(57)【要約】本出願は、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）などの抗体、またはＴＩＧＩＴを特異的に認識するその抗原結合フラグメントを提供する。医薬組成物、または前記抗体もしくはその抗原結合フラグメントを作製及び使用する方法も提供される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
（ａ）
ｉ．配列番号２７〜３９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、
ｉｉ．配列番号４０〜５２からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、及び
ｉｉｉ．それぞれ、配列番号５３〜６５からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、ならびに
（ｂ）
ｉ．配列番号６６〜７８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、
ｉｉ．配列番号７９〜９１からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び
ｉｉｉ．それぞれ、配列番号９２〜１０４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含み、
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＴＩＧＩＴ、好ましくは、ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合することが可能である、前記単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２】
（１）前記ＶＨが、それぞれ、配列番号２７、４０、及び５３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、前記ＶＬが、それぞれ、配列番号６６、７９、及び９２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むか、
（２）前記ＶＨが、それぞれ、配列番号２８、４１、及び５４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、前記ＶＬが、それぞれ、配列番号６７、８０、及び９３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むか、
（３）前記ＶＨが、それぞれ、配列番号２９、４２、及び５５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、前記ＶＬが、それぞれ、配列番号６８、８１、及び９４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むか、
（４）前記ＶＨが、それぞれ、配列番号３０、４３、及び５６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、前記ＶＬが、それぞれ、配列番号６９、８２、及び９５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むか、
（５）前記ＶＨが、それぞれ、配列番号３１、４４、及び５７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、前記ＶＬが、それぞれ、配列番号７０、８３、及び９６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むか、
（６）前記ＶＨが、それぞれ、配列番号３２、４５、及び５８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、前記ＶＬが、それぞれ、配列番号７１、８４、及び９７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むか、
（７）前記ＶＨが、それぞれ、配列番号３３、４６、及び５９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、前記ＶＬが、それぞれ、配列番号７２、８５、及び９８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むか、
（８）前記ＶＨが、それぞれ、配列番号３４、４７、及び６０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、前記ＶＬが、それぞれ、配列番号７３、８６、及び９９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むか、
（９）前記ＶＨが、それぞれ、配列番号３５、４８、及び６１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、前記ＶＬが、それぞれ、配列番号７４、８７、及び１００のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むか、
（１０）前記ＶＨが、それぞれ、配列番号３６、４９、及び６２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、前記ＶＬが、それぞれ、配列番号７５、８８、及び１０１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むか、
（１１）前記ＶＨが、それぞれ、配列番号３７、５０、及び６３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、前記ＶＬが、それぞれ、配列番号７６、８９、及び１０２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むか、
（１２）前記ＶＨが、それぞれ、配列番号３８、５１、及び６４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、前記ＶＬが、それぞれ、配列番号７７、９０、及び１０３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むか、または
（１３）前記ＶＨが、それぞれ、配列番号３９、５２、及び６５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、前記ＶＬが、それぞれ、配列番号７８、９１、及び１０４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、請求項１に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３】
前記ＶＨが、それぞれ、配列番号３８、５１、及び６４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、前記ＶＬが、それぞれ、配列番号７７、９０、及び１０３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、請求項２に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４】
前記ＶＨが、それぞれ、配列番号３９、５２、及び６５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、前記ＶＬが、配列番号７８、９１、及び１０４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、請求項２に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５】
前記ＶＨが、配列番号１〜１３からなる群より選択される配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、それぞれ、配列番号１４〜２６からなる群より選択される配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項６】
前記ＶＨが、配列番号１〜１３からなる群より選択されるアミノ酸配列、または前記ＶＨに最大約３アミノ酸置換を含むその多様体を含み、前記ＶＬが、配列番号１４〜２６からなる群より選択されるアミノ酸配列、または前記ＶＬに最大約３アミノ酸置換を含むその多様体を含む、請求項５に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項７】
（１）前記ＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号１４のアミノ酸配列を含むか、
（２）前記ＶＨが、配列番号２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号１５のアミノ酸配列を含むか、
（３）前記ＶＨが、配列番号３のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号１６のアミノ酸配列を含むか、
（４）前記ＶＨが、配列番号４のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号１７のアミノ酸配列を含むか、
（５）前記ＶＨが、配列番号５のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号１８のアミノ酸配列を含むか、
（６）前記ＶＨが、配列番号６のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号１９のアミノ酸配列を含むか、
（７）前記ＶＨが、配列番号７のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号２０のアミノ酸配列を含むか、
（８）前記ＶＨが、配列番号８のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号２１のアミノ酸配列を含むか、
（９）前記ＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号２２のアミノ酸配列を含むか、
（１０）前記ＶＨが、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号２３のアミノ酸配列を含むか、
（１１）前記ＶＨが、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号２４のアミノ酸配列を含むか、
（１２）前記ＶＨが、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号２５のアミノ酸配列を含むか、または
（１３）前記ＶＨが、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号２６のアミノ酸配列を含む、請求項５または６に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項８】
前記ＶＨが、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号２５のアミノ酸配列を含む、請求項７に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項９】
前記ＶＨが、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号２６のアミノ酸配列を含む、請求項７に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１０】
前記ＶＨが、免疫グロブリンの重鎖定常領域に融合している、請求項１〜９のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１１】
前記ＶＬが、免疫グロブリンの軽鎖定常領域（ＣＬ）に融合している、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１２】
前記抗体またはその抗原結合フラグメント及び前記ＴＩＧＩＴ間の結合のＫＤが、１０−７Ｍ〜約１０−１２Ｍ、好ましくは、約１０−８Ｍ〜約１０−１２Ｍ、より好ましくは、約１０−９Ｍ〜約１０−１２Ｍである、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１３】
齧歯動物、キメラ、ヒト、部分的にヒト化、または完全にヒト化である、請求項１〜１２のいずれか１項記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１４】
ヒト化である、請求項１３に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１５】
前記ＶＨが、配列番号１０５〜１１２からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号１１３〜１１８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１４に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１６】
さらに、第２の抗体部分を含み、前記第２の抗体部分が、第２の抗原に特異的に結合することが可能である、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１７】
前記第２の抗体部分が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ−ｓｃＦｖ、ミニボディ、ダイアボディ、ｓｄＡｂ、または抗体模倣物である、請求項１６に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１８】
前記第２の抗体部分が、ｓｄＡｂである、請求項１７に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１９】
前記第２の抗体部分が、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合することが可能であり、好ましくは、前記第２の抗体部分が、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合することが可能なｓｄＡｂである、請求項１６〜１８のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２０】
前記第２の抗体部分が、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合することが可能であり、好ましくは、前記第２の抗体部分が、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合することが可能なｓｄＡｂである、請求項１６〜１８いずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２１】
前記第２の抗体部分が、ＴＩＭ−３に特異的に結合することが可能であり、好ましくは、前記第２の抗体部分が、ＴＩＭ−３に特異的に結合することが可能なｓｄＡｂである、請求項１６〜１８のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２２】
前記第２の抗体部分が、ＬＡＧ−３に特異的に結合することが可能であり、好ましくは、前記第２の抗体部分が、ＬＡＧ−３に特異的に結合することが可能なｓｄＡｂである、請求項１６〜１８のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２３】
ＴＩＧＩＴを特異的に認識することが可能な全長ＩｇＧの前記重鎖または軽鎖の前記アミノ末端が、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ１、ＴＩＭ−３、またはＬＡＧ−３に特異的に結合することが可能な前記ｓｄＡｂの前記カルボキシル末端に、任意に、ペプチドリンカーを介して融合している、請求項１９〜２２のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２４】
ＴＩＧＩＴを特異的に認識することが可能な前記重鎖または軽鎖または全長ＩｇＧの前記カルボキシル末端が、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ１、ＴＩＭ−３、またはＬＡＧ−３に特異的に結合することが可能な前記ｓｄＡｂの前記アミノ末端に、任意に、ペプチドリンカーを介して融合している、請求項１９〜２２のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２５】
ＴＩＧＩＴを特異的に認識することが可能な前記全長ＩｇＧが、配列番号１１９〜１２１の１つのアミノ酸配列を有するペプチドリンカーを介して、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ１、ＴＩＭ−３、またはＬＡＧ−３に特異的に結合することが可能な前記ｓｄＡｂに融合している、請求項２３または２４に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２６】
請求項１〜２５のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメントと競合的に、ＴＩＧＩＴに特異的に結合することが可能である、第２の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２７】
請求項１〜２５のいずれか１項に記載の単離抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または請求項２６に記載の第２の単離抗体またはその抗原結合フラグメント、及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項２８】
それを必要とする対象のＴＩＧＩＴ関連疾患の処置に使用される、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の単離抗体もしくはその抗原結合フラグメント、請求項２６に記載の第２の単離抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
前記ＴＩＧＩＴ関連疾患が、がんである、請求項２８に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメントまたは使用のための医薬組成物。
【請求項３０】
前記がんが、固形腫瘍である、請求項２９に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメントまたは使用のための医薬組成物。
【請求項３１】
前記がんが、結腸癌である、請求項２９に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメントまたは使用のための医薬組成物。
【請求項３２】
追加のがん治療法と組み合わせた、請求項２８〜３１のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメントまたは使用のための医薬組成物。
【請求項３３】
前記追加のがん治療が、外科手術、放射線、化学療法、免疫療法、ホルモン療法、またはそれらの組み合わせである、請求項３２に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメントまたは使用のための医薬組成物。
【請求項３４】
前記ＴＩＧＩＴ関連疾患が、病原性感染である、請求項２８に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメントまたは使用のための医薬組成物。
【請求項３５】
前記単離抗体またはその抗原結合フラグメントまたは医薬組成物が、全身または局所投与用である、請求項２８〜３４のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメントまたは使用のための医薬組成物。
【請求項３６】
前記単離抗体またはその抗原結合フラグメントまたは医薬組成物が、静脈内投与用である、請求項２８〜３４のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメントまたは使用のための医薬組成物。
【請求項３７】
前記単離抗体またはその抗原結合フラグメントまたは医薬組成物が、腫瘍内投与用である、請求項２８〜３４のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメントまたは使用のための医薬組成物。
【請求項３８】
前記対象が、ヒトである、請求項２８〜３７のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメントまたは使用のための医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年１月１５日に出願された国際特許出願第ＰＣＴ／ＣＮ２０１８／０７２６０７号の優先権を主張し、その内容は、全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
本出願は、ファイル名「６８８０９６．０１２０配列表」及び２０１８年１月１２日の作成日を有し、６１ｋｂのサイズを有するＡＳＣＩＩフォーマットの配列表としてＥＦＳ−Ｗｅｂ経由で電子的に提出される配列表を含有する。ＥＦＳ−Ｗｅｂ経由で提出される配列表は、本明細書の一部であり、本明細書に全体が参照により組み込まれる。
【０００３】
発明の分野
本出願は、ＴＩＧＩＴタンパク質に特異的に結合することが可能な抗体またはその抗原結合フラグメント及びそのような薬剤の使用に関する。一部の実施形態では、本出願は、マウス及びヒト化モノクローナルＴＩＧＩＴに対する抗体及びこれらの抗体の使用に関する。抗体またはその抗原結合フラグメントは、診断薬として、ＴＩＧＩＴの活性及び／または発現に関連する疾患の処置に有用である。
【背景技術】
【０００４】
免疫系は、「外来の」侵入物または変異により生じた異常細胞による攻撃から保護するために一緒に作用する細胞、組織、及び器官の集合体を含む宿主防御系である。侵入物は主に、細菌、ウイルス、寄生虫、及び真菌などの感染症を引き起こす生物である。異常な細胞を検出及び破壊する免疫系の能力は、多くのがんの発生を防ぎ、がんの撃退に役立つ。中枢免疫器官及び末梢免疫器官からなる免疫系は、感染症を撃退するために、１つのユニットとして一緒に作用する。構造的に異なる数百万の外来の敵を回避する能力は、免疫系の複雑さを示す。この複雑さは、器官、組織、細胞、及び分子の動的な通信ネットワークにより実現される。これらの器官、組織、細胞、及び分子が互いに協力し、外来の侵入物を撃退するために、免疫系のバランスを保ち、同時に自己寛容を維持する。
【０００５】
免疫チェックポイントタンパク質は、自己寛容を維持し、侵入物を撃退するために、免疫応答を制御することにおいて重要な役割を果たす。それらは、免疫応答を誘発または遮断する分子である。刺激性免疫チェックポイントタンパク質は、免疫を促進するが、抑制性免疫チェックポイントタンパク質は、免疫活性にブレーキをかけ、自己免疫を防ぐ。Ｔ細胞上に発現されるＰＤ−１及びＣＴＬＡ−４などの抑制性免疫チェックポイントタンパク質は、免疫応答を抑制するブレーキとして機能する。抑制性免疫チェックポイントタンパク質を遮断すると、Ｔ細胞が活性化される。
【０００６】
人間の腫瘍は、遺伝的変化及び後成的変化の組み合わせの結果である。腫瘍細胞が形成される時、表面の抗原の一部が変化し得る。これらのいわゆるネオ抗原は、免疫系により検出され、異物として破壊されることになる。異常な細胞は、進行がんの病期に進行する前に、除去される。しかし、腫瘍細胞は、免疫系を回避及び抑制する複数の耐性機序を進展させる。腫瘍により適用される一般的な機序は、免疫チェックポイントモジュレーターを過剰発現させることにより、抑制性免疫チェックポイント経路を操作することである。がん免疫療法は、がんを処置するために、宿主の免疫系を利用する。エフェクター細胞の活性化から抑制因子の遮断までの機序は、免疫系を追加免疫し、抗腫瘍活性を生じる。抑制性免疫チェックポイント経路を遮断する薬物は、種々の固形腫瘍において有望な臨床活性を示している。
【０００７】
ＰＤ−１及びＣＴＬＡ−４は、広く研究されている２つの抑制性免疫チェックポイントタンパク質である。ＰＤ−１またはＣＴＬＡ−４に対するモノクローナル抗体は、進行期のメラノーマ患者の管理に変革をもたらしており、多くの他のがんのための良好ながん処置として浮上している。さらに、ＰＤ−１またはＣＴＬＡ−４の遮断ががん患者に腫瘍退縮の応答を示しただけでなく、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、またはＶＩＳＴＡなどの他の抑制性免疫チェックポイントタンパク質の遮断も、多くの前臨床試験において、有効な抗腫瘍応答を示している。これらの結果は、効果的ながん免疫療法のための新しい抑制性免疫チェックポイントタンパク質に対する抗体を同定することの重要性を強調する。
【０００８】
Ｉｇ及びＩＴＩＭドメイン（ＴＩＧＩＴ）を有するＴ細胞免疫受容体は、Ｔ細胞及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の両方で発現される免疫チェックポイントタンパク質である。ＴＩＧＩＴは、免疫グロブリン（Ｉｇ）及び免疫受容体チロシンベースの抑制モチーフ（ＩＴＩＭ）ドメインを含有し、適応免疫系及び先天性免疫系の両方を標的とする抑制性免疫チェックポイントタンパク質として機能する。ＩＴＩＭは、免疫細胞の活性を負に制御する多数の抑制性受容体において発現されている。これらの受容体は、免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーのメンバー、シアル酸結合レクチン様分子（Ｓｉｇｌｅｃｓ）、及びＣ型レクチン受容体を含む。ＩＴＩＭ含有受容体がリガンドと相互作用する時、ＩＴＩＭは、Ｓｒｃファミリーのチロシンキナーゼによりリン酸化される。リン酸化ＩＴＩＭは、ＳＨＩＰ−１、Ｓｈｐ１、及びＳｈｐ２を含むＳｒｃホモロジー２ドメイン含有ホスファターゼのドッキング部位を提供する。これらのホスファターゼは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）含有受容体を脱リン酸化及び不活化することができる。この機序を介して、ＩＴＩＭ含有受容体は、免疫系におけるＩＴＡＭ含有受容体からのシグナル伝達を抑制し、免疫系の活性化を阻止する。ＴＩＧＩＴは、活性化された細胞毒性Ｔ細胞及び制御性Ｔ細胞により発現され、免疫応答を「止める」ための主な抑制性免疫チェックポイントモジュレーターとして作用し得る。
【０００９】
ＣＤ２８及びＣＴＬＡ−４は、リガンドＢ７−１またはＢ７−２と相互作用すると逆の効果を有する。ＣＤ２８へのＢ７−１またはＢ７−２の結合は、免疫系に対する刺激効果を有し、ＣＴＬＡ−４へのＢ７−１またはＢ７−２の結合は、抑制効果を有する。ＣＤ２２６及びＴＩＧＩＴは、ＣＤ２８及びＣＴＬＡ−４の想起させるペアである。ＣＤ２２６及びＴＩＧＩＴのリガンドは、ＣＤ１１２及びＣＤ１５５（ＰＶＲとしても知られる）である。ＣＤ２２６の活性化及びＴＩＧＩＴの不活化は、同じリガンドについて競合し、これは、Ｔ細胞のスイッチを入れるかまたは切る微妙な均衡をもたらし得る。
【００１０】
がん免疫療法は、がんを撃退するために患者の免疫系を追加免疫することによる処置である。抑制性免疫チェックポイントモジュレーターを遮断すると、免疫系の活性化状態に向かって均衡が傾くであろう。それは、がん免疫療法のツールの１つである。ＴＩＧＩＴは、抑制性免疫チェックポイントモジュレーターの有望な新しい標的である。ＴＩＧＩＴに対して特異的なアンタゴニスト抗体を開発すると、Ｔ細胞に対する抑制効果が遮断され、がんを撃退するために免疫力が増加する。
【発明の概要】
【００１１】
本出願は、ＴＩＧＩＴタンパク質に対する標的化結合剤、ならびにその作製及び使用方法に関する。
【００１２】
一般的な態様では、本出願は、
（ａ）
ｉ．配列番号２７〜３９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、
ｉｉ．配列番号４０〜５２からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、及び
ｉｉｉ．配列番号５３〜６５からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、ならびに、
（ｂ）
ｉ．配列番号６６〜７８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、
ｉｉ．配列番号７９〜９１からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び
ｉｉｉ．配列番号９２〜１０４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）
を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントに関し、
抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＴＩＧＩＴ、好ましくは、ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合することが可能である。
【００１３】
本発明は、ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合するマウスモノクローナル抗体（７０Ａ１１Ａ８Ｅ６）または抗原結合フラグメントを提供し、それぞれ配列番号２７、４０、及び５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む。ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合するマウスモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントはまた、それぞれ配列番号６６、７９、及び９２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み得る。一実施形態では、本発明の抗ヒトＴＩＧＩＴマウスモノクローナル抗体は、配列番号１及び１４のアミノ酸配列を含む７０Ａ１１Ａ８Ｅ６の重鎖及び軽鎖可変ドメインを含む。それは、これらの開示された配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、及び９５％の配列同一性を共有する配列を網羅する。別の実施形態では、マウスモノクローナル抗体７０Ａ１１Ａ８Ｅ６または抗原結合フラグメントは、以下の機能的特徴を含む：（ａ）表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ）により決定されるように２０ｎｍ以下のＫＤでヒトＴＩＧＩＴに結合する；（ｂ）カニクイザルＴＩＧＩＴに対して交差反応性がある；（ｃ）ヒトＴＩＧＩＴ及びそのリガンドＣＤ１５５間の相互作用を遮断する；（ｄ）レポーターアッセイでＴ細胞を活性化する；（ｅ）ジャーカット細胞のＩＬ−２産生を刺激する。
【００１４】
本発明は、ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合するマウスモノクローナル抗体（１１Ｄ８Ｅ１２Ａ４）または抗原結合フラグメントを提供し、それぞれ配列番号２８、４１、及び５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む。ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合するマウスモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントはまた、それぞれ配列番号６７、８０、及び９３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み得る。一実施形態では、本発明の抗ヒトＴＩＧＩＴマウスモノクローナル抗体は、配列番号２及び１５のアミノ酸配列を含む１１Ｄ８Ｅ１２Ａ４の重鎖及び軽鎖可変ドメインを含む。それは、これらの開示された配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、及び９５％の配列同一性を共有する配列を網羅する。別の実施形態では、マウスモノクローナル抗体１１Ｄ８Ｅ１２Ａ４または抗原結合フラグメントは、以下の機能的特徴を含む：（ａ）表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ）により決定されるように２０ｎｍ以下のＫＤでヒトＴＩＧＩＴに結合する；（ｂ）カニクイザルＴＩＧＩＴに対して交差反応性がある；（ｃ）ヒトＴＩＧＩＴ及びそのリガンドＣＤ１５５間の相互作用を遮断する；（ｄ）レポーターアッセイでＴ細胞を活性化する；（ｅ）ジャーカット細胞のＩＬ−２産生を刺激する。
【００１５】
本発明は、ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合するマウスモノクローナル抗体（１６Ｆ１０Ｈ１２Ｃ１１）または抗原結合フラグメントを提供し、それぞれ配列番号２９、４２、及び５５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む。ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合するマウスモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントはまた、それぞれ配列番号６８、８１、及び９４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み得る。一実施形態では、本発明の抗ヒトＴＩＧＩＴマウスモノクローナル抗体は、配列番号３及び１６のアミノ酸配列を含む１６Ｆ１０Ｈ１２Ｃ１１の重鎖及び軽鎖可変ドメインを含む。それは、これらの開示された配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、及び９５％の配列同一性を共有する配列を網羅する。別の実施形態では、マウスモノクローナル抗体１６Ｆ１０Ｈ１２Ｃ１１または抗原結合フラグメントは、以下の機能的特徴を含む：（ａ）表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ）により決定されるように２０ｎｍ以下のＫＤでヒトＴＩＧＩＴに結合する；（ｂ）カニクイザルＴＩＧＩＴに対して交差反応性がある；（ｃ）ヒトＴＩＧＩＴ及びそのリガンドＣＤ１５５間の相互作用を遮断する；（ｄ）レポーターアッセイでＴ細胞を活性化する；（ｅ）ジャーカット細胞のＩＬ−２産生を刺激する。
【００１６】
本発明は、ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合するマウスモノクローナル抗体（８Ｆ２Ｄ８Ｅ７）または抗原結合フラグメントを提供し、それぞれ配列番号３０、４３、及び５６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む。ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合するマウスモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントはまた、それぞれ配列番号６９、８２、及び９５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み得る。一実施形態では、本発明の抗ヒトＴＩＧＩＴマウスモノクローナル抗体は、配列番号４及び１７のアミノ酸配列を含む８Ｆ２Ｄ８Ｅ７の重鎖及び軽鎖可変ドメインを含む。それは、これらの開示された配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、及び９５％の配列同一性を共有する配列を網羅する。別の実施形態では、マウスモノクローナル抗体８Ｆ２Ｄ８Ｅ７または抗原結合フラグメントは、以下の機能的特徴を含む：（ａ）表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ）により決定されるように２０ｎｍ以下のＫＤでヒトＴＩＧＩＴに結合する；（ｂ）カニクイザルＴＩＧＩＴに対して交差反応性がある；（ｃ）ヒトＴＩＧＩＴ及びそのリガンドＣＤ１５５間の相互作用を遮断する；（ｄ）レポーターアッセイでＴ細胞を活性化する；（ｅ）ジャーカット細胞のＩＬ−２産生を刺激する。
【００１７】
本発明は、ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合するマウスモノクローナル抗体（４８Ｂ５Ｇ４Ｅ１２）または抗原結合フラグメントを提供し、それぞれ配列番号３１、４４、及び５７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む。ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合するマウスモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントはまた、それぞれ配列番号７０、８３、及び９６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み得る。一実施形態では、本発明の抗ヒトＴＩＧＩＴマウスモノクローナル抗体は、配列番号５及び１８のアミノ酸配列を含む４８Ｂ５Ｇ４Ｅ１２の重鎖及び軽鎖可変ドメインを含む。それは、これらの開示された配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、及び９５％の配列同一性を共有する配列を網羅する。別の実施形態では、マウスモノクローナル抗体４８Ｂ５Ｇ４Ｅ１２または抗原結合フラグメントは、以下の機能的特徴を含む：（ａ）表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ）により決定されるように２０ｎｍ以下のＫＤでヒトＴＩＧＩＴに結合する；（ｂ）カニクイザルＴＩＧＩＴに対して交差反応性がある；（ｃ）ヒトＴＩＧＩＴ及びそのリガンドＣＤ１５５間の相互作用を遮断する；（ｄ）レポーターアッセイでＴ細胞を活性化する；（ｅ）ジャーカット細胞のＩＬ−２産生を刺激する。
【００１８】
本発明は、ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合するマウスモノクローナル抗体（１３９Ｅ２Ｃ２Ｄ２）または抗原結合フラグメントを提供し、それぞれ配列番号３２、４５、及び５８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む。ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合するマウスモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントはまた、それぞれ配列番号７１、８４、及び９７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み得る。一実施形態では、本発明の抗ヒトＴＩＧＩＴマウスモノクローナル抗体は、配列番号６及び１９のアミノ酸配列を含む１３９Ｅ２Ｃ２Ｄ２の重鎖及び軽鎖可変ドメインを含む。それは、これらの開示された配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、及び９５％の配列同一性を共有する配列を網羅する。別の実施形態では、マウスモノクローナル抗体１３９Ｅ２Ｃ２Ｄ２または抗原結合フラグメントは、以下の機能的特徴を含む：（ａ）表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ）により決定されるように２０ｎｍ以下のＫＤでヒトＴＩＧＩＴに結合する；（ｂ）カニクイザルＴＩＧＩＴに対して交差反応性がある；（ｃ）ヒトＴＩＧＩＴ及びそのリガンドＣＤ１５５間の相互作用を遮断する；（ｄ）レポーターアッセイでＴ細胞を活性化する；（ｅ）ジャーカット細胞のＩＬ−２産生を刺激する。
【００１９】
本発明は、ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合するマウスモノクローナル抗体（１２８Ｅ３Ｇ７Ｆ５）または抗原結合フラグメントを提供し、それぞれ配列番号３３、４６、及び５９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む。それらは、それぞれ配列番号７２、８５、及び９８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列も含む。一実施形態では、本発明の抗ヒトＴＩＧＩＴマウスモノクローナル抗体は、配列番号７及び２０のアミノ酸配列を含む１２８Ｅ３Ｇ７Ｆ５の重鎖及び軽鎖可変ドメインを含む。それは、これらの開示された配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、及び９５％の配列同一性を共有する配列を網羅する。別の実施形態では、マウスモノクローナル抗体１２８Ｅ３Ｇ７Ｆ５または抗原結合フラグメントは、以下の機能的特徴を含む：（ａ）表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ）により決定されるように２０ｎｍ以下のＫＤでヒトＴＩＧＩＴに結合する；（ｂ）カニクイザルＴＩＧＩＴに対して交差反応性がある；（ｃ）ヒトＴＩＧＩＴ及びそのリガンドＣＤ１５５間の相互作用を遮断する；（ｄ）レポーターアッセイでＴ細胞を活性化する；（ｅ）ジャーカット細胞のＩＬ−２産生を刺激する。
【００２０】
本発明は、ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合するマウスモノクローナル抗体（１２１Ｃ２Ｆ１０Ｂ５）または抗原結合フラグメントを提供し、それぞれ配列番号３４、４７、及び６０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む。ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合するマウスモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントはまた、それぞれ配列番号７３、８６、及び９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み得る。一実施形態では、本発明の抗ヒトＴＩＧＩＴマウスモノクローナル抗体は、配列番号８及び２１のアミノ酸配列を含む１２１Ｃ２Ｆ１０Ｂ５の重鎖及び軽鎖可変ドメインを含む。それは、これらの開示された配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、及び９５％の配列同一性を共有する配列を網羅する。別の実施形態では、マウスモノクローナル抗体１２１Ｃ２Ｆ１０Ｂ５または抗原結合フラグメントは、以下の機能的特徴を含む：（ａ）表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ）により決定されるように２０ｎｍ以下のＫＤでヒトＴＩＧＩＴに結合する；（ｂ）カニクイザルＴＩＧＩＴに対して交差反応性がある；（ｃ）ヒトＴＩＧＩＴ及びそのリガンドＣＤ１５５間の相互作用を遮断する；（ｄ）レポーターアッセイでＴ細胞を活性化する；（ｅ）ジャーカット細胞のＩＬ−２産生を刺激する。
【００２１】
本発明は、ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合するマウスモノクローナル抗体（１０４Ｇ１２Ｅ１２Ｇ２）または抗原結合フラグメントを提供し、それぞれ配列番号３５、４８、及び６１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む。ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合するマウスモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントはまた、それぞれ配列番号７４、８７、及び１００のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み得る。一実施形態では、本発明の抗ヒトＴＩＧＩＴマウスモノクローナル抗体は、配列番号９及び２２のアミノ酸配列を含む１０４Ｇ１２Ｅ１２Ｇ２の重鎖及び軽鎖可変ドメインを含む。それは、これらの開示された配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、及び９５％の配列同一性を共有する配列を網羅する。別の実施形態では、マウスモノクローナル抗体１０４Ｇ１２Ｅ１２Ｇ２または抗原結合フラグメントは、以下の機能的特徴を含む：（ａ）表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ）により決定されるように２０ｎｍ以下のＫＤでヒトＴＩＧＩＴに結合する；（ｂ）カニクイザルＴＩＧＩＴに対して交差反応性がある；（ｃ）ヒトＴＩＧＩＴ及びそのリガンドＣＤ１５５間の相互作用を遮断する；（ｄ）レポーターアッセイでＴ細胞を活性化する；（ｅ）ジャーカット細胞のＩＬ−２産生を刺激する。
【００２２】
本発明は、ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合するマウスモノクローナル抗体（８３Ｇ６Ｈ１１Ｃ１２）または抗原結合フラグメントを提供し、それぞれ配列番号３６、４９、及び６２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む。ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合するマウスモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントはまた、それぞれ配列番号７５、８８、及び１０１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み得る。一実施形態では、本発明の抗ヒトＴＩＧＩＴマウスモノクローナル抗体は、配列番号１０及び２３のアミノ酸配列を含む８３Ｇ６Ｈ１１Ｃ１２の重鎖及び軽鎖可変ドメインを含む。それは、これらの開示された配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、及び９５％の配列同一性を共有する配列を網羅する。別の実施形態では、マウスモノクローナル抗体８３Ｇ６Ｈ１１Ｃ１２または抗原結合フラグメントは、以下の機能的特徴を含む：（ａ）表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ）により決定されるように２０ｎｍ以下のＫＤでヒトＴＩＧＩＴに結合する；（ｂ）カニクイザルＴＩＧＩＴに対して交差反応性がある；（ｃ）ヒトＴＩＧＩＴ及びそのリガンドＣＤ１５５間の相互作用を遮断する；（ｄ）レポーターアッセイでＴ細胞を活性化する；（ｅ）ジャーカット細胞のＩＬ−２産生を刺激する。
【００２３】
本発明は、ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合するマウスモノクローナル抗体（９２Ｅ９Ｄ４Ｂ４）または抗原結合フラグメントを提供し、それぞれ配列番号３７、５０、及び６３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む。ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合するマウスモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントはまた、それぞれ配列番号７６、８９、及び１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み得る。一実施形態では、本発明の抗ヒトＴＩＧＩＴマウスモノクローナル抗体は、配列番号１１及び２４のアミノ酸配列を含む９２Ｅ９Ｄ４Ｂ４の重鎖及び軽鎖可変ドメインを含む。それは、これらの開示された配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、及び９５％の配列同一性を共有する配列を網羅する。別の実施形態では、マウスモノクローナル抗体９２Ｅ９Ｄ４Ｂ４または抗原結合フラグメントは、以下の機能的特徴を含む：（ａ）表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ）により決定されるように２０ｎｍ以下のＫＤでヒトＴＩＧＩＴに結合する；（ｂ）カニクイザルＴＩＧＩＴに対して交差反応性がある；（ｃ）ヒトＴＩＧＩＴ及びそのリガンドＣＤ１５５間の相互作用を遮断する；（ｄ）レポーターアッセイでＴ細胞を活性化する；（ｅ）ジャーカット細胞のＩＬ−２産生を刺激する。
【００２４】
本発明は、ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合するマウスモノクローナル抗体（１００Ｃ４Ｅ７Ｄ１１）または抗原結合フラグメントを提供し、それぞれ配列番号３８、５１、及び６４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む。ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合するマウスモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントはまた、それぞれ配列番号７７、９０、及び１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み得る。一実施形態では、本発明の抗ヒトＴＩＧＩＴマウスモノクローナル抗体は、配列番号１２及び２５のアミノ酸配列を含む１００Ｃ４Ｅ７Ｄ１１の重鎖及び軽鎖可変ドメインを含む。配列番号１０５〜１０８のヒト化ＶＨ配列は、配列番号３８、５１、及び６４のＣＤＲを有し、配列番号１１３〜１１７のヒト化ＶＬ配列は、配列番号７７、９０、及び１０３のＣＤＲを有する。それは、これらの開示された配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、及び９５％の配列同一性を共有する配列を網羅する。別の実施形態では、配列番号１２及び１０５〜１０８のＶＨ配列のうちの１つならびに配列番号２５及び１１３〜１１７のＶＬ配列のうちの１つを組み合わせることにより作製される抗体であるマウスモノクローナル抗体１００Ｃ４Ｅ７Ｄ１１、または抗原結合フラグメントは、以下の機能的特徴を含む：（ａ）表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ）により決定されるように２０ｎｍ以下のＫＤでヒトＴＩＧＩＴに結合する；（ｂ）カニクイザルＴＩＧＩＴに対して交差反応性がある；（ｃ）ヒトＴＩＧＩＴ及びそのリガンドＣＤ１５５間の相互作用を遮断する；（ｄ）レポーターアッセイでＴ細胞を活性化する；（ｅ）ジャーカット細胞のＩＬ−２産生を刺激する。
【００２５】
本発明は、ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合するマウスモノクローナル抗体（６４Ｇ１Ｅ９Ｂ４）または抗原結合フラグメントを提供し、それぞれ配列番号３９、５２、及び６５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む。それらは、それぞれ配列番号７８、９１、及び１０４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列も含む。一実施形態では、本発明の抗ヒトＴＩＧＩＴマウスモノクローナル抗体は、配列番号１３及び２６のアミノ酸配列を含む６４Ｇ１Ｅ９Ｂ４の重鎖及び軽鎖可変ドメインを含む。一実施形態では、抗体は、配列番号５２の重鎖ＣＤＲに１つのアミノ酸置換を含み、置換が７Ｄ位で行われ、残基７ＤがＧに置換される。一実施形態では、抗体は、配列番号６５の重鎖ＣＤＲに１つのアミノ酸置換を含み、置換が８Ｍ位で行われ、残基８ＭがＦまたはＬに置換される。一実施形態では、抗体は、配列番号７８の軽鎖ＣＤＲに１つのアミノ酸置換を含み、置換が１Ｋ位で行われ、残基１ＫがＲに置換される。配列番号１０９〜１１２のヒト化ＶＨ配列は、配列番号３９、５２、及び６５のＣＤＲを有し、配列番号１１８のヒト化ＶＬ配列は、配列番号７８、９１、及び１０４のＣＤＲを有する。一部の実施形態では、上記のＣＤＲ置換は、配列番号１０９〜１１２のＶＨ配列の対応するＣＤＲで作製することができ：、上記のＣＤＲ置換は、配列番号１１８のＶＬ配列の対応するＣＤＲで作製することができる。それは、これらの開示された配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、及び９５％の配列同一性を共有する配列を網羅する。別の実施形態では、対応するＣＤＲが上述のＣＤＲ置換と置換された配列番号１３、１０９〜１１２、もしくは配列番号１０９〜１１２のＶＨ配列のうちの１つ及び、対応するＣＤＲが上述のＣＤＲ置換と置換された配列番号２６、１１８もしくは配列番号１１８のＶＬ配列のうちの１つを組み合わせることにより作製された抗体であるマウスモノクローナル抗体６４Ｇ１Ｅ９Ｂ４、または抗原結合フラグメントは、以下の機能的特徴を含む：（ａ）ヒトに結合する表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ）により決定されるように２０ｎｍ以下のＫＤを有するＴＩＧＩＴ；（ｂ）カニクイザルＴＩＧＩＴに対して交差反応性を有する；（ｃ）ヒトＴＩＧＩＴ及びそのリガンドＣＤ１５５間の相互作用を遮断する；（ｄ）レポーターアッセイでＴ細胞を活性化する；（ｅ）ジャーカット細胞におけるＩＬ−２産生を刺激する。
【００２６】
本出願の抗体または抗原結合フラグメントは、齧歯動物、キメラ、ヒト、部分的ヒト化、または完全ヒト化であり得る。それはまた、さらにＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ１、ＴＩＭ−３、またはＬＡＧ−３などの第２の抗原に特異的に結合することが可能である、第２の抗体部分を含む二重特異性であり得る。好ましくは、第２の抗体部分は、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）である。
【００２７】
さらに、本出願の単離抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合フラグメントのいずれか１つ、及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物が提供される。
【００２８】
本出願の別の態様は、上記の医薬組成物のいずれか１つの有効量を個体に投与することを含む、ＴＩＧＩＴ関連疾患を有する個体を処置する方法を提供する。一部の実施形態では、ＴＩＧＩＴ関連疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、結腸癌などの固形腫瘍である。一部の実施形態では、方法はさらに、手術、放射線、化学療法、免疫療法、ホルモン療法、またはそれらの組み合わせなどの追加のがん治療法を個体に投与することを含む。一部の実施形態では、ＴＩＧＩＴ関連疾患は、病原性感染である。一部の実施形態では、医薬組成物は、静脈内（ｉ．ｖ．）など、全身投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は、腫瘍内など、局所投与される。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【００２９】
本発明の他の態様、特徴、及び利点は、本発明の詳細な説明及びその好ましい実施形態及び添付の特許請求の範囲を含む、以下の開示から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１Ａ】ヒトＴＩＧＩＴで過剰発現されたＣＨＯ細胞に対する蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）による血清抗体力価試験を示す。血清を力価試験のために各免疫マウスから収集した（マウス＃８０８７）。試験の出血を、ヒトＴＩＧＩＴで過剰発現されたＣＨＯ細胞のＦＡＣＳ研究によりスクリーニングした。ＴＩＧＩＴ結合シグナルが高いマウスは、より高い力価を示し、細胞融合前の最後の追加免疫のために選択された。
【図１Ｂ】ヒトＴＩＧＩＴで過剰発現されたＣＨＯ細胞に対する蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）による血清抗体力価試験を示す。血清を力価試験のために各免疫マウスから収集した（マウス＃８１００）。試験の出血を、ヒトＴＩＧＩＴで過剰発現されたＣＨＯ細胞のＦＡＣＳ研究によりスクリーニングした。ＴＩＧＩＴ結合シグナルが高いマウスは、より高い力価を示し、細胞融合前の最後の追加免疫のために選択された。
【図１Ｃ】ヒトＴＩＧＩＴで過剰発現されたＣＨＯ細胞に対する蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）による血清抗体力価試験を示す。血清を力価試験のために各免疫マウスから収集した（マウス＃８７７１）。試験の出血を、ヒトＴＩＧＩＴで過剰発現されたＣＨＯ細胞のＦＡＣＳ研究によりスクリーニングした。ＴＩＧＩＴ結合シグナルが高いマウスは、より高い力価を示し、細胞融合前の最後の追加免疫のために選択された。
【図２Ａ】ヒトＴＩＧＩＴに対するハイブリドーマサブクローン由来の上清の結合を示す（８Ｆ２Ｄ８Ｅ７）。ハイブリドーマサブクローンから収集された上清を、ヒトＴＩＧＩＴで過剰発現されたＣＨＯ細胞のＦＡＣＳ研究によりスクリーニングした。ＴＩＧＩＴ結合シグナルの高いサブクローンを精製のために選択した。
【図２Ｂ】ヒトＴＩＧＩＴに対するハイブリドーマサブクローン由来の上清の結合を示す（１６Ｆ１０Ｈ１２Ｃ１１）。ハイブリドーマサブクローンから収集された上清を、ヒトＴＩＧＩＴで過剰発現されたＣＨＯ細胞のＦＡＣＳ研究によりスクリーニングした。ＴＩＧＩＴ結合シグナルの高いサブクローンを精製のために選択した。
【図２Ｃ】ヒトＴＩＧＩＴに対するハイブリドーマサブクローン由来の上清の結合を示す（１１Ｄ８Ｅ１２Ａ４）。ハイブリドーマサブクローンから収集された上清を、ヒトＴＩＧＩＴで過剰発現されたＣＨＯ細胞のＦＡＣＳ研究によりスクリーニングした。ＴＩＧＩＴ結合シグナルの高いサブクローンを精製のために選択した。
【図２Ｄ】ヒトＴＩＧＩＴに対するハイブリドーマサブクローン由来の上清の結合を示す（４８Ｂ５Ｇ４Ｅ１２）。ハイブリドーマサブクローンから収集された上清を、ヒトＴＩＧＩＴで過剰発現されたＣＨＯ細胞のＦＡＣＳ研究によりスクリーニングした。ＴＩＧＩＴ結合シグナルの高いサブクローンを精製のために選択した。
【図２Ｅ】ヒトＴＩＧＩＴに対するハイブリドーマサブクローン由来の上清の結合を示す（７０Ａ１１Ａ８Ｅ６）。ハイブリドーマサブクローンから収集された上清を、ヒトＴＩＧＩＴで過剰発現されたＣＨＯ細胞のＦＡＣＳ研究によりスクリーニングした。ＴＩＧＩＴ結合シグナルの高いサブクローンを精製のために選択した。
【図２Ｆ】ヒトＴＩＧＩＴに対するハイブリドーマサブクローン由来の上清の結合を示す（１３９Ｅ２Ｃ２Ｄ２）。ハイブリドーマサブクローンから収集された上清を、ヒトＴＩＧＩＴで過剰発現されたＣＨＯ細胞のＦＡＣＳ研究によりスクリーニングした。ＴＩＧＩＴ結合シグナルの高いサブクローンを精製のために選択した。
【図２Ｇ】ヒトＴＩＧＩＴに対するハイブリドーマサブクローン由来の上清の結合を示す（１０４Ｇ１２Ｅ１２Ｇ２）。ハイブリドーマサブクローンから収集された上清を、ヒトＴＩＧＩＴで過剰発現されたＣＨＯ細胞のＦＡＣＳ研究によりスクリーニングした。ＴＩＧＩＴ結合シグナルの高いサブクローンを精製のために選択した。
【図２Ｈ】ヒトＴＩＧＩＴに対するハイブリドーマサブクローン由来の上清の結合を示す（６４Ｇ１Ｅ９Ｂ４）。ハイブリドーマサブクローンから収集された上清を、ヒトＴＩＧＩＴで過剰発現されたＣＨＯ細胞のＦＡＣＳ研究によりスクリーニングした。ＴＩＧＩＴ結合シグナルの高いサブクローンを精製のために選択した。
【図２Ｉ】ヒトＴＩＧＩＴに対するハイブリドーマサブクローン由来の上清の結合を示す（８３Ｇ６Ｈ１１Ｃ１２）。ハイブリドーマサブクローンから収集された上清を、ヒトＴＩＧＩＴで過剰発現されたＣＨＯ細胞のＦＡＣＳ研究によりスクリーニングした。ＴＩＧＩＴ結合シグナルの高いサブクローンを精製のために選択した。
【図２Ｊ】ヒトＴＩＧＩＴに対するハイブリドーマサブクローン由来の上清の結合を示す（９２Ｅ９Ｄ４Ｂ４）。ハイブリドーマサブクローンから収集された上清を、ヒトＴＩＧＩＴで過剰発現されたＣＨＯ細胞のＦＡＣＳ研究によりスクリーニングした。ＴＩＧＩＴ結合シグナルの高いサブクローンを精製のために選択した。
【図２Ｋ】ヒトＴＩＧＩＴに対するハイブリドーマサブクローン由来の上清の結合を示す（１００Ｃ４Ｅ７Ｄ１１）。ハイブリドーマサブクローンから収集された上清を、ヒトＴＩＧＩＴで過剰発現されたＣＨＯ細胞のＦＡＣＳ研究によりスクリーニングした。ＴＩＧＩＴ結合シグナルの高いサブクローンを精製のために選択した。
【図２Ｌ】ヒトＴＩＧＩＴに対するハイブリドーマサブクローン由来の上清の結合を示す（１２８Ｅ３Ｇ７Ｆ５）。ハイブリドーマサブクローンから収集された上清を、ヒトＴＩＧＩＴで過剰発現されたＣＨＯ細胞のＦＡＣＳ研究によりスクリーニングした。ＴＩＧＩＴ結合シグナルの高いサブクローンを精製のために選択した。
【図２Ｍ】ヒトＴＩＧＩＴに対するハイブリドーマサブクローン由来の上清の結合を示す（１２１Ｃ２Ｆ１０Ｂ５）。ハイブリドーマサブクローンから収集された上清を、ヒトＴＩＧＩＴで過剰発現されたＣＨＯ細胞のＦＡＣＳ研究によりスクリーニングした。ＴＩＧＩＴ結合シグナルの高いサブクローンを精製のために選択した。
【図３Ａ】ＣＨＯ−Ｋ１細胞で発現されたヒトＴＩＧＩＴへのマウス抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体の結合を示す。
【図３Ｂ】ＣＨＯ−Ｋ１細胞で発現されたヒトＴＩＧＩＴへのマウス抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体の結合を示す。
【図３Ｃ】ＣＨＯ−Ｋ１細胞で発現されたカニクイザルＴＩＧＩＴへのマウス抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体の結合を示す。
【図４Ａ】マウス抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体とＰＶＲ組み換えタンパク質との間のヒトＴＩＧＩＴに対する競合的結合を示す。
【図４Ｂ】マウス抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体とＰＶＲ組み換えタンパク質との間のヒトＴＩＧＩＴに対する競合的結合を示す。
【図５Ａ】Ｔ細胞で過剰発現されたＴＩＧＩＴへのＰＶＲの結合により抑制されるＴ細胞活性化に対するマウス抗ヒトＴＩＧＩＴ抗体の中和効果を示す。ルシフェラーゼレポーターシグナルにより示されるＴ細胞活性化を示した。
【図５Ｂ】Ｔ細胞で過剰発現されたＴＩＧＩＴへのＰＶＲの結合により抑制されるＴ細胞活性化に対するマウス抗ヒトＴＩＧＩＴ抗体の中和効果を示す。ＩＬ−２分泌により示されるＴ細胞活性化を示した。
【図６Ａ】ＣＨＯ−Ｋ１細胞で発現されたヒトＴＩＧＩＴへの、キメラ抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体またはヒト化抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体の結合を示す。
【図６Ｂ】ＣＨＯ−Ｋ１細胞で発現されたカニクイザルＴＩＧＩＴへの、キメラ抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体またはヒト化抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体の結合を示す。
【図７】キメラ抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体またはヒト化抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体とＰＶＲ組み換えタンパク質との間のヒトＴＩＧＩＴに対する競合的結合を示す。
【図８】Ｔ細胞活性化に対するキメラ抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体またはヒト化抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体の中和効果を示す。
【図９Ａ】Ｃ５７ＢＬ／６マウス中にヒトＴＩＧＩＴ  ＫＩマウスを有するＭＣ３８同系モデルにおけるヒト化抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体のｉｎ  ｖｉｖｏ有効性実験の結果を示す。
【図９Ｂ】Ｃ５７ＢＬ／６マウス中にヒトＴＩＧＩＴ  ＫＩマウスを有するＭＣ３８同系モデルにおけるヒト化抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体のｉｎ  ｖｉｖｏ有効性実験の結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
本出願は、抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体及びその適用を提供する。本開示は、マウス抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体クローンの所定の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）の遺伝子配列に関する、７０Ａ１１Ａ８Ｅ６、１１Ｄ８Ｅ１２Ａ４、１６Ｆ１０Ｈ１２Ｃ１１、８Ｆ２Ｄ８Ｅ７、４８Ｂ５Ｇ４Ｅ１２、１３９Ｅ２Ｃ２Ｄ２、１２８Ｅ３Ｇ７Ｆ５、１２１Ｃ２Ｆ１０Ｂ５、１０４Ｇ１２Ｅ１２Ｇ２、８３Ｇ６Ｈ１１Ｃ１２、９２Ｅ９Ｄ４Ｂ４、１００Ｃ４Ｅ７Ｄ１１、及び６４Ｇ１Ｅ９Ｂ４。それはまた、これらのマウス抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体クローンの一部に対するヒト化または翻訳後修飾後の、所定の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）の遺伝子配列に関する。本開示は、抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体の生成方法に関する。
【００３２】
本出願は、開示されたクローンの重鎖及び軽鎖の可変ドメインをヒトＩｇＧ１の定常領域と融合させることにより、キメラ抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体を提供する。本出願は、マウス抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体クローンの重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）のヒト化形態を提供する。ヒト化抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体は、開示されたクローンの重鎖及び軽鎖のヒト化可変ドメインをヒトＩｇＧ１の定常領域と融合させることにより生成された。
【００３３】
Ｉ．定義
本発明の実施は、特に反対の指示がない限り、当業者の範囲内のウイルス学、免疫学、微生物学、分子生物学、及び組み換えＤＮＡ技術の従来の方法を用いることになり、それらの多くは、例示の目的で以下に記載される。そのような技術は、文献で完全に説明される。例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｒ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（２００９）；Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ，Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ  ｅｄ．，Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９５；Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ａｎｄ  Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００１）；Ｍａｎｉａｔｉｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（１９８２）；ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ｖｏｌ．Ｉ  ＆  ＩＩ（Ｄ．Ｇｌｏｖｅｒ，ｅｄ．）；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｎ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）；Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｈａｍｅｓ  ＆  Ｓ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．，１９８５）；Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｈａｍｅｓ  ＆  Ｓ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．，１９８４）；Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．，１９８６）；Ｐｅｒｂａｌ，Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）及び他の類似の参考文献を参照のこと。
【００３４】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈に別途明示のない限り、複数の指示対象を含むことに留意しなければならない。
【００３５】
別途指示のない限り、一連の要素に先行する「少なくとも」という用語は、一連の全ての要素を指すと理解されるべきである。当業者らは、本明細書に記載される本発明の特定の実施形態に対する多くの等価物を認識するか、または日常的な実験のみを使用して確認することができるであろう。そのような等価物は、本発明に包含されることが意図される。
【００３６】
文脈に別途要求のない限り、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という単語ならびに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」及び「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変形形態に伴う本明細書及び特許請求の範囲の全体にわたって、所定の整数もしくはステップまたは整数もしくはステップのグループを含むが、任意の他の整数もしくはステップまたは整数もしくはステップのグループを除外しないことを意味すると理解されるであろう。本明細書で使用される時、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、「含有すること（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」もしくは「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語で、または、多くの場合、本明細書で使用される時、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」という用語で置き換えることができる。
【００３７】
本明細書で使用される場合、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」は、請求項の要素で詳述されない任意の要素、ステップ、または成分を除外する。本明細書で使用される場合、「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」は、請求項の基本的且つ新規の特徴に実質的に影響を与えない物質またはステップを除外しない。本出願の態様または実施形態との関連において、本明細書で使用される時はいつでも、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含有すること（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、及び「有すること（ｈａｖｉｎｇ）」という上述の用語のいずれも、開示の範囲を変更するために、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」または「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」という用語で置き換えることができる。
【００３８】
本明細書で使用される場合、複数の列挙された要素間の接続用語「及び／または」は、個々の選択肢及び組み合わされた選択肢の両方を包含すると理解される。例えば、２つの要素が「及び／または」で結合されている場合、最初の選択肢は、２番目の要素なしの最初の要素の適用性を指す。２番目の選択肢は、最初の要素なしの２番目の要素の適用性を指す。３番目の選択肢は、同時に最初の要素及び２番目の要素の適用性を指す。これらの選択肢のいずれか１つは、意味内に入り、それにより、本明細書で使用される「及び／または」という用語の要件を満足すると理解される。複数の選択肢の同時適用性も、意味の範囲内に入り、それにより、「及び／または」という用語の要件を満たすものと理解される。
【００３９】
別途記載のない限り、本明細書に記載の濃度または濃度範囲などの任意の数値は、全ての場合において、「約」という用語により変更されるものとして理解されるべきである。従って、数値には通常、列挙された値の±１０％を含む。例えば、１ｍｇ／ｍＬの濃度は、０．９ｍｇ／ｍＬ〜１．１ｍｇ／ｍＬを含む。同様に、１ｍｇ／ｍＬ〜１０ｍｇ／ｍＬの濃度範囲は、０．９ｍｇ／ｍＬ〜１１ｍｇ／ｍＬを含む。本明細書で使用される場合、数値範囲の使用は、文脈が別途明示しない限り、可能な部分範囲全て、そのような範囲内の整数及び値の分数を含むその範囲内の個々の数値全てを明示的に含む。
【００４０】
「エピトープ」という用語は、抗体への特異的な結合が可能なタンパク質決定基を意味する。エピトープは通常、アミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面グループからなり、通常、特定の３次元構造特性及び特定の電荷特性を有する。立体配座エピトープ及び非立体配座エピトープは、後者ではなく前者への結合が変性溶媒の存在下で失われるという点で区別される。
【００４１】
本明細書で使用される場合、「処置」または「処置すること」は、臨床結果を含む有益なまたは所望の結果を得るためのアプローチである。本発明の目的のために、有益または所望の臨床結果は、以下のうちの１つ以上を含むが、これらに限定されない：疾患から生じる１つ以上の症状の緩和、疾患の程度の軽減、疾患の安定化（例えば、疾患の予防または疾患の悪化の遅延）、疾患の拡大の予防または疾患の拡大（例えば、転移）の遅延、疾患の防止または疾患の再発の遅延、疾患の進行の遅延または減速、病状の改善、疾患の（一部または全部）の寛解の提供、疾患の処置に必要な１つ以上の他の薬剤の用量の減少、疾患の進行の遅延、生活の質の向上、及び／または生存期間の延長。疾患の病理学的結果の軽減も、「処置」に包含される。本発明の方法は、これらの処置の態様のうちのいずれか１つ以上を企図する。
【００４２】
本明細書で使用される「有効量」という用語は、特定の障害、状態、または疾患を処置する、例えば、症状のうちの１つ以上を改善、緩和、軽減、及び／または遅延させるのに十分な薬剤または薬剤の組み合わせの量を指す。がんに関して、有効量は、腫瘍を収縮させる及び／または腫瘍の成長速度を減少させる（例えば、腫瘍成長を抑制する）か、または他の望ましくない細胞増殖を防止または遅延させるのに十分な量を含む。一部の実施形態では、有効量は、発達を遅延させるのに十分な量である。一部の実施形態では、有効量は、再発を防止または遅延させるのに十分な量である。有効量は、１回以上の投与で投与することができる。薬物または組成物の有効量は、（ｉ）がん細胞数を低減させ；（ｉｉ）腫瘍サイズを低減させ；（ｉｉｉ）末梢器官へのがん細胞の浸潤を抑制し、遅らせ、ある程度減速させ、好ましくは停止させ；（ｉｖ）腫瘍転移を抑制する（すなわち、ある程度減速させ、好ましくは、停止させ）；（ｖ）腫瘍の成長を抑制し；（ｖｉ）腫瘍の発生及び／または再発を防止もしくは遅延させ；及び／または、（ｖｉｉ）がんに関連する症状のうちの１つ以上をある程度緩和させ得る。
【００４３】
「抗体」、「抗体部分」、または「抗体構築物」という用語は、最も広い意味で使用され、所望の抗原結合活性を示す限り、限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、全長抗体、及びその抗原結合フラグメントを含む種々の抗体構造を包含する。
【００４４】
基本的な４鎖抗体ユニットは、２つの同一の軽（Ｌ）鎖及び２つの同一の重（Ｈ）鎖からなヘテロ四量体糖タンパク質である。ＩｇＭ抗体は、Ｊ鎖と呼ばれるさらなるポリペプチドと共に基本的なヘテロ四量体ユニットの５つからなり、１０の抗原結合部位を含有するが、ＩｇＡ抗体は、Ｊ鎖と組み合わせて多価集団を形成するために重合し得る基本的な４鎖ユニットのうちの２〜５つを含む。ＩｇＧの場合、４鎖ユニットは一般に、約１５０，０００ダルトンである。各Ｌ鎖は、１つの共有ジスルフィド結合によりＨ鎖に連結されているが、２つのＨ鎖は、Ｈ鎖アイソタイプに応じて１つ以上のジスルフィド結合により互いに連結されている。各Ｈ鎖及びＬ鎖は、規則的な間隔の鎖内ジスルフィドブリッジも有する。各Ｈ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン（ＶＨ）、続いて、α鎖及びγ鎖のそれぞれに対する３つの定常ドメイン（ＣＨ）ならびにμアイソタイプ及びεアイソタイプに対する４つのＣＨドメインを有する。各Ｌ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン（ＶＬ）、続いて、他端に定常ドメインを有する。ＶＬは、ＶＨとアラインされ、ＣＬは、重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）とアラインされる。特定のアミノ酸残基は、軽鎖及び重鎖可変ドメイン間の界面を形成すると考えられている。ＶＨ及びＶＬが一緒にペアリングされると、単一の抗原結合部位が形成される。抗体の種々のクラスの構造及び特性について、例えば、Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｄａｎｉｅｌ  Ｐ．Ｓｔｉｅｓ，Ａｂｂａ  Ｉ．Ｔｅｒｒ  ａｎｄ  Ｔｒｉｓｔｒａｍ  Ｇ．Ｐａｒｓｏｌｗ（ｅｄｓ），Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ＆  Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，Ｃｏｎｎ．，１９９４，ｐａｇｅ  ７１  ａｎｄ  Ｃｈａｐｔｅｒ  ６を参照のこと。任意の脊椎動物種由来のＬ鎖は、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ及びラムダと呼ばれる２つの明確に異なるタイプの１つに割り当てることができる。重鎖の定常ドメイン（ＣＨ）のアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは、異なるクラスまたはアイソタイプに割り当てることができる。それぞれα、δ、ε、γ、及びμと称される重鎖を有する免疫グロブリンの５つのクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭがある。γクラス及びαクラスはさらに、ＣＨ配列及び機能と比較的小さな差異に基づいてサブクラスに分類され、例えば、ヒトは、以下のサブクラス：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２を発現する。
【００４５】
「重鎖のみの抗体」または「ＨＣＡｂ」という用語は、重鎖を含むが、４鎖抗体に通常見られる軽鎖を欠く機能的抗体を指す。ラクダ科動物（例えば、ラクダ、ラマ、またはアルパカ）は、ＨＣＡｂを生産することが知られる。
【００４６】
「単一ドメイン抗体」または「ｓｄＡｂ」という用語は、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する単一の抗原結合ポリペプチドを指す。ｓｄＡｂ単独は、対応するＣＤＲ含有ポリペプチドとペアリングすることなく、抗原に結合することが可能である。一部の場合では、単一ドメイン抗体は、ラクダ科ＨＣＡｂから操作され、それらの重鎖可変ドメインは、本明細書では、「ＶＨＨ」（重鎖抗体の重鎖の可変ドメイン）と呼ばれる。一部のＶＨＨは、ナノボディとしても知られ得る。ラクダ科ｓｄＡｂは、既知の最小の抗原結合抗体フラグメントの１つである（例えば、Ｈａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６３：４４６−８（１９９３）；Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３７４：１６８−７３（１９９５）；Ｈａｓｓａｎｚａｄｅｈ−Ｇｈａｓｓａｂｅｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ（Ｌｏｎｄ），８：１０１３−２６（２０１３）を参照のこと）。基本的なＶＨＨは、Ｎ末端からＣ末端に、以下の構造：ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４を有し、ＦＲ４〜ＦＲ１は、それぞれフレームワーク領域１〜４を指し、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３は、相補性決定領域１〜３を指す。
【００４７】
「単離」抗体は、その産生環境の構成要素（例えば、天然または組み換え）から同定、分離、及び／または回収されているものである。好ましくは、単離ポリペプチドは、その生産環境からの他の全ての構成要素との関連がない。組み換えトランスフェクト細胞から生じるものなどの、生産環境の汚染構成要素は、抗体の研究、診断、または治療的使用を通常妨害する物質であり、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質性または非タンパク質性溶質を含み得る。好ましい実施形態では、ポリペプチドは、（１）例えば、Ｌｏｗｒｙ法により決定されるように、抗体の９５重量％超まで、一部の実施形態では、９９重量％超まで；（２）スピニングカップシーケンサーを使用して、Ｎ末端もしくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで；または、（３）クーマシーブルーまたは、好ましくは、銀染色を使用する非還元または還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥにより均質まで、精製されるであろう。抗体の天然環境の少なくとも１つの構成要素が存在しないので、単離抗体は、組み換え細胞内にｉｎ  ｓｉｔｕで抗体を含む。しかし、通常、単離ポリペプチド、抗体、または構築物は、少なくとも１つの精製ステップで調製されるであろう。
【００４８】
抗体の「可変領域」または「可変ドメイン」は、抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端ドメインを指す。重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ、「ＶＨ」及び「ＶＬ」と呼ぶことができる。これらのドメインは一般に、（同じクラスの他の抗体と比較して）抗体の最も可変の部分であり、抗原結合部位を含有する。ラクダ科種の重鎖のみ抗体は、「ＶＨＨ」と呼ばれる単一重鎖可変領域を有する。従って、ＶＨＨは、特別なタイプのＶＨである。
【００４９】
「可変」という用語は、可変ドメインの特定のセグメントが抗体間で配列が大きく異なるという事実を指す。Ｖドメインは、抗原結合を媒介し、特定の抗原に対する特定の抗体の特異性を定義する。しかし、可変性は、可変ドメインの全スパンにわたって均一に分布しない。その代わりに、それは、軽鎖及び重鎖可変ドメインの両方に相補性決定領域（ＣＤＲ）または超可変領域（ＨＶＲ）と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインはそれぞれ、３つのＣＤＲにより連結されているβシート立体配置を主に採用する４つのＦＲ領域を含み、これは、βシート構造を連結するループを形成し、一部の場合では、βシート構造を形成する。各鎖のＣＤＲは、ＦＲ領域により近接して結び付けられ、他の鎖のＣＤＲと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）を参照のこと）。定常ドメインは、抗原への抗体の結合には直接関与しないが、抗体依存性細胞毒性への抗体の関与など、種々のエフェクター機能を発揮する。
【００５０】
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指す、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る、起こり得る天然の変異及び／または翻訳後修飾（例えば、異性化、脱アミド化）を除いて同一である。モノクローナル抗体は、非常に特異的であり、単一の抗原部位に対して向けられる。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を通常含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、それらがハイブリドーマ培養で合成され、他の免疫グロブリンで汚染されていないという点で有利である。「モノクローナル」という修飾語は、実質的に均一な抗体集団から得られるような抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈されるべきではない。例えば、用途に応じて使用されるべきモノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ法（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５−９７（１９７５）；Ｈｏｎｇｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，１４（３）：２５３−２６０（１９９５），Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ  ｅｄ．１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１））、組み換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと）、ファージディスプレイ技術（例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）；Ｓｉｄｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）；Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）；及びＬｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）を参照のこと））；ならびに、ヒト免疫グロブリン遺伝子座またはヒト免疫グロブリン配列をコードする遺伝子の一部または全部を有する動物においてヒトまたはヒト様抗体を産生する技術（例えば、ＷＯ１９９８／２４８９３；ＷＯ１９９６／３４０９６；ＷＯ１９９６／３３７３５；ＷＯ１９９１／１０７４１；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６２：２５５−２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：３３（１９９３）；米国特許第５，５４５，８０７号；同第５，５４５，８０６号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；及び同第５，６６１，０１６号；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６−８５９（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８１２−８１３（１９９４）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８４５−８５１（１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８２６（１９９６）；ならびに、Ｌｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｈｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３（１９９５）を参照のこと）を含む様々な技術で作製することができる。
【００５１】
「全長抗体」、「インタクト抗体」、または「完全抗体」という用語は、抗体フラグメントとは対照的に、実質的にインタクトな形態の抗体を指すために互換的に使用される。具体的には、全長４鎖抗体は、Ｆｃ領域を含む重鎖及び軽鎖を有するものを含む。全長重鎖のみ抗体は、重鎖（例えば、ＶＨＨ）及びＦｃ領域を含む。定常ドメインは、天然配列定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列多様体であり得る。一部の場合では、インタクト抗体は、１つ以上のエフェクター機能を有し得る。
【００５２】
「抗体フラグメント」は、インタクト抗体の一部、好ましくは、インタクト抗体の抗原結合及び／または可変領域を含む。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖフラグメント；ダイアボディ；線状抗体（米国特許第５，６４１，８７０号、実施例２；Ｚａｐａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７−１０６２［１９９５］を参照のこと）；一本鎖抗体分子；単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）、及び抗体フラグメントから形成される多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。抗体のパパイン消化により、「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれる２つの同一の抗原結合フラグメント及び容易に結晶化する能力を表す名称である残りの「Ｆｃ」フラグメントが産生された。Ｆａｂフラグメントは、Ｈ鎖の可変領域ドメイン（ＶＨ）及び１つの重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）と一緒にＬ鎖全体からなる。各Ｆａｂフラグメントは、抗原結合に関して一価であり、すなわち、それは、単一抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理は、異なる抗原結合活性を有する２つのジスルフィド連結されているＦａｂフラグメントに、おおよそ対応する単一の大きなＦ（ａｂ’）２フラグメントを生じ、依然として、抗原を架橋することが可能である。Ｆａｂ’フラグメントは、抗体ヒンジ領域由来の１つ以上のシステインを含む、ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に、いくつかの追加の残基を有することでＦａｂフラグメントとは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を持つＦａｂ’の本明細書での名称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体フラグメントは元々、それらの間にヒンジシステインを有するＦａｂ’フラグメントのペアとして生成された。抗体フラグメントの他の化学的カップリングも知られている。
【００５３】
Ｆｃフラグメントは、ジスルフィドにより結合している両方のＨ鎖のカルボキシ末端部分を含む。抗体のエフェクター機能は、特定のタイプの細胞に見られるＦｃ受容体（ＦｃＲ）によっても認識される領域であるＦｃ領域の配列により決定される。
【００５４】
「定常ドメイン」という用語は、抗原結合部位を含有する可変ドメインである、免疫グロブリンの他の部分と比較して、より保存されたアミノ酸配列を有する免疫グロブリン分子の部分を指す。定常ドメインは、重鎖のＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３ドメイン（一括して、ＣＨ）ならびに軽鎖のＣＨＬ（またはＣＬ）ドメインを含有する。
【００５５】
任意の哺乳動物種の抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（「κ」）及びラムダ（「λ」）と呼ばれる２つの明確に異なるタイプのうちの１つに割り当てることができる。
【００５６】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識部位及び抗原結合部位を含有する最小の抗体フラグメントである。このフラグメントは、密な非共有結合で、１つの重鎖可変領域ドメイン及び１つの軽鎖可変領域ドメインの二量体からなる。これらの２つのドメインの折りたたみから、抗原結合のアミノ酸残基に寄与し、抗体に抗原結合特異性を付与する６つの超可変ループ（Ｈ鎖及びＬ鎖からそれぞれ３つのループ）が生ずる。しかし、単一可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）でさえ、結合部位全体よりも低い親和性ではあるが、抗原を認識及び結合する能力を有する。
【００５７】
「ｓＦｖ」とも略される「一本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」は、単一のポリペプチド鎖に連結されているＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含む抗体フラグメントである。好ましくは、ｓＦｖポリペプチドはさらに、ｓＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にする、ＶＨドメイン及びＶＬドメイン間にポリペプチドリンカーを含む。ｓＦｖの概説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照のこと。
【００５８】
本明細書に記載の抗体の「機能的フラグメント」は、ＦｃＲ結合能を保持するかまたは修飾している、インタクト抗体の抗原結合領域もしくは可変領域または抗体のＦｃ領域を一般に含む、インタクト抗体の一部を含む。抗体フラグメントの例としては、線形抗体、単鎖抗体分子、及び抗体フラグメントから形成された多重特異性抗体を含む。
【００５９】
「ダイアボディ」という用語は、Ｖドメインの鎖内ペアリングではなく鎖間ペアリングが達成され、それにより、二価フラグメント、すなわち、２つの抗原結合部位を有するフラグメント、がもたらされように、ＶＨドメイン及びＶＬドメイン間に短いリンカー（約５〜１０残基）を有するｓＦｖフラグメント（前の段落を参照のこと）を構築することにより調製される小さい抗体フラグメントを指す。二重特異性ダイアボディは、２つの抗体のＶＨドメイン及びＶＬドメインが異なるポリペプチド鎖に存在する２つの「クロスオーバー」ｓＦｖフラグメントのヘテロダイマーである。ダイアボディは、例えば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１；Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８（１９９３）にさらに詳細に記載される。
【００６０】
本明細書のモノクローナル抗体は具体的には、重鎖及び／または軽鎖の一部が特定の種に由来するかまたは特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一または相同であるが、鎖（複数可）の残りが別の種に由来するかまたは別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一または相同である「キメラ」抗体（免疫グロブリン）、ならびに、所望の生物活性を示す限り、そのような抗体のフラグメントを含む（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４））。「ヒト化抗体」は、「キメラ抗体」のサブセットとして使用される。
【００６１】
非ヒト（例えば、ラマまたはラクダ）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含有する抗体である。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、レシピエントのＣＤＲ（以下で定義）由来の残基がマウス、ラット、ウサギ、ラクダ、ラマ、アルパカ、または所望の特異性、親和性、及び／または能力を有する非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲ由来の残基で置換されている、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。一部の場合では、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク（「ＦＲ」）残基は、対応する非ヒト残基で置き換えられている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体には見られない残基を含み得る。これらの修飾は、結合親和性などの抗体性能をさらに改善するために行うことができる。一般に、ヒト化抗体は、超可変ループの全てまたはほぼ全てが非ヒト免疫グロブリン配列のものに対応する、ＦＲ領域の全てまたはほぼ全てがヒト免疫グロブリン配列のものである、少なくとも１つ、通常は２つの可変ドメインをほぼ全て含むであろう。但し、ＦＲ領域は、結合親和性、異性化、免疫原性などの抗体性能を改善する１つ以上の個々のＦＲ残基の置換を含み得る。ＦＲ中のこれらのアミノ酸置換数は通常、Ｈ鎖では６以下であり、Ｌ鎖では３以下である。ヒト化抗体は、任意に、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、通常は、ヒト免疫グロブリンの定常領域、の少なくとも一部も含むであろう。さらなる詳細については、例えば、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９（１９８８）；及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６（１９９２）を参照のこと。例えば、Ｖａｓｗａｎｉ  ａｎｄ  Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ａｎｎ．Ａｌｌｅｒｇｙ，Ａｓｔｈｍａ  ＆  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１：１０５−１１５（１９９８）；Ｈａｒｒｉｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ  ２３：１０３５−１０３８（１９９５）；Ｈｕｒｌｅ  ａｎｄ  Ｇｒｏｓｓ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．５：４２８−４３３（１９９４）；ならびに米国特許第６，９８２，３２１号及び同第７，０８７，４０９号も参照のこと。
【００６２】
「ヒト抗体」は、ヒトにより産生される抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有する抗体であり、及び／または、本明細書に開示されるように、ヒト抗体を作製するための技術のいずれかを使用して作製されている。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を明確に除外する。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリーを含む、当該技術分野で既知の種々の技術を使用して生成することができる。Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１（１９９１）；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１（１９９１）。Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）；Ｂｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７（１）：８６−９５（１９９１）に記載される方法も、ヒトモノクローナル抗体の調製に利用可能である。ｖａｎ  Ｄｉｊｋ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，５：３６８−７４（２００１）も参照のこと。ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答してそのような抗体を産生するように改変されているが、その内因性遺伝子座が無効化されているトランスジェニック動物、例えば、免疫化ゼノマウス、に抗原を投与することにより調製することができる（例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術に関する米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号を参照のこと）。例えば、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術により生成されたヒト抗体に関するＬｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７−３５６２（２００６）も参照のこと。
【００６３】
本明細書で使用される時の「超可変領域」、「ＨＶＲ」、または「ＨＶ」という用語は、配列が超可変であり、及び／または構造的に定義されるループを形成する抗体可変ドメインの領域を指す。一般に、単一ドメイン抗体は、３つのＨＶＲ（またはＣＤＲ）：ＨＶＲ１（またはＣＤＲ１）、ＨＶＲ２（またはＣＤＲ２）、及びＨＶＲ３（またはＣＤＲ３）を含む。ＨＶＲ３（またはＣＤＲ３）は、３つのＨＶＲの中で最も多様性を示し、抗体に良好な特異性を付与する独自の役割を果たしていると考えられる。例えば、Ｈａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６３：４４６−４４８（１９９３）；Ｓｈｅｒｉｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．３：７３３−７３６（１９９６）を参照のこと。
【００６４】
「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」という用語は、Ｋａｂａｔシステムにより定義されるような超可変領域を指すために使用される。Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）を参照のこと。
【００６５】
多数のＨＶＲの図解が使用され、本明細書に包含される。Ｋａｂａｔ相補性決定領域（ＣＤＲ）は、配列変化に基づいており、最も一般に使用される（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））。その代わりに、Ｃｈｏｔｈｉａは、構造的ループの位置を指す（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））。ＡｂＭ  ＨＶＲは、Ｋａｂａｔ  ＨＶＲ及びＣｈｏｔｈｉａ構造的ループ間の中間物を表し、Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアにより使用される。「接触」ＨＶＲは、利用可能な複雑な結晶構造の分析に基づく。これらのＨＶＲのそれぞれからの残基を、以下の表１に示される。
【表１】
2021510710.tif 000002
【００６６】
ＨＶＲは、「拡張ＨＶＲ」を次の通り含み得る：ＶＬに２４〜３６または２４〜３４（Ｌ１）、４６〜５６または５０〜５６（Ｌ２）、及び８９〜９７または８９〜９６（Ｌ３）ならびにＶＨに２６〜３５（Ｈ１）、５０〜６５または４９〜６５（Ｈ２）、及び９３〜１０２、９４〜１０２、または９５〜１０２（Ｈ３）。可変ドメイン残基は、これらの定義のそれぞれについて、上掲のＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．に従って番号付けされる。
【００６７】
単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）のアミノ酸残基は、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０００  Ｊｕｎ．２３；２４０（１−２）：１８５−１９５の論文のラクダ科動物由来のＶＨＨドメインに適用されるように、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．により与えられるＶＨドメインに対する一般的なナンバリングに従って番号付けされる（“Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ”，ＵＳ  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１）。このナンバリングによれば、ＶＨＨのＦＲ１は、１〜３０位にアミノ酸残基を含み、ＶＨＨのＣＤＲ１は、３１〜３５位にアミノ酸残基を含み、ＶＨＨのＦＲ２は、３６〜４９位にアミノ酸を含み、ＶＨＨのＣＤＲ２は、５０〜６５位にアミノ酸残基を含み、ＶＨＨのＦＲ３は、６６〜９４位にアミノ酸残基を含み、ＶＨＨのＣＤＲ３は、９５〜１０２位にアミノ酸残基を含み、ＶＨＨのＦＲ４は、１０３〜１１３位にアミノ酸残基を含む。この点で、ＶＨドメイン及びＶＨＨドメインに対し、当該技術分野で既知のように、ＣＤＲのそれぞれにおけるアミノ酸残基の総数が変動し得、Ｋａｂａｔナンバリングで示されるアミノ酸残基の総数に対応することができない（つまり、Ｋａｂａｔナンバリングによる１つ以上の位置が、実際の配列において占有することができないか、または、実際の配列が、Ｋａｂａｔナンバリングで許容される数より多くのアミノ酸残基を含み得る）という点に留意すべきである。
【００６８】
「Ｋａｂａｔのような可変ドメイン残基ナンバリング」または「Ｋａｂａｔのようなアミノ酸位置ナンバリング」という表現及びそれらの変形形態は、上掲のＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．の抗体の編集物の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインに使用されるナンバリングシステムを指す。このナンバリングシステムを使用すると、実際の線状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲまたはＨＶＲの短縮またはそれらへの挿入に対応する、より少ないまたは追加のアミノ酸を含有し得る。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後に単一アミノ酸挿入物（Ｋａｂａｔによる残基５２ａ）及び重鎖ＦＲ残基８２の後に挿入された残基（例えば、Ｋａｂａｔによる残基８２ａ、８２ｂ、及び８２ｃなど）を含み得る。残基のＫａｂａｔナンバリングは、「標準の」Ｋａｂａｔナンバリング配列を有する抗体の配列の相同性の領域でのアラインメントにより、所与の抗体について決定することができる。
【００６９】
本明細書では別途指示のない限り、免疫グロブリン重鎖の残基のナンバリングは、上掲のＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．のようなＥＵインデックスのものである。「ＫａｂａｔのようなＥＵインデックス」は、ヒトＩｇＧ１  ＥＵ抗体の残基ナンバリングを指す。
【００７０】
「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書で定義されるようなＨＶＲ残基以外の可変ドメイン残基である。
【００７１】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」または「アクセプターヒトフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般に発生するアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからのものである。一般に、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈＥｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）のようなサブグループである。例としては、ＶＬが挙げられ、サブグループは、上掲のＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．のようなサブグループカッパＩ、カッパＩＩ、カッパＩＩＩ、またはカッパＩＶであり得る。さらに、ＶＨの場合、サブグループは、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．のようなサブグループＩ、サブグループＩＩ、またはサブグループＩＩＩであり得る。あるいは、ヒトコンセンサスフレームワークは、例えば、ヒトフレームワーク残基がドナーフレームワーク配列を種々のヒトフレームワーク配列の集合とアラインすることによるドナーフレームワークとの相同性に基づいて選択される時の、上記の特定の残基に由来することができる。ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含み得るか、または既存のアミノ酸配列変化を含有し得る。一部の実施形態では、既存のアミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、または２以下である。
【００７２】
「親和性成熟」抗体は、それらの変更（複数可）を有さない親抗体と比較して、抗原に対する抗体の親和性の改善をもたらす、その１つ以上のＣＤＲにおける１つ以上の変更を伴うものである。一部の実施形態では、親和性成熟抗体は、標的抗原に対してナノモルまたはさらにピコモルの親和性を有する。親和性成熟抗体は、当該技術分野で既知の手順により生成される。例えば、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３（１９９２）は、ＶＨドメイン及びＶＬドメインシャッフリングによる親和性成熟について記載する。ＣＤＲ及び／またはフレームワーク残基のランダム変異導入は、例えば、Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：３８０９−３８１３（１９９４）；Ｓｃｈｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｅ  １６９：１４７−１５５（１９９５）；Ｙｅｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４−２００４（１９９５）；Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０−９（１９９５）；及びＨａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９−８９６（１９９２）により記載される。
【００７３】
本明細書で使用される場合、「特異的に結合する」、「特異的に認識する」、または「特異的な」という用語は、標的及び抗原結合タンパク質（例えば、ｍＡｂ）間の結合などの測定可能及び再現可能な相互作用を指し、これは、生体分子を含む分子の不均一な集団の存在下で標的の存在が決定的である。例えば、（エピトープであり得る）標的と特異的に結合する抗原結合タンパク質（例えば、ｍＡｂ）は、他の標的と結合するよりも、より大きい親和性で、より大きい結合活性、より容易に、及び／またはより長い期間で、この標的と結合する抗原結合タンパク質（例えば、ｍＡｂ）である。一部の実施形態では、無関係な標的への抗原結合タンパク質（例えば、ｍＡｂ）の結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）で測定された対象への抗原結合タンパク質（例えば、ｍＡｂ）の結合の約１０％未満である。一部の実施形態では、標的と特異的に結合する抗原結合タンパク質（例えば、ｍＡｂ）は、≦１０−５Ｍ、≦１０−６Ｍ、≦１０−７Ｍ、≦１０−８Ｍ、≦１０−９Ｍ、≦１０−１０Ｍ、≦１０−１１Ｍ、または≦１０−１２Ｍの解離定数（ＫＤ）を有する。一部の実施形態では、抗原結合タンパク質は、異なる種由来のタンパク質間で保存されているタンパク質上のエピトープと特異的に結合する。一部の実施形態では、特異的結合は、排他的結合を含み得るが、必要はない。
【００７４】
「特異性」という用語は、抗原の特定のエピトープに対する抗原結合タンパク質（例えば、ｍＡｂ）の選択的認識を指す。天然抗体は、例えば、単一特異性である。本明細書で使用される「多重特異性」という用語は、抗原結合性タンパク質が、多エピトープ特異性（すなわち、１つの生物学的分子上の、２つ、３つ、もしくはそれ以上の異なるエピトープに特異的に結合することが可能であるか、または、２つ、３つ、もしくはそれ以上の異なる生物学的分子上のエピトープに特異的に結合することが可能である）を有することを示す。本明細書で使用される「二重特異性」は、抗原結合タンパク質が２つの異なる抗原結合特異性を有することを示す。別途指示のない限り、列挙された二重特異性抗体が結合する抗原の順序は任意である。つまり、例えば、「抗ＴＩＧＩＴ／ＰＤ−Ｌ１」、「抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＩＧＩＴ」、「ＴＩＧＩＴ×ＰＤ−Ｌ１」、「ＰＤ−Ｌ１×ＴＩＧＩＴ」、「ＰＤ−Ｌ１−ＴＩＧＩＴ」、及び「ＴＩＧＩＴ−ＰＤ−Ｌ１」という用語は、ＴＩＧＩＴ及びＰＤ−Ｌ１の両方に特異的に結合する二重特異性抗体を指すために互換的に使用することができる。本明細書で使用される「単一特異性」という用語は、１つ以上の結合部位を有する抗原結合タンパク質（例えば、ｍＡｂ）を示し、これのそれぞれは、同じ抗原の同じエピトープに結合する。
【００７５】
本明細書で使用される「価」という用語は、抗原結合タンパク質における特定数の結合部位の存在を示す。例えば、天然抗体または全長抗体は、２つの結合部位を有し、二価である。そのようなものであるから、「三価」、「四価」、「五価」、及び「六価」という用語は、抗原結合タンパク質における、それぞれ、２つの結合部位、３つの結合部位、４つの結合部位、５つの結合部位、及び６つの結合部位の存在を示す。
【００７６】
「抗体エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域（天然配列Ｆｃ領域またはアミノ酸配列多様体Ｆｃ領域）に寄与する生物学的活性を指し、抗体アイソタイプに伴って変動する。抗体エフェクター機能の例としては、以下が挙げられる：Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞毒性；Ｆｃ受容体結合；抗体−依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）；貪食；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御；ならびに、Ｂ細胞の活性化。「低減または最小化された」抗体エフェクター機能は、野生型または未修飾抗体から少なくとも５０％（あるいは、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）低減するものを意味する。抗体エフェクター機能の決定は、当業者により容易に決定可能及び測定可能である。好ましい実施形態では、補体結合、補体依存性細胞毒性、及び抗体依存性細胞毒性の抗体エフェクター機能が影響を受ける。一部の実施形態では、エフェクター機能は、グリコシル化を排除した定常領域の変異、例えば、「エフェクターのない変異」により排除される。一態様では、エフェクターレス変異は、ＣＨ２領域にＮ２９７ＡまたはＤＡＮＡ変異（Ｄ２６５Ａ及び／またはＮ２９７Ａ）を含む。Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（９）：６５９１−６６０４（２００１）。あるいは、エフェクター機能の低減または排除をもたらす追加の変異は、Ｋ３２２Ａ及びＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ（ＬＡＬＡ）を含む。あるいは、エフェクター機能は、グリコシル化しない宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）またはエフェクター機能を促進することに効果がないもしくは効果が弱いグリコシル化パターンの変化をもたらす宿主細胞における発現などの産生技術により低減させるか、または排除することができる（例えば、Ｓｈｉｎｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８（５）：３４６６−３４７３（２００３））。
【００７７】
「抗体依存性細胞媒介性細胞毒性」またはＡＤＣＣは、特定の細胞毒性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及びマクロファージ）に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）上に結合している分泌型Ｉｇが、これらの細胞毒性エフェクター細胞が抗原担持標的細胞に特異的に結合し、続いて、細胞毒素で標的細胞を死滅させることを可能にする細胞毒性の形態を指す。抗体は、細胞毒性細胞を「作動状態にし」、この機序による標的細胞の死滅に必要である。ＡＤＣＣを媒介する初代細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞でのＦｃ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−９２（１９９１）の４６４ページの表３にまとめられる。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号または同第５，８２１，３３７号に記載されているようなｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＡＤＣＣアッセイを実施することができる。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。代替的または追加的に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されるような動物モデルにおいて、ｉｎ  ｖｉｖｏで評価することができる。
【００７８】
本明細書における「Ｆｃ領域」という用語は、天然配列Ｆｃ領域及び多様体Ｆｃ領域を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変化する可能性があるが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は通常、Ｃｙｓ２２６位のアミノ酸残基またはＰｒｏ２３０からそのカルボキシル末端に伸びると定義される。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵナンバリングシステムによる残基４４７）は、例えば、抗体の産生もしくは精製中に、または抗体の重鎖をコードする核酸を組み換え操作することにより除去することができる。従って、インタクト抗体の組成物は、全てＫ４４７残基を有する抗体集団、Ｋ４４７残基が除去されない抗体集団、ならびに、Ｋ４４７残基の有る及びＫ４４７残基のない抗体の混合物を有する抗体集団を含み得る。本明細書に記載の抗体に使用されるネイティブ配列のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２（ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ）、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含む。
【００７９】
「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を表す。好ましいＦｃＲは、天然配列のヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（ガンマ受容体）と結合し、対立遺伝子多様体及びこれらの受容体の選択的スプライシング型を含む、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体を含むものであり、ＦｃγＲＩＩ受容体は、主にその細胞質ドメインが異なる類似のアミノ酸配列を有するＦｃγＲＩＩＡと（「活性化受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「抑制型受容体」）を含む。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含有する。抑制型受容体ＦｃγＲＩＩＢは、細胞質ドメインに、免疫受容体チロシンベースの抑制モチーフ（ＩＴＩＭ）を含有する（Ｍ．Ｄａｅｒｏｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２０３−２３４（１９９７）を参照のこと）。ＦｃＲは、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−９２  （１９９１）；Ｃａｐｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４：２５−３４（１９９４）；及びｄｅ  Ｈａａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：３３０−４１（１９９５）に概説される。将来的に同定されるＦｃＲを含む他のＦｃＲは、本明細書では、「ＦｃＲ」という用語に包含される。
【００８０】
「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」という用語は、胎児への母系ＩｇＧの移動に関与する新生児受容体ＦｃＲｎも含む。Ｇｕｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）及びＫｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４）。ＦｃＲｎへの結合を測定する方法は、既知である（例えば、Ｇｈｅｔｉｅ  ａｎｄ  Ｗａｒｄ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  １８：（１２）：５９２−８（１９９７）；Ｇｈｅｔｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １５（７）：６３７−４０（１９９７）；Ｈｉｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９（８）：６２１３−６（２００４）；ＷＯ２００４／９２２１９（Ｈｉｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．）を参照のこと））。ｉｎ  ｖｉｖｏでのＦｃＲｎへの結合及びヒトＦｃＲｎ高親和性結合ポリペプチドの血清半減期は、例えば、トランスジェニックマウスまたはヒトＦｃＲｎを発現するトランスフェクトされたヒト細胞株、または多様体Ｆｃ領域を有するポリペプチドが投与される霊長類において、アッセイすることができる。ＷＯ２００４／４２０７２（Ｐｒｅｓｔａ）は、ＦｃＲへの結合を改善または低減させた抗体多様体について記載する。例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１−６６０４（２００１）も参照のこと。
【００８１】
「補体依存性細胞毒性」または「ＣＤＣ」は、補体の存在下での標的細胞の溶解を指す。古典補体経路の活性化は、（適切なサブクラスの）補体系の最初の成分（Ｃ１ｑ）が、同族抗原に結合している抗体に結合することにより開始される。補体活性化を評価するために、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０２：１６３（１９９６）に記載されるようなＣＤＣアッセイを実施することができる。Ｆｃ領域アミノ酸配列が変更され、Ｃ１ｑ結合能力が増加または減少した抗体多様体は、米国特許第６，１９４，５５１Ｂ１号及びＷＯ９９／５１６４２に記載される。それらの特許公開の内容は、具体的には、参照により本明細書に組み込まれる。Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４（２０００）も参照のこと。
【００８２】
「結合親和性」は一般に、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有相互作用の合計の強さを指す。別途指示のない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、結合ペアのメンバー間の１：１相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。結合親和性は、ＫＤ、Ｋｏｆｆ、Ｋｏｎ、またはＫａで示すことができる。本明細書で使用される「Ｋｏｆｆ」という用語は、ｓ−１の単位で表される、速度論的選択セットアップから決定されるような抗体／抗原複合体からの抗体（または抗原結合ドメイン）の解離のオフ速度定数を指すことが意図される。本明細書で使用される「Ｋｏｎ」という用語は、Ｍ−１ｓ−１の単位で表される、抗体／抗原複合体を形成する、抗体（または抗原結合ドメイン）の抗原への会合のオン速度定数を指すことが意図される。平衡解離定数「ＫＤ」という用語は、本明細書で使用される場合、特定の抗体−抗原相互作用の解離定数を指し、平衡状態で抗体分子の溶液中に存在する抗体結合ドメインの全ての半分を占めるのに必要とされる抗原の濃度について記載し、Ｍの単位で表されるＫｏｆｆ／Ｋｏｎに相当する。ＫＤの測定は、全ての結合剤が溶液中にあることを前提とする。例えば、酵母発現系において、抗体が細胞壁に連結されている場合では、対応する平衡速度定数は、ＥＣ５０として表され、これは、ＫＤの良好な近似を与える。親和定数Ｋａは、Ｍ−１の単位で表される解離定数ＫＤの逆数である。
【００８３】
解離定数（ＫＤ）は、抗原に対する抗体の親和性を示す指標として使用される。例えば、簡単な分析は、様々なマーカー剤でマーカーされた抗体を使用したスキャッチャード法、及び、ＢｉａｃｏｒｅＸ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ製）を使用することにより可能であり、これは、市販の測定キット、またはキットに付属するユーザーズマニュアル及び実験操作方法に従う類似のキットである。これらの方法を使用して、導出することができるＫＤ値は、Ｍ（１リットル当たりのモル）の単位で表される。標的に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントは、例えば、≦１０−５Ｍ、≦１０−６Ｍ、≦１０−７Ｍ、≦１０−８Ｍ、≦１０−９Ｍ、≦１０−１０Ｍ、≦１０−１１Ｍ、または≦１０−１２Ｍの解離定数（ＫＤ）を有し得る。
【００８４】
抗体または抗原結合ドメインの結合特異性は、当該技術分野で既知の方法により実験的に決定することができる。そのような方法は、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ試験、ＲＩＡ試験、ＥＣＬ試験、ＩＲＭＡ試験、ＥＩＡ試験、ＢＩＡｃｏｒｅ試験、及びペプチドスキャンを含むが、これらに限定されない。
【００８５】
半最大阻害濃度（ＩＣ５０）は、特定の生物学的または生化学的機能の抑制における物質（例えば、抗体）の有効性の尺度である。それは、所望の生物学的プロセス（例えば、ＰＤ−Ｌ１及びＢ７−１間の結合、またはプロセスの構成要素、すなわち、酵素、細胞、細胞受容体、または微生物）を半分阻害するために、特定の薬物または他の物質（抗体などの阻害剤）が、どの程度必要とされるかを示す。値は通常、モル濃度として表される。ＩＣ５０は、アゴニスト薬物または他の物質（例えば、抗体）のＥＣ５０に相当する。ＥＣ５０は、ｉｎ  ｖｉｖｏで最大効果の５０％を得るのに必要な血漿濃度も表す。本明細書で使用される場合、「ＩＣ５０」は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで抗原生物活性（例えば、ＰＤ−Ｌ１生物活性）の５０％を中和するのに必要な抗体（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂ）の有効濃度を示すために使用される。ＩＣ５０またはＥＣ５０は、ＦＡＣＳ分析（競合結合アッセイ）、細胞ベースのサイトカイン放出アッセイ、または増幅発光近接均一アッセイ（ＡｌｐｈａＬＩＳＡ）によるリガンド結合の抑制などのバイオアッセイで測定することができる。
【００８６】
ペプチド、ポリペプチド、または抗体配列に関する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」及び「相同性」は、必要に応じて、配列同一性の一部として任意の保存的置換を考慮せずに、最大パーセント配列同一性を達成するために、配列をアラインし、ギャップを導入した後に、特定のペプチドまたはポリペプチド配列のアミノ酸残基と同一である候補配列のアミノ酸残基の百分率として定義される。パーセントアミノ酸配列同一性の決定を目的としたアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、またはＭＥＧＡＬＩＧＮ（商標）（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピューターソフトウェアを使用して、当業者の範囲内である種々の方法で達成することができる。当業者らは、比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメーターを決定することができる。
【００８７】
本明細書に記載の構築物、抗体、またはその抗原結合フラグメントをコードする「単離」核酸分子は、同定され、それが産生される環境と通常関連する少なくとも１つの汚染核酸分子から分離される核酸分子である。好ましくは、単離核酸は、産生環境に関連する全ての構成要素と関連がない。本明細書に記載のポリペプチド及び抗体をコードする単離核酸分子は、それが天然に見られる形態または設定以外の形態である。従って、単離核酸分子は、細胞中に天然に存在する、本明細書に記載のポリペプチド及び抗体をコードする核酸とは区別される。単離核酸は、通常核酸分子を含有する細胞に含有される核酸分子を含むが、核酸分子は、染色体外に、またはその天然の染色体位置とは異なる染色体位置に存在する。
【００８８】
本明細書で使用される「ベクター」という用語は、それが連結されている別の核酸を増殖させることが可能な核酸分子を指す。用語は、自己複製核酸構造としてのベクター及びそれが導入されている宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターを含む。特定のベクターは、それらが作動可能に連結されている核酸の発現を導くことが可能である。そのようなベクターは、本明細書では「発現ベクター」と呼ばれる。
【００８９】
本明細書で使用される「トランスフェクトされた」または「形質転換された」または「形質導入された」という用語は、外因性核酸が宿主細胞に移入または導入されるプロセスを指す。「トランスフェクトされた」または「形質転換された」または「形質導入された」細胞は、外因性核酸でトランスフェクト、形質転換、または形質導入されているものである。細胞は、初代対象細胞及びその子孫を含む。
【００９０】
「宿主細胞」、「宿主細胞株」、及び「宿主細胞培養物」という用語は、互換的に使用され、そのような細胞の子孫を含む、外因性核酸が導入されている細胞を指す。宿主細胞は、継代数に関係なく、初代形質転換細胞及びそれに由来する子孫を含む「形質転換体」及び「形質転換細胞」を含む。子孫は、親細胞に対する核酸含有量が完全に同一である可能性がないが、変異を含有し得る。最初の形質転換細胞において、スクリーニングまたは選択されたものと同じ機能または生物活性を有する変異型子孫が、本明細書に含まれる。
【００９１】
「アジュバント設定」は、個体ががんの病歴を有しており、一般に、（必ずしもではないが）限定されないが、手術（例えば、手術切除）、放射線療法、及び化学療法を含む治療に応答している臨床設定を指す。しかし、がんの病歴のために、これらの個体は、疾患を発症するリスクがあると考えられる。「アジュバント設定」における処置または投与は、後続の処置様式を指す。（例えば、アジュバント設定の個体が「高リスク」または「低リスク」と考えられる時の）リスクの程度は、いくつかの要因、ほとんどの場合、最初に処置された時の疾患の程度、に依存する。
【００９２】
「ネオアジュバント設定」は、１次／根治治療前の、方法が実施される臨床設定を指す。
【００９３】
「医薬組成物」の「医薬製剤」という用語は、活性成分の生物学的活性が有効になるような形態であり、且つ、製剤が投与される対象に対して容認できないほど毒性である追加の構成要素を含有しない調製物を指す。そのような製剤は、滅菌である。「滅菌」製剤は、無菌であるか、または全ての生きている微生物及びその胞子を含まない。
【００９４】
本明細書に記載される本発明の実施形態は、「からなる」及び／または「本質的にからなる」実施形態を含むことが理解される。
【００９５】
本明細書の「約」値またはパラメーターのへの言及は、その値またはパラメーター自体に向けられる変形形態を含む（且つ記載する）。例えば、「約Ｘ」に言及する記載は、「Ｘ」の記載を含む。
【００９６】
本明細書で使用される場合、値またはパラメーター「でない」への言及は一般に、値またはパラメーター「以外」を意味及び記載する。例えば、方法がＸ型のがんを処置するために使用されないことは、方法がＸ型以外のがんを処置するために使用されることを意味する。
【００９７】
本明細書で使用される「約Ｘ−Ｙ」という用語は、「約Ｘ〜約Ｙ」と同じ意味を有する。
【００９８】
ＩＩ．抗ＴＩＧＩＴ構築物
抗ＴＩＧＩＴモノクローナル抗体
本明細書に記載の単離抗ＴＩＧＩＴ構築物は、ＴＩＧＩＴ（または「抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂ」）を特異的に認識または結合するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）部分を含む。本発明の一部の実施形態では、単離抗ＴＩＧＩＴ構築物は、全長ＩｇＧである。
【００９９】
ＴＩＧＩＴ
より大きなＰＶＲネクチンファミリーの分子と構造で同様に、ＴＩＧＩＴタンパク質は、細胞外ＩｇＶドメイン、１型膜貫通領域、ならびにＩＴＩＭ及び免疫グロブリンテールチロシン（ＩＴＴ）様モチーフを含有する細胞質尾部を含有する。ＣＤ１５５を介したＴＩＧＩＴの関与は、Ｆｙｎ及びＬｃｋを介したＴＩＧＩＴのリン酸化、ならびに、細胞質ゾルアダプターＧｒｂ２を介したＳＨＩＰ１の動員を誘導する。ＳＨＩＰ１をＴＩＧＩＴ尾部に動員すると、ＰＩ３Ｋ及びＭＡＰＫ経路を介したシグナル伝達が遮断され、ＮＫ細胞の抑制がもたらされる。さらに、リン酸化時に、ＴＩＧＩＴのＩＴＴ様モチーフが、β−アレスチン２に結合し、ＳＨＩＰ１を動員して、ＮＦ−κＢシグナル伝達を制限する。ヒトＴＩＧＩＴの例示的なアミノ酸配列は、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿７７６１６０．２で開示される。
【０１００】
本発明の実施形態によれば、ヒトＴＩＧＩＴ配列は、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿７７６１６０．２のヒトＴＩＧＩＴと、アミノ酸配列中で少なくとも９０％同一であり、他の種（例えば、マウス）のＴＩＧＩＴアミノ酸配列と比較した時、アミノ酸配列をヒトであると同定するアミノ酸残基を含有する。一部の実施形態では、ヒトＴＩＧＩＴは、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿７７６１６０．２のＴＩＧＩＴと、アミノ酸配列において少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であり得る。一部の実施形態では、ヒトＴＩＧＩＴ配列は、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿７７６１６０．２のＴＩＧＩＴとは、１０以下のアミノ酸の差異を示すであろう。一部の実施形態では、ヒトＴＩＧＩＴは、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿７７６１６０．２のＴＩＧＩＴとは、５、４、３、２、または１つ以下のアミノ酸の差異を示し得る。パーセント同一性は、本明細書に記載されように、決定することができる。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂは、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿７７６１６０．２のＴＩＧＩＴと１００％のアミノ酸配列同一性で、ＴＩＧＩＴポリペプチドに特異的に結合する。一部の実施形態では、本出願の抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂは、配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＴＩＧＩＴポリペプチドに特異的に結合する。
【０１０１】
一部の実施形態では、本出願の抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂは、ヒト以外の種由来のＴＩＧＩＴ、またはヒトＴＩＧＩＴ（例えば、ヒトＴＩＧＩＴホモログ）と構造的に関連する他のタンパク質と交差反応し得る。一部の実施形態では、本出願の抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂは、ヒトＴＩＧＩＴに完全に特異的であり、種または他のタイプの交差反応性を示さない。
【０１０２】
抗体親和性
抗体または抗原結合ドメインの結合特異性は、当該技術分野で既知の方法により実験的に決定することができる。そのような方法は、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ試験、ＲＩＡ試験、ＥＣＬ試験、ＩＲＭＡ試験、ＥＩＡ試験、ＢＩＡｃｏｒｅ試験、及びペプチドスキャンを含むが、これらに限定されない。
【０１０３】
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂ及びＴＩＧＩＴ間の結合のＫＤは、約１０−５Ｍ〜約１０−６Ｍ、約１０−６Ｍ〜約１０−７Ｍ、約１０−７Ｍ〜約１０−８Ｍ、約１０−８Ｍ〜約１０−９Ｍ、約１０−９Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−１０Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−１１Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−５Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−６Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−７Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−８Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−９Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−１０Ｍ〜約１０−１２Ｍ、約１０−５Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−７Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−８Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−９Ｍ〜約１０−１１Ｍ、約１０−５Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−７Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−８Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−５Ｍ〜約１０−９Ｍ、約１０−７Ｍ〜約１０−９Ｍ、約１０−５Ｍ〜約１０−８Ｍ、または約１０−６Ｍ〜約１０−８Ｍである。
【０１０４】
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂ及びＴＩＧＩＴ間の結合のＫｏｎは、約１０２Ｍ−１ｓ−１〜約１０４Ｍ−１ｓ−１、約１０４Ｍ−１ｓ−１〜約１０６Ｍ−１ｓ−１、約１０６Ｍ−１ｓ−１〜約１０７Ｍ−１ｓ−１、約１０２Ｍ−１ｓ−１〜約１０７Ｍ−１ｓ−１、約１０３Ｍ−１ｓ−１〜約１０７Ｍ−１ｓ−１、約１０４Ｍ−１ｓ−１〜約１０７Ｍ−１ｓ−１、約１０５Ｍ−１ｓ−１〜約１０７Ｍ−１ｓ−１、約１０３Ｍ−１ｓ−１〜約１０６Ｍ−１ｓ−１、または約１０４Ｍ−１ｓ−１〜約１０６Ｍ−１ｓ−１である。
【０１０５】
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂ及びＴＩＧＩＴ間の結合のＫｏｆｆは、約１ｓ−１〜約１０−２ｓ−１、約１０−２ｓ−１〜約１０−４ｓ−１、約１０−４ｓ−１〜約１０−５ｓ−１、約１０−５ｓ−１〜約１０−６ｓ−１、約１ｓ−１〜約１０−６ｓ−１、約１０−２ｓ−１〜約１０−６ｓ−１、約１０−３ｓ−１〜約１０−６ｓ−１、約１０−４ｓ−１〜約１０−６ｓ−１、約１０−２ｓ−１〜約１０−５ｓ−１、または約１０−３ｓ−１〜約１０−５ｓ−１である。
【０１０６】
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂのＩＣ５０は、抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂが、ヒトＴＩＧＩＴ過剰発現ＣＨＯ−Ｋ１細胞におけるＣＤ１５５（ＰＶＲとしても知られている；０．５μｇ／ｍｌ）の結合を競合的に遮断するＦＡＣＳ研究において、１０ｎＭ未満である。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂのＩＣ５０は、ＦＡＣＳ分析（競合結合アッセイ）または細胞ベースのサイトカイン放出アッセイによるリガンド結合の阻害において５００ｎＭ未満である。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂのＩＣ５０は、１ｎＭ未満、約１ｎＭ〜約１０ｎＭ、約１０ｎＭ〜約５０ｎＭ、約５０ｎＭ〜約１００ｎＭ、約１００ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約４００ｎＭ、または約４００ｎＭ〜約５００ｎＭである。
【０１０７】
キメラまたはヒト化抗体
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＴＩＧＩＴ抗体は、キメラ抗体である。特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；及びＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４）に記載される。一例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、ラマなどのラクダ科種に由来する可変領域）及びヒト定常領域を含む。さらなる例では、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のものから変化している「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合フラグメントを含む。
【０１０８】
一部の実施形態では、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。通常は、非ヒト抗体は、親非ヒト抗体の特異性及び親和性を保持しながら、ヒトに対する免疫原性を低減させるためにヒト化される。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（またはその一部）が非ヒト抗体に由来する１つ以上の可変ドメインを含み、ＦＲ（またはその一部）がヒト抗体配列に由来する。ヒト化抗体は、任意に、ヒト定常領域の少なくとも一部も含むであろう。一部の実施形態では、ヒト化抗体の一部のＦＲ残基は、例えば、抗体特異性または親和性を回復または改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基で置換される。
【０１０９】
ヒト化抗体及びそれらを作製する方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）で概説され、さらに、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９（１９８８）；Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：１００２９−１００３３（１９８９）；米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号、及び同第７，０８７，４０９号；Ｋａｓｈｍｉｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：２５−３４（２００５）（ＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）移植について記載する）；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９−４９８（１９９１）（「リサーフェシング」について記載する）；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：４３−６０（２００５）（「ＦＲシャッフリング」について記載する）；ならびに、Ｏｓｂｏｕｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：６１−６８（２００５）及びＫｌｉｍｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２−２６０（２０００）（ＦＲシャッフリングとほとんど同じである「ガイド選択」について記載する）に記載される。
【０１１０】
ヒト化に使用することができるヒトフレームワーク領域は、「ベストフィット」法を使用して選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照のこと）；「軽鎖または重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）；及びＰｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照のこと）；ヒト成熟（体細胞変異している）フレームワーク領域またはヒト生殖系列フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照のこと）；ならびに、スクリーニングＦＲライブラリーに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４（１９９７）及びＲｏｓｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１−２２６１８（１９９６）を参照のこと）を含むが、これらに限定されない。
【０１１１】
一部の実施形態では、ｍＡｂは、抗原に対するドメインの本来の親和性を低下させないが、異種種に関するその免疫原性を低下させる、ヒト化などの修飾を受ける。例えば、抗体の重鎖及び軽鎖可変ドメイン（ＶＨ及びＶＬ）のアミノ酸残基を決定することができ、例えば、フレームワーク領域中の、マウスアミノ酸のうちの１つ以上は、ポリペプチドが代表的な特徴を失わずに、ヒトコンセンサス配列で見られるようなヒト対応物で置き換えられ、すなわち、ヒト化は、得られるポリペプチドの抗原結合能に著しい影響を及ぼさない。マウスモノクローナル抗体のヒト化は、２つの鎖である軽鎖及び重鎖への限られた量のアミノ酸の導入及び変異導入、ならびに、両方の鎖の組み立ての保存を要求する。
【０１１２】
ヒト抗体
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＴＩＧＩＴ抗体、特に、ｍＡｂは、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野で既知の種々の技術を使用して生成することができる。ヒト抗体は一般に、ｖａｎ  Ｄｉｊｋ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８−７４（２００１）及びＬｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０−４５９（２００８）に記載される。完全にヒト単一ドメイン抗体を産生することが可能なトランスジェニックマウスまたはラットは、当該技術分野で既知である。例えば、ＵＳ２００９０３０７７８７Ａ１、米国特許第８，７５４，２８７号、ＵＳ２０１５０２８９４８９Ａ１、ＵＳ２０１００１２２３５８Ａ１、及びＷＯ２００４０４９７９４を参照のこと。
【０１１３】
ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答して、インタクトヒト抗体またはヒト可変領域を有するインタクト抗体を産生するように改変されているトランスジェニック動物に免疫原を投与することにより調製することができる。そのような動物は通常、内因性免疫グロブリン遺伝子座を交換するか、または染色体外に存在するか、もしくは動物の染色体にランダムに組み込まれるヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部または一部を含有する。そのようなトランスジェニックマウスでは、内因性免疫グロブリン遺伝子座は一般に、不活化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を取得するための方法の概説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７−１１２５（２００５）を参照のこと。例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術について記載する米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号；ＨｕＭａｂ（登録商標）技術について記載する米国特許第５，７７０，４２９号；Ｋ−Ｍ  ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術について記載する米国特許第７，０４１，８７０号、ならびに、ＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（登録商標）技術について記載する米国特許出願公開第ＵＳ２００７／００６１９００号も参照のこと。そのような動物により生成されたインタクト抗体由来のヒト可変領域はさらに、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることにより改変することができる。
【０１１４】
ヒト抗体は、ハイブリドーマに基づく方法により作製することもできる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株が記載されている。（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７）；及びＢｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照のこと）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されたヒト抗体はまた、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７−３５６２（２００６）に記載される。さらなる方法としては、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生について記載する）及びＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ  Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５−２６８（２００６）（ヒト−ヒトハイブリドーマについて記載する）が挙げられる。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）はまた、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７−９３７（２００５）及びＶｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｆｉｎｄｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５−９１（２００５）に記載される。
【０１１５】
ヒト抗体は、ヒト由来のファージディスプレイライブラリーから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することにより生成することもできる。次に、そのような可変ドメイン配列を、所望のヒト定常ドメインと組み合わせることができる。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択するための技術は、以下に記載される。
【０１１６】
ライブラリー由来の抗体
本出願の抗体は、所望の活性（複数可）を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることにより単離することができる。例えば、ファージディスプレイライブラリーを生成し、所望の結合特性を有する抗体についてそのようなライブラリーをスクリーニングするための様々な方法が当該技術分野で既知である。そのような方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）に概説され、さらに、例えば、ｔｈｅ  ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４；Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）；Ｍａｒｋｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｄｂｕｒｙ，ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２４８：１６１−１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）；Ｓｉｄｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）；Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）；及びＬｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）に記載される。単一ドメイン抗体ライブラリーを構築するための方法が記載されており、例えば、米国特許第７３７１８４９号を参照のこと。
【０１１７】
特定のファージディスプレイ法では、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーは、別々に、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）でクローニングされ、Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３−４５５（１９９４）に記載されるように、抗原結合ファージについてスクリーニングすることができるファージライブラリーにおいてランダムに再結合される。ファージは通常、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）フラグメントまたはＦａｂフラグメントのいずれかとしての抗体フラグメントを提示する。免疫源からのライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要なく、免疫原に対する高親和性抗体を提供する。あるいは、ナイーブレパートリーは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ，１２：７２５−７３４（１９９３）に記載されるように、任意の免疫化なしに、広範囲の非自己抗原、さらに自己抗原に対する抗体の単一源を提供するために、（例えば、ヒトから）クローニングすることができる。最終的に、ナイーブライブラリーは、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１−３８８（１９９２）により記載されるように、高度な可変ＣＤＲ３領域をコードするために、且つｉｎ  ｖｉｔｒｏでの再配列を達成するために、幹細胞から再編成されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングすること、及びランダム配列を含有するＰＣＲプライマーを使用することにより、合成的に作製することもできる。ヒト抗体ファージライブラリーについて記載する特許公開は、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、及び米国特許公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号、及び同第２００９／０００２３６０号を含む。
【０１１８】
ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体または抗体フラグメントは、本明細書のヒト抗体またはヒト抗体フラグメントと考えられる。
【０１１９】
生物活性
本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂの生物活性は、その半最大阻害濃度（ＩＣ５０）を測定することにより決定することができ、これは、特定の生物学的または生化学的機能の抑制（例えば、ＴＩＧＩＴ及びそのリガンドＣＤ１５５（ＰＶＲとしても知られる）間の結合の阻害））における抗体の有効性の尺度である。例えば、本明細書では、ＩＣ５０は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＴＩＧＩＴ生物活性の５０％を中和するために必要な抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂの有効濃度を示すために使用することができる。ＩＣ５０は、アゴニスト薬物または他の物質（例えば、抗体）のＥＣ５０に相当する。ＥＣ５０は、ｉｎ  ｖｉｖｏで最大効果の５０％を得るのに必要な血漿濃度も表す。ＩＣ５０またはＥＣ５０は、当該技術分野で既知のアッセイ、例えば、ＦＡＣＳ分析（競合結合アッセイ）、細胞ベースのサイトカイン放出アッセイ、またはルシフェラーゼレポーターアッセイによるリガンド結合の阻害などのバイオアッセイ、で測定することができる。
【０１２０】
例えば、リガンド結合の遮断は、フローサイトメトリーを使用して研究することができる。ヒトＴＩＧＩＴを発現するＣＨＯ細胞は、接着培養フラスコから解離させ、試験のために種々の濃度の抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂ及び一定濃度の標識ＣＤ１５５タンパク質（例えば、ビオチン標識ｈＣＤ１５５／Ｆｃタンパク質）と混合させることができる。アテゾリズマブなどの抗ＴＩＧＩＴ抗体陽性対照を用いることができる。混合物を室温で３０分間平衡化し、ＦＡＣＳ緩衝液（１％のＢＳＡを含有するＰＢＳ）で３回洗浄する。次に、一定濃度の標識ＣＤ１５５タンパク質を特異的に認識する抗体（例えば、ＰＥ／Ｃｙ５ストレプトアビジン２次抗体）を加え、室温で１５分間インキュベートする。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、フローサイトメトリーで分析する。データは、ＩＣ５０を計算するために非線形回帰を使用するＰｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、カリフォルニア州サンディエゴ）で分析することができる。競合アッセイの結果は、標識ＣＤ１５５及びＴＩＧＩＴ間の相互作用の阻害における抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂの能力を示すであろう。
【０１２１】
抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂの生物活性は、サイトカイン放出のＴＩＧＩＴベースの遮断アッセイにより試験することもできる。樹状細胞では、ＣＤ１５５のＴＩＧＩＴライゲーションは、ＩＬ−１２ｐ４０の産生を抑制し、ＩＬ１０産生を誘導し、それにより、Ｔ細胞増殖及び応答するＴ細胞からのＩＦＮ−γ産生を抑制する免疫寛容を生じる樹状細胞を生成する（Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．、２００９）。ＴＩＧＩＴはさらに、エフェクターＴ細胞で作用して、タイプ１またはタイプ１７の優勢からＩＬ−１０の優勢の免疫応答への移行を誘導する。ＴＩＧＩＴ欠損マウスは、抗原での免疫化後のＩＬ−１０産生のほぼ完全な喪失を同時に示しながら、ＩＦＮ−γ＋である細胞及びＩＬ−１７＋ＣＤ−４＋Ｔ細胞の頻度の増加を示す（Ｊｏｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、２０１１）。従って、抗ＴＩＧＩＴ抗体によるＴＩＧＩＴ経路の遮断は、Ｔ細胞増殖、ＩＦＮ−γ放出、またはＩＬ１０分泌を監視する様々なバイオアッセイを使用して研究することができる。
【０１２２】
一部の実施形態では、本出願の抗ＴＩＧＩＴ抗体、特に、抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂは、ＣＤ１５５リガンドにより伝達されるシグナルを遮断または拮抗する。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂは、ＴＩＧＩＴがＣＤ１５５と相互作用するのを阻害するように、ＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合し得る。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂは、抗体結合部位対ＴＩＧＩＴリガンド結合部位の比が１：１を超え、且つ抗体濃度が１０−８Ｍを超える条件下で、ＴＩＧＩＴのＣＤ１５５への結合を少なくとも約５％、１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９９％または９９．９％のいずれか、低減させ得る。
【０１２３】
一部の実施形態では、配列番号２７〜３９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１または最大約３つ（例えば、約１つ、２つ、もしくは３つのいずれか）のアミノ酸置換を含むその多様体；配列番号５３〜６５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重ＣＤＲ３または最大約３つ（例えば、約１つ、２つ、もしくは３つのいずれか）のアミノ酸置換を含むその多様体を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）；及び配列番号６６〜７８のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１または最大約３つ（例えば、約１つ、２つ、もしくは３つのいずれか）のアミノ酸置換を含むその多様体；配列番号７９〜９１のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２または最大約３つ（例えば、約１つ、２つ、もしくは３つのいずれか）のアミノ酸置換を含むその多様体；及び配列番号９２〜１０４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３または最大約３つ（例えば、約１つ、２つ、もしくは３つのいずれか）のアミノ酸置換を含むその多様体を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂが提供される。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂ及びＴＩＧＩＴ間の結合のＫＤは、約１０−５Ｍ〜約１０−１２Ｍ（例えば、約１０−７Ｍ〜約１０−１２Ｍ、または約１０−８Ｍ〜約１０−１２Ｍ）である。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、齧歯動物、キメラ、ヒト、部分的にヒト化、または完全にヒト化である。
【０１２４】
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂは、配列番号５３〜６５のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３及び配列番号９２〜１０４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含み、アミノ酸置換は、ＶＨ及びＶＬドメインのＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２に存在する。
【０１２５】
従って、一部の実施形態では、配列番号２７〜３９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１または最大約３つ（例えば、約１つ、２つ、もしくは３つのいずれか）のアミノ酸置換を含むその多様体；配列番号４０〜５２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２または最大約３つ（例えば、約１つ、２つ、もしくは３つのいずれか）のアミノ酸置換を含むその多様体；及び配列番号５３〜６５のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）；ならびに配列番号６６〜７８のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１または最大約３つ（例えば、約１つ、２つ、もしくは３つのいずれか）のアミノ酸置換を含むその多様体；配列番号７９〜９１のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２または最大約３つ（例えば、約１つ、２つ、もしくは３つのいずれか）のアミノ酸置換を含むその多様体；及び配列番号９２〜１０４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂが提供される。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂ及びＴＩＧＩＴ間の結合のＫＤは、約１０−５Ｍ〜約１０−１２Ｍ（例えば、約１０−７Ｍ〜約１０−１２Ｍ、もしくは約１０−８Ｍ〜約１０−１２Ｍ）、またはそれ以下である。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂは、齧歯動物、キメラ、ヒト、部分的にヒト化、または完全にヒト化である。
【０１２６】
一部の実施形態では、配列番号２７〜３９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号４０〜５２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号５３〜６５のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）；ならびに、配列番号６６〜７８のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号７９〜９１のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び、配列番号９２〜１０４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂが提供される。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂ及びＴＩＧＩＴ間の結合のＫＤは、約１０−５Ｍ〜約１０−１２Ｍ（例えば、約１０−７Ｍ〜約１０−１２Ｍ、または約１０−８Ｍ〜約１０−１２Ｍ）である。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂは、齧歯動物、キメラ、ヒト、部分的にヒト化、または完全にヒト化である。
【０１２７】
一部の実施形態では、本出願の抗体または抗原結合フラグメントは、表１７及び１８で提供されるＣＤＲの配列を含む。
【０１２８】
ＣＤＲは、多数のヒト化抗ＴＩＧＩＴ抗体を生成するために、種々のペアワイズ組み合わせで組み合わせることができる。ヒト化置換は、当業者らには明らかであろう。例えば、潜在的に有用なヒト化置換は、当該技術分野で既知の方法を使用して（また本明細書に記載される）、天然に存在するＶＨまたはＶＬのＦＲの配列を、１つ以上の密接に関連するヒトＶＨまたはＶＬの対応するＦＲ配列と比較することにより決定し、その後に、該ＶＨまたはＶＬに、そのような潜在的に有用なヒト化置換のうちの１つ以上を導入することができる。ヒト化重鎖及び軽鎖はペアになっている。得られるヒト化抗体は、ＴＩＧＩＴ結合親和性、安定性、発現の容易さ及びレベル、及び／または他の望ましい特性について試験することができる。本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂは、部分的または完全にヒト化することができる。好ましくは、得られるヒト化抗体、例えば、ヒト化ｍＡｂ、またはその抗原結合フラグメントは、本明細書に記載のＫＤ、Ｋｏｎ、ＫｏｆｆでＴＩＧＩＴに結合する。
【０１２９】
一部の実施形態では、配列番号１〜１３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、または配列番号１〜１３のいずれか１つと少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％のいずれか）の配列同一性を有するその多様体；及び配列番号１４〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または配列番号１４〜２６のいずれか１つと少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％のいずれか）の配列同一性を有するその多様体を含む抗ＴＩＧＩＴヒト化ｍＡｂまたはその抗原結合フラグメントが提供される。一部の実施形態では、配列番号１〜１３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶＨドメインまたはＶＨドメインに最大約３つ（例えば、約１つ、２つ、もしくは３つのいずれか）のアミノ酸置換を含むその多様体；及び配列番号１４〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶＨドメインまたはＶＬドメインに最大約３つ（例えば、約１つ、２つ、もしくは３つのいずれか）のアミノ酸置換を含むその多様体を含む抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂが提供される。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂまたはその抗原結合フラグメントは、多様体がＶＨのＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２及び／またはＣＤＲ３などのＣＤＲにアミノ酸置換を含む、配列番号１〜１３のいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＨドメインの多様体；ならびに、多様体がＶＬのいずれか１つのＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２及び／またはＣＤＲ３などのＣＤＲにアミノ酸置換を含む、配列番号１４〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＬドメインの多様体を含む。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂまたはその抗原結合フラグメントは、多様体がＶＨのいずれか１つのＦＲ１及び／またはＦＲ２及び／またはＦＲ３及び／またはＦＲ４などのＦＲにアミノ酸置換を含む、配列番号１〜１３のいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＨドメインの多様体；ならびに、多様体が配列番号１４〜２６のいずれか１つのＦＲ１及び／またはＦＲ２及び／またはＦＲ３及び／またはＦＲ４などのＦＲにアミノ酸置換を含む、配列番号１４〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＨドメインの多様体を含む。
【０１３０】
一部の実施形態では、ｍＡｂ（以下、「競合する抗ＴＩＧＩＴ抗体もしくは競合する抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂ」と呼ばれる）などの抗ＴＩＧＩＴ抗体、または本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂのうちのいずれか１つと競合的にＴＩＧＩＴに特異的に結合するその抗原結合フラグメントが提供される。一部の実施形態では、競合結合は、ＥＬＩＳＡアッセイを使用して決定することができる。例えば、一部の実施形態では、それぞれ、配列番号１〜１３のいずれか１つのＶＨアミノ酸配列及び配列番号１４〜２６のいずれか１つのＶＬアミノ酸配列を含む抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂと競合的に、ＴＩＧＩＴに特異的に結合する抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂが提供される。別の例として、一部の実施形態では、配列番号２７〜３９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号４０〜５２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び、配列番号５３〜６５のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）；ならびに、配列番号６６〜７８のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号７９〜９１のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び、配列番号９２〜１０４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂと競合的に、ＴＩＧＩＴに特異的に結合する抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂが提供される。別の例として、一部の実施形態では、表１７及び１８に記載される任意の抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂと競合的に、ＴＩＧＩＴに特異的に結合する抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂが提供される。一部の実施形態では、競合する抗ＴＩＧＩＴｍＡｂ及びＴＩＧＩＴ間の結合のＫＤは、約１０−５Ｍ〜約１０−１２Ｍ（例えば、約１０−７Ｍ〜約１０−１２Ｍ、または約１０−８Ｍ〜約１０−１２Ｍ）、またはそれ以下である。一部の実施形態では、競合する抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂは、齧歯動物、キメラ、ヒト、部分的にヒト化、または完全にヒト化である。
【０１３１】
抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂを含む構築物
抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂを含む抗ＴＩＧＩＴ構築物は、任意の可能なフォーマットとすることができる。
【０１３２】
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂを含む抗ＴＩＧＩＴ構築物はさらに、１つ以上の抗体部分などの追加のポリペプチド配列を含み得る。そのような追加のポリペプチド配列は、抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂの（生物学的）特性を変化させるかまたは他の点で影響させ得るかまたは得ず、本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂに、さらなる機能性を加え得るかまたは得ない。一部の実施形態では、追加のポリペプチド配列は、本出願の抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂに１つ以上の所望の特性または機能を付与する。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ構築物は、本明細書に記載の１つ以上の抗ＴＩＧＩＴ結合部分を含む細胞外抗原結合ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。
【０１３３】
一部の実施形態では、追加のポリペプチド配列は、第２の抗原を特異的に認識する第２の抗体部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）であり得る。一部の実施形態では、第２の抗原は、ＴＩＧＩＴではない。一部の実施形態では、第２の抗体部分は、本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂと同じＴＩＧＩＴ上のエピトープを特異的に認識する。一部の実施形態では、第２の抗体部分は、本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂと、ＴＩＧＩＴ上の異なるエピトープを特異的に認識する。
【０１３４】
一部の実施形態では、追加のポリペプチド配列は、本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂ自体と比較して、分子の安定性、溶解度、もしくは吸収を増加させ、免疫原性もしくは毒性を低減させ、望ましくない副作用を排除もしくは減弱し、及び／または他の有利な特性を本発明の抗ＴＩＧＩＴ構築物に与え、及び／またはそれの望ましくない特性を低減させ得る。
【０１３５】
全長ＩｇＧ
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂは、全長ＩｇＧである。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のいずれかなどのＩｇＧの定常領域を含む。一部の実施形態では、定常領域は、ヒト定常領域である。一部の実施形態では、定常領域は、ヒトＩｇＧ１定常領域である。
【０１３６】
従って、一部の実施形態では、可変領域（ＶＨ）が、配列番号２７〜３９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１または最大約３つ（例えば、約１つ、２つ、もしくは３つのいずれか）のアミノ酸置換を含むその多様体；配列番号４０〜５２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２または最大約３つ（例えば、約１つ、２つ、もしくは３つのいずれか）のアミノ酸置換を含むその多様体；及び配列番号５３〜６５のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３または最大約３つ（例えば、約１つ、２つ、もしくは３つのいずれか）のアミノ酸置換を含むその多様体を含み、ＶＨが、免疫グロブリンの重鎖定常領域（ヒンジ、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）に融合している重鎖、ならびに、可変領域（ＶＬ）が、配列番号６６〜７８のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１または最大約３つ（例えば、約１つ、２つ、もしくは３つのいずれか）のアミノ酸置換を含むその多様体；配列番号７９〜９１のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２または最大約３つ（例えば、約１つ、２つ、もしくは３つのいずれか）のアミノ酸置換を含むその多様体；及び配列番号９２〜１０４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３または最大約３つ（例えば、約１つ、２つ、もしくは３つのいずれか）のアミノ酸置換を含むその多様体を含み、ＶＬが、免疫グロブリンの軽鎖定常領域（ＣＬ）に融合している軽鎖を含む抗ＴＩＧＩＴ全長ＩｇＧが提供される。一部の実施形態では、可変領域（ＶＨ）が、配列番号２７〜３９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む；配列番号４０〜５２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号５３〜６５のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３または最大約３つ（例えば、約１つ、２つ、もしくは３つのいずれか）のアミノ酸置換を含むその多様体を含み、ＶＨが、免疫グロブリンの重鎖定常領域（ヒンジ、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）に融合している重鎖、ならびに、可変領域（ＶＬ）が、配列番号６６〜７８のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号７９〜９１のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び、配列番号９２〜１０４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３または最大約３つ（例えば、約１つ、２つ、もしくは３つのいずれか）のアミノ酸置換を含むその多様体を含み、ＶＬが、免疫グロブリンの軽鎖定常領域（ＣＬ）に融合している軽鎖を含む抗ＴＩＧＩＴ全長ＩｇＧが提供される。一部の実施形態では、定常領域は、ヒトＩｇＧ１定常領域である。一部の実施形態では、全長抗ＴＩＧＩＴ  ＩｇＧ及びＴＩＧＩＴ間の結合のＫＤは、約１０−５Ｍ〜約１０−１２Ｍ（例えば、約１０−７Ｍ〜約１０−１２Ｍ、もしくは約１０−８Ｍ〜約１０−１２Ｍ）、またはそれ以下である。一部の実施形態では、全長抗ＴＩＧＩＴ  ＩｇＧは、齧歯動物、キメラ、ヒト、部分的にヒト化、または完全にヒト化である。
【０１３７】
一部の実施形態では、配列番号１〜１３のいずれか１つの重鎖アミノ酸配列、及び配列番号１４〜２６のいずれか１つの軽鎖アミノ酸配列を含む全長抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂが提供される。
【０１３８】
一部の実施形態では、本明細書に記載の全長抗ＴＩＧＩＴ  ＩｇＧのいずれか１つと競合的に、ＴＩＧＩＴに特異的に結合する全長抗ＴＩＧＩＴ  ＩｇＧ（以下「競合する抗ＴＩＧＩＴ  ＩｇＧ」と呼ばれる）も提供される。競合結合は、ＥＬＩＳＡアッセイを使用して決定することができる。例えば、一部の実施形態では、配列番号１〜１３のいずれか１つの重鎖アミノ酸配列及び配列番号１４〜２６のいずれか１つの軽鎖アミノ酸配列を含む抗ＴＩＧＩＴ  ＩｇＧと競合的に、ＴＩＧＩＴに特異的に結合する抗ＴＩＧＩＴ  ＩｇＧが提供される。別の例として、一部の実施形態では、可変領域（ＶＨ）が、配列番号２７〜３９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号４０〜５２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号５３〜６５のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む重鎖；ならびに、可変領域（ＶＬ）が、配列番号６６〜７８のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号７９〜９１のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び、配列番号９２〜１０４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む軽鎖を含む抗ＴＩＧＩＴ  ＩｇＧと競合的にＴＩＧＩＴと特異的に結合する抗ＴＩＧＩＴ  ＩｇＧが提供される。一部の実施形態では、競合する抗ＴＩＧＩＴ  ＩｇＧ及びＴＩＧＩＴ間の結合のＫＤは、約１０−５Ｍ〜約１０−１２Ｍ（例えば、約１０−７Ｍ〜約１０−１２Ｍ、または約１０−８Ｍ〜約１０−１２Ｍ）またはそれ以下である。一部の実施形態では、競合する抗ＴＩＧＩＴ  ＩｇＧは、齧歯動物、キメラ、ヒト、部分的にヒト化、または完全にヒト化である。
【０１３９】
多価及び／または多特異性抗体
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ構築物は、１つ以上の他の抗体部分（例えば、別の抗原を特異的に認識する抗体部分）に融合している、本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂを含む。１つ以上の他の抗体部分は、ｓｄＡｂ、全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ−ｓｃＦｖ、ミニボディ、またはダイアボディなどの任意の抗体または抗体フラグメントのフォーマットのものであり得る。特定の抗体フラグメントの概説については、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）を参照のこと。ｓｃＦｖフラグメントの概説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、ニューヨーク），ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照のこと；ＷＯ９３／１６１８５；ならびに米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号も参照のこと。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、ｉｎ  ｖｉｖｏ半減期の増加を有するＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２フラグメントの考察については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照のこと。多重特異性抗体の概説については、Ｗｅｉｄｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ，１０（１）：１−１８，２０１３；Ｇｅｅｒｉｎｇ  ａｎｄ  Ｆｕｓｓｅｎｅｇｇｅｒ，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，３３（２）：６５−７９，２０１５；Ｓｔａｍｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，１（２）：１７２−１９８，２０１２を参照のこと。ダイアボディは、二価または二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体フラグメントである。例えば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ１９９３／０１１６１；Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）；及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照のこと。トリアボディ及びテトラボディはまた、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）に記載される。抗体フラグメントは、本明細書に記載されるように、限定されないが、インタクト抗体のタンパク質分解消化、及び組み換え宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉまたはファージ）による産生を含む種々の技術により作製することができる。一部の実施形態では、１つ以上の他の抗体部分は、抗体を想起させる抗原結合ドメインを含む小さな操作タンパク質である抗体模倣物である（Ｇｅｅｒｉｎｇ  ａｎｄ  Ｆｕｓｓｅｎｅｇｇｅｒ，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，３３（２）：６５−７９，２０１５）。これらの分子は、既存のヒト足場タンパク質に由来し、単一のポリペプチドを含む。本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ構築物内に含まれ得る例示的な抗体模倣物は、Ｎ末端及びＣ末端キャップドメインに隣接する設計されたアンキリン反復タンパク質（ＤＡＲＰｉｎ；３〜５完全合成アンキリン反復を含む）、結合活性多量体（アビマー、複数のＡドメイ���を含む高親和性タンパク質、標的に対して低い親和性を有する各ドメイン）、またはアンチカリン（４つのアクセス可能なループを有するリポカリンの足場に基づいて、それぞれの配列がランダム化することができる）であり得るが、これらに限定されない。
【０１４０】
多重特異性抗体を作製するための技術は、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖ペアの組み換え共発現を含むが、これらに限定されない（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ  ３０５：５３７（１９８３））、ＷＯ９３／０８８２９、及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５（１９９１）を参照のこと）、ならびに“ノブ−イン−ホール”工学（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号を参照のこと）。多重特異性抗体は、抗体Ｆｃヘテロ二量体分子を作製するための静電ステアリング効果を設計すること（ＷＯ２００９／０８９００４Ａ１）；２つ以上の抗体またはフラグメントを架橋すること（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、及びＢｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照のこと）；二重特異性抗体を生成するためにロイシンジッパーを使用すること（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）を参照のこと）；二重特異性抗体フラグメントを作製するための「ダイアボディ」技術を使用すること（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照のこと）；及び、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）二量体を使用すること（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照のこと）；及び、例えば、Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載されるように三重特異性抗体を調製すること；及び、タンデム単一ドメイン抗体を含むポリペプチドを作成すること（例えば、米国特許出願第２０１１００２８６９５号；及びＣｏｎｒａｔｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２００１；２７６（１０）：７３４６−５０を参照のこと）により作製することもできる。「タコ抗体」を含む、３つ以上の機能的抗原結合部位を有する操作抗体も本明細書に含まれる（例えば、ＵＳ２００６／００２５５７６Ａ１を参照のこと）。
【０１４１】
ペプチドリンカー
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ構築物内に２つ以上の抗体部分は、任意に、ペプチドリンカーで連結することができる。抗ＴＩＧＩＴ構築物に使用されるペプチドリンカー（複数可）の長さ、柔軟性の程度、及び／または他の特性は、限定されないが、１つ以上の特定の抗原及びエピトープに対する親和性、特異性、または結合活性を含む特性に何らかの影響を与え得る。例えば、確実に、２つの隣接するドメインが互いに立体的に干渉させないために、より長いペプチドリンカーを選択することができる。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、隣接するドメインが互いに対して自由に移動できるように、柔軟な残基（例えば、グリシン及びセリン）を含む。例えば、グリシン−セリンダブレットは、好適なペプチドリンカーであり得る。
【０１４２】
ペプチドリンカーは、任意の好適な長さであり得る。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、５０、７５、１００アミノ酸長以上のいずれかである。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、約１００、７５、５０、４０、３５、３０、２５、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５アミノ酸長以下のいずれかである。一部の実施形態では、ペプチドリンカーの長さは、約１アミノ酸〜約１０アミノ酸、約１アミノ酸〜約２０アミノ酸、約１アミノ酸〜約３０アミノ酸、約５アミノ酸〜約１５アミノ酸、約１０アミノ酸〜約２５アミノ酸、約５アミノ酸〜約３０アミノ酸、約１０アミノ酸〜約３０アミノ酸長、約３０アミノ酸〜約５０アミノ酸、約５０アミノ酸〜約１００アミノ酸、または約１アミノ酸〜約１００アミノ酸のいずれかである。
【０１４３】
ペプチドリンカーは、天然に存在する配列、または天然に存在しない配列を有し得る。例えば、重鎖のみの抗体のヒンジ領域に由来する配列をリンカーとして使用することができる。例えば、ＷＯ１９９６／３４１０３を参照のこと。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、変異型ヒトＩｇＧ１ヒンジ（ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＳＰＰＳＰ、配列番号１２１）である。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、柔軟なリンカーである。例示的なフレキシブルなリンカーとしては、グリシンポリマー（Ｇ）ｎ、グリシン−セリンポリマー（例えば、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＳ）ｎ、及び（ＧＧＧＧＳ）ｎを含み、ｎは、少なくとも１つの整数である）、グリシン−アラニンポリマー、アラニン−セリンポリマー、ならびに当該技術分野で既知の他のフレキシブルなリンカーが挙げられる。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＳのアミノ酸配列（配列番号１１９）を含む。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、配列番号１２０のアミノ酸配列（ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ）を含む。
【０１４４】
二重特異性抗体
一部の実施形態では、本出願の単離抗体または抗原結合フラグメントは、第２の抗体部分に融合している本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ  ＩｇＧを含む二重特異性または多重特異性抗体であり、第２の抗体部分は、別の抗原、好ましくは、別の抑制性免疫チェックポイント分子に特異的に結合する。
【０１４５】
一実施形態では、他の抗原は、ＣＴＬＡ−４であり、第２の抗体部分は、抗ＣＴＬＡ−４ｍＡｂ、好ましくは、抗ＣＴＬＡ−４ｓｄＡｂなどのＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体または抗原結合フラグメントを含む。ＴＩＧＩＴ及びＣＴＬＡ−４に対する二重特異性を含む単離抗体または抗原結合フラグメントは、以後、「抗ＴＩＧＩＴ／ＣＴＬＡ−４抗体」、「抗ＴＩＧＩＴ／ＣＴＬＡ−４構築物」、または「ＴＩＧＩＴ×ＣＴＬＡ−４抗体」と呼ぶことができる。
【０１４６】
一実施形態では、他の抗原は、ＰＤ−Ｌ１であり、第２の抗体部分は、抗ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂ、好ましくは、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｄＡｂなどのＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体または抗原結合フラグメントを含む。ＴＩＧＩＴ及びＰＤ−Ｌ１に対する二重特異性を含む単離抗体または抗原結合フラグメントは、以後、「抗ＴＩＧＩＴ／ＰＤ−Ｌ１抗体」、「抗ＴＩＧＩＴ／ＰＤ−Ｌ１構築物」、または「ＴＩＧＩＴ×ＰＤ−Ｌ１抗体」と呼ぶことができる。
【０１４７】
一実施形態では、他の抗原は、ＴＩＭ−３であり、第２の抗体部分は、ＴＩＭ−３、例えば、抗ＴＩＭ−３  ｍＡｂ、好ましくは、抗ＴＩＭ３  ｓｄＡｂ、に特異的に結合する抗体または抗原結合フラグメントを含む。ＴＩＧＩＴ及びＴＩＭ−３に対する二重特異性を含む単離抗体または抗原結合フラグメントは、以後、「抗ＴＩＧＩＴ／ＴＩＭ−３抗体」、「抗ＴＩＧＩＴ／ＴＩＭ−３構築物」、または「ＴＩＧＩＴ×ＴＩＭ−３抗体」と呼ぶことができる。
【０１４８】
一実施形態では、他の抗原は、ＬＡＧ−３であり、第２の抗体部分は、ＬＡＧ−３、例えば、抗ＬＡＧ−３  ｍＡｂ、好ましくは、抗ＬＡＧ−３  ｓｄＡｂ、に特異的に結合する抗体または抗原結合フラグメントを含む。ＴＩＧＩＴ及びＬＡＧ−３に対する二重特異性を有する単離抗体または抗原結合フラグメントは、以後、「抗ＴＩＧＩＴ／ＬＡＧ−３抗体」、「抗ＴＩＧＩＴ／ＬＡＧ−３構築物」、または「ＴＩＧＩＴ×ＬＡＧ−３抗体」と呼ぶことができる。
【０１４９】
ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ１、ＴＩＭ−３、及びＬＡＧ−３は、ＴＩＧＩＴと同様に、抑制性免疫チェックポイント分子である。
【０１５０】
一部の実施形態では、ＴＩＧＩＴを特異的に認識する全長ＩｇＧ、ならびに抗ＣＴＬＡ−４  ｓｄＡｂ、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｄＡｂ、抗ＴＩＭ−３  ｓｄＡｂ、及び抗ＬＡＧ−３  ｓｄＡｂからなる群より選択されるｓｄＡｂを含む単離抗ＴＩＧＩＴ構築物が提供され、抗ＴＩＧＩＴ  ＩｇＧが、可変領域（ＶＨ）が、配列番号２７〜３９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１または最大約３つ（例えば、約１つ、２つ、もしくは３つのいずれか）のアミノ酸置換を含むその多様体；配列番号４０〜５２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２または最大約３つ（例えば、約１つ、２つ、もしくは３つのいずれか）のアミノ酸置換を含むその多様体；及び配列番号５３〜６５のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３または最大約３つ（例えば、約１つ、２つ、もしくは３つのいずれか）のアミノ酸置換を含むその多様体を含み、ＶＨが、免疫グロブリンの重鎖定常領域（ヒンジ、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）に融合している重鎖、ならびに、可変領域（ＶＬ）が、配列番号６６〜７８のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１または最大約３つ（例えば、約１つ、２つ、もしくは３つのいずれか）のアミノ酸置換を含むその多様体；配列番号７９〜９１のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２または最大約３つ（例えば、約１つ、２つ、もしくは３つのいずれか）のアミノ酸置換を含むその多様体；及び配列番号９２〜１０４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３または最大約３つ（例えば、約１つ、２つ、もしくは３つのいずれか）のアミノ酸置換を含むその多様体を含み、ＶＬが、免疫グロブリンの軽鎖定常領域（ＣＬ）に融合している軽鎖を含む。一部の実施形態では、ｓｄＡｂのＮ末端は、ＴＩＧＩＴを特異的に認識する全長抗体の重鎖の少なくとも１つのＣ末端に融合している。一部の実施形態では、ｓｄＡｂのＣ末端は、ＴＩＧＩＴを特異的に認識する全長抗体の重鎖の少なくとも１つのＮ末端に融合している。一部の実施形態では、ｓｄＡｂのＮ末端は、ＴＩＧＩＴを特異的に認識する全長抗体の軽鎖の少なくとも１つのＣ末端に融合している。一部の実施形態では、ｓｄＡｂのＣ末端は、ＴＩＧＩＴを特異的に認識する全長抗体の軽鎖の少なくとも１つのＮ末端に融合している。一部の実施形態では、ＴＩＧＩＴを特異的に認識する全長ＩｇＧ及び第２の結合部分ｓｄＡｂは、任意に、ペプチドリンカーで連結されている。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、配列番号１１９〜１２１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂ及びＴＩＧＩＴ間の結合のＫＤは、約１０−５Ｍ〜約１０−１２Ｍ（例えば、約１０−７Ｍ〜約１０−１２Ｍ、もしくは約１０−８Ｍ〜約１０−１２Ｍ）、またはそれ以下である。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ  ＩｇＧは、齧歯動物、キメラ、ヒト、部分的にヒト化、または完全にヒト化である。
【０１５１】
一部の実施形態では、ＴＩＧＩＴを特異的に認識する全長ＩｇＧ、ならびに抗ＣＴＬＡ−４  ｓｄＡｂ、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｄＡｂ、抗ＴＩＭ−３  ｓｄＡｂ、及び抗ＬＡＧ−３  ｓｄＡｂからなる群より選択されるｓｄＡｂを含む抗ＴＩＧＩＴ構築物が提供され、全長ＩｇＧは、ＶＨが免疫グロブリンの重鎖定常領域（ヒンジ、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）に融合している、配列番号１〜１３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、または配列番号１〜１３のいずれか１つと少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％のいずれか）の配列同一性を有するその多様体、ならびに、ＶＬが免疫グロブリンの軽鎖定常領域（ＣＬ）に融合している、配列番号１４〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または配列番号１４〜２６のいずれか１つと少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％のいずれか）の配列同一性を有するその多様体を含む。一部の実施形態では、ＴＩＧＩＴを特異的に認識する全長ＩｇＧ、ならびに抗ＣＴＬＡ−４  ｓｄＡｂ、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｄＡｂ、抗ＴＩＭ−３  ｓｄＡｂ、及び抗ＬＡＧ−３  ｓｄＡｂからなる群より選択されるｓｄＡｂを含む単離抗ＴＩＧＩＴ構築物が提供され、全長ＩｇＧは、ＶＨが免疫グロブリンの重鎖定常領域（ヒンジ、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）に融合している、配列番号１〜１３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶＨドメインまたはＶＨドメインに最大約３つ（例えば、約１つ、２つ、もしくは３つのいずれか）のアミノ酸置換を含むその多様体、ならびに、ＶＬが免疫グロブリンの軽鎖定常領域（ＣＬ）に融合している、配列番号１４〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶＨドメインまたはＶＬドメインに最大約３つ（例えば、約１つ、２つ、もしくは３つのいずれか）のアミノ酸置換を含むその多様体を含む。
【０１５２】
一部の実施形態では、ＶＨが免疫グロブリンの重鎖定常領域（ヒンジ、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）に融合している、配列番号１〜１３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶＨドメインまたは配列番号１〜１３のいずれか１つのＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２及び／またはＣＤＲ３などのＣＤＲにアミノ酸置換を含むその多様体、ならびに、ＶＬが免疫グロブリンの軽鎖定常領域（ＣＬ）に融合している、配列番号１４〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶＬドメインまたは配列番号１４〜２６のいずれか１つのＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２及び／またはＣＤＲ３などのＣＤＲにアミノ酸置換を含むその多様体を含む抗ＴＩＧＩＴ全長ＩｇＧ。一部の実施形態では、ＶＨが免疫グロブリンの重鎖定常領域（ヒンジ、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）に融合している、配列番号１〜１３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶＨドメインまたは配列番号１〜１３のいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むその多様体（アミノ酸置換は、配列番号１〜１３のいずれか１つのＦＲ１及び／またはＦＲ２及び／またはＦＲ３及び／またはＦＲ４などのＦＲにある）、ならびに、ＶＬが免疫グロブリンの軽鎖定常領域（ＣＬ）に融合している、配列番号１４〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶＬドメインまたは配列番号１４〜２６のいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むその多様体（アミノ酸置換は、配列番号１４〜２６のいずれか１つのＦＲ１及び／またはＦＲ２及び／またはＦＲ３及び／またはＦＲ４などのＦＲにある）を含む抗ＴＩＧＩＴ全長ＩｇＧ。一部の実施形態では、ＶＨが免疫グロブリンの重鎖定常領域（ヒンジ、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）に融合している、配列番号１〜１３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶＨドメインまたはＣＤＲ及びＦＲの両方にアミノ酸置換を含むその多様体、ならびに、ＶＬが免疫グロブリンの軽鎖定常領域（ＣＬ）に融合している、配列番号１４〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶＬドメインまたはＣＤＲ及びＦＲの両方にアミノ酸置換を含むその多様体を含む抗ＴＩＧＩＴ全長ＩｇＧ。一部の実施形態では、ＴＩＧＩＴを特異的に認識する全長ＩｇＧ、ならびに抗ＣＴＬＡ−４  ｓｄＡｂ、抗ＰＤ−Ｌ１  ｓｄＡｂ、抗ＴＩＭ−３  ｓｄＡｂ、及び抗ＬＡＧ−３  ｓｄＡｂからなる群より選択されるｓｄＡｂを含む単離抗ＴＩＧＩＴ構築物が提供され、全長ＩｇＧは、免疫グロブリンの重鎖定常領域（ヒンジ、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）に融合している、配列番号１〜１３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、ならびに、免疫グロブリンの軽鎖定常領域（ＣＬ）に融合している、配列番号１４〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む。一部の実施形態では、ｓｄＡｂのＮ末端は、ＴＩＧＩＴを特異的に認識する全長抗体の重鎖の少なくとも１つのＣ末端に融合している。一部の実施形態では、ｓｄＡｂのＣ末端は、ＴＩＧＩＴを特異的に認識する全長抗体の重鎖の少なくとも１つのＮ末端に融合している。一部の実施形態では、ｓｄＡｂのＮ末端は、ＴＩＧＩＴを特異的に認識する全長抗体の軽鎖の少なくとも１つのＣ末端に融合している。一部の実施形態では、ｓｄＡｂ���Ｃ末端は、ＴＩＧＩＴを特異的に認識する全長抗体の軽鎖の少なくとも１つのＮ末端に融合している。一部の実施形態では、ＴＩＧＩＴを特異的に認識する全長ＩｇＧ及び第２の結合部分ｓｄＡｂは、任意に、ペプチドリンカーで連結されている。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、配列番号１１９〜１２１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂ及びＴＩＧＩＴ間の結合のＫＤは、約１０−５Ｍ〜約１０−１２Ｍ（例えば、約１０−７Ｍ〜約１０−１２Ｍ、または約１０−８Ｍ〜約１０−１２Ｍ）である。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂは、齧歯動物、キメラ、ヒト、部分的にヒト化、または完全にヒト化である。
【０１５３】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ／ＣＴＬＡ−４構築物、抗ＴＩＧＩＴ／ＰＤ−Ｌ１構築物、抗ＴＩＧＩＴ／ＴＩＭ−３構築物、または抗ＴＩＧＩＴ／ＬＡＧ−３構築物のうちのいずれか１つと競合的に、ＴＩＧＩＴに特異的に結合するＴＩＧＩＴを特異的に認識する全長ＩｇＧを含む抗ＴＩＧＩＴ構築物（以下、「競合する抗ＴＩＧＩＴ構築物」と呼ばれる）も提供される。
【０１５４】
抗ＰＤ−Ｌ１抗体多様体
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体のアミノ酸配列多様体が企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／または他の生物学的特性を改善することが望ましい可能性がある。抗体のアミノ酸配列多様体は、抗体をコードする核酸配列に適切な修飾を導入することにより、またはペプチド合成により調製することができる。そのような修飾としては、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失及び／または残基への挿入及び／または残基の置換が挙げられる。欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせは、最終構築物に到達するように行うことができる。但し、最終構築物が所望の特徴、例えば、抗原結合、を有する。
【０１５５】
ａ）置換、挿入、欠失、及び多様体
一部の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体多様体が提供される。置換変異導入のための目的の部位は、ＨＶＲ及びＦＲを含む。保存的置換は、「好ましい置換」の見出しの下の表２に示される。より実質的な変化は、「例示的置換」の見出しの下の表２に、さらにアミノ酸側鎖クラスに関しては以下に記載のように、提示される。アミノ酸置換は、目的の抗体に導入することができ、生成物を、例えば、所望の活性、結合抗原の保持／改善、免疫原性の減少、またはＡＤＣＣもしくはＣＤＣの改善、についてスクリーニングすることができる。
【表２】
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【０１５６】
アミノ酸は、一般的な側鎖の特性に従ってグループ化することができる：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、
（５）鎖の向きに影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０１５７】
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスと交換することを伴うであろう。
【０１５８】
１つのタイプの置換多様体は、親抗体（例えば、ヒト化またはヒト抗体）のうちの１つ以上の超可変領域残基を置換することを含む。一般に、さらなる研究のために選択される、得られる多様体（複数可）は、親抗体と比較して特定の生物学的特性（例えば、親和性の増加、免疫原性の低下）に改変（例えば、改善）を有することになり、及び／または、親抗体の特定の生物学的特性を実質的に保持することになる。例示的な置換多様体は、親和性成熟抗体であり、これは、例えば、本明細書に記載されるようなファージディスプレイベースの親和性成熟技術を使用して、都合よく生成することができる。要約すると、１つ以上のＨＶＲ残基が変異し、多様体抗体は、ファージ上に提示され、特定の生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。
【０１５９】
改変（例えば、置換）は、例えば、抗体の親和性を改善するために、ＨＶＲで行うことができる。そのような改変は、ＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセス中に高頻度で変異を受けるコドンによりコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９−１９６（２００８）を参照のこと）、及び／または、ＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）で行うことができ、得られる多様性ＶＨまたはＶＬは、結合親和性について試験される。２次ライブラリーの構築及び再選択による親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１））に記載されている。親和性成熟の一部の実施形態では、多様性が、様々な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャッフリング、またはオリゴヌクレオチド特異的変異導入）のいずれかにより、成熟について選択される可変遺伝子に導入される。次に、２次ライブラリーが作成される。次に、ライブラリーは、望ましい親和性を有する任意の抗体多様体を同定するためにスクリーニングされる。多様性を導入する別の方法は、いくつかのＨＶＲ残基（例えば、一度に４〜６残基）がランダム化されるＨＶＲ指向のアプローチを含む。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング変異導入またはモデリングを使用して、具体的に同定することができる。特に、ＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３は多くの場合、標的化される。
【０１６０】
一部の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、そのような変更が抗体が抗原に結合する能力を実質的に低減させない限り、１つ以上のＨＶＲ内で生じ得る。例えば、結合親和性を実質的に低下させない保存的変更（例えば、本明細書で提供されるような保存的置換）は、ＨＶＲで行うことができる。そのような変更は、ＨＶＲの「ホットスポット」またはＣＤＲの外部に存在し得る。上で提供される多様体ＶＨＨ配列の一部の実施形態では、各ＨＶＲは、変化していないか、または１つ、２つ、もしくは３つ以下のアミノ酸置換を含有する。
【０１６１】
変異導入を対象とし得る抗体の残基または領域を同定するための有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５に記載されているような「アラニンスキャニング変異導入」と呼ばれる。本方法では、抗原との抗体の相互作用が影響を受けるかどうかを判定するために、標的残基の残基または基（例えば、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、及びＧｌｕなどの荷電残基）が、同定され、中性または負荷電アミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）で置換される。アミノ酸位置にさらなる置換を導入することができ、最初の置換に対する機能的感受性を示す。代替的または追加的に、抗体及び抗原間の接触点を同定するための抗原抗体複合体の結晶構造。そのような接触残基及び隣接残基は、置換の候補として標的化または排除することができる。多様体は、所望の特性を含有するかどうかを判定するためにスクリーニングすることができる。
【０１６２】
アミノ酸配列挿入は、１残基から、１００残基以上を含有するポリペプチドの長さの範囲がアミノ末端及び／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入多様体は、（例えば、ＡＤＥＰＴの場合）酵素、または抗体の血清半減期を増加させるポリペプチドへの抗体のＮ末端またはＣ末端への融合を含む。
【０１６３】
ｂ）グリコシル化多様体
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＴＩＧＩＴ構築物は、構築物がグリコシル化される程度を増加または減少させるように変更される。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が作成または削除されるようにアミノ酸配列を変更することにより、都合よく達成することができる。
【０１６４】
抗ＴＩＧＩＴ構築物がＦｃ領域を含む場合、それに結合している炭水化物を変更することができる。哺乳動物細胞により産生された天然抗体は通常、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７へのＮ結合により一般に結合する分枝状二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ  ｅｔ  ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ  １５：２６−３２（１９９７）を参照のこと。オリゴ糖は、種々の炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、ならびに二分岐オリゴ糖構造の「ステム」においてＧｌｃＮＡｃに結合しているフコースを含み得る。一部の実施形態では、特定の改善された特性を有する抗体多様体を作製するために、本出願の抗ＰＤ−Ｌ１構築物におけるオリゴ糖の修飾を行うことができる。
【０１６５】
一部の実施形態では、Ｆｃ領域に（直接的または間接的に）結合しているフコースを欠く炭水化物構造を有する抗体多様体が提供される。例えば、そのような抗体におけるフコースの量は、１％〜８０％、１％〜６５％、５％〜６５％、または２０％〜４０％であり得る。フコースの量は、例えば、ＷＯ２００８／０７７５４６に記載されるように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法で測定されたＡｓｎ２９７に結合した全ての糖構造体（例えば、複合構造、ハイブリッド構造、及び高マンノース構造）の合計に対するＡｓｎ２９７の糖鎖内のフコースの平均量を計算することにより決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域のおよそ２９７位にあるアスパラギン残基（Ｆｃ領域残基のＥＵナンバリング）を指すが、Ａｓｎ２９７はまた、抗体における小さな配列変動のために、２９７位の上流または下流、すなわち、２９４位及び３００位間の約±３アミノ酸に位置し得る。そのようなフコシル化多様体は、ＡＤＣＣ機能を改善することができる。例えば、米国特許出願第ＵＳ２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）、同第ＵＳ２００４／００９３６２１号（Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ  Ｋｏｇｙｏ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照のこと。「脱フコシル化」または「フコース欠損」抗体多様体に関連する刊行物の例としては、以下が挙げられる：ＵＳ２００３／０１５７１０８；ＷＯ２０００／６１７３９；ＷＯ２００１／２９２４６；ＵＳ２００３／０１１５６１４；ＵＳ２００２／０１６４３２８；ＵＳ２００４／００９３６２１；ＵＳ２００４／０１３２１４０；ＵＳ２００４／０１１０７０４；ＵＳ２００４／０１１０２８２；ＵＳ２００４／０１０９８６５；ＷＯ２００３／０８５１１９；ＷＯ２００３／０８４５７０；ＷＯ２００５／０３５５８６；ＷＯ２００５／０３５７７８；ＷＯ２００５／０５３７４２；ＷＯ２００２／０３１１４０；Ｏｋａｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９−１２４９（２００４）；Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）。脱フコシル化抗体を産生することが可能な細胞株の例としては、タンパク質フコシル化を欠損するＬｅｃ１３  ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ  ｅｔ  ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３−５４５（１９８６）；米国特許出願第ＵＳ２００３／０１５７１０８Ａ１号、Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ；及びＷＯ２００４／０５６３１２Ａ１、Ａｄａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．、特に、実施例１１で）ならびにノックアウト細胞株、例えば、α−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）；Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０−６８８（２００６）；及びＷＯ２００３／０８５１０７を参照のこと）が挙げられる。
【０１６６】
抗ＴＩＧＩＴ構築物多様体はさらに、例えば、抗体のＦｃ領域に結合している二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃにより二分されている二分オリゴ糖と共に提供される。そのような抗体多様体は、フコシル化の低減及び／またはＡＤＣＣ機能の改善を有し得る。そのような抗体多様体の例としては、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔ  ｅｔ  ａｌ．）；米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．）；及びＵＳ２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ，）に記載される。Ｆｃ領域に結合しているオリゴ糖に少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体多様体も提供されている。そのような抗体多様体は、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。そのような抗体多様体は、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７（Ｐａｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．）；ＷＯ１９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ，Ｓ）；及びＷＯ１９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載されている。
【０１６７】
ｃ）Ｆｃ領域多様体
一部の実施形態では、１つ以上のアミノ酸修飾は、本明細書で提供される抗ＴＩＧＩＴ構築物のＦｃ領域に導入し、それにより、Ｆｃ領域多様体を生成することができる。Ｆｃ領域多様体は、１つ以上のアミノ酸位置においてアミノ酸修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のＦｃ領域）を含み得る。
【０１６８】
一部の実施形態では、本出願は、全てではないが一部のエフェクター機能を有する抗ＴＩＧＩＴ構築物多様体を企図し、これは、ｉｎ  ｖｉｖｏでの抗ＴＩＧＩＴ構築物の半減期が重要であるが、特定のエフェクター機能（例えば、補体及びＡＤＣＣ）が不要または有害である適用に望ましい候補となる。Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及び／またはｉｎ  ｖｉｖｏ細胞毒性アッセイは、実施して、ＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣ活性の低減／枯渇を確認するために行うことができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイは、抗体がＦｃγＲを欠失すること（従って、ＡＤＣＣ活性を欠失する可能性）を確認するために行うことができるが、ＦｃＲｎ結合能力を保持する。ＡＤＣＣを媒介する初代細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上のＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２（１９９１）の４６４ページの表３にまとめられる。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイの非限定例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８３：７０５９−７０６３（１９８６）を参照のこと）、及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：１４９９−１５０２（１９８５）；同第５，８２１，３３７号（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１−１３６１（１９８７）を参照のこと）に記載される。あるいは、非放射性アッセイ法を用いることができる（例えば、フローサイトメトリー用のＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞毒性アッセイ（Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．、カリフォルニア州マウンテンビュー）；及びＣｙｔｏＴｏｘ  ９６（登録商標）非放射性細胞毒性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、ウィスコンシン州マディソン）を参照のこと）。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。代替的または追加的に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されるような動物モデルにおいて、ｉｎ  ｖｉｖｏで評価することができる。Ｃ１ｑ結合アッセイはまた、抗体がＣ１ｑと結合することができず、従って、ＣＤＣ活性を欠くことを確認するために行うことができる。例えば、ＷＯ２００６／０２９８７９及びＷＯ２００５／１００４０２のＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照のこと。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを実施することができる（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０２：１６３（１９９６）；Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １０１：１０４５−１０５２（２００３）；及びＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ  Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ  １０３：２７３８−２７４３（２００４）を参照のこと）。ＦｃＲｎ結合及びｉｎ  ｖｉｖｏクリアランス／半減期の決定は、当該技術分野で既知の方法を使用して実施することもできる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９−１７６９（２００６）を参照のこと）。
【０１６９】
エフェクター機能が低減した抗体は、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、及び３２９のうちの１つ以上が置換されているものを含む（米国特許第６，７３７，０５６号）。そのようなＦｃ変異体は、残基２６５及び２９７がアラニンで置換されている、いわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体を含む、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７、及び３２７のうちの２つ以上に置換を有するＦｃ変異体を含む（米国特許第７，３３２，５８１号）。
【０１７０】
ＦｃＲへの結合が改善または低減した特定の抗体多様体が記載される。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号、ＷＯ２００４／０５６３１２、及びＳｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１−６６０４（２００１）を参照のこと）
【０１７１】
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ構築物多様体は、ＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８、３３３、及び／または３３４位（残基のＥＵナンバリング）での置換、を有するＦｃ領域を含む。
【０１７２】
一部の実施形態では、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ９９／５１６４２、及びＩｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４（２０００）に記載されるように、Ｃ１ｑ結合及び／または補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）の変化（すなわち、改善または低下のいずれか）をもたらすＦｃ領域において変更がなされる。
【０１７３】
一部の実施形態では、半減期を増加させ及び／または新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合を改善する１つ以上のアミノ酸置換を含む多様体Ｆｃ領域を含む抗ＴＩＧＩＴ構築物（例えば、ＨＣＡｂ）多様体が提供される。胎児への母系ＩｇＧの移動に関与する、半減期が増加し、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善された抗体（Ｇｕｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）及びＫｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））は、ＵＳ２００５／００１４９３４Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．）に記載される。これらの抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する１つ以上の置換を有するＦｃ領域を含む。そのようなＦｃ多様体は、Ｆｃ領域残基：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、または４３４のうちの１つ以上に置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換、を有するものを含む（米国特許第７，３７１，８２６号）。
【０１７４】
Ｆｃ領域多様体の他の例に関するＤｕｎｃａｎ  ＆  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  ３２２：７３８−４０（１９８８）；米国特許第５，６４８，２６０号；米国特許第５，６２４，８２１号；及びＷＯ９４／２９３５１も参照のこと。
【０１７５】
本明細書に記載のＦｃ多様体のいずれか、またはその組み合わせを含む抗ＴＩＧＩＴ構築物（例えば、ｓｄＡｂに融合している全長ＩｇＧまたは抗ＴＩＧＩＴＩｇＧなど）が企図される。
【０１７６】
ｄ）システイン操作抗体多様体
一部の実施形態では、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されている、システイン操作された抗ＴＩＧＩＴ構築物、例えば、「チオＭＡｂ」を作成することが望ましい可能性がある。特定の実施形態では、置換残基は、抗体の接近可能な部位に生じる。システインとそれらの残基を置換することにより、反応性チオール基は、それにより、抗体の接近部位に配置され、さらに本明細書に記載されるように、免疫複合体を作成するために、薬剤部分またはリンカー−薬物部分などの他の部分に抗体をコンジュゲートするように使用することができる。一部の実施形態では、以下の残基のうちのいずれか１つ以上は、システインで置換することができる：重鎖のＡ１１８（ＥＵナンバリング）及び重鎖のＦｃ領域のＳ４００（ＥＵナンバリング）。システイン操作された抗ＴＩＧＩＴ構築物は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されるように生成することができる。
【０１７７】
ｅ）抗体誘導体
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＴＩＧＩＴ構築物はさらに、当該分野で既知であり、容易に利用可能である追加の非タンパク質性部分を含有するように修飾することができる。抗体の誘導体化に適する部分は、水溶性ポリマーを含むが、これに限定されない。水溶性ポリマーの非限定例としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストランまたはポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、酸化プロピレン／酸化エチレンコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、及びそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中での安定性に起因して、製造上有利である得る。ポリマーは、任意の分子量であり得、分枝または非分枝であり得る。抗体に結合しているポリマーの数は、変動し得、複数のポリマーが結合している場合、それらは、同じかまたは異なる分子であり得る。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／またはタイプは、限定されないが、改善されるべき抗体の特定の特性または機能、抗体誘導体が、定義された条件下の治療に使用されるかどうかなど、を含む考慮事項に基づいて決定することができる。
【０１７８】
一部の実施形態では、放射線に曝露することにより選択的に加熱することができる抗ＴＩＧＩＴ構築物及び非タンパク質性部分のコンジュゲートが提供される。一部の実施形態では、非タンパク質性部分は、カーボンナノチューブである（Ｋａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０２：１１６００−１１６０５（２００５））。放射線は、任意の波長のものであり得、通常の細胞に害を与えないが、抗体−非タンパク質性部分に近接する細胞が死滅する温度まで非タンパク質性部分を加熱する波長を含むが、これらに限定されない。
【０１７９】
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＴＩＧＩＴ構築物（例えば、抗ＴＩＧＩＴＩｇＧ、抗ＴＩＧＩＴ／ＣＴＬＡ−４二重特異性抗体、抗ＴＩＧＩＴ／ＰＤ−Ｌ１二重特異性抗体、抗ＴＩＧＩＴ／ＴＩＭ−３二重特異性抗体、または抗ＴＩＧＩＴ／ＬＡＧ−３二重特異性抗体）はさらに、１つ以上の生物学的に活性なタンパク質、ポリペプチド、またはそのフラグメントを含有するように修飾することができる。本明細書で使用される「生物活性」または「生物学的に活性な」は、特定の機能を実行するために体内で生物活性を示すことを意味する。例えば、それは、特定の生体分子、例えば、タンパク質、ＤＮＡなどと組み合わせた後の、そのような生体分子の活性の促進または抑制を意味し得る。一部の実施形態では、生物活性タンパク質またはそのフラグメントは、免疫刺激／免疫調節、膜輸送、または酵素活性を有する。
【０１８０】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ構築物と融合させることができる生理活性タンパク質またはそのフラグメントは、リンホカインなどのリガンド及び特定の細胞受容体と相互作用する細胞因子である。リンホカインは、抗原またはレクチンがＴ細胞成長を刺激する時に、Ｔ細胞により分泌される低分子量タンパク質である。リンホカインの例としては、インターフェロン−α、インターフェロン−γ、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、コロニー刺激因子（例えば、ＣＳＦ−１、Ｇ−ＣＳＦ、またはＧＭ−ＣＳＦ）、ケモタキシン、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）、マクロファージ活性化因子（ＭＡＦ）、ＮＫ細胞活性化因子、Ｔ細胞置換因子、白血球抑制因子（ＬＩＦ）、リンホトキシン、破骨細胞活性化因子（ＯＡＦ）、可溶性免疫応答抑制因子（ＳＩＲＳ）、成長刺激因子、単球成長因子などが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の抗ＴＩＧＩＴ融合タンパク質に組み込むことができる細胞因子は、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）、インターフェロン（ＩＦＮ）、及び神経成長因子（ＮＧＦ）などを含むが、これらに限定されない。
【０１８１】
ＩＩＩ．医薬組成物
さらに、本明細書に記載のＴＩＧＩＴを特異的に認識する全長ＩｇＧ（例えば、抗ＴＩＧＩＴ  ＩｇＧ、抗ＴＩＧＩＴ／ＣＴＬＡ−４二重特異性抗体、ＴＩＧＩＴ／ＰＤ−Ｌ１二重特異性抗体、抗ＴＩＧＩＴ／ＴＩＭ−３二重特異性抗体、または抗ＴＩＧＩＴ／ＬＡＧ−３二重特異性抗体）を含む抗ＴＩＧＩＴ構築物のいずれか１つ、及び、任意に、薬学的に許容される担体を含む医薬組成物であるが、本出願により提供される。医薬組成物は、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で、所望の純度を有する本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ構築物を任意の薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））と混合させることにより、調製することができる。
【０１８２】
医薬組成物は、安定であることが好ましく、本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂを含む抗ＴＩＧＩＴ構築物は、保存時にその物理的及び化学的安定性及び完全性を本質的に保持する。タンパク質の安定性を測定するための種々の分析技術は、当該分野で利用可能であり、Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，２４７−３０１，Ｖｉｎｃｅｎｔ  Ｌｅｅ  Ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，Ｐｕｂｓ．（１９９１）及びＪｏｎｅｓ，Ａ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．１０：２９−９０（１９９３）に概説される。安定性は、選択温度で、選択時間測定することができる。迅速なスクリーニングのために、製剤を４０℃で２週間〜１ヶ月間維持することができ、この時点で、安定性が測定される。製剤が２〜８℃で保存される場合、一般に、製剤は、３０℃または４０℃で少なくとも１ヶ月間、及び／または２〜８℃で少なくとも２年間安定でなければならない。製剤を３０℃で保存される場合、一般に、製剤は、３０℃で少なくとも２年間、及び／または４０℃で少なくとも６ヶ月間安定でなければならない。例えば、保存中の凝集の程度は、タンパク質の安定性の指標として使用することができる。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ構築物の安定した製剤は、製剤中に凝集物として存在する抗ＴＩＧＩＴ構築物を約１０％未満（好ましくは、約５％未満）含み得る。
【０１８３】
許容される担体、賦形剤、または安定剤は、用いられる投薬量及び濃度でレシピエントに無害であり、緩衝液、アスコルビン酸、メチオニン、ビタミンＥ、メタ重亜硫酸ナトリウムを含む抗酸化剤；保存剤、等張化剤（例えば、塩化ナトリウム）、安定剤、金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；ＥＤＴＡ及び／または非イオン性界面活性剤などのキレート剤を含む。
【０１８４】
生理学的に許容される担体の例としては、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；保存剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、もしくはベンジルアルコール；メチルもしくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、もしくはリジンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩を形成する対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；及び／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及びＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤が挙げられる。
【０１８５】
緩衝液は、特に、安定性がｐＨ依存性である場合、治療効果を最適化する範囲でｐＨを制御するために使用される。緩衝液は、好ましくは、約５０ｍＭ〜約２５０ｍＭの範囲の濃度で存在する。本出願に使用される好適な緩衝剤は、有機酸及び無機酸の両方ならびにその塩を含む。例えば、クエン酸塩、リン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、シュウ酸塩、乳酸塩、酢酸塩。さらに、緩衝液は、ヒスチジン及びトリスなどのトリメチルアミン塩を含み得る。
【０１８６】
防腐剤は、微生物の成長を遅らせるために添加し、通常、０．２％〜１．０％（ｗ／ｖ）の範囲で存在する。保存料の添加は、例えば、多目的使用（複数回投与）の製剤の生成を容易にすることができる。本出願に使用される好適な防腐剤としては、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；ベンザルコニウムハロゲン化物（例えば、塩化物、臭化物、ヨウ化物）、塩化ベンゼトニウム；チメロサール、フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；メチルまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール、３−ペンタノール、及びｍ−クレゾールが挙げられる。
【０１８７】
場合により、「安定剤」として知られる等張化剤は、組成物中の液体の等張性を調整または維持するために存在する。タンパク質及び抗体などの大きな荷電生体分子と併用される場合、それらは、アミノ酸側鎖の荷電基と相互作用し、それにより、分子間及び分子内相互作用の可能性を軽減することができるので、多くの場合「安定剤」と呼ばれる。等張化剤は、他の成分の相対量を考慮して、０．１重量％〜２５重量％、好ましくは、１重量％〜５重量％の任意の量で存在することができる。好ましい等張化剤としては、多価糖アルコール、好ましくは、三価または高糖アルコール、例えば、グリセリン、エリトリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、及びマンニトールが挙げられる。
【０１８８】
追加の賦形剤は、以下の（１）増量剤、（２）溶解促進剤、（３）安定剤、及び、（４）変性または容器壁への付着を防止する薬剤、のうちの１つ以上として機能し得る薬剤を含む。そのような賦形剤としては、多価糖アルコール（上に列挙）；アラニン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、リジン、オルニチン、ロイシン、２−フェニルアラニン、グルタミン酸、スレオニンなどのアミノ酸；スクロース、ラクトース、ラクチトール、トレハロース、スタキオース、マンノース、ソルボース、キシロース、リボース、リビトール、ミオニシトース、ミオイニシトール、ガラクトース、ガラクチトール、グリセロール、シクリトール（例えば、イノシトール）、ポリエチレングリコールなどの有機糖または糖アルコール；尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、α−モノチオグリセロール、及びチオ硫酸ナトリウムなどの硫黄含有還元剤；ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチン、または他の免疫グロブリンなどの低分子量タンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；単糖類（例えば、キシロース、マンノース、フルクトース、グルコース）；二糖類（例えば、ラクトース、マルトース、スクロース）；ラフィノースなどの三糖類；及びデキストリンまたはデキストランなどの多糖類が挙げられる。
【０１８９】
（「湿潤剤」としても知られる）非イオン性界面活性剤または界面活性剤は、治療薬の可溶化を助けるために、且つ、撹拌誘発性凝集から治療タンパク質を保護するために存在し、これはまた、活性な治療用タンパク質または抗体の変性を引き起こすことなく、製剤を剪断表面応力に曝露させる。非イオン性界面活性剤は、約０．０５ｍｇ／ｍｌ〜約１．０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは、約０．０７ｍｇ／ｍｌ〜約０．２ｍｇ／ｍｌの範囲で存在する。
【０１９０】
好適な非イオン性界面活性剤としては、ポリソルベート（２０、４０、６０、６５、８０など）、ポリオキサマー（１８４、１８８など）、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）ポリオール、ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）、ポリオキシエチレンソルビタンモノエーテル（ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）−８０など）、ラウロマクロゴール４００、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油１０、５０、及び６０、モノステアリン酸グリセロール、ショ糖脂肪酸エステル、メチルセルロース、及びカルボキシメチルセルロースが挙げられる。使用することができるアニオン性界面活性剤は、ラウリル硫酸ナトリウム、ジオクチルソジウムスルホサクシネート、及びジオクチルソジウムスルホサクシネートを含む。カチオン性界面活性剤は、塩化ベンザルコニウムまたは塩化ベンゼトニウムを含む。
【０１９１】
医薬組成物がｉｎ  ｖｉｖｏ投与に使用されるために、それらは、滅菌でなければならない。医薬組成物は、滅菌濾過膜に通す濾過により滅菌にすることができる。本明細書の医薬組成物は一般に、滅菌アクセスポートを有する容器、例えば、皮下注射針により穿刺可能な栓を有する静脈内溶液バッグまたはバイアルに入れられる。
【０１９２】
投与経路は、好適な方法で長期間にわたって、例えば、単一または複数回ボーラスまたは注入による既知の容認された方法、例えば、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内による注射もしくは注入、病巣内もしくは関節内経路、局所投与、吸入、または徐放もしくは持続放出手段によるもの、に従うものである。一部の実施形態では、医薬組成物は、腫瘍内など、局所投与される。
【０１９３】
徐放性調製物を調製することができる。徐放性調製物の好適な例としては、アンタゴニストを含有する固体疎水性ポリマーの半透過性マトリックスを含み、このマトリックスは、成形品、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリックスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリラート）、またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸及びエチル−Ｌ−グルタマートのコポリマー、非分解性エチレン−酢酸ビニル、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴ（商標）などの分解性乳酸−グリコール酸コポリマー（乳酸−グリコール酸コポリマー及び酢酸ロイプロリドで構成される注射用ミクロスフェア）、ならびにポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が挙げられる。
【０１９４】
本明細書の医薬組成物は、処置される特定の適応症に必要な場合に複数の活性化合物、好ましくは、互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有するものも含有し得る。代替的または追加的に、組成物は、細胞毒性剤、化学療法剤、サイトカイン、免疫抑制剤、または成長抑制剤を含み得る。そのような分子は、意図された目的に有効な量で組み合わせて適切に存在する。
【０１９５】
活性成分は、コロイド状薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子、及びナノカプセル）またはマクロエマルションにおいて、例えば、コアセルベーション技術、または界面重合、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリラート）マイクロカプセルにより、調製されたマイクロカプセルに封入することもできる。そのような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １８ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎに開示される。
【０１９６】
一部の実施形態では、医薬組成物は、使い捨て密封バイアルなどの使い捨てバイアルに含有される。一部の実施形態では、医薬組成物は、多目的バイアルに含有される。一部の実施形態では、医薬組成物は、容器に一括で含有される。一部の実施形態では、医薬組成物は、凍結保存される。
【０１９７】
ＩＶ．使用方法または用途
本明細書に記載されているようにＴＩＧＩＴを特異的に認識するｍＡｂを含む抗ＴＩＧＩＴコンストラクト（例えば、抗ＴＩＧＩＴ全長ＩｇＧ、抗ＴＩＧＩＴ／ＣＴＬＡ−４二重特異性抗体、抗ＴＩＧＩＴ／ＰＤ−Ｌ１二重特異性抗体、抗ＴＩＧＩＴ／ＴＩＭ−３二重特異性抗体、または抗ＴＩＧＩＴ／ＬＡＧ−３二重特異性抗体）及びその組成物（例えば、医薬組成物）は、例えば、診断、分子アッセイ、及び治療において様々な用途に有用である。
【０１９８】
本発明の一態様は、本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ構築物を含む有効量の医薬組成物を個体に投与することを含む、それを必要とする個体のＴＩＧＩＴ関連疾患または状態を処置する方法を提供する。一部の実施形態では、ＴＩＧＩＴ関連疾患は、がんである。一部の実施形態では、ＴＩＧＩＴ関連疾患は、ウイルス感染などの病原性感染である。
【０１９９】
本出願は、部分的に、単独または別の療法との任意の組み合わせで、少なくとも一部の態様では、薬学的に許容される担体または賦形剤と共に、投与することができるタンパク質構築物（例えば、抗ＴＩＧＩＴ全長ＩｇＧ、抗ＴＩＧＩＴ／ＣＴＬＡ−４二重特異性抗体、抗ＴＩＧＩＴ／ＰＤ−Ｌ１二重特異性抗体、抗ＴＩＧＩＴ／ＴＩＭ−３二重特異性抗体、または抗ＴＩＧＩＴ／ＬＡＧ−３二重特異性抗体）、核酸分子及び／またはそれらをコードするベクター、核酸分子及び／またはそれらをコードするベクターを含む宿主細胞を検討する。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ構築物の投与前に、それらは、当該分野で周知である好適な薬学的担体及び賦形剤と組み合わせることができる。本開示に従って調製される組成物は、がんの処置またはがんの悪化の遅延に使用することができる。
【０２００】
一部の実施形態では、ＴＩＧＩＴを特異的に認識するｍＡｂ（例えば、抗ＴＩＧＩＴ全長ＩｇＧ、抗ＴＩＧＩＴ／ＣＴＬＡ−４二重特異性抗体、抗ＴＩＧＩＴ／ＰＤ−Ｌ１二重特異性抗体、抗ＴＩＧＩＴ／ＴＩＭ−３二重特異性抗体、または抗ＴＩＧＩＴ／ＬＡＧ−３二重特異性抗体）を含む単離抗ＴＩＧＩＴ構築物を含む有効量の医薬組成物を個体に投与することを含む、がんの処置方法が提供される。一部の実施形態では、がんは、固形腫瘍（例えば、結腸がん）である。一部の実施形態では、医薬組成物は、全身（例えば、静脈内）投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は、局所（例えば、腫瘍内）投与される。一部の実施形態では、方法はさらに、追加のがん治療法（例えば、手術、放射線、化学療法、免疫療法、ホルモン療法、またはそれらの組み合わせ）を個体に投与することを含む。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。一部の実施形態では、がんを処置する方法は、以下の生物活性のうちの１つ以上を有する：（１）がん細胞の死滅（バイスタンダー死滅を含む）；（２）がん細胞の増殖の抑制；（３）腫瘍の免疫応答の誘導；（４）腫瘍サイズの低減；（５）がんを有する個体の１つ以上の症状の緩和；（６）腫瘍転移の抑制；（７）生存期間の延長；（８）がん進行の時間の延長；及び、（９）がんの再発の可能性の予防、抑制、または低減。一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物により媒介されるがん細胞を死滅させる方法は、少なくとも約４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、またはそれ以上のいずれかの腫瘍細胞死滅率を達成し得る。一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物により媒介されるがん細胞を死滅させる方法は、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、またはそれ以上のいずれかのバイスタンダー腫瘍細胞（腫瘍溶解性ＶＶに感染していない）の死滅率を達成し得る。一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物により媒介される腫瘍サイズを低減させる方法は、腫瘍サイズの少なくとも約１０％（例えば、少なくとも約２０％、３０％、４０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％のいずれかを含む）を低減させ得る。一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物により媒介される腫瘍転移を抑制する方法は、転移の少なくとも約１０％（例えば、少なくとも約２０％、３０％、４０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％のいずれかを含む）を抑制し得る。一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物により媒介される個体（例えば、ヒト）の生存を延長する方法は、個体の生存を、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１８、または２４ヶ月のいずれか延長し得る。一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物により媒介されるがん進行の時間を延長する方法は、がん進行の時間を、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２週間のいずれか延長し得る。
【０２０１】
本明細書に記載の方法は、固形がん及び液体がんの両方を含む様々ながんを処置するのに適する。方法は、早期がん、非転移性がん、原発性がん、進行性がん、局所進行性がん、転移性がん、または寛解期のがんを含む全ての段階のがんに適用可能である。本明細書に記載の方法は、アジュバント設定またはネオアジュバント設定における、第１の治療、第２の治療、第３の治療、または当該技術分野で既知の他のタイプのがん治療、例えば、化学療法、手術、ホルモン療法、放射線、遺伝子療法、免疫療法（例えば、Ｔ細胞療法）、骨髄移植、幹細胞移植、標的療法、凍結療法、超音波療法、光線力学療法、高周波アブレーションなどとの併用治療として使用することができる（すなわち、方法は、１次／根治治療前に実施することができる）。一部の実施形態では、方法は、以前に処置されている個体を処置するために使用される。一部の実施形態では、がんは、以前の治療に対して不応であった。一部の実施形態では、方法は、以前に処置されていることがない個体を処置するために使用される。
【０２０２】
一部の実施形態では、方法は、異常なＴＩＧＩＴ発現、活性、及び／またはシグナル伝達を伴うがんを処置するのに適するが、非限定例として、メラノーマ、前立腺癌、肺癌、結腸癌、胃癌、卵巣癌、乳癌、及び神経膠芽腫を含む。
【０２０３】
従って、一部の実施形態では、ＴＩＧＩＴを特異的に認識するモノクローナル抗体（例えば、抗ＴＩＧＩＴ全長ＩｇＧ、抗ＴＩＧＩＴ／ＣＴＬＡ−４二重特異性抗体、抗ＴＩＧＩＴ／ＰＤ−Ｌ１二重特異性抗体、抗ＴＩＧＩＴ／ＴＩＭ−３二重特異性抗体、または抗ＴＩＧＩＴ／ＬＡＧ−３二重特異性抗体）を含む単離抗ＴＩＧＩＴ構築物を含む有効量の医薬組成物を個体に投与することを含む、免疫療法応答性固形腫瘍（例えば、がん腫または腺がん、例えば、異常なＴＩＧＩＴ発現、活性、及び／またはシグナル伝達を伴うがん）を処置する方法が提供される。一部の実施形態では、がんは、固形腫瘍（例えば、結腸癌）である。一部の実施形態では、医薬組成物は、全身（例えば、静脈内）投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は、局所（例えば、腫瘍内）投与される。一部の実施形態では、方法はさらに、追加のがん治療法（例えば、手術、放射線、化学療法、免疫療法、ホルモン療法、またはそれらの組み合わせ）を個体に投与することを含む。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。一部の実施形態では、がんを処置する方法は、以下の生物活性のうちの１つ以上を有する：（１）がん細胞の死滅（バイスタンダー死滅を含む）；（２）がん細胞の増殖の抑制；（３）腫瘍の免疫応答の誘導；（４）腫瘍サイズの低減；（５）がんを有する個体の１つ以上の症状の緩和；（６）腫瘍転移の抑制；（７）生存期間の延長；（８）がん進行の時間の延長；及び、（９）がんの再発の可能性の予防、抑制、または低減。一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物により媒介されるがん細胞を死滅させる方法は、少なくとも約４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、またはそれ以上のいずれかの腫瘍細胞死滅率を達成し得る。一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物により媒介されるがん細胞を死滅させる方法は、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、またはそれ以上のいずれかのバイスタンダー腫瘍細胞（腫瘍溶解性ＶＶに感染していない）の死滅率を達成し得る。一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物により媒介される腫瘍サイズを低減させる方法は、腫瘍サイズの少なくとも約１０％（例えば、少なくとも約２０％、３０％、４０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％のいずれかを含む）を低減させ得る。一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物により媒介される腫瘍転移を抑制する方法は、転移の少なくとも約１０％（例えば、少なくとも約２０％、３０％、４０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％のいずれかを含む）を抑制し得る。一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物により媒介される個体（例えば、ヒト）の生存を延長する方法は、個体の生存を、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１８、または２４ヶ月のいずれか延長し得る。一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物により媒介されるがん進行の時間を延長する方法は、がん進行の時間を、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２週間のいずれか延長し得る。
【０２０４】
一部の実施形態では、方法は、異常なＣＤ１５５またはＴＩＧＩＴの発現、活性、及び／またはシグナル伝達を伴うがんを処置するのに適し、非限定例として、血液がん及び／または固形腫瘍を含む。本発明の抗体を使用して成長を抑制することができる一部のがんは、通常、免疫療法に応答するがんを含む。処置のための他のがんの非限定例としては、メラノーマ（例えば、転移性悪性メラノーマ）、腎癌（例えば、明細胞癌）、前立腺癌（例えば、ホルモン不応性前立腺腺癌）、乳癌、結腸癌、及び肺癌（例えば、非小細胞肺癌）が挙げられる。さらに、本発明は、本発明の抗体を使用して成長を抑制することができる難治性または再発性の悪性腫瘍を含む。本発明の抗体を使用して処置することができる他のがんの例としては、骨癌、膵癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚または眼内悪性メラノーマ、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門の癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道癌、小腸癌、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組織の肉腫、尿道癌、陰茎癌、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病を含む慢性または急性白血病、小児の固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓または尿管の癌、腎盂癌、中枢神経系の新生物（ＣＮＳ）、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、アスベストにより誘発されたものを含む環境誘発性がん、及び該がんの組み合わせが挙げられる。本出願はまた、転移性がん、特に、ＴＩＧＩＴを発現する転移性がんの処置に有用である（Ｉｗａｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７：１３３−１４４）。
【０２０５】
従って、一部の実施形態では、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ１、ＴＩＭ−３、またはＬＡＧ−３  ｓｄＡｂに融合しているＴＩＧＩＴを特異的に認識する全長ＩｇＧを含む単離抗ＴＩＧＩＴ構築物を含む有効量の医薬組成物を個体に投与することを含む、免疫療法応答性固形腫瘍（例えば、がん腫または腺がん、例えば、異常なＴＩＧＩＴ発現、活性、及び／またはシグナル伝達を伴うがん、及び／または異常なＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ１、ＴＩＭ−３、及びＬＡＧ−３の発現、活性、及び／またはシグナル伝達）を処置する方法が提供される。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ１、ＴＩＭ−３、またはＬＡＧ−３  ｓｄＡｂに融合しているＴＩＧＩＴを特異的に認識する全長ＩｇＧを含む単離抗ＴＩＧＩＴ構築物を含む有効量の医薬組成物を個体に投与することを含む、免疫療法応答性固形腫瘍（例えば、がん腫または腺がん、例えば、異常なＴＩＧＩＴ発現、活性、及び／またはシグナル伝達を伴うがん、及び／または異常なＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ１、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３の発現、活性、及び／またはシグナル伝達）を処置する方法が提供される。
【０２０６】
一部の実施形態では、本明細書に記載の方法は、腺がん、胃腸カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍、平滑筋肉腫、メラノーマ、または扁平上皮細胞がんなどの結腸直腸癌を処置するのに適する。
【０２０７】
本出願の医薬組成物の投薬量及び所望の薬物濃度は、想定される特定の用途に応じて変動し得る。適切な投薬量または投与経路の決定は、十分に当業者の技術の範囲内である。動物実験は、ヒト治療のための有効用量を決定するための信頼できるガイダンスを提供する。有効用量の種間スケーリングは、Ｍｏｒｄｅｎｔｉ，Ｊ．ａｎｄ  Ｃｈａｐｐｅｌｌ，Ｗ．“Ｔｈｅ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｅｓ  Ｓｃａｌｉｎｇ  ｉｎ  Ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，”Ｉｎ  Ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｎｅｗ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｙａｃｏｂｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｄｓ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９８９，ｐｐ．４２−４６に定められる原理に従って実施することができる。
【０２０８】
本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ  ｍＡｂを含む抗ＴＩＧＩＴ構築物のｉｎ  ｖｉｖｏ投与が使用される時、通常の投薬量は、投与経路に応じて、１日当たり約１０ｎｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ哺乳動物体重以上、好ましくは、約１ｍｇ／ｋｇ／日〜１０ｍｇ／ｋｇ／日、例えば、約１〜３ｍｇ／ｋｇ／日、約２〜４ｍｇ／ｋｇ／日、約３〜５ｍｇ／ｋｇ／日、約４〜６ｍｇ／ｋｇ／日、約５〜７ｍｇ／ｋｇ／日、約６〜８ｍｇ／ｋｇ／日、約６〜６．５ｍｇ／ｋｇ／日、約６．５〜７ｍｇ／ｋｇ／日、約７〜９ｍｇ／ｋｇ／日、または約８〜１０ｍｇ／ｋｇ／日で変動し得る。これは、異なる製剤が異なる処置及び異なる疾患に有効であること、ならびに、特定の器官または組織を処置することが意図される投与が、別の器官または組織のものと異なる方法の送達を必要とし得ることは、本出願の範囲内である。さらに、投薬量は、１回以上の別々の投与により、または連続注入により投与することができる。数日以上にわたる反復投与では、状態に応じて、疾患症状の望ましい抑制が生じるまで、処置が持続する。しかし、他の投薬レジメンが有用であり得る。この治療法の進行は、従来技術及びアッセイで容易に監視される。
【０２０９】
一部の実施形態では、医薬組成物は、単回投与される（例えば、ボーラス注射）。一部の実施形態では、医薬組成物は、複数回（例えば、２回、３回、４回、５回、６回、またはそれ以上のいずれか）投与される。複数回投与した場合、それらは、同じかまたは異なる経路により実施することができ、同じ部位または代替部位で行うことができる。医薬組成物は、週２回、週３回、週４回、週５回、毎日、中断なしで毎日、週１回、中断なしで毎週、２週に１回、３週に１回、月１回、２ヶ月に１回、３ヶ月に１回、４ヶ月に１回、５ヶ月に１回、６ヶ月に１回、７ヶ月に１回、８ヶ月に１回、９ヶ月に１回、１０ヶ月に１回、１１ヶ月に１回、または年１回投与することができる。投与間隔は、約２４時間〜４８時間、２日〜３日、３日〜５日、５日〜１週間、１週間〜２週間、２週間〜１ヶ月、１ヶ月〜２ヶ月、２ヶ月〜３ヶ月、３ヶ月〜６ヶ月、または６ヶ月〜１年のいずれか１つであり得る。間隔は、（例えば、腫瘍の進行後に）不規則でもあり得る。一部の実施形態では、投与スケジュールに中断はない。一部の実施形態では、医薬組成物は、４日毎に４回投与される。特定の患者のための最適な投薬量及び処置レジメンは、疾患の徴候について患者を監視し、それに応じて処置を調整することにより、医薬品の当業者が容易に決定することができる。
【０２１０】
限定されない、再構成された液体製剤を含む本出願の医薬組成物は、ボーラスとしての静脈内投与などの既知の方法に従って、または筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、静脈内（ｉ．ｖ．）、関節内、滑膜内、くも膜下腔内、経口、局所、もしくは吸入経路による、ある期間にわたる連続注入により、本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ構築物での処置を必要とする個体、好ましくは、ヒト、に投与される。再構成された製剤は、タンパク質が全体に分散されるように、本明細書に記載の凍結乾燥抗ＴＩＧＩＴ構築物を希釈剤に溶解させることにより調製することができる。本出願での使用に適する例示的な薬学的に許容される（ヒトへの投与に対して安全且つ非毒性の）希釈剤としては、滅菌水、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝溶液（例えば、リン酸緩衝食塩水）、滅菌生理食塩水、リンガー溶液、もしくはデキストロース溶液、または塩及び／または緩衝液の水溶液が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２１１】
一部の実施形態では、医薬組成物は、皮下（すなわち、皮膚の下に）投与により個体に投与される。そのような目的のために、医薬組成物は、シリンジを使用して注射することができる。しかし、注射デバイスなどの医薬組成物を投与するための他の装置：インジェクターペン；自動注射器、無針デバイス；及び皮下パッチ送達システムが利用可能である。
【０２１２】
一部の実施形態では、医薬組成物は、個体に静脈内投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は、静脈内注入などの注入により個体に投与される。免疫療法のための注入技術は、当該技術分野で既知である（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇ．Ｊ．ｏｆ  Ｍｅｄ．３１９：１６７６（１９８８）を参照のこと）。
【０２１３】
本明細書に記載のＴＩＧＩＴを特異的に認識するｍＡｂを含む抗ＴＩＧＩＴ構築物（例えば、抗ＴＩＧＩＴ全長ＩｇＧ、抗ＴＩＧＩＴ／ＣＴＬＡ−４二重特異性抗体、抗ＴＩＧＩＴ／ＰＤ−Ｌ１二重特異性抗体、抗ＴＩＧＩＴ／ＴＩＭ−３二重特異性抗体、または抗ＴＩＧＩＴ／ＬＡＧ−３二重特異性抗体）、及びそれらの組成物（例えば、医薬組成物）はまた、診断または分子アッセイにおいて有用である。例えば、抗体または抗原結合フラグメントは、生物学的試料中のＴＩＧＩＴの検出または定量化に使用し、それにより、ＴＩＧＩＴに関連する上記のような疾患の進行または処置を検出または監視することができる。
【０２１４】
Ｖ．調製方法
本明細書に記載の抗ＴＩＧＩＴ構築物（例えば、抗ＴＩＧＩＴモノクローナル抗体）は、当該技術分野で既知の任意の方法を使用して、または本明細書に記載されるように調製することができる。
【０２１５】
齧歯動物モノクローナル抗体は、当該技術分野で既知の方法を使用して、例えば、齧歯動物種（例えば、マウスもしくはラット）を免疫して、そのハイブリドーマを得ることにより、または、当該技術分野で既知の分子生物学的技術及び未選択ライブラリーの個々のクローンを用いるＥＬＩＳＡによる後続の選択を使用して、Ｆａｂフラグメントもしくは一本鎖Ｆｃ（ｓｃＦｖ）のライブラリーをクローニングすることにより、または、ファージディスプレイを使用することにより、得ることができる。
【０２１６】
モノクローナル抗体の組み換え産生のために、モノクローナル抗体をコードする核酸は、単離または合成され、さらなるクローニング（ＤＮＡの増幅）または発現のために複製可能なベクターに挿入される。モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することが可能なオリゴヌクレオチドプローブを使用して）、簡単に分離及び配列決定される。多くのベクターが利用可能である。ベクターの選択は、部分的には使用されるべき宿主細胞に依存する。一般に、好ましい宿主細胞は、原核生物または真核生物（一般に、哺乳動物）起源のいずれかである。
【０２１７】
実施形態
本発明は、以下の非限定的な実施形態も提供する。
【０２１８】
実施形態１は、
（ａ）
ｉ．配列番号２７〜３９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、
ｉｉ．配列番号４０〜５２からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、及び
ｉｉｉ．配列番号５３〜６５からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３をそれぞれ含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、及び
（ｂ）
ｉ．配列番号６６〜７８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、
ｉｉ．配列番号７９〜９１からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び
ｉｉｉ．配列番号９２〜１０４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３をそれぞれ含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、
を含む単離抗体、好ましくは、ｍＡｂ、またはその抗原結合フラグメントを含み、
抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＴＩＧＩＴ、好ましくは、ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合することができる。
【０２１９】
実施形態２は、実施形態１の単離抗体またはその抗原結合フラグメントであり、
（１）ＶＨは、それぞれ、配列番号２７、４０、及び５３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬは、それぞれ、配列番号６６、７９、及び９２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むか、
（２）ＶＨは、それぞれ、配列番号２８、４１、及び５４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬは、それぞれ、配列番号６７、８０、及び９３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むか、
（３）ＶＨは、それぞれ、配列番号２９、４２、及び５５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬは、それぞれ、配列番号６８、８１、及び９４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むか、
（４）ＶＨは、それぞれ、配列番号３０、４３、及び５６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬは、それぞれ、配列番号６９、８２、及び９５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むか、
（５）ＶＨは、それぞれ、配列番号３１、４４、及び５７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬは、それぞれ、配列番号７０、８３、及び９６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むか、
（６）ＶＨは、それぞれ、配列番号３２、４５、及び５８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬは、それぞれ、配列番号７１、８４、及び９７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むか、
（７）ＶＨは、それぞれ、配列番号３３、４６、及び５９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬは、それぞれ、配列番号７２、８５、及び９８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むか、
（８）ＶＨは、それぞれ、配列番号３４、４７、及び６０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬは、それぞれ、配列番号７３、８６、及び９９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むか、
（９）ＶＨは、それぞれ、配列番号３５、４８、及び６１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬは、それぞれ、配列番号７４、８７、及び１００のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むか、
（１０）ＶＨは、それぞれ、配列番号３６、４９、及び６２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬは、それぞれ、配列番号７５、８８、及び１０１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むか、
（１１）ＶＨは、それぞれ、配列番号３７、５０、及び６３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬは、それぞれ、配列番号７６、８９、及び１０２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むか、
（１２）ＶＨは、それぞれ、配列番号３８、５１、及び６４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬは、それぞれ、配列番号７７、９０、及び１０３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むか、または
（１３）ＶＨは、それぞれ、配列番号３９、５２、及び６５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬは、それぞれ、配列番号７８、９１、及び１０４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。
【０２２０】
実施形態３は、ＶＨがそれぞれ配列番号３８、５１、及び６４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬがそれぞれ配列番号７７、９０、及び１０３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、実施形態２の単離抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０２２１】
実施形態４は、ＶＨがそれぞれ配列番号３９、５２、及び６５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが配列番号７８、９１、及び１０４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、実施形態２の単離抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０２２２】
実施形態５は、ＶＨが、配列番号１〜１３のいずれか１つのアミノ酸配列、または配列番号１〜１３のいずれか１つと少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、もしくは少なくとも約９５％の配列同一性を有するその多様体を含み、ＶＬが、配列番号１４〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列、または配列番号１４〜２６のいずれか１つと少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、もしくは少なくとも約９５％の配列同一性を有するその多様体を含む、実施形態１〜４のいずれか１つの単離抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０２２３】
実施形態６は、ＶＨが、配列番号１〜１３からなる群より選択されるアミノ酸配列、またはＶＨに最大約３つのアミノ酸置換を含むその多様体を含み、ＶＬが、配列番号１４〜２６からなる群より選択されるアミノ酸配列、またはＶＬに最大約３つのアミノ酸置換を含むその多様体を含む、実施形態５の単離抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０２２４】
実施形態７は、
（１）ＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号１４のアミノ酸配列を含むか、
（２）ＶＨが、配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号１５のアミノ酸配列を含むか、
（３）ＶＨが、配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号１６のアミノ酸配列を含むか、
（４）ＶＨが、配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号１７のアミノ酸配列を含むか、
（５）ＶＨが、配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号１８のアミノ酸配列を含むか、
（６）ＶＨが、配列番号６のアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号１９のアミノ酸配列を含むか、
（７）ＶＨが、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号２０のアミノ酸配列を含むか、
（８）ＶＨが、配列番号８のアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号２１のアミノ酸配列を含むか、
（９）ＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号２２のアミノ酸配列を含むか、
（１０）ＶＨが、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号２３のアミノ酸配列を含むか、
（１１）ＶＨが、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号２４のアミノ酸配列を含むか、
（１２）ＶＨが、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号２５のアミノ酸配列を含むか、または
（１３）ＶＨが、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号２６のアミノ酸配列を含む、実施形態５または６の単離抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０２２５】
実施形態８は、ＶＨが配列番号１２のアミノ酸配列を含み、ＶＬが配列番号２５のアミノ酸配列を含む、実施形態７の単離抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０２２６】
実施形態９は、ＶＨが配列番号１３のアミノ酸配列を含み、ＶＬが配列番号２６のアミノ酸配列を含む、実施形態７の単離抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０２２７】
実施形態１０は、ＶＨが、免疫グロブリンの重鎖定常領域に融合している、実施形態１〜９のいずれか１つの単離抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０２２８】
実施形態１１は、ＶＬが、免疫グロブリンの軽鎖定常領域（ＣＬ）に融合している、実施形態１〜１０のいずれか１つの単離抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０２２９】
実施形態１２は、抗体またはその抗原結合フラグメント及びＴＩＧＩＴ間の結合のＫＤが、１０−７Ｍ〜約１０−１２Ｍ、好ましくは、約１０−８Ｍ〜約１０−１２Ｍ、より好ましくは、約１０−９Ｍ〜約１０−１２Ｍである、実施形態１〜１１のいずれか１つの単離抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０２３０】
実施形態１３は、齧歯動物、キメラ、ヒト、部分的ヒト化、または完全ヒト化である、実施形態１〜１２のいずれか１つの単離抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０２３１】
実施形態１４は、ヒト化である、実施形態１３の単離抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０２３２】
実施形態１５は、ＶＨが配列番号１０５〜１１２からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、ＶＬが配列番号１１３〜１１８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態１４の単離抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０２３３】
実施形態１６は、さらに、第２の抗体部分を含み、第２の抗体部分が、第２の抗原に特異的に結合することが可能である、実施形態１〜１５のいずれか１つの単離抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０２３４】
実施形態１７は、第２の抗体部分が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ−ｓｃＦｖ、ミニボディ、ダイアボディ、ｓｄＡｂ、または抗体模倣物である、実施形態１６の単離抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０２３５】
実施形態１８は、第２の抗体部分が、ｓｄＡｂである、実施形態１７の単離抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０２３６】
実施形態１９は、第２の抗体部分が、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合することが可能であり、好ましくは、第２の抗体部分が、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合することが可能なｓｄＡｂである、実施形態１６〜１８のいずれか１つの単離抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０２３７】
実施形態２０は、第２の抗体部分が、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合することが可能であり、好ましくは、第２の抗体部分が、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合することが可能なｓｄＡｂである、実施形態１６〜１８のいずれか１つの単離抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０２３８】
実施形態２１は、第２の抗体部分が、ＴＩＭ−３に特異的に結合することが可能であり、好ましくは、第２の抗体部分が、ＴＩＭ−３に特異的に結合することが可能なｓｄＡｂである、実施形態１６〜１８のいずれか１つの単離抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０２３９】
実施形態２２は、第２の抗体部分が、ＬＡＧ−３に特異的に結合することが可能であり、好ましくは、第２の抗体部分が、ＬＡＧ−３に特異的に結合することが可能なｓｄＡｂである、実施形態１６〜１８のいずれか１つの単離抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０２４０】
実施形態２３は、ＴＩＧＩＴを特異的に認識することが可能な全長ＩｇＧの重鎖または軽鎖のアミノ末端が、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ１、ＴＩＭ−３、またはＬＡＧ−３に特異的に結合することが可能なｓｄＡｂのカルボキシル末端に、任意に、ペプチドリンカーを介して融合している、実施形態１９〜２２のいずれか１つの単離抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０２４１】
実施形態２４は、ＴＩＧＩＴを特異的に認識することが可能な重鎖もしくは軽鎖または全長ＩｇＧのカルボキシル末端が、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ１、ＴＩＭ−３、またはＬＡＧ−３に特異的に結合することが可能なｓｄＡｂのアミノ末端に、任意に、ペプチドリンカーを介して融合している、実施形態１９〜２２のいずれか１つの単離抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０２４２】
実施形態２５は、ＴＩＧＩＴを特異的に認識することが可能な全長ＩｇＧが、配列番号１１９〜１２１の１つのアミノ酸配列を有するペプチドリンカーを介して、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ１、ＴＩＭ−３、またはＬＡＧ−３に特異的に結合することが可能なｓｄＡｂに融合している、実施形態２３または２４の単離抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０２４３】
実施形態２６は、実施形態１〜２５のいずれか１つの単離抗体またはその抗原結合フラグメントと競合的に、ＴＩＧＩＴに特異的に結合することが可能である、第２の単離抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０２４４】
実施形態２７は、実施形態１〜２５のいずれか１つの単離抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または実施形態２６の単離抗体もしくはその抗原結合フラグメント、及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物である。
【０２４５】
実施形態２８は、それを必要とする対象のＴＩＧＩＴ関連疾患の処置に使用される、実施形態１〜２５のいずれか１つの単離抗体もしくはその抗原結合フラグメント、実施形態２６の第２の単離抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または実施形態２７の医薬組成物である。
【０２４６】
実施形態２９は、ＴＩＧＩＴ関連疾患が、がんである、実施形態２８の単離抗体またはその抗原結合フラグメントまたは使用のための医薬組成物である。
【０２４７】
実施形態３０は、がんが、固形腫瘍である、実施形態２９の単離抗体またはその抗原結合フラグメントまたは使用のための医薬組成物である。
【０２４８】
実施形態３１は、がんが、結腸癌である、実施形態２９の単離抗体またはその抗原結合フラグメントまたは使用のための医薬組成物である。
【０２４９】
実施形態３２は、追加のがん治療法と組み合わせて、実施形態２８〜３１のいずれか１つの単離抗体またはその抗原結合フラグメントまたは使用のための医薬組成物である。
【０２５０】
実施形態３３は、追加のがん治療法が、外科手術、放射線、化学療法、免疫療法、ホルモン療法、またはそれらの組み合わせである、実施形態３２の単離抗体またはその抗原結合フラグメントまたは使用のための医薬組成物である。
【０２５１】
実施形態３４は、ＴＩＧＩＴ関連疾患が、病原性感染である、実施形態２８の単離抗体またはその抗原結合フラグメントまたは使用のための医薬組成物である。
【０２５２】
実施形態３５は、単離抗体またはその抗原結合フラグメントまたは医薬組成物が、全身または局所投与用である、実施形態２８〜３４のいずれか１つの単離抗体またはその抗原結合フラグメントまたは使用のための医薬組成物である。
【０２５３】
実施形態３６は、単離抗体またはその抗原結合フラグメントまたは医薬組成物が、静脈内投与用である、実施形態２８〜３４のいずれか１つを単離抗体またはその抗原結合フラグメントまたは使用のための医薬組成物である。
【０２５４】
実施形態３７は、単離抗体またはその抗原結合フラグメントまたは医薬組成物が、腫瘍内投与用である、実施形態２８〜３４のいずれか１つの単離抗体またはその抗原結合フラグメントまたは使用のための医薬組成物である。
【０２５５】
実施形態３８は、対象が、ヒトである、実施形態２８〜３７のいずれか１つの単離抗体またはその抗原結合フラグメントまたは使用のための医薬組成物である。
【０２５６】
実施形態３９は、有効量の実施形態２７の医薬組成物を対象に投与することを含む、それを必要とする対象のＴＩＧＩＴ関連疾患を処置する方法である。
【０２５７】
実施形態４０は、ＴＩＧＩＴ関連疾患が、がんである、実施形態３９の方法である。
【０２５８】
実施形態４１は、がんが、固形腫瘍である、実施形態４０の方法である。
【０２５９】
実施形態４２は、がんが、結腸がんである、実施形態４０または４１の方法である。
【０２６０】
実施形態４３は、さらに追加のがん治療を個体に投与することを含む、実施形態４０〜４２のいずれか１つの方法である。
【０２６１】
実施形態４４は、追加のがん治療法が、外科手術、放射線、化学療法、免疫療法、ホルモン療法、またはそれらの組み合わせである、実施形態４３の方法である。
【０２６２】
実施形態４５は、ＴＩＧＩＴ関連疾患が、病原性感染である、実施形態３９の方法である。
【０２６３】
実施形態４６は、医薬組成物が、全身的または局所的に投与される、実施形態３９〜４５のいずれか１つの方法である。
【０２６４】
実施形態４７は、医薬組成物が、静脈内投与される、実施形態３９〜４５のいずれか１つの方法である。
【０２６５】
実施形態４８は、医薬組成物が腫瘍内投与される、実施形態３９〜４５のいずれか１つの方法である。
【０２６６】
実施形態４９は、個体が、ヒトである、実施形態３９〜４８のいずれか１つの方法である。
【実施例】
【０２６７】
以下の実施例は、本発明の単なる例示であることが意図され、従って、決して本発明を限定すると考えるべきではない。以下の実施例及び詳細な記載は、例示のために提供され、限定するものではない。
【０２６８】
実施例１：マウス抗ヒトＴＩＧＩＴハイブリドーマ細胞株及びモノクローナル抗体の生成
本開示では、マウス抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体、７０Ａ１１Ａ８Ｅ６、１１Ｄ８Ｅ１２Ａ４、１６Ｆ１０Ｈ１２Ｃ１１、８Ｆ２Ｄ８Ｅ７、４８Ｂ５Ｇ４Ｅ１２、１３９Ｅ２Ｃ２Ｄ２、１２８Ｅ３Ｇ７Ｆ５、１２１Ｃ２Ｆ１０Ｂ５、１０４Ｇ１２Ｅ１２Ｇ２、８３Ｇ６Ｈ１１Ｃ１２、９２Ｅ９Ｄ４Ｂ４、１００Ｃ４Ｅ７Ｄ１１、及び６４Ｇ１Ｅ９Ｂ４を以下の免疫化方法で得た。
【０２６９】
動物免疫では、免疫原は、ＦｃタグヒトＴＩＧＩＴタンパク質（Ａｃｒｏ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ：ＴＩＴ−５２５４）の融合タンパク質である。５０μｇのＴＩＧＩＴ  Ｆｃ融合タンパク質を２００μｌのフロイト完全アジュバント（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）と１：１で混合して、雌のＢａｌｂ／ｃマウスを免疫した。次に、フロイト不完全アジュバントと１：１で混合した２５μｇのＴＩＧＩＴ  Ｆｃ融合タンパク質で、２週間毎に最大３回、マウスの腹腔内に追加免疫した。融合の４日前に、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ、図１Ａ〜１Ｃ）によるフローサイトメトリー研究でＴＩＧＩＴ結合シグナルが高い３匹のマウス（＃８０８７、＃８１００、及び＃８７７１）を、２５μｇのＴＩＧＩＴ  Ｆｃ融合タンパク質（アジュバントなし）を用いる最終の腹腔内の追加免疫について選択した。ＦＡＣＳ結合テストを適用して、ＣＨＯ−Ｋ１細胞（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ）の表面に発現したＴＩＧＩＴタンパク質へのハイブリドーマ上清中の抗体の結合能力を評価した。ＣＨＯ−Ｋ１親細胞及びヒトＴＩＧＩＴで過剰発現されたＣＨＯ−Ｋ１の両方を収集し、ＰＢＳで３回洗浄した。２．５×１０５の細胞及び１００μｌのハイブリドーマ上清を、９６ウェルプレートの各ウェルに加え、４℃で１時間インキュベートした。次に、ＰＢＳを使用して、プレートを３回洗浄した。１００μｌのｉＦｌｕｏｒ標識ヤギ抗マウスＩｇＧを加え、４℃で４５分間インキュベートした。最終的に、細胞をＰＢＳで３回洗浄し、シグナルをＦＡＣＳ  ＢＤ  Ｃａｌｉｂｕｒで読み取った。
【０２７０】
ハイブリドーマ融合及びスクリーニングでは、単離された脾臓を均質化された単一細胞懸濁液にし、単一細胞懸濁液を骨髄腫細胞（ＳＰ２／０細胞）についても作製した。８．９×１０７の脾臓細胞及び４．１×１０７のＳＰ２／０細胞を、電気融合法で融合させた。胸腺ヌクレオシドピリミジン、ヒポキサンチン、及びアミノプテリンハイブリドーマ選択試薬を含有する１００ｍｌのＤＭＥＭ／１０％のＦＢＳ培地に、各ハイブリドーマ融合からの融合細胞を再懸濁した。細胞懸濁液を、それぞれ１００μｌを、５０の９６ウェルに分配した。９６ウェルプレートを、６％のＣＯ２濃度で、３７℃のインキュベーターで７日間培養した。次に、ハイブリドーマ上清をＥＬＩＳＡ結合、ブロッキング、及びＦＡＣＳ結合で試験して、ＥＬＩＳＡ結合試験で抗ヒトＴＩＧＩＴ抗体の存在を検出した。
【０２７１】
ＥＬＩＳＡ結合試験：間接ＥＬＩＳＡを適用して、上清中の抗体のヒトＴＩＧＩＴ  Ｆｃ融合タンパク質への結合能力を評価した。０．５μｇ／ｍｌの組み換えＴＩＧＩＴ  Ｆｃ融合タンパク質またはヒトＩｇＧ１を、１ウェル当たり１００μｌのＰＢＳを含むＥＬＩＳＡプレートで、４℃で一晩コーティングした。ＰＢＳＴ（０．０５％のｔｗｅｅｎ）を使用してプレートを洗浄した。１％のＢＳＡを含有するＰＢＳＴを使用して、１ウェル当たり２００μｌで、０．５時間プレートを遮断した。ブロッキング緩衝液を後で廃棄し、ハイブリドーマ上清を１ウェル当たり１００μｌ加えて、室温で１時間インキュベートした。次に、プレートをＰＢＳＴで３回洗浄した。ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｆａｂ特異的）ＨＲＰを、１ウェル当たり１００μｌで加え、３７℃で３０分インキュベートした。次に、プレートをＰＢＳＴで５回洗浄し、ＴＭＢ緩衝液（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ）をウェルに加え、室温で１５分間インキュベートした。１ＭのＨＣＬ（Ｓｉｇｍａ）停止緩衝液を１ウェル当たり５０μｌで加えて、反応を停止させ、プレートを４５０ｎｍで読み取った。
【０２７２】
５００を超える、ヒトＴＩＧＩＴ  Ｆｃ融合タンパク質の上清のＥＬＩＳＡ試験読み値及びヒトＩｇＧ１上の上清のＥＬＩＳＡ試験読み値間のＯＤ値の差を有するハイブリドーマはさらに、ハイブリドーマサブクローニングについて選択した。サブクローニングを限界希釈で実施した。細胞を計数し、胸腺ヌクレオシドピリミジン、ヒポキサンチン、及びアミノプテリンハイブリドーマ選択試薬を含有するＤＭＥＭ／１０％のＦＢＳ培地で、５〜１５細胞／ｍｌの濃度に段階希釈した。各ハイブリドーマクローンでは、２００μｌのハイブリドーマ懸濁液を、１ウェル当たり１〜３細胞の濃度で９６ウェルに移した。プレートを３７℃、５％のＣＯ２で１週間インキュベートした。次に、上清をＦＡＣＳ結合研究で使用して、抗ヒトＴＩＧＩＴ抗体の存在を評価した。７０Ａ１１Ａ８Ｅ６、１１Ｄ８Ｅ１２Ａ４、１６Ｆ１０Ｈ１２Ｃ１１、８Ｆ２Ｄ８Ｅ７、４８Ｂ５Ｇ４Ｅ１２、１３９Ｅ２Ｃ２Ｄ２、１２８Ｅ３Ｇ７Ｆ５、１２１Ｃ２Ｆ１０Ｂ５、１０４Ｇ１２Ｅ１２Ｇ２、８３Ｇ６Ｈ１１Ｃ１２、９２Ｅ９Ｄ４Ｂ４、１００Ｃ４Ｅ７Ｄ１１、及び６４Ｇ１Ｅ９Ｂ４由来のハイブリドーマ上清は、ＦＡＣＳ試験（図２Ａ〜２Ｍ）により、ヒトＴＩＧＩＴと特異的に結合することが確認された。
【０２７３】
実施例２：マウス抗ヒトＴＩＧＩＴハイブリドーマ細胞株及びモノクローナル抗体の配列決定及び発現
発現マウスアイソタイプＥＬＩＳＡキット（Ｃｌｏｎｏｔｙｐｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ−ＨＲＰ、ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ、アラバマ州バーミンガム）を使用して、モノクローナル抗体のアイソタイプを同定した。次に、ＴＲＩｚｏｌ（Ａｍｂｉｏｎ）を使用して、３×１０６〜５×１０６のハイブリドーマ細胞からモノクローンの総ＲＮＡを抽出した。アイソタイプ特異的プライマー及びユニバーサルプライマー（ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ（商標）第１鎖ｃＤＮＡ合成キット、Ｔａｋａｒａ；カリフォルニア州マウンテンビュー）を使用して、ＲＮＡをｃＤＮＡに逆転写し、次に、ＲＡＣＥ  ＰＣＲ（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ）を適用して、抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域を増幅し、ＰＣＲ産物をｐＭＤ１８−Ｔベクターシステム（Ｔａｋａｒａ）にサブクローニングした。ベクター特異的プライマーを使用して、挿入されたセグメントを検証及び配列決定をした。最終的に、７０Ａ１１Ａ８Ｅ６、１１Ｄ８Ｅ１２Ａ４、１６Ｆ１０Ｈ１２Ｃ１１、８Ｆ２Ｄ８Ｅ７、４８Ｂ５Ｇ４Ｅ１２、１３９Ｅ２Ｃ２Ｄ２、１２８Ｅ３Ｇ７Ｆ５、１２１Ｃ２Ｆ１０Ｂ５、１０４Ｇ１２Ｅ１２Ｇ２、８３Ｇ６Ｈ１１Ｃ１２、９２Ｅ９Ｄ４Ｂ４、１００Ｃ４Ｅ７Ｄ１１、及び６４Ｇ１Ｅ９Ｂ４の可変領域ＤＮＡ／タンパク質配列を得た。
【０２７４】
上記のクローンのそれぞれの重鎖または軽鎖可変及び定常領域のＤＮＡフラグメントを合成し、ｐＴＴ５発現ベクターに挿入した。構築されたプラスミドを使用して、ＨＥＫ２９３−６Ｅ細胞をトランスフェクトし、ＨＥＫ２９３−６Ｅ細胞を、振盪フラスコ中、３７℃で１０日間培養した。次に、精製のために上清を収集した。精製前に、パイプ及びプロテインＡカラムを０．２ＭのＮａＯＨで処理して、発熱物質を除去した。次に、カラムを０．０５ＭのＴｒｉｓ及び１．５ＭのＮａＣｌ（ｐＨ８．０）で再平衡化した。以前に収集した上清を、平衡緩衝液と１：１で混合し、濾過して滅菌状態を維持した。濾過した上清を室温で２時間プロテインＡカラムを用いてインキュベートし、１Ｘの平衡緩衝液で洗浄した。ＩｇＧを、滅菌の０．１Ｍのクエン酸ナトリウム（ｐＨ３．５）で溶出させた。溶出液を、１／９容量の１ＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ９．０）で中和した。中和した溶液を、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）緩衝液に変更して、他の緩衝液内容物を除去し、最終的な試料溶液を無菌条件下で濃縮した。次に、１．４３の消衰係数Ｅｃ（０．１％）を用いてＯＤ２８０ｎｍで、濃度を決定した。精製した抗体を、ＢｉｏＲａｄ電気泳動システムで１０％の既製ゲル（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ）を使用したＳＤＳ−ＰＡＧＥで試験した。ゲルをＥｓｔａｉｎ２．０（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ）で染色し、純度及び分子量を、タンパク質ラダー（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ）と比較することにより推定した。
【０２７５】
実施例３：ヒトＴＩＧＩＴ組み換えタンパク質へのマウス抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体の結合
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）バイオセンサーＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｔ２００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；イギリス、リトルチャルフォント）を使用して、ヒトＴＩＧＩＴへのマウス抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体の結合動態を決定した。異なる濃度のマウス抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体を、５０ｎＭから３倍連続希釈で調製した。Ｆｃキャプチャー法を介して、各マウス抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体をセンサーチップ上に固定化した。ＨＩＳタグ付きのヒトＴＩＧＩＴタンパク質を検体として使用した。ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｔ２００評価ソフトウェアを使用して、解離（Ｋｄ）及び会合（ＫＡ）速度定数を得た。見かけの平衡解離定数（ＫＤ）をｋｄ対ｋａの比から計算した。表３に示されるように、マウス抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体は、ヒトＴＩＧＩＴタンパク質に相当する結合動態を有していた（表３）。
【表３】
2021510710.tif 000004
2021510710.tif 000005
【０２７６】
実施例４：ＣＨＯ−Ｋ１細胞で発現されたヒトまたはカニクイザルＴＩＧＩＴへのマウス抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体の結合
蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）ベースのアッセイを使用して、ＣＨＯ−Ｋ１細胞で過剰発現されたヒトまたはカニクイザルＴＩＧＩＴへのマウス抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体の結合親和性を決定した。ＦＡＣＳ分析のために１次抗体として（ヒトＴＩＧＩＴの場合１１１μＭ、カニクイザルＴＩＧＩＴの場合５５．６μＭで開始し、９つの濃度の３倍連続希釈した）、マウス抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体を調製した。ヒトＴＩＧＩＴを発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞を接着培養フラスコから分離し、（両方とも９６ウェルプレートで）様々な濃度のマウス抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体と混合した。混合物を室温で３０分間平衡化し、ＦＡＣＳ緩衝液（１％のＢＳＡを含有するＰＢＳ）で３回洗浄した。２次抗体としてｉＦｌｕｏｒ標識ヤギ抗マウスＩｇＧを加え、室温で４５分間インキュベートした。最終的に、細胞をＰＢＳで３回洗浄し、シグナルをＦＡＣＳ  ＢＤ  Ｃａｌｉｂｕｒで読み取った。非線形回帰を使用するＰＲＩＳＭ（商標）（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、カリフォルニア州サンディエゴ）で、データを分析し、ＥＣ５０値を計算した。図３Ａ〜３Ｃ及び表４で示されるように、ＦＡＣＳ研究は、マウス抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体が、０．３ｎＭ〜１６．３ｎＭの範囲のＥＣ５０値で、ＣＨＯ−Ｋ１細胞で過剰発現されたヒトＴＩＧＩＴに結合したことを示した。
【表４】
2021510710.tif 000006
【０２７７】
試験されたマウス抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体のうち、１３９Ｅ２Ｃ２Ｄ２、１２８Ｅ３Ｇ７Ｆ５、１２１Ｃ２Ｆ１０Ｂ５、１０４Ｇ１２Ｅ１２Ｇ２、８３Ｇ６Ｈ１１Ｃ１２、９２Ｅ９Ｄ４Ｂ４、１００Ｃ４Ｅ７Ｄ１１、及び６４Ｇ１Ｅ９Ｂ４のみは、カニクイザルＴＩＧＩＴに結合した。図３Ａ〜３Ｃ及び表５に示されるように、ＦＡＣＳ研究は、マウス抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体の一部が、ＥＣ５０値が１ｎＭ〜１８．５ｎＭの範囲で、ＣＨＯ−Ｋ１細胞で過剰発現されたカニクイザルＴＩＧＩＴに結合したことを示した。
【表５】
2021510710.tif 000007
【０２７８】
実施例５：マウス抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体及びＰＶＲ組み換えタンパク質間のＣＨＯ−Ｋ１細胞で過剰発現されたヒトＴＩＧＩＴに対する競合的結合
ＦＡＣＳアッセイを使用して、マウス抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体及びＰＶＲ組み換えタンパク質間のヒトＴＩＧＩＴに対する競合的結合を評価した。マウス抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体及びＰＶＲ間のヒトＴＩＧＩＴに対する競合的結合を評価するために、マウス抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体試料を調製した（５００ｎＭで開始し、１０の濃度で３倍連続希釈した）。ヒトＴＩＧＩＴを発現するＣＨＯ細胞を接着培養フラスコから分離し、様々な濃度の各マウス抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体及びビオチン標識を有する５μｇ／ｍｌのヒトＴＩＧＩＴ−Ｆｃ融合タンパク質と混合した。混合物を室温で３０分間平衡化し、ＦＡＣＳ緩衝液（１％のＢＳＡを含有するＰＢＳ）で３回洗浄した。次に、ＰＥ／Ｃｙ５ストレプトアビジン２次抗体を混合物に添加し、室温で１５分間インキュベートした。その後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、フローサイトメトリーで分析した。非線形回帰を使用するＰＲＩＳＭ（商標）（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、カリフォルニア州サンディエゴ）で、データを分析し、ＩＣ５０値を計算した（図４Ａ〜４Ｂ及び表６）。競合ＦＡＣＳ研究は、１６Ｆ１０Ｈ１２Ｃ１１を除いて、０．７５ｎＭ〜７３．５ｎＭの範囲のＩＣ５０値で、マウス抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体がヒトＴＩＧＩＴ及びヒトＰＶＲ間の結合を遮断する能力を示した。
【表６】
2021510710.tif 000008
【０２７９】
実施例６：ヒトＴＩＧＩＴに対するマウス抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体のエピトープ結合
１２８Ｅ３Ｇ７Ｆ５、１２１Ｃ２Ｆ１０Ｂ５、１０４Ｇ１２Ｅ１２Ｇ２、８３Ｇ６Ｈ１１Ｃ１２、９２Ｅ９Ｄ４Ｂ４、１００Ｃ４Ｅ７Ｄ１１、及び６４Ｇ１Ｅ９Ｂ４へのエピトープ結合試験を、Ｏｃｔｅｔ  ＲＥＤ９６機器（ＦｏｒｔｅＢｉｏ；カリフォルニア州メンロパーク）で実施した。全ての測定を３０℃で実施した。アミンカップリング法を使用して、目的の１つの抗体をバイオセンサー上に固定化した。検体１として使用されるように、抗原タンパク質ＴＩＧＩＴをＰＢＳＴ緩衝液（１ｘのＰＢＳ、ｐＨ７．４、及び０．０５％のＴｗｅｅｎ−２０）で希釈した。抗原タンパク質ＴＩＧＩＴ（検体１と同じ濃度）及び２次抗体の混合物を検体２として使用した。コーティングされたバイオセンサーを最初に検体１に浸し、次に、再生及び平衡化後に、検体２に浸した。検体１及び検体２のセンサーグラムを比較した。検体１の結合レベルが検体２の結合レベルよりも大幅に高い場合、第２の抗体は、標的タンパク質ＴＩＧＩＴの結合について固定化された抗体と競合することができると考えられた。検体１の結合レベルが検体２の結合レベルよりも大幅に低い場合、第２の抗体は、標的タンパク質ＴＩＧＩＴの結合について固定化された抗体と競合することができないと考えられた。全ての抗体が分析されるまで、実験を繰り返した。１２８Ｅ３Ｇ７Ｆ５、１２１Ｃ２Ｆ１０Ｂ５、１０４Ｇ１２Ｅ１２Ｇ２、８３Ｇ６Ｈ１１Ｃ１２、９２Ｅ９Ｄ４Ｂ４、１００Ｃ４Ｅ７Ｄ１１、及び６４Ｇ１Ｅ９Ｂ４を、３つのグループにマッピングした（表７）。各グループのマウス抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体は、ヒトＴＩＧＩＴにおいて密接に関連するエピトープまたは同じエピトープを有する。
【表７】
2021510710.tif 000009
【０２８０】
実施例７：Ｔ細胞で過剰発現されたＴＩＧＩＴへのＰＶＲの結合により抑制されたＴ細胞活性化に対するマウス抗ヒトＴＩＧＩＴ抗体の中和効果
Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）アクチベーターを安定的にトランスフェクトすることにより、ＣＨＯ−Ｋ１細胞を人工樹状細胞（ＡＰＣ）になるように設計した。次に、ＣＨＯ−Ｋ１  ＡＰＣをＰＶＲで過剰発現させた。ジャーカット細胞株をＮＦＡＴ誘導性ルチアレポーター構築物で安定的にトランスフェクトして、ジャーカット／ＮＦＡＴレポーター細胞株を生成した。次に、ジャーカット／ＮＦＡＴレポーター細胞株を、ヒトＴＩＧＩＴで過剰発現させた。ＣＨＯ−Ｋ１  ＡＰＣ／ＰＶＲ細胞をジャーカット／ＮＦＡＴレポーター／ＴＩＧＩＴ細胞と共培養して、マウス抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体の中和活性を評価した。ジャーカット／ＮＦＡＴレポーター／ＴＩＧＩＴ細胞を、ＣＨＯ−Ｋ１  ＡＰＣ／ＰＶＲ細胞を加える前に、各マウス抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体の連続希釈液と共に３０分間プレインキュベートした。数時間の相互作用の後、２０μｌの上清を、ＩＬ−２測定のために各ウェルから収集し、次に、ＯＮＥ−ＳＴＥＰ（商標）ルシフェラーゼ試薬を、ＮＦＡＴ活性を測定するために、系に加えた。ジャーカット／ＮＦＡＴレポーター／ＴＩＧＩＴ細胞の活性化を、ルシフェラーゼシグナルの強度またはＩＬ−２の分泌により評価した。２つの細胞間のＴＩＧＩＴへのＰＶＲの結合は、ジャーカット／ＮＦＡＴレポーター／ＴＩＧＩＴ細胞の活性化を抑制した。マウス抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体は、ＰＶＲ及びＴＩＧＩＴ間の相互作用を遮断し、次に、ＴＩＧＩＴへのＰＶＲの阻害を中和する。より多くの中和抗体を加え、より多くのジャーカット／ＮＦＡＴレポーター／ＴＩＧＩＴ細胞を活性化し、より多くのルシフェラーゼシグナルまたはより多くのＩＬ−２を分泌した（図５Ａ〜５Ｂ、表８、及び表９）。非線形回帰を使用するＰＲＩＳＭ（商標）（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、カリフォルニア州サンディエゴ）で、データを分析し、ＥＣ５０値を、正規化されたルシフェラーゼシグナル及びＩＬ−２分泌の両方で計算した。
【表８】
2021510710.tif 000010
【表９】
2021510710.tif 000011
【０２８１】
実施例８：ヒトＴＩＧＩＴ組み換えタンパク質へのキメラ抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体またはヒト化抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体の結合
１００Ｃ４Ｅ７Ｄ１１または６４Ｇ１Ｅ９Ｂ４の重鎖及び軽鎖の可変ドメインをヒトＩｇＧ１の定常領域と融合させることにより、キメラ抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体（１００Ｃ４Ｅ７Ｄ１１キメラまたは６４Ｇ１Ｅ９Ｂ４キメラ）を作成した。
【０２８２】
１００Ｃ４Ｅ７Ｄ１１の重鎖（配列番号１０５）及び軽鎖（配列番号１１３）のヒト化可変ドメインをヒトＩｇＧ１の定常領域と融合させることにより、１００Ｃ４Ｅ７Ｄ１１のヒト化抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体（１００Ｃ４Ｅ７Ｄ１１ＶＨ１＿ＶＬ１）を作成した。
【０２８３】
６４Ｇ１Ｅ９Ｂ４の重鎖（配列番号１０９）及び軽鎖（配列番号１１８）のヒト化可変ドメインをヒトＩｇＧ１の定常領域と融合させることにより、６４Ｇ１Ｅ９Ｂ４のヒト化抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体（６４Ｇ１Ｅ９Ｂ４ＶＨ１＿ＶＬ１．Ｍ１）を作成した。ヒト化６４Ｇ１Ｅ９Ｂ４ＶＨ１＿ＶＬ１．Ｍ１モノクローナル抗体は、配列番号７８の軽鎖ＣＤＲに１つのアミノ酸置換を含み、置換が１Ｋ位に形成され、残基１ＫがＲに置換される。
【０２８４】
６４Ｇ１Ｅ９Ｂ４の重鎖（配列番号１０９）及び軽鎖（配列番号１１８）のヒト化可変ドメインをヒトＩｇＧ１の定常領域と融合させることにより、６４Ｇ１Ｅ９Ｂ４のヒト化抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体（６４Ｇ１Ｅ９Ｂ４ＶＨ１．Ｍ１＿ＶＬ１．Ｍ１）を作成した。ヒト化６４Ｇ１Ｅ９Ｂ４ＶＨ１．Ｍ１＿ＶＬ１．Ｍ１モノクローナル抗体は、配列番号５２の重鎖ＣＤＲに１つのアミノ酸置換を含み、置換が７Ｄ位に形成され、残基７ＤがＧに置換される。それはまた、配列番号７８の軽鎖ＣＤＲに１つのアミノ酸置換を含み、置換が１Ｋ位に形成され、残基１ＫがＲに置換される。
【０２８５】
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）バイオセンサーＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｔ２００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、ヒトＴＩＧＩＴへのキメラ抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体及びヒト化抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体の結合動態を決定した。異なる濃度のキメラ抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体またはヒト化抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体を、５０ｎＭで開始し、３倍連続希釈で調製した。各キメラ抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体または各ヒト化抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体を、Ｆｃキャプチャー法でセンサーチップ上に固定化した。ＨＩＳタグ付きのヒトＴＩＧＩＴタンパク質を検体として使用した。ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｔ２００評価ソフトウェアを使用して、解離（ｋｄ）及び会合（ｋａ）の速度定数を得た。見かけの平衡解離定数（ＫＤ）をｋｄ対ｋａの比から計算した。表１０に示されるように、キメラ抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体及びヒト化抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体は、ヒトＴＩＧＩＴタンパク質に相当する結合動態を有していた（表１０）。
【表１０】
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【０２８６】
実施例９：ＣＨＯ−Ｋ１細胞で発現されたヒトまたはカニクイザルＴＩＧＩＴへのキメラ抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体及びヒト化抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体の結合
蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）ベースのアッセイを使用して、ＣＨＯ−Ｋ１細胞で過剰発現されたヒトまたはカニクイザルＴＩＧＩＴへのキメラ抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体及びヒト化抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体の結合親和性を決定した。ＦＡＣＳ分析のために１次抗体として、キメラ抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体及びヒト化抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体を調製した（ヒトＴＩＧＩＴの場合１００μＭ、カニクイザルＴＩＧＩＴの場合５５．６μＭで開始し、１０の濃度で３倍連続希釈）。ヒトＴＩＧＩＴを発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞を接着培養フラスコから分離し、（両方とも９６ウェルプレートで）様々な濃度のマウス抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体と混合した。混合物を室温で３０分間平衡化し、ＦＡＣＳ緩衝液（１％のＢＳＡを含有するＰＢＳ）で３回洗浄した。２次抗体としてｉＦｌｕｏｒ標識ヤギ抗マウスＩｇＧを加え、室温で４５分間インキュベートした。最終的に、細胞をＰＢＳで３回洗浄し、シグナルをＦＡＣＳ  ＢＤ  Ｃａｌｉｂｕｒで読み取った。非線形回帰を使用するＰＲＩＳＭ（商標）（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、カリフォルニア州サンディエゴ）で、データを分析し、ＥＣ５０値を計算した。図６Ａ及び表１１に示されるように、ＦＡＣＳ研究は、キメラ抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体及びヒト化抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体が、０．４ｎＭ〜１．２ｎＭの範囲のＥＣ５０値で、ＣＨＯ−Ｋ１細胞で過剰発現されたヒトＴＩＧＩＴに結合したことを示した。
【表１１】
2021510710.tif 000013
【０２８７】
キメラ抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体及びヒト化抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体はまた、カニクイザルＴＩＧＩＴに結合した。図６Ｂ及び表１２に示されるように、ＦＡＣＳ研究は、キメラ抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体及びヒト化抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体が、０．９〜２．９ｎＭの範囲のＥＣ５０値で、ＣＨＯ−Ｋ１細胞で過剰発現されたカニクイザルＴＩＧＩＴに結合したことを示した。
【表１２】
2021510710.tif 000014
【０２８８】
実施例１０：キメラ抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体またはヒト化抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体とＰＶＲ組み換えタンパク質との間のＣＨＯ−Ｋ１細胞で過剰発現されたヒトＴＩＧＩＴに対する競合的結合
ＦＡＣＳアッセイを使用して、キメラ抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体またはヒト化抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体とＰＶＲ組み換えタンパク質との間のヒトＴＩＧＩＴに対する競合的結合を評価した。キメラ抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体またはヒト化抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体とＰＶＲとの間のヒトＴＩＧＩＴに対する競合的結合を評価するために、キメラ抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体またはヒト化抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体試料を調製した（３００ｎＭで開始し、１０の濃度で３倍連続希釈）。ヒトＴＩＧＩＴを発現するＣＨＯ細胞を、接着培養フラスコから解離させ、様々な濃度の各キメラ抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体またはヒト化抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体及びビオチン標識を有する５μｇ／ｍｌのヒトＴＩＧＩＴ−Ｆｃ融合タンパク質と混合した。混合物を室温で３０分間平衡化し、ＦＡＣＳ緩衝液（１％のＢＳＡを含有するＰＢＳ）で３回洗浄した。次に、ＰＥ／Ｃｙ５ストレプトアビジン２次抗体を混合物に添加し、室温で１５分間インキュベートした。その後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、フローサイトメトリーで分析した。非線形回帰を使用するＰＲＩＳＭ（商標）（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、カリフォルニア州サンディエゴ）で、データを分析し、ＩＣ５０値を計算した（図７及び表１３）。競合ＦＡＣＳ研究は、０．４ｎＭから１．３ｎＭの範囲のＩＣ５０値で、ヒトＴＩＧＩＴ及びヒトＰＶＲ間の結合へのブロッキングに対するマウス抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体の能力を示した。
【表１３】
2021510710.tif 000015
【０２８９】
実施例１１：Ｔ細胞で過剰発現されたＴＩＧＩＴに対するＰＶＲの結合により抑制されたＴ細胞活性化に対するキメラ抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体及びヒト化抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体の中和効果
Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）アクチベーターを安定的にトランスフェクトすることにより、ＣＨＯ−Ｋ１細胞を人工樹状細胞（ＡＰＣ）になるように設計した。次に、ＰＶＲをＣＨＯ−Ｋ１  ＡＰＣで過剰発現させた。ヒトＴＩＧＩＴを、ジャーカット細胞株で過剰発現させた。ＣＨＯ−Ｋ１  ＡＰＣ／ＰＶＲ細胞を、ジャーカット／ＴＩＧＩＴ細胞と共に共培養して、キメラ抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体及びヒト化抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体の中和活性を評価した。ジャーカット／ＴＩＧＩＴ細胞を、各キメラ抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体または各ヒト化抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体の連続希釈液と共に、ＣＨＯ−Ｋ１  ＡＰＣ／ＰＶＲ細胞を加える前に３０分間プレインキュベートした。数時間の相互作用の後、ＩＬ−２測定のために各ウェルから２０μｌの上清を収集した。ジャーカット／ＴＩＧＩＴ細胞の活性化を、ＩＬ−２の分泌により評価した。２つの細胞間のＴＩＧＩＴへのＰＶＲの結合は、ジャーカット／ＴＩＧＩＴ細胞の活性化を抑制した。キメラ抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体またはヒト化抗ヒトＴＩＧＩＴ抗体は、ＰＶＲ及びＴＩＧＩＴ間の相互作用を遮断し、次に、ＴＩＧＩＴでのＰＶＲの抑制を中和する。中和抗体を加えるほど、より多くのジャーカット／ＴＩＧＩＴ細胞が活性化され、より多くのＩＬ−２が分泌された（図８及び表１４）。非線形回帰を使用するＰＲＩＳＭ（商標）（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、カリフォルニア州サンディエゴ）で、データを分析し、ＥＣ５０値をＩＬ−２分泌で計算した。
【表１４】
2021510710.tif 000016
【０２９０】
実施例１２：抗ＴＩＧＩＴ抗体のｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍効果
マウスの結腸腺癌細胞株であるＭＣ３８腫瘍細胞をＣ５７ＢＬ／６ヒトＴＩＧＩＴ  Ｋｎｏｃｋｉｎ（ＫＩ）マウス（Ｂｉｏｃｙｔｏｇｅｎ；マサチューセッツ州ウスター）に移植することにより、マウス異種移植モデルを調製した。ＭＣ３８腫瘍細胞を培養し、マグネシウム不含ＨＢＳＳ−／−及びカルシウム不含ＨＢＳＳ−／−に懸濁し、１×１０６の細胞を、６〜８週齢の雌Ｃ５７ＢＬ／６ヒトＴＩＧＩＴ  ＫＩマウスの脇腹に皮下注射した。ノギスを使用して、腫瘍体積を測定し、式（長さｘ幅ｘ幅）／２で計算した。平均腫瘍体積が９０〜１００ｍｍ３に達した時、マウスをランダム化して、ヒト化抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体での処置を開始した。ヒト化抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体を、ｉ．ｐ．で４日毎に１回投与した（５ｍｇ／ｋｇ）。研究全体を通して、体重を測定した。
【０２９１】
図９Ａ〜９Ｂに示されるように、ヒト化抗ヒトＴＩＧＩＴモノクローナル抗体、１００Ｃ４Ｅ７Ｄ１１ＶＨ１＿ＶＬ１、６４Ｇ１Ｅ９Ｂ４ＶＨ１＿ＶＬ１．Ｍ１、及び６４Ｇ１Ｅ９Ｂ４ＶＨ１．Ｍ１＿ＶＬ１．Ｍ１は、ヒトＩｇＧ対照と比較してより高い腫瘍抑制有効性を示した。各試験グループの平均体重は、試験期間中、有意差を示さなかった。
【表１５】
2021510710.tif 000017
2021510710.tif 000018
ＩＤ：配列番号
【表１６】
2021510710.tif 000019
2021510710.tif 000020
ＩＤ：配列番号
【表１７】
2021510710.tif 000021
ＩＤ：配列番号；ＣＤＲ：相補性決定領域
【表１８】
2021510710.tif 000022
ＩＤ：配列番号；ＣＤＲ：相補性決定領域
【表１９】
2021510710.tif 000023
【表２０】
2021510710.tif 000024
【表２１】
2021510710.tif 000025
【表２２】
2021510710.tif 000026
【図１Ａ】
2021510710.tif 000027
【図１Ｂ】
2021510710.tif 000028
【図１Ｃ】
2021510710.tif 000029
【図２Ａ】
2021510710.tif 000030
【図２Ｂ】
2021510710.tif 000031
【図２Ｃ】
2021510710.tif 000032
【図２Ｄ】
2021510710.tif 000033
【図２Ｅ】
2021510710.tif 000034
【図２Ｆ】
2021510710.tif 000035
【図２Ｇ】
2021510710.tif 000036
【図２Ｈ】
2021510710.tif 000037
【図２Ｉ】
2021510710.tif 000038
【図２Ｊ】
2021510710.tif 000039
【図２Ｋ】
2021510710.tif 000040
【図２Ｌ】
2021510710.tif 000041
【図２Ｍ】
2021510710.tif 000042
【図３Ａ】
2021510710.tif 000043
【図３Ｂ】
2021510710.tif 000044
【図３Ｃ】
2021510710.tif 000045
【図４Ａ】
2021510710.tif 000046
【図４Ｂ】
2021510710.tif 000047
【図５Ａ】
2021510710.tif 000048
【図５Ｂ】
2021510710.tif 000049
【図６Ａ】
2021510710.tif 000050
【図６Ｂ】
2021510710.tif 000051
【図７】
2021510710.tif 000052
【図８】
2021510710.tif 000053
【図９Ａ】
2021510710.tif 000054
【図９Ｂ】
2021510710.tif 000055
【配列表】
2021510710000001.app
【国際調査報告】
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2021510710.tif 000057
2021510710.tif 000058
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