(57)【要約】  本発明は、癌の治療において少なくとも１つの免疫チェックポイント調節物質と組み合わせて使用するためのＨ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＥＴＤＢ１の阻害剤に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌の処置における免疫チェックポイント分子／タンパク質の少なくとも１つの調節物質と組み合わせた使用のためのＨ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＥＴＤＢ１の阻害剤。
【請求項２】
Ｈ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＥＴＤＢ１の上記阻害剤が、有機小分子、アプタマー、細胞内抗体、ポリペプチドまたはＨ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＥＴＤＢ１遺伝子発現の阻害剤から選択される、請求項１に記載の使用のためのＨ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＥＴＤＢ１の阻害剤。
【請求項３】
Ｈ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＥＴＤＢ１の上記阻害剤が、アントラマイシンである、請求項１または２のいずれか１項に記載の使用のためのＨ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＥＴＤＢ１の阻害剤。
【請求項４】
上記Ｈ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＥＴＤＢ１遺伝子発現が、アンチセンスオリゴヌクレオチド構築物、ｓｉＲＮＡ（マイクロＲＮＡ）、ｓｈＲＮＡおよびリボザイムから選択される、請求項１に記載の使用のためのＨ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＥＴＤＢ１の阻害剤。
【請求項５】
上記少なくとも１つの免疫チェックポイントが、抑制性の免疫チェックポイントおよび／または刺激性の免疫チェックポイントである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の少なくとも１つの免疫チェックポイント調節物質と組み合わせた使用のためのＨ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＥＴＤＢ１の阻害剤。
【請求項６】
上記抑制性の免疫チェックポイントが、ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ１、Ａ２ＡＲ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ−４、ＣＤ２７７、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３  ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＣＤ９６、ＣＤ１１２Ｒ、ＣＤ１６０、ＣＤ２４４（または２Ｂ４）  ＤＣＩＲ（Ｃ型レクチン表面受容体）、ＩＬＴ３、ＩＬＴ４（免疫グロブリン様の転写物）、ＣＤ３１（ＰＥＣＡＭ−１）（Ｉｇ様のＲファミリー）、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＣＤ９４／ＮＫＧ２、ＧＰ４９ｂ（免疫グロブリンスーパーファミリー）、ＫＬＲＧ１、ＬＡＩＲ−１（白血球関連免疫グロブリン様受容体１）  ＣＤ３０５、ＰＤ−Ｌ２およびＳＩＲＰαから選択される、請求項５に記載の少なくとも１つの免疫チェックポイント調節物質と組み合わせた使用のためのＨ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＥＴＤＢ１の阻害剤。
【請求項７】
上記刺激性の免疫チェックポイントが、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、ＴＮＦＲＳＦ２５、４１ＢＢ、ＨＶＥＭ、ＣＤ２８、ＴＭＩＧＤ２、ＣＤ２２６、２Ｂ４（ＣＤ２４４）およびリガンドＣＤ４８、Ｂ７−Ｈ６  Ｂｒａｎｄｔ（ＮＫリガンド）、ＬＩＧＨＴ（ＣＤ２５８、ＴＮＦＳＦ１４）およびＣＤ２８Ｈから選択される、請求項５または６に記載の少なくとも１つの免疫チェックポイント制御物質と組み合わせた使用のためのＨ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＥＴＤＢ１の阻害剤。
【請求項８】
上記阻害剤が、少なくとも１つの抑制性の免疫チェックポイント調節物質および少なくとも１つの刺激性の免疫チェックポイントアゴニストと組み合わせて使用されている、請求項１〜７のいずれか１項に記載の使用のためのＨ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＥＴＤＢ１の阻害剤。
【請求項９】
上記免疫チェックポイント調節物質が、抗体または融合タンパク質である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の少なくとも１つの免疫チェックポイント調節物質と組み合わせた使用のためのＨ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＥＴＤＢ１の阻害剤。
【請求項１０】
上記免疫チェックポイント調節物質が、抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の少なくとも１つの免疫チェックポイント調節物質と組み合わせた使用のためのＨ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＥＴＤＢ１の阻害剤。
【請求項１１】
Ｈ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＥＴＤＢ１の阻害剤および少なくとも１つの免疫チェックポイント調節物質を、同時使用、独立使用または順次使用のための組み合わせ調製物として含んでいる、製品。
【請求項１２】
癌にかかっている患者を、免疫チェックポイント療法に対して反応性である、または低い反応性であると分類するための方法であって、
当該患者からの生物学的サンプル中のＳＥＴＤＢ１発現の決定を含む、方法。
【請求項１３】
上記癌は、黒色腫、膠芽腫、気道消化管癌、乳癌、肺癌、尿路上皮癌、ホジキンリンパ腫、腎臓癌、線維肉腫、および胃癌から選択される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の使用のためのＨ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＥＴＤＢ１の阻害剤、請求項１１に記載の製品または請求項１２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
〔技術分野〕
本発明は、癌の処置に関し、特に、免疫チェックポイント療法と組み合わせたＳＥＴＤＢ１の阻害剤の使用に関する。
【０００２】
〔背景技術〕
免疫チェックポイントは、副次的な組織損傷を最小にするために、自己寛容を維持すること、ならびに末梢組織における生理的な免疫応答の持続時間および大きさを調節することにとって決定的な、免疫系に固有の多数の抑制性経路および刺激性経路を指す。実際に、抑制性シグナルおよび刺激性シグナルのバランスがリンパ球の活性化を決定し、その結果、免疫応答を制御する（Ｐａｒｄｏｌｌ  ＤＭ、Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ．２０１２年３月２２日；１２（４）：２５２−６４）。
【０００３】
現在では、腫瘍は、免疫抵抗性（特に腫瘍抗原に特異的なＴ細胞対する）の主な機序としてある免疫チェックポイント経路を選出していることが、明らかになっている。免疫チェックポイントの多くはリガンド−受容体の相互作用によって惹起されるので、それらは抗体によって容易に遮断され得るか、またはリガンドもしくは受容体の組換え体によって調節され得る。このように、抗原特異的なＴ細胞応答の増幅をもたらす共刺激性受容体のアゴニストまたは阻害性シグナルのアンタゴニストは、現在の臨床試験における第一薬剤である。
【０００４】
これに関連して、癌免疫療法は、腫瘍を標的にすることから免疫系を標的にすることに切り変える、癌処置の分野におけるブレークスルーと考えられている（Ｃｏｕｚｉｎ−Ｆｒａｎｋｅｌ  Ｊ、Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１３年１２月２０日；３４２（６１６５）：１４３２−３）。抗ＣＴＬＡ−４、ＰＤ１およびＰＤ−Ｌ１抗体による免疫チェックポイントの遮断は、有望な臨床結果および管理可能な安全性プロファイルをもたらす。
【０００５】
しかし、これらの療法に応答する患者はわずかな割合のみであり、したがって、新しいアプローチによって、および／または抗チェックポイント抗体を他の治療法と組み合わせることによって、癌免疫療法を改善する必要がある（特に、Ｊｅｎｋｉｎｓ  ＲＷら、ＢＪＣ  ２０１８  １１８、９−１６およびＳｈａｒｍａ  Ｐら、Ｃｅｌｌ  ２０１７；１６８（４）：７０７−７２３を参照）。さらに、投与量およびそれに伴う有害事象の低減に役立つ併用療法の実施が、依然として貴重な医療扶助であるほどに、抗チェックポイント抗体は、副作用（主に自己免疫）を誘導し得る。
【０００６】
「エピジェネティクス」は、ＤＮＡまたはヒストンタンパク質の化学的変化から生じる遺伝子発現の遺伝する変化と定義される。エピジェネティックな事象として、ＤＮＡメチル化、共有結合性のヒストン修飾、および非共有結合性の機序（ヒストンバリアントの組み込み、ヌクレオソームポジショニングおよびヌクレオソーム再構築など）が挙げられる。
【０００７】
ヒストンリジン残基およびアルギニン残基のメチル化は、ヒストンメチルトランスフェラーゼおよびヒストンデメチラーゼという、反対の活性を有する２つのクラスの酵素によって調節されている。
【０００８】
ヒストンメチルトランスフェラーゼ（ＨＭＴ）は、ヒストンタンパク質のリジン残基およびアルギニン残基に対する１、２、または３つのメチル基の転移を触媒する、ヒストン修飾酵素（例えば、ヒストン−リジンＮ−メチルトランスフェラーゼおよびヒストン−アルギニンＮ−メチルトランスフェラーゼなど）である。メチル基の結合は、主にヒストンＨ３およびＨ４上の特定のリジン残基またはアルギニン残基に起こる。リジンに特異的なヒストンメチルトランスフェラーゼのクラスは、ＳＥＴドメイン含有および非ＳＥＴドメイン含有にさらに細分される。ヒストンＨ３のＮ末端リジン残基、特に４、９、２７、３６および７９位のＮ末端リジン残基をメチル化して、モノ−、ジ−またはトリ−メチル化リジンを形成することは、多く立証されている。現在、３０を超えるヒストンメチルトランスフェラーゼについて記述されている。
【０００９】
エピジェネティックな因子は、癌、炎症性および自己免疫疾患に関与するとされており、過去数年において、薬剤開発の有望な標的と認められている。ヒストンＨ３またはＨ４の種々のリジン残基をメチル化するいくつかのヒストンメチルトランスフェラーゼの活性は、癌（例えば、ＭＬＬ、ＳＭＹＤ３、Ｇ９ａ、Ｓｕｖ３９Ｈ１、ＳＴＤＢ１、ＥＺＨ２、ＮＳＤ３、ＤＮＳ１、ＤＯＴ１Ｌ、ＳＥＴ８、ＳＵＶ４２０Ｈ１、ＳＵＶ４２０Ｈ２など）に関与している。逆に、様々なデメチラーゼも、癌に関与している（Ｍｏｒｅｒａ  Ｌ  ら、Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓ  ａｎｄ  ｄｅｍｅｔｈｙｌａｓｅｓ  ｉｎ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌｓ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｙ、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｓ  ２０１６；８：５７）。再発性または難治性のＢ細胞リンパ腫の患者の処置には、ヒストンメチルトランスフェラーゼの阻害剤であるＥＺＨ２が、提案されている（Ｎａｔｕｒｅ、２０１２年１２月６日；４９２（７４２７）：１０８−１２）。ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ（ＤＮＭＴ）またはヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）の阻害剤も、現在、血液悪性腫瘍の処置における臨床使用が承認されている。２種類のシチジンアナログ、アザシチジン（５−アザシチジンまたはアザ）およびデシタビンは、ＤＮＡへの取り込み時にＤＮＡメチルトランスフェラーゼ活性を非特異的に阻害し、ＤＮＡメチル化の消失を生じる。これらの薬剤はいずれも骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）患者への使用が承認されている。アザ処置は、インビボおよびインビトロでのいくつかの研究によって証明されているようにＤＮＡメチル化の低下をもたらすが、その脱メチル化の程度は、乏しいと思われる（Ｍａｇｎｕｓ  Ｔｏｂｉａｓｓｏｎ  ら、Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  ｍａｐｐｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ  ｏｎ  ＤＮＡ  ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ、ｒｅｐｒｅｓｓｉｖｅ／ｐｅｒｍｉｓｓｉｖｅ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｍａｒｋｓ  ａｎｄ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｃｅｌｌｓ  ｆｒｏｍ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ＭＤＳ  ａｎｄ  ＭＤＳ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｄｉｓｅａｓｅ  Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ、２０１７、Ｖｏｌ．８、（Ｎｏ．１７）、ｐｐ：２８８１２−２８８２５）。
【００１０】
最近、ＤＮＭＴまたはＨＤＡＣの阻害剤の使用も、免疫療法のような他の癌療法と組み合わせて提案されている（ＷＯ２０１５０３５１１２、Ｃｈｉａｐｉｎｅｌｌｉ  ＫＢ  ら、Ｃｅｌｌ．２０１５年８月２７日；１６２（５）：９７４−８６；Ｌｉｃｈｔ  ＪＤ  Ｃｅｌｌ．２０１５年８月２７日；１６２（５）：９３８−９を参照されたいが、前述のようにＳｈａｒｍａ  Ｐら、Ｃｅｌｌ  ２０１７も参照されたい）。実際、ＤＮＡ脱メチル化剤は、固形腫瘍をＴ細胞媒介免疫応答に対して誘導し得、したがって、チェックポイント阻害剤（Ｒｏｕｌｏｉｓ  Ｄ、Ｙａｕ  ＨＬ、Ｄｅ  Ｃａｒｖａｌｈｏ  ＤＤ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ＤＮＡ  ｄｅｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ：Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２０１６；５（３）：ｅ１０９００７７）などの抗腫瘍免疫療法と相乗的に作用し得ることが示唆されている。また、二次的な臨床知見は、５−アザシチジンで前処理された非小細胞癌腫肺癌患者は、その後の抗ＰＤ１療法に対してより良好な臨床反応を有することを示唆している。（Ｊｕｅｒｇｅｎｓ  ＲＡ、Ｗｒａｎｇｌｅ  Ｊ、Ｖｅｎｄｅｔｔｉ  ＦＰ、Ｍｕｒｐｈｙ  ＳＣ、Ｚｈａｏ  Ｍ、Ｃｏｌｅｍａｎ  Ｂ、Ｓｅｂｒｅｅ  Ｒ、Ｒｏｄｒｅｓ  Ｋ、Ｈｏｏｋｅｒ  ＣＭ、Ｆｒａｎｃｏ  Ｎ  ら、Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｈａｓ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ  ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ  ２０１１；１：５９８−６０７）および黒色腫のマウスモデル（Ｂ１６）が５−アザシチジン単独または抗ＣＴＬＡ４単独よりも５−アザシチジン＋抗ＣＴＬＡ４の併用に対して良好な反応を示す（Ｃｈｉａｐｐｉｎｅｌｌｉ  ＫＢら、Ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ  ＤＮＡ  Ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  Ｃａｕｓｅｓ  ａｎ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  ｖｉａ  ｄｓＲＮＡ  Ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  Ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ．Ｃｅｌｌ  ２０１５；１６２：９７４−８６；ａｎｄ  Ｒｏｕｌｏｉｓ  Ｄら、ＤＮＡ−Ｄｅｍｅｔｈｙｌａｔｉｎｇ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｔａｒｇｅｔ  Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  Ｉｎｄｕｃｉｎｇ  Ｖｉｒａｌ  Ｍｉｍｉｃｒｙ  ｂｙ  Ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ．Ｃｅｌｌ  ２０１５；１６２：９６１−９７３；ＰＭＩＤ：２６３１７４６５；を参照）。
【００１１】
しかし、癌の免疫学および癌の免疫療法におけるこのようなエピジェネティックな調節物質の役割は、あまり理解されていない。実際、脱メチル化剤の作用は多様であり、その再活性化が反応を予測または媒介する遺伝子の同定は、依然としてできていない。一般的に、５−アザシチジンであるＤＮＭＴによる処置の免疫調節作用は、複雑であり、患者の臨床背景およびタイプに依存する（Ｆｒｏｓｉｇ  ＴＭ  ａｎｄ  Ｈａｄｒｕｐ  ＳＲ、Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ  Ｉｎｆｌａｍｍ．２０１５；２０１５：８７１６４１参照）。
【００１２】
したがって、有害な副作用を抑えながら癌免疫療法の有効性を向上させ得る併用療法を実施する必要が依然として存在する。
【００１３】
〔発明の概要〕
本発明者らは、免疫チェックポイント調節物質の抗腫瘍効果がＳＥＴＤＢ１の非存在下で大幅に増強されることを初めて実証した。特に、驚くべきことに、抗ＰＤ１処置、またはＳＥＴＤＢ１の抑制はそれぞれ、中等度のみの抗腫瘍効果を有するかまたは抗腫瘍効果に乏しいことさえある一方で、これらの組み合わせは、広範囲の持続的な腫瘍増殖阻害につながることを本発明者らは示す。さらに、本発明者らはまた、驚くべきことに、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＰＤ１または抗ＰＤＬ１など）とＳＥＴＤＢ１阻害との組み合わせが、Ｓｕｖ３９Ｈ１との組み合わせより劇的に有効であることを示唆する（しかし、後者の組み合わせは抗ＰＤ１有効性を相乗的に向上させることが既に示されている）。この所見は、両方のメチルトランスフェラーゼがＨ３Ｋ９をトリメチル化することが既知であるので、全く驚くべきことである。上述の通り、多数のエピジェネティックな因子が述べられており、これらは潜在的に癌発生に関与している。本結果は、潜在的な治療上の標的間における相乗作用する組み合わせの特定が、病態生理学的カスケードにおけるそれらの既知の個々の役割から予想され得ないことを実証する。
【００１４】
したがって、本発明は、患者の癌の処置における免疫チェックポイントタンパク質の少なくとも１つの調節物質と組み合わせた使用のためのＨ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＥＴＤＢ１の阻害剤に関する。
【００１５】
（定義）
本明細書で使用される「処置」または「処置する」とは、治療剤または治療剤の組み合わせ（例えば、ＳＥＴＤＢ１阻害剤および／または免疫チェックポイント調節物質）の癌患者への使用または投与、または癌患者から取り出した組織または細胞株への当該治療剤の適用または投与、として定義され、その目的は、癌またはその任意の症状を、治癒、回復、軽減、緩和、変更、改善、寛解もしくは好転させる、または癌またはその任意の症状に作用することである。特に、「処置」または「処置する」という文言は、癌に関連する少なくとも１つの有害な臨床症状、例えば、痛み、腫れ、低血球数などを低減または軽減することを指す。
【００１６】
別の実施形態では、「処置する」または「処置」という文言は、制御されていない腫瘍性の細胞増殖の進行を遅らせるかまたは逆転させること、つまり、既存の腫瘍を縮小させること、および／または腫瘍増殖を停止させることを指す。
【００１７】
「処置する」または「処置」という文言はまた、対象にある癌または腫瘍細胞においてアポトーシスを誘導することを指す。
【００１８】
本明細書で使用される「処置」または「処置する」という文言はまた、治療剤の予防的な投与との関連において使用される。
【００１９】
「有効量」または「有効投与量」という文言は、所望の効果を達成するか、または少なくとも部分的に達成するのに十分な量として定義される。「治療有効量」という文言は、既に疾患に罹患している患者において疾患およびその合併症を治癒させるか、または少なくとも部分的に停止させるのに十分な量として定義される。「患者」という文言は、予防的または治療処置のいずれかを受けるヒトおよび他の哺乳類の対象を包含する。
【００２０】
本明細書で使用される場合、「治療上有効なレジメン」という文言は、癌またはその症状の処置および／または管理のための、本発明による１つ以上の治療約（つまり、ＳＥＴＤＢ１阻害剤および少なくとも１つの免疫チェックポイント調節物質）の投与における投薬、タイミング、頻度、および持続時間のためのレジメンを指す。特定の実施形態では、レジメンが以下の結果の１つ、２つ、３つ、またはそれ以上を達成する：（１）癌細胞集団における安定、低減または除去；（２）腫瘍または新生物の増殖の安定または低減；（３）腫瘍の形成の減弱；（４）原発性癌、局所性癌および／または転移性癌の根絶、除去、または制御；（５）死亡率の低下；（６）無病、無再発、無進行、および／または全体的な生存者、持続もしくは割合の、増大；（７）反応している患者または軽快にある患者の反応率、反応持続、または数の増加；（８）入院率の減少、（９）入院期間の減少、（１０）腫瘍の大きさが維持され、増大しない、または１０％未満、好ましくは５％未満、好ましくは４％未満、好ましくは２％未満まで増加する、（１１）軽快にある患者の数の増加。
【００２１】
本発明との関連において「組み合わせ」または「組み合わせ投与」という文言は、本明細書で使用される場合、ＳＥＴＤＢ１阻害剤および少なくとも１つの免疫チェックポイント調節物質の、癌治療の恩恵のための患者への投与を指す。投与との関連において、「組み合わせ」という文言はまた、少なくとも１つの免疫チェックポイント調節物質と共に使用される場合、ＳＥＴＤＢ１阻害剤の予防的な使用を指し得る。
【００２２】
「と組み合わせて」という文言の使用は、治療薬（例えば、ＳＥＴＤＢ１および少なくとも１つの免疫チェックポイント調節物質）が対象に投与される順序を限定しない。治療薬は、癌を有していた、有する、または癌にかかりやすい患者に対する第２の治療薬の、投与前（例えば、１分、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、または１２週間前）、投与と同時、または投与後（例えば、１分、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、または１２週間後）に投与され得る。治療薬は、治療薬が一緒に作用するように、連続的に、かつある時間間隔内に患者に投与される。特定の実施形態では、治療薬が他の方法で投与されたときより、増大した恩恵をもたらすように、連続的に、かつ時間間隔内に対象に投与される。任意の追加の治療薬は、他の追加の治療薬と共に任意の順に投与され得る。
【００２３】
本発明のこれらの結果は、ＳＥＴＤＢ１阻害剤および少なくとも１つの免疫チェックポイント調節物質（抗ＰＤ−１抗体など）による患者の二重処置にとっての基礎を確立している。これらの２つの治療薬は、同時に投与される必要はないが、連続的に投与され得る（例えば、ＳＥＴＤＢ１阻害剤によって始め、続いて免疫チェックポイント調節剤を投与する）。従って、そして本明細書で使用される場合、「癌の治療において少なくとも１つの免疫チェックポイント調節物質と組み合わせた使用のためのＨ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＥＴＤＢ１の阻害剤」という表現は、「癌の治療においてＨ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＥＴＤＢ１の阻害剤と組み合わせた使用のための少なくとも１つの免疫チェックポイント調節物質」という表現と交換可能に使用され得る。
【００２４】
「相乗作用」、「相乗的」、または「相乗効果」という文言は、本明細書で使用される場合、個々の効果の合計よりも大きい効果を説明する。本発明のいくつかの実施形態では、ＳＥＴＤＢ１阻害剤および免疫チェックポイント調節物質の共同使用は、患者における新生物性の状態および／または細胞の増殖に対する相乗的な治療効果を示す。例えば、ＳＥＴＤＢ１阻害剤の使用が腫瘍増殖の１０％の低減をもたらし、免疫チェックポイント調節物質単独の使用が腫瘍増殖の２０％の低減をもたらした場合、新生物性の増殖または腫瘍増殖を低減させるための相加性な効果は３０％の低減であると考えられる。従って、比較すると、ＳＥＴＤＢ１阻害剤および免疫チェックポイント調節物質の両方を使用する場合の相乗効果は、３０％の減少を超える任意の程度までの、腫瘍増殖または新生物性の増殖の低減である。
【００２５】
本明細書で使用される場合、「抗体」という文言は、少なくとも１つの免疫グロブリン可変領域（例えば、免疫グロブリン可変ドメインまたは免疫グロブリン可変ドメイン配列を備えるるアミノ酸配列など）を含むタンパク質を指す。例えば、抗体は、重（Ｈ）鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略す）および軽（Ｌ）鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略す）を含み得る。別の例において、抗体は、２つの重（Ｈ）鎖可変領域および２つの軽（Ｌ）鎖可変領域を含む。「抗体」という文言は、抗体の抗原結合断片（例えば、一本鎖抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、およびｄＡｂ断片）、ならびに完全抗体（例えば、ＩｇＡ型、ＩｇＧ型（例えば、ＩｇＧｌ型、ＩｇＧ２型、ＩｇＧ３型、ＩｇＧ４型）、ＩｇＥ型、ＩｇＤ型、ＩｇＭ型（ならびにそのサブタイプ）の完全なおよび／または全長の免疫グロブリン）を包含する。免疫グロブリンの軽鎖は、カッパ型またはラムダ型であり得る。一実施形態では、抗体はグリコシル化されている。抗体は、抗体に依存する細胞障害性および／または補体に媒介される細胞障害性に関して機能的であり得るか、またはこれらの活性の一方もしくは両方に関して非機能的であり得る。
【００２６】
〔発明を実施するための形態〕
（ＳＥＴＤＢ１の阻害剤）
本明細書で使用される場合、「ＳＥＴドメイン分岐１（ＳＥＴ  Ｄｏｍａｉｎ  Ｂｉｆｕｒｃａｔｅｄ１）」または「ＳＥＴＤＢ１」または「Ｈ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＥＴＤＢ１」という用語（ＥＳＥＴ、ＫＧ１Ｔ、ＫＩＡＡ００６７、ＫＭＴ１Ｅ、ＴＤＲＤ２１としても知られる）は、当該分野で通常の意味を有し、そしてヒストンＨ３（Ｈ３Ｋ９）の９位のリジンをメチル化するヒストンメチルトランスフェラーゼを指す（Ｌｏｙｏｌａ  Ａら、ＥＭＢＯ  Ｒｅｐｏｒｔｓ．２００９；１０（７）：７６９−７７５；Ｇｕｒａｒｄ−Ｌｅｖｉｎ  ＺＡ  ら、Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．２０１４；８３：４８７−５１７）。
【００２７】
ＳＥＴＤＢ１は、すべての真核生物に存在するヒストンメチル化に関与するＳＥＴドメイン含有タンパク質のメンバーである。このタンパク質ファミリーは約１３０アミノ酸からなるＳＥＴドメインを特徴とし、これは、バリエゲーション（ｖａｒｉｅｇａｔｉｏｎ）３〜９（Ｓｕ（ｖａｒ）３〜９）、ゼステ（ｚｅｓｔｅ）（Ｅ（ｚ））のエンハンサー、およびホメオボックス遺伝子調節因子トライソラックス（Ｔｒｘ）の３つのショウジョウバエタンパク質サプレッサーに由来して命名された。ＳＥＴドメインは、このプロセスの間、補因子Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン（ＳＡＭ）を用いてリジン残基のε−アミノ基をメチル化する。
【００２８】
ヒトＳＥＴＤＢ１遺伝子（データベースＥｎｓｅｍｂｌのＥＮＳＧ０００００１４３３７９参照）は、ヒト染色体１ｑ２１上にマッピングされた。ヒトＳＥＴＤＢ１遺伝子は３つのアイソフォームからなる。最も長い転写物によってコードされるアイソフォーム１は、すべてのインタクトなドメインからなり、偏在的に発現している。アイソフォーム２は、アイソフォーム１と比較して、より短いタンパク質である（これは、３’コード領域に選択的インフレームスプライシング部位が使用されるためである）一方、アイソフォーム３はアイソフォーム１と比較して、異なる短いＣ末端を有し、ＨＭＴおよびＳＥＴドメインを欠いている。
【００２９】
（選択的スプライシングによって産生される）３つのアイソフォームを含むＳＥＴＤＢ１タンパク質は、ＵＮＩＰＲＯＴの番号Ｑ１５０４７の下で参照されている。タンパク質（カノニカル配列として特定されたアイソフォーム１）は１２９１アミノ酸からなり、１４３．１ｋＤａの分子量を有する。ヒトおよびマウスのＳＥＴＤＢ１遺伝子はアミノ酸レベルで９２％の類似性を示し、２２のエキソンを含んでいた。ＳＥＴＤＢ１は、ヒストンメチル化に関与する進化的に保存されたＳＥＴ、ｐｒｅ−ＳＥＴ、およびｐｏｓｔ−ＳＥＴドメインを構成するＣ末端領域を含む。ＳＥＴドメインの触媒活性は、ｐｒｅ−ＳＥＴドメインおよびｐｏｓｔ−ＳＥＴドメインに埋め込まれる。マウスＳＥＴＤＢ１遺伝子のプロモーター領域はＧＣ含有量に富み、ハウスキーピング遺伝子の特徴であるＧＡＴＡ結合因子１（ＧＡＴＡ−１）、核因子Ｙ（ＮＦ−Ｙ）および特異性タンパク質−１（Ｓｐ−１）タンパク質に対する結合領域を含む。
【００３０】
本発明によれば、ＳＥＴＤＢ１という一般的な用語はまた、ヒトＳＥＴＤＢ１タンパク質の全てのオルソログを包含する。
【００３１】
本発明によれば、ＳＥＴＤＢ１の阻害剤は、任意の天然化合物の中から選択され得るか、またはＳＥＴＤＢ１の活性もしくは遺伝子発現を阻害する能力を有さない。
【００３２】
化合物の阻害活性は、「Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｄ．ら、Ｎａｔ  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ．２００５年８月；ｌ（３）：１４３−５  ｏｒ  Ｅｓｋｅｌａｎｄ、Ｒ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４３、３７４０−３７４９（２００４）」に記載されるような種々の方法を使用して決定され得る。通常、ＳＥＴＤＢ１の阻害剤とは、被験体（またはｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細胞）において、化合物の投与の前または投与なしの場合のＳＥＴＤＢ１活性と比較して、ＳＥＴＤＢ１活性を少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、および好ましくは７０％より多く、さらにより好ましくは８０％より多く、９０％より多く、９５％より多く、９９％より多く、またはさらに（検出可能な活性がないことに対応する）１００％阻害する、化合物を指す。
【００３３】
ＳＥＴＤＢ１の阻害剤は、有機小分子、アプタマー、細胞内抗体、ポリペプチドまたはＨ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＥＴＤＢ１遺伝子発現の阻害剤、から選択することができる（Ｂｅｎｎｅｔｔ  ＲＬ、Ｌｉｃｈｔ  ＪＤ．「Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ．Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌ．」２０１８年１月６日；５８：１８７−２０７；Ｋａｒａｎｔｈ  ＡＶら、“Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ＳＥＴＤＢ１  ａｓ  ａ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔａｒｇｅｔ”．Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｔｈｅｒ  Ｔａｒｇｅｔｓ．２０１７年３月；２１（３）：３１９−３３１）。
【００３４】
通常、Ｈ３Ｋ９−ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＥＴＤＢ１の阻害剤は有機小分子である。「有機小分子」という用語は、医薬品において一般に使用される有機分子に匹敵するサイズの分子を指す。この用語は生物学的高分子（例えば、タンパク質、核酸など）を除外する。好ましい有機小分子のサイズは、約５０００Ｄａまで、より好ましくは２０００Ｄａまで、最も好ましくは約１０００Ｄａまでの範囲である。
【００３５】
特定の実施形態では、Ｈ３Ｋ９−ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＥＴＤＢ１の阻害剤はミトラマイシン（プリカマイシン、ＭＩＴとも呼ばれる）であり得る（Ｒｙｕ  Ｈら、「ＥＳＥＴ／ＳＥＴＤＢ１  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｈ３（Ｋ９）ｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ'ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ」；Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．２００６年１２月１２日；１０３（５０）：１９１７６−８１））。いくつかの実施形態では、ミトラマイシンをシスタミンと組み合わせてもよい。
【００３６】
新たな小分子阻害剤の特定は、当該分野の古典的技術に従って達成され得る。ヒットする化合物を特定するための現在一般的なアプローチは、ハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）を使用するものである。小分子剤は特に、市販のライブラリのうち、ＡＭＲＩ（Ａｌｂａｎｙ、Ｎ．Ｙ．）、ＡｓｉｓＣｈｅｍ  Ｉｎｃ．（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｍａｓｓ．）、ＴｉｍＴｅｃ（Ｎｅｗａｒｋ、Ｄｅｌ．）などの市販のライブラリから、または当該分野で既知のライブラリから、取得可能な小分子ライブラリ内から特定することができる。
【００３７】
別の実施形態では、ＳＥＴＤＢ１の阻害剤はアプタマーである。アプタマーは、分子認識に関して抗体の代替物を表す分子のクラスである。アプタマーは、高い親和性および特異性を有する実質的に如何なるクラスの標的分子を認識することができるオリゴヌクレオチドまたはオリゴペプチド配列である。このようなリガンドは「Ｔｕｅｒｋ  Ｃ．ａｎｄ  Ｇｏｌｄ  Ｌ．、１９９０」に記載されているように、ランダム配列ライブラリの試験管内人工進化法（Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌｉｇａｎｄｓ  ｂｙ  Ｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌ  ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ；ＳＥＬＥＸ）によって単離することができる。ランダム配列ライブラリは、ＤＮＡのコンビナトリアル化学合成によって取得可能である。このライブラリにおいて、各メンバーは、任意に化学修飾された独特の配列の線状オリゴマーである。このクラスの分子に可能な修飾、使用および利点は、「Ｊａｙａｓｅｎａ  Ｓ．Ｄ．、１９９９」に概説されている。ペプチドアプタマーは、２つのハイブリッド法（Ｃｏｌａｓ  Ｐ、Ｃｏｈｅｎ  Ｂ、Ｊｅｓｓｅｎ  Ｔ、Ｇｒｉｓｈｉｎａ  Ｉ、ＭｃＣｏｙ  Ｊ、Ｂｒｅｎｔ  Ｒ．「Ｇｅｎｅｔｉｃ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｐｔａｍｅｒｓ  ｔｈａｔ  ｒｅｃｏｇｎｉｚｅ  ａｎｄ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｃｙｃｌｉｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｋｉｎａｓｅ  ２」．Ｎａｔｕｒｅ．１９９６年４月１１日；３８０（６５７４）：５４８−５０）によってコンビナトリアルライブラリから選択される、大腸菌Ｔｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ  Ａなどのプラットフォームタンパク質によって提示される立体配座的に制約された抗体可変領域からなる。
【００３８】
本発明による細胞におけるＳＥＴＤＢ１の阻害はまた、細胞内抗体で達成され得る。細胞内抗体は、同じ細胞中で産生された後にそれらの抗原に細胞内結合する抗体である（概説については、例えば以下を参照：Ｍａｒｓｃｈａｌｌ  ＡＬ、Ｄｕｂｅｌ  Ｓ  ａｎｄ  Ｂｏｌｄｉｃｋｅ  Ｔ  「Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ｉｎｔｒａｂｏｄｉｅｓ」．ＭＡｂｓ．２０１５；７（６）：１０１０−３５、しかし、以下も参照：Ｖａｎ  Ｉｍｐｅ  Ｋ、Ｂｅｔｈｕｙｎｅ  Ｊ、Ｃｏｏｌ  Ｓ、Ｉｍｐｅｎｓ  Ｆ、Ｒｕａｎｏ−Ｇａｌｌｅｇｏ  Ｄ、Ｄｅ  Ｗｅｖｅｒ  Ｏ、Ｖａｎｌｏｏ  Ｂ、Ｖａｎ  Ｔｒｏｙｓ  Ｍ、Ｌａｍｂｅｉｎ  Ｋ、Ｂｏｕｃｈｅｒｉｅ  Ｃ、ら、「Ａ  ｎａｎｏｂｏｄｙ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｆ−ａｃｔｉｎ  ｃａｐｐｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ＣａｐＧ  ｒｅｓｔｒａｉｎｓ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ」．Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２０１３；１５：Ｒ１１６；Ｈｙｌａｎｄ  Ｓ、Ｂｅｅｒｌｉ  ＲＲ、Ｂａｒｂａｓ  ＣＦ、Ｈｙｎｅｓ  ＮＥ、Ｗｅｌｓ  Ｗ．「Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｋｉｎａｓｅ  ｄｏｍａｉｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ＥＧＦ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２００３；２２：１５５７−６７」．Ｌｏｂａｔｏ  ＭＮ、Ｒａｂｂｉｔｔｓ  ＴＨ．．「Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ  ｆａｃｉｎｇ  ｔｈｅｉｒ  ｕｓｅ  ａｓ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｇｅｎｔｓ」．Ｔｒｅｎｄｓ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ  ２００３；９：３９０−６、ａｎｄ  Ｄｏｎｉｎｉ  Ｍ、Ｍｏｒｅａ  Ｖ、Ｄｅｓｉｄｅｒｉｏ  Ａ、Ｐａｓｈｋｏｕｌｏｖ  Ｄ、Ｖｉｌｌａｎｉ  ＭＥ、Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏ  Ａ、Ｂｅｎｖｅｎｕｔｏ  Ｅ．「Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｓｔａｂｌｅ  ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ  ｉｎｔｒａｂｏｄｉｅｓ  ｗｉｔｈ  ｄｅｓｉｇｎｅｄ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ」．Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．２００３年７月４日；３３０（２）：３２３−３２．）。
【００３９】
細胞内抗体は既存のハイブリドーマクローンからそれぞれのｃＤＮＡをクローニングすることによって生成することができ、またはより便利には、初期から抗体をコードする必要な遺伝子を提供し、抗体の微細特異性のより詳細な事前設計を可能にするファージディスプレイなどのインビトロディスプレイ技術から、新しいｓｃＦｖｓ／Ｆａｂを選択することができる。さらに、細菌、酵母、哺乳動物細胞表面ディスプレイおよびリボソームディスプレイを用いることができる。しかし、特異的抗体の選択のために一般的に最も使用されるインビトロディスプレイシステムは、ファージディスプレイである。パニング（ｐａｎｎｉｎｇ）（親和性選択）と呼ばれる手順において、組換え抗体ファージは、抗体ファージレパートリと抗原とのインキュベーションによって選択される。このプロセスを数回繰り返すことで、ほぼ全ての標的に対する特異的抗原バインダを含む濃縮された抗体レパートリとなる。今日まで、インビトロで組み立てられた組換えヒト抗体ライブラリは、数千の新規な組換え抗体断片を既に産出してきた。ここで、細胞質内抗体による特異的タンパク質ノックダウンの前提条件は、抗原が抗体結合によって中和／不活性化されることである。好適な抗体を生成するための以下の５つの異なるアプローチが明らかになっている：１）酵母などの真核生物および大腸菌などの原核生物における機能的細胞内抗体のインビボ選択（抗原依存性および非依存性）；２）サイトゾル安定性を改善するための抗体融合タンパク質の生成；３）（例えば、安定な抗体フレームワークにおけるＣＤＲのグラフト化または合成ＣＤＲの導入による）サイトゾル安定性を改善するための特定のフレームワークの使用；４）改善されたサイトゾル安定性のための単一ドメイン抗体の使用；および５）ジスルフィド結合を含まない安定的な細胞内抗体の選択。これらのアプローチは特に、上述の「Ｍａｒｓｃｈａｌｌ、Ａ．Ｌら、ｍＡｂｓ  ２０１５」に詳細に記載されている。
【００４０】
一般的に最も使用される細胞内抗体のためのフォーマットはｓｃＦｖであり、これは、完全なＩｇＧまたはＦａｂ分子の２つの抗体鎖の別々の発現および集合体の必要性を回避するために、短い可撓性リンカー配列（しばしば（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３）によって共に保持されたＨ鎖およびＬ鎖可変抗体ドメイン（ＶＨおよびＶＬ）からなる。また、重鎖のＣ１ドメインおよび軽鎖の定常領域をさらに含むＦａｂフォーマットが使用されている。最近、細胞内抗体のための新しい可能なフォーマット、ｓｃＦａｂが説明されている。ｓｃＦａｂフォーマットは、利用可能なＦａｂ遺伝子の細胞内発現ベクターへのより容易なサブクローニングを保証するが、これが、十分に確立されたｓｃＦｖフォーマットを超える利点を提供するかどうかは依然として明確ではない。ｓｃＦｖおよびＦａｂに加えて、二重特異的フォーマットが細胞内抗体として使用されてきた。ＥＲを標的とする二重特異的Ｔｉｅ−２  ｘ  ＶＥＧＦＲ−２抗体は、単一特異的抗体の対応物と比較して、延長された半減期を示した。表皮成長因子の細胞内および細胞外エピトープを同時に認識するための特殊なフォーマットとして、二重特異的膜貫通細胞内抗体が開発されており、関連する単一特異的抗体の別個な特徴、つまり、自己リン酸化およびリガンド結合の阻害を組み合わせている。
【００４１】
細胞質発現に特に適した別の細胞内抗体構成は、ラクダに由来するか、または１つのヒトＶＨドメインまたはヒトＶＬドメインからなる、単一ドメイン抗体（ナノボディとも呼ばれる）である。これらの単一ドメイン抗体はしばしば、有利な特性（例えば、高い安定性；良好な溶解性；ライブラリのクローニングおよび選択の容易さ；大腸菌および酵母における高い発現量）を有する。
【００４２】
細胞内抗体遺伝子は、発現プラスミドによるトランスフェクションまたは組換えウイルスによるウイルス形質導入の後に、標的細胞の内部で発現し得る。通常、この選択は最適な細胞内抗体トランスフェクションおよび産生レベルを提供することを目的とする。成功したトランスフェクションおよびその後の細胞内産生は、産生された抗体のイムノブロット検出によって分析され得るが、正確な細胞抗原相互作用の評価のために、対応する抗原および細胞内抗体発現プラスミドで一時的に同時形質導入されたＨＥＫ２９３細胞抽出物からの共免疫沈降が使用され得る。
【００４３】
本明細書で使用される場合、ＳＥＴＤＢ１遺伝子発現の阻害は、阻害が誘発されていない状況と比較して、ＳＥＴＤＢ１遺伝子または該ＳＥＴＤＢ１遺伝子によってコードされるタンパク質の、発現またはタンパク質活性もしくはタンパク質レベルのいかなる低下を含む。この低下は、ＳＥＴＤＢ１遺伝子の発現または阻害によって標的化されていないＳＥＴＤＢ１タンパク質のレベルと比較して、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％であり得る。Ｈ３Ｋ９ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＥＴＤＢ１遺伝子発現の阻害剤は、アンチセンスオリゴヌクレオチド構築物、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）およびリボザイムから選択することもできる。
【００４４】
アンチセンスＲＮＡ分子およびアンチセンスＤＮＡ分子を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドは、Ｈ３Ｋ９−ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＥＴＤＢ１の翻訳を直接遮断し、したがってタンパク質の翻訳を妨げ、またはｍＲＮＡの分解を増加させ、したがって、Ｈ３Ｋ９−ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＥＴＤＢ１のレベル、ひいては細胞内でのその活性を低下させるように作用する。例えば、少なくとも約１５塩基であり、Ｈ３Ｋ９−ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＥＴＤＢ１をコードするｍＲＮＡ転写配列の特異領域に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドは、例えば、従来のホスホジエステル技術によって合成され得、そして例えば、静脈注射または注入によって投与され得る。配列が既知である遺伝子の遺伝子発現を特異的に阻害するためのアンチセンス技術を使用するための方法は、当該分野で周知である（例えば、米国特許第６，５６６，１３５号；同第６，５６６，１３１号；同第６，３６５，３５４号；同第６，４１０，３２３号；同第６，１０７，０９１号；同第６，０４６，３２１号；および同第５，９８１，７３２号を参照）。
【００４５】
低阻害ＲＮＡ（Ｓｍａｌｌ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ＲＮＡｓ）（ｓｉＲＮＡｓ）もまた、本発明において使用するための発現阻害剤として機能し得る。ＳＥＴＤＢ１−ヒストンメチルトランスフェラーゼ遺伝子発現が特異的に阻害されるように（つまり、ＲＮＡ干渉またはＲＮＡｉ）、小さな二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、または小さな二本鎖ＲＮＡの産生を誘発するベクターまたは構築物を被験体または細胞に接触させることにより、ＳＥＴＤＢ１遺伝子発現を減少させることができる。適切なｄｓＲＮＡまたはｄｓＲＮＡエンコーディングベクターを選択する方法は、配列が既知である遺伝子についての分野において、周知である（例えば、Ｔｕｓｃｈｌ、Ｔ．ら、（１９９９）；Ｅｌｂａｓｈｉｒ、Ｓ．Ｍ．ら、（２００１）；Ｈａｎｎｏｎ、ＧＪ．（２００２）；ＭｃＭａｎｕｓ、ＭＴ．ら、（２００２）；Ｂｒｕｍｍｅｌｋａｍｐ、ＴＲ．ら、（２００２）；米国特許第６，５７３，０９９号および同６，５０６，５５９；および国際公開第ＷＯ０１／３６６４６号、同ＷＯ９９／３２６１９号、および同ＷＯ０１／６８８３６号を参照）。本発明のｓｉＲＮＡのホスホジエステル結合の全部または一部は、有利には、保護される。この保護は一般に、当技術分野で既知の方法を使用して化学的経路を介して実施される。ホスホジエステル結合は、例えば、チオールまたはアミン官能基によって、またはフェニル基によって保護され得る。本発明のｓｉＲＮＡの５’および／または３’末端はまた、例えば、ホスホジエステル結合を保護するための上記の技術を使用して、有利には、保護される。ｓｉＲＮＡ配列は、少なくとも１２個の連続したジヌクレオチドまたはそれらの誘導体を有利には含む。
【００４６】
本明細書で使用される場合、本核酸配列に関する「ｓｉＲＮＡ誘導体」という用語は、エリスロポエチンまたはその断片と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、例えば少なくとも９８％、およびより好ましくは少なくとも９８％、の同一性の割合を有する任意の核酸を指す。
【００４７】
本明細書で使用される場合、２つの核酸配列間の「同一性の割合」という表現は、比較される２つの配列間の同一な核酸の割合を意味し、前記配列の最良のアラインメントで得られ、この割合は純粋に統計的であり、これら２つの配列間の差異は核酸配列にわたってランダムに広がっている。本明細書で使用される場合、「最良のアラインメント」または「最適なアラインメント」は決定された同一性の割合（以下を参照）が最も高いアラインメントを意味する。２つの核酸配列間の配列比較は、通常、最良のアラインメントに従って予めアラインメントされたこれらの配列を比較することによって実現され、この比較は、類似性の局所領域を特定および比較するために、比較のセグメント上で実現される。比較を行うための配列の最良のアラインメントは、手動で行うことに加えて、ＳＭＩＴＨおよびＷＡＴＥＲＭＡＮによって開発されたグローバル相同性アルゴリズム（Ａｄ．Ａｐｐ．Ｍａｔｈ．、ｖｏｌ．２、ｐ：４８２、１９８１）を使用することによって、ＮＥＤＤＬＥＭＡＮおよびＷＵＮＳＣＨによって開発されたローカル相同性アルゴリズム（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ、ｖｏｌ．４８、ｐ：４４３、１９７０）を使用することによって、さらに、ＰＥＡＲＳＯＮおよびＬＩＰＭＡＮによって開発された類似性の方法（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、ｖｏｌ．８５、ｐ：２４４４、１９８８）を使用することによって、このようなアルゴリズムを使用するコンピューターソフトウェアによって（ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＢＬＡＳＴ  Ｐ、ＢＬＡＳＴ  Ｎ、ＦＡＳＴＡ、ＴＦＡＳＴＡ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ、５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ  ＵＳＡ）、ＭＵＳＣＬＥ多重アラインメントアルゴリズム（Ｅｄｇａｒ、Ｒｏｂｅｒｔ  Ｃ、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、ｖｏｌ．３２、ｐ：１７９２、２００４）を使用することによって、実現され得る。局所的な最良のアラインメントを得るために、好ましくはＢＬＡＳＴソフトウェアが使用され得る。核酸の２つの配列間の同一性の割合は、これらの２つの配列を最適にアラインメントさせて比較することによって決定され、核酸配列は、これらの２つの配列間の最適なアラインメントを得るために、参照配列に関して付加または欠失を含むことができる。同一性の割合は、これらの２つの配列の間の同一の位置の数を決定し、そしてこの数を比較された位置の総数で割り、そして得られた結果に１００を乗算してこれらの２つの配列の間の同一性の割合を得ることにより、計算される。
【００４８】
ｓｈＲＮＡｓ（短いヘアピンＲＮＡ）はまた、本発明における使用のための発現阻害剤として機能し得る。
【００４９】
マイクロＲＮＡｓ（ｍｉＲＮＡｓ）は小さな（約２１〜２３ヌクレオチド）非コードＲＮＡであり、翻訳を抑制することにより、またはｍＲＮＡ分解を誘発することにより、タンパク質の蓄積を防止するために、部分的に相補的な部位への塩基対形成を通して標的遺伝子発現を転写調節する。これらの特徴により、マイクロＲＮＡｓはタンパク質翻訳を阻害するためのツールとなり得る。本発明によれば、ｍｉＲＮＡはｍｉＲ７およびｍｉＲ９から選択され得る（Ｊｕａｎｊｕａｎ  Ｚｈａｏら、「ＭｉｃｒｏＲＮＡ−７：ａ  ｐｒｏｍｉｓｉｎｇ  ｎｅｗ  ｔａｒｇｅｔ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｙ」  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ２０１５；１５：１０３；Ｚｈａｎｇ  Ｈら、「ＭｉＲ−７、ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ  ｉｎｄｉｒｅｃｔｌｙ  ｂｙ  ｌｉｎｃＲＮＡ  ＨＯＴＡＩＲ、ｄｉｒｅｃｔｌｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ＳＥＴＤＢ１  ａｎｄ  「ｒｅｖｅｒｓｅｓ  ｔｈｅ  ＥＭＴ  ｏｆ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ＳＴＡＴ３  ｐａｔｈｗａｙ．」  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ．２０１４年１１月；３２（１１）：２８５８−６８  および、Ａｒｃｈａｎａ  Ｖｅｎｋａｔａｒａｍａｎａ  Ｋａｒａｎｔｈら、「Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ＳＥＴＤＢ１  ａｓ  ａ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔａｒｇｅｔ」  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｏｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｔａｒｇｅｔｓ  ２０１７、も参照）。
【００５０】
リボザイムもまた、本発明における使用のための発現阻害剤として機能し得る。リボザイムはＲＮＡの特異的切断を触媒できる酵素ＲＮＡ分子である。リボザイム作用のメカニズムは、相補的標的ＲＮＡへのリボザイム分子の配列特異的ハイブリダイゼーション、またそれに続くヌクレオチド鎖切断を含む。Ｈ３Ｋ９−ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＥＴＤＢ１  ｍＲＮＡ配列のヌクレオチド鎖切断を特異的かつ効率的に触媒する、設計されたヘアピンまたはハンマーヘッドモチーフリボザイム分子は、それによって本発明の範疇内で有用である。任意の潜在的ＲＮＡ標的内の特異的リボザイム切断部位は、通常はＧＵＡ、ＧＵＵ、およびＧＵＣという配列を含むリボザイム切断部位について標的分子をスキャンすることによって最初に特定される。一旦特定されると、切断部位を含む標的遺伝子の領域に対応する約１５〜２０リボヌクレオチドの間の短いＲＮＡ配列は、二次構造などの予測される構造的特徴について評価され得、オリゴヌクレオチド配列を不適当とし得る。
【００５１】
発現の阻害剤として有用なアンチセンスオリゴヌクレオチドおよびリボザイムの両方は、既知の方法によって調製され得る。これらは、例えば、固相ホスホラミダイト化学合成などによるような化学合成技術を含む。また、アンチセンスＲＮＡ分子が、ＲＮＡ分子をコードするＤＮＡ配列のインビトロまたはインビボ転写によって生成され得る。このようなＤＮＡ配列は、Ｔ７またはＳＰ６ポリメラーゼプロモーターなどの好適なＲＮＡポリメラーゼプロモーターを組み込む様々なベクターに組み込まれ得る。細胞内の安定性および半減期を増加させる手段として、本発明のオリゴヌクレオチドに様々な修飾を導入することができる。可能な修飾として、分子の５’および／または３’末端部へのリボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドのフランキング配列の付加、またはオリゴヌクレオチドバックボーン内のホスホジエステラーゼ結合ではなくホスホロチオエートまたは２’−０−メチルの使用が含まれるが、これらに限定されない。
【００５２】
本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡおよびリボザイムは、インビボで単独で、またはベクターと連結して送達され得る。その最も広い意味において、「ベクター」は、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはリボザイム核酸の、細胞、好ましくはＨ３Ｋ９−ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＥＴＤＢ１を発現する細胞への転移を容易にすることができる任意の伝達手段である。好ましくは、ベクターが、ベクターの不在をもたらす分解の程度と比較して軽く分解した細胞に核酸を輸送する。本発明において有用なベクターは、限定されるものではないが、一般に以下を含む：プラスミド；ファージミド；ウイルス；アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはリボザイム核酸配列の挿入または取り込みによって操作されたウイルスまたは細菌源に由来する他の伝達手段。ウイルスベクターは、ベクターの好ましい種類であり、以下のウイルスからの核酸配列を含むが、これらに限定されない：例えばモロニーマウス白血病ウイルス、ハーベイマウス肉腫ウイルス、マウス乳腺腫瘍ウイルス、およびラウス肉腫ウイルスなどのレトロウイルス；アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス；ＳＶ４０型ウイルス；ポリオーマウイルス；エプスタイン−バーウイルス；パピローマウイルス；ヘルペスウイルス；ワクシニアウイルス；ポリオウイルス；および、例えばレトロウイルスなどのＲ  Ａウイルス。当業者は、命名されていないが当該分野で既知の他のベクターを容易に使用することができる。
【００５３】
好ましいウイルスベクターは、非必須遺伝子が所定の遺伝子と置換されている非細胞変性真核ウイルスに基づく。非細胞変性ウイルスとしては、レトロウイルス（例えばレンチウイルス）が含まれ、そのライフサイクルには、ゲノムウイルスＲＮＡのＤＮＡへの逆転写と、その後の宿主細胞ＤＮＡへのプロウイルス組み込みが含まれる。レトロウイルスは、ヒト遺伝子治療について承認されている。複製欠損性（つまり、所望のタンパク質の合成を指示することができるが、感染性粒子を製造することができない）のレトロウイルスが最も有用である。このような遺伝的に改変されたレトロウイルス発現ベクターは、インビボでの遺伝子の高効率形質導入のための一般的有用性を有する。複製欠損性レトロウイルスを産生するための標準的なプロトコル（プラスミドへの外因性遺伝物質の取り込み、プラスミドを有するパッケージング細胞株のトランスフェクション、パッケージング細胞株による組換えレトロウイルスの産生、組織培養培地からのウイルス粒子の収集、およびウイルス粒子による標的細胞の感染を含む）は、「Ｋｒｉｅｇｌｅｒ、１９９０」および「Ｍｕｒｒｙ、１９９１」に記載されている。
【００５４】
所定の用途に好ましいウイルスは、アデノウイルスおよびアデノ随伴（ＡＡＶ）ウイルスであり、これらは、遺伝子治療において既にヒトでの使用が承認されている二本鎖ＤＮＡウイルスである。現在、１２の異なるＡＡＶ血清型（ＡＡＶ１〜１２）が知られており、その各々が異なる組織親和性を有する（Ｗｕ、Ｚ  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ  ２００６；１４：３１６−２７）。組換えＡＡＶは、依存性パルボウイルスＡＡＶ２に由来する（Ｃｈｏｉ、ＶＷ  Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ２００５；７９：６８０１−０７）。アデノ随伴ウイルス１型〜１２型は、複製欠損となるように設計することができ、広範囲の細胞型および種に感染することが可能である（Ｗｕ、Ｚ  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ  ２００６；１４：３１６−２７）。さらに、熱および脂質溶媒安定性；造血細胞を含む多様な系統の細胞における高い形質導入頻度；ならびに重複感染阻害の欠如などの利点を有し、したがって、複数の系列の形質導入を可能にする。報告によれば、アデノ随伴ウイルスは部位特異的にヒト細胞ＤＮＡに組み込まれ、それによってレトロウイルス感染の特徴である、挿入変異誘発の可能性および挿入遺伝子発現の変動性の可能性を最小限に抑えることができる。さらに、野生型アデノ随伴ウイルス感染は、選択圧のない状態で１００代を超える組織培養で追跡されており、アデノ随伴ウイルスゲノム組み込みが比較的安定した事象であることを意味している。アデノ随伴ウイルスは、染色体外で機能し得る。
【００５５】
他のベクターとして、プラスミドベクターが含まれる。プラスミドベクターは当該分野で広範囲に記載されており、当業者に周知である。例えば、「Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９」を参照されたい。ここ数年、プラスミドベクターは、インビボで抗原をコードする遺伝子を細胞に送達するためのＤＮＡワクチンとして使用されてきた。これらは、多くのウイルスベクターと同じ安全性の問題を有しないので、ＤＮＡワクチンとして特に有利である。しかしながら、これらのプラスミドは、宿主細胞と適合性のあるプロモーターを有し、プラスミド内で機能的にコードされる遺伝子からのペプチドを発現することができる。一般的に使用されるプラスミドとしては、ｐＢＲ３２２、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、ｐＲＣ／ＣＭＶ、ＳＶ４０、およびｐＢｌｕｅＳｃｒｉｐｔがある。他のプラスミドは、当業者に周知である。さらに、プラスミドは、ＤＮＡの特定の断片を除去および付加するために、制限酵素およびライゲーション反応を使用してカスタム設計され得る。プラスミドは、様々な非経口、粘膜および局所経路によって送達され得る。例えば、ＤＮＡプラスミドは、筋肉内、皮内、皮下、または他の経路によって注射され得る。それはまた、鼻腔内スプレーまたは点滴、直腸坐剤および経口によって投与され得る。それはまた、遺伝子銃を用いて表皮または粘膜表面に投与されてもよい。プラスミドは、水溶液中で与えられてもよく、金粒子上で乾燥されてもよく、またはリポソーム、デンドリマー、コクリエート送達伝達手段およびマイクロカプセル化を含むがこれらに限定されない別のＤＮＡ送達システムと組み合わせてもよい。
【００５６】
本発明によるアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはリボザイム核酸配列は一般に、非相同調節領域（例えば、非相同プロモーター）の制御下にある。プロモーターは、ミュラーグリア細胞、ミクログリア細胞、内皮細胞、周皮細胞および星状細胞に特異的であってもよい。例えば、ミュラーグリア細胞における特異的な発現は、好適なグルタミン合成酵素遺伝子のプロモーターを介して得ることができる。プロモーターはまた、例として、ウイルスプロモーター（例えば、ＣＭＶプロモーターまたは任意の合成プロモーター）であり得る。
【００５７】
本発明との関連において、本発明によるＨ３Ｋ９−ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＥＴＤＢ１の阻害剤は、ＥＺＨ２、Ｇ９Ａ  Ｓｕｖ３９Ｈ１またはＳｕｖ３９Ｈ２などの他のヒストンメチルトランスフェラーゼと比較して、Ｈ３Ｋ９−ヒストンメチルトランスフェラーゼＳＥＴＤＢ１に対して選択的であることが好ましい。「選択的」とは、阻害剤の親和性が他のヒストンメチルトランスフェラーゼに対する親和性よりも少なくとも１０倍、好ましくは２５倍、より好ましくは１００倍、さらにより好ましくは５００倍高いことを意味する。
【００５８】
通常、本発明のＳＥＴＤＢ１の阻害剤が２０μＭ未満、好ましくは１０μＭ未満、より好ましくは５μＭ未満、さらにより好ましくは１μＭ未満、特に０．５μＭ未満または０．１μＭ未満のＩＣ５０を有する。典型的にはまた、ＳＥＴＤＢ１の阻害剤は他のメチルトランスフェラーゼ（例えば、ＥＺＨ２、Ｇ９Ａ、Ｓｕｖ３９Ｈ１またはＳｕｖ３９Ｈ２など）、特に他のＨ３ｋ９メチルトランスフェラーゼについて、５μＭを超える、特に１０μＭを超える、２０μＭを超える、さらにより好ましくは５０μＭを超えるＩＣ５０を有する。例えば、本発明の阻害剤は、ＳＥＴＤＢ１について、１μＭ未満、特に０．５μＭ未満のＩＤ５０を示し得、他のメチルトランスフェラーゼ（例えばＥＺＨ２、Ｇ９Ａ、Ｓｕｖ３９Ｈ１またはＳｕｖ３９Ｈ２）について、特にＨ３Ｋ９メチルトランスフェラーゼについて、１０μＭを超える、特に２０μＭを超える、ＩＤ５０を示し得る。
【００５９】
好ましくは、本発明によるＳＥＴＤＢ１の阻害剤はトリプトライド（ｔｒｉｐｔｏｌｉｄｅ）、カエトシン（ｃｈａｅｔｏｃｉｎ）、およびベルチシリンＡ（ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｎ  Ａ）からは選択されない。
【００６０】
（免疫チェックポイント調節物質）
本明細書で使用される場合、「免疫チェックポイントタンパク質」という文言（免疫チェックポイント分子とも呼ばれる）は、当該分野で一般的な意味を有し、Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞によって発現され、シグナル（刺激性チェックポイント分子）を増強させるか、またはシグナル（阻害チェックポイント分子）を低減させる分子を指す。本発明によれば、最も好ましくは、免疫チェックポイント分子は、少なくともＴ細胞によって発現される。
【００６１】
免疫チェックポイント分子は、当該分野において、ＣＴＬＡ−４およびＰＤ−１依存性経路と同様の免疫チェックポイント経路を構成すると知られている。本発明による免疫チェックポイント分子は、特に以下の文献に説明されている：Ｐａｒｄｏｌｌ、２０１２．Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ  １２：２５２−２６４；Ｍｅｌｌｍａｎら、２０１１．Ｎａｔｕｒｅ  ４８０：４８０−  ４８９；Ｃｈｅｎ  Ｌ  &  Ｆｌｉｅｓ  ＤＢ、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１３  Ａｐｒｉｌ；１３（４）：２２７−２４２、ａｎｄ  Ｋｅｍａｌ  Ｃａｔａｋｏｖｉｃ、Ｅｃｋｈａｒｄ  Ｋｌｉｅｓｅｒら、「Ｔ  ｃｅｌｌ  ｅｘｈａｕｓｔｉｏｎ：ｆｒｏｍ  ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｂａｓｉｃｓ  ｔｏ  ｔｕｍｏｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ」  Ｃｅｌｌ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ２０１７，１５：１）。免疫チェックポイント分子の例は、とりわけＣＤ２７、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、ＴＮＦＲＳＦ２５、４１ＢＢ、ＨＶＥＭ、ＣＤ２８、ＴＭＩＧＤ２、ＣＤ２２６、２Ｂ４（ＣＤ２４４）およびリガンドＣＤ４８、Ｂ７−Ｈ６  Ｂｒａｎｄｔ（ＮＫリガンド）、ＬＩＧＨＴ（ＣＤ２５８、ＴＮＦＳＦ１４）、ＣＤ２８Ｈ、Ａ２ＡＲ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ−４、ＣＤ２７７、ＩＤＯ、ＫＩＲｓ、ＰＤ−１ｓ、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３  ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＣＤ９６、ＣＤ１１２Ｒ、ＣＤ１６０、ＣＤ２４４（または２Ｂ４）ＤＣＩＲ（Ｃ型レクチン表面受容体）、ＩＬＴ３、ＩＬＴ４（免疫グロブリン状転写物）、ＣＤ３１（ＰＥＣＡＭ−１）（Ｉｇ状Ｒファミリー）、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＣＤ９４／ＮＫＧ２、ＧＰ４９ｂ（免疫グロブリンスーパーファミリー）、ＫＬＲＧ１、ＬＡＩＲ−１（白血球関連免疫グロブリン状受容体１）ＣＤ３０５、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２およびＳＩＲＰαを包含している。
【００６２】
阻害チェックポイント分子の非限定的な例は、Ａ２ＡＲ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ−４、ＣＤ２７７、ＩＤＯ、ＫＩＲｓ、ＰＤ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３  ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＣＤ９６、ＣＤ１１２Ｒ、ＣＤ１６０、ＤＣＩＲ（Ｃ型レクチン表面受容体）、ＩＬＴ３、ＩＬＴ４（免疫グロブリン状転写物）、ＣＤ３１（ＰＥＣＡＭ−１）（Ｉｇ状Ｒファミリー）、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＣＤ９４／ＮＫＧ２、ＧＰ４９ｂ（免疫グロブリンスーパーファミリー）、ＫＬＲＧ１、ＬＡＩＲ−１（白血球関連免疫グロブリン状受容体１）、ＣＤ３０５、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２を包含している。
【００６３】
Ａ２ａ受容体の活性化に導く、免疫微小環境におけるアデノシンが、負の免疫フィードバックループであり、かつ腫瘍微小環境が比較的高濃度のアデノシンを有するからであるため、そのリガンドがアデノシンであるＡｄｅｎｏｓｉｎｅ  Ａ２ａ受容体（Ａ２ａＲ）は、癌治療における重要なチェックポイントとみなされている。Ａ２ａＲは、アデノシン結合を遮断する抗体によって、またはアデノシンアナログによって阻害することができ、そのいくつかはＡ２ａＲにほぼ特異的である。これらの薬剤は、パーキンソン病の臨床試験で使用されている。
【００６４】
Ｂ７ファミリーは、共刺激性受容体および阻害性受容体を結合する膜結合リガンドの重要なファミリーである。Ｂ７ファミリーメンバーおよびそれらの既知のリガンドの全ては、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する。多くの受容体はまだ同定されていない。ＣＤ２７６とも呼ばれるＢ７−Ｈ３は、元来は共刺激性分子であると理解されていたが、現在では共阻害性とみなされている。ＶＴＣＮ１とも呼ばれるＢ７−Ｈ４は、腫瘍細胞および腫瘍関連マクロファージによって発現され、腫瘍回避に役割を果たす。
【００６５】
ＣＤ１６０は、ＣＤ５６ｄｉｍ  ＣＤ１６＋  ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、γδＴ−細胞、ＣＤ２８の発現を欠いている細胞障害性ＣＤ８＋Ｔ細胞、小画分のＣＤ４＋Ｔ細胞、および全ての上皮内リンパ球に限られている拘束性の発現プロファイルを有する、Ｉｇスーパーファミリーのグリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカータンパク質のメンバーである。古典的および非古典的ＭＨＣ−Ｉの両方へのＣＤ１６０の結合は、ＮＫおよびＣＤ８＋  ＣＴＬ機能を増強する。しかし、ヘルペスウイルス侵入メディエータ（ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４）によるＣＤ１６０の結合は、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖およびＴＣＲ介在性シグナル伝達の阻害を媒介することが示された。
【００６６】
ＨＶＥＭ（ヘルペスウイルス侵入メディエータ）タンパク質は、共刺激ＬＴ−α／ＬＩＧＨＴおよび共阻害性受容体ＢＴＬＡ／ＣＤ１６０の両方を結合する二分子スイッチである。Ｔ細胞上の共阻害性受容体ＢＴＬＡおよび／またはＣＤ１６０の、ＤＣまたはＴｒｅｇ上に発現されたＨＶＥＭによる連結は、負のシグナル（ＣＤまたはむしろ他の活性化Ｔ細胞の上に発現されているＬＩＧＨＴによるＴ細胞に対するＨＶＥＭの直接の結合後に伝えられる共刺激性シグナルによって相殺される（Ｔ−Ｔ細胞協同））をＴ細胞に伝達する。ＨＶＥＭと、ＢＴＬＡおよびＣＤ１６０との相互作用がＨＶＥＭ／ＬＩＧＨＴ経路上で優勢であるか、またはその逆であるかは、リガンド／受容体親和性の違いおよび細胞分化の異なる段階での細胞種によるこれらの分子の発現差異パターンの結果であり得る。ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、およびＣＤ１６０は、実質的に異なる結合親和性を有し、ＨＶＥＭ受容体との相互作用の際に空間的に異なる部位を占め、これは、ＨＶＥＭが分子スイッチとして機能することを可能にする。ＬＩＧＨＴ／ＨＶＥＭおよびＨＶＥＭ／ＢＴＬＡ／ＣＤ１６０の相互作用の正味の影響は、これらの異なる受容体およびリガンドが同時に存在するときの反応の結果を決定する（Ｍ．Ｌ．ｄｅｌ  Ｒｉｏ．「ＨＶＥＭ／ＬＩＧＨＴ／ＢＴＬＡ／ＣＤ１６０  ｃｏｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ａｓ  ｔａｒｇｅｔｓ  ｆｏｒ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ」Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ．２０１０；８７を参照）。
【００６７】
ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）はＣＤ２７２とも呼ばれ、そのリガンドとしてＨＶＥＭも有している。ＢＴＬＡＴ細胞は、そのリガンドであるＨＶＥＭの存在下で阻害される。ＢＴＬＡの表面発現は、ナイーブからエフェクター細胞表現型へのヒトＣＤ８＋Ｔ細胞の分化の間に徐々に下方制御されるが、腫瘍特異的なヒトＣＤ８＋Ｔ細胞は、高レベルのＢＴＬＡを発現する（Ｋｅｎｎｅｔｈ  Ｍ．Ｍｕｒｐｈｙら、Ｂａｌａｎｃｉｎｇ  ｃｏ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ＢＴＬＡ  ａｎｄ  ＨＶＥＭ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２００６、６、６７１−６８１）。
【００６８】
ＣＤ１５２とも呼ばれる細胞障害性Ｔリンパ球関連タンパク質４、ＣＴＬＡ−４は、臨床的に標的にされた最初の免疫チェックポイントであった。それはＴ細胞上に排他的に発現する。Ｔ細胞の表面におけるその発現は、ＣＤ８０およびＣＤ８６を結合することにおいてＣＤ２８を上回ること、ならびに阻害性シグナルをＴ細胞に能動的に伝えることによって、により、Ｔ細胞の活性化を弱めると提唱されている。Ｔｒｅｇ細胞上のＣＴＬＡ−４の発現は、Ｔ細胞増殖を制御するのに役立つ。
【００６９】
Ｉｇ様転写物−３および−４（ＩＬＴ３およびＩＬＴ４）の両方は、単球、マクロファージ、およびＤＣによって発現される阻害性受容体である。対応するＩＬＴ３リガンドはまだ知られていないが、ＩＬＴ３はＴリンパ球の機能を直接に抑制できるため、Ｔ細胞に発現している可能性が高い。いくつかの癌において、ＩＬＴ３は、Ｔ細胞応答を弱めることによって免疫回避メカニズムを媒介することが見出されている。さらに、ＩＬＴ４を発現するＤＣは、効率的なＣＴＬ分化を遮断し、このメカニズムは、ＩＬＴ４をアップレギュレートして免疫系を回避する、腫瘍によって用いられている（Ｖａｓａｔｕｒｏ  Ａら、Ｆｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１３；４：４１７）。
【００７０】
ＣＤ３１としても知られる血小板内皮細胞接着分子−１（ＰＥＣＡＭ−１）は、６つの細胞外Ｉｇドメインおよび２つの細胞質免疫受容体チロシンベース阻害性モチーフ（ＩＴＩＭ）を含む免疫グロブリン（Ｉｇ）遺伝子スーパーファミリーのＩ型膜貫通糖タンパク質メンバーである。ＰＥＣＡＭ−１は、内皮細胞および造血系の細胞に限られている（Ｎｅｗｍａｎ  ＤＫ、Ｆｕ  Ｇ、Ａｄａｍｓ  Ｔ、ら、Ｔｈｅ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ＰＥＣＡＭ−１  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｔｈｅ  ＴＧＦβ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ．２０１６；９（４１８）：ｒａ２７を参照）。
【００７１】
ＬＡＩＲ−１は、ナイーブＴ細胞では、相対的に均質かつ非常に高いレベルで発現するが、記憶Ｔ細胞では、より不均一なより低いレベルで発現する。ＬＡＩＲ−１は、単一の細胞外Ｃ２型Ｉｇ様ドメインを有する２８７アミノ酸のＩ型膜貫通糖タンパク質および２つのＩＴＩＭモチーフを有する細胞質ドメインから成る。ＬＡＩＲ−１は、おそらくＣ末端Ｃｓｋ、ホスファターゼＳＨＩＰ、ＳＨＰ−１またはＳＨＰ−２のうちの１つ以上の動員を介して、ならびにある程度までｐ３８  ＭＡＰキナーゼおよびＥＲＫシグナル伝達を介したシグナル伝達にによって、ＴＣＲ媒介性シグナルを阻害し得る（Ｔｈａｖｅｎｔｈｉｒａｎ  Ｔら、（２０１２）Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｓ１２：００４）。
【００７２】
ＩＤＯ１、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ１は、トリプトファン分解酵素である。関連する免疫阻害酵素。別の重要な分子は、ＴＤＯ、トリプトファン２，３−ジオキシゲナーゼである。ＩＤＯ１は、Ｔ細胞およびＮＫ細胞を抑制し、Ｔｒｅｇおよび骨髄由来抑制細胞を生成および活性化し、腫瘍血管新生を促進することが知られている。
【００７３】
ＫＩＲ、キラー細胞免疫グロブリン状受容体は、構造：キラー細胞免疫グロブリン状受容体（ＫＩＲ）およびＩＩ型膜貫通型受容体であるＣ型レクチン受容体に基づいて、ｓ２つのクラスに分けられ得る阻害性受容体の組紐カテゴリー（braid category）である。ＮＫ細胞の殺活性の調節因子として最初に説明されたが、多くはＴ細胞およびＡＰＣ上に発現される受容体がある。多くは、ＫＩＲがＭＨＣクラスＩ分子のサブセットにソエクフク（soecufuc）であり、かつ対立遺伝子特異性を保有するか否か。
【００７４】
ＬＡＧ３、リンパ球活性化遺伝子−３はそのリガンドとして、ＭＨＣクラスＩＩ分子（いくつかの上皮性癌上で上方制御されるが、腫瘍浸潤マクロファージおよび樹状細胞上にも発現される）を有している。この免疫チェックポイントは、Ｔｒｅｇに対する作用およびＣＤ８＋Ｔ細胞に対する直接的な影響によって免疫応答を抑制するように機能する。
【００７５】
ＰＤ−１、Programmed Death 1（ＰＤ−１）受容体は、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２の２つのリガンドを有する。このチェックポイントは、２０１４年９月にＦＤＡの承認を得た「Ｍｅｒｃｋ  &  Ｃｏ．'ｓ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｄｒｕｇ  Ｋｅｙｔｒｕｄａ」の標的である。ＰＤ−１を標的にする利点は、腫瘍微小環境における免疫機能を修復し得ることである。
【００７６】
そのリガンドがガラクティング（galacting）９である、Ｔ細胞の免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン３の略語であるＴＩＭ−３（Ｂ７Ｈ５とも呼ばれる）は、活性化されたヒトＣＤ４＋Ｔ細胞に発現し、Ｔｈ１およびＴｈ１７サイトカインを調節する。ＴＩＭ−３は、そのリガンドであるガレクチン−９との相互作用によって細胞死を誘発することによってＴｈ１／Ｔｃ１機能の負の調節因子として作用する。
【００７７】
ＶＩＳＴＡ（Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサーの略語）ＶＩＳＴＡ（ｃ１０ｏｒｆ５４、ＰＤ−１Ｈ、ＤＤ１α、Ｇｉ２４、Ｄｉｅｓ１、およびＳＩＳＰ１としても知られる）は、ＮＣＲのＢ７ファミリーのメンバーであり、免疫療法の新たな標的である。マウスＶＩＳＴＡは、ＩｇＶの安定性に重要と考えられる保存されたセグメントを有するそのＢ７類縁体と配列相同性を有する単一のＩｇＶドメインを有するＩ型膜貫通タンパク質である。ＶＩＳＴＡは、ナイーブＴ細胞に発現しているのに対し、ＰＤ−１とＣＴＬＡ−４は発現しておらず、ＶＩＳＴＡがＴ細胞プライミングのさらに早い段階でＴ細胞活性を制限する機能を果たしていることを意味し得る。ＶＩＳＴＡは、Ｔ細胞およびＡＰＣの両方に発現し、骨髄細胞に非常に高い発現を示す。ＶＩＳＴＡは、造血性に拘束されており、多数の癌モデルにおいて、ＶＩＳＴＡは、腫瘍浸潤白血球上でのみ検出され、腫瘍細胞上では検出されなかった。この特有の表面発現パターンは、ＶＩＳＴＡが異なる段階でＴ細胞免疫を抑制するために機能する可能性を示唆する。ＶＩＳＴＡは、リガンドおよび受容体の両方の機能を発揮することが実証されている。第１に、ＶＩＳＴＡは、Ｔ細胞活性化を負に調節するためのリガンドとして機能し得る。第２に、ＶＩＳＴＡは、その活性を負に調節するＴ細胞上の受容体として機能することが実証されている。ＶＩＳＴＡ−／−  ＣＤ４＋Ｔ細胞は、高い増殖、ならびにＩＦＮγ、ＴＮＦα、およびＩＬ−１７Ａの高い産生に導くポリクローナルな刺激および抗原特異的な刺激の両方に野生型（ＷＴ）ＣＤ４＋Ｔ細胞より活発に反応する。抗ＶＩＳＴＡ単剤療法により、複数の前臨床モデルであるＢ１６ＯＶＡ黒色腫、Ｂ１６−ＢＬ６黒色腫、ＭＢ４９膀胱癌およびＰＴＥＮ／ＢＲＡＦ誘発性黒色腫における腫瘍増殖が低減された（Ｄｅｎｇ  Ｊ、Ｌｅ  Ｍｅｒｃｉｅｒ  Ｉ、Ｋｕｔａ  Ａ、Ｎｏｅｌｌｅ  ＲＪ．「Ａ  Ｎｅｗ  ＶＩＳＴＡ  ｏｎ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｂｌｏｃｋａｄｅ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  Ｃａｎｃｅｒ．２０１６年１２月２０日；４：８６．ｄｏｉ：１０．１１８６／ｓ４０４２５−０１６−０１９０−５．ｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ２０１６．Ｒｅｖｉｅｗを参照；また、Ｋａｔｈｌｅｅｎ  Ｍ．Ｍａｈｏｎｅｙら、「Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  ｎｅｗ  ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ  ｔａｒｇｅｔｓ」．Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ２０１５；１４：５６１−５８４も参照）。
【００７８】
ＣＤ９６、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ−１）およびＴＩＧＩＴは、ネクチンおよびネクチン様タンパク質と相互作用する新たな受容体ファミリーに属する。ＣＤ２２６は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞媒介性の細胞障害性を活性化するが、ＴＩＧＩＴはＣＤ２２６を相殺すると報告されている。
【００７９】
ＣＤ９６は、ＣＤ１５５結合についてＣＤ２２６と競合し、直接的な阻害によってＮＫ細胞機能を制限する（Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒ  Ｊ  Ｃｈａｎら、「Ｔｈｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ＣＤ９６  ａｎｄ  ＣＤ２２６  ｏｐｐｏｓｅ  ｅａｃｈ  ｏｔｈｅｒ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ」、Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２０１４  １５、４３１−４３８）。
【００８０】
ＴＩＧＩＴ（ＩｇおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体とも呼ばれる、またはＶＳＴＭ３）ＴＩＧＩＴ  ／  ＶＳＴＭ３は、通常、活性化Ｔ細胞、調節性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞によって発現される。ポリオウイルス受容体（ＣＤ１５５／ＰＶＲ）およびＮｅｃｔｉｎ−２（ＣＤ１１２）ならびにＣＤ１１３は、関連するリガンドとして同定されている。ＴＩＧＩＴ／ＶＳＴＭ３は、ＣＤ１５５／ＰＶＲおよびＣＤ１１２への結合について、それぞれＣＤ２２６およびＣＤ９６分子と競合するが、全てのそれぞれの受容体−リガンド組み合わせの中で、ＴＩＧＩＴ／ＶＳＴＭ３はＣＤ１５５／ＰＶＲに対して最も強い親和性を示す。ＴＩＧＩＴは、インビボでＴ細胞活性化を阻害する（Ｋａｒｓｔｅｎ  Ｍａｈｎｋｅら、ＴＩＧＩＴ−ＣＤ１５５  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｍｅｌａｎｏｍａ：Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｃｏ−Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｐａｔｈｗａｙ  ｗｉｔｈ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ．２０１６；１３６：９−１１を参照）。
【００８１】
そのリガンドがＰＶＲＬ２であるＣＤ１１２Ｒ（ＰＶＲＩＧ）は、Ｔ細胞上に優先的に発現され、Ｔ細胞受容体媒介シグナルを阻害するポリオウイルス受容体様タンパク質のメンバーである。
【００８２】
刺激性のチェックポイント分子の非限定的な例としては、ＣＤ２７、ＣＤ４０Ｌ、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、ＴＮＦＲＳＦ２５、４１ＢＢ、ＨＶＥＭ、ＣＤ２８、ＴＭＩＧＤ２、およびＣＤ２２６、２Ｂ４（ＣＤ２４４）およびそのリガンドであるＣＤ４８、Ｂ７−Ｈ６  Ｂｒａｎｄｔ（ＮＫリガンド）、ＣＤ２８ＨおよびＬＩＧＨＴ（ＣＤ２５８、ＴＮＦＳＦ１４）が挙げられる。
【００８３】
ＣＤ２７、ＣＤ４０Ｌ、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、ＨＶＥＭ、２Ｂ４（ＣＤ２４４）およびそのリガンドＣＤ４８、Ｂ７−Ｈ６  Ｂｒａｎｄｔ（ＮＫリガンド）、ＬＩＧＨＴ（ＣＤ２５８、ＴＮＦＳＦ１４）、ＣＤ２８ＨならびにＴＮＦＳＦ２５は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）のメンバーである刺激性チェックポイント分子である。ＴＮＦＲＳＦタンパク質は、Ｂ細胞およびＴ細胞の発達、生存、および抗腫瘍免疫応答に重要な役割を果たす。さらに、いくつかのＴＮＦＲＳＦは、Ｔｒｅｇ細胞の非活性化に関与する。したがって、ＴＮＦＲＳＦアゴニストは、腫瘍免疫を活性化し、それらの免疫チェックポイント療法との併用が有望である。ＴＮＦＲＳＦアゴニストとして作用するいくつかの抗体が、臨床試験において評価されている（Ｓｈｉｒｏ  Ｋｉｍｂａｒａ  ａｎｄ  Ｓｈｕｎｓｕｋｅ  Ｋｏｎｄｏ、「Ｉｍｍｕｎｅ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  ａｎｄ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ａｓ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔａｒｇｅｔｓ  ｉｎ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ」、Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．２０１６年９月７日；２２（３３）：７４４０−７４５２を参照、また評価のため、Ｗａｔｔｓ  ＴＨ．ＴＮＦ／ＴＮＦＲ  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒｓ  ｉｎ  ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００５；２３：２３−６８も参照）。
【００８４】
ＣＤ２７は、ナイーブＴ細胞の抗原特異的増殖を補助し、Ｔ細胞記憶の生成に不可欠である。ＣＤ２７はまた、Ｂ細胞の記憶マーカーでもある。ＣＤ２７の活性は、そのリガンドＣＤ７０の、リンパ球および樹状細胞による一過性の利用能によって支配されている。ＣＤ２７共刺激は、Ｔｈ１７効果細胞機能を抑制すると知られている。
【００８５】
ＣＤ４０：ＣＤ４０Ｌ経路は、体液性免疫および細胞媒介免疫の両方に影響を及ぼす共刺激性経路である。（ＣＤ１５４としても知られる）ＣＤ４０Ｌは、主に活性化直後にＴヘルパー細胞に発現する。受容体２Ｂ４（ＣＤ２４４）は、免疫グロブリンスーパーファミリー（ＩｇＳＶ）内のシグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭ）サブファミリーに属する。このファミリーのすべてのメンバーは、受容体ＣＤ２２９、ＣＳ１、ＮＴＢ−ＡおよびＣＤ８４を含む細胞質尾部に２つ以上の免疫受容体チロシンベースのスイッチモチーフ（ＩＴＳＭ）を含む［９２］。２Ｂ４は、ＣＤ８＋Ｔ細胞上での活性化時に、ＮＫ細胞、γδＴ細胞  好塩基球および単球によって発現され、リンパ系および骨髄細胞上のＣＤ４８に対して高い親和性を有して結合する（Ｋｅｍａｌ  Ｃａｔａｋｏｖｉｃら、Ｃｅｌｌ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ２０１７１５：１）。
【００８６】
ＴＮＦＳＦ１４／ＬＩＧＨＴ／ＣＤ２５８は、誘導発現を示し、Ｔリンパ球によって発現する受容体であるヘルペスウイルス侵入メディエータ（ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４）について、ヘルペス単純ウイルス（ＨＳＶ）糖タンパク質Ｄと競合し、最近特定されたヒトおよびマウスＴＮＦスーパーファミリーのメンバーである。ＴＮＦＳＦ１４／ＬＩＧＨＴ／ＣＤ２５８は、活性化Ｔ細胞、ならびに単球および顆粒球、ならびに未成熟ＤＣによって産生される２９ｋＤのＩＩ型膜貫通タンパク質である。インビトロにおいて、ＨＶＥＭ／ＬＩＧＨＴ免疫チェックポイント経路は、強力なＣＤ２８非依存性共刺激活性を誘導し、同種間のＤＣに応答してＮＦ−κＢ活性化、ＩＦＮ−γおよび他のサイトカインの産生ならびにＴ細胞増殖をもたらす。インビボ遮断の研究は、ＨＶＥＭ／ＬＩＧＨＴ免疫チェックポイント経路が腫瘍に対する細胞溶解性Ｔ細胞応答の促進およびＧＶＨＤの発症に関与し、Ｔ細胞内でのＴＮＦＳＦ１４／ＬＩＧＨＴ／ＣＤ２５８の遺伝子導入による過剰発現がＴ細胞増殖をもたらしかつ様々な重度の自己免疫疾患を引き起こすことを、示している（Ｑｕｎｒｕｉ  Ｙｅら、Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．２００２年３月１８日；１９５（６）：７９５−８００）。
【００８７】
ＣＤ２８Ｈは、すべてのナイーブＴ細胞に恒常的に発現している。Ｂ７相同物５（Ｂ７−Ｈ５）は、ＣＤ２８Ｈの特異的リガンドとして同定された。Ｂ７−Ｈ５は、マクロファージに恒常的に見られ、樹状細胞上で誘導できた。Ｂ７−Ｈ５／ＣＤ２８Ｈ相互作用は、ＡＫＴ依存性シグナル伝達カスケードを介してヒトＴ細胞増殖およびサイトカイン産生を選択的に同時刺激する（Ｚｈｕ  Ｙら、Ｎａｔ  Ｃｏｍｍｕｎ．２０１３；４：２０４）。
【００８８】
ＣＤ１３４とも呼ばれるＯＸ４０は、そのリガンドとしてＯＸ４０ＬまたはＣＤ２５２を有する。ＣＤ２７と同様に、ＯＸ４０は、エフェクターＴ細胞および記憶Ｔ細胞の増殖を促進するが、調節性Ｔ細胞の分化および活性を抑制する能力、ならびにサイトカイン産生を調節する能力についても着目されている。薬物標的としてのＯＸ４０の価値は主に、Ｔ細胞受容体の会合後に一時的に発現されると、炎症性病変内でごく最近に抗原によって活性化されたＴ細胞上にのみ上方制御されるという事実にある。抗ＯＸ４０モノクローナル抗体は、進行中の癌において臨床的有用性を有することが示されている（Ｗｅｉｎｂｅｒｇ  ＡＤ、Ｍｏｒｒｉｓ  ＮＰ、Ｋｏｖａｃｓｏｖｉｃｓ−Ｂａｎｋｏｗｓｋｉ  Ｍ、Ｕｒｂａ  ＷＪ、Ｃｕｒｔｉ  ＢＤ（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  １、２０１１）．「Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｇｏｎｅ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ：ｔｈｅ  ＯＸ４０  ａｇｏｎｉｓｔ  ｓｔｏｒｙ」．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ．２４４（１）：２１８−３１）。
【００８９】
グルココルチコイド誘発ＴＮＦＲファミリー関連遺伝子の略語であるＧＩＴＲは、Ｔｒｅｇ増殖を含むＴ細胞増殖を促進する。ＧＩＴＲ（ＧＩＴＲＬ）に対するリガンドは、主に抗原提示細胞上に発現される。ＧＩＴＲに対する抗体は、Ｔｒｅｇ系統安定性の喪失を介して抗腫瘍反応を促進することが示されている（Ｎｏｃｅｎｔｉｎｉ  Ｇ、Ｒｏｎｃｈｅｔｔｉ  Ｓ、Ｃｕｚｚｏｃｒｅａ  Ｓ、Ｒｉｃｃａｒｄｉ  Ｃ（Ｍａｙ  １、２００７）．「ＧＩＴＲ／ＧＩＴＲＬ：ｍｏｒｅ  ｔｈａｎ  ａｎ  ｅｆｆｅｃｔｏｒ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｃｏ−ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ｓｙｓｔｅｍ」．Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．３７（５）：１１６５−９を参照）。
【００９０】
誘導性Ｔ細胞同時刺激分子の略語であるＩＣＯＳは、ＣＤ２７８とも呼ばれ、活性化Ｔ細胞上に発現する。そのリガンドはＩＣＯＳＬであり、主にＢ細胞および樹状細胞上に発現している。この分子は、Ｔ細胞エフェクター機能に重要であると考えられる（Ｂｕｒｍｅｉｓｔｅｒ  Ｙ、Ｌｉｓｃｈｋｅ  Ｔ、Ｄａｈｌｅｒ  ＡＣ、Ｍａｇｅｓ  ＨＷ、Ｌａｍ  ＫＰ、Ｃｏｙｌｅ  ＡＪ、Ｋｒｏｃｚｅｋ  ＲＡ、Ｈｕｔｌｏｆｆ  Ａ（２００８年１月１５日）．「ＩＣＯＳ  ｃｏｎｔｒｏｌｓ  ｔｈｅ  ｐｏｏｌ  ｓｉｚｅ  ｏｆ  ｅｆｆｅｃｔｏｒ−ｍｅｍｏｒｙ  ａｎｄ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ」．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８０（２）：７７４−７８２）。
【００９１】
Ｂ７−ＣＤ２８スーパーファミリーに属する他の刺激性チェックポイント分子は、特にＣＤ２８自体およびＴＧＭＩＤ２である。
【００９２】
ＣＤ２８は、ほぼすべてのヒトＣＤ４＋Ｔ細胞上および全ＣＤ８Ｔ細胞上の約半分に、恒常的に発現している。その２つのリガンド（樹状細胞上に発現するＣＤ８０およびＣＤ８６）との結合は、Ｔ細胞の増殖を促進する。
【００９３】
ＴＭＩＧＤ２（ＣＤ２８相同体とも呼ばれる）は、そのリガンドであるＨＨＬＡ２；新たに同定されたＢ７ファミリーメンバーとの相互作用を介してＴ細胞機能を調節する。ＴＭＩＧＤ２タンパク質は、全てのナイーブＴ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上の大多数に恒常的に発現されるが、Ｔ調節性細胞またはＢ細胞上に発現されない（Ｙａｎｐｉｎｇ  Ｘｉａｏ  ａｎｄ  Ｇｏｒｄｏｎ  Ｊ．Ｆｒｅｅｍａｎ、「Ａ  ｎｅｗ  Ｂ７：ＣＤ２８  ｆａｍｉｌｙ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  ｔａｒｇｅｔ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ：ＨＨＬＡ２」、Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１５年５月１５日；２１（１０）：２２０１−２２０３を参照）。
【００９４】
ＣＤ１３７リガンド（ＣＤ１３７Ｌ；４−１ＢＢＬおよびＴＮＦＳＦ９としても知られる）は主に、樹状細胞、単球／マクロファージ、およびＢ細胞などのプロフェッショナル抗原提示細胞（ＡＰＣ）上に発現され、その発現は、これらの細胞の活性化の間に上方制御される。しかし、その発現は様々な造血細胞および非造血細胞において立証されている。一般に、４−１ＢＢＬ／ＣＤ１３７Ｌは、多種類の細胞上で恒常的に発現されるが、その発現レベルは少数の種類の細胞を除いて低い。興味深いことに、４−１ＢＢＬ／ＣＤ１３７Ｌは、様々な種類の細胞上でＣＤ１３７（４−１ＢＢおよびＴＮＦＲＳＦ９としても知られる）と共発現するが、ＣＤ１３７／４−１ＢＢの発現は、２つの分子間のシス相互作用によって４−１ＢＢＬ／ＣＤ１３７Ｌの発現を強力に下方制御し、４−１ＢＢＬ／ＣＤ１３７Ｌのエンドサイトーシスをもたらす（Ｂｙｕｎｇｓｕｋ  Ｋｗｏｎら、Ｉｓ  ＣＤ１３７  Ｌｉｇａｎｄ（ＣＤ１３７Ｌ）「Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ａ  Ｆｉｎｅ  Ｔｕｎｅｒ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ？」Ｉｍｍｕｎｅ  Ｎｅｔｗ．２０１５年６月；１５（３）：１２１−１２４を参照）。
【００９５】
最後に、本発明による他の免疫チェックポイント分子はまた、ＣＤ２４４（または２Ｂ４）およびＳＩＲＰαを含む。
【００９６】
２Ｂ４／ＣＤ２４４は、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭ）関連受容体ファミリーのメンバーであり、ＳＬＡＭＦ４およびＣＤ２４４としても知られている。ＳＬＡＭファミリーの全メンバーは、細胞外ドメイン、膜貫通領域、およびチロシンリッチな細胞質領域を含む、類似の構造を共有する。２Ｂ４＆ＣＤ４８免疫チェックポイント経路は、両方の受容体を介するシグナル伝達をもたし得る。Ｂ細胞におけるＣＤ４８／ＳＬＡＭＦ２シグナル伝達は、同型接着、増殖および／または分化、炎症性エフェクター分子の放出、およびアイソタイプクラス切り替えを引き起こす。さらに、これらのプロセスの全てはまた、それらの活性および／または細胞障害性を促進することに加えて、ＣＤ４８／ＳＬＡＭＦ２ライゲーションを介してＴ細胞において誘導される。２Ｂ４シグナル伝達には、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭ）関連タンパク質（ＳＡＰ）またはＥＷＳ活性化転写物２（ＥＡＴ−２；ＳＨ２Ｄ１Ｂとも呼ばれる）が必要である。ＣＤ８Ｔ細胞およびＮＫ細胞において、２Ｂ４／ＣＤ２４４は正の制御および負の制御の両方に影響することが報告されている（Ｓｅｂａｓｔｉａｎ  Ｓｔａｒｋ．「２Ｂ４（ＣＤ２４４）、ＮＴＢ−Ａ  ａｎｄ  ＣＲＡＣＣ（ＣＳ１）ｓｔｉｍｕｌａｔｅ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｂｕｔ  ｎｏ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ＮＫ  ｃｅｌｌｓ」．Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００６  １８（２）：２４１−２４７も参照）。
【００９７】
ＣＤ４７は、マクロファージおよび樹状細胞に特異的なタンパク質シグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰアルファ）への結合を介したファゴサイトーシスの調節を含む、様々な機能を有する細胞表面糖タンパク質である。ＳＩＲＰアルファ＆ＣＤ４７免疫チェックポイント経路として、ＣＤ４７に対してＳＩＲＰアルファを結合することは、ファゴサイトーシスを阻害するためのシグナル伝達を開始することによって、マクロファージに対するメッセージ「私を食べるな」を基本的に送る。ＣＤ４７の発現増加は、癌細胞が免疫検出およびファゴサイトーシスを回避するメカニズムであると提唱されている。抗ＣＤ４７遮断抗体によって癌細胞上のＣＤ４７を標的化すると、インビトロでマクロファージによるファゴサイトーシスを促進することができる。さらに、抗ＣＤ４７遮断抗体による処理は、インビトロでファゴサイトーシスを促進し、非ホジキンリンパ腫のインビボ異種移植モデルにおいて癌細胞を排除するために、リツキシマブ処理と相乗作用した。さらなる結果は、ＣＤ４７発現が種々の型のヒト固形腫瘍において増加すること、ならびにＳＩＲＰアルファおよびＣＤ４７免疫チェックポイント経路の、抗ＣＤ４７抗体による遮断が、インビトロで固形腫瘍細胞のファゴサイトーシスを促進し、かつインビボで固形腫瘍の増殖を低減可能であることを、証明している（Ｍａｒｔｉｎａ  Ｓｅｉｆｆｅｒｔら、「Ｓｉｇｎａｌ−ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｐｒｏｔｅｉｎ  α（ＳＩＲＰα）ｂｕｔ  ｎｏｔ  ＳＩＲＰβ  ｉｓ  ｉｎｖｏｌｖｅｄ  ｉｎ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ、ｂｉｎｄｓ  ｔｏ  ＣＤ４７  ｗｉｔｈ  ｈｉｇｈ  ａｆｆｉｎｉｔｙ、ａｎｄ  ｉｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｏｎ  ｉｍｍａｔｕｒｅ  ＣＤ３４＋ＣＤ３８−ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ」．２００１；Ｂｌｏｏｄ：９７（９）を参照）。
【００９８】
本明細書で使用される場合、「免疫チェックポイントタンパク質の調節物質」または「チェックポイント調節因子癌免疫療法剤」という表現（両表現は本発明の意味において交換可能に使用され得る）は、当該分野におけるその一般的な意味を有し、免疫阻害性のチェックポイントタンパク質（前述のように阻害性の免疫チェックポイント阻害剤または免疫チェックポイント阻害剤）の機能を阻害するか、または免疫刺激性のチェックポイントタンパク質（交換可能に使用される刺激性の免疫チェックポイントアゴニストまたは免疫チェックポイントアゴニスト）の機能を刺激する任意の化合物を指す。阻害は、機能の低減および完全な遮断を包含している。
【００９９】
免疫チェックポイント調節物質には、ペプチド、抗体、融合タンパク質、核酸分子および小分子が含まれる。所定の免疫チェックポイントタンパク質（つまり、免疫経路遺伝子産物）について、このような遺伝子産物のアンタゴニストまたはアゴニストのいずれかの使用も意図され、このような遺伝子産物の小分子調節物質についても同様である。
【０１００】
好ましい免疫チェックポイント阻害剤またはアゴニストは、前述のように、免疫チェックポイントタンパク質またはそれらのリガンドを特異的に認識する抗体または融合タンパク質である。
【０１０１】
本発明によれば、同じ分子の異なるエピトープまたは同じ腫瘍細胞上の異なる標的のいずれかに対する抗体の種々の混合物を使用することができる；二重特異性または多重特異性抗体を使用することができる（Ｃｏｒｒａｌｉｚａ−Ｇｏｒｊｏｎ  Ｉ、Ｓｏｍｏｖｉｌｌａ−Ｃｒｅｓｐｏ  Ｂ、Ｓａｎｔａｍａｒｉａ  Ｓ、Ｇａｒｃｉａ−Ｓａｎｚ  ＪＡ、Ｋｒｅｍｅｒ  Ｌ．Ｎｅｗ  Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ  ｔｏ  Ｉｎｃｒｅａｓｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２０１７；８：１８０４；Ｌｉｕ  Ｈ、Ｓａｘｅｎａ  Ａ、Ｓｉｄｈｕ  ＳＳ、Ｗｕ  Ｄ．Ｆｃ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｆｏｒ  Ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｎｏｖｅｌ  Ｓｃａｆｆｏｌｄｓ．Ｆｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１７年１月２６日；８：３８．ｄｏｉ：１０．３３８９／ｆｉｍｍｕ．２０１７．０００３８．ｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ２０１７．Ｒｅｖｉｅｗ．）。
【０１０２】
免疫チェックポイント調節物質として使用するための融合タンパク質は、上述のようなチェックポイント分子と免疫グロブリンの結晶性断片（Ｆｃ）領域との融合によって作製され得る。好ましくは、抗体はモノクローナル抗体である。
【０１０３】
多数の免疫チェックポイント阻害剤およびアゴニストは、当該分野およびこれらの既知の免疫チェックポイントタンパク質調節物質の類似性において知られており、代替的な免疫チェックポイント調節物質は、（近い）将来開発され得、また、本発明に係るＳＥＴＤＢ１阻害剤と組み合わせて使用され得る。
【０１０４】
本発明に係る免疫チェックポイント調節物質は、免疫系の活性化をもたらし、特に抗原特異的なＴ細胞応答の増強をもたらす。特に、本発明の免疫チェックポイント調節物質は、対象におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖、移動、持続および／または細胞障害活性、ならびに特に対象のＣＤ８＋Ｔ細胞の腫瘍浸潤を増強するために投与される。本明細書で使用される「ＣＤ８＋Ｔ細胞」は当該分野においてその一般的な意味を有し、それらの表面にＣＤ８を発現するＴ細胞のサブセットを指す。ＣＤ８＋Ｔ細胞はＭＨＣクラスＩ拘束性であり、細胞障害性Ｔ細胞として機能する。「ＣＤ８＋Ｔ細胞」は、細胞障害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、Ｔ−キラー細胞、細胞溶解性Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞またはキラーＴ細胞と呼ばれるＣＤ８＋Ｔ細胞とも呼ばれる。ＣＤ８抗原は、免疫グロブリンスーパー遺伝子ファミリーのメンバーであり、主要組織適合性複合体クラスＩ拘束性の相互作用における結合性の認識因子である。Ｔ  ＣＤ８細胞殺活性を増強する免疫チェックポイント調節物質の能力は、当該分野で周知の任意のアッセイによって決定され得る。通常、前記アッセイは、ＣＤ８＋Ｔ細胞を標的細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞によって認識および／または溶解される標的細胞）と接触させるインビトロアッセイである。
【０１０５】
例えば、本発明の免疫チェックポイント調節物質は、同じエフェクターにおいて得られた特異的な溶解の、約２０％より多く、好ましくは少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、またはそれ以上（本発明の免疫チェックポイント阻害剤によって接触されているＣＤ８＋Ｔ細胞またはＣＤ８Ｔ細胞株との標的細胞比）だけ、ＣＤ８＋Ｔ細胞による特異的な溶解を促進させる能力について選択され得る、古典的な細胞障害性アッセイのためのプロトコルの例としては、従来のものが挙げられる。
【０１０６】
本発明に係る少なくとも１つの免疫チェックポイント調節物質は、阻害性の免疫チェックポイント分子および／または刺激性の免疫チェックポイント分子の調節物質であり得る。
【０１０７】
例えば、チェックポイント調節因子癌免疫療法剤は、
活性化Ｔリンパ球によって発現されている免疫抑制受容体（のアンタゴニスト）（すなわち阻害性の免疫チェックポイント）を遮断する作用物質（例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ４）、プログラム細胞死１（ＰＤＣＤ１、ＰＤ−１として最もよく知られる））、もしくはＮＫ細胞によって発現されている免疫抑制受容体（のアンタゴニスト）（すなわち阻害性の免疫チェックポイント）を遮断する作用物質（キラー細胞免疫グロブリン状受容体（ＫＩＲ）ファミリーの種々のメンバーなど）、または
これらの受容体の主要リガンド（例えば、ＰＤ−１リガンドＣＤ２７４（ＰＤ−Ｌ１またはＢ７−Ｈ１として最もよく知られる））を遮断する作用物質であり得る。
【０１０８】
いくつかの実施形態では、チェックポイント遮断癌免疫療法剤は、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤＬ１抗体、抗ＰＤＬ２抗体、抗ＴＩＭ−３抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＩＤＯ１抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗Ｂ７Ｈ３抗体、抗Ｂ７Ｈ４抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗Ｂ７Ｈ６抗体、抗ＣＤ８６抗体、抗Ｇａｌ９抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＣＤ２８抗体、抗Ａ２ａＲ抗体、抗ＣＤ８０抗体、抗ＫＩＲ（ｓ）抗体、Ａ２ａＲ薬剤（特にアデノシンアナログ）、抗ＤＣＩＲ（Ｃ型レクチン表面受容体）抗体、抗ＩＬＴ３抗体、抗ＩＬＴ４抗体、抗ＣＤ３１（ＰＥＣＡＭ−１）抗体、抗ＣＤ３９抗体、抗ＣＤ７３抗体、抗ＣＤ９４／ＮＫＧ２抗体、抗ＧＰ４９ｂ抗体、抗ＫＬＲＧ１抗体、抗ＬＡＩＲ−１抗体、抗ＣＤ３０５抗体、およびこれらの組み合せからなる群から選択される。ある実施形態では、チェックポイント遮断癌免疫療法剤は抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。
【０１０９】
抗ＣＴＬＡ−４抗体の例としては、米国特許第５，８１１，０９７号；第５，８１１，０９７号；第５，８５５，８８７号；第６，０５１，２２７号；第６，２０７，１５７号；第６，６８２，７３６号；第６，９８４，７２０号；および第７，６０５，２３８号に記載されている。抗ＣＤＬＡ−４抗体の１つとして、トレメリムマブ（チシリムマブ、ＣＰ−６７５，２０６）が挙げられる。いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ−４抗体は、ＣＴＬＡ−４に結合する完全ヒトモノクローナルＩｇＧ抗体であるイピリムマブ（１０Ｄ１、ＭＤＸ−Ｄ０１０としても知られる）である。
【０１１０】
ＰＤ−１抗体およびＰＤ−Ｌ１抗体の例が、米国特許第７，４８８，８０２号、第７，９４３，７４３号、第８，００８，４４９号、第８，１６８，７５７号、第８，２１７，１４９号、およびＰＣＴ公開特許出願ＷＯ０３０４２４０２、ＷＯ２００８１５６７１２、ＷＯ２０１００８９４１１、ＷＯ２０１００３６９５９、ＷＯ２０１１０６６３４２、ＷＯ２０１１１５９８７７、ＷＯ２０１１０８２４００、およびＷＯ２０１１１６１６９９に記載されている。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１遮断剤が、抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む。所定の他の実施形態では、ＰＤ−１遮断剤は、抗ＰＤ−１抗体および類似の結合タンパク質（例えば、そのリガンドＰＤ−ＬｌおよびＰＤ−Ｌ２によってＰＤ−１の活性化に結合し、当該活性化を遮断する完全ヒトＩｇＧ４抗体であるニボルマブ（ＭＤＸ１１０６、ＢＭＳ９３６５５８、ＯＮＯ４５３８）；ＰＤ−１に対するヒト化モノクローナルＩｇＧ４抗体であるランブロリズマブ（ＭＫ−３４７５またはＳＣＨ９００４７５）；ＰＤ−１を結合するヒト化抗体であるＣＴ−０１１；ＡＭＰ−２２４はＢ７−ＤＣの融合タンパク質である；抗体Ｆｃ部分；ＰＤ−Ｌ１（Ｂ７−Ｈ１）遮断のためのＢＭＳ−９３６５５９（ＭＤＸ１１０５−０１））を含む。
【０１１１】
他の免疫チェックポイント阻害剤としては、リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ−３）阻害剤（例えば、可溶性のＩｇ融合タンパク質であるＩＭＰ３２１）が挙げられる（Ｂｒｉｇｎｏｎｅら、２００７、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７９：４２０２−４２１１）。
【０１１２】
他の免疫チェックポイント阻害剤としては、Ｂ７阻害剤（例えば、Ｂ７−Ｈ３阻害剤およびＢ７−Ｈ４阻害剤、特に抗Ｂ７−Ｈ３抗体ＭＧＡ２７１）が挙げられる（Ｌｏｏら、２０１２、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．Ｊｕｌｙ  １５（１８）３８３４）。
【０１１３】
また、ＴＩＭ３（Ｔ細胞免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン３）阻害剤も含まれる（Ｆｏｕｒｃａｄｅら、２０１０、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０７：２１７５−８６およびＳａｋｕｉｓｈｉら、２０１０、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０７：２１８７−９４）。本明細書で使用される「ＴＩＭ−３」という文言は、当該分野における一般的な意味を有し、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン含有分子３を指す。従って、本明細書で使用される「ＴＩＭ−３阻害剤」という文言は、ＴＩＭ−３の機能を阻害し得る化合物、物質または組成物を指す。例えば、当該阻害剤は、ＴＩＭ−３の発現または活性を阻害し、ＴＩＭ−３のシグナル伝達経路を調節または遮断し、および／または、ＴＩＭ−３にとってのその天然リガンドであるガレクチン−９への結合を遮断することができる。ＴＩＭ−３に対して特異性を有する抗体は、当該分野で周知であり、そして典型的には、ＷＯ２０１１１５５６０７、ＷＯ２０１３００６４９０およびＷＯ２０１０１１７０５７に記載される抗体である。
【０１１４】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、好ましくはＩＤＯ１阻害剤である。ＩＤＯ阻害剤の例が、ＷＯ２０１４１５０６７７に記載されている。ＩＤＯ阻害剤の例としては、１−メチル−トリプトローファン（tryptoρhan）（ＩＭＴ）、β（３−ベンゾフラニル）−アラニン、β−（３−ベンゾ（ｂ）チエニル）−アラニン）、６−ニトロ−トリプトファン、６−フルオロ−トリプトファン、４−メチル−トリプトファン、５−メチル−トリプトファン、６−メチル−トリプトファン、５−メトキシ−トリプトファン、５−ヒドロキシ−トリプトファン、インドール  ３−カルビノール、３’３−ジインドリルメタン、エピガロカテキンガレート、５−Ｂｒ−４−Ｃｌ−インドキシル  １，３−ジアセテート、９−ビニルカルバゾール、アセメタシン、５−ブロモ−トリプトファン、５−ブロモインドキシルジアセテート、３−アミノ−ナフトエ酸、ピロリジンジチオカルバメート、４−フェニルイミダゾール  ブラシニン誘導体、チオヒダントイン誘導体、β−カルボリン誘導体、またはブラスレキシン誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、ＩＤＯ阻害剤は、１−メチル−トリプトファン、β−（３ベンゾフラニル）−アラニン、６−ニトロ−Ｌ−トリプトファン、３−アミノ−ナフトエ酸およびβ−［３ベンゾ（ｂ）チエニル］−アラニンまたはそれらの誘導体もしくはプロドラッグから選択される。
【０１１５】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＴＩＧＩＴ（Ｔ細胞免疫グロビンおよびＩＴＩＭドメイン）抗体である。
【０１１６】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＶＩＳＴＡ抗体、好ましくはモノクローナル抗体である（Ｌｉｎｅｓ  ＪＬ、Ｓｅｍｐｅｒｅ  ＬＦ、Ｗａｎｇ  Ｌ、ら、ＶＩＳＴＡ  ｉｓ  ａｎ  ｉｍｍｕｎｅ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｆｏｒ  ｈｕｍａｎ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．Ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｓｅａｒｃｈ．２０１４；７４（７）：１９２４−１９３２．ｄｏｉ：１０．１１５８／０００８−５４７２．ＣＡＮ−１３−１５０４）。
【０１１７】
好ましい実施形態では、チェックポイント調節物質癌免疫療法剤は、イピリムマブなどのＣＴＬＡ４遮断抗体、ニボルマブもしくはペンブロリズマブなどのＰＤ−１遮断抗体、ＰＤＬ−１遮断抗体、またはそれらの組み合わせである。通常、チェックポイント調節物質癌免疫療法剤は、ニボルマブもしくはペンブロリズマブなどのＰＤ−１遮断抗体、またはＰＤＬ−１遮断抗体である。
【０１１８】
チェックポイント調節物質癌免疫療法剤はまた、（１）活性化Ｔリンパ球もしくはＮＫ細胞によって発現される刺激性の免疫チェックポイント受容体を活性化される作用物質、またはこれらの受容体の主要リガンドを模倣する作用物質であり得、抗原特異的Ｔ細胞応答の増幅も生じる。
【０１１９】
したがって、チェックポイント調節物質癌免疫療法剤は、通常は、上述のような刺激性の免疫チェックポイント分子に対するアゴニスト抗体、特にモノクローナルアゴニスト抗体であり得、例えば、アゴニスト抗４−１ＢＢ、−ＯＸ４０、−ＧＩＴＲ、−ＣＤ２７、−ＩＣＯＳ、−ＣＤ４０Ｌ、−ＴＭＩＧＤ２、−ＣＤ２２６、−ＴＮＦＳＦ２５、−２Ｂ４（ＣＤ２４４）、−ＣＤ４８、−Ｂ７−Ｈ６Ｂｒａｎｄｔ（ＮＫリガンド）、−ＣＤ２８Ｈ  −ＬＩＧＨＴ（ＣＤ２５８、ＴＮＦＳＦ１４）および−ＣＤ２８抗体からなる群から選択される。
【０１２０】
チェックポイントアゴニスト癌免疫療法剤はまた、融合タンパク質であり得、例えば、４−１ＢＢ−Ｆｃ融合タンパク質、Ｏｘ４０−Ｆｃ融合タンパク質、ＧＩＴＲ−Ｆｃ融合タンパク質、ＣＤ２７−Ｆｃ融合タンパク質、ＩＣＯＳ−Ｆｃ融合タンパク質、ＣＤ４０Ｌ−Ｆｃ融合タンパク質、ＴＭＩＧＤ２−Ｆｃ融合タンパク質、ＣＤ２２６−Ｆｃ融合タンパク質、ＴＮＦＳＦ２５−Ｆｃ融合タンパク質、ＣＤ２８−Ｆｃ融合タンパク質、２Ｂ４（ＣＤ２４４）融合タンパク質、ＣＤ４８融合タンパク質、Ｂ７−Ｈ６  Ｂｒａｎｄｔ（ＮＫリガンド）融合タンパク質、ＣＤ２８Ｈ融合タンパク質およびＬＩＧＨＴ（ＣＤ２５８、ＴＮＦＳＦ１４）融合タンパク質である。
【０１２１】
４−１ＢＢアゴニストのいくつかは、ヒトの癌への適用について大きな可能性を示す。例えば、４−１ＢＢに対する完全ヒト化モノクローナル抗体であるＢＭＳ−６６６５１３は、黒色腫、腎細胞癌、および卵巣癌を有する患者におけるその抗癌特性についての第Ｉ段階および第ＩＩ段階試験を完了している（Ｓｚｎｏｌ  Ｍ、Ｈｏｄｉ  ＦＳ、Ｍａｒｇｏｌｉｎ  Ｋ、ＭｃＤｅｒｍｏｔｔ  ＤＦ、Ｅｒｎｓｔｏｆｆ  ＭＳ、Ｋｉｒｋｗｏｏｄ  ＪＭ、ら、Ｐｈａｓｅ  Ｉ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ＢＭＳ−６６３５１３、ａ  ｆｕｌｌｙ  ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉ−ＣＤ１３７  ａｇｏｎｉｓｔ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ、ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ（ｐｔｓ）ｗｉｔｈ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｃａｎｃｅｒ（ＣＡ）．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２６：２００８年（Ｍａｙ  ２０  ｓｕｐｐｌ；ａｂｓｔｒ  ３００７）。
【０１２２】
７つのＯＸ４０アゴニストが現在開発中であり、そのうち６つは、マウス抗体の課題に対処するために完全ヒトモノクローナル抗体の形態をとる。１つのＯＸ４０Ｌ−Ｆｃ融合タンパク質、ＭＥＤＩ６３８３もまた、臨床評価を受けている；これは、２つのＯＸ４０Ｌ分子を免疫グロブリンの断片結晶化可能（Ｆｃ）領域の一部に連結する。前臨床試験において、融合タンパク質は、ＯＸ４０抗体より強い作用を有するとみられるが、これは可能性として、Ｔ細胞に加えて樹状細胞および血管内皮細胞も活性化し得るためである。Ｏｘ４０アゴニストの例としては、ＭＥＤＩ６４６９、ＭＥＤＩ６３８３、ＭＥＤＩ０６５２、ＰＦ−０４５１５６００、ＭＯＸＰ０９１６、ＧＳＫ３１７４９９８、ＩＮＣＡＧＮＯ１９４９が挙げられる。
【０１２３】
ＧＩＴＲに対するアゴニスト抗体は、ヒト化抗ヒトＧＩＴＲモノクローナル抗体などが開発されている（ＴＲＸ５１８．Ｔｏｌｅｒｘ  Ｉｎｃ．Ａｇｏｎｉｓｔｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  ｈｕｍａｎ  ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｓ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ  ａｎｄ  ｖｉｒａｌ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ．Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｔｈｅｒ  Ｐａｔｅｎｔｓ．２００７；１７：５６７−５７５、ｓｅｅ  ａｌｓｏ  Ｓｃｈａｅｒ  ＤＡ、Ｍｕｒｐｈｙ  ＪＴ、Ｗｏｌｃｈｏｋ  ＪＤ．Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＧＩＴＲ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１２  Ａｐｒ；２４（２）：２１７−２４）。
【０１２４】
ＴＮＦファミリーの別のメンバーであるＣＤ２７に対するアゴニスト抗体の例として、Ｂ細胞悪性腫瘍、黒色腫および腎細胞癌をＣＤＸ−１１２７（バリルマブ）として現在、第Ｉ段階の臨床試験にある完全ヒト１Ｆ５モノクローナル抗体が挙げられる（Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｎｔｉ−ＣＤ２７  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ（ｍＡｂ）ｔｈａｔ  ｉｓ  ｃｕｒｒｅｎｔｌｙ  ｉｎ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌｓ（Ｖｉｔａｌｅ  ＬＡ、Ｈｅ  Ｌ−Ｚ、Ｔｈｏｍａｓ  ＬＪら、２０１２  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａ  ｈｕｍａｎ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｏｒ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ＣＤ２７−ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｌｙｍｐｈｏｍａ  ａｎｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１８（１４）、３８１２−３８２１）。
【０１２５】
アゴニストＣＤ４０モノクローナル抗体の初期臨床試験は、単剤研究において、障害を引き起こす毒性の非存在下で非常に有望な結果を示している。現在までに、４つのＣＤ４０モノクローナル抗体が臨床試験において調査されている：ＣＰ−８７０，８９３（Ｐｆｉｚｅｒ  ａｎｄ  ＶＬＳＴ）、ｄａｃｅｔｕｚｕｍａｂ（Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、Ｃｈｉ  Ｌｏｂ  ７／４（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｓｏｕｔｈａｍｐｔｏｎ）、およびｌｕｃａｔｕｍｕｍａｂ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）（Ｖｏｎｄｅｒｈｅｉｄｅ  ＲＨ、Ｆｌａｈｅｒｔｙ  ＫＴ、Ｋｈａｌｉｌ  Ｍ、Ｓｔｕｍａｃｈｅｒ  ＭＳ、Ｂａｊｏｒ  ＤＬ、Ｈｕｔｎｉｃｋ  ＮＡ、ら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｅ  ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｔｒｅａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ＣＰ−８７０，８９３、ａ  ｎｏｖｅｌ  ＣＤ４０  ａｇｏｎｉｓｔ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．２００７；２５：８７６−８３；Ｋｈｕｂｃｈａｎｄａｎｉ  Ｓ、Ｃｚｕｃｚｍａｎ  ＭＳ、Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｉｌｉｚａｌｉｔｕｒｒｉ  ＦＪ．Ｄａｃｅｔｕｚｕｍａｂ、ａ  ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  ｍＡｂ  ａｇａｉｎｓｔ  ＣＤ４０  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ  ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ．Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  Ｄｒｕｇｓ．２００９；１０：５７９−８７；Ｊｏｈｎｓｏｎ  ＰＷ、Ｓｔｅｖｅｎ  ＮＭ、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ  Ｆ、Ｄｏｂｂｙｎ  Ｊ、Ｈａｌｌ  Ｅ、Ａｓｈｔｏｎ−Ｋｅｙ  Ｍ、ら、Ａ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ＵＫ  ｐｈａｓｅ  Ｉ  ｓｔｕｄｙ  ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ  ｓａｆｅｔｙ、ｔｏｌｅｒａｂｉｌｉｔｙ、ａｎｄ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａｎｔｉ−ＣＤ４０  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ（ＭＡｂ）、Ｃｈｉ  Ｌｏｂ  ７／４．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．２０１０；２８：２５０７；Ｂｅｎｓｉｎｇｅｒ  Ｗ、Ｍａｚｉａｒｚ  ＲＴ、Ｊａｇａｎｎａｔｈ  Ｓ、Ｓｐｅｎｃｅｒ  Ａ、Ｄｕｒｒａｎｔ  Ｓ、Ｂｅｃｋｅｒ  ＰＳ、ら、Ａ  ｐｈａｓｅ  １  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｌｕｃａｔｕｍｕｍａｂ、ａ  ｆｕｌｌｙ  ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉ−ＣＤ４０  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ  ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓｌｙ  ｔｏ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ｏｒ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ．Ｂｒ  Ｊ  Ｈａｅｍａｔｏｌ．２０１２；１５９：５８−６６）
チェックポイントアゴニスト癌免疫療法剤はまた、抗ＩＣＯＳアゴニストモノクローナル抗体であり得（Ｋｕｔｌｕ  Ｅｌｐｅｋ、Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒ  Ｈａｒｖｅｙ、Ｅｌｌｅｎ  Ｄｕｏｎｇ、Ｔｙｌｅｒ  Ｓｉｍｐｓｏｎ、Ｊｅｎｎｙ  Ｓｈｕ、Ｌｉｎｄｓｅｙ  Ｓｈａｌｌｂｅｒｇ、Ｍａｔｔ  Ｗａｌｌａｃｅ、Ｓｒｉｒａｍ  Ｓａｔｈｙ、Ｒｏｂｅｒｔ  Ｍａｂｒｙ、Ｊｅｎｎｉｆｅｒ  Ｍｉｃｈａｅｌｓｏｎ、ａｎｄ  Ｍｉｃｈａｅｌ  Ｂｒｉｓｋｉｎ、Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ａ０５９：Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ＩＣＯＳ  ａｇｏｎｉｓｔ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｕｍｏｒ  ｍｏｄｅｌｓ  ｐｒｏｖｉｄｅｓ  ａ  ｒａｔｉｏｎａｌｅ  ｆｏｒ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｓ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ；Ａｂｓｔｒａｃｔｓ：ＣＲＩ−ＣＩＭＴ−ＥＡＴＩ−ＡＡＣＲ  Ｉｎａｕｇｕｒａｌ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ：Ｔｒａｎｓｌａｔｉｎｇ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｉｎｔｏ  Ｓｕｒｖｉｖａｌ；２０１５年９月１６〜１９日；Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹ）、または抗ＣＤ２８アゴニスト抗体であり得る（特に、抗ＰＤ−１免疫療法との併用において；「Ｔ  ｃｅｌｌ  ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＣＤ２８  ｉｓ  ａ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｔａｒｇｅｔ  ｆｏｒ  ＰＤ−１−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ」を参照）また、精査のため、「Ｍｅｌｅｒｏ  Ｉ、Ｈｅｒｖａｓ−Ｓｔｕｂｂｓ  Ｓ、Ｇｌｅｎｎｉｅ  Ｍ、Ｐａｒｄｏｌｌ  ＤＭ、Ｃｈｅｎ  Ｌ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ．２００７  Ｆｅｂ；７（２）：９５−１０６」も参照。
【０１２６】
本発明によれば、免疫チェックポイントタンパク質の２つ以上の調節物質を、本発明に係るＳＥＴＤＢ１阻害剤と組み合わせて使用することができる。例えば、（例えば、抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１などの）阻害性免疫チェックポイント阻害剤の少なくとも１つの調節物質は、上述のような少なくとも１つの刺激性の免疫チェックポイントアゴニストと組み合わせて使用され得る。共刺激性および共阻害性の免疫チェックポイント分子は、Ｃｈｅｎ  Ｌ＆Ｆｌｉｅｓ  Ｂ（上記のＮａｔ  ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏ．、２０１３）のレビューに特に記載されている。
【０１２７】
（患者）
通常、本発明によれば、患者は哺乳類、好ましくはヒトである。
【０１２８】
通常、上記患者は、癌に罹患しているか、または癌の軽快の状態にあるか、または癌のリスクがある。軽快の状態にある患者は、通常は、癌が（例えば、外科的な除去によって）処置されており、もはや存在しない患者である。したがって、通常、本発明の併用治療は、治療的な手術または最初の手術を受けた患者に施すことができる。
【０１２９】
本発明における癌は、身体の一部における制御されていない異常細胞の分裂によって引き起こされる。
【０１３０】
上記癌は、固形癌、または血液を冒す癌（つまり、白血病）であり得る。白血病としては、例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、および慢性リンパ球性白血病（マントル細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫または非ホジキンリンパ腫などの種々のリンパ腫を含む）が挙げられる。
【０１３１】
固形癌は通常、細胞の制御されない分裂から生じる悪性増殖または悪性腫瘍を含む。固形癌としては、特に、結腸、網膜（網膜芽細胞腫など）、直腸、皮膚（黒色腫、特に進行黒色腫など）、子宮内膜、気道消化管（喉頭癌を含む）、胆のうおよび胆管、肺（非小細胞肺癌を含む）、子宮、骨（骨肉腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、線維肉腫、巨細胞腫、アダマンチノーマおよび脊索腫など）、肝臓、腎臓、食道、胃、膀胱（尿路上皮性膀胱癌および尿路癌を含む）、膵臓、子宮頸部、脳（髄膜腫、膠芽腫、低悪性度星細胞腫、乏突起膠細胞、下垂体部腫瘍、シュワン細胞腫、および転移性脳腫瘍など）、卵巣、乳房（粘液性癌など）、頭頸部、精巣、前立腺、および甲状腺からなる群から選択される器官のうちの１つの冒す癌が挙げられる。また、癌という文言には、皮膚、肺、甲状腺、乳房、食道または腟を冒し得る扁平上皮癌のほか、線維肉腫も含まれる。いくつかの実施形態では、黒色腫、膠芽腫、気道消化管癌、乳癌、肺癌、尿路上皮癌、ホジキンリンパ腫、腎臓癌、線維肉腫、および胃癌は、本発明の組み合わせによって標的にされることが好ましい。
【０１３２】
（投与量）
好ましくは、ＳＥＴＤＢ１阻害剤および免疫チェックポイント調節物質は、有効用量の範囲にある。
【０１３３】
通常、本発明の組み合わせ治療レジメン（つまり、ＳＥＴＤＢ１阻害剤および少なくとも１つの免疫チェックポイント調節物質）は、治療学的に有効である。現在、利用可能な治療薬、ならびにそれらの投与量、投与経路、および推奨される使用は、当該分野で知られており、「ｔｈｅ  Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ'ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（６０ｔｈ  ｅｄ．、２００６）」などの文献に記載されている。投与経路としては、非経口、静脈内、皮下、頭蓋内、肝臓内、結節内、尿管内、尿管下、皮下、および腹腔内が挙げられる。
【０１３４】
本発明の１つ以上の薬剤（例えば、ＳＥＴＤＢ１阻害剤および免疫チェックポイント調節物質）の投与量は、当業者によって決定され得、任意の合併症のときに、個々の医師によって調整もされ得る。
【０１３５】
（併用療法）
特定の実施形態では、サイクリング療法は、ある期間にわたる第１の癌治療薬の投与、その後のある期間にわたる第２の癌治療薬の投与、必要に応じて、その後のある期間にわたる第３の癌治療薬の投与など、およびこの一連の投与（つまり、癌治療薬のうちの１つに対する耐性の発生を低減するためのサイクル、または癌治療薬のうちの１つの副作用を回避または軽減するためのサイクル、および／または癌治療薬の有効性を向上させるためのサイクル）を繰り返すことに関する。
【０１３６】
本発明に係る２つの組み合わせ療法を同時に患者に施す場合、典型的には治療学的に有効なレジメンで施す場合、「同時」という文言は、正確に同時に癌治療薬を投与することに限定されず、むしろ、それらが（例えば、別のやり方で投与された場合より増大した利益を示すために相乗的に）一緒に作用するように、ある時間間隔をおいて順次に、対象に投与されることを意味する。例えば、２つの治療薬は、同時または順次に、異なる時点で任意の順に投与され得る；しかし、同時に投与されない場合、それらは所望の治療効果を示すために、好ましくは相乗的な方法で、十分に時間的に近接して投与されるべきである。組み合わせ癌治療薬は、任意の適切な形態で、任意の好適な経路によって、別々に投与され得る。組み合わせ癌治療薬の成分が、同じ医薬組成物として投与されない場合、それらは、それを必要とする対象に任意の順に投与され得ることが理解される。例えば、第１の治療学的に有効なレジメンは、本発明によれば、それを必要とする患者に、第２の癌治療薬の投与の前（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、または１２週間前）、同時、または後（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、または１２週間後）に投与され得る。
【０１３７】
好ましくは、ＳＥＴＤＢ１阻害剤と本発明による免疫チェックポイント調節物質との組み合わせ投与が、相乗的な抗癌作用をもたらす。
【０１３８】
（部分調製物のキット）
本願はまた、上述のようなＳＥＴＤＢ１阻害剤および上述のような少なくとも１つの免疫チェックポイント調節物質を、癌治療における同時使用、個々の使用または順次使用のための組み合わせ調製物として含んでいる調製物を包含している。部分のキット”の形態におけるこのような調製物によれば、個々の活性な化合物（つまり、ＳＥＴＤＢ１阻害剤および少なくとも１つの免疫チェックポイント調節物質）は、それらの化合物の使用が、当該化合物によって単独では得られない本明細書に記載のような予想外の新規な共同の治療効果を同時に、個々にまたは順次に生じるとき、治療剤を表し、かつ物理的に分けられている。実際に、以下の結果によって実証されるように、有効成分の請求されている組み合わせは、既知の薬剤の単なる集合体には相当せず、意外かつ有益な特性（これらの成分が別々に使用されるときに見られる抗腫瘍効果の単純な相加より、複合的な抗腫瘍効果がはるかに重要である）を有している新たな組み合わせに相当した。
【０１３９】
従って、両方の有効成分は、別々の複数の組成物、または唯一の組成物に調合され得る。
【０１４０】
本発明のような治療剤は、好適に調合され、かつ対象または細胞の環境に、そのような送達のために認られている任意の手段によって導入され得る。
【０１４１】
このような組成物は、通常、薬剤および薬学的に許容される担体を含む。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」という文言は、薬学的投与に適合する、生理食塩水、溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを包含している。補助活性化合物も組成物に組み込むことができる。
【０１４２】
医薬組成物は、その意図される投与経路と適合するように調合されている。投与経路の例としては、非経口、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口（例えば、吸入）、経皮（局所）、経粘膜、および直腸投与が挙げられる。
【０１４３】
（治療方法）
本発明はまた、癌に罹患している患者を治療するための方法に関し、当該方法は、前述のようにＳＥＴＤＢ１阻害剤および少なくとも１つの免疫チェックポイント調節物質の組み合わせ投与を含む。通常、上記組み合わせ投与は、治療学的に有効なレジメンに従って投与される。
【０１４４】
患者におけるＳＥＴＤＢ１の発現は、特に本願において定義される患者において、極めて可変性であることが示されている（Ｃｕｅｌｌａｒ  Ｔ  Ｌら、ＪＣＢ  ２０１７、https://doi.org/10.1083/jcb.201612160を参照）。本願の結果は、抗ＰＤ１または抗ＰＤＬ１などの免疫チェックポイント調節物質の活性がＳＥＴＤＢ１の非存在下で大きく増強されることを更に示す。
【０１４５】
したがって、本発明の一実施形態ではまた、患者を、免疫チェックポイント療法に対して反応性を有しているか否かで分類する方法に関する。通常、当該方法は、当該患者におけるＳＥＴＤＢ１発現のレベルの決定を含む。ＳＥＴＤＢ１発現のレベルは、基準データと比較され得る。通常、ＳＥＴＤＢ１の発現が当該基準データより低い場合、患者は免疫チェックポイント療法に対して反応性を有するものとして分類され得る。また、ＳＥＴＤＢ１の発現が当該基準データと比較して増加する場合、患者は、免疫チェックポイント療法に対して低い反応性を有するとして分類され得、そしてＳＥＴＤＢ１阻害剤と、本願に定義されるような少なくとも１つの免疫チェックポイント調節物質との組み合わせで治療され得る。
【０１４６】
通常、患者におけるＳＥＴＤＢ１の発現は、患者からの生物学的サンプルから決定され得る。生物学的サンプルは、当該分野で古典的に知られているような生物学的組織、細胞または流体のサンプル（血漿または血液サンプルなど）を指す。
【０１４７】
基準データは、基準サンプル中で判定されたＳＥＴＤＢ１発現から得ることができる。基準サンプルは、癌を有さない対象か、またはより早い時点（例えば、任意の癌治療前、または癌の発症前）における同じ患者から得られてもよい。基準サンプルはまた、通常、複数の対象からのサンプルをプールして、平均集団にとっての標準を生成することによって得ることができ、ここで、標準とは、個体の集団におけるＳＥＴＤＢ１の平均レベルを表す。したがって、そのような方法で得られた標準におけるＳＥＴＤＢ１のレベルは、一般集団または疾患（通常は癌または特定の型の癌に罹患している）集団におけるこのマーカーの平均レベルを表す。
【０１４８】
ＳＥＴＤＢ１の検出は、ポリペプチドの発現、または当該ポリペプチドのｍＲＮＡ転写物の断片を検出する任意の手段によって達成され得る。このような検出方法は、当業者に周知であり、そして古典的なタンパク質検出技術（例えば、免疫組織化学、ウェスタンブロット分析、イムノブロット法、ＥＬＩＳＡ、免疫沈降、側方流動イムノアッセイ、ラジオイムノアッセイ、およびＰＣＲ手順によるメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）発現の測定などの転写物発現レベル、ＲＴ−ＰＣＲ、ノーザンブロット分析、ＲＮＡｓｅ保護アッセイなど）を含む。
【０１４９】
以下の実験結果を考慮して、本発明をさらに説明する。
【０１５０】
〔図面の簡単な説明〕
図１：ＷＴマウスに、ＷＴ、Ｓｕｖ３９ｈ１−／−またはＳＥＴＤＢ１−／−Ｂ１６ＯＶＡ黒色腫細胞を移植した。腫瘍が触知できる（２ｍｍ  ×  ２ｍｍ）とき、動物を抗ＰＤＬ１療法で処置し、腫瘍体積を週２回測定した。
【０１５１】
図２：ＷＴ  Ｃ５７ＢＬ６マウスに、ＷＴ、Ｓｕｖ３９ｈ１−／−またはＳＥＴＤＢ１−／−Ｂ１６ＯＶＡ黒色腫細胞を移植した。腫瘍が触知できる（２ｍｍ  ×  ２ｍｍ）とき、動物を抗ＰＤ１抗体で週２回治療し、腫瘍体積を週２回測定した。
【０１５２】
図３：樹状細胞におけるＳｅｔｄｂ１の消失は、インターフェロン刺激遺伝子（ＩＳＧ）発現を増強し、腫瘍拒絶を促進する。（ａ）ＩＳＧ、Ｉｆｉ２０４およびＳｋｉｖｌ２の発現、ＳＥＴＤＢ１＋／＋（左側から３つのヒストグラムバー）およびＳＥＴＤＢ１−／−（右側から３つのヒストグラムバー）における、示された時間の間のＬＰＳ処理後の骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣ）。（ｂ）Ｌｏｘ−ｃｒｅシステム（ＣＤ１１ｃ−ｃｒｅ＋  ＳＥＴＤＢ１Ｆｌｏｘ／Ｆｌｏｘ（ＳＥＴＤＢ１−／−）およびＣＤ１１ｃ−ｃｒｅ−ＳＥＴＤＢ１Ｆｌｏｘ／Ｆｌｏｘ（ＳＥＴＤＢ１＋／＋）を使用して、ＳＥＴＤＢ１が樹状細胞において条件付きで除去されているマウスにおけるＭＣＡ腫瘍増殖。
【０１５３】
図４：ＳＥＴＤＢ１−／−樹状細胞を有するマウスは、抗ＰＤ−１媒介性の腫瘍拒絶に対してより反応性を有する。図２などのＳＥＴＤＢ１＋／＋およびＳＥＴＤＢ１−／−マウスに、ＭＣＡ−ＯＶＡ線維肉腫細胞を投与し、腫瘍サイズを週３回測定した。腫瘍が触知可能になったときにＰＤ−１を投与した。
【０１５４】
図５：Ｓｅｔｄｂ１−／−樹状を有するマウスでの増強された腫瘍拒絶には、ＣＤ８＋Ｔ細胞が必要である。ＭＣＡ−ＯＶＡ腫瘍を、ＳＥＴＤＢ１＋／＋およびＳＥＴＤＢ１−／−マウスにおいて週３回測定した。腫瘍が触知可能になるとすぐに抗ＣＤ８抗体を投与した。
【０１５５】
〔実施例〕
（マウス）
Ｓｅｔｄｂ１（Ｓｅｔｄｂ１ｔｍ１ａ（ＥＵＣＯＭＭ）Ｗｔｓｉ）のエクソン４にフランキングしているｌｏｘＰ部位を有する、以前に記載された（Ｃｏｌｌｉｎｓ  ２０１５）マウス株をＥＵＣＯＭＭから入手し、ＣＤ１１ｃｒｅ＋  マウス（Ｂ６．Ｃｇ−Ｔｇ（Ｉｔｇａｘ−ｃｒｅ）１−１Ｒｅｉｚ／Ｊ；Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）と交配させて、ＤＣ特異的な欠損有するマウスを作製した。Ｓｅｔｄｂ１ｔｍ１ａ（ＥＵＣＯＭＭ）Ｗｔｓｉマウスにはまた、タモキシフェン誘導性ｃｒｅ（Ｊａｘ、Ｂ６；１２９−Ｇｔ（ＲＯＳＡ）２６Ｓｏｒｔｍ１（ｃｒｅ／ＥＲＴ）Ｎａｔ／Ｊ）を発現するマウスを交配させて、条件付きＳｅｔｄｂ１−／−ＢＭＤＣの生成のための組織ドナーを提供した。ＥＲＴ−ｃｒｅ＋Ｓｕｖ３９ｈ１ＷＴ／ＷＴ骨髄をコントロールにした。Ｃ５７Ｂ１／６Ｎマウスは、元々はＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから入手した。
【０１５６】
（細胞培養および刺激）
骨髄由来樹状細胞を、１０％  ウシ胎児血清（Ｅｕｒｏｂｉｏ）、ペニシリン／ストレプトマイシン、５０μＭ  β−メルカプトエタノール、最小限の非必須アミノ酸、および２ｍＭのＧｌｕｔａｍａｘ（全てＬｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓが提供）（Ｉ−１０培地）を補ったＩＭＤＭ（ＶＷＲＩ３３９０）において、２０ｎｇ／ｍｌのＧＭＣＳＦ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）において培養した。簡潔には、新鮮な骨髄を、遠心分離によって、腸骨、大腿骨、および脛骨の各々の２つから採取した。５００万の骨髄細胞を、未処理の１０ｃｍプレート（ＶＷＲ）に対して、１０ｍｌのＩ−１０培地において播いた。３日目に、追加の１０ｍｌのＩ−１０培地を添加し、続いて６日目に１０ｍｌの回収および継ぎ足しを行った。ＢＭＤＣクラスターを、４℃でＰＢＳ（ＲＥＦ）中で５分間インキュベートした後、８日目に回収し、次いで、未処理の６ウェルプレート（Ｓｉｇｍａ  Ｍ９０６２−１００ＥＡ）の１ウェルあたり２×１０６細胞で、ＧＭＣＳＦなしの２ｍｌのＩ−１０培地において刺激した。Ｓｅｔｄｂ１−／−ＢＭＤＣの生成のために、培養の３日目に２０ｎＭの４−ＯＨ−タモキシフェンの添加によりＣｒｅ媒介欠損を誘導し、当該培養は、６日目に補充され、８日目の回収まで維持した。細胞刺激を、ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｔｌｒｌ−３ｐｅｌｐｓ）を用いて示された期間、実施した。
【０１５７】
（ＭＣＡ１０１  ＯＶＡを発現する腫瘍アッセイ、免疫療法、およびＩＦＮγ  ＥＬＩＳＰＯＴ）
以前に確認されている腫瘍細胞株ＭＣＡ１０１−ｓＯＶＡ１（可溶性ＯＶＡを分泌する線維肉腫）を、１０％  ＦＢＳ（Ｅｕｒｏｂｉｏ）、１００μｇ／ｍｌ  ペニシリン／ストレプトマイシン、β−メルカプトエタノール、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、およびハイグロマイシン（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ、１０６８７０１０）を補ったＲｏｓｗｅｌｌ  Ｐａｒｋ  Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅで培養した。細胞を、対数期増殖における培養物のトリプシン処理によって回収し、そしてレシピエントマウスの右脇腹への皮内注射のために、１０５細胞／１００μｌのコールドＰＢＳで再懸濁した。腫瘍は、４〜５日以内に視認可能であり、２日毎に測定され、その後、それらが１０００ｍｍ３（０．５＊Ｗ＊Ｗ＊Ｌとして計算され、ここで、Ｗは腫瘍の幅であり、Ｌは腫瘍の長さである）に達するまで測定された。ＰＢＳ中の１００μｇの抗ＰＤ−１（Ｂｉｏ  Ｘ  Ｃｅｌｌ、ＲＭＰ１−１４）または抗ＣＤ８（Ｂｉｏ  Ｘ  Ｃｅｌｌ、５３−６．７２）を、実験の最後まで週３回、腹腔内注射によって与えた。腫瘍播種後１３日目にマウスから血液を採取し、滅菌Ｈ２Ｏにおける急速（５秒間）なＲＢＣ溶菌に供し、続いて１×の最終濃度まで１０×ＰＢＳを用いてクエンチした。１０５細胞を、予めコーティングしたＥＬＩＳＰＯＴプレート（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＭＡＩＰＳ４５１０）の１ウェルつき、プレーティングし、ＭＨＣ−Ｉペプチド（ＳＩＩＮＦＥＫＬ；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ  ＯＶＡ  ２５７−２６４）、ＭＨＣＩＩペプチド（ＯＶＡ  ３２３−３３９）、または非特異的抗原ＨＳＡ（ヒト血清アルブミン）と共に３７℃で一晩インキュベートした。翌日、プレートをＴＢＳ０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０でリンスし、製造者のプロトコル（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、ＫＭＣ４０２１Ｃ）に従ってＩＦＮγ  ＥＬＩＳＰＯＴを産生した。ストレプトアビジンアルカリホスファターゼをＩｎｖｉｖｏｇｅｎから購入し、基質をＢｉｏ−Ｒａｄ（１７０６４３２）から購入した。
【０１５８】
（ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９変異生成のためのレンチウイルス粒子の生成）
ＨＥＫ２９３−Ｔ細胞を、１０％のＦＢＳ（Ｅｕｒｏｂｉｏ）および１００μｇ／ｍｌのペニシリン／ストレプトマイシンを補ったダルベッコ改変イーグル培地において維持した。８．１０５を６つのウェルプレートに播き、１μｇのｐｓＰａｘ２、０．４μｇのＶＳＶ−Ｇパッケージングベクター、およびｐＣＲＩＳＰ−ｐｕｒｏ−ｖ２ベクターにクローン化された１．６μｇのｓｇＲＮＡによってトランスフェクトした。トランスフェクションの１４時間後に培地交換を行った。ウイルス上清を３６時間後に回収し、濾過し、Ｂ１６−ＯＶＡ細胞の形質導入のために直ちに使用した。
【０１５９】
使用したｓｇＲＮＡの配列：
【０１６０】
【表１】
2021517127.tif 000002
【０１６１】
（Ｓｕｖ３９ｈ１およびＳｅｔｄｂ１欠損Ｂ１６ＯＶＡ腫瘍細胞の生成）
Ｂ１６−Ｆ１０  ＯＶＡを発現する黒色腫細胞を、１０％  ＦＢＳ、１００μｇ／ｍｌ  ペニシリン／ストレプトマイシンおよびＧｌｕｔａｍａｘ（登録商標）を補ったＲｏｓｗｅｌｌ  Ｐａｒｋ  Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＲＰＭＩ）中で維持した。２．５．１０５を６ウェルプレートに播いた。播種の２４時間後、培地を、２ｍｌの調製したばかりのウイルス上清と交換し、そしてプレートを、３０℃に予め温めた遠心分離機中で２５００ｒｐｍで３０分間回転させた。形質導入の２４時間後に培地を交換し、形質導入の４８時間後に細胞にピューロマイシン（２μｇ／ｍｌ、ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）を添加した。
【０１６２】
細胞を、ピューロマイシンによって２週間選択し、その後、タンパク質発現をウェスタンブロット（Ｓｕｖ３９ｈ１抗体、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、ＡｂｃａｍからのＳｅｔｄｂ１抗体）によって確認した。
【０１６３】
腫瘍実験のために、適切な遺伝子型の２．５×１０５の腫瘍細胞をＣ５７ＢＬ６／Ｊレシピエント（６〜８週齢の雌）に皮下注射した。腫瘍が触知できたとき（通常、注射後５日）、動物を、２００μｇ  抗ＰＤＬ１（Ｂｉｏ  Ｘ  Ｃｅｌｌ、１０Ｆ９Ｇ２）または抗ＰＤ１（ＰＤ−１（Ｂｉｏ  Ｘ  Ｃｅｌｌ、ＲＭＰ１−１４）  １５０μｇ）によって、週２回、処理した。腫瘍を電子ノギスを用いて週２回、測定し、腫瘍が１０００ｍｍ３体積（０．５＊Ｗ＊Ｗ＊Ｌと計算され、ここで、Ｗは腫瘍の幅であり、Ｌは腫瘍の長さである）に達したときに動物を屠殺した。
【０１６４】
参考
１  Zeelenberg, I. S. et al. Targeting tumor antigens to secreted membrane vesicles in vivo induces efficient antitumor immune responses. Cancer research 68, 1228-1235, doi:10.1158/0008-5472.CAN-07-3163 (2008).。
【０１６５】
結果
（ＳＥＴＤＢ１−／−Ｂ１６ＯＶＡ細胞は、ＷＴまたはＳｕｖ３９ｈ１−／−Ｂ１６ＯＶＡ細胞より抗ＰＤＬ１処理に対してより感受性である）
マウス黒色腫の共通遺伝子モデルであるＳｕｖ３９ｈ１−／−またはＳｅｔｄｂ１−／−Ｂ１６  ＯＶＡ細胞は、Ｂ６マウスにおける養子移入後にＷＴ  Ｂ１６  ＯＶＡ細胞と同程度の速度でまたはわずかに速く増殖した（図１Ａ対１Ｃ参照）。
【０１６６】
抗ＰＤＬ１による処理は、ＷＴコントロールと比べて、Ｓｕｖ３９ｈ１−／−またはＳＥＴＤＢ１−／−Ｂ１６ＯＶＡ細胞の増殖を阻害することにおいて顕著に有効であった。実際、抗ＰＤ−Ｌ１処理は、単独では、ＷＴ  Ｂ１６ＯＶＡ細胞の増殖を制御することには無効であり、生存をわずかに改善するだけである。
【０１６７】
抗ＰＤ−Ｌ１による処理は、Ｓｕｖ３９ｈ１−／−Ｂ１６ＯＶＡ細胞の増殖の低下をもたらした。著しく対照的に、ＳＥＴＤＢ１−／−Ｂ１６ＯＶＡ細胞の増殖に対する抗ＰＤ−Ｌ１の影響は、完全な拒絶がマウスの６０％を超えて観察されたので、はるかに強力であった。
【０１６８】
上記結果は、腫瘍細胞におけるＳＥＴＤＢ１の不活性化が、抗ＰＤＬ１抗体によるチェックポイント遮断療法の有効性を向上すさせることを示し、腫瘍細胞におけるＳｅｔｄｂ１阻害を、チェックポイント遮断療法ち組み合わせることの大きな利益を強調している。
【０１６９】
（ＳＥＴＤＢ１−／−Ｂ１６ＯＶＡ細胞は、ＷＴ  Ｂ１６ＯＶＡ細胞と比べて、抗ＰＤ１処理に対して非常に感受性である）
チェックポイント遮断に対するＳｅｔｄｂ１欠損腫瘍の反応をさらに調査するために、ＷＴ  Ｃ５７ＢＬ６マウスにＷＴまたはＳｅｔｄｂ１−ＫＯ  Ｂ１６ＯＶＡ細胞を注射した。腫瘍が触知可能なとき、動物を抗ＰＤ１抗体によって週２回処理した。予想通り、Ｂ１６ＯＶＡ細胞は抗ＰＤ１による処理に対して不十分に反応する。Ｓｅｔｄｂ１の欠損はは、単独では腫瘍増殖の遅延をなんら生じない一方で、Ｓｅｔｄｂ１欠損腫瘍細胞は抗ＰＤ１による処理に対して非常に反応性である（図２）。
【０１７０】
（樹状細胞（ＤＣ）におけるＳｅｔｄｂ１−／−に対する条件変異を有するマウスは、コントロールの同腹子より良好に腫瘍増殖を制御し、抗チェックポイント療法に対してより反応性である）
Ｓｅｔｄｂ１−／−骨髄由来の樹状細胞（ＢＭＤＣ）は、ＬＰＳによる処理に反応して、より多くのインターフェロン刺激遺伝子（ＩＳＧ）を産生し、より炎症性の表現型を示す。この表現型の、見込まれる生理学的な関連性をインビボで試験するために、ＣＤ１１ｃ−ｃｒｅ−発現マウスを、ＳＥＴＤＢ１Ｆｌｏｘ／Ｆｌｏｘマウスと組み合わせてＤＣのＳＥＴＤＢ１を選択的に削除し、ＭＣＡ−ＯＶＡ線維肉腫細胞を播種した。ＣＤ１１ｃ−ｃｒｅ陰性のマウスをＷＴ同腹子コントロールとした。Ｓｅｔｄｂ１−／−マウスは、Ｓｅｔｄｂ１＋／＋マウスより有効に腫瘍増殖を制御した（図３）。これは、ＳＥＴＤＢ１−／−骨髄細胞における炎症性／Ｉｓｇ応答の増強がより良好な腫瘍拒絶を促進することを示す。
【０１７１】
ＤＣのＳＥＴＤＢ１の条件欠損を有する同系統のマウスを用いて、図３と同様の腫瘍実験を行ったが、コントロールとして抗ＰＤ−１またはＰＢＳのいずれかを投与した（図４）。Ｓｅｔｄｂ１−／−マウスが、有意に、抗ＰＤ−１媒介性の腫瘍拒絶に対してより反応性であると観察され、組み合わせられた抗ＰＤ−１療法およびＳｅｔｄｂ１阻害の、潜在的な利益を示唆した。
【０１７２】
ＳＥＴＤＢ１−／−マウスにおいて増強された腫瘍拒絶におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の必要性を試験するために、抗ＣＤ８＋抗体の週１回の投与によってそれらを枯渇させた。ＣＤ８＋Ｔ細胞の枯渇は、ＷＴおよびＫＯ動物における腫瘍による負荷を有意に増加させ、コントロールＭＣＡ腫瘍拒絶におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の必要性。さらに、これらのデータは、ＳＥＴＤＢ１−／−表現型をＣＤ８＋Ｔ細胞に結びつける（図５）。
【図面の簡単な説明】
【０１７３】
【図１】ＷＴマウスに、ＷＴ、Ｓｕｖ３９ｈ１−／−またはＳＥＴＤＢ１−／−Ｂ１６ＯＶＡ黒色腫細胞を移植した。腫瘍が触知できる（２ｍｍ  ×  ２ｍｍ）とき、動物を抗ＰＤＬ１療法で処置し、腫瘍体積を週２回測定した。
【図２】ＷＴ  Ｃ５７ＢＬ６マウスに、ＷＴ、Ｓｕｖ３９ｈ１−／−またはＳＥＴＤＢ１−／−Ｂ１６ＯＶＡ黒色腫細胞を移植した。腫瘍が触知できる（２ｍｍ  ×  ２ｍｍ）とき、動物を抗ＰＤ１抗体で週２回治療し、腫瘍体積を週２回測定した。
【図３】樹状細胞におけるＳｅｔｄｂ１の消失は、インターフェロン刺激遺伝子（ＩＳＧ）発現を増強し、腫瘍拒絶を促進する。（ａ）ＩＳＧ、Ｉｆｉ２０４およびＳｋｉｖｌ２の発現、ＳＥＴＤＢ１＋／＋（左側から３つのヒストグラムバー）およびＳＥＴＤＢ１−／−（右側から３つのヒストグラムバー）における、示された時間の間のＬＰＳ処理後の骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣ）。（ｂ）Ｌｏｘ−ｃｒｅシステム（ＣＤ１１ｃ−ｃｒｅ＋  ＳＥＴＤＢ１Ｆｌｏｘ／Ｆｌｏｘ（ＳＥＴＤＢ１−／−）およびＣＤ１１ｃ−ｃｒｅ−ＳＥＴＤＢ１Ｆｌｏｘ／Ｆｌｏｘ（ＳＥＴＤＢ１＋／＋）を使用して、ＳＥＴＤＢ１が樹状細胞において条件付きで除去されているマウスにおけるＭＣＡ腫瘍増殖。
【図４】ＳＥＴＤＢ１−／−樹状細胞を有するマウスは、抗ＰＤ−１媒介性の腫瘍拒絶に対してより反応性を有する。図２などのＳＥＴＤＢ１＋／＋およびＳＥＴＤＢ１−／−マウスに、ＭＣＡ−ＯＶＡ線維肉腫細胞を投与し、腫瘍サイズを週３回測定した。腫瘍が触知可能になったときにＰＤ−１を投与した。
【図５】Ｓｅｔｄｂ１−／−樹状を有するマウスでの増強された腫瘍拒絶には、ＣＤ８＋Ｔ細胞が必要である。ＭＣＡ−ＯＶＡ腫瘍を、ＳＥＴＤＢ１＋／＋およびＳＥＴＤＢ１−／−マウスにおいて週３回測定した。腫瘍が触知可能になるとすぐに抗ＣＤ８抗体を投与した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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