(57)【要約】本開示は、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する抗体及びその抗原結合断片を、それを必要とする対象、例えば、がん患者に投与する方法を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト対象にて固形腫瘍を治療する方法であって、前記方法が、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、且つ配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２、配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含む約０．００５〜約２０ｍｇ／ｋｇの抗体またはその抗原結合断片を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項２】
ヒト対象にて固形腫瘍を治療する方法であって、前記方法が（ｉ）抗体またはその抗原結合断片がヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、且つ配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２、配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３、配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含む抗体またはその抗原結合断片と（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物を前記対象に投与することを含み、
前記組成物における前記抗体またはその抗原結合断片の少なくとも９５％が非フコシル化され、
約０．００５〜約２０ｍｇ／ｋｇの前記抗体またはその抗原結合断片が投与される、前記方法。
【請求項３】
約２０ｍｇ／ｋｇの前記抗体またはその抗原結合断片が前記対象に投与される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
約１０ｍｇ／ｋｇの前記抗体またはその抗原結合断片が前記対象に投与される。請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
約３ｍｇ／ｋｇの前記抗体またはその抗原結合断片が前記対象に投与される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項６】
約１ｍｇ／ｋｇの前記抗体またはその抗原結合断片が前記対象に投与される請求項１または２に記載の方法。
【請求項７】
約０．３ｍｇ／ｋｇの前記抗体またはその抗原結合断片が前記対象に投与される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項８】
約０．１ｍｇ／ｋｇの前記抗体またはその抗原結合断片が前記対象に投与される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項９】
約０．０３ｍｇ／ｋｇの前記抗体またはその抗原結合断片が前記対象に投与される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１０】
約０．０１ｍｇ／ｋｇの前記抗体またはその抗原結合断片が前記対象に投与される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１１】
約０．００５ｍｇ／ｋｇの前記抗体またはその抗原結合断片が前記対象に投与される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１２】
前記抗体またはその抗原結合断片がほぼ３週ごとに１回投与される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記抗体またはその抗原結合断片が静脈内に投与される、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
Ｂ７−Ｈ４が、前記投与に先立って免疫組織化学（ＩＨＣ）を用いて固形腫瘍にて検出されている、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号１１で示されるアミノ酸配列を含むＶＨ及び／または配列番号１２で示されるアミノ酸配列を含むＶＬを含む請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記抗体または抗原結合断片が重鎖定常領域及び／または軽鎖定常領域を含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記重鎖定常領域がヒト免疫グロブリンＩｇＧ１の重鎖定常領域である、及び／または前記軽鎖定常領域がヒト免疫グロブリンＩｇＧκ軽鎖定常領域である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号２５で示されるアミノ酸配列を含む重鎖定常領域及び／または配列番号２３で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号２１で示されるアミノ酸配列を含む重鎖及び／または配列番号２２で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記抗体またはその抗原結合断片がヒト抗体またはその抗原結合断片である、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記抗体またはその抗原結合断片が非フコシル化される、請求項１及び３〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記抗体またはその抗原結合断片が完全長抗体である、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記抗体またはその抗原結合断片が抗原結合断片である、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記抗原結合断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合Ｆｖ、Ｖ−ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）３、テトラボディ、トリアボディ、ジアボディ、単一ドメイン抗体、ＤＶＤ−Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）２、またはｓｃＦｖ−Ｆｃを含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記組成物においてフコシル化が検出できない、請求項２〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記固形腫瘍がＢ７−Ｈ４を発現する、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記固形腫瘍が、切除不能、局所進行性、または転移性である、請求項１〜２６のいずれかに記載の方法。
【請求項２８】
前記固形腫瘍が、乳癌、乳管癌、子宮内膜癌、卵巣癌、尿路上皮癌、非小細胞肺癌、膵臓癌、甲状腺癌、腎臓癌及び膀胱癌から成る群から選択される、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記固形腫瘍が乳癌、卵巣癌、子宮内膜癌、または尿路上皮癌である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記乳癌が進行性乳癌である、請求項２８または２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記乳癌がＨＥＲ２陰性である、請求項２８〜３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
前記乳癌がトリプルネガティブ乳癌である、請求項２８〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
前記乳癌がホルモン受容体（ＨＲ）陽性乳癌である、請求項２８〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
前記非小細胞肺癌が扁平上皮癌である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３５】
前記対象がＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１アンタゴニストによる前治療を受けたことがない、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
前記方法がさらに、腫瘍における免疫細胞の数をモニタリングすることを含む、請求項１〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
前記方法がさらに、腫瘍におけるナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＣＤ４＋細胞、及び／またはＣＤ８＋細胞の数をモニタリングすることを含む、請求項１〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
前記方法がさらに、前記対象におけるサイトカインレベルをモニターすることを含む、請求項１〜３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
前記方法がさらに、前記対象にてＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＴＮＦ及び／またはインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）のレベルをモニターすることを含む、請求項１〜３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
ヒト対象にて固形腫瘍を治療する方法であって、前記方法がヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、且つ配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと配列番号１２で示されるアミノ酸配列を含むＶＬとを含むその抗体の約２０ｍｇ／ｋｇをほぼ３週ごとに１回前記対象に静脈内投与することを含む、前記方法。
【請求項４１】
ヒト対象にて固形腫瘍を治療する方法であって、前記方法が（ｉ）ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、且つ配列番号１１で示されるアミノ酸配列を含むＶＨと配列番号１２で示されるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む抗体と（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物を前記対象に投与することを含み、
前記組成物における前記抗体またはその抗原結合断片の少なくとも９５％が非フコシル化され、
約２０ｍｇ／ｋｇの前記抗体またはその抗原結合断片がほぼ３週ごとに１回静脈内投与される、前記方法。
【請求項４２】
前記抗体が、配列番号２１で示されるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２２で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、請求項４０または４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記固形腫瘍が乳癌、卵巣癌、子宮内膜癌、または尿路上皮癌である、請求項４０〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
１．本開示は一般に、がんのような疾患の治療のために、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する抗体を投与する方法に関する。有利な投薬計画が提供されている。
【背景技術】
【０００２】
２．Ｂ７−Ｈ４（Ｂ７ｘ、Ｂ７−Ｓ１、及びＶＴＣＮ１としても知られる）は、ＰＤ−Ｌ１を含む他のＢ７ファミリーメンバーと相同性を共有する免疫調節分子である。それは、ＩｇＶとＩｇＣ双方の細胞外ドメインで構成されるＩ型の膜貫通タンパク質である。健康な組織におけるＢ７−Ｈ４の発現はタンパク質レベルでは比較的限定されている一方で、Ｂ７−Ｈ４は乳房、卵巣、子宮内膜の婦人科がんのようないくつかの固形腫瘍にて発現する。腫瘍におけるＢ７−Ｈ４の発現は予後不良と相関する傾向がある。Ｂ７−Ｈ４の受容体は不明であるが、Ｔ細胞に発現していると考えられている。Ｂ７−Ｈ４はＴ細胞活性を直接阻害すると考えられている。
【０００３】
Ｂ７−Ｈ４の発現及び機能を考慮して、Ｂ７−Ｈ４活性の調節を含む治療法、例えば、がんの治療のために、Ｂ７−Ｈ４に特異的に結合する抗体が開発されている。したがって、そのような抗体の効果的な投与のための投薬計画に対するニーズがある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
３．本明細書では、治療的に有効な投薬計画を用いて、Ｂ７−Ｈ４抗体及びその抗原結合断片を投与する方法が提供される。
【０００５】
特定の態様では、ヒト対象にて固形腫瘍を治療する方法は、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、且つ２０５０２抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３及び軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２及びＶＬ  ＣＤＲ３の配列を含む抗体またはその抗原結合断片を約０．００５〜約２０ｍｇ／ｋｇ対象に投与することを含む。
【０００６】
特定の態様では、ヒト対象にて固形腫瘍を治療する方法は、（ｉ）抗体またはその抗原結合断片がヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、且つ２０５０２抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３及び軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３の配列を含む抗体またはその抗原結合断片と、（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物を対象に投与することを含み、その際、組成物における抗体またはその抗原結合断片の少なくとも９５％が非フコシル化されており、約０．００５〜約２０ｍｇ／ｋｇの抗体またはその抗原結合断片が投与される。
【０００７】
特定の態様では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔが定義したＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａが定義したＣＤＲ、またはＡｂＭの定義のＣＤＲである。特定の態様では、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３の配列は、それぞれ配列番号５〜１０で示されるアミノ酸配列を含む。
【０００８】
特定の態様では、約２０ｍｇ／ｋｇまたは２０ｍｇ／ｋｇの抗体またはその抗原結合断片が対象に投与される。特定の態様では、約１０ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇの抗体またはその抗原結合断片が対象に投与される。特定の態様では、約３ｍｇ／ｋｇまたは３ｍｇ／ｋｇの抗体またはその抗原結合断片が対象に投与される。特定の態様では、約１ｍｇ／ｋｇまたは１ｍｇ／ｋｇの抗体またはその抗原結合断片が対象に投与される。特定の態様では、約０．３ｍｇ／ｋｇまたは０．３ｍｇ／ｋｇの抗体またはその抗原結合断片が対象に投与される。特定の態様では、約０．１ｍｇ／ｋｇまたは０．１ｍｇ／ｋｇの抗体またはその抗原結合断片が対象に投与される。特定の態様では、約０．０３ｍｇ／ｋｇまたは０．０３ｍｇ／ｋｇの抗体またはその抗原結合断片が対象に投与される。特定の態様では、約０．０１ｍｇ／ｋｇまたは０．０１ｍｇ／ｋｇの抗体またはその抗原結合断片が対象に投与される。特定の態様では、約０．００５ｍｇ／ｋｇまたは０．００５ｍｇ／ｋｇの抗体またはその抗原結合断片が対象に投与される。
【０００９】
特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片はほぼ３週ごとに１回投与される。
【００１０】
特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片は静脈内に投与される。
【００１１】
特定の態様では、Ｂ７−Ｈ４は投与に先立って免疫組織化学（ＩＨＣ）を用いて固形腫瘍で検出されている。
【００１２】
特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片は配列番号１１で示されるアミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または配列番号１２で示されるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。特定の態様では、抗体または抗原結合断片は重鎖定常領域及び／または軽鎖定常領域を含む。特定の態様では、重鎖定常領域は、ヒト免疫グロブリンＩｇＧ１重鎖定常領域であり、及び／または軽鎖定常領域は、ヒト免疫グロブリンＩｇＧκ軽鎖定常領域である。特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２５で示されるアミノ酸配列を含む重鎖定常領域、及び／または配列番号２３で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む。特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２１で示されるアミノ酸配列を含む重鎖、及び／または配列番号２２で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００１３】
特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片はヒト抗体またはその抗原結合断片である。
【００１４】
特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片は非フコシル化される。
【００１５】
特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片は完全長の抗体である。特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片は抗原結合断片である。特定の態様では、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合Ｆｖ、Ｖ−ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）３、テトラボディ、トリアボディ、ジアボディ、単一ドメイン抗体、ＤＶＤ−Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）２、もしくはｓｃＦｖ−Ｆｃを含む、またはそれである。
【００１６】
特定の態様では、フコシル化は組成物では検出できない。
【００１７】
特定の態様では、固形腫瘍はＢ７−Ｈ４を発現する。
【００１８】
特定の態様では、固形腫瘍は、切除不能、局所進行性、または転移性である。
【００１９】
特定の態様では、固形腫瘍は、乳癌、乳管癌、子宮内膜癌、卵巣癌、尿路上皮癌、非小細胞肺癌、膵臓癌、甲状腺癌、腎臓癌、及び膀胱癌から成る群から選択される。特定の態様では、固形腫瘍は、乳癌、卵巣癌、子宮内膜癌、または尿路上皮癌である。特定の態様では、乳癌は進行性乳癌である。特定の態様では、乳癌はＨＥＲ２陰性である。特定の態様では、乳癌はトリプルネガティブ乳癌である。特定の態様では、乳癌はホルモン受容体（ＨＲ）陽性乳癌である。特定の態様では非小細胞肺癌は扁平上皮癌である。特定の実施形態では、対象はＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１アンタゴニストによる前治療を受けたことがない。
【００２０】
特定の態様では、方法はさらに、腫瘍にて免疫細胞の数をモニターすることを含む。特定の態様では、方法はさらに、腫瘍にてナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＣＤ４＋細胞及び／またはＣＤ８＋細胞の数をモニターすることを含む。特定の態様では、方法はさらに、対象にてサイトカインのレベルをモニターすることを含む。特定の態様では、方法はさらに、対象にてＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＴＮＦ及び／またはインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）のレベルをモニターすることを含む。
【００２１】
特定の態様では、ヒト対象にて固形腫瘍を治療する方法は、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、且つ配列番号１１で示されるアミノ酸配列を含むＶＨと配列番号１２で示されるアミノ酸配列を含むＶＬとを含むその抗体を約２０ｍｇ／ｋｇでほぼ３週ごとに１回対象に静脈内投与することを含む。
【００２２】
特定の態様では、ヒト対象にて固形腫瘍を治療する方法は、（ｉ）ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、且つ配列番号１１で示されるアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号１２で示されるアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗体と（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物を対象に投与することを含み、その際、組成物における抗体またはその抗原結合断片の少なくとも９５％が非フコシル化されており、約２０ｍｇ／ｋｇの抗体またはその抗原結合断片がほぼ３週ごとに１回静脈内投与される。
【００２３】
特定の態様では、抗体は配列番号２１で示されるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２２で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。特定の態様では、固形腫瘍は、乳癌、卵巣癌、子宮内膜癌、または尿路上皮癌である。
４．
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】さまざまなＢ７−Ｈ４発現レベルの細胞に対するフコシル化及び非フコシル化Ｂ７−Ｈ４抗体のＡＤＣＣ活性を示す図である。（実施例３を参照）
【図２】Ｂ７−Ｈ４を発現するように操作されたＣＴ２６がん細胞から生じる腫瘍を持つマウスにおける腫瘍増殖阻害に対するＢ７−Ｈ４抗体の効果を示す図である。（実施例４を参照）
【図３】フェーズ１ａ及び１ｂの試験スキームを示す図である。ＣＮＳ＝中枢神経系；ＤＬＴ＝用量制限毒性；ＩＶ＝静脈内；ＬＴＦＵ＝長期経過観察；ＭＴＤ＝最大耐量；ＰＤ＝進行性疾患；Ｑ３Ｗ＝３週に１回；ＴＮＢＣ＝トリプルネガティブ乳癌；ＲＤ＝推奨用量。（実施例７及び８を参照）
【発明を実施するための形態】
【００２５】
５．本明細書で提供されるのは、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合する抗体（例えば、モノクローナル抗体）及びその抗原結合断片を投与する方法である。抗Ｂ７−Ｈ４抗体及びその抗原結合断片は、例えば、対象にて固形腫瘍を治療するために投与することができる。特定の実施形態では、約２０ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、または約０．００５ｍｇ／ｋｇの抗体またはその抗原結合断片が対象に投与され、例えば、投与は約３週間ごとに発生する。
【００２６】
５．１  用語
本明細書で使用されるとき、「Ｂ７−Ｈ４」という用語は、ネイティブのＢ７−Ｈ４ポリペプチド及びＢ７−Ｈ４ポリペプチドのアイソフォームを含むがこれらに限定されない哺乳動物Ｂ７−Ｈ４ポリペプチドを指す。「Ｂ７−Ｈ４」は完全長、未処理のＢ７−Ｈ４ポリペプチド、と同様に細胞内の処理から生じるＢ７−Ｈ４ポリペプチドの形態を包含する。本明細書中で使用されるとき、「ヒトＢ７−Ｈ４」という用語は配列番号１のアミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。「Ｂ７−Ｈ４ポリヌクレオチド」、「Ｂ７−Ｈ４ヌクレオチド」または「Ｂ７−Ｈ４核酸」はＢ７−Ｈ４をコードするポリヌクレオチドを指す。
【００２７】
「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子の可変領域内の少なくとも１つの抗原認識部位を介して、例えば、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、または前述の組み合わせのような標的を認識しこれに特異的に結合する免疫グロブリン分子を意味する。本明細書で使用されるとき、「抗体」という用語は、インタクトのポリクローナル抗体、インタクトのモノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体を含む融合タンパク質、及び当該抗体が所望の生物活性を示す限り任意の他の修飾された免疫グロブリン分子を包含する。抗体は、それぞれ、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、及びミューと呼ばれる重鎖定常ドメインの独自性に基づいて５つの主な免疫グロブリンのクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ、またはそれらのサブクラス（アイソタイプ）（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）のいずれかであることができる。異なるクラスの免疫グロブリンは、異なる周知のサブユニット構造及び三次元構造を有する。抗体は裸であることができ、毒素、放射性同位元素等のような他の分子に結合することができる。
【００２８】
「抗体断片」という用語は、インタクトな抗体の一部を指す。「抗原結合断片」、「抗原結合ドメイン」、または「抗原結合領域」は、抗原に結合するインタクトな抗体の一部を指す。抗原結合断片は、インタクトな抗体の抗原認識部位（例えば、抗原を特異的に結合するのに十分な相補性決定領域（ＣＤＲ））を含有することができる。抗体の抗原結合断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片、線状抗体、及び単鎖抗体が挙げられるが、これらに限定されない。抗体の抗原結合断片は、げっ歯類（例えば、マウス、ラット、またはハムスター）及びヒトのような任意の動物種に由来することができ、または人工的に作製することができる。
【００２９】
「抗Ｂ７−Ｈ４抗体」、「Ｂ７−Ｈ４抗体」及び「Ｂ７−Ｈ４に結合する抗体」という用語は、抗体がＢ７−Ｈ４を標的とすることにおいて診断薬及び／または治療薬として有用であるように、十分な親和性でＢ７−Ｈ４を特異的に結合することができる抗体を指す。本明細書で使用されるとき、「特異的に結合する」、「免疫特異的に結合する」、「免疫特異的に認識する」、及び「特異的に認識する」という用語は、抗体またはその抗原結合断片の文脈において類似の用語である。これらの用語は、抗体またはその抗原結合断片がその抗原結合ドメインを介してエピトープに結合すること、及び結合が抗原結合ドメインとエピトープの間にある程度の相補性を伴うことを示す。したがって、ヒトＢ７−Ｈ４（配列番号１）に「特異的に結合する」抗体は、他の種（例えば、カニクイザル、マウス及び／またはラットのＢ７−Ｈ４）及び／または他のヒト対立遺伝子から産生されたＢ７−Ｈ４タンパク質にも結合してもよく、ただし関連のない非Ｂ７−Ｈ４タンパク質（例えば、ＰＤ−Ｌ１のような他のＢ７タンパク質ファミリーメンバー）への結合の程度は、例えば放射性免疫アッセイ（ＲＩＡ）により測定されたときＢ７−Ｈ４に対する抗体の結合の約１０％未満である。具体的な実施形態では、本明細書で提供されるのはヒト、カニクイザル、マウス、及びラットのＢ７−Ｈ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片である。
【００３０】
「モノクローナル」抗体またはその抗原結合断片は、単一の抗原決定基またはエピトープの特異性の高い結合に関与する均質な抗体または抗原結合断片の集団を指す。これは、通常は異なる抗原決定基に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体とは対照的である。「モノクローナル」抗体またはその抗原結合断片という用語は、インタクトな且つ完全長のモノクローナル抗体と同様に、抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ）、単鎖（ｓｃＦｖ）変異体、抗体部分を含む融合タンパク質、及び抗原認識部位を含む任意の他の修飾された免疫グロブリン分子を包含する。さらに、「モノクローナル」抗体またはその抗原結合断片は、ハイブリドーマ、ファージ選択、組み換え発現、及びトランスジェニック動物を含むが、これらに限定されないあらゆる方法で作製されるそのような抗体及びその抗原結合断片を指す。
【００３１】
本明細書で使用されるとき、「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は相互交換可能に使用され、当該技術分野で一般的である。可変領域は通常、抗体の一部、一般に軽鎖または重鎖の一部を指し、通常、成熟重鎖のアミノ末端約１１０〜１２０アミノ酸または１１０〜１２５アミノ酸及び成熟した軽鎖の約９０〜１１５アミノ酸を指し、それらは抗体間で配列が異なり、特定の抗体の特定の抗原に対する結合と特異性に使用される。配列の変動性は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる領域に集中している一方で、可変ドメインにおけるさらに高度に保存された領域はフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。特定のメカニズムまたは理論に束縛されることを望まないが、軽鎖及び重鎖のＣＤＲは、抗体の抗原との相互作用及び特異性に主として関与すると考えられている。特定の実施形態では、可変領域はヒト可変領域である。特定の実施形態では、可変領域は、げっ歯類またはマウスのＣＤＲ及びヒトのフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。特定の実施形態では、可変領域は霊長類（例えば、非ヒト霊長類）の可変領域である。特定の実施形態では、可変領域は、げっ歯類またはマウスのＣＤＲ及び霊長類（例えば、非ヒト霊長類）のフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。
【００３２】
「ＶＬ」及び「ＶＬドメイン」という用語は、抗体の軽鎖可変領域を指すために相互交換可能に使用される。
【００３３】
「ＶＨ」及び「ＶＨドメイン」という用語は、抗体の重鎖可変領域を指すために相互交換可能に使用される。
【００３４】
「Ｋａｂａｔ番号付け」という用語及び同様の用語は、当該技術分野で認識されており、抗体またはその抗原結合断片の重鎖及び軽鎖可変領域におけるアミノ酸残基の番号付けの方式を指す。特定の態様では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付け方式に従って決定することができる（例えば、Ｋａｂａｔ  ＥＡ  ＆  Ｗｕ  ＴＴ，（１９７１），Ａｎｎ．ＮＹ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９０：３８２−３９１及びＫａｂａｔ，ＥＡ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９１），Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｎｏ．９１−３２４２を参照のこと）。Ｋａｂａｔ番号付け方式を用いて、抗体重鎖分子内のＣＤＲは通常、３５に続く１または２の追加のアミノ酸を任意で含めることができる（Ｋａｂａｔの番号付けスキームでは３５Ａ及び３５Ｂと呼ばれる）アミノ酸の３１〜３５位（ＣＤＲ１）、アミノ酸の５０〜６５位（ＣＤＲ２）、及びアミノ酸の９５〜１０２位（ＣＤＲ３）に存在する。Ｋａｂａｔ番号付け方式を用いて、抗体軽鎖分子内のＣＤＲは通常、アミノ酸の２４〜３４位（ＣＤＲ１）、アミノ酸の５０〜５６位（ＣＤＲ２）、及びアミノ酸の８９〜９７位（ＣＤＲ３）に存在する。具体的な実施形態では、本明細書に記載されている抗体のＣＤＲはＫａｂａｔ番号付けスキームに従って決定されている。
【００３５】
Ｃｏｔｈｉａは代わりに構造ループの位置を参照する（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））。Ｋａｂａｔ番号付け規則を用いて番号付けした場合、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｈ１ループの末端は、ループの長さに応じてＨ３２とＨ３４の間で異なる（これは、Ｋａｂａｔ番号付けスキームがＨ３５ＡとＨ３５Ｂに挿入を置くためであり、３５Ａも３５Ｂも存在しない場合、このループは３２で終わり、３５Ａのみが存在する場合、このループは３３で終わり、３５Ａ及び３５Ｂの双方が存在する場合、このループは３４で終わる）。ＡｂＭの超可変領域は、ＫａｂａｔのＣＤＲ及びＣｈｏｔｈｉａの構造ループとの間の妥協を表し、Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデル化ソフトウェアによって使用されている。
【表Ａ】
2021513997.tif 000002
【００３６】
本明細書で使用されるとき、「定常領域」及び「定常ドメイン」という用語は相互交換可能であり、当該技術分野でのそれらの共通の意味を有する。定常領域は、抗体の一部であり、例えば、抗体の抗原への結合には直接関与しないが、Ｆｃ受容体との相互作用のような、さまざまなエフェクター機能を発揮できる軽鎖及び／または重鎖のカルボキシル末端部分である。免疫グロブリン分子の定常領域は一般に、免疫グロブリン可変ドメインと比べてさらに保存されたアミノ酸配列を有する。特定の態様では、抗体または抗原結合断片は、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に十分である定常領域またはその一部を含む。
【００３７】
本明細書で使用されるとき、抗体に関して使用される場合の「重鎖」という用語は、任意の異なる種類、例えば、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいてアルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、及びミュー（μ）を指すことができ、それらは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４のようなＩｇＧのサブクラスを含む、それぞれＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭのクラスの抗体を生じる。重鎖アミノ酸配列は当該技術分野で周知である。具体的な実施形態では、重鎖はヒト重鎖である。
【００３８】
本明細書で使用されるとき、抗体に関して使用される場合の「軽鎖」という用語は、定常ドメインのアミノ酸配列に基づく、例えばカッパ（κ）またはラムダ（λ）のような異なる種類を指すことができる。軽鎖アミノ酸配列は当技術分野で周知である。具体的な実施形態では、軽鎖はヒト軽鎖である。
【００３９】
「キメラ」抗体という用語またはその抗原結合断片は、アミノ酸配列が２以上の種に由来する抗体またはその抗原結合断片を指す。通常、軽鎖及び重鎖双方の可変領域は、所望の特異性、親和性、及び機能を持つ哺乳類の一種（例えば、マウス、ラット、ウサギ等）に由来する抗体またはその抗原結合断片の可変領域に対応する一方で、その定常領域は、別の種（通常はヒト）に由来する抗体またはその抗原結合断の配列に対して相同であり、その種での免疫反応の誘発を回避する。
【００４０】
「ヒト化」抗体という用語またはその抗原結合断片は、最小限の非ヒト（例えば、マウス）配列を含有する特定の免疫グロブリン鎖、キメラ免疫グロブリン、またはそれらの断片である非ヒト（例えば、マウス）抗体または抗原結合断片の形態を指す。通常、ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、ヒト免疫グロブリンであって、その相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基が、所望の特異性、親和性、及び機能を有する非ヒト種（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ハムスター）のＣＤＲ由来の残基で置き換えられている（「ＣＤＲグラフト」）（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５，（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２７，（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４−１５３６，（１９８８））。場合によっては、ヒト免疫グロブリンの特定のＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）は、所望の特異性、親和性、及び機能を有する非ヒト種由来の抗体または断片における対応する残基で置き換えられる。ヒト化抗体またはその抗原結合断片を、Ｆｖフレームワーク領域にて及び／または非ヒトＣＤＲ残基内にてさらなる残基の置換によってさらに修飾し、抗体またはその抗原結合断片の特異性、親和性、及び／または機能を改良する及び最適化することができる。一般に、ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、非ヒト免疫グロブリンに対応するＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべてを含有する可変ドメインを含むのに対して、ＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべては、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、通常はヒト免疫グロブリンのものである免疫グロブリン定常領域またはドメイン（Ｆｃ）の少なくとも一部も含むことができる。ヒト化抗体を生成するのに使用される方法の例は、米国特許第５，２２５，５３９号、Ｒｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，９１（３）：９６９−９７３（１９９４）、及びＲｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．９（１０）：８９５−９０４（１９９６）に記載されている。いくつかの実施形態では、「ヒト化抗体」は再表面化抗体である。
【００４１】
「ヒト」抗体という用語またはその抗原結合断片は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座に由来するアミノ酸配列を有する抗体またはその抗原結合断片を意味し、そのような抗体または抗原結合断片は当該技術分野で既知の任意の技法を用いて作製される。ヒト抗体またはその抗原結合断片のこの定義には、インタクトなまたは完全長の抗体及びその断片が含まれる。
【００４２】
「非フコシル化」抗体またはその抗原結合断片または「フコースを欠く」抗体またはその抗原結合断片は、その定常領域のグリコシル化においてフコースを欠くＩｇＧ１またはＩｇＧ３のアイソタイプ抗体またはその抗原結合断片を指す。ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３のグリコシル化は、最大２つのＧａｌ残基で終わるコアのフコシル化二分岐複合オリゴ糖のグリコシル化としてＡｓｎ２９７にて起こる。いくつかの実施形態では、非フコシル化抗体はＡｓｎ２９７でフコースを欠いている。これらの構造は、末端のＧａｌ残基の量に応じてＧ０、Ｇ１（１、６、または１、３）、またはＧ２グリカン残基と呼ばれる。例えば、Ｒａｊｕ，Ｔ．Ｓ．，ＢｉｏＰｒｏｃｅｓｓ  Ｉｎｔ．１：４４−５３（２００３）を参照のこと。抗体ＦｃのＣＨＯ型グリコシル化は、例えば、Ｒｏｕｔｉｅｒ，Ｆ．ＦＬ，Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｊ．１４：２０１−２０７（１９９７）に記載されている。
【００４３】
フコースを測定する方法には当該技術分野で既知の任意の方法が挙げられる。本明細書の目的のために、フコースは、参照によってその全体が本明細書に組み込まれるＷＯ２０１５／０１７６００の実施例１に記載されている方法により検出される。手短には、グリカン分析は、抗体からグリカンを遊離し（例えば、酵素的遊離によって）、グリカンをアントラニル酸（２−ＡＡ）で標識し、次いで標識されたグリカンを精製することによって実施される。蛍光検出を備えた順相ＨＰＬＣを用いて、グリカンを分離し、抗体における各グリカンの相対量を測定する。質量分光分析によってグリカンはフコースを欠いているまたは含んでいると確実に同定されてもよい。いくつかの実施形態では、フコースは、複数の非フコシル化された抗体またはその抗原結合断片を含む組成物では検出できない。いくつかの実施形態では、非フコシル化された抗体またはその抗原結合断片はＦｃガンマＲＩＩＩＡに対して増強された親和性を有する。いくつかの実施形態では、非フコシル化された抗体またはその抗原結合断片は、ＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）に対して増強された親和性を有する。いくつかの実施形態では、非フコシル化された抗体またはその抗原結合断片は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）に対して増強された親和性を有する。
【００４４】
「結合親和性」は、一般に、分子（例えば、抗体またはその抗原結合断片）の単一結合部位とその結合相手（例えば、抗原）との間の非共有結合相互作用の合計の強度を指す。特に指示されない限り、本明細書で使用されるとき、「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、抗体またはその抗原結合断及び抗原）間の１：１の相互作用を反映する、本来の結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は一般に、解離定数（ＫＤ）によって表すことができる。平衡解離定数（ＫＤ）及び平衡会合定数（ＫＡ）を含むがこれらに限定されない、当該技術分野で既知の多数の方法で親和性を測定することができ、及び／または表現することができる。ＫＤはｋｏｆｆ／ｋｏｎの商から計算されるのに対して、ＫＡはｋｏｎ／ｋｏｆｆの商から計算される。ｋｏｎは、例えば、抗体またはその抗原結合断片の抗原への会合速度定数を指し、ｋｏｆｆは、例えば、抗体またはその抗原結合断片の抗原からの解離を指す。ｋｏｎ及びｋｏｆｆは、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）またはＫｉｎＥｘＡのような当業者に既知の技法によって決定することができる。
【００４５】
本明細書で使用されるとき、「エピトープ」は、当該技術分野における用語であり、抗体またはその抗原結合断片が特異的に結合することができる抗原の局在領域を指す。エピトープは、例えば、ポリペプチドの隣接アミノ酸（線状または隣接エピトープ）であることができ、またはエピトープは、例えば、ポリペプチド（単数）またはポリペプチド（複数）の２以上の非隣接領域から集まることができる（立体構造的、非線状、不連続、または非隣接のエピトープ）。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片が特異的に結合するエピトープは、例えば、ＮＭＲ分光法、Ｘ線回折結晶学研究、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析（例、液体クロマトグラフィーエレクトロスプレー質量分析）と併せた水素／重水素交換、アレイ系のオリゴペプチド走査アッセイ、及び／または変異誘発マッピング（例：部位特異的変異誘発マッピング）によって決定することができる。Ｘ線結晶学については、結晶化は当該技術分野で既知の方法のいずれかを用いて達成されてもよい（例えば、ＧｉｅｇｅＲ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ａｃｔａ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ．Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．５０（Ｐｔ４）：３３９−３５０；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ，Ａ．（１９９０），Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１８９：１−２３；Ｃｈａｙｅｎ，ＮＥ．（１９９７）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，５：１２６９−１２７４；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ，Ａ．（１９７６）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５１：６３００−６３０３）。抗体／その抗原結合断片：抗原の結晶は、周知のＸ線回折技術を用いて研究することができ、Ｘ−ＰＬＯＲのようなコンピューターソフトウェアを用いて改良することができる（Ｙａｌｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，１９９２，ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄ  ｂｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．；ｓｅｅ，ｅ．ｇ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ（１９８５），ｖｏｌｕｍｅ  １１４＆１１５，ｅｄｓ  Ｗｙｃｋｏｆｆ  ＨＷ  ｅｔ  ａｌ．，；Ｕ．Ｓ．２００４／００１４１９４），ａｎｄ  ＢＵＳＴＥＲ（Ｂｒｉｃｏｇｎｅ  Ｇ，（１９９３），Ａｃｔａ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ．Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．４９（Ｐｔ１）：３７−６０；Ｂｒｉｃｏｇｎｅ  Ｇ，（１９９７），Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２７６Ａ：３６１−４２３，ｅｄ  Ｃａｒｔｅｒ  ＣＷ；Ｒｏｖｅｒｓｉ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，（２０００），Ａｃｔａ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ．Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．５６，（Ｐｔ１０）：１３１６−１３２３）。変異誘発マッピング研究は、当業者に既知の任意の方法を用いて達成することができる。アラニン走査突然変異誘発技法を含む突然変異誘発技法の説明については、例えば、Ｃｈａｍｐｅ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９５），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１３８８−１３９４及びＣｕｎｎｉｎｇｈａｍ，ＢＣ  ＆  Ｗｅｌｌｓ  ＪＡ，（１９８９），Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５）を参照のこと。
【００４６】
「プログラム細胞死タンパク質１」及び「ＰＤ−１」という用語は、ＣＤ２８ファミリーに属する免疫抑制受容体を指す。ＰＤ−１は、生体内で以前に活性化されたＴ細胞に主として発現し、２つのリガンドＰＤ−Ｌ１とＰＤ−Ｌ２に結合する。本明細書で使用されるとき、「ＰＤ−１」という用語は、ヒトＰＤ−１（ｈＰＤ−１）、ｈＰＤ−１の天然に存在する変異体及びアイソフォーム、ならびにｈＰＤ−１の種ホモログを含む。ｈＰＤ−１の配列は
ＭＱＩＰＱＡＰＷＰＶＶＷＡＶＬＱＬＧＷＲＰＧＷＦＬＤＳＰＤＲＰＷＮＰＰＴＦＳＰＡＬＬＶＶＴＥＧＤＮＡＴＦＴＣＳＦＳＮＴＳＥＳＦＶＬＮＷＹＲＭＳＰＳＮＱＴＤＫＬＡＡＦＰＥＤＲＳＱＰＧＱＤＣＲＦＲＶＴＱＬＰＮＧＲＤＦＨＭＳＶＶＲＡＲＲＮＤＳＧＴＹＬＣＧＡＩＳＬＡＰＫＡＱＩＫＥＳＬＲＡＥＬＲＶＴＥＲＲＡＥＶＰＴＡＨＰＳＰＳＰＲＰＡＧＱＦＱＴＬＶＶＧＶＶＧＧＬＬＧＳＬＶＬＬＶＷＶＬＡＶＩＣＳＲＡＡＲＧＴＩＧＡＲＲＴＧＱＰＬＫＥＤＰＳＡＶＰＶＦＳＶＤＹＧＥＬＤＦＱＷＲＥＫＴＰＥＰＰＶＰＣＶＰＥＱＴＥＹＡＴＩＶＦＰＳＧＭＧＴＳＳＰＡＲＲＧＳＡＤＧＰＲＳＡＱＰＬＲＰＥＤＧＨＣＳＷＰＬ（配列番号３０）である。
【００４７】
「プログラム細胞死１リガンド１」及び「ＰＤ−Ｌ１」という用語は、ＰＤ−１に結合した際のＴ細胞の活性化とサイトカイン分泌を下方調節する、ＰＤ−１の２つの細胞表面糖タンパク質リガンドのうちの一方を指す（他方はＰＤ−Ｌ２）。本明細書で使用されるとき、「ＰＤ−Ｌ１」という用語は、ヒトＰＤ−Ｌ１（ｈＰＤ−Ｌ１）、ｈＰＤ−１の天然に存在する変異体及びアイソフォーム、ならびにｈＰＤ−Ｌ１の種ホモログを含む。ｈＰＤ−Ｌ１の配列は
ＭＲＩＦＡＶＦＩＦＭＴＹＷＨＬＬＮＡＦＴＶＴＶＰＫＤＬＹＶＶＥＹＧＳＮＭＴＩＥＣＫＦＰＶＥＫＱＬＤＬＡＡＬＩＶＹＷＥＭＥＤＫＮＩＩＱＦＶＨＧＥＥＤＬＫＶＱＨＳＳＹＲＱＲＡＲＬＬＫＤＱＬＳＬＧＮＡＡＬＱＩＴＤＶＫＬＱＤＡＧＶＹＲＣＭＩＳＹＧＧＡＤＹＫＲＩＴＶＫＶＮＡＰＹＮＫＩＮＱＲＩＬＶＶＤＰＶＴＳＥＨＥＬＴＣＱＡＥＧＹＰＫＡＥＶＩＷＴＳＳＤＨＱＶＬＳＧＫＴＴＴＴＮＳＫＲＥＥＫＬＦＮＶＴＳＴＬＲＩＮＴＴＴＮＥＩＦＹＣＴＦＲＲＬＤＰＥＥＮＨＴＡＥＬＶＩＰＥＬＰＬＡＨＰＰＮＥＲＴＨＬＶＩＬＧＡＩＬＬＣＬＧＶＡＬＴＦＩＦＲＬＲＫＧＲＭＭＤＶＫＫＣＧＩＱＤＴＮＳＫＫＱＳＤＴＨＬＥＥＴ（配列番号３１）である。
【００４８】
「ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１シグナル伝達経路を破壊する部分を指す。いくつかの実施形態では、アンタゴニストは、ＰＤ−１及び／またはＰＤ−Ｌ１への結合によってＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１のシグナル伝達経路を阻害する。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１アンタゴニストはＰＤ−Ｌ２にも結合する。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１アンタゴニストは、ＰＤ−１のＰＤ−Ｌ１及び任意でＰＤ−Ｌ２への結合を遮断する。非限定の例示的なＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１アンタゴニストには、ＰＤ−１に結合する抗体のようなＰＤ−１アンタゴニスト、例えば、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ）及びペンブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ）；ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体のようなＰＤ−Ｌ１アンタゴニスト（例えば、アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ）、デュルバルマブ及びアベルマブ）；ＡＭＰ−２２４のような融合タンパク質及びＡＵＲ−０１２のようなペプチドが挙げられる。
【００４９】
「単離される」ポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物は、自然界には見られない形態であるポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物である。単離されたポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物には、もはやそれらが自然界で見られる形態ではない程度まで精製されたものが含まれる。いくつかの実施形態では、単離されている抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物は、実質的に純粋である。本明細書で使用されるとき、「実質的に純粋」は、少なくとも５０％純粋（すなわち、混入物質を含まない）、少なくとも９０％純粋、少なくとも９５％純粋、少なくとも９８％純粋、または少なくとも９９％である材料を指す。
【００５０】
「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」という用語は本明細書では、相互交換可能に使用されて、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指す。該ポリマーは、直鎖状であっても分岐状であってもよく、修飾アミノ酸を含むことができ、非アミノ酸によって中断され得る。これらの用語は、自然に、または介入、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、もしくは任意の他の操作または修飾、例えば、標識成分とのコンジュゲーションにより修飾されたアミノ酸ポリマーも包含する。その定義内に含まれるのはまた、例えば、アミノ酸（例えば、非天然アミノ酸等を含む）の１以上の類似体を含有するポリペプチド、と同様に当該技術分野で既知の他の修飾である。本発明のポリペプチドは抗体に基づいているので、特定の実施形態では、該ポリペプチドは一本鎖または結合鎖として存在し得ることが理解される。
【００５１】
本明細書中で使用されるとき、「宿主細胞」という用語は、任意の種類の細胞、例えば、初代細胞、培養中の細胞、または細胞株由来の細胞であることができる。具体的な実施形態では、「宿主細胞」という用語は、核酸分子で形質移入された細胞及びそのような細胞の子孫または潜在的な子孫を指す。そのような細胞の子孫は、例えば、次の世代または宿主細胞ゲノムへの核酸分子の組み込みにおいて起こり得る突然変異または環境の影響に起因して、核酸分子で形質移入された親細胞と同一ではなくてもよい。
【００５２】
「薬学的製剤」という用語は、活性成分の生物学的活性が有効になるような形態であり、かつ製剤が投与される対象に許容できない程度に毒性のさらなる成分を含有しない調製物を指す。製剤は無菌であることができる。
【００５３】
本明細書で使用されるとき、「投与する」、「投与すること」、「投与」等の用語は、生物作用の所望の部位への薬剤、例えば、抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片の送達を可能にするのに使用されてもよい方法（例えば、静脈内投与）を指す。本明細書に記載されている作用剤及び方法とともに採用することができる投与技法は、例えば、Ｇｏｏｄｍａｎ及びＧｉｌｍａｎ，Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ｃｕｒｒｅｎｔ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ；ならびにＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｃｕｒｒｅｎｔ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．にて見いだされる。
【００５４】
本明細書で使用されるとき、「対象」及び「患者」という用語は相互交換可能に使用される。対象は動物であることができる。いくつかの実施形態では、対象は非ヒト動物（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラット、マウス、サルまたは他の霊長類等）のような哺乳動物である。いくつかの実施形態では、対象はカニクイザルである。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。
【００５５】
「治療上有効な量」という用語は、対象における疾患または障害を治療するのに有効な薬剤、例えば、抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片の量を指す。がんの場合、治療上有効な量の薬剤はがん細胞の数を減らすことができ；腫瘍のサイズまたは負担を軽減することができ；末梢臓器へのがん細胞の浸潤をある程度阻害することができ；ある程度、腫瘍転移を阻害することができ；ある程度、腫瘍の成長を阻害することができ；がんに関連する症状の１以上をある程度緩和することができ；及び／または無増悪生存期間（ＰＦＳ）、無病生存期間（ＤＦＳ）、全生存期間（ＯＳ）、完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）、場合によっては安定した疾患（ＳＤ）、進行性疾患の減少（ＰＤ）、進行までの時間の短縮（ＴＴＰ）、またはそれらの任意の組み合わせのような良好な反応をもたらすことができる。薬剤が既存のがん細胞の成長の防ぎ及び／またはそれらの殺傷する範囲で、薬剤は細胞増殖抑制性及び／または細胞傷害性であることができる。
【００５６】
「治療すること」、「治療」、「治療すること」、「緩和すること」、及び「緩和すること」のような用語は、病的状態または障害を治癒させ、その症状を減速し、軽減する及び／またはその進行を止める治療手段を指す。したがって、治療を必要とするものには、すでにその障害があると診断された、またはその疑いがあるものが含まれる。特定の実施形態では、患者が以下：がん細胞の数の減少または完全な非存在；腫瘍サイズの低下；例えば、軟組織及び骨へのがんの広がりを含む、末梢器官へのがん細胞浸潤の阻害または非存在；腫瘍転移の阻害または非存在；腫瘍増殖の阻害または非存在；特定のがんに関連する１以上の症状の緩和；罹患率と死亡率の低下；生活の質の改善；腫瘍の腫瘍形成性、腫瘍形成頻度、または腫瘍形成能の低下；腫瘍におけるがん幹細胞の数または頻度の低下；腫瘍原性細胞の非腫瘍原性状態への分化；増加した無増悪生存期間（ＰＦＳ）、無病生存期間（ＤＦＳ）、全生存期間（ＯＳ）、完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）、安定した疾患（ＳＤ）、進行性疾患（ＰＤ）の減少、進行時間の短縮（ＴＴＰ）、またはその任意の組み合わせの１以上を示す場合、対象は、本発明の方法に従ってがんについて首尾よく「治療」されている。
【００５７】
「がん」及び「がん性」という用語は、細胞の集団が制御されていない細胞増殖を特徴とする哺乳動物における生理学的状態を指す、または記載する。がんの例には、婦人科癌（例えば、乳癌（トリプルネガティブ乳癌を含む）、乳管癌、卵巣癌、及び子宮内膜癌）、非小細胞肺癌、膵臓癌、甲状腺癌、腎臓癌（例えば、腎細胞癌）及び膀胱癌（例えば、尿路上皮細胞癌）が挙げられるが、これらに限定されない。がんは、「Ｂ７−Ｈ４を発現するがん」または「Ｂ７−Ｈ４を発現しているがん」であることができる。そのような用語は、Ｂ７−Ｈ４を発現している細胞を含むがんを指す。がんはＢ７−Ｈ４を発現する固形腫瘍であることができる。がんは原発腫瘍であってもよいし、または進行がんまたは転移がんであってもよい。
【００５８】
「不応性」がんとは、化学療法剤のような抗腫瘍治療ががん患者に投与されているにもかかわらず進行するがんである。
【００５９】
「再発性」がんとは、初期療法に応答した後に、初期の部位または遠位部位で再増殖しているがんである。
【００６０】
本開示及びクレームで使用されるとき、単数形態「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈が別途明確に指示しない限り、複数の指示対象を含む。
【００６１】
実施形態が本明細書で「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（含む）」という言葉で説明される場合は常に、そうでなければ「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ（から成る）」及び／または  「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ（から本質的に成る）」という用語で説明される類似の実施形態も提供されることが理解される。本開示では、「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ（含む）」、「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（含むこと）」、「ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ（含有すること）」、及び「ｈａｖｉｎｇ（有すること）」等は、米国特許法においてそれらに帰せられる意味を有することができ、「ｉｎｃｌｕｄｅｓ（含む）」及び「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ（含むこと）」等を意味することができ；「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ（から本質的に成る）」または「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ（本質的に成る）」は同様に、米国特許法において帰せられる意味を有し、用語は制限がなく、引用されるものの基本的または新規の特徴が引用されるもの以上のものの存在によって変化しない限り、引用されるもの以上のものの存在を許容するが、先行技術の実施形態は除外する。
【００６２】
具体的に述べられるか、文脈から明らかでない限り、本明細書で使用されるとき、「または」という用語は包括的であることが理解される。「及び／または」という用語は、本明細書で「Ａ及び／またはＢ」のような表現で使用されるとき、「Ａ及びＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」及び「Ｂ」の双方を含むことが意図される。同様に、「及び／または」という用語は「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」のような表現で使用されるとき、以下の各実施形態：Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；ＡとＣ；ＡとＢ；ＢとＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；及びＣ（単独）のそれぞれを包含することが意図される。
【００６３】
本明細書で使用されるとき、「約」及び「およそ」という用語は、数値または数値範囲を変更するために使用される場合、値または範囲の５％〜１０％を上回る及び５％〜１０％を下回る逸脱は引用された値または範囲の意図された意味の範囲内にとどまることを示す。
【００６４】
本明細書で提供される任意の組成物または方法は、本明細書で提供される他の組成物及び方法のいずれかの１以上と組み合わせることができる。
【００６５】
５．２  がんの治療方法
一態様では、本明細書で提供されるのは、本明細書に記載されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片または本明細書に記載されているようなその医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、ヒト対象にてがんを治療する方法である。
【００６６】
一態様では、ヒト対象にてがんを治療する方法は、本明細書に記載されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片または本明細書に記載されているようなその医薬組成物をそれを必要とする対象に投与することを含み、その際、約０．００５〜約２０ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が、例えば、ほぼ３週ごとに１回投与される。
【００６７】
一態様では、ヒト対象にてがんを治療する方法は、本明細書に記載されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片または本明細書に記載されているようなその医薬組成物をそれを必要とする対象に投与することを含み、その際、約０．００５ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が、例えば、ほぼ３週ごとに１回投与される。一態様では、ヒト対象にてがんを治療する方法は、本明細書に記載されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片または本明細書に記載されているようなその医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含み、その際、約０．０１ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が、例えば、ほぼ３週ごとに１回投与される。一態様では、ヒト対象にてがんを治療する方法は、本明細書に記載されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片または本明細書に記載されているようなその医薬組成物をそれを必要とする対象に投与することを含み、その際、約０．０３ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が、例えば、ほぼ３週ごとに１回投与される。一態様では、ヒト対象にてがんを治療する方法は、本明細書に記載されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片または本明細書に記載されているようなその医薬組成物をそれを必要とする対象に投与することを含み、その際、約０．１ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が、例えば、ほぼ３週ごとに１回投与される。一態様では、ヒト対象にてがんを治療する方法は、本明細書に記載されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片または本明細書に記載されているようなその医薬組成物をそれを必要とする対象に投与することを含み、その際、約０．３ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が、例えば、ほぼ３週ごとに１回投与される。一態様では、ヒト対象にてがんを治療する方法は、本明細書に記載されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片または本明細書に記載されているようなその医薬組成物をそれを必要とする対象に投与することを含み、その際、約１ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が、例えば、３週ごとに１回投与される。一態様では、ヒト対象にてがんを治療する方法は、本明細書に記載されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片または本明細書に記載されているようなその医薬組成物をそれを必要とする対象に投与することを含み、その際、約３ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が、例えば、ほぼ３週ごとに１回投与される。一態様では、ヒト対象にてがんを治療する方法は、本明細書に記載されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片または本明細書に記載されているようなその医薬組成物をそれを必要とする対象に投与することを含み、その際、約１０ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が、例えば、ほぼ３週ごとに１回投与される。一態様では、ヒト対象にてがんを治療する方法は、本明細書に記載されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片または本明細書に記載されているようなその医薬組成物をそれを必要とする対象に投与することを含み、その際、約２０ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が、例えば、ほぼ３週ごとに１回投与される。
【００６８】
一態様では、ヒト対象にてがんを治療する方法は、本明細書に記載されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片または本明細書に記載されているようなその医薬組成物をそれを必要とする対象に投与することを含み、その際、０．００５ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が、例えば、３週ごとに１回投与される。一態様では、ヒト対象にてがんを治療する方法は、本明細書に記載されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片または本明細書に記載されているようなその医薬組成物をそれを必要とする対象に投与することを含み、その際、０．０１ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が、例えば、３週ごとに１回投与される。一態様では、ヒト対象にてがんを治療する方法は、本明細書に記載されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片または本明細書に記載されているようなその医薬組成物をそれを必要とする対象に投与することを含み、その際、０．０３ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が、例えば、３週ごとに１回投与される。一態様では、ヒト対象にてがんを治療する方法は、本明細書に記載されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片または本明細書に記載されているようなその医薬組成物をそれを必要とする対象に投与することを含み、その際、０．１ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が、例えば、３週ごとに１回投与される。一態様では、ヒト対象にてがんを治療する方法は、本明細書に記載されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片または本明細書に記載されているようなその医薬組成物をそれを必要とする対象に投与することを含み、その際、０．３ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が、例えば、３週ごとに１回投与される。一態様では、ヒト対象にてがんを治療する方法は、本明細書に記載されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片または本明細書に記載されているようなその医薬組成物をそれを必要とする対象に投与することを含み、その際、１ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が、例えば、３週ごとに１回投与される。一態様では、ヒト対象にてがんを治療する方法は、本明細書に記載されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片または本明細書に記載されているようなその医薬組成物をそれを必要とする対象に投与することを含み、その際、３ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が、例えば、３週ごとに１回投与される。一態様では、ヒト対象のがんを治療する方法は、本明細書に記載されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片または本明細書に記載されているようなその医薬組成物をそれを必要とする対象に投与することを含み、その際、１０ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が、例えば、３週ごとに１回投与される。一態様では、ヒト対象にてがんを治療する方法は、本明細書に記載されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片または本明細書に記載されているようなその医薬組成物をそれを必要とする対象に投与することを含み、その際、２０ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が、例えば、３週ごとに１回投与される。
【００６９】
本明細書で提供されている方法によれば、抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片、または抗Ｂ７−Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片を含む医薬組成物は静脈内に投与することができる。
【００７０】
特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、乳癌（例えば、進行性乳癌、トリプルネガティブ乳癌、または乳管癌）、子宮内膜癌腫、卵巣癌、尿路上皮癌、非小細胞肺癌（例えば、扁平上皮癌）、膵臓癌、甲状腺癌、腎臓癌（例えば、腎細胞癌）、及び膀胱癌（例えば、尿路上皮細胞癌）から成る群から選択されるがんを治療する方法である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、進行性の乳癌（トリプルネガティブ乳癌を含む）、卵巣癌、子宮内膜癌、または尿路上皮癌を治療する方法である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは乳癌を治療する方法である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるのはホルモン受容体（ＨＲ）陽性乳癌を治療する方法である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは卵巣癌を治療する方法である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは子宮内膜癌を治療する方法である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは尿路上皮癌を治療する方法である。本明細書で提供される特定の実施形態では、対象はＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１アンタゴニストによる前治療を受けたことがない。特定の実施形態では、そのような方法は、本明細書で提供されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片、または本明細書で提供されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片を含む医薬組成物をそれを必要とする患者（例えば、ヒト患者）に投与することを含む。
【００７１】
いくつかの実施形態では、がんはＢ７−Ｈ４を発現しているがんである。特定の実施形態では、がんは、Ｂ７−Ｈ４を発現している固形腫瘍である。特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４は対象から得られた生体試料にて（例えば、免疫組織化学（ＩＨＣ）を用いて）検出されている。
【００７２】
生体試料は、対象、細胞株、組織、またはＢ７−Ｈ４を潜在的に発現する細胞の他の供給源から得られる任意の生体試料であってもよい。ヒトから組織生検及び体液を得る方法は当該技術分野で周知である。生体試料には末梢単核血球が含まれる。生体試料はまた、血液試料であってもよく、その中で循環腫瘍細胞（または「ＣＴＣ」）は、Ｂ７−Ｈ４を発現してもよく、且つ検出されてもよい。
【００７３】
Ｂ７−Ｈ４タンパク質の発現レベルをアッセイすることには、直接（例えば、絶対タンパク質レベルを決定するまたは推定することによって）または相対的に（例えば、第２の生体試料のタンパク質レベルと比較することによって）第１の生体試料におけるＢ７−Ｈ４タンパク質のレベルを定性的にまたは定量的に測定することまたは推定することを含むように意図される。第１の生体試料におけるＢ７−Ｈ４ポリペプチドの発現レベルを測定または推定し、標準のＢ７−Ｈ４タンパク質レベルと比較することができ、標準は、罹患していない第２の生体試料から決定され、または罹患していない試料の集団に由来する平均レベルから決定される。当該技術分野で十分に理解されるように、いったん「標準」のＢ７−Ｈ４ポリペプチドレベルが知られると、それを比較のための標準として繰り返し使用することができる。
【００７４】
別の実施形態では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片、または医薬組成物はがんと診断された患者（例えば、ヒト患者）に投与されて、患者にてＴ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、またはＣＤ８＋Ｔの増殖を増やす。別の実施形態では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片、または医薬組成物はがんと診断された患者（例えば、ヒト患者）に投与されて、患者にてインターフェロン−ガンマ（ＩＦＮγ）産生を増加させる。別の実施形態では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片、または医薬組成物はがんと診断された患者（例えば、ヒト患者）に投与されて、患者にてＴ細胞に対するＢ７−Ｈ４の阻害活性を遮断する。別の実施形態では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片、または医薬組成物は、患者にてＢ７−Ｈ４発現がん細胞を枯渇させるために、がんと診断された患者（例えば、ヒト患者）に投与される。
【００７５】
いくつかの実施形態では、本発明は、薬物として使用するための本明細書で提供されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片または医薬組成物に関するものであり、その際、薬物は約０．００５ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ（例えば、約０．００５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、または約２０ｍｇ／ｋｇ）の抗体またはその抗原結合断片の投与のためのものである。いくつかの態様では、本発明は、がんの治療のための方法で使用するための本明細書で提供されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片または医薬組成物に関するものであり、その際、薬物は約０．００５ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ（例えば、約０．００５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、または約２０ｍｇ／ｋｇ）の  抗体またはその抗原結合断片が投与される。いくつかの態様では、本発明は、約０．００５ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ（例えば、約０．００５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇまたは約２０ｍｇ／ｋｇ）の本明細書で提供されている抗体またはその抗原結合断片または医薬組成物を対象に投与することを含む、対象にてがんの治療方法で使用するための、本明細書で提供されている抗体またはその抗原結合断片または医薬組成物に関する。
【００７６】
いくつかの実施形態では、本発明は、薬物として使用するための本明細書で提供されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片または医薬組成物に関するものであり、薬物は約０．００５ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ（例えば、約０．００５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇまたは約２０ｍｇ／ｋｇ）の抗体またはその抗原結合断片の投与のためのものである。いくつかの態様では、本発明は、がんを治療方法で使用するための、本明細書で提供されている抗体またはその抗原結合断片または医薬組成物に関するものであり、約０．００５ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ（例えば、約０．００５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇまたは約２０ｍｇ／ｋｇ）の抗体またはその抗原結合断片が投与される。いくつかの態様では、本発明は、約０．００５ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ（例えば、約０．００５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇまたは約２０ｍｇ／ｋｇ）の本明細書で提供されている抗体またはその抗原結合断片または医薬組成物を対象に投与することを含む、対象にてがんの治療方法に使用するための、本明細書に提供されている抗体またはその抗原結合断片または医薬組成物に関する。
【００７７】
５．３  Ｂ７−Ｈ４抗体及びその抗原結合断片
本明細書で提供されるのは、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合する抗体（例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体のようなモノクローナル抗体）及びその抗原結合断片を対象に投与することを含む、ヒト対象にてがんを治療する方法である。本明細書で提供されている方法で使用することができる例示的なＢ７−Ｈ４抗体及びその抗原結合断片は当該技術分野で既知である。ヒト、カニクイザル、マウス、及びラットのＢ７−Ｈ４のアミノ酸配列は当該技術分野で既知であり、それぞれ配列番号１〜４によって表されるように本明細書でも提供されている。
ヒトＢ７−Ｈ４：
ＭＡＳＬＧＱＩＬＦＷＳＩＩＳＩＩＩＩＬＡＧＡＩＡＬＩＩＧＦＧＩＳＧＲＨＳＩＴＶＴＴＶＡＳＡＧＮＩＧＥＤＧＩＬＳＣＴＦＥＰＤＩＫＬＳＤＩＶＩＱＷＬＫＥＧＶＬＧＬＶＨＥＦＫＥＧＫＤＥＬＳＥＱＤＥＭＦＲＧＲＴＡＶＦＡＤＱＶＩＶＧＮＡＳＬＲＬＫＮＶＱＬＴＤＡＧＴＹＫＣＹＩＩＴＳＫＧＫＧＮＡＮＬＥＹＫＴＧＡＦＳＭＰＥＶＮＶＤＹＮＡＳＳＥＴＬＲＣＥＡＰＲＷＦＰＱＰＴＶＶＷＡＳＱＶＤＱＧＡＮＦＳＥＶＳＮＴＳＦＥＬＮＳＥＮＶＴＭＫＶＶＳＶＬＹＮＶＴＩＮＮＴＹＳＣＭＩＥＮＤＩＡＫＡＴＧＤＩＫＶＴＥＳＥＩＫＲＲＳＨＬＱＬＬＮＳＫＡＳＬＣＶＳＳＦＦＡＩＳＷＡＬＬＰＬＳＰＹＬＭＬＫ（配列番号１）
カニクイザルＢ７−Ｈ４：
ＭＡＳＬＧＱＩＬＦＷＳＩＩＳＩＩＦＩＬＡＧＡＩＡＬＩＩＧＦＧＩＳＧＲＨＳＩＴＶＴＴＶＡＳＡＧＮＩＧＥＤＧＩＬＳＣＴＦＥＰＤＩＫＬＳＤＩＶＩＱＷＬＫＥＧＶＩＧＬＶＨＥＦＫＥＧＫＤＥＬＳＥＱＤＥＭＦＲＧＲＴＡＶＦＡＤＱＶＩＶＧＮＡＳＬＲＬＫＮＶＱＬＴＤＡＧＴＹＫＣＹＩＩＴＳＫＧＫＧＮＡＮＬＥＹＫＴＧＡＦＳＭＰＥＶＮＶＤＹＮＡＳＳＥＴＬＲＣＥＡＰＲＷＦＰＱＰＴＶＶＷＡＳＱＶＤＱＧＡＮＦＳＥＶＳＮＴＳＦＥＬＮＳＥＮＶＴＭＫＶＶＳＶＬＹＮＶＴＩＮＮＴＹＳＣＭＩＥＮＤＩＡＫＡＴＧＤＩＫＶＴＥＳＥＩＫＲＲＳＨＬＱＬＬＮＳＫＡＳＬＣＶＳＳＦＬＡＩＳＷＡＬＬＰＬＡＰＹＬＭＬＫ（配列番号２）
マウスＢ７−Ｈ４
ＭＡＳＬＧＱＩＩＦＷＳＩＩＮＩＩＩＩＬＡＧＡＩＡＬＩＩＧＦＧＩＳＧＫＨＦＩＴＶＴＴＦＴＳＡＧＮＩＧＥＤＧＴＬＳＣＴＦＥＰＤＩＫＬＮＧＩＶＩＱＷＬＫＥＧＩＫＧＬＶＨＥＦＫＥＧＫＤＤＬＳＱＱＨＥＭＦＲＧＲＴＡＶＦＡＤＱＶＶＶＧＮＡＳＬＲＬＫＮＶＱＬＴＤＡＧＴＹＴＣＹＩＲＴＳＫＧＫＧＮＡＮＬＥＹＫＴＧＡＦＳＭＰＥＩＮＶＤＹＮＡＳＳＥＳＬＲＣＥＡＰＲＷＦＰＱＰＴＶＡＷＡＳＱＶＤＱＧＡＮＦＳＥＶＳＮＴＳＦＥＬＮＳＥＮＶＴＭＫＶＶＳＶＬＹＮＶＴＩＮＮＴＹＳＣＭＩＥＮＤＩＡＫＡＴＧＤＩＫＶＴＤＳＥＶＫＲＲＳＱＬＱＬＬＮＳＧＰＳＰＣＶＦＳＳＡＦＶＡＧＷＡＬＬＳＬＳＣＣＬＭＬＲ（配列番号３）
ラットＢ７−Ｈ４
ＭＡＳＬＧＱＩＩＦＷＳＩＩＮＶＩＩＩＬＡＧＡＩＶＬＩＩＧＦＧＩＳＧＫＨＦＩＴＶＴＴＦＴＳＡＧＮＩＧＥＤＧＴＬＳＣＴＦＥＰＤＩＫＬＮＧＩＶＩＱＷＬＫＥＧＩＫＧＬＶＨＥＦＫＥＧＫＤＤＬＳＱＱＨＥＭＦＲＧＲＴＡＶＦＡＤＱＶＶＶＧＮＡＳＬＲＬＫＮＶＱＬＴＤＡＧＴＹＴＣＹＩＨＴＳＫＧＫＧＮＡＮＬＥＹＫＴＧＡＦＳＭＰＥＩＮＶＤＹＮＡＳＳＥＳＬＲＣＥＡＰＲＷＦＰＱＰＴＶＡＷＡＳＱＶＤＱＧＡＮＦＳＥＶＳＮＴＳＦＥＬＮＳＥＮＶＴＭＫＶＶＳＶＬＹＮＶＴＩＮＮＴＹＳＣＭＩＥＮＤＩＡＫＡＴＧＤＩＫＶＴＤＳＥＶＫＲＲＳＱＬＥＬＬＮＳＧＰＳＰＣＶＳＳＶＳＡＡＧＷＡＬＬＳＬＳＣＣＬＭＬＲ（配列番号４）
【００７８】
特定の実施形態では、本明細書に記載されている方法で使用するための抗体またはその抗原結合断片はヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載されている方法で使用するための抗体またはその抗原結合断片はヒト及びカニクイザルのＢ７−Ｈ４に特異的に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載されている方法で使用するための抗体またはその抗原結合断片はヒト、マウス、及びラットのＢ７−Ｈ４に特異的に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載されている方法で使用するための抗体またはその抗原結合断片は、ヒト、カニクイザル、マウス、及びラットのＢ７−Ｈ４に特異的に結合する。
【００７９】
Ｂ７−Ｈ４は、ＩｇＣ細胞外ドメイン（配列番号１のアミノ酸１５３−２４１）及びＩｇＶ細胞外ドメイン（配列番号１のアミノ酸３５−１４６）を含有する。特定の実施形態では、本明細書に記載されている方法で使用するための抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４のＩｇＶドメインに特異的に結合する。したがって、本明細書で提供されるのは、配列番号１のアミノ酸３５〜１４６から成るポリペプチドに特異的に結合する抗体及びその抗原結合断片を投与する方法である。
【００８０】
特定の実施形態では、本明細書に記載されている方法で使用するための抗体またはその抗原結合断片はヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、且つ表１及び２に提供されているようにリストにされている２０５０２抗体の６つのＣＤＲを含む。「２０５０２」は本明細書に記載されている２０５０２抗体を指す。
【表１】
2021513997.tif 000003
【表２】
2021513997.tif 000004
【００８１】
特定の実施形態では、本明細書に記載されている方法で使用するための抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、且つ表３でリストされている２０５０２抗体のＶＨを含む。
【表３】
2021513997.tif 000005
【００８２】
特定の実施形態では、本明細書に記載されている方法で使用するための抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、且つ表４でリストにされている２０５０２のＶＬを含む。
【表４】
2021513997.tif 000006
【００８３】
特定の実施形態では、本明細書に記載されている方法で使用するための抗体またはその抗原結合断片はヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、且つ表３及び４でリストにされている２０５０２抗体のＶＨ及びＶＬを含む。
【００８４】
特定の実施形態では、本明細書に記載されている方法で使用するための抗体またはその抗原結合断片はヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、且つ表５でリストにされている２０５０２抗体のＶＨフレームワーク領域を含む。
【表５】
2021513997.tif 000007
【００８５】
特定の実施形態では、本明細書に記載されている方法で使用するための抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、且つ表６でリストにされている２０５０２抗体のＶＬフレームワーク領域を含む。
【表６】
2021513997.tif 000008
【００８６】
特定の実施形態では、本明細書に記載されている方法で使用するための抗体またはその抗原結合断片はヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、且つ表５及び６でリストにされている２０５０２抗体の４つのＶＨフレームワーク領域及び４つのＶＬフレームワーク領域を含む。
【００８７】
特定の実施形態では、本明細書に記載されている方法で使用するための抗体またはその抗原結合断片はヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、且つ表７でリストにされている２０５０２抗体の重鎖配列を含む。
【表７】
2021513997.tif 000009
【００８８】
特定の実施形態では、本明細書に記載されている方法で使用するための抗体またはその抗原結合断片はヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、且つ表８でリストにされている２０５０２抗体の軽鎖配列を含む。
【表８】
2021513997.tif 000010
【００８９】
特定の実施形態では、本明細書に記載されている方法で使用するための抗体または抗原結合断片はヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、且つ表７及び８でリストにされている２０５０２抗体の重鎖配列及び軽鎖配列を含む。
【００９０】
特定の態様では、本明細書に記載されている方法で使用するための抗体またはその抗原結合断片は、そのＶＬドメインのみ、またはそのＶＨドメインのみによって、またはその３つのＶＬ  ＣＤＲのみ、またはその３つのＶＨ  ＣＤＲのみによって記載される。例えば、ヒト軽鎖または重鎖のライブラリーからそれぞれ相補性の軽鎖または重鎖を同定し、元の抗体の親和性と同じかそれより高い親和性を有するヒト化抗体変異体を生じることによってマウス抗αｖβ３抗体のヒト化を説明している、参照によってその全体が本明細書に組み込まれるＲａｄｅｒ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９８）ＰＮＡＳ９５：８９１０−８９１５を参照のこと。特定のＶＬドメイン（またはＶＨドメイン）を使用し，相補性ＶＨドメインまたは（ＶＬドメイン）についてライブラリーをスクリーニングすることによって特定の抗原を特異的に結合する抗体を作製する方法を説明している、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  Ｔ．，（１９９１），Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８も参照のこと。このスクリーニングは、ＥＬＩＳＡで判定したところ、特定のＶＨドメインについて１４の新しいパートナーと特定のＶＬドメインについて１３の新しいパートナーを生じ、それらは強力なバインダーだった。特定のＶＨドメインを使用し、相補性ＶＬドメインについてライブラリー（例えば、ヒトＶＬライブラリー）をスクリーニングすることによって特定の抗原を特異的に結合する抗体を作製する方法を説明している、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる、Ｋｉｍ，ＳＪ及びＨｏｎｇ，ＨＪ，（２００７），Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４５：５７２−５７７も参照のこと；選択されたＶＬドメインを次に用いて追加の相補性（例えば、ヒト）ＶＨドメインの選択を導き得る。
【００９１】
特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片のＣＤＲは、免疫グロブリンの構造ループの位置を指すＣｈｏｔｈｉａ番号付けスキームに従って決定することができる（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ及びＬｅｓｋ，ＡＭ，（１９８７），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７；Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ，Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９７），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７−９４８；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９２），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７９９−８１７；Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９０），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５（１）：１７５−８２；ならびに米国特許第７，７０９，２２６号を参照のこと）。通常、Ｋａｂａｔ番号付け規則を使用する場合、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｈ１ループは重鎖アミノ酸２６〜３２、３３、または３４に存在し、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｈ２ループは重鎖アミノ酸５２〜５６に存在し、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｈ３ループは重鎖アミノ酸９５〜１０２に存在する一方で、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｌ１ループは軽鎖アミノ酸２４〜３４に存在し、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｌ２ループは軽鎖アミノ酸５０〜５６に存在し、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｌ３ループは軽鎖アミノ酸８９〜９７に存在する。Ｋａｂａｔ番号付け規則を用いて番号付けした場合、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｈ１ループの末端は、ループの長さに応じてＨ３２とＨ３４の間で異なる（これは、Ｋａｂａｔ番号付けスキームがＨ３５ＡとＨ３５Ｂに挿入を置くためであり、３５Ａも３５Ｂも存在しない場合、このループは３２で終わり、３５Ａのみが存在する場合、このループは３３で終わり、３５Ａ及び３５Ｂの双方が存在する場合、このループは３４で終わる）。
【００９２】
特定の態様では、本明細書で提供されるのは、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合し、且つ表３及び４でリストにされた２０５０２抗体のＣｈｏｔｈｉａのＶＨ及びＶＬのＣＤＲを含む抗体及びその抗原結合断片を投与する方法である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合し、且つ１以上のＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合断片を投与する方法であり、その際、Ｃｈｏｔｈｉａ及びＫａｂａｔのＣＤＲは同じアミノ酸配列を有する。特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合し、且つＫａｂａｔのＣＤＲ及びＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲの組み合わせを含む抗体及びその抗原結合断片を投与する方法である。
【００９３】
特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片のＣＤＲは、Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ−Ｐ，（１９９９），Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ，７：１３２−１３６及びＬｅｆｒａｎｃ，Ｍ−Ｐ，ｅｔ  ａｌ．，（１９９９），Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２７：２０９−２１２に記載されているようなＩＭＧＴ番号付け方式に従って決定することができる。ＩＭＧＴ番号付けスキームによれば、ＶＨ−ＣＤＲ１は、２６〜３５位であり、ＶＨ−ＣＤＲ２は５１〜５７位であり、ＶＨ−ＣＤＲ３は９３〜１０２位であり、ＶＬ−ＣＤＲ１は２７〜３２位であり、ＶＬ−ＣＤＲ２は５０〜５２位であり、ＶＬ−ＣＤＲ３は８９〜９７位である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合し、且つ表３及び４でリストにされた、例えば、Ｌｅｆｒａｎｃ，ＭＰ（１９９９）上記及びＬｅｆｒａｎｃ，ＭＰ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９９）上記に記載されているような２０５０２抗体のＩＭＧＴのＶＨ及びＶＬのＣＤＲを含む抗体及びその抗原結合断片を投与する方法である。
【００９４】
特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片のＣＤＲは、ＭａｃＣａｌｌｕｍ，ＲＭ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９６），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２−７４５に従って決定することができる。例えば、Ｍａｒｔｉｎ，Ａ．”Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｄｏｍａｉｎｓ，”ｉｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ及びＤｕｂｅｌ，ｅｄｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ  ３１，ｐｐ．４２２−４３９，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ（２００１）も参照のこと。特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合し、且つＭａｃＣａｌｌｕｍ，ＲＭ．ｅｔ  ａｌ．，の方法によって判定されたように表３及び４でリストにされた２０５０２抗体のＶＨ及びＶＬのＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合断片を投与する方法である。
【００９５】
特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片のＣＤＲは、ＡｂＭ番号付けスキームに従って決定することができ、それは、ＫａｂａｔのＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａの構造ループとの折衷物を表し、Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェア（ＯｘｆｏＲＤ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｉｎｃ．）によって使用されているＡｂＭの超可変領域を参照する。特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合し、且つＡｂＭ番号付けスキームによって決定されたように表３及び４でリストにされた２０５０２抗体のＶＨ及びＶＬのＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合断片を投与する方法である。
【００９６】
特定の態様では、本明細書で提供されるのは、重鎖及び軽鎖を含む抗体を投与する方法である。
【００９７】
軽鎖に関して、具体的な実施形態では、本明細書に記載されている抗体の軽鎖はカッパ軽鎖である。ヒトカッパ軽鎖の定常領域は以下のアミノ酸配列を含むことができる：
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２３）。
【００９８】
ヒトカッパ軽鎖の定常領域は以下のヌクレオチド配列によってコードされ得る。
ＣＧＧＡＣＣＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴ（配列番号２４）。
【００９９】
特定の実施形態では、本明細書に記載されている方法で使用するための、Ｂ７−Ｈ４ポリペプチド（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する抗体は、ＶＬドメインのアミノ酸配列が表４で示される配列を含み、軽鎖の定常領域がヒトカッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０１００】
特定の実施形態では、本明細書に記載されている方法で使用するための、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する抗体は、ＶＨドメインのアミノ酸配列が表３で示されるアミノ酸配列を含み、重鎖の定常領域がヒトガンマ（γ）重鎖定常領域のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【０１０１】
ヒトＩｇＧ１重鎖の定常領域は以下のアミノ酸配列を含むことができる：
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２５）。
【０１０２】
ヒトＩｇＧ１重鎖の定常領域は以下のヌクレオチド配列によってコードされ得る。
ＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＧＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＴＧＡＧＣＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡ．（配列番号２６）
【０１０３】
具体的な実施形態では、本明細書に記載されている方法で使用するための、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する抗体は、本明細書に記載されている任意のＶＨ及びＶＬドメインのアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及びＶＬドメインを含み、その際、定常領域はＩｇＧ（例えば、ヒトＩｇＧ）免疫グロブリン分子の定常領域のアミノ酸配列を含む。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載されている方法で使用するための、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する抗体は、本明細書に記載されている任意のＶＨ及びＶＬドメインのアミノ酸配列を含む及びＶＨドメインのＶＬドメインを含み、その際、定常領域は、ＩｇＧ１（例えば、ヒトＩｇＧ１）免疫グロブリン分子の定常領域のアミノ酸配列を含む。
【０１０４】
フコース含量が低下した抗体は、例えば、ＦｃγＲＩＩＩＡのようなＦｃ受容体に対する親和性が増加すると報告されている。したがって、特定の実施形態では、本明細書に記載されている方法で使用するための抗体またはその抗原結合断片は、フコース含量が低下しているか、またはフコースを欠いている（すなわち、「非フコシル化されている」）。そのような抗体またはその抗原結合断片は、当業者に既知の技法を用いて作り出すことができる。例えば、それらは、フコシル化する能力を欠損するまたは欠如する細胞において発現させることができる。特定の例では、α１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子（ＦＵＴ８）の双方の対立遺伝子をノックアウトした細胞株を用いて、フコース含量が低下した抗体またはその抗原結合断片を作り出すことができる。Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）システム（Ｌｏｎｚａ）は、フコース含量が低下した抗体及びその抗原結合断片を作り出すために使用できるそのようなシステムの例である。あるいは、フコース含量が低下した、またはフコース含量が存在しない抗体またはその抗原結合断片は、例えば、（ｉ）フコシル化を防止するまたは低下させる条件下で細胞を培養すること；（ｉｉ）フコースの翻訳後の除去（例えば、フコシダーゼ酵素による）；（ｉｉｉ）例えば、非グリコシル化糖タンパク質の組換え発現後の、所望の炭水化物の翻訳後付加；または（ｉｖ）フコシル化されていない抗体またはその抗原結合断片を選択するための糖タンパク質の精製によって作り出すことができる。フコース含量を含まないか、またはフコース含量が低下したその抗体を産生させる方法については、例えば、Ｌｏｎｇｍｏｒｅ，ＧＤ．＆  Ｓｃｈａｃｈｔｅｒ，Ｈ．（１９８２），Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．１００：３６５−９２及びＩｍａｉ−Ｎｉｓｈｉｙａ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．，（２００７），ＢＭＣ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７：８４を参照のこと。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、非フコシル化されたＢ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片は、同じアミノ酸配列を有するフコシル化されたＢ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片と比べて試験管内でのＡＤＣＣ活性が増強されている。いくつかの実施形態では、非フコシル化されたＢ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片は、フコシル化Ｂ７−Ｈ４抗体による特異的溶解より少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、または少なくとも７５パーセントポイント高い特異的溶解を引き起こす。特異的溶解は本明細書の実施例２に記載されるように決定されてもよい。
【０１０６】
いくつかの実施形態では、Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片は、同じアミノ酸配列を有するフコシル化されたＢ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片と比べてＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する親和性が増強されている。いくつかの実施形態では、非フコシル化されたＢ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片はフコシル化されたＢ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片よりも少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも７倍、少なくとも１０倍、少なくとも１２倍、少なくとも１５倍、少なくとも１７倍、または少なくとも２０倍高い親和性でＦｃガンマＲＩＩＩＡに結合する。いくつかの実施形態では、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する親和性は表面プラズモン共鳴を用いて決定される。いくつかの実施形態では、ＦｃガンマＲＩＩＩＡは、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）及びＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）から選択される。いくつかの実施形態では、ＦｃガンマＲＩＩＩＡは、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）である。
【０１０７】
いくつかの実施形態では、フコースの存在は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、キャピラリー電気泳動、またはＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析を含む方法によって決定することができる。
【０１０８】
具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）２０５０２のＣＤＲ配列、２０５０２のＶＨ及びＶＬの配列、または２０５０２の重鎖及び軽鎖の配列を含み、（ｉｉ）非フコシル化される。
【０１０９】
具体的な実施形態では、組成物は、（ｉ）２０５０２のＣＤＲ配列、２０５０２のＶＨ及びＶＬ配列、または２０５０２の重鎖及び軽鎖の配列を含み、且つ（ｉｉ）非フコシル化される抗体またはその抗原結合断片を含み、例えば、組成物における抗体の少なくとも９５％が非フコシル化されているか、または組成物にてフコシル化が検出できない。
【０１１０】
操作された糖型は、エフェクター機能を増強することまたは低減することを含むがこれらに限定されない、様々な目的に有用であってもよい。本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片において操作された糖型を生成する方法には、例えば、Ｕｍａｎａ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９９），Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：１７６−１８０；Ｄａｖｉｅｓ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，（２００１），Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．７４：２８８−２９４；Ｓｈｉｅｌｄｓ，ＲＬ．ｅｔ  ａｌ．，（２００２），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３−２６７４０；Ｓｈｉｎｋａｗａ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．，（２００３），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：３４６６−３４７３；Ｎｉｗａ，Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，（２００４），Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１：６２４８−６２５５；Ｐｒｅｓｔａ，ＬＧ．ｅｔ  ａｌ．，（２００２），Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．３０：４８７−４９０；Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，（２００７），Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ，１７：１０４−１１８；米国特許第６，６０２，６８４号；同第６，９４６，２９２号；及び同第７，２１４，７７５号；米国特許公開番号ＵＳ２００７／０２４８６００；２００７／０１７８５５１；２００８／００６００９２；及び２００６／０２５３９２８；国際公開番号ＷＯ００／６１７３９；ＷＯ０１／２９２２４６；ＷＯ０２／３１１１４０；及びＷＯ０２／３０９５４；Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（商標）ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｂｉｏｗａ，Ｉｎｃ．Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）；並びにＧｌｙｃｏＭＡｂ（登録商標）グリコシル化操作技術（Ｇｌｙｃａｒｔ  ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＡＧ，Ｚｕｒｉｃｈ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）にて開示されているものが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Ｆｅｒｒａｒａ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，（２００６），Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．９３：８５１−８６１；国際公開番号ＷＯ０７／０３９８１８；ＷＯ１２／１３０８３１；ＷＯ９９／０５４３４２；ＷＯ０３／０１１８７８；及びＷＯ０４／０６５５４０も参照のこと。
【０１１１】
特定の実施形態では、本明細書に記載されている定常領域の変異または修飾のいずれかを、２つの重鎖定常領域を有する本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片の一方または双方の重鎖定常領域に導入することができる。
【０１１２】
別の特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）重鎖が表１でリストにされている２０５０２抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含み；（ｉｉ）軽鎖が表２でリストにされている２０５０２抗体のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含み、（ｉｉｉ）重鎖がさらに、ヒトＩｇＧ１重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常重鎖ドメインを含み；（ｉｖ）軽鎖がさらに、ヒトカッパ軽鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常軽鎖ドメインを含む、重鎖及び軽鎖を含む。
【０１１３】
別の特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）重鎖が表３でリストにされている２０５０２抗体のＶＨドメインのアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含み；（ｉｉ）軽鎖が表４でリストにされている２０５０２抗体のＶＬドメインのアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含み；（ｉｉｉ）重鎖がさらに、ヒトＩｇＧ１重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常重鎖ドメインを含み；（ｉｖ）軽鎖がさらに、ヒトカッパ軽鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常軽鎖ドメインを含む、重鎖及び軽鎖を含む。
【０１１４】
具体的な実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は、Ｔ細胞チェックポイント遮断活性を示す。具体的な実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は、Ｔ細胞におけるインターフェロン−ガンマ（ＩＦＮγ）の産生を増加させる。具体的な実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は、Ｔ細胞増殖を増加させる。具体的な実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を増加させる。具体的な実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を増加させる。
【０１１５】
具体的な実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を示す。具体的な実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも３００，０００の細胞表面Ｂ７−Ｈ４分子を伴う細胞株（例えば、ＳＫ−ＢＲ−３細胞）に対して抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を示す。具体的な実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも１００，０００の細胞表面Ｂ７−Ｈ４分子を伴う細胞株（例えば、ＨＣＣ１５６９細胞）に対して抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を示す。具体的な実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも５０，０００の細胞表面Ｂ７−Ｈ４分子を伴う細胞株（例えば、ＺＲ−７５−１細胞）において抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を示す。具体的な実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも３０，０００の細胞表面Ｂ７−Ｈ４分子を伴う細胞株（例えば、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞）に対して抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を示す  。具体的な実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも１５，０００の細胞表面Ｂ７−Ｈ４分子を伴う細胞株（例えば、ＨＣＣ１９６４細胞）に対して抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を示す。
【０１１６】
具体的な態様では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載されている抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びｓｃＦｖから成る群から選択され、その際、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖは、本明細書に記載されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片の重鎖可変領域配列及び軽鎖可変領域配列を含む。Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖは、当業者に既知の任意の技法によって生成することができる。特定の実施形態では、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖは生体内での抗体の半減期を延長する部分をさらに含む。その部分は「半減期延長部分」とも呼ばれる。生体内でのＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖの半減期を延長するために当業者に既知の任意の部分を使用することができる。例えば、半減期延長部分は、Ｆｃ領域、ポリマー、アルブミン、またはアルブミン結合タンパク質または化合物を含むことができる。ポリマーには、天然または合成の、任意で置換された直鎖または分岐鎖のポリアルキレン、ポリアルケニレン、ポリオキシアルキレン、多糖類、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアルコール、メトキシポリエチレングリコール、ラクトース、アミロース、デキストラン、グリコーゲン、またはそれらの誘導体を挙げることができる。置換基には、１以上のヒドロキシ基、メチル基、またはメトキシ基を挙げることができる。特定の実施形態では、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖは、半減期延長部分の取付のために１以上のＣ末端アミノ酸の付加によって修飾することができる。特定の実施形態では、半減期延長部分はポリエチレングリコールまたはヒト血清アルブミンである。特定の実施形態では、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖはＦｃ領域に融合される。
【０１１７】
５．４  医薬組成物
本明細書で提供されるのは、生理学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，（１９９０），Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）にて所望の純度を有する抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片を含む組成物を投与する方法である。許容される担体、賦形剤、または安定剤は、採用される投与量及び濃度でレシピエントに無毒である。（例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ｗｉｔｈ  Ｆａｃｔｓ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ：Ｄｒｕｇｆａｃｔｓ  Ｐｌｕｓ，２０ｔｈ  ｅｄ．（２００３）；Ａｎｓｅｌ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ  ｅｄ．，Ｌｉｐｐｅｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００４）；Ｋｉｂｂｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，３ｒｄ  ｅｄ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ（２０００）を参照のこと）。生体内投与に使用される組成物は無菌であることができる。これは、例えば、無菌濾過膜を介した濾過によって容易に達成される。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、医薬組成物を投与する方法が提供され、医薬組成物は、非フコシル化された抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片と薬学的に許容される担体とを含む。具体的な実施形態では、医薬組成物を投与する方法が提供され、医薬組成物は非フコシル化された抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片を含み、例えば、組成物における抗体の少なくとも８０％が非フコシル化される。具体的な実施形態では、医薬組成物を投与する方法が提供され、医薬組成物は非フコシル化された抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片を含み、例えば、組成物における抗体の少なくとも８５％が非フコシル化される。具体的な実施形態では、医薬組成物を投与する方法が提供され、医薬組成物は非フコシル化された抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片を含み、例えば、組成物における抗体の少なくとも９０％が非フコシル化される。具体的な実施形態では、医薬組成物を投与する方法が提供され、医薬組成物は非フコシル化された抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片を含み、例えば、組成物における抗体の少なくとも９５％が非フコシル化される。具体的な実施形態では、医薬組成物を投与する方法が提供され、医薬組成物は非フコシル化された抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片を含み、例えば、組成物における抗体の少なくとも９６％が非フコシル化される。具体的な実施形態では、医薬組成物を投与する方法が提供され、医薬組成物は非フコシル化された抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片を含み、例えば、組成物における抗体の少なくとも９７％が非フコシル化される。具体的な実施形態では、医薬組成物を投与する方法が提供され、医薬組成物は非フコシル化された抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片を含み、例えば、組成物における抗体の少なくとも９８％が非フコシル化される。具体的な実施形態では、医薬組成物を投与する方法が提供され、医薬組成物は非フコシル化された抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片を含み、例えば、組成物における抗体の少なくとも９９％が非フコシル化される。具体的な実施形態では、医薬組成物を投与する方法が提供され、医薬組成物は非フコシル化された抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片を含み、フコースは組成物にて検出できない。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、医薬組成物を投与する方法が提供され、医薬組成物は、（ｉ）（ａ）それぞれ配列番号５〜１０の重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３及び軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３の配列と、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号１２のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域、または（ｃ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片と（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤とを含む。
【０１２０】
本明細書で提供されるのはまた、医薬組成物を投与する方法であり、医薬組成物は、（ｉ）ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、それぞれ配列番号５〜１０の重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３  及び軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３の配列を含む抗体またはその抗原結合断片と、（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤とを含み、その際、組成物における抗体またはその抗原結合断片の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が非フコシル化される。一実施形態では、（ｉ）抗体もしくはその抗原結合断片は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含むか、または（ｉｉ）抗体は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０１２１】
５．５  抗体の生産及びポリヌクレオチド
Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する抗体及びその抗原結合断片は、抗体及びその抗原結合断片の合成について当該技術分野で既知の任意の方法によって、例えば、化学合成によってまたは組換え発現技術によって作り出すことができる。本明細書に記載されている方法は、特に指示されない限り、分子生物学、微生物学、遺伝子分析、組換えＤＮＡ、有機化学、生化学、ＰＣＲ、オリゴヌクレオチドの合成及び修飾、核酸のハイブリッド形成、及び当該技術の範囲内の関連分野における従来の技法を採用する。これらの技法は、例えば、本明細書に引用される参考文献に記載されており、文献で完全に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，（２００１），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；Ａｕｓｕｂｅｌ，ＦＭ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（１９８７  ａｎｄ  ａｎｎｕａｌ  ｕｐｄａｔｅｓ）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（１９８７  ａｎｄ  ａｎｎｕａｌ  ｕｐｄａｔｅｓ）Ｇａｉｔ（ｅｄ．）（１９８４），Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ；Ｅｃｋｓｔｅｉｎ（ｅｄ．）（１９９１），Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ；Ｂｉｒｒｅｎ，Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，（ｅｄｓ．）（１９９９），Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓを参照のこと。
【０１２２】
特定の態様では、本明細書で提供されるのは、抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片またはそのような抗体もしくは断片を含む医薬組成物を投与する方法であり、その際、抗体または断片は、宿主細胞におけるヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドの組換え発現によって生成される。
【０１２３】
特定の態様では、本明細書で提供されている方法に従って投与される抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片は、表９に示されるヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２７）を含むポリヌクレオチドによってコードされる重鎖可変領域を含む。特定の態様では、本明細書で提供されている方法に従って投与される抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片は、表９に示されるヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２７）を含むポリヌクレオチドによってコードされる重鎖可変領域と、ヒトガンマ（γ）重鎖定常領域をコードするヌクレオチド配列とを含む。特定の態様では、本明細書で提供されている方法に従って投与される抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片は、表９に示されるヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２７）を含むポリヌクレオチドによってコードされる重鎖可変領域と、配列番号２６のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる重鎖定常ドメインとを含む。
【表９】
2021513997.tif 000011
【０１２４】
特定の態様では、本明細書で提供されている方法に従って投与される抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片は、表１０に示されるヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２８）を含むポリヌクレオチドによってコードされる軽鎖可変領域を含む。特定の態様では、本明細書で提供されている方法に従って投与される抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片は、表１０に示されるヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２８）を含むポリヌクレオチドによってコードされる軽鎖可変領域と、ヒトラムダ軽鎖定常領域をコードするヌクレオチド配列とを含む。特定の態様では、本明細書で提供されている方法に従って投与される抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片は、表１０に示されるヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２８）を含むポリヌクレオチドによってコードされる軽鎖可変領域と、配列番号２４のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる軽鎖定常ドメインとを含む。
【表１０】
2021513997.tif 000012
【０１２５】
特定の態様では、本明細書で提供されている方法に従って投与される抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片は、表９に示される可変重鎖をコードするヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２７）を含むポリヌクレオチドによってコードされる可変重鎖と、表１０に示される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２８）を含むポリヌクレオチドによってコードされる可変軽鎖とを含む。
【０１２６】
特定の態様では、本明細書で提供されている方法に従って投与される抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片は、（ｉ）表９に示される可変重鎖をコードするヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２７）及びヒトガンマ（γ）重鎖定常領域をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる重鎖と、（ｉｉ）表１０に示される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２８）及びヒトラムダ軽鎖定常領域をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる軽鎖とを含む。
【０１２７】
特定の態様では、本明細書で提供されている方法に従って投与される抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片は、（ｉ）表９に示される可変重鎖をコードするヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２７）及び配列番号２６の重鎖定常ドメインをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる重鎖と、（ｉｉ）表１０に示される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２８）及び配列番号２４の軽鎖定常ドメインをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる軽鎖とを含む。
【０１２８】
特定の態様では、本明細書で提供されている方法に従って投与される抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片は、例えば、コドン／ＲＮＡの最適化、異種シグナル配列による置換、及びｍＲＮＡ不安定要素の排除によって最適化されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片またはそのドメインをコードするポリヌクレオチドによってコードされる。コドンの変化（例えば、遺伝子コードの縮重に起因して同じアミノ酸をコードするコドンの変化）を導入することによって及び／またはｍＲＮＡにおける阻害性領域を排除することによってＢ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片またはそのドメイン（例えば、重鎖、軽鎖、ＶＨドメイン、またはＶＬドメイン）をコードする、組換え発現のために最適化された核酸を生成する方法は、例えば、適切に米国特許第５，９６５，７２６号；同第６，１７４，６６６号；同第６，２９１，６６４号；同第６，４１４，１３２号；及び同第６，７９４，４９８号に記載されている最適化方法を適合させることによって実施することができる。
【０１２９】
ポリヌクレオチドは、例えば、ＲＮＡの形態またはＤＮＡの形態であることができる。ＤＮＡにはｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、及び合成ＤＮＡが挙げられる。ＤＮＡは一本鎖または二本鎖であることができる。一本鎖の場合、ＤＮＡはコード鎖または非コード（アンチセンス）鎖であることができる。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは１以上のイントロンを欠くｃＤＮＡまたはＤＮＡである。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは天然に存在しないポリヌクレオチドである。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは組換えにより産生される。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは単離される。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは実質的に純粋である。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは天然成分から精製される。
【０１３０】
特定の態様では、ベクター（例えば、発現ベクター）は、宿主細胞、好ましくは哺乳動物細胞における組換え発現のために抗Ｂ７−Ｈ４抗体及びその抗原結合断片またはそのドメインをコードするヌクレオチド配列を含む。特定の態様では、細胞、例えば宿主細胞は、本明細書に記載されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片（例えば、ヒト抗体またはヒト化抗体またはその抗原結合断片）を組換え発現するためのそのようなベクターを含む。したがって、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片を作製する方法は、宿主細胞でそのような抗体またはその抗原結合断片を発現させることを含むことができる。
【０１３１】
発現ベクターは、従来の技法によって細胞（例えば、宿主細胞）に移すことができ、次いで得られた細胞を従来の技法によって培養して、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片（例えば、２０５０２の抗体または６つのＣＤＲ、ＶＨ、ＶＬ、ＶＨとＶＬ、重鎖、軽鎖、または重鎖と軽鎖を含む抗原結合断片）またはそのドメイン（例えば、２０５０２のＶＨ、ＶＬ、ＶＨとＶＬ、重鎖、または軽鎖）を産生させることができる。
【０１３２】
特定の実施形態では、本明細書で提供されている方法に従って投与される抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片（例えば、２０５０２のＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合断片）は、Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）のＣＨＯＫ１ＳＶ細胞にて産生される。
【０１３３】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されている方法に従って投与される抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片（例えば、２０５０２のＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合断片）は、機能的なアルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子（ＦＵＴ８）の遺伝子を欠く宿主細胞で産生される。いくつかの実施形態では、宿主細胞はＣＨＯ細胞である。
【０１３４】
具体的な実施形態では、本明細書で提供されている方法に従って投与される抗体またはその抗原結合断片は単離されるまたは精製される。一般に、単離された抗体またはその抗原結合断片は、単離された抗体またはその抗原結合断片とは異なる抗原特異性を持つ他の抗体またはその抗原結合断片を実質的に含まないものである。例えば、特定の実施形態では、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片の調製物は、細胞性物質及び／または化学前駆物質を実質的に含まない。
【０１３５】
下記の実施例は、例示を目的として提供されるのであって、限定を目的とするものではない。
【実施例】
【０１３６】
６．このセクション（すなわち、セクション６）における実施例は、例示を目的として提供されるのであって、限定を目的とするものではない。
【０１３７】
６．１  実施例１：複数の適応症におけるＢ７−Ｈ４発現の蔓延の評価
Ｂ７−Ｈ４マウスモノクローナル抗体Ａ５７．１（ＡＴＣＣカタログ番号ＰＴＡ−５１８０）を用いて、保存試料、全切片の混合物、及び腫瘍マイクロアレイにてＢ７−Ｈ４の存在を検出した。試料を一次抗体で処理し、ＤＡＢ（Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）に連結されたポリマー検出システムを用いて検出した。
【０１３８】
Ｂ７−Ｈ４は、浸潤性乳管癌、トリプルネガティブ乳癌、卵巣癌、非小細胞肺癌、及び子宮内膜癌を含むさまざまながん患者から採取した腫瘍組織の膜と細胞質で容易に検出された。さらに、表１１でリストにされている適応症でも発現頻度が高かった。
【表１１】
2021513997.tif 000013
【０１３９】
Ｂ７−Ｈ４は、乳癌、腎臓癌（例、腎細胞癌）、膀胱癌（例えば、尿路上皮細胞癌）、膵臓癌、甲状腺癌のような他のがんで発現している。例えば、Ｚｈｕ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｓｉａｎ  Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｐｒｅｖ．１４：３０１１−３０１５（２０１１），Ｋｒａｍｂｅｃｋ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ，１０３：１０３９１−１０３９６（２００６），Ｆａｎ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｐａｔｈｏｌ．７：６７６８−６７７５（２０１４），Ｘｕ，Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，１１：１８４１−１８４６（２０１６），及びＬｉｕ，Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，８：２５２７−２５３４（２０１４）を参照のこと。
【０１４０】
６．２  実施例２：非フコシル化された及びフコシル化された２０５０２抗体
グリカン部分のフコース含量が低下したＦｃ領域を持つ抗体は、完全フコシル化抗体と比べてさらに高いＡＤＣＣ活性を示してもよい（Ｎｉｗａ  Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１１（６）：２３２７−３６（２００５））。Ｂ７−Ｈ４抗体は、通常フコシル化抗体を産生するＣＨＯ−ｘ細胞（Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  Ｎ，ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，８７（５）：６１４−２２（２００４））及び非フコシル化抗体を産生するように操作されたＣＨＯ細胞株（ＣＨＯ−ｙ細胞）において生成された（上記）。
【０１４１】
フコシル化された及び非フコシル化された２０５０２抗体は表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって特徴付けられた。手短には、抗ヒトＦａｂ抗体をカルボキシル誘導体化ＳＰＲチップ表面に不動化し、抗Ｂ７−Ｈ４抗体を５ｕｇ／ｍｌで３０秒間、得られた表面に捕捉した。次いで、さまざまな濃度（０ｎＭ、３．７ｎＭ、１１．１ｎＭ、３３．３ｎＭ、１００ｎＭ、及び３００ｎＭ）のＢ７−Ｈ４  ＩｇＶ−ｈｕＩｇＧ１を表面に流し、会合相の間に抗Ｂ７−Ｈ４抗体に結合させた後、解離相の間での緩衝液の洗浄が続いた。
Ｂ７−Ｈ４  ＩｇＶ−ｈｕＩｇＧ１：
ＭＡＳＬＧＱＩＬＦＷＳＩＩＳＩＩＩＩＬＡＧＡＩＡＬＩＩＧＦＧＩＳＧＲＨＳＩＴＶＴＴＶＡＳＡＧＮＩＧＥＤＧＩＬＳＣＴＦＥＰＤＩＫＬＳＤＩＶＩＱＷＬＫＥＧＶＬＧＬＶＨＥＦＫＥＧＫＤＥＬＳＥＱＤＥＭＦＲＧＲＴＡＶＦＡＤＱＶＩＶＧＮＡＳＬＲＬＫＮＶＱＬＴＤＡＧＴＹＫＣＹＩＩＴＳＫＧＫＧＮＡＮＬＥＹＫＴＧＡＦＳＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２９）
【０１４２】
データは１：１結合モデルを用いて適合させ、フコシル化及び非フコシル化された２０５０２は、ヒトＢ７−Ｈ４タンパク質への同様の結合を示した。したがって、結合に対するグリコシル化の影響はない。
【０１４３】
ＦｃγＲＩＩＩａ（Ｖ１５８）に対するフコシル化２０５０２（Ａｂ−Ｆ）及び非フコシル化２０５０２（Ａｂ−Ａ）のＦｃ領域の結合親和性も表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって特徴付けられた。手短には、プロテインＡは、ブロッキング試薬としての１００ｍＭホウ酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ  ８．０）中の１００ｍＭエチレンジアミンによるアミンカップリングキットを用いてデキストランチップに共有結合された。Ａｂ−ＡまたはＡｂ−Ｆは、別々のフローセルにて２つの密度で捕捉され、プロテインＡ誘導体化の流れが参照対照として役立った。ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）をＨＢＳ−Ｐ＋ランニング緩衝液で希釈し、６つの濃度（０ｎＭ、１．３７ｎＭ、１２．３ｎＭ、３７ｎＭ、１１１ｎＭ、３３３ｎＭ、及び１０００ｎＭ）にて２つ組で注入した。Ａｂ−Ａ結合についての会合定数、解離定数、及び親和性は、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００評価ソフトウェア１：１結合モデルを用いて算出した。Ａｂ−Ａ及びＡｂ−Ｆの結合についての親和性定数は、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００評価ソフトウェア定常状態親和性モデルを用いて決定した。非フコシル化Ｂ７−Ｈ４抗体は、フコシル化Ｆｃ（Ａｂ−Ｆ）を持つ同じ抗体よりもＦｃガンマ受容体ＩＩＩＡ（Ｖ１５８）に対して１４０倍高い親和性を有する（表１２）。
【表１２】
2021513997.tif 000014
【０１４４】
フコシル化及び非フコシル化された２０５０２抗体のＴ細胞チェックポイント遮断活性も特徴付けた。これらの実験では、製造元の指示書に基づいてＥａｓｙＳｅｐ（商標）ヒトＴ細胞濃縮キットを用いて、初代ヒトＴ細胞をＰＢＭＣから濃縮した。濃縮されたＴ細胞を２×１０５個の細胞／ｍＬで抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８Ｄｙｎａｂｅａｄｓと共に細胞当たりビーズ１つの比率で３７℃にてインキュベートした。６日後、ビーズを磁気的に除去し、Ｔ細胞を洗浄して１×１０６個の細胞／ｍＬで１０Ｕ／ｍＬのＩＬ−２と共に３７℃でインキュベートした。４日後、Ｔ細胞を洗浄し、Ｂ７−Ｈ４抗体の用量設定の存在下で１×１０６個の細胞／ｍＬで２×１０６個の細胞／ｍＬの濃度での人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）とともに３７℃でインキュベートした。ａＡＰＣは３７℃にて１時間マイトマイシンＣで処理し、次いで、Ｔ細胞共培養物に添加する前に十分に洗浄した。Ｔ細胞、ａＡＰＣ、及びＢ７−Ｈ４抗体の共培養の７２時間後、プレートを遠心分離し、上清を回収し、ＥＬＩＳＡによってＩＦＮγの産生について評価した。ＩＦＮγの産生を抗体濃度に対してプロットし、ＥＣ５０効力は非線形回帰曲線適合（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ）を用いて算出した。
【０１４５】
Ｂ７−Ｈ４抗体は、ＩＦＮγ産生の増加によって測定されたように強力なＴ細胞チェックポイント遮断活性を示した。さらに、非フコシル化抗体とフコシル化抗体の間で効力に明白な差異はなかった（表１３）。
【表１３】
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【０１４６】
追加の実験では、フコシル化及び非フコシル化された２０５０２抗体のＡＤＣＣ活性もＢ７−Ｈ４発現標的細胞株に対して特徴付けた。具体的には、初代ヒトＰＢＭＣ細胞を１×１０６個の細胞／ｍＬにて２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２によって３７℃でサイトカイン活性化した。翌日、細胞を洗浄し、カルセイン−ＡＭで標識したＳＫ−ＢＲ−３標的細胞とともに４０：１のエフェクター：標的の比率でインキュベートした。インキュベートの４時間後、蛍光光度計を用いて標的細胞溶解を定量した。Ｔｒｉｔｏｎ／Ｘ処理した試料を最大溶解対照試料として役立てたのに対して、培地のみで処理した試料はバックグラウンド溶解対照試料として役立てた。パーセント（％）特異的溶解は以下のように算出した：［１−（（試料−培地対照）／（最大溶解−培地対照））］×１００パーセント（％）特異的溶解を抗体濃度に対してプロットし、非線形回帰曲線適合（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ）を用いてＥＣ５０効力を算出した。
【０１４７】
Ｂ７−Ｈ４抗体は、内在性Ｂ７−Ｈ４発現乳房細胞株ＳＫ−ＢＲ−３に対して強力な用量依存性のＡＤＣＣ活性を示した。さらに、非フコシル化抗体はフコシル化抗体と比べて有意に強力なＡＤＣＣ活性を示した（表１４）。
【表１４】
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【０１４８】
６．３  実施例３：ＡＤＣＣ活性の受容体密度との相関
Ｂ７−Ｈ４密度はＳＫ−ＢＲ−３、ＨＣＣ１５６９、ＺＲ−７５−１、ＭＤＡ−ＭＢ−４８、及びＨＣＣ１９６４細胞の表面にて製造元の仕様に従ってＦＡＣＳによって定量した。具体的には、１×１０５個の細胞を１５μｇ／ｍＬのＢ７−Ｈ４抗体と共に氷上で２５分間インキュベートした。並行して、１滴のＱｕａｎｔｕｍ（商標）Ｓｉｍｐｌｙ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ（ＱＳＣ）ミクロスフェア（濃度を増加させた抗マウスＩｇＧ捕捉抗体で予めコーティングされた）も１５ｕｇ／ｍＬのＢ７−Ｈ４抗体と共に氷上で２５分間インキュベートした。インキュベートの後、細胞とＱＳＣミクロスフェアをペレット化して洗浄し、フローサイトメーターで試料を取得した。ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを用いてデータを分析した。平均蛍光強度（ＭＦＩ）を算出し、ＱｕｉｃｋＣａｌ（登録商標）スプレッドシートに入力した。各ビーズの蛍光チャネル値を、事前に割り当てられた抗体結合容量（ＡＢＣ）値に関連付ける回帰が自動的に算出されるであろう。標識した細胞のＭＦＩ値もテンプレートに追加されると、ＡＢＣ値が割り当てられた。
【０１４９】
Ｂ７−Ｈ４抗体は、Ｂ７−Ｈ４の細胞表面密度のレベルが異なるＢ７−Ｈ４発現標的細胞株に対するＡＤＣＣ活性について評価した。具体的には、１×１０４のＳＫ−ＢＲ−３、ＨＣＣ１５６９、ＺＲ−７５−１、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８、またはＨＣＣ１９６４標的細胞は、Ｂ７−Ｈ４抗体の用量設定と４℃にて共インキュベートした。２５分後、ＰｒｏｍｅｇａのＪｕｒｋａｔ−ｈｕＣＤ１６レポーター細胞の使い捨てバイアルを解凍し、７．５×１０４個の細胞を標的細胞／Ｂ７−Ｈ４  抗体混合物に加え、３７℃でインキュベートした。２４時間後、試料を室温（ＲＴ）にして、Ｂｉｏ−Ｇｌｏ緩衝液と共にインキュベートした。ＥｎＶｉｓｉｏｎマルチラベルリーダーで基質と発光を定量化した。データを発光として抗体濃度に対してプロットし、非線形回帰曲線適合（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ）を用いてＥＣ５０効力を算出した。
【０１５０】
Ｂ７−Ｈ４抗体のＡＤＣＣ活性はＢ７−Ｈ４の細胞表面密度に依存し：細胞表面分子の数が低下するにつれて、最大ＡＤＣＣ活性の量も低下した。さらに、非フコシル化抗体は、特にＢ７−Ｈ４の細胞表面密度のレベルが低い標的細胞に対して、フコシル化抗体と比べて改善されたＡＤＣＣ活性を示した（図１）。
【０１５１】
６．４  実施例４：生体内の抗腫瘍有効性
ヒトの腫瘍とは異なり、マウスモデルは高レベルのＢ７−Ｈ４タンパク質を内在性には発現しない。マウスにて非フコシル化された２０５０２を調べるために、Ｂ７−Ｈ４タンパク質を発現するように操作されたマウス腫瘍細胞株を用いた同系マウスがんモデルを使用した。７週齢のメスＢＡＬＢ／ｃマウスはＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ、ＣＡ）から購入し、試験開始前の最大３週間、順化した。マウス結腸直腸癌細胞株ＣＴ２６を、マウスＢ７−Ｈ４の細胞外ドメインとマウスＢ７Ｈ３の膜貫通ドメインからなるキメラタンパク質を発現するように操作した。これらの腫瘍細胞を１．０×１０６個の細胞／２００μＬ／マウスでマウスの右側腹部に皮下移植した。播種に先立って、細胞は１０％熱非働化ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、２ｍＭのＬ−グルタミンで補完したＲＰＭＩ１６４０培地にて３継代を超えずに培養した。細胞は、５％ＣＯ２の加湿された雰囲気で３７℃にて増殖させた。８０〜８５％の集密度に達したら、細胞を回収し、無血清ＲＰＭＩ１６４０とマトリゲルの１：１混合液にミリリットルあたり５×１０６個の細胞で再浮遊させた。
【０１５２】
腫瘍の成長について細胞移植後、マウスを週に２回モニターした。腫瘍の測定については、キャリパーを用いて各腫瘍の長さと幅を測定し、体積を式：腫瘍体積（ｍｍ３）＝（幅（ｍｍ）×長さ（ｍｍ２）／２に従って算出した。治療開始日に、すべての腫瘍を測定し、外れ値を除外し、マウスを無作為に処理群に割り当てた。抗Ｂ７−Ｈ４処理のために、非フコシル化された２０５０２抗体を投与した。対照として、マウスにポリクローナルヒトＩｇＧ（Ｂｉｏ  Ｘ  Ｃｅｌｌ、ＢＥ００９２）またはマウスＩｇＧ２ａ（Ｂｉｏ  Ｘ  Ｃｅｌｌ、ＢＥ００８５）を投与した。抗体は、播種後４日目または５日目に開始して週２回、静脈内（ｉ．ｖ．）注射によって４回投与された。
【０１５３】
腫瘍体積が動物の体重の１０％、または約２０００ｍｍ３を超えるまで、腫瘍を少なくとも週に２回測定し続けた。腫瘍サイズの変化は、動物にＣＴ２６細胞を播種した日と比べて個々の腫瘍をグラフ化することによって示す。Ｐ値は、試験のそれぞれの日に算出された腫瘍体積の対応のない両側ｔ検定分析を用いて計算した。
【０１５４】
Ｂ７−Ｈ４タンパク質を発現している操作されたＣＴ２６モデルは、１〜３０ｍｇ／ｋｇの用量範囲での５つの用量レベルにて有意な用量依存性腫瘍増殖抑制を示した（図２）。個々の動物における最も一般的な影響は腫瘍の増殖抑制だった。しかしながら、非フコシル化された２０５０２処理は、３０ｍｇ／ｋｇ群にて１５匹のうち７匹のマウスで、２０ｍｇ／ｋｇ群にて１５匹のうち６匹のマウスで、１０ｍｇ／ｋｇ群にて１５匹のうち５匹マウスで完全な腫瘍退縮を生じた。（図２）。３ｍｇ／ｋｇ以下で投与された非フコシル化された２０５０２は陰性対照処理群（ヒトＩｇＧ）と比べて最低限の抗腫瘍活性を引き出した。
【０１５５】
６．５  実施例５：非臨床での薬物動態
マウス、ラット、及びカニクイザルにおける単回の及び／または反復の毎週の静脈内（ＩＶ）投与に続いて非フコシル化された２０５０２の薬物動態（ＰＫ）及び毒物動態（ＴＫ）を評価した。観察されたＰＫ特性は試験すべてで一貫していた。すべての種で、非フコシル化された２０５０２は、漸増用量への曝露において線形ＰＫ及び用量に比例した増加（血清濃度−時間の曲線下面積［ＡＵＣ］）を示した。最初の投与と最後の投与の間で２０５０２を毎週４回投与した後、毎週の曝露（ＡＵＣ０〜７日）で約２倍の増加があった。しかしながら、定常状態は達成されなかった。血清の非フコシル化２０５０２濃度−時間プロファイルでは、実質的な性差は明らかではなかった。カニクイザル（２つの異なる試験にまたがる）では、回復期の動物から推定される半減期は約８．８日から１２日の範囲で、用量レベルは１〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲だった。４０ｍｇ／ｋｇでの単回ＩＶ点滴投与後のラットの推定半減期はおよそ１３．２日だった。動物における非フコシル化された２０５０２のＰＫ特性は、３週ごとに１回（Ｑ３Ｗ）の投薬計画でのヒトにおけるＩＶ点滴を支持する。
【０１５６】
６．６  実施例６：毒物学
非フコシル化された２０５０２による毒性学試験をラット及びカニクイザルで実施した。試験には、ラットにおける単回用量薬物動態（ＰＫ）／忍容性の予備試験、カニクイザルにおける反復用量毒性の予備試験、及びラットとカニクイザルにおける治験薬（ＩＮＤ）を有効にする適正試験所規範（ＧＬＰ）反復用量毒性試験、と同様にヒト、ラット及びカニクイザルの組織とのＧＬＰ組織交差性試験が含まれた。
【０１５７】
ラットにおける単回用量忍容性予備試験では、動物は４０ｍｇ／ｋｇまでの用量を３０分の静脈内（ＩＶ）注入として受け取った。非フコシル化２０５０２は、臨床観察、体重、摂食量、臨床病理学（血清化学または血液学）評価、肉眼観察、臓器重量、または組織病理学評価に影響を有さなかった。
【０１５８】
反復投与毒性予備試験では、カニクイザルは最大１００ｍｇ／ｋｇの非フコシル化された２０５０２の毎週のＩＶ投与を３０分間のＩＶ注入として４回受けた。用量はすべてカニクイザルによって十分に忍容された。臨床観察、体重、臨床病理学、剖検、臓器重量、または組織病理学パラメーターの評価の間にて、非フコシル化された２０５０２の投与に起因する、論文に関連する予定外の死亡または変化はなかった。
【０１５９】
反復投与ＧＬＰ毒性試験では、非フコシル化された２０５０２を、１、１０、及び１００ｍｇ／ｋｇ／投与の用量レベルでＩＶによってラット及びカニクイザル双方に毎週投与で４回投与した。最終投与後の６週間の回復期間中に毒性の可逆性を評価した。評価用のパラメーターには、眼科検査、臨床観察、体温、体重、摂食量、血液学、凝固、臨床化学、尿検査、臓器重量、肉眼的及び顕微鏡的評価が含まれた。カニクイザルの試験では、潜在的な心臓毒性を評価するために心電図（ＥＣＧ）も評価した。
【０１６０】
ＧＬＰラット試験の評価の間に、非フコシル化２０５０２は一般的に忍容性が高く、非フコシル化２０５０２に起因する毒性作用はなかった。Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットにおける無毒性量（ＮＯＡＥＬ）は１００ｍｇ／ｋｇ／投与であると見なされた。
【０１６１】
ＧＬＰカニクイザル試験では、非フコシル化２０５０２は一般的に忍容性が高く、評価されたパラメーターのいずれかで観察された非フコシル化２０５０２に起因する有害事象（ＡＥ）はなかった。試験中、高用量群の投与フェーズの終了時に高い下痢の発生率が観察された。中用量及び高用量での影響を受けた動物の発生率が高いため、及び投与期間の後期に発症するため、非フコシル化された２０５０２暴露との関連性があり得る。下痢の動物を含む、非フコシル化された２０５０２で処理された動物の腸管に微視的な変化はなかった；したがって、この所見は有害ではないと見なされたが、おそらく被験物質に関連した。試験では死亡例が１件あった。中用量回復群の動物１匹が、最終投与の１４日後の試験３５日目に死亡しているのが見いだされた。臨床観察、肉眼的及び顕微鏡的評価は、腸捻転の診断と一致した。腸捻転はカニクイザルで時々発生し、これはこの動物では自然発生的な状態であると考えられ、被験物質に関連するものではなかった。カニクイザルにおけるＮＯＡＥＬは１００ｍｇ／ｋｇ／投与であると見なされた。
【０１６２】
生体内毒性試験に加えて、ＧＬＰ準拠の組織交差反応性試験が行われ、非フコシル化された２０５０２のラット、カニクイザル、及びヒトの３６組織のパネルとの結合を比較した。結果は、非フコシル化された２０５０２の結合パターンが３つの種間で類似しており、乳腺上皮に限定されていることを示した。
【０１６３】
したがって、非フコシル化された２０５０２は、カニクイザル及びラットにて十分に忍容された。双方の種におけるＮＯＡＥＬは、毎週のＩＶ投与４回として与えられた場合に調べた最高用量である１００ｍｇ／ｋｇ／投与であると見なされた。
【０１６４】
６．７  実施例７：フェーズ１ａの非フコシル化された２０５０２の用量漸増及び用量探索
フェーズ１ａ非盲検多施設試験は、非フコシル化２０５０２を用いて、進行性固形腫瘍の患者最大３４名で実施される。
【０１６５】
（Ａ）試験設計
フェーズ１ａには、用量漸増フェーズ及び用量探索フェーズが含まれる。フェーズ１ａの試験スキームを図３に示す。用量漸増フェーズと用量探索フェーズの双方では、非フコシル化２０５０２は、各２１日サイクルの１日目に３週ごと（Ｑ３Ｗ）の６０分間の静脈内（ＩＶ）点滴として投与される。非フコシル化された２０５０２の用量は、サイクル１の１日目の体重に基づく。サイクル１の後、患者の体重がサイクル１の１日目から＞１０％変化した場合にのみ、点滴来診のたびに用量が再計算される。
【０１６６】
フェーズ１ａ用量漸増には、初期の加速用量設定設計とそれに続く最大耐量（ＭＴＤ）まで１ｍｇ／ｋｇ以上の用量レベルでの標準３＋３の用量漸増設計が含まれ、及び／またはフェーズ１ｂの推奨用量（ＲＤ）が決定される。最大１６〜４８人の患者が用量漸増に参加する。０．０１（または０．００５）から２０ｍｇ／ｋｇまでの用量が表１５に概説されているコホート当たりに投与され、患者の２回目の投与は最初の投与のち少なくとも２１日でなければならない。
【表１５】
2021513997.tif 000017
【０１６７】
フェーズ１ａの用量漸増の間、用量制限毒性（ＤＬＴ）の評価は点滴開始時の治療の初日に始まり、２１日間続く。ＤＬＴは属性に関係なく、次のいずれかとして定義される（根本的な疾患または無関係な原因に明瞭に起因する事象を除いて）：（ｉ）治療の最初の２１日間で発生するグレード３以上の非血液毒性（グレード３の悪心、嘔吐及び下痢以外）、（ｉｉ）治療の最初の２１日間に発生する、最適な支持療法にもかかわらず、少なくとも７２時間持続するグレード３の吐き気、嘔吐及び下痢、（ｉｉｉ）発熱性好中球減少症及び／または絶対好中球数（ＡＮＣ）が１Ｌあたり１．０×１０９未満である記録されている感染、７日超えて続くグレード４の好中球減少症、グレード４の血小板減少症（Ｌあたり２５．０×１０９未満）、または治療の最初の２１日以内に出血を伴うグレード３の血小板減少症（５０．０〜２５．０×１０９／Ｌ未満）、（ｉｖ）がんとの肝臓の関与とは関係なく正常の上限（ＵＬＮ）の３倍を超えるアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ／アラニントランスアミナーゼ（ＡＳＴ／ＡＬＴ）、及び同時に起きるＵＬＮの２倍を超える総ビリルビン、（ｖ）７２時間以内に解決しない臨床的有意性ではない他のグレード３の臨床検査値、または（ｖｉ）臨床的続発症に関係なく、グレード４の臨床検査値。
【０１６８】
各用量レベルで少なくとも１人の患者を登録する加速用量設定設計は、用量レベル０．０１、０．０３、０．１及び０．３ｍｇ／ｋｇについて実施される。次の用量レベルへの用量漸増は、少なくとも１人の患者が２１日間の評価間隔を完了した後に進行する。２１日間の評価間隔中に１人の患者がＤＬＴを経験するか、または少なくとも２人の患者が中程度のＡＥ（任意の用量レベル）を経験する場合、追加の患者が現在の用量レベルで登録され、標準３＋３用量漸増基準はそのコホート及びその後のすべての投薬コホートに適用される。中程度のＡＥは、属性に関係なく、グレード２のＡＥ以上として定義される（根本的な疾患や無関係の原因に明らかに起因する事象を除く）。グレード２の臨床検査値は、臨床的続発症を伴わない限り、この目的では中程度のＡＥとは見なされない。
【０１６９】
１ｍｇ／ｋｇ未満の用量レベルで登録された患者では、患者内の用量漸増が許可される：（ｉ）患者はＤＬＴを経験しなかった；（ｉｉ）他のすべてのＡＥは用量漸増前にグレード１以下に回復している；（ｉｉｉ）患者は、２１日ごとに最大１用量レベルまでしか用量漸増しなくてもよい。（ｉｖ）以下に記載されているような標準３＋３の用量漸増設計従って用量レベルがクリアされていない限り、患者は１ｍｇ／ｋｇを超えて用量漸増することができない。
【０１７０】
以下の表１６Ａに概説されているアルゴリズムは、すべての標準３＋３用量漸増に使用される。
【表１６Ａ】
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【０１７１】
フェーズ１ａ用の非フコシル化２０５０２のＭＴＤ及び／またはＲＤは、全体的な安全性、忍容性、薬力学、薬物動態、及び予備的有効性の評価に基づいて特定される。ＲＤは、ＤＬＴ評価期間中及びそれ以降に観察された毒性、ならびにＤＬＴ基準を満たしていない毒性による投薬の減少及び中止を考慮に入れるであろう。したがって、ＲＤは特定されたＭＴＤと同じであってもよいし、または同じでなくてもよい。たとえば、ＭＴＤに達していない場合、またはフェーズ１ａの後続の治療サイクルからのデータが安全性プロファイルに関する追加の洞察を提供する場合、ＲＤはＭＴＤより高くはないが、異なる用量であってもよい。ＭＴＤは、わずか１／６の患者がＤＬＴを報告した用量レベルであろう。ＲＤもわずか１／６の患者がＤＬＴを報告した用量であろうが、それはＭＴＤよりも低くてもよい。いくつかの実施形態では、ＭＴＤはわずか１／３、１／４、または１／５の患者がＤＬＴを報告した用量レベルであろう。ＲＤもわずか１／３、１／４、または１／５の患者がＤＬＴを報告した用量であろうが、それはＭＴＤよりも低くてもよい。
【０１７２】
フェーズ１ａの用量探索コホートは３人を超える（すべての用量レベルで最大１０人の追加患者）患者を登録する。保存腫瘍組織の事前スクリーニング（または保存組織が利用できない場合は新鮮な生検）を用いて、フェーズ１ａの用量探索の間にすべての患者について免疫組織化学（ＩＨＣ）によってＢ７−Ｈ４の発現レベルを調べる。保存腫瘍組織（または新鮮な生検）は、本明細書のようにバイオマーカー分析に使用することができる。加えて、新鮮な生検は拡大された薬力学解析のためにスクリーニング中及び治療後に使用される。
【０１７３】
一実施形態では、フェーズ１ａの単剤療法の用量探索について提案された用量コホートを表１６Ｂに示す。
【表１６Ｂ】
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【０１７４】
一実施形態では、推奨用量は２０ｍｇ／ｋｇである。
【０１７５】
（Ｂ）対象
合計１２〜２４人の患者が以下の選択基準及び除外基準に基づいて特定される。
【０１７６】
フェーズ１ａの患者は以下の選択基準のすべてを満たす。
原発性中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍を除く組織学的に確認された固形腫瘍；
切除不能、局所進行性、または転移性である疾患；
患者の状態に臨床的利益を提供することが知られている既存の治療法に対して不応性または不耐性；及び
ＲＥＣＩＳＴ  ｖ１．１（固形腫瘍の反応評価基準１．１）に基づく、ベースラインでの少なくとも１つの測定可能な病変；以前に照射された領域、または他の局所療法を受けた領域にある腫瘍部位は、病変の進行が証明されていない限り、測定可能とは見なされない。
【０１７７】
除外基準：フェーズ１ａの患者は、以前の生物製剤に対する抗薬物抗体（ＡＤＡ）、重度のアレルギー反応、アナフィラキシー反応、またはその他の輸液関連反応の病歴を有さず、且つ非フコシル化２０５０２製剤における任意の成分に対する既知の過敏症を有さない。
【０１７８】
（Ｃ）結果
グレード３及びグレード４の有害事象の発生率と、用量制限毒性として定義された臨床検査異常を評価して、非フコシル化された２０５０２が進行性固形腫瘍の患者に安全で且つ忍容性があることを示す。有害事象、臨床検査異常及びＥＣＧ異常の発生率を評価して、非フコシル化２０５０２の最大耐量及び／または推奨用量を決定する。
【０１７９】
進行性固形腫瘍患者における薬物動態パラメーター（ＡＵＣ（血清濃度時間曲線下面積）、Ｃｍａｘ（最大血清濃度）、Ｃｍｉｎ（最小血清濃度）、クリアランス（ＣＬ）、ｔ１／２（終末相半減期）、Ｖｓｓ（定常状態での分布量）、及びＣトラフ（投与間隔終了時のトラフ血清濃度）を、非コンパートメント分析を用いて血清非フコシル化２０５０２濃度−時間のデータから決定する。血清非フコシル化２０５０２濃度は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）法を用いて決定する。非フコシル化２０５０２曝露に対する進行性固形腫瘍患者の免疫原性（すなわち、非フコシル化２０５０２に対する抗薬物抗体免疫応答）の影響は、すべての患者からの抗非フコシル化２０５０２抗体全体を測定することによって評価する。
【０１８０】
進行性固形腫瘍患者における非フコシル化２０５０２の臨床的利益も実証される。腫瘍の評価には、臨床検査と画像診断（例えば、ＲＥＣＩＳＴ  ｖ１．１ごとに適切な切片厚のコンピューター断層撮影（ＣＴ）スキャンまたは磁気共鳴画像解析（ＭＲＩ））が含まれる。腫瘍はスクリーニング時、最初の１２ヵ月は９週ごと、その後１２週ごと（＋／−２週間）に評価して、腫瘍増殖の阻害及び腫瘍退縮（例えば、完全な腫瘍退縮）を示す。
【０１８１】
全体的な奏効率（ＯＲＲ）、奏効期間（ＤＯＲ）、及び無増悪生存期間（ＰＦＳ）も有効性の測定値として決定される。ＯＲＲは、応答が確認された患者の総数（ＲＥＣＩＳＴ  ｖ．１．１ごとの完全応答（ＣＲ）または部分応答（ＰＲ）のいずれか）を、応答について評価可能な患者の総数で割ったものとして定義される。ＤＯＲは、応答の開始（ＣＲまたはＰＲ）が確認されてから、進行性の疾患または何らかの原因による死亡が最初に観察されるまでの時間として定義される。ＰＦＳは、患者の最初の投与から、進行性の疾患または何らかの原因による死亡が最初に観察されるまでの時間として定義される。
【０１８２】
薬力学的バイオマーカーも観察される。治療前及び治療中の腫瘍生検における免疫細胞浸潤の分析を行うことができる。例えば、腫瘍免疫浸潤のマーカー（ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、ＣＤ４、ＣＤ８、及び／または他の選択された免疫バイオマーカーを含むが、これらに限定されない）の変化はＩＨＣ及び／またはリボ核酸（ＲＮＡ）分析によって評価される。加えて、サイトカイン（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＴＮＦ、及び／またはインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ））のレベルの変化は、多重分析によって評価される。
【０１８３】
患者は用量レベルの範囲にわたって非フコシル化２０５０２を受け取った。Ｂ７−Ｈ４について未選択であり進行性固形腫瘍がある且つ３つの前治療の中央値を持つ２４人の患者を非フコシル化２０５０２抗体で治療した。用量漸増コホートでは、１８人の患者が加速用量設定とその後の３＋３設計にて３週ごとに（Ｑ３Ｗ）０．０１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇの用量レベルを受け取った。患者は、３（範囲＝１〜１１）用量の中央値の非フコシル化された２０５０２で治療された。ほとんどが３ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝８または１０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝６）の非フコシル化２０５０２を受け取った。用量漸増コホートの患者のうち７人は、Ｂ７−Ｈ４陽性と遡及的に同定された。別の用量探索コホートでは、６人のＢ７−Ｈ４陽性患者（合計２４人の患者のうち）が強制的な治療前及び治療中の生検と共に３ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇのＱ３Ｗで治療された。２４人の患者で用量減量の必要はなく、用量制限毒性または治療関連の重篤な有害事象（ＳＡＥ）は観察されなかった。したがって、非フコシル化された２０５０２は好ましい安全性プロファイルを示し、データは２０ｍｇ／ｋｇが推奨用量として選択され得ることを示唆している。
【０１８４】
６．８  実施例８：フェーズ１ｂ非フコシル化２０５０２用量拡大
フェーズ１ｂの非盲検多施設試験は、免疫組織化学（ＩＨＣ）によって決定されるＢ７−Ｈ４発現レベルを伴う特定の固形腫瘍型の２１０人までの患者にて非フコシル化された２０５０２を用いて実施される。特定の固形腫瘍型は、Ｂ７−Ｈ４発現の高い蔓延、及び切除不能や転移性の状況での効果的な治療法の限定的な利用性に基づいて特定された。
【０１８５】
（Ａ）試験設計
フェーズ１ｂは試験の用量拡大部分である。フェーズ１ｂの試験スキームを図３に提供する。フェーズ１ｂ用量拡大への登録はフェーズ１ａにおける最大耐量（ＭＴＤ）及び／または推奨用量（ＲＤ）の特定後に開始する。
【０１８６】
フェーズ１ｂには表１７に示すように、それぞれ最大３０人の患者の腫瘍特異的コホートが含まれる。フェーズ１ｂ試験は、表１７に示すよりも多いまたは少ないコホートを有してもよいが、７コホートを超えない。
【表１７】
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【０１８７】
保存腫瘍組織（または保存組織が利用できない場合は新鮮な生検）を用いて、すべての患者の事前スクリーニングとバイオマーカー分析のために免疫組織化学（ＩＨＣ）によってＢ７−Ｈ４発現レベルを調べる。加えて、スクリーニング中及び治療後に採取された新鮮な生検は、患者のサブセット（３０人の患者コホート当たり１０人の患者）からの拡大された薬力学的分析に使用される。
【０１８８】
非フコシル化された２０５０２は、各２１日サイクルの１日目に３週ごと（Ｑ３Ｗ）に６０分間の静脈内（ＩＶ）投与として投与される。非フコシル化された２０５０２の用量は、サイクル１の１日目の体重に基づく。サイクル１の後、患者の体重がサイクル１の１日目から＞１０％変化した場合にのみ、点滴来診のたびに用量が再計算されるであろう。
【０１８９】
（Ｂ）対象
乳癌、卵巣癌、子宮内膜癌、または尿路上皮癌の患者が最大３０人参加するであろう。それぞれ最大３０人の患者の追加の腫瘍型固有のコホートも参加してもよい。
【０１９０】
フェーズ１ｂの患者は以下の選択基準のすべてを満たす。
フェーズ１ａのすべての選択基準（原発性中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍を除く、組織学的に確認された固形腫瘍）；
免疫組織化学（ＩＨＣ）アッセイによって評価されるような、保存または新鮮な腫瘍試料におけるＢ７−Ｈ４発現が陽性；
コホート１ｂ１について−乳癌
ｏ    組織学的または細胞学的に確認された転移性乳癌；
ｏ    アントラサイクリン及びタキサンの化学療法以降のまたは忍容性が認められない進行性疾患；
ｏ    転移性の環境で少なくとも１回の全身性化学療法におけるまたはそれ以降の進行性疾患；
ｏ    エストロゲン受容体（ＥＲ）及び／またはプロゲステロン受容体（ＰＲ）陽性の疾患（ＥＲ及び／またはＰＲ＞１％として定義）を有する患者はホルモン不応性（３回の連続した内分泌療法の後に進行した）であるか、または症状のある内臓疾患を有する必要がある；ならびに
ｏ    患者はＨＥＲ２陰性疾患を有する；
コホート１ｂ１におけるトリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）患者について：
ｏ    組織学的または細胞学的に確認された転移性ＴＮＢＣ；及び
ｏ    少なくとも１つは転移性の環境で投与されている全身化学療法の少なくとも２つ以前の選択；
コホート１ｂ１におけるホルモン受容体陽性（ＨＲ＋）の乳癌患者について：
ｏ    組織学的または細胞学的に確認された転移性ＨＲ＋乳癌；
ｏ    患者は以前に少なくとも２つの選択でホルモン療法を受けたことがある；及び
ｏ    患者は少なくとも１つの以前の選択で全身化学療法を受けたことがある（アジュバントまたは転移の設定で）
コホート１ｂ２について−卵巣癌
ｏ    臨床的利益をもたらすことが知られている既存の治療法に不応性である再発性の上皮性卵巣癌、原発性腹膜癌、または卵管癌の組織学的または細胞学的に確認された診断；及び
ｏ    少なくとも１つのプラチナ含有投薬計画を含む少なくとも２つの以前の投薬計画の治療におけるもしくはそれ以降の、または追加の化学療法を忍容できない進行性疾患；
コホート１ｂ３について−子宮内膜癌
ｏ    治癒的治療または確立された治療に不応性である組織学的または細胞学的に確認された再発性または持続性の子宮内膜癌；及び
ｏ    全身性化学療法の少なくとも１つの以前の投薬計画におけるもしくはそれ以降の、または全身性化学療法を忍容できない進行性疾患；
コホート１ｂ４について−尿路上皮癌
ｏ    組織学的または細胞学的に確認された尿路上皮癌；及び
ｏ    プラチナ含有投薬計画及びＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１指向性薬剤におけるもしくはそれ以降の、またはそれを忍容できない進行性疾患。
【０１９１】
フェーズ１ｂの患者は、以前の生物製剤に対する抗薬物抗体（ＡＤＡ）、重度のアレルギー、アナフィラキシー、またはその他の輸液関連反応の病歴を有さず、且つ非フコシル化された２０５０２製剤の成分に対する既知の過敏症を有さない。
【０１９２】
（Ｃ）結果
有害事象、臨床検査異常及びＥＣＧ異常の発生率を評価して、Ｂ７−Ｈ４陽性進行性固形腫瘍の患者における非フコシル化２０５０２の安全性と忍容性を実証する。
【０１９３】
Ｂ７−Ｈ４陽性進行固形腫瘍患者における薬物動態パラメーター（ＡＵＣ、Ｃｍａｘ、Ｃｍｉｎ、ＣＬ、ｔ１／２、Ｖｓｓ（定常状態での分布量））を、非コンパートメント分析を用いて血清非フコシル化２０５０２濃度−時間のデータから決定する。血清非フコシル化２０５０２濃度は酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）法を用いて決定する。
【０１９４】
薬力学的バイオマーカーも観察される。例えば、腫瘍免疫浸潤のマーカー（ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、ＣＤ４、ＣＤ８、及び／または他の選択された免疫バイオマーカーを含むが、これらに限定されない）の変化はＩＨＣ及び／またはリボ核酸（ＲＮＡ）分析によって評価される。加えて、サイトカイン（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＴＮＦ、及び／またはインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ））のレベルの変化は、多重分析によって評価される。
【０１９５】
非フコシル化２０５０２曝露に対するＢ７−Ｈ４陽性進行性固形腫瘍患者の免疫原性（すなわち、非フコシル化２０５０２に対する抗薬物抗体免疫応答）の影響は、すべての患者からの総抗非フコシル化２０５０２抗体を測定することによって評価する。
【０１９６】
非フコシル化２０５０２の臨床的利益も実証される。腫瘍の評価には、臨床検査と画像処理（例えば、ＲＥＣＩＳＴ  ｖ１．１ごとに適切な切片厚のコンピューター断層撮影（ＣＴ）スキャンまたは磁気共鳴画像解析（ＭＲＩ））が含まれる。腫瘍はスクリーニング時、最初の１２か月は９週ごと、その後１２週ごと（＋／−２週）に評価され、腫瘍増殖の阻害及び腫瘍退縮（例えば、完全な腫瘍退縮）を示す。
【０１９７】
患者の最初の投与から何らかの原因による死亡までの時間として定義される全生存期間も有効性の尺度として判定される。全体的な生存率は、Ｂ７−Ｈ４陽性進行性固形腫瘍の患者における非フコシル化された２０５０２の臨床的利益を実証している。
【０１９８】
本発明は、本明細書に記載されている特定の実施形態によって範囲を限定されるものではない。実際、記載されているものに加えて、本発明の様々な修飾が、上記の説明及び添付の図面から当業者に明らかとなるだろう。そのような修正は、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図される。
【０１９９】
本明細書で引用されている全ての参考文献（例えば、出版物または特許または特許出願）は、各個々の参考文献（例えば、出版物または特許または特許出願）が、あらゆる目的でその全体が参照によって組み込まれるように具体的かつ個別に指示されたかのような同じ程度に、あらゆる目的でその全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【０２００】
他の実施形態は以下のクレームの範囲内である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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