(57)【要約】肝臓特異的デリバリー技術（肝臓送達）（Ｌｉｖｅｒ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（ＬＳＤ））に基づくエンテカビル抗ウイルスプロドラッグであるヌクレオシドの環状リン酸エステル化合物および応用を開示した。具体的に、式（Ｉ）に示される化合物及びその異性体、薬用塩、水和物、溶媒和物、および対応する医薬組成物を開示した。さらに、本発明の化合物単独または他の抗ウイルス薬との併用による抗ウイルスへの応用、特に抗Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）への応用を開示した。2021506846.tif 000057
2021506846.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下述式Ｉに示される化合物、又はその光学異性体、薬学的に許容される塩、水和物または
溶媒和物であって、
2021506846.tif 000051
ここで、Ｒ１は、独立してハロゲン、ニトロ基、水酸基、アミノ基、シアノ基、置換また
は非置換のＣ１−Ｃ６アルキル基、置換または非置換のＣ３−Ｃ８シクロアルキル基、置
換または非置換のＣ１−Ｃ６アルコキシ基、置換または非置換のＣ１−Ｃ６アルキルアミ
ン基、置換または非置換のＣ１−Ｃ６カルボキシル基、置換または非置換のＣ２−Ｃ６エ
ステル基、置換または非置換のＣ２−Ｃ６アルカノイル基、置換または非置換のＣ２−Ｃ
６アルキルアミド基から選択され、ここで、前記の置換とは、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ３アル
キル基、Ｃ１−Ｃ３ハロゲンアルキル基、ニトロ基、水酸基、アミノ基、シアノ基からな
る群から選択される１つ以上の置換基を有することをいい、
Ｒ２、Ｒ３は、それぞれ独立してハロゲン（ＦまたはＣｌ）であり、
Ｒ４は、水素、置換または非置換のＣ１−Ｃ１０アルキル基、置換または非置換のＣ３−
Ｃ１０シクロアルキル基、置換または非置換のＣ２−Ｃ１２アルカノイル基、置換または
非置換の−ＣＯ−Ｏ−Ｃ１−Ｃ１０アルキル基からなる群から選択され、ここで、前記の
置換とは、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ３アルキル基、Ｃ１−Ｃ３ハロゲンアルキル基、ニトロ基
、水酸基、−ＮＲａＲｂ、シアノ基からなる群から選択される１つ以上の置換基を有する
ことをいい、ここで、Ｒａ及びＲｂは、それぞれ独立してＨ、Ｃ１−Ｃ３アルキル基、Ｃ
３−Ｃ６シクロアルキル基、またはＣ１−Ｃ３ハロアルキル基であり、
ｍは、０、１、２または３である、
式Ｉに示される化合物、又はその光学異性体、薬学的に許容される塩、水和物または溶媒
和物。
【請求項２】
Ｒ４は、水素、置換または非置換のＣ１−Ｃ６アルキル基、置換または非置換のＣ３−Ｃ
８シクロアルキル基、置換または非置換のＣ１−Ｃ６エステル基、置換または非置換のＣ
２−Ｃ６アルカノイル基からなる群から選択され、ここで、前記の置換とは、ハロゲン、
Ｃ１−Ｃ３アルキル基、Ｃ１−Ｃ３ハロゲンアルキル基、ニトロ基、水酸基、アミノ基、
シアノ基からなる群から選択される１つ以上の置換基を有することをいう、ことを特徴と
する、
請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記の化合物は、下述式ＩＩに示される構造を有することを特徴とする、
請求項１に記載の化合物。
2021506846.tif 000052
【請求項４】
Ｒ２がＣｌであり、且つＲ３がＦであり、あるいは、
Ｒ２がＣｌであり、且つＲ３がＣｌであり、あるいは、
Ｒ２がＦであり、且つＲ３がＣｌである、ことを特徴とする、
請求項１−３のいずれか一項に記載の化合物、又はその光学異性体、薬学的に許容される
塩、水和物または溶媒和物。
【請求項５】
前記の化合物は、以下のものから選択されることを特徴とする、
請求項１−４のいずれか一項に記載の化合物、又はその光学異性体、薬学的に許容される
塩、水和物または溶媒和物。
2021506846.tif 000053
【請求項６】
前記式Ｉ及び式ＩＩに示される化合物の塩は、式Ｉ及び式ＩＩに示される化合物と無機酸
または有機酸との薬用塩であり、あるいは
前記式Ｉ及び式ＩＩに示される化合物の塩は、式Ｉ及び式ＩＩに示される化合物が塩基と
反応して形成される薬用塩であり、
前記の式Ｉ及び式ＩＩに示される化合物またはその塩は、無定形物質または結晶である、
ことを特徴とする、
請求項１−５のいずれか一項に記載の化合物、又はその光学異性体、薬学的に許容される
塩、水和物または溶媒和物。
【請求項７】
治療有効量の請求項１−６のいずれか一項に記載の化合物又はその光学異性体、薬学的に
許容される塩、水和物または溶媒和物と、
薬学的に許容される補助剤、希釈剤または担体とを含むことを特徴とする、医薬組成物。
【請求項８】
Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染に関連する急性または慢性疾患を治療及び／または予防
する医薬組成物の調製への、請求項１−６のいずれか一項に記載の化合物又はその光学異
性体、薬学的に許容される塩、水和物または溶媒和物の使用。
【請求項９】
請求項１に記載の式Ｉに示される化合物の調製方法であって、
2021506846.tif 000054
（ｉ−ａ）不活性溶媒において、式ＩＩに示される化合物と酸、塩化アシル、ハロアルキ
ル基とを反応させ、式Ｉに示される化合物を形成すること含み、
ここで、各基は請求項１に記載の通りである、化合物の調製方法。
【請求項１０】
前記の式ＩＩに示される化合物は、以下のように調製され：
2021506846.tif 000055
（ｉ−ｂ）不活性溶媒において、式ＩＩａに示される化合物でＴＢＳを除去し、式ＩＩに
示される化合物を形成し、
ここで、各基は、請求項１に記載の通りであり、
好ましくは、前記の式ＩＩａに示される化合物は、以下のように調製され：
2021506846.tif 000056
（ｉ−ｃ）不活性溶媒において、式Ｉｃに示される化合物をＰＡ３００１−３と置換反応
させ、式ＩＩａに示される化合物を得ることを特徴とする、
請求項９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、肝臓特異的デリバリー技術（肝臓送達）（Ｌｉｖｅｒ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｄ
ｅｌｉｖｅｒｙ（ＬＳＤ））に基づく抗ウイルスプロドラッグであるヌクレオシドの環状
リン酸エステル化合物の調製および応用、又はその光学異性体、水和物、溶媒和物、薬用
塩および医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｄ型肝炎ウイルス（ＨＤＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（Ｈ
ＩＶ）等のウイルスは、人間の健康を深刻に脅かしている。Ｂ型肝炎ウイルスを例として
、Ｂ型ウイルス性肝炎（Ｂ型肝炎）は、Ｂ型肝炎ウイルスによって引き起こされ、肝臓炎
性病変を主とする疾患であり、多器官損傷を招来することがある。世界保健機関（ＷＴＯ
）の調査結果により示すように、全世界に慢性Ｂ型肝炎の感染者が約２．４億人であり、
毎年、約７８万人がＢ型肝炎感染で亡くなっていること推定し、その中、６５万人が慢性
Ｂ型肝炎による肝硬変と肝がんで、１３万人が急性Ｂ型肝炎感染で亡くなっていることを
推定し、これは、全世界に健康に関わる重要な問題になっている。
【０００３】
抗Ｂ型肝炎ウイルス薬物のうち、最も主要なのは、例えば、アデフォビルジピボキシル、
テノホビルジソプロキシル（ＴＤＦ）、テノホビルアラフェナミド（ＴＡＦ）、エンテカ
ビル、ラミブジン、テルビブジン等のヌクレオチド類薬物であり、その作用機序は、細胞
内で活性化されて三リン酸代謝物になり、ウイルスのＤＮＡポリメラーゼの活性を阻害し
、ウイルスＤＮＡの合成を阻止することにより、ウイルス複製を阻害することである。
【０００４】
抗Ｂ型肝炎ウイルスヌクレオシド系化合物には、一リン酸を有するヌクレオチド類似物及
び一リン酸を有しないヌクレオシド類似物が含まれる。ヌクレオチド類似物、例えばアデ
フォビルやテノホビル等は、一般的に、リン酸エステルとして製薬し、例えば、アデフォ
ビルジピボキシル及びテノホビルジソプロキシルは、体内で一リン酸生成物に直接に代謝
できる。ヌクレオシド類似物、例えばエンテカビル等は、ヌクレオシド類似物のままで製
薬され、体内でさらにリン酸化されて一リン酸代謝物になる必要があり、また、当該リン
酸化プロセスは、最終活性形態である三リン酸代謝物に転化する律速段階であり、これに
より、肝臓で有効活性成分が低くなる。現在、エンテカビル一リン酸エステルプロドラッ
グがまだ開発、出荷されていない。
【０００５】
エンテカビルは、インビトロで抗ウイルス活性が非常に強く（ＥＣ５０＝０．００４μＭ
）、従来のヌクレオシド類薬物のなかでも活性が最も強い化合物であり、ラミブジンに耐
性を有するウイルス株に対しても、非常に強い阻害活性（ＥＣ５０＝０．０１０−０．０
５９μＭ）を持つ。エンテカビルは、ＨＢＶポリメラーゼ（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ）の三
種類の活性をすべて阻害できる：１）ＨＢＶポリメラーゼの開始及び起動、２）プレゲノ
ムＲＮＡの逆転写合成ｒｃＤＮＡ（弛緩した環状の二本鎖ＤＮＡ）のマイナス鎖；３）ｒ
ｃＤＮＡプラス鎖の合成。また、エンテカビルへの耐性の発生率が非常に低く、６年間に
耐性の発生率が１．２％である。これにより、出荷されたヌクレオシド類薬物において、
エンテカビルは、抗ウイルス活性が強く、耐薬品性バリアが高いという利点があることが
わかった。
【０００６】
しかしながら、臨床的に、エンテカビルは、頭痛、疲労、眩暈、吐き気等の副作用がある
ことが発見され、これらの副作用は、その臨床的な使用量を限定する。例えば、バラクル
ード（エンテカビルの商品名）１ｍｇ規格は、ラミブジンに対して耐性を有する患者のみ
に推奨し、耐性を有しない患者に推奨する使用量は、０．５ｍｇである。
【０００７】
本発明は、肝臓特異的デリバリー技術により、キナーゼリン酸化工程を回避する上で、肝
中の活性成分の濃度向上に成功した。
【０００８】
環状リン酸エステルによって修飾されたエンテカビルプロドラッグは、肝中にＣＹＰ３Ａ
酵素代謝を経て、リン酸キナーゼなしに、一リン酸化合物を生成する。具体的に、環状リ
ン酸エステル（４−アリール−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホリナン）前駆体
構造は、優れた肝臓特異的デリバリー機能を有し、メカニズムが非常に明らかであり、４
−アリール置換位置は、肝細胞でのシトクロムＰ４５０アイソザイムファミリーのうちの
ＣＹＰ３Ａによって特異的に触媒され、水酸基を生成した後、開環して負に帯電したリン
酸中間体を生成し、当該物質は、細胞膜を通過しにくくて細胞内に残り、ホスホジエステ
ラーゼ触媒下で、加水分解、β−脱離反応を経て、ヌクレオシド一リン酸類似物を生成し
、続いて、ヌクレオチドキナーゼ作用下で、生物学的活性を有するヌクレオチド三リン酸
類似物を生成するとともに、代謝副生成物であるアリールビニルケトンは、肝細胞に富ん
だ抗酸化およびフリーラジカル成分であるグルタチオンと、１，４−付加反応を行い、ク
リアランスされ、当該付加生成物は、副作用を有することがはまだ報告されていない。
現在、臨床的に、活性が高く、肝臓送達特異性が強く、また毒性と副作用が低いエンテカ
ビル一リン酸エステルプロドラッグの応用は、まだ発見されていない。そのため、本分野
では、活性が高く、肝臓送達特異性が強く、また毒性と副作用が低い等の利点を有する新
規なエンテカビルプロドラッグの開発が切望されている。
【発明の概要】
【０００９】
本発明は、抗ウイルスエンテカビル一リン酸の環状リン酸エステルを合成し、その芳香族
環置換基に対してさらに改善することにより、肝臓送達作用を有する一連のプロドラッグ
を得、それらは治療効果がさらに高く、毒性と副作用が小さくなる。
【００１０】
本発明の第一態様によれば、下述式Ｉに示される化合物、又はその光学異性体、薬学的に
許容される塩、水和物または溶媒和物を提供する。
2021506846.tif 000003
ここで、
各Ｒ１は、独立してハロゲン、ニトロ基、水酸基、アミノ基、シアノ基、置換または非置
換のＣ１−Ｃ６アルキル基、置換または非置換のＣ３−Ｃ８シクロアルキル基、置換また
は非置換のＣ１−Ｃ６アルコキシ基、置換または非置換のＣ１−Ｃ６アルキルアミン基、
置換または非置換のＣ１−Ｃ６カルボキシル基、置換または非置換のＣ１−Ｃ６エステル
基、置換または非置換のＣ２−Ｃ６アルカノイル基、置換または非置換のＣ２−Ｃ６アル
キルアミド基から選択され、ここで、前記の置換とは、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ３アルキル基
、Ｃ１−Ｃ３ハロゲンアルキル基、ニトロ基、水酸基、アミノ基、シアノ基からなる群か
ら選択される１つ以上の置換基を有することをいい、
Ｒ２、Ｒ３は、それぞれ独立してハロゲン（ＦまたはＣｌ）であり、
ｍは、０、１、２または３である。
Ｒ４は、水素、置換または非置換のＣ１−Ｃ６アルキル基、置換または非置換のＣ３−Ｃ
８シクロアルキル基、置換または非置換のＣ１−Ｃ６エステル基、置換または非置換のＣ
２−Ｃ６アルカノイル基から選択され、ここで、前記の置換とは、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ３
アルキル基、Ｃ１−Ｃ３ハロゲンアルキル基、ニトロ基、水酸基、アミノ基、シアノ基か
らなる群から選択される１つ以上の置換基を有することをいい、
かつ、式Ｉ中、キラルが明記しない限り、キラル中心のそれぞれは、Ｒ型またはＳ型であ
り、
【００１１】
他の好ましい例において、Ｒ２がＣｌであり、且つＲ３がＦであり、Ｒ２がＣｌであり、
且つＲ３がＣｌであり、あるいはＲ２がＦであり、且つＲ３がＣｌである。
【００１２】
他の好ましい例において、前記の光学異性体には、互変異性体、シストランス異性体、配
座異性体、メソ化合物、およびエナンチオトピックまたはジアステレオトピックな関係に
ある光学異性体が含まれる。
【００１３】
他の好ましい例において、前記の化合物は、以下のものから選択される。
2021506846.tif 000004
2021506846.tif 000005
【００１４】
他の好ましい例において、前記式Ｉに示される化合物の塩は、式Ｉに示される化合物と無
機酸または有機酸との薬用塩であり、あるいは、前記式Ｉに示される化合物の塩は、式Ｉ
に示される化合物が塩基と反応して形成される薬用塩である。前記の式Ｉに示される化合
物またはその塩は、無定形物質または結晶である。
【００１５】
本発明の第二態様によれば、医薬組成物を提供し、前記の医薬組成物は、治療有効量の本
発明の第一態様に記載の化合物又はその光学異性体、薬学的に許容される塩、水和物また
は溶媒和物と、薬学的に許容される補助剤、希釈剤または担体とを含む。
【００１６】
本発明の第三態様によれば、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染に関連する急性または慢性
疾患を治療及び／または予防する医薬組成物の調製への、本発明の第一態様に記載の化合
物又はその光学異性体、薬学的に許容される塩、水和物または溶媒和物の使用を提供する
。
【００１７】
本発明の第四態様によれば、本発明の第一態様に記載の式Ｉに示される化合物の調製方法
を提供し、前記方法は、以下の工程を含む。
2021506846.tif 000006
（ｉ−ａ）不活性溶媒において、式ＩＩに示される化合物と酸、塩化アシル、ハロアルキ
ル基とを反応させ、式Ｉに示される化合物を形成する、
ここで、各基は前記の通りである。
【００１８】
他の好ましい例において、前記の工程（ｉ−ａ）中、前記の試薬は、ジシクロヘキシルカ
ルボジイミド（ＤＣＣ）、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンまた
はそれらの組み合せからなる群から選択され、好ましくは、ＤＣＣ及びトリエチルアミン
である。
【００１９】
他の好ましい例において、前記の工程（ｉ−ａ）中、前記の不活性溶媒は、Ｎ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド、ジクロロメタン、テトラヒドロフランまたはそれらの組み合せからな
る群から選択され、好ましくは、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド及びジクロロメタン溶媒
である。
【００２０】
他の好ましい例において、前記の工程（ｉ−ａ）の反応温度が−０−１００℃（好ましく
は２５±５℃程度）である。
【００２１】
他の好ましい例において、前記の工程（ｉ−ａ）の脱保護反応の反応時間が０．５−２４
時間であり、好ましくは、０．５−８時間である。
2021506846.tif 000007
（ｉ−ｂ）不活性溶媒において、式ＩＩａに示される化合物でＴＢＳを除去し、式ＩＩに
示される化合物を形成する、
他の好ましい例において、前記の工程（ｉ−ｂ）中、前記のＴＢＳを除去する試薬は、Ｔ
ＢＡＦ、氷酢酸、希塩酸またはそれらの組み合せからなる群から選択され、好ましくは、
塩酸エタノール溶液及びＴＢＡＦである。
【００２２】
他の好ましい例において、前記の工程（ｉ−ｂ）中、前記の不活性溶媒は、Ｎ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド、テトラヒドロフランまたはそれらの組み合せからなる群から選択され
、好ましくは、テトラヒドロフラン溶媒である。
【００２３】
他の好ましい例において、前記の工程（ｉ−ｂ）の反応温度が−５０−３０℃（好ましく
は２５±５℃程度）である。
【００２４】
他の好ましい例において、前記の工程（ｉ−ｂ）の脱保護反応の反応時間が０．５−６時
間であり、好ましくは、０．５−３時間であり、より好ましくは、０．５−２時間である
。
【００２５】
他の好ましい例において、前記の式ＩＩａに示される化合物は、以下の方法により調製さ
れる。
2021506846.tif 000008
（ｉ−ｃ）不活性溶媒において、式Ｉｃに示される化合物をＰＡ３００１−３と置換反応
させ、式ＩＩａに示される化合物を得る、
他の好ましい例において、工程（ｉ−ｃ）中、前記反応は、グリニャール試薬存在下で行
い、好ましくは、前記のグリニャール試薬は、ｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド（
ｔ−ＢｕＭｇＣｌ）からなる群から選択される。
【００２６】
他の好ましい例において、前記の工程（ｉ−ｃ）の置換反応は、−５０−３０℃で（好ま
しくは２５±５℃程度で）行う。
【００２７】
他の好ましい例において、前記の工程（ｉ−ｃ）の置換反応の反応時間は、１−７２時間
であり、好ましくは、３−４８時間であり、より好ましくは、６−２４時間である。
【００２８】
他の好ましい例において、前記の工程（ｉ−ｃ）の不活性溶媒は、Ｎ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド、テトラヒドロフラン、またはそれらの組み合せからなる群から選択され、好ま
しくは、テトラヒドロフラン溶媒である。
【００２９】
本発明の範囲内で、本発明の上述の各技術的特徴と以下（例えば、実施例）に具体的に説
明する各技術的特徴とは、互いに組み合わせることができ、それにより新しいまたは好ま
しい技術案を構成できる。スペースの制限のため、ここでは繰り返しない。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】ラットに０．０３６ｍｍｏｌ／ｋｇ  ＰＡ３００１、ＰＡ３００２、ＰＡ３００３、ＰＡ３００４、ＰＡ３０１７及びエンテカビルを胃内投与した後の一リン酸活性分子ＥＴＶＭＰの肝臓における濃度−時間ヒストグラム（ｎｍｏｌ／ｇ、モル濃度／組織重量）を示す。
【図２】ラットに０．０３６ｍｍｏｌ／ｋｇ  ＰＡ３００１、ＰＡ３００２、ＰＡ３００３、ＰＡ３００４、ＰＡ３０１７及びエンテカビルを胃内投与した後のＥＴＶの肝臓における濃度−時間ヒストグラム（ｎｍｏｌ／ｇ、モル濃度／組織重量）を示す。
【図３】ラットに０．０３６ｍｍｏｌ／ｋｇ  ＰＡ３００１、ＰＡ３００２、ＰＡ３００３、ＰＡ３００４、ＰＡ３０１７及びエンテカビルを胃内投与した後の一リン酸活性分子ＥＴＶＭＰの血漿における濃度−時間ヒストグラム（ｎｍｏｌ／ｇ、モル濃度／組織重量）を示す。
【図４】ラットに０．０３６ｍｍｏｌ／ｋｇ  ＰＡ３００１、ＰＡ３００２、ＰＡ３００３、ＰＡ３００４、ＰＡ３０１７及びエンテカビルを胃内投与した後のＥＴＶの血漿における濃度−時間ヒストグラム（ｎｍｏｌ／ｇ、モル濃度／組織重量）を示す。
【図５】ラットに０．０３６ｍｍｏｌ／ｋｇ  ＰＡ３００１、ＰＡ３００２、ＰＡ３００３、ＰＡ３００４、ＰＡ３０１７及びエンテカビルを胃内投与した後の一リン酸活性分子ＥＴＶＭＰの脳漿における濃度−時間ヒストグラム（ｎｍｏｌ／ｇ、モル濃度／組織重量）を示す。
【図６】ラットに０．０３６ｍｍｏｌ／ｋｇ  ＰＡ３００１、ＰＡ３００２、ＰＡ３００３、ＰＡ３００４、ＰＡ３０１７及びエンテカビルを胃内投与した後のＥＴＶの脳漿における濃度−時間ヒストグラム（ｎｍｏｌ／ｇ、モル濃度／組織重量）を示す。
【００３１】
注釈：
ＥＴＶ：エンテカビル、２−アミノ−９−［（１Ｓ，３Ｓ，４Ｓ）−４−ヒドロキシ−３
−ヒドロキシメチル−２−メチレンシクロペンチル］−１，９−ジヒドロ−６Ｈ−プリン
−６−オン（ＣＡＳ：１４２２１７−６９−４）
ＥＴＶＭＰ：２−アミノ−９−（（１Ｓ，３Ｒ，４Ｓ）−４−ヒドロキシ−３−（モノリ
ン酸エステルメチレン）−２−メチレニルシクロペンチル）−３Ｈ−プリン−６（９Ｈ）
−オン（ＣＡＳ：１１０３９９４−５３−１）
【発明を実施するための形態】
【００３２】
発明者は、長期にわたって鋭意検討を重ねたところ、大量の化合物をスクリーニングして
研究することにより、特定の構造を有する式Ｉおよび式ＩＩに示される化合物（ただし、
ベンゼン環部分の２位および５位が特定のハロゲンである）は、驚くべきことに、非常に
優れた抗ウイルス活性を有し、肝臓送達性を大きく向上させ、また毒性と副作用を顕著に
低減できることを初めて発見した。本発明者らは、以上の知見に基づき、本発明を完成し
た。
【００３３】
用語
本発明に用いられる用語「Ｃ１−Ｃ６アルキル基」とは、１〜６個の炭素原子を有する直
鎖または分岐鎖アルキル基、例えばメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、
ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、または類似基をいう
。
本発明に用いられる用語「Ｃ２−Ｃ６アルカノイル基」とは、「１〜６個の炭素原子を有
する直鎖または分岐鎖アルキル基−カルボニル基」構造の置換基、例えばアセチル基、プ
ロピオニル基、ブチリル基、または類似基をいう。
本発明に用いられる用語「Ｃ１−Ｃ６アルキルアミン基」とは、「１〜６個の炭素原子を
有する直鎖または分岐鎖アルキル基−アミン基」構造の置換基、例えばメチルアミノ基、
ジメチルアミノ基、エチルアミン基、プロピルアミン基、ジエチルアミン基、または類似
基をいう。
用語「ハロゲン」は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩをいう。
本発明において、用語「含有する」、「含む」または「からなる」は、それぞれの成分が
一緒に本発明の混合物または組成物に応用できることをいう。そのため、用語「主に．．
．から構成する」及び「．．．から構成する」は、用語「含有する」に含まれる。
本発明において、用語「薬学的に許容される」成分とは、ヒト及び／または動物に適用し
て、過度の副反応（例えば、毒性、刺激及びアレルギー反応）なしに合理的なリスク／ベ
ネフィット比を有する物質をいう。
本発明において、用語「有効量」とは、目的の疾患または状况を治療、緩和または予防す
る治療剤の量、或いは検出できる治療または予防効果を表現する量をいう。ある対象に対
する正確な有効量は、当該対象の体型や健康状態、病症の性質と程度、および投与される
治療剤及び／または治療剤の組み合わせに依頼する。そのため、予め正確な有効量を指定
することが無駄である。しかしながら、ある所定の状况について、当該有効量は、一般的
な実験で決定でき、臨床的にも医師が判断できるものである。
本発明において、特に記載されない限り、用語「置換」とは、基上の１つ以上の水素原子
がハロゲン、Ｃ１−Ｃ３アルキル基、Ｃ１−Ｃ３ハロゲンアルキル基、ニトロ基、水酸基
、アミノ基、シアノ基からなる群から選択される置換基で置換されることをいう。
特に記載されない限り、本発明に記載のすべての化合物には、存在可能なすべての光学異
性体、例えばキラル単一化合物、または種々なキラルの異なる化合物の混合物（即ちラセ
ミ化合物）が含まれる。本発明に記載のすべての化合物のうち、各不斉炭素原子は、Ｒ型
またはＳ型、またはＲ型とＳ型との混合物であってもよい。
本発明に用いられる用語「本発明の化合物」とは、式Ｉ及び式ＩＩに示される化合物をい
う。当該用語は、さらに式Ｉ及び式ＩＩに示される化合物の種々な結晶形、薬学的に許容
される塩、水和物または溶媒和物を含む。
本発明に用いられる用語「薬学的に許容される塩」とは、本発明の化合物と酸または塩基
との、医薬品として適用される塩をいう。薬学的に許容される塩は、無機塩と有機塩を含
む。好ましい塩は、本発明の化合物と酸との塩である。塩形成に適合な酸は、塩酸、臭化
水素酸、フッ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の無機酸、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、シ
ュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン
酸、ピクリン酸、メタンスルホン酸、ベンゼンメタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸等
の有機酸、およびアスパラギン酸、グルタミン酸等の酸性アミノ酸が含まれるが、これら
に限らない。
本発明におけるいくつの化合物は、水または種々な有機溶媒で結晶または再結晶し、この
場合に、種々な溶媒和物を形成できる。本発明の溶媒和物は、化学量論の水和物のような
溶媒和物を含み、さらに、低圧昇華乾燥法で調製された、変数である水を含有する化合物
を含む。
なお、本発明の化合物が調製された後、種々な熱力学的に安定な異性体、例えば互変異性
体、配座異性体、メソ化合物及びエナンチオトピックまたはジアステレオトピックな関係
にある光学異性体等が存在する可能性があり、当業者にとって、本発明の開示を読んだ上
、上記の変更が自明なことになろう。
【００３４】
式Ｉに示される化合物及びその調製
肝臓送達機構により、抗ウイルスヌクレオチド類医薬品を肝細胞で放出させる効率的かつ
低毒性の肝臓送達プロドラッグを提供するために、発明者は、式Ｉに示される化合物を調
製した。
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ここで、
各Ｒ１は、それぞれ独立して、ハロゲン、ニトロ基、水酸基、アミノ基、シアノ基、置換
または非置換のＣ１−Ｃ６アルキル基、置換または非置換のＣ３−Ｃ８シクロアルキル基
、置換または非置換のＣ１−Ｃ６アルコキシ基、置換または非置換のＣ１−Ｃ６アルキル
アミン基、置換または非置換のＣ１−Ｃ６カルボキシル基、置換または非置換のＣ１−Ｃ
６エステル基、置換または非置換のＣ２−Ｃ６アルカノイル基、置換または非置換のＣ２
−Ｃ６アルキルアミド基から選択され、ここで、前記の置換とは、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ３
アルキル基、Ｃ１−Ｃ３ハロゲンアルキル基、ニトロ基、水酸基、アミノ基、シアノ基か
らなる群から選択される１つ以上の置換基を有することをいい、
ｍは、０、１、２または３であり、
Ｒ２、Ｒ３は、それぞれ独立してハロゲン（ＦまたはＣｌ）であり、
Ｒ４は、独立して水素、置換または非置換のＣ１−Ｃ６アルキル基、置換または非置換の
Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル基、置換または非置換のＣ１−Ｃ６エステル基、置換または非
置換のＣ２−Ｃ６アルカノイル基から選択され、ここで、前記の置換とは、ハロゲン、Ｃ
１−Ｃ３アルキル基、Ｃ１−Ｃ３ハロゲンアルキル基、ニトロ基、水酸基、アミノ基、シ
アノ基からなる群から選択される１つ以上の置換基を有することをいい、
且つ、式Ｉ中、キラルが明記しない限り、キラル中心のそれぞれは、Ｒ型またはＳ型であ
る。
【００３５】
前記の化合物は、消旋体であっても、光学異性体であってもよく、両方とも一定の抗ウイ
ルス活性を有する。好ましくは、前記の式Ｉに示される化合物は、以下の構造を有する。
2021506846.tif 000010
【００３６】
他の好ましい例において、前記のＰ２とリン酸エステル環構造での４位の芳香族基とは互
いにシス型になり、且つＰ２がＲ型であり、Ｃ４がＳ型である。
【００３７】
他の好ましい例において、Ｒ２がＣｌであり、且つＲ３がＦであり、Ｒ２がＣｌであり、
且つＲ３がＣｌであり、あるいはＲ２がＦであり、且つＲ３がＣｌである。
【００３８】
他の好ましい例において、前記の光学異性体には、互変異性体、シストランス異性体、配
座異性体、メソ化合物、及びエナンチオトピックまたはジアステレオトピックな関係にあ
る光学異性体が含まれる。
【００３９】
他の好ましい例において、前記の化合物は、以下のものから選択される。
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一般式Ｉに示される化合物の調製方法は、以下のとおりである。
【００４０】
テトラヒドロフラン溶液にＰＡ３００１−３化合物を加え、その後、０℃で、ｔｅｒｔ−
ブチルマグネシウムクロリドを滴下し、３０分間反応させ、その後、一気にＩｃに示され
る化合物を加え、一晩反応させ、クエンチし、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによ
り精製し、得られた中間体ＩＩａ、ＩＩａを塩酸エタノール溶液に加え、保護基ＴＢＳを
除去し、一般式ＩＩに示される化合物を得、ＩＩと酸、塩化アシル、ハロアルキル基と反
応させて一般式Ｉに示される化合物を得た。
2021506846.tif 000012
ここで、各反応物は、市販品のまま入手してもよく、市販の原材料を用いて、本分野での
一般的な方法により調製されてもよい。
【００４１】
医薬組成物及び施用方法
本発明の化合物は、Ｂ型肝炎ウイルスへの阻害活性に優れるため、本発明の化合物及びそ
の種々な結晶形、薬学的に許容される無機または有機塩、水和物または溶媒和物、および
本発明の化合物を主な活性成分として含む医薬組成物は、Ｂ型肝炎ウイルスによる疾患を
治療、予防および緩和することに適用できる。従来の技術によれば、本発明の化合物は、
ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＩＶ及びＨＣＭＶ等の感染による疾患を治療することに適用できる。
本発明の医薬組成物は、安全有効量の範囲内において、本発明の化合物またはその薬理学
的に許容される塩及び薬理学的に許容される賦形剤または担体を含む。ここで、「安全有
効量」とは、重い副作用を引き起こさなくて病状を顕著に改善するに十分な化合物の量を
いう。通常、医薬組成物は、０．１−１０００ｍｇの本発明の化合物／剤を含有し、より
好ましくは、０．５〜５００ｍｇの本発明の化合物／剤を含有する。好ましくは、前記の
「一剤」は、一つのカプセルまたは錠剤をいう。
【００４２】
「薬学的に許容される担体」とは、一つまたは複数の相容性固体または液状充填材または
ゲル物質をいい、人に適用し、十分な純度及び十分に低い毒性を持つ必要がある。ここで
、「相容性」とは、組成物中の各成分同士、または本発明の化合物と互いにブレンドでき
、化合物の薬物効果を顕著に低減しないことをいう。薬学的に許容される担体のいくつか
の例として、セルロース及びその誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウ
ム、エチルセルロースナトリウム、セルロースアセテート等）、ゼラチン、タルク、固形
潤滑剤（例えば、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム）、硫酸カルシウム、植物油
（例えば、大豆油、ごま油、落花生油、オリーブ油等）、ポリオール（例えば、プロピレ
ングリコール、グリセリン、マンニトール、ソルビトール等）、乳化剤（例えば、トゥイ
ーン（登録商標））、湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）、着色剤、調味剤、安
定剤、抗酸化剤、防腐剤、発熱性物質除去水等が挙げられる。
【００４３】
本発明の化合物または医薬組成物の施用方式については、特に限定されず、代表的な施用
方式は、経口投与、直腸内投与、非経口投与（静脈内投与、筋肉内投与または皮下投与）
、及び局所投与を含む（これらに限らない）。特に好ましい施用方式は、経口投与である
。
経口投与のための固体剤形は、カプセル、錠剤、丸剤、散剤及び顆粒剤を含む。これらの
固体剤形において、活性化合物は、クエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウムのよう
な一般的な不活性賦形剤（または担体）の少なくとも一つと混合し、あるいは下述の成分
と混合する：（ａ）充填材または相溶化剤、例えば、澱粉、乳糖、ショ糖、ブドウ糖、マ
ンニトール及びケイ酸、（ｂ）粘着剤、例えば、ヒドロキシメチルセルロース、アルギン
酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、ショ糖及びアラビアガム、（ｃ）保湿剤、例え
ば、グリセリン、（ｄ）崩壊剤、例えば、寒天、炭酸カルシウム、じゃがいも澱粉または
キャッサバ澱粉、アルギン酸、ある複合ケイ酸塩、及び炭酸ナトリウム、（ｅ）溶解遅延
剤、例えばパラフィン、（ｆ）吸収促進剤、例えば、第四級アミン化合物、（ｇ）湿潤剤
、例えばセチルアルコール及びモノステアリン酸グリセリル、（ｈ）吸着剤、例えば、カ
オリン、及び（ｉ）潤滑剤、例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マ
グネシウム、固形ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、またはそれらの混
合物。カプセル、錠剤及び丸剤では、剤形が緩衝剤を含んでも良い。
【００４４】
錠剤、シューガーピルズ、カプセル、丸剤及び顆粒剤のような固体剤形は、ケーシング、
本分野での公知の他の材料のようなコーティング及びシェル材により調製されることがで
きる。その中、不透明剤を含んでもよく、また、このような組成物では、活性化合物また
は化合物の放出が遅延して、消化道内のある部位で放出されてもよい。用いられる埋込成
分の例として、ポリマー及びワックス類物質が挙げられる。必要に応じて、活性化合物は
、上述の賦形剤の中の一つまたは複数と、マイクロカプセルになる可能性がある。
【００４５】
経口投与のための液状剤形としては、薬学的に許容される乳液、溶液、懸濁液、シロップ
またはチンキ剤が挙げられる。液状剤形には、活性化合物以外に、本分野で通常に用いら
れる不活性希釈剤、例えば水または他の溶媒、可溶化剤及び乳化剤、例えば、エタノール
、イソプロパノール、炭酸エチル、酢酸エチル、プロピレングリコール、１，３−ブタン
ジオール、ジメチルホルムアミドおよび油、特に綿実油、落花生油、トウモロコシ胚芽油
、オリーブ油、ひまし油及びごま油またはこれらの混合物等が含まれる。
【００４６】
組成物には、これらの不活性希釈剤以外に、助剤、例えば湿潤剤、乳化剤及び懸濁剤、甘
味料、矯味剤及び香料が含まれる。
【００４７】
懸濁液には、活性化合物以外に、懸濁剤、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール
、ポリオキシエチレンソルビトール及びソルビタンエステル、微結晶性セルロース、アル
ミニウムメトキシド及び寒天またはこれらの混合物等が含まれる。
【００４８】
非経口注射のための組成物は、生理学的に許容される無菌の含水または非水溶液、分散液
、懸濁液または乳液、及び改めて無菌の注射溶液または分散液に溶解するための無菌粉末
が含まれる。適切な含水及び非水担体、希釈剤、溶媒または賦形剤には、水、エタノール
、ポリオール及びそれらの適切な混合物が含まれる。
【００４９】
局所投与のための本発明の化合物の剤形には、軟膏剤、散剤、パッチ剤、噴射剤及び吸入
剤が含まれる。活性成分は、無菌条件下で生理学的に許容される担体及び任意の防腐剤、
緩衝剤、または必要に応じて必要としうる推進剤とともに混合される。
【００５０】
本発明の化合物は、単独投与されてもよく、または他の薬学的に許容される化合物と併用
して投与されてもよい。
【００５１】
医薬組成物を使用するとき、安全有効量の本発明の化合物を、治療される哺乳動物（例え
ば、人）に適用し、ここで、施用時の使用量は、薬学的に認められる効果的な投与使用量
であり、６０ｋｇの人に対して、１日あたり投与使用量は、通常０．２〜１０００ｍｇ、
好ましくは０．５〜１００ｍｇである。無論、具体的な使用量は、投与経路、患者の健康
状態等の要素を考えする上で定めなければならず、熟練した医師にとっての技能範囲にあ
る。
【００５２】
本発明は、主として以下の利点を含む。
（１）肝臓送達性が高く、化合物が肝細胞でのシトクロムＰ４５０アイソザイムファミリ
ーのうちのＣＹＰ３Ａのみに特異的に触媒され、活性分子が生成させ、当該活性分子は、
大量の負の電荷を持ち、肝外に排出されにくく、他の組織では、ＣＹＰ３Ａ酵素の発現が
ほとんど見られず、そのため、肝での活性分子は、他の組織よりも濃度がはるかに高く、
これにより、肝臓送達効果を達成する。
（２）活性が高く、化合物が肝細胞でのシトクロムＰ４５０アイソザイムファミリーのう
ちのＣＹＰ３Ａのみに特異的に触媒され、活性分子が生成され、当該活性分子は、大量の
負の電荷を持ち、肝外に排出されにくく、経口投与で吸収された後、まず肝臓代謝（初回
通過効果）を経るため、より多くの活性分子が肝臓に集まり、抗ウイルス活性が大きく向
上させることができる。
（３）毒性と副作用が低い：同じ使用量のプロドラッグは、肝臓以外の組織で、活性分子
に代謝される量が非常に少ないため、腎臓、脳等の主な臓器への毒性が大きく低減される
。
【００５３】
以下、具体な実施例により、本発明をさらに説明する。これらの実施例は、本発明を例示
するためだけに使用され、本発明の範囲を限定するものではないことを理解すべきである
。以下の実施例で具体な条件が明記されない実験方法は、一般的な条件で、またはメーカ
ーによって推奨される条件で行う。特に明記しない限り、百分率及び部数は、重量として
算出される。
【００５４】
実施例１  ＰＡ３００１（比較例）
合成経路：
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実験部分：
工程１）化合物ＰＡ３００１−２の合成：
化合物エンテカビル一水和物ＰＡ３００１−１（５．３２ｇ、１８ｍｍｏｌ）及びイミダ
ゾール（８．０ｇ、１１７．６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（４０ｍｌ）に溶解させ、氷浴でｔｅ
ｒｔ−ブチルジメチルクロロシラン（ＴＢＳＣｌ、１３．３ｇ、８８ｍｍｏｌ）をゆっく
り加え、窒素雰囲気下で、室温で反応を一晩攪拌し、反応終了後、ゆっくり水（４００ｍ
Ｌ）に加え、１５分間攪拌し、酢酸エチル（３×１５０ｍＬ）で抽出し、無水硫酸ナトリ
ウムで乾燥し、濾過し、スピン乾燥し、シリカゲルクロマトグラフィーカラムにより分離
精製し（溶離液：ＰＥ：ＥＡ（Ｖ：Ｖ）＝１：３）、ＰＡ３００１−２（８．２ｇ）を得
、収率９０％であった。
工程２）化合物ＰＡ３００１−３の合成：
化合物ＰＡ３００１−２（２．５ｇ、４．９ｍｍｏｌ）を０．５％の塩酸エタノール溶液
（５０ｍｌ）中に溶解させ、室温で０．５時間攪拌した直後、飽和ＮａＨＣＯ３溶液でｐ
Ｈ＝９に中和し、エバポレーターでエタノールを除去し、シリカゲルクロマトグラフィー
カラムにより分離精製し（溶離液：ＰＥ：ＥＡ：ＣＨ３ＯＨ（Ｖ：Ｖ）＝３０：１５０：
４．５）、白色固体である化合物ＰＡ３００１−３（１．５ｇ）を得、収率７８％であっ
た。
工程３）化合物ＰＡ３００１−５の合成：
化合物ＰＡ３００１−３（４８４ｍｇ、１．２４ｍｍｏｌ）を無水テトラヒドロフランに
溶解させ、氷浴で、ゆっくり１Ｍのｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド溶液（４．９
ｍＬ、４．９ｍｍｏｌ）を滴下し、１時間攪拌し、ＰＡ３００１−４（６３３ｍｇ、１．
７１ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩攪拌した。飽和塩化アンモニウムを２０ｍＬ加えてク
エンチし、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出し、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナト
リウムで乾燥し、スピン乾燥し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し（Ｄ
ＣＭ：ＭｅＯＨ（Ｖ：Ｖ）＝２０：１）、ＰＡ３００１−５（５３８ｇ）を得、収率７０
％であった。
工程４）化合物ＰＡ３００１の合成：
化合物ＰＡ３００１−５（２７０ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）を２％の塩酸エタノール溶液
（１０ｍＬ）に加え、室温で２時間攪拌した。反応終了後、飽和ＮａＨＣＯ３溶液でｐＨ
値が中性になるまで中和し、エバポレーターでエタノールを除去した後、酢酸エチル（２
×５０ｍＬ）で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾
過し、スピン乾燥し、Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈクロマトグラフィーカラムにより精製し、ラ
イトホワイト固体であるＰＡ３００１（１５５ｍｇ）を得、収率７０％であった。
【００５５】
実施例２  ＰＡ３００２
合成経路：
2021506846.tif 000014
工程１）化合物ＰＡ３００２−２の合成：
化合物ＰＡ３００１−３（５６１ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（３０ｍ
ｌ）に溶解させ、氷浴で、ゆっくり１Ｍのｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド溶液（
５．６ｍＬ、５．６ｍｍｏｌ、４．０ｅｑ）を滴下し、滴下終了後、反応液を室温で１時
間攪拌し、再度０℃に冷却し、ＰＡ３００２−１（８３３ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）を加え
、その後、反応液を室温で一晩攪拌し、飽和塩化アンモニウム水溶液（３０ｍＬ）で反応
をクエンチし、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾
過し、スピン乾燥し、シリカゲルクロマトグラフィーカラムにより分離精製し（溶離液：
ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（Ｖ：Ｖ）＝２０：１）、白色固体であるＰＡ３００２−２（６００ｍ
ｇ）を得、収率６５％であった。
工程２）目的の化合物ＰＡ３００２の合成：
化合物ＰＡ３００２−２（３１０ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）を３．６％の塩酸エタノール
溶液（１５ｍｌ）に溶解させ、室温で攪拌しながら２時間反応させた。反応終了後、飽和
ＮａＨＣＯ３溶液でｐＨ値が中性になるまで中和し、エバポレーターでエタノールを除去
した後、酢酸エチル（２×６０ｍＬ）で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸
ナトリウムで乾燥し、濾過し、スピン乾燥し、Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈクロマトグラフィー
カラムにより精製し、ライトホワイト固体であるＰＡ３００２（１７０ｍｇ）を得、収率
６６％であった。
【００５６】
実施例３  ＰＡ３００３
合成経路：
2021506846.tif 000015
実験部分：
工程１）化合物ＰＡ３００３−２の合成：
化合物ＰＡ３００１−３（９００ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（５０ｍ
ｌ）に溶解させ、氷浴で、ゆっくり１Ｍのｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド溶液（
４．６ｍＬ、４．６ｍｍｏｌ）を滴下し、滴下終了後、反応液を室温で１時間攪拌し、再
度０℃に冷却し、ＰＡ３００３−１（１．１７ｇ、３．５ｍｍｏｌ）を加え、その後、反
応液を室温で一晩攪拌し、飽和塩化アンモニウム水溶液（３０ｍＬ）で反応をクエンチし
、酢酸エチル（３×１５０ｍＬ）で抽出し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、スピン
乾燥し、シリカゲルクロマトグラフィーカラムにより分離精製し（溶離液：ＤＣＭ：Ｍｅ
ＯＨ（Ｖ：Ｖ）＝１０：１）、白色固体であるＰＡ３００３−２（７００ｍｇ）を得、収
率６４％であった。
工程２）目的の化合物ＰＡ３００３の合成：
化合物ＰＡ３００３−２（６００ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）を３．６％の塩酸エタノール
溶液（１５ｍｌ）に溶解させ、室温で攪拌しながら２時間反応させた。反応終了後、飽和
ＮａＨＣＯ３溶液でｐＨ値が中性になるまで中和し、エバポレーターでエタノールを除去
した後、酢酸エチル（２×１００ｍＬ）で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫
酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、スピン乾燥し、Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈクロマトグラフィ
ーカラムにより精製し、ライトホワイト固体であるＰＡ３００３（２００ｍｇ）を得、収
率４１％であった。
【００５７】
実施例４  ＰＡ３００４
合成経路：
2021506846.tif 000016
実験部分：
工程１）化合物ＰＡ３００４−２の合成：
化合物ＰＡ３００１−３（６７７ｍｇ、１．７３ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（４０
ｍｌ）に溶解させ、氷浴で、ゆっくり１Ｍのｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド溶液
（６．６ｍＬ、６．６ｍｍｏｌ）を滴下し、滴下終了後、反応液を室温で１時間攪拌し、
再度０℃に冷却し、ＰＡ３００４−１（９７０ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）を加え、その後、
反応液を室温で一晩攪拌し、飽和塩化アンモニウム水溶液（３０ｍＬ）で反応をクエンチ
し、酢酸エチル（３×１５０ｍＬ）で抽出し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、スピ
ン乾燥し、シリカゲルクロマトグラフィーカラムにより分離精製し（溶離液：ＤＣＭ：Ｍ
ｅＯＨ（Ｖ：Ｖ）＝２０：１）、白色固体であるＰＡ３００４−２（５８０ｍｇ）を得、
収率５３％であった。
工程２）目的の化合物ＰＡ３００４の合成：
化合物ＰＡ３００４−２（５８０ｍｇ、０．９１ｍｍｏｌ）を３．６％の塩酸エタノール
溶液（１５ｍｌ）に溶解させ、室温で攪拌しながら２時間反応させた。反応終了後、飽和
ＮａＨＣＯ３溶液でｐＨ値が中性になるまで中和し、エバポレーターでエタノールを除去
した後、酢酸エチル（２×８０ｍＬ）で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸
ナトリウムで乾燥し、濾過し、スピン乾燥し、Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈクロマトグラフィー
カラムにより精製し、ライトホワイト固体であるＰＡ３００４（２５０ｍｇ）を得、収率
５２％であった。
【００５８】
実施例５  ＰＡ３００５
合成経路：
2021506846.tif 000017
実験部分：
工程１）化合物ＰＡ３００５の合成：
化合物ＰＡ３００４（３００ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍｌ）に溶解させ
、室温で、ＤＣＣ（３５２ｍｇ、１．７１ｍｍｏｌ）を加え、イソ酪酸（６０ｍｇ、０．
６８ｍｍｏｌ）及び触媒量のＤＭＡＰ（１０ｍｇ）を加え、その後、反応液を室温で一晩
攪拌し、飽和塩化ナトリウム水溶液（４０ｍＬ）で反応をクエンチし、酢酸エチル（３×
５０ｍＬ）で抽出し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、スピン乾燥し、Ｃｏｍｂｉｆ
ｌａｓｈクロマトグラフィーカラムにより精製し、白色固体であるＰＡ３００５（２０６
ｍｇ）を得、収率６１％であった。
【００５９】
実施例６  ＰＡ３００６
合成経路：
2021506846.tif 000018
実験部分：
工程１）化合物ＰＡ３００６−１の合成：
化合物ＰＡ３００４（２００ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍｌ）に溶解させ
、室温で、ＤＣＣ（２３４ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ）、（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブト
キシカルボニル）アミノ）−３−メチル酪酸（１２４ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）及び触媒
量のＤＭＡＰ（１０ｍｇ）を加え、その後、反応液を室温で一晩攪拌し、飽和塩化ナトリ
ウム水溶液（４０ｍＬ）で反応をクエンチし、酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出し、無
水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、スピン乾燥し、Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈクロマトグラフ
ィーカラムにより精製し、白色固体であるＰＡ３００６−１（１８０ｍｇ）を得、収率６
５％であった。
工程２）化合物ＰＡ３００６の合成：
化合物ＰＡ３００６−１（１８０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸溶液（５
ｍｌ）に加え、室温で攪拌しながら２時間反応させた。反応終了後、エバポレーターでト
リフルオロ酢酸を除去した後、酢酸エチル４０ｍＬで溶解させ、水５０ｍＬを加え、飽和
ＮａＨＣＯ３溶液でｐＨ値が中性になるまで中和し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水
硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、スピン乾燥し、Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈクロマトグラフ
ィーカラムにより精製し、ライトホワイト固体であるＰＡ３００６（７８ｍｇ）を加え、
収率５０％であった。
【００６０】
実施例７  ＰＡ３００７
合成経路：
2021506846.tif 000019
実験部分：
工程１）化合物ＰＡ３００４（２００ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）、ＤＣＣ（２３５ｍｇ、
１．１４ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（５ｍｇ、０．０３８ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド：ジクロロメタン（Ｖ、Ｖ＝１：１、１０ｍｌ）に加え、氷浴で、ゆっくりプロ
ピオン酸（４５ｕＬ、０．７６ｍｍｏｌ）を滴下し、滴下終了後、反応液を室温で一晩攪
拌した。反応液を濃縮した後、飽和塩化ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）を加え、酢酸エチ
ル（３×３０ｍＬ）で抽出し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、スピン乾燥し、シリ
カゲルクロマトグラフィーカラムにより分離精製し（溶離液：ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（Ｖ：Ｖ
）＝２０：１）、白色固体であるＰＡ３００７（１０５ｍｇ）を得、収率４７％であった
。
【００６１】
実施例８  ＰＡ３００８
合成経路：
2021506846.tif 000020
実験部分：
工程１）化合物ＰＡ３００８−１の合成：
化合物ＰＡ３００４（５００ｍｇ、０．９５ｍｍｏｌ）をピリジン（５ｍＬ）に溶解させ
、氷浴で、ゆっくりＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（０．２ｍＬ、１
．９ｍｍｏｌ）を滴下し、滴下終了後、反応液を室温で一晩攪拌した。反応液を濃縮し、
真空ボックスで乾燥してＰＡ３００８−１粗生成物（５１０ｍｇ）を得た。
工程２）目的の化合物ＰＡ３００８−２の合成：
化合物ＰＡ３００８−１（５００ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ）をピリジン（５ｍＬ）に溶解
させ、氷浴で、ゆっくりクロロギ酸イソプロピル（０．１ｍＬ、０．８６ｍｍｏｌ）を滴
下し、滴下終了後、反応液を室温で４ｈ攪拌した後、残りのクロロギ酸イソプロピル（０
．１ｍＬ、０．８６ｍｍｏｌ）を反応液にゆっくり滴下し、滴下終了後、反応液を室温で
一晩攪拌した。反応液を濃縮し、飽和塩化ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）を加え、酢酸エ
チル（３×３０ｍＬ）で抽出し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、スピン乾燥し、シ
リカゲルクロマトグラフィーカラムにより分離精製し（溶離液：ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（Ｖ：
Ｖ）＝５０：１）、白色固体であるＰＡ３００８−２（５２０ｍｇ）を得、収率８７％で
あった。
工程３）目的の化合物ＰＡ３００８の合成：
化合物ＰＡ３００８−２（２００ｍｇ、３．０２ｍｍｏｌ）を９％の塩酸エタノール溶液
（１０ｍｌ）に溶解させ、室温で攪拌しながら１６時間反応させた。反応終了後、飽和Ｎ
ａＨＣＯ３溶液でｐＨ値が中性になるまで中和し、エバポレーターでエタノールを除去し
た後、酢酸エチル（３×３００ｍＬ）で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸
ナトリウムで乾燥し、濾過し、スピン乾燥し、Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈクロマトグラフィー
カラムにより精製し、ライトホワイト固体であるＰＡ３００８（１２０ｍｇ）を得、収率
６５％であった。
【００６２】
実施例９  ＰＡ３００９
合成経路：
2021506846.tif 000021
実験部分：
工程１）化合物ＰＡ３００９の合成：
化合物ＰＡ３００４（３００ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍｌ）に溶解させ
、室温で、ＤＣＣ（３５２ｍｇ、
１．７１ｍｍｏｌ）、カプリン酸（１１７ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）及び触媒量のＤＭＡ
Ｐ（１０ｍｇ）を加え、その後、反応液を室温で一晩攪拌し、飽和塩化ナトリウム水溶液
（４０ｍＬ）で反応をクエンチし、酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出し、無水Ｎａ２Ｓ
Ｏ４で乾燥し、濾過し、スピン乾燥し、Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈクロマトグラフィーカラム
により精製し、白色固体であるＰＡ３００９（２４３ｍｇ）を得、収率６３％であった。
【００６３】
実施例１０  ＰＡ３０１０
合成経路：
2021506846.tif 000022
実験部分：
工程１）化合物ＰＡ３０１０−２の合成：
化合物ＰＡ３００１−３（３００ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（５ｍ
ｌ）に溶解させ、氷浴で、ゆっくり１Ｍのｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド溶液（
２．７ｍＬ、２．７ｍｍｏｌ、３．５ｅｑ）を滴下し、滴下終了後、反応液を室温で２時
間攪拌し、再度０℃に冷却し、ＰＡ３０１０−１（３７０ｍｇ、０．９２ｍｍｏｌ）を加
え、その後、反応液を室温で一晩攪拌し、飽和塩化アンモニウム水溶液（３０ｍＬ）で反
応をクエンチし、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、
濾過し、スピン乾燥し、シリカゲルクロマトグラフィーカラムにより分離精製し（溶離液
：ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（Ｖ：Ｖ）＝２０：１）、白色固体であるＰＡ３０１０−２（３００
ｍｇ）を得、収率６６％であった。
工程２）目的の化合物ＰＡ３０１０の合成：
化合物ＰＡ３０１０−２（３００ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）を３．６％の塩酸エタノール
溶液（１０ｍｌ）に溶解させ、室温で攪拌しながら２時間反応させた。反応終了後、飽和
ＮａＨＣＯ３溶液でｐＨ値が７．５程度になるまで中和し、エバポレーターでエタノール
を除去した後、酢酸エチル（３×８０ｍＬ）で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無
水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、スピン乾燥し、シリカゲルクロマトグラフィーカラ
ムにより分離精製し（溶離液：ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（Ｖ：Ｖ）＝２０：１）、粗生成物を得
、粗生成物をＣｏｍｂｉｆｌａｓｈクロマトグラフィーカラムにより精製し、白色固体で
あるＰＡ３０１０（４５ｍｇ）を得、収率１８％であった。
【００６４】
実施例１１  ＰＡ３０１１
合成経路：
2021506846.tif 000023
実験部分：
工程１）化合物ＰＡ３０１１−２の合成：
化合物ＰＡ３００１−３（３００ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（５ｍ
ｌ）に溶解させ、氷浴で、ゆっくり１Ｍのｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド溶液（
２．７ｍＬ、２．７ｍｍｏｌ、３．５ｅｑ）を滴下し、滴下終了後、反応液を室温で２時
間攪拌し、再度０℃に冷却し、ＰＡ３０１１−１（０．３７ｇ、０．９９ｍｍｏｌ、１．
３ｅｑ）を加え、その後、反応液を室温で一晩攪拌し、飽和塩化アンモニウム水溶液（３
０ｍＬ）で反応をクエンチし、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出し、無水Ｎａ２ＳＯ
４で乾燥し、濾過し、スピン乾燥し、シリカゲルクロマトグラフィーカラムにより分離精
製し（溶離液：ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（Ｖ：Ｖ）＝２０：１）、白色固体であるＰＡ３０１１
−２（３２０ｍｇ）を得、収率６５％であった。
工程２）目的の化合物ＰＡ３０１１の合成：
化合物ＰＡ３０１１−２（０．３２ｇ、０．５ｍｍｏｌ）を３．６％の塩酸エタノール溶
液（１０ｍｌ）に溶解させ、室温で攪拌しながら２時間反応させた。反応終了後、飽和Ｎ
ａＨＣＯ３溶液でｐＨ値が７．５程度になるまで中和し、エバポレーターでエタノールを
除去した後、酢酸エチル（３×８０ｍＬ）で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水
硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、スピン乾燥し、シリカゲルクロマトグラフィーカラム
により分離精製し（溶離液：ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（Ｖ：Ｖ）＝２０：１）、粗生成物を得、
粗生成物をＣｏｍｂｉｆｌａｓｈクロマトグラフィーカラムにより精製し、白色固体であ
るＰＡ３０１１（１１５ｍｇ）を得、収率４４％であった。
【００６５】
実施例１２  ＰＡ３０１２
合成経路：
2021506846.tif 000024
実験部分：
工程１）化合物ＰＡ３０１２−２の合成：
化合物ＰＡ３００１−３（３００ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（５ｍ
ｌ）に溶解させ、氷浴で、ゆっくり１Ｍのｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド溶液（
２．７ｍＬ、２．７ｍｍｏｌ、３．５ｅｑ）を滴下し、滴下終了後、反応液を室温で２時
間攪拌し、再度０℃に冷却し、ＰＡ３０１２−１（４４６ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加え
、その後、反応液を室温で一晩攪拌し、飽和塩化アンモニウム水溶液（３０ｍＬ）で反応
をクエンチし、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾
過し、スピン乾燥し、シリカゲルクロマトグラフィーカラムにより分離精製し（溶離液：
ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（Ｖ：Ｖ）＝２０：１）、白色固体であるＰＡ３０１２−２（３００ｍ
ｇ）を得、収率６６％であった。
工程２）目的の化合物ＰＡ３０１２の合成：
化合物ＰＡ３０１２−２（３００ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）を３．６％の塩酸エタノール
溶液（１０ｍｌ）に溶解させ、室温で攪拌しながら２時間反応させた。反応終了後、飽和
ＮａＨＣＯ３溶液でｐＨ値が７．５程度になるまで中和し、エバポレーターでエタノール
を除去した後、酢酸エチル（３×６０ｍＬ）で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無
水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、スピン乾燥し、シリカゲルクロマトグラフィーカラ
ムにより分離精製し（溶離液：ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（Ｖ：Ｖ）＝２０：１）、粗生成物を得
、粗生成物をＣｏｍｂｉｆｌａｓｈ  クロマトグラフィーカラムにより精製し、ライトホ
ワイト固体であるＰＡ３０１２（４５ｍｇ）を得、収率１８％であった。
【００６６】
実施例１３  ＰＡ３０１３
合成経路：
2021506846.tif 000025
実験部分：
工程１）化合物ＰＡ３０１３−２の合成：
化合物ＰＡ３００１−３（３００ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１０
ｍｌ）に溶解させ、氷浴で、ゆっくり１Ｍのｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド溶液
（２．７ｍＬ、２．７ｍｍｏｌ、３．５ｅｑ）を滴下し、滴下終了後、反応液を室温で２
時間攪拌し、再度０℃に冷却し、ＰＡ３０１３−２（４４６ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加
え、その後、反応液を室温で一晩攪拌し、飽和塩化アンモニウム水溶液（３０ｍＬ）で反
応をクエンチし、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、
濾過し、スピン乾燥し、シリカゲルクロマトグラフィーカラムにより分離精製し（溶離液
：ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（Ｖ：Ｖ）＝２０：１）、白色固体であるＰＡ３０１３−２（３５０
ｍｇ）を得、収率７１％であった。
工程２）目的の化合物ＰＡ３０１３の合成：
化合物ＰＡ３０１３−２（３５０ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）を３．６％の塩酸エタノール
溶液（１５ｍｌ）に溶解させ、室温で攪拌しながら２時間反応させた。反応終了後、飽和
ＮａＨＣＯ３溶液でｐＨ値が中性になるまで中和し、エバポレーターでエタノールを除去
した後、酢酸エチル（２×６０ｍＬ）で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸
ナトリウムで乾燥し、濾過し、スピン乾燥し、シリカゲルクロマトグラフィーカラムによ
り分離精製し（溶離液：ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（Ｖ：Ｖ）＝２０：１）、分取プレートにより
精製し（展開剤：ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（Ｖ：Ｖ）＝１０：１）、さらにＣｏｍｂｉｆｌａｓ
ｈクロマトグラフィーカラムにより精製し、ライトホワイト固体であるＰＡ３０１３（２
０ｍｇ）を得、収率７％であった。
【００６７】
実施例１４  ＰＡ３０１４
合成経路：
2021506846.tif 000026
実験部分：
工程１）化合物ＰＡ３０１４−２の合成：
化合物ＰＡ３００１−３（２３０ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２０
ｍｌ）に溶解させ、氷浴で、ゆっくり１Ｍのｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド溶液
（１．７５ｍＬ、１．７５ｍｍｏｌ、５．５ｅｑ）を滴下し、滴下終了後、反応液を室温
で１時間攪拌し、再度０℃に冷却し、ＰＡ３０１４−１（０．２７ｇ、０．６９ｍｍｏｌ
、１．３ｅｑ）を加え、その後、反応液を室温で一晩攪拌し、飽和塩化アンモニウム水溶
液（２０ｍＬ）で反応をクエンチし、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出し、無水Ｎａ
２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、スピン乾燥し、シリカゲルクロマトグラフィーカラムにより
分離精製し（溶離液：ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（Ｖ：Ｖ）＝２０：１）白色固体であるＰＡ３０
１４−２（２９８ｍｇ）を得、収率７９％であった。
工程２）目的の化合物ＰＡ３０１４の合成：
化合物ＰＡ３０１４−２（２９８ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）を３．６％の塩酸エタノール
溶液（３．５ｍｌ）に加え、室温で攪拌しながら２時間反応させた。反応終了後、飽和Ｎ
ａＨＣＯ３溶液でｐＨ値が中性になるまで中和し、エバポレーターでエタノールを除去し
た後、酢酸エチル（２×６０ｍＬ）で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナ
トリウムで乾燥し、濾過し、スピン乾燥し、Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈクロマトグラフィーカ
ラムにより精製し、ライトホワイト固体であるＰＡ３０１４（６１ｍｇ）を得、収率３６
％であった。
【００６８】
実施例１５  ＰＡ３０１６
合成経路：
2021506846.tif 000027
実験部分：
工程１）化合物ＰＡ３０１６−２の合成：
化合物ＰＡ３００１−３（２３０ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１０
ｍｌ）に溶解させ、氷浴で、ゆっくり１Ｍのｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド溶液
（２．１ｍＬ、２．１ｍｍｏｌ、３．５ｅｑ）を滴下し、滴下終了後、反応液を室温で２
時間攪拌し、再度０℃に冷却し、ＰＡ３０１６−１（３４０ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）を
加え、その後、反応液を室温で一晩攪拌し、飽和塩化アンモニウム水溶液（３０ｍＬ）で
反応をクエンチし、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し
、濾過し、スピン乾燥し、シリカゲルクロマトグラフィーカラムにより分離精製し（溶離
液：ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（Ｖ：Ｖ）＝２０：１）、白色固体であるＰＡ３０１６−２（２５
０ｍｇ）を得、収率６６％であった。
工程２）目的の化合物ＰＡ３０１６の合成：
化合物ＰＡ３０１６−２（２５０ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）を３．６％の塩酸エタノール
溶液（１５ｍｌ）に溶解させ、室温で攪拌しながら２時間反応させた。反応終了後、飽和
ＮａＨＣＯ３溶液でｐＨ値が中性になるまで中和し、エバポレーターでエタノールを除去
した後、酢酸エチル（２×６０ｍＬ）で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸
ナトリウムで乾燥し、濾過し、スピン乾燥し、シリカゲルクロマトグラフィーカラムによ
り分離精製し（溶離液：ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（Ｖ：Ｖ）＝２０：１）、Ｃｏｍｂｉｆｌａｓ
ｈクロマトグラフィーカラムにより精製し、ライトホワイト固体であるＰＡ３０１６（２
０ｍｇ）を得、収率５１％であった。
【００６９】
実施例１６  ＰＡ３０１７
合成経路：
2021506846.tif 000028
実験部分：
工程１）化合物ＰＡ３０１７−２の合成：
化合物ＰＡ３００１−３（３００ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（５ｍ
ｌ）に溶解させ、氷浴で、ゆっくり１Ｍのｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド溶液（
２．７ｍＬ、２．７ｍｍｏｌ、３．５ｅｑ）を滴下し、滴下終了後、反応液を室温で２時
間攪拌し、再度０℃に冷却し、ＰＡ３０１７−１（４４６ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加え
、その後、反応液を室温で一晩攪拌し、飽和塩化アンモニウム水溶液（３０ｍＬ）で反応
をクエンチし、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾
過し、スピン乾燥し、シリカゲルクロマトグラフィーカラムにより分離精製し（溶離液：
ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（Ｖ：Ｖ）＝２０：１）、白色固体であるＰＡ３０１７−２（３００ｍ
ｇ）を得、収率６６％であった。
工程２）目的の化合物ＰＡ３０１７の合成：
化合物ＰＡ３０１７−２（３００ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）を３．６％の塩酸エタノール
溶液（１０ｍｌ）に溶解させ、室温で攪拌しながら２時間反応させた。反応終了後、飽和
ＮａＨＣＯ３溶液でｐＨ値が７．５程度になるまで中和し、エバポレーターでエタノール
を除去した後、酢酸エチル（３×６０ｍＬ）で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無
水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、スピン乾燥し、シリカゲルクロマトグラフィーカラ
ムにより分離精製し（溶離液：ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（Ｖ：Ｖ）＝２０：１）、粗生成物を得
、粗生成物をＣｏｍｂｉｆｌａｓｈクロマトグラフィーカラムにより精製し、ライトホワ
イト固体であるＰＡ３０１７（８０ｍｇ）を得、収率２８％であった。
【００７０】
実施例１７  ＰＡ３０１８
合成経路：
2021506846.tif 000029
実験部分：
工程１）化合物ＰＡ３０１８−２の合成：
化合物ＰＡ３００１−３（３９１ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（４０ｍ
ｌ）に溶解させ、氷浴で、ゆっくり１Ｍのｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド溶液（
３．５ｍＬ、３．５ｍｍｏｌ）を滴下し、滴下終了後、反応液を室温で１時間攪拌し、再
度０℃に冷却し、ＰＡ３０１８−１（３７１ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を加え、その後、反
応液を室温で一晩攪拌し、飽和塩化アンモニウム水溶液（３０ｍＬ）で反応をクエンチし
、酢酸エチル（３×７０ｍＬ）で抽出し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、スピン乾
燥し、シリカゲルクロマトグラフィーカラムにより分離精製し（溶離液：ＤＣＭ：ＭｅＯ
Ｈ（Ｖ：Ｖ）＝２０：１）、白色固体であるＰＡ３０１８−２（２６２ｍｇ）を得、収率
４２％であった。
工程２）目的の化合物ＰＡ３０１８の合成：
化合物ＰＡ３０１８−２（２６２ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）を３．６％の塩酸エタノール
溶液（１０ｍｌ）に溶解させ、室温で攪拌しながら２時間反応させた。反応終了後、飽和
ＮａＨＣＯ３溶液でｐＨ値が中性になるまで中和し、エバポレーターでエタノールを除去
した後、酢酸エチル（３×６０ｍＬ）で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸
ナトリウムで乾燥し、濾過し、スピン乾燥し、Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈクロマトグラフィー
カラムにより精製し、白色固体であるＰＡ３０１８（９６ｍｇ）を得、収率４５％であっ
た。
【００７１】
実施例１８  ＰＡ３０１９
合成経路：
2021506846.tif 000030
実験部分：
工程１）化合物ＰＡ３０１９−２の合成：
化合物ＰＡ３００１−３（２００ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１０
ｍｌ）に溶解させ、氷浴で、ゆっくり１Ｍのｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド溶液
（１．８ｍＬ、１．８ｍｍｏｌ）を滴下し、滴下終了後、反応液を室温で１時間攪拌し、
再度０℃に冷却し、ＰＡ３０１９−１（２８５ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）を加え、その後
、反応液を室温で一晩攪拌し、飽和塩化アンモニウム水溶液（３０ｍＬ）で反応をクエン
チし、酢酸エチル（３×１５０ｍＬ）で抽出し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、ス
ピン乾燥し、シリカゲルクロマトグラフィーカラムにより分離精製し（溶離液：ＤＣＭ：
ＭｅＯＨ（Ｖ：Ｖ）＝１０：１）、白色固体であるＰＡ３０１９−２（１８０ｍｇ）を得
、収率５６％であった。
工程２）目的の化合物ＰＡ３０１９の合成：
化合物ＰＡ３０１９−２（１８０ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）を３．６％の塩酸エタノール
溶液（１５ｍｌ）に溶解させ、室温で攪拌しながら２時間反応させた。反応終了後、飽和
ＮａＨＣＯ３溶液でｐＨ値が中性になるまで中和し、エバポレーターでエタノールを除去
した後、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫
酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、スピン乾燥し、Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈクロマトグラフィ
ーカラムにより精製し、ライトホワイト固体であるＰＡ３０１９（２０ｍｇ）を得、収率
１３．５％であった。
【００７２】
実施例１９  ＰＡ３０２０
合成経路：
2021506846.tif 000031
実験部分：
工程１）化合物ＰＡ３０２０−２の合成：
化合物ＰＡ３００１−３（２００ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（５ｍ
ｌ）に溶解させ、氷浴で、ゆっくり１Ｍのｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド溶液（
１．８ｍＬ、１．８ｍｍｏｌ、３．５ｅｑ）を滴下し、滴下終了後、反応液を室温で２時
間攪拌し、再度０℃に冷却し、ＰＡ３０２０−１（１９０ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）を加
え、その後、反応液を室温で一晩攪拌し、飽和塩化アンモニウム水溶液（２０ｍＬ）で反
応をクエンチし、酢酸エチル（３×８０ｍＬ）で抽出し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾
過し、スピン乾燥し、シリカゲルクロマトグラフィーカラムにより分離精製し（溶離液：
ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（Ｖ：Ｖ）＝２０：１）、白色固体であるＰＡ３０２０−２（１７０ｍ
ｇ）を得、収率５３％であった。
工程２）目的の化合物ＰＡ３０２０の合成：
化合物ＰＡ３０２０−２（１７０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を３．６％の塩酸エタノール
溶液（１０ｍｌ）に溶解させ、室温で攪拌しながら２時間反応させた。反応終了後、飽和
ＮａＨＣＯ３溶液でｐＨ値が７．５程度になるまで中和し、エバポレーターでエタノール
を除去した後、酢酸エチル（３×６０ｍＬ）で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無
水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、スピン乾燥し、シリカゲルクロマトグラフィーカラ
ムにより分離精製し（溶離液：ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（Ｖ：Ｖ）＝２０：１）、粗生成物を得
、粗生成物をＣｏｍｂｉｆｌａｓｈクロマトグラフィーカラムにより精製し、ライトホワ
イト固体であるＰＡ３０２０（２５ｍｇ）を得、収率１８％であった。
【００７３】
実施例２０  ＰＡ３０２２
合成経路：
2021506846.tif 000032
実験部分：
工程１）化合物ＰＡ３０２２−２の合成：
化合物ＰＡ３００１−３（３９１ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（４０ｍ
ｌ）に溶解させ、氷浴で、ゆっくり１Ｍのｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド溶液（
３．５ｍＬ、３．５ｍｍｏｌ）を滴下し、滴下終了後、反応液を室温で１時間攪拌し、再
度０℃に冷却し、ＰＡ３０２２−１（３７１ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を加え、その後、反
応液を室温で一晩攪拌し、飽和塩化アンモニウム水溶液（３０ｍＬ）で反応をクエンチし
、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、スピン
乾燥し、シリカゲルクロマトグラフィーカラムにより分離精製し（溶離液：ＤＣＭ：Ｍｅ
ＯＨ（Ｖ：Ｖ）＝２０：１）、白色固体であるＰＡ３０２２−２（２４０ｍｇ）を得、収
率３８．５％であった。
工程２）目的の化合物ＰＡ３０２２の合成：
化合物ＰＡ３０２２−２（２４０ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）を３．６％の塩酸エタノール
溶液（１０ｍｌ）に溶解させ、室温で攪拌しながら２時間反応させた。反応終了後、飽和
ＮａＨＣＯ３溶液でｐＨ値が中性になるまで中和し、エバポレーターでエタノールを除去
した後、酢酸エチル（３×８０ｍＬ）で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸
ナトリウムで乾燥し、濾過し、スピン乾燥し、Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈクロマトグラフィー
カラムにより精製し、白色固体であるＰＡ３０２２（１０３ｍｇ）を得、収率５３％であ
った。
【００７４】
実施例２１  ＰＡ３０２３
合成経路：
2021506846.tif 000033
実験部分：
工程１）化合物ＰＡ３０２３−２の合成：
化合物ＰＡ３００１−３（２００ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１０
ｍｌ）に溶解させ、氷浴で、ゆっくり１Ｍのｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド溶液
（１．８ｍＬ、１．８ｍｍｏｌ）を滴下し、滴下終了後、反応液を室温で１時間攪拌し、
再度０℃に冷却し、ＰＡ３０２３−１（３０９ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）を加え、その後
、反応液を室温で一晩攪拌し、飽和塩化アンモニウム水溶液（３０ｍＬ）で反応をクエン
チし、酢酸エチル（３×１５０ｍＬ）で抽出し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、ス
ピン乾燥し、シリカゲルクロマトグラフィーカラムにより分離精製し（溶離液：ＤＣＭ：
ＭｅＯＨ（Ｖ：Ｖ）＝１０：１）、白色固体であるＰＡ３０２３−２（１２０ｍｇ）を得
、収率３６％であった。
工程２）目的の化合物ＰＡ３０２３の合成：
化合物ＰＡ３０２３−２（１２０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を３．６％の塩酸エタノール
溶液（１５ｍｌ）に溶解させ、室温で攪拌しながら２時間反応させた。反応終了後、飽和
ＮａＨＣＯ３溶液でｐＨ値が中性になるまで中和し、エバポレーターでエタノールを除去
した後、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫
酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、スピン乾燥し、Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈクロマトグラフィ
ーカラムにより精製し、ライトホワイト固体であるＰＡ３０２３（２２ｍｇ）を得、収率
２２％であった。
【００７５】
実施例２２  ＰＡ３０２４
合成経路：
2021506846.tif 000034
実験部分：
工程１）化合物ＰＡ３０２４−２の合成：
化合物ＰＡ３００１−３（２００ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（５ｍ
ｌ）に溶解させ、氷浴で、ゆっくり１Ｍのｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド溶液（
１．８ｍＬ、１．８ｍｍｏｌ、３．５ｅｑ）を滴下し、滴下終了後、反応液を室温で２時
間攪拌し、再度０℃に冷却し、ＰＡ３０２４−１（２００ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）を加
え、その後、反応液を室温で一晩攪拌し、飽和塩化アンモニウム水溶液（２０ｍＬ）で反
応をクエンチし、酢酸エチル（３×８０ｍＬ）で抽出し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾
過し、  スピン乾燥し、シリカゲルクロマトグラフィーカラムにより分離精製し（溶離液
：ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（Ｖ：Ｖ）＝２０：１）、白色固体であるＰＡ３０２４−２（１５０
ｍｇ）を得、収率４５％であった。
工程２）目的の化合物ＰＡ３０２４の合成：
化合物ＰＡ３０２４−２（１５０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）を３．６％の塩酸エタノール
溶液（１０ｍｌ）に溶解させ、室温で攪拌しながら２時間反応させた。反応終了後、飽和
ＮａＨＣＯ３溶液でｐＨ値が７．５程度になるまで中和し、エバポレーターでエタノール
を除去した後、酢酸エチル（３×６０ｍＬ）で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無
水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、スピン乾燥し、シリカゲルクロマトグラフィーカラ
ムにより分離精製し（溶離液：ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（Ｖ：Ｖ）＝２０：１）、粗生成物を得
、粗生成物をＣｏｍｂｉｆｌａｓｈクロマトグラフィーカラムにより精製し、ライトホワ
イト固体であるＰＡ３０２４（８０ｍｇ）を得、収率６５％であった。
【００７６】
実施例２３  ＰＡ３０２６
合成経路：
2021506846.tif 000035
実験部分：
工程１）化合物ＰＡ３０２６−２の合成：
化合物ＰＡ３００１−３（３９１ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（４０ｍ
ｌ）に溶解させ、氷浴で、ゆっくり１Ｍのｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド溶液（
３．５ｍＬ、３．５ｍｍｏｌ）を滴下し、滴下終了後、反応液を室温で１時間攪拌し、再
度０℃に冷却し、ＰＡ３０２６−１（４０２ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を加え、その後、反
応液を室温で一晩攪拌し、飽和塩化アンモニウム水溶液（３０ｍＬ）で反応をクエンチし
、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、スピン
乾燥し、シリカゲルクロマトグラフィーカラムにより分離精製し（溶離液：ＤＣＭ：Ｍｅ
ＯＨ（Ｖ：Ｖ）＝２０：１）、白色固体であるＰＡ３０２６−２（１００ｍｇ）を得、収
率１５．３％であった。
工程２）目的の化合物ＰＡ３０２６の合成：
化合物ＰＡ３０２６−２（１００ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を３．６％の塩酸エタノール
溶液（１０ｍｌ）に溶解させ、室温で攪拌しながら２時間反応させた。反応終了後、飽和
ＮａＨＣＯ３溶液でｐＨ値が中性になるまで中和し、エバポレーターでエタノールを除去
した後、酢酸エチル（３×６０ｍＬ）で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸
ナトリウムで乾燥し、濾過し、スピン乾燥し、Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈクロマトグラフィー
カラムにより精製し、白色固体であるＰＡ３０２６（３２ｍｇ）を得、収率３２．５％で
あった。
【００７７】
表１  各実施例で調製された化合物が下記の表に示される
2021506846.tif 000036
2021506846.tif 000037
2021506846.tif 000038
2021506846.tif 000039
【００７８】
表２  各実施例に調製された化合物のＮＭＲが下記の表に示される
2021506846.tif 000040
2021506846.tif 000041
2021506846.tif 000042
【００７９】
実施例２４  インビトロでのヒト、マウス及びラット肝ミクロソーム代謝の評価
測定方法：
１）試薬の供給源
ヒト肝ミクロソーム（ＨＬＭ、Ｈｕｍａｎ  Ｌｉｖｅｒ  Ｍｉｃｒｏｓｏｍｅｓ）は、Ｉ
ＶＴ（Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）から入手され、商品番号がＸ００
８０７０であり、ロット番号がＳＳＰである。ラット肝ミクロソーム（ＲＬＭ、Ｒａｔ  
Ｌｉｖｅｒ  Ｍｉｃｒｏｓｏｍｅｓ）は、ＢＤから入手され、ロット番号が１６２９８で
あり、マウス肝ミクロソーム（ＭＬＭ、Ｍｉｃｅ  Ｌｉｖｅｒ  Ｍｉｃｒｏｓｏｍｅｓ）
は、リルド肝臓疾患研究（上海）社から入手され、ロット番号がＢＱＮＩである。
試験化合物ＰＡ３００１、ＰＡ３００２、ＰＡ３００３、ＰＡ３００４はＺＨＥＪＩＡＮ
Ｇ  ＰＡＬＯ  ＡＬＴＯ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ  ＩＮＣによって合成され、
メタノール（国薬試薬）に溶解させ、濃度が２５ｍＭである保存液にした。
２）反応プロセス
酵素触媒反応は、１００ｍＭのＫＨ２ＰＯ４緩衝溶液（ｐＨ  ７．４）で行い、試験化合
物濃度が２５μＭであり、ヒト肝ミクロソーム濃度が２ｍｇ／ｍｌであり、ＮＡＤＰＨ濃
度が２ｍＭであった。反応は、最後に添加されたＮＡＤＰＨによって開始され、恒温振と
う水浴で５ｍｉｎ反応させた直後、１．５倍体積のメタノールを加えて反応を停止させた
。
３）サンプル処理及び分析方法
Ｉ  サンプル前処理：
Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ卓上型遠心分離機により、最大回転数１３，６００ｒｐｍで２０分間
遠心した。上澄み液を取り、窒素送風機で乾かした後、再度移動相Ａ（０．１％ギ酸ｖ／
ｖの水溶液）に溶解させた。
ＩＩ  液相勾配：
2021506846.tif 000043
分析カラム：Ｗａｔｅｒｓ、Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＨＳＳ  Ｔ３  ｃｏｌｕｍｎ
流速：０．５ｍｌ／ｍｉｎ
カラム温度：４０℃
ＩＩＩ  質量分析の条件
イオン源：エレクトロスプレーのイオン源
イオンモード：陽イオンモード
キャピラリー電圧：３．０ｋＶ
温度：５００℃
脱溶媒ガス流量：１００Ｌ／ｈ
スキャン時間：０．０２５ｓ
コーン電圧：４０Ｖ
衝突エネルギー：１８ｅＶ
Ｑ１（ｍ／ｚ）：３５８
Ｑ３（ｍ／ｚ）：１５２
【００８０】
表３  インビトロで肝ミクロソーム代謝化合物が一リン酸生成物ＥＴＶＭＰを放出するレ
ート
2021506846.tif 000044
注釈：ＮＤ＝Ｎｏｔ  Ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ
結果の分析：インビトロで、化合物ＰＡ３００１、ＰＡ３００３及びＰＡ３００４のいず
れも、ヒト、ラット、マウス肝ミクロソームによって活性化されて一リン酸代謝生成物Ｅ
ＴＶＭＰになることができ、ＰＡ３００２及びＰＡ３００４は、対照化合物ＰＡ３００１
によりも、ヒト肝ミクロソームによって活性化されて一リン酸代謝生成物ＥＴＶＭＰにな
る効率が顕著に大きくなり、異なる化合物のコンバージョンレートは、有意な違いがあり
（表３）、ただし、ＰＡ３００４は、すべての種でもコンバージョンレートが最も高かっ
た。
【００８１】
実施例２５  インビトロでのヒト肝ミクロソーム代謝の評価
測定方法：
１）試薬の供給源
ヒト肝ミクロソーム（ＨＬＭ、Ｈｕｍａｎ  Ｌｉｖｅｒ  Ｍｉｃｒｏｓｏｍｅｓ）は、Ｉ
ＶＴ（Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）から入手され、商品番号がＸ００
８０７０であり、ロット番号がＩＱＦである。
試験化合物ＰＡ３００１、ＰＡ３００２、ＰＡ３００３、ＰＡ３００４、ＰＡ３０１０、
ＰＡ３０１１、ＰＡ３０１２Ａ、  ＰＡ３０１３、ＰＡ３０１４、ＰＡ３０１６、ＰＡ３
０１７、ＰＡ３０１８、ＰＡ３０１９、ＰＡ３０２０、ＰＡ３０２２、ＰＡ３０２３、Ｐ
Ａ３０２４、ＰＡ３０２６は、ＺＨＥＪＩＡＮＧ  ＰＡＬＯ  ＡＬＴＯ  ＰＨＡＲＭＡＣ
ＥＵＴＩＣＡＬＳ  ＩＮＣによって合成され、メタノール（国薬試薬）に溶解させ、濃度
が２５ｍＭの保存液にした。
２）反応プロセス
酵素触媒反応は、１００ｍＭのＫＨ２ＰＯ４緩衝溶液（ｐＨ  ７．４）で行い、試験化合
物濃度が２５μＭであり、ヒト肝ミクロソーム濃度が２ｍｇ／ｍｌであり、ＮＡＤＰＨ濃
度が２ｍＭであった。反応は、最後に添加されたＮＡＤＰＨによって開始され、恒温振と
う水浴で５ｍｉｎ反応させた直後、１．５倍体積のメタノールを加えて反応を停止させた
。
３）サンプル処理及び分析方法
Ｉ  サンプル前処理：
Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ卓上型遠心分離機により、最大回転数１３，６００ｒｐｍで２０分間
遠心した。上澄み液を取り、窒素送風機で乾かした後、再度移動相Ａ（０．１％ギ酸ｖ／
ｖの水溶液）に溶解させた。
ＩＩ  液相勾配：
2021506846.tif 000045
分析カラム：Ｗａｔｅｒｓ、Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＨＳＳ  Ｔ３  ｃｏｌｕｍｎ
流速：０．５ｍｌ／ｍｉｎ
カラム温度：４０℃
ＩＩＩ  質量分析の条件
イオン源：エレクトロスプレーのイオン源
イオンモード：陽イオンモード
キャピラリー電圧：３．０ｋＶ
温度：５００℃
脱溶媒ガス流量：１００Ｌ／ｈ
スキャン時間：０．０２５ｓ
コーン電圧：４０Ｖ
衝突エネルギー：１８ｅＶ
Ｑ１（ｍ／ｚ）：３５８
Ｑ３（ｍ／ｚ）：１５２
【００８２】
表４  インビトロでヒト肝ミクロソーム代謝化合物が一リン酸生成物ＥＴＶＭＰを放出す
るレート
2021506846.tif 000046
2021506846.tif 000047
結果の分析：インビトロで、化合物のいずれも、ヒト肝ミクロソームによって活性化され
て一リン酸代謝生成物ＥＴＶＭＰになることができ、異なる化合物のコンバージョンレー
トは、有意な違いがあり（表４）、ＰＡ３０１７、ＰＡ３０１６、ＰＡ３００４は、対照
化合物ＰＡ３００１によりも、ヒト肝ミクロソームによって活性化されて一リン酸代謝生
成物ＥＴＶＭＰになる効率が顕著に大きくなり、それぞれＰＡ３００１によるコンバージ
ョンレートの４．６倍、３．０倍及び１．５倍であった。
【００８３】
実施例２６  化合物組織分布実験
２６．１  方法：
２６．１．１  動物実験
雄のＳＤラットは、体重が１８０〜３００ｇであり、Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｓｉｐｐｅ−Ｂ
ｋ  Ｌａｂ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．によって提供された。雄の動物が環境に３
日間以上慣れさせ、実験前の一晩から１２時間絶食させ、絶水させなかった。ＰＡ３００
１、ＰＡ３００２、ＰＡ３００３、ＰＡ３００４及びエンテカビルの溶液（Ｃｒｅｍｏｐ
ｈｏｒ  ＥＬ：エタノール：生理食塩水＝１０：１０：８０、Ｖ／Ｖ／Ｖ）を調製した。
投与する前に、動物の体重が実験要求に合うかを確認し、ラットを１２匹選択し、グルー
プ毎に２匹のラットになるようにグループ分け、０．０３６ｍｍｏｌ／ｋｇの薬液を胃内
投与した。それぞれ０．５ｈ、１ｈ、３ｈ、６ｈ、１２ｈ及び２４ｈに、二酸化炭素でラ
ットを安楽死させた後、サンプリングした。
２６．１．２．  一リン酸であるＥＴＶＭＰ及び脱リン酸代謝生成物ＥＴＶそれぞれの生
物サンプル中の含量測定
サンプル前処理
心臓から採血し、ヘパリン抗凝固チューブに保管し、４℃、６０００ｒｐｍで５ｍｉｎ遠
心し、上澄み血漿を取り、すぐに５倍体積の１０％トリクロロ酢酸沈殿剤（内部標準ＰＭ
ＰＡ含有、濃度１００ｎｇ／ｍＬ）を加え、血漿サンプル液を得、氷の上で適量のラット
の肝臓及び脳漿サンプルを量り、ホモジネートチューブに加え、上述のようにすぐに５倍
体積の１０％トリクロロ酢酸沈殿剤を加え、ホモジネートチューブごとに２つのセラミッ
クビーズを加えてホモジナイズし、組織ホモジネート液サンプルを得た。
生物サンプルを１００μＬ取り、１．５ｍＬ試験管に加え、５ｍｉｎ遠心した。上澄み液
を２０μＬ取り、１８０μＬの水を加え、均一にし、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析を行った。
クロマトグラフィーの条件
ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ−ＡＪ（Ｔｒｉｐｌｅ  Ｑｕａｄ  ５５００、ＡＢ  ＳＣＩＥＸ）がサ
ンプルの分析に用いられた。クロマトグラフィーカラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  Ｈ
ＳＳ  Ｔ３（２．１×５０ｍｍ、１．８μｍ）、カラム温度：４０℃、流速：０．５ｍＬ
／ｍｉｎ。移動相Ａ：０．１％ギ酸水溶液、移動相Ｂ：アセトニトリル溶液。サンプル分
離は、勾配洗脱を採用し、プロセスを表５に示す。
表５  ＥＴＶＭＰ及びＥＴＶの液相洗脱勾配の条件
2021506846.tif 000048
質量分析の条件
イオン源がエレクトロスプレーのイオン源（Ｔｕｒｂｏ  Ｉｏｎｓｐｒａｙ）であり、陽
イオンモードで、キャピラリー電圧が３．０ｋＶであり、温度が５００℃であり、脱溶媒
気流１０００Ｌ／ｈで、スキャン時間、コーン電圧、衝突エネルギー、及び定量分析のた
めのイオン反応を表６に示す。
表６  ＥＴＶＭＰ及びＥＴＶの質量分析の条件
2021506846.tif 000049
注：ＥＴＶＭＰサンプルの室温安定性があまりよくなかったため、氷の上に操作してすぐ
に沈殿剤を加えなければならない。
２６．１．３．  データー分析
各化合物の代謝生成物について、時間に対する肝臓での濃度をヒストグラムにした。ＥＴ
ＶＭＰ及びＥＴＶの組織中濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ０−ｔ）は、ＷｉｎＮｏｎＬｉ
ｎ６．２．１（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ、ＣＡ）の非コンパートメントモデル中の対数線形台
形法により、フィッティングして算出された。
２６．２  実験結果
ＰＡ３００１、ＰＡ３００２、ＰＡ３００３、ＰＡ３００４、ＰＡ３０１７及びエンテカ
ビルがＥＴＶＭＰ及びＥＴＶを放出した結果をまとめて表７に示す。
表７  ラットに０．０３６ｍｍｏｌ／ｋｇ  ＰＡ３００１、ＰＡ３００２、ＰＡ３００３
、ＰＡ３００４及びエンテカビルを胃内投与した後２４時間以内の一リン酸代謝生成物Ｅ
ＴＶＭＰ及び脱リン酸代謝生成物ＥＴＶの肝臓、脳漿及び血漿での暴露量（ＡＵＣ０−２
４ｈ、ｈ・ｎｍｏｌ／ｇ、濃度／組織重量）
2021506846.tif 000050
Ｎ．Ｄ．＝Ｎｏｔ  ｄｅｔｅｃｔａｂｌｅ、検出されなかった（相応した器官または組織
での濃度が５ｎｍｏｌ／ｇまたは５ｎｍｏｌ／ｍＬよりも低いことを示す）
２６．２．１  代謝生成物の肝臓、血漿及び脳漿組織での分布
ＳＤラットに０．０３６ｍｍｏｌ／ｋｇの試薬を胃内投与した後、肝臓組織分布の結果と
して、ＰＡ３００１、ＰＡ３００２、ＰＡ３００３、ＰＡ３００４及びＰＡ３０１７によ
って代謝して放出された、Ｂ型肝炎ウイルスを阻害するポリメラーゼの活性分子であるＥ
ＴＶＭＰは、対応した時刻のＥＴＶよりも若干低く、または同じレベル（図１）であるが
、ＰＡ３００１、ＰＡ３００２、ＰＡ３００３、ＰＡ３００４及びＰＡ３０１７の肝臓で
の脱リン酸代謝生成物ＥＴＶは、ＥＴＶよりもはるかに低い（図２）ことを示し、プロド
ラッグによって代謝して生成されたＥＴＶＭＰは、逆にＥＴＶに代謝しにくく、プロドラ
ッグ薬物効果の働きに保証を提供したことを示した。式ＩＩに示される化合物は、肝臓で
ＣＹＰ３Ａ４酵素触媒により一リン酸生成物ＥＴＶＭＰを放出し、ＥＴＶの一リン酸化が
その律速段階であり、ＥＴＶＭＰは、逆にＥＴＶに代謝しにくくなった。そのため、式Ｉ
Ｉに示される化合物は、活性代謝生成物の肝臓での分布比率を向上させ、代謝生成物の血
漿、脳漿等の組織での分布比率を低減することができる。
ＳＤラットに０．０３６ｍｍｏｌ／ｋｇの試薬を胃内投与した後、血液及び脳漿分布の結
果として、ＰＡ３００１、ＰＡ３００２、ＰＡ３００３、ＰＡ３００４及びＰＡ３０１７
によって代謝して放出されたＥＴＶＭＰ及びＥＴＶのいずれも、対応した時刻のＥＴＶよ
りもはるかに低い（図３、図４、図５及び図６）ことを示した。これにより、ＥＴＶは、
血液脳関門を通過でき、ＥＴＶ自身及びその代謝生成物ＥＴＶＭＰは、脳神経毒性を引き
起こす活性分子であり、確立されたＬＣ−ＭＳ／ＭＳ検出方法（検出下限がＬＯＤ＝５ｎ
ｍｏｌ／ｇまたは５ｎｍｏｌ／ｍＬ）により、ＰＡ３００４及びＰＡ３０１７を経口投与
したラットの脳サンプルでこれらの活性分子を検出できなかった（表７）ことを示した。
血液において、ＰＡ３００４及びＰＡ３０１７によって放出されたＥＴＶＭＰは、それぞ
れＥＴＶの１６．４％及び１４．５％であり、放出されたＥＴＶは、それぞれＥＴＶの２
．３％及び１．８％であり、また、比較例ＰＡ３００１よりも低かった。
肝でのＥＴＶＭＰと血液でのＥＴＶのＡＵＣの比率（肝ターゲットインデックス）により
化合物の肝標的指向性を表し、ＰＡ３００４及びＰＡ３０１７の肝ターゲットインデック
スは、それぞれ１５．５２及び１５．４７であり、ＰＡ３００１及びＥＴＶ（肝ターゲッ
トインデックスは、それぞれ１２．４６及び０．５１）よりも著しく大きかった。これら
の結果により、ＥＴＶに比べると、同等の使用量で、肝臓送達基の修飾により、活性分子
ＥＴＶＭＰ及びＥＴＶの血、脳での分布が著しく低減されたことがわかった。ＰＡ３０１
７及びＰＡ３０１４は、臨床的にＥＴＶによる一般的な副作用、例えば頭痛、疲労、眩暈
、吐き気等を改善することができる。
以上のようにして、本発明に係る式Ｉ及び式ＩＩに示される化合物は、より高い活性及び
より高い肝臓送達組織特異性を持つため、治療に必要な使用量がさらに低く、より高い安
全性及びより低い毒性と副作用を有する。
本発明において言及されるすべての文献は、本発明において参照として援用され、各文献
は、単独的に参照として引用される。さらに、本発明の上記の内容を読んだ後、当業者は
本発明に様々な変更または修正を加えることができ、これらの同等の形態も本出願の添付
の特許請求の範囲によって定義される範囲内にあることを理解すべきである。
【図１】
2021506846.tif 000058
【図２】
2021506846.tif 000059
【図３】
2021506846.tif 000060
【図４】
2021506846.tif 000061
【図５】
2021506846.tif 000062
【図６】
2021506846.tif 000063
【国際調査報告】
2021506846.tif 000064
2021506846.tif 000065
2021506846.tif 000066
2021506846.tif 000067