(57)【要約】  本発明は、生物医薬技術分野に属しており、具体的には、修飾オリゴヌクレオチド、修飾オリゴヌクレオチドの合成に使用可能な化合物、およびオリゴヌクレオチドに対する修飾方法に関する。本発明は、さらに前記修飾オリゴヌクレオチドの用途に関し、それがテスト対象の肝臓関連疾患を予防および/または治療するために使用される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
オリゴヌクレオチドと共役基を含む化合物であって、その化学式は、
【化１】
2021504454.tif 000084
であり、式中、ＰＮはオリゴヌクレオチドであり、Ｙは１〜１０の整数から選択され、Ｘは０〜１０の整数から選ばれ、ＭＴは式（１）、式（２）、式（３）および式（４）で表される共役基から選ばれ、Ｘが０ではない場合に、Ｘ個のＭはそれぞれ独立に式（１'）、式（２'）および式（３'）で表される共役基から独立して選ばれて、
【化２】
2021504454.tif 000085
式中、ＡＸはリガンド、ｌｉｎｋｅｒは結合アーム、Ｑはヒドロキシル基または修飾基である化合物。
【請求項２】
式（１）〜式（４）、式（１'）〜式（３'）で表される共役基において、Ａｘはそれぞれ独立して、ヒトアシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）のリガンドであり、
好ましくは、式（１）〜式（４）、式（１'）〜式（３'）で表される共役基において、ＡＸはそれぞれ独立して、ガラクトース、Ｎ-アセチル-Ｄ-ガラクトサミン、ガラクトース含有多糖類、Ｎ-アセチル-Ｄ-ガラクトサミン含有多糖類、ガラクトース誘導体（例えばガラクトースアセテートなどのガラクトースエステル）またはＮ-アセチル-Ｄ-ガラクトサミン誘導体（例えばＮ-アセチル-Ｄ-ガラクトサミンアセテートなどのＮ-アセチル-Ｄ-ガラクトサミンエステル）から選ばれるものであり、
好ましくは、ＡＸは更にそれぞれ独立して、例えば、カルボニルアルキル基またはエステルアルキル基などの修飾基を持っており、好ましくは、前記アルキル基は、Ｃ１−６アルキル基またはＣ６−１２アルキル基であり、
好ましくは、ＡＸは
【化３】
2021504454.tif 000086
から選ばれるものである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
式（１）〜式（４）、式（１'）〜式（３'）で表される共役基において、ｌｉｎｋｅｒの構造はそれぞれ独立して式（ｉ）、式（ｉｉ）、式（ｉｉｉ）、式（ｉＶ）または式（Ｖ）で表され、
【化４】
2021504454.tif 000087
式中、ｎは１〜１０の整数から選ばれるものであり、好ましくは、ｎは１または６であり、
【化５】
2021504454.tif 000088
式中、ｎ１とｎ２はそれぞれ独立して１〜１０の整数から選ばれるものであり、好ましくはｎ１は１、好ましくはｎ２は４であり、
【化６】
2021504454.tif 000089
式中、ｎ１、ｎ２、ｎ３はそれぞれ独立して１〜１０の整数から選ばれるものであり、好ましくはｎ１は１、好ましくはｎ２は３であり、ｎ３は４であり、
【化７】
2021504454.tif 000090
式中、ｎは１〜１０の整数から選ばれるものであり、好ましくは、ｎは１であり、
【化８】
2021504454.tif 000091
式中、ｎは１〜１０の整数から選ばれるものであり、好ましくは、ｎは４である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
式（１）または式（１’）で表される共役基において、
ＡＸはそれぞれ独立して、Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ１’、Ａ２’またはＡ３’から選ばれるものであり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉ）で表され、或いは、
ＡＸはそれぞれ独立して、Ａ１またはＡ１’から選ばれるものであり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｉ）で表され、或いは、
ＡＸはそれぞれ独立して、Ａ１またはＡ１’から選ばれるものであり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｉｉ）で表され、或いは、
ＡＸはそれぞれ独立して、Ａ１またはＡ１’から選ばれるものであり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｖ）で表される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
式（２）または式（２’）で表される共役基において、 
ＡＸはそれぞれ独立して、Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ１’、Ａ２’またはＡ３’から選ばれるものであり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉ）で表され、或いは、
ＡＸはそれぞれ独立して、Ａ１またはＡ１’から選ばれるものであり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｉ）で表される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
式（３）または式（３’）で表される共役基において、
ＡＸはそれぞれ独立して、Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ１’、Ａ２’またはＡ３’から選ばれるものであり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉ）で表される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
式（４）で表される共役基において、
ＡＸは、Ａ１またはＡ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｖ）で表される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
式（１）〜式（３）、式（１'）〜式（３'）で表される共役基において、Ｑは、コレステロール及びその誘導体、ポリエチレングリコール、蛍光プローブ、ビオチン、ペプチド、ビタミン、組織ターゲティング分子から選ばれるものである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９】
前記オリゴヌクレオチドは、一本鎖オリゴヌクレオチドまたは二本鎖オリゴヌクレオチドであり、
好ましくは、前記オリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の修飾ヌクレオチドを含み、
好ましくは、前記１つまたは複数の修飾ヌクレオチドはそれぞれ独立して、２'−メトキシエチル修飾ヌクレオチド、２'−Ｏ−アルキル修飾ヌクレオチド（例えば、２'−Ｏ−メチル修飾ヌクレオチド）、２'−Ｏ−アリル修飾ヌクレオシド酸、２'−Ｃ−アリル修飾ヌクレオチド、２'−フルオロ修飾ヌクレオチド、２'−デオキシ修飾ヌクレオチド、２'−ヒドロキシ修飾ヌクレオチド、ロックされたヌクレオチド、ロック解除された核酸、ヘキシトール核酸から選ばれるものであり、
好ましくは、前記修飾ヌクレオチドは、２'−Ｏ−アルキル修飾ヌクレオチド、２'−フルオロ修飾ヌクレオチドから選ばれるものであり、
好ましくは、前記オリゴヌクレオチドには末端修飾物があり、好ましくは、前記末端修飾物は、コレステロール、ポリエチレングリコール、蛍光プローブ、ビオチン、ポリペプチド、ビタミン、組織ターゲティング分子、およびそれらの任意の組み合わせから選ばれるものであり、
好ましくは、前記オリゴヌクレオチドのリン酸含有骨格は修飾されたものであり、好ましくは、前記修飾はチオ修飾であり、
好ましくは、前記オリゴヌクレオチドはｓｉＲＮＡであり、
好ましくは、前記ｓｉＲＮＡは、相補的に二本鎖を形成するセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、
好ましくは、前記ｓｉＲＮＡは、例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４で表される配列を含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
【化９】
2021504454.tif 000092
は、それぞれ独立して前記オリゴヌクレオチドの任意の鎖の３'末端、５'末端または配列の中央に結合され、
好ましくは、
【化１０】
2021504454.tif 000093
は、リン酸トリエステル結合を介してオリゴヌクレオチドに結合され、
好ましくは、ＭとＭＴとの間またはＭとＭとの間は、リン酸トリエステル結合を介して結合されている、請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１１】
前記オリゴヌクレオチドは一本鎖オリゴヌクレオチドであり、
好ましくは、Ｙは１であり、
【化１１】
2021504454.tif 000094
は前記オリゴヌクレオチドの３'末端または５'末端に結合され、
好ましくは、Ｙは２であり、２つの
【化１２】
2021504454.tif 000095
はそれぞれ前記オリゴヌクレオチドの３'末端及び５'末端に結合される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１２】
前記オリゴヌクレオチドは、二本鎖オリゴヌクレオチドであり、
好ましくは、Ｙは１であり、
【化１３】
2021504454.tif 000096
は前記オリゴヌクレオチドの任意の鎖の３'末端または５'末端に結合され、
好ましくは、Ｙは２であり、２つの
【化１４】
2021504454.tif 000097
はそれぞれ前記オリゴヌクレオチドの同一の鎖の３'末端及び５'末端に結合され、
好ましくは、Ｙは２であり、２つの
【化１５】
2021504454.tif 000098
はそれぞれ前記オリゴヌクレオチドの２つの鎖の３'末端に結合され、
好ましくは、Ｙは２であり、２つの
【化１６】
2021504454.tif 000099
はそれぞれ前記オリゴヌクレオチドの２つの鎖の５'末端に結合され、
好ましくは、Ｙは３であり、３つの
【化１７】
2021504454.tif 000100
のうちの２つは、それぞれ前記オリゴヌクレオチドの同一の鎖の３'末端及び５'末端に結合され、もう１つは、その他の鎖の３'末端または５'末端に結合され、
好ましくは、Ｙは４であり、４つの
【化１８】
2021504454.tif 000101
はそれぞれ前記オリゴヌクレオチドの２つの鎖の３'末端及び５'末端に結合される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｘは０ではなく、ＭＴは少なくとも１つのＭと同様なＡＸ及び／またはｌｉｎｋｅｒ構造を有し、
好ましくは、Ｘは１より大きく、Ｘ個のＭは同様または異なる構造を有し、
好ましくは、Ｙは１より大きく、Ｙ個の
【化１９】
2021504454.tif 000102
は同様または異なる構造を有している、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｙは１で、Ｘは０であり、前記化合物は以下の特徴の１つを有し、
（１）ＭＴの構造は式（１）で表され、ＡＸは、Ａ１’、Ａ２’又はＡ３’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉ）で表され、
（２）ＭＴの構造は式（１）で表され、ＡＸは、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｉ）で表され、
（３）ＭＴの構造は式（１）で表され、ＡＸは、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｉｉ）で表され、
（４）ＭＴの構造は式（１）で表され、ＡＸは、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｖ）で表され、
（５）ＭＴの構造は式（２）で表され、ＡＸは、Ａ１’、Ａ２’またはＡ３’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉ）で表され、
（６）ＭＴの構造は式（２）で表され、ＡＸは、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｉ）で表され、
（７）ＭＴの構造は式（３）で表され、ＡＸは、Ａ１’、Ａ２’またはＡ３’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉ）で表され、
（８）ＭＴの構造は式（４）で表され、ＡＸは、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｖ）で表され、
（９）ＭＴの構造は式（２）で表され、ＡＸは、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｉｉ）で表され、
好ましくは、式（ｉ）で表されるｌｉｎｋｅｒにおいて、ｎは１または６であり、
好ましくは、式（ｉｉ）で表されるｌｉｎｋｅｒにおいて、ｎ１は１で、且つ、ｎ２は４であり、
好ましくは、式（ｉｉｉ）で表されるｌｉｎｋｅｒにおいて、ｎ１は１で、ｎ２は３で、且つ、ｎ３は４であり、
好ましくは、式（ｉｖ）で表されるｌｉｎｋｅｒにおいて、ｎは１である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｙは１で、Ｘは１、２または３であり、Ｘが２または３であるときに、各Ｍは同様な構造を有し、且つ前記化合物は以下の特徴の１つを有し、
（１）Ｍの構造は式（１’）で表され、ＡＸが、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉ）で表され、ＭＴの構造は式（１）で表され、ＡＸが、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉ）で表され、
（２）Ｍの構造は式（１’）で表され、ＡＸが、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉｉ）で表され、ＭＴの構造は式（１）で表され、ＡＸが、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉｉ）で表され、
（３）Ｍの構造は式（１’）で表され、ＡＸが、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉｉｉ）で表され、ＭＴの構造は式（１）で表され、ＡＸが、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉｉｉ）で表され、
（４）Ｍの構造は式（２’）で表され、ＡＸが、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉ）で表され、ＭＴの構造は式（２）で表され、ＡＸが、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉ）で表され、
（５）Ｍの構造は式（１’）で表され、ＡＸが、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉｉ）で表され、ＭＴの構造は式（１）で表され、ＡＸが、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉｉ）で表され、
（６）Ｍの構造は式（１’）で表され、ＡＸが、Ａ３’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉｉ）で表され、ＭＴの構造は式（１）で表され、ＡＸが、Ａ３’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉｉ）で表され、
好ましくは、式（ｉ）で表されるｌｉｎｋｅｒにおいて、ｎは１または６であり、
好ましくは、式（ｉｉ）で表されるｌｉｎｋｅｒにおいて、ｎ１は１で、且つ、ｎ２は４であり、
好ましくは、式（ｉｉｉ）で表されるｌｉｎｋｅｒにおいて、ｎ１は１で、ｎ２は３で、且つ、ｎ３は４である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｙは１で、Ｘは２であり、２つのＭは同様な構造を有し、式（１’）で表されるように、ＡＸが、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉｖ）で表され、ＭＴの構造は式（４）で表され、ＡＸが、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｖ）で表され、
好ましくは、式（ｉｖ）で表されるｌｉｎｋｅｒにおいて、ｎは１である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１７】
前記化合物は、
【化２０】
2021504454.tif 000103
【化２１】
2021504454.tif 000104
【化２２】
2021504454.tif 000105
から選ばれ、
式中、ｎ１、ｎ２、ｎ３及びｎはそれぞれ独立して、１〜１０の整数から選ばれるものである、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１８】
一般式がＡｘ−ｌｉｎｋｅｒ−Ｒ１である化合物であって、ＡＸはリガンド、ｌｉｎｋｅｒは結合アーム、Ｒ１は
【化２３】
2021504454.tif 000106
であり、式中、Ｚはヒドロキシル基の保護基であり、４,４−ジメトキシトリフェニルメチル（ＤＭＴｒ）または４−メトキシトリフェニルクロロメチル（ＭＭＴ）が好ましい。
【請求項１９】
一般式がＡｘ−ｌｉｎｋｅｒ−Ｒ２である化合物であって、ＡＸはリガンド、ｌｉｎｋｅｒは結合アーム、Ｒ２は
【化２４】
2021504454.tif 000107
であり、式中、ｍ１及びｍ２はそれぞれ独立して１〜１０の整数から選ばれるものであり、Ｚはヒドロキシル基の保護基であり、４,４−ジメトキシトリフェニルメチル（ＤＭＴｒ）または４−メトキシトリフェニルクロロメチル（ＭＭＴ）が好ましい。
【請求項２０】
一般式がＡｘ−ｌｉｎｋｅｒ−Ｒ３である化合物であって、ＡＸはリガンド、ｌｉｎｋｅｒは結合アーム、Ｒ３は
【化２５】
2021504454.tif 000108
である。
【請求項２１】
一般式がＡｘ−ｌｉｎｋｅｒ−Ｒ４である化合物であって、ＡＸはリガンド、ｌｉｎｋｅｒは結合アーム、Ｒ４は
【化２６】
2021504454.tif 000109
である。
【請求項２２】
Ａｘはヒトアシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）のリガンドであり、
好ましくは、ＡＸは、ガラクトース、Ｎ-アセチル-Ｄ-ガラクトサミン、ガラクトース含有多糖類、Ｎ-アセチル-Ｄ-ガラクトサミン含有多糖類、ガラクトース誘導体（例えばガラクトースアセテートなどのガラクトースエステル）またはＮ-アセチル-Ｄ-ガラクトサミン誘導体（例えばＮ-アセチル-Ｄ-ガラクトサミンアセテートなどのＮ-アセチル-Ｄ-ガラクトサミンエステル）であり、
好ましくは、ＡＸは更にそれぞれ独立して、例えば、カルボニルアルキル基またはエステルアルキル基などの修飾基を持っており、好ましくは、前記アルキル基は、Ｃ１−６アルキル基またはＣ６−１２アルキル基であり、
好ましくは、ＡＸは
【化２７】
2021504454.tif 000110
から選ばれるものである、請求項１８〜２１のいずれか１つに記載の化合物。
【請求項２３】
ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉ）、式（ｉｉ）、式（ｉｉｉ）、式（ｉＶ）または式（Ｖ）で表され、
【化２８】
2021504454.tif 000111
式中、ｎは１〜１０の整数から選ばれるものであり、好ましくは、ｎは１または６であり、
【化２９】
2021504454.tif 000112
式中、ｎ１とｎ２はそれぞれ独立して１〜１０の整数から選ばれるものであり、好ましくはｎ１は１、好ましくはｎ２は４であり、
【化３０】
2021504454.tif 000113
式中、ｎ１、ｎ２、ｎ３はそれぞれ独立して１〜１０の整数から選ばれるものであり、好ましくはｎ１は１、好ましくはｎ２は３であり、好ましくはｎ３は４であり、
【化３１】
2021504454.tif 000114
式中、ｎは１〜１０の整数から選ばれるものであり、好ましくは、ｎは１であり、
【化３２】
2021504454.tif 000115
式中、ｎは１〜１０の整数から選ばれるものであり、好ましくは、ｎは４である、請求項１８〜２２のいずれか１つに記載の化合物。
【請求項２４】
前記化合物は、以下の特徴の１つを有し、
（１）ＡＸは、Ａ１、Ａ２またはＡ３であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉ）で表され、
（２）ＡＸは、Ａ１であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｉ）で表され、
（３）ＡＸは、Ａ１であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｉｉ）で表され、
（４）ＡＸは、Ａ１であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｖ）で表され、
好ましくは、式（ｉ）で表されるｌｉｎｋｅｒにおいて、ｎは１または６であり、
好ましくは、式（ｉｉ）で表されるｌｉｎｋｅｒにおいて、ｎ１は１、且つ、ｎ２は４であり、
好ましくは、式（ｉｉｉ）で表されるｌｉｎｋｅｒにおいて、ｎ１は１、ｎ２は３、且つ、ｎ３は４であり、
好ましくは、式（ｉｖ）で表されるｌｉｎｋｅｒにおいて、ｎは１であり、
好ましくは、前記化合物は、下記のものから選ばれ、
【化３３】
2021504454.tif 000116
式中、ｎは１〜１０の整数から選ばれるものであり、
【化３４】
2021504454.tif 000117
式中、ｎ１およびｎ２はそれぞれ独立して１〜１０の整数から選ばれるものであり、
【化３５】
2021504454.tif 000118
式中、ｎ１、ｎ２、ｎ３はそれぞれ独立して１〜１０の整数から選ばれるものである、
請求項１８、２２または２３に記載の化合物。
【請求項２５】
前記化合物は、下記特徴のうちの１つを有し、
（１）ＡＸは、Ａ１、Ａ２またはＡ３であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉ）で表され、
（２）ＡＸは、Ａ１であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｉ）で表され、
好ましくは、式（ｉ）で表されるｌｉｎｋｅｒにおいて、ｎは１または６であり、
好ましくは、式（ｉｉ）で表されるｌｉｎｋｅｒにおいて、ｎ１は１、且つ、ｎ２は４であり、
好ましくは、前記化合物は、下記のものから選ばれ、
【化３６】
2021504454.tif 000119
式中、ｎ、ｍ１、ｍ２はそれぞれ独立して１〜１０の整数から選ばれるものであり、
【化３７】
2021504454.tif 000120
式中、ｎ１、ｎ２、ｍ１、ｍ２はそれぞれ独立して１〜１０の整数から選ばれるものであり、
【化３８】
2021504454.tif 000121
式中、ｎ１、ｎ２、ｎ３、ｍ１、ｍ２はそれぞれ独立して１〜１０の整数から選ばれるものである、請求項１９、２２または２３に記載の化合物。
【請求項２６】
ＡＸは、Ａ１、Ａ２またはＡ３であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉ）で表され、
好ましくは、式（ｉ）で表されるｌｉｎｋｅｒにおいて、ｎは１または６である、請求項２０、２２または２３に記載の化合物。
【請求項２７】
ＡＸは、Ａ１であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｖ）で表され、
好ましくは、式（ｖ）で表されるｌｉｎｋｅｒにおいて、ｎは４である、請求項２１、２２または２３に記載の化合物。
【請求項２８】
オリゴヌクレオチドに対して修飾する方法であって、
１つまたは複数の化合物をオリゴヌクレオチドに結合させ、前記１つまたは複数の化合物は、請求項１８〜２７のいずれか１つに記載の化合物から選ばれるものであり、
好ましくは、前記方法において、前記化合物における
【化３９】
2021504454.tif 000122
に発生する化学反応により結合し、
好ましくは、前記オリゴヌクレオチドは、請求項９に定義され、
好ましくは、前記方法は、固相合成に用いられるオリゴヌクレオチドに対して修飾する方法。
【請求項２９】
オリゴヌクレオチドに対して修飾する方法であって、
オリゴヌクレオチドを提供し、請求項１８〜２０および２２〜２６のいずれか１項に定義された化合物から選ばれる第１の化合物をオリゴヌクレオチドに結合させて、共役基Ｍを含むオリゴヌクレオチドを取得するステップ（１）と、
請求項１８〜２７のいずれか１項に記載の化合物から選ばれる第２の化合物をステップ（１）において形成された共役基Ｍに結合させるステップ（２）と、を含み、
非限定的には、ステップ（２）を１回または複数回（例えば、２〜９回）繰り返すステップ（３）を更に含み、
非限定的には、ステップ（１）、ステップ（２）及びステップ（３）を１回または複数回（例えば、２〜９回）繰り返すステップ（４）を含み、
好ましくは、前記ステップ（１）と（２）において、前記第１の化合物または第２の化合物における
【化４０】
2021504454.tif 000123
に発生する化学反応により結合し、
好ましくは、前記オリゴヌクレオチドは、請求項９に定義され、
好ましくは、前記方法は、固相合成に用いられるオリゴヌクレオチドに対して修飾する方法。
【請求項３０】
請求項１８〜２７のいずれか１項に記載の化合物を含むキットであって、
好ましくは、前記キットには、オリゴヌクレオチドを合成および／または修飾するための試薬も含まれるキット。
【請求項３１】
請求項１〜１７のいずれか１項に記載の化合物、及び薬学的に許容される担体を含む薬物組成物であって、
好ましくは、前記医薬組成物は、テスト対象の肝臓関連疾患を予防および／または治療するために使用され、
好ましくは、前記肝臓関連疾患は、遺伝性血管性浮腫、Ｉ型家族性チロシン血症、アラジール症候群、α−１−アンチトリプシン欠乏症、胆汁酸合成および代謝異常、胆道閉鎖症、嚢胞性線維性肝疾患、特発性新生児肝炎、ミトコンドリア肝疾患、進行性家族性肝内胆汁うっ滞、原発性硬化性胆管炎、トランスサイレチンアミロイドーシス、血友病、ホモ接合性家族性高コレステロール血症、高脂血症、脂肪性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、高血糖およびＩＩ型糖尿病に類似した異常に高い肝臓グルコース産生に関連する疾患、肝炎、肝性ポルフィリン症から選ばれるものである薬物組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生物医学の技術分野に属し、特に、修飾オリゴヌクレオチド、修飾オリゴヌクレオチドの合成に使用可能な化合物、およびオリゴヌクレオチドに対する修飾方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
アシアロ糖タンパク質受容体（ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＡＳＧＰＲ）は、数量が多いヘテロオリゴマーのエンドサイトーシス受容体であり、主に、肝実質細胞の類洞側の細胞膜の表面に存在し、糖に対して特異性を有しているものである。各種の糖タンパク質は、酵素加水分解または酸加水分解によって末端シアル酸が除去された後に、露出した二次末端がガラクトース残基であるため、ＡＳＧＰＲの糖結合特異性は、実際にはガラクトシル基にあり、従って、アシアロ糖タンパク質受容体はガラクトース特異的受容体とも称す。ＡＳＧＰＲは主に肝実質細胞に分布しており、その他の細胞の含有量は少ないため、肝臓向けの輸送に最適な受容体となる。
【０００３】
末端が非還元ガラクトース（Ｇａｌ）またはＮ-アセチル-Ｄ-ガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）残基である糖タンパク質は、いずれもＡＳＧＰＲによって認識可能であり、ＧａｌＮＡｃは、Ｇａｌよりも約５０倍高い親和性でＡＳＧＰＲに結合する(Ｉｏｂｓｔ Ｓ Ｔ ｅｔ ａｌ,Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ,１９９６,２７１(１２)：６６８６−６６９３)。生体外実験では、クラスター化された糖残基が、受容体の結合部位を同時に占有することにより、クラスター化されていない糖残基よりもはるかに高い親和性を持つことができることを示しており、アフィニティの順序は４アンテナ>３アンテナ>>２アンテナ>>単一アンテナガラクトシドという順になった(Ｌｅｅ Ｙ Ｃ，ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ,１９８３,２５８(１)：１９９−２０２)。
【０００４】
ＡＳＧＰＲ受容体を介した肝臓ターゲティングオリゴヌクレオチドは、革新的核酸医薬品の分野における新しいブレークスルーである。２０１２年に、米国のＡｌｎｙｌａｍ製薬会社は、以前に研究された３アンテナＧａｌＮＡｃ構造と低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を共有結合させて、ｉｎ ＶｉｖｏでのｓｉＲＮＡの肝臓ターゲティング送達を実現した。研究者は、この技術を用いて、アミロイドーシス、血友病、高コレステロール血症、肝性ポルフィリン症、Ｂ型肝炎などの疾患の薬剤の開発を行い、複数の薬剤候補が臨床研究段階に入った(ｈｔｔｐ：／／www．ａｌｎｙｌａｍ．ｃｏｍ／ｐｒｏｄｕｃｔ−ｐｉｐｅｌｉｎｅ／)。２０１４年、米国のＩＳＩＳ製薬は、３アンテナＧａｌＮＡｃとアンチセンス核酸を共有結合させて、動物の体内で肝臓ターゲティング薬物投与を実現し、結合後のアンチセンス核酸の活性は１０倍に増加した(Ｐｒａｋａｓｈ,Ｔ．Ｐ．ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．４２,８７９６−８０７．)。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明者は、深く研究して創造性のある労働を経り、オリゴヌクレオチドの修飾に用いられる、ＡＳＧＰＲリガンドを含む化合物を得て、そして、共役基を含む修飾オリゴヌクレオチドを取得した。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
したがって、１つの方面で、本発明は、オリゴヌクレオチドと共役基を含む化合物を提供し、その一般式は、
【化１】
2021504454.tif 000002
であり、式中、ＰＮはオリゴヌクレオチドであり、Ｙは１〜１０の整数から選択され、Ｘは０〜１０の整数から選ばれ、ＭＴは式（１）、式（２）、式（３）および式（４）で表される共役基から選ばれ、Ｘが０ではない場合に、Ｘ個のＭはそれぞれ独立して式（１'）、式（２'）および式（３'）で表される共役基から選ばれて、
【化２】
2021504454.tif 000003
【０００７】
式中、ＡＸはリガンド、ｌｉｎｋｅｒは結合アーム、Ｑはヒドロキシル基または修飾基である。
【０００８】
ある実施形態で、式（１）〜式（４）、式（１’）〜式（３’）で表される共役基において、Ａｘはそれぞれ独立してヒトアシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）のリガンドである。
【０００９】
ある実施形態で、式（１）〜式（４）、式（１’）〜式（３’）で表される共役基において、ＡＸは、ガラクトース、Ｎ-アセチル-Ｄ-ガラクトサミン、ガラクトース含有多糖類、Ｎ-アセチル-Ｄ-ガラクトサミン含有多糖類、ガラクトース誘導体（例えばガラクトースアセテートなどのガラクトースエステル）またはＮ-アセチル-Ｄ-ガラクトサミン誘導体（例えばＮ-アセチル-Ｄ-ガラクトサミンアセテートなどのＮ-アセチル-Ｄ-ガラクトサミンエステル）から選ばれるものである。好ましくは、ＡＸは更にそれぞれ独立して、例えばカルボニルアルキル基またはエステルアルキル基などの修飾基を持っており、前記アルキル基は、Ｃ１−６アルキル基またはＣ６−１２アルキル基である。
【００１０】
ある実施形態で、ＡＸは、
【化３】
2021504454.tif 000004
【００１１】
から選ばれるものである。
【００１２】
ある実施形態で、式（１）〜式（４）、式（１'）〜式（３'）で表される共役基において、ｌｉｎｋｅｒの構造はそれぞれ独立して式（ｉ）、式（ｉｉ）、式（ｉｉｉ）、式（ｉｖ）または式（ｖ）で表され、
【化４】
2021504454.tif 000005
【００１３】
式中、ｎは１〜１０の整数から選ばれるものであり、ある実施形態で、ｎは１または６である。
【化５】
2021504454.tif 000006
【００１４】
式中、ｎ１とｎ２はそれぞれ独立して１〜１０の整数から選ばれるものであり、ある実施形態で、ｎ１は１である。ある実施形態で、ｎ２は４である。ある実施形態で、ｎ１は１であり、かつｎ２は４である。
【化６】
2021504454.tif 000007
【００１５】
式中、ｎ１、ｎ２、ｎ３はそれぞれ独立して１〜１０の整数から選ばれるものである。ある実施形態で、ｎ１は１である。ある実施形態で、ｎ２は３である。ある実施形態で、ｎ３は４である。ある実施形態で、ｎ１は１であり、ｎ２は３であり、かつ、ｎ３は４である。
【化７】
2021504454.tif 000008
【００１６】
式中、ｎは１〜１０の整数から選ばれるものである。ある実施形態で、ｎは１である。
【化８】
2021504454.tif 000009
【００１７】
式中、ｎは１〜１０の整数から選ばれるものである。ある実施形態で、ｎは４である。
【００１８】
ある実施形態で、式（１）または式（１’）で表される共役基において、ＡＸはそれぞれ独立して、Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ１’、Ａ２’またはＡ３’から選ばれるものであり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉ）で表される。ある実施形態で、ｎは１または６である。
【００１９】
ある実施形態で、式（１）または式（１’）で表される共役基において、ＡＸはそれぞれ独立して、Ａ１またはＡ１’から選ばれるものであり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｉ）で表されている。ある実施形態で、ｎ１は１で、かつ、ｎ２は４である。
【００２０】
ある実施形態で、式（１）または式（１’）で表される共役基において、ＡＸはそれぞれ独立して、Ａ１またはＡ１’から選ばれるものであり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｉｉ）で表されている。ある実施形態で、ｎ１は１で、ｎ２は３で、かつ、ｎ３は４である。
【００２１】
ある実施形態で、式（１）または式（１’）で表される共役基において、ＡＸはそれぞれ独立して、Ａ１またはＡ１’から選ばれるものであり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｖ）で表される。ある実施形態で、ｎは１である。
【００２２】
ある実施形態で、式（２）または式（２’）で表される共役基において、ＡＸはそれぞれ独立して、Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ１’、Ａ２’またはＡ３’から選ばれるものであり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉ）で表される。ある実施形態で、ｎは１または６である。
【００２３】
ある実施形態で、式（２）または式（２’）で表される共役基において、ＡＸはそれぞれ独立して、Ａ１またはＡ１’から選ばれるものであり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｉ）で表される。ある実施形態で、ｎ１は１で、かつ、ｎ２は４である。
【００２４】
ある実施形態で、式（３）または式（３’）で表される共役基において、ＡＸはそれぞれ独立して、Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ１’、Ａ２’またはＡ３’から選ばれるものであり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉ）で表される。ある実施形態で、ｎは１または６である。
【００２５】
ある実施形態で、式（４）で表される共役基において、ＡＸは、Ａ１またはＡ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｖ）で表される。ある実施形態で、ｎは４である。
【００２６】
ある実施形態で、式（１）〜式（３）、式（１'）〜式（３'）で表される共役基において、Ｑは、コレステロール及びその誘導体、ポリエチレングリコール、蛍光プローブ、ビオチン、ポリペプチド、ビタミン、組織ターゲティング分子から選ばれるものである。
【００２７】
本発明では、前記オリゴヌクレオチドは、一本鎖オリゴヌクレオチドまたは二本鎖オリゴヌクレオチドであってもよい。非限定的には、本発明のオリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の修飾ヌクレオチドを含む。ある実施形態で、前記１つまたは複数の修飾ヌクレオチドはそれぞれ独立して、２'−メトキシエチル修飾ヌクレオチド、２'−Ｏ−アルキル修飾ヌクレオチド（例えば、２'−Ｏ−メチル修飾ヌクレオチド）、２'−Ｏ−アリル修飾ヌクレオシド酸、２'−Ｃ−アリル修飾ヌクレオチド、２'−フルオロ修飾ヌクレオチド、２'−デオキシ修飾ヌクレオチド、２'−ヒドロキシ修飾ヌクレオチド、ロックされたヌクレオチド、ヘキシトール核酸（Ｈｅｘｉｔｏｌ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ，ＨＮＡ）、ロック解除された核酸（ｕｎｌｏｃｋｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ，ＵＮＡ）から選ばれるものである。ある実施形態で、前記修飾ヌクレオチドは、２'−Ｏ−アルキル修飾ヌクレオチド、２'−フルオロ修飾ヌクレオチドから選ばれるものである。
【００２８】
ある実施形態で、前記オリゴヌクレオチドには末端修飾物があり、好ましくは、前記末端修飾物は、コレステロール、ポリエチレングリコール、蛍光プローブ、ビオチン、ポリペプチド、ビタミン、組織ターゲティング分子、およびそれらの任意の組み合わせから選ばれるものである。
【００２９】
ある実施形態で、前記オリゴヌクレオチドのリン酸含有骨格は修飾されたものであり、好ましくは、前記修飾はチオ修飾である。
【００３０】
ある実施形態で、前記オリゴヌクレオチドはｓｉＲＮＡである。ある実施形態で、前記ｓｉＲＮＡは、相補的に二本鎖を形成するセンス鎖とアンチセンス鎖を含む。ある実施形態で、前記ｓｉＲＮＡは、例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４で表される配列を含む。
【００３１】
本発明の修飾オリゴヌクレオチドにおいて、共役基はオリゴヌクレオチドにおける異なる位置に結合できる。
【００３２】
ある実施形態で、
【化９】
2021504454.tif 000010
は、それぞれ独立して前記オリゴヌクレオチドの任意の鎖の３'末端、５’末端または配列の中央に結合される。ある実施形態で、
【化１０】
2021504454.tif 000011
は、リン酸トリエステル結合を介してオリゴヌクレオチドに結合される。ある実施形態で、ＭとＭＴとの間またはＭとＭとの間は、リン酸トリエステル結合を介して結合される。
【００３３】
ある実施形態で、オリゴヌクレオチドは一本鎖オリゴヌクレオチドである。ある実施形態で、Ｙは１であり、
【化１１】
2021504454.tif 000012
は前記オリゴヌクレオチドの３'末端または５'末端に結合される。ある実施形態で、Ｙは２であり、２つの
【化１２】
2021504454.tif 000013
はそれぞれ前記オリゴヌクレオチドの３'末端または５'末端に結合される。
【００３４】
ある実施形態で、オリゴヌクレオチドは、二本鎖オリゴヌクレオチドである。ある実施形態で、Ｙは１であり、
【化１３】
2021504454.tif 000014
は前記オリゴヌクレオチドの任意の鎖の３'末端または５'末端に結合される。ある実施形態で、Ｙは２であり、２つの
【化１４】
2021504454.tif 000015
はそれぞれ前記オリゴヌクレオチドの同一の鎖の３'末端及び５'末端に結合される。ある実施形態で、Ｙは２であり、２つの
【化１５】
2021504454.tif 000016
はそれぞれ前記オリゴヌクレオチドの２つの鎖の３'末端に結合される。ある実施形態で、Ｙは２であり、２つの
【化１６】
2021504454.tif 000017
はそれぞれ前記オリゴヌクレオチドの２つの鎖の５'末端に結合される。ある実施形態で、Ｙは３であり、３つの
【化１７】
2021504454.tif 000018
のうちの２つは、それぞれ前記オリゴヌクレオチドの同一の鎖の３'末端及び５'末端に結合され、もう１つは、その他の鎖の３'末端または５'末端に結合される。ある実施形態で、Ｙは４であり、４つの
【化１８】
2021504454.tif 000019
はそれぞれ前記オリゴヌクレオチドの２つの鎖の３'末端及び５'末端に結合される。
【００３５】
本発明の修飾オリゴヌクレオチドにおいて、ＭＴとＭとが、または複数のＭ同士が、同様または異なる構造を有する。ある実施形態で、Ｘは０ではなく、ＭＴは少なくとも１つのＭと同様なＡＸ及び／またはｌｉｎｋｅｒ構造を有する。ある実施形態で、Ｘは１より大きく、Ｘ個のＭは同様または異なる構造を有する。ある実施形態で、Ｙは１より大きく、Ｙ個の
【化１９】
2021504454.tif 000020
は同様または異なる構造を有する。
【００３６】
本発明の修飾オリゴヌクレオチドにおいて、１つまたは複数の
【化２０】
2021504454.tif 000021
を含んでもよく、且つ、ＭまたはＭＴの構造、Ｍの数または
【化２１】
2021504454.tif 000022
の数を調整してもよい。
【００３７】
ある実施形態で、Ｙは１で、Ｘは０であり、前記化合物は以下の特徴の１つを有し、
（１）ＭＴの構造は式（１）で表され、ＡＸは、Ａ１’、Ａ２’またはＡ３’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉ）で表され、好ましくは、ｎは１または６である。
（２）ＭＴの構造は式（１）で表され、ＡＸは、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｉ）で表され、好ましくは、ｎ１は１で、且つ、ｎ２は４である。
（３）ＭＴの構造は式（１）で表され、ＡＸは、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｉｉ）で表され、好ましくは、ｎ１は１で、ｎ２は３で、且つ、ｎ３は４である。
（４）ＭＴの構造は式（１）で表され、ＡＸは、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｖ）で表され、好ましくは、ｎは１である。
（５）ＭＴの構造は式（２）で表され、ＡＸは、Ａ１’、Ａ２’またはＡ３’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉ）で表され、好ましくは、ｎは１または６である。
（６）ＭＴの構造は式（２）で表され、ＡＸは、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｉ）で表され、好ましくは、ｎ１は１で、且つ、ｎ２は４である。
（７）ＭＴの構造は式（３）で表され、ＡＸは、Ａ１’、Ａ２’またはＡ３’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉ）で表され、好ましくは、ｎは１または６である。
（８）ＭＴの構造は式（４）で表され、ＡＸは、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｖ）で表され、好ましくは、ｎは１である。
（９）ＭＴの構造は式（２）で表され、ＡＸは、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｉｉ）で表され、好ましくは、ｎ１は１で、ｎ２は３で、且つ、ｎ３は４である。
【００３８】
ある実施形態で、Ｙは１で、Ｘは１、２または３であり、Ｘが２または３であるときに、各Ｍは同様な構造を有し、且つ前記化合物は以下の特徴の１つを有する。
（１）Ｍの構造は式（１’）で表され、ＡＸが、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉ）で表され、好ましくは、ｎは１または６である。ＭＴの構造は式（１）で表され、ＡＸが、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉ）で表され、好ましくは、ｎは１または６である。
（２）Ｍの構造は式（１’）で表され、ＡＸは、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉｉ）で表され、好ましくは、ｎ１が１で、且つ、ｎ２は４である。ＭＴの構造は式（１）で表され、ＡＸが、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉｉ）で表され、好ましくは、ｎ１は１で、且つ、ｎ２は４である。
（３）Ｍの構造は式（１’）で表され、ＡＸが、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉｉｉ）で表され、好ましくは、ｎ１は１で、ｎ２は３で、且つ、ｎ３は４である。ＭＴの構造は式（１）で表され、ＡＸが、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉｉｉ）で表され、好ましくは、ｎ１は１で、ｎ２は３で、且つ、ｎ３は４である。
（４）Ｍの構造は式（２’）で表され、ＡＸが、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉ）で表され、好ましくは、ｎは１または６である。ＭＴの構造は式（２）で表され、ＡＸが、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉ）で表され、好ましくは、ｎは１または６である。
（５）Ｍの構造は式（１’）で表され、ＡＸが、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉｉ）で表され、好ましくは、ｎ１は１で、且つ、ｎ２は４である。ＭＴの構造は式（１）で表され、ＡＸが、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉｉ）で表され、好ましくは、ｎ１は１で、且つ、ｎ２は４である。
（６）Ｍの構造は式（１’）で表され、ＡＸが、Ａ３’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉｉ）で表され、好ましくは、ｎ１は１で、且つ、ｎ２は４である。ＭＴの構造は式（１）で表され、ＡＸが、Ａ３’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉｉ）で表され、好ましくは、ｎ１は１で、且つ、ｎ２は４である。
【００３９】
ある実施形態で、Ｙは１で、Ｘは２であり、２つのＭは同様な構造を有し、式（１’）で表されるように、ＡＸが、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉｖ）で表され、好ましくは、ｎは１である。ＭＴの構造は式（４）で表され、ＡＸが、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｖ）で表され、好ましくは、ｎは４である。
【００４０】
本発明の一例とする化合物は、
【化２２】
2021504454.tif 000023
【化２３】
2021504454.tif 000024
【化２４】
2021504454.tif 000025
【００４１】
から選ばれ、
式中、ｎ１、ｎ２、ｎ３及びｎはそれぞれ独立して、１〜１０の整数から選ばれるものである。
【００４２】
もう１つ形態で、本出願はオリゴヌクレオチドの修飾用化合物を提供する。前記化合物は、リガンドと、オリゴヌクレオチドの鎖と反応できる化学基と、リガンドと前記化学基とを結合させるリンクアームを含む。
【００４３】
したがって、本願は、一般式がＡｘ−ｌｉｎｋｅｒ−Ｒ１、Ａｘ−ｌｉｎｋｅｒ−Ｒ２、Ａｘ−ｌｉｎｋｅｒ−Ｒ３とＡｘ−ｌｉｎｋｅｒ−Ｒ４である化合物に係っており、式中、ＡＸはリガンド、ｌｉｎｋｅｒはリンクアームである。
【００４４】
Ｒ１は
【化２５】
2021504454.tif 000026
Ｒ２は
【化２６】
2021504454.tif 000027
（式中、ｍ１及びｍ２はそれれぞ独立して１〜１０の整数から選ばれる）
Ｒ３は
【化２７】
2021504454.tif 000028
Ｒ４は
【化２８】
2021504454.tif 000029
である。
【００４５】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３において、Ｚはヒドロキシル基の保護基であり、４,４−ジメトキシトリフェニルメチル（ＤＭＴｒ）または４−メトキシトリフェニルクロロメチル（ＭＭＴ）が好ましい。
【００４６】
ある実施形態で、Ａｘはヒトアシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）のリガンドである。
【００４７】
ある実施形態で、ＡＸは、ガラクトース、Ｎ-アセチル-Ｄ-ガラクトサミン、ガラクトース含有多糖類、Ｎ-アセチル-Ｄ-ガラクトサミン含有多糖類、ガラクトース誘導体（例えばガラクトースアセテートなどのガラクトースエステル）またはＮ-アセチル-Ｄ-ガラクトサミン誘導体（例えばＮ-アセチル-Ｄ-ガラクトサミンアセテートなどのＮ-アセチル-Ｄ-ガラクトサミンエステル）である。非限定的には、ＡＸは更にそれぞれ独立して、例えば、カルボニルアルキル基またはエステルアルキル基などの修飾基を持っており、好ましくは、前記アルキル基は、Ｃ１−６アルキル基またはＣ６−１２アルキル基である。
【００４８】
ある実施形態で、ＡＸは、
【化２９】
2021504454.tif 000030
【００４９】
から選ばれる。
【００５０】
ある実施形態で、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉ）、式（ｉｉ）、式（ｉｉｉ）、式（ｉｖ）または式（ｖ）で表される。
【化３０】
2021504454.tif 000031
【００５１】
式中、ｎは１〜１０の整数から選ばれるものであり、好ましくは、ｎは１または６である。
【化３１】
2021504454.tif 000032
【００５２】
式中、ｎ１とｎ２はそれぞれ独立して１〜１０の整数から選ばれるものであり、好ましくはｎ１は１、好ましくはｎ２は４である。
【化３２】
2021504454.tif 000033
【００５３】
式中、ｎ１、ｎ２、ｎ３はそれぞれ独立して１〜１０の整数から選ばれるものであり、好ましくはｎ１は１、好ましくはｎ２は３であり、好ましくはｎ３は４である。
【化３３】
2021504454.tif 000034
【００５４】
式中、ｎは１〜１０の整数から選ばれるものであり、好ましくは、ｎは１である。
【化３４】
2021504454.tif 000035
【００５５】
式中、ｎは１〜１０の整数から選ばれるものであり、好ましくは、ｎは４である。
【００５６】
ある実施形態で、一般式がＡｘ−ｌｉｎｋｅｒ−Ｒ１である化合物は、以下の特徴の１つを有する。
（１）ＡＸは、Ａ１、Ａ２またはＡ３であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉ）で表され、好ましくは、ｎは１または６である。
（２）ＡＸは、Ａ１であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｉ）で表され、好ましくは、ｎ１は１、且つ、ｎ２は４である。
（３）ＡＸは、Ａ１であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｉｉ）で表され、好ましくは、ｎ１は１、ｎ２は３、且つ、ｎ３は４である。
（４）ＡＸは、Ａ１であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｖ）で表され、好ましくは、ｎは１である。
【００５７】
ある実施形態で、一般式がＡｘ−ｌｉｎｋｅｒ−Ｒ１である化合物は、以下のものから選ばれる。
【化３５】
2021504454.tif 000036
【００５８】
式中、ｎは１〜１０の整数から選ばれるものであり、
【化３６】
2021504454.tif 000037
【００５９】
式中、ｎ１およびｎ２はそれぞれ独立して１〜１０の整数から選ばれるものであり、
【化３７】
2021504454.tif 000038
【００６０】
式中、ｎ１、ｎ２、ｎ３はそれぞれ独立して１〜１０の整数から選ばれるものである。
【００６１】
ある実施形態で、一般式がＡｘ−ｌｉｎｋｅｒ−Ｒ２である化合物は、下記特徴のうちの１つを有する。
（１）ＡＸは、Ａ１、Ａ２またはＡ３であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉ）で表され、好ましくは、ｎは１または６である。
（２）ＡＸは、Ａ１であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｉ）で表され、好ましくは、ｎ１は１、且つ、ｎ２は４である。
【００６２】
ある実施形態で、一般式がＡｘ−ｌｉｎｋｅｒ−Ｒ２である化合物は、以下の化合物から選ばれる。
【化３８】
2021504454.tif 000039
【００６３】
式中、ｎ、ｍ１、ｍ２は１〜１０の整数から選ばれるものであり、
【化３９】
2021504454.tif 000040
【００６４】
式中、ｎ１、ｎ２、ｍ１、ｍ２はそれぞれ独立して１〜１０の整数から選ばれるものであり、
【化４０】
2021504454.tif 000041
【００６５】
式中、ｎ１、ｎ２、ｎ３、ｍ１、ｍ２はそれぞれ独立して１〜１０の整数から選ばれるものである。
【００６６】
ある実施形態で、化学式がＡｘ−ｌｉｎｋｅｒ−Ｒ３である化合物において、ＡＸは、Ａ１、Ａ２、Ａ３であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉ）で表され、好ましくは、ｎは１または６である。
【００６７】
ある実施形態で、化学式がＡｘ−ｌｉｎｋｅｒ−Ｒ４である化合物において、ＡＸは、Ａ１であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｖ）で表され、好ましくは、ｎは４である。
【００６８】
もう１つの形態で、本願は、オリゴヌクレオチドに対する修飾方法を提供し、１つまたは複数（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つまたは１０つ）の化合物をオリゴヌクレオチドに結合させ、前記１つまたは複数の化合物は、それぞれ独立して上述のように定義された一般式がＡｘ−ｌｉｎｋｅｒ−Ｒ１、Ａｘ−ｌｉｎｋｅｒ−Ｒ２、Ａｘ−ｌｉｎｋｅｒ−Ｒ３またはＡｘ−ｌｉｎｋｅｒ−Ｒ４である化合物から選ばれるものである。好ましくは、前記方法において、前記化合物における
【化４１】
2021504454.tif 000042
に発生する化学反応により結合する。ある実施形態で、前記方法は、固相合成に用いられる。
【００６９】
本願は、その他のオリゴヌクレオチドを修飾する方法を提供し、
【００７０】
オリゴヌクレオチドを提供し、一般式がＡｘ−ｌｉｎｋｅｒ−Ｒ１、Ａｘ−ｌｉｎｋｅｒ−Ｒ２またはＡｘ−ｌｉｎｋｅｒ−Ｒ３である化合物から選ばれる第１の化合物をオリゴヌクレオチドに結合させて、共役基Ｍを含むオリゴヌクレオチドを取得するステップ（１）と、
一般式がＡｘ−ｌｉｎｋｅｒ−Ｒ１、Ａｘ−ｌｉｎｋｅｒ−Ｒ２、Ａｘ−ｌｉｎｋｅｒ−Ｒ３、またはＡｘ−ｌｉｎｋｅｒ−Ｒ４である化合物から選ばれる第２の化合物をステップ（１）において形成された共役基Ｍに結合させるステップ（２）と、を含み、
非限定的には、ステップ（２）を１回または複数回（例えば、２〜９回）繰り返すステップ（３）を含み、
非限定的には、ステップ（１）、ステップ（２）及びステップ（３）を１回または複数回（例えば、２〜９回）繰り返すステップ（４）を含む。
【００７１】
好ましくは、前記ステップ（１）と（２）において、第１の化合物または第２の化合物における
【化４２】
2021504454.tif 000043
に発生する化学反応により結合する。
【００７２】
本発明のいずれか１つの修飾方法に用いられるオリゴヌクレオチドは、一本鎖オリゴヌクレオチドまたは二本鎖オリゴヌクレオチドであってもよい。非限定的には、前記オリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の修飾ヌクレオチドを含む。ある実施形態で、前記１つまたは複数の修飾ヌクレオチドはそれぞれ独立して、２'−メトキシエチル修飾ヌクレオチド、２'−Ｏ−アルキル修飾ヌクレオチド（例えば、２'−Ｏ−メチル修飾ヌクレオチド）、２'−Ｏ−アリル修飾ヌクレオシド酸、２'−Ｃ−アリル修飾ヌクレオチド、２'−フルオロ修飾ヌクレオチド、２'−デオキシ修飾ヌクレオチド、２'−ヒドロキシ修飾ヌクレオチド、ロックされたヌクレオチド、ＨＮＡ、ＵＮＡから選ばれるものである。ある実施形態で、前記修飾ヌクレオチドは、２'−Ｏ−アルキル修飾ヌクレオチド、２'−フルオロ修飾ヌクレオチドから選ばれるものである。
【００７３】
ある実施形態で、前記オリゴヌクレオチドには末端修飾物があり、好ましくは、前記末端修飾物は、コレステロール、ポリエチレングリコール、蛍光プローブ、ビオチン、ポリペプチド、ビタミン、組織ターゲティング分子、およびそれらの任意の組み合わせから選ばれるものである。
【００７４】
ある実施形態で、前記オリゴヌクレオチドのリン酸含有骨格は修飾されたものであり、好ましくは、前記修飾はチオ修飾である。
【００７５】
ある実施形態で、前記オリゴヌクレオチドはｓｉＲＮＡである。ある実施形態で、前記ｓｉＲＮＡは、相補的に二本鎖を形成するセンス鎖とアンチセンス鎖を含む。ある実施形態で、前記ｓｉＲＮＡは、例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４で表される配列を含む。
【００７６】
本出願は上述のように定義された一般式がＡｘ−ｌｉｎｋｅｒ−Ｒ１、Ａｘ−ｌｉｎｋｅｒ−Ｒ２、Ａｘ−ｌｉｎｋｅｒ−Ｒ３、またはＡｘ−ｌｉｎｋｅｒ−Ｒ４である化合物の用途をさらに提供し、前記化合物は、オリゴヌクレオチドの修飾に用いられるものである。本願は、上述のように定義された一般式がＡｘ−ｌｉｎｋｅｒ−Ｒ１、Ａｘ−ｌｉｎｋｅｒ−Ｒ２、Ａｘ−ｌｉｎｋｅｒ−Ｒ３、またはＡｘ−ｌｉｎｋｅｒ−Ｒ４である化合物から選ばれる少なくとも１つの化合物を含むキットを提供する。ある実施形態で、前記キットには、オリゴヌクレオチドを合成および／または修飾するための試薬（例えば、固相支持体、ＤＮＡモノマー、ＲＮＡモノマー、修飾モノマー、活性化剤、酸化剤、脱保護試薬、緩衝液、およびそれらの任意の組み合わせ）も含まれる。
【００７７】
もう１つの形態で、本願は、本発明のオリゴヌクレオチド及び共役基を含む化合物と、薬学的に許容されるいかなる担体を含む薬物組成物を提供する。ある実施形態で、前記医薬組成物は、テスト対象の肝臓関連疾患を予防および／または治療するために使用される。
【００７８】
本発明の医薬組成物は、薬学的に許容される任意の剤形に作製することができる。ある実施形態で、前記剤形は、粉末剤、錠剤、顆粒剤、カプセル剤、溶液剤、エマルジョン剤、懸濁液、注射剤、スプレー剤、エアロゾル剤および吸入型乾燥粉末剤からなる群から選択される。ある実施形態で、前記製剤は、例えば、経口投与、非経口投与、直腸投与、肺投与または局所投与などの任意の適切な投与手段により、予防および/または治療を必要とする患者またはテスト対象に投与することができる。経口投与に用いられる場合、前記製剤は、錠剤、カプセル剤、丸剤、顆粒剤などの経口固形製剤などの経口製剤であってもよい。或いは、経口液剤、経口懸濁剤、シロップなどの経口液剤であってもよい。前記経口製剤は、適切な充填剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤などをさらに含んでもよい。非経口投与に用いられる場合、前記製剤は、注射液、注射用滅菌粉末、および注射用濃縮溶液を含む注射剤であってもよい。注射剤の場合、製薬分野の従来の方法で生産できる。注射剤を調製する場合、前記製剤には添加剤を加えなくてもよいが、薬物の特性に応じて適切な添加剤を添加してもよい。
【００７９】
もう１つの形態で、本願は、テスト対象の肝臓関連疾患の予防および/または治療のための本発明のオリゴヌクレオチドおよび共役基を含有する化合物の用途を提供する。
【００８０】
もう１つの形態で、本願は、テスト対象の肝臓関連疾患の予防および/または治療方法を提供し、当該方法は、有効量の本発明のオリゴヌクレオチドおよび共役基を含有する化合物を、必要とするテスト対象に投与することを含む。
【００８１】
ある実施形態で、前記肝臓関連疾患は、遺伝性血管性浮腫、Ｉ型家族性チロシン血症、Ａｌａｇｉｌｌｅ症候群、α−１−アンチトリプシン欠乏症、胆汁酸合成および代謝の欠陥、胆道閉鎖症、嚢胞線維性肝疾患、特発性新生児肝炎、ミトコンドリア肝疾患、進行性家族性肝内胆汁うっ滞、原発性硬化性胆管炎、トランスサイレチンアミロイドーシス、血友病、ホモ接合性家族性高コレステロール血症、高脂血症、脂肪性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、高血糖症、およびＩＩ型糖尿病に類似した異常に高い肝臓グルコース産生に関連する疾患、肝炎、肝性ポルフィリン症からなる群から選択される。
【００８２】
ある実施形態で、前記テスト対象は、ウシ科動物、ウマ科動物、ラム科動物、ブタ科動物、イヌ科動物、ネコ科動物、げっ歯類動物、霊長類動物などの哺乳動物である。例えば、前記テスト対象は人間である。
【００８３】
本発明では、特に説明しない限り、本明細書で使用される科学用語および技術用語は、当業者によって一般に理解される意味を有する。さらに、本明細書に記載の実験室操作手順はすべて、対応する分野で広く使用されている慣用的な手順です。同時に、本発明をよりよく理解するために、関連する用語の定義および解釈を以下に提供する。
【００８４】
例えば、本明細書に記載の「オリゴヌクレオチド」という用語は、複数の結合された化学修飾または非修飾ヌクレオチドを含むオリゴマー化合物を指し、約1００ヌクレオチド未満の長さ（例えば、１−２０のヌクレオチドまたは１−５０のヌクレオチド）を有する。ある実施形態で、オリゴヌクレオチドは、非核酸共役基を含んでもよい。ある実施形態で、オリゴヌクレオチドは、リボ核酸（ＲＮＡ）またはデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）を含む。ある実施形態で、オリゴヌクレオチドは二本鎖または一本鎖である。ある実施形態で、オリゴヌクレオチドはｓｉＲＮＡ、アプタマーまたはアンチセンス核酸である。
【００８５】
本明細書に記載の用語「共役物」または「共役基」は、オリゴヌクレオチドに結合した原子または原子群を意味する。場合によっては、共役基は、それらが結合しているオリゴヌクレオチドの1つ以上の特性を変更し、薬効学、薬物代謝動力学、結合、吸収、細胞分布、細胞摂取、電荷および/またはクリアランス性質を含むが、それらに限定されない。
【００８６】
本明細書に記載の「受容体」という用語は、細胞膜、細胞質、または細胞核に存在する糖タンパク質またはリポタンパク質によって構成される生体高分子を指す。異なる受容体は特異的構造及び立体配置がある。例えば、本明細書に記載の「リガンド」という用語は、受容体に対して認識能力があり、それと結合できる物質を指す。ある実施形態で、前記リガンドは、アシアロ糖タンパク質受容体（ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＡＳＧＰＲ）に親和性を持つリガンドである。ある実施形態で、前記リガンドは、単糖類や多糖類などの炭水化物であり、ガラクトース、Ｎ-アセチル-Ｄ-ガラクトサミン、マンノース、グルコース、グルコサミン、フコースを含むが、それらに限定されない。
【００８７】
本明細書に記載の「多糖」という用語は、グリコシド結合により接続された複数の単糖基から構成されるポリマーを指す。本発明において、多糖類は、オリゴ糖および少糖を含む。通常、「オリゴ糖」とは、グリコシド結合によって接続された２−１０個の単糖基で構成されるポリマーを指し、「少糖」とは、グリコシドによって接続された２０個以下の単糖基で構成されるポリマーを指す。
【００８８】
本明細書に記載の「約」という用語は、当業者によって理解されるべきであり、また、使用される文脈に応じてある程度変化することができる。用語が適用される文脈に従って当業者にとって意味が明確ではない場合、「約」というのは、偏差が指定値または範囲のプラスまたはマイナス１０％を超えないことを意味する。
【００８９】
本明細書に記載の「予防」という用語は、病気の発症を阻止または遅延させることを意味する。
【００９０】
本明細書に記載の「治療」という用語は、病気の進行を治癒または少なくとも部分的に阻止すること、または病気の症状を緩和することを意味する。
本明細書に記載の「有効量」という用語は、意図した目的を達成するのに有効な量を意味する。例えば、疾患を予防するための有効量とは、疾患の発生を予防、阻止または遅延させるのに有効な量を指す。そのような有効量を測定するのは、当業者の能力の範囲内のことである。
【発明の効果】
【００９１】
従来技術と比較して、本発明は以下の有益な効果を有する。
【００９２】
Ａｌｎｙｌａｍ製薬とＩＳＩＳ製薬会社の関連発明（ＵＳ２０１５０１１９４４４Ａ１，ＵＳ２０１５０１１９４４５Ａ１，ＵＳ２０１５０１２６７１８Ａ１）と比較して、本発明には下記顕著な区別がある。
【００９３】
１．化学構造が異なること。両社の設計構造は、マルチアンテナＡＳＧＰＲリガンドをオリゴに一次結合させる構造である。本発明の設計構造は、単一のＡＳＧＰＲリガンドを、核酸ホスホラミダイト固相化学合成により複数回オリゴ核酸とカップリングさせて多リガンド修飾を実現することである。単一のＡＳＧＰＲリガンドで複数回に固相合成カップリングを行わせる利点は次のとおりである。（１）合成ステップが短縮され、大規模の生産を容易に実現することができる。各リガンドに対する固相合成カップリング反応の結合効率は９8％を超え、３つのリガンドに対する反応の結合効率は９４％を超え、固相合成は、装置によって自動的に完成することができ、結合反応においては純化する必要がない。３つのリガンドを組合わせて１つの分子にしてから結合する液相合成と比較して、より効率的、高速で、容易に大規模の生産を実現できる。（２）オリゴ修飾範囲の拡大。報道（ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃａrｂｏｈｙｄrａｔｅｓ ｉｎ Ｃｈｅｍｉｓｔrｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ；４：５４９，２０００）によると、３アンテナ構造におけるＧａｌＮＡｃと中心との距離は、それぞれ１４Å、１８Å、２０Åであり、不等距離は、よりＡＳＧＰＲ受容体への結合に有利です。調製方法の制限のために、両社に用いられた３アンテナ構造においては、ＧａｌＮＡｃと中心との距離は等距離（１７個の原子）である。しかし、本発明では、各ＡＳＰＧＲリガンドがオリゴ核酸に個別に結合されるので、中央とリガンドとの空間距離を容易に制御し、リガンドの数を調節し、数百の組み合わせを形成し、オリゴ核酸修飾の種類を拡大し、より高い活性な製薬分子を見つけるのに役立つことができる。（３）ＡＳＧＰＲリガンドのタイプの拡張。ＧａｌＮＡｃに基づいて、一連の新しいＡＳＧＰＲリガンド基質が調製可能で、これらの新しいリガンドのスクリーニングにより、より多くのオリゴヌクレオチドの革新的な医薬品の開発が促進される。
【００９４】
２．リガンドとオリゴ核酸との共有結合を合成する方法が異なること。Ａｌｎｙｌａｍ製薬会社は３アンテナのＧａｌＮＡｃリガンドを使用して固相支持体に結合し、修飾された固相支持体はオリゴ核酸固相合成に使用されることにより、リガンドがオリゴ核酸の３’末端に結合される。ＩＳＩＳ製薬は、核酸ホスホラミダイト固相合成法によって３アンテナＧａｌＮＡｃリガンドを５'末端に結合させようとしたが、大きな立体障害のために結合できなくなった（Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ５′−ＧａｌＮＡｃ）。そこで、ＩＳＩＳ製薬は、液相３アンテナＧａｌＮＡｃリガンドと末端アミノ修飾オリゴ核酸との液相結合方法を開発し、当該方法により、３時間の反応時間を実現し、反応効率は９５％を超えた。本発明の方法は、各リガンドを独立してオリゴ核酸に結合させ、分子立体障害は小さく、結合効率は高い。
【００９５】
３．修飾可能なオリゴ核酸の部位及び組合せが異なること。通常、薬動力学性質を改善するため、オリゴヌクレオチド薬物分子の末端部位がコレステロール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などで修飾されている。ＡｌｎｙｌａｍとＩＳＩＳ製薬会社によって設計された３アンテナのＧａｌＮＡｃリガンドは、オリゴ核酸鎖の末端修飾にのみ使用され、末端修飾部位を占有し、オリゴ核酸修飾に適用できる種類を減らした。本発明の新規化合物は、固相合成においてオリゴ核酸の任意の位置を修飾することができ、他の修飾は末端による影響を受けない。本発明の実施例に、新規化合物及び末端コレステロール混合修飾オリゴヌクレオチドの調製が記載されている。
以下、図面及び実施例を参照して本発明の実施形態を詳細に説明するが、当業者は、以下の図面及び実施例が本発明を説明するためにのみ使用され、本発明の範囲を限定するものではないことを理解できる。本発明の様々な目的および有利な態様は、以下の図面および好ましい実施形態の詳細な説明により、当業者にとって明らかなものである。
【図面の簡単な説明】
【００９６】
【図１】実施例３５における各サンプルのＧａｌＮＡｃ結合曲線を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００９７】
配列情報
下表は、本発明に係わる配列情報を示すものである。
2021504454.tif 000044
【００９８】
配列１(ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１)：１９ｎｔ
ＣＡＧＣＡＡＧＵＧＵＧＡＣＡＧＵＣＡＵ
配列２(ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２)：２５ｎｔ
ＡＵＧＡＣＵＧＵＣＡＣＡＣＵＵＧＣＵＧＧＣＣＵＧＵ
配列３(ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３)：１９ｎｔ
ＣＡＧＧＣＣＡＧＣＡＡＧＵＧＵＧＡＣＡ
配列４(ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４)：２１ｎｔ
ＵＧＵＣＡＣＡＣＵＵＧＣＴＧＧＣＣＵＧＵＣ
【００９９】
以下、実施例を参照しながら、本発明の実施形態を詳細に説明するが、当業者は、以下の実施例が本発明を説明するための一例に過ぎず、本発明の範囲を限定するものではないことを理解できる。実施例において、具体的な条件が示されていない場合は、従来の条件またはメーカーが推奨する条件により実施する。使用される試薬または機器は製造元が示されていない場合、いずれも市販された通常製品である。
【０１００】
実施例１  化合物Ｒ’１−Ｈの合成
【化４３】
2021504454.tif 000045
【０１０１】
文献(Ｃｈｏｉ Ｊ Ｙ,Ｂｏｒｃｈ Ｒ Ｆ．Ｈｉｇｈｌｙ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｉｃａｌｌｙ ｅｎｒｉｃｈｅｄ ２−ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌａｚｉｒｉｄｉｎｅｓ ｂｙ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｄｅｓｙｍｍｅｔｒｉｚａｔｉｏｎ．[Ｊ]．Ｏｒｇａｎｉｃ ｌｅｔｔｅｒｓ,２００７,９(２)：２１５−２１８)を参考し、セリノールを原料として、化合物１を調製し、さらに、化合物Ｒ’１−Ｈを調製して、白色固体が得られた。２つのステップの総収率は、４９％である。１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：７．４１−７．３７(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ),７．３３−７．２８(ｔ,Ｊ＝６．９Ｈｚ,２Ｈ),７．２７−７．１９(ｍ,５Ｈ),６．９１−６．８６(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,４Ｈ),５．１６(ｓ,２Ｈ),４．６３−４．５８(ｍ,１Ｈ),４．０５−３．９７(ｍ,１Ｈ),３．７４(ｓ,６Ｈ),３．０４−２．９９(ｍ,２Ｈ),２．９５−２．９０(ｍ,２Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：４１６．３([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１０２】
実施例２  化合物Ｒ’２−Ｈの合成
【化４４】
2021504454.tif 000046
【０１０３】
実施例１の方法を参照し、白色固体である化合物Ｒ’２−Ｈを調製して、収率は、５５％である。１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：７．４２−７．３７(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ),７．３５−７．２９(ｔ,Ｊ＝６．９Ｈｚ,２Ｈ),７．２８−７．１９(ｍ,５Ｈ),６．９２−６．８６(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,４Ｈ),５．１７(ｓ,１Ｈ),４．６３−４．５９(ｍ,１Ｈ),３．７４(ｓ,６Ｈ),３．０５−２．９９(ｍ,２Ｈ),２．９６−２．９０(ｍ,２Ｈ)，２．８８−２．８１(ｍ,４Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：４３０．３([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１０４】
実施例３  化合物Ｒ’３−Ｈの合成
【化４５】
2021504454.tif 000047
【０１０５】
実施例１の方法を参照し、Ｌ−ヒドロキシプロリンメチルエステル塩酸塩を原料として、化合物Ｒ’３−Ｈを調製し、白色固体が得られ、収率は４５％である。１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：７．４２−７．３７(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ),７．３５−７．２９(ｔ,Ｊ＝６．９Ｈｚ,２Ｈ),７．２８−７．１９(ｍ,５Ｈ),６．９２−６．８６(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,４Ｈ),５．１７(ｓ,１Ｈ),４．６３−４．５９(ｍ,１Ｈ),３．７４(ｓ,６Ｈ),３．０５−２．９９(ｍ,３Ｈ),２．９０−２．８６(ｍ,２Ｈ),２．７７−２．７１(ｍ,１Ｈ),１．８８−１．８１(ｍ,２Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：４４２．５([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１０６】
実施例４  化合物Ａ１−Ｉ１の合成
【化４６】
2021504454.tif 000048
【０１０７】
（１）化合物３の合成
１Ｌ丸底フラスコで、δ−バレロラクトン（１００ｇ，１ｍｏｌ）、水酸化ナトリウム（４０ｇ，１ｍｏｌ）、脱イオン水４００ｍＬを加えて混合し、７０°Ｃで６時間反応させ、ＴＬＣで反応が完了したことを監視してから、反応液をスピン乾燥させ、２００ｍＬのトルエンを加えた後、スピン乾燥を行い、１４０ｇの白色固体が得られる。
【０１０８】
（２）化合物４の合成
１Ｌ丸底フラスコで、化合物３（１４０ｇ，１ｍｏｌ）、５００ｍＬの無水アセトン、臭化ベンジル（２０５．２ｇ，１．２ｍｏｌ）、触媒であるテトラブチルアンモニウムブロマイド（１６．２ｇ，０．０５ｍｏｌ）を加え、加熱還流し、ＴＬＣで反応を監視し、２４時間後、反応が完了し、反応溶液を室温まで冷却した後に、減圧でアセトンを除去し、残渣を酢酸エチル５００ｍＬに溶解させ、飽和硫酸水素ナトリウム溶液２００ｍＬ、飽和炭酸水素ナトリウム溶液２００ｍＬ、飽和食塩水２００ＭＬという順で洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥して濃縮させ、シリカゲルカラム（石油エーテル：酢酸エチルＶ：Ｖ=１：１）を用い、分離を行い、透明な油性液体１７５ｇをえて、収率は８４％である。
【０１０９】
（３）化合物５の合成
１Ｌ丸底フラスコで、Ｄ−ガラクトース塩酸塩（１００ｇ，０．４６ｍｏｌ）と４５０ｍＬの無水ピリジンを加え、氷浴の下で、３２５ｍＬの無水酢酸、トリエチルアミン（６４．５ｍＬ、０．４６ｍｏｌ）、およびＤＭＡＰ（２ｇ，０．０１６ｍｏｌ）を徐々に加え、室温で一晩反応させた後に、大量の固体を析出し、吸引濾過し、フィルターケーキを０．５Ｎ ＨＣｌ溶液２００ｍＬでリンスして、白色固体１６２．５ｇが得られ、収率は９０％である。１Ｈ ＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：７．８８(ｄ,Ｊ＝９．２Ｈｚ,１Ｈ),５．６３(ｄ,Ｊ＝８．８Ｈｚ,１Ｈ),５．２６(ｄ,Ｊ＝３．１Ｈｚ,１Ｈ),５．０５(ｄ,Ｊ＝１１．３,３．３Ｈｚ,１Ｈ),４．３６(ｍ,４Ｈ),２．１１(ｓ,３Ｈ),２．０３(ｓ,３Ｈ),１．９８(ｓ,３Ｈ),１．９０(ｓ,３Ｈ),１．７８(ｓ,３Ｈ)．
【０１１０】
（４）化合物６の合成
２５０ｍＬ丸底フラスコで、化合物５（１０ｇ，２５．７ｍｍｏｌ）と１００ｍＬの無水ジクロロメタンを加え、１０分間攪拌した後に、トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート（７ｍＬ，３８．７ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩反応させて、その反応液を重炭酸ナトリウム（７ｇ、７９．５ｍｍｏｌ）の水溶液（２００ｍＬ）にゆっくりと注ぎ、０．５時間撹拌して、有機相を分離させ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮して、７．７８ｇの淡黄色コロイドが得られ、収率は９２％である。
【０１１１】
（５）化合物７の合成
１００ｍＬの丸底フラスコで、化合物６（５ｇ，１５．２ｍｍｏｌ）、化合物４（３．８ｇ，１８．２５ｍｍｏｌ）を５０ｍＬの無水１,２−ジクロロエタンに溶解させ、１０分間撹拌した後に、トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート（０．５５ＭＬ，３ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩反応させ、反応液をジクロロメタンで抽出し、有機相を飽和炭酸水素ナトリウム溶液５０ｍＬで２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮し、シリカゲルカラム（石油エーテル：酢酸エチルＶ：Ｖ=３：２）を用い、分離を行い、透明な油性液体６．９４ｇが得られ、収率は８５％である。１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：７．６９(ｄ,Ｊ＝９．３Ｈｚ,１Ｈ),７．３３−７．１６(ｍ,５Ｈ),５．２８(ｄ,Ｊ＝５．３Ｈｚ,１Ｈ),４．９５(ｓ,２Ｈ),４．９３(ｑ,Ｊ＝４．２Ｈｚ,１Ｈ),４．４０(ｄ,Ｊ＝８．６Ｈｚ,１Ｈ),４．００−３．８６(ｍ,３Ｈ),３．７３−３．５６(ｍ,２Ｈ),３．３６−３．２１(ｍ,１Ｈ),２．５３(ｔ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,２Ｈ),２．１１(ｓ,３Ｈ),１．８９(ｓ,３Ｈ),１．８３(ｓ,３Ｈ),１．６５(ｓ,３Ｈ),１．５９−１．３６(ｍ,４Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：５６０．２([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１１２】
（６）化合物Ａ１−Ｉ１の合成
５０ｍＬ丸底フラスコで、化合物７（３．３ｇ，６．１ｍｍｍｏｌ）、Ｐｄ／Ｃ（０．３３ｇ，１０％）を５ｍＬのメタノールと２０ｍＬの酢酸エチルに溶解させ、水素バルーンを反応液に導入して、反応液を珪藻土で濾過し、珪藻土をメタノールでリンスし、濾液を減圧濃縮してスピン乾燥し、２．８ｇの白色固体が得られ、収率は９５．５％である。１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：１１．９８(ｓ,１Ｈ),７．７９−７．７５(ｄ,Ｊ＝８．９Ｈｚ,１Ｈ),５．２０(ｓ,１Ｈ),５．０−４．９５(ｑ,Ｊ＝４．２Ｈｚ,１Ｈ),４．４６−４．５１(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ),４．１５−４．０７(ｍ,３Ｈ),３．８９−３．７９(ｍ,１Ｈ),３．８０−３．６９(ｍ,１Ｈ),３．４６−３．３６(ｍ,１Ｈ)，２．２２−２．１４(ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ)，２．１５(ｓ，３Ｈ)，２．００(ｓ，３Ｈ)，１．９５(ｓ，３Ｈ)，１．８７(ｓ，３Ｈ)，１．５９−１．４２(ｍ，４Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：４７０．５([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１１３】
実施例５  化合物Ａ１−Ｉ２の合成
【化４７】
2021504454.tif 000049
【０１１４】
（１）化合物８の合成
１００ｍＬ丸底フラスコで、化合物６（５ｇ，１５．２ｍｍｏｌ）、１０−ウンデセノール（３．１ｇ，１８．２４ｍｍｏｌ）を無水ジクロロメタン５０ｍＬに溶解させ、１０分間撹拌した後に、トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート（０．５５ｍＬ、３．０ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩反応させ、反応液をジクロロメタンで抽出し、有機相を飽和重炭酸ナトリウム溶液５０ｍＬで２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮し、シリカゲルカラム（石油エーテル：酢酸エチルＶ：Ｖ＝３：２）を用い、分離を行い、６．５９ｇの白色固体が得られ、収率は８７％である。１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：７．８２(ｄ,Ｊ＝３．３Ｈｚ,１Ｈ),５．８６−５．７３(ｍ,１Ｈ),５．２２(ｓ,１Ｈ),５．０２−４．９(ｍ,３Ｈ),４．５−４．９８(ｓ,Ｊ＝３．５Ｈｚ,１Ｈ),４．０８−３．９９(ｍ,３Ｈ),３．９−３．８８(ｍ,１Ｈ),３．７３−３．６５(ｍ,１Ｈ),３．４８−３．３８(ｍ,１Ｈ),２．１２(ｓ,３Ｈ),２．０５−２．０１(ｍ,２Ｈ),２．００(ｓ,３Ｈ),１．８８(ｓ,３Ｈ),１．６６(ｓ,３Ｈ),１．５−１．４(ｍ,２Ｈ),１．３９−１．３(ｍ,２Ｈ),１．２９−１．１９(ｍ,１０Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：５２２．４([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１１５】
（２）化合物Ａ１−Ｉ２の合成
１００ｍＬの丸底フラスコで、化合物８（４ｇ，８．０２ｍｍｏｌ）、５０ｍＬのジクロロメタン、５０ｍＬのアセトニトリル、７０ｍＬの脱イオン水を加え、ＮａＩＯ４（６．８６ｇ、３２．１ｍｍｏｌ）をバッチに分けて加え、常温で４８時間反応し、ＴＬＣで反応が完了したことを監視してから、反応液に脱イオン水１００ｍＬを加え、ジクロロメタン（５０ｍＬ×３）で３回抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮してスピン乾燥させ、４．１ｇの淡褐色コロイド状生成物が得られ、収率は９９％である。１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：１１．９９(ｓ,１Ｈ),７．８２(ｄ,Ｊ＝３．３Ｈｚ,１Ｈ),５．２２(ｓ,１Ｈ),５．０２−４．９(ｍ,１Ｈ),４．５−４．９８(ｓ,Ｊ＝３．５Ｈｚ,１Ｈ),４．０８−３．９９(ｍ,３Ｈ),３．９−３．８８(ｍ,１Ｈ),３．７３−３．６５(ｍ,１Ｈ),３．４８−３．３８(ｍ,１Ｈ),２．１２(ｓ,３Ｈ),２．０５−２．０１(ｍ,２Ｈ),２．００(ｓ,３Ｈ),１．８８(ｓ,３Ｈ),１．６６(ｓ,３Ｈ),１．５−１．４(ｍ,２Ｈ),１．３９−１．３(ｍ,２Ｈ),１．２９−１．１９(ｍ,１０Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：５４０．２６([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１１６】
実施例６  化合物Ａ２−Ｉ１の合成
【化４８】
2021504454.tif 000050
【０１１７】
（１）化合物９の合成
化合物９は文献［２］Ｈｕｄｓｏｎ,Ｃ．Ｓ．；Ｊｏｈｎｓｏｎ,Ｊ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９１５,３７,１２７０−１２７５を参照して合成されたものである。
【０１１８】
Ｈ ＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：５．２０(ｓ,２Ｈ),４．９５(ｑ,Ｊ＝４．２Ｈｚ,２Ｈ),４．５１(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ),４．４６(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ)，４．１５−３．９７(ｍ,６Ｈ),３．８９−３．７９(ｍ,２Ｈ),２．２３(ｓ,３Ｈ)，２．１５(ｓ,６Ｈ)，２．００(ｓ,６Ｈ)，１．９５(ｓ,６Ｈ)，１．８７(ｓ,３Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：７０１．６([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１１９】
（２）化合物１０の合成
５００ｍＬ丸底フラスコで、化合物９（２０ｇ，２９．５ｍｍｏｌ）、化合物４（９．２ｇ，４４．３ｍｍｏｌ）を２００ｍＬの無水ジクロロメタンに溶解させ、ＢＦ３−ＯＥｔ２（１４．８ｍＬ）を氷浴で滴下し、氷浴中で２４時間反応し、ＴＬＣで反応が完了したことを監視した。珪藻土をろ過し、ろ液を５００ｍＬの酢酸エチルに溶解し、２００ｍＬの飽和重炭酸ナトリウム溶液と２００ｍＬの飽和食塩水という順で洗浄した。有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧濃縮し、シリカゲルカラム（石油エーテル：酢酸エチルＶ：Ｖ=３：２）を用い、分離を行い、１７．０６ｇの白色固体が得られ、収率は７０％である。ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：８４９．２６([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１２０】
（３）化合物Ａ２−Ｉ１の合成
１００ｍＬの丸底フラスコで、化合物１０（１０ｇ，１２．１ｍｍｏｌ）、Ｐｄ／Ｃ（１ｇ，１０％）を１０ｍＬのメタノールと５０ｍＬの酢酸エチルに溶解させ、空気を窒素で置換し、水素バルーンを導入して、室温で一晩反応させ、反応液を珪藻土でろ過し、珪藻土をメタノールでリンスし、ろ液を減圧下でスピン乾燥して、８．５ｇの白色固体が得られ、収率は９５．５％である。Ｈ ＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：１１．９８(ｓ,１Ｈ),５．２０(ｓ,２Ｈ),４．９５(ｑ,Ｊ＝４．２Ｈｚ,２Ｈ),４．５１(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ),４．４６(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ),４．１５−３．９７(ｍ,６Ｈ),３．８９−３．７９(ｍ,２Ｈ),３．８０−３．６９(ｍ,１Ｈ),３．４６−３．３６(ｍ,１Ｈ),２．２２−２．１４(ｔ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ),２．１５(ｓ,６Ｈ),２．００(ｓ,６Ｈ),１．９５(ｓ,６Ｈ),１．８７(ｓ,３Ｈ),１．５９−１．４２(ｍ,４Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：７５９．２６([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１２１】
実施例７化合物Ａ２−Ｉ２の合成
【化４９】
2021504454.tif 000051
【０１２２】
（１）化合物１１の合成
５００ｍＬの丸底フラスコで、化合物９（２０ｇ，２９．５ｍｍｏｌ）と１０−ウンデセノール（６ｇ，３５．４ｍｍｏｌ）を２００ｍＬの無水ＤＣＭに溶解させ、氷浴でＢＦ３−ＯＥｔ２（１４．８ｍＬ）を滴下し、氷浴中で２４時間反応して、ＴＬＣで反応が完了したことを監視した。珪藻土でろ過し、ろ液を５００ｍＬの酢酸エチルに溶解させ、２００ｍＬの飽和重炭酸ナトリウム溶液と２００ｍＬの飽和食塩水という順で洗浄した。有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧濃縮し、シリカゲルカラム（石油エーテル：酢酸エチルＶ：Ｖ=３：２）を用い、分離して、１９．５ｇの白色固体が得られ、収率は８３．９％である。ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：８１１．２５([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１２３】
（２）化合物Ａ２−Ｉ２の合成
化合物１１を原料として、Ａ１−Ｉ２を参照して合成した。収率は、８７％である。１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：１１．８２(ｓ,１Ｈ),５．８６−５．７３(ｍ,１Ｈ),５．２２(ｓ,１Ｈ),５．２−４．９(ｍ,６Ｈ),４．５−４．９８(ｓ,Ｊ＝３．５Ｈｚ,２Ｈ),４．０８−３．９９(ｍ,３Ｈ),３．９−３．８８(ｍ,２Ｈ),３．７３−３．６５(ｍ,２Ｈ),３．４８−３．３８(ｍ,１Ｈ),２．１２(ｓ,６Ｈ),２．０５−２．０１(ｍ,２Ｈ),２．００(ｓ,６Ｈ),１．８８(ｓ,６Ｈ),１．６６(ｓ,３Ｈ),１．５−１．４(ｍ,２Ｈ),１．３９−１．３(ｍ,２Ｈ),１．２９−１．１９(ｍ,８Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：８２９．７([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１２４】
実施例８化合物Ａ３−Ｉ１の合成
【化５０】
2021504454.tif 000052
【０１２５】
（１）化合物１２の合成
化合物５の合成を参照した。白色固体で、収率は９１％である。１Ｈ ＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ： ５．６３(ｄ,Ｊ＝８．８Ｈｚ,１Ｈ),５．２６(ｄ,Ｊ＝３．１Ｈｚ,１Ｈ),５．０５(ｄ,Ｊ＝１１．３,３．３Ｈｚ,１Ｈ),４．３６(ｍ,４Ｈ),２．１１(ｓ,３Ｈ),２．０３(ｓ,３Ｈ),１．９８(ｓ,３Ｈ),１．９０(ｓ,３Ｈ),１．７８(ｓ,３Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：３９１．２１([Ｍ＋１]＋)．
【０１２６】
（２）化合物１３の合成
化合物１２を原料として、化合物１０の合成を参照した。透明な油性液体で、収率は８６％である。
【０１２７】
１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：７．３３−７．１６(ｍ,５Ｈ),５．２８(ｄ,Ｊ＝５．３Ｈｚ,１Ｈ),４．９５(ｓ,２Ｈ),４．９３(ｑ,Ｊ＝４．２Ｈｚ,１Ｈ),４．４０(ｄ,Ｊ＝８．６Ｈｚ,１Ｈ),４．００−３．８６(ｍ,３Ｈ),３．７３−３．５６(ｍ,１Ｈ),３．３６−３．２１(ｍ,２Ｈ),２．５３(ｔ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,２Ｈ),２．１１(ｓ,３Ｈ),１．８９(ｓ,３Ｈ),１．８３(ｓ,３Ｈ),１．６５(ｓ,３Ｈ),１．５９−１．３６(ｍ,４Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：５６１．２([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１２８】
（３）化合物Ａ３−Ｉ１の合成
化合物１３を原料として、化合物Ａ１−Ｉ１の合成を参照した。白色固体で、収率９３．５％である。１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：１１．９８(ｓ,１Ｈ),５．２０(ｓ,１Ｈ),４．９５(ｑ,Ｊ＝４．２Ｈｚ,１Ｈ),４．５１(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ),４．１５−３．９７(ｍ,３Ｈ),３．８９−３．７９(ｍ,１Ｈ),３．８０−３．６９(ｍ,１Ｈ),３．４６−３．３６(ｍ,１Ｈ)，２．２２−２．１４(ｔ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ)，２．１５(ｓ,３Ｈ)，２．００(ｓ,３Ｈ)，１．９５(ｓ,３Ｈ)，１．８７(ｓ,３Ｈ)，１．５９−１．４２(ｍ,４Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：４７１．５([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１２９】
実施例９  化合物Ａ３−Ｉ２の合成
【化５１】
2021504454.tif 000053
【０１３０】
（１）化合物１４の合成
化合物１２を原料として、化合物１１の合成を参照した。白色固体で、収率は８８％である。１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：５．８６−５．７３(ｍ,１Ｈ),５．２２(ｓ,１Ｈ),５．２−４．９(ｍ,３Ｈ),４．５−４．９８(ｓ,Ｊ＝３．５Ｈｚ,１Ｈ),４．０８−３．９９(ｍ,３Ｈ),３．９−３．８８(ｍ,１Ｈ),３．７３−３．６５(ｍ,１Ｈ),３．４８−３．３８(ｍ,１Ｈ),２．１２(ｓ,３Ｈ),２．０５−２．０１(ｍ,２Ｈ),２．００(ｓ,３Ｈ),１．８８(ｓ,３Ｈ),１．６６(ｓ,３Ｈ),１．５−１．４(ｍ,２Ｈ),１．３９−１．３(ｍ,２Ｈ),１．２９−１．１９(ｍ,１０Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：５２３．５([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１３１】
（２）化合物Ａ３−Ｉ２の合成
化合物１４を原料として、化合物Ａ１−Ｉ２の合成を参照した。淡褐色コロイド状生成物で、収率は９７％である。１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：１１．９９(ｓ,１Ｈ),５．２２(ｓ,１Ｈ),５．０２−４．９(ｍ,１Ｈ),４．５−４．９８(ｓ,Ｊ＝３．５Ｈｚ,１Ｈ),４．０８−３．９９(ｍ,３Ｈ),３．９−３．８８(ｍ,１Ｈ),３．７３−３．６５(ｍ,１Ｈ),３．４８−３．３８(ｍ,１Ｈ),２．１２(ｓ,３Ｈ),２．０５−２．０１(ｍ,２Ｈ),２．００(ｓ,３Ｈ),１．８８(ｓ,３Ｈ),１．６６(ｓ,３Ｈ),１．５−１．４(ｍ,２Ｈ),１．３９−１．３(ｍ,２Ｈ),１．２９−１．１９(ｍ,１０Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：５４１．３([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１３２】
実施例１０  化合物Ａ１−ＩＶ１の合成
【化５２】
2021504454.tif 000054
【０１３３】
（１）化合物１５の合成
化合物６を原料として、化合物８の合成を参照した。ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：４８４．２([Ｍ＋１]＋)．
【０１３４】
（２）化合物Ａ１−ＩＶ１の合成
化合物１５を原料として、化合物Ａ１−Ｉ２の合成を参照した。１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：１１．８８(ｓ,１Ｈ),７．７７−７．７３(ｄ,Ｊ＝８．９Ｈｚ,１Ｈ),５．２１(ｓ,１Ｈ),５．０−４．９６(ｑ,Ｊ＝４．２Ｈｚ,１Ｈ),４．４５−４．５１(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ),４．１２−４．０７(ｍ,３Ｈ),３．８８−３．７８(ｍ,１Ｈ),３．７２−３．６８(ｍ，２Ｈ)，３．６２−３．５８(ｍ，２Ｈ)，３．５６−３．４６(ｍ,４Ｈ)，２．１５(ｓ，３Ｈ)，２．００(ｓ，３Ｈ)，１．９５(ｓ，３Ｈ)，１．８７(ｓ，３Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：５０２．６([Ｍ＋１]＋)．
【０１３５】
実施例１１  化合物Ａ１−Ｉ１−Ｒ１の合成
【化５３】
2021504454.tif 000055
【０１３６】
（１）化合物１６の合成
２５０ｍＬ丸底フラスコに、化合物Ａ１−Ｉ１（１０ｇ，２２．３５ｍｍｏｌ）、１−エチル−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ．ＨＣＬ）（５．１４ｇ，２６．８２ｍｍｏｌ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（２．８３ｇ，２４．５９ｍｍｏｌ）、１００ｍＬのジクロロメタンを加えた。反応物を室温で０．５時間撹拌した後に、化合物Ｒ１−Ｈ（８．７９ｇ，２２．３５ｍｍｏｌ）を加え、ＴＬＣで反応を監視し、４時間後に反応が完了した。反応液を飽和炭酸水素ナトリウム溶液５０ｍＬおよび飽和食塩水５０ｍＬで順次に洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥して濃縮し、シリカゲルカラム（ジクロロメタン：メタノールＶ：Ｖ＝２０：１）を用い分離を行い、１５．８ｇの白色固体が得られた。収率は８６％である。ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：８４５．２([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１３７】
（２）化合物Ａ１−Ｉ１−Ｒ１の合成
２５０ｍＬの２つ口フラスコに、化合物１６（５ｇ，６．０８ｍｍｏｌ）を加え、窒素で保護し、１００ｍＬの無水アセトニトリルとビス(ジイソプロピルアミン)(２−シアノエポキシ)ホスフィン（３．６６ｇ，１２．１６ｍｍｏｌ）を加え、攪拌しながらエチルチオテトラゾールのアセトニトリル溶液（２．５Ｍ）（１．２２ｍＬ，３．０４ｍｍｏｌ）をゆっくりと滴下し、０．５時間反応させ、ＴＬＣで反応を監視し、０．５時間後に反応が完了した。減圧濃縮によりアセトニトリルを除去し、ジクロロメタン１００ｍＬを加えて溶解し、飽和食塩水１００ｍＬで洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、シリカゲルカラム（石油エーテル：酢酸エチルＶ：Ｖ=１：３）を用い分離して、５．１６ｇの白色固体が得られ、収率は８３％である。１Ｈ ＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：７．８４−７．７９(ｄ,Ｊ＝８．９Ｈｚ,１Ｈ),７．６５−７．６０(ｄ,Ｊ＝８．９Ｈｚ,１Ｈ),７．４１−７．３７(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ),７．３３−７．２８(ｔ,Ｊ＝６．９Ｈｚ,２Ｈ),７．２７−７．１９(ｍ,５Ｈ),６．９１−６．８６(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,４Ｈ),５．２０(ｓ,１Ｈ),５．０−４．９５(ｑ,Ｊ＝４．２Ｈｚ,１Ｈ),４．５１−４．４６(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ),４．１５−４．０６(ｍ,３Ｈ),４．０５−３．９６(ｍ,１Ｈ),３．８４−３．８０(ｍ,２Ｈ),３．８９−３．７９(ｍ,１Ｈ),３．７４(ｓ,６Ｈ),３．７１−３．６９(ｍ,１Ｈ),３．４６−３．３６(ｍ,１Ｈ)，３．０４−２．９９(ｍ,２Ｈ),２．９５−２．９０(ｍ,２Ｈ)，２．８８−２．８４(ｍ,２Ｈ),２．５９−２．５４(ｍ,２Ｈ),２．２２−２．１４(ｔ,Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ)，２．１５(ｓ,３Ｈ)，２．００(ｓ,３Ｈ)，１．９５(ｓ,３Ｈ)，１．８７(ｓ,３Ｈ)，１．７７(ｓ,１２Ｈ)，１．５９−１．４２(ｍ,４Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：１０４５．５([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１３８】
実施例１２  化合物Ａ１−Ｉ１−Ｒ２の合成
【化５４】
2021504454.tif 000056
【０１３９】
（１）化合物１７の合成
化合物Ａ１−Ｉ１を原料として、化合物１６の合成を参照した。白色固体で、収率は８２．５％である。ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：８５９．２([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１４０】
（２）化合物Ａ１−Ｉ１−Ｒ２の合成
化合物１７を原料として、化合物Ａ１−Ｉ１−Ｒ１の合成を参照した。白色固体で、収率は、８４．２％である。１Ｈ ＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：７．８３−７．７９(ｄ,Ｊ＝８．８Ｈｚ,１Ｈ),７．４２−７．３７(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ),７．３３−７．２８(ｔ,Ｊ＝６．９Ｈｚ,２Ｈ),７．２７−７．１９(ｍ,５Ｈ),６．９１−６．８６(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,４Ｈ),５．２０(ｓ,１Ｈ),５．０−４．９５(q,Ｊ＝４．２Ｈｚ,１Ｈ),４．５１−４．４６(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ),４．１５−３．９７(ｍ,３Ｈ),４．０５−３．９６(ｍ,１Ｈ),３．８４−３．８０(ｍ,２Ｈ),３．８９−３．７９(ｍ,１Ｈ),３．７４(ｓ,６Ｈ),３．７１−３．６９(ｍ,１Ｈ),３．４６−３．３６(ｍ,１Ｈ)，３．０４−２．９９(ｍ,２Ｈ),２．９８−２．９５(ｍ,２Ｈ)，２．８９−２．９３(ｍ,４Ｈ)，２．８８−２．８４(ｍ,２Ｈ),２．６０−２．５５(ｍ,２Ｈ),２．２２−２．１４(ｔ,Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ)，２．１５(ｓ,３Ｈ)，２．００(ｓ,３Ｈ)，１．９５(ｓ,３Ｈ)，１．８７(ｓ,３Ｈ)，１．７７(ｓ,１２Ｈ),１．５９−１．４２(ｍ,４Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：１０５９．６([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１４１】
実施例１３  化合物Ａ１−Ｉ１−Ｒ３の合成
【化５５】
2021504454.tif 000057
【０１４２】
（１）化合物１８の合成
化合物Ａ１−Ｉ１を原料として、化合物１６の合成を参照した。白色固体で、収率は８６％である。ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：８７１．２([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１４３】
（２）化合物Ａ１−Ｉ１−Ｒ３の合成
化合物１８を原料として、化合物Ａ１−Ｉ１−Ｒ１の合成を参照した。白色固体で、収率は、８４．２％である。
【０１４４】
１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：７．７３−７．７０(ｄ,Ｊ＝７．９Ｈｚ,１Ｈ),７．４２−７．３７(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ),７．３５−７．２９(ｔ,Ｊ＝６．９Ｈｚ,２Ｈ),７．２８−７．１９(ｍ,５Ｈ),６．９２−６．８６(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,４Ｈ),５．２０(ｓ,１Ｈ),５．０−４．９５(q,Ｊ＝４．２Ｈｚ,１Ｈ),４．５１−４．４６(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ),４．１５−３．９７(ｍ,３Ｈ),３．８９−３．７９(ｍ,３Ｈ),３．７４(ｓ,６Ｈ),３．７０−３．６７(ｍ,１Ｈ),３．４６−３．３６(ｍ,１Ｈ),３．０５−２．９９(ｍ,３Ｈ),２．９０−２．８６(ｍ,３Ｈ),２．７７−２．７１(ｍ,１Ｈ),２．６０−２．５５(ｍ,２Ｈ),２．２２−２．１４(ｔ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ),２．１５(ｓ,３Ｈ),２．００(ｓ,３Ｈ),１．９５(ｓ,３Ｈ),１．８７(ｓ,３Ｈ),１．８８−１．８１(ｍ,２Ｈ)，１．７７(ｓ,１２Ｈ),１．５９−１．４２(ｍ,４Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：１０７１．４([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１４５】
実施例１４  化合物Ａ１−Ｉ２−Ｒ１の合成
【化５６】
2021504454.tif 000058
【０１４６】
（１）化合物１９の合成
化合物Ａ１−Ｉ２を原料として、化合物１６の合成を参照した。白色固体で、収率は８５．６％である。ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：９１５．５([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１４７】
（２）化合物Ａ１−Ｉ２−Ｒ１の合成
化合物１９を原料として、化合物Ａ１−Ｉ１−Ｒ１の合成を参照した。白色固体で、収率は、８２．１％である。１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：７．８２−７．７８(ｄ,Ｊ＝７．３Ｈｚ,１Ｈ),７．６９−７．６３(ｄ,Ｊ＝７．３Ｈｚ,１Ｈ),７．４１−７．３７(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ),７．３３−７．２８(ｔ,Ｊ＝６．９Ｈｚ,２Ｈ),７．２７−７．１９(ｍ,５Ｈ),６．９１−６．８６(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,４Ｈ),５．２２(ｓ,１Ｈ),５．０２−４．９(ｍ,１Ｈ),４．５−４．９８(ｓ,Ｊ＝３．５Ｈｚ,１Ｈ),４．０８−３．９９(ｍ,３Ｈ),４．０５−３．９７(ｍ,１Ｈ),３．９−３．８８(ｍ,１Ｈ),３．８４−３．８０(ｍ,２Ｈ),３．７４(ｓ,６Ｈ),３．７３−３．６５(ｍ,１Ｈ),３．４８−３．３８(ｍ,１Ｈ),３．０４−２．９９(ｍ,２Ｈ),２．９５−２．９０(ｍ,２Ｈ)，２．８８−２．８４(ｍ,２Ｈ),２．６１−２．５５(ｍ,２Ｈ),２．１２(ｓ,３Ｈ),２．０５−２．０１(ｍ,２Ｈ),２．００(ｓ,３Ｈ),１．８８(ｓ,３Ｈ),１．７７(ｓ,１２Ｈ)，１．６６(ｓ,３Ｈ),１．５−１．４(ｍ,２Ｈ),１．３９−１．３(ｍ,２Ｈ),１．２９−１．１９(ｍ,１０Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：１１１５．２([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１４８】
実施例１５  化合物Ａ１−Ｉ２−Ｒ２の合成
【化５７】
2021504454.tif 000059
【０１４９】
（１）化合物２０の合成
化合物Ａ１−Ｉ２を原料として、化合物１６の合成を参照した。白色固体で、収率は８４．２％である。ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：９２９．３([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１５０】
（２）化合物Ａ１−Ｉ２−Ｒ２の合成
化合物２０を原料として、化合物Ａ１−Ｉ１−Ｒ１の合成を参照した。白色固体で、収率は、８１．１％である。１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：７．８３−７．７７(ｄ,Ｊ＝７．３Ｈｚ,１Ｈ),７．４１−７．３７(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ),７．３３−７．２８(ｔ,Ｊ＝６．９Ｈｚ,２Ｈ),７．２７−７．１９(ｍ,５Ｈ),６．９１−６．８６(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,４Ｈ),５．２２(ｓ,１Ｈ),５．０２−４．９(ｍ,１Ｈ),４．５−４．９８(ｓ,Ｊ＝３．５Ｈｚ,１Ｈ),４．０８−３．９９(ｍ,３Ｈ),３．９−３．８８(ｍ,１Ｈ),３．８４−３．８０(ｍ,２Ｈ),３．７４(ｓ,６Ｈ),３．７３−３．６５(ｍ,１Ｈ),３．４８−３．３８(ｍ,１Ｈ),３．１５−３．１１(ｍ,４Ｈ),３．０４−２．９９(ｍ,２Ｈ),２．９５−２．９０(ｍ,２Ｈ)，２．８８−２．８４(ｍ,２Ｈ),２．６１−２．５５(ｍ,２Ｈ),２．１２(ｓ,３Ｈ),２．０５−２．０１(ｍ,２Ｈ),２．００(ｓ,３Ｈ),１．８８(ｓ,３Ｈ),１．７７(ｓ,１２Ｈ)，１．６６(ｓ,３Ｈ),１．５−１．４(ｍ,２Ｈ),１．３９−１．３(ｍ,２Ｈ),１．２９−１．１９(ｍ,１０Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：１１２９．４([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１５１】
実施例１６  化合物Ａ１−Ｉ２−Ｒ３の合成
【化５８】
2021504454.tif 000060
【０１５２】
（１）化合物２１の合成
化合物Ａ１−Ｉ２を原料として、化合物１６の合成を参照した。白色固体で、収率は８０．５％である。ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：９４１．１([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１５３】
（２）化合物Ａ１−Ｉ２−Ｒ３の合成
化合物２１を原料として、化合物Ａ１−Ｉ１−Ｒ１の合成を参照した。白色固体で、収率は、８１．１％である。１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：７．８２(ｄ,Ｊ＝３．３Ｈｚ,１Ｈ),７．４２−７．３７(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ),７．３５−７．２９(ｔ,Ｊ＝６．９Ｈｚ,２Ｈ),７．２８−７．１９(ｍ,５Ｈ),６．９２−６．８６(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,４Ｈ),５．２２(ｓ,１Ｈ),５．０２−４．９(ｍ,１Ｈ),４．５−４．９８(ｓ,Ｊ＝３．５Ｈｚ,１Ｈ),４．０８−３．９９(ｍ,３Ｈ),３．９−３．８８(ｍ,１Ｈ),３．８４−３．８０(ｍ,２Ｈ),３．７６(ｓ,６Ｈ),３．７３−３．６５(ｍ,１Ｈ),３．４８−３．３８(ｍ,１Ｈ),３．０５−２．９９(ｍ,３Ｈ),２．９０−２．８４(ｍ,４Ｈ),２．７７−２．７１(ｍ,１Ｈ),２．６２−２．５６(ｍ,２Ｈ),２．１２(ｓ,３Ｈ),２．０５−２．０１(ｍ,２Ｈ),２．００(ｓ,３Ｈ),１．８８(ｓ,３Ｈ),１．８７−１．８１(ｍ,２Ｈ)，１．７７(ｓ,１２Ｈ)，１．６６(ｓ,３Ｈ),１．５−１．４(ｍ,２Ｈ),１．３９−１．３(ｍ,２Ｈ),１．２９−１．１９(ｍ,１０Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：１１４１．２([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１５４】
実施例１７  化合物Ａ２−Ｉ１−Ｒ１の合成
【化５９】
2021504454.tif 000061
【０１５５】
（１）化合物２２の合成
化合物Ａ２−Ｉ１を原料として、化合物１６の合成を参照した。白色固体で、収率は８０．４％である。ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：１１３４．７([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１５６】
（２）化合物Ａ２−Ｉ１−Ｒ１の合成
化合物２２を原料として、化合物Ａ１−Ｉ１−Ｒ１の合成を参照した。白色固体で、収率は、８１．３％である。Ｈ ＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：７．６１−７．５７(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ),７．４１−７．３７(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ),７．３３−７．２８(ｔ,Ｊ＝６．９Ｈｚ,２Ｈ),７．２７−７．１９(ｍ,５Ｈ),６．９１−６．８６(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,４Ｈ),５．２０(ｓ,２Ｈ),４．９５(q,Ｊ＝４．２Ｈｚ,２Ｈ),４．５１(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ),４．４６(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ),４．１５−３．９７(ｍ,６Ｈ),４．０５−３．９７(ｍ,１Ｈ),３．８９−３．７９(ｍ,４Ｈ),３．７５(ｓ,６Ｈ),３．８０−３．６９(ｍ,１Ｈ),３．４６−３．３６(ｍ,１Ｈ),３．０４−２．９９(ｍ,２Ｈ),２．９５−２．９０(ｍ,２Ｈ),２．８８−２．８４(ｍ,２Ｈ),２．６１−２．５５(ｍ,２Ｈ)，２．２２−２．１４(ｔ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ)，２．１５(ｓ,６Ｈ)，２．００(ｓ,６Ｈ)，１．９５(ｓ，６Ｈ)，１．８７(ｓ,３Ｈ)，１．７７(ｓ,１２Ｈ)，１．５９−１．４２(ｍ,４Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：１３３４．２([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１５７】
実施例１８  化合物Ａ２−Ｉ１−Ｒ２の合成
【化６０】
2021504454.tif 000062
【０１５８】
（１）化合物２３の合成
化合物Ａ２−Ｉ１を原料として、化合物１６の合成を参照した。白色固体で、収率は８６．１％である。ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：１１４８．３([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１５９】
（２）化合物Ａ２−Ｉ１−Ｒ２の合成
化合物２３を原料として、化合物Ａ１−Ｉ１−Ｒ１の合成を参照した。白色固体で、収率は、８２．３％である。Ｈ ＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：７．４０−７．３６(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ),７．３３−７．２８(ｔ,Ｊ＝６．９Ｈｚ,２Ｈ),７．２７−７．１９(ｍ,５Ｈ),６．９１−６．８６(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,４Ｈ),５．２０(ｓ,２Ｈ),４．９５(q,Ｊ＝４．２Ｈｚ,２Ｈ),４．５１(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ),４．４６(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ),４．１５−３．９７(ｍ,６Ｈ),３．８９−３．７９(ｍ,４Ｈ),３．７５(ｓ,６Ｈ),３．８０−３．６９(ｍ,１Ｈ),３．４６−３．４１(ｍ,４Ｈ),３．４６−３．３６(ｍ,１Ｈ),３．０４−２．９９(ｍ,２Ｈ),２．９５−２．９０(ｍ,２Ｈ),２．８８−２．８４(ｍ,２Ｈ),２．６１−２．５５(ｍ,２Ｈ)，２．２２−２．１４(ｔ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ)，２．１５(ｓ,６Ｈ)，２．００(ｓ,６Ｈ)，１．９５(ｓ，６Ｈ)，１．８７(ｓ,３Ｈ)，１．７７(ｓ,１２Ｈ)，１．５９−１．４２(ｍ,４Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：１３４８．２([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１６０】
実施例１９  化合物Ａ２−Ｉ１−Ｒ３の合成
【化６１】
2021504454.tif 000063
【０１６１】
（１）化合物２４の合成
化合物Ａ２−Ｉ１を原料として、化合物１６の合成を参照した。白色固体で、収率は８２．９％である。ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：１１６０．５([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１６２】
（２）化合物Ａ２−Ｉ１−Ｒ３の合成
化合物２４を原料として、化合物Ａ１−Ｉ１−Ｒ１の合成を参照した。白色固体で、収率は、８２．３％である。Ｈ ＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：７．４４−７．３９(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ),７．３６−７．３０(ｔ,Ｊ＝６．９Ｈｚ,２Ｈ),７．２８−７．１９(ｍ,５Ｈ),６．９２−６．８６(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,４Ｈ),５．２０(ｓ,２Ｈ),４．９５(q,Ｊ＝４．２Ｈｚ,２Ｈ),４．５１(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ),４．４６(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ),４．１５−３．９７(ｍ,６Ｈ),３．８９−３．８２(ｍ,４Ｈ),３．８０−３．７６(ｍ,１Ｈ),３．７４(ｓ,６Ｈ),３．４６−３．３６(ｍ,１Ｈ)，３．０５−２．９９(ｍ,３Ｈ)，２．９０−２．８６(ｍ,２Ｈ)，２．７７−２．７１(ｍ,１Ｈ),２．６１−２．５６(ｍ,２Ｈ)，２．２２−２．１４(ｔ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ)，２．１５(ｓ，６Ｈ)，２．００(ｓ，６Ｈ)，１．９５(ｓ，６Ｈ)，１．８７(ｓ,３Ｈ)，１．８６−１．８１(ｍ,２Ｈ)，１．７７(ｓ,１２Ｈ)，１．５９−１．４２(ｍ,４Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：１３６０．２６([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１６３】
実施例２０  化合物Ａ２−Ｉ２−Ｒ１の合成
【化６２】
2021504454.tif 000064
【０１６４】
（１）化合物２５の合成
化合物Ａ２−Ｉ２を原料として、化合物１６の合成を参照した。白色固体で、収率は８６．３％である。ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：１２０４．６([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１６５】
（２）化合物Ａ２−Ｉ２−Ｒ１の合成
化合物２５を原料として、化合物Ａ１−Ｉ１−Ｒ１の合成を参照した。白色固体で、収率は、８０．３％である。１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：７．７１−７．６６(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ),７．４１−７．３７(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ),７．３３−７．２８(ｔ,Ｊ＝６．９Ｈｚ,２Ｈ),７．２７−７．１９(ｍ,５Ｈ),６．９１−６．８６(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,４Ｈ),５．８６−５．７３(ｍ,１Ｈ),５．２２(ｓ,１Ｈ),５．２−４．９(ｍ,６Ｈ),４．５−４．９８(ｓ,Ｊ＝３．５Ｈｚ,２Ｈ),４．０８−３．９９(ｍ,４Ｈ),３．９−３．８８(ｍ,２Ｈ),３．８４−３．８０(ｍ,２Ｈ)，３．７５(ｓ,６Ｈ)，３．７３−３．６５(ｍ,２Ｈ),３．４８−３．３８(ｍ,１Ｈ),３．０４−２．９９(ｍ,２Ｈ),２．９５−２．９０(ｍ,２Ｈ)，２．８８−２．８４(ｍ,２Ｈ)，２．５９−２．５５(ｍ,２Ｈ),２．１２(ｓ,６Ｈ),２．０５−２．０１(ｍ,２Ｈ),２．００(ｓ,６Ｈ),１．８８(ｓ,６Ｈ),１．７７(ｓ,１２Ｈ)，１．６６(ｓ,３Ｈ),１．５−１．４(ｍ,２Ｈ),１．３９−１．３(ｍ,２Ｈ),１．２９−１．１９(ｍ,８Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：１４０４．７([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１６６】
実施例２１  化合物Ａ２−Ｉ２−Ｒ２の合成
【化６３】
2021504454.tif 000065
【０１６７】
（１）化合物２６の合成
化合物Ａ２−Ｉ２を原料として、化合物１６の合成を参照した。白色固体で、収率は８７．３％である。ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：１２１８．４([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１６８】
（２）化合物Ａ２−Ｉ２−Ｒ２の合成
化合物２６を原料として、化合物Ａ１−Ｉ１−Ｒ１の合成を参照した。白色固体で、収率は、８４．３％である。１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：７．４１−７．３７(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ),７．３３−７．２８(ｔ,Ｊ＝６．９Ｈｚ,２Ｈ),７．２７−７．１９(ｍ,５Ｈ),６．９１−６．８６(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,４Ｈ),５．８６−５．７３(ｍ,１Ｈ),５．２２(ｓ,１Ｈ),５．２−４．９(ｍ,６Ｈ),４．５−４．９８(ｓ,Ｊ＝３．５Ｈｚ,２Ｈ),３．９−３．８８(ｍ,２Ｈ),３．８４−３．８０(ｍ,２Ｈ)，３．７５(ｓ,６Ｈ)，３．７３−３．６５(ｍ,２Ｈ),３．４８−３．３８(ｍ,１Ｈ),３．３．１６−３．１２(ｍ,４Ｈ),３．０４−２．９９(ｍ,２Ｈ),２．９５−２．９０(ｍ,２Ｈ)，２．８８−２．８４(ｍ,２Ｈ)，２．５９−２．５５(ｍ,２Ｈ),２．１２(ｓ,６Ｈ),２．０５−２．０１(ｍ,２Ｈ),２．００(ｓ,６Ｈ),１．８８(ｓ,６Ｈ),１．７７(ｓ,１２Ｈ)，１．６６(ｓ,３Ｈ),１．５−１．４(ｍ,２Ｈ),１．３９−１．３(ｍ,２Ｈ),１．２９−１．１９(ｍ,８Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：１４１８．７([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１６９】
実施例２２  化合物Ａ２−Ｉ２−Ｒ３の合成
【化６４】
2021504454.tif 000066
【０１７０】
（１）化合物２７の合成
化合物Ａ２−Ｉ２を原料として、化合物１６の合成を参照した。白色固体で、収率は８８．０％である。ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：１２３０．２([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１７１】
（２）化合物Ａ２−Ｉ２−Ｒ３の合成
化合物２７を原料として、化合物Ａ１−Ｉ１−Ｒ１の合成を参照した。白色固体で、収率は、８７．０％である。１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：７．４２−７．３７(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ),７．３５−７．２９(ｔ,Ｊ＝６．９Ｈｚ,２Ｈ)，７．２８−７．１９(ｍ,５Ｈ),６．９２−６．８６(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,４Ｈ)，５．８６−５．７３(ｍ,１Ｈ),５．２２(ｓ,１Ｈ),５．２−４．９(ｍ,６Ｈ),４．５−４．９８(ｓ,Ｊ＝３．５Ｈｚ,２Ｈ),４．０８−３．９９(ｍ,３Ｈ),３．９−３．８８(ｍ,２Ｈ),３．８４−３．８０(ｍ,２Ｈ),３．７４(ｓ,６Ｈ),３．７３−３．６５(ｍ,２Ｈ),３．４８−３．３８(ｍ,１Ｈ),３．０５−２．９９(ｍ,３Ｈ)，２．９０−２．８６(ｍ,４Ｈ)，２．７７−２．７１(ｍ,１Ｈ)，２．６０−２．５６(ｍ,２Ｈ)，２．１２(ｓ,６Ｈ),２．０５−２．０１(ｍ,２Ｈ),２．００(ｓ,６Ｈ),１．８８(ｓ,６Ｈ),１．８６−１．８１(ｍ,２Ｈ)，１．７７(ｓ,１２Ｈ)，１．６６(ｓ,３Ｈ),１．５−１．４(ｍ,２Ｈ),１．３９−１．３(ｍ,２Ｈ),１．２９−１．１９(ｍ,８Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：１４３０．２([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１７２】
実施例２３  化合物Ａ３−Ｉ１−Ｒ１の合成
【化６５】
2021504454.tif 000067
【０１７３】
（１）化合物２８の合成
化合物Ａ３−Ｉ１を原料として、化合物１６の合成を参照した。白色固体で、収率は８８．２％である。ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：８４６．３([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１７４】
（２）化合物Ａ３−Ｉ１−Ｒ１の合成
化合物２８を原料として、化合物Ａ１−Ｉ１−Ｒ１の合成を参照した。白色固体で、収率は、８４．２％である。１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：７．６１−７．５６(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ),７．４１−７．３７(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ),７．３３−７．２８(ｔ,Ｊ＝６．９Ｈｚ,２Ｈ),７．２７−７．１９(ｍ,５Ｈ),６．９１−６．８６(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,４Ｈ),５．２０(ｓ,１Ｈ),４．９５(q,Ｊ＝４．２Ｈｚ,１Ｈ),４．５１(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ),４．１５−３．９７(ｍ,４Ｈ),３．８９−３．７９(ｍ,３Ｈ),３．７５(ｓ,６Ｈ),３．７３−３．６９(ｍ,１Ｈ),３．４６−３．３６(ｍ,１Ｈ),３．０４−２．９９(ｍ,２Ｈ)，２．９５−２．９０(ｍ,２Ｈ)，２．８８−２．８４(ｍ,２Ｈ)，２．５９−２．５４(ｍ,２Ｈ)，２．２２−２．１４(ｔ,Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ)，２．１５(ｓ,３Ｈ)，２．００(ｓ,３Ｈ)，１．９５(ｓ,３Ｈ)，１．８７(ｓ,３Ｈ)，１．７７(ｓ,１２Ｈ)，１．５９−１．４２(ｍ,４Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：１０４６．５([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１７５】
実施例２４  化合物Ａ３−Ｉ１−Ｒ２の合成
【化６６】
2021504454.tif 000068
【０１７６】
（１）化合物２９の合成
化合物Ａ３−Ｉ１を原料として、化合物１６の合成を参照した。白色固体で、収率は８８．９％である。ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：８６０．３([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１７７】
（２）化合物Ａ３−Ｉ１−Ｒ２の合成
化合物２９を原料として、化合物Ａ１−Ｉ１−Ｒ１の合成を参照した。白色固体で、収率は、８４．７％である。１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：７．４１−７．３７(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ),７．３３−７．２８(ｔ,Ｊ＝６．９Ｈｚ,２Ｈ),７．２７−７．１９(ｍ,５Ｈ),６．９１−６．８６(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,４Ｈ),５．２０(ｓ,１Ｈ),４．９５(q,Ｊ＝４．２Ｈｚ,１Ｈ),４．５１(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ),３．８９−３．７９(ｍ,３Ｈ),３．７５(ｓ,６Ｈ),３．７３−３．６９(ｍ,１Ｈ),３．４６−３．３６(ｍ,１Ｈ),３．０４−２．９９(ｍ,２Ｈ)，２．９５−２．９０(ｍ,２Ｈ)，２．８８−２．８４(ｍ,２Ｈ)，２．８２−２．７８(ｍ,４Ｈ)，２．５９−２．５４(ｍ,２Ｈ)，２．２２−２．１４(ｔ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ)，２．１５(ｓ,３Ｈ)，２．００(ｓ,３Ｈ)，１．９５(ｓ,３Ｈ)，１．８７(ｓ,３Ｈ)，１．７７(ｓ,１２Ｈ)，１．５９−１．４２(ｍ,４Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：１０６０．５([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１７８】
実施例２５  化合物Ａ３−Ｉ１−Ｒ３の合成
【化６７】
2021504454.tif 000069
【０１７９】
（１）化合物３０の合成
化合物Ａ３−Ｉ１を原料として、化合物１６の合成を参照した。白色固体で、収率は８４．３％である。ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：８７２．７([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１８０】
（２）化合物Ａ３−Ｉ１−Ｒ３の合成
化合物３０を原料として、化合物Ａ１−Ｉ１−Ｒ１の合成を参照した。白色固体で、収率は、８６．２％である。１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：７．４６−７．３９(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ),７．３７−７．３１(ｔ,Ｊ＝６．９Ｈｚ,２Ｈ),７．２８−７．１９(ｍ,５Ｈ),６．９２−６．８６(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,４Ｈ),５．２０(ｓ,１Ｈ),４．９５(q,Ｊ＝４．２Ｈｚ,１Ｈ),４．５１(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ),４．１５−３．９７(ｍ,３Ｈ),３．８９−３．７９(ｍ,３Ｈ),３．７６(ｓ,６Ｈ),３．７２−３．６８(ｍ,１Ｈ),３．４６−３．３６(ｍ,１Ｈ)，３．０５−２．９９(ｍ,３Ｈ),２．９０−２．８６(ｍ,２Ｈ),２．８８−２．８４(ｍ,２Ｈ)，２．７７−２．７１(ｍ,１Ｈ)，２．５９−２．５４(ｍ,２Ｈ)，２．２２−２．１４(ｔ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ)，２．１５(ｓ,３Ｈ)，２．００(ｓ,３Ｈ)，１．９５(ｓ,３Ｈ)，１．８７(ｓ,３Ｈ)，１．８６−１．８１(ｍ,２Ｈ)，１．７７(ｓ,１２Ｈ)，１．５９−１．４２(ｍ,４Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：１０７２．８([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１８１】
実施例２６  化合物Ａ３−Ｉ２−Ｒ１の合成
【化６８】
2021504454.tif 000070
【０１８２】
（１）化合物３１の合成
化合物Ａ３−Ｉ２を原料として、化合物１６の合成を参照した。白色固体で、収率は８６．２％である。ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：９１６．４([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１８３】
（２）化合物Ａ３−Ｉ２−Ｒ１の合成
化合物３１を原料として、化合物Ａ１−Ｉ１−Ｒ１の合成を参照した。白色固体で、収率は、８５．１％である。１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：７．７５−７．７１(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ),７．４２−７．３９(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ),７．３２−７．２８(ｔ,Ｊ＝６．９Ｈｚ,２Ｈ),７．２７−７．１９(ｍ,５Ｈ),６．９１−６．８６(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,４Ｈ)，５．２２(ｓ,１Ｈ),５．０２−４．９(ｍ,１Ｈ),４．５−４．９８(ｓ,Ｊ＝３．５Ｈｚ,１Ｈ),４．０５−３．９９(ｍ,４Ｈ),３．９−３．８８(ｍ,１Ｈ), ３．８４−３．８０(ｍ,２Ｈ)，３．７６(ｓ,６Ｈ),３．７３−３．６５(ｍ,１Ｈ),３．４８−３．３８(ｍ,１Ｈ),３．０４−２．９９(ｍ,２Ｈ)，２．９５−２．９０(ｍ,２Ｈ)，２．８７−２．８４(ｍ,２Ｈ)，２．５８−２．５４(ｍ,２Ｈ)，２．１２(ｓ,３Ｈ),２．０５−２．０１(ｍ,２Ｈ),２．００(ｓ,３Ｈ),１．８８(ｓ,３Ｈ),１．７７(ｓ,１２Ｈ)，１．６６(ｓ,３Ｈ),１．５−１．４(ｍ,２Ｈ),１．３９−１．３(ｍ,２Ｈ)，１．２９−１．１９(ｍ,１０Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：１１１６．６([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１８４】
実施例２７  化合物Ａ３−Ｉ２−Ｒ２の合成
【化６９】
2021504454.tif 000071
【０１８５】
（１）化合物３２の合成
化合物Ａ３−Ｉ２を原料として、化合物１６の合成を参照した。白色固体で、収率は８２．９％である。ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：９３０．７([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１８６】
（２）化合物Ａ３−Ｉ２−Ｒ２の合成
化合物３２を原料として、化合物Ａ１−Ｉ１−Ｒ１の合成を参照した。白色固体で、収率は、８４．３％である。１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：７．４４−７．３９(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ),７．３２−７．２８(ｔ,Ｊ＝６．９Ｈｚ,２Ｈ),７．２７−７．１９(ｍ,５Ｈ),６．９１−６．８６(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,４Ｈ)，５．２２(ｓ,１Ｈ),５．０２−４．９(ｍ,１Ｈ),４．５−４．９８(ｓ,Ｊ＝３．５Ｈｚ,１Ｈ),３．９−３．８８(ｍ,１Ｈ),３．８４−３．８０(ｍ,２Ｈ)，３．７６(ｓ,６Ｈ),３．７３−３．６５(ｍ,１Ｈ),３．４８−３．３８(ｍ,１Ｈ),３．０４−２．９９(ｍ,２Ｈ)，２．９７−２．９４(ｍ,２Ｈ)，２．９３−２．８８(ｍ,４Ｈ)，２．８７−２．８４(ｍ,２Ｈ)，２．５８−２．５４(ｍ,２Ｈ)，２．１２(ｓ,３Ｈ),２．０５−２．０１(ｍ,２Ｈ),２．００(ｓ,３Ｈ),１．８８(ｓ,３Ｈ),１．７７(ｓ,１２Ｈ)，１．６６(ｓ,３Ｈ),１．５−１．４(ｍ,２Ｈ),１．３９−１．３(ｍ,２Ｈ)，１．２９−１．１９(ｍ,１０Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：１１３０．６([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１８７】
実施例２８  化合物Ａ３−Ｉ２−Ｒ３の合成
【化７０】
2021504454.tif 000072
【０１８８】
（１）化合物３３の合成
化合物Ａ３−Ｉ２を原料として、化合物１６の合成を参照した。白色固体で、収率は８３．８％である。ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：９４２．４([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１８９】
（２）化合物Ａ３−Ｉ２−Ｒ３の合成
化合物３３を原料として、化合物Ａ１−Ｉ１−Ｒ１の合成を参照した。白色固体で、収率は、８５．２％である。１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：７．４６−７．４１(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ),７．３７−７．３１(ｔ,Ｊ＝６．９Ｈｚ, ２Ｈ),７．２８−７．１９(ｍ,５Ｈ),６．９２−６．８６(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,４Ｈ)，５．２２(ｓ,１Ｈ),５．０２−４．９(ｍ,１Ｈ),４．５−４．９８(ｓ,Ｊ＝３．５Ｈｚ,１Ｈ),４．０８−３．９９(ｍ,３Ｈ),３．９−３．８８(ｍ,１Ｈ),３．８４−３．８０(ｍ,２Ｈ)，３．７５(ｓ,６Ｈ),３．７３−３．６５(ｍ,１Ｈ),３．４８−３．３８(ｍ,１Ｈ),３．０５−３．００(ｍ,３Ｈ),２．９１−２．８６(ｍ,２Ｈ)，２．８８−２．８４(ｍ,２Ｈ)，２．７７−２．７１(ｍ,１Ｈ)，２．５９−２．５４(ｍ,２Ｈ)，２．１２(ｓ,３Ｈ),２．０５−２．０１(ｍ,２Ｈ),２．００(ｓ,３Ｈ),１．８８(ｓ,３Ｈ),１．８６−１．８１(ｍ,２Ｈ)，１．７７(ｓ,１２Ｈ)，１．６６(ｓ,３Ｈ),１．５−１．４(ｍ,２Ｈ)，１．３９−１．３(ｍ,２Ｈ)，１．２９−１．１９(ｍ,１０Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：１１４２．５([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１９０】
実施例２９  化合物Ａ１−ＩＩ１−Ｒ１の合成
【化７１】
2021504454.tif 000073
【０１９１】
（１）化合物３４の合成
２５０ｍＬ丸底フラスコに、化合物Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−６−アミノヘキサン酸（１０ｇ，３７．６９ｍｍｏｌ）、１−エチル−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ．ＨＣＬ）（８．６７ｇ，４５．２３ｍｍｏｌ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（４．６７ｇ，４１．４６ｍｍｏｌ）、１００ｍＬのジクロロメタンを加えた。撹拌しながら室温で０．５時間反応した後に、化合物Ｒ'１−Ｈ（１４．８ｇ，３７．６９ｍｍｏｌ）を加え、ＴＬＣで反応を監視し、４時間後に反応が完了した。反応液を５０ｍＬの飽和炭酸水素ナトリウム溶液と５０ｍＬの飽和食塩水で順次洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥して濃縮し、シリカゲルカラム（酢酸エチル：石油エーテルＶ：Ｖ＝４：１）を用い、分離して、１９．８ｇの白色固体が得られ、収率は８２．１％である。ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：６６３．１([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１９２】
（２）化合物３５の合成
１００ｍＬの丸底フラスコで、化合物３４（５ｇ，７．８ｍｍｍｏｌ）、Ｐｄ／Ｃ（０．５ｇ，１０％）を１０ｍＬのメタノールと４０ｍＬの酢酸エチルに溶解させ、水素バルーンを導入し、ＴＬＣで反応を監視し、反応は６時間後に完了した。反応液を珪藻土でろ過し、珪藻土をメタノールでリンスし、ろ液を減圧濃縮してスピン乾燥させ、３．８ｇの白色固体が得られ、収率は９６．１％である。１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：７．６４−７．６１(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ),７．４３−７．３７(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,２Ｈ)，７．３３−７．２８(ｔ,Ｊ＝６．９Ｈｚ,２Ｈ)，７．２７−７．１９(ｍ,５Ｈ),６．９２−６．８７(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,４Ｈ)，５．１２(ｍ,２Ｈ)，４．６３−４．５８(ｍ,１Ｈ)，４．０５−３．９７(ｍ,１Ｈ),３．７３(ｓ,６Ｈ),３．５−３．４２(ｍ,２Ｈ),３．０４−２．９９(ｍ,２Ｈ),２．９５−２．９０(ｍ,２Ｈ)，２．１２−２．０６(ｍ,２Ｈ)，１．５２−１．４５(ｍ,２Ｈ)，１．４２−１．３５(ｍ,２Ｈ)，１．２８−１．２０(ｍ,２Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：５２９．３([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１９３】
（３）化合物３６の合成
２５０ｍＬ丸底フラスコに、化合物Ａ１−Ｉ１（１０ｇ，２２．３７ｍｍｏｌ）、１−エチル−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ．ＨＣＬ）（５．１５ｇ，２６．８５ｍｍｏｌ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（２．８３ｇ，２４．６１ｍｍｏｌ）、１００ｍＬのジクロロメタンを加えた。撹拌しながら室温で０．５時間後反応した後に、化合物３５（１１．３２ｇ,２２．３７ｍｍｏｌ）を加え、ＴＬＣで反応を監視し、反応は６時間後に完了した。反応液を５０ｍＬの飽和炭酸水素ナトリウム溶液と５０ｍＬの飽和食塩水で順次洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥して濃縮し、シリカゲルカラム（ジクロロメタン：メタノールＶ：Ｖ =２０：１）を用い、分離して、１７．３ｇの白色固体が得られ、収率は８２．７％である。ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：９５８([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１９４】
（４）化合物Ａ１−ＩＩ１−Ｒ１の合成
化合物３６を原料として、化合物Ａ１−Ｉ１−Ｒ１の合成を参照した。白色固体で、収率は、８４．７％である。１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：７．８４−７．８０(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ),７．７２−７．６６(ｍ,１Ｈ)，７．６４−７．６１(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ),７．４３−７．３７(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,２Ｈ)，７．３３−７．２８(ｔ,Ｊ＝６．９Ｈｚ,２Ｈ)，７．２７−７．１９(ｍ,５Ｈ),６．９２−６．８７(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,４Ｈ)，５．２０(ｓ,１Ｈ),５．０−４．９５(ｑ,Ｊ＝４．２Ｈｚ,１Ｈ),４．５１−４．４６(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ),４．１５−４．１１(ｍ,３Ｈ),４．０５−３．９７(ｍ,１Ｈ)，３．８９−３．７９(ｍ,３Ｈ),３．７６(ｓ,６Ｈ),３．７４−３．６９(ｍ,１Ｈ),３．５４−３．４９(ｍ,２Ｈ)，３．４６−３．３６(ｍ,１Ｈ)，３．０４−２．９９(ｍ,２Ｈ)，２．９５−２．９０(ｍ,２Ｈ)，２．８８−２．８４(ｍ,２Ｈ)，２．５９−２．５４(ｍ,２Ｈ)，２．２２−２．１４(ｔ,Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ)，２．１５(ｓ,３Ｈ)，２．１２−２．０６(ｍ,２Ｈ)，２．００(ｓ，３Ｈ)，１．９５(ｓ，３Ｈ)，１．８７(ｓ，３Ｈ)，１．７７(ｓ，１２Ｈ)，１．５９−１．４２(ｍ,６Ｈ)，１．４１−１．３５(ｍ,２Ｈ)，１．２８−１．２０(ｍ,２Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：１１５８．５([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１９５】
実施例３０  化合物Ａ１−ＩＩ１−Ｒ２の合成
【化７２】
2021504454.tif 000074
【０１９６】
（１）化合物３７の合成
化合物Ｒ’２−Ｈを原料として、化合物３４の合成を参照した。白色固体で、収率は８４．３％である。ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：６７７．５([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１９７】
（２）化合物３８の合成
化合物３７を原料として、化合物３５の合成を参照した。白色固体で、収率は、８８．２％である。１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：７．４４−７．３８(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,２Ｈ)，７．３４−７．２９(ｔ,Ｊ＝６．９Ｈｚ,２Ｈ)，７．２８−７．２０(ｍ,５Ｈ),６．９２−６．８７(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,４Ｈ)，５．１２(ｍ,２Ｈ)，４．６３−４．５８(ｍ,１Ｈ)，３．７３(ｓ,６Ｈ),３．５−３．４２(ｍ,２Ｈ),３．０４−２．９９(ｍ,２Ｈ)，２．９５−２．９０(ｍ,２Ｈ)，２．８８−２．８２(ｍ,４Ｈ)，２．１２−２．０６(ｍ,２Ｈ)，１．５２−１．４５(ｍ,２Ｈ)，１．４２−１．３５(ｍ,２Ｈ)，１．２８−１．２０(ｍ,２Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：５４３．３([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１９８】
（３）化合物３９の合成
化合物３８を原料として、化合物３６の合成を参照した。白色固体で、収率は、８０．７％である。ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：９７２．６([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０１９９】
（４）化合物Ａ１−ＩＩ１−Ｒ２の合成
化合物３９を原料として、化合物Ａ１−Ｉ１−Ｒ１の合成を参照した。白色固体で、収率は、８４．１％である。１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：７．８３−７．７９(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ),７．７２−７．６６(ｍ,１Ｈ)，７．４２−７．３６(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,２Ｈ)，７．３３−７．２８(ｔ,Ｊ＝６．９Ｈｚ,２Ｈ)，７．２７−７．１９(ｍ,５Ｈ),６．９２−６．８７(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,４Ｈ)，５．２０(ｓ,１Ｈ),５．０−４．９５(ｑ,Ｊ＝４．２Ｈｚ,１Ｈ),４．５１−４．４６(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ)，４．１５−４．１０(ｍ,３Ｈ)，３．８９−３．７９(ｍ,３Ｈ)，３．７６(ｓ,６Ｈ),３．７４−３．６９(ｍ,１Ｈ),３．５４−３．４９(ｍ,２Ｈ)，３．４６−３．３６(ｍ,１Ｈ)，３．０４−２．９９(ｍ,２Ｈ)，２．９５−２．９０(ｍ,２Ｈ)，２．８８−２．８４(ｍ,６Ｈ)，２．５９−２．５４(ｍ,２Ｈ)，２．２２−２．１４(ｔ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ)，２．１５(ｓ,３Ｈ)，２．１２−２．０６(ｍ,２Ｈ)，２．００(ｓ，３Ｈ)，１．９５(ｓ，３Ｈ)，１．８７(ｓ，３Ｈ)，１．７７(ｓ，１２Ｈ)，１．５９−１．４２(ｍ，６Ｈ)１．４１−１．３５(ｍ,２Ｈ)，１．２８−１．２０(ｍ,２Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：１１７２．７([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０２００】
実施例３１  化合物Ａ１−ＩＩＩ１−Ｒ１の合成
【化７３】
2021504454.tif 000075
【０２０１】
（１）化合物４０の合成
化合物３５を原料として、化合物３４の合成を参照した。白色固体で、収率は８２．６％である。ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：７７６．７([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０２０２】
（２）化合物４１の合成
化合物４０を原料として、化合物３５の合成を参照した。白色固体で、収率は９６．７％である。１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：７．７１−７．６７(ｍ,１Ｈ),７．６５−７．６２(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ),７．４５−７．３９(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,２Ｈ)，７．３４−７．２９(ｔ,Ｊ＝６．９Ｈｚ,２Ｈ)，７．２６−７．１９(ｍ,５Ｈ),６．９３−６．８８(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,４Ｈ)，５．１４(ｍ,２Ｈ)，４．６４−４．５８(ｍ,１Ｈ)，４．０５−３．９８(ｍ,１Ｈ),３．７２(ｓ,６Ｈ),３．５−３．４３(ｍ,４Ｈ),３．０５−２．９９(ｍ,２Ｈ),２．９５−２．９０(ｍ,２Ｈ)，２．１２−２．０６(ｍ,４Ｈ)，１．５２−１．４５(ｍ,４Ｈ)，１．４１−１．３５(ｍ,４Ｈ)，１．２９−１．２０(ｍ,４Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：６４２．３([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０２０３】
（３）化合物４２の合成
化合物４１を原料として、化合物３６の合成を参照した。白色固体で、収率は８６．３％である。ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：１０７１．４([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０２０４】
（４）化合物Ａ１−ＩＩＩ１−Ｒ１の合成
化合物４２を原料として、化合物Ａ１−Ｉ１−Ｒ１の合成を参照した。白色固体で、収率は８４．１％である。１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：７．８５−７．８１(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ),７．７８−７．７４(ｍ,１Ｈ),７．７２−７．６６(ｍ,１Ｈ)，７．６５−７．６１(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ),７．４２−７．３８(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,２Ｈ)，７．３４−７．２９(ｔ,Ｊ＝６．９Ｈｚ,２Ｈ)，７．２７−７．１８(ｍ,５Ｈ),６．９３−６．８７(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,４Ｈ)，５．２２(ｓ,１Ｈ),５．０−４．９６(ｑ,Ｊ＝４．２Ｈｚ,１Ｈ),４．５１−４．４６(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ),４．１５−４．１１(ｍ,３Ｈ),４．０５−３．９７(ｍ,１Ｈ)，３．８９−３．７９(ｍ,３Ｈ),３．７６(ｓ,６Ｈ),３．７４−３．６９(ｍ,１Ｈ),３．５４−３．４９(ｍ,４Ｈ)，３．４６−３．３６(ｍ,１Ｈ)，３．０４−２．９９(ｍ,２Ｈ)，２．９５−２．９０(ｍ,２Ｈ)，２．８８−２．８４(ｍ,２Ｈ)，２．５９−２．５４(ｍ,２Ｈ)，２．２２−２．１４(ｔ,Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ)，２．１５(ｓ,３Ｈ)，２．１２−２．０６(ｍ,４Ｈ)，２．００(ｓ，３Ｈ)，１．９５(ｓ，３Ｈ)，１．８７(ｓ，３Ｈ)，１．７７(ｓ，１２Ｈ)，１．５９−１．４２(ｍ,８Ｈ)，１．４１−１．３５(ｍ,４Ｈ)，１．２８−１．２０(ｍ,４Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：１２７１．２([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０２０５】
実施例３２  化合物Ａ１−ＩＶ１−Ｒ１の合成
【化７４】
2021504454.tif 000076
【０２０６】
（１）化合物４３の合成
化合物Ａ１−ＩＩＩ１を原料として、化合物１６の合成を参照した。白色固体で、収率は８２．８％である。ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：８７７．４([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０２０７】
（２）化合物Ａ１−ＩＩＩ１−Ｒ１の合成
化合物４０を原料として、化合物Ａ１−Ｉ１−Ｒ１の合成を参照した。白色固体で、収率は８２．９％である。１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：７．７６−７．７２(ｄ,Ｊ＝８．９Ｈｚ,１Ｈ)，７．７０−７．６６(ｄ,Ｊ＝８．０Ｈｚ,１Ｈ)，７．４０−７．３６(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ),７．３２−７．２８(ｔ,Ｊ＝６．９Ｈｚ,２Ｈ)，７．２７−７．１９(ｍ,５Ｈ)，６．９１−６．８６(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,４Ｈ，５．２１(ｓ,１Ｈ),５．０−４．９６(ｑ,Ｊ＝４．２Ｈｚ,１Ｈ)，４．４５−４．５１(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ)，４．１２−４．０７(ｍ,３Ｈ)，４．０５−３．９７(ｍ,１Ｈ),３．８８−３．７８(ｍ,３Ｈ)，３．７４(ｓ,６Ｈ)，３．７２−３．６８(ｍ，２Ｈ)，３．６２−３．５８(ｍ，２Ｈ)，３．５６−３．４６(ｍ,４Ｈ)，３．０４−２．９９(ｍ,２Ｈ)，２．９５−２．９０(ｍ,２Ｈ)，２．８９−２．８５(ｍ,２Ｈ)，２．５８−２．５３(ｍ,２Ｈ)，２．１５(ｓ，３Ｈ)，２．００(ｓ，３Ｈ)，１．９５(ｓ，３Ｈ)，１．８８(ｓ，３Ｈ)，１．７６(ｓ,１２Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：５０２．６([Ｍ＋１]＋)．１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：１０７７．３([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０２０８】
実施例３３  化合物Ａ１−Ｖ１−Ｒ４の合成
【化７５】
2021504454.tif 000077
【０２０９】
（１）化合物４４の合成
２５０ｍＬ丸底フラスコで、化合物６（５ｇ，１５．２ｍｍｏｌ）、１,６−ヘキサンジオール（９ｇ，７６ｍｍｏｌ）を１００ｍＬの無水１,２−ジクロロエタンに溶解させ、３０分間撹拌した後に、トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート（０．５５ｍＬ，３ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩反応させ、反応液をジクロロメタンで抽出し、有機相を飽和重炭酸ナトリウム溶液８０ｍＬで２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮し、シリカゲルカラム（石油エーテル：酢酸エチルＶ：Ｖ=３：２）を用い分離して、５．８６ｇ透明な油性液体が得られ、収率は８６．２％である。ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：４７０．２([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０２１０】
（２）化合物Ａ１−Ｖ１−Ｒ４の合成
化合物４１を原料として、化合物Ａ１−Ｉ１−Ｒ１の合成を参照した。収率は８４．１％である。１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：７．８０−７．７５(ｄ,Ｊ＝８．９Ｈｚ,１Ｈ),５．２１(ｓ,１Ｈ),５．０２−４．９５(ｑ,Ｊ＝４．２Ｈｚ,１Ｈ),４．５０−４．７６(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ),４．１２−４．０７(ｍ,３Ｈ),３．８８−３．７９(ｍ,３Ｈ),３．８０−３．６９(ｍ,２Ｈ),３．４６−３．３６(ｍ,２Ｈ)，２．８８−２．８４(ｍ,２Ｈ)，２．５９−２．５４(ｍ,２Ｈ),２．２３−２．２８(ｍ，２Ｈ)，２．２２−２．１４(ｍ，２Ｈ)，２．１５(ｓ，３Ｈ)，２．００(ｓ，３Ｈ)，１．９５(ｓ，３Ｈ)，１．８７(ｓ，３Ｈ)，１．７９(ｓ,１２Ｈ)，１．５８−１．４２(ｍ，４Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：８７０．５([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【０２１１】
実施例３４  修飾一本鎖オリゴヌクレオチドの調製
この実施例では、修飾ゴヌクレオチドは、１μｍｏｌの理論収量に従って合成される。工程は以下のとおりである。
【０２１２】
（１）１μｍｏｌのユニバーサル固相サポートＣＰＧまたは３'−コレステロール修飾ＣＰＧ（Ｃｈｅｍｇｅｎｅｓから購入）、２'−Ｏ−ＴＢＤＭＳ保護ＲＮＡホスホロアミダイトモノマー、ＤＮＡモノマー、２'−メトキシモノマー、２'−フルオロモノマー（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈから購入）を量り、その濃度が０．２Ｍに達するように、無水アセトニトリル溶液に溶解させた。リン酸骨格のチオール修飾オリゴヌクレオチドに対して、０．２Ｍ ＰＡＤＳ溶液をチオール試薬として使用した。５−エチルチオ−１Ｈ−テトラゾール（Ｃｈｅｍｇｅｎｅｓから購入）のアセトニトリル溶液を調製してアクチベーター（０．２５Ｍ）とし、０．０２Ｍヨウ素のピリジン／水溶液を調製して酸化剤とし、及び３％のジクロロメタントリクロロ酢酸溶液を脱保護試薬として配合し、ＡＢＩ ３９４型番ＤＮＡ／ＲＮＡ自動合成機における指定試薬位置に配置した。
【０２１３】
（２）合成プログラムを設置し、指定されたオリゴヌクレオチド塩基配列を入力し、それが正しいことを確認した後に、オリゴヌクレオチド合成のサイクリングを開始し、各ステップのカップリング時間は６分で、ガラクトースリガンド（ＡＸ−ｌｉｎｋｅｒ−ＲＸ化合物）対応モノマーのカップリング時間は１０〜２０分である。自動サイクリングを経た後に、オリゴヌクレオチド固相合成が完了した。
【０２１４】
（３）ＣＰＧを乾燥窒素で吹き付け乾燥させ、５ｍＬ ＥＰチューブに移し、２ｍＬのアンモニア水／エタノール溶液（３／１）を加え、５５℃で１６〜１８時間加熱した。１０,０００ｒｐｍの回転速度で１０ｍｉｎ遠心して上清液を得て、濃アンモニア水／エタノールを全部引き出した後に、白色のコロイド状固体を得た。固体を２００μＬの１Ｍ ＴＢＡＦ ＴＨＦ溶液に溶解させ、室温で２０時間振盪した。０．５ｍＬの１Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．４）を加え、室温で１５分間振盪し、遠心吸引乾燥機に入れて元の体積の１／２に吸引され、ＴＨＦを除去した。溶液を０．５ｍＬのクロロホルムで２回抽出し、１ｍＬの０．１Ｍ ＴＥＡＡ試料ローディング液を加え、混合溶液を固相抽出カラムに流して、溶液から過剰な塩を除去した。
【０２１５】
（４）得られたオリゴヌクレオチドの濃度をマイクロ紫外分光光度計（ＫＯ５５００）で測定した。Ｏｌｉｇｏ ＨＴＣＳ ＬＣ−ＭＳ  ｓｙｓｔｅｍ（ＮｏＶａｔｉａ）システムで、質量スペクトル分析を実施した。一次スキャンした後にＰｒｏｍａｓｓソフトウェアにて基準化して、核酸の分子量を算出した。
【０２１６】
実施例３５  修飾一本鎖オリゴヌクレオチドの調製
この実施例では、修飾ゴヌクレオチドは、１μｍｏｌの理論収量に従って合成される。工程は以下のとおりである。
【０２１７】
（１）１μｍｏｌのユニバーサル固相サポートＣＰＧまたは３'−コレステロール修飾ＣＰＧ（Ｃｈｅｍｇｅｎｅｓから購入）、ＤＮＡモノマー、２'−メトキシモノマー、２'−フルオロモノマー（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈから購入）を量り、その濃度が０．２Ｍに達するように、無水アセトニトリル溶液に溶解させた。リン酸骨格のチオール修飾オリゴヌクレオチドに対して、０．２Ｍ ＰＡＤＳ溶液をチオール試薬として使用した。５−エチルチオ−１Ｈ−テトラゾール（Ｃｈｅｍｇｅｎｅｓから購入）のアセトニトリル溶液を調製してアクチベーター（０．２５Ｍ）とし、０．０２Ｍヨウ素のピリジン／水溶液を調製して酸化剤とし、及び３％のジクロロメタントリクロロ酢酸溶液を脱保護試薬として配合し、ＡＢＩ３９４型番ＤＮＡ／ＲＮＡ自動合成機における指定試薬位置に配置した。
【０２１８】
（２）合成プログラムを設置し、指定されたオリゴヌクレオチド塩基配列を入力し、それが正しいことを確認した後に、オリゴヌクレオチド合成のサイクリングを開始し、各ステップのカップリング時間は６分で、ガラクトースリガンド（ＡＸ−ｌｉｎｋｅｒ−ＲＸ化合物）対応モノマーのカップリング時間は６〜１０分である。自動サイクリングを経た後に、オリゴヌクレオチド固相合成が完了した。
【０２１９】
（３）ＣＰＧを乾燥窒素で吹き付け乾燥させ、５ｍＬ ＥＰチューブに移し、２ｍＬのアンモニア水溶液を加え、５５℃で１６〜１８時間加熱した。１０,０００ｒｐｍの回転速度で１０ｍｉｎ遠心して上清液を得て、濃アンモニア水／エタノールを全部引き出した後に、白色または黄色いコロイド状固体を得た。１ｍＬの０．１Ｍ ＴＥＡＡ試料ローディング液を加え、混合溶液を固相抽出カラムに流して、溶液から過剰な塩を除去した。
【０２２０】
（４）得られたオリゴヌクレオチドの濃度をマイクロ紫外分光光度計（ＫＯ５５００）で測定した。Ｏｌｉｇｏ ＨＴＣＳ ＬＣ−ＭＳ ｓｙｓｔｅｍ（Ｎｏｖａｔｉａ）システムで、質量スペクトル分析を実施した。一次スキャンした後にＰｒｏｍａｓｓソフトウェアにて標準化して、核酸の分子量を算出した。
【０２２１】
実施例３６  修飾二本鎖オリゴヌクレオチドの調製
工程は、以下のとおりである。修飾一本鎖オリゴヌクレオチドの調製が完了した後に、紫外線吸収量１：１に従って混合し、９５°Ｃまで加熱し、３分間を経て室温まで冷却し、二本鎖が形成された。
【０２２２】
実施例３４〜３６では、粗純度が５０％未満の修飾オリゴヌクレオチドに対して、ＤＮＡＰＡｃ ＰＡ−１００イオン交換カラムにて線状グラデーションで精製した。移動相Ａ：２０ ｍＭ ＮａＯＨ、移動相Ｂ：２０ｍＭ ＮａＯＨ＋２Ｍ ＮａＣｌ混合液。
【０２２３】
例示の修飾オリゴヌクレオチド配列および対応する分子量測定結果は、表１に示されている。
【０２２４】
略語説明：Ｎ＝ＲＮＡ；ｄＮ＝ＤＮＡ；ｍＮ＝２'ＯＭｅ修飾；ｆＮ＝２'Ｆ修飾。
【表１】
2021504454.tif 000078
【０２２５】
実施例３７  修飾オリゴヌクレオチドの細胞ターゲティング性能の検出
動物実験用の修飾オリゴヌクレオチドは、注入前に０．２２μｍメンブレン膜でろ過された。
【０２２６】
１．マウス初代肝細胞の分離
マウスを麻酔し、皮膚と筋肉の層を切り開き、肝臓を露出させ、門脈に灌流カテーテルを挿入し、下大静脈に小さな開口部を切り、肝臓灌流の準備をする。４０°Ｃでｐｅｒｆｕｓｉｏｎ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｉ(Ｈａｎｋ’ｓ，０．５ｍＭ ＥＧＴＡ，ｐＨ ８)とｐｅｒｆｕｓｉｏｎ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ ＩＩ(Ｌｏw−ｇｌｕｃｏｓｅ ＤＭＥＭ，１００Ｕ／ｍＬ Ｔｙｐｅ ＩＶ，ｐＨ ７．４)をウォームアップし、３７°Ｃ ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｉで門脈に挿入した灌流カテーテルに沿って、７ｍＬ／ｍｉｎの流量で肝臓を灌流し、肝臓が灰色になるまで５ｍｉｎ灌流する。次に、３７°Ｃ ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ ＩＩで、７ｍＬ／ｍｉｎの流量で７ｍｉｎ肝臓を灌流する。灌流が終了した後に、肝臓を取り出し、Ｓｏｌｕｔｉｏｎ ＩＩＩ（１０％ＦＢＳ ｌｏw−ｇｌｕｃｏｓｅ ＤＭＥＭ，４°Ｃ）に入れて消化を終了させる。ピンセットで肝包膜を切り、軽く振って肝臓細胞を放出する。肝細胞を７０μｍのセルストレーナーでろ過し、５０ｇで２ｍｉｎ遠心分離し、上清を廃棄する。Ｓｏｌｕｔｉｏｎ ＩＶ（４０％ｐｅｒｃｏｌｌ ｌｏw−ｇｌｕｃｏｓｅ ＤＭＥＭ，４°Ｃ）で細胞を再懸濁し、１００ｇで２ｍｉｎ遠心分離し、上清を廃棄する。２％ＦＢＳ ｌｏw−ｇｌｕｃｏｓｅ ＤＭＥＭを加え、細胞を再懸濁しておく。細胞生存率を特定するためのトリパンブルー染色を行う。
【０２２７】
２．ＧａｌＮＡｃ結合曲線とＫｄ値の測定
新たに単離したマウス初代肝細胞を９６ウェル／プレートに敷き、２×１０４細胞／ウェル、１００μＬ／ウェルである。ＧａｌＮＡｃ−ｓｉＲＮＡを各ウェルに加える。各ＧａｌＮＡｃ−ｓｉＲＮＡは、最終濃度０．９ｎＭ、２．７ｎＭ、８．３ｎＭ、２５ｎＭ、５０ｎＭ、または１００ｎＭに設定される。４°Ｃで２時間インキュベートした後に、５０ｇで２ｍｉｎ遠心分離し、上清を廃棄する。１０μｇ／ｍＬ ＰＩで細胞を再懸濁し、１０ｍｉｎ染色した後に、５０ｇで２ｍｉｎ遠心分離する。細胞を事前に冷却したＰＢＳで洗浄し、５０ｇで２ｍｉｎ遠心分離し、上清を廃棄する。ＰＢＳで細胞を再懸濁する。フローサイトメトリーで生細胞の平均蛍光強度ＭＦＩ(Ｍｅａｎ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ)を測定し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ５ソフトウェアで非線形フィッティングと解離定数Ｋｄの計算を行う。結果を表２、表３、および図１に示す。データによると、ＧａｌＮＡｃ−ｓｉＲＮＡが肝細胞を特異的にターゲティングすることができる;そのＧａｌＮＡｃリガンドと細胞受容体のＫｄ値は７．６−５３．４ｎＭであり、従来技術（ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０４６４２５）の好ましいガラクトースリガンドによりも相当高い親和性（Ｋｉ値５．２−５１．３ｎＭ）を持ち、異なる共役物構造を持つＧａｌＮＡｃ−ｓｉＲＮＡは受容体への結合能力に一定の差を示し、Ａ３、Ａ４構造は比較的強い受容体親和性を示す（Ｋｄ値が小さいほど、親和性は大きくなる）。
【０２２８】
【表２】
2021504454.tif 000079
【０２２９】
【表３】
2021504454.tif 000080
【０２３０】
実施例３８  生体内肝臓ターゲティング性能実験
実験で、１３匹の雄、６〜７週のＳＰＦランクのＢａｌｂ／ｃ−ｎｕマウス（北京維通利華実験動物有限公司から購入）を用い、ランダムに陰性対照群、Ｐ８Ｇ８対照群（非共役リガンド）、Ｐ８Ｇ８−Ａ３群、Ｐ８Ｇ８−Ｂ３群という４つの群に分けた。各群の動物の数は２、３、４、および４匹で、約１０ ｍｇ／ｋｇの用量で尾静脈注射によって投与された（実験設計は表４を参照）。投与前、投与の１５ｍｉｎ、３０ｍｉｎ、１ｈ、２ｈ、４ｈ、６ｈに、白色光とＸ線イメージングを含め、すべての動物について生体内イメージングを行った。投薬６時間後に安楽死させ、摘出臓器の画像化のために脳、唾液腺、心臓、脾臓、肺、肝臓、腎臓、腸を取り出した。
【０２３１】
【表４】
2021504454.tif 000081
【０２３２】
生体外画像分析の結果（表５から表６）は、投薬後６時間で、Ｐ８Ｇ８−Ａ３群、Ｐ８Ｇ８−Ｂ３群の肝臓の蛍光強度がいずれも陰性対照群よりも高いことを示した。その結果は、Ｐ８Ｇ８−Ａ３、Ｐ８Ｇ８−Ｂ３がある程度肝臓をターゲティングしていることを示した。
【０２３３】
【表５】
2021504454.tif 000082
【０２３４】
【表６】
2021504454.tif 000083
【０２３５】
本発明の具体的実施形態を詳細に説明したが、勿論、当業者は、開示されたすべての教示に従って、細かいところについて様々な修正および変更を行うことができ、これらの変更はすべて本発明の保護範囲内であることを理解できる。本発明の全体範囲は、特許請求の範囲およびそのいかなる均等物によって与えられるものである。
【図１】
2021504454.tif 000124
【配列表】
2021504454000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和2年5月27日(2020.5.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４０】
本発明の一例とする化合物は、
【化２２】
2021504454.tif 000125
【化２３】
2021504454.tif 000126
【化２４】
2021504454.tif 000127
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１２】
（６）化合物Ａ１−Ｉ１の合成
５０ｍＬ丸底フラスコで、化合物７（３．３ｇ，６．１ｍｍｏｌ）、Ｐｄ／Ｃ（０．３３ｇ，１０％）を５ｍＬのメタノールと２０ｍＬの酢酸エチルに溶解させ、水素バルーンを反応液に導入して、反応液を珪藻土で濾過し、珪藻土をメタノールでリンスし、濾液を減圧濃縮してスピン乾燥し、２．８ｇの白色固体が得られ、収率は９５．５％である。１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：１１．９８(ｓ,１Ｈ),７．７９−７．７５(ｄ,Ｊ＝８．９Ｈｚ,１Ｈ),５．２０(ｓ,１Ｈ),５．０−４．９５(ｑ,Ｊ＝４．２Ｈｚ,１Ｈ),４．４６−４．５１(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ),４．１５−４．０７(ｍ,３Ｈ),３．８９−３．７９(ｍ,１Ｈ),３．８０−３．６９(ｍ,１Ｈ),３．４６−３．３６(ｍ,１Ｈ)，２．２２−２．１４(ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ)，２．１５(ｓ，３Ｈ)，２．００(ｓ，３Ｈ)，１．９５(ｓ，３Ｈ)，１．８７(ｓ，３Ｈ)，１．５９−１．４２(ｍ，４Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：４７０．５([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１６８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１６８】
（２）化合物Ａ２−Ｉ２−Ｒ２の合成
化合物２６を原料として、化合物Ａ１−Ｉ１−Ｒ１の合成を参照した。白色固体で、収率は、８４．３％である。１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：７．４１−７．３７(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ),７．３３−７．２８(ｔ,Ｊ＝６．９Ｈｚ,２Ｈ),７．２７−７．１９(ｍ,５Ｈ),６．９１−６．８６(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,４Ｈ),５．８６−５．７３(ｍ,１Ｈ),５．２２(ｓ,１Ｈ),５．２−４．９(ｍ,６Ｈ),４．５−４．９８(ｓ,Ｊ＝３．５Ｈｚ,２Ｈ),３．９−３．８８(ｍ,２Ｈ),３．８４−３．８０(ｍ,２Ｈ)，３．７５(ｓ,６Ｈ)，３．７３−３．６５(ｍ,２Ｈ),３．４８−３．３８(ｍ,１Ｈ),３．１６−３．１２(ｍ,４Ｈ),３．０４−２．９９(ｍ,２Ｈ),２．９５−２．９０(ｍ,２Ｈ)，２．８８−２．８４(ｍ,２Ｈ)，２．５９−２．５５(ｍ,２Ｈ),２．１２(ｓ,６Ｈ),２．０５−２．０１(ｍ,２Ｈ),２．００(ｓ,６Ｈ),１．８８(ｓ,６Ｈ),１．７７(ｓ,１２Ｈ)，１．６６(ｓ,３Ｈ),１．５−１．４(ｍ,２Ｈ),１．３９−１．３(ｍ,２Ｈ),１．２９−１．１９(ｍ,８Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：１４１８．７([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１９２】
（２）化合物３５の合成
１００ｍＬの丸底フラスコで、化合物３４（５ｇ，７．８ｍｍｏｌ）、Ｐｄ／Ｃ（０．５ｇ，１０％）を１０ｍＬのメタノールと４０ｍＬの酢酸エチルに溶解させ、水素バルーンを導入し、ＴＬＣで反応を監視し、反応は６時間後に完了した。反応液を珪藻土でろ過し、珪藻土をメタノールでリンスし、ろ液を減圧濃縮してスピン乾燥させ、３．８ｇの白色固体が得られ、収率は９６．１％である。１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：７．６４−７．６１(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ),７．４３−７．３７(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,２Ｈ)，７．３３−７．２８(ｔ,Ｊ＝６．９Ｈｚ,２Ｈ)，７．２７−７．１９(ｍ,５Ｈ),６．９２−６．８７(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,４Ｈ)，５．１２(ｍ,２Ｈ)，４．６３−４．５８(ｍ,１Ｈ)，４．０５−３．９７(ｍ,１Ｈ),３．７３(ｓ,６Ｈ),３．５−３．４２(ｍ,２Ｈ),３．０４−２．９９(ｍ,２Ｈ),２．９５−２．９０(ｍ,２Ｈ)，２．１２−２．０６(ｍ,２Ｈ)，１．５２−１．４５(ｍ,２Ｈ)，１．４２−１．３５(ｍ,２Ｈ)，１．２８−１．２０(ｍ,２Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：５２９．３([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１９９】
（４）化合物Ａ１−ＩＩ１−Ｒ２の合成
化合物３９を原料として、化合物Ａ１−Ｉ１−Ｒ１の合成を参照した。白色固体で、収率は、８４．１％である。１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：７．８３−７．７９(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ),７．７２−７．６６(ｍ,１Ｈ)，７．４２−７．３６(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,２Ｈ)，７．３３−７．２８(ｔ,Ｊ＝６．９Ｈｚ,２Ｈ)，７．２７−７．１９(ｍ,５Ｈ),６．９２−６．８７(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,４Ｈ)，５．２０(ｓ,１Ｈ),５．０−４．９５(ｑ,Ｊ＝４．２Ｈｚ,１Ｈ),４．５１−４．４６(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ)，４．１５−４．１０(ｍ,３Ｈ)，３．８９−３．７９(ｍ,３Ｈ)，３．７６(ｓ,６Ｈ),３．７４−３．６９(ｍ,１Ｈ),３．５４−３．４９(ｍ,２Ｈ)，３．４６−３．３６(ｍ,１Ｈ)，３．０４−２．９９(ｍ,２Ｈ)，２．９５−２．９０(ｍ,２Ｈ)，２．８８−２．８４(ｍ,６Ｈ)，２．５９−２．５４(ｍ,２Ｈ)，２．２２−２．１４(ｔ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ)，２．１５(ｓ,３Ｈ)，２．１２−２．０６(ｍ,２Ｈ)，２．００(ｓ，３Ｈ)，１．９５(ｓ，３Ｈ)，１．８７(ｓ，３Ｈ)，１．７７(ｓ，１２Ｈ)，１．５９−１．４２(ｍ，６Ｈ)，１．４１−１．３５(ｍ,２Ｈ)，１．２８−１．２０(ｍ,２Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：１１７２．７([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２０７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２０７】
（２）化合物Ａ１−ＩＩＩ１−Ｒ１の合成
化合物４０を原料として、化合物Ａ１−Ｉ１−Ｒ１の合成を参照した。白色固体で、収率は８２．９％である。１ＨＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６)δ：７．７６−７．７２(ｄ,Ｊ＝８．９Ｈｚ,１Ｈ)，７．７０−７．６６(ｄ,Ｊ＝８．０Ｈｚ,１Ｈ)，７．４０−７．３６(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ),７．３２−７．２８(ｔ,Ｊ＝６．９Ｈｚ,２Ｈ)，７．２７−７．１９(ｍ,５Ｈ)，６．９１−６．８６(ｄ,Ｊ＝８．２Ｈｚ,４Ｈ，５．２１(ｓ,１Ｈ),５．０−４．９６(ｑ,Ｊ＝４．２Ｈｚ,１Ｈ)，４．４５−４．５１(ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ)，４．１２−４．０７(ｍ,３Ｈ)，４．０５−３．９７(ｍ,１Ｈ),３．８８−３．７８(ｍ,３Ｈ)，３．７４(ｓ,６Ｈ)，３．７２−３．６８(ｍ，２Ｈ)，３．６２−３．５８(ｍ，２Ｈ)，３．５６−３．４６(ｍ,４Ｈ)，３．０４−２．９９(ｍ,２Ｈ)，２．９５−２．９０(ｍ,２Ｈ)，２．８９−２．８５(ｍ,２Ｈ)，２．５８−２．５３(ｍ,２Ｈ)，２．１５(ｓ，３Ｈ)，２．００(ｓ，３Ｈ)，１．９５(ｓ，３Ｈ)，１．８８(ｓ，３Ｈ)，１．７６(ｓ,１２Ｈ)．ＭＳ(ＥＳＩ),ｍ／ｚ：１０７７．３([Ｍ＋Ｎａ]＋)．
【手続補正７】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
オリゴヌクレオチドと共役基を含む化合物であって、その化学式は、
【化１】
2021504454.tif 000128
であり、式中、ＰＮはオリゴヌクレオチドであり、Ｙは１〜１０の整数から選択され、Ｘは０〜１０の整数から選ばれ、ＭＴは式（１）、式（２）、式（３）および式（４）で表される共役基から選ばれ、Ｘが０ではない場合に、Ｘ個のＭはそれぞれ独立に式（１'）、式（２'）および式（３'）で表される共役基から独立して選ばれて、
【化２】
2021504454.tif 000129
式中、ＡＸはリガンド、ｌｉｎｋｅｒは結合アーム、Ｑはヒドロキシル基または修飾基である化合物。
【請求項２】
式（１）〜式（４）、式（１'）〜式（３'）で表される共役基において、Ａｘはそれぞれ独立して、ヒトアシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）のリガンドであり、
好ましくは、式（１）〜式（４）、式（１'）〜式（３'）で表される共役基において、ＡＸはそれぞれ独立して、ガラクトース、Ｎ-アセチル-Ｄ-ガラクトサミン、ガラクトース含有多糖類、Ｎ-アセチル-Ｄ-ガラクトサミン含有多糖類、ガラクトース誘導体（例えばガラクトースアセテートなどのガラクトースエステル）またはＮ-アセチル-Ｄ-ガラクトサミン誘導体（例えばＮ-アセチル-Ｄ-ガラクトサミンアセテートなどのＮ-アセチル-Ｄ-ガラクトサミンエステル）から選ばれるものであり、
好ましくは、ＡＸは更にそれぞれ独立して、例えば、カルボニルアルキル基またはエステルアルキル基などの修飾基を持っており、好ましくは、前記アルキル基は、Ｃ１−６アルキル基またはＣ６−１２アルキル基であり、
好ましくは、ＡＸは
【化３】
2021504454.tif 000130
から選ばれるものである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
式（１）〜式（４）、式（１'）〜式（３'）で表される共役基において、ｌｉｎｋｅｒの構造はそれぞれ独立して式（ｉ）、式（ｉｉ）、式（ｉｉｉ）、式（ｉＶ）または式（Ｖ）で表され、
【化４】
2021504454.tif 000131
式中、ｎは１〜１０の整数から選ばれるものであり、好ましくは、ｎは１または６であり、
【化５】
2021504454.tif 000132
式中、ｎ１とｎ２はそれぞれ独立して１〜１０の整数から選ばれるものであり、好ましくはｎ１は１、好ましくはｎ２は４であり、
【化６】
2021504454.tif 000133
式中、ｎ１、ｎ２、ｎ３はそれぞれ独立して１〜１０の整数から選ばれるものであり、好ましくはｎ１は１、好ましくはｎ２は３であり、ｎ３は４であり、
【化７】
2021504454.tif 000134
式中、ｎは１〜１０の整数から選ばれるものであり、好ましくは、ｎは１であり、
【化８】
2021504454.tif 000135
式中、ｎは１〜１０の整数から選ばれるものであり、好ましくは、ｎは４である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
式（１）または式（１’）で表される共役基において、
ＡＸはそれぞれ独立して、Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ１’、Ａ２’またはＡ３’から選ばれるものであり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉ）で表され、或いは、
ＡＸはそれぞれ独立して、Ａ１またはＡ１’から選ばれるものであり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｉ）で表され、或いは、
ＡＸはそれぞれ独立して、Ａ１またはＡ１’から選ばれるものであり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｉｉ）で表され、或いは、
ＡＸはそれぞれ独立して、Ａ１またはＡ１’から選ばれるものであり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｖ）で表される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
式（２）または式（２’）で表される共役基において、 
ＡＸはそれぞれ独立して、Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ１’、Ａ２’またはＡ３’から選ばれるものであり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉ）で表され、或いは、
ＡＸはそれぞれ独立して、Ａ１またはＡ１’から選ばれるものであり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｉ）で表される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
式（３）または式（３’）で表される共役基において、
ＡＸはそれぞれ独立して、Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ１’、Ａ２’またはＡ３’から選ばれるものであり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉ）で表される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
式（４）で表される共役基において、
ＡＸは、Ａ１またはＡ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｖ）で表される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
式（１）〜式（３）、式（１'）〜式（３'）で表される共役基において、Ｑは、コレステロール及びその誘導体、ポリエチレングリコール、蛍光プローブ、ビオチン、ペプチド、ビタミン、組織ターゲティング分子から選ばれるものである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９】
前記オリゴヌクレオチドは、一本鎖オリゴヌクレオチドまたは二本鎖オリゴヌクレオチドであり、
好ましくは、前記オリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の修飾ヌクレオチドを含み、
好ましくは、前記１つまたは複数の修飾ヌクレオチドはそれぞれ独立して、２'−メトキシエチル修飾ヌクレオチド、２'−Ｏ−アルキル修飾ヌクレオチド（例えば、２'−Ｏ−メチル修飾ヌクレオチド）、２'−Ｏ−アリル修飾ヌクレオシド酸、２'−Ｃ−アリル修飾ヌクレオチド、２'−フルオロ修飾ヌクレオチド、２'−デオキシ修飾ヌクレオチド、２'−ヒドロキシ修飾ヌクレオチド、ロックされたヌクレオチド、ロック解除された核酸、ヘキシトール核酸から選ばれるものであり、
好ましくは、前記修飾ヌクレオチドは、２'−Ｏ−アルキル修飾ヌクレオチド、２'−フルオロ修飾ヌクレオチドから選ばれるものであり、
好ましくは、前記オリゴヌクレオチドには末端修飾物があり、好ましくは、前記末端修飾物は、コレステロール、ポリエチレングリコール、蛍光プローブ、ビオチン、ポリペプチド、ビタミン、組織ターゲティング分子、およびそれらの任意の組み合わせから選ばれるものであり、
好ましくは、前記オリゴヌクレオチドのリン酸含有骨格は修飾されたものであり、好ましくは、前記修飾はチオ修飾であり、
好ましくは、前記オリゴヌクレオチドはｓｉＲＮＡであり、
好ましくは、前記ｓｉＲＮＡは、相補的に二本鎖を形成するセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、
好ましくは、前記ｓｉＲＮＡは、例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４で表される配列を含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
【化９】
2021504454.tif 000136
は、それぞれ独立して前記オリゴヌクレオチドの任意の鎖の３'末端、５'末端または配列の中央に結合され、
好ましくは、
【化１０】
2021504454.tif 000137
は、リン酸トリエステル結合を介してオリゴヌクレオチドに結合され、
好ましくは、ＭとＭＴとの間またはＭとＭとの間は、リン酸トリエステル結合を介して結合されている、請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１１】
前記オリゴヌクレオチドは一本鎖オリゴヌクレオチドであり、
好ましくは、Ｙは１であり、
【化１１】
2021504454.tif 000138
は前記オリゴヌクレオチドの３'末端または５'末端に結合され、
好ましくは、Ｙは２であり、２つの
【化１２】
2021504454.tif 000139
はそれぞれ前記オリゴヌクレオチドの３'末端及び５'末端に結合される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１２】
前記オリゴヌクレオチドは、二本鎖オリゴヌクレオチドであり、
好ましくは、Ｙは１であり、
【化１３】
2021504454.tif 000140
は前記オリゴヌクレオチドの任意の鎖の３'末端または５'末端に結合され、
好ましくは、Ｙは２であり、２つの
【化１４】
2021504454.tif 000141
はそれぞれ前記オリゴヌクレオチドの同一の鎖の３'末端及び５'末端に結合され、
好ましくは、Ｙは２であり、２つの
【化１５】
2021504454.tif 000142
はそれぞれ前記オリゴヌクレオチドの２つの鎖の３'末端に結合され、
好ましくは、Ｙは２であり、２つの
【化１６】
2021504454.tif 000143
はそれぞれ前記オリゴヌクレオチドの２つの鎖の５'末端に結合され、
好ましくは、Ｙは３であり、３つの
【化１７】
2021504454.tif 000144
のうちの２つは、それぞれ前記オリゴヌクレオチドの同一の鎖の３'末端及び５'末端に結合され、もう１つは、その他の鎖の３'末端または５'末端に結合され、
好ましくは、Ｙは４であり、４つの
【化１８】
2021504454.tif 000145
はそれぞれ前記オリゴヌクレオチドの２つの鎖の３'末端及び５'末端に結合される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｘは０ではなく、ＭＴは少なくとも１つのＭと同様なＡＸ及び／またはｌｉｎｋｅｒ構造を有し、
好ましくは、Ｘは１より大きく、Ｘ個のＭは同様または異なる構造を有し、
好ましくは、Ｙは１より大きく、Ｙ個の
【化１９】
2021504454.tif 000146
は同様または異なる構造を有している、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｙは１で、Ｘは０であり、前記化合物は以下の特徴の１つを有し、
（１）ＭＴの構造は式（１）で表され、ＡＸは、Ａ１’、Ａ２’又はＡ３’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉ）で表され、
（２）ＭＴの構造は式（１）で表され、ＡＸは、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｉ）で表され、
（３）ＭＴの構造は式（１）で表され、ＡＸは、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｉｉ）で表され、
（４）ＭＴの構造は式（１）で表され、ＡＸは、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｖ）で表され、
（５）ＭＴの構造は式（２）で表され、ＡＸは、Ａ１’、Ａ２’またはＡ３’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉ）で表され、
（６）ＭＴの構造は式（２）で表され、ＡＸは、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｉ）で表され、
（７）ＭＴの構造は式（３）で表され、ＡＸは、Ａ１’、Ａ２’またはＡ３’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉ）で表され、
（８）ＭＴの構造は式（４）で表され、ＡＸは、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｖ）で表され、
（９）ＭＴの構造は式（２）で表され、ＡＸは、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｉｉ）で表され、
好ましくは、式（ｉ）で表されるｌｉｎｋｅｒにおいて、ｎは１または６であり、
好ましくは、式（ｉｉ）で表されるｌｉｎｋｅｒにおいて、ｎ１は１で、且つ、ｎ２は４であり、
好ましくは、式（ｉｉｉ）で表されるｌｉｎｋｅｒにおいて、ｎ１は１で、ｎ２は３で、且つ、ｎ３は４であり、
好ましくは、式（ｉｖ）で表されるｌｉｎｋｅｒにおいて、ｎは１である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｙは１で、Ｘは１、２または３であり、Ｘが２または３であるときに、各Ｍは同様な構造を有し、且つ前記化合物は以下の特徴の１つを有し、
（１）Ｍの構造は式（１’）で表され、ＡＸが、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉ）で表され、ＭＴの構造は式（１）で表され、ＡＸが、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉ）で表され、
（２）Ｍの構造は式（１’）で表され、ＡＸが、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉｉ）で表され、ＭＴの構造は式（１）で表され、ＡＸが、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉｉ）で表され、
（３）Ｍの構造は式（１’）で表され、ＡＸが、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉｉｉ）で表され、ＭＴの構造は式（１）で表され、ＡＸが、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉｉｉ）で表され、
（４）Ｍの構造は式（２’）で表され、ＡＸが、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉ）で表され、ＭＴの構造は式（２）で表され、ＡＸが、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉ）で表され、
（５）Ｍの構造は式（１’）で表され、ＡＸが、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉｉ）で表され、ＭＴの構造は式（１）で表され、ＡＸが、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉｉ）で表され、
（６）Ｍの構造は式（１’）で表され、ＡＸが、Ａ３’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉｉ）で表され、ＭＴの構造は式（１）で表され、ＡＸが、Ａ３’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉｉ）で表され、
好ましくは、式（ｉ）で表されるｌｉｎｋｅｒにおいて、ｎは１または６であり、
好ましくは、式（ｉｉ）で表されるｌｉｎｋｅｒにおいて、ｎ１は１で、且つ、ｎ２は４であり、
好ましくは、式（ｉｉｉ）で表されるｌｉｎｋｅｒにおいて、ｎ１は１で、ｎ２は３で、且つ、ｎ３は４である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｙは１で、Ｘは２であり、２つのＭは同様な構造を有し、式（１’）で表されるように、ＡＸが、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｉｖ）で表され、ＭＴの構造は式（４）で表され、ＡＸが、Ａ１’であり、ｌｉｎｋｅｒの構造が式（ｖ）で表され、
好ましくは、式（ｉｖ）で表されるｌｉｎｋｅｒにおいて、ｎは１である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１７】
前記化合物は、
【化２０】
2021504454.tif 000147
【化２１】
2021504454.tif 000148
【化２２】
2021504454.tif 000149
から選ばれ、
式中、ｎ１、ｎ２、ｎ３及びｎはそれぞれ独立して、１〜１０の整数から選ばれるものである、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１８】
一般式がＡｘ−ｌｉｎｋｅｒ−Ｒ１である化合物であって、ＡＸはリガンド、ｌｉｎｋｅｒは結合アーム、Ｒ１は
【化２３】
2021504454.tif 000150
であり、式中、Ｚはヒドロキシル基の保護基であり、４,４−ジメトキシトリフェニルメチル（ＤＭＴｒ）または４−メトキシトリフェニルクロロメチル（ＭＭＴ）が好ましい。
【請求項１９】
一般式がＡｘ−ｌｉｎｋｅｒ−Ｒ２である化合物であって、ＡＸはリガンド、ｌｉｎｋｅｒは結合アーム、Ｒ２は
【化２４】
2021504454.tif 000151
であり、式中、ｍ１及びｍ２はそれぞれ独立して１〜１０の整数から選ばれるものであり、Ｚはヒドロキシル基の保護基であり、４,４−ジメトキシトリフェニルメチル（ＤＭＴｒ）または４−メトキシトリフェニルクロロメチル（ＭＭＴ）が好ましい。
【請求項２０】
一般式がＡｘ−ｌｉｎｋｅｒ−Ｒ３である化合物であって、ＡＸはリガンド、ｌｉｎｋｅｒは結合アーム、Ｒ３は
【化２５】
2021504454.tif 000152
である。
【請求項２１】
一般式がＡｘ−ｌｉｎｋｅｒ−Ｒ４である化合物であって、ＡＸはリガンド、ｌｉｎｋｅｒは結合アーム、Ｒ４は
【化２６】
2021504454.tif 000153
である。
【請求項２２】
Ａｘはヒトアシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）のリガンドであり、
好ましくは、ＡＸは、ガラクトース、Ｎ-アセチル-Ｄ-ガラクトサミン、ガラクトース含有多糖類、Ｎ-アセチル-Ｄ-ガラクトサミン含有多糖類、ガラクトース誘導体（例えばガラクトースアセテートなどのガラクトースエステル）またはＮ-アセチル-Ｄ-ガラクトサミン誘導体（例えばＮ-アセチル-Ｄ-ガラクトサミンアセテートなどのＮ-アセチル-Ｄ-ガラクトサミンエステル）であり、
好ましくは、ＡＸは更にそれぞれ独立して、例えば、カルボニルアルキル基またはエステルアルキル基などの修飾基を持っており、好ましくは、前記アルキル基は、Ｃ１−６アルキル基またはＣ６−１２アルキル基であり、
好ましくは、ＡＸは
【化２７】
2021504454.tif 000154
から選ばれるものである、請求項１８〜２１のいずれか１つに記載の化合物。
【請求項２３】
ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉ）、式（ｉｉ）、式（ｉｉｉ）、式（ｉＶ）または式（Ｖ）で表され、
【化２８】
2021504454.tif 000155
式中、ｎは１〜１０の整数から選ばれるものであり、好ましくは、ｎは１または６であり、
【化２９】
2021504454.tif 000156
式中、ｎ１とｎ２はそれぞれ独立して１〜１０の整数から選ばれるものであり、好ましくはｎ１は１、好ましくはｎ２は４であり、
【化３０】
2021504454.tif 000157
式中、ｎ１、ｎ２、ｎ３はそれぞれ独立して１〜１０の整数から選ばれるものであり、好ましくはｎ１は１、好ましくはｎ２は３であり、好ましくはｎ３は４であり、
【化３１】
2021504454.tif 000158
式中、ｎは１〜１０の整数から選ばれるものであり、好ましくは、ｎは１であり、
【化３２】
2021504454.tif 000159
式中、ｎは１〜１０の整数から選ばれるものであり、好ましくは、ｎは４である、請求項１８〜２２のいずれか１つに記載の化合物。
【請求項２４】
前記化合物は、以下の特徴の１つを有し、
（１）ＡＸは、Ａ１、Ａ２またはＡ３であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉ）で表され、
（２）ＡＸは、Ａ１であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｉ）で表され、
（３）ＡＸは、Ａ１であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｉｉ）で表され、
（４）ＡＸは、Ａ１であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｖ）で表され、
好ましくは、式（ｉ）で表されるｌｉｎｋｅｒにおいて、ｎは１または６であり、
好ましくは、式（ｉｉ）で表されるｌｉｎｋｅｒにおいて、ｎ１は１、且つ、ｎ２は４であり、
好ましくは、式（ｉｉｉ）で表されるｌｉｎｋｅｒにおいて、ｎ１は１、ｎ２は３、且つ、ｎ３は４であり、
好ましくは、式（ｉｖ）で表されるｌｉｎｋｅｒにおいて、ｎは１であり、
好ましくは、前記化合物は、下記のものから選ばれ、
【化３３】
2021504454.tif 000160
式中、ｎは１〜１０の整数から選ばれるものであり、
【化３４】
2021504454.tif 000161
式中、ｎ１およびｎ２はそれぞれ独立して１〜１０の整数から選ばれるものであり、
【化３５】
2021504454.tif 000162
式中、ｎ１、ｎ２、ｎ３はそれぞれ独立して１〜１０の整数から選ばれるものである、請求項１８、２２または２３に記載の化合物。
【請求項２５】
前記化合物は、下記特徴のうちの１つを有し、
（１）ＡＸは、Ａ１、Ａ２またはＡ３であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉ）で表され、
（２）ＡＸは、Ａ１であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉｉ）で表され、
好ましくは、式（ｉ）で表されるｌｉｎｋｅｒにおいて、ｎは１または６であり、
好ましくは、式（ｉｉ）で表されるｌｉｎｋｅｒにおいて、ｎ１は１、且つ、ｎ２は４であり、
好ましくは、前記化合物は、下記のものから選ばれ、
【化３６】
2021504454.tif 000163
式中、ｎ、ｍ１、ｍ２はそれぞれ独立して１〜１０の整数から選ばれるものであり、
【化３７】
2021504454.tif 000164
式中、ｎ１、ｎ２、ｍ１、ｍ２はそれぞれ独立して１〜１０の整数から選ばれるものであり、
【化３８】
2021504454.tif 000165
式中、ｎ１、ｎ２、ｎ３、ｍ１、ｍ２はそれぞれ独立して１〜１０の整数から選ばれるものである、請求項１９、２２または２３に記載の化合物。
【請求項２６】
ＡＸは、Ａ１、Ａ２またはＡ３であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｉ）で表され、
好ましくは、式（ｉ）で表されるｌｉｎｋｅｒにおいて、ｎは１または６である、請求項２０、２２または２３に記載の化合物。
【請求項２７】
ＡＸは、Ａ１であり、ｌｉｎｋｅｒの構造は式（ｖ）で表され、
好ましくは、式（ｖ）で表されるｌｉｎｋｅｒにおいて、ｎは４である、請求項２１、２２または２３に記載の化合物。
【請求項２８】
オリゴヌクレオチドに対して修飾する方法であって、
１つまたは複数の化合物をオリゴヌクレオチドに結合させ、前記１つまたは複数の化合物は、請求項１８〜２７のいずれか１つに記載の化合物から選ばれるものであり、
好ましくは、前記方法において、前記化合物における
【化３９】
2021504454.tif 000166
に発生する化学反応により結合し、
好ましくは、前記オリゴヌクレオチドは、請求項９に定義され、
好ましくは、前記方法は、固相合成に用いられるオリゴヌクレオチドに対して修飾する方法。
【請求項２９】
オリゴヌクレオチドに対して修飾する方法であって、
オリゴヌクレオチドを提供し、請求項１８〜２０および２２〜２６のいずれか１項に定義された化合物から選ばれる第１の化合物をオリゴヌクレオチドに結合させて、共役基Ｍを含むオリゴヌクレオチドを取得するステップ（１）と、
請求項１８〜２７のいずれか１項に記載の化合物から選ばれる第２の化合物をステップ（１）において形成された共役基Ｍに結合させるステップ（２）と、を含み、
非限定的には、ステップ（２）を１回または複数回（例えば、２〜９回）繰り返すステップ（３）を更に含み、
非限定的には、ステップ（１）、ステップ（２）及びステップ（３）を１回または複数回（例えば、２〜９回）繰り返すステップ（４）を含み、
好ましくは、前記ステップ（１）と（２）において、前記第１の化合物または第２の化合物における
【化４０】
2021504454.tif 000167
に発生する化学反応により結合し、
好ましくは、前記オリゴヌクレオチドは、請求項９に定義され、
好ましくは、前記方法は、固相合成に用いられるオリゴヌクレオチドに対して修飾する方法。
【請求項３０】
請求項１８〜２７のいずれか１項に記載の化合物を含むキットであって、
好ましくは、前記キットには、オリゴヌクレオチドを合成および／または修飾するための試薬も含まれるキット。
【請求項３１】
請求項１〜１７のいずれか１項に記載の化合物、及び薬学的に許容される担体を含む薬物組成物であって、
好ましくは、前記医薬組成物は、テスト対象の肝臓関連疾患を予防および／または治療するために使用され、
好ましくは、前記肝臓関連疾患は、遺伝性血管性浮腫、Ｉ型家族性チロシン血症、アラジール症候群、α−１−アンチトリプシン欠乏症、胆汁酸合成および代謝異常、胆道閉鎖症、嚢胞性線維性肝疾患、特発性新生児肝炎、ミトコンドリア肝疾患、進行性家族性肝内胆汁うっ滞、原発性硬化性胆管炎、トランスサイレチンアミロイドーシス、血友病、ホモ接合性家族性高コレステロール血症、高脂血症、脂肪性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、高血糖およびＩＩ型糖尿病に類似した異常に高い肝臓グルコース産生に関連する疾患、肝炎、肝性ポルフィリン症から選ばれるものである薬物組成物。
【国際調査報告】
2021504454.tif 000168
2021504454.tif 000169
2021504454.tif 000170
2021504454.tif 000171
2021504454.tif 000172
2021504454.tif 000173
2021504454.tif 000174
2021504454.tif 000175
2021504454.tif 000176