(57)【要約】  体重維持を支援する際に、及び／又は肥満を治療若しくは予防する際に使用するための、ＡＬＫの活性を低下させることができる作用物質。【選択図】  図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
体重維持を支援する際に、及び／又は肥満を治療若しくは予防する際に使用するための、ＡＬＫの活性を低下させることができる作用物質。
【請求項２】
前記作用物質が、減量介入中又は減量介入後に、好ましくは減量介入中に対象に投与される、請求項１に記載の使用のための作用物質。
【請求項３】
前記作用物質が、対象におけるＡＬＫのレベルを低下させる、請求項１又は２に記載の使用のための作用物質。
【請求項４】
前記作用物質が、表１に掲載された前記作用物質から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用のための作用物質。
【請求項５】
前記作用物質が、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、ポリヌクレオチド、ポリペプチド又は小分子からなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用のための作用物質。
【請求項６】
対象の体重維持を支援すること、及び／又は肥満を治療若しくは予防することができる作用物質を同定する方法であって、
（ａ）ＡＬＫポリペプチド又はポリヌクレオチドを含む調製物を、候補となる作用物質と接触させる工程と、
（ｂ）前記候補となる作用物質が、前記ＡＬＫポリペプチド又はポリヌクレオチドの活性に影響を及ぼすかを検出する工程と、を含む、方法。
【請求項７】
ＡＬＫの活性を低下させる作用物質を同定する方法であって、
（ａ）ＡＬＫポリペプチド又はポリヌクレオチドを含む調製物を、候補となる作用物質と接触させる工程と、
（ｂ）前記候補となる作用物質が、前記ＡＬＫポリペプチド又はポリヌクレオチドの活性に影響を及ぼすかを検出する工程と、を含む、方法。
【請求項８】
前記ＡＬＫポリペプチド又はポリヌクレオチドを含む前記調製物が、前記ＡＬＫポリペプチド又はポリヌクレオチドを含む細胞を含む、請求項６又は７に記載の方法。
【請求項９】
前記細胞が、脂肪細胞である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記細胞が、脳細胞である、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記方法が、ＡＬＫの発現を低下させる作用物質を同定するための方法である、請求項６〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記候補となる作用物質が、天然産物である、請求項６〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＡＬＫの活性を調節することができる作用物質、並びにかかる作用物質の治療における使用、特に、体重維持の支援、及び肥満の治療における使用に関する。本発明はまた、このような作用物質を同定する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
肥満は、世界の多くの地域で蔓延している慢性的な代謝異常である。肥満は、重度の併存症、例えば２型糖尿病、心臓血管疾患、脂質代謝異常、及び特定のタイプのがんに関する主要な危険因子である（Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎ．Ｔｅｃｈ．Ｒｅｐ．Ｓｅｒ（２０００）８９４：ｉ−ｘｉｉ、１−２５３）。
【０００３】
肥満とは、炭水化物、脂肪などからの過剰なエネルギーの蓄積の結果として、個体の重量が通常より重い状態を意味する。余剰体重は、典型的には、皮膚の下又は内臓の周囲に脂肪の形態で保持されている。経験的データにより、初期体重の少なくとも１０％の減量が、肥満関連の併存症のリスクを大幅に低下させることが示唆されている（Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎ．Ｔｅｃｈ．Ｒｅｐ．Ｓｅｒ（２０００）８９４：ｉ−ｘｉｉ、１−２５３）。しかしながら、減量能力は、対象間で非常に様々である。
【０００４】
エネルギー摂取量がエネルギー消費量を超える場合に、肥満が生じる。したがって、肥満の改善を目的とした、脂肪及び炭水化物などからのエネルギー摂取量を減少させる方法、又はｉｎ  ｖｉｖｏ代謝を促進することによってエネルギー消費量を増加させる方法が望まれる。したがって、食習慣及び運動の改善は、肥満及び肥満関連疾患の予防及び改善のための有効な方法であると考えられる。
【０００５】
減量を促進するための多くの方法が知られているが、減量介入の期間が終了すると、対象は減少した体重が再増加するというリスクに直面する。体重が再増加してしまうと、それまでの体重減少に関連した効果を減少させる恐れがあり、又は可能性としては完全にもとに戻してしまう恐れがある。
【０００６】
したがって、体重減量を促進するための改良法だけでなく、体重維持を支援する（減量分の再増加を防止又は減少させ、したがって減量介入後に達成されたものと同様のレベルでの体重の維持をサポートする）ための方法も、依然として強く必要とされている。このような改善は、肥満に対するより完全な治療を提供し、したがって肥満関連疾患のリスクを減少させるであろう。
【０００７】
肥満は、肥満個体においては特定の遺伝子産物のレベルが標準体重の個体と比較して高い又は低いといった違いをはじめとした、身体における数多くの生理的変化を伴う（Ｓｉｎｇｌａ，Ｂａｒｄｏｌｏｉ  ａｎｄ  Ｐａｒｋａｓｈ，Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ（２０１０））。更に、これらの遺伝子産物の多くの血中濃度は、減量介入中に劇的に変化することが示されている（Ｖａｎ  Ｄｉｊｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｌｏｓ  Ｏｎｅ（２０１０），Ｖｉｇｕｅｒｉｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｌｏｓ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（２０１２），Ａｒｍｅｎｉｓｅ  ｅｔ  ａｌ．ＡＪＣＮ（２０１７））。
【０００８】
ほとんどの研究は、肥満集団における遺伝子の研究に焦点を当てており、これらの遺伝子が減量及び維持プログラム中にどのように変化するかを重視しているが、有望な治療法とみなされる別の方法として、体重増加から一部の人々を保護し得る遺伝子を見出すというものがある。実際に、体質性痩せ（Ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ｔｈｉｎ（ＣＴ））個体と呼ばれる特定の人々は、通常の摂食、運動及び心理学的プロファイルであるにもかかわらず、生涯にわたって極端に低い体格指数（ＢＭＩ）（一般に１８ｋｇ／ｍ２未満と定義されるＢＭＩ）を有する。
【０００９】
母集団全体についてのバイオバンクから大規模な遺伝子データセット及び臨床データベースを使用することによって、ＣＴ表現型と関係のある遺伝的多様体を同定することができる。動物モデルでのノックダウン実験でこれらの遺伝子のレベルを改変し、その代謝効果を評価することによって、これらの遺伝子多様体の遺伝子発現における変化に関し考えられる因果関係を調べることができる。現代の分子生物的手法を用いて、複数の生物でこのような実験を実施し、繰り返すことができる。かかるノックダウンが致死性でない表現型をもたらすとき、遺伝子発現を低減させることによる効果を、例えば体重や脂肪の変化などの生理、形態、分子、及び代謝、並びに読み出された結果を使用して評価することができる。体重増加に対するこの抵抗性に関与する遺伝子を同定することは、肥満の新たな治療につながる可能性がある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、Ｅｓｔｏｎｉａｎ  ＥＧＣＵＴバイオバンクからの遺伝的及び臨床的データを使用して、体質性痩せの表現型においてＡＬＫ（未分化リンパ腫受容体チロシンキナーゼ、Ａｎａｐｌａｓｔｉｃ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｔｙｒｏｓｉｎｅ  Ｋｉｎａｓｅ）遺伝子座内に位置する遺伝子マーカーを同定した。
【００１１】
ＡＬＫ遺伝子がＣＴ個体の体重増加に対する抵抗性に関わっているかを確認するために、キイロショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）のＡＬＫオーソログの全身性のＲＮＡｉノックダウンを実施した。このノックダウンにより、野生型と比較して脂肪の蓄積（トリグリセリドレベルで測定したもの）が有意に減少した生存可能な系統が得られた。
【００１２】
したがって、一態様では、本発明は、体重維持を支援する際に、及び／又は肥満を治療若しくは予防する際に使用するための、ＡＬＫの活性を低下させることができる作用物質を提供する。
【００１３】
別の態様では、本発明は、体重維持を支援するためにＡＬＫの活性を低下させることができる作用物質の使用を提供する。
【００１４】
別の態様では、本発明は、除脂肪体重を増加させるための、又は除脂肪体重の体脂肪量に対する割合を増加させるための、ＡＬＫの活性を低下させることができる作用物質の使用を提供する。
【００１５】
別の態様では、本発明は、トリグリセリドレベルを低下させることができる作用物質の使用を提供する。
【００１６】
別の態様では、本発明は、脂質異常症を改善するためにＡＬＫの活性を低下させることができる作用物質の使用を提供する。
【００１７】
別の態様では、本発明は、心血管疾患（ＣＶＤ）のリスクを低減することができる作用物質の使用を提供する。
【００１８】
別の態様では、本発明は、体重維持の支援を必要とする対象に本発明の作用物質を投与することを含む、体重維持を支援する方法を提供する。別の態様では、本発明は、脂肪沈着の低減を必要とする対象に本発明の作用物質を投与することを含む、対象における脂肪沈着を低減する方法を提供する。別の態様では、本発明は、肥満の治療又は予防を必要とする対象に本発明の作用物質を投与することを含む、肥満を治療又は予防する方法を提供する。
【００１９】
ＡＬＫの活性は、本発明の作用物質の非存在下での活性と比較して、低下され得る。ＡＬＫの活性は、例えば、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、５０％又は７５％低下され得る。
【００２０】
作用物質は、例えば、ＡＬＫアンタゴニスト若しくはインヒビターであってもよく、又は作用物質は、細胞中のＡＬＫのレベルを低下させ得る。
【００２１】
一実施形態では、作用物質は、減量介入中又は減量介入後に対象に投与される。好ましい実施形態では、作用物質は、減量介入中に対象に投与される。減量介入は、例えば、食事療法（例えば、低カロリー食）及び／又は運動療法であり得る。
【００２２】
一実施形態では、作用物質は、対象におけるＡＬＫのレベルを低下させる。この文脈において、「レベル」は、ＡＬＫの量を指し、例えば、発現したタンパク質の量を分析することによって、及び／又は存在する対応するｍＲＮＡの量を分析することによって測定することができる。好ましくは、作用物質は、ＡＬＫの発現を低下させる。例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ又はアンチセンスＲＮＡは、ＡＬＫの発現を低下させ得る。
【００２３】
ＡＬＫのレベルは、本発明の作用物質の非存在下でのレベルと比較して、低下され得る。ＡＬＫのレベルは、例えば、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、５０％、７５％又は１００％低下され得る。
【００２４】
一実施形態では、作用物質は、表１に掲載される作用物質から選択される。
【００２５】
好ましい実施形態では、作用物質は、アセチルシステイン、エモジン、及びヘパリンのうちの１つ以上から選択される。
【００２６】
別の好ましい実施形態では、作用物質は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、ポリヌクレオチド、ポリペプチド又は小分子からなる群から選択される。ポリペプチドは、例えば、抗体であり得る。したがって、本発明の作用物質は、ＡＬＫを標的とするｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ若しくはアンチセンスＲＮＡをコードするポリヌクレオチド、又はポリペプチド（例えば、抗体）の形態であってもよい。ポリヌクレオチドは、ウイルスベクターなどのベクターの形態であり得る。
【００２７】
本発明の作用物質は、本発明の方法によって同定される作用物質であり得る。
別の態様では、本発明は、対象の体重維持を支援すること、及び／又は肥満を治療若しくは予防することができる作用物質を同定する方法であって、
（ａ）ＡＬＫポリペプチド又はポリヌクレオチドを含む調製物を、候補となる作用物質と接触させる工程と、
（ｂ）当該候補となる作用物質が、当該ＡＬＫポリペプチド又はポリヌクレオチドの活性に影響を及ぼすかを検出する工程と、を含む方法を提供する。
【００２８】
ＡＬＫポリペプチド又はポリヌクレオチドの活性に対する効果は、候補となる作用物質の存在下及び非存在（すなわち、対照実験）下におけるＡＬＫポリペプチド又はポリヌクレオチドの活性を比較することによって、分析してもよい。
【００２９】
別の態様では、本発明は、ＡＬＫの活性を低下させる作用物質を同定する方法であって、
（ａ）ＡＬＫポリペプチド又はポリヌクレオチドを含む調製物を、候補となる作用物質と接触させる工程と、
（ｂ）当該候補となる作用物質が、当該ＡＬＫポリペプチド又はポリヌクレオチドの活性に影響を及ぼすかを検出する工程と、を含む方法を提供する。
【００３０】
本発明の方法は、対象の食欲を抑制すること、満腹感を増大又は持続させること、対象による食物摂取を低減すること、及び／又は、対象における脂肪沈着を低減すること、ができる、作用物質を同定するための方法であり得る。
【００３１】
一実施形態では、ＡＬＫポリペプチド又はポリヌクレオチドを含む調製物は、ＡＬＫポリペプチド又はポリヌクレオチドを含む細胞を含む。
【００３２】
好ましい実施形態では、細胞は、脂肪細胞である。
【００３３】
好ましい実施形態では、細胞は、脳細胞である。
【００３４】
一実施形態では、本方法は、ＡＬＫの発現を低下させる作用物質を同定するための方法である。
【００３５】
一実施形態では、候補となる作用物質は天然産物であり、好ましくは植物に天然に存在する化合物である。
【００３６】
別の態様では、本発明は、体重維持を支援し、対象の食欲を抑制し、満腹感を増加又は延長させ、対象による食物摂取を減らし、対象における脂肪沈着を低減し、及び／又は肥満を治療若しくは予防する、作用物質を同定する方法における、ＡＬＫ、又はそれをコードするポリヌクレオチドの使用を提供する。
【００３７】
別の態様では、本発明は、体重維持を支援し、対象の食欲を抑制し、満腹感を増加又は延長させ、対象による食物摂取を減らし、対象における脂肪沈着を低減し、及び／又は肥満を治療若しくは予防する際に使用するための医薬品を製造するための、ＡＬＫの活性を低下させることができる作用物質の使用を提供する。
別の態様では、本発明は、ＡＬＫの発現を低下させる作用物質を同定する方法であって、
（ａ）細胞、好ましくはＡＬＫを発現する細胞を、候補となる作用物質と接触させる工程と、
（ｂ）候補となる作用物質が、ＡＬＫの発現を低下させるかを検出する工程と、を含む方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】２番染色体上のＡＬＫ遺伝子の領域を同定するマンハッタンプロットである。Ｘ軸に変異位置を示し、Ｙ軸に統計的有意性（−ｌｏｇ１０  ｐ値）を示している。各点は多様体に対応する。遺伝子の位置は下側のパネルに示す。上側のパネル内のピーク線（右側の第２のＹ軸）は組換え率（メガ塩基当たりのセンチモルガン）を示す。最も関係のある多様体を、ダイヤモンド形状及びその染色体座標で示す。
【図２】Ａｌｋの全身性のＲＮＡｉノックダウンは、トリグリセリドレベルを低下させ、ショウジョウバエの体重を増加させる。（Ａ）トリグリセリドレベルは、Ａｌｋ  ＲＮＡｉハエにおいて低下する。体重は、Ａｌｋ  ＲＮＡｉハエにおいて増加する。（Ｂ）データは平均値として表される。白色バーは、野生型のハエ（アクチン−Ｇａｌ４／＋）のデータを示し、黒色バーは、ＲＮＡｉノックダウンしたハエ（アクチン−Ｇａｌ４＞ＵＡＳ−ＡｌｋＩＲ）＊のデータを示し、Ｚスコアは、それぞれ−１．９５又は１．９５より低い又は高い。
【発明を実施するための形態】
【００３９】
本明細書で使用する場合、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、及び「から構成される（ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ  ｏｆ）」は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」又は「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」又は「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」又は「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」と同義であり、包括的又は非限定的であり、追加の、列挙されていない構成要素、要素、又は工程を除外しない。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、及び「から構成される（ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ  ｏｆ）」はまた、用語「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」を含む。
【００４０】
ＡＬＫ
この遺伝子は、インスリン受容体スーパーファミリーに属する受容体チロシンキナーゼをコードする。このタンパク質は、細胞外ドメイン、１回膜貫通領域に相当する疎水性区間、及び細胞内キナーゼドメインを含む。また、脳の発達において重要な役割を果たし、神経系の特定のニューロンにその効果を及ぼす。この遺伝子は、未分化大細胞リンパ腫、神経芽細胞腫、及び非小細胞肺癌を含む一連の腫瘍において再構成、変異、又は増幅されることが判明している。染色体再構成は、この遺伝子における最も一般的な遺伝的変化であり、腫瘍形成において複数の融合遺伝子の生成をもたらす。ヌル対立遺伝子についてホモ接合性のマウスは、エタノール消費の増加及びエタノールに応答した鎮静の増加を示す。異なるヌル対立遺伝子についてホモ接合性の雄性マウスは、思春期の遅延、低ゴナドトロピン性性腺機能低下症、血清テストステロンレベルの低下、及び精細管形態の変化を示す。
【００４１】
ヒトでは、ＡＬＫ遺伝子は、ＣＤ２４６  ＮＢＬＳＴ３としても知られている。
【００４２】
一実施形態では、ＡＬＫは、ヒトＡＬＫである。
【００４３】
ＡＬＫのアミノ酸配列の例は、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＰ＿００４２９５．２（ＡＬＫチロシンキナーゼ受容体アイソフォーム１前駆体）で寄託された配列である。この多様体（１）は、より長いアイソフォームをコードする。
【００４４】
そのＡＬＫのアミノ酸配列の例を以下に示す：
ＭＧＡＩＧＬＬＷＬＬＰＬＬＬＳＴＡＡＶＧＳＧＭＧＴＧＱＲＡＧＳＰＡＡＧＰＰＬＱＰＲＥＰＬＳＹＳＲＬＱＲＫＳＬＡＶＤＦＶＶＰＳＬＦＲＶＹＡＲＤＬＬＬＰＰＳＳＳＥＬＫＡＧＲＰＥＡＲＧＳＬＡＬＤＣＡＰＬＬＲＬＬＧＰＡＰＧＶＳＷＴＡＧＳＰＡＰＡＥＡＲＴＬＳＲＶＬＫＧＧＳＶＲＫＬＲＲＡＫＱＬＶＬＥＬＧＥＥＡＩＬＥＧＣＶＧＰＰＧＥＡＡＶＧＬＬＱＦＮＬＳＥＬＦＳＷＷＩＲＱＧＥＧＲＬＲＩＲＬＭＰＥＫＫＡＳＥＶＧＲＥＧＲＬＳＡＡＩＲＡＳＱＰＲＬＬＦＱＩＦＧＴＧＨＳＳＬＥＳＰＴＮＭＰＳＰＳＰＤＹＦＴＷＮＬＴＷＩＭＫＤＳＦＰＦＬＳＨＲＳＲＹＧＬＥＣＳＦＤＦＰＣＥＬＥＹＳＰＰＬＨＤＬＲＮＱＳＷＳＷＲＲＩＰＳＥＥＡＳＱＭＤＬＬＤＧＰＧＡＥＲＳＫＥＭＰＲＧＳＦＬＬＬＮＴＳＡＤＳＫＨＴＩＬＳＰＷＭＲＳＳＳＥＨＣＴＬＡＶＳＶＨＲＨＬＱＰＳＧＲＹＩＡＱＬＬＰＨＮＥＡＡＲＥＩＬＬＭＰＴＰＧＫＨＧＷＴＶＬＱＧＲＩＧＲＰＤＮＰＦＲＶＡＬＥＹＩＳＳＧＮＲＳＬＳＡＶＤＦＦＡＬＫＮＣＳＥＧＴＳＰＧＳＫＭＡＬＱＳＳＦＴＣＷＮＧＴＶＬＱＬＧＱＡＣＤＦＨＱＤＣＡＱＧＥＤＥＳＱＭＣＲＫＬＰＶＧＦＹＣＮＦＥＤＧＦＣＧＷＴＱＧＴＬＳＰＨＴＰＱＷＱＶＲＴＬＫＤＡＲＦＱＤＨＱＤＨＡＬＬＬＳＴＴＤＶＰＡＳＥＳＡＴＶＴＳＡＴＦＰＡＰＩＫＳＳＰＣＥＬＲＭＳＷＬＩＲＧＶＬＲＧＮＶＳＬＶＬＶＥＮＫＴＧＫＥＱＧＲＭＶＷＨＶＡＡＹＥＧＬＳＬＷＱＷＭＶＬＰＬＬＤＶＳＤＲＦＷＬＱＭＶＡＷＷＧＱＧＳＲＡＩＶＡＦＤＮＩＳＩＳＬＤＣＹＬＴＩＳＧＥＤＫＩＬＱＮＴＡＰＫＳＲＮＬＦＥＲＮＰＮＫＥＬＫＰＧＥＮＳＰＲＱＴＰＩＦＤＰＴＶＨＷＬＦＴＴＣＧＡＳＧＰＨＧＰＴＱＡＱＣＮＮＡＹＱＮＳＮＬＳＶＥＶＧＳＥＧＰＬＫＧＩＱＩＷＫＶＰＡＴＤＴＹＳＩＳＧＹＧＡＡＧＧＫＧＧＫＮＴＭＭＲＳＨＧＶＳＶＬＧＩＦＮＬＥＫＤＤＭＬＹＩＬＶＧＱＱＧＥＤＡＣＰＳＴＮＱＬＩＱＫＶＣＩＧＥＮＮＶＩＥＥＥＩＲＶＮＲＳＶＨＥＷＡＧＧＧＧＧＧＧＧＡＴＹＶＦＫＭＫＤＧＶＰＶＰＬＩＩＡＡＧＧＧＧＲＡＹＧＡＫＴＤＴＦＨＰＥＲＬＥＮＮＳＳＶＬＧＬＮＧＮＳＧＡＡＧＧＧＧＧＷＮＤＮＴＳＬＬＷＡＧＫＳＬＱＥＧＡＴＧＧＨＳＣＰＱＡＭＫＫＷＧＷＥＴＲＧＧＦＧＧＧＧＧＧＣＳＳＧＧＧＧＧＧＹＩＧＧＮＡＡＳＮＮＤＰＥＭＤＧＥＤＧＶＳＦＩＳＰＬＧＩＬＹＴＰＡＬＫＶＭＥＧＨＧＥＶＮＩＫＨＹＬＮＣＳＨＣＥＶＤＥＣＨＭＤＰＥＳＨＫＶＩＣＦＣＤＨＧＴＶＬＡＥＤＧＶＳＣＩＶＳＰＴＰＥＰＨＬＰＬＳＬＩＬＳＶＶＴＳＡＬＶＡＡＬＶＬＡＦＳＧＩＭＩＶＹＲＲＫＨＱＥＬＱＡＭＱＭＥＬＱＳＰＥＹＫＬＳＫＬＲＴＳＴＩＭＴＤＹＮＰＮＹＣＦＡＧＫＴＳＳＩＳＤＬＫＥＶＰＲＫＮＩＴＬＩＲＧＬＧＨＧＡＦＧＥＶＹＥＧＱＶＳＧＭＰＮＤＰＳＰＬＱＶＡＶＫＴＬＰＥＶＣＳＥＱＤＥＬＤＦＬＭＥＡＬＩＩＳＫＦＮＨＱＮＩＶＲＣＩＧＶＳＬＱＳＬＰＲＦＩＬＬＥＬＭＡＧＧＤＬＫＳＦＬＲＥＴＲＰＲＰＳＱＰＳＳＬＡＭＬＤＬＬＨＶＡＲＤＩＡＣＧＣＱＹＬＥＥＮＨＦＩＨＲＤＩＡＡＲＮＣＬＬＴＣＰＧＰＧＲＶＡＫＩＧＤＦＧＭＡＲＤＩＹＲＡＳＹＹＲＫＧＧＣＡＭＬＰＶＫＷＭＰＰＥＡＦＭＥＧＩＦＴＳＫＴＤＴＷＳＦＧＶＬＬＷＥＩＦＳＬＧＹＭＰＹＰＳＫＳＮＱＥＶＬＥＦＶＴＳＧＧＲＭＤＰＰＫＮＣＰＧＰＶＹＲＩＭＴＱＣＷＱＨＱＰＥＤＲＰＮＦＡＩＩＬＥＲＩＥＹＣＴＱＤＰＤＶＩＮＴＡＬＰＩＥＹＧＰＬＶＥＥＥＥＫＶＰＶＲＰＫＤＰＥＧＶＰＰＬＬＶＳＱＱＡＫＲＥＥＥＲＳＰＡＡＰＰＰＬＰＴＴＳＳＧＫＡＡＫＫＰＴＡＡＥＩＳＶＲＶＰＲＧＰＡＶＥＧＧＨＶＮＭＡＦＳＱＳＮＰＰＳＥＬＨＫＶＨＧＳＲＮＫＰＴＳＬＷＮＰＴＹＧＳＷＦＴＥＫＰＴＫＫＮＮＰＩＡＫＫＥＰＨＤＲＧＮＬＧＬＥＧＳＣＴＶＰＰＮＶＡＴＧＲＬＰＧＡＳＬＬＬＥＰＳＳＬＴＡＮＭＫＥＶＰＬＦＲＬＲＨＦＰＣＧＮＶＮＹＧＹＱＱＱＧＬＰＬＥＡＡＴＡＰＧＡＧＨＹＥＤＴＩＬＫＳＫＮＳＭＮＱＰＧＰ
（配列番号１）
【００４５】
ＡＬＫをコードするヌクレオチド配列の例は、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＭ＿００４３０４．４で寄託された配列である。
【００４６】
そのＡＬＫをコードするヌクレオチド配列の例を以下に示す：
ＡＧＣＴＧＣＡＡＧＴＧＧＣＧＧＧＣＧＣＣＣＡＧＧＣＡＧＡＴＧＣＧＡＴＣＣＡＧＣＧＧＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＴＧＧＴＡＧＣＡＧＣＴＧＧＴＡＣＣＴＣＣＣＧＣＣＧＣＣＴＣＴＧＴＴＣＧＧＡＧＧＧＴＣＧＣＧＧＧＧＣＡＣＣＧＡＧＧＴＧＣＴＴＴＣＣＧＧＣＣＧＣＣＣＴＣＴＧＧＴＣＧＧＣＣＡＣＣＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＣＧＣＴＧＡＴＧＡＴＧＧＧＴＧＡＧＧＡＧＧＧＧＧＣＧＧＣＡＡＧＡＴＴＴＣＧＧＧＣＧＣＣＣＣＴＧＣＣＣＴＧＡＡＣＧＣＣＣＴＣＡＧＣＴＧＣＴＧＣＣＧＣＣＧＧＧＧＣＣＧＣＴＣＣＡＧＴＧＣＣＴＧＣＧＡＡＣＴＣＴＧＡＧＧＡＧＣＣＧＡＧＧＣＧＣＣＧＧＴＧＡＧＡＧＣＡＡＧＧＡＣＧＣＴＧＣＡＡＡＣＴＴＧＣＧＣＡＧＣＧＣＧＧＧＧＧＣＴＧＧＧＡＴＴＣＡＣＧＣＣＣＡＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＧＣＡＧＡＣＡＧＴＣＣＧＡＡＧＣＣＴＴＣＣＣＧＣＡＧＣＧＧＡＧＡＧＡＴＡＧＣＴＴＧＡＧＧＧＴＧＣＧＣＡＡＧＡＣＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＧＣＣＣＴＣＧＧＴＴＣＣＣＧＣＣＣＡＧＡＣＣＧＧＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＴＧＧＡＧＧＡＧＣＣＡＡＡＡＧＧＡＡＣＧＣＡＡＡＡＧＧＣＧＧＣＣＡＧＧＡＣＡＧＣＧＴＧＣＡＧＣＡＧＣＴＧＧＧＡＧＣＣＧＣＣＧＴＴＣＴＣＡＧＣＣＴＴＡＡＡＡＧＴＴＧＣＡＧＡＧＡＴＴＧＧＡＧＧＣＴＧＣＣＣＣＧＡＧＡＧＧＧＧＡＣＡＧＡＣＣＣＣＡＧＣＴＣＣＧＡＣＴＧＣＧＧＧＧＧＧＣＡＧＧＡＧＡＧＧＡＣＧＧＴＡＣＣＣＡＡＣＴＧＣＣＡＣＣＴＣＣＣＴＴＣＡＡＣＣＡＴＡＧＴＡＧＴＴＣＣＴＣＴＧＴＡＣＣＧＡＧＣＧＣＡＧＣＧＡＧＣＴＡＣＡＧＡＣＧＧＧＧＧＣＧＣＧＧＣＡＣＴＣＧＧＣＧＣＧＧＡＧＡＧＣＧＧＧＡＧＧＣＴＣＡＡＧＧＴＣＣＣＡＧＣＣＡＧＴＧＡＧＣＣＣＡＧＴＧＴＧＣＴＴＧＡＧＴＧＴＣＴＣＴＧＧＡＣＴＣＧＣＣＣＣＴＧＡＧＣＴＴＣＣＡＧＧＴＣＴＧＴＴＴＣＡＴＴＴＡＧＡＣＴＣＣＴＧＣＴＣＧＣＣＴＣＣＧＴＧＣＡＧＴＴＧＧＧＧＧＡＡＡＧＣＡＡＧＡＧＡＣＴＴＧＣＧＣＧＣＡＣＧＣＡＣＡＧＴＣＣＴＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＧＧＴＧＧＡＡＧＧＡＧＣＣＧＣＴＧＧＧＴＡＣＣＡＡＧＧＡＣＴＧＴＴＣＡＧＡＧＣＣＴＣＴＴＣＣＣＡＴＣＴＣＧＧＧＧＡＧＡＧＣＧＡＡＧＧＧＴＧＡＧＧＣＴＧＧＧＣＣＣＧＧＡＧＡＧＣＡＧＴＧＴＡＡＡＣＧＧＣＣＴＣＣＴＣＣＧＧＣＧＧＧＡＴＧＧＧＡＧＣＣＡＴＣＧＧＧＣＴＣＣＴＧＴＧＧＣＴＣＣＴＧＣＣＧＣＴＧＣＴＧＣＴＴＴＣＣＡＣＧＧＣＡＧＣＴＧＴＧＧＧＣＴＣＣＧＧＧＡＴＧＧＧＧＡＣＣＧＧＣＣＡＧＣＧＣＧＣＧＧＧＣＴＣＣＣＣＡＧＣＴＧＣＧＧＧＧＣＣＧＣＣＧＣＴＧＣＡＧＣＣＣＣＧＧＧＡＧＣＣＡＣＴＣＡＧＣＴＡＣＴＣＧＣＧＣＣＴＧＣＡＧＡＧＧＡＡＧＡＧＴＣＴＧＧＣＡＧＴＴＧＡＣＴＴＣＧＴＧＧＴＧＣＣＣＴＣＧＣＴＣＴＴＣＣＧＴＧＴＣＴＡＣＧＣＣＣＧＧＧＡＣＣＴＡＣＴＧＣＴＧＣＣＡＣＣＡＴＣＣＴＣＣＴＣＧＧＡＧＣＴＧＡＡＧＧＣＴＧＧＣＡＧＧＣＣＣＧＡＧＧＣＣＣＧＣＧＧＣＴＣＧＣＴＡＧＣＴＣＴＧＧＡＣＴＧＣＧＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣＡＧＧＴＴＧＣＴＧＧＧＧＣＣＧＧＣＧＣＣＧＧＧＧＧＴＣＴＣＣＴＧＧＡＣＣＧＣＣＧＧＴＴＣＡＣＣＡＧＣＣＣＣＧＧＣＡＧＡＧＧＣＣＣＧＧＡＣＧＣＴＧＴＣＣＡＧＧＧＴＧＣＴＧＡＡＧＧＧＣＧＧＣＴＣＣＧＴＧＣＧＣＡＡＧＣＴＣＣＧＧＣＧＴＧＣＣＡＡＧＣＡＧＴＴＧＧＴＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＧＧＣＧＡＧＧＡＧＧＣＧＡＴＣＴＴＧＧＡＧＧＧＴＴＧＣＧＴＣＧＧＧＣＣＣＣＣＣＧＧＧＧＡＧＧＣＧＧＣＴＧＴＧＧＧＧＣＴＧＣＴＣＣＡＧＴＴＣＡＡＴＣＴＣＡＧＣＧＡＧＣＴＧＴＴＣＡＧＴＴＧＧＴＧＧＡＴＴＣＧＣＣＡＡＧＧＣＧＡＡＧＧＧＣＧＡＣＴＧＡＧＧＡＴＣＣＧＣＣＴＧＡＴＧＣＣＣＧＡＧＡＡＧＡＡＧＧＣＧＴＣＧＧＡＡＧＴＧＧＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＡＧＧＣＴＧＴＣＣＧＣＧＧＣＡＡＴＴＣＧＣＧＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＧＣＣＴＴＣＴＣＴＴＣＣＡＧＡＴＣＴＴＣＧＧＧＡＣＴＧＧＴＣＡＴＡＧＣＴＣＣＴＴＧＧＡＡＴＣＡＣＣＡＡＣＡＡＡＣＡＴＧＣＣＴＴＣＴＣＣＴＴＣＴＣＣＴＧＡＴＴＡＴＴＴＴＡＣＡＴＧＧＡＡＴＣＴＣＡＣＣＴＧＧＡＴＡＡＴＧＡＡＡＧＡＣＴＣＣＴＴＣＣＣＴＴＴＣＣＴＧＴＣＴＣＡＴＣＧＣＡＧＣＣＧＡＴＡＴＧＧＴＣＴＧＧＡＧＴＧＣＡＧＣＴＴＴＧＡＣＴＴＣＣＣＣＴＧＴＧＡＧＣＴＧＧＡＧＴＡＴＴＣＣＣＣＴＣＣＡＣＴＧＣＡＴＧＡＣＣＴＣＡＧＧＡＡＣＣＡＧＡＧＣＴＧＧＴＣＣＴＧＧＣＧＣＣＧＣＡＴＣＣＣＣＴＣＣＧＡＧＧＡＧＧＣＣＴＣＣＣＡＧＡＴＧＧＡＣＴＴＧＣＴＧＧＡＴＧＧＧＣＣＴＧＧＧＧＣＡＧＡＧＣＧＴＴＣＴＡＡＧＧＡＧＡＴＧＣＣＣＡＧＡＧＧＣＴＣＣＴＴＴＣＴＣＣＴＴＣＴＣＡＡＣＡＣＣＴＣＡＧＣＴＧＡＣＴＣＣＡＡＧＣＡＣＡＣＣＡＴＣＣＴＧＡＧＴＣＣＧＴＧＧＡＴＧＡＧＧＡＧＣＡＧＣＡＧＴＧＡＧＣＡＣＴＧＣＡＣＡＣＴＧＧＣＣＧＴＣＴＣＧＧＴＧＣＡＣＡＧＧＣＡＣＣＴＧＣＡＧＣＣＣＴＣＴＧＧＡＡＧＧＴＡＣＡＴＴＧＣＣＣＡＧＣＴＧＣＴＧＣＣＣＣＡＣＡＡＣＧＡＧＧＣＴＧＣＡＡＧＡＧＡＧＡＴＣＣＴＣＣＴＧＡＴＧＣＣＣＡＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＣＡＴＧＧＴＴＧＧＡＣＡＧＴＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＡＡＴＣＧＧＧＣＧＴＣＣＡＧＡＣＡＡＣＣＣＡＴＴＴＣＧＡＧＴＧＧＣＣＣＴＧＧＡＡＴＡＣＡＴＣＴＣＣＡＧＴＧＧＡＡＡＣＣＧＣＡＧＣＴＴＧＴＣＴＧＣＡＧＴＧＧＡＣＴＴＣＴＴＴＧＣＣＣＴＧＡＡＧＡＡＣＴＧＣＡＧＴＧＡＡＧＧＡＡＣＡＴＣＣＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＡＧＡＴＧＧＣＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＣＣＴＴＣＡＣＴＴＧＴＴＧＧＡＡＴＧＧＧＡＣＡＧＴＣＣＴＣＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＧＧＣＣＴＧＴＧＡＣＴＴＣＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＴＧＣＣＣＡＧＧＧＡＧＡＡＧＡＴＧＡＧＡＧＣＣＡＧＡＴＧＴＧＣＣＧＧＡＡＡＣＴＧＣＣＴＧＴＧＧＧＴＴＴＴＴＡＣＴＧＣＡＡＣＴＴＴＧＡＡＧＡＴＧＧＣＴＴＣＴＧＴＧＧＣＴＧＧＡＣＣＣＡＡＧＧＣＡＣＡＣＴＧＴＣＡＣＣＣＣＡＣＡＣＴＣＣＴＣＡＡＴＧＧＣＡＧＧＴＣＡＧＧＡＣＣＣＴＡＡＡＧＧＡＴＧＣＣＣＧＧＴＴＣＣＡＧＧＡＣＣＡＣＣＡＡＧＡＣＣＡＴＧＣＴＣＴＡＴＴＧＣＴＣＡＧＴＡＣＣＡＣＴＧＡＴＧＴＣＣＣＣＧＣＴＴＣＴＧＡＡＡＧＴＧＣＴＡＣＡＧＴＧＡＣＣＡＧＴＧＣＴＡＣＧＴＴＴＣＣＴＧＣＡＣＣＧＡＴＣＡＡＧＡＧＣＴＣＴＣＣＡＴＧＴＧＡＧＣＴＣＣＧＡＡＴＧＴＣＣＴＧＧＣＴＣＡＴＴＣＧＴＧＧＡＧＴＣＴＴＧＡＧＧＧＧＡＡＡＣＧＴＧＴＣＣＴＴＧＧＴＧＣＴＡＧＴＧＧＡＧＡＡＣＡＡＡＡＣＣＧＧＧＡＡＧＧＡＧＣＡＡＧＧＣＡＧＧＡＴＧＧＴＣＴＧＧＣＡＴＧＴＣＧＣＣＧＣＣＴＡＴＧＡＡＧＧＣＴＴＧＡＧＣＣＴＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＧＧＴＧＴＴＧＣＣＴＣＴＣＣＴＣＧＡＴＧＴＧＴＣＴＧＡＣＡＧＧＴＴＣＴＧＧＣＴＧＣＡＧＡＴＧＧＴＣＧＣＡＴＧＧＴＧＧＧＧＡＣＡＡＧＧＡＴＣＣＡＧＡＧＣＣＡＴＣＧＴＧＧＣＴＴＴＴＧＡＣＡＡＴＡＴＣＴＣＣＡＴＣＡＧＣＣＴＧＧＡＣＴＧＣＴＡＣＣＴＣＡＣＣＡＴＴＡＧＣＧＧＡＧＡＧＧＡＣＡＡＧＡＴＣＣＴＧＣＡＧＡＡＴＡＣＡＧＣＡＣＣＣＡＡＡＴＣＡＡＧＡＡＡＣＣＴＧＴＴＴＧＡＧＡＧＡＡＡＣＣＣＡＡＡＣＡＡＧＧＡＧＣＴＧＡＡＡＣＣＣＧＧＧＧＡＡＡＡＴＴＣＡＣＣＡＡＧＡＣＡＧＡＣＣＣＣＣＡＴＣＴＴＴＧＡＣＣＣＴＡＣＡＧＴＴＣＡＴＴＧＧＣＴＧＴＴＣＡＣＣＡＣＡＴＧＴＧＧＧＧＣＣＡＧＣＧＧＧＣＣＣＣＡＴＧＧＣＣＣＣＡＣＣＣＡＧＧＣＡＣＡＧＴＧＣＡＡＣＡＡＣＧＣＣＴＡＣＣＡＧＡＡＣＴＣＣＡＡＣＣＴＧＡＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＧＧＡＧＣＧＡＧＧＧＣＣＣＣＣＴＧＡＡＡＧＧＣＡＴＣＣＡＧＡＴＣＴＧＧＡＡＧＧＴＧＣＣＡＧＣＣＡＣＣＧＡＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＡＴＣＴＣＧＧＧＣＴＡＣＧＧＡＧＣＴＧＣＴＧＧＣＧＧＧＡＡＡＧＧＣＧＧＧＡＡＧＡＡＣＡＣＣＡＴＧＡＴＧＣＧＧＴＣＣＣＡＣＧＧＣＧＴＧＴＣＴＧＴＧＣＴＧＧＧＣＡＴＣＴＴＣＡＡＣＣＴＧＧＡＧＡＡＧＧＡＴＧＡＣＡＴＧＣＴＧＴＡＣＡＴＣＣＴＧＧＴＴＧＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＡＧＡＧＧＡＣＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＴＡＣＡＡＡＣＣＡＧＴＴＡＡＴＣＣＡＧＡＡＡＧＴＣＴＧＣＡＴＴＧＧＡＧＡＧＡＡＣＡＡＴＧＴＧＡＴＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＡＴＣＣＧＴＧＴＧＡＡＣＡＧＡＡＧＣＧＴＧＣＡＴＧＡＧＴＧＧＧＣＡＧＧＡＧＧＣＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＧＧＧＴＧＧＡＧＣＣＡＣＣＴＡＣＧＴＡＴＴＴＡＡＧＡＴＧＡＡＧＧＡＴＧＧＡＧＴＧＣＣＧＧＴＧＣＣＣＣＴＧＡＴＣＡＴＴＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＧＴＧＧＴＧＧＣＡＧＧＧＣＣＴＡＣＧＧＧＧＣＣＡＡＧＡＣＡＧＡＣＡＣＧＴＴＣＣＡＣＣＣＡＧＡＧＡＧＡＣＴＧＧＡＧＡＡＴＡＡＣＴＣＣＴＣＧＧＴＴＣＴＡＧＧＧＣＴＡＡＡＣＧＧＣＡＡＴＴＣＣＧＧＡＧＣＣＧＣＡＧＧＴＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＣＴＧＧＡＡＴＧＡＴＡＡＣＡＣＴＴＣＣＴＴＧＣＴＣＴＧＧＧＣＣＧＧＡＡＡＡＴＣＴＴＴＧＣＡＧＧＡＧＧＧＴＧＣＣＡＣＣＧＧＡＧＧＡＣＡＴＴＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＧＧＣＣＡＴＧＡＡＧＡＡＧＴＧＧＧＧＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＡＧＡＧＧＧＧＧＴＴＴＣＧＧＡＧＧＧＧＧＴＧＧＡＧＧＧＧＧＧＴＧＣＴＣＣＴＣＡＧＧＴＧＧＡＧＧＡＧＧＣＧＧＡＧＧＡＴＡＴＡＴＡＧＧＣＧＧＣＡＡＴＧＣＡＧＣＣＴＣＡＡＡＣＡＡＴＧＡＣＣＣＣＧＡＡＡＴＧＧＡＴＧＧＧＧＡＡＧＡＴＧＧＧＧＴＴＴＣＣＴＴＣＡＴＣＡＧＴＣＣＡＣＴＧＧＧＣＡＴＣＣＴＧＴＡＣＡＣＣＣＣＡＧＣＴＴＴＡＡＡＡＧＴＧＡＴＧＧＡＡＧＧＣＣＡＣＧＧＧＧＡＡＧＴＧＡＡＴＡＴＴＡＡＧＣＡＴＴＡＴＣＴＡＡＡＣＴＧＣＡＧＴＣＡＣＴＧＴＧＡＧＧＴＡＧＡＣＧＡＡＴＧＴＣＡＣＡＴＧＧＡＣＣＣＴＧＡＡＡＧＣＣＡＣＡＡＧＧＴＣＡＴＣＴＧＣＴＴＣＴＧＴＧＡＣＣＡＣＧＧＧＡＣＧＧＴＧＣＴＧＧＣＴＧＡＧＧＡＴＧＧＣＧＴＣＴＣＣＴＧＣＡＴＴＧＴＧＴＣＡＣＣＣＡＣＣＣＣＧＧＡＧＣＣＡＣＡＣＣＴＧＣＣＡＣＴＣＴＣＧＣＴＧＡＴＣＣＴＣＴＣＴＧＴＧＧＴＧＡＣＣＴＣＴＧＣＣＣＴＣＧＴＧＧＣＣＧＣＣＣＴＧＧＴＣＣＴＧＧＣＴＴＴＣＴＣＣＧＧＣＡＴＣＡＴＧＡＴＴＧＴＧＴＡＣＣＧＣＣＧＧＡＡＧＣＡＣＣＡＧＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＣＣＡＴＧＣＡＧＡＴＧＧＡＧＣＴＧＣＡＧＡＧＣＣＣＴＧＡＧＴＡＣＡＡＧＣＴＧＡＧＣＡＡＧＣＴＣＣＧＣＡＣＣＴＣＧＡＣＣＡＴＣＡＴＧＡＣＣＧＡＣＴＡＣＡＡＣＣＣＣＡＡＣＴＡＣＴＧＣＴＴＴＧＣＴＧＧＣＡＡＧＡＣＣＴＣＣＴＣＣＡＴＣＡＧＴＧＡＣＣＴＧＡＡＧＧＡＧＧＴＧＣＣＧＣＧＧＡＡＡＡＡＣＡＴＣＡＣＣＣＴＣＡＴＴＣＧＧＧＧＴＣＴＧＧＧＣＣＡＴＧＧＣＧＣＣＴＴＴＧＧＧＧＡＧＧＴＧＴＡＴＧＡＡＧＧＣＣＡＧＧＴＧＴＣＣＧＧＡＡＴＧＣＣＣＡＡＣＧＡＣＣＣＡＡＧＣＣＣＣＣＴＧＣＡＡＧＴＧＧＣＴＧＴＧＡＡＧＡＣＧＣＴＧＣＣＴＧＡＡＧＴＧＴＧＣＴＣＴＧＡＡＣＡＧＧＡＣＧＡＡＣＴＧＧＡＴＴＴＣＣＴＣＡＴＧＧＡＡＧＣＣＣＴＧＡＴＣＡＴＣＡＧＣＡＡＡＴＴＣＡＡＣＣＡＣＣＡＧＡＡＣＡＴＴＧＴＴＣＧＣＴＧＣＡＴＴＧＧＧＧＴＧＡＧＣＣＴＧＣＡＡＴＣＣＣＴＧＣＣＣＣＧＧＴＴＣＡＴＣＣＴＧＣＴＧＧＡＧＣＴＣＡＴＧＧＣＧＧＧＧＧＧＡＧＡＣＣＴＣＡＡＧＴＣＣＴＴＣＣＴＣＣＧＡＧＡＧＡＣＣＣＧＣＣＣＴＣＧＣＣＣＧＡＧＣＣＡＧＣＣＣＴＣＣＴＣＣＣＴＧＧＣＣＡＴＧＣＴＧＧＡＣＣＴＴＣＴＧＣＡＣＧＴＧＧＣＴＣＧＧＧＡＣＡＴＴＧＣＣＴＧＴＧＧＣＴＧＴＣＡＧＴＡＴＴＴＧＧＡＧＧＡＡＡＡＣＣＡＣＴＴＣＡＴＣＣＡＣＣＧＡＧＡＣＡＴＴＧＣＴＧＣＣＡＧＡＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＴＧＡＣＣＴＧＴＣＣＡＧＧＣＣＣＴＧＧＡＡＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡＧＡＴＴＧＧＡＧＡＣＴＴＣＧＧＧＡＴＧＧＣＣＣＧＡＧＡＣＡＴＣＴＡＣＡＧＧＧＣＧＡＧＣＴＡＣＴＡＴＡＧＡＡＡＧＧＧＡＧＧＣＴＧＴＧＣＣＡＴＧＣＴＧＣＣＡＧＴＴＡＡＧＴＧＧＡＴＧＣＣＣＣＣＡＧＡＧＧＣＣＴＴＣＡＴＧＧＡＡＧＧＡＡＴＡＴＴＣＡＣＴＴＣＴＡＡＡＡＣＡＧＡＣＡＣＡＴＧＧＴＣＣＴＴＴＧＧＡＧＴＧＣＴＧＣＴＡＴＧＧＧＡＡＡＴＣＴＴＴＴＣＴＣＴＴＧＧＡＴＡＴＡＴＧＣＣＡＴＡＣＣＣＣＡＧＣＡＡＡＡＧＣＡＡＣＣＡＧＧＡＡＧＴＴＣＴＧＧＡＧＴＴＴＧＴＣＡＣＣＡＧＴＧＧＡＧＧＣＣＧＧＡＴＧＧＡＣＣ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ＣＧＧＡＴＧＴＡＡＴＣＡＡＣＡＣＣＧＣＴＴＴＧＣＣＧＡＴＡＧＡＡＴＡＴＧＧＴＣＣＡＣＴＴＧＴＧＧＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＧＡＡＡＧＴＧＣＣＴＧＴＧＡＧＧＣＣＣＡＡＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＧＧＧＴＴＣＣＴＣＣＴＣＴＣＣＴＧＧＴＣＴＣＴＣＡＡＣＡＧＧＣＡＡＡＡＣＧＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＣＧＣＡＧＣＣＣＡＧＣＴＧＣＣＣＣＡＣＣＡＣＣＴＣＴＧＣＣＴＡＣＣＡＣＣＴＣＣＴＣＴＧＧＣＡＡＧＧＣＴＧＣＡＡＡＧＡＡＡＣＣＣＡＣＡＧＣＴＧＣＡＧＡＧＡＴＣＴＣＴＧＴＴＣＧＡＧＴＣＣＣＴＡＧＡＧＧＧＣＣＧＧＣＣＧＴＧＧＡＡＧＧＧＧＧＡＣＡＣＧＴＧＡＡＴＡＴＧＧＣＡＴＴＣＴＣＴＣＡＧＴＣＣＡＡＣＣＣＴＣＣＴＴＣＧＧＡＧＴＴＧＣＡＣＡＡＧＧＴＣＣＡＣＧＧＡＴＣＣＡＧＡＡＡＣＡＡＧＣＣＣＡＣＣＡＧＣＴＴＧＴＧＧＡＡＣＣＣＡＡＣＧＴＡＣＧＧＣＴＣＣＴＧＧＴＴＴＡＣＡＧＡＧＡＡＡＣＣＣＡＣＣＡＡＡＡＡＧＡＡＴＡＡＴＣＣＴＡＴＡＧＣＡＡＡＧＡＡＧＧＡＧＣＣＡＣＡＣＧＡＣＡＧＧＧＧＴＡＡＣＣＴＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＧＧＡＡＧＣＴＧＴＡＣＴＧＴＣＣＣＡＣＣＴＡＡＣＧＴＴＧＣＡＡＣＴＧＧＧＡＧＡＣＴＴＣＣＧＧＧＧＧＣＣＴＣＡＣＴＧＣＴＣＣＴＡＧＡＧＣＣＣＴＣＴＴＣＧＣＴＧＡＣＴＧＣＣＡＡＴＡＴＧＡＡＧＧＡＧＧＴＡＣＣＴＣＴＧＴＴＣＡＧＧＣＴＡＣＧＴＣＡＣＴＴＣＣＣＴＴＧＴＧＧＧＡＡＴＧＴＣＡＡＴＴＡＣＧＧＣＴＡＣＣＡＧＣＡＡＣＡＧＧＧＣＴＴＧＣＣＣＴＴＡＧＡＡＧＣＣＧＣＴＡＣＴＧＣＣＣＣＴＧＧＡＧＣＴＧＧＴＣＡＴＴＡＣＧＡＧＧＡＴＡＣＣＡＴＴＣＴＧＡＡＡＡＧＣＡＡＧＡＡＴＡＧＣＡＴＧＡＡＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＣＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＧＴＣＧＣＡＣＡＣＴＣＡＣＴＴＣＴＣＴＴＣＣＴＴＧＧＧＡＴＣＣＣＴＡＡＧＡＣＣＧＴＧＧＡＧＧＡＧＡＧＡＧＡＧＧＣＡＡＴＧＧＣＴＣＣＴＴＣＡＣＡＡＡＣＣＡＧＡＧＡＣＣＡＡＡＴＧＴＣＡＣＧＴＴＴＴＧＴＴＴＴＧＴＧＣＣＡＡＣＣＴＡＴＴＴＴＧＡＡＧＴＡＣＣＡＣＣＡＡＡＡＡＡＧＣＴＧＴＡＴＴＴＴＧＡＡＡＡＴＧＣＴＴＴＡＧＡＡＡＧＧＴＴＴＴＧＡＧＣＡＴＧＧＧＴＴＣＡＴＣＣＴＡＴＴＣＴＴＴＣＧＡＡＡＧＡＡＧＡＡＡＡＴＡＴＣＡＴＡＡＡＡＡＴＧＡＧＴＧＡＴＡＡＡＴＡＣＡＡＧＧＣＣＣＡＧＡＴＧＴＧＧＴＴＧＣＡＴＡＡＧＧＴＴＴＴＴＡＴＧＣＡＴＧＴＴＴＧＴＴＧＴＡＴＡＣＴＴＣＣＴＴＡＴＧＣＴＴＣＴＴＴＣＡＡＡＴＴＧＴＧＴＧＴＧＣＴＣＴＧＣＴＴＣＡＡＴＧＴＡＧＴＣＡＧＡＡＴＴＡＧＣＴＧＣＴＴＣＴＡＴＧＴＴＴＣＡＴＡＧＴＴＧＧＧＧＴＣＡＴＡＧＡＴＧＴＴＴＣＣＴＴＧＣＣＴＴＧＴＴＧＡＴＧＴＧＧＡＣＡＴＧＡＧＣＣＡＴＴＴＧＡＧＧＧＧＡＧＡＧＧＧＡＡＣＧＧＡＡＡＴＡＡＡＧＧＡＧＴＴＡＴＴＴＧＴＡＡＴＧＡＣＴＡＡＡＡ
（配列番号２）
【００４７】
ＡＬＫのアミノ酸配列の更なる例は、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＰ＿００１３４０６９４．１ＡＬＫチロシンキナーゼ受容体アイソフォーム２で寄託された配列である。この多様体（２）は、代替的プロモーターの使用を表しており、したがって、多様体１と比較して、５’ＵＴＲ及び５’コード領域が異なる。プロモーター及び５’末端エキソン配列は、内在性レトロウイルスＬＴＲ由来である。得られるアイソフォーム（２、ＡＬＫＡＴＩとしても知られる）は、アイソフォーム１と比較してより短く、かつ異なるＮ末端を有する。コードされたタンパク質は、黒色腫細胞で発現される。
【００４８】
そのＡＬＫの更なるアミノ酸配列の例を以下に示す：
ＭＱＭＥＬＱＳＰＥＹＫＬＳＫＬＲＴＳＴＩＭＴＤＹＮＰＮＹＣＦＡＧＫＴＳＳＩＳＤＬＫＥＶＰＲＫＮＩＴＬＩＲＧＬＧＨＧＡＦＧＥＶＹＥＧＱＶＳＧＭＰＮＤＰＳＰＬＱＶＡＶＫＴＬＰＥＶＣＳＥＱＤＥＬＤＦＬＭＥＡＬＩＩＳＫＦＮＨＱＮＩＶＲＣＩＧＶＳＬＱＳＬＰＲＦＩＬＬＥＬＭＡＧＧＤＬＫＳＦＬＲＥＴＲＰＲＰＳＱＰＳＳＬＡＭＬＤＬＬＨＶＡＲＤＩＡＣＧＣＱＹＬＥＥＮＨＦＩＨＲＤＩＡＡＲＮＣＬＬＴＣＰＧＰＧＲＶＡＫＩＧＤＦＧＭＡＲＤＩＹＲＡＳＹＹＲＫＧＧＣＡＭＬＰＶＫＷＭＰＰＥＡＦＭＥＧＩＦＴＳＫＴＤＴＷＳＦＧＶＬＬＷＥＩＦＳＬＧＹＭＰＹＰＳＫＳＮＱＥＶＬＥＦＶＴＳＧＧＲＭＤＰＰＫＮＣＰＧＰＶＹＲＩＭＴＱＣＷＱＨＱＰＥＤＲＰＮＦＡＩＩＬＥＲＩＥＹＣＴＱＤＰＤＶＩＮＴＡＬＰＩＥＹＧＰＬＶＥＥＥＥＫＶＰＶＲＰＫＤＰＥＧＶＰＰＬＬＶＳＱＱＡＫＲＥＥＥＲＳＰＡＡＰＰＰＬＰＴＴＳＳＧＫＡＡＫＫＰＴＡＡＥＩＳＶＲＶＰＲＧＰＡＶＥＧＧＨＶＮＭＡＦＳＱＳＮＰＰＳＥＬＨＫＶＨＧＳＲＮＫＰＴＳＬＷＮＰＴＹＧＳＷＦＴＥＫＰＴＫＫＮＮＰＩＡＫＫＥＰＨＤＲＧＮＬＧＬＥＧＳＣＴＶＰＰＮＶＡＴＧＲＬＰＧＡＳＬＬＬＥＰＳＳＬＴＡＮＭＫＥＶＰＬＦＲＬＲＨＦＰＣＧＮＶＮＹＧＹＱＱＱＧＬＰＬＥＡＡＴＡＰＧＡＧＨＹＥＤＴＩＬＫＳＫＮＳＭＮＱＰＧＰ
（配列番号３）
【００４９】
ＡＬＫをコードする更なるヌクレオチド配列の例は、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＭ＿００１３５３７６５．１で寄託された配列である。
【００５０】
そのＡＬＫをコードする更なるヌクレオチド配列の例を以下に示す：
ＣＡＧＣＣＴＴＣＣＣＴＧＧＣＴＣＣＣＴＣＣＣＣＡＴＴＴＣＣＴＣＴＣＡＴＧＧＧＣＡＴＴＴＣＴＴＣＴＡＡＴＡＡＡＡＴＣＴＧＣＡＧＡＣＣＡＴＡＴＴＧＧＧＴＣＴＡＡＴＣＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＴＣＴＧＣＴＴＣＴＴＧＧＡＧＧＡＡＣＣＡＧＡＣＴＡＡＣＡＴＧＡＣＴＣＴＧＣＣＣＴＡＴＡＴＡＡＴＡＣＡＡＡＴＡＡＴＴＡＴＴＴＴＣＣＡＴＡＴＡＴＣＴＧＡＴＴＴＴＴＡＧＣＴＴＴＧＣＡＴＴＴＡＣＴＴＴＡＡＡＴＣＡＴＧＣＴＴＣＡＡＴＴＡＡＡＧＡＣＡＣＡＣＣＴＴＣＴＴＴＡＡＴＣＡＴＴＴＴＡＴＴＡＧＴＡＴＴＴＣＴＡＡＧＴＡＴＧＡＴＧＧＡＡＡＧＧＴＴＣＡＧＡＧＣＴＣＡＧＧＧＧＡＧＧＡＴＡＴＧＧＡＧＡＴＣＣＡＧＧＧＡＧＧＣＴＴＣＣＴＧＴＡＧＧＡＡＧＴＧＧＣＣＴＧＴＧＴＡＧＴＧＣＴＴＣＡＡＧＧＧＣＣＡＧＧＣＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＴＧＴＴＧＣＡＧＣＴＧＡＣＣＡＣＣＣＡＣＣＴＧＣＡＧＴＧＴＡＣＣＧＣＣＧＧＡＡＧＣＡＣＣＡＧＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＣＣＡＴＧＣＡＧＡＴＧＧＡＧＣＴＧＣＡＧＡＧＣＣＣＴＧＡＧＴＡＣＡＡＧＣＴＧＡＧＣＡＡＧＣＴＣＣＧＣＡＣＣＴＣＧＡＣＣＡＴＣＡＴＧＡＣＣＧＡＣＴＡＣＡＡＣＣＣＣＡＡＣＴＡＣＴＧＣＴＴＴＧＣＴＧＧＣＡＡＧＡＣＣＴＣＣＴＣＣＡＴＣＡＧＴＧＡＣＣＴＧＡＡＧＧＡＧＧＴＧＣＣＧＣＧＧＡＡＡＡＡＣＡＴＣＡＣＣＣＴＣＡＴＴＣＧＧＧＧＴＣＴＧＧＧＣＣＡＴＧＧＣＧＣＣＴＴＴＧＧＧＧＡＧＧＴＧＴＡＴＧＡＡＧＧＣＣＡＧＧＴＧＴＣＣＧＧＡＡＴＧＣＣＣＡＡＣＧＡＣＣＣＡＡＧＣＣＣＣＣＴＧＣＡＡＧＴＧＧＣＴＧＴＧＡＡＧＡＣＧＣＴＧＣＣＴＧＡＡＧＴＧＴＧＣＴＣＴＧＡＡＣＡＧＧＡＣＧＡＡＣＴＧＧＡＴＴＴＣＣＴＣＡＴＧＧＡＡＧＣＣＣＴＧＡＴＣＡＴＣＡＧＣＡＡＡＴＴＣＡＡＣＣＡＣＣＡＧＡＡＣＡＴＴＧＴＴＣＧＣＴＧＣＡＴＴＧＧＧＧＴＧＡＧＣＣＴＧＣＡＡＴＣＣＣＴＧＣＣＣＣＧＧＴＴＣＡＴＣＣＴＧＣＴＧＧＡＧＣＴＣＡＴＧＧＣＧＧＧＧＧＧＡＧＡＣＣＴＣＡＡＧＴＣＣＴＴＣＣＴＣＣＧＡＧＡＧＡＣＣＣＧＣＣＣＴＣＧＣＣＣＧＡＧＣＣＡＧＣＣＣＴＣＣＴＣＣＣＴＧＧＣＣＡＴＧＣＴＧＧＡＣＣＴＴＣＴＧＣＡＣＧＴＧＧＣＴＣＧＧＧＡＣＡＴＴＧＣＣＴＧＴＧＧＣＴＧＴＣＡＧＴＡＴＴＴＧＧＡＧＧＡＡＡＡＣＣＡＣＴＴＣＡＴＣＣＡＣＣＧＡＧＡＣＡＴＴＧＣＴＧＣＣＡＧＡＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＴＧＡＣＣＴＧＴＣＣＡＧＧＣＣＣＴＧＧＡＡＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡＧＡＴＴＧＧＡＧＡＣＴＴＣＧＧＧＡＴＧＧＣＣＣＧＡＧＡＣＡＴＣＴＡＣＡＧＧＧＣＧＡＧＣＴＡＣＴＡＴＡＧＡＡＡＧＧＧＡＧＧＣＴＧＴＧＣＣＡＴＧＣＴＧＣＣＡＧＴＴＡＡＧＴＧＧＡＴＧＣＣＣＣＣＡＧＡＧＧＣＣＴＴＣＡＴＧＧＡＡＧＧＡＡＴＡＴＴＣＡＣＴＴＣＴＡＡＡＡＣＡＧＡＣＡＣＡＴＧＧＴＣＣＴＴＴＧＧＡＧＴＧＣＴＧＣＴＡＴＧＧＧＡＡＡＴＣＴＴＴＴＣＴＣＴＴＧＧＡＴＡＴＡＴＧＣＣＡＴＡＣＣＣＣＡＧＣＡＡＡＡＧＣＡＡＣＣＡＧＧＡＡＧＴＴＣＴＧＧＡＧＴＴＴＧＴＣＡＣＣＡＧＴＧＧＡＧＧＣＣＧＧＡＴＧＧＡＣＣＣＡＣＣＣＡＡＧＡＡＣＴＧＣＣＣＴＧＧＧＣＣＴＧＴＡＴＡＣＣＧＧＡＴＡＡＴＧＡＣＴＣＡＧＴＧＣＴＧＧＣＡＡＣＡＴＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＣＡＧＧＣＣＣＡＡＣＴＴＴＧＣＣＡＴＣＡＴＴＴＴＧＧＡＧＡＧＧＡＴＴＧＡＡＴＡＣＴＧＣＡＣＣＣＡＧＧＡＣＣＣＧＧＡＴＧＴＡＡＴＣＡＡＣＡＣＣＧＣＴＴＴＧＣＣＧＡＴＡＧＡＡＴＡＴＧＧＴＣＣＡＣＴＴＧＴＧＧＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＧＡＡＡＧＴＧＣＣＴＧＴＧＡＧＧＣＣＣＡＡＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＧＧＧＴＴＣＣＴＣＣＴＣＴＣＣＴＧＧＴＣＴＣＴＣＡＡＣＡＧＧＣＡＡＡＡＣＧＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＣＧＣＡＧＣＣＣＡＧＣＴＧＣＣＣＣＡＣＣＡＣＣＴＣＴＧＣＣＴＡＣＣＡＣＣＴＣＣＴＣＴＧＧＣＡＡＧＧＣＴＧＣＡＡＡＧＡＡＡＣＣＣＡＣＡＧＣＴＧＣＡＧＡＧＡＴＣＴＣＴＧＴＴＣＧＡＧＴＣＣＣＴＡＧＡＧＧＧＣＣＧＧＣＣＧＴＧＧＡＡＧＧＧＧＧＡＣＡＣＧＴＧＡＡＴＡＴＧＧＣＡＴＴＣＴＣＴＣＡＧＴＣＣＡＡＣＣＣＴＣＣＴＴＣＧＧＡＧＴＴＧＣＡＣＡＡＧＧＴＣＣＡＣＧＧＡＴＣＣＡＧＡＡＡＣＡＡＧＣＣＣＡＣＣＡＧＣＴＴＧＴＧＧＡＡＣＣＣＡＡＣＧＴＡＣＧＧＣＴＣＣＴＧＧＴＴＴＡＣＡＧＡＧＡＡＡＣＣＣＡＣＣＡＡＡＡＡＧＡＡＴＡＡＴＣＣＴＡＴＡＧＣＡＡＡＧＡＡＧＧＡＧＣＣＡＣＡＣＧＡＣＡＧＧＧＧＴＡＡＣＣＴＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＧＧＡＡＧＣＴＧＴＡＣＴＧＴＣＣＣＡＣＣＴＡＡＣＧＴＴＧＣＡＡＣＴＧＧＧＡＧＡＣＴＴＣＣＧＧＧＧＧＣＣＴＣＡＣＴＧＣＴＣＣＴＡＧＡＧＣＣＣＴＣＴＴＣＧＣＴＧＡＣＴＧＣＣＡＡＴＡＴＧＡＡＧＧＡＧＧＴＡＣＣＴＣＴＧＴＴＣＡＧＧＣＴＡＣＧＴＣＡＣＴＴＣＣＣＴＴＧＴＧＧＧＡＡＴＧＴＣＡＡＴＴＡＣＧＧＣＴＡＣＣＡＧＣＡＡＣＡＧＧＧＣＴＴＧＣＣＣＴＴＡＧＡＡＧＣＣＧＣＴＡＣＴＧＣＣＣＣＴＧＧＡＧＣＴＧＧＴＣＡＴＴＡＣＧＡＧＧＡＴＡＣＣＡＴＴＣＴＧＡＡＡＡＧＣＡＡＧＡＡＴＡＧＣＡＴＧＡＡＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＣＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＧＴＣＧＣＡＣＡＣＴＣＡＣＴＴＣＴＣＴＴＣＣＴＴＧＧＧＡＴＣＣＣＴＡＡＧＡＣＣＧＴＧＧＡＧＧＡＧＡＧＡＧＡＧＧＣＡＡＴＧＧＣＴＣＣＴＴＣＡＣＡＡＡＣＣＡＧＡＧＡＣＣＡＡＡＴＧＴＣＡＣＧＴＴＴＴＧＴＴＴＴＧＴＧＣＣＡＡＣＣＴＡＴＴＴＴＧＡＡＧＴＡＣＣＡＣＣＡＡＡＡＡＡＧＣＴＧＴＡＴＴＴＴＧＡＡＡＡＴＧＣＴＴＴＡＧＡＡＡＧＧＴＴＴＴＧＡＧＣＡＴＧＧＧＴＴＣＡＴＣＣＴＡＴＴＣＴＴＴＣＧＡＡＡＧＡＡＧＡＡＡＡＴＡＴＣＡＴＡＡＡＡＡＴＧＡＧＴＧＡＴＡＡＡＴＡＣＡＡＧＧＣＣＣＡＧＡＴＧＴＧＧＴＴＧＣＡＴＡＡＧＧＴＴＴＴＴＡＴＧＣＡＴＧＴＴＴＧＴＴＧＴＡＴＡＣＴＴＣＣＴＴＡＴＧＣＴＴＣＴＴＴＣＡＡＡＴＴＧＴＧＴＧＴＧＣＴＣＴＧＣＴＴＣＡＡＴＧＴＡＧＴＣＡＧＡＡＴＴＡＧＣＴＧＣＴＴＣＴＡＴＧＴＴＴＣＡＴＡＧＴＴＧＧＧＧＴＣＡＴＡＧＡＴＧＴＴＴＣＣＴＴＧＣＣＴＴＧＴＴＧＡＴＧＴＧＧＡＣＡＴＧＡＧＣＣＡＴＴＴＧＡＧＧＧＧＡＧＡＧＧＧＡＡＣＧＧＡＡＡＴＡＡＡＧＧＡＧＴＴＡＴＴＴＧＴＡＡＴＧＡＣＴＡＡ
（配列番号４）
【００５１】
一実施形態では、ＡＬＫは、配列番号１又は３に対して少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、好ましくは、アミノ酸配列は、配列番号１又は３によって表されるタンパク質の天然の機能を実質的に保持する。
【００５２】
一実施形態では、ＡＬＫをコードするヌクレオチド配列は、配列番号２又は４に対して少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の同一性を有するヌクレオチド配列を含み、好ましくは、ヌクレオチド配列によってコードされるタンパク質は、配列番号１又は３によって表されるタンパク質の天然の機能を実質的に保持する。
【００５３】
一実施形態では、ＡＬＫをコードするヌクレオチド配列は、配列番号１又は３に対して少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含み、好ましくは、アミノ酸配列は、配列番号１又は３によって表されるタンパク質の天然の機能を実質的に保持する。
【００５４】
減量及び体重維持
本明細書で使用される場合、用語「減量」は、体重（例えば、キログラム）、体格指数（ｋｇ／ｍ２）、ウェスト・ヒップ比（例えば、センチメートル）、体脂肪量（例えば、キログラム）、殿囲（例えば、センチメートル）、又は腹囲（例えば、センチメートル）などのパラメータの減少を意味し得る。
【００５５】
減量は、介入（例えば、食事療法及び／又は運動療法）の開始時のパラメータの値から介入の終了時の上述のパラメータのうちの１つ以上の値を差し引くことによって計算され得る。
【００５６】
減量度は、上述の体重の表現型パラメータ（例えば、対象の体重（例えば、キログラム）又は体格指数（ｋｇ／ｍ２）における変化率）のうちの１つの変化率として表現され得る。例えば、対象は、その初期体重の少なくとも１０％、その初期体重の少なくとも８％、又はその初期体重の少なくとも５％を減じ得る。単に一例として、対象は、その初期体重の５〜１０％を減じ得る。
【００５７】
一実施形態では、初期体重の少なくとも１０％の減量は、肥満関連の併存症のリスクの大幅な低下をもたらす。
【００５８】
本明細書で使用される場合、用語「体重維持」は、体重（例えば、キログラム）、体格指数（ｋｇ／ｍ２）、ウェスト・ヒップ比（例えば、センチメートル）、体脂肪量（例えば、キログラム）、殿囲（例えば、センチメートル）、又は腹囲（例えば、センチメートル）などのパラメータにおける維持を意味し得る。体重維持は、例えば、介入（例えば、食事療法及び／又は運動療法）後に減量体重を維持することを意味し得る。
【００５９】
体重維持度は、ある期間にわたって上述のパラメータのうちの１つ以上の変化を測定することによって計算され得る。期間は、例えば、少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５又は５０週であり得る。
【００６０】
本発明の作用物質によって支援される体重維持は、例えば、ある期間にわたって上述のパラメータのうちの１つ以上において、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％又は１％未満の変化（例えば、増加）をもたらし得る。
【００６１】
体重維持度は、減量達成後の期間中に再増加した体重として表すことができ、例えば、減量獲得中の減量に関するパーセンテージとして表すことができる。
【００６２】
本発明の作用物質によって支援される体重維持は、作用物質の投与後の対象の食欲の抑制によってもたらされ得る。したがって、対象は、本発明の作用物質の非存在下での食欲と比較して、食欲が低減され得る。
【００６３】
本発明の作用物質によって支援される体重維持は、作用物質の投与後の対象の食欲の制御によってもたらされ得る。したがって、対象は、彼らの食欲の制御を維持することができ、したがって、例えば減量介入の期間後に、その体重を維持することができる。
【００６４】
特に、本発明の作用物質は、減量介入（例えば、食事又は運動療法）の期間中及び／又は後に、食欲抑制又は制御により体重維持を支援し得る。
【００６５】
一態様では、本発明は、例えば減量期間後の、健康な身体組成を維持するための本発明の作用物質の非治療的使用を提供する。
【００６６】
肥満
本明細書で使用する場合、用語「過体重」は、成人に関して、体格指数（ＢＭＩ）が２５〜３０であるものとして定義される。
【００６７】
本明細書で使用する場合、用語「体格指数」は、体重のｋｇ値を身長のメートル値の二乗で除算した比率を意味する。
【００６８】
本明細書で使用する場合、用語「肥満」は、動物、特にヒト及び他の哺乳類の脂肪組織に蓄えられた自然エネルギーが、一定の健康状態又は死亡率の増加に関係する点まで増加した状態を意味する。本明細書で使用する場合、用語「肥満の」は、成人のヒトに関して、３０を超えるＢＭＩを有するものとして定義される。
【００６９】
本明細書で使用する場合、用語「正常体重」は、成人に関して、１８．５〜２５のＢＭＩを有するものとして定義されるが、本明細書で使用する場合、用語「低体重」は、１８．５未満のＢＭＩとして定義され得る。
【００７０】
肥満は、世界中の多くの地域で蔓延している慢性的な代謝疾患であり、２型糖尿病、循環器疾患、脂質代謝異常、及びある種のがんなどといった深刻な併存症の主要なリスク因子である（Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎ．Ｔｅｃｈ．Ｒｅｐ．Ｓｅｒ（２０００）８９４：ｉ−ｘｉｉ、１−２５３）。
【００７１】
本明細書で使用する場合、用語「肥満関連疾患」は、肥満個体が発症するリスクが高い任意の状態を意味する。肥満関連疾患としては、糖尿病（例えば、２型糖尿病）、脳卒中、高コレステロール、心血管疾患、インスリン抵抗性、冠動脈心疾患、メタボリックシンドローム、高血圧及び脂肪肝が挙げられる。
【００７２】
スクリーニング方法
本発明は、ＡＬＫの活性を低下させることが可能な作用物質を提供し、更に、かかる作用物質を同定するための方法を提供する。
【００７３】
本発明の作用物質は、定性的結果又は定量的結果のいずれかを提供する方法によって同定され得る。更に、このような方法を使用して、本発明の作用物質の特性評価並びに同定ができる。
【００７４】
候補となる作用物質は、対象となる可能性のある任意の作用物質、例えばペプチド、ポリペプチド（例えば抗体）、核酸、又は小分子であり得る。好ましくは、候補となる作用物質は、治療目的に関し可能性がある化合物又は混合物である。好ましくは、候補となる作用物質は、哺乳動物、特にヒトにとって低毒性のものである。いくつかの実施形態では、候補となる作用物質は、植物又は動物抽出物などの天然化合物又は化合物の混合物を含む栄養剤及び／又は食品成分を含み得る。
【００７５】
候補となる作用物質は、作用物質のライブラリ、例えば、コンビナトリアル化学により作製されるライブラリ又はファージディスプレイライブラリの一部を形成し得る。一実施形態では、候補となる作用物質は、植物生理活性分子のライブラリの一部を形成する。
【００７６】
ＡＬＫ活性
タンパク質、例えば酵素の活性を低下させるための候補となる作用物質の性能は、ＩＣ５０値で表すことができる。ＩＣ５０は、タンパク質の活性を５０％低下（例えば、酵素活性を５０％低下）させるのに必要とされる作用物質の濃度である。ＩＣ５０値の計算は、当該技術分野において周知である。
【００７７】
好ましくは、本発明の作用物質は、ＡＬＬＫの阻害に関して、ＩＣ５０値が１００μＭ未満、より好ましくは１０μＭ未満、例えば、１μＭ未満、１００ｎＭ未満、又は１０ｎＭ未満である。
【００７８】
ＡＬＫ活性を測定するための技術を、細胞から単離されたＡＬＫに適用することができる。ＡＬＫは、組換え技術を使用して発現されていてもよい。ＡＬＫは、精製されていることが好ましい。
【００７９】
ＡＬＫ結合
本発明はまた、ＡＬＫ結合能があり、あるいは又はそれに加えて、かかる結合の特性を評価することができる作用物質を同定する方法も提供する。例えば、方法は、絶対若しくは相対結合親和性、並びに／又は結合のエンタルピー及びエントロピーの測定を可能にし得る。結合親和性は、平衡解離（Ｋｄ）定数又は会合（Ｋａ）定数で表すことができる。
【００８０】
候補となる作用物質とタンパク質との間の結合を同定するための、多くのアッセイ法が当該技術分野において既知である。使用されるアッセイ法は、好ましくは、候補となる作用物質の自動スクリーニング及び／又はハイスループットスクリーニングに適したものである。アッセイは、マイクロタイタープレート、マイクロビーズ、樹脂、又は同様のものなどの使い捨て固体支持体上で実施され得る。
【００８１】
例えば、標的ＡＬＫは、固体支持体、例えば、マイクロビーズ、樹脂、マイクロタイタープレート又はアレイ上に固定することができる。次いで、この固定した標的タンパク質に候補となる作用物質を接触させてもよい。任意に、洗浄手順を適用して、結合が弱い作用物質又は非特異的に結合している作用物質を除去してもよい。次いで、標的タンパク質に結合する任意の作用物質を検出し、同定することができる。結合剤の検出を容易にするために、候補となる作用物質を、容易に検出可能なマーカーで標識することもできる。マーカーは、例えば、放射性標識、酵素標識、抗体標識、蛍光標識、粒子（例えば、ラテックス又は金）標識、又は同様のものを含み得る。
【００８２】
あるいは、上記の手順を逆にしてもよく、候補となる作用物質を固定してもよく、標的ＡＬＫを当該固定剤と接触させてもよい。任意に、洗浄手順を適用して、弱く結合した標的タンパク質又は非特異的に結合した標的タンパク質を除去してもよい。次いで、ＡＬＫが結合する任意の作用物質を検出し、同定することができる。結合の検出を容易にするために、ＡＬＫを、上記のように容易に検出可能なマーカーで標識してもよい。
【００８３】
上記のアッセイに加えて、他の好適なアッセイ法が当該技術分野において既知である。このような手法の例としては、放射アッセイ、蛍光アッセイ、ＥＬＩＳＡ、蛍光偏光、蛍光異方性、等温滴定型熱量測定（ＩＴＣ）、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）などが挙げられる。これらのアッセイは、ＡＬＫに結合する作用物質を同定するために適用することができる。実際、これらの手法の多くを自動化するためのプラットフォームは、ハイスループットスクリーニングを容易にすることが当該技術分野において広く知られている。
【００８４】
２つ以上のアッセイ技術を使用して、候補となる作用物質のＡＬＫに対する結合に関する詳細な理解を提供することもできる。例えば、定性的な結合情報を提供するアッセイを、本方法における第１ステップとして使用することができ、続いて、定量的結合データ及び／又は標的タンパク質の活性に対する効果についてのデータを提供するために、異なる技術を使用して更なるアッセイを行うことができる。
【００８５】
競合結合試験を実施するために、上記のアッセイ法を適用してもよい。例えば、これらの手法は、候補となる作用物質の存在下で、タンパク質の基質又は補因子への結合を分析するのに同様に好適である。したがって、タンパク質とその基質又は補因子との間の結合を調節し、これによりタンパク質の活性に影響を及ぼす作用物質をスクリーニング及び同定するために、上記手法を使用することが可能である。
【００８６】
好ましくは、本発明の作用物質は、高い親和性で結合するであろう。例えば、本発明の作用物質は、１００μＭ未満、より好ましくは１０μＭ未満、例えば、１μＭ未満、１００ｎＭ未満、又は１０ｎＭ未満のＫｄでＡＬＫに結合する。
【００８７】
結合親和性は、当該技術分野において既知の標準的な手法、例えば、表面プラズモン共鳴、ＥＬＩＳＡなど（例えば上記のようなもの）を使用して測定することができ、解離（Ｋｄ）定数又は会合（Ｋａ）定数のいずれかで定量することができる。
【００８８】
ｉｎ  ｓｉｌｉｃｏ構造誘導スクリーニングなどのバイオインフォマティクスに基づくアプローチもまた、本発明の作用物質を同定するために使用され得る。
【００８９】
ＡＬＫレベル
本発明は、ＡＬＫレベルを低下させるための作用物質を提供する。ＡＬＫレベルは、細胞又は生物におけるタンパク質の発現レベルと同一であり得る。タンパク質レベルは、例えば、タンパク質をコードするｍＲＮＡのレベルの分析によって、直接又は間接的に分析され得る。
【００９０】
ＡＬＫの発現を分析するための方法は、候補となる作用物質のタンパク質レベルに対する効果をスクリーニングするために、本発明において使用することができる。
【００９１】
タンパク質の発現レベルを決定するための多くの手法が当該技術分野において既知である。これらの技術は、候補となる作用物質のＡＬＫの発現レベルに対する効果を試験するために適用することができる。使用される手法は、好ましくは、候補となる作用物質の自動スクリーニング及び／又はハイスループットスクリーニングに適したものである。
【００９２】
例えば、スクリーニングは、レポーター部分に操作可能に連結されたＡＬＫをコードしているポリヌクレオチドを含む細胞を使用して実施することができる。レポーター部分は、内因性ＡＬＫコード遺伝子に操作可能に連結することができる。あるいは、レポーター部分に操作可能に連結されたＡＬＫの外因性コピーを細胞に挿入してもよい。この実施形態では、細胞は、もともとのＡＬＫ発現を欠損するように遺伝子操作によって改変することができる。好適なレポーター部分としては、蛍光標識、例えば、緑、黄、チェリー、シアン、又はオレンジ蛍光タンパク質などの蛍光タンパク質が挙げられる。
【００９３】
本明細書で使用する場合、用語「操作可能に連結された」は、記載される構成要素が、意図された様式での機能を可能にする関係にあることを意味する。
【００９４】
上記の細胞は、候補となる作用物質と接触させることができ、また、当該細胞におけるレポーター部分の発現レベルを分析することによって、ＡＬＫの発現レベルを監視することができる。蛍光レポーター部分は、当該技術分野において既知の多くの手法、例えばフローサイトメトリー、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）及び蛍光顕微鏡法によって分析することができる。ＡＬＫの発現レベルは、候補となる作用物質との接触の前及び後に比較することができる。あるいは、ＡＬＫの発現レベルは、候補となる作用物質と接触した細胞と、対照細胞との間で比較することができる。
【００９５】
他の方法を使用して、タンパク質、例えば、ＡＬＫの発現を分析することができる。タンパク質発現は、直接分析され得る。例えば、発現は、クマシー染色又は銀染色による可視化を伴うＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析などの方法を使用して定量的に分析することができる。あるいは、発現は、タンパク質生成物に結合する抗体プローブによるウエスタンブロット法又は酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を用いて、定量的に分析することができる。上記のように、レポーター部分によって標識されたＡＬＫもまた、これらの方法で使用することができる。あるいは、タンパク質発現は、例えば、細胞内で転写されるタンパク質に相当するｍＲＮＡの量を調査することによって間接的に分析されてもよい。これは、定量的逆転写ＰＣＲ及びノーザンブロットなどの方法を使用して達成することができる。
【００９６】
同様の手法を、レプチンタンパク質の発現の分析に使用することができる。
【００９７】
作用物質
本発明は、ＡＬＫの活性を低下させることが可能な作用物質を提供し、更に、かかる作用物質を同定するための方法を提供する。
【００９８】
本発明の作用物質は、例えば、ペプチド、ポリペプチド（例えば抗体）、核酸（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、及びアンチセンスＲＮＡ）又は小分子であり得る。好ましくは、作用物質は、哺乳動物、特にヒトにとって低毒性である。いくつかの実施形態では、作用物質は、植物又は動物抽出物などの天然化合物又は化合物の混合物を含む栄養剤及び／又は食品成分を含んでもよい。
【００９９】
ＡＬＫの活性を低下させる又はＡＬＫの活性に影響を及ぼす作用物質の例としては、表１に列挙した作用物質が挙げられる。
【０１００】
【表１】
2021504304.tif 000003
【０１０１】
本発明による使用のための作用物質は、例えば、塩又はエステル、特に薬剤として許容される塩又はエステルとして存在し得る。
【０１０２】
ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ及びアンチセンスＤＮＡ／ＲＮＡ
ＡＬＫの発現は、転写後遺伝子サイレンシング（ＰＴＧＳ）を用いて調節することができる。二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）によって介在される転写後遺伝子サイレンシングは、外来遺伝子の発現を制御するための、保存された細胞防御機構である。トランスポゾン又はウイルスなどの因子のランダムな組み込みは、相同一本鎖ｍＲＮＡ又はウイルスゲノムＲＮＡの配列特異的な分解を活性化するｄｓＲＮＡの発現を生じさせると考えられる。サイレンシング効果は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）として知られている（Ｒａｌｐｈ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｎａｔ．Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １１：４２９−４３３）。ＲＮＡｉの機序は、長いｄｓＲＮＡを約２１〜２５ヌクレオチド（ｎｔ）のＲＮＡ二本鎖にプロセシングすることを含む。これらの産物は、ｍＲＮＡの分解の配列特異的メディエータである、低干渉又はサイレンシングＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）と呼ばれる。分化した哺乳類細胞において、３０ｂｐより長いｄｓＲＮＡは、タンパク質合成の停止及び非特異的ｍＲＮＡ分解をもたらすインターフェロン応答を活性化することが見出されている（Ｓｔａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６７：２２７−６４）。しかしながら、この応答を、２１ｎｔのｓｉＲＮＡ二本鎖を使用することによって回避して（Ｅｌｂａｓｈｉｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）ＥＭＢＯ  Ｊ．２０：６８７７−８８；Ｈｕｔｖａｇｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９３：８３４−８）、培養哺乳動物細胞での遺伝子機能の分析を可能にすることができる。
【０１０３】
ｓｈＲＮＡは、小さなループ配列によって隔てられた短い逆方向反復ＲＮＡからなる。これらは、細胞機構によって１９〜２２ｎｔのｓｉＲＮＡに迅速にプロセシングされ、それによって標的遺伝子発現が抑制される。
【０１０４】
マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）は、３’非翻訳領域（ＵＴＲ）に結合することにより標的ｍＲＮＡの翻訳を効果的に減少させることができる、小さな（長さ２２〜２５ヌクレオチドの）ノンコーディングＲＮＡである。マイクロＲＮＡは、生物において天然に産生される小さなＲＮＡの非常に大きな群であり、そのうちの少なくともいくつかは標的遺伝子の発現を調節する。マイクロＲＮＡファミリーの基本構成要素は、ｌｅｔ−７及びｌｉｎ−４である。ｌｅｔ−７遺伝子は、虫の発生の間、内在的なタンパク質コード遺伝子の発現を調節する、高度に保存された小さなＲＮＡ分子をコードする。活性のあるＲＮＡ分子は、まず約７０ｎｔの前駆体として転写され、この前駆体は、転写後に約２１ｎｔの成熟型へとプロセシングされる。ｌｅｔ−７及びｌｉｎ−４はいずれも、Ｄｉｃｅｒ酵素によってそれらの成熟型にプロセシングされるヘアピンＲＮＡ前駆体として転写される。
【０１０５】
アンチセンスの概念は、短くて、場合によっては修飾されたＤＮＡ分子又はＲＮＡ分子を、細胞内で選択的にメッセンジャーＲＮＡに結合させ、かかるメッセンジャーＲＮＡにコードされるタンパク質の合成を防止するというものである。
【０１０６】
標的タンパク質の発現を調節するためのｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ及びアンチセンスＤＮＡ／ＲＮＡの設計方法、並びにこれらの作用物質を対象となる細胞に送達する方法は、当該技術分野において周知である。更に、例えば組織特異的プロモーターを使用することによって、生物中の特定の細胞型におけるタンパク質の発現を特異的に調節する（例えば、低下させる）ための方法が、当該技術分野において周知である。
【０１０７】
抗体
本明細書で使用する場合、用語「抗体」は、選択された標的に結合することができる完全な抗体又は抗体断片を意味し、Ｆｖ、ＳｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）及びＦ（ａｂ’）２、モノクローナル抗体及びポリクローナル抗体、改変抗体、例えば、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト化抗体及びヒト化抗体、並びにファージディスプレイ又は代替技術を用いて産生される人工的に選択された抗体が挙げられる。
【０１０８】
加えて、本発明ではまた、典型的な抗体の代替物、例えば、「アビボディ」、「アビマー」、「アンチカリン」、「ナノボディ」、及び「ＤＡＲＰｉｎ」も使用され得る。
【０１０９】
抗体の製造方法は、当業者に既知である。あるいは、抗体は、民間の供給元に由来するものでもよい。
【０１１０】
ポリクローナル抗体が所望される場合、選択された哺乳動物（例えば、マウス、ウサギ、ヤギ、又はウマ）は免疫され得る。既知の手順に従って、免疫動物から血清を回収し、処理してもよい。血清が他の抗原に対するポリクローナル抗体を含有する場合、ポリクローナル抗体は、免疫親和性クロマトグラフィによって精製され得る。ポリクローナル抗血清を製造及びプロセシングするための手法は、当該技術分野において既知である。
【０１１１】
本発明で使用される抗原（例えば、タンパク質）に対するモノクローナル抗体は、当業者によって容易に産生され得る。ハイブリドーマによりモノクローナル抗体を作製するための一般的な方法は周知である。不死化抗体産生細胞株は、細胞融合によって、また、腫瘍形成性のＤＮＡによるＢリンパ球の直接形質転換、又はエプスタインバーウイルスによるトランスフェクションなどの他の手法によって作製することができる。抗原に対して産生されるモノクローナル抗体の集団は、様々な特性、例えば、アイソタイプ及びエピトープ親和性についてスクリーニングすることができる。
【０１１２】
代替的な手法は、例えば、ファージが自身のコートの表面上に、多様な相補性決定領域（ＣＤＲ）を有するｓｃＦｖ断片を発現する、ファージディスプレイのライブラリをスクリーニングすることを含む。この手法は、当該技術分野において周知である。
【０１１３】
抗原に対するモノクローナル及びポリクローナルいずれの抗体も、診断において特に有用であり、中和抗体は、受動免疫療法において有用である。モノクローナル抗体は、特に、抗イディオタイプ抗体を産生するために使用され得る。抗イディオタイプ抗体は、それに対する防御が所望される感染因子である抗原の、「インターナルイメージ（ｉｎｔｅｒｎａｌ  ｉｍａｇｅ）」を有する免疫グロブリンである。
【０１１４】
抗イディオタイプ抗体を産生するための手法は、当該技術分野において既知である。これらの抗イディオタイプ抗体はまた、抗原の免疫病原性領域の解明に加えて、治療に有用であり得る。
【０１１５】
ポリペプチド及びポリヌクレオチドの細胞への導入
本発明で使用するための作用物質は、例えば、ポリペプチド又はポリヌクレオチドであり得る。ポリヌクレオチド及びポリペプチドはまた、本発明の方法又はスクリーニングアッセイの一部として細胞内へ導入することが必要な場合がある。
【０１１６】
本発明がポリペプチドを使用する場合、細胞に直接ポリペプチドが投与されてよく（例えば、ポリペプチド自体が投与され得る）、又は対象とする細胞においてポリペプチドの発現を可能にする条件下で、ポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドを細胞に導入することによって、ポリペプチドが投与され得る。ポリヌクレオチドは、ベクターを使用して細胞に導入され得る。
【０１１７】
ベクターは、ある環境から別の環境への対象物の移動を可能にする又は容易にするツールである。本発明によれば、及び一例として、組換え核酸法で使用されるいくつかのベクターは、核酸のセグメント（例えば、異種ｃＤＮＡセグメントなどの異種ＤＮＡセグメント）などの対象物を標的細胞に移動させることができる。ベクターは、細胞内で異種核酸（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ）を維持する、核酸断片を含むベクターの複製を促進する、又は核酸断片によってコードされるタンパク質の発現を促進する目的を果たし得る。ベクターは、非ウイルス又はウイルスであってもよい。組換え核酸法で使用されるベクターの例としては、プラスミド、染色体、人工染色体及びウイルスが挙げられるが、これらに限定されない。ベクターは、例えば、ネイキッド（ｎａｋｅｄ）核酸（例えば、ＤＮＡ）であってもよい。最も単純な形態では、ベクターそのものが、目的のヌクレオチドであってもよい。
【０１１８】
本発明で使用されるベクターは、例えば、プラスミド又はウイルスベクターであり得、ポリヌクレオチドの発現のためのプロモーター、及び任意にプロモーターのレギュレーターを含み得る。
【０１１９】
本発明で使用されるポリヌクレオチドを含むベクターは、形質導入及びトランスフェクションなど、当該技術分野において既知の様々な手法を使用して細胞に導入することができる。例えば、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、バキュロウイルス、及び単純ヘルペスウイルスベクターなどの組換えウイルスベクターを用いた感染；核酸の直接注入、並びに遺伝子銃による形質転換など、この目的に好適ないくつかの手法が、当該技術分野で既知である。非ウイルス送達系としては、ＤＮＡトランスフェクション法が挙げられるが、これに限定されない。トランスフェクションは、非ウイルスベクターを使用して標的細胞に遺伝子を送達するプロセスを含む。
【０１２０】
ポリペプチド又はポリヌクレオチドの移動は、物理的又は化学的に細胞膜を透過させ得る当該技術分野において既知の方法のいずれかによって実施され得る。ポリペプチドを細胞に移動させるために、細胞膜透過ペプチドも使用され得る。
【０１２１】
加えて、本発明は、遺伝子ターゲティングプロトコル、例えば、ＤＮＡ修飾剤の送達を用いてもよい。
【０１２２】
ベクターは、発現ベクターであり得る。本明細書に記載される発現ベクターは、転写可能な配列を含有する核酸領域を含む。したがって、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、及びｒＲＮＡをコードする配列が、この定義に含まれる。
【０１２３】
発現ベクターは、好ましくは、宿主細胞によるコーディング配列の発現をもたらすことが可能な制御配列に操作可能に連結された、本発明で使用するためのポリヌクレオチドを含む。コーディング配列に「操作可能に連結される」調節配列は、制御配列に適した条件下でコーディング配列の発現が達成されるように連結される。例えば、制御配列によって指示される転写レベルを、より転写調節因子に応答したものにする追加の転写調節配列を付加することによって、制御配列が修飾されてもよい。
【０１２４】
ポリヌクレオチド
本発明のポリヌクレオチドは、ＤＮＡ又はＲＮＡを含み得る。これらは、一本鎖又は二本鎖であり得る。数多くの異なるポリヌクレオチドが、遺伝コードの縮重の結果として同じポリペプチドをコードし得ることが、当業者には理解されるであろう。加えて、本発明のポリペプチドを発現させる任意の特定の宿主生物のコドン使用を反映するように、常法を用いて、本発明のポリヌクレオチドにコードされるポリペプチド配列に影響を与えないヌクレオチド置換をすることが、当業者に可能であることが理解されるべきである。
【０１２５】
ポリヌクレオチドは、当該技術分野において利用可能な任意の方法によって修飾され得る。このような修飾は、本発明のポリヌクレオチドのｉｎ  ｖｉｖｏ活性又は使用可能時間を向上させるために実施され得る。
【０１２６】
ＤＮＡポリヌクレオチドなどのポリヌクレオチドは、組換えにより、合成により、又は当業者に利用可能な任意の手段によって産生され得る。これらはまた、標準的な技術によってクローン化され得る。
【０１２７】
より長いポリヌクレオチドは、一般的に、例えばポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）クローニング技術を用いて、組換え手段を使用して産生される。これは、クローン化の対象とする標的配列に隣接する一対のプライマー（例えば、約１５〜３０ヌクレオチド）を作製することと、プライマーをｍＲＮＡ又はｃＤＮＡ、例えば、動物又はヒト細胞から得られるｍＲＮＡ又はｃＤＮＡと接触させることと、所望の領域の増幅をもたらす条件下でポリメラーゼ連鎖反応を実施することと、（例えば、アガロースゲルで反応混合物を精製することによって）増幅された断片を単離することと、増幅されたＤＮＡを回収することと、を含む。プライマーは、増幅されたＤＮＡを好適なベクターにクローン化することができるように、好適な制限酵素認識部位を含有するように設計することができる。
【０１２８】
タンパク質
本明細書で使用する場合、用語「タンパク質」は、単鎖ポリペプチド分子、加えて個々の構成ポリペプチドが共有結合又は非共有結合によって連結される複数のポリペプチドの複合体を含む。本明細書で使用する場合、用語「ポリペプチド」及び「ペプチド」は、モノマーがアミノ酸であり、ペプチド結合又はジスルフィド結合を介してともに連結したポリマーを意味する。
【０１２９】
多様体、誘導体、類似体、相同体、及び断片
本明細書で言及される特定のタンパク質及びヌクレオチドに加えて、本発明は、多様体、誘導体、類似体、相同体、及びこれらの断片を包含する。
【０１３０】
本発明の文脈において、任意の所与の配列の多様体は、対象とするポリペプチド又はポリヌクレオチドが、その内在的な機能のうちの少なくとも１つを保持するような方法で、特定配列の残基（アミノ酸残基又は核酸残基のいずれか）が修飾された配列である。多様体配列は、天然ポリペプチド又はポリヌクレオチド中に存在する少なくとも１つの残基の付加、欠失、置換、修飾、交換、及び／又は変異によって得ることができる。
【０１３１】
本明細書で使用する場合、本発明のタンパク質又はポリペプチドに関し、用語「誘導体」は、得られたタンパク質又はポリペプチドがその内在的な機能のうちの少なくとも１つを保持するのであれば、配列から又は配列への１つ（又は１つ以上の）アミノ酸残基の任意の置換、変異、修飾、置き換え、欠失及び／又は付加を含む。
【０１３２】
本明細書で使用する場合、ポリペプチド又はポリヌクレオチドに関し、用語「類似体」は、任意の模倣物質を、すなわち、模倣するポリペプチド又はポリヌクレオチドの内在的な機能のうちの少なくとも１つを有する化合物を含む。
【０１３３】
典型的には、修飾配列が必要な活性又は能力を保持するのであれば、アミノ酸置換は、例えば、１、２、又は３〜１０、又は２０個の置換が行われてもよい。アミノ酸置換は、非天然に生じる類似体の使用を含み得る。
【０１３４】
本発明で使用されるタンパク質は、サイレントな変化をもたらし、結果として機能的に等価なタンパク質が得られる、アミノ酸残基の欠失、挿入、又は置換も含み得る。内在的な機能が保有されるという条件で、残基の極性、電荷、溶解性、疎水性、親水性及び／又は両親媒性における類似性をもとに、計画的なアミノ酸置換がなされ得る。例えば、負に帯電したアミノ酸としてはアスパラギン酸及びグルタミン酸が挙げられ、正に帯電したアミノ酸としてはリジン及びアルギニンが挙げられ、並びに帯電しておらず同様の親水性値をもつ極性頭部を有するアミノ酸としては、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、及びチロシンが挙げられる。
【０１３５】
保存的置換は、例えば、下表によりなされ得る。第２欄の同じブロックにおけるアミノ酸、及び好ましくは第３欄の同じ行内にあるアミノ酸は、互いに置換され得る。
【０１３６】
【表２】
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【０１３７】
本明細書で使用する場合、用語「相同体」は、野生型アミノ酸配列又は野生型ヌクレオチド配列と特定の相同性を有する対象物を意味する。用語「相同性」は、「同一性」と同一視可能である。
【０１３８】
本文脈において、相同配列は、対象配列と少なくとも５０％、５５％、６５％、７５％、８５％又は９０％同一、好ましくは少なくとも９５％、又は９７％、又は９９％同一であり得るアミノ酸配列を含むものとみなされる。典型的には、相同体は、対象とするアミノ酸配列と同じ活性部位等を含み得る。相同性は、類似性（すなわち、類似する化学的特性／機能を有するアミノ酸残基）の観点で考慮することもできるが、本発明の文脈では、相同性を配列同一性の観点で表現することが好ましい。
【０１３９】
本文脈において、相同配列は、対象配列と少なくとも５０％、５５％、６５％、７５％、８５％又は９０％同一、好ましくは少なくとも９５％、又は９７％、又は９９％同一であり得るヌクレオチド配列を含むものとみなされる。相同性は、類似性の観点で考慮することもできるが、本発明の文脈では、相同性を配列同一性の観点で表現することが好ましい。
【０１４０】
好ましくは、本明細書に記載の配列番号のうちのいずれか１つに対しある程度の同一性（％）を有する配列についての言及は、参照する配列番号の全長に対し記載の同一性（％）を有する配列を指すものである。
【０１４１】
相同性比較は、目で行うこともでき、又はより一般的には、容易に利用できる配列比較プログラムを使用して実施できる。これらの市販のコンピュータプログラムにより、２つ以上の配列間の相同性（％）又は同一性（％）を計算することができる。
【０１４２】
相同性（％）は、連続的な配列にわたって計算することができる。すなわち、一方の配列を他方の配列とアラインメントし、一方の配列中の各々のアミノ酸又はヌクレオチドを他方の配列中の対応するアミノ酸又はヌクレオチドと一度に１残基ずつ直接比較する。これは、「ギャップなし」アラインメントと呼ばれている。典型的には、こうしたギャップなしアラインメントは、比較的短い残基数に対してのみ行われる。
【０１４３】
これは、非常に単純で一貫した方法であるが、例えば、アミノ酸又はヌクレオチド配列中の１箇所の挿入又は欠失を除き同一である配列のペアにおいて、それに後続する残基又はコドンがアラインメントから外れる場合があることを考慮していないため、グローバルアラインメントを実施する場合に、相同性（％）が大きく減少する可能性がある。そのため、ほとんどの配列比較法は、全体的な相同性スコアに過度にペナルティを適用せずに、考えられる挿入及び欠失を考慮に入れた最適アラインメントを生成するように設計されている。これは、局所相同性を最大にするように、配列アラインメント中に「ギャップ」を挿入することによって達成される。
【０１４４】
しかしながら、これらのより複雑な方法は、同数の同一のアミノ酸又はヌクレオチドに対して、２つの比較配列間の関係性がより高いことを反映している可能な限り少ないギャップを有する配列アラインメントが、多数のギャップを有する配列アラインメントよりも高いスコアを達成するように、アラインメント中に生じる各ギャップに「ギャップペナルティ」を割り当てている。典型的に、ギャップの存在には比較的高いコストを課し、ギャップ中の後続するそれぞれの残基には小さなペナルティを課す、「アフィンギャップコスト」が使用される。これは、最も一般的に使用されているギャップスコアリングシステムである。当然のことながら、ギャップペナルティが高いと、ギャップのより少ない最適化アラインメントが生成される。ほとんどのアラインメントプログラムは、ギャップペナルティを変更することができる。しかしながら、配列比較のためにこのようなソフトウェアを使用する場合、デフォルト値を用いるのが好ましい。例えば、ＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｂｅｓｔｆｉｔパッケージを用いる場合、アミノ酸配列のデフォルトギャップペナルティは、ギャップについては−１２であり、各伸長については−４である。
【０１４５】
したがって、最大相同性（％）の算出には、まず、ギャップペナルティを考慮した最適アラインメントの生成が必要である。このようなアラインメントを実施するのに好適なコンピュータプログラムは、ＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｂｅｓｔｆｉｔパッケージである（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｕ．Ｓ．Ａ．；Ｄｅｖｅｒｅｕｘ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １２：３８７）。配列比較を行うことができる他のソフトウェアの例には、ＢＬＡＳＴパッケージ（Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）同書１８章参照）、ＦＡＳＴＡ（Ａｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４０３−４１０）及びＧＥＮＥＷＯＲＫＳ式の比較ツールが挙げられるが、これらに限定されない。ＢＬＡＳＴとＦＡＳＴＡとはいずれもオフライン及びオンライン検索が利用可能である（Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）同書７−５８〜７−６０頁参照）。しかしながら、いくつかの用途については、ＧＣＧ  Ｂｅｓｔｆｉｔプログラムを使用するのが好ましい。ＢＬＡＳＴ２  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓと称する別のツールもまた、タンパク質とヌクレオチド配列との比較に使用できる（ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｌｅｔｔ．（１９９９）１７４（２）：２４７−５０；ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｌｅｔｔ．（１９９９）１７７（１）：１８７−８）。
【０１４６】
最終的な相同性（％）を同一性の点から測定することができるが、アラインメントプロセスそのものは、典型的には、イエスかノーかのペア比較に基づいていない。むしろ、化学的類似性又は進化距離に基づいて各々のペアワイズ比較にスコアを割り当てる、スケール化類似性スコア行列が通常使用される。一般的に使用されるこのような行列の例は、ＢＬＯＳＵＭ６２行列（ＢＬＡＳＴ式プログラムのデフォルト行列）である。ＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎプログラムは、通常、パブリックデフォルト値、又は提供される場合はカスタムシンボル比較表のいずれかを使用する（更なる詳細についてはユーザマニュアル参照）。いくつかの用途については、ＧＣＧパッケージ用のパブリックデフォルト値を用いることが、又は他のソフトウェアの場合は、ＢＬＯＳＵＭ６２などのデフォルト行列を使用することが好ましい。
【０１４７】
ソフトウェアにより最適アラインメントが生成されたら、相同性（％）、好ましくは配列同一性（％）を算出することができる。典型的に、ソフトウェアは、配列比較の一部としてこれを行い、数値による結果を生成する。
【０１４８】
「断片」はまた、多様体であり、その用語は、典型的には、機能的に又は例えばアッセイにおいてのいずれかで、対象となるポリペプチド又はポリヌクレオチドの選択領域を意味する。したがって、「断片」は、完全長のポリペプチド又はポリヌクレオチドの一部分であるアミノ酸配列又は核酸配列を指す。
【０１４９】
このような多様体は、部位特異的変異導入などの標準的な組換えＤＮＡ法を用い調製され得る。挿入がなされる場合、挿入部位のいずれかの側の天然に生じる配列に相当する５’及び３’隣接領域と合わせて挿入部位をコードしている、合成ＤＮＡが作製され得る。隣接領域は、適切な酵素（複数可）により配列が切断されて、合成ＤＮＡが切断部分にライゲートされ得るよう、天然に生じる配列中の部位に相当する適当な制限部位を含有し得る。次に、このＤＮＡを本発明により発現させて、コードされているタンパク質を作製する。これらの方法は、ＤＮＡ配列の操作について当該技術分野で既知の数多くの標準法について単に例示するものであり、その他の既知の手法も使用され得る。
【０１５０】
コドン最適化
本発明で使用されるポリヌクレオチドは、コドンの最適化がなされ得る。コドン最適化は、国際公開第１９９９／４１３９７号及び同第２００１／７９５１８号に既に記載されている。細胞が異なると、特定のコドンの使用で相違がある。このコドンバイアスは、その細胞型における特定のｔＲＮＡの相対的存在量におけるバイアスに対応している。対応するｔＲＮＡの相対的存在量と一致するように調整されるように、配列中のコドンを変更することにより、発現を増加させることが可能である。同様に、対応するｔＲＮＡが特定の細胞型で稀であることが分かっているコドンを意図的に選択することによって発現を低下させることが可能である。このように、転写度合いの追加的な制御が可能である。哺乳類細胞のコドン使用表は、他の多様な生物と同様に当業者に知られている。
【０１５１】
治療方法
治療についての本明細書の全参照は、治癒的、緩和的、予防的治療を含む。哺乳類、特にヒトの治療が好ましい。ヒト及び動物治療の両方が、本発明の範囲内である。
【０１５２】
投与
本発明で使用される作用物質は単独で投与され得るが、特にヒトの治療法において、それらは一般的には医薬担体、賦形剤又は希釈剤との混合物で投与されるであろう。
【０１５３】
いくつかの実施形態では、作用物質は栄養剤、食品添加物、又は食品成分であり、したがって好適な食品組成物に配合され得る。そのため、作用物質は、例えば食料品、飲料、栄養補助食品、機能性食品、栄養配合物又はペットフード製品の形態で投与され得る。
【０１５４】
投与量
当業者は、本発明の作用物質について、過度の実験を行わずとも、対象への投与に適切な投与量を容易に決定することができる。典型的には、医師が個々の患者に最も好適な実際の投与量を決定し、その投与量は、用いる特定の化合物の活性、その化合物の代謝安定性及び作用期間、齢、体重、健康状態、性別、食事、投与の方法及び時期、排出率、併用する薬剤、特定の状態についての重症度、並びに個々に受けている治療を含む様々な因子によるであろう。当然ではあるが、より高い又はより低い投与量範囲が優れている個別の場合があり得、そのような場合も本発明の範囲内にある。
【０１５５】
対象
本明細書で使用する場合、用語「対象」は、ヒト又は非ヒト動物のいずれかを意味する。
【０１５６】
非ヒト動物の例としては、脊椎動物、例えば、非ヒト霊長類（特に高等霊長類）、イヌ、げっ歯類（例えば、マウス、ラット、又はモルモット）、ブタ及びネコなどの哺乳類が挙げられる。非ヒト動物は、コンパニオンアニマルであってもよい。
【０１５７】
好ましくは、対象は、ヒトである。
【０１５８】
当業者は、開示される本発明の範囲から逸脱することなく、本明細書に開示される本発明の全ての特徴を組み合わせることができることを理解するであろう。
【０１５９】
本発明の好ましい特徴及び実施形態を、これより非限定的な例によって記述する。
【０１６０】
本発明の実施は、特に指示がない限り、当業者の能力の範囲内である、化学、生化学、分子生物学、微生物学、及び免疫学の従来技術を使用する。かかる技術は文献で説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．，Ｆｒｉｔｓｃｈ，Ｅ．Ｆ．ａｎｄ  Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｔ．（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ；Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（１９９５  ａｎｄ  ｐｅｒｉｏｄｉｃ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｃｈ．９，１３  ａｎｄ  １６，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ；Ｒｏｅ，Ｂ．，Ｃｒａｂｔｒｅｅ，Ｊ．ａｎｄ  Ｋａｈｎ，Ａ．（１９９６）ＤＮＡ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ：Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ；Ｐｏｌａｋ，Ｊ．Ｍ．ａｎｄ  ＭｃＧｅｅ，Ｊ．Ｏ’Ｄ．（１９９０）Ｉｎ  Ｓｉｔｕ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ；Ｇａｉｔ，Ｍ．Ｊ．（１９８４）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、並びに、Ｌｉｌｌｅｙ，Ｄ．Ｍ．ａｎｄ  Ｄａｈｌｂｅｒｇ，Ｊ．Ｅ．（１９９２）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ：ＤＮＡ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  Ｐａｒｔ  Ａ：Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ＤＮＡ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓを参照のこと。これらの一般的なテキストの各々は、本明細書に参照により組み込まれる。
【実施例】
【０１６１】
実施例１：ＡＬＫの遺伝多様体と痩せの表現型との関連
集団選択．この研究は、ＥＧＣＵＴバイオバンクからのデータを使用して、体質性痩せ（ＣＴ）個体に関して実施される遺伝子関連研究に関する。エストニアは、Ｅｓｔｏｎｉａｎ  Ｇｅｎｏｍｉｃ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｔａｒｔｕ（ＥＧＣＵＴ）によって、６０，０００人の生物学的サンプル（ＤＮＡ、ＲＮＡ及び血漿）及び臨床データを用い、一般集団に基づくバイオバンクを設立した。痩せの表現型は、年齢及び性別で補正した最低６パーセンタイルのＢＭＩを有する人々と定義され、厳格な除外基準としては、妊娠、閉経後又は月経異常と、菜食主義者である対象又は食物に対して既知の不耐性（アレルギー）を有する対象と、ＤＳＭＩＶに従って診断された摂食障害の対象と、週に１０杯を超えるワインの飲酒と、重度の慢性疾患（例えば、糖尿病）と、過度の身体活動（週に３回を超えるトレーニングセッション）と、週に１０本を超えるタバコ、うつ病又は精神医学的状態（抗うつ治療）と、体重に影響を与えることが知られている過去の手術（特に肥満症の手術）と、ベータ遮断薬、降圧薬、脂質低下薬、又はコルチコイドによる長期間にわたる既知の治療下の対象と、がん患者と、が挙げられる。それらのデータベースの分析により、８００人のＣＴ個体が特定され、並びに３０００人の適した対照個体が分かった。このリソースにより、ＣＴ表現型についての強力かつ制御された遺伝子研究が可能になる。これは、ＣＴ表現型の遺伝的構成要素を大規模に試験する最初の研究である。
【０１６２】
遺伝子型の同定．遺伝子型データは、ＨｕｍａｎＣｏｒｅＰｓｙアレイ（ｗｗｗ．Ｉｌｌｕｍｉｎａ．ｃｏｍ）を使用して生成した。遺伝子型は、ＧｅｎｏｍｅＳｔｕｄｉｏソフトウェア（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）によってコールした。ＺＣａｌｌ（Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．）を使用して、希少な多様体の遺伝子型コーリングを実施した（Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ（２０１２））。遺伝子型の品質管理により、
ＳＮＰコールレート＜９８％
把握している性別と遺伝子型データから推定される性別との間の不一致
遺伝子型ヘテロ接合性＞３標準偏差
集団の外れ値（ＭＤＳ分析で検出したもの）
によって対象を除いた。
また品質管理により、
コールレート＜９５％
Ｈａｒｄｙ−Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡からの偏差（ｐ＜１ｅ−４）
潜性対立遺伝子頻度（ＭＡＦ）＜１％を有する希少多様体
Ａ／Ｔ又はＣ／Ｇ遺伝子型（インピュテーション前（ｐｒｉｏｒ  ｉｍｐｕｔａｔｉｏｎ））
である場合に、対象を除外した。
【０１６３】
次いで、１０００ゲノムプロジェクト（Ａｂｅｃａｓｉｓ，Ｇ．Ｒ．ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ４９１，５６−６５（２０１２））（１０００ゲノム統合ハプロタイプ、２０１３年１２月にリリース）からのリファレンスパネルに基づいて、ＳＨＡＰＥＩＴ（Ｄｅｌａｎｅａｕ，Ｏ．，Ｍａｒｃｈｉｎｉ，Ｊ．＆  Ｚａｇｕｒｙ，Ｊ．−Ｆ．Ｎａｔ  Ｍｅｔｈ  ９，１７９−１８１（２０１２））及びＩＭＰＵＴＥ２（Ｈｏｗｉｅ，Ｂ．Ｎ．，Ｄｏｎｎｅｌｌｙ，Ｐ．＆  Ｍａｒｃｈｉｎｉ，Ｊ．ＰＬｏＳ  Ｇｅｎｅｔ．５，ｅ１０００５２９（２００９））を使用して、遺伝子型インピュテーションを実施した。インピュテーション後の品質管理により、ＩＮＦＯスコア＜０．８又はＭＡＦ＜１％のマーカーを除いた。
【０１６４】
全体として、遺伝子型データは、遺伝子型が決定されたマーカーが２８１Ｋ及びインピュテーションされたマーカーが８．３Ｍであった。
【０１６５】
統計解析．「ｅｘｐｅｃｔｅｄ」法を用いて、ＳＮＰＴＥＳＴ（Ｍａｒｃｈｉｎｉ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（２００７））で統計分析を行った。かかるロジスティック回帰により、ＣＴと対照との間の遺伝子型を比較した。共変量は、（可能性のある集団層別化を考慮するために）、性別、年齢、及び遺伝子型データに関する主成分分析から第１の成分を４つ含んでいた。分析の際、ＱＱプロットでは、異常なｐ値の上昇は認められなかった。
【０１６６】
結果．分析により、ＣＴ表現型と関連のある上位多様体として、ｒｓ５６８０５７３６４（ｃｈｒ２：３００２５６４３とも呼ばれる）が同定された（ｐ＝１．４４ｅ−６）（表２）。この多様体は、ＡＬＫ遺伝子のイントロン領域にあるインデルである（図１）。第２の上位多様体は、ｒｓ２０２０２１７４１（ｃｈｒ２：３００２５４４９、ｐ＝３．８ｅ−６）である。いずれのヒットも調節性多様体（ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｖａｒｉａｎｔ）と注釈される。
【０１６７】
【表３】
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【０１６８】
略語：ＣＨＲ：染色体名、ＰＯＳ：染色体上の位置（塩基対）、ＥＡ及びＮＥＡ：有効及び非有効な対立遺伝子、ＯＲ、ＯＲ＿９５Ｌ、及びＯＲ＿９５Ｕ：９５％信頼区間のオッズ比、Ｐ：関連性Ｐ値。
【０１６９】
実施例２：ＡＬＫのｉｎ  ｖｉｖｏでの機能
ハエ系統．ハエのストックは、寒天、糖及び酵母を含む標準的な飼料で維持し、１２／１２の暗夜のサイクルで２５℃のインキュベーターで飼育した。アクチン−Ｇａｌ４は、Ｂｌｏｏｍｉｎｇｔｏｎからのものであり、ｗ１１１８及びＵＡＳ−ＡｌｋＩＲ（ＧＤ１１４４６）はＶＤＲＣからのものであった。
【０１７０】
トリグリセリドアッセイ．１０匹（４〜７日齢）の雄性ハエを５回計量し、氷上で２００μＬのｄＨ２Ｏ中で均質化し、次いで、氷上でプローブ超音波発生装置を使用して、１０秒間、超音波処理した。超音波処理後、８００μＬの氷冷したｄＨ２Ｏを加え、十分に混合した。５０μＬの混合物を使用して、製造業者の指示に基づいてＲｏｃｈｅトリグリセリドキット（１１７３０７１１２１６）を用いてトリグリセリドを測定した。体重は、分析天秤によって測定した。トリグリセリドは体重に対して正規化した。
【０１７１】
結果．ｉｎ  ｖｉｖｏでＡＬＫ遺伝子機能を調査するために、ミバ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）においてトランスジェニックＲＮＡｉを使用した。ＡＬＫは、ハエのＡｌｋ遺伝子と高い相同性を示した。全身（アクチン−Ｇａｌ４）ドライバーを使用すると、Ａｌｋ変異体動物（アクチン−Ｇａｌ４＞ＵＡＳ−ＡｌｋＩＲ）は、過剰な発生表現型（ｏｖｅｒｔ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）を示さず、生育可能であった。重要なことに、ＡＬＫノックダウン動物は、対照（アクチン−Ｇａｌ４／＋）と比較して、トリグリセリド蓄積が著しく減少し（Ｚスコア＝−３．２７）（図２Ａ）、一方、体重は増加した（Ｚスコア＝３．０２）（１３％）（図２Ｂ）。したがって、Ａｌｋをｉｎ  ｖｉｖｏで標的にすると、ハエにおいて、痩せの表現型が促進される。
【０１７２】
上記明細書で言及した全ての刊行物は、本明細書に参照により組み込まれる。本発明に開示される作用物質、使用及び方法の様々な改変及び変更は、本発明の範囲及び主旨から逸脱することなく、当業者には明白であろう。本発明は、特定の好ましい実施形態に関連して開示されているが、特許請求される本発明は、このような特定の実施形態に過度に限定されるべきではないことを理解されたい。実際、当業者には自明の、開示した、本発明を実施するための様式の種々の改変は以下の特許請求の範囲の範囲内であることを意図している。
【図１】
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【図２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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