(57)【要約】本発明は、トランスサイレチン関連アミロイドーシスの予防または処置に有用な抗体製剤及び方法を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）Ｋａｂａｔ番号付けによるＨ５２位及びＬ２６位がそれぞれ独立して、ＮもしくはＳであり得ることを除いて、配列番号６１の３つのＣＤＲを含む成熟重鎖可変領域及び配列番号７０の３つのＣＤＲを含む成熟軽鎖可変領域を含むモノクローナル抗体、または配列番号１の３つのＣＤＲを含む成熟重鎖可変領域及び配列番号１６の３つのＣＤＲを含む成熟軽鎖可変領域を含むモノクローナル抗体であって、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度で存在する、前記抗体、
（ｂ）約２０ｍＭの濃度で存在する緩衝液であって、クエン酸塩、ヒスチジン、リン酸塩、またはコハク酸塩である、前記緩衝液、
（ｃ）約２０５ｍＭ〜約２６０ｍＭの範囲内の濃度で存在する糖であって、スクロースもしくはトレハロースであり、または前記糖が不存在である場合、約１６０ｍＭのアルギニンが存在する、前記糖、及び
（ｄ）約０．０１重量％〜約１重量％の範囲内の濃度で存在する界面活性剤、を含む医薬製剤であって、
前記製剤が、約５．０〜約６．５の範囲内のｐＨを特徴とし、但し、
（ｉ）ヒスチジンまたはコハク酸緩衝液が存在する場合、前記ｐＨが、約６．０であり、
（ｉｉ）リン酸緩衝液が存在する場合、前記ｐＨが、約６．５であり、
（ｉｉｉ）ヒスチジン及びトレハロースが存在する場合、前記界面活性剤が
ａ．ＰＳ８０、または
ｂ．ＰＳ２０であり、但し、ＰＳ２０が存在する場合、約２５ｍＭのＬ−アルギニンも存在する、前記医薬製剤。
【請求項２】
マンニトールまたはソルビトールを本質的に含まない、請求項１に記載の製剤。
【請求項３】
前記緩衝液が、ヒスチジンである、請求項１に記載の製剤。
【請求項４】
前記糖が、約２３０ｍＭ〜約２５０ｍＭの範囲で存在する、請求項３に記載の製剤。
【請求項５】
前記糖が、約２３０〜２４０ｍＭで存在する、請求項４に記載の製剤。
【請求項６】
前記糖が、スクロースであり、前記界面活性剤が、ＰＳ２０またはＰＸ１８８である、請求項５に記載の製剤。
【請求項７】
前記界面活性剤が、０．０２％ｗ／ｗの濃度のＰＳ２０である、請求項６に記載の製剤。
【請求項８】
前記界面活性剤が、０．０４％ｗ／ｗの濃度のＰＸ１８８である、請求項７に記載の製剤。
【請求項９】
前記糖が、トレハロースである、請求項５に記載の製剤。
【請求項１０】
１６０ｍＭのアルギニンが、存在する、請求項１に記載の製剤。
【請求項１１】
前記緩衝液が、クエン酸塩である、請求項１に記載の製剤。
【請求項１２】
前記糖が、２３０ｍＭで存在する、請求項１１に記載の製剤。
【請求項１３】
前記界面活性剤が、０．０２％のＰＳ２０である、請求項１２に記載の製剤。
【請求項１４】
前記緩衝液が、リン酸塩である、請求項１に記載の製剤。
【請求項１５】
前記糖が、存在し、スクロースである、請求項１４に記載の製剤。
【請求項１６】
前記緩衝液が、コハク酸塩である、請求項１に記載の製剤。
【請求項１７】
前記糖が、存在し、スクロースである、請求項１６に記載の製剤。
【請求項１８】
前記糖が、存在し、トレハロースである、請求項４に記載の製剤。
【請求項１９】
前記トレハロースが、２０５ｍＭの濃度で存在する、請求項１８に記載の製剤。
【請求項２０】
前記界面活性剤が、ＰＳ２０である、請求項４に記載の製剤。
【請求項２１】
（ａ）ｐＨ５の、２０ｍＭのクエン酸塩、２３０ｍＭのトレハロース、及び０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０、
（ｂ）２０ｍＭのヒスチジン、２３０ｍＭのスクロース、及び０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０、
（ｃ）ｐＨ６．５の、２０ｍＭのリン酸塩、２３０ｍＭのスクロース、及び０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０、
（ｄ）ｐＨ６．５の、２０ｍＭのクエン酸塩、２３０ｍＭのスクロース、及び０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０、
（ｅ）２０ｍＭのヒスチジン、２３０ｍＭのトレハロース、及び０．０２％ｗ／ｗのＰＳ８０、
（ｆ）２０ｍＭのヒスチジン、０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０、及び１６０ｍＭのＬ−アルギニン、
（ｇ）２０ｍＭのヒスチジン、２４０ｍＭのスクロース、及び０．０４％ｗ／ｗのＰＸ１８８、
（ｈ）ｐＨ６．０の、２０ｍＭのコハク酸塩、２４０ｍＭのスクロース、及び０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０、または
（ｉ）２０ｍＭのヒスチジン、２０５ｍＭのトレハロース、０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０、及び２５ｍＭのＬ−アルギニン、
を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項２２】
前記製剤が、前記抗体、ならびに、およそ：
（ａ）ｐＨ５の、２０ｍＭのクエン酸塩、２３０ｍＭのトレハロース、及び０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０、
（ｂ）２０ｍＭのヒスチジン、２３０ｍＭのスクロース、及び０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０、
（ｃ）ｐＨ６．５の、２０ｍＭのリン酸塩、２３０ｍＭのスクロース、及び０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０、
（ｄ）ｐＨ６．５の、２０ｍＭのクエン酸塩、２３０ｍＭのスクロース、及び０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０、
（ｅ）２０ｍＭのヒスチジン、２３０ｍＭのトレハロース、及び０．０２％ｗ／ｗのＰＳ８０、
（ｆ）２０ｍＭのヒスチジン、０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０、及び１６０ｍＭのＬ−アルギニン、
（ｇ）２０ｍＭのヒスチジン、２４０ｍＭのスクロース、及び０．０４％ｗ／ｗのＰＸ１８８、
（ｈ）ｐＨ６．０の、２０ｍＭのコハク酸塩、２４０ｍＭのスクロース、及び０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０、または
（ｉ）２０ｍＭのヒスチジン、２０５ｍＭのトレハロース、０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０、及び２５ｍＭのＬ−アルギニン、
から本質的になる、請求項２１に記載の製剤。
【請求項２３】
前記製剤が、前記抗体、ならびに、およそ：
（ａ）２０ｍＭのヒスチジン、２４０ｍＭのスクロース、及び０．０４％ｗ／ｗのＰＸ１８８、
（ｂ）ｐＨ６．０の、２０ｍＭのコハク酸塩、２４０ｍＭのスクロース、及び０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０、または
（ｃ）２０ｍＭのヒスチジン、２０５ｍＭのトレハロース、０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０、及び２５ｍＭのＬ−アルギニン
から本質的になる、請求項２２に記載の製剤。
【請求項２４】
前記抗体が、配列番号６５のアミノ酸配列を含む成熟重鎖可変領域及び配列番号７６のアミノ酸配列を含む成熟軽鎖可変領域を含む、先行請求項のいずれかに記載の製剤。
【請求項２５】
前記製剤が、約５０ｍｇ／ｍｌの前記抗体、ならびに約２０ｍＭのヒスチジン、約２４０ｍＭのスクロース、及び約０．０４％ｗ／ｗのＰＸ１８８のから本質的になる、請求項２４に記載の製剤。
【請求項２６】
前記抗体が、Ｋａｂａｔ番号付けによるＨ５２位及びＬ２６位がそれぞれ独立して、ＮまたはＳであり得ることを除いて、配列番号６１の３つのＫａｂａｔ  ＣＤＲを含む成熟重鎖可変領域及び配列番号７０の３つのＫａｂａｔ  ＣＤＲを含む成熟軽鎖可変領域を含む、先行請求項のいずれかに記載の製剤。
【請求項２７】
前記抗体が、配列番号１の３つのＫａｂａｔ  ＣＤＲを含む成熟重鎖可変領域及び配列番号１６の３つのＫａｂａｔ  ＣＤＲを含む成熟軽鎖可変領域を含む、請求項１〜２５のいずれかに記載の製剤。
【請求項２８】
前記モノクローナル抗体が、ヒト化、キメラ、またはベニヤ抗体である、先行請求項のいずれかに記載の医薬製剤。
【請求項２９】
前記モノクローナル抗体が、ヒト化される、請求項２８に記載の製剤。
【請求項３０】
前記成熟重鎖可変領域が、配列番号６４〜６６のいずれか１つを含むアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が、配列番号７４〜７６のいずれか１つを含むアミノ酸配列を有する、請求項２９に記載の製剤。
【請求項３１】
前記成熟重鎖可変領域が、配列番号５〜１２のいずれか１つを含むアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が、配列番号１９〜２３のいずれか１つを含むアミノ酸配列を有する、請求項２９に記載の製剤。
【請求項３２】
前記成熟重鎖が、配列番号６５を含むアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖が、配列番号７６を含むアミノ酸配列を有する、請求項３０に記載の製剤。
【請求項３３】
前記成熟重鎖が、配列番号１１を含むアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖が、配列番号１９を含むアミノ酸配列を有する、請求項３１に記載の製剤。
【請求項３４】
前記成熟重鎖可変領域が、重鎖定常領域に融合しており、前記成熟軽鎖可変領域が、軽鎖定常領域に融合している、請求項２８〜３３のいずれか１項に記載のヒト化抗体。
【請求項３５】
前記成熟重鎖可変領域が、配列番号１０３の配列を有する重鎖定常領域に融合しており、但し、Ｃ末端リジンは不存在であり得、及び／または、前記成熟軽鎖可変領域が、配列番号１０４もしくは１０５の配列を有する軽鎖定常領域に融合している、請求項３４に記載のヒト化抗体。
【請求項３６】
前記モノクローナル抗体が、約５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、いずれかの先行請求項に記載の製剤。
【請求項３７】
前記ヒスチジン緩衝液が、約２０ｍＭの濃度である、いずれかの先行請求項に記載の製剤。
【請求項３８】
前記ｐＨが、約５．７５〜６．２５である、いずれかの先行請求項に記載の製剤。
【請求項３９】
前記糖／ポリオールが、約２４０ｍＭの濃度で存在するスクロースである、いずれかの先行請求項に記載の製剤。
【請求項４０】
前記ポロキサマーが、約０．０４重量％の濃度のポロキサマー１８８である、いずれかの先行請求項に記載の製剤。
【請求項４１】
前記抗体の約５重量％または３重量％未満が、前記製剤中の凝集体として存在する、いずれかの先行請求項に記載の製剤。
【請求項４２】
抗体の少なくとも９５重量％または９７重量％が、ＨＰ−ＳＥＣ分析での単一ピークとして機能する、いずれかの先行請求項に記載の製剤。
【請求項４３】
無菌である、請求項１〜４２のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項４４】
凍結及び解凍に安定である、請求項１〜４３のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項４５】
約２７０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ〜約３３０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇの浸透圧を有する、請求項１〜４４のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項４６】
（ａ）Ｋａｂａｔ番号付けによるＨ５２位及びＬ２６位がそれぞれ独立して、ＮもしくはＳであり得ることを除いて、配列番号６１の３つのＣＤＲを含む成熟重鎖可変領域及び配列番号７０の３つのＣＤＲを含む成熟軽鎖可変領域を含むモノクローナル抗体、または配列番号１の３つのＣＤＲを含む成熟重鎖可変領域及び配列番号１６の３つのＣＤＲを含む成熟軽鎖可変領域を含むモノクローナル抗体、
（ｂ）ヒスチジン、
（ｃ）糖／ポリオール、ならびに
（ｄ）ポロキサマー、
を含む、凍結乾燥製剤。
【請求項４７】
請求項１〜４５のいずれかに記載の製剤を凍結乾燥することにより調製される、請求項４６に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項４８】
約５．５〜約６．５のｐＨに、水で再構成可能である、請求項４６に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項４９】
約６．０のｐＨに、水で再構成可能である、請求項４６に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項５０】
約１０ｍｇ〜約４０ｍｇの前記抗体を含有する、請求項４６に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項５１】
水溶液を得るために水で再構成可能である凍結乾燥製剤であって、
（ａ）Ｋａｂａｔ番号付けによるＨ５２位及びＬ２６位がそれぞれ独立して、ＮもしくはＳであり得ることを除いて、配列番号６１の３つのＣＤＲを含む成熟重鎖可変領域及び配列番号７０の３つのＣＤＲを含む成熟軽鎖可変領域を含む抗体、または配列番号１の３つのＣＤＲを含む成熟重鎖可変領域及び配列番号１６の３つのＣＤＲを含む成熟軽鎖可変領域を含むモノクローナル抗体を含み、前記抗体が約２５ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度で存在し、さらに、前記医薬製剤が、
（ｂ）約１０ｍＭ〜約３０ｍＭの範囲内の濃度で存在する緩衝液、
（ｃ）約２２０ｍＭ〜約２６０ｍＭの範囲内の濃度で存在する糖／ポリオール、
（ｄ）約０．０１重量％〜約０．１重量％の範囲内の濃度で存在する界面活性剤、及び
（ｅ）約５．５〜約７．０の範囲内のｐＨ、
を含む、前記凍結乾燥製剤。
【請求項５２】
前記抗体が、配列番号６４〜６６のいずれか１つを含むアミノ酸配列を有する成熟重鎖可変領域及び配列番号７４〜７６のいずれか１つを含むアミノ酸配列を有する成熟軽鎖可変領域、または配列番号５〜１２のいずれか１つを含むアミノ酸配列を有する成熟重鎖可変領域及び配列番号１９〜２３のいずれか１つを含むアミノ酸配列を有する成熟軽鎖可変領域を含む抗体、を含む、請求項５１に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項５３】
前記抗体が約５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在するように、水で再構成可能である、請求項５２に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項５４】
前記緩衝液が、ヒスチジンを含む、請求項５１〜５３のいずれかに記載の凍結乾燥製剤。
【請求項５５】
前記ｐＨが約６．０であるように、水で再構成可能である、請求項５１〜５４のいずれかに記載の凍結乾燥製剤。
【請求項５６】
前記糖／ポリオールが、スクロースである、請求項５１〜５５のいずれかに記載の凍結乾燥製剤。
【請求項５７】
前記界面活性剤が、ポロキサマーである、請求項５１〜５６のいずれかに記載の凍結乾燥製剤。
【請求項５８】
前記ポロキサマーが、ＰＸ１８８である、請求項５７に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項５９】
（ａ）前記抗体が、配列番号６４〜６６のいずれか１つを含むアミノ酸配列を有する成熟重鎖可変領域及び配列番号７４〜７６のいずれか１つを含むアミノ酸配列を有する成熟軽鎖可変領域を含み、約５０ｍｇ／ｍｌの濃度に再構成可能であり、
（ｂ）前記緩衝液が、ヒスチジンであり、約２０ｍＭの濃度に再構成可能であり、
（ｃ）前記糖／ポリオールが、スクロースであり、約２４０ｍＭの濃度に再構成可能であり、
（ｄ）前記界面活性剤が、ポロキサマー１８８であり、約０．０４重量％の濃度に再構成可能である、
請求項５１に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項６０】
前記ｐＨが約６．０であるように、水で再構成可能である、請求項５９に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項６１】
前記抗体が、配列番号６５を含むアミノ酸配列を有する成熟重鎖可変領域及び配列番号７６を含むアミノ酸配列を有する成熟軽鎖可変領域を含む、請求項６０に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項６２】
前記成熟重鎖可変領域が、配列番号１０３の配列を有する重鎖定常領域に融合しており、但し、Ｃ末端リジンは不存在であり得、前記成熟軽鎖可変領域が、配列番号１０４の配列を有する軽鎖定常領域に融合している、請求項６１に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項６３】
前記抗体の少なくとも９５または９７％が、２〜８℃で最長３ヶ月の貯蔵後に、ＨＰ−ＳＥＣ下で単一ピークとして機能する、先行請求項のいずれかに記載の凍結乾燥製剤。
【請求項６４】
請求項４６〜６３のいずれかに記載の凍結乾燥製剤を再構成する方法であって、
前記凍結乾燥製剤を滅菌水と組み合わせて、液体製剤を生成することを含む、前記方法。
【請求項６５】
さらに、前記再構成製剤を注入用の等張液のバッグに導入することを含む、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記凍結乾燥製剤が、粉末形態またはバイアル中の固体発泡体の形態である、請求項６４に記載の方法。
【請求項６７】
２０ｍｌのバイアル中の抗体製剤の無菌凍結乾燥剤形であって、
（ｉ）約２２５〜２７５ｍｇの範囲内の抗体、
（ｉｉ）約１５〜１９ｍｇの範囲内のヒスチジン、
（ｉｉｉ）約２〜２．５ｍｇの範囲内のポロキサマーＰＸ１８８、及び
（ｉｖ）約４００〜４９０ｍｇの範囲内のスクロース、
から本質的になり、
前記抗体が、Ｋａｂａｔ番号付けによるＨ５２位及びＬ２６位がそれぞれ独立して、ＮもしくはＳであり得ることを除いて、配列番号６１の３つのＣＤＲを含む成熟重鎖可変領域及び配列番号７０の３つのＣＤＲを含む成熟軽鎖可変領域を含むモノクローナル抗体、または配列番号１の３つのＣＤＲを含む成熟重鎖可変領域及び配列番号１６の３つのＣＤＲを含む成熟軽鎖可変領域を含むモノクローナル抗体である、前記無菌凍結乾燥剤形。
【請求項６８】
前記バイアルが、
（ｉ）約２５０ｍｇの前記抗体、
（ｉｉ）約１６．８ｍｇのＬ−ヒスチジン、
（ｉｉｉ）約２．２ｍｇのポロキサマーＰＸ１８８、及び
（ｉｖ）約４４５．３ｍｇのスクロース、
から本質的になる内容物を有する、請求項６７に記載の凍結乾燥剤形。
【請求項６９】
前記抗体が、Ｋａｂａｔ番号付けによるＨ５２位及びＬ２６位がそれぞれ独立して、ＮまたはＳであり得ることを除いて、配列番号６１の３つのＫａｂａｔ  ＣＤＲを含む成熟重鎖可変領域及び配列番号７０の３つのＫａｂａｔ  ＣＤＲを含む成熟軽鎖可変領域を含む、請求項６７または６８に記載の凍結乾燥剤形。
【請求項７０】
前記抗体が、配列番号１の３つのＫａｂａｔ  ＣＤＲを含む成熟重鎖可変領域及び配列番号１６の３つのＫａｂａｔ  ＣＤＲを含む成熟軽鎖可変領域を含む、請求項６７または６８に記載の凍結乾燥剤形。
【請求項７１】
前記成熟重鎖可変領域が、配列番号６４〜６６のいずれか１つを含むアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が、配列番号７４〜７６のいずれか１つを含むアミノ酸配列を有する、請求項６７または６８に記載の凍結乾燥剤形。
【請求項７２】
前記成熟重鎖可変領域が、配列番号５〜１２のいずれか１つを含むアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が、配列番号１９〜２３のいずれか１つを含むアミノ酸配列を有する、請求項６７または６８に記載の凍結乾燥剤形。
【請求項７３】
前記成熟重鎖が、配列番号６５を含むアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖が、配列番号７６を含むアミノ酸配列を有する、請求項６７または６８に記載の凍結乾燥剤形。
【請求項７４】
前記成熟重鎖が、配列番号１１を含むアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖が、配列番号１９を含むアミノ酸配列を有する、請求項６７または６８に記載の凍結乾燥剤形。
【請求項７５】
前記成熟重鎖可変領域が、配列番号１０３の配列を有する重鎖定常領域に融合しており、但し、Ｃ末端リジンは不存在であり得、及び／または、前記成熟軽鎖可変領域が、配列番号１０４もしくは１０５の配列を有する軽鎖定常領域に融合している、請求項６７または６８に記載の凍結乾燥剤形。
【請求項７６】
Ｃ末端リジンが不存在であり得ることを除いて、前記成熟重鎖が、配列番号８２の配列を有し、前記成熟軽鎖が、配列番号８６の配列を有する、請求項６７または６８に記載の凍結乾燥剤形。
【請求項７７】
対象への投与のための、請求項６７〜７６のいずれかに記載の凍結乾燥剤形を調製する方法であって、
（ｉ）約５．０ｍＬの容量に、滅菌水で前記抗体製剤を再構成すること、及び
（ｉｉ）注入のために、生理食塩水で、ステップ（ｉ）の前記再構成された抗体製剤を希釈すること、
を含む、前記方法。
【請求項７８】
注入のための総容量が、２５０ｍＬである、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
注入のための総容量が、１００ｍＬである、請求項７７に記載の方法。
【請求項８０】
注入のための総容量が、５００ｍＬである、請求項７７に記載の方法。
【請求項８１】
請求項４６〜８０のいずれかに記載の凍結乾燥製剤の再構成から生じる、再構成製剤。
【請求項８２】
約５０ｍｇ／ｍＬの濃度の前記抗体、約２０ｍＭの濃度の前記ヒスチジン緩衝液、約０．０４重量％の濃度のポロキサマーを、約６．０のｐＨで含む、請求項８１の再構成製剤。
【請求項８３】
前記抗体の少なくとも９５、９６、９７、９８、または９９％が、高圧サイズ排除クロマトグラフィーで単一ピークとして機能する、請求項８１または８２の再構成製剤。
【請求項８４】
トランスサイレチン媒介性アミロイドーシスを有するか、またはその危険性がある対象を処置または予防する方法であって、有効なレジメンの、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の医薬製剤または請求項４６〜６３のいずれか１項に記載の再構成形態の凍結乾燥製剤を、前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項８５】
前記対象が、以前に、ＴＴＲ四量体安定剤、アンチセンスオリゴヌクレオチドベースの療法、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）ベースの療法、またはアミロイド分解剤で処置されている、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
前記対象が、前記ＴＴＲ四量体安定剤、アンチセンスオリゴヌクレオチドベースの療法、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）の療法、またはアミロイド分解剤を用いた前記処置をもう受けていない、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
前記対象が、ジフルニサルを用いる処置を同時に投与されている、請求項８４に記載の方法。
【請求項８８】
前記対象が、タファミディスを用いる処置を同時に投与されている、請求項８４に記載の方法。
【請求項８９】
前記対象が、ＴＴＲ四量体安定剤、アンチセンスオリゴヌクレオチドベースの治療、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）ベースの治療、またはアミロイド分解剤を用いる処置を同時に投与されている、請求項８４に記載の方法。
【請求項９０】
前記対象が、タファミディス、ジフルイサル、パティシラン、イノテルセン、４’−ヨード−４’−デオキシドキソルビシン（ＩＤＯＸ）、ドキシサイクリン、タウロウルソデオキシコール酸（ＴＵＤＣＡ）、シクロデキストリン（ＣｙＤ）、または抗ＳＡＰ抗体を用いる処置を同時に投与されている、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
前記対象が、ＡＴＴＲアミロイドーシスと診断されている、請求項８４に記載の方法。
【請求項９２】
前記対象が、野生型ＡＴＴＲ−心筋症を有する、請求項８４に記載の方法。
【請求項９３】
前記対象が、遺伝性ＡＴＴＲ−心筋症を有する、請求項８４に記載の方法。
【請求項９４】
前記対象が、遺伝性ＡＴＴＲ−多発神経障害を有する、請求項８４に記載の方法。
【請求項９５】
前記対象が、ＡＴＴＲ心臓病変を有する、請求項８４に記載の方法。
【請求項９６】
前記対象が、ＡＴＴＲアミロイドーシス末梢神経障害病変を有する、請求項８４に記載の方法。
【請求項９７】
前記医薬製剤、再構成形態の前記凍結乾燥製剤、または前記再構成形態の前記凍結乾燥抗体製剤が、希釈形態で、前記対象の静脈内に投与される、請求項８４に記載の方法。
【請求項９８】
前記希釈形態用の前記希釈剤が、生理食塩水である、請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
前記対象に投与される前記希釈形態の総容量が、少なくとも約１００ｍＬである、請求項９８に記載の方法。
【請求項１００】
前記対象に投与される前記希釈形態の総容量が、少なくとも約２５０ｍＬである、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０１】
前記対象に投与される前記希釈形態の総容量が、少なくとも約５００ｍＬである、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
前記総容量が、約２５０ｍＬである、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０３】
０．１、０．２、０．３、１、３、１０、または３０ｍｇ／ｋｇの前記抗体が、２８日毎に約１回前記対象に投与される、請求項９７の方法。
【請求項１０４】
０．１、０．２、０．３、１、または３ｍｇ／ｋｇの前記抗体が、約６０〜１２０分の範囲にわたる注入として前記対象に投与される、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０５】
１０または３０ｍｇ／ｋｇの前記抗体が、約９０〜１８０分の範囲にわたる注入として前記対象に投与される、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０６】
前記対象が、抗ヒスタミン薬を前投薬される、請求項９７に記載の方法。
【請求項１０７】
前記対象が、前記抗体投与前の約３０〜９０分の範囲内にジフェンヒドラミンを投与される、請求項９７に記載の方法。
【請求項１０８】
前記対象が、前記抗体投与前の約３０〜９０分の範囲内にアセトアミノフェンを投与される、請求項１０７に記載の方法。
【請求項１０９】
前記レジメンの期間が、少なくとも３ヶ月である、請求項８４に記載の方法。
【請求項１１０】
前記レジメンの期間が、少なくとも１２ヶ月である、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１１】
前記対象が、併用のタファミディスを投与されている、請求項８４に記載の方法。
【請求項１１２】
有効なレジメンのＴＴＲ四量体安定剤、アンチセンスオリゴヌクレオチドベースの療法、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）ベースの療法、またはアミロイド分解剤を投与することを含む、トランスサイレチン媒介アミロイドーシスを有するか、またはそのリスクがある対象を処置または予防する方法であって、前記対象が、以前に、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の医薬製剤または請求項４６〜６３のいずれか１項に記載の再構成形態の凍結乾燥製剤で処置されている、前記方法。
【請求項１１３】
前記対象が、請求項１〜４５のいずれか１項に記載の医薬製剤を用いた前記処置をもう受けていない、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１１４】
前記ＴＴＲ四量体安定剤が、タファミディスまたはジフルニサルである、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１１５】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドベースの療法が、イノテルセンである、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１１６】
前記ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）ベースの療法が、パティシランまたはレブシランである、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１１７】
前記アミロイド分解剤が、４’−ヨード−４’−デオキシドキソルビシン（ＩＤＯＸ）、ドキシサイクリン、タウロウルソデオキシコール酸（ＴＵＤＣＡ）、シクロデキストリン（ＣｙＤ）、または抗ＳＡＰ抗体である、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１１８】
前記アミロイド分解剤が、タウロウルソデオキシコール酸（ＴＵＤＣＡ）と組み合わせたドキシサイクリンである、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１１９】
前記対象が、ＡＴＴＲアミロイドーシスと診断されている、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１２０】
前記対象が、野生型ＡＴＴＲ−心筋症を有する、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１２１】
前記対象が、遺伝性ＡＴＴＲ−心筋症を有する、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１２２】
前記対象が、遺伝性ＡＴＴＲ−多発神経障害を有する、請求項１１２または１２１に記載の方法。
【請求項１２３】
前記対象が、ＡＴＴＲ心臓病変を有する、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１２４】
前記対象が、ＡＴＴＲアミロイドーシス末梢神経障害病変を有する、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１２５】
前記医薬製剤、再構成形態の前記凍結乾燥製剤、または前記再構成形態の前記凍結乾燥抗体製剤が、希釈形態で、前記対象の静脈内に投与される、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１２６】
前記希釈形態用の前記希釈剤が、生理食塩水である、請求項１２５に記載の方法。
【請求項１２７】
前記対象に投与される前記希釈形態の総容量が、少なくとも約１００ｍＬである、請求項１２６に記載の方法。
【請求項１２８】
前記対象に投与される前記希釈形態の総容量が、少なくとも約２５０ｍＬである、請求項１２７に記載の方法。
【請求項１２９】
前記対象に投与される前記希釈形態の総容量が、少なくとも約５００ｍＬである、請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３０】
前記総容量が、約２５０ｍＬである、請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３１】
０．１、０．２、０．３、１、３、１０、または３０ｍｇ／ｋｇの前記抗体が、２８日毎に約１回、前記対象に投与される、請求項１２５の方法。
【請求項１３２】
０．１、０．２、０．３、１、または３ｍｇ／ｋｇの前記抗体が、約６０〜１２０分の範囲にわたる注入として前記対象に投与される、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１３３】
１０または３０ｍｇ／ｋｇの前記抗体が、約９０〜１８０分の範囲にわたる注入として前記対象に投与される、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１３４】
前記対象が、抗ヒスタミン薬を前投薬される、請求項１２５に記載の方法。
【請求項１３５】
前記対象が、前記抗体投与前の約３０〜９０分の範囲内にジフェンヒドラミンを投与される、請求項１２５に記載の方法。
【請求項１３６】
前記対象が、前記抗体投与前の約３０〜９０分の範囲内にアセトアミノフェンを投与される、請求項１３５に記載の方法。
【請求項１３７】
前記レジメンの期間が、少なくとも３ヶ月である、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１３８】
前記レジメンの期間が、少なくとも１２ヶ月である、請求項１３７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年１１月２９日に出願されたＵＳ６２／５９２，２９４の利益を主張し、これは、あらゆる目的のために全体が参照により組み込まれる。
【０００２】
配列表の参照
本出願は、２０１８年１１月２８日に作成され、１４０，６７９バイトを含む５１９１０２＿ＳＥＱＬＳＴ．ｔｘｔという名前のファイル内の電子配列表を含み、これは、参照により組み込まれる。
【０００３】
疾患特異的タンパク質のフォールディング及び凝集の異常が原因であると考えられている疾患がいくつかある。このようなタンパク質は、アミロイドとして知られる病理診断的な蓄積物として蓄積することがあり、特定の組織学的染色によって可視化される。アミロイドは、炎症性応答を誘発すると考えられており、関係のある組織に複数の負の結果をもたらす。さらに、フォールディングが異常なタンパク質の小さい凝集体が存在し細胞毒性効果をもたらすこともある。
【０００４】
トランスサイレチン（ＴＴＲ）は、ミスフォールドして凝集する（例えば、アミロイドを形成する）ことが知られている多数のタンパク質の１つである。トランスサイレチン関連アミロイドーシスには、変異型または多様性ＴＴＲのミスフォールディングによって生じる家族性疾患、及び野生型ＴＴＲの不適切な凝集を原因とする孤発性非遺伝性疾患の２つの形態の疾患が含まれる。ＴＴＲアミロイド形成の過程で、神経系及び／または心臓ならびにそれ以外の組織に病態が生じることがある。
【発明の概要】
【０００５】
本発明は、以下を含む医薬製剤を提供する。（ａ）Ｋａｂａｔ番号付けによるＨ５２位及びＬ２６位がそれぞれ独立して、ＮもしくはＳであり得ることを除いて、配列番号６１の３つのＣＤＲを含む成熟重鎖可変領域及び配列番号７０の３つのＣＤＲを含む成熟軽鎖可変領域を含むモノクローナル抗体、または配列番号１の３つのＣＤＲを含む成熟重鎖可変領域及び配列番号１６の３つのＣＤＲを含む成熟軽鎖可変領域を含むモノクローナル抗体（抗体が約２５ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度で存在する）；（ｂ）約２０ｍＭの濃度で存在する緩衝液（緩衝液は、クエン酸塩、ヒスチジン、リン酸塩、またはコハク酸塩である）、（ｃ）約２０５ｍＭ〜約２６０ｍＭの範囲内の濃度で存在する糖（糖は、スクロースもしくはトレハロースであり、または糖が不存在である場合、約１６０ｍＭのアルギニンが存在する）；及び（ｄ）約０．０１重量％〜約１重量％の範囲内の濃度で存在する界面活性剤（製剤は、約５．０〜約６．５の範囲内のｐＨを特徴とし、但し、（ｉ）ヒスチジンまたはコハク酸緩衝液が存在する場合、ｐＨは、約６．０であり；（ｉｉ）リン酸緩衝液が存在する場合、ｐＨは、約６．５であり；（ｉｉｉ）ヒスチジン及びトレハロースが存在する場合、界面活性剤は、ａ．ＰＳ８０またはｂ．ＰＳ２０であり、但し、ＰＳ２０が存在する場合、約２５ｍＭのＬ−アルギニンも存在する）。任意に、製剤は、マンニトールまたはソルビトールを本質的に含まない。任意に、（ａ）に記載されるモノクローナル抗体を含む製剤は、マンニトール及びソルビトールを本質的に含まない。
【０００６】
いくつかの製剤では、緩衝液は、ヒスチジンである。任意に、糖は、約２３０ｍＭ〜約２５０ｍＭの、任意に、約２３０ｍＭ〜約２４０ｍＭの範囲で存在する。任意に、糖は、トレハロースである。任意に、糖は、スクロースであり、界面活性剤は、ＰＳ２０またはＰＸ１８８である。任意に、界面活性剤は、０．０２％ｗ／ｗの濃度のＰＳ２０である。任意に、界面活性剤は、０．０４％ｗ／ｗの濃度のＰＸ１８８である。いくつかの製剤では、１６０ｍＭのアルギニンが存在する。任意に、糖が存在し、トレハロースである。任意に、トレハロースは、２０５ｍＭの濃度で存在する。任意に、界面活性剤は、ＰＳ２０である。
【０００７】
いくつかの製剤では、緩衝液は、クエン酸塩である。任意に、糖は、２３０ｍＭで存在する。任意に、界面活性剤は、０．０２％のＰＳ２０である。いくつかの製剤では、緩衝液は、リン酸塩である。任意に、糖は、存在し、スクロースである。いくつかの製剤では、緩衝液は、コハク酸塩である。任意に、糖は、存在し、スクロースである。
【０００８】
いくつかの製剤は、（ａ）ｐＨ５の、２０ｍＭのクエン酸塩、２３０ｍＭのトレハロース、及び０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０；（ｂ）２０ｍＭのヒスチジン、２３０ｍＭのスクロース、及び０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０；（ｃ）ｐＨ６．５の、２０ｍＭのリン酸塩、２３０ｍＭのスクロース、及び０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０；（ｄ）ｐＨ６．５の、２０ｍＭのクエン酸塩、２３０ｍＭのスクロース、及び０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０；（ｅ）２０ｍＭのヒスチジン、２３０ｍＭのトレハロース、及び０．０２％ｗ／ｗのＰＳ８０；（ｆ）２０ｍＭのヒスチジン、０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０、及び１６０ｍＭのＬ−アルギニン；（ｇ）２０ｍＭのヒスチジン、２４０ｍＭのスクロース、及び０．０４％ｗ／ｗのＰＸ１８８；（ｈ）ｐＨ６．０の、２０ｍＭのコハク酸塩、２４０ｍＭのスクロース、及び０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０、または、（ｉ）２０ｍＭのヒスチジン、２０５ｍＭのトレハロース、０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０、及び２５ｍＭのＬ−アルギニンを含む。任意に、製剤は、抗体、ならびに、およそ：（ａ）ｐＨ５の２０ｍＭのクエン酸塩、２３０ｍＭのトレハロース、及び０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０；（ｂ）２０ｍＭのヒスチジン、２３０ｍＭのスクロース、及び０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０；（ｃ）ｐＨ６．５の、２０ｍＭのリン酸塩、２３０ｍＭのスクロース、及び０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０；（ｄ）ｐＨ６．５の、２０ｍＭのクエン酸塩、２３０ｍＭのスクロース、及び０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０；（ｅ）２０ｍＭのヒスチジン、２３０ｍＭのトレハロース、及び０．０２％ｗ／ｗのＰＳ８０；（ｆ）２０ｍＭのヒスチジン、０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０、及び１６０ｍＭのＬ−アルギニン；（ｇ）２０ｍＭのヒスチジン、２４０ｍＭのスクロース、及び０．０４％ｗ／ｗのＰＸ１８８；（ｈ）ｐＨ６．０の、２０ｍＭのコハク酸塩、２４０ｍＭのスクロース及び０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０；または（ｉ）２０ｍＭのヒスチジン、２０５ｍＭのトレハロース、０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０、及び２５ｍＭのＬ−アルギニン、から本質的になる。任意に、製剤は、抗体、ならびに：、およそ：（ａ）２０ｍＭのヒスチジン、２４０ｍＭのスクロース、及び０．０４％ｗ／ｗのＰＸ１８８；（ｂ）ｐＨ６．０の、２０ｍＭのコハク酸塩、２４０ｍＭのスクロース、及び０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０；または、（ｃ）２０ｍＭのヒスチジン、２０５ｍＭのトレハロース、０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０、及び２５ｍＭのＬ−アルギニン、から本質的になる。
【０００９】
いくつかの製剤では、抗体は、配列番号６５のアミノ酸配列を含む成熟重鎖可変領域、及び配列番号７６のアミノ酸配列を含む成熟軽鎖可変領域を含む。任意に、製剤は、約５０ｍｇ／ｍｌの抗体、及び約２０ｍＭのヒスチジン、約２４０ｍＭのスクロース、及び約０．０４％ｗ／ｗのＰＸ１８８から本質的になる。
【００１０】
いくつかの製剤では、抗体は、Ｋａｂａｔ番号付けによるＨ５２位及びＬ２６位がそれぞれ独立して、ＮまたはＳであり得ることを除いて、配列番号６１の３つのＫａｂａｔ  ＣＤＲを含む成熟重鎖可変領域及び配列番号７０の３つのＫａｂａｔ  ＣＤＲを含む成熟軽鎖可変領域を含む。
【００１１】
いくつかの製剤では、抗体は、配列番号１の３つのＫａｂａｔ  ＣＤＲを含む成熟重鎖可変領域、及び配列番号１６の３つのＫａｂａｔ  ＣＤＲを含む成熟軽鎖可変領域を含む。
【００１２】
いくつかの製剤では、モノクローナル抗体は、ヒト化、キメラまたはベニヤ抗体である。任意に、モノクローナル抗体は、ヒト化されている。任意に、成熟重鎖可変領域は、配列番号６４〜６６のいずれか１つを含むアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は、配列番号７４〜７６のいずれか１つを含むアミノ酸配列を有する。任意に、成熟重鎖可変領域は、配列番号５〜１２のいずれか１つを含むアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は、配列番号１９〜２３のいずれか１つを含むアミノ酸配列を有する。任意に、成熟重鎖は、配列番号１１を含むアミノ酸配列を有し、及び成熟軽鎖は、配列番号１９を含むアミノ酸配列を有する。任意に、成熟重鎖は、配列番号６５を含むアミノ酸配列を有し、及び成熟軽鎖は、配列番号７６を含むアミノ酸配列を有する。
【００１３】
ヒト化抗体を含む製剤では、成熟重鎖可変領域は、重鎖定常領域に融合しており、成熟軽鎖可変領域は、軽鎖定常領域に融合している。任意に、成熟重鎖可変領域は、配列番号１０３の配列を有する重鎖定常領域に融合しており、但し、Ｃ末端リジンは不存在であり得、及び／または成熟軽鎖可変領域は、配列番号１０４もしくは１０５の配列を有する軽鎖定常領域に融合している。
【００１４】
いくつかの製剤では、モノクローナル抗体は、約５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの製剤では、ヒスチジン緩衝液は、約２０ｍＭの濃度である。いくつかの製剤では、ｐＨは、約５．７５〜６．２５である。いくつかの製剤では、糖／ポリオールは、約２４０ｍＭの濃度で存在するスクロースである。いくつかの製剤では、ポロキサマーは、約０．０４重量％の濃度のポロキサマー１８８である。いくつかの製剤では、約５重量％または３重量％未満の抗体は、製剤中に凝集体として存在する。いくつかの製剤では、少なくとも９５重量％または９７重量％の抗体が、ＨＰ−ＳＥＣ分析で単一ピークとして機能する。いくつかの製剤は、無菌である。いくつかの製剤は、凍結及び解凍に安定である。いくつかの製剤は、約２７０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ〜約３３０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇの浸透圧を有する。
【００１５】
本発明はまた、（ａ）Ｋａｂａｔ番号付けによるＨ５２位及びＬ２６位がそれぞれ独立して、ＮもしくはＳであり得ることを除いて、配列番号６１の３つのＣＤＲを含む成熟重鎖可変領域及び配列番号７０の３つのＣＤＲを含む成熟軽鎖可変領域を含むモノクローナル抗体、または配列番号１の３つのＣＤＲを含む成熟重鎖可変領域及び配列番号１６の３つのＣＤＲを含む成熟軽鎖可変領域を含むモノクローナル抗体；（ｂ）ヒスチジン；（ｃ）糖／ポリオール；ならびに、（ｄ）ポロキサマー、を含む抗体の凍結乾燥製剤を提供する。任意に、凍結乾燥製剤は、上述の製剤を凍結乾燥することにより調製される。任意に、凍結乾燥製剤は、約５．５〜約６．５のｐＨに、水で再構成可能である。任意に、凍結乾燥製剤は、約６．０のｐＨに、水で再構成可能である。任意に、凍結乾燥製剤は、約１０ｍｇ〜約４０ｍｇの抗体を含む。
【００１６】
本発明はまた、以下を含む水溶液を得るための水で再構成可能な凍結乾燥製剤を提供する：（ａ）Ｋａｂａｔ番号付けによるＨ５２位及びＬ２６位がそれぞれ独立して、ＮもしくはＳであり得ることを除いて、配列番号６１の３つのＣＤＲを含む成熟重鎖可変領域及び配列番号７０の３つのＣＤＲを含む成熟軽鎖可変領域を含むモノクローナル抗体、または配列番号１の３つのＣＤＲを含む成熟重鎖可変領域及び配列番号１６の３つのＣＤＲを含む成熟軽鎖可変領域を含む抗体（抗体が約２５ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度で存在する）；（ｂ）約１０ｍＭ〜約３０ｍＭの範囲内の濃度で存在する緩衝液、（ｃ）約２２０ｍＭ〜約２６０ｍＭの範囲内の濃度で存在する糖／ポリオール、（ｄ）約０．０１重量％〜約０．１重量％の範囲内の濃度で存在する界面活性剤、ならびに（ｅ）約５．５〜約７．０の範囲内のｐＨ。
【００１７】
いくつかの凍結乾燥製剤では、抗体は、配列番号６４〜６６のいずれか１つを含むアミノ酸配列を有する成熟重鎖可変領域及び配列番号７４〜７６のいずれか１つを含むアミノ酸配列を有する成熟軽鎖可変領域を含み、または抗体は、配列番号５〜１２のいずれか１つを含むアミノ酸配列を有する成熟重鎖可変領域及び配列番号１９〜２３のいずれか１つを含むアミノ酸配列を有する成熟軽鎖可変領域を含む。任意に、凍結乾燥製剤は、抗体が約５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在するように、水で再構成可能である。任意に、緩衝液は、ヒスチジンを含む。任意に、凍結乾燥製剤は、ｐＨが約６．０になるように、水で再構成可能である。任意に、糖／ポリオールは、スクロースである。任意に、界面活性剤は、ポロキサマーである。任意に、ポロキサマーは、ＰＸ１８８である。
【００１８】
いくつかの凍結乾燥製剤において、（ａ）抗体は、配列番号６４〜６６のいずれか１つを含むアミノ酸配列を有する成熟重鎖可変領域及び配列番号７４〜７６のいずれか１つを含むアミノ酸配列を有する成熟軽鎖可変領域を含み、約５０ｍｇ／ｍｌの濃度に再構成可能であり；（ｂ）緩衝液は、ヒスチジンであり、約２０ｍＭの濃度に再構成可能であり；（ｃ）糖／ポリオールは、スクロースであり、約２４０ｍＭの濃度に再構成可能であり；（ｄ）界面活性剤は、ポロキサマー１８８であり、約０．０４重量％の濃度に再構成可能である。任意に、凍結乾燥製剤は、ｐＨが約６．０になるように、水で再構成可能である。任意に、抗体は、配列番号６５を含むアミノ酸配列を有する成熟重鎖可変領域及び配列番号７６を含むアミノ酸配列を有する成熟軽鎖可変領域を含む。任意に、成熟重鎖可変領域は、配列番号１０３の配列を有する重鎖定常領域に融合しており、成熟軽鎖可変領域は、配列番号１０４の配列を有する軽鎖定常領域に融合している。これらの凍結乾燥製剤では、抗体の少なくとも９５または９７％は、２〜８℃で最大３ヶ月間貯蔵した後、ＨＰ−ＳＥＣ下で単一ピークとして機能する。
【００１９】
本発明はまた、凍結乾燥製剤を滅菌水と組み合わせて、液体製剤を得ることを含む、凍結乾燥製剤を再構成する方法を提供する。任意に、それはさらに、再構成製剤を注入用等張液のバッグに導入することを含む。任意に、凍結乾燥製剤は、粉末形態またはバイアル中の固体発泡体の形態である。
【００２０】
本発明はさらに、（ｉ）約２２５〜２７５ｍｇの範囲内の抗体；（ｉｉ）約１５〜１９ｍｇの範囲内のヒスチジン；（ｉｉｉ）約２〜２．５ｍｇの範囲内のポロキサマーＰＸ１８８；ならびに；（ｉｖ）約４００〜４９０ｍｇの範囲内のスクロース、から本質的になる、２０ｍｌのバイアル中の抗体製剤の無菌凍結乾燥剤形を提供し、抗体は、Ｋａｂａｔ番号付けによるＨ５２位及びＬ２６位がそれぞれ独立して、ＮもしくはＳであり得ることを除いて、配列番号６１の３つのＣＤＲを含む成熟重鎖可変領域及び配列番号７０の３つのＣＤＲを含む成熟軽鎖可変領域を含むモノクローナル抗体、または配列番号１の３つのＣＤＲを含む成熟重鎖可変領域及び配列番号１６の３つのＣＤＲを含む成熟軽鎖可変領域を含むモノクローナル抗体である。任意に、バイアルは、本質的に以下からなる内容物を有する：（ｉ）約２５０ｍｇの抗体；（ｉｉ）約１６．８ｍｇのＬ−ヒスチジン；（ｉｉｉ）約２．２ｍｇのポロキサマーＰＸ１８８；及び、（ｉｖ）約４４５．３ｍｇのスクロース。任意に、抗体は、Ｋａｂａｔ番号付けによるＨ５２位及びＬ２６位がそれぞれ独立して、ＮまたはＳであり得ることを除いて、配列番号６１の３つのＫａｂａｔ  ＣＤＲを含む成熟重鎖可変領域及び配列番号７０の３つのＫａｂａｔ  ＣＤＲを含む成熟軽鎖可変領域を含む。任意に、抗体は、配列番号１の３つのＫａｂａｔ  ＣＤＲを含む成熟重鎖可変領域、及び配列番号１６の３つのＫａｂａｔ  ＣＤＲを含む成熟軽鎖可変領域を含む。任意に、成熟重鎖可変領域は、配列番号６４〜６６のいずれか１つを含むアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は、配列番号７４〜７６のいずれか１つを含むアミノ酸配列を有する。任意に、成熟重鎖可変領域は、配列番号５〜１２のいずれか１つを含むアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域は、配列番号１９〜２３のいずれか１つを含むアミノ酸配列を有する。任意に、成熟重鎖は、配列番号６５を含むアミノ酸配列を有し、及び成熟軽鎖は、配列番号７６を含むアミノ酸配列を有する。任意に、成熟重鎖は、配列番号６を含むアミノ酸配列を有し、及び成熟軽鎖は、配列番号２１を含むアミノ酸配列を有する。任意に、成熟重鎖可変領域は、配列番号１０３の配列を有する重鎖定常領域に融合しており、但し、Ｃ末端リジンは不存在であり得、及び／または成熟軽鎖可変領域は、配列番号１０４もしくは１０５の配列を有する軽鎖定常領域に融合している。任意に、成熟重鎖は、Ｃ末端リジンが不存在であり得ることを除いて、配列番号８２の配列を有し、成熟軽鎖は、配列番号８６の配列を有する。
【００２１】
本発明はまた、以下を含む、対象への投与のための凍結乾燥剤形を調製する方法を提供する：（ｉ）抗体製剤を滅菌水で約５．０ｍＬの容量に再構成すること、及び、（ｉｉ）ステップ（ｉ）の再構成抗体製剤を、注入用の生理食塩水中で希釈すること、を含む。任意に、注入総容量は、２５０ｍＬである。任意に、注入総容量は、１００ｍＬである。任意に、注入総容量は、５００ｍＬである。
【００２２】
本発明はまた、凍結乾燥製剤の再構成から生じる再構成製剤を提供する。いくつかの再構成製剤は、約５０ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体、約２０ｍＭの濃度のヒスチジン緩衝液、約０．０４重量％の濃度のポロキサマーを、約６．０のｐＨで含む。任意に、抗体の少なくとも９５、９６、９７、９８、または９９％が、高圧サイズ排除クロマトグラフィーの単一ピークとして機能する。
【００２３】
本発明はまた、有効なレジメンの医薬製剤または再構成形態の凍結乾燥製剤を対象に投与することを含む、トランスサイレチン媒介性アミロイドーシスを有するか、またはその危険性がある対象を処置または予防する方法を提供する。任意に、対象は、以前に、ＴＴＲ四量体安定剤、アンチセンスオリゴヌクレオチドベースの療法、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）ベースの療法、またはアミロイド分解剤で処置されている。任意に、対象は、ＴＴＲ四量体安定剤、アンチセンスオリゴヌクレオチドベースの療法、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）ベースの療法、またはアミロイド分解剤による処置をもう受けていない。任意に、対象は、ジフルニサルを用いる処置を同時に投与されている。任意に、対象は、タファミディスを用いる処置を同時に投与されている。任意に、対象は、ＴＴＲ四量体安定剤、アンチセンスオリゴヌクレオチドベースの療法、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）ベースの療法、またはアミロイド分解剤での処置を同時に投与されている。任意に、対象は、タファミディス、ジフルイサル（ｄｉｆｌｕｉｓａｌ）、パティシラン、イノテルセン、４’−ヨード−４’−デオキシドキソルビシン（ＩＤＯＸ）、ドキシサイクリン、タウロウルソデオキシコール酸（ＴＵＤＣＡ）、シクロデキストリン（ＣｙＤ）、または抗ＳＡＰ抗体を用いる処置を同時に投与されている。任意に、対象は、ＡＴＴＲアミロイドーシスと診断されている。任意に、対象は、野生型ＡＴＴＲ−心筋症を有する。任意に、対象は、遺伝性ＡＴＴＲ−心筋症、または遺伝性ＡＴＴＲ−多発神経障害、またはその両方を有する。任意に、対象は、ＡＴＴＲ−心臓病変を有する。任意に、対象は、ＡＴＴＲアミロイドーシス末梢神経障害病変を有する。任意に、対象は、併用のタファミディスを投与されている。
【００２４】
本発明はまた、医薬製剤、再構成形態の凍結乾燥製剤、または再構成形態の凍結乾燥抗体製剤が、希釈形態で対象に静脈内投与されることを提供する。任意に、希釈形態用の希釈剤は、生理食塩水である。任意に、対象に投与される希釈形態の総容量は、少なくとも約１００ｍＬである。任意に、対象に投与される希釈形態の総容量は、少なくとも約２５０ｍＬである。任意に、対象に投与される希釈形態の総容量は、少なくとも約５００ｍＬである。任意に、総容量は、約２５０ｍＬである。任意に、０．１、０．２、０．３、１、３、１０、または３０ｍｇ／ｋｇの抗体が、約２８日に１回対象に投与される。任意に、０．１、０．２、０．３、１、または３ｍｇ／ｋｇの抗体が、約６０〜１２０分の範囲にわたる注入として対象に投与される。任意に、１０または３０ｍｇ／ｋｇの抗体が、約９０〜１８０分の範囲にわたる注入として対象に投与される。任意に、対象は、抗ヒスタミン薬を前投薬される。任意に、対象は、抗体投与前の約３０〜９０分の範囲内でジフェンヒドラミンを投与される。任意に、対象は、抗体投与前の約３０〜９０分の範囲内でアセトアミノフェンを投与される。任意に、レジメンの期間は、少なくとも３ヶ月である。任意に、レジメンの期間は、少なくとも１２ヶ月である。
【００２５】
本発明はさらに、有効なレジメンのＴＴＲ四量体安定剤、アンチセンスオリゴヌクレオチドベースの療法、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）ベースの療法、またはアミロイド分解剤を投与することを含む、トランスサイレチン媒介性アミロイドーシスを有するか、またはその危険性がある対象を処置または予防する方法を提供し、対象は、以前に、上記のような医薬製剤または再構成形態の凍結乾燥製剤で処置されている。任意に、対象は、医薬製剤を用いる処置をもう受けていない。任意に、ＴＴＲ四量体安定剤は、タファミディスまたはジフルニサルである。任意に、アンチセンスオリゴヌクレオチドベースの療法は、イノテルセンである。任意に、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）ベースの療法は、パティシランまたはレブシランである。任意に、アミロイド分解剤は、４’−ヨード−４’−デオキシドキソルビシン（ＩＤＯＸ）、ドキシサイクリン、タウロウルソデオキシコール酸（ＴＵＤＣＡ）、シクロデキストリン（ＣｙＤ）、または抗ＳＡＰ抗体である。任意に、アミロイド分解剤は、タウロウルソデオキシコール酸（ＴＵＤＣＡ）と組み合わせたドキシサイクリンである。任意に、対象は、ＡＴＴＲアミロイドーシスと診断されている。任意に、対象は、野生型ＡＴＴＲ−心筋症を有する。任意に、対象は、遺伝性ＡＴＴＲ−心筋症を有する。任意に、対象は、遺伝性ＡＴＴＲ−多発神経障害を有する。任意に、対象は、ＡＴＴＲ−心臓病変を有する。任意に、対象は、ＡＴＴＲアミロイドーシス末梢神経障害病変を有する。任意に、医薬製剤、再構成形態の凍結乾燥製剤、または再構成形態の凍結乾燥抗体製剤は、希釈形態で、対象の静脈内に投与される。任意に、希釈形態用の希釈剤は、生理食塩水である。任意に、対象に投与される希釈形態の総容量は、少なくとも約１００ｍＬである。任意に、対象に投与される希釈形態の総容量は、少なくとも約２５０ｍＬである。任意に、対象に投与される希釈形態の総容量は、少なくとも約５００ｍＬである。任意に、総容量は、約２５０ｍＬである。任意に、０．１、０．２、０．３、１、３、１０、または３０ｍｇ／ｋｇの抗体が、約２８日に１回対象に投与される。任意に、０．１、０．２、０．３、１、または３ｍｇ／ｋｇの抗体が、約６０〜１２０分の範囲にわたる注入として対象に投与される。任意に、１０または３０ｍｇ／ｋｇの抗体が、約９０〜１８０分の範囲にわたる注入として対象に投与される。任意に、対象は、抗ヒスタミン薬を前投薬される。任意に、対象は、抗体投与前の約３０〜９０分の範囲内でジフェンヒドラミンを投与される。任意に、対象は、抗体投与前の約３０〜９０分の範囲内でアセトアミノフェンを投与される。任意に、レジメンの期間は、少なくとも３ヶ月である。任意に、レジメンの期間は、少なくとも１２ヶ月である。
【００２６】
配列の簡単な説明
配列番号１は、マウス９Ｄ５抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【００２７】
配列番号２は、マウス重鎖可変領域構造の鋳型１ＳＥＱ＿Ｈのアミノ酸配列を表す。
【００２８】
配列番号３は、重鎖可変アクセプターＡＣＣ番号ＢＡＣＯ２１１４のアミノ酸配列を表す。
【００２９】
配列番号４は、重鎖可変アクセプターＡＣＣ番号ＡＡＸ８２４９４．１のアミノ酸配列を表す。
【００３０】
配列番号５は、ヒト化９Ｄ５抗体の重鎖可変領域バージョン１（Ｈｕ９Ｄ５ＶＨｖ１）のアミノ酸配列を表す。
【００３１】
配列番号６は、ヒト化９Ｄ５抗体の重鎖可変領域バージョン２（Ｈｕ９Ｄ５ＶＨｖ２）のアミノ酸配列を表す。
【００３２】
配列番号７は、ヒト化９Ｄ５抗体の重鎖可変領域バージョン２ｂ（Ｈｕ９Ｄ５ＶＨｖ２ｂ）のアミノ酸配列を表す。
【００３３】
配列番号８は、ヒト化９Ｄ５抗体の重鎖可変領域バージョン３（Ｈｕ９Ｄ５ＶＨｖ３）のアミノ酸配列を表す。
【００３４】
配列番号９は、ヒト化９Ｄ５抗体の重鎖可変領域バージョン３ｂ（Ｈｕ９Ｄ５ＶＨｖ３ｂ）のアミノ酸配列を表す。
【００３５】
配列番号１０は、ヒト化９Ｄ５抗体の重鎖可変領域バージョン４（Ｈｕ９Ｄ５ＶＨｖ４）のアミノ酸配列を表す。
【００３６】
配列番号１１は、ヒト化９Ｄ５抗体の重鎖可変領域バージョン４ｂ（Ｈｕ９Ｄ５ＶＨｖ４ｂ）のアミノ酸配列を表す。
【００３７】
配列番号１２は、ヒト化９Ｄ５抗体の重鎖可変領域バージョン５（Ｈｕ９Ｄ５ＶＨｖ５）のアミノ酸配列を表す。
【００３８】
配列番号１３は、マウス９Ｄ５抗体のＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１のアミノ酸配列を表す。
【００３９】
配列番号１４は、マウス９Ｄ５抗体のＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２のアミノ酸配列を表す。
【００４０】
配列番号１５は、マウス９Ｄ５抗体のＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３のアミノ酸配列を表す。
【００４１】
配列番号１６は、マウス９Ｄ５抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【００４２】
配列番号１７は、マウス軽鎖可変領域構造の鋳型１ＭＪＵ＿Ｌのアミノ酸配列を表す。
【００４３】
配列番号１８は、軽鎖可変アクセプターＡＣＣ番号ＡＢＣ６６９５２のアミノ酸配列を表す。
【００４４】
配列番号１９は、ヒト化９Ｄ５抗体の軽鎖可変領域バージョン１（Ｈｕ９Ｄ５ＶＬｖ１）のアミノ酸配列を表す。
【００４５】
配列番号２０は、ヒト化９Ｄ５抗体の軽鎖可変領域バージョン２（Ｈｕ９Ｄ５ＶＬｖ２）のアミノ酸配列を表す。
【００４６】
配列番号２１は、ヒト化９Ｄ５抗体の軽鎖可変領域バージョン３（Ｈｕ９Ｄ５ＶＬｖ３）のアミノ酸配列を表す。
【００４７】
配列番号２２は、ヒト化９Ｄ５抗体の軽鎖可変領域バージョン４（Ｈｕ９Ｄ５ＶＬｖ４）のアミノ酸配列を表す。
【００４８】
配列番号２３は、ヒト化９Ｄ５抗体の軽鎖可変領域バージョン５（Ｈｕ９Ｄ５ＶＬｖ５）のアミノ酸配列を表す。
【００４９】
配列番号２４は、マウス９Ｄ５抗体のＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｌ１のアミノ酸配列を表す。
【００５０】
配列番号２５は、マウス９Ｄ５抗体のＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｌ２のアミノ酸配列を表す。
【００５１】
配列番号２６は、マウス９Ｄ５抗体のＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｌ３のアミノ酸配列を表す。
【００５２】
配列番号２７は、ヒト化９Ｄ５重鎖バージョン１のアミノ酸配列を表す。
【００５３】
配列番号２８は、ヒト化９Ｄ５重鎖バージョン２のアミノ酸配列を表す。
【００５４】
配列番号２９は、ヒト化９Ｄ５重鎖バージョン２ｂのアミノ酸配列を表す。
【００５５】
配列番号３０は、ヒト化９Ｄ５重鎖バージョン３のアミノ酸配列を表す。
【００５６】
配列番号３１は、ヒト化９Ｄ５重鎖バージョン３ｂのアミノ酸配列を表す。
【００５７】
配列番号３２は、ヒト化９Ｄ５重鎖バージョン４のアミノ酸配列を表す。
【００５８】
配列番号３３は、ヒト化９Ｄ５重鎖バージョン４ｂのアミノ酸配列を表す。
【００５９】
配列番号３４は、アミノ酸配列ヒト化９Ｄ５重鎖バージョン５を表す。
【００６０】
配列番号３５は、ヒト化９Ｄ５軽鎖バージョン１のアミノ酸配列を表す。
【００６１】
配列番号３６は、ヒト化９Ｄ５軽鎖バージョン２のアミノ酸配列を表す。
【００６２】
配列番号３７は、ヒト化９Ｄ５軽鎖バージョン３のアミノ酸配列を表す。
【００６３】
配列番号３８は、ヒト化９Ｄ５軽鎖バージョン４のアミノ酸配列を表す。
【００６４】
配列番号３９は、ヒト化９Ｄ５軽鎖バージョン５のアミノ酸配列を表す。
【００６５】
配列番号４０は、シグナルペプチドを有するマウス９Ｄ５抗体の重鎖可変領域の核酸配列を表す。
【００６６】
配列番号４１は、シグナルペプチドを有するマウス９Ｄ５抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【００６７】
配列番号４２は、シグナルペプチドを有するマウス９Ｄ５抗体の軽鎖可変領域の核酸配列を表す。
【００６８】
配列番号４３は、シグナルペプチドを有するマウス９Ｄ５抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【００６９】
配列番号４４は、ヒト化９Ｄ５抗体の重鎖可変領域バージョン１（Ｈｕ９Ｄ５ＶＨｖ１）の核酸配列を表す。
【００７０】
配列番号４５は、ヒト化９Ｄ５抗体の重鎖可変領域バージョン２（Ｈｕ９Ｄ５ＶＨｖ２）の核酸配列を表す。
【００７１】
配列番号４６は、ヒト化９Ｄ５抗体の重鎖可変領域バージョン２ｂ（Ｈｕ９Ｄ５ＶＨｖ２ｂ）の核酸配列を表す。
【００７２】
配列番号４７は、ヒト化９Ｄ５抗体の重鎖可変領域バージョン３（Ｈｕ９Ｄ５ＶＨｖ３）の核酸配列を表す。
【００７３】
配列番号４８は、ヒト化９Ｄ５抗体の重鎖可変領域バージョン３ｂ（Ｈｕ９Ｄ５ＶＨｖ３ｂ）の核酸配列を表す。
【００７４】
配列番号４９は、ヒト化９Ｄ５抗体の重鎖可変領域バージョン４（Ｈｕ９Ｄ５ＶＨｖ４）の核酸配列を表す。
【００７５】
配列番号５０は、ヒト化９Ｄ５抗体の重鎖可変領域バージョン４ｂ（Ｈｕ９Ｄ５ＶＨｖ４ｂ）の核酸配列を表す。
【００７６】
配列番号５１は、ヒト化９Ｄ５抗体の重鎖可変領域バージョン５（Ｈｕ９Ｄ５ＶＨｖ５）の核酸配列を表す。
【００７７】
配列番号５２は、ヒト化９Ｄ５抗体の軽鎖可変領域バージョン１（Ｈｕ９Ｄ５ＶＬｖ１）の核酸配列を表す。
【００７８】
配列番号５３は、ヒト化９Ｄ５抗体の軽鎖可変領域バージョン２（Ｈｕ９Ｄ５ＶＬｖ２）の核酸配列を表す。
【００７９】
配列番号５４は、ヒト化９Ｄ５抗体の軽鎖可変領域バージョン３（Ｈｕ９Ｄ５ＶＬｖ３）の核酸配列を表す。
【００８０】
配列番号５５は、ヒト化９Ｄ５抗体の軽鎖可変領域バージョン４（Ｈｕ９Ｄ５ＶＬｖ４）の核酸配列を表す。
【００８１】
配列番号５６は、ヒト化９Ｄ５抗体の軽鎖可変領域バージョン５（Ｈｕ９Ｄ５ＶＬｖ５）の核酸配列を表す。
【００８２】
配列番号５７は、マウス９Ｄ５重鎖可変領域シグナルペプチドのアミノ酸配列を表す。
【００８３】
配列番号５８は、マウス９Ｄ５重鎖可変領域シグナルペプチドの核酸配列を表す。
【００８４】
配列番号５９は、マウス９Ｄ５軽鎖可変領域シグナルペプチドのアミノ酸配列を表す。
【００８５】
配列番号６０は、マウス９Ｄ５軽鎖可変領域シグナルペプチドの核酸配列を表す。
【００８６】
配列番号６１は、マウス１４Ｇ８抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【００８７】
配列番号６２は、マウス重鎖可変領域構造の鋳型１ＭＱＫ＿Ｈのアミノ酸配列を表す。
【００８８】
配列番号６３は、重鎖可変アクセプターＡＣＣ番号ＡＡＤ３０４１０．１のアミノ酸配列を表す。
【００８９】
配列番号６４は、ヒト化１４Ｇ８抗体の重鎖可変領域バージョン１（Ｈｕ１４Ｇ８ＶＨｖ１）のアミノ酸配列を表す。
【００９０】
配列番号６５は、ヒト化１４Ｇ８抗体の重鎖可変領域バージョン２（Ｈｕ１４Ｇ８ＶＨｖ２）のアミノ酸配列を表す。
【００９１】
配列番号６６は、ヒト化１４Ｇ８抗体の重鎖可変領域バージョン３（Ｈｕ１４Ｇ８ＶＨｖ３）のアミノ酸配列を表す。
【００９２】
配列番号６７は、マウス１４Ｇ８抗体のＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１のアミノ酸配列を表す。
【００９３】
配列番号６８は、マウス１４Ｇ８抗体のＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２のアミノ酸配列を表す。
【００９４】
配列番号６９は、マウス１４Ｇ８抗体のＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３のアミノ酸配列を表す。
【００９５】
配列番号７０は、マウス１４Ｇ８抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【００９６】
配列番号７１は、マウス軽鎖可変領域構造の鋳型１ＭＪＵ＿Ｌのアミノ酸配列を表す。
【００９７】
配列番号７２は、軽鎖可変アクセプターＡＣＣ番号ＡＢＡ７１３７４．１のアミノ酸配列を表す。
【００９８】
配列番号７３は、軽鎖可変アクセプターＡＣＣ番号ＡＢＣ６６９５２．１のアミノ酸配列を表す。
【００９９】
配列番号７４は、ヒト化１４Ｇ８抗体の軽鎖可変領域バージョン１（Ｈｕ１４Ｇ８ＶＬｖ１）のアミノ酸配列を表す。
【０１００】
配列番号７５は、ヒト化１４Ｇ８抗体の軽鎖可変領域バージョン２（Ｈｕ１４Ｇ８ＶＬｖ２）のアミノ酸配列を表す。
【０１０１】
配列番号７６は、ヒト化１４Ｇ８抗体の軽鎖可変領域バージョン３（Ｈｕ１４Ｇ８ＶＬｖ３）のアミノ酸配列を表す。
【０１０２】
配列番号７７は、マウス１４Ｇ８抗体のＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｌ１のアミノ酸配列を表す。
【０１０３】
配列番号７８は、マウス１４Ｇ８抗体のＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｌ２のアミノ酸配列を表す。
【０１０４】
配列番号７９は、マウス１４Ｇ８抗体のＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｌ３のアミノ酸配列を表す。
【０１０５】
配列番号８０は、ヒト化１４Ｇ８抗体バージョン３（Ｈｕ１４Ｇ８ＶＬｖ３）のＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｌ１のアミノ酸配列を表す。
【０１０６】
配列番号８１は、ヒト化１４Ｇ８重鎖バージョン１のアミノ酸配列を表す。
【０１０７】
配列番号８２は、ヒト化１４Ｇ８重鎖バージョン２のアミノ酸配列を表す。
【０１０８】
配列番号８３は、ヒト化１４Ｇ８重鎖バージョン３のアミノ酸配列を表す。
【０１０９】
配列番号８４は、ヒト化１４Ｇ８軽鎖バージョン１のアミノ酸配列を表す。
【０１１０】
配列番号８５は、ヒト化１４Ｇ８軽鎖バージョン２のアミノ酸配列を表す。
【０１１１】
配列番号８６は、ヒト化１４Ｇ８軽鎖バージョン３のアミノ酸配列を表す。
【０１１２】
配列番号８７は、シグナルペプチドを有するマウス１４Ｇ８抗体の重鎖可変領域の核酸配列を表す。
【０１１３】
配列番号８８は、シグナルペプチドを有するマウス１４Ｇ８抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【０１１４】
配列番号８９は、シグナルペプチドを有するマウス１４Ｇ８抗体の軽鎖可変領域の核酸配列を表す。
【０１１５】
配列番号９０は、シグナルペプチドを有するマウス１４Ｇ８抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
【０１１６】
配列番号９１は、ヒト化１４Ｇ８抗体の重鎖可変領域バージョン１（Ｈｕ１４Ｇ８ＶＨｖ１）の核酸配列を表す。
【０１１７】
配列番号９２は、ヒト化１４Ｇ８抗体の重鎖可変領域バージョン２（Ｈｕ１４Ｇ８ＶＨｖ２）の核酸配列を表す。
【０１１８】
配列番号９３は、ヒト化１４Ｇ８抗体の重鎖可変領域バージョン３（Ｈｕ１４Ｇ８ＶＨｖ３）の核酸配列を表す。
【０１１９】
配列番号９４は、ヒト化１４Ｇ８抗体の軽鎖可変領域バージョン１（Ｈｕ１４Ｇ８ＶＬｖ１）の核酸配列を表す。
【０１２０】
配列番号９５は、ヒト化１４Ｇ８抗体の軽鎖可変領域バージョン２（Ｈｕ１４Ｇ８ＶＬｖ２）の核酸配列を表す。
【０１２１】
配列番号９６は、ヒト化１４Ｇ８抗体の軽鎖可変領域バージョン３（Ｈｕ１４Ｇ８ＶＬｖ３）の核酸配列を表す。
【０１２２】
配列番号９７は、マウス１４Ｇ８重鎖可変領域シグナルペプチドのアミノ酸配列を表す。
【０１２３】
配列番号９８は、マウス１４Ｇ８重鎖可変領域シグナルペプチドの核酸配列を表す。
【０１２４】
配列番号９９は、マウス１４Ｇ８軽鎖可変領域シグナルペプチドのアミノ酸配列を表す。
【０１２５】
配列番号１００は、マウス１４Ｇ８軽鎖可変領域シグナルペプチドの核酸配列を表す。
【０１２６】
配列番号１０１は、例示的ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域のアミノ酸配列を表す。
【０１２７】
配列番号１０２は、アラニンがＥＵ番号付けによる２３４位及び２３５位を占める、ＩｇＧ１  Ｇｌｍ３アロタイプの例示的なヒトＩｇＧ１重鎖定常領域のアミノ酸配列を表す。
【０１２８】
配列番号１０３は、ＩｇＧ１  Ｇｌｍ３アロタイプの例示的ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域のアミノ酸配列を表す。
【０１２９】
配列番号１０４は、Ｎ末端アルギニンを有する例示的ヒトカッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を表す。
【０１３０】
配列番号１０５は、Ｎ末端アルギニンを有さない例示的ヒトカッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を表す。
【０１３１】
配列番号１０６は、Ｇ１ｍ３アロタイプの例示的重鎖定常領域の核酸配列を表す。
【０１３２】
配列番号１０７は、Ｎ末端アルギニンを有する例示的軽鎖定常領域の核酸配列を表す。
【０１３３】
配列番号１０８は、Ｎ末端アルギニンを有さない例示的軽鎖定常領域の核酸配列を表す。
【０１３４】
配列番号１０９は、アクセッション番号Ｐ０２７６６．１（ＵｎｉＰｒｏｔ）で表されるヒトトランスサイレチンのアミノ酸配列を表す。
【０１３５】
配列番号１１０は、アクセッション番号ＡＡＢ３５６３９．１（ＧｅｎＢａｎｋ）で表されるヒトトランスサイレチンのアミノ酸配列を表す。
【０１３６】
配列番号１１１は、アクセッション番号ＡＡＢ３５６４０．１（ＧｅｎＢａｎｋ）で表されるヒトトランスサイレチンのアミノ酸配列を表す。
【０１３７】
配列番号１１２は、アクセッション番号ＡＢＩ６３３５１．１（ＧｅｎＢａｎｋ）で表されるヒトトランスサイレチンのアミノ酸配列を表す。
【０１３８】
配列番号１１３は、ヒトトランスサイレチンの残基８９〜９７のアミノ酸配列を表す。
【０１３９】
配列番号１１４は、潜在的トランスサイレチン免疫原のアミノ酸配列を表す。
【０１４０】
配列番号１１５は、潜在的トランスサイレチン免疫原のアミノ酸配列を表す。
【０１４１】
配列番号１１６は、潜在的トランスサイレチン免疫原のアミノ酸配列を表す。
【０１４２】
配列番号１１７は、マウス９Ｄ５抗体のＣｈｏｔｈｉａ−Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１複合体のアミノ酸配列を表す。
【０１４３】
配列番号１１８は、マウス１４Ｇ８抗体のＣｈｏｔｈｉａ−Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１複合体のアミノ酸配列を表す。
【０１４４】
定義
「抗体」という用語は、インタクト抗体及びその結合フラグメントを包含する。通常、フラグメントは、標的への特異的結合について、それらが由来するインタクト抗体と競合する。フラグメントは、別々の重鎖、別々の軽鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）ｃ、Ｆｖ、一本鎖抗体、及び単一ドメイン抗体を含む。「抗体」という用語はまた、二重特異性抗体を含む。二重特異性抗体または二機能性抗体とは、２つの異なる重鎖／軽鎖ペア及び２つの異なる結合部位を有する人工ハイブリッド抗体である（例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ  ａｎｄ  Ｌａｃｈｍａｎｎ，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．ＩｍＭのｕｎｏｌ．，７９：３１５−３２１（１９９０）；Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．ＩｍＭのｕｎｏｌ．，１４８：１５４７−５３（１９９２）を参照のこと）。
【０１４５】
抗体の基本的な構造単位はサブユニットの四量体である。各四量体にはポリペプチド鎖の同一のペアが２つ含まれており、各ペアは１つの「軽鎖」（約２５ｋＤａ）及び１つの「重鎖」（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分には、主に抗原認識を担う約１００〜１１０以上のアミノ酸の可変領域が含まれる。最初に発現された時、この可変領域は通常、切断可能なシグナルペプチドに連結されている。シグナルペプチドを有さない可変領域を成熟可変領域と呼ぶこともある。従って、例えば、軽鎖成熟可変領域は、軽鎖シグナルペプチドを有さない軽鎖可変領域を意味する。各鎖のカルボキシ末端部分は、主にエフェクター機能を担う定常領域を定める。定常領域は、ＣＨ１領域、ヒンジ領域、ＣＨ２領域、及びＣＨ３領域のうちのいずれかまたは全てを含み得る。
【０１４６】
軽鎖は、カッパまたはラムダのいずれかに分類される。重鎖は、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロンに分類され、それぞれ抗体のアイソタイプＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥを定める。軽鎖及び重鎖内では、約１２以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって可変領域及び定常領域が連結され、重鎖はまた、約１０以上のアミノ酸の「Ｄ」領域も含む。（一般に、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｐａｕｌ，Ｗ．，ｅｄ．，２ｎｄ  ｅｄ．Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．，１９８９），Ｃｈ．７を参照のこと）（あらゆる目的のために全体が参照により組み込まれる）。
【０１４７】
各軽鎖／重鎖ペアの成熟可変領域は、抗体結合部位を形成する。従って、インタクト抗体は、２つの結合部位を有する。二官能性または二重特異性抗体を除いて、２つの結合部位は、同じである。鎖は全て、相補性決定領域またはＣＤＲとも呼ばれる、３つの超可変領域によって結合された比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）の同じ一般的な構造を示す。各ペアの２つの鎖由来のＣＤＲは、フレームワーク領域によりアラインされ、特定のエピトープへの結合を可能にする。Ｎ末端からＣ末端にかけて、軽鎖及び重鎖の両方は、領域ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４を含む。各領域へのアミノ酸の割り当ては、Ｋａｂａｔ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、メリーランド州ベセスダ、１９８７及び１９９１）、もしくはＣｈｏｔｈｉａ  ＆  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７８−８８３（１９８９）の定義に従い、または、ＣＤＲは、以下の表１の代替定義で定義することができる。Ｋａｂａｔはまた、広く使用される慣例的な番号付け（Ｋａｂａｔ番号付け）を提供しており、この番号付けでは、異なる重鎖同士または異なる軽鎖同士で対応する残基に同じ番号を割り当てる。
【０１４８】
表１：Ｋａｂａｔ番号付けを使用したＣＤＲの従来の定義
【表１】
2021504372.tif 000002
＊ＣｈｏｔｈｉａによるＣＤＲ−Ｈ１はＨ３２、Ｈ３３、またはＨ３４で終了し得る（ループの長さに応じて）。これは、Ｋａｂａｔ番号付けスキームでは、余分な残基の挿入を３５Ａ及び３５Ｂに位置付けるのに対し、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けでは、それを３１Ａ及び３１Ｂに位置付けることによる。Ｈ３５ＡもＨ３５Ｂ（Ｋａｂａｔ番号付け）も存在しない場合、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１ループは、Ｈ３２で終了する。Ｈ３５Ａのみが存在する場合、それはＨ３３で終了する。Ｈ３５Ａ及びＨ３５Ｂがともに存在する場合、それはＨ３４で終了する。
【０１４９】
重鎖または軽鎖の成熟可変領域が参照抗体の同じ領域と比較されるので、対象及び参照抗体領域間の百分率の配列同一性は、百分率に変換するために１００が掛けられた、２つの領域のアラインされた総数（ギャップがカウントされない）で除した対象及び参照抗体領域の両方で同じアミノ酸で占められている位置の数である。
【０１５０】
アミノ酸置換を保存的または非保存的として分類する目的で、アミノ酸は、以下のようにグループ化される：グループＩ（疎水性側鎖）：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；グループＩＩ（中性親水性側鎖）：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；グループＩＩＩ（酸性側鎖）：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；グループＩＶ（基本側鎖）：Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；グループＶ（鎖の配向に影響を与える残基）：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；及びグループＶＩ（芳香族側鎖）：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。保存的置換は、同じクラスのアミノ酸間の置換を含む。
【０１５１】
非保存的置換は、これらのクラスの１つのメンバーを別のクラスのメンバーと交換することからなる。
【０１５２】
本発明の抗体は通常、少なくとも１０６、１０７、１０８、１０９、または１０１０Ｍ−１の親和性定数で、それらの指定された標的に結合する。そのような結合は、大きさが検出可能に高く、少なくとも１つの無関係な標的に生じる非特異的結合と区別することができるという点で、特異的結合である。特異的結合は、特定の官能基の間の結合形成または特定の空間的嵌合（例えば、鍵−鍵穴型）の結果であり得るが、これに対し非特異的結合は通常、ファンデルワールス力の結果である。しかし、特異的結合は必ずしも、モノクローナル抗体が唯一の標的を結合することを意味しない。
【０１５３】
「症状」という用語は、対象に知覚されるような、歩行の変化などの疾患の主観的な証拠を指す。「徴候」は、内科医により観察されるように、疾患の客観的な証拠を指す。
【０１５４】
ある個体は、既知の危険因子（例えば、遺伝学的因子、生化学的因子、家族歴、環境曝露）であって、その危険因子を有する個体がそれをもたない個体よりも疾患を発症するリスクが統計的に有意に高い危険因子をその対象が少なくとも１つ有する場合、その疾患のリスクが高い。統計的有意性は、ｐ≦０．０５を意味する。
【０１５５】
別途文脈から明白でない限り、「約」という用語は、記載される値の±５または±１０％以内の値を包含する。
【０１５６】
別途文脈から明白でない限り、範囲への言及は、範囲内の任意の整数を含む。
【０１５７】
構造トランスサイレチン（ＴＴＲ）に関する「天然の」という用語は、正常にフォールドし正しく機能する状態にあるＴＴＲの構造（すなわち、ＴＴＲ四量体）を指す。ＴＴＲは天然にフォールドした形態で四量体であることから、非天然形態のＴＴＲとしては、例えば、ミスフォールドしたＴＴＲ四量体、ＴＴＲ単量体、凝集形態のＴＴＲ、及び原線維形態のＴＴＲが挙げられる。非天然形態のＴＴＲは、野生型ＴＴＲのアミノ酸配列または変異を含む分子を含み得る。
【０１５８】
ＴＴＲに関する「ミスフォールドした」という用語は、ＴＴＲポリペプチドの単量体または多量体の２次構造及び三次構造を指し、ポリペプチドが、正しく機能する状態にあるそのタンパク質には正常ではない立体構造をとっていることを表す。ＴＴＲのミスフォールディングはタンパク質の変異（例えば、欠失、置換、または付加）によって引き起こされ得るが、野生型ＴＴＲタンパク質が疾患でミスフォールドすることもあり、特定のエピトープを曝露する。
【０１５９】
「薬学的に許容される」という用語は、担体、希釈剤、補形剤、または補助剤が製剤の他の成分と適合し、そのレシピエントに実質的に有害でないことを意味する。
【０１６０】
「患者」という用語は、予防処置または治療処置のいずれかを投与されるヒト及び他の哺乳動物対象を包含する。
【０１６１】
ある個体は、既知の危険因子（例えば、遺伝学的因子、生化学的因子、家族歴、及び環境曝露）であって、その危険因子を有する個体がそれをもたない個体よりも疾患を発症するリスクが統計的に有意に高い危険因子をその対象が少なくとも１つ有する場合、その疾患のリスクが高い。
【０１６２】
「疾患」という用語は、生理的機能を損なう任意の異常な状態を指す。この用語は広義に使用され、病因の性質に関係なく生理的機能が損なわれる任意の障害、病気、異常、病態、疾病、状態、または症候群を包含する。
【発明を実施するための形態】
【０１６３】
Ｉ．概要
１４Ｇ８及び９Ｇ５は、トランスサイレチン（ＴＴＲ）に結合する抗体である。ヒト化形態の抗体は、ＷＯ２０１６／１２０８１０に記載されており、あらゆる目的のために全体が参照により組み込まれる。本出願は、１４Ｇ８もしくは９Ｇ５抗体のＣＤＲを有する抗体、特に、キメラ、ベニヤ、またはヒト化形態の１４Ｇ８または９Ｇ５、を組み込む液体及び凍結乾燥製剤を提供する。製剤は、以下にさらに記載されるように、抗体に安定性を与える薬学的に許容される担体の組み合わせを含む。
【０１６４】
ＩＩ．標的分子
トランスサイレチン（ＴＴＲ）は、血清中及び脳脊髄液中に存在する１２７アミノ酸、５５ｋＤａの輸送タンパク質であり、主に肝臓で合成される。それはまたプレアルブミン、チロキシン結合プレアルブミン、ＡＴＴＲ、及びＴＢＰＡとも呼ばれている。その天然の状態では、ＴＴＲは四量体として存在する。ホモ接合体では、四量体は同一の１２７アミノ酸ベータシートリッチサブユニットを含む。ヘテロ接合体では、ＴＴＲ四量体は通常、統計的に組み合わされる多様体サブユニット及び／または野生型サブユニットからなる。
【０１６５】
血液中での確立されたＴＴＲの機能は、ホロ−レチノール結合タンパク質の輸送である。げっ歯類の血液中でＴＴＲはチロキシン（Ｔ４）の主要な担体であり、ホロ−レチノール結合タンパク質に使用されるものと直交する結合部位を利用するが、ヒトではこのＴ４結合部位は事実上空いている。
【０１６６】
ＴＴＲは、様々な凝集構造へのその細胞外でのミスフォールド及び／または誤会合（アミロイド形成）がアミロイド疾患と呼ばれる変性性疾患を引き起こすと考えられる、少なくとも３０の異なるヒトタンパク質のうちの１つである。ＴＴＲは立体構造変化を受けてアミロイド原性となる。部分的なアンフォールディングによって、伸長した立体構造の、大部分が非荷電で疎水性のひと続きの残基が露出し、これがほぼ不定形の球状凝集体へと効率的に誤会合し、最終的にはクロスベータシートアミロイド構造へと立体構造変換する。
【０１６７】
別途文脈から明白でない限り、トランスサイレチン（ＴＴＲ）またはそのフラグメントもしくはドメインへの言及は、アイソフォーム、変異体、及び対立遺伝子多様体を含む天然のヒトアミノ酸配列を含む。例示的なＴＴＲポリペプチド配列は、アクセッション番号Ｐ０２７６６．１（ＵｎｉＰｒｏｔ）、ＡＡＢ３５６３９．１（ＧｅｎＢａｎｋ）、ＡＡＢ３５６４０．１（ＧｅｎＢａｎｋ）、及びＡＢＩ６３３５１．１（ＧｅｎＢａｎｋ）（それぞれ配列番号１０９〜１１２）で表される。残基はＳｗｉｓｓ  Ｐｒｏｔ  Ｐ０２７６６．１に従って番号付けされ、成熟タンパク質（すなわち、２０アミノ酸のシグナル配列を含まない）の最初のアミノ酸を残基１と表す。他の任意のＴＴＲタンパク質では、最大アライメントでＰ０２７６６．１中の対応する残基に合わせて残基を番号付けする。
【０１６８】
ＩＩＩ．トランスサイレチンアミロイドーシス
トランスサイレチン（ＴＴＲ）アミロイドーシスは、病原性のミスフォールドＴＴＲ及びＴＴＲからなるアミロイド原線維の細胞外沈着を特徴とする全身障害である。ＴＴＲアミロイドーシスは、天然のＴＴＲ四量体形態の不安定化（環境条件または遺伝条件による）により一般に引き起こされ、ＴＴＲの解離、ミスフォールディング、及びアミロイド原線維への凝集が起こり、これが種々の器官及び組織に蓄積し、進行性の機能不全を引き起こす。例えば、Ａｌｍｅｉｄａ  ａｎｄ  Ｓａｒａｉｖａ，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ５８６：２８９１−２８９６（２０１２）；Ａｎｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｒｐｈａｎｅｔ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｒａｒｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  ８：３１（２０１３）を参照のこと。
【０１６９】
ヒトでは、野生型ＴＴＲ四量体と、変異体サブユニット及び野生型サブユニットとからなる混合型四量体の両方が、有糸分裂終了組織の変性をもたらすアミロイド形成の過程で、解離、ミスフォールド、及び凝集し得る。従って、ＴＴＲアミロイドーシスは、ＴＴＲにおける変異により生じるまたは変異していないミスフォールドＴＴＲによって生じる病原性のミスフォールドＴＴＲを原因とする疾患を包含する。
【０１７０】
例えば、老人性全身性アミロイドーシス（ＳＳＡ）及び老人性心アミロイドーシス（ＳＣＡ）は加齢に関連する種類のアミロイドーシスであり、心臓の心筋細胞の外側と内側に野生型ＴＴＲアミロイドが沈着することによって起こる。ＴＴＲアミロイドーシスはまた、最も一般的な形態の遺伝性（家族性）アミロイドーシスでもあり、ＴＴＲタンパク質を不安定化する変異を原因とする。ＴＴＲ遺伝子中の点変異に関連するＴＴＲアミロイドーシスとしては、家族性アミロイド多発神経障害（ＦＡＰ）、家族性アミロイド心筋症（ＦＡＣ）、及びまれな中枢神経系選択性アミロイドーシス（ＣＮＳＡ）が挙げられる。遺伝性（家族性）ＴＴＲアミロイドーシス患者は、ほぼ例外なくヘテロ接合体であり、このことは、ＴＴＲ四量体が、一般には統計的に分布する変異型及び／または野生型ＴＴＲサブユニットからなることを意味する。遺伝性（家族性）のＴＴＲアミロイドーシスは一般に常染色体優性であり、通常、孤発性の疾患（ＳＳＡ及びＳＣＡ）よりも早期に発症する。
【０１７１】
常染色体優性障害のＦＡＰ及びＦＡＣに関与しているＴＴＲをコードする遺伝子中の１００を超える変異がある。例えば、ＵＳ２０１４／００５６９０４；Ｓａｒａｉｖａ，Ｈｕｍ．Ｍｕｔａｔ．１７（６）：４９３−５０３（２００１）；Ｄａｍａｓ  ａｎｄ  Ｓａｒａｉｖａ，Ｊ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．１３０：２９０−２９９；Ｄｗｕｌｅｔ  ａｎｄ  Ｂｅｎｓｏｎ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．ＣｏｍＭのｕｎ．１１４：６５７−６６２（１９８３）を参照のこと。これらのアミロイドを生じる変異はＴＴＲの分子全体にわたって分布している。一般に、変異体サブユニットがＴＴＲの四量体構造をより不安定化させるほど、アミロイド疾患の発症がより早くなる。ＴＴＲ多様体が病原性となる可能性は一般に、その不安定性及び細胞分泌効率を組み合わせて求められる。いくつかのＴＴＲ多様体により引き起こされる初期の病態は、心臓組織を選択的に破壊することによりもたらされるが、他のＴＴＲ多様体によるものは、末梢神経系及び自律神経系を損なうことによりもたらされる。ＴＴＲアミロイド形成を原因とする組織損傷は、小さい拡散性のＴＴＲ凝集体の毒性によるものがほとんどであると思われるが、細胞外アミロイドの蓄積が一因であることもあり、その場合、ＴＴＲアミロイドーシスの後期に器官構造がほぼ確実に損なわれる。
【０１７２】
ＴＴＲアミロイドーシスには多数の異なる形態がみられ、表現型に相当な個体差及び地域差がある。例えば、ＴＴＲアミロイドーシスは、進行性の軸索感覚性自律神経性運動性神経障害として存在し得る。ＴＴＲアミロイドーシスはまた、浸潤性心筋症としてみられることがある。
【０１７３】
疾患関連症状が発症する年齢は、１０代〜８０代で変動し、異なる集団間で大きなばらつきがある。ＴＴＲアミロイドーシスの多系統病変は、診断の手掛かりである。例えば、以下のものが１つまたはいくつか存在する時、ＴＴＲアミロイドーシスの診断が考慮される：（１）特に心不全に関わる、神経障害性疾患の家族歴；（２）原因不明の神経因性疼痛または進行性感覚障害；（３）原因が明らかでなく、特に両側性で外科的開放を必要とする手根管症候群；（４）原因不明の消化管運動障害または自律神経機能不全（例えば、勃起不全、起立性低血圧症、神経因性膀胱）；（５）高血圧が不存在で心室壁の肥厚を特徴とする心疾患；（６）原因が不明であり、特に心肥大を伴う高度房室ブロック；及び（６）綿花状の硝子体封入体。Ａｎｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｒｐｈａｎｅｔ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｒａｒｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  ８：３１（２０１３）を参照のこと。他の症状は、例えば、多発神経障害、間隔消失、疼痛、下肢脱力、発汗異常、下痢、便秘、体重減少、及び尿失禁／尿閉を含み得る。
【０１７４】
末梢神経障害は、種々の臨床スケールで検出及び定量化することができる。例えば、臨床神経障害評価（ＣＡＮ）、（Ｄｙｃｋ  ＰＪ，Ｈｕｇｈｅｓ  ＲＡＣ，Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ＰＣ．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｎｇ  ｏｖｅｒａｌｌ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃ  ｓｙｍｐｔｏｍｓ，ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔｓ  ａｎｄ  ｏｕｔｃｏｍｅｓ．Ｉｎ：Ｄｙｃｋ  ＰＪ，Ｔｈｏｍａｓ  ＰＫ，，ｅｄｉｔｏｒｓ．Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ．４ｔｈ  ｅｄ．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ：Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓａｕｎｄｅｒｓ；２００５．Ｐ  １０３１−５１）は、下肢機能スコア（ＬＬＦ）、ならびに、つま先で歩く、かかとで歩く、及び中腰から立ち上がることが可能（スコア０）または不可能（スコア１）を含むスケールを提供し；項目は、両側で別々にスコアリングされる。神経障害スコア（ＮＩＳ）は、筋力、反射活動、ならびに足指及び指の感覚を試験する臨床評価を提供する。末梢神経障害を伴うｈＡＴＴＲ対象の場合、神経機能は、ＮＩＳを使用して経時的に評価することができる。ＮＩＳには、合計スコアは２４４（弱さ１９２、感覚３２、反射２０）の下肢、上肢、及び脳神経の神経学的検査を含む。神経障害症状及び変化（ＮＳＣ）は、３つのスケール：症状の数、経時的な変化を評価するために使用することができる症状の重症度（軽度＝１、中等度＝２、重度＝３）、及び（症状をベースラインと比較した）変化のカテゴリーで、末梢神経障害の症状の重症度及び変化（弱さ、感覚、自律神経）を評価する３８項目の質問票である。他のスケールは、家族性アミロイド多発神経障害（ＦＡＰ）ステージ及び多発神経障害（ＰＮＤ）スコアである。
【０１７５】
ＴＴＲアミロイドーシスの診断は通常、標的器官生検に依拠し、続いて、摘出組織をアミロイド特異的色素であるコンゴレッドで組織学的に染色する。アミロイドの陽性試験が観察される場合、続いて、ＴＴＲの免疫組織化学染色を実施して、アミロイド形成の原因である前駆体タンパク質が実際にＴＴＲであることを確認する。家族性形態の疾患の場合、次に、ＴＴＲをコードする遺伝子の変異を証明することは、診断がされ得る前に必要とされる。これは、例えば、等電点電気泳動、ポリメラーゼ連鎖反応、またはレーザー分析／液体クロマトグラフィー−タンデム質量分析によって達成することができる。例えば、ＵＳ２０１４／００５６９０４；Ｒｕｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｂｅｒｋ，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １２６：１２８６−１３００（２０１２）；Ａｎｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｒｐｈａｎｅｔ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｒａｒｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  ８：３１（２０１３）を参照のこと。
【０１７６】
ＩＶ．抗体
Ａ．結合特異性及び機能的特性
配列番号６１で定義される成熟重鎖可変領域及び配列番号７０で定義される成熟軽鎖可変を有するマウス抗体として、抗体１４Ｇ８を最初に単離した。Ｋａｂａｔ  ＣＤＲＨ１、Ｈ２、及びＨ３は、配列番号６７〜６９を有し、ＣＤＲＬ１、Ｌ２、及びＬ３は、配列番号７７〜７９を有する。複合体Ｃｈｏｔｈｉａ−Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１は、配列番号１１８として提供される。
【０１７７】
さらに、配列番号６１で定義される成熟重鎖可変領域及び配列番号７０で定義される成熟軽鎖可変を有するマウス抗体として、抗体９Ｇ５を最初に単離した。Ｋａｂａｔ  ＣＤＲＨ１、Ｈ２、及びＨ３は、配列番号１３〜１５を有し、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲＬ１、Ｌ２、及びＬ３は、配列番号２４〜２６を有する。９Ｇ５のＫａｂａｔＣＤＲは、１４Ｇ８のものと同じであるが、９Ｇ５では、Ｋａｂａｔ番号付けによるＨ５２位及びＬ２６位がＮで、９Ｇ５では、Ｓで占められる。複合体Ｃｈｏｔｈｉａ−Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１は、配列番号１１７として提供される。
【０１７８】
あるいは、ＣＤＲは、上記の以下の規則のいずれかにより定義することができる。
【０１７９】
本発明の製剤は、Ｋａｂａｔ番号付けによるＨ５２位及びＬ２６位がそれぞれ独立してＮまたはＳであり得ることを除いて、１４Ｇ８のＣＤＲＨ１、Ｈ２、及びＨ３を含む成熟重鎖ならびに１４Ｇ８のＣＤＲＬ１、Ｌ２、及びＬ３を含む抗体を含む。いくつかの抗体は、１４Ｇ８のＣＤＲＨ１、Ｈ２及びＨ３ならびに１４Ｇ８のＣＤＲＬ１、Ｌ２、及びＬ３を含み、Ｈ５２位及びＬ２６位は両方とも、Ｎで占められている。いくつかの抗体は、９Ｇ５のＣＤＲ  Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３を含む成熟重鎖及び９Ｇ５のＣＤＲＬ１、Ｌ２、Ｌ３を含む成熟軽鎖を含み、Ｈ５２位及びＬ２６位は、Ｓである。
【０１８０】
別途文脈から明白でない限り、１４Ｇ８または９Ｇ５への言及は、マウス、キメラ、ベニヤ、及びヒト化形態のマウス抗体のうちのいずれかを指すと理解されるべきである。これらの抗体。これらの抗体は、ＴＴＲのアミノ酸残基約８９〜９７（配列番号１１３）内に特異的に結合する。そのようなエピトープは天然のＴＴＲ四量体では埋没しており、単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態、または原線維形態のＴＴＲでは露出している。
【０１８１】
１４Ｇ８または９Ｇ５などの例示的抗体の重鎖及び軽鎖をコードするｃＤＮＡの変異誘発によって、他の抗体を得ることができる。成熟重鎖可変領域及び／もしくは成熟軽鎖可変領域のアミノ酸配列において１４Ｇ８に少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一であり、その機能的特性を維持し、且つ／または少数の機能的に重要ではないアミノ酸の置換（例えば、保存的置換）、欠失、もしくは挿入を有する点で各抗体と異なるモノクローナル抗体も本発明に含まれる。
【０１８２】
上で一般に記載される１４Ｇ８または９Ｇ５のＣＤＲを含む抗体は、天然の四量体形態のＴＴＲよりも優先的に、単量体、ミスフォールド、凝集、または原線維形態のＴＴＲに結合する能力を特徴とする。さらに、これらの抗体は、健康な心臓組織ではなく、ＴＴＲ媒介性アミロイドーシス心臓組織で選択的免疫反応性を特徴とする。優先的結合または免疫反応性は、相対的、例えば、少なくとも２倍良好、または絶対的であり得る（すなわち、天然ＴＴＲまたは健康な心臓組織への結合または免疫反応性がない）。
【０１８３】
いくつかの抗体は、動物モデルまたは臨床試験でＴＴＲの凝集を阻害もしくは低減し、ＴＴＲ原線維形成を阻害もしくは低減し、ＴＴＲ沈着物もしくは凝集したＴＴＲを低減もしくは除去し、またはＴＴＲの非毒性立体構造を安定化させ得る。いくつかの抗体は、動物モデルまたは臨床試験で示されるように、ＴＴＲアミロイドーシスを処置もしくは予防し、その発症を遅延させ得る。ＴＴＲアミロイドーシスに対する活性を検討するための例示的動物モデルとしては、Ｋｏｈｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ．１５０（４）：１４９７−１５０８（１９９７）；Ｔｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｓ  ８１：３８５−３９６（２００１）；Ｗａｋａｓｕｇｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｊａｐａｎ  Ａｃａｄ．６３Ｂ：３４４−３４７（１９８７）；Ｓｈｉｍａｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．６：３３３−３４３（１９８９）；Ｎａｇａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１１７：１６９−１７５（１９９５）；Ｓｏｕｓａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ．１６１：１９３５−１９４８（２００２）；及びＳａｎｔｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ａｇｉｎｇ  ３１：２８０−２８９（２０１０）に記載されているものが挙げられる。
【０１８４】
Ｂ．ヒト化抗体
ヒト化抗体は、遺伝子操作によって非ヒト「ドナー」抗体のＣＤＲをヒト「アクセプター」抗体配列内に移植した抗体である（例えば、Ｑｕｅｅｎ、ＵＳ５，５３０，１０１及び同５，５８５，０８９；Ｗｉｎｔｅｒ、ＵＳ５，２２５，５３９；Ｃａｒｔｅｒ、ＵＳ６，４０７，２１３；Ａｄａｉｒ、ＵＳ５，８５９，２０５；ならびにＵＳ６，８８１，５５７を参照のこと）。アクセプター抗体配列は、例えば、成熟ヒト抗体配列、そのような配列の複合体、ヒト抗体配列のコンセンサス配列、または生殖系列領域の配列であり得る。従って、ヒト化抗体は、完全にまたは実質的にドナー抗体に由来するＣＤＲを少なくとも３、４、５つまたは全部ならびに、存在する場合は、完全にまたは実質的にヒト抗体配列に由来する可変領域フレームワーク配列及び定常領域を有する抗体である。同様に、ヒト化重鎖は、ドナー抗体重鎖に完全にまたは実質的に由来するＣＤＲを少なくとも１、２、通常は３つ全て、ならびに存在する場合、ヒト重鎖可変領域フレームワーク及び定常領域配列に実質的に由来する重鎖可変領域フレームワーク配列及び重鎖定常領域を有する。同様に、ヒト化軽鎖は、ドナー抗体軽鎖に完全にまたは実質的に由来するＣＤＲを少なくとも１、２、通常は３つ全て、ならびに存在する場合、ヒト軽鎖可変領域フレームワーク及び定常領域配列に実質的に由来する軽鎖可変領域フレームワーク配列及び軽鎖定常領域を有する。ナノボディ及びｄＡｂ以外にも、ヒト化抗体はヒト化重鎖及びヒト化軽鎖を含む。ヒト化抗体のＣＤＲは、各ＣＤＲ間で対応する残基（任意の従来の定義、例えば、Ｋａｂａｔによって定義されるもの）の少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％が一致する場合、非ヒト抗体での対応するＣＤＲに実質的に由来する。抗体鎖の可変領域フレームワーク配列または抗体鎖の定常領域は、任意の従来の定義、例えば、Ｋａｂａｔによって定義される対応する残基の少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％が同一である場合、それぞれヒト可変領域フレームワーク配列またはヒト定常領域に実質的に由来する。
【０１８５】
ヒト化抗体はマウス抗体由来の６つのＣＤＲ（任意の従来の定義、例えば、Ｋａｂａｔによって定義されるもの）を全て組み込むことが多いが、マウス抗体由来のＣＤＲが全部に満たない（例えば、ＣＤＲが少なくとも３つ、４つ、または５つである）ヒト化抗体を作製することもできる（例えば、Ｐａｓｃａｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：３０７６，２００２；Ｖａｊｄｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．ｏｆ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３２０：４１５−４２８，２００２；Ｉｗａｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３６：１０７９−１０９１，１９９９；Ｔａｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６４：１４３２−１４４１，２０００）。
【０１８６】
いくつかの抗体では、ヒト化抗体での結合を保持するためにＣＤＲの一部、すなわち、ＳＤＲと呼ばれる結合に必要なＣＤＲ残基のサブセットのみを必要とする。抗原と接触せずＳＤＲにも存在しないＣＤＲ残基は、これまでの研究に基づき、分子モデリング及び／または経験的に、またはＧｏｎｚａｌｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．ＩｍＭのｕｎｏｌ．４１：８６３，２００４に記載されている通りに、Ｃｈｏｔｈｉａ超可変ループ（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１，１９８７）の外側に存在するＫａｂａｔ  ＣＤＲの領域から識別することができる（例えば、ＣＤＲ  Ｈ２の残基Ｈ６０〜Ｈ６５は多くの場合必要とされない）。そのようなヒト化抗体では、１つ以上のドナーＣＤＲ残基が不存在である位置またはドナーＣＤＲ全体が除去されている位置で、この位置を占めるアミノ酸は、アクセプター抗体配列での対応する位置（Ｋａｂａｔ番号付けによるもの）を占めるアミノ酸であり得る。ＣＤＲ中に含まれるべきそのようなドナーアミノ酸からアクセプターアミノ酸への置換の数は、競合する考慮事項のバランスを反映する。そのような置換は、ヒト化抗体中のマウスアミノ酸の数を減少させ、その結果、潜在的免疫原性を減少させるのに有利である可能性がある。しかし、置換によって親和性が変化する可能性もあり、親和性の実質的な低下は回避するのが好ましい。ＣＤＲ内の置換の位置及び置換するアミノ酸は、経験的に選択することもできる。
【０１８７】
ヒトアクセプター抗体配列は、任意に、ヒトアクセプター配列の可変領域フレームワーク及びドナー抗体鎖の対応する可変領域フレームワーク間に高い配列同一性（例えば、６５〜８５％の同一性）が得られるよう多数の既知のヒト抗体配列の中から選択することができる。
【０１８８】
重鎖のアクセプター配列の例は、ＮＣＢＩアクセッションコードＢＡＣＯ２１１４及びＡＡＸ８２４９４．１（配列番号３及び４）のヒト成熟重鎖可変領域ならびにヒトＫａｂａｔサブグループ３の重鎖可変領域である。ＢＡＣＯ２１１４は、マウス９Ｄ５重鎖と同じカノニカル形態を有する。重鎖のアクセプター配列の他の例は、ＮＣＢＩアクセッションコードＡＡＤ３０４１０．１及びＡＡＸ８２４９４．１（それぞれ配列番号６３及び４）のヒト成熟重鎖可変領域ならびにヒトＫａｂａｔサブグループ１の重鎖可変領域である。ＡＡＤ３０４１０．１及びＡＡＸ８２４９４．１は、マウス１４Ｇ８重鎖と同じカノニカル形態を有するＣＤＲを２つ含む。軽鎖のアクセプター配列の例は、ＮＣＢＩアクセッションコードＡＢＣ６６９５２（配列番号１８）のヒト成熟軽鎖可変領域及びヒトＫａｂａｔサブグループ３の軽鎖可変領域である。ＡＢＣ６６９５２は、マウス９Ｄ５軽鎖と同じカノニカル形態を有するＣＤＲを２つ含む。軽鎖のアクセプター配列の他の例は、ＮＣＢＩアクセッションコードＡＢＡ７１３７４．１及びＡＢＣ６６９５２．１（それぞれ配列番号７２及び７３）のヒト成熟軽鎖可変領域ならびにヒトＫａｂａｔサブグループ２の軽鎖可変領域である。ＡＢＡ７１３７４．１及びＡＢＣ６６９５２．１は、マウス１４Ｇ８軽鎖と同じカノニカル形態を有する。
【０１８９】
複数のヒトアクセプター抗体配列が選択される場合、それらのアクセプターの複合体またはハイブリッドを使用でき、ヒト化軽鎖可変領域及び重鎖可変領域での様々な位置に使用するアミノ酸を、使用するいずれかのヒトアクセプター抗体配列から取ることができる。例えば、ＮＣＢＩアクセッションコードＢＡＣＯ２１１４及びＡＡＸ８２４９４．１（配列番号３及び４）のヒト成熟重鎖可変領域を、９Ｄ５成熟重鎖可変領域のヒト化のためのアクセプター配列として使用した。これらの２つのアクセプターが異なっている位置の例としては、Ｈ１９位（ＲまたはＫ）、Ｈ４０位（ＡまたはＴ）、Ｈ４４位（ＧまたはＲ）、Ｈ４９位（ＳまたはＡ）、Ｈ７７位（ＳまたはＴ）、Ｈ８２ａ位（ＮまたはＳ）、Ｈ８３位（ＲまたはＫ）、Ｈ８４位（ＡまたはＳ）、及びＨ８９位（ＶまたはＭ）が挙げられる。ヒト化型の９Ｄ５重鎖可変領域は、上記のいずれかの位置でいずれかのアミノ酸を含み得る。同様に、ＮＣＢＩアクセッションコードＡＡＤ３０４１０．１及びＡＡＸ８２４９４．１（それぞれ配列番号６３及び４）のヒト成熟重鎖可変領域を、１４Ｇ８成熟重鎖可変領域のヒト化のためのアクセプター配列として使用した。これらの２つのアクセプターが異なっている位置の例としては、Ｈ８２ａ位（ＮまたはＳ）、Ｈ８３位（ＲまたはＫ）、Ｈ８４位（ＡまたはＳ）、及びＨ８９位（ＶまたはＭ）が挙げられる。ヒト化型の１４Ｇ８重鎖可変領域は、上記のいずれかの位置でいずれかのアミノ酸を含み得る。同様に、ＮＣＢＩアクセッションコードＡＢＡ７１３７４．１及びＡＢＣ６６９５２．１（それぞれ配列番号７２及び７３）のヒト成熟軽鎖可変領域を１４Ｇ８成熟軽鎖可変領域のヒト化のためのアクセプター配列として使用した。これらの２つのアクセプターが異なっている位置の例としては、Ｌ１８位（ＳまたはＰ）が挙げられる。ヒト化型の１４Ｇ８軽鎖可変領域は、この位置でいずれかのアミノ酸を含み得る。
【０１９０】
ヒト可変領域フレームワーク残基からの特定のアミノ酸が、ＣＤＲの立体構造及び／または抗原への結合に及ぼすそれらの起こりうる影響に基づき、選択され得る。そのような起こりうる影響の調査は、モデリング、特定の位置でのアミノ酸の特徴の検討、または特定のアミノ酸の置換もしくは変異誘発の影響の経験的な観察による。
【０１９１】
例えば、アミノ酸がマウス成熟可変領域フレームワーク残基及び選択されたヒト成熟可変領域フレームワーク残基間で異なる時、ヒトフレームワークアミノ酸は、マウス抗体由来の同等のフレームワークアミノ酸で置換することができ、その場合、アミノ酸が、
（１）直接抗原に非共有結合的に結合し、
（２）ＣＤＲ領域に隣接している、
（３）別の点で、ＣＤＲ領域と相互作用し（例えば、ＣＤＲ領域の約６Å以内であり）、
（４）重鎖及び軽鎖間の相互作用を媒介する
ことが合理的に予想される。
【０１９２】
ＱｕｅｅｎのＵＳ５，５３０，１０１によって定義されるクラス（１）〜（３）のフレームワーク残基は、カノニカル及びバーニヤ残基と代わりに呼ばれることがある。ＣＤＲループの立体構造を規程するのに役立つフレームワーク残基は、カノニカル残基と呼ばれることがある（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７）；Ｔｈｏｒｎｔｏｎ及びＭａｒｔｉｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６３：８００−８１５（１９９６））。抗原結合ループの立体構造を支え、抗原への抗体の嵌合の微調整に何らかの役割を果たすフレームワーク残基は、バーニヤ残基と呼ばれることがある（Ｆｏｏｔｅ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ  ２２４：４８７−４９９（１９９２））。
【０１９３】
置換の候補となる他のフレームワーク残基は、潜在的なグリコシル化部位を形成する残基である。また別の置換の候補は、ヒト免疫グロブリンのその位置には通常みられないアクセプターヒトフレームワークアミノ酸である。これらのアミノ酸は、マウスドナー抗体の同等の位置またはより代表的なヒト免疫グロブリンの同等の位置のアミノ酸で置換することができる。
【０１９４】
ＣＤＲコンフォメーション及び／または抗原への結合に起こりうる影響、重鎖及び軽鎖間の相互作用を媒介すること、定常領域との相互作用、望ましいまたは望ましくない翻訳後修飾の部位であること、ヒト可変領域配列における位置の異常な残基及びそれによる潜在的に免疫原性があること、凝集の可能性を得ること、ならびに他の理由などの理由から、以下の１５の可変領域フレームワーク位置は、例：Ｈ４２（Ｇ４２Ｅ）、Ｈ４７（Ｗ４７Ｌ）、Ｈ６９（Ｉ６９Ｆ）、Ｈ８２（Ｍ８２Ｓ）、Ｈ８２ｂ（Ｓ８２（ｂ）Ｌ）、Ｈ１０８（Ｔ１０８Ｌ）、Ｌ８（Ｐ８Ａ）、Ｌ９（Ｌ９Ｐ）、Ｌ１８（Ｐ１８Ｓ）、Ｌ１９（Ａ１９Ｖ）、Ｌ３６（Ｙ３６Ｆ）、Ｌ３９（Ｋ３９Ｒ）、Ｌ６０（Ｄ６０Ｓ）、Ｌ７０（Ｄ７０Ａ）、及びＬ７４（Ｋ７４Ｒ）でさらに詳述されるように、８つの例示されたＨｕ９Ｄ５成熟重鎖可変領域及び５つの例示されたＨｕ９Ｄ５成熟軽鎖可変領域における置換の候補として考えられた。同様に、以下の１１の可変領域フレームワークの位置は、例：Ｈ１（Ｑ１Ｅ）、Ｈ３（Ｑ３Ｋ）、Ｈ４７（Ｗ４７Ｌ）、Ｈ１０５（Ｑ１０５Ｔ）、Ｌ８（Ｐ８Ａ）、Ｌ９（Ｌ９Ｐ）、Ｌ１９（Ａ１９Ｖ）、Ｌ２６（Ｎ２６Ｓ）、Ｌ３６（Ｙ３６Ｆ）、Ｌ６０（Ｄ６０Ｓ）、及びＬ７０（Ｄ７０Ａ）、でさらに詳述されるように、３つの例示されたＨｕ１４Ｇ８成熟重鎖可変領域及び３つの例示されたＨｕ１４Ｇ８成熟軽鎖可変領域における置換の候補と考えられた。
【０１９５】
別の箇所と同じくここでも、最初に記載される残基は、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲまたはＣＤＲ−Ｈ１の場合はＣｈｏｔｈｉａ−Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ複合体をヒトアクセプターフレームワーク（例えば、複合体またはハイブリッドのヒトアクセプターフレームワーク）内に移植することによって形成されるヒト化抗体の残基であり、２番目に記載される残基は、そのような残基を置き換えるのに考慮される残基である。従って、可変領域フレームワーク内では、最初に記載される残基は、ヒトであり、ＣＤＲ内では、最初に記載される残基は、マウスである。
【０１９６】
例示されたＨｕ９Ｄ５抗体は、例示された成熟重鎖可変領域及び成熟軽鎖可変領域の任意の順列または組み合わせを含む（例えば、ＶＨｖｌ／ＶＬｖｌまたはＨ１Ｌ１、ＶＨｖｉ／ＶＬｖ２またはＨ１Ｌ２、ＶＨｖｉ／ＶＬｖ３またはＨ１Ｌ３、ＶＨｖｉ／ＶＬｖ４またはＨ１Ｌ４、ＶＨｖｉ／ＶＬｖ５またはＨ１Ｌ５、ＶＨｖ２／ＶＬｖｌまたはＨ２Ｌ１、ＶＨｖ２／ＶＬｖ２またはＨ２Ｌ２、ＶＨｖ２／ＶＬｖ３またはＨ２Ｌ３、ＶＨｖ２／ＶＬｖ４またはＨ２Ｌ４、ＶＨｖ２／ＶＬｖ５またはＨ２Ｌ５、ＶＨｖ２ｂ／ＶＬｖｉまたはＨ２ｂＬ１、ＶＨｖ２ｂ／ＶＬｖ２またはＨ２ｂＬ２、ＶＨｖ２ｂ／ＶＬｖ３またはＨ２ｂＬ３、ＶＨｖ２ｂ／ＶＬｖ４またはＨ２ｂＬ４、ＶＨｖ２ｂ／ＶＬｖ５またはＨ２ｂＬ５、ＶＨｖ３／ＶＬｖｌまたはＨ３Ｌ１、ＶＨｖ３／ＶＬｖ２またはＨ３Ｌ２、ＶＨｖ３／ＶＬｖ３またはＨ３Ｌ３、ＶＨｖ３／ＶＬｖ４またはＨ３Ｌ４、ＶＨｖ３／ＶＬｖ５またはＨ３Ｌ５、ＶＨｖ３ｂＮＬｖｌまたはＨ３ｂＬ１、ＶＨｖ３ｂ／ＶＬｖ２またはＨ３ｂＬ２、ＶＨｖ３ｂ／ＶＬｖ３またはＨ３ｂＬ３、ＶＨｖ３ｂ／ＶＬｖ４またはＨ３ｂＬ４、ＶＨｖ３ｂ／ＶＬｖ５またはＨ３ｂＬ５、ＶＨｖ４／ＶＬｖｌまたはＨ４Ｌ１、ＶＨｖ４／ＶＬｖ２またはＨ４Ｌ２、ＶＨｖ４／ＶＬｖ３またはＨ４Ｌ３、ＶＨｖ４／ＶＬｖ４またはＨ４Ｌ４、ＶＨｖ４／ＶＬｖ５またはＨ４Ｌ５、ＶＨｖ４ｂ／ＶＬｖｌまたはＨ４ｂＬ１、ＶＨｖ４ｂ／ＶＬｖ２またはＨ４ｂＬ２、ＶＨｖ４ｂ／ＶＬｖ３またはＨ４ｂＬ３、ＶＨｖ４ｂ／ＶＬｖ４またはＨ４ｂＬ４、ＶＨｖ４ｂ／ＶＬｖ５またはＨ４ｂＬ５、ＶＨｖ５／ＶＬｖｉまたはＨ５Ｌ１、ＶＨｖ５／ＶＬｖ２またはＨ５Ｌ２、ＶＨｖ５／ＶＬｖ３またはＨ５Ｌ３、ＶＨｖ５／ＶＬｖ４またはＨ５Ｌ４、及びＶＨｖ５／ＶＬｖ５またはＨ５Ｌ５）。
【０１９７】
本発明は、ヒト化成熟重鎖可変領域がヒト化Ｈｕ９Ｄ５ＶＨｖ４ｂ（配列番号１１）に少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を示し、且つヒト化成熟軽鎖可変領域がＨｕ９Ｄ５ＶＬｖ１（配列番号１９）に少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を示す、ヒト化９Ｄ５抗体の多様体の製剤を提供する。いくつかのそのような抗体では、Ｈｕ９Ｄ５  Ｈ４ｂＬ１の復帰変異または他の変異の少なくとも１、２、または３つ全てが保持されている。本発明はまた、他の例示されるヒト化９Ｄ５抗体の多様体も提供する。そのような多様体は、例示されるヒト化抗体９Ｄ５  Ｈ１Ｌ１、Ｈ１Ｌ２、Ｈ１Ｌ３、Ｈ１Ｌ４、Ｈ１Ｌ５、Ｈ２Ｌ１、Ｈ２Ｌ２、Ｈ２Ｌ３、Ｈ２Ｌ４、Ｈ２Ｌ５、Ｈ２ｂＬ１、Ｈ２ｂＬ２、Ｈ２ｂＬ３、Ｈ２ｂＬ４、Ｈ２ｂＬ５、Ｈ３Ｌ１、Ｈ３Ｌ２、Ｈ３Ｌ３、Ｈ３Ｌ４、Ｈ３Ｌ５、Ｈ３ｂＬ１、Ｈｂ３Ｌ２、Ｈ３ｂＬ３、Ｈｂ３Ｌ４、Ｈ３ｂＬ５、Ｈ４Ｌ１、Ｈ４Ｌ２、Ｈ４Ｌ３、Ｈ４Ｌ４、Ｈ４Ｌ５、Ｈ４ｂＬ１、Ｈ４ｂＬ２、Ｈ４ｂＬ３、Ｈ４ｂＬ４、Ｈ４ｂＬ５、Ｈ５Ｌ１、Ｈ５Ｌ２、Ｈ５Ｌ３、Ｈ５Ｌ４、またはＨ５Ｌ５の成熟軽鎖可変領域及び成熟重鎖可変領域に少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を示す成熟軽鎖可変領域及び成熟重鎖可変領域を有する。
【０１９８】
可変領域フレームワークの位置は、別途記載のない限り、Ｋａｂａｔ番号付けに従う。他のそのような多様体は通常、少数（例えば、通常１、２、３、５、１０、または１５以下）の置換、欠失または挿入により例示されるＨｕ９Ｄ５重鎖及び軽鎖の配列と異なる。そのような差は通常、フレームワークにあるが、ＣＤＲにも生じ得る。
【０１９９】
例示されるＨｕ１４Ｇ８抗体は、例示される成熟重鎖可変領域及び成熟軽鎖可変領域の任意の順列または組み合わせ（例えば、ＶＨｖ１／ＶＬｖ１またはＨ１Ｌ１、ＶＨｖ１／ＶＬｖ２またはＨ１Ｌ２、ＶＨｖ１／ＶＬｖ３またはＨ１Ｌ３、ＶＨｖ２ＮＬｖ１またはＨ２Ｌ１、ＶＨｖ２／ＶＬｖ２またはＨ２Ｌ２、ＶＨｖ２／ＶＬｖ３またはＨ２Ｌ３、ＶＨｖ３／ＶＬｖ１またはＨ３Ｌ１、ＶＨｖ３／ＶＬｖ２またはＨ３Ｌ２、及びＶＨｖ３／ＶＬｖ３またはＨ３Ｌ３）を含む。
【０２００】
本発明は、ヒト化成熟重鎖可変領域がＨｕ１４Ｇ８ＶＨｖ２（Ｈｕ１４Ｇ８  Ｈ２）（配列番号６５）に少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を示し、且つヒト化成熟軽鎖可変領域がＨｕ１４Ｇ８ＶＬｖ３（Ｈｕ１４Ｇ８  Ｌ３）（配列番号７６）に少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を示す、ヒト化１４Ｇ８抗体の多様体の製剤を提供する。いくつかのそのような抗体では、Ｈｕ１４Ｇ８  Ｈ２Ｌ３の復帰変異または他の変異の少なくとも１、２、３、４、または５つ全てが保持されている。本発明はまた、他の例示されるヒト化１４Ｇ８抗体の多様体も提供する。そのような多様体は、例示されるヒト化抗体１４Ｇ８  Ｈ１Ｌ１、Ｈ１Ｌ２、Ｈ１Ｌ３、Ｈ２Ｌ１、Ｈ２Ｌ２、Ｈ２Ｌ３、Ｈ３Ｌ１、Ｈ３Ｌ２、またはＨ３Ｌ３の成熟軽鎖可変領域及び成熟重鎖可変領域に少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を示す成熟軽鎖可変領域及び成熟重鎖可変領域を有する。
【０２０１】
いくつかの抗体では、Ｖｈ領域中のＨ１位及びＨ４７位のうち少なくとも１つをそれぞれＥ及びＬが占める。いくつかの抗体では、Ｈｕ１４Ｇ８ＶＨｖ２及びＨｕ１４Ｇ８ＶＨｖ３でのように、Ｖｈ領域中のＨ１位及びＨ４７位をそれぞれＥ及びＬが占める。いくつかの抗体では、Ｖｈ領域中のＨ３位及びＨ１０５位のうち少なくとも１つをそれぞれＫ及びＴが占める。いくつかの抗体では、Ｈｕ１４Ｇ８ＶＨｖ１でのように、Ｖｈ領域中のＨ３位及びＨ１０５位をそれぞれＫ及びＴが占める。いくつかの抗体では、Ｈｕ１４Ｇ８ＶＬｖ２でのように、Ｖｋ領域中のＬ３６位をＦが占める。いくつかの抗体では、Ｖｋ領域中のＬ８位、Ｌ９位、Ｌ１９位、Ｌ２６位、Ｌ６０位、及びＬ７０位のうち少なくとも１つをそれぞれＡ、Ｐ、Ｖ、Ｓ、Ｓ、及びＡが占める。いくつかの抗体では、Ｈｕ１４Ｇ８ＶＬｖ１でのように、Ｖｋ領域中のＬ８位、Ｌ９位、Ｌ１９位、及びＬ７０位をそれぞれＡ、Ｐ、Ｖ、及びＡが占める。いくつかの抗体では、Ｈｕ１４Ｇ８ＶＬｖ３でのように、Ｖｋ領域中のＬ２６位及びＬ６０位をそれぞれＳが占める。そのようなヒト化抗体のＣＤＲ領域は、１４Ｇ８マウスドナー抗体のＣＤＲ領域に同一または実質的に同一であり得る。ＣＤＲ領域は、例えば、Ｋａｂａｔによって定義されるように、任意の従来の定義（例えば、ＣｈｏｔｈｉａまたはＣｈｏｔｈｉａ及びＫａｂａｔの複合体）によって定義され得る。
【０２０２】
可変領域フレームワークの位置は、別途記載のない限り、Ｋａｂａｔ番号付けに従う。他のそのような多様体は通常、少数（例えば、通常１、２、３、５、１０、または１５以下）の置換、欠失または挿入により例示されるＨｕ１４Ｇ８の重鎖及び軽鎖の配列と異なる。そのような差は通常、フレームワークにあるが、ＣＤＲにも生じ得る。
【０２０３】
ヒト化１４Ｇ８または９Ｇ５多様体における追加の変化として考えられるものは、可変領域フレームワーク中の追加の復帰変異である。ヒト化ｍＡｂにおいてＣＤＲと接していないフレームワーク残基の多くは、ドナーマウスｍＡｂまたは他のマウスまたはヒト抗体の対応する位置からのアミノ酸の置換を受け入れることができ、多くの潜在的なＣＤＲ接触残基もまた置換に適している。ＣＤＲ内のアミノ酸でさえ、例えば、可変領域フレームワークを供給するのに使用されるヒトアクセプター配列の対応する位置にみられる残基で改変され得る。さらに、代替のヒトアクセプター配列を、例えば重鎖及び／または軽鎖に使用することができる。異なるアクセプター配列を使用する場合、上で推奨した復帰変異の１つ以上は、復帰変異がなくても対応するドナー及びアクセプター残基が既に同じであることを理由に実施されなくてもよい。
【０２０４】
好ましくは、ヒト化１４Ｇ８または９Ｇ５多様体における置換または復帰変異（保存的か否かに関わらず）は、ヒト化ｍＡｂの結合親和性または力価に、つまり、単量体ＴＴＲに結合するその能力、に実質的な有害な影響を及ぼさない（例えば、多様体ヒト化１４Ｇ８または９Ｇ５抗体の本実施例に記載されるアッセイのいくつかまたは全部における力価は、マウスの１４Ｇ８または９Ｇ５抗体の力価の本質的に同じまたは少なくとも９０％である、すなわち、実験誤差の範囲内にある）。
【０２０５】
Ｃ．定常領域の選択
ヒト化抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域は、ヒト定常領域の少なくとも一部分に連結することができる。定常領域の選択は部分的に、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性、抗体依存性細胞食作用及び／または補体依存性細胞傷害を所望するかどうかに左右される。例えば、ヒト同位体のＩｇＧ１及びＩｇＧ３は補体依存性細胞傷害性を有し、ヒトアイソタイプのＩｇＧ２及びＩｇＧ４にはない。ヒトＩｇＧ１及びＩｇＧ３はまた、ヒトＩｇＧ２及びＩｇＧ４よりも強力な細胞仲介性エフェクター機能を誘導する。軽鎖定常領域はラムダまたはカッパであり得る。
【０２０６】
軽鎖及び／または重鎖のアミノ末端またはカルボキシ末端で１つまたはいくつかのアミノ酸、例えば重鎖のＣ末端リジンは、分子の一部または全部で欠損していても、誘導体化されていてもよい。置換は、補体仲介性細胞傷害性もしくはＡＤＣＣなどのエフェクター機能を低減もしくは増加させるために（例えば、Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第５，６２４，８２１号；Ｔｓｏ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第５，８３４，５９７号；及びＬａｚａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０３：４００５，２００６を参照のこと）、または、ヒトでの半減期を延長するために（例えば、Ｈｉｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９：６２１３，２００４を参照のこと）、定常領域に行うことができる。例示的な置換としては、抗体の半減期を増加させるための２５０位のＧｌｎ及び／または４２８位のＬｅｕ（この段落では定常領域にＥＵ番号付けを使用する）が挙げられる。２３４位、２３５位、２３６位、及び／または２３７位のいずれかまたは全てでの置換は、Ｆｃγ受容体、特にＦｃγＲＩ受容体に対する親和性を低下させる（例えば、ＵＳ６，６２４，８２１を参照のこと）。エフェクター機能を低下させるために、ヒトＩｇＧ１の２３４位、２３５位、及び２３７位のアラニン置換を使用することができる。いくつかの抗体は、エフェクター機能を低下させるために、ヒトＩｇＧ１の２３４位、２３５位、及び２３７位にアラニン置換を有する。任意に、ヒトＩｇＧ２の２３４位、２３６位、及び／または２３７位をアラニンで置換し、２３５位をグルタミンで置換する（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号を参照のこと）。いくつかの抗体では、ヒトＩｇＧ１のＥＵ番号付けによる２４１位、２６４位、２６５位、２７０位、２９６位、２９７位、３２２位、３２９位、及び３３１位のうちの１つ以上の位置での変異を使用した。いくつかの抗体では、ヒトＩｇＧ１のＥＵ番号付けによる３１８位、３２０位、及び３２２位のうちの１つ以上の位置での変異を使用した。いくつかの抗体では、２３４位及び／または２３５位をアラニンで置換し、且つ／または３２９位をグリシンで置換する。いくつかの抗体では、配列番号１０２などにおいて、２３４位及び２３５位をアラニンで置換する。いくつかの抗体では、アイソタイプは、ヒトＩｇＧ２またはＩｇＧ４である。
【０２０７】
例示的ヒト軽鎖カッパ定常領域は、配列番号１０４のアミノ酸配列を有する。配列番号１０４のＮ末端アルギニンは、除去することができ、軽鎖カッパ定常領域は、配列番号１０５のアミノ酸配列を有する。抗体は、２つの軽鎖及び２つの重鎖とが含まれる四量体として、別々の重鎖、軽鎖として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖとして、または重鎖及び軽鎖の成熟可変ドメインがスペーサーを介して連結される一本鎖抗体として発現させることができる。
【０２０８】
ヒト定常領域は個体間でアロタイプ多様性及びイソアロタイプ多様性を示し、つまり、定常領域は、１つ以上の多形位置で個体によって異なり得る。イソアロタイプは、イソアロタイプを認識する血清が１つ以上の他のアイソタイプの非多型領域に結合するという点でアロタイプとは異なる。ヒト定常領域への言及は、任意の天然のアロタイプまたは天然のアロタイプでの位置を占める残基の任意の順列を含む定常領域を含む。ＩｇＧ１  Ｇ１ｍ３アロタイプである、配列番号１０３を含む、配列番号１０１〜１０３のアミノ酸配列を有する重鎖配列を含む例示的な重鎖配列が好ましい。ヒト定常領域への言及は、任意の天然のアロタイプまたは天然のアロタイプでの位置を占める残基の任意の順列を含む定常領域を含む。
【０２０９】
Ｄ．組み換え抗体の発現
抗体は、組み換え発現により産生することができる。抗体をコードする核酸は、所望の細胞型（例えば、ＣＨＯまたはＳｐ２／０）での発現のためにコドン最適化することができる。組み換え核酸構築物は通常、天然関連または異種プロモーター領域を含む、抗体鎖のコード配列に作動可能に連結されている発現制御配列を含む。発現制御配列は、真核宿主細胞を形質転換またはトランスフェクトすることができるベクター中の真核プロモーター系であり得る。ベクターを適切な宿主内に組み込んだ後、ヌクレオチド配列の高レベル発現ならびに交差反応抗体の収集及び精製に適した条件下で宿主を維持する。抗体鎖をコードするベクター（複数可）はまた、抗体鎖をコードする核酸のコピー数の増幅を可能にするために、ジヒドロ葉酸レダクターゼなどの選択可能な遺伝子を含有し得る。
【０２１０】
Ｅ．ｃｏｌｉは、抗体、特に、抗体フラグメントの発現に特に有用な原核宿主である。酵母などの微生物も発現に有用である。Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓは、所望に応じて、発現制御配列、複製起点、終止配列などを有する好適なベクターを持つ好ましい酵母宿主である。代表的なプロモーターとしては、３−ホスホグリセリン酸キナーゼ及び他の糖分解酵素が挙げられる。誘導性の酵母プロモーターとしてはとりわけ、アルコールデヒドロゲナーゼ、イソシトクロームＣ、ならびにマルトース及びガラクトースの利用を担う酵素に由来するプロモーターが挙げられる。
【０２１１】
免疫グロブリンまたはそのフラグメントをコードするヌクレオチドの発現に、哺乳動物細胞を使用することができる。Ｗｉｎｎａｃｋｅｒ，Ｆｒｏｍ  Ｇｅｎｅｓ  ｔｏ  Ｃｌｏｎｅｓ，（ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，ＮＹ，１９８７）を参照のこと。インタクトの異種タンパク質を分泌することができる好適な宿主細胞系が当該技術分野で多数開発されており、ＣＨＯ細胞系、種々のＣＯＳ細胞系、ＨｅＬａ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、Ｌ細胞、ならびにＳｐ２／０及びＮＳ０を含む非抗体産生骨髄腫を含む。非ヒト細胞を使用することが有利であり得る。これらの細胞の発現ベクターは、複製開始点、プロモーター、エンハンサーなどの発現制御配列（Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．８９：４９（１９８６）、ならびにリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位、及び転写ターミネーター配列などの必要なプロセシング情報部位を含み得る。好適な発現制御配列は、内因性遺伝子、サイトメガロウイルス、ＳＶ４０、アデノウイルス、ウシパピローマウイルスなどに由来するプロモーターである。Ｃｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．ＩｍＭのｕｎｏｌ．１４８：１１４９（１９９２）を参照のこと。
【０２１２】
抗体の重鎖及び軽鎖をコードするベクター（複数可）を細胞培養物中に導入した後、細胞プールは、無血清培地中で成長生産性及び産物品質についてスクリーニングすることができる。次に、最も産生量の多い細胞プールをＦＡＣＳベースの単一細胞クローン化にかけて、モノクローナル系を作製することができる。７．５ｇ／Ｌ培地を超える産生力価に相当する１日当たり１細胞当たり５０ｐｇまたは１００ｐｇを超える具体的な産生量が有利であり得る。単一細胞クローンにより産生される抗体はまた、濁度、濾過特性、ＰＡＧＥ、ＩＥＦ、ＵＶスキャン、ＨＰ−ＳＥＣ、炭水化物−オリゴ糖マッピング、質量分析、及び、ＥＬＩＳＡまたはＢｉａｃｏｒｅなどの結合アッセイについて試験することができる。次に、選択したクローンは、複数のバイアルに保存し、後続の使用のために凍結保管することができる。
【０２１３】
抗体の商業的生産のための方法論は、コドン最適化、プロモーターの選択、転写要素、及びターミネーター、無血清単一細胞クローニング、細胞バンキング、コピー数の増幅のための選択マーカーの使用、ＣＨＯターミネーター、無血清単一細胞クローニング、タンパク質力価の改善を含む（例えば、ＵＳ５，７８６，４６４、ＵＳ６，１１４，１４８、ＵＳ６，０６３，５９８、ＵＳ７，５６９，３３９、ＷＯ２００４／０５０８８４、ＷＯ２００８／０１２１４２、ＷＯ２００８／０１２１４２、ＷＯ２００５／０１９４４２、ＷＯ２００８／１０７３８８、及びＷＯ２００９／０２７４７１、ならびにＵＳ５，８８８，８０９を参照のこと）。
【０２１４】
発現されると、抗体は、プロテインＡキャプチャー、カラムクロマトグラフィー（例えば、疎水性相互作用またはイオン交換）、ウイルス不活化のための低ｐＨなどを含む当技術分野の標準的な手順に従って精製することができる（一般に、Ｓｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，ＮＹ，１９８２）を参照のこと）。
【０２１５】
開示の製剤を調製するために使用される抗体は通常、単離または精製され、すなわち、細胞物質もしくはそれらが産生される細胞由来の他の混入タンパク質を実質的に含まないか、または、化学合成される時、化学前駆物質もしくは他の化学物質を実質的に含まない。例えば、細胞物質を実質的に含まない抗体は、（乾燥重量で）約３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、８％、５％、２％、１％、０．５％、０．１％未満、またはそれ以下の混入タンパク質を有する抗体の調製物を含む。抗体が組み換え産生される時、それはさらに、培地がタンパク質調製物の容量の約３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、８％、５％、２％、１％、０．５％、０．１％未満、またはそれ以下に相当するように、培地を実質的に含まない。抗体は、化学合成によって生成される時、好ましくは、タンパク質の合成に関与する化学前駆物質または他の化学物質を実質的に含まないか、またはそれらから分離される。従って、そのような抗体調製物は、（乾燥重量で）約３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、８％、５％、２％、１％、０．５％、０．１％未満、またはそれ以下の、抗体原薬以外の化学前駆物質または化合物を有する。組み換え発現された抗体は、例えば、アフィニティークロマトグラフィー、酸処理、深層濾過、陰イオン交換クロマトグラフィー、陽イオン交換クロマトグラフィー、ナノ濾過、限外濾過、透析、及びダイアフィルトレーションなどの方法により精製することができる。
【０２１６】
精製された抗体原薬は、本明細書に記載の製剤のいずれかを含む溶液に調整し、所望の濃度に希釈し、使用可能な状態まで保管することができる。任意に、製剤は、使用可能な状態まで濃縮された形態で保管することができる。
【０２１７】
Ｅ．コンジュゲート
開示された製剤で使用される抗体は、細胞傷害剤、放射線治療剤、免疫調節剤、第２の抗体（例えば、抗体ヘテロコンジュゲートを形成する）、あるいは、キメラ、ベニヤ、またはヒト化１４Ｇ８もしくは９Ｇ５の活性を促進もしくは増強する他の任意の生物学的活性剤などの治療部分と組み合わせることができる。代表的な治療部分の例としては、ＴＴＲレベルを低下させる薬物、ＴＴＲの天然の四量体構造を安定化させる薬物、ＴＴＲの凝集を阻害する薬物、ＴＴＲ原線維もしくはアミロイドの形成を妨害する薬物、または細胞毒性を打ち消す薬物が挙げられる。
【０２１８】
本明細書に開示される抗体はまた、１つ以上の他の抗体にカップリングまたはコンジュゲートすることができる（例えば、抗体ヘテロコンジュゲートを形成する）。そのような他の抗体は、ＴＴＲもしくはその一部分の中の異なるエピトープに結合することができるか、または異なる標的抗原に結合することができる。
【０２１９】
抗体はまた、検出可能な標識とカップリングすることができる。そのような抗体は、例えば、ＴＴＲアミロイドーシスの診断、ＴＴＲアミロイドーシスの進行のモニタリング、及び／または処置効果の評価に使用することができる。そのような抗体は、ＴＴＲアミロイドーシスに罹患しているか、もしくは罹患しやすい対象中で、またはそのような対象から採取した適切な生体試料で上記のような決定を実施するのに特に有用である。抗体にカップリングまたは連結し得る代表的な検出可能な標識としては、種々の酵素、例えば西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β‐ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼ；ストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチンなどの補欠分子族；蛍光物質、例えばウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアナート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィコエリトリン；ルシフェラーゼ、ルシフェリン、及びエクオリンなどの発光物質；放射性物質、例えばイットリウム９０（９０Ｙ）、放射性銀−１１１、放射性銀−１９９、ビスマス２１３、ヨウ素（１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１１５Ｉｎ、１１３Ｉｎ、１１２Ｉｎ、１１１Ｉｎ）、テクネチウム（９９Ｔｃ）、タリウム（２０１Ｔｉ）、ガリウム（６８Ｇａ、６７Ｇａ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、キセノン（１３３Ｘｅ）、フッ素（１８Ｆ）、１５３Ｓｍ、１７７Ｌｕ、１５９Ｇｄ、１４９Ｐｍ、１４０Ｌａ、１７５Ｙｂ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、４７Ｓｃ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１４２Ｐｒ、１０５Ｒｎ、９７Ｒｕ、６８Ｇｅ、５７Ｃｏ、６５Ｚｎ、８５Ｓｒ、３２Ｐ、１５３Ｇｄ、１６９Ｙｂ、５１Ｃｒ、５４Ｍｎ、７５Ｓｅ、１１３Ｓｎ、及び１１７Ｔｉｎ；種々の陽電子放射断層撮影法を使用する陽電子放出金属；非放射性常磁性金属イオン；ならびに放射標識した分子または特定の放射性同位元素にコンジュゲートした分子が挙げられる。
【０２２０】
抗体への放射性同位元素の連結は、従来の二官能性キレートを用いて実施し得る。放射性銀−１１１及び放射性銀−１９９の連結には、硫黄系リンカーを使用してもよい。Ｈａｚｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４−２５：１−７（１９９４）を参照のこと。銀放射性同位元素の連結は、免疫グロブリンをアスコルビン酸で還元することを含み得る。１１１Ｉｎ及び９０Ｙなどの放射性同位元素には、イブリツモマブチウキセタンを使用することができ、イブリツモマブチウキセタンは上記の同位体と反応して、それぞれ１１１Ｉｎ−イブリツモマブチウキセタン及び９０Ｙ−イブリツモマブチウキセタンを形成するであろう。Ｗｉｔｚｉｇ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｎｎａｃｏｌ．，４８  Ｓｕｐｐｌ  １：Ｓ９１−Ｓ９５（２００１）を参照のこと。
【０２２１】
治療部分、その他のタンパク質、その他の抗体、及び／または検出可能な標識は、本発明の抗体に、直接または介在物（例えば、リンカー）を介して間接的にカップリングまたはコンジュゲートされてもよい。例えば、Ａｒｎｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，”ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｒｅｉｓｆｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．２４３−５６（Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．１９８５）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，“Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，”ｉｎ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（２ｎｄ  Ｅｄ．），Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．６２３−５３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．１９８７）；Ｔｈｏｒｐｅ，“Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  Ｏｆ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：  Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ，”ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐｉｎｃｈｅｒａ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．４７５−５０６（１９８５）；“Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，Ａｎｄ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｕｓｅ  Ｏｆ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，”ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂａｌｄｗｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．３０３−１６（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  １９８５）；及びＴｈｏｒｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，ＩｍＭのｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．，６２：１１９−５８（１９８２）を参照のこと。好適なリンカーとしては、例えば、切断可能なリンカー及び切断可能でないリンカーが挙げられる。酸性もしくは還元性の条件下で、特定のプロテアーゼに曝露した時、またはその他の定められた条件下で、カップリングした治療部分、タンパク質、抗体、及び／または検出可能な標識を放出する様々なリンカーを用いることができる。
【０２２２】
Ｖ．製剤
本発明の製剤（医薬組成物としても知られている）は、キメラ、ベニヤ、またはヒト化バージョンの抗体１４Ｇ８または９Ｇ５を含む、本出願に記載のモノクローナル抗体のうちのいずれか、緩衝液、１つ以上の糖及び／またはポリオール、ならびに界面活性剤を含み、約４．５〜約７．５の範囲内のｐＨを有する。例えば、アルギニン、リジン、ＮａＣｌ、ソルビトール、またはマンニトールなどを含む他の構成成分（液体製剤中の水以外）は、存在してもしなくてもよい。製剤は、液体または凍結乾燥形態であり得る。液体製剤は、凍結乾燥製剤の凍結乾燥前または再構成後の製剤を指すことができる。一般に、水以外の製剤の構成成分は、凍結乾燥製剤中において、凍結乾燥前の液体製剤中と同じ相対重量比または相対モル比で生じる。同様に、水での再構成後の製剤の構成成分は一般に、凍結乾燥前の製剤または凍結乾燥製剤中と同じ相対比で存在するが、絶対濃度は、再構成前及び後の製剤の相対容量に比例して変化し得る。再構成後の容量は、凍結乾燥前の容量と同じか、それより少ないか、またはそれより多い可能性がある。通常、再構成後の容量は、凍結乾燥前の容量の５、３、２、１．５、１．２、または１．１倍以内で同じである。例えば、再構成後の容量が凍結乾燥前の容量の２倍である場合、構成成分の濃度は、再構成後において、凍結乾燥前のおよそ半分である。
【０２２３】
液体製剤では、抗体は、とりわけ、約１０〜１００、１５〜８０、２０〜６５、２５〜７５、４０〜６５、４５〜６５ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度で存在することができる。いくつかの製剤では、抗体は、凍結乾燥前に５５〜６５ｍｇ／ｍｌで、再構成後に４５〜５５ｍｇ／ｍｌで存在する。いくつかの製剤では、抗体は、再構成後に５０ｍｇ／ｍｌで存在する。
【０２２４】
製剤は、約４．５〜約７．５のｐＨ範囲、例えば、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、または７．０のｐＨをもたらすために、例えば、クエン酸塩、ヒスチジン、リン酸塩、またはコハク酸塩などの緩衝液を含む。いくつかの製剤は、約５．５〜約７．０、または約５．５〜約６．５、または約５．５〜約６．０、または約６．０〜約６．５、または約６．０〜約７．０、または約５．７５〜６．２５のｐＨを有する。いくつかの製剤は、約６．０のｐＨを有し、いくつかの製剤は、約６．５のｐＨを有する。いくつかの製剤では、ヒスチジンは、約１０〜３０ｍＭまたは１５〜２５ｍＭの範囲内の濃度で、例えば、約１０ｍＭ、２０ｍＭ、または２５ｍＭの濃度で、存在する。いくつかの製剤では、クエン酸塩は、約１０〜３０ｍＭの範囲内の濃度で、例えば、約１０ｍＭまたは２０ｍＭの濃度で、存在する。いくつかの製剤では、リン酸塩は、約２０ｍＭの濃度で存在する。いくつかの製剤では、コハク酸塩は、約２０ｍＭの濃度で存在する。
【０２２５】
製剤は、例えば、トレハロースまたはスクロースなどの糖／ポリオールを含む。糖／ポリオールは、約３０ｍＭ〜約２６０ｍＭ、もしくは約１５０〜３５０ｍＭ、もしくは約２００〜３００ｍＭ、もしくは約２２０〜２６０ｍＭ、もしくは約２３０〜２５０ｍＭ、もしくは約２０５〜２４０ｍＭ、もしくは約２０５〜２５０ｍＭ、もしくは約２０５〜２６０ｍＭ、もしくは約２３０〜２５０ｍＭ、もしくは約２３０〜２４０ｍＭ、または約３０ｍＭ、約２０５ｍＭ、もしくは約２４０ｍＭで存在し得る。いくつかの製剤では、トレハロースは、約２０５〜２６０ｍＭ、約２０５〜２５０ｍＭ、または約２０５〜２４０ｍＭの範囲内、例えば、約２０５ｍＭ、約２３０ｍＭ、または約２４０ｍＭ、の濃度で存在する。いくつかの製剤では、スクロースは、約３０〜２６０ｍＭ、約３０〜２５０ｍＭ、または約３０〜２４０ｍＭの範囲内、例えば、約３０ｍＭ、約２３０ｍＭ、または約２４０ｍＭ、の濃度で存在する。
【０２２６】
製剤は、例えば、ポリソルベート２０（ＰＳ２０）、ポリソルベート８０（ＰＳ８０）、またはポロキサマー、例えば、ポロキサマー１８８（ＰＸ１８８、ＰＬＵＲＯＮＩＣ  Ｆ６８、またはＦＬＯＣＯＲとしても知られている）などの界面活性剤を含む。界面活性剤は、約０．０１重量％〜０．１重量％、０．０２重量％〜０．０４重量％、または０．０３重量％〜０．０５重量％の範囲内の濃度で存在し得る。例えば、濃度は、０．００５重量％、０．０１重量％、０．０１５重量％、０．０２重量％、０．０２５重量％、０．０３重量％、０．０３５重量％、０．０４重量％、０．０４５重量％、または０．０５重量％であり得る。ポロキサマーは、ポリオキシエチレン（ポリ（エチレンオキシド））の２つの親水性鎖に隣接するポリオキシプロピレン（ポリ（プロピレンオキシド））の中央の疎水性鎖からなる非イオン性トリブロックコポリマーである。いくつかの製剤は、約０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０、約０．０２％ｗ／ｗのＰＳ８０、または約０．０４重量％のポロキサマー、例えば、０．０４重量％のポロキサマーＰＸ１８８、を含む。
【０２２７】
いくつかのそのような製剤は、約２７０ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３３０ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲、例えば、約３３５ｍＯｓｍ／ｋｇ、の浸透圧を特徴とする。
【０２２８】
約５．０〜約６．５の範囲内のｐＨを特徴とする例示的な製剤は、以下を含む、（ａ）Ｋａｂａｔ番号付けによるＨ５２位及び／もしくはＬ２６位がＮもしくはＳであり得ることを除いて、配列番号６１の３つのＣＤＲを含む成熟重鎖可変領域及び配列番号７０の３つのＣＤＲを含む成熟軽鎖可変領域を含む、キメラ、ベニヤ、もしくはヒト化バージョンの抗体１４Ｇ８、または、配列番号１の３つのＣＤＲを含む成熟重鎖可変領域及び配列番号１６の３つのＣＤＲを含む成熟軽鎖可変領域を含む、キメラ、ベニヤ、もしくはヒト化バージョンの抗ＴＴＲ抗体９Ｇ５（抗体は、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度で存在する）、（ｂ）約２０ｍＭの濃度で存在するヒスチジン、クエン酸塩、リン酸塩、またはコハク酸塩、（ｃ）約２９５ｍＭ〜約２４０ｍＭの範囲内の濃度で存在するスクロースもしくはトレハロース（または糖が不存在である場合、１６０ｍＭのアルギニンが存在する）、ならびに（ｄ）約０．０１重量％〜約０．１重量％の範囲内の濃度で存在する界面活性剤、但し、（ｉ）ヒスチジンまたはコハク酸緩衝液が存在する場合、ｐＨは、約６．０であり、（ｉｉ）リン酸緩衝液が存在する場合、ｐＨは、約６．５であり、且つヒスチジン及びトレハロースが存在する場合、界面活性剤は、ＰＳ８０またはＰＳ２０であり、但し、ＰＳ２０が存在する場合、２５ｍＭのＬ−アルギニンも存在する。
【０２２９】
いくつかの製剤は、マンニトールもしくはソルビトールまたはマンニトール及びソルビトールの両方を本質的に含まない。いくつかの製剤では、緩衝液は、例えば、ヒスチジン緩衝液などのヒスチジンを含む。いくつかのそのような製剤では、糖は、約２３０ｍＭ〜約２４０ｍＭの範囲で存在することができる。いくつかの製剤では、糖は、スクロースであり、界面活性剤は、ＰＳ２０またはＰＸ１８８、例えば、０．０２％ｗ／ｗの濃度のＰＳ２０または０．０４％ｗ／ｗの濃度のＰＸ１８８である。他の製剤では、糖は、トレハロースである。いくつかの製剤では、１６０ｍＭのアルギニンが存在する。いくつかの製剤の緩衝液は、クエン酸塩であり得る。いくつかのそのような製剤では、糖は、２３０ｍＭで存在する。いくつかのそのような製剤では、界面活性剤は、０．０２％のＰＳ２０である。あるいは、緩衝液は、リン酸塩であり得る。いくつかのそのような製剤では、スクロースが存在する。他の製剤では、緩衝液は、コハク酸塩である。いくつかのそのような製剤では、スクロースが存在する。ヒスチジンを含むいくつかの製剤では、トレハロースは、例えば、２０５ｍＭの濃度で存在する。
【０２３０】
例示的な製剤は、およそ（ａ）ｐＨ５の、２０ｍＭのクエン酸塩、２３０ｍＭのトレハロース、及び０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０；（ｂ）２０ｍＭのヒスチジン、２３０ｍＭのスクロース、及び０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０；（ｃ）ｐＨ６．５の、２０ｍＭのリン酸塩、２３０ｍＭのスクロース、及び０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０；（ｄ）ｐＨ６．５の、２０ｍＭのクエン酸塩、２３０ｍＭのスクロース、及び０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０；（ｅ）２０ｍＭのヒスチジン、２３０ｍＭのトレハロース、及び０．０２％ｗ／ｗのＰＳ８０；（ｆ）２０ｍＭのヒスチジン、０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０、及び１６０ｍＭのＬ−アルギニン；（ｇ）２０ｍＭのヒスチジン、２４０ｍＭのスクロース、及び０．０４％ｗ／ｗのＰＸ１８８；（ｈ）６．０のｐＨの、２０ｍＭのコハク酸塩、２４０ｍＭのスクロース、及び０．０２２％ｗ／ｗのＰＳ２０；ならびに、（ｉ）２０ｍＭのヒスチジン、２０５ｍＭのトレハロース、０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０、及び２５ｍＭのＬ−アルギニン、を含む。そのような製剤のいくつかは、抗体ならびに（ａ）ｐＨ５の、２０ｍＭのクエン酸塩、２３０ｍＭのトレハロース、及び０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０；（ｂ）２０ｍＭのヒスチジン、２３０ｍＭのスクロース、及び０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０；（ｃ）ｐＨ６．５の、２０ｍＭのリン酸塩、２３０ｍＭのスクロース、及び０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０；（ｄ）ｐＨ６．５の、２０ｍＭのクエン酸塩、２３０ｍＭのスクロース、及び０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０；（ｅ）２０ｍＭのヒスチジン、２３０ｍＭのトレハロース、及び０．０２％ｗ／ｗのＰＳ８０；（ｆ）２０ｍＭのヒスチジン、０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０、及び１６０ｍＭのＬ−アルギニン；（ｇ）２０ｍＭのヒスチジン、２４０ｍＭのスクロース、及び０．０４％ｗ／ｗのＰＸ１８８；（ｈ）ｐＨ６．０の、２０ｍＭのコハク酸塩、２４０ｍＭのスクロース、及び０．０２２％ｗ／ｗのＰＳ２０；または、（ｉ）２０ｍＭのヒスチジン、２０５ｍＭのトレハロース、０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０、及び２５ｍＭのＬ−アルギニンから本質的になる。例えば、製剤は、抗体、ならびに、およそ（ａ）２０ｍＭのヒスチジン、２４０ｍＭのスクロース、及び０．０４％ｗ／ｗのＰＸ１８８；（ｂ）６．０のｐＨの、２０ｍＭのコハク酸塩、２４０ｍＭのスクロース、及び０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０；または、（ｃ）２０ｍＭのヒスチジン、２０５ｍＭのトレハロース、０．０２％ｗ／ｗのＰＳ２０、及び２５ｍＭのＬ−アルギニンから本質的になり得る。
【０２３１】
例えば、製剤は、（ａ）約４５〜６５ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、配列番号６５と記載されるアミノ酸配列を有する成熟軽鎖及び配列番号７６と記載されるアミノ酸配列を含む成熟重鎖を含む抗体；（ｂ）約１５〜２５ｍＭの濃度のヒスチジン緩衝液；（ｃ）約２２０〜２６０ｍＭの濃度のスクロース；（ｄ）約０．０３〜０．０５％の濃度及び約５．７５〜６．２５のｐＨのポロキサマーを含み得る。製剤は、（ａ）約４５〜６５ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、配列番号６５と記載されるアミノ酸配列を有する成熟軽鎖及び配列番号７６と記載されるアミノ酸配列を含む成熟重鎖を含む抗体；（ｂ）約２０ｍＭの濃度のヒスチジン緩衝液；（ｃ）約２４０ｍＭの濃度のスクロース；（ｄ）約０．０４％の濃度及び約６のｐＨのポロキサマー、を含み得る。例えば、製剤は、配列番号６５と記載されるアミノ酸配列を有する成熟軽鎖及び配列番号７６と記載されるアミノ酸配列を含む成熟重鎖を含む抗体、ならびに約２０ｍＭのヒスチジン、約２４０ｍＭのスクロース、及び約０．０４％ｗ／ｗのＰＸ１８８から本質的になり得る。
【０２３２】
凍結乾燥製剤は、本明細書に記載の抗体のうちのいずれか、（ｂ）ヒスチジンなどの緩衝液；（ｃ）スクロースなどの糖／ポリオール；及び、（ｄ）ポロキサマーなどの界面活性剤を含む。いくつかの凍結乾燥製剤では、任意の残留水は、製剤の５重量％未満、いくつかのそのような製剤では、２または１重量％未満を構成する。構成成分の量は、凍結乾燥された容量に依存するが、例えば、約１００〜３００、１５０〜２５０、または２２５〜２７５ｍｇの抗体、約１５〜３５または１５〜１９ｍｇの緩衝液、及び約０．２〜２．５または２．０〜２．５ｍｇの界面活性剤、及び約４００〜４９０ｍｇの糖またはポリオールであり得る。例示的な凍結乾燥製剤は、２２５〜２７５ｍｇのヒト化１４Ｇ８抗体、約１５〜１９ｍｇのＬ−ヒスチジン、約４００〜４９０ｍｇのスクロース、及び約２．０〜２．５ｍｇのポロキサマー、または同じ割合であるが異なる量で存在する同じ構成成分を含む。凍結乾燥製剤は、上記の液体製剤のうちのいずれかから調製することができる。１つのそのような凍結乾燥製剤は、約２５０ｍｇのヒト化１４Ｇ８抗体、約１６．８ｍｇのＬ−ヒスチジン、約２．２ｍｇのポロキサマーＰＸ１８８、及び約４４５．３ｍｇのスクロース、または同じ割合の異なる量の同じ構成要素、から本質的になる。凍結乾燥製剤は、凍結（例えば、−２０℃）で、冷却（例えば、４℃）で、または室温（例えば、２２℃）で保管することができる。凍結乾燥製剤の例示的なバイアルサイズは、２０ｍｌである。
【０２３３】
凍結乾燥製剤は、好適な液体、例えば、滅菌水、と組み合わせることにより、再構成することができる。凍結乾燥製剤は、５、４、３、２分未満以内に、目視で粒子のない溶液に、滅菌水で再構成可能であり得る。再構成は、凍結乾燥前の液体製剤と同じ容量（＋／−２０％）まで測定することができる。特定の所望の最終容量、例えば、約５ｍｌへの再構成は、乾燥構成成分によって占められる容量を考慮して、特定量の液体を加えることにより、達成することができる。例えば、いくつかの凍結乾燥製剤は、約４．９ｍｌの滅菌水を加えることにより、約５ｍｌの総容量に再構成することができる。再構成は、凍結乾燥前と相対的及び絶対的にほぼ同じ濃度を有する構成成分をもたらし得るか、または、絶対濃度の減少もしくは増加以外は、凍結乾燥前とほぼ同じ相対濃度をもたらし得る。いくつかの凍結乾燥製剤は、凍結乾燥前製剤の容量の約１．２倍の容量で構成され、約１７％の濃度の減少がもたらされる。いくつかの再構成製剤は、約４０〜６０ｍｇ／ｍＬ、例えば、約５０ｍｇ／ｍＬの抗体濃度；（ｂ）約１５〜２５ｍＭ、例えば、約２０ｍＭの濃度で存在するヒスチジン緩衝液；（ｃ）約２００〜３００ｍＭ、例えば、約２４０ｍＭの濃度で存在するスクロース；（ｄ）約０．０１重量％〜約０．１重量％、例えば、約０．０４重量％の濃度で存在するポロキサマー；及び、（ｅ）約５．５〜６．５、例えば、約６．０のｐＨ、を含む。
【０２３４】
液体または再構成凍結乾燥製剤は、約２５０〜３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ水の浸透圧を意味する、実質的に等張であり得る。いくつかの製剤は、約３３５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧を有する。いくつかの製剤は、２７０〜３００ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧を有する。液体または再構成凍結乾燥製剤はまた、３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ水を超える高張または低張（２５０ｍＯｓｍ／ｋｇ水未満）であり得る。
【０２３５】
液体製剤（通常は、再構成後）は、患者に投与する前に、生理食塩水またはリンガー液などの希釈剤を含有する輸血バッグに加えることができる。輸液バッグの容量は通常、液体製剤または構成凍結乾燥製剤の容量（例えば、１〜１０ｍｌ）と比較して、比較的大きい（例えば、５０ｍｌ〜１Ｌ、または１００〜５００ｍｌ）。生理食塩水、乳酸加リンガー液、または５％のデキストロース溶液などの、輸液バッグ中のいくつかの液体を使用することができ、これらのそれぞれは、実質的に等張である。例示的なレジメンでは、生理食塩水の１００ｍｌのバッグのポートを介して、約５ｍｌの液体または再構成凍結乾燥製剤を注射し、約１．７５ｍｌ／分の流速で約１時間にわたって、ｉｖ注入により投与される。
【０２３６】
ヒトへの投与を目的とする製剤は、ヒトへの投与用薬物の調製のために、ＦＤＡまたは米国以外の国の規制機関、例えば、欧州医薬品庁、により承認または承認可能な適正製造規範（ＧＭＰ）に基づいて作成されるのが好ましい。通常、製剤は、例えば、０．２μｍまたは０．２２μｍのフィルターを使用する無菌濾過により達成されるような無菌である。
【０２３７】
製剤の安定性は、凍結乾燥形態で貯蔵し、その後、再構成した後に評価することができる。例示的な製剤は、少なくとも約３０日間、凍結乾燥形態で貯蔵した後に、（例えば、高性能サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）により評価されるように）３８℃〜４２℃で安定しており、製剤は、少なくとも約１年間貯蔵した後に２０℃〜２４℃で安定性を有し、製剤は、少なくとも約３年間貯蔵した後に２℃〜４℃で安定性を有する。製剤は、時間及び温度のこれらの特定の組み合わせのうちの１つ以上でインキュベートした後に、少ない〜検出不可能な断片化及び／または少ない〜検出不可能な凝集に対する以下の定義を満たす場合に、安定と考えられる。より詳細には、開示の製剤は、低レベル〜検出不可能なレベルの抗体凝集及び／もしくは断片化、または、初期レベルを超える抗体断片化及び／もしくは凝集における少ないかまたは検出不可能な増加を示す（例えば、約１０％未満の凝集）。いくつかの製剤は、凝集及び／または断片化の合計が約５％以下であることを示す。低レベル〜検出不可能レベルの断片化を有する製剤は、例えば、高性能サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）で決定された単一ピーク、または還元キャピラリーゲル電気泳動（ｒＣＧＥ）による２つのピーク（抗体重鎖及び抗体軽鎖のそれぞれに対応するもの）において、総タンパク質の少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％を含有し、これは、分解されていない抗体を表し、それぞれ総タンパク質の５％超、４％超、３％超、２％超、１％超、または０．５％超を有する他の単一ピークを含まない。低レベル〜検出不可能なレベルの凝集を有する製剤は、高性能サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）で測定された、約１５重量％以下、約１０重量％以下、約５重量％以下、約４重量％以下、約３重量％以下、約２重量％以下、約１重量％以下、または約０．５重量％以下のタンパク質を含有する。例えば、いくつかの製剤では、約１０％未満の抗シヌクレイン抗体が凝集体として存在する。本発明の安定した製剤はまた、例えば、ＥＬＩＳＡ及び／または追加の機能アッセイによって測定可能な結合親和性を有する抗体の生物学的活性の損失がほとんどないか、またはないことを示し、これは、初期の測定可能な値の少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％である。いくつかの製剤は、参照物質の最初の測定可能な値の約６０％〜約１４０％の結合親和性を有する。
【０２３８】
ＶＩ．処置方法
本発明の製剤は、少なくとも部分的に、トランスサイレチン（ＴＴＲ）により、特に、単量体、ミスフォールディング、凝集、または原線維形態のＴＴＲにより媒介される疾患を有するか、またはそれのリスクがある患者の疾患を処置または予防するのに使用することができる。いくつかの処置方法では、患者は、ＡＴＴＲアミロイドーシスと診断されている。いくつかのそのような患者は、ＡＴＴＲ心臓病変及び／または末梢神経障害病変を有し得る。何人かの患者は、正常な『野生型』ＴＴＲタンパク質が凝集して、アミロイド沈着物を形成する野生型ＡＴＴＲ−心筋症を有する。何人かの患者は、遺伝性ＡＴＴＲ−心筋症を有する。何人かの患者は、遺伝性多発神経障害を有する。
【０２３９】
製剤は、有効なレジメン、つまり、発症を遅らせ、重症度を軽減し、さらなる増悪を抑制し、且つ／または処置される障害の少なくとも１つの徴候もしくは症状を寛解する投薬量、投与経路及び投与頻度で、投与される。患者が既に障害に罹患している場合、そのレジメンを治療上有効なレジメンと呼ぶことができる。患者が一般集団よりも障害のリスクが高いが未だ症状を認めない場合、そのレジメンを予防上有効なレジメンと呼ぶことができる。いくつかの場合には、治療有効性または予防有効性が、個々の患者において既存対照または同じ患者での過去の経験と比較して観察することができる。別の場合には、治療有効性または予防有効性は、前臨床試験または臨床試験で、処置された患者の集団を未処置の患者の対照集団と比較して明らかにすることができる。
【０２４０】
投与頻度は、他の因子の中でもとりわけ、循環血中の抗体の半減期、患者の状態、及び投与経路によって決まる。頻度は、患者の状態または処置される障害の進行度の変化に応じて、連日、週に１回、月に１回、年に４回、または不規則な間隔であり得る。静脈内投与の例示的な頻度は、処置の継続的な原因に対して週に１回〜４半期に１回、例えば、４週間毎に１回、であるが、多かれ少なかれ頻繁な投与も可能である。皮下投与では、例示的な投与頻度は連日〜月に１回であるが、より多いまたは少ない投与頻度も可能である。
【０２４１】
投与される投薬量の回数は、障害が、急性または慢性、及び障害の処置に対する応答によって決まる。急性障害または慢性障害の急性増悪では、１〜１０用量が多くの場合、十分である。場合により、単回ボーラス投与は、任意に、分割形態であるが、急性障害または慢性障害の急性増悪に十分である。急性障害または急性増悪の再発に対して処置を反復することができる。慢性障害の場合、抗体は、少なくとも３ヶ月間、１２ヶ月間、５年間、１０年間、または患者の寿命の間に、定期的間隔で、例えば、週に１回、２週に１回、月に１回、４半期に１回、６ヶ月毎、に投与することができる。
【０２４２】
レジメンは、個々の処置された患者が、本発明の方法により処置されていない比較可能な患者の対照集団における平均転帰よりも好ましい転帰を達成する場合、または、よりも好ましい転帰が、ｐ＜０．０５もしくは０．０１もしくは、さらに０．００１レベルの、制御された臨床試験（例えば、第ＩＩ相、第ＩＩ／ＩＩＩ相、もしくは第ＩＩＩ相試験）における、処置された患者対対照患者で実証される場合、治療的または予防的に有効であるとみなされる。
【０２４３】
有効用量は、多数の異なる因子、例えば投与手段、標的部位、対象の生理的状態、対象がヒトであるのか動物であるのか、投与する他の薬剤、及び処置が予防的であるのか治療的であるのかなどによって異なる。
【０２４４】
抗体のための例示的な用量範囲は、約０．１〜８０ｍｇ／ｋｇ、０．１〜３０、０．５〜５、または１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重（例えば、０．１、０．２、０．３、１．０、３．０、１０．０、もしくは３０．０ｍｇ／ｋｇ）あるいは固定投薬量として、１０〜５０００、例えば、１０〜１５００ｍｇであり得る。いくつかの方法は、経時的に用量を増加させる。用量は、１（すなわち、１用量変化）、２、３つ、またはそれ以上の増分で増加させることができる。最終レベルの前に、各レベルで１、２、３つ、またはそれ以上の投薬量が可能である。最終レベルは、例えば、少なくとも１５投薬量継続することができる。例えば、初期用量は、２８日毎に１度、３回注入、次に、さらに２８日毎に中間レベルの３回注入、続いて、３８時間毎に高レベルで、例えば、１０〜３０ｍｇ／ｋｇでの、任意に、少なくとも１５回の投与の場合、０．１ｍｇ／ｋｇ〜３ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。投薬量は、他の因子の中でもとりわけ、患者の状態及び、もしあれば以前の処置に対する応答、処置が予防的あるのか治療的であるのか、及び障害が急性であるのか慢性であるのかによって決まる。
【０２４５】
製剤は、末梢経路により投与することができる。投与経路としては、局所、静脈内、経口、皮下、動脈内、頭蓋内、髄腔内、腹腔内、鼻腔内、または筋肉内が挙げられる。例えば、本明細書で提供される製剤の投与経路は、静脈内または皮下であり得る。静脈内投与は、例えば、３０〜９０分、６０〜１２０分、または９０〜１８０分などの３０〜１８０分の範囲内の期間にわたって注入することによるものであり得る。このタイプの注射は、腕または脚の筋肉で最も一般的に実施される。いくつかのそのような方法では、患者は、鎮痛剤または抗ヒスタミン剤またはジフェンヒドラミンを前投薬されてもよい。例えば、ジフェンヒドラミンは、抗体投与前の約３０〜９０分の範囲内で患者に投与することができる。何人かの患者は、抗体投与前の約３０〜９０分の範囲内でアセトミノフェンを前投薬されてもよい。いくつかの方法では、薬剤を沈着物が蓄積した特定の組織の中に直接注射し、例えば頭蓋内に注射する。
【０２４６】
液体製剤は、例えば、皮下注射または注入により、患者に直接投与することができる。凍結乾燥製剤は、患者への投与前に、液体、例えば、滅菌水、で再構成される。注入のために、液体製剤は、等張液、例えば、生理食塩水のバッグに導入される。例えば、製剤の凍結乾燥剤形は、滅菌水で約５．０ｍＬの容量に再構成し、注入のために、例えば、１００ｍＬ、２５０ｍＬ、または５００ｍＬの総注入容量の生理食塩水で希釈することができる。
【０２４７】
本明細書で製剤化された抗体を含むレジメンは、トランスサイレチン媒介性アミロイドーシスを有するか、またはその危険性がある対象に、他の療法と組み合わせて投与することができる。任意に、本明細書で製剤化された抗体を投与することに加えて、そのような治療は、それを必要とする対象に連続的または別々に投与される。任意に、対象は、製剤化された抗体を含む医薬製剤での処置をもう受けていない。
【０２４８】
これらの療法は、タファミディス及びジフルニサルなどのＴＴＲ安定剤、パティシラン及びイノテルセンなどの小分子干渉ＲＮＡならびにアンチセンスオリゴヌクレオチドの使用を含むＴＴＲ発現及びその後のＴＴＲタンパク質産生を抑制する遺伝子療法、ならびに４’−ヨード−４’−デオキシドキソルビシン（ＩＤＯＸ）、ドキシサイクリン、タウロウルソデオキシコール酸（ＴＵＤＣＡ）、及びシクロデキストリン（ＣｙＤ）を含むアミロイド分解剤、ならびに抗ＳＡＰ抗体、を含む。
【０２４９】
タファミディス（ＰｆｉｚｅｒのＶｙｎｄａｑｕｅｌ）などのＴＴＲ安定剤、（例えば、ＷＯ２０１１１１６１２３、ＵＳ９，１５０，４８９を参照のこと）及びジフルニサル（ジェネリック）は、ＴＴＲの通常の可溶性四量体構造を維持するため、及び循環におけるＴＴＲ単量体の数を制限するために使用することができる。例えば、タファミディスは、ＴＴＲ四量体のチロキシン結合部位に結合し、単量体への解離を阻害し、ＴＴＲアミロイド形成カスケードの律速段階をブロックする新規化合物として積極的な調査が行われている。ジフルニサルは、酸媒介性原線維形成に対して一般的な家族性ＴＴＲ多様体に結合してそれを安定化する。
【０２５０】
ＲＮＡ阻害療法は、標的化ｍＲＮＡに結合し、それにより、ｍＲＮＡ発現を抑制し、対応するタンパク質の翻訳を妨げる。これまで、臨床結果は、小分子干渉ＲＮＡ、例えば、パティシランまたはレブシラン（例えば、ＷＯ２０１６０３３３２６を参照のこと）、ならびにアンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば、イノテルセン（例えば、ＵＳ８，１０１，７４３及び９，０６１，０４４を参照のこと）は、ＴＴＲ  ｍＲＮＡの分解を引き起こすこと、または翻訳を阻害することにより、ＴＴＲタンパク質産生を除去する強力なアプローチである。
【０２５１】
ｓｉＲＮＡ療法であるパティシランは、多発神経障害（ｈＡＴＴＲ−ＰＮ）を伴う遺伝性ＡＴＴＲアミロイドーシス患者について、第ＩＩＩ相多施設臨床試験で調査されている。パティシランと同じ患者グループを標的とする、皮下投与されるアンチセンスオリゴヌクレオチドであるイノテルセン（ＩＯＮＩＳ−ＴＴＲＲｘ）もまた、調査が行われている。
【０２５２】
アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）は、アミロイド形成性ＴＴＲタンパク質の肝臓での発現を阻害する能力について臨床調査が行われている。現在、ＡＳＯ化合物であるＩＳＩＳ−ＴＴＲＲｘは、家族性アミロイド多発神経障害（ＦＡＰ）患者において、第３相多施設無作為二重盲検プラセボ対照臨床試験で調査が行われている。
【０２５３】
ドキシサイクリン／タウロウルソデオキシコール酸などのアミロイド分解剤の併用療法は、器官に沈着したＴＴＲアミロイドを除去する可能性を有する。例えば、組み合わされたドキシサイクリン及びタウロウルソデオキシコール酸（ＴＵＤＣＡ）は、ＴＴＲアミロイド線維を破壊し、２０人のＴＴＲ患者における小規模な第２相非盲検試験で許容することができる安全性プロファイルを有するようにみえる。
【０２５４】
ＴＴＲ分解剤の別の例は、抗ＳＡＰ抗体である。抗ＳＡＰ抗体は、正常な非線維性糖タンパク質ＳＡＰに対する抗体であり、これは、内臓のアミロイド沈着物を除去する巨大細胞反応を促進する。
【実施例】
【０２５５】
実施例１．低濃度での製剤前試験
配列番号８２の成熟重鎖配列（Ｃ末端リジンが不存在であり得ることを除く）及び配列番号８６の成熟軽鎖配列を有するヒト化１４Ｇ８抗体で、製剤前開発研究を行った。特定の糖、界面活性剤、及び他の賦形剤を含む及び含まない、約４．５〜約７．０のｐＨ範囲の種々の緩衝液の組み合わせを含有する２０の製剤中のヒト化１４Ｇ８抗体で、製剤化前の試験を実施した。
【０２５６】
目視検査、動的光散乱法（ＤＬＳ）マイクロフローイメージング（ＭＦＩ）、示差走査蛍光測定（ＤＳＦ）、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、及び高性能サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰ−ＳＥＣ）を含む方法で、製剤の特性を試験した。
【０２５７】
試験された緩衝液は、約１０ｍＭ〜約２０ｍＭの範囲の濃度のクエン酸塩、ヒスチジン、コハク酸塩、及びリン酸塩であった。試験された糖は、約２０５ｍＭ〜約２３０ｍＭの範囲の濃度のトレハロース及びスクロースであった。４つの緩衝液のうちのいずれかにスクロースを有する製剤と同様に、クエン酸塩またはヒスチジン緩衝液中にトレハロースを有する製剤を試験した。
【０２５８】
試験された界面活性剤は、約０．０２％ｗ／ｗ〜約０．０４％ｗ／ｗの範囲の濃度のＰＳ２０、ＰＳ８０、及びポロキサマー１８８であった。ＰＳ２０を種々の製剤で試験した。ヒスチジン緩衝液にトレハロースを含有した１つの製剤でのみ、ポロキサマー及びＰＳ８０を試験した。
【０２５９】
試験された追加の賦形剤は、トレハロースまたはＰＳ２０を含む及び含まないヒスチジン製剤において、約２５ｍＭ〜約１６０ｍＭの範囲の濃度のＬ−アルギニン、Ｌ−リジン、及びＮａＣｌであった。
【０２６０】
これらの試験（Ｆ１〜Ｆ２０）のそれぞれでの製剤の結果を、Ｔ０と比較した変化の相対的な程度に応じた値に割り当てた。変化が観察されなかった状況が最も好ましかった。大きな変化が観察された状況は容認できなかった。さらなる値を、小さな変化が観察された状況及び中程度の変化が観察された状況に割り当てた。表２〜３は、目視検査、ＭＦＩ、ＤＬＳ、及びＨＰ−ＳＥＣにより決定されるような、試料を凍結−解凍応力（Ｔ−ＦＴ）にかけ、５０℃で１週間貯蔵（Ｔ−５０）した結果を報告する。表２は、大きな変化が試験のいずれにおいても観察されなかった製剤の一般的な特性のリストを提供する。全体的に、製剤Ｆ１３及びＦ２０（この両方が界面活性剤を欠いていた）は、ストレス時に最悪の性能を示した。４．５以下または７．０以上のｐＨを有する製剤は一般に、他の製剤ほど良好に機能しなかった。１０ｍＭの緩衝液濃度は、２０ｍＭの緩衝液濃度ほど良好に機能しなかった。糖の存在は有益であったが、糖を含まず、高濃度のＬ−アルギニンを含む製剤は、両方の糖及び高濃度のＬ−アルギニンを欠く製剤よりも良好に機能した。
【０２６１】
表２は、全ての試験で相当な性能を示す（すなわち、大きな変化はない）製剤の結論のリストを提供する。
【表２】
2021504372.tif 000003
【０２６２】
表３は、任意の特定の試験で大きな変化を示さなかった特定の賦形剤の組み合わせのリストを提供する。
【表３】
2021504372.tif 000004
【０２６３】
しかし、製剤の全てが少なくとも１つの試験で中間的な変化を示したので、実施例２で考察されるように、製剤のさらなる変更を実施し、抗体に最も安定した条件を提供する製剤を作成した。
【０２６４】
実施例２：５０ｍｇ／ｍｌでの製剤スクリーニング
製剤前スクリーニングの結果に基づいて、表４に記載の製剤Ｆ２１〜Ｆ３１を、５０ｍｇ／ｍｌ抗体の濃度での試験にかけた。
【０２６５】
表４：５０ｍｇ／ｍｌで試験された製剤のリスト
【表４】
2021504372.tif 000005
【０２６６】
試料を、調製（Ｔ−液体）、凍結乾燥（Ｔ０）、２５℃で液体状態で２週間貯蔵、ならびに、２〜８℃、２５℃、及び４０℃で凍結乾燥形態の１ヶ月及び３ヶ月の貯蔵後に、必要に応じて、目視検査、ガラス転移温度、ＭＦＩ、ＨＰ−ＳＥＣ、及びｃＩＥＦ試験にかけた。これらの試験のそれぞれの製剤の結果を、「不良」、「許容」、「良好」、及び「非常に良好」の値に割り当てた。許容される製剤は、４０℃／７５％の相対湿度で３ヶ月間の貯蔵した後に、１０μｍ／ｍｌ以上の４０００〜６０００粒子（Ｆ２７）、９４．０％を超える単量体、及び３％未満の高分子量の種（Ｆ２２〜Ｆ２７及びＦ３０）、ならびに７４％を超える主なアイソフォームを有していた。表５は、実施された試験のいずれにおいても、「不良」スコアを投与されなかった製剤の一般的な特性のリストを提供する。
【０２６７】
表５：全ての試験で許容〜非常に良好の範囲の性能を示す製剤の結論のリスト。
【表５】
2021504372.tif 000006
【０２６８】
表６：全ての試験で許容〜非常に良好の範囲の性能を示す製剤のリスト。
【表６】
2021504372.tif 000007
【０２６９】
製剤Ｆ２５は、試験された全ての製剤よりも優れており、２５℃で２週間保管された液体製剤ならびに試験された温度（４０℃）で１ヶ月及び３ヶ月間保管された凍結乾燥形態中に、４０００粒子／ｍｌ未満、９６．０％を超える単量体、高分子量の種は２．５％未満、及び７７％の主要なアイソフォーム（ｃＩＥＦで決定される）を示すことが判明した。これらの研究に基づいて、実施例３に記載されているように、さらなる開発の主要な候補として、製剤２５（２０ｍＭのヒスチジン−ＨＣｌ、２４０ｍＭのスクロース、０．０４％のポロキサマー、ｐＨ６．０）を同定した。
【０２７０】
実施例３：製剤Ｆ２５の調製及び特性決定
試料調製：液体製剤の前凍結乾燥は、６１ｍｇ／ｍｌのヒト化１４Ｇ８、２０ｍＭのヒスチジン、２４０ｍＭのスクロース、及び０．０４％のポロキサマーであった。凍結乾燥後、製剤を、約５０ｍｇ／ｍｌの抗体濃度に再構成した。
【０２７１】
上記のような凍結された出発物質を２０℃の水浴で解凍した。解凍後、２つのバッチの物質を混合し、タンパク質濃度を測定した。第２のバッチのアリコートを、さらに使用するまで、再度、−８０℃に凍結した。製剤緩衝液で希釈することにより、試料濃度を調整して、５０ｍｇ／ｍｌの目標濃度を得た。直接製剤中に、濃縮された水中ストック溶液のアリコートをスパイクすることにより、界面活性剤を添加した。次に、試料を層流フードの下で０．２２μｍのＰＶＤＦメンブレンフィルターで濾過した。最終的に、濾過された製剤を、予め洗浄されたガラス製Ｉ型２０Ｒバイアルに充填し、各バイアルは、凍結乾燥機の棚に載せる前に、５ｍｌの充填容量を有する。
【０２７２】
凍結乾燥：Ｅｐｓｉｌｏｎ  ２−１２Ｄパイロット規模の凍結乾燥機（Ｍａｒｔｉｎ  Ｃｈｒｉｓｔ，Ｏｓｔｅｒｏｄｅ（ドイツ））を使用することにより、試料の凍結乾燥を実施した。凍結乾燥プロセスは、選択された製剤の臨界生成物温度（−２５．７℃のＴｇ’及び−２５．３℃のＴｃｏｎｓｅｔ）に基づき、アクティブＤＰに対して開発された。凍結乾燥を実施するための選択された条件の開始点は、公開されたガイドラインに基づいていた（例えばＣａｒｐｅｎｔｅｒ  ＪＦ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．１９９７  Ａｕｇｕｓｔ，４（８）：９６９−７５；Ｊａｍｅｅｌ  Ｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｏｏｋ  ｃｈａｐｔｅｒ  ３０  ｉｎ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  ｏｎｌｉｎｅ：Ａｕｇｕｓｔ  ２０１０；及び  Ｒｅｍｍｅｌｅ  ＲＬ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２０１２  Ｍａｒｃｈ，１３（３）：４７１−９６を参照のこと）。０．５℃／分の速度で−４５℃に冷却することにより、スクロースベースの製剤に使用される標準的な凍結プロトコルを適用した。１次乾燥中の棚温度の初期推定は、得られる生成物温度が、１次乾燥中の崩壊を避けるために、製剤の測定Ｔｇ’及び測定崩壊温度以下となるように維持された。真空が、実験室パイロット規模及び商業規模の両方で乾燥するための実用的な範囲内にあり（チャンバ圧の推奨範囲は、０．０７〜０．２０ｍｂａｒであり）、製剤の固形分含有量も考慮するように、０．１３ｍｂａｒのチャンバ圧を選択した。従って、選択されたチャンバー圧は、確実に、合理的な期間（実験室規模で、約２５時間）内に最適な昇華及び１次乾燥の完了させるであろう。２次乾燥中の棚温度を、０．１３ｍｂａｒのチャンバー圧で２５℃に維持した。高い固形分含有量のスクロースベースの製剤の場合。２次乾燥中の２５〜４５℃の棚温度は、生成物の品質に悪影響を与えることなく低含水量を達成するために、妥当な時間内の水脱着に適切でなければならない（Ｐｉｋａｌ  ＭＪ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，１９９０，６０：２０３−２１７；Ｓｔａｒｔｚｅｌ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０１５，１０４：２３４５−２３５８；及びＤａｖｉｓ  ＪＭ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｈａｒｍ  Ｄｅｖ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．２０１３，Ｊｕｌｙ−Ａｕｇｕｓｔ，１８（４）：８８３−９６．）。１次〜２次乾燥の上昇速度は、生成物中の水分含有量が高い時、２次乾燥の初期段階中に、生成物温度が棚温度（及び場合によりＴｇを超える）を超えて上昇しないように、低く（保存的に）保った。凍結乾燥プロセス中の真空は、静電容量（ＭＫＳ）ゲージで制御された。凍結乾燥プロセス中に、凍結乾燥機のプレキシグラスドアは、放熱を低減させるためにステンレス鋼のシールドで覆われていた。異なる残留水分の試料を生成し、プロセスの過程において、製剤の乾燥挙動を特性決定するために、１つの棚の閉鎖は、以下のサンプリング時点で実施された：１）Ｔ−ＩＰＣ１：１次乾燥の終了時；２）Ｔ−ＩＰＣ２：２次乾燥温度（２５℃）への上昇後；３）Ｔ−ＩＰＣ３：２５℃で２次乾燥の５時間（ＤｅｖＲｕｎ＃１）及び６時間（ＤｅｖＲｕｎ＃２）後；４）Ｔ−最終（＝Ｔ０）：２次乾燥の最後。
【０２７３】
凍結乾燥製剤２５の分析的特性評価：
光学的外観：一般に、乾燥の過程（Ｔ−ＩＰＣ１、Ｔ−ＩＰＣ２、Ｔ−ＩＰＣ３）で凍結乾燥された製剤は、オフホワイトのケーキでケーキ構造の優れた保持を示した。
【０２７４】
Ｋａｒｌ  Ｆｉｓｃｈｅｒ滴定：ヘッドスペースモジュールを備えている電量分析Ｋａｒｌ  Ｆｉｓｃｈｅｒ滴定装置Ａｑｕａ４０．００（Ａｎａｌｙｔｉｋ  Ｊｅｎａ  ＧｍｂＨ，Ｊｅｎａ（ドイツ））を使用して、凍結乾燥ケーキの水分含有量を測定した。測定では、約１５ｍｇの試料を、湿度管理された条件下（５％未満の相対湿度）でグローブボックス内の２Ｒガラスバイアルに計量し、チューブシステムを介して反応容器に連結されているオーブンで１２０℃に加熱した。蒸発した水を滴定溶液に移し、水の量を測定した。水の蒸発が検出されなくなるまで、測定を実施した。３つのブランクで測定されたように、環境水分を考慮して、試料の含水量を計算した。両方のサイクルの終了時に、全ての試料は、１．０％以下の残留水分を有していた。
【０２７５】
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）：Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ  ＤＳＣ１＿９４３（Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ，Ｇｉｅｓｓｅｎ（ドイツ））の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を使用して、凍結製剤の熱イベント、例えば、凍結乾燥生成物のガラス転移温度（Ｔｇ）を測定した。乾燥生成物の物理化学的分析のために、１０ｍｇの凍結乾燥生成物を、クリンプされたＡｌ坩堝（Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ，Ｇｉｅｓｓｅｎ（ドイツ））で分析した。試料を１０Ｋ／分で０℃に冷却し、１０Ｋ／分の走査速度で１２０℃に再加熱した。第２サイクルで、この温度プロファイルを繰り返した。加熱スキャン中のベースラインの吸熱シフトの中点をＴｇとした。ガラス転移温度は、残留含水量に反比例して変化した。
【０２７６】
粉末Ｘ線回折（ＸＲＤ）：広角粉末Ｘ線回折（ＸＲＤ）を使用して、凍結乾燥生成物のモルホロジーを研究した。銅陽極（４５ｋＶ、４０ｍＡ、０．１５４ｎｍの波長でのＫα１発光）及びＰＩＸｃｅｌ３Ｄ検出器を備えたＸ線回折計Ｅｍｐｙｒｅａｎ（Ｐａｎａｌｙｔｉｃａｌ，Ａｌｍｅｌｏ（オランダ））を使用した。約１００ｍｇの凍結乾燥試料を、角度範囲５〜４５°２θの反射モードで分析し、ステップサイズは、０．０４°２θであり、カウント時間は、１ステップ当たり１００秒であった。両方の凍結乾燥プロセスの凍結乾燥の過程（Ｔ−ＩＰＣ１、Ｔ−ＩＰＣ２、Ｔ−ＩＰＣ３、Ｔ０）で生成された試料の凍結乾燥ケーキのモルホロジー／結晶化度をＸＲＤで決定した。全ての試料は、完全にアモルファスのケーキ構造を示し、緩衝塩または他の賦形剤の結晶化に関する明確なピークが検出されなかった。全ての試料では、約２０度２θに最大値を有する唯一の広いピークが観察され、これは、アモルファス試料の特徴である（Ｌｉｕ  Ｗ  ｅｔ  ａｌ，ＡＡＰＳ  Ｐｈａｒｍｓｃｉｔｅｃｈ，２００５，Ｖｏｌ．６（２））。
【０２７７】
凍結乾燥製剤の再構成：両方のサイクルに対し凍結乾燥前及び後の、棚当たり４つのバイアルの計量により、再構成容量を決定して、除去された水の質量を決定した。凍結乾燥生成物の試料（プラセボ及びアクティブバイアル）を、以下の手順に従って層流フードの下で再構成し；ピペットを使用することにより、必要量の超純水（Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水）を凍結乾燥生成物に（バイアルの中心に）添加した。バイアルを慎重に回転させた（振盪を避けた）。液体の添加後に凍結乾燥生成物の完全な再構成を達成するための時間として、再構成時間を測定した。主に発泡に関して、再構成挙動を判定した。凍結乾燥物への超純水の添加後決定されるような、両方の凍結乾燥プロセスの、凍結乾燥の過程（Ｔ−ＩＰＣ１、Ｔ−ＩＰＣ２、Ｔ−ＩＰＣ３、Ｔ０）で生じた試料の再構成（全ての目に見える固体の溶解）時間は、表７に示される。４．５ｍｌの超純水を添加した後、最終生成物の再構成は、４分未満で完了した。
【０２７８】
表７：凍結乾燥中の異なる時点で生成された試料の再構成時間
【表７】
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【０２７９】
ｐＨ：製剤のｐＨは、低イオン強度の電極（ＩｎＬａｂ（登録商標）Ｐｕｒｅ  Ｐｒｏ）または高／通常のイオン強度の電極（ＩｎＬａｂ（登録商標）Ｍｉｃｒｏ）を使用して、較正ｐＨメーター（ＳｅｖｅｎＥａｓｙ（登録商標）、Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ  ＡＧ，Ｓｃｈｗｅｒｚｅｎｂａｃｈ（スイス））で測定した。再構成後の両方の凍結乾燥プロセスの、凍結乾燥の過程（Ｔ−ＩＰＣ１、Ｔ−ＩＰＣ２、Ｔ−ＩＰＣ３、Ｔ０）に生成された全ての試料のｐＨ値は、表８に示される。ｐＨの変化は、凍結乾燥前及び後に観察されなかった。調製（Ｔ−液体）後、６．０の目標ｐＨ値は、両方のサイクルで達成され、ｐＨ値は依然として、２つの凍結乾燥プロセスの過程及び後で、６．０±０．１の目標範囲内にあった。
【０２８０】
表８：凍結乾燥中の異なる時点で生成された試料のｐＨ値。
【表８】
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【０２８１】
浸透圧：Ｋｎａｕｅｒ  Ａｕｔｏｍａｔｉｃ  Ｓｅｍｉ−Ｍｉｃｒｏ  Ｏｓｍｏｍｅｔｅｒ  Ｎｏ．Ａ０３００（Ｋｎａｕｅｒ，Ｂｅｒｌｉｎ（ドイツ））を使用した凝固点降下法で、試料の浸透圧を測定した。再構成後の両方の凍結乾燥プロセスで凍結乾燥の過程（Ｔ−ＩＰＣ１、Ｔ−ＩＰＣ２、Ｔ−ＩＰＣ３、Ｔ０）で生成された全ての試料の浸透圧は、表９に示される。調製（Ｔ−液体）後の浸透圧は、生理学的範囲（２７０〜３３０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）であり、依然として、凍結乾燥の過程及び後も基本的に変化しなかった。
【０２８２】
表９：凍結乾燥中の異なる時点で生成された試料の浸透圧。
【表９】
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【０２８３】
ＵＶ−Ｖｉｓ分光法：Ｔｅｃａｎ  Ｓａｆｉｒｅ２プレートリーダー（Ｔｅｃａｎ  Ａｕｓｔｒｉａ  ＧｍｂＨ，Ｇｒｏｄｉｇ（オーストリア））を、濃度決定及び濁度評価のために使用した。２００μｌの試料を３回、９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，ＮＹ（アメリカ））中で調製した。測定後、得られた吸収値を経路長について補正し、対応するブランクを差し引いた。測定前に、全ての試料を、プラセボ緩衝液中で、０．５−１ｍｇ／ｍｌに希釈した。２８０ｎｍで、１．４０４ｍｌ  ｍｇ−１ｃｍ−１の経路長１ｃｍでの濃度１ｍｇ／ｍｌに基づく吸光係数を濃度の計算のために使用した（Ｒｅｎｔｓｃｈｌｅｒの情報）。さらに、粒子の光散乱による３５０ｎｍでの光学密度の増加を使用して、試料の濁度を評価した。凝集指数（Ａ．Ｉ．）を計算するために、以下の方程式を使用した：Ａ．Ｉ．＝１００＊（Ａ３５０／（Ａ２８０−Ａ３５０））。再構成後の両方の凍結乾燥プロセスの、凍結乾燥の過程（Ｔ−ＩＰＣ１、Ｔ−ＩＰＣ２、Ｔ−ＩＰＣ３、Ｔ０）で生成された全ての試料（ｎ＝３）のタンパク質濃度は、表１０に示される。調製（Ｔ−液体）後、５０±２．５ｍｇ／ｍｌの目標濃度を全ての試料について達成し、依然として、凍結乾燥の過程及び後の条件内にあった。
【０２８４】
表１０：凍結乾燥中の異なる時点で生成された試料のタンパク質濃度。
【表１０】
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【０２８５】
高性能サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰ−ＳＥＣ）：Ｒｅｎｔｓｃｈｌｅｒから入手された情報に従って、ＨＰ−ＳＥＣを実施した。Ｂｉｏ−Ｒａｄゲル濾過標準（ＧＦＳ）及び抗体試料のうち、２０μｇの量をカラムにロードした（１ｍｇ／ｍｌの濃度を使用した）。表１１に示されるように、低分子量の固形分の変化が、観察されず、凍結乾燥に伴い、高分子量の固形分の変化が、わずかであったか、またはなかった。従って、凍結乾燥は、単量体形態の抗体の大部分を保持する。
【０２８６】
表１１：凍結乾燥中の異なる時点で生成された試料の異なる種の相対含有量。
【表１１】
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【０２８７】
本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく、形態及び詳細の種々の変更を行うことができる。別途文脈から明白でない限り、任意の実施形態、態様、要素、特徴、ステップなどを、他の任意のものと組み合わせて使用することができる。引用に関連する情報が時間とともに変化し得る限り、最も早い有効な出願日の引用に関連する情報は、引用の最も早い有効な出願日が、本出願または引用を開示するより早い優先出願の出願日を意味するものとする。本明細書の本文内で引用された全ての参考文献、発行された特許、及び特許出願は、あらゆる目的のために全体が本明細書で参照により組み込まれる。別途文脈が示さない限り、任意の実施形態、態様、特徴、要素、ステップなどは、他の任意のものと組み合わせることができる。組成物が特定の具体的な構成成分を含むと言われる時、出願は、別途文脈が要求しない限り、代わりに、組成物が、具体的な構成成分からなるか、または本質的になり得ることを開示するものと読まれるべきである。例えば、抗体鎖は、特定の配列番号を含むアミノ酸配列を有すると言われる時、別途文脈が要求しない限り、代わりに、抗体鎖が配列番号からなるか、または本質的になり得ることが理解されるべきである。「本質的になる」は、規則に従って、組成物の基本的及び新規の構成成分を示すために使用される。別途文脈から明白でない限り、水はまた、任意の量で存在し得る。他の構成成分は、組成物の活性または安定性に有意な効果を有さない少量で存在してもよい。「本質的に含まない」は、同様に、構成成分が、もしあれば、そのような少量でのみ存在し得ることを示すように定義される。組成物の構成成分が、「約」の所定の値または値の範囲の濃度で存在すると言われる時、本出願は、構成成分が、所定の値または値の範囲で存在し得ることを代替で開示するものとして読まれるべきである。
【手続補正書】
【提出日】令和2年6月16日(2020.6.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
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【国際調査報告】
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