(57)【要約】本発明は、ＣＤ２５２に特異的に結合する抗体、抗体フラグメント、および抗体−薬物コンジュゲートの使用による造血細胞の選択的枯渇によって、移植療法から生じる移植片対宿主病などの移植片対宿主病を予防および処置する方法を提供する。本明細書に記載の組成物および方法は、幹細胞障害および他の血液状態を含む様々な病状を処置するために使用され得る。【選択図】なし
2021517133.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
移植片対宿主病を患っているかまたはそのリスクがあるヒト患者においてＣＤ２５２＋細胞の集団を枯渇させる方法であって、前記方法は、抗ＣＤ２５２抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の有効量を前記患者に投与することを含み、前記抗ＣＤ２５２ＡＤＣは式Ａｂ−Ｚ−Ｌ−Ｃｙで表され、式中、ＡｂはヒトＣＤ２５２に結合する抗体であって、Ｌはリンカーであって、Ｚは化学部分であって、Ｃｙは細胞毒素である、方法。
【請求項２】
前記患者が造血幹細胞を含む移植を受ける前に、前記患者に前記抗ＣＤ２５２ＡＤＣを投与することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記患者が造血幹細胞を含む移植を受ける約３日前に、前記患者に前記抗ＣＤ２５２ＡＤＣを投与することを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けるのと同時に、前記患者に前記抗ＣＤ２５２ＡＤＣを投与することを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けた後に、前記患者に前記抗ＣＤ２５２ＡＤＣを投与することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記細胞毒素は、微小管結合剤またはＲＮＡポリメラーゼ阻害剤である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤はアマトキシンである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記アマトキシンは、α−アマニチン、β−アマニチン、γ−アマニチン、ε−アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、およびプロアマヌリンからなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
移植片対宿主病を患っているかまたはそのリスクがあるヒト患者においてＣＤ２５２＋細胞の集団を枯渇させる方法であって、前記方法は、抗ＣＤ２５２抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の有効量を前記患者に投与することを含み、前記抗ＣＤ２５２ＡＤＣは式Ａｂ−Ｚ−Ｌ−Ａｍで表され、式中、Ａｂは抗体またはその抗原結合フラグメントであって、Ｌはリンカーであって、Ｚは化学部分であって、Ａｍはアマトキシンである、方法。
【請求項１０】
Ａｍ−Ｌ−Ｚは式（ＩＡ）で表される、請求項９に記載の方法：
【化１】
2021517133.tif 000067
［式中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＡ、またはＯＲＣであり；
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＢ、またはＯＲＣであり；
ＲＡおよびＲＢは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して任意に置換された５員ヘテロシクロアルキル基を形成し；
Ｒ３は、Ｈ、ＲＣ、またはＲＤであり；
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、それぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり；
Ｒ８は、ＯＨ、ＮＨ２、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＮＨＲＣ、またはＮＲＣＲＤであり；
Ｒ９は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、またはＯＲＤであり；
Ｘは、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、または−ＳＯ２−であり；
ＲＣは、−Ｌ−Ｚであり；
ＲＤは、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルケニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルキニル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；
Ｌは、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキレン、任意に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルケニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルキニレン、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、任意に置換されたヘテロアリーレン、任意にジペプチド、任意に−（Ｃ＝Ｏ）−、任意にペプチド、またはそれらの組み合わせであり；ならびに
Ｚは、Ｌ上に存在する反応性置換基と、前記抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学部分であり、
式中、Ａｍは、ちょうど１つのＲＣ置換基を含む］。
【請求項１１】
Ｌ−Ｚは、
【化２】
2021517133.tif 000068
である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
Ａｍ−Ｌ−Ｚ−Ａｂは、
【化３】
2021517133.tif 000069
である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
Ａｍ−Ｌ−Ｚは式（ＩＢ）で表される、請求項９に記載の方法：
【化４】
2021517133.tif 000070
［式中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＡ、またはＯＲＣであり；
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＢ、またはＯＲＣであり；
ＲＡおよびＲＢは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して任意に置換された５員ヘテロシクロアルキル基を形成し；
Ｒ３は、Ｈ、ＲＣ、またはＲＤであり；
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、それぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり；
Ｒ８は、ＯＨ、ＮＨ２、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＮＨＲＣ、またはＮＲＣＲＤであり；
Ｒ９は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、またはＯＲＤであり；
Ｘは、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、または−ＳＯ２−であり；
ＲＣは、−Ｌ−Ｚであり；
ＲＤは、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルケニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルキニル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；
Ｌは、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキレン、任意に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルケニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルキニレン、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、任意に置換されたヘテロアリーレン、任意にジペプチド、任意に−（Ｃ＝Ｏ）−、任意にペプチド、またはそれらの組み合わせであり；ならびに
Ｚは、Ｌ上に存在する反応性置換基と、前記抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学部分であり、
式中、Ａｍは、ちょうど１つのＲＣ置換基を含む］。
【請求項１４】
Ｌ−Ｚは、
【化５】
2021517133.tif 000071
である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
Ｌ−Ｚは、
【化６】
2021517133.tif 000072
である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
Ａｍ−Ｌ−Ｚ−Ａｂは、
【化７】
2021517133.tif 000073
である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
Ａｍ−Ｌ−Ｚは、式（ＩＩ）、式（ＩＩＡ）、または式（ＩＩＢ）で表される、請求項９に記載の方法：
【化８−１】
2021517133.tif 000074
【化８−２】
2021517133.tif 000075
［式中、Ｘは、Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ２であり；
Ｒ１はＨであるか、化学部分Ｚを介して抗体またはその抗原結合フラグメントに共有結合しているリンカーであり、当該化学部分Ｚは、前記リンカー上に存在する反応性置換基と前記抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成され；ならびに
Ｒ２はＨであるか、化学部分Ｚを介して抗体またはその抗原結合フラグメントに共有結合しているリンカーであり、当該化学部分Ｚは、前記リンカー上に存在する反応性置換基と前記抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成され；
ここで、Ｒ１がＨである場合、Ｒ２が前記リンカーであり、Ｒ２がＨである場合、Ｒ１が前記リンカーである］。
【請求項１８】
Ｌ−Ｚは、
【化９】
2021517133.tif 000076
である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
Ａｍ−Ｌ−Ｚは、以下のうちの１つである、請求項１８に記載の方法：
【化１０】
2021517133.tif 000077
【請求項２０】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記Ｆｃドメインにおけるシステイン残基によって前記アマトキシンにコンジュゲートされる、請求項９に記載の方法。
【請求項２１】
前記システイン残基は、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記Ｆｃドメインにおける変異によって導入される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記システイン残基はＣｙｓ１１８、Ｃｙｓ２３９、およびＣｙｓ２６５からなる群から選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記システイン残基は、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記Ｆｃドメインに天然に存在する、請求項２０に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＦｃドメインはＩｇＧ  Ｆｃドメインであり、前記システイン残基はＣｙｓ２６１、Ｃｙｓ３２１、Ｃｙｓ３６７、およびＣｙｓ４２５からなる群から選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記抗ＣＤ２５２ＡＤＣは、抗原提示細胞（ＡＰＣ）によって内在化される、先行する請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記細胞毒素は、微小管結合剤またはアウリスタチンである、請求項１に記載の方法。
【請求項２７】
前記微小管結合剤はメイタンシンである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記微小管結合剤はメイタンシノイドである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
前記メイタンシノイドは、ＤＭ１、ＤＭ３、およびＤＭ４、ならびにメイタンシノールからなる群から選択される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記アウリスタチンは、モノメチルアウリスタチンＥまたはモノメチルアウリスタチンＦである、請求項２６に記載の方法。
【請求項３１】
前記細胞毒素は、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、およびイダルビシンからなる群から選択されるアントラサイクリンである、請求項１に記載の方法。
【請求項３２】
移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を処置することを必要とするヒト患者において移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を処置する方法であって、ＧＶＨＤが処置されるように抗ＣＤ２５２ＡＤＣを前記ヒト患者に投与することを含む、方法。
【請求項３３】
前記ヒト患者は以前に移植を受けたことがある、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記ヒト患者は、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの投与前４日以内に前記移植を受けた、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記抗ＣＤ２５２抗体またはその抗原結合フラグメントは、単回用量として前記ヒト患者に投与される、請求項３２〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートされた抗ＣＤ２５２抗体またはその抗原結合部分を含む、抗ＣＤ２５２抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
【請求項３７】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＥからなる群から選択されるアイソタイプを有する、請求項３６に記載の抗ＣＤ２５２ＡＤＣ。
【請求項３８】
前記ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプである、請求項３７に記載の抗ＣＤ２５２ＡＤＣ。
【請求項３９】
前記抗体はインタクト抗体である、請求項３６〜３８のいずれか一項に記載の抗ＣＤ２５２ＡＤＣ。
【請求項４０】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、二重特異性抗体、二重可変免疫グロブリンドメイン、一本鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、抗体様タンパク質スキャフォールド、Ｆｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２分子、またはタンデムｄｉ−ｓｃＦｖである、請求項３６〜３９のいずれか一項に記載の抗ＣＤ２５２ＡＤＣ。
【請求項４１】
前記抗ＣＤ２５２抗体またはその抗原結合部分は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含有する重鎖可変領域を含み、且つ、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含有する軽鎖可変領域を含む、請求項３６に記載の抗ＣＤ２５２ＡＤＣ。
【請求項４２】
前記抗ＣＤ２５２抗体またはその抗原結合部分は、配列番号３〜５のアミノ酸配列に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメインを含有する重鎖可変領域を含み、且つ、配列番号６〜８のアミノ酸配列に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメインを含有する軽鎖可変領域を含む、請求項３６に記載の抗ＣＤ２５２ＡＤＣ。
【請求項４３】
前記細胞毒素は、微小管結合剤またはＲＮＡポリメラーゼ阻害剤である、請求項３６に記載の抗ＣＤ２５２ＡＤＣ。
【請求項４４】
前記ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤はアマトキシンである、請求項４３に記載の抗ＣＤ２５２ＡＤＣ。
【請求項４５】
前記アマトキシンは、α−アマニチン、β−アマニチン、γ−アマニチン、ε−アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、およびプロアマヌリンからなる群から選択される、請求項４４に記載の抗ＣＤ２５２ＡＤＣ。
【請求項４６】
式Ａｂ−Ｚ−Ｌ−Ａｍで表される抗ＣＤ２５２ＡＤＣであって、式中、Ａｂは請求項４４に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、Ｌはリンカーであって、Ｚは化学部分であって、Ａｍはアマトキシンである、抗ＣＤ２５２ＡＤＣ。
【請求項４７】
Ａｍ−Ｌ−Ｚは式（ＩＡ）で表わされる、請求項４６に記載の抗ＣＤ２５２ＡＤＣ：
【化１１】
2021517133.tif 000078
［式中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＡ、またはＯＲＣであり；
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＢ、またはＯＲＣであり；
ＲＡおよびＲＢは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して任意に置換された５員ヘテロシクロアルキル基を形成し；
Ｒ３は、Ｈ、ＲＣ、またはＲＤであり；
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、それぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり；
Ｒ８は、ＯＨ、ＮＨ２、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＮＨＲＣ、またはＮＲＣＲＤであり；
Ｒ９は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、またはＯＲＤであり；
Ｘは、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、または−ＳＯ２−であり；
ＲＣは、−Ｌ−Ｚであり；
ＲＤは、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルケニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルキニル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；
Ｌは、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキレン、任意に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルケニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルキニレン、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、任意に置換されたヘテロアリーレン、任意にジペプチド、任意に−（Ｃ＝Ｏ）−、任意にペプチド、またはそれらの組み合わせであり；ならびに
Ｚは、Ｌ上に存在する反応性置換基と、前記抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学部分であり、
式中、Ａｍは、ちょうど１つのＲＣ置換基を含む］。
【請求項４８】
Ｌ−Ｚは、
【化１２】
2021517133.tif 000079
である、請求項４７に記載の抗ＣＤ２５２ＡＤＣ。
【請求項４９】
Ａｍ−Ｌ−Ｚ―Ａｂは、
【化１３】
2021517133.tif 000080
である、請求項４７に記載の抗ＣＤ２５２ＡＤＣ。
【請求項５０】
Ａｍ−Ｌ−Ｚは式（ＩＢ）で表わされる、請求項４６に記載の抗ＣＤ２５２ＡＤＣ：
【化１４】
2021517133.tif 000081
［式中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＡ、またはＯＲＣであり；
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＢ、またはＯＲＣであり；
ＲＡおよびＲＢは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して任意に置換された５員ヘテロシクロアルキル基を形成し；
Ｒ３は、Ｈ、ＲＣ、またはＲＤであり；
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、それぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり；
Ｒ８は、ＯＨ、ＮＨ２、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＮＨＲＣ、またはＮＲＣＲＤであり；
Ｒ９は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、またはＯＲＤであり；
Ｘは、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、または−ＳＯ２−であり；
ＲＣは、−Ｌ−Ｚであり；
ＲＤは、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルケニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルキニル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；
Ｌは、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキレン、任意に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルケニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルキニレン、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、任意に置換されたヘテロアリーレン、任意にジペプチド、任意に−（Ｃ＝Ｏ）−、任意にペプチド、またはそれらの組み合わせであり；ならびに
Ｚは、Ｌ上に存在する反応性置換基と、前記抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学部分であり、
式中、Ａｍは、ちょうど１つのＲＣ置換基を含む］。
【請求項５１】
Ｌ−Ｚは、
【化１５】
2021517133.tif 000082
である、請求項５０に記載の抗ＣＤ２５２ＡＤＣ。
【請求項５２】
Ｌ−Ｚは、
【化１６】
2021517133.tif 000083
である、請求項５１に記載の抗ＣＤ２５２ＡＤＣ。
【請求項５３】
Ａｍ−Ｌ−Ｚ−Ａｂは、
【化１７】
2021517133.tif 000084
である、請求項５２に記載の抗ＣＤ２５２ＡＤＣ。
【請求項５４】
Ａｍ−Ｌ−Ｚは、式（ＩＩ）、式（ＩＩＡ）、または式（ＩＩＢ）で表される、請求項４６に記載の抗ＣＤ２５２ＡＤＣ：
【化１８−１】
2021517133.tif 000085
【化１８−２】
2021517133.tif 000086
［式中、Ｘは、Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ２であり；
Ｒ１はＨであるか、化学部分Ｚを介して抗体またはその抗原結合フラグメントに共有結合しているリンカーであり、当該化学部分Ｚは、前記リンカー上に存在する反応性置換基と前記抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成され；ならびに
Ｒ２はＨであるか、化学部分Ｚを介して抗体またはその抗原結合フラグメントに共有結合しているリンカーであり、当該化学部分Ｚは、前記リンカー上に存在する反応性置換基と前記抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成され；
ここで、Ｒ１がＨである場合、Ｒ２が前記リンカーであり、Ｒ２がＨである場合、Ｒ１が前記リンカーである］。
【請求項５５】
Ｌ−Ｚは、
【化１９】
2021517133.tif 000087
である、請求項５４に記載の抗ＣＤ２５２ＡＤＣ。
【請求項５６】
Ａｍ−Ｌ−Ｚは、以下のうちの１つである、請求項５５に記載の抗ＣＤ２５２ＡＤＣ：
【化２０】
2021517133.tif 000088
【請求項５７】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記Ｆｃドメインにおけるシステイン残基によって前記アマトキシンにコンジュゲートされる、請求項４６に記載の抗ＣＤ２５２ＡＤＣ。
【請求項５８】
前記システイン残基は、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記Ｆｃドメインにおける変異によって導入される、請求項５７に記載の抗ＣＤ２５２ＡＤＣ。
【請求項５９】
前記システイン残基はＣｙｓ１１８、Ｃｙｓ２３９、およびＣｙｓ２６５からなる群から選択される、請求項５８に記載の抗ＣＤ２５２ＡＤＣ。
【請求項６０】
前記システイン残基は、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記Ｆｃドメインに天然に存在する、請求項５７に記載の抗ＣＤ２５２ＡＤＣ。
【請求項６１】
前記ＦｃドメインはＩｇＧ  Ｆｃドメインであり、前記システイン残基はＣｙｓ２６１、Ｃｙｓ３２１、Ｃｙｓ３６７、およびＣｙｓ４２５からなる群から選択される、請求項６０に記載の抗ＣＤ２５２ＡＤＣ。
【請求項６２】
前記抗ＣＤ２５２抗体、そのフラグメント、またはＡＤＣは、抗原提示細胞（ＡＰＣ）によって内在化される、請求項３６〜６１のいずれか一項に記載の抗ＣＤ２５２ＡＤＣ。
【請求項６３】
前記細胞毒素は、微小管結合剤またはアウリスタチンである、請求項３６に記載の抗ＣＤ２５２ＡＤＣ。
【請求項６４】
前記微小管結合剤はメイタンシンである、請求項６３に記載の抗ＣＤ２５２ＡＤＣ。
【請求項６５】
前記微小管結合剤はメイタンシノイドである、請求項６３に記載の抗ＣＤ２５２ＡＤＣ。
【請求項６６】
前記メイタンシノイドは、ＤＭ１、ＤＭ３、およびＤＭ４、ならびにメイタンシノールからなる群から選択される、請求項６５に記載の抗ＣＤ２５２ＡＤＣ。
【請求項６７】
前記アウリスタチンは、モノメチルアウリスタチンＥまたはモノメチルアウリスタチンＦである、請求項６３に記載の抗ＣＤ２５２ＡＤＣ。
【請求項６８】
前記細胞毒素は、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、およびイダルビシンからなる群から選択されるアントラサイクリンである、請求項３６に記載の抗ＣＤ２５２ＡＤＣ。
【請求項６９】
請求項３６〜６８のいずれか一項に記載の抗ＣＤ２５２ＡＤＣと、薬学的に活性な担体とを含む、医薬組成物。
【請求項７０】
移植片対宿主病を患っているかまたはそのリスクがあるヒト患者においてＣＤ２５２＋細胞の集団を枯渇させる方法であって、請求項３６〜６８のいずれか一項に記載の抗ＣＤ２５２ＡＤＣの有効量を前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項７１】
前記患者が造血幹細胞を含む移植を受ける前に、前記患者に前記抗ＣＤ２５２ＡＤＣを投与することを含む、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記患者が造血幹細胞を含む移植を受ける約３日前に、前記患者に前記抗ＣＤ２５２ＡＤＣを投与することを含む、請求項７０に記載の方法。
【請求項７３】
前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けるのと同時に、前記患者に前記抗ＣＤ２５２ＡＤＣを投与することを含む、請求項７７に記載の方法。
【請求項７４】
前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けた後に、前記患者に前記抗ＣＤ２５２ＡＤＣを投与することを含む、請求項７０に記載の方法。
【請求項７５】
移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を処置することを必要とするヒト患者において移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を処置する方法であって、前記方法は、ＧＶＨＤが処置されるように、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートされた抗ＣＤ２５２抗体またはその抗原結合部分を含む抗ＣＤ２５２抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を前記ヒト患者に投与することを含む、方法。
【請求項７６】
移植片不全またはＧＶＨＤを処置することを必要とするヒト患者において移植片不全またはＧＶＨＤを処置する方法であって、前記方法は、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートされた抗ＣＤ２５２抗体またはその抗原結合部分を含む抗ＣＤ２５２抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の有効量を前記ヒト患者に投与することを含む、方法。
【請求項７７】
前記ヒト患者は以前に移植を受けたことがある、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
前記ヒト患者は、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの投与前４日以内に前記移植を受けた、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
移植片不全またはＧＶＨＤを有するリスクがあるヒト患者を処置する方法であって、請求項３６〜６８のいずれか一項に記載の抗ＣＤ２５２ＡＤＣの有効量を前記移植片不全またはＧＶＨＤを有するリスクがあるヒト患者に投与することと、その後前記ヒト対象に移植片を投与することを含む、方法。
【請求項８０】
前記ＡＤＣは、単回用量として前記ヒト患者に投与される、請求項７６〜７９のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の相互参照】
【０００１】
本出願は、２０１８年３月８日に出願された米国仮出願第６２／６４０，５４３号に対する優先権を主張する。前述の出願の内容は、参照によりその全体が本明細書に援用される。
【技術分野】
【０００２】
本発明は移植療法の分野に関し、抗ＣＤ２５２抗体、その抗原結合フラグメント、および抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の投与による移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の処置方法を提供する。
【背景技術】
【０００３】
移植後のＧＶＨＤの処置に関してかなりの進歩がなされてきたが、特にＧＶＨＤによる死亡率の低下に関して、方法の改善が当技術分野において依然として必要とされている。ＧＶＨＤの従来の処置には、コルチコステロイドやシクロスポリンなどの強力な薬物による全身免疫抑制療法が必要である。ミコフェノール酸モフェチル、ラパマイシン（シロリムス）、イマチニブ、およびリツキシマブなどの薬剤は、ステロイド不応性ＧＶＨＤ患者に使用される。しかしながら、これらの処置は有効性が制限されており、しばしば深刻な副作用を引き起こす。ＧＶＨＤ患者の５０％のみが診断後５年以内に免疫抑制治療を中止することができ、１０％は５年を超える継続治療を必要とする。残りの４０％は、ＧＶＨＤが治る前に死亡または再発悪性腫瘍を発症する。ハイリスクＧＶＨＤ（血小板数＜１００，０００／マイクロリットル、またはＧＶＨＤからの進行性発症）の患者の５年生存率は４０〜５０％に過ぎない。このように、ＧＶＨＤを予防および処置するための革新的戦略の開発は、重要な未充足の臨床的ニーズを表している。したがって、ＧＶＨＤの細胞メディエーターをより特異的に標的とする戦略を開発する必要がある。
【発明の概要】
【０００４】
本明細書に開示されるのは、ＧＶＨＤに関連する罹患率および死亡率を低減するために、ヒト患者などの患者における急性および慢性形態の移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を予防および処置するための組成物および方法である。
【０００５】
一実施形態では、本発明は、患者内の抗原提示細胞（ＡＰＣ）、すなわち、ＯＸ４０リガンド（すなわちＣＤ２５２）を発現するＡＰＣの集団を枯渇させるために、抗ＣＤ２５２抗体、その抗原結合フラグメント、または抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）で患者を処置する方法を特徴とする。
【０００６】
一態様では、本発明は、抗ＣＤ２５２抗体、その抗原結合フラグメントまたはＡＤＣの有効量を患者に投与することによって、ＧＶＨＤを処置することを必要とするヒト患者においてＧＶＨＤを処置する方法を特徴とする。
【０００７】
別の態様では、本発明は、抗ＣＤ２５２抗体、その抗原結合フラグメントまたはＡＤＣの有効量を患者に投与することによって、ＧＶＨＤを有するかまたはそのリスクがあるヒト患者において抗原提示細胞（ＡＰＣ）、すなわち、ＯＸ４０リガンド（すなわち、ＣＤ２５２）を発現するＡＰＣの集団を枯渇させる方法を提供する。
【０００８】
いくつかの実施形態では、前記抗ＣＤ２５２抗体、その抗原結合フラグメント、またはＡＤＣは、前記患者への投与後にＣＤ２５２（ＯＸ４０リガンド）を発現する抗原提示細胞（ＡＰＣ）によって内在化される。例えば、前記抗体、その抗原結合フラグメント、またはＡＤＣは、受容体媒介エンドサイトーシスによって（例えば、ＯＸ４０リガンドを発現する抗原提示細胞（ＡＰＣ）の細胞表面に結合すると）内在化され得る。いくつかの実施形態では、前記抗ＯＸ４０抗体、その抗原結合フラグメントに共有結合した細胞毒素は、化学的切断（例えば、本明細書に記載のリンカーの酵素的または非特異的切断）によって細胞内に放出され得る。次いで、前記細胞毒素は、ＯＸ４０リガンドを発現する抗原提示細胞（ＡＰＣ）の死を促進するために、その細胞内標的（とりわけ、有糸分裂紡錘体装置、核ＤＮＡ、リボソームＲＮＡ、またはトポイソメラーゼなど）にアクセスすることができる。
【０００９】
いくつかの実施形態では、前記抗ＣＤ２５２抗体、その抗原結合フラグメント、またはＡＤＣは、（例えば、微小管の動的不安定性を抑制することによって）ＣＤ２５２を発現する抗原提示細胞（ＡＰＣ）の有糸分裂停止を促進し、増殖を抑制することができる。
【００１０】
いくつかの実施形態では、前記抗体、その抗原結合フラグメント、ＡＤＣは、患者への投与時に、１つ以上複数の補体タンパク質、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好中球、および／または好酸球をリクルートすることによって細胞の死を促進し得る。
【００１１】
いくつかの実施形態では、前記抗ＣＤ２５２抗体、その抗原結合フラグメント、またはＡＤＣは、患者への投与時に、１つ以上の補体タンパク質、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好中球、および／または好酸球をリクルートすることによって、ＯＸ４０リガンドを発現する抗原提示細胞（ＡＰＣ）の死を促進し得る。
【００１２】
さらなる態様では、本発明は、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を予防または軽減することを必要とするヒト患者において移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を予防または軽減する方法であって、前記方法は、ＧＶＨＤが予防されるように抗ＣＤ２５２抗体を前記ヒト患者に投与することを含む、方法を特徴とする。いくつかの実施形態では、前記抗ＣＤ２５２抗体は、細胞毒素に結合している（すなわち、抗ＣＤ２５２ＡＤＣ）。一実施形態では、前記方法は、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受ける前に、前記患者に抗ＣＤ２５２抗体または抗ＣＤ２５２ＡＤＣを投与することを含む。別の実施形態では、前記方法は、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受ける約３日前に、前記患者に抗ＣＤ２５２抗体または抗ＣＤ２５２ＡＤＣを投与することを含む。別の実施形態では、前記方法は、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けるのと同時に、前記患者に抗ＣＤ２５２抗体または抗ＣＤ２５２ＡＤＣを投与することを含む。さらなる実施形態では、前記方法は、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けた後に、前記患者に抗ＣＤ２５２抗体または抗ＣＤ２５２ＡＤＣを投与することを含む。さらに別の実施形態では、前記方法は、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けた約１時間〜約１０日（例えば、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約２４時間、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約８日、約９日、または約１０日）後に、前記患者に抗ＣＤ２５２抗体または抗ＣＤ２５２ＡＤＣを投与することを含む。さらなる実施形態では、前記方法は、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けた約１〜８日後に、前記患者に抗ＣＤ２５２抗体または抗ＣＤ２５２ＡＤＣを投与することを含む。別の実施形態では、前記方法は、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けた約１〜７日後に、前記患者に抗ＣＤ２５２抗体または抗ＣＤ２５２ＡＤＣを投与することを含む。さらなる実施形態では、前記方法は、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けた約１〜６日後に、前記患者に抗ＣＤ２５２抗体または抗ＣＤ２５２ＡＤＣを投与することを含む。さらなる実施形態では、前記方法は、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けた約１〜５日後に、前記患者に抗ＣＤ２５２抗体または抗ＣＤ２５２ＡＤＣを投与することを含む。さらなる実施形態では、前記方法は、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けた約２〜４日後に、前記患者に抗ＣＤ２５２抗体または抗ＣＤ２５２ＡＤＣを投与することを含む。さらなる実施形態では、前記方法は、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けた約３〜４日後に、前記患者に抗ＣＤ２５２抗体または抗ＣＤ２５２ＡＤＣを投与することを含む。他の実施形態では、前記移植は同種移植である。
【００１３】
さらに別の態様では、本発明は、ＧＶＨＤを有するかまたはＧＶＨＤを発症するリスクがあるヒト対象においてＣＤ２５２を発現する抗原提示細胞（ＡＰＣ）の集団を枯渇させる方法であって、前記方法は、前記ＣＤ２５２を発現する抗原提示細胞（ＡＰＣ）の集団が枯渇するように抗ＣＤ２５２ＡＤＣを前記ヒト患者に投与することを含み、前記抗ＣＤ２５２ＡＤＣは、細胞毒素に結合した抗ＯＸ４０リガンド抗体を含む、方法を特徴とする。一実施形態では、前記方法は、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受ける前に、前記患者に抗ＣＤ２５２抗体または抗ＣＤ２５２ＡＤＣを投与することを含む。別の実施形態では、前記方法は、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受ける約３日前に、前記患者に抗ＣＤ２５２抗体または抗ＣＤ２５２ＡＤＣを投与することを含む。別の実施形態では、前記方法は、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けるのと同時に、前記患者に抗ＣＤ２５２抗体または抗ＣＤ２５２ＡＤＣを投与することを含む。さらなる実施形態では、前記方法は、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けた後に、前記患者に抗ＯＸ４０抗体または抗ＣＤ２５２ＡＤＣを投与することを含む。さらに別の実施形態では、前記方法は、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けた約１時間〜約１０日（例えば、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約２４時間、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約８日、約９日、または約１０日）、約１時間〜約６時間、約１時間〜約１２時間、約１時間〜約２４時間、約１日〜約２日、約１時間〜約３日、約１日〜約４日、約１日〜約５日、約１日〜約６日、約１日〜約７日、約１日〜約８日、約１日〜約９日、または約１日〜約１０日後に前記患者に抗ＣＤ２５２抗体または抗ＣＤ２５２ＡＤＣを投与することを含む。さらなる実施形態では、前記方法は、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けた約１〜８日後に、前記患者に抗ＣＤ２５２抗体または抗ＣＤ２５２ＡＤＣを投与することを含む。別の実施形態では、前記方法は、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けた約１〜７日後に、前記患者に抗ＣＤ２５２抗体または抗ＣＤ２５２ＡＤＣを投与することを含む。さらなる実施形態では、前記方法は、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けた約１〜６日後に、前記患者に抗ＣＤ２５２抗体または抗ＣＤ２５２ＡＤＣを投与することを含む。さらなる実施形態では、前記方法は、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けた約１〜５日後に、前記患者に抗ＣＤ２５２抗体または抗ＣＤ２５２ＡＤＣを投与することを含む。さらなる実施形態では、前記方法は、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けた約２〜４日後に、前記患者に抗ＣＤ２５２抗体または抗ＣＤ２５２ＡＤＣを投与することを含む。さらなる実施形態では、前記方法は、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けた約３〜４日後に、前記患者に抗ＣＤ２５２抗体または抗ＣＤ２５２ＡＤＣを投与することを含む。他の実施形態では、前記移植は同種移植である。
【００１４】
一実施形態では、前記抗ＣＤ２５２抗体またはその抗原結合部分は、配列番号１のアミノ酸配列に記載の重鎖可変領域を含み、且つ、配列番号２のアミノ酸配列に記載の軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、前記抗ＣＤ２５２抗体またはその抗原結合部分は、配列番号１の重鎖可変領域に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含有する重鎖を含み、且つ、配列番号２の軽鎖可変領域に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含有する軽鎖を含む。特定の実施形態では、前記抗ＣＤ２５２抗体またはその抗原結合部分は、配列番号３〜５に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲを含有する重鎖を含み、且つ、配列番号６〜８に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含有する軽鎖を含む。
【００１５】
別の実施形態では、前記抗ＣＤ２５２抗体またはその抗原結合部分は、配列番号１７のアミノ酸配列に記載の重鎖可変領域を含み、且つ、配列番号１８のアミノ酸配列に記載の軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、前記抗ＣＤ２５２抗体またはその抗原結合部分は、配列番号１７の重鎖可変領域に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含有する重鎖を含み、且つ、配列番号１８の軽鎖可変領域に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含有する軽鎖を含む。特定の実施形態では、前記抗ＣＤ２５２抗体またはその抗原結合部分は、配列番号１１〜１３に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲを含有する重鎖を含み、且つ、配列番号１４〜１６に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含有する軽鎖を含む。
【００１６】
さらに別の態様では、本発明は、配列番号９に記載のアミノ酸配列を含有する全長重鎖を含み、且つ、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含有する全長軽鎖を含む抗ＣＤ２５２抗体またはその抗原結合部分を特徴とする。
【００１７】
特定の実施形態では、抗ＣＤ２５２抗体またはそのフラグメントは、細胞毒素にコンジュゲートされる。抗ＣＤ２５２抗体（またはそのフラグメント）にコンジュゲートされ得る細胞毒素の例には、限定されないが、微小管結合剤が含まれる。
【００１８】
一態様では、本発明は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含有する重鎖可変領域を含み、且つ、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含有する軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ２５２抗体またはその抗原結合部分を特徴とする。
【００１９】
別の態様では、本発明は、配列番号１のアミノ酸配列に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメインを含有する重鎖可変領域を含み、且つ、配列番号２のアミノ酸配列に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメインを含有する軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ２５２抗体またはその抗原結合部分を特徴とする。特定の実施形態では、前記抗ＣＤ２５２抗体またはその抗原結合部分は、配列番号３〜５に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメインを含有する重鎖を含み、且つ、配列番号６〜８に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメインを含有する軽鎖を含む。
【００２０】
一実施形態では、前記抗ＣＤ２５２抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＥからなる群から選択されるアイソタイプを有する。別の実施形態では、前記ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプである。さらなる実施形態では、前記抗ＣＤ２５２抗体はインタクト抗体である。
【００２１】
いくつかの実施形態では、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、二重特異性抗体、二重可変免疫グロブリンドメイン、一本鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、抗体様タンパク質スキャフォールド、Ｆｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２分子、またはタンデムｄｉ−ｓｃＦｖである。
【００２２】
別の態様では、本発明は、本発明の抗体またはその抗原結合部分と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を特徴とする。
【００２３】
別の態様では、本発明は、本発明の抗ＣＤ２５２抗体またはその抗原フラグメントをヒト患者に投与することによって、移植片不全またはＧＶＨＤを処置することを必要とするヒト患者において移植片不全またはＧＶＨＤを処置する方法を特徴とする。一実施形態では、前記ヒト患者は以前に移植を受けたことがある。別の実施形態では、前記ヒト患者は、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの投与前４日以内に前記移植を受けた。別の実施形態では、前記ヒト患者は、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの投与前３日以内に前記移植を受けた。別の実施形態では、前記ヒト患者は、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの投与前２日以内に前記移植を受けた。別の実施形態では、前記ヒト患者は、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの投与前１日以内に前記移植を受けた。別の実施形態では、前記ヒト患者は、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの投与の１〜４日前に前記移植を受けた。別の実施形態では、前記ヒト患者は、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの投与前１日以内に前記移植を受けた。別の実施形態では、前記ヒト患者は、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの投与の２〜４日前に前記移植を受けた。別の実施形態では、前記ヒト患者は、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの投与前１日以内に前記移植を受けた。別の実施形態では、前記ヒト患者は、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの投与の３〜４日前に前記移植を受けた。
【００２４】
別の態様では、本発明は、本発明の抗ＣＤ２５２抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を移植片不全またはＧＶＨＤを有するリスクがあるヒト患者に投与することと、その後前記ヒト対象に移植片を投与することによって、移植片不全またはＧＶＨＤを有するリスクがあるヒト患者を処置する方法を特徴とする。特定の実施形態では、前記抗ＣＤ２５２抗体またはその抗原結合フラグメントは、単回用量として前記ヒト患者に投与される。
【００２５】
別の態様では、本発明は、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートされた本明細書に記載の抗ＣＤ２５２抗体またはその抗原結合部分を含む、抗ＣＤ２５２抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を特徴とする。一実施形態では、前記細胞毒素は、微小管結合剤またはＲＮＡポリメラーゼ阻害剤である。別の実施形態では、前記ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤はアマトキシンである。さらに別の実施形態では、前記アマトキシンはアマニチンである。別の実施形態では、前記アマトキシンは、α−アマニチン、β−アマニチン、γ−アマニチン、ε−アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、およびプロアマヌリンからなる群から選択される。
【００２６】
別の態様では、本発明は、式Ａｂ−Ｚ−Ｌ−Ａｍで表される抗ＣＤ２５２ＡＤＣであって、式中、Ａｂは本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、Ｌはリンカーであって、Ｚは化学部分であって、Ａｍはアマトキシンである、抗ＣＤ２５２ＡＤＣを特徴とする。いくつかの実施形態では、前記アマトキシンはリンカーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、前記アマトキシン−リンカーコンジュゲートＡｍ−Ｌ−Ｚは、式（Ｉ）で表される：
【化１】
2021517133.tif 000003
［式中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＡ、またはＯＲＣであり；
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＢ、またはＯＲＣであり；
ＲＡおよびＲＢは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して任意に置換された５員ヘテロシクロアルキル基を形成し；
Ｒ３は、Ｈ、ＲＣ、またはＲＤであり；
Ｒ４は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり；
Ｒ５は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり；
Ｒ６は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり；
Ｒ７は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり；
Ｒ８は、ＯＨ、ＮＨ２、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＮＨＲＣ、またはＮＲＣＲＤであり；
Ｒ９は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、またはＯＲＤであり；
Ｘは、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、または−ＳＯ２−であり；
ＲＣは、−Ｌ−Ｚであり；
ＲＤは、任意に置換されたアルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ６アルキル）、任意に置換されたヘテロアルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ６ヘテロアルキル）、任意に置換されたアルケニル（例えば、Ｃ２−Ｃ６アルケニル）、任意に置換されたヘテロアルケニル（例えば、Ｃ２−Ｃ６ヘテロアルケニル）、任意に置換されたアルキニル（例えば、Ｃ２−Ｃ６アルキニル）、任意に置換されたヘテロアルキニル（例えば、Ｃ２−Ｃ６ヘテロアルキニル）、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；
Ｌは、任意に置換されたアルキレン（例えば、Ｃ１−Ｃ６アルキレン）、任意に置換されたヘテロアルキレン（Ｃ１−Ｃ６ヘテロアルキレン）、任意に置換されたアルケニレン（例えば、Ｃ２−Ｃ６アルケニレン）、任意に置換されたヘテロアルケニレン（例えば、Ｃ２−Ｃ６ヘテロアルケニレン）、任意に置換されたアルキニレン（例えば、Ｃ２−Ｃ６アルキニレン）、任意に置換されたヘテロアルキニレン（例えば、Ｃ２−Ｃ６ヘテロアルキニレン）、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、任意に置換されたヘテロアリーレン、ジペプチド、−（Ｃ＝Ｏ）−、ペプチド、またはそれらの組み合わせなどのリンカーであり；ならびに
Ｚは、Ｌ上に存在する反応性置換基と、ＣＤ２５２に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学部分である］。
【００２７】
いくつかの実施形態では、Ａｍは、ちょうど１つのＲＣ置換基を含む。
【００２８】
いくつかの実施形態では、リンカーＬおよび化学部分Ｚは、Ｌ−Ｚとしてまとめて、
【化２】
2021517133.tif 000004
であり、上記式において、Ｓは、ＣＤ２５２に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基を表す（例えば、システイン残基の−ＳＨ基由来の）硫黄原子である。
【００２９】
いくつかの実施形態では、Ｌ−Ｚは、
【化３】
2021517133.tif 000005
である。
【００３０】
いくつかの実施形態では、Ａｍ−Ｌ−Ｚ−Ａｂは、
【化４】
2021517133.tif 000006
である。
【００３１】
一実施形態では、Ａｍ−Ｌ−Ｚは、式（ＩＡ）で表される：
【化５】
2021517133.tif 000007
［式中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＡ、またはＯＲＣであり；
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＢ、またはＯＲＣであり；
ＲＡおよびＲＢは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して任意に置換された５員ヘテロシクロアルキル基を形成し；
Ｒ３は、Ｈ、ＲＣ、またはＲＤであり；
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、それぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり；
Ｒ８は、ＯＨ、ＮＨ２、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＮＨＲＣ、またはＮＲＣＲＤであり；
Ｒ９は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、またはＯＲＤであり；
Ｘは、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、または−ＳＯ２−であり；
ＲＣは、−Ｌ−Ｚであり；
ＲＤは、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルケニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルキニル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；
Ｌは、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキレン、任意に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルケニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルキニレン、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、任意に置換されたヘテロアリーレン、ジペプチド、−（Ｃ＝Ｏ）−、ペプチド、またはそれらの組み合わせであり；ならびに
Ｚは、Ｌ上に存在する反応性置換基と、前記抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学部分であり； 
式中、Ａｍは、ちょうど１つのＲＣ置換基を含む］。
【００３２】
いくつかの実施形態では、リンカーＬと化学部分Ｚは、Ｌ−Ｚとしてまとめて、
【化６】
2021517133.tif 000008
である。
【００３３】
いくつかの実施形態では、Ｌ−Ｚは、
【化７】
2021517133.tif 000009
である。
【００３４】
いくつかの実施形態では、Ａｍ−Ｌ−Ｚ−Ａｂは、
【化８】
2021517133.tif 000010
である。
【００３５】
別の実施形態では、Ａｍ−Ｌ−Ｚは、式（ＩＢ）で表される：
【化９】
2021517133.tif 000011
［式中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＡ、またはＯＲＣであり；
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＢ、またはＯＲＣであり；
ＲＡおよびＲＢは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して任意に置換された５員ヘテロシクロアルキル基を形成し；
Ｒ３は、Ｈ、ＲＣ、またはＲＤであり；
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、それぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり；
Ｒ８は、ＯＨ、ＮＨ２、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＮＨＲＣ、またはＮＲＣＲＤであり；
Ｒ９は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、またはＯＲＤであり；
Ｘは、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、または−ＳＯ２−であり；
ＲＣは、−Ｌ−Ｚであり；
ＲＤは、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルケニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルキニル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；
Ｌは、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキレン、任意に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルケニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルキニレン、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、任意に置換されたヘテロアリーレン、ジペプチド、−（Ｃ＝Ｏ）−、ペプチド、またはそれらの組み合わせであり；ならびに
Ｚは、Ｌ上に存在する反応性置換基と、前記抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学部分であり； 
式中、Ａｍは、ちょうど１つのＲＣ置換基を含む］。
【００３６】
いくつかの実施形態では、リンカーＬと化学部分Ｚは、Ｌ−Ｚとしてまとめて、
【化１０】
2021517133.tif 000012
である。
【００３７】
いくつかの実施形態では、Ｌ−Ｚは、
【化１１】
2021517133.tif 000013
である。
【００３８】
いくつかの実施形態では、Ａｍ−Ｌ−Ｚ−Ａｂは、
【化１２】
2021517133.tif 000014
である。
【００３９】
いくつかの実施形態では、Ａｍ−Ｌ−Ｚは、式（ＩＩ）、式（ＩＩＡ）、または式（ＩＩＢ）で表される：
【化１３−１】
2021517133.tif 000015
【化１３−２】
2021517133.tif 000016
［式中、Ｘは、Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ２であり；
Ｒ１はＨであるか、化学部分Ｚを介して前記抗体またはその抗原結合フラグメントに共有結合しているリンカーであり、当該化学部分Ｚは、前記リンカー上に存在する反応性置換基と抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成され；ならびに
Ｒ２はＨであるか、化学部分Ｚを介して前記抗体またはその抗原結合フラグメントに共有結合しているリンカーであり、当該化学部分Ｚは、前記リンカー上に存在する反応性置換基と抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成され；
ここで、Ｒ１がＨである場合、Ｒ２が前記リンカーであり、Ｒ２がＨである場合、Ｒ１が前記リンカーである］。
【００４０】
いくつかの実施形態では、Ｌ−Ｚは、
【化１４】
2021517133.tif 000017
である。
【００４１】
いくつかの実施形態では、Ａｍ−Ｌ−Ｚは、以下のうちの１つである：
【化１５】
2021517133.tif 000018
【００４２】
さらに他の実施形態では、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記Ｆｃドメインにおけるシステイン残基によって前記アマトキシンにコンジュゲートされる。別の実施形態では、前記システイン残基は、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記Ｆｃドメインにおける変異によって導入される。別の実施形態では、前記システイン残基はＣｙｓ１１８、Ｃｙｓ２３９、およびＣｙｓ２６５からなる群から選択される。さらに他の実施形態では、前記システイン残基は、前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記Ｆｃドメインに天然に存在する。別の実施形態では、前記ＦｃドメインはＩｇＧ  Ｆｃドメインであり、前記システイン残基はＣｙｓ２６１、Ｃｙｓ３２１、Ｃｙｓ３６７、およびＣｙｓ４２５からなる群から選択される。
【００４３】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の抗ＣＤ２５２抗体、そのフラグメント、またはＡＤＣであって、抗原提示細胞（ＡＰＣ）によって内在化される抗ＣＤ２５２抗体、そのフラグメント、またはＡＤＣを特徴とする。いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、微小管結合剤またはアウリスタチンである。他の実施形態では、前記微小管結合剤はメイタンシンである。さらに他の実施形態では、前記微小管結合剤はメイタンシノイドである。別の実施形態では、前記メイタンシノイドは、ＤＭ１、ＤＭ３、およびＤＭ４、ならびにメイタンシノールからなる群から選択される。別の実施形態では、前記アウリスタチンは、モノメチルアウリスタチンＥまたはモノメチルアウリスタチンＦである。他の実施形態では、前記細胞毒素は、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、およびイダルビシンからなる群から選択されるアントラサイクリンである。
【００４４】
別の態様では、本発明は、本明細書に開示される抗体またはその抗原結合フラグメントまたはＡＤＣの有効量を患者に投与することによって、移植片対宿主病を患っているかまたはそのリスクがあるヒト患者においてＣＤ２５２＋細胞の集団を枯渇させる方法を特徴とする。一実施形態では、前記方法は、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受ける前に、前記患者に本明細書に開示される抗体、その抗原結合フラグメントまたはＡＤＣを投与することを含む。別の実施形態では、本明細書に開示される抗体、その抗原結合フラグメントまたはＡＤＣは、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受ける約３日前に、前記患者に投与される。別の実施形態では、前記抗体、その抗原結合フラグメントは、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けるのと同時に、前記患者に投与される。さらに他の実施形態では、前記抗体、その抗原結合フラグメントは、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けた後に、前記患者に投与される。
【００４５】
別の態様では、本発明は、ＧＶＨＤが処置されるように本明細書に開示される抗ＣＤ２５２抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）をヒト患者に投与することによって、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を処置することを必要とするヒト患者において移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を処置する方法を特徴とする。
【００４６】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の抗ＣＤ２５２ＡＤＣと、薬学的に活性な担体とを含む医薬組成物を特徴とする。
【００４７】
別の態様では、本明細書に記載の方法は、自己免疫疾患の処置にも有用である。一実施形態では、本明細書に開示される方法および組成物は、限定されないが、乾癬、炎症性腸疾患（クローン病、潰瘍性大腸炎）、乾癬性関節炎、多発性硬化症、関節リウマチ、または強直性脊椎炎などの自己免疫疾患を処置するために使用され得る。他の実施形態では、本明細書に開示される方法および組成物は、限定されないが乾癬、炎症性腸疾患（クローン病、潰瘍性大腸炎）、乾癬性関節炎、多発性硬化症、関節リウマチ、または強直性脊椎炎などの自己免疫疾患を処置するために使用され得る。他の実施形態では、本明細書に開示される方法を使用して処置され得る自己免疫疾患には、例えば、強皮症、多発性硬化症（ＭＳ）、ヒト全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、関節リウマチ（ＲＡ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬の処置、Ｉ型真性糖尿病（Ｉ型糖尿病）、急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、アジソン病、汎発性脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ）、再生不良性貧血、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患（ＡＩＥＤ）、自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性卵巣炎、バロー病、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、シャーガス病、慢性疲労免疫機能障害症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、クローン病、瘢痕性類天疱瘡、セリアックスプルー・疱疹状皮膚炎、寒冷凝集素症、クレスト症候群、デゴス病、円板状エリテマトーデス、自律神経失調症、子宮内膜症、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛症・線維筋炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギランバレー症候群（ＧＢＳ）、橋本甲状腺炎、化膿性汗腺炎、特発性および／または急性型血小板減少性紫斑病、特発性肺線維症、ＩｇＡニューロパチー、間質性膀胱炎、若年性関節炎、川崎病、扁平苔癬、ライム病、メニエール病、混合性結合組織病（ＭＣＴＤ）、重症筋無力症、神経性筋強直症、オプソクローヌス・ミオクローヌス運動失調（ＯＭＳ）、視神経炎、オード甲状腺炎、尋常性天疱瘡、悪性貧血、多発性軟骨炎、多発性筋炎および皮膚筋炎、原発性胆汁性肝硬変、結節性多発性動脈炎、多腺性症候群、リウマチ性多発筋痛症、原発性無ガンマグロブリン血症、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、全身硬直症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎（「巨細胞性動脈炎」としても知られている）、潰瘍性大腸炎、ぶどう膜炎、血管炎、白斑、外陰部痛（「外陰部前庭炎」）、ならびにウェゲナー肉芽腫症などの自己免疫疾患を処置するために使用され得る。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】ネイキッド抗ＣＤ２５２抗体、抗ＣＤ４５ＡＤＣ、およびアイソタイプコントロールを比較した混合リンパ球反応の結果を示すグラフである。
【図２】ネイキッド抗ＣＤ２５２抗体、抗ＣＤ４５ＡＤＣ、およびアイソタイプコントロールを異なる抗ＣＤ２５２抗体（１１Ｃ３．１、１５９４０３、１５９４０８、およびオキセルマブ）と比較した混合リンパ球反応の結果を示すグラフである。結果は、抗体濃度の関数として、％活性化Ｔ細胞（図２Ａ）または非活性化Ｔ細胞カウント（図２Ｂ）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００４９】
本発明は、ヒトＣＤ２５２（すなわち、ＯＸ４０リガンド）に結合する抗ＣＤ２５２抗体（ならびにそのフラグメントおよび抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ））を提供する。本明細書で同定された抗ＣＤ２５２の結合領域は、以下の配列番号１および配列番号２に記載されている。
【００５０】
本発明は、抗ＣＤ２５２抗体、その抗原結合フラグメント、またはＡＤＣの投与によって移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を予防および処置する方法を提供する。この投与は、宿主に対して反応性であるＡＰＣの集団の選択的枯渇を引き起こすことができる。本発明は、ＣＤ２５２（すなわち、ＯＸ４０リガンド）に結合することができる抗体、その抗原結合フラグメント、またはＡＤＣが、造血幹細胞移植療法から生じるＧＶＨＤを含むＧＶＨＤを予防および処置するために患者に投与され得るという発見に一部基づいている。
【００５１】
以下のセクションでは、ＧＶＨＤを患っているかまたはそのリスクがある患者に投与され得る抗体、その抗原結合フラグメント、またはＡＤＣ、ならびにそのような治療薬を該患者に投与する方法について説明する。
【００５２】
（定義）
本明細書で使用される場合、用語「約」は、記載されている値の上下１０％以内の値を指す。例えば、用語「約５ｎＭ」は、４．５ｎＭ〜５．５ｎＭの範囲を示す。
【００５３】
本明細書で使用される場合、「同種」という用語は、同じ種に属するが遺伝的に異なり、したがって免疫学的に不適合である個体由来の細胞または組織を指す。したがって、「同種細胞」という用語は、遺伝的に異なるが同じ種に属する細胞型を指す。通常、「同種」という用語は、ドナーから同じ種のレシピエントに移植される幹細胞などの細胞を定義するために使用される。
【００５４】
本明細書で使用される場合、用語「アマトキシン」は、タマゴテングタケによって産生されるペプチドのアマトキシンファミリーのメンバー、またはそのバリアントもしくは誘導体、例えばＲＮＡポリメラーゼＩＩ活性を阻害することができるそのバリアントもしくは誘導体を指す。本明細書に記載の組成物および方法と併せて有用なアマトキシンには、限定されないが、α-アマニチン、β-アマニチン、γ-アマニチン、ε-アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、またはプロアマヌリンを含む、式（ＩＩＩ）による化合物が含まれる。式（ＩＩＩ）は、以下の通りである：
【化１６】
2021517133.tif 000019
［式中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、またはＯＲＡであり、
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、またはＯＲＢであり、
ＲＡおよびＲＢは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して任意に置換された５員ヘテロシクロアルキル基を形成し、
Ｒ３は、ＨまたはＲＤであり、
Ｒ４は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＤ、またはＲＤであり、
Ｒ５は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＤ、またはＲＤであり、
Ｒ６は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＤ、またはＲＤであり、
Ｒ７は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＤ、またはＲＤであり、
Ｒ８は、ＯＨ、ＮＨ２、またはＯＲＤであり、
Ｒ９は、Ｈ、ＯＨ、またはＯＲＤであり、
Ｘは、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、または−ＳＯ２−であり、ならびに
ＲＤは、任意に置換されたアルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ６アルキル）、任意に置換されたヘテロアルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ６ヘテロアルキル）、任意に置換されたアルケニル（例えば、Ｃ２−Ｃ６アルケニル）、任意に置換されたヘテロアルケニル（例えば、Ｃ２−Ｃ６ヘテロアルケニル）、任意に置換されたアルキニル（例えば、Ｃ２−Ｃ６アルキニル）、任意に置換されたヘテロアルキニル（例えば、Ｃ２−Ｃ６ヘテロアルキニル）、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールである］。
【００５５】
例えば、一実施形態では、本明細書に記載の組成物および方法と併せて有用なアマトキシンには、以下の式（ＩＩＩＡ）の化合物が挙げられる：
【化１７】
2021517133.tif 000020
［式中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、またはＯＲＡであり、
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、またはＯＲＢであり、
ＲＡおよびＲＢは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して任意に置換された５員ヘテロシクロアルキル基を形成し、
Ｒ３は、ＨまたはＲＤであり、
Ｒ４は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＤ、またはＲＤであり、
Ｒ５は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＤ、またはＲＤであり、
Ｒ６は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＤ、またはＲＤであり、
Ｒ７は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＤ、またはＲＤであり、
Ｒ８は、ＯＨ、ＮＨ２、またはＯＲＤであり、
Ｒ９は、Ｈ、ＯＨ、またはＯＲＤであり、
Ｘは、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、または−ＳＯ２−であり、ならびに
ＲＤは、任意に置換されたアルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ６アルキル）、任意に置換されたヘテロアルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ６ヘテロアルキル）、任意に置換されたアルケニル（例えば、Ｃ２−Ｃ６アルケニル）、任意に置換されたヘテロアルケニル（例えば、Ｃ２−Ｃ６ヘテロアルケニル）、任意に置換されたアルキニル（例えば、Ｃ２−Ｃ６アルキニル）、任意に置換されたヘテロアルキニル（例えば、Ｃ２−Ｃ６ヘテロアルキニル）、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールである］。
【００５６】
一実施形態では、本明細書に記載の組成物および方法と併せて有用なアマトキシンには、以下の式（ＩＩＩＢ）の化合物も挙げられる：
【化１８】
2021517133.tif 000021
［式中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、またはＯＲＡであり、
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、またはＯＲＢであり、
ＲＡおよびＲＢは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して任意に置換された５員ヘテロシクロアルキル基を形成し、
Ｒ３は、ＨまたはＲＤであり、
Ｒ４は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＤ、またはＲＤであり、
Ｒ５は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＤ、またはＲＤであり、
Ｒ６は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＤ、またはＲＤであり、
Ｒ７は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＤ、またはＲＤであり、
Ｒ８は、ＯＨ、ＮＨ２、またはＯＲＤであり、
Ｒ９は、Ｈ、ＯＨ、またはＯＲＤであり、
Ｘは、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、または−ＳＯ２−であり、ならびに
ＲＤは、任意に置換されたアルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ６アルキル）、任意に置換されたヘテロアルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ６ヘテロアルキル）、任意に置換されたアルケニル（例えば、Ｃ２−Ｃ６アルケニル）、任意に置換されたヘテロアルケニル（例えば、Ｃ２−Ｃ６ヘテロアルケニル）、任意に置換されたアルキニル（例えば、Ｃ２−Ｃ６アルキニル）、任意に置換されたヘテロアルキニル（例えば、Ｃ２−Ｃ６ヘテロアルキニル）、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールである］。
【００５７】
本明細書に記載されるように、アマトキシンは、例えばリンカー部分（Ｌ）を介して、抗体またはその抗原結合フラグメントにコンジュゲートされ得る（したがって、ＡＤＣを形成する）。そのようなプロセスに有用なアマトキシンコンジュゲーションおよびリンカーの例示的な方法は、表１を含めて以下に記載されている。本明細書に記載の組成物および方法による、抗体または抗原結合フラグメントへの結合に有用な例示的なリンカー含有アマトキシンは、本明細書に記載の構造式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩＡ）および（ＩＩＢ）に示されている。
【００５８】
本明細書で使用される場合、用語「抗体」は、特定の抗原に特異的に結合するか、またはそれと免疫学的に反応性である免疫グロブリン分子を指し、モノクローナル抗体、遺伝子操作された抗体、およびその他の修飾形態の抗体が含まれ、限定されないが、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヘテロコンジュゲート抗体（例えば、二重、三重および四重特異性抗体、ダイアボディ、トリアボディ、およびテトラボディ）、ならびに、例えば、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｒＩｇＧ、およびｓｃＦｖフラグメントを含む抗体の抗原結合フラグメントが含まれる。特に明記しない限り、「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）という用語は、インタクト分子と、標的タンパク質（抗原）に特異的に結合することができる抗体フラグメント（例えば、ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２フラグメントを含む）の両方を含むことを意味する。本明細書で使用される場合、ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２フラグメントは、インタクト抗体のＦｃフラグメントを欠く抗体フラグメントを指す。これらの抗体フラグメントの例は、本明細書に記載されている。
【００５９】
一般に、抗体は、抗原結合領域を含有する重鎖および軽鎖を含む。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲまたはＶＨと略される）および重鎖定常領域からなる。重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３の３つのドメインからなる。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲまたはＶＬと略される）および軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域は、１つのドメインＣＬからなる。ＶＨおよびＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域にさらに細分化することでき、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域が点在している。各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシル末端に向かって、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序で配置された３つのＣＤＲと４つのＦＲからなる。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的な補体系の第１成分（Ｃｌｑ）を含む宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介することができる。
【００６０】
本明細書で使用される「インタクト」または「全長」抗体は、ジスルフィド結合によって相互接続された２つの重鎖（Ｈ）鎖ポリペプチドおよび２つの軽（Ｌ）鎖ポリペプチドを有する抗体を指す。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲまたはＶＨと略される）および重鎖定常領域からなる。重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３の３つのドメインからなる。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲまたはＶＬと略される）および軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域は、１つのドメインＣＬからなる。ＶＨおよびＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域にさらに細分化することでき、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域が点在している。各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシル末端に向かって、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序で配置された３つのＣＤＲと４つのＦＲからなる。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的な補体系の第１成分（Ｃｌｑ）を含む宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介することができる。
【００６１】
本明細書で使用される「抗原結合フラグメント」という用語は、標的抗原に特異的に結合する能力を保持する、抗体の1つ以上のフラグメントを指す。抗体の抗原結合機能は、全長抗体のフラグメントによって実行され得る。抗体フラグメントは、例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、トリアボディ、アフィボディ、ナノボディ、アプタマー、またはドメイン抗体であり得る。抗体の「抗原結合フラグメント」という用語に包含される結合フラグメントの例には、以下が含まれるが、これらに限定されない：（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、およびＣＨ１ドメインからなる一価フラグメントであるＦａｂフラグメント；（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメントであるＦ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖフラグメント；（ｖ）ＶＨおよびＶＬドメインを含むｄＡｂ；（ｖｉ）ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント（例えば、Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６頁、１９８９年を参照）；（ｖｉｉ）ＶＨまたはＶＬドメインからなるｄＡｂ；（ｖｉｉｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）；および（ｉｘ）任意に合成リンカーによって連結されていてもよい２つ以上（例えば、２、３、４、５、または６つ）の単離されたＣＤＲの組み合わせ。さらに、Ｆｖフラグメントの２つのドメイン、ＶＬおよびＶＨは、別々の遺伝子によってコードされているが、それらは、組み換え法を用いて、ＶＬおよびＶＨ領域がペアになって一価分子を形成する単一のタンパク質鎖としてそれらが作製されることを可能にするリンカーによって連結され得る（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる；例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６頁、１９８８年、およびＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ，  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３頁、１９８８年を参照）。これらの抗体フラグメントは、当業者に知られている従来技術を用いて得ることができ、該フラグメントは、インタクト抗体と同じ方法で、有用性についてスクリーニングすることができる。抗原結合フラグメントは、組み換えＤＮＡ技術、インタクト免疫グロブリンの酵素的または化学的切断によって、または、特定の場合には、当該技術分野で知られている化学的ペプチド合成手順によって産生することができる。
【００６２】
本明細書で使用される場合、用語「抗ＯＸ４０リガンド抗体」または「抗ＣＤ２５２抗体」または「抗ＯＸ４０リガンドＡＤＣ」または「抗ＣＤ２５２ＡＤＣ」は、ＯＸ４０リガンド（すなわち、ＣＤ２５２）に特異的に結合する抗体またはＡＤＣを指す。目的の抗原、すなわちＣＤ２５２に結合する抗体は、抗体が抗原を発現する細胞を標的化するのに有用であるように、十分な親和性でその抗原に結合することができるものである。好ましい実施形態において、抗体は、ヒトＣＤ２５２（ｈＣＤ２５２）に特異的に結合する。ＣＤ２５２は抗原提示細胞に見られる。抗ＣＤ２５２抗体（または抗ＣＤ２５２抗体−薬物コンジュゲート）が結合するヒトＣＤ２５２のアミノ酸配列は、以下の配列番号１９または２０に記載されている。
【００６３】
本明細書で使用される場合、用語「二重特異性抗体」は、２つの異なる抗原に結合することができる抗体を指す。例えば、結合特異性の一方は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）表面抗原ＣＤ２５２に向けることができ、他方は、とりわけ、細胞増殖を増強するシグナル伝達経路に関与する受容体または受容体サブユニットなどの、異なる細胞表面抗原または別の細胞表面タンパク質に特異的に結合することができる。
【００６４】
本明細書で使用される場合、用語「相補性決定領域（ＣＤＲ）」は、抗体の軽鎖および重鎖可変ドメインの両方に見られる超可変領域を指す。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。抗体の超可変領域を線引きするアミノ酸位置は、文脈および当該技術分野で知られている様々な定義に応じて変わり得る。可変ドメイン内のいくつかの位置は、これらの位置がある基準の下では超可変領域内にあると見なすことができるが、異なる基準の下では超可変領域外にあると見なすことができるという点で、ハイブリッド超可変位置と見なされ得る。これらの位置のうちの１つ以上を、拡張超可変領域にも見ることができる。本明細書に記載の抗体は、これらのハイブリッド超可変位置に改変を含み得る。天然の重鎖および軽鎖の可変ドメインはそれぞれ、主にβシート構造をとる４つのフレームワーク領域を含み、３つのＣＤＲによって接続され、それらはβシート構造をつなぐループを形成し、場合によってはβシート構造の一部を形成する。各鎖中のＣＤＲは、ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４の順序で、フレームワーク領域によって互いに近接して一緒に保持され、他の抗体鎖からのＣＤＲと共に、抗体の標的結合部位の形成に寄与する（例えば、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、国立衛生研究所、ベセスダ、メリーランド州、１９８７年またはｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／３Ｄｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ＤＢ／ｃｇｉ／ＤｏｍａｉｎＧａｐＡｌｉｇｎ．ｃｇｉを参照）。特定の実施形態では、別段の指定がない限り、免疫グロブリンアミノ酸残基のナンバーリングは、Ｋａｂａｔらの免疫グロブリンアミノ酸残基のナンバーリングシステムに従って行われる。
【００６５】
本明細書で使用される場合、用語「抗体−薬物コンジュゲート」または「ＡＤＣ」は、抗体またはその抗原結合フラグメントの反応性官能基と、本明細書に記載の細胞毒素などの別の分子の適切な反応性官能基との化学結合によって形成される化合物を指す。ＡＤＣは、互いに結合した抗体（例えば、抗ＣＤ２５２抗体）と細胞毒素との間にリンカーを含み得る。そのようなＡＤＣは式Ａｂ−Ｚ−Ｌ−Ｃｙで表わされ得、式中、Ａｂは抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Ｚはリンカー上に存在する化学性反応基と抗体またはその抗原結合フラグメント内の化学性反応基との間のカップリング反応から形成される化学部分であり、Ｌはリンカーであり、Ｃｙは細胞毒素である。ＡＤＣの形成に使用され得るリンカーの例には、天然に存在するアミノ酸またはＤ−アミノ酸などの天然に存在しないアミノ酸を含有するものなどのペプチド含有リンカーが挙げられる。リンカーは、本明細書に記載され、当該技術分野で知られている種々の戦略を使用して調製することができる。その中の反応性成分に応じて、リンカーは、例えば、酵素加水分解、光分解、酸性条件下での加水分解、塩基性条件下での加水分解、酸化、ジスルフィド還元、求核開裂、または有機金属開裂によって切断され得る（例えば、Ｌｅｒｉｃｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｏｒｇ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．，  ２０：５７１−５８２頁、２０１２年を参照）。前述のコンジュゲートは、本明細書では互換的に「薬物−抗体コンジュゲート」または「コンジュゲート」とも呼ばれる。
【００６６】
本明細書で使用される場合、用語「カップリング反応」は、互いに反応するのに適した２つ以上の置換基が反応して、各置換基に結合した分子フラグメントを（例えば、共有結合的に）連結する化学的部位を形成する化学反応を指す。カップリング反応には、当該技術分野で知られているかまたは本明細書に記載の細胞毒素などの細胞毒素であるフラグメントに結合した反応性置換基が抗体またはその抗原結合フラグメント、例えば、当該技術分野で知られているかまたは本明細書に記載のＣＤ２５２に特異的な抗体またはその抗原結合フラグメントであるフラグメントに結合した適切に反応性の置換基と反応するものが挙げられる。適切に反応性の置換基の例には、求核剤／求電子剤対（例えば、とりわけチオール／ハロアルキル対、アミン／カルボニル対、またはチオール／α，β−不飽和カルボニル対）、ジエン／ジエノフィル対（例えば、とりわけアジド／アルキン対）などが挙げられる。カップリング反応には、特に限定されないが、チオールアルキル化、ヒドロキシルアルキル化、アミンアルキル化、アミン縮合、アミド化、エステル化、ジスルフィド形成、付加環化（例えば、とりわけ、［４＋２］ディールス−アルダー付加環化、［３＋２］ヒュスゲン付加環化）、求核芳香族置換、求電子芳香族置換、および当該技術分野で知られているまたは本明細書に記載の他の反応様式が含まれる。
【００６７】
本明細書で使用される場合、「ＣＲＵ（競合的再増殖単位）」は、ｉｎ  ｖｉｖｏ移植後に検出され得る長期生着幹細胞の測定単位を指す。
【００６８】
本明細書で使用される場合、用語「ドナー」は、１つ以上の細胞が、その細胞またはその子孫のレシピエントへの投与の前に単離されるヒトまたは動物を指す。１つ以上の細胞は、例えば、造血幹細胞の集団であり得る。
【００６９】
本明細書で使用される場合、用語「ダイアボディ」は、２本のポリペプチド鎖を含有する二価抗体を指し、各ポリペプチド鎖は、同じペプチド鎖上のＶＨおよびＶＬドメインの分子内会合を可能にするには短すぎるリンカー（例えば、５個のアミノ酸からなるリンカー）によって連結されたＶＨおよびＶＬドメインを含む。この立体配置は、ホモ二量体構造を形成するように、各ドメインを別のポリペプチド鎖上の相補的ドメインと対合させる。したがって、用語「トリアボディ」は、３つのペプチド鎖を含む三価抗体を指し、その各々は、同じペプチド鎖内のＶＨドメインとＶＬドメインの分子内会合を可能にするには非常に短いリンカー（例えば、１〜２個のアミノ酸からなるリンカー）によって連結された１つのＶＨドメインと１つのＶＬドメインとを含む。それらの天然構造に折り畳むために、このように構成されたペプチドは、典型的には、隣接するペプチド鎖のＶＨおよびＶＬドメインを互いに空間的に近位に配置するように三量体化する（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９０：６４４４−４８頁、１９９３年を参照）。
【００７０】
本明細書で使用される場合、「二重可変ドメイン免疫グロブリン」（「ＤＶＤ−Ｉｇ」）は、リンカーを介して２つのモノクローナル抗体の標的結合可変ドメインを組み合わせて、四価の二重標的単一剤を作製する抗体を指す（例えば、Ｇｕ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｅｔｈ．  Ｅｎｚｙｍｏｌ．，  ５０２：２５−４１頁、２０１２年を参照）。
【００７１】
本明細書で使用される場合、用語「内因性」は、ヒト患者などの特定の生物において天然に見られる分子、細胞、組織、または臓器などの物質（例えば、造血幹細胞または造血系列の細胞、例えば巨核球、栓球（ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｅｓ）、血小板（ｐｌａｔｅｌｅｔｓ）、赤血球、マスト細胞、筋芽細胞、好塩基球、好中球、好酸球、ミクログリア、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、Ｔリンパ球、またはＢリンパ球）を表す。
【００７２】
本明細書で使用される場合、用語「外因性」は、ヒト患者などの特定の生物において天然には見られない分子、細胞、組織、または臓器などの物質（例えば、造血幹細胞または造血系列の細胞、例えば巨核球、栓球（ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｅｓ）、血小板（ｐｌａｔｅｌｅｔｓ）、赤血球、マスト細胞、筋芽細胞、好塩基球、好中球、好酸球、ミクログリア、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、Ｔリンパ球、またはＢリンパ球など）を表す。外因性物質には、外部供給源から生物に、またはそれらから抽出された培養物に提供されるものが挙げられる。
【００７３】
本明細書で使用される場合、用語「フレームワーク領域」または「ＦＷ領域」は、抗体またはその抗原結合フラグメントのＣＤＲに隣接しているアミノ酸残基を含む。ＦＷ領域残基は、例えば、とりわけ、ヒト抗体、ヒト化抗体、モノクローナル抗体、抗体フラグメント、Ｆａｂフラグメント、一本鎖抗体フラグメント、ｓｃＦｖフラグメント、抗体ドメイン、および二重特異性抗体に存在し得る。
【００７４】
本明細書で使用される場合、用語「造血幹細胞」（「ＨＳＣ」）は、自己複製し、以下を含むがこれらに限定されない多様な系列を含む成熟血球に分化する能力を有する未成熟血球を指す：顆粒球（例えば前骨髄球、好中球、好酸球、好塩基球）、赤血球（例えば、網状赤血球、赤血球）、栓球（ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｅｓ）（例えば、巨核球、血小板産生巨核球、血小板（ｐｌａｔｅｌｅｔｓ））、単球（例えば、単球、マクロファージ）、樹状細胞、ミクログリア、破骨細胞、およびリンパ球（例えば、ＮＫ細胞、Ｂ細胞およびＴ細胞）。そのような細胞には、ＣＤ３４＋細胞が挙げられ得る。ＣＤ３４＋細胞は、ＣＤ３４細胞表面マーカーを発現する未熟細胞である。ヒトでは、ＣＤ３４＋細胞は上記定義の幹細胞特性を有する細胞の亜集団を含むと考えられているが、マウスでは、ＨＳＣはＣＤ３４−である。さらに、ＨＳＣは、長期再構築ＨＳＣ（ＬＴ−ＨＳＣ）および短期再構築ＨＳＣ（ＳＴ−ＨＳＣ）も指す。ＬＴ−ＨＳＣおよびＳＴ−ＨＳＣは、機能的ポテンシャルおよび細胞表面マーカー発現に基づいて区別される。例えば、ヒトＨＳＣは、ＣＤ３４＋、ＣＤ３８−、ＣＤ４５ＲＡ−、ＣＤ９０＋、ＣＤ４９Ｆ＋、およびｌｉｎ−（ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１０、ＣＤ１１Ｂ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ５６、ＣＤ２３５Ａを含む成熟系列マーカーについて陰性）である。マウスでは、骨髄ＬＴ−ＨＳＣは、ＣＤ３４−、ＳＣＡ−１＋、Ｃ−ｋｉｔ＋、ＣＤ１３５−、Ｓｌａｍｆ１／ＣＤ１５０＋、ＣＤ４８−、およびｌｉｎ−（Ｔｅｒ１１９、ＣＤ１１ｂ、Ｇｒ１、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、Ｂ２２０、ＩＬ７ｒａを含む成熟系列マーカーについて陰性）であり、一方、ＳＴ−ＨＳＣは、ＣＤ３４＋、ＳＣＡ−１＋、Ｃ−ｋｉｔ＋、ＣＤ１３５−、Ｓｌａｍｆ１／ＣＤ１５０＋、およびｌｉｎ−（Ｔｅｒ１１９、ＣＤ１１ｂ、Ｇｒ１、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、Ｂ２２０、ＩＬ７ｒａを含む成熟系列マーカーについて陰性）である。さらに、ＳＴ−ＨＳＣは、恒常性条件下で、ＬＴ−ＨＳＣよりも不活発ではなく、増殖性が高い。しかしながら、ＬＴ−ＨＳＣは、より大きな自己複製能力を有し（すなわち、それらは成熟期を通じて生存し、一連のレシピエントを通して連続的に移植され得る）、一方でＳＴ−ＨＳＣは、限られた自己複製を有する（すなわち、それらは限られた期間のみ生存し、連続移植能力を持たない）。これらのＨＳＣのいずれも、本明細書に記載の方法で使用することができる。ＳＴ−ＨＳＣは、高度に増殖性であり、したがってより迅速に分化した子孫を生じさせることができるため、特に有用である。
【００７５】
本明細書で使用される場合、用語「造血幹細胞としての機能的ポテンシャル」は、以下を含む造血幹細胞の機能的特性を指す：１）多能性（顆粒球（例えば前骨髄球、好中球、好酸球、好塩基球）、赤血球（例えば、網状赤血球、赤血球）、栓球（ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｅｓ）（例えば、巨核球、血小板産生巨核球、血小板（ｐｌａｔｅｌｅｔｓ））、単球（例えば、単球、マクロファージ）、樹状細胞、ミクログリア、破骨細胞、およびリンパ球（例えば、ＮＫ細胞、Ｂ細胞およびＴ細胞を含むが、これらに限定されない複数の異なる血系列に分化する能力を指す）、２）自己複製（造血幹細胞が、母細胞と同等の能力を有する娘細胞を生じさせる能力を指し、さらにこの能力は、枯渇することなく個体の生涯を通じて繰り返し出現することができる）、ならびに３）造血幹細胞またはその子孫が移植レシピエントに再導入され、そこでそれらが造血幹細胞ニッチにホーミングし、生産的かつ持続的な造血を再確立する能力。
【００７６】
本明細書で使用される場合、用語「ヒト抗体」は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変および定常領域を有する抗体を含むことを意図している。ヒト抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列よってコードされないアミノ酸残基（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのまたは遺伝子再構成中のランダムまたは部位特異的突然変異誘発によって、あるいはｉｎ  ｖｉｖｏでの体細胞突然変異によって導入された変異）を含み得る。しかしながら、本明細書で使用される用語「ヒト抗体」は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖細胞系列に由来するＣＤＲ配列が、ヒトのフレームワーク配列上にグラフトされている抗体を含むことは意図していない。ヒト抗体は、ヒト細胞においてｉｎ  ｖｉｔｒｏで（例えば、組み換え発現によって）、または機能的に再構成されたヒト免疫グロブリン（重鎖および／または軽鎖など）遺伝子を発現することができるヒト以外の動物または原核もしくは真核細胞によって産生され得る。ヒト抗体が一本鎖抗体である場合、それは天然のヒト抗体には見られないリンカーペプチドを含むことができる。例えば、Ｆｖは、重鎖の可変領域と軽鎖の可変領域を連結する、２〜約８個のグリシンまたは他のアミノ酸残基などのリンカーペプチドを含むことができる。そのようなリンカーペプチドは、ヒト起源のものであるとみなされる。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体ライブラリーを使用するファージディスプレイ法を含む、当技術分野で知られている様々な方法によって作製することができる。ヒト抗体は、機能的な内因性免疫グロブリンを発現することはできないが、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現することができるトランスジェニックマウスを使用して産生することもできる（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ１９９８／２４８９３；ＷＯ１９９２／０１０４７；ＷＯ１９９６／３４０９６；ＷＯ１９９６／３３７３５；米国特許第５，４１３，９２３号；第５，６２５，１２６号；第５，６３３，４２５号；第５，５６９，８２５号；第５，６６１，０１６号；第５，５４５，８０６号；第５，８１４，３１８号；第５，８８５，７９３号；第５，９１６，７７１号；および第５，９３９，５９８号を参照）。
【００７７】
本明細書で使用される場合、「微小管結合剤」という用語は、有糸分裂および間期細胞機能に不可欠である微小管ネットワークを破壊することによって作用する化合物を指す。微小管結合剤の例には、メイタシン、メイタンシノイド、およびそれらの誘導体（例えば、本明細書に記載されているまたは当技術分野で知られているものなど）、ビンブラスチン、硫酸ビンブラスチン、ビンクリスチン、硫酸ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビンなどのビンカアルカロイド、ドセタキセルおよびパクリタキセルなどのタキサン、ディスコデルモライド、コルヒチン、およびエポチロンなどのマクロライド、ならびにその誘導体（エポチロンＢまたはその誘導体など）が含まれるが、これらに限定されない。パクリタキセルはＴＡＸＯＬ（登録商標）として、ドセタキセルはＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）として、硫酸ビンブラスチンはＶＩＮＢＬＡＳＴＩＮ  Ｒ．Ｐ（登録商標）として、硫酸ビンクリスチンはＦＡＲＭＩＳＴＩＮ（登録商標）として販売されている。パクリタキセルのジェネリック形態およびパクリタキセルの様々な剤形も含まれる。パクリタキセルのジェネリック形態には、塩酸ベタキソロールが含まれるが、これに限定されない。パクリタキセルの様々な剤形には、これらに限定されないが、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）として販売されているアルブミンナノ粒子パクリタキセル、ＯＮＸＯＬ（登録商標）、ＣＹＴＯＴＡＸ（登録商標）が含まれる。ディスコデルモライドは、例えば、米国特許第５，０１０，０９９号に開示されているように得ることができる。また、米国特許第６，１９４，１８１号、ＷＯ９８１０１２１、ＷＯ９８２５９２９、ＷＯ９８０８８４９、ＷＯ９９４３６５３、ＷＯ９８２２４６１およびＷＯ００３１２４７に開示されているエポトリン誘導体も含まれ、これらの各々の開示は、参照により本明細書に援用される。
【００７８】
タンパク質、例えば、抗体に関連して使用される場合の「単離された」という用語は、その起源または由来の源のために、その天然状態でそれに付随する天然関連成分と関連しないタンパク質；同じ種の他のタンパク質を実質的に含まないタンパク質；異なる種の細胞によって発現されるタンパク質；または自然界に発生しないタンパク質を指す。したがって、化学的に合成されたタンパク質、またはそれが天然に由来する細胞とは異なる細胞系で合成されたタンパク質は、その天然関連成分から「単離される」であろう。タンパク質はまた、当技術分野で周知のタンパク質精製技術を使用して、単離することにより、天然関連成分を実質的に含まないようにすることができる。
【００７９】
本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、真核生物、原核生物、またはファージのクローンを含む単一のクローンに由来する抗体を指し、それを作製する方法ではない。
【００８０】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」という用語は、哺乳動物（例えば、ヒト）などの対象の組織との接触に適した化合物、材料、組成物および／または剤形であり、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、およびその他の問題の合併症がなく、合理的な利益／リスク比に見合ったものを指す。
【００８１】
本明細書で使用される場合、「医薬組成物」という用語は、哺乳動物に影響を与えている特定の疾患または状態、例えば、とりわけ本明細書に記載の自己免疫障害、癌、または血液障害を予防、処置または制御するために、哺乳動物（例えば、ヒト）などの対象に投与される治療化合物を含有する混合物を意味する。
【００８２】
本明細書で使用される場合、「ＧＶＨＤのリスクがある患者」という用語は、ＧＶＨＤを発症する１つ以上の危険因子を有する患者を指す。危険因子には、ミスマッチヒト白血球抗原（ＨＬＡ）ドナーおよび性ミスマッチドナーを含む同種ドナー移植（例えば、骨髄移植からの造血幹細胞の移植）、Ｔ細胞が豊富な幹細胞移植、ドナーおよびレシピエントの年齢、移植ドナーまたは宿主におけるサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）またはＣＭＶ抗体の存在、全身照射（ＴＢＩ）の線量の増加、コンディショニングレジメンの強度、急性ＧＶＨＤ予防、保護環境の欠如、脾臓摘出、免疫グロブリンの使用、基礎疾患、ＡＢＯ適合性、ヘルペスウイルスへの以前の曝露、ドナーの輸血、パフォーマンススコア、抗生物質の腸管の除染、および同種移植後の輸血が含まれるが、これらに限定されない。
【００８３】
本明細書で使用される場合、「ＨＬＡ不適合」という用語は、特にＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、およびＨＬＡ−ＤＲに関して、少なくとも１つのＨＬＡ抗原が、造血幹細胞移植療法を必要とするレシピエントに造血幹細胞移植片を提供するドナーなどのドナーとレシピエントの間で不適合であるドナー−レシピエントペアを指す。いくつかの実施形態では、一方のハプロタイプが適合であり、他方が不適合である。内因性Ｔ細胞およびＮＫ細胞は、ＨＬＡ不適合のドナー−レシピエントのペアの場合、入ってくる移植片を外来性として認識する可能性が高く、したがって、そのようなＴ細胞とＮＫ細胞は移植片に対して免疫応答を開始する可能性が高くなるので、ＨＬＡ不適合のドナー−レシピエントのペアは、ＨＬＡ適合のドナー−レシピエントのペアと比較して移植片拒絶のリスクが高い可能性がある。
【００８４】
本明細書で使用される場合、用語「サンプル」は、対象から採取した検体（例えば、血液、血液成分（例えば、血清または血漿）、尿、唾液、羊水、脳脊髄液、組織（例えば、胎盤または真皮）、膵液、絨毛膜絨毛サンプル、および細胞）を指す。
【００８５】
本明細書で使用される場合、用語「ｓｃＦｖ」は、抗体由来の重鎖および軽鎖の可変ドメインが連結されて１本の鎖を形成している一本鎖Ｆｖ抗体を指す。ｓｃＦｖフラグメントは、リンカーによって分離された、抗体軽鎖の可変領域（ＶＬ）（例えば、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、および／またはＣＤＲ−Ｌ３）と抗体重鎖の可変領域（ＶＨ）（例えば、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、および／またはＣＤＲ−Ｈ３）とを含む単一ポリペプチド鎖を含有する。ｓｃＦｖフラグメントのＶＬおよびＶＨ領域を連結するリンカーは、タンパク質新生アミノ酸からなるペプチドリンカーであり得る。代替リンカーを、ｓｃＦｖフラグメントのタンパク質分解に対する耐性を増加させるように（例えば、Ｄ−アミノ酸を含有するリンカー）、ｓｃＦｖフラグメントの溶解性を高めるために（例えば、ポリエチレングリコール含有リンカーもしくは反復グリシンおよびセリン残基を含有するポリペプチドなどの親水性リンカー）、分子の生物物理学的安定性を改善するために（例えば、分子内もしくは分子間ジスルフィド結合を形成するシステイン残基を含有するリンカー）、またはｓｃＦｖフラグメントの免疫原性を弱めるために（例えば、グリコシル化部位を含むリンカー）、使用することができる。本明細書に記載のｓｃＦｖ分子の可変領域は、それらが由来する抗体分子とはアミノ酸配列が異なるように修飾することができることも、当業者には理解されよう。例えば、保存的置換もしくはアミノ酸残基の変化をもたらすヌクレオチドまたはアミノ酸置換を（例えば、ＣＤＲおよび／またはフレームワーク残基において）、対応する抗体によって認識される抗原に結合するｓｃＦｖの能力を保持または増強するように、実施することができる。
【００８６】
本明細書で使用される「特異的結合」または「特異的に結合する」という用語は、タンパク質一般にではなく、特定のタンパク質構造（エピトープ）を認識および結合する抗体（またはＡＤＣ）の能力を指す。抗体またはＡＤＣがエピトープ「Ａ」に特異的である場合、標識「Ａ」と抗体を含む反応において、エピトープＡを含む分子（または遊離の非標識Ａ）が存在すると、抗体またはＡＤＣに結合した標識Ａの量が減少する。例として、抗体は、標識されたときに、対応する非標識抗体によってその標的からコンピートアウェイ（ｃｏｍｐｅｔｅｄ  ａｗａｙ）され得る場合、その標的に「特異的に結合する」。一実施形態では、抗体の標的に対するＫＤが、少なくとも約１０−４Ｍ、約１０−５Ｍ、約１０−６Ｍ、約１０−７Ｍ、約１０−８Ｍ、約１０−９Ｍ、約１０−１０Ｍ、約１０−１１Ｍ、約１０−１２Ｍ、またはそれ未満である場合（それ未満は１０−１２未満の数値、例えば１０−１３を意味する）、その抗体は標的、例えばＣＤ２５２に特異的に結合する。別の実施形態では、抗体の標的に対するＫＤが、少なくとも約１０−４Ｍ〜１０−５Ｍ、約１０−５Ｍ〜１０−６Ｍ、約１０−６Ｍ〜１０−７Ｍ、約１０−７Ｍ〜１０−８Ｍ、約１０−８Ｍ〜１０−９Ｍ、約１０−９Ｍ〜１０−１０Ｍ、約１０−１０Ｍ〜１０−１１Ｍ、約１０−１１Ｍ〜１０−１２Ｍ、またはそれ未満である場合（それ未満は１０−１２未満の数値、例えば１０−１３を意味する）、その抗体は標的、例えばＣＤ２５２に特異的に結合する。一実施形態では、本明細書で使用される「ＣＤ２５２への特異的結合」または「ＣＤ２５２に特異的に結合する」という用語は、ＣＤ２５２に結合し、表面プラズモン共鳴によって決定される解離定数（ＫＤ）が１．０×１０−７Ｍ以下である抗体またはＡＤＣを指す。一実施形態では、ＫＤは、標準的な生体層干渉計（ＢＬＩ）によって決定される。ただし、抗体またはＡＤＣは、配列が関連する２つ以上の抗原に特異的に結合できる可能性があることを理解されたい。例えば、一実施形態では、抗体は、ＣＤ２５２のヒトおよび非ヒト（例えば、マウスまたは非ヒト霊長類）オルソログの両方に特異的に結合することができる。
【００８７】
本明細書で使用される場合、用語「対象」および「患者」は、本明細書に記載されるような特定の疾患または状態についての処置を受ける、ヒトなどの生物を指す。例えば、ヒト患者などの患者は、外因性造血幹細胞の生着を促進するために、造血幹細胞移植療法の前に処置を受け得る。
【００８８】
本明細書で使用される場合、語句「血液から実質的に除去される」は、治療薬（抗ＣＤ２５２抗体、またはその抗原結合フラグメントなど）の患者への投与後のある時点であって、患者から単離された血液サンプル中の治療薬の濃度が、従来の手段によって治療薬を検出することができないようなときであるとき（例えば、治療薬が、治療薬の検出に使用される装置またはアッセイのノイズ閾値を超えて検出されないとき）を指す。当該技術分野で知られているまたは本明細書に記載されるＥＬＩＳＡベースの検出アッセイなどの、当該技術分野で知られている様々な技術が、抗体、抗体フラグメントおよびタンパク質リガンドを検出するために使用され得る。抗体、または抗体フラグメントを検出するために使用され得る追加的アッセイには、当該技術分野で知られているものの中でも、とりわけ免疫沈降技術および免疫ブロットアッセイが含まれる。
【００８９】
本明細書で使用される場合、語句「幹細胞障害」は、対象の標的組織をコンディショニングすることによって、および／または標的組織中の内因性幹細胞集団を切除する（例えば、対象の骨髄組織から内因性造血幹細胞または前駆細胞集団を切除する）ことによって、および／または対象の標的組織に幹細胞を生着させるもしくは移植することによって処置もしくは治癒され得る任意の疾患、障害、または状態を広く指す。
【００９０】
本明細書で使用される場合、「疾患を患っている」という用語は、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）などの疾患に関連する症状を経験している対象（例えば、ヒト）を指す。本発明が特定の兆候または症状、または疾患に限定されることは意図されていない。したがって、本発明は、無症状から本格的な疾患まで、あらゆる範囲の疾患を経験している対象を包含し、当該対象は、ＧＶＨＤに関連する兆候（例えば、兆候および症状）の少なくとも一部を示すことが意図されている。
【００９１】
本明細書で使用される場合、「トランスフェクション（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）」という用語は、エレクトロポレーション、リポフェクション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクションなど、外因性ＤＮＡを原核生物または真核生物の宿主細胞内に導入するために一般的に使用される多種多様な技術のいずれかを指す。
【００９２】
本明細書で使用される場合、「移植（片）」という用語は、その起源の部位からレシピエント部位に移された任意の臓器、体組織、または細胞、またはそうする行為を指す。
【００９３】
本明細書で使用される場合、「処置する」または「処置」という用語は、疾患症状の重症度および／または頻度を低減すること、疾患症状および／または前記症状の根本原因を排除すること、疾患症状および／またはそれらの根本原因の頻度または可能性を低減すること、および疾患によって直接的または間接的に引き起こされる損傷を改善または修復することを指す。有益なまたは望ましい臨床結果には、限定されないが、本明細書に記載の抗体コンディショニング療法およびその後の造血幹細胞移植療法後の患者における外因性造血細胞の生着の促進が含まれる。追加の有益な結果には、コンディショニング療法およびその後の患者への外因性造血幹細胞移植片の投与後の造血幹細胞移植を必要とする患者における造血幹細胞の細胞数または相対濃度の増加が含まれる。本明細書に記載の療法の有益な結果には、コンディショニング療法およびその後の造血幹細胞移植療法後の、巨核球、栓球（ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｅｓ）、血小板（ｐｌａｔｅｌｅｔｓ）、赤血球、マスト細胞、骨髄芽球、好塩基球、好中球、好酸球、ミクログリア、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、Ｔリンパ球、またはＢリンパ球などの造血系列の１つ以上の細胞の細胞数または相対濃度の増加も含まれ得る。追加の有益な結果には、癌細胞または自己免疫細胞の集団などの疾患を引き起こす細胞集団の量の減少が含まれ得る。本発明の方法が障害を予防することを対象とする限り、「予防する」という用語は、疾患が完全に阻止されることを必要としないことが理解される。むしろ、本明細書で使用される場合、予防という用語は、本発明の化合物の投与が疾患の発症前に起こり得るように、障害に感受性のある集団を特定する当業者の能力を指す。当該用語は、疾患が完全に回避されることを意味するものではない。
【００９４】
本明細書で使用される場合、「バリアント」および「誘導体」という用語は交換可能に使用され、化合物、ペプチド、タンパク質または本明細書に記載の他の物質の天然に存在する、合成の、および半合成の類似体を指す。本明細書に記載の化合物、ペプチド、タンパク質もしくは他の物質のバリアントまたは誘導体は、元の材料の生物学的活性を保持または改善し得る。
【００９５】
本明細書で使用される場合、「有効量」または「治療有効量」という用語は、所望の結果を達成するために、またはＧＶＨＤに影響を与えるために十分な量を指す。特定の患者に対する特定の治療有効用量レベルは、処置される障害および障害の重症度；使用される特定の組成物；患者の年齢、体重、一般的な健康状態、性別および食事；投与時間；投与経路；使用した特定の化合物の排泄速度；処置期間；使用される特定の化合物および当技術分野でよく知られている同様の因子と組み合わせてまたは同時に使用される薬物を含む様々な因子に依存する。用量は変動する可能性があり、１日または数日間、毎日１回以上の投与で投与され得る。
【００９６】
抗体の「可変領域」または「可変ドメイン」は、抗原結合部位（ＣＤＲ）を含有する抗体の領域を指す。通常、可変領域は、抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端ドメインである。重鎖の可変ドメインは、「ＶＨ」と呼ばれることもある。軽鎖の可変ドメインは、「ＶＬ」と呼ばれることもある。これらのドメインは、一般的に抗体の最も可変的な部分である。
【００９７】
本明細書で使用される場合、用語「ベクター」は、プラスミド、ＤＮＡベクター、プラスミド、ＲＮＡベクター、ウイルス、または他の適切なレプリコンなどの核酸ベクターを含む。本明細書に記載の発現ベクターは、ポリヌクレオチド配列、ならびに、例えば、タンパク質の発現および／またはこれらのポリヌクレオチド配列の哺乳動物細胞のゲノムへの組み込みに使用される追加的配列要素を含み得る。本発明の抗体および抗体フラグメントの発現に用いることができる特定のベクターは、遺伝子転写を指示するプロモーターおよびエンハンサー領域などの調節配列を含有するプラスミドを含む。抗体および抗体フラグメントの発現のための他の有用なベクターは、これらの遺伝子の翻訳速度を増強するか、または遺伝子転写から生じるｍＲＮＡの安定性もしくは核外輸送を改善するポリヌクレオチド配列を含有する。これらの配列要素は、例えば、発現ベクターで運ばれる遺伝子の効率的な転写を指示するための、５’および３’非翻訳領域とポリアデニル化シグナル部位とを含み得る。本明細書に記載の発現ベクターは、そのようなベクターを含む細胞を選択するためのマーカーをコードするポリヌクレオチドを含有し得る。適切なマーカーの例には、アンピシリン、クロラムフェニコール、カナマイシン、およびノウルセオトリシンなどの抗生物質に対する耐性をコードする遺伝子が挙げられる。
【００９８】
本明細書で使用される場合、用語「アルキル」は、例えば、鎖中に１〜２０個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖アルキル基を指す。アルキル基の例には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ｔｅｒｔ−ペンチル、ヘキシル、イソヘキシルなどが挙げられる。
【００９９】
本明細書で使用される場合、用語「アルキレン」は、直鎖または分岐鎖の二価アルキル基を指す。二価の位置は、アルキル鎖内の同じまたは異なる原子上にあり得る。アルキレンの例には、メチレン、エチレン、プロピレン、イソプロピレンなどが挙げられる。
【０１００】
本明細書で使用される場合、用語「ヘテロアルキル」は、例えば、鎖中に１〜２０個の炭素原子を有し、さらに鎖中に１個以上のヘテロ原子（例えば、とりわけ酸素、窒素、または硫黄）を含有する直鎖または分岐鎖アルキル基を指す。
【０１０１】
本明細書で使用される場合、用語「ヘテロアルキレン」は、直鎖または分岐鎖の二価ヘテロアルキル基を指す。二価の位置は、ヘテロアルキル鎖内の同じまたは異なる原子上にあり得る。二価の位置は、１個以上のヘテロ原子であり得る。
【０１０２】
本明細書で使用される場合、用語「アルケニル」は、例えば、鎖中に２〜２０個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖アルケニル基を指す。アルケニル基の例には、ビニル、プロペニル、イソプロペニル、ブテニル、ｔｅｒｔ−ブチレニル、ヘキセニルなどが挙げられる。
【０１０３】
本明細書で使用される場合、用語「アルケニレン」は、直鎖または分岐鎖の二価アルケニル基を指す。二価の位置は、アルケニル鎖内の同じまたは異なる原子上にあり得る。アルケニレンの例には、エテニレン、プロペニレン、イソプロペニレン、ブテニレンなどが挙げられる。
【０１０４】
本明細書で使用される場合、用語「ヘテロアルケニル」は、例えば、鎖中に２〜２０個の炭素原子を有し、さらに鎖中に１個以上のヘテロ原子（例えば、とりわけ酸素、窒素、または硫黄）を含有する直鎖または分岐鎖アルケニル基を指す。
【０１０５】
本明細書で使用される場合、用語「ヘテロアルケニレン」は、直鎖または分岐鎖の二価ヘテロアルケニル基を指す。二価の位置は、ヘテロアルケニル鎖内の同じまたは異なる原子上にあり得る。二価の位置は、１個以上のヘテロ原子であり得る。
【０１０６】
本明細書で使用される場合、用語「アルキニル」は、例えば、鎖中に２〜２０個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖アルキニル基を指す。アルキニル基の例には、プロパルギル、ブチニル、ペンチニル、ヘキシニルなどが挙げられる。
【０１０７】
本明細書で使用される場合、用語「アルキニレン」は、直鎖または分岐鎖の二価アルキニル基を指す。二価の位置は、アルキニル鎖内の同じまたは異なる原子上にあり得る。
【０１０８】
本明細書で使用される場合、用語「ヘテロアルキニル」は、例えば、鎖中に２〜２０個の炭素原子を有し、さらに鎖中に１個以上のヘテロ原子（例えば、とりわけ酸素、窒素、または硫黄）を含有する直鎖または分岐鎖アルキニル基を指す。
【０１０９】
本明細書で使用される場合、用語「ヘテロアルキニレン」は、直鎖または分岐鎖の二価ヘテロアルキニル基を指す。二価の位置は、ヘテロアルキニル鎖内の同じまたは異なる原子上にあり得る。二価の位置は、１個以上のヘテロ原子であり得る。
【０１１０】
本明細書で使用される場合、用語「シクロアルキル」は、飽和であり、例えば、３〜１２個の炭素環原子を有する、単環式、または縮合、架橋、もしくはスピロ多環式環構造を指す。シクロアルキル基の例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、ビシクロ［３．１．０］ヘキサンなどが挙げられる。
【０１１１】
本明細書で使用される場合、用語「シクロアルキレン」は、二価のシクロアルキル基を指す。二価の位置は、環構造内の同じまたは異なる原子上にあり得る。シクロアルキレンの例には、シクロプロピレン、シクロブチレン、シクロペンチレン、シクロヘキシレンなどが挙げられる。
【０１１２】
本明細書で使用される場合、用語「ヘテロシクロアルキル」は、飽和であり、例えば、炭素原子と、例えば、とりわけ窒素、酸素、および硫黄から選択されるヘテロ原子とから選択される３〜１２個の環原子を環構造当たりに有する、単環式、または縮合、架橋、もしくはスピロ多環式環構造を指す。環構造は、例えば、炭素、窒素、または硫黄の環員上に１つ以上のオキソ基を含有し得る。ヘテロシクロアルキルの例には、限定としてではなく例として、ジヒドロピリジル、テトラヒドロピリジル（ピペリジル）、テトラヒドロチオフェニル、ピペリジニル、４−ピペリドニル、ピロリジニル、２−ピロリドニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、ビステトラヒドロピラニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、デカヒドロキノリニル、オクタヒドロイソキノリニル、ピペラジニル、キヌクリジニル、およびモルホリニルが含まれる。
【０１１３】
本明細書で使用される場合、用語「ヘテロシクロアルキレン」は、二価のヘテロシクロアルキル基を指す。二価の位置は、環構造内の同じまたは異なる原子上にあり得る。
本明細書で使用される場合、用語「アリール」は、例えば、６〜１９個の炭素原子を含有する単環式または多環式芳香環系を指す。アリール基には、フェニル、フルオレニル、ナフチルなどが挙げられるが、これらに限定されない。二価の位置は、１個以上のヘテロ原子であり得る。
【０１１４】
本明細書で使用される場合、用語「アリーレン」は、二価のアリー二価の位置は、１個以上のヘテロ原子であり得る。ル基を指す。二価の位置は、同じまたは異なる原子上にあり得る。
【０１１５】
本明細書で使用される場合、用語「ヘテロアリール」は、１つ以上の環原子がヘテロ原子、例えば、窒素、酸素または硫黄である、単環式ヘテロ芳香族、または二環式もしくは三環式の縮合環ヘテロ芳香族基を指す。ヘテロアリール基には、以下が挙げられる：ピリジル、ピロリル、フリル、チエニル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、ピラゾリル、１，２，３−トリアゾリル、１，２，４−トリアゾリル、１，２，３−オキサジアゾリル、１，２，４−オキサジア−ゾリル、１，２，５−オキサジアゾリル、１，３，４−オキサジアゾリル、１，３，４−トリアジニル、１，２，３−トリアジニル、ベンゾフリル、［２，３−ジヒドロ］ベンゾフリル、イソベンゾフリル、ベンゾチエニル、ベンゾトリアゾリル、イソベンゾチエニル、インドリル、イソインドリル、３Ｈ−インドリル、ベンゾイミダゾリル、イミダゾ［１，２−ａ］ピリジル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、キノリジニル、キナゾリニル、フタラジニル、キノキサリニル、シンノリニル、ナフチリジニル、ピリド［３，４−ｂ］ピリジル、ピリド［３，２−ｂ］ピリジル、ピリド［４，３−ｂ］ピリジル、キノリル、イソキノリル、テトラゾリル、５，６，７，８−テトラヒドロキノリル、５，６，７，８−テトラヒドロイソキノリル、プリニル、プテリジニル、カルバゾリル、キサンテニル、ベンゾキノリルなど。
【０１１６】
本明細書で使用される場合、用語「ヘテロアリーレン」は、二価ヘテロアリール基を指す。二価の位置は、同じまたは異なる原子上にあり得る。二価の位置は、１個以上のヘテロ原子であり得る。
【０１１７】
個々の置換基の定義によって特に制限されない限り、前述の化学的部位、例えば「アルキル」、「アルキレン」、「ヘテロアルキル」、「ヘテロアルキレン」、「アルケニル」、「アルケニレン」、「ヘテロアルケニル」、「ヘテロアルケニレン」、「アルキニル」、「アルキニレン」、「ヘテロアルキニル」、「ヘテロアルキニレン」、「シクロアルキル」、「シクロアルキレン」、「ヘテロシクロアルキル」、「ヘテロシクロアルキレン」、「アリール」、「アリーレン」、「ヘテロアリール」、および「ヘテロアリーレン」基は、例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、アルキルシクロアルキル、アルキルヘテロシクロアルキル、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバメート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、ニトロなどからなる群より選択される１〜５個の置換基で任意に置換されていてもよい。典型的な置換基には、限定されることなく、−Ｘ、−Ｒ、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＳＨ、−ＳＲ、−ＮＨ２、−ＮＨＲ、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ＋（Ｒ）３、−ＣＸ３、−ＣＮ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＣＯ、−ＮＣＳ、−ＮＯ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−ＮＣ（＝Ｏ）Ｈ、−ＮＣ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−ＳＯ３−、−ＳＯ３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ、−ＯＳ（＝Ｏ）２ＯＲ、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）２、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ）２、−ＰＯ３、−ＰＯ３Ｈ２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｒ、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２Ｒ、−ＣＯ２−、−Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、および−Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２が含まれ、各Ｘは、それぞれの場合に独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、およびＩからそれぞれ独立して選択され、各Ｒは、それぞれの場合に独立して、アルキル、アリール、ヘテロシクロアルキルまたはヘテロアリール、保護基およびプロドラッグ部分からそれぞれ独立して選択される。基が「任意に置換され」と記載されている場合はいつでも、その基は、それぞれの場合に独立して、上記の置換基の１つ以上で置換され得る。置換は、隣接官能置換基の閉環など、隣接置換基が閉環を受けて、例えば、閉環により形成されるラクタム、ラクトン、環状無水物、アセタール、ヘミアセタール、チオアセタール、アミナール、およびヘミアミナールを形成し、例えば、保護基を供給する状況を含み得る。
【０１１８】
特定のラジカル命名規則には、文脈に応じてモノラジカルまたはジラジカルのいずれかを含み得ることを理解されたい。例えば、置換基が分子の残りの部分への２つの結合点を必要とする場合、該置換基はジラジカルであると理解される。例えば、２つの結合点を必要とするアルキルとして識別される置換基には、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−などのジラジカルが含まれる。他のラジカル命名規則は、ラジカルが「アルキレン」、「アルケニレン」、「アリーレン」、「ヘテロシクロアルキレン」などのようなジラジカルであることを明確に示している。
【０１１９】
置換基がジラジカルとして示されている場合（即ち、分子の残りの部分への２つの結合点を有する場合）、別段の指定がない限り、該置換基は任意の方向性配置で結合され得ることが理解されるべきである。
【０１２０】
（抗ＣＤ２５２抗体）
本発明は、ＣＤ２５２（ＯＸ４０リガンド（ＯＸ４０Ｌ）とも呼ばれる。タンパク質ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００３３１７．１；Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号：Ｐ２３５１０；配列番号１９または２０）に結合できる抗体またはその抗原結合フラグメント、ＧＶＨＤを予防および処置するための治療薬として使用することができるという発見に一部基づいている。そのような抗体は、単独で使用することも、抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）として細胞毒素にコンジュゲートさせることもできる。
【０１２１】
一実施形態では、本明細書に記載の方法および組成物（例えば、ＡＤＣ）には、抗ＣＤ２５２抗体が含まれ、その重鎖および軽鎖アミノ酸配列はそれぞれ配列番号１および２に記載されている。一実施形態では、抗ＣＤ２５２抗体またはその抗原結合部分は、配列番号１のアミノ酸配列に記載の重鎖可変領域、および配列番号２のアミノ酸配列に記載の軽鎖可変領域を含む。一実施形態では、抗ＣＤ２５２抗体またはその抗原結合部分は、配列番号１のアミノ酸配列に記載のＣＤＲを含有する重鎖可変領域、および配列番号２のアミノ酸配列に記載のＣＤＲを含有する軽鎖可変領域を含む。配列番号１および２のアミノ酸配列を以下に示す。
【０１２２】
特定の実施形態では、抗ＣＤ２５２抗体またはその抗原結合部分は、配列番号３〜５のアミノ酸配列に記載のＣＤＲを含有する重鎖可変領域、および配列番号６〜８のアミノ酸配列に記載のＣＤＲを含有する軽鎖可変領域を含む。配列番号３〜８のアミノ酸配列を以下に示す。
【化１９】
2021517133.tif 000022
【化２０】
2021517133.tif 000023
【０１２３】
一実施形態では、本明細書において開示される方法および組成物で使用される抗ＣＤ２５２抗体は、配列番号１のアミノ酸配列に記載の重鎖可変領域、および配列番号２のアミノ酸配列に記載の軽鎖可変領域を含むインタクト抗体である。一実施形態では、抗ＣＤ２５２抗体は、短い半減期を有するように操作されている。
【０１２４】
一実施形態では、本明細書に記載の方法および組成物（ＡＤＣを含む）で使用され得る抗ＣＤ２５２抗体は、１１Ｃ３．１（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３２６３０２）、１５９４０３（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＭＡＢ１０５４１）、１５９４０８（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＭＡＢ１０５４）、ＭＭ０５０５−８Ｓ２３（Ｎｏｖｕｓ、カタログ番号ＮＢＰ２−１１９６９）、またはオキセルマブ（Ｎｏｖｕｓ、カタログ番号ＮＢＰ２−５２６８７−０．１）から選択される抗体である。
【０１２５】
一実施形態では、本明細書に記載の方法および組成物（ＡＤＣを含む）で使用され得る抗ＣＤ２５２抗体は、マウスモノクローナル抗ＣＤ２５２抗体１１Ｃ３．１、または１１Ｃ３．１抗体に対応する抗原結合領域を含む抗ＣＤ２５２抗体である。１１Ｃ３．１（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３２６３０２（２０１９年２月２７日付）によって販売）。
【０１２６】
一実施形態では、抗ＣＤ２５２抗体は、抗ＣＤ２５２抗体１１Ｃ３．１のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含有する重鎖、ならびに抗ＣＤ２５２抗体１１Ｃ３．１のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含有する軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、本明細書に開示される組成物および方法で使用される抗ＣＤ２５２抗体は、ヒト化１１Ｃ３．１抗体である。
【０１２７】
一実施形態では、本明細書に記載の方法および組成物（ＡＤＣを含む）で使用され得る抗ＣＤ２５２抗体は、マウスモノクローナル抗ＣＤ２５２抗体１５９４０３、または１５９４０３抗体に対応する抗原結合領域を含む抗ＣＤ２５２抗体である。１５９４０３（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＭＡＢ１０５４１（２０１９年２月２７日付）によって販売）。
【０１２８】
一実施形態では、抗ＣＤ２５２抗体は、抗ＣＤ２５２抗体１５９４０３のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含有する重鎖、ならびに抗ＣＤ２５２抗体１５９４０３のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含有する軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、本明細書に開示される組成物および方法で使用される抗ＣＤ２５２抗体は、ヒト化１５９４０３抗体である。
【０１２９】
一実施形態では、本明細書に記載の方法および組成物（ＡＤＣを含む）で使用され得る抗ＣＤ２５２抗体は、マウスモノクローナル抗ＣＤ２５２抗体１５９４０８、または１５９４０８抗体に対応する抗原結合領域を含む抗ＣＤ２５２抗体である。１５９４０８（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＭＡＢ１０５４（２０１９年２月２７日付）によって販売）。
【０１３０】
一実施形態では、抗ＣＤ２５２抗体は、抗ＣＤ２５２抗体１５９４０８のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含有する重鎖、ならびに抗ＣＤ２５２抗体１５９４０８のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含有する軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、本明細書に開示される組成物および方法で使用される抗ＣＤ２５２抗体は、ヒト化１５９４０８抗体である。
【０１３１】
一実施形態では、本明細書に記載の方法および組成物（ＡＤＣを含む）で使用され得る抗ＣＤ２５２抗体は、マウスモノクローナル抗ＣＤ２５２抗体ＭＭ０５０５−８Ｓ２３、またはＭＭ０５０５−８Ｓ２３抗体に対応する抗原結合領域を含む抗ＣＤ２５２抗体である。ＭＭ０５０５−８Ｓ２３（Ｎｏｖｕｓ、カタログ番号ＮＢＰ２−１１９６９（２０１９年２月２７日付）によって販売）。この抗体は、ハイブリドーマ（ＯＸ４０リガンドとも呼ばれるヒトＴＮＦＳＦ４で免疫化されたマウス由来の脾臓細胞と融合したマウス骨髄腫）から産生された。
【０１３２】
一実施形態では、抗ＣＤ２５２抗体は、抗ＣＤ２５２抗体ＭＭ０５０５−８Ｓ２３のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含有する重鎖、ならびに抗ＣＤ２５２抗体ＭＭ０５０５−８Ｓ２３のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含有する軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、本明細書に開示される組成物および方法で使用される抗ＣＤ２５２抗体は、ヒト化ＭＭ０５０５−８Ｓ２３抗体である。
【０１３３】
一実施形態では、本明細書に記載の方法および組成物（ＡＤＣを含む）で使用され得る抗ＣＤ２５２抗体は、ウサギモノクローナル抗ＣＤ２５２抗体オキセルマブ、またはオキセルマブ抗体に対応する抗原結合領域を含む抗ＣＤ２５２抗体である。オキセルマブ（Ｎｏｖｕｓ、カタログ番号ＮＢＰ２−５２６８７−０．１（２０１９年２月２７日付）によって販売）。
【０１３４】
一実施形態では、抗ＣＤ２５２抗体は、抗ＣＤ２５２抗体オキセルマブのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含有する重鎖、ならびに抗ＣＤ２５２抗体オキセルマブのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含有する軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、本明細書に開示される組成物および方法で使用される抗ＣＤ２５２抗体は、ヒト化オキセルマブ抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２５２抗体またはその抗原結合部分は、配列番号９のアミノ酸配列に記載の重鎖、および配列番号１０のアミノ酸配列に記載の軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２５２抗体またはその抗原結合部分は、配列番号１７のアミノ酸配列に記載の重鎖可変領域、および配列番号１８のアミノ酸配列に記載の軽鎖可変領域を含む。一実施形態では、抗ＣＤ２５２抗体またはその抗原結合部分は、配列番号１１〜１３のアミノ酸配列に記載のＣＤＲを含有する重鎖可変領域と、配列番号１４〜１６のアミノ酸配列に記載のＣＤＲを含有する軽鎖可変領域とを含む。一実施形態では、抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列に記載の重鎖可変領域、および配列番号１８のアミノ酸配列に記載の軽鎖可変領域を含むインタクト抗体である。配列番号９〜１６のアミノ酸配列を以下に示す。
【化２１】
2021517133.tif 000024
【化２２】
2021517133.tif 000025
【０１３５】
本明細書に記載の抗ＣＤ２５２抗体または結合フラグメントはまた、当該分野で公知であるように、半減期を増加させるもの、ＡＤＣＣを増加または減少させるものなど、抗体および／またはフラグメントの特性を変化させる改変および／または変異を含み得る。
【０１３６】
一実施形態では、本明細書に開示される方法および組成物で使用される抗ＣＤ２５２抗体またはその結合フラグメントは、バリアントＦｃ領域を含み、前記バリアントＦｃ領域は、野生型Ｆｃ領域と比較して少なくとも１つのアミノ酸改変を含み、その結果、前記分子は、ＦｃｇａｍｍａＲ（ＦｃγＲ）に対する親和性が変化している。Ｆｃ領域内の特定のアミノ酸位置は、結晶学研究によりＦｃγＲと直接接触することが知られている。具体的には、アミノ酸２３４−２３９（ヒンジ領域）、アミノ酸２６５−２６９（Ｂ／Ｃループ）、アミノ酸２９７−２９９（Ｃ’／Ｅループ）、およびアミノ酸３２７−３３２（Ｆ／Ｇ）ループ（Ｓｏｎｄｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０００年  Ｎａｔｕｒｅ，４０６：２６７−２７３頁を参照）。したがって、本明細書に記載の抗ＣＤ２５２抗体はバリアントＦｃ領域を含み得、当該バリアントＦｃ領域は構造的および結晶学的分析に基づいてＦｃγＲと直接接触する少なくとも１つの残基の改変を含む。一実施形態では、抗ＣＤ２５２抗体（またはそのフラグメント）のＦｃ領域は、参照により本明細書に明示的に援用されるＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，  ＮＨ１、メリーランド州（１９９１年）のＥＵインデックスに従って、アミノ酸２６５にアミノ酸置換を含む。「ＫａｂａｔのＥＵインデックス」は、ヒトＩｇＧ１  ＥＵ抗体のナンバーリングを指す。一実施形態では、Ｆｃ領域はＤ２６５Ａ変異を含む。一実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｄ２６５Ｃ変異を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２５２抗体（またはそのフラグメント）のＦｃ領域は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従って、アミノ酸２３４にアミノ酸置換を含む。一実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｌ２３４Ａ変異を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２５２抗体（またはそのフラグメント）のＦｃ領域は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスによるアミノ酸２３５にアミノ酸置換を含む。一実施形態では、Ｆｃ領域はＬ２３５Ａ変異を含む。さらに別の実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ変異を含む。さらなる実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｄ２６５Ｃ、Ｌ２３４Ａ、およびＬ２３５Ａ変異を含む。
【０１３７】
特定の態様では、バリアントＩｇＧ  Ｆｃドメインは、アミノ酸置換を含まない野生型Ｆｃドメインと比較して、ＦｃγＲおよび／またはＣ１ｑに対する結合親和性の低下または消失をもたらす１つ以上のアミノ酸置換を含む。Ｆｃ結合相互作用は、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を含むがこれらに限定されない、様々なエフェクター機能および下流のシグナル伝達イベントに不可欠である。したがって、特定の態様では、改変されたＦｃ領域を含む（例えば、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＤ２６５Ｃ変異を含む）抗ＣＤ２５２抗体は、実質的に低減または無効化されたエフェクター機能を有する。
【０１３８】
Ｆｃ領域に対する親和性は、当技術分野で公知の様々な技術、例えば、限定されないが、平衡法（例えば、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）；ＫｉｎＥｘＡ、Ｒａｔｈａｎａｓｗａｍｉ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、３７３巻：５２−６０頁、２００８年；またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ））、または表面プラズモン共鳴アッセイまたは他のメカニズムの速度論に基づくアッセイ（ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）分析またはＯｃｔｅｔ（商標）分析（ｆｏｒｔｅＢＩＯ））、および間接結合アッセイ、競合結合アッセイ、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）、ゲル電気泳動およびクロマトグラフィー（例えば、ゲルろ過）などの他の方法を使用して決定することができる。これらおよび他の方法は、検査されている成分の１つ以上の標識を利用し、かつ／または発色、蛍光、発光、または同位体標識を含むがこれらに限定されない様々な検出方法を使用し得る。結合親和性および反応速度論の詳細な説明は、Ｐａｕｌ，  Ｗ．  Ｅ．，  ｅｄ．，  Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第４版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ、フィラデルフィア（１９９９年）にあり、抗体−免疫原の相互作用に焦点を当てている。競合結合アッセイの一例は、増加する量の非標識抗原の存在下における標識された抗原と目的の抗体とのインキュベーションと、標識された抗原に結合した抗体の検出とを含むラジオイムノアッセイである。特定の抗原に対する目的の抗体の親和性および結合オフ速度（ｂｉｎｄｉｎｇ  ｏｆｆ−ｒａｔｅ）は、スキャッチャードプロット分析によってデータから決定することができる。二次抗体との競合は、ラジオイムノアッセイを使用して決定することもできる。この場合、抗原は、増加する量の非標識二次抗体の存在下で、標識された化合物にコンジュゲートされた目的の抗体とインキュベートされる。
【０１３９】
本発明の抗体は、追加のＦｃ変異を導入することによって抗体半減期をさらに調節するようにさらに操作され得、当該追加のＦｃ変異は、例えば（Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．（２００６年）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８１：２３５１４−２４頁）、（Ｚａｌｅｖｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０年）Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２８：１５７−９頁）、（Ｈｉｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００４年）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７９：６２１３−６頁）、（Ｈｉｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００６年）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７６：３４６−５６頁）、（Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００１年）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７６：６５９１−６０４頁）、（Ｐｅｔｋｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．（２００６年）Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８：１７５９−６９頁）、（Ｄａｔｔａ−Ｍａｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００７年）Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ  Ｄｉｓｐｏｓ  ３５：８６−９４頁）、（Ｖａｃｃａｒｏ  ｅｔ  ａｌ．（２００５年）Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２３：１２８３−８頁）、（Ｙｅｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０年）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ７０：３２６９−７７頁）および（Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９年）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２９：２８１９−２５頁）に記載されており、２５０、２５２、２５３、２５４、２５６、２５７、３０７、３７６、３８０、４２８、４３４および４３５位を含む。単独でまたは組み合わせて作製され得る例示的な変異は、Ｔ２５０Ｑ、Ｍ２５２Ｙ、１２５３Ａ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｐ２５７１、Ｔ３０７Ａ、Ｄ３７６Ｖ、Ｅ３８０Ａ、Ｍ４２８Ｌ、Ｈ４３３Ｋ、Ｎ４３４Ｓ、Ｎ４３４Ａ、Ｎ４３４Ｈ、Ｎ４３４Ｆ、Ｈ４３５Ａ、およびＨ４３５Ｒ変異である。
【０１４０】
したがって、一実施形態では、Ｆｃ領域は、半減期の減少をもたらす変異を含む。半減期が短い抗体は、抗体が短命の治療薬として機能すると予想される特定の場合、例えば抗体が投与され、続いてＨＳＣが投与される本明細書に記載のコンディショニングステップにおいて有利であり得る。理想的には、抗体はＨＳＣの送達前に実質的に除去され、ここで内因性幹細胞とは異なり、ＨＳＣはまた一般にＣＤ２５２を発現するが抗ＣＤ２５２抗体の標的ではない。一実施形態では、Ｆｃ領域は４３５位（ＫａｂａｔによるＥＵインデックス）に変異を含む。一実施形態では、変異はＨ４３５Ａ変異である。
【０１４１】
一実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２５２抗体は、１４時間以下、１３時間以下、１２時間以下、または１１時間以下の半減期を有する。一実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２５２抗体は、約２４時間以下の半減期、約２２時間以下の半減期、約２０時間以下の半減期、約１８時間以下の半減期、約１６時間以下の半減期、約１４時間以下の半減期、約１３時間以下の半減期、約１２時間以下の半減期、または約１１時間以下の半減期を有する。一実施形態では、抗体の半減期は、約１時間〜約２０時間、約２時間〜約１８時間、約４時間〜約１６時間、約６時間〜約１４時間、約８時間〜約１２時間、約１１時間〜約１２時間、約１１時間〜約２４時間、約１２時間〜約２２時間、約１０時間〜約２０時間、約８時間〜約１８時間、約１時間〜約６時間、約２時間〜約５時間、約３時間〜約４時間、または約１４時間〜約２４時間である。
【０１４２】
いくつかの態様では、Ｆｃ領域は、半減期の減少をもたらし、抗体のエフェクター機能を大幅に減少させるかまたは完全になくす２つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、半減期の減少をもたらす変異、および（例えば、構造的および結晶学的分析に基づいて）ＦｃγＲと直接接触することができる少なくとも１つの残基の変異を含む。一実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｈ４３５Ａ変異、Ｌ２３４Ａ変異、およびＬ２３５Ａ変異を含む。一実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｈ４３５Ａ変異およびＤ２６５Ｃ変異を含む。一実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｈ４３５Ａ変異、Ｌ２３４Ａ変異、Ｌ２３５Ａ変異、およびＤ２６５Ｃ変異を含む。
【０１４３】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体またはその抗原結合フラグメントのＦｃドメイン中のシステイン残基を介して細胞毒素（例えば、アマトキシン）にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、システイン残基は、抗体またはその抗原結合フラグメントのＦｃドメインにおける変異によって導入される。例えば、システイン残基は、Ｃｙｓ１１８、Ｃｙｓ２３９、およびＣｙｓ２６５からなる群から選択され得る。一実施形態では、抗ＣＤ２５２抗体（またはそれらのフラグメント）のＦｃ領域は、ＫａｂａｔのＥＵインデックス従って、アミノ酸２６５にアミノ酸置換を含む。一実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｄ２６５Ｃ変異を含む。一実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｄ２６５ＣおよびＨ４３５Ａ変異を含む。一実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｄ２６５、Ｌ２３４Ａ、およびＬ２３５Ａ変異を含む。一実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｄ２６５Ｃ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＨ４３５Ａ変異を含む。
【０１４４】
これらの態様のいくつかの実施形態では、システイン残基は、抗体またはその抗原結合フラグメントのＦｃドメインに天然に存在する。例えば、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１  ＦｃドメインなどのＩｇＧ  Ｆｃドメインであり得、システイン残基は、Ｃｙｓ２６１、Ｃｓｙ３２１、Ｃｙｓ３６７、およびＣｙｓ４２５からなる群から選択され得る。
【０１４５】
本明細書に記載のバリアントＦｃドメインは、それらを構成するアミノ酸改変に従って定義される。Ｆｃ領域に関して本明細書で説明するすべてのアミノ酸置換について、ナンバーリングは常にＥＵインデックスに従う。したがって、例えば、Ｄ２６５Ｃは、親Ｆｃドメインに対して、ＥＵ位置２６５のアスパラギン酸（Ｄ）がシステイン（Ｃ）で置換されたＦｃバリアントである。同様に、例えば、Ｄ２６５Ｃ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａは、親Ｆｃドメインに対して、ＥＵ位置２６５（ＤからＣ）、２３４（ＬからＡ）、および２３５（ＬからＡ）に置換を有するＦｃバリアントを定義する。バリアントはまた、変異させたＥＵアミノ酸位置におけるその最終的なアミノ酸組成に従って指定することができる。例えば、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ変異体はＬＡＬＡと呼ばれる。置換が提供される順序は任意であることに留意されたい。
【０１４６】
一実施形態では、抗ＣＤ２５２抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書に開示される配列番号と少なくとも９５％、９６％、９７％または９９％同一であるアミノ酸配列を有する可変領域を含む。あるいは、抗ＣＤ２５２抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書に開示される配列番号と少なくとも９５％、９６％、９７％または９９％同一であるアミノ酸配列を有する本明細書に記載の可変領域のフレームワーク領域とともに、本明細書に開示される配列番号を含有するＣＤＲを含む。
【０１４７】
特定の実施形態では、抗ＣＤ２５２抗体またはその抗原結合フラグメントは、コンジュゲートの一部として使用される場合に特に有利である特定の解離速度を有する。例えば、抗ＣＤ２５２抗体は、特定の実施形態において、生体層干渉計（ＢＬＩ）によって測定した場合に、ヒトＣＤ２５２および／またはアカゲザルＣＤ２５２に対して１×１０−２〜１×１０−３、１×１０−３〜１×１０−４、１×１０−５〜１×１０−６、１×１０−６〜１×１０−７または１×１０−７〜１×１０−８のオフ速度定数（Ｋｏｆｆ）を有する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、生体層干渉計（ＢＬＩ）アッセイによって決定した場合、約１００ｎＭ以下、約９０ｎＭ以下、約８０ｎＭ以下、約７０ｎＭ以下、約６０ｎＭ以下、約５０ｎＭ以下、約４０ｎＭ以下、約３０ｎＭ以下、約２０ｎＭ以下、約１０ｎＭ以下、約８ｎＭ以下、約６ｎＭ以下、約４ｎＭ以下、約２ｎＭ以下、約１ｎＭ以下のＫＤでＣＤ２５２（例えば、ヒトＣＤ２５２および／またはアカゲザルＣＤ２５２）に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、生体層干渉計（ＢＬＩ）アッセイによって決定した場合、約９０ｎＭ〜１００ｎＭ、約８０ｎＭ〜９０ｎＭ、約７０ｎＭ〜８０ｎＭ、約６０ｎＭ〜７０ｎＭ、約５０ｎＭ〜６０ｎＭ、約４０ｎＭ〜５０ｎＭ、約３０ｎＭ〜４０ｎＭ、約２０ｎＭ〜３０ｎＭ、約１０ｎＭ〜２０ｎＭ、約８ｎＭ〜１０ｎＭ、約６ｎＭ〜８ｎＭ、約４ｎＭ〜６ｎＭ、約２ｎＭ〜４ｎＭ、約１ｎＭ〜２ｎＭ、または約１ｎＭ以下のＫＤでＣＤ２５２（例えば、ヒトＣＤ２５２および／またはアカゲザルＣＤ２５２）に結合する。
【０１４８】
本明細書に開示される抗体、およびその結合フラグメントは、以下により詳細に記載されるように、コンジュゲートにおいて使用され得る。
【０１４９】
前述の抗体の例示的な抗原結合フラグメントには、とりわけ、二重可変免疫グロブリンドメイン、一本鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、抗体様タンパク質スキャフォールド、Ｆｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２分子、およびタンデムｄｉ−ｓｃＦｖが含まれる。本明細書に記載の抗ＣＤ２５２抗体は、限定されないがＦａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ）、ｓｃＦｖ（一本鎖Ｆｖ）、サロボディ（サロゲート軽鎖コンストラクトを含む）、単一ドメイン抗体、ラクダ化抗体などを含む、全長抗体、二重特異性抗体、二重可変ドメイン抗体、多鎖または一本鎖抗体、および／またはヒトＣＤ２５２に特異的に結合する結合フラグメントの形態であり得る。それらはまた、例えば、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）、またはＩｇＭを含む、任意のアイソタイプのものであるか、またはそれらに由来し得る。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２５２抗体は、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）である。
【０１５０】
一実施形態では、抗ＣＤ２５２抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書に開示される配列番号と少なくとも９５％、９６％、９７％または９９％同一であるアミノ酸配列を有する可変領域を含む。あるいは、抗ＣＤ２５２抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書に開示される配列番号と少なくとも９５％、９６％、９７％または９９％同一であるアミノ酸配列を有する本明細書に記載の可変領域のフレームワーク領域とともに、本明細書に開示される配列番号を含有するＣＤＲを含む。
【０１５１】
（抗ＣＤ２５２抗体の産生方法）
本明細書に開示される組成物および方法で使用され得る抗ＣＤ２５２抗体は、当技術分野で知られている方法を使用して産生することができる。抗ＣＤ２５２抗体は、本開示によって提供されるＣＤ２５２結合分子のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子から生成され得る。ヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列は抗体の任意の部分、例えば、ＣＤＲ、１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲを含む配列、重鎖の可変領域、軽鎖の可変領域であってよく、または全長の重鎖もしくは全長の軽鎖であってもよい。本開示の核酸は、例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡであり得、イントロン配列を含んでも含まなくてもよい。典型的には、核酸はｃＤＮＡ分子である。
【０１５２】
抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載されているように、組換え法および組換え組成物を使用して産生することができる。一実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２５２抗体をコードする単離された核酸が提供される。そのような核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列および／またはＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖および／または重鎖）をコードし得る。さらなる実施形態では、そのような核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。さらなる実施形態では、そのような核酸を含む宿主細胞が提供される。そのような一実施形態では、宿主細胞は以下を含む（例えば、以下で形質転換されている）：（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列および抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクターと、抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクター。一実施形態では、宿主細胞は真核生物、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞（Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞など）である。一実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体を作製する方法が提供され、この方法は、上記のように、抗体の発現に適した条件下で抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を培養することと、任意に宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から抗体を回収することを含む。
【０１５３】
抗ＣＤ２５２抗体の組換え産生のために、例えば上記のように、抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞におけるさらなるクローニングおよび／または発現のために１つ以上のベクターに挿入される。そのような核酸は、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離および配列決定することができる。
【０１５４】
抗体をコードするベクターのクローニングまたは発現に適した宿主細胞には、本明細書に記載の原核細胞または真核細胞が含まれる。例えば、抗体は、特にグリコシル化とＦｃエフェクター機能が不要な場合に、細菌内で産生され得る。細菌における抗体フラグメントおよびポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、第５，７８９，１９９号、および第５，８４０，５２３号を参照されたい（大腸菌における抗体フラグメントの発現について説明のあるＣｈａｒｌｔｏｎ，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２４８巻（Ｂ．Ｋ．Ｃ．  Ｌｏ，  ｅｄ．，  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、トトワ、ニュージャージー州、２００３年）、２４５−２５４頁も参照）。発現後、抗体は細菌細胞ペーストから可溶性画分に単離され得、さらに精製することができる。
【０１５５】
脊椎動物細胞も宿主として使用され得る。例えば、懸濁液（ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ）中で増殖するように適合された哺乳動物細胞株が有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７）；ヒト胎児腎臓株（例えば、Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．  ３６：５９（１９７７年）に記載されている２９３または２９３細胞）；ベビーハムスター腎細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，  Ｂｉｏｌ．  Ｒｅｐｒｏｄ．  ２３：２４３−２５１頁（１９８０年）に記載されているＴＭ４細胞）；サル腎細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎細胞（ＶＥＲＯ−７６）；ヒト子宮頸がん細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎細胞（ＭＤＣＫ）；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ  ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２）；例えばＭａｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．Ｙ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ３８３：４４−６８頁（１９８２年）に記載されているＴＲＩ細胞；ＭＲＣ  ５細胞；およびＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株には、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Ｕｒｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ７７：４２１６（１９８０年））；およびＹ０、ＮＳ０、Ｓｐ２／０などの骨髄腫細胞株が含まれる。抗体産生に適した特定の哺乳動物宿主細胞株の総説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ  ａｎｄ  Ｗｕ，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２４８巻（Ｂ．Ｋ．Ｃ．  Ｌｏ，  ｅｄ．，  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、トトワ、ニュージャージー州）、２５５−２６８頁（２００３年）を参照されたい。
【０１５６】
（抗ＣＤ２５２抗体の同定方法）
本明細書に開示される組成物および方法において有用な追加の抗ＣＤ２５２抗体、その抗原結合フラグメントは、当技術分野で公知であり本明細書に記載されている技術、例えば、免疫化、計算モデリング技術、ならびに以下に記載するファージディスプレイおよび細胞ベースのディスプレイプラットフォームなどのｉｎ  ｖｉｔｒｏ選択法を用いて同定することができる。
【０１５７】
本明細書に記載の組成物および方法で使用され得る抗ＣＤ２５２抗体は、当該分野で公知の技術（例えば、ハイブリドーマ産生）を使用して同定することができる。ハイブリドーマは、マウスのシステムを使用して調製することができる。免疫化およびその後の融合用の脾細胞の単離のためのプロトコルは、当技術分野で知られている。ハイブリドーマ生成のための融合パートナーおよび手順も知られている。抗ＣＤ２５２抗体を作製する際、ＣＤ２５２抗原は単離および／または精製される。いくつかの実施形態では、ＣＤ２５２抗原はＣＤ２５２のフラグメントであり得る。動物の免疫化は、当技術分野で知られている任意の方法によって行うことができる。例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、ニューヨーク：  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ、１９９０年を参照。マウス、ラット、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウシおよびウマなどの動物を免疫化する方法は、当技術分野でよく知られている。例えば、上記のＨａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅおよび米国特許第５，９９４，６１９号を参照。ＣＤ２５２抗原は、免疫応答を刺激するためにアジュバントと共に投与され得る。当技術分野で公知のアジュバントには、完全または不完全フロイントアジュバント、ＲＩＢＩ（ムラミルジペプチド）、またはＩＳＣＯＭ（免疫刺激複合体）が含まれる。動物をＣＤ２５２抗原で免疫化した後、免疫化した動物から単離された細胞から抗体産生不死化細胞株を調製する。免疫化後、動物を犠牲にし、リンパ節および／または脾臓Ｂ細胞を当技術分野で公知の方法（例えば、癌遺伝子導入、発癌性ウイルスの形質導入、発癌性または変異化合物への曝露、不死化細胞（骨髄腫細胞など）との融合、および腫瘍抑制遺伝子の不活性化）により不死化する。例えば、上記のＨａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅを参照。ハイブリドーマを選択し、クローン化し、高増殖、高い抗体産生、および所望の抗体特性を含む所望の特性についてさらにスクリーニングすることができる。ヒト抗ＣＤ２５２抗体は、ＨｕＭＡｂ−Ｍｏｕｓｅ（登録商標）またはＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（商標）などのマウスにおいて作製することもできる。
【０１５８】
ＣＤ２５２に結合することができる抗体、または抗体フラグメントおよび分子用ライブラリーのハイスループットスクリーニングのための方法は、癌、自己免疫疾患を処置すること、および本明細書に記載の造血幹細胞療法を必要とする患者（例えば、ヒト患者）をコンディショニングする上で有用な抗体を同定し、その親和性を成熟化させるために使用され得る。そのような方法には、とりわけファージディスプレイ、細菌ディスプレイ、酵母ディスプレイ、哺乳動物細胞ディスプレイ、リボソームディスプレイ、ｍＲＮＡディスプレイ、およびｃＤＮＡディスプレイなどの当該技術分野で知られているｉｎ  ｖｉｔｒｏディスプレイ技術が挙げられる。生物学的に関連のある分子に結合するリガンドを単離するためのファージディスプレイの使用は、例えば、Ｆｅｌｉｃｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ．  １：１４９−１８３頁、１９９５年；Ｋａｔｚ，  Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｂｉｏｍｏｌ．  Ｓｔｒｕｃｔ．  ２６：２７−４５頁、１９９７年；およびＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ４：１−２０頁、１９９８年にレビューされており、これらの各々の開示は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏディスプレイ技術に関連するため、参照により本明細書に援用される。Ｋａｙ，  Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｄｅｓ．  ２：２５１−２６８頁、１９９５年およびＫａｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ．  Ｄｉｖｅｒｓ．  １：１３９−１４０頁、１９９６年に記載されているように、細胞表面抗原に結合するポリペプチドを選択するために、ランダム化コンビナトリアルペプチドライブラリーが構築されており、これらの各々の開示は、抗原結合分子の発見に関連するため、参照により本明細書に援用される。多量体タンパク質などのタンパク質は、機能的分子として首尾よくファージディスプレイされている（例えば、ＥＰ０３４９５７８；ＥＰ４５２７８３９；およびＥＰ０５８９８７７、ならびにＣｈｉｓｗｅｌｌ  ａｎｄ  ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ，  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  １０：８０−８４頁、１９９２年を参照し、それらの各々の開示は、抗原結合分子の発見のためのｉｎ  ｖｉｔｒｏディスプレイ技術の使用に関連するため、参照により本明細書に援用される）。さらに、ＦａｂフラグメントおよびｓｃＦＶフラグメントなどの機能的抗体フラグメントは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏディスプレイフォーマットで発現されている（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４頁、１９９０年；Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８８：７９７８−７９８２頁、１９９１年；およびＣｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８頁、１９９１年を参照し、これらの各々の開示は、抗原結合分子の発見のためのｉｎ  ｖｉｔｒｏディスプレイ技術の使用に関連するため、参照により本明細書に援用される）。これらの技術は、とりわけ、ＣＤ２５２に結合する抗体の親和性を同定および改善するために使用され得る。
【０１５９】
Ｉｎ  ｖｉｔｒｏディスプレイ技術に加えて、ｉｎ  ｓｉｌｉｃｏでＣＤ２５２に結合する抗体または抗体フラグメントを設計および同定するために、計算モデリング技法を使用することができる。例えば、計算モデリング技法を使用して、当業者は、この抗原の細胞外エピトープなどの特定のエピトープに結合できる分子について、抗体または抗体フラグメントのライブラリーをｉｎ  ｓｉｌｉｃｏでスクリーニングすることができる。これらの計算技法によって同定された抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書に記載の治療方法と組み合わせて使用することができる。
【０１６０】
細胞（例えば、癌細胞、自己免疫細胞、または造血幹細胞）の表面上のＣＤ２５２に結合し、例えば、受容体媒介エンドサイトーシスによって該細胞によって内在化される抗体またはその抗原結合フラグメントを同定するために、さらなる技術を使用することができる。例えば、ＡＰＣの表面上のＣＤ２５２に結合し、その後内在化される抗体またはその抗原結合フラグメントについてスクリーニングするために、上記のｉｎ  ｖｉｔｒｏディスプレイ技術を適合させることができる。ファージディスプレイは、このスクリーニングパラダイムと併せて使用することができるそのような技術の１つを表す。ＣＤ２５２に結合し、続いて癌細胞、自己免疫細胞、ＡＰＣまたは造血幹細胞によって内在化される抗体またはそのフラグメントを同定するために、当業者は、例えばＷｉｌｌｉａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  １９：１４３２−１４３８頁、２００５年に記載のファージディスプレイ技術を適合させることができ、当該文献の開示は、その全体が参照により本明細書に援用される。例えば、当該技術分野で知られている突然変異誘発法を用いて、ランダム化アミノ酸カセット（例えば、ＣＤＲもしくはその等価領域のうちの１つ以上、もしくは全部、または抗体もしくは抗体フラグメント）を含有する、とりわけ抗体、抗体フラグメント、例えばｓｃＦｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、ダイアボディ、トリアボディ、および１０Ｆｎ３ドメインをコードする組み換えファージライブラリーを作製することができる。前述の抗体の例示的な抗原結合フラグメントには、とりわけ二重可変免疫グロブリンドメイン、一本鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、抗体様タンパク質スキャフォールド、Ｆｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２分子、およびタンデムｄｉ−ｓｃＦｖが含まれる。フレームワーク領域、ヒンジ、Ｆｃドメイン、および抗体または抗体フラグメントの他の領域は、例えば、ヒト生殖細胞系列抗体配列またはヒト生殖細胞系列抗体に対してわずかな変異のみを示す配列を有することによって、ヒトにおいて非免疫原性であるように設計され得る。
【０１６１】
本明細書に記載のまたは当該技術分野で知られているファージディスプレイ技術を用いて、ファージ粒子に共有結合したランダム化された抗体、または抗体フラグメントを含むファージライブラリーを、ＣＤ２５２抗原とインキュベートすることができ、それは、例えば、最初に、ファージライブラリーをブロッキング剤（例えば、乳タンパク質、ウシ血清アルブミン、および／またはＩｇＧなど）とインキュベートし、非特異的タンパク質結合を示す抗体またはそのフラグメントをコードするファージと、Ｆｃドメインに結合する抗体またはそのフラグメントをコードするファージを除去し、次いでファージライブラリーをＡＰＣの集団とインキュベートすることによる。ＣＤ２５２特異的抗体またはその抗原結合フラグメントが細胞表面ＣＤ２５２抗原に結合し、その後、癌細胞、自己免疫細胞、または造血幹細胞によって内在化されるのを可能するのに十分な時間、ファージライブラリーを癌細胞、自己免疫細胞、または造血幹細胞などの標的細胞とインキュベートすることができる（例：４℃で３０分〜６時間、例えば４℃で１時間）。癌細胞、自己免疫細胞、または造血幹細胞への結合およびそれらによる内在化を可能にするために、これらの抗原の１つ以上に対して十分親和性を示さない抗体またはそのフラグメントを含有するファージは、その後、例えばｐＨ２．８の冷（４℃）０．１Ｍグリシン緩衝液で細胞を洗浄することによって除去され得る。抗体もしくはそのフラグメントに結合したファージ、または癌細胞、自己免疫細胞、もしくは造血幹細胞によって内在化されたファージは、例えば、細胞を溶解し、内在化されたファージを細胞培養培地から回収することによって同定することができる。次いで、ファージは、例えば、当該技術分野で知られている方法を用いて、２×ＹＴ培地中で細菌細胞を回収されたファージとインキュベートすることによって、細菌細胞中で増幅させることができる。次いで、この培地から回収されたファージは、例えば、ファージゲノム内に挿入された抗体またはそのフラグメントをコードする遺伝子（単数または複数）の核酸配列を決定することによって、特性評価することができる。コードされた抗体、またはそのフラグメントは、その後、（例えば、ｓｃＦｖフラグメントなどの抗体フラグメントの）化学合成によって、または（例えば、全長抗体の）組み換え発現によってｄｅ  ｎｏｖｏで調製され得る。
【０１６２】
調製された抗体またはそのフラグメントの内在化能力は、例えば当該技術分野で知られている放射性核種内在化アッセイを用いて評価することができる。例えば、本明細書に記載されているかまたは当該技術分野で知られているｉｎ  ｖｉｔｒｏディスプレイ技術を使用して同定された抗体またはそのフラグメントは、１８Ｆ、７５Ｂｒ、７７Ｂｒ、１２２Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１２９Ｉ、１３１Ｉ、２１１Ａｔ、６７Ｇａ、１１１Ｉｎ、９９Ｔｃ、１６９Ｙｂ、１８６Ｒｅ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、１７７Ｌｕ、７７Ａｓ、７２Ａｓ、８６Ｙ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、または２２５Ａｃなどの放射性同位元素の組み込みによって機能化され得る。例えば、１８Ｆ、７５Ｂｒ、７７Ｂｒ、１２２Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１２９Ｉ、１３１Ｉ、２１１Ａｔなどの放射性ハロゲンを、求電子性ハロゲン試薬を含有するポリスチレンビーズなどのビーズ（例えば、ヨウ素化ビーズ、サーモフィッシャーサイエンティフィック社、ケンブリッジ、マサチューセッツ州）を用いて、抗体またはそのフラグメントに組み込むことができる。放射標識された抗体またはそのフラグメントを、内在化を可能にするのに十分な時間（例：４℃で３０分〜６時間、例えば４℃で１時間）、癌細胞、自己免疫細胞、または造血幹細胞とインキュベートすることができる。次いで、細胞を洗浄して、内在化されなかった抗体またはそのフラグメントを除去することができる（例えば、ｐＨ２．８の冷（４℃）０．１Ｍグリシン緩衝液を使用して）。内在化された抗体またはそのフラグメントは、回収された洗浄緩衝液から放出される放射線（例えば、γ線）と比較して、得られた癌細胞、自己免疫細胞、または造血幹細胞から放出される放射線（例えば、γ線）を検出することによって同定され得る。
【０１６３】
（抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ））
＜細胞毒素＞
本明細書に記載の抗ＣＤ２５２抗体およびその抗原結合フラグメントは、細胞毒素にコンジュゲート（結合）させることができ、したがって抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を形成する。いくつかの実施形態では、細胞毒性分子は、抗体またはそのフラグメントの細胞取り込みに続いて、細胞毒素がその細胞内標的にアクセスし、細胞死を媒介し得るように、本明細書に開示される細胞内在化抗体またはその抗原結合フラグメントにコンジュゲートされる。本明細書に開示されるように、そのようなＡＤＣは、式Ａｂ−Ｚ−Ｌ−Ｃｙで表され得、ここで、それぞれ本明細書で開示されるように、ＡｂはＣＤ２５２に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Ｚはリンカー上に存在する反応性官能基と抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在する反応性官能基との間のカップリング反応から形成される化学部分であり、Ｌはリンカーであり、Ｃｙは細胞毒素である。
【０１６４】
本明細書に記載の組成物および方法での使用に適した細胞毒素には、当該技術分野で知られているものの中でもとりわけ、ＤＮＡ挿入剤（例えば、アントラサイクリン）、有糸分裂紡錘体装置を破壊することができる薬剤（例えば、ビンカアルカロイド、メイタンシン、メイタンシノイド、およびそれらの誘導体）、ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤（例えば、α−アマニチンなどのアマトキシンおよびそれらの誘導体）、およびタンパク質生合成を妨害することができる薬剤（例えば、サポリンおよびリシンＡ鎖などのｒＲＮＡ  Ｎ−グリコシダーゼ活性を示す薬剤）が挙げられる。
【０１６５】
いくつかの実施形態では、細胞毒素は、微小管結合剤（例えば、メイタンシンまたはメイタンシノイド）、アマトキシン、シュードモナス外毒素Ａ、ｄｅＢｏｕｇａｎｉｎ、ジフテリア毒素、サポリン、アウリスタチン、アントラサイクリン、カリケアマイシン、イリノテカン、ＳＮ−３８、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン、インドリノベンゾジアゼピン二量体、もしくはそれらのバリアント、または本明細書に記載か当該技術分野で知られている別の細胞毒性化合物である。
【０１６６】
上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、細胞毒素は、ＤＭ１およびＤＭ４からなる群から選択されるメイタンシノイドである。いくつかの実施形態では、細胞毒素は、モノメチルアウリスタチンＥおよびモノメチルアウリスタチンＦからなる群から選択されるアウリスタチンである。いくつかの実施形態では、細胞毒素は、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、およびイダルビシンからなる群から選択されるアントラサイクリンである。
【０１６７】
いくつかの実施形態では、細胞毒素は、式（ＩＶ）で表されるピロロベンゾジアゼピン二量体である：
【化２３】
2021517133.tif 000026
【０１６８】
いくつかの実施形態では、細胞毒素は、マレイミドカプロイルリンカーを介して、抗体またはその抗原結合フラグメントにコンジュゲートされる。
【０１６９】
いくつかの実施形態では、細胞毒素は、モノメチルアウリスタチンＥおよびモノメチルアウリスタチンＦからなる群から選択されるアウリスタチンである。
【０１７０】
いくつかの実施形態では、細胞毒素は、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、およびイダルビシンからなる群から選択されるアントラサイクリンである。
【０１７１】
本明細書に記載の組成物および方法での使用に適した追加の細胞毒素には、限定されないが、とりわけ以下のものが挙げられる：５−エチニルウラシル、アビラテロン、アシルフルベン、アデシペノール、アドゼレシン、アルデスロイキン、アルトレタミン、アンバムスチン、アミドックス、アミホスチン、アミノレブリン酸、アムルビシン、アムサクリン、アナグレリド、アナストロゾール、アンドログラホリド、血管新生阻害剤、アンタレリックス、抗背側化形態形成性タンパク質−１、抗アンドロゲン、前立腺癌、抗エストロゲン、抗新生物薬、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アフィジコリングリシネート、アポトーシス遺伝子モジュレーター、アポトーシスレギュレーター、アプリン酸、アスラクリン、アタメスタン、アトリムスチン、アキシナスタチン１、アキシナスタチン２、アキシナスタチン３、アザセトロン、アザトキシン、アザチロシン、バッカチンＩＩＩ誘導体、バラノール、バチマスタット、ＢＣＲ／ＡＢＬアンタゴニスト、ベンゾクロリン、ベンゾイルスタウロスポリン、ベータラクタム誘導体、ベータ−アレチン、ベタクラマイシンＢ、ベツリン酸、ｂＦＧＦ阻害剤、ビカルタミド、ビサントレン、ビスアジリジニルスペルミン、ビスナフィド、ビストラテンＡ、ビゼレシン、ブレフレート、ブレオマイシンＡ２、ブレオマイシンＢ２、ブロピリミン、ブドチタン、ブチオニンスルホキシミン、カルシポトリオール、カルホスチンＣ、カンプトテシン誘導体（例えば、１０−ヒドロキシ−カンプトテシン）、カペシタビン、カルボキサミド−アミノ−トリアゾール、カルボキシアミドトリアゾール、カルゼレシン、カゼインキナーゼ阻害剤、カスタノスペルミン、セクロピンＢ、セトロレリックス、クロリン、クロロキノキサリンスルホンアミド、シカプロスト、シス−ポルフィリン、クラドリビン、クロミフェンおよびその類似体、クロトリマゾール、コリスマイシンＡ、コリスマイシンＢ、コンブレタスタチンＡ４、コンブレタスタチン類似体、コナゲニン、クラムベシジン８１６、クリスナトール、クリプトフィシン８、クリプトフィシンＡ誘導体、キュラシンＡ、シクロペンタアントラキノン、シクロプラタム、シペマイシン、シタラビンオクホスフェート、細胞溶解因子、サイトスタチン、ダクリキシマブ、デシタビン、デヒドロジデムニンＢ、２’デオキシコホルマイシン（ＤＣＦ）、デスロレリン、デキシフォスファミド、デクスラゾキサン、デクスベラパミル、ジアジコン、ジデムニンＢ、ジドックス、ジエチルノルスペルミン、ジヒドロ−５−アザシチジン、ジヒドロタキソール、ジオキサマイシン、ジフェニルスピロムスチン、ディスコデルモリド、ドコサノール、ドラセトロン、ドキシフルリジン、ドロロキシフェン、ドロナビノール、デュオカルマイシンＳＡ、エブセレン、エコムスチン、エデルフォシン、エドレコロマブ、エフロルニチン、エレメン、エミテフル、エポチロン、エピチロン、エプリステリド、エストラムスチンおよびその類似体、エトポシド、エトポシド４’−リン酸（エトポフォスとも呼ばれる）、エキセメスタン、ファドロゾール、ファザラビン、フェンレチニド、フィルグラスチム、フィナステリド、フラボピリドール、フレゼラスチン、フルアステロン、フルダラビン、塩酸フルオロダウノルニシン、ホルフェニメックス、フォルメスタン、フォストリエシン、フォテムスチン、ガドリニウムテキサフィリン、硝酸ガリウム、ガロシタビン、ガニレリックス、ゼラチナーゼ阻害剤、ゲムシタビン、グルタチオン阻害剤、ヘプスルファム、ホモハリングトニン（ＨＨＴ）、ヒペリシン、イバンドロン酸、イドキシフェン、イドラマントン、イルモホシン、イロマスタット、イミダゾアクリドン、イミキモド、免疫刺激ペプチド、ヨーベングアン、ヨードドキソルビシン、イポメアノール、イリノテカン、イロプラクト、イルソグラジン、イソベンガゾール、ジャスプラキノリド、カハラリドＦ、ラメラリン−Ｎトリアセテート、ランレオチド、レイナマイシン、レノグラスチム、レンチナン硫酸、レプトルスタチン、レトロゾール、親油性白金化合物リソクリンアミド７、ロバプラチン、ロメトレキソール、ロニダミン、ロキソキサントロン、ロキソリビン、ルルトテカン、ルテチウムテキサフィリン、リゾフィリン、マソプロコール、マスピン、マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤、メノガリル、ルネルバロン、メテレリン、メチオニナーゼ、メトクロプラミド、ＭＩＦ阻害剤、イフェプリストン、ミルテフォシン、ミリモスチム、ミトラシン、ミトグアゾン、ミトラクトール、マイトマイシンおよびその類似体、ミトナフィド、ミトキサントロン、モファロテン、モルグラモスチン、マイカペルオキシドＢ、ミリアポロン、Ｎ−アセチルジナリン、Ｎ−置換ベンズアミド、ナファレリン、ナグレスチップ、ナパビン、ナフテルピン、ナルトグラスチム、ネダプラチン、ネモルビシン、ネリドロン酸、ニルタミド、ニサマイシン、ニトルリン、オクトレオチド、オキセノン、オナプリストン、オンダンセトロン、オラシン、オルマプラチン、オキサリプラチン、オキサウノマイシン、パクリタキセルおよびその類似体、パラウアミン、パルミトイルリゾキシン、パミドロン酸、パナキシトリオール、パノミフェン、パラバクチン、パゼリプチン、ペガスパルガーゼ、ペルデシン、ペントサンポリ硫酸ナトリウム、ペントスタチン、ペントロゾール、ペルフルブロン、ペルホスファミド、フェナジノマイシン、ピシバニール、ピラルビシン、ピリトレキシム、ポドフィロトキシン、ポルフィロマイシン、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ阻害剤、ラルチトレキセド、リゾキシン、ログレチミド、ロヒツキン、ルビギノンＢ１、ルボキシル、サフィンゴール、セイントピン、サルコフィトールＡ、サルグラモスチム、ソブゾキサン、ソネルミン、スパルホシン酸、スピカマイシンＤ、スピロムスチン、スチピアミド、スルフィノシン、タリムスチン、テガフール、テモゾロミド、テニポシド、タリブラスチン、チオコラリン、チラパザミン、トポテカン、トプセンチン、トリシリビン、トリメトレキサート、ベラミン、ビノレルビン、ビンキサルチン、ボロゾール、ゼニプラチン、ならびにジラスコルブ。
【０１７２】
いくつかの実施形態では、抗体−薬物コンジュゲートの細胞毒素は、ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤は、アマトキシンまたはその誘導体である。いくつかの実施形態では、細胞毒素は、アマトキシンまたはその誘導体、例えば、α−アマニチン、β−アマニチン、γ−アマニチン、ε−アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、およびプロアマヌリンである。天然に存在する様々なアマトキシンの構造は、例えば、Ｚａｎｏｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．  ３０，  １９８７年、４５０−４５９頁に開示されている。一実施形態では、細胞毒素はアマニチンである。
【０１７３】
例えば、本明細書に記載の抗体または抗原結合フラグメントは、式Ａｂ−Ｚ−Ｌ−Ａｍによって表されるコンジュゲートを形成するように、アマトキシンに結合され得（すなわち、細胞毒素Ｃｙはアマトキシンである）、ここでＡｂは抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Ｌはリンカーであり、Ｚは化学部分であり、Ａｍは本明細書に記載のアマトキシンである。アマトキシンまたはその誘導体の多くの位置は、連結部分Ｌ、したがって抗体またはその抗原結合フラグメントを共有結合する位置として機能することができる。いくつかの実施形態では、アマトキシン−リンカーコンジュゲートＡｍ−Ｌ−Ｚは、式（Ｉ）で表される：
【化２４】
2021517133.tif 000027
［式中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＡ、またはＯＲＣであり、
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＢ、またはＯＲＣであり、
ＲＡおよびＲＢは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して任意に置換された５員ヘテロシクロアルキル基を形成し、
Ｒ３は、Ｈ、ＲＣ、またはＲＤであり、
Ｒ４は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり、
Ｒ５は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり、
Ｒ６は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり、
Ｒ７は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり、
Ｒ８は、ＯＨ、ＮＨ２、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＮＨＲＣ、またはＮＲＣＲＤであり、
Ｒ９は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、またはＯＲＤであり、
Ｘは、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、または−ＳＯ２−であり、
ＲＣは、−Ｌ−Ｚであり、
ＲＤは、任意に置換されたアルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ６アルキル）、任意に置換されたヘテロアルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ６ヘテロアルキル）、任意に置換されたアルケニル（例えば、Ｃ２−Ｃ６アルケニル）、任意に置換されたヘテロアルケニル（例えば、Ｃ２−Ｃ６ヘテロアルケニル）、任意に置換されたアルキニル（例えば、Ｃ２−Ｃ６アルキニル）、任意に置換されたヘテロアルキニル（例えば、Ｃ２−Ｃ６ヘテロアルキニル）、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり、
Ｌは、任意に置換されたアルキレン（例えば、Ｃ１−Ｃ６アルキレン）、任意に置換されたヘテロアルキレン（例えば、Ｃ１−Ｃ６ヘテロアルキレン）、任意に置換されたアルケニレン（例えば、Ｃ２−Ｃ６アルケニレン）、任意に置換されたヘテロアルケニレン（例えば、Ｃ２−Ｃ６ヘテロアルケニレン）、任意に置換されたアルキニレン（例えば、Ｃ２−Ｃ６アルキニレン）、任意に置換されたヘテロアルキニレン（例えば、Ｃ２−Ｃ６ヘテロアルキニレン）、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、任意に置換されたヘテロアリーレン、任意にジペプチド、任意に−（Ｃ＝Ｏ）−、任意にペプチド、またはそれらの組み合わせなどのリンカーであり、ならびに
Ｚは、Ｌ上に存在する反応性置換基と、ＣＤ２５２に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学部分である］。
【０１７４】
いくつかの実施形態では、Ａｍは、ちょうど１つのＲＣ置換基を含む
【０１７５】
式Ｉのいくつかの実施形態では、ＲＡおよびＲＢは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して以下の式の５員ヘテロシクロアルキル基を形成する：
【化２５】
2021517133.tif 000028
上記式において、Ｙは、−（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｓ）−、−（Ｃ＝ＮＲＥ）−、または−（ＣＲＥＲＥ’）−であり、ＲＥおよびＲＥ’は、それぞれ独立して、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキレン−ＲＣ、任意に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキレン−ＲＣ、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニレン−ＲＣ、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルケニレン−ＲＣ、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニレン−ＲＣ、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルキニレン−ＲＣ、任意に置換されたシクロアルキレン−ＲＣ、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン−ＲＣ、任意に置換されたアリーレン−ＲＣ、または任意に置換されたヘテロアリーレン−ＲＣである。
【０１７６】
いくつかの実施形態では、Ａｍ−Ｌ−Ｚは式Ｉで表され、
上記式において、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＡ、またはＯＲＣであり、
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＢ、またはＯＲＣであり、
ＲＡおよびＲＢは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して以下を形成し、
【化２６】
2021517133.tif 000029
Ｒ３は、ＨまたはＲＣであり、
Ｒ４は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり、
Ｒ５は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり、
Ｒ６は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり、
Ｒ７は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり、
Ｒ８は、ＯＨ、ＮＨ２、ＯＲＣ、またはＮＨＲＣであり、
Ｒ９は、ＨまたはＯＨであり、ならびに
Ｘ、ＲＣおよびＲＤは、それぞれ上記で定義した通りである。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、Ａｍ−Ｌ−Ｚは式Ｉで表され、
上記式において、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＡ、またはＯＲＣであり、
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＢ、またはＯＲＣであり、
ＲＡおよびＲＢは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して以下を形成し、
【化２７】
2021517133.tif 000030
Ｒ３は、ＨまたはＲＣであり、
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＲＣ、またはＯＲＤであり、
Ｒ６およびＲ７は、それぞれＨであり、
Ｒ８は、ＯＨ、ＮＨ２、ＯＲＣ、またはＮＨＲＣであり、
Ｒ９は、ＨまたはＯＨであり、ならびに
ＸおよびＲＣは、上記で定義した通りである。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、Ａｍ−Ｌ−Ｚは式Ｉで表され、
上記式において、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、またはＯＲＡであり、
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、またはＯＲＢであり、
ＲＡおよびＲＢは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して以下を形成し、
【化２８】
2021517133.tif 000031
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、およびＲ７は、それぞれＨであり、
Ｒ５はＯＲＣであり、
Ｒ８は、ＯＨまたはＮＨ２であり、
Ｒ９は、ＨまたはＯＨであり、ならびに
ＸおよびＲＣは、上記で定義した通りである。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、Ａｍ−Ｌ−Ｚは式Ｉで表され、
上記式において、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、ＨまたはＯＨであり、
Ｒ３はＲＣであり、
Ｒ４、Ｒ６、およびＲ７は、それぞれＨであり、
Ｒ５は、Ｈ、ＯＨ、またはＯＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ８は、ＯＨまたはＮＨ２であり、
Ｒ９は、ＨまたはＯＨであり、ならびに
ＸおよびＲＣは、上記で定義した通りである。
【０１８０】
いくつかの実施形態では、Ａｍ−Ｌ−Ｚは式Ｉで表され、
上記式において、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、ＨまたはＯＨであり、
Ｒ３、Ｒ６、およびＲ７は、それぞれＨであり、
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、またはＲＣであり、
Ｒ８は、ＯＨまたはＮＨ２であり、
Ｒ９は、ＨまたはＯＨであり、ならびに
ＸおよびＲＣは、上記で定義した通りである。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、Ａｍ−Ｌ−Ｚは式Ｉで表され、
上記式において、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、ＨまたはＯＨであり、
Ｒ３、Ｒ６、およびＲ７は、それぞれＨであり、
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して、ＨまたはＯＨであり、
Ｒ８は、ＯＨ、ＮＨ２、ＯＲＣ、またはＮＨＲＣであり、
Ｒ９は、ＨまたはＯＨであり、ならびに
ＸおよびＲＣは、上記で定義した通りである。
【０１８２】
いくつかの実施形態では、リンカーは、−（ＣＨ２）ｎ−単位を含み、ここでｎは２〜６の整数である。いくつかの実施形態では、リンカーは−（ＣＨ２）ｎ−を含み、ここでｎは６である。いくつかの実施形態では、リンカーＬおよび化学部分Ｚは、Ｌ−Ｚとしてまとめて、
【化２９】
2021517133.tif 000032
であり、上記式において、Ｓは、ＣＤ２５２に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基を表す（例えば、システイン残基の−ＳＨ基由来の）硫黄原子である。
【０１８３】
いくつかの実施形態では、Ｌ−Ｚは、
【化３０】
2021517133.tif 000033
である。
【０１８４】
いくつかの実施形態では、Ｌ−Ｚは、
【化３１】
2021517133.tif 000034
である。
【０１８５】
いくつかの実施形態では、Ａｍ−Ｌ−Ｚ−Ａｂは、
【化３２】
2021517133.tif 000035
である。
【０１８６】
いくつかの実施形態では、Ａｍ−Ｌ−Ｚは、式（ＩＡ）で表される：
【化３３】
2021517133.tif 000036
［式中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＡ、またはＯＲＣであり、
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＢ、またはＯＲＣであり、
ＲＡおよびＲＢは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して任意に置換された５員ヘテロシクロアルキル基を形成し、
Ｒ３は、Ｈ、ＲＣ、またはＲＤであり、
Ｒ４は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり、
Ｒ５は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり、
Ｒ６は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり、
Ｒ７は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり、
Ｒ８は、ＯＨ、ＮＨ２、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＮＨＲＣ、またはＮＲＣＲＤであり、
Ｒ９は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、またはＯＲＤであり、
Ｘは、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、または−ＳＯ２−であり、
ＲＣは、−Ｌ−Ｚであり、
ＲＤは、任意に置換されたアルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ６アルキル）、任意に置換されたヘテロアルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ６ヘテロアルキル）、任意に置換されたアルケニル（例えば、Ｃ２−Ｃ６アルケニル）、任意に置換されたヘテロアルケニル（例えば、Ｃ２−Ｃ６ヘテロアルケニル）、任意に置換されたアルキニル（例えば、Ｃ２−Ｃ６アルキニル）、任意に置換されたヘテロアルキニル（例えば、Ｃ２−Ｃ６ヘテロアルキニル）、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり、
Ｌは、任意に置換されたアルキレン（例えば、Ｃ１−Ｃ６アルキレン）、任意に置換されたヘテロアルキレン（例えば、Ｃ１−Ｃ６ヘテロアルキレン）、任意に置換されたアルケニレン（例えば、Ｃ２−Ｃ６アルケニレン）、任意に置換されたヘテロアルケニレン（例えば、Ｃ２−Ｃ６ヘテロアルケニレン）、任意に置換されたアルキニレン（例えば、Ｃ２−Ｃ６アルキニレン）、任意に置換されたヘテロアルキニレン（例えば、Ｃ２−Ｃ６ヘテロアルキニレン）、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、任意に置換されたヘテロアリーレン、任意にジペプチド、任意に−（Ｃ＝Ｏ）−、任意にペプチド、またはそれらの組み合わせなどのリンカーであり、
Ｚは、Ｌ上に存在する反応性置換基と、ＣＤ２５２に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学部分であり、ならびに
Ａｍは、ちょうど１つのＲＣ置換基を含む］。
【０１８７】
いくつかの実施形態では、リンカーＬおよび化学部分Ｚは、Ｌ−Ｚとしてまとめて、
【化３４】
2021517133.tif 000037
である。
【０１８８】
いくつかの実施形態では、Ｌ−Ｚは、
【化３５】
2021517133.tif 000038
である。
【０１８９】
いくつかの実施形態では、Ａｍ−Ｌ−Ｚ−Ａｂは、
【化３６】
2021517133.tif 000039
である。
【０１９０】
いくつかの実施形態では、Ａｍ−Ｌ−Ｚは、式（ＩＢ）で表される：
【化３７】
2021517133.tif 000040
［式中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＡ、またはＯＲＣであり、
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＢ、またはＯＲＣであり、
ＲＡおよびＲＢは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して任意に置換された５員ヘテロシクロアルキル基を形成し、
Ｒ３は、Ｈ、ＲＣ、またはＲＤであり、
Ｒ４は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり、
Ｒ５は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり、
Ｒ６は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり、
Ｒ７は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり、
Ｒ８は、ＯＨ、ＮＨ２、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＮＨＲＣ、またはＮＲＣＲＤであり、
Ｒ９は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、またはＯＲＤであり、
Ｘは、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、または−ＳＯ２−であり、
ＲＣは、−Ｌ−Ｚであり、
ＲＤは、任意に置換されたアルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ６アルキル）、任意に置換されたヘテロアルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ６ヘテロアルキル）、任意に置換されたアルケニル（例えば、Ｃ２−Ｃ６アルケニル）、任意に置換されたヘテロアルケニル（例えば、Ｃ２−Ｃ６ヘテロアルケニル）、任意に置換されたアルキニル（例えば、Ｃ２−Ｃ６アルキニル）、任意に置換されたヘテロアルキニル（例えば、Ｃ２−Ｃ６ヘテロアルキニル）、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり、
Ｌは、任意に置換されたアルキレン（例えば、Ｃ１−Ｃ６アルキレン）、任意に置換されたヘテロアルキレン（例えば、Ｃ１−Ｃ６ヘテロアルキレン）、任意に置換されたアルケニレン（例えば、Ｃ２−Ｃ６アルケニレン）、任意に置換されたヘテロアルケニレン（例えば、Ｃ２−Ｃ６ヘテロアルケニレン）、任意に置換されたアルキニレン（例えば、Ｃ２−Ｃ６アルキニレン）、任意に置換されたヘテロアルキニレン（例えば、Ｃ２−Ｃ６ヘテロアルキニレン）、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、任意に置換されたヘテロアリーレン、ジペプチド、−（Ｃ＝Ｏ）−、ペプチド、またはそれらの組み合わせなどのリンカーであり、
Ｚは、Ｌ上に存在する反応性置換基と、ＣＤ２５２に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学部分であり、ならびに
Ａｍは、ちょうど１つのＲＣ置換基を含む］。
【０１９１】
いくつかの実施形態では、式（ＩＡ）または（ＩＢ）において、ＲＡおよびＲＢは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して以下の式の５員ヘテロシクロアルキル基を形成する：
【化３８】
2021517133.tif 000041
上記式において、Ｙは、−（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｓ）−、−（Ｃ＝ＮＲＥ）−、または−（ＣＲＥＲＥ’）−であり、ＲＥおよびＲＥ’は、それぞれ独立して、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキレン−ＲＣ、任意に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキレン−ＲＣ、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニレン−ＲＣ、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルケニレン−ＲＣ、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニレン−ＲＣ、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルキニレン−ＲＣ、任意に置換されたシクロアルキレン−ＲＣ、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン−ＲＣ、任意に置換されたアリーレン−ＲＣ、または任意に置換されたヘテロアリーレン−ＲＣである。
【０１９２】
いくつかの実施形態では、Ａｍ−Ｌ−Ｚは、式（ＩＡ）または式（ＩＢ）で表され、
上記式において、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＡ、またはＯＲＣであり、
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＢ、またはＯＲＣであり、
ＲＡおよびＲＢは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して以下を形成し、
【化３９】
2021517133.tif 000042
Ｒ３は、ＨまたはＲＣであり、
Ｒ４は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり、
Ｒ５は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり、
Ｒ６は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり、
Ｒ７は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり、
Ｒ８は、ＯＨ、ＮＨ２、ＯＲＣ、またはＮＨＲＣであり、
Ｒ９は、ＨまたはＯＨであり、ならびに
Ｘ、ＲＣ、およびＲＤはそれぞれ上記で定義した通りである。
【０１９３】
いくつかの実施形態では、Ａｍ−Ｌ−Ｚは、式（ＩＡ）または式（ＩＢ）で表され、
上記式において、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＡ、またはＯＲＣであり、
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＢ、またはＯＲＣであり、
ＲＡおよびＲＢは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して以下を形成し、
【化４０】
2021517133.tif 000043
Ｒ３は、ＨまたはＲＣであり、
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＲＣ、またはＯＲＤであり、
Ｒ６およびＲ７は、それぞれＨであり、
Ｒ８は、ＯＨ、ＮＨ２、ＯＲＣ、またはＮＨＲＣであり、
Ｒ９は、ＨまたはＯＨであり、ならびに
ＸおよびＲＣは上記で定義した通りである。
【０１９４】
いくつかの実施形態では、Ａｍ−Ｌ−Ｚは、式（ＩＡ）または式（ＩＢ）で表され、
上記式において、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、またはＯＲＡであり、
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、またはＯＲＢであり、
ＲＡおよびＲＢは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して以下を形成し、
【化４１】
2021517133.tif 000044
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、およびＲ７は、それぞれＨであり、
Ｒ５はＯＲＣであり、
Ｒ８は、ＯＨまたはＮＨ２であり、
Ｒ９は、ＨまたはＯＨであり、ならびに
ＸおよびＲＣは上記で定義した通りである。そのようなアマトキシンコンジュゲートは、例えば、米国特許出願公開第２０１６／０００２２９８号に記載されており、その開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、Ａｍ−Ｌ−Ｚは、式（ＩＡ）または式（ＩＢ）で表され、
上記式において、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、ＨまたはＯＨであり、
Ｒ３はＲＣであり、
Ｒ４、Ｒ６、およびＲ７は、それぞれＨであり、
Ｒ５は、Ｈ、ＯＨ、またはＯＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ８は、ＯＨまたはＮＨ２であり、
Ｒ９は、ＨまたはＯＨであり、ならびに
ＸおよびＲＣは上記で定義した通りである。そのようなアマトキシンコンジュゲートは、例えば、米国特許出願公開第２０１４／０２９４８６５号に記載されており、その開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される。
【０１９６】
いくつかの実施形態では、Ａｍ−Ｌ−Ｚは、式（ＩＡ）または式（ＩＢ）で表され、
上記式において、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、ＨまたはＯＨであり、
Ｒ３、Ｒ６、およびＲ７は、それぞれＨであり、
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、またはＲＣであり、
Ｒ８は、ＯＨまたはＮＨ２であり、
Ｒ９は、ＨまたはＯＨであり、ならびに
ＸおよびＲＣは上記で定義した通りである。そのようなアマトキシンコンジュゲートは、例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１８２２０号に記載されており、その開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される。
【０１９７】
いくつかの実施形態では、Ａｍ−Ｌ−Ｚは、式（ＩＡ）または式（ＩＢ）で表され、
上記式において、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、ＨまたはＯＨであり、
Ｒ３、Ｒ６、およびＲ７は、それぞれＨであり、
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して、ＨまたはＯＨであり、
Ｒ８は、ＯＨ、ＮＨ２、ＯＲＣ、またはＮＨＲＣであり、
Ｒ９は、ＨまたはＯＨであり、ならびに
ＸおよびＲＣは上記で定義した通りである。そのようなアマトキシンコンジュゲートは、例えば、米国特許第９，２３３，１７３号および第９，３９９，６８１号ならびに米国特許出願公開第２０１６／００８９４５０号に記載されており、それらの各々の開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される。
【０１９８】
いくつかの実施形態では、リンカーＬおよび化学部分Ｚは、Ｌ−Ｚとしてまとめて、
【化４２】
2021517133.tif 000045
である。
【０１９９】
いくつかの実施形態では、Ｌ−Ｚは、
【化４３】
2021517133.tif 000046
である。
【０２００】
いくつかの実施形態では、Ａｍ−Ｌ−Ｚ−Ａｂは、
【化４４】
2021517133.tif 000047
である。
【０２０１】
いくつかの実施形態では、Ａｍ−Ｌ−Ｚ前駆体は、
【化４５】
2021517133.tif 000048
であり、ここで、マレイミドは抗体中のシステイン上にあるチオール基と反応する。
【０２０２】
本明細書に記載の組成物および方法に従って抗体またはその抗原結合フラグメントへのコンジュゲーションに使用され得るさらなるアマトキシンは、例えば、ＷＯ２０１６／１４２０４９；ＷＯ２０１６／０７１８５６；およびＷＯ２０１７／０４６６５８に記載されており、これらの各々の開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される。
【０２０３】
いくつかの実施形態では、Ａｍ−Ｌ−Ｚは、以下の式（ＩＩ）、式（ＩＩＡ）、または式（ＩＩＢ）で表され、
【化４６−１】
2021517133.tif 000049
【化４６−２】
2021517133.tif 000050
式中、Ｘは、Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ２であり；Ｒ１はＨであるか、化学部分Ｚを介して抗体またはその抗原結合フラグメントに共有結合しているリンカーであり、当該化学部分Ｚは、前記リンカー上に存在する反応性置換基と前記抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成され；Ｒ２はＨであるか、化学部分Ｚを介して抗体またはその抗原結合フラグメントに共有結合しているリンカーであり、当該化学部分Ｚは、前記リンカー上に存在する反応性置換基と前記抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成され；Ｒ１がＨである場合、Ｒ２が前記リンカーであり、Ｒ２がＨである場合、Ｒ１が前記リンカーである。
【０２０４】
いくつかの実施形態では、リンカーは−（ＣＨ２）ｎ−単位を含み、ここでｎは２〜６の整数である。
【０２０５】
いくつかの実施形態では、Ｒ１はリンカーであり、Ｒ２はＨであり、リンカーおよび化学部分は、Ｌ−Ｚとしてまとめて、
【化４７】
2021517133.tif 000051
である。
【０２０６】
いくつかの実施形態では、Ａｍ−Ｌ−Ｚ−Ａｂは、
【化４８】
2021517133.tif 000052
である。
【０２０７】
いくつかの実施形態では、Ａｂ−Ｚ−Ｌ−Ａｍは、
【化４９】
2021517133.tif 000053
である。
【０２０８】
いくつかの実施形態では、Ａｍ−Ｌ−Ｚ−Ａｂは、
【化５０】
2021517133.tif 000054
である。
【０２０９】
いくつかの実施形態では、Ａｍ−Ｌ−Ｚ前駆体は、以下のうちの１つであり、ここで、マレイミドは抗体中のシステイン上にあるチオール基と反応する：
【化５１】
2021517133.tif 000055
【０２１０】
いくつかの実施形態では、細胞毒素はα−アマニチンである。いくつかの実施形態では、α−アマニチンは式ＩＩＩの化合物である。いくつかの実施形態では、式ＩＩＩのα−アマニチンは、リンカーＬを介して抗ＣＤ２５２抗体に結合される。リンカーＬは、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、ＩＩ、ＩＩＡ、またはＩＩＢのα−アマニチン−リンカーコンジュゲートを提供するために、いくつかの可能な位置（例えば、Ｒ１〜Ｒ９のいずれか）のいずれか１つで式ＩＩＩのα−アマニチンに結合され得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ１位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ２位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ３位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ４位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ５位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ６位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ７位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ８位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ９位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、ヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテルまたはジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｖａｌ−ＡｌａおよびＶａｌ−Ｃｉｔから選択されるジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、パラアミノベンジル基（ＰＡＢ）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、部分ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、部分ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−単位を含み、ここでｎは１〜６の整数である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。
【０２１１】
いくつかの実施形態では、細胞毒素はβ−アマニチンである。いくつかの実施形態では、β−アマニチンは式ＩＩＩの化合物である。いくつかの実施形態では、式ＩＩＩのβ−アマニチンは、リンカーＬを介して抗ＣＤ２５２抗体に結合される。リンカーＬは、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、ＩＩ、ＩＩＡ、またはＩＩＢのβ−アマニチン−リンカーコンジュゲートを提供するために、いくつかの可能な位置（例えば、Ｒ１〜Ｒ９のいずれか）のいずれか１つで式ＩＩＩのβ−アマニチンに結合され得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ１位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ２位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ３位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ４位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ５位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ６位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ７位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ８位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ９位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、ヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテルまたはジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｖａｌ−ＡｌａおよびＶａｌ−Ｃｉｔから選択されるジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、パラアミノベンジル基（ＰＡＢ）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、部分ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、部分ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−単位を含み、ここでｎは１〜６の整数である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。
【０２１２】
いくつかの実施形態では、細胞毒素はγ−アマニチンである。いくつかの実施形態では、γ−アマニチンは式ＩＩＩの化合物である。いくつかの実施形態では、式ＩＩＩのγ−アマニチンは、リンカーＬを介して抗ＣＤ２５２抗体に結合される。リンカーＬは、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、ＩＩ、ＩＩＡ、またはＩＩＢのγ−アマニチン−リンカーコンジュゲートを提供するために、いくつかの可能な位置（例えば、Ｒ１〜Ｒ９のいずれか）のいずれか１つで式ＩＩＩのγ−アマニチンに結合され得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ１位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ２位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ３位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ４位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ５位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ６位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ７位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ８位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ９位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、ヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテルまたはジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｖａｌ−ＡｌａおよびＶａｌ−Ｃｉｔから選択されるジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、パラアミノベンジル基（ＰＡＢ）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、部分ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、部分ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−単位を含み、ここでｎは１〜６の整数である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。
【０２１３】
いくつかの実施形態では、細胞毒素はε−アマニチンである。いくつかの実施形態では、ε−アマニチンは式ＩＩＩの化合物である。いくつかの実施形態では、式ＩＩＩのε−アマニチンは、リンカーＬを介して抗ＣＤ２５２抗体に結合される。リンカーＬは、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、ＩＩ、ＩＩＡ、またはＩＩＢのε−アマニチン−リンカーコンジュゲートを提供するために、いくつかの可能な位置（例えば、Ｒ１〜Ｒ９のいずれか）のいずれか１つで式ＩＩＩのε−アマニチンに結合され得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ１位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ２位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ３位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ４位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ５位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ６位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ７位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ８位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ９位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、ヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテルまたはジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｖａｌ−ＡｌａおよびＶａｌ−Ｃｉｔから選択されるジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、パラアミノベンジル基（ＰＡＢ）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、部分ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、部分ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−単位を含み、ここでｎは１〜６の整数である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。
【０２１４】
いくつかの実施形態では、細胞毒素はアマニンである。いくつかの実施形態では、アマニンは式ＩＩＩの化合物である。いくつかの実施形態では、式ＩＩＩのアマニンは、リンカーＬを介して抗ＣＤ２５２抗体に結合される。リンカーＬは、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、ＩＩ、ＩＩＡ、またはＩＩＢのアマニン−リンカーコンジュゲートを提供するために、いくつかの可能な位置（例えば、Ｒ１〜Ｒ９のいずれか）のいずれか１つで式ＩＩＩのアマニンに結合され得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ１位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ２位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ３位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ４位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ５位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ６位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ７位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ８位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ９位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、ヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテルまたはジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｖａｌ−ＡｌａおよびＶａｌ−Ｃｉｔから選択されるジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、パラアミノベンジル基（ＰＡＢ）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、部分ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、部分ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−単位を含み、ここでｎは１〜６の整数である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。
【０２１５】
いくつかの実施形態では、細胞毒素はアマニンアミドである。いくつかの実施形態では、アマニンアミドは式ＩＩＩの化合物である。いくつかの実施形態では、式ＩＩＩのアマニンアミドは、リンカーＬを介して抗ＣＤ２５２抗体に結合される。リンカーＬは、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、ＩＩ、ＩＩＡ、またはＩＩＢのアマニンアミド−リンカーコンジュゲートを提供するために、いくつかの可能な位置（例えば、Ｒ１〜Ｒ９のいずれか）のいずれか１つで式ＩＩＩのアマニンアミドに結合され得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ１位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ２位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ３位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ４位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ５位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ６位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ７位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ８位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ９位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、ヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテルまたはジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｖａｌ−ＡｌａおよびＶａｌ−Ｃｉｔから選択されるジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、パラアミノベンジル基（ＰＡＢ）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、部分ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、部分ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−単位を含み、ここでｎは１〜６の整数である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。
【０２１６】
いくつかの実施形態では、細胞毒素はアマヌリンである。いくつかの実施形態では、アマヌリンは式ＩＩＩの化合物である。いくつかの実施形態では、式ＩＩＩのアマヌリンは、リンカーＬを介して抗ＣＤ２５２抗体に結合される。リンカーＬは、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、ＩＩ、ＩＩＡ、またはＩＩＢのアマヌリン−リンカーコンジュゲートを提供するために、いくつかの可能な位置（例えば、Ｒ１〜Ｒ９のいずれか）のいずれか１つで式ＩＩＩのアマヌリンに結合され得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ１位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ２位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ３位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ４位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ５位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ６位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ７位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ８位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ９位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、ヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテルまたはジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｖａｌ−ＡｌａおよびＶａｌ−Ｃｉｔから選択されるジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、パラアミノベンジル基（ＰＡＢ）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、部分ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、部分ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−単位を含み、ここでｎは１〜６の整数である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。
【０２１７】
いくつかの実施形態では、細胞毒素はアマヌリン酸である。いくつかの実施形態では、アマヌリン酸は式ＩＩＩの化合物である。いくつかの実施形態では、式ＩＩＩのアマヌリン酸は、リンカーＬを介して抗ＣＤ２５２抗体に結合される。リンカーＬは、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、ＩＩ、ＩＩＡ、またはＩＩＢのアマヌリン酸−リンカーコンジュゲートを提供するために、いくつかの可能な位置（例えば、Ｒ１〜Ｒ９のいずれか）のいずれか１つで式ＩＩＩのアマヌリン酸に結合され得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ１位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ２位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ３位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ４位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ５位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ６位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ７位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ８位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ９位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、ヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテルまたはジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｖａｌ−ＡｌａおよびＶａｌ−Ｃｉｔから選択されるジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、パラアミノベンジル基（ＰＡＢ）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、部分ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、部分ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−単位を含み、ここでｎは１〜６の整数である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。
【０２１８】
いくつかの実施形態では、細胞毒素はプロアマヌリンである。いくつかの実施形態では、プロアマヌリンは式ＩＩＩの化合物である。いくつかの実施形態では、式ＩＩＩのプロアマヌリンは、リンカーＬを介して抗ＣＤ２５２抗体に結合される。リンカーＬは、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、ＩＩ、ＩＩＡ、またはＩＩＢのプロアマヌリン−リンカーコンジュゲートを提供するために、いくつかの可能な位置（例えば、Ｒ１〜Ｒ９のいずれか）のいずれか１つで式ＩＩＩのプロアマヌリンに結合され得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ１位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ２位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ３位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ４位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ５位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ６位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ７位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ８位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｒ９位で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、ヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテルまたはジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｖａｌ−ＡｌａおよびＶａｌ−Ｃｉｔから選択されるジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、パラアミノベンジル基（ＰＡＢ）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、部分ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、部分ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−単位を含み、ここでｎは１〜６の整数である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。
【０２１９】
アマトキシンを作製する合成方法は、参照により本明細書に援用される米国特許第９，６７６，７０２号に記載されている。
【０２２０】
本明細書に記載の組成物および方法と併せて使用するための抗体または抗原結合フラグメントは、例えば当該技術分野で知られているか本明細書に記載のコンジュゲート技術を使用して、リンカー部分（Ｌ）を介してα−アマニチンまたはそのバリアントなどのアマトキシンにコンジュゲートされ得る（したがって、コンジュゲート（抗体−薬物コンジュゲートとも呼ばれる）を形成する）。例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１８２２０号に記載されているように、ＣＤ２５２を認識して結合する抗体またはその抗原結合フラグメントは、α−アマニチンまたはそのバリアントなどのアマトキシンにコンジュゲートされ得、その開示は、例えば、α−アマニチンおよびそのバリアントなどのアマトキシン、ならびに共有結合コンジュゲーションに使用することができる共有結合リンカーに関連するため、参照により本明細書に援用される。そのようなプロセスに有用なアマトキシンコンジュゲーションおよびリンカーの例示的な方法は、本明細書に記載されている。当該組成物および方法による抗体または抗原結合フラグメントへのコンジュゲーションに有用な例示的なリンカー含有アマトキシンもまた、本明細書に記載されている。アマトキシンを作製する合成方法は、例えば、米国特許第９，６７６，７０２号に記載されており、米国特許第９，６７６，７０２号は、その中で開示されている合成方法に関して参照により本明細書に援用される。
【０２２１】
本明細書に記載の方法と併せて有用な例示的な抗体−薬物コンジュゲートは、抗体またはその抗原結合フラグメントと、当該抗体またはその抗原結合フラグメント上の反応性残基との反応に適した置換基を含有するリンカーにコンジュゲートされたアマトキシンとの反応によって形成され得る。本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント上の反応性残基との反応に適した置換基を含有するリンカーにコンジュゲートされるアマトキシンとしては、限定されないが、以下のものが挙げられる：７’Ｃ−（４−（６−（マレイミド）ヘキサノイル）ピペラジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（６−（マレイミド）ヘキサンアミド）ピペリジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（６−（６−（マレイミド）ヘキサンアミド）ヘキサノイル）ピペラジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボニル）ピペラジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（６−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）ヘキサノイル）ピペラジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（２−（６−（マレイミド）ヘキサンアミド）エチル）ピペリジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（２−（６−（６−（マレイミド）ヘキサンアミド）ヘキサンアミド）エチル）ピペリジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（２−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）エチル）ピペリジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（２−（６−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）ヘキサンアミド）エチル）ピペリジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（２−（３−カルボキシプロパンアミド）エチル）ピペリジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（２−（２−ブロモアセトアミド）エチル）ピペリジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（２−（３−（ピリジン−２−イルジスルファニル）プロパンアミド）エチル）ピペリジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（２−（４−（マレイミド）ブタンアミド）エチル）ピペリジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（２−（マレイミド）アセチル）ピペラジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（３−（マレイミド）プロパノイル）ピペラジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（４−（マレイミド）ブタノイル）ピペラジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（２−（６−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）ヘキサンアミド）エチル）ピペリジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（３−（（６−（マレイミド）ヘキサンアミド）メチル）ピロリジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（３−（（６−（６−（マレイミド）ヘキサンアミド）ヘキサンアミド）メチル）ピロリジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（３−（（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）メチル）ピロリジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（３−（（６−（（４−（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）ヘキサンアミド）メチル）ピロリジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（２−（６−（２−（アミノオキシ）アセトアミド）ヘキサンアミド）エチル）ピペリジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（２−（４−（２−（アミノオキシ）アセトアミド）ブタンアミド）エチル）ピペリジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（４−（２−（アミノオキシ）アセトアミド）ブタノイル）ピペラジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（６−（２−（アミノオキシ）アセトアミド）ヘキサノイル）ピペラジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（６−（マレイミド）ヘキサンアミド）ピペリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（６−（マレイミド）ヘキサンアミド）エチル）ピペリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（６−（マレイミド）ヘキサノイル）ピペラジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；（Ｒ）−７’Ｃ−（（３−（（６−（マレイミド）ヘキサンアミド）メチル）ピロリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；（Ｓ）−７’Ｃ−（（３−（（６−（マレイミド）ヘキサンアミド）メチル）ピロリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（６−（６−（マレイミド）ヘキサンアミド）ヘキサンアミド）エチル）ピペリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）エチル）ピペリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（６−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）ヘキサンアミド）エチル）ピペリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（６−（マレイミド）ヘキサンアミド）エチル）ピペラジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（６−（６−（マレイミド）ヘキサンアミド）ヘキサンアミド）エチル）ピペラジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）エチル）ピペラジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（６−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）ヘキサンアミド）エチル）ピペラジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（３−（（６−（６−（マレイミド）ヘキサンアミド）ヘキサンアミド）−Ｓ−メチル）ピロリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（３−（（６−（６−（マレイミド）ヘキサンアミド）ヘキサンアミド）−Ｒ−メチル）ピロリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（３−（（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）−Ｓ−メチル）ピロリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（３−（（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）−Ｒ−メチル）ピロリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（３−（（６−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）ヘキサンアミド）メチル）ピロリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（３−カルボキシプロパンアミド）エチル）ピペラジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（６−（６−（マレイミド）ヘキサンアミド）ヘキサノイル）ピペラジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（６−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）ヘキサノイル）ピペラジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（マレイミド）アセチル）ピペラジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（３−（マレイミド）プロパノイル）ピペラジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（４−（マレイミド）ブタノイル）ピペラジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（２−（マレイミド）アセトアミド）エチル）ピペリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（４−（マレイミド）ブタンアミド）エチル）ピペリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（６−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）ヘキサンアミド）エチル）ピペリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（３−（（６−（マレイミド）ヘキサンアミド）メチル）アゼチジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（３−（２−（６−（マレイミド）ヘキサンアミド）エチル）アゼチジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（３−（（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）メチル）アゼチジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（３−（２−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）エチル）アゼチジン−１イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（３−（２−（６−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）ヘキサンアミド）エチル）アゼチジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（（２−（６−（マレイミド）−Ｎ−メチルヘキサンアミド）エチル）（メチル）アミノ）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（（４−（６−（マレイミド）Ｎ−メチルヘキサンアミド）ブチル（メチル）アミノ）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（２−（２−（６−（マレイミド）ヘキサンアミド）エチル）アジリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（２−（２−（６−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）ヘキサンアミド）エチル）アジリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（６−（６−（２−（アミノオキシ）アセトアミド）ヘキサンアミド）ヘキサノイル）ピペラジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（１−（アミノオキシ）−２−オキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３−アザヘプタデカン−１７−オイル）ピペラジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（２−（アミノオキシ）アセトアミド）アセチル）ピペラジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（３−（２−（アミノオキシ）アセトアミド）プロパノイル）ピペラジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（４−（２−（アミノオキシ）アセトアミド）ブタノイル）ピペラジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（６−（２−（アミノオキシ）アセトアミド）ヘキサンアミド）エチル）ピペリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（２−（２−（アミノオキシ）アセトアミド）アセトアミド）エチル）ピペリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（４−（２−（アミノオキシ）アセトアミド）ブタンアミド）エチル）ピペリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２０−（アミノオキシ）−４，１９−ジオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３，１８−ジアザイコシル）ピペリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（（２−（６−（２−（アミノオキシ）アセトアミド）−Ｎ−メチルヘキサンアミド）エチル）（メチル）アミノ）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（（４−（６−（２−（アミノオキシ）アセトアミド）−Ｎ−メチルヘキサンアミド）ブチル）（メチル）アミノ）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（３−（（６−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）ヘキサンアミド）メチル）ピロリジン−１−イル）−Ｓ−メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（３−（（６−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）ヘキサンアミド）−Ｒ−メチル）ピロリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（２−ブロモアセトアミド）エチル）ピペラジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（２−ブロモアセトアミド）エチル）ピペリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（３−（ピリジン−２−イルジスルファニル）プロパンアミド）エチル）ピペリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；６’Ｏ−（６−（６−（マレイミド）ヘキサンアミド）ヘキシル）−アマトキシン；６’Ｏ−（５−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）ペンチル）−アマトキシン；６’Ｏ−（２−（（６−（マレイミド）ヘキシル）オキシ）−２−オキソエチル）−アマトキシン；６’Ｏ−（（６−（マレイミド）ヘキシル）カルバモイル）−アマトキシン；６’Ｏ−（（６−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）ヘキシル）カルバモイル）−アマトキシン；
６’Ｏ−（６−（２−ブロモアセトアミド）ヘキシル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（６−（アジド）ヘキサンアミド）ピペリジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（ヘキサ−５−イノイルアミノ）ピペリジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（２−（６−（マレイミド）ヘキサンアミド）エチル）ピペラジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（２−（６−（６−（マレイミド）ヘキサンアミド）ヘキサンアミド）エチル）ピペラジン−１−イル）−アマトキシン；６’Ｏ−（６−（６−（１１，１２−ジデヒドロ−５，６−ジヒドロ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−イル）−６−オキソヘキサンアミド）ヘキシル）−アマトキシン；６’Ｏ−（６−（ヘキサ−５−イノイルアミノ）ヘキシル）−アマトキシン；６’Ｏ−（６−（２−（アミノオキシ）アセチルアミド）ヘキシル）−アマトキシン；６’Ｏ−（（６−アミノオキシ）ヘキシル）−アマトキシン；および６’Ｏ−（６−（２−ヨードアセトアミド）ヘキシル）−アマトキシン。本明細書に記載の組成物および方法と併せて有用な前述のリンカーは、例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１８２２０号に記載されており、その開示は、その全体が参照により本明細書に援用される。
【０２２２】
ＧＶＨＤまたは自己免疫疾患を直接処置する際に使用するための、ＣＤ２５２を認識して結合する抗体またはその抗原結合フラグメントにコンジュゲートされ得るさらなる細胞毒素には、限定されないが、とりわけ以下のものが挙げられる：５−エチニルウラシル、アビラテロン、アシルフルベン、アデシペノール、アドゼレシン、アルデスロイキン、アルトレタミン、アンバムスチン、アミドックス、アミホスチン、アミノレブリン酸、アムルビシン、アムサクリン、アナグレリド、アナストロゾール、アンドログラホリド、血管新生阻害剤、アンタレリックス、抗背側化形態形成性タンパク質−１、抗アンドロゲン、前立腺癌、抗エストロゲン、抗新生物薬、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アフィジコリングリシネート、アポトーシス遺伝子モジュレーター、アポトーシスレギュレーター、アプリン酸、アスラクリン、アタメスタン、アトリムスチン、アキシナスタチン１、アキシナスタチン２、アキシナスタチン３、アザセトロン、アザトキシン、アザチロシン、バッカチンＩＩＩ誘導体、バラノール、バチマスタット、ＢＣＲ／ＡＢＬアンタゴニスト、ベンゾクロリン、ベンゾイルスタウロスポリン、ベータラクタム誘導体、ベータ−アレチン、ベタクラマイシンＢ、ベツリン酸、ｂＦＧＦ阻害剤、ビカルタミド、ビサントレン、ビスアジリジニルスペルミン、ビスナフィド、ビストラテンＡ、ビゼレシン、ブレフレート、ブレオマイシンＡ２、ブレオマイシンＢ２、ブロピリミン、ブドチタン、ブチオニンスルホキシミン、カルシポトリオール、カルホスチンＣ、カンプトテシン誘導体（例えば、１０−ヒドロキシ−カンプトテシン）、カペシタビン、カルボキサミド−アミノ−トリアゾール、カルボキシアミドトリアゾール、カルゼレシン、カゼインキナーゼ阻害剤、カスタノスペルミン、セクロピンＢ、セトロレリックス、クロリン、クロロキノキサリンスルホンアミド、シカプロスト、シス−ポルフィリン、クラドリビン、クロミフェンおよびその類似体、クロトリマゾール、コリスマイシンＡ、コリスマイシンＢ、コンブレタスタチンＡ４、コンブレタスタチン類似体、コナゲニン、クラムベシジン８１６、クリスナトール、クリプトフィシン８、クリプトフィシンＡ誘導体、キュラシンＡ、シクロペンタアントラキノン、シクロプラタム、シペマイシン、シタラビンオクホスフェート、細胞溶解因子、サイトスタチン、ダクリキシマブ、デシタビン、デヒドロジデムニンＢ、２’デオキシコホルマイシン（ＤＣＦ）、デスロレリン、デキシフォスファミド、デクスラゾキサン、デクスベラパミル、ジアジコン、ジデムニンＢ、ジドックス、ジエチルノルスペルミン、ジヒドロ−５−アザシチジン、ジヒドロタキソール、ジオキサマイシン、ジフェニルスピロムスチン、ディスコデルモリド、ドコサノール、ドラセトロン、ドキシフルリジン、ドロロキシフェン、ドロナビノール、デュオカルマイシンＳＡ、エブセレン、エコムスチン、エデルフォシン、エドレコロマブ、エフロルニチン、エレメン、エミテフル、エポチロン、エピチロン、エプリステリド、エストラムスチンおよびその類似体、エトポシド、エトポシド４’−リン酸（エトポフォスとも呼ばれる）、エキセメスタン、ファドロゾール、ファザラビン、フェンレチニド、フィルグラスチム、フィナステリド、フラボピリドール、フレゼラスチン、フルアステロン、フルダラビン、塩酸フルオロダウノルニシン、ホルフェニメックス、フォルメスタン、フォストリエシン、フォテムスチン、ガドリニウムテキサフィリン、硝酸ガリウム、ガロシタビン、ガニレリックス、ゼラチナーゼ阻害剤、ゲムシタビン、グルタチオン阻害剤、ヘプスルファム、ホモハリングトニン（ＨＨＴ）、ヒペリシン、イバンドロン酸、イドキシフェン、イドラマントン、イルモホシン、イロマスタット、イミダゾアクリドン、イミキモド、免疫刺激ペプチド、ヨーベングアン、ヨードドキソルビシン、イポメアノール、イリノテカン、イロプラクト、イルソグラジン、イソベンガゾール、ジャスプラキノリド、カハラリドＦ、ラメラリン−Ｎトリアセテート、ランレオチド、レイナマイシン、レノグラスチム、レンチナン硫酸、レプトルスタチン、レトロゾール、親油性白金化合物リソクリンアミド７、ロバプラチン、ロメトレキソール、ロニダミン、ロキソキサントロン、ロキソリビン、ルルトテカン、ルテチウムテキサフィリン、リゾフィリン、マソプロコール、マスピン、マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤、メノガリル、ルネルバロン、メテレリン、メチオニナーゼ、メトクロプラミド、ＭＩＦ阻害剤、イフェプリストン、ミルテフォシン、ミリモスチム、ミトラシン、ミトグアゾン、ミトラクトール、マイトマイシンおよびその類似体、ミトナフィド、ミトキサントロン、モファロテン、モルグラモスチン、マイカペルオキシドＢ、ミリアポロン、Ｎ−アセチルジナリン、Ｎ−置換ベンズアミド、ナファレリン、ナグレスチップ、ナパビン、ナフテルピン、ナルトグラスチム、ネダプラチン、ネモルビシン、ネリドロン酸、ニルタミド、ニサマイシン、ニトルリン、オクトレオチド、オキセノン、オナプリストン、オンダンセトロン、オラシン、オルマプラチン、オキサリプラチン、オキサウノマイシン、パクリタキセルおよびその類似体、パラウアミン、パルミトイルリゾキシン、パミドロン酸、パナキシトリオール、パノミフェン、パラバクチン、パゼリプチン、ペガスパルガーゼ、ペルデシン、ペントサンポリ硫酸ナトリウム、ペントスタチン、ペントロゾール、ペルフルブロン、ペルホスファミド、フェナジノマイシン、ピシバニール、ピラルビシン、ピリトレキシム、ポドフィロトキシン、ポルフィロマイシン、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ阻害剤、ラルチトレキセド、リゾキシン、ログレチミド、ロヒツキン、ルビギノンＢ１、ルボキシル、サフィンゴール、セイントピン、サルコフィトールＡ、サルグラモスチム、ソブゾキサン、ソネルミン、スパルホシン酸、スピカマイシンＤ、スピロムスチン、スチピアミド、スルフィノシン、タリムスチン、テガフール、テモゾロミド、テニポシド、タリブラスチン、チオコラリン、チラパザミン、トポテカン、トプセンチン、トリシリビン、トリメトレキサート、ベラミン、ビノレルビン、ビンキサルチン、ボロゾール、ゼニプラチン、ならびにジラスコルブ。
【０２２３】
＜化学的コンジュゲーション用リンカー＞
本明細書に記載の抗体または抗原結合フラグメント（例えば、ＣＤ２５２を認識して結合する抗体またはその抗原結合フラグメント）を細胞毒性分子にコンジュゲートするために、様々なリンカーを使用することができる。
【０２２４】
本明細書で使用される用語「リンカー」は、抗体またはそのフラグメント（Ａｂ）を薬物部分（Ｄ）に共有結合させて、本開示の抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ；Ａｂ−Ｚ−Ｌ−Ｄ、Ｄは細胞毒素）を形成する共有結合または原子鎖を含む二価化学部分を意味する。適切なリンカーは、２つの反応性末端を有し、一方は抗体へのコンジュゲーション用であり、他方は細胞毒素へのコンジュゲーション用である。リンカーの抗体コンジュゲーション用反応性末端（反応性部分、Ｚ）は、通常、抗体上のシステインチオールまたはリジンアミン基を介して抗体にコンジュゲーション可能な部位であり、通常、二重結合（マレイミドなど）または脱離基（クロロ、ブロモ、ヨード、Ｒ−スルファニル基など）などのチオール反応性基（マレイミドなど）、またはカルボキシル基などのアミン反応性基である。一方、リンカーの抗体コンジュゲーション用反応性末端は、通常、細胞毒素上の塩基性アミンまたはカルボキシル基とのアミド結合の形成を介して細胞毒素にコンジュゲーション可能な部位であり、通常、カルボキシル基または塩基性アミン基である。「リンカー」という用語がコンジュゲートされた形態のリンカーを説明する際に使用される場合、リンカーおよび／または細胞毒素の間、ならびにリンカーおよび／または抗体もしくはその抗原結合フラグメントの間の結合の形成のため、反応性末端の一方または両方が存在しない（化学部分Ｚに変換された反応部分Ｚなど）か不完全（カルボン酸のカルボニルのみなど）である。このようなコンジュゲーション反応は、本明細書において以下にさらに記載される。
【０２２５】
いくつかの実施形態では、リンカーの切断により細胞内環境で抗体から薬物ユニットが放出されるように、リンカーは細胞内条件下で切断可能である。さらに他の実施形態では、リンカー単位は切断可能ではなく、薬物は、例えば抗体分解によって放出される。本ＡＤＣに有用なリンカーは、好ましくは、細胞外で安定であり、ＡＤＣ分子の凝集を防止し、ＡＤＣを水性媒体および単量体状態で自由に可溶性に保つ。細胞への輸送または送達の前に、ＡＤＣは好ましくは安定であり、インタクトのままである；即ち、抗体は薬物部分に連結されたままである。リンカーは標的細胞外で安定であり、該細胞内で有効な速度で切断され得る。効果的なリンカーは、（ｉ）抗体の特異的結合特性を維持し、（ｉｉ）コンジュゲートまたは薬物部分の細胞内送達を可能にし、（ｉｉｉ）コンジュゲートがその標的部位に送達または輸送されるまで、安定かつインタクトのままであり（即ち、切断されず）、（ｉｖ）細胞毒性部分の細胞毒性効果、殺細胞効果または細胞増殖抑制効果を維持する。ＡＤＣの安定性は、質量分析、ＨＰＬＣなどの標準的な分析技術、および分離／分析技術ＬＣ／ＭＳによって測定され得る。抗体と薬物部分の共有結合は、リンカーが２つの反応性官能基を有すること、即ち反応性の意味で二価性を有することを必要とする。ペプチド、核酸、薬物、毒素、抗体、ハプテン、レポーターグループなどの２つ以上の機能的または生物学的に活性な部分を結合するのに有用な二価リンカー試薬が知られており、方法がその結果生じるコンジュゲートについて記載されている（Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，  Ｇ．  Ｔ．（１９９６年）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ；Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ：ニューヨーク、２３４−２４２頁）。
【０２２６】
リンカーには、例えば、酵素加水分解、光分解、酸性条件下での加水分解、塩基性条件下での加水分解、酸化、ジスルフィド還元、求核開裂、または有機金属開裂によって切断され得るものが挙げられる（例えば、Ｌｅｒｉｃｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｏｒｇ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．，  ２０：５７１−５８２頁、２０１２年を参照し、その開示は、共有結合コンジュゲーションに適したリンカーに関連するため、参照により本明細書に援用される）。
【０２２７】
酸性条件下で加水分解可能なリンカーには、例えば、ヒドラゾン、セミカルバゾン、チオセミカルバゾン、ｃｉｓ−アコニットアミド、オルトエステル、アセタール、ケタールなどが含まれる。例えば、米国特許第５，１２２，３６８号；米国特許第５，８２４，８０５号；米国特許第５，６２２，９２９号；Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ  ａｎｄ  Ｗａｌｋｅｒ，  １９９９年、Ｐｈａｒｍ．  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ８３：６７−１２３頁；Ｎｅｖｉｌｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９年、Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６４：１４６５３−１４６６１頁を参照。これらの各々の開示は、共有結合コンジュゲーションに適したリンカーに関連するため、参照によりその全体が本明細書に援用される。そのようなリンカーは、血中のような中性ｐＨ条件下では比較的安定であるが、リソソームのおおよそのｐＨであるｐＨ５．５または５．０未満では不安定である。
【０２２８】
還元条件下で切断可能なリンカーには、例えば、ジスルフィドが含まれる。例えば、ＳＡＴＡ（Ｎ−スクシンイミジル−Ｓ−アセチルチオアセテート）、ＳＰＤＰ（Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート）、ＳＰＤＢ（Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）ブチレート）およびＳＭＰＴ（Ｎ−スクシンイミジル−オキシカルボニル−アルファ−メチル−アルファ−（２−ピリジル−ジチオ）トルエン）、ＳＰＤＢおよびＳＭＰＴを使用して形成され得るものを含む、様々なジスルフィドリンカーが当技術分野で知られている。例えば、Ｔｈｏｒｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８７年、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ４７：５９２４−５９３１頁；Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ：  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ｉｎ  Ｒａｄｉｏｉｍａｇｅｒｙ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  （Ｃ．Ｗ．  Ｖｏｇｅｌ編集，  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕ．  Ｐｒｅｓｓ，  １９８７年を参照。また、米国特許第４，８８０，９３５号も参照。これらの各々の開示は、共有結合コンジュゲーションに適したリンカーに関連するため、参照によりその全体が本明細書に援用される。
【０２２９】
薬物−抗体コンジュゲートの合成に有用なリンカーの例には、抗体または抗原結合フラグメント内に存在する求核性置換基（アミンおよびチオール部分など）との反応に適した、マイケル受容体（例えば、マレイミド）、活性化エステル、電子不足カルボニル化合物、およびアルデヒドなどの求電子試薬を含むものが含まれる。例えば、薬物−抗体コンジュゲートの合成に適したリンカーには、限定されないが、例えばＬｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，  １８：６９０−６９７頁（１９７９年）に記載のスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−Ｌ−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、Ｎ−スクシンイミジルヨード酢酸（ＳＩＡ）、スルホ−ＳＭＣＣ、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル（ＭＢＳ）、スルホ−ＭＢＳ、およびスクシンイミジルヨード酢酸が含まれ、その開示は化学的コンジュゲーション用リンカーに関連するため、参照により本明細書に援用される。追加のリンカーには、アウリスタチンなどの微小管破壊剤のコンジュゲーションに特に有用である非開裂性マレイミドカプロイルリンカーが挙げられ、Ｄｏｒｏｎｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．  １７：１４−２４頁、２００６年に記載されており、その開示は、化学的コンジュゲーション用のリンカーに関連するため、参照により本明細書に援用される。本明細書に記載の薬物−抗体コンジュゲートの合成に適した追加のリンカーには、１，６−脱離プロセスによって細胞毒素を放出することができるもの（「自壊性」基）、例えば、ｐ−アミノベンジルアルコール（ＰＡＢＣ）、ｐ−アミノベンジル（ＰＡＢ）、６−マレイミドヘキサン酸、ｐＨ感受性炭酸塩、およびＪａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｈａｒｍ．  Ｒｅｓ．  ３２：３５２６−３５４０頁、２０１５年に記載の他の試薬が挙げられ、その開示は、その全体が参照により本明細書に援用される。いくつかの実施形態では、リンカーは、前述のＰＡＢまたはＰＡＢＣ（パラアミノベンジルオキシカルボニル）などの自壊性基を含み、これらは、例えば、Ｃａｒｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．（１９８１年）２４：４７９−４８０頁；Ｃｈａｋｒａｖａｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ  （１９８３年）Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ２６：６３８−６４４頁；ＵＳ６２１４３４５；ＵＳ２００３０１３０１８９；ＵＳ２００３００９６７４３；ＵＳ６７５９５０９；ＵＳ２００４００５２７９３；ＵＳ６２１８５１９；ＵＳ６８３５８０７；ＵＳ６２６８４８８；ＵＳ２００４００１８１９４；Ｗ０９８／１３０５９；ＵＳ２００４００５２７９３；ＵＳ６６７７４３５；ＵＳ５６２１００２；ＵＳ２００４０１２１９４０；Ｗ０２００４／０３２８２８に開示されている。このプロセスが可能な他のそのような化学部分（「自壊性リンカー」）には、メチレンカルバメートとアミノチアゾール、アミノイミダゾール、アミノピリミジンなどのヘテロアリール基とが含まれる。そのような複素環式自壊性基を含むリンカーは、例えば、米国特許公開第２０１６０３０３２５４号および第２０１５００７９１１４号、ならびに米国特許第７，７５４，６８１号；Ｈａｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９年）Ｂｉｏｏｒｇ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈ���ｍ．  Ｌｅｔｔ．  ９：２２３７頁；ＵＳ２００５／０２５６０３０；ｄｅ  Ｇｒｏｏｔ  ｅｔ  ａｌ（２００１年）Ｊ．  Ｏｒｇ．  Ｃｈｅｍ．  ６６：８８１５−８８３０頁；およびＵＳ７２２３８３７に開示されている。
【０２３０】
酵素加水分解を受けやすいリンカーは、例えば、リソソームまたはエンドソームプロテアーゼを含むがこれらに限定されない細胞内ペプチダーゼまたはプロテアーゼ酵素によって切断されるペプチド含有リンカーであり得る。治療薬の細胞内タンパク質分解放出を使用することの１つの利点は、薬剤がコンジュゲートされると一般に減弱され、かつコンジュゲートの血清安定性が一般に高いことである。いくつかの実施形態では、ペプチジルリンカーは、少なくとも２アミノ酸長または少なくとも３アミノ酸長である。例示的なアミノ酸リンカーは、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチドまたはペンタペプチドを含む。適切なペプチドの例には、バリン、アラニン、シトルリン（Ｃｉｔ）、フェニルアラニン、リジン、ロイシン、およびグリシンなどのアミノ酸を含むものが含まれる。アミノ酸リンカー成分を含むアミノ酸残基には、天然に存在するもの、ならびにマイナーアミノ酸およびシトルリンなどの非天然アミノ酸類似体が含まれる。例示的なジペプチドには、バリン−シトルリン（ｖｃまたはｖａｌ−ｃｉｔ）およびアラニン−フェニルアラニン（ａｆまたはａｌａ−ｐｈｅ）が含まれる。例示的なトリペプチドには、グリシン−バリン−シトルリン（ｇｌｙ−ｖａｌ−ｃｉｔ）およびグリシン−グリシン−グリシン（ｇｌｙ−ｇｌｙ−ｇｌｙ）が含まれる。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ａｌａ−Ｖａｌ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｃｉｔ、Ｌｅｕ−Ｃｉｔ、Ｉｌｅ−Ｃｉｔ、Ｐｈｅ−Ａｒｇ、またはＴｒｐ−Ｃｉｔなどのジペプチドを含む。Ｖａｌ−ＣｉｔまたはＰｈｅ−Ｌｙｓなどのジペプチドを含有するリンカーは、例えば、米国特許第６，２１４，３４５号に開示されており、その開示は、共有結合コンジュゲーションに適したリンカーに関連するので、その全体が参照により本明細書に援用される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｖａｌ−ＡｌａおよびＶａｌ−Ｃｉｔから選択されるジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ジペプチドは、自壊性リンカーと組み合わせて使用される。
【０２３１】
本明細書における使用に適したリンカーは、Ｃ１−Ｃ６アルキレン、Ｃ１−Ｃ６ヘテロアルキレン、Ｃ２−Ｃ６アルケニレン、Ｃ２−Ｃ６ヘテロアルケニレン、Ｃ２−Ｃ６アルキニレン、Ｃ２−Ｃ６ヘテロアルキニレン、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、ヘテロアリーレン、およびそれらの組み合わせから選択される１つ以上の基をさらに含み得、これらの各々は、任意に置換され得る。このような基の非限定的な例には、（ＣＨ２）ｎ、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ、および−（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−単位が含まれ、ここでｎは１〜６の整数であり、それぞれの場合について独立して選択される。
【０２３２】
いくつかの実施形態では、リンカーは、ヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテル、ジペプチド、ｐ−アミノベンジル（ＰＡＢ）基、複素環自壊性基、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルケニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルキニル、任意に置換されたＣ３−Ｃ６シクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、任意に置換されたヘテロアリール、アシル、−（Ｃ＝Ｏ）−、または−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−基の１つ以上を含み得、ここでｎは１〜６の整数である。当業者は、列挙された１つ以上の基が、二価（ジラジカル）種、例えば、Ｃ１−Ｃ６アルキレンなどの形態で存在し得ることを認識するであろう。
【０２３３】
いくつかの実施形態では、リンカーは、ｐ−アミノベンジル基（ＰＡＢ）を含む。一実施形態では、ｐ−アミノベンジル基は、細胞毒性薬物とリンカー中のプロテアーゼ切断部位との間に配置される。一実施形態では、ｐ−アミノベンジル基は、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル単位の一部である。一実施形態では、ｐ−アミノベンジル基は、ｐ−アミノベンジルアミド単位の一部である。
【０２３４】
いくつかの実施形態では、リンカーは、ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢ、またはＡｌａ−ＰＡＢを含む。
【０２３５】
いくつかの実施形態では、リンカーは、ペプチド、オリゴ糖、−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−、ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢ、またはＡｌａ−ＰＡＢの１つ以上の組み合わせを含む。
【０２３６】
いくつかの実施形態では、リンカーは、−（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−単位を含み、ここでｎは１〜６の整数である。
【０２３７】
いくつかの実施形態では、リンカーは、−（ＣＨ２）ｎ−単位を含み、ここでｎは２〜６の整数である。
【０２３８】
特定の実施形態では、ＡＤＣのリンカーは、Ｎ−β−マレイミドプロピル−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラアミノベンジル（ＢＭＰ−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ）である。
【０２３９】
抗体またはその抗原結合フラグメントを細胞毒性剤にコンジュゲートするために使用され得るリンカーには、リンカーの一端で細胞毒性剤に共有結合しており、リンカーの他端で、リンカー上に存在する反応性置換基と、ＣＤ２５２に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学部分を含有するものが挙げられる。ＣＤ２５２に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在し得る反応性置換基には以下が挙げられるが、これらに限定されない：セリン、スレオニン、およびチロシン残基のヒドロキシル部分；リジン残基のアミノ部分；アスパラギン酸およびグルタミン酸残基のカルボキシル部分；およびシステイン残基のチオール部分、ならびにプロパルギル、アジド、ハロアリール（例えば、フルオロアリール）、ハロヘテロアリール（例えば、フルオロヘテロアリール）、ハロアルキル、および天然に存在しないアミノ酸のハロヘテロアルキル部分。
【０２４０】
薬物−抗体コンジュゲートの合成に有用なリンカーの例には、抗体または抗原結合フラグメント内に存在する求核性置換基（アミンおよびチオール部分など）との反応に適した、マイケル受容体（例えば、マレイミド）、活性化エステル、電子不足カルボニル化合物、およびアルデヒドなどの求電子試薬を含むものが含まれる。例えば、薬物−抗体コンジュゲートの合成に適したリンカーには、限定されないが、例えばＬｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，  １８：６９０−６９７頁（１９７９年）に記載のスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−Ｌ−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、Ｎ−スクシンイミジルヨード酢酸（ＳＩＡ）、スルホ−ＳＭＣＣ、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル（ＭＢＳ）、スルホ−ＭＢＳ、およびスクシンイミジルヨード酢酸が含まれ、その開示は化学的コンジュゲーション用リンカーに関連するため、参照により本明細書に援用される。追加のリンカーには、アウリスタチンなどの微小管破壊剤のコンジュゲーションに特に有用である非開裂性マレイミドカプロイルリンカーが挙げられ、Ｄｏｒｏｎｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．  １７：１４−２４頁、２００６年に記載されており、その開示は、化学的コンジュゲーション用リンカーに関連するため、参照により本明細書に援用される。
【０２４１】
本明細書に開示される化学基、部分および特徴のいずれか１つ以上が複数の方法で組み合わされて、本明細書に開示される抗体および細胞毒素のコンジュゲーションに有用なリンカーを形成し得ることが当業者に認識されるであろう。本明細書に記載の組成物および方法と併せて有用なさらなるリンカーは、例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１８２２０号に記載されており、その開示は、その全体が参照により本明細書に援用される。
【０２４２】
本明細書に記載の抗体−薬物と組み合わせて有用なリンカーには、以下の表１に示すようなカップリング反応によって形成された化学的部位を含むリンカーが含まれるが、これらに限定されない。曲線は、それぞれ、抗体または抗原結合フラグメントへの結合点、および細胞毒性分子への結合点を示す。
【０２４３】
【表１−１】
2021517133.tif 000056
【表１−２】
2021517133.tif 000057
【表１−３】
2021517133.tif 000058
【表１−４】
2021517133.tif 000059
【０２４４】
当業者は、リンカーに結合した反応性置換基Ｚと抗体またはその抗原結合フラグメント上の反応性置換基とが、共有結合カップリング反応に関与して化学部分Ｚを生成することを認識し、かつ反応性置換基Ｚを認識するであろう。したがって、本明細書に記載の方法と併せて有用な抗体−薬物コンジュゲートは、本明細書に記載のように、抗体またはその抗原結合フラグメントとリンカーまたは細胞毒素−リンカーコンジュゲートとの反応によって形成され得、前記リンカーまたは細胞毒素−リンカーコンジュゲートは、化学部分Ｚを形成するために、抗体またはその抗原結合フラグメント上の反応性置換基との反応に適した反応性置換基Ｚを含む。
【０２４５】
表１に示すように、リンカーおよび抗体またはその抗原結合フラグメント上の適切な反応性置換基の例には、求核剤／求電子剤対（例えば、チオール／ハロアルキル対、アミン／カルボニル対、またはチオール／α、β−不飽和カルボニル対など）、ジエン／ジエノフィル対（例えば、とりわけ、アジド／アルキン対、またはジエン／α、β−不飽和カルボニル対）などが挙げられる。化学部分Ｚを形成するための反応性置換基間のカップリング反応には、特に限定されないが、チオールアルキル化、ヒドロキシルアルキル化、アミンアルキル化、アミンまたはヒドロキシルアミンの縮合、ヒドラジン形成、アミド化、エステル化、ジスルフィド形成、付加環化（例えば、とりわけ、［４＋２］ディールス−アルダー付加環化、［３＋２］ヒュスゲン付加環化）、求核芳香族置換、求電子芳香族置換、および当該技術分野で知られているまたは本明細書に記載の他の反応様式が含まれる。好ましくは、リンカーは、抗体またはその抗原結合フラグメント上の求核官能基との反応のための求電子官能基を含む。
【０２４６】
本明細書に開示される、抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在し得る反応性置換基には、限定されないが、（ｉ）Ｎ末端アミン基、（ｉｉ）側鎖アミン基（例えば、リジン）、（ｉｉｉ）側鎖チオール基（例えば、システイン）、および（ｉｖ）抗体がグリコシル化されている場合の糖のヒドロキシル基またはアミノ基などの求核基が含まれる。本明細書に開示される、抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在し得る反応性置換基には、限定されないが、セリン、スレオニン、およびチロシン残基のヒドロキシル部分；リジン残基のアミノ部分；アスパラギン酸およびグルタミン酸残基のカルボキシル部分；およびシステイン残基のチオール部分、ならびに非天然アミノ酸のプロパルギル、アジド、ハロアリール（例えば、フルオロアリール）、ハロヘテロアリール（例えば、フルオロヘテロアリール）、ハロアルキル、およびハロヘテロアルキル部分が含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される、抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基は、アミンまたはチオール部分である。特定の抗体は、還元可能な鎖間ジスルフィド、即ち、システインブリッジを有する。抗体は、ＤＴＴ（ジチオスレイトール）などの還元剤で処理することにより、リンカー試薬とのコンジュゲーションに対して反応性にすることができる。したがって、各システインブリッジは、理論的には２つの反応性チオール求核剤を形成する。リジンと２−イミノチオラン（トラウト試薬）との反応により、追加の求核基を抗体に導入することができ、アミンのチオールへの変換がもたらされる。反応性チオール基は、１つ、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上のシステイン残基を導入することで（例えば、１つ以上の非天然システインアミノ酸残基を含む変異抗体を調製することで）、抗体（またはそのフラグメント）に導入され得る。米国特許第７，５２１，５４１号は、反応性システインアミノ酸の導入による抗体の操作を教示している。
【０２４７】
いくつかの実施形態では、リンカーに結合した反応性部分Ｚは、抗体上に存在する求電子基と反応する求核基である。抗体上の有用な求電子基には、アルデヒドおよびケトンカルボニル基が含まれるが、これらに限定されない。求核基のヘテロ原子は、抗体上の求電子基と反応し、抗体への共有結合を形成することができる。有用な求核基には、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドロキシル、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、カルボン酸ヒドラジン、およびアリールヒドラジドが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、Ｚは、抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在するアミンおよびチオール部分などの反応性求核置換基と、反応性求電子置換基Ｚとの間の反応の生成物である。例えば、Ｚは、とりわけ、マイケル受容体（例えば、マレイミド）、活性化エステル、電子不足カルボニル化合物、またはアルデヒドであり得る。
【０２４８】
いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、本明細書に開示される式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、ＩＩ、ＩＩａまたはＩＩＢのいずれかのアマトキシンにリンカーおよび化学部分Ｚを介してコンジュゲートされた抗ＣＤ２５２抗体を含み、ここでリンカーはヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテル、またはジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｖａｌ−ＡｌａおよびＶａｌ−Ｃｉｔから選択されるジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、パラアミノベンジル基（ＰＡＢ）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、部分ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、部分ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−単位を含み、ここでｎは１〜６の整数である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。
【０２４９】
いくつかの実施形態では、リンカーは−（ＣＨ２）ｎ−単位を含み、ここでｎは２〜６の整数である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−（ＣＨ２）ｎ−である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−（（ＣＨ２）ｎ−であり、ここでｎは６である。
【０２５０】
いくつかの実施形態では、化学部分Ｚは表１から選択される。いくつかの実施形態では、化学部分Ｚは、
【化５２】
2021517133.tif 000060
であり、上記式において、Ｓは、ＣＤ２５２に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基を表す（例えば、システイン残基の−ＳＨ基由来の）硫黄原子である。
【０２５１】
いくつかの実施形態では、リンカーＬおよび化学部分Ｚは、Ｌ−Ｚとしてまとめて、
【化５３】
2021517133.tif 000061
である。
【０２５２】
当業者は、抗体またはその抗原結合フラグメントとのコンジュゲーションの前のリンカー反応性置換基の構造が、Ｚ基としてマレイミドを含むことを認識するであろう。とりわけ本明細書に記載の組成物および方法と併せて有用な前述のリンカー部分およびアマトキシン−リンカーコンジュゲートは、例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１８２２０号および国際公開第２０１７／１４９０７７号に記載されており、これらの各々の開示は、その全体が参照により本明細書に援用される。
【０２５３】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントとのコンジュゲーション前のリンカー反応性置換基の構造は、以下の通りである：
【化５４】
2021517133.tif 000062
【０２５４】
＜抗体−薬物コンジュゲートの調製＞
本明細書に開示される式Ｉ、式ＩＡ、式ＩＢ、式ＩＩ、式ＩＩＡおよび式ＩＩＢのＡＤＣにおいて、抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書に開示されるリンカーＬおよび化学部分Ｚを介して、１つ以上の細胞毒性薬物部分（Ｄ）（例えば、抗体あたり約１〜約２０の薬物部分）にコンジュゲートされる。本開示のＡＤＣは、以下を含む、当業者に公知の有機化学反応、条件、および試薬を使用して、いくつかの経路によって調製され得る：（１）抗体またはその抗原結合フラグメントの反応性置換基と二価リンカー試薬との反応により、上述したＡｂ−Ｚ−Ｌを形成してから、薬物部分Ｄと反応させる；または（２）薬物部分の反応性置換基と二価リンカー試薬との反応によりＤ−Ｌ−Ｚを形成してから、上述した抗体またはその抗原結合フラグメントの反応性置換基との反応により、Ａｍ−Ｚ−Ｌ−Ａｂなどの式Ｄ−Ｌ−Ｚ−ＡｂのＡＤＣを形成する。ＡＤＣを調製するためのさらなる方法は、本明細書に記載されている。
【０２５５】
別の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、１つ以上のスルフヒドリル基を導入するように化学的に修飾され得る１つ以上のリジン残基を有する。次に、本明細書で上述したように、スルフヒドリル基の硫黄原子を介したコンジュゲーションによってＡＤＣが形成される。リジンの修飾に使用され得る試薬には、Ｎ−スクシンイミジルＳ−アセチルチオアセテート（ＳＡＴＡ）と２−イミノチオラン塩酸塩（トラウト試薬）が含まれるが、これらに限定されない。
【０２５６】
別の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、１つ以上のスルフヒドリル基を有するように化学的に修飾され得る１つ以上の炭水化物基を有することができる。次に、本明細書で上述したように、スルフヒドリル基の硫黄原子を介したコンジュゲーションによってＡＤＣが形成される。
【０２５７】
さらに別の態様では、抗体は、酸化されてアルデヒド（−ＣＨＯ）基を提供し得る１つ以上の炭水化物基を有することができる（例えば、Ｌａｇｕｚｚａ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  １９８９年、３２（３），５４８−５５頁を参照）。次に、本明細書で上述したように、対応するアルデヒドを介したコンジュゲーションによってＡＤＣが形成される。細胞毒素の結合または会合のためのタンパク質の修飾の他のプロトコルは、参照により本明細書に援用されるＣｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  第２巻、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（２００２年）に記載されている。
【０２５８】
リンカー薬物部分を、抗体、免疫グロブリン、またはそれらのフラグメントなどの細胞標的タンパク質に結合させる方法は、例えば、米国特許第５，２０８，０２０号、米国特許第６，４４１，１６３号、ＷＯ２００５０３７９９２、ＷＯ２００５０８１７１１、およびＷＯ２００６／０３４４８８に見出され、これらのすべては、参照によりその全体が本明細書に明示的に援用される。
【０２５９】
あるいは、抗体および細胞毒性剤を含む融合タンパク質は、例えば、組換え技術またはペプチド合成によって作製され得る。ＤＮＡの長さは、コンジュゲートの２つの部分をコードするそれぞれの領域を含み得、当該２つの部分は互いに隣接しているか、またはコンジュゲートの所望の特性を破壊しないリンカーペプチドをコードする領域によって分離されている。
【０２６０】
（処置法）
本明細書に記載の組成物および方法を使用して、移植寛容を達成するために、移植片不全に関連する抗原提示細胞を枯渇させることができる。本明細書に記載の組成物および方法は、ＧＶＨＤの予防および処置に特に有用である。本明細書に開示される方法および組成物はまた、同種移植を受けているヒト患者における移植失敗のリスクを低減するのにも有用である。好ましい対象はヒトである。投与される抗体、抗体−薬物コンジュゲート、またはＡＤＣの量は、ＧＶＨＤを促進する細胞、例えば抗原提示細胞を枯渇させるのに十分であるべきである。治療上有効な用量の決定は、当技術分野の医師の能力の範囲内であるが、一例として、ＧＨＶＤの処置のために抗体の全身投与を利用する本明細書に記載された方法の実施形態では、有効なヒト用量は０．１〜１５０ｍｇ／ｋｇ（例えば、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約７５ｍｇ／ｋｇ、約１００ｍｇ／ｋｇ、約１５０ｍｇ／ｋｇなど）の範囲であろう。投与経路が推奨用量に影響を与える可能性がある。繰り返される全身投与が、採用される投与方法に応じて、有効レベルを維持するため、例えば、ＧＶＨＤを減弱または阻害するために企図される。
【０２６１】
抗体、抗体−薬物コンジュゲート、またはＡＤＣは、細胞または固形臓器の患者への移植の前に、それと同時に、またはその後に、必要とするヒト患者に投与され得る。一実施形態では、抗ＣＤ２５２ＡＤＣは、細胞または固形臓器の移植前（例えば、約５日前、約１日前、約３日前、約２日前、約１日前、約１２時間前）に、それを必要とするヒト患者に投与される。一実施形態では、抗ＣＤ２５２ＡＤＣは、細胞または固形臓器の移植後（例えば、約１日後、約２日後、約３日後、約４日後、約５日後、約６日後、約７日後、約８日後、約９日後、または約１０日後）に、それを必要とするヒト患者に投与される。抗ＣＤ２５２ＡＤＣの単回用量は、細胞または臓器の移植の前に、それと同時に、またはその後にヒト患者に投与され得、そのような単回用量は、ＧＶＨＤまたは移植片不全を処置または予防するのに十分である。
【０２６２】
抗ＣＤ２５２ＡＤＣは、同種移植を含む移植の受け入れを促進するために使用される従来の薬剤（例えば、化学療法および／または放射線）の代替として使用され得る。従来の薬剤は一般に、移植された細胞または臓器の生着および受容を促進するために、患者の免疫応答を低下させる。本明細書に記載の方法および組成物は、ＣＤ２５２発現活性化Ｔ細胞を標的とし、枯渇させながら、患者の免疫系のほとんどをそのままにできる、より選択的な治療を提供する。したがって、細胞または固形臓器の移植を成功させるために、特にアロ活性化免疫細胞を標的とし、枯渇させることができることを考えると、本明細書に開示される抗ＣＤ２５２ＡＤＣが抗原提示細胞を選択的に枯渇させる能力は、移植の文脈において従来の療法よりも有利な療法を提供する。
【０２６３】
本明細書に開示される方法および組成物は、移植片不全を予防または処置するために使用され得る。同種造血幹細胞移植後の不全を含む、移植片不全または移植片拒絶は、一般的にドナー細胞の初期生着の欠如、または初期生着後のドナー細胞の喪失として現れる（総説については、Ｍａｔｔｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （２００８年）Ｂｉｏｌ  Ｂｌｏｏｄ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．  １４（Ｓｕｐｐｌ  １）：１６５−１７０頁を参照）。本明細書に開示される組成物および方法は、移植片不全が懸念される移植片または移植シナリオにおいて、例えばヒト患者が固形臓器または細胞の移植後に移植片不全を発症するリスクがある場合、特に移植された細胞または臓器が同種である場合に、ＣＤ２５２発現抗原提示細胞を枯渇させるために使用され得る。
【０２６４】
一実施形態では、抗ＣＤ２５２抗体、抗体−薬物コンジュゲート、またはＡＤＣは、細胞、移植片または臓器をヒト患者に移植する前に、細胞、移植片または固形臓器を抗ＣＤ２５２抗体、抗体−薬物コンジュゲート、またはＡＤＣと接触させることによって、ＣＤ２５２発現ドナー細胞を枯渇させるために使用される。一実施形態では、細胞、移植片または臓器は同種である。
【０２６５】
ＧＶＨＤのリスクは、現在の治療法による移植後も高いままである。本明細書に開示される方法および組成物は、ヒト患者における移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を阻害するために使用され得る。抗ＣＤ２５２抗体またはＡＤＣを使用して、幹細胞移植などの移植を受ける患者の抗原提示細胞（ＡＰＣ）を選択的に標的とすることができる。本明細書に記載の抗ＣＤ２５２抗体またはＡＤＣは、限定されないがＨＳＣ移植などの移植を受ける予定の、またはすでに移植を受けたヒト患者において、ＣＤ２５２＋細胞を標的として枯渇させることによって、ＧＶＨＤのリスクを軽減するためにも使用され得る。特定の実施形態において、本明細書に開示される組成物および方法は、移植療法、例えば、同種ＨＳＣ後の患者においてＧＶＨＤの症状が現れる前にＧｖＨＤを処置するためのものである。
【０２６６】
本明細書に記載の方法はまた、宿主対移植片（ＨｖＧ）反応を防止するためにも有用である。抗ＣＤ２５２抗体またはＡＤＣはまた、宿主対移植片（ＨｖＧ）反応を防止するために免疫抑制剤として使用され得、それによって同種移植片不全のリスクを防止または軽減することもできる。ＨｖＧ反応のリスクがある患者における抗ＣＤ２５２ＡＤＣの使用は、ＨＬＡ不適合の度合いがより高いドナー細胞の生着を可能にする。追加の用途には、固形臓器移植における寛容誘導が含まれ、宿主対移植片反応がＣＤ２５２−ＡＤＣによって防止または抑制される。これらには、臓器が非ヒト由来であり、かつ／または遺伝子改変されている異種移植を含む、造血幹細胞移植の有無にかかわらず行われる固形臓器移植が含まれる。
【０２６７】
一実施形態では、抗ＣＤ２５２抗体またはＡＤＣは、２人のドナーが使用される同種移植の状況で、移植片対移植片（ＧｖＧ）を予防するために使用される。例としては、成人および小児患者における２人の臍帯血幹細胞ドナーの使用が含まれる。両方の幹細胞ソースが正常に生着するため、ＧｖＧの防止は、移植後のより迅速な造血（例えば、好中球および血小板）再構成を可能にする。
【０２６８】
いくつかの実施形態では、移植は同種移植である。いくつかの実施形態では、移植は自己移植である。
【０２６９】
いくつかの実施形態では、移植は、骨髄移植、末梢血移植、または臍帯血移植である。
【０２７０】
いくつかの実施形態では、移植片は造血細胞（例えば、造血幹細胞）を含む。
【０２７１】
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、移植は、任意の固形臓器または皮膚移植であり得る。いくつかの実施形態では、移植は、腎臓移植、心臓移植、肝臓移植、膵臓移植、肺移植、腸移植および皮膚移植からなる群から選択される。
【０２７２】
抗ＣＤ２５２抗体、その抗原結合フラグメント、またはＡＤＣは、粘度調整剤などの１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む水溶液で患者に投与することができる。水溶液は、本明細書に記載されているか、または当技術分野で知られている技法を使用して滅菌することができる。抗体、その抗原結合フラグメント、または薬物−抗体コンジュゲートは、造血幹細胞移植片を患者に投与する前に、例えば、０．００１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの用量で患者に投与することができる。抗体、その抗原結合フラグメント、またはＡＤＣは、外因性造血幹細胞の生着を最適に促進するときに、例えば、外因性造血幹細胞移植片の投与の約１時間〜約７日（例えば、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約２４時間、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、または約７日）以上前に患者に投与することができる。例えば、抗体、その抗原結合フラグメント、またはＡＤＣを、移植の約３日前に投与することができる。あるいは、抗体、その抗原結合フラグメント、またはＡＤＣは、外因性造血幹細胞の生着を最適に促進するときに、例えば、外因性造血幹細胞移植片の投与と同時に患者に投与することができる。さらに、抗体、その抗原結合フラグメント、またはＡＤＣは、外因性造血幹細胞の生着を最適に促進するときに、例えば、外因性造血幹細胞移植片の投与の約１時間〜約１０日（例えば、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約２４時間、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約８日、約９日、または約１０日）以上後に患者に投与することができる。例えば、一実施形態では、抗体、その抗原結合フラグメント、またはＡＤＣを、移植の約１〜約２日後に投与することができる。別の実施形態では、抗体、その抗原結合フラグメント、またはＡＤＣを、移植の約２〜約３日後に投与することができる。別の実施形態では、抗体、その抗原結合フラグメント、またはＡＤＣを、移植の約３〜約４日後に投与することができる。別の実施形態では、抗体、その抗原結合フラグメント、またはＡＤＣを、移植の約４〜約５日後に投与することができる。別の実施形態では、抗体、その抗原結合フラグメント、またはＡＤＣを、移植の約５〜約６日後に投与することができる。別の実施形態では、抗体、その抗原結合フラグメント、またはＡＤＣを、移植の約７〜約８日後に投与することができる。別の実施形態では、抗体、その抗原結合フラグメント、またはＡＤＣを、移植の約８〜約９日後に投与することができる。別の実施形態では、抗体、その抗原結合フラグメント、またはＡＤＣを、移植の約９〜約１０日後に投与することができる。抗体、その抗原結合フラグメント、またはＡＤＣの量は、抗体、その抗原結合フラグメント、またはＡＤＣの濃度がいつ最大に達したかを決定するために、当技術分野で既知の方法により、患者の血漿中において定量化され得る。
【０２７３】
次に、患者は、外因性造血幹細胞の注入（例えば、静脈内注入）を、例えば、抗体またはその抗原結合フラグメントまたは薬物−抗体コンジュゲートを投与した同じ医師から、またはそれと異なる医師から受けてよい。医師は、自己、同系、または同種造血幹細胞の注入を、例えば、１×１０３〜１×１０９  ＣＤ３４＋細胞／ｋｇの用量で患者に投与することができる。医師は、例えば、患者から血液サンプルを採取し、移植片の投与後の造血幹細胞または造血系列の細胞（巨核球、栓球（ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｅｓ）、血小板（ｐｌａｔｅｌｅｔｓ）、赤血球、マスト細胞、骨髄芽球、好塩基球、好中球、好酸球、ミクログリア、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、Ｔ細胞、およびＢ細胞など）の濃度の増加を決定することによって、造血幹細胞移植片の生着をモニターすることができる。この分析は、造血幹細胞移植療法後に、例えば、１時間〜６ヶ月以上（例えば、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約２４時間、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約２週間、約３週間、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、約１３週間、約１４週間、約１５週間、約１６週間、約１７週間、約１８週間、約１９週間、約２０週間、約２１週間、約２２週間、約２３週間、約２４週間、またはそれ以上）にわたって実施することができる。造血幹細胞または造血系列の細胞の濃度が、移植療法前の対応する細胞型の濃度と比較して、移植療法後に（例えば、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％、約２００％、約５００％、またはそれ以上）増加したという所見は、抗ＣＤ２５２抗体、その抗原結合フラグメント、またはＡＤＣによる処置が、移植された造血幹細胞移植片の生着を首尾よく促進したことを示す１つの指標を与える。
【０２７４】
本明細書に記載の方法は、自己免疫疾患の処置にも有用である。一実施形態では、本明細書に開示される方法および組成物は、限定されないが、乾癬、炎症性腸疾患（クローン病、潰瘍性大腸炎）、乾癬性関節炎、多発性硬化症、関節リウマチ、または強直性脊椎炎などの自己免疫疾患を処置するために使用され得る。他の実施形態では、本明細書に開示される方法を使用して処置され得る自己免疫疾患には、例えば、強皮症、多発性硬化症（ＭＳ）、ヒト全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、関節リウマチ（ＲＡ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬の処置、Ｉ型真性糖尿病（Ｉ型糖尿病）、急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、アジソン病、汎発性脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ）、再生不良性貧血、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患（ＡＩＥＤ）、自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性卵巣炎、バロー病、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、シャーガス病、慢性疲労免疫機能障害症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、クローン病、瘢痕性類天疱瘡、セリアックスプルー・疱疹状皮膚炎、寒冷凝集素症、クレスト症候群、デゴス病、円板状エリテマトーデス、自律神経失調症、子宮内膜症、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛症・線維筋炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギランバレー症候群（ＧＢＳ）、橋本甲状腺炎、化膿性汗腺炎、特発性および／または急性型血小板減少性紫斑病、特発性肺線維症、ＩｇＡニューロパチー、間質性膀胱炎、若年性関節炎、川崎病、扁平苔癬、ライム病、メニエール病、混合性結合組織病（ＭＣＴＤ）、重症筋無力症、神経性筋強直症、オプソクローヌス・ミオクローヌス運動失調（ＯＭＳ）、視神経炎、オード甲状腺炎、尋常性天疱瘡、悪性貧血、多発性軟骨炎、多発性筋炎および皮膚筋炎、原発性胆汁性肝硬変、結節性多発性動脈炎、多腺性症候群、リウマチ性多発筋痛症、原発性無ガンマグロブリン血症、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、全身硬直症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎（「巨細胞性動脈炎」としても知られている）、潰瘍性大腸炎、ぶどう膜炎、血管炎、白斑、外陰部痛（「外陰部前庭炎」）、ならびにウェゲナー肉芽腫症がさらに含まれる。
【０２７５】
当業者の医師は、ＣＤ２５２に結合することができる抗体、その抗原結合フラグメントまたはＡＤＣ、例えば本明細書に記載の抗ＣＤ２５２抗体をヒト患者に投与した後、ＧＶＨＤの臨床症状を評価することができる。
【０２７６】
（投与経路と投薬）
本明細書に記載のＡＤＣ、抗体またはその抗原結合フラグメントを、患者に様々な剤形で投与することができる。例えば、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを、ＧＶＨＤを処置（または阻害）するために患者に、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含有する水溶液などの水溶液の形態で投与することができる。本明細書に記載の組成物および方法で使用するのに適した薬学的に許容される賦形剤としては、粘度調整剤が挙げられる。水溶液は、当該技術分野で知られている技術を用いて滅菌することができる。
【０２７７】
本明細書に記載の抗ＣＤ２５２ＡＤＣまたは抗体を含む医薬製剤は、そのようなＡＤＣまたは抗ＣＤ２５２抗体を凍結乾燥製剤または水溶液の形態で１つ以上の任意の薬学的に許容される担体（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１６版、Ｏｓｏｌ，  Ａ．  Ｅｄ．（１９８０年））と混合することによって調製される。薬学的に許容される担体は、一般に、使用される用量および濃度でレシピエントに対して無毒であり、以下が含まれるが、これらに限定されない：リン酸、クエン酸、および他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；メチルまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む単糖、二糖、および他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩を形成する対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；および／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤。
【０２７８】
本明細書に記載のＡＤＣ、抗体、または抗原結合フラグメントは、経口的、経皮的、皮下的、鼻腔内、静脈内、筋肉内、眼内、または非経口的などの様々な経路で投与され得る。任意の所与の場合における投与に最も適した経路は、投与される特定の抗体または抗原結合フラグメント、患者、医薬製剤方法、投与方法（例えば、投与時間および投与経路）、患者の年齢、体重、性別、処置されている疾患の重症度、患者の食事、ならびに患者の排泄率に依存する。
【０２７９】
本明細書に記載のＡＤＣ、抗体、またはその抗原結合フラグメントの有効量は、例えば、単回（例えば、ボーラス）投与、複数回投与、または連続投与あたり、約０．００１〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲であり得るか、または、抗体、その抗原結合フラグメントの最適血清濃度（例えば、約０．０００１〜約５０００μｇ／ｍＬの血清濃度）を達成する範囲であり得る。用量は、癌、自己免疫疾患を患っているか、または造血幹細胞移植を受ける準備としてコンディショニング療法を受けている対象（例えば、ヒト）に、１日、１週、または１月あたり１回以上（例えば、約２〜１０回）投与され得る。造血幹細胞移植前のコンディショニング手順の場合、ＡＤＣ、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、外因性造血幹細胞の生着を最適に促進するときに、例えば、外因性造血幹細胞移植片の投与前の１時間〜１週間（例えば、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約２４時間、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、または約７日）、１時間〜６時間、１時間〜７時間、１時間〜８時間、１時間〜９時間、１時間〜１０時間、１時間〜１２時間、１２時間〜１４時間、１４時間〜１６時間、１６時間〜１８時間、１８時間〜２０時間、２０時間〜２４時間、１週間〜２週間、またはそれ以上前に患者に投与することができる。
【実施例】
【０２８０】
（実施例１：抗ＣＤ２５２抗体は活性化Ｔ細胞を阻害する）
抗ＣＤ２５２抗体は、以下の重鎖および軽鎖可変配列を有することが同定された。
VH:
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMNWVRQAPGKGLEWVSTISGSGGATRYADSVKGRFTISRDNSRNTVYLQMNSLRVEDTAVFYCTKDRLIMATVRGPYYYGMDVWGQGTTVTVSS  （配列番号１）
VL:
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPNLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSETDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSHSVSFTFGPGTKVDIK （配列番号２）
【０２８１】
この抗体は混合リンパ球反応アッセイで使用された。図１に示すように、上記配列を有する抗ＣＤ２５２抗体は、活性化Ｔ細胞を阻害するのに有効であった。
【０２８２】
図１および２において与えられるデータは、混合リンパ球反応を用いて得られた。簡単に説明すると、ＣＤ１４＋単球に由来する樹状細胞を、平底の３８４ウェルプレートにウェルあたり５ｅ３で播種した。Ｔ細胞をＣＦＳＥで染色し、樹状細胞の上にウェルあたり５ｅ４細胞で播種した。抗体を細胞の上で滴定し（１ｕｍから０．０１ｎＭまで）、播種時に添加した。４日後にウェルを抗ＣＤ３で染色し、フローサイトメーターにかけた。活性化Ｔ細胞の割合は、ＦＳＣおよびＣＦＳＥの明るさ（ｂｒｉｇｈｔｎｅｓｓ）に基づいて１回以上の分裂を経たＣＤ３＋細胞をゲーティングすることによって決定した。非活性化Ｔ細胞の数は、体積フローサイトメトリーを使用してＣＦＳＥブライト（ｂｒｉｇｈｔ）集団のイベント数によって決定した。コントロールには、培養中のＴ細胞を死滅させることができる抗ＣＤ４５−アマニチンコンジュゲートと、関連のアイソタイプコントロールが含まれていた。
【０２８３】
図１は、上記抗ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）抗体がアイソタイプコントロールと比較してＴ細胞活性化を阻害したことを示す。
【０２８４】
図２Ａは、抗ＣＤ２５２抗体の複数の異なるクローンがＴ細胞活性化を阻害できることを示す。図２Ｂは、これが活性化Ｔ細胞に特異的な阻害であることを示している（非活性化Ｔ細胞は、抗ＣＤ２５２処理サンプルでは変化していないが、抗ＣＤ４５−アマニチンコンジュゲートはすべてのＴ細胞を殺傷するので抗ＣＤ４５−アマニチンサンプルでは枯渇している）。
【０２８５】
図２Ａおよび２Ｂに示す抗体には、１１Ｃ３．１（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３２６３０２）、１５９４０３（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＭＡＢ１０５４１）、１５９４０８（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＭＡＢ１０５４）、ＭＭ０５０５−８Ｓ２３（Ｎｏｖｕｓ、カタログ番号ＮＢＰ２−１１９６９）、およびオキセルマブ（Ｎｏｖｕｓ、カタログ番号ＮＢＰ２−５２６８７−０．１）が含まれる。
【０２８６】
【表２−１】
2021517133.tif 000063
【表２−２】
2021517133.tif 000064
【表２−３】
2021517133.tif 000065
【表２−４】
2021517133.tif 000066
【０２８７】
（他の実施形態）
本明細書で言及される全ての刊行物、特許、および特許出願は、あたかもそれぞれの独立した刊行物または特許出願が具体的かつ個別に参照により組み込まれることが示されるのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２８８】
本発明をその特定の実施形態に関連して説明してきたが、それはさらなる修正が可能であることが理解され、本出願は、概して本発明の原理に従い、当該技術分野における既知のまたは慣習的な慣行の範囲内にある本発明からのそのような逸脱を含む本発明のあらゆる変形、使用、または適合を、本発明が前述した本質的な特徴に関連してそれらに適用することができ、特許請求の範囲に従う程度に網羅することを意図している。
【０２８９】
他の実施形態は、特許請求の範囲内にある。
【図１】
2021517133.tif 000089
【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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