(57)【要約】本発明は、がん免疫療法のためのβ−グルカンおよびＣＤ４０アゴニストの組み合わせに関する。上記併用療法は、Ｔ細胞に依存する相乗的抗腫瘍活性を示す。驚くべきことに、上記併用療法は、免疫原性が不十分な腫瘍に対して有効である。本開示は、一局面において、可溶性β−グルカンおよびＣＤ４０アゴニストの組成物、ならびにがん免疫療法のためのそれらの使用を提供する。上記ＣＤ４０アゴニストは、アゴニスト性ＣＤ４０抗体であり得、上記可溶性β−グルカンは、酵母に由来し得る。
2021518433.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
がんを有する被験体を処置する方法であって、前記方法は、可溶性β−グルカンおよびＣＤ４０アゴニストを投与する工程を包含する、方法。
【請求項２】
前記がんは、免疫原性が不十分ながんである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記がんは、黒色腫、膵臓がん、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、中皮腫または進行した固形腫瘍である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記可溶性β−グルカンおよび前記ＣＤ４０アゴニストは、単一の製剤中にある、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記可溶性β−グルカンおよび前記ＣＤ４０アゴニストは、別個に製剤中にある、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記可溶性β−グルカンは酵母に由来する、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記酵母は、Ｓａｃｃａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記可溶性β−グルカンは、β（１，６）−［ポリ−（１，３）−Ｄ−グルコピラノシル］−ポリ-β（１，３）−Ｄ−グルコピラノースである、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記ＣＤ４０アゴニストは、アゴニスト性ＣＤ４０抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記アゴニスト性ＣＤ４０抗体は、非補体活性化抗体である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記アゴニスト性ＣＤ４０抗体は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ２抗体である、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記アゴニスト性ＣＤ４０抗体は、ｉｓ  ＣＰ−８７０，８９３、ＡＰＸ００５、ＡＤＣ−１０１３、ダセツズマブ、ＳＥＡ−ＣＤ４０またはＣｈｉＬｏｂ  ７／４である、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
前記方法は、抗β−グルカン抗体構成要素を投与する工程をさらに包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
がん細胞に対して被験体の免疫系を刺激する方法であって、前記方法は、可溶性β−グルカンおよびアゴニスト性ＣＤ４０抗体を投与する工程を包含する、方法。
【請求項１５】
前記可溶性β−グルカンおよびアゴニスト性ＣＤ４０抗体の投与は、相乗効果を生じる、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記がん細胞は、免疫原性が不十分である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
可溶性β−グルカン；および
アゴニスト性ＣＤ４０抗体
を含む、がん免疫療法のための組成物。
【請求項１８】
前記可溶性β−グルカンは、β（１，６）−［ポリ−（１，３）−Ｄ−グルコピラノシル］−ポリ−β（１，３）−Ｄ−グルコピラノースである、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記アゴニスト性ＣＤ４０抗体は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ２抗体である、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２０】
前記可溶性β−グルカンおよびアゴニスト性ＣＤ４０抗体は、免疫原性が不十分ながんに対して相乗効果を有する、請求項１７に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の引用
本出願は、２０１８年３月１３日出願の米国仮特許出願第６２／６４２，２１０号（本明細書に参考として援用される）の優先権を主張する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００２】
要旨
本開示は、一局面において、可溶性β−グルカンおよびＣＤ４０アゴニストの組成物、ならびにがん免疫療法のためのそれらの使用を提供する。上記ＣＤ４０アゴニストは、アゴニスト性ＣＤ４０抗体であり得、上記可溶性β−グルカンは、酵母に由来し得る。
【０００３】
上記の本発明の要旨は、各開示される実施形態または本発明のあらゆる実行を記載することは意図されない。以下の説明は、例証的実施形態をより詳細に例示する。本出願全体でいくつかの箇所に、例の列挙を通じてガイダンスが提供され、その例は、種々の組み合わせにおいて使用され得る。各場合に、その記載されるリストは、代表的な群としてのみ役立ち、網羅的なリストとして解釈されるべきではない。
【図面の簡単な説明】
【０００４】
【図１】図１Ａ〜１Ｅ。可溶性β−グルカンおよびＦＧＫ４５を含む処置組み合わせ物の腫瘍成長曲線。
【０００５】
【図２】図２Ａ〜２Ｅ。可溶性β−グルカンおよびゲムシタビン化学療法を含む処置組み合わせ物の腫瘍成長曲線。
【０００６】
【図３】図３Ａ〜３Ｂ。処置群間の腫瘍成長を比較するグラフ。
【０００７】
【図４】図４。処置群間の全生存を比較するグラフ。
【０００８】
【図５−１】図５Ａ。処置群間の応答を比較するグラフ。
【０００９】
【図５−２】図５Ｂ。処置群間の全生存を比較するグラフ。
【００１０】
【図５−３】図５Ｃ〜５Ｅ。処置群間の薬力学的変化を比較するグラフ。
【図５−４】図５Ｃ〜５Ｅ。処置群間の薬力学的変化を比較するグラフ。
【図５−５】図５Ｃ〜５Ｅ。処置群間の薬力学的変化を比較するグラフ。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
例証的実施形態の詳細な説明
がんを処置するために免疫系を利用するように設計した薬物は、有望な結果を示してきたが、個々に使用される場合、多くの患者は、これらの薬物に応答しないか、または応答は一過性である。従って、ある種の免疫療法薬物は、免疫系の先天的力と適応的な力とを橋渡しし、増強されたがん治療を駆動するように組み合わされ得る。具体的には、本発明は、β−グルカンおよびＣＤ４０アゴニストの組成物、ならびにがん免疫療法におけるそれらの使用に関する。
【００１２】
β−グルカンは、種々の微生物供給源および植物供給源（例えば、酵母、細菌、藻類、海藻、キノコ、オーツ麦、およびオオムギが挙げられる）に由来するグルコースのポリマーである。これらのうち、酵母β−グルカンは、それらの免疫調節特性に関して広範にわたって評価されてきた。酵母β−グルカンは、種々の形態（例えば、無傷の酵母の、ザイモサン、精製全グルカン粒子、可溶化ザイモサンポリサッカリド、または種々の分子量の高度に精製された可溶性β−グルカンのような）として存在し得る。構造的には、酵母β−グルカンは、β−（１，６）グリコシド結合を介して骨格に連結された周期的なβ−（１，３）グルコピラノース分枝を有する、β−（１，３）結合グルコピラノース骨格として組織化されたグルコースモノマーから構成される。酵母β−グルカンの異なる形態は、互いとは異なって機能し得る。酵母β−グルカンがそれらの免疫調節効果を発揮する機構は、例えば、その粒子または可溶性の性質、三次構造、主鎖の長さ、側鎖の長さ、および側鎖の頻度のような、β−グルカンの異なる形態の間で構造的差異によって影響を及ぼされ得る。酵母β−グルカンの免疫刺激機能はまた、異なる種における異なる細胞タイプに結合したレセプターに依存し、これは、繰り返すと、β−グルカンの構造的特性に依存し得る。
【００１３】
一般に、β−グルカン免疫療法は、被験体に、任意の適切な形態のβ−グルカンまたはβ−グルカンの２種もしくはこれより多くの形態の任意の組み合わせ物を投与する工程を包含し得る。適切なβ−グルカンおよびそれらの天然供給源からの適切なβ−グルカンの調製は、例えば、米国特許第９，６１０，３０３号に記載される。いくつかの場合には、上記β−グルカンは、例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅのような酵母に由来し得る。ある種の場合には、上記β−グルカンは、β（１，６）−［ポリ−（１，３）−Ｄ−グルコピラノシル］−ポリ−β（１，３）−Ｄ−グルコピラノース（本明細書でＰＧＧ（ＩＭＰＲＩＭＥ  ＰＧＧ，  Ｂｉｏｔｈｅｒａ，  Ｅａｇａｎ，  ＭＮ）ともいわれ、可溶性の酵母由来β−グルカンの高度に精製されかつ十分に特徴づけられた形態）であり得るか、またはこれに由来し得る。β−グルカンは、免疫活性化および増強された抗腫瘍殺滅のカスケードをもたらす先天的免疫細胞機能を誘発し得るＰＡＭＰ（病原体関連分子パターン）である。酵母可溶性β−グルカンは、腫瘍標的化抗体の存在下で、先天的免疫エフェクター細胞によって腫瘍細胞の直接的殺滅を増強することが公知であった。しかし、酵母可溶性β−グルカンはまた、２つの機構を通じてＴ細胞ベースのがん治療を増強する。具体的には、酵母可溶性β−グルカンは、腫瘍によって確立された免疫抑制性微小環境に対抗するように骨髄機能の再極性化を誘発する。さらに、酵母可溶性β−グルカンは、抗原提示細胞（すなわち、マクロファージおよび樹状細胞）の成熟化を活性化し、Ｔ細胞拡大および活性化、ならびにＩＦＮ−γの発現を可能にする。全身性投与がしばしば毒性副作用をもたらす他のＰＡＭＰとは異なり、Ｉｍｐｒｉｍｅ  ＰＧＧは、４００名を超えるヒト被験体への静脈内注入によって安全に投与されてきた。さらに、β−グルカンベースの免疫療法は、例えば、改変されたおよび／または誘導体化したβ−グルカン（例えば、国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ１２／３６７９５に記載されるもの）の使用を包含し得る。他の場合には、β−グルカン免疫療法は、例えば、粒状の可溶性β−グルカンまたは粒状の可溶性β−グルカン調製物（これらの各々は、例えば、米国特許第７，９８１，４４７号に記載される）を投与することを包含し得る。
【００１４】
生体マーカー研究は、被験体の好中球および単球が酵母可溶性β−グルカンに結合する能力において、被験体の中で差異を示した。これらの細胞への酵母可溶性β−グルカンの結合は、酵母可溶性β−グルカンに対する被験体の免疫調節応答と相関した。さらに、好中球および単球への酵母可溶性β−グルカン結合は、天然の抗βグルカン抗体の特異的レベルの存在を要する。患者血清サンプル中の抗β−グルカンＩｇＧおよびＩｇＭ抗体（ＡＢＡ）を定量的に測定する生体マーカーアッセイ法は、国際公開出願番号ＷＯ２０１３１６５５９１Ａ１およびＷＯ２０１５０８４７３２Ａ１に記載される。上記生体マーカーアッセイのカットオフレベルは、生体マーカー陽性および生体マーカー陰性の下位群へと患者を階層化し、これらのカットオフポイントは、結合、機能、および臨床転帰と相関する。
【００１５】
被験体のＡＢＡレベルが、選択された所定のカットオフレベルより下に落ちていることから、上記被験体が生体マーカー陰性と同定される場合、上記被験体を生体マーカー陰性状態から生体マーカー陽性状態へと転換し得る抗体調製物は、上記免疫療法への被験体の応答を改善するために投与され得る。従って、いくつかの場合には、上記β−グルカンおよびＣＤ４０アゴニスト併用免疫療法はまた、上記免疫療法への被験体の応答を改善するために、抗体調製物の投与を包含し得る。免疫療法への被験体の応答を改善するための組成物および方法は、国際公開出願番号ＷＯ２０１３１６５５９３Ａ１に記載される。
【００１６】
いくつかの場合には、上記抗体調製物は、生体マーカー陽性被験体に由来する血清を含み得る。いくつかの場合には、上記抗体調製物は、上記β−グルカンに特異的に結合するモノクローナル抗体または抗体フラグメントを含み得る。いくつかの場合には、上記抗体調製物は、静脈内免疫グロブリンを含み得る
【００１７】
上記ＣＤ４０分子は、ＴＮＦレセプタースーパーファミリーのメンバーであり、単球、マクロファージ、樹状細胞、Ｂ細胞、血小板、線維芽細胞、内皮細胞、平滑筋細胞およびいくつかの悪性上皮細胞を含む多数の細胞タイプによって発現される。ＣＤ４０に対するリガンドであるＣＤ４０リガンド（ＣＤ１５４）は、活性化ＣＤ４  Ｔ細胞、活性化Ｂ細胞、メモリーＣＤ８  Ｔ細胞、活性化ナチュラルキラー細胞、顆粒球、内皮細胞、平滑筋細胞、および活性化血小板を含む種々の細胞上で発現される。ＣＤ４０経路の活性化は、効果的に抗原を提示し、抗原特異的Ｔ細胞を刺激する能力を有する抗原提示細胞に「許可を与える」ことにおける重大な工程である。樹状細胞（ＤＣ）上でのＣＤ４０の連結は、共刺激（例えば、ＣＤ８０およびＣＤ８６）分子および主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子の発現を増強し、免疫刺激性サイトカインおよびの放出および活性化した抗原提示機構を誘導した。腫瘍免疫におけるＣＤ４０の重要性は、その後、ＣＤ４０に対して指向されるアゴニスト性抗体の投与が、がんのマウスモデルにおいて防御的Ｔ細胞免疫を生じたいくつかの研究において示された。これは、現在臨床研究中である臨床グレードのＣＤ４０アゴニスト開発の基礎であった。
【００１８】
本発明において有用なＣＤ４０アゴニストは、Ａｖｒｅｎｄ（Ｉｍｍｕｎｅｘ  Ｃｏｒｐ，  Ｓｅａｔｔｌｅ，  ＷＡ）などの組換えヒトＣＤ４０リガンド、ラウス肉腫ウイルスプロモーターによって駆動されるヒトＣＤ４０Ｌ遺伝子を有するアデノウイルスベクター血清型５（ＡｄＣＤ４０Ｌ）（Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，  Ｂａｙｌｏｒ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（Ｈｏｕｓｔｏｎ，  ＴＸ）にあるベクター生成施設）のようなＣＤ４０リガンド遺伝子治療、またはアゴニスト性ＣＤ４０抗体であり得る。アゴニスト性ＣＤ４０抗体は、ポリクローナル抗体、抗体フラグメントまたは種々のアイソタイプ（例えば、完全ヒトＩｇＧ２、ヒト化ウサギＩｇＧ１、完全ヒトＩｇＧ１、キメラＩｇＧ１および非フコシル化ヒト化ＩｇＧ１アイソタイプのような）のモノクローナル抗体であり得る。
【００１９】
ＩｇＧ１  Ｆｃドメインを有するアゴニスト性ＣＤ４０抗体は、いくつかの場合には有益であり得る。なぜなら上記ＩｇＧ１  Ｆｃドメインは、架橋を通じてＣＤ４０アゴニスト効力を潜在的に増大する、ＦｃγレセプターＩＩ−Ｂ（ＦｃγＲＩＩＢ）への結合を増強するからである。あるいは、アゴニスト性ＣＤ４０抗体は、Ｆｃ非依存性の増強された活性のために化学的に架橋され得る。他の場合には、ＩｇＧ２  Ｆｃドメインを有するアゴニスト性ＣＤ４０抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプの特有のヒンジ特性を通じて、ＦｃγＲ非依存性アゴニスト活性を媒介し得る。あるいは、いくつかの場合には、抗体のＦｃドメインまたはＦｃレセプター架橋のいずれも、アゴニスト性ＣＤ４０抗体によるＣＤ４０刺激に必要とされない。この知見の根底にある正確な機構は不明確であるが、強力なシグナル伝達活性を生じるヒトＣＤ４０上の特異的エピトープに結合するある種のＦａｂ領域によって説明され得る。
【００２０】
ＦｃγＲＩＩＢは、唯一の阻害性Ｆｃレセプターであり、このタンパク質をコードする遺伝子におけるバリエーション、または多型は、長い間、自己免疫疾患に対する感受性と関連付けられている。これらの多型は、ＩｇＧ１改変ＣＤ４０アゴニストの有効性に関する治療上の意味を有し得る。その結果、種々のＦｃγＲＩＩＢ多型が、特異的ＣＤ４０抗体の投与と相関する。例えば、ＩｇＧ１改変ＣＤ４０アゴニストの低減した有効性と相関するＦｃγＲＩＩＢ多型を有する被験体は、ＩｇＧ２  ＣＤ４０アゴニストまたはＦｃドメインを欠くアゴニスト性ＣＤ４０抗体を投与されるのみである。
【００２１】
さらに、マウスモデルにおいて、ＩｇＧ１  ＣＤ４０アゴニストの増強した効力は、一過性の血小板減少症の増大したリスクと関連する。ＩｇＧ１  ＣＤ４０アゴニストの用量の低減は、ＩｇＧ２アイソタイプと比較して、改善されたアゴニスト活性をなおも維持しながら、血小板減少症のレベルを低下させた。従って、いくつかの場合には、ＩｇＧ１  ＣＤ４０アゴニストの低減した用量または頻度を減らした投与は、β−グルカンおよびアゴニスト性ＣＤ４０抗体併用免疫療法にとって好ましいこともある。
【００２２】
いくつかのアゴニスト性ＣＤ４０モノクローナル抗体を、本発明において使用され得る臨床用途のために開発されている。各抗体は、（ｉ）ＣＤ４０に対する結合親和性、（ｉｉ）アイソタイプ、（ｉｉｉ）活性に関して架橋に依存すること、および（ｉｖ）ＣＤ４０リガンド結合を遮断する能力によって規定される特有の特性とは別個である。これらとしては、以下が挙げられる：
（１）ＣＰ−８７０，８９３（ＰｆｉｚｅｒおよびＶＬＳＴ）は、ＣＤ４０とのＣＤ４０リガンド相互作用を遮断しないＦｃＲ結合が不十分な抗ＣＤ４０  ＩｇＧ２抗体であり；架橋の非存在下でＣＤ４０刺激を媒介し得；そして３．４８×１０−１０Ｍの結合親和性（Ｋｄ）を有する。
（２）ＡＰＸ００５（Ａｐｅｘｉｇｅｎ）は、ＣＤ４０を認識し、ＣＤ４０リガンド結合を遮断するＩｇＧ１抗体であり；架橋とともにインビトロで増強した活性を示し；９．６×１０−１０ＭのＫｄを有する。
（３）ＡＤＣ−１０１３（Ａｌｌｉｇａｔｏｒ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）は、酸性条件（ｐＨ５．４）下ですら高結合親和性（Ｋｄ  １×１０−１１Ｍ）でＣＤ４０を認識し、ＦｃＲ結合および架橋に依存する活性を有するＩｇＧ１抗体である。
（４）ダセツズマブ（ＳＧＮ−４０ともいわれ、以前はＳＧＮ−１４といわれた）（Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）は、１×１０−９ＭのＫｄでＣＤ４０を認識するヒト化ＩｇＧ１抗体である。ダセツズマブは、Ｂ細胞増殖を刺激するにあたって弱い活性を示す部分的アゴニストであり；Ｂ細胞リンパ腫株に対して強力な抗増殖特性およびアポトーシス促進特性を示し、ＣＤ４０へのＣＤ４０リガンド結合を増強する。
（５）ＳＥＡ−ＣＤ４０（Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）は、１×１０−９ＭのＫｄを有する、ダセツズマブ（ＳＧＮ−４０）に由来する非フコシル化ヒト化ＩｇＧ１  抗ＣＤ４０抗体である。ＳＥＡ−ＣＤ４０は、ＦｃｇＲＩＩＩａへの結合の増強に起因して、改善されたアゴニスト活性を示す。
（６）ＣｈｉＬｏｂ  ７／４（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｓｏｕｔｈａｍｐｔｏｍ）は、抗原提示細胞においてＣＤ４０刺激のために架橋を要する、２×１０−１０ＭのＫｄを有するキメラＩｇＧ１抗体である。
【００２３】
多くの患者において認められる免疫療法に対する不十分な応答性は、免疫療法が成功するために必要ながんに対する既存の継続中の免疫応答がないことに起因し得る。よって、本発明は、がん免疫療法の治療的影響を拡げかつ増強するために、強力な抗腫瘍免疫をもたらし得る、免疫アゴニストの使用のような新規なアプローチを包含する。
【００２４】
ＣＤ４０アゴニストの有効性は、ＣＤ４０−活性化抗原提示細胞が抗原特異的Ｔ細胞免疫を誘導するために必要な腫瘍抗原の存在に依存することが報告されている。次に、その後の研究は、ＣＤ４０アゴニストとワクチンおよび化学療法とを組み合わせて、腫瘍細胞死の免疫原性の形態を引き起こすことに焦点を当てた。しかし、化学療法と組み合わせても、Ｔ細胞依存性抗腫瘍活性の証拠は観察されず、さらなる研究によって、腫瘍微小環境における免疫抑制性のマクロファージが同定された。他の免疫抑制機構に加えて、これらのマクロファージは、Ｔ細胞依存性抗腫瘍活性の欠如をおそらく説明する。
【００２５】
可溶性β−グルカンは、骨髄性起源の細胞、すなわち、好中球および単球上のＣＤ１１ｂに結合し、Ｎ１好中球およびＭ１マクロファージの免疫刺激機能を増大させ、骨髄球由来サプレッサー細胞、Ｎ２好中球およびＭ２マクロファージの免疫抑制機能を低下させる。この調節は、腫瘍微小環境において種々の先天的細胞と適応性細胞との間のクロストークを生じ、これは、免疫刺激に向かって条件を再指向する。可溶性β−グルカンは、Ｍ１表現型へのＭ２再極性化に直接影響を及ぼし、Ｔｈ１極性化を駆動し、可溶性β−グルカン刺激性先天的免疫細胞は、サイトカインを生成して、制御性Ｔ細胞の存在下ですら、ＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞増殖に間接的に影響を及ぼし、最終的には、Ｔｈ１極性化を駆動する。
【００２６】
この目的に向けて、可溶性β−グルカンは、ＣＤ４０アゴニストと組み合わされ得る。例えば、可溶性β−グルカンは、例えば、黒色腫、膵臓がん、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、中皮腫、進行した固形腫瘍などを含むがんの処置において、アゴニスト性ＣＤ４０抗体と組み合わされ得る。可溶性β−グルカンは、腫瘍によって確立された免疫抑制性微小環境に対抗し、抗原提示細胞の成熟化を活性化するように骨髄球機能の再極性化を誘発し、Ｔ細胞拡大および活性化ならびにＩＦＮ−γ発現をもたらす。これらの状態は、Ｔ細胞依存性抗腫瘍免疫を誘導するためのＣＤ４０アゴニストに理想的である。ＣＤ４０アゴニストおよび可溶性β−グルカンの組み合わせ物は、免疫原性が不十分な腫瘍に対してすら、治療転帰を大きく増強する相乗効果を生じる。
【００２７】
本発明は、部分的に、β−グルカンとＣＤ４０アゴニストとの共投与を含む。本明細書で使用される場合、「共投与される」とは、上記組み合わせ物の治療効果または予防効果が、単独で投与されるいずれかの構成要素の治療効果または予防効果より大きいものであり得るように投与される組み合わせ物の２種またはこれより多くの構成要素に言及する。２つの構成要素は、同時にまたは連続して共投与され得る。同時に共投与される構成要素は、１種またはこれより多くの薬学的組成物に提供され得る。２種またはこれより多くの構成要素の連続的共投与は、タイミングとは無関係であり、上記構成要素が、両方の構成要素が投与された後に、両方が同時に生物利用可能であるように投与される場合を含む。上記構成要素が同時に共投与されるかまたは連続して共投与されるかに拘わらず、上記構成要素は、単一部位または異なる部位において共投与され得る。
【００２８】
β−グルカン、ＣＤ４０アゴニスト、および／または両方の構成要素の組み合わせ物は、「キャリア」とともに組成物に製剤化され得る。本明細書で使用される場合、「キャリア」としては、任意の溶媒、分散媒、ビヒクル、コーティング、希釈剤、抗細菌剤、および抗真菌剤、等張化剤、吸収遅延剤、緩衝液、キャリア溶液、懸濁物、コロイドなどが挙げられる。薬学的に活性な物質のためのこのような媒体および／または薬剤の使用は、当該分野で周知である。いかなる従来の媒体も薬剤も、β−グルカンまたはＣＤ４０アゴニストと不適合である限りを除いて、治療用組成物におけるその使用が企図される。補助的な活性成分はまた、上記組成物の中に組み込まれ得る。
【００２９】
「薬学的に受容可能」は、生物学的にまたは他の点で望ましくないものではない物質を意味する。すなわち、上記物質は、上記物質が含まれる薬学的組成物の他の構成要素のうちのいずれかと有害な様式で何らかの望ましくない生物学的効果を引き起こすことも、相互作用することもなく、β−グルカンおよび／または上記薬剤とともに個体に投与され得る。
【００３０】
上記β−グルカン、上記ＣＤ４０アゴニスト、および／または両方の構成要素の組み合わせ物は、薬学的組成物へと製剤化され得る。いくつかの実施形態において、上記β−グルカンおよび上記ＣＤ４０アゴニストは、単一の製剤において提供され得る。他の実施形態において、上記β−グルカンおよび上記ＣＤ４０アゴニストは、別個の製剤において提供され得る。薬学的組成物は、１またはこれより多くの好ましい投与経路に適合された種々のおよび／または複数の形態において製剤化され得る。従って、薬学的組成物は、例えば、経口、非経口（例えば、皮内、経皮、皮下、筋肉内、静脈内、腹腔内、腫瘍内など）、または局所（例えば、鼻内、肺内、乳腺内、腟内、子宮内、皮内、経皮、直腸になど）を含む１またはこれより多くの公知の経路を介して投与され得る。薬学的組成物またはその一部は、粘膜表面に投与され得る（例えば、鼻粘膜または呼吸器粘膜への（例えば、スプレーまたはエアロゾルによる）投与のような）。薬学的組成物またはその一部はまた、徐放または放出遅延を介して投与され得る。
【００３１】
製剤は、便利なことには、単位投与形態において提示され得、薬学分野で周知の方法によって調製され得る。薬学的に受容可能なキャリアとともに組成物を調製する方法は、β−グルカンおよび／またはＣＤ４０アゴニストを、１またはこれより多くの補助的成分を構成するキャリアと会合した状態にする工程を包含する。一般に、製剤は、活性化合物を、液体キャリア、微細に分割した固体キャリア、または両方と均質におよび／または密接に会合した状態にする工程、次いで、必要であれば、上記生成物を望ましい製剤へと成形する工程によって、調製され得る。
【００３２】
上記β−グルカン、上記ＣＤ４０アゴニスト、および／または両方の構成要素の組み合わせ物は、液剤、懸濁物、エマルジョン、スプレー、エアロゾル、または任意の混合物形態が挙げられるが、これらに限定されない任意の適切な形態において提供され得る。上記組成物は、任意の薬学的に受容可能な賦形剤、キャリア、またはビヒクルとの製剤において送達され得る。例えば、上記製剤は、例えば、クリーム剤、軟膏、エアロゾル製剤、非エアロゾルスプレー、ゲル、ローション剤などのような従来の局所投与形態において送達され得る。上記製剤は、例えば、アジュバント、皮膚透過増強剤、着色剤、香料、矯味矯臭剤、保湿剤、濃化剤などのようなものを含む１種またはこれより多くの添加物をさらに含み得る。
【００３３】
いくつかの実施形態において、本発明は、上記被験体に、例えば、約１００ｎｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの用量を提供するために十分なβ−グルカンを投与することを包含し得るが、いくつかの実施形態においては、上記β−グルカンは、この範囲外の用量で投与され得る。上記用量は、被験体のＡＢＡレベルに依存し得る。いくつかの実施形態において、上記β−グルカン用量範囲は、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約６ｍｇ／ｋｇ（０．５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ、５．５ｍｇ／ｋｇおよび６．０ｍｇ／ｋｇを含む）である。上記β−グルカンは、１回投与され得るだけであるか、または投与間の時間間隔は、例えば、以下であり得る：処置の過程の間に、例えば、１週間ごと、２週間ごと、３週間ごと、４週間ごと、５週間ごと、６週間ごと、７週間ごと、８週間ごと、９週間ごと、１０週間ごと、１１週間ごともしくは１２週間ごと、または７日ごと、８日ごと、９日ごと、１０日ごと、１１日ごと、１２日ごと、１３日ごと、１４日ごと、１５日ごと、１６日ごと、１７日ごと、１８日ごと、１９日ごと、２０日ごと、２１日ごと、２２日ごと、２３日ごと、２４日ごと、２５日ごと、２６日ごと、２７日ごと、２８日ごと、２９日ごと、３０日ごと、３１日ごと、３２日ごと、３３日ごと、３４日ごと、３５日ごと、３６日ごと、３７日ごと、３８日ごと、３９日ごと、４０日ごと、４１日ごと、４２日ごと、４３日ごと、４４日ごと、４５日ごと、４６日ごと、４７日ごと、４８日ごと、４９日ごと、５０日ごと、５１日ごと、５２日ごと、５３日ごと、５４日ごと、５５日ごと、５６日ごと、５７日ごと、５８日ごと、５９日ごと、６０日ごと、６１日ごと、６２日ごと、６３日ごと、６４日ごと、６５日ごと、６６日ごと、６７日ごと、６８日ごと、６９日ごと、７０日ごと、７１日ごと、７２日ごと、７３日ごと、７４日ごと、７５日ごと、７６日ごと、７７日ごと、７８日ごと、７９日ごと、８０日ごと、８１日ごと、８２日ごと、８３日ごともしくは８４日ごと。上記投与スケジュールは、とりわけ、処置されているがんおよび上記被験体のＡＢＡレベルに依存して変動する。可溶性β−グルカン投与は、国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ１８／１９４１２に記載される。
【００３４】
あるいは、上記用量は、処置過程の開始直前に得られる実際の体重を使用して計算され得る。このようにして計算される投与量に関しては、体表面積（ｍ２）が、Ｄｕｂｏｉｓ法を使用して、処置過程の開始前に計算される：  ｍ２＝（体重  ｋｇ０．４２５  ×身長  ｃｍ０．７２５）×０．００７１８４。従って、いくつかの実施形態において、方法は、例えば、約０．０１ｍｇ／ｍ２〜約１０ｍｇ／ｍ２の用量を提供するために十分なβ−グルカンを投与する工程を包含し得る。
【００３５】
本発明は、十分なＣＤ４０アゴニストを投与することを包含する。ＣＤ４０アゴニストの用量は、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ（０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ、５．５ｍｇ／ｋｇ、６．０ｍｇ／ｋｇ、６．５ｍｇ／ｋｇ、７．０ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、８．０ｍｇ／ｋｇ、８．５ｍｇ／ｋｇ、９．０ｍｇ／ｋｇ、９．５ｍｇ／ｋｇ、１０．０ｍｇ／ｋｇ、１０．５ｍｇ／ｋｇ、１１．０ｍｇ／ｋｇ、１１．５ｍｇ／ｋｇ、１２．０ｍｇ／ｋｇ、１２．５ｍｇ／ｋｇ、１３．０ｍｇ／ｋｇ、１３．５ｍｇ／ｋｇ、１４．０ｍｇ／ｋｇ、１４．５ｍｇ／ｋｇ、１５．０ｍｇ／ｋｇ、１５．５ｍｇ／ｋｇ、１６．０ｍｇ／ｋｇ、１６．５ｍｇ／ｋｇ、１７．０ｍｇ／ｋｇ、１７．５ｍｇ／ｋｇ、１８．０ｍｇ／ｋｇ、１８．５ｍｇ／ｋｇ、１９．０ｍｇ／ｋｇ、１９．５ｍｇ／ｋｇおよび２０．０ｍｇ／ｋｇを含む）であり得る。上記ＣＤ４０アゴニストは、１回投与され得るだけであるか、または投与間の時間間隔は、例えば、以下であり得る：処置の過程の間に、例えば、１週間ごと、２週間ごと、３週間ごと、４週間ごと、５週間ごと、６週間ごと、７週間ごと、８週間ごと、９週間ごと、１０週間ごと、１１週間ごともしくは１２週間ごと、または７日ごと、８日ごと、９日ごと、１０日ごと、１１日ごと、１２日ごと、１３日ごと、１４日ごと、１５日ごと、１６日ごと、１７日ごと、１８日ごと、１９日ごと、２０日ごと、２１日ごと、２２日ごと、２３日ごと、２４日ごと、２５日ごと、２６日ごと、２７日ごと、２８日ごと、２９日ごと、３０日ごと、３１日ごと、３２日ごと、３３日ごと、３４日ごと、３５日ごと、３６日ごと、３７日ごと、３８日ごと、３９日ごと、４０日ごと、４１日ごと、４２日ごと、４３日ごと、４４日ごと、４５日ごと、４６日ごと、４７日ごと、４８日ごと、４９日ごと、５０日ごと、５１日ごと、５２日ごと、５３日ごと、５４日ごと、５５日ごと、５６日ごと、５７日ごと、５８日ごと、５９日ごと、６０日ごと、６１日ごと、６２日ごと、６３日ごと、６４日ごと、６５日ごと、６６日ごと、６７日ごと、６８日ごと、６９日ごと、７０日ごと、７１日ごと、７２日ごと、７３日ごと、７４日ごと、７５日ごと、７６日ごと、７７日ごと、７８日ごと、７９日ごと、８０日ごと、８１日ごと、８２日ごと、８３日ごともしくは８４日ごと。
【００３６】
あるいは、β−グルカンまたはＣＤ４０アゴニストのいずれかの用量は、処置過程の開始直前に得られる実際の体重を使用して計算され得る。このようにして計算される投与量に関しては、体表面積（ｍ２）が、Ｄｕｂｏｉｓ法を使用して、処置過程の開始前に計算される：  ｍ２＝（体重  ｋｇ０．４２５  ×身長  ｃｍ０．７２５）×０．００７１８４。従って、いくつかの実施形態において、方法は、例えば、約０．０１ｍｇ／ｍ２〜約１０  ｍｇ／ｍ２の用量を提供するために十分なβ−グルカンおよび／またはＣＤ４０アゴニストを投与する工程を包含し得る。
【００３７】
本発明は、以下の実施例によって例証される。特定の例、物質、量、および手順が、本明細書で示されるとおりの本発明の範囲および趣旨に従って、広く解釈されるべきであることは、理解されるべきである。
【実施例】
【００３８】
実施例１
ＣＤ４０アゴニストとの組み合わされた可溶性β−グルカンは、腫瘍退縮を増強する：
Ｔ細胞排除および強い炎症性免疫反応が顕著な免疫原性が不十分ながんである膵管腺癌（ＰＤＡＣ）に対して強力な抗腫瘍免疫を誘導することにおける可溶性β−グルカンの役割を、評価した。この試験において、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、ＫＰＣ由来ＰＤＡＣ細胞株（７９４０Ｂ，  Ｐ９）を皮下移植した。マウスを、１週間に２〜３回、ノギスによって腫瘍成長に関してモニターした。−２日目に、マウスは、ゲムシタビン（１２０ｍｇ／ｋｇ）またはＰＢＳを受容した。０日目に、マウスを、ＦＧＫ４５（０．１ｍｇ）、ＩＭＰＲＩＭＥ  ＰＧＧ（１．２ｍｇ）、または両方あり、またはなしで処置した。ＦＧＫ４５は、ＣＤ４０に対するラット抗マウスモノクローナルアゴニスト性抗体である。これを、腹腔内注射によって投与した。ＩＭＰＲＩＭＥ  ＰＧＧを、静脈内注射によって投与した。
【００３９】
マウスを、腫瘍成長および全生存に関して（すなわち、腫瘍が＞１０００ｍｍ３に達するまで、または動物が腫瘍に関連する不快感／苦痛を示すまで）追跡した。コントロールに対して、腫瘍成長に対するＩＭＰＲＩＭＥ  ＰＧＧ処置単独の影響は、図１Ａおよび図１Ｂに示される。ここで、ＩＭＰＲＩＭＥ  ＰＧＧの単一用量での処置は、１０匹のマウスのうちの１匹において腫瘍増殖（ｔｕｍｏｒ  ｏｕｔｇｒｏｗｔｈ）における遅延を生じた。以前の実験において、ＩＭＰＲＩＭＥ  ＰＧＧは、９匹のマウスのうちの３匹において腫瘍増殖における遅延を生じた（データは示さず）。これらの実験は、ＩＭＰＲＩＭＥ  ＰＧＧが、この腫瘍モデルにおいて単剤療法として制限された活性を有することを示す。同様の結果は、図１Ｃに示され、ＦＧＫ４５処置単独で認められ、この場合、遅延した腫瘍成長が１０匹のマウスのうちの４匹において認められた。以前の実験は、９匹のマウスのうちの５匹において遅延した腫瘍成長を示した（データは示さず）。
【００４０】
対照的に、ＩＭＰＲＩＭＥ  ＰＧＧおよびＦＧＫ４５を組み合わせると、１０匹のマウスのうちの９匹において腫瘍退縮が生じた（図１Ｄ）。完全腫瘍退縮は、その後の再発なしに、１０匹のマウスのうちの６匹において認められた。
【００４１】
実施例２
アゴニスト性ＣＤ４０抗体との組み合わされた可溶性β−グルカンは、免疫原性が不十分な腫瘍に対してＴ細胞依存性抗腫瘍活性をもたらす：
−３日目、０日目、４日目、７日目、および１１日目に、実施例１のマウスを、ＧＫ１．５（抗ＣＤ４）および２．４３（抗ＣＤ８）除去抗体（０．２ｍｇ／用量）ありまたはなしで処置した。２．４３およびＧＫ１．５は、それぞれ、ＣＤ８α発現Ｔ細胞およびＣＤ４発現Ｔ細胞を除去するラット抗マウスモノクローナル抗体である。両方の抗体を、腹腔内注射によって投与した。
【００４２】
図１Ｅに示されるように、ＩＭＰＲＩＭＥ  ＰＧＧおよびＦＧＫ４５の組み合わせ物を使用する相乗的治療活性は、ＣＤ４  Ｔ細胞およびＣＤ８  Ｔ細胞が除去される場合に除去された。従って、このデータは、ＩＭＰＲＩＭＥ  ＰＧＧおよびＦＧＫ４５を組み合わせると、マウス膵管腺癌の免疫原性が不十分なモデルにおいて、顕著なＴ細胞依存性抗腫瘍活性が生じることを示す。
【００４３】
実施例３
化学療法との組み合わされた可溶性β−グルカンは、腫瘍退縮を増強する：
Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、ＫＰＣ由来ＰＤＡＣ細胞株（７９４０Ｂ，  Ｐ９）を皮下移植した。マウスを、１週間に２〜３回、ノギスによって腫瘍成長に関してモニターした。−２日目に、マウスは、ゲムシタビン（１２０ｍｇ／ｋｇ）またはＰＢＳを受容した。
【００４４】
繰り返すと、ＩＭＰＲＩＭＥ  ＰＧＧ単独は、最小限の活性を示した（図２Ａ、Ｂ）。同様に、図２Ｃに示されるように、ゲムシタビン化学療法は、腫瘍成長に対して有意な影響を生じなかった。対照的に、ＩＭＰＲＩＭＥ  ＰＧＧの４８時間前に投与したゲムシタビン化学療法での処置は、有意な抗腫瘍活性を生じ、遅延した腫瘍増殖が、１０匹のマウスのうちの５匹において認められた（図２Ｄ）。以前の実験において、この処置組み合わせは、９匹のマウスのうちの６匹において抗腫瘍活性を生じた。
【００４５】
実施例４
化学療法との組み合わされた可溶性β−グルカンは、免疫原性が不十分な腫瘍に対してＴ細胞依存性抗腫瘍活性をもたらす：
−３日目、０日目、４日目、７日目および１１日目に、実施例３のマウスを、ＧＫ１．５（抗ＣＤ４）および２．４３（抗ＣＤ８）除去抗体（０．２ｍｇ／用量）ありまたはなしで処置した。ＩＭＰＲＩＭＥ  ＰＧＧおよびゲムシタビンの組み合わせ物を使用する相乗的治療活性は、Ｔ細胞が処置前に除去される場合に認められるように、ＣＤ４  Ｔ細胞およびＣＤ８  Ｔ細胞に依存する（図２Ｅ）。従って、化学療法とＩＭＰＲＩＭＥ  ＰＧＧとを組み合わせると、マウス膵管腺癌の免疫原性が不十分なモデルにおいて十分なＴ細胞依存性抗腫瘍活性が生じ得る。
【００４６】
図３Ａおよび３Ｂは、それぞれ、各ゲムシタビンおよびＦＧＫ４５処置群に関する平均腫瘍成長曲線を示す。２６日目の腫瘍成長比較に関する統計的有意性を、二元配置Ａｎｏｖａとテューキーの多重比較検定を使用して決定した。処置群間の統計を、表１に示す。
【００４７】
【表１】
2021518433.tif 000003
【００４８】
図４は、全生存に対する各処置の影響を示す。処置群間の生存比較の統計は、表２に示される。統計的有意性を、ログランク検定を使用して決定した。
【００４９】
【表２】
2021518433.tif 000004
【００５０】
統計的有意差は、以下の処置群間で認められた：（ｉ）コントロール対ゲムシタビン＋ＩＭＰＲＩＭＥ（ｐ＝０．０００２）、（ｉｉ）ゲムシタビン対ゲムシタビン＋ＩＭＰＲＩＭＥ（ｐ＝０．００１２）、（ｉｉｉ）ＩＭＰＲＩＭＥ対ゲムシタビン＋ＩＭＰＲＩＭＥ（ｐ＝０．００２９）、（ｉｖ）コントロール対ＦＧＫ４５＋ＩＭＰＲＩＭＥ（ｐ＜０．０００１）、（ｖ）ＦＧＫ４５対ＦＧＫ４５＋ＩＭＰＲＩＭＥ（ｐ＜０．０００１）、（ｖｉ）ＩＭＰＲＩＭＥ対ＦＧＫ４５＋ＩＭＰＲＩＭＥ（ｐ＜０．０００１）、および（ｖｉｉ）ゲムシタビン＋ＩＭＰＲＩＭＥ対ＦＧＫ４５＋ＩＭＰＲＩＭＥ（ｐ＝０．００４８）、まとめると、これらのデータは、ゲムシタビンまたはＦＧＫ４５のいずれかが、ＩＭＰＲＩＭＥ  ＰＧＧと組み合わされた場合に顕著な治療活性を、および両方の処置組み合わせ物の治療活性がＴ細胞に依存することを示す。全体として、より大きな応答率（９０％対５０％）および改善された全生存（６０％対０％）が、それぞれ、化学療法と比較して、ＩＭＰＲＩＭＥ  ＰＧＧをＦＧＫ４５と組み合わせた場合に認められた。
【００５１】
可溶性β−グルカンとＣＤ４０アゴニストとを組み合わせると、いずれか単独での処置より有効であり、マウスのうちの６０％において完全かつ持続する腫瘍退縮が生じる。さらに、可溶性β−グルカン＋ＣＤ４０アゴニストの抗腫瘍効果は、ＣＤ４  Ｔ細胞およびＣＤ８  Ｔ細胞に依存する。
【００５２】
実施例５
貪食骨髄細胞は、アゴニスト性ＣＤ４０抗体との組み合わされた可溶性β−グルカンの抗腫瘍応答の持続のために必要とされた：
抗腫瘍活性に関する別個の骨髄細胞サブセットの役割は、ＩＭＰＲＩＭＥ  ＰＧＧおよびＣＤ４０アゴニストで誘導した。骨髄性標的化化合物を投与して、腫瘍外マクロファージを除去し（すなわち、クロンドロネートリポソーム）、Ｌｙ６Ｃ＋末梢血単球を除去し（すなわち、抗Ｌｙ６Ｃ抗体）、腫瘍関連マクロファージ／腫瘍外マクロファージを除去し（すなわち、コロニー刺激因子１レセプター（ＣＳＦ１Ｒ）インヒビター）、そしてマクロファージおよび樹状細胞を含む抗原提示細胞によって発現されるＣＤ７０を遮断した（抗ＣＤ７０抗体）。
【００５３】
Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝１０／群）に、ＫＰＣ由来ＰＤＡＣ細胞株を皮下移植した。マウスを、１週間に２〜３回、ノギスによって腫瘍成長に関してモニターした。腫瘍がおよそ直径４〜５ｍｍに達した場合、マウスは、以下の処置を受容した：
群１  ：  コントロール
群２：  ＦＧＫ４５＋ＩＭＰＲＩＭＥ  ＰＧＧ
群３：  ＦＧＫ４５＋ＩＭＰＲＩＭＥ  ＰＧＧ＋クロンドロネートリポソーム（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．  ２０１５  Ｊｕｌ；  １４９（１）：  ２０１−２１０．）
群４：  ＦＧＫ４５＋ＩＭＰＲＩＭＥ  ＰＧＧ＋抗Ｌｙ６Ｃ（Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ．  ２０１６  Ａｐｒ；  ６（４）：  ４００−  ４１３）
群５：  ＦＧＫ４５＋ＩＭＰＲＩＭＥ  ＰＧＧ＋ＣＳＦ１Ｒインヒビター
群６：  ＦＧＫ４５＋ＩＭＰＲＩＭＥ  ＰＧＧ＋ＣＤ７０遮断抗体（Ｎａｔ  Ｃｏｍｍｕｎ．  ２０１２  Ｊｕｌ  １０；３：９４８）
【００５４】
上記化合物を、以下の投与スキームを使用して投与した：
１．  ＦＧＫ４５を、０日目に、腹腔内（ｉ．ｐ．）注射によって０．１ｍｇで投与した。
２．  ＩＭＰＲＩＭＥ  ＰＧＧを、０日目に、静脈内（ｉ．ｖ．）に１．２ｍｇで投与した。
３．  クロンドロネート被包リポソームを、−２日目、２日目、５日目、および９日目に、１０ｍｇ／ｋｇでｉ．ｐ．投与した。
４．  抗Ｌｙ６Ｃ抗体（Ｍｏｎｔｓ  １）を、−１日目、０日目、１日目、５日目、９日目に、０．５ｍｇ／用量でｉ．ｐ．投与した。
５．  ＣＳＦ１Ｒインヒビター（ＧＷ２５８０）を、−２日目〜２日目および５日目〜９日目に、１６０ｍｇ／ｋｇで強制経口投与によって１日に１回与えた。
６．  抗ＣＤ７０抗体（クローンＦＲ７０）を、−１日目、０日目、１日目、５日目に、０．２５ｍｇ／用量でｉ．ｐ．投与した。
【００５５】
図５Ａおよび５Ｂは、各群の処置に対する応答および生存データを示す。上記データは、クロドロネート被包リポソームによるマクロファージの除去が併用療法を阻害したことから、貪食骨髄細胞が応答持続のために必要とされることを示す。
【００５６】
さらに、末梢血を、処置の−２日目、０日目、および１日目に、尾静脈採血によって各マウスで集め、ＣＤ１９＋  Ｂ細胞、ＣＤ３＋  Ｔ細胞およびＣＤ３＋  ＣＤ８β＋  Ｔ細胞の応答に関してフローサイトメトリーによって分析した。結果を、図５Ｃ、５Ｄおよび５Ｅに示し、これらの細胞タイプが末梢血循環を離れていることを示す。
【００５７】
ＣＤ４０アゴニスト／可溶性β−グルカン併用療法で認められる相乗効果は、少なくとも３つの理由から、予測外かつ顕著である。第１に、化学療法は必要とされない。上記で考察されるように、ＣＤ４０アゴニストの有効性は、腫瘍抗原の存在に依存することが報告されている。これは、ＣＤ４０−活性化抗原提示細胞が抗原特異的Ｔ細胞免疫を誘導するために必要である。実施例２は、上記併用療法が、化学療法なしで、免疫原性が不十分な腫瘍に対して顕著な活性を示すことを示す。実施例５は、可溶性β−グルカンを示唆する貪食骨髄細胞の要件が、腫瘍浸潤骨髄細胞の貪食能力を変化させ、そのように変化するにあたって、それらの腫瘍抗原の捕捉を改善することを示す。第２に、ＣＤ４０アゴニスト／可溶性β−グルカン併用療法で観察された活性が化学療法なしで顕著であるのみならず、それは、化学療法に続いてＣＤ４０アゴニストを使用して認められたものをも超える。第３に、２種の骨髄標的化薬剤、ＣＤ４０アゴニストおよび可溶性β−グルカンの組み合わせ物が、相乗的活性を生じたことは、予測外かつ顕著である。実施例１は、いずれかの薬剤での単剤療法が制限された活性を示したが、ＣＤ４０アゴニスト／可溶性β−グルカン併用療法が、相加的より顕著な活性を示したことを示す。
【００５８】
本明細書で引用される全ての特許、特許出願、および刊行物、ならびに電子的に利用可能な資料（例えば、ＧｅｎＢａｎｋおよびＲｅｆＳｅｑにおける例えば、ヌクレオチド配列提出、ならびに例えば、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ、ＰＩＲ、ＰＲＦ、ＰＤＢにおけるアミノ酸配列提出、ならびにＧｅｎＢａｎｋおよびＲｅｆＳｅｑにおける註釈付きのコード領域からの翻訳）の完全な開示は、それらの全体において参考として援用される。本出願の開示と本明細書に参考として援用される任意の文献の開示との間に何らかの不一致が存在する場合には、本出願の開示が優先するものとする。前述の詳細な説明および実施例は、理解を明瞭にするために与えられているに過ぎない。そこから不要な限定が理解されるべきではない。本発明は、示されかつ記載される正確な詳細に限定されず、当業者に自明なバリエーションに関しては、請求項によって規定される発明の範囲内に含まれる。
【００５９】
別段示されなければ、本明細書および請求項において使用される構成要素、分子量などの量を表す全ての数字は、全ての場合に、用語「約（ａｂｏｕｔ）」によって修飾されていると理解されるべきである。よって、そうでないことが別段示されなければ、本明細書および請求項に示される数値パラメーターは、本発明によって得ようと求められる所望の特性に依存して変動し得る近似値である。少なくとも、および均等論を請求項の範囲に限定しようとする試みとしてではなく、各数値パラメーターは、報告された有効数字の数字に鑑みて、および通常の四捨五入法を適用することによって、少なくとも解釈されるべきである。
【００６０】
本発明の広い範囲を示す数値範囲およびパラメーターが近似値であるにも関わらず、具体例に示される数値は、可能な限り正確に報告される。しかし、全ての数値は、本質的に、それらそれぞれの試験測定において見出される標準偏差から必然的に生じる範囲を含む。
【００６１】
全ての見出しは、読み手の便宜のためであり、特定されなければ、その見出しに続く本文の意味を限定するために使用されるべきではない。
【図１】
2021518433.tif 000005
【図２】
2021518433.tif 000006
【図３】
2021518433.tif 000007
【図４】
2021518433.tif 000008
【図５−１】
2021518433.tif 000009
【図５−２】
2021518433.tif 000010
【図５−３】
2021518433.tif 000011
【図５−４】
2021518433.tif 000012
【図５−５】
2021518433.tif 000013
【国際調査報告】
2021518433.tif 000014