(57)【要約】個体における癌を治療するための方法及び組成物であって、個体に、有効量の、少なくとも１種のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニスト、少なくとも１種の免疫チェックポイント阻害剤、並びに、癌抑制遺伝子及び／又はアデノウイルス死タンパク質を過剰発現するように改変された１種以上のウイルスを含むウイルス組成物を投与することを含む、方法及び組成物を本明細書で提供する。また、個体における癌を治療するための方法及び組成物であって、個体に、有効量の、少なくとも１種の腫瘍崩壊ウイルス組成物、及び少なくとも１種のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニスト、及び少なくとも１種の免疫チェックポイント阻害剤を投与することを含む、方法及び組成物も、本明細書中で提供する。また、上述の作用物質を、他の癌治療法と組み合わせて投与することによる、抗腫瘍有効性の向上方法も、本明細書中で提供する。一般的に免疫療法に耐性があることが知られている、非常に侵襲性の形態の癌において、これらに治療は予期せず、完全な腫瘍の寛解及び治癒性のアウトカムをもたらした。【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における癌の治療方法であって、有効量の、（１）ｐ５３をコードする核酸及び／又はＭＤＡ−７をコードする核酸、並びに、（２）少なくとも１種の選択性ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストを、前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項２】
前記対象にｐ５３をコードする核酸が投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記対象にＭＤＡ７をコードする核酸が投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記対象にｐ５３をコードする核酸、及びＭＤＡ７をコードする核酸が投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記少なくとも１種のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストが、ＩＬ−２／抗ＩＬ−２免疫複合体、ＩＬ−１５／抗ＩＬ−１５免疫複合体、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５受容体α−ＩｇＧ１−Ｆｃ（ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−ＩｇＧ１−Ｆｃ）免疫複合体、ＰＥＧ化ＩＬ−２、ＰＥＧ化ＩＬ−１５、ＩＬ−２ムテイン、ＩＬ−１５ムテイン、及び／又は、ＩＬ−１５受容体のα／ＩｇＧ１  Ｆｃ融合タンパク質に結合するＩＬ−１５変異体からなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項６】
前記ＩＬ−１５がＩＬ−１５Ｒαと予め複合体化され、ＣＤ１２２／ＣＤ１３２に選択的に結合する、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
１、２、３、又は４種類のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストが前記対象に投与される、請求項７に記載の方法。
【請求項８】
前記少なくとも１種のＣＤ１２２アゴニスト及び／又はＣＤ１３２アゴニストがＦ４２Ｋではない、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記癌が転移性である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
ｐ５３をコードする前記核酸、及び／又はＭＤＡ−７をコードする前記核酸が発現カセット内にある、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
ｐ５３及びＭＤＡ−７が単一のプロモーターの制御下にある、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記プロモーターがサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ＳＶ４０、又はＰＧＫである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
発現カセットがウイルスベクター内にある、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記ウイルスベクターがアデノウイルスベクター、レトロウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、小胞性口内炎ウイルスベクター、ポリオーマウイルスベクターである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記ウイルスベクターがアデノウイルスベクター又はワクシニアウイルスベクターである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記ワクシニアウイルスベクターが更に、ＮＩＬ欠損ワクシニアウイルスベクターとして定義される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記アデノウイルスベクターが更に、ＡＤＰの発現が増加したアデノウイルスベクターとして定義される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記ウイルスベクターが、約１０３〜約１０１３のウイルス粒子で投与される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１９】
ｐ５３をコードする前記核酸、及び／又はＭＤＡ−７をコードする前記核酸が非ウイルス性アプローチにより投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記方法が、遺伝子編集によるｐ５３及び／又はＭＤＡ−７機能の回復及び／又は増幅を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
遺伝子編集が、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、又はクラスター化して規則的に間隔を空けて配置された短い回文配列反復（ＣＲＩＳＰＲ）を用いてｐ５３及び／又はＭＤＡ−７を発現することを含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
ｐ５３をコードする前記核酸、及び／又はＭＤＡ−７をコードする前記核酸が、ウイルスベクター及び遺伝子編集を介して投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
ｐ５３をコードする前記核酸、及び／又はＭＤＡ−７をコードする前記核酸が前記対象に、静脈内、動脈内、血管内、胸膜内、腹腔内、気管内、腫瘍内、髄腔内、筋肉内、内視鏡、病巣内、経皮、皮下、局所、定位投与される、又は、直接注射若しくは還流により投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
ｐ５３をコードする前記核酸、及び／又はＭＤＡ−７をコードする前記核酸が前記対象に、腫瘍内投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
前記対象にｐ５３をコードする前記核酸、及び／又はＭＤＡ−７をコードする前記核酸が２回以上投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
前記対象に前記少なくとも１種のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストが２回以上投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項２７】
前記対象にｐ５３をコードする前記核酸、及び／又はＭＤＡ−７をコードする前記核酸が、前記少なくとも１種のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストの前、これと同時、又はこの後に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
ｐ５３をコードする前記核酸、及び／又はＭＤＡ−７をコードする核酸が、リポプレックスに入れて前記対象に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項２９】
前記リポプレックスが、ＤＯＴＡＰと、コレステロール、コレステロール誘導体またはコレステロール混合物の少なくとも１つとを含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
投与が、局部又は局所注射を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３１】
投与が、連続注入、腫瘍内注射、又は静脈内注射を介する、請求項１に記載の方法。
【請求項３２】
前記対象がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項３３】
前記癌が、黒色腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺癌、肝細胞癌、網膜芽細胞腫、星状膠細胞腫、グリア芽腫、白血病、神経芽細胞腫、頭部癌、頸部癌、乳癌、膵臓癌、前立腺癌、腎癌、骨癌、睾丸癌、卵巣癌、中皮腫、子宮頸癌、胃腸癌、泌尿生殖器癌、気道癌、造血癌、筋骨格癌、神経内分泌癌、癌腫、肉腫、中枢神経系癌、末梢神経系癌、リンパ腫、脳癌、結腸癌、又は膀胱癌である、請求項１に記載の方法。
【請求項３４】
少なくとも１種の追加の抗癌治療を投与することを更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３５】
前記少なくとも１種の追加の抗癌治療が、外科療法、化学療法、放射線療法、ホルモン療法、免疫療法、小分子療法、受容体キナーゼ阻害剤療法、抗血管新生療法、サイトカイン療法、凍結療法、放射線切除、又は生物学的療法である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記少なくとも１種の追加の抗癌治療が免疫チェックポイント阻害剤である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
前記少なくとも１種のチェックポイント阻害剤が、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＬＡＧ３、ＢＴＬＡ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲ、又はＡ２ａＲの阻害剤から選択される、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記少なくとも１種のチェックポイント阻害剤が抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、及び／又は抗ＫＩＲ抗体である、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記抗ＰＤ−１抗体がニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピディリズマブ、ＡＭＰ−５１４、ＲＥＧＮ２８１０、ＣＴ−０１１、ＢＭＳ  ９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８ＯＡ、又はＡＭＰ−２２４である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体がデュルバルマブ、アテゾリズマブ、又はアベルマブである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
前記抗ＰＤ−Ｌ２抗体がｒＨＩｇＭ１２Ｂ７である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４２】
ＬＡＧ３の前記阻害剤がＩＭＰ３２１又はＢＭＳ−９８６０１６である、請求項３７に記載の方法。
【請求項４３】
Ａ２ａＲの前記阻害剤がＰＢＦ−５０９である、請求項３７に記載の方法。
【請求項４４】
前記抗ＣＴＬＡ−４抗体がトレメリムマブ又はイピリムマブである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４５】
前記抗ＫＩＲ抗体がリリルマブである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４６】
２種以上のチェックポイント阻害剤が投与される、請求項３６に記載の方法。
【請求項４７】
前記免疫チェックポイント阻害剤が全身投与される、請求項３６に記載の方法。
【請求項４８】
前記少なくとも１種の追加の抗癌治療がヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤である、請求項３４に記載の方法。
【請求項４９】
前記ＨＤＡＣ阻害剤がトラクチノスタットである、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
細胞外マトリックス分解タンパク質を提供することを更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５１】
前記細胞外マトリックス分解タンパク質がリラキシン、ヒアルロニダーゼ、又はデコリンである、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記生物学的療法がモノクローナル抗体、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、又は遺伝子治療法である、請求項３４に記載の方法。
【請求項５３】
前記少なくとも１種の追加の抗癌治療が腫瘍崩壊ウイルスである、請求項３４に記載の方法。
【請求項５４】
前記腫瘍崩壊ウイルスが、ｐ５３、ＭＤＡ−７、ＩＬ−１２、少なくとも１種の熱ショックタンパク質、ＴＧＦ−β阻害剤、及び／又はＩＬ−１０阻害剤を発現するように改変されている、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記腫瘍崩壊ウイルスが、一本鎖若しくは二本鎖ＤＮＡウイルス、ＲＮＡウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、ワクシニアウイルス、水疱性口内炎ウイルス、ポリオウイルス、ニューカッスル病ウイルス、エプスタイン・バーウイルス、インフルエンザウイルス、レオウイルス、粘液腫ウイルス、マラバウイルス、ラブドウイルス、エナデノチュシレブ、コクサッキーウイルス、又はＥ１ｂ欠損アデノウイルスである、請求項５３に記載の方法。
【請求項５６】
前記腫瘍崩壊ウイルスが単純ヘルペスウイルスである、請求項５３に記載の方法。
【請求項５７】
前記腫瘍崩壊ウイルスがサイトカインを発現するように改変されている、請求項５３に記載の方法。
【請求項５８】
前記サイトカインが顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）又はＩＬ１２である、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記腫瘍崩壊ウイルスが更に、タリモジーン・ラハーパレプベック（Ｔ−ＶＥＣ）として定義される、請求項５３に記載の方法。
【請求項６０】
前記少なくとも１種の追加の抗癌治療がプロテインキナーゼ又は成長因子シグナル伝達経路阻害剤である、請求項３４に記載の方法。
【請求項６１】
前記プロテインキナーゼ、又は成長因子シグナル伝達経路阻害剤が、アファチニブ、アキシチニブ、ベバシズマブ、ボスチニブ、セツキシマブ、クリゾチニブ、ダサチニブ、エルロチニブ、フォスタマチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レンバチニブ、ムブリチニブ、ニロチニブ、パニツムマブ、パゾパニブ、ペガプタニブ、ラニビズマブ、ルキソリチニブ、サラカチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、トラスツズマブ、バンデタニブ、ＡＰ２３４５１、ベムラフェニブ、ＣＡＬ１０１、ＰＸ−８６６、ＬＹ２９４００２、ラパマイシン、テムシロリムス、エベロリムス、リダフォロリムス、アルボシジブ、ゲニステイン、セルメチニブ、ＡＺＤ−６２４４、バタラニブ、Ｐ１４４６Ａ−０５、ＡＧ−０２４３２２、ＺＤ１８３９、Ｐ２７６−００、又はＧＷ５７２０１６である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記プロテインキナーゼ阻害剤がＰＩ３Ｋ阻害剤である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】
前記ＰＩ３Ｋ阻害剤がＰＩ３Ｋδ阻害剤である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記免疫療法がサイトカインを含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項６５】
前記サイトカインが、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）又はＩＬ１２である、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記サイトカインがインターロイキン及び／又はインターフェロンである、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記インターロイキンがＩＬ−２である、請求項６５に記載の方法。
【請求項６８】
前記インターフェロンがＩＦＮαである、請求項６５に記載の方法。
【請求項６９】
前記免疫療法が共刺激受容体アゴニスト、先天性免疫細胞の刺激因子、又は先天性免疫の活性化因子を含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項７０】
前記共刺激受容体アゴニストが、抗ＯＸ４０抗体、抗ＧＩＴＲ抗体、抗ＣＤ１３７抗体、抗ＣＤ４０抗体、又は抗ＣＤ２７抗体である、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
免疫細胞の前記刺激因子が、細胞傷害性阻害受容体の阻害剤、又は、免疫刺激トル様受容体（ＴＬＲ）のアゴニストである、請求項６９に記載の方法。
【請求項７２】
前記細胞傷害性阻害受容体が、ＮＫＧ２Ａ／ＣＤ９４又はＣＤ９６  ＴＡＣＴＩＬＥの阻害剤である、請求項６９に記載の方法。
【請求項７３】
前記ＴＬＲアゴニストがＴＬＲ７アゴニスト、ＴＬＲ８アゴニスト、又はＴＬＲ９アゴニストである、請求項７１に記載の方法。
【請求項７４】
前記免疫療法が、ＰＤ−Ｌ１阻害剤、４−１ＢＢアゴニスト、及びＯＸ４０アゴニストの組み合わせを含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項７５】
前記免疫療法が、インターフェロン遺伝子刺激因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニストを含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項７６】
先天性免疫の前記活性化因子が、ＩＤＯ阻害剤、ＴＧＦβ阻害剤、又はＩＬ−１０阻害剤である、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記化学療法がＤＮＡ損傷剤を含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項７８】
前記ＤＮＡ損傷剤が、γ照射、Ｘ線、紫外線照射、マイクロ波、電子放出、アドリアマイシン、５−フルオロウラシル（５ＦＵ）、カペシタビン、エトポシド（ＶＰ−１６）、カンプトテシン、アクチノマイシン−Ｄ、マイトマイシンＣ、シスプラチン（ＣＤＤＰ）、又は過酸化水素である、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
対象における癌の治療方法であって、有効量の少なくとも１種の腫瘍崩壊ウイルス及び少なくとも１種のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストを、前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項８０】
前記少なくとも一種の腫瘍崩壊ウイルスが、ｐ５３、ＭＤＡ−７、サイトカイン、及び／又は免疫刺激遺伝子を発現するように改変されている、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記サイトカインがＧＭ−ＣＳＦ又はＩＬ−１２である、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
前記免疫刺激遺伝子がＴＧＦβの阻害剤、ＩＬ−１０の阻害剤、又は熱ショックタンパク質である、請求項８０に記載の方法。
【請求項８３】
前記少なくとも１種の腫瘍崩壊ウイルスが、一本鎖又は二本鎖ＤＮＡウイルス、ＲＮＡウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、ワクシニアウイルス、水疱性口内炎ウイルス、ポリオウイルス、ニューカッスル病ウイルス、エプスタイン・バーウイルス、インフルエンザウイルス、レオウイルス、粘液腫ウイルス、マラバウイルス、ラブドウイルス、エナデノチュシレブ、及びコクサッキーウイルスからなる群から選択される、請求項７９に記載の方法。
【請求項８４】
前記少なくとも１種の腫瘍崩壊ウイルスが、Ａｄ５−ｙＣＤ／ｍｕｔＴＫＳＲ３９ｒｅｐ−ｈＩＬ１２、ＣＡＶＡＴＡＫ（商標）、ＣＧ００７０、ＤＮＸ−２４０１、Ｇ２０７、ＨＦ１０、ＩＭＬＹＧＩＣ（商標）、ＪＸ−５９４、ＭＧ１−ＭＡ３、ＭＶ−ＮＩＳ、ＯＢＰ−３０１、ＲＥＯＬＹＳＩＮ（登録商標）、Ｔｏｃａ  ５１１、Ｏｎｃｏｒｉｎｅ（Ｈ１０１）、Ｈ１０２、Ｈ１０３、ＲＩＧＶＩＲ、アデノウイルス死タンパク質（ＡＤＰ）を過剰発現するアデノウイルス、Ｔ−ＶＥＣ、Ｎ１Ｌ欠損ワクシニアウイルス、Ｅ１ｂ欠損アデノウイルス、α−フェトプロテイン（ＡＦＰ）プロモーターＡｄ  Ｅ１ａ遺伝子調節アデノウイルス、修飾ＴＥＲＴプロモーター腫瘍崩壊アデノウイルス、ＨＲＥ−Ｅ２Ｆ−ＴＥＲＴハイブリッドプロモーター腫瘍崩壊アデノウイルス、及び／又は、Ｐｅａ３結合部位Ｅ１ａ調節配列欠失、及びＥｌｂ−１９Ｋクローン挿入部位を有するアデノウイルスである、請求項７９に記載の方法。
【請求項８５】
ＡＤＰを過剰発現する前記アデノウイルスがＶｉＲｘ００７である、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
前記Ｎ１Ｌ欠損ワクシニアウイルスがＩＬ−１２を発現するように改変されている、請求項８４に記載の方法。
【請求項８７】
前記少なくとも１種のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストが、ＩＬ−２／抗ＩＬ−２免疫複合体、ＩＬ−１５／抗ＩＬ−１５免疫複合体、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５受容体α−ＩｇＧ１−Ｆｃ（ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−ＩｇＧ１−Ｆｃ）免疫複合体、ＰＥＧ化ＩＬ−２、ＰＥＧ化ＩＬ−１５、ＩＬ−２ムテイン、ＩＬ−１５ムテイン、及び／又は、ＩＬ−１５受容体のα／ＩｇＧ１  Ｆｃ融合タンパク質に結合するＩＬ−１５変異体からなる群から選択される、請求項７９に記載の方法。
【請求項８８】
１、２、３、又は４種類のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストが前記対象に投与される、請求項７９に記載の方法。
【請求項８９】
前記少なくとも１種のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストがＦ４２Ｋではない、請求項７９に記載の方法。
【請求項９０】
前記対象に前記少なくとも１種のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストが２回以上投与される、請求項７９に記載の方法。
【請求項９１】
前記対象に前記腫瘍崩壊ウイルスが、前記少なくとも１種のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストの前、これと同時、又はこの後に投与される、請求項７９に記載の方法。
【請求項９２】
投与が、局部又は局所注射を含む、請求項７９に記載の方法。
【請求項９３】
投与が、連続注入、腫瘍内注射、又は静脈内注射を介する、請求項７９に記載の方法。
【請求項９４】
投与が腫瘍内注射を介する、請求項７９に記載の方法。
【請求項９５】
前記対象がヒトである、請求項７９に記載の方法。
【請求項９６】
前記癌が、黒色腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺癌、肝細胞癌、網膜芽細胞腫、星状膠細胞腫、グリア芽腫、白血病、神経芽細胞腫、頭部癌、頸部癌、乳癌、膵臓癌、前立腺癌、腎癌、骨癌、睾丸癌、卵巣癌、中皮腫、子宮頸癌、胃腸癌、泌尿生殖器癌、気道癌、造血癌、筋骨格癌、神経内分泌癌、癌腫、肉腫、中枢神経系癌、末梢神経系癌、リンパ腫、脳癌、結腸癌、又は膀胱癌である、請求項７９に記載の方法。
【請求項９７】
少なくとも１種の追加の抗癌治療を投与することを更に含む、請求項７９に記載の方法。
【請求項９８】
前記少なくとも１種の追加の抗癌治療が、外科療法、化学療法、放射線療法、ホルモン療法、免疫療法、小分子療法、受容体キナーゼ阻害剤療法、抗血管新生療法、サイトカイン療法、凍結療法、又は生物学的療法である、請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
前記少なくとも１種の追加の抗癌治療が樹状細胞ワクチンである、請求項９７に記載の方法。
【請求項１００】
前記樹状細胞ワクチンが、腫瘍関連抗原としてｐ５３を発現するように改変されている、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０１】
前記少なくとも１種の追加の抗癌治療が免疫チェックポイント阻害剤である、請求項９７に記載の方法。
【請求項１０２】
前記少なくとも１種のチェックポイント阻害剤が、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＬＡＧ３、ＢＴＬＡ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲ、又はＡ２ａＲの阻害剤から選択される、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
前記少なくとも１種のチェックポイント阻害剤が抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、及び／又は抗ＫＩＲ抗体である、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
前記抗ＰＤ−１抗体がニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピディリズマブ、ＡＭＰ−５１４、ＲＥＧＮ２８１０、ＣＴ−０１１、ＢＭＳ  ９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８ＯＡ、又はＡＭＰ−２２４である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０５】
前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体がデュルバルマブ、アテゾリズマブ、又はアベルマブである、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０６】
前記抗ＰＤ−Ｌ２抗体がｒＨＩｇＭ１２Ｂ７である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０７】
ＬＡＧ３の前記阻害剤がＩＭＰ３２１又はＢＭＳ−９８６０１６である、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０８】
Ａ２ａＲの前記阻害剤がＰＢＦ−５０９である、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０９】
前記抗ＣＴＬＡ−４抗体がトレメリムマブ又はイピリムマブである、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１１０】
前記抗ＫＩＲ抗体がリリルマブである、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１１１】
２種以上のチェックポイント阻害剤が投与される、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１１２】
前記免疫チェックポイント阻害剤が全身投与される、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１１３】
前記少なくとも１種の追加の抗癌治療がヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤である、請求項９７に記載の方法。
【請求項１１４】
前記ＨＤＡＣ阻害剤がトラクチノスタットである、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１１５】
細胞外マトリックス分解タンパク質を提供することを更に含む、請求項７９に記載の方法。
【請求項１１６】
前記細胞外マトリックス分解タンパク質がリラキシン、ヒアルロニダーゼ、又はデコリンである、請求項１１５に記載の方法。
【請求項１１７】
（ａ）ｐ４３をコードする核酸及び／又はＭＤＡ−７をコードする核酸；並びに（ｂ）少なくとも１種のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストを含む、医薬組成物。
【請求項１１８】
（ａ）腫瘍崩壊ウイルス；及び（ｂ）少なくとも１種のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストを含む、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１８年３月１９日に出願された、米国仮特許出願番号第６２／６４５，０２２号、及び２０１９年２月１１日に出願された同第６２／８０３，８８７号の利益を主張し、それら両方全体が、参照により本明細書に組み込まれている。
【０００２】
背景技術
１．分野
本発明は概して、生物学及び医学の分野に関する。より具体的には、本発明は、癌抑制機能の回復又は増幅を、選択性ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストと組み合わせる方法及び組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
２．関連技術の説明
悪性細胞はしばしば、化学療法及び照射により誘導されるプログラム細胞死、即ちアポトーシスなどのＤＮＡ損傷剤に対して耐性を有する。このような耐性は一般的に、特定の癌遺伝子の異常発現、又は、アポトーシスの制御における、癌抑制遺伝子の発現喪失の結果である。欠陥のある癌抑制遺伝子を置き換え、かつ、アポトーシス誘発遺伝子を発現させる方法は、腫瘍細胞中での、この形態の細胞死の回復に見込みを与える。
【０００４】
恐らく、最も研究された癌抑制遺伝子はｐ５３であり、この遺伝子は、細胞周期調節及びアポトーシスの制御を含むいくつかのプロセスにおいて、重要な役割を果たす（Ｈａｒｔｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４）。ｐ５３変異は腫瘍細胞では頻繁なものであり、癌の進行、及び、化学療法と放射線療法の両方への耐性の発達と関連している（Ｓｐｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）。野生型（ｗｔ）ｐ５３機能の回復により、癌細胞でのアポトーシスを誘導することができることが、インビトロとインビボの両方の前臨床試験において示されている。レトロウイルス型又はアデノウイルス型ｗｔ−ｐ５３構築物の動物モデルへの腫瘍内注射により、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、白血病、グリア芽腫、並びに乳癌、肝癌、卵巣癌、結腸癌、及び腎臓癌を含む、種々の異なる腫瘍組織学に関する腫瘍後退がもたらされる（Ｆｕｊｉｗａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４）。有力な前臨床データ及び臨床データにより、卵巣癌を有する患者の第一線の治療のための、ｐ５３遺伝子治療法治験の、国際無作為化フェーズＩＩ／ＩＩＩ治験が開始された（Ｂｕｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）。しかし、十分な治療効果が見られなかったために、最初の暫定分析の後、この研究は閉じられた（Ｚｅｉｍｅｔ  ａｎｄ  Ｍａｒｔｈ，２００３）。
【０００５】
したがって、癌抑制遺伝子治療法を用いる著しい進展にもかかわらず、非特異的発現、低効率の送達及び生物学的安全性を含む、いくつかの障壁が、クリニックにおける成功を依然として制限している。更に、遺伝子の異常サイレンシングをもたらす、癌及びエピジェネティック的調節異常における、複数の遺伝子変化が存在する。したがって、単一の遺伝子治療は、癌治療のための好適な方法とはなり得ない。したがって、遺伝子治療法の向上した抗腫瘍活性及び効率的な送達のための、他の抗癌剤と組み合わせた複数の癌抑制因子を標的化する方法が、必要とされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｈａｒｔｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６６：１８２１−１８２８，１９９４．
【非特許文献２】Ｓｐｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２：１６６５−１６７１，１９９６．
【非特許文献３】Ｆｕｊｉｗａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ，８６：１４５８−１４６２，１９９４．
【非特許文献４】Ｂｕｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，９：５５３−５６６，２００２．
【非特許文献５】Ｚｅｉｍｅｔ  ａｎｄ  Ｍａｒｔｈ，Ｔｈｅ  Ｌａｎｃｅｒ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，７：４１５−４２２，２００３．
【発明の概要】
【０００７】
一実施形態において、本開示は、対象における、癌治療のための方法及び組成物であって、有効量の、（１）ｐ５３をコードする核酸、及び／又はＭＤＡ−７をコードする核酸と、（２）少なくとも１種のＣＤ１２２アゴニスト及びＣＤ１３２アゴニスト（例えば、選択性ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニスト）とを、対象に投与することを含む、方法及び組成物を提供する。
【０００８】
いくつかの態様では、対象に、ｐ５３をコードする核酸が投与される。特定の態様において、対象に、ＭＤＡ７をコードする核酸が投与される。いくつかの態様では、対象に、ｐ５３をコードする核酸及びＭＤＡ７をコードする核酸が投与される。
【０００９】
特定の態様において、ｐ５３をコードする核酸、及び／若しくはＭＤＡ−７をコードする核酸、並びに／又はＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストは、癌抑制因子機能を回復又は増幅させるのに有効な量で送達される。特定の態様において、ｐ５３をコードする核酸、及び／又はＭＤＡ−７をコードする核酸は、１つ以上の腫瘍部位に送達される。特定の態様において、２つ以上のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストが投与される。特定の態様において、対象はヒトである。
【００１０】
特定の態様において、ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストは、ＣＤ１２２／ＣＤ１３２受容体複合体に選択的に結合し、ＣＤ１２２／ＣＤ１３２受容体複合体への親和結合と比較して、ＣＤ２５、又はＩＬ１５α受容体に対して、低い親和結合を有する。特定の態様において、１種以上のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストは、ＩＬ−２／抗ＩＬ−２免疫複合体、ＩＬ−１５／抗ＩＬ−１５免疫複合体、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５受容体α−ＩｇＧ１−Ｆｃ（ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−ＩｇＧ１−Ｆｃ）免疫複合体、ＰＥＧ化ＩＬ−２、ＰＥＧ化ＩＬ−１５、ＩＬ−２ムテイン、及び／又はＩＬ−１５ムテインである。ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストは、ＡＬＴ−８０３などの、ＩＬ−１５受容体α／ＩｇＧ１  Ｆｃ融合タンパク質に結合したＩＬ−１５変異体（例えば、ＩＬ−１５Ｎ７２Ｄ）であることができる。特定の態様において、ＩＬ−１５は、ＩＬ−１５Ｒαと予め複合体化され、ＣＤ１２２／ＣＤ１３２に優先的に結合する。特定の態様において、ＩＬ−２受容体アゴニストは、Ｆ４２Ｋではない。
いくつかの態様では、ｐ５３をコードする核酸、及び／又はＭＤＡ−７をコードする核酸は、ウイルス法、及び／又は非ウイルス法により送達される。特定の態様において、ｐ５３をコードする核酸、及び／又はＭＤＡ−７をコードする核酸は、ウイルスベクターなどの発現カセット内に送達される。いくつかの態様では、ｐ５３及びＭＤＡ−７は、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ＳＶ４０、又はＰＧＫなどの１つのプロモーターの制御下にある。特定の態様において、ウイルスベクターは、アデノウイルスベクター（例えば、ＡＤＰを過剰発現するアデノウイルスベクター）、レトロウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター（例えば、ＮＩＬ欠損ワクシニアウイルスベクター）、アデノ随伴ウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、小胞性口内炎ウイルスベクター、ポリオーマウイルスベクターである。
【００１１】
いくつかの態様では、ｐ５３をコードする核酸、及び／又はＭＤＡ−７をコードする核酸は、癌抑制遺伝子の発現を回復又は増幅させるためなどの、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、又は、クラスター化して規則的に間隔を空けて配置された短い回文配列反復（ＣＲＩＳＰＲ）などの、遺伝子編集法により送達される。ウイルス及び非遺伝子導入送達及び発現法、並びに／又は、遺伝子編集法の組み合わせが、本開示にて考慮される。特定の態様において、アデノウイルスｐ５３（Ａｄ−ｐ５３）注射用量（ｍＬ）は、１ｃｍ３の腫瘍体積当たり、少なくとも、１×１０１１のウイルス粒子（ｖｐ）のＡｄ−ｐ５３用量を受ける各腫瘍損傷をもたらす。いくつかの態様では、ｐ５３をコードする核酸、及び／又はＭＤＡ−７をコードする核酸は、リポプレックスに入れて対象に投与される。いくつかの態様では、リポプレックスは、ＤＯＴＡＰと、コレステロール、コレステロール誘導体及びコレステロール混合物の少なくとも１つとを含む。
【００１２】
いくつかの態様では、ｐ５３をコードする核酸、及び／又はＭＤＡ−７をコードする核酸は対象に、静脈内、動脈内、血管内、胸膜内、腹腔内、気管内、腫瘍内、髄腔内、筋肉内、内視鏡、病巣内、経皮、皮下、局所、定位投与される、又は、直接注射若しくは還流により投与される。特定の態様において、ｐ５３をコードする核酸、及び／又はＭＤＡ−７をコードする核酸は対象に、腫瘍内投与される。いくつかの態様では、投与は、局部又は局所注射を含む。いくつかの態様では、投与は、連続注入、腫瘍内注射、又は静脈内注射を介する。
【００１３】
いくつかの態様では、対象には、ｐ５３をコードする核酸、及び／又はＭＤＡ−７をコードする核酸が２回以上投与される。特定の態様において、対象には、少なくとも１種のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストが２回以上投与される。いくつかの態様では、対象には、ｐ５３をコードする核酸、及び／又はＭＤＡ−７をコードする核酸が、少なくとも１種のＣＤ１２２アゴニスト及びＣＤ１３２アゴニストの前、これらと同時、又はこれらの後に投与される。
【００１４】
いくつかの態様では、癌は、黒色腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺癌、肝細胞癌、網膜芽細胞腫、星状膠細胞腫、グリア芽腫、白血病、神経芽細胞腫、頭部癌、頸部癌、乳癌、膵臓癌、前立腺癌、腎癌、骨癌、睾丸癌、卵巣癌、中皮腫、子宮頸癌、胃腸癌、泌尿生殖器癌、気道癌、造血癌、筋骨格癌、神経内分泌癌、癌腫、肉腫、中枢神経系癌、末梢神経系癌、リンパ腫、脳癌、結腸癌、又は膀胱癌である。特定の態様において、癌は転移性である。
【００１５】
いくつかの態様では、方法は、少なくとも１種の追加の抗癌治療を投与することを更に含む。特定の態様において、少なくとも１種の追加の抗癌治療は、外科療法、化学療法、放射線療法、ホルモン療法、免疫療法、小分子療法、受容体キナーゼ阻害剤療法、抗血管新生療法、サイトカイン療法、凍結療法、放射線切除、又は生物学的療法である。いくつかの態様では、生物学的療法は、モノクローナル抗体、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、遺伝子編集、細胞療法、又は遺伝子治療である。
【００１６】
いくつかの態様では、少なくとも１種の追加の抗癌治療は、免疫チェックポイント阻害剤である。特定の態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＬＡＧ−３、ＢＴＬＡ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲ、又はＡ２ａＲのものである。いくつかの態様では少なくとも１種の免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＣＴＬＡ−４抗体である。いくつかの態様では、抗ＣＴＬＡ−４抗体はトレメリムマブ又はイピリムマブである。特定の態様において、少なくとも１種の免疫チェックポイント阻害剤は、抗キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）抗体である。いくつかの実施形態において、抗ＫＩＲ抗体はリリルマブである。いくつかの態様では、ＰＤ−Ｌ１の阻害剤はデュルバルマブ、アテゾリズマブ、又はアベルマブである。いくつかの態様では、ＰＤ−Ｌ２の阻害剤はｒＨＩｇＭ１２Ｂ７である。いくつかの態様では、ＬＡＧ３阻害剤は、ＩＭＰ３２１又はＢＭＳ−９８６０１６である。いくつかの態様では、Ａ２ａＲの阻害剤はＰＢＦ−５０９である。いくつかの態様では、少なくとも１種の免疫チェックポイント阻害剤は、ヒトプログラム細胞死１（ＰＤ−１）軸結合アンタゴニストである。特定の態様において、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤＬ１結合アンタゴニスト、及びＰＤＬ２結合アンタゴニストからなる群から選択される。いくつかの態様では、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストはＰＤ−１結合アンタゴニストである。特定の態様において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１の、ＰＤＬ１及び／又はＰＤＬ２への結合を阻害する。特に、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストはニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピディリズマブ、ＡＭＰ−５１４、ＲＥＧＮ２８１０、ＣＴ−０１１、ＢＭＳ  ９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８ＯＡ、又はＡＭＰ−２２４である。
【００１７】
いくつかの態様では、少なくとも１種の追加の治療法は、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤である。特定の態様において、ＨＤＡＣ阻害剤はトラクチノスタット（ＣＨＲ−３９９６又はＶＲｘ−３９９６）である。特定の態様において、方法は、リラキシン、ヒアルロニダーゼ、又はデコリンなどの、細胞外マトリックス分解タンパク質を提供することを更に含む。
【００１８】
いくつかの態様では、少なくとも１種の追加の抗癌治療は腫瘍崩壊ウイルスである。いくつかの態様では、腫瘍崩壊ウイルスは、ｐ５３、ＭＤＡ−７、ＩＬ−１２、ＴＧＦ−β阻害剤、及び／又はＩＬ−１０阻害剤を発現するように改変されている。特定の態様において、腫瘍崩壊ウイルスは、一本鎖若しくは二本鎖ＤＮＡウイルス、ＲＮＡウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、ワクシニアウイルス、水疱性口内炎ウイルス、ポリオウイルス、ニューカッスル病ウイルス、エプスタイン・バーウイルス、インフルエンザウイルス、レオウイルス、粘液腫ウイルス、マラバウイルス、ラブドウイルス、エナデノチュシレブ、又はコクサッキーウイルスである。いくつかの態様では、腫瘍崩壊ウイルスは、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）又はＩＬ−１２を発現するように改変されている。いくつかの態様では、腫瘍崩壊ウイルスは更に、タリモジーン・ラハーパレプベック（Ｔ−ＶＥＣ）として定義される。いくつかの態様では、腫瘍崩壊アデノウイルスベクターは、Ｅ１ｂ欠損アデノウイルス、並びに、Ａｄ  Ｅ１ａ遺伝子が、全て、修飾されて治療用遺伝子を発現することができる、α−フェトプロテイン（ＡＦＰ）プロモーター、修飾ＴＥＲＴプロモーター腫瘍崩壊アデノウイルス、ＨＲＥ−Ｅ２Ｆ−ＴＥＲＴハイブリッドプロモーター腫瘍崩壊アデノウイルス、及び／又は、少なくとも１つのＰｅａ３結合部位、又はその機能性タンパク質が、Ｅｌｂ−１９Ｋクローン挿入部位により欠損されている、修飾Ｅ１ａ調節配列を有するアデノウイルスにより駆動されるアデノウイルスに由来する。
【００１９】
特定の態様において、少なくとも１種の追加の抗癌治療は、プロテインキナーゼ、又は成長因子シグナル伝達経路阻害剤である。特定の態様において、プロテインキナーゼ、又は成長因子シグナル伝達経路阻害剤は、アファチニブ、アキシチニブ、ベバシズマブ、ボスチニブ、セツキシマブ、クリゾチニブ、ダサチニブ、エルロチニブ、フォスタマチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レンバチニブ、ムブリチニブ、ニロチニブ、パニツムマブ、パゾパニブ、ペガプタニブ、ラニビズマブ、ルキソリチニブ、サラカチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、トラスツズマブ、バンデタニブ、ＡＰ２３４５１、ベムラフェニブ、ＣＡＬ１０１、ＰＸ−８６６、ＬＹ２９４００２、ラパマイシン、テムシロリムス、エベロリムス、リダフォロリムス、アルボシジブ、ゲニステイン、セルメチニブ、ＡＺＤ−６２４４、バタラニブ、Ｐ１４４６Ａ−０５、ＡＧ−０２４３２２、ＺＤ１８３９、Ｐ２７６−００、又はＧＷ５７２０１６である。いくつかの態様では、プロテインキナーゼ阻害剤は、ＰＩ３Ｋδ阻害剤などのＰＩ３Ｋ阻害剤である。
【００２０】
いくつかの態様では、免疫療法は、ＧＭ−ＣＳＦなどのサイトカイン、インターロイキン（例えばＩＬ−２）、及び／又はインターフェロン（例えばＩＦＮα）若しくは熱ショックタンパク質を含む。特定の態様において、免疫療法は、共刺激受容体アゴニスト、先天性免疫細胞の刺激因子、又は先天性免疫の活性化因子を含む。特定の態様において、共刺激受容体アゴニストは、抗ＯＸ４０抗体、抗ＧＩＴＲ抗体、抗ＣＤ１３７抗体、抗ＣＤ４０抗体、又は抗ＣＤ２７抗体である。いくつかの態様では、免疫細胞の刺激因子は、細胞傷害性阻害受容体の阻害剤、又は、免疫刺激トル様受容体（ＴＬＲ）のアゴニストである。いくつかの態様では、細胞傷害性阻害受容体は、ＮＫＧ２Ａ／ＣＤ９４又はＣＤ９６  ＴＡＣＴＩＬＥの阻害剤である。いくつかの態様では、ＴＬＲアゴニストはＴＬＲ７アゴニスト、ＴＬＲ８アゴニスト、又はＴＬＲ９アゴニストである。いくつかの態様では、免疫療法は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤、４−１ＢＢアゴニスト、及びＯＸ４０アゴニストの組み合わせを含む。特定の態様において、免疫療法は、インターフェロン遺伝子刺激因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニストを含む。いくつかの態様では、先天性免疫の活性化因子は、ＩＤＯ阻害剤、ＴＧＦβ阻害剤、又はＩＬ−１０阻害剤である。いくつかの態様では、これらの免疫療法がタンパク質であるとき、タンパク質は、複製可能及び／又は複製不可能なウイルス及び／又は非ウイルス遺伝子療法により投与される、ポリペプチド又はそれらに対応する核酸として投与されることができる。いくつかの態様では、化学療法は、γ照射、Ｘ線、紫外線照射、マイクロ波、電子放出、アドリアマイシン、５−フルオロウラシル（５ＦＵ）、カペシタビン、エトポシド（ＶＰ−１６）、カンプトテシン、アクチノマイシン−Ｄ、マイトマイシンＣ、シスプラチン（ＣＤＤＰ）、又は過酸化水素などの、ＤＮＡ損傷剤を含む。
【００２１】
別の実施形態において、対象における癌の治療方法であって、有効量の、少なくとも１種の腫瘍崩壊ウイルス、及び少なくとも１種のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストを対象に投与することと、少なくとも１種の免疫チェックポイント阻害剤と、を含む、方法を提供する。いくつかの態様では、少なくとも１種の腫瘍崩壊ウイルスは、ＶｉｒＲｘ００７などのアデノウイルス死タンパク質（ＡＤＰ）を過剰発現するように改変されたアデノウイルスである。いくつかの態様では、少なくとも１種の腫瘍崩壊ウイルスを遺伝子組み換えして、ｐ５３、ＭＤＡ−７、サイトカイン、及び／又は免疫刺激遺伝子を発現する。特定の態様において、サイトカインはＧＭ−ＣＳＦ又はＩＬ−１２である。いくつかの態様では、免疫刺激遺伝子は、ＴＧＦβ又はＩＬ−１０の阻害剤である。
【００２２】
いくつかの態様では、少なくとも１種の腫瘍崩壊ウイルスは、一本鎖又は二本鎖ＤＮＡウイルス、ＲＮＡウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、ワクシニアウイルス、水疱性口内炎ウイルス、ポリオウイルス、ニューカッスル病ウイルス、エプスタイン・バーウイルス、インフルエンザウイルス、レオウイルス、粘液腫ウイルス、マラバウイルス、ラブドウイルス、エナデノチュシレブ、及びコクサッキーウイルスからなる群から選択される。
【００２３】
いくつかの態様では、上記実施形態にて用いられるウイルスは、複製可能及び／又は複製不能ウイルスを含む。特定の態様において、複製可能又は複製不可能なウイルスは、一本鎖若しくは二本鎖ＤＮＡウイルス、ＲＮＡウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、ワクシニアウイルス、水疱性口内炎ウイルス、ポリオウイルス、ニューカッスル病ウイルス、粘液腫ウイルス、エプスタイン・バーウイルス、インフルエンザウイルス、レオウイルス、マラバウイルス、ラブドウイルス、エナデノチュシレブ、又はコクサッキーウイルスである。特定の態様において、１種以上のウイルスが利用される。特定の態様において、ウイルス組成物は、複製可能及び複製不可能なウイルスの組み合わせを含む。
【００２４】
更なる態様において、上記実施形態における複製可能なウイルスは、１種以上の腫瘍崩壊ウイルスであることができる。これらの腫瘍崩壊ウイルスを組み換えて、ｐ５３及び／若しくはＩＬ２４を発現させる、並びに／又は、ｐ５３及び／若しくはＩＬ２４以外の遺伝子、例えばサイトカイン（例えばＩＬ１２）及び／若しくは、別の免疫刺激遺伝子（例えば、ＴＧＦ−β阻害剤、若しくはＩＬ１０阻害剤、若しくは熱ショックタンパク質）を発現させることができる。特定の態様において、腫瘍崩壊ウイルスは、ｐ５３及び／又はＩＬ２４癌抑制因子治療法の代わりに、又はこれらに加えて、使用することができる。腫瘍崩壊ウイルスの例としては、一本鎖若しくは二本鎖ＤＮＡウイルス、ＲＮＡウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、ワクシニアウイルス、水疱性口内炎ウイルス、ポリオウイルス、ニューカッスル病ウイルス、エプスタイン・バーウイルス、インフルエンザウイルス及びレオウイルス、粘液腫ウイルス、マラバウイルス、ラブドウイルス、エナデノチュシレブ、又はコクサッキーウイルスが挙げられる。例示的な腫瘍崩壊ウイルスとしては、Ａｄ５−ｙＣＤ／ｍｕｔＴＫＳＲ３９ｒｅｐ−ｈＩＬ１２、Ｃａｖａｔａｋ（商標）、ＣＧ００７０、ＤＮＸ−２４０１、Ｇ２０７、ＨＦ１０、ＩＭＬＹＧＩＣ（商標）、ＪＸ−５９４、ＭＧ１−ＭＡ３、ＭＶ−ＮＩＳ、ＯＢＰ−３０１、Ｒｅｏｌｙｓｉｎ（登録商標）、Ｔｏｃａ  ５１１、Ｏｎｃｏｒｉｎｅ（Ｈ１０１）、Ｏｎｙｘ−０１５、Ｈ１０２、Ｈ１０３、ＲＩＧＶＩＲ、アデノウイルス死タンパク質（ＡＤＰ）を過剰発現するアデノウイルス、例えば、ＶｉｒＲｘ００７、Ｎ１Ｌ欠損ワクシニアウイルス、又はＩＬ１２を発現するＮ１Ｌ欠損ワクシニアウイルスが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２５】
いくつかの態様では、ウイルス及び非ウイルス核酸並びに遺伝子編集組成物は、局所及び／又は全身効果を誘発する。いくつかの態様では、これらの組成物は、局所及び全身効果を誘発する。
【００２６】
特定の態様において、治療された対象は哺乳類又はヒトである。特定の態様において、治療を提供して、悪性前、又は悪性増殖過剰状態の予防又は治療をする。予防の特定の態様において、対象は健常な対象である。予防の別の態様において、対象は、例えば白板症又は形成異常損傷などの悪性前損傷を含む。予防の別の態様において、対象は、例えば、喫煙者であることにより、又は、癌の家族歴を有することなどにより、癌の進行リスクがある。特定の態様において、治療は、初期又は再発増殖過剰状態に対するものである。いくつかの態様では、治療を投与して、別の治療法への耐性を増強する、又は逆転させる。特定の態様において、治療への耐性は、増殖過剰状態患者の特定の集団に関して、病歴により知られる。特定の態様において、治療への耐性は、個々の増殖過剰状態患者にて観察される。
【００２７】
上記実施形態の特定の態様において、方法は、細胞外マトリックス分解タンパク質を提供することを更に含む。いくつかの態様では、方法は、細胞外マトリックス分解タンパク質をコードする発現カセットを投与することを含む。いくつかの実施形態では、細胞外マトリックス分解タンパク質はリラキシン、ヒアルロニダーゼ、又はデコリンである。特定の態様において、細胞外マトリックス分解タンパク質はリラキシンである。いくつかの態様では、発現カセットはウイルスベクター内にある。特定の態様において、ウイルスベクターは、アデノウイルスベクター、レトロウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、小胞性口内炎ウイルスベクター、若しくはポリオーマウイルスベクター、又は別の種類の、ウイルス若しくは非遺伝子治療ベクターである。
【００２８】
いくつかの態様では、細胞外マトリックス分解タンパク質をコードする発現カセットは、腫瘍内、動脈内、静脈内、血管内、胸膜内、腹腔内、気管内、髄腔内、筋肉内、内視鏡、病巣内、経皮、皮下、局所、定位投与される、又は直接注射若しくは還流により、投与される。特定の態様において、対象には、少なくとも１種のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストの後に、ｐ５３をコードする核酸、及び／又はＭＤＡ−７をコードする核酸が投与される。特定の態様において、対象には、少なくとも１種のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストの前に、ｐ５３をコードする核酸、及び／又はＭＤＡ−７をコードする核酸が投与される。特定の態様において、対象には、少なくとも１種のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストと同時に、ｐ５３をコードする核酸、及び／又はＭＤＡ−７をコードする核酸が投与される。特定の態様において、アデノウイルスベクターは対象に腫瘍内投与される。いくつかの態様では、ｐ５３をコードする核酸、及び／又はＭＤＡ−７をコードする核酸、並びに少なくとも１種のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストは、ｐ５３をコードする核酸、及び／又はＭＤＡ−７をコードする核酸が注射されていない、離れた腫瘍にて、アブスコパル（全身）効果を誘発する。
【００２９】
特定の態様において、癌は、黒色腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺癌、肝細胞癌、網膜芽細胞腫、星状膠細胞腫、グリア芽腫、白血病、神経芽細胞腫、頭部癌、頸部癌、乳癌、膵臓癌、前立腺癌、腎癌、骨癌、睾丸癌、卵巣癌、中皮腫、子宮頸癌、胃腸癌、泌尿生殖器癌、気道癌、造血癌、筋骨格癌、神経内分泌癌、癌腫、肉腫、中枢神経系癌、末梢神経系癌、リンパ腫、脳癌、結腸癌、又は膀胱癌である。いくつかの態様では、癌は転移性である。
【００３０】
いくつかの態様では、ｐ５３をコードする核酸、及び／又はＭＤＡ−７をコードする核酸は発現カセット内にある。特定の態様において、発現カセットはウイルスベクター内にある。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、アデノウイルスベクター、レトロウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、小胞性口内炎ウイルスベクター、又はポリオーマウイルスベクターである。特定の態様において、ウイルスベクターはアデノウイルスベクターである。
【００３１】
特定の態様において、ウイルスベクターは、約１０３〜約１０１３個のウイルス粒子にて投与される。いくつかの態様では、アデノウイルスベクターは対象に、静脈内、血管内、胸膜内、腹腔内、気管内、腫瘍内、髄腔内、筋肉内、内視鏡、病巣内、経皮、皮下、局所、定位投与される、又は、直接注射若しくは還流により投与される。特定の態様において、対象には、アデノウイルスベクターが２回以上投与される。
【００３２】
いくつかの態様では、対象には、ｐ５３をコードする核酸が投与される。別の態様において、対象には、ＭＤＡ−７をコードする核酸が投与される。特定の態様において、対象には、ｐ５３をコードする核酸及びＭＤＡ−７をコードする核酸が投与される。いくつかの態様では、ｐ５３及びＭＤＡ−７は、単一のプロモーターの制御下にある。いくつかの実施形態では、プロモーターはサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ＳＶ４０、又はＰＧＫである。
【００３３】
いくつかの態様では、核酸はリポプレックスに入れて対象に投与される。特定の態様において、リポプレックスは、ＤＯＴＡＰと、コレステロール、コレステロール誘導体及びコレステロール混合物の少なくとも１つとを含む。いくつかの態様では、核酸はナノ粒子に入れて投与される。
【００３４】
特定の態様において、投与は、局部又は局所注射を含む。別の態様において、投与は、連続注入、腫瘍内注射、又は静脈内注射を介する。
【００３５】
いくつかの態様では、方法は、少なくとも１種の追加の抗癌治療を投与することを更に含む。特定の態様において、少なくとも１種の追加の抗癌治療は、外科療法、化学療法（例えば、プロテインキナーゼ阻害剤又はＥＧＦＲ標的化療法の投与）、塞栓形成療法、化学塞栓形成療法、放射線療法、凍結療法、高体温治療、写真療法、放射線切除療法、ホルモン療法、免疫療法、小分子療法、受容体キナーゼ阻害剤療法、抗血管新生療法、サイトカイン療法又は生物学的療法（例えばモノクローナル抗体、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、又は遺伝子治療法）である。
いくつかの態様では、免疫療法はサイトカインを含む。特定の態様において、サイトカインは、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、ＩＬ−２などのインターロイキン、及び／又はＩＦＮ−αなどのインターフェロンである。腫瘍を標的化する免疫応答を加速させるための追加のアプローチとしては、追加の免疫チェックポイント阻害が挙げられる。いくつかの態様では、免疫チェックポイント阻害としては、抗ＣＴＬＡ４、抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１、抗ＰＤ−Ｌ２、抗ＴＩＭ−３、抗ＬＡＧ−３、抗Ａ２ａＲ、又は抗ＫＩＲ抗体が挙げられる。いくつかの態様では、免疫療法は、抗ＯＸ４０抗体、抗ＧＩＴＲ抗体、抗ＣＤ１３７抗体、抗ＣＤ４０抗体、及び抗ＣＤ２７抗体などの共刺激受容体アゴニストを含む。特定の態様において、免疫療法は、Ｔ制御性細胞（Ｔｒｅｇ）、骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、及び癌関連線維芽細胞（ＣＡＦ）の抑制を含む。
【００３６】
更なる態様において、免疫療法は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、及び樹状細胞などの先天性免疫細胞の刺激を含む。更なる免疫刺激治療としては、ＩＤＯ阻害剤、ＴＧＦ−β阻害剤、ＩＬ−１０阻害剤、インターフェロン遺伝子刺激因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニスト、トル様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト（例えばＴＬＲ７、ＴＬＲ８、又はＴＬＲ９）、腫瘍ワクチン（例えば、全腫瘍細胞ワクチン、ペプチド、及び組み換え腫瘍関連抗原ワクチン）、並びに養子細胞治療法（ＡＣＴ）（例えばＴ細胞、ナチュラルキラー細胞、ＴＩＬ、及びＬＡＫ細胞）、並びに、遺伝子組み換え受容体を有するＡＣＴ（例えばキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）及びＴ細胞受容体（ＴＣＲ））を挙げることができる。特定の態様において、免疫チェックポイント阻害剤、チェックポイント阻害＋Ｔ細胞共刺激受容体のアゴニズム、及びチェックポイント阻害＋ＴＩＬ  ＡＣＴの組み合わせなどの、これらの作用物質の組み合わせを使用することができる。特定の態様において、追加の抗癌治療としては、免疫チェックポイント阻害剤（例えばアベルマブ）、４−１ＢＢ（ＣＤ−１３７）アゴニスト（例えばウトミルマブ）、及びＯＸ４０（ＴＮＦＲＳ４）アゴニストの組み合わせが挙げられる。
いくつかの態様では、化学療法はＤＮＡ損傷剤を含む。いくつかの実施形態では、ＤＮＡ損傷剤は、γ照射、Ｘ線、紫外線照射、マイクロ波、電子放出、アドリアマイシン、５−フルオロウラシル（５ＦＵ）、カペシタビン、エトポシド（ＶＰ−１６）、カンプトテシン、アクチノマイシン−Ｄ、マイトマイシンＣ、シスプラチン（ＣＤＤＰ）、又は過酸化水素である。特定の態様において、ＤＮＡ損傷剤は５ＦＵ又はカペシタビンである。
【００３７】
いくつかの態様では、化学療法は、シスプラチン（ＣＤＤＰ）、カルボプラチン、プロカルバジン、メクロレタミン、シクロホスファミド、カンプトテシン、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ビスルファン、ニトロソウレア、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソンビシン、ブレオマイシン、プリコマイシン、マイトマイシン、エトポシド（ＶＰ１６）、タモキシフェン、タキソテール、タキソール、ｔｒａｎｓ−白金、５−フルオロウラシル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メトトレキサート、ＨＤＡＣ阻害剤、又は、これらの任意の類似体若しくは派生多様体を含む。
【００３８】
いくつかの態様では、少なくとも１種の追加の癌治療は、プロテインキナーゼ又は成長因子シグナル伝達経路に関与する受容体を阻害する、プロテインキナーゼ阻害剤又はモノクローナル抗体である。例えば、プロテインキナーゼ又は受容体阻害剤は、ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ、ＡＫＴ、Ｅｒｂ１、Ｅｒｂ２、ＥｒｂＢ、Ｓｙｋ、Ｂｃｒ−Ａｂｌ、ＪＡＫ、Ｓｒｃ、ＧＳＫ−３、ＰＩ３Ｋ、Ｒａｓ、Ｒａｆ、ＭＡＰＫ、ＭＡＰＫＫ、ｍＴＯＲ、ｃ−Ｋｉｔ、ｅｐｈ受容体、又はＢＲＡＦ阻害剤であることができる。特定の態様において、プロテインキナーゼ阻害剤はＰＩ３Ｋ阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＰＩ３Ｋ阻害剤はＰＩ３Ｋδ阻害剤である。例えば、プロテインキナーゼ又は受容体阻害剤は、アファチニブ、アキシチニブ、ベバシズマブ、ボスチニブ、セツキシマブ、クリゾチニブ、ダサチニブ、エルロチニブ、フォスタマチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レンバチニブ、ムブリチニブ、ニロチニブ、パニツムマブ、パゾパニブ、ペガプタニブ、ラニビズマブ、ルキソリチニブ、サラカチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、トラスツズマブ、バンデタニブ、ＡＰ２３４５１、ベムラフェニブ、ＣＡＬ１０１、ＰＸ−８６６、ＬＹ２９４００２、ラパマイシン、テムシロリムス、エベロリムス、リダフォロリムス、アルボシジブ、ゲニステイン、セルメチニブ、ＡＺＤ−６２４４、バタラニブ、Ｐ１４４６Ａ−０５、ＡＧ−０２４３２２、ＺＤ１８３９、Ｐ２７６−００、ＧＷ５７２０１６、又はこれらの混合物であることができる。特定の態様において、プロテインキナーゼ阻害剤は、ＡＫＴ阻害剤（例えばＭＫ−２２０６、ＧＳＫ６９０６９３、Ａ−４４３６５４、ＶＱＤ−００２、ミルテフォシン、又はペリホシン）である。特定の態様において、実施形態に従い使用するためのＥＧＦＲ標的療法としては、ＥＧＦＲ／ＥｒｂＢ１／ＨＥＲ、ＥｒｂＢ２／Ｎｅｕ／ＨＥＲ２、ＥｒｂＢ３／ＨＥＲ３、及び／又はＥｒｂＢ４／ＨＥＲ４の阻害剤が挙げられるが、これらに限定されない。広範囲のこのような阻害剤が知られており、受容体及びＥＧＦＲ結合抗体又はアプタマーに対して活性なチロシンキナーゼ阻害剤が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、ＥＧＦＲ阻害剤はゲフィチニブ、エルロチニブ、セツキシマブ、マツズマブ、パニツムマブ、ＡＥＥ７８８；ＣＩ−１０３３、ＨＫＩ−２７２、ＨＫＩ−３５７、又はＥＫＢ−５６９であることができる。プロテインキナーゼ阻害剤は、ダブラフェニブなどのＢＲＡＦ阻害剤、又はトラメチニブなどのＭＥＫ阻害剤であることができる。
【００３９】
本発明の他の目的、特徴及び利点は、以下の詳細な説明から明らかになるだろう。しかし、本発明の趣旨及び範囲内での種々の変化及び変更が、この詳細の説明より当業者には明らかとなるため、詳細の説明及び特定の実施例は、本発明の好ましい実施形態を示しているものの、実例としてのみ与えられることが理解されなければならない。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
以下の図面は、本明細書の一部を形成し、本発明の特定の態様を更に示すために含まれている。本発明は、本明細書に提示する具体的な実施形態の詳細な説明と組み合わせて、これら１つ以上の図面を参照することによって、よりよく理解されるだろう。
【００４１】
【図１】効果的なＡｄ−ｐ５３投与及び腫瘍応答。７×１０１０未満のウイルス粒子／ｃｍ３のＡｄ−ｐ５３投与量（右パネル）と比較した、７×１０１０超のウイルス粒子／ｃｍ３のＡｄ−ｐ５３で治療した（左パネル）、好ましい腫瘍ｐ５３バイオマーカー患者サブグループに関する、腫瘍応答のウォーターフォールプロット。奏功者の大部分（７／９の患者）が、１×１０１１ｖｐ／ｃｍ３付近、又はこれを超過する（７．８１〜３３３．２×１０１０ｖｐ／ｃｍ３）のＡｄ−ｐ５３の用量を受けたことが、Ａｄ−ｐ５３奏功者の詳細な調査により明らかとなった。したがって、Ａｄ−ｐ５３臨床用途のための用量は、１×１０１１ｖｐ／ｃｍ３の、注射された腫瘍体積を超える可能性がある。
【００４２】
【図２】Ａｄ−ｐ５３バイオマーカー／用量最適化治療に対する、全体的な優れた生残。好ましい腫瘍ｐ５３バイオマーカープロファイルを有する、メトトレキサートで治療した患者と比較した、７×１０１０超のウイルス粒子／ｃｍ３のＡｄ−ｐ５３用量で処理した、好ましい腫瘍ｐ５３バイオマーカープロファイルを有する患者の、１年及び全体的な、優れた生残。メトトレキサートと比較して、好ましい腫瘍ｐ５３バイオマーカー及びＡｄ−ｐ５３用量最適化治療に関しては、全体的な生残の統計学的に有意な増加を、結果は示す（Ａｄ−ｐ５３治療の中央生残：１１．５ヶ月に対して、メトトレキサートでは４．３ヶ月；ｐ＜０．０１６、ＨＲ  １．９７６７）。
【００４３】
【図３】ＱＵＡＤＲＡ−ＦＵＳＥ（商標）注入デバイス。ＱＵＡＤＲＡ−ＦＵＳＥ（商標）（画像はＲＥＸＭＥＤＩＣＡＬ（登録商標）から入手）は、腫瘍損傷の短い幅（Ｗ）直径に応じて、中心針軸の周りを、１〜５ｃｍの調節可能な直径で用いられるトロカールシャフト（右上の挿入物）から延びる３つの枝を有する、複数尖叉注入デバイスである。この水平拡張により、損傷を通しての薬剤の広範な分散が可能となる。各枝は、２つの送達貫通孔（４つの流体出口）を有する。これ故、各注入により、１２個の送達点が得られる。
【００４４】
【図４】Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２アゴニスト＋抗ＰＤ−１の有効性：腫瘍体積。リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）対照、ＣＤ１２２／１３２、抗ＰＤ−１、Ａｄ−ｐ５３、又は、ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２、Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−１、又はＡｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１の組み合わせのいずれかを受ける齧歯類における、経時的な原発性腫瘍の体積を示すグラフ。ＣＤ１２２／１３２、抗ＰＤ−１、及びＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療法の間には深刻な腫瘍の進行があり、これらは、Ａｄ−ｐ５３治療法と組み合わせることにより逆転した。治療法のいずれかと比較して、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２、Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−１、及びＡｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の、向上した有効性もまた、結果は示す。２１日目までに、（ＰＢＳ）、ＣＤ１２２／１３２、抗ＰＤ−１、ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１、及びＡｄ−ｐ５３で治療した群の平均腫瘍体積は全て、２，０００ｍｍ３を超えた。対照的に、組み合わせ治療のそれぞれ：Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２、Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−１、及びＡｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１は、非Ａｄ−ｐ５３治療法、又はＡｄ−ｐ５３治療のみのいずれかと比較して、腫瘍体積の大幅な減少を誘発した。２１日目における腫瘍体積の、統計学的分散分析（ＡＮＯＶＡ）により、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２、Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−１、及びＡｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の抗腫瘍効果の相乗作用が測定された（ｐ値＜０．０００１）。しかし、３０日目までに、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２、及びＡｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−１治療群の平均腫瘍体積もまた、２，０００ｍｍ３を超えた。重要なことに、３０日目における腫瘍体積の統計学的分散分析（ＡＮＯＶＡ）比較により、抗腫瘍効果の相乗作用は、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の組み合わせにおいてのみ維持された（ｐ値＜０．０００１（全体）、及び、それぞれの別の治療群と個別に比較して、ｐ値＜０．０００１）ことが測定された。
【００４５】
【図５】完全な腫瘍奏効率。治療法に対する腫瘍の完全奏功は、重要な治療効果と関連し、治癒性のアウトカムのために必要とされていると、一般に理解されている。ｐ５３治療群及びこれらの対照に関して、図５に示すように、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療のみが、原発性腫瘍及び対側腫瘍の両方において、完全な腫瘍の寛解をもたらした。原発性腫瘍及び対側腫瘍の両方の、腫瘍の完全奏功は、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療群の６０％（１０匹の動物のうちの６匹）にて観察され、他の治療群において、７０匹の動物のいずれにおいても、腫瘍の完全奏功は存在しなかった（Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療群対全ての他の治療群の動物を比較する、フィッシャーの両側正確確率検定によると、ｐ値＜０．０００１；Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１対あらゆる他の治療群を比較する、フィッシャーの両側正確確率検定によると、ｐ値＜０．０１１）。予想外なことに、腫瘍の完全奏功は持続的であり、これらの腫瘍を有するこれらの動物を恐らく治癒する、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療群の５０％において、４０日後も維持された。
【００４６】
【図６Ａ】図６Ａ及び６Ｂ：対側腫瘍増殖における、全身性／アブスコパル治療効果。対側に移植した腫瘍の原発性腫瘍治療における全身性／アブスコパル効果を、原発性腫瘍がＡｄ−ｐ５３腫瘍内治療法のうちの１つを受けた齧歯類にて、評価した。予想外の、原発性腫瘍増殖及び完全寛解率における、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の実質的に増加した相乗効果に一致して、我々は、他のＡｄ−ｐ５３治療群と比較して、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の驚くべき程に強力で統計的に有意なアブスコパル効果もまた、観察した。図６Ａに示すように、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１の原発性腫瘍治療を受けた動物の９０％（１０匹の動物のうち９匹）において、対側腫瘍増殖が消滅した。対照的に、対側腫瘍増殖は、他のＡｄ−ｐ５３治療群の動物の６２．５〜１００％で観察された。対側腫瘍増殖のこの差は、統計的に有意であった（全ての治療群に対するカイ二乗検定によるｐ値＝０．０００４；Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療群対あらゆる他の治療群を比較する、フィッシャーの両側正確確率検定によるｐ値＜０．０４３０）。図６Ｂは、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２、Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−１、又はＡｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１の組み合わせのいずれかの、３つの最も効果的な原発性腫瘍治療を受ける齧歯類における、経時的な対側腫瘍体積を示すグラフを表す。２２日目における、これらの対側腫瘍体積の統計学的分散分析（ＡＮＯＶＡ）比較により、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の抗腫瘍効果の相乗作用が測定された（ｐ値＝全体で０．０４３５）。Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１群のみが、対側腫瘍増殖対Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−１群における、統計的に有意な減少を示した（ｐ値＝０．０３６０）。これらを合わせると、全てのＡｄ−ｐ５３治療法のうち、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の３つの組み合わせのみが、実質的なアブスコパル効果を媒介する強力な局所及び全身抗腫瘍免疫を誘発することにより治癒の有効性をもたらしたことを、これらの発見は示す。
【図６Ｂ】図６Ａ及び６Ｂ：対側腫瘍増殖における、全身性／アブスコパル治療効果。対側に移植した腫瘍の原発性腫瘍治療における全身性／アブスコパル効果を、原発性腫瘍がＡｄ−ｐ５３腫瘍内治療法のうちの１つを受けた齧歯類にて、評価した。予想外の、原発性腫瘍増殖及び完全寛解率における、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の実質的に増加した相乗効果に一致して、我々は、他のＡｄ−ｐ５３治療群と比較して、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の驚くべき程に強力で統計的に有意なアブスコパル効果もまた、観察した。図６Ａに示すように、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１の原発性腫瘍治療を受けた動物の９０％（１０匹の動物のうち９匹）において、対側腫瘍増殖が消滅した。対照的に、対側腫瘍増殖は、他のＡｄ−ｐ５３治療群の動物の６２．５〜１００％で観察された。対側腫瘍増殖のこの差は、統計的に有意であった（全ての治療群に対するカイ二乗検定によるｐ値＝０．０００４；Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療群対あらゆる他の治療群を比較する、フィッシャーの両側正確確率検定によるｐ値＜０．０４３０）。図６Ｂは、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２、Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−１、又はＡｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１の組み合わせのいずれかの、３つの最も効果的な原発性腫瘍治療を受ける齧歯類における、経時的な対側腫瘍体積を示すグラフを表す。２２日目における、これらの対側腫瘍体積の統計学的分散分析（ＡＮＯＶＡ）比較により、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の抗腫瘍効果の相乗作用が測定された（ｐ値＝全体で０．０４３５）。Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１群のみが、対側腫瘍増殖対Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−１群における、統計的に有意な減少を示した（ｐ値＝０．０３６０）。これらを合わせると、全てのＡｄ−ｐ５３治療法のうち、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の３つの組み合わせのみが、実質的なアブスコパル効果を媒介する強力な局所及び全身抗腫瘍免疫を誘発することにより治癒の有効性をもたらしたことを、これらの発見は示す。
【００４７】
【図７】Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１の有効性：生残の延長。ＰＢＳ、ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１、Ａｄ−ｐ５３、又は、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２、Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−１、及びＡｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１のいずれかで治療したマウスの、カプランマイヤー生残曲線。ログランク検定によると、これらの生残曲線には統計的な有意差があった（全体でｐ＜０．０００１；Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療群対任意の他の治療群の比較ではｐ値＜０．０００３）。これらの結果もまた、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療法の、予想できない実質的な相乗作用を示す。Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療法の群の中央生残は、４０日後にも達せず、この治療群の８０％が、残存する何らかの腫瘍の証拠を持たずに、依然として生きていた。著しく対照的に、他の治療群における動物の９８％（４９匹／５０匹）は３０日目までに死に、１０〜２８日の範囲の中央生残を有した。
【００４８】
【図８】ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２アゴニスト＋抗ＰＤ−１の有効性：腫瘍体積。リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）対照、ＣＤ１２２／１３２、抗ＰＤ−１、ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１、ＶｉｒＲｘ００７、又は、ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２、ＶｉｒＲｘ００７＋抗ＰＤ−１、及びＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１の組み合わせのいずれかを受ける齧歯類における、経時的な原発性腫瘍の体積を示すグラフ。ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１、及びＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療法で治療した群にて、著しい腫瘍の進行があり、これらは、ＶｉｒＲｘ００７治療法と組み合わせることにより逆転した。単独の治療法のいずれかと比較しての、ＶｉｒＲｘ００７＋抗ＰＤ−１及びＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の向上した有効性もまた、結果は示す。Ａｄ−ｐ５３を用いる発見とは対照的に、ＶｉｒＲｘ００７は、ＣＤ１２２／ＣＤ１３２治療との相乗作用を示さなかった。３０日目までに、（ＰＢＳ）、ＣＤ１２２／１３２、抗ＰＤ−１、ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１、ＶｉｒＲｘ００７、及びＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／ＣＤ１３２で治療した群の平均腫瘍体積は全て、２，０００ｍｍ３を超えた。対照的に、ＶｉｒＲｘ００７＋抗ＰＤ−１及びＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１との組み合わせ治療のそれぞれは、非ＶｉｒＲｘ００７治療法、又はＶｉｒＲｘ００７治療のみのいずれかと比較して、腫瘍体積の大きな減少を誘発した。３０日目における腫瘍体積の統計学的分散分析（ＡＮＯＶＡ）比較により、ＶｉｒＲｘ００７＋抗ＰＤ−１及びＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の、抗腫瘍効果の相乗作用が測定された（全体、及び、これらの治療対ＶｉｒＲｘ００７のそれぞれに関して、ｐ値＜０．０００１）。ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療は、ＶｉｒＲｘ００７＋抗ＰＤ−１よりも優れていた（ｐ値＝０．０００２）。驚くべきことに、ＶｉｒＲｘ００７の単剤療法と比較して、ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２の組み合わせ治療の明らかな利点はなかったものの、ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１を組み合わせる三重治療法に関して、相乗作用が示された。
【００４９】
【図９】完全な腫瘍奏効率。治療法に対する腫瘍の完全奏功は、重要な治療効果と関連し、治癒性のアウトカムのために必要とされていると、一般に理解されている。ＶｉｒＲｘ００７治療群及びこれらの対照に関して、図９に示すように、ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療のみが、原発性腫瘍及び対側腫瘍の両方の、完全な腫瘍寛解をもたらした。原発性腫瘍及び対側腫瘍の両方の腫瘍の完全奏功が、ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療群の６０％で観察され、他の治療群において、７０匹の動物のいずれにおいても、腫瘍の完全奏功は存在しなかった（ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療群対全ての他の治療群の動物を比較する、フィッシャーの両側正確確率検定によると、ｐ値＜０．０００１；ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１対あらゆる他の治療群を比較する、フィッシャーの両側正確確率検定によると、ｐ値＜０．０１１）。予想外なことに、腫瘍の完全奏功は持続的であり、これらの腫瘍を有するこれらの動物を恐らく治癒する、ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１で治療した動物の５０％において、４０日後に維持されていた。
【００５０】
【図１０Ａ】図１０Ａ及び１０Ｂ：対側腫瘍増殖における、全身性／アブスコパル治療効果。対側に移植した腫瘍の原発性腫瘍治療における全身性／アブスコパル効果を、原発性腫瘍がＶｉｒＲｘ００７腫瘍内治療法のうちの１つを受けた齧歯類にて、評価した。予想しなかった、原発性腫瘍増殖及び完全寛解率における、ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の実質的に増加した相乗効果に一致して、我々は、他のＶｉｒＲｘ００７治療群と比較して、ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の驚くべき程に強力で、非常に統計的に有意なアブスコパル効果もまた、観察した。図１０Ａに示すように、原発性腫瘍がＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療を受けた動物の８０％において、対側腫瘍増殖が消滅した。対照的に、対側腫瘍増殖は、他のＶｉｒＲｘ００７治療群の動物の８０〜１００％で観察された。対側腫瘍増殖のこの差は、統計的に有意であった（全ての治療群を比較するカイ二乗検定によるｐ値＝０．０００２；ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療群対あらゆる他の治療群を比較する、フィッシャーの両側正確確率検定によるｐ値＜０．０２３０）。ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の組み合わせが、強力な全身性抗腫瘍免疫を誘発し、潜在的な治癒の有効性を有する、実質的なアブスコパル効果を媒介したことを、これらの発見は示唆する。図１０Ｂは、ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２、ＶｉｒＲｘ００７＋抗ＰＤ−１、又はＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１のいずれかの、３つの最も効果的な原発性腫瘍の組み合わせ治療を受ける齧歯類における、経時的な対側腫瘍体積を示すグラフを表す。２２日目における、これらの対側腫瘍体積の統計学的分散分析（ＡＮＯＶＡ）比較により、ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の抗腫瘍効果の相乗作用が測定された（ｐ値＝全体で０．０１７１）。ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１群のみが、対側腫瘍増殖対ＶｉｒＲｘ００７＋抗ＰＤ−１群における、統計的に有意な減少を示した（ｐ値＝０．０１１５）。これらを合わせると、全てのＶｉｒＲｘ００７治療法のうち、ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の３つの組み合わせのみが、実質的なアブスコパル効果を媒介する強力な局所及び全身抗腫瘍免疫を誘発することにより治癒の有効性をもたらしたことを、これらの発見は示す。
【図１０Ｂ】図１０Ａ及び１０Ｂ：対側腫瘍増殖における、全身性／アブスコパル治療効果。対側に移植した腫瘍の原発性腫瘍治療における全身性／アブスコパル効果を、原発性腫瘍がＶｉｒＲｘ００７腫瘍内治療法のうちの１つを受けた齧歯類にて、評価した。予想しなかった、原発性腫瘍増殖及び完全寛解率における、ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の実質的に増加した相乗効果に一致して、我々は、他のＶｉｒＲｘ００７治療群と比較して、ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の驚くべき程に強力で、非常に統計的に有意なアブスコパル効果もまた、観察した。図１０Ａに示すように、原発性腫瘍がＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療を受けた動物の８０％において、対側腫瘍増殖が消滅した。対照的に、対側腫瘍増殖は、他のＶｉｒＲｘ００７治療群の動物の８０〜１００％で観察された。対側腫瘍増殖のこの差は、統計的に有意であった（全ての治療群を比較するカイ二乗検定によるｐ値＝０．０００２；ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療群対あらゆる他の治療群を比較する、フィッシャーの両側正確確率検定によるｐ値＜０．０２３０）。ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の組み合わせが、強力な全身性抗腫瘍免疫を誘発し、潜在的な治癒の有効性を有する、実質的なアブスコパル効果を媒介したことを、これらの発見は示唆する。図１０Ｂは、ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２、ＶｉｒＲｘ００７＋抗ＰＤ−１、又はＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１のいずれかの、３つの最も効果的な原発性腫瘍の組み合わせ治療を受ける齧歯類における、経時的な対側腫瘍体積を示すグラフを表す。２２日目における、これらの対側腫瘍体積の統計学的分散分析（ＡＮＯＶＡ）比較により、ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の抗腫瘍効果の相乗作用が測定された（ｐ値＝全体で０．０１７１）。ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１群のみが、対側腫瘍増殖対ＶｉｒＲｘ００７＋抗ＰＤ−１群における、統計的に有意な減少を示した（ｐ値＝０．０１１５）。これらを合わせると、全てのＶｉｒＲｘ００７治療法のうち、ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の３つの組み合わせのみが、実質的なアブスコパル効果を媒介する強力な局所及び全身抗腫瘍免疫を誘発することにより治癒の有効性をもたらしたことを、これらの発見は示す。
【００５１】
【図１１】ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１の有効性：生残の延長。ＰＢＳ、ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１、ＶｉｒＲｘ００７、又は、ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２、ＶｉｒＲｘ００７＋抗ＰＤ−１、及びＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１の組み合わせのいずれかで治療したマウスの、カプランマイヤー生残曲線。ログランク検定によると、これらの生残曲線には統計的な有意差があった（全体でｐ＜０．０００１；ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療群対任意の他の治療群の比較ではｐ値＜０．０００５）。予想できない、ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療法の実質的な相乗作用もまた、この結果は示す。ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療法の群の中央生残は、４０日後にも達せず、この治療群の９０％が依然として生きていた。著しく対照的に、他の治療群における動物の９８％（４９匹／５０匹）は４０日目までに死に、１０〜３３日の範囲の中央生残を有した。驚くべきことに、ＶｉｒＲｘ００７の単剤療法と比較して、ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２の組み合わせ治療の、明らかな生残の利点はなかったものの、ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１を組み合わせる三重治療法に関して、相乗作用が示された。
【００５２】
【図１２】Ａｄ−ＩＬ２４＋ＣＤ１２２／１３２アゴニスト＋抗ＰＤ−１の有効性：腫瘍体積。リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）対照、ＣＤ１２２／１３２、抗ＰＤ−１、ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１、Ａｄ−ＩＬ２４、又は、Ａｄ−ＩＬ２４＋ＣＤ１２２／１３２及びＡｄ−ＩＬ２４＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１の組み合わせのいずれかを受ける齧歯類における、経時的な原発性腫瘍の体積を示すグラフ。ＣＤ１２２／１３２、抗ＰＤ−１、及びＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療法の間には深刻な腫瘍の進行があり、これらは、Ａｄ−ＩＬ２４治療法と組み合わせることにより逆転した。単独の治療法のいずれかと比較して、Ａｄ−ＩＬ２４＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療では有効性が向上した。１６日目までに、（ＰＢＳ）、ＣＤ１２２／１３２、抗ＰＤ−１、ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１、及びＡｄ−ＩＬ２４で治療した群の平均腫瘍体積は全て、２，０００ｍｍ３を超えた。対照的に、Ａｄ−ＩＬ２４＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１との組み合わせ治療は、非Ａｄ−ＩＬ２４治療法、又はＡｄ−ＩＬ２４治療法のみのいずれかと比較して、腫瘍体積の実質的な減少を誘発した。１６日目における腫瘍体積の、統計学的分散分析（ＡＮＯＶＡ）により、Ａｄ−ＩＬ２４＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の抗腫瘍効果の相乗作用が測定された（ｐ値＜０．０００１）。Ａｄ−ＩＬ２４（ｐ＝０．００２５）又はＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療（ｐ値＜０．０００１）のいずれかと比較して、Ａｄ−ＩＬ２４＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療では、腫瘍体積が統計的に有意に減少した。
【００５３】
【図１３】Ａｄ−ＩＬ２４＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１の有効性：生残の延長。ＰＢＳ、ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１、Ａｄ−ＩＬ２４、又はＡｄ−ＩＬ２４＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１の組み合わせのいずれかで治療したマウスの、カプランマイヤー生残曲線。ログランク検定によると、これらの生残曲線には統計的な有意差があった（ｐ＜０．０００１）。予想できない、Ａｄ−ＩＬ２４＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療法の実質的な相乗作用を、この結果は示す。Ａｄ−ＩＬ２４＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療法の群の中央生残は、相乗的に向上した。ＰＢＳ、ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１、及びＩＬ２４治療群の全ての動物は、１６日目までに死んだが、Ａｄ−ＩＬ２４＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療法の群の動物の５０％は、１９日目にて生きていた。Ａｄ−ＩＬ２４のみ（ｐ＝０．０００３）又はＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ１治療群（ｐ＜０．０００１）のいずれかと比較して、統計的に有意に改善された生残を、Ａｄ−ＩＬ２４＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療法の群は示した。興味深いことに、ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１の対と比較して、Ａｄ−ＩＬ２４＋ＣＤ１２２／１３２の対は驚くほど優れた有効性を有した（ログランク検定によるｐ＝０．０００２、データは図示せず）。
【００５４】
【図１４】Ａｄ−ルシフェラーゼ（Ａｄ−Ｌｕｃ）陰性対照＋ＣＤ１２２／１３２アゴニスト＋抗ＰＤ−１の有効性：腫瘍体積。リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）対照、ＣＤ１２２／１３２、抗ＰＤ−１、ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１、Ａｄ−Ｌｕｃ対照、又は、Ａｄ−Ｌｕｃ対照＋ＣＤ１２２／１３２、Ａｄ−Ｌｕｃ対照＋抗ＰＤ−１、及びＡｄ−Ｌｕｃ対照＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１の組み合わせのいずれかを受ける齧歯類における、経時的な原発性腫瘍の体積を示すグラフ。Ａｄ−ｐ５３、ＶｉｒＲｘ００７、及びＡｄ−ＩＬ２４を用いる治療とは対照的に、Ａｄ−Ｌｕｃを抗ＰＤ−１、ＣＤ１２２／１３２、又はＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療と組み合わせたときに、治療の有効性の有意な増加は存在しなかった。１６日目までに、全ての群の平均腫瘍体積は２，０００ｍｍ３を超えた。１６日目における腫瘍体積の、統計学的分散分析（ＡＮＯＶＡ）は、統計的に有意ではなかった（ｐ値＝０．１２１２、これらのあらゆる治療群の間での平均腫瘍体積が、統計的に有意ではなかった）。
【００５５】
【図１５】Ａｄ−Ｌｕｃ対照＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１と比較して、それぞれＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１と組み合わせた、Ａｄ−ｐ５３、ＶｉｒＲｘ００７、及びＡｄ−ＩＬ２４を用いる「三重治療法」は、生残を延長した。Ａｄ−ｐ５３、ＶｉｒＲｘ００７、Ａｄ−ＩＬ２４、又はＡｄ−Ｌｕｃ対照と組み合わせたＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１で治療したマウスの、カプランマイヤー生残曲線。ログランク検定によると、これらの生残曲線には統計的な有意差があった（ｐ＜０．０００１）。ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１三重治療法と組み合わせた、Ａｄ−ｐ５３、ＶｉｒＲｘ００７、及びＡｄ−ＩＬ２４のそれぞれは、Ａｄ−Ｌｕｃ＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１三重治療法対照と比較して、統計的に有意な生残の増加を示した（ログランク検定によると、ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１三重治療法と組み合わせたＡｄ−ｐ５３及びＶｉｒＲｘ００７は共に、ｐ値＜０．０００１；ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１と組み合わせたＡｄ−ＩＬ２４はｐ＜０．０１５）。
【００５６】
【図１６】Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２（ＩＬ１５）アゴニスト＋抗ＰＤ−１の有効性：腫瘍体積。癌抑制因子治療法と組み合わせた選択性ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストは、組み換えＩＬ１５及びＩＬ−１５−Ｒ  α−Ｆｃからなる免疫複合体であった。リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）対照、ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１、Ａｄ−ｐ５３のみ、又は、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２（ＩＬ１５）＋抗ＰＤ−１の組み合わせのいずれかを受ける齧歯類における、経時的な原発性腫瘍の体積を示すグラフ。ＰＢＳ、ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１、及びＡｄ−ｐ５３治療法の間には、深刻な腫瘍の進行があった。上述の、初期のＡｄ−ｐ５３組み合わせ治療の結果と一致して、あらゆる治療法と比較して、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２（ＩＬ１５）＋抗ＰＤ−１治療では、実質的に有効性が向上した。３０日目までに、ＰＢＳ、ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１、及びＡｄ−ｐ５３で治療した群の平均腫瘍体積は、全て２，０００ｍｍ３を超えた。対照的に、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２（ＩＬ１５）＋抗ＰＤ−１を用いる組み合わせ治療は、腫瘍体積の大きな減少を誘発した。腫瘍体積の統計学的分散分析（ＡＮＯＶＡ）により、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２（ＩＬ１５）＋抗ＰＤ−１治療の抗腫瘍効果の相乗作用が測定された（ｐ値＜０．０００１（全体）、及び、それぞれの別の治療群と個別に比較したｐ値＜０．０００１）。
【図１７】対側腫瘍増殖における、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２（ＩＬ１５）＋抗ＰＤ−１の全身性／アブスコパル治療効果。癌抑制因子治療法と組み合わせた選択性ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストは、組み換えＩＬ１５及びＩＬ−１５−Ｒ  α−Ｆｃからなる免疫複合体であった。対側に移植した腫瘍の原発性腫瘍治療における全身性／アブスコパル効果を、原発性腫瘍がＡｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２（ＩＬ１５）＋抗ＰＤ−１を受けた齧歯類にて、評価した。図１６に示す原発性腫瘍増殖における、予想しなかった、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２（ＩＬ１５）＋抗ＰＤ−１治療の実質的に増加した相乗効果に一致して、我々は、他のＡｄ−ｐ５３治療群と比較して、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２（ＩＬ１５）＋抗ＰＤ−１治療の驚くべき程に強力で統計的に有意なアブスコパル効果もまた、観察した。図１７は、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２、Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−１、又はＡｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２（ＩＬ１５）＋抗ＰＤ−１の組み合わせのいずれかの、原発性腫瘍治療を受ける齧歯類における、経時的な対側腫瘍体積を示すグラフを表す。２２日目における、これらの対側腫瘍体積の統計学的分散分析（ＡＮＯＶＡ）比較により、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２（ＩＬ１５）＋抗ＰＤ−１治療の抗腫瘍効果の相乗作用が測定された（ｐ値＝全体で０．０４３３）。Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１群のみが、対側腫瘍増殖対Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−１群における、統計的に有意な減少を示した（ｐ値＝０．０３５９）。これらを合わせると、全てのＡｄ−ｐ５３治療法のうち、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の３つの組み合わせのみが、実質的なアブスコパル効果を媒介する強力な局所及び全身抗腫瘍免疫を誘発することにより治癒の有効性をもたらしたことを、これらの発見は示す。
【００５７】
【図１８】Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２（ＩＬ１５）＋抗ＰＤ−１の有効性：生残の延長。癌抑制因子治療法と組み合わせた選択性ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストは、組み換えＩＬ１５及びＩＬ−１５−Ｒ  α−Ｆｃからなる免疫複合体であった。ＰＢＳ、ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１、Ａｄ−Ｌｕｃ＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１対照、Ａｄ−ｐ５３、又はＡｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２（ＩＬ１５）＋抗ＰＤ−１の組み合わせのいずれかで治療したマウスの、カプランマイヤー生残曲線を、図１８に示す。ログランク検定によると、これらの生残曲線には統計的な有意差があった（全体でｐ＜０．０００１、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２（ＩＬ１５）＋抗ＰＤ−１治療群対任意の他の治療群を比較するｐ値＜０．０００１）。結果は、予想外の、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２（ＩＬ１５）＋抗ＰＤ−１治療法の実質的な相乗作用を更に示す。Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２（ＩＬ１５）＋抗ＰＤ−１治療法の群において、動物の５０％が３６日目に生きていた。著しく対照的に、他の治療群の全ての動物は、２２日目までに死に、１０〜１８日の範囲の中央生残を有した。
【発明を実施するための形態】
【００５８】
腫瘍は、初期及び進行中に進化し、免疫系による破壊を免れることがよく知られている。最近は、免疫チェックポイント阻害剤を使用してこの耐性を逆転させることが、ある程度成功していることが示されている一方で、患者の大部分は、これらの治療に応答しない。したがって、特定の実施形態において、本開示は、腫瘍の微小環境を変化させて、耐性を克服し、抗腫瘍免疫応答を向上させるための方法及び組成物に関する。一実施形態において、少なくとも１種のＣＤ１２２及びＣＤ１３２アゴニストと組み合わせてｐ５３及び／又はＭＤＡ−７を発現することにより癌を治療する方法を提供する。具体的に、癌抑制遺伝子は複製不可能なアデノウイルスとして投与される。一方法では、ｐ５３及び／又はＭＤＡ７遺伝子治療法は、ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストと組み合わせて投与される。ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストは、ＩＬ−２／抗ＩＬ−２免疫複合体、ＩＬ−１５／抗ＩＬ−１５免疫複合体、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５受容体α−ＩｇＧ１−Ｆｃ（ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−ＩｇＧ１−Ｆｃ）免疫複合体、ＰＥＧ化ＩＬ−２、ＰＥＧ化ＩＬ−１５、ＩＬ−２ムテイン、及び／又はＩＬ−１５ムテインであることができる。ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストは、ＡＬＴ−８０３などの、ＩＬ−１５受容体α／ＩｇＧ１  Ｆｃ融合タンパク質に結合したＩＬ−１５変異体（例えば、ＩＬ−１５Ｎ７２Ｄ）であることができる（Ｒｈｏｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。
【００５９】
更に、抗ＰＤ１抗体といった免疫チェックポイント阻害剤などの追加の治療法を投与することにより、選択性ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストと組み合わせてｐ５３及び／又はＭＤＡ−７遺伝子治療法を投与する前、投与する間、又は投与後のいずれかに、抗腫瘍免疫が増強されることを、本発明者らは測定した。
【００６０】
更に、追加の治療法を投与して、腫瘍細胞の細胞外マトリックスを分解することにより、併用療法の腫瘍浸透を向上することができることを、本発明者らは測定した。特に、細胞外マトリックス分解治療法は、併用療法の前に投与される。一方法では、細胞外マトリックス分解治療法は、アデノウイルスリラキシンなどの、リラキシン遺伝子治療法である。特に、アデノウイルスリラキシンは、腫瘍内投与又は動脈内投与される。
【００６１】
更に、治療方法は、本明細書において提供する併用療法の抗腫瘍効果を増強するための、サイトカイン又は化学療法などの、追加の抗癌治療法を含むことができる。例えば、サイトカインは、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）であることができ、化学療法は、５−フルオロウラシル（５ＦＵ）、又はカペシタビン、又はシクロホスファミド、又はＰＩ３Ｋ阻害剤であることができる。
【００６２】
Ｉ．  定義
本明細書で使用する場合、具体的な構成成分の観点における「本質的に含まない」は、具体的な構成成分が、組成物に意図的に配合されていないか、及び／又は混入物質として、若しくは微量で存在することを意味するために、本明細書で使用される。したがって、ある組成物の意図しない混入から生じる具体的な構成要素の合計量は、０．０５％より十分に低く、好ましくは、０．０１％より低い。最も好ましいのは、具体的な構成成分の量が標準的な分析方法を用いて分析できない組成物である。
【００６３】
本明細書で使用される場合、「１つの（ａ）」又は「１つの（ａｎ）」は、１つ以上を意味していてもよい。本明細書の特許請求の範囲内で用いる場合、単語「〜を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」と共に使用する場合、単語「ａ」又は「ａｎ」は、１つ、又は２つ以上を意味し得る。
【００６４】
特許請求の範囲における用語「又は」の使用は、代替物のみ、又は代替物が相互に排他的であることを指すように明白に示されていない限り、「及び／又は」を意味するために用いられるが、本開示は、代替物のみ、及び「及び／又は」を指す定義を支持する。本明細書で使用される場合、「別の」は、少なくとも第２の、又はそれ以上を意味していてもよい。
【００６５】
本明細書全体で、「約」の用語は、ある値が、値を決定するために使用されるデバイス、方法に関する誤差の固有の偏差、又は試験対象の中に存在する偏差を含むことを示すために用いられる。
本明細書で使用する場合、「野生型」とは、生命体のゲノム内の座位における、天然に存在する核酸の配列、及び、このような核酸から転写又は翻訳された配列を意味する。
【００６６】
したがって、用語「野生型」は、核酸によりコードされるアミノ酸配列もまた意味することができる。座位は、個体の集団において２つ以上の配列又は対立遺伝子を有し得るため、用語「野生型」は、このような天然に存在する全ての対立遺伝子を包含する。本明細書で使用する場合、用語「多型」とは、ある集団の個体の座位に、変化が存在する（即ち、２つ以上の対立遺伝子が存在する）ことを意味する。本明細書で使用する場合、「変異体」とは、核酸、又は、組み換えＤＮＡ技術の結果である、そのコードされたタンパク質、ポリペプチド、若しくはペプチドの配列における変化を意味する。
【００６７】
細胞又は生命体内のタンパク質、遺伝子、核酸、又はポリヌクレオチドと関係して用いられる場合、用語「外来性」とは、人工的、又は自然の方法により、その細胞又は生命体に導入されたタンパク質、遺伝子、核酸、又はポリヌクレオチドを意味する。又は、細胞との関係において、この用語は、人工、又は自然の方法により単離され、その後、他の細胞又はある生命体に導入された細胞を意味する。外来性核酸は、異なる生命体又は細胞に由来することができる。又は、外来性核酸は、その生命体又は細胞内で自然に存在する核酸の、１つ以上の追加のコピーであることができる。外来性細胞は異なる生命体に由来することができる、又は同じ生命体に由来することができる。非限定例として、外来性核酸とは、自然細胞にて存在する箇所とは異なる染色体位置にある、又は別様において自然にて発見されるものとは異なる核酸配列が隣接している、核酸である。
【００６８】
「発現構築物」又は「発現カセット」とは、転写を指示することができる核酸分子を意味する。発現構築物は最低でも、１つ以上の所望の細胞型、組織、又は臓器における遺伝子発現を指示する、１つ以上の転写調節要素（例えばプロモーター、エンハンサー、又はこれらと機能が等価な構築物）を含む。転写終結シグナルなどの追加の要素もまた、含まれることができる。
【００６９】
「ベクター」又は「構築物」（場合によっては、デリバリーシステム、又は遺伝子導入「ビヒクル」と呼ばれる）とは、インビトロ又はインビボのいずれかにて宿主細胞に送達されるポリヌクレオチドを含む、巨大分子、又は分子の複合体を意味する。
【００７０】
一般的な種類のベクターである「プラスミド」とは、染色体ＤＮＡとは独立して複製可能な、染色体ＤＮＡとは別の染色体外ＤＮＡ分子である。特定の場合において、プラスミドは環状かつ二本鎖である。
【００７１】
「複製の起点」（「ｏｒｉ」）、又は「複製起点」とは、細胞内のプラスミドに存在する場合、そのプラスミド内、及び／又は、ＤＮＡ合成が開始する、若しくはその付近の位置にて、結合した配列を維持可能な、例えば、リンパ増殖性ヘルペスウイルス内のＤＮＡ配列である。例として、ＥＢＶのための複製起点は、ＦＲ配列（３０ｂｐ反復の、２０個の不完全なコピー）、及び好ましくはＤＳ配列を含む。しかし、ＥＢＶ結合ＥＢＮＡ−１内の他の部位、例えばＲｅｐ＊配列を、複製起点としてＤＳと置き換えることができる（Ｋｉｒｓｈｍａｉｅｒ  ａｎｄ  Ｓｕｇｄｅｎ，１９９８）。したがって、ＥＢＶの複製起点は、ＦＲ、ＤＳ、若しくはＲｅｐ＊配列、又は、これらに由来する核酸修飾若しくは合成の組み合わせによる、任意の機能的に等価な配列を含む。例えば、本発明は、Ｌｉｎｄｎｅｒ，ｅｔ．ａｌ．，２００８に具体的に記載されているような、個別の要素の挿入又は変異などによる、ＥＢＶの、遺伝子組み換えされた複製起点もまた使用することができる。
【００７２】
特定のタンパク質を「コード」する、「遺伝子」、「ポリヌクレオチド」、「コード領域」、「配列」、「セグメント」、「断片」、又は「導入遺伝子」  とは、適切な調節配列の制御下に置かれたときに、インビトロ又はインビボで転写され、かつ任意に、遺伝子産物（例えばポリペプチド）に翻訳される核酸分子である。コード領域はｃＤＮＡ形態、ゲノムＤＮＡ形態、又はＲＮＡ形態のいずれかで存在してよい。ＤＮＡ形態で存在する場合、核酸分子は一本鎖（即ちセンス鎖）、又は二本鎖であることができる。コード領域の境界は、５’（アミノ）末端における開始コドン、及び３’（カルボキシ）末端における翻訳終止コドンにより決定される。遺伝子としては、原核細胞又は真核細胞ｍＲＮＡ由来のｃＤＮＡ、原核細胞又は真核細胞ＤＮＡ由来のゲノムＤＮＡ配列、及び合成ＤＮＡ配列を挙げることができるが、これらに限定されない。転写終結配列は通常、遺伝子配列に対して３’側に位置する。
【００７３】
用語「調節要素」とはまとめて、レシピエント細胞内のコード配列の複製、転写、翻訳後修飾プロセス、及び翻訳をまとめて提供する、プロモーター領域、ポリアデニル化シグナル、転写終結配列、上流調節ドメイン、複製起点、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、エンハンサー、スプライスジャンクションなどを意味する。選択したコード配列が、適切な宿主細胞内で複製、転写、及び翻訳されることが可能なのであれば、これらの調節要素の全てが存在する必要はない。
【００７４】
用語「プロモーター」は、本明細書でその通常の意味で用いられ、ＤＮＡ調節配列を含むヌクレオチド領域を意味し、ここで、調節配列は、ＲＮＡポリメラーゼを結合可能であり、かつ、下流（３’方向）コード配列の転写を開始することができる遺伝子に由来する。プロモーターは、調節タンパク質及び分子、例えばＲＮＡポリメラーゼ及びその他の転写因子が結合し、核酸配列の特異的転写を開始することができる遺伝因子を含有することができる。語句「作用可能に位置する」、「作用可能に結合した」、「制御下にある」、及び「転写制御下にある」とは、プロモーターが、核酸配列に対して正しい機能位置及び／又は方向にあり、その配列の転写開始及び／又は発現を制御することを意味する。
【００７５】
「エンハンサー」とは、プロモーターに隣接して配置されたときに、エンハンサードメインがないときのプロモーターから生じる転写活性と比較して、増加した転写活性を付与する、核酸配列を意味する。
【００７６】
核酸分子に関する「作用可能に結合した」又は「同時発現した」とは、２つ以上の核酸分子（例えば、転写される核酸分子、プロモーター、及びエンハンサー要素）が、核酸分子の転写を可能にするような方法で接続されていることを意味する。ペプチド及び／又はポリペプチド分子に関する「作用可能に結合した」又は「同時発現した」とは、２つ以上のペプチド及び／又はポリペプチド分子が、単一ポリペプチド鎖、即ち、融合の各ペプチド及び／又はポリペプチド構成成分の少なくとも１つの性質を有する、融合ポリペプチドを得るような方法で接続されていることを意味する。融合ポリペプチドはキメラ、即ち、異種分子で構成されるのが好ましい。
【００７７】
「相同性」とは、２つのポリヌクレオチド間、又は２つのポリペプチド間の同一性の割合を意味する。ある配列と別の配列の一致は、当該技術分野において既知の技術により測定することができる。例えば、相同性は、配列情報をアラインし、速やかに利用可能なコンピュータプログラムを使用することにより、２つのポリペプチド分子間における配列情報を直接比較することにより測定することができる。あるいは、相同性は、相同領域間において安定したデュプレックスの形成を促進する条件下にてポリヌクレオチドをハイブリダイズし、その後、一本鎖特異的ヌクレアーゼを用いて分解し、分解した断片のサイズを測定することにより測定することができる。上述の方法を用いて測定し、ヌクレオチド、又はアミノ酸の少なくとも約８０％、好ましくは少なくとも約９０％、及び最も好ましくは少なくとも約９５％が、確定された長さの分子にてそれぞれ一致するときに、２つのＤＮＡ配列、又は２つのポリペプチド配列は互いに、「実質的に相同」である。
【００７８】
用語「核酸」とは一般に、例えばＤＮＡ（例えばアデニン「Ａ」、グアニン「Ｇ」、チミン「Ｔ」、及びシトシン「Ｃ」）、又はＲＮＡ（例えばＡ、Ｇ、ウラシル「Ｕ」、及びＣ）にて見出される、天然に存在するプリン又はピリミジン塩基などの、少なくとも１つのヌクレオ塩基を含む、ＤＮＡ、ＲＮＡ、又はその誘導体若しくは模倣物の、少なくとも１つの分子又は鎖を意味する。用語「核酸」は、用語「オリゴヌクレオチド」及び「ポリヌクレオチド」を包含する。用語「オリゴヌクレオチド」とは、長さが約３〜約１００ヌクレオ塩基の、少なくとも１つの分子を意味する。用語「ポリヌクレオチド」とは、長さが約１００超のヌクレオ塩基の、少なくとも１つの分子を意味する。これらの定義は一般的に、少なくとも１つの一本鎖分子を意味するものの、特定の実施形態においては、少なくとも１つの一本鎖分子に部分的に、実質的に、又は完全に相補的な、少なくとも１つの追加の鎖もまた包含する。したがって、核酸は、当該分子鎖を含む特定の配列の、１つ以上の相補鎖又は「補体」を含む、少なくとも１つの二本鎖分子、又は少なくとも１つの三本鎖分子を包含することができる。
【００７９】
本出願を通して使用される用語「治療的効果」とは、患者の癌の内科治療に関して、その患者の健康を促進する、又は向上させる、あらゆるものを意味する。この非包括的な例の一覧としては、あらゆる期間での患者の寿命の延長；病気の腫瘍性進行の低下又は遅延；過剰増殖の減少；腫瘍増殖の減少；転移の遅延；癌細胞又は腫瘍細胞の増殖速度の低下；あらゆる治療済み細胞、又は、治療済み細胞により影響を受けるあらゆる細胞における、アポトーシスの誘発；及び、患者の状態に起因し得る、患者への疼痛の減少が挙げられる。
【００８０】
「有効量」は、特定の疾患の測定可能な改善又は予防をもたらすのに必要な少なくとも最小量である。本明細書における有効量は、患者の疾患状態、年齢、性別、及び体重、並びに個体における所望の応答を誘発する抗体の能力などの要因に応じて異なり得る。有効量はまた、治療上有益な作用が治療の任意の毒性作用又は有害作用を上回るものでもある。予防的使用の場合、有益な又は所望の結果には、疾患の生化学的、組織学的、及び／又は挙動的症状、その合併症、並びに疾患の進行中に現れる中間病理学的表現型を含む、疾患のリスクの排除若しくは低減、疾患の重症度の軽減、又は疾患の発生の遅延などの結果が含まれる。治療的使用の場合、有益な又は所望の結果には、疾患に起因する１つ以上の症状の減少、疾患に罹患している者の生活の質の向上、疾患の治療に必要な他の薬剤の用量の減少、別の薬剤の効果の増強（例えば、標的による）、疾患の進行の遅延、及び／又は生存期間の延長などの臨床結果が含まれる。癌又は腫瘍の場合、有効量の薬物は、癌細胞の数を減少させ、腫瘍サイズを低下させ、癌細胞の末梢器官への浸潤を阻害し（すなわち、ある程度遅らせるか、又は望ましくは停止し）、腫瘍転移を阻害し（すなわち、ある程度遅らせるか、又は望ましくは停止し）、腫瘍成長をある程度阻害し、及び／又は疾患に関連する症状のうちの１つ以上をある程度軽減する効果を有し得る。有効量は、１回以上の投与で投与され得る。本発明の目的に関しては、薬物、化合物、又は医薬組成物の有効量は、予防的又は治療的治療を直接又は間接的のいずれかで達成するのに十分な量である。臨床分野において理解されるように、薬物、化合物、又は医薬組成物の有効量は、別の薬物、化合物、又は医薬組成物と併せて達成されても、されなくてもよい。したがって、「有効量」は、１つ以上の治療薬の投与に関連して考慮される場合があり、単一の作用物質は、１つ以上の他の作用物質と併せると望ましい結果が達成され得るか、又は達成される場合、有効量で与えられるとみなされ得る。
【００８１】
本明細書で使用する場合、「担体」はあらゆる溶媒、分散媒、ビヒクル、コーティング剤、希釈剤、抗菌及び抗カビ剤、等張剤及び吸収遅延剤、緩衝液、担体溶液、懸濁液、コロイドなどを含む。薬学的に活性な物質用の、そのような媒体及び作用物質の使用は、当該技術分野において公知である。任意の従来の媒体又は作用物質が活性成分と非適合性である場合を除いて、従来の媒体又は作用物質を治療用組成物中で使用することが想到される。補助的活性成分も、組成物に組み込むことができる。
【００８２】
「薬学的製剤」という用語は、活性成分の生物学的活性が有効となるような形態であり、かつ製剤が投与され得る対象に許容できない毒性を有する追加の成分を含有しない、調製物を指す。そのような製剤は無菌である。「薬学的に許容される」賦形剤（ビヒクル、添加剤）とは、有効量の用いられる活性成分を提供するために、対象哺乳動物に合理的に投与可能な賦形剤である。
【００８３】
本明細書で使用する場合、用語「治療」とは、病状の経過の間、治療されている個体又は細胞の自然の経過を変更するよう設計されている臨床的介入を意味する。治療の望ましい効果としては、病気進行率の低下、病状の寛解又は緩和、及び寛解又は予後改善が挙げられる。例えば、癌性細胞の増殖の減少（又は破壊）、病気に由来する症状の低下、病気を患う個体の生活の質の増加、病気を治療するのに必要な他の投薬の投与量の減少、及び／又は、個々の生残の持続を含むがこれらに限定されない、１つ以上の、癌に関連する症状が緩和又は除去されている場合、個体は上手く「治療されている」。
【００８４】
「抗癌」剤は、例えば、癌細胞の殺傷の促進、癌細胞でのアポトーシスの誘発、癌細胞の増殖速度の低下、転移の発生又は回数の減少、腫瘍サイズの減少、腫瘍増殖の阻害、腫瘍又は癌細胞への血液供給の減少、癌細胞又は腫瘍に対する免疫応答の促進、癌の進行の予防又は阻害、あるいは、癌を有する対象の寿命の増加により、対象内の癌細胞／腫瘍に負の影響を及ぼすことができる。
【００８５】
用語「抗体」は本明細書で最も広い意味で用いられ、特に、所望の生物活性を示す限り、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）及び抗体断片を含む。
【００８６】
用語「モノクローナル抗体」は本発明で使用する場合、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を意味する。例えば、その集団を含む個々の抗体は、可能性のある変異、例えば、少量で存在し得る、天然に存在する変異を除いて同一である。したがって、修飾語「モノクローナル」は、個々の抗体の混合物ではない抗体の形質を示す。特定の実施形態において、このようなモノクローナル抗体は典型的には、標的結合ポリペプチド配列が、複数のポリペプチド配列に由来する１つの標的ポリペプチド配列の選択を含むプロセスにより入手された、標的に結合するポリペプチド配列を含む抗体を含む。例えば、選択プロセスは、ハイブリドーマクローン、ファージクローン、又は組み換えＤＮＡクローンのプールなどの、複数のプールからの、独自のクローンの選択であることができる。選択した標的結合配列を更に変更して、例えば、標的に対する親和性を改善する、標的結合配列をヒト化する、細胞培養における産生を改善する、インビボでの免疫原性を低下させる、多重特異性抗体を作成する、といったことができ、かつ、変更された標的結合配列を含む抗体もまた、本発明のモノクローナル抗体であると理解されるべきである。異なる決定基（エピトープ）に対して異なる抗体を典型的には含むポリクローナル抗体の調製物とは対照的に、モノクローナル抗体の調製物における各モノクローナル抗体は抗原の単一の決定基に対するものである。その特異性に加えて、モノクローナル抗体調製は、典型的には、他の免疫グロブリンにより汚染されない、という点で有利である。
【００８７】
用語「ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニスト」、又は「選択性ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニスト」とは、優先的にＣＤ１２２／ＣＤ１３２受容体複合体に結合し、ＩＬ−２α受容体（ＣＤ２５）又はＩＬ−１５α受容体に対して低い親和結合を有する作用物質を意味する。既知の選択性ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストとしては、ＩＬ２／抗ＩＬ２モノクローナル抗体免疫複合体（例えば、その全体が本明細書に参照により組み込まれている、米国特許出願公開第２０１７０１８３４０３Ａ１号を参照のこと）；野生型ＩＬ−２と比較して修飾されたアミノ酸配列を有する、遺伝子組み換えされたＩＬ−２ムテイン（例えば、その全体が本明細書に参照により組み込まれている、米国特許出願公開第２０１７／００４４２２９Ａ１号を参照のこと）；抗ＩＬ２モノクローナル抗体免疫複合体と組み合わせた野生型ＩＬ−２と比較して、修飾されたアミノ酸配列を有する、遺伝子組み換えされたＩＬ−２ムテイン（例えば、その全体が本明細書に参照より組み込まれている、国際公開第２０１４１０００１４Ａ１号を参照のこと）；ＮＫＴＲ−２１４などの、ＩＬ−２のＰＥＧ化形態（例えば、その全体が本明細書に参照により組み込まれている、Ｃｈａｒｙｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６を参照のこと）、ＩＬ−１５／抗ＩＬ−１５モノクローナル抗体免疫複合体；ＩＬ１５／ＩＬ１５受容体α−ＩｇＧ１−Ｆｃ（ＩＬ１５／ＩＬ１５Ｒα−ＩｇＧ１−Ｆｃ）免疫複合体（例えば、全てが参照により本明細書に組み込まれている、米国特許出願公開第２００６０２５７３６１Ａ１号、欧州特許出願公開第２７２４７２８Ａ１号、及びＤｕｂｏｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００８を参照のこと）；ＩＬ１５Ｒα−ＩｇＧ１−Ｆｃ免疫複合体と組み合わせた野生型ＩＬ−１５と比較して、修飾されたアミノ酸配列を有する、遺伝子組み換えされたＩＬ−１５ムテイン（例えば、その全体が本明細書に参照により組み込まれている、米国特許出願公開第２００７０１６０５７８号）；又は、ＣＤ１２２／ＣＤ１３２に優先的に結合する、ＩＬ−１５のＰＥＧ化形態を含む。
【００８８】
用語「免疫チェックポイント」とは、免疫反応のバランスを取るために、その構成要素に阻害信号を提供する、免疫系内のタンパク質などの分子を意味する。既知の免疫チェックポイントタンパク質は、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、並びにそのリガンドであるＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２、並びに、加えて、ＬＡＧ−３、ＢＴＬＡ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲを含む。ＬＡＧ３、ＢＴＬＡ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＴＩＭ３、及びＫＩＲを伴う経路は、ＣＴＬＡ−４及びＰＤ−１依存性経路に類似する免疫チェックポイント経路を構成することが、当該技術分野において認識されている（例えば、Ｐａｒｄｏｌｌ，２０１２．Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ  １２：２５２−２６４；Ｍｅｌｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１．Ｎａｔｕｒｅ  ４８０：４８０−４８９を参照のこと）。
【００８９】
用語「ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト」とは、Ｔ細胞機能（例えば、増殖、サイトカイン産生、標的細胞の殺傷）を回復又は向上させる結果を有しながら、ＰＤ−１シグナル伝達軸におけるシグナル伝達から生じるＴ細胞の機能障害を取り除くための、ＰＤ−１軸結合パートナーと、その１つ以上の結合パートナーのいずれかとの相互作用を阻害する分子を意味する。本明細書で使用する場合、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストとしては、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト、又はＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストを挙げることができる。
【００９０】
用語「ＰＤ−１結合アンタゴニスト」とは、ＰＤ−１と、ＰＤ−Ｌ１及び／又はＰＤ−Ｌ２などの、その１つ以上の結合パートナーとの相互作用により生じるシグナル伝達を低下させる、遮断する、阻害する、抑制する、又はこれに干渉する分子を意味する。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストとは、ＰＤ−１の、その１つ以上の結合パートナーへの結合を阻害する分子である。特定の態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１のＰＤ−Ｌ１及び／又はＰＤ−Ｌ２への結合を阻害する。例えば、ＰＤ−１結合アンタゴニストとしては、抗ＰＤ−１抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、並びに、ＰＤ−１と、ＰＤ−Ｌ１及び／又はＰＤ−Ｌ２との相互作用により生じるシグナル伝達を低下させる、遮断する、阻害する、抑制する、又はこれに干渉する、その他の分子が挙げられる。一実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、機能障害性Ｔ細胞の機能障害性を低下させる（例えば、抗原認識へのエフェクター応答を増強する）ように、ＰＤ−１を介してＴリンパ球媒介シグナル伝達で発現された細胞表面タンパク質によって、又はそれを介して媒介される、負の共刺激性シグナルを低減させる。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは抗ＰＤ−１抗体である。特定の態様において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＭＤＸ−１１０６（ニボルマブ）である。特定の態様において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＭＫ−３４７５（ペムブロリズマブ）である。別の特定の態様において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＣＴ−０１１（ピディリズマブ）である。別の特定の態様において、ＰＤ−１結合アンタゴニストはＡＭＰ−２２４である。
【００９１】
「ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ−Ｌ１とその結合パートナーのうちのいずれか１つ以上、例えば、ＰＤ−１又はＢ７−１との相互作用により生じるシグナル伝達を減少させる、遮断する、阻害する、抑制する、又はこれに干渉する分子を指す。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１の、その結合パートナーへの結合を阻害する分子である。具体的な態様では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１の、ＰＤ−１及び／又はＢ７−１への結合を阻害する。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストとしては、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、及び、ＰＤ−Ｌ１の、その１つ以上の結合パートナー、例えばＰＤ−１又はＢ７−１との相互作用により生じるシグナル伝達を減少させる、遮断する、阻害する、抑制する、又はそれに干渉するその他の分子が挙げられる。一実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、機能障害性Ｔ細胞の機能障害性を低下させる（例えば、抗原認識へのエフェクター応答を増強する）ように、ＰＤ−Ｌ１を介してＴリンパ球媒介シグナル伝達で発現された細胞表面タンパク質によって、又はそれを介して媒介される、負の共刺激性シグナルを低減させる。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。特定の態様において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体はＹＷ２４３．５５．Ｓ７０である。別の特定の態様において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体はＭＤＸ−１１０５である。更に別の特定の態様において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体はＭＰＤＬ３２８０Ａである。更に別の特定の態様において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体はＭＥＤＩ４７３６である。
【００９２】
「ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ−Ｌ２とその結合パートナーのうちのいずれか１つ以上、例えば、ＰＤ−１との相互作用により生じるシグナル伝達を減少させる、遮断する、阻害する、抑制する、又はそれに干渉する分子を指す。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２の、その結合パートナーのうちの１つ以上への結合を阻害する分子である。具体的な一態様において、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２のＰＤ−１への結合を阻害する。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ２アンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、及びＰＤ−Ｌ２とその結合パートナーのうちのいずれか１つ以上、例えば、ＰＤ−１との相互作用により生じるシグナル伝達を低減する、遮断する、阻害する、抑制する、又はそれに干渉するその他の分子を含む。一実施形態では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、機能障害性Ｔ細胞の機能障害性を低下させる（例えば、抗原認識へのエフェクター応答を増強する）ように、ＰＤ−Ｌ２を介してＴリンパ球媒介シグナル伝達で発現された細胞表面タンパク質によって、又はそれを介して媒介される、負の共刺激性シグナルを低減させる。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、イムノアドヘシンである。
【００９３】
「免疫チェックポイント阻害剤」とは、免疫チェックポイントタンパク質の機能を阻害するあらゆる化合物を意味する。阻害には、機能の低下、及び完全な遮断が含まれる。具体的には、免疫チェックポイントタンパク質はヒト免疫チェックポイントタンパク質である。したがって、免疫チェックポイントタンパク質阻害剤は具体的には、ヒト免疫チェックポイントタンパク質の阻害剤である。
【００９４】
「細胞外マトリックス分解性タンパク質」、又は「細胞外マトリックス分解タンパク質」とは、細胞マトリックスの一体性に作用する、特に、上記マトリックスの成分のうち少なくとも１つ、又は、これらの様々な成分を一体化させる結合上で、全体的又は部分的な分解又は不安定化作用を発揮する、あらゆるタンパク質を意味する。
【００９５】
「アブスコパル効果」とは本明細書において、腫瘍の局在的治療の範囲外で、腫瘍が収縮することとして言及される。例えば、免疫チェックポイント治療法による全身治療と組み合わせて、ｐ５３及び／又はＩＬ−２４を用いる局所治療により、離れた未治療腫瘍にてアブスコパル効果をもたらすことができる。
【００９６】
ＩＩ．  癌抑制因子
いくつかの実施形態において、対象には、ｐ５３及び／又はＭＤＡ−７治療法などの、癌抑制治療法が投与される。ｐ５３及び／又はＭＤＡ−７をコードする核酸は、当該技術分野において既知の様々な方法で提供することができる。
【００９７】
いくつかの態様では、ｐ５３及びＭＤＡ−７癌抑制治療法は、核酸多様体を組み込んで、その活性を増加させる。特定の態様において、多様体癌抑制核酸は、負の制御に耐性を有するｐ５３多様体である（Ｙｕｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２；その全体が本明細書に参照により組み込まれている）。
【００９８】
Ａ．ｐ５３
特定の実施形態において、本開示は、癌治療のための併用療法を提供する。本明細書において提供する併用療法のいくつかとしては、野生型ｐ５３遺伝子を対象に投与することを含む、ｐ５３遺伝子治療法が挙げられる。野生型ｐ５３は、多くの細胞型における重要な成長制御因子として認識されている。ｐ５３遺伝子は、大型Ｔ抗原及びＥ１Ｂなどの宿主タンパク質と複合体を形成可能な、３７５アミノ酸のリンタンパク質をコードする。タンパク質は通常の組織及び細胞内で見出されるが、形質転換細胞又は腫瘍組織と比較してわずかな濃度においてである。
【００９９】
ミスセンス変異はｐ５３遺伝子にとっては一般的であり、癌遺伝子の形質転換能力のために不可欠である。点変異により促進される１つの遺伝子変化により、発癌性物質のｐ５３が作製され得る。しかし、他の癌遺伝子とは異なり、ｐ５３点変異は、少なくとも３０個の異なるコドンにて生じることが知られており、多くの場合、ホモ接合体に対する低減なしに、細胞表現型におけるシフトを生み出す優性対立遺伝子を作製する。更に、これらのドミナントネガティブ対立遺伝子の多くは、生命体にて耐性があり、生殖細胞系を通過するようである。様々な変異対立遺伝子が、機能障害が最小のものから、強力で貫通性のドミナントネガティブ対立遺伝子までの範囲となっているようである（Ｗｅｉｎｂｅｒｇ，１９９１）。化学的発癌性物質、紫外線、及びいくつかのウイルスにより形質転換された多くの細胞において、多量の変異体ｐ５３が発見されている。
【０１００】
いくつかの態様では、ｐ５３バイオマーカーを用いて、ｐ５３治療のための患者を選択する。特定の態様において、好ましい腫瘍ｐ５３バイオマーカープロファイルは、野生型ｐ５３遺伝子構成、又は、免疫組織化学により２０％未満のｐ５３陽性細胞のいずれかにより定義される（米国特許第９，７４６，４７１号、及びＮｅｍｕｎａｉｔｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００９；両方の全体が参照により組み込まれている）。
【０１０１】
Ｂ．  ＭＤＡ−７
本明細書において提供する併用療法はまた更に、完全長又は切断ＭＤＡ−７遺伝子を投与することを含むＭＤＡ−７遺伝子治療法を含むことができる。ｍｄａ−７遺伝子のタンパク質産生物であるインターロイキン（ＩＬ）−２４は、サイトカインのＩＬ−１０ファミリーに属するサイトカインであり、癌抑制因子でもある。ＭＤＡ−７タンパク質をコードするｃＤＮＡが、Ｊｉａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５（国際公開第１９９５０１１９８６号）により記載されている。ＭＤＡ−７  ｃＤＮＡは、２３．８ｋＤａの予想サイズを有する２０６アミノ酸の、進化上で保存されたタンパク質をコードする。
【０１０２】
本明細書において提供するＭＤＡ−７をコードする核酸は、完全長又は切断ヒトＩＬ−２４タンパク質又はポリペプチドをコードすることができる。切断版のＭＤＡ−７は、完全長配列の連続したアミノ酸領域のある部分又は複数の部分を含むが、配列全体を含有はしない。切断版は、ポリペプチドの任意の部位における、任意数の連続アミノ酸で切断することができる。例えば、切断版のＭＤＡ−７は、ヒト野生型ＭＤＡ−７の約４９〜約２０６；約７５〜約２０６；約１００〜約２０６；約１２５〜約２０６；約１５０〜約２０６；約１７５〜約２０６；又は約１８２〜約２０６のアミノ酸をコードすることができる。ヒト野生型ＭＤＡ−７の少なくとも約８５％、９０％、及び９５％を含有するＭＤＡ−７ポリペプチドは本発明の範囲内であることもまた想到される。
【０１０３】
Ｃ．その他の癌抑制因子
追加の癌抑制因子を本開示で使用することができる。その他の癌抑制遺伝子を組み込むのに本開示で使用するための遺伝子治療ベクターとしては、表１に記載されているものが挙げられるが、これらに限定されない。
【表１】
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【０１０４】
ＩＩＩ．  細胞外マトリックス分解
癌抑制遺伝子治療法、及び／又は免疫チェックポイント阻害剤の抗腫瘍効果を増強させる方法もまた、本明細書において提供する。一態様において、遺伝子治療法（例えばウイルス分配）の送達及び腫瘍貫通は、腫瘍細胞の細胞外マトリックス（ＥＣＭ）又はその補体を分解する、タンパク質又は作用物質により増強される。
【０１０５】
細胞外マトリックス（ＥＣＭ）は、周囲の細胞の構造的及び生化学的支持を提供する細胞により分泌される、細胞外分子の収集物である。多細胞性は、異なる多細胞のリネージにて独立して進化したため、ＥＣＭの組成物は、多細胞構築物間で異なる。しかし、細胞接着、細胞どうしの通信、及び分化は、ＥＣＭの共通の機能である。細胞外マトリックス分解性タンパク質により標的化され得るＥＣＭの構成成分としては、コラーゲン、エラスチン、ヒアルロン酸、フィブロネクチン、及びラミニンが挙げられる。
【０１０６】
Ａ．  リラキシン
本明細書において提供する方法にて使用可能な、１つの細胞外マトリックス分解タンパク質は、リラキシンである。リラキシンとは、構造的にインスリン及びインスリン様成長因子に関連している、６ｋＤａのペプチドホルモンである。リラキシンは、黄体及び子宮内膜にて主に産生され、その血清量は、妊娠中に大幅に増加する（Ｓｈｅｒｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４）。リラキシンは、コラーゲンが過剰発現する際の、コラーゲン発現の強力な阻害剤であるが、他のコラーゲンとは対照的に、コラーゲン発現の基底量を著しく変えることはない。リラキシンは、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、及びＭＭＰ９などの様々なＭＭＰの発現を促進してコラーゲンを分解するため、結合組織及び基底膜が分解され、産道の細胞外マトリックスの破壊をもたらす。これに加え、リラキシンによるＭＭＰ１及びＭＭＰ３の発現の促進もまた、肺、心臓、皮膚、腸、乳腺、血管、及び精管において観察されており、これらの場所では、リラキシンは、阻害剤としての役割を果たし、コラーゲンの過剰発現を防止する（Ｑｉｎ，Ｘ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９７ａ；Ｑｉｎ，Ｘ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９７ｂ）。
【０１０７】
リラキシンタンパク質、又はリラキシンタンパク質をコードする核酸を投与することにより、腫瘍細胞の周囲にある細胞外マトリックスの主要構成成分であるコラーゲンの分解を誘発し、結合組織及び基底膜を破壊することで、細胞外マトリックスの分解をもたらすことができる。特に、結合組織によりきつく囲まれた腫瘍組織に投与されるとき、リラキシンと組み合わせての、癌抑制遺伝子治療法の投与は、改善された抗腫瘍有効性を示す。
【０１０８】
リラキシンタンパク質は、米国特許第５，０２３，３２１号に記載されているように、生物活性を保持する、完全長リラキシン、又はリラキシン分子の一部であることができる。具体的には、リラキシンは、受容体から、結合したリラキシンを競合的に置き換える作用物質などの、組み換えヒトリラキシン（Ｈ２）、又はリラキシン様活性を有する、その他の活性剤である。リラキシンは、好ましくは米国特許第４，８３５，２５１号に記載されているように、当業者に既知の任意の方法により、作製することができる。リラキシン類似体又はその誘導体は、米国特許第５８１１３９５号に記載されており、ペプチド合成は、米国特許出願公開第２０１１００３９７７８号に記載されている。
【０１０９】
本明細書において提供する方法にて使用可能な、例示的なアデノウイルスリラキシンは、Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）により説明されている。手短かに言えば、リラキシン遺伝子をＥ３アデノウイルス領域に挿入することにより、リラキシンを発現し、複製可能な（Ａｄ−ΔＥ１Ｂ−ＲＬＸ）アデノウイルスが作製される。
【０１１０】
Ｂ．  ヒアルロニダーゼ
いくつかの実施形態では、通常、ヒアルロン酸などの細胞外マトリックスに存在する多糖類を加水分解することができる任意の物質を、投与することができる。具体的には、本発明で使用する細胞外マトリックス分解タンパク質は、ヒアルロニダーゼであることができる。ヒアルロナン（又はヒアルロン酸）は、脊椎動物の細胞外マトリックスの広範囲に存在する構成成分である。グルクロン酸及びグルコサミン［Ｄ−グルクロン酸（１−β−３）Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（１−ｂ−４）］をベースにする、この直鎖状多糖類は、非常に粘稠な溶液を形成するというその性質により、マトリックスの物理化学的性質に影響を及ぼすことができる。ヒアルロン酸は、細胞表面に位置する、様々な受容体及び結合タンパク質ともまた相互作用する。ヒアルロン酸は、受精、胚の発達、細胞移動及び分化、傷の治癒、炎症、腫瘍増殖、及び転移の形成などの、多数の生物過程に関与する。
【０１１１】
ヒアルロン酸はヒアルロニダーゼにより加水分解され、加水分解により、細胞外マトリックスの解体がもたらされる。したがって、Ｋｒｅｉｌ（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．，１９９５，４：１６６６−１６６９）に記載されている、ヒアルロニダーゼなどの、ヒアルロニダーゼ活性を有する任意の物質が、本方法での使用に好適であることが想到される。ヒアルロニダーゼは、哺乳類、爬虫類、又は膜翅類のヒアルロナートであるグリカノヒドロラーゼ、ヒルの唾液腺由来の、ヒアルロナートであるグリカノヒドロラーゼ、又は、細菌、特に連鎖球菌、肺炎球菌、及びガス壊疽菌のヒアルロナートであるリアーゼに由来するヒアルロニダーゼであることができる。ヒアルロニダーゼの酵素活性は、Ｈｙｎｅｓ  ａｎｄ  Ｆｅｒｒｅｔｔｉ（Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１９９４，２３５：６０６−６１６）又はＢａｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｌｅｖｉｎｅ（Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ａｎａｌ．，１９９３，１１：２８５−２９２）に記載されているような従来技術によって、評価することができる。
【０１１２】
Ｃ．デコリン
小型のロイシンリッチなプロテオグリカンであるデコリンは、細胞外マトリックスの遍在する構成成分であり、コラーゲンフィブリルと関連して、主に発見されている。デコリンはコラーゲンフィブリルに結合し、個々の三重ヘリックスコラーゲン分子の水平アセンブリを遅らせ、フィブリル直径の減少をもたらす。更に、デコリンは、フィブロネクチン及びトロンボスポンジンなどの細胞外マトリックス構成成分の、細胞との相互作用を調節することができる。更に、デコリンは、マトリックスメタロプロテイナーゼであるコラゲナーゼの誘発により、細胞外マトリックスの再構築に影響を及ぼすことができる。Ｃｈｏｉ  ｅｔ  ａｌ．（Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，１７：１９０−２０１，２０１０）及びＸｕ  ｅｔ  ａｌ．（Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，２２（３）：３１−４０，２０１５）により説明されているように、いくつかのレベルにおいて、デコリンが細胞外マトリックスの産生及びアセンブリを制御し、故に、結合組織の再構築において主たる役割を有することを、これらの観測結果は示唆している。
【０１１３】
本明細書において提供する方法にて使用可能な、例示的なアデノウイルス型デコリンは、Ｃｈｏｉ  ｅｔ  ａｌ．（Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，１７：１９０−２０１，２０１０）により説明されている。手短かに言えば、デコリンを発現する、複製可能な（Ａｄ−ΔＥ１Ｂ−ＤＣＮＧ）アデノウイルスは、デコリン遺伝子をＥ３アデノウイルス領域に挿入することにより生成される。本明細書において提供する方法にて使用可能な、別のアデノウイルス型デコリンは、Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．（Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，２２（３）：３１−４０，２０１５）により説明されている。同様に、デコリンを発現する複製可能な（Ａｄ．ｄｃｎ）アデノウイルスは、デコリン遺伝子をＥ３アデノウイルス領域に挿入することにより生成される。
【０１１４】
ＩＶ．  核酸
当業者に既知の任意の技術により、核酸を作製することができる。合成核酸、特に、合成オリゴヌクレオチドの非限定例としては、欧州特許第２６６，０３２号に記載されているような、ホスホトリエステル、ホスファイト、若しくはホスホラミダイト化学現象、及び固相技術を用いる、又は、Ｆｒｏｅｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６、及び米国特許第５，７０５，６２９号に記載されているデオキシヌクレオシドＨ−ホスホネート中間体による、インビトロ化学合成により作製される核酸が挙げられる。酵素により作製した核酸の非限定例としては、ＰＣＲ（商標）などの増幅反応における酵素（例えば、米国特許第４，６８３，２０２号、及び同第４，６８２，１９５号を参照のこと）、又は、米国特許第５，６４５，８９７号に記載されている、オリゴヌクレオチドの合成により、作製したものが挙げられる。生物学的に作製した核酸の非限定例としては、細菌中での組み換えＤＮＡベクター作製などの、生細胞での組み換え核酸作製が挙げられる（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．１９８９を参照のこと）。
【０１１５】
核酸を、それ自体の配列の長さに関係なく、プロモーター、エンハンサー、ポリアデニル化シグナル、制限酵素部位、複数のクローニング部位、コードセグメントなどを含むがこれらに限定されない、他の核酸配列と組み合わせ、１つ以上の核酸構築物を作製することができる。全長は、核酸構築物間で大幅に異なる場合がある。したがって、ほぼあらゆる長さの核酸セグメントを用いることができるものの、全長は、調製の容易さ、又は意図される組み換え核酸プロトコールでの使用により、限定されるのが好ましい。
【０１１６】
Ａ．  発現ベクターによる核酸送達
本明細書において提供するベクターは主に、調節された真核細胞プロモーター（即ち、体質性、誘発性、抑制性、組織特異的）の制御下において、治療用癌抑制遺伝子（例えば、ｐ５３及び／又はＭＤＡ−７）、及び／又は細胞外マトリックス分解性遺伝子（例えば、リラキシン）を発現するために設計される。いくつかの態様では、ｐ５３及びＭＤＡ−７は、ベクター内で同時に発現することができる。別の態様において、ｐ５３及び／又はＭＤＡ−７は、細胞外マトリックス分解性遺伝子と共に同時に発現することができる。また、他の理由がない場合、ベクターは、インビトロでの操作を容易にするための選択マーカーを含有することができる。
【０１１７】
当業者は、標準的な組み換え技術により、ベクターを構築するための装備を十分に有しているであろう（例えば、両方が参照により本明細書に組み込まれている、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００１及びＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６を参照のこと）。ベクターとしては、レトロウイルスベクター（例えば、モロニーマウス白血病ウイルスベクター（ＭｏＭＬＶ）、ＭＳＣＶ、ＳＦＦＶ、ＭＰＳＶ、ＳＮＶなどに由来する）、レンチウイルスベクター（例えば、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＳＩＶ、ＢＩＶ、ＦＩＶなどに由来する）、複製可能、複製不能、及びガットレス形態を含むアデノウイルス（Ａｄ）ベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、シミアンウイルス４０（ＳＶ−４０）ベクター、ウシ乳頭腫ウイルス、エプスタイン・バーウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、Ｈａｒｖｅｙマウス肉腫ウイルスベクター、マウス乳癌ウイルスベクター、Ｒｏｕｓ肉腫ウイルスベクターなどの、プラスミド、コスミド、ウイルス（バクテリオファージ、動物ウイルス、及び植物ウイルス）、並びに人工染色体（例えばＹＡＣ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１８】
１．  ウイルスベクター
癌抑制因子、及び／又は細胞外マトリックス分解性遺伝子をコードするウイルスベクターを、本発明の特定の態様にて提供することができる。組み換えウイルスベクターの生成において、不可欠ではない遺伝子は典型的には、異種（又は非天然）タンパク質用の遺伝子又はコード配列で置き換えられる。ウイルスベクターとは、ウイルス配列を利用して、核酸、及び場合によりタンパク質を、細胞内に導入する、発現構築物の一種である。特定のウイルスが、受容体を媒介するエンドサイトーシスにより細胞に感染し、又は細胞に入り、宿主細胞ゲノム内に一体化してウイルス遺伝子を発現するという能力により、それらのウイルスは外来核酸を細胞（例えば哺乳類細胞）内に移動させるための魅力的な候補に、安定して、かつ効率的に仕立てられる。本発明の特定の態様の核酸を送達するために使用可能なウイルスベクターの非限定例を、以下で説明する。
【０１１９】
レンチウイルスは、一般的なレトロウイルス遺伝子であるｇａｇ、ｐｏｌ、及びｅｎｖに加えて、制御性又は構造性機能を有する他の遺伝子を含有する、複雑なレトロウイルスである。レンチウイルスベクターは当該技術分野において周知である（例えば、Ｎａｌｄｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６；Ｚｕｆｆｅｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７；Ｂｌｏｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７；米国特許第６，０１３，５１６号、及び同第５，９９４，１３６号を参照のこと）。
【０１２０】
組み換えレンチウイルスベクターは、非分裂細胞に感染することができ、核酸配列の、インビボ及びエクスビボ遺伝子導入及び発現の両方に使用することができる。例えば、非分裂細胞に感染可能な組み換えレンチウイルス（ここで、好適な宿主細胞には、パッケージング機能を有する２つ以上のベクター、即ちｇａｇ、ｐｏｌ、及びｅｎｖ、並びにｒｅｖ及びｔａｔがトランスフェクションされている）は、参照により本明細書に組み込まれている、米国特許第５，９９４，１３６号に記載されている。
【０１２１】
ａ．  アデノウイルスベクター
癌抑制因子、及び／又は細胞外マトリックス分解性遺伝子を送達するための一方法には、アデノウイルス発現ベクターの使用を伴う。アデノウイルスベクターは、ゲノムＤＮＡへの組み込み能力が低いことが知られているものの、この特徴は、これらのベクターにより得られる高効率の遺伝子導入により、相殺される。アデノウイルス発現ベクターとしては、（ａ）構築物のパッケージングを支持し、かつ、（ｂ）その中にクローニングされた組換え遺伝子構築物を最終的に発現するのに十分なアデノウイルス配列を含有する構築物が挙げられる。
【０１２２】
アデノウイルス増殖及び操作は当業者に既知であり、インビトロ及びインビボにて、広い宿主範囲を示す。このウイルスの群は高い力価、例えば、１ｍＬ当たり、１０９〜１０１１のプラーク形成単位にて得ることができ、これらは感染性が高い。アデノウイルスの生活環は、宿主細胞ゲノムへの組み込みを必要としない。アデノウイルスベクターにより送達される外来遺伝子はエピソーム性であり、それ故、宿主細胞に対して低い遺伝毒性を有する。野生型アデノウイルスをワクチン接種する研究において、副作用は報告されておらず（Ｃｏｕｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９６３；Ｔｏｐ  ｅｔ  ａｌ．，１９７１）、これは、インビボ遺伝子導入ベクターとしての安全性、及び治療上の可能性を示している。
【０１２３】
３６ｋｂの直鎖状二本鎖ＤＮＡウイルスであるという、アデノウイルスの遺伝構成の知識により、大型のアデノウイルスＤＮＡを、最大７ｋｂの外来配列で置き換えることが可能となる（Ｇｒｕｎｈａｕｓ  ａｎｄ  Ｈｏｒｗｉｔｚ，１９９２）。レトロウイルスとは対照的に、アデノウイルスＤＮＡは、潜在的な遺伝毒性を有することなく、エピソームのように複製することができるため、宿主細胞がアデノウイルスで感染することによっては、染色体の導入はもたらされない。アデノウイルスはまた、構造的に安定しており、大規模な増幅の後に、ゲノム転位は検出されていない。
【０１２４】
アデノウイルスは、中型サイズゲノムであり、操作の容易性、高い力価、広い標的細胞の範囲、及び高い感染性によって、遺伝子導入ベクターとして使用するのが特に好適である。ウイルスゲノムの両端は、１００〜２００塩基対の逆位反復（ＩＴＲ）を含有し、これらは、ウイルスＤＮＡ複製及びパッケージングのために必要なｃｉｓ要素である。ゲノムの初期（Ｅ）及び後期（Ｌ）領域は、ウイルスＤＮＡ複製の開始により分けられる、異なる転写単位を含有する。Ｅ１領域（Ｅ１Ａ及びＥ１Ｂ）は、ウイルスゲノムの転写制御を担うタンパク質、及び少数の細胞遺伝子をコードする。Ｅ２領域（Ｅ２Ａ及びＥ２Ｂ）の発現により、ウイルスＤＮＡ複製のためのタンパク質の合成がもたらされる。これらのタンパク質はＤＮＡ複製、後期遺伝子発現、及び宿主細胞の遮断に関与している（Ｒｅｎａｎ，１９９０）。ウイルス性キャプシドタンパク質の大部分を含む、後期遺伝子の生成物は、主要後期プロモーター（ＭＬＰ）に由来する、単一の一次転写物の著しい処理の後にのみ、発現する。ＭＬＰ（１６．８ｍ．ｕ．に位置）は特に、感染の後期段階の間に効果的であり、このプロモーターに由来するｍＲＮＡは全て、５’の３つに分かれたリーダー（ＴＰＬ）配列を有し、これらにより、特定のｍＲＮＡが翻訳用となる。
【０１２５】
本明細書において提供する組み換えアデノウイルスは、シャトルベクターとプロウイルスベクターとの相同組み換えにより、生成することができる。２つのプロウイルスベクターの、可能な組み換えにより、野生型アデノウイルスを、本プロセスから生成することができる。それ故、ウイルスの単一クローンは個々のプラークから単離され、そのゲノム構造が調査される。
【０１２６】
アデノウイルスベクターは複製可能、複製不能、又は条件次第で不能であることができ、アデノウイルスベクターの性質は、本発明を上手く実施するのに重要であるとは考えられていない。アデノウイルスは、４２個の異なる既知の血清型又は亜群Ａ〜Ｆのいずれかであることができる。亜群Ｃのアデノウイルス５型は、本発明で使用するための、条件次第で複製不能なアデノウイルスベクターを得るための、具体的な出発物質である。これは、アデノウイルス５型が、多くの生化学的及び遺伝子情報が知られているヒトアデノウイルスであり、アデノウイルスをベクターとして用いる最も多くの構築物に、歴史的に用いられているためである。
【０１２７】
核酸はアデノウイルスベクターに、コード配列が取り除かれた位置として導入することができる。例えば、複製不能なアデノウイルスベクターでは、Ｅ１をコードする配列が取り除かれていることができる。対象の遺伝子をコードするポリヌクレオチドはまた、Ｋａｒｌｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８６）により説明されているように、Ｅ３置き換えベクター内に、欠失したＥ３領域の代わりに、又は、ヘルパー細胞株又はヘルパーウイルスがＥ４欠失を補完する、Ｅ４領域に、挿入することができる。
【０１２８】
複製不能アデノウイルスベクターの生成及び増殖を、ヘルパー細胞株を用いて実施することができる。２９３と呼ばれる、ある独自のヘルパー細胞株を、Ａｄ５ＤＮＡ断片によりヒト胎児腎臓細胞から形質転換すると、構造的に、Ｅ１タンパク質を発現する（Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９７７）。Ｅ３領域は、アデノウイルスゲノムから分配可能であるため（Ｊｏｎｅｓ  ａｎｄ  Ｓｈｅｎｋ，１９７８）、アデノウイルスベクターは、２９３細胞の補助により、外来ＤＮＡをＥ１、Ｅ３のいずれか、又はこれら両方の領域に運搬する（Ｇｒａｈａｍ  ａｎｄ  Ｐｒｅｖｅｃ，１９９１）。
【０１２９】
ヘルパー細胞株は、ヒト胎児腎臓細胞、筋細胞、造血細胞、又は、他のヒト胚間葉若しくは上皮細胞などの、ヒト細胞に由来することができる。あるいは、ヘルパー細胞は、ヒトアデノウイルスに対して許容的な、他の哺乳動物種の細胞に由来することができる。このような細胞としては例えば、ベロ細胞、又は、他のサル胚間葉若しくは上皮細胞が挙げられる。上述のとおり、具体的なヘルパー細胞株は、２９３である。
【０１３０】
参照により本明細書に組み込まれている米国特許第６７４０３２０号などの組み換えアデノウイルスの作製方法は、当技術分野において既知である。また、Ｒａｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）は、２９３細胞を培養する、及び、アデノウイルスを増殖させる、改善された方法について開示している。一形態において、個別の細胞を１リットルの、１００〜２００ｍＬの培地を含有する、シリコーン処理したスピナーフラスコ（Ｔｅｃｈｎｅ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）に播種することにより、天然細胞のアグリゲートが増殖する。４０ｒｐｍにて撹拌した後、トリパンブルーを用いて細胞生存能を推定する。別の形態において、Ｆｉｂｒａ−Ｃｅｌマイクロキャリア（Ｂｉｂｂｙ  Ｓｔｅｒｌｉｎ，Ｓｔｏｎｅ，ＵＫ）（５ｇ／Ｌ）を、以下のとおりに用いる。５ｍＬの培地に再懸濁した細胞種菌を、２５０ｍＬの三角フラスコ内で担体（５０ｍＬ）に加え、適宜撹拌しながら、１〜４時間静置した。次に、培地を５０ｍＬの、新鮮な培地で交換し、振盪を開始した。ウイルス作製のため、細胞を約８０％のコンフルエンスまで増殖させ、その後、培地を交換し（終体積は２５％）、アデノウイルスをＭＯＩ  ０．０５にて添加した。培養液を一晩静置し、その後、体積を１００％まで増加させて、更に７２時間の振盪を開始した。
【０１３１】
ｂ．  レトロウイルスベクター
更に、癌抑制因子、及び／又は細胞外マトリックス分解性遺伝子を、レトロウイルスベクターによりコードすることができる。レトロウイルスは、逆転写プロセスにより、感染した細胞内で、細胞のＲＮＡを二本鎖ＤＮＡに転換する能力を特徴とする、一本鎖ＲＮＡウイルスの群である（Ｃｏｆｆｉｎ，１９９０）。得られたＤＮＡを次に、プロウイルスとして細胞染色体内に、安定的に組み込み、ウイルス性タンパク質の合成を指令する。組み込みにより、レシピエント細胞、及びその子孫において、遺伝子配列が保持される。レトロウイルスゲノムは、それぞれ、キャプシドタンパク質、ポリメラーゼ酵素、及びエンベロープ構成成分に対してコードする３つの遺伝子、ｇａｇ、ｐｏｌ、及びｅｎｖを含有する。ｇａｇ遺伝子の上流に見出される配列は、ゲノムをヴィリオンにパッケージングするためのシグナルを含有する。２つの長末端反復（ＬＴＲ）配列は、ウイルスゲノムの５’及び３’末端に存在する。これらは、強力なプロモーター及びエンハンサー配列を含有し、宿主細胞ゲノム内への組み込みのためにも必要である（Ｃｏｆｆｉｎ，１９９０）。
レトロウイルスベクターを構築するために、対象の遺伝子をコードする核酸を、特定のウイルス配列の代わりにウイルスゲノムに挿入し、複製不能なウイルスを作製する。
【０１３２】
ヴィリオンを作製するために、ｇａｇ、ｐｏｌ、及びｅｎｖ遺伝子を含有するが、ＬＴＲ及びパッケージング構成成分を含有しない、パッケージング細胞を構築する（Ｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８３）。レトロウイルスＬＴＲ及びパッケージング細胞と共に、ｃＤＮＡを含有する組み換えプラスミドが、（例えばリン酸カルシウム沈殿により）この細胞株に組み込まれるとき、パッケージング配列により、組み換えプラスミドのＲＮＡ転写産物がウイルス粒子内にパッケージされることができ、これが次に、細胞培地内に分泌される（Ｎｉｃｏｌａｓ  ａｎｄ  Ｒｕｂｅｎｓｔｅｉｎ，１９８８；Ｔｅｍｉｎ，１９８６；Ｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８３）。組み換えレトロウイルスを含有する培地を次いで収集し、任意に濃縮して、遺伝子導入のために使用する。レトロウイルスベクターは、広範囲の様々な細胞型に感染することができる。しかし、導入及び安定した発現のためには、宿主細胞の分裂が必要である（Ｐａｓｋｉｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９７５）。
【０１３３】
欠損性レトロウイルスベクターを使用する懸念は、パッケージング細胞内で、野生型の複製可能なウイルスが出現する可能性があることである。これは、組み換えウイルス由来のインタクトな配列が、宿主細胞ゲノムに組み込まれたｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ配列の上流に挿入される組み換え事象により生じる可能性がある。しかし、組み換えの可能性を大幅に低下させるはずである、パッケージング細胞株が利用可能である（Ｍａｒｋｏｗｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８；Ｈｅｒｓｄｏｒｆｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０）。
【０１３４】
ｃ．  アデノ随伴ウイルスベクター
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）は、高頻度の組み込みを有するために、本開示での使用に関して魅力的なベクター系であり、非分裂細胞に感染することができるため、遺伝子を哺乳類細胞に送達するのに有用となる（Ｍｕｚｙｃｚｋａ，１９９２）。ＡＡＶは、広い範囲の宿主に対して感染力を持っており（Ｔｒａｔｓｃｈｉｎ，ｅｔ  ａｌ．，１９８４；Ｌａｕｇｈｌｉｎ，ｅｔ  ａｌ．，１９８６；Ｌｅｂｋｏｗｓｋｉ，ｅｔ  ａｌ．，１９８８；ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ，ｅｔ  ａｌ．，１９８８）、これは、ＡＡＶが本発明で用いるのに適していることを意味する。ｒＡＡＶベクターの生成及び使用に関する詳細は、米国特許第５，１３９，９４１号、及び同第４，７９７，３６８号に記載されている。
別のウイルス（アデノウイルス、又はヘルペスウイルスファミリーの要素のいずれか）と同時感染し、培養細胞にて増殖感染を受ける必要がある（Ｍｕｚｙｃｚｋａ，１９９２）という点で、ＡＡＶは依存性のパルボウイルスである。
【０１３５】
ヘルパーウイルスとの同時感染がないと、野生型ＡＡＶゲノムは、その末端を通して、プロウイルスとして潜在的な状態で存在する、ヒト染色体１９に組み込まれる（Ｋｏｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０；Ｓａｍｕｌｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１）。しかし、ＡＡＶ  Ｒｅｐタンパク質もまた発現しない限り、ｒＡＡＶは、組み込みに関して、染色体１９に限定されていない（Ｓｈｅｌｌｉｎｇ  ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ，１９９４）。ＡＡＶプロウイルスを有する細胞がヘルパーウイルスで重感染するとき、ＡＡＶゲノムは染色体から、又は組み換えプラスミドから「救出」され、通常の増殖感染が確立される（Ｓａｍｕｌｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９；ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８；Ｋｏｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０；Ｍｕｚｙｃｚｋａ，１９９２）。
【０１３６】
典型的には、組み換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ウイルスは、２つのＡＡＶ末端反復が隣接する対象の遺伝子を含有するプラスミド（ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８；Ｓａｍｕｌｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９；それぞれが参照により本明細書に組み込まれている）と、末端反復を有しない野生型ＡＡＶコード配列を含有する発現プラスミド、例えばｐＩＭ４５（ＭｃＣａｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１）同時トランスフェクションすることにより作製される。細胞はまた、ＡＡＶヘルパー機能のために必要なアデノウイルス遺伝子を有するアデノウイルス又はプラスミドで感染される、又はこれをトランスフェクションされる。このように作製されたｒＡＡＶウイルスのストックを、（例えば、塩化セシウム密度勾配により）物理的にｒＡＡＶ粒子から分離されていなければならないアデノウイルスで汚染させる。あるいは、ＡＡＶコード領域を含有するアデノウイルスベクター、又は、ＡＡＶコード領域、及びアデノウイルスヘルパー遺伝子のいくつか若しくは全てを含有する細胞株を、使用することができる（Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４；Ｃｌａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５）。組み込まれたプロウイルスとしてｒＡＡＶ  ＤＮＡを有する細胞株もまた、使用することができる（Ｆｌｏｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５）。
【０１３７】
ｄ．  その他のウイルスベクター
本開示において、その他のウイルスベクターを構築物として使用することができる。ワクシニアウイルス（Ｒｉｄｇｅｗａｙ，１９８８；Ｂａｉｃｈｗａｌ  ａｎｄ  Ｓｕｇｄｅｎ，１９８６；Ｃｏｕｐａｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８）及びヘルペスウイルスなどのウイルスに由来するベクターを使用することができる。それらは、様々な哺乳類細胞に対していくつかの魅力的な特徴を提供する（Ｆｒｉｅｄｍａｎｎ，１９８９；Ｒｉｄｇｅｗａｙ，１９８８；Ｂａｉｃｈｗａｌ  ａｎｄ  Ｓｕｇｄｅｎ，１９８６；Ｃｏｕｐａｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８；Ｈｏｒｗｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０）。
【０１３８】
ベネズエラウマ脳炎（ＶＥＥ）ウイルスの、分子的にクローニングした株が遺伝的に、異種ウイルス性タンパク質の発現のための複製可能なワクチンベクターとして洗練されている（Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）。研究により、ＶＥＥ感染が潜在的なＣＴＬ応答を刺激することが示され、ＶＥＥが、予防接種用のベクターとして非常に有用であり得ることが示唆された（Ｃａｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７）。
【０１３９】
更なる実施形態では、キメラＣＤ１５４をコードする核酸は、特異的結合リガンドを発現するように改変された感染性ウイルス内に収容されている。したがって、ウイルス粒子は標的細胞の同種の受容体に特異的に結合し、内容物を細胞に送達する。ラクトース残基をウイルスエンベロープに化学付加することによる、レトロウイルスの化学修飾に基づき、レトロウイルスベクターを特異的に標的化することができるように設計された新規のアプローチが、近年開発された。この修飾により、シアロ糖タンパク質受容体を介して、肝細胞の特異的感染を可能にすることができる。
【０１４０】
例えば、レトロウイルスエンベロープタンパク質、及び特異的細胞受容体に対するビオチン化抗体を使用する、組み換えレトロウイルスの標的化が設計された。ストレプトアビジンを使用して、ビオチン構成成分を介して抗体を結合した（Ｒｏｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９）。主要組織適合性複合体クラスＩ及びクラスＩＩ抗原に対する抗体を使用すると、これらは、同種指向性ウイルスを有するこれらの表面抗原を有する様々なヒト細胞の、インビトロでの感染を示した（Ｒｏｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９）。
【０１４１】
２．  制御因子
本開示において有用なベクターに含まれる発現カセットは具体的に、（５’から３’方向に）タンパク質コード配列に作用可能に結合した真核細胞転写プロモーター、介在配列を含むスプライスシグナル、及び、転写終結／ポリアデニル化配列を含有する。真核細胞内で遺伝子をコードするタンパク質の転写を制御するプロモーター及びエンハンサーは、複数の遺伝因子で構成される。細胞の機構は、各要素により運ばれる制御情報を集めて一体化させることが可能であり、これにより、異なる遺伝子が異なる、多くの場合は複雑な、転写制御パターンを進化させることを可能にする。本発明の文脈で使用されるプロモーターとしては、体質性、誘導性、及び組織特異的プロモーターが挙げられる。
【０１４２】
ａ．  プロモーター／エンハンサー
本明細書において提供する発現構築物は、癌抑制因子、及び／又は細胞外マトリックス分解性遺伝子の発現を駆動するプロモーターを含む。プロモーターは一般に、ＲＮＡ合成の開始部位を位置決めするように機能する配列を含む。この最も知られた例はＴＡＴＡボックスであるが、例えば、哺乳動物の末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ遺伝子用のプロモーター、及びＳＶ４０後期遺伝子用のプロモーターなどＴＡＴＡボックスを欠くいくつかのプロモーターにおいては、それ自体の開始部位に重なっている個別の因子が、開始位置を固定するのに役立つ。追加のプロモーター因子は、転写開始の頻度を制御する。典型的には、開始部位の３０−１１０ｂｐ上流の領域にこれらは位置するものの、多数のプロモーターが、同様に、開始部位の顆粒に、機能因子を含有することが示されている。コード配列を、プロモーター「の制御下」に置くためには、転写リーディングフレームの転写開始位置の５’末端を、選択したプロモーターの「下流」（即ち、３’）に配置する。「上流」プロモーターは、ＤＮＡの転写を刺激し、コードされたＲＮＡの発現を促進する。
プロモーター因子間の間隔は多くの場合柔軟であるため、因子が互いに反転する、又は移動する場合、プロモーター機能は保存される。
【０１４３】
ｔｋプロモーターにおいて、プロモーター因子間の間隔は、活性が低下し始める前に増加させて、５０ｂｐまで離すことができる。プロモーターに応じて、個々の因子は共同して、又は独立してのいずれかで、転写を活性化するように機能することができるようである。プロモーターは、「エンハンサー」と共に使用してもよく、又はしなくてもよく、これは、核酸配列の転写活性化に関与する調節配列のｃｉｓ作用を意味する。
【０１４４】
プロモーターは、コードするセグメント及び／又はエクソンの上流に位置する、５’非コード配列を単離することにより入手することができる、核酸配列と自然に関連しているものであってもよい。このようなプロモーターは「内在性」と呼ぶことができる。同様に、エンハンサーは、核酸配列と自然に関連している、その配列の上流又は下流のいずれかに位置するものであることができる。あるいは、コードする核酸セグメントを、その自然環境において、通常核酸配列と関連していないプロモーターを意味する、組み換え又は異種プロモーターの制御下に配置することにより、ある種の利点が得られる。組み換え又は異種エンハンサーとは、その自然環境において、通常核酸配列と関連していないエンハンサーもまた意味する。このようなプロモーター又はエンハンサーとしては、他の遺伝子のプロモーター又はエンハンサー、並びに、任意の他のウイルス、又は原核細胞若しくは真核細胞から単離したプロモーター又はエンハンサー、並びに、「自然に存在」しない、即ち、異なる転写制御因子領域の異なる因子、及び／又は発現を変える変異を含有するプロモーター又はエンハンサーを挙げることができる。例えば、組み換えＤＮＡ構築物にて最も一般的に用いられるプロモーターとしては、β−ラクタマーゼ（ペニシリナーゼ）、ラクトース、及びトリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系が挙げられる。プロモーター及びエンハンサーの核酸配列を合成により作製することに加えて、配列は、開示された組成物と共に、ＰＣＲ（商標）を含む、組み換えクローニング、及び／又は核酸増幅技術を使用して、作製することができる（例えば、それぞれが参照により本明細書に組み込まれている、米国特許第４，６８３，２０２号、及び同第５，９２８，９０６号を参照のこと）。更に、ミトコンドリア、クロロプラストなどの非核オルガネラ内での、配列の直接転写及び／又は発現を指令する調節配列も、同様に使用することができると想到されている。
【０１４５】
本来は、発現のために選択されるオルガネラ、細胞型、組織、器官、又は生命体内でＤＮＡセグメントの発現を効率的に指令する、プロモーター及び／又はエンハンサーを用いることが重要である。分子生物学の当業者は一般に、タンパク質発現のためのプロモーター、エンハンサー、及び細胞型の組み合わせの使用を理解している（例えば、参照により本明細書に組み込まれているＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．１９８９を参照のこと）。用いられるプロモーターは、導入されたＤＮＡセグメントの高度な発現を指令するのに適切な条件下において、体質性、組織特異的、誘導性であることができる、かつ／又は、有用であることができ、例えば、大規模な組み換えタンパク質及び／又はペプチド産生にて有利である。プロモーターは異種又は内在性であることができる。
【０１４６】
更に、任意のプロモーター／エンハンサーの組み合わせ（例えば、ワールドワイドウェブｅｐｄ．ｉｓｂ−ｓｉｂ．ｃｈ／による、Ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ  Ｐｒｏｍｏｔｅｒ  Ｄａｔａ  Ｂａｓｅ  ＥＰＤＢによる）もまた、発現を駆動するために使用することができる。Ｔ３、Ｔ７、又はＳＰ６細胞質発現系を使用することは、可能性のある別の実施形態である。真核細胞は、適切な細菌ポリメラーゼが、送達複合体の一部として、又は追加の遺伝発現構築物としてのいずれかとして提供される場合、特定の細菌プロモーターからの細胞質転写を支持することができる。
【０１４７】
プロモーターの非限定例としては、初期又は後期ウイルスプロモーター、例えば、ＳＶ４０初期又は後期プロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）前初期プロモーター、Ｒｏｕｓ肉腫ウイルス（ＲＳＶ）初期プロモーター；真核細胞プロモーター、例えば、βアクチンプロモーター（Ｎｇ，１９８９；Ｑｕｉｔｓｃｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９）、ＧＡＤＰＨプロモーター（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｅｒｃｏｌａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８）、メタロチオネインプロモーター（Ｋａｒｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９；Ｒｉｃｈａｒｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４）など；並びに、最小のＴＡＴＡボックス付近の、連鎖応答因子プロモーター、例えば環式ＡＭＰ応答因子プロモーター（ｃｒｅ）、血清応答因子プロモーター（ｓｒｅ）、ホルボールエステルプロモーター（ＴＰＡ）、及び応答因子プロモーター（ｔｒｅ）が挙げられる。ヒト成長ホルモンプロモーター配列（例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号Ｘ０５２４４，ヌクレオチド２８３−３４１に記載されている、ヒト成長ホルモン最小プロモーター）、又は、マウス乳癌プロモーター（ＡＴＣＣ、カタログ番号ＡＴＣＣ  ４５００７から入手可能）を使用することもまた、可能である。特定の実施形態において、プロモーターはＣＭＶ  ＩＥ、デクチン１、デクチン２、ヒトＣＤ１１ｃ、Ｆ４／８０、ＳＭ２２、ＲＳＶ、ＳＶ４０、Ａｄ  ＭＬＰ、βアクチン、ＭＨＣクラスＩ又はＭＨＣクラスＩＩプロモーターであるが、ｐ５３、ＭＤＡ−７、及び／又はリラキシン遺伝子の発現を駆動するのに有用な、任意の他のプロモーターが、本発明を実施するのに適用可能である。
【０１４８】
特定の態様において、本開示の方法は、エンハンサー配列、即ち、プロモーターの活性を増加させ、かつ、ｃｉｓ、及びその方向に関係なく、比較的長い距離を超えても（最大、標的プロモーターから数キロベース）、作用する潜在性を有する、核酸配列にもまた関する。しかし、エンハンサーの機能は、所与のプロモーターに極めて接近しても機能し得るような長い距離に、必ずしも限定されない。
【０１４９】
ｂ．  開始シグナル、及び関連した発現
特異的な開始シグナルは、コード配列の効率的な翻訳のために、本開示で提供される発現構築物でも使用することができる。これらのシグナルは、ＡＴＧ開始コドン又は隣接配列を含む。ＡＴＧ開始コドンを含む、外来性の翻訳制御シグナルを提供する必要がある場合がある。当業者は速やかにこれを測定し、必要なシグナルを提供することができるであろう。開始コドンは、挿入物全体の翻訳を確実にするために、所望のコード配列のリーディングフレームと「インフレーム」でなければならないことがよく知られている。外因性翻訳制御シグナル及び開始コドンは、自然のもの、又は合成のもののいずれかであることができる。発現効率は、適切な転写エンハンサー因子を含めることにより、向上させることができる。
【０１５０】
特定の実施形態において、内部リボソーム侵入部（ＩＲＥＳ）因子を使用することにより、多重遺伝子性、又はポリシストロニック伝達暗号が作製される。ＩＲＥＳ因子は、５’メチル化Ｃａｐ依存性翻訳のリボソームスキャニングモデルをバイパスさせ、内部位置にて翻訳を開始させることができる（Ｐｅｌｌｅｔｉｅｒ  ａｎｄ  Ｓｏｎｅｎｂｅｒｇ，１９８８）。ピコルナウイルスファミリーの２つの要素（ポリオ及び脳心筋炎）由来のＩＲＥＳ因子（Ｐｅｌｌｅｔｉｅｒ  ａｎｄ  Ｓｏｎｅｎｂｅｒｇ，１９８８）、及び、哺乳動物の伝達暗号由来のＩＲＥＳ（Ｍａｃｅｊａｋ  ａｎｄ  Ｓａｒｎｏｗ，１９９１）が、説明されている。ＩＲＥＳ因子を、異種のオープンリーディングフレームに連結することができる。それぞれがＩＲＥＳにより分離されている、複数のオープンリーディングフレームを互いに転写して、ポリシストロニック伝達情報を作成することができる。ＩＲＥＳ因子のために、各オープンリーディングフレームは、効率的な翻訳のためにリボソームに接近することができる。単一のプロモーター／エンハンサーを使用して複数の遺伝子を効率的に発現させ、単一の伝達情報を転写することができる（それぞれが本明細書に参考として組み込まれる、米国特許第５，９２５，５６５号、及び同第５，９３５，８１９号を参照のこと）。
【０１５１】
更に、特定の２Ａ配列因子を使用して、本開示で提供される構築物中にて、遺伝子の関連発現、又は同時発現を生み出すことができる。例えば、切断配列を使用して、オープンリーディングフレームを連結して単一のシストロンを形成することにより、遺伝子を同時発現させることができる。例示的な切断配列は、Ｆ２Ａ（口蹄疫ウイルス２Ａ）、又は「２Ａ様」配列（例えば、Ｔｈｏｓｅａ  ａｓｉｇｎａウイルス２Ａ；Ｔ２Ａ）である（Ｍｉｎｓｋａｉａ  ａｎｄ  Ｒｙａｎ，２０１３）。
【０１５２】
ｃ．  複製起点
宿主細胞内でベクターを増殖させるために、宿主細胞は、１つ以上の複製起点部位（多くの場合「ｏｒｉ」と呼ばれる）、例えば、複製が開始される位置において特異的な核酸配列である、上述したＥＢＶのｏｒｉＰ、又は、プログラミングの機能が同様、若しくは向上した、遺伝子組み換えされたｏｒｉＰに対応する核酸配列を含有することができる。あるいは、上述した、その他の染色体外複製ウイルスの複製起点、又は自律複製配列（ＡＲＳ）を用いることができる。
【０１５３】
３．  選択及びスクリーニング可能なマーカー
いくつかの実施形態では、本開示の構築物を含有する細胞を、発現ベクターにマーカーを含めることで、インビトロ又はインビボで同定することができる。このようなマーカーは、細胞に特定可能な変化を付与し、発現ベクターを含有する細胞の同定を容易にする。一般に、選択マーカーは、選択を可能にする性質を付与するマーカーである。ポジティブ選択マーカーは、マーカーが存在することにより選択を可能にするマーカーである一方、ネガティブ選択マーカーは、マーカーが存在することで選択を防止するマーカーである。ポジティブ選択マーカーの例は、薬物耐性マーカーである。
【０１５４】
通常、薬物選択マーカーを含めることで、形質転換細胞、例えば、ネオマイシン、ピューロマイシン、ハイグロマイシン、ＤＨＦＲ、ＧＰＴ、ゼオシンに対する耐性を付与する遺伝子の、クローニング及び同定が補助され、ヒスチジノールが有用な選択マーカーである。条件の導入に基づき、形質転換細胞の識別を可能にする表現型を付与するマーカーに加えて、スクリーニング可能なマーカー、例えば、ベースが比色分析である、ＧＦＰなどの他の種類のマーカーもまた、想到される。あるいは、単純ヘルペスウイルス由来チミジンキナーゼ（ｔｋ）、又はクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）などの、ポジティブ選択マーカーとしてスクリーニング可能な酵素を、利用することができる。当業者は、場合によりＦＡＣＳ分析と共に、免疫性マーカーを用いるノウハウについても知っているであろう。使用するマーカーは、遺伝子産物をコードする核酸を当時に発現することが可能である限り、重要であるとは考えられない。選択及びスクリーニング可能なマーカーの更なる例は、当業者に周知である。
【０１５５】
Ｂ．  核酸送達の他の方法
癌抑制因子、及び／又は細胞外マトリックス分解性遺伝子をコードする核酸のウイルス送達に加えて、以下が、所与の宿主細胞に組み換え遺伝子を送達する更なる方法であり、それ故、本開示の範囲内とみなされる。
【０１５６】
ＤＮＡ又はＲＮＡなどの核酸の導入には、本明細書に記載されている、又は、当業者に知られているであろう、細胞を形質転換するために核酸を送達する、任意の好適な方法を用いることができる。このような方法としては、エクスビボトランスフェクションなどによる、ＤＮＡの直接送達（Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｎａｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ，１９８９）；マイクロインジェクション（Ｈａｒｌａｎｄ  ａｎｄ  Ｗｅｉｎｔｒａｕｂ，１９８５；米国特許第５，７８９，２１５号、参照により本明細書に組み込まれている）を含む、注入によるもの（米国特許第５，９９４，６２４号、同第５，９８１，２７４号、同第５，９４５，１００号、同第５，７８０，４４８号、同第５，７３６，５２４号、同第５，７０２，９３２号、同第５，６５６，６１０号、同第５，５８９，４６６号、及び同第５，５８０，８５９号、それぞれが参照により本明細書に組み込まれている）；電気穿孔法によるもの（参照により本明細書に組み込まれている米国特許第５，３８４，２５３号；Ｔｕｒ−Ｋａｓｐａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６；Ｐｏｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４）；リン酸カルシウム沈殿によるもの（Ｇｒａｈａｍ  ａｎｄ  Ｖａｎ  Ｄｅｒ  Ｅｂ，１９７３；Ｃｈｅｎ  ａｎｄ  Ｏｋａｙａｍａ，１９８７；Ｒｉｐｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０）；ＤＥＡＥ−デキストランの後にポリエチレングリコールを用いることによるもの（Ｇｏｐａｌ，１９８５）；直接音波装填（Ｆｅｃｈｈｅｉｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７）；リポソーム媒介トランスフェクション（Ｎｉｃｏｌａｕ  ａｎｄ  Ｓｅｎｅ，１９８２；Ｆｒａｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９７９；Ｎｉｃｏｌａｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７；Ｗｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９８０；Ｋａｎｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９；Ｋａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１）及び受容体媒介トランスフェクション（Ｗｕ  ａｎｄ  Ｗｕ，１９８７；Ｗｕ  ａｎｄ  Ｗｕ，１９８８）によるもの；マイクロ噴出性ボンバードメント（ＰＣＴ出願国際公開第９４／０９６９９号及び同第９５／０６１２８号；米国特許第５，６１０，０４２号、同第５，３２２，７８３号、同第５，５６３，０５５号、同第５，５５０，３１８号、同第５，５３８，８７７号、及び同第５，５３８，８８０号、それぞれが参照により本明細書に組み込まれている）によるもの；炭化ケイ素繊維を用いる撹拌（Ｋａｅｐｐｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０；米国特許第５，３０２，５２３号及び同第５，４６４，７６５号、それぞれが参照により本明細書に組み込まれている）によるもの；アグロバクテリウム−媒介形質転換（米国特許第５，５９１，６１６号、及び同第５，５６３，０５５号、それぞれが参照により本明細書に組み込まれている）によるもの；乾燥／阻害−媒介ＤＮＡ取り込み（Ｐｏｔｒｙｋｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５）によるもの、並びにこのような方法の任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。これらのような技術を応用することで、オルガネラ、細胞、組織、又は生命体を安定して、又は一過的に形質転換することができる。
【０１５７】
１．  電気穿孔法
本開示のある種の特定の実施形態において、遺伝子構築物を、電気穿孔法により標的の増殖過剰細胞に導入する。電気穿孔法は、細胞（又は組織）及びＤＮＡ（又はＤＮＡ複合体）を、高電圧放電に曝すことを伴う。
【０１５８】
電気穿孔法を用いる真核細胞のトランスフェクションは、極めて上手くいっている。この方法で、マウスのプレＢリンパ球にはヒトκ−免疫グロブリン遺伝子がトランスフェクションされ（Ｐｏｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４）、ラット肝細胞には、クロラムフェニコール・アセチルトランスフェラーゼ遺伝子がトランスフェクションされている（Ｔｕｒ−Ｋａｓｐａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６）。
【０１５９】
異なる源からの増殖過剰細胞に対する電気穿孔法条件を最適化することができることが想到されている。電圧、静電容量、時間、及び電気穿孔法用の媒体の組成などのパラメーターを特に最適化したいと望むかもしれない。他の日常的な調節を実行することは、当業者に既知であろう。例えば、Ｈｏｆｆｍａｎ，１９９９；Ｈｅｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６を参照のこと。
【０１６０】
２．  脂質媒介形質転換
更なる実施形態において、癌抑制因子、及び／又は細胞外マトリックス分解性遺伝子は、リポソーム又は脂質製剤にトラップすることができる。リポソームは、リン脂質二重層の膜、及び内部の水性媒体を特徴とする小胞構造体である。マルチラメラリポソームは、水性媒体により分離された複数の脂質層を有する。これらは、リン脂質が過剰な水溶液に懸濁するときに、自然に形成される。脂質成分は、閉じた構造を形成する前に自己再編成を受け、脂質二重層の間で、水と溶解した溶質をトラップする（Ｇｈｏｓｈ  ａｎｄ  Ｂａｃｈｈａｗａｔ，１９９１）。リポフェクタミン（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ）と複合体化した遺伝子構築物もまた想到される。
【０１６１】
脂質が媒介する核酸の送達、及びインビトロでの、外来ＤＮＡの発現は、非常に上手くいっている（Ｎｉｃｏｌａｕ  ａｎｄ  Ｓｅｎｅ，１９８２；Ｆｒａｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９７９；Ｎｉｃｏｌａｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７）。培養した鶏胚、ヒーラー及び肝癌細胞での、脂質が媒介する外来ＤＮＡの送達及び発現の可能性を、Ｗｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９８０）は示した。
【０１６２】
脂質ベースの非ウイルス製剤は、アデノウイルス遺伝子治療法に対する代替物を提供する。多くの細胞培養研究が、脂質ベースの非ウイルス遺伝子導入について記録を残しているが、脂質ベース製剤による全身性遺伝子導入は制限されている。非ウイルス性脂質ベースの遺伝子導入における主な制限は、非ウイルス性送達ビヒクルを含む陽イオン性脂質の毒性である。リポソームのインビボ毒性は特に、インビトロとインビボでの遺伝子導入結果での矛盾について説明している。この矛盾するデータの一因となる別の因子は、血清タンパク質の有無における脂質ビヒクルの安定性の差である。脂質ビヒクルと血清タンパク質との相互作用は、脂質ビヒクルの安定性の性質に劇的な影響を有する（Ｙａｎｇ  ａｎｄ  Ｈｕａｎｇ，１９９７）。陽イオン性脂質は、負電荷を帯びる血清タンパク質を引きつけて結合する。血清タンパク質と会合した脂質ビヒクルは、マクロファージに溶解するか、マクロファージにより取り込まれるかのいずれかであり、これにより、血液循環から取り除かれる。現在のインビボ脂質送達法は、皮下、皮内、腫瘍内、又は頭蓋内注射を用い、血液循環中で陽イオン性脂質と関連する毒性及び安定性の問題を回避する。脂質ビヒクルと血漿タンパク質との相互作用が、インビトロでの効率（Ｆｅｌｇｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７）と、インビボでの遺伝子導入（Ｚｈｕ  ｅｌ  ａｌ．，１９９３；Ｐｈｉｌｉｐ  ｅｔ  ａｌ，１９９３；Ｓｏｌｏｄｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５；Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５；Ｔｈｉｅｒｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５；Ｔｓｕｋａｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５；Ａｋｓｅｎｔｉｊｅｖｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）との不一致の原因である。
【０１６３】
脂質製剤の進展により、インビボでの遺伝子導入の効率が改善した（Ｔｅｍｐｌｅｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．１９９７；国際公開第９８／０７４０８号）。当モル比の１，２−ビス（オレオイルオキシ）−３−（トリメチルアンモニオ）プロパン（ＤＯＴＡＰ）とコレステロールで構成される新規の脂質製剤は、インビボでの全身性遺伝子導入を著しく、約１５０倍向上させる。ＤＯＴＡＰ：コレステロール脂質製剤は、「サンドイッチリポソーム」と呼ばれる独自の構造を形成する。この製剤は、陥入した二重層、即ち「つぼ」構造の間にＤＮＡを「サンドイッチする」と報告されている。これらの脂質構造の有益な特徴としては、正のρ、コレステロールによるコロイド安定化、２次元ＤＮＡパッキング、及び増加した血清安定性が挙げられる。特許出願第６０／１３５，８１８号及び同第６０／１３３，１１６号は、本発明と共に使用可能な製剤について論じている。
【０１６４】
脂質製剤の製造は多くの場合、（Ｉ）逆相蒸発、（ＩＩ）脱水−再水和、（ＩＩＩ）洗剤での透析、及び（ＩＶ）薄膜水和後に、リポソーム混合物の音波処理又は連続押出形成により達成される。製造されると、脂質構造を使用して、血液循環中にあるときに、毒性のある（化学療法）、又は不安定な（核酸）化合物を封入することができる。脂質の封入により、低い毒性、及び、そのような化合物に対する、血清の長い半減期がもたらされる（Ｇａｂｉｚｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０）。多数の病気の治療では、脂質ベースの遺伝子導入法を用い、特に、増殖過剰病を治療するための治療法において、従来の治療法を向上させる、又は、新規の治療法を確立する。
【０１６５】
Ｖ．  選択性ＣＤ１２３／ＣＤ１３２アゴニスト
特定の態様において、対象には、ＣＤ１２２／ＣＤ１３２受容体複合体に選択的に結合し、ＣＤ２５又はＩＬ１５α受容体に対して低い親和結合を有するＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストなどの、少なくとも１種のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストが投与される。ＣＤ１２２／ＣＤ１３２は、野生型ＩＬ２と比較して、修飾されたアミノ酸配列を有する遺伝子組み換えされたＩＬ−２２ムテインから選択することができる（米国特許出願公開第２０１７／００４４２２９号；その全体が参照により組み込まれている）。特定の態様において、選択性ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストは、ＩＬ−２／抗ＩＬ−２モノクローナル抗体免疫複合体（米国特許出願公開第２０１７０１８３４０３Ａ１号；その全体が参照により組み込まれている）、又は、抗ＩＬ２モノクローナル抗体免疫複合体と組み合わせた野生型ＩＬ−２と比較して、修飾されたアミノ酸配列を有する、遺伝子組み換えＩＬ−２ムテイン（国際公開第２０１４１０００１４Ａ１号；その全体が参照により組み込まれている）、ＮＫＴＲ−２１４などの、ＩＬ２のＰＥＧ化形態（Ｃｈａｒｙｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）、ＩＬ１５／抗ＩＬ１５モノクローナル抗体免疫複合体、ＩＬ１５／ＩＬ１５受容体α−ＩｇＧ１−Ｆｃ（ＩＬ１５／ＩＬ１５Ｒα−ＩｇＧ１−Ｆｃ）免疫複合体（米国特許出願公開第２００６０２５７３６１Ａ１号、欧州特許出願公開第２７２４７２８Ａ１号、及びＤｕｂｏｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）、ＩＬ１５Ｒα−ＩｇＧ１−Ｆｃ免疫複合体と組み合わせた野生型ＩＬ−１５と比較して、修飾されたアミノ酸配列を有する遺伝子組み換えＩＬ−１５ムテイン（米国特許出願公開第２００７０１６０５７８号；その全体が本明細書に組み込まれている）、又は、ＣＤ１２２／ＣＤ１３２に選択的に結合する、ＩＬ１５のＰＥＧ化形態である。いくつかの実施形態では、２種以上のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストを利用する。
【０１６６】
ＶＩ．  腫瘍崩壊ウイルス
いくつかの態様では、本開示は、少なくとも１種の腫瘍崩壊ウイルスを投与することを含む。いくつかの態様では、腫瘍崩壊ウイルスは、ｐ５３、ＭＤＡ−７、ＩＬ−１２、ＴＧＦ−β阻害剤、ＡＤＰ、及び／又はＩＬ−１０阻害剤を発現するように改変されている。特定の態様において、腫瘍崩壊ウイルスは、一本鎖若しくは二本鎖ＤＮＡウイルス、ＲＮＡウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、ワクシニアウイルス、水疱性口内炎ウイルス、ポリオウイルス、ニューカッスル病ウイルス、エプスタイン・バーウイルス、インフルエンザウイルス、レオウイルス、粘液腫ウイルス、マラバウイルス、ラブドウイルス、エナデノチュシレブ、又はコクサッキーウイルスである。いくつかの態様では、腫瘍崩壊ウイルスは、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）又はＩＬ−１２を発現するように改変されている。いくつかの態様では、腫瘍崩壊ウイルスは更に、タリモジーン・ラハーパレプベック（Ｔ−ＶＥＣ）として定義される。いくつかの態様では、腫瘍崩壊アデノウイルスベクターは、改変ＴＥＲＴプロモーター腫瘍崩壊アデノウイルス（米国特許第８，０６７，５６７号；その全体が本明細書に参照により組み込まれている）、及び／又は、ＨＲＥ−Ｅ２Ｆ−ＴＥＲＴハイブリッドプロモーター腫瘍崩壊アデノウイルス（ＰＣＴ／ＫＲ２０１１／００４６９３；その全体が本明細書に参照により組み込まれている）、及び／又は、改変Ｅ１ａ調節配列を有するアデノウイルスであって、少なくとも１つのＰｅａ３結合部位、又はその機能性部分が、Ｅｌｂ−１９Ｋクローン挿入部位により欠損している、アデノウイルス（欧州特許出願公開第２４０３９５１Ａ２号；その全体が本明細書に参照により組み込まれている）に由来し、これら全てを改変して、治療用遺伝子を発現することができる。いくつかの態様では、腫瘍崩壊アデノウイルスベクターは、Ｅ１ｂ欠失腫瘍崩壊アデノウイルスに由来する（Ｙｕ  ａｎｄ  Ｆａｎｇ，２００７；Ｌｉ，２００９；これら両方の全体が参照により組み込まれている）。
【０１６７】
例示的な腫瘍崩壊ウイルスとしては、Ａｄ５−ｙＣＤ／ｍｕｔＴＫＳＲ３９ｒｅｐ−ｈＩＬ１２、Ｃａｖａｔａｋ（商標）、ＣＧ００７０、ＤＮＸ−２４０１、Ｇ２０７、ＨＦ１０、ＩＭＬＹＧＩＣ（商標）、ＪＸ−５９４、ＭＧ１−ＭＡ３、ＭＶ−ＮＩＳ、ＯＢＰ−３０１、Ｒｅｏｌｙｓｉｎ（登録商標）、Ｔｏｃａ  ５１１、Ｏｎｃｏｒｉｎｅ、ＲＩＧＶＩＲ、ＶｉｒＲｘ００７のような、米国特許第７５８９０６９Ｂ１号（その全体が参照により組み込まれている）に記載されている、アデノウイルス死タンパク質（ＡＤＰ）を過剰発現するアデノウイルス、ＰＣＴ／ＧＢ２０１５／０５１０２３（その全体が参照により組み込まれている）に記載されている、ＩＬ１２を発現するＮ１Ｌ欠失ワクシニアウイルスが挙げられるが、これらに限定されない。他の例示的な腫瘍崩壊ウイルスは、例えば、国際公開第２０１５／０２７１６３号、同第２０１４／１３８３１４号、同第２０１４／０４７３５０号、及び同第２０１６／００９０１７号に記載されており、全てが参照により本明細書に組み込まれている。
【０１６８】
特定の態様において、腫瘍崩壊ウイルス剤は、ＧＭ−ＣＳＦを発現するように遺伝子組み換えされた腫瘍崩壊単純ヘルペスウイルスである、タリモジーン・ラハーパレプベック（Ｔ−ＶＥＣ）である。タリモジーン・ラハーパレプベックである、ＨＳＶ−１［株ＪＳ１］ＩＣＰ３４．５−／ＩＣＰ４７−／ｈＧＭ−ＣＳＦ（ＯｎｃｏＶＥＸＧＭ  ＣＳＦとして以前は知られていた）は、充実性腫瘍にて選択的に複製する免疫増強ＨＳＶ−１を含む、腫瘍内に送達される腫瘍崩壊性免疫療法である。（Ｌｕｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００３；米国特許第７，２２３，５９３号、及び同第７，５３７，９２４号；参照により本明細書に組み込まれている。）２０１５年１０月に、アメリカのＦＤＡは、手術不可能な腫瘍を持つ患者における黒色腫の治療のために、商品名ＩＭＬＹＧＩＣ（商標）にて、Ｔ−ＶＥＣを認可した。Ｔ−ＶＥＣの特徴及び投与方法は例えば、ＩＭＬＹＧＩＣ（商標）の添付文書（Ａｍｇｅｎ，２０１５）、及び米国特許出願公開第２０１５／０２０２２９０号（両方が参照により本明細書に組み込まれている）に記載されている。例えば、タリモジーン・ラハーパレプベックは典型的には、１週目の１日目に、最大４．０ｍＬの、１０６プラーク形成ユニット／ｍＬ（ＰＦＵ／ｍＬ）の用量で、続いて、４週目の１日目、及びその後隔週にて（±３日）、最大４．０ｍＬの、１０８ＰＦＵ／ｍＬの用量で、注射可能な皮膚、皮下、及び結節腫瘍への腫瘍内注射により投与される。腫瘍に注射されるタリモジーン・ラハーパレプベックの、推奨される体積は、腫瘍サイズに左右され、注入量ガイドラインに従い決定されなければならない。Ｔ−ＶＥＣは、黒色腫患者において臨床活性を示したものの、多くの癌患者は、Ｔ−ＶＥＣ治療に応答しないか、又は治療への応答を終えるかのいずれかである。一実施形態では、ｐ５３及び／又はＭＤＡ−７核酸、並びに少なくとも１種のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストを、Ｔ−ＶＥＣ治療法の後、間、又は前に投与して、例えば治療耐性を逆転させることができる。
【０１６９】
いくつかの実施形態では、Ｅ１ｂ欠損腫瘍崩壊アデノウイルスを、少なくとも１種の選択性ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニスト、及び少なくとも１種の免疫チェックポイント阻害剤を組み合わせる。例示的なＥ１ｂ欠失腫瘍崩壊アデノウイルスは、熱ショックタンパク質７０（ＨＳＰ７０）を発現する、Ｈ１０１（Ｏｎｃｏｒｉｎｅ）、Ｏｎｙｘ  ０１５、若しくはＨ１０３、又は、Ａｄ  Ｅ１ａ遺伝子の発現がα−フェトプロテイン（ＡＦＰ）プロモーターにより駆動され、通常の細胞と比較して、肝細胞癌、及びその他の、ＡＦＰを過剰発現する癌における、選択的な複製をもたらす腫瘍崩壊アデノウイルスＨ１０２である（Ｙｕ  ａｎｄ  Ｆａｎｇ，２００７；Ｌｉ，２００９；これら両方の全体が参照により組み込まれている）。
【０１７０】
本発明中で使用するための、更なる例示的なＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストとしては、下表２に記載する作用物質が挙げられるが、これらに限定されない。
【表２−１】
2021518408.tif 000003
【表２−２】
2021518408.tif 000004
【０１７１】
ＶＩＩ．  免疫チェックポイント阻害剤
特定の実施形態において、本開示は、免疫チェックポイントの遮断を、ｐ５３及び／又はＭＤＡ−７遺伝子治療法などの、癌抑制遺伝子療法と組み合わせる方法を提供する。免疫チェックポイントとは、シグナルを上げる、又はシグナルを下げるいずれかを行う、免疫系内の分子（例えば、共刺激分子）である。チェックポイント分子の遮断によって標的とされ得る阻害性免疫チェックポイントとしては、アデノシンＡ２Ａ受容体（Ａ２ＡＲ）、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６としても知られる）、Ｂ及びＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４、ＣＤ１５２としても知られる）、インドールアミン  ２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、キラー細胞免疫グロブリン（ＫＩＲ）、リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ３）、プログラム死１（ＰＤ−１）、Ｔ細胞免疫グロブリンドメイン及びムチンドメイン３（ＴＩＭ−３）及びＴ細胞活性化（ＶＩＳＴＡ）のＶ−ドメインＩｇサプレッサーが挙げられる。特に、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１軸及び／又はＣＴＬＡ−４を標的とする。
【０１７２】
免疫チェックポイント阻害剤は、リガンド又は受容体の低分子組換え形態などの薬剤であってもよく、又は特に、抗体、例えば、ヒト抗体である（例えば、国際公開第２０１５０１６７１８号；Ｐａｒｄｏｌｌ，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ，１２（４）：２５２−６４，２０１２；共に本明細書に参照により組み込まれる）。免疫チェックポイントタンパク質の既知の阻害剤、又はその類似体を使用することができ、特に、抗体のキメラ化、ヒト化、又はヒト形態を使用することができる。当業者は知っているだろうが、本開示で述べられる特定の抗体について、代替的及び／又は等価な名称が使用される場合がある。このような代替的及び／又は等価な名称は、本発明の内容において相互に置き換え可能である。例えば、ラムブロリズマブは、代替的及び等価な名称でＭＫ−３４７５及びペンブロリズマブとしても知られていることが知られている。
【０１７３】
免疫応答を刺激する、当技術分野において既知の免疫チェックポイント阻害剤のいずれかを使用することができることが想到されている。これには、抗原特異的Ｔリンパ球を直接、又は間接的に刺激又は増強する阻害剤が含まれる。これらの免疫チェックポイント阻害剤としてはＰＤ−Ｌ２、ＬＡＧ３、ＢＴＬＡ、Ｂ７Ｈ４、及びＴＩＭ３に関与する免疫チェックポイントタンパク質及び経路を標的化する作用物質が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、当該技術分野において公知のＬＡＧ３阻害剤としては、可溶性ＬＡＧ３（国際公開第２００９０４４２７３号に開示されている、ＩＭＰ３２１又はＬＡＧ３−Ｉｇ）、並びに、ヒトＬＡＧ３を遮断するマウス若しくはヒト化抗体（例えば、国際公開第２００８１３２６０１号に開示されているＩＭＰ７０１）、又は、ヒトＬＡＧ３を遮断する完全ヒト抗体（欧州特許第２３２０９４０号に開示されているものなど）が挙げられる。別の例は、ヒトＢＴＬＡの、そのリガンドとの相互作用を遮断する抗体（国際公開第２０１１０１４４３８に開示されている４Ｃ７など）が挙げられるが、これに限定されない、ＢＴＬＡに対して遮断剤を用いることにより提供される。更に別の実施例は、ヒトＢ７Ｈ４に対する抗体（国際公開第２０１３０２５７７９号、及び同第２０１３０６７４９２号に開示されている）、又は、Ｂ７Ｈ４の可溶性組み換え形態（米国特許出願公開第２０１２０１７７６４５に開示されているものなど）を含むがこれらに限定されない、Ｂ７Ｈ４を中和する作用物質を使用することにより、提供される。更に別の例は、ヒトＢ７−Ｈ３を中和する抗体（例えば、米国特許出願公開第２０１２０２９４７９６号において、ＢＲＣＡ８４Ｄとして開示されているＭＧＡ２７１、及び誘導体類）を含むがこれに限定されない、Ｂ７−Ｈ３を中和する作用物質により、提供される。更に別の例は、ヒトＴＩＭ３を標的化する抗体（例えば、国際公開第２０１３００６４９０Ａ２号に開示されているもの、又は、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．２００８；２０５（１２）：２７６３−７９により開示されている、抗ヒトＴＩＭ３遮断抗体Ｆ３８〜２Ｅ２）を含むがこれに限定されない、ＴＩＭ３を標的化する作用物質により提供される。
【０１７４】
更に、２種以上の免疫チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体及び抗ＣＴＬＡ−４抗体）を、癌抑制遺伝子と組み合わせて使用することができる。例えば、ｐ５３遺伝子治療及び免疫チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＫＩＲ抗体及び／又は抗ＰＤ−１抗体）を投与して、先天性抗腫瘍免疫を増強させ、その後、ＩＬ２４遺伝子治療法及び免疫チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体）を投与して、適応性抗腫瘍免疫応答を誘発することができる。
【０１７５】
Ａ．  ＰＤ−１軸アンタゴニスト
Ｔ細胞の機能障害又はアネルギーは、阻害性受容体であるプログラム細胞死１ポリペプチド（ＰＤ−１）の発現の誘発及び維持と同時に生じる。したがって、プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）及びプログラム細胞死リガンド２（ＰＤ−Ｌ２）などの、ＰＤ−１、及び、ＰＤ−１との相互作用によりシグナル伝達をする他の分子の治療標的化を、本明細書において提供する。ＰＤ−Ｌ１は多くの癌で過剰発現し、多くの場合、予後不良と関連している（Ｏｋａｚａｋｉ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｉｍｍｕｎ．２００７  １９（７）：８１３）。したがって、例えば、腫瘍のＣＤ８＋Ｔ細胞が媒介する殺傷を増強するための、ｐ５３、ＡＤＰ、及び／又はＭＤＡ−７遺伝子治療法と組み合わせた、ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１相互作用の阻害を、本明細書において提供する。
【０１７６】
個体における、癌を治療する、又は癌の進行を遅延させる方法であって、当該個体に、有効量の、ｐ５３、ＡＤＰ（ＶｉｒＲｘ００７）、及び／又はＭＤＡ−７遺伝子治療法と組み合わせたＰＤ−１軸結合アンタゴニストを投与することを含む、方法を本明細書において提供する。免疫機能の増強を必要とする個体における、免疫機能を増強する方法であって、当該個体に、有効量の、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト、並びに、ｐ５３、ＡＤＰ（ＶｉｒＲｘ００７）、及び／又はＭＤＡ−７遺伝子治療法を投与することを含む、方法もまた、本明細書において提供する。
【０１７７】
例えば、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストとしては、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤＬ１結合アンタゴニスト、及びＰＤＬ２結合アンタゴニストが挙げられる。「ＰＤ−１」の代替名としては、ＣＤ２７９及びＳＬＥＢ２が挙げられる。「ＰＤＬ１」の代替名としては、Ｂ７−Ｈ１、Ｂ７−４、ＣＤ２７４、及びＢ７−Ｈが挙げられる。「ＰＤＬ２」の代替名としては、Ｂ７−ＤＣ、Ｂｔｄｃ、及びＣＤ２７３が挙げられる。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１、ＰＤＬ１、及びＰＤＬ２は、ヒトＰＤ−１、ＰＤＬ１、及びＰＤＬ２である。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１のそのリガンド結合パートナーへの結合を阻害する分子である。具体的な態様では、ＰＤ−１リガンド結合パートナーは、ＰＤＬ１及び／又はＰＤＬ２である。別の実施形態では、ＰＤＬ１結合アンタゴニストは、ＰＤＬ１の、その結合パートナーへの結合を阻害する分子である。具体的な態様では、ＰＤＬ１結合パートナーは、ＰＤ−１及び／又はＢ７−１である。別の実施形態では、ＰＤＬ２結合アンタゴニストは、ＰＤＬ２の、その結合パートナーへの結合を阻害する分子である。特定の態様において、ＰＤＬ２結合パートナーはＰＤ−１である。アンタゴニストは、抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、又はオリゴペプチドであることができる。例示的な抗体は、米国特許第８７３５５５３号、同第８３５４５０９号、及び同第８００８４４９号に記載されており、全てが参照により本明細書に組み込まれている。米国特許出願公開第２０１４０２９４８９８号、同第２０１４０２２０２１号、及び同第２０１１０００８３６９号（全てが参照により本明細書に組み込まれている）に記載されているものなどの、本明細書において提供する方法に使用するためのその他のＰＤ−１軸アンタゴニストが、当技術分野において既知である。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−１抗体（例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体又はキメラ抗体）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ及びＣＴ−０１１からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、イムノアドヘシン（例えば、定常領域（例えば、免疫グロブリン配列のＦｃ領域）に融合したＰＤＬ１又はＰＤＬ２の細胞外又はＰＤ−１結合部分を含むイムノアドヘシンである。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストはＡＭＰ−２２４である。ニボルマブは、ＭＤＸ−１１０６−０４、ＭＤＸ−１１０６、ＯＮＯ−４５３８、ＢＭＳ−９３６５５８及びＯＰＤＩＶＯ（登録商標）としても知られており、国際公開第２００６／１２１１６８号に記載されている抗ＰＤ−１抗体である。ペンブロリズマブは、ＭＫ−３４７５、Ｍｅｒｃｋ  ３４７５、ラムブロリズマブ、ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）及びＳＣＨ−９００４７５としても知られており、国際公開第２００９／１１４３３５号に記載されている抗ＰＤ−１抗体である。ＣＴ−０１１は、ｈＢＡＴ又はｈＢＡＴ−１としても知られており、国際公開第２００９／１０１６１１号に記載されている抗ＰＤ−１抗体である。ＡＭＰ−２２４は、Ｂ７−ＤＣＩｇとしても知られており、国際公開第２０１０／０２７８２７号、及び同第２０１１／０６６３４２号に記載されているＰＤＬ２−Ｆｃ融合可溶性受容体である。更なるＰＤ−１結合アンタゴニストとしては、ＣＴ−０１１としても知られているピディリズマブ、ＡＭＰ−５１４としても知られているＭＥＤＩ０６８０、及びＲＥＧＮ２８１０が挙げられる。
【０１８０】
いくつかの態様では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＭＥＤＩ４７３６としても知られているデュルバルマブ、ＭＰＤＬ３２８０Ａとしても知られているアテゾリズマブ、又は、ＭＳＢ０００１０１１８Ｃとしても知られているアベルマブなどのＰＤ−Ｌ１アンタゴニストである。特定の態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ｒＨＩｇＭ１２Ｂ７などのＰＤ−Ｌ２アンタゴニストである。いくつかの態様では、免疫チェックポイント阻害剤は、限定されるわけではないが、ＩＭＰ３２１及びＢＭＳ−９８６０１６などのＬＡＧ−３アンタゴニストである。免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＢＦ−５０９などの、アデノシンＡ２ａ受容体（Ａ２ａＲ）アンタゴニストであることができる。
【０１８１】
いくつかの態様では、本明細書で記載される抗体（例えば、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤＬ１抗体、又は抗ＰＤＬ２抗体）は、ヒト又はマウス定常領域を更に含む。また更なる態様において、ヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からなる群から選択される。また更なる特定の態様において、ヒト定常領域はＩｇＧ１である。また更なる態様において、マウス定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ３からなる群から選択される。また更なる特定の態様において、抗体は、低下した、又は最小のエフェクター機能を有する。また更なる特定の態様において、最小のエフェクター機能は、原核細胞での産生により生じる。また更なる特定の態様において、最小のエフェクター機能は、「エフェクター非含有のＦｃ変異」、即ち非グリコシル化により生じる。
【０１８２】
したがって、本明細書で使用する抗体を非グリコシル化することができる。抗体のグリコシル化は、典型的には、Ｎ結合又はＯ結合のいずれかである。Ｎ結合とは、炭水化物部位をアスパラギン残基の側鎖に結合することを意味する。トリペプチド配列であるアスパラギン−Ｘ−セリン、及びアスパラギン−Ｘ−スレオニン（Ｘは、プロリンを除く任意のアミノ酸である）は、炭水化物部位をアスパラギン側鎖に、酵素により結合させるための認識配列である。したがって、ポリペプチド内にこれらのトリペプチド配列のいずれかが存在することにより、潜在的なグリコシル化部位が作製される。Ｏ結合グリコシル化とは、糖類のＮ−アセチルガラクトースアミン、ガラクトース、又はキシロースのうちの１つの、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリン又はスレオニンへの結合を意味するが、５−ヒドロキシプロリン又は５−ヒドロキシリジンを使用してもよい。アミノ酸配列を、（Ｎ−結合グリコシル化部位に対する上述のトリペプチド配列の１つ）が取り除かれるように変更することにより、抗体からのグリコシル化部位の除去が便利に達成される。グリコシル化部位内のアスパラギン、セリン、又はスレオニン残基を、別のアミノ酸残基（例えば、グリシン、アラニン、又は保存的置換）で置換することにより、変更を加えることができる。
【０１８３】
例えば、発現に適した形態の、前述した抗ＰＤＬ１、抗ＰＤ−１、若しくは抗ＰＤＬ２抗体、又は抗原結合断片のいずれかをコードする核酸を含有する宿主細胞を、そのような抗体又は断片を作製するのに好適な条件下にて培養することと、抗体又は断片を回収することと、を含むプロセスにより、当該技術分野において既知の方法を使用して、抗体又はその抗原結合断片を作製することができる。
【０１８４】
Ｂ．  ＣＴＬＡ−４
本明細書で提供される方法で標的にされ得る別の免疫チェックポイントは、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）であり、ＣＤ１５２としても知られている。ヒトＣＴＬＡ−４の完全なｃＤＮＡ配列は、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号Ｌ１５００６を有する。ＣＴＬＡ−４は、Ｔ細胞表面で見出され、抗原提示細胞の表面にあるＣＤ８０又はＣＤ８６に結合すると、「オフ」スイッチとして作用する。ＣＴＬＡ４は、ヘルパーＴ細胞の表面で発現し、Ｔ細胞に阻害性シグナルを伝える、免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーである。ＣＴＬＡ４は、Ｔ細胞共刺激タンパク質、ＣＤ２８に似ており、両分子は、抗原提示細胞上のＣＤ８０及びＣＤ８６（それぞれＢ７−１及びＢ７−２とも呼ばれる）に結合する。ＣＴＬＡ４は、Ｔ細胞に阻害シグナルを伝える一方、ＣＤ２８は、刺激シグナルを伝える。細胞内ＣＴＬＡ４は、制御性Ｔ細胞で見出され、その機能にとって重要な場合がある。Ｔ細胞受容体及びＣＤ２８によるＴ細胞活性化によって、Ｂ７分子の阻害性受容体であるＣＴＬＡ−４の発現が増加する。
【０１８５】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体、又はキメラ抗体）、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質又はオリゴペプチドである。
【０１８６】
本発明の方法で使用するのに適した抗ヒト−ＣＴＬＡ−４抗体（又はこれらに由来するＶＨドメイン及び／又はＶＬドメイン）は、当該技術分野において周知方法を用いて生成することができる。あるいは、当該技術分野で認識されている抗ＣＴＬＡ−４抗体を使用することができる。例えば、米国特許第８，１１９，１２９号、国際公開第０１／１４４２４号、同第９８／４２７５２号；同第００／３７５０４号（ＣＰ６７５，２０６、トレメリムマブ；以前のティチリムマブとしてもまた知られている）、米国特許第６，２０７，１５６号；Ｈｕｒｗｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９５（１７）：１００６７−１００７１；Ｃａｍａｃｈｏ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２２（１４５）：要約番号２５０５（抗体ＣＰ−６７５２０６）；及びＭｏｋｙｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５８：５３０１−５３０４に開示されている抗ＣＴＬＡ−４抗体を、本明細書で開示される方法で使用することができる。上述の刊行物それぞれの教示は、本明細書に参照により組み込まれる。ＣＴＬＡ−４に対する結合について、これらの当該技術分野で認識されている任意の抗体と競争する抗体も使用可能である。例えば、ヒト化ＣＴＬＡ−４抗体は、国際特許出願公開第２００１０１４４２４号、同第２００００３７５０４号及び米国特許第８０１７１１４号に記載されており、全て本明細書に参照により組み込まれている。
【０１８７】
例示的な抗ＣＴＬＡ−４抗体は、イピリムマブ（１０Ｄ１、ＭＤＸ−０１０、ＭＤＸ−１０１及びＹｅｒｖｏｙ（登録商標）としても知られる）又はその抗原結合フラグメント及び多様体である（例えば、国際公開第０１／１４４２４号を参照）。他の実施形態では、抗体は、イピリムマブの重鎖及び軽鎖ＣＤＲ又はＶＲを含む。したがって、一実施形態では、抗体は、イピリムマブのＶＨ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメインと、イピリムマブのＶＬ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメインとを含む。別の実施形態では、抗体は、上述の抗体と同様に、ＣＴＬＡ−４上の同じエピトープとの結合について競合し、かつ／又はこれに結合する。別の実施形態では、抗体は、上述の抗体と少なくとも約９０％の可変領域アミノ酸配列同一性を有する（例えば、イピリムマブと少なくとも約９０％、９５％、又は９９％の可変領域同一性）。
【０１８８】
ＣＴＬＡ−４を調整する他の分子としては、米国特許第５８４４９０５号、同第５８８５７９６号及び国際特許出願公開第１９９５００１９９４号及び同第１９９８０４２７５２号（全て本明細書に参照により組み込まれる）に記載されるような、ＣＴＬＡ−４リガンド、及び受容体、並びに本明細書に参照により組み込まれる米国特許第８３２９８６７号に記載されるようなイムノアドヘシンが挙げられる。
【０１８９】
Ｃ．  キラー免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）
本発明で使用するための別の免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＫＩＲ抗体である。本発明中で使用するのに好適な抗ヒトＫＩＲ抗体（又は、それらに由来するＶＨ／ＶＬドメイン）は、当該技術分野において周知の方法を使用して生成することができる。
【０１９０】
あるいは、当該技術分野で認識されている抗ＫＩＲ抗体を使用することができる。抗ＫＩＲ抗体は、複数の阻害性ＫＩＲ受容体と交差反応性であることができ、これらの受容体の１つ以上を有するＮＫ細胞の細胞傷害性を増強する。例えば、抗ＫＩＲ抗体は、ＫＩＲ２Ｄ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２、及びＫＩＲ２ＤＬ３のそれぞれに結合することができ、これらのＫＩＲのいずれかにより媒介されるＮＫ細胞細胞傷害性の阻害を低下させる、中和する、及び／又は逆転させることにより、ＮＫ細胞活性を増強することができる。いくつかの態様では、抗ＫＩＲ抗体はＫＩＲ２ＤＳ４及び／又はＫＩＲ２ＤＳ３に結合しない。例えば、国際公開第２００６／００３１７９号（その教示が参照により本明細書に組み込まれている）に記載されている、モノクローナル抗体１−７Ｆ９（ＩＰＨ２１０１としても知られている）、１４Ｆ１、１−６Ｆ１、及び１−６Ｆ５を使用することができる。ＫＩＲに対する結合について、これらの当該技術分野で認識されている任意の抗体と競争する抗体も使用可能である。当該技術分野で使用されている、使用可能な更なる抗ＫＩＲ抗体としては、例えば、国際公開第２００５／００３１６８号、同第２００５／００９４６５号、同第２００６／０７２６２５号、同第２００６／０７２６２６号、同第２００７／０４２５７３号、同第２００８／０８４１０６号、同第２０１０／０６５９３９号、同第２０１２／０７１４１１号、及び同第／２０１２／１６０４４８号に記載されているものが挙げられる。
【０１９１】
例示的な抗ＫＩＲ抗体はリリルマブである（ＢＭＳ−９８６０１５、又はＩＰＨ２１０２としても知られている）である。別の実施形態において、抗ＫＩＲ抗体は、リリルマブの、重鎖及び軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）又は可変領域（ＶＲ）を含む。したがって、一実施形態において、抗体は、リリルマブの重鎖可変（ＶＨ）領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、並びに、リリルマブの軽鎖可変（ＶＬ）領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインを含む。別の実施形態では、抗体は、リリルマブと少なくとも約９０％の、可変領域のアミノ酸配列同一性を有する。
【０１９２】
ＶＩＩＩ．  治療方法
個体における、癌を治療する、又は癌の進行を遅延させる方法であって、当該個体に、有効量の、少なくとも１種のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニスト、及び少なくとも１種の癌抑制遺伝子治療法（例えば、ｐ５３及び／若しくはＭＤＡ−７遺伝子治療法、又はウイルス腫瘍崩壊性治療法−ＶｉｒＲｘ００７）を投与することを含む、方法を本明細書で提供する。治療法は、少なくとも１種の免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び／又はＣＴＬＡ−４抗体）を更に含むことができる。
【０１９３】
いくつかの実施形態では、治療により、治療の終了後の個体における応答の維持がもたらされる。本明細書記載の方法は、癌治療のための腫瘍免疫原性の増加といった、免疫原性の増強が望まれる治療条件での使用が見出され得る。本明細書において、癌を有する個体などにおける、免疫機能を増強する方法であって、当該個体に、有効量の、ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニスト（例えば、ＩＬ−２／抗ＩＬ−２免疫複合体、ＩＬ−１５／抗ＩＬ−１５免疫複合体、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５受容体α−ＩｇＧ１−Ｆｃ（ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−ＩｇＧ１−Ｆｃ）免疫複合体、ＰＥＧ化ＩＬ−２、ＰＥＧ化ＩＬ−１５、ＩＬ−２ムテイン及び／又はＩＬ−１５ムテイン）、並びに、ｐ５３及び／若しくはＭＤＡ−７癌抑制遺伝子治療法、又はウイルス腫瘍崩壊性治療法であるＶｉｒＲｘ００７を投与することを含む、方法もまた提供される。ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストは、ＡＬＴ−８０３などの、ＩＬ−１５受容体α／ＩｇＧ１  Ｆｃ融合タンパク質に結合したＩＬ−１５変異体（例えば、ＩＬ−１５Ｎ７２Ｄ）であることができる。いくつかの実施形態において個体はヒトである。
【０１９４】
いくつかの態様では、対象には、癌抑制免疫遺伝子治療法が更に投与される（その全体が本明細書に参照により組み込まれている、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０６０８３３を参照のこと）。いくつかの態様では、対象には、追加のウイルス及び非ウイルス遺伝子治療法（その全体が本明細書に参照により組み込まれている、ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０６５８６１）が更に投与される。いくつかの態様では、複製可能な、及び／又は複製不可能なウイルス及び／又は非ウイルス遺伝子治療法は、癌抑制遺伝子又は免疫刺激遺伝子であることができる、１種以上の治療様遺伝子を送達することができる。
【０１９５】
治療が想到される癌の例としては、肺癌、頭頸癌、乳癌、膵癌、前立腺癌、腎癌、骨肉腫、精巣癌、子宮頚癌、胃腸癌、リンパ腫、肺における新生物発生前の損傷、大腸癌、黒色腫、及び膀胱癌が挙げられる。
【０１９６】
いくつかの実施形態では、個体は、１種以上の抗癌治療法に耐性を有する（耐性があることが示されている）癌を有する。いくつかの実施形態では、抗癌治療法への耐性としては、癌の再発、又は耐性癌が挙げられる。再発とは、治療後、元の位置、又は新しい位置での、癌の再出現を意味することができる。いくつかの実施形態では、抗癌治療法への耐性としては、抗癌治療法での治療中に癌が進行することが挙げられる。いくつかの実施形態では、癌は初期段階、又は後期段階である。
【０１９７】
いくつかの実施形態では、対象は、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト、及び／股は抗ＣＴＬＡ−４抗体などの免疫チェックポイント阻害剤でもまた治療される。個体は、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーを発現する（例えば、診断試験にて発現することが示されている）癌、又は、高い腫瘍変異負荷を有し得る。いくつかの実施形態では、患者の癌は、不十分なＰＤ−Ｌ１バイオマーカーを発現する。いくつかの実施形態では、患者の癌は、多くのＰＤ−Ｌ１バイオマーカーを発現する。ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーは、ＦＡＣＳ、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、免疫沈降、免疫組織化学法、免疫蛍光法、ラジオイムノアッセイ、ドットブロッティング、免疫検出法、ＨＰＬＣ、表面プラズモン共鳴、光学分光法、質量分析法、ＨＰＬＣ、ｑＰＣＲ、ＲＴ−ｑＰＣＲ、多重ｑＰＣＲ又はＲＴ−ｑＰＣＲ、ＲＮＡ−ｓｅｑ、マイクロアレイ分析、ＳＡＧＥ、ＭａｓｓＡＲＲＡＹ技術、及びＦＩＳＨ、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される方法を使用して、サンプル中で検出することができる。高変異の腫瘍負荷の測定は、ゲノム配列決定（例えば、Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ  Ｏｎｅ  ＣＤｘアッセイ）により決定することができる。
【０１９８】
いくつかの実施形態では、対象は、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤（例えば、以前はＣＨＲ−３９９６又はＶＲｘ−３９９６であった、経口投与されるクラス１ヒストンデアセチラーゼ選択性阻害剤である、トラクチノスタット）でもまた治療される。
【０１９９】
本明細書記載の方法のいずれかの有効性（例えば、有効量の、少なくとも１種のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニスト、ｐ５３、ＡＤＰ、並びに／又は、ＭＤＡ−７、遺伝子治療法、少なくとも１種の免疫チェックポイント阻害剤、及び／若しくは少なくとも１種のＨＤＡＣ阻害剤の組み合わせを投与することを含む、治療の組み合わせ）を、臨床モデル又は臨床前モデルなどの、当該技術分野において公知の様々なモデルで試験することができる。好適な臨床前モデルが本明細書で例示され、ＩＤ８卵巣癌、ＧＥＭモデル、Ｂ１６黒色腫、ＲＥＮＣＡ腎細胞癌、ＣＴ２６結腸直腸癌、ＭＣ３８結腸直腸癌、及び、癌のクラウドマン黒色腫モデルを更に含むことができるが、これらに限定されない。
【０２００】
本開示の方法のいくつかの実施形態において、癌は、少量のＴ細胞湿潤を有する。いくつかの実施形態では、癌は、検出可能なＴ細胞浸潤を有しない。いくつかの実施形態では、癌は、非免疫原性癌（例えば、非免疫原性結腸直腸癌、及び／又は卵巣癌）である。理論に束縛されるものではないが、併用治療は、組み合わせの投与前と比較して、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、メモリーＴ細胞）のプライミング、活性化、及び／又は増殖を増加させることができる。
【０２０１】
本開示の方法のいくつかの実施形態において、個体における、活性化されたＣＤ４及び／又はＣＤ８  Ｔ細胞は、γ−ＩＦＮ産生ＣＤ４及び／若しくはＣＤ８  Ｔ細胞、並びに／又は、組み合わせの投与前と比較して、増強された細胞溶解活性を特徴とする。γ−ＩＦＮは、例えば、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）を伴う細胞の固定、易透化、及びγ−ＩＦＮに対する抗体による染色などの、当該技術分野において公知の任意の手段により測定することができる。細胞溶解活性は当該技術分野において公知の任意の手段、例えば、混合したエフェクター細胞及び標的細胞による細胞殺傷アッセイを用いることにより、測定することができる。
【０２０２】
本開示は、免疫系に対する標的、又は、外来標的に対する免疫系の応答の一部のいずれかとしての、免疫反応に関与する任意のヒト細胞に有用である。方法は、エクスビボ法、インビボ法、及び、ポリヌクレオチド又はベクターを宿主細胞に注入することを伴う、様々な他の方法を含む。方法は、腫瘍又は腫瘍床への直接注射、及び、腫瘍への局所又は局部注射もまた含む。
【０２０３】
Ａ．  投与
本明細書において提供する併用療法は、選択性ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニスト（例えば、ＩＬ−２／抗ＩＬ−２免疫複合体、ＩＬ−１５／抗ＩＬ−１５免疫複合体、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５受容体α−ＩｇＧ１−Ｆｃ（ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−ＩｇＧ１−Ｆｃ）免疫複合体、ＰＥＧ化ＩＬ−２、ＰＥＧ化ＩＬ−１５、ＩＬ−２ムテイン、及び／又はＩＬ−１５ムテイン）、並びに、ｐ５３、ＡＤＰ、及び／又はＭＤＡ−７遺伝子治療法を投与することを含む。併用療法は、当該技術分野において既知の任意の好適方法で投与されることができる。例えば、ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニスト（例えば、ＩＬ−２／抗ＩＬ−２免疫複合体、ＩＬ−１５／抗ＩＬ−１５免疫複合体、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５受容体α−ＩｇＧ１−Ｆｃ（ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−ＩｇＧ１−Ｆｃ）免疫複合体、ＰＥＧ化ＩＬ−２、ＰＥＧ化ＩＬ−１５、ＩＬ−２ムテイン、及び／又はＩＬ−１５ムテイン）、並びに、ｐ５３及び／又はＭＤＡ−７遺伝子治療法は、連続して（異なる時間で）、又は同時に（同じ時間に）投与されることができる。いくつかの実施形態では、１種以上のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストは、ｐ５３、ＡＤＰ、及び／若しくはＭＤＡ−７遺伝子治療法、又はそれらの発現構築物として、個別の組成物中に存在する。いくつかの実施形態では、ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストは、ｐ５３及び／又はＭＤＡ−７遺伝子治療法と同じ組成物中に存在する。特定の態様において、対象には、少なくとも１種のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストの前、これと同時、又はこの後に、ｐ５３をコードする核酸、ＡＤＰ、及び／又はＭＤＡ−７をコードする核酸が投与される。
【０２０４】
１種以上のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニスト、並びに、ｐ５３、ＡＤＰ、及び／又はＭＤＡ−７遺伝子治療法は、同じ投与経路で、又は異なる投与経路で投与されることができる。いくつかの実施形態では、ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストは静脈内に、筋肉内に、皮下に、局所的に、経口的に、経皮的に、腹腔内に、眼窩内に、移植によって、吸入によって、髄腔内に、脳室内に、又は鼻腔内に投与される。いくつかの実施形態では、ｐ５３、ＡＤＰ、及び／又はＭＤＡ−７遺伝子治療法は静脈内に、筋肉内に、皮下に、局所的に、経口的に、経皮的に、腹腔内に、眼窩内に、移植によって、吸入によって、髄腔内に、脳室内に、又は鼻腔内に投与される。有効量のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニスト、並びにｐ５３、ＡＤＰ、及び／又はＭＤＡ−７遺伝子治療法を、病気の予防又は治療のために投与することができる。ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニスト、並びに／又はｐ５３、ＡＤＰ、及び／若しくはＭＤＡ−７遺伝子治療法の、適切な用量は、治療される病気の種類、病気の重症度及び過程、個体の臨床状態、個体の病歴及び治療に対する応答、並びに、主治医の自由裁量に基づき決定することができる。いくつかの実施形態では、少なくとも１種の選択性ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニスト（例えば、ＩＬ−２／抗ＩＬ−２免疫複合体、ＩＬ−１５／抗ＩＬ−１５免疫複合体、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５受容体α−ＩｇＧ１−Ｆｃ（ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−ＩｇＧ１−Ｆｃ）免疫複合体、ＰＥＧ化ＩＬ−２、ＰＥＧ化ＩＬ−１５、ＩＬ−２ムテイン、及び／又はＩＬ−１５ムテイン）、並びに、ｐ５３、ＡＤＰ、及び／又はＭＤＡ−７遺伝子治療法による併用治療は相乗的であり、これにより、単剤としての治療と比較して、少なくとも１種のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニスト（例えば、ＩＬ−２／抗ＩＬ−２免疫複合体、ＩＬ−１５／抗ＩＬ−１５免疫複合体、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５受容体α−ＩｇＧ１−Ｆｃ（ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−ＩｇＧ１−Ｆｃ）免疫複合体、ＰＥＧ化ＩＬ−２、ＰＥＧ化ＩＬ−１５、ＩＬ−２ムテイン、及び／又はＩＬ−１５ムテイン）と組み合わせた、個別用量のｐ５３、ＡＤＰ、及び／又はＭＤＡ−７遺伝子治療法の相加効果を超える効果が存在する。
【０２０５】
例えば、治療的有効量のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニスト（例えば、ＩＬ−２／抗ＩＬ−２免疫複合体、ＩＬ−１５／抗ＩＬ−１５免疫複合体、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５受容体α−ＩｇＧ１−Ｆｃ（ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−ＩｇＧ１−Ｆｃ）免疫複合体、ＰＥＧ化ＩＬ−２、ＰＥＧ化ＩＬ−１５、ＩＬ−２ムテイン及び／又はＩＬ−１５ムテイン）は、毎週、隔週、３週間に１回、４週間に１回の範囲の間隔で、皮下又は経静脈投与のいずれかで投与される場合、５〜１００μｇ／ｋｇの範囲の用量で投与される。
【０２０６】
例えば、治療的有効量の、１種以上のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニスト、並びにｐ５３、ＡＤＰ、及び／又はＭＤＡ−７遺伝子治療法を、抗体などの免疫チェックポイント阻害剤と更に組み合わせて投与する場合、治療的有効量は、１回以上の投与であるかないかに関係なく、患者の体重の約０．０１〜約５０ｍｇ／ｋｇの範囲である。いくつかの実施形態では、使用する抗体は例えば、１日当たりの投与において、約０．０１〜約４５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約２０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約１５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約５ｍｇ／ｋｇ、又は約０．０１〜約１ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態において、抗体は１５ｍｇ／ｋｇで投与される。しかし、他の投薬レジメンが有用であり得る。一実施形態では、本明細書で記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体はヒトに、１〜２１日のサイクルにおいて、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、又は約１４００ｍｇの用量で投与される。用量は、注入物などの、単回用量で、又は複数回用量（例えば、２回用量若しくは３回用量）で投与されてもよい。本治療法の進捗は、従来の技術によって容易に監視することができる。
【０２０７】
腫瘍内注射、又は、腫瘍脈管構造への注射が、併用療法のｐ５３、ＡＤＰ、及び／又はＭＤＡ−７遺伝子治療法構成成分に対して具体的に想到される。局所、局部、又は全身投与もまた好適であり得る。４ｃｍを超える腫瘍に対しては、投与される体積は約４〜１０ｍＬ（特に１０ｍＬ）である一方で、４ｃｍ未満の腫瘍に対しては、約１〜３ｍＬの体積（特に３ｍＬ）が用いられる。単回投与として送達される複数回注射は、約０．１〜約０．５ｍＬの体積を占める。例えば、アデノウイルス粒子は、複数回の注射を腫瘍に投与することにより、有利に接触されることができる。
【０２０８】
治療レジメンも同様に様々であり得、多くの場合、腫瘍の種類、腫瘍の位置、病気の進行、並びに、患者の健康及び年齢に左右される。明らかに、ある種の腫瘍は、より強力な治療を必要とする一方、同時に、ある種の患者は、より厄介なプロトコールに耐えることができない。臨床医は、治療用製剤の既知の有効性及び（存在する場合）毒性に基づき、このような決断を下すのに最も適しているであろう。
【０２０９】
特定の実施形態において、治療されている腫瘍は、少なくとも最初は、切除可能ではない場合がある。併用治療は、周辺における収縮により、又は、ある特定の侵襲性部分を取り除くことにより、腫瘍の切除可能性を増加させることができる。併用治療の後で、切除を実施する。切除後の更なる治療は、残った病気を取り除く役割を果たすであろう。
【０２１０】
治療は様々な「単位用量」を含むことができる。単位用量は、所定の量の治療用組成物を含有していること、と定義される。投与される量、並びに、特定の経路及び製剤は、臨床分野の当業者の技術の範囲内である。単位用量は、単回注射として投与される必要はないものの、一連の時間にまたがる連続注入を含むことができる。本発明の単位用量は便宜上、ウイルス性構築物に対するプラーク形成単位（ｐｆｕ）の観点で記載されることができる。単位用量は、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１０１０、１０１１、１０１２、１０１３ｐｆｕ、又はそれ以上の範囲である。あるいは、ウイルスの種類、及び達成可能な力価に応じて、患者、又は患者の細胞に、１〜１００、１０〜５０、１００〜１０００、又は、最大約１×１０４、１×１０５、１×１０６、１×１０７、１×１０８、１×１０９、１×１０１０、１×１０１１、１×１０１２、１×１０１３、１×１０１４、又は、１×１０１５、又はそれ以上の感染性ウイルス粒子（ｖｐ）を送達する。
【０２１１】
Ｂ．  注射可能な組成物及び製剤
ヒトｐ５３、ＡＤＰ、及びＭＤＡ−７をコードする１種以上の発現構築物を、本発明の増殖過剰細胞に送達するための一方法は、腫瘍内注射によるものである一方で、ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニスト、免疫チェックポイント阻害剤、及びＨＤＡＣ阻害剤は、全身投与される。しかし、本明細書にて開示した医薬組成物は、全てが参照により本明細書に組み込まれている、米国特許第５，５４３，１５８号、同第５，６４１，５１５号、及び同第５，３９９，３６３号に記載されているように、腫瘍内、非経口、静脈内、皮内、動脈内、筋肉内、経皮的、又は更に、腹腔内投与されることができる。
【０２１２】
核酸構築物の注射は、発現構築物が、注射に必要な特定のゲージの針を通過することができるのであれば、シリンジ、又は、溶液の注射に用いられる任意の他の方法により送達することができる。溶液を保持するためのアンプルチャンバーを画定するノズルと、溶液を、ノズルから送達部位に押すためのエネルギーデバイスと、を有する、新規の無針注射システムが説明されている（米国特許第５，８４６，２３３号）。任意の深さにて、所定量の溶液を複数回、正確に注射することを可能にする、遺伝子治療法で使用するためのシリンジシステムもまた、記載されている（米国特許第５，８４６，２２５号）。使用可能な別の注射システムは、取り付けられたシリンジにより、異なる深さまで調節可能な分岐式針を備える、ＱｕａｄｒａＦｕｓｅデバイスである。
【０２１３】
遊離塩基、又は薬理学的に許容される塩としての活性化合物の溶液は、ヒドロキシプロピルセルロースなどの界面活性剤と好適に混合された水の中で調製することができる。分散液もまた、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、及びこれらの混合物中、並びに油中で調製することができる。通常の保管及び使用条件では、これら調製物は、微生物の増殖を防ぐための保存剤を含む。注射可能な使用に好適な薬剤形態としては、滅菌水溶液又は分散液、及び、無菌注射可能な溶液又は分散液を即時調製するための、滅菌粉末が挙げられる（米国特許第５，４６６，４６８号）。いずれの場合も、形態は滅菌されてなければならず、容易な注射可能性が存在する程度まで流体でなければならない。形態は、製造及び保管の条件下で安定している必要があり、細菌や真菌などの微生物による汚染作用から保護されなければならない。担体は、例えば水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、これらの好適な混合物、並びに／又は植物油を含有する、溶媒又は分散媒であることができる。例えば、レシチンなどのコーティング剤を使用することにより、分散液の場合は必要な粒径を維持することにより、そして、界面活性剤を使用することにより、適切な流動性を維持することができる。微生物の活動は、様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどにより防止できる。多くの場合、等張剤、例えば糖累又は塩化ナトリウムを含むことが好ましい。注射用組成物の持続的吸収は、組成物に吸収遅延剤、例えばモノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを使用することで実現できる。
【０２１４】
水溶液中での非経口的投与のためには、例えば、溶液は、必要に応じて好適に緩衝化されなければならず、液体希釈剤はまず、十分な生理食塩水又はグルコースで等張性が付与される。これらの特定の水溶液は特に、静脈内、筋肉内、皮下、腫瘍内、及び腹腔内投与に好適である。これに関連して、使用可能な滅菌水性媒体は、本開示の観点から、当業者に既知であろう。例えば、一用量は、１ｍＬの等張性ＮａＣｌ溶液に溶解し、１０００ｍＬの皮下注入用流体に添加される、又は、注入予定の位置に注射されるかのいずれかであることができる（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ２２ｍｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎを参照のこと）。治療される対象の状態に応じて、いくらかの用量変化が必要に応じて生じるであろう。投与を担う人はいずれにせよ、個々の対象に対して適切な用量を決定するであろう。更に、ヒトへの投与のためには、調製物は、ＦＤＡオフィスの生物学的製剤規格により必要とされる滅菌性、発熱原性、一般的な安全性、及び純度規格を満たさなければならない。
【０２１５】
無菌注射液は、必要な量の活性化合物を適切な溶媒中に、必要に応じて上述のその他各種成分と共に組み入れ、続いてフィルタにかけて滅菌することにより調製される。一般的に、分散液は、各種滅菌済みの活性成分を、塩基性分散媒及び上述の他の成分のうち必要なものを含有する無菌ビヒクルに混ぜ合わせることにより調製される。無菌注射可能な溶液を調製するための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、予め滅菌してフィルタにかけたその溶液から、活性成分の粉末に加えて任意の追加の所望の成分を得る、真空乾燥及びフリーズドライ技術である。
【０２１６】
本明細書で開示する組成物は、中性又は塩形態で製剤化することができる。製薬上許容できる塩としては、酸付加塩（タンパク質の遊離アミノ基と共に形成される）、及び、例えば、塩酸若しくはリン酸などの無機酸、又は、酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸などの有機酸と共に形成されるものが挙げられる。遊離カルボキシル基と共に形成される塩もまた、例えばナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、若しくは水酸化第二鉄などの無機塩基、及びイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、プロカインなどの有機塩基に由来することができる。製剤化の際、溶液は、投薬形態と適合性のある方法で、そして、治療的有効量で投与される。製剤は、注射可能な溶液、薬剤放出カプセルなどの、様々な投薬形態にて容易に投与される。
【０２１７】
Ｃ．  追加の抗癌治療法
ｐ５３、ＡＤＰ、及び／又はＭＤＡ−７核酸、並びに少なくとも１種のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストの有効性を増加させるために、これらを、癌の治療において効果的な、少なくとも１種の追加の作用物質と組み合わせることができる。より一般的には、これらその他の組成物は、細胞の増殖を殺傷又は阻害するのに効果的な併用量で、提供される。このプロセスには、細胞を、発現構築物と、作用物質又は複数の因子と同時に接触させることを伴う場合がある。これは、細胞を、両方の作用物質を含む単一の組成物又は薬理学的製剤と接触させることにより、又は、一方の組成物が発現構築物を含み、他方が第二の作用物質を含む、２つの異なる組成物又は製剤に、細胞を接触させることにより、達成することができる。あるいは、発現構築物は増殖細胞に接触する場合があり、かつ、追加の治療法は、免疫系又は腫瘍微小環境の他の細胞に影響を及ぼし、抗腫瘍免疫応答及び治療効果を向上させることができる。少なくとも１種の追加の抗癌治療法は、外科療法、化学療法（例えば、プロテインキナーゼ阻害剤又はＥＧＦＲ標的化療法の投与）、放射線療法、凍結療法、高体温治療、写真療法、放射線切除療法、ホルモン療法、免疫チェックポイント阻害剤を含むがこれに限定されない免疫療法、小分子療法、受容体キナーゼ阻害剤療法、抗血管新生療法、サイトカイン療法又は生物学的療法（例えばモノクローナル抗体、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、又は遺伝子治療）であることができるが、これらに限定されない。生物学的療法は、癌抑制遺伝子治療法、細胞死タンパク質遺伝子治療法、細胞周期制御因子遺伝子治療法、サイトカイン遺伝子治療法、毒性遺伝子治療法、免疫原治療法、スーサイド遺伝子治療法、プロドラッグ遺伝子治療法、抗細胞増殖遺伝子治療法、酵素遺伝子治療法、又は、抗血管新生因子遺伝子治療法などの遺伝子治療法であることができるが、これらに限定されない。
【０２１８】
遺伝子治療法は、数分〜数週間の範囲のインターバルで、他の作用物質治療に先行する、又はこの後に続くことができる。他の作用物質及び発現構築物が細胞に個別に適用される実施形態において、一般的に、作用物質及び発現構築物が依然として、組み合わされた有利な効果を発揮することができるように、各送達の間の時間が著しく延びないことが確実に行われる。このような例において、細胞を、約１２〜２４時間で互いに、両方の様式で、かつ好ましくは、約６〜１２時間で互いに、接触することができると想到される。しかし、場合によっては、それぞれの投与の間が数日（例えば、２、３、４、５、６、又は７日）から数週間（例えば、１、２、３、４、５、６、７、又は８週間）かかる場合、治療のための期間を著しく延ばすのが望ましい場合がある。特定の実施形態において、１つ以上の治療法を、維持療法としての他の療法と共に、又はそれなしで、続けることができる。
【０２１９】
各種組み合わせを用いることができ、遺伝子治療法及びＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストは「Ａ」であり、第２の作用物質、即ち免疫チェックポイント阻害剤は「Ｂ」である。
Ａ／Ｂ／Ａ  Ｂ／Ａ／Ｂ  Ｂ／Ｂ／Ａ  Ａ／Ａ／Ｂ  Ａ／Ｂ／Ｂ  Ｂ／Ａ／Ａ  Ａ／Ｂ／Ｂ／Ｂ  Ｂ／Ａ／Ｂ／Ｂ
Ｂ／Ｂ／Ｂ／Ａ  Ｂ／Ｂ／Ａ／Ｂ  Ａ／Ａ／Ｂ／Ｂ  Ａ／Ｂ／Ａ／Ｂ  Ａ／Ｂ／Ｂ／Ａ  Ｂ／Ｂ／Ａ／Ａ
Ｂ／Ａ／Ｂ／Ａ  Ｂ／Ａ／Ａ／Ｂ  Ａ／Ａ／Ａ／Ｂ  Ｂ／Ａ／Ａ／Ａ  Ａ／Ｂ／Ａ／Ａ  Ａ／Ａ／Ｂ／Ａ
【０２２０】
１．  化学療法
癌治療法は一般的に、化学ベース及び放射線ベースの治療の両方による、様々な併用療法もまた含む。併用化学療法としては、例えば、シスプラチン（ＣＤＤＰ）、カルボプラチン、プロカルバジン、メクロレタミン、シクロホスファミド、カンプトテシン、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、ニトロソウレア、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリコマイシン、マイトマイシン、エトポシド（ＶＰ１６）、タモキシフェン、ラロキシフェン、エストロゲン受容体結合剤、タキソール、ゲムシタビン、ナベルビン、ファルネシル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、ｔｒａｎｓ−白金、５−フルオロウラシル、ビンクリスチン、ビンブラスチン及びメトトレキサート、テモゾロマイド（ＤＴＩＣの水性形態）、又は、前述の任意の類似体若しくは誘導体の異型が挙げられる。化学療法を生物学的療法と組み合わせることは、バイオケモセラピーとして知られている。化学療法は、少量を継続して投与されることもまた可能であり、これはメトロノーム化学療法として知られている。
【０２２１】
また更なる併用化学療法としては、例えば、アルキル化剤、例えば、チオテパ及びシクロホスファミド；アルキルスルホネート、例えば、ブスルファン、イムプロスルファン及びピポスルファン；アジリジン、例えば、ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ及びウレドーパ；エチレンイミン及びメチラメラミン、アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド及びトリメチロロメラミン；アセトゲニン（特に、ブラタシン及びブラタシノン）；カンプトセシン（合成アナログであるトポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン及びビゼレシン合成アナログを含む）；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成アナログであるＫＷ−２１８９及びＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エリューセロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン；スポンギスタチン；ナイトロジェンマスタード、例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミンオキシド、メルファラン、ノベムビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソ尿素、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン及びラニムスチン；抗生物質、例えば、エンジイン抗生物質（例えば、カリケアミシン、特に、カリケアミシンガンマＩ及びカリケアミシンオメガＩ１）；ダイネミシン、ダイネミシンＡを含む；ビスホスホネート、例えば、クロンドロネート；エスペラミシン；及びネオカルジノスタチンクロモフォア及び関連する色素タンパク質エンジイン抗生物質クロモフォア、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６ージアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン（モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、例えば、マイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗剤、例えば、メトトレキサート及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；葉酸アナログ、例えば、デノプテリン、プテロプテリン、トリメトレキサート；プリンアナログ、例えば、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジンアナログ、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン；アンドロゲン、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗副腎剤、例えば、ミトタン、トリロスタン；葉酸補充剤、例えば、フォリン酸；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキサート；デフォファミン；デメコルチン；ジアジクオン；エフロールニチン；酢酸エリプチニウム；エポシロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン；メイタンシノイド、例えば、メイタンシン及びアンサマイトシン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメト；ピラルビシン；ロキソキサントロン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ多糖複合体；ラゾキサン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特に、Ｔ−２毒素、ベラキュリンＡ、ロリジンＡ及びアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；タキソイド、例えば、パクリタキセル及びドセタキセルゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；白金配位複合体、例えば、シスプラチン、オキサリプラチン及びカルボプラチン；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビンブラスチン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；イリノテカン（例えば、ＣＰＴ−１１）；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド、例えば、レチノイン酸；カペシタビン；カルボプラチン、プロカルバジン，プリコマイシン、ゲムシタビン、ナベルビン、ファルネシル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、トランス白金、及び上述のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、又は誘導体が挙げられる。特定の実施形態において、本明細書において提供する組成物を、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤と組み合わせることができる。特定の実施形態において、本明細書において提供する組成物を、ゲフィチニブと組み合わせることができる。別の実施形態において、本実施形態を、Ｇｌｅｅｖｅｃと組み合わせて実践することができる（例えば、約４００〜約８００ｍｇ／日のＧｌｅｅｖｅｃを患者に投与することができる）。特定の実施形態において、１つ以上の化学療法を、本明細書において提供する組成物と組み合わせて使用することができる。
【０２２２】
２．  放射線療法
ＤＮＡの損傷を引き起こす、幅広く使用されてきた他の因子としては、ｙ線、Ｘ線として一般に知られているもの、及び／又は、放射性同位体を腫瘍細胞に向けて送達することが挙げられる。マイクロ波及び紫外線などの、ＤＮＡ損傷因子の他の形態もまた知られている。これらの因子全てが、ＤＮＡ、ＤＮＡの前駆体、ＤＮＡの複製及び修復、並びに染色体の集合及び維持の広範囲に影響を及ぼす可能性が最も高い。Ｘ線の照射範囲は、長期間（３〜４週間）では１日あたり５０〜２００レントゲンの照射から、１回の照射では２０００〜６０００レントゲンの範囲で変動する。放射性同位体の照射範囲は広範に変化し、同位体の半減期、放射される放射線の強さ及び種類、並びに新生細胞による取り込みに依存する。
【０２２３】
３．  免疫療法
免疫療法は一般に、癌細胞を標的化し破壊するための、免疫エフェクター細胞及び分子の使用に依存する。免疫エフェクターは、例えば、腫瘍細胞表面にあるいくつかのマーカーに特異的な抗体であってもよい。抗体のみが、治療のエフェクターとして役立つことができる、又は細胞の殺傷に実際に影響を与えるように、他の細胞を動員することができる。抗体はまた、薬物又は毒素（化学療法、放射性核種、リシンＡ鎖、コレラ毒素、百日咳毒素等）に抱合してよく、また、単に標的化剤として機能してよい。あるいは、エフェクターは、腫瘍細胞標的と直接又は間接的のいずれかで相互作用する表面分子を担持するリンパ球であってよい。様々なエフェクター細胞としては、細胞傷害性Ｔ細胞及びＮＫ細胞、並びに、キメラ抗原受容体を発現するように改変された、これらの細胞型の遺伝子組み換え多様体が挙げられる。腫瘍細胞へのＭｄａ−７遺伝子導入により、腫瘍細胞死及びアポトーシスが引き起こされる。アポトーシス腫瘍細胞は、樹状細胞及びマクロファージを含む細網内皮細胞により捕捉され、免疫系に提示されて抗腫瘍免疫を生成する（Ｒｏｖｅｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９；Ｓｔｅｉｎｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）。
【０２２４】
他の補助的な免疫療法を、上述のレジメンに追加して、ＧＭ−ＣＳＦが挙げられるがこれに限定されない、有効性を更に向上させ、骨髄由来の自然免疫系細胞の数、先天性及び適応免疫及び５ＦＵ（例えば、カペシタビン）を阻害するＴ制御性細胞を取り除くための、低用量のシクロホスファミド又はＰＩ３Ｋ阻害剤（例えば、ＰＩ３Ｋδ阻害剤）の数、阻害性骨髄由来免疫抑制細胞を取り除くための、ＰＩ３Ｋ阻害剤又はヒストンデアセチラーゼ阻害剤の数、を増加させることができるということが、癌免疫療法の当業者によって理解されるであろう。例えば、ＰＩ３Ｋ阻害剤としては、ＬＹ２９４００２、ペリホシン、ＢＫＭ１２０、デュベリシブ、ＰＸ−８６６、ＢＡＹ８０−６９４６、ＢＥＺ２３５、ＳＦ１１２６、ＧＤＣ−０９４１、ＸＬ１４７、ＸＬ７６５、パロミド５２９、ＧＳＫ１０５９６１５、ＰＷＴ３３５９７、ＩＣ８７１１４、ＴＧ１００−１５、ＣＡＬ２６３、ＰＩ−１０３、ＧＮＥ−４７７、ＣＵＤＣ−９０７、及びＡＥＺＳ−１３６が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの態様では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、限定されるものではないが、イデラリシブＲＰ６５３０、ＴＧＲ１２０２、及びＲＰ６５０３などのＰＩ３Ｋδ阻害剤である。更なるＰＩ３Ｋ阻害剤は、米国特許出願公開第２０１５０２９１５９５号、同第２０１１０１９０３１９号、並びに、国際特許出願公開第２０１２１４６６６７号、同第２０１４１６４９４２号、同第２０１２０６２７４８号、及び同第２０１５０８２３７６号に開示されている。免疫療法は、ＩＬ−２などのインターロイキン、又は、ＩＮＦαなどのインターフェロンの投与もまた含むことができる。
【０２２５】
ｐ５３、ＡＤＰ、及び／又はＭＤＡ−７遺伝子治療法、並びに、ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストと組み合わせることができる免疫療法の例は、免疫アジュバント（例えば、ウシ型結核菌、熱帯熱マラリア原虫、ジニトロクロロベンゼン、及び芳香族化合物）（米国特許第５，８０１，００５号、同第５，７３９，１６９号；Ｈｕｉ  ａｎｄ  Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ，１９９８；Ｃｈｒｉｓｔｏｄｏｕｌｉｄｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）、サイトカイン療法（例えば、インターフェロンα、β、及びγ；インターロイキン（ＩＬ−１、ＩＬ−２）、ＧＭ−ＣＳＦ、並びにＴＮＦ）（Ｂｕｋｏｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８；Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８；Ｈｅｌｌｓｔｒａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）、遺伝子治療法（例えば、ＴＮＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ｐ５３）（Ｑｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８；Ａｕｓｔｉｎ−Ｗａｒｄ  ａｎｄ  Ｖｉｌｌａｓｅｃａ，１９９８；米国特許第５，８３０，８８０号及び同第５，８４６，９４５号）、並びにモノクローナル抗体（例えば、抗ガングリオシドＧＭ２、抗ＨＥＲ−２、抗ｐ１８５）（Ｐｉｅｔｒａｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８；Ｈａｎｉｂｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８；米国特許第５，８２４，３１１号）である。ハーセプチン（トラスツズマブ）は、ＨＥＲ２−ｎｅｕ受容体を遮断するキメラ（マウス−ヒト）モノクローナル抗体である。ハーセプチンは抗腫瘍活性を有し、悪性腫瘍の治療での使用が認可されている（Ｄｉｌｌｍａｎ，１９９９）。癌をハーセプチンと化学療法とで併用療法することは、個別の治療法よりも効果的であることが示されている。したがって、１種以上の抗癌治療法を、本明細書で記載されるｐ５３、ＡＤＰ、及び／又はＭＤＡ−７遺伝子治療法と共に用いることができると想到される。
【０２２６】
ｐ５３、ＡＤＰ、及び／又はＭＤＡ−７遺伝子治療法、並びにＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストと組み合わせて使用することができる追加の免疫療法としては、免疫チェックポイント阻害剤、共刺激受容体アゴニスト、先天性免疫細胞の刺激因子、又は、先天性免疫の活性因子が挙げられる。特定の態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＬＡＧ−３、ＢＴＬＡ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲ、又はＡ２ａＲの阻害剤である。いくつかの態様では、少なくとも１種の免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＣＴＬＡ−４抗体である。いくつかの態様では、抗ＣＴＬＡ−４抗体はトレメリムマブ又はイピリムマブである。特定の態様において、少なくとも１種の免疫チェックポイント阻害剤は、抗キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）抗体である。いくつかの実施形態において、抗ＫＩＲ抗体はリリルマブである。いくつかの態様では、ＰＤ−Ｌ１の阻害剤はデュルバルマブ、アテゾリズマブ、又はアベルマブである。いくつかの態様では、ＰＤ−Ｌ２の阻害剤はｒＨＩｇＭ１２Ｂ７である。いくつかの態様では、ＬＡＧ３阻害剤は、ＩＭＰ３２１又はＢＭＳ−９８６０１６である。いくつかの態様では、Ａ２ａＲの阻害剤はＰＢＦ−５０９である。
【０２２７】
いくつかの態様では、少なくとも１種の免疫チェックポイント阻害剤は、ヒトプログラム細胞死１（ＰＤ−１）軸結合アンタゴニストである。特定の態様において、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤＬ１結合アンタゴニスト、及びＰＤＬ２結合アンタゴニストからなる群から選択される。いくつかの態様では、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストはＰＤ−１結合アンタゴニストである。特定の態様において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１の、ＰＤＬ１及び／又はＰＤＬ２への結合を阻害する。特に、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストはニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピディリズマブ、ＡＭＰ−５１４、ＲＥＧＮ２８１０、ＣＴ−０１１、ＢＭＳ  ９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８ＯＡ、又はＡＭＰ−２２４である。
【０２２８】
特定の態様において、少なくとも１種のチェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＬＡＧ−３、ＢＴＬＡ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＴＩＭ３、ＫＩＲ、又はＡ２ａＲの阻害剤から選択される。いくつかの態様では、少なくとも１種の免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＣＴＬＡ−４抗体である。いくつかの態様では、抗ＣＴＬＡ−４抗体はトレメリムマブ又はイピリムマブである。特定の態様において、少なくとも１種の免疫チェックポイント阻害剤は、抗キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）抗体である。いくつかの実施形態において、抗ＫＩＲ抗体はリリルマブである。いくつかの態様では、ＰＤ−Ｌ１の阻害剤はデュルバルマブ、アテゾリズマブ、又はアベルマブである。いくつかの態様では、ＰＤ−Ｌ２の阻害剤はｒＨＩｇＭ１２Ｂ７である。いくつかの態様では、ＬＡＧ３阻害剤は、ＩＭＰ３２１又はＢＭＳ−９８６０１６である。いくつかの態様では、Ａ２ａＲの阻害剤はＰＢＦ−５０９である。
【０２２９】
共刺激受容体アゴニストは、抗ＯＸ４０抗体（例えば、ＭＥＤＩ６４６９、ＭＥＤＩ６３８３、ＭＥＤＩ０５６２、及びＭＯＸＲ０９１６）、抗ＧＩＴＲ抗体（例えば、ＴＲＸ５１８、及びＭＫ−４１６６）、抗ＣＤ１３７抗体（例えばウレルマブ、及びＰＦ−０５０８２５６６）、抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＰ−８７０，８９３、Ｃｈｉ  Ｌｏｂ  ７／４）、又は、抗ＣＤ２７抗体（例えば、ＣＤＸ−１１２７としても知られているバルリルマブ）であることができる。先天性免疫細胞の刺激因子としては、ＫＩＲモノクローナル抗体（例えばリリルマブ）、細胞傷害性阻害受容体の阻害剤（例えば、ＫＬＲＣ及びＣＤ９４としても知られているＮＫＧ２Ａ、例えば、モノクローナル抗体のモナリズマブ、並びに、ＴＡＣＴＩＬＥとしても知られている抗ＣＤ９６）、並びに、トル様受容体（ＴＬＲ）アゴニストが挙げられるが、これらに限定されない。ＴＬＲアゴニストは、ＢＣＧ、ＴＬＲ７アゴニスト（例えば、ｐｏｌｙ０ＩＣＬＣ、及びイミキモド）、ＴＬＲ８アゴニスト（例えばレシキモド）、又はＴＬＲ９アゴニスト（例えばＣＰＧ７９０９）であることができる。ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、及び樹状細胞などの先天性免疫細胞の活性因子としては、ＩＤＯ阻害剤、ＴＧＦβ阻害剤、ＩＬ−１０阻害剤が挙げられる。先天性免疫の例示的活性因子は、インドキシモドである。いくつかの態様では、免疫療法は、インターフェロン遺伝子刺激因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニストである（Ｃｏｒｒａｌｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。
【０２３０】
本開示の方法で用いることが想到される他の免疫療法としては、参照により本明細書に組み込まれている、Ｔｃｈｅｋｍｅｄｙｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５により説明されているものが挙げられる。免疫療法は、Ｔ制御性細胞（Ｔｒｅｇ）、骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、及び癌関連線維芽細胞（ＣＡＦ）の抑制を含むことができる。いくつかの実施形態では、免疫療法は、腫瘍ワクチン（例えば、全腫瘍細胞ワクチン、樹状細胞ワクチン、ＤＮＡ及び／若しくはＲＮＡ発現ワクチン、ペプチド、並びに、組み換え腫瘍関連抗原ワクチン）、又は、養子細胞治療法（ＡＣＴ）（例えば、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、及びＬＡＫ細胞）である。Ｔ細胞及び／又はナチュラルキラー細胞を、特異的腫瘍抗原に対するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を用いて改変することができる。本明細書で使用する場合、キメラ抗原受容体（又はＣＡＲ）とは、Ｔ細胞又はナチュラルキラー細胞で発現したときに、そのＴ細胞又はナチュラルキラー細胞にＣＡＲの特異性を付与する、目的の抗原に特異的な、任意の改変受容体を意味することができる。標準的な分子技術を用いて作製したら、キメラ抗原受容体を発現するＴ細胞又はナチュラルキラー細胞を、養子細胞導入などの技術と同様に、患者に導入することができる。いくつかの態様では、Ｔ細胞は、組み合わせの投与前と比較して、γ−ＩＦＮ’’産生ＣＤ４、及び／又はＣＤ８  Ｔ細胞、及び／又は増強された細胞溶解活性を特徴とする、個体において活性化されたＣＤ４及び／又はＣＤ８  Ｔ細胞である。ＣＤ４及び／又はＣＤ８  Ｔ細胞は、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、及びインターロイキンからなる群から選択されるサイトカインの放出の増加を示す可能性がある。ＣＤ４及び／又はＣＤ８  Ｔ細胞は、エフェクターメモリーＴ細胞であることができる。特定の実施形態において、ＣＤ４及び／又はＣＤ８エフェクターメモリーＴ細胞は、ＣＤ４４ｈｉｇｈＣＤ６２Ｌｌｏｗの発現を有することを特徴とする。
【０２３１】
特定の態様において、２種以上の免疫療法を、Ｔ細胞共刺激受容体のアゴニストと組み合わせた、又は、ＴＩＬ  ＡＣＴと組み合わせた、追加の免疫チェックポイント阻害剤を含む、ｐ５３、ＡＤＰ、及び／又はＭＤＡ−７遺伝子治療法、並びにＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストと組み合わせることができる。他の組み合わせとしては、Ｔ細胞チェックポイント遮断＋共刺激受容体アゴニスト、先天性免疫細胞機能を改善するためのＴ細胞チェックポイント遮断、チェックポイント遮断＋ＩＤＯ阻害、又は、チェックポイント遮断＋養子Ｔ細胞導入が挙げられる。特定の態様において、免疫療法は、抗ＰＤ−Ｌ１免疫チェックポイント阻害剤（例えばアベルマブ）、４−１ＢＢ（ＣＤ−１３７）アゴニスト（例えばウトミルマブ）、及びＯＸ４０（ＴＮＦＲＳ４）アゴニストの組み合わせを含む。免疫療法を、５−アザシチジン及びエンチノスタットなどのヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤と組み合わせることができる。
【０２３２】
免疫療法は、１種以上の癌抗原、特に、タンパク質若しくはその免疫原性断片、上記癌抗原、特に、タンパク質又はその免疫原性断片をコードするＤＮＡ若しくはＲＮＡ、細胞可溶化物、並びに／又は、腫瘍細胞由来のタンパク質調製物を含む癌ワクチンであることができる。本明細書で使用する場合、癌抗原は、癌細胞に存在する抗原性物質である。原則として、通常の細胞と比較して、癌細胞内で上方制御された、又は変異により異常構造を有する癌細胞内で産生されたあらゆるタンパク質は、癌抗原として作用することができる。原則として、癌抗原は、変異若しくは過剰発現した癌遺伝子及び癌抑制遺伝子の産生物；他の変異遺伝子、過剰発現若しくは異常発現した細胞タンパク質の産生物；発癌性ウイルスにより産生された癌抗原；癌胎児性抗原；変化した細胞表面糖脂質及び糖タンパク質；又は、細胞の種類に特異的な分化抗原であることができる。癌抗原の例としては、異常又は過剰発現した、ｒａｓ及びｐ５３遺伝子の産生物である。他の例としては、組織分化抗原、変異タンパク質抗原、発癌性ウイルス性抗原、癌精巣抗原、及び血管又は間質特異的抗原が挙げられる。組織分化抗原は、特定の種類の組織に対して特異的な抗原である。変異タンパク質は、通常の細胞がこれらのタンパク質を含有してないために、癌細胞に対してはるかに特異的である可能性がある。通常の細胞は、ＭＨＣ分子に対して通常のタンパク質抗原を提示する一方で、癌細胞は変異版を提示する。いくつかのウイルス性タンパク質は癌を形成することが示唆されており、いくつかのウイルス性抗原は、癌抗原でもある。癌精巣抗原は、睾丸の生殖細胞で主に発現するが、胎児の卵巣及び栄養芽細胞でもまた発現する抗原である。いくつかの癌細胞はこれらのタンパク質を異常発現するが故に、これらの抗原を提示し、これらの抗原に特異的なＴ細胞による攻撃を可能にする。この種の例示的な抗原は、ＣＴＡＧ１  Ｂ及びＭＡＧＥＡ１、並びに、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）ＶＩＩＩ多様体に対して標的化された、１４量体の皮内注射可能なペプチドワクチンである、リンドペプミトである。リンドペプミトは、本明細書に記載したＣＤ９５／ＣＤ９５Ｌシグナル伝達系の阻害剤と組み合わせて使用する際、グリア芽腫を治療するのに特に好適である。また、通常は非常に少量が産生されるが、癌細胞での産生が劇的に増加するタンパク質は、免疫応答をトリガーする場合がある。このようなタンパク質の例は酵素のチロシナーゼであり、メラニン産生に必要である。通常、チロシナーゼは微量で産生されるが、その量は、黒色腫細胞では非常に増加する。癌胎児性抗原は、癌抗原の別の重要な部類である。例としては、α−フェトプロテイン（ＡＦＰ）及び癌胎児性抗原（ＣＥＡ）がある。これらのタンパク質は通常、胚発達の初期段階で産生され、免疫系が完全に発達するときまでには消失する。したがって、自己寛容は、これらの抗原に対しては発達しない。異常タンパク質もまた、例えばＥＢＶ及びＨＰＶなどのオンコウイルスで感染した細胞により産生される。これらのウイルスにより感染される細胞は、転写され、得られるタンパク質が免疫応答を生み出す、潜在的なウイルスＤＮＡを含有する。癌ワクチンはペプチド��ワクチンを含むことができ、これは、いくつかの実施形態では、個人向けにデザインされたペプチドワクチンである。いくつかの実施形態では、ペプチド癌ワクチンは、多価の長いペプチドワクチン、多ペプチドワクチン、ペプチドカクテルワクチン、ハイブリッドペプチドワクチン、又は、ペプチドによりパルスされた樹状細胞ワクチンである。
【０２３３】
免疫療法は、ポリクローナル抗体調製物の一部としてなどの抗体であることができる、又はモノクローナル抗体であることができる。抗体は、ヒト化抗体、キメラ抗体、抗体断片、二重特異性抗体、又は一本鎖抗体であることができる。本明細書で開示する抗体としては、例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、及びＦ（ａｂ′）２、Ｆｄ、一本鎖Ｆｖｓ（ｓｃＦｖ）、一本鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖｓ（ｓｄｆｖ）、及び、ＶＬ又はＶＨドメインのいずれかを含む断片があるが、これらに限定されない抗体断片が挙げられる。いくつかの態様では、抗体又はその断片は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ１、Ｅｒｂ−Ｂ１）、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（Ｅｒｂ−Ｂ２）、ＣＤ２０、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）、ＴＲＡＩＬ受容体、上皮細胞接着分子、癌胎児性抗原、前立腺特異的膜抗原、ムチン−１、ＣＤ３０、ＣＤ３３、又はＣＤ４０に特異的に結合する。
【０２３４】
本明細書において提供する組成物と組み合わせて使用可能なモノクローナル抗体の例としてはトラスツズマブ（抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体）；ペルツズマブ（抗ＨＥＲ２  ｍＡｂ）；セツキシマブ（上皮成長因子受容体ＥＧＦＲに対するキメラモノクローナル抗体）；パニツムマブ（抗ＥＧＦＲ抗体）；ニモツズマブ（抗ＥＧＦＲ抗体）；ザルツムマブ（抗ＥＧＦＲ  ｍＡｂ）；ネシツムマブ（抗ＥＧＦＲ  ｍＡｂ）；ＭＤＸ−２１０（ヒト化抗ＨＥＲ−２二重特異性抗体）；ＭＤＸ−２１０（ヒト化抗ＨＥＲ−２二重特異性抗体）；ＭＤＸ−４４７（ヒト化抗ＥＧＦ受容体二重特異性抗体）；リツキシマブ（キメラマウス／ヒト抗ＣＤ２０  ｍＡｂ）；オビヌツズマブ（抗ＣＤ２０  ｍＡｂ）；オファツムマブ（抗ＣＤ２０  ｍＡｂ）；トシツモマブ−Ｉ１３１（抗ＣＤ２０  ｍＡｂ）；イブリツモマブチウキセタン（抗ＣＤ２０  ｍＡｂ）；ベバシズマブ（抗ＶＥＧＦ  ｍＡｂ）；ラムシルマブ（抗ＶＥＧＦＲ２  ｍＡｂ）；ラニビズマブ（抗ＶＥＧＦ  ｍＡｂ）；アフリベルセプト（ＩｇＧ１  Ｆｃに融合したＶＥＧＦＲ１及びＶＥＧＦＲ２の細胞外ドメイン）；ＡＭＧ３８６（ＩｇＧ１  Ｆｃに融合したアンジオポエチン−１及び２結合ペプチド）；ダロツズマブ（抗ＩＧＦ−１Ｒ  ｍＡｂ）；ゲムツズマブオゾガマイシン（抗ＣＤ３３  ｍＡｂ）；アレムツズマブ（抗キャンパス−１／ＣＤ５２  ｍＡｂ）；ブレンツキシマブベドチン（抗ＣＤ３０  ｍＡｂ）；カツマキソマブ（上皮細胞接着分子及びＣＤ３を標的化する二重特異的ｍＡｂ）；ナプツモマブ（抗５Ｔ４  ｍＡｂ）；ジレンツキシマブ（抗カルボニックアンヒドラーゼｉｘ）；又はファーレツズマブ（抗葉酸塩受容体）が挙げられるが、これらに限定されない。他の例としては、Ｐａｎｏｒｅｘ（商標）（１７−１Ａ）（マウスモノクローナル抗体）；Ｐａｎｏｒｅｘ（＠（１７−１Ａ）（キメラマウスモノクローナル抗体））；ＢＥＣ２（ＧＤエピトープの模倣物である、抗イディオタイプｍＡｂ）（ＢＣＧを有する）；Ｏｎｃｏｌｙｍ（Ｌｙｍ−１モノクローナル抗体）；ＳＭＡＲＴ  Ｍ１９５  Ａｂ（ヒト化１３’１  ＬＹＭ−１（Ｏｎｃｏｌｙｍ）、Ｏｖａｒｅｘ（Ｂ４３．１３、抗イディオタイプマウスｍＡｂ））；腺癌にてＥＧＰ４０（１７−１Ａ）汎用癌腫（ｐａｎｃａｒｃｉｎｏｍａ）抗原に結合する３６２２Ｗ９４  ｍＡｂ；Ｚｅｎａｐａｘ（ＳＭＡＲＴ  Ａｎｔｉ−Ｔａｃ（ＩＬ−２受容体））；ＳＭＡＲＴ  Ｍ１９５  Ａｂ（ヒト化Ａｂ、ヒト化）；ＮｏｖｏＭＡｂ−Ｇ２（汎用癌腫特異的Ａｂ）；ＴＮＴ（ヒストン抗原に対するキメラｍＡｂ）；ＴＮＴ（ヒストン抗原に対するキメラｍＡｂ）；グリオーマブ（Ｇｌｉｏｍａｂ）−Ｈ（モノクローナル−ヒト化Ａｂ）；ＧＮＩ−２５０  Ｍａｂ；ＥＭＤ−７２０００（キメラＥＧＦアンタゴニスト）；ＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ（ヒト化ＩＬ．Ｌ．２抗体）；及び、ＧＤ−２、ＡＮＡ  Ａｂ、ＳＭＡＲＴ  ＩＤＩＯ  Ａｂ、ＳＭＡＲＴ  ＡＢＬ  ３６４  Ａｂ、又はＩｍｍｕＲＡＩＴ−ＣＥＡを標的化する、二重特異性のＭＤＸ−２６０などの抗体が挙げられる。抗体の例としては、米国特許第５，７３６，１６７号、同第７，０６０，８０８号、及び同第５，８２１，３３７号に開示されているものが挙げられ��。
【０２３５】
抗体の更なる例としては、ザヌリムマブ（抗ＣＤ４  ｍＡｂ）、ケリキシマブ（抗ＣＤ４  ｍＡｂ）；イピリムマブ（ＭＤＸ−１０１；抗ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂ）；レメリムマブ（抗ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂ）；ダクリズマブ（抗ＣＤ２５／ＩＬ−２Ｒ  ｍＡｂ）；バシリキシマブ（抗ＣＤ２５／ＩＬ−２Ｒ  ｍＡｂ）；ＭＤＸ−１１０６（抗−ＰＤ１  ｍＡｂ）；ＧＩＴＲに対する抗体；ＧＣ１００８（抗ＴＧＦ−β抗体）；メテリムマブ／ＣＡＴ−１９２（抗ＴＧＦ−β抗体）；レルデリムマブ／ＣＡＴ−１５２（抗ＴＧＦ−β抗体）；ＩＤ１１（抗ＴＧＦ−β抗体）；デノスマブ（抗ＲＡＮＫＬ  ｍＡｂ）；ＢＭＳ−６６３５１３（ヒト化抗４−１ＢＢ  ｍＡｂ）；ＳＧＮ−４０（ヒト化抗ＣＤ４０  ｍＡｂ）；ＣＰ８７０，８９３（ヒト抗ＣＤ４０  ｍＡｂ）；インフリキシマブ（キメラ抗ＴＮＦ  ｍＡｂ）；アダリムマブ（ヒト抗ＴＮＦ  ｍＡｂ）；セルトリズマブ（ヒト化Ｆａｂ抗ＴＮＦ）；ゴリムマブ（抗ＴＮＦ）；エタネルセプト（ＩｇＧ１  Ｆｃに融合したＴＮＦＲの細胞外ドメイン）；ベラタセプト（Ｆｃに融合したＣＴＬＡ−４の細胞外ドメイン）；アバタセプト（Ｆｃに融合したＣＴＬＡ−４の細胞外ドメイン）；ベリムマブ（抗Ｂリンパ球刺激因子）；ムロモナブ−ＣＤ３（抗ＣＤ３  ｍＡｂ）；オテリキシズマブ（抗ＣＤ３  ｍＡｂ）；テプリズマブ（抗ＣＤ３  ｍＡｂ）；トシリズマブ（抗ＩＬ６Ｒ  ｍＡｂ）；ＲＥＧＮ８８（抗ＩＬ６Ｒ  ｍＡｂ）；ウステキヌマブ（抗ＩＬ−１２／２３  ｍＡｂ）；ウステキヌマブ（抗ＩＬ−１２／２３  ｍＡｂ）；ナタリズマブ（抗α４インテグリン）；ベドリズマブ（抗α４  β７インテグリンｍＡｂ）；Ｔ１  ｈ（抗ＣＤ６  ｍＡｂ）；エプラツズマブ（抗ＣＤ２２  ｍＡｂ）；エファリズマブ（抗ＣＤ１１ａ  ｍＡｂ）；並びに、アタシセプト（Ｆｃに融合した、膜貫通活性化因子及びカルシウム制御リガンド相互作用因子の細胞外ドメイン）が挙げられる。
【０２３６】
ａ．  受動免疫療法
癌の受動免疫療法に関する、多数の異なるアプローチが存在する。これらは以下のように、大別することができる：抗体のみの注射；毒素又は化学療法剤に結合した抗体の注射；放射性同位元素に結合した抗体の注射；抗イディオタイプ抗体の注射；及び最後に、腫瘍細胞の骨髄へのパージング。
【０２３７】
ヒトモノクローナル抗体は、患者において副作用をほとんど、又は生じないために、受動免疫療法にて用いられるのが好ましい。ガングリオシド抗原に対するヒトモノクローナル抗体が、皮膚再発性黒色腫に苦しむ患者に病巣内投与されてきた（Ｉｒｉｅ＆Ｍｏｒｔｏｎ，１９８６）。退化は、毎日、又は毎週病巣内注射をした後で、１０名の患者のうち６名で観察された。別の研究では、２種類のヒトモノクローナル抗体を病巣内注射することで、適度な成功が達成された（Ｉｒｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９）。
【０２３８】
２つの異なる抗原に対して向けられる２種以上のモノクローナル抗体、又は更に、複数の抗原特異性を有する抗体を投与するのが、好ましい場合がある。治療プロトコールは、Ｂａｊｏｒｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）により記載されているような、リンホカイン又はその他の免疫促進因子の投与を含むこともまた可能である。ヒトモノクローナル抗体の開発については、本明細書の他の箇所にて更に詳細に記載されている。
【０２３９】
ｂ．  能動免疫療法
能動免疫療法において、一般的に、異なる細菌アジュバントと共に、抗原性ペプチド、ポリペプチド若しくはタンパク質、又は、自己若しくは同種異系腫瘍細胞組成物、即ち「ワクチン」が投与される（Ｒａｖｉｎｄｒａｎａｔｈ＆Ｍｏｒｔｏｎ，１９９１；Ｍｏｒｔｏｎ＆Ｒａｖｉｎｄｒａｎａｔｈ，１９９６；Ｍｏｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２；Ｍｉｔｃｈｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０；Ｍｉｔｃｈｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３）。黒色腫の免疫療法において、高いＩｇＭ応答を誘発する患者は、ＩｇＭ抗体を全く、又はほとんど誘発しない患者よりも多くの場合、生残が良好である（Ｍｏｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２）。ＩｇＭ抗体は多くの場合、一過性抗体であり、この規則の例外としては、抗ガングリオシド又は抗炭水化物抗体があるようである。
【０２４０】
ｃ．  養子免疫療法
養子免疫療法において、患者の血液を循環するリンパ球、又は腫瘍が浸潤したリンパ球を、インビトロで単離し、ＩＬ−２などのリンホカインで活性化する、又は腫瘍壊死のために遺伝子を形質導入し、再投与する（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８；１９８９）。これを達成するために、動物又はヒト患者に、免疫学的有効量の、活性化したリンパ球を、本明細書に記載した、アジュバントを組み込んだ抗原性ペプチド組成物と共に投与する。活性化したリンパ球は、血液又は腫瘍から以前に単離され、インビトロで活性化された（又は、「膨張」した）、患者自身の細胞であるのが最も好ましい。この形態の免疫療法は、黒色腫及び腎癌腫の退行のいくつかのケースを生み出したが、応答した対象の割合は、応答しなかった対象と比較して低かった。より最近では、このような養子免疫細胞療法に、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療法と呼ばれる、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する遺伝子組み換えＴ細胞を組み込んだ際に、より高い奏効率が観察されている。同様に、自己及び同種異系の両方のナチュラルキラー細胞が単離され、膨張して遺伝子組み換えされて、腫瘍細胞の結合及び殺傷を容易にする受容体又はリガンドを発現する。
【０２４１】
４．  他の作用物質
治療の治療効果を改善するために、その他の作用物質を、本明細書において提供する組成物と組み合わせて使用することができることが想到されている。これらの追加の作用物質としては、免疫賦活剤、細胞表面受容体及びギャップ結合の上方制御に影響を及ぼす作用物質、細胞増殖抑制剤及び分化剤、細胞接着阻害剤、又は、増殖過剰細胞の、アポトーシス誘発因子に対する感度を増加させる作用物質が挙げられる。免疫賦活剤としては、腫瘍壊死因子；インターフェロンα、β、及びγ；ＩＬ−２及びその他のサイトカイン；又は、ＭＩＰ−１、ＭＩＰ−１β、ＭＣＰ−１、ＲＡＮＴＥＳ、及びその他のケモカインが挙げられる。細胞表面受容体、又は、Ｆａｓ／Ｆａｓリガンド、ＤＲ４又はＤＲ５／ＴＲＡＩＬなどの、それらのリガンドを上方制御することにより、増殖過剰細胞におけるオートクライン又はパラクリン効果を確立することで、本明細書において提供する組成物のアポトーシス誘導能力が増強されることが更に想到される。ギャップ結合の数を増加させることで細胞内シグナル伝達を増加させることにより、隣接する増殖過剰細胞集団の抗増殖過剰効果が増加する。別の実施形態において、細胞増殖抑制又は分化剤を、本明細書において提供する組成物と組み合わせて使用し、治療の抗増殖過剰効果を改善することができる。細胞接着阻害剤は、本発明の有効性を改善すると想到されている。細胞接着阻害剤の例は、焦点接着キナーゼ（ＦＡＫ）阻害剤及びロバスタチンである。抗体ｃ２２５などの、アポトーシスに対する増殖過剰細胞の感度を増加させる、他の作用物質を、本明細書において提供する組成物と共に使用して、治療の有効性を改善することができると更に想到される。
【０２４２】
更なる実施形態では、他の作用物質は、１種以上の腫瘍崩壊ウイルスであることができる。これらの腫瘍崩壊ウイルスを改変して、ｐ５３及び／若しくはＩＬ２４を発現することができる、かつ／又は、サイトカイン、ＡＤＰ、若しくは熱ショックタンパク質などの、ｐ５３及び／若しくはＩＬ２４以外の遺伝子を発現することができる。腫瘍崩壊ウイルスの例としては、一本鎖若しくは二本鎖ＤＮＡウイルス、ＲＮＡウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、ワクシニアウイルス、水疱性口内炎ウイルス、ポリオウイルス、ニューカッスル病ウイルス、エプスタイン・バーウイルス、インフルエンザウイルス及びレオウイルス、粘液腫ウイルス、マラバウイルス、ラブドウイルス、エナデノチュシレブ、又はコクサッキーウイルスが挙げられる。特定の実施形態では、他の作用物質は、ＧＭ−ＣＳＦを発現するように遺伝子組み換えされた腫瘍崩壊性単純ヘルペスウイルスである、タリモジーン・ラハーパレプベック（Ｔ−ＶＥＣ）である。タリモジーン・ラハーパレプベックである、ＨＳＶ−１［株ＪＳ１］ＩＣＰ３４．５−／ＩＣＰ４７−／ｈＧＭ−ＣＳＦ（ＯｎｃｏＶＥＸＧＭ  ＣＳＦとして以前は知られていた）は、充実性腫瘍にて選択的に複製する免疫増強ＨＳＶ−１を含む、腫瘍内に送達される腫瘍崩壊性免疫療法である。（Ｌｕｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，１０：２９２−３０３，２００３；米国特許第７，２２３，５９３号、及び同第７，５３７，９２４号；参照により本明細書に組み込まれている。）２０１５年１０月に、アメリカのＦＤＡは、手術不可能な腫瘍を持つ患者における黒色腫の治療のために、商品名ＩＭＬＹＧＩＣ（商標）にて、Ｔ−ＶＥＣを認可した。Ｔ−ＶＥＣの特徴及び投与方法は例えば、ＩＭＬＹＧＩＣ（商標）の添付文書（Ａｍｇｅｎ，２０１５）、及び米国特許出願公開第２０１５／０２０２２９０号（両方が参照により本明細書に組み込まれている）に記載されている。例えば、タリモジーン・ラハーパレプベックは典型的には、１週目の１日目に、最大４．０ｍＬの、１０６プラーク形成ユニット／ｍＬ（ＰＦＵ／ｍＬ）の用量で、続いて、４週目の１日目、及びその後隔週にて（±３日）、最大４．０ｍＬの、１０８ＰＦＵ／ｍＬの用量で、注射可能な皮膚、皮下、及び結節腫瘍への腫瘍内注射により投与される。腫瘍に注射されるタリモジーン・ラハーパレプベックの、推奨される体積は、腫瘍サイズに左右され、注入量ガイドラインに従い決定されなければならない。Ｔ−ＶＥＣは、黒色腫患者において臨床活性を示したものの、多くの癌患者は、Ｔ−ＶＥＣ治療に応答しないか、又は治療への応答を終えるかのいずれかである。一実施形態では、ｐ５３、ＡＤＰ、及び／又はＭＤＡ−７核酸、並びに少なくとも１種のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストを、Ｔ−ＶＥＣ治療法の後、間、又は前に投与して、例えば治療耐性を逆転させることができる。例示的な腫瘍崩壊ウイルスとしては、Ａｄ５−ｙＣＤ／ｍｕｔＴＫＳＲ３９ｒｅｐ−ｈＩＬ１２、Ｃａｖａｔａｋ（商標）、ＣＧ００７０、ＤＮＸ−２４０１、Ｇ２０７、ＨＦ１０、ＩＭＬＹＧＩＣ（商標）、ＪＸ−５��４、ＭＧ１−ＭＡ３、ＭＶ−ＮＩＳ、ＯＢＰ−３０１、Ｒｅｏｌｙｓｉｎ（登録商標）、Ｔｏｃａ  ５１１、Ｏｎｃｏｒｉｎｅ（Ｈ１０１）、Ｏｎｙｘ−０１５、Ｈ１０２、Ｈ１０３、及びＲＩＧＶＩＲが挙げられるが、これらに限定されない。他の例示的な腫瘍崩壊ウイルスは、例えば、国際公開第２０１５／０２７１６３号、同第２０１４／１３８３１４号、同第２０１４／０４７３５０号、及び同第２０１６／００９０１７号に記載されており、全てが参照により本明細書に組み込まれている。
【０２４３】
特定の実施形態において、ホルモン療法は、本実施形態と組み合わせて、又は、前述の任意の他の癌治療法と組み合わせて使用することもまた、可能である。ホルモンの使用を、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、又は子宮頚癌などの特定の癌の治療で用いて、テストステロン又はエストロゲンなどの特定のホルモンの量を低下させる、又は影響を遮断することができる。この治療は多くの場合、治療オプションとして、少なくとも１種のその他の癌治療と組み合わせて、又は転移リスクを低下させるために、使用される。
【０２４４】
いくつかの態様では、更なる抗癌剤は、ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ、ＡＫＴ、Ｅｒｂ１、Ｅｒｂ２、ＥｒｂＢ、Ｓｙｋ、Ｂｃｒ−Ａｂｌ、ＪＡＫ、Ｓｒｃ、ＧＳＫ−３、ＰＩ３Ｋ、Ｒａｓ、Ｒａｆ、ＭＡＰＫ、ＭＡＰＫＫ、ｍＴＯＲ、ｃ−Ｋｉｔ、ｅｐｈ受容体、又はＢＲＡＦ阻害剤などの、プロテインキナーゼ又は成長因子シグナル伝達経路に関与する受容体を阻害する、プロテインキナーゼ阻害剤又はモノクローナル抗体である。プロテインキナーゼ又は成長因子シグナル伝達経路阻害剤の非限定例としては、アファチニブ、アキシチニブ、ベバシズマブ、ボスチニブ、セツキシマブ、クリゾチニブ、ダサチニブ、エルロチニブ、フォスタマチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レンバチニブ、ムブリチニブ、ニロチニブ、パニツムマブ、パゾパニブ、ペガプタニブ、ラニビズマブ、ルキソリチニブ、サラカチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、トラスツズマブ、バンデタニブ、ＡＰ２３４５１、ベムラフェニブ、ＭＫ−２２０６、ＧＳＫ６９０６９３、Ａ−４４３６５４、ＶＱＤ−００２、ミルテフォシン、ペリホシン、ＣＡＬ１０１、ＰＸ−８６６、ＬＹ２９４００２、ラパマイシン、テムシロリムス、エベロリムス、リダフォロリムス、アルボシジブ、ゲニステイン、セルメチニブ、ＡＺＤ−６２４４、バタラニブ、Ｐ１４４６Ａ−０５、ＡＧ−０２４３２２、ＺＤ１８３９、Ｐ２７６−００、ＧＷ５７２０１６、又はこれらの混合物が挙げられる。
【０２４５】
いくつかの態様では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、ブパリシブ、イデラリシブ、ＢＹＬ−７１９、ダクトリシブ、ＰＦ−０５２１２３８４、ピクチリシブ、コパンリシブ、コパンリシブジヒドロクロリド、ＺＳＴＫ−４７４、ＧＳＫ−２６３６７７１、デュベリシブ、ＧＳ−９８２０、ＰＦ−０４６９１５０２、ＳＡＲ−２４５４０８、ＳＡＲ−２４５４０９、ソノリシブ、アルヘクシン、ＧＤＣ−００３２、ＧＤＣ−０９８０、アピトリシブ、ピララリシブ、ＤＬＢＳ  １４２５、ＰＸ−８６６、ボクスタリシブ、ＡＺＤ−８１８６、ＢＧＴ−２２６、ＤＳ−７４２３、ＧＤＣ−００８４、ＧＳＫ−２１  ２６４５８、ＩＮＫ−１  １  １７、ＳＡＲ−２６０３０１、ＳＦ−１  １  ２６、ＡＭＧ−３１９、ＢＡＹ−１０８２４３９、ＣＨ−５１  ３２７９９、ＧＳＫ−２２６９５５７、Ｐ−７１  ７０、ＰＷＴ−３３５９７、ＣＡＬ−２６３、ＲＧ−７６０３、ＬＹ−３０２３４１４、ＲＰ−５２６４、ＲＶ−１７２９、タセリシブ、ＴＧＲ−１  ２０２、ＧＳＫ−４１８、ＩＮＣＢ−０４００９３、Ｐａｎｕｌｉｓｉｂ、ＧＳＫ−１０５９６１  ５、ＣＮＸ−１３５１、ＡＭＧ−５１  １、ＰＱＲ−３０９、１７β−ヒドロキシワートマニン、ＡＥＺＳ−１２９、ＡＥＺＳ−１３６、ＨＭ−５０１６６９９、ＩＰＩ−４４３、ＯＮＣ−２０１、ＰＦ−４９８９２１６、ＲＰ−６５０３、ＳＦ−２６２６、Ｘ−３３９、ＸＬ−４９９、ＰＱＲ−４０１、ＡＥＺＳ−１３２、ＣＺＣ−２４８３２、ＫＡＲ−４１４１、ＰＱＲ−３１  １、ＰＱＲ−３１６、ＲＰ−５０９０、ＶＳ−５５８４、Ｘ−４８０、ＡＥＺＳ−１２６、ＡＳ−６０４８５０、ＢＡＧ−９５６、ＣＡＬ−１３０、ＣＺＣ−２４７５８、ＥＴＰ−４６３２１、ＥＴＰ−４７１  ８７、ＧＮＥ−３１７、ＧＳ−５４８２０２、ＨＭ−０３２、ＫＡＲ−１  １３９、ＬＹ−２９４００２、ＰＦ−０４９７９０６４、ＰＩ−６２０、ＰＫＩ−４０２、ＰＷＴ−１４３、ＲＰ−６５３０、３−ＨＯＩ−ＢＡ−０１、ＡＥＺＳ−１３４、ＡＳ−０４１  １６４、ＡＳ−２５２４２４、ＡＳ−６０５２４０、ＡＳ−６０５８５８、ＡＳ−６０６８３９、ＢＣＣＡ−６２１  Ｃ、ＣＡＹ−１０５０５、ＣＨ−５０３３８５５、ＣＨ−５１  ０８１３４、ＣＵＤＣ−９０８、ＣＺＣ−１  ９９４５、Ｄ−１０６６６９、Ｄ−８７５０３、ＤＰＴ−ＮＸ７、ＥＴＰ−４６４４４、ＥＴＰ−４６９９２、ＧＥ−２１、ＧＮＥ−１２３、ＧＮＥ−１５１、ＧＮＥ−２９３、ＧＮＥ−３８０、ＧＮＥ−３９０、ＧＮＥ−４７７、ＧＮＥ−４９０、ＧＮＥ−４９３、ＧＮＥ−６１４、ＨＭＰＬ−５１  ８、ＨＳ−１０４、ＨＳ−１  ０６、ＨＳ−１  １６、ＨＳ−１７３、ＨＳ−１９６、ＩＣ−４８６０６８、ＩＮＫ−０５５、ＫＡＲ  １  １４１、ＫＹ−１  ２４２０、ワートマニン、Ｌｉｎ−０５、ＮＰＴ−５２０−３４、ＰＦ−０４６９１５０３、ＰＦ−０６４６５６０３、ＰＧＮＸ−０１、ＰＧＮＸ−０２、ＰＩ  ６２０、ＰＩ−１０３、ＰＩ−５０９、ＰＩ−５１６、ＰＩ−５４０、ＰＩＫ−７５、ＰＷＴ−４５８、ＲＯ−２４９２、ＲＰ−５１５２、ＲＰ−５２３７、ＳＢ−２０１  ５、ＳＢ−２３１２、ＳＢ−２３４３、ＳＨＢＭ−１００９、ＳＮ  ３２９７６、ＳＲ−１３１７９、ＳＲＸ−２５２３、ＳＲ���−２５５８、ＳＲＸ−２６２６、ＳＲＸ−３６３６、ＳＲＸ−５０００、ＴＧＲ−５２３７、ＴＧＸ−２２１、ＵＣＢ−５８５７、ＷＡＹ−２６６１７５、ＷＡＹ−２６６１７６、ＥＩ−２０１、ＡＥＺＳ−１３１、ＡＱＸ−ＭＮ１００、ＫＣＣ−ＴＧＸ、ＯＸＹ−１  １  １  Ａ、ＰＩ−７０８、ＰＸ−２０００、及びＷＪＤ−００８からなるＰＩ３Ｋ阻害剤の群から選択される。
【０２４６】
更なる癌治療法としては、例えば、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ１、ＥｒｂＢ−１、ＨＥＲ１）、ＥｒｂＢ−２（ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、ＥｒｂＢ−３／ＨＥＲ３、ＥｒｂＢ−４／ＨＥＲ４、ＥＧＦＲリガンドファミリー；インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）ファミリー、ＩＧＦ−結合タンパク質（ＩＧＦＢＰ）、ＩＧＦＲリガンドファミリー（ＩＧＦ−１Ｒ）；血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）ファミリー、ＰＤＧＦＲリガンドファミリー、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦＲ）ファミリー、ＦＧＦＲリガンドファミリー、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦＲ）ファミリー、ＶＥＧＦファミリー；ＨＧＦ受容体ファミリー：ＴＲＫ受容体ファミリー；エフリン（ＥＰＨ）受容体ファミリー；ＡＸＬ受容体ファミリー；白血球チロシンキナーゼ（ＬＴＫ）受容体ファミリー；ＴＩＥ受容体ファミリー、アンジオポエチン１、２；受容体型チロシンキナーゼ様オーファン受容体（ＲＯＲ）受容体ファミリー；ジスコイジンドメイン受容体（ＤＤＲ）ファミリー；ＲＥＴ受容体ファミリー；ＫＬＧ受容体ファミリー；ＲＹＫ受容体ファミリー；ＭｕＳＫ受容体ファミリー；トランスフォーミング増殖因子α（ＴＧＦ−α）、ＴＧＦ−α受容体；トランスフォーミング増殖因子β（ＴＧＦ−β）、ＴＧＦ−β受容体；インターロイキン１３受容体α２鎖（１Ｌ１３Ｒａｌｐｈａ２）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、ＩＬ−６受容体、インターロイキン−４、ＩＬ−４受容体、サイトカイン受容体、クラスＩ（ヘマトポイエチンファミリー）及びクラスＩＩ（インターフェロン／ＩＬ−１０ファミリー）受容体、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）ファミリー、ＴＮＦ−α、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体スーパーファミリー（ＴＮＴＲＳＦ）、死受容体ファミリー、ＴＲＡＩＬ受容体；癌精巣（ＣＴ）抗原、リネージ特異的抗原、分化抗原、α−アクチニン−４、ＡＲＴＣ１、ブレイクポイントクラスター領域Ａｂｅｌｓｏｎ（Ｂｃｒ−ａｂｌ）融合生成物、Ｂ−ＲＡＦ、カスパーゼ−５（ＣＡＳＰ−５）、カスパーゼ−８（ＣＡＳＰ−８）、β−カテニン（ＣＴＮＮＢ１）、細胞分裂サイクル２７（ＣＤＣ２７）、サイクリン依存性キナーゼ４（ＣＤＫ４）、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＯＡ−１、ｄｅｋ−ｃａｎ融合タンパク質、ＥＦＴＵＤ−２、延長因子２（ＥＬＦ２）、Ｅｔｓ多様体遺伝子６／急性骨髄性白血病１遺伝子ＥＴＳ（ＥＴＣ６−ＡＭＬ１）融合タンパク質、フィブロネクチン（ＦＮ）、ＧＰＮＭＢ、低密度脂質受容体／ＧＤＰ−Ｌフコース：β−Ｄガラクトース２α−Ｌフコシルトランスフェラーゼ（ＬＤＬＲ／ＦＵＴ）融合タンパク質、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ａ２遺伝子におけるα２ドメインのαヘリックスの残基１７０における、アルギニンのイソロイシンへの交換（ＨＬＡ−Ａ＊２０１−Ｒ１７０Ｉ）、ＭＬＡ−Ａ１１、熱ショックタンパク質７０−２変異（ＨＳＰ７０−２Ｍ）、ＫＩＡＡ０２０５、ＭＡＲＴ２、黒色腫遍在変異１、２、３（ＭＵＭ−１、２、３）、前立腺酸性リン酸化酵素（ＰＡＰ）、ネオＰＡＰ、ミオシンクラス１、ＮＦＹＣ、ＯＧＴ、ＯＳ−９、ｐｍｌ−ＲＡＲα融合タンパク質、ＰＲＤＸ５、ＰＴＰＲＫ、Ｋ−ｒａｓ（ＫＲＡＳ２）、Ｎ−ｒａｓ（ＮＲＡＳ）、ＨＲＡＳ、ＲＢＡＦ６００、ＳＩＲＴ２、ＳＮＲＰＤ１、ＳＹＴ−ＳＳＸ１又は−ＳＳＸ２融合タンパク質、トリオースリン酸イソメラーゼ、ＢＡＧＥ、ＢＡＧＥ−１、ＢＡＧＥ−２、３、４、５、ＧＡＧＥ−１、２、３、４、５、６、７、８、ＧｎＴ−Ｖ（異常Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ、ＭＧＡＴ５）、ＨＥＲＶ−Ｋ−ＭＥＬ、ＫＫ−ＬＣ、ＫＭ−ＨＮ−１、ＬＡＧＥ、ＬＡＧＥ−１、黒色腫でのＣＴＬ認識抗原（ＣＡＭＥＬ）、ＭＡＧＥ−Ａ１（ＭＡＧＥ−１）、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−ＡＳ、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ８、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１１、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＭＡＧＥ−３、ＭＡＧＥ−Ｂ１、ＭＡＧＥ−Ｂ２、ＭＡＧＥ−Ｂ５、ＭＡＧＥ−Ｂ６、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、ムチン１（ＭＵＣ１）、ＭＡＲＴ−１／／Ｍｅｌａｎ−Ａ（ＭＬＡＮＡ）、ｇｐ１００、ｇｐ１００／Ｐｍｅ１１７（Ｓ１ＬＶ）、チロシナーゼ（ＴＹＲ）、ＴＲＰ−１、ＨＡＧＥ、ＮＡ−８８、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−２、ＳＡＧＥ、Ｓｐ１７、ＳＳＸ−１、２、３、４、ＴＲＰ２−１ＮＴ２、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、カリクフェイン４、マンマグロビン−Ａ、ＯＡ１、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、前立腺特異的膜抗原、ＴＲＰ−１／ｇｐ７５、ＴＲＰ−２、アジポフィリン、ニエラノルナ（ｎｉｅｌａｎｏｒｎａ）に存在しないインターフェロン誘導性タンパク質（ＡＩＭ−２）、ＢＩＮＧ−４、ＣＰＳＦ、サイクリンＤ１、上皮細胞接着分子（Ｅｐ−ＣＡＭ）、ＥｐｂＡ３、線維芽細胞増殖因子−５（ＦＧＦ−５）、糖タンパク質２５０（ｇｐ２５０腸カルボキシルエステラーゼ（ｉＣＥ））、αフェトタンパク質（ＡＦＰ）、Ｍ−ＣＳＦ、ｍｄｍ−２（例えば、ＨＤＭ２０１などの、ｐ５３活性の阻害を逆転させるためなどの、ＭＤＭ２としても知られているＨＤＭ２、及び／又はＨＤＭ４の、低分子阻害剤、ｃｉｓイミダゾリン（例えばヌトリン）、ベンゾジアゼピン（ＢＤＰ）、スピロオキシインドール）、ＭＵＣＩ、ｐ５３（ＴＰ５３）、ＰＢＦ、ＦＲＡＭＥ、ＰＳＭＡ、ＲＡＧＥ−１、ＲＮＦ４３、ＲＵ２ＡＳ、ＳＯＸ１０、ＳＴＥＡＰ１、スルビビン（ＢＩＲＣＳ）、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、テロメラーゼ、ウィルムス腫瘍遺伝子（ＷＴ１）、ＳＹＣＰ１、ＢＲＤＴ、ＳＰＡＮＸ、ＸＡＧＥ、ＡＤＡＭ２、ＰＡＧＥ−５、ＬＩＰ１、ＣＴＡＧＥ−１、ＣＳＡＧＥ、ＭＭＡ１、ＣＡＧＥ、ＢＯＲＩＳ、ＨＯＭ−ＴＥＳ−８５、ＡＦ１５ｑ１４、ＨＣＡ６６Ｉ、ＬＤＨＣ、ＭＯＲＣ、ＳＧＹ−１、ＳＰＯ１１、ＴＰＸ１、ＮＹ−ＳＡＲ−３５、ＦＴＨＬＩ７、ＮＸＦ２  ＴＤＲＤ１、ＴＥＸ  １５、ＦＡＴＥ、ＴＰＴＥ、免疫グロブリンイディオタイプ、ベンスジョーンズタンパク質、エストロゲン受容体（ＥＲ）、アンドロゲン受容体（ＡＲ）、ＣＤ４０、ＣＤ３０、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ３３、ＣＤ４、ＣＤ２５、ＣＤ３、癌抗原７２−４（ＣＡ  ７２−４）、癌抗原１５−３（ＣＡ  １５−３）、癌抗原２７−２９（ＣＡ  ２７−２９）、癌抗原１２５（ＣＡ１２５）、癌抗原１９−９（ＣＡ  １９−９）、βヒト絨毛膜性腺刺激ホルモン、１−２マイクログリブリン、扁平上皮細胞癌抗原、��ューロン特異的エノラーゼ、熱ショックタンパク質ｇｐ９６、ＧＭ２、サルグラモスチム、ＣＴＬＡ−４、７０７アラニンプロリン（７０７−ＡＰ）、Ｔ細胞４により認識される腺癌抗原（ＡＲＴ−４）、癌胎児性抗原ペプチド１（ＣＡＰ−１）、カルシウム活性化塩素イオンチャネル２（ＣＬＣＡ２）、サイクロフィリンＢ（Ｃｙｐ−Ｂ）、ヒト印環腫瘍２（ＨＳＴ−２）、ヒトパピローマ・ウイルス（ＨＰＶ）タンパク質（ＨＰＶ−Ｅ６、ＨＰＶ−Ｅ７、主及び副キャプシド抗原など）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）タンパク質（ＥＢＶ潜在性膜タンパク質−ＬＭＰ１、ＬＭＰ２など）、Ｂ型肝炎又はＣ型肝炎ウイルスタンパク質、並びにＨＩＶタンパク質を標的化する、抗体、ペプチド、ポリペプチド、低分子阻害剤、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、又は遺伝子治療法を含むことができることが想到されている。
【０２４７】
ＩＸ．  製品又はキット
少なくとも１種のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニスト（例えば、ＩＬ−２／抗ＩＬ−２免疫複合体、ＩＬ−１５／抗ＩＬ−１５免疫複合体、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５受容体α−ＩｇＧ１−Ｆｃ（ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−ＩｇＧ１−Ｆｃ）免疫複合体、ＰＥＧ化ＩＬ−２、ＰＥＧ化ＩＬ−１５、ＩＬ−２ムテイン、及び／又はＩＬ−１５ムテイン）、並びに、ｐ５３をコードする核酸、ＡＤＰ、及び／又はＭＤＡ−７をコードする核酸（例えば、ａｄ−ｐ５３及び／又はａｄ−ＭＤＡ−７）を含む製造物品又はキットもまた、本明細書で提供する。製品又はキットは、個体における癌を治療する、若しくは癌の進行を遅延するため、又は、癌を有する個体の免疫機能を増強するために、癌抑制遺伝子治療法と組み合わせて、少なくとも１種のＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストを使用するための取扱説明書を含む添付文書を更に含むことができる。本明細書で記載されるＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニスト、及びｐ５３をコードする核酸、ＡＤＰ、並びに／又はＭＤＡ−７をコードする核酸のいずれかを、製品又はキットに含めることができる。キットは、細胞外マトリックス分解タンパク質、又は、細胞外マトリックス分解タンパク質をコードする発現構築物を更に含むことができる。
【０２４８】
いくつかの実施形態では、少なくとも１種の選択性ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニスト（例えば、ＩＬ−２／抗ＩＬ−２免疫複合体、ＩＬ−１５／抗ＩＬ−１５免疫複合体、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５受容体α−ＩｇＧ１−Ｆｃ（ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−ＩｇＧ１−Ｆｃ）免疫複合体、ＰＥＧ化ＩＬ−２、ＰＥＧ化ＩＬ−１５、ＩＬ−２ムテイン、及び／又はＩＬ−１５ムテイン）、並びに、ｐ５３をコードする核酸、ＡＤＰ、及び／又はＭＤＡ−７をコードする核酸は、同じ容器、又は個別の容器の中に存在する。好適な容器としては例えば、ボトル、バイアル瓶、バッグ、及びシリンジが挙げられる。容器は、ガラス、プラスチック（ポリ塩化ビニル若しくはポリオレフィンなど）、又は合金（ステンレス鋼若しくはハステロイなど）といった、様々な材料から形成することができる。いくつかの実施形態では、容器は製剤を保持し、容器上の、又は容器に付着したラベルは、使用のための指示を示すことができる。製品又はキットは、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、使用のため取扱説明書を有する添付文書などの、商業的観点及び使用者観点から望ましい他の材料を更に含むことができる。いくつかの実施形態では、製品は更に、１種以上の別の作用物質（例えば、化学療法剤、及び抗新生物剤）を含む。１種以上の作用物質様の好適な容器としては例えば、ボトル、バイアル瓶、バッグ、及びシリンジが挙げられる。
【実施例】
【０２４９】
Ｘ．  実施例
以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を示すために含まれている。以下の実施例に開示される技術は、本発明の実施において十分に機能するように本願発明者によって開発された技術を表し、そのため、その実施のための好ましい態様を構成すると考えることができることが、当業者によって理解されるべきである。しかし、当業者は、本開示の観点で、開示される具体的な実施形態において、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、同じ又は同様の結果が依然として得られる多くの変更をなし得ることを理解するべきである。
【０２５０】
実施例１−局所及び全身的な有効性の増強、並びに、以前の免疫療法に対する耐性の逆転のための、選択性ＣＤ１２２／１３２アゴニスト及び免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせた、Ａｄ−ｐ５３及びＡｄ−ＩＬ２４癌抑制因子、並びに腫瘍崩壊ウイルス（ＶｉｒＲｘ００７）免疫遺伝子治療法
ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストを癌抑制因子、及びウイルス腫瘍崩壊性免疫遺伝子治療法と組み合わせて、以前の免疫療法に対して耐性を有する腫瘍を含む、局所及び全身性抗腫瘍効果を増強させる有効性を、免疫応答性動物腫瘍モデルにて示す。以下の治療法、用量、及びスケジュールを利用した：
【０２５１】
動物、腫瘍播種、及び測定：病原体非含有のＣ５７ＢＬ／６（Ｂ６）オスマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｓから入手した、６〜８週齢）を利用した。動物の右脇腹に、Ｂ１６Ｆ１０黒色腫細胞（ＡＴＣＣ、５×１０５ｃｅｌｌｓ／マウス、血清非含有培地にて懸濁）を皮下注射して、「原発性腫瘍」を形成した。腫瘍のサイズが約５０ｍｍ３に達したときに治療を開始し、これを治療１日目と呼ぶ。腫瘍の長さ（Ｌ）と幅（ｗ）を測定することで腫瘍増殖を監視し、以下の式：体積＝０．５２３Ｌ（ｗ）２を使用して、腫瘍の体積を計算した。最大４０日間動物を監視し、腫瘍が約２０００ｍｍ３に達したときに犠牲にした。
【０２５２】
ウイルスベクター：ｐ５３又はＩＬ２４癌抑制遺伝子のいずれかを発現させるためにコードする、複製不能なヒト５型アデノウイルス（Ａｄ５）、及び、ＡＤＰ（ＶｉｒＲｘ００７）を過剰発現するように改変された、複製可能な腫瘍崩壊アデノウイルスを、これらの実験に使用した。ベクターの構築、性質、及び精製は、Ａｄ５／ＣＭＶ  ｐ５３、ＩＬ２４及びＶｉｒＲｘ００７ベクターに関する他の箇所で報告されている（Ｚｈａｎｇ  １９９４；Ｍｈａｓｈｉｌｋａｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００１；米国特許第７５８９０６９Ｂ１号）。ウイルスベクターの４回用量のうちの３回を、腫瘍内投与する。Ａｄ−ｐ５３及び／又はＡＤＰ（ＶＲＸ−００７）に関して、ウイルスベクターを２、５、及び８日目に投与した。Ａｄ−ＩＬ２４に関して、ベクターを３、５、７、及び９日目に（４８時間の間隔で）投与した。ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストと免疫チェックポイント阻害剤とを組み合わせるウイルス治療を評価する群において、更なる腫瘍内ウイルス注射を、２１日目に投与した。各ウイルス投与量は、５０μＬの体積に５×１０９のウイルス粒子を含んだ。
【０２５３】
ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニスト治療：Ｂ１６Ｆ１０モデルに関して、マウスＩＬ−２（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ又はＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を、Ｓ４Ｂ６−１抗マウスＩＬ２抗体（Ｂｉｏｘｃｅｌｌ，Ｗｅｓｔ  Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ又はＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）と、２：１のモル比で混合し、選択性ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニスト免疫複合体を作製した。ヒトＴ細胞を伴う研究のために、ヒトＩＬ−２を、ＭＡＢ６０２抗ヒトＩＬ−２抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）と混合した。ＩＬ−２／Ｓ４Ｂ６又はＩＬ−２／ＭＡＢ６０２  ｍＡｂ免疫複合体を、２、６、及び１０日目に、２．５μｇのＩＬ２／用量にて、腹腔内（ＩＰ）投与した。あるいは、ＩＬ−２／Ｓ４Ｂ６  ｍＡｂ免疫複合体を、２〜６日目に注射した（１．０μｇのＩＬ２／用量）。１５分間室温で、抗ＩＬ−２モノクローナルをＩＬ−２とインキュベートすることで、免疫複合体を調製する。
【０２５４】
いくつかのマウス実験において、ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストは、組み換えマウスＩＬ−１５（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）及びＩＬ−１５−Ｒα−Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を含んだ。これらを合わせて３７Ｃで３０分間インキュベートすることで免疫複合体を調製し、腫瘍が触知可能になったら、この選択性ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニスト免疫複合体を、連続して２日間静脈内注射した。代替スケジュールは、腫瘍が触知可能になった後、３、５、及び７日目に、腹腔内注射されるＩＬ−１５免疫複合体を投与することである。ＩＬ−１５免疫複合体研究のために、静脈内注射で１週間に１回、１回の注射当たり２μｇの組み換えマウスＩＬ−１５の用量で、組み換えマウスＩＬ−１５（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ，Ｒｏｃｋｙ  Ｈｉｌｌ，ＣＴ，ＵＳＡ）を、インビボ研究で使用する。組み換えマウスＩＬ−１５Ｒα  Ｆｃキメラタンパク質をＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）から入手し、ＩＬ−１５サイトカインと等モルの用量（免疫複合体内の各２μｇのＩＬ−１５タンパク質に対して、１回の注射当たり１２μｇのＩＬ−１５−Ｒａ−Ｆｃ）で使用する。
【０２５５】
免疫チェックポイント阻害剤：免疫チェックポイント阻害剤治療法の間に、腫瘍進行の一般的な臨床状態を模倣するために、マウス一匹当たり２００μｇの用量で、抗ＰＤ１治療を、１日目に腹腔内で開始し、３０日目まで、３日ごとに投与した。いくつかの実験において、以前の免疫療法に対して耐性を有する、選択性ＣＤ１２２／１３２アゴニスト及び免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせた、癌抑制及び腫瘍崩壊ウイルスＶｉｒＲｘ００７治療法の効果を評価するために、抗ＰＤ−１治療を開始した後に、最初の癌抑制治療法用量を１〜２日間与えることで、抗ＰＤ−１治療法における腫瘍進行の後、癌抑制治療を開始した。Ｂ１６Ｆ１０及びＢ１６黒色腫モデルは、免疫療法に対して非常に耐性があることが知られている。これらのモデルにおいて、腫瘍は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を用いる対象治療に対して、免疫チェックポイント阻害剤、及び選択性ＣＤ１２２／１３２治療の治療法にて同様に進行する。インビボでの使用のために特別に作製した抗マウスＰＤ−１抗体（ＣＤ２７９）を、ＢｉｏＸｃｅｌｌから購入した（カタログ番号ＢＥ０１４６）。
【０２５６】
以前の免疫療法に対する耐性の逆転：選択性ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニスト、及び免疫チェックポイント阻害剤治療と組み合わせた癌抑制因子又はウイルス腫瘍崩壊性治療法が、以前の免疫療法に対する耐性を逆転させる能力もまた、実証した。免疫チェックポイント阻害剤治療法の間に、腫瘍進行の一般的な臨床状態を模倣するために、１０ｍｇ／ｋｇの用量で、抗ＰＤ１治療を、１日目に腹腔内で開始し、３０日目まで、３日ごとに投与した。いくつかの実験において、以前の免疫療法に対して耐性を有する腫瘍における、ＣＤ１２２／ＣＤ１３２治療法と組み合わせた癌抑制又はウイルス腫瘍崩壊性治療の効果を評価するために、抗ＰＤ−１治療を開始した後に、最初の癌抑制及びＣＤ１２２／ＣＤ１３２治療法の用量を１〜２日間与えて、抗ＰＤ−１治療法における腫瘍の進行後、併用治療を開始した。これらの研究を、免疫療法に対して非常に耐性があることが知られている、Ｂ１６Ｆ１０及びＢ１６黒色腫モデルで実施した。これらのモデルにおいて、腫瘍は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を用いる対象治療に対して、免疫チェックポイント阻害剤治療法にて同様に進行する。インビボでの使用のために特別に作製した、抗ＰＤ−Ｌ１に対する抗体であり、免疫調節剤抗ＬＡＧ−３である、抗マウスＰＤ−１抗体（ＣＤ２７９）を、ＢｉｏＸｃｅｌｌから購入する（カタログ番号ＢＥ０１４６）。抗マウスＰＤ−Ｌ１抗体（クローン９Ｇ２、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、及び／又は抗ＣＴＬＡ−４抗体（クローンＵＣ１０−４Ｆ１０−１１；Ａｌｔｏｒ）を２週間、１週間に２回の注射当たり１００μｇで腹腔内投与した。
【０２５７】
原発性腫瘍及び対側腫瘍での腫瘍体積の測定、並びに、Ｔ検定、分散分析（ＡＮＯＶＡ）、クラスカル・ウォリス（ＡＮＯＶＡ）による、これらの統計学的分析により、並びに、カプランマイヤー及びログランク検定を用いて生残を比較することにより、治療の有効性、及びその相乗的な相互作用が示された。
【０２５８】
驚くべきことに、発見は、原発性腫瘍及び対側腫瘍の両方の完全な腫瘍の寛解と関連する、潜在的な治癒治療をもたらした、予想外の、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１及びＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療法の実質的な相乗作用即ち、癌抑制治療法を注射されていない離れた腫瘍における、著しく優れたアブスコパル効果を示した。これらの効果は、例外的に長い、全体の生残をもたらした。減少した腫瘍増殖、及び増加した生残における、統計的に有意な改善もまた、Ａｄ−ＩＬ２４＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療法で観察された。
【０２５９】
Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２アゴニスト、及びチェックポイント阻害剤免疫療法：ＣＤ１２２／１３２アゴニスト及び抗ＰＤ−１治療と組み合わせた、Ａｄ−ｐ５３の治療の有効性を、（原発性腫瘍及び対側腫瘍における）腫瘍体積、腫瘍の完全奏功、並びに生残を確認することにより評価した。原発性腫瘍の体積に関して、図４のグラフは、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）対照、ＣＤ１２２／１３２、抗ＰＤ−１、ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１、Ａｄ−ｐ５３、又は、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２、Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−１、及びＡｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１の組み合わせのいずれかを受ける齧歯類における、経時的な腫瘍体積を示す。ＣＤ１２２／１３２、抗ＰＤ−１、及びＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療法の間には深刻な腫瘍の進行があり、これらは、Ａｄ−ｐ５３治療法と組み合わせることにより逆転した。単独の治療法のいずれかと比較して、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２、Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−１、及びＡｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の有効性は向上した。２１日目までに、（ＰＢＳ）、ＣＤ１２２／１３２、抗ＰＤ−１、ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１、及びＡｄ−ｐ５３で治療した群の平均腫瘍体積は全て、２，０００ｍｍ３を超えた。対照的に、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２、Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−１、及びＡｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１との併用治療はそれぞれ、非Ａｄ−ｐ５３治療法、又はＡｄ−ｐ５３治療のみのいずれかと比較して、腫瘍体積の大幅な減少を誘発した。２１日目における腫瘍体積の、統計学的分散分析（ＡＮＯＶＡ）により、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２、Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−１、及びＡｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の抗腫瘍効果の相乗作用が測定された（ｐ値＜０．０００１）。しかし、３０日目までに、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２、及びＡｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−１治療群の平均腫瘍体積もまた、２，０００ｍｍ３を超えていた。重要なことに、３０日目における腫瘍体積の統計学的分散分析（ＡＮＯＶＡ）比較により、抗腫瘍効果の相乗作用は、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の組み合わせにおいてのみ維持された（それぞれの別の治療群と比較して、ｐ値＜０．０００１（全体）、及びｐ値＜０．０００１（個別））ことが測定された。
【０２６０】
Ａｄ−ｐ５３治療群：腫瘍の完全奏功率の評価。治療法に対する腫瘍の完全奏功は、重要な治療効果と関連し、治癒性のアウトカムのために必要とされていると、一般に理解されている。ｐ５３治療群及びこれらの対照に関して、図５に示すように、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療のみが、原発性腫瘍及び対側腫瘍の両方において、完全な腫瘍の寛解をもたらした。原発性腫瘍及び対側腫瘍の両方の、腫瘍の完全奏功は、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療群の６０％にて観察され、他の治療群において、７０匹の動物のいずれにおいても、原発性腫瘍及び対側腫瘍の両方の腫瘍の完全奏功は存在しなかった（Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療群対全ての他の治療群の動物を比較する、フィッシャーの両側正確確率検定によると、ｐ値＜０．０００１；Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１対あらゆる他の治療群を比較する、フィッシャーの両側正確確率検定によると、ｐ値＜０．０１１）。予想外なことに、腫瘍の完全奏功は持続的であり、これらの腫瘍を有するこれらの動物を恐らく治癒する、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療群の５０％において、４０日後も維持された。
【０２６１】
Ａｄ−ｐ５３治療群：対側腫瘍増殖における、全身性／アブスコパル治療効果。対側に移植した腫瘍の原発性腫瘍治療における全身性／アブスコパル効果を、原発性腫瘍がＡｄ−ｐ５３治療法のうちの１つを受けた齧歯類にて、評価し、結果を図６に示す。予想外の、原発性腫瘍増殖及び完全寛解率における、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の実質的に増加した相乗効果に一致して、我々は、他のＡｄ−ｐ５３治療群と比較して、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の驚くべき程に強力で統計的に有意なアブスコパル効果もまた、観察した。図６Ａに示すように、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１の原発性腫瘍治療を受けた動物の９０％（１０匹の動物のうち９匹）において、対側腫瘍増殖が消滅した。対照的に、対側腫瘍増殖は、他のＡｄ−ｐ５３治療群の動物の６２．５〜１００％で観察された。対側腫瘍増殖のこの差は、統計的に有意であった（全ての治療群に対するカイ二乗検定によるｐ値＝０．０００４；Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療群対あらゆる他の治療群を比較する、フィッシャーの両側正確確率検定によるｐ値＜０．０４３０）図６Ｂは、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２、Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−１、又はＡｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１の組み合わせのいずれかの、３つの最も効果的な原発性腫瘍治療を受ける齧歯類における、経時的な対側腫瘍体積を示すグラフを表す。２２日目における、これらの対側腫瘍体積の統計学的分散分析（ＡＮＯＶＡ）比較により、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の抗腫瘍効果の相乗作用が測定された（ｐ値＝全体で０．０４３５）。Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１群のみが、対側腫瘍増殖対Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−１群における、統計的に有意な減少を示した（ｐ値＝０．０３６０）。これらを合わせると、全てのＡｄ−ｐ５３治療法のうち、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の３つの組み合わせのみが、実質的なアブスコパル効果を媒介する強力な局所及び全身抗腫瘍免疫を誘発することにより治癒の有効性をもたらしたことを、これらの発見は示す。
【０２６２】
Ａｄ−ｐ５３治療群：生残の持続をもたらす治療の有効性。ＰＢＳ、ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１、Ａｄ−ｐ５３、又は、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２、Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−１、及びＡｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１のいずれかで治療したマウスの、カプランマイヤー生残曲線を、図７に示す。ログランク検定によると、これらの生残曲線には統計的な有意差があった（全体でｐ＜０．０００１；Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療群対任意の他の治療群の比較ではｐ値＜０．０００３）。予想できない、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療法の実質的な相乗作用もまた、この結果は示す。Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療法の群の中央生残は、４０日後にも達せず、この治療群の８０％が依然として生きていた。著しく対照的に、他の治療群における動物の９８％（４９匹／５０匹）は３０日目までに死に、１０〜２８日の範囲の中央生残を有した。
【０２６３】
ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２アゴニスト、及びチェックポイント阻害剤免疫療法：ＣＤ１２２／１３２アゴニスト及び抗ＰＤ−１治療と組み合わせたＶｉｒＲｘ００７の、同様に印象的かつ予想外の治療の有効性もまた、（原発性腫瘍及び対側腫瘍における）腫瘍体積、腫瘍の完全奏功、並びに生残を確認することにより観察された。原発性腫瘍の体積に関して、図８のグラフは、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）対照、ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１、ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１、ＶｉｒＲｘ００７、又は、ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２、ＶｉｒＲｘ００７＋抗ＰＤ−１、及びＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１の組み合わせのいずれかを受ける齧歯類における、経時的な腫瘍の体積を示す。ＣＤ１２２／１３２、抗ＰＤ−１、及びＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療法の間には深刻な腫瘍の進行があり、これらは、ＶｉｒＲｘ００７治療法と組み合わせることにより逆転した。単独の治療法のいずれかと比較しての、ＶｉｒＲｘ００７＋抗ＰＤ−１及びＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の向上した有効性を、結果は示す。Ａｄ−ｐ５３を用いる発見とは対照的に、ＶｉｒＲｘ００７は、ＣＤ１２２／ＣＤ１３２治療との相乗作用を示さなかった。３０日目までに、ＰＢＳ、ＣＤ１２２／１３２、抗ＰＤ−１、ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１、ＶｉｒＲｘ００７、及びＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／ＣＤ１３２で治療した群の平均腫瘍体積は全て、２，０００ｍｍ３を超えた。対照的に、ＶｉｒＲｘ００７＋抗ＰＤ−１及びＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１との組み合わせ治療のそれぞれは、非ＶｉｒＲｘ００７治療法、又はＶｉｒＲｘ００７治療のみのいずれかと比較して、腫瘍体積の大きな減少を誘発した。３０日目における腫瘍体積の統計学的分散分析（ＡＮＯＶＡ）比較により、ＶｉｒＲｘ００７＋抗ＰＤ−１及びＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の、抗腫瘍効果の相乗作用が測定された（全体、及び、これらの治療対ＶｉｒＲｘ００７のそれぞれに関して、ｐ値＜０．０００１）。ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療は、ＶｉｒＲｘ００７＋抗ＰＤ−１よりも優れていた（ｐ値＝０．０００２）。驚くべきことに、ＶｉｒＲｘ００７の単剤療法と比較して、ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２の組み合わせ治療の明らかな利点はなかったものの、ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１を組み合わせる三重治療法に関して、相乗作用が示された。
【０２６４】
ＶｉｒＲｘ００７治療群−腫瘍の完全奏功率の評価。治療法に対する腫瘍の完全奏功は、重要な治療効果と関連し、治癒性のアウトカムのために必要とされていると、一般に理解されている。ＶｉｒＲｘ００７治療群及びこれらの対照に関して、図９に示すように、ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療のみが、原発性腫瘍及び対側腫瘍の両方の、完全な腫瘍寛解をもたらした。原発性腫瘍及び対側腫瘍の両方の、腫瘍の完全奏功は、ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療群の６０％にて観察され、他の治療群において、７０匹の動物のいずれにおいても、原発性腫瘍及び対側腫瘍の両方の腫瘍の完全奏功は存在しなかった（ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療群対全ての他の治療群の動物を比較する、フィッシャーの両側正確確率検定によると、ｐ値＜０．０００１；ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１対あらゆる他の治療群を比較する、フィッシャーの両側正確確率検定によると、ｐ値＜０．０１１）。予想外なことに、腫瘍の完全奏功は持続的であり、これらの腫瘍を有するこれらの動物を恐らく治癒する、ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療群の５０％において、４０日後も維持された。
【０２６５】
ＶｉｒＲｘ００７治療群−対側腫瘍増殖における、全身性／アブスコパル治療の効果。対側に移植した腫瘍の原発性腫瘍治療における全身性／アブスコパル効果を、原発性腫瘍がＶｉｒＲｘ００７治療法のうちの１つを受けた齧歯類にて、評価し、結果を図１０に示す。予想外の、原発性腫瘍増殖及び完全寛解率における、ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の実質的に増加した相乗効果に一致して、我々は、他のＶｉｒＲｘ００７治療群と比較して、ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の驚くべき程に強力で、とても統計的に有意なアブスコパル効果もまた、観察した。図１０Ａに示すように、ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１原発性腫瘍治療を受ける動物の８０％において、対側腫瘍増殖が消失した。対照的に、対側腫瘍増殖は、他のＶｉｒＲｘ００７治療群の動物の８０〜１００％で観察された。対側腫瘍増殖のこの差は、統計的に有意であった（全ての治療群を比較するカイ二乗検定によるｐ値＝０．０００２；ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療群対あらゆる他の治療群を比較する、フィッシャーの両側正確確率検定によるｐ値＜０．０２３０）。ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の組み合わせが、強力な全身性抗腫瘍免疫を誘発し、潜在的な治癒の有効性を有する、実質的なアブスコパル効果を媒介したことを、これらの発見は示唆する。図１０Ｂは、ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２、ＶｉｒＲｘ００７＋抗ＰＤ−１、又はＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１のいずれかの、３つの最も効果的な原発性腫瘍の組み合わせ治療を受ける齧歯類における、経時的な対側腫瘍体積を示すグラフを表す。２２日目における、これらの対側腫瘍体積の統計学的分散分析（ＡＮＯＶＡ）比較により、ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の抗腫瘍効果の相乗作用が測定された（ｐ値＝全体で０．０１７１）。ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１群のみが、対側腫瘍増殖対ＶｉｒＲｘ００７＋抗ＰＤ−１群における、統計的に有意な減少を示した（ｐ値＝０．０１１５）。これらを合わせると、全てのＶｉｒＲｘ００７治療法のうち、ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の３つの組み合わせのみが、実質的なアブスコパル効果を媒介する強力な局所及び全身抗腫瘍免疫を誘発することにより治癒の有効性をもたらしたことを、これらの発見は示す。
【０２６６】
ＶｉｒＲｘ００７治療群−生残の持続をもたらす治療の有効性。ＰＢＳ、ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１、ＶｉｒＲｘ００７、又は、ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２、ＶｉｒＲｘ００７＋抗ＰＤ−１、及びＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１の組み合わせのいずれかで治療したマウスの、カプランマイヤー生残曲線を、図１１に示す。ログランク検定によると、これらの生残曲線には統計的な有意差があった（全体でｐ＜０．０００１；ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療群対任意の他の治療群の比較ではｐ値＜０．０００５）。予想できない、ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療法の実質的な相乗作用もまた、この結果は示す。ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療法の群の中央生残は、４０日後にも達せず、この治療群の９０％が依然として生きていた。著しく対照的に、他の治療群における動物の９８％（４９匹／５０匹）は４０日目までに死に、１０〜３３日の範囲の中央生残を有した。驚くべきことに、ＶｉｒＲｘ００７の単剤療法と比較して、ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２の組み合わせ治療の、明らかな生残の利点はなかったものの、ＶｉｒＲｘ００７＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１を組み合わせる三重治療法に関して、相乗作用が示された。
【０２６７】
Ａｄ−ＩＬ２４＋ＣＤ１２２／１３２アゴニスト、及びチェックポイント阻害剤免疫療法：ＣＤ１２２／１３２アゴニスト及び抗ＰＤ−１治療と組み合わせたＡｄ−ＩＬ２４の、類似の優れた治療の有効性もまた、原発性腫瘍の体積と生残を評価することにより、観察した。原発性腫瘍の体積に関して、図１２のグラフは、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）対照、ＣＤ１２２／１３２、抗ＰＤ−１、ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１、Ａｄ−ＩＬ２４、又は、Ａｄ−ＩＬ２４＋ＣＤ１２２／１３２及びＡｄ−ＩＬ２４＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１の組み合わせのいずれかを受ける齧歯類における、経時的な腫瘍の体積を示す。ＣＤ１２２／１３２、抗ＰＤ−１、及びＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療法の間には深刻な腫瘍の進行があり、これらは、Ａｄ−ＩＬ２４治療法と組み合わせることにより逆転した。単独の治療法のいずれかと比較して、Ａｄ−ＩＬ２４＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療では有効性が向上した。１６日目までに、ＰＢＳ、ＣＤ１２２／１３２、抗ＰＤ−１、ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１、及びＡｄ−ＩＬ２４で治療した群の平均腫瘍体積は全て、２，０００ｍｍ３を超えた。対照的に、Ａｄ−ＩＬ２４＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１との組み合わせ治療は、非Ａｄ−ＩＬ２４治療法、又はＡｄ−ＩＬ２４治療法のみのいずれかと比較して、腫瘍体積の実質的な減少を誘発した。１６日目における腫瘍体積の、統計学的分散分析（ＡＮＯＶＡ）により、Ａｄ−ＩＬ２４＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療の抗腫瘍効果の相乗作用が測定された（ｐ値＜０．０００１）。Ａｄ−ＩＬ２４（ｐ＝０．００２５）又はＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療（ｐ値＜０．０００１）のいずれかと比較して、Ａｄ−ＩＬ２４＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療では、腫瘍体積が統計的に有意に減少した。
【０２６８】
Ａｄ−ＩＬ２４治療群−生残の持続をもたらす治療の有効性。ＰＢＳ、ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１、Ａｄ−ＩＬ２４、又はＡｄ−ＩＬ２４＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１の組み合わせのいずれかで治療したマウスの、カプランマイヤー生残曲線を、図１３に示す。ログランク検定によると、これらの生残曲線には統計的な有意差があった（ｐ＜０．０００１）。予想できない、Ａｄ−ＩＬ２４＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療法の実質的な相乗作用を、この結果は示す。Ａｄ−ＩＬ２４＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療法の群の中央生残は、相乗的に向上した。ＰＢＳ、ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１、及びＩＬ２４治療群の全ての動物は、１６日目までに死んだが、Ａｄ−ＩＬ２４＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療法の群の動物の５０％は、１９日目にて生きていた。Ａｄ−ＩＬ２４のみ（ｐ＝０．０００３）又はＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ１治療群（ｐ＜０．０００１）のいずれかと比較して、統計的に有意に改善された生残を、Ａｄ−ＩＬ２４＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療法の群は示した。興味深いことに、ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１の対と比較して、Ａｄ−ＩＬ２４＋ＣＤ１２２／１３２の対は驚くほど優れた有効性を有した（ログランク検定によるｐ＝０．０００２、データは図示せず）。
【０２６９】
Ａｄ−ルシフェラーゼ（Ａｄ−Ｌｕｃ）を用いる陰性対照。Ａｄ−Ｌｕｃ対照＋ＣＤ１２２／１３２アゴニスト＋抗ＰＤ−１：腫瘍体積。図１４のグラフは、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）対照、ＣＤ１２２／１３２、抗ＰＤ−１、ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１、Ａｄ−Ｌｕｃ対照、又は、Ａｄ−Ｌｕｃ対照＋ＣＤ１２２／１３２、Ａｄ−Ｌｕｃ対照＋抗ＰＤ−１、及びＡｄ−Ｌｕｃ対照＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１の組み合わせのいずれかを受ける齧歯類における、経時的な原発性腫瘍の体積を示す。Ａｄ−ｐ５３、ＶｉｒＲｘ００７、及びＡｄ−ＩＬ２４を用いる治療とは対照的に、Ａｄ−Ｌｕｃを抗ＰＤ−１、ＣＤ１２２／１３２、又はＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１治療と組み合わせたときに、治療の有効性の有意な増加は存在しなかった。１６日目までに、全ての群の平均腫瘍体積は２，０００ｍｍ３を超えた。１６日目における腫瘍体積の、統計学的分散分析（ＡＮＯＶＡ）は、統計的に有意ではなかった（ｐ値＝０．１２１２、これらのあらゆる治療群の間での平均腫瘍体積が、統計的に有意ではなかった）。
【０２７０】
ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１を用いるＡｄ−Ｌｕｃ陰性対照と比較しての、それぞれ、ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１と組み合わせた、Ａｄ−ｐ５３、ＶｉｒＲｘ００７、及びＡｄ−ＩＬ２４の「三重治療法」との優秀性。生残に関して、それぞれＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１と組み合わせた、Ａｄ−ｐ５３、ＶｉｒＲｘ００７、及びＡｄ−ＩＬ２４との「三重治療法」はそれぞれ、Ａｄ−Ｌｕｃ＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１による治療と比較して、生残を統計的に有意に増加させたことを、図１５は明らかにする。ログランク検定によると、これらの生残曲線には統計的な有意差があった（ｐ＜０．０００１）。ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１三重治療法と組み合わせた、Ａｄ−ｐ５３、ＶｉｒＲｘ００７、及びＡｄ−ＩＬ２４のそれぞれは、Ａｄ−Ｌｕｃ＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１三重治療法対照と比較して、統計的に有意な生残の増加を示した（ログランク検定によると、ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１三重治療法と組み合わせたＡｄ−ｐ５３及びＶｉｒＲｘ００７は共に、ｐ値＜０．０００１；ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１と組み合わせたＡｄ−ＩＬ２４はｐ＜０．０１５）。
【０２７１】
ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストが組み換えマウスＩＬ−１５及びＩＬ−１５−Ｒα−Ｆｃからなる場合の実験。これらの研究において、これらの試薬を共に、３７Ｃで３０分間インキュベートすることで選択性ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストを調製し、得られる免疫複合体を、腫瘍が触知可能になった後の３、５、及び７日目に腹腔内注射する。
【０２７２】
Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２（ＩＬ１５）アゴニスト、及びチェックポイント阻害剤免疫療法−腫瘍体積：ＩＬ１５ベースのＣＤ１２２／１３２アゴニスト及び抗ＰＤ−１治療と組み合わせた、Ａｄ−ｐ５３の治療の有効性を、（原発性腫瘍及び対側腫瘍における）腫瘍体積、並びに生残を確認することで評価した。原発性腫瘍体積に関して、図１６のグラフは、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）対照、ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１、Ａｄ−ｐ５３のみ、又は、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２（ＩＬ１５）＋抗ＰＤ−１の組み合わせのいずれかを受ける齧歯類における、経時的な腫瘍の体積を示す。ＰＢＳ、ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１、及びＡｄ−ｐ５３治療法の間には、深刻な腫瘍の進行があった。上述の、初期のＡｄ−ｐ５３組み合わせ治療の結果と一致して、あらゆる治療法と比較して、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２（ＩＬ１５）＋抗ＰＤ−１治療では、実質的に有効性が向上した。３０日目までに、ＰＢＳ、ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１、及びＡｄ−ｐ５３で治療した群の平均腫瘍体積は、全て２，０００ｍｍ３を超えた。対照的に、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２（ＩＬ１５）＋抗ＰＤ−１を用いる組み合わせ治療は、腫瘍体積の大きな減少を誘発した。腫瘍体積の統計学的分散分析（ＡＮＯＶＡ）により、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２（ＩＬ１５）＋抗ＰＤ−１治療の抗腫瘍効果の相乗作用が測定された（ｐ値＜０．０００１（全体）、及び、それぞれの別の治療群と個別に比較したｐ値＜０．０００１）。
【０２７３】
Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２（ＩＬ１５）アゴニスト、及びチェックポイント阻害剤免疫療法−対側腫瘍増殖における全身性／アブスコパル治療効果。対側に移植した腫瘍の原発性腫瘍治療における全身性／アブスコパル効果を、原発性腫瘍がＡｄ−ｐ５３治療法のうちの１つを受けた齧歯類にて、評価し、結果を図１７に示す。図１６に示す原発性腫瘍増殖における、予想しなかった、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２（ＩＬ１５）＋抗ＰＤ−１治療の実質的に増加した相乗効果に一致して、我々は、他のＡｄ−ｐ５３治療群と比較して、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２（ＩＬ１５）＋抗ＰＤ−１治療の驚くべき程に強力で非常に統計的に有意なアブスコパル効果もまた、観察した。図１７は、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２、Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−１、又はＡｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２（ＩＬ１５）＋抗ＰＤ−１の組み合わせのいずれかの、原発性腫瘍治療を受ける齧歯類における、経時的な対側腫瘍体積を示すグラフを表す。２２日目における、これらの対側腫瘍体積の統計学的分散分析（ＡＮＯＶＡ）比較により、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２（ＩＬ１５）＋抗ＰＤ−１治療の抗腫瘍効果の相乗作用が測定された（ｐ値＝全体で０．０４３３）。Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１群のみが、対側腫瘍増殖対Ａｄ−ｐ５３＋抗ＰＤ−１群における、統計的に有意な減少を示した（ｐ値＝０．０３５９）。
【０２７４】
Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２（ＩＬ１５）アゴニスト、並びにチェックポイント阻害剤免疫療法−生残の持続をもたらす治療効果。ＰＢＳ、ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１、Ａｄ−Ｌｕｃ＋ＣＤ１２２／１３２＋抗ＰＤ−１対照、Ａｄ−ｐ５３、又はＡｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２（ＩＬ１５）＋抗ＰＤ−１の組み合わせのいずれかで治療したマウスの、カプランマイヤー生残曲線を、図１８に示す。ログランク検定によると、これらの生残曲線には統計的な有意差があった（全体でｐ＜０．０００１、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２（ＩＬ１５）＋抗ＰＤ−１治療群対任意の他の治療群を比較するｐ値＜０．０００１）。結果は、予想外の、Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２（ＩＬ１５）＋抗ＰＤ−１治療法の実質的な相乗作用を更に示す。Ａｄ−ｐ５３＋ＣＤ１２２／１３２（ＩＬ１５）＋抗ＰＤ−１治療法の群において、動物の５０％が３６日目に生きていた。著しく対照的に、他の治療群の全ての動物は、２２日目までに死に、１０〜１８日の範囲の中央生残を有した。
【０２７５】
実施例２−局所領域及び全身投与の両方のための、ＰＩ３Ｋδ／γ阻害剤と組み合わせた、Ｎ１Ｌ欠損、ＩＬ１２発現、及び選択性ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストで改変したワクシニアベクターを用いる適用
この治療用アプローチの別の実施形態において、ＶＶＬ  １５−Ｎ１Ｌ−ＩＬ１２と呼ばれる新規の腫瘍崩壊性ワクシニアウイルスを、追加の治療用ウイルスとして用い、上記実施例１に記載するアプローチの有効性を向上させる。いくつかの腫瘍崩壊性ワクシニアウイルスの株、例えばＷｅｓｔｅｒｎ  Ｒｅｓｅｒｖｅ、Ｗｙｅｔｈ、及びＬｉｓｔｅｒ株が報告されている。これらの株のそれぞれの、様々な欠損変異体が作製されている。Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ（国際公開第２０１５／１５０８０９Ａ１号の特許）は、向上した選択性及び抗腫瘍有効性を示す、不活性化Ｎ１Ｌ遺伝子を有するＴＫ欠失ワクシニアウイルス株を開発している。Ｎ１Ｌは、感染した細胞のアポトーシス、及び、ＮＦ−ｋＢ活性化を阻害すると考えられている。Ｎ１Ｌ遺伝子の欠損は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞応答の制御に加えて、ＮＦ−ｋＢにより制御されるプロ炎症性の抗ウイルスサイトカインの増加をもたらすことが示されている。Ｎ１Ｌ欠損誘導体は、Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５（国際公開第２０１５／１５０８０９Ａ１号の特許）に記載されている。ＶＶＬ  １５Ｎ１Ｌ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１２、ＩＬ−２１の抗腫瘍有効性を向上させるために、癌抑制因子及び他の治療用遺伝子を、ＶＶＬ  １５Ｎ１ＬベクターのＮ１Ｌ領域に挿入する。これらの治療用「アームド」ＶＶＬ  １５Ｎ１Ｌベクターを、上記実施例１に記載する治療と１つずつ、又は複数で組み合わせて使用し、治療の局所及びアブスコパル効果を向上させる。
【０２７６】
上記実施例１及び２に記載するアプローチを評価することに加えて、ウイルスベクターもまた、ＰＩ３Ｋ阻害剤と組み合わせる。ＰＩ３Ｋδ又はＰＩ３Ｋγ／δ阻害剤を組み込む例を記載して、ウイルスベクターの静脈内投与を向上させる。動物は、尾静脈を通して７５ｍｇ・ｋｇ−１の濃度でＩＣ８７１１４（ＰＩ３Ｋδ阻害剤）を受け、３時間後に、１００μＬのＰＢＳ中に１×１０８ＰＦＵ／マウスにて、静脈内ＶＶＬ  １５Ｎ１Ｌベクターを受ける。この治療を、０日目、３日目、及び５日目に少なくとも３回、与える。これらの治療を、上述したものと同じ治療法と組み合わせる。腫瘍のサイズと動物の生残を測定し、データを上述のとおりに分析すると、Ａｄ−ｐ５３及び／又はＡｄ−ＩＬ２４及び／又はＶＶＬ  １５Ｎ１Ｌベクター、ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニスト、免疫チェックポイント阻害剤、並びにＰＩ３Ｋ阻害剤と組み合わせた治療の有効性の増加を示す。
【０２７７】
実施例３−免疫両方を含む以前の治療の患者の進行における、腫瘍内Ａｄ−ｐ５３、ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニスト、及び抗ＰＤ−１治療を含む併用療法。
各バイアル瓶当たり２ｍＬの体積にて、Ａｄ−ｐ５３を供給し、１ｍＬ当たり１×１０１２のウイルス粒子（ｖｐ）を含有する。Ａｄ−ｐ５３は、安定剤として１０％（ｖ／ｖ）グリセロールを含有するリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に、滅菌したウイルス性懸濁液として提供される。投与前に、操作を記載する手順に従い、Ａｄ−ｐ５３を希釈してフィルタにかける。抗ＰＤ−１治療法を、ＦＤＡが認可した添付文書の取扱説明書に従い投与する。ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニスト治療法（例えば、ＩＬ−２／抗ＩＬ−２免疫複合体、ＩＬ−１５／抗ＩＬ−１５免疫複合体、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５受容体α−ＩｇＧ１−Ｆｃ（ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−ＩｇＧ１−Ｆｃ）免疫複合体、ＰＥＧ化ＩＬ−２、ＰＥＧ化ＩＬ−１５、ＩＬ−２ムテイン及び／又はＩＬ−１５ムテイン）を、毎週、隔週、３週間に１回、４週間に１回の範囲の間隔で、皮下又は経静脈投与のいずれかで投与する場合、５〜１００μｇ／ｋｇの範囲の用量で投与する。ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストは、ＡＬＴ−８０３などの、ＩＬ−１５受容体α／ＩｇＧ１  Ｆｃ融合タンパク質に結合したＩＬ−１５変異体（例えば、ＩＬ−１５Ｎ７２Ｄ）であることができる。
【０２７８】
治療は、例えば、Ａｄ−ｐ５３、選択性ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニスト、及び抗ＰＤ−１抗体を用いる治療により、ＨＮＳＣＣが進行した患者の予後を改善するように設計されている。併用療法の臨床的有効性には、全体の奏効率の評価［ＯＲＲ＝部分奏功（ＰＲ）＋完全奏功（ＣＲ）］、完全寛解率（ＣＲＲ）、持続性奏効率（ＤＲＲ＝少なくとも、６ヶ月間維持されるＰＲ＋ＣＲ）；内臓器官への転移に関する速度及び時間；無進行生存（ＰＦＳ）及び全体の生残（ＯＳ）が含まれる。リンパ球表現型及び血清サイトカイン、病気に関係するバイオマーカー、選択した抗原に対する抗体応答、並びに、腫瘍抗原に対する体液性応答及び細胞応答における、研究薬物の効果もまた、評価する。有効性のエンドポイントは、診断分析における、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、免疫細胞浸潤物、及び腫瘍変異負荷バイオマーカーと相関する。
【０２７９】
患者は２８日毎に、１、２、及び３日目に、Ａｄ−ｐ５３の腫瘍内注射を受ける。５日目に始まる、２週間毎のニボルマブ注入、並びに、選択性ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニスト治療法（例えば、ＩＬ２／抗ＩＬ２免疫複合体、及び／又はＩＬ１５／抗ＩＬ１５免疫複合体、及び／又はＩＬ１５／ＩＬ１５受容体α−ＩｇＧ１−Ｆｃ（ＩＬ１５／ＩＬ１５Ｒα−ＩｇＧ１−Ｆｃ）免疫複合体、及び／又はＰＥＧ化ＩＬ２、及び／又はＰＥＧ化ＩＬ１５、及び／又はＩＬ２ムテイン、及び／又はＩＬ１５ムテイン）を、毎週、隔週、３週間に１回、４週間に１回の範囲の間隔で、皮下又は経静脈投与のいずれかで投与する場合、５〜１００μｇ／ｋｇの範囲の用量で投与する。
【０２８０】
表３に記載する腫瘍損傷の直径に基づく、Ａｄ−ｐ５３注射用量（ｍＬ）及びＡｄ−ｐ５３注射法の決定。表３は、ＣＴ又はＭＲＩスキャンで測定した、２次元の損傷直径に対応する、各腫瘍損傷に対するＡｄ−ｐ５３の注射用量（ｍＬ）を識別するために使用されなければならない。Ａｄ−ｐ５３の注射用量（ｍＬ）を、１×１０１２のウイルス粒子（ｖｐ）／ｍＬを含有する、提供される２ｍＬのバイアル瓶から差し引かなければならない。記載する損傷の直径に対応するＡｄ−ｐ５３の注射用量（ｍＬ）は、１ｃｍ３の腫瘍体積当たり、少なくとも、１×１０１１のウイルス粒子（ｖｐ）のＡｄ−ｐ５３用量を受ける各腫瘍損傷をもたらす。この治療用量は、以前のＡｄ−ｐ５３臨床試験の腫瘍応答、生残及び安全性データから決定した。
【０２８１】
全ての腫瘍損傷が治療されるはずである。しかし、Ａｄ−ｐ５３のＭＴＤが１治療日当たり２．５×１０１３ｖｐであるため、Ａｄ−ｐ５３注射用量（ｍＬ）の総計は、２５ｍＬ未満でなければならない。下表は、Ａｄ−ｐ５３の注射用量（ｍＬ）に基づき、各損傷に利用される、対応するＡｄ−ｐ５３の注射法を一覧に記載する。Ａｄ−ｐ５３の注射用量（ｍＬ）の量に基づき、下表に列挙した各損傷に対してのＡｄ−ｐ５３注射法を用いる。添付文書の取扱説明書に従うと、細針シリンジ技術により、２ｍＬ以下のＡｄ−ｐ５３注射用量（ｍＬ）が投与されなければならないが、以下に示すＱｕａｄｒａ−Ｆｕｓｅデバイスを用いるのであれば、４ｍＬ以下のＡｄ−ｐ５３注射用量（ｍＬ）が投与されなければならない。
【０２８２】
【表３】
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ａ：損傷の直径−Ｌは長いほうの直径で、Ｗは短いほうの直径（ｃｍ）である（最も近い整数に切り上げ）。ｂ：１ｃｍ３の腫瘍体積当たり、約１×１０１１のウイルス粒子（ｖｐ）のＡｄ−ｐ５３用量を受ける各腫瘍損傷をもたらす、１×１０１２ｖｐ（ウイルス粒子）／ｍＬを含有するバイアル瓶からの、Ａｄ−ｐ５３の注射用量（ｍＬ）。Ａｄ−ｐ５３のＭＴＤが１治療日当たり２．５×１０１３ｖｐであるため、Ａｄ−ｐ５３の注射用量（ｍＬ）の総計は、２５ｍＬ未満でなければならない。ｃ：Ａｄ−ｐ５３の注射法。
【０２８３】
Ａｄ−ｐ５３の注射法：Ａｄ−ｐ５３の注射用量（ｍＬ）の量に基づき、表３に列挙した各損傷に対してのＡｄ−ｐ５３注射法を用いる。細針シリンジ技術により、２ｍＬ以下のＡｄ−ｐ５３注射用量（ｍＬ）が投与されなければならないが、記載のＱｕａｄｒａ−Ｆｕｓｅデバイスを用いるのであれば、２ｍＬを超えるＡｄ−ｐ５３注射用量（ｍＬ）が投与されなければならない。
【０２８４】
２ｍＬ以下のＡｄ−ｐ５３の注射用量（ｍＬ）用の細針シリンジ：Ａｄ−ｐ５３の注射用量（ｍＬ）が２ｍＬ以下である場合の損傷に関して、Ａｄ−ｐ５３の注射用量（１又は２ｍＬのいずれか）は、２７ゲージ針を備えた標準的な１ｍＬシリンジを用いて送達されなければならない。Ａｄ−ｐ５３の全注射用量（ｍＬ）の４分の１を、針を配置する腫瘍損傷の各四分円に、各四分円内での注射の分配を最大しながら、注射しなければならない。
【０２８５】
２ｍを超えるＡｄ−ｐ５３の注射用量（ｍＬ）のための、Ｑｕａｄｒａ−Ｆｕｓｅデバイス：Ａｄ−ｐ５３の注射用量（ｍＬ）が２ｍＬを超える場合の損傷に関して、Ａｄ−ｐ５３の注射用量は、Ｑｕａｄｒａ−Ｆｕｓｅ送達デバイス（Ｒｅｘ  Ｍｅｄｉｃａｌ，ＰＡ）を使用して送達されなければならない。Ｑｕａｄｒａ−Ｆｕｓｅデバイス（ＦＤＡ１等級の医療用デバイス）は１つの中央トロカールから構成され、ここから３つの尖叉が、調節可能な１〜５ｃｍ直径の放射状方向に延びる（図３）。
【０２８６】
以下に詳述するように、Ｑｕａｄｒａ−Ｆｕｓｅデバイスは、損傷の複数領域に薬物を正確かつ拡散して、同時に送達することを可能にする。
【０２８７】
１．腫瘍損傷の２次元直径に一致する、表３のＡｄ−ｐ５３の注射用量（ｍＬ）を、標準的なシリンジに引き出し、Ｑｕａｄｒａ−Ｆｕｓｅデバイスの拡張管材に取り付ける。
【０２８８】
２．腫瘍損傷の下半分をまず治療し、デバイスの深度マーカーを使用して、損傷の最も長い長さ直径（Ｌ）の底部に、Ｑｕａｄｒａ−Ｆｕｓｅの中央トロカール端を配置し、ＣＴ又は超音波ガイダンスの下で、損傷の最も長い直径に一致させる。Ｑｕａｄｒａ−Ｆｕｓｅデバイスの尖叉アレイ治療直径を、腫瘍損傷の最も短い幅直径（Ｗ）の１ｃｍ未満に調節する（尖叉アレイ治療直径＝幅腫瘍直径−１ｃｍ）。Ｑｕａｄｒａ−Ｆｕｓｅデバイスを尖叉アレイ治療直径に調節した後、尖叉を開けて、Ａｄ−ｐ５３の４分の１の注射用量（ｍＬ）をこの位置に送達する。（注：各損傷の４つ全てのＡｄ−ｐ５３の注射用量注射に対して、同じ尖叉アレイ治療直径を用いる。）尖叉を収縮させて、デバイスを同じ深さで６０°回転させる。次に、尖叉を再度開けて、Ａｄ−ｐ５３の、２番目の４分の１の注射用量（ｍＬ）を、この位置に送達する。これらの手順により、Ａｄ−ｐ５３の治療用量の半分が、腫瘍損傷の下半分に効率的に送達される。
【０２８９】
３．腫瘍損傷の上半分を治療するために、尖叉を再び収縮し、中央トロカール端を、腫瘍損傷の最長のＬ直径の中点まで移動させる。尖叉を再び、尖叉アレイ治療直径（＝幅腫瘍直径−１ｃｍ）まで延ばし、Ａｄ−ｐ５３の３番目の４分の１の注射用量（ｍＬ）を、この位置に送達する。尖叉を収縮させて、デバイスを同じ中点の腫瘍の深さで６０°回転させる。次に、尖叉を再度開けて、Ａｄ−ｐ５３の、最後の４分の１の注射用量（ｍＬ）を、この位置に送達する。
【０２９０】
このようにして、各腫瘍損傷における合計で４８部位が、Ａｄ−ｐ５３を受ける。それぞれの尖叉アレイ展開当たりで、各尖叉は、合計で１２箇所の同時薬物注入のための、２つの貫通孔（４つの流体出口）を有する（４つの尖叉アレイ展開×１２＝４８箇所のＡｄ−ｐ５３送達部位）。
【０２９１】
５×４ｃｍの腫瘍損傷の治療：表３に記載のとおり、Ｌ（最長直径）が５ｃｍ、及びＷ（最短直径）が４ｃｍの損傷直径を有する腫瘍を、Ｑｕａｄｒａ−ＦｕｓｅＡｄ−ｐ５３注射法により、４ｍＬのＡｄ−ｐ５３の注射用量で治療する。
【０２９２】
ＣＴ又はＵＳガイダンスの下でＱｕａｄｒａ−Ｆｕｓｅの中央トロカール端を最初に配置するのは、より長いＬ＝５ｃｍの腫瘍直径の底部でなければならない。尖叉を３ｃｍ（幅腫瘍直径４ｃｍ−１ｃｍ＝３ｃｍ）の尖叉アレイ治療直径まで拡張する必要があり、最初の４分の１の治療用量（１ｍＬ）を注入する。（注：この損傷の４つ全てのＡｄ−ｐ５３の注射用量注入に対して、同じ尖叉アレイ治療直径を用いる。）尖叉を収縮させて、デバイスを、腫瘍の５ｃｍ深さの同じ底部で６０°回転させる。尖叉を、３ｃｍの尖叉アレイ治療直径まで再度拡張して、Ａｄ−ｐ５３の、２番目の４分の１の１ｍＬ用量を注入する。これらの手順により、Ａｄ−ｐ５３の注射用量の半分が、腫瘍の下半分に送達される。
【０２９３】
腫瘍損傷の上半分を治療するために、Ｑｕａｄｒａ−Ｆｕｓｅ中央トロカールの深さを、最長の損傷直径＝２．５ｃｍの中点まで上げる。尖叉を再び、３ｃｍの尖叉アレイ治療直径まで拡張し、３番目の４分の１の、治療用量（１ｍＬ）を注入する。最長の腫瘍直径に沿って、同じ腫瘍内深さ（２．５ｃｍ）を維持しながら、尖叉を収縮し、中央トロカールを６０°回転させて、尖叉を３ｃｍの尖叉アレイ治療直径まで再度拡張し、４番目であり最終の４分の１の、１ｍＬのＡｄ−ｐ５３用量を注入する。これらの手順により、Ａｄ−ｐ５３の注射用量の半分が、腫瘍の上半分に送達される。まとめると、これらの手順で、４ｍＬのＡｄ−ｐ５３が、腫瘍損傷内の４８箇所の注入点に送達される。
【０２９４】
治療期間：１回の治療の期間は２８日（４週間）である。治療サイクルの１日目は、研究治療投与の最初の日である。治療レジメンは以下のとおりである：
【０２９５】
治療レジメン：Ａｄ−ｐ５３を用いるスケジュールされた治療日は、２８日毎に１、２、及び３日目である。ニボルマブは、５日目から始まって、２週間毎に投与される。抗ＰＤ−１治療法を、ＦＤＡが認可した添付文書の取扱説明書に従い投与する。選択性ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニスト治療法（例えば、ＩＬ２／抗ＩＬ２免疫複合体、及び／又はＩＬ１５／抗ＩＬ１５免疫複合体、及び／又はＩＬ１５／ＩＬ１５受容体α−ＩｇＧ１−Ｆｃ（ＩＬ１５／ＩＬ１５Ｒα−ＩｇＧ１−Ｆｃ）免疫複合体、及び／又はＰＥＧ化ＩＬ２、及び／又はＰＥＧ化ＩＬ１５、及び／又はＩＬ２ムテイン、及び／又はＩＬ１５ムテイン）を、毎週、隔週、３週間に１回、４週間に１回の範囲の間隔で、皮下又は経静脈投与のいずれかで投与する場合、５〜１００μｇ／ｋｇの範囲の用量で投与する。
【０２９６】
研究の２８又は２９日目に、腫瘍の位置及び測定値を評価するための検査を終わらせ、その後で、新しい治療サイクルを開始する。
【０２９７】
局所での病気の進行（治療可能な新規の損傷を除く）、又は許容されない有害事象が生じる場合を除き、患者は、３回又はそれ以上のサイクルで治療される。
【０２９８】
有効性評価の基準：
１．ＣＴ又はＭＲＩにより、腫瘍のサイズを監視する。測定は研究の２８又は２９日目に実施し、この後で、ＣＴ又はＭＲＩの場合、３回目のサイクルの１日目の注射を行い、８週間毎にスキャンする。ＲＥＣＩＳＴ  １．１基準を適用する。
２．奏効期間は、応答日から進行日まで経過した時間として定義される。
３．無進行生存は、無作為化の日から、進行を記録した日まで経過した時間として定義される。
４．全体の生残は、無作為化から死亡した日まで経過した時間として定義される。
５．有効性のエンドポイントは、診断分析における、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、免疫細胞浸潤物、及び腫瘍変異負荷バイオマーカーと相関する。
【０２９９】
安全性の評価：
１．有害事象の報告。
２．ＣＢＣ、生化学、及び尿検査を含む、身体検査、生命徴候、実験室試験。
３．抗体試験による、アデノベクターの体内分布。
【０３００】
治療及び研究患者含有基準のために、Ａｄ−ｐ５３有効性の好ましいバイオマーカーが必要であり、Ｓｏｂｏｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２に記載されているように、免疫組織化学により、野生型ｐ５３遺伝子配列、又は２０％未満のｐ５３−陽性腫瘍細胞のいずれかが挙げられる。
【０３０１】
再発性ＨＮＳＣＣにおける、抗ＰＤ−１の近年のブレイクスルーをもたらす任命、及び認可の加速の観点から、我々は、再発性ＨＮＳＣＣ患者において、Ａｄ−ｐ５３治療データのメタ分析を行い、可能性のある治療用量とスケジュールを識別し、公表された抗ＰＤ−１の結果を改善した。メタ分析には、大多数が以前の手術、放射線及び白金ベースの化学療法を受けた、好ましいｐ５３バイオマーカープロファイルを有する、再発性ＨＮＳＣＣの患者（ｎ＝５４）を伴った。メタ分析において、最も高い奏効率が臨床試験で観察され、これには、最初に１週間の間の３日連続の治療、又は、各月の治療サイクルの最初の２週間に隔週、のいずれかで、１週間当たり３回の治療スケジュールで、Ａｄ−ｐ５３が腫瘍内投与された。奏功者（ＲＥＣＩＳＴ  １．１基準により定義される）は全て、１ｃｍ３の腫瘍体積当たり、７×１０１０のウイルス粒子を超えるＡｄ−ｐ５３の用量を受けた。
【０３０２】
下表に示すように、より少ないＡｄ−ｐ５３用量で治療を受けた患者と比較して、７×１０１０のウイルス粒子／ｃｍ３を超えて治療を受けた患者の腫瘍奏功には、統計的な有意差が存在した（７×１０１０のウイルス粒子／ｃｍ３を超えるＡｄ−ｐ５３については、３１％（９／２９）の腫瘍奏功に対して、７×１０１０のウイルス粒子／ｃｍ３未満のＡｄ−ｐ５３については、０％（０／２５）；ｐ＝０．００２３）。
【０３０３】
【表６】
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【０３０４】
図１は、７×１０１０のウイルス粒子／ｃｍ３未満のＡｄ−ｐ５３用量（右パネル）と比較した、７×１０１０のウイルス粒子／ｃｍ３を超えるＡｄ−ｐ５３（左パネル）で治療した患者亜群に対する、腫瘍奏功のウォーターフォールプロットを示す。
【０３０５】
奏功者の大部分（７／９の患者）が、１×１０１１ｖｐ／ｃｍ３付近、又はこれを超過する（７．８１〜３３３．２×１０１０ｖｐ／ｃｍ３）Ａｄ−ｐ５３の用量を受けたことが、Ａｄ−ｐ５３奏功者の更に詳細な調査により明らかとなった。
【０３０６】
以前のフェーズ３再発性ＨＮＳＣＣ臨床治験で、好ましいＡｄ−ｐ５３バイオマーカープロファイルを有する、メトトレキサートで治療した患者と比較した、７×１０１０のウイルス粒子／ｃｍ３を超えるＡｄ−ｐ５３用量で治療した、好ましいＡｄ−ｐ５３バイオマーカープロファイルを有する患者の、１年及び全体の生残。結果を図２に示し、メトトレキサートと比較して、Ａｄ−ｐ５３バイオマーカー及び用量最適化Ａｄ−ｐ５３治療に関する全体生残の、統計的に有意な増加を示す（Ａｄ−ｐ５３治療の中央生残：１１．５ヶ月に対して、メトトレキサートでは４．５ヶ月；ｐ＜０．０１６、ＨＲ  １．９７６７）。
【０３０７】
表４に示すとおり、メタ分析データからの最適なＡｄ−ｐ５３再発性ＨＮＳＣＣ治療は、腫瘍奏功の有効性エンドポイント、１年生残、及び全体の中央生残に関して、Ｆｅｒｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６により報告された、標準治療（ＳＯＣ）化学療法及び抗ＰＤ−１治療に匹敵した。
【０３０８】
【表４−１】
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【０３０９】
したがって、選択性ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストと抗ＰＤ−１治療法の併用治療のためのＡｄ−ｐ５３の用量（腫瘍体積１ｃｍ３当たり、１×１０１１ｖｐ）を、このデータに基づき選択する。
【０３１０】
実施例４−Ａｄ−ＭＤＡ７（ＩＬ２４）、ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニスト及び抗ＰＤ１抗体を用いる併用療法
抗ＰＤ−１治療は、進行した切除不能な病気を有する黒色腫患者に対して認可された治療法である。抗ＰＤ−１は、多くの患者に利点をもたらす、躍進的な治療を提示する一方で、複数の研究での臨床データは、患者の大多数はこの治療法に応答しないことを示している。
【０３１１】
この治療法は、Ａｄ−ＭＤＡ−７（注：Ａｄ−ＭＤＡ−７＝Ａｄ−ＩＬ２４）、並びにＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニスト及び抗ＰＤ−１抗体を用いる治療により、進行した黒色腫患者の予後を改善するように設計されている。併用療法の臨床的有効性には、全体の奏効率の評価［ＯＲＲ＝部分奏功（ＰＲ）＋完全奏功（ＣＲ）］、完全寛解率（ＣＲＲ）、持続性奏効率（ＤＲＲ＝少なくとも、６ヶ月間維持されるＰＲ＋ＣＲ）；内臓器官への転移に関する速度及び時間；無進行生存（ＰＦＳ）及び全体の生残（ＯＳ）が含まれる。リンパ球表現型及び血清サイトカイン、病気に関係するバイオマーカー、選択した抗原に対する抗体応答、並びに、腫瘍抗原に対する体液性応答及び細胞応答における、研究薬物の効果もまた、評価される。
【０３１２】
更に、炎症性浸潤物（例えば、それぞれ、リンパ球及び腫瘍細胞における、ＣＤ８及びＣＤ４細胞、並びに、プログラム細胞死１（ＰＤ−１）及びプログラム細胞死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）の発現）の量及び特徴、並びに、腫瘍変異の負荷を含む（しかし、これらに限定されない）臨床活性の病理学的相関について、腫瘍サンプルを調査する。
【０３１３】
そのときに患者が奏功するのであれば、患者を最大１２ヶ月、又は最大１８ヶ月間治療する。１２ヶ月で奏功する（ＣＲ又はＰＲ）患者は、１８ヶ月、又は臨床的に関連する進行性疾患（ＰＤｒ）のいずれか早いほうまで、治療を続けなければならない。
【０３１４】
免疫療法は、腫瘍応答の開始の遅延を引き起こし得、かつ、腫瘍進行に関する誤った腫瘍炎症と関連する可能性があるため、３種類のＰＤが定義される。臨床的に関連のない進行性の病気（ＰＤｎ）は、パフォーマンス状態の低下を被らない患者における、かつ／又は、医師の意見により、代替の治療法を必要としないＰＤとして定義される。ＰＤｎを示す患者は、治療を続けることが許可される。臨床的に関連のある進行性の病気（ＰＤｒ）は、パフォーマンス状態の低下と関連のある、かつ／又は、医師の意見において、患者が代替の治療法を必要としないＰＤとして定義される。ＰＤｒの患者は、医師の意見により、他の治療が保証される場合を除いて、治療法を受けた２４週間まで、治療を受けたままとなる。ＣＮＳ進行性の病気（ＰＤｃｎｓ）は、中枢神経系（脳）での進行と定義される。
【０３１５】
治療のＡｄ−ＩＬ２４は、生理食塩水及び１０％グリセロールを含有する中性緩衝液中の、１×１０１２ｖｐ／ｍＬの濃度での凍結バイアル懸濁液（バイアル瓶当たり２．０ｍＬ）として提供される。注射を受けるための腫瘍質量に関して、最小サイズは存在しない。治療される腫瘍の第１の群に皮膚損傷を含めて、皮膚抗原提示細胞により媒介される治療法の免疫効果を増強しなければならない。
【０３１６】
個々の患者は、最長直径が５ｃｍを超える単独の損傷が存在しない状態で、最大２０個の損傷を有することができる。最終的に全ての損傷を、少なくとも１サイクルのＡｄ−ＩＬ２４治療法で治療することを意図している（３週間で、週に２回腫瘍内注射）。各患者の損傷をＡｄ−ＩＬ２４治療群に分け、各治療群における損傷の数は、各治療に送達されるＡｄ−ＩＬ２４が、表４に明記する用量エスカレーションスキームに明記される各治療日に対して許可される全体積用量を超過しないように、腫瘍直径及び用量エスカレーションコホートにより示される。腫瘍に送達される全用量（体積）は、表４に明記される体積を超えず、治療群の各個別の腫瘍に注射される量は、腫瘍の結節のサイズに左右され、以下のアルゴリズムに従い決定される：
●  最長寸法が０．５ｃｍ以下の腫瘍に対しては、０．１ｍＬ以下。
●  最長寸法が０．５〜１．５ｃｍの腫瘍に対しては、０．５ｍＬ以下。
●  最長寸法が１．５〜２．５ｃｍの腫瘍に対しては、１．０ｍＬ以下。
●  最長寸法が２．５〜５ｃｍの腫瘍に対しては、２．０ｍＬ以下。
【０３１７】
あらゆる個別の損傷に注射される最大体積は、２ｍＬである。任意の１治療日における最大用量は、下表に明記する、治療用量エスカレーションコホートに応じて、２、４、又は６ｍＬのいずれかである。
【０３１８】
【表４−２】
2021518408.tif 000008
【０３１９】
【表５】
2021518408.tif 000009
【０３２０】
上記表の治療レジメンを、毎週、隔週、３週間に１回、４週間に１回の範囲の間隔で、皮下又は経静脈投与のいずれかで投与する場合、５〜１００μｇ／ｋｇの範囲の用量で投与される、ＩＬ２／抗ＩＬ２免疫複合体、及び／又はＩＬ１５／抗ＩＬ１５免疫複合体、及び／又はＩＬ１５／ＩＬ１５受容体α−ＩｇＧ１−Ｆｃ（ＩＬ１５／ＩＬ１５Ｒα−ＩｇＧ１−Ｆｃ）免疫複合体、及び／又はＰＥＧ化ＩＬ２、及び／又はＰＥＧ化ＩＬ１５、及び／又はＩＬ２ムテイン、及び／又はＩＬ１５ムテイン）などの、選択性ＣＤ１２２／ＣＤ１３２アゴニストを組み合わせることができるであろう。
【０３２１】
まとめ：実施例に記載の動物研究集団は、免疫療法に一般的に耐性があることが知られている、非常に侵襲性の形態の癌を用いる。驚くべきことに、選択性ＣＤ１２２／ＣＤ１３２療法と組み合わせた、局所領域癌抑制及び腫瘍崩壊ウイルス治療は、全身性免疫チェックポイント阻害剤治療法に対する耐性を逆転させ、このことは、免疫チェックポイント阻害剤治療との予想外の相乗作用を示した。また、併用療法は、癌抑制又は腫瘍崩壊ウイルス療法で治療しなかった、離れた腫瘍において、優れたアブスコパル効果を誘発した。免疫療法に対する耐性が非常に高い癌において、これらの治療は驚くべきことに、完全な腫瘍の寛解及び治癒性のアウトカムをもたらした。
【０３２２】
本明細書で開示及び権利主張する方法は全て、本開示を考慮して、過度な実験をすることなく作製及び実施可能である。本発明の組成物及び方法は、好ましい実施形態の観点で記載されてきたが、本発明の概念、精神及び範囲を逸脱することなく、本明細書に記載の方法、工程又は工程の順序に変化が加えられてもよいことは当業者には明らかであろう。より具体的には、化学的及び生理学的に関連する特定の作用物質を、同じ結果又は同様の結果が達成されつつ、本明細書に記載される作用物質に交換されてもよいことは明らかであろう。当業者に明らかな全てのこのような同様の代替物及び改変は、添付の特許請求の範囲に定義されるような本発明の精神、範囲及び概念の範囲内であると考えられる。
参考文献
以下の参考文献は、本明細書に示されるものに対して補助的に例示的な手順又は他の詳細を与える程度まで、本明細書に参照により組み込まれる。
Ａｇｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５９：３８６１−３８６５，１９９９．
Ａｋｓｅｎｔｉｊｅｖｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．７：１１１１，１９９６．
Ａｏｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ．，１２０：３３２７−３５，２００７．
Ｂａｃｋｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．，１２（５）：５１６，２００２．
Ｂａｉｃｈｗａｌ  ａｎｄ  Ｓｕｇｄｅｎ，Ｉｎ：Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ，Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ  Ｒ，ｅｄ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，ｐｐ．１  １７−１４８，１９８６．
Ｂａｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｌｅｖｉｎｅ，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ａｎａｌ．，１１：２８５−２９２，１９９３．
Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｕｔａｔ  Ｒｅｓ．，５１１（２）：１４５−７８，２００２．
Ｂｏｕｖｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５８：２２８８−２２９２，１９９８．
Ｂｕｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，９：５５３−５６６，２００２．
Ｃａｍａｃｈｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２２（１４５），２００４．
Ｃａｒｒｏｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１：４９−６０，２００１．
Ｃａｕｄｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６８：６０４１−６０４６，２００２．
Ｃｈａｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．，１３：４９０−５０２，２００６．４４４−４４８，１９９８．
Ｃｈａｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．，１３：４９０−５０２，２００６．４４４−４４８，１９９８．
Ｃｈａｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１６：
Ｃｈｅｎ  ａｎｄ  Ｏｋａｙａｍａ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．７：２７４５−２７５２，１９８７．
Ｃｈｏｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，１７：１９０−２０１，２０１０．
Ｃｏｒｒａｌｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ，１１，１０１８−１０３０，２０１５．
Ｃｏｕｃｈ  ｅｔ  ａｌ，Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐ．Ｄｉｓ．，８８：３９４−４０３，１９６３．
Ｄｏｒｏｎｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，３０５：３７８−３８７，２００３．
Ｄｕｂｏｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００８．
欧州特許出願公開第２４０３９５１Ａ２号
欧州特許出願公開第２７２４７２８Ａ１号
Ｆｒａｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ  ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７６：３３４８−３３５２，１９７９．
Ｆｕｊｉｗａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ，８６：１４５８−１４６２，１９９４．
Ｇｈｉｒｉｎｇｈｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｍｅｄ．Ｊ．，３８：１１１−１１６，２０１５．
Ｇｉｏｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．２０９（１）：１３−２０，２００６．
Ｇｌａｄｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖ  Ｃｅｌｌ．１６；１９（５）：７２７−３９，２０１０．
Ｇｒａｈａｍ  ａｎｄ  Ｖａｎ  Ｄｅｒ  Ｅｂ，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，５２：４５６−４６７，１９７３．
Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａ．１１７（４）：３０５−１７，２００８．
Ｇｕｒｎａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，４４（２）：１４３−１５１，１９９９．
Ｈａｒｌａｎｄ  ａｎｄ  Ｗｅｉｎｔｒａｕｂ，Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ，１０１：１０９４−１０９９，１９８５．
Ｈａｒｔｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６６：１８２１−１８２８，１９９４．
Ｈａｓｈｅｍｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ．，１８０（２）：２１１−２１，２００２．
Ｈｅｌｄｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．２１（２）：１６６−７６，２００９．
Ｈｕｒｗｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．９５（１７）：１００６７−１００７１，１９９８．
Ｈｙｎｅｓ  ａｎｄ  Ｆｅｒｒｅｔｔｉ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．，２３５：６０６−６１６，１９９４．
Ｉａｎｎｅｌｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２１０（１０）：２０５７−２０６９．
ＩＭＬＹＧＩＣ（商標）［添付文書］．Ａｍｇｅｎ，Ｉｎｃ．，Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ，ＣＡ；Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２０１５．
Ｉｎｏｕｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，１５７：１０５−１１２，２０００．
国際特許出願公開第１９９５００１９９４号。
国際特許出願公開第１９９８０４２７５２号。
国際特許出願公開第２００００３７５０４号。
国際特許出願公開第２００１０１４４２４号。
国際特許出願公開第２００４０５８８０１号。
国際公開第２００５／００３１６８号。
国際公開第２００５／００９４６５号。
国際公開第２００６／００３１７９号。
国際公開第ＰＣＴ／ＫＲ２０１１／００４６９３号
国際公開第２００６／０７２６２５号。
国際公開第２００６／０７２６２６号。
国際公開第２００７／０４２５７３号。
国際公開第２００８／０８４１０６号。
国際公開第２０１０／０６５９３９号。
国際公開第２０１２／０７１４１１号。
国際公開第２０１２／１６０４４８号。
国際公開第２０１２００９７０３号。
国際公開第１９９５０１１９８６号。
国際公開第２０１４／０４７３５０号
国際公開第２０１４／０４７３５０号。
国際公開第２０１４／１３８３１４号
国際公開第２０１４／１３８３１４号。
国際公開第２０１４１０００１４Ａ１号。
国際公開第２０１５／０１６７１８号。
国際公開第２０１５／０２７１６３号
国際公開第２０１５／０２７１６３号。
国際公開第２０１５／１５０８０９号。
国際公開第２０１６／００９０１７号
国際公開第２０１６／００９０１７号。
Ｊｉａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，９３：９１６０−９１６５．
Ｊｏｈａｎｎｅｓｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．１０２（２４）：８５７３−８，２００５．
Ｋａｅｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ，２（９）：６７３−８２，２００２．
Ｋａｗａｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．６（５）：６３７−４４，２００２．
Ｋａｗａｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．６（５）：６３７−６４４，２００２．
Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，９８（２０）：１４８２−１４９３，２００６．
Ｋｏｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：２２１  １−２２１５，１９９０．
Ｋｒｅｉｌ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．，４：１６６６−１６６９，１９９５．
Ｌｉ  Ｐｈａｓｅ  １  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ；１６  ３７６−３８２，２００９．
Ｌｉｃｈｔｅｎｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２３：７５−１１１，２００４．
Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７０：２４８６４，１９９５．
Ｌｕｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，１０：２９２−３０３，２００３．
Ｌｕｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，１０：２９２−３０３，２００３．
Ｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｅｌｌ，３３：１５３−１５９，１９８３．
Ｍａｒｋｏｗｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，６２：１  １２０−１  １２４，１９８８．
ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，６２：１９６３−１９７３，１９８８．
Ｍｅｌｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４８０：４８０−４８９，２０１１．
Ｍｅｌｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，４８０：４８０−４８９，２０１１．
Ｍｈａｓｈｉｌｋａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ７（４）：２７１−２８２，２００１．
Ｍｉｙａｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，１３：７５３−７６１，２００６．
Ｍｏｋｙｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５８：５３０１−５３０４，１９９８．
ＭｕｌｔｉＶｉｒ  Ｉｎｃ．，Ｆｏｒｍ  Ｓ−１  Ｒｅｇｉｓｔｒａｔｉｏｎ  Ｓｔａｔｅｍｅｎｔ，Ｕ．Ｓ．Ｓｅｃｕｒｉｔｉｅｓ  ａｎｄ  Ｅｘｃｈａｎｇｅ  Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ，２０１５
Ｍｕｚｙｃｚｋａ，Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，１５８：９７−１２９，１９９２．
Ｎｅｍｕｎａｉｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，１５（２４）：７７１９−２５，２００９．
Ｎｉｃｏｌａｓ  ａｎｄ  Ｒｕｂｅｎｓｔｅｉｎ，Ｉｎ：Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ  ｓｕｒｖｅｙ  ｏｆ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｖｅｃｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｕｓｅｓ，Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ  ａｎｄ  Ｄｅｎｈａｒｄｔ（ｅｄｓ．），Ｓｔｏｎｅｈａｍ：Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈ，ｐｐ．４９３−５１３，１９８８．
Ｎｉｃｏｌａｕ  ａｎｄ  Ｓｅｎｅ，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，７２１：１８５−１９０，１９８２．
Ｎｉｃｏｌａｕ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ，１４９：１５７−１７６，１９８７．
Ｎｉｓｈｉｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．，９（８）：８１８−８２８，２００４ｂ．
Ｎｉｓｈｉｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２３（４２）：７１２５−７１３１，２００４ａ．
Ｎｉｓｈｉｚａｋｉ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎ．Ｒｅｓ．，５：１０１５−１０２３，１９９９．
Ｏｈａｓｈｉ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．，Ｇｕｔ，４４：３６６−３７１，１９９９．
Ｐａｒｄｏｌｌ，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ，１２（４）：２５２−６４，２０１２．
Ｐａｒｄｏｌｌ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ，１２：２５２−２６４，２０１２．
Ｐｈｉｌｉｐ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６８：１６０８７，１９９３．
Ｐｉｅｒｃｅａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖ  Ｂｉｏｌ．，１６６：６５４−６６５，１９９４．
Ｑｉｎ，Ｘ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｌ  Ｒｅｐｒｏｄ．，５６：８００−１１，１９９７ａ．
Ｑｉｎ，Ｘ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｌ  Ｒｅｐｒｏｄ．，５６：８１２−２０，１９９７ｂ．
Ｒｈｏｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ，４（１）：４９−６０，２０１６．
Ｒｉｄｇｅｗａｙ，Ｉｎ：Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ  ｓｕｒｖｅｙ  ｏｆ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｖｅｃｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｕｓｅｓ，Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ  ＲＬ．Ｄｅｎｈａｒｄｔ  ＤＴ，ｅｄ．，Ｓｔｏｎｅｈａｍ：Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈ，ｐｐ．４６７−４９２，１９８８．
Ｒｉｐｐｅ  ｅｔ  ａｌ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ，１０：６８９−６９５，１９９０．
Ｒｏｃｃｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ．，１０；２６４（１）：４２−５５，２００１．
Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｍｅｄ．，１０（１９）：９０９−１５，２００４．
Ｓａｍｕｌｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ，ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３９４１−３９５０，１９９１．
Ｓａｍｕｌｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ  Ｖｉｒｏｌ，６３：３８２２−３８２８，１９８９．
Ｓｈｅｒｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １１４：８０６−１３，１９８４．
Ｓｏｂｏｌ  ＲＥ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈａｐｔｅｒ  １１：Ｔｐ５３  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，ＮＹ：Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ＋Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｍｅｄｉａ，２０１３．
Ｓｏｌｏｄｉｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３４：１３５３７，１９９５．
Ｓｐｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２：１６６５−１６７１，１９９６．
Ｓｔａｒｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．，２１（１）：２９−３３，２００９．
Ｓｗｉｓｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，９：９３−１０１，２００３．
Ｔａｔｅｂｅ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ  Ｏｎｃｏｌ．，１５：２２９−２３５，１９９９．
Ｔａｔｅｂｅ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ  Ｏｎｃｏｌ．，１５：２２９−２３５，１９９９．
Ｔｃｈｅｋｍｅｄｙｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２９（１２）：９９０−１００２，２０１５．
Ｔｅｍｉｎ，ｎ：Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ，Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ（ｅｄ．），Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，ｐｐ．１４９−１８８，１９８６．
Ｔｅｘｔｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，７１（１８）：５９９８−６００９，２０１１．
Ｔｈｉｅｒｒｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，９２（２１）：９７４２−６，１９９５．
Ｔｉｍｉｒｙａｓｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．３１：５３４，６，８−４０，２００１．
Ｔｏｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒａｐｙ，２（４）：３２４−３２９，２０００．
Ｔｏｌｌｅｆｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７０：２２９６−２３０６，１９９６．
Ｔｏｐ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．，１２４：１５５−１６０，１９７１．
Ｔｓｕｋａｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，９：２４３，１９９５．
米国特許出願公開第２０１１０００８３６９号。
米国特許出願公開第２０１４０２２０２１号。
米国特許出願公開第２０１４０２９４８９８号。
米国特許第４，７９７，３６８号。
米国特許第４，８３５，２５１号。
米国特許第５，０２３，３２１号。
米国特許第５，１３９，９４１号。
米国特許第５，３０２，５２３号。
米国特許第５，３８４，２５３号。
米国特許第５，４６４，７６５号。
米国特許第５，５８０，８５９号。
米国特許第５，５８９，４６６号。
米国特許第５，６５６，６１０号。
米国特許第５，７０２，９３２号。
米国特許第５，７３６，５２４号。
米国特許第５，７８０，４４８号。
米国特許第５，７８９，２１５号。
米国特許第５，８１１，３９５号。
米国特許第５，９２５，５６５号。
米国特許第５，９３５，８１９号。
米国特許第５，９４５，１００号。
米国特許第５，９８１，２７４号。
米国特許第５，９９４，１３６号。
米国特許第５，９９４，６２４号。
米国特許第６，０１３，５１６号。
米国特許第６，２０７，１５６号。
米国特許第７，２２３，５９３号。
米国特許第７，５３７，９２４号。
米国特許第８，０１７，１１４号。
米国特許第８，１１９，１２９号。
米国特許第８，３２９，８６７号。
米国特許第８，３５４，５０９号。
米国特許第９，７４６，４７１号。
米国特許出願公開第２０１７／００４４２２９号。
米国特許出願公開第２００６０２５７３６１号。
米国特許出願公開第２００７０１６０５７８号。
米国特許出願公開第２０１１／００３９７７８号。
米国特許出願公開第２０１５／０２０２２９０号
米国特許出願公開第２０１５／０２０２２９０号。
米国特許出願公開第２０１７０１８３４０３号。
米国特許第８，０６７，５６７号。
Ｖｉｎｃｅｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，７０（８）：３０５２−３０６１，２０１０．
Ｗａｋｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６５：５８８４−５８９０，２０００．
Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，２２（３）：３１−４０，２０１５．
Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．，４８（２）：２０３−１３，２０１３．
Ｘｕｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，４４５（７１２８）：６５６−６６０，２００７．
Ｙａｃｈｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ  Ｐａｔｈｏｌ  Ｌａｂ  Ｍｅｄ．１３３（３）：４１３−２２，２００９．
Ｙａｍａｓａｋｉ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔ  Ｒｅｓ．１１５：２０９−３９，２００３．
Ｙｏｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．，２０（９）：５３１−５３７，２０１３．
Ｙｕ  ａｎｄ  Ｆａｎｇ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ；７  ６５９−６７０，２００７．
Ｙｕｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ２３：６０９−６２２，２０１２．
Ｚｅｉｍｅｔ  ａｎｄ  Ｍａｒｔｈ，Ｔｈｅ  Ｌａｎｃｅｒ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，７：４１５−４２２，２００３．
Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ，２２：１７−２２，２０１５．
Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．，１：５−１３，１９９４．
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【国際調査報告】
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