(57)【要約】ａ）それぞれ、配列番号１ナンバリング及び配列番号２を用いて、位置１２４〜１３１において、２つの負に荷電したアミノ酸残基であるアスパラギン酸（Ｄ）及び／又はグルタミン酸（Ｅ）を含む、配列番号１又は配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも６０％の同一性を有する変異体であるプロテアーゼと、ｂ）組成物の０〜３０重量％未満のクエン酸を含む、組成物の１０〜５０重量％の錯化剤系と、を含む、ホスフェート非含有自動食洗洗浄組成物。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ホスフェート非含有自動食洗洗浄組成物であって、
ｉ）それぞれ、配列番号１ナンバリング及び配列番号２を用いて、位置１２４〜１３１において、２つの負に荷電したアミノ酸残基であるアスパラギン酸（Ｄ）及び／又はグルタミン酸（Ｅ）を含む、配列番号１又は配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも６０％の同一性を有する変異体であるプロテアーゼと、
ｉｉ）前記組成物の０〜３０重量％未満のクエン酸を含む、前記組成物の１０〜５０重量％の錯化剤系と、
を含む、ホスフェート非含有自動食洗洗浄組成物。
【請求項２】
前記２つの負に荷電したアミノ酸残基が位置１２６〜１２８にある、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
位置１２８にグルタミン酸（Ｅ）を有する、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
前記２つの負に荷電したアミノ酸残基がグルタミン酸（Ｅ）である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記プロテアーゼが、
ａ）配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する変異体であって、好ましくは、（配列番号１ナンバリングを用いて）Ｓ３９Ｅ、Ｓ９９Ｒ、Ｎ２４２Ｄ、及びこれらの混合からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含む、変異体、又は
ｂ）配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有し、（配列番号２ナンバリングを用いて）Ｘ３９Ｅ、Ｘ９９Ｒ、Ｎ２４２Ｄ、及びこれらの混合からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含む、変異体
から選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記プロテアーゼが、
ｉ）配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有し、（配列番号１ナンバリングを用いて）Ｐ５４Ｔ、Ｘ１１４Ｑ、及びＸ１１４Ｃ、好ましくはＰ５４Ｔ及びＴ１１４Ｑからなる群から選択される少なくとも１つの置換を含む、変異体、又は
ｉｉ）配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有し、（配列番号２ナンバリングを用いて）Ｘ５４Ｔ、Ｘ１１４Ｑ、及びＸ１１４Ｃからなる群から選択される少なくとも１つの置換を含む、変異体
から選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の洗浄組成物。
【請求項７】
前記プロテアーゼが、
ｉ）配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有し、（配列番号１ナンバリングを用いて）Ｎ７４Ｄ，Ｉ８０Ｖ，Ｒ，Ｙ；Ｎ８５Ｓ，Ｃ，Ｄ，Ｒ；Ｅ８７Ｄ，Ｃ及びＭ２１１Ｌからなる群から選択される少なくとも１つの置換を含む、変異体、又は
ｉｉ）配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する親プロテアーゼのアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有し、（配列番号２ナンバリングを用いて）Ｘ７４Ｄ，Ｘ８０Ｖ，Ｒ，Ｙ；Ｘ８５Ｃ，Ｄ及びＸ８７Ｄ，Ｃからなる群から選択される少なくとも１つの置換を含む、変異体
から選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
前記プロテアーゼが、
ｉ）配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有し、（配列番号１ナンバリングを用いて）Ｔ３Ｖ、Ｔ９Ｒ、Ａ１５Ｔ、Ｖ６６Ａ、Ｎ７４Ｄ、Ｎ９７ＮＥ、Ｎ９７ＡＤ、Ｎ９７Ｄ／Ｇ、Ｎ９９Ｇ／Ｍ、Ｓ１０１Ａ、Ｖ１０２Ｅ／Ｉ、Ｎ１１６Ｖ／Ｒ、Ｓ１２６Ｌ、Ｄ１２７Ｑ、Ｆ１２８Ａ、Ｇ１５７Ｓ、Ｙ１６１Ａ、Ｒ１６４Ｓ、Ｔ１８８Ｐ、Ｖ１９９Ｉ、Ｑ２００Ｃ／Ｅ／Ｉ／Ｋ／Ｔ／Ｖ／Ｗ／Ｌ、Ｙ２０３Ｗ、Ｍ２１１Ｃ／Ｄ／Ｌ、Ｎ２１２Ｄ、Ｍ２１６Ｓ／Ｆ、Ｑ２３９Ｒ、及びＴ２４９Ｒからなる群から選択される少なくとも１つの置換を含む、変異体、
ｉｉ）配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する親プロテアーゼのアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有し、（配列番号２ナンバリングを用いて）Ｘ３Ｖ、Ｘ９Ｒ、Ｘ１５Ｔ、Ｘ６６Ａ、Ｘ７４Ｄ、Ｘ８５Ｎ／Ｒ、Ｘ９７ＳＥ、Ｘ９７ＡＤ、Ｘ９７Ｄ／Ｇ、Ｘ９９Ｇ／Ｍ、Ｘ１０１Ａ、Ｘ１０２Ｅ／Ｉ、Ｘ１１６Ｖ／Ｒ、Ｘ１２６Ｌ、Ｘ１２７Ｑ、Ｘ１２８Ａ、Ｘ１５７Ｓ、Ｘ１６１Ａ、Ｘ１６４Ｓ、Ｘ１８８Ｐ、Ｘ１９９Ｉ、Ｘ２００Ｃ／Ｅ／Ｉ／Ｋ／Ｔ／Ｖ／Ｗ／Ｌ、Ｘ２０３Ｗ、Ｘ２１１Ｃ／Ｄ、Ｘ２１２Ｄ、Ｘ２１６Ｓ／Ｆ、Ｘ２３９Ｒ、及びＸ２４９Ｒからなる群から選択される少なくとも１つの置換を含む、変異体
から選択される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記プロテアーゼが、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する変異体であって、
（配列番号１ナンバリングを用いて）
１）Ａ０３７Ｔ−Ｓ０３９Ｅ−Ｉ０４３Ｖ−Ａ０４７Ｖ−Ｔ０５６Ｙ−Ｉ０８０Ｖ−Ｎ０８５Ｓ−Ｅ０８７Ｄ−Ｓ０９９Ｒ−Ｔ１１４Ｑ−Ｆ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ
２）Ａ０３７Ｔ−Ｓ０３９Ｅ−Ｉ０４３Ｖ−Ａ０４７Ｖ−Ｐ０５４Ｔ−Ｔ０５６Ｙ−Ｉ０８０Ｖ−Ｎ０８５Ｓ−Ｅ０８７Ｄ−Ｓ０９９Ｒ−Ｔ１１４Ｑ−Ｓ１２６Ｇ−Ｄ１２７Ｅ−Ｆ１２８Ｄ−Ｎ２４２Ｄ
３）Ａ０３７Ｔ−Ｓ０３９Ｅ−Ｉ０４３Ｖ−Ａ０４７Ｖ−Ｐ０５４Ｔ−Ｔ０５６Ｙ−Ｉ０８０Ｖ−Ｎ０８５Ｓ−Ｅ０８７Ｄ−Ｓ０９９Ｒ−Ｔ１１４Ｑ−Ｓ１２６Ｔ−Ｆ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ
４）Ａ０３７Ｔ−Ｓ０３９Ｅ−Ｉ０４３Ｖ−Ａ０４７Ｖ−Ｐ０５４Ｔ−Ｔ０５６Ｙ−Ｉ０８０Ｖ−Ｎ０８５Ｓ−Ｅ０８７Ｄ−Ｓ０９９Ｒ−Ｔ１１４Ｑ−Ｆ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ
からなる群から選択される置換を含む、変異体から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
前記プロテアーゼが、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する変異体であって、
（配列番号１ナンバリングを用いて）
（ａ）Ａ３７Ｔ−Ｓ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｔ５６Ｙ−Ｉ８０Ｖ−Ｎ８５Ｓ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｔ１１４Ｑ−Ｓ１２６Ｄ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｂ）Ａ３７Ｔ−Ｓ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｔ５６Ｙ−Ｉ８０Ｖ−Ｎ８５Ｓ−Ｅ８７Ｄ−Ｔ１１４Ｑ−Ｆ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｃ）Ａ３７Ｔ−Ｓ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｔ５６Ｙ−Ｉ８０Ｖ−Ｎ８５Ｓ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｔ１１４Ｑ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｄ）Ａ３７Ｔ−Ｓ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｉ８０Ｖ−Ｎ８５Ｓ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｅ−Ｔ１１４Ｑ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｅ）Ａ３７Ｔ−Ｓ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｉ８０Ｖ−Ｎ８５Ｓ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｔ１１４Ｑ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｆ）Ａ３７Ｔ−Ｓ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｉ８０Ｖ−Ｎ８５Ｓ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｔ１１４Ｑ−Ｆ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｇ）Ａ３７Ｔ−Ｓ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｔ５６Ｙ−Ｉ８０Ｖ−Ｎ８５Ｓ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｅ−Ｔ１１４Ｑ−Ｄ１２７Ｅ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｈ）Ａ３７Ｔ−Ｓ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｉ８０Ｖ−Ｎ８５Ｓ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｔ１１４Ｑ−Ｄ１２７Ｅ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｉ）Ａ３７Ｔ−Ｓ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｔ５６Ｙ−Ｉ８０Ｖ−Ｎ８５Ｓ−Ｅ８７Ｄ−Ｔ１１４Ｑ−Ｆ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｊ）Ａ３７Ｔ−Ｓ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｉ８０Ｖ−Ｎ８５Ｓ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｔ１１４Ｑ−Ｓ１２６Ｇ−Ｄ１２７Ｅ−Ｆ１２８Ｄ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｋ）Ａ３７Ｔ−Ｓ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｔ５６Ｙ−Ｉ８０Ｖ−Ｎ８５Ｓ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｔ１１４Ｑ−Ｆ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｌ）Ａ３７Ｔ−Ｓ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｔ５６Ｙ−Ｉ８０Ｖ−Ｎ８５Ｓ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｔ１１４Ｑ−Ｓ１２６Ｔ−Ｄ１２７Ｅ−Ｆ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｍ）Ａ３７Ｔ−Ｓ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｉ８０Ｖ−Ｎ８５Ｓ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｔ１１４Ｑ−Ｄ１２７Ｅ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｎ）Ａ３７Ｔ−Ｓ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｉ８０Ｖ−Ｎ８５Ｓ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｔ１１４Ｑ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｏ）Ａ３７Ｔ−Ｓ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｉ８０Ｖ−Ｎ８５Ｓ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｔ１１４Ｑ−Ｆ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｐ）Ａ３７Ｔ−Ｓ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｉ８０Ｖ−Ｎ８５Ｓ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｔ１１４Ｑ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｑ）Ａ３７Ｔ−Ｓ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｉ８０Ｖ−Ｎ８５Ｓ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｔ１１４Ｑ−Ｓ１２６Ｔ−Ｆ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ
からなる群から選択される置換を含む、変異体から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
前記プロテアーゼが、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する変異体であって、
（配列番号２ナンバリングを用いて）
１）Ｐ０３９Ｅ−Ｉ０４３Ｖ−Ａ０４７Ｖ−Ｔ０５６Ｙ−Ｌ０８０Ｖ−Ｅ０８７Ｄ−Ｓ０９９Ｒ−Ｎ１１４Ｑ−Ｐ１２７Ｄ−Ｓ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ
２）Ｐ０３９Ｅ−Ｉ０４３Ｖ−Ａ０４７Ｖ−Ｐ０５４Ｔ−Ｔ０５６Ｙ−Ｌ０８０Ｖ−Ｅ０８７Ｄ−Ｓ０９９Ｒ−Ｎ１１４Ｑ−Ｓ１２６Ｇ−Ｐ１２７Ｅ−Ｓ１２８Ｄ−Ｎ２４２Ｄ
３）Ｐ０３９Ｅ−Ｉ０４３Ｖ−Ａ０４７Ｖ−Ｐ０５４Ｔ−Ｔ０５６Ｙ−Ｌ０８０Ｖ−Ｅ０８７Ｄ−Ｓ０９９Ｒ−Ｎ１１４Ｑ−Ｓ１２６Ｔ−Ｐ１２７Ｄ−Ｓ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ
４）Ｐ０３９Ｅ−Ｉ０４３Ｖ−Ａ０４７Ｖ−Ｐ０５４Ｔ−Ｔ０５６Ｙ−Ｌ０８０Ｖ−Ｅ０８７Ｄ−Ｓ０９９Ｒ−Ｎ１１４Ｑ−Ｐ１２７Ｄ−Ｓ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ
からなる群から選択される置換を含む、変異体から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
前記プロテアーゼが、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する変異体であって、
（配列番号２ナンバリングを用いて）
（ｉ）Ｐ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｔ５６Ｙ−Ｌ８０Ｖ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｎ１１４Ｑ−Ｓ１２６Ｄ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｉｉ）Ｐ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｔ５６Ｙ−Ｌ８０Ｖ−Ｅ８７Ｄ−Ｎ１１４Ｑ−Ｓ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｉｉｉ）Ｐ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｔ５６Ｙ−Ｌ８０Ｖ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｎ１１４Ｑ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｉｖ）Ｐ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｌ８０Ｖ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｅ−Ｎ１１４Ｑ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｖ）Ｐ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｌ８０Ｖ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｎ１１４Ｑ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｖｉ）Ｐ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｌ８０Ｖ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｎ１１４Ｑ−Ｓ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｖｉｉ）Ｐ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｔ５６Ｙ−Ｌ８０Ｖ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｅ−Ｎ１１４Ｑ−Ｐ１２７Ｅ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｖｉｉｉ）Ｐ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｌ８０Ｖ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｎ１１４Ｑ−Ｐ１２７Ｅ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｉｘ）Ｐ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｔ５６Ｙ−Ｌ８０Ｖ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｘ）Ｐ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｌ８０Ｖ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｎ１１４Ｑ−Ｓ１２６Ｇ−Ｐ１２７Ｅ−Ｓ１２８Ｄ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｘｉ）Ｐ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｔ５６Ｙ−Ｌ８０Ｖ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｎ１１４Ｑ−Ｐ１２７Ｄ−Ｓ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｘｉｉ）Ｐ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｔ５６Ｙ−Ｌ８０Ｖ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｎ１１４Ｑ−Ｓ１２６Ｔ−Ｐ１２７Ｅ−Ｓ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｘｉｉｉ）Ｐ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｌ８０Ｖ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｎ１１４Ｑ−Ｐ１２７Ｅ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｘｉｖ）Ｐ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｌ８０Ｖ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｎ１１４Ｑ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｘｖ）Ｐ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｌ８０Ｖ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｎ１１４Ｑ−Ｓ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｘｖｉ）Ｐ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｌ８０Ｖ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｎ１１４Ｑ−Ｐ１２７Ｄ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｘｖｉｉ）Ｐ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｌ８０Ｖ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｎ１１４Ｑ−Ｓ１２６Ｔ−Ｐ１２７Ｄ−Ｓ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ
（ｘｖｉｉｉ）Ｐ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｌ８０Ｖ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｅ−Ｎ１１４Ｑ−Ｐ１２７Ｄ−Ｎ２４２Ｄ
からなる群から選択される置換を含む、変異体から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記錯化剤系が、クエン酸、メチルグリシン二酢酸、グルタミン−Ｎ，Ｎ−二酢酸、イミノ二コハク酸、カルボキシメチルイヌリン、及びこれらの混合物、好ましくは、メチルグリシン二酢酸の塩からなる群から選択される錯化剤を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記組成物の少なくとも１０重量％の漂白剤、好ましくは過炭酸塩、並びに任意に、漂白活性化剤及び／又は漂白触媒を含む、漂白剤系を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
ｉ）前記組成物の少なくとも１０重量％の過炭酸塩、並びに任意に、漂白活性化剤及び／又は漂白触媒を含む漂白系、
ｉｉ）非イオン性界面活性剤、
ｉｉｉ）分散剤ポリマー、好ましくはカルボキシル化／スルホネートポリマー、
ｉｖ）アミラーゼ、並びに
ｖ）任意に、しかし好ましくはガラスケア剤
を含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
自動食洗方法であって、
ｉ）焦げ付いた糖食品汚れを含む、汚れのある食器を提供する工程と、
ｉｉ）前記食器を自動食洗機に配置する工程と、
ｉｉｉ）請求項１〜１６のいずれか一項に記載の自動食洗洗浄組成物を提供する工程と、
ｉｖ）前記食器を自動食洗プログラムに供する工程と、
を含む、方法。
【請求項１７】
自動食洗においてクリームブリュレを洗浄するための、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、洗剤の分野に属する。特に、本発明は、プロテアーゼを含む、ホスフェート非含有自動食器洗剤組成物に関する。組成物は、ストレス条件下でも、焦げ付いた糖食品の汚れの洗浄の改善を提供する。
【背景技術】
【０００２】
焦げ付いた糖食品の汚れなどの、いくつかの汚れは、自動食洗にて食器から取り除くのが非常に難しい。卵などのタンパク様の汚れもまた、取り除くのが難しい。
【０００３】
環境への懸念により、ホスフェートはますます、生分解性錯化剤に置き換えられている。これらの錯化剤は、金属に対する強力な結合能力を有することがあり、及び／又は多量に使用することがあり、並びに、酵素の性能にマイナスの影響を与える可能性がある。特に、錯化剤は、プロテアーゼを構成するカルシウム金属イオンを引き抜くことにより、プロテアーゼにマイナスの影響を与える可能性がある。プロテアーゼは製品中で、及び／又は使用中に影響を受ける可能性がある。プロテアーゼは、十分にビルダーがある条件にて、又はビルダーが過剰な条件にて、すなわち、組成物が多量の錯化剤を含み、組成物が軟水で用いられるときに、プロテアーゼを構成するカルシウム金属イオンと錯体化する遊離ビルダーが多くなるため、より影響を受ける可能性がある。最も汚れが落ちにくいものに対して、消費者は通常、熱く長い自動食洗サイクルを選択する。これらのサイクルは、酵素に対し多くのストレスを生み出す。
【０００４】
自動食洗組成物は、特定の使用条件にて最適の性能を有するように設計可能であり、例えば、組成物は軟水サイクルにて最適の性能を有するように設計可能であるが、軟水で最適の性能を有する組成物は、硬水では最適の性能を有さない場合があり、逆もまた同様に起こり得る。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、クリームブリュレなどの糖の汚れ、及びタンパク様の汚れのより良好な除去をもたらす、ホスフェート非含有自動食洗組成物を提供することである。特に、自動食洗の際の卵及び糖の汚れの除去は、軟水で行う。非常に汚れのある負荷などのストレス条件下であっても、組成物が改善された性能をもたらすこともまた望ましい。
【０００６】
本発明の目的は、ストレス条件下でも焦げ付いた糖食品の汚れの良好な洗浄をもたらす、ホスフェート非含有自動食洗組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の第１の態様に従うと、ホスフェート非含有自動食洗洗浄組成物が提供される。組成物は、錯化剤系及び新規のプロテアーゼを含む。組成物は、クリームブリュレなどの糖の汚れ、及び卵などのタンパク様の汚れの除去の改善を示す。軟水を自動食洗プロセスで使用する際でも、熱く長いサイクルを使用する際でも、除去は非常に良好である。
【０００８】
本発明の第２の態様に従うと、軟水を用いる自動食洗方法、及び、熱く長いサイクルを用いる自動食洗方法が提供される。
【０００９】
本発明の第３の態様に従うと、軟水を用いる自動食洗のための本発明の組成物の使用、及び、熱く長いサイクルで軟水を用いる自動食洗のための本発明の組成物の使用が提供される。
【００１０】
本発明の第１の態様に関連して説明される本発明の組成物の要素は、変更すべきところは変更して、発明の他の態様にも準用する。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明は、自動食洗洗浄組成物を包含する。組成物はホスフェート非含有であり、錯化剤系及びプロテアーゼを含む。組成物は、従来のプロテアーゼを含む洗浄組成物に対して、複数の条件下において、洗浄の改善をもたらす。組成物は、特に卵及びクリームブリュレの汚れに対して、良好なタンパクの洗浄をもたらす。本発明は、軟水による自動食洗方法、及びまた、熱く長いサイクルを用いる、軟水による自動食洗方法もまた包含する。
【００１２】
本明細書で「軟」水とは、約２ｇｐｇ（３４．３ｐｐｍ）未満の硬度を有する水を意味する。ガロン当たりのグレイン（ｇｐｇ）は、１ＵＳガロンの水（３．７８５４１２Ｌ）に溶解した、１グレイン（６４．８ミリグラム）の炭酸カルシウムとして定義される水の硬度の単位である。これは１７．１百万分率（ｐｐｍ）に変換される。
【００１３】
本明細書で「熱い」サイクルとは、主なサイクルが５０℃を超える、好ましくは５５℃を超える温度にて実施される食洗プログラムと理解される。
【００１４】
本明細書で「長い」サイクルとは、主なサイクルが少なくとも２５、好ましくは少なくとも３０、及びより好ましくは少なくとも３５分の期間を有する食洗プログラムと理解される。
【００１５】
本発明の組成物は変異体プロテアーゼを含み、変異体プロテアーゼは、参照プロテアーゼ（配列番号１〜１０のプロテアーゼ）に対して、定義された同一性パーセントを有する。
【００１６】
本明細書で、本発明の組成物のプロテアーゼは、「本発明のプロテアーゼ」と呼ばれることがある。配列番号１〜１０のいずれかを有するプロテアーゼは本明細書で、「参照プロテアーゼ」と呼ばれることもある。
【００１７】
２つのアミノ酸配列の関連性、又は２つのヌクレオチド配列の関連性は、パラメータ「配列同一性」により説明される。
【００１８】
用語「変異体」は、参照プロテアーゼに対して１つ以上の（例えばいくつかの）位置において、変異、すなわち、置換、挿入、及び／又は欠失を含むプロテアーゼを意味する。置換は、ある位置を占有するアミノ酸を異なるアミノ酸で置き換えることを意味し、欠失は、ある位置を占有するアミノ酸の除去を意味し、挿入は、ある位置を占有するアミノ酸に隣接する、その直後にある、アミノ酸を付加することを意味する。本発明の変異体は、参照プロテアーゼと少なくとも６０％、好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、及び特に９０％の同一性を有する。
【００１９】
好ましい実施形態では、変異体は、配列番号１のプロテアーゼと少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９２％の同一性を示す。配列番号１はＢ．ｇｉｂｓｏｎｉｉ−クレードサブチリシンＢｇｉ０２４４６に対応する。他の実施形態において、変異体は、配列番号２のプロテアーゼと少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９２％の同一性を示す。配列番号２は、Ｂ．ｌｅｎｔｕｓサブチリシンに対応する。他の実施形態において、変異体は、配列番号３〜１０のプロテアーゼの配列のうちの１つと少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９２％の同一性を示す。
【００２０】
用語「野生型」プロテアーゼとは、自然で発見される細菌、酵母菌、又は糸状菌などの、天然微生物により発現されるプロテアーゼを意味する。
【００２１】
酵素に関連する用語
アミノ酸修飾に関する命名法
本明細書の酵素変異体を説明する中で、参照しやすいように以下の命名法が用いられる：元のアミノ酸（複数可）：位置（複数可）：置換アミノ酸（複数可）。
【００２２】
この命名法に従うと、例えば、位置１９５でグリシンをグルタミン酸に置換したものは、Ｇ１９５Ｅと示される。同じ位置でグリシンが欠失したものは、Ｇ１９５＊と示され、追加のアミノ酸残基、例えばリジンを挿入したものは、Ｇ１９５ＧＫと示される。特定の酵素が他の酵素と比較して「欠失」を含有し、このような位置で挿入が行われる場合、これは、位置３６におけるアスパラギン酸の挿入については＊３６Ｄというように示される。複数の変異は、プラスにより分離され、すなわち、Ｓ９９Ｇ＋Ｖ１０２Ｎは、位置９９と１０２における変異が、それぞれ、グリシンをセリンに、アスパラギンをバリンに置換していることを表す。ある位置（例えば、１０２）のアミノ酸が、アミノ酸の群、例えば、Ｎ及びＩからなる群から選択された別のアミノ酸により置換され得る場合、これは、Ｖ１０２Ｎ，Ｉと示される。
【００２３】
全ての場合において、認められているＩＵＰＡＣの一文字又は三文字アミノ酸略記を用いる。
【００２４】
プロテアーゼアミノ酸のナンバリング
本特許で用いられるナンバリングは示した配列に対するものであり、ＢＰＮのナンバリングではない。
【００２５】
アミノ酸の同一性
２つのアミノ酸配列の間の関連性は、パラメータ「同一性」により説明される。本発明の目的上、２つのアミノ酸配列のアラインメントは、ＥＭＢＯＳＳパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｅｍｂｏｓｓ．ｏｒｇ）バージョン２．８．０からのＮｅｅｄｌｅプログラムを用いることによって割り出される。Ｎｅｅｄｌｅプログラムは、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ，Ｓ．Ｂ．及びＷｕｎｓｃｈ，Ｃ．Ｄ．（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８、４４３〜４５３に記載のグローバルアラインメントアルゴリズムを実行する。用いられる置換マトリクスは、ＢＬＯＳＵＭ６２であり、ギャップオープニングペナルティは、１０であり、ギャップエクステンションペナルティは、０．５である。
【００２６】
本明細書で使用される酵素のアミノ酸配列（「本配列」）と、異なるアミノ酸配列（「異質配列」）との間の同一性の度合いは、２つの配列のアラインメントにおける完全一致の数を「本配列」の長さ又は「異質配列」の長さのいずれか短い方で除算して、計算される。この結果を同一性（％）として表す。完全一致は、「本配列」及び「異質配列」に、同一のアミノ酸残基が重複部分の同じ位置に備わっている場合に発生する。配列の長さは、配列中のアミノ酸残基の数である。
【００２７】
用語「サクシネート系化合物」及び「コハク酸系化合物」は、本明細書において互換的に使用される。
【００２８】
本明細書で使用するとき、特許請求の範囲において使用される「ａ」及び「ａｎ」などの冠詞は、特許請求又は記述されるものが１つ以上であることを意味すると理解される。
【００２９】
別途記載のない限り、全ての成分又は組成物の濃度は、当該成分又は組成物の活性部分に関するものであり、かかる成分又は組成物の市販の供給源に存在し得る不純物、例えば残留溶媒又は副生成物は除外される。
【００３０】
全ての百分率及び比率は、別途記載のない限り、重量基準で計算される。全ての百分率及び比率は、別途記載のない限り、全組成に基づいて計算される。
【００３１】
本発明のプロテアーゼ
本発明の変異体は、配列番号１のプロテアーゼと、又は配列番号２のプロテアーゼと、又は配列番号３〜１０のプロテアーゼの１つと少なくとも６０％の同一性を有する。本発明の変異体は、配列番号１のプロテアーゼと、又は配列番号２のプロテアーゼと、又は配列番号３〜１０のプロテアーゼの１つと少なくとも６５％、より好ましくは少なくとも７０％の同一性を有するのが好ましい。
【００３２】
本発明のプロテアーゼは、それぞれ配列番号１ナンバリング及び配列番号２を用いて、位置１２４〜１３１において、負に荷電した２つのアミノ酸残基であるアスパラギン酸（Ｄ）及び／又はグルタミン酸（Ｅ）を含む配列番号１又は配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも６０％の同一性を有する変異体である。負に荷電した２つのアミノ酸残基は位置１２６〜１２８にあるのが好ましい。位置１２８にグルタミン酸を有する変異体は、性能の観点から特に好ましいことが見出された。
【００３３】
変異体は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する変異体であって、好ましくは、（配列番号１ナンバリングを用いて）Ｓ３９Ｅ、Ｓ９９Ｒ、及びＮ２４２Ｄからなる群から選択される、少なくとも１つ、より好ましくは少なくとも２つのアミノ酸置換を含む。
【００３４】
好ましい変異体は、（配列番号１ナンバリングを用いて）Ｐ５４Ｔ、Ｘ１１４Ｑ、Ｘ１１４Ｃ、好ましくはＴ１１４Ｑから選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を更に含む。
【００３５】
変異体は、（配列番号１ナンバリングを用いて）Ｎ７４Ｄ；Ｉ８０Ｖ，Ｒ，Ｙ；Ｎ８５Ｓ，Ｃ，Ｄ；Ｅ８７Ｄ，Ｃ及びＭ２１１Ｌからなる群から選択される少なくとも１つ、及びより好ましくは少なくとも２つ、及びより好ましくは３つのアミノ酸置換を更に含むのが好ましい。
【００３６】
好ましくは、変異体は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有し、（配列番号１ナンバリングを用いて）Ｔ３Ｖ、Ｔ９Ｒ、Ａ１５Ｔ、Ｖ６６Ａ、Ｎ７４Ｄ、Ｎ８５Ｒ、Ｎ９７ＮＥ、Ｎ９７ＡＤ、Ｎ９７Ｄ／Ｇ、Ｓ９９Ｇ／Ｍ、Ｓ１０１Ａ、Ｖ１０２Ｅ／Ｉ、Ｎ１１６Ｖ／Ｒ、Ｇ１５７Ｓ、Ｙ１６１Ａ、Ｒ１６４Ｓ、Ｔ１８８Ｐ、Ｖ１９９Ｉ、Ｑ２００Ｃ／Ｅ／Ｉ／Ｋ／Ｔ／Ｖ／Ｗ／Ｌ、Ｙ２０３Ｗ、Ｍ２１１Ｃ／Ｄ、Ｎ２１２Ｄ、Ｍ２１６Ｓ／Ｆ、Ｑ２３９Ｒ、及びＴ２４９Ｒからなる群から選択される、少なくとも１つの置換、好ましくは少なくとも２つ又は３つの置換を含む。
【００３７】
本発明の組成物で使用するのに特に好ましい変異体は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９２％の同一性を有する変異体であって、（配列番号１ナンバリングを用いて）、
Ａ０３７Ｔ−Ｓ０３９Ｅ−Ｉ０４３Ｖ−Ａ０４７Ｖ−Ｔ０５６Ｙ−Ｉ０８０Ｖ−Ｎ０８５Ｓ−Ｅ０８７Ｄ−Ｓ０９９Ｒ−Ｔ１１４Ｑ−Ｆ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ
Ａ０３７Ｔ−Ｓ０３９Ｅ−Ｉ０４３Ｖ−Ａ０４７Ｖ−Ｐ０５４Ｔ−Ｔ０５６Ｙ−Ｉ０８０Ｖ−Ｎ０８５Ｓ−Ｅ０８７Ｄ−Ｓ０９９Ｒ−Ｔ１１４Ｑ−Ｓ１２６Ｇ−Ｄ１２７Ｅ−Ｆ１２８Ｄ−Ｎ２４２Ｄ
Ａ０３７Ｔ−Ｓ０３９Ｅ−Ｉ０４３Ｖ−Ａ０４７Ｖ−Ｐ０５４Ｔ−Ｔ０５６Ｙ−Ｉ０８０Ｖ−Ｎ０８５Ｓ−Ｅ０８７Ｄ−Ｓ０９９Ｒ−Ｔ１１４Ｑ−Ｓ１２６Ｔ−Ｆ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ
Ａ０３７Ｔ−Ｓ０３９Ｅ−Ｉ０４３Ｖ−Ａ０４７Ｖ−Ｐ０５４Ｔ−Ｔ０５６Ｙ−Ｉ０８０Ｖ−Ｎ０８５Ｓ−Ｅ０８７Ｄ−Ｓ０９９Ｒ−Ｔ１１４Ｑ−Ｆ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ
からなる群から選択される置換を含む変異体からなる群から選択される。
【００３８】
本発明の組成物で使用する他の好ましい変異体は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９２％の同一性を有する変異体であって、（配列番号１ナンバリングを用いて）、
（ａ）Ａ３７Ｔ−Ｓ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｔ５６Ｙ−Ｉ８０Ｖ−Ｎ８５Ｓ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｔ１１４Ｑ−Ｓ１２６Ｄ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｂ）Ａ３７Ｔ−Ｓ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｔ５６Ｙ−Ｉ８０Ｖ−Ｎ８５Ｓ−Ｅ８７Ｄ−Ｔ１１４Ｑ−Ｆ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｃ）Ａ３７Ｔ−Ｓ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｔ５６Ｙ−Ｉ８０Ｖ−Ｎ８５Ｓ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｔ１１４Ｑ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｄ）Ａ３７Ｔ−Ｓ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｉ８０Ｖ−Ｎ８５Ｓ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｅ−Ｔ１１４Ｑ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｅ）Ａ３７Ｔ−Ｓ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｉ８０Ｖ−Ｎ８５Ｓ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｔ１１４Ｑ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｆ）Ａ３７Ｔ−Ｓ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｉ８０Ｖ−Ｎ８５Ｓ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｔ１１４Ｑ−Ｆ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｇ）Ａ３７Ｔ−Ｓ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｔ５６Ｙ−Ｉ８０Ｖ−Ｎ８５Ｓ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｅ−Ｔ１１４Ｑ−Ｄ１２７Ｅ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｈ）Ａ３７Ｔ−Ｓ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｉ８０Ｖ−Ｎ８５Ｓ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｔ１１４Ｑ−Ｄ１２７Ｅ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｉ）Ａ３７Ｔ−Ｓ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｔ５６Ｙ−Ｉ８０Ｖ−Ｎ８５Ｓ−Ｅ８７Ｄ−Ｔ１１４Ｑ−Ｆ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｊ）Ａ３７Ｔ−Ｓ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｉ８０Ｖ−Ｎ８５Ｓ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｔ１１４Ｑ−Ｓ１２６Ｇ−Ｄ１２７Ｅ−Ｆ１２８Ｄ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｋ）Ａ３７Ｔ−Ｓ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｔ５６Ｙ−Ｉ８０Ｖ−Ｎ８５Ｓ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｔ１１４Ｑ−Ｆ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｌ）Ａ３７Ｔ−Ｓ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｔ５６Ｙ−Ｉ８０Ｖ−Ｎ８５Ｓ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｔ１１４Ｑ−Ｓ１２６Ｔ−Ｄ１２７Ｅ−Ｆ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｍ）Ａ３７Ｔ−Ｓ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｉ８０Ｖ−Ｎ８５Ｓ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｔ１１４Ｑ−Ｄ１２７Ｅ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｎ）Ａ３７Ｔ−Ｓ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｉ８０Ｖ−Ｎ８５Ｓ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｔ１１４Ｑ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｏ）Ａ３７Ｔ−Ｓ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｉ８０Ｖ−Ｎ８５Ｓ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｔ１１４Ｑ−Ｆ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ；及び
（ｐ）Ａ３７Ｔ−Ｓ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｉ８０Ｖ−Ｎ８５Ｓ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｔ１１４Ｑ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｑ）Ａ３７Ｔ−Ｓ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｉ８０Ｖ−Ｎ８５Ｓ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｔ１１４Ｑ−Ｓ１２６Ｔ−Ｆ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ
からなる群から選択される置換を含む変異体からなる群から選択される。
【００３９】
好ましい変異体は、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％の％同一性を有し、（配列番号２ナンバリングを用いて）Ｘ３９Ｅ及びＸ２４２Ｄからなる群から選択される少なくとも１つ、より好ましくは少なくとも２つのアミノ酸置換を含む。
【００４０】
好ましい変異体は、（配列番号２ナンバリングを用いて）Ｘ５４Ｔ、Ｘ１１４Ｑ、及びＸ１１４Ｃから選択されるアミノ酸置換を更に含む。
【００４１】
変異体は、（配列番号２ナンバリングを用いて）Ｎ７４Ｄ；Ｌ８０Ｖ，Ｒ，Ｙ；Ｎ８５Ｓ，Ｃ，Ｄ、及びＥ８７Ｄ，Ｃからなる群から選択される少なくとも１つ、より好ましくは少なくとも２つ、及びより好ましくは３つのアミノ酸置換を更に含むのが好ましい。
【００４２】
好ましくは、変異体は、配列番号２のアミノ酸配列を有する親プロテアーゼのアミノ酸配列と少なくとも９０％の％同一性を有し、（配列番号２ナンバリングを用いて）Ｓ３Ｖ、Ｓ９Ｒ、Ａ１５Ｔ、Ｖ６６Ａ、Ｎ７４Ｄ、Ｓ８５Ｎ／Ｒ、Ｓ９７ＳＥ、Ｓ９７ＡＤ、Ｓ９７Ｄ／Ｇ、Ｓ９９Ｇ／Ｍ、Ｓ１０１Ａ、Ｖ１０２Ｅ／Ｉ、Ｇ１１６Ｖ／Ｒ、Ｇ１５７Ｓ、Ｙ１６１Ａ、Ｒ１６４Ｓ、Ａ１８８Ｐ、Ｖ１９９Ｉ、Ｑ２００Ｃ／Ｅ／Ｉ／Ｋ／Ｔ／Ｖ／Ｗ／Ｌ、Ｙ２０３Ｗ、Ｌ２１１Ｃ／Ｍ／Ｄ、Ｎ２１２Ｄ、Ｍ２１６Ｓ／Ｆ、Ｑ２３９Ｒ、及びＴ２４９Ｒからなる群から選択される少なくとも１つの置換、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは少なくとも３つの置換を含む。
【００４３】
本発明の組成物で使用するのに特に好ましい変異体は、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９２％の同一性を有する変異体であって、（配列番号２ナンバリングを用いて）、
Ｐ０３９Ｅ−Ｉ０４３Ｖ−Ａ０４７Ｖ−Ｔ０５６Ｙ−Ｌ０８０Ｖ−Ｅ０８７Ｄ−Ｓ０９９Ｒ−Ｎ１１４Ｑ−Ｐ１２７Ｄ−Ｓ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ
Ｐ０３９Ｅ−Ｉ０４３Ｖ−Ａ０４７Ｖ−Ｐ０５４Ｔ−Ｔ０５６Ｙ−Ｌ０８０Ｖ−Ｅ０８７Ｄ−Ｓ０９９Ｒ−Ｎ１１４Ｑ−Ｓ１２６Ｇ−Ｐ１２７Ｅ−Ｓ１２８Ｄ−Ｎ２４２Ｄ
Ｐ０３９Ｅ−Ｉ０４３Ｖ−Ａ０４７Ｖ−Ｐ０５４Ｔ−Ｔ０５６Ｙ−Ｌ０８０Ｖ−Ｅ０８７Ｄ−Ｓ０９９Ｒ−Ｎ１１４Ｑ−Ｓ１２６Ｔ−Ｐ１２７Ｄ−Ｓ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ
Ｐ０３９Ｅ−Ｉ０４３Ｖ−Ａ０４７Ｖ−Ｐ０５４Ｔ−Ｔ０５６Ｙ−Ｌ０８０Ｖ−Ｅ０８７Ｄ−Ｓ０９９Ｒ−Ｎ１１４Ｑ−Ｐ１２７Ｄ−Ｓ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ
からなる群から選択される置換を含む変異体からなる群から選択される。
【００４４】
本発明の組成物で使用するのに特に好ましい変異体は、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９２％の同一性を有する変異体であって、（配列番号２ナンバリングを用いて）、
（ｉ）Ｐ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｔ５６Ｙ−Ｌ８０Ｖ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｎ１１４Ｑ−Ｓ１２６Ｄ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｉｉ）Ｐ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｔ５６Ｙ−Ｌ８０Ｖ−Ｅ８７Ｄ−Ｎ１１４Ｑ−Ｓ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｉｉｉ）Ｐ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｔ５６Ｙ−Ｌ８０Ｖ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｎ１１４Ｑ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｉｖ）Ｐ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｌ８０Ｖ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｅ−Ｎ１１４Ｑ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｖ）Ｐ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｌ８０Ｖ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｎ１１４Ｑ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｖｉ）Ｐ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｌ８０Ｖ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｎ１１４Ｑ−Ｓ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｖｉｉ）Ｐ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｔ５６Ｙ−Ｌ８０Ｖ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｅ−Ｎ１１４Ｑ−Ｐ１２７Ｅ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｖｉｉｉ）Ｐ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｌ８０Ｖ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｎ１１４Ｑ−Ｐ１２７Ｅ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｉｘ）Ｐ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｔ５６Ｙ−Ｌ８０Ｖ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｘ）Ｐ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｌ８０Ｖ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｎ１１４Ｑ−Ｓ１２６Ｇ−Ｐ１２７Ｅ−Ｓ１２８Ｄ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｘｉ）Ｐ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｔ５６Ｙ−Ｌ８０Ｖ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｎ１１４Ｑ−Ｐ１２７Ｄ−Ｓ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｘｉｉ）Ｐ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｔ５６Ｙ−Ｌ８０Ｖ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｎ１１４Ｑ−Ｓ１２６Ｔ−Ｐ１２７Ｅ−Ｓ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｘｉｉｉ）Ｐ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｌ８０Ｖ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｎ１１４Ｑ−Ｐ１２７Ｅ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｘｉｖ）Ｐ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｌ８０Ｖ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｎ１１４Ｑ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｘｖ）Ｐ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｌ８０Ｖ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｎ１１４Ｑ−Ｓ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｘｖｉ）Ｐ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｌ８０Ｖ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｎ１１４Ｑ−Ｐ１２７Ｄ−Ｎ２４２Ｄ；
（ｘｖｉｉ）Ｐ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｌ８０Ｖ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｒ−Ｎ１１４Ｑ−Ｓ１２６Ｔ−Ｐ１２７Ｄ−Ｓ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ
（ｘｖｉｉｉ）Ｐ３９Ｅ−Ｉ４３Ｖ−Ａ４７Ｖ−Ｐ５４Ｔ−Ｔ５６Ｙ−Ｌ８０Ｖ−Ｅ８７Ｄ−Ｓ９９Ｅ−Ｎ１１４Ｑ−Ｐ１２７Ｄ−Ｎ２４２Ｄ
からなる群から選択される置換を含む変異体からなる群から選択される。
【００４５】
好ましい変異体は、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０からなる群から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有し、（配列番号２ナンバリングを用いて）Ｘ３９Ｅ及びＸ２４２Ｄからなる群から選択される、少なくとも１つ、より好ましくは少なくとも２つのアミノ酸置換を含む。
【００４６】
好ましい変異体は、（配列番号２ナンバリングを用いて）Ｘ５４Ｔ、Ｘ１１４Ｑ、及びＸ１１４Ｃから選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を更に含む。
【００４７】
変異体は、（配列番号２ナンバリングを用いて）Ｘ７４Ｄ；Ｘ８０Ｖ，Ｒ，Ｙ；Ｘ８５Ｓ，Ｃ，Ｄ、及びＸ８７Ｄ，Ｃからなる群から選択される少なくとも１つ、及びより好ましくは少なくとも２つ、及びより好ましくは３つのアミノ酸置換を更に含むのが好ましい。
【００４８】
好ましくは、変異体は、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０からなる群から選択される配列を有する親プロテアーゼのアミノ酸配列と少なくとも９０％の％同一性を有し、（配列番号２ナンバリングを用いて）Ｘ３Ｖ、Ｘ９Ｒ、Ｘ１５Ｔ、Ｘ６６Ａ、Ｘ７４Ｄ、Ｘ８５Ｎ／Ｒ、Ｘ９７ＳＥ、Ｘ９７ＡＤ、Ｘ９７Ｄ／Ｇ、Ｘ９９Ｇ／Ｍ、Ｘ１０１Ａ、Ｘ１０２Ｅ／Ｉ、Ｘ１１６Ｖ／Ｒ、Ｘ１５７Ｓ、Ｘ１６１Ａ、Ｘ１６４Ｓ、Ｘ１８８Ｐ、Ｘ１９９Ｉ、Ｘ２００Ｃ／Ｅ／Ｉ／Ｋ／Ｔ／Ｖ／Ｗ／Ｌ、Ｘ２０３Ｗ、Ｘ２１１Ｃ／Ｍ／Ｄ、Ｘ２１２Ｄ、Ｘ２１６Ｓ／Ｆ、Ｘ２３９Ｒ、及びＸ２４９Ｒからなる群から選択される少なくとも１つの置換、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは少なくとも３つの置換を含む。
【００４９】
好ましい変異体は、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０からなる群から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する。配列番号２に関して上で列挙した置換は、配列番号２に関して列挙した位置にて、これらの配列に存在するアミノ酸残基に関係なく、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０に、変更すべきところは変更して準用する。配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０は、健全な位置において配列番号２と同じアミノ酸残基を有しない場合があるが、変異体は同じ置換を含むことと理解される。
【００５０】
例えば、
配列番号２に対する、Ｐ０３９Ｅ−Ｉ０４３Ｖ−Ａ０４７Ｖ−Ｔ０５６Ｙ−Ｌ０８０Ｖ−Ｅ０８７Ｄ−Ｓ０９９Ｒ−Ｎ１１４Ｑ−Ｐ１２７Ｄ−Ｓ１２８Ｅ−Ｎ２４２Ｄ
は、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０のいずれかに対しては、Ｘ０３９Ｅ−Ｘ０４３Ｖ−Ｘ０４７Ｖ−Ｘ０５６Ｙ−Ｘ０８０Ｖ−Ｘ０８７Ｄ−Ｘ０９９Ｒ−Ｘ１１４Ｑ−Ｘ１２７Ｄ−Ｘ１２８Ｅ−Ｘ２４２Ｄになる。
【００５１】
本発明のプロテアーゼは、組成物が軟水中で用いられる場合においても、ホスフェート非含有組成物にて非常によく性能を発揮する。
【００５２】
本発明の組成物中での、プロテアーゼの好ましい量としては、組成物１グラム当たり、約０．０４〜約５ｍｇ、より好ましくは約０．０５〜約１．５ｍｇの活性プロテアーゼが挙げられる。
【００５３】
自動食洗洗浄組成物
自動食洗洗浄組成物は、任意の物理的形態であってよい。当該自動食洗洗浄組成物は、詰まっていない粉末であっても、ゲルであっても、又は単位用量形態で提供されてもよい。好ましくは、組成物は単位用量形態であり、単位用量形態としては、圧縮錠剤及び水溶性パックが挙げられる。本発明の自動食洗洗浄組成物は、好ましくは、単位用量形態で提示され、固体、液体、及びゲルの形態を含む任意の物理的形態であり得る。本発明の組成物は、多区画型パックの形態、より具体的には、異なる物理的形態の組成物を有する区画、例えば固体形態の組成物を含む区画と液体形態の組成物を含む別の区画とを有する多区画型パックでの提供に非常によく適している。組成物は、好ましくは、ポリビニルアルコールなどの水溶性フィルムに封入される。厚さ１００μｍ未満、好ましくは２０〜９０μｍのポリビニルアルコールフィルムに包まれた単位用量形態の組成物がとりわけ好ましい。本発明の洗剤組成物は、約８〜約２５グラム、好ましくは約１０〜約２０グラムの重量を有する。この重量範囲は、食洗機のディスペンサーに余裕をもって収まる。この範囲は洗剤としては少ない量に相当するものであるが、洗剤は本明細書において上記に述べたような効果の全てをもたらすように配合されている。
【００５４】
組成物は、好ましくは、ホスフェート非含有である。本明細書において「ホスフェート非含有」とは、組成物が、組成物の１重量％未満、好ましくは０．１重量％未満のホスフェートを含むものとして理解される。
【００５５】
本発明の組成物はホスフェート非含有であり、錯化剤系を含む。
【００５６】
錯化剤系
本発明の説明において、「錯化剤」とは、カルシウム、マグネシウム、鉛、銅、亜鉛、カドミウム、水銀、マンガン、鉄、アルミニウム、及び他のカチオン性多価イオンなどの多価イオンと結合して水溶性の錯体を形成することが可能な化合物のことである。錯化剤は、Ｃａ２＋に対して少なくとも３の、対数安定性定数（［ｌｏｇ  Ｋ］）を有する。安定性定数、ｌｏｇＫは、温度２５℃でイオン強度０．１の溶液中で測定される。
【００５７】
本発明の組成物は、組成物の１０重量％〜５０重量％の錯化剤系を含む。組成物は、クエン酸、メチルグリシン二酢酸（ＭＧＤＡ）、グルタミン−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＧＬＤＡ）、イミノ二コハク酸（ＩＤＳ）、カルボキシメチルイヌリン、Ｌ−アスパラギン酸Ｎ，Ｎ−二酢酸四ナトリウム塩（ＡＳＤＡ）、及びこれらの混合物からなる群から選択される錯化剤を含むのが好ましい。本発明の目的に関し、用語「酸」は、錯化剤に言及する場合、酸及びその塩を含む。
【００５８】
好ましい実施形態では、組成物は、本発明の１５重量％〜４０重量％のＭＧＤＡ、より好ましくはＭＧＤＡの三ナトリウム塩を含む。これだけ多くの量のＭＧＤＡを含む組成物は、硬水の存在下において、また、長い、及び／又は熱いサイクルにても、良好に機能する。
【００５９】
好ましい実施形態では、組成物は、本発明の１５重量％〜２８重量％のクエン酸、より好ましくはクエン酸ナトリウムを含む。クエン酸を含む組成物は、軟水で良好に機能する。
【００６０】
好ましい実施形態では、錯化剤系は、クエン酸とＭＧＤＡを、好ましくは約０．５：１〜約５：１、より好ましくは約０．５：１〜約２．５：１の重量比で含む。
【００６１】
分散剤ポリマー
分散剤ポリマーは、組成物の約０．１〜約２０重量％、好ましくは０．２〜約１５重量％、より好ましくは０．３〜重量％の任意の好適な量で使用される。
【００６２】
分散剤ポリマーは、自動食洗プロセスにおいてカルシウム又は炭酸カルシウムを懸濁させることが可能である。
【００６３】
分散剤ポリマーは、２５℃で、３０ｍｇ／ｇ〜２５０ｍｇ／ｇの分散剤ポリマー、好ましくは３５ｍｇ／ｇ〜２００ｍｇ／ｇの分散剤ポリマー、より好ましくは４０ｍｇ／ｇ〜１５０ｍｇのＣａ／ｇの分散剤ポリマーの範囲内で、カルシウム結合能を有する。本発明の意味において、ポリマーが分散剤ポリマーであるかどうかを判定するために、以下の指示に従い、以下のカルシウム結合能の判定を行う。
【００６４】
カルシウム結合能試験方法
本明細書で言及されるカルシウム結合能は、Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ  ＳｅｖｅｎＭｕｌｔｉ（商標）ベンチトップメータ及びＰｅｒｆｅｃｔＩＯＮ（商標）櫛形Ｃａ組み合わせ電極などのｐＨ／イオンメータを用いて、滴定によって決定される。結合能を測定するために、ビーカー又はターゴトメータポットに適した加熱撹拌装置を２５℃に設定し、メータ付イオン電極を製造元の説明書に従って較正する。電極校正の標準濃度は試験濃度をブラケティングし、２５℃で測定しなければならない。脱イオン水１Ｌに３．６７ｇのＣａＣｌ２ー２Ｈ２Ｏを添加することにより、１０００ｍｇ／ｇのＣａの原液を調製し、次いで希釈を行ってそれぞれ１００ｍｇ／ｇ、１０ｍｇ／ｇ、及び１ｍｇ／ｇ濃度のカルシウムを含む、それぞれ１００ｍＬの３つの作業溶液を調製する。１００ｍｇＣａ／ｇの作業溶液を、２５℃で実施される滴定中の初期濃度として使用する。各作業溶液のイオン強度は、２．５ｇ／ＬのＮａＣｌをそれぞれ添加することによって調節される。１００ｍｇＣａ／ｇの作業溶液１００ｍＬを、２５℃に達するまで加熱し撹拌する。カルシウムイオン濃度の初期測定は、溶液が２５℃に達したときにイオン電極を使用して行われる。次いで、試験ポリマーをカルシウム作業溶液（０．０１ｇ／Ｌ間隔で）に徐々に加え、各増分添加後に５分間攪拌した後に測定する。滴定は、溶液が１ｍｇ／ｇのカルシウムに達すると停止される。残りの２つのカルシウム濃度作業溶液を用いて滴定手順を繰り返す。試験ポリマーの結合能は、添加された試験ポリマーのグラム／Ｌに対して測定されたカルシウム濃度の直線勾配として計算される。
【００６５】
分散剤ポリマーは、好ましくは、６を超えるｐＨを有する水溶液に溶解されたときに負の正味電荷を有する。
【００６６】
分散剤ポリマーは、より低いｐＨで負電荷を増加させ、硬水中でのその分散特性を改善するために、スルホン化カルボキシルステル又はアミドも担持することができる。好ましい分散剤ポリマーは、スルホン化／カルボキシル化ポリマー、すなわち、スルホン化モノマー及びカルボキシル化モノマーの両方から構成されるポリマーである。
【００６７】
好ましくは、分散剤ポリマーは、ポリカルボン酸のスルホン化誘導体であり、２、３、４又はそれ以上の異なるモノマー単位を含むことができる。好ましいコポリマーは、
一般式（ＩＩＩ）を有するカルボン酸モノマーから誘導された少なくとも１つの構造単位を含む：
【００６８】
【化１】
2021506256.tif 000002
式中、Ｒ１〜Ｒ３は、水素、メチル、２〜１２個の炭素原子を有する直鎖又は分枝状の飽和アルキル基、２〜１２個の炭素原子を有する直鎖又は分枝状のモノ又はポリ不飽和アルケニル基、−ＮＨ２若しくは−ＯＨで置換された前述のアルキル又はアルケニル基、又は−ＣＯＯＨ、又はＣＯＯＲ４から選択され、式中、Ｒ４は、水素、アルカリ金属、又は２〜１２個の炭素を有する直鎖又は分枝状の、飽和又は不飽和のアルキル又はアルケニル基である。
【００６９】
好ましいカルボン酸モノマーとしては、アクリル酸、マレイン酸、無水マレイン酸、イタコン酸、シトラコン酸、２−フェニルアクリル酸、桂皮酸、クロトン酸、フマル酸、メタクリル酸、２−エチルアクリル酸、メチレンマロン酸、又はソルビン酸の１つ以上が挙げられる。アクリル及びメタクリル酸がより好ましい。
【００７０】
任意に、一般式（ＩＶ）を有する少なくとも１つの非イオン性モノマーから誘導される１つ以上の構造単位を含む：
【００７１】
【化２】
2021506256.tif 000003
式中、Ｒ５〜Ｒ７は、独立して、水素、メチル、フェニル又は１〜６個の炭素原子を含むヒドロキシアルキル基から選択され、環状構造の一部であることができ、Ｘは、−ＣＨ２−、−ＣＯＯ−、−ＣＯＮＨ−又は−ＣＯＮＲ８−から選択される、任意に存在するスペーサ基であり、Ｒ８は、１〜２２個の炭素原子を有する直鎖又は分枝状の飽和アルキル基又は６〜２２個の炭素原子を有する不飽和の、好ましくは芳香族の基、から選択される。
【００７２】
好ましい非イオン性モノマーとしては、ブテン、イソブテン、ペンテン、２−メチルペンタ−１−エン、３−メチルペンタ−１−エン、２，４，４−トリメチルペンタ−１−エン、２，４，４−トリメチルペンタ−２−エン、シクロペンテン、メチルシクロペンテン、２−メチル−３−メチル−シクロペンテン、ヘキセン、２，３−ジメチルヘキサ−１−エン、２，４−ジメチルヘキサ−１−エン、２，５−ジメチルヘキサ−１−エン、３，５−ジメチルヘキサ−１−エン、４，４−ジメチルヘキサ−１−エン、シクロヘキセン、メチルシクロヘキセン、シクロヘプテン、１０個以上の炭素原子を有する、デカ−１−エン、ドデカ−１−エン、ヘキサデカ−１−エン、オクタデカ−１−エン及びドコサ−１−エン、などのアルファオレフィン、の１つ以上が挙げられ、好ましい芳香族モノマーは、スチレン、アルファメチルスチレン、３−メチルスチレン、４−ドデシルスチレン、２−エチル−４−ベジルスチレン、４−シクロヘキシルスチレン、４−プロピルスチロール、１−ビニルナフタレン、２−ビニルナフタレンであり、好ましいカルボキシルエステルモノマーは、メチル（メタ）アクリレート、エチル（メタ）アクリレート、プロピル（メタ）アクリレート、ｔ−ブチル（メタ）アクリレート、ペンチル（メタ）アクリレート、ヘキシル（メタ）アクリレート、２−エチルヘキシル（メタ）アクリレート、オクチル（メタ）アクリレート、ラウリル（メタ）アクリレート、ステアリル（メタ）アクリレート及びベヘニル（メタ）アクリレートであり、好ましいアミドは、Ｎ−メチルアクリルアミド、Ｎ−エチルアクリルアミド、Ｎ−ｔ−ブチルアクリルアミド、Ｎ−２−エチルヘキシルアクリルアミド、Ｎ−オクチルアクリルアミド、Ｎ−ラウリルアクリルアミド、Ｎ−ステアリルアクリルアミド、Ｎ−ベヘニルアクリルアミドである。
【００７３】
及び、一般式（Ｖ）及び（ＶＩ）を有する少なくとも１つのスルホン酸モノマーから誘導される少なくとも１つの構造単位を含む：
【００７４】
【化３】
2021506256.tif 000004
式中、Ｒ７は、少なくとも１つのｓｐ２結合を含む基であり、Ａは、Ｏ、Ｎ、Ｐ、Ｓ、アミド又はエステル結合であり、Ｂは、単環式又は多環式芳香族基又は脂肪族基であり、各ｔは独立して０又は１であり、Ｍ＋はカチオンである。一態様では、Ｒ７は、Ｃ２〜Ｃ６アルケンである。別の態様では、Ｒ７は、エテン、ブテン又はプロペンである。
【００７５】
好ましいスルホン化モノマーとしては、１−アクリルアミド−１−プロパンスルホン酸、２−アクリルアミド−２−プロパンスルホン酸、２−アクリルアミド−２−メチル−１−プロパンスルホン酸、２−メタクリルアミド−２−メチル−１−プロパンスルホン酸、３−メタクリルアミド−２−ヒドロキシ−プロパンスルホン酸、アリルスルホン酸、メタリルスルホン酸、アリルオキシベンゼンスルホン酸、メタリルオキシベンゼンスルホン酸、２−ヒドロキシ−３−（２−プロペニルオキシ）プロパンスルホン酸、２−メチル−２−プロペン−１−スルホン酸、スチレンスルホン酸、ビニルスルホン酸、３−スルホプロピル、３−スルホ−プロピルメタクリレート、スルホメタクリルアミド、及び上述の酸又はそれらの水溶性塩の混合物、の１つ以上が挙げられる。
【００７６】
好ましくは、ポリマーは、以下の濃度の各種モノマー、すなわち、ポリマーの重量に対して約４０〜約９０重量％の、好ましくは約６０〜約９０重量％の１つ以上のカルボン酸モノマー、ポリマーの重量に対して約５〜約５０重量％の、好ましくは約１０〜約４０重量％の１種類以上のスルホン酸モノマー、及び、任意に、ポリマーの重量に対して約１重量％〜約３０重量％の、好ましくは約２〜約２０重量％の、１つ以上の非イオン性モノマー、を含む。特に好ましいポリマーは、ポリマーの約７０重量％〜約８０重量％の少なくとも１種のカルボン酸モノマー及びポリマーの約２０重量％〜約３０重量％の少なくとも１つのスルホン酸モノマーを含む。
【００７７】
ポリマー中、カルボン酸基又はスルホン酸基の全て又はいくつかが中和形態で存在していてよく、すなわちいくつか又は全ての酸性基中のカルボン酸基及び／又はスルホン酸基の酸性水素原子が、金属イオン、好ましくはアルカリ金属イオン、特にナトリウムイオンと置き換えられ得る。
【００７８】
カルボン酸は好ましくは（メタ）アクリル酸である。スルホン酸モノマーは、好ましくは２−アクリルアミド−２−プロパンスルホン酸（ＡＭＰＳ）である。
【００７９】
好ましい市販のポリマーとしては、Ａｌｃｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌにより供給されるＡｌｃｏｓｐｅｒｓｅ２４０、Ａｑｕａｔｒｅａｔ  ＡＲ５４０、及びＡｑｕａｔｒｅａｔ  ＭＰＳ、Ｒｏｈｍ  ＆  Ｈａａｓによって供給されるＡｃｕｍｅｒ３１００、Ａｃｕｍｅｒ２０００、Ａｃｕｓｏｌ５８７Ｇ、及びＡｃｕｓｏｌ５８８Ｇ、ＢＦ  Ｇｏｏｄｒｉｃｈによって供給されるＧｏｏｄｒｉｃｈ  Ｋ−７９８、Ｋ−７７５及びＫ−７９７、並びにＩＳＰ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．によって供給されるＡＣＰ１０４２が挙げられる。特に好ましいポリマーは、Ｒｏｈｍ  ＆  Ｈａａｓによって供給されるＡｃｕｓｏｌ  ５８７Ｇ及びＡｃｕｓｏｌ  ５８８Ｇである。
【００８０】
好適な分散剤ポリマーとしては、低分子量のアニオン性カルボキシルポリマーが挙げられる。それらは、約２００，０００ｇ／ｍｏｌ以下、又は約７５，０００ｇ／ｍｏｌ以下、又は約５０，０００ｇ／ｍｏｌ以下又は約３，０００ｇ／ｍｏｌ〜約５０，０００ｇ／ｍｏｌ、好ましくは約５，０００ｇ／ｍｏｌ〜約４５，０００ｇ／ｍｏｌの重量平均分子量を有するホモポリマー又はコポリマーであってもよい。分散剤ポリマーは、１，０００〜２０，０００、特に２，０００〜１０，０００、特に好ましくは３，０００〜５，０００の平均分子量を有するポリアクリレートの低分子量ホモポリマーであってもよい。
【００８１】
分散剤ポリマーは、７０，０００未満の分子量を有する、アクリル酸とメタクリル酸、アクリル酸及び／又はメタクリル酸とマレイン酸のコポリマー、並びにアクリル酸及び／又はメタクリル酸とフマル酸のコポリマーであってもよい。それらの分子量は、２，０００〜８０，０００、より好ましくは２０，０００〜５０，０００、特に３０，０００〜４０，０００ｇ／ｍｏｌの範囲であり、（メタ）アクリレート対マレエート又はフマレートセグメントの比は３０：１〜１：２の範囲である。
【００８２】
分散剤ポリマーは、３，０００〜１００，０００、あるいは４，０００〜２０，０００の分子量を有するアクリルアミドとアクリレートとのコポリマーであってもよく、分散剤ポリマーの５０重量％未満、あるいは２０重量％未満のアクリルアミド含有量も使用され得る。あるいは、そのような分散剤ポリマーは、４，０００〜２０，０００の分子量及びポリマーの０重量％〜１５重量％のアクリルアミド含有量を有することができる。
【００８３】
本明細書に好適な分散剤ポリマーとしては、イタコン酸ホモポリマー及びコポリマーも挙げられる。
【００８４】
あるいは、分散剤ポリマーは、アルコキシル化ポリアルキレンイミン、アルコキシル化ポリカルボキシレート、ポリエチレングリコール、スチレンコポリマー、セルロースサルフェートエステル、カルボキシル化ポリサッカライド、両親媒性グラフトコポリマー及びそれらの混合物からなる群から選択され得る。
【００８５】
漂白剤
本発明の組成物は、組成物の約１０〜約２０重量％、より好ましくは約１２〜約１８重量％の漂白剤、好ましくは過炭酸塩を含むのが好ましい。
【００８６】
無機及び有機漂白剤が、本明細書における使用に好適である。無機漂白剤には、過ホウ酸塩、過炭酸塩、過リン酸塩、過硫酸塩、及び過ケイ酸塩などの過水和塩が挙げられる。無機過水和塩は、通常、アルカリ金属塩である。無機過水和塩は、追加の保護なしの結晶性固体として含まれ得る。あるいは、塩はコーティングされていてもよい。好適なコーティングとしては、硫酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、ケイ酸ナトリウム、及びこれらの混合物が挙げられる。当該コーティングは、表面に適用される混合物として適用され、又は順次積層して適用され得る。
【００８７】
アルカリ金属過炭酸塩、特に過炭酸ナトリウムは、本明細書における使用に好ましい漂白剤である。過炭酸塩は、最も好ましくは、製品内安定性をもたらす、コーティングされた形態で製品に組み込まれる。
【００８８】
過酸化モノ過硫酸カリウムは、本明細書で有用な別の無機過水和塩である。
【００８９】
典型的な有機漂白剤は、有機ペルオキシ酸、とりわけドデカンジペルオキシ酸、テトラデカンジペルオキシ酸、及びヘキサデカンジペルオキシ酸である。モノ及びジペルアゼライン酸、モノ及びジペルブラシル酸も、本明細書において好適である。ジアシル及びテトラアシル過酸化物、例えば過酸化ジベンゾイル及び過酸化ジラウロイルは、本発明の関連において使用可能な他の有機過酸化物である。
【００９０】
更なる典型的な有機漂白剤としては、ペルオキシ酸が挙げられ、具体例は、アルキルペルオキシ酸及びアリールペルオキシ酸である。好ましい代表例は、（ａ）ペルオキシ安息香酸及びその環置換の誘導体、例えばアルキルペルオキシ安息香酸の他、ペルオキシ−α−ナフトエ酸及びモノペルフタル酸マグネシウム、（ｂ）脂肪族又は置換脂肪族ペルオキシ酸、例えばペルオキシラウリン酸、ペルオキシステアリン酸、ε−フタルイミドペルオキシカプロン酸［フタロイミノペルオキシヘキサン酸（ＰＡＰ）］、ｏ−カルボキシベンズアミドペルオキシカプロン酸、Ｎ−ノネニルアミドペルアジピン酸及びＮ−ノネニルアミドペルスクシネート、並びに（ｃ）脂肪族及び芳香脂肪族ペルオキシジカルボン酸、例えば１，１２−ジペルオキシカルボン酸、１，９−ジペルオキシアゼライン酸、ジペルオキシセバシン酸、ジペルオキシブラシル酸、ジペルオキシフタル酸、２−デシルジペルオキシブタン−１，４−二酸、Ｎ，Ｎ−テレフタロイルジ（６−アミノペルカプロン酸）である。
【００９１】
漂白活性化剤
漂白活性化剤は、典型的には、６０℃以下の温度での洗浄の過程で漂白作用を強化する有機過酸前駆体である。本明細書での使用に適した漂白活性化剤は、過加水分解条件下で、好ましくは１〜１２個の炭素原子、特に２〜１０個の炭素原子を有する脂肪族ペルオキソカルボン酸、及び／又は任意に置換された過安息香酸を与える化合物を含む。好適な物質は、炭素原子の数が指定されているＯ−アシル基及び／若しくはＮ−アシル基並び／又は任意に置換ベンゾイル基を有する。ポリアシル化アルキレンジアミン、特にテトラアセチルエチレンジアミン（ＴＡＥＤ）、アシル化トリアジン誘導体、特に１，５−ジアセチル−２，４−ジオキソヘキサヒドロ−１，３，５−トリアジン（ＤＡＤＨＴ）、アシル化グリコールウリル、特にテトラアセチルグリコールウリル（ＴＡＧＵ）、Ｎ−アシルイミド、特にＮ−ノナノイルスクシンイミド（ＮＯＳＩ）、アシル化フェノールスルホネート、特にｎ−ノナノイル−又はイソノナノイルオキシベンゼンスルホネート（ｎ−又はイソ−ＮＯＢＳ）、デカノイルオキシ安息香酸（ＤＯＢＡ）、無水カルボン酸、特に無水フタル酸、アシル化多価アルコール、特にトリアセチン、二酢酸エチレングリコール及び２，５−ジアセトキシ−２，５−ジヒドロフラン、並びにクエン酸トリエチルアセチル（ＴＥＡＣ）も好まれる。存在する場合、本発明の組成物は、組成物の０．０１〜５重量％、好ましくは０．２〜２重量％の漂白活性化剤、好ましくはＴＡＥＤを含む。
【００９２】
漂白触媒
本明細書の組成物は、好ましくは、漂白触媒、好ましくは金属含有漂白触媒を含有する。より好ましくは、金属含有漂白触媒は、遷移金属含有漂白触媒、とりわけマンガン又はコバルト含有漂白触媒である。
【００９３】
本明細書での使用に好ましい漂白触媒としては、マンガントリアザシクロノナン及び関連する錯体、Ｃｏ、Ｃｕ、Ｍｎ及びＦｅビスピリジルアミン及び関連する錯体、並びにペンタミン酢酸コバルト（ＩＩＩ）及び関連する錯体が挙げられる。本明細書に用いるのに特に好ましい漂白触媒は、１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン（Ｍｅ−ＴＡＣＮ）、及び、１，２，４，７−テトラメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン（Ｍｅ／Ｍｅ−ＴＡＣＮ）である。
【００９４】
本発明の組成物は、好ましくは、組成物の０．００５〜０．５重量％、より好ましくは０．００５〜０．０７５重量％の漂白触媒を含む。好ましくは、漂白触媒は、マンガン漂白触媒である。
【００９５】
無機ビルダー
本発明の組成物は、好ましくは、無機ビルダーを含む。好適な無機ビルダーは、炭酸塩、ケイ酸塩、及びこれらの混合物からなる群から選択される。炭酸ナトリウムが、本明細書における使用に特に好ましい。本発明の組成物は、好ましくは、組成物の５〜６０重量％、より好ましくは１０〜５５重量％、とりわけ１５〜５０重量％の炭酸ナトリウムを含む。
【００９６】
界面活性剤
本明細書における使用に好適な界面活性剤には、非イオン性界面活性剤が挙げられ、好ましくは、組成物は、いかなる他の界面活性剤も含まない。従来より、非イオン性界面活性剤は、膜形成及び斑点形成を回避し、光沢を改善するための表面改質、特にシート化を目的として、自動食洗において使用されてきた。非イオン性界面活性剤は、汚れの再付着防止にも寄与することができることが判明している。
【００９７】
好ましくは、本発明の組成物は、非イオン性界面活性剤又は非イオン性界面活性剤系を含み、より好ましくは、非イオン性界面活性剤又は非イオン性界面活性剤系は、蒸留水中１％の濃度で測定して、４０〜７０℃、好ましくは４５〜６５℃の転相温度を有する。「非イオン性界面活性剤系」とは、本明細書において、２つ以上の非イオン性界面活性剤の混合物を意味する。本明細書における使用に好ましいのは、非イオン性界面活性剤系である。これらは、単一の非イオン性界面活性剤よりも、製品中で、改善された洗浄及び仕上がり特性、並びに良好な安定性を有すると考えられる。
【００９８】
転相温度とは、それよりも低い温度では界面活性剤又はその混合物が油膨潤ミセルとして水性相中に優先的に分配され、それよりも高い温度では水膨潤逆性ミセルとして油性相に優先的に分配される温度である。転相温度は、混濁が生じる温度を識別することによって視覚的に判断することができる。
【００９９】
非イオン性界面活性剤又は系の転相温度は、以下のように判断することができる：蒸留水中、溶液の１重量％の対応する界面活性剤又は混合物を含有する溶液を調製する。溶液を軽く撹拌した後、転相温度を分析して、プロセスが化学平衡で生じることを確認する。転相温度は、７５ｍｍ密封ガラス試験管中に溶液を浸漬することによって熱安定性の浴槽内で測定する。転相温度の測定の前後に試験管を秤量して、漏れがないことを確認する。温度が事前予測した転相温度より数度下に達するまで、温度を１℃／分未満の速度で徐々に上昇させる。転相温度は、濁りの最初の兆候があった時点で視覚的に判断される。
【０１００】
好適な非イオン性界面活性剤としては、ｉ）６〜２０個の炭素原子を有するモノヒドロキシアルカノール又はアルキルフェノール（alkyphenol）と、アルコール又はアルキルフェノール１モル当たり、好ましくは少なくとも１２モル、特に好ましくは少なくとも１６モル、更により好ましくは少なくとも２０モルのエチレンオキシドと、の反応によって調製されるエトキシル化非イオン性界面活性剤、ｉｉ）６〜２０個の炭素原子及び少なくとも１つのエトキシ基及びプロポキシ基を有するアルコールアルコキシル化界面活性剤が挙げられる。本明細書における使用に好ましいのは、界面活性剤ｉ）とｉｉ）との混合物である。
【０１０１】
別の好適な非イオン性界面活性剤は、次式で表されるエポキシで保護されたポリ（オキシアルキル化）アルコールである：
Ｒ１Ｏ［ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）Ｏ］ｘ［ＣＨ２ＣＨ２Ｏ］ｙ［ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）Ｒ２］  （Ｉ）
式中、Ｒ１は、４〜１８個の炭素原子を有する直鎖状又は分枝状の脂肪族炭化水素基であり、Ｒ２は、２〜２６個の炭素原子を有する直鎖状又は分枝状の脂肪族炭化水素基であり、ｘは、０．５〜１．５の平均値を有する、より好ましくは約１の整数であり、ｙは、少なくとも１５、より好ましくは少なくとも２０の値を有する整数である。
【０１０２】
好ましくは、式Ｉの界面活性剤は、末端エポキシド単位［ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）Ｒ２］中に少なくとも約１０個の炭素原子を有する。本発明によれば、式Ｉの好適な界面活性剤は、例えば、Ｏｌｉｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎによって１９９４年１０月１３日に公開された国際公開第９４／２２８００号に記載の、Ｏｌｉｎ  ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎのＰＯＬＹ−ＴＥＲＧＥＮＴ（登録商標）ＳＬＦ−１８Ｂ非イオン性界面活性剤である。
【０１０３】
酵素
その他のプロテアーゼ
本発明の組成物は、本発明のプロテアーゼに加えてプロテアーゼを含むことができる。２つ以上のプロテアーゼの混合物は、特に、再付着防止剤及び／又はスルホン化ポリマーと組み合わせたときに、より広範な温度、より長いサイクル持続時間、及び／又はより広範な基質範囲にまたがる洗浄の向上に寄与することができ、優れた光沢効果をもたらすことができる。
【０１０４】
本発明の変異体プロテアーゼと組み合わせての使用に好適なプロテアーゼとしては、サブチリシン（ＥＣ３．４．２１．６２）などの微生物セリンプロテアーゼといった中性又はアルカリ性セリンプロテアーゼをはじめとする、メタロプロテアーゼ及びセリンプロテアーゼが挙げられる。好適なプロテアーゼとしては、動物、植物又は微生物起源のものが挙げられる。一態様では、このような好適なプロテアーゼは、微生物起源のものであってもよい。好適なプロテアーゼとしては、前述の好適なプロテアーゼの化学的又は遺伝的に改変された変異が挙げられる。一態様では、好適なプロテアーゼは、アルカリ性微生物プロテアーゼ又は／及びトリプシン型プロテアーゼなどのセリンプロテアーゼであってもよい。好適な中性又はアルカリ性プロテアーゼの例としては、以下が挙げられる。
（ａ）サブチリシン（ＥＣ  ３．４．２１．６２）、特に、国際公開第２００４０６７７３７号、同第２０１５０９１９８９号、同第２０１５０９１９９０号、同第２０１５０２４７３９号、同第２０１５１４３３６０号、米国特許第６，３１２，９３６（Ｂ１）号、同第５，６７９，６３０号、同第４，７６０，０２５号，独国第１０２００６０２２２１６（Ａ１）号、同第１０２００６０２２２２４（Ａ１）号、国際公開第２０１５０８９４４７号、同第２０１５０８９４４１号、同第２０１６０６６７５６号、同第２０１６０６６７５７号、同第２０１６０６９５５７号、同第２０１６０６９５６３号、同第２０１６０６９５６９号に記載されている、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．，Ｂ．ｌｅｎｔｕｓ，Ｂ．ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｕｓ，Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ，Ｂ．ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ，Ｂ．ｐｕｍｉｌｕｓ，Ｂ．ｇｉｂｓｏｎｉｉ，ａｎｄ  Ｂ．ａｋｉｂａｉｉなどのＢａｃｉｌｌｕｓに由来するもの。
（ｂ）国際公開第８９／０６２７０号に記載されているフサリウム属プロテアーゼ、並びに同第０５／０５２１６１号及び同第０５／０５２１４６号に記載されているセルロモナス属に由来するキモトリプシンプロテアーゼを含むトリプシン（例えば、ブタ又はウシ起源）などのトリプシン型又はキモトリプシン型プロテアーゼ。
（ｃ）メタロプロテアーゼ、特に、国際公開第０７／０４４９９３（Ａ２）号に記載されているＢａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ、国際公開第２０１４１９４０３２号、同第２０１４１９４０５４号及び同第２０１４１９４１１７号に記載されているＢａｃｉｌｌｕｓ、Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｔｈｅｒｍｏａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ、Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ又はＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐｐ．、国際公開第２０１５１９３４８８号に記載されているＫｒｉｂｅｌｌａ  ａｌｌｕｍｉｎｏｓａ、及び国際公開第２０１６０７５０７８号に記載されているＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ及びＬｙｓｏｂａｃｔｅｒに由来するもの。
（ｄ）国際公開第９２／１７５７７号（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ａ／Ｓ）に記載されているＢａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．ＴＹ１４５、ＮＣＩＭＢ  ４０３３９由来のサブチラーゼと少なくとも９０％の同一性を有するプロテアーゼ、同第２０１５０２４７３９号及び同第２０１６０６６７５７号に記載されているこのＢａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ  ＴＹ１４５サブチラーゼの変異体を含むもの。
【０１０５】
本発明の洗剤にとりわけ好ましい追加のプロテアーゼは、バシラス・レンタス由来の野生型酵素と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％、更により好ましくは少なくとも９９％、とりわけ１００％の同一性を示すポリペプチドであり、これは、本明細書に参照により組み込まれる国際公開第００／３７６２７号に示されるようなＢＰＮのナンバリング体系及びアミノ酸略号を用いた場合に、以下に示す位置の１つ以上、好ましくは２つ以上、より好ましくは３つ以上に変異を有する：Ｖ６８Ａ、Ｎ７６Ｄ、Ｎ８７Ｓ、Ｓ９９Ｄ、Ｓ９９ＳＤ、Ｓ９９Ａ、Ｓ１０１Ｇ、Ｓ１０１Ｍ、Ｓ１０３Ａ、Ｖ１０４Ｎ／Ｉ、Ｇ１１８Ｖ、Ｇ１１８Ｒ、Ｓ１２８Ｌ、Ｐ１２９Ｑ、Ｓ１３０Ａ、Ｙ１６７Ａ、Ｒ１７０Ｓ、Ａ１９４Ｐ、Ｖ２０５Ｉ、Ｑ２０６Ｌ／Ｄ／Ｅ、Ｙ２０９Ｗ、及び／又はＭ２２２Ｓ。
【０１０６】
最も好ましくは、追加のプロテアーゼは、ＰＢ９２野生型（国際公開第０８／０１０９２５号中、配列番号２）又はスブチリシン３０９野生型（Ｎ８７Ｓの自然変異体を含む以外はＰＢ９２主鎖のとおりの配列）のいずれかに対して以下の変異（ＢＰＮのナンバリング体系）を含むプロテアーゼの群から選択される。
（ｉ）Ｇ１１８Ｖ＋Ｓ１２８Ｌ＋Ｐ１２９Ｑ＋Ｓ１３０Ａ
（ｉｉ）Ｓ１０１Ｍ＋Ｇ１１８Ｖ＋Ｓ１２８Ｌ＋Ｐ１２９Ｑ＋Ｓ１３０Ａ
（ｉｉｉ）Ｎ７６Ｄ＋Ｎ８７Ｒ＋Ｇ１１８Ｒ＋Ｓ１２８Ｌ＋Ｐ１２９Ｑ＋Ｓ１３０Ａ＋Ｓ１８８Ｄ＋Ｎ２４８Ｒ
（ｉｖ）Ｎ７６Ｄ＋Ｎ８７Ｒ＋Ｇ１１８Ｒ＋Ｓ１２８Ｌ＋Ｐ１２９Ｑ＋Ｓ１３０Ａ＋Ｓ１８８Ｄ＋Ｖ２４４Ｒ
（ｖ）Ｎ７６Ｄ＋Ｎ８７Ｒ＋Ｇ１１８Ｒ＋Ｓ１２８Ｌ＋Ｐ１２９Ｑ＋Ｓ１３０Ａ
（ｖｉ）Ｖ６８Ａ＋Ｎ８７Ｓ＋Ｓ１０１Ｇ＋Ｖ１０４Ｎ
（ｖｉｉ）Ｓ９９ＡＤ
【０１０７】
市販されている、好適な追加のプロテアーゼ酵素としては、Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ａ／Ｓ（Ｄｅｎｍａｒｋ）製の、商標名Ａｌｃａｌａｓｅ（登録商標）、Ｓａｖｉｎａｓｅ（登録商標）、Ｐｒｉｍａｓｅ（登録商標）、Ｄｕｒａｚｙｍ（登録商標）、Ｐｏｌａｒｚｙｍｅ（登録商標）、Ｋａｎｎａｓｅ（登録商標）、Ｌｉｑｕａｎａｓｅ（登録商標）、Ｌｉｑｕａｎａｓｅ  Ｕｌｔｒａ（登録商標）、Ｓａｖｉｎａｓｅ  Ｕｌｔｒａ（登録商標）、Ｏｖｏｚｙｍｅ（登録商標）、Ｎｅｕｔｒａｓｅ（登録商標）、Ｅｖｅｒｌａｓｅ（登録商標）、Ｃｏｒｏｎａｓｅ（登録商標）、Ｂｌａｚｅ（登録商標）、Ｂｌａｚｅ  Ｕｌｔｒａ（登録商標）、及びＥｓｐｅｒａｓｅ（登録商標）で販売されているもの；Ｄｕｐｏｎｔ製の、商標名Ｍａｘａｔａｓｅ（登録商標）、Ｍａｘａｃａｌ（登録商標）、Ｍａｘａｐｅｍ（登録商標）、Ｐｒｏｐｅｒａｓｅ（登録商標）、Ｐｕｒａｆｅｃｔ（登録商標）、Ｐｕｒａｆｅｃｔ  Ｐｒｉｍｅ（登録商標）、Ｐｕｒａｆｅｃｔ  Ｏｘ（登録商標）、ＦＮ３（登録商標）、ＦＮ４（登録商標）、Ｅｘｃｅｌｌａｓｅ（登録商標）、Ｕｌｔｉｍａｓｅ（登録商標）、及びＰｕｒａｆｅｃｔ  ＯＸＰ（登録商標）で販売されているもの；Ｓｏｌｖａｙ  Ｅｎｚｙｍｅｓ製の、商標名Ｏｐｔｉｃｌｅａｎ（登録商標）及びＯｐｔｉｍａｓｅ（登録商標）で販売されているもの；並びに、Ｈｅｎｋｅｌ／Ｋｅｍｉｒａから入手可能なもの、即ち、ＢＬＡＰ（以下の変異Ｓ９９Ｄ＋Ｓ１０１Ｒ＋Ｓ１０３Ａ＋Ｖ１０４Ｉ＋Ｇ１５９Ｓを有する、米国特許第５，３５２，６０４号の図２９に示される配列、以下ＢＬＡＰと呼ぶ）、ＢＬＡＰ  Ｒ（Ｓ３Ｔ＋Ｖ４Ｉ＋Ｖ１９９Ｍ＋Ｖ２０５Ｉ＋Ｌ２１７Ｄを有するＢＬＡＰ）、ＢＬＡＰ  Ｘ（Ｓ３Ｔ＋Ｖ４Ｉ＋Ｖ２０５Ｉを有するＢＬＡＰ）、及び、ＢＬＡＰ  Ｆ４９（Ｓ３Ｔ＋Ｖ４Ｉ＋Ａ１９４Ｐ＋Ｖ１９９Ｍ＋Ｖ２０５Ｉ＋Ｌ２１７Ｄを有するＢＬＡＰ）；並びに、花王製のＫＡＰ（変異Ａ２３０Ｖ＋Ｓ２５６Ｇ＋Ｓ２５９Ｎを有する、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｕｓサブチリシン）が挙げられる。
【０１０８】
本発明の変異体プロテアーゼと組み合わせて、本明細書に用いるのに特に好ましいのは、Ｐｒｏｐｅｒａｓｅ（登録商標）、Ｂｌａｚｅ（登録商標）、Ｕｌｔｉｍａｓｅ（登録商標）、Ｅｖｅｒｌａｓｅ（登録商標）、Ｓａｖｉｎａｓｅ（登録商標）、Ｅｘｃｅｌｌａｓｅ（登録商標）、Ｂｌａｚｅ  Ｕｌｔｒａ（登録商標）、ＢＬＡＰ、及びＢＬＡＰ変異体からなる群から選択される商用プロテアーゼである。
【０１０９】
本発明の製品中のプロテアーゼの好ましい濃度としては、組成物１ｇ当たり、約０．０５〜約１０ｍｇ、より好ましくは約０．５〜約７ｍｇ、とりわけ約１〜約６ｍｇの活性プロテアーゼが挙げられる。
【０１１０】
アミラーゼ
本発明の組成物はアミラーゼを含み得るのが好ましい。好適なα−アミラーゼとしては、細菌又は真菌起源のものが挙げられる。化学的又は遺伝的に改変された変異（変異体）が含まれる。好ましいアルカリ性α−アミラーゼは、バチルスの菌種、例えば、バチルス・リケニフォルミス、バチルス・アミロリケファシエンス、バチルス・ステロサーモフィラス、バチルス・ズブチルス又は他のバチルス種、例えばバチルス種ＮＣＩＢ１２２８９、ＮＣＩＢ１２５１２、ＮＣＩＢ１２５１３、ＤＳＭ９３７５（米国特許第７，１５３，８１８号）、ＤＳＭ１２３６８、ＤＳＭＺ番号１２６４９、ＫＳＭ  ＡＰ１３７８（国際公開第９７／００３２４号）、ＫＳＭ  Ｋ３６又はＫＳＭ  Ｋ３８（欧州特許第１，０２２，３３４号）に由来する。好ましいアミラーゼとしては、以下が挙げられる：
（ａ）国際公開第９６／２３８７３号、同第００／６００６０号、同第０６／００２６４３号、及び同第２０１７／１９２６５７号に記載されている変異体、特に、国際公開第０６／００２６４３号で、配列番号１２として列挙されている、ＡＡ５６０に対して以下の位置に１つ以上の置換を有する変異体：
２６、３０、３３、８２、３７、１０６、１１８、１２８、１３３、１４９、１５０、１６０、１７８、１８２、１８６、１９３、２０２、２１４、２３１、２４６、２５６、２５７、２５８、２６９、２７０、２７２、２８３、２９５、２９６、２９８、２９９、３０３、３０４、３０５、３１１、３１４、３１５、３１８、３１９、３３９、３４５、３６１、３７８、３８３、４１９、４２１、４３７、４４１、４４４、４４５、４４６、４４７、４５０、４６１、４７１、４８２、４８４、好ましくはＤ１８３＊及びＧ１８４＊の欠失も含有する変異体。
（ｂ）国際公開第０６／００２６４３号の配列番号４と少なくとも９０％の同一性を示す変異体、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ＳＰ７２２からの野生型酵素、特に、１８３位及び１８４位の欠失を伴う変異体、並びに国際公開第００／６００６０号、同第２０１１／１００４１０号、及び同第２０１３／００３６５９号に記述されている変異体であり、これらは参照により本明細書に組み込まれる。
（ｃ）バチルス種７０７（米国特許第６，０９３，５６２号の配列番号７）由来の野生型酵素と少なくとも９５％の同一性を示す変異体、特に以下の変異：Ｍ２０２、Ｍ２０８、Ｓ２５５、Ｒ１７２及び／又はＭ２６１のうちの１つ以上含をむもの。好ましくは、当該アミラーゼは、Ｍ２０２Ｌ、Ｍ２０２Ｖ、Ｍ２０２Ｓ、Ｍ２０２Ｔ、Ｍ２０２Ｉ、Ｍ２０２Ｑ、Ｍ２０２Ｗ、Ｓ２５５Ｎ及び／又はＲ１７２Ｑのうちの１つ以上を含むもの。特に好ましいのは、Ｍ２０２Ｌ又はＭ２０２Ｔ変異を含むものである。
（ｄ）国際公開第０９／１４９１３０号に記載されている変異体、好ましくは国際公開第０９／１４９１３０号において配列番号１又は配列番号２と少なくとも９０％の同一性を示す変異体、ゲオバチルス・ステアロフェルモフィルス（Geobacillus Stearophermophiluss）に由来する野生型酵素又はその切断版。
（ｅ）国際公開第２０１６０９１６８８号の配列番号１と少なくとも８９％の同一性を示す変異体、特にＨ１８３＋Ｇ１８４位での欠失及び４０５、４２１、４２２、及び／又は４２８位に更に１つ以上の変異を含む変異体。
（ｆ）パエニバチルス・カードラノリティカス（Paenibacillus curdlanolyticus）ＹＫ９由来の「ＰｃｕＡｍｙｌ  α−アミラーゼ」（国際公開第２０１４０９９５２３号の配列番号３）と少なくとも６０％のアミノ酸配列同一性を示す変異体。
（ｇ）サイトファーガ属由来の「ＣｓｐＡｍｙ２アミラーゼ」（国際公開第２０１４１６４７７７号の配列番号１）と少なくとも６０％のアミノ酸配列同一性を示す変異体。
（ｈ）バチルス・ズブチルスからのＡｍｙＥ（国際公開第２００９１４９２７１号の配列番号１）と少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を示す変異体。
（ｉ）受託番号ＡＢ０５１１０２によるＢａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．ＫＳＭ−Ｋ３８由来の野生型アミラーゼと少なくとも９０％の同一性を示す変異体。
（ｊ）Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ（国際公開第２０１６１８０７４８号の配列番号７）からのＡＡＩ１０の成熟アミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を示す変異体
（ｋ）アリシクロバチルス属アミラーゼ（国際公開第２０１６１８０７４８号の配列番号８）の成熟アミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を示す変異体
【０１１１】
アミラーゼは、漂白酸化を受けやすいアミノ酸の１つ以上が、酸化を受けにくいアミノ酸により置換されている遺伝子組み換え酵素であるのが好ましい。特に、メチオニン残基が任意の他のアミノ酸で置換されていることが好ましい。特に、最も酸化を受けやすいメチオニンが置換されていることが好ましい。国際公開第０６／００２６４３号に、配列番号１２として記載されているＡＡ５６０酵素の２０２に等しい位置のメチオニンが置換されているのが好ましい。この位置のメチオニンがスレオニン又はロイシン、好ましくはロイシンで置換されているのが好ましい。
【０１１２】
好適な市販のα−アミラーゼとしては、ＤＵＲＡＭＹＬ（登録商標）、ＬＩＱＵＥＺＹＭＥ（登録商標）、ＴＥＲＭＡＭＹＬ（登録商標）、ＴＥＲＭＡＭＹＬ  ＵＬＴＲＡ（登録商標）、ＮＡＴＡＬＡＳＥ（登録商標）、ＳＵＰＲＡＭＹＬ（登録商標）、ＳＴＡＩＮＺＹＭＥ（登録商標）、ＳＴＡＩＮＺＹＭＥ  ＰＬＵＳ（登録商標）、ＦＵＮＧＡＭＹＬ（登録商標）、ＡＴＬＡＮＴＩＣ（登録商標）、ＩＮＴＥＮＳＡ（登録商標）、及びＢＡＮ（登録商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ａ／Ｓ（Ｂａｇｓｖａｅｒｄ，Ｄｅｎｍａｒｋ））、ＫＥＭＺＹＭ（登録商標）ＡＴ  ９０００（Ｂｉｏｚｙｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｔｒａｄｉｎｇ  ＧｍｂＨ  Ｗｅｈｌｉｓｔｒａｓｓｅ  ２７ｂ  Ａ−１２００  Ｗｉｅｎ  Ａｕｓｔｒｉａ）、ＲＡＰＩＤＡＳＥ（登録商標）、ＰＵＲＡＳＴＡＲ（登録商標）、ＥＮＺＹＳＩＺＥ（登録商標）、ＯＰＴＩＳＩＺＥ  ＨＴ  ＰＬＵＳ（登録商標）、ＰＯＷＥＲＡＳＥ（登録商標）、ＰＲＥＦＥＲＥＮＺ  Ｓ１０００（登録商標）及びＰＲＥＦＥＲＥＮＺ  Ｓ２０００（登録商標）を含むＰＲＥＦＥＲＥＮＺ  Ｓ（登録商標）シリーズ、並びにＰＵＲＡＳＴＡＲ  ＯＸＡＭ（登録商標）（ＤｕＰｏｎｔ．，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）、及びＫＡＭ（登録商標）（花王、日本、１０３−８２１０、東京都中央区１丁目日本橋茅場町１４−１０）、が挙げられる。一態様では、好適なアミラーゼとしては、ＡＴＬＡＮＴＩＣ（登録商標）、ＳＴＡＩＮＺＹＭＥ（登録商標）、ＰＯＷＥＲＡＳＥ（登録商標）、ＩＮＴＥＮＳＡ（登録商標）、及びＳＴＡＩＮＺＹＭＥ  ＰＬＵＳ（登録商標）、並びにこれらの混合物が挙げられる。
【０１１３】
好ましくは、本発明の製品は、組成物１ｇ当たり、少なくとも０．０１ｍｇ、好ましくは約０．０５〜約１０ｍｇ、より好ましくは約０．１〜約６、とりわけ約０．２〜約５ｍｇの活性アミラーゼを含む。
【０１１４】
好ましくは、本発明の組成物のプロテアーゼ及び／又はアミラーゼは顆粒の形態であり、顆粒は、顆粒の２９重量％を超える硫酸ナトリウムを含み、かつ／又は、硫酸ナトリウム並びに活性酵素（プロテアーゼ及び／又はアミラーゼ）は、３：１〜１００：１、又は好ましくは４：１〜３０：１、又はより好ましくは５：１〜２０：１の重量比で存在する。
【０１１５】
結晶成長抑制剤
結晶成長抑制剤は、炭酸カルシウム結晶に結合して、アラゴナイト及び方解石などの種の更なる成長を防止することができる材料である。
【０１１６】
効果的な結晶成長抑制剤の例としては、ホスホネート、ポリホスホネート、イヌリン誘導体、ポリイタコン酸ホモポリマー、及び環状ポリカルボキシレートが挙げられる。
【０１１７】
好適な結晶成長抑制剤は、ＨＥＤＰ（１−ヒドロキシエチリデン１，１−ジホスホン酸）、カルボキシメチルイヌリン（ＣＭＩ）、トリカルバリル酸、及び環状カルボキシレートを含む群から選択されてもよい。本発明の目的のため、用語カルボキシレートは、アニオン形態及びプロトン化したカルボン酸形態の両方を包含する。
【０１１８】
環状カルボキシレートは、少なくとも２つ、好ましくは３つ、又は好ましくは少なくとも４つのカルボキシレート基を含み、環状構造は、単環若しくは二環アルカン又は複素環に基づく。好適な環状構造としては、シクロプロパン、シクロブタン、シクロヘキサン若しくはシクロペンタン若しくはシクロヘプタン、ビシクロ−ヘプタン若しくはビシクロ−オクタン、及び／又はテトラヒドロフランが挙げられる。好ましい結晶成長抑制剤の１つは、シクロペンタンテトラカルボキシレートである。
【０１１９】
少なくとも７５％、好ましくは１００％のカルボキシレート基が、環の三次元構造の同じ側に、又は「シス」位にある環状カルボキシレートは、本明細書での使用に好ましい。
【０１２０】
環の同じ側にある２つのカルボキシレート基は、直接隣接していること、又は「オルト」位にあることが好ましい。
【０１２１】
好ましい結晶成長抑制剤には、ＨＥＤＰ、トリカルバリル酸、テトラヒドロフランテトラカルボン酸（ＴＨＦＴＣＡ）、及びシクロペンタンテトラカルボン酸（ＣＰＴＣＡ）が挙げられる。ＴＨＦＴＣＡは、好ましくは２ｃ，３ｔ，４ｔ，５ｃ配置であり、ＣＰＴＣＡは、シス，シス，シス，シス配置である。本明細書で使用するための特に好ましい結晶成長抑制剤は、ＨＥＤＰである。
【０１２２】
好ましくは、脱炭酸レベルが５０モル％〜９０モル％の範囲の、部分脱炭酸ポリイタコン酸ホモポリマーもまた、本明細書で使用するのに好ましい。本明細書で使用するのに特に好適なポリマーは、Ｉｔａｃｏｎｉｘにより提供されているＩｔａｃｏｎｉｘ  ＴＳＩ（登録商標）である。
【０１２３】
結晶成長抑制剤は、好ましくは、組成物の約０．０１〜約１０重量％、特に約０．０２〜約５重量％、特に０．０５〜３重量％の量で存在する。
【０１２４】
金属ケア剤
金属ケア剤は、アルミニウム、ステンレス鋼並びに銀及び銅等の非鉄金属を含む金属の曇り、腐食、又は酸化を、防止又は低減することができる。好ましくは、本発明の組成物は、製品の０．１〜５重量％、より好ましくは０．２〜４重量％、とりわけ０．３〜３重量％の金属ケア剤を含み、好ましくは、金属ケア剤はベンゾトリアゾール（ＢＴＡ）である。
【０１２５】
ガラスケア剤
ガラスケア剤は、食洗プロセス中にガラス製品の外観を保護する。好ましくは、本発明の組成物は、組成物の０．１〜５重量％、より好ましくは０．２〜４重量％、特に０．３〜３重量％の金属ケア剤を含み、好ましくは、ガラスケア剤は亜鉛含有材料、特に水亜鉛土である。他の好適なガラスケア剤は、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）である。特に好ましいＰＥＩは、ＢＡＳＦにより供給されているＬｕｐａｓｏｌ（登録商標）ＦＧである。
【０１２６】
本発明の自動食洗組成物は、２０℃の蒸留水にて１重量／体積％の水溶液中で測定した場合に好ましくは約９〜約１２、より好ましくは約１０〜約１１．５未満、とりわけ約１０．５〜約１１．５のｐＨを有する。
【０１２７】
本発明の自動食洗組成物は、２０℃の１００グラムの製品を含むＮａＯＨ中で測定した場合に、ｐＨ９．５で、好ましくは約１０〜約２０、より好ましくは約１２〜約１８の予備アルカリ度を有する。
【０１２８】
本発明の、好ましい自動食洗組成物は、以下を含む。
ｉ）組成物の１０〜２０重量％の漂白剤、好ましくは過炭酸ナトリウム、
ｉｉ）好ましくは漂白活性化剤、より好ましくはＴＡＥＤ、
ｉｉｉ）アミラーゼ、
ｉｖ）任意に、しかし好ましくは組成物の５重量％〜３０重量％無機ビルダー、好ましくは炭酸ナトリウム、
ｖ）任意に、しかし好ましくは組成物の２重量％〜１０重量％の非イオン性界面活性剤、
ｖｉ）任意に、しかし好ましくは漂白触媒、より好ましくはマンガン漂白触媒、及び
ｖｉｉ）他の任意による成分としては次のものが挙げられる：結晶成長抑制剤、好ましくはＨＥＤＰ、及びガラスケア剤。
【０１２９】
本明細書にて開示された寸法及び値は、列挙された正確な数値に厳密に限定されるものとして理解されるべきではない。その代わりに、特に指示がない限り、このような寸法はそれぞれ、列挙された値とその値を囲む機能的に同等な範囲との両方を意味することが意図されている。例えば、「４０ｍｍ」と開示された寸法は、「約４０ｍｍ」を意味することが意図される。
【実施例】
【０１３０】
変異体プロテアーゼを含む自動食洗組成物による卵黄の除去を、親プロテアーゼを含む同じ組成物と比較した。
【０１３１】
表１に示す組成物を使用した。１リットルの脱イオン水に、３ｇの各組成物を溶解させ、ｐＨが１１の洗浄溶液を作製した。対応するプロテアーゼを、０．２５〜０．７５ｐｐｍの濃度にて、洗浄溶液に添加した。
【０１３２】
【表１】
2021506256.tif 000005
【０１３３】
【表２】
2021506256.tif 000006
【０１３４】
洗浄性能法：ＰＡＳ−３８を用いた、卵黄の洗浄性能
卵黄微細見本（ＰＡＳ−３８，Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｔｅｓｔｍａｔｅｒｉａｌｓ  ＢＶ，Ｖｌａａｒｄｉｎｇｅｎ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）での染み除去により測定される、表２に列挙するプロテアーゼ変異体の洗浄性能を、自動食洗組成物Ａ、Ｂ、及びＣを用いる親に対して試験した（表１を参照のこと）。卵見本の染みを、マイクロタイタープレート（ＭＴＰ）；標準９６ウェルプレートに適合するように、予め寸法を合わせた。ＰＡＳ−３８の卵見本の染み除去を、洗浄後と参照とで測定した。
【０１３５】
３ｇ／Ｌの洗剤、並びに洗剤及び脱イオン水をプロテアーゼに添加する前に、ＭＴＰを満たした。
【０１３６】
ＰＡＳ−３８見本を３０℃分間５０℃でインキュベートした後、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘプレートリーダで、４０５ｎｍにおける吸光度を読み取った。各サンプルの値からブランク対照（プロテアーゼ非含有）を差し引くことにより吸光度の結果を得た（以下「ブランク差し引き吸光度」）。各条件及び変異体に関して、ブランク差し引き吸光度を、同濃度の親プロテアーゼの吸光度で除算することにより、性能指数（ＰＩ）を計算した。試験に含まれ、ラングミュアの適合に適合した親プロテアーゼの検量線から、親プロテアーゼの値を測定した。
【０１３７】
プロテアーゼ酵素活性法２：ＡＡＰＦアッセイ
親及びそのサブチリシン変異体のプロテアーゼ活性を、Ｎ−ｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡの加水分解を測定することにより試験した。ＡＡＰＦ加水分解アッセイに用いた試薬溶液は、以下のとおりであった。０．００５％  ＴＷＥＥＮ（登録商標）−８０含有の、１００ｍＭのトリス／ＨＣｌ（ｐＨ  ８．６）（トリス希釈緩衝液）；１０ｍＭのＣａＣｌ２及び０．００５％のＴｗｅｅｎ（登録商標）−８０含有の、１００ｍＭのトリス緩衝液（ｐＨ  ８．６）（トリス／Ｃａ緩衝液）；並びに、ＤＭＳＯ中の１６０ｍＭのｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡ（ｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡ原液）（Ｓｉｇｍａ：Ｓ−７３８８）。１ｍＬのｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡ原液を、１００ｍＬのトリス／Ｃａ緩衝液に添加することにより、基質作業溶液を調製し、十分に混合した。酵素サンプルを１ｍｇ／ｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡ作用溶液含有のＭＴＰ（Ｇｒｅｉｎｅｒ  ７８１１０１）に添加し、動的モードでＳｐｅｃｔｒａＭａｘプレートリーダを使用して、４０５ｎｍにて３分間にわたり室温（ＲＴ）で、活性についてアッセイした。プロテアーゼ非含有のブランクの吸光度を、各サンプルの読み取り値から差し引いた。プロテアーゼ活性をｍＯＤ・ｍｉｎ−１として表した。
【０１３８】
プロテアーゼ酵素安定性−安定性アッセイ
変異体をストレス緩衝液に希釈し、上述のＡＡＰＦアッセイを用いて、５６℃にて５分の加熱インキュベーション工程の前後で、変異体のタンパク質分解活性を測定することにより、本明細書に記載する変異体の安定性を測定した。安定性を、トリス−ＥＤＴＡ（５０ｍＭトリス（ｐＨ９）；５ｍＭのＥＤＴＡ；０．００５％のＴｗｅｅｎ  ８０）緩衝条件で測定した。残留活性％については、ストレス活性の非ストレス活性に対する比率を求め、１００を掛けることにより計算した。
【０１３９】
【表３】
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【０１４０】
表２から分かるように、本発明の組成物の変異体は、卵の染み除去に関して、親プロテアーゼよりも相当に良好である。
【配列表】
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【国際調査報告】
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