(57)【要約】本発明は、発毛障害を予防または処置するためのイミノオキソチアゾリジン誘導体の使用に関する。イミノオキソチアゾリジン誘導体は、全身投与または頭皮への局部的適用のいずれかに適した組成物として処方することができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
2021513509.tif 000016
式中、
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、シクロアルキル、フェニル、−ＣＨ２−ＮＨ−フェニルであり；
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロゲン、フェニルであり；
Ｒ３は、ＣＯＯ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、ＣＯＮＲ４Ｒ５であり、式中、Ｒ４およびＲ５は、個々に、ＨもしくはＣ１〜Ｃ６アルキルであるか、またはＲ１およびＲ２が一緒になって、チオフェン環と融合したＣ５〜Ｃ７シクロアルキルを形成する、
のイミノオキソチアゾリジン化合物の、発毛を促進するため、ならびに／または脱毛を予防および／もしくは低減するための美容的使用。
【請求項２】
Ｒ１は、ＨまたはＣ１〜Ｃ３アルキル、好ましくはメチルであり、
Ｒ２は、Ｈ、ハロゲン、好ましくはＢｒまたはＣ１〜Ｃ３アルキル、好ましくはＣＨ３であり、
Ｒ３は、ＣＯＯ（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、好ましくはメチルまたはエチルエステルである、
請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記化合物が２−（２−（２−イミノ−４−オキソ−チアゾリジン−５−イル）−アセチルアミノ）−４，５−ジメチル−チオフェン−３−カルボン酸メチルエステルまたは２−（２−（２−イミノ−４−オキソ−チアゾリジン−５−イル）−アセチルアミノ）−４，５−ジメチル−チオフェン−３−カルボン酸エチルエステルである、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の式（Ｉ）のイミノオキソチアゾリジン化合物および生理学的に許容可能な担体を含む組成物の、発毛を促進するための、ならびに／または脱毛を予防し、および／もしくは減少させるための美容的使用。
【請求項５】
前記組成物が局部的もしくは局所的適用用または経口投与用である、請求項４に記載の使用。
【請求項６】
発毛障害の予防または処置に使用するための、式（Ｉ）
【化２】
2021513509.tif 000017
式中、
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、シクロアルキル、フェニル、−ＣＨ２−ＮＨ−フェニルであり；
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロゲン、フェニルであり；
Ｒ３は、ＣＯＯ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、ＣＯＮＲ４Ｒ５であり、式中、Ｒ４およびＲ５は、個々に、ＨもしくはＣ１〜Ｃ６アルキルであるか、またはＲ１およびＲ２が一緒になって、チオフェン環と融合したＣ５〜Ｃ７シクロアルキルを形成する、
のイミノオキソチアゾリジン化合物。
【請求項７】
Ｒ１がＨまたはＣ１〜Ｃ３アルキル、好ましくはメチルであり；
Ｒ２がＨ、ハロゲン、好ましくはＢｒまたはＣ１〜Ｃ３アルキル、好ましくはＣＨ３であり、
Ｒ３がＣＯＯ（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、好ましくはメチルまたはエチルエステルである、
請求項５に記載の使用のための式（Ｉ）のイミノオキソチアゾリジン化合物。
【請求項８】
前記化合物が、２−（２−（２−イミノ−４−オキソ−チアゾリジン−５−イル）−アセチルアミノ）−４，５−ジメチル−チオフェン−３−カルボン酸メチルエステルまたは２−（２−（２−イミノ−４−オキソ−チアゾリジン−５−イル）−アセチルアミノ）−４，５−ジメチル−チオフェン−３−カルボン酸エチルエステルである、請求項１または２に記載の使用のための式（Ｉ）のイミノオキソチアゾリジン化合物。
【請求項９】
請求項６〜８のいずれか一項に記載の使用のための式（Ｉ）のイミノオキソチアゾリジン化合物および薬学的に許容可能な担体を含む、医薬組成物。
【請求項１０】
前記組成物が局部的／局所的適用用または全身投与用である、請求項９に記載の使用のための医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、発毛障害を処置するための組成物に関する。
【０００２】
具体的には、本発明は、美容／トリコロジカル（ｔｒｉｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ）分野および栄養学分野に由来し、毛髪の生理学的成長を刺激し、脱毛を予防または処置するのに適した製剤またはサプリメントに関するものである。
【背景技術】
【０００３】
毛髪は保護的な役割をもち、皮脂腺、汗腺、爪とともに皮膚付属物と考えられている。
【０００４】
毛球のライフサイクルには、３つの主要な局面が含まれる：成長期として知られる成長局面、退行期として知られる退縮局面、休止期として知られる休止局面。
【０００５】
頭皮上の毛髪は、哺乳類の皮膚器官である毛包によってつくられる。毛包は継続的に毛髪を産生しない。それらは、２年以上続き、最長２カ月間休止期に戻ってから、再び新しい毛髪繊維が成長し始める成長段階を経ている。
【０００６】
この現象の生物学的局面は、球の幹細胞が、その静止状態を交互のステップにおいて残す能力にある。球の成長期および発毛局面の間、成長因子によって調節される分化および生存活性が優勢である。逆に、退行局面は、球状細胞においてアポトーシスを誘導する分子経路の活性化によって特徴づけられる。
【０００７】
成長局面において、真皮乳頭は、毛包の基部に移動することにより毛母を形成するバルジの幹細胞を活性化し、指示する化学シグナルを発生させる。この「移動」により、バルジの幹細胞は、外側の根鞘またはＯＲＳを生じる細胞の「経路」を作り出す。
【０００８】
真皮乳頭によるさらなるシグナルに応答して、幹細胞に由来するマトリックス細胞は、上方に移動して毛包の軸および内鞘を形成することによって増殖し、分化過程を開始する。
【０００９】
退行局面の開始は、細胞増殖の終了およびマトリックス細胞のアポトーシスによって特徴づけられる。退行期中、真皮乳頭はバルジの最下部に向かって移動する。この乳頭のバルジへの近接は、別の毛髪産生サイクルを開始するために必須であると考えられている。これにより、休止時のバルジ細胞の相互作用／活性化および発毛の新たなサイクルが可能となる。
【００１０】
カタゲン／休止期移行の際に、バルジの一部の細胞は乳頭に出会うように移動し、毛芽を生じる。
【００１１】
休止期の毛髪は、その基部に細胞集団を含み、それは、実際には毛胚と呼ばれ、真皮乳頭の近くに位置している。毛芽は活性化されて、バルジの前でも休止期の終わりに向かって増殖して、乳頭、すなわち新しい球のマトリックスを取り囲むことによって形成される。
【００１２】
様々な要因、中でもストレス、栄養素の不足および老化が、毛球のライフサイクルに悪影響を及ぼし、毛髪の数の減少および毛髪の薄化を決定する。
【００１３】
毛髪成長障害は、特に男性集団において非常に一般的である。毛髪の役割を社会的な関係で考えると、多くの人にとって脱毛は直面しにくいことがある。
【００１４】
もっと広く普及している毛髪障害の１つは、脱毛症によって表され、遺伝学的から環境的に至る種々の要因によって引き起こされ得る発毛の障害である。脱毛の程度とパターンは様々であり得るが、最も一般的な脱毛症形態の１つは、男性型脱毛症（ＡＧＡ）で表される。男性型脱毛症以外の脱毛症形態には、休止期の流出、円形脱毛症、白癬、瘢痕性脱毛症、美容上の過剰処理による脱毛が含まれる。
【００１５】
アンドロゲン性脱毛症（ＡＧＡ）に罹患した個人では、新たな発育期の開始時に形成される卵胞は時間の経過とともに大きさが小さくなり（小型化）、時間が進むにつれて、前回より小さい毛髪の形成に至る。その結果、顕微鏡的な毛髪が形成される。
【００１６】
皮膚科医は、脱毛症を瘢痕性と非瘢痕性のカテゴリーに細分して分類する。扁平苔癬、円板状エリテマトーデス、移植片対宿主病などの一部の型の脱毛症は、バルジ濾胞幹細胞の破壊および永久的な脱毛と関連している。円形脱毛症のような可逆性のタイプの脱毛症では、炎症は卵胞前駆細胞に影響を及ぼすが、その幹細胞は残さない。これらの疾患では、炎症を除去し、損傷を受けていない幹細胞から始まる毛包の結果的な再生に伴い、再増殖が起こる。
【００１７】
男性型脱毛症（ＡＧＡ）に罹患している個人では、経時的に、新たな成長期の開始時に再び形成される卵胞は、大きさがより小さくなり、初期直径と比較してより小さい直径を有する毛髪の形成をもたらす。その結果、顕微鏡的な毛髪の形成が起こる。
【００１８】
頭皮萎縮の卵胞ではあるが、生理学的条件では頭皮と比較して程度は低いものの、依然として前駆細胞に変換される幹細胞の供給が残っていることが観察された。
【００１９】
現在、脱毛症を含む発毛障害の処置のための多くの選択肢が利用可能である。
【００２０】
処置の第一線は、発毛障害を予防および処置するための製剤の局所適用および／または投与を含む。市販されている毛髪製剤のほとんどは、毛球を対象とし、頭皮の代謝、摂食、酸素化および微小循環に作用して、毛髪の生理学的成長に寄与する条件を改善する。
【００２１】
典型的には、これらのトリコロジカル製品には、皮膚を回復するための化粧品成分と、発毛を促進するのに適した条件が組み込まれている。
【００２２】
多数のトリコロジカル製品は、酸化防止物質、例えばビタミンＥ、ヒアルロン酸のようなグリコサミノグリカン、およびビタミンＡのようなビタミンおよびＢ群のビタミンまたはその誘導体、例えばナイアシンまたはニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）を含む。
【００２３】
しかしながら、多くの場合、上記および他の成分を含むトリコロジカル組成物の頭皮への適用または栄養製剤の投与は、発毛の刺激に対する効果が乏しいことを示している。
【００２４】
トリコロジカル成分としての薬学的活性物質を含むトリコロジカル製品は、化粧品／トリコロジカル製剤に関して優れた活性を示した。
【００２５】
これらの医薬品のうち、血管拡張活性を有する薬理活性成分であるミノキシジルを含有する製剤は、周知である。これらの製品は、通常局所適用のためのアルコール溶液として処方される。
【００２６】
毛髪障害の処置に使用される他の製品には、ホルモン物質であるフィナステリドを含む医薬組成物が含まれる。これらの製品は、テストステロンをジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）に変換する酵素であるＩＩ型５−α−レダクターゼを阻害し、このホルモンは、分泌が生理学的産生を上回ると毛包を収縮または小型化し、脱毛につながる。
【００２７】
しかし、ミノキシジルおよびフィナステリドの使用には欠点がないわけではない。具体的には、ミノキシジルの局所適用は、皮膚発疹、局所炎症などの局所的な副作用、および頭痛、多毛症などの一般的な欠点につながり得、一方、フィナステリドの経口投与はホルモン機能不全をもたらす可能性がある。
【００２８】
従って、有効で、おそらく重篤な副作用のない発毛障害を処置するための代替的な治療法を得る必要性がまだ存在する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２９】
本発明の目的の１つは、既に知られている化合物のトライコロジー分野における新たな用途を提供することにある。
【００３０】
別の目的は、毛髪の脱毛または薄毛に罹患した対象における生理学的な発毛を刺激するための組成物を提供することにある。
【００３１】
本発明の別の目的は、局所的または全身的な投与経路のいずれかを介して投与され得る美容的および薬学的使用のための組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００３２】
一般的に言えば、本発明は、ある種のイミノオキソチアゾリジン誘導体のための美容およびトリコロジカル分野における新たな用途を提供する。
【００３３】
特定の態様に従って、本発明者らは、骨粗鬆症または他の骨関連障害の処置に使用するための公知の化合物である特定のイミノオキソチアゾリジン誘導体が、頭皮上に局所的に適用された場合、または全身的に投与された場合に発毛を刺激することを予想外に見出した。
【００３４】
第１の態様に従って、本発明は、従って、式（Ｉ）
【化１】
2021513509.tif 000002
式中、
Ｒ１は、Ｈ、直線状または分枝Ｃ１〜Ｃ６アルキル、シクロアルキル、フェニル、−ＣＨ２−ＮＨ−フェニルであり；
Ｒ２は、Ｈ、直線状または分枝Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロゲン、フェニルであり；
Ｒ３は、ＣＯＯ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、ＣＯＮＲ４Ｒ５であり、式中、Ｒ４およびＲ５は、個々に、ＨもしくはＣ１〜Ｃ６アルキルであるか、またはＲ１およびＲ２が一緒になって、チオフェン環と融合したＣ５〜Ｃ７シクロアルキルを形成する、
のイミノオキソチアゾリジン化合物の、発毛障害を処置するための美容的、非治療的使用を提供する。
【００３５】
第２の態様に従って、本発明は、発毛障害または影響の処置に使用するための、式（Ｉ）
【化２】
2021513509.tif 000003
式中、
Ｒ１は、Ｈ、直線状または分枝Ｃ１〜Ｃ６アルキル、シクロアルキル、フェニル、−ＣＨ２−ＮＨ−フェニルであり；
Ｒ２は、Ｈ、直線状または分枝Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロゲン、フェニルであり；
Ｒ３は、ＣＯＯ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、ＣＯＮＲ４Ｒ５であり、式中、Ｒ４およびＲ５は、個々に、ＨもしくはＣ１〜Ｃ６アルキルであるか、またはＲ１およびＲ２が一緒になって、チオフェン環と融合したＣ５〜Ｃ７シクロアルキルを形成する、
のイミノオキソチアゾリジン誘導体を提供する。
【００３６】
第３の態様に従って、本発明は、毛髪の生理学的成長を刺激するための、式Ｉの化合物および生理学的に許容される担体を含む組成物の化粧用使用を提供する。
【００３７】
いくつかの実施形態によれば、本発明の組成物は、局所適用に適した美容的組成物である。
【００３８】
特定の実施形態によれば、美容的使用のための組成物は、美容的組成物、食品サプリメントまたは栄養補助食品組成物であり、それを、脱毛、毛髪肥厚または変色などのトリコロジカル障害に罹患している対象の食事療法に導入することができる。
【００３９】
本発明者らは、式（Ｉ）のイミノオキソチアゾリジン誘導体が、薄毛または脱毛に罹患している対象に局所的または全身的経路で投与した場合、頭皮のより薄い領域の進行性の肥厚をもたらすことを観察した。
【００４０】
特定の態様に従って、発毛障害の処置に使用するための、式（Ｉ）のイミノオキソチアゾリジン誘導体および生理学的に許容可能な担体を含む組成物が提供される。
【００４１】
特定の実施形態によれば、本発明の組成物は、医薬組成物である。
【００４２】
典型的には、本発明の組成物は、式（Ｉ）のイミノオキソチアゾリジン誘導体のトリコロジー的に、または薬学的に活性な量を含む。
【００４３】
本発明の特定の局面および利点は、添付の図面を参照してさらに記載される。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】図１は、実施例４のＣ１およびＣ５と同定された本発明の２つの化合物によるその刺激によって得られたＬｅｆ１遺伝子発現の、ビヒクル単独によって得られたものに対する３〜６倍の増加を示す。
【図２】図２は、本発明のイミノキソチアゾリジン化合物、特に毛髪細胞株（皮膚乳頭細胞）を用いて以下の表Ｉで報告されたものの発毛促進活性を示すことを目的とした追加試験を示す。
【発明を実施するための形態】
【００４５】
本発明の特定の態様に従って、本発明者らは、式（Ｉ）の選択されたクラスのイミノオキソチアゾリジン誘導体が、トリコロジカル分野で適用が見出され、発毛障害の予防または処置に有用であることを見出した。
【００４６】
式（Ｉ）の化合物は、トリコロジカルまたは発毛障害の予防または処置に適用を見出す。
【００４７】
本出願人は、式（Ｉ）の化合物がトリコロジカル活性を発揮し、頭皮の毛包細胞の、および静止毛球の活性を刺激することを発見した。これらの活性により、毛包のライフサイクルが活性化され、発毛が促進される。
【００４８】
第１の態様に従って、本発明は、従って、式（Ｉ）
【化３】
2021513509.tif 000004
式中、
Ｒ１は、Ｈ、直線状または分枝Ｃ１〜Ｃ６アルキル、好ましくはＣ１〜Ｃ３アルキル、（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル、フェニル、−ＣＨ２−ＮＨ−フェニルであり；
Ｒ２は、Ｈ、直線状または分枝Ｃ１〜Ｃ６アルキル、好ましくはＣ１〜Ｃ３アルキル、ハロゲン、フェニルであり；
Ｒ３は、ＣＯＯ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、好ましくはＣＯＯ（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、ＣＯＮＲ４Ｒ５であり、式中、Ｒ４およびＲ５は、個々に、ＨもしくはＣ１〜Ｃ６アルキル、好ましくはＣ１〜Ｃ３アルキルであるか、またはＲ１およびＲ２が一緒になって、チオフェン環と融合したＣ５〜Ｃ７シクロアルキルを形成する、
のイミノオキソチアゾリジン化合物の、発毛を促進するため、または脱毛を予防および／もしくは遅延させるための美容的／非治療的使用を提供する。
【００４９】
好適なハロゲンは、Ｂｒである。
【００５０】
特定の実施形態によれば、Ｒ１は、ＨまたはＣ１〜Ｃ３アルキル、好ましくはメチルであり、Ｒ２は、Ｈ、ハロゲン、好ましくはＢｒまたはＣ１〜Ｃ３アルキル、好ましくはＣＨ３であり、Ｒ３は、ＣＯＯ（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、好ましくはメチルまたはエチルエステルである。
【００５１】
特定の実施形態では、Ｒ１は、ＨまたはＣ１〜Ｃ３アルキルであり、
Ｒ２は、Ｈまたはハロゲン、好ましくはＢｒであり、
Ｒ３は、ＣＯＯＣＨ３またはＣＯＯＣＨ２ＣＨ３である。
【００５２】
式（Ｉ）の好ましい化合物は、次の置換基を有する：
Ｒ１はメチルであり、Ｒ２はＢｒであり、Ｒ３はＣＯＯエチルであり；
Ｒ１はメチルであり、Ｒ２はＨであり、Ｒ３はＣＯＯエチルであり、
Ｒ１はＨであり、Ｒ２はＨであり、Ｒ３はＣＯＯメチルであり、
Ｒ１は−ＣＨ２−ＮＨ−フェニルであり、Ｒ２はＢｒであり、Ｒ３はＣＯＯエチルである。
【００５３】
特定の実施形態に従い、以下の表１に報告される式（Ｉ）の化合物を提供し、好ましくは、より活性な化合物Ｃ１、Ｃ５、Ｃ７、Ｃ１７、特に化合物Ｃ１およびＣ５を提供する。
【００５４】
最も好ましい化合物は、２−（２−（２−イミノ−４−オキソ−チアゾリジン−５−イル）−アセチルアミノ）−４，５−ジメチル−チオフェン−３−カルボン酸メチルエステルおよび２−（２−（２−イミノ−４−オキソ−チアゾリジン−５−イル）−アセチルアミノ）−４，５−ジメチル−チオフェン−３−カルボン酸エチルエステルである。
【００５５】
本発明によれば、式（Ｉ）の化合物は、脱毛、抜け毛の予防または処置のための美容分野、白髪の予防または白髪の美容的処置において有用である。式（Ｉ）の化合物は、毛髪色素沈着のような毛髪の審美的側面を改善するのにも有用である。
【００５６】
典型的には、式（Ｉ）の化合物は、毛髪の生理学的成長および毛髪の肥厚を刺激する。
【００５７】
第２の態様によれば、本発明は、発毛障害／罹患を処置するための式（Ｉ）の化合物の医薬用途に関する。
【００５８】
この後者の態様に従って、発毛障害または罹患の処置に使用するための、式（Ｉ）のイミノオキソチアゾリジン化合物が提供される。
【化４】
2021513509.tif 000005
式中、
Ｒ１は、Ｈ、直線状または分枝Ｃ１〜Ｃ６アルキル、好ましくはＣ１〜Ｃ３アルキル、（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル、フェニル、−ＣＨ２−ＮＨ−フェニルであり；
Ｒ２は、Ｈ、直線状または分枝Ｃ１〜Ｃ６アルキル、好ましくはＣ１〜Ｃ３アルキル、ハロゲン、フェニルであり；
Ｒ３は、ＣＯＯ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、好ましくはＣＯＯ（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、ＣＯＮＲ４Ｒ５であり、式中、Ｒ４およびＲ５は、個々に、ＨもしくはＣ１〜Ｃ６アルキル、好ましくはＣ１〜Ｃ３アルキルであるか、またはＲ１およびＲ２が一緒になって、チオフェン環と融合したＣ５〜Ｃ７シクロアルキルを形成する。
【００５９】
好適なハロゲンは、Ｂｒである。
【００６０】
本発明のこの態様に従って処置され得る発毛障害または罹患には、脱毛症および休止期流出症、男性および女性の対象に影響を及ぼす障害が含まれる。この組成物はまた、女性型、脱毛症、または男性型脱毛症を処置または予防するのに適している。
【００６１】
イミノオキソチアゾリジン化合物およびその調製方法は、米国Ｗｙｅｔｈ  Ｃｏｒｐ．に対する国際特許出願ＷＯ  ２００６１２４８８７に開示されている。
【００６２】
第３の態様によれば、本発明は、本明細書において上記した実施形態のいずれか１つによる式（Ｉ）のイミノオキソチアゾリジン化合物と、毛髪の生理学的成長を刺激するための生理学的に許容される担体とを含む組成物の、化粧用、非治療的使用を提供する。本発明の組成物は、前述した脱毛または薄毛の形態を予防および／または処置するのに有効である。
【００６３】
美容上の使用のための組成物は、局所投与用または全身投与用のいずれかである。
【００６４】
いくつかの実施形態によれば、経口投与用の組成物は、機能性食品、栄養補助組成物、食物製品、栄養補助食品または栄養製品または医療機器である。
【００６５】
機能性食品とは、それが含有する従来の栄養素以外に、欠点または生理学的状態に対して利益または保護を提供し得るあらゆる改変食品または食品成分を意味する。
【００６６】
「栄養補助製品」とは、食用物質から単離または精製された製品を意味する。栄養補助製品は、それが生理学的利点を有する、または欠陥もしくは生理学的障害に対する保護を提供することを示す場合にそのようである。
【００６７】
投与経路とは無関係に、化粧品組成物は、成長期中の卵胞細胞の生存性を増加させ、卵胞の代謝および新しい毛髪の成長を刺激することによって頭皮の静止細胞を活性化する。
【００６８】
第４の態様によれば、本明細書において上記された実施形態のいずれか１つによる式（Ｉ）のイミノオキソチアゾリジン化合物、および発毛障害の処置に使用するための薬学的に許容される担体を含有する組成物が提供される。
【００６９】
これらの組成物により処置される発毛障害の例としては、脱毛症および休止期流出症が挙げられる。典型的には、これらの組成物は、医薬組成物として処方される。
【００７０】
美容的／医薬的／栄養学的使用のための組成物中の式（Ｉ）の活性化合物の量は、予防的または治療的に有効な投与量が得られるようなものである。
【００７１】
特定の実施形態によれば、美容的および医学的使用の両方のための組成物は、式（Ｉ）のイミノオキソチアゾリジン化合物を、０，０００１〜１５重量％、０．００１〜１０重量％または０，１〜３重量％の量で含有してもよい。
【００７２】
特定の実施形態では、本発明の組成物は、トリコロジカル活性を有する１つ以上の追加成分をさらに含むことができる。
【００７３】
組成物の投与される量および投与頻度は、処置されるトリコロジカル状態の型および重症度に依存するであろう。
【００７４】
特定の実施形態では、美容的および治療的使用の両方のための組成物は、ビタミン、例えばビタミンＡ、ビタミンＣ、Ｂ群のビタミン、ナイアシンなどの追加成分をさらに含む。
【００７５】
いくつかの実施形態に従って、本発明の組成物は、特に経口投与のための製剤のために、アミノ酸、特に硫黄含有アミノ酸、例えばＬ−システインまたはＬ−メチオニンをさらに含有する。
【００７６】
いくつかの実施形態によれば、本発明の組成物はまた、特に経口投与用の製剤について、Ｍｇ、Ｚｎ、Ｃａ、Ｆｅ、Ｃｒ、Ｓｅおよび他のものなどの１つまたは微量栄養素および／またはミネラルまたは微量栄養素を含む。
【００７７】
特定の実施形態では、組成物は、葉酸、パントテン酸カルシウム、ヒアルロン酸などのムコ多糖、または大豆イソフラボンなどの大豆誘導体などの追加の物質をさらに含有してもよい。
【００７８】
いくつかの実施形態では、美容的および治療的使用の両方のための本発明の組成物は、生理学的および／または薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む。
【００７９】
典型的には、本発明の組成物の生理学的に許容される担体は、局所的適用および／または全身的投与に適した賦形剤、担体または希釈剤である。生理学的および薬学的担体は、同一の担体であってもよい。
【００８０】
本文書の範囲内で、「担体」という用語は、本発明の組成物中に存在し得る賦形剤、担体、希釈剤またはアジュバントに関する。投与に望ましい調製物の形態に適した任意の担体および／または賦形剤は、そこに存在する植物抽出物または本明細書中に記載される活性成分の使用において企図される。
【００８１】
典型的には、適当な担体は、生理学的、食用または薬学的に許容可能な担体である。
【００８２】
典型的には、経口投与用の組成物は、１以上の食用担体を含むことができる。
【００８３】
本出願の目的のために、「食用」の用語は、栄養または食品用途に使用するために規制当局によって承認されている食品等級の材料を意味することを意図する。「トリコロジカル障害」の用語は、毛髪の生理学的条件、特に毛髪の審美的側面の変化に変化があるあらゆる状態を意味する。本発明の組成物は、式（Ｉ）の化合物および生理学的に許容される担体との会合体を混合することによって作製される任意の組成物を包含する。このような組成物は、哺乳動物、特にヒトにおける栄養学的、薬学的または食事療法的使用に適している。
【００８４】
担体は、全身的または局所的投与の両方に望ましい製剤の形態に応じて、多種多様な適当な形態をとることができる。
【００８５】
従って、生理学的および／または薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤は、組成物が意図される投与経路に基づいて選択され得る。
【００８６】
経口投与用の組成物は、固体または液体の形態であってもよい。
【００８７】
固体形態の典型的な組成物は、錠剤、カプセル、粉末、顆粒、丸剤を含む。所望であれば、錠剤は、従来の技術によって持続／延長放出を得るための適切なポリマー剤または剤でコーティングされてもよい。
【００８８】
固体形態で使用される例示的な賦形剤は、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシエチルセルロース、エチルヒドロキシエチルセルロース、酢酸酪酸セルロース、酢酸フタル酸セルロース、およびそれらの混合物などのセルロース誘導体を含む。
【００８９】
適切な賦形剤のさらなる例としては、ラクタムのクラスのポリマー、典型的にはピロリドンおよびその誘導体、例えばポリビニルピロリドン、ポリビニルポリピロリドンおよびそれらの混合物、無機塩、例えばリン酸カルシウムまたはリン酸二カルシウム、潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、トリアシルグリセロールおよびそれらの混合物が挙げられる。
【００９０】
錠剤、丸剤、カプセル等はまた、トラガカントゴム、アカシア、コーンスターチまたはゼラチンのような結合剤；リン酸二カルシウムのような賦形剤；トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、アルギン酸のような崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤；およびスクロース、ラクトース、サッカリンまたは他の甘味剤のような甘味剤を含むことができる。投与単位形態がカプセルである場合、それは、上記の種類の材料に加えて、脂肪油のような液体担体を含むことができる。
【００９１】
特定の実施形態において、本発明の組成物はさらに、添加剤、充填剤、安定剤、乳化剤、テクスチャー化剤、フィルモジェニック、可塑化剤、湿潤剤、および増粘剤などの１以上の追加成分を含む。
【００９２】
コーティングとして、または投与単位の物理的形状を修正するために、種々の他の物質が存在し得る。例えば、錠剤は、シェラック、糖またはその両方で被覆することができる。シロップ剤またはエリキシル剤は、活性成分に加えて、甘味剤としてのスクロース、防腐剤としてのメチルおよびプロピルパラベン、色素、ならびにチェリーまたはオレンジフレーバーなどの香味付与剤も含むことができる。消化管の上部を通過する間の破壊を防止するために、組成物は腸溶コーティングされた製剤であってもよい。
【００９３】
経口投与のための液体形態の典型的な組成物は、溶液、懸濁液、シロップ、エマルジョン、ゲルを含む。
【００９４】
これらの形態の投与では、適当な担体は、水、グリコール、または水中油型もしくは油中水型エマルジョンを含み、その中に分散した式（Ｉ）の化合物を含む。
【００９５】
特定の実施形態において、組成物は、全身的経路、特に注射により投与される。注射目的の組成物において、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的塩は、薬学的に許容可能な溶媒、例えば注射用の水に溶解される。注射目的の組成物はさらに、緩衝液／緩衝液系、保存剤、共溶媒または添加剤の少なくとも１つを含むことができる。
【００９６】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物の投与経路は、局所的である。局所投与用の組成物は、固体、半液体または液体形態であってもよい。典型的には、局所的組成物は、皮膚上に、特に頭皮上に有効量で適用される。
【００９７】
例えば、美容上の使用のために、本発明の組成物の美容的に活性な量を、１日に１回または複数回、好都合には２〜３カ月間持続する周期にわたって、休息期間と交互に、頭皮に直接適用することができる。
【００９８】
局所的適用のための組成物は、固体、半固体または流体の形態であってもよい。
【００９９】
固体形態の適当な製剤には、クリーム、ゲル、ペースト、軟膏が含まれる。
【０１００】
他の実施形態において、局所的投与のための製剤は、流体形態、例えば、ローション、ゲル、シャンプー、懸濁液、エマルジョンの形態である。
【０１０１】
流体または半流体形態の配合物の場合、式（Ｉ）の化合物は、水、アルコール、ヒドロアルコールもしくはグリセリン溶液などの生理学的に許容される液体形態の担体中で希釈されてもよく、または局所的適用に適した他の液体と混合されてもよい。
【０１０２】
溶液、懸濁液または分散液の形態では、本発明の組成物は、液体、例えばアルコールと任意に混合された水の約１〜９９．９％を含むことができる。いくつかの実施形態において、水は５〜９５％の量で存在する。他の実施形態では、水は、１０〜９０重量％の量で存在する。
【０１０３】
局所的使用のための典型的な組成物は、中に溶解した式（Ｉ）の化合物を含むヒドロアルコール溶液である。
【０１０４】
例として、液体形態の本発明の組成物は、水溶性成分および残りの成分をアルコールに溶解し、次いで撹拌下で種々の画分を再結合することによって調製することができる。次いで、得られた混合物を緩衝して、頭皮のｐＨに適合するように、５〜７の間で都合よく選択されるｐＨ間隔に到達させ、次いで濾過し、ビンまたはバイアルなどの適切な容器に包装することができる。
【０１０５】
特定の実施形態では、本発明の組成物は、外用のためのローションの形態である。
【０１０６】
典型的には、医薬組成物の式（Ｉ）の活性化合物は、投薬単位で処方される。投薬単位は、１日投与のための投薬単位当たり０．１〜１０００ｍｇの活性成分を含んでいてもよい。
【０１０７】
いくつかの実施形態において、処方物に有効な量は、処置される障害または状態の重症度に依存するであろう。いくつかの実施形態において、用量は、処方物の０．００１重量％から約６０重量％の範囲内である。
【０１０８】
特定の態様によれば、本発明は、毛包の刺激において有用であり、特に女性において脱毛症のような発毛障害を処置することの結果としての利益を有する局所的使用用の組成物に関する。関連する集団の処置の方法もまた、本発明の特徴である。
【０１０９】
本発明の別の態様によれば、先に記載されたタイプの組成物の有効量を頭皮に適用することを含む、美容的処置の方法が提供される。
【０１１０】
例えば、局所的使用のために、本発明の組成物の美容的または薬学的に活性な量を、好都合には２〜３カ月の継続期間と休止の期間とを交互に有する周期にわたって、１日１回以上、頭皮に直接適用する。
【０１１１】
以下の実施例は、単に本発明を説明するために提供されるものであり、添付した特許請求の範囲からの結果として保護の範囲を限定することを意図するものではない。
【実施例】
【０１１２】
実施例１
発毛を刺激するための式（Ｉ）の化合物を含む経口投与用錠剤
【表１】
2021513509.tif 000006
【０１１３】
例２
発毛を刺激するための式（Ｉ）の化合物を含む局所的適用用ローション
【表２】
2021513509.tif 000007
【０１１４】
例３
脱毛症を処置するための式（Ｉ）の化合物を含む局所的適用用の組成物
【表３】
2021513509.tif 000008
【０１１５】
例４
実験的証拠。
本発明の化合物の活性の証拠は、膨出幹細胞の成長および分化において重要な役割を果たすリンパ系エンハンサー結合因子１（Ｌｅｆ１）の発現によって提供される（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ２０１３；１０（６）：７３８−７４６）。
【０１１６】
試験化合物
試験した化合物は、以下であった：
Ｃ１：２−（２−（２−イミノ−４−オキソ−チアゾリジン−５−イル）−アセチルアミノ）−４，５−ジメチル−チオフェン−３−カルボン酸メチルエステル
Ｃ５：２−（２−（２−イミノ−４−オキソ−チアゾリジン−５−イル）−アセチルアミノ）−４，５−ジメチル−チオフェン−３−カルボン酸エチルエステル。
【０１１７】
これらの生成物を、ＤＭＳＯ（原液）中で再構成し、中間体または希釈標準溶液を、Ｗｉｌｌｉａｍ’ｓ  Ｅ培地中で原液または作業液を希釈して調製した。
【０１１８】
毛包（ＨＦ）器官培養
顕微解剖したヒトアナーゲンＶＩ頭皮ＨＦを、２ｍＭのＬ−グルタミン（Ｇｉｂｃｏ）、１０ｎｇ／ｍｌのヒドロコルチゾン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、１０μｇ／ｍｌのインスリン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）および１％のペニシリン／ストレプトマイシン混合物（Ｇｉｂｃｏ）を添加したＷｉｌｌｉａｍ’ｓ  Ｅ培地（Ｇｉｂｃｏ，Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）の最少培地で５％  ＣＯ２で３７℃で培養して、既に記載されているように（Ｐｈｉｌｐｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０；Ｋｌｏｅｐｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０；Ｌａｎｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）Ｗｉｌｌｉａｍｓ完全培地（ＷＣＭ）を作成した。２４時間後に、培地を、最終濃度０．１％のＤＭＳＯ（賦形剤）を含むＷＣＭまたはＣ１およびＣ５のための最終濃度１５μＭの試験化合物のいずれかを含む新鮮な培地に置き換えた。ｑＲＴ−ＰＣＴについては、６時間のみ処置した毛包からＲＮＡを抽出した。
【０１１９】
ｑＲＴ−ＰＣＲ分析
ＲＮＡはＲＮｅａｓｙキット（Ｑｉａｇｅｎ，ＵＳＡ）で毛包から抽出し、製造者の指示に従ってＴｅｔｒｏ  ｃＤＮＡ合成キット（Ｂｉｏｌｉｎｅ）で逆転写した。ｑＰＣＲを、ＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ３（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）において、Ａｘｉｎ２（Ｈｓ００６１０３４４＿ｍ１、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）、Ｌｅｆ１（Ｈｓ０１５４７２５０＿ｍ１、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）、ｂ−アクチン（Ｈｓ０１０６０６６５＿ｇ１、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）およびＧａｐｄｈ  （Ｈｓ０２７５８９９１＿ｇ１、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）についてのＴａｑｍａｎプローブを用いて行った。発現レベルは、デルタ−デルタＣＴ方法で算出した。
【０１２０】
結果
Ｌｅｆ−１（遺伝子発現）
以下の表は、ビヒクル、Ｃ１およびＣ５で処理された微小切片化された卵胞におけるＬｅｆ１（ｍＲＮＡ）の遺伝子発現を報告する。
【０１２１】
Ｌｅｆ１発現は、ハウスキーピング（ＧＡＰＤＨ）の平均で正規化される。１のドナーからＮ＝８  ＨＦｓ／群。
【０１２２】
【表４】
2021513509.tif 000009
【０１２３】
化合物Ｃ１およびＣ５での発現は、ビヒクル単独によって得られたものに対して３〜６倍の増加を示す。
【０１２４】
結果を図１に示す。
【０１２５】
例５（図２）
本発明のイミノオキソチアゾリジン化合物、特に以下の表Ｉに報告されている化合物の発毛促進活性を評価することを目的とした追加の試験。
【０１２６】
本試験では、実施例４の実験と同様に、ヒト毛包ではなく毛髪細胞株（乳頭皮細胞）を用いた。
【０１２７】
本発明者らは、Ｌｅｆ１（発毛のマーカー）の刺激を評価し、本発明者らは、化合物１および化合物５を再試験し、本発明者らはまた、その既知の発毛促進活性について、骨粗鬆症の処置のために既に使用されているＳＦＲＰ１の比較的無毒性の特異的アンタゴニストである化合物ＷＡＹ−３１６６０を含めて使用した（Ｒｉｆ．Ｈａｗｋｓｈａｗ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｌｏｓ  Ｂｉｏｌ，２０１８；ｈｔｔｐｓ：／／ｊｏｕｒｎａｌｓ．ｐｌｏｓ．ｏｒｇ／ｐｌｏｓｂｉｏｌｏｇｙ／ａｒｔｉｃｌｅ？ｉｄ＝１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｂｉｏ．２００３７０５）。
【０１２８】
【表５（１）】
2021513509.tif 000010
【表５（２）】
2021513509.tif 000011
【０１２９】
生物学的モデル
ヒト卵胞皮膚乳頭細胞（ＨＦＤＰＣ）
ヒト卵胞皮膚乳頭細胞（ＨＦＤＰＣ）を、Ｐｒｏｍｏｃｅｌｌ  （ドイツ）から購入した。
【０１３０】
細胞株を、２５ｃｍ２の培養フラスコ中の卵胞皮膚乳頭細胞培地で、３７℃、５％ＣＯ２で培養した。トリプシン／ＥＤＴＡを用い、２〜５・１０４細胞／ｃｍ２で播種し、３７℃、５％ＣＯ２で、ＰＢＳ  １Ｘ（Ｃａ２＋およびＭｇ２＋を含まない）で洗浄後、２日ごとに融合培養物を１：３〜１：６に分割した。
【０１３１】
凍結培地：Ｃｒｙｏ−ＳＦＭ．細胞定量：トリパンブルーアッセイ
【０１３２】
対照
陽性対照：Ｗａｙ３１６６０６
陰性対照：同一の試料培養条件下での卵胞皮膚乳頭細胞における未処理細胞。
【０１３３】
方法
ＬＥＦ１の発現は、ＲＴ−ＰＣＲで調べた。分析は、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓによって供給されているＴａｑＭａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｓｓａｙを使用して、報告された方法（Ｇｉｂｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ，１９９６；Ｈｅｉｄ  ｅｔ  ａｌ，１９９６）に従って行った。簡単に説明すると、遺伝子特異的ＰＣＲオリゴヌクレオチドプライマー対内で、５０末端にレポーター蛍光色素（ＦＡＭ）および３０末端にクエンチャー蛍光色素（ＴＡＭＵＲＡ）で標識したオリゴヌクレオチドプローブを設計した。プローブが未変化の場合、レポーター色素放出はクエンチされた。ＰＣＲサイクルの延長局面の間、ＤＮＡポリメラーゼの核融解活性は、ハイブリダイゼーションプローブを切断し、プローブからレポーター色素を放出した。ＰＣＲ増幅中に産生された蛍光強度を、反応チューブ内で直接配列検出器によりモニターした（「リアルタイム」）。コンピュータアルゴリズムでは、レポーター色素発光の量をクエンチング色素発光と比較し、ベースラインの標準偏差の１０倍にシグナルが達したときの閾値サイクル数（ＣＴ）を計算し、それから、試験した種々の遺伝子から転写されたｍＲＮＡのレベルが得られた（Ｇｉｂｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ，１９９６）。
【０１３４】
遺伝子発現解析には、次の４つのステップが含まれる：
１．細胞の活性化合物での２４時間にわたる処理；
２．ＲＮＡ抽出；
３．ｃＤＮＡレトロ転写；
４．定量ＲＴ−ＰＣＲ；
【０１３５】
１日目：種子細胞
細胞（ヒト卵胞皮膚乳頭細胞）が約８０％の融合に達したとき、それらをトリプシン／ＥＤＴＡで回収し、１２ウェルプレートに１×１０６細胞／ｍｌの密度で播種した後、３７℃、５％ＣＯ２（２４時間）でインキュベートした。
【０１３６】
２〜３日目：化学物質曝露２４時間
細胞が約８０％の融合に達したとき、完全な培地を除去した；細胞をＰＢＳ  １Ｘで１回洗浄し、ヒト卵胞皮膚乳頭細胞中で３７℃、５％ＣＯ２で少なくとも２４時間インキュベートした；
【０１３７】
試験される化合物（ＷＡＹ３１６６０６、１、５、７、１７、１８、２０、２１、２４）をＤＭＳＯに溶解し、ヒト卵胞皮膚乳頭細胞中で最終濃度で希釈した。
【０１３８】
対照（培地のみ）も含めた。
【０１３９】
次に細胞を、３７℃、５％ＣＯ２で種々の２４時間インキュベートした。
【０１４０】
ＲＮＡ抽出
全ＲＮＡを単離するための単一の均質な溶液であるＴｒｉ試薬（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、全ＲＮＡを細胞から抽出した。この手順は、全ＲＮＡ単離のために（ＣｈｏｍｃｚｙｎｓｋｉおよびＭａｃｋｅｙ，１９９５）によって報告された単一ステップ法の改良である。単相溶液中のグアニジンチオシアネートおよびフェノールの混合物であるＴｒｉ  Ｒｅａｇｅｎｔは、組織試料の均質化または溶解時にＤＮＡ、ＲＮＡ、およびタンパク質を効果的に溶解し、変性剤およびＲＮＡ分解酵素阻害剤の独特の組み合わせを含み、簡便な一段階の破壊／分離手順で使用される。
【０１４１】
抽出された全ＲＮＡの純度を、核酸が最も高い吸光度を有するλである２６０ｎｍでの吸光度を読み取ることによって評価した。また、タンパク質またはフェノールによる汚染を評価するために、２８０ｎｍで吸光度を読み取った。一方、２３０ｎｍおよび３３０ｎｍでの吸光度を測定すると、試料およびキュベットの両方の純度に関する情報が得られる。Ｒ＝Ａ２６０／Ａ２８０比が＞１．６であれば、ＲＮＡは良質であると考えられる。
【０１４２】
全ＲＮＡ濃度および純度を測定した後、ＲＮＡの各試料をＤＥＰＣ水で希釈して、最終濃度２μｇ／ｍｌにした。これは、レトロ転写キット（次の相）による必要な濃度である。
【０１４３】
また、電気泳動ゲル走行を行って、抽出した全ＲＮＡの完全性を検証した。
【０１４４】
逆転写ＰＣＲ
「ＰＲＩＭＥ  ＳＣＲＩＰＴ  ＲＴ試薬キット（Ｐｅｒｆｅｃｔ  Ｒｅａｌ  ｔｉｍｅ）（Ｔａｋａｒａ）」を用いて、全ＲＮＡを抽出、定量し増幅した。
【０１４５】
ｍＲＮＡの最初の鎖の効率的な合成を確実にするために、ランダムプライマーを用いた。
【０１４６】
増幅のために、本発明者らは、Ｒｅａｌ  ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｍｘ３０００Ｐ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を使用し、各全ＲＮＡを二連で増幅した。
【０１４７】
【表６】
2021513509.tif 000012
【０１４８】
増幅後、試料を３０μｌのＤＥＰＣ水で希釈し、使用するまで−２０℃で保存した。
【０１４９】
リアルタイムＰＣＲ
ＲＴ−ＰＣＲ解析は、ＴａｑＭａｎ線状プローブ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて設定した。これらのプローブは、ｑＰＣＲ適用のために最も広く使用され、公表されている検出化学である。
【０１５０】
インベントリされたプローブおよびプライマーを、以前の特定の書誌調査に従って選択した。
【０１５１】
本発明者らは、未知試料中の目的遺伝子（対象）の相対濃度をキャリブレーター、または対照試料（未処理細胞）と比較する相対定量法を用いている。ここで、キャリブレーターは、与えられた標的遺伝子の発現のためのベースラインである。このアプローチを用いると、未知試料とキャリブレーターの間のＣｔ値の差は、キャリブレーター試料に対する倍率変化として表される。対照対実験試料における標的遺伝子単独の発現を比較することに加えて、標準化標的、典型的には、発現が対照試料および実験試料の両方で一定である遺伝子で、結果を標準化することが有用である。ＧＡＰＤＨは、結果を正常化するために用いたハウスキーピング遺伝子であった。この種の定量法を用いると、増幅効率１００％を評価しながら、すべてのプレート上で標準曲線を実行する必要はない。Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓが提供するＴａｑＭａｎ遺伝子発現アッセイは、以下の熱プロファイルおよび１００％の効率のために最適化される。
【０１５２】
以下の遺伝子について研究した：
【表７】
2021513509.tif 000013
【０１５３】
実験的手順
種々の時点の処理細胞からのｃＤＮＡを用いてＲＴＰＣＲを行い、対照細胞（未処理）を２Ｘ  ＴａｑＭａｎ遺伝子発現マスターミックス１０μｌおよび２０Ｘ  ＴａｑＭａｎ遺伝子発現アッセイ１μｌに添加した。各生体試料を二連で処理し、ハウスキーピングＴａｑＭａｎ遺伝子発現アッセイおよび標的ＴａｑＭａｎ遺伝子発現アッセイの両方で増幅した。また、非鋳型対照試料（ＮＣＴ）を、すべての試行に含めた。
【０１５４】
Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ  ｔｅｒｍｏｃｙｃｌｅｒ  ＭＸ３０００Ｐは、以下のようにプログラムされた：
・  ９５℃、３０秒（Ａｍｐｌｉｔａｑ活性化）；
・  ９５℃、５秒（変性）
・  ６０℃、２０秒（アニーリング−拡張）
【０１５５】
【表８】
2021513509.tif 000014
【０１５６】
データ収集
Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ  ＭＸ３０００Ｐ機器によって提供されるデータは、内部ソフトウェアＭＸＰｒｏ  ｖ．４．０１によって登録された。増幅が完了した時点で、ソフトウェアは、自動的に２−ΔΔＣｔ法を適用し、処理された試料とキャリブレーターの標的遺伝子間のＣｔ差異を計算し、処理された試料およびキャリブレーター試料のノーマライザー遺伝子のＣｔｓの差異によって補正する。標的およびノーマライザーのＣｔ値は、理想的にはお互いに約１０周期以内であるべきである。
【０１５７】
比較の量子化試行のための出力は、相対量チャートである。１の値は、当該試料とキャリブレーター試料との間で標的遺伝子発現に変化がないことを示す。１より大きいすべての値は上方調節を示し、１より小さいすべての値は下方調節を示す。キャリブレーターに関していったん上方調節または下方調節された場合、値は有意に受け入れられる。
【０１５８】
結果
２４時間のインキュベーション後、試験したすべての化合物はＬＥＦ１  ｍＲＮＡ発現を誘導し、刺激することができた（図１）。また、陽性対照として用いたＷＡＹ３１６６０６も、このような誘導作用を発揮した。
【０１５９】
【表９】
2021513509.tif 000015
【０１６０】
Ｌｅｆ１の主要な誘導は、化合物１および５で得られた。
【０１６１】
試験したすべての化合物の２４時間後に、（図２）に示したように、Ｌｅｆ１  ｍＲＮＡ発現を阻害することができた。また、陽性対照として用いたＷＡＹ３１６６０６は、このような阻害作用を発揮した。
【図１】
2021513509.tif 000018
【図２】
2021513509.tif 000019
【手続補正書】
【提出日】令和2年9月18日(2020.9.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４４】
【図１】図１は、実施例４のＣ１およびＣ５と同定された本発明の２つの化合物によるその刺激によって得られたＬｅｆ１遺伝子発現の、ビヒクル単独によって得られたものに対する３〜６倍の増加を示す。
【図２】図２は、本発明のイミノオキソチアゾリジン化合物、特に毛髪細胞株（皮膚乳頭細胞）を用いて以下の表Ｉで報告されたものの発毛促進活性を示すことを目的とした追加試験を示す。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６０】
本発明のこの態様に従って処置され得る発毛障害または罹患には、脱毛症および休止期流出症、男性および女性の対象に影響を及ぼす障害が含まれる。この組成物はまた、女性型脱毛、脱毛症、または男性型脱毛症を処置または予防するのに適している。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７６】
いくつかの実施形態によれば、本発明の組成物はまた、特に経口投与用の製剤について、Ｍｇ、Ｚｎ、Ｃａ、Ｆｅ、Ｃｒ、Ｓｅおよび他のものなどの１つ以上の微量栄養素および／またはミネラルを含む。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１２】
実施例１
発毛を刺激するための式（Ｉ）の化合物を含む経口投与用錠剤
【表１】
2021513509.tif 000020
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１３】
例２
発毛を刺激するための式（Ｉ）の化合物を含む局所的適用用ローション
【表２】
2021513509.tif 000021
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１４】
例３
脱毛症を処置するための式（Ｉ）の化合物を含む局所的適用用の組成物
【表３】
2021513509.tif 000022
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２１】
Ｌｅｆ１発現は、ハウスキーピング（ＧＡＰＤＨ）遺伝子の平均で正規化される。１のドナーからＮ＝８  ＨＦｓ／群。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５９】
【表９】
2021513509.tif 000023
【国際調査報告】
2021513509.tif 000024
2021513509.tif 000025
2021513509.tif 000026