(57)【要約】飽和剤、ＡＡＶ遺伝子療法ベクター、及び治療剤、並びにそれを含む方法及びキットが本明細書において記載される。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト対象の医学的治療における使用のためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）遺伝子療法ベクターであって、前記ヒト対象が飽和剤を投与されており、前記飽和剤が細網内皮系（ＲＥＳ）によって取り込まれる、ヒト対象の医学的治療における使用のためのＡＡＶ遺伝子療法ベクター。
【請求項２】
前記飽和剤が、炭水化物、アミノ酸、脂質、ビタミン、食物ミネラル、又はその任意の組み合わせから選択される１種又は複数種の栄養素を含む、請求項１に記載の、ヒト対象の医学的治療における使用のためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）遺伝子療法ベクター。
【請求項３】
前記飽和剤が、トリグリセリド、ステロイド、リン脂質、又はその任意の組み合わせから選択される１種又は複数種の脂質を含む、請求項１又は請求項２に記載の、ヒト対象の医学的治療における使用のためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）遺伝子療法ベクター。
【請求項４】
前記飽和剤が、エマルション、好ましくは脂質及び／又は脂肪エマルションを含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の、ヒト対象の医学的治療における使用のためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）遺伝子療法ベクター。
【請求項５】
前記飽和剤が、イントラリピッド（登録商標）１０％、イントラリピッド（登録商標）２０％、及びイントラリピッド（登録商標）３０％の群から選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の、ヒト対象の医学的治療における使用のためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）遺伝子療法ベクター。
【請求項６】
前記飽和剤がトリグリセリドを含み、前記ヒト対象の血中におけるトリグリセリドの血漿濃度が、前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの投与前に少なくとも３ｍｍｏｌ／Ｌである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の、ヒト対象の医学的治療における使用のためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）遺伝子療法ベクター。
【請求項７】
前記飽和剤が、前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの投与の少なくとも１５分前又はそれを上回る時間前に前記ヒト対象に投与されている、請求項１〜６のいずれか一項に記載の、ヒト対象の医学的治療における使用のためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）遺伝子療法ベクター。
【請求項８】
前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの前記投与が血流を介した投与を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の、ヒト対象の医学的治療における使用のためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）遺伝子療法ベクター。
【請求項９】
前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの前記投与が肝臓の医学的治療を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の、ヒト対象の医学的治療における使用のためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）遺伝子療法ベクター。
【請求項１０】
前記医学的治療が疾患の治療を伴い、疾患が、急性間質性ポルフィリン症（ＡＩＰ）、加齢黄斑変性症、アルツハイマー病、関節炎、バッテン病、カナバン病、シトルリン血症１型、クリグラーナジャール、鬱血性心不全、嚢胞性線維症、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、脂質異常症、糖原病Ｉ型（ＧＳＤ−Ｉ）、血友病Ａ、血友病Ｂ、遺伝性肺気腫、ホモ接合型家族性高コレステロール血症（ＨｏＦＨ）、ハンチントン病（ＨＤ）、レーバー先天性黒内障、メチルマロン酸血症、オルニチントランスカルバミラーゼ欠損症（ＯＴＣ）、パーキンソン病、フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）、脊髄性筋萎縮症、麻痺、ウィルソン病、てんかん、ポンペ病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、テイ−サックス病、高シュウ酸尿症（ＰＨ−１）、脊髄小脳失調症１型（ＳＣＡ−１）、ＳＣＡ−３、ｕ−ジストロフィン、ゴーシェＩＩ又はＩＩＩ型、不整脈源性右室心筋症（ＡＲＶＣ）、ファブリー病、家族性地中海熱（ＦＭＦ）、プロピオン酸血症、脆弱Ｘ症候群、レット症候群、ニーマン−ピック、クラッベ病、血友病Ａ、血友病Ｂ、ハンチントン病（ＨＤ）、及び心疾患から選択される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の、ヒト対象の医学的治療における使用のためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）遺伝子療法ベクター。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
[0001]飽和剤、ＡＡＶ遺伝子療法ベクター、及び治療剤、並びに前記飽和剤、ＡＡＶ遺伝子療法ベクター、及び治療剤を含むキット、並びにそれを使用する方法が本明細書において記載される。
【背景技術】
【０００２】
[0002]以下の記述は、本開示を理解する際に読者を助けるために提供されるものであり、本開示に対する先行技術を記載する又は先行技術を構成することを認めるものではない。
【０００３】
[0003]肝臓は、２つの源から血液供給を受ける。第１は、体循環からの酸素化血液を送達する肝動脈である。第２は、栄養素を含有する小さなＧＩ管からの脱酸素化血液を送達する肝門脈である。実際には、肝臓は、全身循環及び門脈循環の両方によって供給され；血液の２０％は肝動脈から、８０％は門脈から来る。血液は、肝臓組織を通って、多くの代謝機能が行われる肝細胞へ流れる。血液は、肝静脈を介して肝臓から流れ出る。肝臓組織は、他のほとんどの臓器のように毛細血管網を有して血管形成されているのではなく、むしろ肝細胞を取り囲む、血液で満たされた類洞からなる。
【０００４】
[0004]肝臓に入ると、血液は肝類洞に流れ込み、肝類洞で血液は特殊化細胞によって選別されて、ＧＩ防御を何とか通り抜けるいかなる病原体をも除去する。血漿は、類洞の内膜を通して濾過され、肝細胞を浸す；これら肝細胞は、ＧＩ管によって吸収されている産物のほとんどを分解し得る及び代謝し得る膨大な数の酵素を含有する。門脈血は、ＧＩ管から吸収された消化の産物のすべてを含有し、そのため、すべての有用な及び有用でない産物は、横隔膜のすぐ下方にある下大静脈につながる肝静脈に再び放出される又は後の使用のために肝臓に貯蔵される前に、肝臓において処理される。
【０００５】
[0005]それゆえ、門脈循環に直接接続された肝臓類洞は、血流と肝臓組織との間の第１の細胞バリアとして働く。肝臓類洞は、類洞内皮細胞（ＬＳＥＣ／ＨＳＥＣ）、クッパー細胞（肝臓に常駐するマクロファージ）、肝星細胞（ＨＳＣ）、及び肝ＮＫ細胞を含めた様々な細胞タイプを含有し、そのすべてが細網内皮系（ＲＥＳ）を構成する。
【０００６】
[0006]遺伝子療法において使用されるファージ粒子及びアデノウイルスの肝臓取り込みに関する研究により、肝臓は、循環からこれらの粒子を除去する非常に高い能力を有することが示されている。ＲＥＳは、このクリアランス過程において極めて重要な役割を果たすことが示唆されている。例えば、Ｋｕｚｍｉｎ  Ａら、１９９７、Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ  ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ｔｈｅ  ｓａｆｅｔｙ，ｅｆｆｉｃａｃｙ  ａｎｄ  ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｃｅ  ｏｆ  ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｇｅｎｅ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｉｎ  ｖｉｖｏ、ＧＥＮＥ  ＴＨＥＲ  ４：３０９〜３１６ページ；Ｗｏｌｆｆ  Ｇら、１９９７、Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｇｅｎｅ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｂｙ  ｐｒｉｏｒ  ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｉｓｓｕｅ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔａｒｇｅｔ  ｏｒｇａｎ、Ｊ  ＶＩＲＯＬ  ７１：６２４〜６２９ページ；及びＳｃｈｉｅｄｎｅｒ  Ｇら、２００３、Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ  ｏｒ  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｏｆ  Ｋｕｐｆｆｅｒ  ｌｅａｄｓ  ｔｏ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ａｎｄ  ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｔｒａｎｓｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｕｓｉｎｇ  ｈｉｇｈ−ｃａｐａｃｉｔｙ  ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ  ｖｅｃｔｏｒｓ、ＭＯＬ  ＴＨＥＲ  ７：３５〜４３ページを参照されたい。
【０００７】
[0007]非経口投与された脂質エマルションは、肝臓の細網内皮細胞によるアデノウイルスベクターの取り込みを遮断し得、導入遺伝子発現を強力に増加させ得ることが示唆されている（Ｓｎｏｅｙｓら、２００６、Ｌｉｐｉｄ  ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ  ｐｏｔｅｎｔｌｙ  ｉｎｃｒｅａｓｅ  ｔｒａｎｓｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ  ａｆｔｅｒ  ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ  ｔｒａｎｓｆｅｒ、ＭＯＬ  ＴＨＥＲ  １３：９８〜１０７ページ）。同様のストラテジーが、肝臓の細網内皮系を占拠して、一般的にはＲＥＳによって一掃されるナノ粒子（診療所においてＭＲＩに使用される）の欠失を阻止することが示唆されている。しかしながら、そのような手法は、肝臓における細胞に形質導入するために使用することができるアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターに対して示唆されたことはない又は試みられたことはない。
【０００８】
[0008]実際、ＡＡＶ形質導入は、非常に効率的なものとしてすでに受け止められており、それゆえ、ＡＡＶ形質導入がさらに向上し得るであろうという予想はほとんどなく、ましてＡＡＶ形質導入を向上させようと試みる動機付けはもたらされなかった。本開示は、ＲＥＳ応答を占拠し、ゆえに例えば後に投与されるＡＡＶの肝取り込み及び形質導入を増加させることを可能にする飽和剤を使用することによって、ＡＡＶ遺伝子療法が形質導入効率及び安全性の両方の観点において有意に向上し得ることを予想外に（ｕｎｅｘｐｅｃｔｅｄ）示している。
【０００９】
〔発明の概要〕
[0009]飽和剤、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）遺伝子療法ベクター、及び治療剤、並びにそれを使用する方法及びキットが本明細書において記載される。
【００１０】
[0010]１つの態様において、本開示は、飽和剤及びアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）遺伝子療法ベクターを疾患に罹患しているヒト対象に投与するステップであって、前記飽和剤は細網内皮系（ＲＥＳ）の１種又は複数種の細胞によって取り込まれるステップを含む、ヒト対象における疾患を治療する方法を提供する。
【００１１】
[0011]１つの態様において、本開示は、疾患に罹患している対象に飽和剤及び遺伝子療法ベクターを投与するステップであって、前記飽和剤は細網内皮系（ＲＥＳ）の１種又は複数種の細胞によって取り込まれ、前記遺伝子療法ベクターはアデノウイルスに基づく療法を含まず、且つ前記疾患は癌ではないステップを含む、疾患を治療する方法を提供する。
【００１２】
[0012]１つの態様において、本開示は、疾患に罹患している対象に飽和剤及びＡＡＶ遺伝子療法ベクターを投与するステップであって、前記飽和剤は細網内皮系（ＲＥＳ）の１種又は複数種の細胞によって取り込まれるステップを含む、疾患を治療する方法を提供する。
【００１３】
[0013]１つの態様において、本開示は、疾患に罹患している対象に飽和剤及びＡＡＶ遺伝子療法ベクターを投与するステップであって、前記飽和剤は細網内皮系（ＲＥＳ）の１種又は複数種の細胞によって取り込まれるステップを含む、疾患を治療する方法を提供する。
【００１４】
[0014]前述の態様についての一部の実施形態において、疾患には、血友病、遺伝性障害若しくは疾患（例えば、ハンチントン病）、心血管疾患、又は神経系疾患が含まれてもよいが、それらに限定されるわけではない。
【００１５】
[0015]１つの態様において、本開示は、対象に飽和剤及びＡＡＶ遺伝子療法ベクターを投与するステップであって、前記飽和剤は細網内皮系（ＲＥＳ）の１種又は複数種の細胞によって取り込まれるステップを含む、標的臓器又は臓器系における遺伝子の発現を増加させる方法を提供する。
【００１６】
[0016]前述の態様についての一部の実施形態において、標的臓器又は臓器系は肝臓であってもよい；しかしながら、標的臓器又は臓器系には、心臓、肺、脳／中枢神経系、目、甲状腺、膵臓、脾臓、膀胱、胃、腎臓、小腸、リンパ節、及び／又は前立腺も含まれてもよい。
【００１７】
[0017]１つの態様において、本開示は、患者にＡＡＶ遺伝子療法を投与する前に、患者に飽和剤を投与し、それによって、治療上有効なレベルの形質導入を達成するのに必要とされるＡＡＶ遺伝子療法ベクターの必要用量を減少させ、それゆえ、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターのみを投与するステップと比較して、ＡＡＶ遺伝子療法の安全性及び効力を増加させるステップを含む、ＡＡＶ遺伝子療法の安全性及び／又は効力を増加させる方法を提供する。
【００１８】
[0018]１つの態様において、本開示は、細網内皮系の１種又は複数種の細胞によって取り込まれる飽和剤、及びアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）遺伝子療法ベクターを含むキットを提供する。
【００１９】
[0019]１つの態様において、本開示は、飽和剤及び治療剤を含むキットであって、前記飽和剤は細網内皮系（ＲＥＳ）の１種又は複数種の細胞によって取り込まれ、前記治療剤はアデノ随伴ウイルス遺伝子療法ベクターであるキットを提供する。
【００２０】
[0020]前述の態様についての一部の実施形態において、飽和剤はエマルションを含み、一部の実施形態において、エマルションは脂質に基づくエマルションである。一部の実施形態において、脂質に基づくエマルションは、イントラリピッド（ＩＮＴＲＡＬＩＰＩＤ）（登録商標）１０％、イントラリピッド（登録商標）２０％、及びイントラリピッド（登録商標）３０％から選択される。一部の実施形態において、脂質に基づくエマルションはクリノリピッド（Ｃｌｉｎｏｌｉｐｉｄ）である。一部の実施形態において、脂質に基づくエマルションは、リポシン（ＬＩＰＯＳＹＮ）（登録商標）、リポシン（登録商標）ＩＩ、及びリポシン（登録商標）ＩＩＩから選択される。
【００２１】
[0021]前述の態様についての一部の実施形態において、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターは、ＡＡＶカプシド、導入遺伝子、及び／又はポリヌクレオチドを含んでもよい。
【００２２】
[0022]前述の態様についての一部の実施形態において、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターは、ＡＡＶ１又はＡＡＶ５から選択されるＡＡＶ血清型を含んでもよい。一部の実施形態において、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターは、組み換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）；例えばｒＡＡＶ２／５であってもよい。一部の実施形態において、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターは、キメラＡＡＶ（ＡＡＶｃｈ）；例えばキメラＡＡＶ血清型５（ＡＡＶ５ｃｈ）であってもよい。
【００２３】
[0023]前述の態様についての一部の実施形態において、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターは、治療用タンパク質又はそのフラグメントをコードする導入遺伝子を含んでもよい。例えば、治療用タンパク質は、第ＩＸ因子（ＦＩＸ）、ＦＶＩＩＩ因子、インターフェロン−β、神経ペプチドＹ受容体Ｙ２、アルファグルコシダーゼ、Ｃ９ｏｒｆ７２、スーパーオキシドジスムターゼ、ＣＦＴＲ、コンドロイチナーゼ、ＨＥＸＡ、及びＨＥＸＢから選択されてもよい。一部の実施形態において、治療用タンパク質は、ヒトタンパク質又は組み換えタンパク質である。
【００２４】
[0024]一部の実施形態において、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターは、肝臓の疾患の治療又は予防のための治療用タンパク質及び／又は治療用ポリヌクレオチドをコードする。肝臓を標的にするのに適切な疾患は、糖原病１ａ型、シトルリン血症１型、フェニルケトン尿症、オルニチントランスカルバミラーゼ（Ｏｒｎｉｔｈｉｎｅ  ｔｒａｎｃａｒｂａｍｙｌａｓｅ）欠損症、高シュウ酸尿症１型、ゴーシェ病、ＭＰＤＳ  ＶＩ、ファブリー病、クリグラーナジャール症候群１型、プロピオン酸血症（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｃ  ａｃｉｄｉｍｉａ）、リソソーム酸性リパーゼ欠損症、ビオチナーゼ欠損症、遺伝性フルクトース不耐症、無βリポタンパク血症、ウィルソン病、ニーマンＣ型、ホモ接合型家族性高コレステロール血症（ｈｙｐｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌａｅｍｉａ）、Ｂ型ウイルス肝炎、及びＣ型ウイルス肝炎であってもよい。
【００２５】
[0025]前述の態様についての一部の実施形態において、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターは、干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）；マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）；又は短いヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）をコードするポリヌクレオチドを含んでもよい。
【００２６】
[0026]前述の全般的な説明及び以下の詳細な説明は、例示的及び説明的なものであり、本発明のさらなる解説を提供することを意図される。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１Ａ】図１Ａは、血漿におけるｈＦＩＸ導入遺伝子タンパク質レベルに対する、イントラリピッド前処理の効果を示している。図１Ｂは、肝臓組織におけるＡＡＶベクターＤＮＡコピーに対する、イントラリピッド前処理の効果を示している。
【図１Ｂ】図１Ａは、血漿におけるｈＦＩＸ導入遺伝子タンパク質レベルに対する、イントラリピッド前処理の効果を示している。図１Ｂは、肝臓組織におけるＡＡＶベクターＤＮＡコピーに対する、イントラリピッド前処理の効果を示している。
【図２Ａ】ＡＡＶ５−ＬＰ１−ｈＦＩＸ形質導入効力に対する、イントラリピッド前処理の効果を示す図である。図２Ａは、ｈＦＩＸベクターＤＮＡ及びｍＲＮＡに対して陽性の細胞のパーセンテージを示している。図２Ｂは、ｈＦＩＸベクターＤＮＡ及びｍＲＮＡに対して陽性の細胞の採点を示している、１＋＝低い、２＋＝中間、３＋＝強い、及び４＋＝非常に強い。図２Ｃは、ｈＦＩＸベクターＤＮＡ及びｍＲＮＡに対して陽性の細胞のＨスコアを示している。
【図２Ｂ】ＡＡＶ５−ＬＰ１−ｈＦＩＸ形質導入効力に対する、イントラリピッド前処理の効果を示す図である。図２Ａは、ｈＦＩＸベクターＤＮＡ及びｍＲＮＡに対して陽性の細胞のパーセンテージを示している。図２Ｂは、ｈＦＩＸベクターＤＮＡ及びｍＲＮＡに対して陽性の細胞の採点を示している、１＋＝低い、２＋＝中間、３＋＝強い、及び４＋＝非常に強い。図２Ｃは、ｈＦＩＸベクターＤＮＡ及びｍＲＮＡに対して陽性の細胞のＨスコアを示している。
【図２Ｃ】ＡＡＶ５−ＬＰ１−ｈＦＩＸ形質導入効力に対する、イントラリピッド前処理の効果を示す図である。図２Ａは、ｈＦＩＸベクターＤＮＡ及びｍＲＮＡに対して陽性の細胞のパーセンテージを示している。図２Ｂは、ｈＦＩＸベクターＤＮＡ及びｍＲＮＡに対して陽性の細胞の採点を示している、１＋＝低い、２＋＝中間、３＋＝強い、及び４＋＝非常に強い。図２Ｃは、ｈＦＩＸベクターＤＮＡ及びｍＲＮＡに対して陽性の細胞のＨスコアを示している。
【図３】図３Ａは、ＡＡＶ５−ＬＰ１−ｈＦＩＸの静脈内注射を受けた動物（ＮＨＰ  １００２）における門脈との関係での、ＡＡＶベクターＤＮＡ／ｈＦＩＸ  ｍＲＮＡの空間分布を示している。図３Ｂは、ＡＡＶ５−ＬＰ１−ｈＦＩＸの静脈内注射を受けた動物（ＮＨＰ  １００２）における中心静脈との関係での、ＡＡＶベクターＤＮＡ／ｈＦＩＸ  ｍＲＮＡの空間分布を示している。図３Ｃは、イントラリピッドでの前処理の後にＡＡＶ５−ＬＰ１−ｈＦＩＸの静脈内注射を受けた動物（ＮＨＰ  ２００２）における門脈との関係での、ＡＡＶベクターＤＮＡ／ｈＦＩＸ  ｍＲＮＡの空間分布を示している。図３Ｄは、イントラリピッドでの前処理の後にＡＡＶ５−ＬＰ１−ｈＦＩＸの静脈内注射を受けた動物（ＮＨＰ  ２００２）における中心静脈との関係での、ＡＡＶベクターＤＮＡ／ｈＦＩＸ  ｍＲＮＡの空間分布を示している。
【図４Ａ】図４Ａは、門脈までの距離に対する、平均細胞陽性シグナル（パーセンテージ／強度／面積：Ｈスコア）を示している。図４Ｂは、中心静脈までの距離に対する、平均細胞陽性シグナル（パーセンテージ／強度／面積：Ｈスコア）を示している。
【図４Ｂ】図４Ａは、門脈までの距離に対する、平均細胞陽性シグナル（パーセンテージ／強度／面積：Ｈスコア）を示している。図４Ｂは、中心静脈までの距離に対する、平均細胞陽性シグナル（パーセンテージ／強度／面積：Ｈスコア）を示している。
【図５Ａ】図５Ａは、抗ＡＡＶ全抗体のレベルによって測定される、対照動物（１００１、１００２）及びイントラリピッド前処理動物（２００１、２００２）における液性免疫応答を示している。図５Ｂは、抗ＡＡＶ中和抗体のレベルによって測定される、対照動物（１００１、１００２）及びイントラリピッド前処理動物（２００１、２００２）における液性免疫応答を示している。図５Ｃは、全抗ｈＦＩＸ抗体のレベルによって測定される、対照動物（１００１、１００２）及びイントラリピッド前処理動物（２００１、２００２）における液性免疫応答を示している。図５Ｄは、全抗ｈＦＩＸ抗体のレベルによって測定される、対照動物（１００１、１００２）及びイントラリピッド前処理動物（２００１、２００２）における液性免疫応答を示している。
【図５Ｂ】図５Ａは、抗ＡＡＶ全抗体のレベルによって測定される、対照動物（１００１、１００２）及びイントラリピッド前処理動物（２００１、２００２）における液性免疫応答を示している。図５Ｂは、抗ＡＡＶ中和抗体のレベルによって測定される、対照動物（１００１、１００２）及びイントラリピッド前処理動物（２００１、２００２）における液性免疫応答を示している。図５Ｃは、全抗ｈＦＩＸ抗体のレベルによって測定される、対照動物（１００１、１００２）及びイントラリピッド前処理動物（２００１、２００２）における液性免疫応答を示している。図５Ｄは、全抗ｈＦＩＸ抗体のレベルによって測定される、対照動物（１００１、１００２）及びイントラリピッド前処理動物（２００１、２００２）における液性免疫応答を示している。
【図５Ｃ】図５Ａは、抗ＡＡＶ全抗体のレベルによって測定される、対照動物（１００１、１００２）及びイントラリピッド前処理動物（２００１、２００２）における液性免疫応答を示している。図５Ｂは、抗ＡＡＶ中和抗体のレベルによって測定される、対照動物（１００１、１００２）及びイントラリピッド前処理動物（２００１、２００２）における液性免疫応答を示している。図５Ｃは、全抗ｈＦＩＸ抗体のレベルによって測定される、対照動物（１００１、１００２）及びイントラリピッド前処理動物（２００１、２００２）における液性免疫応答を示している。図５Ｄは、全抗ｈＦＩＸ抗体のレベルによって測定される、対照動物（１００１、１００２）及びイントラリピッド前処理動物（２００１、２００２）における液性免疫応答を示している。
【図５Ｄ】図５Ａは、抗ＡＡＶ全抗体のレベルによって測定される、対照動物（１００１、１００２）及びイントラリピッド前処理動物（２００１、２００２）における液性免疫応答を示している。図５Ｂは、抗ＡＡＶ中和抗体のレベルによって測定される、対照動物（１００１、１００２）及びイントラリピッド前処理動物（２００１、２００２）における液性免疫応答を示している。図５Ｃは、全抗ｈＦＩＸ抗体のレベルによって測定される、対照動物（１００１、１００２）及びイントラリピッド前処理動物（２００１、２００２）における液性免疫応答を示している。図５Ｄは、全抗ｈＦＩＸ抗体のレベルによって測定される、対照動物（１００１、１００２）及びイントラリピッド前処理動物（２００１、２００２）における液性免疫応答を示している。
【図６】肝葉（動物あたり８つ）、脾臓、及び副腎組織における、ＡＡＶ５−ＬＰ１−ｈＦＩＸベクターＤＮＡの分布を示すグラフである。
【図７】対照動物及びイントラリピッドで前処理された動物から得られた血漿サンプルにおける、ＡＡＶベクターＤＮＡのレベルを示す表である。
【図８Ａ】図８Ａは、ＰＢＳを投与された対照動物、及びイントラリピッドで前処理された動物から得られた血漿サンプルにおける、脂質クリアランスを示している。図８Ｂは、対照動物及びイントラリピッド前処理動物からのサンプルチューブを示している。
【図８Ｂ】図８Ａは、ＰＢＳを投与された対照動物、及びイントラリピッドで前処理された動物から得られた血漿サンプルにおける、脂質クリアランスを示している。図８Ｂは、対照動物及びイントラリピッド前処理動物からのサンプルチューブを示している。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
[0035]飽和剤、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）遺伝子療法ベクター、及び治療剤、並びにそれを含む方法及びキットが本明細書において記載される。
【００２９】
[0036]理論によって縛られることなく、ここに開示される方法及びキットは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）遺伝子療法の形質導入効率及び安全性を増加させる飽和現象を利用する。ＡＡＶ遺伝子療法は、特に肝臓の形質導入に関して、効率的であると伝統的には考えられたものの、本開示は、飽和剤の事前投与により細網内皮系（ＲＥＳ）を飽和させることによって、肝臓並びに他の標的臓器及び臓器系へのＡＡＶ遺伝子療法ベクターの形質導入効率が増加し得ることを予想外に示している。形質導入のこの増加は、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの実際の用量の減少を可能にし、この減少は、対象における免疫学的応答の可能性を限定することによってとりわけ安全性を増加させることができる。形質導入される肝臓のパーセンテージも増加し得、肝臓のかなりの部分が形質導入されることを要するヒトにおける遺伝子療法治療を可能にする。加えて、実施例の節に示されるように、本明細書で、肝臓細胞は肝臓全体にわたって効率的に形質導入されることができ（とりわけ図４Ａ及び４Ｂを参照されたい）、開示される方法なしでは、主に門脈に近い細胞が形質導入された。
【００３０】
[0037]開示される方法は、肝臓の治療に制限されなくてもよい。ＲＥＳを有するさらなる臓器も恩恵を受けることがある。例えば、肺、腎臓、脾臓、及び小腸はＡＡＶ遺伝子療法治療において標的にされてもよく、ＲＥＳを飽和させる開示される方法は、そのような臓器の治療も向上させることができる。さらに、開示される方法は、ＲＥＳを有する臓器を標的にすることにおいて有利であることがあるだけではない。細網内皮系（ＲＥＳ）は特異的でないこともあるため、任意のＡＡＶ治療は、任意のＡＡＶ治療が、標的にされた臓器にとってＡＡＶベクターをより利用可能であるようにするような、ＲＥＳが特異的でないことからの恩恵を受けることがある。例えば、特異的臓器を、例えば中枢神経系（すなわち、脳）又は筋肉を標的にしたＡＡＶは、例えば血流を介して投与され得る。理論によって縛られることなく、ＲＥＳ細胞は、ＡＡＶの大部分を血流から非特異的に捕捉することがあり、それによって、ＡＡＶが標的臓器に形質導入する利用可能性を限定する。患者を本発明の方法に供することによって、ＡＡＶの利用可能性は向上し得、それによって、より効率的な形質導入及び／又はより低量の投与されるＡＡＶを可能にする。
【００３１】
[0038]下記でより詳細に記述されるように、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターのタイプは特に限定されるわけではなく、様々な血清型由来のＡＡＶ並びに組み換え若しくはキメラＡＡＶを含んでもよい。飽和剤がＲＥＳを占拠し得、それによりＲＥＳがＡＡＶ粒子を一掃し得ない限りにおいて、本開示の目的上、飽和剤は同様に無制限である。しかしながら、多くの実施形態において、飽和剤は、本明細書において記載されるイントラリピッド（登録商標）エマルションなど、脂質に基づくエマルションである。
【００３２】
[0039]開示される方法及び現象の適用は広範囲に及び、下記でより詳細に記述されるように、数多くの遺伝子療法適用の安全性及び効力を向上させることにおいて有用であることがある。
[0040]定義
本発明の説明、条項、及び添付の特許請求の範囲において使用するとき、「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」という単数形は互換可能に使用され、文脈上別様にはっきりと述べられていない限り、複数形も含み、それぞれの意味の中に入ることを意図される。また、本明細書において使用するとき、「及び／又は」とは、列挙された項目のうちの１つ又は複数のありとあらゆる考え得る組み合わせ、並びに選択肢（「又は」）で解釈される場合には、組み合わせがないことを指し及び包含する。
【００３３】
[0041]本明細書において使用するとき、「約」という用語は、当業者によって理解され、当該用語が使用される文脈に応じてある程度異なるであろう。当該用語が使用される文脈を考慮しても当業者にとってはっきりしない用語の使用がある場合、「約」は、特定の用語の最高でプラス又はマイナス１０％までを意味するであろう。
【００３４】
[0042]本明細書において使用するとき、「飽和剤」という用語は、ＲＥＳの捕捉機能を飽和させる能力がある作用物質を指す。本開示の目的上、化合物又は組成物の投与がＲＥＳの捕捉機能を占拠し得、それによりＲＥＳが、同時に又は後に投与されるＡＡＶ遺伝子療法ベクターを捕捉し得ない限りにおいて、正確な化合物又は組成物は重大ではない。多くの飽和剤はエマルション、より具体的には脂質に基づくエマルションであるが、本開示は、下記で例示的な飽和剤に関するより多くの詳細を提供する。
【００３５】
[0043]本明細書において使用するとき、「ＲＥＳの捕捉機能」という語句は、ＲＥＳの食作用活性を指す。クッパー細胞は、ＲＥＳの総食作用能のおよそ９０％に関与している。一部の実施形態において、飽和剤は、ＲＥＳの食作用能を飽和させる能力がある作用物質である。一部の実施形態において、飽和剤は、クッパー細胞の食作用能を飽和させる能力がある作用物質である。
【００３６】
[0044]本明細書において使用するとき、「食作用能を飽和させる」という語句は、食細胞が別の作用物質（例えば、ＡＡＶ遺伝子療法ベクター）を取り込むのを阻止する、作用物質（例えば、飽和剤）の食作用的取り込みを指す。ゆえに、一部の実施形態において、飽和剤は、ＲＥＳの食作用活性を飽和させる能力がある作用物質であり、それによりＲＥＳの食細胞は、ＡＡＶ遺伝子療法ベクター及び／又は治療剤などの別の作用物質の代わりに飽和剤を取り込む。一部の実施形態において、飽和剤は、クッパー細胞の食作用活性を飽和させる能力がある作用物質であり、それによりクッパー細胞は、ＡＡＶ遺伝子療法ベクター及び／又は治療剤などの別の作用物質の代わりに飽和剤を取り込む。
【００３７】
[0045]本明細書において使用するとき、「治療上有効な量」という語句は、開示されるＡＡＶ遺伝子療法ベクターを投与して、例えば標的細胞／臓器において治療用遺伝子又は関心対象の遺伝子を発現させる、特異的な薬理効果を提供する、対象における用量又は血漿濃度を意味する。治療上有効な量又は治療レベルのＡＡＶベクターは、たとえそのような投薬量が、当業者によって治療上有効な量であると判断されるとしても、本明細書において記載される病状を治療することにおいて必ずしも有効であるとは限らないであろうことが強調される。単なる便宜上、例示的な投薬量、薬物送達量、及び治療上有効な量が下記で提供される。当業者であれば、特異的な対象及び／又は病状を治療するための必要に応じて、標準的な慣行に従ってそのような量を調整し得る。治療上有効な量は、投与の経路と剤形、対象の年齢と重量、及び／又は治療されている疾患若しくは病状に基づいて様々に異なってもよい。
【００３８】
[0046]本明細書において使用するとき、「治療」又は「治療すること」という用語は、疾患又は病状の1つ又は複数の兆候、症状、又は影響を低下させること、改善すること、又は排除することを指す（例えば、血友病を有する対象において凝固因子の発現を増加させること、又は遺伝子の発現を減少させることが疾患と関連している、等）。
【００３９】
[0047]「個体」、「対象」、及び「患者」という用語は本明細書において互換可能に使用され、治療を必要とする疾患又は病状を有する任意の個々の対象を指す。本開示の目的上、対象は、ヒト霊長類などの霊長類、又はイヌ、ネコ、ウマ、ブタ、ヤギ、若しくはウシなどの別の哺乳類等であってもよい。
【００４０】
[0048]細網内皮系
一部の実施形態において、本明細書において開示される飽和剤は、細網内皮系（ＲＥＳ）の１種又は複数種の細胞によって取り込まれる。ＲＥＳの１種又は複数種の細胞には、クッパー細胞、類洞内皮細胞（ＳＥＣ）、及び肝星細胞（ＨＳＣ）が含まれてもよいが、それらに限定されるわけではない。一部の（ｓｍｅ）実施形態において、飽和剤は、前述のＲＥＳ細胞タイプの任意の１種によって選択的又は優先的に取り込まれてもよいが、一方で一部の実施形態において、飽和剤は、これら細胞タイプのすべてによって取り込まれてもよい。言い換えれば、飽和剤は、ＲＥＳの１種若しくは複数種、２種若しくはそれを上回る種類、又は３種若しくはそれを上回る種類の細胞タイプによって取り込まれてもよい。例えば、飽和剤は、クッパー細胞及びＳＥＣによって選択的若しくは優先的に取り込まれてもよい、又は飽和剤は、クッパー細胞及びＨＳＣ若しくはＳＥＣ及びＨＳＣによって選択的若しくは優先的に取り込まれてもよい。
【００４１】
[0049]一部の実施形態において、ＲＥＳの１種又は複数種の細胞は、多数の細胞を含む。例えば、多数の細胞の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又はそれを上回る割合は、クッパー細胞であってもよい。加えて又は代替的に、多数の細胞の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又はそれを上回る割合は、類洞内皮細胞（ＳＥＣ）であってもよい。加えて又は代替的に、多数の細胞の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又はそれを上回る割合は、肝星細胞（ＨＳＣ）であってもよい。
【００４２】
[0050]一部の実施形態において、飽和剤は、ＲＥＳの１種又は複数種の細胞によって主として取り込まれる。例えば、飽和剤の約４０〜１００％、約５０〜９０％、又は約６０〜８０％は、ＲＥＳの１種又は複数種の細胞によって取り込まれてもよい。ゆえに、飽和剤の少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、若しくは少なくとも９５％、又はそれを上回る割合は、ＲＥＳの１種又は複数種の細胞によって取り込まれてもよい。一部の実施形態において、飽和剤の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％未満は、実質肝臓細胞によって取り込まれる。
【００４３】
[0051]飽和剤の投与の結果として、ＲＥＳによって取り込まれ得るＡＡＶ遺伝子療法ベクターの量は低下する。したがって、一部の実施形態において、ＡＡＶ遺伝子療法ベクター及び／又は治療剤の１０％未満、２０％未満、３０％未満、４０％未満、５０％未満、５５％未満、６０％未満、６５％未満、７０％未満、７５％未満、８０％未満、８５％未満、９０％未満、又は９５％未満は、ＲＥＳの１種又は複数種の細胞によって取り込まれることがある。一部の実施形態において、ＡＡＶ遺伝子療法ベクター及び／又は治療剤の少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、若しくは少なくとも９５％、又はそれを上回る割合は、実質肝臓細胞又は標的臓器若しくは臓器系によって取り込まれる。
【００４４】
[0052]一部の実施形態において、飽和剤を主として取り込む細胞は、ＡＡＶ遺伝子療法ベクター及び／又は治療剤を主として取り込む細胞とは異なる。例えば、一部の実施形態において、飽和剤は、非実質肝臓細胞によって主として取り込まれてもよく、ＡＡＶ遺伝子療法ベクター及び／又は治療剤は、実質肝臓細胞によって主として取り込まれてもよい。一部の実施形態において、飽和剤は、ＲＥＳによって主として取り込まれてもよく、一方でＡＡＶ遺伝子療法ベクター及び／又は治療剤は、別個の標的臓器又は臓器系によって主として取り込まれる。
【００４５】
[0053]一部の実施形態において、ＡＡＶ遺伝子療法ベクター及び／又は治療剤は、標的臓器における細胞（例えば、実質肝臓細胞）の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、若しくは少なくとも９５％、又はそれを上回る割合に形質導入する。
[0054]飽和剤
一部の実施形態において、開示される方法及びキットは、それを必要とする対象に投与された場合に、ＲＥＳの１種又は複数種の細胞によって取り込まれる飽和剤を含む。一部の実施形態において、対象は、ＲＥＳの１種又は複数種の細胞によって取り込まれる複数種の飽和剤を投与されてもよい。例えば、対象は、少なくとも１種、少なくとも２種、又は少なくとも３種の別個の飽和剤を投与されてもよい。
【００４６】
[0055]一部の実施形態において、対象は、１種の飽和剤又は複数種の飽和剤の１回又は複数回の投薬を施されてもよい。１回を上回る回数の投薬が対象に施される場合、それぞれの投薬は、同じ飽和剤又は異なる飽和剤を含んでもよい。
【００４７】
[0056]一部の実施形態において、飽和剤は、炭水化物、アミノ酸、脂質、ビタミン、食物ミネラル、又はその任意の組み合わせから選択される１種又は複数種の栄養素を含む。
【００４８】
[0057]一部の実施形態において、飽和剤は、トリグリセリド、ステロイド、リン脂質、又はその任意の組み合わせから選択される１種又は複数種の脂質を含む。一部の実施形態において、リン脂質は、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、レシチン、プラズマローゲン、及びスフィンゴミエリンから選択される。一部の実施形態において、飽和剤はリン脂質を含む。一部の実施形態において、リン脂質はホスファチジルコリンである。一部の実施形態において、ホスファチジルコリンは、パルミトイル−オレイル−ｓｎ−ホスファチジルコリン、１−オレオイル−２−パルミトイル−ホスファチジルコリン、及びＬ−α−ホスファチジルコリンから選択される。一部の実施形態において、ホスファチジルコリンはＬ−α−ホスファチジルコリンではない。
【００４９】
[0058]一部の実施形態において、飽和剤は、完全非経口栄養（ＴＰＮ）補給剤、末梢静脈栄養（ＰＰＮ）補給剤、アミノシン（Ａｍｉｎｏｓｙｎ）（登録商標）、アミノシン（登録商標）−ＨＢＣ、アミノシン（登録商標）−ＨＦ、アミノシン（登録商標）−ＲＦ、ブランチアミン（ＢＲＡＮＣＨＡＭＩＮ）（登録商標）、フレアミン（ＦＲＥＡＭＩＮＥ）ＨＢＣ（登録商標）、フレアミン（登録商標）ＩＩＩ、ヘパタミン（ＨＥＰＡＴＡＭＩＮＥ）（登録商標）、カビヴェン（ＫＡＢＩＶＥＮ）（登録商標）、ペリカビヴェン（ＰＥＲＩＫＡＢＩＶＥＮ）（登録商標）、ノバミン（ＮＯＶＡＭＩＮＥ）（登録商標）、プレマゾール（Ｐｒｅｍａｓｏｌ）、プロカラミン（ＰＲＯＣＡＬＡＭＩＮＥ）（登録商標）、プロゾール（ＰｒｏＳｏｌ）、レナミン（ＲＥＮＡＭＩＮ）（登録商標）、トロファミン（ＴＲＯＰＨＡＭＩＮＥ）（登録商標）、又はその任意の組み合わせから選択される栄養補給剤を含む。
【００５０】
[0059]一部の実施形態において、飽和剤はエマルションを含む。適切なエマルションは、大豆油、植物油、魚油、リン脂質、及びグリセロール、又はその任意の組み合わせを含んでもよい。エマルションの液滴は、０．１μｍよりも大きく又は２μｍよりも小さくてもよいが、このサイズ範囲を外れた液滴を有するエマルションも、ＲＥＳに対する飽和効果を有することがある。一部の実施形態において、エマルションは、０．１μｍ〜２μｍ、０．５〜１．５μｍ、又は０．７５〜１．２５μｍのサイズを有する液滴を含む。一部の実施形態において、エマルションは、脂質エマルション（すなわち、脂質に基づくエマルションである）及び／又は脂肪エマルションを含む。脂質エマルションは、脂肪及び油を含んでもよく、脂肪エマルションとも称されることがあることが理解される。
【００５１】
[0060]例示的なエマルションには、イントラリピッド（登録商標）１０％、イントラリピッド（登録商標）２０％、及びイントラリピッド（登録商標）３０％、クリノリピッド、リポシン（登録商標）、リポシン（登録商標）ＩＩ、又はリポシン（登録商標）ＩＩＩが含まれ得るが、それらに限定されるわけではない。イントラリピッドエマルションは、大豆油、卵黄リン脂質、グリセリン、及び水を含有する。例えば、イントラリピッド（登録商標）１０％は、１０％大豆油、１．２％卵黄リン脂質、２．２５％グリセリン、及び水を含有する。イントラリピッド（登録商標）２０％は、２０％大豆油、１．２％卵黄リン脂質、２．２５％グリセリン、及び水を含有する。イントラリピッド（登録商標）３０％は、３０％大豆油、１．２％卵黄リン脂質、２．２５％グリセリン、及び水を含有する。クリノリピッドエマルションは、４：１の概算比で精製オリーブ油と精製大豆油とを含有する。例えば、クリノリピッド２０％は、およそ１６％のオリーブ油、４％の大豆油、１．２％卵リン脂質、２．２５％グリセリン、０．０３％オレイン酸ナトリウム、及び水を含有する。リポシン（登録商標）エマルションは、１０％又は２０％エマルションとして製剤化されてもよい。リポシン（登録商標）ＩＩ  １０％は、水中に５％サフラワー油、５％大豆油、乳化剤として添加される最高で１．２％の卵ホスファチド、及び２．５％グリセリンを含有する。リポシン（登録商標）ＩＩ  ２０％は、水中に１０％サフラワー油、１０％大豆油、１．２％卵ホスファチド、及び２．５％グリセリンを含有する。リポシン（登録商標）ＩＩＩ  １０％は、水中に１０％大豆油、乳化剤として添加される最高で１．２％の卵ホスファチド、及び２．５％グリセリンを含有する。リポシン（登録商標）ＩＩＩ  ２０％は、水中に２０％大豆油、１．２％卵ホスファチド、及び２．５％グリセリンを含有する。当業者であれば、他の許容される脂質及び／又は油を同様のパーセンテージで使用して、同様の脂質及び／又は脂肪に基づくエマルションを調製し得、そのようなエマルションは、開示される方法における使用に同じように適しているであろうことを理解するであろう。
【００５２】
[0061]一部の実施形態において、飽和剤は、脂質ナノ粒子（例えば、リポソーム、ミセル、又は逆（ｒｅｖｅｒｅｓ）ミセル）などのナノ粒子を含む。ナノ粒子は、エマルションにおける分散相又は懸濁液における内部相であってもよい。例示的なナノ粒子には、ミセル溶液及び固体脂質ナノ粒子（ＳＬＮ）も含まれてもよい。本開示の目的上、ナノ粒子は、概して０．２〜３００ｎｍの直径を有する。
【００５３】
[0062]飽和剤として使用されてもよい例示的なリポソームには、Ｌ−α−ホスファチジルコリンリポソーム、多層小胞（ＭＬＶ）、単層小胞、及び渦巻形小胞が含まれ得るが、それらに限定されるわけではない。当業者であれば、単層小胞は、例えば小型単層小胞（ＳＵＶ）又は大型単層小胞（ＬＵＶ）であり得ることを理解するであろう。
【００５４】
[0063]一部の実施形態において、飽和剤はミクロスフェアであってもよい。一部の実施形態において、飽和剤は、空のアデノウイルスカプシド又は空のＡＡＶカプシドなど、空のウイルスカプシドであってもよい。一部の実施形態において、飽和剤は空のウイルスカプシドではない。空のＡＡＶカプシドを含むＡＡＶカプシドは、前処理において、例えば中和抗体など、血中に存在する中和構成要素を捕捉することが先行技術で示唆されている。
【００５５】
[0064]ＡＡＶ遺伝子療法ベクター
一部の実施形態において、開示される方法及びキットは、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターを含む。一部の実施形態において、開示されるキット及び方法は、複数種のＡＡＶ遺伝子療法ベクターを含む。例えば、開示されるキット及び方法は、少なくとも１種、少なくとも２種、又は少なくとも３種の別個のＡＡＶ遺伝子療法ベクターを含んでもよい。対象に１種を上回る種類のＡＡＶ遺伝子療法ベクターを投与する場合、ベクターは同じ又は異なる血清型であってもよく、ベクターは同じ又は異なる治療用遺伝子をコードしてもよい。ＡＡＶ遺伝子療法ベクターは、ＡＡＶカプシド及びポリヌクレオチドを含んでもよい。ポリヌクレオチドは治療用タンパク質をコードしてもよいが；しかしながら、すべてのポリヌクレオチドが治療用タンパク質をコードするわけではない。一部の実施形態において、ＡＡＶ遺伝子療法ベクター内のポリヌクレオチドは、関心対象の遺伝子（例えば、対象において変異している遺伝子）、関心対象のタンパク質（例えば、対象において過小発現している又は変異しているタンパク質）、又は治療用ＲＮＡ（例えば、変異している又は過剰発現している遺伝子を標的にするｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、又はｓｈＲＮＡ）をコードしてもよい。それゆえ、導入遺伝子又は治療用遺伝子は、治療用タンパク質若しくは治療用ＲＮＡ又はそのフラグメントをコードするポリヌクレオチド配列を含んでもよい。
【００５６】
[0065]ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの血清型は、特に限定されるわけではなく、ＡＡＶ血清型１（ＡＡＶ１）、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、又はＡＡＶ１１を含んでもよいが、それらに限定されるわけではない。一部の実施形態において、ＡＡＶは、ＡＡＶ１又はＡＡＶ５である。一部の実施形態において、ＡＡＶは、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、又はＡＡＶ１０である。一部の実施形態において、遺伝子療法は、複数種のＡＡＶ遺伝子療法ベクターの投与を含んでもよく、ベクターは同じ又は異なる血清型であってもよい。
【００５７】
[0066]一部の実施形態において、ＡＡＶは、ヒト細胞、又はアカゲザル細胞若しくはカニクイザル細胞などの非ヒト霊長類細胞において発見された。
【００５８】
[0067]一部の実施形態において、ＡＡＶカプシドは野生型カプシドではなく、ＡＡＶ２及びＡＡＶ５の少なくとも一部分を含むｒＡＡＶ２／５などの組み換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）である。例えば、ＶＰ１カプシドタンパク質は、ＡＡＶ２とＡＡＶ５との間のハイブリッドアミノ酸配列からなってもよく、一方でＶＰ２及びＶＰ３カプシドはＡＡＶ５血清型に由来してもよい（例えば、Ｕｒａｂｅら、Ｓｃａｌａｂｌｅ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｉｇｈ−ｔｉｔｅｒ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ａｄｅｎｏ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｖｉｒｕｓ  ｔｙｐｅ  ５  ｉｎ  ｉｎｓｅｃｔ  ｃｅｌｌｓ．Ｊ  Ｖｉｒｏｌ．２００６  Ｆｅｂ；８０（４）：１８７４〜８５ページ）。一部の実施形態において、ＡＡＶは、キメラＡＡＶ血清型５（ＡＡＶ５ｃｈ）などのキメラＡＡＶ（ＡＡＶｃｈ）である。
【００５９】
[0068]複数種のＡＡＶ遺伝子療法ベクターを対象に投与する場合、複数種のＡＡＶ遺伝子療法ベクターのうちの少なくとも２種は同じタイプのＡＡＶであってもよく、一方で一部の実施形態において、複数種のＡＡＶ遺伝子療法ベクターのうちの少なくとも２種は異なるタイプのＡＡＶであってもよい。
【００６０】
[0069]治療用遺伝子
一部の実施形態において、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターは、導入遺伝子又は治療用遺伝子を含む。導入遺伝子又は治療用遺伝子は、治療用タンパク質若しくは治療用ＲＮＡ又はそのフラグメントをコードするポリヌクレオチド配列を含む。
【００６１】
[0070]治療用タンパク質は、霊長類タンパク質、非霊長類タンパク質、又はヒトタンパク質であってもよい。一部の実施形態において、治療用タンパク質には、第ＩＸ因子（ＦＩＸ）、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）、及びその修飾型が含まれてもよいが、それらに限定されるわけではない。一部の実施形態において、治療用遺伝子には、アルファ−１アンチトリプシン（ＡＡＴ）、芳香族アミノ酸デカルボキシラーゼ（ＡＡＤＣ）、ＡＴＰａｓｅ筋小胞体／小胞体Ｃａ２＋輸送２（ＡＴＰ２Ａ２）、嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（ＣＴＦＲ）、グルタミン酸デカルボキシラーゼ６５ｋＤａタンパク質（ＧＡＤ６５）、グルタミン酸デカルボキシラーゼ６７ｋＤａタンパク質（ＧＡＤ６７）、リポタンパク質リパーゼ（ＬＰＬ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、ニュールツリン（ＮＴＮ）、ポルフォビリノーゲンデアミナーゼ（ＰＢＧＤ）、サルコグリカンアルファ（ＳＧＣＡ）、可溶性ｆｍｓ様チロシンキナーゼ−１（ｓＦＬＴ−１）、Ｓ１００カルシウム結合タンパク質Ａ１（Ｓ１００Ａ１）、生存運動ニューロン１（ＳＭＮ１）、トリペプチジルペプチダーゼ１（ＴＰＰ１）、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）−免疫グロブリン（ＩｇＧ１）Ｆｃ融合体（ＴＮＦＲ：Ｆｃ）、インターフェロンベータ（ＩＦＮ−β）、神経ペプチドＹ受容体Ｙ２、アルファグルコシダーゼ、Ｃ９ｏｒｆ７２、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）、ＣＦＴＲ、アルファ−ガラクトシダーゼ、アルファ−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼ、ウリカーゼ、コンドロイチナーゼ、ＨｅｘＡ、ＨｅｘＢ、及びその修飾型が含まれてもよいが、それらに限定されるわけではない。
【００６２】
[0071]導入遺伝子及び／又は治療用遺伝子は、遺伝子編集とも関係してもよい。遺伝子編集とは、操作されたヌクレアーゼ、すなわち「分子バサミ」を使用して、生きた生物のゲノムにＤＮＡを挿入する、欠失させる、又は置き換える遺伝子操作の１タイプである。現在、メガヌクレアーゼ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターに基づくヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、及びクラスター化した規則的にスペーサーが入った短い回文型リピート（ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ  ｒｅｇｕｌａｒｌｙ  ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ  ｓｈｏｒｔ  ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ  ｒｅｐｅａｔ）ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓシステムを伴う、４つのクラスの遺伝子編集を利用することができる。利用されるＡＡＶベクターは、内因性遺伝子を編集する遺伝子編集能が一過性であるように操作されてもよい。ヌクレアーゼは、ゲノムにおける所望の位置に部位特異的二本鎖断裂（ＤＳＢ）を創出する。誘導された二本鎖断裂は、非相同末端結合（ＮＨＥＪ）又は相同組み換え（ＨＲ）によりその後修復され、標的化変異をもたらす。例えば、１種又は複数種のＡＡＶ遺伝子療法ベクターは、特異的遺伝子配列を標的にする遺伝子をコードしてもよい。疾患遺伝子の発現を妨げることを療法の目的として、標的遺伝子は疾患遺伝子であってもよい。別の手法は、例えばＸ連鎖関連疾患に関する疾患遺伝子、又は優性疾患関連遺伝子を修復することを目的としてもよい。１種又は複数種のＡＡＶ遺伝子療法ベクターは、遺伝子編集配列、並びに例えば相同組み換えを介して挿入される／置き換えられる対象となるＤＮＡ配列及び／又は疾患と関連した遺伝子を修復するためのＤＮＡ配列をコードしてもよい。
【００６３】
[0072]前述の態様についての一部の実施形態において、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターは、干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）；マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）；又は短いヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）をコードするポリヌクレオチドを含んでもよい。一部の実施形態において、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、又はｓｈＲＮＡは、疾患と関連した遺伝子を標的にし且つサイレンシングする又は下方調節する。例えば、サイレンシングのための周知の標的遺伝子には、Ｈｔｔ遺伝子、Ｃ９ｏｒｆ７２遺伝子等、すなわちリピート障害（例えば、トリヌクレオチド（すなわち、ポリグルタミン又は非ポリグルタミン病）又はヘキサヌクレオチドリピート障害）と関連した遺伝子が含まれてもよい。一部の実施形態において、治療用ＲＮＡは、疾患に関与するタンパク質をコードする遺伝子の発現に干渉する。
【００６４】
[0073]ＡＡＶ遺伝子療法ベクターによってコードされる治療用遺伝子は、プロモーターの制御下にあってもよい。数多くの適切なプロモーターが当技術分野において公知であり、一部の実施形態において、プロモーターは組織特異的プロモーター（ＬＰ１肝臓特異的プロモーター、神経特異的プロモーター、例えばニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）、ヒトシナプシン１、ｃａＭＫキナーゼ、及びチューブリンプロモーターなど）であってもよい。ＰＧＫプロモーター、ＣＡＧプロモーター、又はＣＭＶプロモーターのような構成的プロモーターも使用してもよい。企図され得る他の適切なプロモーターは、誘導性プロモーター、すなわち宿主細胞が何らかの特定の刺激に曝露された場合にのみ転写を開始するプロモーターである。いずれの場合でも、当業者であれば、治療用タンパク質及び／又は治療用ＲＮＡの発現にとって適当なプロモーターを選択する十分な能力がある。
[0074]治療剤
一部の実施形態において、開示される方法及びキットは、飽和剤及び／又はＡＡＶ遺伝子療法ベクターの投与の前に、同時に、又は後に投与され得る１種又は複数種の治療剤を含む。
【００６５】
[0075]当業者であれば、開示される方法及びキットに適している付加的な治療剤には、本明細書において開示される疾患及び病状に対する従来的療法が含まれ得ることを理解するであろう。
[0076]投与の方法
開示される方法は、飽和剤及びＡＡＶ遺伝子療法ベクターを投与するステップを含む。一部の実施形態において、飽和剤及びＡＡＶ遺伝子療法ベクターは同時に投与され、一方で一部の実施形態において、飽和剤及びＡＡＶ遺伝子療法ベクターは逐次的に投与される。飽和剤及びＡＡＶ遺伝子療法ベクターを投与する開示される方法は、飽和剤及びＡＡＶ遺伝子療法ベクターを共投与するステップとも称されることがある。
【００６６】
[0077]例えば、飽和剤は、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの前に投与されてもよい。一部の実施形態において、飽和剤は、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの投与の少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、若しくは１５０分前、又はそれを上回る時間前に投与される。一部の実施形態において、飽和剤は、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの投与の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、若しくは２４時間前、又はそれを上回る時間前に投与される。一部の実施形態において、飽和剤は、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの投与の０．５〜２４時間、０．５〜１２時間、１〜５時間、又は１〜２時間前に投与される。一部の実施形態において、飽和剤は、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの投与の少なくとも１時間前に投与される。一部の実施形態において、飽和剤及びＡＡＶ遺伝子療法ベクターは、互いの２４時間又はそれ未満以内に投与される。一部の実施形態において、飽和剤及びＡＡＶ遺伝子療法は、互いの４８時間又はそれ未満以内に投与される。
【００６７】
[0078]一部の実施形態において、２種又はそれを上回る種類の飽和剤を対象に投与してもよく、２種又はそれを上回る種類の飽和剤は同時に又は逐次的に投与されてもよい。一部の実施形態において、第１の飽和剤は、１種又は複数種の付加的な飽和剤の投与の少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、若しくは１５０分前、又はそれを上回る時間前に投与されてもよい。一部の実施形態において、飽和剤は、１種又は複数種の付加的な飽和剤の投与の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、若しくは２４時間前、又はそれを上回る時間前に投与される。一部の実施形態において、第１の飽和剤は、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの前に投与されてもよく、１種又は複数種の付加的な飽和剤は、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの後に投与される。
【００６８】
[0079]一部の実施形態において、開示される方法は、付加的な治療剤を投与するステップをさらに含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ遺伝子療法ベクター及び１種又は複数種の治療剤は同時に投与され、一方で一部の実施形態において、ＡＡＶ遺伝子療法ベクター及び１種又は複数種の治療剤は逐次的に投与される。例えば、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターは、１種又は複数種の治療剤の投与の少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、若しくは１５０分前、又はそれを上回る時間前に投与されてもよく、或いはＡＡＶ遺伝子療法ベクターは、１種又は複数種の治療剤の投与の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、若しくは２４時間前、又はそれを上回る時間前に投与されてもよい。一部の実施形態において、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターは、１種又は複数種の治療剤の投与の少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、若しくは１５０分後、又はそれを上回る時間後に投与されてもよく、或いはＡＡＶ遺伝子療法ベクターは、１種又は複数種の治療剤の投与の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、若しくは２４時間後、又はそれを上回る時間後に投与されてもよい。
【００６９】
[0080]開示される方法の構成要素の投与の持続期間も様々に異なってもよい。実際に、飽和剤又はＡＡＶ遺伝子療法ベクターの持続的注入は、それぞれの構成要素の効力を増加させることができる。したがって、一部の実施形態において、飽和剤の投与は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、若しくは１５０分間、又はそれを上回る時間延長してもよい。一部の実施形態において、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの投与は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、若しくは１５０分間、又はそれを上回る時間延長してもよい。同様に、開示される方法が、付加的な飽和剤又は１種若しくは複数種の治療剤を投与するステップをさらに含む場合、これら構成要素の投与は、少なくとも１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、若しくは１５０分間、又はそれを上回る時間延長してもよい。
【００７０】
[0081]一部の実施形態において、本明細書において開示される方法は、飽和剤、ＡＡＶ遺伝子療法ベクター、１種若しくは複数種の付加的な飽和剤、及び／又は１種若しくは複数種の治療剤を全身に投与するステップを含む。全身投与は、経腸又は非経口であってもよい。経腸投与の適切な経路には、経口、舌下、及び直腸投与が含まれてもよいが、それらに限定されるわけではない。経腸投与の適切な経路には、吸入、注射、及び経皮投与が含まれてもよいが、それらに限定されるわけではない。本開示の目的上、注射の好ましい経路には、静脈内、筋肉内、皮下、動脈内、関節内、髄腔内、及び皮内注射が含まれる。
【００７１】
[0082]一部の実施形態において、飽和剤、ＡＡＶ遺伝子療法ベクター、１種若しくは複数種の付加的な飽和剤、及び／又は１種若しくは複数種の治療剤は局所投与される。局所投与は、標的臓器又は臓器系における又は付近における静脈内、筋肉内、皮下、動脈内、関節内、髄腔内、又は皮内注射を含み得る。例えば、リンパ節が標的臓器である場合、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターは、標的リンパ節に極めて近接して投与されてもよい。同様に、治療されている疾患が神経系疾患である場合、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターは髄腔内に投与されてもよい。局所投与されるＡＡＶ遺伝子療法ベクターによって適切に治療されることができる他の標的臓器又は臓器系には、肝臓、肺、脾臓、リンパ節、腎臓、小腸、又は脳が含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００７２】
[0083]一部の実施形態において、第１の飽和剤に対する投与の経路は、１種又は複数種の付加的な飽和剤に対する投与の経路とは異なり、一方で一部の実施形態において、任意の又はすべての飽和剤は、同じ経路を介して投与されてもよい。
【００７３】
[0084]一部の実施形態において、飽和剤に対する投与の経路は、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの投与の経路とは異なり、一方で一部の実施形態において、飽和剤及びＡＡＶ遺伝子療法ベクターは、同じ投与の経路によって投与される。
【００７４】
[0085]一部の実施形態において、飽和剤、治療剤、１種若しくは複数種の付加的な飽和剤、及び／又は１種若しくは複数種の治療剤を投与するステップは、飽和剤、治療剤、１種若しくは複数種の付加的な飽和剤、及び／又は１種若しくは複数種の治療剤を臓器に送達するステップを含む。一部の実施形態において、臓器は、筋骨格系、消化器系、呼吸器系、泌尿器系、生殖器系、内分泌系、循環系、神経系、及び外皮系から選択される臓器系由来のものである。一部の実施形態において、臓器は、脳、目、甲状腺、肺、心臓、膵臓、肝臓、脾臓、膀胱、胃、腎臓、小腸、リンパ節、及び前立腺から選択される。一部の実施形態において、臓器は肝臓である。一部の実施形態において、飽和剤、ＡＡＶ遺伝子療法ベクター、１種若しくは複数種の付加的な飽和剤、及び／又は１種若しくは複数種の治療剤は、肝臓の１種又は複数種の細胞に送達される。
【００７５】
[0086]一部の実施形態において、開示される方法は、脂肪に基づくエマルション及びＡＡＶ遺伝子療法ベクターを対象に投与するステップを含む。一部の実施形態において、開示される方法は、脂質に基づくエマルション及びＡＡＶ遺伝子療法ベクターを対象に投与するステップを含む。一部の実施形態において、エマルションは、イントラリピッド（登録商標）１０％、イントラリピッド（登録商標）２０％、及びイントラリピッド（登録商標）３０％から選択される。一部の実施形態において、投与されるエマルションはクリノリピッドである。一部の実施形態において、投与されるエマルションは、リポシン（登録商標）、リポシン（登録商標）ＩＩ、及びリポシン（登録商標）ＩＩＩから選択される。エマルション及びＡＡＶ遺伝子療法ベクターは同時に投与されてもよい。エマルション及びＡＡＶ遺伝子療法ベクターは、投与前に混合もされてもよい。エマルションは、ＡＡＶ遺伝子療法ベクター投与の前に投与されてもよい。ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの投与の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、若しくは２４時間前、又はそれを上回る時間前に、エマルションは投与されてもよい。例えば、イントラリピッドなどのエマルションについての実施例の節に示される投薬量及び／又は投与の経路は、１．３３ｍｍｏｌ／Ｌよりも上の又はそれよりも高い、血漿において測定されるトリグリセリドレベルをもたらし、そのトリグリセリドレベルは形質導入を向上させた。少なくとも２ｍｍｏｌ／Ｌ、３ｍｍｏｌ／Ｌ、４ｍｍｏｌ／Ｌ、５ｍｍｏｌ／Ｌ、６ｍｍｏｌ／Ｌ、７ｍｍｏｌ／Ｌ、８ｍｍｏｌ／Ｌ、９ｍｍｏｌ／Ｌ、１０ｍｍｏｌ／Ｌ、又はそれを上回る濃度の血中におけるトリグリセリドレベルを達成するように、任意の投薬量及び／又は投与の経路を選択してもよい。言い換えれば、対象を、脂質及び／又は脂肪に基づくエマルション製剤（例えば、イントラリピッド）などの食品補給剤で処理して、それによって、少なくとも２ｍｍｏｌ／Ｌ、３ｍｍｏｌ／Ｌ、４ｍｍｏｌ／Ｌ、５ｍｍｏｌ／Ｌ、６ｍｍｏｌ／Ｌ、７ｍｍｏｌ／Ｌ、８ｍｍｏｌ／Ｌ、９ｍｍｏｌ／Ｌ、１０ｍｍｏｌ／Ｌ、又はそれを上回る濃度の血中におけるトリグリセリドレベルを達成し、その後にＡＡＶ遺伝子療法ベクターの後続投与が続く方法が本明細書において提供される。ゆえに、選択されるエマルションの投薬量は、例えば０．５ｇ／ｋｇ、１ｇ／ｋｇ、１．５ｇ／ｋｇ、２ｇ／ｋｇ、２．５ｇ／ｋｇ、３ｇ／ｋｇ、３．５ｇ／ｋｇ、４ｇ／ｋｇ、４．５ｇ／ｋｇ、５ｇ／ｋｇ、５．５ｇ／ｋｇ、６ｇ／ｋｇ、６．５ｇ／ｋｇ、７ｇ／ｋｇ、７．５ｇ／ｋｇ、８ｇ／ｋｇ、８．５ｇ／ｋｇ、９ｇ／ｋｇ、９．５ｇ／ｋｇ、若しくは１０ｇ／ｋｇ、又はそれを上回る量であってもよい。一部の実施形態において、エマルションの投薬量は、５ｇ／ｋｇ、５．５ｇ／ｋｇ、６ｇ／ｋｇ、６．５ｇ／ｋｇ、７ｇ／ｋｇ、７．５ｇ／ｋｇ、８ｇ／ｋｇ、８．５ｇ／ｋｇ、９ｇ／ｋｇ、９．５ｇ／ｋｇ、又は１０ｇ／ｋｇ未満であってもよい。一部の実施形態において、エマルションの投薬量は０．５ｇ／ｋｇ〜５ｇ／ｋｇである。一部の実施形態において、エマルションの投薬量は約２ｇ／ｋｇ又は約４ｇ／ｋｇである。
【００７６】
[0087]用量及び剤形
一部の実施形態において、開示されるキット及び方法は、特異的な投薬量の飽和剤を含む。飽和剤の投薬量は、例えば０．５ｇ／ｋｇ、１ｇ／ｋｇ、１．５ｇ／ｋｇ、２ｇ／ｋｇ、２．５ｇ／ｋｇ、３ｇ／ｋｇ、３．５ｇ／ｋｇ、４ｇ／ｋｇ、４．５ｇ／ｋｇ、５ｇ／ｋｇ、５．５ｇ／ｋｇ、６ｇ／ｋｇ、６．５ｇ／ｋｇ、７ｇ／ｋｇ、７．５ｇ／ｋｇ、８ｇ／ｋｇ、８．５ｇ／ｋｇ、９ｇ／ｋｇ、９．５ｇ／ｋｇ、若しくは１０ｇ／ｋｇ、又はそれを上回る量であってもよい。一部の実施形態において、飽和剤の投薬量は、５ｇ／ｋｇ、５．５ｇ／ｋｇ、６ｇ／ｋｇ、６．５ｇ／ｋｇ、７ｇ／ｋｇ、７．５ｇ／ｋｇ、８ｇ／ｋｇ、８．５ｇ／ｋｇ、９ｇ／ｋｇ、９．５ｇ／ｋｇ、又は１０ｇ／ｋｇ未満であってもよい。一部の実施形態において、飽和剤の投薬量は０．５ｇ／ｋｇ〜５ｇ／ｋｇである。一部の実施形態において、飽和剤の投薬量は約２ｇ／ｋｇ又は約４ｇ／ｋｇである。１種を上回る種類の飽和剤を対象に投与する場合、それぞれの投薬量は同じであっても異なってもよい。
【００７７】
[0088]形質導入の向上を可能にする、ＲＥＳ細胞の実質的な飽和を達成し得る投薬量及び／又は投与の経路が飽和剤に対して選択される限りにおいて、そのような投薬量及び／又は経路が企図される。例えば、イントラリピッドなどの飽和剤及び／又はエマルションについての実施例の節に示される投薬量及び／又は投与の経路は、１．３３ｍｍｏｌ／Ｌよりも上の又はそれよりも高い、血漿において測定されるトリグリセリドレベルをもたらし、形質導入の向上を得ることができる（例えば、図８Ａを参照されたい）。投薬量及び／又は投与の経路は、少なくとも２ｍｍｏｌ／Ｌ、３ｍｍｏｌ／Ｌ、４ｍｍｏｌ／Ｌ、５ｍｍｏｌ／Ｌ、６ｍｍｏｌ／Ｌ、７ｍｍｏｌ／Ｌ、８ｍｍｏｌ／Ｌ、９ｍｍｏｌ／Ｌ、１０ｍｍｏｌ／Ｌ、又はそれを上回る濃度の血中におけるトリグリセリドレベルを達成するように選択されてもよい。言い換えれば、対象を、脂質に基づくエマルション製剤（例えば、イントラリピッド）などの食品補給剤で処理して、それによって、少なくとも２ｍｍｏｌ／Ｌ、３ｍｍｏｌ／Ｌ、４ｍｍｏｌ／Ｌ、５ｍｍｏｌ／Ｌ、６ｍｍｏｌ／Ｌ、７ｍｍｏｌ／Ｌ、８ｍｍｏｌ／Ｌ、９ｍｍｏｌ／Ｌ、１０ｍｍｏｌ／Ｌ、又はそれを上回る濃度の血中におけるトリグリセリドレベルを達成し、その後にＡＡＶ遺伝子療法ベクターの後続投与が続く方法が本明細書において提供される。
【００７８】
[0089]一部の実施形態において、開示されるキット及び方法は、特異的な投薬量のＡＡＶ遺伝子療法ベクターを含む。ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの投薬量は、例えば１×１０１０ｇｃ／ｋｇ、５×１０１０ｇｃ／ｋｇ、１×１０１１ｇｃ／ｋｇ、５×１０１１ｇｃ／ｋｇ、１×１０１２ｇｃ／ｋｇ、２×１０１２ｇｃ／ｋｇ、３×１０１２ｇｃ／ｋｇ、４×１０１２ｇｃ／ｋｇ、５×１０１２ｇｃ／ｋｇ、６×１０１２ｇｃ／ｋｇ、７×１０１２ｇｃ／ｋｇ、８×１０１２ｇｃ／ｋｇ、９×１０１２ｇｃ／ｋｇ、１×１０１３ｇｃ／ｋｇ、５×１０１３ｇｃ／ｋｇ、１×１０１４ｇｃ／ｋｇ、５×１０１４ｇｃ／ｋｇ、若しくは１×１０１５ｇｃ／ｋｇ、又はそれを上回る量であってもよい。一部の実施形態において、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの投薬量は、１×１０１３ｇｃ／ｋｇ、５×１０１３ｇｃ／ｋｇ、１×１０１４ｇｃ／ｋｇ、５×１０１４ｇｃ／ｋｇ、又は１×１０１５ｇｃ／ｋｇ未満である。一部の実施形態において、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの投薬量は１×１０１２ｇｃ／ｋｇ〜１×１０１４ｇｃ／ｋｇである。一部の実施形態において、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの投薬量は５×１０１２ｇｃ／ｋｇ〜５×１０１３ｇｃ／ｋｇである。一部の実施形態において、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの投薬量は、４×１０１２ｇｃ／ｋｇ、４．５×１０１２ｇｃ／ｋｇ、５×１０１２ｇｃ／ｋｇ、５．５×１０１２ｇｃ／ｋｇ、６×１０１２ｇｃ／ｋｇ、６．５×１０１２ｇｃ／ｋｇ、７×１０１２ｇｃ／ｋｇ、７．５×１０１２ｇｃ／ｋｇ、８×１０１２ｇｃ／ｋｇ、８．５×１０１２ｇｃ／ｋｇ、８．６×１０１２ｇｃ／ｋｇ、８．７×１０１２ｇｃ／ｋｇ、８．８×１０１２ｇｃ／ｋｇ、８．９×１０１２ｇｃ／ｋｇ、９×１０１２ｇｃ／ｋｇ、９．１×１０１２ｇｃ／ｋｇ、９．２×１０１２ｇｃ／ｋｇ、９．３×１０１２ｇｃ／ｋｇ、９．４×１０１２ｇｃ／ｋｇ、９．５×１０１２ｇｃ／ｋｇ、９．６×１０１２ｇｃ／ｋｇ、９．７×１０１２ｇｃ／ｋｇ、９．８×１０１２ｇｃ／ｋｇ、９．９×１０１２ｇｃ／ｋｇ、１×１０１３ｇｃ／ｋｇ、１．５×１０１３ｇｃ／ｋｇ、２×１０１３ｇｃ／ｋｇ、２．５×１０１３ｇｃ／ｋｇ、３×１０１３ｇｃ／ｋｇ、３．５×１０１３ｇｃ／ｋｇ、４×１０１３ｇｃ／ｋｇ、４．５×１０１３ｇｃ／ｋｇ、５×１０１３ｇｃ／ｋｇ、５．５×１０１３ｇｃ／ｋｇ、若しくは６×１０１３ｇｃ／ｋｇ、又はそれを上回る量である。一部の実施形態において、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの投薬量は約９．７×１０１２ｇｃ／ｋｇ又は約５×１０１３ｇｃ／ｋｇである。一部の実施形態において、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの投薬量は、飽和剤の投薬量に反比例する。１種を上回る種類のＡＡＶ遺伝子療法ベクターを対象に投与する場合、それぞれの投薬量は同じであっても異なってもよい。
【００７９】
[0090]一部の実施形態において、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの用量は、飽和剤とともに共投与される場合、飽和剤なしで投与される場合の同じＡＡＶ遺伝子療法ベクターの用量と比較して少ない。一部の実施形態において、飽和剤との共投与は、飽和剤の共投与なしのＡＡＶ遺伝子療法ベクターの用量と比較して、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの用量の少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、又は７５％の低下をもたらす。
[0091]形質導入効率の増加及び副作用の低下
同時にでも逐次的にでも、飽和剤とＡＡＶ遺伝子療法ベクターとの共投与は、ＲＥＳによるＡＡＶ遺伝子療法ベクターの取り込みの量を減少させる。ＲＥＳゼクエストレーションのこの減少の結果として、より多くのＡＡＶ遺伝子療法ベクターがより長く循環にとどまり得、より大量のＡＡＶ遺伝子療法ベクターが標的細胞、臓器、又は臓器系に到達することを可能にする。標的細胞、臓器、又は臓器系に到達するＡＡＶ遺伝子療法ベクターの量の増加は、形質導入効率の増加に同じようにつながる。
【００８０】
[0092]この形質導入効率の増加に起因して、所定の疾患を治療するために必要とされるＡＡＶ遺伝子療法ベクターの治療上有効な量は、飽和剤の共投与なしで同じ疾患を治療するために必要とされるであろう量と比べて低下し得る。意図されない免疫学的応答は、対象にＡＡＶ遺伝子療法ベクターを投与する結果として生じることがある最も起こり得る深刻な副作用であり、対象に投与されるＡＡＶ遺伝子療法ベクターの量を減少させることは、これらの意図されない副作用の可能性を減少させるであろう。
【００８１】
[0093]したがって、一部の実施形態において、飽和剤とＡＡＶ遺伝子療法ベクターとの共投与は、飽和剤の共投与なしのＡＡＶ遺伝子療法ベクターの形質導入効率と比較して、少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、若しくは１００％、又はそれを上回る割合、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの形質導入効率を向上させる。より具体的には、開示される方法は、飽和剤の共投与なしの形質導入効率と比較して、少なくとも約３０％又はそれを上回る割合、形質導入効率を増加させることができる。一部の実施形態において、開示される方法の形質導入効率は、飽和剤の共投与なしの方法の形質導入効率と比較して、少なくとも約１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．４、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、若しくは１０倍、又はそれを上回る割合増加する。より具体的には、開示される方法は、飽和剤の共投与なしの形質導入効率と比較して、少なくとも約２倍若しくは３倍、又はそれを上回る割合、形質導入効率を増加させることができる。
【００８２】
[0094]一部の実施形態において、形質導入効率は、例えばＡＡＶ遺伝子療法ベクターによってコードされる治療用タンパク質のレベルを検出することによって、導入遺伝子発現のレベルに基づいて測定され得る。治療用タンパク質は、蛍光分析法、熱量測定法、発光、ゲル、ブロット、及びアレイを含むがそれらに限定されない、当技術分野において公知の任意のタンパク質検出法によって検出されてもよい。一部の実施形態において、治療用タンパク質は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって検出される。
【００８３】
[0095]一部の実施形態において、形質導入効率は、導入遺伝子コピー数に基づいて測定され得る。導入遺伝子コピー数は、サザンブロッティング、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、及び蛍光インサイチューハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）を含むがそれらに限定されない、当技術分野において公知の任意の遺伝子コピー数法によって判定され得る。一部の実施形態において、導入遺伝子コピー数は、定量ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）によって測定される。
【００８４】
[0096]一部の実施形態において、飽和剤とＡＡＶ遺伝子療法ベクター及び／又は治療剤との共投与は、飽和剤なしのＡＡＶ遺伝子療法の投与と比較して、ＡＡＶ遺伝子療法によって引き起こされる１つ又は複数の副作用の低下をもたらす。１つ又は複数の副作用の低下には、１つ若しくは複数の副作用の重症度を低下させること、又は１つ若しくは複数の副作用が一緒に生じるのを阻止することが含まれ得る。
【００８５】
[0097]一部の実施形態において、ＡＡＶ遺伝子療法の副作用は、免疫学的応答の生成である。免疫学的応答は、ウイルスカプシド、又はＡＡＶ遺伝子療法ベクターによってコードされる治療用タンパク質若しくはＲＮＡによって引き起こされる液性応答など、液性免疫応答であってもよい。一部の実施形態において、副作用を低下させることには、抗体応答又は細胞性免疫応答が含まれる。
【００８６】
[0098]一部の実施形態において、飽和剤とＡＡＶ遺伝子療法ベクターとの共投与は、飽和剤なしのＡＡＶ遺伝子療法の投与と比較して、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの半減期の増加をもたらす。ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの半減期は、血液からのＡＡＶ遺伝子療法ベクターのクリアランス速度に基づいて算出され得る。一部の実施形態において、開示される方法におけるＡＡＶ遺伝子療法ベクターの血中クリアランス速度は、飽和剤なしの投与と比較して減少する。一部の実施形態において、血中におけるＡＡＶ遺伝子療法ベクターの持続期間は、飽和剤なしと比較して、飽和剤とともに共投与された場合に増加する。一部の実施形態において、血中におけるＡＡＶ遺伝子療法ベクターの量は、飽和剤なしと比較して、飽和剤とともに投与された場合に増加する。
【００８７】
[0099]一部の実施形態において、飽和剤とＡＡＶ遺伝子療法ベクターとの共投与は、飽和剤なしのＡＡＶ遺伝子療法ベクター及び／又は治療剤の投与と比較して、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの生体内分布を増加させる。一部の実施形態において、生体内分布を増加させることには、標的細胞、臓器、組織、又は臓器系におけるＡＡＶ遺伝子療法ベクターの量を増加させることが含まれる。一部の実施形態において、生体内分布を増加させることには、臓器又は組織の内部領域におけるＡＡＶ遺伝子療法ベクターの量を増加させることが含まれる。一部の実施形態において、臓器又は組織におけるＡＡＶ遺伝子療法ベクターの量は、臓器又は組織におけるＡＡＶ遺伝子療法ベクターの検出に基づく。一部の実施形態において、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの検出には、ウイルスカプシドの検出、治療用遺伝子若しくはそのフラグメントの検出、又は治療用タンパク質の検出が含まれる。
【００８８】
[0100]適応症
開示される方法及びキットは、遺伝性障害及び疾患を治療するために使用され得る。開示される方法及びキットで治療することができる遺伝性疾患及び障害には、急性間質性ポルフィリン症（ＡＩＰ）、加齢黄斑変性症、筋萎縮性側索硬化症、嚢胞性線維症、麻痺、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、関節炎、バッテン病、カナバン病、シトルリン血症１型、クリグラーナジャール、血友病、関節リウマチ、てんかん、鬱血性心不全、嚢胞性線維症、デュシェンヌ型（Ｄｕｃｈｅｎｅ）筋ジストロフィー、脂質異常症、糖原病Ｉ型（ＧＳＤ−Ｉ）、血友病Ａ、血友病Ｂ、遺伝性肺気腫、ホモ接合型家族性高コレステロール血症（ＨｏＦＨ）、ハンチントン病（ＨＤ）、レーバー先天性黒内障、メチルマロン酸血症（ｍｅｔｈｙｌｍａｌｏｎｉｃ  ａｃａｄｅｍｉａ）、オルニチントランスカルバミラーゼ欠損症（ＯＴＣ）、パーキンソン病、フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）、脊髄性筋萎縮症、麻痺、ウィルソン病、てんかん、ポンペ病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、テイ−サックス病、高シュウ酸尿症（ＰＨ−１）、脊髄小脳失調症１型（ＳＣＡ−１）、ＳＣＡ−３、ｕ−ジストロフィン、ゴーシェＩＩ又はＩＩＩ型、不整脈源性右室心筋症（ＡＲＶＣ）、ファブリー病、家族性地中海熱（ＦＭＦ）、プロピオン酸血症（ｐｒｏｐｒｉｏｎｉｃ  ａｃｉｄｅｍｉａ）、脆弱Ｘ症候群、レット症候群（ｓｕｎｄｒｏｍｅ）、ニーマン−ピック、及びクラッベ病が含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００８９】
[0101]一部の実施形態において、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターは、リソソーム蓄積障害、代謝障害、及び凝固障害の治療のためのものであってもよい。
【００９０】
[0102]リソソーム蓄積障害は、体細胞におけるある特定の脂質（脂肪）又は炭水化物（糖）を分解する特異的酵素の欠如により生じることがある。身体は、再利用のために酵素によって標的にされる脂肪又は炭水化物を分解し得ないため、これら脂肪又は炭水化物は、細胞リソソームに蓄積することがあり、正常機能を妨げ、リソソーム蓄積障害をもたらす。リソソーム障害には、ファーバー病、クラッベ病（幼児期又は晩期発症）、ガラクトシアリドーシス、ファブリー病（アルファ−ガラクトシダーゼＡ）、シンドラー病（アルファ−ガラクトシダーゼＢ）、ベータ−ガラクトシダーゼ／ＧＭ１ガングリオシドーシス、ＧＭ２ガングリオシドーシス、ゴーシェ病Ｉ、ＩＩ、及びＩＩＩ型、スフィンゴミエリナーゼ、リソソーム酸性リパーゼ欠損症、ニーマン−ピック病Ａ及びＢ型、スルファチドーシス、サポシンＢ欠損症、多重スルファターゼ欠損症、ムコ多糖症Ｉ型（ハーラー／シャイエ）、ＩＩ型（ハンター）、ＩＩＩ型（サンフィリポ）、ＩＶ型（モルキオ）、ＶＩ型（マロトー）、ＶＩＩ型（スライ）、及びＩＸ型（ヒアルロニダーゼ欠損症）、ムコリピドーシスＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、及びＩＶ型、ニーマン−ピック病、神経セロイドリポフスチン症１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０型、ウォルマン病、アルファ−マンノシドーシス、ベータ−マンノシドーシス、アスパルチルグルコサミン尿症、フコシドーシス、リソソーム輸送疾患、シスチノーシス、濃化異骨症、サラ病、幼児期遊離シアル酸蓄積症、ポンペ病などの糖原病、並びにダノン病、コレステロールエステル蓄積症が含まれてもよい。
【００９１】
[0103]代謝障害には、オルニチントランスカルバミラーゼ欠損症、フェニルケトン尿症、プロピオン酸血症、メチルマロン酸血症、原発性高シュウ酸尿症が含まれてもよい。
【００９２】
[0104]凝固障害には、凝固因子ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、ＩＸ及びＸ、ＸＩ、Ｖ、ＸＩＩ、ＩＩ、フォン・ヴィレブランド因子の欠損症、ＦＶ／ＦＶＩＩＩ複合欠乏症、サラセミアが含まれてもよい。
【００９３】
[0105]例えば、一部の実施形態において、血友病Ａ又はＢは、飽和剤（例えば、脂質に基づくエマルション）を対象に投与し、ＦＩＸ又はそのバリアントをコードするＡＡＶ遺伝子療法ベクターをその後投与することによる開示される方法を使用して治療され得る。一部の実施形態において、ＡＡＶ遺伝子療法ベクターはＡＡＶ５血清型であってもよく、治療用遺伝子（すなわち、ＦＩＸをコードする遺伝子）は、肝臓特異的プロモーター（例えば、ＬＰ−１）の制御下にあってもよい。さらには、一部の実施形態において、治療用ＦＩＸタンパク質は、とりわけ［参考文献のとりわけＳｉｍｉｏｎｉ、Ｂｌｕｔｓｐｅｎｄｅ、及び他の数人、Ｓｐａｒｋ］に記載されているものなど、１つ又は複数の挿入、欠失、又は置換を含んでもよい。
【実施例】
【００９４】
[0106]実施例１−ＡＡＶ遺伝子療法ベクターで処理された動物におけるイントラリピッド前処理の分析
本実施例では、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）遺伝子療法で処理された動物における、イントラリピッド前処理の効果を分析した。具体的には、肝臓におけるＡＡＶベクター形質導入効力及びその後に導入遺伝子発現に対する、ＦＤＡ認可栄養補給剤であるイントラリピッド２０％前処理の効果を調べた。加えて、ＡＡＶ生体内分布及び抗ＡＡＶ免疫応答に対する、イントラリピッド２０％前処理の効果を分析した。
【００９５】
実験のセットアップ：抗ＡＡＶ血清型５中和抗体（ＮＡＢ）の存在について検査で陰性を示した非ヒト霊長類（ＮＨＰ、ｎ＝２）に、９．７×１０１２ｇｃ／ｋｇの用量のＡＡＶ遺伝子療法ベクター（例えば、ＡＡＶ５（１６０）−ＬＰ１−ｈＦＩＸ）の静脈内投与の１時間前に、臨床用量（すなわち、２ｇ／ｋｇ）のイントラリピッド２０％のボーラスを静脈内注射した（イントラリピッド前処理動物と称される）。対照群（ｎ＝２）には、イントラリピッド２０％前処理なしで、９．７×１０１２ｇｃ／ｋｇの用量のＡＡＶ５（１６０）−ＬＰ１−ｈＦＩＸを注射した。動物を、屠殺前に８週間モニターした。血液サンプルを、ＡＡＶ投与後１時間、４時間、８時間、２４時間、４日の時点、及び週１回採取した。さらなる分析のために、屠殺時に組織を回収した。陰性対照は、任意の処理前に採取された血液／血漿サンプル、及び対照動物からの組織（事前の内部調査）であった。
【００９６】
【表１】
2021506751.tif 000002
【００９７】
[0107]結果
形質導入効力：肝臓における導入遺伝子タンパク質発現及びベクターＤＮＡコピー
ＡＡＶ５−ＬＰ１−ｈＦＩＸによる肝臓形質導入の効力に対する、イントラリピッド２０％での前処理の効果を判定するために、ｈＦＩＸ導入遺伝子発現のレベルをサル血漿サンプルにおいて分析した。ｈＦＩＸタンパク質レベルを、ＡＡＶ５−ＬＰ１−ｈＦＩＸ投与の４、８、１４、２１、２８、４２、及び５６後に回収された血漿サンプルにおいてＥＬＩＳＡによって測定した。加えて、肝臓組織におけるＡＡＶベクターＤＮＡコピー数を、屠殺時に定量ポリメラーゼ連鎖反応（ＱＰＣＲ）によって判定した。
【００９８】
[0108]図１Ａに示されるように、対照群（１００１及び１００２を参照されたい）と比較した場合、イントラリピッドボーラス後にＡＡＶ５−ｈＦＩＸを注射された動物（２００１及び２００２を参照されたい）において、導入遺伝子発現のレベルの増加が観察され、３．４倍の平均増加であった。したがって、図１Ｂに示されるように、ベクターＤＮＡコピー数は、対照群においてよりもイントラリピッドで前処理された動物において高く、２．６倍の平均増加であった。
【００９９】
[0109]全体として、得られたデータは、ＡＡＶ遺伝子療法による肝臓形質導入効力の向上、及びそれに続く、イントラリピッド２０％で前処理された動物における循環導入遺伝子タンパク質のレベルの増加を示した。
【０１００】
[0110]形質導入効力及び空間分布（ＦＩＳＨ）
肝臓組織におけるＡＡＶ遺伝子療法の形質導入効力及び空間分布をさらに調べるために、ＡＡＶベクターＤＮＡ及び導入遺伝子ＲＮＡの存在を、肝臓組織サンプルにおいて蛍光インサイチューハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）によって検出した。ＡＡＶ−ｈＦＩＸベクターＤＮＡ及びｈＦＩＸ  ｍＲＮＡの両方にハイブリダイズするプローブを用いてアッセイを実施した。組織及び手順の品質を査定するために、肝臓陽性（アルファ１アンチトリプシン、ｈＡＡＴ）及び陰性（ＤａｐＢ）対照プローブをアッセイにおいて使用した。プローブに加えて、組織をＤＡＰＩで染色して細胞核を可視化し、グルタミンシンテターゼ（ＧＳ）に対する抗体で染色して中心静脈を可視化した。
【０１０１】
[0111]得られた画像を画像分析ソフトウェア（Ｈａｌｏ、ＩｎｄｉｃａｌＬａｂ）で分析した。取得された画像から、各肝臓組織由来の平均４０００個の細胞を分析した。分析は、ＡＡＶベクターＤＮＡ及び導入遺伝子ＲＮＡに対して陽性の細胞のパーセンテージ、並びにＡＡＶベクターＤＮＡ及び導入遺伝子ＲＮＡに対して陽性の細胞の採点に基づいた（それぞれ図２Ａ及び２Ｂを参照されたい）。プローブに対して陽性の細胞は、平均陽性シグナル面積［μｍ２］と細胞内陽性シグナルの平均強度との組み合わせに基づいて、低い（１＋）、中間（２＋）、強い（３＋）、又は非常に強い（４＋）に採点された。加えて、細胞染色の強度及び染色された細胞のパーセンテージの両方に基づいて０〜３００のスコアを算出する半定量スコアシステムである、ＡＡＶベクターＤＮＡ及び導入遺伝子ＲＮＡに対して陽性の細胞についてのＨ−スコアを、各動物に対して判定した（図２Ｃを参照されたい）。
【０１０２】
[0112]図２Ａ〜２Ｃに示されるように、対照動物と比較した場合、イントラリピッド２０％での前処理後、有意により多くの数の肝臓細胞がＡＡＶ５によって形質導入された。動物群あたりの陽性細胞の平均数は、＋１、＋２、＋３、＋４カテゴリーに分けられ、Ｈスコア値を説明することが見出された。Ｈスコアは、癌診断において使用される組織化学的データ分析法である（Ｈｉｒｓｃｈら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２１：３７９８〜３８０７ページ、２００３、及びＪｏｈｎら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２８：Ｓ１４〜Ｓ２３ページ、２００９）。Ｈスコアを、より強力に染色された細胞により大きな重みを付すアルゴリズムに適用し、そのアルゴリズムを、採点されたＧＦＰ導入遺伝子発現に適用した。
【０１０３】
[0113]ＡＡＶベクターＤＮＡ及び導入遺伝子ＲＮＡに対して陽性の細胞のパーセンテージは、イントラリピッド前処理動物において平均で２．５５倍（全体のパーセンテージ）又は３．２倍（Ｈスコア）高かった。これらの結果によれば、Ｈスコアは、全体の細胞パーセンテージよりも、測定された循環ｈＦＩＸのレベルをより精確に反映した。
【０１０４】
[0114]これらの実験は、肝臓組織におけるＡＡＶ５−ＬＰ１−ｈＦＩＸ空間分布に対する、イントラリピッド前処理の有益な効果も示している（図３Ａ〜３Ｄ）。ＡＡＶベクターＤＮＡ／導入遺伝子ｈＦＩＸ  ｍＲＮＡの存在を、ＡＡＶ−ｈＦＩＸベクターＤＮＡ及びｈＦＩＸ  ｍＲＮＡの両方にハイブリダイズするプローブを用いた蛍光インサイチューハイブリダイゼーションによって分析した。得られた画像を画像分析ソフトウェア（Ｈａｌｏ、ＩｎｄｉｃａｌＬａｂ）で分析し、空間分布を一般的肝臓形態との関係で判定した。
【０１０５】
[0115]ＡＡＶベクターＤＮＡ／ｈＦＩＸ  ｍＲＮＡの空間分布を、門脈（図３Ａ及び３Ｃ）及び中心静脈（図３Ｂ及び３Ｄ）との関係で分析した。ＡＡＶ５−ＬＰ１−ｈＦＩＸの静脈内注射の後、ＡＡＶベクターＤＮＡ／ｈＦＩＸ  ｍＲＮＡは、肝臓組織への非常に限定された広がりを有して、門脈周辺にほとんど検出された（図３Ａ及び３Ｂ、対照動物ＮＨＰ  １００２）。興味深いことに、イントラリピッド２０％前処理の後、肝臓組織におけるＡＡＶベクターＤＮＡ／ｈＦＩＸ  ｍＲＮＡの拡散は増加した（図３Ｃ及び３Ｄ、イントラリピッド前処理動物ＮＨＰ  ２００２）。さらに、門脈及び中心静脈の両方の周辺に位置することが見出されたＡＡＶベクターＤＮＡ／ｈＦＩＸ  ｍＲＮＡは、当該組織における拡散の増加を示した（図３Ｃ及び３Ｄ、イントラリピッド前処理動物ＮＨＰ  ２００２）。
【０１０６】
[0116]肝臓組織におけるＡＡＶ５−ＬＰ１−ｈＦＩＸ空間分布に対する、イントラリピッド前処理の効果についてのグラフ表示が、図４Ａ及び４Ｂに示されている。図４Ａは、対照動物（１００２）及びイントラリピッド２０％前処理動物（２００２）に関して、門脈までの距離（例えば、中心静脈から門脈までの距離）との関係における、平均細胞陽性シグナル（パーセンテージ／強度／面積：Ｈスコア値）を示している。図４Ｂは、対照動物（１００２）及びイントラリピッド２０で前処理された動物（２００２）に関して、中心静脈までの距離（例えば、門脈から中心静脈までの距離）との関係における、平均細胞陽性シグナル（パーセンテージ／強度／面積：Ｈスコア値）を示している。
【０１０７】
[0117]液性免疫応答：ＡＡＶ５ウイルスカプシドタンパク質に対して生成される抗体のレベルに対するイントラリピッドの潜在的効果を判定するために、全抗体及び中和抗体に対するアッセイを、ベースライン時及び実験の経過にわたって得られたサル血漿サンプルに対して実施した（図５Ａ及び５Ｂ）。対照動物（１００１及び１００２）及びイントラリピッド前処理動物（２００１及び２００２）におけるＡＡＶ５−ＬＰ１−ＦＩＸを用いた投与の後、抗ＡＡＶ全抗体（図５Ａ）及び抗ＡＡＶ中和抗体（図５Ｂ）のレベルを測定した。図５Ａ及び５Ｂに示されるように、抗ＡＡＶ全抗体及び中和抗体は、イントラリピッドでの前処理にかかわらず、注射されたすべての動物に関して同程度に増加した。
【０１０８】
[0118]抗ｈＦＩＸ抗体の存在も、ベースライン時及びＡＡＶ５−ＬＰ１−ＦＩＸの投与の５６日後に得られた血漿サンプルにおいてモニターした。ＩｇＧを枯渇したサル血清（カニクイザル血清）を陰性対照として使用した。抗ｈＦＩＸ抗体の存在に対して陽性であることが既知のサル血漿サンプルを、アッセイにおける陽性対照として使用した。抗ｈＦＩＸ全抗体のレベルによって測定される液性免疫応答は、対照動物（１００１及び１００２）又はイントラリピッドで前処理された動物（２００１及び２００２）において、導入遺伝子タンパク質に対して検出され得なかった（図５Ｃ及び５Ｄ）。図において言及される１：２５及び１：５０は、使用された希釈係数を指す。血漿サンプルを２つの異なる希釈で試験し、同じ結果であった。
【０１０９】
[0119]生体内分布：ＡＡＶオフターゲットに対するイントラリピッド２０％前処理の潜在的影響を、副腎及び脾臓におけるＡＡＶベクターＤＮＡの存在を検出することによって査定した。屠殺時に組織を回収した。ベクターＤＮＡレベルをＱＰＣＲによって測定した。
【０１１０】
[0120]図６に示されるように、イントラリピッド２０％での前処理は、肝臓においてだけでなく、それもまたＲＥＳ系の一部である脾臓においてもＡＡＶ形質導入を増加させた。副腎におけるＡＡＶ形質導入に対するイントラリピッド２０％の明らかな効果は観察されなかった。
【０１１１】
[0121]シェディング：投与前に、並びにＡＡＶ投与後１、４、８、２４時間、並びに８、１４、２１、２８、４２、及び５６日の時点で回収された血漿サンプルにおいて、血中におけるＡＡＶベクターＤＮＡの持続性をＱＰＣＲによって経時的にモニターした。図７に示されるように、ＡＡＶベクターＤＮＡのレベルは経時的に減少し、最終的にはＡＡＶ注射の２８〜５６日後に基礎レベル（例えば、定量の限界）まで戻った。ＡＡＶ注射後の最初の８時間の間に、血中におけるＡＡＶベクターＤＮＡのレベルは、対照動物（群１、１００１及び１００２）においてよりもイントラリピッドで前処理された動物（群２、２００１及び２００２）において高い傾向があり、この傾向は、ＲＥＳ臓器からの（とりわけ肝臓における）血液クリアランス機能に対するイントラリピッドの効果を説明することができた。
【０１１２】
[0122]イントラリピッド処理後の脂質クリアランス：血中におけるイントラリピッドのクリアランスを、イントラリピッドボーラスを静脈内注射された動物において経時的にモニターした。リードアウトとして、投与前に、並びにＡＡＶ投与後１、４、８、２４時間、並びに８及び２８日の時点で得られた血漿サンプルにおいて、トリグリセリドレベルを測定した。図８Ａに示されるように、トリグリセリドは、イントラリピッドボーラス注射後５時間以内に正常値の範囲のレベル（Ｘｉｅ  Ｌら、２０１３）に戻った。
【０１１３】
[0123]結論：全体として、本実施例から得られた結果は以下のことを示した。
【０１１４】
ＡＡＶ５−ＬＰ１−ｈＦＩＸ（９．７Ｅ１２ｇｃ／ｋｇ）を用いた注射前の２ｇ／ｋｇのボーラス用量のイントラリピッドでの処理の後、ＡＡＶ肝臓形質導入は増加した。
【０１１５】
肝臓組織におけるＡＡＶベクターＤＮＡレベル並びに血漿における導入遺伝子タンパク質発現レベルは、対照動物と比較して、イントラリピッド２０％で処理された動物において高かった。
【０１１６】
イントラリピッド２０％前処理の後、肝臓組織におけるＡＡＶベクターのより良好な広がり及び空間分布が観察された。組織におけるＡＡＶベクターＤＮＡ／ｈＦＩＸ  ｍＲＮＡの拡散は、門脈及び中心静脈の両方の周辺に見出される空間位置を有して増加した。
【０１１７】
ＡＡＶ形質導入は、肝臓においてだけでなく、ＲＥＳ系の一部である脾臓においても増加した。
【０１１８】
対照動物とイントラリピッド前処理動物との間で、ＡＡＶ５ウイルスカプシドタンパク質に対する液性応答の差は観察されなかった。そして、対照動物及びイントラリピッド前処理動物において、導入遺伝子タンパク質に対して液性応答は検出されなかった。
【０１１９】
血中におけるイントラリピッド２０％のクリアランスは、イントラリピッドボーラス注射後５時間以内に生じ、このクリアランスは優れた安全性プロファイルと適合する。
【０１２０】
ＡＡＶ注射後の最初の８時間の間に、血中におけるＡＡＶベクターＤＮＡのレベルは、対照動物と比較して、イントラリピッドで前処理された動物において高い傾向があり、この傾向は、ＲＥＳ臓器からの（とりわけ肝臓における）血液クリアランス機能に対するイントラリピッドの効果を説明することができた。
[0124]実施例２−形質導入効率に対するＡＡＶ遺伝子療法ベクター投薬量の分析
本実施例では、ＡＡＶ遺伝子療法ベクター用量と形質導入効力との間の相関を調べる。
【０１２１】
[0125]実験のセットアップ：抗ＡＡＶ血清型５中和抗体の存在について検査で陰性を示した非ヒト霊長類（ＮＨＰ、ｎ＝３）に、５×１０１２ｇｃ／ｋｇ、１×１０１３ｇｃ／ｋｇ、又は５×１０１３ｇｃ／ｋｇの用量（それぞれ群１、２、及び３と称される）のＡＡＶ遺伝子療法ベクター（例えば、ＡＡＶ５（１６０）−ＬＰ１−ｈＦＩＸ）の投与の１時間前に、臨床用量（２ｇ／ｋｇ）のイントラリピッド２０％のボーラスを静脈内注射する。対照群（ｎ＝３）には、先行処理なしで、５×１０１２ｇｃ／ｋｇ、１×１０１３ｇｃ／ｋｇ、又は５×１０１３ｇｃ／ｋｇの用量（それぞれ群４、５、及び６と称される）のＡＡＶ５（１６０）−ＬＰ１−ｈＦＩＸを注射する。動物を、屠殺前に８週間モニターする。
【０１２２】
【表２】
2021506751.tif 000003
【０１２３】
[0126]陰性対照は、任意の処理前に採取された血液／血漿サンプル、及びＰＢＳ動物からの組織（事前の調査）である。
【０１２４】
[0127]分析
血液サンプルを週１回で（及び／又は下に記載される時点で）採取し、組織を屠殺時に回収する。以下のパラメーターを、実施例１に記載される方法を使用して、又は当技術分野において公知の標準的方法を使用してモニターする。
【０１２５】
循環ｈＦＩＸのレベルをＥＬＩＳＡによって測定する（時点：処理前、並びに４、８、１４、２１、２８、４２、及び５６日目）。
【０１２６】
ＡＡＶ５に対する中和／全抗体のレベルを、中和抗体（ＮＡＢ）アッセイ及びＥＬＩＳＡによって測定する（時点：処理前、並びに４、８、１４、２１、２８、４２、及び５６日目）。
【０１２７】
精製末梢血リンパ球ＥＬＩｓｐｏｔによる、ベクター投与後にＡＡＶベクターカプシドに対して誘導される潜在的細胞性免疫応答の評価（時点：処理前、並びに１、２、４、及び８週目）。
【０１２８】
屠殺時の組織における、とりわけ、肝臓（８つの肝葉）、脾臓、リンパ節（腸間膜、腸骨、鼠径部）、腎臓、肺、十二指腸（パイエル板）など、ＲＥＳ系と関連した臓器における生体内分布。ＡＡＶベクターＤＮＡ及び導入遺伝子ｍＲＮＡのレベルをｑＰＣＲ、ＦＩＳＨ、ＩＨＣ、及び組織学により検出することによって、副腎及び心臓を調べる。
【０１２９】
血液／血漿及び尿におけるＡＡＶベクターＤＮＡのシェディングをｑＰＣＲによって測定する（時点：処理前、並びに投薬後１、４、８、及び２４時間、並びに４、８、１４、２１、２８、４２、及び５６日目）。
【０１３０】
血液／血漿におけるトリグリセリドレベルを測定することによって、血液／血漿におけるイントラリピッドのクリアランスを判定する（時点：処理前、並びに投薬後１、４、８、及び２４時間、並びに４、８、１４、２１、２８、４２、及び５６日目）。
【０１３１】
赤血球数、ヘモグロビン濃度、ヘマトクリット、平均赤血球容積、赤血球分布幅、平均赤血球ヘモグロビン濃度、平均赤血球ヘモグロビン量（ｈｅｍｏｇｌｏｂｕｌｉｎ）、網状赤血球パーセント、血小板数、白血球数、好中球数（絶対数）、リンパ球数（絶対数）、単球数（絶対数）、好酸球数（絶対数）、好塩基球数（絶対数）、及び大型非染色球（絶対数）など、血液学パラメーターを測定する。
【０１３２】
アラニンアミノトランスフェラーゼ、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、アルカリホスファターゼ、ガンマ−グルタミルトランスフェラーゼ、クレアチンキナーゼ、総ビリルビン（又は、総ビリルビンが＞１７．１μｍｏｌ／Ｌである場合には、間接及び直接ビリルビン）、尿素、クレアチン、カルシウム、ホスフェート、総タンパク質、アルブミン、グロブリン、アルブミン／グロブリン比、グルコース、コレステロール、トリグリセリド、ナトリウム、カリウム、塩化物、及びサンプル品質など、臨床化学パラメーターを測定する。
【０１３３】
[0128]実施例３−ＡＡＶ遺伝子療法ベクター形質導入効率に対するイントラリピッド投薬量の分析
本実施例では、イントラリピッド用量とＡＡＶ遺伝子療法ベクター形質導入効力との間の相関を調べる。
【０１３４】
[0129]実験のセットアップ：抗ＡＡＶ血清型５中和抗体の存在について検査で陰性を示した非ヒト霊長類（ＮＨＰ、ｎ＝３）に、１×１０１３ｇｃ／ｋｇの用量のＡＡＶ遺伝子療法ベクター（例えば、ＡＡＶ５（１６０）−ＬＰ１−ｈＦＩＸ）の投与の１時間前に、２ｇ／ｋｇ又は４ｇ／ｋｇのいずれかの臨床用量のイントラリピッド２０％のボーラスを静脈内注射する（それぞれ群１及び２と称される）。対照群（ｎ＝３）には、先行イントラリピッド処理なしで、１×１０１３ｇｃ／ｋｇの用量のＡＡＶ５（１６０）−ＬＰ１−ｈＦＩＸを注射する（群３と称される）。動物を、屠殺前に８週間モニターする。
【０１３５】
【表３】
2021506751.tif 000004
【０１３６】
[0130]陰性対照は、任意の処理前に採取された血液／血漿サンプル、及びＰＢＳ動物からの組織（事前の調査）である。
【０１３７】
[0131]分析
血液サンプルを週１回で（及び／又は下に記載される時点で）採取し、組織を屠殺時に回収する。以下のパラメーターを、実施例１に記載される方法を使用して、又は当技術分野において公知の標準的方法を使用してモニターする。
【０１３８】
循環ｈＦＩＸのレベルをＥＬＩＳＡによって測定する（時点：処理前、並びに４、８、１４、２１、２８、４２、及び５６日目）。
【０１３９】
ＡＡＶ５に対する中和／全抗体のレベルを、中和抗体（ＮＡＢ）アッセイ及びＥＬＩＳＡによって測定する（時点：処理前、並びに４、８、１４、２１、２８、４２、及び５６日目）。
【０１４０】
精製末梢血リンパ球ＥＬＩｓｐｏｔによる、ベクター投与後にＡＡＶベクターカプシドに対して誘導される潜在的細胞性免疫応答の評価（時点：処理前、並びに１、２、４、及び８週目）。
【０１４１】
屠殺時の組織における、とりわけ、肝臓（８つの肝葉）、脾臓、リンパ節（腸間膜、腸骨、鼠径部）、腎臓、肺、十二指腸（パイエル板）など、ＲＥＳ系と関連した臓器における生体内分布。ＡＡＶベクターＤＮＡ及び導入遺伝子ｍＲＮＡのレベルをｑＰＣＲ、ＦＩＳＨ、ＩＨＣ、及び組織学により検出することによって、副腎及び心臓を調べる。
【０１４２】
血液／血漿及び尿におけるＡＡＶベクターＤＮＡのシェディングをｑＰＣＲによって測定する（時点：処理前、並びに投薬後１、４、８、及び２４時間、並びに４、８、１４、２１、２８、４２、及び５６日目）。
【０１４３】
血液／血漿におけるトリグリセリドレベルを測定することによって、血液／血漿におけるイントラリピッドのクリアランスを判定する（時点：処理前、並びに投薬後１、４、８、及び２４時間、並びに４、８、１４、２１、２８、４２、及び５６日目）。
【０１４４】
赤血球数、ヘモグロビン濃度、ヘマトクリット、平均赤血球容積、赤血球分布幅、平均赤血球ヘモグロビン濃度、平均赤血球ヘモグロビン量、網状赤血球パーセント、血小板数、白血球数、好中球数（絶対数）、リンパ球数（絶対数）、単球数（絶対数）、好酸球数（絶対数）、好塩基球数（絶対数）、及び大型非染色球（絶対数）など、血液学パラメーターを測定する。
【０１４５】
アラニンアミノトランスフェラーゼ、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、アルカリホスファターゼ、ガンマ−グルタミルトランスフェラーゼ、クレアチンキナーゼ、総ビリルビン（又は、総ビリルビンが＞１７．１μｍｏｌ／Ｌである場合には、間接及び直接ビリルビン）、尿素、クレアチン、カルシウム、ホスフェート、総タンパク質、アルブミン、グロブリン、アルブミン／グロブリン比、グルコース、コレステロール、トリグリセリド、ナトリウム、カリウム、塩化物、及びサンプル品質など、臨床化学パラメーターを測定する。
【０１４６】
〔条項〕
１．
飽和剤及びアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）遺伝子療法ベクターを疾患に罹患しているヒト対象に投与するステップであって、前記飽和剤が細網内皮系（ＲＥＳ）の１種又は複数種の細胞によって取り込まれるステップを含む、ヒト対象における疾患を治療する方法。
２．
ＲＥＳの前記１種又は複数種の細胞が、クッパー細胞、類洞内皮細胞（ＳＥＣ）、及び肝星細胞（ＨＳＣ）から選択される、条項１に記載の方法。
３．
ＲＥＳの前記１種又は複数種の細胞がクッパー細胞である、条項１に記載の方法。
４．
ＲＥＳの前記１種又は複数種の細胞が類洞内皮細胞（ＳＥＣ）である、条項１に記載の方法。
５．
ＲＥＳの前記１種又は複数種の細胞が肝星細胞（ＨＳＣ）である、条項１に記載の方法。
６．
ＲＥＳの前記１種又は複数種の細胞が、クッパー細胞、類洞内皮細胞（ＳＥＣ）、及び肝星細胞（ＨＳＣ）から選択される２種又はそれを上回る種類の細胞である、条項１に記載の方法。
７．
前記２種又はそれを上回る種類の細胞がクッパー細胞及びＳＥＣである、条項６に記載の方法。
８．
前記２種又はそれを上回る種類の細胞がクッパー細胞及びＨＳＣである、条項６に記載の方法。
９．
前記２種又はそれを上回る種類の細胞がＳＥＣ及びＨＳＣである、条項６に記載の方法。
１０．
ＲＥＳの前記１種又は複数種の細胞が多数の細胞を含む、条項１に記載の方法。
１１．
前記多数の細胞の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又はそれを上回る割合はクッパー細胞である、条項１０に記載の方法。
１２．
前記多数の細胞の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又はそれを上回る割合は類洞内皮細胞（ＳＥＣ）である、条項１０に記載の方法。
１３．
前記多数の細胞の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又はそれを上回る割合は肝星細胞（ＨＳＣ）である、条項１０に記載の方法。
１４．
前記飽和剤が、炭水化物、アミノ酸、脂質、ビタミン、食物ミネラル、又はその任意の組み合わせから選択される１種又は複数種の栄養素を含む、条項１に記載の方法。
１５．
前記飽和剤が、トリグリセリド、ステロイド、リン脂質、又はその任意の組み合わせから選択される１種又は複数種の脂質を含む、条項１に記載の方法。
１６．
前記リン脂質が、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、レシチン、プラズマローゲン、及びスフィンゴミエリンから選択される、条項１５に記載の方法。
１７．
前記飽和剤がリン脂質を含む、条項１に記載の方法。
１８．
前記リン脂質がホスファチジルコリンである、条項１７に記載の方法。
１９．
前記ホスファチジルコリンが、パルミトイル−オレイル−ｓｎ−ホスファチジルコリン、１−オレオイル−２−パルミトイル−ホスファチジルコリン、及びＬ−α−ホスファチジルコリンから選択される、条項１８に記載の方法。
２０．
前記ホスファチジルコリンがＬ−α−ホスファチジルコリンではない、条項１８に記載の方法。
２１．
前記飽和剤が、完全非経口栄養（ＴＰＮ）補給剤、末梢静脈栄養（ＰＰＮ）補給剤、アミノシン（登録商標）、アミノシン（登録商標）−ＨＢＣ、アミノシン（登録商標）−ＨＦ、アミノシン（登録商標）−ＲＦ、ブランチアミン（登録商標）、フレアミンＨＢＣ（登録商標）、フレアミン（登録商標）ＩＩＩ、ヘパタミン（登録商標）、カビヴェン（登録商標）、ペリカビヴェン（登録商標）、ノバミン（登録商標）、プレマゾール、プロカラミン（登録商標）、プロゾール、レナミン（登録商標）、トロファミン（登録商標）、又はその任意の組み合わせから選択される栄養補給剤を含む、条項１に記載の方法。
２２．
前記飽和剤がエマルションを含む、条項１に記載の方法。
２３．
前記エマルションが、大豆油、植物油、魚油、リン脂質、及びグリセロール、又はその任意の組み合わせを含む、条項２２に記載の方法。
２４．
前記エマルションが、０．１μｍよりも大きなサイズを有する液滴を含む、条項２２に記載の方法。
２５．
前記エマルションが、２μｍよりも小さなサイズを有する液滴を含む、条項２２に記載の方法。
２６．
前記エマルションが、０．１μｍ〜２μｍのサイズを有する液滴を含む、条項２２に記載の方法。
２７．
前記エマルションが脂質エマルションを含む、条項２２に記載の方法。
２８．
前記エマルションが脂肪エマルションを含む、条項２２に記載の方法。
２９．
前記脂肪エマルションが、イントラリピッド（登録商標）１０％、イントラリピッド（登録商標）２０％、及びイントラリピッド（登録商標）３０％から選択される、条項２８に記載の方法。
３０．
前記脂質エマルションがクリノリピッドである、条項２８２に記載の方法。
３１．
前記脂肪エマルションが、リポシン（登録商標）、リポシン（登録商標）ＩＩ、及びリポシン（登録商標）ＩＩＩから選択される、条項２８に記載の方法。
３２．
前記飽和剤がナノ粒子を含む、条項１に記載の方法。
３３．
前記飽和剤がミクロスフェアである、条項１に記載の方法。
３４．
前記飽和剤が、ミセル、逆ミセル、及びリポソームから選択される、条項１に記載の方法。
３５．
前記リポソームがＬ−α−ホスファチジルコリンリポソームである、条項３４に記載の方法。
３６．
前記リポソームが、多層小胞（ＭＬＶ）、単層小胞、及び渦巻形小胞から選択される、条項３４に記載の方法。
３７．
前記単層小胞が小型単層小胞（ＳＵＶ）及び大型単層小胞（ＬＵＶ）から選択される、条項３６に記載の方法。
３８．
前記ナノ粒子が脂質ナノ粒子である、条項３２に記載の方法。
３９．
前記ナノ粒子が、エマルションにおける分散相又は懸濁液における内部相である、条項３２に記載の方法。
４０．
前記ナノ粒子がミセル溶液及び固体脂質ナノ粒子（ＳＬＮ）から選択される、条項３２に記載の方法。
４１．
前記ナノ粒子が０．２〜３００ｎｍの直径を有する、条項３２に記載の方法。
４２．
前記飽和剤が空のウイルスカプシドを含む、条項１に記載の方法。
４３．
前記飽和剤が空のウイルスカプシドではない、条項１に記載の方法。
４４．
前記空のウイルスカプシドがアデノ随伴ウイルスカプシドである、条項４２又は４３に記載の方法。
４５．
１種又は複数種の付加的な飽和剤をさらに含む、条項１に記載の方法。
４６．
条項１の飽和剤が、条項４５の１種又は複数種の付加的な飽和剤とは異なる、条項４５に記載の方法。
４７．
前記ＡＡＶが、ＡＡＶ血清型１（ＡＡＶ１）、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、及びＡＡＶ１１からなる群より選択される、条項１に記載の方法。
４８．
前記ＡＡＶがＡＡＶ１又はＡＡＶ５である、条項１に記載の方法。
４９．
前記ＡＡＶが、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、又はＡＡＶ１０である、条項１に記載の方法。
５０．
前記ＡＡＶはヒト細胞において発見された、条項１に記載の方法。
５１．
前記ＡＡＶは非ヒト霊長類細胞において発見された、条項１に記載の方法。
５２．
前記非ヒト霊長類細胞がアカゲザル細胞又はカニクイザル細胞から選択される、条項５１に記載の方法。
５３．
前記ＡＡＶが組み換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）である、条項１に記載の方法。
５４．
前記ｒＡＡＶがｒＡＡＶ２／５であり、前記ｒＡＡＶ２／５はＡＡＶ２及びＡＡＶ５の少なくとも一部分を含む、条項５３に記載の方法。
５５．
前記ＡＡＶがキメラＡＡＶ（ＡＡＶｃｈ）である、条項１に記載の方法。
５６．
前記ＡＡＶｃｈがキメラＡＡＶ血清型５（ＡＡＶ５ｃｈ）である、条項５５に記載の方法。
５７．
前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクターが治療用遺伝子又はそのフラグメントをコードする、条項１に記載の方法。
５８．
前記治療用遺伝子が、第ＩＸ因子（ＦＩＸ）、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）、アルファ−ガラクトシダーゼ、若しくはアルファ−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼ、又はその修飾型をコードする、条項５７に記載の方法。
５９．
前記治療用遺伝子が、アルファ−１アンチトリプシン（ＡＡＴ）、芳香族アミノ酸デカルボキシラーゼ（ＡＡＤＣ）、ＡＴＰａｓｅ筋小胞体／小胞体Ｃａ２＋輸送２（ＡＴＰ２Ａ２）、嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（ＣＴＦＲ）、グルタミン酸デカルボキシラーゼ６５ｋＤａタンパク質（ＧＡＤ６５）、グルタミン酸デカルボキシラーゼ６７ｋＤａタンパク質（ＧＡＤ６７）、リポタンパク質リパーゼ（ＬＰＬ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、ニュールツリン（ＮＴＮ）、ポルフォビリノーゲンデアミナーゼ（ＰＢＧＤ）、サルコグリカンアルファ（ＳＧＣＡ）、可溶性ｆｍｓ様チロシンキナーゼ−１（ｓＦＬＴ−１）、Ｓ１００カルシウム結合タンパク質Ａ１（Ｓ１００Ａ１）、生存運動ニューロン１（ＳＭＮ１）、トリペプチジルペプチダーゼ１（ＴＰＰ１）、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）−免疫グロブリン（ＩｇＧ１）Ｆｃ融合体（ＴＮＦＲ：Ｆｃ）、インターフェロンベータ（ＩＦＮ−β）、神経ペプチドＹ受容体Ｙ２、アルファグルコシダーゼ、Ｃ９ｏｒｆ７２、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）、ＣＦＴＲ、コンドロイチナーゼ、ＨｅｘＡ、又はＨｅｘＢをコードする、条項５７に記載の方法。
６０．
前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクターが、関心対象の遺伝子を標的にする低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ｍｉＲＮＡ、又はｓｈＲＮＡをコードするポリヌクレオチドを含む、条項１に記載の方法。
６１．
前記関心対象の遺伝子がＨｔｔ遺伝子である、条項６０に記載の方法。
６２．
前記治療用遺伝子が第ＩＸ因子（ＦＩＸ）タンパク質をコードする、条項５７に記載の方法。
６３．
前記治療用遺伝子がヒトタンパク質をコードする、条項５７に記載の方法。
６４．
前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクターが、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）をコードするポリヌクレオチドを含む、条項１に記載の方法。
６５．
前記ｍｉＲＮＡが関心対象の遺伝子をサイレンシングする、条項６４に記載の方法。
６６．
１種又は複数種の治療剤をさらに含む、条項１に記載の方法。
６７．
前記治療剤が、ウイルスに基づく療法、ウイルスに基づかない療法、及び遺伝子療法から選択される、条項６６に記載の方法。
６８．
前記治療剤がウイルスに基づく療法を含む、条項６６に記載の方法。
６９．
前記治療剤が、レンチウイルス、レトロウイルス、及びアデノウイルスに基づく療法から選択されるウイルスに基づく療法を含む、条項６６に記載の方法。
７０．
前記治療剤が付加的なＡＡＶ遺伝子療法ベクターを含む、条項６６に記載の方法。
７１．
前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクター及び前記付加的なＡＡＶ遺伝子療法が、異なる血清型のＡＡＶを含む、条項７０に記載の方法。
７２．
前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクター及び前記付加的なＡＡＶ遺伝子療法が、同じ血清型のＡＡＶを含む、条項７０に記載の方法。
７３．
前記飽和剤及び前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクターが逐次的に投与される、条項１に記載の方法。
７４．
前記飽和剤及び前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクターが同時に投与される、条項１に記載の方法。
７５．
前記飽和剤が、前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの投与前に投与される、条項１に記載の方法。
７６．
前記飽和剤が、前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの投与の少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、若しくは９０分前、又はそれを上回る時間前に投与される、条項１に記載の方法。
７７．
前記飽和剤が、前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの投与の０．５〜２４時間、０．５〜１２時間、又は１〜５時間前に投与される、条項１に記載の方法。
７８．
前記飽和剤及び前記１種又は複数種の付加的な飽和剤が同時に投与される、条項４５に記載の方法。
７９．
前記飽和剤及び前記１種又は複数種の付加的な飽和剤が逐次的に投与される、条項４５に記載の方法。
８０．
前記飽和剤が、前記１種又は複数種の付加的な飽和剤の投与前に投与される、条項４５に記載の方法。
８１．
前記飽和剤が、前記１種又は複数種の付加的な飽和剤の投与の少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、若しくは１５０分前、又はそれを上回る時間前に投与される、条項４５に記載の方法。
８２．
前記飽和剤が、前記１種又は複数種の付加的な飽和剤の投与の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、若しくは２４時間前、又はそれを上回る時間前に投与される、条項４５に記載の方法。
８３．
前記飽和剤が、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、若しくは１５０分間、又はそれを上回る時間投与される、条項１に記載の方法。
８４．
前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクターが、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、若しくは１５０分間、又はそれを上回る時間投与される、条項１に記載の方法。
８５．
前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクター及び前記１種又は複数種の治療剤が同時に投与される、条項６６に記載の方法。
８６．
前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクター及び前記１種又は複数種の治療剤が逐次的に投与される、条項６６に記載の方法。
８７．
前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクターが、前記１種又は複数種の治療剤の投与前に投与される、条項６６に記載の方法。
８８．
前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクターが、前記１種又は複数種の治療剤の投与の少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、若しくは１５０分前、又はそれを上回る時間前に投与される、条項６６に記載の方法。
８９．
前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクターが、前記１種又は複数種の治療剤の投与の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、若しくは２４時間前、又はそれを上回る時間前に投与される、条項６６に記載の方法。
９０．
前記１種又は複数種の付加的な飽和剤が、少なくとも１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、若しくは１５０分間、又はそれを上回る時間投与される、条項４５に記載の方法。
９１．
前記１種又は複数種の治療剤が、少なくとも１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、若しくは１５０分間、又はそれを上回る時間投与される、条項６６に記載の方法。
９２．
前記飽和剤が全身投与される、条項１に記載の方法。
９３．
前記全身投与が経腸投与を含む、条項９２に記載の方法。
９４．
経腸投与が、経口、舌下、及び直腸投与から選択される、条項９３に記載の方法。
９５．
前記全身投与が非経口投与を含む、条項９２に記載の方法。
９６．
非経口投与が、吸入、注射、及び経皮投与から選択される、条項９５に記載の方法。
９７．
注射による投与が、静脈内、筋肉内、皮下、動脈内、関節内、髄腔内、及び皮内から選択される、条項９６に記載の方法。
９８．
前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクターが全身投与される、条項１に記載の方法。
９９．
前記全身投与が非経口投与を含む、条項９８に記載の方法。
１００．
非経口投与が注射を含む、条項９９に記載の方法。
１０１．
注射による投与が、静脈内、筋肉内、皮下、動脈内、関節内、髄腔内、及び皮内から選択される、条項１００に記載の方法。
１０２．
前記飽和剤及び／又はＡＡＶ遺伝子療法ベクターが局所投与される、条項１に記載の方法。
１０３．
局所投与が、標的臓器において又は付近において前記飽和剤及び／又はＡＡＶ遺伝子療法ベクターを投与するステップを含む、条項１０２に記載の方法。
１０４．
投与が、静脈内、筋肉内、皮下、動脈内、関節内、髄腔内、又は皮内注射を含む、条項１０３に記載の方法。
１０５．
前記標的臓器が、肝臓、肺、脾臓、リンパ節、腎臓、小腸、又は脳である、条項１０３に記載の方法。
１０６．
前記飽和剤に対する投与の経路が、前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクターに対する投与の経路とは異なる、条項１に記載の方法。
１０７．
前記飽和剤に対する投与の経路が、前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクターに対する投与の経路と同じである、条項１に記載の方法。
１０８．
条項１の飽和剤に対する投与の経路が、条項４５の１種又は複数種の付加的な飽和剤に対する投与の経路とは異なる、条項４５に記載の方法。
１０９．
条項１の飽和剤に対する投与の経路が、条項４５の１種又は複数種の付加的な飽和剤に対する投与の経路と同じである、条項４５に記載の方法。
１１０．
前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクターに対する投与の経路が、前記１種又は複数種の治療剤に対する投与の経路とは異なる、条項６６に記載の方法。
１１１．
前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクターに対する投与の経路が、前記１種又は複数種の治療剤に対する投与の経路とは異なる、条項６６に記載の方法。
１１２．
前記飽和剤及び／又は治療剤を投与するステップが、臓器に前記飽和剤及び／又は治療剤を送達するステップを含む、条項１に記載の方法。
１１３．
前記臓器が、筋骨格系、消化器系、呼吸器系、泌尿器系、生殖器系、内分泌系、循環系、神経系、及び外皮系から選択される臓器系由来のものである、条項１１２に記載の方法。
１１４．
前記臓器が、脳、目、甲状腺、肺、心臓、膵臓、肝臓、脾臓、膀胱、胃、腎臓、小腸、リンパ節、及び前立腺から選択される、条項１１２に記載の方法。
１１５．
前記臓器が肝臓である、条項１１２に記載の方法。
１１６．
前記飽和剤及び前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクターが、肝臓の１種又は複数種の細胞に送達される、条項１１５に記載の方法。
１１７．
前記飽和剤が、ＲＥＳの前記１種又は複数種の細胞によって主として取り込まれる、条項１１６に記載の方法。
１１８．
前記飽和剤の少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、若しくは９５％、又はそれを上回る割合が、ＲＥＳの前記１種又は複数種の細胞によって取り込まれる、条項１１６に記載の方法。
１１９．
前記飽和剤の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％未満が、実質肝臓細胞によって取り込まれる、条項１１６に記載の方法。
１２０．
前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％未満が、ＲＥＳの前記１種又は複数種の細胞によって取り込まれる、条項１１６に記載の方法。
１２１．前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの少なくとも２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、若しくは９５％、又はそれを上回る割合が、実質肝臓細胞によって取り込まれる、条項１１６に記載の方法。
１２２．
前記飽和剤を主として取り込む肝臓の細胞が、前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクターを主として取り込む肝臓の細胞とは異なる、条項１１６に記載の方法。
１２３．
前記飽和剤が非実質肝臓細胞によって主として取り込まれ、前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクターが実質肝臓細胞によって主として取り込まれる、条項１１６に記載の方法。
１２４．
前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクターが、実質肝臓細胞の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、若しくは９５％、又はそれを上回る割合に形質導入する、条項１１５に記載の方法。
１２５．
前記飽和剤の投薬量が、０．５ｇ／ｋｇ、１ｇ／ｋｇ、１．５ｇ／ｋｇ、２ｇ／ｋｇ、２．５ｇ／ｋｇ、３ｇ／ｋｇ、３．５ｇ／ｋｇ、４ｇ／ｋｇ、４．５ｇ／ｋｇ、５ｇ／ｋｇ、５．５ｇ／ｋｇ、６ｇ／ｋｇ、６．５ｇ／ｋｇ、７ｇ／ｋｇ、７．５ｇ／ｋｇ、８ｇ／ｋｇ、８．５ｇ／ｋｇ、９ｇ／ｋｇ、９．５ｇ／ｋｇ、若しくは１０ｇ／ｋｇ、又はそれを上回る量である、条項１に記載の方法。
１２６．
前記飽和剤の投薬量が、５ｇ／ｋｇ、５．５ｇ／ｋｇ、６ｇ／ｋｇ、６．５ｇ／ｋｇ、７ｇ／ｋｇ、７．５ｇ／ｋｇ、８ｇ／ｋｇ、８．５ｇ／ｋｇ、９ｇ／ｋｇ、９．５ｇ／ｋｇ、又は１０ｇ／ｋｇ未満である、条項１に記載の方法。
１２７．
前記飽和剤の投薬量が０．５ｇ／ｋｇ〜５ｇ／ｋｇである、条項１に記載の方法。
１２８．
前記飽和剤の投薬量が２ｇ／ｋｇである、条項１に記載の方法。
１２９．
前記飽和剤の投薬量が４ｇ／ｋｇである、条項１に記載の方法。
１３０．
条項１の飽和剤の投薬量が、条項４５の１種又は複数種の付加的な飽和剤の投薬量とは異なる、条項４５に記載の方法。
１３１．
前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの投薬量が、１×１０１０ｇｃ／ｋｇ、５×１０１０ｇｃ／ｋｇ、１×１０１１ｇｃ／ｋｇ、５×１０１１ｇｃ／ｋｇ、１×１０１２ｇｃ／ｋｇ、２×１０１２ｇｃ／ｋｇ、３×１０１２ｇｃ／ｋｇ、４×１０１２ｇｃ／ｋｇ、５×１０１２ｇｃ／ｋｇ、６×１０１２ｇｃ／ｋｇ、７×１０１２ｇｃ／ｋｇ、８×１０１２ｇｃ／ｋｇ、９×１０１２ｇｃ／ｋｇ、１×１０１３ｇｃ／ｋｇ、５×１０１３ｇｃ／ｋｇ、１×１０１４ｇｃ／ｋｇ、５×１０１４ｇｃ／ｋｇ、若しくは１×１０１５ｇｃ／ｋｇ、又はそれを上回る量である、条項１に記載の方法。
１３２．
前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの投薬量が、１×１０１３ｇｃ／ｋｇ、５×１０１３ｇｃ／ｋｇ、１×１０１４ｇｃ／ｋｇ、５×１０１４ｇｃ／ｋｇ、又は１×１０１５ｇｃ／ｋｇ未満である、条項１に記載の方法。
１３３．
前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの投薬量が１×１０１２ｇｃ／ｋｇ〜１×１０１４ｇｃ／ｋｇである、条項１に記載の方法。
１３４．
前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの投薬量が５×１０１２ｇｃ／ｋｇ〜５×１０１３ｇｃ／ｋｇである、条項１に記載の方法。
１３５．
前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの投薬量が、４×１０１２ｇｃ／ｋｇ、４．５×１０１２ｇｃ／ｋｇ、５×１０１２ｇｃ／ｋｇ、５．５×１０１２ｇｃ／ｋｇ、６×１０１２ｇｃ／ｋｇ、６．５×１０１２ｇｃ／ｋｇ、７×１０１２ｇｃ／ｋｇ、７．５×１０１２ｇｃ／ｋｇ、８×１０１２ｇｃ／ｋｇ、８．５×１０１２ｇｃ／ｋｇ、８．６×１０１２ｇｃ／ｋｇ、８．７×１０１２ｇｃ／ｋｇ、８．８×１０１２ｇｃ／ｋｇ、８．９×１０１２ｇｃ／ｋｇ、９×１０１２ｇｃ／ｋｇ、９．１×１０１２ｇｃ／ｋｇ、９．２×１０１２ｇｃ／ｋｇ、９．３×１０１２ｇｃ／ｋｇ、９．４×１０１２ｇｃ／ｋｇ、９．５×１０１２ｇｃ／ｋｇ、９．６×１０１２ｇｃ／ｋｇ、９．７×１０１２ｇｃ／ｋｇ、９．８×１０１２ｇｃ／ｋｇ、９．９×１０１２ｇｃ／ｋｇ、１×１０１３ｇｃ／ｋｇ、１．５×１０１３ｇｃ／ｋｇ、２×１０１３ｇｃ／ｋｇ、２．５×１０１３ｇｃ／ｋｇ、３×１０１３ｇｃ／ｋｇ、３．５×１０１３ｇｃ／ｋｇ、４×１０１３ｇｃ／ｋｇ、４．５×１０１３ｇｃ／ｋｇ、５×１０１３ｇｃ／ｋｇ、５．５×１０１３ｇｃ／ｋｇ、若しくは６×１０１３ｇｃ／ｋｇ、又はそれを上回る量である、条項１に記載の方法。
１３６．
前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの投薬量が９．７×１０１２ｇｃ／ｋｇである、条項１に記載の方法。
１３７．
前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの投薬量が５×１０１３ｇｃ／ｋｇである、条項１に記載の方法。
１３８．
前記ＡＡＶ遺伝子療法ベクターの投薬量が、前記飽和剤の投薬量に反比例する、条項１に記載の方法。
１３９．
前記疾患が遺伝性障害である、条項１に記載の方法。
１４０．
前記遺伝性障害が遺伝子における変異を含む、条項１３９に記載の方法。
１４１．
前記遺伝性障害が代謝障害である、条項１３９に記載の方法。
１４２．
前記疾患が、急性間質性ポルフィリン症（ＡＩＰ）、加齢黄斑変性症、アルツハイマー病、関節炎、バッテン病、カナバン病、シトルリン血症１型、クリグラーナジャール、鬱血性心不全、嚢胞性線維症、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、脂質異常症、糖原病Ｉ型（ＧＳＤ−Ｉ）、血友病Ａ、血友病Ｂ、遺伝性肺気腫、ホモ接合型家族性高コレステロール血症（ＨｏＦＨ）、ハンチントン病（ＨＤ）、レーバー先天性黒内障、メチルマロン酸血症、オルニチントランスカルバミラーゼ欠損症（ＯＴＣ）、パーキンソン病、フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）、脊髄性筋萎縮症、麻痺、ウィルソン病、てんかん、ポンペ病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、テイ−サックス病、高シュウ酸尿症（ＰＨ−１）、脊髄小脳失調症１型（ＳＣＡ−１）、ＳＣＡ−３、ｕ−ジストロフィン、ゴーシェＩＩ又はＩＩＩ型、不整脈源性右室心筋症（ＡＲＶＣ）、ファブリー病、家族性地中海熱（ＦＭＦ）、プロピオン酸血症、脆弱Ｘ症候群、レット症候群、ニーマン−ピック、及びクラッベ病から選択される、条項１に記載の方法。
１４３．
前記疾患が、血友病Ａ、血友病Ｂ、ハンチントン病（ＨＤ）から選択される、条項１に記載の方法。
１４４．
疾患に罹患している対象に飽和剤及び遺伝子療法ベクターを投与するステップであって、前記飽和剤が細網内皮系（ＲＥＳ）の１種又は複数種の細胞によって取り込まれ、前記遺伝子療法ベクターがアデノウイルスに基づく療法を含まず、前記疾患が癌ではないステップを含む、疾患を治療する方法。
１４５．
疾患に罹患している対象に飽和剤及び治療剤を投与するステップであって、前記飽和剤が細網内皮系（ＲＥＳ）の１種又は複数種の細胞によって取り込まれ、前記治療剤がアデノ随伴ウイルス遺伝子療法ベクターを含み、疾患が癌ではないステップを含む、疾患を治療する方法。
１４６．
疾患に罹患している対象に飽和剤及びアデノ随伴ウイルス遺伝子療法ベクターを投与するステップであって、前記飽和剤が細網内皮系（ＲＥＳ）の１種又は複数種の細胞によって取り込まれるステップを含む、疾患を治療する方法。
１４７．
血友病に罹患している対象に飽和剤及びアデノ随伴ウイルス遺伝子療法ベクターを投与するステップであって、前記飽和剤が細網内皮系（ＲＥＳ）の１種又は複数種の細胞によって取り込まれるステップを含む、血友病を治療する方法。
１４８．
ハンチントン病に罹患している対象に飽和剤及びアデノ随伴ウイルス遺伝子療法ベクターを投与するステップであって、前記飽和剤が細網内皮系（ＲＥＳ）の１種又は複数種の細胞によって取り込まれるステップを含む、ハンチントン病を治療する方法。
１４９．
心血管疾患に罹患している対象に飽和剤及びアデノ随伴ウイルス遺伝子療法ベクターを投与するステップであって、前記飽和剤が細網内皮系（ＲＥＳ）の１種又は複数種の細胞によって取り込まれるステップを含む、心血管疾患を治療する方法。
１５０．
対象に飽和剤及びアデノ随伴ウイルス遺伝子療法ベクターを投与するステップであって、前記対象がヒトであり、前記飽和剤が細網内皮系（ＲＥＳ）の１種又は複数種の細胞によって取り込まれるステップを含む、肝臓における遺伝子の発現を増加させる方法。
１５１．
対象に飽和剤及びアデノ随伴ウイルス遺伝子療法ベクターを投与するステップであって、前記対象がヒトであり、前記飽和剤が細網内皮系（ＲＥＳ）の１種又は複数種の細胞によって取り込まれるステップを含む、実質肝臓細胞における遺伝子の発現を増加させる方法。
１５２．
飽和剤及びアデノ随伴ウイルス遺伝子療法ベクターを含むキットであって、前記飽和剤が細網内皮系（ＲＥＳ）の１種又は複数種の細胞によって取り込まれる、キット。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【国際調査報告】
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