(57)【要約】L、Y1、Y2、Y3、Y4、Y5、Z1、Z2、Z3、Z4、Z5、Z6がそれぞれ本明細書で定義される通りである、式(I)を有する化合物：またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、溶媒和物、もしくは立体異性体；それらの組成物；それらの使用；およびそれらの使用方法が開示される。2021512953.tif 000232
2021512953.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(I)の化合物：
2021512953.tif 000220
またはその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物、もしくは立体異性体：
式中、
-L-は-(C1〜C5)アルキレン-O-C(O)-、-(C3〜C5)アルケニレン-O-、
2021512953.tif 000221
として定義され、
Aは、-(C1〜C5)アルキレン-O-C(O)-であり；
Eは、-O-、-O-C(O)N(H)-、-O-C(S)N(H)-、または-S-、もしくは-S-C(O)N(H)-であり；
Dは、-(C1〜C5)アルキレン-または-(C3〜C5)アルケニレン-であり；
Y1は、C=C、炭素または窒素であり、Y1が窒素である場合、Z1は存在せず；
Y4およびY5のそれぞれは、独立に、炭素または窒素であり、Y3が窒素である場合は、Z3は存在せず、Y4が窒素である場合は、Z5は存在せず；
Y2は、CまたはNであり；
Y5は、酸素、炭素、窒素、または硫黄原子であり、Y5が酸素または硫黄原子である場合は、Z6は存在せず；
Z1およびZ2のそれぞれは、存在する場合、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、アルキルオキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アリールオキシ、アラルキルオキシ、アルキルチオキシ、アルケニルチオキシ、アルキニルチオキシ、アリールチオキシ、アラルキルチオキシ、アミノ、ヒドロキシ、チオ、ハロ、カルボキシ、ホルミル、ニトロ、およびシアノより独立に選択され、各アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、およびアリール部分は、独立に、1〜3個のハロで置換されていてもよく；
Z3、Z4、およびZ5は、水素、アルキル、重水素化アルキル、C1〜6アルコキシ、重水素化C1〜6アルコキシ、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、アルキルオキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アリールオキシ、アラルキルオキシ、アルキルチオキシ、アルケニルチオキシ、アルキニルチオキシ、アリールチオキシ、アラルキルチオキシ、アミノ、ヒドロキシ、チオ、ハロ、カルボキシ、ホルミル、ニトロ、およびシアノよりそれぞれ独立に選択され、各アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、およびアリール部分は、独立に、1〜3個のハロで置換されていてもよく；
Z1、Z2、またはZ4の少なくとも1つがHであることを条件とし；
Z6は、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、およびアラルキルより選択され、各アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、およびアリール部分は、独立に、1〜3個のハロで置換されていてもよく；
各Z8は、独立に、水素、無置換C1〜C6アルキル、置換C1〜C6アルキル、無置換C1〜C6アルコキシ、無置換重水素化C1〜C6アルコキシ、置換C1〜C6アルコキシ、および置換重水素化C1〜C6アルコキシであり、該置換されたアルキル、アルコキシ、および重水素化アルコキシは、アミノ、一置換もしくは二置換のアミノ、環状C1〜C5アルキルアミノ、イミダゾリル、C1〜C6アルキルピペラジニル、モルホリノ、チオール、チオエーテル、テトラゾール、カルボン酸、エステル、アミド、一置換もしくは二置換のアミド、N結合アミド、N結合スルホンアミド、スルホキシ、スルホネート、スルホニル、スルホキシ、スルフィネート、スフィニル、ホスホノオキシ、ホスフェート、またはスルホンアミドより選択される1つまたは複数の基で置換されており、各アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、およびアリールは、1〜3個のハロで置換されていてもよい。
【請求項２】
Y3およびY4がそれぞれ炭素である、請求項1記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、溶媒和物、もしくは立体異性体。
【請求項３】
Z3、Z4およびZ5がそれぞれ、ハロ、無置換C1〜C3アルキル、置換C1〜C3アルキル、無置換C1〜C3アルコキシ、置換C1〜C3アルコキシ、無置換重水素化C1〜C3アルコキシ、または置換C1〜C3アルコキシより選択され、各アルキル、およびアルコキシ部分が、1〜3個のハロで独立に置換され得る、上記請求項のいずれか一項記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、溶媒和物、もしくは立体異性体。
【請求項４】
Z3、Z4、およびZ5がそれぞれ、ブロモ、クロロ、フルオロ、メチル、1〜3個のハロで置換されていてもよい重水素化メチル、1〜3個のハロで置換されていてもよいメトキシ、または重水素化メトキシより選択される、上記請求項のいずれか一項記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、溶媒和物、もしくは立体異性体。
【請求項５】
式(Ia)：
2021512953.tif 000222
を有する、上記請求項のいずれか一項記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、溶媒和物、もしくは立体異性体：
式中、
L、Y1、Y2、Y5、Z3、Z4、Z5、およびZ6はそれぞれ、請求項1〜4のいずれか一項で定義される通りであり、
エフェクターは、(i)ゲムシタビンのリン酸誘導体、または(ii)ゲムシタビンのリン酸誘導体の塩形態、の部分である。
【請求項６】
式(Ib-i)、(Ib-ii)、(Ib-iii)、(Ib-iv)、(Ib-v)、(Ib-vi)、(Ib-vii)、(Ib-viii)、(Ib-ix)、(Ib-x)、(Ib-xi)、(Ib-xii)、(Ib-xiii)、(Ib-xiv)、(Ib-xv)、(Ib-xvi)、(Ib-xvii)、または(Ib-xviii)：
2021512953.tif 000223
2021512953.tif 000224
を有する、上記請求項のいずれか一項記載の化合物、または上記の式のいずれかの薬学的に許容される塩、エステル、アミド、溶媒和物、もしくは立体異性体：
式中、
Z3およびZ5は、それぞれ独立に、ハロ、1〜3個のハロで置換されていてもよいメチル、1〜3個のハロで置換されていてもよいメトキシ、または重水素化メトキシであり；
Z4は、存在する場合、ハロ、1〜3個のハロで置換されていてもよいメチル、1〜3個のハロで置換されていてもよいメトキシ、または重水素化メトキシであり；
-L-エフェクターは、-(C1〜C3)アルキレン-O-C(O)-エフェクター、
2021512953.tif 000225
であり：
Dは、-(C1〜C3)アルキレン-であり；
Eは、-O-、-O-C(O)N(H)-、-O-C(S)N(H)-、-S-または-S-C(O)N(H)-であり；
Aは、-(C1〜C3)アルキレン-O-C(O)-であり；
エフェクターは、(i)ゲムシタビンのリン酸誘導体、または(ii)ゲムシタビンのリン酸誘導体の塩形態、の部分である。
【請求項７】
前記リンカー領域(L)が-C(H)2-O-C(O)-である、上記請求項のいずれか一項記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、溶媒和物、もしくは立体異性体。
【請求項８】
式(Id-i)、(Id-ii)、(Icd-iii)、(Id-iv)、(Id-v)、(Id-vi)、(Id-vii)、(Id-viii)、(Id-ix)、(Id-x)、(Id-xi)、(Id-xii)、(Id-xiii)、(Id-xiv)、(Id-xv)、(Id-xvi)、(Id-xvii)、(Id-xviii)、(Id-xix)、または(Id-xx)：
2021512953.tif 000226
2021512953.tif 000227
を有する、請求項1記載の化合物、または上記の式のいずれかの薬学的に許容される塩、エステル、アミド、溶媒和物、もしくは立体異性体：
式中、
Z3、Z4、およびZ5は、それぞれ独立に、1〜3個のハロで置換されていてもよいメチル、ハロ、1〜3個のハロで置換されていてもよいメトキシ、または重水素化メトキシであり；
M2は-O- Na+、-O- Et3NH+、-O- K+、-O- NH4+である。
【請求項９】
Z3、Z5、およびZ4が、存在する場合、それぞれ、1〜3個のハロで置換されていてもよいメトキシ、または重水素化メトキシである、上記請求項のいずれか一項記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、溶媒和物、もしくは立体異性体。
【請求項１０】
Z3およびZ5が、それぞれ独立にブロモまたはフルオロであり、Z4が、存在する場合、1〜3個のハロで置換されていてもよいメトキシ、または重水素化メトキシである、上記請求項のいずれか一項記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、溶媒和物、もしくは立体異性体。
【請求項１１】
前記化合物が、そのリン酸ナトリウムまたはリン酸トリエチルアンモニウム塩形態である、上記請求項のいずれか一項記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、溶媒和物、もしくは立体異性体。
【請求項１２】
以下の構造：
2021512953.tif 000228
2021512953.tif 000229
のうちの1つを有する、請求項1記載の化合物、または化合物1〜9のうちのいずれか1つの薬学的に許容される塩、エステル、アミド、溶媒和物、もしくは立体異性体。
【請求項１３】
式(Id-ii-1)：
2021512953.tif 000230
を有する、請求項1記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、溶媒和物、もしくは立体異性体：
式中、
Z3、Z4、およびZ5は、それぞれ独立に、水素、1〜3個のハロで置換されていてもよいメチル、ハロ、1〜3個のハロで置換されていてもよいメトキシ、または重水素化メトキシであり；
各M2は、OHおよびO- (M1)からなる群より独立に選択され、(M1)はそれぞれ出現時に、独立に、金属陽イオン、アンモニウム、アルキルアンモニウム陽イオン、またはアミノ酸陽イオンである。
【請求項１４】
(M1)が、Na+、Ca2+、K+、Mg2+、Zn2+、NH4+、(HNEt3)+、メグルミン-H+、トロメタミン-H+、ジエタノールアミン-H+、リジン-H+、およびアルギニン-H+からなる群より選択される、請求項13記載の化合物。
【請求項１５】
Z5およびZ3のそれぞれが、独立にメトキシである、請求項13〜14のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１６】
Z4が水素である、請求項13〜15のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１７】
前記化合物が、
2021512953.tif 000231
である、請求項13〜16のいずれか一項記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、溶媒和物、もしくは立体異性体。
【請求項１８】
上記請求項のいずれか一項記載の化合物を薬学的に許容される担体とともに含む、または上記請求項のいずれか一項記載の化合物の薬学的に許容される塩、エステル、アミドもしくは溶媒和物をその薬学的に許容される担体とともに含む、組成物。
【請求項１９】
医薬で使用するための、請求項1〜17のいずれか一項記載の化合物、または薬学的に許容される塩、エステル、アミド、もしくは溶媒和物。
【請求項２０】
増殖性状態の治療または予防の方法で使用するための、請求項1〜17のいずれか一項記載の化合物、または薬学的に許容される塩、エステル、アミド、もしくは溶媒和物。
【請求項２１】
前記増殖性状態が、膀胱、脳、乳房、結腸、頭頸部、腎臓、肺、肝臓、卵巣、膵臓、前立腺、または皮膚のがんより選択されるがんである、請求項20記載の治療または予防の方法で使用するための、前記化合物、または薬学的に許容される塩、エステル、アミド、もしくは溶媒和物。
【請求項２２】
増殖性状態の治療または予防の方法で使用するための医用薬剤の調製のための、請求項1〜21のいずれか一項記載の化合物、または薬学的に許容される塩、エステル、アミド、もしくは溶媒和物の使用。
【請求項２３】
CYP1B1酵素を発現する腫瘍細胞の存在について患者を診断する方法であって、
(a)請求項1〜21のいずれか一項記載の特定の化合物を該患者に投与する工程、
(b)続いて生成される、対応するヒドロキシル化代謝物の量を決定する工程；および
(c)該量を該患者における該腫瘍細胞の有無と相関させる工程
を含む、方法。
【請求項２４】
(1)患者において腫瘍の存在を特定し；
(2)治療的または予防的に有用な量の請求項1〜21のいずれか一項記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、もしくは溶媒和物を投与することによって、前記治療を必要とするとして特定された該患者を治療する、
方法。
【請求項２５】
治療的に有用な量の請求項1〜21のいずれか一項記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、もしくは溶媒和物を、それらを必要とする対象に投与する工程
を含む、増殖性状態を治療する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
優先権の主張
本出願は、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる、2018/2/2に出願された米国仮出願第62/625,820号の恩恵を主張する。
【０００２】
発明の分野
本発明は、例えば、チトクロームP450 1B1（CYP1B1）およびそのアレル変異体を発現する細胞を特徴とするがんおよび他の増殖性状態の治療または予防で使用するための、新規な小分子薬物コンジュゲート（SMDC）に関する。本発明は、医学療法で、例えば、がんまたは他の増殖性状態の治療または予防で使用するための1種または複数種のそのような化合物を含む薬学的組成物、およびヒトまたは非ヒト動物患者においてがんまたは他の状態を治療するための方法も提供する。本発明の他の局面は、本明細書においてさらに開示される。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
CYP1B1は、Sutter et al.（J Biol. Chem., May 6; 269(18):13092-9, 1994）（非特許文献1）によって記載されているように、CYP1A1およびCYP1A2もまた含むダイオキシン誘導性CYP1遺伝子ファミリーのメンバーである。CYP1B1は、ステロイド、生体異物、薬物、および／またはSMDCを含めた様々な基質を代謝および活性化することができるヘムチオレートモノオキシゲナーゼ酵素である。CYP1B1タンパク質は、様々な組織原タイプの幅広い原発性および転移性のヒトがんで高頻度に発現しており、正常な組織では、発現していないか、または無視できるレベルである（McFadyen MC, Melvin WT and Murray GI, "Cytochrome P450 Enzymes: Novel Options for Cancer Therapeutics", Mol Cancer Ther., 3(3): 363-71, 2004（非特許文献2）; McFadyen MC and Murray GI, "Cytochrome P450 1B1: a Novel Anticancer Therapeutic Target", Future Oncol., 1(2): 259-63, 2005（非特許文献3））。
【０００４】
より具体的には、CYP1B1は、膀胱、脳、乳房、結腸、頭頸部、腎臓、肺、肝臓、卵巣、前立腺および皮膚のがんで発現しており、対応する正常な組織では発現していないことが示されている。例えば、Barnett, et al.in Clin. Cancer Res., 13(12): 3559-67, 2007（非特許文献4）によって、CYP1B1は、膠芽腫、退形成星状細胞腫、乏突起神経膠腫、および退形成乏突起神経膠腫を含めたグリア系腫瘍で過剰発現しているが、影響をうけていない脳組織では過剰発現していないことが報告され；Carnell, et al., in Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys., 58(2): 500-9, 2004（非特許文献5）によって、CYP1B1は前立腺腺がんで過剰発現しているが、対応する正常な前立腺組織では過剰発現していないことが報告され；Carnell, et al., 2004（同書）によって、CYP1B1は（n=22、100％）の膀胱がんで発現していることも示され；Downie, et al., in Clin. Cancer Res., 11(20): 7369-75, 2005（非特許文献6）、およびMcFadyen, et al., in Br. J. Cancer, 85(2): 242-6, 2001（非特許文献7）によって、原発性および転移性卵巣がんにおけるCYP1B1の発現の増大が報告されたが、正常な卵巣組織では報告されず；Gibson, et al., in Mol. Cancer Ther., 2(6): 527-34, 2003（非特許文献8）、およびKumarakulasingham, et al., in Clin. Cancer Res., 11(10): 3758-65, 2005（非特許文献9）によって、CYP1B1は、対応する正常な組織と比較して、結腸腺がんで過剰発現していることが報告された。
【０００５】
いくつかの研究によって、CYP1B1は、対応する正常な組織と比較して、乳がんで過剰発現していることが示された（例えば：Murray GI, Taylor MC, McFadyen MC, McKay JA, Greenlee WF, Burke MD and Melvin WT, "Tumor-Specific Expression of Cytochrome P450 CYP1B1", Cancer Res., 57(14): 3026-31, 1997（非特許文献10）; Haas S, Pierl C, Harth V, Pesch B, Rabstein S, Bruning T, Ko Y, Hamann U, Justenhoven C, Brauch H and Fischer HP, "Expression of Xenobiotic and Steroid Hormone Metabolizing Enzymes in Human Breast Carcinomas". Int. J. Cancer, 119(8): 1785-91, 2006（非特許文献11）; McKay JA, Murray GI, Ah-See AK, Greenlee WF, Marcus CB, Burke MD and Melvin WT, "Differential Expression of CYP1A1 and CYP1B1 in Human Breast Cancer", Biochem. Soc. Trans., 24(2): 327S, 1996（非特許文献12）を参照されたい）。
【０００６】
Everett, et al., in J. Clin. Oncology, 25: 18S, 2007（非特許文献13）によって、CYP1B1は悪性黒色腫および播種性疾患で過剰発現しているが、正常な皮膚では過剰発現していないことが報告された。Chang, et al., in Toxicol. Sci., 71(1): 11-9, 2003（非特許文献14）によって、CYP1B1タンパク質は正常な肝臓中に存在しないことが報告されたが、Everett, et al., 2007（同書）によって、肝臓への黒色腫ステージIV転移におけるCYP1B1の過剰発現が確証されたが、隣接する正常な肝臓組織では確証されなかった。
【０００７】
Greer, et al., in Proc. Am. Assoc. Cancer Res., 45: 3701, 2004（非特許文献15）によって、CYP1B1は頭頸部扁平上皮がんの悪性進行中に過剰発現しているが、正常な上皮では過剰発現していないことが報告された。
【０００８】
McFadyen, et al., in Br. J. Cancer, 91(5): 966-71, 2004（非特許文献16）によって、CYP1B1は腎臓がんで検出されたが、対応する正常な組織では検出されなかった。
【０００９】
Murray, et al., 2004（同書）は、免疫組織化学的検査を使用して、正常な肺組織と比較して、肺がん細胞でCYP1B1の過剰発現を示した。Su, et al., in Anti-Cancer Res., 2, 509-15, 2009（非特許文献17）は、免疫組織化学的検査を使用して、進行したステージIVの非小細胞肺がんにおいて、初期ステージの該疾患と比較してCYP1B1の過剰発現を示した。
【００１０】
CYP1B1の発現は様々な異なるがんおよび他の増殖性状態に特徴的であること、およびCYP1B1の発現は、そのような様々ながんおよび他の状態を定義するのに使用することができることが、上記で引用した多数の開示から明らかである。正常（非がん性）細胞は有意なレベルのCYP1B1を発現しないので、CYP1B1を発現する細胞で細胞毒性を示すが正常細胞で実質的に非細胞毒性である化合物は、CYP1B1の発現を特徴とするがんにおける標的指向抗がん剤としての有用性を有するであろうことも当然期待され得る。「標的指向」は、そのような化合物が、全身的に送達され得、CYP1B1を発現するがん性細胞の存在下でのみ活性化されると考えられ、体の残りの部分に対して実質的に非毒性のままであることを意味する。
【００１１】
さらに、いくつかのチトクロームP450酵素は、様々な抗がん薬を代謝および解毒することが公知である。McFadyen, et al.（Biochem Pharmacol. 2001, Jul 15; 62(2): 207-12（非特許文献18））によって、非CYP1B1発現細胞と比較した場合に、CYP1B1を発現する細胞におけるドセタキセルの感受性の有意な低下が実証された。この発見は、細胞におけるCYP1B1の存在によって、いくつかの細胞毒性薬物に対するその感受性が低下され得ることを示す。したがって、CYP1B1活性化SMDCは、薬物抵抗性がCYP1B1によって媒介されるがんの治療に有用であり得る。
【００１２】
さらに、CYP1B1遺伝子は、がんにおいて非常に多形性があり、コードされるタンパク質の発現および／または活性を変化させる、CYP1B1遺伝子内に含まれるいくつかの一塩基多形が特定されている。これらのうち、CYP1B1*3（4326C>G; L432V）アレルは、Sissung, et al. in Mol Cancer Ther., 7(1): 19-26, 2008（非特許文献19）、および本明細書において引用される参考文献によって記載されているように、いくつかの基質に対するCYP1B1の増大した発現と酵素キネティクスの両方により特徴づけられた。この発見は、CYP1B1だけでなく、該酵素のアレル変異体もSMDCの活性化およびがんへの標的指向に寄与し得ることを示す。
【００１３】
SMDCは、効力の喪失なしに薬物の望まれない毒性またはいくつかの他の負の属性を低下させるための手段として検討された。SMDCは、不活性にするように化学的に修飾されているが、投与の後で、体内で薬物の活性型に代謝されるか、またはさもなければ変換される、薬物である。正常な組織と比較した際の原発腫瘍および転移性疾患におけるCYP1B1の過剰発現は、McFadyen et al., Mol Cancer Ther., 3(3), 363-71, 2004（非特許文献20）によって概説されるように、標的指向がん療法のためのCYP1B1活性化SMDCの開発に対して、極めて大きな機会を与える。実際に、標的指向がん療法のためのCYP1B1活性化SMDCの発見および開発は、Patterson LH and Murray GI in Curr Pharm Des., 8(15): 1335-47, 2002（非特許文献21）によって概説されるように、正常な組織で発現しているチトクロームP450によって活性化されるSMDCアルキル化剤、シクロホスファミド、イホスファミド、ダカルバジン、プロカルバジンなどの、臨床的に使用される既存の非標的指向性チトクロームP450活性化SMDCを超える有意な薬理学的利点を与える可能性がある。
【００１４】
SMDC設計におけるいわゆる「トリガー−リンカー−エフェクター」化学の利用は、リンカーの断片化を開始してエフェクター（典型的には活性薬物）を放出するために、トリガーの活性化を必要とし、エフェクターの生物活性は、SMDC形態ではマスクされている。CYP1B1などの腫瘍発現性チトクロームP450を標的指向する選択的SMDCモジュラー設計は、(1)選択的トリガー部分の特定、(2)トリガーの活性化に続いて（通常、芳香族ヒドロキシル化によって）効率的に断片化する生体安定性リンカーの使用、および(3)トリガーリングプロセスの効率を妨げない適切なエフェクターまたは薬物を必要とする。
【００１５】
WO 99/40944（特許文献1）は、担体フレームワークに結合した薬物部分を含むSMDCを記載しており、記載されているSMDCは、CYP1B1によるヒドロキシル化を介して活性化されて、薬物部分を放出する。
【００１６】
WO 2010/125350（特許文献2）も、CYP1B1によるヒドロキシル化を介して活性化されて、薬物部分を放出するSMDCを記載している。
【００１７】
したがって、それらを必要とする患者に有用な新規なSMDCの強い必要性が依然として存在する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１８】
【特許文献１】WO 99/40944
【特許文献２】WO 2010/125350
【非特許文献】
【００１９】
【非特許文献１】Sutter et al.（J Biol. Chem., May 6; 269(18):13092-9, 1994）
【非特許文献２】McFadyen MC, Melvin WT and Murray GI, "Cytochrome P450 Enzymes: Novel Options for Cancer Therapeutics", Mol Cancer Ther., 3(3): 363-71, 2004
【非特許文献３】McFadyen MC and Murray GI, "Cytochrome P450 1B1: a Novel Anticancer Therapeutic Target", Future Oncol., 1(2): 259-63, 2005
【非特許文献４】Barnett, et al.in Clin. Cancer Res., 13(12): 3559-67, 2007
【非特許文献５】Carnell, et al., in Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys., 58(2): 500-9, 2004
【非特許文献６】Downie, et al., in Clin. Cancer Res., 11(20): 7369-75, 2005
【非特許文献７】McFadyen, et al., in Br. J. Cancer, 85(2): 242-6, 2001
【非特許文献８】Gibson, et al., in Mol. Cancer Ther., 2(6): 527-34, 2003
【非特許文献９】Kumarakulasingham, et al., in Clin. Cancer Res., 11(10): 3758-65, 2005
【非特許文献１０】Murray GI, Taylor MC, McFadyen MC, McKay JA, Greenlee WF, Burke MD and Melvin WT, "Tumor-Specific Expression of Cytochrome P450 CYP1B1", Cancer Res., 57(14): 3026-31, 1997
【非特許文献１１】Haas S, Pierl C, Harth V, Pesch B, Rabstein S, Bruning T, Ko Y, Hamann U, Justenhoven C, Brauch H and Fischer HP, "Expression of Xenobiotic and Steroid Hormone Metabolizing Enzymes in Human Breast Carcinomas". Int. J. Cancer, 119(8): 1785-91, 2006
【非特許文献１２】McKay JA, Murray GI, Ah-See AK, Greenlee WF, Marcus CB, Burke MD and Melvin WT, "Differential Expression of CYP1A1 and CYP1B1 in Human Breast Cancer", Biochem. Soc. Trans., 24(2): 327S, 1996
【非特許文献１３】Everett, et al., in J. Clin. Oncology, 25: 18S, 2007
【非特許文献１４】Chang, et al., in Toxicol. Sci., 71(1): 11-9, 2003
【非特許文献１５】Greer, et al., in Proc. Am. Assoc. Cancer Res., 45: 3701, 2004
【非特許文献１６】McFadyen, et al., in Br. J. Cancer, 91(5): 966-71, 2004
【非特許文献１７】Su, et al., in Anti-Cancer Res., 2, 509-15, 2009
【非特許文献１８】McFadyen, et al.（Biochem Pharmacol. 2001, Jul 15; 62(2): 207-12
【非特許文献１９】Sissung, et al. in Mol Cancer Ther., 7(1): 19-26, 2008
【非特許文献２０】McFadyen et al., Mol Cancer Ther., 3(3), 363-71, 2004
【非特許文献２１】Patterson LH and Murray GI in Curr Pharm Des., 8(15): 1335-47, 2002
【発明の概要】
【００２０】
本発明は、新規な構造的および機能的特徴を有する、記載されるSMDCを提供し、これらの新規な特徴は、これらのSMDCを必要としている患者の未だ対処されていない要求を満たすために開発された。
【００２１】
第1の局面によれば、本発明は、式(I)の化合物：
2021512953.tif 000003
またはその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物、もしくは立体異性体に関し、
式中、
-L-は、-(C1〜C5)アルキレン-O-C(O)-、-(C3〜C5)アルケニレン-O-、
2021512953.tif 000004
として定義され、
Aは、-(C1〜C5)アルキレン-O-C(O)-であり；
Eは、-O-、-O-C(O)N(H)-、-O-C(S)N(H)-、または-S-、もしくは-S-C(O)N(H)-であり；
Dは、-(C1〜C5)アルキレン-または-(C3〜C5)アルケニレン-であり；
Y1は、C=C、炭素または窒素であり、Y1が窒素である場合、Z1は存在せず；
Y4およびY5のそれぞれは、独立に、炭素または窒素であり、Y3が窒素である場合は、Z3は存在せず、Y4が窒素である場合は、Z5は存在せず；
Y2は、CまたはNであり、Y2が窒素である場合は、Z2は存在せず；
Y5は、酸素、炭素、窒素、または硫黄原子であり、Y5が酸素または硫黄原子である場合は、Z6は存在せず；
Z1およびZ2のそれぞれは、存在する場合、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、アルキルオキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アリールオキシ、アラルキルオキシ、アルキルチオキシ、アルケニルチオキシ、アルキニルチオキシ、アリールチオキシ、アラルキルチオキシ、アミノ、ヒドロキシ、チオ、ハロ、カルボキシ、ホルミル、ニトロ、およびシアノより独立に選択され、各アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、およびアリール部分は、独立に、1〜3個のハロで置換されていてもよく；
Z3、Z4、およびZ5は、水素、アルキル、重水素化アルキル、C1〜6アルコキシ、重水素化C1〜6アルコキシ、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、アルキルオキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アリールオキシ、アラルキルオキシ、アルキルチオキシ、アルケニルチオキシ、アルキニルチオキシ、アリールチオキシ、アラルキルチオキシ、アミノ、アルキルアミノ、アラルキルアミノ、アリールアミノ、ヒドロキシ、チオ、ハロ、カルボキシ、ホルミル、ニトロ、およびシアノよりそれぞれ独立に選択され、各アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、およびアリール部分は、独立に、1〜3個のハロで置換されていてもよく；
Z1、Z2、またはZ4の少なくとも1つがHであることを条件とし；
Z6は、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、およびアラルキルより選択され、各アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、およびアリール部分は、独立に、1〜3個のハロで置換されていてもよく；
各Z8は、独立に、水素、無置換C1〜C6アルキル、置換C1〜C6アルキル、無置換C1〜C6アルコキシ、無置換重水素化C1〜C6アルコキシ、置換C1〜C6アルコキシ、および置換重水素化C1〜C6アルコキシであり、置換されたアルキル、アルコキシおよび重水素化アルコキシは、アミノ、一置換もしくは二置換のアミノ、環状C1〜C5アルキルアミノ、イミダゾリル、C1〜C6アルキルピペラジニル、モルホリノ、チオール、チオエーテル、テトラゾール、カルボン酸、エステル、アミド、一置換もしくは二置換のアミド、N結合アミド、N結合スルホンアミド、スルホキシ、スルホネート、スルホニル、スルホキシ、スルフィネート、スフィニル、ホスホノオキシ、ホスフェート、またはスルホンアミドより選択される1つまたは複数の基で置換されており、各アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、およびアリールは、1〜3個のハロで置換されていてもよい。
【００２２】
本発明の別の局面は、医用薬剤として使用するための、本明細書に記載される本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、もしくは溶媒和物に関する。
【００２３】
本発明の別の局面は、増殖性状態の治療または予防の方法で使用するための、本明細書に記載される本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、もしくは溶媒和物に関する。
【００２４】
本発明の別の局面は、治療的または予防的に有用な量の、本明細書に記載される本発明の化合物を、それを必要とする患者に投与することを含む、治療または予防の方法に関する。
【００２５】
本発明の別の局面は、治療的または予防的に有用な量の、本明細書に記載される本発明の化合物を、それを必要とする患者に投与することを含む治療または予防の方法であって、増殖性状態が、膀胱、脳、乳房、結腸、頭頸部、腎臓、肺、肝臓、卵巣、膵臓、前立腺、または皮膚のがんより選択されるがんである、治療または予防の方法に関する。
【００２６】
本発明の別の局面は、治療的または予防的に有用な量の、本明細書に記載される本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、もしくは溶媒和物を、それらを必要とする対象に投与することを含む、増殖性状態の治療または予防の方法に関する。
【００２７】
本発明の別の局面は、増殖性状態の治療または予防の方法で使用するための医用薬剤の調製のための、本明細書に記載される本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、もしくは溶媒和物の使用に関する。
【００２８】
本発明の別の局面は、CYP1B1酵素を発現する腫瘍細胞の存在について患者を診断する方法であって、(a)本明細書において記載される態様のいずれかで開示される特定のSMDCを患者に投与すること；(b)続いて生成される、対応するヒドロキシル化代謝物の量を決定すること；および(c)該量を患者における腫瘍細胞の有無と相関させること含む方法に関する。
【００２９】
本発明の別の局面は、
(1)患者において腫瘍の存在を特定し；
(2)治療的または予防的に有用な量の、本明細書に記載される本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、もしくは溶媒和物を投与することによって、治療を必要とするとして特定された患者を治療する、
方法、に関する。
【００３０】
本発明の別の局面は、式(I)のある特定の化合物を製造するのに使用することができる中間化合物に関し、中間体は、式(I)で定義される通りであるか、またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、溶媒和物、もしくは立体異性体である。
【００３１】
本発明のさらなる局面および態様は、以下に続く記載から追えるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１ａ】(5,7-ジ(メトキシ)ベンゾフラン-2-イル)メチル(1-((2R,4R,5R)-3,3-ジフルオロ-4-ヒドロキシ-5-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン-2-イル)-2-オキソ-1,2-ジヒドロピリミジン-4-イル)カルバメート(I)のCYP1B1誘導性3-ヒドロキシル化、それに続く、1,4脱離による、細胞毒性エフェクター分子の自発的放出の機構を示す。
【図１ｂ】(5,7-ジ(メトキシ)ベンゾフラン-2-イル)メチル(1-((2R,4R,5R)-3,3-ジフルオロ-4-ヒドロキシ-5-(ヒドロキシル-メチル)テトラヒドロフラン-2-イル)-2-オキソ-1,2-ジヒドロピリミジン-4-イル)カルバメート(I)のCYP1B1誘導性4-ヒドロキシル化、それに続く、1,6脱離による、細胞毒性エフェクター分子の自発的放出の機構を示す。
【図１ｃ】(5,7-ジ(メトキシ)ベンゾフラン-2-イル)メチル(1-((2R,4R,5R)-3,3-ジフルオロ-4-ヒドロキシ-5-(ヒドロキシル-メチル)テトラヒドロフラン-2-イル)-2-オキソ-1,2-ジヒドロピリミジン-4-イル)カルバメート(I)のCYP1B1誘導性6-ヒドロキシル化、それに続く、1,8脱離による、細胞毒性エフェクター分子の自発的放出の機構を示す。
【図１ｄ】(5,6,7-トリ(メトキシ)ベンゾフラン-2-イル)メチル(1-((2R,4R,5R)-3,3-ジフルオロ-4-ヒドロキシ-5-(ヒドロキシル-メチル)テトラヒドロフラン-2-イル)-2-オキソ-1,2-ジヒドロ-ピリミジン-4-イル)カルバメート(II)のCYP1B1誘導性C-6脱アルキル化、それに続く、1,6脱離による、細胞毒性エフェクター分子の自発的放出の機構を示す。
【図２ａ】CD-1マウスへのゲムシタビンのiv投与後の、ゲムシタビン、およびdFdUの平均血漿濃度を示す。
【図２ｂ】CD-1マウスへのInt 1-4のiv投与後の、Int 1-4、ゲムシタビン、およびdFdUの平均血漿濃度を示す。
【図３ａ】雄のCD-1マウスへの化合物1（11.6mg/kgおよび23.2mg/kg）のiv投与後の、化合物1、Int 1-4、ゲムシタビン、dFdU、およびゲムシタビンモノホスフェートの血漿濃度を示す。
【図３ｂ】雄のCD-1マウスへのInt 1-4（10.0mg/kg、製剤1および2）のiv投与後の、化合物1、Int 1-4、ゲムシタビン、dFdU、およびゲムシタビンモノホスフェートの血漿濃度を示す。
【図４】CD-1マウスへのiv投与後の、Int 3-3のiv投与後のInt 3-3、ゲムシタビン、およびdFdUの濃度を示す。
【図５】CD-1マウスへのInt 1-4のiv投与後の、正常な組織および血漿におけるInt 1-4、ゲムシタビン、およびdFdUのC0またはCmaxを示す。
【図６】CD-1マウスへのゲムシタビンのiv投与後の、正常な組織および血漿におけるゲムシタビンおよびdFdUのC0またはCmaxを示す。
【図７】雄のカニクイザルにおけるInt 1-4のiv投与後の、Int 1-4、ゲムシタビン、およびdFdUの平均血漿濃度を示す。
【図８ａ】雄のカニクイザルにおけるInt 1-4のiv投与後の、Int 1-4、ゲムシタビン、およびdFdUの平均血漿濃度を示す。
【図８ｂ】雄のカニクイザルにおけるゲムシタビン（2.65および5mg/kg）のiv投与後の、ゲムシタビンおよびdFdUの平均血漿濃度を示す。
【図９ａ】雄のカニクイザルにおける化合物1（5mg/kg）のiv投与後の、化合物1、Int 1-4、ゲムシタビン、およびdFdUの血漿濃度を示す。
【図９ｂ】雄のカニクイザルにおけるゲムシタビンのiv投与後の、ゲムシタビンおよびdFdUの血漿濃度を示す。
【図１０ａ】雄のSprague-Dawleyラットへのゲムシタビンのiv投与後の、ゲムシタビンおよびdFdUの平均血漿濃度を示す。
【図１０ｂ】雄のSprague-DawleyラットへのInt 1-4のiv投与後の、Int 1-4、ゲムシタビン、およびdFdUの平均血漿濃度を示す。
【図１１】雄のビーグル犬へのInt 1-4のiv投与後の、Int 1-4、ゲムシタビン、およびdFdUの平均血漿濃度を示す。
【図１２ａ】雄のビーグル犬へのInt 1-4のiv投与後の、Int 1-4、ゲムシタビン、およびdFdUの平均血漿濃度を示す。
【図１２ｂ】雄のビーグル犬へのゲムシタビンのiv投与後の、ゲムシタビンおよびdFdUの平均血漿濃度を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
発明の詳細な説明
エフェクター分子が薬理学的機能を有するゲムシタビン類似体であるSMDCが開示される。
【００３４】
これらのエフェクター分子は、式(I)の化合物を形成するようにこれを反応させることによって、化学的に修飾されている。式(I)の化合物のヒドロキシル化、例えば、CYP1B1誘導性ヒドロキシル化は、ヒドロキシル化またはエポキシド形成を介するヒドロキシル化の結果として起こる式(I)の化合物の崩壊によって、ゲムシタビン分子の放出を可能にする。あるいは、式(II)の化合物の脱アルキル化、例えば、CYP1B1誘導性脱アルキル化は、式(II)の化合物の崩壊によって、ゲムシタビン分子の放出を可能にする。
【００３５】
概略を述べると、式(I)の化合物の構造は、3つの部分：トリガー領域、リンカー、および一リン酸化されたゲムシタビン分子を含むと考えられ得る。トリガーは、典型的にはCYP1B1誘導性ヒドロキシル化のための基質として働き、式(I)の左側に示される二環式部分およびそれらの置換基を含む、すなわち、Y1、Y2、Y3、Y4、Y5、Z1、Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、およびこれらの部分のいくつかが結合している残りの炭素原子を含む化合物のその部分を含むと一般に理解され得る。
【００３６】
化合物のトリガー領域は、Lを含むリンカー領域を介して結合しており、リンカー領域は、そのようにラベルされたエフェクター分子に結合している。以下の議論では、いくつかの用語を参照し、これらの用語は、文脈においてそうでないと示されない限り、以下に提供される意味を有すると理解されたい。
【００３７】
化学構造が示されるまたは記載される場合は、別段明確に記載のない限り、すべての炭素は、4の原子価に合致するように水素置換を有すると考えられる。例えば、化学部分-C(C)3については、9つの水素が含意されており、したがって構造は-C(CH3)3である。構造中の特定の原子は、例えば、-CH2CH2-のように、1つの水素または複数の水素を置換基（明確に定義された水素）として有するとして、文字式で記載されることもある。前述の記述的な技法は、そうでなければ複雑な構造の説明に簡潔さおよび単純さを提供するために、化学分野で一般的であることが当業者によって理解される。
【００３８】
結合点が別段示されない限り、式(I)の可変物の定義およびそれらのすべての態様に列挙される化学部分は、左から右に読まれるべきであり、右側は、定義される親構造に直接的に結合している。しかし、化学部分（例えば、-アルキルオキシ-(C1〜C25)アルキル）の左側に結合点が示される場合、この化学部分の左側が、定義される親部分に直接的に結合している。
【００３９】
化合物を構築する目的で本明細書において開示される化合物の一般的な説明を考慮する場合、そのような構築は、安定な構造の生成をもたらすことが想定される。すなわち、当業者は、安定な化合物（すなわち、立体的に実際的および／または合成的に実行可能）として通常は考えられない、理論上のいくつかの構築物を認識するであろう。
【００４０】
本明細書において記載される化合物、およびその薬学的に許容される塩または他のその誘導体は、任意で、化合物の1つまたは複数の原子が、同じ原子番号を有するが、通常天然に見られる原子質量とは異なる原子質量を有する原子に置き換えられている、同位体ラベルされた形態で存在し得る。本明細書において記載される化合物に組み込むことができる同位体の例としては、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、およびクロリドの同位体、例えば、それぞれ、2H（重水素）、3H（トリチウム）、13C、14C、15N、180、170、31P、32P、35S、18F、および36Clが挙げられる。本明細書において記載される同位体ラベルされた化合物、およびその薬学的に許容される塩、エステル、SMDC、溶媒和物、水和物、または他の誘導体は、一般に、同位体ラベルされていない試薬の代わりに容易に利用可能な同位体ラベルされた試薬を用いることによって、以下のスキームで、および／または例で開示される手順を行うことにより調製することができる。特定の水素位置が「D」または「重水素」で置き換えられる場合は、その位置における重水素の存在量は、0.015％である重水素の天然の存在量より実質的に大きく、典型的には、その位置において少なくとも50％の重水素の組み込みを有することを理解されたい。一態様では、本明細書において開示される化合物の1つまたは複数のsp3炭素に結合している1つまたは複数の水素が、重水素で置き換えられる。別の態様では、本明細書において開示される化合物の1つまたは複数のsp2炭素に結合している1つまたは複数の水素が、重水素で置き換えられる。
【００４１】
「任意の（Optional）」または「任意で」は、続いて記載される事象または状況が、生じてもよいし、または生じなくてもよいこと、および説明が、該事象または状況が生じる例、およびそれらが生じない例を含むことを意味する。当業者は、1つまたは複数の任意の置換基を含むと記載されるいずれかの分子に関して、立体的に実際的な、および／または合成的に実行可能な化合物のみが含まれることが意味されることを理解するであろう。「置換されていてもよい」は、置換または無置換を意味し、別段の指定がない限り、用語中のすべての引き続く修飾語句を指す。したがって、例えば、用語「置換されていてもよいアリールアルキル」では、分子の「アルキル」部分と「アリール」部分の両方が、置換または無置換であり得る。
【００４２】
別段の指定がない限り、用語「置換されていてもよい」は、その直前の化学部分に適用される。例えば、可変基（例えば、R）がアリール、置換されていてもよいアルキル、またはシクロアルキルとして定義される場合、アルキル基のみが置換されていてもよい。
【００４３】
化合物の「薬学的に許容される塩」は、薬学的に許容され、かつ親化合物の望ましい薬理学的活性を持つ塩を意味する。薬学的に許容される塩は非毒性であることが理解されよう。適切な薬学的に許容される塩に関するさらなる情報は、参照により本明細書に組み入れられる、Remington's Pharmaceutical Sciences, 17.sup.th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985、またはS. M. Berge, et al., “Pharmaceutical Salts”, J. Pharm. Sci., 1977; 66:1-19に見出すことができ、これらの両方とも参照により本明細書に組み入れられる。
【００４４】
薬学的に許容される酸付加塩の非限定例としては、無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸など；ならびに有機酸、例えば、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンタンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、3-(4-ヒドロキシベンゾイル)安息香酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、1,2-エタンジスルホン酸、2-ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、4-クロロベンゼンスルホン酸、2-ナフタレンスルホン酸、4-トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、グルコヘプトン酸、4,4'-メチレンビス-(3-ヒドロキシ-2-エン-1-カルボン酸）、3-フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、三級ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸、p-トルエンスルホン酸、およびサリチル酸などを用いて形成されるものが挙げられる。
【００４５】
薬学的に許容される塩基付加塩の非限定例としては、親化合物中に存在する酸性プロトンが、イオン形態のナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウム塩などに置き換えられている場合に形成されるものが挙げられる。好ましい塩は、アンモニウム、カリウム、ナトリウム、カルシウム、およびマグネシウム塩である。前述の塩は、可能であれば置換され得る。置換塩の非限定例としては、アルキル化アンモニウム塩、例えば、トリエチルアンモニウム塩が挙げられる。薬学的に許容される非毒性有機塩基に由来する塩としては、限定されないが、一級、二級、および三級アミン、天然に存在する置換アミンを含めた置換アミン、環状アミン、および塩基性イオン交換樹脂の塩が挙げられる。有機塩基の例としては、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、2-ジメチルアミノエタノール、2-ジエチルアミノエタノール、ジシクロヘキシルアミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、N-エチルピペリジン、トロメタミン、N-メチルグルカミン、ポリアミン樹脂などが挙げられる。例示的な有機塩基は、イソプロピルアミン、ジエチルアミン、エタノールアミン、トリメチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、コリン、およびカフェインである。
【００４６】
本明細書において開示される化合物のすべては、これらの化合物がそれらの薬学的に許容される塩として存在し得ることが本明細書に記載されているかどうかを問わず、それらの遊離塩基形態またはそれらの薬学的に許容される塩のいずれかを含む。
【００４７】
用語「SMDC」は、小分子薬物コンジュゲートを指す。SMDCは、特定の適用のために別の化学部分に共有結合している薬物である。
【００４８】
本明細書において使用する場合、疾患、障害または症候群を「治療する」または疾患、障害または症候群の「治療」は、(i)疾患、障害または症候群がヒトで生じるのを防止すること、すなわち疾患、障害または症候群にさらされる可能性があるか、または疾患、障害または症候群にかかりやすい可能性があるが、疾患、障害または症候群の症状をまだ経験していない、または呈していない動物において、疾患、障害または症候群の臨床症状を発生させないようにすること；(ii)疾患、障害または症候群を阻害すること、すなわち、その発生を阻止すること；および(iii)疾患、障害または症候群を軽減すること、すなわち、疾患、障害または症候群の退行を引き起こすことを含む。当技術分野において公知であるように、全身的送達対局在化送達、年齢、体重、全体的な健康状態、性別、食事、投与時間、薬物相互作用、および状態の重症度についての調整が必要である可能性があり、これらの調整は、当業者によって、常用の実験で確かめることができるであろう。
【００４９】
本明細書において開示される化合物のすべては、単一の立体異性体（単一の鏡像異性体および単一のジアステレオマーを含める）、ラセミ体、鏡像異性体とジアステレオマーの混合物、および多形体として存在し得る。本開示の化合物の立体異性体としては、幾何異性体および光学異性体、例えばアトロプ異性体が挙げられる。本明細書において開示される化合物は、幾何異性体として存在することもできる。すべてのそのような単一の立体異性体、ラセミ体およびそれらの混合物、ならびに幾何異性体は、本明細書において開示される化合物の範囲内であることが意図される。
【００５０】
さらに、本開示の化合物は、非溶媒和形態、および薬学的に許容される溶媒、例えば、水、エタノールなどとの溶媒和形態で存在し得る。一般に、溶媒和形態は、本開示の化合物の目的のために、非溶媒和形態と同等であると考えられる。
【００５１】
アルキルは、本明細書において、直鎖、環状、または分枝でもよい（文脈においてそうでないと示されない限り、典型的には直鎖である）、飽和ヒドロカルビル基を意味する。アルキル基が1つまたは複数の不飽和部位を有する場合、これらは、炭素−炭素二重結合または炭素−炭素三重結合によって構成され得る。アルキル基が炭素−炭素二重結合を含む場合は、これは、アルケニル基をもたらし；炭素−炭素三重結合の存在はアルキニル基をもたらす。一例では、アルキル、アルケニル、およびアルキニル基は、1〜25個の炭素原子を含む。別の例では、アルキル、アルケニル、およびアルキニル基は1〜10個の炭素原子を含む。別の例では、アルキル、アルケニル、およびアルキニル基は1〜6個の炭素原子を含む。別の例では、アルキル、アルケニル、およびアルキニル基は1〜4個の炭素原子を含む。別の例では、アルキル、アルケニル、およびアルキニル基は1〜3個の炭素原子を含む。別の例では、アルキル、アルケニル、およびアルキニル基は1〜2個の炭素原子を含む。別の例では、アルキル基は1個の炭素原子を含む。アルケニルおよびアルキニル基の下限は2個の炭素原子であり、シクロアルキル基の下限は3個の炭素原子であることが理解されよう。
【００５２】
アルキル、アルケニル、またはアルキニル基は、例えば、1回、2回、または3回、例えば、1回置換され得、すなわち、アルキル基の1つまたは複数の水素原子が形式的に置きかえられる。そのような置換基の例は、ハロ（例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ、およびヨード）、アリール、ヒドロキシ、ニトロ、アミノ、アルコキシ、アルキルチオ、カルボキシ、シアノ、チオ、ホルミル、エステル、アシル、チオアシル、アミド、スルホンアミド、カルバメートなどである。
【００５３】
-(C3〜C5)アルケニレンは、-(C3〜C5)アルケニレン-O-または-(C3〜C5)アルケニレン-O-C(O)N(H)-の場合のように別の原子に結合し得る、3〜5個の炭素長の二価のアルケン基であることを意味する。-(C3〜C5)アルケニレン-は、1〜4個のC1〜C6アルキル基で置換されていてもよい場合がある。
【００５４】
カルボキシは、本明細書において、脱プロトン化形態（CO2-）でもよい官能基CO2Hを意味する。
【００５５】
ハロまたはハロゲンは、それぞれ、フルオロ、ブロモ、クロロ、またはヨードである。
【００５６】
アシルおよびチオアシルは、それぞれ、式-C(O)-アルキルまたは-C(S)-アルキルの官能基を意味し、アルキルは上文で定義された通りである。
【００５７】
エステルは、部分-OC(=O)-を含む官能基を意味する。
【００５８】
アミドは、示される各水素原子がアルキルまたはアリールで置き換えられ得る、部分-N(H)C(=O)-を含む官能基を意味する。
【００５９】
カルバメートは、示される各水素原子がアルキルまたはアリールで置き換えられ得る、部分-N(H)C(=O)O-を含む官能基を意味する。
【００６０】
スルホンアミドは、示される各水素原子がアルキルまたはアリールで独立に置き換えられ得る、部分-SO2N(H)2-を含む官能基を意味する。
【００６１】
アルキルオキシ（アルコキシと同義）およびアルキルチオ部分は、それぞれ式-O-アルキルおよび-S-アルキルのものであり、アルキルは上文で定義された通りである。
【００６２】
Et3NH+は、構造
2021512953.tif 000005
を指す。
【００６３】
アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アルケニルチオ、およびアルキニルチオは、式-O-アルケニル、-O-アルキニル、-S-アルケニル、およびS-アルキニルのものであり、アルケニル、およびアルキニルは、上文で定義された通りである。
【００６４】
重水素化アルキルは、アルキル基の1つまたは複数の水素原子が重水素で置き換えられている、本明細書において定義されるアルキル基として、本明細書において意味する。本明細書において開示される分子中に1個より多い重水素化アルキル基が存在する場合、各重水素化C1〜C6アルキル基は、同じでもよいし、または異なっていてもよい。
【００６５】
重水素化C1〜C6アルキルは、C1〜C6アルキル基の1つまたは複数の水素原子が重水素で置き換えられている-C1〜C6アルキル基として、本明細書において意味する。本明細書において開示される分子中に1個より多い重水素化C1〜C6アルキル基が存在する場合、各重水素化C1〜C6アルキル基は、同じでもよいし、または異なっていてもよい。
【００６６】
重水素化アルコキシは、アルキル基の1つまたは複数の水素原子が重水素で置き換えられている-O-アルキル基として、本明細書において意味する。本明細書において開示される分子中に1個より多い重水素化アルキル基が存在する場合、各重水素化C1〜C6アルキル基は、同じでもよいし、または異なっていてもよい。
【００６７】
重水素化C1〜C6アルコキシは、C1〜C6アルキル基の1つまたは複数の水素原子が重水素で置き換えられているO-C1〜C6アルキル基として、本明細書において意味する。本明細書において開示される分子中に1個より多い重水素化C1〜C6アルキル基が存在する場合、各重水素化C1〜C6アルキル基は、同じでもよいし、または異なっていてもよい。
【００６８】
重水素化メトキシは、-OCD1〜3として本明細書において意味する。-OCD1〜3は、-OCH2D、-OCHD2、または-OCD3のいずれかを含むことを意味することを理解されたい。本明細書において開示される分子中に1個より多い重水素化メトキシ基が存在する場合、各重水素化メトキシ基は、同じでもよいし、または異なっていてもよい。
【００６９】
アミノ基は、各Rが、独立に、水素、アルキル、またはアリールである、一群の式-N(R)2を本明細書において意味する。例えば、Rは、不飽和無置換C1〜6アルキル、例えば、メチルまたはエチルでもよい。別の例では、窒素原子Nに結合している2つのR基は、結合して環を形成している。窒素原子Nに結合している2つのRが結合している一例は、-R-R-が、典型的には末端炭素原子から2つの水素原子が取り除かれたアルカンから形式的に生じるアルキレンジラジカルを形成して、それによって、アミンの窒素原子とともに環を形成する場合である。公知であるように、環状アミン中のジラジカルは必ずしもアルキレンである必要がなく、モルホリン（-R-R-は、-(CH2)2O(CH2)2-である）は、環状アミノ置換基が調製され得る1つのそのような例である。
【００７０】
本明細書におけるアミノへの言及はまた、そのようなアミノ基を含む化合物から得られたアミンの四級化またはプロトン化された誘導体をその範囲内に包含すると理解されるべきである。後者の例は、塩酸塩などの塩であると理解され得る。
【００７１】
アリールは、本明細書において、芳香族化合物から水素原子が取り除かれることによって、形式的に形成される基を意味する。
【００７２】
アリーレンジラジカルは、形式的に、2つの水素原子が取り除かれることにより、芳香族部分から生じ、文脈においてそうでないと特に示されない限り、単環式、例えば、フェニレンでもよい。当業者に公知のように、ヘテロ芳香族部分は、1つまたは複数の炭素原子およびそれらに結合している任意の水素原子の代わりに、1つまたは複数のヘテロ原子、典型的には、O、N、またはSを含む、芳香族部分のサブセットである。例示的なヘテロ芳香族部分としては、ピリジン、フラン、ピロール、チオフェン、およびピリミジンが挙げられる。ヘテロ芳香族環のさらなる例としては、ピリジル；ピリダジン（芳香族6員環中で2個の窒素原子が隣接している）；ピラジン（6員芳香族環中で2個の窒素が1,4配置している）；ピリミジン（6員芳香族環中で2個の窒素原子が1,3配置している）；および1,3,5-トリアジン（6員芳香族環中で3個の窒素原子が1,3,5配置している）が挙げられる。
【００７３】
アリールまたはアリーレンラジカルは、電子求引基で1回または複数回置換され得る。
【００７４】
ゲムシタビンのリン酸誘導体は、以下の構造：
2021512953.tif 000006
を有する化合物を含む。
【００７５】
ゲムシタビンのリン酸誘導体の塩形態の非限定例としては、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、トリエチルアミン塩、およびアンモニウム塩が挙げられる。
【００７６】
電子求引基の非限定例としては、シアノ（-CN）、ハロアルキル、アミド、ニトロ、ケト（-COR）、アルケニル、アルキニル、四級アミノ（-N+R3）、エステル、アミド(-C(O)NR2）、N結合アミド（-NR-C(=O)-R）、N結合スルホンアミド（-NR-S(=O)2R）、スルホキシ（-S(=O)2OH）、スルホネート（S(=O)2OR）、スルホニル（S(=O)2R）、およびスルホンアミド（-S(=O)2-NR2）が挙げられ、式中、各Rは、C1〜C6アルキル基、C3〜C20複素環基、またはC3〜C20アリール基より独立に選択され、C1〜C6アルキル基は、エーテル、アミノ、一置換または二置換のアミノ、環状C1〜C5アルキルアミノ、イミダゾリル、C1〜C6アルキルピペラジニル、モルホリノ、チオール、チオエーテル、テトラゾール、カルボン酸、エステル、アミド、一置換または二置換のアミド、N結合アミド（-NR-C(=O)-R）、N結合スルホンアミド（-NR-S(=O)2-R）、スルホキシ（-S(=O)2OH）、スルホネート（S(=O)2OR）、スルホニル（S(=O)2R）、スルホキシ（S(=O)OH）、スルフィネート（S(=O)OR）、スルフィニル（S(=O)R）、ホスホノオキシ（-OP(=O)(OH)2）、ホスフェート（OP(=O)(OR)2)、およびスルホンアミド（-S(=O)2-NR2）より選択される1つまたは複数の基で置換され得、式中、各Rは、C1〜C6アルキル基、C3〜C20複素環基、またはC3〜C20アリール基より独立に選択される。別の例では、各Rは、C1〜C6アルキル基（前述のアルキルの定義に基づき、C1〜C6アルキル基は、無置換C1〜C6アルコキシおよび置換C1〜C6アルコキシ基を含む）。別の例では、各Rは、C1〜C6アルキル、無置換C1〜C6アルコキシ、または置換C1〜C6アルコキシであり、置換アルキルまたは置換アルコキシは、エーテル、-OHアミノ、一置換または二置換のアミノ、環状C1〜C5アルキルアミノ、イミダゾリル、C1〜C6アルキルピペラジニル、モルホリノ、チオール、チオエーテル、テトラゾール、カルボン酸、エステル、アミド、一置換または二置換のアミド、N結合アミド（-NR-C(=O)-R）、N結合スルホンアミド（-NR-S(=O)2-R）、スルホキシ（-S(=O)2OH）、スルホネート（S(=O)2OR）、スルホニル（S(=O)2R）、スルホキシ（S(=O)OH）、スルフィネート（S(=O)OR）、スルフィニル（S(=O)R）、ホスホノオキシ（-OP(=O)(OH)2）、ホスフェート（OP(=O)(OR)2）、およびスルホンアミド（-S(=O)2-NR2）より選択される1つまたは複数の基で置換され、式中、各Rは、C1〜C6アルキル基、C3〜C20複素環基、またはC3〜C20アリール基より独立に選択される。
【００７７】
式(I)の化合物のこれらの3つの領域：トリガー、リンカー、およびエフェクター領域、の構成および可変性を次に記載する。
【００７８】
式(I)の化合物のトリガー領域は、一般に、5員環に縮合した6員環を含む共役した二環式部分を含む。
【００７９】
理論に拘束されないが、例えばCYP1B1によって行われるヒドロキシル化に対する基質としての式(I)の化合物の活性は、図1a-1dに示すように、どの位置でヒドロキシル化が起こるかに応じて、1,4、1,6、または1,8脱離のいずれかの脱離プロセスによる、化合物の自発的な崩壊につながるヒドロキシル化を受けやすいトリガー部分の構造によって、ある程度達成されると考えられる。さらに、-OCH3は、通常は、ヒドロキシル化、それに続くO-脱アルキル化を介して代謝されると考えられる。しかし、重水素化メトキシは、速度論的同位体効果を介して、CYPベースのヒドロキシル化およびO-脱アルキル化の安定性に増強を付与する可能性がある。したがって、隣接する芳香族C-H結合は、CYPベースのヒドロキシル化のための部位になり、これが、1,4、1,6、または1,8脱離を介する化合物の自発的な崩壊につながる。
【００８０】
式(I)の化合物の構造から、炭素原子の共役によって、化合物の自発的な分解に関する3機構のいずれかが、トリガー領域上の置換基の性質とは無関係に起こり得ることに気付くであろう。したがって、以下に述べるように、式(I)の化合物のこの領域の性質に対する多種多様性が許容され得る。
【００８１】
式(I)の化合物の一態様では、Y2はCであり、Y3はC(H)である。式(I)の化合物の別の態様では、Y3およびY4のそれぞれはC(H)である。式(I)の化合物の別の態様では、Y2はCであり、Y3およびY4はC(H)である。式(I)の化合物の別の態様では、Y2はCであり、Y1、Y3および、Y4はC(H)である。
【００８２】
式(I)の化合物の別の態様では、Y1はNであり、Y2はCであり、Y3はC(H)であり、Y4はC(H)であり、Y5はSである。式(I)の化合物の別の態様では、Y1はNであり、Y2はNであり、Y3はC(H)であり、Y4はC(H)であり、Y5はC(H)である。式(I)の化合物の別の態様では、Y1はC(H)であり、Y2はCであり、Y3はC(H)であり、Y4はC(H)であり、Y5はN(CH3)である。式(I)の化合物の別の態様では、Y1はC(H)であり、Y2はNであり、Y3はC(H)であり、Y4はC(H)であり、Y5はNである。式(I)の化合物の別の態様では、Y1はNであり、Y2はNであり、Y3はC(H)であり、Y4はC(H)であり、Y5はNである。式(I)の化合物の別の態様では、Y1はCであり、Y2はCであり、Y3はC(H)であり、Y4はC(H)であり、Y5はSである。式(I)の化合物の別の態様では、Y1はNであり、Y2はCであり、Y3はC(H)であり、Y4はC(H)であり、Y5はOである。式(I)の化合物の別の態様では、Y1はC(H)であり、Y2はCであり、Y3はC(H)であり、Y4はC(H)であり、Y5はOである。
【００８３】
置換基Z1、Z2およびZ4は、一般に、本明細書において記載される通りである。しかし、これらの部分の少なくとも1つは、化合物のヒドロキシル化のための部位を与えるために、水素原子である。式(I)の化合物のいくつかの態様では、Z2またはZ4のいずれかは水素である。他の態様では、Z2およびZ4は水素である。これらの態様のいずれかでは、Z2またはZ4が水素原子である、またはZ2とZ4の両方が水素原子である、またはZ2もZ4も水素原子ではない場合は、Z1は水素でもよい。式(I)の化合物のある特定の態様では、Z1、Z2およびZ4のそれぞれは水素原子である。
【００８４】
式(I)の別の態様では、Z3は、水素アルキル、重水素化アルキル、C1〜6アルコキシ、重水素化C1〜6アルコキシ、ハロ、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、アルキルオキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アリールオキシ、アラルキルオキシ、アルキルチオキシ、アルケニルチオキシ、アルキニルチオキシ、アリールチオキシ、アラルキルチオキシ、アミノ、ヒドロキシ、チオ、カルボキシ、ホルミル、ニトロ、およびシアノより選択され、各アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、およびアリール部分は、1〜3個のハロで独立に置換されていてもよい。式(I)の別の態様では、Z3はハロである。式(I)の別の態様では、Z3はメチルである。式(I)の別の態様では、Z3はメトキシである。式(I)の別の態様では、Z3はブロモである。
【００８５】
式(I)の別の態様では、Z5は、水素アルキル、重水素化アルキル、C1〜6アルコキシ、重水素化C1〜6アルコキシ、ハロ、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、アルキルオキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アリールオキシ、アラルキルオキシ、アルキルチオキシ、アルケニルチオキシ、アルキニルチオキシ、アリールチオキシ、アラルキルチオキシ、アミノ、ヒドロキシ、チオ、カルボキシ、ホルミル、ニトロ、およびシアノより選択される。式(I)の別の態様では、Z5はハロである。式(I)の別の態様では、Z5はメチルである。式(I)の別の態様では、Z5はメトキシである。式(I)の別の態様では、Z5はブロモである。
【００８６】
式(I)の別の態様では、Z3およびZ5はそれぞれ、水素アルキル、重水素化アルキル、C1〜C6アルコキシ、重水素化C1〜C6アルコキシ、ハロ、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、アルキルオキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アリールオキシ、アラルキルオキシ、アルキルチオキシ、アルケニルチオキシ、アルキニルチオキシ、アリールチオキシ、アラルキルチオキシ、アミノ、ヒドロキシ、チオ、ハロ、カルボキシ、ホルミル、ニトロ、およびシアノより選択され、各アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、およびアリール部分は、1〜3個のハロで独立に置換されていてもよい。式(I)の別の態様では、Z3およびZ5はそれぞれ、アルキル、重水素化アルキル、C1〜C6アルコキシ、重水素化C1〜C6アルコキシ、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、アルキルオキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アリールオキシ、アラルキルオキシ、アルキルチオキシ、アルケニルチオキシ、アルキニルチオキシ、アリールチオキシ、アラルキルチオキシ、アミノ、ヒドロキシ、チオ、ハロ、カルボキシ、ホルミル、ニトロ、およびシアノより選択され、各アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、およびアリール部分は、1〜3個のハロで独立に置換されていてもよい。式(I)の別の態様では、Z3およびZ5はそれぞれ重水素化C1〜C6アルコキシである。式(I)の別の態様では、Z3およびZ5はそれぞれC1〜C6アルコキシである。式(I)の別の態様では、Z3およびZ5はそれぞれC1〜C6アルキルである。式(I)の別の態様では、Z3およびZ5はそれぞれC1〜C3アルコキシである。式(I)の別の態様では、Z3およびZ5はそれぞれC1〜C3アルキルである。式(I)の別の態様では、Z3およびZ5はそれぞれ水素である。式(I)の別の態様では、Z3およびZ5はそれぞれハロである。式(I)の別の態様では、Z3およびZ5はそれぞれブロモである。式(I)の別の態様では、Z3およびZ5はそれぞれ各重水素化メトキシである。式(I)の別の態様では、Z3およびZ5はそれぞれメトキシである。式(I)の別の態様では、Z3およびZ5はそれぞれメチルである。式(I)の別の態様では、Z3およびZ5はそれぞれ-OCD1〜3である。式(I)の別の態様では、Z3およびZ5はそれぞれ-OCD3である。
【００８７】
式(I)の別の態様では、Z3およびZ5はそれぞれ、ハロ、メチル、メトキシ、または重水素化メトキシより独立に選択される。
【００８８】
本発明の一局面は、式(I)の化合物：
2021512953.tif 000007
またはその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物、もしくは立体異性体に関し、
式中、
-L-は、-(C1〜C5)アルキレン-O-C(O)-、-(C3-C5)アルケニレン-O-、
2021512953.tif 000008
として定義され、
Aは、-(C1〜C5)アルキレン-O-C(O)-であり；
Eは、-O-、-O-C(O)N(H)-、-O-C(S)N(H)-、-S-または-S-C(O)N(H)-であり；
Dは、-(C1〜C5)アルキレン-または-(C3-C5)アルケニレン-であり；
Y1は、C=C、炭素、または窒素であり、Y1が窒素である場合、Z1は存在せず；
Y4およびY5のそれぞれは、独立に、炭素または窒素であり、Y3が窒素である場合は、Z3は存在せず、Y4が窒素である場合は、Z5は存在せず；
Y2は、CまたはNであり、Y2が窒素である場合は、Z2は存在せず；
Y5は、酸素、炭素、窒素、または硫黄原子であり、Y5が酸素または硫黄原子である場合は、Z6は存在せず；
Z3、Z4、およびZ5は、水素、アルキル、重水素化アルキル、C1〜6アルコキシ、重水素化C1〜6アルコキシ、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、アルキルオキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アリールオキシ、アラルキルオキシ、アルキルチオキシ、アルケニルチオキシ、アルキニルチオキシ、アリールチオキシ、アラルキルチオキシ、アミノ、ヒドロキシ、チオ、ハロ、カルボキシ、ホルミル、ニトロ、およびシアノよりそれぞれ独立に選択され、各アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、およびアリール部分は、独立に、1〜3個のハロで置換されていてもよく；
Z1、Z2、またはZ4の少なくとも1つがHであることを条件とし；
Z6は、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、およびアラルキルより選択され、各アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、およびアリール部分は、独立に、1〜3個のハロで置換されていてもよく；
各Z8は、独立に、水素、無置換C1〜C6アルキル、置換C1〜C6アルキル、無置換C1〜C6アルコキシ、無置換重水素化C1〜C6アルコキシ、置換C1〜C6アルコキシ、および置換重水素化C1〜C6アルコキシであり、置換されたアルキル、アルコキシ、および重水素化アルコキシは、アミノ、一置換もしくは二置換のアミノ、環状C1〜C5アルキルアミノ、イミダゾリル、C1〜C6アルキルピペラジニル、モルホリノ、チオール、チオエーテル、テトラゾール、カルボン酸、エステル、アミド、一置換もしくは二置換のアミド、N結合アミド、N結合スルホンアミド、スルホキシ、スルホネート、スルホニル、スルホキシ、スルフィネート、スフィニル、ホスホノオキシ、ホスフェート、またはスルホンアミドより選択される1つまたは複数の基で置換されており、各アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、およびアリールは、1〜3個のハロで置換されていてもよい。
【００８９】
式(I)、またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、溶媒和物、もしくは立体異性体の別の態様では、Y3およびY4はそれぞれ炭素である。
【００９０】
式(I)、またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、溶媒和物、もしくは立体異性体の別の態様では、Z3、Z4およびZ5はそれぞれ、ハロ、無置換C1〜C3アルキル、置換C1〜C3アルキル、無置換C1〜C3アルコキシ、置換C1〜C3アルコキシ、無置換重水素化C1〜C3アルコキシ、または置換C1〜C3アルコキシより選択され、各アルキルおよびアルコキシ部分は、1〜3個のハロで独立に置換され得る。
【００９１】
式(I)、またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、溶媒和物、もしくは立体異性体の別の態様では、Z3、Z4およびZ5はそれぞれ、ブロモ、クロロ、フルオロ、1〜3個のハロで置換されていてもよいメチル、重水素化メチル、1〜3個のハロで置換されていてもよいメトキシ、または重水素化メトキシより選択される。
【００９２】
式(I)の別の態様は、式(Ia)：
2021512953.tif 000009
を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物、もしくは立体異性体に関し、
式中、
L、Y1、Y2、Y5、Z3、Z4、Z5、Z6は、式(I)の態様のいずれかで定義される通りである。
【００９３】
式(I)および(Ia)の他の態様は、式(Ib-i)、(Ib-ii)、(Ib-iii)、(Ib-iv)、(Ib-v)、(Ib-vi)、(Ib-vii)、(Ib-viii)、(Ib-ix)、(Ib-x)、(Ib-xi)、(Ib-xii)、(Ib-xiii)、(Ib-xiv)、(Ib-xv)、(Ib-xvi)、(Ib-xvii)、または(Ib-xviii)：
2021512953.tif 000010
2021512953.tif 000011
の1つまたは複数を有する化合物、または上記の式のいずれかの薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物、もしくは立体異性体に関し、
式中、
Z3およびZ5は、それぞれ独立に、ハロ、1〜3個のハロで置換されていてもよいメチル、1〜3個のハロで置換されていてもよいメトキシ、または重水素化メトキシであり；
Z4は、存在する場合、ハロ、1〜3個のハロで置換されていてもよいメチル、1〜3個のハロで置換されていてもよいメトキシ、または重水素化メトキシであり；
-L-エフェクターは、-(C1〜C3)アルキレン-O-C(O)-エフェクター、
2021512953.tif 000012
であり、
Dは、-(C1〜C3)アルキレン-であり；
Eは、-O-、-O-C(O)N(H)-、-O-C(S)N(H)-、-S-または-S-C(O)N(H)-であり；
Aは、-C(H)2-O-C(O)-であり；
エフェクターは、(i)ゲムシタビンのリン酸誘導体、または(ii)ゲムシタビンのリン酸誘導体の塩形態、の部分である。
【００９４】
式(I)、(Ia)、(Ib-i)、(Ib-ii)、(Ib-iii)、(Ib-iv)、(Ib-v)、(Ib-vi)、(Ib-vii)、(Ib-viii)、(Ib-ix)、(Ib-x)、(Ib-xi)、(Ib-xii)、(Ib-xiii)、(Ib-xiv)、(Ib-xv)、(Ib-xvi)、(Ib-xvii)、または(Ib-xviii)を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、溶媒和物、もしくは立体異性体の他の態様では、リンカー領域（L）は-C(H)2-O-C(O)-である。
【００９５】
Lは、以下により詳細に記載されている連結領域を表す。L（連結領域）の以下の態様のそれぞれは、化学的に可能である限り、トリガー領域とエフェクターの任意の組み合わせを含めて、トリガー領域およびエフェクターのそれぞれに関する別々の態様であり得る。リンカー領域の様々な態様を次に記載する。
【００９６】
式(I)、(Ia)、(Ib-i)、(Ib-ii)、(Ib-iii)、(Ib-iv)、(Ib-v)、(Ib-vi)、(Ib-vii)、(Ib-viii)、(Ib-ix)、(Ib-x)、(Ib-xi)、(Ib-xii)、(Ib-xiii)、(Ib-xiv)、(Ib-xv)、(Ib-xvi)、(Ib-xvii)、または(Ib-xviii)の他の態様では、上記のこれらの式の副態様を含めて、リンカー領域（L）は-(C1〜C5)アルキレン-O-C(O)-である。
【００９７】
式(I)、(Ia)、(Ib-i)、(Ib-ii)、(Ib-iii)、(Ib-iv)、(Ib-v)、(Ib-vi)、(Ib-vii)、(Ib-viii)、(Ib-ix)、(Ib-x)、(Ib-xi)、(Ib-xii)、(Ib-xiii)、(Ib-xiv)、(Ib-xv)、(Ib-xvi)、(Ib-xvii)、または(Ib-xviii)の他の態様では、上記のこれらの式の副態様を含めて、リンカー領域（L）は-(C3〜C5)アルケニレン-O-C(O)-である。
【００９８】
式(I)、(Ia)、(Ib-i)、(Ib-ii)、(Ib-iii)、(Ib-iv)、(Ib-v)、(Ib-vi)、(Ib-vii)、(Ib-viii)、(Ib-ix)、(Ib-x)、(Ib-xi)、(Ib-xii)、(Ib-xiii)、(Ib-xiv)、(Ib-xv)、(Ib-xvi)、(Ib-xvii)、または(Ib-xviii)の他の態様では、上記のこれらの式の副態様を含めて、リンカー領域（L)は、
2021512953.tif 000013
であり、
式中、
Aは、-(C1〜C5)アルキレン-O-C(O)であり；
Xは、-O-であり；
Dは、-(C1〜C5)アルキレン-または-(C3〜C5)アルケニレン-であり；
各Z8は、本明細書の態様のいずれかで定義される通りである。
【００９９】
式(I)、(Ia)、(Ib-i)、(Ib-ii)、(Ib-iii)、(Ib-iv)、(Ib-v)、(Ib-vi)、(Ib-vii)、(Ib-viii)、(Ib-ix)、(Ib-x)、(Ib-xi)、(Ib-xii)、(Ib-xiii)、(Ib-xiv)、(Ib-xv)、(Ib-xvi)、(Ib-xvii)、または(Ib-xviii)の他の態様では、上記のこれらの式の副態様を含めて、リンカー領域（L）は、
2021512953.tif 000014
であり、
式中、
Aは、-(C1〜C2)アルキレン-O-C(O)-であり；
Xは、-O-であり；
Dは、-(C1〜C2)アルキレン-または-(C3〜C4)アルケニレン-であり；
各Z8は、本明細書の態様のいずれかで定義される通りである。
【０１００】
式(I)、(Ia)、(Ib-i)、(Ib-ii)、(Ib-iii)、(Ib-iv)、(Ib-v)、(Ib-vi)、(Ib-vii)、(Ib-viii)、(Ib-ix)、(Ib-x)、(Ib-xi)、(Ib-xii)、(Ib-xiii)、(Ib-xiv)、(Ib-xv)、(Ib-xvi)、(Ib-xvii)、または(Ib-xviii)の他の態様では、上記のこれらの式の副態様を含めて、リンカー領域（L）は、
2021512953.tif 000015
であり、
式中、
Aは、-(C1〜C2)アルキレン-O-C(O)-である。
【０１０１】
式(I)、(Ia)、(Ib-i)、(Ib-ii)、(Ib-iii)、(Ib-iv)、(Ib-v)、(Ib-vi)、(Ib-vii)、(Ib-viii)、(Ib-ix)、(Ib-x)、(Ib-xi)、(Ib-xii)、(Ib-xiii)、(Ib-xiv)、(Ib-xv)、(Ib-xvi)、(Ib-xvii)、または(Ib-xviii)の他の態様では、上記のこれらの式の副態様を含めて、リンカー領域（L）は、
2021512953.tif 000016
であり、
式中、
Aは、-(C1〜C2)アルキレン-O-C(O)-であり；
Dは、-CH2-または-CH2-C(H)=C(H-である。
【０１０２】
式(Ic-i)、(Ic-ii)、(Ic-iii)、(Ic-iv)、(Ic-v)、(Ic-vi)、(Ic-vii)、(Ic-viii)、(Ic-ix)、(Ic-x)、(Ic-xi)、(Ic-xii)、(Ic-xiii)、(Ic-xiv)、(Ic-xv)、(Ic-xvi)、(Ic-xvii)、(Ic-xviii)、(Ic-xix)、または(Ic-xx)のいずれか、またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、溶媒和物、もしくは立体異性体の他の態様では：
Rbは、ヘテロシクロアルキルで置換されていてもよい-(C1〜C5)アルキル、またはアルコキシアリールであり；
Rzは、ヘテロシクロアルキルまたはアリールで置換されていてもよい-(C1〜C5)アルキルであり；
Mは、-O- Na+、-O- Et3NH+、-O- K+、または-O- NH4+である。
【０１０３】
式(Ic-i)、(Ic-ii)、(Ic-iii)、(Ic-iv)、(Ic-v)、(Ic-vi)、(Ic-vii)、(Ic-viii)、(Ic-ix)、(Ic-x)、(Ic-xi)、(Ic-xii)、(Ic-xiii)、(Ic-xiv)、(Ic-xv)、(Ic-xvi)、(Ic-xvii)、(Ic-xviii)、(Ic-xix)、または(Ic-xx)のいずれか、またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、溶媒和物、もしくは立体異性体の他の態様では：
Rbは、ヘテロシクロアルキルで置換されていてもよい-(C1〜C5)アルキル、またはアルコキシアリールであり；
Rzは、ヘテロシクロアルキルまたはアリールで置換されていてもよい-(C1〜C5)アルキルであり；
Mは、Et3NH+である。
【０１０４】
式(Ic-i)、(Ic-ii)、(Ic-iii)、(Ic-iv)、(Ic-v)、(Ic-vi)、(Ic-vii)、(Ic-viii)、(Ic-ix)、(Ic-x)、(Ic-xi)、(Ic-xii)、(Ic-xiii)、(Ic-xiv)、(Ic-xv)、(Ic-xvi)、(Ic-xvii)、(Ic-xviii)、(Ic-xix)、または(Ic-xx)のいずれか、またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、溶媒和物、もしくは立体異性体の他の態様では：
Rbは、ヘテロシクロアルキルで置換されていてもよい-(C1〜C5)アルキル、またはアルコキシアリールであり；
Rzは、ヘテロシクロアルキルまたはアリールで置換されていてもよい-(C1〜C5)アルキルであり；
Mは、-O-(C1〜C5)アルキル-ヘテロシクロアルキルである。
【０１０５】
式(I)、(Ia)、(Ib-i)、(Ib-ii)、(Ib-iii)、(Ib-iv)、(Ib-v)、(Ib-vi)、(Ib-vii)、(Ib-viii)、(Ib-ix)、(Ib-x)、(Ib-xi)、(Ib-xii)、(Ib-xiii)、(Ib-xiv)、(Ib-xv)、(Ib-xvi)、(Ib-xvii)、(Ib-xviii)（上記のこれらの式の副態様を含める）、またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、溶媒和物、もしくは立体異性体の他の態様では、Z3、Z5、およびZ4は、存在する場合、それぞれ、メトキシまたは重水素化メトキシである。
【０１０６】
式(I)、(Ia)、(Ib-i)、(Ib-ii)、(Ib-iii)、(Ib-iv)、(Ib-v)、(Ib-vi)、(Ib-vii)、(Ib-viii)、(Ib-ix)、(Ib-x)、(Ib-xi)、(Ib-xii)、(Ib-xiii)、(Ib-xiv)、(Ib-xv)、(Ib-xvi)、(Ib-xvii)、または(Ib-xviii)（上記のこれらの式の副態様を含める）、またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、溶媒和物、もしくは立体異性体の他の態様では、Z3、Z5、およびZ4は、存在する場合、それぞれ、1〜3個のハロで置換されていてもよいメトキシ、または重水素化メトキシであり、エフェクターは、本明細書に記載されている態様のいずれかで定義される通りである。
【０１０７】
式(I)、(Ia)、(Ib-i)、(Ib-ii)、(Ib-iii)、(Ib-iv)、(Ib-v)、(Ib-vi)、(Ib-vii)、(Ib-viii)、(Ib-ix)、(Ib-x)、(Ib-xi)、(Ib-xii)、(Ib-xiii)、(Ib-xiv)、(Ib-xv)、(Ib-xvi)、(Ib-xvii)、(Ib-xviii)（上記のこれらの式の副態様を含める）、またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、溶媒和物、もしくは立体異性体の他の態様では、Z3およびZ5は、それぞれ独立にブロモまたはフルオロであり、Z4は、存在する場合、1〜3個のハロで置換されていてもよいメトキシ、または重水素化メトキシである。
【０１０８】
式(I)、(Ia)、(Ib-i)、(Ib-ii)、(Ib-iii)、(Ib-iv)、(Ib-v)、(Ib-vi)、(Ib-vii)、(Ib-viii)、(Ib-ix)、(Ib-x)、(Ib-xi)、(Ib-xii)、(Ib-xiii)、(Ib-xiv)、(Ib-xv)、(Ib-xvi)、(Ib-xvii)、(Ib-xviii)（上記のこれらの式の副態様を含める）、またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、溶媒和物、もしくは立体異性体の他の態様では、Z3およびZ5は、それぞれ独立にブロモまたはフルオロであり；Z4は、存在する場合、1〜3個のハロで置換されていてもよいメトキシ、または重水素化メトキシであり；エフェクターは、本明細書に記載されている態様のいずれかで定義される通りである。
【０１０９】
式(I)を有する化合物の他の態様は、以下の式、式(Id-i)、(Id-ii)、(Icd-iii)、(Id-iv)、(Id-v)、(Id-vi)、(Id-vii)、(Id-viii)、(Id-ix)、(Id-x)、(Id-xi)、(Id-xii)、(Id-xiii)、(Id-xiv)、(Id-xv)、(Id-xvi)、(Id-xvii)、(Id-xviii)、(Id-xix)、または(Id-xx)：
2021512953.tif 000017
2021512953.tif 000018
のいずれか1つもしくは複数、または上記の式のいずれかの薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物、もしくは立体異性体に関し、
式中、
Z3、Z4、およびZ5は、それぞれ独立に、1〜3個のハロで置換されていてもよいメチル、ハロ、1〜3個のハロで置換されていてもよいメトキシ、または重水素化メトキシであり；
M2は、-O- Na+、-O- Et3NH+、-O- K+、-O- NH4+である。
【０１１０】
いくつかの態様では、式(Id-ii-1)：
2021512953.tif 000019
を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、溶媒和物、もしくは立体異性体が本明細書において提供され、
式中、
Z3、Z4、およびZ5は、それぞれ独立に、水素、1〜3個のハロで置換されていてもよいメチル、ハロ、1〜3個のハロで置換されていてもよいメトキシ、または重水素化メトキシであり；
各M2は、OHおよびO- (M1)からなる群より独立に選択され、(M1)はそれぞれ出現時に、独立に、金属陽イオン、アンモニウム、アルキルアンモニウム陽イオン、またはアミノ酸陽イオンである。
【０１１１】
(Id-ii-1)のいくつかの態様では、１つの出現時のM2はOHであり；他の出現時のM2はO- (M1)である。
【０１１２】
いくつかの他の態様では、各出現時のM2は独立に選択されるO- (M1)である。
【０１１３】
(Id-ii-1)のいくつかの態様では、(M1)は、Na+、Ca2+、K+、Mg2+、Zn2+、NH4+、(HNEt3)+、メグルミン-H+、トロメタミン-H+、ジエタノールアミン-H+、リジン-H+、およびアルギニン-H+からなる群より選択される。ある特定の態様では、(M1)はNa+である。
【０１１４】
(Id-ii-1)のいくつかの態様では、Z5およびZ3のそれぞれは、独立にメトキシである。
【０１１５】
(Id-ii-1)のいくつかの態様では、Z4は水素である。
【０１１６】
(Id-ii-1)のいくつかの態様では、化合物は、
2021512953.tif 000020
またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、溶媒和物、もしくは立体異性体である。
【０１１７】
式(I)の別の態様の化合物は、本明細書の実施例に記載されている化合物の1つもしくは複数、または化合物1〜5のうちのいずれか1つもしくは複数の薬学的に許容される塩、エステル、アミド、溶媒和物、もしくは立体異性体である。
【０１１８】
式(I)の化合物のゲムシタビン部分は、細胞、典型的にはCYP1B1が発現している細胞において、望ましい標的指向効果を提供する部分である。式(I)のすべての態様では、式(I)のリンカー部分は、式(I)のエフェクター成分のアミノ基を有する基部に直接的に結合している。放出される場合は、エフェクター分子は、それが放出される細胞に対して、認識可能な薬理効果を有する。
【０１１９】
エフェクター分子は、その放出が起こるのを引き起こすように働く細胞（例えば、CYP1B1発現細胞）に対して、細胞増殖抑制作用または細胞毒性作用を有する。公知であるように、細胞毒性分子は細胞に対して毒性がある分子であり、一方で、細胞増殖抑制剤は細胞の増殖および／または複製を抑制する分子である。
【０１２０】
本発明に従って使用するために、本明細書において記載される化合物、またはその生理学的に許容される塩、溶媒和物、エステルもしくはアミドは、化合物、またはその生理学的に許容される塩、エステル、アミドもしくは他の生理的に機能的な誘導体を、これらのための1種または複数種の薬学的に許容される担体、ならびに任意で他の治療的および／または予防的成分とともに含む薬学的製剤として、提供することができる。任意の担体は、製剤の他の成分と適合性であり、その受容者に有害でないという意味で、許容される。
【０１２１】
本発明による化合物の生理学的に許容される塩の例としては、有機カルボン酸、例えば、酢酸、乳酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、ピルビン酸、シュウ酸、フマル酸、オキサロ酢酸、イセチオン酸、ラクトビオン酸、およびコハク酸；有機スルホン酸、例えば、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、およびp-トルエンスルホン酸、ならびに無機酸、例えば、塩酸、硫黄、リン酸、およびスルファミン酸を用いて形成される酸付加塩が挙げられる。
【０１２２】
生理学的に許容されるエステルまたはアミド、特にエステルの決定は、十分に当業者の技能内である。
【０１２３】
本明細書において記載される化合物の対応する溶媒和物を、調製する、精製する、および／または取り扱うことが、好都合であるかまたは望ましい場合があり、これらは、記載される使用／方法のうちのいずれか1つで使用され得る。溶媒和物という用語は、溶質、例えば、化合物または化合物の塩と溶媒の複合物を指すように、本明細書において使用される。溶媒が水である場合は、溶媒和物は、水和物、例えば、基質の分子あたりに存在する水分子の数に応じて、一水和物、二水和物、三水和物などと呼ぶことができる。
【０１２４】
本発明の化合物は様々な立体異性型で存在することができ、上文で定義された本発明の化合物は、鏡像異性体およびラセミ混合物を含めて、すべての立体異性型およびそれらの混合物を含むことが認識されるであろう。本発明は、その範囲内に、式(I)の化合物の個々の鏡像異性体およびそのような鏡像異性体の完全または部分的ラセミ混合物を含めて、任意のそのような立体異性型または立体異性体の混合物の使用を含む。
【０１２５】
抗がん性SMDC、例えば本明細書において記載されるものは、腫瘍標的指向化ペプチドなどの腫瘍標的指向化部分、例えば、ファージディスプレイペプチドライブラリーの開発を介して特定された低分子ペプチドなどを結合させることによって、特定の腫瘍に対して標的指向することができることも当業者によって理解されるであろう。そのようなペプチドまたは他の部分は、特定のがん、特に固形腫瘍への、それらを含むコンジュゲートの標的指向化を援助することができる。したがって、そのようなコンジュゲート、すなわち、腫瘍標的指向化部分にコンジュゲートした本発明の化合物を提供することは、そのようなコンジュゲートの使用を含む、または伴う、本明細書において記載される組成物、使用、および方法と同様に、本発明のさらなる局面を形成する。
【０１２６】
本発明の化合物は、当技術分野において容易に利用可能な試薬および技法ならびに／または下文に記載される例示的方法を使用して、調製することができる。本発明の化合物は、CYP1B1酵素を発現する細胞で細胞毒性を示すが、CYP1B1を発現しない正常細胞では実質的に非毒性であることが発見された。本発明の化合物はまた、CYP1A1酵素を発現する細胞で細胞毒性を示し得る。したがって、実際には、本発明の化合物は、（典型的にはCYP1B1によって）細胞毒性剤へ変換される非毒性プロドラッグである。
【０１２７】
適切には、本発明の化合物は、以下で定義される、または10μM未満、有利には5μM未満、例えば、1.0μMまたは0.5μM未満の細胞毒性IC50値を有する。
【０１２８】
いくつかの態様では、本発明の化合物の細胞毒性は、CYP1B1を発現するように操作された細胞とともに様々な段階希釈の化合物をインキュベートすることによって、測定することができる。適切には、該細胞はチャイニーズハムスター卵巣（CHO）細胞でもよく、これは、組換えCYP1B1およびチトクロームP-450還元酵素（CPR）を含み得る。ヒトP-450還元酵素とともに共発現される場合の高レベルの機能的酵素は、ジヒドロ葉酸還元酵素（DHFR）遺伝子の増幅を使用して達成され得る。典型的には、操作された細胞を化合物とインキュベートし、適切な期間（例えば、96時間）の後に、適切なアッセイ試薬とともにさらに（例えば、1.5時間）インキュベートして、培養における生細胞の数の指標を提供することができる。適切なアッセイ試薬はMTS（以下を参照されたい）であり、これは、組織培養培地に可溶性であるホルマザン生成物へ、細胞によって生物還元される。ホルマザン生成物の吸光度は、510nmで直接測定することができ、490nmまたは510nmの吸光度の量によって測定した定量的ホルマザン生成物は、培養における生細胞の数と正比例する。本発明による化合物のIC50値を決定するための詳細な方法は、以下の実施例3に記載されている。
【０１２９】
比較のために、本発明の化合物のIC50値は、CYP1B1を含まない細胞（例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞）、例えば、野生型CHO細胞中で測定することもできる。本発明の化合物は、適切には、CYP1B1発現細胞に対して少なくとも200の倍数選択性を有することができ、「倍数選択性」は、非CYP1発現細胞における所与の化合物のIC50値とCYP1B1発現細胞における同じ化合物のIC50値の商として定義される。
【０１３０】
いくつかの態様では、本発明の化合物の細胞毒性は、実施例5に記載されているように、頭頸部扁平上皮がんを有する患者に由来する原発性頭頸部腫瘍細胞とともに様々な段階希釈の化合物をインキュベートすることによって、測定することもできる。
【０１３１】
いくつかの態様では、本発明の化合物のインビボ効力は、CYP1B1を構成的に発現する原発性頭頸部扁平上皮がん腫瘍細胞をヌードマウスの側腹部に皮下移植して、原発性ヒト腫瘍異種移植モデルを生成し、腫瘍増殖に対するSMDC治療の効果を測定することによって、測定することができる。
【０１３２】
いくつかの態様では、本発明の化合物のインビボ薬物動態パラメーター（AUC、濃度、tmax、t1/2）は、マウス、ラット、イヌ、およびサルを含めたげっ歯類および非げっ歯類種の、血漿および組織において測定することができる。
【０１３３】
したがって、本発明は、本発明のある特定の態様においてCYP1B1を発現する細胞を特徴とする増殖性状態を含めて、ヒトおよび非ヒト動物における、例えば増殖性障害または疾患などの増殖性状態の療法、特に治療または予防による、ヒトまたは動物の体の治療で使用するための、前述の薬学的に許容されるエステル、アミド、塩、溶媒和物、およびSMDCを含めた本発明の化合物の1つまたは複数の使用も包含する。より詳細には、本発明は、本発明のある特定の態様においてCYP1B1の発現を特徴とするがんの治療のための、本発明の化合物の1つまたは複数の使用を包含する。
【０１３４】
本明細書における「増殖性状態」は、インビトロであろうとインビボであろうと、望ましくない過剰なまたは異常な細胞の望まれないまたは制御されていない細胞増殖、例えば、新生物性または過形成性増殖を特徴とする、疾患または障害を意味する。増殖性状態の例は、悪性の新生物および腫瘍、がん、白血病、乾癬、骨疾患、（例えば、結合組織の）線維増殖性障害、およびアテローム性動脈硬化症を含めた、前悪性および悪性の細胞増殖である。
【０１３５】
増殖性状態は、本発明のある特定の態様では、CYP1B1を発現する細胞を特徴とし得る。
【０１３６】
増殖性状態は、膀胱、脳、乳房、結腸、頭頸部、腎臓、肺、肝臓、卵巣、前立腺、および皮膚のがんより選択され得る。いくつかの態様では、増殖性状態は固形腫瘍を含み得る。
【０１３７】
別の態様は、治療的または予防的に有用な量の、式(I)のすべての態様を含めた式(I)による化合物、またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、もしくは溶媒和物を対象に投与することを含む、増殖性状態の治療または予防の方法に関し、増殖性状態は、膀胱、脳、乳房、結腸、頭頸部、腎臓、肺、肝臓、卵巣、前立腺、および皮膚のがんである。
【０１３８】
本明細書における「治療」は、ヒトのものであろうと（例えば、獣医学的適用における）非ヒト動物のものであろうと、増殖性状態に対してある種の望ましい治療効果；例えば、進行速度の低減、進行速度の停止を含めた、障害の進行の阻害、障害の改善、または状態の治癒が達成される療法による治療を意味する。予防策としての治療も含まれる。本明細書における防止または予防への言及は、本明細書において、状態の完全な防止を示さないか、または必要とせず；代わりに、その症状発現は、本発明による予防または防止を介して、低減または遅延され得る。本明細書における「治療的有効量」は、合理的な利益／危険比に見合った、そのような治療効果をもたらすのに有効な、本発明の1種もしくは複数種の化合物、またはそのような1種もしくは複数種の化合物を含む薬学的製剤の量を意味する。
【０１３９】
したがって、本発明の化合物は、抗がん剤として使用することができる。本明細書における用語「抗がん剤」は、がんを治療する化合物（すなわち、がんの治療で有用である化合物）を意味する。本発明の化合物の抗がん作用は、細胞増殖の調節、血管新生の阻害、転移の阻害、浸潤の阻害、またはアポトーシスの促進を含めた1つまたは複数の機構を介して生じ得る。
【０１４０】
本発明の化合物の適切な投薬量は、患者によって異なり得ることが認識されるであろう。最適な投薬量の決定は、一般に、本発明の治療の任意の危険性または有害な副作用に対して治療的利益のレベルのバランスをとることを伴う。選択される投薬量レベルは、特定の化合物の活性、投与経路、投与時間、化合物の排出速度、治療の継続期間、組み合わせて使用される他の薬物、化合物、または材料、ならびに患者の年齢、性別、体重、状態、全体的な健康状態、および既往歴を含めた、様々な因子に依存する。化合物の量および投与経路は、最終的に医師の自由裁量によるが、一般に、投薬量は、望ましい効果を達成するように、作用部位において局部濃度を達成すべきである。
【０１４１】
インビボ投与は、治療過程の全体を通して、1回の投与で、連続的に、または断続的に行うことができる。投与の最も有効な手段および投薬量を決定する方法は当業者に周知であり、療法に使用される製剤、療法の目的、治療される標的細胞、および治療される対象によって異なる。単回または複数回投与は、治療担当医師によって選択された用量レベルおよびパターンで行うことができる。
【０１４２】
薬学的製剤としては、経口、局所（経皮、頬側、および舌下を含める）、直腸、または非経口（皮下、皮内、筋肉内、および静脈内を含める）、経鼻、ならびに例えば吸入による肺内投与に適したものが挙げられる。製剤は、適切な場合は、好都合には別々の投薬単位で提供することができ、薬学の分野で周知の方法のいずれかによって調製することができる。方法は、典型的には、活性化合物を液状担体または微粉砕固体担体または両方と混合し、次いで、必要であれば、生成物を望ましい製剤に形づくる工程を含む。
【０１４３】
担体が固体である、経口投与に適した薬学的製剤は、最も好ましくは、それぞれ所定量の活性化合物を含む、ボーラス剤、カプセル剤、または錠剤などの単位用量製剤として提供される。錠剤は、任意で1種または複数種の補助成分とともに圧縮または成型することによって、製造することができる。圧縮錠剤は、粉末または顆粒などの自由流動形態の活性化合物を、任意で、結合剤、潤滑剤、不活性な希釈剤、潤滑化剤、表面活性剤、または分散剤と混合して、適切な機械の中で圧縮することによって、調製することができる。成型錠剤は、不活性な液体希釈剤を用いて活性化合物を成型することによって、製造することができる。錠剤は任意でコーティングすることができ、コーティングされない場合は、任意で切り目を付けることができる。カプセル剤は、活性化合物を、単独または1種または複数種の補助成分との混合物のいずれかでカプセル殻中に充填し、次いで、それらを通常の方法で密封することによって、調製することができる。カシェ剤はカプセル剤と類似しており、活性化合物は、任意の補助成分とともにライスペーパーの包みに密封される。活性化合物は分散性顆粒剤として製剤化することもでき、これは、例えば、投与前に水に懸濁させることができるか、または食物上に振りかけることができる。顆粒剤は、小袋に包装することができる。担体が液体である経口投与に適した製剤は、水性もしくは非水性の液体中の溶液剤もしくは懸濁剤として、または水中油型液体エマルジョンとして、提供することができる。
【０１４４】
経口投与のための製剤は、制御放出剤形、例えば、活性化合物が適切な放出制御マトリックス中に製剤化されるか、または適切な放出制御フィルムでコーティングされる錠剤を含む。そのような製剤は、予防的使用に特に好都合であり得る。
【０１４５】
担体が固体である、直腸内投与に適した薬学的製剤は、最も好ましくは、単位用量坐剤として提供される。適切な担体としては、カカオバターおよび当技術分野において一般に使用される他の材料が挙げられる。坐剤は、好都合には、軟化または融解した担体と活性化合物を混合し、続いて、鋳型中で冷却し、成形することによって、形成することができる。
【０１４６】
非経口投与に適した薬学的製剤としては、水性または油性ビヒクル中の活性化合物の無菌の溶液剤または懸濁剤が挙げられる。
【０１４７】
注射可能な調製物は、ボーラス注射または持続注入に適合させることができる。そのような調製物は、好都合には、単位用量容器または多回用量容器中に提供され、容器は、使用のために必要とされるまで、製剤の導入後に密封されている。あるいは、活性化合物は、使用前に適切なビヒクル、例えば、無菌の発熱物質を含有しない水で構成される、粉末状でもよい。
【０１４８】
活性化合物は、長時間作用型デポー調製物として製剤化することもでき、これは、筋肉内注射によって、または例えば、皮下または筋肉内の移植によって、投与することができる。デポー調製物は、例えば、適切なポリマー性もしくは疎水性材料、またはイオン交換樹脂を含むことができる。そのような長時間作用型製剤は、予防的使用に特に好都合である。
【０１４９】
頬側口腔を介する肺内投与に適した製剤は、活性化合物を含み、望ましくは0.5〜7ミクロンの範囲の直径を有する粒子が受容者の気管支樹中に送達されるように提供される。
【０１５０】
1つの可能性として、そのような製剤は、細かく砕かれた粉末の形態であり、これは、好都合には、吸入装置で使用するための、穴をあけることが可能な、適切には、例えばゼラチンのカプセル剤中で、あるいは活性化合物、適切な液体または気体の噴射剤、ならびに任意で他の成分、例えば、表面活性物質および／または固体の希釈剤を含む自動推進式製剤としてのいずれかで提供され得る。適切な液体噴射剤としては、プロパンおよびクロロフルオロカーボンが挙げられ、適切な気体噴射剤としては二酸化炭素が挙げられる。活性化合物が溶液剤または懸濁剤の小滴の形態で調剤される自動推進式製剤も用いることができる。
【０１５１】
そのような自動推進式製剤は当技術分野において公知であるものと類似してあり、確立された手順によって調製することができる。適切には、これらは、望ましい噴霧特性を有する、手動で操作可能な弁または自動的に機能する弁のいずれかとともに提供される容器中に提供され；有利には、弁は、それらの各操作の際に、固定量、例えば、25〜100マイクロリットルを送達する計量タイプのものである。
【０１５２】
さらなる可能性として、活性化合物は、吸入用の微小液ミストを生成するために加速された気流または超音波撹拌が用いられる、アトマイザーまたはネブライザーで使用するための、溶液剤または懸濁剤の形態でもよい。
【０１５３】
経鼻投与に適した製剤としては、肺内投与のための上記のものと概して類似している調製物が挙げられる。調剤される場合、そのような製剤は、鼻腔中での保持を可能にするために、10〜200ミクロンの範囲内の粒子直径を望ましくは有するべきであり；これは、適宜、適切な粒径の粉末を使用すること、または適切な弁を選択することによって達成され得る。他の適切な製剤としては、鼻に近づけて維持された容器から鼻孔を通った急速吸入による投与のための、20〜500ミクロンの範囲内の粒子直径を有する粗粉末剤、および水性または油性の溶液または懸濁液中に0.2〜5％w/vの活性化合物を含む点鼻液が挙げられる。
【０１５４】
前述の担体成分に加えて、上記の薬学的製剤は、適切な1種または複数種のさらなる担体成分、例えば、希釈剤、緩衝剤、香味剤、結合剤、表面活性剤、増ちょう剤、潤滑剤、防腐剤（抗酸化剤を含める）など、および目的の受容者の血液と製剤を等張にする目的で含まれる物質を含むことができることを理解されたい。
【０１５５】
薬学的に許容される担体は当業者に周知であり、限定されないが、0.1M、好ましくは0.05Mのリン酸緩衝剤、または0.8％生理食塩水が挙げられる。さらに、薬学的に許容される担体は、水性または非水性の溶液、懸濁液、およびエマルジョンでもよい。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、例えばオリーブ油、および注射可能な有機エステル、例えばオレイン酸エチルである。水性担体としては、生理食塩水および緩衝化媒体を含めた、水、アルコール／水溶液、エマルジョン、または懸濁液が挙げられる。非経口ビヒクルとしては、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸リンゲル液または不揮発性油が挙げられる。防腐剤および他の添加剤、例えば、抗菌剤、抗酸化剤、キレート剤、不活性ガスなども存在していてもよい。
【０１５６】
局所製剤に適した製剤は、例えば、ゲル剤、クリーム剤、または軟膏剤として提供され得る。
【０１５７】
治療される部位、例えば、傷または潰瘍に直接的に噴霧するか、または振りかけることができる、液体または粉末製剤も提供され得る。あるいは、担体、例えば、包帯、ガーゼ、メッシュなどに製剤を噴霧するか、または振りかけ、次いで、治療される部位に適用することができる。
【０１５８】
獣医学的使用のための治療用製剤としては、好都合には、粉末剤または液体濃縮形態のいずれかであり得る。標準的な獣医学的製剤の慣例に従って、従来の水溶性賦形剤、例えば、ラクトースまたはショ糖を粉末剤に組み込んで、その物理的特質を向上させることができる。したがって、本発明の特に適した粉末剤は、50〜100％w/w、好ましくは60〜80％w/wの活性成分、および0〜50％w/w、好ましくは20〜40％w/wの従来の獣医学的賦形剤を含む。これらの粉末剤は、中間プレミックスとして動物飼料に加えることができ、または動物飲料水中に希釈することができる。
【０１５９】
本発明の液体濃縮物は、化合物またはその誘導体もしくは塩を適切に含み、獣医学的に許容される水混和性溶媒、例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、グリセロール、グリセロールフォーマル、または30％v/vまでのエタノールと混合されたそのような溶媒を任意で含むことができる。液体濃縮物は、動物の飲料水中に投与することができる。
【０１６０】
一般に、本発明の1つまたは複数の化合物の適切な用量は、1日あたり約1μg〜約5000μg/対象のkg体重の範囲、例えば、1日あたり1、5、10、25、50、100、250、1000、2500、または5000μg/kgであり得る。化合物が塩、溶媒和物、SMDCなどである場合は、投与される量は、親化合物に基づいて算することができ、そのため、使用される実際の重量は比例して増大し得る。
【０１６１】
いくつかの態様では、本発明の1つまたは複数の化合物は、上記の種類の増殖性状態の治療のための併用療法で、すなわち、他の治療剤と併せて使用することができる。そのような他の治療剤の例としては、限定されないが、トポイソメラーゼ阻害剤、アルキル化剤、代謝拮抗剤、DNA結合剤、および微小管阻害剤（チューブリン標的剤）、例えば、シスプラチン、シクロホスファミド、エトポシド、イリノテカン、フルダラビン、5FU、タキサン、またはマイトマイシンCが挙げられる。他の治療剤は当業者に明らかであろう。他の療法と組み合わされた活性化合物の場合では、2つ以上の治療は、それぞれ異なる投与スケジュールで、別々の経路を介して与えることができる。
【０１６２】
上に列挙した薬剤と本発明の化合物の組み合わせは医師の自由裁量により、医師は、医師の共通の一般的知識および当業者に公知の投与レジメンを使用して投薬量を選択するであろう。
【０１６３】
本発明の化合物が、1つ、2つ、3つ、4つ、またはそれ以上の、好ましくは1つまたは2つの、好ましくは1つの他の治療剤との併用療法で投与される場合は、化合物は、同時にまたは逐次投与することができる。逐次投与される場合は、これらは、短い間隔（例えば、5〜10分にわたる）で、またはより長い間隔（例えば、1、2、3、4時間、またはそれ以上の時間離れる、または必要とされる場合はさらに長い期間離れる）で投与することができ、正確な投薬レジメンは治療剤の特質に見合ったものである。
【０１６４】
本発明の化合物は、非化学療法的治療、例えば、放射線療法、光線力学的療法、遺伝子療法、手術、および制限食と併せて投与することもできる。
【０１６５】
本発明の別の局面は、CYP1B1酵素を発現する腫瘍細胞の存在について患者を診断する方法であって、(a)本発明の1つまたは複数の化合物を患者に投与すること；(b)続いて生成される、対応するヒドロキシル化代謝物の量を決定すること；および(c)該量を患者における腫瘍細胞の有無と相関させることを含む方法に関する。
【０１６６】
本発明の別の局面は、
(1)患者において腫瘍の存在を特定し；
(2)治療的または予防的に有用な量の、請求項1〜15のいずれか一項記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、もしくは溶媒和物を投与することによって、治療を必要とするとして特定された患者を治療する、
方法、に関する。一態様では、腫瘍は、腫瘍バイオマーカーを用いることによって特定することができる。腫瘍バイオマーカーは、特定の診断を確定すること、例えば、腫瘍が原発性起源のものであるか、転移性起源のものであるかを決定することにおいても有用であり得る。この区別を行うために、原発腫瘍部位に位置する細胞で見られる染色体変化を二次部位で見られるものに対してスクリーニングすることができる。変化が一致する場合は、転移性として二次腫瘍を特定することができ；一方で、変化が異なる場合は、別の原発腫瘍として二次腫瘍を特定することができる。
【０１６７】
別の態様では、腫瘍は生検によって特定することができる。用いることができる生検の非限定例としては、穿刺吸引生検、コア針生検、真空補助下生検、画像誘導下生検、外科生検、切開生検、内視鏡下生検、骨髄生検が挙げられる。
【０１６８】
別の態様では、腫瘍の特定は、体の詳細な画像を生成するために磁場を使用する検査である磁気共鳴画像（MRI）によってもよい。
【０１６９】
別の態様では、腫瘍の特定は骨スキャンによってもよい。別の態様では、腫瘍の特定はCATスキャンとも呼ばれるコンピュータ断層撮影（CT）スキャンであってもよい。
【０１７０】
別の態様では、腫瘍の特定は、同じ機械を使用して同時に実施された陽電子放出断層撮影法 （PET）スキャンとコンピュータ断層撮影（CT）スキャンからの画像を組み合わせる統合型PET-CTスキャンによってもよい。
【０１７１】
別の態様では、腫瘍の特定は超音波によってもよく、これは、体内の腫瘍の位置を突き止めるために高周波音波を使用する画像検査である。
【０１７２】
より具体的な態様では、個別化医療の形態として、患者を治療するのを支援するのに使用することができるコンパニオン診断を、1910 Innovation Park Drive, Tuscon, AZ 85755に位置する、RocheグループのメンバーであるVentana Medical Systems, Inc.から得ることができる。
【０１７３】
以下の例およびスキームは、本明細書において開示される化合物についての一般的合成手順を示す。本明細書において開示される化合物の合成は、これらの例およびスキームによって制限されない。当業者は、他の手順を本明細書において開示される化合物を合成するのに使用することができること、および例およびスキームに記載されている手順は、そのような手順の1つにすぎないことを知っているであろう。以下の説明では、当業者は、特定の反応条件、加えられる試薬、溶媒、および反応温度は、本開示の範囲に入る特定の化合物の合成のために変更できることを認識するであろう。
【０１７４】
化合物の調製
一般原則
1H、13C、および31P核磁気共鳴（NMR）スペクトルは、いずれかのBruker Avance DPX 400 MHz分光計で、示される溶媒中で記録した。化学シフトはppmで表した。シグナル分裂パターンは、一重線（s）、幅広一重線（bs）、二重線（d）、三重線（t）、四重線（q）、多重線（m）、またはこれらの組み合わせとして記載する。低分解能エレクトロスプレー（ES）質量スペクトルは、Bruker MicroTof質量分析計で記録し、移動相として、メタノール／水（95:5）または水アセトニトリル（1:1）＋0.1％ギ酸を使用して、正イオンモードで実施した。高分解能エレクトロスプレー測定は、Bruker Microtof質量分析計で実施した。LC-MS分析は、Agilent HPLC 1100（Phenomenex Geminiカラム 5μ C18 110Å 50×3.0mm、（0〜20％MeOH/H2O）で溶出した）、およびBruker Microtof 質量分析計と直列のダイオードアレイ検出器で実施した。カラムクロマトグラフィーは、シリカゲル（230〜400メッシュ）またはRediSep（登録商標）.4、12、40、または80gシリカプレパックカラムを用いて実施した。すべての出発材料は市販されており、さらに精製することなく使用した。すべての反応は、別段の記載がない限り乾燥かつ不活性な条件下で行った。
【０１７５】
立体異性体のラセミ混合物または非ラセミ混合物からの単一立体異性体の調製ならびに／または分離および単離のための方法は、当技術分野において周知である。例えば、光学活性な(R)および(S)異性体は、キラルシントンもしくは鏡像異性体（RおよびS異性体）は、当業者に公知の方法によって、例えば、結晶化などによって分離することができる、ジアステレオ異性体の塩もしくは錯体の形成；例えば、結晶化、鏡像異性体特異的試薬との1つの鏡像異性体の選択的反応、例えば、酵素的酸化もしくは還元、それに続く改変された鏡像異性体と改変されていない鏡像異性体の分離によって分離することができる、ジアステレオ異性体の誘導体の形成を介すること；またはキラル環境における、例えば、キラル配位子が結合したシリカなどのキラル支持体上での、もしくはキラル溶媒の存在下における、ガス液体または液体クロマトグラフィーによって、分解することができる。望ましい鏡像異性体が、上記の分離手順のうちの1つによって別の化学的実体に変換される場合、望ましい鏡像異性形態を遊離させるために、さらなる工程が必要とされ得ることが認識されるであろう。あるいは、光学活性試薬、基質、触媒、もしくは溶媒を使用する不斉合成によって、または不斉変換によって1つの鏡像異性体を他の鏡像異性体に変換することによって、特定の鏡像異性体を合成することができる。特定の鏡像異性体が富化された、鏡像異性体の混合物については、再結晶化によって、主要成分の鏡像異性体をさらに富化することができる（収率の低下を伴う）。
【０１７６】
以下の例は、本明細書において開示される化合物についての一般的合成手順を示す。本明細書において開示される化合物の合成は、これらの例およびスキームによって制限されない。当業者は、他の手順を本明細書において開示される化合物を合成するのに使用することができること、および例およびスキームに記載されている手順は、そのような手順の1つにすぎないことを知っているであろう。以下の説明では、当業者は、特定の反応条件、加えられる試薬、溶媒、および反応温度は、本開示の範囲に入る特定の化合物の合成のために変更できることを認識するであろう。別段の指定がない限り、どのようにそれらが製造されたかの説明を含まない、以下の例の中間化合物は、当業者に市販されているか、そうでなければ、市販の前駆分子および当技術分野において公知である合成方法を使用することによって、当業者が合成することができるかのいずれかである。
【０１７７】
別段の指定がない限り、どのようにそれらが製造されたかの説明を含まない、以下の例の中間化合物は、当業者に市販されているか、そうでなければ、使用して当業者が合成することができるかのいずれかである。
【０１７８】
トリガー前駆物質の一般的調製例
本発明の化合物のトリガー前駆分子は、以下の合成スキームによって、および本発明の化合物に到達するために、熟練の医薬品化学者に公知である出発材料、試薬、および／または反応条件に任意の必要な変更を加えることによって、製造することができる。これらのスキームのための合成前駆分子は、市販されているか、またはそれらの調製が当技術分野において公知であるのいずれかである。
【０１７９】
調製例1
ベンゾフラントリガー前駆物質
Z3、Z4およびZ5が本明細書において定義される通りであるベンゾフラントリガー前駆物質(i)は、以下のスキームを使用して製造することができる：
2021512953.tif 000021
ベンゾフラン-2-カルボキシレートの合成は広く公知であり、(i-b)などの中間体の合成のための多くの方法が存在する。したがって、適切に置換されたサリチルアルデヒド出発材料(i-a)をエチル-2-ブロモアセテートなどのハロアセテートと反応させ、続いて、ホルミルフェノキシ酢酸誘導体中間体の環化を行うことができる［H. Dumont and S. Kostanecki, “Zur kenntnis der cumaron-gruppe”, Chemische Berichte, vol. 42, no. 1, pp. 911-915, 1909を参照されたい］。環化は、ナトリウムエタノレート、1,8-ジアゾビシクロ-[5.4.0]-7-ウンデカン、または炭酸カリウムなどの塩基性触媒の存在下で、アルコール溶液中で行うことができる。次いで、金属水素化物還元剤（LiAlH4、LiBEt3H、またはNaBH4）などの、一級アルコールへのカルボキシレートエステルの還元のための公知の方法を使用して、得られたエステルを望ましいトリガー前駆物質にさらに官能化または変換することができる。
【０１８０】
調製例2
ベンゾ[b]チオフェントリガー前駆物質
Z3、Z4およびZ5が本明細書において定義される通りであるベンゾ[b]チオフェントリガー前駆物質(iii)は、以下のスキームのうちの1つを使用して製造することができる。
スキーム(ii)
2021512953.tif 000022
あるいは、式(ii)のベンゾチオフェン-2-イルアルコールは、好都合には、式(ii-e)の置換サリチルアルデヒド誘導体から調製することができる（上記のスキームを参照されたい）。ジメチルチオカルバモイルクロリドでのアルキル化、引き続くNewman-Kwart転位によって、式(ii-g)の中間体がもたらされる。アルカリ後処理によって式(ii-h)の遊離チオフェノールを得ることができ、これは、標準的手順を使用してアルキル化／環化反応を受けることができる。次いで、テトラヒドロフラン中のLAHなどの、一級アルコールへのカルボキシレートエステルの還元のために一般に用いられる方法を使用して、エステル中間体(ii-i)をアルコール（ii)に還元することができる。
【０１８１】
調製例3
1H-ベンゾ[d]イミダゾールトリガー前駆物質
Z3、Z4およびZ5が本明細書において定義される通りである1H-ベンゾ[d]イミダゾールトリガー前駆物質は、Borchardt et. al. “Preparation of tetrahydropyranones as hepatitis C virus RNA-dependent RNA polymerase inhibitors”, WO 2004/074270によって記載されるものと類似した以下のスキームを使用して製造することができる。
スキーム(iii)
2021512953.tif 000023
適切に置換された2-ハロ-ニトロベンゼン（iii)をメチルアミンと反応させて、アミノニトロ中間体を形成することができ、次いで、これを、亜鉛および酸供給源、例えばHClなどの、アニリンへのニトロアレーンの変換のための公知の方法を使用して、還元して、化合物（iii-b)を得ることができる。次いで、化合物（iii-b)を、ヒドロキシ酢酸などの試薬とともに加熱することによって、標的アルコール（vi)に変換することができる。
【０１８２】
調製例4
1H-インドールトリガー前駆物質
Z3、Z4およびZ5が本明細書において定義される通りである1H-インドールトリガー前駆物質は、Condie et. al. in Tetrahedron, (2005), 61(21), 4989-5004によって記載されるものと類似した以下のスキームを使用して製造することができる。
スキーム(iv)
2021512953.tif 000024
適切に置換されたベンズアルデヒド出発材料(iv-a)を2-アジドアセテート試薬と反応させ、次いで、オルト-ジクロロベンゼンなどの不活性溶媒中で高温で加熱して、インドールエステル中間体(iv-b)をもたらすことができる。次いで、ヨウ化メチルなどのハロゲン化アルキルおよびNaHなどの適切な塩基を用いてインドール（iv-b)をアルキル化して、最後から2番目のトリガー(iv-c)をもたらすことができ、次いで、これを、テトラヒドロフラン中の水素化リチウムアルミニウムなどの、一級アルコールへのカルボキシルエステルの還元のために一般に用いられる方法を使用して、一級アルコール標的(vii)に還元することができる。
【０１８３】
調製例5
ベンゾチアゾールトリガー前駆物質
Z3、Z4およびZ5が本明細書において定義される通りであるベンゾチアゾールトリガー前駆物質は、以下のスキームのいずれかを使用して製造することができる。
2021512953.tif 000025
適切に置換されたアニリンをヨウ素化し、次いでアシル化して、中間体(v-b)にすることができ、これは、N-ヨードスクシンイミドなどのそのような変換を行うことが公知の標準的な方法を使用し、続いて、塩化アセチルと反応させることによる。アセトアミド(v-b)を、ローソン試薬などの試薬を使用して対応するチオアセトアミドに変換し、次いで、塩基またはヨウ化銅(I)のいずれかを使用して環化させて、チアゾール(v-c)をもたらすことができる。
次いで、過マンガン酸カリウムなどの酸化体を使用して、2-メチル基を対応するカルボン酸（v-d)に酸化することができる。一級アルコール(ix)への引き続く変換は、上記の条件を使用して行うことができる。
【０１８４】
調製例6
ベンゾキサゾールトリガー前駆物質
Z3、Z4およびZ5が本明細書において定義される通りであるベンゾキサゾールトリガー前駆物質は、以下のスキームのいずれかを使用して製造することができる。
2021512953.tif 000026
適切に置換されたアニリンをヨウ素化し、次いでアシル化して、中間体(vI-b)にすることができ、これは、N-ヨードスクシンイミドなどのそのような変換を行うことが公知の標準的な方法を使用し、続いて、塩化アセチルと反応させることによる。アセトアミド(vI-c)を環化させて、オキサゾール(vI-d)をもたらすことができる。一級アルコール(vi)への引き続く変換は、上記の条件を使用して行うことができる。
【０１８５】
本発明の化合物の合成例
本発明の化合物は、以下の合成スキームIおよびIIに従って、および本発明の化合物に到達するために、熟練の医薬化学者に公知である出発材料、試薬、および／または反応条件に任意の必要な変更を加えることによって、製造することができる。これらのスキームのための合成前駆分子は、市販されているか、またはそれらの調製が当技術分野において公知であるのいずれかである。
【０１８６】
合成スキームI
2021512953.tif 000027
SMDCのホスフェート類似体は、ヌクレオシドのホスフェートおよびホスホネート類似体の合成のための周知かつ確立された文献の方法を使用して、本明細書において記載される進展した中間体から出発して、調製することができる（Pradere et. al. Chem. Rev. 2014, 114, 9154-9218を参照されたい）。
【０１８７】
中間化合物の合成
化合物A：(5,7-ジブロモベンゾフラン-2-イル)メタノール
2021512953.tif 000028
工程A：Int A-1の合成
2021512953.tif 000029
3,5-ジブロモ-2-ヒドロキシベンズアルデヒド（400g、1.44モル）と2-ブロモ酢酸エチル（360g、2.16モル）のDMF（1800mL）溶液に、無水炭酸カリウム（590g、4.29モル)を室温で一度に加えた。混合物を100℃で加熱し、この温度で一晩磁気撹拌した。混合物を室温に冷却し、固体を濾過によって除去した。濾過ケークをEtOAc（500mL×3）で洗浄し、ロータリーエバポレーターを用いて減圧下で濾液を濃縮して、EtOAcを除去した。残留物を氷水（w/w=1/1、4L）に注ぎ、これによって、黄色固体が形成された。固体を濾過によって収集し、MeOH（200mL）で3回洗浄した。固体を減圧下で乾燥して、240gの化合物Int A-1を得て、これを次の工程で直接使用した。Rf=0.5（石油エーテル：EtOAc=20:1）。
【０１８８】
工程B：化合物Aの合成
2021512953.tif 000030
Int A-1（120g、0.35モル）のMeOH（1000mL）およびTHF（1000mL）の冷却溶液に、NaBH4（52.8g、1.39モル）を、5〜10℃の間に反応温度を維持するように、小量ずつ（各5g）加えた。得られた混合物を3時間撹拌してから氷浴を除去し、16時間かけて反応を室温にした。混合物を氷／水（w/w=1/1、3L）に注ぎ、濃縮して、有機溶媒の大部分を除去した。混合物をEtOAc（800mL×3）で抽出し、混合した有機洗浄液を飽和ブライン（400mL）で3回抽出した。有機相を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。このプロセスを繰り返し、2つの反応生成物を混合し、濃縮し、120gの粗製化合物Aを得て、これを次の工程に直接使用した。Rf=0.4（石油エーテル：EtOAc=5:1）
2021512953.tif 000031
【０１８９】
化合物B：(5,7-ジメトキシベンゾフラン-2-イル)メタノール
2021512953.tif 000032
化合物Bの合成
2021512953.tif 000033
化合物A（60g、0.20モル）とNaOMe（600mL、30％w/w、Alfaから購入した）とDMF（6g、0.08モル）の混合物に、CuBr（8g、0.056モル）を窒素下で室温で加えた。次いで、混合物を80℃で4時間撹拌した。反応混合物を0℃に冷却し、次いで、H2O（500mL）を0℃で混合物に加えた。混合物をセライトのパッドを通して濾過し、濾液をDCM（500mL）で3回抽出した。混合したDCM抽出物を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液を濃縮して、褐色固体を得た。このプロセスを繰り返し、2つの反応生成物を混合し、濃縮し、油を得て、カラムクロマトグラフィー（石油エーテル：EtOAc=5:1〜0:1）によってこれを精製し、黄色固体として60gの化合物Bを得た。Rf（石油エーテル：EtOAc=5:1）=0.4
2021512953.tif 000034
【０１９０】
化合物C：(5,7-ビス(メトキシ-d3)ベンゾフラン-2-イル)メタノール
2021512953.tif 000035
工程A：Int C-1の合成
2021512953.tif 000036
5-メトキシサリチルアルデヒド（200g、1.31モル）と無水NaOAc（172g、2.10モル）のAcOH（1.5L）混合物に、Br2（270g、1.71モル）を窒素下で0〜5℃（氷水浴）で1時間かけて滴下漏斗で滴加した。混合物を室温に温め、2時間撹拌した。混合物を氷水（w/w=1/1、2L）に注ぎ、15分間撹拌した。次いで、混合物を濾過した。濾液を水（400mL×3）で洗浄し、次いで、45℃で2日間、真空（油ポンプ）によって乾燥し、黄色固体としてInt C-1（200g）を得た。
2021512953.tif 000037
【０１９１】
工程B：Int C-2の合成
2021512953.tif 000038
Int C-1（200g、0.87モル）と無水K2CO3（360g、2.61モル）の1000mLの乾燥DMF混合物に、217g（1.30モル）の2-ブロモ酢酸エチルを窒素下で室温で一度に加え、室温で10分間撹拌してから、100℃に加熱し、6時間撹拌した。混合物を室温に冷却し、濃縮した。残留物を水（1L）に注ぎ、20分間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を水（500mL×3）で洗浄し、真空（油ポンプ）乾燥し、褐色固体としてInt C-2（105.4g）を得た。
2021512953.tif 000039
【０１９２】
工程C：Int C-3の合成
2021512953.tif 000040
Int C-2（120g、0.40モル）のDCM（700mL）溶液に、BBr3（350g、1.4モル）のDCM（500mL）溶液を窒素下で-70℃で30分かけて滴加し、その間、-60℃未満に温度を維持した。反応混合物を0℃に温め、0℃で3時間撹拌した。反応物を氷水（w/w=1/1、1L）中にゆっくりと注ぎ、次いで、DCM（800mL×2）で抽出した。混合した有機相を飽和ブライン（800mL×2）で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥し、濾過し、真空濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（カラムの高さ：150mm、直径：50mm、100〜200メッシュのシリカゲル、石油エーテル/EtOAc=20/1、10/1、5/1）によって残留物を精製し、白色固体としてInt C-3（42g）を得た。
2021512953.tif 000041
【０１９３】
工程D：Int C-4の合成
2021512953.tif 000042
Int C-3（95g、0.33モル）の乾燥アセトン（2L）溶液に、K2CO3（115g、0.83モル）およびCD3I（97g、0.67モル）を一度に加え、12時間加熱還流した。混合物を冷却し、濾過し、固体をアセトン（300mL×3）で洗浄した。混合した有機層を蒸発させて、黄色固体としてInt C-4（81g）を得た。
2021512953.tif 000043
【０１９４】
工程E：Int C-5の合成
2021512953.tif 000044
Int C-4（70g、0.071モル）とビス(ピナコラト)ジボロン（89g、0.35モル）とKOAc（68.6g、0.70モル）とPd(dppf)Cl2（16.8g、0.023モル）のDMSO（800mL）混合物を、窒素で15分間脱気し、次いで、窒素下で一晩80℃に加熱した。反応混合物を水（1.5L）に注ぎ、EtOAc（600mL×3）で抽出した。有機抽出物を飽和ブライン（800mL×2）で洗浄し、無水MgSO4で乾燥し、濾過した。濾液を濃縮して残留物を得て、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（カラムの高さ：80mm、直径：28mm、100〜200メッシュのシリカゲル、石油エーテル/EtOAc=20/1、10/1、5/1）によってこれを精製して、淡色固体としてInt C-5（53g）を得た。
2021512953.tif 000045
【０１９５】
工程F：Int C-6の合成
2021512953.tif 000046
Int C-5（58g、0.17モル）の600mLのTHF/MeOH（v/v=1/2）溶液に、30％H2O2（200mL）を0℃で一度に加えた。混合物を同じ温度で2時間撹拌した。飽和水性Na2S2O3（500mL）を加え、混合物をもう1時間撹拌した。反応をヨウ化カリウムデンプン試験紙によって確認して、H2O2が破壊されたかどうかを確かめた。混合物をEtOAc（500mL×3）で抽出し、混合した抽出物をブライン（500mL）で洗浄し、無水MgSO4で乾燥し、次いで濾過した。濾過物を濃縮し、白色固体としてInt C-6（25.4g）を得た。
2021512953.tif 000047
【０１９６】
工程G：Int C-7の合成
2021512953.tif 000048
化合物Int C-6（27g、0.113モル）のアセトン（800mL）溶液に、無水K2CO3（38.8g、0.282モル）およびCD3I（32.8g、0.226モル）を加えた。反応混合物を12時間加熱還流し、次いで、冷却し、濾過した。固体をアセトン（400mL×3）で洗浄し、混合した有機抽出物を真空蒸発させて、白色固体として22gの化合物Int C-7を得た。
2021512953.tif 000049
【０１９７】
工程H：化合物Cの合成
2021512953.tif 000050
Int C-7（16g、0.062モル）の無水THF（400mL）溶液に、窒素下で0℃で10分かけてLiAlH4（4.8g、0.125モル）を加えた。反応混合物を0℃で2時間撹拌した。反応を水（100ml）でクエンチし、得られた懸濁液を濾過した。濾液を濃縮し、白色固体として化合物C（8.5g）を得た。
2021512953.tif 000051
【０１９８】
化合物D：5-メトキシ-7-メチルベンゾフラン-2-イル)メタノール
2021512953.tif 000052
工程A：Int D-1の合成
2021512953.tif 000053
2.0g（7.0ミリモル）のメチル7-ブロモ-5-メトキシベンゾフラン-2-カルボキシレート（エチルエステルInt C-2について記載されるものと類似した方法で調製した）とCH3B(OH)2（0.42g、7.0ミリモル）とNa2CO3（2.2g、20.7ミリモル）のジオキサン（80mL）/H2O（10mL）溶液に、Pd(PPh3)4（0.8g、0.7ミリモル）を加えた。混合物を一晩還流し、次いで、室温に冷却した。反応混合物をH2Oに注ぎ、EtOAcで抽出し、有機抽出物をブラインで洗浄し、MgSO4で乾燥した。溶液を濃縮して残留物を得て、これをシリカゲルカラムによって精製して、320mgのInt D-1化合物を得た。
【０１９９】
工程B：化合物Dの合成
2021512953.tif 000054
LiAlH4（0.22g、5.79ミリモル）のTHF（15mL）懸濁液に、Int D-1（0.32g、1.45ミリモル）のTHF（15mL）溶液を0℃で滴加した。混合物を0℃で30分間撹拌し、次いで、H2Oに注ぎ、EtOAcで抽出し、有機相をブラインで洗浄し、MgSO4で乾燥し、濃縮して残留物を得て、これをシリカゲルカラムによって精製して、260mgの化合物Dを得た。
2021512953.tif 000055
【０２００】
化合物E：(7-シクロプロピル-5-メトキシベンゾフラン-2-イル)メタノール
2021512953.tif 000056
工程A：化合物Eの合成
2021512953.tif 000057
2.0g（7.0ミリモル）のメチル7-ブロモ-5-メトキシベンゾフラン-2-カルボキシレート（エチルエステルInt C-2について記載されるものと類似した方法で調製した）とシクロプロピルボロン酸（0.6g、8.0ミリモル）とNa2CO3（2.2g、20.7ミリモル）のジオキサン（80mL）/H2O（10mL）溶液に、Pd(PPh3)4（0.8g、0.7ミリモル）を加えた。混合物を一晩還流し、次いで、冷却した。反応混合物をH2Oに注ぎ、EtOAc（3×20mL）で抽出した。混合した有機抽出物をブラインで洗浄し、MgSO4で乾燥し、濃縮して残留物を得て、これをシリカゲルカラムによって精製して、200mgの望ましいエステルを得た。LiAlH4（0.12g、3.25ミリモル）のTHF（5mL）懸濁液にエステル（0.20g、0.813ミリモル）のTHF（5mL）溶液を0℃で滴加し、0℃で30分間撹拌した。反応混合物をH2Oに注ぎ、EtOAcで抽出し、有機抽出物をブラインで洗浄し、MgSO4で乾燥し、濃縮して残留物を得て、これをシリカゲルカラムによって精製して、化合物E（0.15g）を得た。
2021512953.tif 000058
【０２０１】
化合物F：(7-イソプロピル-5-メトキシベンゾフラン-2-イル)メタノール
2021512953.tif 000059
化合物Fの合成
2021512953.tif 000060
2.0g（7.0ミリモル）のメチル7-ブロモ-5-メトキシベンゾフラン-2-カルボキシレート（エチルエステルInt C-2について記載されるものと類似した方法で調製した）とシクロプロピルボロン酸（0.6g、8.0ミリモル）とNa2CO3（2.2g、20.7ミリモル）のジオキサン（80mL）/H2O（10mL）溶液に、Pd(PPh3)4（0.8g、0.7ミリモル）を加えた。混合物を一晩還流し、次いで、冷却した。反応混合物をH2Oに注ぎ、EtOAc（3×20mL）で抽出した。混合した有機抽出物をブラインで洗浄し、MgSO4で乾燥し、濃縮して残留物を得て、これをシリカゲルカラムによって精製して、500mgの望ましいエステルを得た。オレフィンエステル（0.5g、2.29ミリモル）とPd/C（0.1g）のエタノール（20mL）混合物を50psiの水素圧下で2時間室温で水素化した。混合物を濾過し、蒸発させることによって、400mgの望ましい化合物がもたらされた。LiAlH4（0.305g、8.04ミリモル）のTHF（15mL）懸濁液に中間体エステル（0.50g、2.01ミリモル）のTHF（15mL）溶液を0℃で滴加し、0℃で30分間撹拌した。反応混合物を水に注ぎ、EtOAcで抽出した。有機抽出物をブラインで洗浄し、MgSO4で乾燥し、濃縮して残留物を得て、これをシリカゲルカラムによって精製して、350mgの化合物Fを得た。
2021512953.tif 000061
【０２０２】
化合物G：(5-メトキシ-7-フェニルベンゾフラン-2-イル)メタノール
2021512953.tif 000062
化合物Gの合成
2021512953.tif 000063
メチル7-ブロモ-5-メトキシベンゾフラン-2-カルボキシレート（1.5ミリモル）とフェニルボロン酸（0.18g、1.5ミリモル）とNa2CO3（0.48g、4.5ミリモル）のジオキサン（20mL）/H2O（5mL）溶液に、Pd(PPh3)4（0.17g、0.15ミリモル）を加えた。混合物をN2下で1時間還流した。反応混合物をH2Oに注ぎ、EtOAcで抽出し、有機抽出物をブラインで洗浄し、MgSO4で乾燥し、濃縮し、200mgの粗製カップリング生成物を得て、これを15mLのTHF中に再溶解し、LiAlH4（0.23g、5.96ミリモル）のTHF（15mL）懸濁液に0℃で滴加した。反応物を0℃で30分間撹拌し、次いで、水に注ぎ、EtOAc（3×10mL）で抽出した。有機抽出物をブラインで洗浄し、MgSO4で乾燥し、次いで濃縮して残留物を得て、これをシリカゲルカラムによって精製して、300mgの化合物Gを得た。
2021512953.tif 000064
【０２０３】
化合物H：(7-(ジメチルアミノ)-5-メトキシベンゾフラン-2-イル)メタノール
2021512953.tif 000065
化合物Hの合成
2021512953.tif 000066
メチル7-ブロモ-5-メトキシベンゾフラン-2-カルボキシレート（3.0g、10ミリモル）とジメチルアミン（0.57g、13ミリモル）とCs2CO3（12.3g、37ミリモル）のジオキサン（80mL）溶液に、Pd2(dba)3（0.75g、0.82ミリモル）および450mg（1.50ミリモル）の(2-ビフェニル）ジ-tert-ブチルホスフィン（JohnPhos）を加えた。混合物をN2下で一晩還流し、次いで、冷却した。反応混合物をH2Oに注ぎ、次いで、EtOAc（3×20mL）で抽出した。有機抽出物をブラインで洗浄し、MgSO4で乾燥し、真空濃縮して、700mgの望ましいアミノエステルを得た。LiAlH4（0.32g、8.43ミリモル）のTHF（30mL）懸濁液に上述のアミノエステル（0.70g、2.81ミリモル）のTHF（30mL）溶液を0℃で滴加し、30分間撹拌した。反応混合物をH2Oに注ぎ、EtOAcで抽出した。有機抽出物をブラインで洗浄し、MgSO4で乾燥し、真空濃縮して残留物を得て、これをシリカゲルカラムによって精製して、化合物H（0.39g）を得た。
2021512953.tif 000067
【０２０４】
化合物I：(5-メトキシ-7-(メチル(フェニル）アミノベンゾフラン-2-イル)メタノール
2021512953.tif 000068
化合物Iの合成
2021512953.tif 000069
メチル7-ブロモ-5-メトキシベンゾフラン-2-カルボキシレート（3.0g、10ミリモル）とN-メチルアニリン（1.36g、12ミリモル）とCs2CO3（12.3g、37ミリモル）のジオキサン（80mL）溶液に、Pd2(dba)3（0.75g、0.82ミリモル）およびX-Phos（0.43、1.44ミリモル）を加えた。混合物をN2下で一晩還流した。反応混合物を冷却し、次いで、水に注ぎ、EtOAcで抽出した。有機抽出物をブラインで洗浄し、MgSO4で乾燥し、濃縮して残留物を得て、これをシリカゲルカラムによって精製して、1.1gの望ましいC-Nカップリング生成物を得て、これを次の工程で直接使用した。LiAlH4（0.20g、5.77ミリモル）のTHF（20mL）懸濁液に、上記のエステル（0.60g、1.92ミリモル）のTHF（20mL）溶液を0℃で滴加した。反応混合物を0℃で30分間撹拌し、次いで、H2Oに注ぎ、EtOAcで抽出した。有機抽出物をブラインで洗浄し、MgSO4で乾燥し、濃縮した。残留物をシリカゲルカラムによって精製して、白色固体として化合物I（0.35g）を得た。
2021512953.tif 000070
【０２０５】
化合物J：(5-メトキシ-7-(4-メチルピペラジン-l-イル)ベンゾフラン-2-イル)メタノール
2021512953.tif 000071
アミンとしてN-メチルピペラジンを使用する、化合物Iの合成について記載されるものと同様の2工程手順。
2021512953.tif 000072
【０２０６】
化合物K：(5-メトキシ-7-モルホリノベンゾフラン-2-イル)メタノール
2021512953.tif 000073
アミンとしてモルホリンを使用する、化合物Iの合成について記載されるものと同様の2工程手順。
2021512953.tif 000074
【０２０７】
化合物L：4-(2-(ヒドロキシメチル）-5-メトキシベンゾフラン-7-イル)チオモルホリン1,1-ジオキシド
2021512953.tif 000075
アミンとしてチオモルホリン1,1-ジオキシドを使用する、化合物Iの合成について記載されるものと同様の2工程手順。
2021512953.tif 000076
【０２０８】
化合物M：(7-(1,1-ジフルオロエチル）-5-メトキシベンゾフラン-2-イル)メタノール
2021512953.tif 000077
工程A：Int M-1の調製
2021512953.tif 000078
メチル7-ブロモ-5-メトキシベンゾフラン-2-カルボキシレート（2.85g、10ミリモル）の（100mL）溶液に、（1-エトキシ)-トリブチルスタンナン（6.31g、17.5ミリモル）およびPdCl2(PPh)3（0.7g、1.0ミリモル）を加えた。混合物をN2下で50℃で一晩撹拌した。反応混合物をH2Oに注ぎ、EtOAcで抽出し、有機抽出物をブラインで洗浄し、MgSO4で乾燥し、真空濃縮して2.0gの残留物を得て、これを、さらに精製することなく次の工程で直接使用した。
【０２０９】
工程B：Int M-2の調製
2021512953.tif 000079
Int M-1（2.0g、7.25ミリモル）のジオキサン（100mL）溶液に、2M HCl（9mL、18ミリモル）を加えた。混合物を室温で30分間撹拌し、次いで、EtOAcで希釈した。有機相を飽和NaHCO3で2回、次いで水、次いでブラインで洗浄した。有機物をMgSO4で乾燥し、真空濃縮して1.2gのInt M-2を得て、これを精製なしで次の工程で直接使用した。
【０２１０】
工程C：Int M-3の調製
2021512953.tif 000080
Int M-2（0.9g、0.88ミリモル）のDAST（6mL）溶液を60℃で一晩撹拌した。反応混合物を冷却し、1mLの水で非常にゆっくりと処理した。得られた混合物をEtOAc（3×20mL）で抽出し、有機抽出物をブラインで洗浄し、MgSO4で乾燥した。溶媒の蒸発によって、オフホワイト固体として450mgのInt M-3がもたらされた。
【０２１１】
工程D：化合物Mの調製
2021512953.tif 000081
LiAlH4（0.18g、4.93ミリモル）のTHF（20mL）懸濁液に、Int M-3（0.45g、1.67ミリモル）のTHF（20mL）溶液を0℃で滴加した。反応混合物を0℃で30分間撹拌し、次いで、H2Oに注ぎ、EtOAcで抽出した。有機抽出物をブラインで洗浄し、MgSO4で乾燥し、濃縮した。残留物をシリカゲルカラムによって精製して、白色固体として化合物M（0.27g）を得た。
2021512953.tif 000082
【０２１２】
化合物N：(5,7-ジメチルベンゾフラン-2-イル)メタノール
2021512953.tif 000083
工程A：Int N-1の調製
2021512953.tif 000084
2,4-ジメチルフェノール（80g、0.66モル）のCH3CN（2000mL）溶液に、Et3N（248g、2.46モル）およびMgCl2（93g、0.99モル）を室温で一度に加えた。混合物を室温で1時間撹拌し、次いで、(CH2O)nを加えた。得られた混合物を加熱還流し、一晩撹拌した。混合物を室温に冷却し、次いで、撹拌した5％HCl（500mL）溶液に注いだ。混合物をEtOAc（3×400mL）で抽出した。混合した有機抽出物をブライン（300mL）で洗浄し、分離した。有機層を無水Na2SO4で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（カラムの高さ：50cm、直径：20cm、100〜200メッシュのシリカゲル、石油エーテル/EtOAc=10/1）によって残留物を精製して、黄色固体としてInt N-1（58g）を得た。
2021512953.tif 000085
【０２１３】
工程B：Int N-2の調製
2021512953.tif 000086
Int N-1（58g、0.386モル）とK2CO3（160g、1.16モル）のDMF（1.2L）混合物に、メチル2-ブロモアセテート（88.2g、0.58モル）をN2下で室温で一度に加えた。混合物を室温で10分間撹拌し、次いで100℃に加熱し、一晩撹拌した。懸濁液を室温に冷却し、濾過した。濾過ケークをEtOAc（500mL×3）で洗浄し、濾液を濃縮して、EtOAcの大部分を除去した。得られたDMF溶液を氷水（w/w=1/1）（1L）に注ぎ、室温で20分間撹拌した。褐色固体を濾過によって収集した。濾過ケークを水（200mL）で洗浄し、次いで、高真空（P2O5を用いる真空乾燥機。油ポンプによって<10Paの圧力が生成される）で乾燥して、粗製Int N-2を得て、これをPE/EA（v/v=5/1、600mL）で洗浄した。ロータリーエバポレーターを用いて残留溶媒を除去して、褐色固体として純粋なInt N-2（40g）を得た。
2021512953.tif 000087
【０２１４】
工程C：化合物Nの調製
2021512953.tif 000088
LAH（4.5g、118ミリモル）の無水THF（100mL）撹拌懸濁液に、Int N-2（12g、60ミリモル）をN2下で4℃（氷水浴）で滴加した。混合物を0℃で1時間撹拌してから、内部温度を10℃未満に制御するように注意して水（50mL）を滴加することによって、混合物をクエンチした。懸濁液を濾過し、濾過ケークをTHF（100mL）で洗浄した。濾液を濃縮し、残留物を石油エーテル/EtOAc=8/1で洗浄して、白色固体として化合物N（8g）を得た。
2021512953.tif 000089
LCMS：純度：98.4％；MS計算値：176.1；MS実測値：159.1[M-OH]。融点：96.4℃〜97.1℃。
【０２１５】
化合物O：(4-((5,7-ジメトキシベンゾフラン-2-イル)メトキシ)フェニル)メタノール
2021512953.tif 000090
工程A：Int O-1の合成
2021512953.tif 000091
化合物B（30.0g、0.144モル）と4-ヒドロキシ安息香酸エチル（28.7g、0.173モル）とPPh3（18.8g、0.187モル）の無水THF（300mL）懸濁液DEAD（32.2g、0.187モル）を、4℃（氷水バッチ）で30分かけて滴加した。添加が完了した後、反応混合物を室温で15時間撹拌させた。混合物を水に注ぎ、DCM（200mL×3）で抽出した。混合した有機抽出物をNa2SO4で乾燥した。濾液を減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（カラムの高さ：20cm、直径：5cm、100〜200メッシュのシリカゲル、石油エーテル/EtOAc=5/1）によって残留物を精製して、オフホワイト固体として粗製Int O-1（20g、85％の1H NMR純度）を得た。
2021512953.tif 000092
【０２１６】
工程B：化合物Oの合成
2021512953.tif 000093
LAH（2.87g、0.075モル）の無水THF（200mL）懸濁液に、Int O-1（18g、0.050モル）を窒素下で4℃（氷水浴）で30分かけて少しずつ加えた。添加が完了した後、反応混合物を室温で12時間撹拌させた。水（3ml）を0℃で滴加し、次いで、15％NaOH水溶液（3ml）およびH2O（15ml）を加えた。30分撹拌した後、MgSO4（40g）を加え、混合物をさらに30分撹拌した。次いで、混合物を濾過分離し、濾液を減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（カラムの高さ：20cm、直径：5cm、100〜200メッシュのシリカゲル、石油エーテル/EtOAc=5:1）によって残留物を精製して、オフホワイト固体として化合物O（11g）を得た。
2021512953.tif 000094
【０２１７】
化合物P：(4-((5,7-ビス(メトキシ-d3)ベンゾフラン-2-イル)メトキシ)フェニル)メタノール
2021512953.tif 000095
出発材料として化合物Cを使用する、化合物Oの合成について記載されるものと同様の2工程手順。
2021512953.tif 000096
【０２１８】
化合物Q：(4-((5-メトキシ-7-メチルベンゾフラン-2-イル)メトキシ)フェニル)メタノール
2021512953.tif 000097
出発材料として化合物Dを使用する、化合物Oの合成について記載されるものと同様の2工程手順。
2021512953.tif 000098
融点：101.6℃〜102.3℃
【０２１９】
化合物R：(4-((5,7-ジメチルベンゾフラン-2-イル)メトキシ)フェニル)メタノール
2021512953.tif 000099
出発材料として化合物Nを使用する、化合物Nの合成について記載されるものと同様の2工程手順。
2021512953.tif 000100
融点：133.8℃〜135.6℃
【０２２０】
化合物S：(E)-3-(5,7-ジメチルベンゾフラン-2-イル)プロパ-2-エン-1-オール
2021512953.tif 000101
工程A：Int S-1の調製
2021512953.tif 000102
化合物N（30g、0.170モル）のアセトニトリル（300mL）溶液に、IBX（104.3g、0.340モル）を加え、混合物を加熱還流し、一晩撹拌した。混合物を室温に冷却し、濾過した。濾過ケークをEtOAc（100mL）で洗浄し、溶媒を濃縮して、無色油としてInt S-1（27g）を得た。
2021512953.tif 000103
【０２２１】
工程B：Int S-2の調製
2021512953.tif 000104
NaH（3.3g、0.139モル）のTHF（50mL）混合物に、トリエチルホスホノアセテート（31.2g、0.139モル）を0℃（氷水浴）で加えた。添加後、混合物を0℃で1時間撹拌した。次いで、Int S-1（22g、0.126モル）のTHF（150mL）溶液を0℃で滴加し、混合物を周囲温度に一晩温めた。溶媒を氷水に注ぎ、EtOAc（200mL）で抽出した。有機抽出物を無水Na2SO4で乾燥し、濃縮して、白色固体として16.5gのInt S-2を得た。
2021512953.tif 000105
【０２２２】
工程C：化合物Sの調製
2021512953.tif 000106
4℃（氷水浴）のInt S-2（21g、0.086モル）の無水THF（200mL）撹拌溶液に、DIBAL-H（206mL、0.206モル）を、窒素下で-78℃〜-65℃に反応温度を維持するように滴加した。次いで、混合物を室温に温め、2時間撹拌した。反応を水（20mL）でクエンチし、無水MgSO4（200g）を加え、次いで、1時間撹拌した。混合物を濾過し、濾過ケークをEtOAc（200mL×2）で洗浄した。溶媒を濃縮して、10.4gの化合物Sを得た。
2021512953.tif 000107
融点：104.6℃〜106.3℃
【０２２３】
化合物T：(E)-3-(5-メトキシ-7-メチルベンゾフラン-2-イル)プロパ-2-エン-1-オール
2021512953.tif 000108
出発材料として化合物Dを使用する、化合物Sの合成について記載されるものと同様の2工程手順。
2021512953.tif 000109
【０２２４】
化合物U：(E)-3-(5,7-ビス(メトキシ-d3)ベンゾフラン-2-イル)プロパ-2-エン-1-オール
2021512953.tif 000110
出発材料として化合物Cを使用する、化合物Sの合成について記載されるものと同様の2工程手順。
2021512953.tif 000111
融点：86.5℃〜87.0℃
【０２２５】
化合物V：(5,6,7-トリメトキシベンゾフラン-2-イル)メタノール
2021512953.tif 000112
工程A：Int V-1の合成
2021512953.tif 000113
1000mLのDCM中に150.0g（0.77モル）の2,3,4-トリメトキシベンズアルデヒドを含む溶液に、300.0g（1.74モル）のm-CPBAを5回（各30g）に分けて0℃〜10℃（氷水浴）で加えた。添加後、反応混合物を室温に温め、一晩撹拌した。反応混合物を濾過して、固体を除去し、濾液をNaHCO3水溶液（400mL×3）、水（300mL）、およびブライン（300mL）で洗浄した。有機層を分離し、無水Na2SO4で乾燥し、混合物を濾過した。濾液を濃縮することによって、暗黄色油がもたらされ、これをEtOH（600mL）に溶解し、10％KOH水溶液（500mL）で一度に処理した。混合物を50℃で4時間撹拌した。次いで、混合物を冷却し、1M HClでpH=1に酸性化し、DCM（500mL×3）で抽出した。混合した有機抽出物を水（500mL）およびブライン（500mL）で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥し、次いで濾過した。濾液を濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（カラムの高さ：50cm、直径：20cm、100〜200メッシュのシリカゲル、石油エーテル/EtOAc=30/1、20/1、15/1、10/1）によって精製して、黄色油としてInt V-1（79.0g）を得た。
2021512953.tif 000114
【０２２６】
工程B：Int V-2の合成
2021512953.tif 000115
Int V-1（74g、400ミリモル）とHMTA（67.6g、480ミリモル）とTFA（500mL）の混合物を、N2下で20時間還流した。溶液を室温に冷却し、真空下で濃縮した。トルエン（200mL）を残留物に加え、溶液をさらに濃縮して、微量のTFAを除去した。残留油をTHF（300mL）および2M HCl（300mL）で処理し、次いで、2時間加熱還流した。溶液を室温に冷却し、DCM（300mL×3）で抽出した。混合した有機層を水（300mL）およびブライン（300mL）で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥し、次いで濾過した。濾液を濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（カラムの高さ：50cm、直径：20cm、100〜200メッシュのシリカゲル、石油エーテル/EtOAc=30/1、20/1、15/1、10/1）によって精製して、黄色固体としてInt V-2（36.0g）を得た。
2021512953.tif 000116
【０２２７】
工程C：Int V-3の合成
2021512953.tif 000117
Int V-2（36g、0.17モル）の無水DMF（200mL）溶液に、K2CO3（46.9g、0.34モル）およびメチルブロモアセテート（28.4g、0.19モル）を室温で加えた。得られた溶液を110℃に加熱し、6時間撹拌した。懸濁液を冷却し、セライトのパッドを通して濾過した。濾過ケークをEtOAc（500mL）で洗浄し、濾液を濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（カラムの高さ：30cm、直径：10cm、100〜200メッシュのシリカゲル、石油エーテル/EtOAc=15/1、10/1、5/1）によって残留油を精製して、白色固体としてInt V-3（14g）を得た。
2021512953.tif 000118
【０２２８】
工程D：化合物Vの合成
2021512953.tif 000119
化合物Int V-3（14g、52.63ミリモル）の無水MeOH（100mL）溶液に、NaBH4（10g、263.16ミリモル）を10回（各回1g）に分けて0〜10℃（氷水浴）で加え、得られた混合物を30℃で3時間撹拌した。懸濁液を濾過し、濾液を濃縮して、白色固体として10.6gの化合物Vを得た。MP：68.2℃〜68.7℃。
2021512953.tif 000120
【０２２９】
化合物W：(4,5,7-トリメトキシベンゾフラン-2-イル)メタノール
2021512953.tif 000121
出発材料として2,4,5-トリメトキシベンズアルデヒドを使用する、化合物Vの合成について記載されるものと同様の3工程手順。
2021512953.tif 000122
【０２３０】
化合物X：(5,7-ジメトキシ-3-メチルベンゾフラン-2-イル)メタノール
2021512953.tif 000123
工程A：Int X-1の合成
2021512953.tif 000124
2-ヒドロキシ-5-メトキシアセトフェノン（200g、1200ミリモル）および無水NaOAc（104g、1264ミリモル）を、2000mLのAcOHに室温で一度に加えた。次いで、300mLのAcOHに入れた臭素（199g、1.264モル）を室温で2時間かけて滴下漏斗で滴加し、内部反応温度を15〜25℃（水浴）に維持した。添加が完了した後、混合物を室温で16時間撹拌し、次いで、氷水（w/w=1/1、8L）に注ぎ、1時間撹拌した。次いで、混合物を濾過し、濾過ケークを水（3×1L）で洗浄し、次いで、2日間風乾して、黄色固体としてInt X-1（210g）を得た。
2021512953.tif 000125
【０２３１】
工程B：Int X-2の合成
2021512953.tif 000126
Int X-1（100g、0.408モル）と2-ブロモアセトニトリル（73g、0.612モル）のDMF（1L）混合物に、K2CO3（169g、1.224モル）を室温で一度に加えた。次いで、混合物をN2下で80℃に加熱し、一晩撹拌した。懸濁液を室温に冷却し、2000mLの氷／水／ブライン（v/v/v=1/1/2）に注ぎ、混合物をEtOAc（3×1000mL）で抽出した。混合した有機抽出物を水（3×1000mL）、次いでブライン（3×1000mL）で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥した。混合物を濾過し、濾液を濃縮した。シリカゲルカラム（カラムの高さ：60cm、直径：20cm、100〜200メッシュのシリカゲル、石油エーテル/EtOAc=5/1〜3/1）によって残留物を精製して、黄色固体としてInt X-2（38g）を得た。
2021512953.tif 000127
【０２３２】
工程C：Int X-3の合成
2021512953.tif 000128
Int X-2（50g、188ミリモル）のMeOH/MeCN（600mL、v/v=1/1）溶液に、K2CO3（182g、1316ミリモル）を室温で一度に加えた。混合物を室温で一晩撹拌した。混合物を濾過し、濾液を水（800mL）に注ぎ、EtOAc（3×400mL）で抽出した。混合した有機抽出物をブライン（3×500mL）で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥した。混合物を濾過し、濾液を濃縮した。残留物を1M HCl（500mL）およびMeOH（100mL）に再溶解した。混合物を80℃に2時間加熱してから、反応物を冷却し、濾過した。固体を水（800mL×3）で洗浄し、次いで、乾燥して、白色固体としてInt X-3（34.3g）を得た。
2021512953.tif 000129
【０２３３】
工程D：Int X-4の合成
2021512953.tif 000130
Int X-3（35g、117ミリモル）の無水DCM（500mL）混合物に、DIBAL-H（257mL、トルエン中に1M、257ミリモル）の溶液をN2下で-70℃（ドライアイス−アセトン浴）で1時間かけて滴加した。添加の間に系の温度は-65℃に上昇し、混合物は-70℃で2時間撹拌した。混合物を0℃に温め、水（100mL）でクエンチし、混合物を濾過した。有機相を分離し、水性相をDCM（2×100mL）で抽出した。混合した有機相を飽和ブライン（2×100mL）で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥し、次いで濾過した。濾液を真空濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（カラムの高さ：30cm、直径：15cm、100〜200メッシュのシリカゲル、石油エーテル/EtOAc=10/1〜3/1）によって残留物を精製して、黄色固体としてInt X-4（9.8g）を得た。
2021512953.tif 000131
【０２３４】
工程E：化合物Xの合成
2021512953.tif 000132
Int X-4（19.5g、71.9ミリモル）とNaOMe（212mL、MeOH中25％w/v）と無水DMF（2.2g、29.6ミリモル）の混合物に、CuBr（3.0g、21.2ミリモル）を窒素下で室温で加えた。反応混合物を80℃〜90℃に3時間加熱した。反応混合物を0℃に冷却してから、H2O（500mL）を加えた。混合物をDCM（2×300mL）で抽出し、混合した有機抽出物を無水Na2SO4で乾燥し、濾過した。濾液をロータリーエバポレーターを用いて真空濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（カラムの高さ：30cm、直径：10cm、100〜200メッシュのシリカゲル、石油エーテル/EtOAc=10/1〜3/1）によって残留物を精製して、黄色固体として化合物X（8.4g）を得た。
2021512953.tif 000133
融点：71.9℃〜73.8℃。
【０２３５】
化合物Y：1-(5,7-ジメトキシベンゾフラン-2-イル)エタン-1-オール
2021512953.tif 000134
工程A：Int Y-1の合成
2021512953.tif 000135
化合物B（10.0g、48.03ミリモル）とIBX（26.9g、96.06ミリモル）の溶液を150mLのアセトニトリルに溶解し、窒素ブランケット下で80℃で4時間撹拌した。懸濁液を冷却し、濾過し、濾過したケークを100mLのEtOAcで洗浄した。濾液を濃縮して、黄色固体として9.8gのInt Y-1を得た。
【０２３６】
工程B：化合物Yの合成
2021512953.tif 000136
0℃の50mLのTHF中に3.0g（14.5ミリモル）を含む溶液に、MeMgBr（7.3mL、21.9ミリモル、エーテル中に3M）を0℃で滴加した。反応混合物を10分間撹拌してから、これを飽和NH4Cl溶液（20mL）でクエンチした。得られた有機層をEtOAc（100mL×2）で抽出し、混合した有機抽出物をNa2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、褐色油として3.2gの化合物Yを得た。
2021512953.tif 000137
【０２３７】
化合物Z：(5,7-ジメトキシベンゾ[b]チオフェン-2-イル)メタノール
2021512953.tif 000138
工程A：Int Z-1の合成
2021512953.tif 000139
THF（100mL）中に3,5-ジブロモ-2-ヒドロキシベンズアルデヒド（12g、42.8ミリモル）を含む0℃溶液に、NaH（1.9g、47.6ミリモル）を5回に分けて加えた。反応物を0℃〜20℃で1時間撹拌し、次いで、再冷却し、ジメチルチオカルバモイルクロリド（6.52g、52.7ミリモル）のTHF（20mL）溶液で処理した。反応が完了すると、飽和NH4Cl（100mL）水溶液を加え、得られた混合物をEtOAc（100mL×2）で抽出した。有機抽出物を無水Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮した。カラムクロマトグラフィー（石油エーテル：EtOAc=50:1〜20:1）によって残留物を精製して、黄色固体として9.0gのInt Z-1を得た。
2021512953.tif 000140
【０２３８】
工程B：Int Z-2の合成
2021512953.tif 000141
100mL丸底フラスコ中の化合物Int Z-1（5.0g、13.6ミリモル）を150℃で3時間撹拌し、次いで、冷却し、カラムクロマトグラフィー（石油エーテル：EtOAc=5:1）によって精製して、黄色固体として3gのInt Z-2を得た。
2021512953.tif 000142
【０２３９】
工程C：Int Z-3の合成
2021512953.tif 000143
MeOH（50mL）中に3g（8.17ミリモル）のInt Z-2を含む溶液に、H2O（50mL）中のNaOH（1.8g、45ミリモル）を加えた。反応物を周囲温度で2時間撹拌した。反応物を10％クエン酸（50mL）の添加により中和し、EtOAc（50mL×2）で抽出した。有機抽出物を無水Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮することによって、黄色油としてInt Z-3（2g、粗製）がもたらされ、これを、さらに精製することなく次の工程で使用した。
【０２４０】
工程D：Int Z-4の合成
2021512953.tif 000144
DMF（80mL）中に2g（6.76ミリモル）のInt Z-3を含む溶液に、エチルブロモアセテート（1.13g、6.76ミリモル）およびK2CO3（2.8g、20.3ミリモル）を加えた。得られた混合物を100℃に加熱し、12時間撹拌した。次いで、反応物を冷却し、100mLの水で処理し、次いで、2×100mLのEtOAcで抽出した。有機抽出物を乾燥し、濃縮して残留物を得て、カラムクロマトグラフィー（石油エーテル：EtOAc=100:1）によってこれを精製することによって、白色固体としてInt Z-4（2.0g）がもたらされた。
2021512953.tif 000145
【０２４１】
工程E：Int Z-5の合成
2021512953.tif 000146
250mL丸底フラスコ中の、THF（80mL）中にLiAlH4（0.42g、11ミリモル）を含む0℃のスラリーに、Int Z-4（2g、5.5ミリモル）のTHF（20mL）溶液を0℃で滴加した。反応混合物を0℃で1時間撹拌し、次いで、H2O（0.45mL）、次いで、NaOH（15％、0.45mL）およびH2O（1.3mL）でゆっくりとクエンチした。固体のMgSO4を加え、混合物を濾過した。濾液を濃縮して、白色固体としてInt Z-5（1.4g）を得た。
【０２４２】
工程F：Int Z-6の合成
2021512953.tif 000147
NaOMe/MeOH（40mL）中にInt Z-5（1.4g、4.35ミリモル）を含む溶液に、DMF（0.13g、1.74ミリモル）およびCuBr（0.19g、1.31ミリモル）を加えた。得られた混合物を100℃で12時間撹拌し、次いで、冷却し、50mLの水で処理した。混合物を50mLのDCMで抽出し、次いで、無水Na2SO4で乾燥した。混合物を濾過し、濃縮して、残留物を残し、カラムクロマトグラフィー（石油エーテル/EtOAc=20:1）によってこれを精製することによって、白色固体として1.1gの化合物Zがもたらされた。
2021512953.tif 000148
【実施例】
【０２４３】
実施例1
((2R,3R,5R)-5-(4-((((5,7-ジメトキシベンゾフラン-2-イル)メトキシ)カルボニル)-アミノ)-2-オキソピリミジン-1(2H)-イル)-4,4-ジフルオロ-3-ヒドロキシテトラヒドロフラン-2-イル)メチルリン酸水素トリエチルアンモニウム塩（化合物1）の調製
2021512953.tif 000149
工程A：Int 1-1の合成
2021512953.tif 000150
化合物B（60g、0.29モル）とTEA（31g、0.30モル）の無水THF（500mL）撹拌溶液（氷水浴）に、4-ニトロフェニルクロロホルメート（60g、0.30モル）の無水THF（300mL）を0℃で滴加した。次いで、反応混合物を20℃で12時間撹拌してから、溶媒を蒸発させた。粗製残留物をMTBE（150mL×3）で洗浄し、次いで濾過した。濾液を捨て、濾過ケークをEtOAc（2000mL）および水（1000mL）に溶解した。有機相を分離し、水（1000mL×2）、次いでブライン（500mL）で洗浄し、次いで、無水Na2SO4で乾燥した。濾液を濃縮して、85gのInt 1-1を得た。
2021512953.tif 000151
【０２４４】
工程B：Int 1-2の合成
2021512953.tif 000152
ゲムシタビン塩酸塩（140g、460ミリモル）のピリジン（2000mL）（氷水浴）溶液に、TIPDSCl（176g、560ミリモル）をN2下で0℃で滴加した。反応混合物を20℃で12時間撹拌した。ピリジンを真空下で除去し、残留物をEtOAc（1500mL）で溶解し、水（800mL×3）で洗浄した。有機層を分離し、無水Na2SO4で乾燥し、濾過した。濾液を濃縮して、白色固体として250gの化合物1-2を得て、これを次の工程に直接使用した。
2021512953.tif 000153
【０２４５】
工程C：Int i-3の合成
2021512953.tif 000154
化合物Int 1-1（85g、0.224モル）のTHF（800mL）撹拌懸濁液に、化合物1-2（116g、0.23モル）を窒素下で一度に加えた。得られた溶液を100℃で12時間加熱還流した。混合物を冷却し、溶媒を蒸発させて除き、残留物を得て、これをEtOAc（500mL）に溶解し、水（200mL×3）で洗浄した。有機相を分離し、無水Na2SO4で乾燥し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮して、粗生成物を得て、フラッシュクロマトグラフィーによってこれを精製して、発泡体として90gの化合物Int 1-3を得た。Rf（石油エーテル：EtOAc=1:1）=0.4。
【０２４６】
工程D：Int 1-4の合成
2021512953.tif 000155
化合物Int 1-3（90g、0.12モル）をMeOH（1000mL）に溶解し、NH4F（22.5g、2.46モル）で一度に処理した。得られた溶液を20℃で12時間撹拌してから、溶媒を蒸発させて、残留物を得た。残留物をEtOAc（1000mL）に溶解し、水（500mL×3）で洗浄、次いで、無水Na2SO4で乾燥し、濃縮して、残留物を得た。残留物をHPLCグレードのMeOH（1000mL）で覆い、次いで濾過した。濾過ケークをHPLCグレードのMeOH（200mL×2）で洗浄した。次いで、濾過ケークをHPLCグレードのMeOH（1500mL）で覆い、80℃で加熱して、溶液を生成した。溶液を12時間かけて室温に冷却して、沈殿を生じさせた。沈殿物を濾過し、HPLCグレードのMeOH（150mL×3）で洗浄し、固体を45℃で6日間乾燥して、白色固体として35gのInt 1-4を得た。Rf（DCM/MeOH=15/1）=0.3。HPLC：t=2.40分；純度：99.71％。
2021512953.tif 000156
【０２４７】
工程E：化合物1の合成
2021512953.tif 000157
Int 1-4（2.0g、4.0ミリモル）を含む乾燥100mL丸底フラスコにトリメチルホスフェート（10ml）を加えた。均一な溶液が形成されるまで、スラリーを窒素下で室温で撹拌した。次いで、得られた反応混合物を氷水塩浴中で-10℃に冷却し、10分間撹拌した。オキシ塩化リン（2.8g、18ミリモル）を10分かけて滴下して加えた。添加が完了すると、反応混合物を-10℃でさらに3時間撹拌した。次いで、反応混合物を脱イオン水（200mL）で0℃で滴下処理した。添加の間に、黄色固体が形成され、これを続いて濾過し、水（10mL×3）で洗浄した。黄色固体をアセトニトリル／水（20mL、1/1）に溶解し、EtOAcでpH=8に調整した。混合物を分取HPLCによって精製して、白色固体として1.0gの化合物1を得た。HPLC純度：99.83％。
2021512953.tif 000158
【０２４８】
実施例2
ジナトリウム((2R,3R,5R)-5-(4-((((5,7-ジメトキシベンゾフラン-2-イル)メトキシ)-カルボニル)アミノ)-2-オキソピリミジン-1(2H)-イル)-4,4-ジフルオロ-3-ヒドロキシテトラ-ヒドロフラン-2-イル)-メチルホスフェート（化合物2）の調製
2021512953.tif 000159
工程A：化合物2の調製
2021512953.tif 000160
化合物1（0.100g、0.1ミリモル、1.0当量）を脱イオン水（10mL）に溶解し、脱イオン水（10mL）であらかじめ膨張させたBio-Rex 70ナトリウム型イオン交換樹脂（5.0g）に加えた。混合物を脱イオン水（20mL）で希釈し、室温で1時間撹拌した。HPLCおよびLC_MSは、出発材料と完全に異なる保持時間を示した。この材料を焼結フリットを通して濾過した。得られた透明な溶液を凍結乾燥して乾燥させ、白色粉末として化合物2を得た。
2021512953.tif 000161
【０２４９】
実施例3
トリエチルアンモニウム((2R,3R,5R)-5-(4-((((5,7-ビス(メトキシ-d3)ベンゾフラン-2-イル)-メトキシ)カルボニル)アミノ)-2-オキソピリミジン-1(2H)-イル)-4,4-ジフルオロ-3-ヒドロキシ-テトラヒドロフラン-2-イル)メチルリン酸水素（化合物3）の調製
2021512953.tif 000162
工程A：Int 3-1の合成
2021512953.tif 000163
化合物C（17g、79ミリモル）のTHF（100mL）撹拌溶液に、EtOAc（8.2g、83ミリモル）を0℃（氷水浴）で5分かけて滴加し、続いて、4-ニトロフェニルクロロホルメート（17.1g、85ミリモル）のTHF（50mL）溶液を小量ずつ加えた。得られた溶液を室温で2時間撹拌した。次いで、溶媒を蒸発させ、粗製残留物をMTBE（100mL×3）とともに撹拌し、次いで濾過した。濾過ケークをEtOAc（150mL）に溶解し、水（50mL×2）で洗浄した。有機層を分離し、無水Na2SO4で乾燥し、濾過した。濾液を濃縮して、白色固体としてInt 3-9（19g）を得た。
2021512953.tif 000164
【０２５０】
工程B：Int 3-2の合成
2021512953.tif 000165
Int 1-2（14g、28ミリモル）のTHF（50mL）撹拌溶液に、Int 3-9（11g、28ミリモル）を加え、得られた溶液を一晩加熱還流した。混合物を室温に冷却し、溶媒を除去して、残留物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（カラムの高さ：30cm、直径：10cm、100〜200メッシュのシリカゲル、石油エーテル/EtOAc=10/1、5/1、4/1）によって残留物を精製して、白色固体としてInt 3-10（13g）を得た。
2021512953.tif 000166
【０２５１】
工程C：Int 3-3の合成
2021512953.tif 000167
化合物Int 3-2（13g、17.4ミリモル）をMeOH（50mL）に溶解した。この溶液に、NH4F（2.9g、78.4ミリモル）を一度に加え、得られた溶液を室温で一晩撹拌した。溶媒を蒸発させて、残留物を得て、これをEtOAc（100mL）に溶解し、次いで、水（50mL×3）で洗浄した。有機抽出物を混合し、無水Na2SO4で乾燥し、次いで濃縮して、残留物を得た。残留物をHPLCグレードのMeOH（200mL）とともに撹拌し、次いで濾過した。濾過ケークを500mLのHPLCグレードのMeOHで2回洗浄した（HPLCによって、濾過ケークの純度が約99％であることが示された）。濾過ケークをHPLCグレードのMeOH（200mL）に溶解し、80℃に加熱した。熱を除去し、得られた溶液を室温で一晩静置した。得られた固体を濾過し、HPLCグレードのMeOH（50mL×3）で洗浄した。固体生成物を真空下で6日間45℃で加熱して、白色固体としてInt 3-3（5.7g）を得た。
2021512953.tif 000168
【０２５２】
工程D：化合物3の合成
2021512953.tif 000169
乾燥100mL丸底フラスコにInt 3-3（0.223g、0.4ミリモル、1.0当量）およびトリメチルホスフェート（0.918ml）を入れた。この混合物を超音波処理して、均一な溶液を得て、次いで、これを氷水浴中で冷却し、10分間撹拌した。オキシ塩化リン（49ul、0.5ミリモル、1.2当量）を3分かけて滴下して加えた。撹拌した反応混合物を室温に温め、2時間撹拌した。さらなるオキシ塩化リン（13ul）を加え、1時間撹拌した。反応を2M TEAHC緩衝液（トリエチルアンモニウム炭酸水素）で、pH=8になるまでクエンチし、週末にかけて冷蔵庫に保存した。次いで、混合物をジクロロメタン（50ml）で抽出した。水性層を分取逆相HPLC（Gemini-NX、10u C18 110A AXD 100×21.20mm；9分にわたる0〜50％CH3CN/50mM TEAHC水、50％CH3CN/50mM TEAHC水で10分間保持し、約6mLの粗生成物が存在し、注入量は0.4mLであり、生成物は約5.5分で溶出された）によって精製した。収集した画分を凍結乾燥して、白色固体として140mgの化合物3を得た。
2021512953.tif 000170
【０２５３】
以下の化合物4〜6は、実施例3に記載されているものと同様の手順を使用して調製することができる。
化合物4：トリエチルアンモニウム((2R,3R,5R)-5-(4-((((5,7-ジブロモベンゾフラン-2-イル)メトキシ)カルボニル)-アミノ)-2-オキソピリミジン-1(2H)-イル)-4,4-ジフルオロ-3-ヒドロキシテトラ-ヒドロフラン-2-イル)メチルリン酸水素
2021512953.tif 000171
化合物5：トリエチルアンモニウム((2R,3R,5R)-4,4-ジフルオロ-3-ヒドロキシ-5-(4-((((5-メトキシ-7-メチルベンゾフラン-2-イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)-2-オキソピリミジン-1(2H)-イル)テトラヒドロフラン-2-イル)メチルリン酸水素
2021512953.tif 000172
化合物6：トリエチルアンモニウム((2R,3R,5R)-5-(4-((((5,7-ジメチルベンゾフラン-2-イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)-2-オキソピリミジン-1(2H)-イル)-4,4-ジフルオロ-3-ヒドロキシテトラ-ヒドロフラン-2-イル)メチルリン酸水素
2021512953.tif 000173
【０２５４】
実施例4
ジ(トリエチルアンモニウム)((2R,3R,5R)-5-(4-((((4-((5,7-ジメトキシベンゾフラン-2-イル)メトキシ)ベンジル）オキシ)カルボニル)アミノ)-2-オキソピリミジン-1(2H)-イル)-4,4-ジフルオロ-3-ヒドロキシテトラヒドロフラン-2-イル)メチルホスフェート（化合物7）の調製
2021512953.tif 000174
工程A：化合物7の調製
2021512953.tif 000175
実施例1に記載されている3工程手順を使用して、Int NをInt N-3に変換した。乾燥100mL丸底フラスコにInt N-3（0.220g、0.4ミリモル）およびトリメチルホスフェート（0.906ml）を入れた。この混合物を超音波処理して、均一な溶液を得て、その後これを氷水浴中で冷却し、10分間撹拌した。オキシ塩化リン（40uL、0.4ミリモル）を3分かけて滴下して加えた。添加が完了すると、反応混合物を室温に温め、2時間撹拌した。さらなるオキシ塩化リン（13ul）を加え、反応混合物を1時間撹拌した。反応をpH=8になるまで2M TEAHC緩衝液でクエンチし、室温で一晩撹拌した。次いで、混合物をジクロロメタンで抽出した。水性層（最初にエマルジョンであり、これは、立たせて一晩静置すると透明になった）を分取逆相HPLC（Gemini-NX、10u C18 110A AXD 100×21.20mm；16分にわたって0〜45％CH3CN/50mM TEAHC水、45％CH3CN/50mM TEAHC水で2分間保持し、12分で生成物は溶出された）で精製した。適切な画分を収集し、混合し、凍結乾燥して、白色粉末（87mg）として化合物7を得た。
2021512953.tif 000176
【０２５５】
以下の化合物は、実施例4に記載されているものと同様の手順を使用して調製することができる。
化合物8：ジ(トリエチルアンモニウム)((2R,3R,5R)-5-(4-((((4-((5-メトキシ-7-メチルベンゾフラン-2-イル)メトキシ)ベンジル）オキシ)カルボニル)アミノ)-2-オキソピリミジン-1(2H)-イル)-4,4-ジフルオロ-3-ヒドロキシテトラヒドロフラン-2-イル)メチルホスフェート
2021512953.tif 000177
【０２５６】
実施例5
原発性ヒト頭頸部扁平上皮がん細胞株における、化合物1とその非リン酸化SMDC Int 1-4およびゲムシタビンとの比較細胞毒性IC50
腫瘍細胞増殖アッセイを使用して、UT-SCC-5、UT-SCC-8、UT-SCC-9、UT-SCC-10、UT-SCC-14、UT-SCC-16A、UT-SCC-16B、およびUT-SCC-24Aを含めた8種の初代初期継代ヒト頭頸部扁平上皮がん細胞株にわたって、ホスフェートプロドラッグ化合物1〜9、親の非リン酸化SMDC親化合物、およびエフェクター（ゲムシタビン）について細胞毒性IC50値を決定した。
【０２５７】
方法
96ウェル 黒色 透明底 組織培養プレートに、4000細胞／100μL／ウェルでUTSCC細胞を播種した。細胞を37℃および5％CO2で一晩インキュベートして、細胞を回復させ、再接着させた。翌日、細胞を試験化合物（0〜100μM）で72時間処理した。処理後、alamarBlue試薬の蛍光定量化によって細胞増殖を測定した。alamarBlueアッセイは、代謝活性の検出に基づく蛍光定量的／比色定量的増殖指示薬を組み入れている。特に、alamarBlue試薬の活性成分であるレサズリンは、青色であり、事実上非蛍光性である。細胞に入ると、レサズリンは、赤色でありかつ非常に蛍光性の化合物であるレゾルフィンに還元される。継続した細胞増殖によって還元環境が維持されるので、細胞周辺の培地の全体的な蛍光および色が増大する。alamarBlue試薬の蛍光強度は細胞数に正比例した。alamarBlueアッセイを実施するために、10μLのalamarBlue試薬を各ウェルに加え、プレートを37℃でさらに2時間インキュベートした。BioTek Synergy（商標）2マイクロプレートリーダーを使用して、530nmの励起および590nmの発光で蛍光強度を測定した。
【０２５８】
3つ組での細胞増殖アッセイを各濃度で実施した。コンピューターソフトウェア、Graphpad Prismを使用して、蛍光強度データを分析した。化合物の非存在下で、各データセットの蛍光強度（Ft）を100％として定義した。細胞の非存在下で、各データセットの蛍光強度（Fb）を0％として定義した。以下の方程式に従って各化合物の存在下におけるパーセント細胞を計算した：
F=化合物の存在下における蛍光強度、Fb=細胞の非存在下における蛍光強度、およびFt=化合物の非存在下における蛍光強度である、％細胞=(F-Fb)/(Ft-Fb)。
次いで、Y=パーセント細胞、B=最小パーセント細胞、T=最大パーセント細胞、X=化合物の対数、およびヒル勾配=傾き係数またはヒル係数である、方程式Y=B+(T-B)/1+10((Log EC50-X)×ヒル勾配)
を用いて作成したシグモイド用量応答曲線の非線形回帰分析を使用して、％細胞の値を、一連の化合物濃度に対して、プロットした。最大パーセント活性の半量を引き起こす濃度によって、IC50値を決定した。
【０２５９】
化合物1、非リン酸化親SMDC（Int 1-4）、およびゲムシタビンに対する細胞毒性IC50値を表1に表示する。化合物1／Int 1-4に対する細胞毒性IC50値の平均比率、約1は、Int 1-4のプロドラッグとして作用する化合物1と矛盾がない。化合物1／ゲムシタビンに対する細胞毒性IC50値の平均比率、約1.6は、化合物1が原発性頭頸部扁平上皮がん細胞株において匹敵する細胞毒性を示すことを示す。
【０２６０】
（表１）一連の原発性頭頸部扁平上皮がん細胞株において、中間体1-4（親SMDC）およびゲムシタビン（エフェクター）と比較した、化合物1（ホスフェートプロドラッグ）の細胞毒性
*提供元：Turku University Hospital and University of Turku, Turku, Finland
【０２６１】
実施例6
薬物動態研究
2021512953.tif 000178
化合物1に対応する非リン酸化SMDC（Int 1-4）は、低度から中程度の溶解度を示すが、50mg/mLに製剤化された。Int 1-4を、安定性および血漿／正常組織のPKの研究に進めた。
【０２６２】
化合物1は水溶性（>300mg/mL）であることが分かり、好都合には、iv/sq投与のために製剤化された。
【０２６３】
a)マウス血漿における、化合物1の非リン酸化SMDC（Int 1-4）対ゲムシタビンの、比較薬物動態（PK）研究
背景：
ゲムシタビンは、脱アミノ化して不活性なdFdUになることが公知である。理論に拘束されることを望むものではないが、Int 1-4は、全身的に安定であり、かつ腫瘍内で活性化されて「遊離」ゲムシタビンを放出するように、設計される。
目的：
CD-1マウスにおいて10mg/kgのInt 1-4および5mg/kgのゲムシタビンを単回静脈内注入投与した後に、血漿において、Int 1-4対「遊離」ゲムシタビンの、血漿薬物動態および安定性を比較すること。
【０２６４】
PK測定：
Int 1-4およびゲムシタビンに対するPKパラメーターC0、CL、Vdss、Cmax、tmax、t1/2、AUC(0-t)、AUC(0-inf)、MRT(0-t)、MRT(0-inf)を比較する。
2021512953.tif 000179
【０２６５】
CD-1マウスにおけるゲムシタビンの薬物動態
2021512953.tif 000180
注：--＝試料なし
【０２６６】
上記の表および図2aは、ゲムシタビンが、長い循環半減期およびAUCならびに長い暴露時間を有する不活性なdFdUに変換されることを示す。AUC0-last（ng.h/mL）の比率に基づくと、dFdUの血漿レベルはゲムシタビンよりも約500％高い。本データは公開されている文献と矛盾がない。
【０２６７】
CD-1マウスにおけるInt 1-4の薬物動態
2021512953.tif 000181
注：--＝試料なし
【０２６８】
AUC0-last（ng.h/mL）の比率に基づくと、ゲムシタビンの血漿レベルは、投与されたInt 1-4の約1.3％を構成する（上記の表のデータおよび図2bを参照されたい）。C0およびCmax（ng/mL）の比率に基づくと、ゲムシタビンの血漿レベルは、投与されたInt 1-4の0.01％を構成する。正常な組織のPK研究によって実証されるように、Int 1-4はすばやく血漿を通過し、組織中に取り込まれる。
【０２６９】
b)雄のCD-1マウスにおける、化合物1の非リン酸化SMDC（Int 1-4）対化合物1の、比較薬物動態（PK）研究
目的：
雄のCD-1マウスにおいて10.0mg/kgのInt 1-4（製剤 F1 & F2）とともに11.6mg/kgおよび23.2mg/kgの化合物1を単回静脈内注入投与した後に、血漿において、化合物1の血漿薬物動態および安定性を、その非リン酸化SMDC類似体（Int 1-4）と比較すること。
【０２７０】
PK測定：
化合物1およびInt 1-4に対するPKパラメーターC0、CL、Vdss、Cmax、tmax、t1/2、AUC(0-t)、AUC(0-inf)、MRT(0-t)、MRT(0-inf)を比較する。
2021512953.tif 000182
【０２７１】
マウス血漿における化合物1対Int 1-4の比較（IV1）
2021512953.tif 000183
マウス血漿における化合物1対Int 1-4の比較（IV2）
2021512953.tif 000184
マウス血漿における化合物1対Int 1-4の比較（IV3）
2021512953.tif 000185
ND＝不検出
2021512953.tif 000186
【０２７２】
c)Int 3-3（Int 1-4の重水素化類似体）、化合物3（化合物1の重水素化類似体）の非リン酸化SMDCの薬物動態
目的：
CD-1マウスにおいて8.83mg/kgのInt 3-3を単回静脈内注入した後に、Int 3-3の血漿薬物動態を決定すること。
【０２７３】
PK測定：
Int 3-3に対するPKパラメーターC0、CL、Vdss、Cmax、tmax、t1/2、AUC(0-t)、AUC(0-inf)、MRT(0-t)、MRT(0-inf)を比較する。
2021512953.tif 000187
【０２７４】
CD-1マウスにおけるInt 3-3の薬物動態
2021512953.tif 000188
【０２７５】
d)CD-1マウスにおける、正常な組織および血漿のInt 1-4のPK
目的：
雄のCD-1マウスにおいて20mg/kgのInt 1-4を単回静脈内注入投与した後に、排出器官における正常な組織でのInt 1-4の薬物動態、分布、および安定性を比較すること。
【０２７６】
PK測定：
Int 1-4に対するPKパラメーターC0、CL、Vdss、Cmax、tmax、t1/2、AUC(0-t)、AUC(0-inf)、MRT(0-t)、MRT(0-inf)を比較する。
2021512953.tif 000189
【０２７７】
図5に示すように、Int 1-4は、血漿ならびに肝臓および腎臓などの主な排出器官で安定である。ゲムシタビンは、脱アミノ化してdFdUになると思われる。ゲムシタビンの90％がシチジンデアミナーゼによって解毒され、これは、SMDC形態では防止される。
【０２７８】
e)CD-1マウスにおける、正常な組織および血漿のゲムシタビンのPK
目的：
雄のCD-1マウスにおいて10.5mg/kgのゲムシタビンを単回静脈内注入投与した後に、選択された排出器官および血漿における正常な組織でのゲムシタビンの薬物動態、分布、および安定性を決定すること。
【０２７９】
PK測定：
ゲムシタビンに対するPKパラメーターC0、CL、Vdss、Cmax、tmax、t1/2、AUC(0-t)、AUC(0-inf)、MRT(0-t)、MRT(0-inf)を決定する。
2021512953.tif 000190
【０２８０】
図6に示すように、ゲムシタビンは血漿および正常な組織において脱アミノ化されて、dFdUになる。クリニックでは、注射した用量の90％は、親ゲムシタビン（1％）またはdFdU（99％）のいずれかとして尿中に回収される。
【０２８１】
f)雄のカニクイザルにおけるInt 1-4の血漿PK
目的：
雄のカニクイザルにおいて5mg/kgおよび10mg/kgのInt 1-4を単回静脈内注入投与した後に、血漿においてInt 1-4の血漿薬物動態および安定性を比較すること。
【０２８２】
PK測定：
Int 1-4に対するPKパラメーターC0、CL、Vdss、Cmax、tmax、t1/2、AUC(0-t)、AUC(0-inf)、MRT(0-t)、MRT(0-inf)を比較する。
2021512953.tif 000191
【０２８３】
雄のカニクイザルにおけるInt 1-4のパラメーター
2021512953.tif 000192
【０２８４】
g)雄のカニクイザルにおける、Int 1-4とゲムシタビンの比較PK
目的：
雄のカニクイザルにおいて2.65mg/kgおよび5.29mg/kgの等モルのゲムシタビンとともに5mg/kgおよび10mg/kgのInt 1-4を単回静脈内注入投与した後に、血漿においてInt 1-4対ゲムシタビンの血漿薬物動態および安定性を比較すること。
【０２８５】
PK測定：
Int 1-4に対するPKパラメーターC0、CL、Vdss、Cmax、tmax、t1/2、AUC(0-t)、AUC(0-inf)、MRT(0-t)、MRT(0-inf)をゲムシタビンと比較する。
2021512953.tif 000193
【０２８６】
雄のカニクイザルにおけるInt 1-4のPKパラメーター
2021512953.tif 000194
【０２８７】
雄のカニクイザルにおけるゲムシタビンのPK
2021512953.tif 000195
【０２８８】
ゲムシタビン/Int 1-4のCmax値の比率に基づくと、血漿中の0.09％遊離ゲムシタビンは低い全身的曝露を示し、ゲムシタビンは、サルにおいて0.02時間の半減期を有し、不活性化されてdFdUになるが、Int 1-4は、約50倍長い半減期かつ大きい安定性を有する。ゲムシタビンの分布容積VDss=0.221L/kgは、Int 1-4に匹敵する。Int 1-4および薬物の血漿対全身水分分布を意味する、（サルにおける等モルの2.65mg/kgおよび5mg/kg投与での）VDss=0.287L/kgは、類似している。サル血漿PK研究におけるInt 1-4のPKパラメーターは、遊離薬物ゲムシタビンに引けをとらないが、Int 1-4は代謝的安定性の向上を示す。
【０２８９】
h)雄のカニクイザルにおける化合物1およびゲムシタビンの血漿PK
目的：
雄のカニクイザルにおいて2.28mg/kgの等モルのゲムシタビンとともに5mg/kgおよび10mg/kgの化合物1を単回静脈内注入投与した後に、血漿において化合物1の血漿薬物動態および安定性をInt 1-4と比較すること。
【０２９０】
PK測定：
化合物1およびInt 1-4に対するPKパラメーターC0、CL、Vdss、Cmax、tmax、t1/2、AUC(0-t)、AUC(0-inf)、MRT(0-t)、MRT(0-inf)をゲムシタビンと比較する。
2021512953.tif 000196
【０２９１】
サルの血漿における化合物1対Int 1-4の比較
2021512953.tif 000197
【０２９２】
化合物1は0.01時間の血漿半減期を有し、おそらくホスファターゼ酵素によってInt 1-4に変換される。したがって、化合物1はInt 1-4の可溶性プロドラッグであり、ゲムシタビンのHCl塩と同様にクリニックにおけるPBS中でのiv投与に有用であると考えられる。ゲムシタビン/Int 1-4のCmax値の比率に基づくと、0.09％遊離ゲムシタビンが血漿中に存在し、全身的曝露は低い。ゲムシタビンは、サルにおいて0.02時間という短い半減期を有し、不活性化されてdFdUになる。VDss=0.0357L/kgという化合物1の高い分布容積は、Int 1-4より10倍低い。理論に拘束されることを望むものではないが、この知見は、荷電親水性プロドラッグは血漿中に残存し、一方で、Int 1-4は体内水分中により多く分布していることと矛盾がない。化合物1および代謝物Int 1-4に対するPKパラメーターはプロドラッグ／薬物変換と矛盾がない。
【０２９３】
i)ラット血漿におけるInt 1-4対ゲムシタビンの比較薬物動態
目的：
Sprague-Dawleyラットにおいて10mg/kgのInt 1-4および4.71mg/kgのゲムシタビンを単回静脈内注入投与した後に、血漿においてInt 1-4対「遊離」ゲムシタビンの血漿薬物動態および安定性を比較すること。
【０２９４】
PK測定：
Int 1-4およびゲムシタビンに対するPKパラメーターC0、CL、Vdss、Cmax、tmax、t1/2、AUC(0-t)、AUC(0-inf)、MRT(0-t)、MRT(0-inf)を比較する。
2021512953.tif 000198
【０２９５】
ゲムシタビンは、ラットにおいてかなり長い血漿半減期（t1/2）、マウスの3倍を有する（図10a）。
・ラット血漿  t1/2約3.3時間 
・マウス血漿  t1/2約0.9時間
【０２９６】
Sprague-Dawleyラットにおけるゲムシタビンの薬物動態
2021512953.tif 000199
--＝試料なし；ND=未決定
【０２９７】
Sprague-DawleyラットにおけるInt 1-4の薬物動態
2021512953.tif 000200
【０２９８】
血漿中の「遊離」ゲムシタビンに対するより高いCmaxおよびAUC値に基づくと、Int 1-4はラットにおいて不安定である。
・ラット血漿ゲムシタビン  t1/2約9.43時間
【０２９９】
j)Int 1-4のイヌ血漿薬物動態
目的：
雄のビーグル犬において10mg/kgおよび20mg/kgのInt 1-4を単回静脈内注入投与した後に、血漿においてInt 1-4の血漿薬物動態および安定性を比較すること。
【０３００】
PK測定：
10および20mg/kgのInt 1-4に対するPKパラメーターC0、CL、Vdss、Cmax、tmax、t1/2、AUC(0-t)、AUC(0-inf)、MRT(0-t)、MRT(0-inf)を比較する。
2021512953.tif 000201
【０３０１】
雄のビーグル犬におけるInt 1-4のPKパラメーター
2021512953.tif 000202
【０３０２】
k)Int 1-4対ゲムシタビンの比較イヌ血漿PK
目的：
雄のビーグル犬における5mg/kgおよび10mg/kgのInt 1-4対5mg/kgのゲムシタビンの単回静脈内注入投与後に、血漿におけるInt-4の血漿薬物動態および安定性を比較すること。
【０３０３】
PK測定：
5および10mg/kgの1-4対5mg/kgのゲムシタビンに対するPKパラメーターC0、CL、Vdss、Cmax、tmax、t1/2、AUC(0-t)、AUC(0-inf)、MRT(0-t)、MRT(0-inf)を比較する。
2021512953.tif 000203
【０３０４】
雄のビーグル犬におけるInt 1-4のPKパラメーター
2021512953.tif 000204
【０３０５】
雄のビーグル犬におけるゲムシタビンの薬物動態
2021512953.tif 000205
【０３０６】
実施例7
a)ヒト、ラット、およびマウスの血漿におけるInt 1-4および化合物1の代謝的安定性
ヒト血漿安定性実験における試験化合物の半減期値
方法：アッセイは96ウェルマイクロタイタープレートで行った。化合物は、反復して（n=2）、37℃で0、5、15、30、および45分間インキュベートした。反応混合物（20μL）は、ヒト血漿中に3μMの終濃度の試験化合物を含んでいた。アッセイ能力を検証するために陽性対照としてユーカトロピンを含めた。化合物の残存％に対する時間の片対数プロットの線形回帰を使用して、半減期t1/2値を決定した。反復測定に基づいて、Int 1-4はヒト血漿において安定であることが分かった。
2021512953.tif 000206
*負の値は化合物が安定であることを示す
【０３０７】
CD-1マウス血漿安定性実験における試験化合物の半減期値
方法：アッセイは96ウェルマイクロタイタープレートで行った。化合物は、反復して（n=2）、37℃で0、5、15、30、および45分間インキュベートした。反応混合物（20μL）は、新鮮なCD-1マウス血漿中に3μMの終濃度の試験化合物を含んでいた。アッセイ能力を検証するために陽性対照としてユーカトロピンを含めた。化合物の残存％に対する時間の片対数プロットの線形回帰を使用して、半減期t1/2値を決定した。Int 1-4はCD-1マウス血漿において安定であり、t1/2は約13時間であった。
2021512953.tif 000207
【０３０８】
ラット血漿安定性実験における試験化合物の半減期値
方法：アッセイは96ウェルマイクロタイタープレートで行った。化合物は、反復して（n=2）、37℃で0、5、15、30、および45分間インキュベートした。反応混合物（20μL）は、新鮮なSprague Dawleyラットの血漿中に3μMの終濃度の試験化合物を含んでいた。ユーカトロピンはアッセイ能力を検証するための陽性対照である。化合物の残存％に対する時間の片対数プロットの線形回帰を使用して、半減期t1/2値を決定した。Int 1-4は、Sprague Dawleyラットの血漿において安定性が低いことが分かり、t1/2は約1.2時間であった。
2021512953.tif 000208
【０３０９】
マウス血漿安定性実験における試験化合物の半減期値
方法：アッセイは96ウェルマイクロタイタープレートで行った。化合物は、反復して（n=2）、37℃で0、5、15、30、および45分間インキュベートした。反応混合物（20μL）は、新鮮なSprague Dawleyラットの血漿中に3μMの終濃度の試験化合物を含んでいた。ユーカトロピンはアッセイ能力を検証するための陽性対照である。化合物の残存％に対する時間の片対数プロットの線形回帰を使用して、半減期t1/2値を決定した。Int 1-4のリン酸エステルTEA塩である化合物1は、マウス血漿において安定であることが分かった。
2021512953.tif 000209
*負の値は化合物が安定であることを示す
【０３１０】
実施例8
ヒト肝臓S9安定性実験におけるInt 1-4の半減期および固有クリアランス値
方法：肝臓S9組織画分を、チトクロームP450（CYP450）媒介性フェーズI酸化、UDPグルクロノシルトランスフェラーゼ（UGT）媒介性フェーズIIグルクロン酸抱合、およびアルデヒドオキシダーゼ（AO）などの他の経路を介する代謝による試験化合物の代謝的安定性のインビトロ評価に使用した。Int 1-4に対する固有クリアランス値は、ヒト肝臓S9において2.22uL/分/mgタンパク質であり、約4uL/分/mgタンパク質未満のものは何でも低クリアランス速度であると考えられた。
2021512953.tif 000210
【０３１１】
マウス肝臓S9安定性実験におけるInt 1-4の半減期および固有クリアランス値
方法：肝臓S9組織画分を、チトクロームP450（CYP450）媒介性フェーズI酸化、UDPグルクロノシルトランスフェラーゼ（UGT）媒介性フェーズIIグルクロン酸抱合、およびアルデヒドオキシダーゼ（AO）などの他の経路を介する代謝による試験化合物の代謝的安定性のインビトロ評価に使用した。Int 1-4に対する固有クリアランス値は、マウス肝臓S9において、1.27μL/分/mgタンパク質であり、約4μL/分/mgタンパク質未満のものは何でも低クリアランス速度であると考えられる。マウス肝臓S9におけるInt 1-4に対するCLintは、インビボでのマウス肝臓PK研究と矛盾がない。
2021512953.tif 000211
【０３１２】
サル肝臓S9安定性実験におけるInt 1-4の半減期および固有クリアランス値
方法：肝臓S9組織画分を、チトクロームP450（CYP450）媒介性フェーズI酸化、UDPグルクロノシルトランスフェラーゼ（UGT）媒介性フェーズIIグルクロン酸抱合、およびアルデヒドオキシダーゼ（AO）などの他の経路を介する代謝による試験化合物の代謝的安定性のインビトロ評価に使用した。Int 1-4に対する固有クリアランス値は、マウス肝臓S9において1.55μL/分/mgタンパク質であり、約4μL/分/mgタンパク質未満のものは何でも低クリアランス速度であると考えられる。サル肝臓S9におけるInt 1-4に対する低CLintは、インビボでのサルの血漿PKデータと矛盾がない。
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【０３１３】
イヌ肝臓S9安定性実験の半減期および固有クリアランス値
方法：肝臓S9組織画分を、チトクロームP450（CYP450）媒介性フェーズI酸化、UDPグルクロノシルトランスフェラーゼ（UGT）媒介性フェーズIIグルクロン酸抱合、およびアルデヒドオキシダーゼ（AO）などの他の経路を介する代謝による試験化合物の代謝的安定性のインビトロ評価に使用した。Int 1-4に対する固有クリアランス値は、マウス肝臓S9において2.2μL/分/mgタンパク質であり、約4μL/分/mgタンパク質未満のものは何でも低クリアランス速度であると考えられる。イヌ肝臓S9におけるInt 1-4に対するCLintはヒト肝臓S9に対するものと同様である。
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【０３１４】
ラット肝臓S9安定性実験におけるInt 1-4の半減期および固有クリアランス値
肝臓S9組織画分を、チトクロームP450（CYP450）媒介性フェーズI酸化、UDPグルクロノシルトランスフェラーゼ（UGT）媒介性フェーズIIグルクロン酸抱合、およびアルデヒドオキシダーゼ（AO）などの他の経路を介する代謝による試験化合物の代謝的安定性のインビトロ評価に使用した。Int 1-4に対する固有クリアランス値は、ラット肝臓S9において14.3μL/分/mgタンパク質であり、適度に高いクリアランス速度と考えられる。
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【０３１５】
ヒトS9安定性データから化合物を低または高クリアランスにカテゴリー化するのに使用することができる分類バンド
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【０３１６】
Int 1-4は、ヒト、マウス、イヌ、およびサルにおいて低いS9固有クリアランス値、Clint<2.5μL/分/mgタンパク質を示すが、ラットにおいて適度に高い値、Clint約14μL/分/mgタンパク質を示す。種全体にわたるS9固有クリアランス値は、Int 1-4に対するインビボでの血漿／正常な組織のPK安定性研究と矛盾がない。
【０３１７】
実施例9
ヒト、イヌ、サル、ラット、およびマウスの肝臓ミクロソームにおけるInt 1-4の代謝的安定性
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【０３１８】
化合物を肝臓ミクロソームにおける低、中、または高クリアランスにカテゴリー化するのに典型的に使用される分類バンド：
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【０３１９】
Int 1-4は、ヒト肝臓ミクロソームで安定であるであるように思われる（CLint=0.75mL/分/mgタンパク質）。Int 1-4は、ラット肝臓ミクロソームにおいて高クリアランス速度を有する（CLint=297mL/分/mgタンパク質）。
【０３２０】
実施例10
ヒト、ラット、マウス、イヌ、サルの肝臓の肝細胞におけるInt 1-4の代謝的安定性
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*負の値は化合物が安定であることを示す
【０３２１】
化合物を肝臓の肝細胞における低または高クリアランスにカテゴリー化するのに典型的に使用される分類バンド：
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【０３２２】
Int 1-4は、種の肝細胞全体にわたって比較的低い固有クリアランス値、Clint約3〜8μL/分/mgを示し、ラットが最高のクリアランス速度であり、ヒトが最低である。ゲムシタビンは、ラット肝細胞において代謝的に安定であり、ラット血漿PK研究における長い半減期および高い曝露と矛盾がない。
【０３２３】
前述の開示を、明瞭化および理解の目的で、例示および例としていくらか詳細に説明してきた。本発明を、様々な特定のおよび好ましい態様および技法に関連して説明してきた。しかし、本発明の趣旨および範囲内にとどまりながらも、多くの変形および修正を行うことができることを理解されたい。添付の特許請求の範囲の範囲内で変更および修正を行うことができることは当業者に明白であろう。したがって、上記の説明は、例示的であり、限定的でないことが意図されることを理解されたい。したがって、本発明の範囲は、上記の説明に関連して決定されるべきでないが、代わりに、以下の添付の特許請求の範囲、およびそのような特許請求の範囲が権利付与される均等物の全範囲に関連して決定されるべきである。
【図１ａ】
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【図１ｂ】
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【図１ｃ】
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【図１ｄ】
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【図２ａ】
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【図２ｂ】
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【図３ａ】
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【図３ｂ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８ａ】
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【図８ｂ】
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【図９ａ】
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【図９ｂ】
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【図１０ａ】
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【図１０ｂ】
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【図１１】
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【図１２ａ】
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【図１２ｂ】
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【国際調査報告】
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