(57)【要約】  本発明は、グルコリピドを含有する混合組成物、配合物を製造するためのその使用、および該混合組成物を含有する配合物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）：
【化１】
2021513538.tif 000242
［式中、
Ｒ１およびＲ２は、互いに独立して、２〜２４個の炭素原子を有する、同一の、または異なった有機基である］
のグルコリピドまたはその塩を含有する混合組成物であって、
前記混合組成物は、Ｒ１およびＲ２が（ＣＨ２）６−ＣＨ３である前記一般式（Ｉ）のグルコリピドＧＬ−Ｃ１０Ｃ１０を少なくとも５１質量％含有し、前記質量％の記載は、存在する前記一般式（Ｉ）の全ての前記グルコリピドの合計に関するものであることを特徴とする、前記混合組成物。
【請求項２】
前記混合組成物が、１質量％〜３０質量％のＧＬ−Ｃ８Ｃ１０を含有し、
前記質量％の記載は、存在する前記一般式（Ｉ）の全ての前記グルコリピドの合計に関するものであることを特徴とする、請求項１記載の混合組成物。
【請求項３】
前記混合組成物が、０．５質量％〜２０質量％のＧＬ−Ｃ１０Ｃ１２：１を含有し、
前記質量％の記載は、存在する前記一般式（Ｉ）の全ての前記グルコリピドの合計に関するものであることを特徴とする、請求項１記載の混合組成物。
【請求項４】
前記混合組成物が、０．５質量％〜２０質量％のＧＬ−Ｃ１０Ｃ１２を含有し、
前記質量％の記載は、存在する前記一般式（Ｉ）の全ての前記グルコリピドの合計に関するものであることを特徴とする、請求項１または２記載の混合組成物。
【請求項５】
前記混合組成物が、
１質量％〜３０質量％のＧＬ−Ｃ８Ｃ１０と、
０．５質量％〜２０質量％のＧＬ−Ｃ１０Ｃ１２：１と、
０．５質量％〜２０質量％のＧＬ−Ｃ１０Ｃ１２と、
を含有し、前記質量％の記載は、存在する前記一般式（Ｉ）の全ての前記グルコリピドの合計に関するものであることを特徴とする、請求項１から４までのいずれか１項記載の混合組成物。
【請求項６】
前記混合組成物が、０質量％〜５質量％のＧＬ−Ｃ１０を含有し、
前記質量％の記載は、存在する前記一般式（Ｉ）の全ての前記グルコリピドの合計に関するものであることを特徴とする、請求項１から５までのいずれか１項記載の混合組成物。
【請求項７】
前記混合組成物が、少なくとも６０質量％、好ましくは少なくとも８０質量％、特に好ましくは少なくとも９０質量％の前記一般式（Ｉ）のグルコリピドを含有し、前記質量％の記載は、前記混合組成物全体の総乾燥質量に関するものであることを特徴とする、請求項１から６までのいずれか１項記載の混合組成物。
【請求項８】
配合物を製造するための、請求項１から７までのいずれか１項記載の混合組成物の使用。
【請求項９】
請求項１から７までのいずれか１項記載の混合組成物を含有する、配合物。
【請求項１０】
少なくとも１種の追加的な界面活性剤、好ましくはアニオン性、非イオン性、カチオン性、および両性イオン性の界面活性剤から選択される界面活性剤を含有する、請求項９記載の配合物。
【請求項１１】
前記配合物の界面活性剤総含有量が、前記配合物全体を基準として５〜６０質量％であることを特徴とする、請求項９または１０記載の配合物。
【請求項１２】
請求項１から７までのいずれか１項記載の混合組成物または請求項９から１１までのいずれか１項記載の配合物の、表面を洗浄するための使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、グルコリピドを含有する混合組成物、配合物を製造するためのその使用、および該混合組成物を含有する配合物に関する。
【０００２】
発明の背景
欧州特許第２７８７０６５号明細書には、ラムノリピドを含有する配合物であって、ジラムノリピドの含有量がモノラムノリピドの含有量よりも多い配合物が開示されており、また過剰のジラムノリピドが泡形成速度および／または泡安定化速度を増加させることが開示されている。
【０００３】
従来技術
Matsuyama T., Tanikawa T., Nakagawa Y. (2011), Serrawettins and Other Surfactants Produced by Serratia. In: Soberon-Chavez G. (eds) Biosurfactants. Microbiology Monographs, vol 20. Springer, Berlin, Heidelbergには、ルビウェッチンＲＧ１の構造が、β−Ｄ−グルコピラノシル３−（３’−ヒドロキシテトラデカノイルオキシ）デカノエートであることが開示されている。
【０００４】
独国特許出願公開第１９６４８４３９号明細書には、グリコリピドと界面活性剤とを含有する洗浄液の製造に使用される混合物が開示されている。
【０００５】
本発明の目的は、より単純な構造および／またはより低い分子量を有しながらも、ジラムノリピドと同じ利点を有するバイオベースの組成物を提供することであった。
【０００６】
発明の説明
驚くべきことに、本発明によって対処される目的を、以下に記載の混合組成物により達成できることが見出された。
【０００７】
したがって、本発明は、特定のグルコリピドを規定の質量比で含有する混合組成物を提供する。
【０００８】
本発明はさらに、本発明による混合組成物を含む配合物を提供する。
【０００９】
本発明による混合組成物の１つの利点は、水性条件下でのそれらの優れた泡安定性である。
【００１０】
本発明による混合組成物のさらなる利点は、水性条件下でのそれらの非常に優れた泡量である。
【００１１】
本発明による混合組成物のさらなる利点は、それらの並外れた起泡挙動である。
【００１２】
本発明による混合組成物のさらなる利点は、任意の望まれる水性界面活性系にそれらを簡単に配合できることである。
【００１３】
本発明による混合組成物のさらなる利点は、配合物においてこれらを従来の増粘剤で良好に増粘できることである。
【００１４】
さらなる利点は、皮膚や髪を洗い流すそれらの良好な能力である。
【００１５】
本発明による混合組成物のさらなる利点は、それらの低刺激性、および特に赤血球（ＲＢＣ）試験における高い値によって特徴付けられる良好な生理学的適合性である。
【００１６】
さらなる利点は、洗浄中および洗浄後のそれらの良好な皮膚感触である。
【００１７】
本発明による混合組成物のさらなる利点は、それらが洗浄後にソフトな皮膚感触を残すことである。
【００１８】
本発明による混合組成物のさらなる利点は、それらが洗浄後に滑らかな皮膚感触を残すことである。
【００１９】
本発明による混合組成物のさらなる利点は、それらが皮膚に対して加脂効果を有することである。
【００２０】
本発明による混合組成物のさらなる利点は、実質的に油分なしでそれらを合成できることである。
【００２１】
さらなる利点は、本発明による混合組成物が、ジラムノリピドよりも高い空時収率、高い炭素収率、および高い生成物濃度で製造できることである。
【００２２】
本発明との関連における「グルコリピド」という用語は、一般式（Ｉ）：
【化１】
2021513538.tif 000002
［式中、
ｍは、１または０であり、
Ｒ１およびＲ２は、互いに独立して、２〜２４個の炭素原子を有する、同一の、または異なった有機基であり、特に分岐していてもよく、置換（特にヒドロキシ置換）されていてもよく、不飽和であってもよい（特にモノ−、ジ−、またはトリ不飽和であってもよい）アルキル基であり、好ましくはペンテニル、ヘプテニル、ノネニル、ウンデセニル、およびトリデセニル、ならびに（ＣＨ２）ｏ−ＣＨ３［ここで、ｏ＝１〜２３、好ましくは４〜１２］からなる群から選択されるアルキル基である］
の化合物またはその塩を意味すると理解される。
【００２３】
異なるグルコリピドは、以下の命名法に従って略記される：
「ＧＬ−ＣＸＣＹ」は、基Ｒ１とＲ２のうちの一方が（ＣＨ２）ｏ−ＣＨ３［ここで、ｏ＝Ｘ−４］であり、残りの基であるＲ１またはＲ２が（ＣＨ２）ｏ−ＣＨ３［ここで、ｏ＝Ｙ−４］である一般式（Ｉ）のグルコリピドを意味すると理解される。
【００２４】
したがって、使用する命名法では、「ＣＸＣＹ」と「ＣＹＣＸ」とは区別されない。
【００２５】
前述した添え字Ｘおよび／またはＹのうちの一方に「：Ｚ」が付与されている場合、これは、それぞれの基Ｒ１および／またはＲ２がＺ個の二重結合を有するＸ−３個またはＹ−３個の炭素原子を有する非分岐の無置換炭化水素基であることを意味する。
【００２６】
本発明との関係において、「ｐＨ」は、ＩＳＯ  ４３１９（１９７７）に従って校正されたｐＨ電極を使用して、５分間撹拌した後に、２５℃で対応する物質について測定された値として定義される。
【００２７】
本発明との関係において、「水性媒体」という用語は、対象の組成物全体を基準として少なくとも５質量％の水を含有する組成物を意味すると理解される。
【００２８】
別段の記載がない限り、記載されている全てのパーセント（％）は質量パーセントである。
【００２９】
本発明は、一般式（Ｉ）：
【化２】
2021513538.tif 000003
［式中、
Ｒ１およびＲ２は、互いに独立して、２〜２４個の炭素原子を有する、同一の、または異なった有機基である］
のグルコリピドまたはその塩を含有する混合組成物であって、
該混合組成物は、Ｒ１およびＲ２が（ＣＨ２）６−ＣＨ３である一般式（Ｉ）のグルコリピドＧＬ−Ｃ１０Ｃ１０を少なくとも５１質量％〜好ましくは９８質量％、好ましくは６０質量％〜９５質量％、より好ましくは７０質量％〜９０質量％、特に好ましくは７５質量％〜８５質量％含有し、ここで、質量百分率は、存在する一般式（Ｉ）の全てのグルコリピドの合計に関するものであることを特徴とする混合組成物を提供する。
【００３０】
本発明による好ましい混合組成物は、２５℃での混合組成物のｐＨが、３．５〜９、好ましくは５〜７、特に好ましくは５．６〜６．６であることを特徴とする。
【００３１】
本発明による混合組成物中に存在するグルコリピドは、所定のｐＨで少なくとも部分的に塩として存在する。
【００３２】
本発明による好ましい混合組成物において、存在するグルコリピド塩のカチオンは、Ｌｉ＋、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋、Ａｌ３＋、ＮＨ４＋、第一級アンモニウムイオン、第二級アンモニウムイオン、第三級アンモニウムイオン、および第四級アンモニウムイオンを含む群から、好ましくはこれらからなる群から選択される。
【００３３】
適切なアンモニウムイオンの代表的な例は、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、テトラプロピルアンモニウム、テトラブチルアンモニウム、および［（２−ヒドロキシエチル）トリメチルアンモニウム］（コリン）、ならびに２−アミノエタノール（エタノールアミン、ＭＥＡ）、ジエタノールアミン（ＤＥＡ）、２，２’，２’’−ニトリロトリエタノール（トリエタノールアミン、ＴＥＡ）、１−アミノプロパン−２−オール（モノイソプロパノールアミン）、エチレンジアミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、テトラエチレンペンタミン、１，４−ジエチレンジアミン（ピペラジン）、アミノエチルピペラジン、およびアミノエチルエタノールアミンのカチオンである。
【００３４】
上述したカチオンの混合物は、本発明に従って存在するグルコリピド塩のカチオンとしても存在することができる。
【００３５】
特に好ましいカチオンは、Ｎａ＋、Ｋ＋、ＮＨ４＋、およびトリエタノールアンモニウムカチオンを含む群から、好ましくはこれらからなる群から選択される。
【００３６】
本発明による混合組成物が１質量％〜３０質量％、好ましくは５質量％〜２５質量％、特に好ましくは１０質量％〜２０質量％（ここで、質量百分率は、存在する一般式（Ｉ）の全てのグルコリピドの合計に関するものである）のＧＬ−Ｃ８Ｃ１０を含有すると有利な場合があり、そのため好ましい。
【００３７】
本発明による好ましい混合組成物は、０．５質量％〜２０質量％、好ましくは３質量％〜１７質量％、特に好ましくは５質量％〜１５質量％のＧＬ−Ｃ１０Ｃ１２：１を含有し、ここで、質量百分率は、存在する一般式（Ｉ）の全てのグルコリピドの合計に関するものであることを特徴とする。
【００３８】
本発明によるさらに好ましい混合組成物は、０．５質量％〜２０質量％、好ましくは２質量％〜１５質量％、特に好ましくは３質量％〜１２質量％のＧＬ−Ｃ１０Ｃ１２を含有し、ここで、質量百分率は、存在する一般式（Ｉ）の全てのグルコリピドの合計に関するものであることを特徴とする。
【００３９】
本発明による特に好ましい混合組成物は、
１質量％〜３０質量％、好ましくは５質量％〜２５質量％、特に好ましくは１０質量％〜２０質量％のＧＬ−Ｃ８Ｃ１０と、
０．５質量％〜２０質量％、好ましくは３質量％〜１７質量％、特に好ましくは５質量％〜１５質量％のＧＬ−Ｃ１０Ｃ１２：１と、
０．５質量％〜２０質量％、好ましくは２質量％〜１５質量％、特に好ましくは３質量％〜１２質量％のＧＬ−Ｃ１０Ｃ１２と、
を含有し、ここで、質量百分率は、存在する一般式（Ｉ）の全てのグルコリピドの合計に関するものであることを特徴とする。
【００４０】
本発明によるさらに特に好ましい混合組成物は、
１０質量％〜２０質量％のＧＬ−Ｃ８Ｃ１０と、
５質量％〜１５質量％のＧＬ−Ｃ１０Ｃ１２：１と、
３質量％〜１２質量％のＧＬ−Ｃ１０Ｃ１２と、
を含有し、ここで、質量百分率は、存在する一般式（Ｉ）の全てのグルコリピドの合計に関するものであることを特徴とする。
【００４１】
これに加えて、本発明による混合組成物は、式ＧＬ−ＣＸのグルコリピドを少量のみ含むことが好ましい。特に、本発明による混合組成物は、好ましくは０質量％〜５質量％、好ましくは０．０１質量％〜４質量％、特に好ましくは０．１質量％〜３質量％のＧＬ−Ｃ１０を含有し、ここで、質量百分率は、存在する一般式（Ｉ）の全てのグルコリピドの合計に関するものである。
【００４２】
本発明による混合組成物は、好ましくは、少なくとも６０質量％、好ましくは少なくとも８０質量％、特に好ましくは少なくとも９０質量％の一般式（Ｉ）のグルコリピドを含有し、ここで、質量百分率は、混合組成物全体の総乾燥質量に関するものである。
【００４３】
本発明との関係における「総乾燥質量」という用語は、２５℃、１ｂａｒで液体である成分が本発明による混合組成物から除去された後に、水の他に自然に残る本発明による混合組成物の部分を意味すると理解される。
【００４４】
本発明による混合組成物は、特に化粧品配合物の中に有利に配合することができる。
【００４５】
結果として、本発明のさらなる主題は、配合物、特に化粧品配合物を製造するための本発明による混合組成物の使用、ならびに本発明による混合組成物を含む配合物、特に化粧品配合物である。
【００４６】
本発明による配合物は、好ましくは０．５質量％〜２０質量％、好ましくは２質量％〜１５質量％、特に好ましくは３質量％〜１２質量％の一般式（Ｉ）のグルコリピドを含有し、ここで、質量百分率は、配合物全体に関するものである。
【００４７】
本発明による混合組成物に加えて、本発明による好ましい配合物は、グルコリピドの他に、少なくとも１種の追加的な界面活性剤を含み、例えばアニオン性、非イオン性、カチオン性、および／または両性の界面活性剤を使用することができる。好ましくは、用途に関連した観点からは、アニオン性と非イオン性の界面活性剤の混合物が好ましい。配合物の界面活性剤総含有量は、配合物全体を基準として好ましくは５〜６０質量％、特に好ましくは１５〜４０質量％である。
【００４８】
使用される非イオン性界面活性剤は、好ましくはアルコキシル化されている、有利にはエトキシル化されている、特に好ましくは８〜１８個の炭素原子とアルコール１ｍｏｌ当たり平均１〜１２ｍｏｌのエチレンオキシド（ＥＯ）とを有する第一級アルコールであり、この中のアルコール基は、直鎖であってもよく、もしくは好ましくは２位でメチル分岐していてもよく、またはオキソアルコール基中に通常存在するように混合物中に直鎖およびメチル分岐の基を含んでいてもよい。しかしながら、特に、１２〜１８個の炭素原子を有する天然起源のアルコール由来の、例えばココナツ、パーム、獣脂、またはオレイルアルコール由来の直鎖基と、アルコール１ｍｏｌ当たり平均２〜８個のＥＯとを有するアルコールエトキシレートが好ましい。好ましいエトキシル化アルコールとしては、例えば、３個のＥＯ、４個のＥＯ、もしくは７個のＥＯを有するＣ１２〜Ｃ１４アルコール、７個のＥＯを有するＣ９〜Ｃ１１アルコール、３個のＥＯ、５個のＥＯ、７個のＥＯ、もしくは８個のＥＯを有するＣ１３〜Ｃ１５アルコール、または３個のＥＯ、５個のＥＯ、もしくは７個のＥＯを有するＣ１２〜Ｃ１８アルコール、および３個のＥＯを有するＣ１２〜Ｃ１４アルコールと７個のＥＯを有するＣ１２〜Ｃ１８アルコールとの混合物などのこれらの混合物が挙げられる。記載のエトキシル化度は、特定の製品についての統計的平均値であり、これは整数であっても分数であってもよい。好ましいアルコールエトキシレートは、狭い同族体分布を有する。これらの非イオン性界面活性剤に加えて、１２個より多いＥＯを有する脂肪アルコールを使用することもできる。その例は、１４個のＥＯ、２５個のＥＯ、３０個のＥＯ、または４０個のＥＯを有する獣脂脂肪アルコールである。分子内にＥＯ基とＰＯ（プロピレンオキシド）基を一緒に含む非イオン性界面活性剤も使用することができる。これに関連して、ＥＯ−ＰＯブロック単位またはＰＯ−ＥＯブロック単位を有するブロックコポリマーだけでなく、ＥＯ−ＰＯ−ＥＯコポリマーまたはＰＯ−ＥＯ−ＰＯコポリマーも使用することができる。
【００４９】
当然のことながら、ＥＯ単位およびＰＯ単位がブロック状ではなくランダムに分布している混合アルコキシル化非イオン性界面活性剤を使用することもできる。そのような製品は、脂肪アルコールに対してエチレンオキシドおよびプロピレンオキシドを同時に作用させる結果として得られる。
【００５０】
さらに、追加的な非イオン性界面活性剤としてアルキルグリコシドを使用することもできる。
【００５１】
唯一の非イオン性界面活性剤として、または他の非イオン性界面活性剤との組み合わせで使用される、好ましく使用される非イオン性界面活性剤のさらなる分類は、例えば特開昭５８−２１７５９８号公報に記載されているような、あるいは好ましくは、国際公開第９０／１３５３３号に記載されている方法により製造される、好ましくはアルキル鎖に１〜４個の炭素原子を有する、アルコキシル化、好ましくはエトキシル化またはエトキシル化およびプロポキシル化脂肪酸アルキルエステル、特に脂肪酸メチルエステルである。
【００５２】
例えばＮ−ヤシ油アルキル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミンオキシドおよびＮ−獣脂アルキル−Ｎ，Ｎ−ジヒドロキシエチルアミンオキシドなどのアミンオキシド型、ならびに脂肪酸アルカノールアミド型の非イオン性界面活性剤も、適切な場合がある。これらの非イオン性界面活性剤の量は、好ましくは、エトキシル化脂肪アルコールの量以下、特にその半分以下である。
【００５３】
さらに適切な界面活性剤は、ポリヒドロキシ脂肪酸アミドであり、ポリヒドロキシ脂肪酸アミドは、還元糖をアンモニア、アルキルアミン、またはアルカノールアミンで還元的アミノ化し、続いて脂肪酸、脂肪酸アルキルエステル、または脂肪酸クロリドでアシル化することにより通常得られる物質である。
【００５４】
使用されるアニオン性界面活性剤は、例えばスルホネート型およびスルフェート型のものである。本明細書におけるスルホネート型の適切な界面活性剤は、好ましくはＣ９〜Ｃ１３アルキルベンゼンスルホネート、オレフィンスルホネート、すなわちアルケン−およびヒドロキシアルカンスルホネートの混合物、ならびに例えば末端または内部二重結合を有するＣ１２〜Ｃ１８モノオレフィンを三酸化硫黄ガスでスルホン化してからスルホン化生成物をアルカリまたは酸で加水分解することにより得られるジスルホネートである。また、例えばスルホクロロ化またはスルホ酸化およびその後の加水分解または中和によりＣ１２〜Ｃ１８アルカンから得られるアルカンスルホネートも適している。同様に、α−スルホ脂肪酸のエステル（エステルスルホネート）、例えば水素化されたココナツ、パーム核、または獣脂の脂肪酸のα−スルホン化メチルエステルも適している。
【００５５】
さらに適切なアニオン性界面活性剤は、硫酸化脂肪酸グリセロールエステルである。脂肪酸グリセロールエステルは、モノグリセロールを１〜３ｍｏｌの脂肪酸でエステル化することによる製造において、またはトリグリセリドと０．３〜２ｍｏｌのグリセロールとのエステル交換において得られる、モノ−、ジ−、トリエステル、およびそれらの混合物を意味すると理解される。本明細書において好ましい硫酸化脂肪酸グリセロールエステルは、例えば、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ミリスチン酸、ラウリン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、またはベヘン酸などの６〜２２個の炭素原子を有する飽和脂肪酸の硫酸化生成物である。
【００５６】
好ましいアルキル（またはアルケニル）硫酸塩は、例えばココナツ脂肪アルコール、獣脂脂肪アルコール、ラウリル、ミリスチル、セチル、もしくはステアリルアルコール由来などのＣ１２〜Ｃ１８脂肪アルコールまたはＣ１０〜Ｃ２０オキソアルコールの硫酸ハーフエステルのアルカリ金属塩、特にナトリウム塩、ならびにこれらの鎖長の第二級アルコールのハーフエステルのものである。さらに、石油化学に基づいて製造された合成直鎖アルキル基を含み、脂肪化学原料に基づく適切な化合物と類似の分解挙動を有する、特定の鎖長のアルキル（またはアルケニル）硫酸塩も好ましい。洗浄の観点からは、Ｃ１２〜Ｃ１６アルキル硫酸塩およびＣ１２〜Ｃ１８アルキル硫酸塩ならびにＣ１４〜Ｃ１８アルキル硫酸塩が好ましい。例えば米国特許第３，２３４，２５８号明細書または同第５，０７５，０４１号明細書に従って製造され、DAN（登録商標）の名称でShell Oil Companyの市販製品として入手可能な２，３−アルキル硫酸塩も適したアニオン性界面活性剤である。
【００５７】
平均３．５ｍｏｌのエチレンオキシド（ＥＯ）を有する２−メチル分岐Ｃ９〜Ｃ１１アルコールまたは１〜４個のＥＯを有するＣ１２〜Ｃ１８脂肪アルコールなどの、１〜６ｍｏｌのエチレンオキシドでエトキシル化されている直鎖または分岐のＣ７〜Ｃ２０アルコールの硫酸モノエステルも適している。これらの高い起泡挙動のため、それらは比較的少量のみで、例えば１〜５質量％の量で洗浄組成物において使用される。
【００５８】
さらに、スルホコハク酸塩またはスルホコハク酸エステルとも呼ばれ、スルホコハク酸とアルコール、好ましくは脂肪アルコール、特にエトキシル化脂肪アルコールとのモノエステルおよび／またはジエステルを構成するアルキルスルホコハク酸の塩も、適切なアニオン性界面活性剤である。好ましいスルホコハク酸塩は、Ｃ８〜Ｃ１８脂肪アルコール基またはこれらの混合物を含む。特に好ましいスルホコハク酸塩は、エトキシル化脂肪アルコールから誘導される脂肪アルコール基を含む。これに関連して、その脂肪アルコール基が狭い同族体分布を有するエトキシル化脂肪アルコールから誘導されるものであるスルホコハク酸塩が、同様に特に好ましい。アルキル（またはアルケニル）鎖に好ましくは８〜１８個の炭素原子を有するアルキル（またはアルケニル）コハク酸またはその塩を使用することも、同様に可能である。
【００５９】
特に好ましいアニオン性界面活性剤は石鹸である。ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、（水素化）エルカ酸、およびベヘン酸の塩などの飽和および不飽和脂肪酸石鹸、ならびに特に例えばココナツ、パーム核、オリーブ油、または獣脂の脂肪酸などの天然脂肪酸由来の石鹸混合物も適している。
【００６０】
石鹸などのアニオン性界面活性剤は、それらのナトリウム、カリウム、またはアンモニウム塩の形態、ならびにモノ−、ジ−、またはトリエタノールアミンなどの有機塩基の可溶性塩の形態であってもよい。好ましくは、アニオン性界面活性剤は、それらのナトリウム塩またはカリウム塩の形態、特にナトリウム塩の形態である。
【００６１】
本発明に従って使用できる両性界面活性剤は、分子中に少なくとも１つの第四級アンモニウム基と少なくとも１つの−ＣＯＯ−基または−ＳＯ３−基を有する界面活性化合物である。これに関して特に好ましい両性界面活性剤は、アルキル−またはアルキルアミドプロピルベタインなどのベタイン界面活性剤である。特に、Ｎ−アルキル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムグリシネート、例えばヤシ油アルキルジメチルアンモニウムグリシネート、Ｎ−アシルアミノプロピル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムグリシネート、例えばココアシルアミノプロピルジメチルアンモニウムグリシネート、Ｃ１２〜Ｃ１８アルキルジメチルアセトベタイン、ココアミドプロピルジメチルアセトベタイン、２−アルキル−３−カルボキシメチル−３−ヒドロキシエチルイミダゾリン、およびアルキル基またはアシル基中にそれぞれ８〜１８個の炭素原子を有するスルホベタイン、ならびにココアシルアミノエチルヒドロキシエチルカルボキシメチルグリシネートなどのベタインが、本明細書では好ましい。特に好ましい双性イオン性界面活性剤は、ＩＮＣＩ名コカミドプロピルベタインとして知られている、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−（ラウロイルアミドプロピル）アンモニウムアセトベタインである。
【００６２】
さらなる適切な両性界面活性剤は、アンホアセテートおよびアンホジアセテートの群（特に例えばココ−またはラウリルアンホアセテートまたは−ジアセテート）、アンホプロピオネートおよびアンホジプロピオネートの群、ならびにアシルグルタミネート（特にココイルグルタミン酸二ナトリウムおよびココイルグルタミン酸ナトリウム）、アシルグリシネート（特にココイルグリシネート）、およびアシルサルコシネート（特にアンモニウムラウロイルサルコシネートおよびナトリウムココイルサルコシネート）などのアミノ酸ベースの界面活性剤の群により形成される。
【００６３】
さらに、本発明による配合物は、
皮膚軟化剤、
乳化剤、
増粘剤／粘度調整剤／安定剤、
ＵＶ光保護フィルター、
抗酸化剤、
ヒドロトロープ（またはポリオール）、
固体およびフィラー、
膜形成剤、
真珠光沢付与剤、
消臭および制汗有効成分、
防虫剤、
セルフタンニング剤、
保存料、
コンディショナー、
香料、
着色料、
臭気吸収剤、
化粧品有効成分、
ケア用添加剤、
過脂肪剤、
溶剤、
の群から選択される少なくとも１つの追加の成分を含んでいてもよい。
【００６４】
個々の群の典型的な代表例として使用できる物質は、当業者に公知であり、例えば独国出願第１０２００８００１７８８．４号において確認することができる。この特許出願は参照により本明細書に組み込まれ、そのため本開示の一部を形成する。
【００６５】
さらなる任意成分および使用されるこれらの成分の量に関しては、当業者に公知の関連するハンドブック、例えばK. Schrader, “Grundlagen und Rezepturen der Kosmetika [Fundamentals and Formulations of Cosmetics]”, 2nd edition, page 329-341, Huethig Buch Verlag Heidelbergが明示的に参照される。
【００６６】
それぞれの添加剤の量は、意図される用途に依存する。
【００６７】
それぞれの用途のための典型的な指針となる配合物は、公知の先行技術であり、例えばそれぞれのベース材料および有効成分の製造業者のパンフレットに含まれている。これらの既存の配合物を、概して変更なしに採用することができる。しかしながら、必要に応じて、改変や最適化の目的で簡単な実験を行うことにより、複雑化せずに望まれる変更を行うことができる。
【００６８】
本発明による混合組成物および本発明による混合組成物を含む本発明による配合物は、表面の洗浄のために有利に使用することができる。本発明による使用のこの形態では、表面は、好ましくは生物の表面、特に人の表面であり、そのような表面は、特に好ましくは皮膚および毛髪から選択される。生物の表面での本発明の使用との関係においては、本発明の使用は、非治療的使用、好ましくは美容上の使用である。
【００６９】
以下に記載の実施例は、例示の目的で本発明を説明するものであり、本発明を実施例で規定されている実施形態に限定する意図を有さず、本発明の適用範囲は、明細書全体および特許請求の範囲に基づく。
【００７０】
添付の図面は、本明細書の一部を構成する。
【図面の簡単な説明】
【００７１】
【図１】様々な脂質の泡量対時間を示す図である。
【００７２】
実施例
実施例１：緑膿菌（P.aeruginosa）遺伝子ｒｈｌＡおよびＳ．ルビダエア（S.rubidaea）遺伝子ｒｂｗＢの発現ベクターの構築
緑膿菌（P.aeruginosa）由来の遺伝子ｒｈｌＡ（配列番号３）およびＳ．ルビダエア（S.rubidaea）由来のｒｂｗＢ（配列番号１）の異種発現のために、プラスミドｐＡＣＹＣ＿ｒｈｌＡ＿Ｐａ  ｒｂｗＢ＿Ｓｒｕｂを構築した。３−（３−ヒドロキシアルカノイルオキシ）アルカン酸（ＨＡＡ）シンターゼ（ＲｈｌＡ、配列番号４）およびグルコシルトランスフェラーゼ（ＲｂｗＢ、配列番号２）をそれぞれコードするｒｈｌＡ＿Ｐａ（配列番号７）からなる合成オペロンを、ラムノース誘導性プロモーターＰｒｈａの制御下でベクターｐＡＣＹＣＡＴｈ−５にクローニングした。合成オペロンの下流には、ターミネーター配列が位置する。遺伝子は、緑膿菌（P.aeruginosa）およびＳ．ルビダエア（S.rubidaea）のゲノムＤＮＡからそれぞれＰＣＲによって増幅した。ＰＲｈａプロモーターカセット（配列番号５）およびターミネーター配列（配列番号６）は、大腸菌（E.coli）Ｋ１２ゲノムＤＮＡから増幅した。ベクターは、ｐＡＣＹＣ１８４（New England Biolabs, フランクフルト・アム・マイン、ドイツ）に基づいており、大腸菌（E.coli）のｐ１５Ａ複製起点およびＰ．プチダ（P.putida）ＫＴ２４４０の複製のｐＶＳ１複製起点を有している。ｐＶＳ１の起点は、シュードモナス（Pseudomonas）プラスミドｐＶＳ１（Itoh Y, Watson JM, Haas D, Leisinger T, Plasmid 1984, 11(3), 206-20）に由来する。ｒｈｌＡおよびｒｂｗＢは、クロスオーバーＰＣＲにより融合され、最適化されたオペロンを生成した。増幅には、製造元のマニュアルに従って、New England Biolabs（フランクフルト・アム・マイン、ドイツ）のPhusion（商標）High-Fidelity Master Mixを使用した。次の工程では、制限部位ＡｐａＩ／ＰｓｐＸＩを使用して、ベクターｐＡＣＹＣＡＴｈ−５に融合構築体をクローニングした。ライゲーションした生成物を、ケミカルコンピテントな大腸菌（E.coli）ＤＨ５α細胞（New England Biolabs, フランクフルト・アム・マイン、ドイツ）に形質転換した。ＰＣＲ精製、クローニング、および形質転換の手順は、製造元のマニュアルに従って行った。標的遺伝子の正しい挿入を制限解析により確認し、導入されたＤＮＡ断片の信頼性は、ＤＮＡシークエンシングにより検証した。得られたプラスミドを、ｐＡＣＹＣ＿ｒｈｌＡ＿Ｐａ  ｒｂｗＢ＿Ｓｒｕｂ（配列番号８）と名付けた。
【００７３】
Ｐ．プチダ（P.putida）株ＫＴ２４４０は、エレクトロポレーション（Iwasaki K, et al., Biosci. Biotech. Biochem. 1994. 58(5):851-854）によりプラスミドｐＡＣＹＣ＿ｒｈｌＡ＿Ｐａ  ｒｂｗＢ＿Ｓｒｕｂを用いて形質転換し、カナマイシン（５０μｇ／ｍＬ）を添加したＬＢ寒天プレートにプレーティングした。形質転換体を、プラスミド調製および分析制限解析により、正しいプラスミドの存在について確認した。得られた株を、ＢＳ−ＰＰ−３６８（Ｐ．ｐｕｔｉｄａ  ＫＴ２４４０  ｐＡＣＹＣ＿ｒｈｌＡ＿Ｐａ  ｒｂｗＢ＿Ｓｒｕｂ）と名付けた。
【００７４】
実施例２：ＢＳ−ＰＰ−３６８株（Ｐ．ｐｕｔｉｄａ  ＫＴ２４４０  ｐＡＣＹＣ＿ｒｈｌＡ＿Ｐａ  ｒｂｗＢ＿Ｓｒｕｂ）によるグルコリピドの製造
グルコリピドの製造のために、Eppendorf（ハンブルク、ドイツ）のDASGIP（登録商標）パラレルバイオリアクターシステムを使用した。発酵は、１Ｌの反応器を使用して行った。ｐＨおよびｐＯ２は、プロセス監視のためにオンラインで測定した。ＯＴＲ／ＣＴＲ測定は、特に代謝活性および細胞適応性を推定する役割を果たした。
【００７５】
ｐＨ電極は、DASGIPの技術指示書で指定されている通りに、ｐＨ４．０およびｐＨ７．０の標準溶液を用いる２点校正により校正した。反応器に、技術指示書で指定されている必要なセンサーおよびコネクタを装着し、撹拌機シャフトを取り付けた。次いで、反応器を３００ｍｌの水で満たし、１２１℃で２０分間オートクレーブ処理して確実に滅菌した。ｐＯ２電極を測定用増幅器に接続し、一晩（少なくとも６時間）分極した。その後、クリーンベンチで水を除去し、発酵培地に置き換えた（２．２ｇ／Ｌの（ＮＨ４）２ＳＯ４、０．０２ｇ／ＬのＮａＣｌ、０．４ｇ／ＬのＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、０．０４ｇ／ＬのＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、個別に滅菌：２ｇ／ＬのＫＨ２ＰＯ４、８．５１ｇ／ＬのＫＨ２ＰＯ４、２０ｇ／Ｌのグルコース、１０ｍＬ／Ｌ微量元素溶液Ｍ１２（滅菌−濾過：０．２ｇ／ＬのＺｎＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、０．１ｇ／ＬのＭｎＣｌ２・４Ｈ２Ｏ、１．５ｇ／ＬのＮａ３−Ｃｉｔｒａｔ・２Ｈ２Ｏ、０．１ｇ／ＬのＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ、０．００２ｇ／ＬのＮｉＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、０．００３ｇ／ＬのＮａ２ＭｏＯ４・２Ｈ２Ｏ、０．０３ｇ／ＬのＨ３ＢＯ３、１ｇ／ＬのＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ）。その後、ｐＯ２電極を、１点校正を用いて１００％に校正し（撹拌機：６００ｒｐｍ／曝気１０ｓｌ／ｈ空気）、フィード、調整剤、および誘導剤のラインを、技術指示書で指定されている通りに「その場でのクリーニング」により洗浄した。この目的のために、チューブを、最初に７０％エタノールで、次いで１ＭのＮａＯＨで、その後滅菌された完全脱塩水ですすぎ洗いし、最後にそれぞれの培地で満たした。
【００７６】
Ｐ．プチダ（P.putida）株ＢＳ−ＰＰ−３６８を使用して、バッフル付き振とうフラスコの中のカナマイシン（５０μｇ／ｍＬ）を添加した２５ｍｌのＬＢ１培地（１０ｇ／Ｌのトリプトン、５ｇ／Ｌの酵母エキス、１ｇ／ＬのＮａＣｌ、ｐＨ７．０）に１００μｌのグリセロール原液を接種し、３０℃、２００ｒｐｍで約１８時間終夜インキュベートした。５０ｍｌの種培地（オートクレーブ処理：４．４ｇ／ＬのＮａ２ＨＰＯ４＊２Ｈ２Ｏ、１．５ｇ／ＬのＫＨ２ＰＯ４、１ｇ／ＬのＮＨ４Ｃｌ、１０ｇ／Ｌの酵母エキス、個別に滅菌：２０ｇ／Ｌのグルコース、０．２ｇ／ＬのＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、０．００６ｇ／ＬのＦｅＣｌ３、０．０１５ｇ／ＬのＣａＣｌ２、１ｍｌ／Ｌの微量元素溶液ＳＬ６（滅菌−濾過：０．３ｇ／ＬのＨ３ＢＯ３、０．２ｇ／ＬのＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、０．１ｇ／ＬのＺｎＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、０．０３ｇ／ＬのＭｎＣｌ２・４Ｈ２Ｏ、０．０１ｇ／ＬのＣｕＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、０．０３ｇ／ＬのＮａ２ＭｏＯ４・２Ｈ２Ｏ、０．０２ｇ／ＬのＮｉＣｌ２・６Ｈ２Ｏ）に接種するために、５００ｍｌバッフル付き振とうフラスコの中で、第１の前培養物を使用した（ＯＤ６０００．２で開始）。培養物を２００ｒｐｍ、３０℃で約７時間インキュベートした。光学密度０．７で反応器に接種するために、第２の前培養段階のＯＤ６００を測定し、接種に必要な培養物の量を計算した。
【００７７】
必要量の培養物を、３０ｍｌのシリンジを使用して、熱処理され曝気された反応器の中にセプタムから添加した。
【００７８】
表１に示す標準プログラムが使用される：
【表１】
2021513538.tif 000004
【００７９】
１２．５％濃度のアンモニア溶液を用いて、ｐＨを一方的に（unilaterally）ｐＨ７．０に調整した。増殖期および生体内変換の間、培養物中の溶存酸素（ｐＯ２またはＤＯ）を、撹拌速度および曝気速度により少なくとも３０％に調整した。接種後、ＤＯは１００％からこれらの３０％に低下し、これは、発酵の残りの間安定に維持された。
【００８０】
発酵は、フェドバッチとして行った。フィードは、５００ｇ／Ｌのグルコースからなる２．５ｇ／Ｌ＊ｈのグルコースフィードを用いて開始し、これは、バッチフェーズの終了を示すＤＯピークを契機とした。供給開始の３時間後、グルコリピド生成の発現は０．２％（ｗ／ｖ）ラムノースで誘導された。誘導物質濃度は、発酵の開始時の量に基づく。両方の糖のために、２２０ｇ／Ｌの原液を使用した。グルコリピドの生成は誘導により開始した。特定の時点で発酵槽からサンプルを採取し、生成したグルコリピドの濃度を決定した。６５時間の発酵後、１１．１ｇ／Ｌのグルコリピドを生成した。
【００８１】
実施例３：ＨＰＬＣに基づくグルコリピドの定量
グルコリピドの定量はＨＰＬＣにより行った。置換式ピペット（Combitip）を使用して、２ｍｌの反応容器の中に７０％（ｖ／ｖ）のｎ−プロパノール９００μｌを入れ、蒸発を最小限に抑えるために反応容器をすぐに閉じた。続いて、１００μｌの発酵培養液を添加した。３０Ｈｚの振動数でレッチェミルの中で１分間振とうした後、得られた粗抽出混合物を１３，０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、８００μｌの透明な上清み液をＨＰＬＣバイアルに移した。細胞培養液を、５５％（ｖ／ｖ）プロパノールでさらに希釈した。測定前に、サンプルを−２０℃で保管した。
【００８２】
脂質の検出および定量のために、蒸発光散乱検出器（Sedex LT-ELSD モデル85LT）を使用した。測定は、Agilent Technologies 1200シリーズ（Santa Clara,Calif.）およびZorbax SB-C8 Rapid Resolutionカラム（４．６×１５０ｍｍ、３．５μｍ、Agilent）を使用して行った。注入量は５．０μｌであり、実行時間は２０分であった。移動相Ａ：０．１％ＴＦＡ水溶液（トリフルオロ酢酸、溶液）；移動相Ｂ：メタノール。カラム温度は４０℃であった。検出器として、ＥＬＳＤ（検出器温度６０℃）およびＤＡＤ（ダイオードアレイ、２１０ｎｍ）を使用した。
【００８３】
【表２】
2021513538.tif 000005
【００８４】
使用したグラジエントは、Ａ中の７０％のＢから開始し、１ｍＬ／ｍｉｎの流量で１５分以内に１００％のＢになり、続いてＡ中の７０％のＢで５分間再度平衡化する（表２を参照）。同一性および純度がＨＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳおよびＮＭＲで確認された参照材料を使用した。
【００８５】
実施例２の生成物は、以下に記載の組成を有しており、以降「生成物実施例１」と呼ぶ：
ＧＬ−Ｃ１０Ｃ１０：  ６３．７％
ＧＬ−Ｃ８Ｃ１０：  １５．５％
ＧＬ−Ｃ１０Ｃ１２：１：  ７．９％
ＧＬ−Ｃ１０Ｃ１２：  ６．６％
ＧＬ−Ｃ８Ｃ８：  １．８％
ＧＬ−Ｃ１０Ｃ１０：１：  １．３％
ＧＬ−Ｃ１２Ｃ１２：１：  １．１％
ＧＬ−Ｃ１２Ｃ１２：  ０．８％
ＧＬ−Ｃ１０：  １．３％。
【００８６】
実施例４：ＳＩＴＡ泡試験機を使用した起泡特性の評価
界面活性剤および界面活性剤に基づく製品の起泡性は、消費者が知覚する重要な特性である。迅速な瞬時の起泡および大きい泡量は、製品が有効な品質の製品であることを消費者に示す指標である。いずれのパラメータも、SITA Messtechnik GmbHの「ＳＩＴＡ泡試験機Ｒ−２０００」測定装置を使用して決定することができる。この装置では、特殊なローターを介して規定量の界面活性剤溶液に空気を入れることにより、泡を生成する。液体および得られる泡の総体積は、コンピュータで制御される検知技術により経時的に測定される。
【００８７】
この方法を使用して、生成物実施例１（Ａ）の起泡性について、共に同等の脂肪酸置換を有するジラムノリピドの組成物（Ｂ）およびモノラムノリピドの組成物（Ｃ）と比較して評価した。
【００８８】
（Ｂ）および（Ｃ）は、分取カラムクロマトグラフィーにより準備される。
【００８９】
このために、１０ｇの凍結乾燥したＲＬ混合物（ＪＢＲ５０５、Jeneil Biosurfactants, 約５質量％の初期総ラムノリピド濃度）を、１質量％の酢酸を含む水飽和酢酸エチルの中に５質量％の濃度で溶解させる。７５０ｇのシリカ６０ゲル（２００〜５００μｍ；３５〜７０メッシュ；Sigma-Aldrich, ドイツ）を、水飽和酢酸エチル（１質量％の酢酸で酸性化）の中に懸濁させ、カラム（直径＝６５ｍｍ、最大充填レベル＝６００ｍｍ、１ｌの溶媒リザーバ）の中に流し入れた。固定相上の保護層としての２〜３ｃｍの酸処理された海砂（Riedel de Haen, ゼールツェ、ドイツ）で、表面を覆う。使用する溶離液も、同様に１質量％の酢酸を含む水飽和酢酸エチルである。準備したカラムにラムノリピド溶液を載せる。溶離液の流量は１５ｍｌ／ｍｉｎに調整する。溶離液を１００ｍｌのフラクションで回収し、薄膜クロマトグラフィーおよびＨＰＬＣにより分析する。モノ−およびジラムノリピドの形態は、この方法で分離することができる。同一組成のフラクションを合わせ、ロータリーエバポレーターで溶媒を留去する。その後、残渣を水に溶解し、凍結乾燥する。十分な量を得るために、この手順を数回行う。得られるフラクションの純度は、１Ｈ−ＮＭＲおよびＨＰＬＣにより＞９９質量％であると決定される。
【００９０】
実施例２で生成した組成物（Ａ）ならびにラムノリピド（Ｂ）および（Ｃ）を、全硬度１０°ｄＨ（ドイツ硬度）の水で０．５％の活性界面活性物質の濃度までそれぞれ希釈した。各試験溶液のｐＨは６．０に調整した。その後、１５００ｒｐｍの一定の撹拌速度を１０秒間使用して、各試験溶液３００ｍｌの３０℃での起泡性について試験した。各試験溶液について、合計１０回のそのような測定間隔を実行した。図１は、各試験溶液の経時的な泡量を示している。
【００９１】
測定パラメータ：温度：３０℃±０．５℃；サンプル量／測定：３００ｍｌ；試験サンプルの濃度：水中で０．５％；水：１０°ｄＨ（＝ドイツ硬度）、ｐＨ：６、撹拌速度：１５００ｒｐｍ；撹拌時間：１０秒；間隔の数：１０；数。
【００９２】
驚くべきことに、図１でみられるように、本発明による組成物（Ａ）は、最も速い瞬時の起泡を示し、ＳＩＴＡ泡試験で最も大きい泡量を生成することから、ＳＩＴＡ泡試験で最も優れた性能を示す。
【００９３】
生成物実施例１（Ａ）は、モノラムノリピドの組成物（Ｃ）よりもはるかに良好に機能し、またわずかな程度ながらもジラムノリピドの組成物（Ｂ）よりも有意に優れている。（Ａ）と（Ｃ）は、（Ａ）と（Ｂ）よりもはるかに構造的に類似しているため、この知見は非常に驚くべきことである。
【００９４】
実施例５：配合例
以下の実施例は、例示を目的とするものであり、本発明の範囲から逸脱することなしにそれらの多くの変形が可能であるため、これらは本発明の限定として解釈されるべきではない。
【００９５】
配合例は、従来の方法を使用して製造される。必要に応じて、製造プロセスの終わりに水酸化ナトリウム水溶液またはクエン酸のいずれかを添加することにより、ｐＨ値が調整される。
【００９６】
配合例で使用される「グルコリピド」という用語は、常に生成物実施例１を指す。
【００９７】
配合例で使用される「グリコリピド」という用語は、常にEvonik Nutrition & Care GmbHからRheance Oneとして市販されているラムノリピドを指す。
【００９８】
【表３】
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【表４】
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【表５】
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【表６】
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【表７】
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【表８】
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【表９】
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【表１０】
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【表１１】
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【表１２−１】
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【表１２−２】
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【表１３】
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【表１４】
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【表１５】
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【表１６】
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【表１７】
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【表１８】
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【表１９】
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【表２０】
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【表２１】
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【表２２】
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【表２３】
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【表２４】
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【表２５】
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【表２６】
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【表２７】
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【表２８】
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【表２９】
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【表３０】
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【表３１】
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【表３２】
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【表３３】
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【表３４】
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【表３５】
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【表３６】
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【表３７】
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【表３８】
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【表３９−１】
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【表３９−２】
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【表４０】
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【表４１】
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【表４２】
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【表４３】
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【表４４】
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【表４５】
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【表４６】
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【表４７】
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【表４８】
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【表４９】
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【表５０】
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【表５１】
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【表５２】
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【表５３】
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【表５４】
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【表５５】
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【表５６】
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【表５７】
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【表５８】
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【表５９】
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【表６０】
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【表６１】
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【表６２】
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【表６３】
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【表６４】
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【表６５】
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【表６６】
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【表６７】
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【表６８】
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【表６９】
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【表７０】
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【表７１】
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【表７２】
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【表７３】
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【表７４】
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【表７５】
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【表７６】
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【表７７】
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【表７８】
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【表７９】
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【表８０】
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【表８１】
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【表８２】
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【表８３】
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【表８４】
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【表８５】
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【表８６】
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【表８７】
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【表８８】
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【表８９】
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【表９０】
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【表９１】
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【表９２】
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【表９３】
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【表９４】
2021513538.tif 000099
【表９５】
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【表９６】
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【表９７】
2021513538.tif 000102
【表９８】
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【表９９】
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【表１００】
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【表１０１】
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【表１０２】
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【表１０３】
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【表１０４】
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【表１０５】
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【表１０６】
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【表１０７】
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【表１０８】
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【表１０９】
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【表１１０】
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【表１１１】
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【表１１２】
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【表１１３】
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【表１１４】
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【表１１５】
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【表１１６】
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【表１１７】
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【表１１８】
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【表１１９】
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【表１２０】
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【表１２１】
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【表１２２】
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【表１２３】
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【表１２４】
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【表１２５】
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【表１２６】
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【表１２７】
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【表１２８】
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【表１２９】
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【表１３０】
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【表１３１】
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【表１３２】
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【表１３３】
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【表１３４】
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【表１３５】
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【表１３６】
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【表１３７】
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【表１３８】
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【表１３９】
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【表１４０】
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【表１４１】
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【表１４２】
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【表１４３】
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【表１４４】
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【表１４５】
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【表１４６】
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【表１４７】
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【表１４８】
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【表１４９】
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【表１５０】
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【表１５１】
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【表１５２】
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【表１５３】
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【表１５４】
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【表１５５】
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【表１５６】
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【表１５７】
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【表１５８】
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【表１５９】
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【表１６０】
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【表１６１】
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【表１６２】
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【表１６３】
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【表１６４】
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【表１６５】
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【表１６６】
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【表１６７】
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【表１６８】
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【表１６９】
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【表１７０】
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【表１７１】
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【表１７２】
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【表１７３】
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【表１７４】
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【表１７５】
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【表１７６】
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【表１７７】
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【表１７８】
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【表１７９】
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【表１８０】
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【表１８１】
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【表１８２】
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【表１８３】
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【表１８４】
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【表１８５】
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【表１８６】
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【表１８７】
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【表１８８】
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【表１８９】
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【表１９０】
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【表１９１】
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【表１９２】
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【表１９３】
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【表１９４】
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【表１９５】
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【表１９６】
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【表１９７】
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【表１９８】
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【表１９９】
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【表２００】
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【表２０１】
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【表２０２】
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【表２０３】
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【表２０４】
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【表２０５】
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【表２０６】
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【表２０７】
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【表２０８】
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【表２０９】
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【表２１０】
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【表２１１】
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【表２１２】
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【表２１３】
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【表２１４】
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【表２１５】
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【表２１６】
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【表２１７】
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【表２１８】
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【表２１９】
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【表２２０】
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【表２２１】
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【表２２２】
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【表２２３】
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【表２２４−１】
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【表２２４−２】
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【表２２５−１】
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【表２２５−２】
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【表２２６−１】
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【表２２６−２】
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【表２２７】
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【表２２８】
2021513538.tif 000236
【表２２９】
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【表２３０】
2021513538.tif 000238
【表２３１】
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【表２３２】
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【表２３３】
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【図１】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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