(57)【要約】  ＨＥＲ３抗原結合性分子が開示される。また、ＨＥＲ３抗原結合性分子をコードする核酸および発現ベクター、ＨＥＲ３抗原結合性分子を含む組成物、ならびにＨＥＲ３抗原結合性分子を使用する方法も開示される。【選択図】図１Ａ
2021510535.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号４３のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号４６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号５１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号９１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号９４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号９９のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域
を含む、ＨＥＲ３に結合することが可能な抗原結合性分子、任意選択で、単離抗原結合性分子。
【請求項２】
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号４１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号４５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号４８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号８８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号９２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号９５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域
を含む、請求項１に記載の抗原結合性分子。
【請求項３】
配列番号３６のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号８３のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域
を含む、請求項１または請求項２に記載の抗原結合性分子。
【請求項４】
（ｉ）請求項１から３のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、および（ｉｉ）ＨＥＲ３以外の抗原に結合することが可能な抗原結合性分子を含む、抗原結合性分子、任意選択で、単離抗原結合性分子。
【請求項５】
請求項１から４のいずれか一項に記載の抗原結合性分子を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
【請求項６】
請求項１から４のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、または請求項５に記載のＣＡＲをコードする、１つの核酸または複数の核酸、任意選択で、１つの単離核酸または複数の単離核酸。
【請求項７】
請求項６に記載の、１つの核酸または複数の核酸を含む、１つの発現ベクターまたは複数の発現ベクター。
【請求項８】
請求項１から４のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、請求項５に記載のＣＡＲ、請求項６に記載の、１つの核酸もしくは複数の核酸、または請求項７に記載の、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクターを含む細胞。
【請求項９】
請求項６に記載の、１つの核酸もしくは複数の核酸、または請求項７に記載の、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクターを含む細胞を、抗原結合性分子またはＣＡＲの、核酸（複数可）または発現ベクター（複数可）からの発現に適する条件下で培養するステップを含む方法。
【請求項１０】
請求項１から４のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、請求項５に記載のＣＡＲ、請求項６に記載の、１つの核酸もしくは複数の核酸、請求項７に記載の、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、または請求項８に記載の細胞を含む組成物。
【請求項１１】
医学的処置または予防の方法における使用のための、請求項１から４のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、請求項５に記載のＣＡＲ、請求項６に記載の、１つの核酸もしくは複数の核酸、請求項７に記載の、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、請求項８に記載の細胞、または請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
がんの処置または防止の方法における使用のための、請求項１から４のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、請求項５に記載のＣＡＲ、請求項６に記載の、１つの核酸もしくは複数の核酸、請求項７に記載の、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、請求項８に記載の細胞、または請求項１０に記載の組成物。
【請求項１３】
がんの処置または防止の方法における使用のための医薬の製造における、請求項１から４のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、請求項５に記載のＣＡＲ、請求項６に記載の、１つの核酸もしくは複数の核酸、請求項７に記載の、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、請求項８に記載の細胞、または請求項１０に記載の組成物の使用。
【請求項１４】
がんを処置または防止する方法であって、対象へと、治療または予防有効量の、請求項１から４のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、請求項５に記載のＣＡＲ、請求項６に記載の、１つの核酸もしくは複数の核酸、請求項７に記載の、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、請求項８に記載の細胞、または請求項１０に記載の組成物を投与するステップを含む方法。
【請求項１５】
方法が、ＥＧＦＲファミリーメンバーにより媒介されるシグナル伝達の阻害剤の投与をさらに含み、任意選択で、ＥＧＦＲファミリーメンバーにより媒介されるシグナル伝達の阻害剤が、ＨＥＲ２および／またはＥＧＦＲにより媒介されるシグナル伝達の阻害剤である、請求項１１もしくは請求項１２に記載の使用、請求項１３に記載の使用、または請求項１４に記載の方法のための、抗原結合性分子、ＣＡＲ、１つの核酸もしくは複数の核酸、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、細胞、または組成物。
【請求項１６】
がんが、ＥＧＦＲファミリーメンバーを発現する細胞を含むがん、ＨＥＲ３を発現する細胞を含むがん、充実性腫瘍、乳がん、乳癌、乳管癌、胃がん、胃癌、胃腺癌、結腸直腸がん、結腸直腸癌、結腸直腸腺癌、頭頸部がん、頭頸部扁平上皮がん（ＳＣＣＨＮ）、肺がん、肺腺癌、扁平上皮肺癌、卵巣がん、卵巣癌、漿液性卵巣腺癌、腎がん、腎細胞癌、腎明細胞癌、腎細胞腺癌、乳頭状腎細胞癌、膵がん、膵腺癌、膵管腺癌、子宮頸がん、子宮頸部扁平上皮がん、皮膚がん、黒色腫、食道がん、食道腺癌、肝がん、肝細胞癌、胆管癌、子宮がん、子宮体内膜癌、甲状腺がん、甲状腺癌、褐色細胞腫、傍神経節腫、膀胱がん、膀胱尿路上皮癌、前立腺がん、前立腺腺癌、肉腫、および胸腺腫から選択される、請求項１１から１５のいずれか一項に記載の、使用のための抗原結合性分子、ＣＡＲ、１つの核酸もしくは複数の核酸、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、細胞、もしくは組成物、使用または方法。
【請求項１７】
ＨＥＲ３媒介性シグナル伝達を阻害する方法であって、ＨＥＲ３発現細胞を、請求項１から４のいずれか一項に記載の抗原結合性分子と接触させるステップを含む方法。
【請求項１８】
ＨＥＲ３発現細胞の数または活性を低減する方法であって、ＨＥＲ３発現細胞を、請求項１から４のいずれか一項に記載の抗原結合性分子と接触させるステップを含む方法。
【請求項１９】
ＨＥＲ３に結合した、請求項１から４のいずれか一項に記載の抗原結合性分子を含むｉｎ  ｖｉｔｒｏ複合体、任意選択で、単離ｉｎ  ｖｉｔｒｏ複合体。
【請求項２０】
ＨＥＲ３を含有するか、またはこれを含有することが疑われる試料を、請求項１から４のいずれか一項に記載の抗原結合性分子と接触させるステップと、抗原結合性分子の、ＨＥＲ３との複合体の形成を検出するステップとを含む方法。
【請求項２１】
対象を、ＨＥＲ３ターゲティング剤による処置のために選択または層別化する方法であって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、対象に由来する試料を、請求項１から４のいずれか一項に記載の抗原結合性分子と接触させるステップと、抗原結合性分子の、ＨＥＲ３との複合体の形成を検出するステップとを含む方法。
【請求項２２】
請求項１から４のいずれか一項に記載の抗原結合性分子の、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏにおける診断または予後診断剤としての使用。
【請求項２３】
がんを検出、位置特定、またはイメージングするための方法における、請求項１から４のいずれか一項に記載の抗原結合性分子の使用であって、任意選択で、がんが、ＥＧＦＲファミリーメンバーを発現する細胞を含むがん、ＨＥＲ３を発現する細胞を含むがん、充実性腫瘍、乳がん、乳癌、乳管癌、胃がん、胃癌、胃腺癌、結腸直腸がん、結腸直腸癌、結腸直腸腺癌、頭頸部がん、頭頸部扁平上皮がん（ＳＣＣＨＮ）、肺がん、肺腺癌、扁平上皮肺癌、卵巣がん、卵巣癌、漿液性卵巣腺癌、腎がん、腎細胞癌、腎明細胞癌、腎細胞腺癌、乳頭状腎細胞癌、膵がん、膵腺癌、膵管腺癌、子宮頸がん、子宮頸部扁平上皮がん、皮膚がん、黒色腫、食道がん、食道腺癌、肝がん、肝細胞癌、胆管癌、子宮がん、子宮体内膜癌、甲状腺がん、甲状腺癌、褐色細胞腫、傍神経節腫、膀胱がん、膀胱尿路上皮癌、前立腺がん、前立腺腺癌、肉腫、および胸腺腫から選択される、使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、それらの内容および要素が、参照によりそれらの全体において、全ての目的のために本明細書に組み込まれる、２０１８年３月２９日に出願された、ＰＣＴ／ＥＰ２０１８／０５８２５９、２０１８年１０月２５日に出願された、ＵＳ１６／１７０，３７０からの優先権を主張する。
発明の分野
本発明は、分子生物学の分野に関し、より具体的には、抗体技術の分野に関する。本発明はまた、医学的な処置および予防の方法にも関する。
【背景技術】
【０００２】
ＨＥＲ３発現の増大は、乳がん、胃がん、頭頸部がん、膵がん、卵巣がん、および肺がんを含む、複数の充実性腫瘍における予後不良と連関する。ＨＥＲ３媒介性シグナル伝達は、腫瘍の進行に有害な帰結をもたらし；ＨＥＲ３の上方調節は、抗ＨＥＲ２および抗ＥＧＦＲ療法に対する耐性と関連し；抗ＰＤ−１療法に対して不応性の充実性腫瘍は、抗ＰＤ−１療法に対するレスポンダーと比較して、高度にＨＥＲ３を発現することが示されている。
【０００３】
ＨＥＲ３結合性抗体については、例えば、Ｚｈａｎｇら、Ａｃｔａ  Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ｓｉｎｉｃａ（２０１６）、４８（１）：３９〜４８において記載されている。抗ＨＥＲ３抗体である、ＬＪＭ−７１６は、ＨＥＲ３細胞外ドメインの、サブドメインＩＩ上およびＩＶ上のエピトープに結合し、ＨＥＲ３を、不活性コンフォメーションにロッキングする（Ｇａｒｎｅｒら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ（２０１３）、７３：６０２４〜６０３５）。ＭＭ−１２１（また、セリバンツマブとしても公知である）は、ヘレグリン（ＨＲＧ）の、ＨＥＲ３への結合を遮断することにより、ＨＥＲ３媒介性シグナル伝達を阻害することが示されている（Ｓｃｈｏｅｂｅｒｌら、Ｓｃｉ．Ｓｉｇｎａｌ．（２００９）、２（７７）：ｒａ３１）。パトリツマブ（また、Ｕ−１２８７およびＡＭＧ−８８８としても公知である）もまた、ヘレグリンの、ＨＥＲ３への結合を遮断する（例えば、Ｓｈｉｍｉｚｕら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．（２０１７）、７９（３）：４８９〜４９５を参照されたい）。ＲＧ７１１６（また、ルムレツズマブおよびＲＯ−５４７９５９９としても公知である）は、ＨＥＲ３細胞外ドメインのサブドメインＩ内のエピトープを認識する（例えば、Ｍｉｒｓｃｈｂｅｒｇｅｒら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２０１３）、７３（１６）５１８３〜５１９４を参照されたい）。ＫＴＮ３３７９は、サブドメインＩＩＩ内のアミノ酸残基（配列番号の、以下の位置１：Ｇｌｙ４７６、Ｐｒｏ４７７、Ａｒｇ４８１、Ｇｌｙ４５２、Ａｒｇ４７５、Ｓｅｒ４５０、Ｇｌｙ４２０、Ａｌａ４５１、Ｇｌｙ４１９、Ａｒｇ４２１、Ｔｈｒ３９４、Ｌｅｕ４２３、Ａｒｇ４２６、Ｇｌｙ４２７、Ｌｙｓ３５６、Ｌｅｕ３５８、Ｌｅｕ３５８、Ｌｙｓ３５６、Ａｌａ３３０、Ｌｙｓ３２９、およびＧｌｙ３３７に対応する）、ならびにサブドメインＩＩのＭｅｔ３１０、Ｇｌｕ３１１、およびＰｒｏ３２８（Ｌｅｅら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．、２０１５年１０月２７日、１１２（４３）：３２２５を参照されたい）との相互作用を介して、ＨＥＲ３に結合する。ＡＶ−２０３（また、ＣＡＮ−０１７としても公知である）は、ＮＲＧ１の、ＨＥＲ３への結合を遮断し、ＨＥＲ３の分解を促進することが示されている（Ｍｅｅｔｚｅら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ、２０１２、４８：１２６を参照されたい）。ＲＥＧＮ１４００もまた、リガンドの、ＨＥＲ３への結合を阻害する（Ｚｈａｎｇら、Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ（２０１４）、１３：１３４５〜１３５５を参照されたい）。ＲＧ７５９７（ドゥリゴツズマブ）は、ＨＥＲ３およびＥＧＦＲの両方に結合することが可能な、二重作用型Ｆａｂ（ＤＡＦ）であり、ＨＥＲ３のサブドメインＩＩＩに結合する（Ｓｃｈａｅｆｅｒら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ（２０１１）、２０（４）：４７２〜４８６を参照されたい）。ＭＭ−１１１およびＭＭ−１４１は、ＨＲＧリガンドの、ＨＥＲ３への結合を阻害する、ＨＥＲ３結合性アームを有する二特異性抗体である（ＭｃＤｏｎａｇｈら、Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ（２０１２）、１１：５８２〜５９３；およびＦｉｔｚｇｅｒａ���ｄら、Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ（２０１４）、１３：４１０〜４２５を参照されたい）。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
第１の態様では、本発明は、細胞外領域サブドメインＩＩ内のＨＥＲ３に結合することが可能な抗原結合性分子、任意選択で、単離抗原結合性分子を提供する。
【０００５】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３と、ＨＥＲ３の相互作用パートナーとの相互作用を阻害する。
【０００６】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号１６のアミノ酸配列を含むか、またはこれからなるポリペプチドに結合することが可能である。
【０００７】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２２９のアミノ酸配列を含むポリペプチドに結合することが可能である。
【０００８】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２３０および２３１のアミノ酸配列を含むポリペプチドに結合することが可能である。
【０００９】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２３０のアミノ酸配列を含むポリペプチドに結合することが可能である。
【００１０】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２３１のアミノ酸配列を含むポリペプチドに結合することが可能である。
【００１１】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むポリペプチドに結合することが可能である。
【００１２】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２１のアミノ酸配列を含むポリペプチドに結合することが可能である。
【００１３】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号４３のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号４６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号５１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号９１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号９４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号９９のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。
【００１４】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号４１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号４４のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号４７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号８８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号９２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号９５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。
【００１５】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号４１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号４４のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号４７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号８９のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号９２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号９５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。
【００１６】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号４１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号４４のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号４７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号９０のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号９２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号９６のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。
【００１７】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号４１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号４４のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号４７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号８８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号９２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号９８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。
【００１８】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号４１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号４５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号４７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号８８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号９３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号９５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。
【００１９】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号４１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号４５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号４９のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号８８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号９３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号９５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。
【００２０】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号４１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号４５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号５０のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号８８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号９３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号９５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。
【００２１】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号４１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号４５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号４８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号８８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号９２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号９５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。
【００２２】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号４１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号４５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号４８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号８８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号９２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号９７のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。
【００２３】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号４２のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号４５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号４８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号８８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号９２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号９５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。
【００２４】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１５８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号１５９のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号１６０のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１６５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号１６６のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号１６７のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。
【００２５】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２２のアミノ酸配列を含むポリペプチドに結合することが可能である。
【００２６】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１２８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号１２９のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号１３０のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１３６のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号１３７のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号１３８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。
【００２７】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１４４のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号１４５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号１４６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１５１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号１５２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号１５３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。
【００２８】
特定の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号４１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号４５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号４８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号８８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号９２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号９５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域；
または
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号４１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号４５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号４８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号８８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号９２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号９７のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域；
または
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号４２のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号４５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号４８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号８８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号９２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号９５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。
【００２９】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）配列番号２４のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号７４のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｉｉ）配列番号２５のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号７５のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｉｉｉ）配列番号２６のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号７６のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｉｖ）配列番号２７のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号７７のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｖ）配列番号２８のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号７８のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｖｉ）配列番号２９のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号７８のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｖｉｉ）配列番号３０のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号７８のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｖｉｉｉ）配列番号３１のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号７９のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｉｘ）配列番号３２のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号７９のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｘ）配列番号３３のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号８０のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｘｉ）配列番号３４のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号８１のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｘｉｉ）配列番号３５のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号８２のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｘｉｉｉ）配列番号３６のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号８３のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｘｉｖ）配列番号３７のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号８４のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｘｖ）配列番号３８のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号８５のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｘｖｉ）配列番号３９のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号８６のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｘｖｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号８７のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｘｖｉｉｉ）配列番号１２７のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号１３５のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｘｉｘ）配列番号１４３のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号１５０のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｘｘ）配列番号１５７のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号１６４のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。
【００３０】
特定の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）配列番号３６のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号８３のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｉｉ）配列番号３７のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号８４のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｉｉｉ）配列番号３８のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号８５のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。
【００３１】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ヒトＨＥＲ３、ならびにマウスＨＥＲ３、ラットＨＥＲ３、およびカニクイザルＨＥＲ３のうちの１つまたは複数に結合することが可能である。
【００３２】
また、（ｉ）本発明に従う抗原結合性分子、および（ｉｉ）ＨＥＲ３以外の抗原に結合することが可能な抗原結合性分子を含む抗原結合性分子、任意選択で、単離抗原結合性分子も提供される。
【００３３】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３を発現する細胞の、細胞表面に結合することが可能である。
【００３４】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３媒介性シグナル伝達を阻害することが可能である。
【００３５】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、Ｆｃ領域を含み、Ｆｃ領域が、（ｉ）２４２位に対応する位置におけるＣ、および３３４位に対応する位置におけるＣ、ならびに（ｉｉ）２３６位に対応する位置におけるＡ、２３９位に対応する位置におけるＤ、３３２位に対応する位置におけるＥ、３３０位に対応する位置におけるＬ、３４５位に対応する位置におけるＫ、および４３０位に対応する位置におけるＧのうちの１つまたは複数を有するポリペプチドを含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、２４２位に対応する位置におけるＣ、３３４位に対応する位置におけるＣ、２３６位に対応する位置におけるＡ、２３９位に対応する位置におけるＤ、３３２位に対応する位置におけるＥ、および３３０位に対応する位置におけるＬを有するポリペプチドを含む。
【００３６】
また、本発明に従う抗原結合性分子を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）も提供される。
【００３７】
また、本発明に従う、抗原結合性分子またはＣＡＲをコードする、１つの核酸または複数の核酸、任意選択で、単離核酸も提供される。
【００３８】
また、本発明に従う、１つの核酸または複数の核酸を含む、１つの発現ベクターまたは複数の発現ベクターも提供される。
【００３９】
また、本発明に従う、抗原結合性分子、ＣＡＲ、１つの核酸もしくは複数の核酸、または１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクターを含む細胞も提供される。
【００４０】
また、本発明に従う、１つの核酸もしくは複数の核酸、または１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクターを含む細胞を、抗原結合性分子またはＣＡＲの、核酸（複数可）または発現ベクター（複数可）からの発現に適する条件下で培養するステップを含む方法も提供される。
【００４１】
また、本発明に従う抗原結合性分子、ＣＡＲ、１つの核酸もしくは複数の核酸、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、または細胞を含む組成物も提供される。
【００４２】
また、医学的処置または予防の方法における使用のための、本発明に従う、抗原結合性分子、ＣＡＲ、１つの核酸もしくは複数の核酸、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、細胞、または組成物も提供される。
【００４３】
また、がんの処置または防止の方法における使用のための、本発明に従う、抗原結合性分子、ＣＡＲ、１つの核酸もしくは複数の核酸、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、細胞、または組成物も提供される。
【００４４】
また、がんの処置または防止の方法における使用のための医薬の製造における、本発明に従う、抗原結合性分子、ＣＡＲ、１つの核酸もしくは複数の核酸、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、細胞、または組成物の使用も提供される。
【００４５】
また、がんを処置または防止する方法であって、対象へと、治療または予防有効量の、本発明に従う、抗原結合性分子、ＣＡＲ、１つの核酸もしくは複数の核酸、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、細胞、または組成物を投与するステップを含む方法も提供される。
【００４６】
本発明の多様な態様に従う、一部の実施形態では、方法は、ＥＧＦＲファミリーメンバーにより媒介されるシグナル伝達の阻害剤の投与をさらに含み、任意選択で、ＥＧＦＲファミリーメンバーにより媒介されるシグナル伝達の阻害剤は、ＨＥＲ２および／またはＥＧＦＲにより媒介されるシグナル伝達の阻害剤である。
【００４７】
一部の実施形態では、がんは、ＥＧＦＲファミリーメンバーを発現する細胞を含むがん、ＨＥＲ３を発現する細胞を含むがん、充実性腫瘍、乳がん、乳癌、乳管癌、胃がん、胃癌、胃腺癌、結腸直腸がん、結腸直腸癌、結腸直腸腺癌、頭頸部がん、頭頸部扁平上皮がん（ＳＣＣＨＮ）、肺がん、肺腺癌、扁平上皮肺癌、卵巣がん、卵巣癌、漿液性卵巣腺癌、腎がん、腎細胞癌、腎明細胞癌、腎細胞腺癌、乳頭状腎細胞癌、膵がん、膵腺癌、膵管腺癌、子宮頸がん、子宮頸部扁平上皮がん、皮膚がん、黒色腫、食道がん、食道腺癌、肝がん、肝細胞癌、胆管癌、子宮がん、子宮体内膜癌、甲状腺がん、甲状腺癌、褐色細胞腫、傍神経節腫、膀胱がん、膀胱尿路上皮癌、前立腺がん、前立腺腺癌、肉腫、および胸腺腫から選択される。
【００４８】
また、ＨＥＲ３媒介性シグナル伝達を阻害する方法であって、ＨＥＲ３発現細胞を、本発明に従う抗原結合性分子と接触させるステップを含む方法も提供される。
【００４９】
また、ＨＥＲ３発現細胞の数または活性、方法を低減する方法であって、ＨＥＲ３発現細胞を、本発明に従う抗原結合性分子と接触させるステップを含む方法も提供される。
【００５０】
また、ＨＥＲ３に結合した、本発明に従う抗原結合性分子を含むｉｎ  ｖｉｔｒｏ複合体、任意選択で、単離ｉｎ  ｖｉｔｒｏ複合体も提供される。
【００５１】
また、ＨＥＲ３を含有するか、またはこれを含有することが疑われる試料を、本発明に従う抗原結合性分子抗原結合性分子と接触させるステップと、抗原結合性分子の、ＨＥＲ３との複合体の形成を検出するステップとを含む方法も提供される。
【００５２】
また、対象を、ＨＥＲ３ターゲティング剤による処置のために選択または層別化する方法であって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、対象に由来する試料を、本発明に従う抗原結合性分子と接触させるステップと、抗原結合性分子の、ＨＥＲ３との複合体の形成を検出するステップとを含む方法も提供される。
【００５３】
また、本発明に従う抗原結合性分子の、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏにおける診断または予後診断剤としての使用も提供される。
【００５４】
また、任意選択で、がんが、ＥＧＦＲファミリーメンバーを発現する細胞を含むがん、ＨＥＲ３を発現する細胞を含むがん、充実性腫瘍、乳がん、乳癌、乳管癌、胃がん、胃癌、胃腺癌、結腸直腸がん、結腸直腸癌、結腸直腸腺癌、頭頸部がん、頭頸部扁平上皮がん（ＳＣＣＨＮ）、肺がん、肺腺癌、扁平上皮肺癌、卵巣がん、卵巣癌、漿液性卵巣腺癌、腎がん、腎細胞癌、腎明細胞癌、腎細胞腺癌、乳頭状腎細胞癌、膵がん、膵腺癌、膵管腺癌、子宮頸がん、子宮頸部扁平上皮がん、皮膚がん、黒色腫、食道がん、食道腺癌、肝がん、肝細胞癌、胆管癌、子宮がん、子宮体内膜癌、甲状腺がん、甲状腺癌、褐色細胞腫、傍神経節腫、膀胱がん、膀胱尿路上皮癌、前立腺がん、前立腺腺癌、肉腫、および胸腺腫から選択される、がんを検出、位置特定、またはイメージングするための方法における、本発明に従う抗原結合性分子の使用も提供される。
【発明を実施するための形態】
【００５５】
本発明は、公知の抗ＨＥＲ３抗体と比較して、改善された特性を有する、新規のＨＥＲ３結合性分子に関する。
【００５６】
本発明者らは、ＨＥＲ３の細胞外領域内の、特に目的となる領域に結合する抗原結合性分子の、ターゲティングされた作出を企図した。本発明のＨＥＲ３結合性分子は、先行技術において開示された抗原結合性分子と比較して、所望の生物物理的および／または機能的特性の組合せを備える。
【００５７】
本発明の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３の細胞外領域のサブドメインＩＩ（配列番号１６）に結合することが可能であり、それ結合するＨＥＲ３分子の、相互作用パートナーとの会合を阻害する。
【００５８】
特に、本明細書で記載されるＨＥＲ３結合性抗原結合性分子は、ＨＥＲ３のエピトープに結合し、ＨＥＲ３の、相互作用パートナーとの会合の、強力な阻害、下流のシグナル伝達の、強い阻害、および広範にわたるがんに対する、例外的な抗がん活性をもたらすことが裏付けられる。
ＨＥＲ３
ＨＥＲ３（また、例えば、ＥＲＢＢ３、ＬＣＣＳ２、ＭＤＡ−ＢＦ−１としても公知である）は、ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ２１８６０により同定されるタンパク質である。ヒトＥＲＢＢ３遺伝子によりコードされるｍＲＮＡの、代替的なスプライシングは、５つの異なるアイソフォーム：アイソフォーム１（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ２１８６０−１、ｖ１；配列番号１）；１４１位において、配列番号１と異なる配列を含み、配列番号１の１８３〜１３４２位に対応するアミノ酸配列を欠く、アイソフォーム２（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ２１８６０−２；配列番号２）；配列番号１と比べた置換である、Ｃ３３１Ｆを含み、配列番号１の３３２〜１３４２位に対応するアミノ酸配列を欠く、アイソフォーム３（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ２１８６０−３；配列番号３）；配列番号１の１〜５９位に対応するアミノ酸配列を欠く、アイソフォーム４（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ２１８６０−４；配列番号４）；および配列番号１の１〜６４３位に対応するアミノ酸配列を欠く、アイソフォーム５（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ２１８６０−５；配列番号５）をもたらす。
【００５９】
配列番号１〜３の、Ｎ末端の１９アミノ酸は、シグナルペプチドを構成するので、ＨＥＲ３アイソフォーム１、２、および３の成熟形態（すなわち、シグナルペプチドを除去するプロセシング後の形態）は、それぞれ、配列番号６、７、および８に示されるアミノ酸配列を有する。
【００６０】
ＨＥＲ３の構造および機能については、例えば、それらの各々が、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる、ＣｈｏおよびＬｅａｈｙ、Ｓｃｉｅｎｃｅ（２００２）、２９７（５５８５）：１３３０〜１３３３；Ｓｉｎｇｅｒら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００１）、２７６、４４２６６〜４４２７４；Ｒｏｓｋｏｓｋｉら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｓ．（２０１４）、７９：３４〜７４；ＢａｚｌｅｙおよびＧｕｌｌｉｃｋ、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ−Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｃａｎｃｅｒ（２００５）、Ｓ１７〜Ｓ２７；ならびにＭｕｊｏｏら、Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ（２０１４）、５（２１）：１０２２２〜１０２３６において記載されている。ＨＥＲ３は、２つのロイシンリッチサブドメイン（それぞれ、配列番号１５および１７に示される、ドメインＩおよびＩＩＩ）と、２つのシステインリッチサブドメイン（それぞれ、配列番号１６および１８に示される、ドメインＩＩおよびＩＶ）とを含む、Ｎ末端細胞外領域（配列番号９）を有する１回膜貫通型ＥｒｂＢ受容体チロシンキナーゼである。ドメインＩＩは、他のＨＥＲ受容体分子との、分子間相互作用に関与する、βヘアピン二量体化ループ（配列番号１９）を含む。細胞外領域は、膜貫通領域（配列番号１０）を介して、細胞質領域（配列番号１１）へと連結される。細胞質領域は、膜近接セグメント（配列番号１２）、タンパク質キナーゼドメイン（配列番号１３）、およびＣ末端セグメント（配列番号１４）を含む。
【００６１】
ＨＥＲ３を介するシグナル伝達は、受容体のホモ二量体化（すなわち、他のＨＥＲ３受容体との）またはヘテロ二量体化（他のＨＥＲ受容体、例えば、ＨＥＲ２との）と、その帰結としての、細胞質領域のチロシンのタンパク質キナーゼドメインの自己リン酸化とを伴う。リン酸化チロシン残基は、ｓｒｃ相同性ドメイン２（ＳＨ２）またはホスホチロシン結合性（ＰＴＢ）ドメインを含有する、アダプター／エフェクタータンパク質（例えば、Ｇｒｂ２およびホスホリパーゼＣγ（ＰＬＣγ）を動員する。
【００６２】
ＨＥＲ３を介するシグナル伝達は、リガンド依存的に活性化される場合もあり、リガンド非依存的に活性化される場合もある。リガンドの非存在下では、ＨＥＲ３受容体分子は通常、細胞表面において、受容体の二量体化を阻止するコンフォメーションであって、サブドメインＩＩの二量体化ループが、サブドメインＩＶ上のポケットと、細胞内接触するコンフォメーションを伴う、単量体として発現される。ニューレグリン（ＮＲＧ）、例えば、ＮＲＧ１（また、ヘレグリン、ＨＲＧとしても公知である）またはＮＲＧ２など、ＨＥＲ３のリガンドの、細胞外領域のサブドメインＩおよびＩＩＩへの結合は、コンフォメーション変化を引き起こす結果として、サブドメインＩＩの二量体化ループの曝露をもたらし、受容体の二量体化およびシグナル伝達を容易とする。一部の、ＨＥＲ３内のがん関連突然変異は、不活性の「閉鎖型」コンフォメーションの形成に要求される、サブドメインＩＩとＩＶとの相互作用を破壊し、これにより、二量体化ループの構成的提示、およびリガンド結合の非存在下における、ＨＥＲ３媒介性シグナル伝達の活性化を引き起こす（例えば、Ｊａｉｓｗａｌら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ（２０１３）、２３（５）：６０３〜６１７を参照されたい）。
【００６３】
本明細書では、「ＨＥＲ３」とは、任意の種に由来するＨＥＲ３を指し、任意の種に由来する、ＨＥＲ３の、アイソフォーム、断片、変異体（突然変異体を含む）、または相同体を含む。
【００６４】
本明細書で使用される、タンパク質の「断片」、「変異体」、または「相同体」は、任意選択で、参照タンパク質（例えば、参照アイソフォーム）のアミノ酸配列に対する、少なくとも６０％、好ましくは、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有することとして特徴付けられうる。一部の実施形態では、参照タンパク質の、断片、変異体、アイソフォーム、および相同体は、参照タンパク質により果たされる機能を果たす能力により特徴付けられうる。
【００６５】
「断片」とは、一般に、参照タンパク質の部分を指す。「変異体」とは、一般に、参照タンパク質のアミノ酸配列と比べて、１つまたは複数のアミノ酸の置換、挿入、欠失、または他の修飾を含むが、参照タンパク質のアミノ酸配列に対する、かなりの程度の配列同一性（例えば、少なくとも６０％）を保持するアミノ酸配列を有するタンパク質を指す。「アイソフォーム」とは、一般に、参照タンパク質の種と同じ種により発現される、参照タンパク質の変異体を指す（例えば、ＨＥＲ３アイソフォーム１〜５は全て、互いのアイソフォームである）。「相同体」とは、一般に、参照タンパク質の種と比較して、異なる種により産生される、参照タンパク質の変異体を指す。例えば、ヒトＨＥＲ３アイソフォーム１（Ｐ２１８６０−１、ｖ１；配列番号１）と、アカゲザルＨＥＲ３（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｆ７ＨＥＨ３−１、ｖ２；配列番号２０）とは、互いの相同体である。相同体は、オーソログを含む。
【００６６】
参照タンパク質の「断片」は、任意の長さ（アミノ酸の数による）でありうるが、任意選択で、参照タンパク質（すなわち、断片が由来するタンパク質）の長さの、少なくとも２０％であることが可能であり、参照タンパク質の長さの、５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のうちの１つの、最大の長さを有しうる。
【００６７】
ＨＥＲ３の断片は、１０、２０、３０、４０、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１１００、１２００アミノ酸のうちの１つの、最小の長さを有することが可能であり、２０、３０、４０、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１１００、１２００、または１３００アミノ酸のうちの１つの、最大の長さを有しうる。
【００６８】
一部の実施形態では、ＨＥＲ３は、哺乳動物に由来するＨＥＲ３（例えば、霊長動物（アカゲザル、カニクイザル、非ヒト霊長動物、またはヒト）、および／または齧歯動物（例えば、ラットまたはマウス）のＨＥＲ３）である。ＨＥＲ３の、アイソフォーム、断片、変異体、または相同体は、任意選択で、所与の種、例えば、ヒトに由来する、未成熟または成熟のＨＥＲ３アイソフォームのアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有することとして特徴付けられうる。
【００６９】
アイソフォーム、断片、変異体、または相同体は、任意選択で、例えば、機能的特性／活性に適切なアッセイを介する解析により決定する場合、リファレンスＨＥＲ３（例えば、ヒトＨＥＲ３アイソフォーム１）の機能的特性／活性を有する、機能的なアイソフォーム、断片、変異体、または相同体でありうる。例えば、ＨＥＲ３のアイソフォーム、断片、変異体、または相同体は、ＨＥＲ２、ＮＲＧ１（Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、またはＶＩ型）、またはＮＲＧ２（αまたはβ）のうちの１つまたは複数との会合を呈しうる。
【００７０】
一部の実施形態では、ＨＥＲ３は、配列番号１〜８のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなる。
【００７１】
一部の実施形態では、ＨＥＲ３の断片は、配列番号９〜１９、例えば、配列番号９、１６、または１９のうちの１つのアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなる。
標的分子上の、特に目的となる領域
本発明の抗原結合性分子は、ＨＥＲ３の、特に目的となる領域をターゲティングするように、特異的にデザインされた。２ステップ法では、予測される抗原性、機能、および安全性についての解析に従い、ターゲティングされるＨＥＲ３領域が選択された。次いで、標的領域に対応するペプチドを、特異的モノクローナル抗体を惹起するための免疫原として使用して、ＨＥＲ３の標的領域に特異的な抗体が調製され、後続するスクリーニングは、ナイーブ状態において、ＨＥＲ３に結合することが可能な抗体を同定した。この手法は、抗体エピトープに対する、精緻な制御をもたらす。
【００７２】
本発明の抗原結合性分子は、それらが結合する、ＨＥＲ３の領域を参照することにより規定されうる。本発明の抗原結合性分子は、ＨＥＲ３の、特に目的となる領域に結合しうる。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、アミノの酸連続配列（すなわち、アミノ酸の一次配列）からなる、ＨＥＲ３の直鎖状エピトープに結合しうる。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、アミノ酸配列のうちの、アミノ酸の不連続配列からなる、ＨＥＲ３のコンフォメーションエピトープに結合しうる。
【００７３】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、ＨＥＲ３に結合する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３の細胞外領域（例えば、配列番号９に示される領域）に結合する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３の細胞外領域のサブドメインＩＩ（例えば、配列番号１６に示される領域）に結合する。
【００７４】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２２９に示される、ＨＥＲ３の領域に結合する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２２９に示される、ＨＥＲ３の領域の、１つまたは複数のアミノ酸残基に接触する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２３０および２３１に示される、ＨＥＲ３の領域に結合する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２３０および２３１に示される、ＨＥＲ３の領域の、１つまたは複数のアミノ酸残基に接触する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２３０に示される、ＨＥＲ３の領域に結合する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２３０に示される、ＨＥＲ３の領域の、１つまたは複数のアミノ酸残基に接触する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２３１に示される、ＨＥＲ３の領域に結合する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２３１に示される、ＨＥＲ３の領域の、１つまたは複数のアミノ酸残基に接触する。
【００７５】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２３に示される、ＨＥＲ３の領域に結合する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２３に示される、ＨＥＲ３の領域の、１つまたは複数のアミノ酸残基に接触する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２１に示される、ＨＥＲ３の領域に結合する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２１に示される、ＨＥＲ３の領域の、１つまたは複数のアミノ酸残基に接触する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号１９に示される、ＨＥＲ３の領域に結合する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号１９に示される、ＨＥＲ３の領域の、１つまたは複数のアミノ酸残基に接触する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２２に示される、ＨＥＲ３の領域に結合する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２２に示される、ＨＥＲ３の領域の、１つまたは複数のアミノ酸残基に接触する。
【００７６】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号１の２６０〜２７９位に対応する、ＨＥＲ３の領域に結合しない。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号１の２６０〜２７９位に対応する、ＨＥＲ３の領域のアミノ酸残基に接触しない。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２３に示される、ＨＥＲ３の領域に結合しない。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２３に示される、ＨＥＲ３の領域のアミノ酸残基に接触しない。
【００７７】
抗体が結合する、ペプチド／ポリペプチドの領域は、抗体−抗原複合体についてのＸ線共結晶構造解析、ペプチド走査、突然変異誘発マッピング、質量分析による水素−重水素交換解析、ファージディスプレイ、競合ＥＬＩＳＡ、およびタンパク質分解ベースの「保護」法を含む、当技術分野で周知の、多様な方法を使用して、当業者により決定されうる。このような方法については、例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Ｇｅｒｓｈｏｎｉら、ＢｉｏＤｒｕｇｓ、２００７、２１（３）：１４５〜１５６において記載されている。
【００７８】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、本明細書で記載される抗体クローンである、１０Ｄ１、１０Ｄ１＿ｃ７５、１０Ｄ１＿ｃ７６、１０Ｄ１＿ｃ７７、１０Ｄ１＿ｃ７８ｖ１、１０Ｄ１＿ｃ７８ｖ２、１０Ｄ１＿１１Ｂ、１０Ｄ１＿ｃ８５ｖ１、１０Ｄ１＿ｃ８５ｖ２、１０Ｄ１＿ｃ８５ｏ１、１０Ｄ１＿ｃ８５ｏ２、１０Ｄ１＿ｃ８７、１０Ｄ１＿ｃ８９、１０Ｄ１＿ｃ９０、１０Ｄ１＿ｃ９１、１０Ｄ１＿ｃ９２、１０Ｄ１＿ｃ９３、１０Ａ６、４−３５−Ｂ２、または４−３５−Ｂ４のうちの１つのＶＨ配列およびＶＬ配列を含む抗体が結合するＨＥＲ３の領域と同じＨＥＲ３の領域、または重複するＨＥＲ３の領域に結合することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、抗体クローンである、１０Ｄ１＿ｃ８９、１０Ｄ１＿ｃ９０、または１０Ｄ１＿ｃ９１のうちの１つのＶＨ配列およびＶＬ配列を含む抗体が結合するＨＥＲ３の領域と同じＨＥＲ３の領域、または重複するＨＥＲ３の領域に結合することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、抗体クローンである、１０Ｄ１＿ｃ８９のＶＨ配列およびＶＬ配列を含む抗体が結合するＨＥＲ３の領域と同じＨＥＲ３の領域、または重複するＨＥＲ３の領域に結合することが可能である。
【００７９】
本明細書で使用される、「ペプチド」とは、ペプチド結合により連結された、２つ以上のアミノ酸単量体による鎖を指す。ペプチドは、典型的に、領域内に、約２〜５０アミノ酸の長さを有する。「ポリペプチド」とは、２つ以上のペプチドによるポリマー鎖である。ポリペプチドは、典型的に、約５０アミノ酸を超える長さを有する。
【００８０】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、配列番号１、３、４、６、または８のうちの１つのアミノ酸配列を含むか、またはこれからなるポリペプチドに結合することが可能である。
【００８１】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号９のアミノ酸配列を含むか、またはこれからなるポリペプチドに結合することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号１６のアミノ酸配列を含むか、またはこれからなるポリペプチドに結合することが可能である。
【００８２】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２２９のアミノ酸配列を含むか、またはこれからなるペプチド／ポリペプチドに結合することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２３０および２３１のアミノ酸配列を含むか、またはこれからなるペプチド／ポリペプチドに結合することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２３０のアミノ酸配列を含むか、またはこれからなるペプチド／ポリペプチドに結合することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２３１のアミノ酸配列を含むか、またはこれからなるペプチド／ポリペプチドに結合することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むか、またはこれからなるペプチド／ポリペプチドに結合することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２１のアミノ酸配列を含むか、またはこれからなるペプチド／ポリペプチドに結合することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号１９のアミノ酸配列を含むか、またはこれからなるペプチド／ポリペプチドに結合することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２２のアミノ酸配列を含むか、またはこれからなるペプチド／ポリペプチドに結合することが可能である。
【００８３】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号１の２６０〜２７９位に対応するアミノ酸配列からなるペプチドに結合することが可能ではない。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２３のアミノ酸配列からなるペプチドに結合することが可能ではない。
【００８４】
抗原結合性分子が、所与のペプチド／ポリペプチドに結合する能力は、ＥＬＩＳＡ、免疫ブロット（例えば、ウェスタンブロット）、免疫沈降、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ；例えば、Ｈｅａｒｔｙら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ（２０１２）、９０７：４１１〜４４２を参照されたい）、またはバイオレイヤー干渉法（例えば、Ｌａｄら（２０１５）、Ｊ  Ｂｉｏｍｏｌ  Ｓｃｒｅｅｎ、２０（４）：４９８〜５０７を参照されたい）による解析を含む、当業者に周知の方法により解析されうる。
【００８５】
抗原結合性分子が、参照アミノ酸配列を含むペプチド／ポリペプチドに結合することが可能である実施形態では、ペプチド／ポリペプチドは、参照アミノ酸配列の、一方または両方の末端において、１つまたは複数の、さらなるアミノ酸を含みうる。一部の実施形態では、ペプチド／ポリペプチドは、参照アミノ酸配列の、一方または両方の末端において、例えば、１〜５、１〜１０、１〜２０、１〜３０、１〜４０、１〜５０、５〜１０、５〜２０、５〜３０、５〜４０、５〜５０、１０〜２０、１０〜３０、１０〜４０、１０〜５０、２０〜３０、２０〜４０、または２０〜５０の、さらなるアミノ酸を含む。
【００８６】
一部の実施形態では、ＨＥＲ３のアミノ酸配列の文脈では、参照配列の一方または両方の末端（すなわち、Ｎ末端およびＣ末端）においてもたらされる、さらなるアミノ酸（複数可）は、参照配列の末端における位置に対応する。例を目的として述べると、抗原結合性分子が、配列番号２３の配列、および配列番号２３のＣ末端における、さらなる、２つのアミノ酸を含むペプチドに結合することが可能である場合、さらなる、２つのアミノ酸は、配列番号１の２７８および２７９位に対応する、スレオニンおよびリシンでありうる。
【００８７】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、本明細書で記載される抗体クローンである、１０Ｄ１、１０Ｄ１＿ｃ７５、１０Ｄ１＿ｃ７６、１０Ｄ１＿ｃ７７、１０Ｄ１＿ｃ７８ｖ１、１０Ｄ１＿ｃ７８ｖ２、１０Ｄ１＿１１Ｂ、１０Ｄ１＿ｃ８５ｖ１、１０Ｄ１＿ｃ８５ｖ２、１０Ｄ１＿ｃ８５ｏ１、１０Ｄ１＿ｃ８５ｏ２、１０Ｄ１＿ｃ８７、１０Ｄ１＿ｃ８９、１０Ｄ１＿ｃ９０、１０Ｄ１＿ｃ９１、１０Ｄ１＿ｃ９２、１０Ｄ１＿ｃ９３、１０Ａ６、４−３５−Ｂ２、または４−３５−Ｂ４のうちの１つのＶＨおよびＶＬ配列を含む抗体が結合するペプチド／ポリペプチドに結合することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、抗体クローンである、１０Ｄ１＿ｃ８９、１０Ｄ１＿ｃ９０、または１０Ｄ１＿ｃ９１のうちの１つのＶＨおよびＶＬ配列を含む抗体が結合するペプチド／ポリペプチドに結合することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、抗体クローンである、１０Ｄ１＿ｃ８９のＶＨおよびＶＬ配列を含む抗体が結合するペプチド／ポリペプチドに結合することが可能である。
抗原結合性分子
本発明は、ＨＥＲ３に結合することが可能な抗原結合性分子を提供する。
【００８８】
「抗原結合性分子」とは、標的抗原に結合することが可能な分子を指し、それらが、対象とする標的分子（複数可）への結合を呈する限りにおいて、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、単一特異性抗体および多特異性抗体（例えば、二特異性抗体）、ならびに抗体断片（例えば、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、ｓｃＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ２、ダイアボディー、トリアボディー、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、ミニボディー、単一ドメイン抗体（例えば、ＶｈＨ）など）を包含する。
【００８９】
本発明の抗原結合性分子は、標的抗原（複数可）に結合することが可能な部分を含む。一部の実施形態では、標的抗原に結合することが可能な部分は、標的抗原に特異的に結合することが可能な抗体の、抗体重鎖可変領域（ＶＨ）と、抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む。一部の実施形態では、標的抗原に結合することが可能な部分は、標的抗原に結合することが可能なアプタマー、例えば、核酸アプタマー（例えば、ＺｈｏｕおよびＲｏｓｓｉ、Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．、２０１７、１６（３）：１８１〜２０２において総説された）を含むか、またはこれからなる。一部の実施形態では、標的抗原に結合することが可能な部分は、抗原結合性ペプチド／ポリペプチド、例えば、ペプチドアプタマー、チオレドキシン、モノボディー、アンチカリン、Ｋｕｎｉｔｚドメイン、アビマー、ノッティン、フィノマー、アトリマー、ＤＡＲＰｉｎ、アフィボディー、ナノボディー（すなわち、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ））、アフィリン、アルマジロリピートタンパク質（ＡｒｍＲＰ）、ＯＢｏｄｙ、またはフィブロネクチン（例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Ｒｅｖｅｒｄａｔｔｏら、Ｃｕｒｒ  Ｔｏｐ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．、２０１５、１５（１２）：１０８２〜１１０１において総説された（例えば、Ｂｏｅｒｓｍａら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ（２０１１）、２８６：４１２７３〜８５；およびＥｍａｎｕｅｌら、Ｍａｂ（２０１１）、３：３８〜４８もまた参照されたい））を含むか、またはこれからなる。
【００９０】
本発明の抗原結合性分子は、一般に、標的抗原に特異的に結合することが可能な、抗体のＶＨおよびＶＬを含む、抗原結合性ドメインを含む。本明細書では、ＶＨおよびＶＬにより形成される抗原結合性ドメインはまた、Ｆｖ領域とも称される。
【００９１】
抗原結合性分子は、抗原結合性ポリペプチド、または抗原結合性ポリペプチド複合体でありうるか、またはこれを含みうる。抗原結合性分子は、併せて、抗原結合性ドメインを形成する、１つを超えるポリペプチドを含みうる。ポリペプチドは、共有結合的に会合する場合もあり、非共有結合的に会合する場合もある。一部の実施形態では、ポリペプチドは、ポリペプチドを含むより大型ポリペプチドの一部を形成する（例えば、ＶＨおよびＶＬを含むｓｃＦｖの場合、またはＶＨ−ＣＨ１およびＶＬ−ＣＬを含むｓｃＦａｂの場合において）。
【００９２】
抗原結合性分子は、１つを超えるポリペプチド（例えば、２つ、３つ、４つ、６つ、または８つのポリペプチド）、例えば、２つの重鎖ポリペプチドと、２つの軽鎖ポリペプチドとを含む、ＩｇＧ様抗原結合性分子の、非共有結合的または共有結合的複合体を指す場合がある。
【００９３】
本発明の抗原結合性分子は、ＨＥＲ３に結合することが可能な、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）の配列を使用して、デザインおよび調製されうる。単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、およびＦ（ａｂ’）２断片など、抗体の抗原結合性領域もまた、使用されうる／もたらされうる。「抗原結合性領域」とは、所与の抗体が特異的である標的に結合することが可能な抗体の、任意の断片である。
【００９４】
抗体は、一般に、重鎖可変（ＶＨ）領域内の３つ：ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、およびＨＣ−ＣＤＲ３、ならびに軽鎖可変（ＶＬ）領域内の３つ：ＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、およびＬＣ−ＣＤＲ３である、６つの相補性決定領域であるＣＤＲを含む。６つのＣＤＲは、併せて、標的抗原に結合する、抗体の部分である、抗体のパラトープを規定する。
【００９５】
ＶＨ領域およびＶＬ領域は、各ＣＤＲのいずれの側にも、ＣＤＲのための足場をもたらす、フレームワーク領域（ＦＲ）を含む。Ｎ末端から、Ｃ末端へと、ＶＨ領域は、以下の構造：Ｎ末端−［ＨＣ−ＦＲ１］−［ＨＣ−ＣＤＲ１］−［ＨＣ−ＦＲ２］−［ＨＣ−ＣＤＲ２］−［ＨＣ−ＦＲ３］−［ＨＣ−ＣＤＲ３］−［ＨＣ−ＦＲ４］−Ｃ末端を含み、ＶＬ領域は、以下の構造：Ｎ末端−［ＬＣ−ＦＲ１］−［ＬＣ−ＣＤＲ１］−［ＬＣ−ＦＲ２］−［ＬＣ−ＣＤＲ２］−［ＬＣ−ＦＲ３］−［ＬＣ−ＣＤＲ３］−［ＬＣ−ＦＲ４］−Ｃ末端を含む。
【００９６】
Ｋａｂａｔら、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ（１９９１）；Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９６：９０１〜９１７（１９８７）において記載された慣例、ならびにＲｅｔｔｅｒら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、（２００５）、３３（増刊１号）：Ｄ６７１〜Ｄ６７４において記載されたＶＢＡＳＥ２など、抗体のＣＤＲおよびＦＲを規定するための、いくつかの異なる慣例が存在する。本明細書で記載される抗体クローンの、ＶＨ領域およびＶＬ領域のＣＤＲおよびＦＲは、Ｌｅｆｒａｎｃら、Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００３）、２７：５５〜７７において記載された、ＩＭＧＴ  Ｖドメイン番号付け規則を使用する、ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩＭＧＴ（ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ）ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ（ＬｅＦｒａｎｃら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．（２０１５）、４３（データベース号）：Ｄ４１３〜２２）に従い規定された。
【００９７】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３に結合することが可能な抗原結合性分子のＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３に結合することが可能な抗原結合性分子のＦＲを含む。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３に結合することが可能な抗原結合性分子のＣＤＲおよびＦＲを含む。すなわち、一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３に結合することが可能な抗原結合性分子のＶＨ領域およびＶＬ領域を含む。
【００９８】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、本明細書で記載されるＨＥＲ３結合性抗体クローン（すなわち、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１＿ｃ７５、１０Ｄ１＿ｃ７６、１０Ｄ１＿ｃ７７、１０Ｄ１＿ｃ７８ｖ１、１０Ｄ１＿ｃ７８ｖ２、１０Ｄ１＿１１Ｂ、１０Ｄ１＿ｃ８５ｖ１、１０Ｄ１＿ｃ８５ｖ２、１０Ｄ１＿ｃ８５ｏ１、１０Ｄ１＿ｃ８５ｏ２、１０Ｄ１＿ｃ８７、１０Ｄ１＿ｃ８９、１０Ｄ１＿ｃ９０、１０Ｄ１＿ｃ９１、１０Ｄ１＿ｃ９２、１０Ｄ１＿ｃ９３、１０Ｄ１、１０Ａ６、４−３５−Ｂ２、または４−３５−Ｂ４；例えば、１０Ｄ１＿ｃ８９、１０Ｄ１＿ｃ９０、または１０Ｄ１＿ｃ９１；例えば、１０Ｄ１＿ｃ８９）のＶＨ／ＶＬ領域であるか、またはこれらに由来する、ＶＨ領域およびＶＬ領域を含む。
【００９９】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、下記の（１）〜（１０）のうちの１つに従うＶＨ領域を含む。
【０１００】
（１）（１０Ｄ１由来の）以下のＣＤＲ：
配列番号４３のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号４６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号５１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３、
またはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、またはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＨ領域。
【０１０１】
（２）（１０Ｄ１、１０Ｄ１＿ｃ７５、１０Ｄ１＿ｃ７６、１０Ｄ１＿ｃ７７、１０Ｄ１＿ｃ７８ｖ１、１０Ｄ１＿ｃ７８ｖ２、１０Ｄ１＿１１Ｂ、１０Ｄ１＿ｃ８７、１０Ｄ１＿ｃ９２、１０Ｄ１＿ｃ９３の）以下のＣＤＲ：
配列番号４１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号４４のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号４７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３、
またはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、またはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＨ領域。
【０１０２】
（３）（１０Ｄ１＿ｃ８５ｖ１、１０Ｄ１＿ｃ８５ｖ２の）以下のＣＤＲ：
配列番号４１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号４５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号４７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３、
またはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、またはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＨ領域。
【０１０３】
（４）（１０Ｄ１＿ｃ８５ｏ１の）以下のＣＤＲ：
配列番号４１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号４５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号４９のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３、
またはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、またはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＨ領域。
【０１０４】
（５）（１０Ｄ１＿ｃ８５ｏ２の）以下のＣＤＲ：
配列番号４１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号４５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号５０のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３、
またはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、またはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＨ領域。
【０１０５】
（６）（１０Ｄ１＿ｃ８９、１０Ｄ１＿ｃ９０の）以下のＣＤＲ：
配列番号４１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号４５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号４８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３、
またはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、またはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＨ領域。
【０１０６】
（７）（１０Ｄ１＿ｃ９１の）以下のＣＤＲ：
配列番号４２のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号４５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号４８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３、
またはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、またはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＨ領域。
【０１０７】
（８）（１０Ａ６の）以下のＣＤＲ：
配列番号１５８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号１５９のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号１６０のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３、
またはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、またはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＨ領域。
【０１０８】
（９）（４−３５−Ｂ２の）以下のＣＤＲ：
配列番号１２８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号１２９のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号１３０のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３、
またはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、またはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＨ領域。
【０１０９】
（１０）（４−３５−Ｂ４の）以下のＣＤＲ：
配列番号１４４のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号１４５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号１４６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３、
またはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、またはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＨ領域。
【０１１０】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、下記の（１１）〜（２４）のうちの１つに従うＶＨ領域を含む。
【０１１１】
（１１）（１０Ｄ１の）以下のＦＲ：
配列番号５５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ１
配列番号５８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ２
配列番号６９のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ３
配列番号７３のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ４、
またはＨＣ−ＦＲ１、ＨＣ−ＦＲ２、ＨＣ−ＦＲ３、またはＨＣ−ＦＲ４のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＨ領域。
【０１１２】
（１２）（１０Ｄ１＿ｃ７５、１０Ｄ１＿ｃ９２の）以下のＦＲ：
配列番号５２のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ１
配列番号５６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ２
配列番号６１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ３
配列番号７０のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ４、
またはＨＣ−ＦＲ１、ＨＣ−ＦＲ２、ＨＣ−ＦＲ３、またはＨＣ−ＦＲ４のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＨ領域。
【０１１３】
（１３）（１０Ｄ１＿ｃ７６、１０Ｄ１＿ｃ７７、１０Ｄ１＿ｃ７８ｖ１の）以下のＦＲ：
配列番号５２のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ１
配列番号５６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ２
配列番号６２のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ３
配列番号７０のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ４、
またはＨＣ−ＦＲ１、ＨＣ−ＦＲ２、ＨＣ−ＦＲ３、またはＨＣ−ＦＲ４のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＨ領域。
【０１１４】
（１４）（１０Ｄ１＿ｃ７８ｖ２の）以下のＦＲ：
配列番号５２のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ１
配列番号５７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ２
配列番号６２のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ３
配列番号７０のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ４、
またはＨＣ−ＦＲ１、ＨＣ−ＦＲ２、ＨＣ−ＦＲ３、またはＨＣ−ＦＲ４のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＨ領域。
【０１１５】
（１５）（１０Ｄ１＿１１Ｂの）以下のＦＲ：
配列番号２２４のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ１
配列番号６０のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ２
配列番号６３のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ３
配列番号７０のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ４、
またはＨＣ−ＦＲ１、ＨＣ−ＦＲ２、ＨＣ−ＦＲ３、またはＨＣ−ＦＲ４のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＨ領域。
【０１１６】
（１６）（１０Ｄ１＿ｃ８５ｖ１の）以下のＦＲ：
配列番号５２のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ１
配列番号５６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ２
配列番号６４のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ３
配列番号７０のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ４、
またはＨＣ−ＦＲ１、ＨＣ−ＦＲ２、ＨＣ−ＦＲ３、またはＨＣ−ＦＲ４のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＨ領域。
【０１１７】
（１７）（１０Ｄ１＿ｃ８５ｖ２、１０Ｄ１＿ｃ８５ｏ１、１０Ｄ１＿ｃ８５ｏ２の）以下のＦＲ：
配列番号５２のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ１
配列番号５７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ２
配列番号６４のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ３
配列番号７０のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ４、
またはＨＣ−ＦＲ１、ＨＣ−ＦＲ２、ＨＣ−ＦＲ３、またはＨＣ−ＦＲ４のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＨ領域。
【０１１８】
（１８）（１０Ｄ１＿ｃ８７、１０Ｄ１＿ｃ９３の）以下のＦＲ：
配列番号５２のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ１
配列番号５６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ２
配列番号６５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ３
配列番号７０のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ４、
またはＨＣ−ＦＲ１、ＨＣ−ＦＲ２、ＨＣ−ＦＲ３、またはＨＣ−ＦＲ４のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＨ領域。
【０１１９】
（１９）（１０Ｄ１＿ｃ８９の）以下のＦＲ：
配列番号５３のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ１
配列番号５９のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ２
配列番号６６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ３
配列番号７１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ４、
またはＨＣ−ＦＲ１、ＨＣ−ＦＲ２、ＨＣ−ＦＲ３、またはＨＣ−ＦＲ４のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＨ領域。
【０１２０】
（２０）（１０Ｄ１＿ｃ９０の）以下のＦＲ：
配列番号５４のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ１
配列番号５９のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ２
配列番号６７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ３
配列番号７１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ４、
またはＨＣ−ＦＲ１、ＨＣ−ＦＲ２、ＨＣ−ＦＲ３、またはＨＣ−ＦＲ４のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＨ領域。
【０１２１】
（２１）（１０Ｄ１＿ｃ９１の）以下のＦＲ：
配列番号５３のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ１
配列番号５９のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ２
配列番号６８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ３
配列番号７２のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ４、
またはＨＣ−ＦＲ１、ＨＣ−ＦＲ２、ＨＣ−ＦＲ３、またはＨＣ−ＦＲ４のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＨ領域。
【０１２２】
（２２）（１０Ａ６の）以下のＦＲ：
配列番号１６１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ１
配列番号１６２のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ２
配列番号１６３のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ３
配列番号７３のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ４、
またはＨＣ−ＦＲ１、ＨＣ−ＦＲ２、ＨＣ−ＦＲ３、またはＨＣ−ＦＲ４のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＨ領域。
【０１２３】
（２３）（４−３５−Ｂ２の）以下のＦＲ：
配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ１
配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ２
配列番号１３３のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ３
配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ４、
またはＨＣ−ＦＲ１、ＨＣ−ＦＲ２、ＨＣ−ＦＲ３、またはＨＣ−ＦＲ４のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＨ領域。
【０１２４】
（２４）（４−３５−Ｂ４の）以下のＦＲ：
配列番号１４７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ１
配列番号１４８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ２
配列番号１４９のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ３
配列番号７３のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ４、
またはＨＣ−ＦＲ１、ＨＣ−ＦＲ２、ＨＣ−ＦＲ３、またはＨＣ−ＦＲ４のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＨ領域。
【０１２５】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、上記の（１）〜（１０）のうちの１つに従うＣＤＲと、上記の（１１）〜（２４）のうちの１つに従うＦＲとを含むＶＨ領域を含む。
【０１２６】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、下記の（２５）〜（４１）のうちの１つに従うＶＨ領域を含む。
【０１２７】
（２５）（１）に従うＣＤＲと、（１１）、（１２）、（１３）、（１４）、（１５）、（１６）、（１７）、（１８）、（１９）、（２０）、または（２１）に従うＦＲとを含むＶＨ領域。
【０１２８】
（２６）（２）に従うＣＤＲと、（１１）に従うＦＲとを含むＶＨ領域。
【０１２９】
（２７）（２）に従うＣＤＲと、（１２）に従うＦＲとを含むＶＨ領域。
【０１３０】
（２８）（２）に従うＣＤＲと、（１３）に従うＦＲとを含むＶＨ領域。
【０１３１】
（２９）（２）に従うＣＤＲと、（１４）に従うＦＲとを含むＶＨ領域。
【０１３２】
（３０）（２）に従うＣＤＲと、（１５）に従うＦＲとを含むＶＨ領域。
【０１３３】
（３１）（２）に従うＣＤＲと、（１８）に従うＦＲとを含むＶＨ領域。
【０１３４】
（３２）（３）に従うＣＤＲと、（１６）に従うＦＲとを含むＶＨ領域。
【０１３５】
（３３）（３）に従うＣＤＲと、（１７）に従うＦＲとを含むＶＨ領域。
【０１３６】
（３４）（４）に従うＣＤＲと、（１７）に従うＦＲとを含むＶＨ領域。
【０１３７】
（３５）（５）に従うＣＤＲと、（１７）に従うＦＲとを含むＶＨ領域。
【０１３８】
（３６）（６）に従うＣＤＲと、（１９）に従うＦＲとを含むＶＨ領域。
【０１３９】
（３７）（６）に従うＣＤＲと、（２０）に従うＦＲとを含むＶＨ領域。
【０１４０】
（３８）（７）に従うＣＤＲと、（２１）に従うＦＲとを含むＶＨ領域。
【０１４１】
（３９）（８）に従うＣＤＲと、（２２）に従うＦＲとを含むＶＨ領域。
【０１４２】
（４０）（９）に従うＣＤＲと、（２３）に従うＦＲとを含むＶＨ領域。
【０１４３】
（４１）（１０）に従うＣＤＲと、（２４）に従うＦＲとを含むＶＨ領域。
【０１４４】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、下記の（４２）〜（６１）のうちの１つに従うＶＨ領域を含む。
【０１４５】
（４２）配列番号２４のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域。
【０１４６】
（４３）配列番号２５のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域。
【０１４７】
（４４）配列番号２６のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域。
【０１４８】
（４５）配列番号２７のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域。
【０１４９】
（４６）配列番号２８のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域。
【０１５０】
（４７）配列番号２９のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域。
【０１５１】
（４８）配列番号３０のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域。
【０１５２】
（４９）配列番号３１のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域。
【０１５３】
（５０）配列番号３２のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域。
【０１５４】
（５１）配列番号３３のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域。
【０１５５】
（５２）配列番号３４のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域。
【０１５６】
（５３）配列番号３５のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域。
【０１５７】
（５４）配列番号３６のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域。
【０１５８】
（５５）配列番号３７のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域。
【０１５９】
（５６）配列番号３８のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域。
【０１６０】
（５７）配列番号３９のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域。
【０１６１】
（５８）配列番号４０のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域。
【０１６２】
（５９）配列番号１２７のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域。
【０１６３】
（６０）配列番号１４３のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域。
【０１６４】
（６１）配列番号１５７のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域。
【０１６５】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、下記の（６２）〜（７１）のうちの１つに従うＶＬ領域を含む。
【０１６６】
（６２）（１０Ｄ１由来の）以下のＣＤＲ：
配列番号９１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号９４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号９９のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３；
またはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、またはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＬ領域。
【０１６７】
（６３）（１０Ｄ１、１０Ｄ１＿ｃ７５、１０Ｄ１＿ｃ７８ｖ１、１０Ｄ１＿ｃ７８ｖ２、１０Ｄ１＿１１Ｂ、１０Ｄ１＿ｃ８７、１０Ｄ１＿ｃ８９、１０Ｄ１＿ｃ９１、１０Ｄ１＿ｃ９３の）以下のＣＤＲ：
配列番号８８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号９２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号９５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３；
またはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、またはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＬ領域。
【０１６８】
（６４）（１０Ｄ１＿ｃ７６の）以下のＣＤＲ：
配列番号８９のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号９２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号９５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３；
またはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、またはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＬ領域。
【０１６９】
（６５）（１０Ｄ１＿ｃ７７の）以下のＣＤＲ：
配列番号９０のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号９２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号９６のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３；
またはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、またはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＬ領域。
【０１７０】
（６６）（１０Ｄ１＿ｃ８５ｖ１、１０Ｄ１＿ｃ８５ｖ２、１０Ｄ１＿ｃ８５ｏ１、１０Ｄ１＿ｃ８５ｏ２の）以下のＣＤＲ：
配列番号８８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号９３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号９５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３；
またはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、またはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＬ領域。
【０１７１】
（６７）（１０Ｄ１＿ｃ９０の）以下のＣＤＲ：
配列番号８８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号９２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号９７のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３；
またはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、またはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＬ領域。
【０１７２】
（６８）（１０Ｄ１＿ｃ９２の）以下のＣＤＲ：
配列番号８８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号９２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号９８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３；
またはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、またはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＬ領域。
【０１７３】
（６９）（１０Ａ６の）以下のＣＤＲ：
配列番号１６５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号１６６のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号１６７のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３；
またはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、またはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＬ領域。
【０１７４】
（７０）（４−３５−Ｂ２の）以下のＣＤＲ：
配列番号１３６のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号１３７のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号１３８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３；
またはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、またはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＬ領域。
【０１７５】
（７１）（４−３５−Ｂ４の）以下のＣＤＲ：
配列番号１５１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号１５２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号１５３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３；
またはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、またはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＬ領域。
【０１７６】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、下記の（７２）〜（８６）のうちの１つに従うＶＬ領域を含む。
【０１７７】
（７２）（１０Ｄ１の）以下のＦＲ：
配列番号１０６のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ１
配列番号１１３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ２
配列番号１２３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ３
配列番号１２６のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ４、
またはＬＣ−ＦＲ１、ＬＣ−ＦＲ２、ＬＣ−ＦＲ３、またはＬＣ−ＦＲ４のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＬ領域。
【０１７８】
（７３）（１０Ｄ１＿ｃ７５の）以下のＦＲ：
配列番号１００のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ１
配列番号１０７のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ２
配列番号１１４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ３
配列番号１２４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ４、
またはＬＣ−ＦＲ１、ＬＣ−ＦＲ２、ＬＣ−ＦＲ３、またはＬＣ−ＦＲ４のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＬ領域。
【０１７９】
（７４）（１０Ｄ１＿ｃ７６の）以下のＦＲ：
配列番号１０１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ１
配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ２
配列番号１１５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ３
配列番号１２４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ４、
またはＬＣ−ＦＲ１、ＬＣ−ＦＲ２、ＬＣ−ＦＲ３、またはＬＣ−ＦＲ４のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＬ領域。
【０１８０】
（７５）（１０Ｄ１＿ｃ７７の）以下のＦＲ：
配列番号１０２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ１
配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ２
配列番号１１６のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ３
配列番号１２４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ４、
またはＬＣ−ＦＲ１、ＬＣ−ＦＲ２、ＬＣ−ＦＲ３、またはＬＣ−ＦＲ４のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＬ領域。
【０１８１】
（７６）（１０Ｄ１＿ｃ７８ｖ１、１０Ｄ１＿ｃ７８ｖ２、１０Ｄ１＿１１Ｂの）以下のＦＲ：
配列番号１０３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ１
配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ２
配列番号１１７のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ３
配列番号１２４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ４、
またはＬＣ−ＦＲ１、ＬＣ−ＦＲ２、ＬＣ−ＦＲ３、またはＬＣ−ＦＲ４のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＬ領域。
【０１８２】
（７７）（１０Ｄ１＿ｃ８５ｖ１、１０Ｄ１＿ｃ８５ｖ２、１０Ｄ１＿ｃ８５ｏ１、１０Ｄ１＿ｃ８５ｏ２の）以下のＦＲ：
配列番号１０３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ１
配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ２
配列番号１１８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ３
配列番号１２４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ４、
またはＬＣ−ＦＲ１、ＬＣ−ＦＲ２、ＬＣ−ＦＲ３、またはＬＣ−ＦＲ４のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＬ領域。
【０１８３】
（７８）（１０Ｄ１＿ｃ８７の）以下のＦＲ：
配列番号１０３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ１
配列番号１０９のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ２
配列番号１１９のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ３
配列番号１２４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ４、
またはＬＣ−ＦＲ１、ＬＣ−ＦＲ２、ＬＣ−ＦＲ３、またはＬＣ−ＦＲ４のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＬ領域。
【０１８４】
（７９）（１０Ｄ１＿ｃ８９の）以下のＦＲ：
配列番号１０４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ１
配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ２
配列番号１２０のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ３
配列番号１２５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ４、
またはＬＣ−ＦＲ１、ＬＣ−ＦＲ２、ＬＣ−ＦＲ３、またはＬＣ−ＦＲ４のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＬ領域。
【０１８５】
（８０）（１０Ｄ１＿ｃ９０の）以下のＦＲ：
配列番号１０５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ１
配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ２
配列番号１２１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ３
配列番号１２４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ４、
またはＬＣ−ＦＲ１、ＬＣ−ＦＲ２、ＬＣ−ＦＲ３、またはＬＣ−ＦＲ４のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＬ領域。
【０１８６】
（８１）（１０Ｄ１＿ｃ９１の）以下のＦＲ：
配列番号１０４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ１
配列番号１１１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ２
配列番号１２２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ３
配列番号１２５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ４、
またはＬＣ−ＦＲ１、ＬＣ−ＦＲ２、ＬＣ−ＦＲ３、またはＬＣ−ＦＲ４のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＬ領域。
【０１８７】
（８２）（１０Ｄ１＿ｃ９２の）以下のＦＲ：
配列番号１００のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ１
配列番号１１２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ２
配列番号１１４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ３
配列番号１２４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ４、
またはＬＣ−ＦＲ１、ＬＣ−ＦＲ２、ＬＣ−ＦＲ３、またはＬＣ−ＦＲ４のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＬ領域。
【０１８８】
（８３）（１０Ｄ１＿ｃ９３の）以下のＦＲ：
配列番号１０３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ１
配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ２
配列番号１１９のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ３
配列番号１２４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ４、
またはＬＣ−ＦＲ１、ＬＣ−ＦＲ２、ＬＣ−ＦＲ３、またはＬＣ−ＦＲ４のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＬ領域。
【０１８９】
（８４）（１０Ａ６の）以下のＦＲ：
配列番号１６８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ１
配列番号１６９のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ２
配列番号１７０のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ３
配列番号１４２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ４、
またはＬＣ−ＦＲ１、ＬＣ−ＦＲ２、ＬＣ−ＦＲ３、またはＬＣ−ＦＲ４のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＬ領域。
【０１９０】
（８５）（４−３５−Ｂ２の）以下のＦＲ：
配列番号１３９のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ１
配列番号１４０のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ２
配列番号１４１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ３
配列番号１４２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ４、
またはＬＣ−ＦＲ１、ＬＣ−ＦＲ２、ＬＣ−ＦＲ３、またはＬＣ−ＦＲ４のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＬ領域。
【０１９１】
（８６）（４−３５−Ｂ４の）以下のＦＲ：
配列番号１５４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ１
配列番号１５５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ２
配列番号１５６のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ３
配列番号１４２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ４、
またはＬＣ−ＦＲ１、ＬＣ−ＦＲ２、ＬＣ−ＦＲ３、またはＬＣ−ＦＲ４のうちの１つまたは複数における、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＬ領域。
【０１９２】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、上記の（６２）〜（７１）のうちの１つに従うＣＤＲと、上記の（７２）〜（８６）のうちの１つに従うＦＲとを含むＶＬ領域を含む。
【０１９３】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、下記の（８７）〜（１０２）のうちの１つに従うＶＬ領域を含む。
【０１９４】
（８７）（６２）に従うＣＤＲと、（７２）、（７３）、（７４）、（７５）、（７６）、（７７）、（７８）、（７９）、（８０）、（８１）、（８２）、または（８３）に従うＦＲとを含むＶＬ領域。
【０１９５】
（８８）（６３）に従うＣＤＲと、（７２）に従うＦＲとを含むＶＬ領域。
【０１９６】
（８９）（６３）に従うＣＤＲと、（７３）に従うＦＲとを含むＶＬ領域。
【０１９７】
（９０）（６３）に従うＣＤＲと、（７６）に従うＦＲとを含むＶＬ領域。
【０１９８】
（９１）（６３）に従うＣＤＲと、（７８）に従うＦＲとを含むＶＬ領域。
【０１９９】
（９２）（６３）に従うＣＤＲと、（７９）に従うＦＲとを含むＶＬ領域。
【０２００】
（９３）（６３）に従うＣＤＲと、（８１）に従うＦＲとを含むＶＬ領域。
【０２０１】
（９４）（６３）に従うＣＤＲと、（８３）に従うＦＲとを含むＶＬ領域。
【０２０２】
（９５）（６４）に従うＣＤＲと、（７４）に従うＦＲとを含むＶＬ領域。
【０２０３】
（９６）（６５）に従うＣＤＲと、（７５）に従うＦＲとを含むＶＬ領域。
【０２０４】
（９７）（６６）に従うＣＤＲと、（７７）に従うＦＲとを含むＶＬ領域。
【０２０５】
（９８）（６７）に従うＣＤＲと、（８０）に従うＦＲとを含むＶＬ領域。
【０２０６】
（９９）（６８）に従うＣＤＲと、（８２）に従うＦＲとを含むＶＬ領域。
【０２０７】
（１００）（６９）に従うＣＤＲと、（８４）に従うＦＲとを含むＶＬ領域。
【０２０８】
（１０１）（７０）に従うＣＤＲと、（８５）に従うＦＲとを含むＶＬ領域。
【０２０９】
（１０２）（７１）に従うＣＤＲと、（８６）に従うＦＲとを含むＶＬ領域。
【０２１０】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、下記の（１０３）〜（１１９）のうちの１つに従うＶＬ領域を含む。
【０２１１】
（１０３）配列番号７４のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域。
【０２１２】
（１０４）配列番号７５のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域。
【０２１３】
（１０５）配列番号７６のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域。
【０２１４】
（１０６）配列番号７７のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域。
【０２１５】
（１０７）配列番号７８のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域。
【０２１６】
（１０８）配列番号７９のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域。
【０２１７】
（１０９）配列番号８０のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域。
【０２１８】
（１１０）配列番号８１のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域。
【０２１９】
（１１１）配列番号８２のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域。
【０２２０】
（１１２）配列番号８３のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域。
【０２２１】
（１１３）配列番号８４のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域。
【０２２２】
（１１４）配列番号８５のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域。
【０２２３】
（１１５）配列番号８６のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域。
【０２２４】
（１１６）配列番号８７のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域。
【０２２５】
（１１７）配列番号１３５のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域。
【０２２６】
（１１８）配列番号１５０のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域。
【０２２７】
（１１９）配列番号１６４のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域。
【０２２８】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、上記の（１）〜（６１）のうちのいずれか１つに従うＶＨ領域と、上記の（６２）〜（１１９）のうちのいずれか１つに従うＶＬ領域とを含む。
【０２２９】
１つまたは複数のアミノ酸が、別のアミノ酸で置換される、本発明に従う実施形態では、置換は、例えば、以下の表に従う、保存的置換でありうる。一部の実施形態では、中欄の同じブロック内のアミノ酸が置換される。一部の実施形態では、最も右の欄の同じ連なりのアミノ酸が置換される。
【０２３０】
【表１】
2021510535.tif 000003
一部の実施形態では、置換（複数可）は、機能的に保存的でありうる。すなわち、一部の実施形態では、置換は、同等の非置換分子と比較して置換を含む抗原結合性分子の、１つまたは複数の機能的特性（例えば、標的への結合）に影響を及ぼさない場合がある（またはこれに実質的に影響を及ぼさない場合がある）。
【０２３１】
抗体の抗原結合性領域の、ＶＨおよびＶＬ領域は、併せて、Ｆｖ領域を構成する。一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、ＨＥＲ３に結合するＦｖ領域を含むか、またはこれらからなる。一部の実施形態では、ＦｖのＶＨおよびＶＬ領域は、リンカー領域により接合された、単一のポリペプチド、すなわち、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として提供される。
【０２３２】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、免疫グロブリンの重鎖定常配列の、１つまたは複数の領域を含む。一部の実施形態では、免疫グロブリンの重鎖定常配列は、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、またはＩｇＭの重鎖定常配列であるか、またはこれらに由来する。
【０２３３】
一部の実施形態では、免疫グロブリンの重鎖定常配列は、ヒト免疫グロブリンＧ１定常配列（ＩＧＨＧ１；ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ０１８５７−１、ｖ１；配列番号１７１）である。配列番号１７１の１〜９８位は、ＣＨ１領域（配列番号１７２）を形成する。配列番号１７１の９９〜１１０位は、ＣＨ１とＣＨ２領域との間のヒンジ領域（配列番号１７３）を形成する。配列番号１７１の１１１〜２２３位は、ＣＨ２領域（配列番号１７４）を形成する。配列番号１７１の２２４〜３３０位は、ＣＨ３領域（配列番号１７５）を形成する。
【０２３４】
例示される抗原結合性分子は、ＣＨ３領域内に、置換である、Ｄ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ（ＥＵ番号付けに従い番号付けされた位置）を含む、ｐＦＵＳＥ−ＣＨＩｇ−ｈＧ１を使用して調製されうる。ｐＦＵＳＥ−ＣＨＩｇ−ｈＧ１によりコードされるＣＨ３領域のアミノ酸配列を、配列番号１７６に示す。ＣＨ３領域は、本明細書で記載される抗原結合性分子のＦｃ領域への修飾に従い、さらなる置換を施されうることが理解されるであろう。
【０２３５】
一部の実施形態では、ＣＨ１領域は、配列番号１７２の配列、または配列番号１７２のアミノ酸配列に対する、少なくとも６０％、好ましくは、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有する配列を含むか、またはこれらからなる。一部の実施形態では、ＣＨ１−ＣＨ２間のヒンジ領域は、配列番号１７３の配列、または配列番号１７３のアミノ酸配列に対する、少なくとも６０％、好ましくは、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有する配列を含むか、またはこれらからなる。一部の実施形態では、ＣＨ２領域は、配列番号１７４の配列、または配列番号１７４のアミノ酸配列に対する、少なくとも６０％、好ましくは、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有する配列を含むか、またはこれらからなる。一部の実施形態では、ＣＨ３領域は、配列番号１７５もしくは１７６の配列、または配列番号１７５もしくは１７６のアミノ酸配列に対する、少なくとも６０％、好ましくは、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有する配列を含むか、またはこれらからなる。
【０２３６】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、免疫グロブリンの軽鎖定常配列の、１つまたは複数の領域を含む。一部の実施形態では、免疫グロブリンの軽鎖定常配列は、ヒト免疫グロブリンカッパ定常配列（ＩＧＫＣ；Ｃκ；ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ０１８３４−１、ｖ２；配列番号１７７）である。一部の実施形態では、免疫グロブリンの軽鎖定常配列は、ヒト免疫グロブリンラムダ定常配列（ＩＧＬＣ；Ｃλ）、例えば、ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６、またはＩＧＬＣ７である。一部の実施形態では、ＣＬ領域は、配列番号１７７の配列、または配列番号１７７のアミノ酸配列に対する、少なくとも６０％、好ましくは、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有する配列を含むか、またはこれらからなる。
【０２３７】
抗体の抗原結合性領域の、ＶＬおよび軽鎖定常（ＣＬ）領域、ならびにＶＨ領域および重鎖定常１（ＣＨ１）領域は、併せて、Ｆａｂ領域を構成する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＶＨ、ＣＨ１、ＶＬ、ＣＬ（例えば、ＣκまたはＣλ）を含むＦａｂ領域を含む。一部の実施形態では、Ｆａｂ領域は、ＶＨとＣＨ１とを含むポリペプチド（例えば、ＶＨ−ＣＨ１融合ポリペプチド）、およびＶＬとＣＬとを含むポリペプチド（例えば、ＶＬ−ＣＬ融合ポリペプチド）を含む。一部の実施形態では、Ｆａｂ領域は、ＶＨとＣＬとを含むポリペプチド（例えば、ＶＨ−ＣＬ融合ポリペプチド）、およびＶＬとＣＨとを含むポリペプチド（例えば、ＶＬ−ＣＨ１融合ポリペプチド）を含む；すなわち、一部の実施形態では、Ｆａｂ領域は、ＣｒｏｓｓＦａｂ領域である。一部の実施形態では、ＦａｂまたはＣｒｏｓｓＦａｂの、ＶＨ、ＣＨ１、ＶＬ、およびＣＬ領域は、リンカー領域により接合された、単一のポリペプチド、すなわち、単鎖Ｆａｂ（ｓｃＦａｂ）または単鎖ＣｒｏｓｓＦａｂ（ｓｃＣｒｏｓｓＦａｂ）として提供される。
【０２３８】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、ＨＥＲ３に結合するＦａｂ領域を含むか、またはこれらからなる。
【０２３９】
一部の実施形態では、本明細書で記載される抗原結合性分子は、ＨＥＲ３に結合する全抗体を含むか、またはこれらからなる。本明細書で使用される、「全抗体」とは、免疫グロブリン（Ｉｇ）の構造と、実質的に同様の構造を有する抗体を指す。異なる種類の免疫グロブリン、およびそれらの構造については、例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、ＳｃｈｒｏｅｄｅｒおよびＣａｖａｃｉｎｉ、Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１０）、１２５（２０２）：Ｓ４１〜Ｓ５２において記載されている。
【０２４０】
Ｇ型の免疫グロブリン（すなわち、ＩｇＧ）は、２つの重鎖と、２つの軽鎖とを含む、約１５０ｋＤａの糖タンパク質である。Ｎ末端から、Ｃ末端へと、重鎖は、ＶＨに続き、３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３）を含む、重鎖定常領域を含み、同様に、軽鎖は、ＶＬに続き、ＣＬを含む。重鎖に応じて、免疫グロブリンは、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、またはＩｇＭと分類されうる。軽鎖は、カッパ（κ）鎖の場合もあり、ラムダ（λ）鎖の場合もある。
【０２４１】
一部の実施形態では、本明細書で記載される抗原結合性分子は、ＨＥＲ３に結合するＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、またはＩｇＭを含むか、またはこれらからなる。
【０２４２】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、ＨＥＲ３に対して、少なくとも一価の結合性分子である。結合価とは、所与の抗原決定基についての、抗原結合性分子内の結合性部位の数を指す。したがって、一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３に対する、少なくとも１つの結合性部位を含む。
【０２４３】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３に対する、１つを超える結合性部位、例えば、２つ、３つ、または４つの結合性部位を含む。結合性部位は、同じ場合もあり、異なる場合もある。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３に対して、例えば、二価、三価、または四価である。
【０２４４】
本発明の態様は、多特異性の抗原結合性分子に関する。「多特異性」とは、抗原結合性分子が、１つを超える標的への特異的結合をもたらすことを意味する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、二特異性の抗原結合性分子である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、少なくとも２つの、異なる抗原結合性ドメイン（すなわち、例えば、同一でないＶＨおよびＶＬを含む、少なくとも２つの抗原結合性ドメイン）を含む。
【０２４５】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３、および別の標的（例えば、ＨＥＲ３以外の抗原）に結合するので、少なくとも二特異性である。「二特異性」という用語は、抗原結合性分子が、少なくとも２つの、別個の抗原決定基に特異的に結合することが可能であることを意味する。
【０２４６】
本発明に従う抗原結合性分子（例えば、多特異性抗原結合性分子）は、抗原結合性分子が特異的である標的に結合することが可能な抗原結合性分子を含みうることが理解されるであろう。例えば、ＨＥＲ３およびＨＥＲ３以外の抗原に結合することが可能な抗原結合性分子は、（ｉ）ＨＥＲ３に結合することが可能な抗原結合性分子、および（ｉｉ）ＨＥＲ３以外の抗原に結合することが可能な抗原結合性分子を含みうる。
【０２４７】
また、本発明に従う抗原結合性分子（例えば、多特異性抗原結合性分子）は、抗原結合性分子が特異的である標的に結合することが可能な、抗原結合性ポリペプチド、または抗原結合性ポリペプチド複合体を含みうることも理解されるであろう。例えば、本発明に従う抗原結合性分子は、例えば、（ｉ）軽鎖ポリペプチド（構造ＶＬ−ＣＬを含む）と、重鎖ポリペプチド（構造ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３を含む）とを含む、ＨＥＲ３に結合することが可能な抗原結合性ポリペプチド複合体、および（ｉｉ）軽鎖ポリペプチド（構造ＶＬ−ＣＬを含む）と、重鎖ポリペプチド（構造ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３を含む）とを含む、ＨＥＲ３以外の抗原に結合することが可能な抗原結合性ポリペプチド複合体を含みうる。
【０２４８】
一部の実施形態では、より大型の抗原結合性分子（例えば、多特異性抗原結合性分子）の、構成要素である抗原結合性分子は、より大型の抗原結合性分子の、例えば、「抗原結合性ドメイン」または「抗原結合性領域」と称されうる。
【０２４９】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３に結合することが可能な抗原結合性分子と、ＨＥＲ３以外の抗原に結合することが可能な抗原結合性分子とを含む。一部の実施形態では、ＨＥＲ３以外の抗原は、免疫細胞の表面分子である。一部の実施形態では、ＨＥＲ３以外の抗原は、がん細胞抗原である。一部の実施形態では、ＨＥＲ３以外の抗原は、受容体分子、例えば、細胞表面受容体である。一部の実施形態では、ＨＥＲ３以外の抗原は、細胞シグナル伝達分子、例えば、サイトカイン、ケモカイン、インターフェロン、インターロイキン、またはリンホカインである。一部の実施形態では、ＨＥＲ３以外の抗原は、増殖因子またはホルモンである。
【０２５０】
がん細胞抗原とは、がん細胞により発現または過剰発現される抗原である。がん細胞抗原は、任意のペプチド／ポリペプチド、糖タンパク質、リポタンパク質、グリカン、糖脂質、脂質、またはこれらの断片でありうる。がん細胞抗原の発現は、がんと関連しうる。がん細胞抗原は、がん細胞により、異常に発現される場合もあり（例えば、がん細胞抗原は、異常な局在化を伴って発現されうる）、がん細胞による、異常な構造を伴って発現される場合もある。がん細胞抗原は、免疫応答を誘発することが可能でありうる。一部の実施形態では、抗原は、がん細胞の細胞表面において発現される（すなわち、がん細胞抗原は、がん細胞表面抗原である）。一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子が結合する、抗原の部分は、がん細胞の外部表面上に呈示される（すなわち、細胞外にある）。がん細胞抗原は、がん関連抗原でありうる。一部の実施形態では、がん細胞抗原は、その発現が、がんの発症、進行、または症状の重症度と関連する抗原である。がん関連抗原は、がんの原因または病理と関連する場合もあり、がんの帰結として、異常に発現される場合もある。一部の実施形態では、がん細胞抗原は、その発現が、がんの細胞により、例えば、同等な非がん性細胞（例えば、同じ組織／細胞型に由来する、非がん性細胞）による発現レベルと比較して、上方調節される（例えば、ＲＮＡレベルおよび／またはタンパク質レベルで）抗原である。一部の実施形態では、がん関連抗原は、がん性細胞により、優先的に発現され、同等な非がん性細胞（例えば、同じ組織／細胞型に由来する、非がん性細胞）により発現されない場合がある。一部の実施形態では、がん関連抗原は、突然変異したがん遺伝子、または突然変異した腫瘍サプレッサー遺伝子の産物でありうる。一部の実施形態では、がん関連抗原は、過剰発現された細胞内タンパク質の産物の場合もあり、発がん性ウイルス、がん胎児抗原、または細胞表面糖脂質もしくは糖タンパク質により産生されたがん抗原の場合もある。
【０２５１】
一部の実施形態では、ＨＥＲ３以外の抗原は、ＨＥＲ３関連がんの細胞により発現される抗原である。ＨＥＲ３関連がんは、ＨＥＲ３を発現する（例えば、細胞表面において、ＨＥＲ３タンパク質を発現する）がんであることが可能であり；このようながんは、「ＨＥＲ３陽性」がんと称されうる。ＨＥＲ３関連がんは、ＨＥＲ３遺伝子／タンパク質の発現が、危険性因子であり、かつ／あるいはがんの発生、発症、進行、もしくは症状の重症度、および／または転移と正に関連するがんを含む。ＨＥＲ３関連がんは、それらのいずれもが、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる、Ｚｈａｎｇら、Ａｃｔａ  Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ｓｉｎｉｃａ（２０１６）、４８（１）：３９〜４８；ならびにＳｉｔｈａｎａｎｄａｍおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ（２００８）、１５（７）：４１３〜４４８において記載されたがんを含む。一部の実施形態では、ＨＥＲ３関連がんは、肺がん（例えば、ＮＳＣＬＣ）、黒色腫、乳がん、膵がん、前立腺がん、卵巣がん、胃がん、結腸がん、または口腔がんでありうる。
【０２５２】
免疫細胞の表面分子は、免疫細胞の細胞表面、または細胞表面上において発現される、任意のペプチド／ポリペプチド、糖タンパク質、リポタンパク質、グリカン、糖脂質、脂質、またはこれらの断片でありうる。一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子が結合する、免疫細胞の表面分子の部分は、免疫細胞の外部表面上にある（すなわち、細胞外にある）。免疫細胞の表面分子は、任意の免疫細胞の細胞表面において発現されうる。一部の実施形態では、免疫細胞は、造血細胞由来の細胞、例えば、好中球、好酸球、好塩基球、樹状細胞、リンパ球、または単球でありうる。リンパ球は、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、もしくは自然リンパ球細胞（ＩＬＣ）、またはこれらの前駆細胞（例えば、胸腺細胞またはプレＢ細胞）でありうる。一部の実施形態では、免疫細胞の表面分子は、共刺激分子（例えば、ＣＤ２８、ＯＸ４０、４−１ＢＢ、ＩＣＯＳ、またはＣＤ２７）またはこれらのリガンドでありうる。一部の実施形態では、免疫細胞の表面分子は、チェックポイント分子（例えば、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＧＩＴ、またはＢＴＬＡ）またはこれらのリガンドでありうる。
【０２５３】
本発明に従う、多特異性抗原結合性分子は、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、ＢｒｉｎｋｍａｎｎおよびＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ、ＭＡｂｓ（２０１７）、９（２）：１８２〜２１２において記載されたフォーマットなど、任意の適切なフォーマットで提供されうる。適切なフォーマットは、ＢｒｉｎｋｍａｎｎおよびＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ、ＭＡｂｓ（２０１７）、９（２）：１８２〜２１２の図２に示されたフォーマット：抗体コンジュゲート、例えば、ＩｇＧ２、Ｆ（ａｂ’）２、またはＣｏｖＸ−Ｂｏｄｙ；ＩｇＧまたはＩｇＧ様分子、例えば、ＩｇＧ、キメラＩｇＧ、κλ−ｂｏｄｙの共通ＨＣ；ＣＨ１／ＣＬ融合タンパク質、例えば、ｓｃＦｖ２−ＣＨ１／ＣＬ、ＶＨＨ２−ＣＨ１／ＣＬ；「可変ドメインだけの」二特異性抗原結合性分子、例えば、タンデムｓｃＦｖ（ｔａＦＶ）、トリプルボディー、ダイアボディー（Ｄｂ）、ｄｓＤｂ、Ｄｂ（ｋｉｈ）、ＤＡＲＴ、ｓｃＤＢ、ｄｓＦｖ−ｄｓＦｖ、ｔａｎｄＡｂ、トリプルヘッド、タンデムｄＡｂ／ＶＨＨ、四価ｄＡｂ．ＶＨＨ；非Ｉｇ融合タンパク質、例えば、ｓｃＦｖ２−アルブミン、ｓｃＤｂ−アルブミン、ｔａＦｖ−アルブミン、ｔａＦｖ−毒素、ミニ抗体、ＤＮＬ−Ｆａｂ２、ＤＮＬ−Ｆａｂ２−ｓｃＦｖ、ＤＮＬ−Ｆａｂ２−ＩｇＧ−サイトカイン２、ＩｍｍＴＡＣ（ＴＣＲ−ｓｃＦｖ）；修飾Ｆｃ／ＣＨ３融合タンパク質、例えば、ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ｋｉｈ）、ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ＣＨ３電荷対）、ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ＥＷ−ＲＶＴ）、ｓｃＦｖ−ｆｃ（ＨＡ−ＴＦ）、ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ＳＥＥＤｂｏｄｙ）、ｔａＦｖ−Ｆｃ（ｋｉｈ）、ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ｋｉｈ）−Ｆｖ、Ｆａｂ−Ｆｃ（ｋｉｈ）−ｓｃＦｖ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ｋｉｈ）、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ＢＥＡＴ）、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ＳＥＥＤｂｏｄｙ）、ＤＡＲＴ−Ｆｃ、ｓｃＦｖ−ＣＨ３（ｋｉｈ）、ＴｒｉＦａｂ；Ｆｃ融合体、例えば、ジダイアボディー、ｓｃＤｂ−Ｆｃ、ｔａＦｖ−Ｆｃ、ｓｃＦｖ−Ｆｃ−ｓｃＦｖ、ＨＣＡｂ−ＶＨＨ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、ｓｃＦｖ４−Ｉｇ、ｓｃＦｖ２−Ｆｃａｂ；ＣＨ３融合体、例えば、ダイア−ダイアボディー、ｓｃＤｂ−ＣＨ３；ＩｇＥ／ＩｇＭ  ＣＨ２融合体、例えば、ｓｃＦｖ−ＥＨＤ２−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖＭＨＤ２−ｓｃＦｖ；Ｆａｂ融合タンパク質、例えば、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ（バイボディー）、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ２（トリボディー）、Ｆａｂ−Ｆｖ、Ｆａｂ−ｄｓＦｖ、Ｆａｂ−ＶＨＨ、直交型Ｆａｂ−Ｆａｂ；非Ｉｇ融合タンパク質、例えば、ＤＮＬ−Ｆａｂ３、ＤＮＬ−Ｆａｂ２−ｓｃＦｖ、ＤＮＬ−Ｆａｂ２−ＩｇＧ−サイトカイン２；非対称ＩｇＧまたはＩｇＧ様分子、例えば、ＩｇＧ（ｋｉｈ）、ＩｇＧ（ｋｉｈ）共通ＬＣ、ＺＷ１  ＩｇＧ共通ＬＣ、Ｂｉｃｌｏｎｉｃｓ共通ＬＣ、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ＣｒｏｓｓＭａｂ（ｋｉｈ）、ｓｃＦａｂ−ＩｇＧ（ｋｉｈ）、Ｆａｂ−ｓｃＦａｂ−ＩｇＧ（ｋｉｈ）、直交型Ｆａｂ  ＩｇＧ（ｋｉｈ）、ＤｕｅｔＭａｂ、ＣＨ３電荷対＋ＣＨ１／ＣＬ電荷対、ヒンジ／ＣＨ３電荷対、ＳＥＥＤ−ｂｏｄｙ、デュオボディー、ｆｏｕｒ−ｉｎ−ｏｎｅ−ＣｒｏｓｓＭａｂ（ｋｉｈ）、ＬＵＺ−Ｙ共通ＬＣ；ＬＵＺ−Ｙ  ｓｃＦａｂ−ＩｇＧ、ＦｃＦｃ＊；アペンデッド／Ｆｃ修飾ＩｇＧ、例えば、ＩｇＧ（ｋｉｈ）−Ｆｖ、ＩｇＧ  ＨＡ−ＴＦ−Ｆｖ、ＩｇＧ（ｋｉｈ）ｓｃＦａｂ、ｓｃＦａｂ−Ｆｃ（ｋｉｈ）−ｓｃＦｖ２、ｓｃＦａｂ−Ｆｃ（ｋｉｈ）−ｓｃＦｖ、ｈａｌｆ  ＤＶＤ−Ｉｇ、ＤＶＩ−Ｉｇ（ｆｏｕｒ−ｉｎ−ｏｎｅ）、ＣｒｏｓｓＭａｂ−Ｆａｂ；修飾Ｆｃ／ＣＨ３融合タンパク質、例えば、Ｆａｂ−Ｆｃ（ｋｉｈ）−ｓｃＦｖ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ｋｉｈ）、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ＢＥＡＴ）、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ−ＳＥＥＤｂｏｄｙ、ＴｒｉＦａｂ；アペンデッドＩｇＧ−ＨＣ融合体、例えば、ＩｇＧ−ＨＣ、ｓｃＦｖ、ＩｇＧ−ｄＡｂ、ＩｇＧ−ｔａＦＶ、ＩｇＧ−ＣｒｏｓｓＦａｂ、ＩｇＧ−直交型Ｆａｂ、ＩｇＧ−（ＣαＣβ）Ｆａｂ、ｓｃＦｖ−ＨＣ−ＩｇＧ、タンデムＦａｂ−ＩｇＧ（直交型Ｆａｂ）Ｆａｂ−ＩｇＧ（ＣαＣβ  Ｆａｂ）、Ｆａｂ−ＩｇＧ（ＣＲ３）、Ｆａｂ−ヒンジ−ＩｇＧ（ＣＲ３）；アペンデッドＩｇＧ−ＬＣ融合体、例えば、ＩｇＧ−ｓｃＦｖ（ＬＣ）、ｓｃＦｖ（ＬＣ）−ＩｇＧ、ｄＡｂ−ＩｇＧ；アペンデッドＩｇＧ−ＨＣ／ＬＣ融合体、例えば、ＤＶＤ−Ｉｇ、ＴＶＤ−Ｉｇ、ＣＯＤＶ−Ｉｇ、ｓｃＦｖ４−ＩｇＧ、Ｚｙｂｏｄｙ；Ｆｃ融合体、例えば、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、ｓｃＦｖ４−Ｉｇ；Ｆ（ａｂ’）２融合体、例えば、Ｆ（ａｂ’）２−ｓｃＦｖ２；ＣＨ１／ＣＬ融合タンパク質、例えば、ｓｃＦｖ２−ＣＨ１−ヒンジ／ＣＬ；修飾ＩｇＧ、例えば、ＤＡＦ（ｔｗｏ−ｉｎ−ｏｎｅ−ＩｇＧ）、ＤｕｔａＭａｂ、Ｍａｂ２；および非Ｉｇ融合体、例えば、ＤＮＬ−Ｆａｂ４−ＩｇＧを含む。
【０２５４】
当業者は、二特異性の抗原結合性分子を、デザインし、調製することが可能である。二特異性の抗原結合性分子を作製するための方法は、例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、ＳｅｇａｌおよびＢａｓｔ、２００１、「Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｎｔｉｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ」、「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、１４：ＩＶ：２．１３：２．１３．１〜２．１３．１６において記載される通りに、例えば、還元性ジスルフィド結合または非還元性チオエーテル結合により、抗原結合性分子または抗体断片を、化学的に架橋するステップを含む。例えば、Ｎ−スクシンイミジル−３−（−２−ピリジルジチオ）−プロピオネート（ＳＰＤＰ）は、例えば、ヒンジ領域のＳＨ基を介して、Ｆａｂ断片を、化学的に架橋して、ジスルフィドにより連結された、二特異性Ｆ（ａｂ）２ヘテロ二量体を創出するのに使用されうる。
【０２５５】
二特異性の抗原結合性分子を作製するための、他の方法は、抗体産生ハイブリドーマを、例えば、ポリエチレングリコールと融合させて、例えば、Ｄ．Ｍ．およびＢａｓｔ，Ｂ．Ｊ．、２００１、「Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｎｔｉｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ」、「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、１４：ＩＶ：２．１３：２．１３．１〜２．１３．１６に記載された、二特異性抗体を分泌することが可能なクァドローマ細胞を作製するステップを含む。
【０２５６】
本発明に従う、二特異性抗原結合性分子はまた、例えば、それらの両方の全内容が、参照により本明細書に組み込まれる、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」、２版（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、２０１２）、４０章：「Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｎｔｉｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ：Ｄｉａｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔａｎｄｅｍ  ｓｃＦｖ」（ＨｏｒｎｉｇおよびＦａｅｒｂｅｒ−Ｓｃｈｗａｒｚ）；またはＦｒｅｎｃｈ、「Ｈｏｗ  ｔｏ  ｍａｋｅ  ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ」、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．、２０００、４０：３３３〜３３９に記載された、抗原結合性分子のためのポリペプチドをコードする核酸構築物からの組換え発現によっても作製されうる。例えば、２つの抗原結合性断片のための軽鎖および重鎖可変ドメイン（すなわち、ＨＥＲ３に結合することが可能な抗原結合性断片のための、軽鎖および重鎖可変ドメイン、ならびに別の標的タンパク質に結合することが可能な抗原結合性断片のための、軽鎖および重鎖可変ドメイン）をコードし、抗原結合性断片の間の、適切なリンカーまたは二量体化ドメインをコードする配列を含むＤＮＡ構築物は、分子クローニング法により調製されうる。その後、組換え二特異性抗体は、適切な宿主細胞（例えば、哺乳動物宿主細胞）内の、構築物の発現（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける）により産生され、次いで、発現された組換え二特異性抗体は、任意選択で、精製されうる。
Ｆｃ領域
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、Ｆｃ領域を含む。
【０２５７】
ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＤのアイソタイプでは、Ｆｃ領域は、１つのポリペプチドに由来する、ＣＨ２およびＣＨ３領域と、別のポリペプチドに由来する、ＣＨ２およびＣＨ３領域とから構成される。２つのポリペプチドに由来する、ＣＨ２およびＣＨ３領域が、併せて、Ｆｃ領域を形成する。ＩｇＭおよびＩｇＥのアイソタイプでは、Ｆｃ領域は、３つの定常ドメイン（ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４）を含有し、２つのポリペプチドに由来するＣＨ２〜ＣＨ４が、併せて、Ｆｃ領域を形成する。
【０２５８】
本開示の多様な態様に従う、好ましい実施形態では、Ｆｃ領域は、各ポリペプチドが、ＣＨ２領域およびＣＨ３領域を含む、２つのポリペプチドを含む。
【０２５９】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、ＣＨ２およびＣＨ３領域のうちの１つまたは複数における、Ｆｃ領域の会合を促進する修飾を含むＦｃ領域を含む。抗原結合性分子の構成要素であるポリペプチドの組換え共発現、および後続する会合は、いくつかの可能な組合せをもたらす。組換え作製において、抗原結合性分子内の、所望の組合せのポリペプチドの収率を改善するために、所望の組合せの、重鎖ポリペプチドの会合を促進する、Ｆｃ領域の修飾（複数可）を導入することが有利である。修飾は、例えば、異なるポリペプチド鎖の、ＣＨ２および／またはＣＨ３領域の間の疎水性および／または静電相互作用を促進しうる。適切な修飾については、例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Ｈａら、Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｎｏｌ（２０１６）、７：３９４において記載されている。
【０２６０】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、Ｈａら、Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｎｏｌ（２０１６）、７：３９４の表１において示される、以下のフォーマット：ＫｉＨ、ＫｉＨＳ−Ｓ、ＨＡ−ＴＦ、ＺＷ１、７．８．６０、ＤＤ−ＫＫ、ＥＷ−ＲＶＴ、ＥＷ−ＲＶＴＳ−Ｓ、ＳＥＥＤ、またはＡ１０７のうちの１つに従う、Ｆｃ領域のＣＨ３領域内に、対をなす置換を含むＦｃ領域を含む。
【０２６１】
一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、例えば、ＵＳ７，６９５，９３６；およびＣａｒｔｅｒ、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈ、２４８、７〜１５（２００１）に、記載された、「ｋｎｏｂ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅ（ＫＩＨ）」または「ＫｉＨ」修飾を含む。このような実施形態では、Ｆｃ領域のうちの、ＣＨ３領域の１つは、「ノブ」修飾を含み、他のＣＨ３領域は、「ホール」修飾を含む。「ノブ」が、ポリペプチドのヘテロ二量体化を促進し（そして、ホモ二量体化を阻害し）、かつ／またはヘテロ二量体を安定化させるために、「ホール」内に配置されるように、「ノブ」修飾および「ホール」修飾は、それぞれのＣＨ３領域内に配置される。ノブは、小型鎖を有するアミノ酸を、より大型の側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）を有するアミノ酸で置換することにより構築される。ホールは、大型側鎖を有するアミノ酸を、より小型の側鎖（例えば、アラニンまたはスレオニン）を有するアミノ酸で置換することにより創出される。
【０２６２】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子のＦｃ領域のうちの、ＣＨ３領域の１つは、置換である、（本明細書における、Ｆｃ、ＣＨ２、およびＣＨ３領域の、位置／置換の番号付けは、Ｋａｂａｔら、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ、１９９１において記載されている、ＥＵ番号付けシステムに従う）Ｔ３６６Ｗを含み、Ｆｃ領域のうちの、他のＣＨ３領域は、置換である、Ｙ４０７Ｖを含む。一部の実施形態では、抗原結合性分子のＦｃ領域のうちの、ＣＨ３領域の１つは、置換である、Ｔ３６６Ｗを含み、Ｆｃ領域のうちの、他のＣＨ３領域は、置換である、Ｔ３６６ＳおよびＬ３６８Ａを含む。一部の実施形態では、抗原結合性分子のＦｃ領域のうちの、ＣＨ３領域の１つは、置換である、Ｔ３６６Ｗを含み、Ｆｃ領域のうちの、他のＣＨ３領域は、置換である、Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｓ、およびＬ３６８Ａを含む。
【０２６３】
一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、例えば、ＷＯ２０１４／１３１６９４Ａ１に記載された、「ＤＤ−ＫＫ」修飾を含む。一部の実施形態では、ＣＨ３領域の１つは、置換である、Ｋ３９２ＤおよびＫ４０９Ｄを含み、Ｆｃ領域のうちの、他のＣＨ３領域は、置換である、Ｅ３５６ＫおよびＤ３９９Ｋを含む。修飾は、ＣＨ３領域の間の静電相互作用を促進する。
【０２６４】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、Ｌａｂｒｉｊｎら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．（２０１３）、１１０（１３）：５１４５〜５０において記載される通りに修飾され、「デュオボディー」フォーマットと称されるＦｃ領域を含む。一部の実施形態では、ＣＨ３領域の１つは、置換である、Ｋ４０９Ｒを含み、Ｆｃ領域のうちの、他のＣＨ３領域は、置換である、Ｋ４０５Ｌを含む。
【０２６５】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、Ｓｔｒｏｐら、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．（２０１２）、４２０（３）：２０４〜１９に記載された、「ＥＥＥ−ＲＲＲ」修飾を含むＦｃ領域を含む。一部の実施形態では、ＣＨ３領域の１つは、置換である、Ｄ２２１Ｅ、Ｐ２２８Ｅ、およびＬ３６８Ｅを含み、Ｆｃ領域のうちの、他のＣＨ３領域は、置換である、Ｄ２２１Ｒ、Ｐ２２８Ｒ、およびＫ４０９Ｒを含む。
【０２６６】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、Ｃｈｏｉら、Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ（２０１３）、１２（１２）：２７４８〜５９に記載された、「ＥＷ−ＲＶＴ」修飾を含むＦｃ領域を含む。一部の実施形態では、ＣＨ３領域の１つは、置換である、Ｋ３６０ＥおよびＫ４０９Ｗを含み、Ｆｃ領域のうちの、他のＣＨ３領域は、置換である、Ｑ３４７Ｒ、Ｄ３９９Ｖ、およびＦ４０５Ｔを含む。
【０２６７】
一部の実施形態では、ＣＨ３領域の１つは、置換である、Ｓ３５４Ｃを含み、Ｆｃ領域のうちの、他のＣＨ３領域は、置換である、Ｙ３４９Ｃを含む。これらのシステイン残基の導入は、Ｆｃ領域の、２つのＣＨ３領域の間のジスルフィド架橋の形成を結果としてもたらし、ヘテロ二量体を、さらに安定化させる（Ｃａｒｔｅｒ（２００１）、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ、２４８、７〜１５）。
【０２６８】
一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、「ＫｉＨＳ−Ｓ」修飾を含む。一部の実施形態では、ＣＨ３領域の１つは、置換である、Ｔ３６６ＷおよびＳ３５４Ｃを含み、Ｆｃ領域のうちの、他のＣＨ３領域は、置換である、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＹ３４９Ｃを含む。
【０２６９】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、Ｄａｖｉｓら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ  Ｄｅｓ  Ｓｅｌ（２０１０）、２３（４）：１９５〜２０２に記載された、ヒトＩｇＧ１  ＣＨ３のβ鎖セグメントと、ヒトＩｇＡ  ＣＨ３のβ鎖セグメントとが交換される、「ＳＥＥＤ」修飾を含むＦｃ領域を含む。
【０２７０】
一部の実施形態では、ＣＨ３領域の１つは、置換である、Ｓ３６４ＨおよびＦ４０５Ａを含み、Ｆｃ領域のうちの、他のＣＨ３領域は、置換である、Ｙ３４９ＴおよびＴ３９４Ｆ（例えば、Ｍｏｏｒｅら、ＭＡｂｓ（２０１１）、３（６）：５４６〜５７を参照されたい）を含む。
【０２７１】
一部の実施形態では、ＣＨ３領域の１つは、置換である、Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、およびＹ４０７Ｖを含み、Ｆｃ領域のうちの、他のＣＨ３領域は、置換である、Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２Ｌ、およびＴ３９４Ｗ（例えば、Ｖｏｎ  Ｋｒｅｕｄｅｎｓｔｅｉｎら、ＭＡｂｓ（２０１３）、５（５）：６４６〜５４を参照されたい）を含む。
【０２７２】
一部の実施形態では、ＣＨ３領域の１つは、置換である、Ｋ３６０Ｄ、Ｄ３９９Ｍ、およびＹ４０７Ａを含み、Ｆｃ領域のうちの、他のＣＨ３領域は、置換である、Ｅ３４５Ｒ、Ｑ３４７Ｒ、Ｔ３６６Ｖ、およびＫ４０９Ｖ（例えば、Ｌｅａｖｅｒ−Ｆａｙら、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（２０１６）、２４（４）：６４１〜５１を参照されたい）を含む。
【０２７３】
一部の実施形態では、ＣＨ３領域の１つは、置換である、Ｋ３７０ＥおよびＫ４０９Ｗを含み、Ｆｃ領域のうちの、他のＣＨ３領域は、置換である、Ｅ３５７Ｎ、Ｄ３９９Ｖ、およびＦ４０５Ｔ（例えば、Ｃｈｏｉら、ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ（２０１５）、１０（１２）：ｅ０１４５３４９を参照されたい）を含む。
【０２７４】
Ｆｃ媒介性機能は、Ｆｃ受容体への結合、抗体依存性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）、補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）、膜侵襲複合体（ＭＡＣ）の形成、細胞からの脱顆粒、サイトカインおよび／またはケモカインの産生、ならびに抗原のプロセシングおよび提示を含む。
【０２７５】
当技術分野では、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、例えば、Ｗａｎｇら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｅｌｌ（２０１８）、９（１）：６３〜７３において記載された修飾など、Ｆｃ媒介性機能に影響を及ぼす、抗体のＦｃ領域への修飾が公知である。抗体のエフェクター機能に影響を及ぼすことが公知である、例示的なＦｃ領域の修飾は、Ｗａｎｇら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｅｌｌ（２０１８）、９（１）：６３〜７３の表１にまとめられている。
【０２７６】
置換の組合せである、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌは、Ｓｔａｖｅｎｈａｇｅｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２００７）において、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合を増大させ、これにより、ＡＤＣＣを増強することが記載されている。置換の組合せである、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２ＥまたはＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌは、Ｌａｚａｒら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．（２００６）、１０３：４００５〜４０１０において、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合を増大させ、これにより、ＡＤＣＣを増大させることが記載されている。置換の組合せである、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌはまた、ＦｃγＲＩＩｂへの結合を減少させ、これにより、ＡＤＣＣを増大させることも記載されている。置換の組合せである、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａは、Ｓｈｉｅｌｄｓら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．（２００１）、２７６：６５９１〜６６０４において、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合を増大させ、これにより、ＡＤＣＣを増大させることが記載されている。１つの重鎖における置換の組合せである、Ｌ２３４Ｙ／Ｌ２３５Ｑ／Ｇ２３６Ｗ／Ｓ２３９Ｍ／Ｈ２６８Ｄ／Ｄ２７０Ｅ／Ｓ２９８Ａ、および他の重鎖における置換の組合せである、Ｄ２７０Ｅ／Ｋ３２６Ｄ／Ａ３３０Ｍ／Ｋ３３４Ｅは、Ｍｉｍｏｔｏら、ＭＡｂｓ．（２０１３）：５：２２９〜２３６において、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合を増大させ、これにより、ＡＤＣＣを増大させることが記載されている。置換の組合せである、Ｇ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅは、Ｒｉｃｈａｒｄｓら、Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．（２００８）７：２５１７〜２５２７において、ＦｃγＲＩＩａへの結合を増大させ、かつ、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合を増大させ、これにより、ＡＤＣＰを増大させることが記載されている。
【０２７７】
置換の組合せである、Ｋ３２６Ｗ／Ｅ３３３Ｓは、Ｉｄｕｓｏｇｉｅら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００１）、１６６（４）：２５７１〜５において、Ｃ１ｑへの結合を増大させ、これにより、ＣＤＣを増大させることが記載されている。置換の組合せである、Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔは、Ｍｏｏｒｅら、ＭＡｂｓ．（２０１０）、２（２）：１８１〜９において、Ｃ１ｑへの結合を増大させ、これにより、ＣＤＣを増大させることが記載されている。Ｎａｔｓｕｍｅら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２００８）、６８（１０）：３８６３〜７２に記載された、置換の組合せは、Ｃ１ｑへの結合を増大させ、これにより、ＣＤＣを増大させることが報告されている。置換の組合せである、Ｅ３４５Ｒ／Ｅ４３０Ｇ／Ｓ４４０Ｙは、Ｄｉｅｂｏｌｄｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ（２０１４）、３４３（６１７６）：１２６０〜３において、六量体化への結合を増大させ、これにより、ＣＤＣを増大させることが記載されている。
【０２７８】
置換の組合せである、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅは、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００２）、１６９：５１７１〜５１８０において、ｐＨ６．０における、ＦｃＲｎへの結合を増大させ、これにより、抗原結合性分子の半減期を延長することが報告されている。置換の組合せである、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓは、Ｚａｌｅｖｓｋｙら、Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（２０１０）、２８：１５７〜１５９において、ｐＨ６．０における、ＦｃＲｎへの結合を増大させ、これにより、抗原結合性分子の半減期を延長することが報告されている。
【０２７９】
本明細書で、重鎖定常領域／Ｆｃ領域／ＣＨ２−ＣＨ３領域／ＣＨ２領域／ＣＨ３領域が、参照の位置（複数可）／置換（複数可）「に対応する」位置（複数可）／置換（複数可）を含むものとして記載される場合、相同な重鎖定常領域／Ｆｃ領域／ＣＨ２−ＣＨ３領域／ＣＨ２領域／ＣＨ３領域内の、同等の位置（複数可）／置換（複数可）が想定される。
【０２８０】
Ｆｃ領域が、特異的な位置（複数可）／置換（複数可）を含むものとして記載される場合、位置（複数可）／置換（複数可）は、併せて、Ｆｃ領域を形成する、ポリペプチド鎖の一方または両方に存在しうる。
【０２８１】
別途に指定されない限りにおいて、本明細書における位置は、Ｋａｂａｔら、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ、１９９１に記載された、ＥＵ番号付けシステムに従い番号付けされた、ヒト免疫グロブリン定常領域のアミノ酸配列の位置を指す。例示を目的として述べると、ヒトＩｇＧ１における置換である、Ｌ２４２ＣおよびＫ３３４Ｃは、配列番号１７１に従い番号付けされた、ヒトＩｇＧ１定常領域の、１２５位におけるＬ→Ｃ置換と、２１７位におけるＫ→Ｃ置換とに対応する。
【０２８２】
相同な重鎖定常領域とは、ヒトＩｇＧ１（すなわち、配列番号１７１に示されるアミノ酸配列）の重鎖定常領域に対する、少なくとも６０％、好ましくは、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖定常領域である。相同なＦｃ領域とは、ヒトＩｇＧ１（すなわち、配列番号１７４および１７５に示されるアミノ酸配列）のＣＨ２−ＣＨ３領域に対する、少なくとも６０％、好ましくは、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ポリペプチドから構成されるＦｃ領域である。相同なＣＨ２領域とは、ヒトＩｇＧ１（すなわち、配列番号１７４に示されるアミノ酸配列）のＣＨ２領域に対する、少なくとも６０％、好ましくは、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＣＨ２領域である。相同なＣＨ３領域とは、ヒトＩｇＧ１（すなわち、配列番号１７５に示されるアミノ酸配列）のＣＨ３領域に対する、少なくとも６０％、好ましくは、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＣＨ３領域である。
【０２８３】
ヒトＩｇＧ１内で同定される位置に対応する位置は、例えば、ＣｌｕｓｔａｌＯｍｅｇａ（Ｓｏｄｉｎｇ、Ｊ．２００５、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ、２１、９５１〜９６０）などの配列アライメントソフトウェアを使用して実施されうる、配列アライメントにより同定されうる。
【０２８４】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、Ｆｃ媒介性機能を増大させる修飾を含むＦｃ領域を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＡＤＣＣを増大させる修飾を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＡＤＣＰを増大させる修飾を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＣＤＣを増大させる修飾を含む。Ｆｃ媒介性機能（例えば、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、ＣＤＣ）を増大させる修飾を含むＦｃ領域を含む抗原結合性分子は、対応する非修飾のＦｃ領域を含む抗原結合性分子と比較した、関連するエフェクター機能のレベルの上昇を誘導する。
【０２８５】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、１つまたは複数のＦｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩａ）に対するアフィニティーを増大させる修飾を含むＦｃ領域を含む。Ｆｃ受容体に対するアフィニティーを増大させる修飾は、抗体依存性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）および／または抗体依存性細胞性食作用（ＡＤＣＰ）など、Ｆｃ媒介性のエフェクター機能を増大させうる。一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、Ｃ１ｑに対するアフィニティーを低減する修飾を含むＦｃ領域を含み、このような修飾は、補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）を低減し、これは、所望でありうる。一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、六量体の形成を増大させる修飾を含むＦｃ領域を含む。１つまたは複数のＦｃ受容体に対するアフィニティーを増大させ、Ｃ１ｑに対するアフィニティーを低減し、かつ／または六量体の形成を増大させることが可能な、Ｆｃ領域に対する修飾については、例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、ＳａｘｅｎａおよびＷｕ、Ｆｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１６）、７：５８０において記載されている。一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、ＳａｘｅｎａおよびＷｕ、Ｆｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１６）、７：５８０の表１に示された置換のうちの１つまたは複数を含むＣＨ２／ＣＨ３を含むＦｃ領域を含む。
【０２８６】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、Ｆｃ受容体への結合を増大させる修飾を含むＦｃを含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｆｃγ受容体への結合を増大させる修飾を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ、およびＦｃγＲＩＩＩｂのうちの１つまたは複数への結合を増大させる修飾を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合を増大させる修飾を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＦｃγＲＩＩａへの結合を増大させる修飾を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＦｃγＲＩＩｂへの結合を増大させる修飾を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＦｃＲｎへの結合を増大させる修飾を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、補体タンパク質への結合を増大させる修飾を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｃ１ｑへの結合を増大させるか、または低減する修飾を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、抗原結合性分子の六量体化を促進する修飾を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、抗原結合性分子の半減期を延長する修飾を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、コエンゲージメントを増大させる修飾を含む。
【０２８７】
本明細書では、「Ｆｃγ受容体」は、任意の種に由来することが可能であり、任意の種に由来する、アイソフォーム、断片、変異体（突然変異体を含む）、または相同体を含みうる。同様に、「ＦｃγＲＩ」、「ＦｃγＲＩＩａ」、「ＦｃγＲＩＩｂ」、「ＦｃγＲＩＩｃ」、「ＦｃγＲＩＩＩａ」、および「ＦｃγＲＩＩＩｂ」とは、それぞれ、任意の種に由来する、ＦｃγＲＩ／ＦｃγＲＩＩａ／ＦｃγＲＩＩｂ／ＦｃγＲＩＩｃ／ＦｃγＲＩＩＩａ／ＦｃγＲＩＩＩｂを指し、任意の種に由来する、アイソフォーム、断片、変異体（突然変異体を含む）、または相同体を含む。ヒトは、Ｆｃγ受容体の、６つの異なるクラス（マウスオーソログを、カッコ内に示す）：ＦｃγＲＩ（ｍＦｃγＲＩ）、ＦｃγＲＩＩａ（ｍＦｃγＲＩＩＩ）、ＦｃγＲＩＩｂ（ｍＦｃγＲＩＩｂ）、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ（ｍＦｃγＲＩＶ）、およびＦｃγＲＩＩＩｂを有する。変異体のＦｃγ受容体は、例えば、ヒトＦｃγＲＩＩＩａの、１５８Ｖおよび１５８Ｆの多型、ならびにヒトＦｃγＲＩＩａの、１６７Ｈおよび１６７Ｒの多型を含む。
【０２８８】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、以下：２４２位に対応する位置におけるＣ；３３４位に対応する位置におけるＣ；２３６位に対応する位置におけるＡ；２３９位に対応する位置におけるＤ；３３２位に対応する位置におけるＥ；３３０位に対応する位置におけるＬ；３４５位に対応する位置におけるＫ；および４３０位に対応する位置におけるＧのうちの、１つまたは複数（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、または８つ）を含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域またはＣＨ２−ＣＨ３領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）Ｆｃ領域を含む。
【０２８９】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、以下の置換（または対応する置換）：Ｌ２４２Ｃ、Ｋ３３４Ｃ、Ｇ２３６Ａ、Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、Ａ３３０Ｌ、Ｅ３４５Ｋ、およびＥ４３０Ｇのうちの、１つまたは複数（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、または８つ）を含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域またはＣＨ２−ＣＨ３領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）Ｆｃ領域を含む。
【０２９０】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、２４２位に対応する位置におけるＣを含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域、ＣＨ２−ＣＨ３領域、またはＣＨ２領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、３３４位に対応する位置におけるＣを含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域、ＣＨ２−ＣＨ３領域、またはＣＨ２領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、２４２位に対応する位置におけるＣ、および３３４位に対応する位置におけるＣを含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域、ＣＨ２−ＣＨ３領域、またはＣＨ２領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）。
【０２９１】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、２３６位に対応する位置におけるＡを含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域、ＣＨ２−ＣＨ３領域、またはＣＨ２領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、２３９位に対応する位置におけるＤを含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域、ＣＨ２−ＣＨ３領域、またはＣＨ２領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、２３６位に対応する位置におけるＡ、および２３９位に対応する位置におけるＤを含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域、ＣＨ２−ＣＨ３領域、またはＣＨ２領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）。
【０２９２】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、３３２位に対応する位置におけるＥを含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域、ＣＨ２−ＣＨ３領域、またはＣＨ２領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、２３６位に対応する位置におけるＡ、２３９位に対応する位置におけるＤ、および３３２位に対応する位置におけるＥを含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域、ＣＨ２−ＣＨ３領域、またはＣＨ２領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）。
【０２９３】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、３３０位に対応する位置におけるＬを含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域、ＣＨ２−ＣＨ３領域、またはＣＨ２領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、２３６位に対応する位置におけるＡ、２３９位に対応する位置におけるＤ、３３２位に対応する位置におけるＥ、および３３０位に対応する位置におけるＬを含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域、ＣＨ２−ＣＨ３領域、またはＣＨ２領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）。
【０２９４】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、３４５位に対応する位置におけるＫを含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域、ＣＨ２−ＣＨ３領域、またはＣＨ３領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、４３０位に対応する位置におけるＧを含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域、ＣＨ２−ＣＨ３領域、またはＣＨ３領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、３４５位に対応する位置におけるＫ、および４３０位に対応する位置におけるＧを含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域、ＣＨ２−ＣＨ３領域、またはＣＨ２領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）。
【０２９５】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、２４２位に対応する位置におけるＣ、３３４位に対応する位置におけるＣ、２３６位に対応する位置におけるＡ、および２３９位に対応する位置におけるＤを含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域、ＣＨ２−ＣＨ３領域、またはＣＨ２領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）Ｆｃ領域を含む。
【０２９６】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、２４２位に対応する位置におけるＣ、３３４位に対応する位置におけるＣ、２３６位に対応する位置におけるＡ、２３９位に対応する位置におけるＤ、および３３２位に対応する位置におけるＥを含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域、ＣＨ２−ＣＨ３領域、またはＣＨ２領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）Ｆｃ領域を含む。
【０２９７】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、２４２位に対応する位置におけるＣ、３３４位に対応する位置におけるＣ、２３６位に対応する位置におけるＡ、２３９位に対応する位置におけるＤ、３３２位に対応する位置におけるＥ、および３３０位に対応する位置におけるＬを含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域、ＣＨ２−ＣＨ３領域、またはＣＨ２領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）Ｆｃ領域を含む。
【０２９８】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、２４２位に対応する位置におけるＣ、３３４位に対応する位置におけるＣ、３４５位に対応する位置におけるＫ、および４３０位に対応する位置におけるＧを含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域またはＣＨ２−ＣＨ３領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）Ｆｃ領域を含む。
【０２９９】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、置換であるＬ２４２Ｃ（または同等の置換）を含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域、ＣＨ２−ＣＨ３領域、またはＣＨ２領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、置換であるＫ３３４Ｃ（または同等の置換）を含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域、ＣＨ２−ＣＨ３領域、またはＣＨ２領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、置換であるＬ２４２Ｃ（または同等の置換）、および置換であるＫ３３４Ｃ（または同等の置換）を含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域、ＣＨ２−ＣＨ３領域、またはＣＨ２領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）。
【０３００】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、置換であるＧ２３６Ａ（または同等の置換）を含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域、ＣＨ２−ＣＨ３領域、またはＣＨ２領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、置換であるＳ２３９Ｄ（または同等の置換）を含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域、ＣＨ２−ＣＨ３領域、またはＣＨ２領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、置換であるＧ２３６Ａ（または同等の置換）、および置換であるＳ２３９Ｄ（または同等の置換）を含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域、ＣＨ２−ＣＨ３領域、またはＣＨ２領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）。
【０３０１】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、置換であるＩ３３２Ｅ（または同等の置換）を含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域、ＣＨ２−ＣＨ３領域、またはＣＨ２領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、置換であるＧ２３６Ａ（または同等の置換）、置換であるＳ２３９Ｄ（または同等の置換）、および置換であるＩ３３２Ｅ（または同等の置換）を含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域、ＣＨ２−ＣＨ３領域、またはＣＨ２領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）。
【０３０２】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、置換であるＡ３３０Ｌ（または同等の置換）を含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域、ＣＨ２−ＣＨ３領域、またはＣＨ２領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、置換であるＧ２３６Ａ（または同等の置換）、置換であるＳ２３９Ｄ（または同等の置換）、置換であるＩ３３２Ｅ（または同等の置換）、および置換であるＡ３３０Ｌ（または同等の置換）を含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域、ＣＨ２−ＣＨ３領域、またはＣＨ２領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）。
【０３０３】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、置換であるＥ３４５Ｋ（または同等の置換）を含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域、ＣＨ２−ＣＨ３領域、またはＣＨ３領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、置換であるＥ４３０Ｇ（または同等の置換）を含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域、ＣＨ２−ＣＨ３領域、またはＣＨ３領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、置換であるＥ３４５Ｋ（または同等の置換）、および置換であるＥ４３０Ｇ（または同等の置換）を含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域、ＣＨ２−ＣＨ３領域、またはＣＨ２領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）。
【０３０４】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、置換であるＬ２４２Ｃ（または同等の置換）、置換であるＫ３３４Ｃ（または同等の置換）、置換であるＧ２３６Ａ（または同等の置換）、および置換であるＳ２３９Ｄ（または同等の置換）を含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域、ＣＨ２−ＣＨ３領域、またはＣＨ２領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）Ｆｃ領域を含む。
【０３０５】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、置換であるＬ２４２Ｃ（または同等の置換）、置換であるＫ３３４Ｃ（または同等の置換）、置換であるＧ２３６Ａ（または同等の置換）、置換であるＳ２３９Ｄ（または同等の置換）、および置換であるＩ３３２Ｅ（または同等の置換）を含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域、ＣＨ２−ＣＨ３領域、またはＣＨ２領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）Ｆｃ領域を含む。
【０３０６】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、置換であるＬ２４２Ｃ（または同等の置換）、置換であるＫ３３４Ｃ（または同等の置換）、置換であるＧ２３６Ａ（または同等の置換）、置換であるＳ２３９Ｄ（または同等の置換）、置換であるＩ３３２Ｅ（または同等の置換）、および置換であるＡ３３０Ｌ（または同等の置換）を含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域、ＣＨ２−ＣＨ３領域、またはＣＨ２領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）Ｆｃ領域を含む。
【０３０７】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、置換であるＬ２４２Ｃ（または同等の置換）、置換であるＫ３３４Ｃ（または同等の置換）、置換であるＥ３４５Ｋ（または同等の置換）、および置換であるＥ４３０Ｇ（または同等の置換）を含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域またはＣＨ２−ＣＨ３領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）Ｆｃ領域を含む。
【０３０８】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、以下：２４３位に対応する位置におけるＬ、２９２位に対応する位置におけるＰ、３００位に対応する位置におけるＬ、３０５位に対応する位置におけるＩ、および３９６位に対応する位置におけるＬ；２３９位に対応する位置におけるＤ、および３３２位に対応する位置におけるＥ；２３９位に対応する位置におけるＤ、３３２位に対応する位置におけるＥ、および３３０位に対応する位置におけるＬ；２９８位に対応する位置におけるＡ、３３３位に対応する位置におけるＡ、および３３４位に対応する位置におけるＡ；２３４位に対応する位置におけるＹ、２３５位に対応する位置におけるＱ、２３６位に対応する位置におけるＷ、２３９位に対応する位置におけるＭ、２６８位に対応する位置におけるＤ、２７０位に対応する位置におけるＥ、および２９８位に対応する位置におけるＡ；２７０位に対応する位置におけるＥ、３２６位に対応する位置におけるＤ、３３０位に対応する位置におけるＭ、および３３４位に対応する位置におけるＥ；２３６位に対応する位置におけるＡ、２３９位に対応する位置におけるＤ、および３３２位に対応する位置におけるＥ；３２６位に対応する位置におけるＷ、および３３３位に対応する位置におけるＳ；２６７位に対応する位置におけるＥ、２６８位に対応する位置におけるＦ、および３２４位に対応する位置におけるＴ；３４５位に対応する位置におけるＲ、４３０位に対応する位置におけるＧ、および４４０位に対応する位置におけるＹ；２５２位に対応する位置におけるＹ、２５４位に対応する位置におけるＴ、および２５６位に対応する位置におけるＥ；および４２８位に対応する位置におけるＬ、および４３４位に対応する位置におけるＳのうちの、１つまたは複数（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、または１２）を含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域またはＣＨ２−ＣＨ３領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）Ｆｃ領域を含む。
【０３０９】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、以下の置換（または対応する置換）の組合せ：Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ；Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ；Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌ；Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ；Ｌ２３４Ｙ／Ｌ２３５Ｑ／Ｇ２３６Ｗ／Ｓ２３９Ｍ／Ｈ２６８Ｄ／Ｄ２７０Ｅ／Ｓ２９８Ａ；Ｄ２７０Ｅ／Ｋ３２６Ｄ／Ａ３３０Ｍ／Ｋ３３４Ｅ；Ｇ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ；Ｋ３２６Ｗ／Ｅ３３３Ｓ；Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔ；Ｅ３４５Ｒ／Ｅ４３０Ｇ／Ｓ４４０Ｙ；Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ；およびＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓのうちの、１つまたは複数（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、または１２）を含む（例えば、これらを含む、重鎖定常領域またはＣＨ２−ＣＨ３領域を含む、さらに１つのポリペプチドを含む）Ｆｃ領域を含む。
ポリペプチド
本発明はまた、抗原結合性分子の、ポリペプチド構成要素も提供する。ポリペプチドは、単離形態で提供される場合もあり、実質的な精製形態で提供される場合もある。
【０３１０】
本発明の抗原結合性分子は、ポリペプチドの複合体でありうるか、またはこれを含みうる。
【０３１１】
ポリペプチドが、１つを超えるドメインまたは領域を含む、本明細書では、複数のドメイン／領域が、同じポリペプチド鎖内に存在することが好ましいことが理解されるであろう。すなわち、１つを超えるドメインまたは領域を含むポリペプチドは、ドメイン／領域を含む融合ポリペプチドである。
【０３１２】
一部の実施形態では、本発明に従うポリペプチドは、本明細書で記載されるＶＨを含むか、またはこれらからなる。一部の実施形態では、本発明に従うポリペプチドは、本明細書で記載されるＶＬを含むか、またはこれらからなる。
【０３１３】
一部の実施形態では、ポリペプチドは、加えて、１つまたは複数の、抗体の重鎖定常領域（ＣＨ）を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、加えて、１つまたは複数の、抗体の軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、免疫グロブリン（Ｉｇ）のＣＨ１、ＣＨ２領域、および／またはＣＨ３領域を含む。
【０３１４】
一部の実施形態では、ポリペプチドは、免疫グロブリンの重鎖定常配列の、１つまたは複数の領域を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、本明細書で記載されるＣＨ１領域を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、本明細書で記載される、ＣＨ１−ＣＨ２間のヒンジ領域を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、本明細書で記載されるＣＨ２領域を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、本明細書で記載されるＣＨ３領域を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、本明細書で記載されるＣＨ２−ＣＨ３領域を含む。
【０３１５】
一部の実施形態では、ポリペプチドは、以下のアミノ酸置換／アミノ酸置換の組合せ（例えば、参照により本明細書の上記に組み込まれた、Ｈａら、Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｎｏｌ（２０１６）、７：３９４の表１に示される）：Ｔ３６６Ｗ；Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖ；Ｔ３６６ＷおよびＳ３５４Ｃ；Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＹ３４９Ｃ；Ｓ３６４ＨおよびＦ４０５Ａ；Ｙ３４９ＴおよびＴ３９４Ｆ；Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、およびＹ４０７Ｖ；Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２Ｌ、およびＴ３９４Ｗ；Ｋ３６０Ｄ、Ｄ３９９Ｍ、およびＹ４０７Ａ；Ｅ３４５Ｒ、Ｑ３４７Ｒ、Ｔ３６６Ｖ、およびＫ４０９Ｖ；Ｋ４０９ＤおよびＫ３９２Ｄ；Ｄ３９９ＫおよびＥ３５６Ｋ；Ｋ３６０ＥおよびＫ４０９Ｗ；Ｑ３４７Ｒ、Ｄ３９９Ｖ、およびＦ４０５Ｔ；Ｋ３６０Ｅ、Ｋ４０９Ｗ、およびＹ３４９Ｃ；Ｑ３４７Ｒ、Ｄ３９９Ｖ、Ｆ４０５Ｔ、およびＳ３５４Ｃ；Ｋ３７０ＥおよびＫ４０９Ｗ；ならびにＥ３５７Ｎ、Ｄ３９９Ｖ、およびＦ４０５Ｔのうちのいずれか１つを含むＣＨ３領域を含む。
【０３１６】
一部の実施形態では、ポリペプチドのＣＨ２および／またはＣＨ３領域は、ポリペプチドの、ＣＨ２および／またはＣＨ３領域を含む、別のポリペプチドとの会合を促進するための、１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。
【０３１７】
一部の実施形態では、ポリペプチドは、免疫グロブリンの軽鎖定常配列の、１つまたは複数の領域を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、本明細書で記載されるＣＬ領域を含む。
【０３１８】
一部の実施形態では、本発明に従うポリペプチドは、Ｎ末端から、Ｃ末端へと、以下：
（ｉ）ＶＨ
（ｉｉ）ＶＬ
（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＨ１
（ｉｖ）ＶＬ−ＣＬ
（ｖ）ＶＬ−ＣＨ１
（ｖｉ）ＶＨ−ＣＬ
（ｖｉｉ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３
（ｖｉｉｉ）ＶＬ−ＣＬ−ＣＨ２−ＣＨ３
（ｉｘ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３
（ｘ）ＶＨ−ＣＬ−ＣＨ２−ＣＨ３
のうちの１つに従う構造を含む。
【０３１９】
本発明によりまた、本発明のポリペプチドから構成される抗原結合性分子も提供される。一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、以下のポリペプチドの組合せ：
（Ａ）ＶＨ＋ＶＬ
（Ｂ）ＶＨ−ＣＨ１＋ＶＬ−ＣＬ
（Ｃ）ＶＬ−ＣＨ１＋ＶＨ−ＣＬ
（Ｄ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３＋ＶＬ−ＣＬ
（Ｅ）ＶＨ−ＣＬ−ＣＨ２−ＣＨ３＋ＶＬ−ＣＨ１
（Ｆ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３＋ＶＨ−ＣＬ
（Ｇ）ＶＬ−ＣＬ−ＣＨ２−ＣＨ３＋ＶＨ−ＣＨ１
（Ｈ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３＋ＶＬ−ＣＬ−ＣＨ２−ＣＨ３
（Ｉ）ＶＨ−ＣＬ−ＣＨ２−ＣＨ３＋ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３
のうちの１つを含む。
【０３２０】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、上記の（Ａ）〜（Ｉ）に示された組合せのポリペプチドのうちの、１つを超えるポリペプチドを含む。例を目的として述べると、上記の（Ｄ）を参照すると、一部の実施形態では、抗原結合性分子は、構造ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３を含む、２つのポリペプチドと、構造ＶＬ−ＣＬを含む、２つのポリペプチドとを含む。
【０３２１】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、以下のポリペプチドの組合せ：
（Ｊ）ＶＨ（抗ＨＥＲ３）＋ＶＬ（抗ＨＥＲ３）
（Ｋ）ＶＨ（抗ＨＥＲ３）−ＣＨ１＋ＶＬ（抗ＨＥＲ３）−ＣＬ
（Ｌ）ＶＬ（抗ＨＥＲ３）−ＣＨ１＋ＶＨ（抗ＨＥＲ３）−ＣＬ
（Ｍ）ＶＨ（抗ＨＥＲ３）−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３＋ＶＬ（抗ＨＥＲ３）−ＣＬ
（Ｎ）ＶＨ（抗ＨＥＲ３）−ＣＬ−ＣＨ２−ＣＨ３＋ＶＬ（抗ＨＥＲ３）−ＣＨ１
（Ｏ）ＶＬ（抗ＨＥＲ３）−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３＋ＶＨ（抗ＨＥＲ３）−ＣＬ
（Ｐ）ＶＬ（抗ＨＥＲ３）−ＣＬ−ＣＨ２−ＣＨ３＋ＶＨ（抗ＨＥＲ３）−ＣＨ１
（Ｑ）ＶＨ（抗ＨＥＲ３）−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３＋ＶＬ（抗ＨＥＲ３）−ＣＬ−ＣＨ２−ＣＨ３
（Ｒ）ＶＨ（抗ＨＥＲ３）−ＣＬ−ＣＨ２−ＣＨ３＋ＶＬ（抗ＨＥＲ３）−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３
のうちの１つを含むが、この場合、「ＶＨ（抗ＨＥＲ３）」とは、本明細書で記載される、例えば、上記の（１）〜（６１）のうちの１つにおいて規定される、ＨＥＲ３に結合することが可能な抗原結合性分子のＶＨを指し；「ＶＬ（抗ＨＥＲ３）」とは、本明細書で記載される、例えば、上記の（６２）〜（１１９）のうちの１つにおいて規定される、ＨＥＲ３に結合することが可能な抗原結合性分子のＶＬを指す。
【０３２２】
一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１８７〜２２３のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなる。
リンカーおよびさらなる配列
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子およびポリペプチドは、ヒンジ領域を含む。一部の実施形態では、ヒンジ領域は、ＣＨ１領域と、ＣＨ２領域との間にもたらされる。一部の実施形態では、ヒンジ領域は、ＣＬ領域と、ＣＨ２領域との間にもたらされる。一部の実施形態では、ヒンジ領域は、配列番号１７３のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなる。
【０３２３】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子およびポリペプチドは、アミノ酸配列の間に、１つまたは複数のリンカー配列を含む。リンカー配列は、抗原結合性分子／ポリペプチドの、ＶＨ、ＶＬ、ＣＨ１−ＣＨ２間のヒンジ領域、ＣＨ２領域、およびＣＨ３領域のうちの１つまたは複数の、一方または両方の末端にもたらされうる。
【０３２４】
当業者には、リンカー配列が公知であり、例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Ｃｈｅｎら、Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ（２０１３）、６５（１０）：１３５７〜１３６９において記載されている。一部の実施形態では、リンカー配列は、可動性リンカー配列でありうる。可動性リンカー配列は、リンカー配列により連結されたアミノ酸配列の、相対的運動を可能とする。当業者には、リンカー配列が公知であり、いくつかのリンカー配列は、Ｃｈｅｎら、Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ（２０１３）、６５（１０）：１３５７〜１３６９において同定されている。可動性リンカー配列は、しばしば、高比率のグリシン残基および／またはセリン残基を含む。
【０３２５】
一部の実施形態では、リンカー配列は、少なくとも１つのグリシン残基、および／または少なくとも１つのセリン残基を含む。一部の実施形態では、リンカー配列は、グリシンおよびセリン残基からなる。一部の実施形態では、リンカー配列は、１〜２、１〜３、１〜４、１〜５、または１〜１０アミノ酸の長さを有する。
【０３２６】
本発明の抗原結合性分子およびポリペプチドは、加えて、さらなるアミノ酸またはアミノ酸の配列を含みうる。例えば、抗原結合性分子およびポリペプチドは、抗原結合性分子／ポリペプチドの、発現、フォールディング、トラフィッキング、プロセシング、精製、または検出を容易とするアミノ酸配列（複数可）を含みうる。例えば、抗原結合性分子／ポリペプチドは、任意選択で、抗原結合性分子／ポリペプチドのＮ末端またはＣ末端において、Ｈｉｓ（例えば、６×Ｈｉｓ）、Ｍｙｃ、ＧＳＴ、ＭＢＰ、ＦＬＡＧ、ＨＡ、Ｅ、またはビオチンタグをコードする配列を含みうる。一部の実施形態では、抗原結合性分子／ポリペプチドは、検出用部分、例えば、蛍光、発光、免疫検出用、放射性、化学、核酸、または酵素標識を含む。
【０３２７】
本発明の抗原結合性分子およびポリペプチドは、加えて、シグナルペプチド（また、リーダー配列またはシグナル配列としても公知である）を含みうる。シグナルペプチドは通常、単一のアルファヘリックスを形成する、５〜３０の疎水性アミノ酸の配列からなる。細胞表面で分泌されるタンパク質および発現されるタンパク質は、しばしば、シグナルペプチドを含む。
【０３２８】
シグナルペプチドは、抗原結合性分子／ポリペプチドのＮ末端に存在することが可能であり、新たに合成される抗原結合性分子／ポリペプチド内に存在しうる。シグナルペプチドは、抗原結合性分子／ポリペプチドの、効率的なトラフィッキングおよび分泌をもたらす。シグナルペプチドは、しばしば、切断により除去されるため、抗原結合性分子／ポリペプチドを発現する細胞から分泌される、成熟抗原結合性分子／ポリペプチド内に含まれない。
【０３２９】
シグナルペプチドは、多くのタンパク質について公知であり、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ、Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ、ＴｒＥＭＢＬ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄａｔａ  Ｂａｎｋ、Ｅｎｓｅｍｂｌ、およびＩｎｔｅｒＰｒｏなどのデータベースに記録されており、かつ／または例えば、ＳｉｇｎａｌＰ（Ｐｅｔｅｒｓｅｎら、２０１１、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｔｈｏｄｓ、８：７８５〜７８６）またはＳｉｇｎａｌ−ＢＬＡＳＴ（ＦｒａｎｋおよびＳｉｐｐｌ、２００８、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ、２４：２１７２〜２１７６）などのアミノ酸配列解析ツールを使用して、同定／予測されうる。
【０３３０】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子／ポリペプチドのシグナルペプチドは、配列番号１７８〜１８６のうちの１つのアミノ酸配列に対する、少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなる。
標識およびコンジュゲート
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、加えて、検出可能部分を含む。
【０３３１】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、検出可能部分、例えば、蛍光標識、リン光標識、発光標識、免疫検出可能標識（例えば、エピトープタグ）、放射性標識、化学、核酸、または酵素標識を含む。抗原結合性分子は、検出可能部分で、共有結合的に標識付けされる場合もあり、非共有結合的に標識付けされる場合もある。
【０３３２】
蛍光標識は、例えば、フルオレセイン、ローダミン、アロフィコシアニン、エオシン、およびＮＤＢ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、ユーロピウム（Ｅｕ）、テルビウム（Ｔｂ）、およびサマリウム（Ｓｍ）など、希土類のキレート剤、テトラメチルローダミン、Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄ、４−メチルウンベリフェロン、７−アミノ−４−メチルクマリン、Ｃｙ３、Ｃｙ５を含む。放射性標識は、ヨウ素１２３、ヨウ素１２５、ヨウ素１２６、ヨウ素１３１、ヨウ素１３３、臭素７７、テクネシウム９９ｍ、インジウム１１１、インジウム１１３ｍ、ガリウム６７、ガリウム６８、ルテニウム９５、ルテニウム９７、ルテニウム１０３、ルテニウム１０５、水銀２０７、水銀２０３、レニウム９９ｍ、レニウム１０１、レニウム１０５、スカンジウム４７、テルリウム１２１ｍ、テルリウム１２２ｍ、テルリウム１２５ｍ、ツリウム１６５、ツリウム１６７、ツリウム１６８、銅６７、フッ素１８、イットリウム９０、パラジウム１００、ビスマス２１７、およびアンチモニー２１１などの放射性同位体を含む。発光標識は、放射性発光標識、化学発光標識（例えば、アクリジニウムエステル、ルミノール、イソルミノール）、および生物発光標識を含む。免疫検出可能標識は、ハプテン、ペプチド／ポリペプチド、抗体、受容体、およびビオチン、アビジン、ストレプトアビジン、またはジゴキシゲニンなどのリガンドを含む。核酸標識は、アプタマーを含む。酵素標識は、例えば、ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、グルコースオキシダーゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼを含む。
【０３３３】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、化学的部分へとコンジュゲートされる。化学的部分は、治療効果をもたらすための部分でありうる。抗体−薬物コンジュゲートについては、例えば、Ｐａｒｓｌｏｗら、Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅｓ、２０１６年９月、４（３）：１４において総説されている。一部の実施形態では、化学的部分は、薬物部分（例えば、細胞傷害剤）でありうる。一部の実施形態では、薬物部分は、化学療法剤でありうる。一部の実施形態では、薬物部分は、カリケアミシン、ＤＭ１、ＤＭ４、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、ＳＮ−３８、ドキソルビシン、デュオカルマイシン、Ｄ６．５、およびＰＢＤから選択される。
抗原結合性分子についての、特定の例示的な実施形態
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）配列番号１８７のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド；および
（ｉｉ）配列番号１８８のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド
を含むか、またはこれからなる。
【０３３４】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）配列番号１８９のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド；および
（ｉｉ）配列番号１９０のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド
を含むか、またはこれからなる。
【０３３５】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）配列番号１９１のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド；および
（ｉｉ）配列番号１９２のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド
を含むか、またはこれからなる。
【０３３６】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）配列番号１９３のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド；および
（ｉｉ）配列番号１９５のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド
を含むか、またはこれからなる。
【０３３７】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）配列番号１９４のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド；および
（ｉｉ）配列番号１９５のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド
を含むか、またはこれからなる。
【０３３８】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）配列番号１９６のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド；および
（ｉｉ）配列番号１９５のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド
を含むか、またはこれからなる。
【０３３９】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）配列番号１９７のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド；および
（ｉｉ）配列番号１９９のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド
を含むか、またはこれからなる。
【０３４０】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）配列番号１９８のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド；および
（ｉｉ）配列番号１９９のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド
を含むか、またはこれからなる。
【０３４１】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）配列番号２００のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド；および
（ｉｉ）配列番号２０１のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド
を含むか、またはこれからなる。
【０３４２】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）配列番号２０２のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド；および
（ｉｉ）配列番号２０３のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド
を含むか、またはこれからなる。
【０３４３】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）配列番号２０４のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド；および
（ｉｉ）配列番号２０５のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド
を含むか、またはこれからなる。
【０３４４】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）配列番号２０６のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド；および
（ｉｉ）配列番号２０７のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド
を含むか、またはこれからなる。
【０３４５】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）配列番号２０８のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド；および
（ｉｉ）配列番号２０９のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド
を含むか、またはこれからなる。
【０３４６】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）配列番号２１０のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド；および
（ｉｉ）配列番号２１１のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド
を含むか、またはこれからなる。
【０３４７】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）配列番号２１２のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド；および
（ｉｉ）配列番号２１３のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド
を含むか、またはこれからなる。
【０３４８】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）配列番号２１４のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド；および
（ｉｉ）配列番号２１５のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド
を含むか、またはこれからなる。
【０３４９】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）配列番号２１６のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド；および
（ｉｉ）配列番号２１７のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド
を含むか、またはこれからなる。
【０３５０】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）配列番号２１８のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド；および
（ｉｉ）配列番号２１９のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド
を含むか、またはこれからなる。
【０３５１】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）配列番号２２０のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド；および
（ｉｉ）配列番号２２１のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド
を含むか、またはこれからなる。
【０３５２】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）配列番号２２２のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド；および
（ｉｉ）配列番号２２３のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド
を含むか、またはこれからなる。
【０３５３】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）配列番号２２５のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド；および
（ｉｉ）配列番号２０７のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド
を含むか、またはこれからなる。
【０３５４】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）配列番号２２６のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド；および
（ｉｉ）配列番号２０７のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド
を含むか、またはこれからなる。
【０３５５】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）配列番号２２７のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド；および
（ｉｉ）配列番号２１７のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド
を含むか、またはこれからなる。
【０３５６】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）配列番号２２８のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド；および
（ｉｉ）配列番号２１７のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、２つのポリペプチド
を含むか、またはこれからなる。
抗原結合性分子の機能的特性
本明細書で記載される抗原結合性分子は、ある特定の機能的特性に言及することにより特徴付けられうる。一部の実施形態では、本明細書で記載される抗原結合性分子は、以下の特性：
ＨＥＲ３（例えば、ヒト、マウス、ラット、またはカニクイザルＨＥＲ３）に結合すること；
ＥＧＦＲおよび／またはＨＥＲ２に結合しないこと；
ＨＥＲ３発現細胞に結合すること；
ＨＥＲ３の細胞外領域のサブドメインＩＩに結合すること；
ＨＥＲ３が、開放型コンフォメーションおよび閉鎖型コンフォメーションにある場合のＨＥＲ３に結合すること；
ＮＲＧ非依存的に、ＨＥＲ３に結合すること；
ＨＥＲ３への結合について、ＭＭ−１２１および／またはＬＪＭ−７１６と競合しないこと；
ＨＥＲ３への結合について、Ｍ−０５−７４および／またはＭ−０８−１１と競合しないこと；
ＨＥＲ３と、ＨＥＲ３の相互作用パートナー（例えば、ＨＥＲ３、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ４、ＨＧＦＲ、ＩＧＦ１Ｒ、および／またはｃＭｅｔ）との相互作用を阻害すること；
ＨＥＲ３媒介性シグナル伝達を阻害すること；
ＨＥＲ３発現細胞の増殖（例えば、ＮＲＧによる刺激に応答する）を阻害すること；
ＨＥＲ３発現細胞の、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ、および／またはＭＡＰＫによるシグナル伝達（例えば、ＮＲＧによる刺激に応答する）を阻害すること；
活性化型Ｆｃγ受容体（例えば、ＦｃγＲＩＩＩａ）に結合すること；
活性化型Ｆｃγ受容体への結合の増大；
配列番号１７４〜１７５のアミノ酸配列を有するＣＨ２−ＣＨ３から構成されるＦｃ領域を有する、同等の抗原結合性分子と比較した、活性化型Ｆｃγ受容体への結合の増大；
配列番号１７４〜１７５のアミノ酸配列を有するＣＨ２−ＣＨ３から構成されるＦｃ領域を有する、同等の抗原結合性分子と比較した、阻害型Ｆｃγ受容体への結合の減少；
配列番号１７４〜１７５のアミノ酸配列を有するＣＨ２−ＣＨ３から構成されるＦｃ領域を有する、同等の抗原結合性分子と比較した、活性化型Ｆｃγ受容体への結合の、阻害型Ｆｃγ受容体への結合を上回る増大；
配列番号１７４〜１７５のアミノ酸配列を有するＣＨ２−ＣＨ３から構成されるＦｃ領域を有する、同等の抗原結合性分子と比較した、補体タンパク質（例えば、Ｃ１ｑ）への結合の増大または減少；
配列番号１７４〜１７５のアミノ酸配列を有するＣＨ２−ＣＨ３から構成されるＦｃ領域を有する、同等の抗原結合性分子と比較した、六量体化の増大；
配列番号１７４〜１７５のアミノ酸配列を有するＣＨ２−ＣＨ３から構成されるＦｃ領域を有する、同等の抗原結合性分子と比較した、ＡＤＣＣ活性の増大；
配列番号１７４〜１７５のアミノ酸配列を有するＣＨ２−ＣＨ３から構成されるＦｃ領域を有する、同等の抗原結合性分子と比較した、ＡＤＣＰ活性の増大；
配列番号１７４〜１７５のアミノ酸配列を有するＣＨ２−ＣＨ３から構成されるＦｃ領域を有する、同等の抗原結合性分子と比較した、ＣＤＣ活性の増大または減少；
配列番号１７４〜１７５のアミノ酸配列を有するＣＨ２−ＣＨ３から構成されるＦｃ領域を有する、同等の抗原結合性分子と比較して、同様であるか、または増大した熱安定性；
ＨＥＲ３発現細胞の殺滅を増大させること；
ＨＥＲ３発現細胞の数／比率を低減すること；
ならびに
ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるがんの発症および／または進行を阻害すること
のうちの１つまたは複数を所有しうる。
【０３５７】
本明細書で記載される抗原結合性分子は、好ましくは、ＨＥＲ３への特異的結合を呈する。本明細書で使用される、「特異的結合」とは、抗原に対して選択的であり、非標的抗原への非特異的結合から区別されうる結合を指す。標的分子に特異的に結合する抗原結合性分子は、好ましくは、他の非標的分子に結合する場合より、大きなアフィニティーおよび／または長い持続時間で、標的に結合する。
【０３５８】
所与のポリペプチドが、所与の分子に特異的に結合する能力は、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ；例えば、Ｈｅａｒｔｙら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ（２０１２）、９０７：４１１〜４４２を参照されたい）、バイオレイヤー干渉法（例えば、Ｌａｄら（２０１５）、Ｊ  Ｂｉｏｍｏｌ  Ｓｃｒｅｅｎ、２０（４）：４９８〜５０７を参照されたい）、フローサイトメトリー、または放射性標識抗原結合性アッセイ（ＲＩＡ）、酵素免疫測定アッセイによる方法など、当技術分野で公知の方法に従う解析により決定されうる。このような解析によって、所与の分子への結合は、測定および定量されうる。一部の実施形態では、結合は、所与のアッセイにおいて検出される応答でありうる。
【０３５９】
一部の実施形態では、抗原結合性分子の、非標的分子への結合の程度は、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＳＰＲ、バイオレイヤー干渉法により、またはＲＩＡにより測定される、抗体の、標的分子への結合の、約１０％未満である。代替的に、結合特異性は、抗原結合性分子が、抗原結合性分子の、非標的分子へのＫＤを超える、少なくとも０．１の桁数（すなわち、０．１×１０ｎ［式中、ｎは、桁数を表す整数である］）である解離定数（ＫＤ）で結合する、結合アフィニティーの点でも反映されうる。これは、任意選択で、少なくとも０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．５、または２．０のうちの１つでありうる。
【０３６０】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ヒトＨＥＲ３、マウスＨＥＲ３、ラットＨＥＲ３、および／またはカニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）ＨＥＲ３への結合をもたらす。すなわち、一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ヒトＨＥＲ３、マウスＨＥＲ３、ラットＨＥＲ３、および／またはカニクイザルＨＥＲ３に対して、交差反応性である。一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、非ヒト霊長動物のＨＥＲ３との交差反応性をもたらす。モデル種におけるＨＥＲ３に対する交差反応性は、ｉｎ  ｖｉｖｏの同系モデルにおける、サロゲート分子に依拠しない、有効性についての調べることを可能とする。
【０３６１】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ヒトＨＥＲ３、マウスＨＥＲ３、ラットＨＥＲ３、および／またはカニクイザルＨＥＲ３に結合し、ＨＥＲ２および／またはＥＧＦＲ（例えば、ヒトＨＥＲ２および／またはヒトＥＧＦＲ）に結合しない。
【０３６２】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＥＧＦＲ（例えば、ヒトＥＧＦＲ）への特異的結合をもたらさない。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ２（例えば、ヒトＨＥＲ２）への特異的結合をもたらさない。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３以外の、タンパク質の、ＥＧＦＲファミリーのメンバーへの特異的結合をもたらさない（すなわち、これらと交差反応しない）。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ４への特異的結合をもたらさない。
【０３６３】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、１０μＭ以下、好ましくは、≦５μＭ、≦２μＭ、≦１μＭ、≦５００ｎＭ、≦４００ｎＭ、≦３００ｎＭ、≦２００ｎＭ、≦１００ｎＭ、≦９５ｎＭ、≦９０ｎＭ、≦８５ｎＭ、≦８０ｎＭ、≦７５ｎＭ、≦７０ｎＭ、≦６５ｎＭ、≦６０ｎＭ、≦５５ｎＭ、≦５０ｎＭ、≦４５ｎＭ、≦４０ｎＭ、≦３５ｎＭ、≦３０ｎＭ、≦２５ｎＭ、≦２０ｎＭ、≦１５ｎＭ、≦１２．５ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦９ｎＭ、≦８ｎＭ、≦７ｎＭ、≦６ｎＭ、≦５ｎＭ、≦４ｎＭ、≦３ｎＭ、≦２ｎＭ、≦１ｎＭ、≦９００ｐＭ、≦８００ｐＭ、≦７００ｐＭ、≦６００ｐＭ、≦５００ｐＭ、≦４００ｐＭ、≦３００ｐＭ、≦２００ｐＭ、≦１００ｐＭ、≦９０ｐＭ、≦８０ｐＭ、≦７０ｐＭ、≦６０ｐＭ、≦５０ｐＭ、≦４０ｐＭ、≦３０ｐＭ、≦２０ｐＭ、≦１０ｐＭ、≦９ｐＭ、≦８ｐＭ、≦７ｐＭ、≦６ｐＭ、≦５ｐＭ、≦４ｐＭ、≦３ｐＭ、≦２ｐＭ、≦１ｐＭのうちの１つのＫＤで、ＨＥＲ３（例えば、ヒトＨＥＲ３）に結合する。
【０３６４】
本発明の抗原結合性分子は、ＨＥＲ３の、特に目的となる領域に結合しうる。本発明に従う抗原結合性分子の抗原結合性領域は、アミノの酸連続配列（すなわち、アミノ酸の一次配列）からなる、ＨＥＲ３の直鎖状エピトープに結合しうる。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、アミノ酸配列のうちの、アミノ酸の不連続配列からなる、ＨＥＲ３のコンフォメーションエピトープに結合しうる。
【０３６５】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、ＨＥＲ３に結合する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３の細胞外領域（例えば、配列番号９に示される領域）に結合する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３の細胞外領域のサブドメインＩＩ（例えば、配列番号１６に示される領域）に結合する。
【０３６６】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２２９に示される、ＨＥＲ３の領域に結合する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２２９に示される、ＨＥＲ３の領域の、１つまたは複数のアミノ酸残基に接触する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２３０および２３１に示される、ＨＥＲ３の領域に結合する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２３０および２３１に示される、ＨＥＲ３の領域の、１つまたは複数のアミノ酸残基に接触する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２３０に示される、ＨＥＲ３の領域に結合する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２３０に示される、ＨＥＲ３の領域の、１つまたは複数のアミノ酸残基に接触する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２３１に示される、ＨＥＲ３の領域に結合する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２３１に示される、ＨＥＲ３の領域の、１つまたは複数のアミノ酸残基に接触する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２３に示される、ＨＥＲ３の領域に結合する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２３に示される、ＨＥＲ３の領域の、１つまたは複数のアミノ酸残基に接触する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２１に示される、ＨＥＲ３の領域に結合する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２１に示される、ＨＥＲ３の領域の、１つまたは複数のアミノ酸残基に接触する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号１９に示される、ＨＥＲ３の領域に結合する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号１９に示される、ＨＥＲ３の領域の、１つまたは複数のアミノ酸残基に接触する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２２に示される、ＨＥＲ３の領域に結合する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２２に示される、ＨＥＲ３の領域の、１つまたは複数のアミノ酸残基に接触する。
【０３６７】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、配列番号１、３、４、６、または８のうちの１つのアミノ酸配列を含むか、またはこれからなるポリペプチドに結合することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号９のアミノ酸配列を含むか、またはこれからなるポリペプチドに結合することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号１６のアミノ酸配列を含むか、またはこれからなるポリペプチドに結合することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２２９のアミノ酸配列を含むか、またはこれからなるペプチド／ポリペプチドに結合することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２３０および２３１のアミノ酸配列を含むか、またはこれからなるペプチド／ポリペプチドに結合することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２３０のアミノ酸配列を含むか、またはこれからなるペプチド／ポリペプチドに結合することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２３１のアミノ酸配列を含むか、またはこれからなるペプチド／ポリペプチドに結合することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むか、またはこれからなるペプチド／ポリペプチドに結合することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２１のアミノ酸配列を含むか、またはこれからなるペプチド／ポリペプチドに結合することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号１９のアミノ酸配列を含むか、またはこれからなるペプチド／ポリペプチドに結合することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２２のアミノ酸配列を含むか、またはこれからなるペプチド／ポリペプチドに結合することが可能である。
【０３６８】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号１の２６０〜２７９位に対応する、ＨＥＲ３の領域に結合しない。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号１の２６０〜２７９位に対応する、ＨＥＲ３の領域のアミノ酸残基に接触しない。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２３に示される、ＨＥＲ３の領域に結合しない。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２３に示される、ＨＥＲ３の領域のアミノ酸残基に接触しない。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号１の２６０〜２７９位に対応するアミノ酸配列からなるペプチドに結合することが可能ではない。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号２３のアミノ酸配列からなるペプチドに結合することが可能ではない。
【０３６９】
本明細書で使用される、「ペプチド」とは、ペプチド結合により連結された、２つ以上のアミノ酸単量体による鎖を指す。ペプチドは、典型的に、領域内に、約２〜５０アミノ酸の長さを有する。「ポリペプチド」とは、２つ以上のペプチドによるポリマー鎖である。ポリペプチドは、典型的に、約５０アミノ酸を超える長さを有する。
【０３７０】
抗原結合性分子が、所与のペプチド／ポリペプチドに結合する能力は、ＥＬＩＳＡ、免疫ブロット（例えば、ウェスタンブロット）、免疫沈降、表面プラズモン共鳴、およびバイオレイヤー干渉法による解析を含む、当業者に周知の方法により解析されうる。
【０３７１】
リガンドの、ＨＥＲ３への結合は、ＨＥＲ３が、ホモ二量体化またはヘテロ二量体化することを可能とする、コンフォメーション変化を促進する結果として、下流経路の活性化をもたらす。ＨＥＲ３は、「閉鎖型」および「開放型」コンフォメーションを顕示する。閉鎖型コンフォメーションとは、ＨＥＲ３が、テザリングコンフォメーションにあり、受容体のホモまたはヘテロ二量体化のために結合不可能であることを意味する。開放型コンフォメーションとは、ＨＥＲ３が、伸長コンフォメーションにあり、受容体のホモまたはヘテロ二量体化のために結合可能であることを意味する。
【０３７２】
一部の実施形態では、ＨＥＲ３が、開放型コンフォメーションにある場合、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３に結合することが可能である。一部の実施形態では、ＨＥＲ３が、閉鎖型コンフォメーションにある場合、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３に結合することが可能である。一部の実施形態では、ＨＥＲ３が、開放型コンフォメーションおよび／または閉鎖型コンフォメーションにある場合、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３に結合することが可能である。一部の実施形態では、ＨＥＲ３が、開放型コンフォメーションおよび／または閉鎖型コンフォメーションにある場合、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３の細胞外ドメインに結合することが可能である。一部の実施形態では、ＨＥＲ３が、開放型コンフォメーションおよび／または閉鎖型コンフォメーションにある場合、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３の二量体化アームに結合することが可能である。二量体化アームへの結合は、抗原結合性分子が、ＨＥＲ３と、例えば、本明細書で記載される、ＨＥＲ３の相互作用パートナーとの相互作用を防止することを可能とする。
【０３７３】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３に対するリガンドの存在下および／または非存在下において、ＨＥＲ３に結合することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３に対するリガンドに依存せずに、ＨＥＲ３に結合することが可能である。一部の実施形態では、リガンドは、ＮＲＧ、ＮＲＧ−１、および／またはＮＲＧ−２である。ＨＥＲ３は、ＨＥＲ３が、ホモまたはヘテロ二量体化することを可能とする、コンフォメーション変化を促進する、リガンドの、その細胞外ドメインへの結合により活性化される。抗原結合性分子の、ＨＥＲ３への結合は、リガンド非存在下およびリガンド存在下のコンフォメーション状態のいずれにおいても、リガンドの結合に依存せずに、抗原結合性分子が、ＨＥＲ３の作用を阻害することを可能とする。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３への結合について、リガンドと競合しない。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、リガンド結合性部位において、ＨＥＲ３に結合しない。
【０３７４】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、クローンである、１０Ｄ１、１０Ｄ１＿ｃ７５、１０Ｄ１＿ｃ７６、１０Ｄ１＿ｃ７７、１０Ｄ１＿ｃ７８ｖ１、１０Ｄ１＿ｃ７８ｖ２、１０Ｄ１＿１１Ｂ、１０Ｄ１＿ｃ８５ｖ１、１０Ｄ１＿ｃ８５ｖ２、１０Ｄ１＿ｃ８５ｏ１、１０Ｄ１＿ｃ８５ｏ２、１０Ｄ１＿ｃ８７、１０Ｄ１＿ｃ８９、１０Ｄ１＿ｃ９０、１０Ｄ１＿ｃ９１、１０Ｄ１＿ｃ９２、１０Ｄ１＿ｃ９３、１０Ａ６、４−３５−Ｂ２、または４−３５−Ｂ４のうちの１つのＶＨおよびＶＬ配列を含む抗体が結合するＨＥＲ３の領域と同じＨＥＲ３の領域、または重複するＨＥＲ３の領域に結合することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、クローンである、１０Ｄ１＿ｃ８９、１０Ｄ１＿ｃ９０、または１０Ｄ１＿ｃ９１のうちの１つのＶＨおよびＶＬ配列を含む抗体が結合するＨＥＲ３の領域と同じＨＥＲ３の領域、または重複するＨＥＲ３の領域に結合することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、クローンである、１０Ｄ１＿ｃ８９のＶＨおよびＶＬ配列を含む抗体が結合するＨＥＲ３の領域と同じＨＥＲ３の領域、または重複するＨＥＲ３の領域に結合することが可能である。
【０３７５】
抗体が結合する、ペプチド／ポリペプチドの領域は、抗体−抗原複合体についてのＸ線共結晶構造解析、ペプチド走査、突然変異誘発マッピング、質量分析による水素−重水素交換解析、ファージディスプレイ、競合ＥＬＩＳＡ、およびタンパク質分解ベースの「保護」法を含む、当技術分野で周知の、多様な方法を使用して、当業者により決定されうる。このような方法については、例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Ｇｅｒｓｈｏｎｉら、ＢｉｏＤｒｕｇｓ、２００７、２１（３）：１４５〜１５６において記載されている。このような方法はまた、抗原結合性分子が、異なるコンフォメーションにあるタンパク質に結合することが可能であるのかどうかを決定するのにも使用されうる。
【０３７６】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、ＨＥＲ３抗ＨＥＲ３抗体クローンである、ＭＭ−１２１（例えば、Ｓｃｈｏｅｂｅｒｌら、Ｓｃｉ．Ｓｉｇｎａｌ．（２００９）、２（７７）：ｒａ３１において記載された）、および／またはＬＪＭ−７１６（例えば、Ｇａｒｎｅｒら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ（２０１３）、７３：６０２４〜６０３５において記載された）のＶＨおよびＶＬ配列を含む抗体と、同じＨＥＲ３の領域、または重複するＨＥＲ３の領域に結合しない。一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、例えば、ＳＰＲ解析により決定される、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、ＭＭ−１２１および／またはＬＪＭ−７１６のＶＨおよびＶＬ配列を含む抗体との、ＨＥＲ３への結合についての競合をもたらさない。
【０３７７】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、ＨＥＲ３が、細胞表面（すなわち、細胞膜内または細胞膜）において発現される場合、抗原結合性分子（すなわち、細胞外抗原結合性分子）にアクセス可能な領域内のＨＥＲ３に結合する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３を発現する細胞の細胞表面において発現されるＨＥＲ３に結合することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３発現細胞（例えば、ＨＥＲ３＋細胞、例えば、ＨＥＲ３＋がん細胞）に結合することが可能である。
【０３７８】
抗原結合性分子が、所与の細胞型に結合する能力は、例えば、結合しなかった抗原結合性分子を除去する洗浄ステップの後で、細胞を、抗原結合性分子抗原結合性分子と接触させ、細胞に結合した抗原結合性分子を検出することにより解析されうる。抗原結合性分子が、免疫細胞表面分子発現細胞および／またはがん細胞抗原発現細胞に結合する能力は、フローサイトメトリーおよび免疫蛍光顕微鏡法などの方法により解析されうる。
【０３７９】
本発明の抗原結合性分子は、ＨＥＲ３のアンタゴニストでありうる。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３および／またはＨＥＲ３の結合パートナー（例えば、ＨＥＲ３（すなわち、ホモ二量体化の場合における）、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ４、ＨＧＦＲ、ＩＧＦ１Ｒおよび／またはｃＭｅｔ）により媒介される、機能または過程（例えば、相互作用、シグナル伝達、または他の活性）を阻害することが可能である。本明細書に、「阻害」とは、対照条件と比べた、低減、減少、または低下を指す。
【０３８０】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、ＨＥＲ３と、ＨＥＲ３の相互作用パートナーとの相互作用を阻害することが可能である。ＨＥＲ３の相互作用パートナーは、ＨＥＲ３と同じ細胞により発現されうる。相互作用パートナーまたはＨＥＲ３は、細胞表面（すなわち、細胞膜内または細胞膜）において発現されうる。一部の実施形態では、ＨＥＲ３の相互作用パートナーは、タンパク質の、ＥＧＦＲファミリーのメンバー、例えば、ＨＥＲ３、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ４、ＨＧＦＲ、ＩＧＦ１Ｒ、および／またはｃＭｅｔでありうる。一部の実施形態では、ＨＥＲ３の相互作用パートナーは、ＩＧＦ１Ｒおよび／またはｃＭｅｔでありうる。ＨＥＲ３と、ＨＥＲ３の相互作用パートナーとの相互作用は、ポリペプチド複合体の形成を結果としてもたらしうる。ポリペプチド複合体を形成する、ＨＥＲ３と、ＨＥＲ３の相互作用パートナーとの相互作用は、多量体化と称されうる。多量体化が、ポリペプチド単量体の間の多量体化である場合、多量体化は、二量体化と称されうる。
【０３８１】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３単量体の間の相互作用を阻害することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３とＨＥＲ２との相互作用を阻害することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３とＥＧＦＲとの相互作用を阻害することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３とＨＥＲ４との相互作用を阻害することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３とＨＧＦＲとの相互作用を阻害することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３とＩＧＦ１Ｒとの相互作用を阻害することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３とｃＭｅｔとの相互作用を阻害することが可能である。
【０３８２】
相互作用の阻害は、抗原結合性分子の、ＨＥＲ３と、ＨＥＲ３の相互作用パートナーとの相互作用に要求される、ＨＥＲ３の領域（例えば、配列番号１９に示される、ＨＥＲ３の二量体化ループ）への結合により達成されうる。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３と、ＨＥＲ３の相互作用パートナーとの相互作用に必要な、ＨＥＲ３の、１つまたは複数の残基に接触し、このようにして、抗原結合性分子は、領域を結合不能とし、これにより、相互作用を阻害する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３と、ＨＥＲ３の相互作用パートナーとの相互作用を阻害／阻止する形で、ＨＥＲ３に結合する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３の相互作用パートナーの、ＨＥＲ３と、ＨＥＲ３の相互作用パートナーとの相互作用に要求される、ＨＥＲ３の領域へのアクセスを阻害／阻止するが、これは、抗原結合性分子が、ＨＥＲ３と、ＨＥＲ３の相互作用パートナーとの相互作用に要求される、ＨＥＲ３の領域に接触しない場合であってもなお、例えば、ＨＥＲ３の相互作用パートナーの、ＨＥＲ３と、相互作用パートナーとの相互作用に要求される、ＨＥＲ３の領域へのアクセスの立体的阻害によって達成されうる。
【０３８３】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３単量体のホモ二量体化を阻害することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３とＨＥＲ２との二量体化を阻害することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３とＥＧＦＲとの二量体化を阻害することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３とＨＥＲ４との二量体化を阻害することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３とＨＧＦＲとの二量体化を阻害することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３とＩＧＦ１Ｒとの二量体化を阻害することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３とｃＭｅｔとの二量体化を阻害することが可能である。
【０３８４】
抗原結合性分子が、２つの因子の間の相互作用を阻害する能力は、例えば、抗体／断片の存在下で、または相互作用パートナーの一方もしくは両方の、抗体／断片を伴うインキュベーションの後で、相互作用を解析することにより決定されうる。所与の抗原結合性分子が、２つの相互作用パートナーの間の相互作用を阻害することが可能であるのかどうかを決定するためのアッセイは、競合ＥＬＩＳＡアッセイおよびＳＰＲによる解析を含む。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３と、ＨＥＲ３の相互作用パートナーとの相互作用の、競合的阻害剤である。
【０３８５】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、適切なアッセイにおいて、ＨＥＲ３と、ＨＥＲ３の相互作用パートナー（例えば、ＨＥＲ３、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ４、ＨＧＦＲ、ＩＧＦ１Ｒ、および／またはｃＭｅｔ）との相互作用を、抗原結合性分子の非存在下（または適切な対照抗原結合性分子の存在下）における、ＨＥＲ３と、ＨＥＲ３の相互作用パートナーとの相互作用のレベルの、１倍未満、例えば、≦０．９９倍、≦０．９５倍、≦０．９倍、≦０．８５倍、≦０．８倍、≦０．７５倍、≦０．７倍、≦０．６５倍、≦０．６倍、≦０．５５倍、≦０．５倍、≦０．４５倍、≦０．４倍、≦０．３５倍、≦０．３倍、≦０．２５倍、≦０．２倍、≦０．１５倍、≦０．１倍、≦０．０５倍、または≦０．０１倍へと阻害することが可能である。
【０３８６】
抗原結合性分子が、相互作用パートナー間の相互作用を阻害する能力はまた、このような相互作用の、下流における機能的帰結を解析することによっても決定されうる。例えば、ＨＥＲ３と、ＨＥＲ３と、ＨＥＲ３の相互作用パートナーとの相互作用の、下流における機能的帰結は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ、および／またはＭＡＰＫによるシグナル伝達を含む。例えば、抗原結合性分子が、ＨＥＲ３と、ＨＥＲ３の相互作用パートナーとの相互作用を阻害する能力は、抗原結合性分子の存在下における、ＮＲＧによる処理の後で、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ、および／またはＭＡＰＫによるシグナル伝達を解析することにより決定されうる。ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ、および／またはＭＡＰＫによるシグナル伝達は、例えば、シグナル伝達経路のリン酸化メンバーを検出することが可能な抗体を使用して、検出および定量されうる。
【０３８７】
抗原結合性分子が、ＨＥＲ３と、ＨＥＲ３の相互作用パートナーとの相互作用を阻害する能力はまた、抗原結合性分子の存在下における、ＮＲＧによる処理の後で、ＨＥＲ３を発現する細胞の増殖を解析することによっても決定されうる。細胞増殖は、例えば、細胞数の変化を、時間経過にわたり検出することにより決定される場合もあり、３Ｈ−チミジンの取込みについてのｉｎ  ｖｉｔｒｏ解析により決定される場合もあり、例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、ＦｕｌｃｈｅｒおよびＷｏｎｇ、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ（１９９９）、７７（６）：５５９〜５６４において記載された、ＣＦＳＥ希釈アッセイにより決定される場合もある。
【０３８８】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、ＢＲＡＦのＶ６００に対する突然変異を保有する細胞、例えば、ＢＲＡＦの、Ｖ６００ＥまたはＶ６００Ｋ突然変異を含む細胞（実施例１０を参照されたい）の増殖を阻害することが可能である。
【０３８９】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＨＥＲ３媒介性シグナル伝達を阻害する。ＨＥＲ３媒介性シグナル伝達は、例えば、ＨＥＲ３媒介性シグナル伝達の相関因子、例えば、細胞増殖、ならびに／またはＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ、および／もしくはＭＡＰＫのシグナル伝達経路の、１つもしくは複数のシグナル伝達分子のリン酸化についてのアッセイを使用して解析されうる。
【０３９０】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、ＨＥＲ３発現細胞の、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ、および／またはＭＡＰＫによるシグナル伝達を阻害することが可能である。ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ、および／またはＭＡＰＫによるシグナル伝達のレベルは、例えば、ＮＲＧによる刺激の後における、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ、および／またはＭＡＰＫ経路の構成要素のうちの１つまたは複数のリン酸化を検出し、このレベルを定量することにより解析されうる（実施例４．３を参照されたい）。
【０３９１】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、例えば、ＮＲＧによる刺激に応答する、ＨＥＲ３発現細胞の増殖を阻害することが可能である。一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、適切なアッセイにおいて、ＨＥＲ３発現細胞の増殖を、抗原結合性分子の非存在下（または適切な対照抗原結合性分子の存在下）における、ＨＥＲ３発現細胞の増殖のレベルの、１倍未満、例えば、≦０．９９倍、≦０．９５倍、≦０．９倍、≦０．８５倍、≦０．８倍、≦０．７５倍、≦０．７倍、≦０．６５倍、≦０．６倍、≦０．５５倍、≦０．５倍、≦０．４５倍、≦０．４倍、≦０．３５倍、≦０．３倍、≦０．２５倍、≦０．２倍、≦０．１５倍、≦０．１倍、≦０．０５倍、または≦０．０１倍へと阻害することが可能である。
【０３９２】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、適切なアッセイにおいて、ＨＥＲ３発現細胞の、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ、および／またはＭＡＰＫによるシグナル伝達を、抗原結合性分子の非存在下（または適切な対照抗原結合性分子の存在下）における、ＨＥＲ３発現細胞によるシグナル伝達のレベルの、１倍未満、例えば、≦０．９９倍、≦０．９５倍、≦０．９倍、≦０．８５倍、≦０．８倍、≦０．７５倍、≦０．７倍、≦０．６５倍、≦０．６倍、≦０．５５倍、≦０．５倍、≦０．４５倍、≦０．４倍、≦０．３５倍、≦０．３倍、≦０．２５倍、≦０．２倍、≦０．１５倍、≦０．１倍、≦０．０５倍、または≦０．０１倍へと阻害することが可能である。
【０３９３】
ＨＥＲ３媒介性シグナル伝達は、例えば、実施例８．９に記載される通り、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて調べる場合もあり、例えば、実施例１１に記載される通り、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて調べる場合もある。
【０３９４】
ＡＤＣＣ活性は、例えば、Ｙａｍａｓｈｉｔａら、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｒｅｐｏｒｔｓ（２０１６）、６：１９７７２（参照によりその全体において本明細書に組み込まれる）に記載された方法に従い、解析される場合もあり、例えば、Ｊｅｄｅｍａら、Ｂｌｏｏｄ（２００４）、１０３：２６７７〜８２（参照によりその全体において本明細書に組み込まれる）に記載された、５１Ｃｒ放出アッセイにより解析される場合もある。ＡＤＣＣ活性はまた、製造元の指示書に従い、Ｐｉｅｒｃｅ  ＬＤＨ細胞傷害作用アッセイキットを使用して（本明細書の実施例５に記載される）も解析されうる。
【０３９５】
ＡＤＣＰは、例えば、Ｋａｍｅｎら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（２０１７）、１９８（増刊１号）１５７．１７（参照によりその全体において本明細書に組み込まれる）に記載された方法に従い解析されうる。
【０３９６】
ＣＤＣを誘導する能力は、例えば、Ｓｃｈｌｏｔｈａｕｅｒら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ（２０１６）、２９（１０）：４５７〜４６６（参照によりその全体において本明細書に組み込まれる）において記載された、例えば、Ｃ１ｑ結合アッセイを使用して解析されうる。
【０３９７】
抗原結合性分子の熱安定性は、例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Ｈｅら、Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ．（２０１０）において記載された、示差走査蛍光測定および示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を含む、当業者に周知の方法により解析されうる。熱安定性は、溶融温度（Ｔｍ）、アンフォールディング温度、または分解温度（例えば、℃または°Ｆで表される）により反映されうる。
【０３９８】
一部の実施形態では、本明細書で記載されるＦｃ領域を含む抗原結合性分子は、活性化型Ｆｃγ受容体（例えば、ｈＦｃγＲＩＩａ（例えば、ｈＦｃγＲＩＩａ１６７Ｈ、ｈＦｃγＲＩＩａ１６７Ｒ）、ｈＦｃγＲＩＩＩａ（例えば、ｈＦｃγＲＩＩＩａ１５８Ｖ、ｈＦｃγＲＩＩＩａ１５８Ｆ）、ｍＦｃγＲＩＶ、ｍＦｃγＲＩＩＩ）に、配列番号１７４〜１７５のアミノ酸配列を有するＣＨ２−ＣＨ３から構成されるＦｃ領域を有する、同等の抗原結合性分子による、活性化型Ｆｃγ受容体に対する結合アフィニティーの、１倍を超える、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５倍を超える、または２０倍を超える、結合アフィニティーで結合する。一部の実施形態では、本明細書で記載されるＦｃ領域を含む抗原結合性分子の、活性化型Ｆｃγ受容体への結合についてのＫＤは、配列番号１７４〜１７５のアミノ酸配列を有するＣＨ２−ＣＨ３から構成されるＦｃ領域を有する、同等の抗原結合性分子の、活性化型Ｆｃγ受容体についてのＫＤの、１倍未満、例えば、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、０．０９、０．０８、０．０７、０．０６倍未満、または０．０５倍未満である。
【０３９９】
一部の実施形態では、本明細書で記載されるＦｃ領域を含む抗原結合性分子は、１０００ｎＭ以下、好ましくは、≦５００ｎＭ、≦１００ｎＭ、≦７５ｎＭ、≦５０ｎＭ、≦４０ｎＭ、≦３０ｎＭ、≦２０ｎＭ、≦１５ｎＭ、≦１２．５ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦９ｎＭ、≦８ｎＭ、≦７ｎＭ、≦６ｎＭ、≦５ｎＭ、≦４ｎＭ、≦３ｎＭ、≦２ｎＭ、または≦１ｎＭのうちの１つのＫＤで、活性化型Ｆｃγ受容体（例えば、ｈＦｃγＲＩＩａ（例えば、ｈＦｃγＲＩＩａ１６７Ｈ、ｈＦｃγＲＩＩａ１６７Ｒ）、ｈＦｃγＲＩＩＩａ（例えば、ｈＦｃγＲＩＩＩａ１５８Ｖ、ｈＦｃγＲＩＩＩａ１５８Ｆ）、ｍＦｃγＲＩＶ、ｍＦｃγＲＩＩＩ）に結合する。
【０４００】
一部の実施形態では、本明細書で記載されるＦｃ領域を含む抗原結合性分子は、ＦｃＲｎ（例えば、ｈＦｃＲｎ、ｍＦｃＲｎ）に、配列番号１７４〜１７５のアミノ酸配列を有するＣＨ２−ＣＨ３から構成されるＦｃ領域を有する、同等の抗原結合性分子による、ＦｃＲｎに対する結合アフィニティーの、１倍を超える、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５倍を超える、または２０倍を超える、結合アフィニティーで結合する。一部の実施形態では、本明細書で記載されるＦｃ領域を含む抗原結合性分子の、ＦｃＲｎへの結合についてのＫＤは、配列番号１７４〜１７５のアミノ酸配列を有するＣＨ２−ＣＨ３から構成されるＦｃ領域を有する、同等の抗原結合性分子の、ＦｃＲｎについてのＫＤの、１倍未満、例えば、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、０．０９、０．０８、０．０７、０．０６倍未満、または０．０５倍未満である。
【０４０１】
一部の実施形態では、本明細書で記載されるＦｃ領域を含む抗原結合性分子は、１０００ｎＭ以下、好ましくは、≦５００ｎＭ、≦１００ｎＭ、≦７５ｎＭ、≦５０ｎＭ、≦４０ｎＭ、≦３０ｎＭ、≦２０ｎＭ、≦１５ｎＭ、≦１２．５ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦９ｎＭ、≦８ｎＭ、≦７ｎＭ、≦６ｎＭ、≦５ｎＭ、≦４ｎＭ、≦３ｎＭ、≦２ｎＭ、または≦１ｎＭのうちの１つのＫＤで、ＦｃＲｎ（例えば、ｈＦｃＲｎ、ｍＦｃＲｎ）に結合する。
【０４０２】
一部の実施形態では、本明細書で記載されるＦｃ領域を含む抗原結合性分子は、阻害型Ｆｃγ受容体（例えば、ｈＦｃγＲＩＩｂ、ｍＦｃγＲＩＩｂ）に、配列番号１７４〜１７５のアミノ酸配列を有するＣＨ２−ＣＨ３から構成されるＦｃ領域を有する、同等の抗原結合性分子による、阻害型Ｆｃγ受容体に対する結合アフィニティーの、１倍未満、例えば、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２倍未満、または０．１倍未満の結合アフィニティーで結合する。一部の実施形態では、本明細書で記載されるＦｃ領域を含む抗原結合性分子の、阻害型Ｆｃγ受容体への結合についてのＫＤは、配列番号１７４〜１７５のアミノ酸配列を有するＣＨ２−ＣＨ３から構成されるＦｃ領域を有する、同等の抗原結合性分子の、阻害型Ｆｃγ受容体についてのＫＤの、１倍を超える、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９倍を超える、または１０倍を超える。
【０４０３】
一部の実施形態では、本明細書で記載されるＦｃ領域を含む抗原結合性分子は、阻害型Ｆｃγ受容体（例えば、ｈＦｃγＲＩＩｂ、ｍＦｃγＲＩＩｂ）に、１ｎＭ以上、好ましくは、≧５ｎＭ、≧１０ｎＭ、≧５０ｎＭ、≧１００ｎＭ、≧５００ｎＭ、≧１０００ｎＭ、≧２０００ｎＭ、≧３０００ｎＭ、≧４０００ｎＭ、または≧５０００ｎＭのうちの１つのＫＤで結合する。
【０４０４】
一部の実施形態では、本明細書で記載されるＦｃ領域を含む抗原結合性分子についての、阻害型Ｆｃγ受容体（例えば、ｈＦｃγＲＩＩｂ）と比べた、活性化型Ｆｃγ受容体（例えば、ｈＦｃγＲＩＩａ）に対する結合の選択性は、配列番号１７４〜１７５のアミノ酸配列を有するＣＨ２−ＣＨ３から構成されるＦｃ領域を有する、同等の抗原結合性分子によりもたらされる結合の選択性の、１倍を超える、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５倍を超える、または２０倍を超える。
【０４０５】
一部の実施形態では、本明細書で記載されるＦｃ領域を含む抗原結合性分子は、配列番号１７４〜１７５のアミノ酸配列を有するＣＨ２−ＣＨ３から構成されるＦｃ領域を有する、同等の抗原結合性分子によりもたらされるＡＤＣＣの、１倍を超える、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５倍を超える、または２０倍を超えるＡＤＣＣをもたらす。
【０４０６】
一部の実施形態では、ＡＤＣＣ活性についてのアッセイにおいて、本明細書で記載されるＦｃ領域を含む抗原結合性分子について決定されるＥＣ５０（ｎｇ／ｍｌ）は、配列番号１７４〜１７５のアミノ酸配列を有するＣＨ２−ＣＨ３から構成されるＦｃ領域を有する、同等の抗原結合性分子について決定されるＥＣ５０（ｎｇ／ｍｌ）の、１倍未満、例えば、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２倍未満、または０．１倍未満である。
【０４０７】
一部の実施形態では、ＡＤＣＣ活性についてのアッセイにおける、本明細書で記載されるＦｃ領域を含む抗原結合性分子についてのＥＣ５０（ｎｇ／ｍｌ）は、５００ｎｇ／ｍｌ以下、好ましくは、≦４００ｎｇ／ｍｌ、≦３００ｎｇ／ｍｌ、≦２００ｎｇ／ｍｌ、≦１００ｎｇ／ｍｌ、≦９０ｎｇ／ｍｌ、≦８０ｎｇ／ｍｌ、≦７０ｎｇ／ｍｌ、≦６０ｎｇ／ｍｌ、≦５０ｎｇ／ｍｌ、≦４０ｎｇ／ｍｌ、≦３０ｎｇ／ｍｌ、≦２０ｎｇ／ｍｌ、または≦１０ｎｇ／ｍｌのうちの１つである。
【０４０８】
一部の実施形態では、本明細書で記載されるＦｃ領域を含む抗原結合性分子は、配列番号１７４〜１７５のアミノ酸配列を有するＣＨ２−ＣＨ３から構成されるＦｃ領域を有する、同等の抗原結合性分子の溶融温度、アンフォールディング温度、または分解温度の≧０．７５倍、かつ、≦１．２５倍、例えば、≧０．８倍、かつ、≦１．２倍、≧０．８５倍、かつ、≦１．１５倍、≧０．９倍、かつ、≦１．１倍、≧０．９１倍、かつ、≦１．０９倍、≧０．９２倍、かつ、≦１．０８倍、≧０．９３倍、かつ、≦１．０７倍、≧０．９４倍、かつ、≦１．０６倍、≧０．９５倍、かつ、≦１．０５倍、≧０．９６倍、かつ、≦１．０４倍、≧０．９７倍、かつ、≦１．０３倍、≧０．９８倍、かつ、≦１．０２倍、または≧０．９９倍、かつ、≦１．０１倍である、溶融温度、アンフォールディング温度、または分解温度を有しうる。
【０４０９】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、ＨＥＲ３発現細胞の殺滅を増大させることが可能である。ＨＥＲ３発現細胞の殺滅は、抗原結合性分子のエフェクター機能を介して増大させうる。抗原結合性分子が、Ｆｃ領域を含む実施形態では、抗原結合性分子は、補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）、および抗体依存性細胞性食作用（ＡＤＣＰ）のうちの１つまたは複数を介して、ＨＥＲ３発現細胞の殺滅を増大させうる。
【０４１０】
ＨＥＲ３発現細胞の殺滅を増大させることが可能な抗原結合性分子は、適切なアッセイの、抗原結合性分子の非存在下（または適切な対照抗原結合性分子の存在下）において検出される細胞殺滅のレベルと比較した、抗原結合性分子の存在下（またはＨＥＲ３発現細胞の、抗原結合性分子を伴うインキュベーションの後）における、ＨＥＲ３発現細胞の殺滅のレベルの上昇の観察により同定されうる。当業者には、ＣＤＣ、ＡＤＣＣ、およびＡＤＣＰについてのアッセイが周知である。ＨＥＲ３発現細胞の殺滅のレベルはまた、異なる処置条件への曝露の後における、ＨＥＲ３発現細胞の、生存および／または非生存の数／比率を測定することによっても決定されうる。
【０４１１】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、ＨＥＲ３発現細胞（例えば、ＨＥＲ３発現がん細胞）の殺滅を、抗原結合性分子の非存在下（または適切な対照抗原結合性分子の存在下）において観察される殺滅のレベルの、１倍を超えて、例えば、≧１．０１倍、≧１．０２倍、≧１．０３倍、≧１．０４倍、≧１．０５倍、≧１．１倍、≧１．２倍、≧１．３倍、≧１．４倍、≧１．５倍、≧１．６倍、≧１．７倍、≧１．８倍、≧１．９倍、≧２倍、≧３倍、≧４倍、≧５倍、≧６倍、≧７倍、≧８倍、≧９倍、または≧１０倍へと増大させることが可能である。
【０４１２】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、同等のアッセイにおいて、ＨＥＲ３発現細胞（例えば、ＨＥＲ３発現がん細胞）の数を、抗原結合性分子の非存在下におけるインキュベーションの後に（または適切な対照の抗原結合性分子の存在下におけるインキュベーションの後に）検出される、ＨＥＲ３発現細胞（例えば、ＨＥＲ３発現がん細胞）の数の、１倍未満、例えば、≦０．９９倍、≦０．９５倍、≦０．９倍、≦０．８５倍、≦０．８倍、≦０．７５倍、≦０．７倍、≦０．６５倍、≦０．６倍、≦０．５５倍、≦０．５倍、≦０．４５倍、≦０．４倍、≦０．３５倍、≦０．３倍、≦０．２５倍、≦０．２倍、≦０．１５倍、≦０．１倍、≦０．０５倍、または≦０．０１倍へと低減することが可能である。
【０４１３】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるがんの発症および／または進行を阻害する。
【０４１４】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、例えば、エフェクター免疫細胞により、がん細胞の殺滅の増大を引き起こす。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、例えば、適切な対照条件と比較した、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるがん細胞の数の低減を引き起こす。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、例えば、時間経過にわたり、腫瘍サイズ／容量を測定することにより決定される、腫瘍増殖を阻害する。
【０４１５】
本発明の抗原結合性分子は、適切なｉｎ  ｖｉｖｏモデル、例えば、細胞株由来異種移植モデルにおいて、がんの発症および／または進行を阻害する能力について解析されうる。細胞株由来異種移植モデルは、ＨＥＲ３発現がん細胞に由来しうる。一部の実施形態では、モデルは、Ｎ８７細胞由来モデル、ＳＮＵ１６細胞由来モデル、ＦａＤｕ細胞由来モデル、ＯｖＣＡＲ８細胞由来モデル、ＨＣＣ９５細胞由来モデル、Ａ５４９細胞由来モデル、ＡＣＨＮ細胞由来モデル、またはＨＴ２９細胞由来モデルである。
【０４１６】
がんは、本明細書で記載される、ＨＥＲ３関連がん（すなわち、ＨＥＲ３遺伝子／タンパク質の発現が、危険性因子であり、かつ／あるいはがんの発生、発症、進行、もしくは症状の重症度、および／または転移と正に関連するがん）でありうる。がんは、ＨＥＲ３発現細胞を含みうる。一部の実施形態では、がんは、ＨＥＲ３＋腫瘍を含む。
【０４１７】
一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子の投与は、がんの発症／進行の阻害、がんの発生までの遅延／がんの発生の防止、腫瘍増殖の軽減／腫瘍増殖までの遅延／腫瘍増殖の防止、転移の軽減／転移までの遅延／転移の防止、がんの症状の重症度の軽減、がん細胞数の低減、腫瘍サイズ／体積の低減、および／または、例えば、適切なＨＥＲ３発現がん細胞株由来異種移植モデルで決定される、生存期間（例えば、無増悪生存期間）の延長のうちの１つまたは複数を引き起こしうる。
【０４１８】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、ＨＥＲ３発現がん細胞株由来異種移植モデルにおける腫瘍増殖を、抗原結合性分子による処置の非存在下で（または適切な負の対照の抗原結合性分子による処置の後に）観察される腫瘍増殖の、１倍未満、例えば、≦０．９９倍、≦０．９５倍、≦０．９倍、≦０．８５倍、≦０．８倍、≦０．７５倍、≦０．７倍、≦０．６５倍、≦０．６倍、≦０．５５倍、≦０．５倍、≦０．４５倍、≦０．４倍、≦０．３５倍、≦０．３倍、≦０．２５倍、≦０．２倍、≦０．１５倍、≦０．１倍、≦０．０５倍、または≦０．０１倍へと阻害することが可能である。
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
本発明はまた、本発明の抗原結合性分子またはポリペプチドを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）も提供する。
【０４１９】
ＣＡＲは、抗原結合およびＴ細胞活性化機能の両方をもたらす、組換え受容体である。ＣＡＲの構造および操作については、例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Ｄｏｔｔｉら、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ（２０１４）、２５７（１）において総説されている。ＣＡＲは、細胞膜アンカー領域およびシグナル伝達領域へと連結された、抗原結合性領域を含む。任意選択のヒンジ領域は、抗原結合性領域と、細胞膜アンカー領域との分離をもたらすことが可能であり、可動性リンカーとして作用しうる。
【０４２０】
本発明のＣＡＲは、本発明の抗原結合性分子を含むか、もしくはこれからなるか、または本発明に従うポリペプチドを含むか、もしくはこれからなる、抗原結合性領域を含む。
【０４２１】
細胞膜アンカー領域は、ＣＡＲの、抗原結合性領域と、シグナル伝達領域との間にもたらされ、細胞外腔に抗原結合性領域を伴い、細胞内部にシグナル伝達領域を伴う、ＣＡＲの、ＣＡＲを発現する細胞の細胞膜へのアンカリングをもたらす。一部の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ３−ζ、ＣＤ４、ＣＤ８、またはＣＤ２８のうちの１つの、膜貫通領域のアミノ酸配列を含むか、これからなるか、またはこれに由来するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる細胞膜アンカー領域を含む。本明細書で使用される、参照アミノ酸配列「に由来する」領域は、参照配列に対する、少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む。
【０４２２】
ＣＡＲのシグナル伝達領域は、Ｔ細胞の活性化を可能とする。ＣＡＲのシグナル伝達領域は、ＣＡＲ発現Ｔ細胞のリン酸化および活性化のための、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）をもたらす、ＣＤ３−ζの細胞内ドメインのアミノ酸配列を含みうる。ＣＡＲでは、ＦｃγＲＩなど、他のＩＴＡＭ含有タンパク質の配列を含むシグナル伝達領域もまた利用されている（Ｈａｙｎｅｓら、２００１、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、１６６（１）：１８２〜１８７）。ＣＡＲのシグナル伝達領域はまた、標的タンパク質への結合時における、ＣＡＲ発現Ｔ細胞の活性化を容易とするように、共刺激分子のシグナル伝達領域に由来する、共刺激配列も含みうる。適切な共刺激分子は、ＣＤ２８、ＯＸ４０、４−１ＢＢ、ＩＣＯＳ、およびＣＤ２７を含む。場合によって、ＣＡＲは、異なる細胞内シグナル伝達経路の共刺激をもたらすように操作される。例えば、ＣＤ２８の共刺激と関連するシグナル伝達が、ホスファチジルイノシトール３キナーゼ（Ｐ１３Ｋ）経路を優先的に活性化させるのに対し、４−１ＢＢ媒介性シグナル伝達ＴＮＦ受容体関連因子（ＴＲＡＦ）アダプタータンパク質を介する。したがって、ＣＡＲのシグナル伝達領域は、場合によって、１つを超える共刺激分子のシグナル伝達領域に由来する共刺激配列を含有する。一部の実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ２８、ＯＸ４０、４−１ＢＢ、ＩＣＯＳ、およびＣＤ２７のうちの１つまたは複数の細胞内ドメインのアミノ酸配列を含むか、これからなるか、またはこれに由来するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、１つまたは複数の共刺激配列を含む。
【０４２３】
任意選択のヒンジ領域は、抗原結合性ドメインと、膜貫通ドメインとの分離をもたらすことが可能であり、可動性リンカーとして作用しうる。ヒンジ領域は、ＩｇＧ１に由来しうる。一部の実施形態では、本発明のＣＡＲは、このＩｇＧ１のヒンジ領域のアミノ酸配列を含むか、これからなるか、またはこれに由来するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなるヒンジ領域を含む。
【０４２４】
また、本発明に従うＣＡＲを含む細胞も提供される。本発明に従うＣＡＲは、ＣＡＲ発現免疫細胞、例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞またはＣＡＲ−ＮＫ細胞を作出するのに使用されうる。ＣＡＲの、免疫細胞への操作は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける培養時に実施されうる。
【０４２５】
本発明のＣＡＲの抗原結合性領域は、例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂなど、任意の適切なフォーマットでもたらされうる。
核酸およびベクター
本発明は、本発明に従う、抗原結合性分子、ポリペプチド、またはＣＡＲをコードする、１つの核酸または複数の核酸を提供する。
【０４２６】
一部の実施形態では、核酸は、例えば、他の核酸から、精製または単離される場合もあり、天然に存在する生物学的素材から、精製または単離される場合もある。一部の実施形態では、核酸（複数可）は、ＤＮＡおよび／またはＲＮＡを含むか、またはこれからなる。
【０４２７】
本発明はまた、本発明に従う、１つの核酸または複数の核酸を含む、１つのベクターまたは複数のベクターも提供する。
【０４２８】
ヌクレオチド配列は、ベクター、例えば、発現ベクター内に含有されうる。本明細書で使用される、「ベクター」とは、外因性核酸を、細胞へと導入するビヒクルとして使用される核酸分子である。ベクターは、細胞内で核酸を発現させるためのベクターでありうる。このようなベクターは、発現される配列をコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結されたプロモーター配列を含みうる。ベクターはまた、終止コドンおよび発現エンハンサーも含みうる。当技術分野で公知である、任意の、適切なベクター、プロモーター、エンハンサー、および終止コドンが、ペプチドまたはポリペプチドを、本発明に従うベクターから発現させるのに使用されうる。
【０４２９】
「作動可能に連結された」という用語は、核酸配列の発現を、調節配列の影響下または制御下に置く（これにより、発現カセットを形成する）ように、選択された核酸配列と、調節的核酸配列（例えば、プロモーターおよび／またはエンハンサー）とが、共有結合的に連結された状況を含みうる。したがって、調節配列が、核酸配列の転写を実行することが可能な場合、調節配列は、選択された核酸配列に作動可能に連結されている。次いで、結果として得られる転写物（複数可）は、所望のペプチド（複数可）／ポリペプチド（複数可）へと翻訳されうる。
【０４３０】
適切なベクターは、プラスミド、二元ベクター、ＤＮＡベクター、ｍＲＮＡベクター、ウイルスベクター（例えば、ガンマレトロウイルスベクター（例えば、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）由来ベクター）、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、およびヘルペスウイルスベクター）、トランスポゾンベースのベクター、および人工染色体（例えば、酵母人工染色体）を含む。
【０４３１】
一部の実施形態では、ベクターは、真核生物ベクター、例えば、真核細胞内のベクターからの、タンパク質の発現に必要なエレメントを含むベクターでありうる。一部の実施形態では、ベクターは、例えば、タンパク質の発現を駆動する、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）またはＳＶ４０プロモーターを含む、哺乳動物ベクターでありうる。
【０４３２】
本発明に従う抗原結合性分子の、構成要素であるポリペプチドは、複数の核酸のうちの、異なる核酸、または複数のベクターのうちの、異なるベクターによりコードされうる。
抗原結合性分子およびポリペプチドを含む／発現する細胞
本発明はまた、本発明に従う、抗原結合性分子、ポリペプチド、またはＣＡＲを含むか、またはこれを発現する細胞も提供する。また、本発明に従う１つの核酸、複数の核酸、１つのベクター、または複数のベクターを含むか、またはこれを発現する細胞も提供される。
【０４３３】
細胞は、真核細胞、例えば、哺乳動物細胞でありうる。哺乳動物は、霊長動物（アカゲザル、カニクイザル、非ヒト霊長動物、またはヒト）、または非ヒト哺乳動物（例えば、ウサギ、モルモット、ラット、マウスまたは他の齧歯動物（ネズミ目内の任意の動物を含む）、ネコ、イヌ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、畜牛（ウシ、例えば、乳牛、またはウシ目内の任意の動物を含む）、ウマ（ウマ目内の任意の動物を含む）、ロバ、および非ヒト霊長動物）でありうる。
【０４３４】
本発明はまた、本発明に従う核酸（複数可）またはベクター（複数可）を含む細胞を作製するための方法であって、本発明に従う１つの核酸、複数の核酸、１つのベクター、または複数のベクターを、細胞へと導入するステップを含む方法も提供する。一部の実施形態では、本発明に従う、単離核酸（複数可）または単離ベクター（複数可）を、細胞へと導入するステップは、形質転換、トランスフェクション、電気穿孔、または形質導入（例えば、レトロウイルスによる形質導入）を含む。
【０４３５】
本発明はまた、本発明に従う、抗原結合性分子、ポリペプチド、またはＣＡＲを発現する／含む細胞を作製するための方法であって、本発明に従う１つの核酸、複数の核酸、１つのベクター、または複数のベクターを、細胞へと導入するステップを含む方法も提供する。一部の実施形態では、方法は、細胞を、細胞による、核酸（複数可）またはベクター（複数可）の発現にも適する条件下で培養するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて実施される。
【０４３６】
本発明はまた、本発明に従う方法により得られるか、または得られうる細胞も提供する。
抗原結合性分子およびポリペプチドの作製
本発明に従う抗原結合性分子およびポリペプチドは、当業者に公知の、ポリペプチドを作製するための方法に従い調製されうる。
【０４３７】
ポリペプチドは、化学合成、例えば、液相または固相合成により調製されうる。例えば、ペプチド／ポリペプチドは、例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Ｃｈａｎｄｒｕｄｕら、Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ（２０１３）、１８：４３７３〜４３８８において記載された方法を使用して合成されうる。
【０４３８】
代替的に、抗原結合性分子およびポリペプチドは、組換え発現によっても作製されうる。当技術分野では、それらのいずれもが、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる、ＧｒｅｅｎおよびＳａｍｂｒｏｏｋ、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ」（４版）、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ、２０１２；ならびにＮａｔ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．（２００８）、５（２）：１３５〜１４６において明示された分子生物学法など、ポリペプチドの組換え作製に適する分子生物学法が周知である。抗原結合性分子の組換え作製のための方法はまた、それらのいずれもが、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる、Ｆｒｅｎｚｅｌら、Ｆｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１３）、４：２１７；ならびにＫｕｎｅｒｔおよびＲｅｉｎｈａｒｔ、Ａｐｐｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（２０１６）、１００：３４５１〜３４６１においても記載されている。
【０４３９】
場合によって、本発明の抗原結合性分子は、１つを超えるポリペプチド鎖から構成される。このような場合に、抗原結合性分子の作製は、抗原結合性分子を形成するのに、１つを超えるポリペプチドの転写および翻訳と、後続するポリペプチド鎖の会合とを含みうる。
【０４４０】
本発明に従う組換え作製のために、ポリペプチドの発現に適する、任意の細胞が使用されうる。細胞は、原核細胞の場合もあり、真核細胞の場合もある。一部の実施形態では、細胞は、古細菌または細菌の細胞などの原核細胞である。一部の実施形態では、細菌は、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒａｃｅａｅ科の細菌、例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉなどのグラム陰性菌でありうる。一部の実施形態では、細胞は、酵母細胞、植物細胞、昆虫細胞、または哺乳動物細胞、例えば、ＣＨＯ、ＨＥＫ（例えば、ＨＥＫ２９３）、ＨｅＬａ、またはＣＯＳ細胞などの真核細胞である。一部の実施形態では、細胞は、一過性に、または安定的にポリペプチドを発現するＣＨＯ細胞である。
【０４４１】
場合によって、細胞は、一部の原核細胞は、真核細胞と同じフォールディングまたは翻訳後修飾を可能としないため、原核細胞ではない。加えて、真核細胞内では、極めて高度の発現レベルが可能であり、タンパク質は、適切なタグを使用する、真核細胞からの精製が容易である。タンパク質の、培地への分泌を増強する、特異的なプラスミドもまた利用されうる。
【０４４２】
一部の実施形態では、ポリペプチドは、例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Ｚｅｍｅｌｌａら、Ｃｈｅｍｂｉｏｃｈｅｍ（２０１５）、１６（１７）：２４２０〜２４３１において記載されたシステムを使用する、無細胞タンパク質合成（ＣＦＰＳ）により調製されうる。
【０４４３】
作製は、目的のポリペプチド（複数可）を発現するように修飾された、真核細胞の培養または発酵を伴いうる。培養または発酵は、栄養物、空気／酸素、および／または増殖因子の適切な供給がなされたバイオリアクター内で実施されうる。分泌されたタンパク質は、培養培地／発酵培養液を、細胞から分別し、タンパク質含有物を抽出し、個別のタンパク質を分離して、分泌されたポリペプチド（複数可）を単離することにより回収されうる。当業者には、培養、発酵、および分離法が周知であり、例えば、ＧｒｅｅｎおよびＳａｍｂｒｏｏｋ、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ」（４版；参照により、本明細書の上記に組み込まれた）において記載されている。
【０４４４】
バイオリアクターは、細胞が培養されうる、１または複数の反応槽を含む。バイオリアクター内の培養は、反応物の、リアクターへの、持続的な流入と、培養された細胞の、リアクターからの、持続的な流出とにより、持続的に生じうる。代替的に、培養は、バッチ内で生じうる。バイオリアクターは、培養される細胞に、最適の条件がもたらされるように、ｐＨ、酸素、反応槽への流入および反応槽からの流出の流量、ならびに反応槽内の攪拌などの環境条件をモニタリングし、制御する。
【０４４５】
抗原結合性分子／ポリペプチド（複数可）を発現する細胞の培養の後、目的のポリペプチド（複数可）は、単離されうる。当技術分野で公知の、細胞から、タンパク質を分離するための、任意の適切な方法が使用されうる。ポリペプチドを単離するために、細胞を、栄養培地から分離することが必要でありうる。目的のポリペプチド（複数可）が、細胞から分泌される場合、細胞は、分泌された目的のポリペプチド（複数可）を含有する培養培地から、遠心分離により分離されうる。目的のポリペプチド（複数可）が、細胞内に集まる場合、タンパク質の単離は、細胞を、細胞培養培地から分離する遠心分離、細胞ペレットの、溶解緩衝液による処理、および超音波処理、急速な凍結−融解、または浸透圧溶解による、細胞の破壊を含みうる。
【０４４６】
次いで、目的のポリペプチド（複数可）を、他のタンパク質および非タンパク質成分を含有しうる、上清または培養物培地を単離することが所望されうる。タンパク質成分を、上清または培養培地から分離するための、一般的な手法は、沈殿である。可溶性が異なるタンパク質は、硫酸アンモニウムなど、異なる濃度の沈殿剤で沈殿する。例えば、低濃度の沈殿剤では、水溶性のタンパク質が抽出される。したがって、増大させる、異なる濃度の沈殿剤を添加することにより、可溶性の異なるタンパク質が、識別されうる。その後、分離されたタンパク質から、硫酸アンモニウムを除去するのに、透析が使用されうる。
【０４４７】
当技術分野では、異なるタンパク質を識別するための、他の方法、例えば、イオン交換クロマトグラフィーおよびサイズクロマトグラフィーが公知である。これらは、沈殿に対する代替法として使用される場合もあり、沈殿に後続して実施される場合もある。
【０４４８】
目的のポリペプチド（複数可）が、培養物から単離されたら、ポリペプチド（複数可）を濃縮することが所望または必要でありうる。当技術分野では、限外濾過または凍結乾燥など、タンパク質を濃縮する、多数の方法が公知である。
組成物
本発明はまた、本明細書で記載される、抗原結合性分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸、発現ベクター、および細胞を含む組成物も提供する。
【０４４９】
本明細書で記載される、抗原結合性分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸、発現ベクター、および細胞は、臨床使用のための医薬組成物または医薬として製剤化される場合があり、薬学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤、またはアジュバントを含みうる。組成物は、注射または注入を含みうる、局所、非経口、全身、腔内、静脈内、動脈内、筋内、髄腔内、眼内、結膜内、腫瘍内、皮下、皮内、髄腔内、経口、または経皮投与経路のために製剤化されうる。
【０４５０】
適切な製剤は、滅菌媒体中または等張性媒体中の抗原結合性分子を含みうる。医薬および医薬組成物は、ゲル形態を含む、流体中で製剤化されうる。流体製剤は、ヒトまたは動物体内の、選択された領域への、注射または注入（例えば、カテーテルを介する）による投与のために製剤化されうる。
【０４５１】
一部の実施形態では、組成物は、例えば、血管または腫瘍への、注射または注入のために製剤化される。
【０４５２】
また、本発明に従い、本明細書で記載される、薬学的に有用な組成物を作製するための方法も提供され、このような作製法は、本明細書で記載される、抗原結合性分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸（または複数の核酸）、発現ベクター（または複数の発現ベクター）、もしくは細胞を作製するステップ；本明細書で記載される、抗原結合性分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸（または複数の核酸）、発現ベクター（または複数の発現ベクター）、もしくは細胞を単離するステップ；および／または本明細書で記載される、抗原結合性分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸（または複数の核酸）、発現ベクター（または複数の発現ベクター）、もしくは細胞を、薬学的に許容される担体、アジュバント、賦形剤、または希釈剤と混合するステップから選択される、１つまたは複数のステップを含みうる。
【０４５３】
例えば、本明細書で記載される、本発明のさらなる態様は、疾患／状態（例えば、がん）の処置における使用のための医薬または医薬組成物を製剤化または作製する方法であって、本明細書で記載される、抗原結合性分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸（または複数の核酸）、発現ベクター（または複数の発現ベクター）、または細胞を、薬学的に許容される担体、アジュバント、賦形剤、または希釈剤と混合することにより、医薬組成物または医薬を製剤化するステップに関する。
治療適用および予防適用
本明細書で記載される、抗原結合性分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸、発現ベクター、細胞、および組成物は、治療法および予防法において使用される。
【０４５４】
本発明は、医学的処置または予防の方法における使用のための、本明細書で記載される、抗原結合性分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸（または複数の核酸）、発現ベクター（または複数の発現ベクター）、細胞、または組成物を提供する。また、疾患または状態を処置または防止するための医薬の製造における、本明細書で記載される、抗原結合性分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸（または複数の核酸）、発現ベクター（または複数の発現ベクター）、細胞、または組成物の使用も提供される。また、疾患または状態を処置または防止する方法であって、対象へと、治療または予防有効量の、本明細書で記載される、抗原結合性分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸（または複数の核酸）、発現ベクター（または複数の発現ベクター）、細胞、または組成物を投与するステップを含む方法も提供される。
【０４５５】
方法は、疾患／状態の発症もしくは進行の低減、疾患／状態の症状の緩和、または疾患／状態の病態の軽減に効果的でありうる。方法は、疾患／状態の進行を防止する、例えば、疾患／状態の増悪を防止するか、または疾患／状態の発症速度を遅くするのに効果的でありうる。一部の実施形態では、方法は、疾患／状態の改善、例えば、疾患／状態の症状の軽減、または疾患／状態の、重症度／活動性についての、他の一部の相関因子の低減をもたらしうる。一部の実施形態では、方法は、疾患／状態の後期（例えば、慢性期または転移）の発症を防止しうる。
【０４５６】
本発明の物品が、ＨＥＲ３を発現する細胞の数および／または活性の低減から、治療または予防利益を引き出す、任意の疾患／状態の処置／防止のために使用されうることが理解されるであろう。例えば、疾患／状態は、ＨＥＲ３を発現する細胞が、病理学的に関与する疾患／状態、例えば、ＨＥＲ３を発現する細胞の数／比率の増大が、疾患／状態の発生、発症、もしくは進行、および／または疾患／状態の１つもしくは複数の症状の重症度と正に関連するか、あるいはＨＥＲ３を発現する細胞の数／比率の増大が、疾患／状態の、発生、発症、または進行の危険性因子である、疾患／状態でありうる。
【０４５７】
一部の実施形態では、本発明に従い処置／防止される疾患／状態は、ＨＥＲ３を発現する細胞の数／比率／活性の、例えば、疾患／状態の非存在下における、ＨＥＲ３を発現する細胞の数／比率／活性と比較した増大により特徴付けられる疾患／状態である。
【０４５８】
一部の実施形態では、処置／防止される疾患／状態は、がんである。
【０４５９】
がんは、任意の、望ましくない細胞増殖（または望ましくない細胞増殖により顕示される、任意の疾患）、新生物、または腫瘍でありうる。がんは、良性の場合もあり、悪性の場合もあり、原発性の場合もあり、続発性（転移性）の場合もある。新生物または腫瘍は、細胞の、任意の異常な増殖（ｇｒｏｗｔｈまたはｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）であることが可能であり、任意の組織内に位置しうる。がんは、例えば、副腎、副腎髄質、肛門、虫垂、膀胱、血液、骨、骨髄、脳、乳房、盲腸、中枢神経系（脳を含むか、または除外する）、小脳、子宮頸部、結腸、十二指腸、子宮内膜、上皮細胞（例えば、腎臓上皮）、胆嚢、食道、神経膠細胞、心臓、回腸、空腸、腎臓、涙腺、喉頭、肝臓、肺、リンパ、リンパ節、リンパ芽球、顎、縦隔、腸間膜、子宮筋層、鼻咽頭、網、口腔、卵巣、膵臓、耳下腺、末梢神経系、腹膜、胸膜、前立腺、唾液腺、Ｓ字結腸、皮膚、小腸、軟部組織、脾臓、胃、精巣、胸腺、甲状腺、舌、扁桃腺、気管、子宮、外陰、および／または白血球に由来する組織／細胞のがんでありうる。
【０４６０】
処置される腫瘍は、神経系腫瘍の場合もあり、非神経系腫瘍の場合もある。神経系腫瘍、例えば、神経膠腫、髄芽腫、髄膜腫、神経線維腫、上衣腫、シュワン細胞腫、神経線維肉腫、星状細胞腫、および希突起神経膠腫は、中枢神経系に由来する場合もあり、末梢神経系に由来する場合もある。非神経系がん／腫瘍は、他の任意の非神経組織に由来する場合があり、例は、黒色腫、中皮腫、リンパ腫、骨髄腫、白血病、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、ホジキンリンパ腫、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、肝がん、類表皮癌、前立腺癌、乳がん、肺がん、結腸がん、卵巣がん、膵がん、胸腺癌、ＮＳＣＬＣ、血液がん、および肉腫を含む。
【０４６１】
ＨＥＲ３、ならびにがんとのその関連、およびがんにおけるその役割については、例えば、それらのいずれもが、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる、Ｋａｒａｃｈａｌｉｏｕら、ＢｉｏＤｒｕｇｓ．（２０１７）、３１（１）：６３〜７３；およびＺｈａｎｇら、Ａｃｔａ  Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ｓｉｎｉｃａ（２０１６）、４８（１）：３９〜４８において総説されている。
【０４６２】
一部の実施形態では、がんは、ＨＥＲ３を発現する細胞を含むがん、充実性腫瘍、乳がん、乳癌、乳管癌、胃がん、胃癌、胃腺癌、結腸直腸がん、結腸直腸癌、結腸直腸腺癌、頭頸部がん、頭頸部扁平上皮がん（ＳＣＣＨＮ）、肺がん、肺腺癌、扁平上皮肺癌、卵巣がん、卵巣癌、漿液性卵巣腺癌、腎がん、腎細胞癌、腎明細胞癌、腎細胞腺癌、乳頭状腎細胞癌、膵がん、膵腺癌、膵管腺癌、子宮頸がん、子宮頸部扁平上皮がん、皮膚がん、黒色腫、食道がん、食道腺癌、肝がん、肝細胞癌、胆管癌、子宮がん、子宮体内膜癌、甲状腺がん、甲状腺癌、褐色細胞腫、傍神経節腫、膀胱がん、膀胱尿路上皮癌、前立腺がん、前立腺腺癌、肉腫、および胸腺腫から選択される。
【０４６３】
一部の実施形態では、本発明に従い処置されるがんは、ＨＥＲ３発現がん、胃がん（例えば、胃癌、胃腺癌、消化管腺癌）、頭頸部がん（例えば、頭頸部扁平上皮がん）、乳がん、卵巣がん（例えば、卵巣癌）、肺がん（例えば、ＮＳＣＬＣ、肺腺癌、扁平上皮肺細胞癌）、黒色腫、前立腺がん、口腔がん（例えば、口腔咽頭がん）、腎臓がん（例えば、腎細胞癌）、または結腸直腸がん（例えば、結腸直腸癌）、食道がん、膵がん、固形がん、および／もしくは液性がんから選択される。
【０４６４】
処置／防止は、がんの症状の発症／進行を遅延させる／防止すること、がんの症状の重症度を軽減すること、がんの細胞の生存期間／増殖／浸潤／転移を低減すること、がんの細胞の数を低減すること、および／または対象の生存期間を延長することのうちの１つまたは複数を目標としうる。
【０４６５】
一部の実施形態では、処置／防止されるがんは、ＥＧＦＲファミリーメンバー（例えば、ＨＥＲ３、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、またはＨＥＲ４）を発現する細胞、および／またはＥＧＦＲファミリーメンバーに対するリガンドを発現する細胞を含む。一部の実施形態では、処置／防止されるがんは、ＥＧＦＲファミリーメンバーについて陽性であるがんである。一部の実施形態では、がんは、ＥＧＦＲファミリーメンバー、および／またはＥＧＦＲファミリーメンバーに対するリガンドを過剰発現する。過剰発現は、同等の非がん性細胞／非腫瘍組織による発現のレベルを超える発現のレベルを検出することにより決定されうる。
【０４６６】
発現は、任意の適切な手段により決定されうる。発現は、遺伝子発現の場合もあり、タンパク質発現の場合もある。遺伝子発現は、例えば、定量的リアルタイムＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）を介する、ＨＥＲ３をコードするｍＲＮＡの検出により決定されうる。例えば、タンパク質の発現は、例えば、抗体ベースの方法、例えば、ウェスタンブロット、免疫組織化学、免疫細胞化学、フローサイトメトリー、またはＥＬＩＳＡにより決定されうる。
【０４６７】
一部の実施形態では、処置／防止されるがんは、ＨＥＲ３を発現する細胞を含む。一部の実施形態では、処置／防止されるがんは、ＨＥＲ３について陽性であるがんである。一部の実施形態では、がんは、ＨＥＲ３を過剰発現する。ＨＥＲ３の過剰発現は、同等の非がん性細胞／非腫瘍組織による発現のレベルを超える、ＨＥＲ３の発現レベルを検出することにより決定されうる。
【０４６８】
一部の実施形態では、患者は、例えば、対象から得られた試料中の、ＨＥＲ３を発現するか、またはＨＥＲ３を過剰発現するがんの検出に基づき、本明細書で記載される処置に選択されうる。
【０４６９】
一部の実施形態では、処置／防止されるがんは、ＨＥＲ３に対するリガンド（例えば、ＮＲＧ１および／またはＮＲＧ２）を発現する細胞を含む。一部の実施形態では、処置／防止されるがんは、同等の非がん性細胞／非腫瘍組織による発現のレベルを超える発現レベルのＮＲＧ１および／またはＮＲＧ２の発現レベルを発現する細胞を含む。
【０４７０】
本発明の物品の投与は、好ましくは、「治療有効」量または「予防有効」量であり、これは、対象に対して、治療または予防利益を示すのに十分な量である。投与される実際の量、および速度、ならびに投与の時間経過は、疾患／状態の性質および重症度、ならびに投与される、特定の物品に依存するであろう。処置の処方、例えば、投与量についての決定などは、一般的な従事者および他の医師の責任の範囲内にあり、典型的に、処置される疾患／障害、個々の対象の状態、送達部位、投与法、および従事者に公知の他の因子を考慮に入れる。上記で言及された技法およびプロトコールの例は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、２０版、２０００、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ刊において見出されうる。
【０４７１】
投与は、処置される状態に応じて、単独でなされる場合もあり、他の処置と同時に、または逐次的に、組み合わせてなされる場合もある。本明細書で記載される抗原結合性分子または組成物と、治療剤とは、同時に投与される場合もあり、逐次的に投与される場合もある。
【０４７２】
一部の実施形態では、方法は、例えば、がんの処置／防止のための、さらなる治療的または予防的介入を含む。一部の実施形態では、治療的または予防的介入は、化学療法、免疫療法、放射線治療、手術、ワクチン接種、および／またはホルモン療法から選択される。一部の実施形態では、治療的または予防的介入は、白血球除去療法を含む。一部の実施形態では、治療的または予防的介入は、幹細胞移植を含む。
【０４７３】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＥＧＦＲファミリーメンバーにより媒介されるシグナル伝達を阻害することが可能な薬剤と組み合わせて投与される。
【０４７４】
したがって、本発明は、本発明に従う物品（例えば、本発明に従う抗原結合性分子）と、ＥＧＦＲファミリーメンバー（例えば、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、またはＨＥＲ４）により媒介されるシグナル伝達を阻害することが可能な、別の薬剤とを含む組成物を提供する。また、本明細書で記載される疾患／状態の、医学的な処置および予防の方法における、このような組成物の使用も提供される。
【０４７５】
また、本明細書で記載される疾患／状態を処置／防止するための方法であって、本発明に従う物品（例えば、本発明に従う抗原結合性分子）と、ＥＧＦＲファミリーメンバーにより媒介されるシグナル伝達を阻害することが可能な、別の薬剤とを投与するステップを含む方法も提供される。
【０４７６】
当技術分野では、ＥＧＦＲファミリーメンバーにより媒介されるシグナル伝達を阻害することが可能な薬剤が公知であり、例えば、低分子阻害剤（例えば、チロシンキナーゼ阻害剤）、モノクローナル抗体（およびこの抗原結合性断片）、ペプチド／ポリペプチド阻害剤（例えば、デコイリガンド／受容体またはペプチドアプタマー）、および核酸（例えば、アンチセンス核酸、スプライススイッチング核酸、または核酸アプタマー）を含む。ＥＧＦＲファミリーメンバーにより媒介されるシグナル伝達の阻害剤は、ＥＧＦＲファミリーメンバーである、相互作用パートナーに対する直接的な効果を介して、シグナル伝達を阻害し、したがって、かつ／または、ＥＧＦＲファミリーメンバーにより媒介されるシグナル伝達に関与する下流の因子も阻害する薬剤を含む。
【０４７７】
一部の実施形態では、ＥＧＦＲファミリーメンバーにより媒介されるシグナル伝達のアンタゴニストは、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＨＥＲ４、およびＨＥＲ３のうちの１つまたは複数により媒介されるシグナル伝達を阻害する。ＥＧＦＲファミリーメンバーにより媒介されるシグナル伝達の阻害剤については、例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Ｙａｍａｏｋａら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｃｉ．（２０１８）、１９、３４９１において記載されている。一部の実施形態では、アンタゴニストは、ｐａｎ‐ＥｒｂＢ阻害剤である。一部の実施形態では、アンタゴニストは、ＥＧＦＲにより媒介されるシグナル伝達の阻害剤（例えば、セツキシマブ、パニツムマブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、ラパチニブ、アファチニブ、ブリガチニブ、イコチニブ、オシメルチニブ、ザルツムマブ、バンデタニブ、ネシツルムマブ、ニモツズマブ、ダコミチニブ、ドゥリゴツズマブ、またはマツズマブ）である。一部の実施形態では、アンタゴニストは、ＨＥＲ２により媒介されるシグナル伝達の阻害剤（例えば、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ラパチニブ、ネラチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、ＭＭ−１１１、ＭＣＬＡ−１２８、またはマルゲツキシマブ）である。一部の実施形態では、アンタゴニストは、ＨＥＲ３により媒介されるシグナル伝達の阻害剤（例えば、セリバンツマブ、ルムレツズマブ、エルゲムツマブ、ＫＴＮ３３７９、ＡＶ−２０３、ＧＳＫ２８４９３３０、ＲＥＧＮ１４００、ＭＰ−ＲＭ−１、ＥＶ２０、ドゥリゴツズマブ、ＭＭ−１１１、イストラスツマブ、ＭＣＬＡ−１２８、パトリツマブ、ＥＺＮ−３９２０、ＲＢ２００、またはＵ３−１４０２）である。一部の実施形態では、アンタゴニストは、ＨＥＲ４により媒介されるシグナル伝達の阻害剤（例えば、ラパチニブ、イブルチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、またはネラチニブ）である。
【０４７８】
一部の実施形態では、ＥＧＦＲファミリーメンバーにより媒介されるシグナル伝達のアンタゴニストは、ＥＧＦＲファミリーメンバーによるシグナル伝達の、下流のエフェクターを阻害する。ＥＧＦＲファミリーメンバーによるシグナル伝達の、下流のエフェクターは、例えば、ＰＩ３Ｋ、ＡＫＴ、ＫＲＡＳ、ＢＲＡＦ、ＭＥＫ／ＥＲＫ、およびｍＴＯＲを含む。一部の実施形態では、ＥＧＦＲファミリーメンバーにより媒介されるシグナル伝達のアンタゴニストは、ＭＡＰＫ／ＥＲＫ経路の阻害剤である。一部の実施形態では、ＥＧＦＲファミリーメンバーにより媒介されるシグナル伝達のアンタゴニストは、ＰＩ３Ｋ／ＡＴＫ／ｍＴＯＲ経路の阻害剤である。一部の実施形態では、アンタゴニストは、ＰＩ３Ｋ阻害剤（例えば、ピクチリシブ、ブパリシブ、イデラリシブ、コパンリシブ、またはドゥベリシブ）である。一部の実施形態では、アンタゴニストは、ＡＫＴ阻害剤（例えば、ＭＫ−２２０６、ＡＺＤ５３６３、イパタセルチブ、ＶＱＤ−００２、ペリホシン、またはミルテホシン）である。一部の実施形態では、アンタゴニストは、ＢＲＡＦ阻害剤（例えば、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、ＳＢ５９０８８５、ＸＬ２８１、ＲＡＦ２６５、エンコラフェニブ、ＧＤＣ−０８７９、ＰＬＸ−４７２０、ソラフェニブ、またはＬＧＸ８１８）である。一部の実施形態では、アンタゴニストは、ＭＥＫ／ＥＲＫ阻害剤（例えば、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、セルメチニブ、ＰＤ−３２５９０１、ＣＩ−１０４０、ＰＤ０３５９０１、またはＴＡＫ−７３３）である。一部の実施形態では、アンタゴニストは、ｍＴＯＲ阻害剤（例えば、ラパマイシン、デフォロリムス、テムシロリムス、エベロリムス、リダホロリムス、またはサパニセルチブ）である。
【０４７９】
一部の実施形態では、本発明の態様（単剤療法または組合せ療法を含む）に従い処置されるがんは、ＥＧＦＲファミリーメンバー（例えば、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＨＥＲ４、および／またはＨＥＲ３）により媒介されるシグナル伝達のアンタゴニスト、例えば、前出の３つの段落において記載されたアンタゴニストによる処置に対して耐性であるがんである。一部の実施形態では、処置される対象は、ＥＧＦＲファミリーメンバーにより媒介されるシグナル伝達のアンタゴニストによる処置に対して耐性であるがんを有する。一部の実施形態では、処置される対象は、ＥＧＦＲファミリーメンバーにより媒介されるシグナル伝達のアンタゴニストによる処置に対して耐性を発生させたがんを有する。一部の実施形態では、処置される対象は、かつては、ＥＧＦＲファミリーメンバーにより媒介されるシグナル伝達のアンタゴニストによる処置に応答したが、現在は、アンタゴニストによる処置に対して耐性であるがんを有する。一部の実施形態では、処置される対象は、ＥＧＦＲファミリーメンバーにより媒介されるシグナル伝達のアンタゴニストによる処置の後で、再発および／または進行したがんを有する。一部の実施形態では、処置される対象は、初期には、ＥＧＦＲファミリーメンバーにより媒介されるシグナル伝達のアンタゴニストによる処置に応答したが、その後、前記処置により進行したがんを有する。
【０４８０】
当業者は、前出の段落に従うがんおよび対象を同定することが、たやすく可能である。このようながんおよび対象は、例えば、がん（および／またはこの相関因子）の発症／進行の、時間経過にわたる、例えば、ＥＧＦＲファミリーメンバーにより媒介されるシグナル伝達のアンタゴニストによる処置の経過中におけるモニタリングによって同定されうる。一部の実施形態では、このような対象／がんの同定は、例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける、試料（例えば、生検）の解析を含みうる。一部の実施形態では、がんは、アンタゴニストによる処置に対する、感受性の低減および／または耐性と関連する突然変異を有する細胞を含むことが決定されうる。一部の実施形態では、がんは、ＥＧＦＲファミリーメンバーの発現を上方調節した細胞を含むことが決定されうる。
【０４８１】
特定の実施形態では、処置されるがんは、ＥＧＦＲおよび／またはＨＥＲ２により媒介されるシグナル伝達のアンタゴニストによる処置に対して耐性であるがんである。一部の実施形態では、処置される対象は、ＥＧＦＲおよび／またはＨＥＲ２により媒介されるシグナル伝達のアンタゴニストによる処置に対して耐性であるがんを有する。一部の実施形態では、処置される対象は、ＥＧＦＲおよび／またはＨＥＲ２により媒介されるシグナル伝達のアンタゴニストによる処置に対して耐性を発生させたがんを有する。一部の実施形態では、処置される対象は、かつては、ＥＧＦＲおよび／またはＨＥＲ２により媒介されるシグナル伝達のアンタゴニストによる処置に応答したが、現在は、アンタゴニストによる処置に対して耐性であるがんを有する。一部の実施形態では、処置される対象は、ＥＧＦＲおよび／またはＨＥＲ２により媒介されるシグナル伝達のアンタゴニストによる処置の後で、再発および／または進行したがんを有する。一部の実施形態では、処置される対象は、初期には、ＥＧＦＲおよび／またはＨＥＲ２により媒介されるシグナル伝達のアンタゴニストによる処置に応答したが、その後、前記処置により進行したがんを有する。
【０４８２】
特定の実施形態では、処置されるがんは、ＢＲＡＦの阻害剤による処置に対する耐性を付与する突然変異を含む。一部の実施形態では、突然変異は、ＢＲＡＦのＶ６００における突然変異である。一部の実施形態では、突然変異は、ＢＲＡＦのＶ６００ＥまたはＶ６００Ｋである。
【０４８３】
特定の実施形態では、処置されるがんは、ＢＲＡＦの阻害剤による処置に対する耐性を付与する突然変異（例えば、ＢＲＡＦのＶ６００における突然変異）を含み、処置は、ベムラフェニブまたはダラフェニブの投与を含む。
【０４８４】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、免疫チェックポイント分子により媒介されるシグナル伝達を阻害することが可能な薬剤と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、免疫チェックポイント分子は、例えば、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ−３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ−３、ＴＩＧＩＴ、またはＢＴＬＡである。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、共刺激受容体により媒介されるシグナル伝達を促進することが可能な薬剤と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、共刺激受容体は、例えば、ＣＤ２８、ＣＤ８０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ８６、ＯＸ４０、４−１ＢＢ、ＣＤ２７、またはＩＣＯＳである。
【０４８５】
したがって、本発明は、本発明に従う物品（例えば、本発明に従う抗原結合性分子）と、免疫チェックポイント分子により媒介されるシグナル伝達を阻害することが可能な薬剤とを含む組成物を提供する。また、本発明の物品と、共刺激受容体により媒介されるシグナル伝達を促進することが可能な薬剤とを含む組成物も提供される。また、本明細書で記載される疾患／状態の、医学的な処置および予防の方法における、このような組成物の使用も提供される。
【０４８６】
また、本明細書で記載される疾患／状態を処置／防止するための方法であって、本発明に従う物品（例えば、本発明に従う抗原結合性分子）と、免疫チェックポイント分子により媒介されるシグナル伝達を阻害することが可能な薬剤とを投与するステップを含む方法も提供される。また、本明細書で記載される疾患／状態を処置／防止するための方法であって、本発明に従う物品（例えば、本発明に従う抗原結合性分子）と、共刺激受容体により媒介されるシグナル伝達を促進することが可能な薬剤とを投与するステップを含む方法も提供される。
【０４８７】
当技術分野では、免疫チェックポイント分子により媒介されるシグナル伝達を阻害することが可能な薬剤が公知であり、例えば、免疫チェックポイント分子、またはそれらに対するリガンドに結合し、免疫チェックポイント分子により媒介されるシグナル伝達を阻害することが可能な抗体を含む。免疫チェックポイント分子により媒介されるシグナル伝達を阻害することが可能な、他の薬剤は、免疫チェックポイント分子、または免疫チェックポイント分子に対するリガンドの、遺伝子／タンパク質の発現を低減すること（例えば、免疫チェックポイント分子／リガンドをコードする遺伝子（複数可）の転写を阻害すること、免疫チェックポイント分子／リガンドをコードするＲＮＡの転写後プロセシングを阻害すること、免疫チェックポイント分子／リガンドをコードするＲＮＡの安定性を低減すること、免疫チェックポイント分子／リガンドをコードするＲＮＡの分解を促進すること、免疫チェックポイント分子／リガンドの翻訳後プロセシングを阻害すること、免疫チェックポイント分子／リガンドの安定性を低減すること、または免疫チェックポイント分子／リガンドの分解を促進することを介して）が可能な薬剤、および低分子阻害剤を含む。
【０４８８】
当技術分野では、共刺激受容体により媒介されるシグナル伝達を促進することが可能な薬剤が公知であり、例えば、共刺激受容体に結合し、共刺激受容体により媒介されるシグナル伝達を誘発するか、または増大させることが可能なアゴニスト抗体を含む。共刺激受容体により媒介されるシグナル伝達を促進することが可能な、他の薬剤は、共刺激受容体、または共刺激受容体に対するリガンドの、遺伝子／タンパク質の発現を増大させる（例えば、共刺激受容体／リガンドをコードする遺伝子（複数可）の転写を促進すること、共刺激受容体／リガンドをコードするＲＮＡの転写後プロセシングを促進すること、共刺激受容体／リガンドをコードするＲＮＡの安定性を増大させること、共刺激受容体／リガンドをコードするＲＮＡの分解を阻害すること、共刺激受容体／リガンドの翻訳後プロセシングを促進すること、共刺激受容体／リガンドの安定性を増大させること、または共刺激受容体／リガンドの分解を阻害することを介して）ことが可能な薬剤、および低分子アゴニストを含む。
【０４８９】
特定の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、ＰＤ−１により媒介されるシグナル伝達を阻害することが可能な薬剤と組み合わせて投与される。ＰＤ−１により媒介されるシグナル伝達を阻害することが可能な薬剤は、ＰＤ−１ターゲティング剤またはＰＤ−Ｌ１ターゲティング剤でありうる。ＰＤ−１により媒介されるシグナル伝達を阻害することが可能な薬剤は、例えば、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１に結合し、ＰＤ−１媒介性シグナル伝達を阻害することが可能な抗体でありうる。
【０４９０】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、ＣＴＬＡ−４により媒介されるシグナル伝達を阻害することが可能な薬剤と組み合わせて投与される。ＣＴＬＡ−４により媒介されるシグナル伝達を阻害することが可能な薬剤は、ＣＴＬＡ−４ターゲティング剤、またはＣＤ８０もしくはＣＤ８６など、ＣＴＬＡ−４に対するリガンドに対してターゲティングされた薬剤でありうる。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ−４により媒介されるシグナル伝達を阻害することが可能な薬剤は、例えば、ＣＴＬＡ−４、ＣＤ８０またはＣＤ８６に結合し、ＣＴＬＡ−４媒介性シグナル伝達を阻害することが可能な抗体でありうる。
【０４９１】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、ＬＡＧ−３により媒介されるシグナル伝達を阻害することが可能な薬剤と組み合わせて投与される。ＬＡＧ−３により媒介されるシグナル伝達を阻害することが可能な薬剤は、ＬＡＧ−３ターゲティング剤、またはＭＨＣクラスＩＩなど、ＬＡＧ−３に対するリガンドに対してターゲティングされた薬剤でありうる。一部の実施形態では、ＬＡＧ−３により媒介されるシグナル伝達を阻害することが可能な薬剤は、例えば、ＬＡＧ−３またはＭＨＣクラスＩＩに結合し、ＬＡＧ−３媒介性シグナル伝達を阻害することが可能な抗体でありうる。
【０４９２】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、ＶＩＳＴＡにより媒介されるシグナル伝達を阻害することが可能な薬剤と組み合わせて投与される。ＶＩＳＴＡにより媒介されるシグナル伝達を阻害することが可能な薬剤は、ＶＩＳＴＡターゲティング剤、またはＶＳＩＧ−３もしくはＶＳＩＧ−８など、ＶＩＳＴＡに対するリガンドに対してターゲティングされた薬剤でありうる。一部の実施形態では、ＶＩＳＴＡにより媒介されるシグナル伝達を阻害することが可能な薬剤は、例えば、ＶＩＳＴＡ、ＶＳＩＧ−３、またはＶＳＩＧ−８に結合し、ＶＩＳＴＡ媒介性シグナル伝達を阻害することが可能な抗体でありうる。
【０４９３】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、ＴＩＭ−３により媒介されるシグナル伝達を阻害することが可能な薬剤と組み合わせて投与される。ＴＩＭ−３により媒介されるシグナル伝達を阻害することが可能な薬剤は、ＴＩＭ−３ターゲティング剤、またはガレクチン９など、ＴＩＭ−３に対するリガンドに対してターゲティングされた薬剤でありうる。一部の実施形態では、ＴＩＭ−３により媒介されるシグナル伝達を阻害することが可能な薬剤は、例えば、ＴＩＭ−３またはガレクチン９に結合し、ＴＩＭ−３媒介性シグナル伝達を阻害することが可能な抗体でありうる。
【０４９４】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、ＴＩＧＩＴにより媒介されるシグナル伝達を阻害することが可能な薬剤と組み合わせて投与される。ＴＩＧＩＴにより媒介されるシグナル伝達を阻害することが可能な薬剤は、ＴＩＧＩＴターゲティング剤、またはＣＤ１１３、ＣＤ１１２、もしくはＣＤ１５５など、ＴＩＧＩＴに対するリガンドに対してターゲティングされた薬剤でありうる。一部の実施形態では、ＴＩＧＩＴにより媒介されるシグナル伝達を阻害することが可能な薬剤は、例えば、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１３、ＣＤ１１２、またはＣＤ１５５に結合し、ＴＩＧＩＴ媒介性シグナル伝達を阻害することが可能な抗体でありうる。
【０４９５】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、ＢＴＬＡにより媒介されるシグナル伝達を阻害することが可能な薬剤と組み合わせて投与される。ＢＴＬＡにより媒介されるシグナル伝達を阻害することが可能な薬剤は、ＢＴＬＡターゲティング剤、またはＨＶＥＭなど、ＢＴＬＡに対するリガンドに対してターゲティングされた薬剤でありうる。一部の実施形態では、ＢＴＬＡにより媒介されるシグナル伝達を阻害することが可能な薬剤は、例えば、ＢＴＬＡまたはＨＶＥＭに結合し、ＢＴＬＡ媒介性シグナル伝達を阻害することが可能な抗体でありうる。
【０４９６】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子と、免疫チェックポイント分子により媒介されるシグナル伝達を阻害することが可能な薬剤（例えば、ＰＤ−１）との組合せを利用する方法は、いずれかの薬剤が、単剤療法として使用される場合に観察される効果と比較した、処置効果の改善をもたらす。一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子と、免疫チェックポイント分子により媒介されるシグナル伝達を阻害することが可能な薬剤（例えば、ＰＤ−１）との組合せは、相乗的（すなわち、相加効果を超える）処置効果をもたらす。
【０４９７】
同時的投与とは、抗原結合性分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸（または複数の核酸）、発現ベクター（または複数の発現ベクター）、細胞、または組成物と、治療剤との、併せた投与、例えば、両方の薬剤を含有する医薬組成物（組合せ調製物）としての投与、または互いの直後における、任意選択で、同じ投与経路を介する、例えば、同じ動脈、静脈、または他の血管への投与を指す。逐次的投与とは、抗原結合性分子／組成物または治療剤のうちの１つの投与に後続する、所与の時間間隔の後における、他の薬剤の、別個の投与を指す。２つの薬剤が、同じ経路により投与されることは、要求されないが、一部の実施形態では、これが該当する。時間間隔は、任意の時間間隔でありうる。
【０４９８】
化学療法および放射線療法は、それぞれ、薬物またはイオン化放射線（例えば、Ｘ線またはγ線を使用する放射線療法）によるがんの処置を指す。薬物は、化学的実体、例えば、低分子医薬の、抗生剤、ＤＮＡ挿入剤、タンパク質阻害剤（例えば、キナーゼ阻害剤）、または生物学的薬剤、例えば、抗体、抗体断片、アプタマー、核酸（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ）、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質でありうる。薬物は、医薬組成物または医薬として製剤化されうる。製剤は、１つまたは複数の薬物（例えば、１つまたは複数の活性の薬剤）を、１つまたは複数の薬学的に許容される希釈剤、賦形剤、または担体と併せて含みうる。
【０４９９】
処置は、１つを超える薬物の投与を伴いうる。薬物は、処置される状態に応じて、単独で投与される場合もあり、他の処置と、同時に、または逐次的に組み合わせて投与される場合もある。例えば、化学療法は、それらのうちの１つまたは複数が、がんを処置することを意図されうる、２つ薬物の投与を伴う併用療法でありうる。
【０５００】
化学療法は、１つまたは複数の投与経路、例えば、非経口、静脈内注射、経口、皮下、皮内、または腫瘍内の投与経路により投与されうる。
【０５０１】
化学療法は、処置レジメに従い投与されうる。処置レジメは、医師または医療従事者により作成されうる、化学療法投与についての、所定の時程表、計画、スキーム、またはスケジュールであることが可能であり、処置を要求する患者に適するように、微調整されうる。処置レジメは、患者へと投与される化学療法の種類；各薬物の用量または放射線の線量；投与の間の時間間隔；各処置の長さ；存在する場合、任意の休薬日の数および性質などのうちの１つまたは複数を指し示しうる。併用療法では、各薬物が、どのようにして投与されるべきであるのかを指し示す、単一の処置レジメが提示されうる。
【０５０２】
化学療法薬は、アベマシクリブ、アビラテロン酢酸塩、アビトレキサート（メトトレキサート）、Ａｂｒａｘａｎｅ（パクリタキセルのアルブミン安定化ナノ粒子製剤）、ＡＢＶＤ、ＡＢＶＥ、ＡＢＶＥ−ＰＣ、ＡＣ、アカラブルチニブ、ＡＣ−Ｔ、Ａｄｃｅｔｒｉｓ（ブレンツキシマブ・ベドチン）、ＡＤＥ、Ａｄｏ−トラスツズマブ・エムタンシン、アドリアマイシン（ドキソルビシン塩酸塩）、アファチニブジマレイン酸塩、アフィニトール（エベロリムス）、Ａｋｙｎｚｅｏ（ネツピタントおよびパロノセトロン塩酸塩）、Ａｌｄａｒａ（イミキモド）、アルデスロイキン、Ａｌｅｃｅｎｓａ（アレクチニブ）、アレクチニブ、アレムツズマブ、Ａｌｉｍｔａ（ペメトレキセド二ナトリウム）、Ａｌｉｑｏｐａ（コパンリシブ塩酸塩）、Ａｌｋｅｒａｎ注射剤（メルファラン塩酸塩）、Ａｌｋｅｒａｎ錠（メルファラン）、Ａｌｏｘｉ（パロノセトロン塩酸塩）、Ａｌｕｎｂｒｉｇ（ブリガチニブ）、Ａｍｂｏｃｈｌｏｒｉｎ（クロランブシル）、Ａｍｂｏｃｌｏｒｉｎ（クロランブシル）、アミホスチン、アミノレブリン酸、アナストロゾール、アプレピタント、Ａｒｅｄｉａ（パミドロネート二ナトリウム）、Ａｒｉｍｉｄｅｘ（アナストロゾール）、Ａｒｏｍａｓｉｎ（エキセメスタン）、Ａｒｒａｎｏｎ（ネララビン）、三酸化ヒ素、Ａｒｚｅｒｒａ（オファツムマブ）、Ｅｒｗｉｎｉａ  ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ由来のアスパラギナーゼ、アテゾリズマブ、Ａｖａｓｔｉｎ（ベバシズマブ）、アベルマブ、アキシカブタゲン・シロロイセル、アキシチニブ、アザシチジン、Ｂａｖｅｎｃｉｏ（アベルマブ）、ＢＥＡＣＯＰＰ、Ｂｅｃｅｎｕｍ（カルムスチン）、Ｂｅｌｅｏｄａｑ（ベリノスタット）、ベリノスタット、ベンダムスチン塩酸塩、ＢＥＰ、Ｂｅｓｐｏｎｓａ（イノツズマブ・オゾガマイシン）、ベバシズマブ、ベキサロテン、Ｂｅｘｘａｒ（トシツモマブおよびヨウ素Ｉ−１３１トシツモマブ）、ビカルタミド、ＢｉＣＮＵ（カルムスチン）、ブレオマイシン、ブリナツモマブ、Ｂｌｉｎｃｙｔｏ（ブリナツモマブ）、ボルテゾミブ、Ｂｏｓｕｌｉｆ（ボスチニブ）、ボスチニブ、ブレンツキシマブ・ベドチン、ブリガチニブ、ＢｕＭｅｌ、ブスルファン、Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（ブスルファン）、カバジタキセル、Ｃａｂｏｍｅｔｙｘ（カボザンチニブ−Ｓ−リンゴ酸塩）、カボザンチニブ−Ｓ−リンゴ酸塩、ＣＡＦ、Ｃａｌｑｕｅｎｃｅ（アカラブルチニブ）、Ｃａｍｐａｔｈ（アレムツズマブ）、Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（イリノテカン塩酸塩）、カペシタビン、ＣＡＰＯＸ、Ｃａｒａｃ（外用フルオロウラシル）、カルボプラチン、カルボプラチン−ＴＡＸＯＬ、カルフィルゾミブ、Ｃａｒｍｕｂｒｉｓ（カルムスチン）、カルムスチン、カルムスチンインプラント剤、Ｃａｓｏｄｅｘ（ビカルタミド）、ＣＥＭ、Ｃｅｒｉｔｉｎｉｂ、Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（ダウノルビシン塩酸塩）、Ｃｅｒｖａｒｉｘ（組換えＨＰＶ二価ワクチン）、セツキシマブ、ＣＥＶ、クロランブシル、クロランブシル−ＰＲＥＤＮＩＳＯＮＥ、ＣＨＯＰ、シスプラチン、クラドリビン、Ｃｌａｆｅｎ（シクロホスファミド）、クロファラビン、Ｃｌｏｆａｒｅｘ（クロファラビン）、Ｃｌｏｌａｒ（クロファラビン）、���ＭＦ、コビメチニブ、Ｃｏｍｅｔｒｉｑ（カボザンチニブ−Ｓ−リンゴ酸塩）、コパンリシブ塩酸塩、ＣＯＰＤＡＣ、ＣＯＰＰ、ＣＯＰＰ−ＡＢＶ、Ｃｏｓｍｅｇｅｎ（ダクチノマイシン）、Ｃｏｔｅｌｌｉｃ（コビメチニブ）、クリゾチニブ、ＣＶＰ、シクロホスファミド、Ｃｙｆｏｓ（イホスファミド）、Ｃｙｒａｍｚａ（ラムシルマブ）、シタラビン、シタラビンリポソーム剤、Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ（シタラビン）、Ｃｙｔｏｘａｎ（シクロホスファミド）、ダラフェニブ、ダカルバジン、Ｄａｃｏｇｅｎ（デシタビン）、ダクチノマイシン、ダラツムマブ、Ｄａｒｚａｌｅｘ（ダラツムマブ）、ダサチニブ、ダウノルビシン塩酸塩、ダウノルビシン塩酸塩およびシタラビンリポソーム剤、デシタビン、デフィブロチドナトリウム、Ｄｅｆｉｔｅｌｉｏ（デフィブロチドナトリウム）、デガレリクス、デニロイキンディフチトクス、デノスマブ、ＤｅｐｏＣｙｔ（シタラビンリポソーム剤）、デキサメタゾン、デキスラゾキサン塩酸塩、ジヌツキシマブ、ドセタキセル、Ｄｏｘｉｌ（ドキソルビシン塩酸塩リポソーム剤）、ドキソルビシン塩酸塩、ドキソルビシン塩酸塩リポソーム剤、Ｄｏｘ−ＳＬ（ドキソルビシン塩酸塩リポソーム剤）、ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（ダカルバジン）、デュルバルマブ、Ｅｆｕｄｅｘ（外用フルオロウラシル）、Ｅｌｉｔｅｋ（ラスブリカーゼ）、Ｅｌｌｅｎｃｅ（エピルビシン塩酸塩）、エロツズマブ、Ｅｌｏｘａｔｉｎ（オキサリプラチン）、エルトロンボパグオラミン、Ｅｍｅｎｄ（アプレピタント）、Ｅｍｐｌｉｃｉｔｉ（エロツズマブ）、エナシデニブメシル酸塩、エンザルタミド、エピルビシン塩酸塩、ＥＰＯＣＨ、Ｅｒｂｉｔｕｘ（セツキシマブ）、エリブリンメシル酸塩、Ｅｒｉｖｅｄｇｅ（ビスモデジブ）、エルロチニブ塩酸塩、Ｅｒｗｉｎａｚｅ（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ由来のアスパラギナーゼ）、Ｅｔｈｙｏｌ（アミホスチン）、Ｅｔｏｐｏｐｈｏｓ（エトポシドリン酸塩）、エトポシド、エトポシドリン酸塩、Ｅｖａｃｅｔ（ドキソルビシン塩酸塩リポソーム剤）、エベロリムス、Ｅｖｉｓｔａ（ラロキシフェン塩酸塩）、Ｅｖｏｍｅｌａ（メルファラン塩酸塩）、エキセメスタン、５−ＦＵ（フルオロウラシル注射）、５−ＦＵ（外用フルオロウラシル）、Ｆａｒｅｓｔｏｎ（トレミフェン）、Ｆａｒｙｄａｋ（パノビノスタット）、Ｆａｓｌｏｄｅｘ（フルベストラント）、ＦＥＣ、Ｆｅｍａｒａ（レトロゾール）、フィルグラスチム、Ｆｌｕｄａｒａ（フルダラビンリン酸塩）、フルダラビンリン酸塩、Ｆｌｕｏｒｏｐｌｅｘ（外用フルオロウラシル）、フルオロウラシル注射剤、外用フルオロウラシル、フルタミド、Ｆｏｌｅｘ（メトトレキサート）、Ｆｏｌｅｘ  ＰＦＳ（メトトレキサート）、ＦＯＬＦＩＲＩ、ＦＯＬＦＩＲＩ−ベバシズマブ、ＦＯＬＦＩＲＩ−セツキシマブ、ＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸ、ＦＯＬＦＯＸ、Ｆｏｌｏｔｙｎ（プララトレキサート）、ＦＵ−ＬＶ、フルベストラント、Ｇａｒｄａｓｉｌ（組換えＨＰＶ四価ワクチン）、Ｇａｒｄａｓｉｌ９（組換えＨＰＶ九価ワクチン）、Ｇａｚｙｖａ（オビヌツズマブ）、ゲフィチニブ、ゲムシタビン塩酸塩、ゲムシタビン−シスプラチン、ゲムシタビン−オキサリプラチン、ゲムツズマブオゾガマイシン、Ｇｅｍｚａｒ（ゲムシタビン塩酸塩）、Ｇｉｌｏｔｒｉｆ（アファチニブジマレイン酸塩）、Ｇｌｅｅｖｅｃ（イマチニブメシル酸塩）、Ｇｌｉａｄｅｌ（カルムスチンインプラント剤）、Ｇｌｉａｄｅｌウェハー剤（カルムスチンインプラント剤）、グルカルピダーゼ、ゴセレリン酢酸塩、Ｈａｌａｖｅｎ（エリブリンメシル酸塩）、Ｈｅｍａｎｇｅｏｌ（プロプラノロール塩酸塩）、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（トラスツズマブ）、ＨＰＶ二価ワクチン、組換えＨＰＶ九価ワクチン、組換えＨＰＶ四価ワクチン、組換えＨｙｃａｍｔｉｎ（トポテカン塩酸塩）、Ｈｙｄｒｅａ（ヒドロキシウレア）、ヒドロキシウレア、Ｈｙｐｅｒ−ＣＶＡＤ、Ｉｂｒａｎｃｅ（パルボシクリブ）、イブリツモマブチウキセタン、Ｉｂｒｕｔｉｎｉｂ、ＩＣＥ、Ｉｃｌｕｓｉｇ（ポナチニブ塩酸塩）、Ｉｄａｍｙｃｉｎ（イダルビシン塩酸塩）、イダルビシン塩酸塩、イデラリシブ、Ｉｄｈｉｆａ（エナシデニブメシル酸塩）、Ｉｆｅｘ（イホスファミド）、イホスファミド、Ｉｆｏｓｆａｍｉｄｕｍ（イホスファミド）、ＩＬ−２（アルデスロイキン）、イマチニブメシル酸塩、Ｉｍｂｒｕｖｉｃａ（イブルチニブ）、Ｉｍｆｉｎｚｉ（デュルバルマブ）、イミキモド、Ｉｍｌｙｇｉｃ（タリモジェン・ラヘルパレプベク）、Ｉｎｌｙｔａ（アキシチニブ）、イノツズマブ・オゾガマイシン、インターフェロンアルファ−２ｂ、組換え、インターロイキン２（アルデスロイキン）、Ｉｎｔｒｏｎ  Ａ（組換えインターフェロンアルファ−２ｂ）、ヨウ素Ｉ−１３１トシツモマブおよびトシツモマブ、イピリムマブ、Ｉｒｅｓｓａ（ゲフィチニブ）、イリノテカン塩酸塩、イリノテカン塩酸塩リポソーム剤、Ｉｓｔｏｄａｘ（ロミデプシン）、イキサベピロン、イキサゾミブクエン酸塩、Ｉｘｅｍｐｒａ（イキサベピロン）、Ｊａｋａｆｉ（ルキソリチニブリン酸塩）、ＪＥＢ、Ｊｅｖｔａｎａ（カバジタキセル）、Ｋａｄｃｙｌａ（Ａｄｏ−トラスツズマブ・エムタンシン）、Ｋｅｏｘｉｆｅｎｅ（ラロキシフェン塩酸塩）、Ｋｅｐｉｖａｎｃｅ（パリフェルミン）、Ｋｅｙｔｒｕｄａ（ペムブロリズマブ）、Ｋｉｓｑａｌｉ（リボシクリブ）、Ｋｙｍｒｉａｈ（チサゲンレクロイセル）、Ｋｙｐｒｏｌｉｓ（カルフィルゾミブ）、ランレオチド酢酸塩、ラパチニブジトシル酸塩、Ｌａｒｔｒｕｖｏ（オララツマブ）、レナリドミド、レンバチニブメシル酸塩、Ｌｅｎｖｉｍａ（レンバチニブメシル酸塩）、レトロゾール、ロイコボリンカルシウム、Ｌｅｕｋｅｒａｎ（クロランブシル）、ロイプロリド酢酸塩、Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（クラドリビン）、Ｌｅｖｕｌａｎ（アミノレブリン酸）、Ｌｉｎｆｏｌｉｚｉｎ（クロランブシル）、ＬｉｐｏＤｏｘ（ドキソルビシン塩酸塩リポソーム剤）、ロムスチン、Ｌｏｎｓｕｒｆ（トリフルリジンおよびチピラシル塩酸塩）、Ｌｕｐｒｏｎ（ロイプロリド酢酸塩）、Ｌｕｐｒｏｎデポ剤（ロイプロリド酢酸塩）、Ｌｕｐｒｏｎ小児用デポ剤（ロイプロリド酢酸塩）、Ｌｙｎｐａｒｚａ（オラパリブ）、Ｍａｒｑｉｂｏ（ビンクリスチン硫酸塩リポソーム剤）、Ｍａｔｕｌａｎｅ（プロカルバジン塩酸塩）、メクロレタミン塩酸塩、メゲストロール酢酸塩、Ｍｅｋｉｎｉｓｔ（ト���メチニブ）、メルファラン、メルファラン塩酸塩、メルカプトプリン、メスナ、Ｍｅｓｎｅｘ（メスナ）、Ｍｅｔｈａｚｏｌａｓｔｏｎｅ（テモゾロミド）、メトトレキサート、メトトレキサートＬＰＦ（メトトレキサート）、メチルナルトレキソン臭化物、Ｍｅｘａｔｅ（メトトレキサート）、Ｍｅｘａｔｅ−ＡＱ（メトトレキサート）、ミドスタウリン、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン塩酸塩、Ｍｉｔｏｚｙｔｒｅｘ（マイトマイシンＣ）、ＭＯＰＰ、Ｍｏｚｏｂｉｌ（プレリキサフォル）、Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（メクロレタミン塩酸塩）、Ｍｕｔａｍｙｃｉｎ（マイトマイシンＣ）、Ｍｙｌｅｒａｎ（ブスルファン）、Ｍｙｌｏｓａｒ（アザシチジン）、Ｍｙｌｏｔａｒｇ（ゲムツズマブオゾガマイシン）、ナノ粒子パクリタキセル（パクリタキセルのアルブミン安定化ナノ粒子製剤）、ナベルビン（ビノレルビン酒石酸塩）、ネシツムマブ、ネララビン、Ｎｅｏｓａｒ（シクロホスファミド）、ネラチニブマレイン酸塩、Ｎｅｒｌｙｎｘ（ネラチニブマレイン酸塩）、ネツピタントおよびパロノセトロン塩酸塩、Ｎｅｕｌａｓｔａ（ペグフィルグラスチム）、Ｎｅｕｐｏｇｅｎ（フィルグラスチム）、Ｎｅｘａｖａｒ（ソラフェニブトシル酸塩）、Ｎｉｌａｎｄｒｏｎ（ニルタミド）、ニロチニブ、ニルタミド、Ｎｉｎｌａｒｏ（イキサゾミブクエン酸塩）、ニラパリブトシル酸塩一水和物、ニボルマブ、Ｎｏｌｖａｄｅｘ（タモキシフェンクエン酸塩）、Ｎｐｌａｔｅ（ロミプロスチム）、オビヌツズマブ、Ｏｄｏｍｚｏ（ソニデジブ）、ＯＥＰＡ、オファツムマブ、ＯＦＦ、オラパリブ、オララツマブ、オマセタキシンメペスクシネート、Ｏｎｃａｓｐａｒ（ペガスパルガーゼ）、オンダンセトロン塩酸塩、Ｏｎｉｖｙｄｅ（イリノテカン塩酸塩リポソーム剤）、Ｏｎｔａｋ（デニロイキンディフチトクス）、Ｏｐｄｉｖｏ（ニボルマブ）、ＯＰＰＡ、オシメルチニブ、オキサリプラチン、パクリタキセル、パクリタキセルのアルブミン安定化ナノ粒子製剤、ＰＡＤ、パルボシクリブ、パリフェルミン、パロノセトロン塩酸塩、パロノセトロン塩酸塩およびネツピタント、パミドロネート二ナトリウム、パニツムマブ、パノビノスタット、Ｐａｒａｐｌａｔ（カルボプラチン）、Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（カルボプラチン）、パゾパニブ塩酸塩、ＰＣＶ、ＰＥＢ、ペガスパルガーゼ、ペグフィルグラスチム、Ｐｅｇインターフェロンアルファ−２ｂ、ＰＥＧ
−Ｉｎｔｒｏｎ（Ｐｅｇインターフェロンアルファ−２ｂ）、ペムブロリズマブ、ペメトレキセド二ナトリウム、Ｐｅｒｊｅｔａ（ペルツズマブ）、ペルツズマブ、Ｐｌａｔｉｎｏｌ（シスプラチン）、Ｐｌａｔｉｎｏｌ−ＡＱ（シスプラチン）、プレリキサフォル、ポマリドミド、Ｐｏｍａｌｙｓｔ（ポマリドミド）、ポナチニブ塩酸塩、Ｐｏｒｔｒａｚｚａ（ネシツムマブ）、プララトレキサート、プレドニゾン、プロカルバジン塩酸塩、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（アルデスロイキン）、Ｐｒｏｌｉａ（デノスマブ）、Ｐｒｏｍａｃｔａ（エルトロンボパグオラミン）、プロプラノロール塩酸塩、Ｐｒｏｖｅｎｇｅ（シプリューセルＴ）、Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ（メルカプトプリン）、Ｐｕｒｉｘａｎ（メルカプトプリン）、［未記載］、ラジウム２２３二塩化物、ラロキシフェン塩酸塩、ラムシルマブ、ラスブリカーゼ、Ｒ−ＣＨＯＰ、Ｒ−ＣＶＰ、組換えヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）二価ワクチン、組換えヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）九価ワクチン、組換えヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）四価ワクチン、組換えインターフェロンアルファ−２ｂ、レゴラフェニブ、Ｒｅｌｉｓｔｏｒ（メチルナルトレキソン臭化物）、Ｒ−ＥＰＯＣＨ、Ｒｅｖｌｉｍｉｄ（レナリドミド）、Ｒｈｅｕｍａｔｒｅｘ（メトトレキサート）、リボシクリブ、Ｒ−ＩＣＥ、Ｒｉｔｕｘａｎ（リツキシマブ）、ＲｉｔｕｘａｎＨｙｃｅｌａ（リツキシマブおよびヒトヒアルロニダーゼ）、リツキシマブ、リツキシマブおよびヒトヒアルロニダーゼ、ロラピタント塩酸塩、ロミデプシン、ロミプロスチム、Ｒｕｂｉｄｏｍｙｃｉｎ（ダウノルビシン塩酸塩）、Ｒｕｂｒａｃａ（ルカパリブカムシル酸塩）、ルカパリブカムシル酸塩、ルキソリチニブリン酸塩、Ｒｙｄａｐｔ（ミドスタウリン）、スクレロゾール胸膜内エアゾール（タルク）、シルツキシマブ、シプリューセルＴ、ソマツリンデポ剤（ランレオチド酢酸塩）、ソニデジブ、ソラフェニブトシル酸塩、Ｓｐｒｙｃｅｌ（ダサチニブ）、ＳＴＡＮＦＯＲＤ  Ｖ、滅菌タルク粉末（タルク）、Ｓｔｅｒｉｔａｌｃ（タルク）、Ｓｔｉｖａｒｇａ（レゴラフェニブ）、スニチニブリンゴ酸塩、Ｓｕｔｅｎｔ（スニチニブリンゴ酸塩）、Ｓｙｌａｔｒｏｎ（Ｐｅｇインターフェロンアルファ−２ｂ）、Ｓｙｌｖａｎｔ（シルツキシマブ）、Ｓｙｎｒｉｂｏ（オマセタキシンメペスクシネート）、Ｔａｂｌｏｉｄ（チオグアニン）、ＴＡＣ、Ｔａｆｉｎｌａｒ（ダラフェニブ）、Ｔａｇｒｉｓｓｏ（オシメルチニブ）、タルク、タリモジェン・ラヘルパレプベク、タモキシフェンクエン酸塩、Ｔａｒａｂｉｎｅ  ＰＦＳ（シタラビン）、Ｔａｒｃｅｖａ（エルロチニブ塩酸塩）、Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（ベキサロテン）、Ｔａｓｉｇｎａ（ニロチニブ）、Ｔａｘｏｌ（パクリタキセル）、Ｔａｘｏｔｅｒｅ（ドセタキセル）、Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ（アテゾリズマブ）、Ｔｅｍｏｄａｒ（テモゾロミド）、テモゾロミド、テムシロリムス、サリドマイド、Ｔｈａｌｏｍｉｄ（サリドマイド）、チオグアニン、チオテパ、チサゲンレクロイセル、Ｔｏｌａｋ（外用フルオロウラシル）、トポテカン塩酸塩、トレミフェン、Ｔｏｒｉｓｅｌ（テムシロリムス）、トシツモマブおよびヨウ素Ｉ−１３１��シツモマブ、Ｔｏｔｅｃｔ（デキスラゾキサン塩酸塩）、ＴＰＦ、Ｔｒａｂｅｃｔｅｄｉｎ、トラメチニブ、トラスツズマブ、Ｔｒｅａｎｄａ（ベンダムスチン塩酸塩）、トリフルリジンおよびチピラシル塩酸塩、Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（三酸化ヒ素）、Ｔｙｋｅｒｂ（ラパチニブジトシル酸塩）、Ｕｎｉｔｕｘｉｎ（ジヌツキシマブ）、ウリジン三酢酸塩、ＶＡＣ、バルルビシン、Ｖａｌｓｔａｒ（バルルビシン）、バンデタニブ、ＶＡＭＰ、Ｖａｒｕｂｉ（ロラピタント塩酸塩）、Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（パニツムマブ）、ＶｅＩＰ、Ｖｅｌｂａｎ（ビンブラスチン硫酸塩）、Ｖｅｌｃａｄｅ（ボルテゾミブ）、Ｖｅｌｓａｒ（ビンブラスチン硫酸塩）、ベムラフェニブ、Ｖｅｎｃｌｅｘｔａ（ベネトクラクス）、ベネトクラクス、Ｖｅｒｚｅｎｉｏ（アベマシクリブ）、Ｖｉａｄｕｒ（ロイプロリド酢酸塩）、Ｖｉｄａｚａ（アザシチジン）、ビンブラスチン硫酸塩、Ｖｉｎｃａｓａｒ  ＰＦＳ（ビンクリスチン硫酸塩）、ビンクリスチン硫酸塩、ビンクリスチン硫酸塩リポソーム剤、ビノレルビン酒石酸塩、ＶＩＰ、ビスモデジブ、Ｖｉｓｔｏｇａｒｄ（ウリジン三酢酸塩）、Ｖｏｒａｘａｚｅ（グルカルピダーゼ）、ボリノスタット、Ｖｏｔｒｉｅｎｔ（パゾパニブ塩酸塩）、Ｖｙｘｅｏｓ（ダウノルビシン塩酸塩およびシタラビンリポソーム剤）、Ｗｅｌｌｃｏｖｏｒｉｎ（ロイコボリンカルシウム）、Ｘａｌｋｏｒｉ（クリゾチニブ）、ゼローダ（カペシタビン）、ＸＥＬＩＲＩ、ＸＥＬＯＸ、Ｘｇｅｖａ（デノスマブ）、Ｘｏｆｉｇｏ（ラジウム２２３二塩化物）、Ｘｔａｎｄｉ（エンザルタミド）、Ｙｅｒｖｏｙ（イピリムマブ）、Ｙｅｓｃａｒｔａ（アキシカブタゲン・シロロイセル）、Ｙｏｎｄｅｌｉｓ（トラベクトジン）、Ｚａｌｔｒａｐ（Ｚｉｖ−アフリベルセプト）、Ｚａｒｘｉｏ（フィルグラスチム）、Ｚｅｊｕｌａ（ニラパリブトシル酸塩一水和物）、Ｚｅｌｂｏｒａｆ（ベムラフェニブ）、Ｚｅｖａｌｉｎ（イブリツモマブチウキセタン）、Ｚｉｎｅｃａｒｄ（デキスラゾキサン塩酸塩）、Ｚｉｖ−アフリベルセプト、Ｚｏｆｒａｎ（オンダンセトロン塩酸塩）、Ｚｏｌａｄｅｘ（ゴセレリン酢酸塩）、ゾレドロン酸、Ｚｏｌｉｎｚａ（ボリノスタット）、Ｚｏｍｅｔａ（ゾレドロン酸）、Ｚｙｄｅｌｉｇ（イデラリシブ）、Ｚｙｋａｄｉａ（セリチニブ）、およびＺｙｔｉｇａ（アビラテロン酢酸塩）から選択されうる。
【０５０３】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、トラスツズマブ、セツキシマブ、シスプラチン、５−ＦＵ、またはカペシタビンのうちの１つまたは複数と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、トラスツズマブおよびシスプラチン、ならびに５−ＦＵまたはカペシタビンと組み合わせて投与される。
【０５０４】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、セツキシマブと組み合わせて投与される。特に、頭頸部がん（例えば、頭頸部扁平上皮がん）処置のためには、セツキシマブとの組合せ投与が想定される。
【０５０５】
抗原結合性分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸（または複数の核酸）、発現ベクター（または複数の発現ベクター）、細胞、または組成物の複数回投与がなされうる。１回もしくは複数回、または各回の投与は、別の治療剤の、同時的または逐次的投与に随伴されうる。
【０５０６】
複数回投与は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、もしくは３１日間、または１、２、３、４、５、もしくは６カ月間のうちの１つであるように選択されうる、所定の時間間隔により隔てられうる。例を目的として述べると、投与は、７、１４、２１、または２８日（±３、２、または１日）ごとになされうる。
検出法
本発明はまた、ＨＥＲ３、またはＨＥＲ３を発現する細胞を検出、位置特定、またはイメージングする方法における使用のための、本発明の物品も提供する。
【０５０７】
本明細書で記載される抗原結合性分子は、ＨＥＲ３に対する抗原結合性分子を伴う方法において使用されうる。このような方法は、抗原結合性分子とＨＥＲ３との結合複合体の検出を伴いうる。
【０５０８】
このように、ＨＥＲ３を含有するか、またはこれを含有することが疑われる試料を接触させるステップと、抗原結合性分子とＨＥＲ３との複合体の形成を検出するステップとを含む方法が提供される。また、ＨＥＲ３を発現する細胞を含有するか、またはこれを含有することが疑われる試料を接触させるステップと、抗原結合性分子と、ＨＥＲ３を発現する細胞との複合体の形成を検出するステップとを含む方法も提供される。
【０５０９】
当技術分野では、サンドイッチアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＡなどのイムノアッセイを含む、適する方法フォーマットが周知である。方法は、検出可能部分、例えば、本明細書で記載される、蛍光標識、リン光標識、発光標識、免疫検出可能標識、放射性標識、化学、核酸、または酵素標識により、抗原結合性分子、または標的（複数可）、またはこれらの両方を標識付けするステップを伴いうる。当業者には、検出法が周知であり、標識化剤と対応するように選択されうる。
【０５１０】
この種の方法は、疾患または状態、例えば、がんについての、診断的および／または予後診断的評価のための方法のベースをもたらしうる。このような方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの患者試料に対して実施される場合もあり、患者試料の加工後に実施される場合もある。試料が回収されたら、患者は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ法の実施に立ち会うことを要求されないため、方法は、ヒトまたは動物体内に対しては行われない方法である。一部の実施形態では、方法は、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて実施される。
【０５１１】
試料中の検出は、疾患／状態（例えば、がん）、疾患／状態に対する素因の診断を目的として使用される場合もあり、疾患／状態、例えば、本明細書で記載される疾患／状態について予後診断する（予知する）ために使用される場合もある。診断または予後診断は、既存の（既に診断された）疾患／状態に関しうる。
【０５１２】
このような方法は、例えば、患者試料中で、ＨＥＲ３またはＨＥＲ３を発現する細胞を検出または定量するステップを伴いうる。方法が、対象とする因子を定量するステップを含む場合、方法は、診断的または予後診断的評価の一部として、決定された量を、標準値または参照値に対して比較するステップをさらに含みうる。他の診断／予後診断検査は、診断もしくは予後診断の精度を増強するか、または本明細書で記載される検査を使用することにより得られる結果を確認するように、本明細書で記載される診断検査／予後診断検査と共に使用されうる。
【０５１３】
試料は、任意の組織または体液から採取されうる。試料は、多量の血液；フィブリン塊および血液細胞を除去した後で得られる血液の流体部分を含みうる、個体の血液に由来する、多量の血清；組織試料または生検；胸水；脳脊髄液（ＣＳＦ）；または前記個体から単離された細胞を含みうるか、またはこれらに由来しうる。一部の実施形態では、試料は、疾患／状態の影響を受ける、１つの組織または複数の組織（例えば、疾患の症状が顕在化するか、または疾患／状態の発症機序に関与する、１つの組織または複数の組織）得られうるか、またはこれらに由来しうる。
【０５１４】
本発明はまた、対象を、ＨＥＲ３ターゲティング剤による処置のために、選択／層別化するための方法も提供する。一部の実施形態では、対象は、本発明に従う処置／防止のために選択されるか、または例えば、個体から得られる試料中の、ＨＥＲ３、またはＨＥＲ３を発現する細胞の検出／定量に基づき、このような処置／防止から利益を得る対象として同定される。
対象
本明細書で記載される、本発明の態様に従う対象は、任意の動物またはヒトでありうる。対象は、好ましくは、哺乳動物、より好ましくは、ヒトである。対象は、非ヒト哺乳動物でもありうるが、より好ましくは、ヒトである。対象は、雄の場合もあり、雌の場合もある。対象は、患者でありうる。対象は、処置を要求する疾患または状態（例えば、がん）を伴うと診断されている場合もあり、このような疾患／状態を有することが疑われる場合もあり、このような疾患／状態を発症する／このような疾患／状態に罹患する危険性がある場合もある。
【０５１５】
本発明に従う実施形態では、対象は、好ましくは、ヒト対象である。一部の実施形態では、本明細書における、本発明の治療または予防法に従い処置される対象は、がんを有するか、またはがんを発症させる危険性がある対象である。本発明に従う実施形態では、対象は、このような疾患／状態の、ある特定のマーカーについての特徴付けに基づく方法に従う処置のために選択されうる。
キット
本発明の一部の態様では、本明細書で記載される部材キットが提供される。一部の実施形態では、キットは、所定数量の、本明細書で記載される、抗原結合性分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸（または複数の核酸）、発現ベクター（または複数の発現ベクター）、細胞、または組成物を有する、少なくとも１つの容器を有しうる。
【０５１６】
一部の実施形態では、キットは、本明細書で記載される、抗原結合性分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸（または複数の核酸）、発現ベクター（または複数の発現ベクター）、細胞、または組成物を作製するための素材を含みうる。
【０５１７】
キットは、抗原結合性分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸（または複数の核酸）、発現ベクター（または複数の発現ベクター）、細胞、または組成物を、指定された疾患／状態を処置するための、患者への投与のための指示書と併せて提供しうる。
【０５１８】
一部の実施形態では、キットは、所定数量の、別の治療剤（例えば、抗感染症剤または化学療法剤）を有する、少なくとも１つの容器をさらに含みうる。このような実施形態では、キットはまた、２つの医薬または医薬組成物が、特異的な疾患または状態のための組合せ処置をもたらすよう、同時に、または個別に投与されうるように、第２の医薬または医薬組成物も含みうる。治療剤はまた、腫瘍または血液への注射または注入に適するようにも製剤化されうる。
配列同一性
本明細書で使用される、「配列同一性」とは、配列の間で、最大の配列同一性パーセントを達成するように、配列をアライメントし、必要な場合は、ギャップを導入した後で、参照配列内のヌクレオチド／アミノ酸残基と同一な、対象配列内のヌクレオチド／アミノ酸残基のパーセントを指す。２つ以上のアミノ酸配列または核酸配列の間の配列同一性パーセントを決定することを目的とする、対での、複数の配列アライメントは、例えば、ＣｌｕｓｔａｌＯｍｅｇａ（Ｓｏｄｉｎｇ、Ｊ．２００５、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ、２１、９５１〜９６０）、Ｔ−ｃｏｆｆｅｅ（Ｎｏｔｒｅｄａｍｅら、２０００、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（２０００）、３０２、２０５〜２１７）、Ｋａｌｉｇｎ（ＬａｓｓｍａｎｎおよびＳｏｎｎｈａｍｍｅｒ、２００５、ＢＭＣ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ、６（２９８））、およびＭＡＦＦＴ（ＫａｔｏｈおよびＳｔａｎｄｌｅｙ、２０１３、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ、３０（４）、７７２〜７８０）ソフトウェアなど、市販のコンピュータソフトウェアを使用して、当業者に公知の、多様な形で達成されうる。このようなソフトウェアを使用する場合、例えば、ギャップペナルティーおよび伸長ペナルティーについての、デフォルトのパラメータを使用することが好ましい。
【０５１９】
【表２−１】
2021510535.tif 000004
【０５２０】
【表２−２】
2021510535.tif 000005
【０５２１】
【表２−３】
2021510535.tif 000006
【０５２２】
【表２−４】
2021510535.tif 000007
【０５２３】
【表２−５】
2021510535.tif 000008
【０５２４】
【表２−６】
2021510535.tif 000009
【０５２５】
【表２−７】
2021510535.tif 000010
【０５２６】
【表２−８】
2021510535.tif 000011
【０５２７】
【表２−９】
2021510535.tif 000012
【０５２８】
【表２−１０】
2021510535.tif 000013
【０５２９】
【表２−１１】
2021510535.tif 000014
【０５３０】
【表２−１２】
2021510535.tif 000015
【０５３１】
【表２−１３】
2021510535.tif 000016
【０５３２】
【表２−１４】
2021510535.tif 000017
【０５３３】
【表２−１５】
2021510535.tif 000018
【０５３４】
【表２−１６】
2021510535.tif 000019
【０５３５】
【表２−１７】
2021510535.tif 000020
【０５３６】
【表２−１８】
2021510535.tif 000021
番号付けされた項目
以下の番号付けされた項目（ｐａｒａ）は、本発明の関連で想定される、特色および特色の組合せについての言明をさらに提示する：
１．細胞外領域サブドメインＩＩ内のＨＥＲ３に結合することが可能な抗原結合性分子、任意選択で、単離抗原結合性分子。
【０５３７】
２．ＨＥＲ３と、ＨＥＲ３の相互作用パートナーとの相互作用を阻害する、項目１に記載の抗原結合性分子。
【０５３８】
３．配列番号１６のアミノ酸配列を含むか、またはこれからなるポリペプチドに結合することが可能である、項目１または項目２に記載の抗原結合性分子。
【０５３９】
４．配列番号２３または配列番号２２９のアミノ酸配列を含むポリペプチドに結合することが可能である、項目１から３のいずれか一項に記載の抗原結合性分子。
【０５４０】
５．配列番号２１または配列番号２２９のアミノ酸配列を含むポリペプチドに結合することが可能である、項目１から４のいずれか一項に記載の抗原結合性分子。
【０５４１】
６．（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号４３のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号４６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号５１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号９１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号９４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号９９のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域
を含む、項目１から５のいずれか一項に記載の抗原結合性分子。
【０５４２】
７．（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号４１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号４４のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号４７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号８８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号９２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号９５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域
を含む、項目１から６のいずれか一項に記載の抗原結合性分子。
【０５４３】
８．（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号４１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号４４のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号４７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号８９のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号９２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号９５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域
を含む、項目１から６のいずれか一項に記載の抗原結合性分子。
【０５４４】
９．（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号４１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号４４のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号４７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号９０のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号９２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号９６のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域
を含む、項目１から６のいずれか一項に記載の抗原結合性分子。
【０５４５】
１０．（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号４１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号４４のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号４７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号８８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号９２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号９８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域
を含む、項目１から６のいずれか一項に記載の抗原結合性分子。
【０５４６】
１１．（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号４１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号４５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号４７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号８８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号９３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号９５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域
を含む、項目１から６のいずれか一項に記載の抗原結合性分子。
【０５４７】
１２．（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号４１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号４５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号４９のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号８８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号９３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号９５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域
を含む、項目１から６のいずれか一項に記載の抗原結合性分子。
【０５４８】
１３．（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号４１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号４５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号５０のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号８８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号９３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号９５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域
を含む、項目１から６のいずれか一項に記載の抗原結合性分子。
【０５４９】
１４．（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号４１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号４５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号４８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号８８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号９２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号９５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域
を含む、項目１から６のいずれか一項に記載の抗原結合性分子。
【０５５０】
１５．（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号４１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号４５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号４８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号８８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号９２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号９７のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域
を含む、項目１から６のいずれか一項に記載の抗原結合性分子。
【０５５１】
１６．（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号４２のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号４５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号４８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号８８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号９２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号９５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域
を含む、項目１から６のいずれか一項に記載の抗原結合性分子。
【０５５２】
１７．（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１５８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号１５９のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号１６０のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１６５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号１６６のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号１６７のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域
を含む、項目１から５のいずれか一項に記載の抗原結合性分子。
【０５５３】
１８．配列番号２２のアミノ酸配列を含むポリペプチドに結合することが可能である、項目１から４のいずれか一項に記載の抗原結合性分子。
【０５５４】
１９．（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１２８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号１２９のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号１３０のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１３６のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号１３７のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号１３８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域
を含む、項目１から４または項目１８のいずれか一項に記載の抗原結合性分子。
【０５５５】
２０．（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１４４のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号１４５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号１４６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１５１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号１５２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号１５３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域
を含む、項目１から４または項目１８のいずれか一項に記載の抗原結合性分子。
【０５５６】
２１．（ｉ）配列番号２４のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号７４のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｉｉ）配列番号２５のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号７５のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｉｉｉ）配列番号２６のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号７６のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｉｖ）配列番号２７のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号７７のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｖ）配列番号２８のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号７８のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｖｉ）配列番号２９のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号７８のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｖｉｉ）配列番号３０のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号７８のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｖｉｉｉ）配列番号３１のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号７９のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｉｘ）配列番号３２のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号７９のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｘ）配列番号３３のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号８０のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｘｉ）配列番号３４のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号８１のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｘｉｉ）配列番号３５のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号８２のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｘｉｉｉ）配列番号３６のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号８３のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｘｉｖ）配列番号３７のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号８４のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｘｖ）配列番号３８のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号８５のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｘｖｉ）配列番号３９のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号８６のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｘｖｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号８７のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｘｖｉｉｉ）配列番号１２７のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号１３５のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｘｉｘ）配列番号１４３のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号１５０のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
または
（ｘｘ）配列番号１５７のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号１６４のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域
を含む、項目１から４のいずれか一項に記載の抗原結合性分子。
【０５５７】
２２．ヒトＨＥＲ３、ならびにマウスＨＥＲ３、ラットＨＥＲ３、およびカニクイザルＨＥＲ３のうちの１つまたは複数に結合することが可能である、項目１から２１のいずれか一項に記載の抗原結合性分子。
【０５５８】
２３．（ｉ）項目１から２２のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、および（ｉｉ）ＨＥＲ３以外の抗原に結合することが可能な抗原結合性分子を含む、抗原結合性分子、任意選択で、単離抗原結合性分子。
【０５５９】
２４．ＨＥＲ３を発現する細胞の、細胞表面に結合することが可能である、項目１から２３のいずれか一項に記載の抗原結合性分子。
【０５６０】
２５．ＨＥＲ３媒介性シグナル伝達を阻害することが可能である、項目１から２４のいずれか一項に記載の抗原結合性分子。
【０５６１】
２６．Ｆｃ領域を含み、Ｆｃ領域が、（ｉ）２４２位に対応する位置におけるＣ、および３３４位に対応する位置におけるＣ、ならびに（ｉｉ）２３６位に対応する位置におけるＡ、２３９位に対応する位置におけるＤ、３３２位に対応する位置におけるＥ、３３０位に対応する位置におけるＬ、３４５位に対応する位置におけるＫ、および４３０位に対応する位置におけるＧのうちの１つまたは複数を有するポリペプチドを含む、項目１から２５のいずれか一項に記載の抗原結合性分子。
【０５６２】
２７．Ｆｃ領域が、２４２位に対応する位置におけるＣ、３３４位に対応する位置におけるＣ、２３６位に対応する位置におけるＡ、２３９位に対応する位置におけるＤ、３３２位に対応する位置におけるＥ、および３３０位に対応する位置におけるＬを有するポリペプチドを含む、項目２６に記載の抗原結合性分子。
【０５６３】
２８．項目１から２７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
【０５６４】
２９．項目１から２７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、または項目２８に記載のＣＡＲをコードする、１つの核酸または複数の核酸、任意選択で、１つの単離核酸または複数の単離核酸。
【０５６５】
３０．項目２９に記載の、１つの核酸または複数の核酸を含む、１つの発現ベクターまたは複数の発現ベクター。
【０５６６】
３１．項目１から２７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、項目２８に記載のＣＡＲ、項目２９に記載の、１つの核酸もしくは複数の核酸、または項目３０に記載の、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクターを含む細胞。
【０５６７】
３２．項目２９に記載の、１つの核酸もしくは複数の核酸、または項目３０に記載の、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクターを含む細胞を、抗原結合性分子またはＣＡＲの、核酸（複数可）または発現ベクター（複数可）からの発現に適する条件下で培養するステップを含む方法。
【０５６８】
３３．項目１から２７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、項目２８に記載のＣＡＲ、項目２９に記載の、１つの核酸もしくは複数の核酸、項目３０に記載の、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、または項目３１に記載の細胞を含む組成物。
【０５６９】
３４．医学的処置または予防の方法における使用のための、項目１から２７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、項目２８に記載のＣＡＲ、項目２９に記載の、１つの核酸もしくは複数の核酸、項目３０に記載の、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、項目３１に記載の細胞、または項目３３に記載の組成物。
【０５７０】
３５．がんの処置または防止の方法における使用のための、項目１から２７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、項目２８に記載のＣＡＲ、項目２９に記載の、１つの核酸もしくは複数の核酸、項目３０に記載の、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、項目３１に記載の細胞、または項目３３に記載の組成物。
【０５７１】
３６．がんの処置または防止の方法における使用のための医薬の製造における、項目１から２７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、項目２８に記載のＣＡＲ、項目２９に記載の、１つの核酸もしくは複数の核酸、項目３０に記載の、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、項目３１に記載の細胞、または項目３３に記載の組成物の使用。
【０５７２】
３７．がんを処置または防止する方法であって、対象へと、治療または予防有効量の、項目１から２７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、項目２８に記載のＣＡＲ、項目２９に記載の、１つの核酸もしくは複数の核酸、項目３０に記載の、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、項目３１に記載の細胞、または項目３３に記載の組成物を投与するステップを含む方法。
【０５７３】
３８．方法が、ＥＧＦＲファミリーメンバーにより媒介されるシグナル伝達の阻害剤の投与をさらに含み、任意選択で、ＥＧＦＲファミリーメンバーにより媒介されるシグナル伝達の阻害剤が、ＨＥＲ２および／またはＥＧＦＲにより媒介されるシグナル伝達の阻害剤である、項目３４もしくは項目３５に記載の使用、項目３６に記載の使用、または項目３７に記載の方法のための、抗原結合性分子、ＣＡＲ、１つの核酸もしくは複数の核酸、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、細胞、または組成物。
【０５７４】
３９．がんが、ＥＧＦＲファミリーメンバーを発現する細胞を含むがん、ＨＥＲ３を発現する細胞を含むがん、充実性腫瘍、乳がん、乳癌、乳管癌、胃がん、胃癌、胃腺癌、結腸直腸がん、結腸直腸癌、結腸直腸腺癌、頭頸部がん、頭頸部扁平上皮がん（ＳＣＣＨＮ）、肺がん、肺腺癌、扁平上皮肺癌、卵巣がん、卵巣癌、漿液性卵巣腺癌、腎がん、腎細胞癌、腎明細胞癌、腎細胞腺癌、乳頭状腎細胞癌、膵がん、膵腺癌、膵管腺癌、子宮頸がん、子宮頸部扁平上皮がん、皮膚がん、黒色腫、食道がん、食道腺癌、肝がん、肝細胞癌、胆管癌、子宮がん、子宮体内膜癌、甲状腺がん、甲状腺癌、褐色細胞腫、傍神経節腫、膀胱がん、膀胱尿路上皮癌、前立腺がん、前立腺腺癌、肉腫、および胸腺腫から選択される、項目３４から３８のいずれか一項に記載の、使用のための抗原結合性分子、ＣＡＲ、１つの核酸もしくは複数の核酸、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、細胞、もしくは組成物、使用または方法。
【０５７５】
４０．ＨＥＲ３媒介性シグナル伝達を阻害する方法であって、ＨＥＲ３発現細胞を、項目１から２７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子と接触させるステップを含む方法。
【０５７６】
４１．ＨＥＲ３発現細胞の数または活性、方法を低減する方法であって、ＨＥＲ３発現細胞を、項目１から２７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子と接触させるステップを含む方法。
【０５７７】
４２．ＨＥＲ３に結合した、項目１から２７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子を含むｉｎ  ｖｉｔｒｏ複合体、任意選択で、単離ｉｎ  ｖｉｔｒｏ複合体。
【０５７８】
４３．ＨＥＲ３を含有するか、またはこれを含有することが疑われる試料を、項目１から２７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子と接触させるステップと、抗原結合性分子の、ＨＥＲ３との複合体の形成を検出するステップとを含む方法。
【０５７９】
４４．対象を、ＨＥＲ３ターゲティング剤による処置のために選択または層別化する方法であって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、対象に由来する試料を、項目１から２７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子と接触させるステップと、抗原結合性分子の、ＨＥＲ３との複合体の形成を検出するステップとを含む方法。
【０５８０】
４５．項目１から２７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子の、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏにおける診断または予後診断剤としての使用。
【０５８１】
４６．任意選択で、がんが、ＥＧＦＲファミリーメンバーを発現する細胞を含むがん、ＨＥＲ３を発現する細胞を含むがん、充実性腫瘍、乳がん、乳癌、乳管癌、胃がん、胃癌、胃腺癌、結腸直腸がん、結腸直腸癌、結腸直腸腺癌、頭頸部がん、頭頸部扁平上皮がん（ＳＣＣＨＮ）、肺がん、肺腺癌、扁平上皮肺癌、卵巣がん、卵巣癌、漿液性卵巣腺癌、腎がん、腎細胞癌、腎明細胞癌、腎細胞腺癌、乳頭状腎細胞癌、膵がん、膵腺癌、膵管腺癌、子宮頸がん、子宮頸部扁平上皮がん、皮膚がん、黒色腫、食道がん、食道腺癌、肝がん、肝細胞癌、胆管癌、子宮がん、子宮体内膜癌、甲状腺がん、甲状腺癌、褐色細胞腫、傍神経節腫、膀胱がん、膀胱尿路上皮癌、前立腺がん、前立腺腺癌、肉腫、および胸腺腫から選択される、がんを検出、位置特定、またはイメージングするための方法における、項目１から２７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子の使用。
【０５８２】
本発明は、このような組合せが、明らかに許容されないか、または明示的に回避される場合を除き、記載される態様と好ましい特徴との組合せを含む。
【０５８３】
本明細書で使用される節の小見出しは、構成上の目的だけのものであり、記載される対象物を限定するものと見なすべきではない。
【０５８４】
ここで、付属の図面を参照しながら、例を目的として、本発明の態様および実施形態が例示される。当業者には、さらなる態様および実施形態が明らかであろう。本文で言及される全ての文献は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０５８５】
本明細書および後続の特許請求の範囲を通して、文脈によりそうでないことが要求されない限りにおいて、「〜を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という語、ならびに「〜を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「〜を含むこと」などの変化形は、言明された整数またはステップまたは整数もしくはステップの群の包含を含意し、他の任意の整数もしくはステップまたは整数もしくはステップの群の除外は含意しないように理解される。
【０５８６】
そうでないことが文脈により明確に指示されない限りにおいて、本明細書および付属の特許請求の範囲において使用される単数形の「ある（ａ）」、「ある（ａｎ）」、および「その」は、複数の指示対象を含むことに注意されたい。本明細書では、範囲は、「約」１つ特定の値から、かつ／または「約」別の特定の値までの範囲として表される。このような範囲が表される場合、別の実施形態は、１つ特定の値から、かつ／または他の特定の値までの範囲を含む。同様に、値が、先行詞である「約」の使用により、近似値として表される場合、特定の値は、別の実施形態を形成することが理解されるであろう。
【０５８７】
本明細書で、核酸配列が開示される場合、その逆相補体もまた、明示的に想定される。
【０５８８】
本明細書で記載される方法は、好ましくは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて実施されうる。「ｉｎ  ｖｉｔｒｏ」と言う用語が、培養物中の細胞に対して実施される手順を包含することが意図されるのに対し、「ｉｎ  ｖｉｖｏ」と言う用語は、無傷の多細胞生物に対する／上の手順を包含することが意図される。
【０５８９】
ここで、付属の図を参照しながら、本発明の原理を例示する、実施形態および実験が論じられる。
【図面の簡単な説明】
【０５９０】
【図１Ａ】フローサイトメトリーにより決定される、抗ＨＥＲ３抗体による、細胞の染色を示すヒストグラムである。ヒストグラムは、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１による、ＨＥＫ２９３細胞（ＨＥＲ３を発現しない）、またはＨＥＫ２９３  ＨＥＲ３過剰発現細胞（ＨＥＫ２９３  ＨＥＲ３  Ｏ／Ｅ）の染色を示す。
【図１Ｂ】フローサイトメトリーにより決定される、抗ＨＥＲ３抗体による、細胞の染色を示すヒストグラムである。ヒストグラムは、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１、および抗ＨＥＲ３抗体クローンである、ＬＪＭ７１６による、ＨＥＫ２９３細胞（ＨＥＲ３を発現しない）、またはＨＥＫ２９３  ＨＥＲ３過剰発現細胞（ＨＥＫ２９３  ＨＥＲ３  Ｏ／Ｅ）の染色を示す。
【図２Ａ】フローサイトメトリーにより決定される、抗ＨＥＲ３抗体による、細胞の染色を示すヒストグラムである。ヒストグラムは、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、４−３５−Ｂ２による、ＨＥＫ２９３細胞（ＨＥＲ３を発現しない）、またはＨＥＫ２９３  ＨＥＲ３過剰発現細胞（ＨＥＫ２９３  ＨＥＲ３  Ｏ／Ｅ）の染色を示す。
【図２Ｂ】フローサイトメトリーにより決定される、抗ＨＥＲ３抗体による、細胞の染色を示すヒストグラムである。ヒストグラムは、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、４−３５−Ｂ２、および抗ＨＥＲ３抗体クローンである、ＬＪＭ７１６による、ＨＥＫ２９３細胞（ＨＥＲ３を発現しない）、またはＨＥＫ２９３  ＨＥＲ３過剰発現細胞（ＨＥＫ２９３  ＨＥＲ３  Ｏ／Ｅ）の染色を示す。
【図３Ａ】フローサイトメトリーにより決定される、抗ＨＥＲ３抗体による、細胞の染色を示すヒストグラムである。ヒストグラムは、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、４−３５−Ｂ４による、ＨＥＫ２９３細胞（ＨＥＲ３を発現しない）、またはＨＥＫ２９３  ＨＥＲ３過剰発現細胞（ＨＥＫ２９３  ＨＥＲ３  Ｏ／Ｅ）の染色を示す。
【図３Ｂ】フローサイトメトリーにより決定される、抗ＨＥＲ３抗体による、細胞の染色を示すヒストグラムである。ヒストグラムは、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、４−３５−Ｂ４、および抗ＨＥＲ３抗体クローンである、ＬＪＭ７１６による、ＨＥＫ２９３細胞（ＨＥＲ３を発現しない）、またはＨＥＫ２９３  ＨＥＲ３過剰発現細胞（ＨＥＫ２９３  ＨＥＲ３  Ｏ／Ｅ）の染色を示す。
【図４】フローサイトメトリーにより決定される、抗ＨＥＲ３抗体による、細胞の染色を示すヒストグラムである。ヒストグラムは、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ａ６による、ＨＥＫ２９３細胞（ＨＥＲ３を発現しない）、またはＨＥＫ２９３  ＨＥＲ３過剰発現細胞（ＨＥＫ２９３  ＨＥＲ３  Ｏ／Ｅ）の染色を示す。
【図５Ａ】抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１の、ヒト、マウス、ラット、およびカニクイザルＨＥＲ３への結合についてのＥＬＩＳＡ解析の結果を示すグラフである。ＥＣ５０値を示す。
【図５Ｂ】抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１の、ヒトＥＧＦＲおよびヒトＨＥＲ２への結合についてのＥＬＩＳＡ解析の結果を示すグラフである。ＥＣ５０値を示す。
【図６Ａ】抗ＨＥＲ３抗体クローンである、４−３５−Ｂ２の、ヒト、マウス３、ラット、およびカニクイザルＨＥＲ３への結合についてのＥＬＩＳＡ解析の結果を示すグラフである。
【図６Ｂ】抗ＨＥＲ３抗体クローンである、４−３５−Ｂ２の、ヒトＥＧＦＲおよびヒトＨＥＲ２への結合についてのＥＬＩＳＡ解析の結果を示すグラフである。
【図７Ａ】抗ＨＥＲ３抗体クローンである、４−３５−Ｂ４の、ヒトＨＥＲ３、ヒトＥＧＦＲ、およびヒトＨＥＲ２への結合についてのＥＬＩＳＡ解析の結果を示すグラフである。
【図７Ｂ】抗ＨＥＲ３抗体クローンである、４−３５−Ｂ４の、ヒト、マウス、ラット、およびカニクイザルＨＥＲ３への結合についてのＥＬＩＳＡ解析の結果を示すグラフである。
【図８】抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１の、ヒトＨＥＲ３に対する結合アフィニティーについての解析の結果を示す、代表的なセンサーグラムである。Ｋｏｎ、Ｋｏｆｆ、およびＫＤを示す。
【図９】抗ＨＥＲ３抗体クローンである、４−３５−Ｂ２の、ヒトＨＥＲ３に対する結合アフィニティーについての解析の結果を示す、代表的なセンサーグラムである。
【図１０】抗ＨＥＲ３抗体クローンである、４−３５−Ｂ４の、ヒトＨＥＲ３に対する結合アフィニティーについての解析の結果を示す、代表的なセンサーグラムである。
【図１１】示差走査蛍光測定解析による、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１の安定性についての解析の結果を示すグラフである。
【図１２】サイズ除外クロマトグラフィーによる、組換え発現された、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１についての解析の結果を示すグラフである。
【図１３】ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウェスタンブロットによる、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１の発現についての解析の結果を示す画像である。レーン：Ｍ１＝型番：３４５２の、ＴａＫａＲａタンパク質マーカー；Ｍ２＝型番：Ｍ００５２１の、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔタンパク質マーカー；１＝還元条件；２＝非還元条件；Ｐ＝陽性対照：ヒトＩｇＧ１カッパ（Ｓｉｇｍａ；型番：Ｉ５１５４）である。ウェスタンブロットのために、使用される一次抗体は、ヤギ抗ヒトＩｇＧ−ＨＲＰ（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ；型番：Ａ００１６６）、およびヤギ抗ヒトカッパ−ＨＲＰ（ＳｏｕｔｅｒｈｎＢｉｏｔｅｃｈ；型番：２０６０−０５）であった。
【図１４Ａ】異なる抗ＨＥＲ３抗体クローンの間の、ＨＥＲ３への結合についての競合の解析結果を示す、代表的なセンサーグラムおよび表である。
【図１４Ｂ】異なる抗ＨＥＲ３抗体クローンの間の、ＨＥＲ３への結合についての競合の解析結果を示す、代表的なセンサーグラムおよび表である。
【図１５】ＥＬＩＳＡにより決定される、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１による、ＨＥＲ３とＨＥＲ２との相互作用の阻害についての解析の結果を示すグラフである。
【図１６Ａ】異なるがん細胞株による、ＥＧＦＲタンパク質ファミリーメンバーおよびそれらに対するリガンドの、遺伝子およびタンパク質の発現を示す、表およびヒストグラムである。
【図１６Ｂ】異なるがん細胞株による、ＥＧＦＲタンパク質ファミリーメンバーおよびそれらに対するリガンドの、遺伝子およびタンパク質の発現を示す、表およびヒストグラムである。
【図１７】ホスホウェスタンブロットによる、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１による処置の、Ｎ８７細胞およびＦａＤｕ細胞におけるＨＥＲ３媒介性シグナル伝達に対する効果についての解析の結果を示す画像である。ＵＮ＝非処置；Ｔ＝抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１による処置である。
【図１８】Ｐｈｏｓｐｈｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ａｒｒａｙアッセイキットを使用する、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１による処置の、ＦａＤｕ細胞におけるＨＥＲ３媒介性シグナル伝達に対する効果についての解析の結果を示す、画像およびグラフである。ＵＮ＝非処置ＦａＤｕ細胞；Ｔ＝抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１により処置されたＦａＤｕ細胞である。
【図１９Ａ】抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１の存在下におけるインキュベーション後の、ＣＣＫ８アッセイにより決定される、細胞の、非処置対照条件（１００％）と比べたコンフルエンシーパーセントを、表示の細胞株について示すグラフである。Ｎ８７細胞について得られた結果を示す。
【図１９Ｂ】抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１の存在下におけるインキュベーション後の、ＣＣＫ８アッセイにより決定される、細胞の、非処置対照条件（１００％）と比べたコンフルエンシーパーセントを、表示の細胞株について示すグラフである。ＦａＤｕ細胞について得られた結果を示す。
【図２０】Ｎ８７細胞株に由来する、マウス胃癌モデルにおける、時間経過にわたる、腫瘍体積についての解析の結果を示すグラフである。抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１を、投与１回当たり５００μｇ、隔週で、合計１０回にわたり、ＩＰ投与した。対照処置群は、等容量のＰＢＳ（溶媒）を施された。
【図２１】Ｎ８７細胞株に由来する、マウス胃癌モデルにおける、時間経過にわたる、腫瘍体積についての解析の結果を示すグラフである。抗ＨＥＲ３抗体クローンである、４−３５−Ｂ２を、投与１回当たり１１ｍｇ／ｋｇ、毎週で、合計４回にわたり、ＩＰ投与した。対照処置群は、当量のアイソタイプ対照抗体（アイソタイプ）を施された。
【図２２】ＳＮＵ１６細胞株に由来する、マウス胃癌モデルにおける、時間経過にわたる、腫瘍体積についての解析の結果を示すグラフである。抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１を、投与１回当たり５００μｇ、隔週で、合計９回にわたり、ＩＰ投与した。対照処置群は、等容量のＰＢＳ（溶媒）を施された。
【図２３】ＦａＤｕ細胞株に由来する、頭頸部扁平上皮がんについてのマウスモデルにおける、時間経過にわたる、腫瘍体積についての解析の結果を示すグラフである。抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１を、投与１回当たり５００μｇ、毎週で、合計４回にわたり、ＩＰ投与した。対照処置群は、等容量のＰＢＳ（溶媒）、または同用量のアイソタイプ対照抗体（アイソタイプ）を施された。
【図２４】ＦａＤｕ細胞株に由来する、頭頸部扁平上皮がんについてのマウスモデルにおける、時間経過にわたる、腫瘍体積についての解析の結果を示すグラフである。抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１を、投与１回当たり５００μｇ、隔週で、合計８回にわたり、ＩＰ投与した。対照処置群は、等容量のＰＢＳ（溶媒）を施された。
【図２５】ＯｖＣＡＲ８細胞株に由来する、卵巣癌についてのマウスモデルにおける、時間経過にわたる、腫瘍体積についての解析の結果を示すグラフである。抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１を、投与１回当たり５００μｇ、隔週で、合計９回にわたり、ＩＰ投与した。対照処置群は、等容量のＰＢＳ（溶媒）を施された。
【図２６】ＨＣＣ−９５細胞株に由来する、扁平上皮肺細胞癌についてのマウスモデルにおける、時間経過にわたる、腫瘍体積についての解析の結果を示すグラフである。抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１を、投与１回当たり５００μｇ、隔週で、合計４回にわたり、ＩＰ投与した。対照処置群は、等容量のＰＢＳ（溶媒）を施された。
【図２７】Ａ５４９細胞株に由来する、肺腺癌についてのマウスモデルにおける、時間経過にわたる、腫瘍体積についての解析の結果を示すグラフである。抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１を、投与１回当たり５００μｇ、隔週で、合計１０回にわたり、ＩＰ投与した。対照処置群は、等容量のＰＢＳ（溶媒）を施された。
【図２８】Ａ５４９細胞株に由来する、肺腺癌についてのマウスモデルにおける、時間経過にわたる、腫瘍体積についての解析の結果を示すグラフである。抗ＨＥＲ３抗体クローンである、４−３５−Ｂ２を、投与１回当たり５００μｇ、隔週で、合計４回にわたり、ＩＰ投与した。対照処置群は、等容量のＰＢＳ（溶媒）を施された。
【図２９】ＡＣＨＮ細胞株に由来する、腎細胞癌についてのマウスモデルにおける、時間経過にわたる、腫瘍体積についての解析の結果を示すグラフである。抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１を、投与１回当たり５００μｇ、隔週で、合計７回にわたり、ＩＰ投与した。対照処置群は、等容量のＰＢＳ（溶媒）を施された。
【図３０】フローサイトメトリーにより決定される、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１＿ｃ８９による細胞の染色を示すヒストグラムである。ヒストグラムは、ＨＥＫ２９３細胞（ＨＥＲ３を発現しない）、またはＨＥＫ２９３  ＨＥＲ３過剰発現細胞（ＨＥＫ２９３  ＨＥＲ３  Ｏ／Ｅ）の染色を示す。
【図３１】フローサイトメトリーにより決定される、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１＿ｃ９０による細胞の染色を示すヒストグラムである。ヒストグラムは、ＨＥＫ２９３細胞（ＨＥＲ３を発現しない）、またはＨＥＫ２９３  ＨＥＲ３過剰発現細胞（ＨＥＫ２９３  ＨＥＲ３  Ｏ／Ｅ）の染色を示す。
【図３２】フローサイトメトリーにより決定される、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１＿ｃ９１による細胞の染色を示すヒストグラムである。ヒストグラムは、ＨＥＫ２９３細胞（ＨＥＲ３を発現しない）、またはＨＥＫ２９３  ＨＥＲ３過剰発現細胞（ＨＥＫ２９３  ＨＥＲ３  Ｏ／Ｅ）の染色を示す。
【図３３Ａ】抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１の変異体クローンの、ヒトＨＥＲ３への結合についてのＥＬＩＳＡ解析の結果を示すグラフである。抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１（１０Ｄ１Ｐと称される）、１０Ｄ１＿ｃ７５、１０Ｄ１＿ｃ７６、１０Ｄ１＿ｃ７７、１０Ｄ１＿ｃ７８、１０Ｄ１＿１１Ｂ（ｖ１１ｂ７８Ｌと称される）、１０Ｄ１＿ｃ８５、１０Ｄ１＿ｃ８５ｏ１、１０Ｄ１＿ｃ８５ｏ２、１０Ｄ１＿ｃ８７、１０Ｄ１＿ｃ８９、１０Ｄ１＿ｃ９０、１０Ｄ１＿ｃ９１、１０Ｄ１＿ｃ９３、ＬＪＭ７１６、およびｈＩｇＧ（陰性対照）の結合を示す。
【図３３Ｂ】抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１の変異体クローンの、ヒトＨＥＲ３への結合についてのＥＬＩＳＡ解析の結果を示すグラフである。クローンである、１０Ｄ１＿ｃ８９、１０Ｄ１＿ｃ９０、１０Ｄ１＿ｃ９１、およびＬＪＭ７１６だけについてのデータである点を除き、３３Ａと同じデータを示す。
【図３４Ａ】サイズ除外クロマトグラフィーによる、組換え発現された抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１の変異体クローンについての解析の結果を示すグラフである。抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１＿ｃ９３、１０Ｄ１＿ｃ７５、１０Ｄ１＿ｃ７６、１０Ｄ１＿ｃ７７、１０Ｄ１＿ｃ７８、１０Ｄ１＿１１Ｂ（Ｃ７８  ｖ１１ｂと称される）、１０Ｄ１＿ｃ８５、１０Ｄ１＿ｃ８５ｏ１、１０Ｄ１＿ｃ８５ｏ２、１０Ｄ１＿ｃ８９、１０Ｄ１＿ｃ９０、１０Ｄ１＿ｃ９１、および１０Ｄ１＿ｃ９３についての結果を示す。
【図３４Ｂ】サイズ除外クロマトグラフィーによる、組換え発現された抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１の変異体クローンについての解析の結果を示すグラフである。クローンである、１０Ｄ１＿ｃ８９、１０Ｄ１＿ｃ９０、１０Ｄ１＿ｃ９１だけについてのデータである点を除き、３３Ａと同じデータを示す。
【図３５Ａ】示差走査蛍光測定解析による、抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１の変異体クローンの安定性についての解析の結果を示すグラフである。抗ＨＥＲ３抗体クローンである、ＬＪＭ７１６（また、エルゲムツマブとも称される）、１０Ｄ１（１０Ｄ１（親）と称される）、１０Ｄ１＿ｃ７５、１０Ｄ１＿ｃ７６、１０Ｄ１＿ｃ７７、および１０Ｄ１＿ｃ７８についての結果を示す。
【図３５Ｂ】示差走査蛍光測定解析による、抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１の変異体クローンの安定性についての解析の結果を示すグラフである。１０Ｄ１＿ｃ８５ｏ２、１０Ｄ１＿ｃ８７、１０Ｄ１＿ｃ８９、１０Ｄ１＿１１Ｂ（ｃ７８＿Ｖ１１Ｂと称される）、１０Ｄ１＿ｃ８５、および１０Ｄ１＿ｃ８５ｏ１についての結果を示す。
【図３５Ｃ】示差走査蛍光測定解析による、抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１の変異体クローンの安定性についての解析の結果を示すグラフである。１０Ｄ１＿ｃ９０、１０Ｄ１＿ｃ９１、および１０Ｄ１＿ｃ９３についての結果を示す。
【図３６Ａ】抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１の変異体クローンの、ヒトＨＥＲ３に対するアフィニティーについての解析の結果を示す、代表的なセンサーグラムである。Ｋｏｎ、Ｋｏｆｆ、およびＫＤを示す。クローンである、１０Ｄ１＿ｃ８９についての結果を示す。
【図３６Ｂ】抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１の変異体クローンの、ヒトＨＥＲ３に対するアフィニティーについての解析の結果を示す、代表的なセンサーグラムである。Ｋｏｎ、Ｋｏｆｆ、およびＫＤを示す。クローンである、１０Ｄ１＿ｃ９０についての結果を示す。
【図３６Ｃ】抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１の変異体クローンの、ヒトＨＥＲ３に対するアフィニティーについての解析の結果を示す、代表的なセンサーグラムである。Ｋｏｎ、Ｋｏｆｆ、およびＫＤを示す。クローンである、１０Ｄ１＿ｃ９１についての結果を示す。
【図３６Ｄ】抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１の変異体クローンの、ヒトＨＥＲ３に対するアフィニティーについての解析の結果を示す、代表的なセンサーグラムである。Ｋｏｎ、Ｋｏｆｆ、およびＫＤを示す。クローンである、１０Ｄ１＿ｃ１１Ｂについての結果を示す。
【図３６Ｅ】抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１の変異体クローンの、ヒトＨＥＲ３に対するアフィニティーについての解析の結果を示す、代表的なセンサーグラムである。Ｋｏｎ、Ｋｏｆｆ、およびＫＤを示す。クローンである、１０Ｄ１＿ｃ８５ｏ２についての結果を示す。
【図３６Ｆ】抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１の変異体クローンの、ヒトＨＥＲ３に対するアフィニティーについての解析の結果を示す、代表的なセンサーグラムである。Ｋｏｎ、Ｋｏｆｆ、およびＫＤを示す。クローンである、１０Ｄ１＿ｃ８７についての結果を示す。
【図３６Ｇ】抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１の変異体クローンの、ヒトＨＥＲ３に対するアフィニティーについての解析の結果を示す、代表的なセンサーグラムである。Ｋｏｎ、Ｋｏｆｆ、およびＫＤを示す。クローンである、１０Ｄ１＿ｃ９３についての結果を示す。
【図３６Ｈ】抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１の変異体クローンの、ヒトＨＥＲ３に対するアフィニティーについての解析の結果を示す、代表的なセンサーグラムである。Ｋｏｎ、Ｋｏｆｆ、およびＫＤを示す。クローンである、１０Ｄ１＿ｃ７６についての結果を示す。
【図３６Ｉ】抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１の変異体クローンの、ヒトＨＥＲ３に対するアフィニティーについての解析の結果を示す、代表的なセンサーグラムである。Ｋｏｎ、Ｋｏｆｆ、およびＫＤを示す。クローンである、１０Ｄ１＿ｃ７７についての結果を示す。
【図３６Ｊ】抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１の変異体クローンの、ヒトＨＥＲ３に対するアフィニティーについての解析の結果を示す、代表的なセンサーグラムである。Ｋｏｎ、Ｋｏｆｆ、およびＫＤを示す。クローンである、１０Ｄ１＿ｃ７８についての結果を示す。
【図３６Ｋ】抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１の変異体クローンの、ヒトＨＥＲ３に対するアフィニティーについての解析の結果を示す、代表的なセンサーグラムである。Ｋｏｎ、Ｋｏｆｆ、およびＫＤを示す。クローンである、１０Ｄ１＿ｃ７５についての結果を示す。
【図３６Ｌ】抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１の変異体クローンの、ヒトＨＥＲ３に対するアフィニティーについての解析の結果を示す、代表的なセンサーグラムである。Ｋｏｎ、Ｋｏｆｆ、およびＫＤを示す。クローンである、１０Ｄ１＿ｃ８５についての結果を示す。
【図３６Ｍ】抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１の変異体クローンの、ヒトＨＥＲ３に対するアフィニティーについての解析の結果を示す、代表的なセンサーグラムである。Ｋｏｎ、Ｋｏｆｆ、およびＫＤを示す。クローンである、１０Ｄ１＿ｃ８５ｏ１についての結果を示す。
【図３７】抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１の変異体クローンの、安全性および開発可能性に関する特性についてまとめる表である。
【図３８Ａ】ＣＨ２領域内に、ＧＡＳＤＡＬＩＥおよびＬＣＫＣ置換を含む、Ｆｃ修飾抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１についてのバイオレイヤー干渉解析を示す図である。ＢＬＩは、Ｆｃ修飾抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１による、ＦｃγＲＩＩＩａに対する結合アフィニティーについての解析の結果を示す、代表的なセンサーグラムを示す。Ｋｏｎ、Ｋｏｆｆ、およびＫＤを示す。
【図３８Ｂ】ＣＨ２領域内に、ＧＡＳＤＡＬＩＥおよびＬＣＫＣ置換を含む、Ｆｃ修飾抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１についての熱安定性解析を示す図である。
【図３９Ａ】非Ｆｃ修飾抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１による、ＦｃγＲＩＩＩａに対する結合アフィニティーについての解析の結果を示す、代表的なセンサーグラムである。Ｋｏｎ、Ｋｏｆｆ、およびＫＤを示す。
【図３９Ｂ】ＣＨ２領域内に、ＧＡＳＤ置換を含む、Ｆｃ修飾抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１による、ＦｃγＲＩＩＩａに対する結合アフィニティーについての解析の結果を示す、代表的なセンサーグラムである。Ｋｏｎ、Ｋｏｆｆ、およびＫＤを示す。
【図４０】示差走査蛍光測定解析による、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１のＧＡＳＤ変異体の安定性についての解析の結果を示すグラフである。
【図４１Ａ】マウスおよびヒトＦｃ受容体に対する、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡおよび１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢ（ＧＡＳＤＡＬＩＥ−ＬＣＫＣ変異体）の結合アフィニティーを、サイレント変異体である、Ｎ２９７Ｑ、アイソフォーム変異体、および市販の抗体と比較して示す表である。ＮＤ＝低結合アフィニティーのために、ＫＤが決定されない。
【図４１Ｂ】マウスおよびヒトＦｃ受容体に対する、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡおよび１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢ（ＧＡＳＤＡＬＩＥ−ＬＣＫＣ変異体）の結合アフィニティーを、サイレント変異体である、Ｎ２９７Ｑ、アイソフォーム変異体、および市販の抗体と比較して示す表である。ＮＤ＝低結合アフィニティーのために、ＫＤが決定されない。
【図４２Ａ】フローサイトメトリーにより決定される、抗ＨＥＲ３抗体による、細胞の染色を示すヒストグラムである。ヒストグラムは、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡによる、ＨＥＫ２９３細胞（ＨＥＲ３を発現しない）、またはＨＥＫ２９３  ＨＥＲ３過剰発現細胞（ＨＥＫ２９３  ＨＥＲ３  Ｏ／Ｅ）の染色を示す。
【図４２Ｂ】フローサイトメトリーにより決定される、抗ＨＥＲ３抗体による、細胞の染色を示すヒストグラムである。ヒストグラムは、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１およびＬＪＭ−７１６による、ＨＥＫ２９３細胞（ＨＥＲ３を発現しない）、またはＨＥＫ２９３  ＨＥＲ３過剰発現細胞（ＨＥＫ２９３  ＨＥＲ３  Ｏ／Ｅ）の染色を示す。
【図４３】抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡの、ヒトＥＧＦＲ（ＨＥＲ１）およびヒトＨＥＲ２への結合についてのＥＬＩＳＡ解析の結果を示すグラフである。ＥＣ５０値を示す。
【図４４】フローサイトメトリーにより決定される、抗ＨＥＲ３および抗ＨＥＲ４抗体による細胞の染色を示すヒストグラムである。ヒストグラムは、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ、抗ＨＥＲ３抗体である、ＬＪＭ−７１６およびＭＭ−１２１、ならびに市販の抗ＨＥＲ４抗体による、ＨＥＫ２９３  ＨＥＲ４過剰発現細胞の染色を示す。
【図４５】抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡの、ヒト、マウス、ラット、およびカニクイザルＨＥＲ３への結合についてのＥＬＩＳＡ解析の結果を示すグラフである。ＥＣ５０値を示す。
【図４６Ａ】抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡの、ヒトＨＥＲ３に対する結合アフィニティーについての解析の結果を示す、代表的なセンサーグラムである。Ｋｏｎ、Ｋｏｆｆ、およびＫＤを示す。
【図４６Ｂ】抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢの、ヒトＨＥＲ３に対する結合アフィニティーについての解析の結果を示す、代表的なセンサーグラムである。Ｋｏｎ、Ｋｏｆｆ、およびＫＤを示す。
【図４７Ａ】示差走査蛍光測定解析による、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡについての安定性解析の結果を示すグラフである。
【図４７Ｂ】示差走査蛍光測定解析による、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢについての安定性解析の結果を示すグラフである。
【図４８Ａ】サイズ除外クロマトグラフィーによる、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡについての純度解析の結果を示すグラフである。
【図４８Ｂ】サイズ除外クロマトグラフィーによる、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢについての純度解析の結果を示すグラフである。
【図４９Ａ】抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ、ならびに抗ＨＥＲ３抗体である、Ｍ−０５−７４およびＭ−０８−１１の間の、ＨＥＲ３への結合についての競合の解析結果を示す、代表的なセンサーグラムおよび表である。
【図４９Ｂ】抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ、ならびに抗ＨＥＲ３抗体である、Ｍ−０５−７４およびＭ−０８−１１の間の、ＨＥＲ３への結合についての競合の解析結果を示す、代表的なセンサーグラムおよび表である。
【図５０】マウスにおける、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１についての薬物動態解析の結果を示すグラフおよび表である。
【図５１Ａ】抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１による処置の、マウスにおける血球数に対する効果を示すグラフである。左バーは、溶媒対照を表し、右バーは、１０Ｄ１による処置を表す。点線は、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒによる参照範囲の端点を指し示す。肝毒性、腎毒性、および膵毒性の指標は、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）、血中尿素窒素（ＢＵＮ）、クレアチニン（ＣＲＥＡ）、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、グルコース（ＧＬＵ）、カルシウム（ＣＡＬ）、総ビリルビン（ＢＩＬ）、総タンパク質（ＴＰＲ）、およびアルブミン（ＡＬＢ）を含む。
【図５１Ｂ】抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１による処置の、マウスにおける電解質指標に対する効果を示すグラフである。左バーは、溶媒対照を表し、右バーは、１０Ｄ１による処置を表す。点線は、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒによる参照範囲の端点を指し示す。肝毒性、腎毒性、および膵毒性の指標は、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）、血中尿素窒素（ＢＵＮ）、クレアチニン（ＣＲＥＡ）、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、グルコース（ＧＬＵ）、カルシウム（ＣＡＬ）、総ビリルビン（ＢＩＬ）、総タンパク質（ＴＰＲ）、およびアルブミン（ＡＬＢ）を含む。
【図５１Ｃ】抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１による処置の、マウスにおける肝毒性、腎毒性、および膵毒性の指標に対する効果を示すグラフである。左バーは、溶媒対照を表し、右バーは、１０Ｄ１による処置を表す。点線は、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒによる参照範囲の端点を指し示す。肝毒性、腎毒性、および膵毒性の指標は、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）、血中尿素窒素（ＢＵＮ）、クレアチニン（ＣＲＥＡ）、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、グルコース（ＧＬＵ）、カルシウム（ＣＡＬ）、総ビリルビン（ＢＩＬ）、総タンパク質（ＴＰＲ）、およびアルブミン（ＡＬＢ）を含む。
【図５１Ｄ】抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１による処置の、マウスにおける肝毒性、腎毒性、および膵毒性の指標に対する効果を示すグラフである。左バーは、溶媒対照を表し、右バーは、１０Ｄ１による処置を表す。点線は、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒによる参照範囲の端点を指し示す。肝毒性、腎毒性、および膵毒性の指標は、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）、血中尿素窒素（ＢＵＮ）、クレアチニン（ＣＲＥＡ）、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、グルコース（ＧＬＵ）、カルシウム（ＣＡＬ）、総ビリルビン（ＢＩＬ）、総タンパク質（ＴＰＲ）、およびアルブミン（ＡＬＢ）を含む。
【図５１Ｅ】抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１による処置の、マウスにおける肝毒性、腎毒性、および膵毒性の指標に対する効果を示すグラフである。左バーは、溶媒対照を表し、右バーは、１０Ｄ１による処置を表す。点線は、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒによる参照範囲の端点を指し示す。肝毒性、腎毒性、および膵毒性の指標は、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）、血中尿素窒素（ＢＵＮ）、クレアチニン（ＣＲＥＡ）、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、グルコース（ＧＬＵ）、カルシウム（ＣＡＬ）、総ビリルビン（ＢＩＬ）、総タンパク質（ＴＰＲ）、およびアルブミン（ＡＬＢ）を含む。
【図５１Ｆ】抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１による処置の、マウスにおける肝毒性、腎毒性、および膵毒性の指標に対する効果を示すグラフである。左バーは、溶媒対照を表し、右バーは、１０Ｄ１による処置を表す。点線は、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒによる参照範囲の端点を指し示す。肝毒性、腎毒性、および膵毒性の指標は、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）、血中尿素窒素（ＢＵＮ）、クレアチニン（ＣＲＥＡ）、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、グルコース（ＧＬＵ）、カルシウム（ＣＡＬ）、総ビリルビン（ＢＩＬ）、総タンパク質（ＴＰＲ）、およびアルブミン（ＡＬＢ）を含む。
【図５２】ＥＬＩＳＡにより決定される、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ、ならびに抗体である、ＭＭ−１２１、ＬＪＭ−７１６、およびＲｏｃｈｅ  Ｍ０５による、ＨＥＲ２とＨＥＲ３との相互作用の阻害についての解析の結果を示す、グラフおよび表である。
【図５３】ＥＬＩＳＡにより決定される、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ、ならびに抗体である、ＭＭ−１２１およびＬＪＭ７１６によるＥＧＦＲとＨＥＲ３との相互作用の阻害についての解析の結果を示す、グラフおよび表である。
【図５４】抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ（１０Ｄ１Ｆ．Ａ）、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢ（１０Ｄ１Ｆ．Ｂ）、１０Ｄ１Ｆ−ｈＩｇＧ１（Ｎ２９７Ｑ）、ならびに抗ＨＥＲ３抗体である、ＬＪＭ−７１６およびセリバンツマブ（ＭＭ−１２１）、が、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）を誘導する能力についての解析の結果を示す、グラフおよび表である。ＥＣ５０値を示す。
【図５５Ａ】ホスホウェスタンブロットによる、抗ＨＥＲ３抗体による処置の、Ｎ８７細胞内のＨＥＲ３媒介性シグナル伝達に対する効果についての解析の結果を示す画像である。
【図５５Ｂ】ホスホウェスタンブロットによる、抗ＨＥＲ３抗体による処置の、ＦａＤｕ細胞内のＨＥＲ３媒介性シグナル伝達に対する効果についての解析の結果を示す画像である。
【図５５Ｃ】ホスホウェスタンブロットによる、抗ＨＥＲ３抗体による処置の、ＯｖＣａｒ８細胞内のＨＥＲ３媒介性シグナル伝達に対する効果についての解析の結果を示す画像である。
【図５６Ａ】マウスにおける、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡについての薬物動態解析の結果を示すグラフおよび表である。パラメータ：最大濃度（Ｃｍａｘ）、Ｔｍａｘ、ＡＵＣ（０〜３３６時間）、ＡＵＣ（０〜無限大）、半減期（ｔ１／２）、クリアランス（ＣＬ）、定常状態における分布容積（Ｖｓｓ）である。
【図５６Ｂ】マウスにおける、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢについての薬物動態解析の結果を示すグラフおよび表である。パラメータ：最大濃度（Ｃｍａｘ）、Ｔｍａｘ、ＡＵＣ（０〜３３６時間）、ＡＵＣ（０〜無限大）、半減期（ｔ１／２）、クリアランス（ＣＬ）、定常状態における分布容積（Ｖｓｓ）である。
【図５７Ａ】ラットにおける、１０ｍｇ／ｋｇの抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡおよび１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢについての薬物動態解析の結果を示すグラフおよび表である。パラメータ：最大濃度（Ｃｍａｘ）、Ｔｍａｘ、ＡＵＣ（０〜３３６時間）、ＡＵＣ（０〜無限大）、半減期（ｔ１／２）、クリアランス（ＣＬ）、定常状態における分布容積（Ｖｓｓ）である。
【図５７Ｂ】ラットにおける、２５ｍｇ／ｋｇの抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡおよび１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢについての薬物動態解析の結果を示すグラフおよび表である。パラメータ：最大濃度（Ｃｍａｘ）、Ｔｍａｘ、ＡＵＣ（０〜３３６時間）、ＡＵＣ（０〜無限大）、半減期（ｔ１／２）、クリアランス（ＣＬ）、定常状態における分布容積（Ｖｓｓ）である。
【図５７Ｃ】ラットにおける、１００ｍｇ／ｋｇの抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡおよび１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢについての薬物動態解析の結果を示すグラフおよび表である。パラメータ：最大濃度（Ｃｍａｘ）、Ｔｍａｘ、ＡＵＣ（０〜３３６時間）、ＡＵＣ（０〜無限大）、半減期（ｔ１／２）、クリアランス（ＣＬ）、定常状態における分布容積（Ｖｓｓ）である。
【図５７Ｄ】ラットにおける、２５０ｍｇ／ｋｇの抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡおよび１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢについての薬物動態解析の結果を示すグラフおよび表である。パラメータ：最大濃度（Ｃｍａｘ）、Ｔｍａｘ、ＡＵＣ（０〜３３６時間）、ＡＵＣ（０〜無限大）、半減期（ｔ１／２）、クリアランス（ＣＬ）、定常状態における分布容積（Ｖｓｓ）である。
【図５８Ａ】２００ｕｇ（約１０ｍｇ／ｋｇ）、５００ｕｇ（約２５ｍｇ／ｋｇ）、２ｍｇ（約１００ｍｇ／ｋｇ）、または５ｍｇ（約２５０ｍｇ／ｋｇ）の、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡまたは１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢによる処置の、赤血球指標に対する効果を示すグラフである。
【図５８Ｂ】２００ｕｇ（約１０ｍｇ／ｋｇ）、５００ｕｇ（約２５ｍｇ／ｋｇ）、２ｍｇ（約１００ｍｇ／ｋｇ）、または５ｍｇ（約２５０ｍｇ／ｋｇ）の、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡまたは１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢによる処置の、赤血球指標に対する効果を示すグラフである。
【図５８Ｃ】２００ｕｇ（約１０ｍｇ／ｋｇ）、５００ｕｇ（約２５ｍｇ／ｋｇ）、２ｍｇ（約１００ｍｇ／ｋｇ）、または５ｍｇ（約２５０ｍｇ／ｋｇ）の、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡまたは１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢによる処置の、白血球指標に対する効果を示すグラフである。
【図５８Ｄ】２００ｕｇ（約１０ｍｇ／ｋｇ）、５００ｕｇ（約２５ｍｇ／ｋｇ）、２ｍｇ（約１００ｍｇ／ｋｇ）、または５ｍｇ（約２５０ｍｇ／ｋｇ）の、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡまたは１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢによる処置の、肝毒性指標に対する効果を示すグラフである。
【図５８Ｅ】２００ｕｇ（約１０ｍｇ／ｋｇ）、５００ｕｇ（約２５ｍｇ／ｋｇ）、２ｍｇ（約１００ｍｇ／ｋｇ）、または５ｍｇ（約２５０ｍｇ／ｋｇ）の、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡまたは１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢによる処置の、腎臓／膵臓指標に対する効果を示すグラフである。
【図５８Ｆ】２００ｕｇ（約１０ｍｇ／ｋｇ）、５００ｕｇ（約２５ｍｇ／ｋｇ）、２ｍｇ（約１００ｍｇ／ｋｇ）、または５ｍｇ（約２５０ｍｇ／ｋｇ）の、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡまたは１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢによる処置の、電解質指標に対する効果を示すグラフである。
【図５９Ａ】抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡによる処置の、Ｎ８７細胞（胃がん）、ＨＣＣ９５細胞（肺がん）、ＦａＤｕ細胞（頭頸部がん）、ＳＮＵ−１６細胞（胃がん）、Ａ５４９細胞（肺がん）、ＯｖＣａｒ８細胞（卵巣がん）、ＡＣＨＮ細胞（腎がん）、およびＨＴ２９細胞（結腸直腸がん）を使用する、ｉｎ  ｖｉｔｒｏマウスがんモデルにおける腫瘍阻害百分率に対する効果を、抗ＨＥＲ３抗体である、セリバンツマブおよびＬＪＭ−７１６と比較して示すグラフである。
【図５９Ｂ】抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡによる処置の、Ｎ８７細胞（胃がん）、ＨＣＣ９５細胞（肺がん）、ＦａＤｕ細胞（頭頸部がん）、ＳＮＵ−１６細胞（胃がん）、Ａ５４９細胞（肺がん）、ＯｖＣａｒ８細胞（卵巣がん）、ＡＣＨＮ細胞（腎がん）、およびＨＴ２９細胞（結腸直腸がん）を使用する、ｉｎ  ｖｉｔｒｏマウスがんモデルにおける腫瘍阻害百分率に対する効果を、抗ＨＥＲ３抗体である、セリバンツマブおよびＬＪＭ−７１６と比較して示すグラフである。
【図５９Ｃ】抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡによる処置の、Ｎ８７細胞（胃がん）、ＨＣＣ９５細胞（肺がん）、ＦａＤｕ細胞（頭頸部がん）、ＳＮＵ−１６細胞（胃がん）、Ａ５４９細胞（肺がん）、ＯｖＣａｒ８細胞（卵巣がん）、ＡＣＨＮ細胞（腎がん）、およびＨＴ２９細胞（結腸直腸がん）を使用する、ｉｎ  ｖｉｔｒｏマウスがんモデルにおける腫瘍阻害百分率に対する効果を、ＥＧＦＲファミリー療法である、セツキシマブ、トラスツズマブ、およびペルツズマブと比較して示すグラフである。
【図５９Ｄ】抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡによる処置の、Ｎ８７細胞（胃がん）、ＨＣＣ９５細胞（肺がん）、ＦａＤｕ細胞（頭頸部がん）、ＳＮＵ−１６細胞（胃がん）、Ａ５４９細胞（肺がん）、ＯｖＣａｒ８細胞（卵巣がん）、ＡＣＨＮ細胞（腎がん）、およびＨＴ２９細胞（結腸直腸がん）を使用する、ｉｎ  ｖｉｔｒｏマウスがんモデルにおける腫瘍阻害百分率に対する効果を、ＥＧＦＲファミリー療法である、セツキシマブ、トラスツズマブ、およびペルツズマブと比較して示すグラフである。
【図６０】表示の濃度の抗体による、隔週で、６週間にわたる処置の後における、Ａ５４９細胞株に由来する、肺腺癌についてのマウスモデルにおける、時間経過にわたる、腫瘍体積についての解析の結果を示すグラフ（ｎ＝６、溶媒対照のｎ＝８）である。抗体の投与は、ｘ軸に沿う三角により指し示される。
【図６１】表示の濃度の抗体による、毎週で、６週間にわたる処置の後における、ＦａＤｕ細胞株に由来する、頭頸部扁平上皮がんについてのマウスモデルにおける、時間経過にわたる、腫瘍体積についての解析の結果を示すグラフ（ｎ＝６）である。抗体の投与は、ｘ軸に沿う三角により指し示される。
【図６２】表示の濃度の抗体による、毎週で、６週間にわたる処置の後における、ＯｖＣＡＲ８細胞株に由来する、卵巣癌についてのマウスモデルにおける、時間経過にわたる、腫瘍体積についての解析の結果を示すグラフ（ｎ＝６）である。抗体の投与は、ｘ軸に沿う三角により指し示される。
【図６３Ａ】ｉｎ  ｖｉｔｒｏリン酸化アッセイにおける、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ、ＬＪＭ−７１６、またはセリバンツマブにより処置されたがん細胞株についての、遺伝子セットエンリッチメント解析による、経路活性化についての解析の結果を示す箱髭図である。Ｎ８７細胞から得られた結果を示す。
【図６３Ｂ】ｉｎ  ｖｉｔｒｏリン酸化アッセイにおける、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ、ＬＪＭ−７１６、またはセリバンツマブにより処置されたがん細胞株についての、遺伝子セットエンリッチメント解析による、経路活性化についての解析の結果を示す箱髭図である。Ａ５４９細胞から得られた結果を示す。
【図６３Ｃ】ｉｎ  ｖｉｔｒｏリン酸化アッセイにおける、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ、ＬＪＭ−７１６、またはセリバンツマブにより処置されたがん細胞株についての、遺伝子セットエンリッチメント解析による、経路活性化についての解析の結果を示す箱髭図である。ＯｖＣａｒ８細胞から得られた結果を示す。
【図６３Ｄ】ｉｎ  ｖｉｔｒｏリン酸化アッセイにおける、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ、ＬＪＭ−７１６、またはセリバンツマブにより処置されたがん細胞株についての、遺伝子セットエンリッチメント解析による、経路活性化についての解析の結果を示す箱髭図である。ＦａＤｕ細胞から得られた結果を示す。
【図６４】表示の時点における、ホスホウェスタンブロットによる、抗ＨＥＲ３抗体による処置の、Ａ５４９細胞内のＨＥＲ３媒介性シグナル伝達に対する効果についての解析の結果を示す画像である。
【図６５】ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ  Ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ  Ｂｉｏａｓｓａｙにより決定される、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡまたはペルツズマブによる、ＨＥＲ２：ＨＥＲ３相互作用の阻害についての解析の結果を示すグラフである。ＩＣ５０（Ｍ）値を示す。
【図６６Ａ】ＢＣＰＡＰ細胞による、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、およびＨＥＲ３の発現についての解析の結果を示すヒストグラムである。１＝非染色細胞、２＝アイソタイプ対照、３＝セツキシマブ、４＝トラスツズマブ、および５＝１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡである。
【図６６Ｂ】ＢＨＴ１０１細胞による、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、およびＨＥＲ３の発現についての解析の結果を示すヒストグラムである。１＝非染色細胞、２＝アイソタイプ対照、３＝セツキシマブ、４＝トラスツズマブ、および５＝１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡである。
【図６６Ｃ】ＳＷ１７３６細胞による、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、およびＨＥＲ３の発現についての解析の結果を示すヒストグラムである。１＝非染色細胞、２＝アイソタイプ対照、３＝セツキシマブ、４＝トラスツズマブ、および５＝１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡである。
【図６７Ａ】ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ突然変異体甲状腺がん細胞株の増殖を阻害する、異なる抗ＥｒｂＢ抗体の能力についての解析の結果を示すグラフである。ＢＨＴ１０１細胞について得られた結果を示す。
【図６７Ｂ】ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ突然変異体甲状腺がん細胞株の増殖を阻害する、異なる抗ＥｒｂＢ抗体の能力についての解析の結果を示すグラフである。ＢＣＰＡＰ細胞について得られた結果を示す。
【図６７Ｃ】ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ突然変異体甲状腺がん細胞株の増殖を阻害する、異なる抗ＥｒｂＢ抗体の能力についての解析の結果を示すグラフである。ＳＷ１７３６細胞について得られた結果を示す。
【図６８Ａ】ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ突然変異体甲状腺がん細胞株の増殖を阻害する、単独の、またはベムラフェニブと組み合わせた、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡの能力についての解析の結果を示すグラフである。ＢＨＴ１０１細胞について得られた結果を示す。
【図６８Ｂ】ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ突然変異体甲状腺がん細胞株の増殖を阻害する、単独の、またはベムラフェニブと組み合わせた、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡの能力についての解析の結果を示すグラフである。ＳＷ１７３６細胞について得られた結果を示す。
【図６８Ｃ】ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ突然変異体甲状腺がん細胞株の増殖を阻害する、単独の、またはベムラフェニブと組み合わせた、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡの能力についての解析の結果を示すグラフである。ＢＣＰＡＰ細胞について得られた結果を示す。
【図６９Ａ】１０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、または２５０ｍｇ／ｋｇの１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡまたは等容量のＰＢＳの投与後における、ＢＡＬＢ／ｃマウスについての、代表的な血液学的プロファイルを示す表である。赤血球コンパートメントについての解析の結果を示す。ＲＢＣ＝赤血球、ＭＶＣ＝平均値赤血球容積、ＭＣＨ＝平均値赤血球ヘモグロビン、ＭＣＨＣ＝平均値赤血球ヘモグロビン濃度、ＷＢＣ＝白血球、ＡＬＴ＝アラニンアミノトランスフェラーゼ、ＡＬＰ＝アルカリホスファターゼ、ＣＲＥＡ＝クレアチニン、ＢＵＮ＝血中尿素窒素、ＧＬＵ＝グルカゴン、ＡＭＹ＝アミラーゼ、ＮＡ＝ナトリウム、Ｋ＝カリウム、Ｐ＝リン、およびＣＡ＝カルシウムである。
【図６９Ｂ】１０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、または２５０ｍｇ／ｋｇの１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡまたは等容量のＰＢＳの投与後における、ＢＡＬＢ／ｃマウスについての、代表的な血液学的プロファイルを示す表である。白血球コンパートメントについての解析の結果を示す。ＲＢＣ＝赤血球、ＭＶＣ＝平均値赤血球容積、ＭＣＨ＝平均値赤血球ヘモグロビン、ＭＣＨＣ＝平均値赤血球ヘモグロビン濃度、ＷＢＣ＝白血球、ＡＬＴ＝アラニンアミノトランスフェラーゼ、ＡＬＰ＝アルカリホスファターゼ、ＣＲＥＡ＝クレアチニン、ＢＵＮ＝血中尿素窒素、ＧＬＵ＝グルカゴン、ＡＭＹ＝アミラーゼ、ＮＡ＝ナトリウム、Ｋ＝カリウム、Ｐ＝リン、およびＣＡ＝カルシウムである。
【図６９Ｃ】１０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、または２５０ｍｇ／ｋｇの１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡまたは等容量のＰＢＳの投与後における、ＢＡＬＢ／ｃマウスについての、代表的な血液学的プロファイルを示す表である。肝機能、腎機能、および膵機能、ならびに電解質レベルの相関因子についての解析の結果を示す。ＲＢＣ＝赤血球、ＭＶＣ＝平均値赤血球容積、ＭＣＨ＝平均値赤血球ヘモグロビン、ＭＣＨＣ＝平均値赤血球ヘモグロビン濃度、ＷＢＣ＝白血球、ＡＬＴ＝アラニンアミノトランスフェラーゼ、ＡＬＰ＝アルカリホスファターゼ、ＣＲＥＡ＝クレアチニン、ＢＵＮ＝血中尿素窒素、ＧＬＵ＝グルカゴン、ＡＭＹ＝アミラーゼ、ＮＡ＝ナトリウム、Ｋ＝カリウム、Ｐ＝リン、およびＣＡ＝カルシウムである。
【図７０Ａ】２５０ｍｇ／ｋｇの１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡまたは等容量のＰＢＳの投与後の、表示の時点における、ＳＤラットについての、代表的な血液学的プロファイルを示す表である。赤血球コンパートメントについての解析の結果を示す。ＲＢＣ＝赤血球、ＭＶＣ＝平均値赤血球容積、ＭＣＨ＝平均値赤血球ヘモグロビン、ＭＣＨＣ＝平均値赤血球ヘモグロビン濃度、ＷＢＣ＝白血球、ＡＬＴ＝アラニンアミノトランスフェラーゼ、ＡＬＰ＝アルカリホスファターゼ、ＣＲＥＡ＝クレアチニン、ＢＵＮ＝血中尿素窒素、ＧＬＵ＝グルカゴン、ＡＭＹ＝アミラーゼ、ＮＡ＝ナトリウム、Ｋ＝カリウム、Ｐ＝リン、およびＣＡ＝カルシウムである。
【図７０Ｂ】２５０ｍｇ／ｋｇの１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡまたは等容量のＰＢＳの投与後の、表示の時点における、ＳＤラットについての、代表的な血液学的プロファイルを示す表である。白血球コンパートメントについての解析の結果を示す。ＲＢＣ＝赤血球、ＭＶＣ＝平均値赤血球容積、ＭＣＨ＝平均値赤血球ヘモグロビン、ＭＣＨＣ＝平均値赤血球ヘモグロビン濃度、ＷＢＣ＝白血球、ＡＬＴ＝アラニンアミノトランスフェラーゼ、ＡＬＰ＝アルカリホスファターゼ、ＣＲＥＡ＝クレアチニン、ＢＵＮ＝血中尿素窒素、ＧＬＵ＝グルカゴン、ＡＭＹ＝アミラーゼ、ＮＡ＝ナトリウム、Ｋ＝カリウム、Ｐ＝リン、およびＣＡ＝カルシウムである。
【図７０Ｃ】２５０ｍｇ／ｋｇの１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡまたは等容量のＰＢＳの投与後の、表示の時点における、ＳＤラットについての、代表的な血液学的プロファイルを示す表である。肝機能、腎機能、および膵機能、ならびに電解質レベルの相関因子についての解析の結果を示す。ＲＢＣ＝赤血球、ＭＶＣ＝平均値赤血球容積、ＭＣＨ＝平均値赤血球ヘモグロビン、ＭＣＨＣ＝平均値赤血球ヘモグロビン濃度、ＷＢＣ＝白血球、ＡＬＴ＝アラニンアミノトランスフェラーゼ、ＡＬＰ＝アルカリホスファターゼ、ＣＲＥＡ＝クレアチニン、ＢＵＮ＝血中尿素窒素、ＧＬＵ＝グルカゴン、ＡＭＹ＝アミラーゼ、ＮＡ＝ナトリウム、Ｋ＝カリウム、Ｐ＝リン、およびＣＡ＝カルシウムである。
【図７１】ホスホウェスタンブロットにより決定される、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡによる処置の、ｉｎ  ｖｉｖｏの、ＦａＤｕ、またはＯｖＣａｒ８細胞由来の腫瘍の細胞における、ＨＥＲ３媒介性シグナル伝達に対する効果についての解析の結果を示す画像である。
【図７２】表示の細胞株による、異なる抗ＥｒｂＢ抗体の内在化についての解析の結果を示す箱髭図である。
【図７３Ａ】フローサイトメトリーにより決定される、異なる時点における、表示の細胞株による、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡまたはトラスツズマブの内在化についての解析の結果を示すヒストグラムおよび表である。
【図７３Ｂ】フローサイトメトリーにより決定される、異なる時点における、表示の細胞株による、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡまたはトラスツズマブの内在化についての解析の結果を示すヒストグラムおよび表である。７３Ｂは、７３Ａに示されたヒストグラムから決定される、ＰＥ陽性細胞の蛍光強度中央値および百分率を示す。
【図７４】表示の濃度の、表示の抗ＥｒｂＢ抗体による、隔週で、６週間にわたる処置の後における、Ｎ８７細胞株に由来する、胃がんについてのマウスモデルにおける、時間経過にわたる、腫瘍体積についての解析の結果を示すグラフ（ｎ＝６）である。抗体の投与は、ｘ軸に沿う三角により指し示される。
【図７５Ａ】１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡを使用する、悪性および正常ヒト組織についての免疫組織化学染色を示す画像である。異なる組織の染色を示す。
【図７５Ｂ】１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡを使用する、悪性および正常ヒト組織についての免疫組織化学染色を示す画像である。異なる組織の染色を示す。
【図７６】表示の拡大率における、１０Ｄ１Ｆまたはウサギポリクローナル抗ＨＥＲ３抗体による、Ａ５４９腫瘍異種移植凍結切片についての免疫組織化学染色を示す画像である。二次抗体だけによる対照染色を示す。
【図７７Ａ】２５ｍｇ／ｋｇにおける、マウスへのＩＰ投与後のＣｍａｘで、抗体が到達する血清濃度において、表示の抗ＥｒｂＢ抗体が、表示のがん細胞株のｉｎ  ｖｉｔｒｏ増殖を阻害する能力についての解析の結果を示す棒グラフである。異なる細胞株を使用して得られた結果を示す。
【図７７Ｂ】２５ｍｇ／ｋｇにおける、マウスへのＩＰ投与後のＣｍａｘで、抗体が到達する血清濃度において、表示の抗ＥｒｂＢ抗体が、表示のがん細胞株のｉｎ  ｖｉｔｒｏ増殖を阻害する能力についての解析の結果を示す棒グラフである。異なる細胞株を使用して得られた結果を示す。
【実施例】
【０５９１】
以下の実施例では、本発明者らは、ＨＥＲ３分子内の、目的の特異的領域へとターゲティングされる、新規の抗ＨＥＲ３抗体クローンの作出、ならびにこれらの抗原結合性分子についての生物物理的および機能的特徴付け、ならびに治療的評価について記載する。
【０５９２】
実施例１
ＨＥＲ３標的のデザインおよび抗ＨＥＲ３抗体ハイブリドーマの作製
本発明者らは、ＨＥＲ３結合性モノクローナル抗体を惹起するために、ヒトＨＥＲ３（配列番号９）の細胞外領域内の、２つの領域を選択した。
１．１  ハイブリドーマの作製
約６週齢の、雌ＢＡＬＢ／ｃマウスは、ＩｎＶｉｖｏｓ（Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ）から得た。動物は、特定の無病原体条件下で飼育し、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）ガイドラインに準拠して処置した。
【０５９３】
ハイブリドーマの作製のために、マウスを、抗原性ペプチド、組換え標的タンパク質、または標的タンパク質を発現する細胞の、本発明者らに所有権がある混合物で免疫化した。
【０５９４】
融合のための脾臓を採取する前に、マウスに、抗原混合物を、連続３日間にわたり、または１日間だけにわたり追加免役した。最終追加免役の２４時間後、全脾臓細胞を単離し、製造元の指示書（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｎａｄａ）に従い、ＣｌｏｎａＣｅｌｌ−ＨＹハイブリドーマクローニングキットを使用して、ＰＥＧにより、骨髄腫細胞株である、Ｐ３Ｘ６３．Ａｇ８．６５３（ＡＴＣＣ、ＵＳＡ）と融合させた。
【０５９５】
融合細胞は、３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーター内の、ＣｌｏｎａＣｅｌｌ−ＨＹ培地Ｃ（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｎａｄａ）中で、一晩にわたり培養した。翌日、融合細胞を遠心分離し、１０ｍｌのＣｌｏｎａＣｅｌｌ−ＨＹ培地Ｃ中に再懸濁させ、次いで、ＨＡＴ成分を含有する、９０ｍｌの、半固体メチルセルロースベースの、ＣｌｏｎａＣｅｌｌ−ＨＹ培地Ｄ（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｎａｄａ）と、静かに混合し、これにより、ハイブリドーマの選択と、クローニングとを、１つステップへと組み合わせた。
【０５９６】
次いで、融合細胞を、９６ウェルプレートへと播種し、３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーター内で増殖させた。７〜１０日後、単一のハイブリドーマクローンを単離し、抗体産生ハイブリドーマを、酵素免疫測定アッセイ（ＥＬＩＳＡ）および蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）によって、上清をスクリーニングすることにより選択した。
１．２  抗体可変領域の増幅およびシーケンシング
製造元のプロトコールを使用する、ＴＲＩｚｏｌ試薬（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．、ＵＳＡ）を使用して、全ＲＮＡを、ハイブリドーマ細胞から抽出した。製造元の指示書に従い、ＳＭＡＲＴｅｒ  ＲＡＣＥ  ５’／３’キット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ（商標）、ＵＳＡ）を使用して、二本鎖ｃＤＮＡを合成した。略述すると、５’−ＲＡＣＥ  ＣＤＳプライマー（キット内に提供された）、および５’アダプター（ＳＭＡＲＴｅｒ  ＩＩ  Ａプライマー）を使用して、全長ｃＤＮＡを作出するのに、１μｇの全ＲＮＡを使用し、次いで、製造元の指示書に従い、各ｃＤＮＡへと組み込んだ。ｃＤＮＡ合成反応物は、５倍濃度のＦｉｒｓｔ−Ｓｔｒａｎｄ緩衝液、ＤＴＴ（２０ｍＭ）、ｄＮＴＰミックス（１０  ｍＭ）、ＲＮアーゼ阻害剤（４０Ｕ／μｌ）、およびＳＭＡＲＴＳｃｒｉｂｅ逆転写酵素（１００Ｕ／μｌ）を含有した。
【０５９７】
ＳｅｑＡｍｐ  ＤＮＡポリメラーゼ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ（商標）、ＵＳＡ）を使用して、ｒａｐｉｄ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃＤＮＡ  ｅｎｄｓ（ＲＡＣＥ）の準備ができたｃＤＮＡを増幅した。増幅反応物は、ＳｅｑＡｍｐ  ＤＮＡポリメラーゼ、２倍濃度のＳｅｑ  ＡＭＰ緩衝液、５’ＳＭＡＲＴｅｒ  Ｒａｃｅキットで提供される、アダプター配列に相補的な、５’ユニバーサルプライマー、および、それぞれの重鎖定常領域または軽鎖定常領域のプライマーにアニーリングする、３’プライマーを含有した。５’定常領域は、Ｋｒｅｂｂｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、１９９７、２０１：３５〜５５；Ｗａｎｇら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ、２０００、２３３、１６７〜１７７；またはＴｉｌｌｅｒら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ、２００９、３５０：１８３〜１９３により、既に報告されたプライマーミックスに基づきデザインした。以下の熱プロトコール：９４℃で、１分間にわたる、前変性サイクル；９４℃で、３０秒間、５５℃で、３０秒間、および７２℃で、４５秒間にわたる、３５サイクル；７２℃で、３分間にわたる、最終伸長を使用した。
【０５９８】
ＣｌｏｎｅＪＥＴ  ＰＣＲクローニングキット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＵＳＡ）を使用して、結果として得られる、約５５０ｂｐである、ＶＨおよびＶＬのＰＣＲ産物を、ｐＪＥＴ１．２／ｂｌｕｎｔベクターへとクローニングし、高度にコンピテントのＥ．ｃｏｌｉ  ＤＨ５αを形質転換するのに使用した。Ｍｉｎｉｐｒｅｐキット（Ｑｉａｇｅｎｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、結果として得られる形質転換体から、プラスミドＤＮＡを調製し、シーケンシングした。ＤＮＡシーケンシングは、ＡＩＴｂｉｏｔｅｃｈにより行われた。ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩＭＧＴ（ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ）ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ（ＬｅＦｒａｎｃら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．（２０１５）、４３（データベース号）：Ｄ４１３〜２２）を使用して、これらのシーケンシングデータを解析して、個々のＣＤＲおよびフレームワーク配列を特徴付けた。ＶＨおよびＶＬの５’末端におけるシグナルペプチドは、ＳｉｇｎａｌＰ（ｖ  ４．１；Ｎｉｅｌｓｅｎ；Ｋｉｈａｒａ，Ｄ（編）：「Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ」（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、１６１１巻）５９〜７３、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ、２０１７）により同定した。
【０５９９】
４つの抗ＨＥＲ３モノクローナル抗体クローン：１０Ｄ１、１０Ａ６、４−３５−Ｂ２、および４−３５−Ｂ４を、さらなる開発のために選択した。
【０６００】
１０Ｄ１のヒト化バージョンを、相補性決定領域（ＣＤＲ）を、ヒト抗体フレームワーク領域を含むＶＨおよびＶＬへとグラフトすることにより、コンピュータでデザインし、酵母ディスプレイ法により、抗原への結合について、さらに最適化した。
【０６０１】
酵母ディスプレイのために、ヒト化配列を、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により、単鎖断片可変（ｓｃＦｖ）フォーマットへと転換し、ランダム突然変異誘発により、突然変異体ライブラリーを作出するための鋳型として使用した。次いで、突然変異体ＰＣＲライブラリーを、直鎖化ｐＣＴｃｏｎ２ベクターと併せて、酵母へと電気穿孔して、酵母ライブラリーを作出した。ライブラリーを、ヒトＨＥＲ３抗原で染色し、上位の結合剤について分取した。４〜５ラウンドにわたる分取の後、個々の酵母クローンをシーケンシングして、固有の抗体配列を同定した。
【０６０２】
【表３】
2021510535.tif 000022
実施例２
抗体の作製および精製
２．１  ＶＨおよびＶＬの、発現ベクターへのクローニング：
ヒト−マウスキメラ抗体を構築するために、抗ＨＥＲ３抗体クローンの、重および軽鎖可変領域をコードするＤＮＡ配列を、ｐｍＡｂＤＺ＿ＩｇＧ１＿ＣＨおよびｐｍＡｂＤＺ＿ＩｇＧ１＿ＣＬ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、ＵＳＡ）の真核生物発現ベクターへとサブクローニングした。
【０６０３】
代替的に、ヒト−マウスキメラ抗体を構築するために、抗ＨＥＲ３抗体クローンの、重および軽鎖可変領域をコードするＤＮＡ配列を、ｐＦＵＳＥ−ＣＨＩｇ−ｈＧ１およびｐＦＵＳＥ２ｓｓ−ＣＬＩｇ−ｈｋ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、ＵＳＡ）の真核生物発現ベクターへとサブクローニングした。ｐＦＵＳＥ−ＣＨＩｇ−ｈＧ１によりコードされるヒトＩｇＧ１定常領域は、ＣＨ３領域内に、ヒトＩｇＧ１定常領域（ＩＧＨＧ１；ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ０１８５７−１、ｖ１；配列番号１７６）と比べた置換である、Ｄ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ（ＥＵ番号付けに従い番号付けされた位置）を含む。ｐＦＵＳＥ２ｓｓ−ＣＬＩｇ−ｈｋは、ヒトＩｇＧ１軽鎖カッパ定常領域（ＩＧＣＫ；ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ０１８３４−１、ｖ２）をコードする。
【０６０４】
製造元のプロトコールに従い、ＳｅｑＡｍｐ酵素（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ（商標）、ＵＳＡ）を使用して、可変領域を、シグナルペプチドと共に、クローニングベクターから増幅した。ＶＨまたはＶＬ内の、適切な領域と重複する、１５〜２０ｂｐに加えて、５’末端における、制限部位として、６ｂｐを有する、フォワードおよびリバースプライマーを使用した。ＤＮＡインサートおよびベクターを、製造元により推奨される制限酵素で消化して、フレームシフトが、導入されていないことを確認し、Ｔ４リガーゼ酵素（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＵＳＡ）を使用して、そのそれぞれのプラスミドへとライゲーションした。ＤＮＡインサートの、ベクターに対する、３：１のモル比を、ライゲーションのために使用した。
２．２  哺乳動物細胞内の、抗体の発現
製造元の指示書に従い、１）Ｅｘｐｉ２９３一過性発現系キット（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＵＳＡ）、または２）ＨＥＫ２９３−６Ｅ一過性発現系（ＣＮＲＣ−ＮＲＣ、Ｃａｎａｄａ）を使用して、抗体を発現させた。
１）Ｅｘｐｉ２９３一過性発現系：
細胞株の維持：
ＨＥＫ２９３Ｆ細胞（Ｅｘｐｉ２９３Ｆ）は、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ（ＵＳＡ）から得た。細胞は、３７℃、８％ＣＯ２、振とう型プラットフォームを伴う、８０％の加湿式インキュベーター内の、５０ＩＵ／ｍｌのペニシリン５０μｇ／ｍｌのストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ、ＵＳＡ）を補充した、無血清、無タンパク質の既知組成培地（Ｅｘｐｉ２９３発現培地、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ、ＵＳＡ）中で培養した。
トランスフェクション：
Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞に、その製造元のプロトコールに従い、ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ  ２９３試薬キット（Ｇｉｂｃｏ、ＵＳＡ）を使用して、発現プラスミドをトランスフェクトした。略述すると、培養物をスピンダウンすることにより、抗生剤を除去するように、維持状態の細胞を、培地交換にかけ、細胞ペレットを、トランスフェクションの１日前に、抗生剤を伴わない新鮮培地中に再懸濁させた。トランスフェクション日に、各トランスフェクションのために、１ｍｌ当たりの生存細胞２．５×１０６個を、シェーカーフラスコ内に播種した。細胞へと添加する前に、血清低減培地である、Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ、ＵＳＡ）中、室温で、２５分間にわたり、ＤＮＡ−ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ複合体を形成した。トランスフェクションの１６〜１８時間後に、転写促進因子を、トランスフェクトされた細胞へと添加した。トランスフェクションの４日後に、等量の培地を、トランスフェクタントの上にかけ、細胞の凝集を防止した。トランスフェクタントを、４０００×ｇで、１５分間にわたる、７日目により採取し、０．２２μｍの滅菌フィルターユニットを通して濾過した。
２）ＨＥＫ２９３−６Ｅ一過性発現系
細胞株の維持：
ＨＥＫ２９３−６Ｅ細胞は、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｕｎｃｉｌ  Ｃａｎａｄａから得た。細胞は、３７℃、５％ＣＯ２、振とう型プラットフォームを伴う、８０％の加湿式インキュベーター内の、０．１％のＫｏｌｌｉｐｈｏｒ−Ｐ１８８および４ｍＭのＬ−グルタミン（Ｇｉｂｃｏ、ＵＳＡ）および２５μｇ／ｍｌのＧ−４１８を補充した、無血清、無タンパク質、既知組成のＦｒｅｅｓｔｙｌｅ  Ｆ１７培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＵＳＡ）中で培養した。
トランスフェクション：
ＨＥＫ２９３−６Ｅ細胞に、その製造元のプロトコールに従い、ＰＥＩｐｒｏ（商標）（Ｐｏｌｙｐｌｕｓ、ＵＳＡ）を使用して、発現プラスミドをトランスフェクトした。略述すると、遠心分離により、抗生剤を除去するように、維持状態の細胞を、培地交換にかけ、細胞ペレットを、トランスフェクションの１日前に、抗生剤を伴わない新鮮培地と共に再懸濁させた。トランスフェクション日に、各トランスフェクションのために、１ｍｌ当たりの生存細胞１．５〜２×１０６個を、シェーカーフラスコ内に播種した。ＤＮＡとＰＥＩｐｒｏ（商標）とを、１：１の比で混合し、細胞へと添加する前に、ＲＴで、５分間にわたり、Ｆ１７培地中で、複合体を形成させた。トランスフェクションの２４〜４８時間後に、０．５％（ｗ／ｖ）のＴｒｙｐｔｏｎｅ  Ｎ１を、トランスフェクタントへとフィードした。トランスフェクタントを、４０００×ｇで、１５分間にわたる、６〜７日目により採取し、上清を、０．２２μｍの滅菌フィルターユニットを通して濾過した。
【０６０５】
細胞に、以下の組合せのポリペプチドをコードするベクターをトランスフェクトした。
【０６０６】
【表４−１】
2021510535.tif 000023
【０６０７】
【表４−２】
2021510535.tif 000024
２．３  抗体の精製
アフィニティー精製、緩衝液交換、および保管：
トランスフェクトされた細胞により、培養物上清へと分泌された抗体は、液体クロマトグラフィーシステムである、ＡＫＴＡ  Ｓｔａｒｔ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＵＫ）を使用して精製した。具体的には、上清を、ＨｉＴｒａｐプロテインＧカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＵＫ）へと、５ｍｌ／分の結合速度でロードするのに続き、カラムを、１０カラム容量の洗浄緩衝液（２０ｍＭのリン酸ナトリウム、ｐＨ７．０）で洗浄した。結合したｍＡｂを、溶出緩衝液（０．１Ｍのグリシン、ｐＨ２．７）により溶出させ、溶出液を、適量の中和緩衝液（１Ｍのトリス、ｐＨ９）を含有する回収チューブへと分画した。カットオフ分子量（ＭＷＣＯ）３０Ｋタンパク質濃縮器（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ、ＵＳＡ）またはＭＷＣＯ  ３，５Ｋ透析カセット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ、ＵＳＡ）を使用して、精製されたｍＡｂを含有する、中和溶出緩衝液を、ＰＢＳへと交換した。０．２２μｍのフィルターを通すことにより、モノクローナル抗体を滅菌し、アリコート分割し、保管のために、−８０℃で凍結させた。
２．４  抗体純度解析
サイズ除外クロマトグラフィー（ＳＥＣ）：
抗体純度を、ＡＫＴＡ  Ｅｘｐｌｏｒｅｒ液体クロマトグラフィーシステム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＵＫ）上の、ＰＢＳランニング緩衝液中で、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００  １０／３０  ＧＬカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＵＫ）を使用する、サイズ除外クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により解析した。５００μｌのＰＢＳ  ｐＨ７．２中に、１５０μｇの抗体を、室温、０．７５ｍｌ／分の流量で、カラムへと注入した。タンパク質を、それらの分子量に従い溶出させた。
【０６０８】
抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１（実施例２．２の［１］）についての結果を、図１２に示す。
【０６０９】
異なる１０Ｄ１変異体クローンについて得られた結果を、図３４に示す。
ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）：
抗体純度もまた、標準的な方法に従う、還元条件下および非還元条件下における、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより解析した。略述すると、Ｍｉｎｉ−Ｐｒｏｔｅａｎ  Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓシステム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、ＵＳＡ）を使用して、タンパク質を分解するのに、４％〜２０％のＴＧＸタンパク質ゲル（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、ＵＳＡ）を使用した。非還元条件のために、ゲルへとロードする前に、２倍濃度のＬａｅｍｍｌｉ試料緩衝液（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、ＵＳＡ）と混合することにより、タンパク質試料を変性させ、９５℃で、５〜１０分間にわたり煮沸した。還元条件のために、５％のβ−メルカプトエタノール（βＭＥ）または４０ｍＭのＤＴＴ（ジチオトレイトール）を含有する、２倍濃度の試料緩衝液を使用した。電気泳動は、１５０Ｖの一定電圧下、ＳＤＳランニング緩衝液（２５ｍＭのトリス、１９２ｍＭのグリシン、１％のＳＤＳ、ｐＨ８．３）中、１時間にわたり行った。
ウェスタンブロット：
タンパク質試料（３０μｇ）を、上記で記載した通りに、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分画し、ニトロセルロース膜へと転写した。次いで、膜をブロッキングし、４℃で、一晩にわたり、抗体による免疫ブロットにかけた。次いで、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ中、３回にわたり洗浄した後、膜を、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）コンジュゲート二次抗体と共に、室温で、１時間にわたりインキュベートした。結果は、化学発光による、Ｐｉｅｒｃｅ  ＥＣＬ基質ウェスタンブロット検出システム（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＵＳＡ）によって視覚化し、オートラジオグラフィーフィルム（Ｋｏｄａｋ  ＸＡＲフィルム）へと曝露した。
【０６１０】
検出のために使用される一次抗体は、ヤギ抗ヒトＩｇＧ−ＨＲＰ（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ；型番：Ａ００１６６）、およびヤギ抗ヒトカッパ−ＨＲＰ（ＳｏｕｔｅｒｈｎＢｉｏｔｅｃｈ；型番：２０６０−０５）であった。
【０６１１】
抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１（実施例２．２の［１］）についての結果を、図１３に示す。１０Ｄ１は、高濃度で、容易に発現され、精製され、加工された。
【０６１２】
実施例３
生物物理的特徴付け
３．１  フローサイトメトリーによる、細胞表面における抗原結合についての解析
野生型ＨＥＫ２９３細胞（高レベルのＨＥＲ３を発現しない）、およびヒトＨＥＲ３をコードするベクターをトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞（すなわち、ＨＥＫ  ２９３  ＨＥＲ  Ｏ／Ｅ細胞）を、２０μｇ／ｍｌの抗ＨＥＲ３抗体またはアイソタイプ対照抗体と共に、４℃で、１．５時間にわたりインキュベートした。抗ＨＥＲ３抗体クローンである、ＬＪＭ７１６（例えば、Ｇａｒｎｅｒら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ（２０１３）、７３：６０２４〜６０３５において記載された）を、陽性対照として、解析に組み入れた。
【０６１３】
細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液（５ｍＭのＥＤＴＡと、０．５％のＢＳＡとを伴うＰＢＳ）で、３回にわたり洗浄し、ＦＩＴＣコンジュゲート抗ＦＣ抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＵＳＡ）中、２〜８℃で、４０分間にわたり再懸濁させた。細胞を再度洗浄し、ＭＡＣＳＱｕａｎｔ  １０（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、フローサイトメトリー解析のために、２００μＬのＦＡＣＳフロー緩衝液（５ｍＭのＥＤＴＡを伴うＰＢＳ）中に再懸濁させた。収集の後、Ｆｌｏｗｌｏｇｉｃソフトウェアを使用して、全ての生データを解析した。前方散乱および側方散乱のプロファイルを使用して、細胞にゲートをかけ、陽性細胞の百分率を、天然および過剰発現細胞集団について決定した。
【０６１４】
結果を、図１〜４および３０〜３２に示す。抗ＨＥＲ３抗体は、ヒトＨＥＲ３に、高度の特異性で結合することが示された。１０Ｄ１とＬＪＭ７１６とは、ヒトＨＥＲ３発現細胞に、同程度に結合することが示された。
３．２  抗体の特異性および交差反応性を決定するためのＥＬＩＳＡ
ＥＬＩＳＡを使用して、抗体の結合特異性を決定した。抗体を、ヒトＨＥＲ３ポリペプチド、ならびにそれぞれの、ＨＥＲ３の、マウス、ラット、およびサルの相同体（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｃ．、Ｃｈｉｎａ）への結合について解析した。抗体はまた、ヒトＥＧＦＲおよびヒトＨＥＲ２（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｃ．、Ｃｈｉｎａ）に結合する、それらの能力についても解析した。
【０６１５】
ＥＬＩＳＡを、標準的なプロトコールに従い行った。略述すると、９６ウェルプレート（Ｎｕｎｃ、Ｄｅｎｍａｒｋ）を、４℃で、１６時間にわたり、リン酸緩衝生理食塩液（ＰＢＳ）中に０．１μｇ／ｍｌの標的ポリペプチドによりコーティングした。トリス緩衝液生理食塩液（ＴＢＳ）中１％のＢＳＡによる、室温で、１時間にわたるブロッキングの後、抗ＨＥＲ３抗体を、最高濃度を１０μｇ／ｍｌとして系列希釈し、プレートへと添加した。室温で、１時間にわたるインキュベーション後、プレートを、０．０５％のＴｗｅｅｎ  ２０を含有するＴＢＳ（ＴＢＳ−Ｔ）で、３回にわたり洗浄し、次いで、ＨＲＰコンジュゲート抗Ｈｉｓ抗体（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．、ＵＳＡ）と共に、室温で、１時間にわたりインキュベートした。洗浄の後、プレートを、比色検出基質である、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（Ｔｕｒｂｏ−ＴＭＢ；Ｐｉｅｒｃｅ、ＵＳＡ）で、１０分間にわたり現像した。２ＭのＨ２ＳＯ４で、反応を停止させ、４５０ｎｍで、ＯＤを測定した。
【０６１６】
ＥＬＩＳＡについての結果を、図５〜７および図３３に示す。
【０６１７】
抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１は、高抗体濃度であってもなお、ヒトＨＥＲ２またはヒトＥＧＦＲに結合しないことが見出された（図５Ａ）。抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１はまた、マウスＨＥＲ３、ラットＨＥＲ３、およびカニクイザルＨＥＲ３との、実質的な交差反応性を呈することも見出された（図５Ｂ）。
【０６１８】
抗ＨＥＲ３抗体クローンである、４−３５−Ｂ２は、ヒトＨＥＲ２およびヒトＥＧＦＲに結合することが見出された（図６Ａ）。抗ＨＥＲ３抗体クローンである、４−３５−Ｂ２はまた、マウスＨＥＲ３、ラットＨＥＲ３、およびカニクイザルＨＥＲ３との、実質的な交差反応性も呈した（図６Ｂ）。
【０６１９】
抗ＨＥＲ３抗体クローンである、４−３５−Ｂ４は、ヒトＨＥＲ２およびヒトＥＧＦＲに結合することが見出された（図７Ａ）。抗ＨＥＲ３抗体クローンである、４−３５−Ｂ４はまた、マウスＨＥＲ３、ラットＨＥＲ３、およびカニクイザルＨＥＲ３との、実質的な交差反応性も呈した（図７Ｂ）。
【０６２０】
１０Ｄ１変異体の全ては、ヒトＨＥＲ３に結合することが裏付けられた（図３３Ａおよび３３Ｂ）。
３．３  Ｏｃｔｅｔ  ＱＫ３８４システムを使用する、グローバルアフィニティー研究
ＩｇＧ１フォーマットにおける抗ＨＥＲ３抗体クローンを、ヒトＨＥＲ３に対する結合アフィニティーについて解析した。
【０６２１】
Ｏｃｔｅｔ  ＱＫ３８４システム（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を使用して、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）実験を実施した。抗ヒトＩｇＧ捕捉（ＡＨＣ）Ｏｃｔｅｔセンサーチップ（Ｐａｌｌ  ＦｏｒｔｅＢｉｏ、ＵＳＡ）を、抗体（２５ｎＭ）に対して使用した。全ての測定は、２５℃、１０００ｒｐｍで攪拌しながら実施した。抗原への結合についての反応速度の測定は、Ｈｉｓタグ付けヒトＨＥＲ３抗原を、異なる濃度で、１２０秒間にわたりロードするのに続き、１２０秒間の解離時間を置き、バイオセンサーを、アッセイ緩衝液を含有するウェルへと導入することにより実施した。緩衝液効果について、センサーグラムを参照し、次いで、Ｏｃｔｅｔ  ＱＫ３８４ユーザーソフトウェア（Ｐａｌｌ  ＦｏｒｔｅＢｉｏ、ＵＳＡ）を使用して当てはめた。反応速度応答は、１部位結合モデルを使用するグローバルフィッティングにかけて、会合速度定数（Ｋｏｎ）、解離速度定数（Ｋｏｆｆ）、および平衡解離定数（ＫＤ）についての値を得た。ソフトウェアにより、信頼できる形で（Ｒ２＞０．９０）当てはめうる曲線だけを、解析に組み入れた。
【０６２２】
クローンである、１０Ｄ１についての解析のための、代表的なセンサーグラムを、図８に示す。クローンである、１０Ｄ１は、ＫＤ＝９．５８ｎＭのアフィニティーで、ヒトＨＥＲ３に結合することが見出された。
【０６２３】
ヒト化／最適化された１０Ｄ１変異体は、ヒトＨＥＲ３に、極めて高度のアフィニティーで結合する。代表的なセンサーグラムを、図３６Ａ〜３６Ｍに示す。
【０６２４】
１０Ｄ１クローン変異体について決定されたアフィニティーを、下記に示す。
【０６２５】
【表５】
2021510535.tif 000025
クローンである、４−３５−Ｂ２は、ＫＤ＝８０．９ｎＭのアフィニティーで、ヒトＨＥＲ３に結合することが見出され（図９）、クローンである、４−３５−Ｂ４は、ＫＤ＝５０．３ｎＭのアフィニティーで、ヒトＨＥＲ３に結合することが見出された（図１０）。
３．４  示差走査蛍光測定法による、熱安定性についての解析
略述すると、０．２ｍｇ／ｍＬの、３連の抗体反応ミックス、およびＳＹＰＲＯ  Ｏｒａｎｇｅ色素（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を、２５μＬのＰＢＳ中で調製し、ＭｉｃｒｏＡｍｐ  Ｏｐｔｉｃａｌ  ９６ウェル反応プレート（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）のウェルへと移し、ＭｉｃｒｏＡｍｐ  Ｏｐｔｉｃａｌ  Ａｄｈｅｓｉｖｅ  Ｆｉｌｍ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）でシーリングした。ＴＡＭＲＡを、レポーターとして選択し、ＲＯＸを、受動参照として選択して、溶融曲線解析を、７５００  ｆａｓｔ  Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  ＰＣＲシステム（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）において実行した。熱プロファイルは、傾斜率を１．２％として、２５℃で、２分間の初期ステップと、９９℃で、２分間の最終ステップとを含んだ。生データの一次微分を、温度の関数としてプロットして、微分溶融曲線を得た。抗体の溶融温度（Ｔｍ）は、微分曲線のピークから抽出した。
【０６２６】
抗体クローンである、１０Ｄ１の熱安定性についての示差走査蛍光測定解析のために得られた生データの一次微分を、図１１に示す。抗体の、３つ異なる試料を解析した。Ｔｍを、７０．３℃であると決定した。
【０６２７】
解析はまた、１０Ｄ１変異体クローンおよびＬＪＭ７１６についても実施した。生データの一次微分、および決定されたＴｍを、図３５Ａ〜３５Ｃに示す。
３．５  抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１のエピトープについての解析
抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１を解析して、それが、ＨＥＲ３への結合について、抗ＨＥＲ３抗体である、ＭＭ−１２１および／またはＬＪＭ−７１６と競合するのかどうかを決定した。ＭＭ−１２１のエピトープは、ＨＥＲ３のドメインＩにマッピングされており、ＮＲＧリガンド結合性部位を遮断する。ＬＪＭ−７１６のエピトープは、ドメインＩＩおよびＩＶにわたり分布する、コンフォメーションエピトープへとマッピングされており、ＨＥＲ３を、不活性コンフォメーションにロッキングする。
【０６２８】
Ｏｃｔｅｔ  ＱＫ３８４システム（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を使用して、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）実験を実施した。抗５×ＨＩＳ（ＨＩＳ１Ｋ）でコーティングされたバイオセンサーチップ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ、ＵＳＡ）を使用して、Ｈｉｓタグ付けヒトＨＥＲ３を捕捉した（７５ｎＭ；３００秒間）。飽和抗体による結合（４００ｎＭ；６００秒間）を検出し、続いて解離ステップ（１２０秒間）、続いて競合抗体との結合（３００ｎＭ；３００秒間）の検出、続いて解離ステップ（１２０秒間）にかけた。ＭＭ−１２１抗体の可変領域は、ヒトＩｇＧ２およびヒトＩｇカッパのＦｃ骨格を有するＰＤＺベクター内にクローニングした。ＬＪＭ−７１６抗体の可変領域は、ヒトＩｇＧ１およびＩｇカッパのＦｃ骨格を有するＰＤＺベクター内にクローニングした。
【０６２９】
解析の結果を、図１４Ａおよび１４Ｂに示す。抗ＨＥＲ３抗体は、ＨＥＲ３への結合について、ＭＭ−１２１および／またはＬＪＭ−７１６と競合しないことが見出された。
【０６３０】
１０Ｄ１は、ＭＭ−１２１および／またはＬＪＭ−７１６のエピトープとは別個であり、トポロジカルに遠く離れている、ＨＥＲ３のエピトープに結合することが見出された。
【０６３１】
重複する、１５マーのアミノ酸を使用して、全ＨＥＲ３細胞外ドメインをカバーするように、１０Ｄ１のエピトープをマッピングした。各固有の１５マーを、Ｃ末端およびＮ末端において、ＧＳリンカーにより伸長させ、３８４ウェルプレート内の固有のウェルへとコンジュゲートさせ、プレートを、０．１、１、１０、および１００ｕｇ／ｍｌの１０Ｄ１抗体と共に、４℃で、１６時間にわたりインキュベートした。プレートを洗浄し、次いで、２０℃で、１時間にわたり、ペルオキシダーゼ（ＰＯＤ）コンジュゲートヤギ抗ヒトＩｇＧと共にインキュベートした。最後に、ＬＩ−ＣＯＲ  Ｏｄｙｓｓｅｙイメージングシステムを使用する、４２５ｎｍにおける化学発光の測定により、結合を査定する前にＰＯＤ基質溶液を、ウェルへと、２０分間にわたり添加し、定量および解析は、ＰｅｐＳｌｉｄｅ  Ａｎａｌｙｚｅｒソフトウェアパッケージを使用して実施した。実験は、２連で実施した。
【０６３２】
１０Ｄ１のエピトープは、ドメインＩＩに位置する、ＨＥＲ３二量体化アームのβヘアピン構造には直接位置せず、Ｎ末端〜βヘアピンの二量体化界面に位置することが見出された。
【０６３３】
１０Ｄ１、および１０Ｄ１由来クローンが結合することが決定された、ＨＥＲ３の部位は、ヒトＨＥＲ３のアミノ酸配列（例えば、配列番号１に示される）の２１８〜２３５位に対応するが、ＨＥＲ３の、この領域についてのアミノ酸配列を、配列番号２２９に示す。この領域内では、２つのコンセンサスの結合性部位のモチーフが同定されたが、これを、配列番号２３０および２３１に示す。
【０６３４】
ＨＥＲ３の、この位置への結合は、ＨＥＲファミリーのヘテロ二量体化と、この帰結としての、下流のシグナル伝達経路を妨げるように作用する（実施例４を参照されたい）。結合は、リガンド（ＮＲＧ）非依存的である。１０Ｄ１結合性部位は、開放型および閉鎖型のいずれのＨＥＲ３コンフォメーションにおいても、溶媒にアクセス可能であり、ＨＥＲ３と、他のＨＥＲファミリーメンバーとの間で保存されず、ヒト、マウス、ラット、およびサルのＨＥＲ３オーソログの間で１００％保存される。
【０６３５】
実施例４
機能的特徴付け
４．１  ＨＥＲ２とＨＥＲ３との二量体化の阻害
抗ＨＥＲ３抗体を、ＨＥＲ３とＨＥＲ２とのヘテロ二量体化を阻害する、それの能力について解析した。
【０６３６】
略述すると、９６ウェルプレート（Ｎｕｎｃ、Ｄｅｎｍａｒｋ）を、４℃で、１６時間にわたり、ＰＢＳ中に０．１μｇ／ｍｌの、Ｈｉｓタグ付けＨＥＲ２タンパク質によりコーティングした。ＰＢＳ中１％のＢＳＡによる、室温で、１時間にわたるブロッキングの後、組換えビオチニル化ヒトＨＥＲ３タンパク質を、異なる濃度の抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１の存在下で添加し、プレートを、室温で、１時間にわたりインキュベートした。その後、プレートを、３回にわたり洗浄し、次いで、ＨＲＰコンジュゲート二次抗体と共に、室温で、１時間にわたりインキュベートした。洗浄の後、プレートを、比色検出基質である、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（Ｔｕｒｂｏ−ＴＭＢ；Ｐｉｅｒｃｅ、ＵＳＡ）で、１０分間にわたり現像した。２ＭのＨ２ＳＯ４で、反応を停止させ、４５０ｎｍで、ＯＤを測定した。
【０６３７】
結果を、図１５に示す。抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１は、ＨＥＲ２とＨＥＲ３との相互作用を、用量依存的に阻害することが見出された。
【０６３８】
さらなる実験では、ＨＥＲ２：ＨＥＲ３二量体化の阻害について解析した。
【０６３９】
さらなる実験では、ＨＥＲ２：ＨＥＲ３二量体化の阻害は、製造元の指示書に従い、ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ  Ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ  Ｂｉｏａｓｓａｙキット（ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ）を使用して評価した。
【０６４０】
略述すると、１ｍｌの、あらかじめ加熱したＣＰ５培地を使用して、ＨＥＲ２およびＨＥＲ３を過剰発現するＵ２ＯＳ細胞を融解させ、ウェル１つ当たりの細胞５，０００個を播種し、５％ＣＯ２の雰囲気中、３７℃で、４時間にわたり培養した。次いで、細胞を、２５μｇ／ｍｌから始まる、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡまたはペルツズマブの、８点の系列希釈液で処置した。
【０６４１】
インキュベーションの４時間後、３０ｎｇ／ｍｌのヘレグリンβ２を、各ウェルへと添加し、細胞を、さらに１６時間にわたりインキュベートした。１０μＬのＰａｔｈＨｕｎｔｅｒバイオアッセイ検出試薬１を、ウェルへと添加し、暗所内、室温で、１５分間にわたりインキュベートした。これに続き、４０μＬのＰａｔｈＨｕｎｔｅｒバイオアッセイ検出試薬２を添加し、暗所内、室温で、６０分間にわたりインキュベートした。次いで、遅延を１秒間とする、Ｓｙｎｅｒｇｙ４  Ｂｉｏｔｅｋを使用して、プレートを読み取った。
【０６４２】
結果を、図６５に示す。１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡは、その低ＩＣ５０により反映される通り、ペルツズマブより大きな効率で、ＨＥＲ２：ＨＥＲ３二量体化を阻害することが見出された。
４．２  解析のためのがん細胞株の同定
本発明者らは、ＨＥＲ３の阻害について調べるのに適切な細胞を同定するために、がん細胞株による、ＥＧＦＲタンパク質ファミリーメンバーの発現を特徴付けた。
【０６４３】
図１６Ａは、「Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐａｅｄｉａ」（ＣＣＬＥ；Ｂａｒｒｅｔｉｎａら、Ｎａｔｕｒｅ（２０１２）、４８３：６０３〜６０７；および「Ｔｈｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ  ＆  Ｔｈｅ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ」、Ｎａｔｕｒｅ（２０１５）、５２８：８４〜８７）に従い、Ｎ８７、ＳＮＵ１６、ＨＴ２９、ＦａＤｕ、Ａ５４９、ＨＣＣ９５、ＯｖＣＡＲ８、およびＡＨＣＮ細胞による、ＥＧＦＲファミリーメンバーおよびリガンドのｍＲＮＡ発現データを示す。図１６Ａはまた、ＦｌｏｗＬｏｇｉｃにより決定される、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、およびＨＥＲ３についてのタンパク質発現データも示す。
【０６４４】
実験で使用される細胞株は、ＡＴＣＣから購入し、推奨されるとおりに培養した。略述すると、細胞株は、１０％のＦＢＳおよび１％のペニシリン／ストレプトマイシンを補充した、表示の細胞培養培地中で維持した。細胞は、３７℃、５％のＣＯ２中のインキュベーター内で培養した。培養した細胞は、９６ウェルプレート内に、適切な播種密度で播種した：ＨＴ２９、ＨＣＣ９５、ＦＡＤＵ、およびＯｖＣａｒ８細胞は、ウェル１つ当たりの細胞２０００個で播種し、ＮＣｌ−Ｎ８７細胞は、ウェル１つ当たりの細胞５０００個で播種し、ＳＮＵ−１６およびＡＣＨＮ細胞は、ウェル１つ当たりの細胞１５００個で播種し、Ａ５４９細胞は、ウェル１つ当たりの細胞１２００個で播種した。
【０６４５】
図１６Ｂは、フローサイトメトリーにより決定される、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、およびＨＥＲ３の表面発現を示す。略述すると、細胞５００，０００個を、０．５％のＢＳＡと、２ｍＭのＥＤＴＡとを含有する染色緩衝液中、４℃で、１．５時間にわたり、一次抗体（２０μｇ／ｍｌ）により染色した。使用した二次抗体は、４℃で、２０分間にわたる、１０μｇ／ｍｌの、抗ヒトＡｌｅｘａｆｌｕｏｒ４８８であった。
４．３  ＨＥＲ３媒介性シグナル伝達の阻害
抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、ＨＥＲ−３媒介性シグナル伝達を阻害する、その能力について解析した。
【０６４６】
略述すると、Ｎ８７およびＦａＤｕ細胞は、３７℃、５％ＣＯ２で、１０％の血清と共に、６ウェルプレートのウェル内に播種した。１６時間後、細胞を、１％のＦＢＳ細胞培養培地中で、一晩にわたる培養により（血清中の増殖因子により誘発されるシグナル伝達を低減するように）飢餓させた。翌日、細胞を、５０μｇ／ｍｌの抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１で、４時間にわたり処置するのに続き、ＮＲＧ（１００ｎｇ／ｍｌ）による、１５分間の刺激にかけた。次いで、タンパク質を抽出し、標準的なＢｒａｄｆｏｒｄタンパク質アッセイを使用して定量し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分画し、ニトロセルロース膜へと転写した。次いで、膜をブロッキングし、４℃で、一晩にわたる、以下の抗体：抗ｐＨＥＲ３、抗ｐＡＫＴ、ｐａｎ抗ＨＥＲ３、ｐａｎ抗ＡＫＴ、および抗ベータ−アクチンによる免疫ブロットにかけた。ブロットは、Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｃｌａｒｉｔｙ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  ＥＣＬ基質によって視覚化し、バンドは、光学濃度測定解析を使用して定量し、データは、ベータアクチン対照に対して正規化した。
【０６４７】
結果を、図１７に示す。抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１は、ＨＥＲ３のリン酸化、および下流のシグナル伝達を阻害することが見出された。
【０６４８】
さらなる実験では、本発明者らは、ＨＥＲ３の抗ＨＥＲ３抗体媒介性阻害に影響を受ける、細胞内シグナル伝達経路について調べた。
【０６４９】
ＦａＤｕ細胞は、３７℃、５％ＣＯ２で、１０％の血清と共に、６ウェルプレートのウェル内に播種した。１６時間後、細胞を、１％のＦＢＳ細胞培養培地中で、一晩にわたる培養により飢餓させた。翌日、細胞を、５０μｇ／ｍｌの抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１で、４時間にわたり処置するのに続き、ＮＲＧ（１００ｎｇ／ｍｌ）による、１５分間の刺激にかけた。次いで、タンパク質を抽出し、標準的なＢｒａｄｆｏｒｄタンパク質アッセイを使用して定量し、あらかじめブロッキングされたＰｈｏｓｐｈｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ａｒｒａｙ膜（Ｒａｙ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）と共に、４℃で、一晩にわたりインキュベートした。次いで、膜を、洗浄緩衝液で洗浄し、検出抗体カクテルと共に、室温で、２時間にわたりインキュベートするのに続き、ＨＲＰコンジュゲート抗ＩｇＧを伴う洗浄およびインキュベーションにかけた。２時間後、膜を洗浄し、キットの検出緩衝液を使用して、プロービングした。Ｓｙｎｇｅｎｅ  Ｇｂｏｘイメージングシステムにより、画像を捕捉し、各ドット／リンタンパク質の強度を測定し、抗体の非存在下で、同様に処理された細胞について測定された強度との比較により、阻害パーセントを計算した。
【０６５０】
結果を、図１８に示す。抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲおよびＭＡＰＫシグナル伝達を阻害することが見出された。
【０６５１】
さらなる実験では、本発明者らは、抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１による処置の、ＨＥＲ３発現細胞の増殖に対する効果について調べた。
【０６５２】
略述すると、Ｎ８７およびＦａＤｕ細胞を、１００μｇ／ｍｌから始まる、９点の３．２倍希釈により系列希釈された濃度の抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１で処置した。細胞増殖は、５日後に、製造元の指示書に従い、ＣＣＫ−８増殖アッセイ（同仁化学研究所）を使用して測定した。略述すると、１倍濃度のＣＣＫ−８溶液を、各ウェルへと添加するのに続き、３７℃で、２時間にわたるインキュベーションにかけた。次いで、４５０ｎｍで、ＯＤを測定した。
【０６５３】
図１９Ａおよび１９Ｂは、非処置対照細胞と比べた、細胞コンフルエンシーパーセント（データ点は、３連の平均である）を示す。
【０６５４】
抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１は、Ｎ８７およびＦａＤｕ細胞による細胞増殖の、用量依存性阻害を呈した。
【０６５５】
実施例５
ｉｎ  ｖｉｖｏにおける解析
５．１  薬物動態解析
約６〜８週齢の、雌ＮＣｒヌードマウスを、特定の無病原体条件下で飼育し、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）ガイドラインに準拠して処置した。
【０６５６】
５００μｇの抗ＨＥＲ３抗体を投与し、血液は、３匹のマウスから、心臓穿刺により、ベースライン（−２時間後）、０．５時間後、投与の６時間後、２４時間後、９６時間後、１６８時間後、および３３６時間後に得た。血清中の抗体は、ＥＬＩＳＡにより定量した。
【０６５７】
結果を、図５０に示す。抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１は、ＮＣｒヌードマウスにおいて、１６．３日間の半減期を有することが見出された。
５．２  安全性および免疫毒性
抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１を、ＩＭＧＴ  ＤｏｍａｉｎＧａｐＡｌｉｇｎ（Ｅｈｒｅｎｍａｎｎら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、３８、Ｄ３０１〜３０７（２０１０））およびＩＥＤＢ脱免疫化（Ｄｈａｎｄａら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．（２０１８）、１５３（１）：１１８〜１３２）ツールを使用して、安全性および免疫原性について、コンピュータにより解析した。
【０６５８】
抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１は、潜在的な免疫原性ペプチドの数が、安全であると考えるのに十分なほど少なく、潜在的な開発可能性問題を引き起こしうる、他の特性を所有しなかった。
【０６５９】
図３７の表は、１０Ｄ１変異体クローンの、安全性および開発可能性に関する特性についての概観を提示する。
【０６６０】
実施例５．３に記載される実験において、抗ＨＥＲ３抗体で処置されたマウスを、体重の変化および肉眼剖検についてモニタリングした。これらのマウスでは、溶媒だけで処置されたマウスと比較して、有意差が検出されなかった。
【０６６１】
血液毒性を、６〜８週齢の、雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（２０〜２５ｇ）に、１０００μｇの抗ＨＥＲ３１０Ｄ１抗体または等容量のＰＢＳの単回投与用量を腹腔内注射する実験において調べた。血液試料は、注射の９６時間後に得、フローサイトメトリーにより、異なる種類の白血球の数について解析し、ＮＡ＋、Ｋ＋、およびＣｌ−の電解質指標についても解析した。
【０６６２】
図５１Ａおよび５１Ｂは、異なる細胞型の細胞数および電解質指標が、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒによる参照範囲内にある（３匹のマウス）ことが見出され、ＰＢＳ処置群（３匹のマウス）と、有意に異ならないことを示す。左バーは、溶媒を表し、右バーは、１０Ｄ１による処置を表し、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒによる参照範囲の端点は、点線で指し示される。異なる群間で、臨床徴候、肉眼剖検、または体重の差違は検出されなかった。
【０６６３】
マウスはまた、注射の９６時間後に、肝毒性、腎毒性、および膵毒性の相関因子についても解析した。１０００μｇの抗ＨＥＲ３抗体の単回投与の後で検出される、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）、血中尿素窒素（ＢＵＮ）、クレアチニン（ＣＲＥＡ）、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、グルコース（ＧＬＵ）、カルシウム（ＣＡＬ）、総ビリルビン（ＢＩＬ）、総タンパク質（ＴＰＲ）、およびアルブミン（ＡＬＢ）のレベルは、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒによる参照範囲内にあることが見出され、ＰＢＳ処置群における、これらのマーカーのレベルと、有意に異ならない。これらを、図５１Ｃ〜５１Ｆに示す。左バーは、溶媒を表し、右バーは、１０Ｄ１による処置を表し、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒによる参照範囲の端点は、点線で指し示される。１０Ｄ１による処置は、腎臓指標、肝臓指標、または膵臓指標に影響を及ぼさず、従って、正常な腎臓、肝臓、または膵臓の機能に影響しない。
５．３  ｉｎ  ｖｉｖｏにおける、がんを処置する有効性についての解析
約６〜８週齢の、雌ＮＣｒヌードマウスを、ＩｎＶｉｖｏｓ（Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ）から購入した。動物は、特定の無病原体条件下で飼育し、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）ガイドラインに準拠して処置した。
【０６６４】
使用される細胞株は、Ｎ８７細胞（胃がん）、ＦａＤｕ細胞（頭頸部がん）、ＯｖＣＡＲ８細胞（卵巣がん）、ＳＮＵ１６細胞（胃がん）、ＨＴ２９細胞（結腸直腸がん）、Ａ５４９細胞（肺がん）、ＨＣＣ９５細胞（肺がん）、およびＡＨＣＮ細胞（腎がん）を含んだ。
【０６６５】
腫瘍体積は、デジタル式キャリパーを使用して、毎週３回測定し、式［Ｌ×Ｗ２／２］を使用して計算した。対照アームの腫瘍が、＞１．５ｃｍの長さと測定されたら、研究の終点に到達したと考えた。
５．３．１  Ｎ８７モデル
図２０は、抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１（実施例２．２の［１］）の抗がん効果を、Ｎ８７細胞株に由来する、マウス胃癌モデルにおいて調べる実験において得られた結果を示す。モデルは、１×１０６個のＮ８７細胞の、右脇腹（処置群１つ当たりのマウスのｎ＝６）への皮下注入により確立した。
【０６６６】
１０Ｄ１は、投与１回当たり５００μｇで、隔週（合計１０回の投与にわたる）ＩＰ投与し；対照処置群は、等容量のＰＢＳを施された。
【０６６７】
このモデルでは、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１は、効力が大きく、腫瘍の増殖を、約７６％阻害することが可能であることが見出された。
【０６６８】
図２１は、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、４−３５−Ｂ４を、１１ｍｇ／ｋｇ（合計４回の投与）の用量で、毎週ＩＰ投与する、同様の実験において得られた結果を示す。このモデルでは、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、４−３５−Ｂ４も、効力が大きく、腫瘍の増殖を、約６０％阻害することが可能であることが見出された。
５．３．２  ＳＮＵ１６モデル
図２２は、抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１（実施例２．２の［１］）の抗がん効果を、ＳＮＵ１６細胞株に由来する、マウス胃癌モデルにおいて調べる実験において得られた結果を示す。モデルは、１×１０６個のＳＮＵ１６細胞の、右脇腹（処置群１つ当たりのマウスのｎ＝６）への皮下注入により確立した。
【０６６９】
１０Ｄ１は、投与１回当たり５００μｇで、隔週（合計９回の投与にわたる）ＩＰ投与し；対照処置群は、等容量のＰＢＳを施された。
【０６７０】
このモデルでは、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１は、効力が大きく、腫瘍の増殖を、約６８％阻害することが可能であることが見出された。
５．３．３  ＦａＤｕモデル
図２３は、抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１（実施例２．２の［１］）の抗がん効果を、ＦａＤｕ細胞株に由来する、頭頸部扁平上皮がんについてのマウスモデルにおいて調べる実験において得られた結果を示す。モデルは、１×１０６個のＦａＤｕ細胞の、雌ＮＰＧマウス（ＮＯＤ  ｓｃｉｄガンマの表現型；処置群１つ当たりのマウスのｎ＝６）の右脇腹への皮下注入により確立した。
【０６７１】
１０Ｄ１は、投与１回当たり５００μｇで、毎週（合計４回の投与にわたる）ＩＰ投与した。対照処置群は、等容量のＰＢＳ、または同じ用量のアイソタイプ対照抗体を施された。
【０６７２】
このモデルでは、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１は、効力が大きく、腫瘍の増殖を、約８５％阻害することが可能であることが見出された。
【０６７３】
図２４は、抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１（実施例２．２の［１］）の抗がん効果を、ＦａＤｕ細胞株に由来する、頭頸部扁平上皮がんについてのマウスモデルにおいて調べる実験において得られた結果を示す。モデルは、１×１０６個のＦａＤｕ細胞の、雌ＮＣｒヌードマウス（処置群１つ当たりのマウスのｎ＝６）の右脇腹への皮下注入により確立した。
【０６７４】
１０Ｄ１は、投与１回当たり５００μｇで、隔週（合計８回の投与にわたる）ＩＰ投与し；対照処置群は、等容量のＰＢＳを施された。
【０６７５】
このモデルでは、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１は、効力が大きく、腫瘍の増殖を、約８６％阻害することが可能であることが見出された。
５．３．４  ＯｖＣＡＲ８モデル
図２５は、抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１（実施例２．２の［１］）の抗がん効果を、ＯｖＣＡＲ８細胞株に由来する、卵巣癌についてのマウスモデルにおいて調べる実験において得られた結果を示す。モデルは、１×１０６個のＯｖＣＡＲ８細胞の、雌ＮＣｒヌードマウス（処置群１つ当たりのマウスのｎ＝６）の右脇腹への皮下注入により確立した。
【０６７６】
１０Ｄ１は、投与１回当たり５００μｇで、隔週（合計９回の投与にわたる）ＩＰ投与し；対照処置群は、等容量のＰＢＳを施された。
【０６７７】
このモデルでは、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１は、効力が大きく、腫瘍の増殖を、約７４％阻害することが可能であることが見出された。
５．３．５  ＨＣＣ−９５モデル
図２６は、抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１（実施例２．２の［１］）の抗がん効果を、ＨＣＣ−９５細胞株に由来する、扁平上皮肺癌についてのマウスモデルにおいて調べる実験において得られた結果を示す。モデルは、１×１０６個のＨＣＣ−９５細胞の、雌ＮＣｒヌードマウス（処置群１つ当たりのマウスのｎ＝６）の右脇腹への皮下注入により確立した。
【０６７８】
１０Ｄ１は、投与１回当たり５００μｇで、隔週（合計４回の投与にわたる）ＩＰ投与し；対照処置群は、等容量のＰＢＳを施された。
【０６７９】
このモデルでは、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１は、効力が大きく、腫瘍の増殖を、約９０％阻害することが可能であることが見出された。
５．３．６  Ａ５４９モデル
図２７は、抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１（実施例２．２の［１］）の抗がん効果を、Ａ５４９細胞株に由来する、肺腺癌についてのマウスモデルにおいて調べる実験において得られた結果を示す。モデルは、１×１０６個のＡ５４９細胞の、雌ＮＣｒヌードマウス（処置群１つ当たりのマウスのｎ＝６）の右脇腹への皮下注入により確立した。
【０６８０】
１０Ｄ１は、投与１回当たり５００μｇで、隔週（合計１０回の投与にわたる）ＩＰ投与し；対照処置群は、等容量のＰＢＳを施された。
【０６８１】
このモデルでは、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１は、効力が大きく、腫瘍の増殖を、約９１％阻害することが可能であることが見出された。
【０６８２】
図２８は、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、４−３５−Ｂ２の抗がん効果を、１×１０６個のＡ５４９細胞の、雌ＮＰＧマウス（ＮＯＤ  ｓｃｉｄガンマの表現型）の右脇腹への注入により確立されたＡ５４９細胞株において調べる、同様の実験において得られた結果を示す。抗ＨＥＲ３抗体クローンである、４−３５−Ｂ２は、投与１回当たり５００μｇの用量で、毎週（合計４回にわたる投与）ＩＰ投与した。対照処置群は、等容量のＰＢＳを施された（処置群１つ当たりのマウス６匹）。
【０６８３】
このモデルでは、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、４−３５−Ｂ２も、効力が大きく、腫瘍の増殖を、約６３％阻害することが可能であることが見出された。
５．３．６  ＡＣＨＮモデル
図２９は、抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１（実施例２．２の［１］）の抗がん効果を、ＡＣＨＮ細胞株に由来する、腎細胞癌についてのマウスモデルにおいて調べる実験において得られた結果を示す。モデルは、１×１０６個のＡＣＨＮ細胞の、雌ＮＣｒヌードマウス（処置群１つ当たりのマウスのｎ＝６）の右脇腹への皮下注入により確立した。
【０６８４】
１０Ｄ１は、投与１回当たり５００μｇで、隔週（合計７回の投与にわたる）ＩＰ投与し；対照処置群は、等容量のＰＢＳを施された。
【０６８５】
このモデルでは、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１は、効力が大きく、腫瘍の増殖を、約６１％阻害することが可能であることが見出された。
５．４  胃癌の処置
ヒトにおける第一段階
トラスツズマブが奏効しなかったか、またはこれを施されえない、ＨＥＲ２＋進行型胃がんを伴う患者を、安全性補正型「Ｍｉｎｉｍａｌ  Ａｎｔｉｃｉｐａｔｅｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｅｆｆｅｃｔ  Ｌｅｖｅｌ」（ＭＡＢＥＬ）法に従い計算された用量における、１０Ｄ１、１０Ｄ１＿ｃ７５、１０Ｄ１＿ｃ７６、１０Ｄ１＿ｃ７７、１０Ｄ１＿ｃ７８ｖ１、１０Ｄ１＿ｃ７８ｖ２、１０Ｄ１＿１１Ｂ、１０Ｄ１＿ｃ８５ｖ１、１０Ｄ１＿ｃ８５ｖ２、１０Ｄ１＿ｃ８５ｏ１、１０Ｄ１＿ｃ８５ｏ２、１０Ｄ１＿ｃ８７、１０Ｄ１＿ｃ８９、１０Ｄ１＿ｃ９０、１０Ｄ１＿ｃ９１、１０Ｄ１＿ｃ９２、および１０Ｄ１＿ｃ９３から選択される抗ＨＥＲ３抗体の静脈内注射により処置する。投与後２８日間にわたり、患者をモニタリングする。
【０６８６】
次いで、Ｃｏｍｍｏｎ  Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  Ａｄｖｅｒｓｅ  Ｅｖｅｎｔｓ（ＣＴＣＡＥ）に従い、患者を評価して、処置の安全性および忍容性を決定し、分子の薬物動態を決定した。
【０６８７】
抗ＨＥＲ３抗体による処置は、安全かつ忍容性であることが見出される。
用量漸増：単剤療法
トラスツズマブが奏効しなかったか、またはこれを施されえない、ＨＥＲ２＋進行型胃がんを伴う、１２〜４８例の患者を、３＋３モデルベースの、ｅｓｃａｌａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｏｖｅｒｄｏｓｅ  ｃｏｎｔｒｏｌ（ＥＷＯＣ）型用量漸増に従う、１０Ｄ１、１０Ｄ１＿ｃ７５、１０Ｄ１＿ｃ７６、１０Ｄ１＿ｃ７７、１０Ｄ１＿ｃ７８ｖ１、１０Ｄ１＿ｃ７８ｖ２、１０Ｄ１＿１１Ｂ、１０Ｄ１＿ｃ８５ｖ１、１０Ｄ１＿ｃ８５ｖ２、１０Ｄ１＿ｃ８５ｏ１、１０Ｄ１＿ｃ８５ｏ２、１０Ｄ１＿ｃ８７、１０Ｄ１＿ｃ８９、１０Ｄ１＿ｃ９０、１０Ｄ１＿ｃ９１、１０Ｄ１＿ｃ９２、および１０Ｄ１＿ｃ９３（例えば、１０Ｄ１＿ｃ８９、１０Ｄ１＿ｃ９０、または１０Ｄ１＿ｃ９１；例えば、１０Ｄ１＿ｃ８９）から選択される抗ＨＥＲ３抗体の静脈内注射により処置する。
【０６８８】
次いで、ＣＴＣＡＥ（Ｃｏｍｍｏｎ  Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  Ａｄｖｅｒｓｅ  Ｅｖｅｎｔｓ）に従い、患者を評価して、処置の安全性および忍容性を決定し、分子の薬物動態および処置の有効性を評価した。最大耐量（ＭＴＤ）および最大投与量（ＭＡＤ）もまた決定した。
用量漸増：組合せ療法
トラスツズマブが奏効しなかったＨＥＲ２＋進行型胃がんを伴う、９〜１８例の患者を、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（３ｍｇ／ｋｇ）を伴う、３＋３モデルベースの漸増に従い、トラスツズマブと組み合わせた、１０Ｄ１、１０Ｄ１＿ｃ７５、１０Ｄ１＿ｃ７６、１０Ｄ１＿ｃ７７、１０Ｄ１＿ｃ７８ｖ１、１０Ｄ１＿ｃ７８ｖ２、１０Ｄ１＿１１Ｂ、１０Ｄ１＿ｃ８５ｖ１、１０Ｄ１＿ｃ８５ｖ２、１０Ｄ１＿ｃ８５ｏ１、１０Ｄ１＿ｃ８５ｏ２、１０Ｄ１＿ｃ８７、１０Ｄ１＿ｃ８９、１０Ｄ１＿ｃ９０、１０Ｄ１＿ｃ９１、１０Ｄ１＿ｃ９２、および１０Ｄ１＿ｃ９３（例えば、１０Ｄ１＿ｃ８９、１０Ｄ１＿ｃ９０、または１０Ｄ１＿ｃ９１；例えば、１０Ｄ１＿ｃ８９）から選択される抗ＨＥＲ３抗体の静脈内注射により処置する。
【０６８９】
次いで、ＣＴＣＡＥ（Ｃｏｍｍｏｎ  Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  Ａｄｖｅｒｓｅ  Ｅｖｅｎｔｓ）に従い、患者を評価して、処置の安全性および忍容性を決定し、分子の薬物動態および処置の有効性を評価した。
用量拡大
トラスツズマブが、最近奏効せず、患者の腫瘍が、遺伝子的に、かつ、組織学的に、十分に特徴付けられている、ＨＥＲ２＋進行型胃がんを伴う患者を、トラスツズマブ、シスプラチン、および５−ＦＵまたはカペシタビンと組み合わせた、抗ＨＥＲ３抗体から選択された：１０Ｄ１、１０Ｄ１＿ｃ７５、１０Ｄ１＿ｃ７６、１０Ｄ１＿ｃ７７、１０Ｄ１＿ｃ７８ｖ１、１０Ｄ１＿ｃ７８ｖ２、１０Ｄ１＿１１Ｂ、１０Ｄ１＿ｃ８５ｖ１、１０Ｄ１＿ｃ８５ｖ２、１０Ｄ１＿ｃ８５ｏ１、１０Ｄ１＿ｃ８５ｏ２、１０Ｄ１＿ｃ８７、１０Ｄ１＿ｃ８９、１０Ｄ１＿ｃ９０、１０Ｄ１＿ｃ９１、１０Ｄ１＿ｃ９２、１０Ｄ１＿ｃ９３（例えば、１０Ｄ１＿ｃ８９、１０Ｄ１＿ｃ９０、または１０Ｄ１＿ｃ９１；例えば、１０Ｄ１＿ｃ８９）により処置する。
【０６９０】
抗ＨＥＲ３抗体は、安全かつ忍容性であり、がん細胞の数／比率を低減し、腫瘍細胞マーカーの発現を低減し、無増悪生存期間を延長し、かつ、全生存期間を延長することが可能であることが見出される。
【０６９１】
実施例６
アフィニティー成熟させ、ヒト化したクローン
親マウス抗体である、１０Ｄ１Ｐの可変領域のヒト化は、ＣＤＲグラフティングにより行った。グラフティングのためのヒトフレームワーク配列は、親アミノ酸配列を、ヒトＶドメインデータベースに対するＢＬＡＳＴ解析にかけることにより同定し、親配列に対する同一性が最大である遺伝子を選択した。マウスＣＤＲを、選択されたヒトフレームワークへとグラフトしたら、抗原への結合を保存するように、フレームワークの、カノニカルの位置における残基を、親マウス配列へと復帰突然変異させた。１０Ｄ１Ｐの、合計９つのヒト化変異体をデザインした。
【０６９２】
酵母ディスプレイを使用する、２ラウンドのアフィニティー成熟により、ヒトＨＥＲ３に対するアフィニティーを増大させた。第１ラウンドでは、ランダム突然変異誘発により、デザインされた、９つの変異体の混合ライブラリーを構築し、ビオチニル化抗原を使用するフローサイトメトリーによりスクリーニングした。第２ラウンドでは、第１ラウンドで単離された、１つの重鎖クローンと、１つの軽鎖クローンとを、鋳型として使用して、第２のライブラリーを作出し、スクリーニングした。合計１０の、ヒト化され、アフィニティー成熟させたクローンを単離した。
【０６９３】
１０Ｄ１Ｐの、デザインされ、単離されたヒト化変異体の可変領域内の、潜在的不安定性（免疫原性、グリコシル化部位、露出した反応性残基、凝集可能性）は、コンピュータ予測ツールを使用して査定した。ＩＥＤＢ脱免疫化ツールを使用して、配列を脱免疫化した。１０Ｄ１Ｆの最終配列は、その開発可能性特徴のほか、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける物理化学的特性および機能的特性に基づき、最適化変異体の間で選択した。
【０６９４】
クローンである、１０Ｄ１Ｆは、配列番号３６のＶＨと、配列番号８３のＶＬとを含む。１０Ｄ１Ｆは、ヒト重鎖との８９．９％相同性、およびヒト軽鎖との８５．３％相同性を呈する。
【０６９５】
１０Ｄ１Ｆの可変領域と、ヒトＩｇＧ１の定常領域とを含み、配列番号２０６および２０７のポリペプチドから構成される抗原結合性分子を、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ（本明細書では、場合によってまた、「１０Ｄ１Ｆ．Ａ」または「抗ＨＥＲ３クローンである、１０Ｄ１＿ｃ８９  ＩｇＧ１」とも称する（例えば、実施例２．２の［１６］を参照されたい））と名指す。
【０６９６】
実施例７
Ｆｃの操作
ＣＨ２および／またはＣＨ３領域内に、抗体の効力を増大させる、例えば、Ｆｃエフェクター機能を最適化し、抗体依存性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）および／または抗体依存性細胞性食作用（ＡＤＣＰ）を増強し、半減期を改善する突然変異を含むように、１０Ｄ１、および１０Ｄ１変異体を操作した。
【０６９７】
ＣＨ２領域内に、修飾である、「ＧＡＳＤＡＬＩＥ」（Ｇ２３６Ａ、Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅ）および「ＬＣＫＣ」（Ｌ２４２Ｃ、Ｋ３３４Ｃ）を含むように、クローンである、１０Ｄ１および１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡのＦｃ領域を修飾した。ＧＡＳＤＡＬＩＥ置換は、ＦｃγＲＩＩａ（ＧＡ）およびＦｃγＲＩＩＩａ（ＳＤＡＬＩＥ）受容体に対するアフィニティーを増大させ、ＡＤＣＰおよびＮＫ媒介性ＡＤＣＣ（実施例８．８を参照されたい）を増強する一方で、Ｃ１ｑに対するアフィニティーを低下させ（ＡＬ）、ＣＤＣを低減することが見出された。ＬＣＫＣ置換は、新たな分子内ジスルフィド架橋を創出することにより、Ｆｃ領域の熱安定性を増大させることが見出された。
【０６９８】
ＧＡＳＤＡＬＩＥ突然変異およびＬＣＫＣ突然変異を含む、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ重鎖ポリペプチドの修飾形を、配列番号２２５に示す。配列番号２２５および２０７のポリペプチドから構成される抗原結合性分子を、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢ（本明細書では、場合によってまた、「１０Ｄ１Ｆ．Ｂ」とも称する）と名指す。
【０６９９】
ＣＨ２領域内に、ＧＡＳＤＡＬＩＥおよびＬＣＫＣ置換を含む１０Ｄ１の修飾形を調製し、Ｆｃ受容体ＦｃγＲＩＩＩａに結合する、その能力を、バイオレイヤー干渉法により解析した。Ｇ２３６Ａ、Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅと、Ｌ２４２Ｃ、Ｋ３３４Ｃとに対応する置換である、ＧＡＳＤＡＬＩＥおよびＬＣＫＣを含む、１０Ｄ１  ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３の配列を、配列番号２２７に示す。
【０７００】
略述すると、抗５×ＨＩＳ（ＨＩＳ１Ｋ）でコーティングしたバイオセンサーチップ（Ｐａｌｌ  ＦｏｒｔｅＢｉｏ、ＵＳＡ）を使用して、Ｈｉｓタグ付けＦｃγＲＩＩＩａ（Ｖ１５８）（２７０ｎＭ）を、１２０秒間にわたり捕捉した。全ての測定は、２５℃、１０００ｒｐｍで攪拌しながら実施した。抗原への結合についての、会合反応速度の測定は、抗ＨＥＲ３抗体を、異なる濃度（５００ｎＭ〜１５．６ｎＭ）で、６０秒間にわたりインキュベートするのに続き、１２０秒間の解離時間を置き、バイオセンサーを、アッセイ緩衝液（ｐＨ７．２）を含有するウェルへと導入することにより実施した。緩衝液効果について、センサーグラムを参照し、次いで、Ｏｃｔｅｔ  ＱＫ３８４ユーザーソフトウェア（Ｐａｌｌ  ＦｏｒｔｅＢｉｏ、ＵＳＡ）を使用して当てはめた。反応速度応答は、１部位結合モデルを使用するグローバルフィッティングにかけて、会合速度定数（Ｋｏｎ）、解離速度定数（Ｋｏｆｆ）、および平衡解離定数（ＫＤ）についての値を得た。ソフトウェアにより、信頼できる形で（Ｒ２＞０．９０）当てはめうる曲線だけを、解析に組み入れた。
【０７０１】
変異体の熱安定性もまた、実施例３．４で記載した通りに、示差走査蛍光測定解析により解析した。
【０７０２】
図３８Ａおよび３８Ｂは、それぞれ、ＧＡＳＤＡＬＩＥおよびＬＣＫＣ  Ｆｃ置換を含む１０Ｄ１について、ＢＬＩ解析および熱安定性解析を示す。Ｆｃ操作１０Ｄ１変異体は、ＦｃγＲＩＩＩａに対する結合の、非Ｆｃ操作１０Ｄ１と比較した、著明な改善（アフィニティーの、約９倍の増大）を示し（図３９Ａを参照されたい）、熱安定性は、６０℃を上回っても維持された。
【０７０３】
ＣＨ２領域内に、ＧＡＳＤ置換を含む１０Ｄ１のための構築物もまた、調製したが、Ｇ２３６ＡおよびＳ２３９Ｄに対応する置換を含む、１０Ｄ１  ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３の配列を、配列番号２２８に示す。
【０７０４】
抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１（実施例２．２の［１］）、およびこのＧＡＳＤ変異体のアフィニティーを、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合アフィニティーについてのバイオレイヤー干渉法により解析した。ＢＬＩは、上記で記載した通りに実施した。
【０７０５】
図３９Ａおよび３９Ｂは、代表的なセンサーグラム、Ｋｏｎ、Ｋｏｆｆ、およびＫＤ値を示す。予測される通り、１０Ｄ１  ＧＡＳＤ変異体（３９Ｂ）は、ＦｃγＲＩＩＩａに対するアフィニティーの、１０Ｄ１（３９Ａ）と比較した、劇的な増大を呈した。
【０７０６】
１０Ｄ１  ＧＡＳＤ変異体の熱安定性もまた、実施例３．４で記載した通りに、示差走査蛍光測定解析により解析した。結果を、図４０に示す。
さらなる１０Ｄ１Ｆ  Ｆｃ変異体
ＣＨ２領域内に、Ｎ２９７Ｑ置換を含む、別の抗体変異体も創出した。Ｎ２９７Ｑ置換を含む、１０Ｄ１  ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３のための、代表的な配列を、配列番号２２６に示す。この「サイレント形態」は、Ｆｃ領域のＮ結合型グリコシル化、およびＦｃの、Ｆｃγ受容体への結合の両方を阻止し、陰性対照として使用される。
【０７０７】
図４１Ａおよび４１Ｂは、上記で記載した通りに決定された、１０Ｄ１Ｆ  ｈＩｇＧ１  Ｆｃ変異体である、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡおよび１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢの、ヒトおよびマウスＦｃ受容体に対する結合アフィニティーを示す。１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢは、ヒトおよびマウスの、ＦｃγおよびＦｃＲｎ受容体への、非修飾の１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡまたは市販の抗体と比較して、著明に改善された結合を示すことが見出された。ＮＤ＝低結合アフィニティーのために、ＫＤが決定されない。
【０７０８】
実施例８
ヒト化および修飾クローンの特徴付け
８．１  フローサイトメトリーによる、細胞表面における抗原結合についての解析
野生型（ＷＴ）ＨＥＫ２９３細胞（高レベルのＨＥＲ３を発現しない）、およびヒトＨＥＲ３をコードするベクターをトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞（すなわち、ＨＥＫ  ２９３  ＨＥＲ  Ｏ／Ｅ細胞）を、１０μｇ／ｍｌの、ヒト化抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ（１０Ｄ１Ｆ）、抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１（１０Ｄ１Ｐ）、またはアイソタイプ対照抗体と共に、４℃で、１．５時間にわたりインキュベートした。抗ＨＥＲ３抗体クローンＬＪＭ７１６（例えば、Ｇａｒｎｅｒら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ（２０１３）、７３：６０２４〜６０３５；および実施例３．５において記載された）を、陽性対照として、解析に組み入れた。
【０７０９】
細胞を、緩衝液（２ｍＭのＥＤＴＡと、０．５％のＢＳＡとを伴うＰＢＳ）で洗浄し、１０μｇ／ｍｌのＦＩＴＣコンジュゲート抗ＦＣ抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＵＳＡ）中、４℃で、２０分間にわたり再懸濁させた。細胞を再度洗浄し、ＭＡＣＳＱｕａｎｔ  １０（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、フローサイトメトリー解析のために、２００μＬのＦＡＣＳフロー緩衝液（５ｍＭのＥＤＴＡを伴うＰＢＳ）中に再懸濁させた。非染色のＷＴおよびトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞を、陰性対照として、解析に組み入れた。収集の後、Ｆｌｏｗｌｏｇｉｃソフトウェアを使用して、全ての生データを解析した。前方散乱および側方散乱プロファイルを使用して、細胞にゲートをかけ、陽性細胞の百分率を、天然および過剰発現細胞集団について決定した。
【０７１０】
結果を、図４２Ａおよび４２Ｂに示す。抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡは、ヒトＨＥＲ３に、高度の特異性で結合することが示された（４２Ａ）。１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ、１０Ｄ１Ｐと、ＬＪＭ７１６とは、ヒトＨＥＲ３発現細胞に、同程度に結合することが示された（４２Ｂ）。
８．２  抗体の特異性および交差反応性を決定するためのＥＬＩＳＡ
ＥＬＩＳＡを使用して、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ抗体の結合特異性を確認した。抗体を、ヒトＨＥＲ３ポリペプチド、ならびにヒトＨＥＲ１（ＥＧＦＲ）およびヒトＨＥＲ２（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｃ．、Ｃｈｉｎａ）に結合する、それらの能力ついて解析した。ヒトＩｇＧアイソタイプおよび無関係な抗原を、陰性対照として組み入れた。
【０７１１】
ＥＬＩＳＡを、標準的なプロトコールに従い行った。プレートを、リン酸緩衝生理食塩液（ＰＢＳ）中に、０．１μｇ／ｍｌの標的ポリペプチドにより、４℃で、１６時間にわたりコーティングした。トリス緩衝液生理食塩液（ＴＢＳ）中１％のＢＳＡによる、室温で、１時間にわたるブロッキングの後、抗ＨＥＲ３抗体を、最高濃度を１０μｇ／ｍｌとして系列希釈し、プレートへと添加した。室温で、１時間にわたるインキュベーション後、プレートを、０．０５％のＴｗｅｅｎ  ２０を含有するＴＢＳ（ＴＢＳ−Ｔ）で、３回にわたり洗浄し、次いで、ＨＲＰコンジュゲート抗Ｈｉｓ抗体（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．、ＵＳＡ）と共に、室温で、１時間にわたりインキュベートした。洗浄の後、プレートを、比色検出基質である、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（Ｔｕｒｂｏ−ＴＭＢ；Ｐｉｅｒｃｅ、ＵＳＡ）で、１０分間にわたり現像した。２ＭのＨ２ＳＯ４で、反応を停止させ、４５０ｎｍで、ＯＤを測定した。
【０７１２】
結果を、図４３に示す。抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡは、高抗体濃度であってもなお、ヒトＨＥＲ２またはヒトＨＥＲ１（ＥＧＦＲ）に結合しないことが見出された。
【０７１３】
フローサイトメトリーを使用して、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡが、ＨＥＲ４に結合する能力を解析した。野生型（ＷＴ）ＨＥＫ２９３細胞（高レベルのＨＥＲ４を発現しない）、およびヒトＨＥＲ４をコードするベクターをトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞（すなわち、ＨＥＫ２９３  ＨＥＲ  Ｏ／Ｅ細胞）を、１０μｇ／ｍｌの抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ（１０Ｄ１Ｆ）、またはアイソタイプ対照抗体（陰性対照）と共に、４℃で、１．５時間にわたりインキュベートした。抗ＨＥＲ３抗体クローンである、ＬＪＭ７１６（例えば、Ｇａｒｎｅｒら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ（２０１３）、７３：６０２４〜６０３５において記載された）、および実施例３．５において記載されたＭＭ−１２１（セリバンツマブ）を、陽性対照として、解析に組み入れた。また、市販の抗ＨＥＲ４抗体（Ｎｏｖｕｓ、型番：ＦＡＢ１１３１１Ｐ）も組み入れた。非染色のＨＥＫ２９３細胞を、陰性対照として、解析に組み入れた。
【０７１４】
ＨＥＫ２９３細胞を、１０μｇ／ｍｌの各抗体と共に、４℃で、１時間にわたりインキュベートした。フローサイトメトリーは、上記で記載した通りに実施した。細胞を、ＦＩＴＣコンジュゲート抗ＦＣ抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＵＳＡ）と、４℃で、３０分間にわたり接触させた。
【０７１５】
結果を、図４４に示す。抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡは、細胞表面に発現されたＨＥＲ４に結合しないことが見出された。
【０７１６】
加えて、抗体である、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡを、マウス、ラット、およびサル（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｃ．、Ｃｈｉｎａ）に由来するＨＥＲ３ポリペプチド相同体に結合する、その能力について解析した。マウス（Ｍ．ｍｕｓｃｕｌｕｓ）、ラット（Ｒ．ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）、およびカニクイザル（Ｍ．ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ）のＨＥＲ３相同体は、それぞれ、ヒトＨＥＲ３と、９１．１、９１．０、および９８．９％の配列同一性を共有し、ＨＥＲ３シグナル伝達経路は、４つの種の間で保存されている。
【０７１７】
ＥＬＩＳＡは、上記の通りに実施した。
【０７１８】
結果を、図４５に示す。１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ抗体は、ＨＥＲ３の、カニクイザル、マウス、ラット、およびヒトオーソログに、高アフィニティーで結合し、これにより、種間の実質的な交差反応性を呈することが見出された。
８．３  Ｏｃｔｅｔ  ＱＫ３８４システムを使用する、グローバルアフィニティー研究
抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡおよび１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢを、ヒトＨＥＲ３に対する結合アフィニティーについて解析した。
【０７１９】
Ｏｃｔｅｔ  ＱＫ３８４システム（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を使用して、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）実験を実施した。抗ヒトＩｇＧ捕捉（ＡＨＣ）Ｏｃｔｅｔセンサーチップ（Ｐａｌｌ  ＦｏｒｔｅＢｉｏ、ＵＳＡ）を、抗体（２５ｎＭ）でコーティングした。結合は、ベースライン（６０秒間）、ローディング（１２０秒間）、ベースライン２（６０秒間）、会合（１２０秒間）、解離（ＦｃＡ：１２０秒間、ＦｃＢ：６００秒間）、および再生（１５秒間）のステップにおける、ＨＩＳタグ付けヒトＨＥＲ３の滴定を使用して検出した。抗原濃度を、図４６Ａおよび４６Ｂにおける表に示す。センサーグラムを、実施例３．３に記載した通りに解析した。値は、会合速度定数（Ｋｏｎ）、解離速度定数（Ｋｏｆｆ）、および平衡解離定数（ＫＤ）について得た。
【０７２０】
クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡおよび１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢについての解析のための、代表的なセンサーグラムを、図４６Ａおよび４６Ｂに示す。１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡは、ＫＤ＝７２．６ｐＭの高アフィニティーで、ヒトＨＥＲ３に結合する（４６Ａ）。１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢは、ＫＤ＝２２．２ｐＭの高アフィニティーで、ヒトＨＥＲ３に結合する（４６Ｂ）。
８．４  示差走査蛍光測定法による、熱安定性についての解析
示差走査蛍光測定法は、抗体である、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡおよび１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢについて、実施例３．４に記載される通りに実施した。
【０７２１】
抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡの熱安定性についての示差走査蛍光測定解析のために得られた生データの一次微分を、図４７Ａに示す。抗体の、３つ異なる試料を、解析し、Ｔｍを、７０．０℃であると決定した。
【０７２２】
抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢの熱安定性についての示差走査蛍光測定解析のために得られた生データの一次微分を、図４７Ｂに示す。抗体の、３つ異なる試料を、解析し、Ｔｍを、６２．７℃であると決定した。
８．５  抗体純度解析
抗体である、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡおよび１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢの純度を、サイズ除外クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により解析した。５００μｌのＰＢＳ  ｐＨ７．２中に１５０μｇの１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ、または５００μｌのＰＢＳ  ｐＨ７．４５中に１５０μｇの１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢを、室温、それぞれ、０．７５ｍｌ／分または０．５ｍｌ／分の流量で、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００  １０／３０  ＧＬカラム上、ＰＢＳランニング緩衝液中に注入し、フロースルーの、Ａ２８０におけるＯＤを記録した。
【０７２３】
結果を、図４８Ａ（１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ）および４８Ｂ（１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢ）に示す。
８．６  抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡのエピトープについての解析
抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡを解析して、それが、ＨＥＲ３への結合について、抗ＨＥＲ３抗体である、Ｍ−０５−７４またはＭ−０８−１１（Ｒｏｃｈｅ）と競合するのかどうかを決定した。Ｍ−０５−７４およびＭ−０８−１１のエピトープは、いずれも、ドメインＩＩに位置する、ＨＥＲ３二量体化アームの、β−ヘアピン構造へとマッピングされた。Ｍ−０８−１１が、ＨＥＲ４に結合しないのに対し、Ｍ−０５−７４は、ＨＥＲ４二量体化アームを認識する。Ｍ−０５−７４およびＭ−０８−１１の、ＨＥＲ３への結合は、リガンド（ＮＲＧ）非依存的である。
【０７２４】
ＢＬＩ実験は、１つの変更：４００ｎＭの競合抗体を使用したことを伴いながら、実施例３．５に記載した通りに実施した。Ｍ−０５−７４およびＭ−０８−１１抗体の可変領域は、ヒトＩｇＧ１およびＩｇカッパのＦｃ骨格を有する、ＰＤＺベクター内にクローニングした。
【０７２５】
解析の結果を、図４９Ａおよび４９Ｂに示す。抗ＨＥＲ３  １０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ抗体は、ＨＥＲ３への結合について、Ｍ−０５−７４またはＭ−０８−１１と競合しないことが見出された。１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡは、Ｍ−０５−７４およびＭ−０８−１１とは別個であり、トポロジカルに遠く離れているＨＥＲ３エピトープに結合することが見出された。１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡの、ＨＥＲ３への結合は、リガンド（ＮＲＧ）非依存的である。
結論：
１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡの、ヒトＨＥＲ３への結合は、リガンドに依存しない方法で達成されうる。
【０７２６】
１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡが結合するエピトープは、Ｍ−０５−７４およびＭ−０８−１１のエピトープとは別個であり、これらから、トポロジカルに遠く離れている。
８．７  ＨＥＲ２−ＨＥＲ３およびＥＧＦＲ−ＨＥＲ３の二量体化の阻害
抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡを、ＨＥＲ３とＨＥＲ２とのヘテロ二量体化を阻害する、その能力について解析した。
【０７２７】
プレートベースの、ＥＬＩＳＡ二量体化アッセイを、標準的なプロトコールに従い行った。プレートを、１μｇ／ｍｌのＨＥＲ２−Ｆｃタンパク質でコーティングした。ブロッキングおよび洗浄の後、プレートを、異なる濃度の、候補抗体である、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ、ＭＭ−１２１、ＬＪＭ７１６、ペルツズマブ、Ｒｏｃｈｅ  Ｍ０５、Ｒｏｃｈｅ  Ｍ０８、またはアイソタイプ対照、ならびに２μｇ／ｍｌの定常ＨＥＲ３  Ｈｉｓ、および０．１μｇ／ｍｌのＮＲＧと共に、１時間にわたりインキュベートした。次いで、プレートを洗浄し、二次抗ＨＩＳＨＲＰ抗体と共に、１時間にわたりインキュベートした。プレートを洗浄し、ＴＭＢで、１０分間にわたり処置し、２ＭのＨ２ＳＯ４停止溶液を使用して、反応を停止させた。吸光度は、４５０ｎｍで読み取った。
【０７２８】
結果を、図５２に示す。抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡは、ＨＥＲ２とＨＥＲ３との相互作用を、用量依存的に、直接阻害することが見出された。
【０７２９】
別のアッセイでは、ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商標）Ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ  Ｂｉｏａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ、Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ＵＳＡ）を使用して、二量体化の阻害を検出した。１ｍｌの、あらかじめ加熱したＣＰ５培地を使用して、ＨＥＲ２およびＨＥＲ３を過剰発現するＵ２ＯＳ細胞を融解させ、細胞５，０００個を、５％ＣＯ２の雰囲気中、３７℃で、４時間にわたり播種した。細胞を、２５μｇ／ｍｌから始まる、８点の系列希釈により系列希釈された濃度の、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ、セリバンツマブ、またはペルツズマブで処置した。インキュベーションの４時間後、３０ｎｇ／ｍｌのヘレグリン−β２を、各ウェルへと添加し、プレートを、さらに１６時間にわたりインキュベートした。インキュベーション後、１０μＬのＰａｔｈＨｕｎｔｅｒバイオアッセイ検出試薬１を添加し、暗所内、室温で、１５分間にわたりインキュベートするのに続き、４０μＬのＰａｔｈＨｕｎｔｅｒバイオアッセイ検出試薬２を添加し、次いで、これを、暗所内、室温で、６０分間にわたりインキュベートした。遅延を１秒間とする、Ｓｙｎｅｒｇｙ４  Ｂｉｏｔｅｋを使用して、プレートを読み取った。
【０７３０】
１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡは、ＨＥＲ２−ＨＥＲ３ヘテロ二量体化の阻害について、３．７１５ｅ−１１のＥＣ５０値を有することが見出された。同じアッセイでは、セリバンツマブ／ＭＭ−１２１についての比較ＥＣ５０値は、６．７８８ｅ−１０であることが見出され、ペルツズマブについての比較ＥＣ５０値は、２．４８１ｅ−１０であることが見出された。
【０７３１】
抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡを、ＥＧＦＲとＨＥＲ３とのヘテロ二量体化を阻害する、その能力について解析した。
【０７３２】
プレートベースの、ＥＬＩＳＡ二量体化アッセイは、標準的なプロトコールに従い実施した。プレートを、１μｇ／ｍｌのヒトＥＧＦＲ−Ｈｉｓでコーティングした。ブロッキングおよび洗浄の後、プレートを、４μｇ／ｍｌの定常ＨＥＲ３−ビオチン、および０．１μｇ／ｍｌのＮＲＧを伴う、異なる濃度の、候補抗体である、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ、ＭＭ−１２１、ＬＪＭ７１６、ペルツズマブ、またはアイソタイプ対照と共に、１時間にわたりインキュベートした。次いで、プレートを洗浄し、二次抗アビジンＨＲＰ抗体と共に、１時間にわたりインキュベートした。プレートを洗浄し、ＴＭＢで、１０分間にわたり処置し、２ＭのＨ２ＳＯ４停止溶液を使用して、反応を停止させた。吸光度は、４５０ｎｍで読み取った。
【０７３３】
結果を、図５３に示す。抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡは、ＥＧＦＲとＨＥＲ３との相互作用を、用量依存的に、直接阻害することが見出された。
８．８  ＡＤＣＣを誘導する能力についての解析
抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡおよび１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢを、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）を誘導する、それらの能力について解析した。
【０７３４】
標的細胞（ＨＥＲ３を過剰発現するＨＥＫ２９３）は、Ｕ字底９６ウェルプレート内に、ウェル１つ当たりの細胞２０，０００個の密度で播種した。細胞を、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢ、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ＿Ｎ２９７Ｑ（サイレント形態）、ＬＪＭ−７１６、セリバンツマブ（ＭＭ−１２１）のうちの１つによる系列希釈液（５０，０００ｎｇ／ｍｌ〜０．１８ｎｇ／ｍｌ）で処置するか、または非処置で放置し、３７℃および５％のＣＯ２で、３０分間にわたりインキュベートした。エフェクター細胞（Ｈｕｍａｎ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｋｉｌｌｅｒ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅ  Ｎｏ−ＧＦＰ−ＣＤ１６．ＮＫ−９２；１７６Ｖ）を、標的細胞を、ウェル１つ当たりの細胞６０，０００個の密度で含有するプレートへと添加した。
【０７３５】
以下の対照：標的細胞による最大のＬＤＨ放出（標的細胞だけ）、自発的放出（抗体を伴わない標的細胞およびエフェクター細胞）、バックグラウンド（培養培地だけ）を組み入れた。プレートをスピンダウンし、３７℃および５％ＣＯ２で、２１時間にわたりインキュベートした。
【０７３６】
ＬＤＨ放出アッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ  ＬＤＨ細胞傷害作用アッセイキット）：アッセイの前に、１０μｌの溶解緩衝液（１０倍）を、標的細胞による最大のＬＤＨ放出対照へと添加し、３７℃および５％ＣＯ２で、２０分間にわたりインキュベートした。インキュベーションの後、プレートをスピンダウンし、５０μＬの上清を、平底９６ウェルプレートへと移した。基質を含有する、５０μｌのＬＤＨアッセイミックスを、上清へと添加することにより反応を開始し、３７℃で３０分間にわたりインキュベートした。５０μｌの停止溶液を添加することにより、反応を停止させ、ＢｉｏＴｅｋ  Ｓｙｎｅｒｇｙ  ＨＴマイクロプレートリーダーにより、４９０ｎｍおよび６８０ｎｍにおける吸光度を記録した。
【０７３７】
データ解析のために、被検試料からの吸光度を、バックグラウンド、ならびに標的細胞およびエフェクター細胞からの自発的放出に対して補正した。被検試料の細胞傷害作用パーセントを、標的細胞による最大のＬＤＨ放出対照と比べて計算し、抗体濃度の関数としてプロットする。
【０７３８】
結果を、図５４に示す。抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢは、ＨＥＲ３過剰発現細胞に対する、強力なＡＤＣＣ活性を、用量依存的に誘導することが見出された。
８．９  ＨＥＲ３媒介性シグナル伝達の阻害
抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡを、ｉｎ  ｖｉｔｒｏのがん細胞株内の、ＨＥＲ−３媒介性シグナル伝達を阻害する、その能力について解析した。
【０７３９】
Ｎ８７、ＦａＤｕ、またはＯｖＣＡＲ８細胞を、１０％の血清を伴う、６ウェルプレートのウェル内に、５％ＣＯ２を伴う、３７℃で、一晩にわたり播種した。細胞を、０．２％のＦＢＳ培養培地で、１６時間にわたり飢餓させ、次いで、細胞株に対応するＩＣ５０の、異なる抗体で、０．５時間にわたり処置した。被験抗体は、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ（１０Ｄ１）、セリバンツマブ（ＳＢＴ）、エレゲムツマブ（ＬＪＭ）、ペルツズマブ（ＰＴＭ）、セツキシマブ（ＣＴＸ）、およびトラスツズマブ（ＴＺ）であった。
【０７４０】
採取の前に、細胞を、１００ｎｇ／ｍｌのＮＲＧ１で刺激した。細胞株から抽出されたタンパク質は、標準的なＢｒａｄｆｏｒｄタンパク質アッセイを使用して定量した。タンパク質試料（５０μｇ）を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分画し、ニトロセルロース膜へと転写した。次いで、膜をブロッキングし、表示の抗体による免疫ブロットにかけた。結果は、Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｃｌａｒｉｔｙ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  ＥＣＬ基質によって視覚化した。光学濃度測定解析を使用して、ブロットを定量し、データは、ベータアクチンに対して正規化した。
【０７４１】
結果を、図５５Ａ〜５５Ｃに示す。抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡは、Ｎ８７（５５Ａ）、ＦａＤｕ（５５Ｂ）、ＯｖＣａｒ８（５５Ｃ）、およびＡ５４９（５５Ｄ）において、ＨＥＲ３のリン酸化、および下流のシグナル伝達を阻害することが見出された。
【０７４２】
Ｎ８７細胞、Ａ５４９細胞、ＯｖＣａｒ８細胞、およびＦａＤｕ細胞を使用する実験のために、全ＲＮＡを、抗体処置の１６時間後に抽出し、遺伝子セットエンリッチメント解析により、鍵となる、シグナル伝達経路タンパク質の発現レベルに基づき、経路の活性化を決定するように解析した。
【０７４３】
解析の結果を、図６３Ａ〜６３Ｄに示す。１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡは、下流のシグナル伝達の、最も効果的な阻害剤であった。
【０７４４】
Ａ５４９細胞を使用する、さらなる実験では、ｉｎ  ｖｉｔｒｏリン酸化アッセイは、細胞を、異なる抗体で、０．５時間または４時間にわたり処置したことを除き、上記と同様に実施した。結果を、図６４に示す。
【０７４５】
実施例９
ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏにおける、ヒト化され、改変されたクローンについての解析
９．１  薬物動態解析
マウス
約６〜８週齢の、雌ＮＣｒヌードマウスを、特定の無病原体条件下で飼育し、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）ガイドラインに準拠して処置した。
【０７４６】
５００μｇの抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡまたは１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢを投与し、血液は、４匹のマウスから、心臓穿刺により、ベースライン（−２時間後）、投与の６時間後、２４時間後、９６時間後、１６８時間後、および３３６時間後に得た。血清中の抗体は、ＥＬＩＳＡにより定量した。
【０７４７】
薬物動態解析のためのパラメータ：最大濃度（Ｃｍａｘ）、ＡＵＣ（０〜３３６時間）、ＡＵＣ（０〜無限大）、半減期（ｔ１／２）、クリアランス（ＣＬ）、定常状態における分布容積（Ｖｓｓ）は、非コンパートメントモデルから導出した。
【０７４８】
結果を、図５６Ａおよび５６Ｂに示す。ＮＣｒヌードマウスにおいて、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡは、２５３時間の半減期を有することが見出され（５６Ａ）、抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢは、２７３時間の半減期を有することが見出された（５６Ｂ）。
ラット
１０Ｄ１Ｆ変異体を解析して、平均値体重を３２０ｇとする、雌Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットにおける、単回投与による薬物動態プロファイルを決定した。
【０７４９】
抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡおよび１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢを、４ｍｇ（約１０ｍｇ／ｋｇ）、１０ｍｇ（約２５ｍｇ／ｋｇ）、４０ｍｇ（約１００ｍｇ／ｋｇ）、または１００ｍｇ（約２５０ｍｇ／ｋｇ）の、尾静脈への、緩徐なｉ．ｖ．注射を介する、単回投与により投与した。溶媒は、陰性対照として投与した。処置１つ当たり２匹ずつのラットからの血液は、ベースライン（−２４時間後）、投与の６時間後、２４時間後、９６時間後、１６８時間後、および３３６時間後に得た。血清中の抗体は、ＥＬＩＳＡにより定量した。
【０７５０】
薬物動態解析のためのパラメータ：最大濃度（Ｃｍａｘ）、ＡＵＣ（０〜３３６時間）、ＡＵＣ（０〜無限大）、半減期（ｔ１／２）、クリアランス（ＣＬ）、定常状態における分布容積（Ｖｄ）は、非コンパートメントモデルから導出した。
【０７５１】
結果を、図５７Ａ（１０ｍｇ／ｋｇ）、５７Ｂ（２５ｍｇ／ｋｇ）、５７Ｃ（１００ｍｇ／ｋｇ）、および５７Ｄ（２５０ｍｇ／ｋｇ）に示す。
９．２  安全性および免疫毒性
１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡおよび１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢの毒性作用について解析した。
マウス
６〜８週齢の、雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（２０〜２５ｇ）に、用量：２００ｕｇ（約１０ｍｇ／ｋｇ）、５００ｕｇ（約２５ｍｇ／ｋｇ）、２ｍｇ（約１００ｍｇ／ｋｇ）、もしくは５ｍｇ（約２５０ｍｇ／ｋｇ）のうちの１つにおける１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡおよび１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢ、または等容量のＰＢＳの単回投与用量を腹腔内注射した。３匹のマウスに、各処置を注射し、４匹のマウスに、ＰＢＳ対照を注射した。血液試料は、注射の９６時間後に得、ＲＢＣ指標（総ＲＢＣ数、ヘマトクリット、ヘモグロビン、血小板カウント、平均値赤血球容積、平均値赤血球ヘモグロビン、平均値赤血球ヘモグロビン濃度）、およびＷＢＣ指標（総ＷＢＣ数、リンパ球数、好中球数、単球数）について解析した。解析は、ＨＭ５  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  Ａｎａｌｙｓｅｒを使用して実施した。
【０７５２】
結果を、図５８Ａ、５８Ｂ（ＲＢＣ指標）、および５８Ｃ（ＷＢＣ指標）に示す。抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡおよび１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢは、ＲＢＣ指標に影響を及ぼさなかったが、高用量（２５０ｍｇ／ｋｇの１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ、１００ｍｇ／ｋｇの１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢ、２５０ｍｇ／ｋｇの１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢ）で、ＷＢＣ指標に影響を及ぼすことが見出された。
【０７５３】
肝毒性、腎毒性、および膵毒性もまた、注射の９６時間後に解析した。１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡおよび１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢは、アラニンアミノトランスフェラーゼ、アルカリホスファターゼ、アルブミン、総タンパク質（肝臓指標；図５８Ｄ）、クレアチニン、血中尿素窒素、グルコースまたはアミラーゼ（腎臓／膵臓指標；図５８Ｅ）のレベルに対して影響を及ぼさなかった。１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡおよび１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢは、電解質指標である、ナトリウム、カリウム、カルシウム、またはリン酸にも影響を及ぼさなかった（図５８Ｆ）。
【０７５４】
１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡまたは１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢで処置されたマウスは、９６時間後に、体重、挙動、皮膚状態、経口検査、糞便／尿検査、または眼検査で異常を示さなかった。より高用量：２５０ｍｇ／ｋｇの１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ、１００ｍｇ／ｋｇの１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢ、２５０ｍｇ／ｋｇの１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢで処置されたマウスでは、脾臓の、正常サイズの約１．５倍の腫大（脾腫）が観察された。
【０７５５】
ＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて、さらなる研究を実施して、５００μｇ（約２５ｍｇ／ｋｇ）の１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡまたは１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢの反復投与による毒性作用を査定した。抗体は、毎週１回、４週間にわたり投与した。血液は、初回投与の２８日後に得た。いずれの抗体についても、ＲＢＣ、肝臓、腎臓、膵臓、または電解質指標に対する影響は観察されず、臨床的異常の徴候も見られず、肉眼剖検における差違も検出されなかった。総ＷＢＣ数、リンパ球数、および好中球数は、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡまたは１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢで処置されたマウスにおいて、減少することが観察されたが、これは、毒性であると考えられなかった。
【０７５６】
別の研究では、ＢＡＬＢ／ｃマウスに、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡまたは等容量のＰＢＳ（溶媒対照）の単回投与を行い、３３６時間後に解析した。代表的な結果を、図６９Ａ〜６９Ｃに示す。
ラット
６〜８週齢の、雌Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラット（４００〜４５０ｇ）に、用量：４ｍｇ（約１０ｍｇ／ｋｇ）、１０ｍｇ（約２５ｍｇ／ｋｇ）、４０ｍｇ（約１００ｍｇ／ｋｇ）、１００ｍｇ（約２５０ｍｇ／ｋｇ）のうちの１つにおける１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ抗体または１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢ抗体の単回投与用量を腹腔内注射した。血液は、−２４時間後、６時間後、２４時間後、９６時間後、１６８時間後、および３３６時間後に得た。注射の３６６時間後までに、ＲＢＣ指標に対する影響、ＷＢＣ指標に対する毒性作用、および肝臓、腎臓、膵臓、または電解質指標に対する影響は見られなかった。臨床的異常の徴候は見られず、肉眼剖検における差違も検出されなかった。
【０７５７】
２５０ｍｇ／ｋｇの１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡを投与されたラットから得られた代表的な結果を、図７０Ａ〜７０Ｃに示す。
【０７５８】
齧歯動物毒性学モデルにおける、毒性徴候の非存在は、１０Ｄ１および変異体について、優れた臨床的安全性を指し示す。
９．３  ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける、がんを処置する有効性についての解析
抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡを、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの多数の腫瘍モデル：Ｎ８７細胞（胃がん）、ＨＣＣ９５細胞（肺がん）、ＦａＤｕ細胞（頭頸部がん）、ＳＮＵ−１６細胞（胃がん）、Ａ５４９細胞（肺がん）、ＯｖＣａｒ８細胞（卵巣がん）、ＡＣＨＮ細胞（腎がん）、およびＨＴ２９細胞（結腸直腸がん）において、腫瘍増殖を阻害する、その能力について解析した。１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡの有効性を、他の抗ＨＥＲ３抗体である、セリバンツマブ（ＭＭ−１２１）およびＬＪＭ−７１６、ならびに他のＥＧＦＲファミリー療法である、セツキシマブ、トラスツズマブ、およびペルツズマブと比較した。
【０７５９】
細胞を、１５００ｕｇ／ｍｌから始まる、９点の希釈により系列希釈された濃度の治療用抗体で処置した。細胞生存率は、処置の３〜５日後に、ＣＣＫ−８細胞増殖アッセイを使用して測定した。示される細胞阻害百分率を、緩衝液（ＰＢＳ）だけで処置された細胞と比べる。データ点は、３連の平均を指し示す。
【０７６０】
結果を、図５９Ａ〜５９Ｄに示す。抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡは、複数の腫瘍モデルにおいて、他のＨＥＲ３抗体療法（５９Ａおよび５９Ｂ）、およびＥＧＦＲファミリー療法（５９Ｃおよび５９Ｄ）と比較して、優れた、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける腫瘍の阻害を裏付ける。
【０７６１】
図７７Ａおよび７７Ｂは、２５ｍｇ／ｋｇの、対象とする抗体をＩＰ投与されたマウスにおいて達成するＣｍａｘ濃度で、異なる抗ＥｒｂＢ抗体が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける、異なるがん細胞株の増殖を阻害する能力を示す。１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡは、多種多様な、異なるがん細胞型の増殖を阻害する、卓越した能力を呈する。
９．４  ｉｎ  ｖｉｖｏにおける、がんを処置する有効性についての解析
抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡおよび１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢを、ｉｎ  ｖｉｖｏがんモデルにおける、それらの、腫瘍増殖に対する効果について評価した。
９．４．１  Ａ５４９モデル
腫瘍細胞を、雌ＮＣｒヌードマウスの右脇腹へと、皮下挿入した。抗体（２５ｍｇ／ｋｇの１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢ、セツキシマブ、ＬＪＭ−７１６、もしくはＭＭ−１２１；各処置について、ｎ＝６）、または溶媒（ｎ＝８）を、隔週で、６週間にわたり投与した。
【０７６２】
結果を、図６０に示す。抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡおよび１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢは、いずれも、肺癌についての、Ａ５４９モデルにおける、強力な有効性を呈した。１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢは、特に、強力であり、腫瘍を退縮させることが見出された。
９．４．２  ＦａＤｕモデル
腫瘍細胞を、Ｍａｔｒｉｇｅｌと共に、雌ＮＣｒヌードマウスの右脇腹へと、皮下挿入した。抗体（１０および２５ｍｇ／ｋｇの１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡおよび１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢ、または２５ｍｇ／ｋｇのセツキシマブ、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ＬＪＭ−７１６、もしくはＭＭ−１２１；各処置について、ｎ＝６）、または溶媒（ｎ＝６）を、毎週１回、６週間にわたり投与した。
【０７６３】
結果を、図６１に示す。抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡおよび１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＢは、いずれも、頭頸部がんについての、ＦａＤｕモデルにおいて、腫瘍増殖を防止するのに効果的であることが見出された。
９．４．３  ＯｖＣａｒ８モデル
腫瘍細胞を、Ｍａｔｒｉｇｅｌと共に、雌ＮＣｒヌードマウスの右脇腹へと、皮下挿入した。抗体（１０および２５ｍｇ／ｋｇの１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ、または２５ｍｇ／ｋｇのセツキシマブ、ＬＪＭ−７１６、もしくはＭＭ−１２１；ｎ＝６）、または溶媒（ｎ＝６）を、毎週１回、６週間にわたり投与した。
【０７６４】
結果を、図６２に示す。抗ＨＥＲ３抗体クローンである、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡは、より高用量において、腫瘍体積の低減に効果的であることが見出された。
９．４．４  Ｎ８７モデル
腫瘍細胞を、Ｍａｔｒｉｇｅｌと共に、雌ＮＣｒヌードマウスの右脇腹へと、皮下挿入する。抗体（２５ｍｇ／ｋｇの１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ、または５０ｍｇ／ｋｇのトラスツズマブ、ＬＪＭ−７１６、もしくはＭＭ−１２１；各処置について、ｎ＝６）、または溶媒（ｎ＝６）を、隔週で、６週間にわたり投与した。
【０７６５】
結果を、図７４に示す。抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡは、胃がんについての、Ｎ８７モデルにおいて、腫瘍増殖を防止するのに効果的であることが見出された。
【０７６６】
実施例１０
ＢＲＡＦＶ６００Ｅ突然変異体甲状腺がん細胞株の増殖の阻害についての解析
以下の細胞株について調べた：
【０７６７】
【表６】
2021510535.tif 000026
細胞を、フローサイトメトリーにより、ＥＧＦＲファミリーメンバーの表面発現について調べた。略述すると、細胞３００，０００個を、２０μｇ／ｍｌの１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ、セツキシマブ、またはトラスツズマブと共に、４℃で、１時間にわたりインキュベートした。Ａｌｅｘａｆｌｕｏｒ  ４８８コンジュゲート抗ヒト抗体を、１０μｇ／ｍｌで、二次抗体として（４℃で、４０分間にわたり）使用した。
【０７６８】
結果を、図６６Ａ〜６６Ｃに示す。ＳＷ１７３６、ＢＨＴ１０１、およびＢＣＰＡＰ細胞は、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、およびＨＥＲ３を発現することが示された。
【０７６９】
本発明者らは、異なるＨＥＲ３結合性抗体が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける、ＢＲＡＦのＶ６００Ｅ突然変異を保有する、異なる甲状腺がん細胞株の増殖を阻害する能力について調べた。
【０７７０】
略述すると、異なる細胞株の細胞を、ウェル１つ当たりの細胞１．５×１０５個の密度で播種し、翌日、１０００μｇ／ｍｌから始まる、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ、セリバンツマブ、ＬＪＭ−７１６、ペルツズマブ、またはアイソタイプ対照抗体の、１０点の系列希釈液で処置した。３日後、ＣＣＫ−８細胞増殖アッセイを使用して、増殖を測定した。抗体ではなく、等容量のＰＢＳで処置された細胞と比べた、増殖の阻害パーセントを計算した。
【０７７１】
結果を、図６７Ａ〜６７Ｃに示す。１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡは、解析される抗ＨＥＲ３抗体のうちの他のいずれよりも、ＢＲＡＦのＶ６００Ｅ突然変異を保有する細胞株の増殖の阻害において効果的であることが見出された。
【０７７２】
さらなる実験では、組合せ１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡとベムラフェニブとの組合せが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける、ＢＲＡＦのＶ６００Ｅ突然変異を保有する、異なる甲状腺がん細胞株の増殖を阻害する能力について調べた。
【０７７３】
細胞を、ウェル１つ当たりの細胞１．５×１０５個の密度で播種し、翌日、２００ｎＭのベムラフェニブの存在下または非存在下、１０００μｇ／ｍｌから始まる、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡまたはアイソタイプ対照抗体の、１０点の系列希釈液で処置した。３日後、ＣＣＫ−８細胞増殖アッセイを使用して、増殖を測定した。抗体ではなく、等容量のＰＢＳで処置された細胞と比べた、増殖の阻害パーセントを計算した。
【０７７４】
結果を、図６８Ａ〜６８Ｃに示す。１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡは、ベムラフェニブが、ベムラフェニブに対して感受性である、ＳＷ１７３６およびＢＨＴ１０１細胞の増殖を阻害する能力を増強することが見出された。１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡはまた、ベムラフェニブ耐性ＢＣＰＡＰ細胞の増殖に対する、強力な阻害剤であることも見出された。
【０７７５】
実施例１１
ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるＨＥＲ３媒介性シグナル伝達の阻害についての解析
本発明者らは、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡが、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるＨＥＲ３媒介性シグナル伝達を阻害する能力について調べた。
【０７７６】
ＦａＤｕ細胞またはＯｖＣａｒ８細胞１×１０６個を、ＮＣｒヌードマウスへと皮下導入して、異所性異種移植腫瘍を確立した。
【０７７７】
腫瘍が、１００ｍｍ３を超える体積に達したら、マウスを、隔週で、用量を２５ｍｇ／ｋｇとする１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ、または等容量の溶媒（対照）の腹腔内注射により処置した。４週間後、腫瘍を採取した。タンパク質抽出物を、腫瘍から調製し、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイによって定量し、５０μｇの試料を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分画し、実施例４．３に記載される通りに、ＨＥＲ３およびＡＫＴの、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるリン酸化を決定するために、抗体を使用して、ウェスタンブロットにより解析した。
【０７７８】
結果を、図７１に示す。１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡは、ｉｎ  ｖｉｖｏの腫瘍細胞内で、ＨＥＲ３およびＡＫＴのリン酸化を阻害することが見出された。
【０７７９】
実施例１２
抗ＨＥＲ３抗体の内在化についての解析
本発明者らは、ＨＥＲ３発現細胞による、抗ＨＥＲ３抗体の内在化について調べた。
【０７８０】
略述すると、ＨＥＲ３を発現するように操作されたＨＥＫ２９３、ＨＣＣ９５、Ｎ８７、またはＯＶＣＡＲ８細胞１００，０００個を、９６ウェル組織培養プレートのウェル内に播種し、５％のＣＯ２中、３７℃で、一晩にわたり培養した。次いで、細胞を、１２０ｎＭの、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ、ＬＪＭ−７１６、セリバンツマブ、またはトラスツズマブで処置し、３６０ｎＭのｐＨｒｏｄｏ  ｉＦＬ  Ｇｒｅｅｎ試薬で処理し、５％のＣＯ２中、３７℃でインキュベートした。培養物中の細胞を、各ウェルの、４つの異なる視野内で、３０分間ごと、２４時間にわたりイメージングした。各視野の、ＦＩＴＣチャネル内の、最大シグナル強度を、２４時間後に定量した。
【０７８１】
結果を、図７２に示す。ＯｖＣａｒ８細胞内では、ＬＪＭ−７１６およびセリバンツマブの、低度〜中程度の内在化が、観察されたのに対し、トラスツズマブの低度の内在化が、Ｎ８７細胞内で観察された。
【０７８２】
１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡの、非有意の内在化が、ＨＣＣ９５、Ｎ８７、またはＯｖＣａｒ８細胞内で観察された。
【０７８３】
予測される通り、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ、ＬＪＭ−７１６、およびセリバンツマブの有意の内在化が、ＨＥＲ３を過剰発現するＨＥＫ２９３細胞内で観察された。
【０７８４】
さらなる実験では、抗体の内在化を、フローサイトメトリーにより調べた。
【０７８５】
Ｎ８７細胞を、９６ウェル組織培養プレートのウェル内に、ウェル１つ当たりの細胞５０，０００個の密度で播種し、一晩にわたり接着させた（３７℃、５％のＣＯ２）。１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡまたはトラスツズマブを、標識化試薬と混合し、標識付けされた複合体を、細胞へと添加した。試料を、０分後、１０分後、３０分後、１時間後、２時間後、および４．５時間後の時点で、細胞培養培地の吸引により採取し、ＰＢＳで洗浄し、アキュターゼで処理した。アキュターゼ活性を中和させ、細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁させ、フローサイトメトリーにより解析した。
【０７８６】
結果を、図７３Ａおよび７３Ｂに示す。細胞は、１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡの、最小限の内在化を呈した。対照的に、抗ＨＥＲ２抗体である、トラスツズマブの実質的な内在化が観察された。
【０７８７】
実施例１３
ＨＥＲ３結合性抗体の、免疫組織化学における使用
ｍＩｇＧ２ａフォーマットにおける、抗ＨＥＲ３抗体である、１０Ｄ１Ｆは、ヒトＨＥＲ３タンパク質を検出するために、免疫組織化学で使用される、その能力について評価した。
【０７８８】
切片の加工は、Ｂｏｎｄ試薬（Ｌｅｉｃａ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して実施した。市販の凍結組織切片アレイを得た。スライドを、乾燥機内で、１０分間にわたり乾燥させ、次いで、ステップの間の、水による洗浄および／またはＴＢＳ−Ｔによるすすぎを伴う、以下の処理：（ｉ）室温で、１０分間にわたる、１００％のアセトンを伴う処理による固定；（ｉｉ）室温で、１５分間にわたる、３％（ｖ／ｖ）のＨ２Ｏ２を伴う処理による、内因性ペルオキシダーゼのブロッキング；（ｉｉｉ）室温で、３０分間にわたる、１０％のヤギ血清を伴う処理によるブロッキング；（ｉｖ）４℃で、一晩にわたる、６．２ｍｇ／ｍｌ溶液の希釈率を１：２５０とする、１０Ｄ１Ｆ−ｍＩｇＧ２ａを伴うインキュベーション；（ｖ）室温で、３０分間にわたる、ＨＲＰ−ポリマーコンジュゲートヤギ抗マウス抗体を伴うインキュベーション、および（ｖｉ）室温で、５分間にわたる、Ｂｏｎｄ  Ｍｉｘｅｄ  ＤＡＢ  Ｒｅｆｉｎｅによる現像に続き、反応を停止させるように、脱イオン水および１倍濃度のＢｏｎｄ洗浄液ですすいだ。
【０７８９】
次いで、スライドを脱水させ、合成の封入剤中でマウンティングし、高解像度で走査した。
【０７９０】
結果を、図７５Ａおよび７５Ｂに示す。１０Ｄ１Ｆは、悪性ヒト組織切片を、正常組織との、低度の交差反応性で、優先的に染色した。
【０７９１】
さらなる実験では、Ａ５４９異種移植腫瘍を、低温ＰＢＳ中に採取し、ＯＣＴ低温包埋媒体中に包埋し、ドライアイス中で凍結させ、−８０℃で保管した。クライオスタットを使用して、１０μｍの切片を得た。
【０７９２】
スライドを、乾燥機内で、１０分間にわたり乾燥させ、次いで、ステップの間の、水による洗浄および／またはＴＢＳ−Ｔによるすすぎを伴う、以下の処理：（ｉ）室温で、１０分間にわたる、１００％のアセトンを伴う処理による固定；（ｉｉ）室温で、１５分間にわたる、３％（ｖ／ｖ）のＨ２Ｏ２を伴う処理による、内因性ペルオキシダーゼのブロッキング；（ｉｉｉ）室温で、３０分間にわたる、１０％のヤギ血清を伴う処理によるブロッキング；（ｉｖ）４℃で、一晩にわたる、８．８ｍｇ／ｍｌ溶液の希釈率を１：５０とする１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡ、または希釈率を１：２００とする、Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ製のウサギ抗ＨＥＲ３（型番：１０２０１−Ｔ２４）を伴うインキュベーション；（ｖ）室温で、３０分間にわたる、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ製のＦ（ａｂ’）２−ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）ＨＲＰ（Ａ２４４７０）（１：５００）、またはＨＲＰ−ポリマーコンジュゲートヤギ抗ウサギ抗体を伴うインキュベーション、および（ｖｉ）室温で、５分間にわたる、Ｂｏｎｄ  Ｍｉｘｅｄ  ＤＡＢ  Ｒｅｆｉｎｅによる現像に続き、反応を停止させるように、脱イオン水および１倍濃度のＢｏｎｄ洗浄液ですすいだ。
【０７９３】
次いで、スライドを、ヘマトキシリンで対比染色し、脱水させ、合成の封入剤中でマウンティングし、高解像度で走査した。
【０７９４】
結果を、図７６に示す。１０Ｄ１Ｆ．ＦｃＡは、Ａ５４９腫瘍異種移植凍結切片に特異的な膜染色および細胞質染色を呈した。
【図１Ａ】
2021510535.tif 000027
【図１Ｂ】
2021510535.tif 000028
【図２Ａ】
2021510535.tif 000029
【図２Ｂ】
2021510535.tif 000030
【図３Ａ】
2021510535.tif 000031
【図３Ｂ】
2021510535.tif 000032
【図４】
2021510535.tif 000033
【図５Ａ】
2021510535.tif 000034
【図５Ｂ】
2021510535.tif 000035
【図６Ａ】
2021510535.tif 000036
【図６Ｂ】
2021510535.tif 000037
【図７Ａ】
2021510535.tif 000038
【図７Ｂ】
2021510535.tif 000039
【図８】
2021510535.tif 000040
【図９】
2021510535.tif 000041
【図１０】
2021510535.tif 000042
【図１１】
2021510535.tif 000043
【図１２】
2021510535.tif 000044
【図１３】
2021510535.tif 000045
【図１４Ａ】
2021510535.tif 000046
【図１４Ｂ】
2021510535.tif 000047
【図１５】
2021510535.tif 000048
【図１６Ａ】
2021510535.tif 000049
【図１６Ｂ】
2021510535.tif 000050
【図１７】
2021510535.tif 000051
【図１８】
2021510535.tif 000052
【図１９Ａ】
2021510535.tif 000053
【図１９Ｂ】
2021510535.tif 000054
【図２０】
2021510535.tif 000055
【図２１】
2021510535.tif 000056
【図２２】
2021510535.tif 000057
【図２３】
2021510535.tif 000058
【図２４】
2021510535.tif 000059
【図２５】
2021510535.tif 000060
【図２６】
2021510535.tif 000061
【図２７】
2021510535.tif 000062
【図２８】
2021510535.tif 000063
【図２９】
2021510535.tif 000064
【図３０】
2021510535.tif 000065
【図３１】
2021510535.tif 000066
【図３２】
2021510535.tif 000067
【図３３Ａ】
2021510535.tif 000068
【図３３Ｂ】
2021510535.tif 000069
【図３４Ａ】
2021510535.tif 000070
【図３４Ｂ】
2021510535.tif 000071
【図３５Ａ】
2021510535.tif 000072
【図３５Ｂ】
2021510535.tif 000073
【図３５Ｃ】
2021510535.tif 000074
【図３６Ａ】
2021510535.tif 000075
【図３６Ｂ】
2021510535.tif 000076
【図３６Ｃ】
2021510535.tif 000077
【図３６Ｄ】
2021510535.tif 000078
【図３６Ｅ】
2021510535.tif 000079
【図３６Ｆ】
2021510535.tif 000080
【図３６Ｇ】
2021510535.tif 000081
【図３６Ｈ】
2021510535.tif 000082
【図３６Ｉ】
2021510535.tif 000083
【図３６Ｊ】
2021510535.tif 000084
【図３６Ｋ】
2021510535.tif 000085
【図３６Ｌ】
2021510535.tif 000086
【図３６Ｍ】
2021510535.tif 000087
【図３７】
2021510535.tif 000088
【図３８Ａ】
2021510535.tif 000089
【図３８Ｂ】
2021510535.tif 000090
【図３９Ａ】
2021510535.tif 000091
【図３９Ｂ】
2021510535.tif 000092
【図４０】
2021510535.tif 000093
【図４１Ａ】
2021510535.tif 000094
【図４１Ｂ】
2021510535.tif 000095
【図４２Ａ】
2021510535.tif 000096
【図４２Ｂ】
2021510535.tif 000097
【図４３】
2021510535.tif 000098
【図４４】
2021510535.tif 000099
【図４５】
2021510535.tif 000100
【図４６Ａ】
2021510535.tif 000101
【図４６Ｂ】
2021510535.tif 000102
【図４７Ａ】
2021510535.tif 000103
【図４７Ｂ】
2021510535.tif 000104
【図４８Ａ】
2021510535.tif 000105
【図４８Ｂ】
2021510535.tif 000106
【図４９Ａ】
2021510535.tif 000107
【図４９Ｂ】
2021510535.tif 000108
【図５０】
2021510535.tif 000109
【図５１Ａ】
2021510535.tif 000110
【図５１Ｂ】
2021510535.tif 000111
【図５１Ｃ】
2021510535.tif 000112
【図５１Ｄ】
2021510535.tif 000113
【図５１Ｅ】
2021510535.tif 000114
【図５１Ｆ】
2021510535.tif 000115
【図５２】
2021510535.tif 000116
【図５３】
2021510535.tif 000117
【図５４】
2021510535.tif 000118
【図５５Ａ】
2021510535.tif 000119
【図５５Ｂ】
2021510535.tif 000120
【図５５Ｃ】
2021510535.tif 000121
【図５６Ａ】
2021510535.tif 000122
【図５６Ｂ】
2021510535.tif 000123
【図５７Ａ】
2021510535.tif 000124
【図５７Ｂ】
2021510535.tif 000125
【図５７Ｃ】
2021510535.tif 000126
【図５７Ｄ】
2021510535.tif 000127
【図５８Ａ】
2021510535.tif 000128
【図５８Ｂ】
2021510535.tif 000129
【図５８Ｃ】
2021510535.tif 000130
【図５８Ｄ】
2021510535.tif 000131
【図５８Ｅ】
2021510535.tif 000132
【図５８Ｆ】
2021510535.tif 000133
【図５９Ａ】
2021510535.tif 000134
【図５９Ｂ】
2021510535.tif 000135
【図５９Ｃ】
2021510535.tif 000136
【図５９Ｄ】
2021510535.tif 000137
【図６０】
2021510535.tif 000138
【図６１】
2021510535.tif 000139
【図６２】
2021510535.tif 000140
【図６３Ａ】
2021510535.tif 000141
【図６３Ｂ】
2021510535.tif 000142
【図６３Ｃ】
2021510535.tif 000143
【図６３Ｄ】
2021510535.tif 000144
【図６４】
2021510535.tif 000145
【図６５】
2021510535.tif 000146
【図６６Ａ】
2021510535.tif 000147
【図６６Ｂ】
2021510535.tif 000148
【図６６Ｃ】
2021510535.tif 000149
【図６７Ａ】
2021510535.tif 000150
【図６７Ｂ】
2021510535.tif 000151
【図６７Ｃ】
2021510535.tif 000152
【図６８Ａ】
2021510535.tif 000153
【図６８Ｂ】
2021510535.tif 000154
【図６８Ｃ】
2021510535.tif 000155
【図６９Ａ】
2021510535.tif 000156
【図６９Ｂ】
2021510535.tif 000157
【図６９Ｃ】
2021510535.tif 000158
【図７０Ａ】
2021510535.tif 000159
【図７０Ｂ】
2021510535.tif 000160
【図７０Ｃ】
2021510535.tif 000161
【図７１】
2021510535.tif 000162
【図７２】
2021510535.tif 000163
【図７３Ａ】
2021510535.tif 000164
【図７３Ｂ】
2021510535.tif 000165
【図７４】
2021510535.tif 000166
【図７５Ａ】
2021510535.tif 000167
【図７５Ｂ】
2021510535.tif 000168
【図７６】
2021510535.tif 000169
【図７７Ａ】
2021510535.tif 000170
【図７７Ｂ】
2021510535.tif 000171
【配列表】
2021510535000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和3年2月12日(2021.2.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号４１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号４５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号４８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号８８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号９２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号９５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域
を含む、ＨＥＲ３に結合することが可能な抗原結合性分子、任意選択で、単離抗原結合性分子。
【請求項２】
配列番号３６のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号８３のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域
を含む、請求項１に記載の抗原結合性分子。
【請求項３】
以下のフレームワーク領域（ＦＲ）：
配列番号５３のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ１
配列番号５９のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ２
配列番号６６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ３
配列番号７１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ４
を組み込んだＶＨ領域を含む、請求項１または請求項２に記載の抗原結合分子。
【請求項４】
以下のフレームワーク領域（ＦＲ）：
配列番号１０４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ１
配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ２
配列番号１２０のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ３
配列番号１２５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ４
を組み込んだＶＬ領域を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
【請求項５】
配列番号１７１の重鎖定常配列を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
【請求項６】
配列番号１７７の軽鎖定常配列を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
【請求項７】
（ｉ）請求項１から６のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、および（ｉｉ）ＨＥＲ３以外の抗原に結合することが可能な抗原結合性分子を含む、抗原結合性分子、任意選択で、単離抗原結合性分子。
【請求項８】
請求項１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子をコードする、１つの核酸または複数の核酸、任意選択で、１つの単離核酸または複数の単離核酸。
【請求項９】
請求項８に記載の、１つの核酸または複数の核酸を含む、１つの発現ベクターまたは複数の発現ベクター。
【請求項１０】
請求項１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、請求項８に記載の、１つの核酸もしくは複数の核酸、または請求項９に記載の、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクターを含む細胞。
【請求項１１】
請求項８に記載の、１つの核酸もしくは複数の核酸、または請求項９に記載の、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクターを含む細胞を、抗原結合性分子の、核酸（複数可）または発現ベクター（複数可）からの発現に適する条件下で培養するステップを含む方法。
【請求項１２】
がんを処置するまたは防止する方法における使用のための医薬の製造における、請求項１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、請求項８に記載の、１つの核酸もしくは複数の核酸、請求項９に記載の、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、または請求項１０に記載の細胞の使用。
【請求項１３】
がんが、ＨＥＲ３発現がん、胃がん、頭頸部がん、乳がん、卵巣がん、肺がん、黒色腫、前立腺がん、口腔がん、腎臓がん、結腸直腸がん、食道がん、膵がん、固形がん、および血液がんから選択される、請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
ＨＥＲ３を含有するか、またはこれを含有することが疑われる試料を、請求項１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子とｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて接触させるステップと、抗原結合性分子の、ＨＥＲ３との複合体の形成を検出するステップとを含む、ＨＥＲ３を検出するための方法。
【手続補正書】
【提出日】令和3年2月25日(2021.2.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号４１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号４５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号４８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号８８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号９２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号９５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域
を含む、ＨＥＲ３に結合することが可能な抗原結合性分子、任意選択で、単離抗原結合性分子。
【請求項２】
配列番号３６のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号８３のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域
を含む、請求項１に記載の抗原結合性分子。
【請求項３】
以下のフレームワーク領域（ＦＲ）：
配列番号５３のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ１
配列番号５９のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ２
配列番号６６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ３
配列番号７１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ４
を組み込んだＶＨ領域を含む、請求項１または請求項２に記載の抗原結合分子。
【請求項４】
以下のフレームワーク領域（ＦＲ）：
配列番号１０４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ１
配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ２
配列番号１２０のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ３
配列番号１２５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ４
を組み込んだＶＬ領域を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
【請求項５】
配列番号１７１の重鎖定常配列を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
【請求項６】
配列番号１７７の軽鎖定常配列を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
【請求項７】
（ｉ）請求項１から６のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、および（ｉｉ）ＨＥＲ３以外の抗原に結合することが可能な抗原結合性分子を含む、抗原結合性分子、任意選択で、単離抗原結合性分子。
【請求項８】
請求項１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
【請求項９】
請求項１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、もしくは請求項８に記載のＣＡＲをコードする、１つの核酸または複数の核酸、任意選択で、１つの単離核酸または複数の単離核酸。
【請求項１０】
請求項９に記載の、１つの核酸または複数の核酸を含む、１つの発現ベクターまたは複数の発現ベクター。
【請求項１１】
請求項１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、請求項８に記載のＣＡＲ、請求項９に記載の１つの核酸もしくは複数の核酸、または請求項１０に記載の１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクターを含む、細胞。
【請求項１２】
請求項９に記載の１つの核酸もしくは複数の核酸、または請求項１０に記載の１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクターを含む細胞を、抗原結合性分子もしくはＣＡＲの、核酸（複数可）または発現ベクター（複数可）からの発現に適する条件下で培養するステップを含む方法。
【請求項１３】
請求項１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、請求項８に記載のＣＡＲ、請求項９に記載の１つの核酸もしくは複数の核酸、請求項１０に記載の１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、または請求項１１に記載の細胞を含む、組成物。
【請求項１４】
がんを処置するまたは防止する方法における使用のための医薬の製造における、請求項１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、請求項８に記載のＣＡＲ、請求項９に記載の１つの核酸もしくは複数の核酸、請求項１０に記載の１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、または請求項１１に記載の細胞、または請求項１３に記載の組成物の使用。
【請求項１５】
がんが、ＨＥＲ３発現がん、胃がん、頭頸部がん、乳がん、卵巣がん、肺がん、黒色腫、前立腺がん、口腔がん、腎臓がん、結腸直腸がん、食道がん、膵がん、固形がん、および血液がんから選択される、請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
ＨＥＲ３に結合した、請求項１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子を含むｉｎ  ｖｉｔｒｏ複合体、任意選択で、単離ｉｎ  ｖｉｔｒｏ複合体。
【請求項１７】
ＨＥＲ３を含有するか、またはこれを含有することが疑われる試料を、請求項１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子とｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて接触させるステップと、抗原結合性分子の、ＨＥＲ３との複合体の形成を検出するステップとを含む、ＨＥＲ３を検出するための方法。
【請求項１８】
対象を、ＨＥＲ３ターゲティング剤による処置のために選択または層別化する方法であって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、対象に由来する試料を、請求項１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子と接触させるステップと、抗原結合性分子の、ＨＥＲ３との複合体の形成を検出するステップとを含む方法。
【請求項１９】
請求項１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子の、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける診断または予後診断剤としての使用。
【国際調査報告】
2021510535.tif 000172
2021510535.tif 000173
2021510535.tif 000174
2021510535.tif 000175
2021510535.tif 000176