(57)【要約】  ＬＩＬＲＢ２と結合する抗体に関する様々な実施形態が本明細書で提供される。抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、例えば、がんなどの疾患を治療する方法で使用できる。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＬＩＬＲＢ２と特異的に結合する抗体であって、前記抗体が、
（ａ）ＪＹ（Ｊ）２Ｇ（Ｊ）２（配列番号１７１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、
（ｂ）（Ｊ）２Ｗ（Ｊ）１１ＫＪ（配列番号１７２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、
（ｃ）（Ｊ）２Ｉ（Ｊ）３ＴＤＹＶ（Ｊ）３（配列番号１７３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、
（ｄ）（Ｊ）８ＤＬＪ（配列番号１７４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、
（ｅ）（Ｊ）７（配列番号１７５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び
（ｆ）（Ｊ）３ＹＪＹＰＬＪ（配列番号１７６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、
各Ｊが、独立して天然起源アミノ酸である、前記抗体。
【請求項２】
前記ＣＤＲ−Ｈ２が、ＳＪＷ（Ｊ）１１ＫＪ（配列番号１７７）のアミノ酸配列を含み、及び／または前記ＣＤＲ−Ｌ３が、（Ｊ）３ＹＤＹＰＬＪ（配列番号１７８）のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
前記ＣＤＲ−Ｈ１が、
（ｉ）ＴＹＡＭＧＶＳ（配列番号１５）、
（ｉｉ）ＪＹＡＭＧＶＳ（配列番号１７９）、
（ｉｉｉ）ＴＹＪＭＧＶＳ（配列番号１８０）、
（ｉｖ）ＴＹＡＪＧＶＳ（配列番号１８１）、
（ｖ）ＴＹＡＭＧＪＳ（配列番号１８２）、
（ｖｉ）ＴＹＡＭＧＶＪ（配列番号１８３）、または
（ｖｉｉ）配列番号１７１においてＪで表される、列挙されたアミノ酸の代わりに追加のＪアミノ酸を含む（ｉｉ）〜（ｖｉ）のうちのいずれか１つのバリアントのアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項４】
前記ＣＤＲ−Ｈ２が、
（ｉ）ＳＩＷＷＮＧＮＫＹＮＮＰＳＬＫＳ（配列番号１６）、
（ｉｉ）ＳＪＷＷＮＧＮＫＹＮＮＰＳＬＫＳ（配列番号１８４）、
（ｉｉｉ）ＳＩＷＪＮＧＮＫＹＮＮＰＳＬＫＳ（配列番号１８５）、
（ｉｖ）ＳＩＷＷＪＧＮＫＹＮＮＰＳＬＫＳ（配列番号１８６）、
（ｖ）ＳＩＷＷＮＪＮＫＹＮＮＰＳＬＫＳ（配列番号１８７）、
（ｖｉ）ＳＩＷＷＮＧＪＫＹＮＮＰＳＬＫＳ（配列番号１８８）、
（ｖｉｉ）ＳＩＷＷＮＧＮＪＹＮＮＰＳＬＫＳ（配列番号１８９）、
（ｖｉｉｉ）ＳＩＷＷＮＧＮＫＪＮＮＰＳＬＫＳ（配列番号１９０）、
（ｉｘ）ＳＩＷＷＮＧＮＫＹＪＮＰＳＬＫＳ（配列番号１９１）、
（ｘ）ＳＩＷＷＮＧＮＫＹＮＪＰＳＬＫＳ（配列番号１９２）、
（ｘｉ）ＳＩＷＷＮＧＮＫＹＮＮＪＳＬＫＳ（配列番号１９３）、
（ｘｉｉ）ＳＩＷＷＮＧＮＫＹＮＮＰＪＬＫＳ（配列番号１９４）、
（ｘｉｉｉ）ＳＩＷＷＮＧＮＫＹＮＮＰＳＪＫＳ（配列番号１９５）、
（ｘｉｖ）ＳＩＷＷＮＧＮＫＹＮＮＰＳＬＫＪ（配列番号１９６）、または
（ｘｖ）配列番号１７２においてＪで表される、列挙されたアミノ酸の代わりに追加のＪアミノ酸を含む（ｉｉ）〜（ｘｉｖ）のうちのいずれか１つのバリアントのアミノ酸配列を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項５】
前記ＣＤＲ−Ｈ３が、
（ｉ）ＳＲＩＩＲＦＴＤＹＶＭＤＡ（配列番号１７）、
（ｉｉ）ＪＲＩＩＲＦＴＤＹＶＭＤＡ（配列番号１９７）、
（ｉｉｉ）ＳＪＩＩＲＦＴＤＹＶＭＤＡ（配列番号１９８）、
（ｉｖ）ＳＲＩＪＲＦＴＤＹＶＭＤＡ（配列番号１９９）、
（ｖ）ＳＲＩＩＪＦＴＤＹＶＭＤＡ（配列番号２００）、
（ｖｉ）ＳＲＩＩＲＪＴＤＹＶＭＤＡ（配列番号２０１）、
（ｖｉｉ）ＳＲＩＩＲＦＴＤＹＶＪＤＡ（配列番号２０２）、
（ｖｉｉｉ）ＳＲＩＩＲＦＴＤＹＶＭＪＡ（配列番号２０３）、
（ｉｘ）ＳＲＩＩＲＦＴＤＹＶＭＤＪ（配列番号２０４）、または
（ｘ）配列番号１７３においてＪで表される、列挙されたアミノ酸の代わりに追加のＪアミノ酸を含む（ｉｉ）〜（ｉｘ）のうちのいずれか１つのバリアントのアミノ酸配列を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項６】
前記ＣＤＲ−Ｌ１が、
（ｉ）ＲＡＳＥＤＩＹＮＤＬＡ（配列番号１８）、
（ｉｉ）ＪＡＳＥＤＩＹＮＤＬＡ（配列番号２０５）、
（ｉｉｉ）ＲＪＳＥＤＩＹＮＤＬＡ（配列番号２０６）、
（ｉｖ）ＲＡＪＥＤＩＹＮＤＬＡ（配列番号２０７）、
（ｖ）ＲＡＳＪＤＩＹＮＤＬＡ（配列番号２０８）、
（ｖｉ）ＲＡＳＥＪＩＹＮＤＬＡ（配列番号２０９）、
（ｖｉｉ）ＲＡＳＥＤＪＹＮＤＬＡ（配列番号２１０）、
（ｖｉｉｉ）ＲＡＳＥＤＩＪＮＤＬＡ（配列番号２１１）、
（ｉｘ）ＲＡＳＥＤＩＹＪＤＬＡ（配列番号２１２）、
（ｘ）ＲＡＳＥＤＩＹＮＤＬＪ（配列番号２１３）、または
（ｘｉ）配列番号１７４においてＪで表される、列挙されたアミノ酸の代わりに追加のＪアミノ酸を含む（ｉｉ）〜（ｘ）のうちのいずれか１つのバリアントのアミノ酸配列を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項７】
前記ＣＤＲ−Ｌ２が、
（ｉ）ＮＡＮＳＬＨＴ（配列番号１９）、
（ｉｉ）ＪＡＮＳＬＨＴ（配列番号２１４）、
（ｉｉｉ）ＮＪＮＳＬＨＴ（配列番号２１５）、
（ｉｖ）ＮＡＪＳＬＨＴ（配列番号２１６）、
（ｖ）ＮＡＮＪＬＨＴ（配列番号２１７）、
（ｖｉ）ＮＡＮＳＪＨＴ（配列番号２１８）、
（ｖｉｉ）ＮＡＮＳＬＪＴ（配列番号２１９）、
（ｖｉｉｉ）ＮＡＮＳＬＨＪ（配列番号２２０）、または
（ｉｘ）配列番号１７５においてＪで表される、列挙されたアミノ酸の代わりに追加のＪアミノ酸を含む（ｉｉ）〜（ｖｉｉｉ）のうちのいずれか１つのバリアントのアミノ酸配列を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項８】
前記ＣＤＲ−Ｌ３が、
（ｉ）ＱＱＹＹＤＹＰＬＴ（配列番号２０）、
（ｉｉ）ＪＱＹＹＤＹＰＬＴ（配列番号２２１）、
（ｉｉｉ）ＱＪＹＹＤＹＰＬＴ（配列番号２２２）、
（ｉｖ）ＱＱＪＹＤＹＰＬＴ（配列番号２２３）、
（ｖ）ＱＱＹＹＤＹＰＬＪ（配列番号２２４）、または
（ｖｉ）配列番号１７６においてＪで表される、列挙されたアミノ酸の代わりに追加のＪアミノ酸を含む（ｉｉ）〜（ｖ）のうちのいずれか１つのバリアントのアミノ酸配列を含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項９】
前記ＣＤＲ−Ｈ２が、ＪＩＷＷＮＧＮＫＹＮＮＰＳＬＫＳ（配列番号２２５）のアミノ酸配列、もしくは配列番号１７２においてＪで表される、列挙されたアミノ酸の代わりに追加のＪアミノ酸を含むそのバリアントを含む、及び／または前記ＣＤＲ−Ｌ３が、ＱＱＹＹＪＹＰＬＴ（配列番号２２６）のアミノ酸配列、もしくは配列番号１７６においてＪで表される、列挙されたアミノ酸の代わりに追加のＪアミノ酸を含むそのバリアントを含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項１０】
前記１つ以上のＣＤＲが、前記追加のＪアミノ酸を含む、請求項３〜９のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１１】
前記ＣＤＲ−Ｈ３が、（Ｊ）２ＩＪＸＪＴＤＹＶ（Ｊ）３（配列番号２２７）のアミノ酸配列を含み、Ｘが、アルギニンではない、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１２】
Ｘが、アスパラギン酸、グルタミン酸、及びアラニンからなる群から選択される、請求項１１に記載の抗体。
【請求項１３】
前記ＣＤＲ−Ｈ３が、
（ｉ）ＪＲＩＩＸＦＴＤＹＶＭＤＡ（配列番号２２８）、
（ｉｉ）ＳＪＩＩＸＦＴＤＹＶＭＤＡ（配列番号２２９）、
（ｉｉｉ）ＳＲＩＪＸＦＴＤＹＶＭＤＡ（配列番号２３０）、
（ｉｖ）ＳＲＩＩＸＦＴＤＹＶＭＤＡ（配列番号２３１）、
（ｖ）ＳＲＩＩＸＪＴＤＹＶＭＤＡ（配列番号２３２）、
（ｖｉ）ＳＲＩＩＸＦＴＤＹＶＪＤＡ（配列番号２３３）、
（ｖｉｉ）ＳＲＩＩＸＦＴＤＹＶＭＪＡ（配列番号２３４）、
（ｖｉｉｉ）ＳＲＩＩＸＦＴＤＹＶＭＤＪ（配列番号２３５）、または
（ｉｘ）配列番号１７３においてＪで表される、列挙されたアミノ酸の代わりに追加のＪアミノ酸を含む（ｉｉ）〜（ｉｉｉ）もしくは（ｖ）〜（ｖｉｉｉ）のうちのいずれか１つのバリアントの配列を含む、請求項１１または１２に記載の抗体。
【請求項１４】
前記抗体が、配列番号３、１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、９３、１０３、もしくは１１３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む可変重鎖（ＶＨ）領域、及び／または配列番号４、１４、２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、もしくは１１４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む可変軽鎖（ＶＬ）領域を含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１５】
前記抗体が、配列番号３、１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、９３、１０３、もしくは１１３のアミノ酸配列を含む可変重鎖（ＶＨ）領域、及び／または配列番号４、１４、２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、もしくは１１４のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（ＶＬ）領域を含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１６】
前記抗体が、配列番号１、１１、２１、３１、４１、５１、６１、７１、８１、９１、１０１、もしくは１１１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び／または配列番号２、２２、３２、４２、５２、６２、７２、８２、９２、１０２、もしくは１１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１７】
ヒトＬＩＬＲＢ２と特異的に結合する抗体であって、前記抗体が、
（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、
（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、
（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、
（ｄ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、
（ｅ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び
（ｆ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３の６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、前記抗体。
【請求項１８】
前記抗体が、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む可変重鎖（ＶＨ）領域、及び配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む可変軽鎖（ＶＬ）領域を含み、前記ＶＨ領域が、配列番号１５〜１７のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含み、前記ＶＬ領域が、配列番号１８〜２０のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含む、請求項１７に記載の抗体。
【請求項１９】
前記抗体が、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む、請求項１７または１８に記載の抗体。
【請求項２０】
前記抗体が、配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１７〜１９のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２１】
前記抗体が、配列番号５３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号５４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含み、前記ＶＨ領域が、配列番号１５〜１７のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含み、前記ＶＬ領域が、配列番号１８〜２０のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含む、請求項１７に記載の抗体。
【請求項２２】
前記抗体が、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号５４のアミノ酸配列を含む可変軽鎖ＶＬ領域を含む、請求項１７または２１に記載の抗体。
【請求項２３】
前記抗体が、配列番号５１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１７、２１、及び２２のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２４】
前記抗体が、配列番号６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号６４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含み、前記ＶＨ領域が、配列番号１５〜１７のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含み、前記ＶＬ領域が、配列番号１８〜２０のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含む、請求項１７に記載の抗体。
【請求項２５】
前記抗体が、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号６４のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む、請求項１７または２４に記載の抗体。
【請求項２６】
前記抗体が、配列番号６１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号６２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１７、２４、及び２５のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２７】
前記抗体が、配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号７４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含み、前記ＶＨ領域が、配列番号１５〜１７のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含み、前記ＶＬ領域が、配列番号１８〜２０のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含む、請求項１７に記載の抗体。
【請求項２８】
前記抗体が、配列番号７３のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む、請求項１７または２７に記載の抗体。
【請求項２９】
前記抗体が、配列番号７１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号７２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１７、２７、及び２８のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項３０】
前記抗体が、配列番号８３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含み、前記ＶＨ領域が、配列番号１５〜１７のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含み、前記ＶＬ領域が、配列番号１８〜２０のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含む、請求項１７に記載の抗体。
【請求項３１】
前記抗体が、配列番号８３のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号８４のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む、請求項１７または３０に記載の抗体。
【請求項３２】
前記抗体が、配列番号８１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号８２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１７、３０、及び３１のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項３３】
前記抗体が、配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号９４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含み、前記ＶＨ領域が、配列番号９５〜９７のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含み、前記ＶＬ領域が、配列番号９８〜１００のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含む、請求項１７に記載の抗体。
【請求項３４】
前記抗体が、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号９４のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む、請求項１７または３３に記載の抗体。
【請求項３５】
前記抗体が、配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号９２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１７、３３、及び３４のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項３６】
前記抗体が、配列番号１０３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１０４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含み、前記ＶＨ領域が、配列番号１０５〜１０７のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含み、前記ＶＬ領域が、配列番号１０８〜１１０のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含む、請求項１７に記載の抗体。
【請求項３７】
前記抗体が、配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む、請求項１７または３６に記載の抗体。
【請求項３８】
前記抗体が、配列番号１０１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１７、３６、及び３７のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項３９】
前記抗体が、配列番号１１３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１１４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含み、前記ＶＨ領域が、配列番号１１５〜１１７のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含み、前記ＶＬ領域が、配列番号１１８〜１２０のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含む、請求項１７に記載の抗体。
【請求項４０】
前記抗体が、配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む、請求項１７または３９に記載の抗体。
【請求項４１】
前記抗体が、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１１２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１７、３９、及び４０のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項４２】
ヒトＬＩＬＲＢ２と特異的に結合する抗体であって、前記抗体が、
（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、
（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、
（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、
（ｄ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、
（ｅ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び
（ｆ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３の６つのＣＤＲを含む、前記抗体。
【請求項４３】
前記抗体が、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含み、前記ＶＨ領域が、配列番号５〜７のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含み、前記ＶＬ領域が、配列番号８〜１０のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含む、請求項４２に記載の抗体。
【請求項４４】
前記抗体が、配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む、請求項４２または４３に記載の抗体。
【請求項４５】
前記抗体が、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項４２〜４４のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項４６】
ヒトＬＩＬＲＢ２と特異的に結合する抗体であって、前記抗体が、
（ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、
（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、
（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、
（ｄ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、
（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び
（ｆ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３の６つのＣＤＲを含む、前記抗体。
【請求項４７】
前記抗体が、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含み、前記ＶＨ領域が、配列番号２５〜２７のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含み、前記ＶＬ領域が、配列番号２８〜３０のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含む、請求項４６に記載の抗体。
【請求項４８】
前記抗体が、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号２４のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む、請求項４６または４７に記載の抗体。
【請求項４９】
前記抗体が、配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項４６〜４８のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項５０】
前記重鎖が、Ｃ末端リジンを追加で含む、請求項１〜４９のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項５１】
請求項１〜５０のいずれか１項に記載の抗体とヒトＬＩＬＲＢ２との結合について交差競合する、抗体。
【請求項５２】
ヒトＬＩＬＲＢ２と特異的に結合し、ＨＬＡ−Ｇ及び／またはＨＬＡ−Ａ２のヒトＬＩＬＲＢ２との結合を遮断する、抗体。
【請求項５３】
前記遮断することが、ヒト単球由来マクロファージ、ヒト骨髄細胞、及び／またはＬＩＬＲＢ２を発現する細胞株を使用する、ＨＬＡ−Ｇ四量体遮断アッセイで決定される、請求項５２に記載の抗体。
【請求項５４】
前記アッセイが、ＨＬＡ−Ｇ抱合化ビーズの使用を含む、請求項５３に記載の抗体。
【請求項５５】
前記抗体が、２０ｎＭ未満、２ｎＭ未満、または０．２ｎＭ未満のＥＣ５０でＨＬＡ−Ｇ四量体を遮断する、請求項５３または５４に記載の抗体。
【請求項５６】
前記遮断することが、ヒト単球由来マクロファージを使用する、ＨＬＡ−Ａ２四量体遮断アッセイで決定される、請求項５２〜５５のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項５７】
前記抗体が、２０ｎＭ未満、２ｎＭ未満、または０．２ｎＭ未満のＥＣ５０でＨＬＡ−Ａ２四量体を遮断する、請求項５６に記載の抗体。
【請求項５８】
請求項１〜５１のいずれか１項に記載の抗体である、請求項５２〜５７のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項５９】
ヒトＬＩＬＲＢ２と特異的に結合する抗体であって、前記抗体が、Ｍ２様マクロファージをＭ１様マクロファージに変換することが可能である、前記抗体。
【請求項６０】
前記Ｍ２様マクロファージのＭ１様マクロファージへの変換が、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１１、ＩＲＦ１、ＴＡＰ１、ＩＬ６Ｒ、及びＩＬ１５からなる群から選択される１つ以上の遺伝子の増加した発現により示される、請求項５９に記載の抗体。
【請求項６１】
前記Ｍ２様マクロファージのＭ１様マクロファージへの変換が、ＩＬ−１０、ＣＣＬ２、ＴＧＦＢＲ２、ＣＸＣＬ１３、ＩＬ２１Ｒ、ＣＤ３６、ＣＲ１、Ｃ１ＱＢ、及びＴＧＦＢＩからなる群から選択される１つ以上の遺伝子の低減した発現により示される、請求項５９または６０に記載の抗体。
【請求項６２】
前記Ｍ２様マクロファージのＭ１様マクロファージへの変換が、腫瘍組織培養アッセイを使用して検出される、請求項５９〜６１のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項６３】
前記Ｍ２様マクロファージのＭ１様マクロファージへの変換が、ヒト単球由来マクロファージを使用する初代ヒトマクロファージアッセイを使用して検出される、請求項５９〜６２のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項６４】
前記Ｍ２様マクロファージのＭ１様マクロファージへの変換が、ＴＮＦα、ＩＬ−１β、及びＩＬ−６からなる群から選択される１つ、２つ、もしくは３つ全てのサイトカインの増加した発現により示される、及び／または前記Ｍ２様マクロファージのＭ１様マクロファージへの変換が、ＩＬ−１０及びＣＣＬ−２からなる群から選択される１つもしくは両方のサイトカインの低減した発現により示される、請求項６３に記載の抗体。
【請求項６５】
請求項１〜５１のいずれか１項に記載の抗体である、請求項５８〜６４のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項６６】
請求項５２〜５７のいずれか１項に記載の抗体である、請求項５８〜６４のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項６７】
前記抗体が、３．０ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）でＬＩＬＲＢ２と結合する、請求項１〜６６のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項６８】
前記抗体が、１．５ｎＭ未満のＫＤでＬＩＬＲＢ２と結合する、請求項６７に記載の抗体。
【請求項６９】
前記抗体が、１．０ｎＭ未満のＫＤでＬＩＬＲＢ２と結合する、請求項６８に記載の抗体。
【請求項７０】
前記抗体が、７５０ｐＭ未満の解離定数（ＫＤ）でＬＩＬＲＢ２と結合する、請求項６９に記載の抗体。
【請求項７１】
前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１〜６６のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項７２】
前記抗体が、キメラ抗体、ヒト化抗体、ＣＤＲ移植抗体、またはヒト抗体である、請求項１〜７１のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項７３】
前記抗体が、天然Ｆｃ領域、バリアントＦｃ領域、及び機能的Ｆｃ領域からなる群から選択されるＦｃ領域を含む、請求項１〜７２のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項７４】
前記抗体が、抱合抗体であるか、または検出可能に標識されている、請求項１〜７３のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項７５】
前記抗体が、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ３抗体、またはＩｇＧ４抗体である、請求項１〜７４のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項７６】
ＩｇＧ４抗体である、請求項７５に記載の抗体。
【請求項７７】
請求項１〜７６のいずれか１項に記載の抗体のポリペプチドをコードする、核酸分子。
【請求項７８】
請求項７７に記載の核酸分子を含む、宿主細胞またはベクター。
【請求項７９】
請求項１〜７６のいずれか１項に記載の抗体、または請求項７７に記載の核酸分子を含む、薬学的組成物。
【請求項８０】
疾患の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、前記方法が、前記対象に、治療有効量の請求項１〜７６のいずれか１項に記載の抗体を投与することを含む、前記方法。
【請求項８１】
前記疾患が、がんである、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
抗腫瘍免疫応答の増強を、それを必要とする対象において行う方法であって、前記方法が、前記対象に、治療有効量の請求項１〜７６のいずれか１項に記載の抗体を投与することを含む、前記方法。
【請求項８３】
前記抗体を第２の治療手段と組み合わせて施すことをさらに含む、請求項８０〜８２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８４】
前記第２の治療手段が、免疫療法またはがんワクチンである、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
前記第２の治療手段が、ＰＤ−１療法及び／またはＩＣＯＳ療法を含む免疫療法である、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
請求項７９に記載の薬学的組成物及び使用説明書を含む、キット。
【請求項８７】
核酸断片を含むオリゴヌクレオチドであって、前記核酸断片が、ＣＧＴＣＡＣＣＣＴＣＡＧＴＴＧＴＣＡＧ（配列番号１４３）、またはＴＣＣＧＴＧＴＡＡＴＣＣＡＡＧＡＴＧＣＴＧ（配列番号１５８）のオリゴヌクレオチド配列の少なくとも１６個の連続した核酸残基を含む、前記オリゴヌクレオチド。
【請求項８８】
前記核酸断片が、ＡＧＴＣＣＣＧＴＣＡＣＣＣＴＣＡＧＴＴＧＴＣＡＧＧＧＧＡＧ（配列番号１６９）、またはＴＣＧＴＡＴＣＣＧＴＧＴＡＡＴＣＣＡＡＧＡＴＧＣＴＧＡＴＴＴＴ（配列番号１７０）のオリゴヌクレオチド配列の少なくとも１６個の連続した核酸残基を含む、請求項８７に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項８９】
フォワードプライマー及びリバースプライマーを含むｑＰＣＲプライマーセットであって、前記フォワードプライマーが、配列番号１４３または１６９のオリゴヌクレオチド配列の少なくとも１６個の連続した核酸残基を含む核酸断片を含み、前記リバースプライマーが、配列番号１５８または１７０のオリゴヌクレオチド配列の少なくとも１６個の連続した核酸残基を含む核酸断片を含み、前記ｑＰＣＲプライマーセットが、任意で、配列番号１６７の少なくとも１６個の連続した残基を含むプローブをさらに含むキット内に含まれる、前記ｑＰＣＲプライマーセット。
【請求項９０】
生物学的試料中のＬＩＬＲＢ２発現のレベルを定量化する方法であって、前記方法が、
（ａ）生物学的試料に由来するｃＤＮＡを取得することと、
（ｂ）増幅産物を生成するために、請求項８７または８８に記載のオリゴヌクレオチド、または請求項８９に記載のｑＰＣＲプライマーセットもしくはキットを使用して、前記ｃＤＮＡに対してｑＰＣＲを実行することであって、前記ｑＰＣＲが、ＬＩＬＲＢ２に特異的である、実行することと、
（ｃ）前記ＬＩＬＲＢ２発現のレベルを決定するために前記増幅産物を定量化することと、を含む、前記方法。
【請求項９１】
請求項１〜７６のいずれか１項に記載の抗体の使用であって、疾患の治療または予防を、それを必要とする対象において、治療有効量の前記抗体を前記対象に投与することにより行うための、前記方法。
【請求項９２】
前記疾患が、がんである、請求項９１に記載の使用。
【請求項９３】
治療有効量の請求項１〜７６のいずれか１項に記載の抗体の使用であって、抗腫瘍免疫応答の増強を、それを必要とする対象において、有効量の前記抗体を前記対象に投与することにより行うための、前記使用。
【請求項９４】
前記抗体を第２の治療手段と組み合わせて施すことをさらに含む、請求項９１〜９３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項９５】
前記第２の治療手段が、免疫療法またはがんワクチンである、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
前記第２の治療手段が、ＰＤ−１療法及び／またはＩＣＯＳ療法を含む免疫療法である、請求項９５に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０１８年１２月１３日に作成された該ＡＳＣＩＩコピーは、５１２６６−００２ＷＯ２＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿１２．１３．１８＿ＳＴ２５と称され、２０６，０２６バイトのサイズである。
【０００２】
樹状細胞及びマクロファージなどの骨髄細胞は、免疫原性サイトカイン及び共刺激シグナルを発現しながらペプチド抗原をＴ細胞に提示し、それにより細胞傷害性Ｔ細胞活性化及び増殖を促進することにより、適応免疫系に腫瘍細胞及び病原体に対する応答を開始するよう指示できる。反対に、定常状態では、骨髄細胞は、制御性サイトカインなどの非免疫原性シグナルとの関連で自己抗原をＴ細胞に提示することにより、内因性タンパク質に対する寛容性を維持し、制御性Ｔ細胞を促進し、免疫原性を抑制することができる。
【０００３】
がん細胞は、免疫抑制または免疫調節性抗原提示に関連するシグナル伝達経路に関与することにより、免疫系を回避することができる。かかる回避事象は、抗腫瘍免疫の促進に依存する治療戦略に対する主要な障壁となることを表す。したがって、腫瘍性免疫抑制を防止し、骨髄細胞による腫瘍抗原の免疫原性提示を促進する治療組成物及び方法が必要とされている。
【発明の概要】
【０００４】
本発明は、ヒトＬＩＬＲＢ２と特異的に結合する抗体を特徴とする。抗ＬＩＬＲＢ２抗体の組成物、ならびに抗ＬＩＬＲＢ２抗体及びその組成物を使用する方法も提供される。
【０００５】
一態様では、本発明は、ヒトＬＩＬＲＢ２と特異的に結合する抗体であって、抗体が、（ａ）ＪＹ（Ｊ）２Ｇ（Ｊ）２（配列番号１７１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）（Ｊ）２Ｗ（Ｊ）１１ＫＪ（配列番号１７２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）（Ｊ）２Ｉ（Ｊ）３ＴＤＹＶ（Ｊ）３（配列番号１７３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、（ｄ）（Ｊ）８ＤＬＪ（配列番号１７４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）（Ｊ）７（配列番号１７５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び（ｆ）（Ｊ）３ＹＪＹＰＬＪ（配列番号１７６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、各Ｊが、独立して天然起源アミノ酸（例えば、以下の表１を参照されたい）である、抗体を提供する。
【０００６】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ２は、ＳＪＷ（Ｊ）１１ＫＪ（配列番号１７７）のアミノ酸配列を含み、及び／またはＣＤＲ−Ｌ３は、（Ｊ）３ＹＤＹＰＬＪ（配列番号１７８）のアミノ酸配列を含む。
【０００７】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ１は、（ｉ）ＴＹＡＭＧＶＳ（配列番号１５）、（ｉｉ）ＪＹＡＭＧＶＳ（配列番号１７９）、（ｉｉｉ）ＴＹＪＭＧＶＳ（配列番号１８０）、（ｉｖ）ＴＹＡＪＧＶＳ（配列番号１８１）、（ｖ）ＴＹＡＭＧＪＳ（配列番号１８２）、（ｖｉ）ＴＹＡＭＧＶＪ（配列番号１８３）、または（ｖｉｉ）配列番号１７１においてＪで表される、列挙されたアミノ酸の代わりに追加のＪアミノ酸を含む（ｉｉ）〜（ｖｉ）のうちのいずれか１つのバリアントのアミノ酸配列を含む。したがって、バリアント配列が配列番号１７１と整列される場合、それは、配列番号１７１に示される非Ｊアミノ酸を維持する。したがって、バリアントの追加のＪアミノ酸は、配列番号１７１においてＪであるアミノ酸と整列する。
【０００８】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ２は、（ｉ）ＳＩＷＷＮＧＮＫＹＮＮＰＳＬＫＳ（配列番号１６）、（ｉｉ）ＳＪＷＷＮＧＮＫＹＮＮＰＳＬＫＳ（配列番号１８４）、（ｉｉｉ）ＳＩＷＪＮＧＮＫＹＮＮＰＳＬＫＳ（配列番号１８５）、（ｉｖ）ＳＩＷＷＪＧＮＫＹＮＮＰＳＬＫＳ（配列番号１８６）、（ｖ）ＳＩＷＷＮＪＮＫＹＮＮＰＳＬＫＳ（配列番号１８７）、（ｖｉ）ＳＩＷＷＮＧＪＫＹＮＮＰＳＬＫＳ（配列番号１８８）、（ｖｉｉ）ＳＩＷＷＮＧＮＪＹＮＮＰＳＬＫＳ（配列番号１８９）、（ｖｉｉｉ）ＳＩＷＷＮＧＮＫＪＮＮＰＳＬＫＳ（配列番号１９０）、（ｉｘ）ＳＩＷＷＮＧＮＫＹＪＮＰＳＬＫＳ（配列番号１９１）、（ｘ）ＳＩＷＷＮＧＮＫＹＮＪＰＳＬＫＳ（配列番号１９２）、（ｘｉ）ＳＩＷＷＮＧＮＫＹＮＮＪＳＬＫＳ（配列番号１９３）、（ｘｉｉ）ＳＩＷＷＮＧＮＫＹＮＮＰＪＬＫＳ（配列番号１９４）、（ｘｉｉｉ）ＳＩＷＷＮＧＮＫＹＮＮＰＳＪＫＳ（配列番号１９５）、（ｘｉｖ）ＳＩＷＷＮＧＮＫＹＮＮＰＳＬＫＪ（配列番号１９６）、または（ｘｖ）配列番号１７２においてＪで表される、列挙されたアミノ酸の代わりに追加のＪアミノ酸を含む（ｉｉ）〜（ｘｉｖ）のうちのいずれか１つのバリアントのアミノ酸配列を含む。したがって、バリアント配列が配列番号１７２と整列される場合、それは、配列番号１７２に示される非Ｊアミノ酸を維持する。したがって、バリアントの追加のＪアミノ酸は、配列番号１７２においてＪであるアミノ酸と整列する。
【０００９】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ３は、（ｉ）ＳＲＩＩＲＦＴＤＹＶＭＤＡ（配列番号１７）、（ｉｉ）ＪＲＩＩＲＦＴＤＹＶＭＤＡ（配列番号１９７）、（ｉｉｉ）ＳＪＩＩＲＦＴＤＹＶＭＤＡ（配列番号１９８）、（ｉｖ）ＳＲＩＪＲＦＴＤＹＶＭＤＡ（配列番号１９９）、（ｖ）ＳＲＩＩＪＦＴＤＹＶＭＤＡ（配列番号２００）、（ｖｉ）ＳＲＩＩＲＪＴＤＹＶＭＤＡ（配列番号２０１）、（ｖｉｉ）ＳＲＩＩＲＦＴＤＹＶＪＤＡ（配列番号２０２）、（ｖｉｉｉ）ＳＲＩＩＲＦＴＤＹＶＭＪＡ（配列番号２０３）、（ｉｘ）ＳＲＩＩＲＦＴＤＹＶＭＤＪ（配列番号２０４）、または（ｘ）配列番号１７３においてＪで表される、列挙されたアミノ酸の代わりに追加のＪアミノ酸を含む（ｉｉ）〜（ｉｘ）のうちのいずれか１つのバリアントのアミノ酸配列を含む。したがって、バリアント配列が配列番号１７３と整列される場合、それは、配列番号１７３に示される非Ｊアミノ酸を維持する。したがって、バリアントの追加のＪアミノ酸は、配列番号１７３においてＪであるアミノ酸と整列する。
【００１０】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｌ１は、（ｉ）ＲＡＳＥＤＩＹＮＤＬＡ（配列番号１８）、（ｉｉ）ＪＡＳＥＤＩＹＮＤＬＡ（配列番号２０５）、（ｉｉｉ）ＲＪＳＥＤＩＹＮＤＬＡ（配列番号２０６）、（ｉｖ）ＲＡＪＥＤＩＹＮＤＬＡ（配列番号２０７）、（ｖ）ＲＡＳＪＤＩＹＮＤＬＡ（配列番号２０８）、（ｖｉ）ＲＡＳＥＪＩＹＮＤＬＡ（配列番号２０９）、（ｖｉｉ）ＲＡＳＥＤＪＹＮＤＬＡ（配列番号２１０）、（ｖｉｉｉ）ＲＡＳＥＤＩＪＮＤＬＡ（配列番号２１１）、（ｉｘ）ＲＡＳＥＤＩＹＪＤＬＡ（配列番号２１２）、（ｘ）ＲＡＳＥＤＩＹＮＤＬＪ（配列番号２１３）、または（ｘｉ）配列番号１７４においてＪで表される、列挙されたアミノ酸の代わりに追加のＪアミノ酸を含む（ｉｉ）〜（ｘ）のうちのいずれか１つのバリアントのアミノ酸配列を含む。したがって、バリアント配列が配列番号１７４と整列される場合、それは、配列番号１７４に示される非Ｊアミノ酸を維持する。したがって、バリアントの追加のＪアミノ酸は、配列番号１７４においてＪであるアミノ酸と整列する。
【００１１】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｌ２は、（ｉ）ＮＡＮＳＬＨＴ（配列番号１９）、（ｉｉ）ＪＡＮＳＬＨＴ（配列番号２１４）、（ｉｉｉ）ＮＪＮＳＬＨＴ（配列番号２１５）、（ｉｖ）ＮＡＪＳＬＨＴ（配列番号２１６）、（ｖ）ＮＡＮＪＬＨＴ（配列番号２１７）、（ｖｉ）ＮＡＮＳＪＨＴ（配列番号２１８）、（ｖｉｉ）ＮＡＮＳＬＪＴ（配列番号２１９）、（ｖｉｉｉ）ＮＡＮＳＬＨＪ（配列番号２２０）、または（ｉｘ）配列番号１７５においてＪで表される、列挙されたアミノ酸の代わりに追加のＪアミノ酸を含む（ｉｉ）〜（ｖｉｉｉ）のうちのいずれか１つのバリアントのアミノ酸配列を含む。したがって、バリアント配列が配列番号１７５と整列される場合、それは、配列番号１７５に示される非Ｊアミノ酸を維持する。したがって、バリアントの追加のＪアミノ酸は、配列番号１７５においてＪであるアミノ酸と整列する。
【００１２】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｌ３は、（ｉ）ＱＱＹＹＤＹＰＬＴ（配列番号２０）、（ｉｉ）ＪＱＹＹＤＹＰＬＴ（配列番号２２１）、（ｉｉｉ）ＱＪＹＹＤＹＰＬＴ（配列番号２２２）、（ｉｖ）ＱＱＪＹＤＹＰＬＴ（配列番号２２３）、（ｖ）ＱＱＹＹＤＹＰＬＪ（配列番号２２４）、または（ｖｉ）配列番号１７６においてＪで表される、列挙されたアミノ酸の代わりに追加のＪアミノ酸を含む（ｉｉ）〜（ｖ）のうちのいずれか１つのバリアントのアミノ酸配列を含む。したがって、バリアント配列が配列番号１７６と整列される場合、それは、配列番号１７６に示される非Ｊアミノ酸を維持する。したがって、バリアントの追加のＪアミノ酸は、配列番号１７６においてＪであるアミノ酸と整列する。
【００１３】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ２は、ＪＩＷＷＮＧＮＫＹＮＮＰＳＬＫＳ（配列番号２２５）のアミノ酸配列、もしくは配列番号１７２においてＪで表される、列挙されたアミノ酸の代わりに追加のＪアミノ酸を含むそのバリアントを含む、及び／またはＣＤＲ−Ｌ３は、ＱＱＹＹＪＹＰＬＴ（配列番号２２６）のアミノ酸配列、もしくは配列番号１７６においてＪで表される、列挙されたアミノ酸の代わりに追加のＪアミノ酸を含むそのバリアントを含む。したがって、バリアント配列が配列番号１７６と整列される場合、それは、配列番号１７６に示される非Ｊアミノ酸を維持する。したがって、バリアントの追加のＪアミノ酸は、配列番号１７６においてＪであるアミノ酸と整列する。
【００１４】
上記の様々な実施形態では、１つ以上のＣＤＲは、該追加のＪアミノ酸を含む。追加の実施形態では、１つ以上のＣＤＲは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上の追加のＪアミノ酸を含む。これらの追加の実施形態では、追加のＪアミノ酸の各々は、ＣＤＲのそれぞれの一般式のＪであるアミノ酸と整列する。一般式の詳細に列挙されたアミノ酸は、維持される。
【００１５】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ３は、（Ｊ）２ＩＪＸＪＴＤＹＶ（Ｊ）３（配列番号２２７）のアミノ酸配列を含み、Ｘは、アルギニンではない。いくつかの実施形態では、Ｘは、アスパラギン酸、グルタミン酸、及びアラニンからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ３は、（ｉ）ＪＲＩＩＸＦＴＤＹＶＭＤＡ（配列番号２２８）、（ｉｉ）ＳＪＩＩＸＦＴＤＹＶＭＤＡ（配列番号２２９）、（ｉｉｉ）ＳＲＩＪＸＦＴＤＹＶＭＤＡ（配列番号２３０）、（ｉｖ）ＳＲＩＩＸＦＴＤＹＶＭＤＡ（配列番号２３１）、（ｖ）ＳＲＩＩＸＪＴＤＹＶＭＤＡ（配列番号２３２）、（ｖｉ）ＳＲＩＩＸＦＴＤＹＶＪＤＡ（配列番号２３３）、（ｖｉｉ）ＳＲＩＩＸＦＴＤＹＶＭＪＡ（配列番号２３４）、（ｖｉｉｉ）ＳＲＩＩＸＦＴＤＹＶＭＤＪ（配列番号２３５）、または（ｉｘ）配列番号１７３においてＪで表される、列挙されたアミノ酸の代わりに追加のＪアミノ酸を含む（ｉｉ）〜（ｉｉｉ）もしくは（ｖ）〜（ｖｉｉｉ）のうちのいずれか１つのバリアントの配列を含む。
【００１６】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号３、１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、９３、１０３、もしくは１１３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む可変重鎖（ＶＨ）領域、及び／または配列番号４、１４、２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、もしくは１１４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む可変軽鎖（ＶＬ）領域を含む。独立請求項で配列が必要であり、従属請求項が独立請求項の配列を包括するより大きな配列において変動を許容する場合、その変動は独立請求項で必要な配列には適用できないことを本明細書では理解されたい。
【００１７】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号３、１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、９３、１０３、もしくは１１３のアミノ酸配列を含む可変重鎖（ＶＨ）領域、及び／または配列番号４、１４、２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、もしくは１１４のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（ＶＬ）領域を含む。
【００１８】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１、１１、２１、３１、４１、５１、６１、７１、８１、９１、１０１、もしくは１１１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び／または配列番号２、２２、３２、４２、５２、６２、７２、８２、９２、１０２、もしくは１１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００１９】
別の態様では、本発明は、ヒトＬＩＬＲＢ２と特異的に結合する抗体であって、抗体が、（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３の６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、抗体を提供する。
【００２０】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む可変重鎖（ＶＨ）領域、及び配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む可変軽鎖（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号１５〜１７のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含み、ＶＬ領域は、配列番号１８〜２０のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００２１】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号５３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号５４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号１５〜１７のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含み、ＶＬ領域は、配列番号１８〜２０のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号５４のアミノ酸配列を含む可変軽鎖ＶＬ領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号５１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００２２】
他の実施形態では、抗体は、配列番号６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号６４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号１５〜１７のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含み、ＶＬ領域は、配列番号１８〜２０のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号６４のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号６１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号６２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００２３】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号７４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号１５〜１７のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含み、ＶＬ領域は、配列番号１８〜２０のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号７３のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号７２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００２４】
他の実施形態では、抗体は、配列番号８３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号１５〜１７のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含み、ＶＬ領域は、配列番号１８〜２０のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号８３のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号８４のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号８１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号８２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００２５】
他の実施形態では、抗体は、配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号９４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号１５〜１７のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含み、ＶＬ領域は、配列番号１８〜２０のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号９４のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号９２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００２６】
他の実施形態では、抗体は、配列番号１０３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１０４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号１５〜１７のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含み、ＶＬ領域は、配列番号１８〜２０のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号１０１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００２７】
他の実施形態では、抗体は、配列番号１１３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１１４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号１５〜１７のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含み、ＶＬ領域は、配列番号１８〜２０のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１１２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００２８】
別の態様では、本発明は、ヒトＬＩＬＲＢ２と特異的に結合する抗体であって、抗体が、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３の６つのＣＤＲを含む、抗体を提供する。
【００２９】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号５〜７のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含み、ＶＬ領域は、配列番号８〜１０のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００３０】
別の態様では、本発明は、ヒトＬＩＬＲＢ２と特異的に結合する抗体であって、抗体が、（ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３の６つのＣＤＲを含む、抗体を特徴とする。
【００３１】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号２５〜２７のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含み、ＶＬ領域は、配列番号２８〜３０のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号２４のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００３２】
別の態様では、本発明は、ヒトＬＩＬＲＢ２と特異的に結合する抗体であって、抗体が、（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３の６つのＣＤＲを含む、抗体を特徴とする。
【００３３】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号３３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号３４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号３５〜３７のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含み、ＶＬ領域は、配列番号３８〜４０のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号３１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００３４】
別の態様では、本発明は、ヒトＬＩＬＲＢ２と特異的に結合する抗体であって、抗体が、（ａ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３の６つのＣＤＲを含む、抗体を特徴とする。
【００３５】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号４３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号４４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号４５〜４７のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含み、ＶＬ領域は、配列番号４８〜５０のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号４４のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００３６】
本明細書に記載される任意の抗体、例えば、上記の抗体のいくつかの実施形態では、抗体の重鎖は、Ｃ末端リジンを追加で含む。
【００３７】
上記で要約した全ての態様及び実施形態に関して、特定の配列が参照される場合、本発明は、配列のバリアント体も含む。様々な実施形態では、バリアントは、列挙された配列の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上の置換を含むものとして特定することができる。
【００３８】
別の態様では、本発明は、先行する態様の抗体とヒトＬＩＬＲＢ２との結合について交差競合する抗体を特徴とする。
【００３９】
別の態様では、本発明は、ヒトＬＩＬＲＢ２と特異的に結合し、ＨＬＡ−Ｇ及び／またはＨＬＡ−Ａ２のヒトＬＩＬＲＢ２との結合を遮断する抗体を特徴とする。いくつかの実施形態では、遮断することは、ヒト単球由来マクロファージ、ヒト骨髄細胞、及び／またはＬＩＬＲＢ２を発現する細胞株を使用する、ＨＬＡ−Ｇ四量体遮断アッセイで決定される。いくつかの実施形態では、アッセイは、ＨＬＡ−Ｇ抱合化ビーズの使用を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、２０ｎＭ未満（例えば、１０ｎＭ未満、５ｎＭ未満、２ｎＭ未満、１．０ｎＭ未満、０．５ｎＭ未満、または０．２ｎＭ未満）のＥＣ５０でＨＬＡ−Ｇ四量体を遮断する。いくつかの実施形態では、抗体は、０．２ｎＭ未満のＥＣ５０でＨＬＡ−Ｇ四量体を遮断する。いくつかの実施形態では、遮断は、ヒト単球由来マクロファージを使用する、ＨＬＡ−Ａ２四量体遮断アッセイで決定される。いくつかの実施形態では、抗体は、２０ｎＭ未満（例えば、１０ｎＭ未満、５ｎＭ未満、２ｎＭ未満、１．０ｎＭ未満、０．５ｎＭ未満、または０．２ｎＭ未満）のＥＣ５０でＨＬＡ−Ａ２四量体を遮断する。いくつかの実施形態では、抗体は、０．２ｎＭ未満のＥＣ５０でＨＬＡ−Ａ２四量体を遮断する。抗体が、ヒトＬＩＬＲＢ２と特異的に結合し、ＨＬＡ−Ｇ及び／またはＨＬＡ−Ａ２のヒトＬＩＬＲＢ２との結合を遮断する前述の実施形態のいずれかにおいて、抗体は、本発明の任意の他の１つ以上の態様の任意の抗体であり得る。
【００４０】
別の態様では、本発明は、ヒトＬＩＬＲＢ２と特異的に結合する抗体であって、該抗体が、Ｍ２様マクロファージをＭ１様マクロファージに変換することが可能である、抗体を提供する。いくつかの実施形態では、Ｍ２様マクロファージのＭ１様マクロファージへの変換は、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１１、ＩＲＦ１、ＴＡＰ１、ＩＬ６Ｒ、及びＩＬ１５からなる群から選択される１つ以上の遺伝子（例えば、１、２、３、４、５、または６つの遺伝子全て）の増加した発現により示される。追加または代替として、いくつかの実施形態では、Ｍ２様マクロファージのＭ１様マクロファージへの変換は、ＩＬ−１０、ＣＣＬ２、ＴＧＦＢＲ２、ＣＸＣＬ１３、ＩＬ２１Ｒ、ＣＤ３６、ＣＲ１、Ｃ１ＱＢ、及びＴＧＦＢＩからなる群から選択される１つ以上の遺伝子（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、または９つの遺伝子）の低減した発現により示される。いくつかの実施形態では、Ｍ２様マクロファージのＭ１様マクロファージへの変換は、腫瘍組織培養アッセイを使用して検出される。いくつかの実施形態では、Ｍ２様マクロファージのＭ１様マクロファージへの変換は、ヒト単球由来マクロファージを使用する初代ヒトマクロファージアッセイを使用して検出される。いくつかの実施形態では、Ｍ２様マクロファージのＭ１様マクロファージへの変換は、ＴＮＦα、ＩＬ−１β、及びＩＬ−６からなる群から選択される１つ、２つ、もしくは３つ全てのサイトカインの増加した発現により示される、及び／またはＭ２様マクロファージのＭ１様マクロファージへの変換は、ＩＬ−１０及びＣＣＬ−２からなる群から選択される１つもしくは両方のサイトカインの低減した発現により示される。抗体がＭ２様マクロファージをＭ１様マクロファージに変換することが可能な前述の実施形態のいずれかにおいて、抗体は、本発明の任意の他の１つ以上の態様の任意の抗体であり得る。
【００４１】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、３．０ｎＭ未満（例えば、１．５ｎＭ未満、１．０ｎＭ未満、または７５０ｐＭ未満）の解離定数（ＫＤ）でＬＩＲＬＢ２と結合する。
【００４２】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、ＣＤＲ移植抗体、またはヒト抗体である。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、天然Ｆｃ領域、バリアントＦｃ領域、及び機能的Ｆｃ領域からなる群から選択されるＦｃ領域を含む。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、抱合抗体であるか、または検出可能に標識されている。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ３抗体、またはＩｇＧ４抗体である。
【００４３】
本発明の全ての態様において、任意のより詳細な実施形態が、より一般的な実施形態と一致しない場合、それは、一般的な実施形態から除外されていると見なすことができる。
【００４４】
別の態様では、本発明は、前述の態様うちののいずれかの抗体のポリペプチドをコードする核酸分子を提供する。
【００４５】
別の態様では、本発明は、前述の態様のうちのいずれかの抗体のポリペプチドをコードする核酸分子を含む、宿主細胞またはベクターを提供する。
【００４６】
別の態様では、本発明は、前述の態様のうちのいずれかの抗体または前述の態様のうちのいずれかの抗体をコードする核酸分子を含む、薬学的組成物を特徴とする。
【００４７】
別の態様では、本発明は、疾患の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、方法が、対象に、治療有効量の前述の態様のうちのいずれかの抗体を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、疾患は、がん（例えば、本明細書の他の場所に列挙されるがん種の例を参照されたい）である。いくつかの実施形態では、方法は、第２の治療手段（例えば、免疫療法またはがんワクチン）と組み合わせて抗体を施すことをさらに含む。いくつかの実施形態では、第２の治療手段は、ＰＤ−１療法及び／またはＩＣＯＳ療法を含む免疫療法である。
【００４８】
別の態様では、本発明は、抗腫瘍免疫応答の増強を、それを必要とする対象において行う方法であって、方法が、対象に、治療有効量の前述の態様のうちのいずれかを投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、方法は、第２の治療手段（例えば、免疫療法またはがんワクチン）と組み合わせて抗体を施すことをさらに含む。いくつかの実施形態では、第２の治療手段は、ＰＤ−１療法及び／またはＩＣＯＳ療法を含む免疫療法である。
【００４９】
他の態様では、本発明は、疾患または状態（例えば、本明細書に記載されるように、例えば、がん）の１つ以上の症状を予防、治療、改善するための抗体、薬学的組成物、及び組み合わせの使用、またはこれらの目的のための医薬品の調製のためのこれらの薬剤の使用を含む。
【００５０】
別の態様では、本発明は、前述の態様のうちのいずれかの抗体、または前述の態様のうちのいずれかの抗体をコードする核酸分子及び使用説明書を含む、薬学的組成物を含む、キットを提供する。
【００５１】
さらなる態様では、本発明は、核酸断片を含むオリゴヌクレオチドであって、核酸断片が、ＣＧＴＣＡＣＣＣＴＣＡＧＴＴＧＴＣＡＧ（配列番号１４３）、またはＴＣＣＧＴＧＴＡＡＴＣＣＡＡＧＡＴＧＣＴＧ（配列番号１５８）のオリゴヌクレオチド配列の少なくとも１６個の連続した核酸残基を含む、オリゴヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態では、核酸断片は、ＡＧＴＣＣＣＧＴＣＡＣＣＣＴＣＡＧＴＴＧＴＣＡＧＧＧＧＡＧ（配列番号１６９）、またはＴＣＧＴＡＴＣＣＧＴＧＴＡＡＴＣＣＡＡＧＡＴＧＣＴＧＡＴＴＴＴ（配列番号１７０）のオリゴヌクレオチド配列の少なくとも１６個の連続した核酸残基を含む。
【００５２】
本発明は、フォワードプライマー及びリバースプライマーを含むｑＰＣＲプライマーセットであって、フォワードプライマーが、配列番号１４３または１６９のオリゴヌクレオチド配列の少なくとも１６個の連続した核酸残基を含む核酸断片を含み、リバースプライマーが、配列番号１５８または１７０のオリゴヌクレオチド配列の少なくとも１６個の連続した核酸残基を含む核酸断片を含み、ｑＰＣＲプライマーセットが、任意で、配列番号１６７の少なくとも１６個の連続した残基を含むプローブをさらに含むキット内に含まれる、ｑＰＣＲプライマーセットを含む。
【００５３】
追加で、本発明は、生物学的試料中のＬＩＬＲＢ２発現のレベルを定量化する方法であって、方法が、（ａ）生物学的試料に由来するｃＤＮＡを取得することと、（ｂ）増幅産物を生成するために、請求項８７または８８に記載のオリゴヌクレオチド、または請求項８９に記載のｑＰＣＲプライマーセットもしくはキットを使用して、ｃＤＮＡに対してｑＰＣＲを実行することであって、ｑＰＣＲが、ＬＩＬＲＢ２に特異的である、実行することと、（ｃ）ＬＩＬＲＢ２発現のレベルを決定するために増幅産物を定量化することと、を含む、方法を含む。
【００５４】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載される（例えば、本明細書の上記及び他の場所）抗体の使用であって、疾患（例えば、がん；以下を参照されたい）の治療または予防を、それを必要とする対象において、治療有効量の抗体を対象に投与することにより行うための、使用を提供する。
【００５５】
さらなる態様では、本発明は、治療有効量の本明細書に記載される（例えば、本明細書の上記及びその他の場所）抗体の使用であって、抗腫瘍免疫応答の増強を、それを必要とする対象において、有効量の抗体を対象に投与することにより行うための、使用を含む。
【００５６】
上記の態様のいずれかにおいて、使用は、第２の治療手段（例えば、免疫療法（例えば、ＰＤ−１療法及び／またはＩＣＯＳ療法）またはがんワクチン）と組み合わせて抗体を施すことをさらに含み得る。
【図面の簡単な説明】
【００５７】
【図１】ＬＩＬＲＢ２発現骨髄細胞及びＨＬＡ−Ｇ発現腫瘍細胞のモデルを示す図である。抗ＬＩＬＲＢ２遮断抗体は、骨髄細胞上に発現されるＬＩＬＲＢ２と腫瘍細胞上に発現されるＨＬＡ−Ｇとの間で示される。
【図２Ａ−２Ｌ】ＨＬＡ−Ｇ四量体によるＤＣ上の成熟マーカーの下方調節を示すフローサイトメトリープロットである。成熟マーカーの発現は、培地のみ（白抜きヒストグラム、点線）で培養した、またはＨＬＡ−Ｇ四量体の非存在（白抜きヒストグラム、実線）もしくは存在下（塗りつぶされたヒストグラム）でサイトカインカクテルと共に成熟させたＬＩＬＲＢ２高／陽性ドナー（図２Ａ〜２Ｆ）及びＬＩＬＲＢ２低／陰性ドナー（図２Ｇ〜２Ｌ）未成熟樹状細胞（ｉＤＣ）に対するフローサイトメトリーにより評価した。図２Ａ及び図２Ｇに示されるように、ヒストグラムは生細胞でゲートされる。図２Ｂ及び２Ｈは、ＬＩＬＲＢ２発現を示し、図２Ｃ及び２Ｉは、ＣＤ１１ｃ発現を示し、図２Ｄ及び２Ｊは、ＨＬＡ−ＤＲ発現を示し、図２Ｅ及び２Ｋは、ＣＤ８６発現を示し、図２Ｆ及び２Ｌは、ＣＤ８０発現を示す。
【図３Ａ−Ｂ】キメラ抗ＬＩＬＲＢ２スクリーニングの結果を示す表である。網掛けのボックスは、各スクリーニングアッセイについての閾値基準を満たした結果を示す。
【図４】抗ＬＩＬＲＢ２キメラｍＡｂの細胞系ＬＩＬＲファミリー交差反応性スクリーニングの結果を示すグラフである。スクリーニングからのｈＬＩＬＲＢ２特異的（塗りつぶされたシンボル）及び交差反応性（白抜きシンボル）抗体が示される。アイソタイプ対照ｍＡｂに対して２倍を超える結合で検出された抗体は、ｈＬＩＬＲ交差反応性抗体として特定した（点線はこの閾値を表す）。
【図５】抗ＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂによる細胞系ＨＬＡ−Ｇ遮断の結果を示すグラフである。ＨＬＡ−Ｇ遮断抗ＬＩＬＲＢ２キメラｍＡｂは、白いバーで示され、ｈＬＩＬＲＢ２＋細胞への少なくとも５０％のＨＬＡ−Ｇ結合を遮断できるｍＡｂとして特定した（点線）。非遮断ＬＩＬＲＢ２キメラｍＡｂは、黒いバーで表示され、アイソタイプ対照ｍＡｂは、灰色のバーで表示される。
【図６】抗ＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂによる細胞系ＨＬＡ−Ａ２遮断の結果を示すグラフである。ＨＬＡ−Ａ２遮断抗ＬＩＬＲＢ２キメラｍＡｂは、白いバーで示され、ｈＬＩＬＲＢ２＋細胞への少なくとも５０％のＨＬＡ−Ａ２結合を遮断できるｍＡｂとして特定した（点線）。非遮断ＬＩＬＲＢ２キメラｍＡｂは、黒いバーで表示され、アイソタイプ対照ｍＡｂは、灰色のバーで表示される。
【図７】抗ＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂの細胞系機能アッセイの結果を示すグラフである。図７Ａは、アイソタイプに対するＴＮＦα産生を示す。図７Ｂは、アイソタイプに対するＩＬ−１０産生を示す。アイソタイプ対照は、灰色／灰色の破線で示される。
【図８】抗ＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂによるリガンド遮断対Ｍ１促進サイトカインの相関を示すグラフである。ＨＬＡ−Ｇ遮断（図８Ａ）及びＨＬＡ−Ａ２遮断（図８Ｂ）と、抗ＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂ（黒丸）に応答して生成されたＴＮＦαとの間の正の相関が、初代細胞アッセイで観察された。陰性対照ｍＡｂは、灰色で示される。
【図９】抗ＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂの初代細胞ヒト−ＮＨＰ交差反応性評価を示すグラフである。抗体は、ヒト（図９Ａ）、カニクイザル（図９Ｂ）、及びアカゲザル（図９Ｃ）の全血と共にインキュベートした。抗ＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂｓは、リンパ球（三角形）と比較して、単球（円）及び好中球（正方形）を含む、より大きな結合ＬＩＬＲＢ２＋集団を示した。全ての抗ＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂは、ヒト単球及び好中球と結合し、単一の抗ＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂは、カニクイザル及びアカゲザル単球及び好中球と異種間結合を示すことを見出した。バーは、種ごとに２人のドナーの平均値を示す。
【図１０】ＣＨＯで発現した推定アカゲザルＬＩＬＲＢ２（ＬＩＬＲＢｂ）に対する細胞上結合評価を示すグラフである。用量依存的かつ特異的な様式において推定アカゲザルＬＩＬＲＢｂ（図１０Ａ）と選択的に結合した抗ｈＬＩＬＲＢ２キメラｍＡｂ（黒）を選択する。この抗ｈＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂは、アカゲザルの密接に関連するタンパク質、ＬＩＬＲＢａと結合しなかった（図１０Ｂ）。アイソタイプ対照ｍＡｂ（灰色）は、どちらの細胞株にも結合しなかった。
【図１１】ヒト化抗ＬＩＬＲＢ２の特性評価の結果を示す表である。
【図１２】抗ＬＩＬＲＢ２ヒト化ｍＡｂの細胞系ＬＩＬＲファミリー交差反応性スクリーニングの結果を示すグラフである。スクリーニングからのｈＬＩＬＲＢ２特異的（塗りつぶされたシンボル）抗体が示される。ＬＩＬＲ交差反応性抗体は、特定されなかった。
【図１３】ヒト化抗ｈＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂの細胞系親和性決定を示すグラフである。試験した全ての抗ｈＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂは、細胞発現ｈＬＩＬＲＢ２（黒）と用量依存的な特異的結合を示したが、アイソタイプ対照ｍＡｂは、ｈＬＩＬＲＢ２（灰色）と結合しなかった。
【図１４】抗ＬＩＬＲＢ２ヒト化ｍＡｂによる細胞系ＨＬＡ−Ｇ遮断を示すグラフである。ヒト化抗ｈＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂｓ（黒、塗りつぶされた丸）は、サブナノモル範囲内の初代ヒトマクロファージに対するＨＬＡ−Ｇ：ｈＬＩＬＲＢ２相互作用を遮断する。アイソタイプ対照ｍＡｂ（灰色）及び非遮断、キメラ抗ｈＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂ（白抜き丸）は、ＨＬＡ−Ｇ及び細胞発現ｈＬＩＬＲＢ２の間の相互作用を妨害しなかった。
【図１５】抗ＬＩＬＲＢ２ヒト化ｍＡｂによる細胞系ＨＬＡ−Ａ２遮断を示すグラフである。ヒト化抗ｈＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂｓ（黒、塗りつぶされた丸）は、サブナノモル範囲内の初代ヒトマクロファージに対するＨＬＡ−Ａ２：ｈＬＩＬＲＢ２相互作用を遮断する。アイソタイプ対照ｍＡｂ（灰色）及び非遮断、キメラ抗ｈＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂ（白抜き丸）は、ＨＬＡ−Ａ２及び細胞発現ｈＬＩＬＲＢ２の間の相互作用を妨害しなかった。
【図１６】抗ＬＩＬＲＢ２ヒト化ｍＡｂの細胞系機能アッセイの結果を示すグラフである。ヒト化抗ｈＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂ（黒、塗りつぶされた丸）は、ＴＮＦα産生により測定されるＭ１促進活性（図１６Ａ）、及びＬＰＳ刺激ＨＭＤＭによるＩＬ−１０産生の減少により測定される抑制Ｍ２活性（図１６Ｂ）を示す。アイソタイプ対照（灰色）及び非リガンド遮断抗ｈＬＩＬＲＢ２キメラｍＡｂ（白抜き丸）を含む陰性対照ｍＡｂは、このアッセイでは活性を示さなかった。
【図１７】ＣＨＯ発現アカゲザルＬＩＬＲＢ２（ＬＩＬＲＢｂ）に対する細胞上結合評価の結果を示すグラフである。用量依存的かつ特異的な様式においてアカゲザルＬＩＬＲＢｂ（図１７Ａ）と選択的に結合した抗ｈＬＩＬＲＢ２ヒト化ｍＡｂ（黒）を選択する。この抗ｈＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂは、アカゲザルの密接に関連するタンパク質、ＬＩＬＲＢａと結合しなかった（図１７Ｂ）。アイソタイプ対照ｍＡｂ（灰色）は、どちらの細胞株にも結合しなかった。
【図１８】パリビズマブ対照対−ｌｏｇ１０（公称ｐ値）に対する治療に応答した遺伝子発現のｌｏｇ２（倍率変化）を示す火山プロットである。各ドットは、同じ治療を受けた全ての試料にわたる遺伝子発現の平均正規化変化を示す。計算は、ＭＡＴＬＡＢ（登録商標）で実行され、ｐ値は、ｔ検定関数を使用して実行することにより計算された（帰無仮説は、特定の治療についての全ての試料にわたる遺伝子発現の平均正規化ｌｏｇ２（倍率変化）が０であるということである）。
【図１９】各腎組織培養試料のＩｇＧ４対照に対して正規化された、各治療された試料（列）の各遺伝子（行）の遺伝子発現におけるｌｏｇ２（倍率変化）を示す階層型クラスターヒートマップである。リスト中の各遺伝子は、０．０５５未満の名目上のｐ値を有する少なくとも２回の処理に対して差次的発現を示した（表７参照）。セット１の遺伝子の発現は、一般的に処理に応答して下方調節され（灰色の枠）、セット２の遺伝子の発現は、一般的に処理に応答して上方調節される（黒枠）。ハウスキーピング遺伝子発現分布に基づいて、ノイズ閾値を０．３に設定する。ユークリッド距離計量は、完全な連鎖クラスタリングで使用され、Ｓｐｏｔｆｉｒｅで実行された。
【図２０】各リガンド遮断抗ＬＩＬＲＢ２抗体に対する各ドナーの応答スコアを示すグラフである。
【図２１】各非応答者、部分応答者、及び完全応答者の３つの抗ＬＩＬＲＢ２抗体の各々の単一培養シグネチャースコアを示すグラフである。
【図２２】抗体濃度に対する血清タンパク質の抗体との結合を示すグラフである。ＬＩＬＲＢ２抗体と結合する血清タンパク質は観察されなかった。
【図２３Ａ−Ｄ】全血サイトカイン放出アッセイの結果を示すグラフである。図２３Ａは、ＩＬ−４分泌を示し、図２３Ｂは、ＩＬ−６分泌を示し、図２３Ｃは、ＩＬ−８分泌を示し、及び図２３Ｄは、ＴＮＦα分泌を示す。アッセイを、３７℃で２４時間インキュベートした。次いで、血漿をサイトカインで単離し、１０サイトカインＭＳＤパネルを使用して測定した。データは、３人のドナーの平均値＋／−ＳＤである。
【図２４】好中球活性化アッセイの結果を示すグラフである。図２４Ａは、ＣＤ１１ｂ発現（幾何的平均値蛍光強度としての）を示し、図２４Ｂは、ＣＤ１１ｂ高細胞のパーセントを示し、図２４Ｃは、ＣＤ６２Ｌ発現（幾何的平均値蛍光強度としての）を示し、図２４Ｄは、ＣＤ６２Ｌ低細胞のパーセントを示し、各々が様々な抗体濃度に応答する。アッセイを、３７℃で２時間インキュベートした。好中球活性化マーカーにおける変化（ＣＤ１１ｂにおける増加及びＣＤ６２Ｌにおける減少）を、フローサイトメトリーによって評価した。データは、２人のドナーの平均値＋／−ＳＤである。
【図２５】３０ｍｇ／ｋｇ投与または３ｍｇ／ｋｇ投与後のカニクイザルにおける抗ＬＩＬＢＲ２抗体の血清濃度を経時的に示すグラフである。データは、３匹のサル個体の平均値＋／−ＳＤである。
【図２６】カニクイザルでの研究前及び抗ＬＩＬＲＢ２抗体の投薬後における完全血球計算（ＣＢＣ）アッセイによって測定した末梢血好中球集団を示すグラフである。データは、細胞の絶対数（図２６Ａ）及び全体のパーセント（図２６Ｂ）として示される。
【図２７】Ｂ１６．ＳＩＹ細胞を注入した後の経時的なマウスの腫瘍の増殖を示すグラフである。図２７Ａは、野生型（ＷＴ）マウスにおける腫瘍増殖を示し、図２７Ｂは、ＰｉｒＢノックアウト（Ｐｉｒｂ−／−）マウスにおける腫瘍増殖を示す。
【図２８】ＬＬＣ細胞を注入した後の経時的なマウスの腫瘍の増殖を示すグラフである。図２８Ａは、ＷＴマウスにおける腫瘍増殖を示し、図２８Ｂは、Ｐｉｒｂ−／−マウスにおける腫瘍増殖を示す。
【図２９】ＭＣ３８細胞を注入した後の経時的なマウスの腫瘍の増殖を示すグラフである。図２９Ａは、ＷＴマウスにおける腫瘍増殖を示し、図２９Ｂは、Ｐｉｒｂ−／−マウスにおける腫瘍増殖を示す。
【図３０】Ｊ−１９．ｈ１の重鎖（配列番号５３）及び軽鎖（配列番号５４）可変領域の配列を示す。
【図３１】パリビズマブで２４時間処置した８０個の腫瘍由来の１７３個の腫瘍試料からのＩＦＮγ  ＰＤ応答スコアのヒストグラムである。
【図３２】腎細胞癌腫、頭頸部癌、及び肺癌の３つの適応症間のＪ−１９．ｈ１に対するＰＤ応答率を説明するＶｅｎｎ図及びチャートである。
【図３３】正規化遺伝子発現に基づいて、未処理試料について計算されたＫｅｙｔｒｕｄａシグネチャースコアを示す、一連のグラフである（生の遺伝子発現をハウスキーピング遺伝子及び陰性対照プローブに対して正規化し、次いで、ｌｏｇ２変換する）。
【図３４】左パネルは、Ｊ−１９．ｈ１、ペンブロリズマブ、またはＪ−１９．ｈ１と組み合わされたペンブロリズマブに応答する１８個の頸部腫瘍について計算された平均ＩＦＮγ  ＰＤシグネチャースコアを示す表である。
【発明を実施するための形態】
【００５８】
一般に、本発明は、白血球免疫グロブリン様受容体Ｂ２（ＬＩＬＲＢ２）に対する抗体、例えば、疾患（例えば、がん）を治療するために有用な抗体を特徴とする。この発明は、同時に、（１）ＬＩＬＲＢ２に対して特異的な（他のＬＩＬＲＡ及びＬＩＬＲＢファミリーメンバーに結合しないという意味で）、（２）マクロファージにおいてＨＬＡ−Ｇ及び／またはＨＬＡ−Ａ２のＬＩＬＲＢ２への結合を遮断することができる、及び（３）接触されたマクロファージにおいて炎症促進性表現型を促進することができる、抗体を生成することが可能であるという発見に一部基づく。実際に、本出願は、そのような抗体の３つの独立したファミリーの特定を開示し、上記の特性を有する抗体が腫瘍関連マクロファージを誘導して抗がん特性を示すことができることを開示する。これらの特性、ならびにヒトの生理機能に関連した動物モデルにおける好ましい薬物動態及び安全特性に一部基づいて、開示される抗体は、ヒトにおける治療的使用のための候補である。
【００５９】
ＬＩＬＲＢ２（例えば、ヒトＬＩＬＲＢ２）に特異的に結合する抗体が提供される。ＬＩＬＲＢ２（例えば、ヒトＬＩＬＲＢ２）に結合する抗体を形成することができる抗体重鎖及び軽鎖も提供される。加えて、１つ以上の特定の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体、重鎖、及び軽鎖が提供される。また、ＬＩＬＲＢ２（例えば、ヒトＬＩＬＲＢ２）との結合について、本明細書に説明される抗体のいずれかと交差競合する抗体も提供される。いくつかの態様では、本発明は、ＬＩＬＲＢ２（例えば、ヒトＬＩＬＲＢ２）と特異的に結合し、ＨＬＡ−Ｇ及び／またはＨＬＡ−Ａ２のヒトＬＩＬＲＢ２との結合を遮断する、抗体を提供する。また、ＬＩＬＲＢ２（例えば、ヒトＬＩＬＲＢ２）と特異的に結合し、Ｍ２様マクロファージをＭ１様マクロファージに変換することが可能である抗体も提供される。ＬＩＬＲＢ２（例えば、本明細書に提供されるＬＩＬＲＢ２抗体のいずれか）に対する抗体をコードするポリヌクレオチドが提供される。また、抗体のその重鎖または軽鎖をコードするポリヌクレオチドも提供される。また、本明細書に開示されるポリヌクレオチドを含有する宿主細胞も提供される。さらに、本明細書に提供される抗体またはポリヌクレオチドのいずれかを含む医薬組成物が提供される。ＬＩＬＲＢ２に対する抗体を使用する治療方法が提供される。このような方法としては、がんを治療する方法が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６０】
本明細書で使用される節の見出しは、構成目的のみのためであり、説明される主題を限定するものと解釈されるべきではない。
【００６１】
特許出願、特許公報、及びＧｅｎｂａｎｋ受託番号を含む、本明細書に引用される全ての参考文献は、各個々の参考文献が参照によりその全体が組み込まれることが具体的かつ個別に示されているかのように、参照により本明細書に組み込まれる。
【００６２】
本明細書で説明または言及される技術及び手法は、当業者によって概してよく理解され、従来の方法論を使用して一般に用いられており、そのような広く利用されている方法学は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ３ｒｄ．ｅｄｉｔｉｏｎ（２００１）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，（２００３））、ｔｈｅ  ｓｅｒｉｅｓ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）：ＰＣＲ  ２：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｍ．Ｊ．ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎ，Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ  ａｎｄ  Ｇ．Ｒ．Ｔａｙｌｏｒ  ｅｄｓ．（１９９５）），Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，ｅｄｓ．（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ａｎｄ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．（１９８７））、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  （Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ，ｅｄ．，１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ），ｅｄ．，１９８７）、Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．Ｍａｔｈｅｒ  ａｎｄ  Ｐ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ，１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ，Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，ａｎｄ  Ｄ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ，ｅｄｓ．，１９９３−８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ  ａｎｄ  Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．）、Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．Ｍｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ，ｅｄｓ．，１９８７）、ＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ（Ｍｕｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９４）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９１）、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，１９９９）、Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ  ａｎｄ  Ｐ．Ｔｒａｖｅｒｓ，１９９７）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ，１９９７）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ．，ｅｄ．，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，１９８８−１９８９）、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａ���ｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄ  ａｎｄ  Ｃ．Ｄｅａｎ，ｅｄｓ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，２０００）、Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｅ．Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９９９）、Ｔｈｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．Ｚａｎｅｔｔｉ  ａｎｄ  Ｊ．Ｄ．Ｃａｐｒａ，ｅｄｓ．，Ｈａｒｗｏｏｄ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９５）、及びＣａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｖ．Ｔ．ＤｅＶｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９３）、ならびにそれらの最新版において説明されている。
【００６３】
Ｉ．定義
別途定義されない限り、本開示に関連して使用される科学用語及び技術用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有するものとする。さらに、文脈上別途要求されない限り、または明らかに指定されない限り、単数形の用語は、複数形の用語を含むものとし、複数形の用語は単数形の用語を含むものとする。様々な出典または参考文献間の定義におけるあらゆる矛盾に対し、本明細書で提供される定義が優先される。
【００６４】
本明細書に説明される発明の実施形態は、実施形態「からなる」及び／または「から本質的になる」を含むことが理解される。本明細書で使用する場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、別途指定されない限り、複数の対象を含む。本明細書における用語「または」の使用は、選択肢が相互に排他的であることを意味するものではない。
【００６５】
本出願では、「または」の使用は、明白に記述されない限り、または当業者によって理解されない限り、「及び／または」を意味する。多項従属請求項の文脈では、「または」の使用は、複数の先行する独立または従属請求項を参照する。
【００６６】
用語「核酸分子」、「核酸」、及び「ポリヌクレオチド」は、互換的に使用されてもよく、ヌクレオチドのポリマーを指す。このようなヌクレオチドのポリマーは、天然及び／または非天然のヌクレオチドを含有してもよく、ＤＮＡ、ＲＮＡ、及びＰＮＡを含むが、これらに限定されない。「核酸配列」は、核酸分子またはポリヌクレオチドを含むヌクレオチドの直鎖配列を指す。
【００６７】
「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は、互換的に使用され、アミノ酸残基のポリマーを指し、最小長に限定されない。このようなアミノ酸残基のポリマーは、天然または非天然アミノ酸残基を含有してもよく、アミノ酸残基のペプチド、オリゴペプチド、二量体、三量体、及び多量体を含むが、これらに限定されない。完全長タンパク質及びそれらの断片の両方が、定義に包含される。用語はまた、ポリペプチドの発現後修飾、例えば、グリコシル化、シアリル化、アセチル化、リン酸化なども含む。さらに、本開示の目的のために、「ポリペプチド」は、タンパク質が所望の活性を維持する限り、天然の配列に対する欠失、付加、及び（一般に天然で保存的な）置換などの修飾を含むタンパク質を指す。これらの修飾は、部位特異的変異原性によるような計画的なものであってもよいし、またはＰＣＲ増幅によってタンパク質もしくはエラーを生成する宿主の変異によるような偶発的なものであってもよい。
【００６８】
抗原またはエピトープに「特異的に結合する」という用語は、当該技術分野においてよく理解されている用語であり、そのような特異的な結合を決定するための方法もまた、当該技術分野において周知である。分子が、他の細胞または物質とよりも、特定の細胞または物質と、より頻繁に、より迅速に、より長い持続期間で、及び／またはより高い親和性で反応または会合した場合、分子は「特異的結合」または「優先的結合」を示すと言われる。抗体は、他の物質に結合するよりも高い親和性、結合力で、より容易に、及び／またはより長い持続時間で結合する場合、標的に「特異的に結合する」または「優先的に結合する」。例えば、ＬＩＬＲＢ２エピトープに特異的または優先的に結合する抗体は、他のＬＩＬＲＢ２エピトープまたは非ＬＩＬＲＢ２エピトープに結合するよりも高い親和性、結合力で、より容易に、及び／またはより長い持続時間でこのエピトープに結合する抗体である。また、この定義を読むことによって、例えば、第１の標的に特異的または優先的に結合する抗体（または部分もしくはエピトープ）が、第２の標的に特異的または優先的に結合してもよいし、しなくてもよいということも理解される。このように、「特異的結合」または「優先的結合」は、排他的結合を（含むことができるが）必ずしも必要としない。必ずしもそうではないが、一般的には、結合への言及は優先的な結合を意味する。「特異性」とは、結合タンパク質の抗原に選択的に結合する能力を指す。
【００６９】
本明細書で使用される場合、「実質的に純粋」とは、少なくとも５０％純粋、例えば、少なくとも９０％純粋、少なくとも９５％純粋、少なくとも９８％純粋、または少なくとも９９％である（すなわち、汚染物質を含まない）材料を指す。
【００７０】
「交差競合する」という用語は、ある分子の、例えば、同じエピトープの全部または一部に結合することによる、別の分子との競合結合を指す。交差競合は、本明細書に説明される実験（例えば、バイオレイヤー干渉法）を使用して、例えば、第１の抗体がシグナルに結合された後に、第２の抗体をセンサへ添加する際に、陽性応答シグナルを全く検出しないことによって、決定することができる。特定の実施形態では、あるＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２との結合について別のＬＩＬＲＢ２抗体と交差競合する。このようなＬＩＬＲＢ２抗体間の交差競合の特性評価は、例えば、実施例３に説明されている。
【００７１】
本明細書の「抗体」という用語は、最も広義に使用され、それらが所望の抗原結合活性を呈する限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性（例えば、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー）及び三重特異性）、ならびに抗体断片を含むがこれらに限定されない、様々な抗体構造を包含する。
【００７２】
抗体という用語は、例えば、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｄｉ−ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ（単一ドメイン抗体）、及び（Ｆａｂ’）２（化学的に連結されたＦ（ａｂ’）２を含む）などの抗原に結合することができる断片を含むが、これらに限定されない。抗体のパパイン消化は、各々が単一の抗原結合部位を有する「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片、及び容易に結晶化する能力を反映した名称を持つ残存「Ｆｃ」断片を産生する。ペプシン処理により、２つの抗原結合部位を有し、かつ依然として抗原を架橋することができるＦ（ａｂ’）２断片を得る。抗体という用語はまた、キメラ抗体、ヒト化抗体、及びマウス、ヒト、カニクイザルなどの様々な種の抗体を含むが、これらに限定されない。さらに、本明細書で提供される全ての抗体構築物について、他の生物由来の配列を有するバリアントもまた企図される。したがって、抗体のヒト型が開示された場合、当業者は、ヒト配列ベースの抗体を、マウス、ラット、ネコ、イヌ、ウマなどの配列に変換する方法を理解するであろう。抗体断片はまた、一本鎖ｓｃＦｖ、タンデムｄｉ−ｓｃＦｖ、ダイアボディ、タンデムｔｒｉ−ｓｄｃＦｖ、ミニボディなどのいずれかの配向を含む。抗体断片はまた、ナノボディ（ｓｄＡｂ、単一の単量体ドメイン、例えば、軽鎖を含まない、重鎖の可変ドメインの対を有する抗体）を含む。抗体断片は、いくつかの実施形態において、特定の種（例えば、ヒトｓｃＦｖまたはマウスｓｃＦｖ）であるとして言及され得る。これは、構築物の供給源というよりは、むしろ非ＣＤＲ領域の少なくとも一部の配列を意味する。
【００７３】
「モノクローナル抗体」という用語は、抗体の実質的に均質な集団の抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る可能性のある天然型の変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原部位を対象としている。さらに、異なる決定基（エピトープ）を対象とする異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基を対象としている。したがって、モノクローナル抗体の試料は、抗原上の同じエピトープに結合することができる。「モノクローナル」という修飾語は、実質的に同種の抗体集団から得られるという抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものと解釈されるべきではない。例えば、モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，１９７５，Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５によって最初に説明されたハイブリドーマ法によって作製され得るか、または米国特許第４，８１６，５６７号などに説明される組み換えＤＮＡ法により作製され得る。モノクローナル抗体はまた、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４に説明される手法を使用して生成されたファージライブラリから単離され得る。
【００７４】
用語「ＣＤＲ」は、Ｋａｂａｔ付番スキームによって定義される相補性決定領域を意味する。Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）。例示的なＣＤＲ（ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３）は、アミノ酸残基２４〜３４のＬ１、５０〜５６のＬ２、８９〜９７のＬ３、３１〜３５ＢのＨ１、５０〜６５のＨ２、及び９５〜１０２のＨ３において生じる。ＣＤＲはまた、添付の図面のいずれか１つ以上に示されるように提供することもできる。可変重鎖領域（ＶＨ）におけるＣＤＲ１を除いて、ＣＤＲは一般に、超可変ループを形成するアミノ酸残基を含む。抗体内の様々なＣＤＲは、それらの適切な数及び鎖の種類によって指定することができ、ａ）ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３、ｂ）ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３、ｃ）ＬＣＤＲ−１，ＬＣＤＲ−２，ＬＣＤＲ−３，ＨＣＤＲ−１，ＨＣＤＲ−２、及びＨＣＤＲ−３、またはｄ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３などが挙げられるが、これらに限定されない。用語「ＣＤＲ」はまた、ＨＶＲまたは超可変ループを含む「超可変領域」を包含するために本明細書中で使用される。例示的な超可変ループは、アミノ酸残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、９１〜９６（Ｌ３）、２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、及び９６〜１０１（Ｈ３）において生じる。（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７）。
【００７５】
本明細書で使用される場合、用語「重鎖可変領域」またはＶＨは、少なくとも３つの重鎖ＣＤＲを含む領域を指す。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は、３つのＣＤＲ及び少なくともＦＲ２及びＦＲ３を含む。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は、少なくとも重鎖ＨＣＤＲ１、フレームワーク（ＦＲ）２、ＨＣＤＲ２、ＦＲ３、及びＨＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域はまた、ＦＲ１の少なくとも一部分及び／またはＦＲ４の少なくとも一部分を含む。
【００７６】
本明細書で使用される場合、用語「重鎖定常領域」は、少なくとも３つの重鎖定常領域、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含む領域を指す。もちろん、特に指定されない限り、ドメイン内の非機能変化型欠失及び変化は、「重鎖定常領域」という用語の範囲内に包含される。非限定的な例示的な重鎖定常領域は、γ、δ、及びαを含む。非限定的な例示的な重鎖定常領域はまた、ε及びμも含む。各重鎖定常領域は、抗体アイソタイプに対応する。例えば、γ定常領域を含む抗体はＩｇＧ抗体であり、δ定常領域を含む抗体はＩｇＤ抗体であり、α定常領域を含む抗体はＩｇＡ抗体である。さらに、μ定常領域を含む抗体はＩｇＭ抗体であり、ε定常領域を含む抗体はＩｇＥ抗体である。特定のアイソタイプは、サブクラスにさらに細分化することができる。例えば、ＩｇＧ抗体としては、ＩｇＧ１（γ１定常領域を含む）、ＩｇＧ２（γ２定常領域を含む）、ＩｇＧ３（γ３定常領域を含む）、及びＩｇＧ４（γ４定常領域を含む）抗体が挙げられるが、これらに限定されない。ＩｇＡ抗体としては、ＩｇＡ１（α１定常領域を含む）及びＩｇＡ２（α２定常領域を含む）抗体が挙げられるが、これらに限定されない。ＩｇＭ抗体としては、ＩｇＭ１及びＩｇＭ２が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７７】
本明細書で使用される場合、用語「重鎖」は、リーダー配列の有無にかかわらず、少なくとも重鎖可変領域を含むポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、重鎖は、重鎖定常領域の少なくとも一部分を含む。本明細書で使用される場合、用語「全長重鎖」は、リーダー配列の有無にかかわらず、重鎖可変領域及び重鎖定常領域を含むポリペプチドを指す。
【００７８】
本明細書で使用される場合、ＶＬの「軽鎖可変領域」という用語は、少なくとも３つの軽鎖ＣＤＲを含む領域を指す。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、３つのＣＤＲ及び少なくともＦＲ２及びＦＲ３を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、少なくとも軽鎖ＬＣＤＲ１、フレームワーク（ＦＲ）２、ＬＣＤＲ２、ＦＲ３、及びＬＣＤＲ３を含む。例えば、軽鎖可変領域は、軽鎖ＣＤＲ１、フレームワーク（ＦＲ）２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、及びＣＤＲ３を含み得る。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域はまた、ＦＲ１の少なくとも一部分及び／またはＦＲ４の少なくとも一部分を含む。
【００７９】
本明細書で使用される場合、「軽鎖定常領域」という用語はまた、軽鎖定常ドメイン、ＣＬを含む領域を指す。非限定的な例示的な軽鎖定常領域は、λ及びκを含む。もちろん、特に指定されない限り、ドメイン内の非機能変化型欠失及び変化は、「軽鎖定常領域」という用語の範囲内に包含される。
【００８０】
本明細書で使用される場合、用語「軽鎖」は、リーダー配列の有無にかかわらず、少なくとも軽鎖可変領域を含むポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、軽鎖は、軽鎖定常領域の少なくとも一部分を含む。本明細書で使用される場合、用語「全長軽鎖」は、リーダー配列の有無にかかわらず、軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域を含むポリペプチドを指す。
【００８１】
本明細書における目的のために、「アクセプターヒトフレームワーク」は、以下に定義されるように、ヒト免役グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに由来する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワークまたは重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免役グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに由来するアクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含むことができるか、またはそれはアミノ酸配列変化を含有することができる。いくつかの実施形態では、アミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、または２以下である。いくつかの実施形態では、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、ＶＬヒト免役グロブリンフレームワーク配列またはヒトコンセンサスフレームワーク配列と、配列において同一である。
【００８２】
「親和性」は、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の、総計の非共有性相互作用の強度を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は、一般に、平衡解離定数（ＫＤ）によって表すことができる。親和性は、当該技術分野で既知の一般的な方法（例えば、ＥＬＩＳＡ  ＫＤ、ＫｉｎＥｘＡ、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）、及び／または表面プラズモン共鳴装置（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）装置）など、本明細書に説明されるものを含む）によって測定することができる。
【００８３】
本明細書で使用する場合、用語「ＫＤ」は、抗体−抗原相互作用の平衡解離定数を指す。
【００８４】
いくつかの実施形態では、抗体の「ＫＤ」は、約１０応答単位（ＲＵ）で固定化抗原ＣＭ５チップを有するＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）を２５℃で使用する表面プラズモン共鳴アッセイを使用することによって測定される。簡潔には、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）は、供給者の説明書に従ってＮ−エチル−Ｎ′−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）で活性化される。抗原を、１０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）で５μｇ／ｍＬ（約０．２μＭ）になるまで希釈した後に、５μＬ／分の流速で注入して、およそ１０応答単位（ＲＵ）のカップリングされたタンパク質を得る。抗原の注入に続いて、１Ｍのエタノールアミンを注入して、未反応の基を遮断する。動態測定のために、ポリペプチド、例えば、全長抗体の段階希釈液を、０．０５％のＴＷＥＥＮ−２０（商標）界面活性剤を含むＰＢＳ（ＰＢＳＴ）中に、２５℃で、およそ２５μＬ／分の流速で注入する。会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）を、単純な１対１Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン３．２）を使用して、会合センサグラム及び解離センサグラムを同時に適合することによって計算する。平衡解離定数（ＫＤ）を、比率ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして計算する。例えば、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１を参照されたい。オン速度が、上の表面プラズモン共鳴アッセイによって、１０６Ｍ−１ｓ−１を超える場合、オン速度は、撹拌されたキュベットを備えるストップトフロー装着分光光度計（Ａｖｉｖ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）または８０００−シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）などの分光計において測定される、漸増濃度の抗原の存在下で、２５℃で、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中２０ｎＭ抗−抗原抗体の蛍光発光強度（励起＝２９５ｎｍ、発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍ帯域通過）の増加または減少を測定する、蛍光消光技法を使用することによって、決定することができる。
【００８５】
いくつかの実施形態では、該２つの値（例えば、ＫＤ値）の間の差異は、参照／比較値の関数と実質的に同じ、例えば、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、及び／または約１０％未満である。
【００８６】
いくつかの実施形態では、該２つの値（例えば、ＫＤ値）の間の差異は、参照／比較分子の値の関数と実質的に異なる、例えば、約１０％超、約２０％超、約３０％超、約４０％超、及び／または約５０％超である。
【００８７】
「表面プラズモン共鳴」とは、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）システム（ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＡＢ、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  ｃｏｍｐａｎｙ、Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ及びＰｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）を使用した、バイオセンサマトリックス内のタンパク質濃度の変化の検出によってリアルタイム生体特異的相互作用の分析を可能にする、光学現象を意味する。さらなる説明については、Ｊｏｎｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ａｎｎ．Ｂｉｏｌ．Ｃｌｉｎ．５１：１９−２６を参照されたい。
【００８８】
「バイオレイヤー干渉法」は、バイオセンサチップ上の固定化されたタンパク質の層及び内部参照層から反射された光の干渉パターンを分析する光学分析技術を指す。バイオセンサチップに結合した分子の数における変化は、リアルタイムで測定することができる干渉パターンにおける変動をもたらす。バイオレイヤー干渉法のための非限定的な例示的なデバイスは、ＦＯＲＴＥＢＩＯ（登録商標）ＯＣＴＥＴ（登録商標）ＲＥＤ９６システム（Ｐａｌｌ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）である。例えば、Ａｂｄｉｃｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３７７：２０９−２７７を参照されたい。
【００８９】
用語「ｋｏｎ」は、本明細書で使用される場合、抗原への抗体の会合についての速度定数を指す。具体的には、速度定数（ｋｏｎ及びｋｏｆｆ）及び平衡解離定数（ＫＤ）は、一価の抗原（例えば、ＬＩＬＲＢ２抗原）を含むＩｇＧ（二価）を使用して測定される。「Ｋｏｎ」、「ｋｏｎ」、「会合速度定数」、または「ｋａ」は、本明細書において互換的に使用される。値は、結合タンパク質のその標的抗原への結合速度、または抗体と抗原との間の複合体形成速度を示し、以下の式で示される。
【００９０】
抗体（「Ａｂ」）＋抗原（「Ａｇ」）→Ａｂ−Ａｇ。
【００９１】
用語「ｋｏｆｆ」は、本明細書で使用される場合、抗体／抗原複合体からの抗体の解離についての速度定数を指す。ｋｏｆｆはまた、「Ｋｏｆｆ」または「解離速度定数」とも表される。この値は、抗体のその標的抗原からの解離速度、またはＡｂ−Ａｇ複合体の遊離抗体及び抗原への経時的な分離速度を示し、以下の式で表される。
【００９２】
Ａｂ＋Ａｇ←Ａｂ−Ａｇ。
【００９３】
用語「生物学的活性」は、分子の任意の１つ以上の生物学的特性（インビボで見出されるように天然に存在するか、または組み換え手段によって提供もしくは有効化される）を指す。生物学的特性としては、レセプターの結合、細胞増殖の誘導、細胞増殖の阻害、成熟または活性化（例えば、骨髄細胞の成熟または活性化）の誘導、成熟または活性化（例えば、骨髄細胞の成熟または活性化）の阻害、サイトカインの発現または分泌（例えば、炎症性サイトカインまたは免疫抑制性サイトカイン）の誘導、アポトーシスの誘導、及び酵素活性が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ＬＩＬＲＢ２タンパク質の生物学的活性は、例えば、Ｍ２様マクロファージのＭ１様マクロファージへの変換を含む。
【００９４】
本明細書で使用される場合、「Ｍ２様マクロファージ」は、参照に対して１つ以上の免疫抑制特性によって特徴付けられたマクロファージを指す。免疫抑制特性は、成熟マーカーまたは活性化マーカーの発現の減少（例えば、１つ以上の共刺激マーカーの発現の減少（例えば、ＣＤ８０またはＣＤ８６）、抗原提示の減少（例えば、ＨＬＡ発現による）、炎症性サイトカインの発現の減少（例えば、ＴＮＦα、ＩＬ−６、またはＩＬ−１β）、及び調節性または抑制性マーカーの発現の増加（例えば、ＩＬ−１０またはＣＣＬ−２の発現または分泌の増加）を含む。免疫抑制特性は、追加的にまたは代替的に、当該技術分野で既知の方法に従って、免疫原性もしくは炎症性遺伝子発現の減少、または免疫抑制もしくは免疫調節遺伝子発現の増加によって特徴付けられ得る。免疫抑制特性は、追加的にまたは代替的に、他の免疫細胞の活性化及び／または増殖を阻害する能力などの、１つ以上の機能的性質によって特徴付けられ得る。マクロファージをＭ２様マクロファージとして特定するための好適なアッセイは、当該技術分野において既知であり、本明細書に説明される。例えば、初代ヒトマクロファージアッセイを使用して、マクロファージがＭ２様マクロファージであるか、またはＭ１様マクロファージであるかを決定することができる。いくつかの例では、Ｍ２様マクロファージは、腫瘍関連マクロファージである。マクロファージがＭ２様マクロファージであるかどうかを決定する文脈において、同じまたは異なる起源の対照マクロファージ（例えば、未処理対照またはＬＰＳ処理された対照）によって、参照を提供することができる。候補マクロファージが腫瘍関連マクロファージである実施形態では、対照は、（例えば、健康なドナー由来の）非腫瘍関連マクロファージであり得る。あるいは、参照は、所定の閾値、例えば、技術分野で既知の免疫抑制閾値由来のパラメータであり得る。
【００９５】
本明細書で使用される場合、「Ｍ１様マクロファージ」は、参照に対して１つ以上の免疫原性（例えば、免疫賦活性または活性化の）特性によって特徴付けられたマクロファージを指す。免疫原性特性は、成熟マーカーまたは活性化マーカーの発現の増加（例えば、１つ以上の共刺激マーカーの発現の増加（例えば、ＣＤ８０またはＣＤ８６）、抗原提示の増加（例えば、ＨＬＡ発現による）、活性化サイトカインの発現の増加（例えば、ＴＮＦα、ＩＬ−６、またはＩＬ−１β）、及び調節性または抑制性マーカーの発現の減少（例えば、ＩＬ−１０またはＣＣＬ−２の発現または分泌の減少）を含む。免疫原性特性は、追加的にまたは代替的に、当該技術分野で既知の方法に従って、免疫原性もしくは炎症性遺伝子発現の増加、または免疫抑制もしくは免疫調節遺伝子発現の減少によって特徴付けられ得る。免疫原性特性は、追加的にまたは代替的に、他の免疫細胞を活性化する及び／または増殖する能力などの、１つ以上の機能的性質によって特徴付けられ得る。マクロファージをＭ１様マクロファージとして特定するための好適なアッセイは、当該技術分野において既知であり、本明細書に説明される。例えば、初代ヒトマクロファージアッセイを使用して、マクロファージがＭ２様マクロファージであるか、またはＭ１様マクロファージであるかを決定することができる。いくつかの例では、Ｍ１様マクロファージは、腫瘍関連マクロファージ（例えば、ＬＩＬＲＢ２に対する抗体に曝露されている腫瘍関連マクロファージ）である。マクロファージがＭ１様マクロファージであるかどうかを決定する文脈において、同じまたは異なる起源の対照マクロファージ（例えば、未処理対照または免疫抑制された対照）によって、参照を提供することができる。候補マクロファージが腫瘍関連マクロファージである実施形態では、対照は、（例えば、健康なドナー由来の）非腫瘍関連マクロファージであり得る。あるいは、参照は、所定の閾値、例えば、技術分野で既知の免疫原性閾値由来のパラメータであり得る。
【００９６】
「Ｍ２様マクロファージのＭ１様マクロファージへの変換」は、Ｍ１様マクロファージの任意の１つ以上の特性の増加、Ｍ２様マクロファージの任意の１つ以上の特性の減少、またはそれらの組み合わせを検出する際に特定することができる。
【００９７】
本明細書で使用される場合、「ヒト単球由来マクロファージ」、「ヒト単球分化マクロファージ」、または「ＨＭＤＭ」は、初代ヒト単球に由来しているマクロファージを指す。いくつかの実施形態では、初代ヒトマクロファージは、全血からの（例えば、ＰＢＭＣ集団からの）単球に由来する。いくつかの実施形態では、初代ヒト単球を、Ｍ−ＣＳＦの存在下で７日間インキュベートした。ヒト単球由来マクロファージは、実施例６に説明される方法を使用して得ることができる。
【００９８】
本明細書で使用する場合、用語「四量体遮断アッセイ」とは、以下のステップを含むアッセイを指す。
【００９９】
（１）１×１０５のマクロファージ（例えば、ヒト単球分化マクロファージ（ＨＭＤＭ））を、９６ウェル丸底組織培養プレートのウェルに播種し、
（２）５０μＬの試験抗体（例えば、ＬＩＬＲＢ２抗体またはアイソタイプ対照）を、緩衝液（例えば、ＦＡＣＳ緩衝液（２％のＨＩ−ＦＢＳ（Ｓｉｇｍａ）＋０．０５％のアジ化ナトリウムを含有する１ｘＤＰＢＳ））に添加し、
（３）４℃で３０分間インキュベートし、
（４）細胞を、緩衝液（例えば、ＦＡＣＳ緩衝液）中で洗浄し、１μｇ／ｍＬの四量体（例えば、蛍光色素標識された四量体、例えば、ＨＬＡ−ＧまたはＨＬＡ−Ａ２四量体）を含有する５０μＬの緩衝液（例えば、ＦＡＣＳ緩衝液）中で再懸濁し、
（５）４℃で３０〜６０分間、光から保護してインキュベートし、
（６）細胞を緩衝液（例えば、ＦＡＣＳ緩衝液）中で洗浄し、
（７）四量体結合を（例えば、フローサイトメトリーを使用して）定量化する。
【０１００】
本明細書で使用される場合、「キメラ抗体」という用語は、重鎖及び／または軽鎖の一部分が特定の源または種に由来し、一方、重鎖及び／または軽鎖の残りの部分の少なくとも一部が、異なる源または種に由来する抗体を指す。いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、第１の種（例えば、マウス、ラット、カニクイザルなど）由来の少なくとも１つの可変領域及び第２の種（例えば、ヒト、カニクイザルなど）由来の少なくとも１つの定常領域を含む抗体を指す。いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、少なくとも１つのマウス可変領域及び少なくとも１つのヒト定常領域を含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、少なくとも１つのカニクイザル可変領域及び少なくとも１つのヒト定常領域を含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体の可変領域の全ては第１の種由来であり、キメラ抗体の定常領域の全ては第２の種由来である。上述のように、キメラ構築物はまた、機能的断片であり得る。
【０１０１】
本明細書で使用される場合、「ヒト化抗体」とは、非ヒト可変領域のフレームワーク領域中の少なくとも１つのアミノ酸を、ヒト可変領域からの対応するアミノ酸で置換している抗体を指す。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、少なくとも１つのヒト定常領域またはそれらの断片を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、抗体断片、例えば、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、（Ｆａｂ’）２などである。ヒト化という用語はまた、非ヒト免疫グロブリンの最小配列を含有する、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはそれらの断片（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、または抗体の他の抗原結合サブ配列）である、非ヒト（例えば、マウス）抗体の形態も意味する。ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット、またはウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基に置換された、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）を含むことができる。いくつかの事例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基に置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも、移入されたＣＤＲまたはフレームワーク配列にも見出されないが、抗体性能をさらに洗練し、最適化するために含まれる残基を含むことができる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むことができ、ここで、ＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全ては、非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全ては、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体はまた、典型的にはヒト免疫グロブリンのものである、免疫グロブリン定常領域またはドメイン（Ｆｃ）の少なくとも一部分も含むことができる。ヒト化抗体の他の形態は、１つ以上のＣＤＲ（ＣＤＲ  Ｌ１、ＣＤＲ  Ｌ２、ＣＤＲ  Ｌ３、ＣＤＲ  Ｈ１、ＣＤＲ  Ｈ２、及び／またはＣＤＲ  Ｈ３）を有し、これは元の抗体に対して変更され、また元の抗体からの１つ以上のＣＤＲ「に由来する」１つ以上のＣＤＲとも称される。理解されるように、ヒト化配列は、その一次配列によって特定することができ、必ずしも抗体が作成されたプロセスを意味しない。
【０１０２】
本明細書で使用される場合、「ＣＤＲ移植抗体」とは、１つ以上の第１の（非ヒト）種の相補性決定領域（ＣＤＲ）が第２の（ヒト）種のフレームワーク領域（ＦＲ）に移植されているヒト化抗体を指す。
【０１０３】
本明細書で使用される「ヒト抗体」は、ヒトにおいて産生される抗体、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）マウスなどのヒト免疫グロブリン遺伝子を含む非ヒト動物において産生される抗体、ならびにファージディスプレイ（Ｖａｕｇｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１４：３０９−３１４、Ｓｈｅｅｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ），９５：６１５７−６１６２、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１）などのインビトロ法を使用して選択される抗体を包含し、ここで、抗体レパートリーは、ヒト免疫グロブリン配列に基づく。用語「ヒト抗体」は、ヒト配列である配列の属を意味する。したがって、この用語は、抗体が作成されたプロセスを指定しないが、関連する配列の属を指定する。
【０１０４】
「機能的Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域の「エフェクター機能」を保有する。例示的な「エフェクター機能」には、Ｆｃ受容体結合；Ｃ１ｑ結合；ＣＤＣ；ＡＤＣＣ；食作用；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体；ＢＣＲ）の下方調節などが含まれる。このようなエフェクター機能は、一般に、結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）と組み合わせるためのＦｃ領域を必要とし、様々なアッセイを使用して評価することができる。
【０１０５】
「天然配列Ｆｃ領域」は、天然で見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。天然配列ヒトＦｃ領域には、天然配列ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域（非Ａ及びＡアロタイプ）、天然配列ヒトＩｇＧ２  Ｆｃ領域、天然配列ヒトＩｇＧ３  Ｆｃ領域、及び天然配列ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域、ならびにそれらの天然型のバリアントが含まれる。
【０１０６】
「バリアントＦｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾によって天然配列Ｆｃ領域のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、「バリアントＦｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾によって天然配列Ｆｃ領域のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含むが、天然配列Ｆｃ領域の少なくとも１つのエフェクター機能を保持する。いくつかの実施形態では、バリアントＦｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して少なくとも１つのアミノ酸置換、例えば、天然配列Ｆｃ領域中または親ポリペプチドのＦｃ領域中に約１〜約１０個のアミノ酸置換、及び好ましくは約１〜約５個のアミノ酸置換を有する。いくつかの実施形態では、本明細書のバリアントＦｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域及び／または親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約８０％の配列同一性、それらと少なくとも約９０％の配列同一性、それらと少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を保有する。
【０１０７】
「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を表す。いくつかの実施形態では、ＦｃγＲは、天然ヒトＦｃＲである。いくつかの実施形態では、ＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（ガンマ受容体）に結合するものであり、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体を含み、それらの受容体の対立遺伝子バリアント、あるいはスプライス形態を含む。ＦｃγＲＩＩ受容体は、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「阻害受容体」）を含み、これらは、主にその細胞質ドメインが異なる同様のアミノ酸配列を有する。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）をその細胞質ドメインにおいて含有し、阻害化受容体ＦｃγＲＩＩＢは、免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）をその細胞質ドメインにおいて含有する。例えば、Ｄａｅｒｏｎ，１９９７，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２０３−２３４を参照されたい。ＦｃＲは、例えば、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，１９９１，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  ９：４５７−９２、Ｃａｐｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ，４：２５−３４、及びｄｅ  Ｈａａｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：３３０−４１に概説されている。将来的に特定されるものも含む他のＦｃＲは、本明細書では「ＦｃＲ」という用語に包含される。
【０１０８】
用語「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」はまた、母体のＩｇＧの胎児への転移（Ｇｕｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９７６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７及びＫｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９）、及び免疫グロブリンの恒常性の調節に関与する新生児受容体である、ＦｃＲｎも含む。ＦｃＲｎへの結合を測定する方法は既知である。例えば、Ｇｈｅｔｉｅ  ａｎｄ  Ｗａｒｄ，１９９７，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，１８（１２）：５９２−５９８、Ｇｈｅｔｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１５（７）：６３７−６４０、Ｈｉｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９（８）：６２１３−６２１６、及びＷＯ２００４／９２２１９（Ｈｉｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．）を参照されたい。
【０１０９】
「エフェクター機能」は、抗体アイソタイプにより様々である、抗体のＦｃ領域に起因し得る生物活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃｌｑ結合及び補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介型細胞毒性（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方調節、及びＢ細胞活性化が挙げられる。
【０１１０】
「抗体依存性細胞媒介型細胞毒性」または「ＡＤＣＣ」は、ある特定の細胞毒性細胞（例えば、ＮＫ細胞、好中球、及びマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）と結合した分泌Ｉｇが、これらの細胞毒性エフェクター細胞が抗原保有標的細胞と特異的に結合して、続いて細胞毒を用いて標的細胞を死滅させることができるようにする細胞毒性の形態を指す。ＡＤＣＣを媒介する初代細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現し、一方、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上のＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，１９９１，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  ９：４５７−９２の４６４頁の表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号、同第５，８２１，３３７号、または同第６，７３７，０５６号（Ｐｒｅｓｔａ）に説明されるもののような、インビトロＡＤＣＣアッセイを実施してもよい。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞としては、ＰＢＭＣ及びＮＫ細胞が挙げられる。あるいは、または加えて、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、動物モデル、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）９５：６５２−６５６に開示される動物モデルにおいて評価され得る。改変されたＦｃ領域アミノ酸配列を有する追加のポリペプチドバリアント（バリアントＦｃ領域を有するポリペプチド）及び増加または減少したＡＤＣＣ活性については、例えば、米国特許第７，９２３，５３８号及び米国特許第７，９９４，２９０号に説明されている。
【０１１１】
「補体依存性細胞毒性」または「ＣＤＣ」とは、補体の存在下での標的細胞の溶解を指す。従来の補体経路の活性化は、補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）の（適切なサブクラスの）抗体への結合によって開始され、これらの抗体は、それらの同族抗原に結合している。補体活性化を評価するために、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ２０２：１６３に説明されるようなＣＤＣアッセイを実施してもよい。改変されたＦｃ領域アミノ酸配列を有するポリペプチドバリアント（バリアントＦｃ領域を有するポリペプチド）及び増加または減少したＣ１ｑ結合能力については、例えば、米国特許第６，１９４，５５１（Ｂ１）号、米国特許第７，９２３，５３８号、米国特許第７，９９４，２９０号、及びＷＯ１９９９／５１６４２に説明されている。例えば、Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４も参照されたい。
【０１１２】
「改変された」ＦｃＲ結合親和性またはＡＤＣＣ活性を有するポリペプチドバリアントは、親ポリペプチドまたは天然型配列Ｆｃ領域を含むポリペプチドと比較して、増強もしくは低下したＦｃＲ結合活性及び／またはＡＤＣＣ活性のいずれかを有するものである。ＦｃＲへの「結合の増加を示す」ポリペプチドバリアントは、親ポリペプチドよりも優れた親和性で少なくとも１つのＦｃＲと結合する。ＦｃＲへの「結合の減少を示す」ポリペプチドバリアントは、親ポリペプチドよりも低い親和性で少なくとも１つのＦｃＲと結合する。ＦｃＲへの結合の減少を示すこのようなバリアントは、ＦｃＲへの感知できる結合をほとんど保有しないか、または全く保有しない場合があり、例えば、天然配列のＩｇＧ  Ｆｃ領域と比較して、ＦｃＲに０〜２０％結合する。
【０１１３】
親抗体よりも「より効果的にヒトエフェクター細胞の存在下で抗体依存性細胞媒介型細胞毒性（ＡＤＣＣ）を媒介する」ポリペプチドバリアントは、アッセイで使用されるポリペプチドバリアント及び親抗体の量が本質的に同じである場合に、ＡＤＣＣの媒介においてより効果的である、インビトロまたはインビボのポリペプチドバリアントである。一般に、このようなバリアントは、本明細書に開示されるようなインビトロＡＤＣＣアッセイを使用して特定されるが、例えば、動物モデルなどにおいて、ＡＤＣＣ活性を決定するための他のアッセイまたは方法が企図される。
【０１１４】
本明細書で使用される場合、「実質的に類似した」または「実質的に同じ」という用語は、当業者が、２つ以上の値の間の差異を、該値により測定される生物学的特質の文脈において、生物学的及び／または統計学的に有意性がほとんどないか、または全くないと見なすような、２つ以上の数値間の十分に程度の高い類似性を意味する。いくつかの実施形態では、２つ以上の実質的に類似した数値は、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、または５０％のうちのいずれか１つ程度以下異なる。
【０１１５】
「実質的に異なる」という語句は、本明細書で使用される場合、当業者が、２つの値の間にある差異を、該値により測定される生物学的特質の文脈において、統計学的に有意性があると見みなすような、２つの数値間の十分に程度の高い差異を意味する。いくつかの実施形態では、２つの実質的に異なる数値は、１０％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％のうちのいずれか１つ程度を超えて異なる。
【０１１６】
「実質的に減少した」という語句は、本明細書で使用される場合、当業者が、２つの値の間にある差異を、該値により測定される生物学的特質の文脈において、統計学的に有意性があると見なすような、数値と参照数値と間の十分に程度の高い減少を意味する。いくつかの実施形態では、実質的に減少した数値は、参照値と比較して、１０％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％のうちのいずれか１つ程度を超えて減少する。
【０１１７】
用語「リーダー配列」は、哺乳動物細胞由来のポリペプチドの分泌を促進するポリペプチドのＮ末端に位置するアミノ酸残基の配列を指す。リーダー配列は、成熟タンパク質を形成する、哺乳動物細胞由来のポリペプチドの輸送の際に切断することができる。リーダー配列は、天然または合成であり得、それらが結合しているタンパク質に対して異種または同種であり得る。
【０１１８】
「天然配列」ポリペプチドは、自然界に見出されるポリペプチドと同じアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。したがって、天然配列ポリペプチドは、任意の哺乳動物由来の天然型のポリペプチドのアミノ酸配列を有することができる。そのような天然配列ポリペプチドは、天然から単離することができるか、または組み換えもしくは合成手段によって産生することができる。「天然配列」ポリペプチドという用語は、具体的には、ポリペプチドの天然型の切断形態または分泌形態（例えば、細胞外ドメイン配列）、天然型のバリアント形態（例えば、オルタナティブスプライシング形態）、及びポリペプチドの天然型の対立遺伝子バリアントを包含する。
【０１１９】
ポリペプチド「バリアント」は、配列同一性最大パーセントを達成するために、必要に応じて配列を整合し、ギャップを導入した後に、天然配列ポリペプチドと少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性を有し、配列同一性の一部としていずれの保存的置換も考慮に入れない、生物学的に活性なポリペプチドを意味する。このようなバリアントとしては、例えば、１つ以上のアミノ酸残基がポリペプチドのＮ末端またはＣ末端に付加または欠失されたポリペプチドが挙げられる。いくつかの実施形態では、バリアントは、少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性を有するであろう。いくつかの実施形態では、バリアントは、少なくとも約９０％のアミノ酸配列同一性を有するであろう。いくつかの実施形態では、バリアントは、天然配列ポリペプチドと少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性を有するであろう。
【０１２０】
本明細書で使用される場合、ペプチド、ポリペプチド、または抗体配列に対する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」及び「相同性」は、配列同一性最大パーセントを達成するために、必要に応じて配列を整合させ、ギャップを導入した後の、配列同一性の一部としていずれの保存的置換も考慮しない、特定のペプチドもしくはポリペプチド配列におけるアミノ酸残基と同一である、候補配列におけるアミノ酸残基の割合として定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のためのアライメントは、当該技術分野における技術の範囲内である様々な方式で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、またはＭＥＧＡＬＩＧＮ（商標）（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して、達成することができる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。
【０１２１】
アミノ酸置換は、ポリペプチド中の１つのアミノ酸の別のアミノ酸との置換を含み得るが、これに限定されない。例示的な置換を表１に示す。アミノ酸置換は、目的の抗体中に導入されてもよく、その産物は、所望の活性、例えば、保持／改善された抗原結合、減少した免疫原性、または改善されたＡＤＣＣもしくはＣＤＣについてスクリーニングされてもよい。
【０１２２】
表１．
【表１】
2021506344.tif 000003
アミノ酸は、以下の一般的な側鎖特性に従って分類されてもよい。
【０１２３】
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０１２４】
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスと交換することを伴うであろう。
【０１２５】
用語「ベクター」は、宿主細胞中においてクローン化されたポリヌクレオチドまたは増殖することができるポリヌクレオチドを含有するように操作することができるポリヌクレオチドを説明するために使用される。ベクターは、以下の要素：複製起点、目的のポリペプチドの発現を調節する１つ以上の調節配列（例えば、プロモーター及び／またはエンハンサー）、及び／または１つ以上の選択可能なマーカー遺伝子（例えば、抗生物質耐性遺伝子、及び比色アッセイにおいて使用することができる遺伝子、例えば、βガラクトシダーゼ）、のうちの１つ以上を含むことができる。用語「発現ベクター」は、宿主細胞における目的のポリペプチドを発現するために使用されるベクターを指す。
【０１２６】
「宿主細胞」は、ベクターもしくは単離ポリヌクレオチドのレシピエントであり得るか、またはそれらである細胞を指す。宿主細胞は、原核細胞または真核細胞であり得る。例示的な真核細胞としては、霊長類または非霊長類動物細胞などの哺乳動物細胞、酵母などの真菌細胞、植物細胞、及び昆虫細胞が挙げられる。非限定的な例示的な哺乳動物細胞としては、ＮＳＯ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞（Ｃｒｕｃｅｌｌ）、ならびに２９３及びＣＨＯ細胞、ならびにそれらの誘導体、例えば、それぞれ２９３−６Ｅ及びＤＧ４４細胞が挙げられるが、これらに限定されない。宿主細胞は、単一の宿主細胞の子孫を含み、子孫は、天然の、偶発の、または意図的な変異のため、元の親細胞と（形態学において、またはゲノムのＤＮＡ相補体において）必ずしも完全に同一でなくてもよい。宿主細胞は、本明細書で提供されるポリヌクレオチド（複数可）を用いてインビボで形質移入された細胞を含む。
【０１２７】
本明細書で使用される場合、「単離された」という用語は、典型的には天然に見出されるかまたは産生される少なくともいくつかの構成要素から分離されている分子を指す。例えば、ポリペプチドは、それが中に産生された細胞の構成要素の少なくともいくつかから分離されている場合、「単離された」と称される。ポリペプチドは、発現後に細胞によって分泌され、それが産生した細胞からポリペプチドを含有する上清を物理的に分離する場合、ポリペプチドを「単離している」と考えられる。同様に、ポリヌクレオチドは、それが典型的に天然に見出されるより大きなポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡポリヌクレオチドの場合には、ゲノムＤＮＡまたはミトコンドリアＤＮＡなど）の一部でない場合、または、例えばＲＮＡポリヌクレオチドの場合には、それが産生された細胞の構成要素の少なくともいくつかから分離されている場合、「単離された」と称される。したがって、宿主細胞内部のベクターに含有されるＤＮＡポリヌクレオチドは、「単離された」と称され得る。
【０１２８】
用語「個体」または「対象」は、動物、例えば哺乳動物を指すために本明細書で互換的に使用される。いくつかの実施形態では、ヒト、げっ歯類、サル、ネコ、イヌ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、哺乳動物の実験動物、哺乳動物の家畜、哺乳動物の競技用動物、及び哺乳動物のペット、を含むがこれらに限定されない、哺乳動物を治療する方法が提供される。いくつかの例では、「個体」または「対象」は、疾患または障害のための治療を必要とする個体または対象を指す。いくつかの実施形態では、治療を受ける対象は、対象が、治療と関連性のある障害を有しているか、または障害に罹患する危険性が十分にあると特定されているという事実を示す、患者であり得る。
【０１２９】
本明細書で使用する場合、「疾患」または「障害」とは、治療が必要とされる及び／または所望される状態を指す。
【０１３０】
本明細書で使用する場合、「がん」及び「腫瘍」は、動物における任意の異常な細胞または組織の成長もしくは増殖を指す互換的な用語である。本明細書で使用する場合、「がん」及び「腫瘍」という用語は、固体及び血液／リンパ性癌を包含し、また、悪性、前悪性、及び異形成などの両性腫瘍も包含する。がんの例としては、がん腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病が挙げられるが、これらに限定されない。そのようながんのより具体的な非限定的な例としては、腎癌（例えば、腎細胞癌、例えば、乳頭状腎細胞癌）、扁平上皮癌、中皮腫、奇形腫、小細胞肺癌、下垂体癌、食道癌、星状細胞腫、軟部肉腫、肺癌（例えば、非小細胞肺癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌）、腹膜癌、肝細胞癌、胃腸癌（例えば、胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ））、膵臓癌、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、直腸癌、子宮内膜または子宮癌、唾液腺癌、肝臓癌、前立腺癌、陰門癌、甲状腺癌、胸腺腫、肝癌、脳癌、神経膠腫、神経膠芽腫、子宮内膜癌、精巣癌、胆管癌、胆管肉腫、胆嚢癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）、黒色腫（例えば、ブドウ膜黒色腫）、褐色細胞腫、傍神経節腫、腺様嚢胞癌、及び様々な種類の頭頸部癌（例えば、扁平頭頸部癌）が挙げられる。
【０１３１】
本明細書で使用される場合、「治療」とは、有益なまたは所望の臨床結果を得るためのアプローチである。本明細書で使用される場合、「治療」は、ヒトを含む哺乳動物における疾患の治療の任意の投与または適用を網羅する。この開示の目的のための、有益または所望の臨床結果としては、１つ以上の症状の緩和、疾患の程度の縮小、疾患の拡散（例えば、転移、例えば、肺またはリンパ節への転移）の予防または遅延、疾患の再発の予防または遅延、疾患の進行の遅延または減速、疾患状態の緩和、疾患またはその疾患の進行の阻害、疾患またはその進行の阻害もしくは減速、その発達の抑止、及び緩解（部分的かまたは全体的かに関わらず）のうちのいずれか１つ以上が挙げられるが、これらに限定されない。増殖性疾患の病理学的結果の軽減もまた、「治療」に包含される。本明細書に提供される方法は、治療のこれらの態様のうちの任意の１つ以上を企図する。上記と一致して、治療という用語は、障害の全て態様の１００パーセントの除去を必要としない。
【０１３２】
「寛解」は、抗ＬＩＬＲＢ２抗体を投与しない場合と比較した、１つ以上の症状の軽減または改善を意味する。「寛解」はまた、症状の持続時間における短縮または低減も含む。
【０１３３】
がんの文脈において、用語「治療する」は、がん細胞の増殖を阻害する、がん細胞の複製を阻害する、全体腫瘍負荷を低減する、及び疾患に関連する１つ以上の症状を寛解する、のうちのいずれかまたは全てを含む。
【０１３４】
用語「生体試料」は、生きているものまたは以前生きていたもの由来の、ある量の物質を意味する。このような物質としては、血液（例えば、全血）、血漿、血清、尿、羊水、滑液、内皮細胞、白血球、単球、他の細胞、器官、組織、骨髄、リンパ節、及び脾臓が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３５】
用語「対照」は、分析物を含有しない（「陰性対照」）、または分析物を含有する（「陽性対照」）ことが知られている組成物を指す。陽性対照は、分析物の既知の濃度を含むことができる。「対照」、「陽性対照」、及び「標準物質」は、分析物の既知の濃度を含む組成物を指すために、本明細書で互換的に使用され得る。「陽性対照」は、アッセイ性能特性を確立するために使用することができ、試薬（例えば、分析物）の完全性の有用な指標である。
【０１３６】
「所定のカットオフ」及び「所定のレベル」は、一般的に、所定のカットオフ／レベルに対するアッセイ結果を比較することによって、診断の／予後の／治療の有効性の結果を評価するために使用される、アッセイカットオフ値を指し、ここで、所定のカットオフ／レベルは、様々な臨床パラメータ（例えば、疾患の重症度、進行、非進行、改善など）と既に連結または会合されている。本開示は、例示的な所定のレベルを提供し得るが、カットオフ値がイムノアッセイの性質（例えば、用いられる抗体など）に依存して変動し得ることは周知である。本開示に基づくそのような他のイムノアッセイのイムノアッセイ特異的カットオフ値を得るために、本明細書の開示を他のイムノアッセイに適応させることは、当業者内でさらに既知である。所定のカットオフ／レベルの正確な値はアッセイ間で変動し得るが、本明細書に説明されるような相関（存在する場合）は一般的に適用し得る。
【０１３７】
用語「阻害」または「阻害する」は、任意の表現型特性の低下もしくは停止、またはその特性の発生率、程度、もしくは可能性の低下もしくは停止を指す。「低減する」または「阻害する」とは、参照と比較して活性、機能、及び／または量を減少、低減、または抑止することである。いくつかの実施形態では、「低減する」または「阻害する」とは、２０％以上の全体的な減少を生じる能力を意味する。いくつかの実施形態では、「低減する」または「阻害する」とは、５０％以上の全体的な減少を生じる能力を意味する。いくつかの実施形態では、「低減する」または「阻害する」とは、７５％、８５％、９０％、または９５％以上の全体的な減少を生じる能力を意味する。いくつかの実施形態では、上述した量は、同じ期間の対照用量（例えば、プラセボ）と比較して、ある期間にわたって阻害または減少する。本明細書で使用される場合、「参照」とは、比較目的のために使用される任意の試料、標準、またはレベルを指す。参照は、健康な及び／または無疾患の試料から得ることができる。いくつかの例では、参照は、未処理の試料から得ることができる。いくつかの例では、参照は、対象個体の無疾患または未処理の試料から得られる。いくつかの例では、参照は、対象または患者ではない１または複数の健康な個体から得られる。
【０１３８】
本明細書で使用される場合、「疾患の発症を遅延させる」とは、疾患（例えば、がん）の発症を留保し、妨害し、減速し、遅延させ、安定させ、抑制し、及び／または延期することを意味する。この遅延は、治療されている病歴及び／または個体に応じて異なる期間のものであり得る。当業者に明らかであるように、十分な、または有意な遅延は、事実上、個体が疾患を発症しないという点で予防を包含し得る。例えば、転移の発症などの末期がんを遅延させることができる。
【０１３９】
本明細書で使用される場合、「予防」とは、疾患にかかりやすい可能性があるが、まだ疾患を有すると診断されていない対象における疾患の発症または再発に対する予防を提供することを含む。特に指定しない限り、用語「減少する」、「阻害する」、または「予防する」は、全期間の完全な予防を意味しないか、またはそれを必要としない。
【０１４０】
本明細書で使用する場合、機能または活性を「抑制」することは、目的の条件またはパラメータを除いてそれ以外は同じ条件と比較した場合、あるいは、他の条件と比較して、機能または活性を低下させることである。例えば、腫瘍の増殖を抑制する抗体は、抗体の非存在下での腫瘍の増殖速度と比較して、腫瘍の増殖速度を低下させる。
【０１４１】
物質／分子、アゴニスト、またはアンタゴニストの「治療有効量」とは、個体の疾患状態、年齢、性別、及び体重などの要因、ならびに個体における所望の応答を引き出す物質／分子、アゴニスト、またはアンタゴニストの能力により変動し得る。また、治療有効量とは、治療的に有益な効果が、物質／分子、アゴニスト、またはアンタゴニストのあらゆる中毒作用または有害効果を上回る量のことである。治療有効量は、１回以上の投与で送達されてもよい。治療有効量は、所望の治療結果及び／または予防結果を達成するために必要な投与量及び期間での有効な量を指す。
【０１４２】
「予防有効量」は、所望の予防結果を達成するために必要な投与量及び期間での有効な量を指す。必ずしもそうではないが、典型的には、予防用量は疾患の早期段階以前または早期段階で対象において使用されるため、予防有効量は治療有効量よりも少ないであろう。
【０１４３】
「医薬製剤」及び「医薬組成物」という用語は、活性成分（複数可）の生物学的活性が有効になるような形態であり、かつ製剤が投与される対象にとって許容不可能なほど毒性であるいかなる追加の成分も含有しない調製物を指す。そのような製剤は、無菌であり得る。
【０１４４】
「薬学的に許容される担体」は、非毒性の固体、半固体、または液体の充填剤、希釈剤、封入材料、製剤補助剤、または対照に投与するための「医薬組成物」を一緒に含む治療剤と使用するための当該技術分野で慣用の担体を指す。薬学的に許容される担体は、用いられる投与量及び濃度でレシピエントに対して非毒性であり、製剤の他の成分と適合性である。薬学的に許容される担体は、用いられる製剤に適切である。
【０１４５】
「滅菌」製剤は、無菌であるか、または生きた微生物及びそれらの胞子を本質的に含まない。
【０１４６】
「ＰＤ−１療法」は、ＰＤ−１のＰＤ−Ｌ１及び／またはＰＤ−Ｌ２への結合を調節する任意の療法を包含する。ＰＤ−１療法は、例えば、ＰＤ−１及び／またはＰＤ−Ｌ１と直接相互作用し得る。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１療法は、ＰＤ−１に直接に結合する及び／またはその活性に影響を与える分子を含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１療法は、ＰＤ−Ｌ１に直接に結合する及び／またはその活性に影響を与える分子を含む。したがって、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１に結合し、ＰＤ−１のＰＤ−Ｌ１への相互作用を遮断する抗体は、ＰＤ−１療法的である。所望のＰＤ−１療法のサブタイプが意図される場合、ＰＤ−１と直接相互作用する分子を含む療法については「ＰＤ−１特異的」、またはＰＤ−Ｌ１と直接相互作用する分子を含む療法については「ＰＤ−Ｌ１特異的」という語句によって、適宜指定されるであろう。特に指定されない限り、ＰＤ−１療法に関する本明細書に含有される全ての開示は、一般的なＰＤ−１療法、ならびにＰＤ−１特異的及び／またはＰＤ−Ｌ１特異的療法に適用される。非限定的な例示的なＰＤ−１療法としては、ニボルマブ（ＢＭＳ−９３６５５８、ＭＤＸ−１１０６、ＯＮＯ−４５３８）；ピディリズマブ、ランブロリズマブ／ペンブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）、ＭＫ−３４７５）；デュルバルマブ；ＲＧ−７４４６；ＭＳＢ−００１０７１８Ｃ；ＡＭＰ−２２４；ＢＭＳ−９３６５５９（抗ＰＤ−Ｌ１抗体）；ＡＭＰ−５１４；ＭＤＸ−１１０５；ＡＮＢ−０１１；抗ＬＡＧ−３／ＰＤ−１；抗ＰＤ−１  Ａｂ（ＣｏＳｔｉｍ）；抗ＰＤ−１  Ａｂ（Ｋａｄｍｏｎ  Ｐｈａｒｍ．）；抗ＰＤ−１  Ａｂ（Ｉｍｍｕｎｏｖｏ）；抗ＴＩＭ−３／ＰＤ−１  Ａｂ（ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏ）；抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂ（ＣｏＳｔｉｍ／Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ＭＥＤＩ−４７３６（抗ＰＤ−Ｌ１抗体、Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ＲＧ７４４６／ＭＰＤＬ３２８０Ａ（抗ＰＤ−Ｌ１抗体、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）；ＫＤ−０３３、ＰＤ−１アンタゴニスト（Ａｇｅｎｕｓ）；ＳＴＩ−Ａ１０１０；ＳＴＩ−Ａ１１１０；ＴＳＲ−０４２；及びプログラムされた死１（ＰＤ−１）またはプログラムされた死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）を対象とする他の抗体が挙げられる。
【０１４７】
１つ以上のさらなる治療剤「と組み合わせた」投与には、同時（同時進行）及び任意の順序での連続または順次投与が含まれる。
【０１４８】
「同時に」という用語は、投与の少なくとも一部が同時に重複するか、または１つの治療剤の投与が別の治療剤の投与に対して短期間内に収まる場合の、２つ以上の治療剤の投与を指すために本明細書で使用される。例えば、２つ以上の治療剤は、指定された分数を超えない程度の時間間隔で投与される。
【０１４９】
用語「順次」は、１つ以上の薬剤（複数可）の投与が、１つ以上の他の薬剤（複数可）の投与を中止した後に継続する場合の、２つ以上の治療剤の投与を指すために本明細書で使用される。例えば、２つ以上の治療剤の投与は、およそ指定された分数を超える時間間隔で投与される。
【０１５０】
本明細書で使用される場合、「と併せて」とは、ある治療法を、別の治療法に加えて投与することを指す。したがって、「と併せて」とは、ある治療法を、別の治療法の投与前、投与中、または投与後に個体へ投与することを指す。
【０１５１】
用語「添付文書」は、治療薬の市販パッケージに通例含まれる、そのような治療薬の使用に関する適応症、用途、投与量、投与、複合療法、禁忌、及び／または警告についての情報を含有する説明書を指すために使用される。
【０１５２】
「製品」とは、少なくとも１つの試薬、例えば、疾患もしくは障害（例えば、がん）の治療のための医薬品、または本明細書に説明されるバイオマーカーを特異的に検出するためのプローブを含む、任意の製造物（例えば、パッケージもしくは容器）またはキットである。いくつかの実施形態では、製造物またはキットは、本明細書に説明される方法を実施するためのユニットとして、推奨、流通、または販売される。
【０１５３】
用語「標識」及び「検出可能な標識」は、検出可能な特異的結合対のメンバー間に反応（例えば、結合）をもたらすために、抗体またはその分析物に結合した部分を意味する。特異的結合対の標識されたメンバーは、「検出可能に標識された」と称される。したがって、用語「標識された結合タンパク質」は、結合タンパク質の特定をもたらす、組み込まれた標識を有するタンパク質を指す。いくつかの実施形態では、標識は、視覚的または機器的手段、例えば、放射標識されたアミノ酸の組み込み、またはマーカーされたアビジン（例えば、蛍光マーカー、または光学法もしくは比色法によって検出することができる酵素活性を含有するストレプトアビジン）によって検出することができるビオチニル部分のポリペプチドへの結合によって、検出可能なシグナルを生成することができる、検出可能なマーカーである。ポリペプチドのための標識の例としては、放射性同位体または放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏ、または１５３Ｓｍ）、色素原、蛍光標識（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニドリン光体）、酵素標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）、化学発光マーカー、ビオチニル基、二次レポーターによって認識される所定のポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）、及びガドリニウムキレートなどの磁気剤が挙げられるが、これらに限定されない。イムノアッセイのために一般に用いられる標識の代表的な例としては、光を生成する部分、例えば、アクリジニウム化合物、及び蛍光を生成する部分、例えば、フルオレセインが挙げられる。この点に関して、部分それ自体は検出可能に標識されない場合があるが、さらに別の部分と反応した際に検出可能となり得る。
【０１５４】
用語「コンジュゲート」とは、治療剤または細胞毒性剤などの第２の化学部分に化学的に連結されている抗体を指す。「薬剤」という用語には、化学化合物、化学化合物の混合物、生物学的巨大分子、または生物学的材料から抽出された抽出物が含まれる。いくつかの実施形態では、治療剤または細胞毒性剤には、百日咳毒素、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭素エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルチシン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、及びピュロマイシン、ならびにそれらの類似体または相同体が挙げられるが、これらに限定されない。イムノアッセイの文脈において用いられる場合、コンジュゲート抗体は、検出抗体として使用される検出可能に標識された抗体であり得る。
【０１５５】
ＩＩ．抗ＬＩＬＲＢ２抗体
ＬＩＬＲＢ２を対象とする新規抗体が提供される。抗ＬＩＬＲＢ２抗体としては、ヒト化抗体、キメラ抗体、マウス抗体、ヒト抗体、ならびに本明細書で考察される重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲを含む抗体が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ＬＩＬＲＢ２に結合する単離された抗体が提供される。いくつかの実施形態では、ＬＩＬＲＢ２に結合するモノクローナル抗体が提供される。
【０１５６】
いくつかの態様では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＣＤＲを含む。
【０１５７】
いくつかの態様では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、（ａ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＣＤＲを含む。
【０１５８】
いくつかの態様では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、（ａ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＣＤＲを含む。
【０１５９】
いくつかの態様では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、（ａ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＣＤＲを含む。
【０１６０】
いくつかの実施形態では、本明細書に説明される抗ＬＩＬＲＢ２抗体と競合する、抗ＬＩＬＲＢ２抗体が提供される。いくつかの実施形態では、結合について、本明細書で提供される抗体のいずれかと競合（すなわち、交差競合）する抗体を作成及び／または使用することができる。
【０１６１】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全ての重鎖ＣＤＲ配列を含む。
【０１６２】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全ての軽鎖ＣＤＲ配列を含む。
【０１６３】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、（ａ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全ての重鎖ＣＤＲ配列を含む。
【０１６４】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、（ａ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全ての軽鎖ＣＤＲ配列を含む。
【０１６５】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、（ａ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全ての重鎖ＣＤＲ配列を含む。
【０１６６】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、（ａ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全ての軽鎖ＣＤＲ配列を含む。
【０１６７】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、（ａ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全ての重鎖ＣＤＲ配列を含む。
【０１６８】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、（ａ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全ての軽鎖ＣＤＲ配列を含む。
【０１６９】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される６つのＣＤＲのいずれかは、サブパーツとして、本明細書で提供される他のＣＤＲのいずれかと、構築物におけるＣＤＲの合計が６つであるように組み合わせることができる。したがって、いくつかの実施形態では、第１の抗体からの２つのＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ−Ｈ１及びＣＤＲ−Ｈ２）は、第２の抗体からの４つのＣＤＲ（ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３）と組み合わせることができる。いくつかの実施形態では、１つ以上のＣＤＲ中の２つ以下の残基を置換して、それらのバリアントを得ることができる。いくつかの実施形態では、１、２、３、４、５、または６つのＣＤＲにおいて、２つ以下の残基を置換することができる。
【０１７０】
特定の実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する可変重鎖（ＶＨ）ドメイン配列を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２に結合する能力を保有する。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１３において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外部の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号１３のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
【０１７１】
いくつかの実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１７２】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体が提供され、この抗体は、配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２に結合する能力を保有する。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１４において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号１４のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
【０１７３】
いくつかの実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１７４】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列、及び配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨドメイン配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有し、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬドメイン配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２に結合する能力を保有する。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１３において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１４において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外部の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号１３のＶＨドメイン配列、及び配列番号１４のＶＬドメイン配列を含み、一方または両方の配列の翻訳後修飾を含む。
【０１７５】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、本明細書で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨドメイン、及び本明細書で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号１３及び配列番号１４のＶＨ及びＶＬドメイン配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。
【０１７６】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０１７７】
特定の実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号５３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する可変重鎖（ＶＨ）ドメイン配列を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２に結合する能力を保有する。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号５３において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外部の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号５３のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体が提供され、この抗体は、配列番号５４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２に結合する能力を保有する。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号５４において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号５４のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
【０１８０】
いくつかの実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号５３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列、及び配列番号５４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨドメイン配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有し、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬドメイン配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２に結合する能力を保有する。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号５３において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号５４において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外部の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号５３のＶＨドメイン配列、及び配列番号５４のＶＬドメイン配列を含み、一方または両方の配列の翻訳後修飾を含む。
【０１８２】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、本明細書で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨドメイン、及び本明細書で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号５３及び配列番号５４のＶＨ及びＶＬドメイン配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。
【０１８３】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号５１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０１８４】
特定の実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号６３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する可変重鎖（ＶＨ）ドメイン配列を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２に結合する能力を保有する。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号６３において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外部の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号６３のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
【０１８５】
いくつかの実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１８６】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体が提供され、この抗体は、配列番号６４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２に結合する能力を保有する。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号６４において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号６４のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
【０１８７】
いくつかの実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１８８】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号６３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列、及び配列番号６４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨドメイン配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有し、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬドメイン配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２に結合する能力を保有する。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号６３において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号６４において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外部の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号６３のＶＨドメイン配列、及び配列番号６４のＶＬドメイン配列を含み、一方または両方の配列の翻訳後修飾を含む。
【０１８９】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、本明細書で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨドメイン、及び本明細書で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号６３及び配列番号６４のＶＨ及びＶＬドメイン配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。
【０１９０】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号６１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号６２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０１９１】
特定の実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号７３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する可変重鎖（ＶＨ）ドメイン配列を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２に結合する能力を保有する。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号７３において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外部の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号７３のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
【０１９２】
いくつかの実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１９３】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体が提供され、この抗体は、配列番号７４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２に結合する能力を保有する。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号７４において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号７４のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
【０１９４】
いくつかの実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号７３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列、及び配列番号７４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨドメイン配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有し、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬドメイン配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２に結合する能力を保有する。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号７３において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号７４において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外部の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号７３のＶＨドメイン配列、及び配列番号７４のＶＬドメイン配列を含み、一方または両方の配列の翻訳後修飾を含む。
【０１９６】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、本明細書で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨドメイン、及び本明細書で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号７３及び配列番号７４のＶＨ及びＶＬドメイン配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。
【０１９７】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号７１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号７２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０１９８】
特定の実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号８３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する可変重鎖（ＶＨ）ドメイン配列を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２に結合する能力を保有する。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号８３において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外部の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号８３のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
【０１９９】
いくつかの実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０２００】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体が提供され、この抗体は、配列番号８４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２に結合する能力を保有する。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号８４において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号８４のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
【０２０１】
いくつかの実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０２０２】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号８３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列、及び配列番号８４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨドメイン配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有し、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬドメイン配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２に結合する能力を保有する。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号８３において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号８４において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外部の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号８３のＶＨドメイン配列、及び配列番号８４のＶＬドメイン配列を含み、一方または両方の配列の翻訳後修飾を含む。
【０２０３】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、本明細書で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨドメイン、及び本明細書で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号８３及び配列番号８４のＶＨ及びＶＬドメイン配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。
【０２０４】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号８１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号８２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０２０５】
特定の実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号９３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する可変重鎖（ＶＨ）ドメイン配列を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２に結合する能力を保有する。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号９３において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外部の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号９３のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
【０２０６】
いくつかの実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０２０７】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体が提供され、この抗体は、配列番号９４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２に結合する能力を保有する。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号９４において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号９４のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
【０２０８】
いくつかの実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０２０９】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号９３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列、及び配列番号９４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨドメイン配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有し、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬドメイン配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２に結合する能力を保有する。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号９３において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号９４において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外部の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号９３のＶＨドメイン配列、及び配列番号９４のＶＬドメイン配列を含み、一方または両方の配列の翻訳後修飾を含む。
【０２１０】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、本明細書で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨドメイン、及び本明細書で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号９３及び配列番号９４のＶＨ及びＶＬドメイン配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。
【０２１１】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号９２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０２１２】
特定の実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号１０３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する可変重鎖（ＶＨ）ドメイン配列を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２に結合する能力を保有する。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１０３において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外部の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号１０３のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
【０２１３】
いくつかの実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０２１４】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体が提供され、この抗体は、配列番号１０４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２に結合する能力を保有する。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１０４において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号１０４のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
【０２１５】
いくつかの実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０２１６】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号１０３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列、及び配列番号１０４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨドメイン配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有し、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬドメイン配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２に結合する能力を保有する。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１０３において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１０４において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外部の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号１０３のＶＨドメイン配列、及び配列番号１０４のＶＬドメイン配列を含み、一方または両方の配列の翻訳後修飾を含む。
【０２１７】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、本明細書で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨドメイン、及び本明細書で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号１０３及び配列番号１０４のＶＨ及びＶＬドメイン配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。
【０２１８】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号１０１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０２１９】
特定の実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号１１３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する可変重鎖（ＶＨ）ドメイン配列を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２に結合する能力を保有する。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１１３において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外部の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号１１３のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
【０２２０】
いくつかの実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０２２１】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体が提供され、この抗体は、配列番号１１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２に結合する能力を保有する。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１１４において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号１１４のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
【０２２２】
いくつかの実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０２２３】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号１１３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列、及び配列番号１１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨドメイン配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有し、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬドメイン配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２に結合する能力を保有する。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１１３において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１１４において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外部の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号１１３のＶＨドメイン配列、及び配列番号１１４のＶＬドメイン配列を含み、一方または両方の配列の翻訳後修飾を含む。
【０２２４】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、本明細書で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨドメイン、及び本明細書で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号１１３及び配列番号１１４のＶＨ及びＶＬドメイン配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。
【０２２５】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１１２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０２２６】
いくつかの態様では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＣＤＲを含む。
【０２２７】
いくつかの実施形態では、本明細書に説明される抗ＬＩＬＲＢ２抗体と競合する、抗ＬＩＬＲＢ２抗体が提供される。いくつかの実施形態では、結合について、本明細書で提供される抗体のいずれかと競合（すなわち、交差競合）する抗体を作成及び／または使用することができる。
【０２２８】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全ての重鎖ＣＤＲ配列を含む。
【０２２９】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全ての軽鎖ＣＤＲ配列を含む。
【０２３０】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される６つのＣＤＲのいずれかは、サブパーツとして、本明細書で提供される他のＣＤＲのいずれかと、構築物におけるＣＤＲの合計が６つであるように組み合わせることができる。したがって、いくつかの実施形態では、第１の抗体からの２つのＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ−Ｈ１及びＣＤＲ−Ｈ２）は、第２の抗体からの４つのＣＤＲ（ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３）と組み合わせることができる。いくつかの実施形態では、１つ以上のＣＤＲ中の２つ以下の残基を置換して、それらのバリアントを得ることができる。いくつかの実施形態では、１、２、３、４、５、または６つのＣＤＲにおいて、２つ以下の残基を置換することができる。
【０２３１】
特定の実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する可変重鎖（ＶＨ）ドメイン配列を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２に結合する能力を保有する。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号３において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号３のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
【０２３２】
いくつかの実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０２３３】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体が提供され、抗体は、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２に結合する能力を保有する。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号４において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号４のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
【０２３４】
いくつかの実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０２３５】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列、及び配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨドメイン配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有し、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬドメイン配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２に結合する能力を保有する。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号３において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号４において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号３のＶＨドメイン配列、及び配列番号４のＶＬドメイン配列を含み、一方または両方の配列の翻訳後修飾を含む。
【０２３６】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、本明細書で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨドメイン、及び本明細書で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、本抗体は、それぞれ、配列番号３及び配列番号４のＶＨ及びＶＬドメイン配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。
【０２３７】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０２３８】
いくつかの態様では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、（ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＣＤＲを含む。
【０２３９】
いくつかの実施形態では、本明細書に説明される抗ＬＩＬＲＢ２抗体と競合する、抗ＬＩＬＲＢ２抗体が提供される。いくつかの実施形態では、結合について、本明細書で提供される抗体のいずれかと競合（すなわち、交差競合）する抗体を作成及び／または使用することができる。
【０２４０】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、（ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全ての重鎖ＣＤＲ配列を含む。
【０２４１】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、（ａ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全ての軽鎖ＣＤＲ配列を含む。
【０２４２】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される６つのＣＤＲのいずれかは、サブパーツとして、本明細書で提供される他のＣＤＲのいずれかと、構築物におけるＣＤＲの合計が６つであるように組み合わせることができる。したがって、いくつかの実施形態では、第１の抗体からの２つのＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ−Ｈ１及びＣＤＲ−Ｈ２）は、第２の抗体からの４つのＣＤＲ（ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３）と組み合わせることができる。いくつかの実施形態では、１つ以上のＣＤＲ中の２つ以下の残基を置換して、それらのバリアントを得ることができる。いくつかの実施形態では、１、２、３、４、５、または６つのＣＤＲにおいて、２つ以下の残基を置換することができる。
【０２４３】
特定の実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号２３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する可変重鎖（ＶＨ）ドメイン配列を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２に結合する能力を保有する。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号２３において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外部の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号２３のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
【０２４４】
いくつかの実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０２４５】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体が提供され、この抗体は、配列番号２４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２に結合する能力を保有する。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号２４において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号２４のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
【０２４６】
いくつかの実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０２４７】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号２３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列、及び配列番号２４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨドメイン配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有し、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬドメイン配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２に結合する能力を保有する。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号２３において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号２４において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外部の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号２３のＶＨドメイン配列、及び配列番号２４のＶＬドメイン配列を含み、一方または両方の配列の翻訳後修飾を含む。
【０２４８】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、本明細書で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨドメイン、及び本明細書で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、本抗体は、それぞれ、配列番号２３及び配列番号２４のＶＨ及びＶＬドメイン配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。
【０２４９】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０２５０】
いくつかの態様では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＣＤＲを含む。
【０２５１】
いくつかの実施形態では、本明細書に説明される抗ＬＩＬＲＢ２抗体と競合する、抗ＬＩＬＲＢ２抗体が提供される。いくつかの実施形態では、結合について、本明細書で提供される抗体のいずれかと競合（すなわち、交差競合）する抗体を作成及び／または使用することができる。
【０２５２】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全ての重鎖ＣＤＲ配列を含む。
【０２５３】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全ての軽鎖ＣＤＲ配列を含む。
【０２５４】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される６つのＣＤＲのいずれかは、サブパーツとして、本明細書で提供される他のＣＤＲのいずれかと、構築物におけるＣＤＲの合計が６つであるように組み合わせることができる。したがって、いくつかの実施形態では、第１の抗体からの２つのＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ−Ｈ１及びＣＤＲ−Ｈ２）は、第２の抗体からの４つのＣＤＲ（ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３）と組み合わせることができる。いくつかの実施形態では、１つ以上のＣＤＲ中の２つ以下の残基を置換して、それらのバリアントを得ることができる。いくつかの実施形態では、１、２、３、４、５、または６つのＣＤＲにおいて、２つ以下の残基を置換することができる。
【０２５５】
特定の実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号３３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する可変重鎖（ＶＨ）ドメイン配列を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２に結合する能力を保有する。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号３３において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外部の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号３３のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
【０２５６】
いくつかの実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０２５７】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体が提供され、この抗体は、配列番号３４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２に結合する能力を保有する。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号３４において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号３４のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
【０２５８】
いくつかの実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０２５９】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号３３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列、及び配列番号３４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨドメイン配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有し、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬドメイン配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２に結合する能力を保有する。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号３３において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号３４において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外部の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号３３のＶＨドメイン配列、及び配列番号３４のＶＬドメイン配列を含み、一方または両方の配列の翻訳後修飾を含む。
【０２６０】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、本明細書で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨドメイン、及び本明細書で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、本抗体は、それぞれ、配列番号３３及び配列番号３４のＶＨ及びＶＬドメイン配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。
【０２６１】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号３１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０２６２】
いくつかの態様では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、（ａ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＣＤＲを含む。
【０２６３】
いくつかの実施形態では、本明細書に説明される抗ＬＩＬＲＢ２抗体と競合する、抗ＬＩＬＲＢ２抗体が提供される。いくつかの実施形態では、結合について、本明細書で提供される抗体のいずれかと競合（すなわち、交差競合）する抗体を作成及び／または使用することができる。
【０２６４】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、（ａ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全ての重鎖ＣＤＲ配列を含む。
【０２６５】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、（ａ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全ての軽鎖ＣＤＲ配列を含む。
【０２６６】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される６つのＣＤＲのいずれかは、サブパーツとして、本明細書で提供される他のＣＤＲのいずれかと、構築物におけるＣＤＲの合計が６つであるように組み合わせることができる。したがって、いくつかの実施形態では、第１の抗体からの２つのＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ−Ｈ１及びＣＤＲ−Ｈ２）は、第２の抗体からの４つのＣＤＲ（ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３）と組み合わせることができる。いくつかの実施形態では、１つ以上のＣＤＲ中の２つ以下の残基を置換して、それらのバリアントを得ることができる。いくつかの実施形態では、１、２、３、４、５、または６つのＣＤＲにおいて、２つ以下の残基を置換することができる。
【０２６７】
特定の実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号４３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する可変重鎖（ＶＨ）ドメイン配列を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２に結合する能力を保有する。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号４３において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外部の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号４３のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
【０２６８】
いくつかの実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０２６９】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体が提供され、この抗体は、配列番号４４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２に結合する能力を保有する。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号４４において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号４４のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
【０２７０】
いくつかの実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０２７１】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号４３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列、及び配列番号４４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨドメイン配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有し、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬドメイン配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２に結合する能力を保有する。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号４３において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号４４において置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外部の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号４３のＶＨドメイン配列、及び配列番号４４のＶＬドメイン配列を含み、一方または両方の配列の翻訳後修飾を含む。
【０２７２】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、本明細書で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨドメイン、及び本明細書で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、本抗体は、それぞれ、配列番号４３及び配列番号４４のＶＨ及びＶＬドメイン配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。
【０２７３】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０２７４】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、上記実施形態のいずれかに説明されるような６つのＣＤＲを含み、ＬＩＬＲＢ２（例えば、ヒトＬＩＬＲＢ２）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、上記に説明される実施形態のいずれかの６つのＣＤＲを含み、ＬＩＬＲＢ２に特異的に結合し、ＨＬＡ−Ｇ及び／またはＨＬＡ−Ａ２のＬＩＬＲＢ２（例えば、ヒトＬＩＬＲＢ２）への結合を遮断する。いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、上記実施形態のいずれかに説明されるような６つのＣＤＲを含み、ＬＩＬＲＢ２（例えば、ヒトＬＩＬＲＢ２）に特異的に結合し、Ｍ２様マクロファージのＭ１様マクロファージへの変換を引き起こす。
【０２７５】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、可変重鎖領域及び重鎖定常領域の少なくとも一部分を含む少なくとも１つの重鎖、ならびに可変軽鎖領域及び軽鎖定常領域の少なくとも一部分を含む少なくとも１つの軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、２つの重鎖（ここで、各重鎖は、可変重鎖領域及び定常重鎖領域の少なくとも一部分を含む）、及び２つの軽鎖（ここで、各軽鎖は、可変軽鎖領域及び定常軽鎖領域の少なくとも一部分を含む）を含む。本明細書で使用される場合、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、または例えば、６つ全てのＣＤＲ（３つの重鎖ＣＤＲ及び３つの軽鎖ＣＤＲ）を含む単一ポリペプチド鎖を含む任意の他の抗体は、重鎖及び軽鎖を有すると考えられる。いくつかの実施形態では、重鎖は、３つの重鎖ＣＤＲを含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体の領域である。いくつかの実施形態では、軽鎖は、３つの軽鎖ＣＤＲを含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体の領域である。
【０２７６】
いくつかの実施形態では、ＬＩＬＲＢ２との結合について、本明細書に提供される抗ＬＩＬＲＢ２抗体と競合する抗体が提供される。いくつかの実施形態では、抗体は、ＬＩＬＲＢ２上のエピトープとの結合について、本明細書に提供される抗ＬＩＬＲＢ２抗体と交差競合する。
【０２７７】
いくつかの実施形態では、ＬＩＬＲＢ２との結合について、本明細書に説明される抗ＬＩＬＲＢ２抗体と競合するモノクローナル抗体を特定するために、競合アッセイが使用され得る。競合アッセイを使用して、２つの抗体が、同一または立体的に重複するエピトープを認識することによって同じエピトープに結合するかどうか、あるいは１つの抗体が、別の抗体の抗原への結合を競合的に阻害するかどうかを判定することができる。いくつかの実施形態では、そのような競合抗体は、本明細書に説明される抗体によって結合される、同一のエピトープに結合する。例示的な競合アッセイとしては、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．）に提供されるものなどの日常的なアッセイが挙げられるが、これに限定されない。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例示的な方法は、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）「Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．）に提供されている。いくつかの実施形態では、２つの抗体は、それぞれがもう一方の結合を５０％以上遮断する場合、同一のエピトープに結合すると言われている。いくつかの実施形態では、本明細書に説明される抗ＬＩＬＲＢ２抗体と競合する抗体は、キメラ、ヒト化、またはヒト抗体である。いくつかの実施形態では、本明細書に説明されるようなキメラ、ヒト化、またはヒト抗ＬＩＬＲＢ２抗体と競合する抗体が提供される。
【０２７８】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体のエピトープのいずれか１つ以上に結合する抗体が提供される。いくつかの実施形態では、本抗体が結合するエピトープに結合し、重複する抗体が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体の少なくとも１つと競合する抗体が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体の少なくとも２つと競合する抗体が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体の少なくとも３つと競合する抗体が提供される。いくつかの実施形態では、抗体は、本明細書の実施例で説明される抗体として重複するエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、全エピトープは、競合抗体によって結合及び／または妨害される。いくつかの実施形態では、エピトープの一部は、競合抗体によって結合及び／または妨害される。いくつかの実施形態では、競合抗体のパラトープは、本明細書に提供される抗体のエピトープの少なくとも一部と結合する。いくつかの実施形態では、競合抗体のパラトープは、標的と結合し、競合する抗体の構成の異なる部分は、本明細書に提供される抗体のエピトープの少なくとも一部を妨害する。
【０２７９】
例示的なキメラ抗体
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、キメラ抗体である。特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５に説明されている。一例において、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、またはサルなどの非ヒト霊長類に由来する可変領域）及びヒト定常領域を含む。さらなる例においては、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のそれから変更されている「クラススイッチされた」抗体である。キメラ抗体は、それらの抗原結合断片を含む。
【０２８０】
非限定的な例示的なキメラ抗体としては、本明細書に説明される抗ＬＩＬＲＢ２抗体のいずれかの重鎖及び／または軽鎖可変領域を含むキメラ抗体が挙げられる。非限定的な例示的なキメラ抗体としては、本明細書に説明される抗ＬＩＬＲＢ２抗体のいずれかのＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３及び／またはＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３を含むキメラ抗体が挙げられる。いくつかの実施形態では、キメラ抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、上記の可変領域を含み、ＬＩＬＲＢ２に結合する。いくつかの実施形態では、キメラ抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、上記の可変領域を含み、ＬＩＬＲＢ２に結合し、かつＭ２様マクロファージのＭ１様マクロファージへの変換を引き起こす。
【０２８１】
いくつかの実施形態では、キメラ抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号３、１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、９３、１０３、及び１１３から選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である可変領域配列を含む重鎖を含み、抗体はＬＩＬＲＢ２に結合する。いくつかの実施形態では、キメラ抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号４、１４、２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、及び１１４から選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である可変領域配列を含む軽鎖を含み、抗体はＬＩＬＲＢ２に結合する。いくつかの実施形態では、キメラ抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号３、１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、９３、１０３、及び１１３から選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である可変領域配列を含む重鎖、ならびに配列番号４、１４、２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、及び１１４から選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である可変領域配列を含む軽鎖を含み、抗体はＬＩＬＲＢ２に結合する。
【０２８２】
また、例示的なキメラ抗ＬＩＬＲＢ２抗体としては、ＬＩＬＲＢ２との結合について、本明細書に説明される抗体またはその断片と競合するキメラ抗体も挙げられる。したがって、いくつかの実施形態では、ＬＩＬＲＢ２との結合について、本明細書に説明されるＬＩＬＲＢ２抗体のいずれかまたはその断片と競合する、キメラ抗ＬＩＬＲＢ２抗体が提供される。いくつかの実施形態では、抗体は、ＬＩＬＲＢ２との結合について競合し、かつＭ２様マクロファージのＭ１様マクロファージへの変換を引き起こす。
【０２８３】
いくつかの実施形態では、本明細書に説明されるキメラ抗体は、１つ以上のヒト定常領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト重鎖定常領域は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、及びＩｇＤから選択されるアイソタイプである。いくつかの実施形態では、ヒト軽鎖定常領域は、κ及びλから選択されるアイソタイプである。いくつかの実施形態では、本明細書に説明されるキメラ抗体は、ヒトＩｇＧ定常領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に説明されるキメラ抗体は、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に説明されるヒト抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域及びヒトκ軽鎖を含む。
【０２８４】
上述のように、エフェクター機能が望ましいかどうかは、抗体のために意図される特定の治療方法に依存し得る。したがって、いくつかの実施形態では、エフェクター機能が望ましい場合、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域またはヒトＩｇＧ３の重鎖定常領域を含むキメラ抗ＬＩＬＲＢ２抗体が選択される。いくつかの実施形態では、エフェクター機能が望ましくない場合、ヒトＩｇＧ４またはＩｇＧ２重鎖定常領域を含むキメラ抗ＬＩＬＲＢ２抗体が選択される。
【０２８５】
例示的なヒト化抗体
いくつかの実施形態では、ＬＩＬＲＢ２に結合するヒト化抗体が提供される。ヒト化抗体は、抗体治療に対する免疫応答（例えば、ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答）及び治療の有効性の減少をもたらし得る非ヒト抗体と比較して、ヒト免疫応答を低減または排除するため、ヒト化抗体は治療用分子として有用である。
【０２８６】
いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的に、非ヒト抗体は、親の非ヒト抗体の特異性及び親和性を保持しながら、ヒトに対する免疫原性を低減するために、ヒト化される。一般に、ヒト化抗体は、ＣＤＲ（またはそれらの部分）が非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（またはそれらの部分）がヒト抗体配列に由来する、１つ以上の可変ドメインを含む。任意に、ヒト化抗体はまた、ヒト定常領域の少なくとも一部分も含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体におけるいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体特異性または親和性を復元または向上させるために、非ヒト抗体（例えば、ＣＤＲ残基の由来となった抗体）由来の対応する残基で置換される。
【０２８７】
ヒト化抗体及びそれらを作製する方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，２００８，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．，１３：１６１９−１６３３に概説され、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２９；Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６：１００２９−１００３３；米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号、及び同第７，０８７，４０９号；Ｋａｓｈｍｉｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｍｅｔｈｏｄｓ，３６：２５−３４；Ｐａｄｌａｎ，１９９１，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２８：４８９−４９８（「リサーフェイシング」を説明する）；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｍｅｔｈｏｄｓ，３６：４３−６０（「ＦＲシャッフリング」を説明する）；ならびにＯｓｂｏｕｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｍｅｔｈｏｄｓ，３６：６１−６８及びＫｌｉｍｋａ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２−２６０（ＦＲシャッフリングに対する「誘導選択」アプローチを説明する）にさらに説明される。
【０２８８】
ヒト化に使用することができるヒトフレームワーク領域としては、「最良適合」法を使用して選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６を参照）、軽鎖または重鎖可変領域の特定の下位集団のヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５、及びＰｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３を参照）、ヒト成熟（体細胞変異）フレームワーク領域またはヒト生殖細胞株フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，２００８，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．，１３：１６１９−１６３３を参照）、及びＦＲライブラリのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７２：１０６７８−１０６８４、及びＲｏｓｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７１：２２６１１−２２６１８を参照）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２８９】
非限定的な例示的なヒト化抗体には、配列番号５３、６３、７３、８３、９３、１０３、及び１１３から選択されるＶＨドメイン、及び／または配列番号５４、６４、７４、８４、９４、１０４、及び１１４から選択されるＶＬドメインを含む抗体、またはそれらの任意の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、もしくは６つのＣＤＲが挙げられる。いくつかの実施形態では、ヒト化抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、上記のＣＤＲを含み、ＬＩＬＲＢ２に結合する。いくつかの実施形態では、ヒト化抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、上記のＣＤＲを含み、ＬＩＬＲＢ２に結合し、かつＭ２様マクロファージのＭ１様マクロファージへの変換を引き起こす。
【０２９０】
いくつかの実施形態では、ヒト化抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号５３、６３、７３、８３、９３、１０３、及び１１３から選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である可変領域配列を含む重鎖を含み、抗体はＬＩＬＲＢ２に結合する。いくつかの実施形態では、ヒト化抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号５４、６４、７４、８４、９４、１０４、及び１１４から選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である可変領域配列を含む軽鎖を含み、抗体はＬＩＬＲＢ２に結合する。いくつかの実施形態では、ヒト化抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号５３、６３、７３、８３、９３、及び１１３から選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である可変領域配列を含む重鎖、ならびに配列番号５４、６４、７４、８４、９４、１０４、及び１１４から選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である可変領域配列を含む軽鎖を含み、抗体はＬＩＬＲＢ２に結合する。
【０２９１】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＣＤＲ配列のいずれか１つ以上が維持され、一方、残りの重鎖及び／または軽鎖領域（すなわち、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４）は、配列番号５３、５４、６３、６４、７３、７４、８３、８４、９３、９４、１０３、１０４、１１３、及び１１４から選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である。
【０２９２】
いくつかの実施形態では、ヒト化抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、本明細書で考察されるＣＤＲのうちの少なくとも１つを含む。すなわち、いくつかの実施形態では、ヒト化抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、本明細書で考察されるＣＤＲ−Ｈ１、本明細書で考察されるＣＤＲ−Ｈ２、本明細書で考察されるＣＤＲ−Ｈ３、本明細書で考察されるＣＤＲ−Ｌ１、本明細書で考察されるＣＤＲ−Ｌ２、及び本明細書で考察されるＣＤＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む。さらに、いくつかの実施形態では、ヒト化抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、本明細書で考察されるＣＤＲに基づく少なくとも１つの変異したＣＤＲを含み、変異したＣＤＲは、本明細書で考察されるＣＤＲに対して、１、２、３、または４つのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。当業者は、特定のＣＤＲ配列のための１つ以上の好適な保存的アミノ酸置換を選択することができ、好適な保存的アミノ酸置換は、変異したＣＤＲを含む抗体の結合特性を有意に変化させることは予測されていない。
【０２９３】
また、例示的なヒト化抗ＬＩＬＲＢ２抗体としては、ＬＩＬＲＢ２との結合について、本明細書に説明される抗体またはその断片と競合する抗体も挙げられる。いくつかの実施形態では、ＬＩＬＲＢ２との結合について、本明細書に説明される任意の抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその断片と競合し、Ｍ２様マクロファージのＭ１様マクロファージへの変換を引き起こす、ヒト化抗ＬＩＬＲＢ２抗体が提供される。
【０２９４】
例示的なヒト抗体
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野で既知の様々な技法を使用して産生することができる。ヒト抗体は、概して、ｖａｎ  Ｄｉｊｋ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ，２００１，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，５：３６８−３７４、及びＬｏｎｂｅｒｇ，２００８，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０：４５０−４５９に説明されている。いくつかの実施形態では、ヒト抗体は、天然型のヒト抗体ではない。いくつかの実施形態では、ヒト抗体は、モノクローナル抗体であり、したがって、いくつかの実施形態では、一組のヒト抗体の各々は、抗原上の同じエピトープに結合することができる。
【０２９５】
ヒト抗体は、免疫原を、抗原投与に応答してインタクトなヒト抗体またはヒト可変領域を含むインタクトな抗体を産生するように修飾されているトランスジェニック動物に投与することによって、調製することができる。そのような動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン座位を置換するか、または染色体外に存在するかもしくは動物の染色体内にランダムに組み込まれたヒト免疫グロブリン座位の全てまたは一部を含有する。そのようなトランスジェニックマウスにおいて、内因性免役グロブリン座位は、概して不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の概説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，２００５，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２３：１１１７−１１２５を参照されたい。また例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術について説明している米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号、ＨＵＭＡＢ（登録商標）技術について説明している米国特許第５，７７０，４２９号、Ｋ−Ｍ  ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術について説明している米国特許第７，０４１，８７０号、ならびにＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）技術について説明している米国特許出願公開第ＵＳ２００７／００６１９００号も参照されたい。そのような動物によって生成されたインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによって、さらに修飾され得る。
【０２９６】
ヒト抗体はまた、ハイブリドーマベースの方法によって作製することもできる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫細胞株及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株が説明されている。例えば、Ｋｏｚｂｏｒ，１９８４，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１、Ｂｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７）、及びＢｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６を参照されたい。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されるヒト抗体はまた、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７−３５６２にも説明されている。追加の方法には、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株由来のモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生について説明する）、及びＮｉ，２００６，Ｘｉａｎｄａｉ  Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５−２６８（ヒト−ヒトハイブリドーマについて説明する）に説明されるものが含まれる。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）はまた、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，２００５，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７−９３７、及びＶｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，２００５，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｆｉｎｄｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５−１９１にも説明されている。
【０２９７】
ヒト抗体はまた、ヒト由来ファージディスプレイライブラリから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによって生成することもできる。そのような可変ドメイン配列は、次いで、所望のヒト定常ドメインと組み合わされてもよい。抗体ライブラリからヒト抗体を選択するための技法を、以下に説明する。
【０２９８】
抗体は、組み合わせのライブラリを、所望の活性（単数または複数）を有する抗体についてスクリーニングすることによって、単離されてもよい。例えば、ファージディスプレイライブラリを生成し、そのようなライブラリを、所望の結合特性を保有する抗体についてスクリーニングするための、様々な方法が当該技術分野で知られている。そのような方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）に概説され、さらに、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｎａｔｕｒｅ，３４８：５５２−５５４、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７、Ｍａｒｋｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｄｂｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２４８：１６１−１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）、Ｓｉｄｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００４  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３３８（２）：２９９−３１０、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３、Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，２００４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０１（３４）：１２４６７−１２４７２、及びＬｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２８４（１−２）：１１９−１３２、ならびにＰＣＴ公開第ＷＯ９９／１０４９４号に説明される。
【０２９９】
ある特定のファージディスプレイ法において、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別個にクローニングされ、ファージライブラリ中でランダムに組み換えられ、次いで、それをＷｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３−４５５に説明されるように抗原結合ファージについてスクリーニングすることができる。ファージは、典型的には、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片としてまたはＦａｂ断片としてのいずれかで、抗体断片を提示する。免疫化供給源由来のライブラリは、ハイブリドーマの構築を必要とすることなく、高親和性抗体を免疫原に提供する。あるいは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ，１２：７２５−７３４（１９９３）によって説明されるように、ナイーブレパートリーを（例えば、ヒトから）クローニングして、いかなる免疫化も伴わずに、広範な非自己抗原及びまた自己抗原に対する抗体の単一供給源を提供することができる。最後に、ナイーブライブラリはまた、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ  １９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１−３８８に説明されるように、幹細胞からの再配列されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して高度可変ＣＤＲ３領域をコードし、インビトロで再配列を達成することによって、合成的に作製することができる。ヒト抗体ファージライブラリについて説明する特許公報としては、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、ならびに米国特許公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号、及び同第２００９／０００２３６０号が挙げられる。
【０３００】
いくつかの実施形態では、キメラヒト抗ＬＩＬＲＢ２抗体が提供され、この抗体は、ＬＩＬＲＢ２を結合するヒト抗体由来の可変領域、及び異なるヒト抗体由来の定常領域を含む。いくつかの実施形態では、キメラヒト抗ＬＩＬＲＢ２抗体が提供され、この抗体は、ＬＩＬＲＢ２を結合するヒト抗体由来のＣＤＲ、及び異なるヒト抗体由来のフレームワークを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、天然型のヒト抗体ではない。
【０３０１】
いくつかの実施形態では、ヒト抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、１つ以上のヒト定常領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト重鎖定常領域は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、及びＩｇＤから選択されるアイソタイプである。いくつかの実施形態では、ヒト軽鎖定常領域は、κ及びλから選択されるアイソタイプである。いくつかの実施形態では、本明細書に説明されるヒト抗体は、ヒトＩｇＧ定常領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に説明されるヒト抗体は、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に説明されるヒト抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域及びヒトκ軽鎖を含む。
【０３０２】
いくつかの実施形態では、エフェクター機能が望ましい場合、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域またはヒトＩｇＧ３の重鎖定常領域を含むヒト抗ＬＩＬＲＢ２抗体が選択される。いくつかの実施形態では、エフェクター機能が望ましくない場合、ヒトＩｇＧ４またはＩｇＧ２重鎖定常領域を含むヒト抗ＬＩＬＲＢ２抗体が選択される。
【０３０３】
本明細書に記載のとおり、用語「ヒト抗体」は、抗体の供給源というよりは、抗体構築物のための可能性のある配列の属を意味する。
【０３０４】
例示的な抗体定常領域
いくつかの実施形態では、本明細書に説明される抗体は、１つ以上のヒト定常領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト重鎖定常領域は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、及びＩｇＤから選択されるアイソタイプである。いくつかの実施形態では、ヒト軽鎖定常領域は、κ及びλから選択されるアイソタイプである。いくつかの実施形態では、本明細書に説明される抗体は、ヒトＩｇＧ定常領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に説明される抗体は、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に説明される抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域及びヒトκ軽鎖を含む。
【０３０５】
本明細書及び特許請求の範囲全体を通して、明白に記載されているかまたは当業者に既知でない限り、免疫グロブリン重鎖中の残基の番号付けは、参照により本明細書に明示的に組み込まれる、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）のようなＥＵインデックスの番号付けである。「ＫａｂａｔにあるようなＥＵインデックス」とは、ヒトＩｇＧ１  ＥＵ抗体の残基番号付けを指す。
【０３０６】
上述のように、エフェクター機能が望ましいかどうかは、抗体のために意図される特定の治療方法に依存し得る。したがって、いくつかの実施形態では、エフェクター機能が望ましい場合、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域またはヒトＩｇＧ３の重鎖定常領域を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体が選択される。いくつかの実施形態では、エフェクター機能が望ましくない場合、ヒトＩｇＧ４またはＩｇＧ２重鎖定常領域を含む抗ＬＩＬＲＢ２抗体が選択される。
【０３０７】
いくつかの実施形態では、バリアントＦｃ領域を含む抗体は、野生型ＩｇＧまたは野生型抗体のＦｃ領域と比較して、少なくとも１つのアミノ酸置換を有する。いくつかの実施形態では、バリアントＦｃ領域は、野生型抗体のＦｃ領域において２つ以上のアミノ酸置換を有する。いくつかの実施形態では、バリアントＦｃ領域は、野生型抗体のＦｃ領域において３つ以上のアミノ酸置換を有する。いくつかの実施形態では、バリアントＦｃ領域は、少なくとも１、２、または３つ以上の本明細書に説明されるＦｃ領域アミノ酸置換を有する。いくつかの実施形態では、本明細書におけるバリアントＦｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域及び／または親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約８０％の相同性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書におけるバリアントＦｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域及び／または親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約９０％の相同性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書におけるバリアントＦｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域及び／または親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約９５％の相同性を有する。
【０３０８】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加または減少させるように変化される。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が作り出されるか、または除去されるように、アミノ酸配列を変化させることによって、好都合に達成され得る。
【０３０９】
抗体がＦｃ領域を含む場合、そこに結合した炭水化物は変化され得る。哺乳動物細胞によって産生される天然抗体は、典型的には、一般にＮ−結合によってＦｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に結合される、分岐した二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，ＴＩＢＴＥＣＨ，１５：２６−３２を参照されたい。オリゴ糖類には、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、ならびに二分岐オリゴ糖類構造の「ステム」においてＧｌｃＮＡｃに結合したフコースが含まれ得る。いくつかの実施形態では、抗体におけるオリゴ糖の修飾は、ある特定の改善された特性を有する抗体バリアントを作り出すためになされ得る。
【０３１０】
いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域に（直接または間接的に）結合したフコースを欠く炭水化物構造を有する抗体バリアントが提供される。例えば、そのような抗体におけるフコースの量は、１％〜８０％、１％〜６５％、５％〜６５％、または２０％〜４０％であってもよい。フコースの量は、例えば、ＷＯ２００８／０７７５４６に説明されるように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析によって測定される場合、Ａｓｎ２９７に結合した全ての糖構造（例えば、複合体、ハイブリッド、及び高マンノース構造）の合計に対する、Ａｓｎ２９７での糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域における約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥＵ付番）に位置するアスパラギン残基を指すが、Ａｓｎ２９７はまた、抗体における小規模な配列変異に起因して、２９７位から約±３アミノ酸上流または下流、すなわち、２９４位〜３００位の間にも位置し得る。そのようなフコシル化バリアントは、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許公開第２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）、同第２００４／００９３６２１号（Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ  Ｋｏｇｙｏ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照されたい。「脱フコシル化」または「フコース欠損」抗体バリアントに関する刊行物の例としては、ＵＳ２００３／０１５７１０８、ＷＯ２０００／６１７３９、ＷＯ２００１／２９２４６、ＵＳ２００３／０１１５６１４、ＵＳ２００２／０１６４３２８、ＵＳ２００４／００９３６２１、ＵＳ２００４／０１３２１４０、ＵＳ２００４／０１１０７０４、ＵＳ２００４／０１１０２８２、ＵＳ２００４／０１０９８６５、ＷＯ２００３／０８５１１９、ＷＯ２００３／０８４５７０、ＷＯ２００５／０３５５８６、ＷＯ２００５／０３５７７８、ＷＯ２００５／０５３７４２、ＷＯ２００２／０３１１４０、Ｏｋａｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９−１２４９（２００４）、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生することができる細胞株の例としては、タンパク質フコシル化が欠損したＬｅｃ１３  ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３−５４５、米国特許出願第Ｕ．Ｓ．２００３／０１５７１０８（Ａ１）号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ）、及びＷＯ２００４／０５６３１２（Ａ１）号（Ａｄａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．、特に実施例１１において）、ならびにノックアウト細胞株、例えば、アルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４、Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０−６８８、及びＷＯ２００３／０８５１０７を参照されたい）が挙げられる。
【０３１１】
例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分されている、二分されたオリゴ糖を有する抗体バリアントがさらに提供される。そのような抗体バリアントは、低減されたフコシル化、及び／または改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。そのような抗体バリアントの例は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔ  ｅｔ  ａｌ．）、米国特許第Ｕ．Ｓ．６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．）、及び同第Ｕ．Ｓ．２００５／０１２３５４６号（Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．）に説明されている。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖類において少なくとも１個のガラクトース残基を有する抗体バリアントもまた提供される。そのような抗体バリアントは、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。そのような抗体バリアントは、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７（Ｐａｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．）、ＷＯ１９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）、及びＷＯ１９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に説明されている。
【０３１２】
アミノ末端リーダー伸長を備えた抗体バリアントもまた提供される。例えば、アミノ末端リーダー配列の１つ以上のアミノ酸残基は、抗体の重鎖または軽鎖のいずれか１つ以上のアミノ末端に存在する。例示的なアミノ末端リーダー伸長は、抗体バリアントの軽鎖の一方または両方の上に存在する３つのアミノ酸残基、ＶＨＳを含むか、またはそれらからなる。
【０３１３】
インビボのまたは血清半減期のヒトＦｃＲｎ高親和性結合ポリペプチドは、例えば、バリアントＦｃ領域を有するポリペプチドを投与されたトランスジェニックマウス、ヒト、または非ヒト霊長類においてアッセイすることができる。例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １８（１２）：１７５９−１７６９も参照されたい。
【０３１４】
いくつかの実施形態では、抗体バリアントは、親抗体よりも効果的にヒトエフェクター細胞の存在下でＡＤＣＣを媒介する。いくつかの実施形態では、抗体バリアントは、アッセイにおいて使用されるポリペプチドバリアント及び親抗体の量が本質的に同じである場合、インビトロでのＡＤＣＣの媒介において実質的により効果的である。いくつかの実施形態では、抗体バリアントは、アッセイにおいて使用されるポリペプチドバリアント及び親抗体の量が本質的に同じである場合、インビボでのＡＤＣＣの媒介において実質的により効果的である。一般に、このようなバリアントは、本明細書に開示されるようなインビトロＡＤＣＣアッセイを使用して特定されるが、例えば、動物モデルなどにおいて、ＡＤＣＣ活性を決定するための他のアッセイまたは方法が企図される。
【０３１５】
例示的な抗体コンジュゲート
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、別の分子にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、追加の分子は、標識などの検出可能なマーカーであり得る。いくつかの実施形態では、追加の分子は、細胞毒性剤などの治療的分子であり得る。いくつかの実施形態では、標識及び／または細胞毒性剤は、抗体にコンジュゲートされ得る。本明細書で使用される場合、標識は、抗体の検出を容易にする、及び／または抗体が結合する分子の検出を容易にする部分である。非限定的な例示的な標識としては、放射性同位元素、蛍光基、酵素グループ、化学発光基、ビオチン、エピトープタグ、金属結合タグなどが挙げられるが、これらに限定されない。当業者は、特定の用途に応じて好適な標識を選択することができる。
【０３１６】
本明細書で使用する場合、細胞毒性剤は、１つ以上の細胞の増殖能力を低下させる部分である。例えば、細胞がアポトーシスを受けた、あるいは死んだために、細胞の増殖能力が低下した場合、細胞は、低下した増殖能力を有し、細胞は、細胞周期を通して進行することができない、及び／または分割、すなわち細胞分化することができない。非限定的な例示的な細胞毒性剤としては、放射性同位体、毒素、及び化学療法剤が挙げられるが、これらに限定されない。当業者は、意図される用途に応じて好適な細胞毒性を選択することができる。いくつかの実施形態では、細胞毒性剤は、代謝抵抗物質、アルキル化剤、抗生物質、増殖因子、サイトカイン、血管新生阻害物質、抗有糸分裂剤、アントラサイクリン、毒素、またはアポトーシス剤のうちの少なくとも１つである。
【０３１７】
いくつかの実施形態では、標識及び／または細胞毒性剤は、インビトロの化学的方法を使用して抗体にコンジュゲートされる。コンジュゲートの非限定的な例示的な化学的方法は、当該技術分野で既知であり、例えば、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｅｓ（以前にはＰｉｅｒｃｅ；Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．）、Ｐｒｏｚｙｍｅ（Ｈａｙｗａｒｄ，Ｃａｌｉｆ．）、ＳＡＣＲＩ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（Ｃａｌｇａｒｙ，Ｃａｎａｄａ）、ＡｂＤ  Ｓｅｒｏｔｅｃ（Ｒａｌｅｉｇｈ，Ｎ．Ｃ．）などから市販されているサービス、方法、及び／または試薬が挙げられる。いくつかの実施形態では、標識及び／または細胞毒性剤がポリペプチドである場合、標識及び／または細胞毒性剤は、少なくとも１つの抗体鎖を含む同じ発現ベクターから発現されて、抗体鎖に融合した標識及び／または細胞毒性剤を含むポリペプチドを産生することができる。当業者は、意図される用途に応じて、標識及び／または細胞毒性剤を抗体にコンジュゲートするための好適な方法を選択することができる。
【０３１８】
いくつかの実施形態では、コンジュゲートは共有結合であり得る。いくつかの実施形態では、コンジュゲートは非共有結合であり得る。いくつかの実施形態では、コンジュゲートは、特異的結合相互作用を介して、例えば、二次抗体の結合を介するものであり得る。
【０３１９】
例示的なリーダー配列
一部の分泌タンパク質が大量に発現し分泌するためには、異種タンパク質由来のリーダー配列が望ましい場合がある。いくつかの実施形態では、異種リーダー配列を用いることは、分泌プロセス中にＥＲにおいてリーダー配列が除去されるときに、得られた成熟ポリペプチドが変化しないままであるという点において有利であり得る。異種リーダー配列の付加は、いくつかのタンパク質を発現し分泌するために、有用であり得る。
【０３２０】
特定の例示的なリーダー配列シーケンスは、例えば、Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｓｉｎｇａｐｏｒｅによって維持されるオンラインのリーダー配列データベースに説明されている。Ｃｈｏｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，ＢＭＣ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，６：２４９、及びＰＣＴ出願公開第ＷＯ２００６／０８１４３０号を参照されたい。
【０３２１】
ＩＩＩ．抗体活性
本明細書では、特定の機能特性を提供する抗ＬＩＬＲＢ２抗体を提供する。本発明の特定の態様では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、（例えば、Ｍ１様マクロファージによって示されるような）免疫原性を促進して、病態、例えば、がんに応答する。さらに、またはあるいは、本発明の抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、例えば、Ｍ２様マクロファージによって示されるような、免疫調節性（例えば、免疫抑制性）応答を阻害することができる。
【０３２２】
ＨＬＡ−Ａ２の遮断は、ＬＩＬＲＢ２と古典的ＭＨＣクラスＩ分子との間の結合を破壊するためのモデルであり得る。したがって、本発明のいくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＨＬＡ−ＧまたはＨＬＡ−Ａ２のＬＩＬＲＢ２（例えば、ヒトＬＩＬＲＢ２）への結合を遮断する。遮断は、当該技術分野で既知の、または本明細書に説明される任意の好適な手段によって、検出及び／または定量化することができる。例えば、ＨＬＡ−ＧまたはＨＬＡ−Ａ２の遮断は、例えば、実施例１０に説明されるような、（例えば、ヒト単球を使用する）四量体遮断アッセイを使用して検出及び／または定量化することができる。
【０３２３】
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ−ＧのＬＩＬＲＢ２への結合を遮断する抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２のＨＬＡ−Ｇと（すなわち、完全にまたは部分的に）同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ−ＧのＬＩＬＲＢ２への結合を遮断する抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＨＬＡ−Ｇに結合されたＬＩＬＲＢ２エピトープの少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、または少なくとも８つの残基に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、四量体結合アッセイにおいて、ＨＬＡ−Ｇ四量体の少なくとも５０％（例えば、５０〜１００％、５５〜９５％、６０〜９０％、６５〜８５％、または７０〜８０％、例えば、５０〜６０％、６０〜７０％、７０〜８０％、８０〜９０％、または９０〜１００％、例えば、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約１００％）を遮断する。いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、四量体結合アッセイにおいて、１．０ｎＭ未満（例えば、０．９ｎＭ未満、０．８ｎＭ未満、０．７ｎＭ未満、０．６ｎＭ未満、０．５ｎＭ未満、０．４ｎＭ未満、０．３ｎＭ未満、０．２ｎＭ未満、０．１５ｎＭ未満、０．１４ｎＭ未満、０．１３ｎＭ未満、０．１２ｎＭ未満、０．１１ｎＭ未満、０．１ｎＭ未満、０．０９ｎＭ未満、または０．０８ｎＭ未満）のＥＣ５０でＨＬＡ−Ｇ四量体を遮断する。
【０３２４】
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ−Ａ２のＬＩＬＲＢ２への結合を遮断する抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２のＨＬＡ−Ａ２と（すなわち、完全にまたは部分的に）同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ−Ａ２のＬＩＬＲＢ２への結合を遮断する抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＨＬＡ−Ａ２に結合されたＬＩＬＲＢ２エピトープの少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、または少なくとも８つの残基に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、四量体結合アッセイにおいて、ＨＬＡ−Ａ２四量体の少なくとも５０％（例えば、５０〜１００％、５５〜９５％、６０〜９０％、６５〜８５％、または７０〜８０％、例えば、５０〜６０％、６０〜７０％、７０〜８０％、８０〜９０％、または９０〜１００％、例えば、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約１００％）を遮断する。いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、四量体結合アッセイにおいて、１．０ｎＭ未満（例えば、０．９ｎＭ未満、０．８ｎＭ未満、０．７ｎＭ未満、０．６ｎＭ未満、０．５ｎＭ未満、０．４ｎＭ未満、０．３ｎＭ未満、０．２ｎＭ未満、０．１５ｎＭ未満、０．１４ｎＭ未満、０．１３ｎＭ未満、０．１２ｎＭ未満、０．１１ｎＭ未満、０．１ｎＭ未満、０．０９ｎＭ未満、または０．０８ｎＭ未満）のＥＣ５０でＨＬＡ−Ａ２四量体を遮断する。
【０３２５】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、Ｍ２様マクロファージ集団をＭ１様マクロファージ集団に変換することができる。Ｍ２様マクロファージのＭ１様マクロファージへの変換は、当該分野で既知の、または本明細書に説明されるような任意の好適な方法、例えば、実施例６に説明されるようなヒト単球由来マクロファージアッセイ、または実施例１３に説明されるような組織培養アッセイを使用して検出または定量化することができる。
【０３２６】
いくつかの実施形態では、Ｍ２様マクロファージのＭ１様マクロファージへの変換は、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１１、ＩＲＦ１、ＴＡＰ１、ＩＬ６Ｒ、及びＩＬ１５からなる群から選択される１つ以上の遺伝子の発現の増加、例えば、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１１、ＩＲＦ１、ＴＡＰ１、ＩＬ６Ｒ、及びＩＬ１５からなる群から選択される１つ以上の遺伝子のうちのいずれかの少なくとも１％（例えば、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも３０倍、少なくとも４０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、またはそれ以上）の発現の増加によって示される。いくつかの実施形態では、Ｍ２様マクロファージのＭ１様マクロファージへの変換は、ＣＣＬ２、ＰＴＰＮ２２、ＫＬＲＣ３、ＩＬ１０、ＩＬ１８Ｒ１、Ｇ６ＰＤ、ＣＤ６８、及びＢＡＴ３からなる群から選択される１つ以上の遺伝子の発現の減少、例えば、ＣＣＬ２、ＰＴＰＮ２２、ＫＬＲＣ３、ＩＬ１０、ＩＬ１８Ｒ１、Ｇ６ＰＤ、ＣＤ６８、及びＢＡＴ３からなる群から選択される１つ以上の遺伝子のうちのいずれかの少なくとも１％（例えば、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または１００％）の発現の減少によって示される。
【０３２７】
いくつかの実施形態では、Ｍ２様マクロファージのＭ１様マクロファージへの変換は、ＴＮＦα、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＣＣＬ３、ＥＧＲ２、ＴＲＡＦ１、ＩＬ１Ａ、ＩＲＡＫ２、ＴＮＦアルファ、ＩＬ７Ｒ、ＣＣＬ２、ＩＬ８、ＣＣＬ４、ＣＸＣＬ１、ＢＣＬ２、ＥＧＲ１、ＩＬ１ＲＮ、ＴＮＦＳＦ１５、ＤＵＳＰ４、ＩＣＡＭ１、ＴＮＦＡＩＰ３、ＴＮＦＲＳＦ９、ＣＤ８３、ＴＮＦＡＩＰ６、ＣＣＬ２０、ＮＦＫＢ１、ＴＮＦＲＳＦ４、ＣＸＣＬ２、ＰＴＧＳ２、ＮＦＫＢＩＡ、ＮＦＫＢ２、ＣＬＥＣ４Ｅ、ＮＦＫＢＩＺ、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＬＥＣ５Ａ、ＣＥＢＰＢ、ＴＬＲ２、ＳＲＣ、ＲＥＬＢ、ＰＬＡＵＲ、ＳＯＣＳ３、ＧＢＰ１、ＣＣＬ１８、ＣＳＦ１、ＣＤ４０、ＮＴ５Ｅ、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ８、ＧＢＰ５、ＩＴＧＡＸ、Ｃ３、ＴＮＦＳＦ１５、ＩＣＡＭ５、ＤＰＰ４、ＺＥＢ１、ＳＰＰ１、ＩＬ２３Ａ、ＣＤ１２３、及びＩＬ６からなる群から選択される１、２、または３つのサイトカインの発現の増加、例えば、ＴＮＦα、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＣＣＬ３、ＥＧＲ２、ＴＲＡＦ１、ＩＬ１Ａ、ＩＲＡＫ２、ＴＮＦ、ＩＬ７Ｒ、ＣＣＬ２、ＩＬ８、ＣＣＬ４、ＣＸＣＬ１、ＢＣＬ２、ＥＧＲ１、ＩＬ１ＲＮ、ＴＮＦＳＦ１５、ＤＵＳＰ４、ＩＣＡＭ１、ＴＮＦＡＩＰ３、ＴＮＦＲＳＦ９、ＣＤ８３、ＴＮＦＡＩＰ６、ＣＣＬ２０、ＮＦＫＢ１、ＴＮＦＲＳＦ４、ＣＸＣＬ２、ＰＴＧＳ２、ＮＦＫＢＩＡ、ＮＦＫＢ２、ＣＬＥＣ４Ｅ、ＮＦＫＢＩＺ、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＬＥＣ５Ａ、ＣＥＢＰＢ、ＴＬＲ２、ＳＲＣ、ＲＥＬＢ、ＰＬＡＵＲ、ＳＯＣＳ３、ＧＢＰ１、ＣＣＬ１８、ＣＳＦ１、ＣＤ４０、ＮＴ５Ｅ、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ８、ＧＢＰ５、ＩＴＧＡＸ、Ｃ３、ＴＮＦＳＦ１５、ＩＣＡＭ５、ＤＰＰ４、ＺＥＢ１、ＳＰＰ１、ＩＬ２３Ａ、ＣＤ１２３、及びＩＬ６からなる群から選択される１つ以上の遺伝子のうちのいずれかの少なくとも１％（例えば、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１倍、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも３０倍、少なくとも４０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、またはそれ以上）の発現の増加によって示される。いくつかの実施形態では、Ｍ２様マクロファージのＭ１様マクロファージへの変換は、ＩＬ−１０、ＣＣＬ２、ＴＧＦＢＲ２、ＣＸＣＬ１３、ＩＬ２１Ｒ、ＣＤ３６、ＣＲ１、Ｃ１ＱＢ、及びＴＧＦＢＩの発現の減少、例えば、ＩＬ−１０、ＣＣＬ２、ＴＧＦＢＲ２、ＣＸＣＬ１３、ＩＬ２１Ｒ、ＣＤ３６、ＣＲ１、Ｃ１ＱＢ、及びＴＧＦＢＩからなる群から選択される１つ以上の遺伝子のうちのいずれかの少なくとも１％（例えば、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少���くとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または１００％）の発現の減少によって示される。
【０３２８】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ヒトＬＩＬＲＢ１、ヒトＬＩＬＲＢ３、ヒトＬＩＬＲＢ４、ヒトＬＩＬＲＢ５、ヒトＬＩＬＲＡ１、ヒトＬＩＬＲＡ２、ヒトＬＩＬＲＡ３、ヒトＬＩＬＲＡ４、ヒトＬＩＬＲＡ５、またはヒトＬＩＬＲＡ６のうちの任意の１つ以上よりも高い親和性でヒトＬＩＬＲＢ２に結合する。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ヒトＬＩＬＲＢ１、ヒトＬＩＬＲＢ３、ヒトＬＩＬＲＢ４、ヒトＬＩＬＲＢ５、ヒトＬＩＬＲＡ１、ヒトＬＩＬＲＡ２、ヒトＬＩＬＲＡ３、ヒトＬＩＬＲＡ４、ヒトＬＩＬＲＡ５、またはヒトＬＩＬＲＡ６のうちの任意の１つ以上と比較して少なくとも２倍以上高い親和性で（例えば、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも３０倍、少なくとも４０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、またはそれ以上）高い親和性でヒトＬＩＬＲＢ２に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＬＩＬＲＢ２抗体の、ヒトＬＩＬＲＢ１、ヒトＬＩＬＲＢ３、ヒトＬＩＬＲＢ４、ヒトＬＩＬＲＢ５、ヒトＬＩＬＲＡ１、ヒトＬＩＬＲＡ２、ヒトＬＩＬＲＡ３、ヒトＬＩＬＲＡ４、ヒトＬＩＬＲＡ５、またはヒトＬＩＬＲＡ６のうちの任意の１つ以上への結合は、例えば、バイオレイヤー干渉法（例えば、ＯＣＴＥＴ（登録商標）による０．０８ｎｍ未満）で検出不可能である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＬＩＬＲＢ２抗体の、ＬＩＬＲＢ１、ヒトＬＩＬＲＢ３、ヒトＬＩＬＲＢ４、ヒトＬＩＬＲＢ５、ヒトＬＩＬＲＡ１、ヒトＬＩＬＲＡ２、ヒトＬＩＬＲＡ３、ヒトＬＩＬＲＡ４、ヒトＬＩＬＲＡ５、またはヒトＬＩＬＲＡ６のうちの任意の１つ以上に対するＫＤは、１０ｎＭより大きい（例えば、１５ｎＭより大きいより大きい、２０ｎＭより大きい、２５ｎＭより大きい、３０ｎＭより大きい、３５ｎＭより大きい、４０ｎＭより大きい、４５ｎＭより大きい、５０ｎＭより大きい、６０ｎＭより大きい、７０ｎＭより大きい、８０ｎＭより大きい、９０ｎＭより大きい、１００ｎＭより大きい、５００ｎＭより大きい、１μＭより大きい、１０μＭより大きい、または１００μＭより大きい）。
【０３２９】
ＩＶ．抗体の発現及び産生
抗ＬＩＬＲＢ２抗体をコードする核酸分子
抗ＬＩＬＲＢ２抗体の１つ以上の鎖をコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、核酸分子は、抗ＬＩＬＲＢ２抗体の重鎖または軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、核酸分子は、抗ＬＩＬＲＢ２抗体の重鎖をコードするポリヌクレオチド及び軽鎖をコードするポリヌクレオチドの両方を含む。いくつかの実施形態では、第１の核酸分子は、重鎖をコードする第１のポリヌクレオチドを含み、第２の核酸分子は、軽鎖をコードする第２のポリヌクレオチドを含む。
【０３３０】
いくつかの実施形態では、重鎖及び軽鎖は、１つの核酸分子から、または２つの別個の核酸分子から、２つの別個のポリペプチドとして発現される。抗体がｓｃＦｖである場合などのいくつかの実施形態では、単一ポリヌクレオチドは、一緒に連結した重鎖及び軽鎖を両方含む単一ポリペプチドをコードする。
【０３３１】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体の重鎖または軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、本明細書に提供されるＣＤＲのうちの少なくとも１つをコードするヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体の重鎖または軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、本明細書に提供されるＣＤＲのうちの少なくとも３つをコードするヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体の重鎖または軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、本明細書に提供されるＣＤＲのうちの少なくとも６つをコードするヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体の重鎖または軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、リーダー配列をコードするヌクレオチド配列を含み、これは、翻訳された場合、重鎖または軽鎖のＮ末端に位置する。上記で考察されたように、リーダー配列は、天然の重鎖または軽鎖リーダー配列であっても、別の異種リーダー配列であってもよい。
【０３３２】
いくつかの実施形態では、核酸は、本明細書中の配列表中の抗体のアミノ酸配列のうちのいずれかをコードする核酸である。いくつかの実施形態では、核酸は、本明細書中の配列表中の抗体のアミノ酸配列のうちのいずれかをコードする核酸と少なくとも８０％の同一性、例えば、少なくとも８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％の同一性を有する核酸である。いくつかの実施形態では、核酸は、本明細書に提供される核酸配列のうちの任意の１つ以上とハイブリダイズする核酸である。実施形態のいくつかでは、ハイブリダイゼーションは、穏和な条件下である。いくつかの実施形態では、ハイブリダイゼーションは、例えば、６５℃で少なくとも約６倍ＳＳＣ及び１％のＳＤＳで、０．１倍ＳＳＣ中の約２０％（ｖ／ｖ）のホルムアミドを用いた約４２℃で１０分間の最初の洗浄、及びそれに続く０．２倍ＳＳＣ及び０．１％のＳＤＳを用いた６５℃での洗浄のような非常に厳しい条件下である。
【０３３３】
核酸分子は、当該技術分野における従来の組み換えＤＮＡ技術を使用して構築することができる。いくつかの実施形態では、核酸分子は、選択された宿主細胞での発現に好適な発現ベクターである。
【０３３４】
ベクター
抗ＬＩＬＲＢ２重鎖及び／または抗ＬＩＬＲＢ２軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含むベクターが提供される。抗ＬＩＬＲＢ２重鎖及び／または抗ＬＩＬＲＢ２軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含むベクターもまた提供される。そのようなベクターとしては、ＤＮＡベクター、ファージベクター、ウイルスベクター、レトロウイルスベクターなどが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ベクターは、重鎖をコードする第１のポリヌクレオチド配列及び軽鎖をコードする第２のポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖及び軽鎖は、２つの別個のポリペプチドとしてベクターから発現される。いくつかの実施形態では、重鎖及び軽鎖は、例えば、抗体がｓｃＦｖである場合、単一ポリペプチドの一部として発現される。
【０３３５】
いくつかの実施形態では、第１のベクターは、重鎖をコードするポリヌクレオチドを含み、第２のベクターは、軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、第１ベクター及び第２のベクターは、同様の量（例えば、同様のモル量または同様の質量）で宿主細胞に形質移入される。いくつかの実施形態では、５：１〜１：５のモル比または質量比の第１のベクター及び第２のベクターが、宿主細胞に形質移入される。いくつかの実施形態では、重鎖をコードするベクター及び軽鎖をコードするベクターについて、１：１〜１：５の質量比が使用される。いくつかの実施形態では、重鎖をコードするベクター及び軽鎖をコードするベクターについて、１：２の質量比が使用される。
【０３３６】
いくつかの実施形態では、ＣＨＯもしくはＣＨＯ由来細胞、またはＮＳＯ細胞におけるポリペプチドの発現のために最適化されたベクターが選択される。例示的なそのようなベクターは、例えば、Ｒｕｎｎｉｎｇ  Ｄｅｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２０：８８０−８８９に説明されている。
【０３３７】
宿主細胞
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体重鎖及び／または抗ＬＩＬＲＢ２抗体軽鎖は、細菌細胞などの原核細胞内で、または真菌細胞（酵母など）、植物細胞、昆虫細胞、及び哺乳動物細胞などの真核細胞内で発現され得る。そのような発現は、例えば、当該技術分野で既知の手順に従って実行され得る。ポリペプチドを発現させるために使用され得る例示的な真核細胞としては、ＣＯＳ７細胞を含むＣＯＳ細胞；２９３−６Ｅ細胞を含む２９３細胞；ＣＨＯ−Ｓ、ＤＧ４４、Ｌｅｃ１３  ＣＨＯ細胞、及びＦＵＴ８  ＣＨＯ細胞を含むＣＨＯ細胞；ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞（Ｃｒｕｃｅｌｌ）；ならびにＮＳＯ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体重鎖及び／または抗ＬＩＬＲＢ２抗体軽鎖は、酵母において発現され得る。例えば、米国公開第Ｕ．Ｓ．２００６／０２７００４５（Ａ１）号を参照されたい。いくつかの実施形態では、特定の真核生物宿主細胞は、抗ＬＩＬＲＢ２抗体重鎖及び／または抗ＬＩＬＲＢ２抗体軽鎖に所望の翻訳後修飾を行う能力に基づいて選択される。例えば、いくつかの実施形態では、ＣＨＯ細胞は、２９３細胞中で産生される同じポリペプチドよりも高いレベルのシアリル化を有するポリペプチドを産生する。
【０３３８】
所望の宿主細胞への１つ以上の核酸の導入は、リン酸カルシウム形質移入法、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介形質移入法、カチオン性脂質媒介形質移入法、電気穿孔法、形質導入、感染などを含むがこれらに限定されない任意の方法によって達成され得る。非限定的な例示的方法は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ  ｅｄ．Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（２００１）に説明されている。核酸は、任意の好適な方法に従って、所望の宿主細胞に一時的または安定的に形質移入され得る。
【０３３９】
本明細書に説明されるポリヌクレオチドまたはベクターのいずれかを含む宿主細胞もまた提供される。いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体を含む宿主細胞が提供される。異種ＤＮＡを過剰発現することができる任意の宿主細胞を、関心対象の抗体、ポリペプチド、またはタンパク質をコードする遺伝子を単離する目的のために使用することができる。哺乳動物宿主細胞の非限定的な例としては、ＣＯＳ、ＨｅＬａ、及びＣＨＯ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。ＰＣＴ公開第ＷＯ８７／０４４６２号も参照されたい。好適な非哺乳動物宿主細胞としては、原核生物（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉまたはＢ．ｓｕｂｔｉｌｌｉｓ）及び酵母（例えば、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓａｅ、Ｓ．ｐｏｍｂｅ、またはＫ．ｌａｃｔｉｓ）が挙げられる。
【０３４０】
抗体の精製
抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、任意の好適な方法によって精製することができる。そのような方法としては、親和性マトリックスまたは疎水性相互作用クロマトグラフィーの使用が挙げられるが、これらに限定されない。好適な親和性リガンドとしては、抗体定常領域に結合するＲＯＲ１  ＥＣＤ及びリガンドが挙げられる。例えば、タンパク質Ａ、タンパク質Ｇ、タンパク質Ａ／Ｇ、または抗体親和性カラムを使用して、定常領域に結合し、抗ＬＩＬＲＢ２抗体を精製し得る。疎水性相互作用クロマトグラフィー、例えば、ブチルまたはフェニルカラムはまた、抗体などのいくつかのポリペプチドを精製するのにも好適であり得る。イオン交換クロマトグラフィー（例えば、陰イオン交換クロマトグラフィー及び／または陽イオン交換クロマトグラフィー）はまた、抗体などのいくつかのポリペプチドを精製するのにも好適であり得る。混合モードクロマトグラフィー（例えば、逆相／陰イオン交換、逆相／陽イオン交換、親水性相互作用／陰イオン交換、親水性相互作用／陽イオン交換など）はまた、抗体などのいくつかのポリペプチドを精製するのにも好適であり得る。ポリペプチドを精製する多くの方法が、当該技術分野で知られている。
【０３４１】
抗体の無細胞産生
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、無細胞システムで産生される。非限定的な例示的な無細胞システムは、例えば、Ｓｉｔａｒａｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４９８：２２９−４４、Ｓｐｉｒｉｎ，２００４，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：５３８−４５、Ｅｎｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｄｖ．２１：６９５−７１３において説明されている。
【０３４２】
組成物
いくつかの実施形態では、上記に説明される方法によって調製される抗体が提供される。いくつかの実施形態では、抗体は、宿主細胞中で調製される。いくつかの実施形態では、抗体は、無細胞システム中で調製される。いくつかの実施形態では、抗体は精製される。いくつかの実施形態では、宿主細胞または無細胞システム中で調製される抗体は、キメラ抗体である。いくつかの実施形態では、宿主細胞または無細胞システム中で調製される抗体は、ヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、宿主細胞または無細胞システム中で調製される抗体は、ヒト抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体を含む細胞培養培地が提供される。いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体を含む宿主細胞培養流体が提供される。
【０３４３】
いくつかの実施形態では、上記に説明される方法によって調製される抗体を含む組成物が提供される。いくつかの実施形態では、組成物は、宿主細胞中で調製された抗体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、無細胞システム中で調製された抗体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、精製された抗体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、宿主細胞または無細胞システム中で調製されたキメラ抗体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、宿主細胞または無細胞システム中で調製されたヒト化抗体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、宿主細胞または無細胞システム中で調製されたヒト抗体を含む。
【０３４４】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体を、約１０ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、６０ｍｇ／ｍＬ、７０ｍｇ／ｍＬ、８０ｍｇ／ｍＬ、９０ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ、１２５ｍｇ／ｍＬ、１５０ｍｇ／ｍＬ、１７５ｍｇ／ｍＬ、２００ｍｇ／ｍＬ、２２５ｍｇ／ｍＬ、または２５０ｍｇ／ｍＬのうちのいずれか１つより高い濃度で含む組成物が提供される。いくつかの実施形態では、組成物は、宿主細胞または無細胞システム中で調製されたキメラ抗体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、宿主細胞または無細胞システム中で調製されたヒト化抗体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、宿主細胞または無細胞システム中で調製されたヒト抗体を含む。
【０３４５】
Ｖ．治療組成物及び方法
抗ＬＩＬＲＢ２抗体を使用する疾患を治療する方法
抗体及び抗体を含む組成物は、ヒトまたは動物の治療の方法における使用のために提供される。また、抗ＬＩＬＲＢ２抗体を投与することを含む、疾患を治療する方法も提供される。抗ＬＩＬＲＢ２抗体を用いて治療することができる非限定的な例示的な疾患としては、がんが挙げられるが、これに限定されない。
【０３４６】
より詳細には、本発明の方法に従って治療することができるがんなどの疾患の例として、固形及び血液／リンパがん、ならびに異形成などの悪性、前悪性、及び良性腫瘍も挙げられる。がんの例としては、がん腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病が挙げられるが、これらに限定されない。そのようながんのより具体的な非限定的な例としては、腎癌（例えば、腎細胞癌、例えば、乳頭状腎細胞癌）、扁平上皮癌、中皮腫、奇形腫、小細胞肺癌、下垂体癌、食道癌、星状細胞腫、軟部肉腫、肺癌（例えば、非小細胞肺癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌）、腹膜癌、肝細胞癌、胃腸癌（例えば、胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ））、膵臓癌、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、直腸癌、子宮内膜または子宮癌、唾液腺癌、肝臓癌、前立腺癌、陰門癌、甲状腺癌、胸腺腫、肝癌、脳癌、神経膠腫、神経膠芽腫、子宮内膜癌、精巣癌、胆管癌、胆管肉腫、胆嚢癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）、黒色腫（例えば、ブドウ膜黒色腫）、褐色細胞腫、傍神経節腫、腺様嚢胞癌、及び様々な種類の頭頸部癌（例えば、扁平頭頸部癌）が挙げられる。
【０３４７】
抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、必要に応じて対象に投与することができる。投与の頻度の決定は、治療される状態の考慮、治療される対象の年齢、治療される状態の重症度、治療される対象の一般的な健康状態などに基づいて、主治医などの当業者によってなされる。いくつかの実施形態では、有効用量の抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、１回以上対象に投与される。いくつかの実施形態では、有効用量の抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、月に１回、月に１回未満、例えば、２か月または３か月に１回、対象に投与される。いくつかの実施形態では、有効用量の抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、月に１回未満、例えば、２週間に１回、週に１回、対象に投与される。有効用量の抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、少なくとも１回、対象に投与される。いくつかの実施形態では、有効用量の抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、少なくとも１か月、少なくとも６か月、または少なくとも１年の期間を含んで、複数回投与され得る。
【０３４８】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、（がんの予防を含む）がんの治療に有効な量で投与される。治療有効量は、一般的に、治療される対象の体重、彼もしくは彼女の身体状態もしくは健康状態、治療される状態の広範さ、または治療される対象の年齢に基づく。一般に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、１用量あたり約１０μｇ／体重ｋｇ〜約１００ｍｇ／体重ｋｇの範囲の量で投与され得る。いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、１用量あたり約５０μｇ／体重ｋｇ〜約５ｍｇ／体重ｋｇの範囲の量で投与され得る。いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、１用量あたり約１００μｇ／体重ｋｇ〜約１０ｍｇ／体重ｋｇの範囲の量で投与され得る。いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、１用量あたり約１００μｇ／体重ｋｇ〜約２０ｍｇ／体重ｋｇの範囲の量で投与され得る。いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、１用量あたり約０．５ｍｇ／体重ｋｇ〜約２０ｍｇ／体重ｋｇの範囲の量で投与され得る。
【０３４９】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、Ｍ２様マクロファージのＭ１様マクロファージへの変換をもたらすのに有効な量で投与される。
【０３５０】
治療有効量は、一般的に、治療される対象の体重、彼もしくは彼女の身体状態もしくは健康状態、治療される状態の広範さ、または治療される対象の年齢に基づく。一般に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、１用量あたり約１０μｇ／体重ｋｇ〜約１００ｍｇ／体重ｋｇの範囲の量で投与され得る。いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、１用量あたり約５０μｇ／体重ｋｇ〜約５ｍｇ／体重ｋｇの範囲の量で投与され得る。いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、１用量あたり約１００μｇ／体重ｋｇ〜約１０ｍｇ／体重ｋｇの範囲の量で投与され得る。いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、１用量あたり約１００μｇ／体重ｋｇ〜約２０ｍｇ／体重ｋｇの範囲の量で投与され得る。いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、１用量あたり約０．５ｍｇ／体重ｋｇ〜約２０ｍｇ／体重ｋｇの範囲の量で投与され得る。
【０３５１】
医薬組成物
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体を含む組成物は、多種多様な薬学的に許容される担体と配合されて提供される（例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ｗｉｔｈ  Ｆａｃｔｓ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ：Ｄｒｕｇｆａｃｔｓ  Ｐｌｕｓ，２０ｔｈ  ｅｄ．（２００３）、Ａｎｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ  ｅｄ．，Ｌｉｐｐｅｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００４）、Ｋｉｂｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，３ｒｄ  ｅｄ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ（２０００）を参照されたい）。ビヒクル、アジュバント、及び希釈剤を含む、様々な薬学的に許容される担体が利用可能である。さらに、ｐＨ調整及び緩衝剤、張度調整剤、安定剤、湿潤剤などのような、様々な薬学的に許容される補助物質もまた利用可能である。非限定的な例示的な担体には、生理食塩水、緩衝食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノール、及びそれらの組み合わせが挙げられる。
【０３５２】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体を含む医薬組成物が提供される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、キメラ抗体を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ヒト化抗体を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、宿主細胞中または本明細書で説明されるような無細胞システムで調製された抗体を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容される担体を含む。
【０３５３】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、（がんの予防を含む）がんの治療に有効な量で投与される。治療有効量は、一般的に、治療される対象の体重、彼もしくは彼女の身体状態もしくは健康状態、治療される状態の広範さ、または治療される対象の年齢に基づく。一般に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、１用量あたり約０．０５ｍｇ／体重ｋｇ〜約１００ｍｇ／体重ｋｇの範囲の量で投与され得る。いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、１用量あたり約１０μｇ／体重ｋｇ〜約１００ｍｇ／体重ｋｇの範囲の量で投与され得る。いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、１用量あたり約５０μｇ／体重ｋｇ〜約５ｍｇ／体重ｋｇの範囲の量で投与され得る。いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、１用量あたり約１００μｇ／体重ｋｇ〜約１０ｍｇ／体重ｋｇの範囲の量で投与され得る。いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、１用量あたり約１００μｇ／体重ｋｇ〜約２０ｍｇ／体重ｋｇの範囲の量で投与され得る。いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、１用量あたり約０．５ｍｇ／体重ｋｇ〜約２０ｍｇ／体重ｋｇの範囲の量で投与され得る。いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、１用量あたり約０．５ｍｇ／体重ｋｇ〜約１０ｍｇ／体重ｋｇの範囲の量で投与され得る。いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、１用量あたり約０．０５ｍｇ／体重ｋｇ〜約２０ｍｇ／体重ｋｇの範囲の量で投与され得る。いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、１用量あたり約０．０５ｍｇ／体重ｋｇ〜約１０ｍｇ／体重ｋｇの範囲の量で投与され得る。いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、約５ｍｇ／体重ｋｇ以下、例えば、４未満、３未満、２未満、または１ｍｇ／体重ｋｇの範囲の量で投与され得る。
【０３５４】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、１用量あたり約５０μｇ／体重ｋｇ〜約５ｍｇ／体重ｋｇの範囲の量で存在し得る。例えば、いくつかの実施形態では、２０ｋｇの人の１用量は、約１ｍｇ〜約１００ｍｇの範囲内であり得る。いくつかの実施形態では、用量は、２ｍｇ〜２００ｍｇの抗ＬＩＬＲＢ２抗体の範囲内であり得る。いくつかの実施形態では、用量は、１０ｍｇ〜４００ｍｇの抗ＬＩＬＲＢ２抗体の範囲内であり得る。
【０３５５】
投与経路
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、静脈内、動脈内、非経口、腫瘍内、腹腔内、または皮下を含むがこれらに限定されない、様々な経路によってインビボで投与することができる。適切な製剤及び投与経路は、意図する用途に応じて選択することができる。
【０３５６】
併用療法
抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、単独で、または他の治療形式で、例えば、追加の治療剤とともに投与することができる。それらは、他の形式の治療、例えば、外科手術、化学療法、放射線療法、または別の治療抗体などの生物の投与の前に、実質的に同時に、または後に、提供することができる。いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、別の抗がん剤と併せて投与される。
【０３５７】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＰＤ−１療法で投与される。例示的なＰＤ−１療法としては、ニボルマブ（ＢＭＳ−９３６５５８、ＭＤＸ−１１０６、ＯＮＯ−４５３８）；ピディリズマブ、ランブロリズマブ／ペンブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ、ＭＫ−３４７５）；デュルバルマブ；ＲＧ−７４４６；アベルマブ（ＭＳＢ−００１０７１８Ｃ）；ＡＭＰ−２２４；ＢＭＳ−９３６５５９（抗ＰＤ−Ｌ１抗体）；ＡＭＰ−５１４；ＭＤＸ−１１０５；ＡＮＢ−０１１；抗ＬＡＧ−３／ＰＤ−１；抗ＰＤ−１  Ａｂ（ＣｏＳｔｉｍ）；抗ＰＤ−１  Ａｂ（Ｋａｄｍｏｎ  Ｐｈａｒｍ．）；抗ＰＤ−１  Ａｂ（Ｉｍｍｕｎｏｖｏ）；抗ＴＩＭ−３／ＰＤ−１  Ａｂ（ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏ）；抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂ（ＣｏＳｔｉｍ／Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ＭＥＤＩ−４７３６（抗ＰＤ−Ｌ１抗体、Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ＲＧ７４４６／ＭＰＤＬ３２８０Ａ（抗ＰＤ−Ｌ１抗体、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）；ＫＤ−０３３、ＰＤ−１アンタゴニスト（Ａｇｅｎｕｓ）；ＳＴＩ−Ａ１０１０；ＳＴＩ−Ａ１１１０；ＴＳＲ−０４２；ならびにプログラムされた死１（ＰＤ−１）またはプログラムされた死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）を対象とする他の抗体及び他の薬剤（例えば、ＪＴＸ−４０１４、ＵＳ２０１８／０１１８８２９）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３５８】
いくつかの実施形態では、対象は、本明細書で提供される抗ＬＩＬＲＢ２抗体、及び対象の腫瘍がＰＤ−Ｌ１高である場合にはＰＤ−１療法を用いた治療のために選択される。ＰＤ−Ｌ１のレベルの決定は、例えば、ＩＨＣを使用して決定され得る。いくつかの実施形態では、対象は、最初にＰＤ−１療法で治療され、後に、ＰＤ−１療法を継続するかしないかに関わらず、本明細書で提供される抗ＬＩＬＲＢ２抗体を用いて治療される。したがって、本明細書で提供される方法は、抗ＬＩＬＲＢ２抗体を用いた対象の治療を含み、ここで、対象は、ＰＤ−１療法で以前に治療されている。
【０３５９】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、１つ以上の腫瘍においてマクロファージの存在を示す患者に投与される。マクロファージの存在は、例えば、ｍＲＮＡシグネチャーまたはＩＨＣによって決定することができる。
【０３６０】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、抗ＣＤ４７抗体（例えば、ＣＣ９０００２（Ｃｅｌｇｅｎｅ）またはＨｕ５Ｆ９−Ｇ４（Ｆｏｒｔｙ  Ｓｅｖｅｎ，Ｉｎｃ．））、抗ＳＩＲＰアルファ抗体（例えば、ＯＳＥ−１７２（ＯＳＥ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｕｅｔｉｃｓ））、ペグ化ＩＬ−２（例えば、ＮＫＴＲ−２１４（Ｎｅｋｔａｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ））、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（商標登録）））、ＴＴＩ−６２１またはＴＴＩ−６２４（Ｔｒｉｌｌｉｕｍ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ＳＩＲＰａ−Ｆｃ）、ＡＬＸ１４８（Ａｌｅｘｏ、ＳＩＲＰａ−Ｆｃ）、及びＩＤＯ阻害剤（例えば、ｅｐａｃａｄｏｓｔａｔ（Ｉｎｃｙｔｅ））から選択される１つ以上の療法とともに投与される。
【０３６１】
いくつかの実施形態では、対象は、本明細書で提供される抗ＬＩＬＲＢ２抗体、及びＩＣＯＳ療法を用いた治療のために選択される（例えば、ＪＴＸ−２０１１、例えば、米国特許公開第２０１６／０３０４６１０号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に説明される）。いくつかの実施形態では、対象は、最初にＩＣＯＳ療法で治療され、後に、ＩＣＯＳ療法を継続するかしないかに関わらず、本明細書で提供される抗ＬＩＬＲＢ２抗体を用いて治療される。したがって、本明細書で提供される方法は、抗ＬＩＬＲＢ２抗体を用いた対象の治療を含み、ここで、対象は、ＩＣＯＳ療法で以前に治療されている。
【０３６２】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体（例えば、Ｍｅｄｉ６４６９、ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ、ＭＯＸＲ０９１６／ＲＧ７８８８、Ｒｏｃｈｅ）とともに投与される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、抗ＣＴＬＡ４抗体（例えば、イピリムマブ、ＹＥＲＶＯＹ（登録商標）、ＢＭＳ−７３４０１６、ＭＤＸ−１０１）とともに投与される。
【０３６３】
いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、化学療法剤である。本明細書に提供される抗ＬＩＬＲＢ２抗体と組み合わせられ得る例示的な化学療法剤としては、カペクチアビン、シクロホスファミド、ダカルバジン、テモゾロミド、シクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、シスプラチン、カルボプラチン、エピルビシン、エリブリン、５−ＦＵ、ゲムシタビン、イリノテカン、イクサベピロン、メトトレキサート、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ｎａｂ−パクリタキセル、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）（プロテイン結合パクリタキセル）、ペメトレキセド、ビノレルビン、及びビンクリスチンが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、少なくとも１つのキナーゼ阻害剤とともに投与される。非限定的な例示的なキナーゼ阻害剤としては、エルロチニブ、アファチニブ、ゲフィチニブ、クリゾチニブ、ダブラフェニブ、トラメチニブ、ベムラフェニブ、及びコビメタニブが挙げられる。
【０３６４】
いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、ＩＤＯ阻害剤である。非限定的な例示的なＩＤＯ阻害剤は、ＵＳ２０１６／００６０２３７、及びＵＳ２０１５／０３５２２０６に説明されている。非限定的な例示的なＩＤＯ阻害剤としては、Ｉｎｄｏｘｉｍｏｄ（Ｎｅｗ  Ｌｉｎｋ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、ＩＮＣＢ０２４３６０（Ｉｎｃｙｔｅ  Ｃｏｒｐ）、１−メチル−Ｄ−トリプトファン（Ｎｅｗ  Ｌｉｎｋ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、及びＧＤＣ−０９１９（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）が挙げられる。
【０３６５】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、免疫修飾薬（ＩＭｉＤ）と組み合わせて投与される。非限定的な例示的なＩＭｉＤとしては、サリドマイド、レナリドマイド、及びポマリドマイドが挙げられる。
【０３６６】
いくつかの実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、治療のための第２の治療方法で投与される。したがって、本明細書で提供される抗体の投与は、治療の別のシステムとの組み合わせであり得る。
【０３６７】
いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、がんワクチンである。がんワクチンは、樹状細胞の抗原転送及び活性化のための潜在的なアプローチとして調査されている。特に、共刺激経路の免疫学的チェックポイントまたはアゴニストと組み合わせたワクチン接種は、耐性を克服し、増加した抗腫瘍応答を生成する証拠を示している。腫瘍に対する免疫応答の促進に異なるアプローチを用いる様々ながんワクチンが試験されている（例えば、Ｅｍｅｎｓ，２００８，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｅｍｅｒｇ．Ｄｒｕｇｓ，１３（２）：２９５−３０８を参照されたい）。アプローチは、腫瘍に対するＢ細胞、Ｔ細胞、またはプロフェッショナル抗原提示細胞の応答を増強するように設計されている。例示的ながんワクチンの種類としては、ペプチド／タンパク質として、または遺伝子操作されたＤＮＡベクター、ウイルス、細菌などとして送達され得る、別個の腫瘍抗原の標的化を用いるペプチド系ワクチン、及び、例えば、患者由来の樹状細胞、自己腫瘍細胞、または腫瘍細胞溶解物、同種異系の腫瘍細胞などから開発されたワクチンを含むが、これらに限定されない、より明確でない標的に対するがんワクチンの開発のための細胞生物学アプローチが挙げられるが、これらに限定されない。
【０３６８】
非限定的な例示的ながんワクチンとしては、抗原提示細胞を含む自己末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）由来のＳｉｐｕｌｅｕｃｅｌ−Ｔが挙げられる（例えば、Ｋａｎｔｏｆｆ  ＰＷ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ３６３：４１１−２２を参照されたい）。Ｓｉｐｕｌｅｕｃｅｌ−Ｔ世代において、患者のＰＢＭＣは、前立腺酸性ホスファターゼ（前立腺抗原）及び顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（免疫細胞活性化因子）の組み換え融合タンパク質であるＰＡ２０２４を用いて、エクスビボで活性化される。候補がんワクチンへの別のアプローチは、黒色腫などの腫瘍組織において変異した特異的ペプチドに対する免疫応答を生成することである（例えば、Ｃａｒｒｅｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５，Ｓｃｉｅｎｃｅ３４８：６２３６を参照されたい）。そのような変異ペプチドは、いくつかの実施形態では、新抗原と称され得る。腫瘍ワクチンにおける新抗原の使用の非限定的な例として、主要組織適合遺伝子複合体タンパク質ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１に結合すると予測される腫瘍内の新生抗原は、黒色腫などのがんを有する個々の患者のために特定される。患者由来の樹状細胞は、エクスビボで成熟され、次いで新抗原でインキュベートされる。活性化樹状細胞は、次いで、患者に投与される。いくつかの実施形態では、がんワクチンの投与後に、新抗原に対する堅固なＴ細胞免疫が検出可能である。
【０３６９】
いくつかのこのような実施形態では、がんワクチンは、新抗原を使用して開発される。いくつかの実施形態では、がんワクチンは、ＤＮＡワクチン、例えば、マンマグロビン−Ａ  ＤＮＡワクチンである（例えば、Ｇｉｌｌａｎｄｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃ．Ｒｅｓ．，２０：５９６４−７５を参照されたい）。いくつかの実施形態では、がんワクチンは、ＰＲＯＳＴＶＡＣ（ｒｉｌｉｍｏｇｅｎｅ  ｇａｌｖａｃｉｒｅｐｖｅｃ／ｒｉｌｉｍｏｇｅｎｅ  ｇｌａｆｏｌｉｖｅｃ）などのがん抗原を含む、操作されたウイルスである。いくつかの実施形態では、がんワクチンは、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）遺伝子形質移入腫瘍細胞ワクチンである、ＧＶＡＸなどの操作された腫瘍細胞を含む（例えば、Ｎｅｍｕｎａｉｔｉｓ，２００５，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ，４：２５９−７４を参照されたい）。
【０３７０】
いくつかの実施形態では、本明細書に説明される抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、がんワクチンの前に、同時に、または後に投与される。いくつかの実施形態では、新抗原を使用して開発されたがんワクチンは、本明細書で説明される抗ＬＩＬＲＢ２抗体と組み合わせて使用される。いくつかのこのような実施形態では、高変異量を有するがん、例えば、黒色腫、肺癌、膀胱癌、または結腸直腸癌を治療するために、組み合わせが使用される。
【０３７１】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、キメラ抗原受容体Ｔ細胞療法（ＣＡＲ−Ｔ療法）と組み合わせて投与される。ＣＡＲ−Ｔ細胞は、腫瘍細胞によって発現される抗原を認識する受容体を発現するように遺伝子修飾され得る。抗原は、腫瘍によって特異的に発現される抗原、またはがん細胞及び健康な組織の両方によって発現される抗原であり得る。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ療法は、患者のＴ細胞を除去し、キメラ抗原受容体を発現するように修飾して、次いで患者に戻す、養子ＣＡＲ−Ｔ療法である。例えば、Ｄａｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６，Ｊ  Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ，１０８（７）：ｄｊｖ４３９，ｄｏｉ：１０．１０９３／ｊｎｃｉ／ｄｊｖ４３９、Ｇｉｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５，Ｂｌｏｏｄ  Ｒｅｖ，ｐｉｉ：Ｓ０２６８−９６０Ｘ（１５）０００８０−６，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｂｌｒｅ．２０１５．１０．００３、Ｇｉｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ，２６３（１）：６８−８９．ｄｏｉ：１０．１１１１／ｉｍｒ．１２２４３を参照されたい。
【０３７２】
キット／製品
本明細書に説明される方法のいずれかにおいて使用するためのキット、医薬品、組成物、及び単位剤形も、本明細書に提供される。
【０３７３】
キットは、抗ＬＩＬＲＢ２抗体を含む１つ以上の容器（または単位剤形及び／または製品）を含むことができる。いくつかの実施形態では、単位投与量が提供され、単位投与量は、１つ以上の追加の薬剤を含むか、または含まずに、抗ＬＩＬＲＢ２を含む所定の量の組成物を含有する。いくつかの実施形態では、このような単位投与量は、注射のための使い捨てプレフィルド注射器で供給される。いくつかの実施形態では、単位投与量に含有される組成物は、生理食塩水、スクロースなど、緩衝液、例えば、リン酸などを含むことができ、及び／または安定かつ効果的なｐＨ範囲内で製剤化することができる。いくつかの実施形態では、組成物は、適切な液体、例えば、滅菌水の添加によって再構成され得る、凍結乾燥粉末として提供することができる。いくつかの実施形態では、組成物は、スクロース及びアルギニンを含むがこれらに限定されない、タンパク質の凝集を阻害する１つ以上の物質を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ヘパリン及び／またはプロテオグリカンを含む。
【０３７４】
いくつかの実施形態では、単位用量で使用される抗ＬＩＬＲＢ２抗体の量は、説明される様々な方法及び／または組成物について本明細書で提供される量のいずれかであり得る。
【０３７５】
いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に説明される方法のいずれかに従うがんの治療における使用説明書をさらに含む。キットは、個々の好適なまたは治療の選択の説明をさらに含んでもよい。キット内に供給される説明書は、典型的には、ラベルまたは添付文書（例えば、キット内に含まれる用紙）上に書かれた説明書であるが、機械読み取り可能な説明書（例えば、磁気または光学記憶ディスクで保持される説明書）もまた許容される。いくつかの実施形態では、キットは、別の治療剤をさらに含む。
【０３７６】
キットは、好適な包装の中に入っている。好適な包装としては、バイアル、ボトル、瓶、可撓性パッケージング（例えば、密封マイラーまたはプラスチック袋）などが挙げられるが、これらに限定されない。キットは、任意に、緩衝液などの追加の成分及び解釈情報を提供することができる。したがって、本出願は、バイアル（密封バイアルなど）、ボトル、瓶、可撓性包装などを含む製品も提供する。
【実施例】
【０３７７】
以下に考察される実施例は、単に本発明の例示として意図されており、決して本発明を限定するものと見なされるべきではない。実施例は、以下の実験が実施される全てのまたは唯一の実験であることを表すことを意図していない。使用される数（例えば、量、温度など）に関して正確性を確実にするための努力がなされているが、いくらかの実験誤差及び偏差が考慮に入れられるべきである。別段指定されない限り、温度は摂氏温度であり、気圧は大気圧であるか、またはそれに近い。
【０３７８】
実施例１．ＨＬＡ−Ｇ細胞培養実験
以下の例では、骨髄細胞機能の抑制におけるＨＬＡ−Ｇの役割を調査する。図１は、ＬＩＬＲＢ２発現骨髄細胞及びＨＬＡ−Ｇ発現腫瘍細胞のモデルを示す。抗ＬＩＬＲＢ２遮断抗体は、骨髄細胞上に発現されるＬＩＬＲＢ２と腫瘍細胞上に発現されるＨＬＡ−Ｇとの間で示される。四量体として発現される多量体ＨＬＡ−Ｇを初代ヒト骨髄細胞アッセイで使用して、樹状細胞機能の抑制におけるＨＬＡ−Ｇの役割を調査した。
【０３７９】
非付着性未成熟樹状細胞（ｉＤＣ）を採集し、１倍ＤＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）中で２回洗浄し、次いで、ＧＬＵＴＡＭＡＸ（商標）（Ｇｉｂｃｏ）及び１０％のＨＩ−ＦＢＳ（Ｓｉｇｍａ）で補充されたＲＰＭＩ１６４０において９６ウェルの丸底組織培養処理プレート中にウェルあたり１×１０５細胞で播種した。ｉＤＣを、培地単独中に播種するか、またはＨＬＡ−Ｇ四量体（Ｆｒｅｄ  Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒ）の存在下または非存在下でＰＧＥ２、ＩＬ−１β、及びＴＮＦαを含有する培地中で成熟させるかのいずれかをして、３７℃＋５％のＣＯ２でインキュベートした。２４時間後、上清を製造者のプロトコル（ＢＤ）に従ってｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ  ｂｅａｄ  ａｒｒａｙ（ＣＢＡ）を介したサイトカイン分析のために採集して、Ａｃｃｕｒｉ  Ｃ６アナライザー（ＢＤ）を使用して分析した。細胞を、重要な抗原提示分子に特異的な抗体を用いて染色し、これらのマーカーの細胞発現を、ＦＡＣＳＣＥＬＥＳＴＡ（商標）フローサイトメーターアナライザー（ＢＤ）を使用して評価した。
【０３８０】
ＨＬＡ−Ｇ四量体の存在下で成熟したＤＣは、成熟マーカーＣＤ８０及びＣＤ８６の発現において減少を示した（図２Ａ〜２Ｆ）。この阻害効果は、ＨＬＡ−Ｇ四量体をＬＩＬＲＢ２低ドナー樹状細胞でインキュベートしたときに消滅した（図２Ｇ〜２Ｌ）。これらの結果は、可溶性ＨＬＡ−Ｇが、樹状細胞の成熟及び強力な抗原提示細胞へと発達する能力を遮断し、ＨＬＡ−Ｇ媒介型抑制が、樹状細胞上に発現されるＬＩＬＲＢ２に依存することを示す。
【０３８１】
実施例２．抗体の生成
マウス及びラットを、ヒトＬＩＬＲＢ２タンパク質またはヒトＬＩＬＲＢ２をコードするＤＮＡプラスミドを有するヒトＬＩＬＲＢ２を過剰発現する細胞で免疫した。Ｊ−１６及びＪ−１８〜Ｊ−２０を除く全ての抗体はマウス起源であり、Ｊ−１６及びＪ−１８〜Ｊ−２０はラット免疫由来である。ハイブリドーマクローンの上清を、全長ＬＩＬＲタンパク質を過剰発現する細胞株を使用して、他のＬＩＬＲファミリーメンバーに対するヒトＬＩＬＲＢ２に対する特異性についてスクリーニングした。関心対象のハイブリドーマクローンをスケールアップし、上清をより広範な抗体スクリーニングのために精製した後、関心対象のクローンを配列決定して、ヒトＩｇＧ４キメラとして組み換え産生した。（図３Ａ及び３Ｂ参照）。
【０３８２】
実施例３．キメラ抗体スクリーニング：初期の抗ＬＩＬＲＢ２スクリーニングセットアップ
１１の報告されているヒトＬＩＬＲファミリーメンバー間における高度の配列類似性のため、抗体を、ハイブリドーマクローン、ハイブリドーマスケールアップ、キメラ、及びヒト化抗体段階で全てのファミリーメンバーに対する特異性についてスクリーニングした。特異性を、細胞ならびに組み換えタンパク質の両方において、キメラ抗体段階でＦＯＲＴＥＢＩＯ（登録商標）ＯＣＴＥＴ（登録商標）を使用して確認した。
【０３８３】
２倍未満のアイソトープ対照カットオフで結合する抗体によって、細胞に対する特異性を定義した。陽性対照の抗体を利用して、細胞表面上のファミリーメンバーの発現を確立し、また、抗体も、陽性対照との比較において評価した。
【０３８４】
可溶性組み換えタンパク質アッセイについて、組み換えＬＩＬＲファミリータンパク質を、６ｘＨｉｓ及び／またはヒトＦｃ１融合タンパク質と表した。抗体を、抗ヒト捕捉（ＡＨＣ）センサに１０μｇ／ｍＬで充填し、センサを動態緩衝液でベースライン化した。対照抗体を、同様にセンサに充填した。ヒトＦｃ融合タンパク質を使用した場合、センサはヒトＦｃタンパク質で遮断され、動態緩衝液でベースライン化された。センサを、次いで、３００ｎＭでのファミリーメンバータンパク質との関連について試験した。結合は、ＯＣＴＥＴ（登録商標）機器上で０．０８ｎｍのカットオフを超える応答と考えられる。
【０３８５】
キメラ（ｈＩｇＧ４）抗ＬＩＬＲＢ２抗体を、１０の他のヒトＬＩＬＲファミリーメンバーに対する細胞発現型ｈＬＩＬＲＢ２に対する特異性、細胞発現型ＬＩＬＲＢ２とのリガンド相互作用を遮断する能力、及び初代ヒトマクロファージアッセイにおいて炎症活性化状態を有するＭ１様マクロファージにＭ２様マクロファージを変換する能力に基づいて選択した。選択したＬＩＬＲＢ２特異性、リガンド遮断抗体を、非ヒト霊長類（ＮＨＰ）単球との結合についてさらにスクリーニングした。全てのスクリーニングにおいてアイソタイプ対照抗体を含み、バックグラウンドシグナルを決定した。リガンド遮断、ｈＬＩＬＲＢ２特異性、キメラ抗体を特定するために実施される、特定の基準及び戦略を以下に説明する。結果を図３Ａ及び図３Ｂに要約し、以下に詳細に説明する。
【０３８６】
抗体ビニングの概要
ＬＩＬＲＢ２に対する抗体のサブセットを、サンドイッチ形式でＯＣＴＥＴ（登録商標）Ｒｅｄ９６を使用してビニングした。簡潔に言えば、抗体＃１（列１に示される）を、１０μｇ／ｍＬでＡＨＣセンサに充填した。先端を動態緩衝液でベースライン化し、ｈＦｃ１で遮断し、動態緩衝液でベースライン化し、次いでヒトＬＩＬＲＢ２で充填した。先端を再び動態緩衝液でベースライン化し、１０μｇ／ｍＬの抗体＃２（行１に示される）で充填した。以下の表２に示される応答値は、説明されるサンドイッチ形式の抗体＃２の結合である。
【０３８７】
表２．競合結合アッセイの結果
【表２】
2021506344.tif 000004
ＬＩＬＲＢ２への特異的な結合剤、及びＬＩＬＲＢ２へのＨＬＡ−Ｇの結合の強力な遮断剤として特定された抗体（Ｊ−１９、Ｊ−１１、及びＪ−１７）は、近いが完全には重複しないエピトープビンに入る。Ｊ−１１及びＪ−１９は、互いのＬＩＬＲＢ２への結合を遮断しなかったが、両方ともＪ−１７によって遮断された。ＬＩＬＲＢ２に特異的であるが、ＨＬＡ−Ｇ、Ｊ−０４、Ｊ−０３、及びＪ−０７を遮断しない抗体は、特異的でかつＨＬＡ−Ｇを遮断する３つの抗体由来の別個のビンで結合するが、ＨＬＡ−ＧのＬＩＬＲＢ２への結合を遮断するが、ＬＩＬＲＡ１に対して交差反応性である抗体、Ｊ−１６と同じビンである。結果を以下の表３に示す。
【０３８８】
表３．抗体ビニング結果
【表３】
2021506344.tif 000005
【０３８９】
実施例４．キメラ抗体スクリーニング：ＬＩＬＲファミリーメンバーとの交差反応性に対するスクリーニング
このスクリーニングの目的は、細胞上で発現されたｈＬＩＬＲＢ２への特異的な結合を有する抗体を、細胞発現型ｈＬＩＬＲＢ１、ｈＬＩＬＲＢ３、ｈＬＩＬＲＢ４、ｈＬＩＬＲＢ５、ｈＬＩＬＲＡ１、ｈＬＩＬＲＡ２、ｈＬＩＬＲＡ３、ｈＬＩＬＲＡ４、ｈＬＩＬＲＡ５、及びｈＬＩＬＲＡ６に対するカウンタースクリーニングを用いて特定することであった。２５のキメラ（ｈＩｇＧ４）抗体を、細胞のｈＬＩＬＲＢ２特異性についてスクリーニングした。ｈＬＩＬＲＢ２結合の陽性ヒットを、アイソタイプ対照ｍＡｂ結合に対して２倍超のｈＬＩＬＲＢ２−ＣＨＯ−ｓに結合する抗体として特定した。また、アイソタイプ対照ｍＡｂ結合に対して２倍超の非ＬＩＬＲＢ２発現細胞に結合した抗体も、非ＬＩＬＲＢ２特異的または交差反応性として指定した。
【０３９０】
図４に示されるように、試験されたキメラ抗体の７６％が細胞発現型ヒトＬＩＬＲＢ２と結合することを確認した。これらのｈＬＩＬＲＢ２結合抗体の７８％が、ＣＨＯ−ｓ上で過剰発現された他の１０のｈＬＩＬＲファミリーメンバーに対してｈＬＩＬＲＢ２への特異的な結合を示した。ｈＬＩＬＲＢ２  ＣＨＯ−ｓに加えて、別のＬＩＬＲ過剰発現細胞株のアイソタイプ対照の２倍超の結合を検出された抗体は、ｈＬＩＬＲＢ３、ｈＬＩＬＲＡ１、ｈＬＩＬＲＡ２、及び／またはｈＬＩＬＲＡ３に対して交差反応性であることが見出された。ｈＬＩＬＲＢ１、ｈＬＩＬＲＢ４、ｈＬＩＬＲＡ４、ｈＬＩＬＲＡ５、またはｈＬＩＬＲＡ６交差反応性抗体は、このスクリーニングでは特定されなかった。
【０３９１】
実施例５．キメラ抗体スクリーニング：抗ＬＩＬＲＢ２キメラｍＡｂを遮断するＨＬＡ−Ｇ及び抗ＬＩＬＲＢ２キメラｍＡｂを遮断するＨＬＡ−Ａ２のスクリーニング
抗体を、細胞ベースのアッセイにおいて、リガンド−レセプター相互作用を遮断する能力についてさらにスクリーニングした。ＨＬＡ−ＧがＬＩＬＲＢ２に結合すると、骨髄細胞は免疫抑制性になる。したがって、ＨＬＡ−Ｇ：ＬＩＬＲＢ２相互作用を遮断することができる抗ＬＩＬＲＢ２抗体を特定することは、抗腫瘍応答の促進において有益であると予測される。ＨＬＡ−Ｇに加えて、骨髄細胞を抑制することができる別のＬＩＬＲＢ２リガンドは、古典的な主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩ分子、例えば、ＨＬＡ−Ａ２である。
【０３９２】
二次スクリーニングでは、ヒトＬＩＬＲＢ２を過剰発現する１×１０５ＣＨＯ−ｓ細胞を、９６ウェルの丸底組織培養処理プレート中に播種し、１ｘＤＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）で２回洗浄して、５０μＬのＦＡＣＳ緩衝液（２％のＨＩ−ＦＢＳ（Ｓｉｇｍａ）及び０．０５％のアジ化ナトリウムを含有する１ｘＤＰＢＳ）中で調製された１０μｇ／ｍＬの一次抗体（抗ＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂまたは対照）でインキュベートした。４℃で３０分間、ｍＡｂでインキュベートした後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、次いで、５μｇ／ｍＬのＡＰＣコンジュゲートＨＬＡ−Ａ２またはＨＬＡ−Ｇ四量体（Ｆｒｅｄ  Ｈｕｔｃｈ）を含有する５０μＬのＦＡＣＳ緩衝液中で再懸濁した。細胞を、４℃で３０〜６０分間、光から保護してインキュベートした。四量体でインキュベートした後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、固定緩衝液（１ｘＤＰＢＳで希釈した１．５％のパラホルムアルデヒド）中で再懸濁した。試料を、Ｃｅｌｅｓｔａフローサイトメーターアナライザー（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して分析した。データは四量体単独に対するｍＡｂによって遮断された四量体パーセンを表し、以下の式に従って計算した。
【０３９３】
【数１】
2021506344.tif 000006
ＨＬＡ−Ｇ遮断抗体をＨＬＡ−Ｇ非遮断抗体から区別する研究の結果を、図５に示す。細胞上のＨＬＡ−Ｇ：ＬＩＬＲＢ２相互作用を遮断することができる抗体を、抗体の非存在下で細胞に結合した四量体と比較した、抗体の存在下でＬＩＬＲＢ２＋細胞に結合した四量体のパーセントとして特定する。２５の抗ＬＩＬＲＢ２抗体のうち７つが、ＨＬＡ−Ｇ四量体がｈＬＩＬＲＢ２＋ＣＨＯ−ｓと結合するのを少なくとも５０％遮断した。アイソタイプ対照抗体のいずれも、ＨＬＡ−ＧがＬＩＬＲＢ２＋細胞と結合するのを遮断しなかった。
【０３９４】
ＨＬＡ−Ａ２遮断抗体をＨＬＡ−Ａ２非遮断抗体から区別する研究の結果を、図６に示す。細胞上のＨＬＡ−Ａ２：ＬＩＬＲＢ２相互作用を遮断することができる抗体を、抗体の非存在下で細胞に結合した四量体と比較した、抗体の存在下でＬＩＬＲＢ２＋細胞に結合した四量体のパーセントとして特定する。２５の抗ＬＩＬＲＢ２抗体のうち６つが、ＨＬＡ−Ａ２四量体がｈＬＩＬＲＢ２＋ＣＨＯ−ｓと結合するのを少なくとも５０％遮断した。アイソタイプ対照抗体のいずれも、ＨＬＡ−Ａ２がＬＩＬＲＢ２＋細胞と結合するのを遮断しなかった。
【０３９５】
実施例６．キメラ抗体スクリーニング：細胞培養中の生物学的活性についての抗ＬＩＬＲＢ２キメラｍＡｂのスクリーニング
ヒトマクロファージ単一培養サイトカイン放出アッセイ
健康なドナーの末梢血からの初代ヒト単球を、Ｍ−ＣＳＦの存在下でマクロファージに分化した。分化の７日後、１×１０５のヒト単球分化マクロファージ（ＨＭＤＭ）を、細胞培養培地（ＲＰＭＩ（Ｇｉｂｃｏ）＋１０％のＦＢＳ（Ｓｉｇｍａ））中１μｇ／ｍＬの可溶性ｍＡｂの存在または非存在下で、１００ｎｇ／ｍＬのＬＰＳを含有する２００μＬの最終体積で、９６ウェルの丸底組織培養処理プレート中にウェルごとに播種した。３７℃で２４時間、５％のＣＯ２でインキュベートした後、上清を採集し、製造者のプロトコル（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に従ってサイトカインビーズアレイ（ＣＢＡ）を実施して、ｍＡｂに応答して産生されるサイトカインを測定した。試料を、Ａｃｃｕｒｉ  Ｃ６サイトメーターアナライザー（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して分析した。データは、２〜４人のドナーの平均値を表す。
【０３９６】
一次ＨＭＤＭによるＭ１／炎症性及びＭ２／抗炎症性サイトカイン産生を、図７Ａ及び７Ｂに示すように、可溶性抗ＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂでの処理時に検出した。測定されたＭ１／炎症性サイトカインは、ＴＮＦα、ならびにＩＬ−６及びＩＬ−１βを含んだ（データは示さず）。測定されたＭ２／抗炎症性サイトカインは、ＩＬ−１０、ならびにＣＣＬ−２を含んだ（データは示さず）。サイトカインの産生を、ＬＰＳ処理のみに対する正規化レベルとして説明する。
【０３９７】
Ｍ１促進活性（ＴＮＦαの増加により測定される）と、抗ＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂがＨＬＡ−Ｇ／Ａ：ＬＩＬＲＢ２相互作用を遮断する能力との間に正の相関を観察した（図８Ａ及び８Ｂ）。
【０３９８】
ヒトマクロファージ単一培養Ｎａｎｏｓｔｒｉｎｇアッセイ
初代ヒト単球を、Ｍ−ＣＳＦの存在下でマクロファージに分化した。分化の７日後、１×１０５ＨＭＤＭを、細胞培養培地（ＲＰＭＩ（Ｇｉｂｃｏ）＋１０％のＦＢＳ（Ｓｉｇｍａ））中１０μｇ／ｍＬの可溶性抗ｈＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂの存在または非存在下で、１００ｎｇ／ｍＬのＬＰＳを含有する２００μＬの最終体積で、９６ウェルの丸底組織培養処理プレート中にウェルごとに播種した。同様の条件を調整して、ＬＰＳの不存在下でのｍＡｂ活性を評価した。細胞を３７℃で５％のＣＯ２でインキュベートし、別個のウェルを播種して、処理後４時間及び２４時間での遺伝子変化を評価した。各時点で、上清を採集し、ＲＮＡを細胞から抽出し、Ｑｕｉｂｉｔを使用して定量化し、ＡＡＴＩのＦｒａｇｍｅｎｔ  Ａｎａｌｙｚｅｒを使用して品質管理した。十分なＲＮＡが試料から抽出された場合、遺伝子発現を、Ｈｕｍａｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｖ２パネルならびに特注のマクロファージ特異的スパイクインを使用した、ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇ  ｎＣｏｕｎｔｅｒを使用して実施した。遺伝子発現を、ハウスキーピング遺伝子の発現に対して正規化し、次いで、負のプローブからのデータを使用してノイズ閾値化を実施した。遺伝子発現をｌｏｇ２空間に変換し、ＬＩＬＲＢ２結合剤で処理された試料からのデータを、同じドナー由来のパリビズマブ処理された試料からのデータに対して正規化した。データは、４人のドナーからの結果を表す。
【０３９９】
各ドナー及び各処理について、ｌｏｇ２（遺伝子発現）をパリビズマブ対照に応答するｌｏｇ２（遺伝子発現）に対して正規化した。表４及び５は、ＭＡＴＬＡＢでｔ検定関数を使用して計算された、ＬＰＳの存在下または非存在下で差次的に発現された遺伝子をそれぞれ列挙する。薬物に４時間曝露された後、ＬＰＳの不在下で全ての抗ＬＩＬＲＢ２抗体に応答して０．０５未満のｐを伴って全てのドナー間で１より大きい（すなわち、２倍の増加）または−１未満（すなわち、２倍の減少）のいずれかの中央値ｌｏｇ２（倍率変化）を有した遺伝子（表４）、及び薬物に２４時間曝露された後、ＬＰＳの存在下で全ての抗ＬＩＬＲＢ２抗体に応答して差次的に発現された遺伝子（表５）。これらの変化は、ドナー間で一貫しており、組織培養の項で定義された単一培養シグネチャースコアの基礎である。
【０４００】
表４．ＬＰＳを含まない４時間での単一培養抗ＬＩＬＲＢ２差次的遺伝子発現
【表４】
2021506344.tif 000007
表５．ＬＰＳを含む２４時間での単一培養抗ＬＩＬＲＢ２差次的遺伝子発現
【表５】
2021506344.tif 000008
【０４０１】
実施例７．キメラ抗体スクリーニング：抗ＬＩＬＲＢ２キメラｍＡｂの非ヒト霊長類に対する交差反応性についてのスクリーニング
方法
初代細胞結合
ヒトにおけるＬＩＬＲＢ２発現は、単球及び好中球を含む自然免疫細胞の種類に制限されている。選択したＨＬＡ−Ｇ／Ａ遮断、Ｍ２からＭ１様マクロファージへの変換を促進することができる抗ＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂを、全血中のヒト、カニクイザル、及びアカゲザルの単球に結合する可能性について試験した。健康なヒト、カニクイザル、及びアカゲザルドナーから得た全血を、ナトリウムヘパリンチューブ中に得た。受容すると、１００μＬの全血原液を、製造業者のプロトコルに従ってＦｃ受容体遮断試薬（ＴｒｕＳｔａｉｎ、Ｂｉｏｌｏｇｅｎｄ）でインキュベートした。１５分間のインキュベーションの後、ビオチン化ｍＡｂを２５μｇ／ｍＬで血液に添加し、室温でインキュベートした。２０分後、希釈したｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ−ＡＰＣ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）及びヒト／ＮＨＰ交差反応性抗ＣＤ１４−ＢＶ４２１クローンＭ５Ｅ２（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）を添加し、室温で２０分間インキュベートした。赤血球を溶解し、試料を、製造業者のプロトコルに従って１倍のＬｙｓｅ／Ｆｉｘ溶液（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して固定した。試料を、Ｃｅｌｅｓｔａフローサイトメーターアナライザー（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して分析した。単球を側方散乱（ＳＳＣ）ｈｉＣＤ１４ｈｉ細胞として種間同定し、好中球をＳＳＣｈｉＣＤ１４ｌｏ細胞として特定し、リンパ球をＳＳＣｌｏＣＤ１４ｎｅｇ細胞として特定した。
【０４０２】
過剰発現アカゲザルＬＩＬＲＢ２への細胞上結合
アカゲザルＬＩＬＲＢ２（ＬＩＬＲＢｂ）タンパク質に結合する抗ｈＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂを、選択した抗ｈＬＩＬＲＢ２  ｍＡＢでＬＩＬＲＢｂ−ＣＨＯ細胞を３０分間インキュベートすることによって評価した。インキュベーション後、細胞を洗浄し、製造業者のプロトコルに従って抗ｈＩｇＧ−ＡＰＣ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｓ）でインキュベートした。細胞結合を、Ｃｅｌｅｓｔａフローサイトメーターアナライザー（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用するフローサイトメトリーによって評価した。
【０４０３】
結果
このアッセイで試験された全ての抗ＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂは、ヒト全血中でリンパ球より単球及び好中球に優先的に結合した（図９Ａ〜９Ｃ）。単一抗ＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂは、カニクイザル及びヒトの両方に異種間反応性を示し、同様にリンパ球より単球及び好中球に優先的に結合した。アイソタイプ対照抗体は、ヒトまたはＮＨＰ血液中のいかなる細胞の種類にも有意に結合しなかった。図１０Ａ及び１０Ｂは、これらの結果が、ＮＨＰ  ＬＩＬＲＢ２（ＬＩＬＲＢｂ）を過剰発現する細胞に翻訳され、そのためＮＨＰ単球及び好中球に優先的に交差結合する同じ抗ｈＬＩＬＲＢ２が、用量依存性様式でアカゲザルＬＩＬＲＢ２（ＬＩＬＲＢｂ）過剰発現ＣＨＯ−ｓにも特異的に結合し、かつＬＩＬＲＢａを含むアカゲザルの近縁ファミリーメンバーとは交差反応しないことを確認した。
【０４０４】
実施例８．リードキメラ抗体のヒト化、親和性特性評価、及び評価戦略
リードキメラを、ループ構造及び鎖インタフェースを支持するために特定のアミノ酸を維持しながら、リード抗体のＣＤＲをヒトフレームワークに移植することによってヒト化した。合計５つの重鎖可変領域及び５つの軽鎖可変領域を生成し、組み合わせて発現させて、ヒトＩｇＧ４バックボーン中に合計２５個のヒト化バリアントを作成した。これらのバリアントは組み換えタンパク質として発現し、タンパク質力価及びヒトＬＩＬＲＢ２標的に対する親和性に基づいて選別した。抗体を、機能及び生物物理学的特性についてさらに特性評価して、パネルを絞り込み、ヒト化リードを選択した。
【０４０５】
ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ  Ｇｏａｔ  Ａｎｔｉ−Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ、Ｆｃγ  Ｆｒａｇｍｅｎｔ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ抗体を用いて事前固定されたＭａｓｓ−２（Ｓｉｅｒｒａ  Ｓｅｎｓｏｒｓ）高容量アミンチップを使用して、ヒト化抗体を抗ヒト表面上で捕捉し、次いで、ヒトＬＩＬＲＢ２−Ｈｉｓへの結合を、６５〜０．２７ｎＭの６つの異なる濃度の分析物を抗体表面上に流動させることによって測定した。抗ＬＩＬＲＢ２の表面を除去し（１０ｍＭのグリシン、ｐＨ２．０）、全ての濃度または緩衝液単独サイクルの間で再捕捉した。データを、Ｓｉｅｒｒａ  Ａｎａｌｙｚｅｒソフトウェア（バージョン３．１．１４）を使用して分析した。全ての曲線を二重減算し、１：１のＬａｎｇｍｕｉｒ  Ｆｉｔに適合した。結果を以下の表６に示す。
【０４０６】
表６．抗体の結合動態
【表６】
2021506344.tif 000009
【０４０７】
ヒト化（ｈＩｇＧ４）抗ＬＩＬＲＢ２抗体を、１０の他のヒトＬＩＬＲファミリーメンバーに対する細胞発現型ｈＬＩＬＲＢ２に対する特異性、細胞発現型ＬＩＬＲＢ２とのリガンド相互作用を遮断する能力、及び初代ヒトマクロファージアッセイにおいてＭ２様マクロファージをＭ１様炎症活性化状態に変換する能力に基づいてさらに特性評価した。抗体を、非ヒト霊長類（ＮＨＰ）単球との結合についてさらにスクリーニングした。ヒト化バリアントを、細胞発現型ＬＩＬＲＢ２に対する親和性の特異的ＥＣ／ＩＣ５０、リガンド遮断、及びサイトカイン産生について、初代ヒトマクロファージ機能アッセイにおいてさらに評価した。全てのスクリーニングにおいてアイソタイプ対照抗体を含み、バックグラウンドシグナルを決定した。ＥＣ／ＩＣ５０を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して、形質転換された非正規化データに基づいて計算した。結果を図１１Ａ及び図１１Ｂ図に要約し、以下に詳細に説明する。
【０４０８】
実施例９．ヒト化抗体特性評価：ＬＩＬＲファミリー交差反応性スクリーニング
この評価の目的は、抗ＬＩＬＲＢ２抗体が、ｈＬＩＬＲＢ１、ｈＬＩＬＲＢ３、ｈＬＩＬＲＢ４、ｈＬＩＬＲＢ５、ｈＬＩＬＲＡ１、ｈＬＩＬＲＡ２、ｈＬＩＬＲＡ３、ｈＬＩＬＲＡ４、ｈＬＩＬＲＡ５、及びｈＬＩＬＲＡ６を含む他の関連ＬＩＬＲファミリーメンバーに結合することなく、ヒト化後の細胞上で発現されたｈＬＩＬＲＢ２への特異性を維持することを検証することであった。ｈＬＩＬＲＢ２結合の陽性ヒットを、アイソタイプ対照抗体結合に対して３倍以上結合する抗体として特定した。試験されたバリアントのいずれも、アイソタイプに対して非特異的結合は３倍を超えなかった。さらに、ＥＣ５０細胞ベースの親和性測定を決定した。
【０４０９】
方法
１０のＬＩＬＲファミリーメンバーのいずれかに向けてではなく、ｈＬＩＬＲＢ２に対する特異性を試験するために、多重化細胞ベースのバーコード化アプローチを、製造業者のプロトコルに従ってＦａｒ  Ｒｅｄ及び／またはＶｉｏｌｅｔ  Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｃｅ色素（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて細胞を染色することによって、または染色しないままにすることによって、使用した。簡潔に言えば、細胞を１ｘＤＰＢＳで２回洗浄し、次いで３７℃で２０分間、１ｘＤＰＢＳ中で希釈した色素でインキュベートし、５〜１０分ごとに穏やかに混合した。色素標識を、１００％のＨＩ−ＦＢＳ（Ｓｉｇｍａ）の等量を細胞に添加することによってクエンチした。ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ２、ＬＩＬＲＢ３、ＬＩＬＲＢ４、及びＬＩＬＲＢ５細胞株はまたＧＦＰ陽性であり、一方ＬＩＬＲＡ１、ＬＩＬＲＡ２、ＬＩＬＲＡ３、ＬＩＬＲＡ４、ＬＩＬＲＡ５、及びＬＩＬＲＡ６細胞株はＧＦＰ陰性であることに留意されたい。次いで、細胞を１ｘＤＰＢＳで２回洗浄し、次いで、１１個全ての細胞株を、９６ウェル丸底組織培養処理プレート中でウェルごとに組み合わせた。各細胞株の少なくとも２５×１０３個の細胞をウェルごとに播種した。次いで、細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液（２％のＨＩ−ＦＢＳ（Ｓｉｇｍａ）＋０．０５％のアジ化ナトリウムを含有する１ｘＤＰＢＳ）中で調製された一次抗体（抗ＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂまたは対照）中で再懸濁した。４℃で３０分間インキュベートした後、細胞を１ｘＤＰＢＳで２回洗浄し、ＦＡＣＳ緩衝液中で１：２００に希釈された抗ヒトＩｇＧ−ＰＥ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）中で再懸濁した。４℃で３０分間、光から保護してインキュベートした後、細胞を１ｘＤＰＢＳで洗浄し、固定緩衝液（１ｘＤＰＢＳで希釈した１．５％のパラホルムアルデヒド）中で再懸濁した。試料を、Ｃｅｌｅｓｔａフローサイトメーターアナライザー（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して分析した。ＰＥの幾何平均蛍光強度（ｇＭＦＩ）を、各細胞株にわたって各抗体について決定した。バックグラウンドＭＦＩを、アイソタイプ対照を用いて検出し、試験された抗体の相対結合を、アイソタイプに対する倍として測定した。
【０４１０】
結果
ｈＬＩＬＲＢ２への結合及び特異性について試験された抗ｈＬＩＬＲＢ２ヒト化抗体は、細胞ベースの結合アッセイにおいて、全ての抗体はｈＬＩＬＲＢ２と高度に結合し、１０の追加のｈＬＩＬＲファミリーメンバーのうちのいずれとも交差結合しなかった（図１２）。ＬＩＬＲＢ２発現ＣＨＯ−ｓに対する各抗体のＥＣ５０は、サブナノモル範囲内であった（図１３）。
【０４１１】
実施例１０．ヒト化抗体特性評価：ＨＬＡ−Ｇ及びＨＬＡ−Ａ２のｈＬＩＬＲＢ２＋細胞への遮断
ＨＬＡ−Ｇ及びＨＬＡ−Ａ２の初代ヒトマクロファージ発現ｈＬＩＬＲＢ２との相互作用の遮断における、選択したヒト化バリアントの効力を評価した。初代ヒト単球を、Ｍ−ＣＳＦの存在下でマクロファージに分化した。分化の７日後、１×１０５のＨＭＤＭを、９６ウェルの丸底組織培養処理プレート中に播種し、１ｘＤＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）で２回洗浄して、次いでＦＡＣＳ緩衝液（２％のＨＩ−ＦＢＳ（Ｓｉｇｍａ）及び０．０５％のアジ化ナトリウムを含有する１ｘＤＰＢＳ）中で調製された５０μＬの一次抗体（抗ＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂまたは対照）でインキュベートした。４℃で３０分間、ｍＡｂでインキュベートした後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、次いで、５μｇ／ｍＬのＡＰＣコンジュゲートＨＬＡ−ＧまたはＨＬＡ−Ａ２四量体（Ｆｒｅｄ  Ｈｕｔｃｈ）を含有する５０μＬのＦＡＣＳ緩衝液中で再懸濁した。細胞を、４℃で３０〜６０分間、光から保護してインキュベートした。四量体でインキュベートした後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、固定緩衝液（１ｘＤＰＢＳで希釈した１．５％のパラホルムアルデヒド）中で再懸濁した。試料を、Ｃｅｌｅｓｔａフローサイトメーターアナライザー（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して分析した。
【０４１２】
図１４に示すように、試験された全ての抗ｈＬＩＬＲＢ２ヒト化抗体は、ナノモル範囲でＥＣ５０を有する細胞発現型ｈＬＩＬＲＢ２とのＨＬＡ−Ｇの相互作用を遮断した。試験した各バリアントのＥＣ５０値を、図１１Ｂに示す。アイソタイプ対照を含む対照抗体及び非リガンド遮断抗ｈＬＩＬＲＢ２キメラ抗体は、このアッセイにおいていかなる活性も示さなかった。
【０４１３】
図１５に示すように、試験された全ての抗ｈＬＩＬＲＢ２ヒト化抗体は、ナノモル範囲でＥＣ５０を有する細胞発現型ｈＬＩＬＲＢ２とのＨＬＡ−Ａ２の相互作用を遮断した。試験した各バリアントのＥＣ５０値を、図１１Ｂに示す。
【０４１４】
実施例１１．ヒト化抗体特性評価：細胞培養中のヒト化抗ＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂの生物学的活性
腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）は、Ｍ２様、免疫抑制性マクロファージと一致する機能的活性化状態を示す。理論に束縛されるものではないが、マクロファージ上の抑制性受容体、ＬＩＬＲＢ２を弱めることは、免疫抑制マクロファージの誘導を防止し、過剰炎症反応を促進すると仮定される。抗ＬＩＬＲＢ２抗体の機能的活性を特性評価するために、ＥＣ／ＩＣ５０を、ヒト単球由来マクロファージ（ＨＭＤＭ）サイトカイン放出アッセイにおいて、Ｍ２をＭ１様マクロファージに変換することができる抗ＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂの効力測定値として決定した。このアッセイにおいてサブｎＭ活性（ＥＣ５０）を有する抗体を、Ｍ１促進ｍＡｂと指定した。
【０４１５】
方法
分化の７日後、１×１０５ＨＭＤＭを、細胞培養培地（ＲＰＭＩ（Ｇｉｂｃｏ）＋１０％のＦＢＳ（Ｓｉｇｍａ））中ｍＡｂの存在または非存在下で、１００ｎｇ／ｍＬのＬＰＳを含有する２００μＬの最終体積で、９６ウェルの丸底組織培養処理プレート中にウェルごとに播種した。３７℃で２４時間、５％のＣＯ２でインキュベートした後、上清を採集し、製造者のプロトコル（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に従ってＣＢＡを実施して、ｍＡｂに応答して産生されるサイトカインを測定した。試料を、Ａｃｃｕｒｉ  Ｃ６サイトメーターアナライザー（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して分析した。
【０４１６】
結果
図１６Ａ及び１６Ｂに示すように、全ての抗ｈＬＩＬＲＢ２ヒト化ｍＡｂは、Ｍ１促進活性を示す一方、ＩＬ−１０及びＣＣＬ−２を含む産生Ｍ２関連サイトカインを抑制した。試験されたヒト化抗ｈＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂの６７％は、このアッセイにおいてサブナノモル活性を有することを示した。試験した各バリアントのＥＣ５０値を、図１０Ｂに示す。
【０４１７】
実施例１２．ヒト化抗体特性評価：非ヒト霊長類ＬＩＬＲＢ２（ＬＩＬＲＢｂ）への選択的結合
ヒト化ｍＡｂを異種間反応性について評価するために、ｈＬＩＬＲＢ２特異的、リガンド遮断ｍＡｂを、近縁のＮＨＰ  ＬＩＬＲファミリーメンバーへではなく、推定上のアカゲザルＬＩＬＲＢ２（ＬＩＬＲＢｂ）過剰発現細胞へのさらなる選択的結合について評価した。
【０４１８】
方法
アカゲザルＬＩＬＲＢ２（ＬＩＬＲＢｂ）タンパク質に結合する抗ｈＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂを、選択した抗ｈＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂでＬＩＬＲＢｂ−ＣＨＯ細胞を３０分間インキュベートすることによって評価した。インキュベーション後、細胞を洗浄し、製造業者のプロトコルに従って抗ｈＩｇＧ−ＡＰＣ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｓ）でインキュベートした。細胞結合を、Ｃｅｌｅｓｔａフローサイトメーターアナライザー（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用するフローサイトメトリーによって評価した。
【０４１９】
結果
全ての抗ｈＬＩＬＲＢ２ヒト化ｍＡｂｓが、用量依存性及び特定の様式でアカゲザルＬＩＬＲＢ２（ＬＩＬＲＢｂ）に結合した（図１７Ａ）。これらの抗ｈＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂｓは、細胞上に発現したアカゲザル近縁のＬＩＬＲＢａタンパク質には結合しなかった（図１７Ｂ）。
【０４２０】
実施例１３．遺伝子発現分析：組織培養実験
新鮮なヒト腎臓腫瘍試料を、手術後に得た。各腫瘍の一部分を切断し、ＩＨＣのために固定した。残った腫瘍のおよそ３００μＭの切片を、６ウェルプレートに載置した。示された処理を培地に添加し、プレートを３７℃でインキュベートした。各切片を、６種類の薬物のうちの１つの１０μｇ／ｍＬで２４時間処理した。実験に含められた６つの処理は、Ｊ−１９、Ｊ−１７、及びＪ−１１（全てＬＩＬＲＢ２結合剤及びリガンド遮断剤）、Ｊ−０４（リガンド結合を遮断しないＬＩＬＲＢ２結合剤）、抗ＴＩＭ３抗体、ならびに陰性対照として使用されたパリビズマブである。
【０４２１】
腫瘍切片を、ＱｉａｇｅｎのＴｉｓｓｕｅＬｙｓｅｒのプロセッサを使用して溶解し、ホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）試料を脱パラフィンした。ＲＮＡを、ＦＦＰＥ及び新鮮な腫瘍試料から抽出し、Ｑｕｉｂｉｔを使用して定量化し、かつ特定の場合には、ＡＡＴＩのＦｒａｇｍｅｎｔ  Ａｎａｌｙｚｅｒを使用して品質管理した。十分なＲＮＡが試料から抽出された場合、遺伝子発現を、Ｈｕｍａｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｖ２パネルならびに特注のマクロファージ特異的スパイクインを使用した、ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇ  ｎＣｏｕｎｔｅｒを使用して実施した。遺伝子発現を、ハウスキーピング遺伝子の発現に対して正規化し、負のプローブからのデータを使用してノイズ閾値化を実施した。遺伝子発現をｌｏｇ２空間に変換し、ＬＩＬＲＢ２結合剤または抗ＴＩＭ３で処理された試料からのデータを、同じ患者由来のパリビズマブ処理された試料からのデータに対して正規化した。図１８は、パリビズマブ対照に対する処理に応答した遺伝子発現における変化を示す。パリビズマブ対照に対する差次的遺伝子発現は、以下の表７に定量化される。リスト中の各遺伝子は、０．０５５未満の名目上のｐ値を有する少なくとも２回の処理に対して差次的発現を示した。遺伝子発現における倍率変化は、全ての処理について陽性であるか、または全ての処理について陰性であるかのいずれかであった。
【０４２２】
表７．組織培養差次的遺伝子発現
【表７】
2021506344.tif 000010
2021506344.tif 000011
【０４２３】
各処理された試料（列）における各遺伝子（行）の発現におけるｌｏｇ２（倍率変化）を示す階層的クラスタリングヒートマップを、図１９に示す。リスト中の各遺伝子は、０．０５５未満の名目上のｐ値を有する少なくとも２回の処理に対して差次的発現を示した。セット１の遺伝子の発現は、一般的に処理に応答して下方調節され（灰色の枠）、セット２の遺伝子の発現は、一般的に処理に応答して上方調節される（黒枠）。
【０４２４】
各試料の応答スコアを、以下の式に従い、セット２における遺伝子のサブセットのｌｏｇ２（倍率変化）の和を、セット１における遺伝子のサブセットのｌｏｇ２（倍率変化）の負の和に加算し、含まれる遺伝子の数で除算することによって計算した。
【０４２５】
【数２】
2021506344.tif 000012
各リガンド遮断抗ＬＩＬＲＢ２薬物に対する各ドナーの応答スコアを、図２０に示す。治療に対する応答は、ドナー内の治療を通して一貫しており、したがって、抗ＬＩＬＲＢ２治療に対するそれらの応答によって、ドナーの分類を可能にする。０．５超の平均応答スコアを有するドナーを「完全応答者」として分類し、０．３〜０．５の平均応答スコアを有するドナーを「部分的応答者」として分類し、０．３未満のスコアを有するドナーを「無応答者」として分類する。
【０４２６】
単一培養シグネチャーを、ＬＰＳの非存在下で４時間後及びＬＰＳの存在下で２４時間後の、抗ＬＩＬＲＢ２リガンド遮断薬物に応答するドナー間の遺伝子発現における平均ｌｏｇ２（倍率変化）に基づいて導出した（図２１Ａ及び２１Ｂ）。単一培養シグネチャースコアを、単一培養シグネチャーによって定義されたベクターへの遺伝子発現におけるｌｏｇ２（倍率変化）の投影によって、抗ＬＩＬＲＢ２リガンド遮断薬物で処理された各組織培養試料について計算した。単一培養シグネチャースコア（ＬＰＳの非存在下で４時間及びＬＰＳの存在下で２４時間）は、部分的応答者及び無応答者と比較して、完全応答者において有意により高い（ｐ＜０．０１）。
【０４２７】
要するに、単一培養結果は、ＬＩＬＲＢ２結合薬物が、マクロファージにドナー間で一貫して多数の遺伝子を差次的に発現させることを示した。このシステムにおける変調された遺伝子の組は、規模及び方向性の両方を組み込む単一培養シグネチャーを構成する。これらの経路がより複雑なシステムにおいても変調され得ることを確認するために、組織培養実験を実施した。組織培養データの分析は、腎臓腫瘍切片のＬＩＬＲＢ２結合薬物への曝露が、炎症性ケモカイン発現の上方調節ならびに既知の骨髄特異的遺伝子の差次的発現をもたらすことを示す。遺伝子は同時調節され、試料のサブセットにおいて差次的にのみ発現される。遺伝子のこのサブセットは、薬物への応答に基づいて応答スコアを計算し試料を分類するために使用される、ＰＤ応答シグネチャーを構成する。１つの抗ＬＩＬＲＢ２薬物に応答するドナーは、一般的にそれらの全てに応答することに留意すべきである。さらに、組織培養データを単一培養シグネチャーに投影した場合、応答者は、統計的に有意な単一培養スコアを示した。したがって、骨髄特異的遺伝子の変調は、インビトロでの実験における発見と一致し、同じ生物学的経路が影響を受けていることを示唆した。
【０４２８】
実施例１４．毒性学
抗ＬＩＬＲＢ２抗体の特異性を、抗体の赤血球及び血小板への結合をフローサイトメトリーによって、または血清タンパク質への結合をＥＬＩＳＡによって評価することにより決定した。これらのアッセイでは、標的外結合は観察されなかった（図２２）。
【０４２９】
抗ＬＩＬＲＢ２抗体のサイトカインストームを誘発する潜在能力を、可溶性抗体の滴定を使用するヒト全血サイトカイン放出アッセイにおいて評価した。アッセイを、３７℃で２４時間インキュベートした。次いで、血漿を単離し、サイトカインを１０サイトカインＭＳＤパネルを使用して測定した。データは、３人のドナーの平均値＋／−ＳＤである。図２３Ａ〜２３Ｄに示すように、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、このアッセイにおいて、サイトカインストーム（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１８、またはＴＮＦα）に関連したサイトカインの誘導を示さなかった。
【０４３０】
抗ＬＩＬＲＢ２抗体の好中球活性化を誘発する潜在能力を、可溶性抗体の滴定を使用するヒト全血において評価した。アッセイを、３７℃で２時間インキュベートした。好中球活性化マーカーにおける変化（ＣＤ１１ｂにおける増加及びＣＤ６２Ｌにおける減少）を、フローサイトメトリーによって評価した。データは、２人のドナーの平均値＋／−ＳＤである。抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、低ＣＤ１１ｂ発現（図２４Ａ及び２４Ｂ）及びＣＤ６２Ｌの保持（図２４Ｃ及び２４Ｄ）によって示されるように、好中球活性化を誘導しなかった。
【０４３１】
実施例１５．薬物動態
カニクイザル（１群あたりｎ＝３）は、指示濃度の抗ＬＩＬＲＢ２抗体の単回静脈内注入を受けた。薬物の血清濃度を、電気化学発光アッセイを使用して測定し、図２５に示される結果は、カニクイザルにおける単一用量の薬物動態が、典型的なヒトＩｇＧ４抗体の半減期を表すことを示す。
【０４３２】
好中球集団における抗ＬＩＬＲＢ２の効果を評価するために、ＣＢＣアッセイを、カニクイザルの事前研究、及びそれに続く抗ＬＩＬＲＢ２抗体の投与において実行した。図２６Ａ及び２６Ｂに示されるように、末梢血の好中球は、正常範囲内のままであり、有意でない下降傾向を示した。
【０４３３】
実施例１６．Ｐｉｒｂノックアウトマウス実験
生後８〜１２週間のＰｉｒＢホモ接合型ノックアウトマウスまたは野生型同腹子対照に、Ｂ１６．ＳＩＹ（１×１０６）、ＬＬＣ（２×１０５）、またはＭＣ３８（５×１０５）腫瘍細胞を皮下接種した。一度触知可能な腫瘍が感じられると、マウスをモニタリングし、腫瘍が２，０００ｍｍ３を超えるか、またはマウスの体重が２０％超減少するまで、腫瘍測定値を少なくとも週２回記録した。一部のマウスを、腫瘍浸潤性細胞の分析のために早期に屠殺した。全ての実験を、動物飼育及び使用についての制定ガイドラインに従って実行した。
【０４３４】
腫瘍は全ての野生型マウスにおいて検出され、Ｊｏｕｎｃｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓにおける過去の増殖動態と一致した。野生型マウスとＰｉｒＢノックアウトマウスとの間に、Ｂ１６．ＳＩＹまたはＬＬＣ腫瘍の増殖における有意な差異は観察されなかったが（図２７Ａ、２７Ｂ、２８Ａ、及び２８Ｂ）、野生型マウスと比較した場合、ＭＣ３８腫瘍増殖における有意な減少がＰｉｒＢノックアウトマウスに見出された（図２９Ａ及び２９Ｂ）。ＭＣ３８腫瘍浸潤性細胞の分析は、野生型対照（データは示されない）と比較して、ＰｉｒＢノックアウトマウスにおいて低い免疫抑制特性（より低いＩＬ−４Ｒ）及び増加した抗原提示能力（より高いＭＨＣクラスＩＩ）を示す、腫瘍関連マクロファージの表現型と一致した。
【０４３５】
実施例１７．アラニンスキャン分析
Ｊ−１９．ｈ１の重鎖及び軽鎖可変領域を、図３０に示す。ＫａｂａｔのＣＤＲ定義によって定義されるようなＪ−１９．ｈ１の重鎖及び軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）を、図３０に下線で示す。標的に結合するために必要なＪ−１９．ｈ１の重要な結合残基、ＬＩＬＲＢ２を、ＣＤＲ中の個々の残基を変異させることによって特定した。ＣＤＲ中の３４個の重鎖及び１８個の軽鎖残基を個々にアラニンへ変異させることによってスキャンを実施した。Ｊ−１９．ｈ１のこの領域はＬＩＬＲＢ２結合に貢献することが決定されなかったため、ＣＤＲＬ２への変異は含まれなかった。Ｊ−１９．ｈ１の生殖細胞系ＣＤＲＬ２配列への完全変異は、標的に対する結合親和性を変更しなかった。
【０４３６】
全てのバリアントを、チャイニーズハムスター卵巣細胞株内で一過的に産生し、自動液体ハンドラーにクエン酸緩衝液を使用して精製した。親和性を、ＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｏｃｔｅｔ  Ｒｅｄ９６を使用して決定した。Ｊ−１９．ｈ１バリアントを１０ｕｇ／ｍＬに正規化し、抗ヒト捕捉センサに充填した。充填されたセンサを、次いでベースラインを確立するために動態緩衝液中に浸漬し、５０ｎＭ〜５ｎＭの２つの濃度でＬＩＬＲＢ２を含有するウェル中に浸漬した後、緩衝液への解離ステップを行った。動態データを、ＦｏｒｔｅＢｉｏデータ解析ソフトウェアを使用して計算した。
【０４３７】
Ｊ−１９．ｈ１バリアントのＬＩＬＲＢ２への得られた親和性は、灰色で強調された重要な残基を示し、ＬＩＬＲＢ２結合に決定的である。アラニンへの変異は、対照より５倍低い親和性をもたらしたか、または結合の完全な廃止をもたらした。点線の下線付き残基は、対照の２〜５倍の親和性を有した。ＣＤＲ中の全ての他の残基は、アラニンに変異した場合、ＬＩＬＲＢ２に対して同様の親和性を維持した。
【０４３８】
実施例１８．ｑＰＣＲプライマー
Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（ＴａｑＭａｎ）及びＢｉｏｒａｄ（ＰｒｉｍｅＰＣＲ）の両方から市販されているＬＩＬＲＢ２についてのｑＰＣＲアッセイは、ＬＩＬＲファミリーメンバー過剰発現細胞株のＲＮＡ由来のｃＤＮＡにおいて実行した場合、それらの標的に対する特異性を示さなかった。ＬＩＬＲファミリーメンバーは互いに高い相同性を有し、したがって、プライマーセットは、ＰＣＲ中に標的外効果を生み出すことができる。
【０４３９】
以下のプライマーセットを過剰発現細胞株において試験し、１つのプライマーセットは、特定のＰＣＲ条件下で特異性を示した。ｃＤＮＡライブラリを、ＢｉｏＲａｄ  ｉＳｃｒｉｐｔ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｓｕｐｅｒｍｉｘ及びＦｌｕｉｄｉｇｍ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎマスターミックスの両方を使用して生成した。プローブを伴わない場合、プライマーセットを、ＢｉｏＲａｄ  ＳｓｏＦａｓｔ  ＥｖａＧｒｅｅｎ  ＳｕｐｅｒｍｉｘをＬｏｗ  ＲＯＸマスターミックスを使用して実行した。プローブを含むプライマーセットを、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ＴａｑＭａｎ  Ｆａｓｔ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘを使用して実行した。プライマーをオリゴとしてＩＤＴから注文し、プローブをＦＡＭで標識した。
【０４４０】
表８．プライマー及びプローブ配列
【表８】
2021506344.tif 000013
【０４４１】
セット１〜１５のためのフォワードプライマーは配列番号１３５〜１４９であり、セット１〜１５のためのリバースプライマーは配列番号１５０〜１６４であり、セット７〜１０のためのプローブは配列番号１６５〜１６８であり、それぞれ表８に記載の順序である。
【０４４２】
上記に列挙されたセット９は、ＴａｑＭａｎアッセイ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓマスターミックス及びＩＤＴ  ＧＥマスターミックスの両方）、ならびにプライマーセットＥｖａＧｒｅｅｎアッセイ（ＢｉｏＲａｄ  Ｍａｓｔｅｒミックス）として実行した場合に、多数のＬＩＬＲファミリーメンバー過剰発現細胞株にわたってアッセイした場合、ＬＩＬＲＢ２に特異的であることが証明された。以下のＰＣＲサイクル条件：サイクル１：９５℃で６０秒間；サイクル２：９６℃で５秒間；サイクル３：６５℃で２０秒間；サイクル２〜３を繰り返して合計４０サイクル；６０〜９５℃のＥｖａＧｒｅｅｎ化学の融解曲線に従った。プライマー及びプローブ配列：フォワード：ＣＧＴＣＡＣＣＣＴＣＡＧＴＴＧＴＣＡＧ（配列番号１４３）、リバース：ＴＣＣＧＴＧＴＡＡＴＣＣＡＡＧＡＴＧＣＴＧ（配列番号１５８）、プローブ：ＣＣＴＴＧＡＡＧＣＣＣＡＧＧＡＧＴＡＣＣＧＴＣＴＡ（配列番号１６７）。
【０４４３】
プライマーいずれかの端部への最大５個のヌクレオチドの添加は、ＵＣＳＣ  Ｉｎ−Ｓｉｌｉｃｏ  ＰＣＲツールごとにＰＣＲ特異性に影響を与えるべきではない（太字は湿式検証済みのプライマーセットである）。ｈｔｔｐｓ：／／ｇｅｎｏｍｅ．ｕｃｓｃ．ｅｄｕ／ｃｇｉ−ｂｉｎ／ｈｇＰｃｒ？ｈｇｓｉｄ＝６９３２４０２２７＿ｎｐｉ８ｗ０Ｕ７ｍＦ４ＥＷＨｕＶａＯＹＡ４ｎＩｑｄｔｓＺ  ＡＧＴＣＣ−ＣＧＴＣＡＣＣＣＴＣＡＧＴＴＧＴＣＡＧ−ＧＧＧＡＧ（配列番号１６９）、ＴＣＧＴＡ−ＴＣＣＧＴＧＴＡＡＴＣＣＡＡＧＡＴＧＣＴＧ−ＡＴＴＴＴ（配列番号１７０）。
【０４４４】
実施例１９．新鮮腫瘍試料のＰＤシグネチャースコア分析
新鮮なヒト腫瘍試料を、手術後に得た。各腫瘍の一部分を切断し、ＩＨＣのために固定した。残った腫瘍の３００μＭの切片を、６ウェルプレートに載置した。処理を培地に添加し、プレートを３７℃でインキュベートした。腫瘍切片を、インキュベーションの後、ＲＮＡｌａｔｅｒに保存した。各切片を１０μｇ／ｍＬの薬物で２４時間処理し、試料を複数の薬物で処理した場合には、各薬物を１０μｇ／ｍＬ使用した。
【０４４５】
腫瘍切片を、ＱｉａｇｅｎのＴｉｓｓｕｅＬｙｓｅｒのプロセッサを使用して溶解し、ＦＦＰＥ試料を脱パラフィンした。ＲＮＡを、ＦＦＰＥ及び新鮮な腫瘍試料から抽出し、Ｑｕｉｂｉｔを使用して定量化し、ＡＡＴＩのＦｒａｇｍｅｎｔ  Ａｎａｌｙｚｅｒを使用して品質管理した。十分なＲＮＡが試料から抽出された場合、遺伝子発現を、Ｈｕｍａｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｖ２パネルならびに特注のマクロファージ特異的スパイクインを使用した、ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇ  ｎＣｏｕｎｔｅｒを使用して実施した。遺伝子発現を、ハウスキーピング遺伝子の発現に対して正規化し、次いで、負のプローブからのデータを使用してノイズ閾値化を実施し、データをｌｏｇ２空間に変換した。このデータを、以降「正規化遺伝子発現」と称することとする。次いで、正規化遺伝子発現データを、同じ患者由来のパリビズマブ処理された試料からの平均データに対してさらに正規化した。このデータを、以降「パリビズマブ正規化遺伝子発現」と称することとする。
【０４４６】
薬力学的（ＰＤ）シグネチャースコアを、各試料について計算した。単一培養シグネチャーを、ＬＰＳの非存在下で４時間後の、抗ＬＩＬＲＢ２リガンド遮断薬物に応答する４人のドナー由来の単球由来マクロファージ間の遺伝子発現における平均ｌｏｇ２（パリビズマブ処理された試料と比較した倍数変化）から導出した。「単一培養シグネチャースコア」を、単一培養シグネチャーによって定義されたベクターにパリビズマブ正規化遺伝子発現を投影することによって、各処理された組織培養試料について計算した。「ＩＦＮγシグネチャースコア」を、抗ＰＤ１処置に応答して変調された発現を示す、Ｈｉｒｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（３２ｎｄ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  ａｎｄ  Ｐｒｅ−Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ  Ｐｒｏｇｒａｍｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ（ＳＩＴＣ  ２０１７）：Ｐａｒｔ  Ｏｎｅ，Ｐ３９、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ  ５（Ｓｕｐｐｌ．２）：８６，２０１７）によって特定された６つの遺伝子のパリビズマブ正規化遺伝子発現を平均することによって計算した。「Ｋｅｙｔｒｕｄａシグネチャースコア」を、ペンブロリズマブに対する臨床応答を予測するものとして、Ａｙｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１２７：２９３０−２９４０，２０１７）によって特定された１８個の遺伝子のパリビズマブ正規化遺伝子発現を平均することによって計算した。
【０４４７】
システムにおけるノイズを評価し、応答カットオフを決定するために、８０の腎臓、肺、及び頭頸部腫瘍由来の１７３個の腫瘍切片（試料）を、２４時間、対照抗体パリビズマブで処置した。各腫瘍からの少なくとも２つの試料を、パリビズマブで処置した。各ＰＤ応答シグネチャーについてのノイズ閾値を、１７３個の試料間のシグネチャースコアの分布の９５パーセンタイルとして定義した。腫瘍を、特定の薬物で処理されたその腫瘍由来の全ての試料間の平均ＰＤシグネチャースコアがそのシグネチャーのノイズ閾値より大きい場合、その特定の薬物に対する「応答者」として分類する。
【０４４８】
ほとんどの腫瘍由来のベースライン（未処理）試料を特性評価した。細胞型特異的シグネチャーを、特定の細胞型に関連付けられている遺伝子の正規化遺伝子発現を平均することによって計算した。Ｋｅｙｔｒｕｄａシグネチャースコアを、ペンブロリズマブに対する臨床応答を予測するものとして、Ａｙｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．（前述）によって特定された１８個の遺伝子の正規化遺伝子発現を平均することによって、各ベースライン試料について計算した。
【０４４９】
上記の実験の結果を、図３１〜３４に示す。
【０４５０】
図３１は、パリビズマブで２４時間処置した８０個の腫瘍由来の１７３個の腫瘍試料からのＩＦＮγ  ＰＤ応答スコアのヒストグラムである。各腫瘍において、少なくとも２つの試料をパリビズマブで処置した。シグネチャーについてのノイズ閾値を、分布の９５パーセンタイルとして定義する。ＩＦＮγシグネチャーについては、ノイズ閾値は０．４３である。
【０４５１】
図３２は、腎細胞癌腫、頭頸部癌、及び肺癌の３つの適応症間のＪ−１９．ｈ１に対するＰＤ応答率を説明するＶｅｎｎ図及びチャートである。腫瘍を、その腫瘍の全てのＪ−１９．Ｈ１で処置された切片間の平均ＰＤ応答スコアがノイズ閾値より大きい場合、「応答者」として分類する。上述したように、各ＰＤシグネチャーについてのノイズ閾値を、複数のパリビズマブ処理された試料を用いて、腫瘍間のパリビズマブ処理された試料のＰＤ応答スコアの分布の９５パーセンタイルとして定義する。組織培養では、Ｊ−１９．Ｈ１は、適応症間の異なるＰＤ応答を誘導し、複数の作用機序を示唆する。単一培養シグネチャーは、マクロファージ偏光を示す。ＩＦＮガンマシグネチャーは、チェックポイント阻害剤に対する同様の応答を示唆する。Ｋｅｙｔｒｕｄａシグネチャーは、チェックポイント阻害剤に応答するための腫瘍プライミングの兆候である。
【０４５２】
図３３は、正規化遺伝子発現に基づいて、未処理試料について計算されたＫｅｙｔｒｕｄａシグネチャースコアを示す、一連のグラフである（生の遺伝子発現をハウスキーピング遺伝子及び陰性対照プローブに対して正規化し、次いで、ｌｏｇ２変換する）。腫瘍を、Ｊ−１９．Ｈ１で処置されたその腫瘍における全ての試料の平均応答がＩＦＮγシグネチャーのノイズ閾値よりも大きい場合、ＩＦＮγ  ＰＤ応答者として分類する。各点は、未処理腫瘍試料のＫｅｙｔｒｕｄａシグネチャースコアを表す。点線は、各適応症おいてプロファイルされた試料についての平均ベースラインＫｅｙｔｒｕｄａシグネチャースコアを示す。ベースラインＫｅｙｔｒｕｄａシグネチャースコアは、組織培養におけるペンブロリズマブに対するＩＦＮガンマＰＤ応答の必須ではあるが不十分な条件であり、これは他者によって報告された臨床観察と一致し、したがって臨床結果に対する組織培養モデルの関連性を示唆する。
【０４５３】
図３４、左パネルは、Ｊ−１９．ｈ１、ペンブロリズマブ、またはＪ−１９．Ｈ１と組み合わされたペンブロリズマブに応答する１８個の頸部腫瘍について計算された平均ＩＦＮγ  ＰＤシグネチャースコアを示す表である。灰色で強調されたセルは、治療に対する応答がノイズ閾値よりも大きい腫瘍を示す。横にアスタリスクが付いている行は、Ｊ−１９．ｈ１が応答を増強する腫瘍を示し、すなわち、Ｊ−１９．Ｈ１＋ペンブロリズマブに応答するＩＦＮγ  ＰＤシグネチャースコアは、ペンブロリズマブ単独に応答するスコア＋０．４３（ＩＦＮγ  ＰＤシグネチャーのノイズ閾値）以上である。Ｊ−１９．Ｈ１で応答を増強している腫瘍を、右パネルで「コンボ効果」を有すると称する。図３４、右パネルは、治療前の腫瘍の適応症正規化された腫瘍マクロファージ含有量の比較を示すグラフである。グラフは、Ｊ−１９．Ｈ１に起因するいかなる増強も示さない腫瘍と比較した、Ｊ−１９．Ｈ１＋ペンブロリズマブに応答する組み合わせ効果を示す腫瘍のベースラインマクロファージ含有量を示す。腎細胞癌腫、肺癌、及び頭頸部癌の３つの適応症間の腫瘍の比較を行った。腫瘍マクロファージ含有量を、未処理試料中のマクロファージに関連する遺伝子の発現を平均することによって計算し、各適応症内で正規化する。組織培養におけるペンブロリズマブに対するＩＦＮガンマＰＤ応答は、マクロファージで富化された試料中のＪ−１９．Ｈ１によって増強される。
【０４５４】
実施例２０．抗体変異体
Ｊ−１９．ｈ１の重鎖可変域を以下に記載する。
【０４５５】
ＱＩＴＬＫＥＳＧＰＴＬＶＫＰＴＱＴＬＴＬＴＣＴＦＳＧＦＳＬＮＴＹＡＭＧＶＳＷＩＲＱＰＰＧＫＡＬＥＷＬＡＳＩＷＷＮＧＮＫＹＮＮＰＳＬＫＳＲＬＴＶＴＫＤＴＳＫＮＱＶＶＬＴＭＴＮＭＤＰＶＤＴＡＴＹＹＣＡＨＳＲＩＩＲ*ＦＴＤＹＶＭＤＡＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５３）
ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を、順に、下線で示す。Ｒ＊は、アラニン（Ｊ−１９．ｈ５）に変異した場合、Ｊ−１９．ｈ１と比較して、ＬＩＬＲＢ２に対してより高い親和性を測定したＣＤＲＨ３における残基を示す。この測定を、ＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｏｃｔｅｔ  Ｒｅｄ９６を使用して決定した。バリアントを、１０ｕｇ／ｍＬに正規化し、抗ヒト捕捉センサに充填した。次いで、充填されたセンサを、動態緩衝液に浸漬してベースラインを確立し、５０ｎＭ及び５ｎＭの２つの濃度でＬＩＬＲＢ２を含有するウェル中に浸漬した後、緩衝液中で解離ステップを行った。動態データを、ＦｏｒｔｅＢｉｏデータ解析ソフトウェアを使用して計算した。結果は、Ｊ−１９．ｈ５が、Ｊ−１９．ｈ１の非変異バージョンと比較して、ＬＩＬＲＢ２に対して２倍高い親和性を有することを示した。
【０４５６】
Ｊ−１９．ｈ１からさらなるバリアントを作製し、ここでアルギニンをアスパラギン酸（Ｊ−１９．ｈ６）及びグルタミン酸（Ｊ−１９．ｈ７）変異させた。全てのバリアントを、チャイニーズハムスター卵巣細胞株を使用して一時的に産生し、自動液体ハンドラーにおいてクエン酸緩衝液を使用して精製した。ＬＩＬＲＢ２に対する親和性を、Ｊ−１９．ｈ５に対して以前測定したのと全く同様に測定した。データは、これらの２つのバリアントが、Ｊ−１９．ｈ１及びＪ−１９．ｈ５と比較して、ＬＩＬＲＢ２に対してさらに高い親和性を有していることを示した。
【０４５７】
４つの抗体（Ｊ−１９．ｈ１、Ｊ−１９．ｈ５、Ｊ−１９．ｈ６、及びＪ−１９．ｈ７）に対する親和性を、ＳｉｅｒｒａＳｅｎｓｏｒ  Ｍａｓｓ−２を使用して表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって確認した。抗体を、２ｕｇ／ｍＬの濃度で抗ヒトＦｃチップを使用して捕捉した。ＬＩＬＲＢ２を、捕捉された抗体上に７つの濃度（６５、２１．６７、７．２２、２．４１、０．８０２、０．２６７、０．０８９ｎＭ）で流した。Ｊ−１９．ｈ５及びＪ−１９．ｈ６を３通り実行し、Ｊ−１９．ｈ７及びＪ−１９．ｈ１を２通り実行した。以下は、４つの抗体の会合、解離、及びＫｄを説明する表である。
表９．Ｊ−１９．ｈ１及び高親和性変異体の反応速度測定
【表９】
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表１０．配列表
【表１０】
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【０４５８】
他の実施形態
本開示は、その趣旨または本質的な特性から逸脱することなく、他の特定の形態で具現化され得る。したがって、前述の実施形態は、本開示を限定するものではなく、あらゆる点において例示的であると見なされるべきである。したがって、本開示の範囲は、前述の説明よりもむしろ添付の特許請求の範囲によって示され、したがって、特許請求の範囲の意味及び同等の範囲内に入る全ての変更が本明細書に含まれることが意図される。本明細書に引用される全ての参考文献は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０４５９】
配列表中の配列と明細書中の配列との間に不一致がある場合には、明細書中の配列が優先されると見なされるべきである。
【図１】
2021506344.tif 000037
【図２Ａ】
2021506344.tif 000038
【図２Ｂ】
2021506344.tif 000039
【図２Ｃ】
2021506344.tif 000040
【図２Ｄ】
2021506344.tif 000041
【図２Ｅ】
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【図２Ｆ】
2021506344.tif 000043
【図２Ｇ】
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【図２Ｈ】
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【図２Ｉ】
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【図２Ｊ】
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【図２Ｋ】
2021506344.tif 000048
【図２Ｌ】
2021506344.tif 000049
【図３Ａ】
2021506344.tif 000050
【図３Ａ−１】
2021506344.tif 000051
【図３Ａ−２】
2021506344.tif 000052
【図３Ａ−３】
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【図３Ａ−４】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｂ−１】
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【図３Ｂ−２】
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【図３Ｂ−３】
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【図３Ｂ−４】
2021506344.tif 000059
【図４】
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【図５】
2021506344.tif 000061
【図６】
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【図７】
2021506344.tif 000063
【図８】
2021506344.tif 000064
【図９】
2021506344.tif 000065
【図１０】
2021506344.tif 000066
【図１１】
2021506344.tif 000067
【図１２】
2021506344.tif 000068
【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
2021506344.tif 000071
【図１６】
2021506344.tif 000072
【図１７】
2021506344.tif 000073
【図１８】
2021506344.tif 000074
【図１９】
2021506344.tif 000075
【図２０】
2021506344.tif 000076
【図２１】
2021506344.tif 000077
【図２２】
2021506344.tif 000078
【図２３Ａ】
2021506344.tif 000079
【図２３Ｂ】
2021506344.tif 000080
【図２３Ｃ】
2021506344.tif 000081
【図２３Ｄ】
2021506344.tif 000082
【図２４】
2021506344.tif 000083
【図２５】
2021506344.tif 000084
【図２６】
2021506344.tif 000085
【図２７】
2021506344.tif 000086
【図２８】
2021506344.tif 000087
【図２９】
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【図３０】
2021506344.tif 000089
【図３１】
2021506344.tif 000090
【図３２】
2021506344.tif 000091
【図３３】
2021506344.tif 000092
【図３４】
2021506344.tif 000093
【手続補正書】
【提出日】令和2年9月29日(2020.9.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2021506344000001.app
【国際調査報告】
2021506344.tif 000094
2021506344.tif 000095
2021506344.tif 000096
2021506344.tif 000097
2021506344.tif 000098
2021506344.tif 000099