(57)【要約】本開示は、癌、感染性疾患、自己免疫性疾患、炎症性疾患および免疫不全の少なくとも１つの症状、もしくはそれらと関連する状態を治療、予防または改善するための、ＮＫＧ２Ｄリガンドを標的とする養子Ｔ細胞療法の組成物の改善を提供する。本開示は、養子細胞療法に関する。より具体的には、本開示は、養子免疫療法中の細胞シグナル伝達の開始および下流反応の空間的ならびに時間的な制御の調節を目的とした、化学的に制御されるシグナル伝達分子、細胞およびそれらの使用方法の改善に関するものである。
2021506262.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
非天然細胞であって、
（ａ）ＦＫＢＰ−ラパマイシン結合（ＦＲＢ）多量体化ドメインポリペプチドもしくはそのバリアント；ＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、もしくはａｍｎｉｏｎｌｅｓｓ（ＡＭＮ）膜貫通ドメイン；ＣＤ１３７共刺激性ドメイン；および／またはＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む第一のポリペプチド；ならびに
（ｂ）ＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片；ＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ）多量体化ドメインポリペプチドまたはそのバリアント；およびＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメインまたはａｍｎｉｏｎｌｅｓｓ（ＡＭＮ）膜貫通ドメインを含む第二のポリペプチド、を含み、
架橋因子は、前記非天然細胞表面上のポリペプチド複合体の形成を促進し、前記架橋因子は、前記第一および第二のポリペプチドの多量体化ドメインと関連付けられ、それらの間に配置される、前記非天然細胞。
【請求項２】
非天然細胞であって、
（ａ）ＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ）多量体化ドメインポリペプチドもしくはそのバリアント；ＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、もしくはａｍｎｉｏｎｌｅｓｓ（ＡＭＮ）膜貫通ドメイン；ＣＤ１３７共刺激性ドメイン；および／またはＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む第一のポリペプチド；ならびに
（ｂ）ＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片；ＦＫＢＰ−ラパマイシン結合（ＦＲＢ）多量体化ドメインポリペプチドまたはそのバリアント；およびＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメインまたはａｍｎｉｏｎｌｅｓｓ（ＡＭＮ）膜貫通ドメインを含む第二のポリペプチド、を含み、
架橋因子は、前記非天然細胞表面上のポリペプチド複合体の形成を促進し、前記架橋因子は、前記第一および第二のポリペプチドの多量体化ドメインと関連付けられ、それらの間に配置される、前記非天然細胞。
【請求項３】
前記細胞が、造血細胞である、請求項１または請求項２に記載の非天然細胞。
【請求項４】
前記細胞が、Ｔ細胞である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の非天然細胞。
【請求項５】
前記細胞が、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋細胞である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の非天然細胞。
【請求項６】
前記細胞が、免疫エフェクター細胞である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の非天然細胞。
【請求項７】
前記細胞が、細胞障害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、またはヘルパーＴ細胞である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の非天然細胞。
【請求項８】
前記細胞が、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞またはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の非天然細胞。
【請求項９】
前記細胞の源は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位の組織、腹水、胸水、脾臓組織または腫瘍である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の非天然細胞。
【請求項１０】
前記ＦＫＢＰ多量体化ドメインは、ＦＫＢＰ１２である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の非天然細胞。
【請求項１１】
前記ＦＲＢポリペプチドが、ＦＲＢ  Ｔ２０９８Ｌである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の非天然細胞。
【請求項１２】
前記架橋因子が、ＡＰ２１９６７、シロリムス、エベロリムス、ノボリムス、ピメクロリムス、リダフォロリムス、タクロリムス、テムシロリムス、ウミロリムス、およびゾタロリムスからなる群から選択される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の非天然細胞。
【請求項１３】
前記第一のポリペプチドは、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激性ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含有する、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の非天然細胞。
【請求項１４】
前記第二のポリペプチドは、ＣＤ４膜貫通ドメインを含有する、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の非天然細胞。
【請求項１５】
前記第二のポリペプチドは、共刺激性ドメインを含有する、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の非天然細胞。
【請求項１６】
前記第二のポリペプチドの前記共刺激性ドメインは、Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  １（ＴＬＲ１）、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ｃａｓｐａｓｅ  ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ  ｄｏｍａｉｎ  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １１（ＣＡＲＤ１１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ９４、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＮＡＸ−Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  １０（ＤＡＰ１０）、Ｌｉｎｋｅｒ  ｆｏｒ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔ−ｃｅｌｌｓ  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １（ＬＡＴ）、ＳＨ２  Ｄｏｍａｉｎ−Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｏｆ  ７６  ｋＤ（ＳＬＰ７６）、Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ａｄａｐｔｏｒ  １（ＴＲＡＴ１）、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＲＳ１４、ＴＮＦＲＳ１８、ＴＮＲＦＳ２５、およびｚｅｔａ  ｃｈａｉｎ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  ７０（ＺＡＰ７０）からなる群から選択される共刺激性分子から選択される、請求項１５に記載の非天然細胞。
【請求項１７】
前記第二のポリペプチドの前記共刺激性ドメインは、ＯＸ４０またはＴＮＦＲ２から単離された共刺激性ドメインである、請求項１５または請求項１６に記載の非天然細胞。
【請求項１８】
前記第一のポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の非天然細胞。
【請求項１９】
前記第二のポリペプチドは、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の非天然細胞。
【請求項２０】
前記第二のポリペプチドは、配列番号６または配列番号７に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の非天然細胞。
【請求項２１】
ポリペプチド複合体を含む非天然細胞であって、前記ポリペプチド複合体は、
（ａ）ＦＲＢ多量体化ドメインポリペプチドもしくはそのバリアント；ＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、もしくはａｍｎｉｏｎｌｅｓｓ（ＡＭＮ）膜貫通ドメイン；ＣＤ１３７共刺激性ドメイン；および／またはＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む第一のポリペプチド；ならびに
（ｂ）シグナルペプチド、ＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片；およびＦＫＢＰ多量体化ドメインポリペプチドまたはそのバリアントを含む第二のポリペプチドを含み、
架橋因子は、前記非天然細胞表面上の前記ポリペプチド複合体の形成を促進し、前記架橋因子は、前記第一および第二のポリペプチドの多量体化ドメインと関連付けられ、それらの間に配置される、前記非天然細胞。
【請求項２２】
ポリペプチド複合体を含む非天然細胞であって、前記ポリペプチド複合体は、
（ａ）ＦＫＢＰ多量体化ドメインポリペプチドもしくはそのバリアント；ＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、もしくはａｍｎｉｏｎｌｅｓｓ（ＡＭＮ）膜貫通ドメイン；ＣＤ１３７共刺激性ドメイン；および／またはＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む第一のポリペプチド；ならびに
（ｂ）シグナルペプチド、ＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片；およびＦＲＢ多量体化ドメインポリペプチドまたはそのバリアントを含む第二のポリペプチドを含み、
架橋因子は、前記非天然細胞表面上の前記ポリペプチド複合体の形成を促進し、前記架橋因子は、前記第一および第二のポリペプチドの多量体化ドメインと関連付けられ、それらの間に配置される、前記非天然細胞。
【請求項２３】
前記細胞が、造血細胞である、請求項２１または請求項２２に記載の非天然細胞。
【請求項２４】
前記細胞が、Ｔ細胞である、請求項２１〜２３のいずれか１項に記載の非天然細胞。
【請求項２５】
前記細胞が、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋細胞である、請求項２１〜２４のいずれか１項に記載の非天然細胞。
【請求項２６】
前記細胞が、免疫エフェクター細胞である、請求項２１〜２５のいずれか１項に記載の非天然細胞。
【請求項２７】
前記細胞が、細胞障害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、またはヘルパーＴ細胞である、請求項２１〜２６のいずれか１項に記載の非天然細胞。
【請求項２８】
前記細胞が、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞またはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞である、請求項２１〜２６のいずれか１項に記載の非天然細胞。
【請求項２９】
前記細胞の源は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位の組織、腹水、胸水、脾臓組織または腫瘍である、請求項２１〜２８のいずれか１項に記載の非天然細胞。
【請求項３０】
前記ＦＫＢＰ多量体化ドメインは、ＦＫＢＰ１２である、請求項２１〜２９のいずれか１項に記載の非天然細胞。
【請求項３１】
前記ＦＲＢポリペプチドが、ＦＲＢ  Ｔ２０９８Ｌである、請求項２１〜２９のいずれか１項に記載の非天然細胞。
【請求項３２】
前記架橋因子が、ＡＰ２１９６７、シロリムス、エベロリムス、ノボリムス、ピメクロリムス、リダフォロリムス、タクロリムス、テムシロリムス、ウミロリムス、およびゾタロリムスからなる群から選択される、請求項２１〜３１のいずれか１項に記載の非天然細胞。
【請求項３３】
前記第一のポリペプチドは、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激性ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含有する、請求項２１〜３２のいずれか１項に記載の非天然細胞。
【請求項３４】
前記ＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片が、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２１〜３３のいずれか１項に記載の非天然細胞。
【請求項３５】
融合ポリペプチドであって、
（ａ）ＦＲＢ多量体化ドメインポリペプチドもしくはそのバリアント；ＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、もしくはａｍｎｉｏｎｌｅｓｓ（ＡＭＮ）膜貫通ドメイン；ＣＤ１３７共刺激性ドメイン；および／またはＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む第一のポリペプチド；
（ｂ）ポリペプチド切断シグナル；ならびに
（ｃ）ＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片；ＦＫＢＰ多量体化ドメインポリペプチドまたはそのバリアント；およびＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメインまたはａｍｎｉｏｎｌｅｓｓ（ＡＭＮ）膜貫通ドメインを含む第二のポリペプチド、を含む、前記融合ポリペプチド。
【請求項３６】
融合ポリペプチドであって、
（ａ）ＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ）多量体化ドメインポリペプチドもしくはそのバリアント；ＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、もしくはａｍｎｉｏｎｌｅｓｓ（ＡＭＮ）膜貫通ドメイン；ＣＤ１３７共刺激性ドメイン；および／またはＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む第一のポリペプチド；
（ｂ）ポリペプチド切断シグナル；ならびに
（ｃ）ＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片；ＦＫＢＰ−ラパマイシン結合（ＦＲＢ）多量体化ドメインポリペプチドまたはそのバリアント；およびＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメインまたはａｍｎｉｏｎｌｅｓｓ（ＡＭＮ）膜貫通ドメインを含む第二のポリペプチド、を含む、前記融合ポリペプチド。
【請求項３７】
前記ＦＫＢＰ多量体化ドメインが、ＦＫＢＰ１２である、請求項３５または請求項３６に記載の融合ポリペプチド。
【請求項３８】
前記ＦＲＢポリペプチドが、ＦＲＢ  Ｔ２０９８Ｌである、請求項３５〜請求項３７のいずれか１項に記載の融合ポリペプチド。
【請求項３９】
前記第一のポリペプチドは、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激性ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含有する、請求項３５〜請求項３８のいずれか１項に記載の融合ポリペプチド。
【請求項４０】
前記第二のポリペプチドは、ＣＤ４膜貫通ドメインを含有する、請求項３５〜請求項３９のいずれか１項に記載の融合ポリペプチド。
【請求項４１】
前記第二のポリペプチドは、共刺激性ドメインを含有する、請求項３５〜４０のいずれか１項に記載の融合ポリペプチド。
【請求項４２】
前記第二のポリペプチドの前記共刺激性ドメインは、Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  １（ＴＬＲ１）、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ｃａｓｐａｓｅ  ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ  ｄｏｍａｉｎ  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １１（ＣＡＲＤ１１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ９４、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＮＡＸ−Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  １０（ＤＡＰ１０）、Ｌｉｎｋｅｒ  ｆｏｒ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔ−ｃｅｌｌｓ  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １（ＬＡＴ）、ＳＨ２  Ｄｏｍａｉｎ−Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｏｆ  ７６  ｋＤ（ＳＬＰ７６）、Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ａｄａｐｔｏｒ  １（ＴＲＡＴ１）、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＲＳ１４、ＴＮＦＲＳ１８、ＴＮＲＦＳ２５、およびｚｅｔａ  ｃｈａｉｎ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  ７０（ＺＡＰ７０）からなる群から選択される共刺激性分子から選択される、請求項４１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項４３】
前記第二のポリペプチドの前記共刺激性ドメインは、ＯＸ４０またはＴＮＦＲ２から単離された共刺激性ドメインである、請求項４１または請求項４２に記載の融合ポリペプチド。
【請求項４４】
前記第一のポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む、請求項３５に記載の融合ポリペプチド。
【請求項４５】
前記第二のポリペプチドは、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項３５に記載の融合ポリペプチド。
【請求項４６】
前記第二のポリペプチドは、配列番号６または配列番号７に記載のアミノ酸配列を含む、請求項３５に記載の融合ポリペプチド。
【請求項４７】
前記融合ポリペプチドは、配列番号５、８および１０のいずれか１つに記載の配列を含む、請求項３５に記載の融合ポリペプチド。
【請求項４８】
前記ポリペプチド切断シグナルは、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）（Ｆ２Ａ）ペプチド、ウマ鼻炎Ａウイルス（ＥＲＡＶ）（Ｅ２Ａ）ペプチド、Ｔｈｏｓｅａ  ａｓｉｇｎａウイルス（ＴａＶ）（Ｔ２Ａ）ペプチド、ブタテッショウウイルス−１（ＰＴＶ−１）（Ｐ２Ａ）ペプチド、タイロウイルス２Ａペプチド、および脳心筋炎ウイルス２Ａペプチドからなる群から選択されるウイルス自己切断ポリペプチドである、請求項３５〜４７のいずれか１項に記載の融合ポリペプチド。
【請求項４９】
前記多量体化ドメインは、前記第一のポリペプチドと前記第二のポリペプチドが発現されるとき、細胞外に局在する、請求項３５〜４８のいずれか１項に記載の融合ポリペプチド。
【請求項５０】
第二のウイルス自己切断ポリペプチドおよびキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をさらに含む、請求項３５〜４９のいずれか１項に記載の融合ポリペプチド。
【請求項５１】
前記ＣＡＲが、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＥＧＦＲおよびＥＧＦＲｖＩＩＩからなる群から選択される抗原に結合する結合ドメインを含む、請求項５０に記載の融合ポリペプチド。
【請求項５２】
融合ポリペプチドであって、
（ａ）ＦＲＢ多量体化ドメインポリペプチドもしくはそのバリアント；ＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、もしくはａｍｎｉｏｎｌｅｓｓ（ＡＭＮ）膜貫通ドメイン；ＣＤ１３７共刺激性ドメイン；および／またはＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む第一のポリペプチド；
（ｂ）ポリペプチド切断シグナル；ならびに
（ｃ）シグナルペプチド、ＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片；およびＦＫＢＰ多量体化ドメインポリペプチドまたはそのバリアントを含む第二のポリペプチドを含む、前記融合ポリペプチド。
【請求項５３】
融合ポリペプチドであって、
（ａ）ＦＫＢＰ多量体化ドメインポリペプチドもしくはそのバリアント；ＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、もしくはａｍｎｉｏｎｌｅｓｓ（ＡＭＮ）膜貫通ドメイン；ＣＤ１３７共刺激性ドメイン；および／またはＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む第一のポリペプチド；
（ｂ）ポリペプチド切断シグナル；ならびに
（ｃ）シグナルペプチド、ＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片；およびＦＲＢ多量体化ドメインポリペプチドまたはそのバリアントを含む第二のポリペプチドを含む、前記融合ポリペプチド。
【請求項５４】
前記ＦＫＢＰ多量体化ドメインが、ＦＫＢＰ１２である、請求項５２または請求項５３に記載の融合ポリペプチド。
【請求項５５】
前記ＦＲＢポリペプチドが、ＦＲＢ  Ｔ２０９８Ｌである、請求項５２〜請求項５４のいずれか１項に記載の融合ポリペプチド。
【請求項５６】
前記第一のポリペプチドは、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激性ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含有する、請求項５２〜請求項５５のいずれか１項に記載の融合ポリペプチド。
【請求項５７】
前記ＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片が、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項５２〜請求項５６のいずれか１項に記載の融合ポリペプチド。
【請求項５８】
前記ポリペプチド切断シグナルが、ウイルス自己切断ポリペプチドである、請求項５２〜５７のいずれか１項に記載の融合ポリペプチド。
【請求項５９】
前記ポリペプチド切断シグナルが、ウイルス自己切断２Ａポリペプチドである、請求項５２〜５８のいずれか１項に記載の融合ポリペプチド。
【請求項６０】
前記ポリペプチド切断シグナルは、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）（Ｆ２Ａ）ペプチド、ウマ鼻炎Ａウイルス（ＥＲＡＶ）（Ｅ２Ａ）ペプチド、Ｔｈｏｓｅａ  ａｓｉｇｎａウイルス（ＴａＶ）（Ｔ２Ａ）ペプチド、ブタテッショウウイルス−１（ＰＴＶ−１）（Ｐ２Ａ）ペプチド、タイロウイルス２Ａペプチド、および脳心筋炎ウイルス２Ａペプチドからなる群から選択されるウイルス自己切断ポリペプチドである、請求項５２〜５９のいずれか１項に記載の融合ポリペプチド。
【請求項６１】
前記多量体化ドメインは、前記第一のポリペプチドと前記第二のポリペプチドが発現されるとき、細胞外に局在する、請求項５２〜６０のいずれか１項に記載の融合ポリペプチド。
【請求項６２】
第二のウイルス自己切断ポリペプチドおよびキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をさらに含む、請求項５２〜６０のいずれか１項に記載の融合ポリペプチド。
【請求項６３】
前記ＣＡＲが、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＥＧＦＲおよびＥＧＦＲｖＩＩＩからなる群から選択される抗原に結合する結合ドメインを含む、請求項６２に記載の融合ポリペプチド。
【請求項６４】
ポリペプチド複合体であって、
（ａ）ＦＲＢ多量体化ドメインポリペプチドもしくはそのバリアント；ＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、もしくはａｍｎｉｏｎｌｅｓｓ（ＡＭＮ）膜貫通ドメイン；ＣＤ１３７共刺激性ドメイン；および／またはＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む第一のポリペプチド；
（ｂ）ＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片；ＦＫＢＰ多量体化ドメインポリペプチドまたはそのバリアント；およびＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメインまたはａｍｎｉｏｎｌｅｓｓ（ＡＭＮ）膜貫通ドメインを含む第二のポリペプチド；ならびに
（ｃ）前記第一および第二のポリペプチドの多量体化ドメインと関連付けられ、それらの間に配置される、架橋因子、を含む前記ポリペプチド複合体。
【請求項６５】
ポリペプチド複合体であって、
（ａ）ＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ）多量体化ドメインポリペプチドもしくはそのバリアント；ＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、もしくはａｍｎｉｏｎｌｅｓｓ（ＡＭＮ）膜貫通ドメイン；ＣＤ１３７共刺激性ドメイン；および／またはＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む第一のポリペプチド；
（ｂ）ＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片；ＦＫＢＰ−ラパマイシン結合（ＦＲＢ）多量体化ドメインポリペプチドまたはそのバリアント；およびＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメインまたはａｍｎｉｏｎｌｅｓｓ（ＡＭＮ）膜貫通ドメインを含む第二のポリペプチド；ならびに
（ｃ）前記第一および第二のポリペプチドの多量体化ドメインと関連付けられ、それらの間に配置される、架橋因子、を含む前記ポリペプチド複合体。
【請求項６６】
前記ＦＫＢＰ多量体化ドメインが、ＦＫＢＰ１２である、請求項６４または請求項６５に記載のポリペプチド複合体。
【請求項６７】
前記ＦＲＢポリペプチドが、ＦＲＢ  Ｔ２０９８Ｌである、請求項６４〜請求項６６のいずれか１項に記載のポリペプチド複合体。
【請求項６８】
前記第一のポリペプチドは、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激性ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含有する、請求項６４〜請求項６７のいずれか１項に記載のポリペプチド複合体。
【請求項６９】
前記第二のポリペプチドは、ＣＤ４膜貫通ドメインを含有する、請求項６４〜請求項６８のいずれか１項に記載のポリペプチド複合体。
【請求項７０】
前記第二のポリペプチドは、共刺激性ドメインを含有する、請求項６４〜６９のいずれか１項に記載のポリペプチド複合体。
【請求項７１】
前記第二のポリペプチドの前記共刺激性ドメインは、Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  １（ＴＬＲ１）、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ｃａｓｐａｓｅ  ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ  ｄｏｍａｉｎ  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １１（ＣＡＲＤ１１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ９４、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＮＡＸ−Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  １０（ＤＡＰ１０）、Ｌｉｎｋｅｒ  ｆｏｒ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔ−ｃｅｌｌｓ  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １（ＬＡＴ）、ＳＨ２  Ｄｏｍａｉｎ−Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｏｆ  ７６  ｋＤ（ＳＬＰ７６）、Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ａｄａｐｔｏｒ  １（ＴＲＡＴ１）、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＲＳ１４、ＴＮＦＲＳ１８、ＴＮＲＦＳ２５、およびｚｅｔａ  ｃｈａｉｎ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  ７０（ＺＡＰ７０）からなる群から選択される共刺激性分子から選択される、請求項６４に記載のポリペプチド複合体。
【請求項７２】
前記第二のポリペプチドの前記共刺激性ドメインは、ＯＸ４０またはＴＮＦＲ２から単離された共刺激性ドメインである、請求項７０または請求項７１に記載のポリペプチド複合体。
【請求項７３】
前記第一のポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む、請求項６４に記載のポリペプチド複合体。
【請求項７４】
前記第二のポリペプチドは、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項６４に記載のポリペプチド複合体。
【請求項７５】
前記第二のポリペプチドは、配列番号６または配列番号７に記載のアミノ酸配列を含む、請求項６４に記載のポリペプチド複合体。
【請求項７６】
前記架橋因子が、ＡＰ２１９６７、シロリムス、エベロリムス、ノボリムス、ピメクロリムス、リダフォロリムス、タクロリムス、テムシロリムス、ウミロリムス、およびゾタロリムスからなる群から選択される、請求項６４〜請求項７５のいずれか１項に記載のポリペプチド複合体。
【請求項７７】
前記多量体化ドメインは、前記第一のポリペプチドと前記第二のポリペプチドが発現されるとき、細胞外に局在する、請求項６４〜７６のいずれか１項に記載のポリペプチド複合体。
【請求項７８】
ポリペプチド複合体であって、
（ａ）ＦＲＢ多量体化ドメインポリペプチドもしくはそのバリアント；ＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、もしくはａｍｎｉｏｎｌｅｓｓ（ＡＭＮ）膜貫通ドメイン；ＣＤ１３７共刺激性ドメイン；および／またはＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む第一のポリペプチド；
（ｂ）シグナルペプチド、ＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片；およびＦＫＢＰ多量体化ドメインポリペプチドまたはそのバリアントを含む第二のポリペプチド；ならびに
（ｃ）前記第一および第二のポリペプチドの多量体化ドメインと関連付けられ、それらの間に配置される、架橋因子、を含む前記ポリペプチド複合体。
【請求項７９】
ポリペプチド複合体であって、
（ａ）ＦＫＢＰ多量体化ドメインポリペプチドもしくはそのバリアント；ＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、もしくはａｍｎｉｏｎｌｅｓｓ（ＡＭＮ）膜貫通ドメイン；ＣＤ１３７共刺激性ドメイン；および／またはＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む第一のポリペプチド；
（ｂ）シグナルペプチド、ＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片；およびＦＲＢ多量体化ドメインポリペプチドまたはそのバリアントを含む第二のポリペプチド；ならびに
（ｃ）前記第一および第二のポリペプチドの多量体化ドメインと関連付けられ、それらの間に配置される、架橋因子、を含む前記ポリペプチド複合体。
【請求項８０】
前記ＦＫＢＰ多量体化ドメインが、ＦＫＢＰ１２である、請求項７８または請求項７９に記載のポリペプチド複合体。
【請求項８１】
前記ＦＲＢポリペプチドが、ＦＲＢ  Ｔ２０９８Ｌである、請求項７８〜請求項８０のいずれか１項に記載のポリペプチド複合体。
【請求項８２】
前記第一のポリペプチドは、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激性ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含有する、請求項７８〜請求項８１のいずれか１項に記載のポリペプチド複合体。
【請求項８３】
前記架橋因子が、ＡＰ２１９６７、シロリムス、エベロリムス、ノボリムス、ピメクロリムス、リダフォロリムス、タクロリムス、テムシロリムス、ウミロリムス、およびゾタロリムスからなる群から選択される、請求項７８〜請求項８２のいずれか１項に記載のポリペプチド複合体。
【請求項８４】
前記多量体化ドメインは、前記第一のポリペプチドと前記第二のポリペプチドが発現されるとき、細胞外に局在する、請求項７８〜８３のいずれか１項に記載のポリペプチド複合体。
【請求項８５】
請求項１〜３４のいずれか１項に記載の第一または第二のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、または請求項３５〜６３のいずれか１項に記載の融合ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
【請求項８６】
請求項１〜３４のいずれか１項に記載の第一または第二のポリペプチドをコードするｃＤＮＡ、または請求項３５〜６３のいずれか１項に記載の融合ポリペプチドをコードするｃＤＮＡ。
【請求項８７】
請求項１〜３４のいずれか１項に記載の第一または第二のポリペプチドをコードするＲＮＡ、または請求項３５〜６３のいずれか１項に記載の融合ポリペプチドをコードするＲＮＡ。
【請求項８８】
請求項８５〜８７のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項８９】
請求項１〜３４のいずれか１項に記載の非天然細胞、請求項３５〜６３のいずれか１項に記載の融合ポリペプチド、請求項８１〜８３のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド、または請求項８４に記載のベクター、を含む組成物。
【請求項９０】
薬学的に許容可能な担体、および請求項１〜３５のいずれか１項に記載の非天然細胞、請求項３５〜５９のいずれか１項に記載の融合ポリペプチド、請求項８５〜８７のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド、または請求項８８に記載のベクター、を含む医薬組成物。
【請求項９１】
その必要のある対象を治療する方法であって、請求項９０に記載の組成物の有効量を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項９２】
癌、感染性疾患、自己免疫性疾患、炎症性疾患および免疫不全の少なくとも１つの症状、もしくはそれらと関連する状態を治療、予防または改善する方法であって、請求項９０に記載の組成物の有効量を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項９３】
固形癌を治療する方法であって、請求項９０に記載の組成物の有効量を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項９４】
前記固形癌は、肝癌、膵臓癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、精巣癌、膀胱癌、脳腫瘍、肉腫、頭頚部癌、骨癌、甲状腺癌、腎癌、または皮膚癌を含む、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
前記固形癌は、膵臓癌、肺癌または乳癌である、請求項９３または９４に記載の方法。
【請求項９６】
悪性血液疾患を治療する方法であって、請求項９０に記載の組成物の有効量を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項９７】
前記悪性血液疾患は、白血病、リンパ腫または多発性骨髄腫である、請求項９６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、米国特許法第１１９（ｅ）の定めのもと、２０１８年９月１３日に出願された米国仮特許出願第６２／７３０，９２６号明細書、および２０１７年１２月１４日に出願された米国仮特許出願第６２／５９８，９０２号明細書の利益を主張するものであり、それら各出願は、その全体で参照により本明細書に援用される。
【０００２】
配列表に関する声明
本出願に関する配列表は紙媒体の代わりにテキストフォーマットで提出され、本明細書に参照により援用される。配列表を含有するテキストファイルの名称は、ＢＬＢＤ＿０９１＿０２ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔである。このテキストファイルは５０ＫＢであり、２０１８年１２月１３日に作成された。そして本明細書の出願と同時にＥＦＳ−Ｗｅｂを介して電子的に提出される。
【０００３】
本開示は、養子細胞療法に関する。より具体的には、本開示は、養子免疫療法中の細胞シグナル伝達の開始および下流反応の空間的ならびに時間的な制御の調節を目的とした、化学的に制御されるシグナル伝達分子、細胞およびそれらの使用方法の改善に関するものである。
【背景技術】
【０００４】
世界中で、癌は、１９７５年〜２０００年の間に倍増した。世界で罹患率および死亡率の２番目の主因は癌であり、２０１２年にはおよそ１４１０万人が新たに発症し、８２０万人が癌関連で死亡している。最も多い癌は乳癌、肺および気管支の癌、前立腺癌、結腸および直腸の癌、膀胱癌、皮膚のメラノーマ、非ホジキンリンパ腫、甲状腺癌、腎臓および腎盂の癌、子宮内膜癌、白血病、ならびに膵臓癌である。今後２０年間で新たな癌の発症数は、２２００万に及ぶと予想されている。
【０００５】
養子細胞療法は、複雑な生物シグナルを送達して癌を治療する強力なパラダイムとして浮上した。低分子医薬や生物医薬とは対照的に、養子細胞療法は、無数の感覚性および反応性のプログラム、そしてさらに明確化された遺伝子制御メカニズムによって、固有の治療タスクを発揮する可能性を有している。そうした治療的価値を実現するために、細胞は、局所的な生理学的環境と関連する化学的および／または生物学的情報を理解し、統合する機構を備える必要がある。
【発明の概要】
【０００６】
概して本開示は部分的に、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ組成物、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、ならびにそれらの作製方法および使用方法に関する。
【０００７】
様々な実施形態では、本開示は部分的に、ＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ：ＦＫ５０６  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ）多量体化ドメインポリペプチドまたはそのバリアント、第一の膜貫通ドメイン、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含む第一のポリペプチドをコードする第一のポリヌクレオチド、ならびにＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片、ＦＫＢＰ−ラパマイシン結合（ＦＲＢ：ＦＫＢＰ−ｒａｐａｍｙｃｉｎ  ｂｉｎｄｉｎｇ）多量体化ドメインポリペプチドまたはそのバリアント、および第二の膜貫通ドメイン、および任意で共刺激性ドメインを含む第二のポリペプチドをコードする第二のポリヌクレオチド、を含む非天然細胞を予期するものであり、この場合において架橋因子は、当該非天然細胞の表面上でポリペプチド複合体の形成を促進し、当該架橋因子は、当該第一のポリペプチドと第二のポリペプチドの多量体化ドメインと関連付けられ、およびその間に配置される。
【０００８】
様々な実施形態では、本開示は部分的に、ＦＲＢ多量体化ドメインポリペプチドまたはそのバリアント、第一の膜貫通ドメイン、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含む第一のポリペプチドをコードする第一のポリヌクレオチド、ならびにＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片、ＦＫＢＰ多量体化ドメインポリペプチドまたはそのバリアント、および第二の膜貫通ドメイン、および任意で共刺激性ドメインを含む第二のポリペプチドをコードする第二のポリヌクレオチド、を含む非天然細胞を予期するものであり、この場合において架橋因子は、当該非天然細胞の表面上でポリペプチド複合体の形成を促進し、当該架橋因子は、当該第一のポリペプチドと第二のポリペプチドの多量体化ドメインと関連付けられ、およびその間に配置される。
【０００９】
特定の実施形態では、ＦＫＢＰ多量体化ドメインは、ＦＫＢＰ１２である。
【００１０】
さらなる実施形態では、ＦＲＢポリペプチドは、ＦＲＢ  Ｔ２０９８Ｌである。
【００１１】
追加的実施形態では、架橋因子は、以下からなる群から選択される：ＡＰ２１９６７、シロリムス（ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）、エベロリムス（ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ）、ノボリムス（ｎｏｖｏｌｉｍｕｓ）、ピメクロリムス（ｐｉｍｅｃｒｏｌｉｍｕｓ）、リダフォロリムス（ｒｉｄａｆｏｒｏｌｉｍｕｓ）、タクロリムス（ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ）、テムシロリムス（ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）、ウミロリムス（ｕｍｉｒｏｌｉｍｕｓ）、およびゾタロリムス（ｚｏｔａｒｏｌｉｍｕｓ）。
【００１２】
特定の実施形態では、第一のポリペプチドは、ＣＤ４膜貫通ドメインまたはＣＤ８α膜貫通ドメインを含有する。
【００１３】
特定の実施形態では、第一のポリペプチドは、ＣＤ８α膜貫通ドメインを含有する。
【００１４】
ある実施形態では、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインは、以下からなる群から選択される共刺激性分子から単離される：Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  １（ＴＬＲ１）、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ｃａｓｐａｓｅ  ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ  ｄｏｍａｉｎ  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １１（ＣＡＲＤ１１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ９４、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＮＡＸ−Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  １０（ＤＡＰ１０）、Ｌｉｎｋｅｒ  ｆｏｒ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔ−ｃｅｌｌｓ  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １（ＬＡＴ）、ＳＨ２  Ｄｏｍａｉｎ−Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｏｆ  ７６  ｋＤ（ＳＬＰ７６）、Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ａｄａｐｔｏｒ  １（ＴＲＡＴ１）、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １４（ＴＮＦＲＳ１４）、ＴＮＦ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １８（ＴＮＦＲＳ１８）、ＴＮＦ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  ２５（ＴＮＦＲＳ２５）、およびｚｅｔａ  ｃｈａｉｎ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  ７０（ＺＡＰ７０）。
【００１５】
特定の実施形態では、第一のポリペプチドは、ＣＤ１３７共刺激性ドメインを含有する。
【００１６】
特定の実施形態では、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインは、以下からなる群から単離される一次シグナル伝達ドメインである。ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄ。
特定の実施形態では、第一のポリペプチドは、ＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含有する。
【００１７】
好ましい実施形態では、第一のポリペプチドは、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激性ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含有する。
【００１８】
特定の実施形態では、第二の膜貫通ドメインは、以下からなる群から選択される：ＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ２７８膜貫通ドメイン、およびａｍｎｉｏｎｌｅｓｓ（ＡＭＮ）膜貫通ドメイン。
【００１９】
特定の実施形態では、第二のポリペプチドは、ＣＤ４膜貫通ドメインを含有する。
【００２０】
ある実施形態では、第二のポリペプチドの共刺激性ドメインは、以下からなる群から選択される共刺激性分子から選択される：Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  １（ＴＬＲ１）、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ｃａｓｐａｓｅ  ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ  ｄｏｍａｉｎ  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １１（ＣＡＲＤ１１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ９４、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＮＡＸ−Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  １０（ＤＡＰ１０）、Ｌｉｎｋｅｒ  ｆｏｒ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔ−ｃｅｌｌｓ  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １（ＬＡＴ）、ＳＨ２  Ｄｏｍａｉｎ−Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｏｆ  ７６  ｋＤ（ＳＬＰ７６）、Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ａｄａｐｔｏｒ  １（ＴＲＡＴ１）、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＲＳ１４、ＴＮＦＲＳ１８、ＴＮＦＲＳ２５、およびｚｅｔａ  ｃｈａｉｎ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  ７０（ＺＡＰ７０）。
【００２１】
一部の実施形態では、第二のポリペプチドの共刺激性ドメインは、ＯＸ４０またはＴＮＦＲ２から単離される共刺激性ドメインである。
【００２２】
特定の実施形態では、当該非天然細胞はさらに、操作された抗原受容体をコードするポリヌクレオチドを含有する。
【００２３】
ある実施形態では、当該操作された抗原受容体は、以下からなる群から選択される：キメラ抗原受容体（ＣＡＲ：ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）、操作されたＴＣＲ、またはゼータカイン（ｚｅｔａｋｉｎｅ）。
【００２４】
ある実施形態では、当該操作された抗原受容体は、以下からなる群から選択される抗原に結合するＣＡＲである。Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ：Ｂ  ｃｅｌｌ  ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  ａｎｔｉｇｅｎ）、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＥＧＦＲおよびＥＧＦＲｖＩＩＩ。
【００２５】
特定の実施形態では、当該非天然細胞はさらに、抗体またはその抗原結合断片、多量体化ドメイン、膜貫通ドメイン、および任意で共刺激性ドメインを含む第三のポリペプチドをコードする第三のポリヌクレオチドを含有し、この場合において当該共刺激性ドメインは、存在する場合には、第二のポリペプチドの共刺激性ドメインと同じであるか、または異なっている。
【００２６】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、以下からなる群から選択される抗原に結合する：Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ：Ｂ  ｃｅｌｌ  ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  ａｎｔｉｇｅｎ）、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＥＧＦＲおよびＥＧＦＲｖＩＩＩ。
【００２７】
特定の実施形態では、第三のポリペプチドは、ＦＫＢＰ多量体化ドメインを含有する。
【００２８】
特定の実施形態では、第三のポリペプチドは、ＦＫＢＰ１２多量体化ドメインを含有する。
【００２９】
ある実施形態では、第三のポリペプチドは、ＣＤ４膜貫通ドメインを含有する。
【００３０】
ある実施形態では、第三のポリペプチドの共刺激性ドメインは、以下からなる群から選択される共刺激性分子から選択される：Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  １（ＴＬＲ１）、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ｃａｓｐａｓｅ  ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ  ｄｏｍａｉｎ  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １１（ＣＡＲＤ１１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ９４、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＮＡＸ−Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  １０（ＤＡＰ１０）、Ｌｉｎｋｅｒ  ｆｏｒ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔ−ｃｅｌｌｓ  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １（ＬＡＴ）、ＳＨ２  Ｄｏｍａｉｎ−Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｏｆ  ７６  ｋＤ（ＳＬＰ７６）、Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ａｄａｐｔｏｒ  １（ＴＲＡＴ１）、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＲＳ１４、ＴＮＦＲＳ１８、ＴＮＦＲＳ２５、およびｚｅｔａ  ｃｈａｉｎ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  ７０（ＺＡＰ７０）。
【００３１】
様々な実施形態では、本開示は部分的に、ＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ）多量体化ドメインポリペプチドもしくはそのバリアント、ＣＤ４膜貫通ドメインもしくはＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激性ドメイン；および／またはＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む第一のポリペプチド；ならびにＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片、ＦＫＢＰ−ラパマイシン結合（ＦＲＢ）多量体化ドメインポリペプチドまたはそのバリアント；およびＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ２７８膜貫通ドメインまたはａｍｎｉｏｎｌｅｓｓ（ＡＭＮ）膜貫通ドメインを含む第二のポリペプチド、を含有する非天然細胞を予期するものであり、この場合において架橋因子は、当該非天然細胞の表面上でポリペプチド複合体の形成を促進し、当該架橋因子は、当該第一のポリペプチドと第二のポリペプチドの多量体化ドメインと関連付けられ、およびその間に配置される。
【００３２】
様々な実施形態では、本開示は部分的に、ＦＲＢ多量体化ドメインポリペプチドもしくはそのバリアント、ＣＤ４膜貫通ドメインもしくはＣＤ８α膜貫通ドメイン；ＣＤ１３７共刺激性ドメイン；および／またはＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む第一のポリペプチド；ならびにＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片、ＦＫＢＰ多量体化ドメインポリペプチドまたはそのバリアント；およびＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１７８膜貫通ドメインまたはａｍｎｉｏｎｌｅｓｓ（ＡＭＮ）膜貫通ドメインを含む第二のポリペプチド、を含有する非天然細胞を予期するものであり、この場合において架橋因子は、当該非天然細胞の表面上でポリペプチド複合体の形成を促進し、当該架橋因子は、当該第一のポリペプチドと第二のポリペプチドの多量体化ドメインと関連付けられ、およびその間に配置される。
【００３３】
特定の実施形態では、細胞は、造血細胞である。
【００３４】
一部の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞である。
【００３５】
ある実施形態では、細胞は、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、および／またはＣＤ８＋の細胞である。
【００３６】
特定の実施形態では、細胞は、免疫エフェクター細胞である。
【００３７】
さらなる実施形態では、細胞は、細胞障害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ：ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ：ｔｕｍｏｒ  ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ）またはヘルパーＴ細胞である。
【００３８】
ある実施形態では、細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞またはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞である。
【００３９】
追加的実施形態では、細胞の源は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位の組織、腹水、胸水、脾臓組織または腫瘍である。
【００４０】
特定の実施形態では、ＦＫＢＰ多量体化ドメインは、ＦＫＢＰ１２である。
【００４１】
一部の実施形態では、ＦＲＢポリペプチドは、ＦＲＢ  Ｔ２０９８Ｌである。
【００４２】
特定の実施形態では、架橋因子は、以下からなる群から選択される：ＡＰ２１９６７、シロリムス（ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）、エベロリムス（ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ）、ノボリムス（ｎｏｖｏｌｉｍｕｓ）、ピメクロリムス（ｐｉｍｅｃｒｏｌｉｍｕｓ）、リダフォロリムス（ｒｉｄａｆｏｒｏｌｉｍｕｓ）、タクロリムス（ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ）、テムシロリムス（ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）、ウミロリムス（ｕｍｉｒｏｌｉｍｕｓ）、およびゾタロリムス（ｚｏｔａｒｏｌｉｍｕｓ）。
【００４３】
ある実施形態では、第一のポリペプチドは、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激性ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含有する。
【００４４】
さらなる実施形態では、第二のポリペプチドは、ＣＤ４膜貫通ドメインを含有する。
【００４５】
特定の実施形態では、第二のポリペプチドは、共刺激性ドメインを含有する。
【００４６】
ある実施形態では、第二のポリペプチドの共刺激性ドメインは、以下からなる群から選択される共刺激性分子から選択される：Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  １（ＴＬＲ１）、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ｃａｓｐａｓｅ  ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ  ｄｏｍａｉｎ  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １１（ＣＡＲＤ１１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ９４、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＮＡＸ−Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  １０（ＤＡＰ１０）、Ｌｉｎｋｅｒ  ｆｏｒ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔ−ｃｅｌｌｓ  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １（ＬＡＴ）、ＳＨ２  Ｄｏｍａｉｎ−Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｏｆ  ７６  ｋＤ（ＳＬＰ７６）、Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ａｄａｐｔｏｒ  １（ＴＲＡＴ１）、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＲＳ１４、ＴＮＦＲＳ１８、ＴＮＦＲＳ２５、およびｚｅｔａ  ｃｈａｉｎ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  ７０（ＺＡＰ７０）。
【００４７】
一部の実施形態では、第二のポリペプチドの共刺激性ドメインは、ＯＸ４０またはＴＮＦＲ２から単離される共刺激性ドメインである。
【００４８】
特定の実施形態では、第一のポリペプチドは、配列番号１に記載されるアミノ酸配列を含有する。
【００４９】
特定の実施形態では、第二のポリペプチドは、配列番号１０に記載されるＮＧＫ２Ｄリガンド結合ドメインポリペプチド配列を含有する。
【００５０】
特定の実施形態では、第二のポリペプチドは、配列番号１１に記載されるＮＧＫ２Ｄリガンド結合ドメインポリペプチド配列を含有する。
【００５１】
特定の実施形態では、第二のポリペプチドは、配列番号６または配列番号７に記載されるアミノ酸配列を含有する。
【００５２】
特定の実施形態では、当該非天然細胞はさらに、操作された抗原受容体をコードするポリヌクレオチドを含有する。
【００５３】
ある実施形態では、当該操作された抗原受容体は、以下からなる群から選択される：キメラ抗原受容体（ＣＡＲ：ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）、操作されたＴＣＲ、またはゼータカイン（ｚｅｔａｋｉｎｅ）。
【００５４】
ある実施形態では、当該操作された抗原受容体は、以下からなる群から選択される抗原に結合するＣＡＲである。Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ：Ｂ  ｃｅｌｌ  ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  ａｎｔｉｇｅｎ）、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＥＧＦＲおよびＥＧＦＲｖＩＩＩ。
【００５５】
様々な実施形態では、本開示は部分的に、ＦＫＢＰ多量体化ドメインポリペプチドもしくはそのバリアント；ＣＤ４膜貫通ドメインもしくはＣＤ８α膜貫通ドメイン；ＣＤ１３７共刺激性ドメイン；および／またはＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む第一のポリペプチド、ならびにシグナルペプチド、ＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片；およびＦＲＢ多量体化ドメインポリペプチドまたはそのバリアントを含む第二のポリペプチド、を含有するポリペプチド複合体を含有する非天然細胞を予期するものであり、この場合において架橋因子は、当該非天然細胞の表面上でポリペプチド複合体の形成を促進し、当該架橋因子は、当該第一のポリペプチドと第二のポリペプチドの多量体化ドメインと関連付けられ、およびその間に配置される。
【００５６】
様々な実施形態では、本開示は部分的に、ＦＲＢ多量体化ドメインポリペプチドもしくはそのバリアント；ＣＤ４膜貫通ドメインもしくはＣＤ８α膜貫通ドメイン；ＣＤ１３７共刺激性ドメイン；および／またはＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む第一のポリペプチド；ならびにシグナルペプチド、ＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片；およびＦＫＢＰ多量体化ドメインポリペプチドまたはそのバリアントを含む第二のポリペプチド、を含有するポリペプチド複合体を含有する非天然細胞を予期するものであり、この場合において架橋因子は、当該非天然細胞の表面上でポリペプチド複合体の形成を促進し、当該架橋因子は、当該第一のポリペプチドと第二のポリペプチドの多量体化ドメインと関連付けられ、およびその間に配置される。
【００５７】
ある実施形態では、細胞は、造血細胞である。
【００５８】
一部の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞である。
【００５９】
特定の実施形態では、細胞は、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、および／またはＣＤ８＋の細胞である。
【００６０】
ある実施形態では、細胞は、免疫エフェクター細胞である。
【００６１】
特定の実施形態では、細胞は、細胞障害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）またはヘルパーＴ細胞である。
【００６２】
一部の実施形態では、細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞またはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞である。
【００６３】
さらなる実施形態では、細胞の源は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位の組織、腹水、胸水、脾臓組織または腫瘍である。
【００６４】
特定の実施形態では、ＦＫＢＰ多量体化ドメインは、ＦＫＢＰ１２である。
【００６５】
追加的実施形態では、ＦＲＢポリペプチドは、ＦＲＢ  Ｔ２０９８Ｌである。
【００６６】
追加的実施形態では、架橋因子は、以下からなる群から選択される：ＡＰ２１９６７、シロリムス（ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）、エベロリムス（ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ）、ノボリムス（ｎｏｖｏｌｉｍｕｓ）、ピメクロリムス（ｐｉｍｅｃｒｏｌｉｍｕｓ）、リダフォロリムス（ｒｉｄａｆｏｒｏｌｉｍｕｓ）、タクロリムス（ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ）、テムシロリムス（ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）、ウミロリムス（ｕｍｉｒｏｌｉｍｕｓ）、およびゾタロリムス（ｚｏｔａｒｏｌｉｍｕｓ）。
【００６７】
一部の実施形態では、第一のポリペプチドは、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激性ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含有する。
【００６８】
ある実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片は、配列番号１０または配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含有する。
【００６９】
さらなる実施形態では、多量体化ドメインは、第一のポリペプチドと第二のポリペプチドが発現されるとき細胞外に局在する。
【００７０】
特定の実施形態では、当該非天然細胞はさらに、操作された抗原受容体をコードするポリヌクレオチドを含有する。
【００７１】
ある実施形態では、当該操作された抗原受容体は、以下からなる群から選択される：キメラ抗原受容体（ＣＡＲ：ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）、操作されたＴＣＲ、またはゼータカイン（ｚｅｔａｋｉｎｅ）。
【００７２】
ある実施形態では、当該操作された抗原受容体は、以下からなる群から選択される抗原に結合するＣＡＲである。Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ：Ｂ  ｃｅｌｌ  ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  ａｎｔｉｇｅｎ）、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＥＧＦＲおよびＥＧＦＲｖＩＩＩ。
【００７３】
様々な実施形態では、本開示は部分的に、ＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ）多量体化ドメインポリペプチドまたはそのバリアント；第一の膜貫通ドメイン；１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメイン；ポリペプチド切断シグナルを含む第一のポリペプチド、ならびにＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片；ＦＫＢＰ−ラパマイシン結合（ＦＲＢ）多量体化ドメインポリペプチドまたはそのバリアント；および第二の膜貫通ドメインを含む第二のポリペプチド、を含有する融合ポリペプチドを予期するものであり、この場合において架橋因子は、当該非天然細胞の表面上でポリペプチド複合体の形成を促進し、当該架橋因子は、当該第一のポリペプチドと第二のポリペプチドの多量体化ドメインと関連付けられ、およびその間に配置される。
【００７４】
様々な実施形態では、本開示は部分的に、ＦＲＢ多量体化ドメインポリペプチドまたはそのバリアント；第一の膜貫通ドメイン；１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメイン；ポリペプチド切断シグナルを含む第一のポリペプチド、ならびにＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片；ＦＫＢＰ多量体化ドメインポリペプチドまたはそのバリアント；および第二の膜貫通ドメインを含む第二のポリペプチド、を含有する融合ポリペプチドを予期するものであり、この場合において架橋因子は、当該非天然細胞の表面上でポリペプチド複合体の形成を促進し、当該架橋因子は、当該第一のポリペプチドと第二のポリペプチドの多量体化ドメインと関連付けられ、およびその間に配置される。
【００７５】
特定の実施形態では、ＦＫＢＰ多量体化ドメインは、ＦＫＢＰ１２である。
【００７６】
さらなる実施形態では、ＦＲＢポリペプチドは、ＦＲＢ  Ｔ２０９８Ｌである。
【００７７】
特定の実施形態では、第一のポリペプチドは、ＣＤ４膜貫通ドメインまたはＣＤ８α膜貫通ドメインを含有する。
【００７８】
特定の実施形態では、第一のポリペプチドは、ＣＤ８α膜貫通ドメインを含有する。
【００７９】
ある実施形態では、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインは、以下からなる群から選択される共刺激性分子から単離される：Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  １（ＴＬＲ１）、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ｃａｓｐａｓｅ  ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ  ｄｏｍａｉｎ  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １１（ＣＡＲＤ１１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ９４、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＮＡＸ−Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  １０（ＤＡＰ１０）、Ｌｉｎｋｅｒ  ｆｏｒ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔ−ｃｅｌｌｓ  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １（ＬＡＴ）、ＳＨ２  Ｄｏｍａｉｎ−Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｏｆ  ７６  ｋＤ（ＳＬＰ７６）、Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ａｄａｐｔｏｒ  １（ＴＲＡＴ１）、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １４（ＴＮＦＲＳ１４）、ＴＮＦ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １８（ＴＮＦＲＳ１８）、ＴＮＦ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  ２５（ＴＮＦＲＳ２５）、およびｚｅｔａ  ｃｈａｉｎ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  ７０（ＺＡＰ７０）。
【００８０】
特定の実施形態では、第一のポリペプチドは、ＣＤ１３７共刺激性ドメインを含有する。
【００８１】
特定の実施形態では、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインは、以下からなる群から単離される一次シグナル伝達ドメインである。ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄ。
特定の実施形態では、第一のポリペプチドは、ＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含有する。
【００８２】
好ましい実施形態では、第一のポリペプチドは、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激性ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含有する。
【００８３】
特定の実施形態では、ポリペプチド切断シグナルは、ウイルス自己切断ポリペプチドである。
【００８４】
ある実施形態では、ポリペプチド切断シグナルは、ウイルス自己切断２Ａポリペプチドである。
【００８５】
ある実施形態では、ポリペプチド切断シグナルは、以下からなる群から選択されるウイルス自己切断ポリペプチドである：口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）（Ｆ２Ａ）ペプチド、ウマ鼻炎Ａウイルス（ＥＲＡＶ）（Ｅ２Ａ）ペプチド、Ｔｈｏｓｅａ  ａｓｉｇｎａウイルス（ＴａＶ）（Ｔ２Ａ）ペプチド、ブタテッショウウイルス−１（ＰＴＶ−１）（Ｐ２Ａ）ペプチド、タイロウイルス２Ａペプチド、および脳心筋炎ウイルス２Ａペプチド。
【００８６】
特定の実施形態では、第二の膜貫通ドメインは、以下からなる群から選択される：ＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ２７８膜貫通ドメイン、およびａｍｎｉｏｎｌｅｓｓ（ＡＭＮ）膜貫通ドメイン。
【００８７】
特定の実施形態では、第二のポリペプチドは、ＣＤ４膜貫通ドメインを含有する。
【００８８】
特定の実施形態では、第二のポリペプチドは、共刺激性ドメインを含有する。
【００８９】
ある実施形態では、第二のポリペプチドの共刺激性ドメインは、以下からなる群から選択される共刺激性分子から選択される：Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  １（ＴＬＲ１）、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ｃａｓｐａｓｅ  ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ  ｄｏｍａｉｎ  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １１（ＣＡＲＤ１１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ９４、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＮＡＸ−Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  １０（ＤＡＰ１０）、Ｌｉｎｋｅｒ  ｆｏｒ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔ−ｃｅｌｌｓ  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １（ＬＡＴ）、ＳＨ２  Ｄｏｍａｉｎ−Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｏｆ  ７６  ｋＤ（ＳＬＰ７６）、Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ａｄａｐｔｏｒ  １（ＴＲＡＴ１）、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＲＳ１４、ＴＮＦＲＳ１８、ＴＮＦＲＳ２５、およびｚｅｔａ  ｃｈａｉｎ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  ７０（ＺＡＰ７０）。
【００９０】
一部の実施形態では、第二のポリペプチドの共刺激性ドメインは、ＯＸ４０またはＴＮＦＲ２から単離される共刺激性ドメインである。
【００９１】
追加的実施形態では、架橋因子は、以下からなる群から選択される：ＡＰ２１９６７、シロリムス（ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）、エベロリムス（ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ）、ノボリムス（ｎｏｖｏｌｉｍｕｓ）、ピメクロリムス（ｐｉｍｅｃｒｏｌｉｍｕｓ）、リダフォロリムス（ｒｉｄａｆｏｒｏｌｉｍｕｓ）、タクロリムス（ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ）、テムシロリムス（ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）、ウミロリムス（ｕｍｉｒｏｌｉｍｕｓ）、およびゾタロリムス（ｚｏｔａｒｏｌｉｍｕｓ）。
【００９２】
様々な実施形態では、本開示は部分的に、ＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ）多量体化ドメインポリペプチドもしくはそのバリアント；ＣＤ４膜貫通ドメインもしくはＣＤ８α膜貫通ドメイン；ＣＤ１３７共刺激性ドメイン；および／またはＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメイン；ポリペプチド切断シグナルを含む第一のポリペプチド、ならびにＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片；ＦＫＢＰ−ラパマイシン結合（ＦＲＢ）多量体化ドメインポリペプチドまたはそのバリアント；およびＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ２７８膜貫通ドメインまたはａｍｎｉｏｎｌｅｓｓ（ＡＭＮ）膜貫通ドメインを含む第二のポリペプチド、を含有する融合ポリペプチドを予期するものである。
【００９３】
様々な実施形態では、本開示は部分的に、ＦＲＢ多量体化ドメインポリペプチドもしくはそのバリアント；ＣＤ４膜貫通ドメインもしくはＣＤ８α膜貫通ドメイン；ＣＤ１３７共刺激性ドメイン；および／またはＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメイン；ポリペプチド切断シグナルを含む第一のポリペプチド、ならびにＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片；ＦＫＢＰ多量体化ドメインポリペプチドまたはそのバリアント；およびＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ２７８膜貫通ドメインまたはａｍｎｉｏｎｌｅｓｓ（ＡＭＮ）膜貫通ドメインを含む第二のポリペプチド、を含有する融合ポリペプチドを予期するものである。
【００９４】
特定の実施形態では、ＦＫＢＰ多量体化ドメインは、ＦＫＢＰ１２である。
【００９５】
さらなる実施形態では、ＦＲＢポリペプチドは、ＦＲＢ  Ｔ２０９８Ｌである。
【００９６】
一部の実施形態では、第一のポリペプチドは、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激性ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含有する。
【００９７】
追加的実施形態では、第二のポリペプチドは、ＣＤ４膜貫通ドメインを含有する。
【００９８】
特定の実施形態では、第二のポリペプチドは、共刺激性ドメインを含有する。
【００９９】
ある実施形態では、第二のポリペプチドの共刺激性ドメインは、以下からなる群から選択される共刺激性分子から選択される：Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  １（ＴＬＲ１）、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ｃａｓｐａｓｅ  ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ  ｄｏｍａｉｎ  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １１（ＣＡＲＤ１１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ９４、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＮＡＸ−Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  １０（ＤＡＰ１０）、Ｌｉｎｋｅｒ  ｆｏｒ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔ−ｃｅｌｌｓ  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １（ＬＡＴ）、ＳＨ２  Ｄｏｍａｉｎ−Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｏｆ  ７６  ｋＤ（ＳＬＰ７６）、Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ａｄａｐｔｏｒ  １（ＴＲＡＴ１）、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＲＳ１４、ＴＮＦＲＳ１８、ＴＮＦＲＳ２５、およびｚｅｔａ  ｃｈａｉｎ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  ７０（ＺＡＰ７０）。
【０１００】
一部の実施形態では、第二のポリペプチドの共刺激性ドメインは、ＯＸ４０またはＴＮＦＲ２から単離される共刺激性ドメインである。
【０１０１】
特定の実施形態では、第一のポリペプチドは、配列番号１に記載されるアミノ酸配列を含有する。
【０１０２】
特定の実施形態では、第二のポリペプチドは、配列番号１０に記載されるＮＧＫ２Ｄリガンド結合ドメインポリペプチド配列を含有する。
【０１０３】
特定の実施形態では、第二のポリペプチドは、配列番号１１に記載されるＮＧＫ２Ｄリガンド結合ドメインポリペプチド配列を含有する。
【０１０４】
特定の実施形態では、第二のポリペプチドは、配列番号６または配列番号７に記載されるアミノ酸配列を含有する。
【０１０５】
ある実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号５、８および１０のいずれか１つに記載される配列を含有する。
【０１０６】
特定の実施形態では、ポリペプチド切断シグナルは、ウイルス自己切断ポリペプチドである。
【０１０７】
ある実施形態では、ポリペプチド切断シグナルは、ウイルス自己切断２Ａポリペプチドである。
【０１０８】
ある実施形態では、ポリペプチド切断シグナルは、以下からなる群から選択されるウイルス自己切断ポリペプチドである：口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）（Ｆ２Ａ）ペプチド、ウマ鼻炎Ａウイルス（ＥＲＡＶ）（Ｅ２Ａ）ペプチド、Ｔｈｏｓｅａ  ａｓｉｇｎａウイルス（ＴａＶ）（Ｔ２Ａ）ペプチド、ブタテッショウウイルス−１（ＰＴＶ−１）（Ｐ２Ａ）ペプチド、タイロウイルス２Ａペプチド、および脳心筋炎ウイルス２Ａペプチド。
【０１０９】
ある実施形態では、多量体化ドメインは、第一のポリペプチドと第二のポリペプチドが発現されるとき細胞外に局在する。
【０１１０】
追加的実施形態では、架橋因子は、以下からなる群から選択される：ＡＰ２１９６７、シロリムス（ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）、エベロリムス（ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ）、ノボリムス（ｎｏｖｏｌｉｍｕｓ）、ピメクロリムス（ｐｉｍｅｃｒｏｌｉｍｕｓ）、リダフォロリムス（ｒｉｄａｆｏｒｏｌｉｍｕｓ）、タクロリムス（ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ）、テムシロリムス（ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）、ウミロリムス（ｕｍｉｒｏｌｉｍｕｓ）、およびゾタロリムス（ｚｏｔａｒｏｌｉｍｕｓ）。
【０１１１】
様々な実施形態では、本開示は部分的に、ＦＫＢＰ多量体化ドメインポリペプチドもしくはそのバリアント；ＣＤ４膜貫通ドメインもしくはＣＤ８α膜貫通ドメイン；ＣＤ１３７共刺激性ドメイン；および／またはＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメイン；ポリペプチド切断シグナルを含む第一のポリペプチド；ならびにシグナルペプチド、ＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片；およびＦＲＢ多量体化ドメインポリペプチドまたはそのバリアントを含む第二のポリペプチド、を含有する融合ポリペプチドを予期するものである。
【０１１２】
様々な実施形態では、本開示は部分的に、ＦＲＢ多量体化ドメインポリペプチドもしくはそのバリアント；ＣＤ４膜貫通ドメインもしくはＣＤ８α膜貫通ドメイン；ＣＤ１３７共刺激性ドメイン；および／またはＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメイン；ポリペプチド切断シグナルを含む第一のポリペプチド、ならびにシグナルペプチド、ＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片；およびＦＫＢＰ多量体化ドメインポリペプチドまたはそのバリアントを含む第二のポリペプチド、を含有する融合ポリペプチドを予期するものである。
【０１１３】
追加的実施形態では、ＦＫＢＰ多量体化ドメインは、ＦＫＢＰ１２である。
【０１１４】
一部の実施形態では、ＦＲＢポリペプチドは、ＦＲＢ  Ｔ２０９８Ｌである。
【０１１５】
特定の実施形態では、第一のポリペプチドは、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激性ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含有する。
【０１１６】
さらなる実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片は、配列番号１０または配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含有する。
【０１１７】
ある実施形態では、ポリペプチド切断シグナルは、ウイルス自己切断ポリペプチドである。
【０１１８】
特定の実施形態では、ポリペプチド切断シグナルは、ウイルス自己切断２Ａポリペプチドである。
【０１１９】
さらなる実施形態では、ポリペプチド切断シグナルは、以下からなる群から選択されるウイルス自己切断ポリペプチドである：口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）（Ｆ２Ａ）ペプチド、ウマ鼻炎Ａウイルス（ＥＲＡＶ）（Ｅ２Ａ）ペプチド、Ｔｈｏｓｅａ  ａｓｉｇｎａウイルス（ＴａＶ）（Ｔ２Ａ）ペプチド、ブタテッショウウイルス−１（ＰＴＶ−１）（Ｐ２Ａ）ペプチド、タイロウイルス２Ａペプチド、および脳心筋炎ウイルス２Ａペプチド。
【０１２０】
一部の実施形態では、多量体化ドメインは、第一のポリペプチドと第二のポリペプチドが発現されるとき細胞外に局在する。
【０１２１】
追加的実施形態では、架橋因子は、以下からなる群から選択される：ＡＰ２１９６７、シロリムス（ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）、エベロリムス（ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ）、ノボリムス（ｎｏｖｏｌｉｍｕｓ）、ピメクロリムス（ｐｉｍｅｃｒｏｌｉｍｕｓ）、リダフォロリムス（ｒｉｄａｆｏｒｏｌｉｍｕｓ）、タクロリムス（ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ）、テムシロリムス（ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）、ウミロリムス（ｕｍｉｒｏｌｉｍｕｓ）、およびゾタロリムス（ｚｏｔａｒｏｌｉｍｕｓ）。
【０１２２】
様々な実施形態では、本開示は部分的に、ＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ）多量体化ドメインポリペプチドまたはそのバリアント；第一の膜貫通ドメイン；および１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含む第一のポリペプチド、ＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片；ＦＫＢＰ−ラパマイシン結合（ＦＲＢ）多量体化ドメインポリペプチドまたはそのバリアント；および第二の膜貫通ドメインを含む第二のポリペプチド、ならびに第一のポリペプチドと第二のポリペプチドの多量体化ドメインと関連付けられ、およびその間に配置される架橋因子、を含有するポリペプチド複合体を予期するものである。
【０１２３】
様々な実施形態では、本開示は部分的に、ＦＲＢ多量体化ドメインポリペプチドまたはそのバリアント；第一の膜貫通ドメイン；および１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含む第一のポリペプチド、ＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片；ＦＫＢＰ多量体化ドメインポリペプチドまたはそのバリアント；および第二の膜貫通を含む第二のポリペプチド、ならびに第一のポリペプチドと第二のポリペプチドの多量体化ドメインと関連付けられ、およびその間に配置される架橋因子、を含有するポリペプチド複合体を予期するものである。
【０１２４】
特定の実施形態では、ＦＫＢＰ多量体化ドメインは、ＦＫＢＰ１２である。
【０１２５】
さらなる実施形態では、ＦＲＢポリペプチドは、ＦＲＢ  Ｔ２０９８Ｌである。
【０１２６】
特定の実施形態では、第一のポリペプチドは、ＣＤ４膜貫通ドメインまたはＣＤ８α膜貫通ドメインを含有する。
【０１２７】
特定の実施形態では、第一のポリペプチドは、ＣＤ８α膜貫通ドメインを含有する。
【０１２８】
ある実施形態では、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインは、以下からなる群から選択される共刺激性分子から単離される：Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  １（ＴＬＲ１）、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ｃａｓｐａｓｅ  ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ  ｄｏｍａｉｎ  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １１（ＣＡＲＤ１１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ９４、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＮＡＸ−Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  １０（ＤＡＰ１０）、Ｌｉｎｋｅｒ  ｆｏｒ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔ−ｃｅｌｌｓ  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １（ＬＡＴ）、ＳＨ２  Ｄｏｍａｉｎ−Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｏｆ  ７６  ｋＤ（ＳＬＰ７６）、Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ａｄａｐｔｏｒ  １（ＴＲＡＴ１）、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １４（ＴＮＦＲＳ１４）、ＴＮＦ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １８（ＴＮＦＲＳ１８）、ＴＮＦ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  ２５（ＴＮＦＲＳ２５）、およびｚｅｔａ  ｃｈａｉｎ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  ７０（ＺＡＰ７０）。
【０１２９】
特定の実施形態では、第一のポリペプチドは、ＣＤ１３７共刺激性ドメインを含有する。
【０１３０】
特定の実施形態では、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインは、以下からなる群から単離される一次シグナル伝達ドメインである。ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄ。
特定の実施形態では、第一のポリペプチドは、ＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含有する。
【０１３１】
好ましい実施形態では、第一のポリペプチドは、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激性ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含有する。
【０１３２】
特定の実施形態では、ポリペプチド切断シグナルは、ウイルス自己切断ポリペプチドである。
【０１３３】
ある実施形態では、ポリペプチド切断シグナルは、ウイルス自己切断２Ａポリペプチドである。
【０１３４】
ある実施形態では、ポリペプチド切断シグナルは、以下からなる群から選択されるウイルス自己切断ポリペプチドである：口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）（Ｆ２Ａ）ペプチド、ウマ鼻炎Ａウイルス（ＥＲＡＶ）（Ｅ２Ａ）ペプチド、Ｔｈｏｓｅａ  ａｓｉｇｎａウイルス（ＴａＶ）（Ｔ２Ａ）ペプチド、ブタテッショウウイルス−１（ＰＴＶ−１）（Ｐ２Ａ）ペプチド、タイロウイルス２Ａペプチド、および脳心筋炎ウイルス２Ａペプチド。
【０１３５】
特定の実施形態では、第二の膜貫通ドメインは、以下からなる群から選択される：ＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ２７８膜貫通ドメイン、およびａｍｎｉｏｎｌｅｓｓ（ＡＭＮ）膜貫通ドメイン。
【０１３６】
特定の実施形態では、第二のポリペプチドは、ＣＤ４膜貫通ドメインを含有する。
【０１３７】
特定の実施形態では、第二のポリペプチドは、共刺激性ドメインを含有する。
【０１３８】
ある実施形態では、第二のポリペプチドの共刺激性ドメインは、以下からなる群から選択される共刺激性分子から選択される：Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  １（ＴＬＲ１）、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ｃａｓｐａｓｅ  ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ  ｄｏｍａｉｎ  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １１（ＣＡＲＤ１１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ９４、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＮＡＸ−Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  １０（ＤＡＰ１０）、Ｌｉｎｋｅｒ  ｆｏｒ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔ−ｃｅｌｌｓ  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １（ＬＡＴ）、ＳＨ２  Ｄｏｍａｉｎ−Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｏｆ  ７６  ｋＤ（ＳＬＰ７６）、Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ａｄａｐｔｏｒ  １（ＴＲＡＴ１）、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＲＳ１４、ＴＮＦＲＳ１８、ＴＮＦＲＳ２５、およびｚｅｔａ  ｃｈａｉｎ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  ７０（ＺＡＰ７０）。
【０１３９】
一部の実施形態では、第二のポリペプチドの共刺激性ドメインは、ＯＸ４０またはＴＮＦＲ２から単離される共刺激性ドメインである。
【０１４０】
追加的実施形態では、架橋因子は、以下からなる群から選択される：ＡＰ２１９６７、シロリムス（ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）、エベロリムス（ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ）、ノボリムス（ｎｏｖｏｌｉｍｕｓ）、ピメクロリムス（ｐｉｍｅｃｒｏｌｉｍｕｓ）、リダフォロリムス（ｒｉｄａｆｏｒｏｌｉｍｕｓ）、タクロリムス（ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ）、テムシロリムス（ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）、ウミロリムス（ｕｍｉｒｏｌｉｍｕｓ）、およびゾタロリムス（ｚｏｔａｒｏｌｉｍｕｓ）。
【０１４１】
様々な実施形態では、本開示は部分的に、ＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ）多量体化ドメインポリペプチドもしくはそのバリアント；ＣＤ４膜貫通ドメインもしくはＣＤ８α膜貫通ドメイン；ＣＤ１３７共刺激性ドメイン；および／またはＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む第一のポリペプチド、ＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片；ＦＫＢＰ−ラパマイシン結合（ＦＲＢ）多量体化ドメインポリペプチドまたはそのバリアント；およびＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ２７８膜貫通ドメインまたはａｍｎｉｏｎｌｅｓｓ（ＡＭＮ）膜貫通ドメインを含む第二のポリペプチド、ならびに第一のポリペプチドと第二のポリペプチドの多量体化ドメインと関連付けられ、およびその間に配置される架橋因子、を含有するポリペプチド複合体を予期するものである。
【０１４２】
様々な実施形態では、本開示は部分的に、ＦＲＢ多量体化ドメインポリペプチドもしくはそのバリアント；ＣＤ４膜貫通ドメインもしくはＣＤ８α膜貫通ドメイン；ＣＤ１３７共刺激性ドメイン；および／またはＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む第一のポリペプチド、ＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片；ＦＫＢＰ多量体化ドメインポリペプチドまたはそのバリアント；およびＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ２７８膜貫通ドメインまたはａｍｎｉｏｎｌｅｓｓ（ＡＭＮ）膜貫通ドメインを含む第二のポリペプチド、ならびに第一のポリペプチドと第二のポリペプチドの多量体化ドメインと関連付けられ、およびその間に配置される架橋因子、を含有するポリペプチド複合体を予期するものである。
【０１４３】
さらなる実施形態では、ＦＫＢＰ多量体化ドメインは、ＦＫＢＰ１２である。
【０１４４】
特定の実施形態では、ＦＲＢポリペプチドは、ＦＲＢ  Ｔ２０９８Ｌである。
【０１４５】
特定の実施形態では、第一のポリペプチドは、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激性ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含有する。
【０１４６】
ある実施形態では、第二のポリペプチドは、ＣＤ４膜貫通ドメインを含有する。
【０１４７】
特定の実施形態では、第二のポリペプチドは、共刺激性ドメインを含有する。
【０１４８】
ある実施形態では、第二のポリペプチドの共刺激性ドメインは、以下からなる群から選択される共刺激性分子から選択される：Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  １（ＴＬＲ１）、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ｃａｓｐａｓｅ  ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ  ｄｏｍａｉｎ  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １１（ＣＡＲＤ１１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ９４、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＮＡＸ−Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  １０（ＤＡＰ１０）、Ｌｉｎｋｅｒ  ｆｏｒ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔ−ｃｅｌｌｓ  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １（ＬＡＴ）、ＳＨ２  Ｄｏｍａｉｎ−Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｏｆ  ７６  ｋＤ（ＳＬＰ７６）、Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ａｄａｐｔｏｒ  １（ＴＲＡＴ１）、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＲＳ１４、ＴＮＦＲＳ１８、ＴＮＦＲＳ２５、およびｚｅｔａ  ｃｈａｉｎ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  ７０（ＺＡＰ７０）。
【０１４９】
一部の実施形態では、第二のポリペプチドの共刺激性ドメインは、ＯＸ４０またはＴＮＦＲ２から単離される共刺激性ドメインである。
【０１５０】
特定の実施形態では、第一のポリペプチドは、配列番号１に記載されるアミノ酸配列を含有する。
【０１５１】
特定の実施形態では、第二のポリペプチドは、配列番号１０に記載されるＮＧＫ２Ｄリガンド結合ドメインポリペプチド配列を含有する。
【０１５２】
特定の実施形態では、第二のポリペプチドは、配列番号１１に記載されるＮＧＫ２Ｄリガンド結合ドメインポリペプチド配列を含有する。
【０１５３】
特定の実施形態では、第二のポリペプチドは、配列番号６または配列番号７に記載されるアミノ酸配列を含有する。
【０１５４】
さらなる実施形態では、架橋因子は、以下からなる群から選択される：ＡＰ２１９６７、シロリムス（ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）、エベロリムス（ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ）、ノボリムス（ｎｏｖｏｌｉｍｕｓ）、ピメクロリムス（ｐｉｍｅｃｒｏｌｉｍｕｓ）、リダフォロリムス（ｒｉｄａｆｏｒｏｌｉｍｕｓ）、タクロリムス（ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ）、テムシロリムス（ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）、ウミロリムス（ｕｍｉｒｏｌｉｍｕｓ）、およびゾタロリムス（ｚｏｔａｒｏｌｉｍｕｓ）。
【０１５５】
ある実施形態では、多量体化ドメインは、第一のポリペプチドと第二のポリペプチドが発現されるとき細胞外に局在する。
【０１５６】
様々な実施形態では、本開示は部分的に、ＦＫＢＰ多量体化ドメインポリペプチドもしくはそのバリアント；ＣＤ４膜貫通ドメインもしくはＣＤ８α膜貫通ドメイン；ＣＤ１３７共刺激性ドメイン；および／またはＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む第一のポリペプチド、シグナルペプチド、ＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片；およびＦＲＢ多量体化ドメインポリペプチドまたはそのバリアントを含む第二のポリペプチド、ならびに第一のポリペプチドと第二のポリペプチドの多量体化ドメインと関連付けられ、およびその間に配置される架橋因子、を含有するポリペプチド複合体を予期するものである。
【０１５７】
様々な実施形態では、本開示は部分的に、ＦＲＢ多量体化ドメインポリペプチドもしくはそのバリアント；ＣＤ４膜貫通ドメインもしくはＣＤ８α膜貫通ドメイン；ＣＤ１３７共刺激性ドメイン；および／またはＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む第一のポリペプチド、シグナルペプチド、ＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片；およびＦＫＢＰ多量体化ドメインポリペプチドまたはそのバリアントを含む第二のポリペプチド、ならびに第一のポリペプチドと第二のポリペプチドの多量体化ドメインと関連付けられ、およびその間に配置される架橋因子、を含有するポリペプチド複合体を予期するものである。
【０１５８】
特定の実施形態では、ＦＫＢＰ多量体化ドメインは、ＦＫＢＰ１２である。
【０１５９】
さらなる実施形態では、ＦＲＢポリペプチドは、ＦＲＢ  Ｔ２０９８Ｌである。
【０１６０】
一部の実施形態では、第一のポリペプチドは、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激性ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含有する。
【０１６１】
特定の実施形態では、架橋因子は、以下からなる群から選択される：ＡＰ２１９６７、シロリムス（ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）、エベロリムス（ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ）、ノボリムス（ｎｏｖｏｌｉｍｕｓ）、ピメクロリムス（ｐｉｍｅｃｒｏｌｉｍｕｓ）、リダフォロリムス（ｒｉｄａｆｏｒｏｌｉｍｕｓ）、タクロリムス（ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ）、テムシロリムス（ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）、ウミロリムス（ｕｍｉｒｏｌｉｍｕｓ）、およびゾタロリムス（ｚｏｔａｒｏｌｉｍｕｓ）。
【０１６２】
ある実施形態では、多量体化ドメインは、第一のポリペプチドと第二のポリペプチドが発現されるとき細胞外に局在する。
【０１６３】
ある実施形態では、本明細書において予期される第一のポリペプチドまたは第二のポリペプチドまたは融合ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが提供される。
【０１６４】
特定の実施形態では、本明細書において予期される第一のポリペプチドまたは第二のポリペプチドまたは融合ポリペプチドをコードするｃＤＮＡが提供される。
【０１６５】
特定の実施形態では、本明細書において予期される第一のポリペプチドまたは第二のポリペプチドまたは融合ポリペプチドをコードするＲＮＡが提供される。
【０１６６】
特定の実施形態では、本明細書に予期されるポリヌクレオチドを含有するベクターが提供される。
【０１６７】
一部の実施形態では、本明細書に予期される非天然細胞、融合ポリペプチド、ポリヌクレオチド、またはベクターを含有する組成物が提供される。
【０１６８】
さらなる実施形態では、薬学的に許容可能な担体と、本明細書に予期される非天然細胞、融合ポリペプチド、ポリヌクレオチド、またはベクターを含有する医薬組成物が提供される。
【０１６９】
特定の実施形態では、その必要のある対象を治療する方法であって、本明細書に予期される組成物の有効量を当該対象に投与する工程を含む方法が提供される。
【０１７０】
さらなる実施形態では、癌、感染性疾患、自己免疫性疾患、炎症性疾患および免疫不全の少なくとも１つの症状、もしくはそれらと関連する状態を治療、予防または改善する方法であって、本明細書に予期される組成物の有効量を対象に投与する工程を含む方法が提供される。
【０１７１】
ある実施形態では、固形癌を治療する方法であって、本明細書に予期される組成物の有効量を対象に投与する工程を含む方法が提供される。
【０１７２】
一部の実施形態では、固形癌は、肝癌、膵臓癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、精巣癌、膀胱癌、脳腫瘍、肉腫、頭頚部癌、骨癌、甲状腺癌、腎癌、または皮膚癌を含む。
【０１７３】
特定の実施形態では、固形癌は、膵臓癌、肺癌または乳癌である。
【０１７４】
ある実施形態では、悪性血液疾患を治療する方法であって、本明細書に予期される組成物の有効量を対象に投与する工程を含む方法が提供される。
【０１７５】
特定の実施形態では、悪性血液疾患は、白血病、リンパ腫または多発性骨髄腫である。
【図面の簡単な説明】
【０１７６】
【図１】図１は、代表的なＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣの図を示す。
【図２】図２は、ＢＣＭＡおよびＧＦＰを発現するよう操作されたＫ５６２細胞（Ｋ５６２−ＢＣＭＡ−ＧＦＰ細胞）上の様々なＮＫＧ２Ｄリガンドの発現を示す。
【図３】図３は、細胞障害性アッセイの結果を示す。ドナーＰＢＭＣ細胞は、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣまたは抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードするＬＶＶを形質導入され、１ｎＭのラパマイシンの存在下／非存在下でＫ５６２−ＢＣＭＡ−ＧＦＰ細胞とともに、エフェクターと標的の比率（Ｅ：Ｔ）が５：１で培養された。
【図４】図４は、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ、ＮＫＧ２Ｄ  ＣＡＲまたは抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲとともに、１：１のＥ：Ｔ比で、ラパマイシンの存在下または非存在下で２４時間、培養されたＫ５６２−ＢＣＭＡ−ＧＦＰ細胞からのＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−１７α、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４およびＩＬ−２の発現を示す。
【図５】図５は、ＨＣＴ１１６細胞上の様々なＮＫＧ２ＤリガンドおよびＥＦＧＲの発現を示す。
【図６】図６は、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ、または抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲとともに、１：１のＥ：Ｔ比で、ラパマイシンもしくはＮＫＧ２Ｄブロッキング抗体の存在下または非存在下で２４時間、培養されたＨＣＴ１１６細胞からのＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−１７α、およびＧＭ−ＣＳＦの発現を示す。
【図７】図７は、Ｎａｌｍ−６細胞、ＲＰＭＩ−８２２６細胞およびＡ５４９細胞上の様々なＮＫＧ２Ｄリガンドの発現を示す。
【図８】図８は、細胞障害性アッセイの結果を示す。ドナーＰＢＭＣは、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣまたは抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲをコードするＬＶＶを形質導入され、１ｎＭのラパマイシンの存在下／非存在下でＡ５４９細胞とともに、１０：１のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比で培養された。
【図９】ラパマイシンの存在下または非存在下でＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ、または抗ＣＤ１９  ＣＡＲ（Ｎａｌｍ−６細胞）、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（ＲＰＭＩ−８２２６細胞）、もしくは抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ（Ａ５４９細胞）とともに１：１のＥ：Ｔ比で２４時間培養されたＮａｌｍ−６細胞、ＲＰＭＩ−８２２６細胞およびＡ５４９細胞からのＩＦＮγの発現を示す。
【図１０】図１０Ａは、ｃｈＮＫＧ２Ｄ  ＣＡＲの図を示す。  図１０Ｂは、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞が、形質導入されていない対照Ｔ細胞（ＵＴＤ）と同じＣＤ４：ＣＤ８比率を維持したことを示す。
【図１１】図１１Ａは、細胞障害性アッセイの結果を示す。ドナーＰＢＭＣは、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ、抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ、またはｃｈＮＫＧ２Ｄ  ＣＡＲをコードするＬＶＶを形質導入され、ラパマイシンの存在下または非存在下でＥＧＦＲ＋ＮＫＧ２ＤＬ＋Ａ５４９細胞とともに培養された。  図１１Ｂは、ＡＰ２１９６７の存在下または非存在下で、非形質導入対照Ｔ細胞、抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ  Ｔ細胞、ｃｈＮＫＧ２Ｄ  ＣＡＲ  Ｔ細胞、またはＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞とともに、１：１のＥ：Ｔ比率で２４時間、共培養されたＥＧＦＲ＋ＮＫＧ２ＤＬ＋  Ａ５４９細胞の培養上清からのＩＦＮγの産生を示す。
【図１２Ａ−Ｂ】図１２Ａは、ＣＤ４膜貫通ドメインを含有する結合構成要素を含むＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣをコードする、またはＡＭＮ膜貫通ドメインを含有する結合構成要素を含むＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣをコードするＬＶＶで形質導入されたＴ細胞と比較された、非形質導入Ｔ細胞の増殖速度を示す。  図１２Ｂは、ＣＤ４膜貫通ドメインを含有する結合構成要素を含むＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣをコードする、またはＡＭＮ膜貫通ドメインを含有する結合構成要素を含むＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣをコードするＬＶＶで形質導入されたＴ細胞と非形質導入Ｔ細胞のＣＤ４＋ゲーティング中のＮＫＧ２Ｄ結合ドメイン発現を示す。
【図１２Ｃ】図１２Ｃは、非形質導入対照Ｔ細胞、およびＣＤ４膜貫通ドメインを含有する結合構成要素を含むＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣをコードする、またはＡＭＮ膜貫通ドメインを含有する結合構成要素を含むＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣをコードするＬＶＶで形質導入されたＴ細胞とともに、１：１のＥ：Ｔ比率で、１ｎＭのラパマイシンの存在下または非存在下で２４時間共培養されたＥＧＦＲ＋ＮＫＧ２ＤＬ＋  Ａ５４９細胞の培養上清からのＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−１７Ａの産生を示す。
【図１３】図１３Ａは、  ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ構築物の図、ＮＫＧ２Ｄ膜貫通ドメインを含有するＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素を含むＢＷ２７６３構築物の図、そして別の構造でＤＡＲＩＣシグナル伝達および結合の構成要素を含むＢＷ２７６４構築物の図を示す。  図１３Ｂは、非形質導入Ｔ細胞、およびＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ、ＢＷ２７６３またはＢＷ２７６４をコードするＬＶＶで形質導入されたＴ細胞のＣＤ４＋ゲート中のＮＫＧ２Ｄ結合ドメイン発現を示す。  図１３Ｃは、非形質導入対照Ｔ細胞、およびＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ、ＢＷ２７６３またはＢＷ２７６４をコードするＬＶＶで形質導入されたＴ細胞とともに、１：１のＥ：Ｔ比率で２４時間、ビヒクルまたはラパマイシン中で共培養されたＥＧＦＲ＋ＮＫＧ２ＤＬ＋  Ａ５４９細胞の培養上清からのＩＦＮγ産生を示す。
【図１４Ａ−Ｃ】図１４Ａは、共刺激性ドメインを有するＤＡＲＩＣ結合構成要素を含むＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ構造の図を示す。  図１４Ｂは、非形質導入Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＴＮＦＲ２  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＯＸ４０  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＣＤ２７  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＨＶＥＭ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＤＲ３  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、およびＮＫＧ２Ｄ．ＧＩＴＲ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞のＣＤ４＋ゲート中のＮＫＧ２Ｄ結合ドメインの発現を示す。  図１４Ｃは、非形質導入Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＴＮＦＲ２  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＯＸ４０  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＣＤ２７  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＨＶＥＭ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＤＲ３  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、およびＮＫＧ２Ｄ．ＧＩＴＲ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞の増殖速度を示す。
【図１４Ｄ】図１４Ｄは、非形質導入対照Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＴＮＦＲ２  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＯＸ４０  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＣＤ２７  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＨＶＥＭ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＤＲ３  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、またはＮＫＧ２Ｄ．ＧＩＴＲ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞とともに１：１のＥ：Ｔ比率で２４時間、ラパマイシンの存在下で共培養されたＥＧＦＲ＋ＮＫＧ２ＤＬ＋  ＨＣＴ１１６細胞の培養上清からのＩＦＮγ、ＴＮＦα、およびＧＭ−ＣＳＦの産生を示す。
【図１５Ａ−Ｂ】図１５Ａは、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＯＸ４０  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、またはＮＫＧ２Ｄ．ＴＮＦＲ２  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞とともに１：１のＥ：Ｔ比率で２４時間、ビヒクル、ラパマイシンまたはＡＰ２１９６７の存在下で共培養されたＥＧＦＲ＋ＮＫＧ２ＤＬ＋  Ａ５４９細胞の培養上清からのＩＦＮγ、ＴＮＦα、およびＧＭ−ＣＳＦの産生を示す。  図１５Ｂは、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＯＸ４０  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、またはＮＫＧ２Ｄ．ＴＮＦＲ２  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞とともに１：１のＥ：Ｔ比率で２４時間、ビヒクル、ラパマイシンまたはＡＰ２１９６７の存在下で共培養されたＥＧＦＲ＋ＮＫＧ２ＤＬ＋  Ａ５４９細胞の培養上清からのＩＦＮγ、ＴＮＦα、およびＧＭ−ＣＳＦの産生を示す。
【図１５Ｃ】図１５Ｃは、Ｔ細胞共培養を、ＡＰ２１６７処置とラパマイシン処置で比較したときのサイトカイン産生の比率を示す。抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＴＮＦＲ２  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞およびＮＫＧ２Ｄ．ＯＸ４０  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞は、ラパマイシンまたはＡＰ２１９６７の存在下で、Ａ５４９標的細胞またはＨＣＴ１１６標的細胞のいずれかとともに１：１のＥ：Ｔ比率で共培養される。ラパマイシン培養からのサイトカイン産生を分母としたＡＰ２１６７培養からのサイトカイン産生の比率を示す。矢印は、ラパマイシン介在免疫抑制（＞１）またはラパマイシン介在免疫強化（＜１）を示す。
【図１６】図１６Ａは、２つの共刺激性ドメインを有するＤＡＲＩＣ結合構成要素を含むＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ構造の図を示す。  図１６Ｂは、非形質導入対照Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＤＡＰ１０  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＣＤ２８  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、またはＮＫＧ２Ｄ．ＣＤ２８．ＤＡＰ１０  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞とともに１：１のＥ：Ｔ比率で２４時間、ビヒクルまたはラパマイシンの存在下で共培養されたＥＧＦＲ＋ＮＫＧ２ＤＬ＋  Ａ５４９細胞の培養上清からのＩＦＮγ、およびＧＭ−ＣＳＦの産生を示す。  図１６Ｃは、非形質導入対照Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＤＡＰ１０  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＤＡＰ１０．ＯＸ４０  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、またはＮＫＧ２Ｄ．ＯＸ４０．ＤＡＰ１０  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞とともに１：１のＥ：Ｔ比率で２４時間、ビヒクルまたはラパマイシンの存在下で共培養されたＥＧＦＲ＋ＮＫＧ２ＤＬ＋  Ａ５４９細胞の培養上清からのＩＦＮγ、およびＧＭ−ＣＳＦの産生を示す。
【図１７Ａ−Ｂ】図１７Ａは、ＩＣＯＳ系膜貫通ドメインと共刺激性ドメインを有するＤＡＲＩＣ結合構成要素を含むＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ構造の図を示す。  図１７Ｂは、抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、またはＩＣＯＳおよびＤＡＰ１０に由来するシングルもしくはデュアル共刺激性ドメインおよび膜貫通ドメインを含有するＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞とともに１：１のＥ：Ｔ比率で２４時間、ＡＰ２１９６７の存在下で共培養されたＥＧＦＲ＋ＮＫＧ２ＤＬ＋  Ａ５４９細胞の培養上清からのＩＦＮγの産生を示す。
【図１７Ｃ】図１７Ｃは、抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、またはＩＣＯＳおよびＤＡＰ１０に由来するシングルもしくはデュアル共刺激性ドメインおよび膜貫通ドメインを含有するＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞とともに１：１のＥ：Ｔ比率で２４時間、ＡＰ２１９６７の存在下で共培養されたＥＧＦＲ＋ＮＫＧ２ＤＬ＋  Ａ５４９細胞の培養上清からのＧＭ−ＣＳＦの産生を示す。
【図１８Ａ−Ｂ】図１８Ａは、デュアル標的化ＤＡＲＩＣ戦略の図を示す。ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣは、抗ＣＤ１９  ＤＡＲＩＣ結合構成要素とともに共刺激性ドメインを含むＤＡＲＩＣ結合構成要素を含有する。  図１８Ｂは、非形質導入Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＴＮＦＲ２  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、およびＮＫＧ２Ｄ．ＴＮＦＲ２  ＤＡＲＩＣ：ＣＤ１９  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞のＣＤ４＋ゲート中のＮＫＧ２Ｄ結合ドメインの発現を示す。
【図１８Ｃ−Ｄ】図１８Ｃは、非形質導入Ｔ細胞、ＣＤ１９  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、およびＮＫＧ２Ｄ．ＴＮＦＲ２  ＤＡＲＩＣ：ＣＤ１９  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞のＣＤ１９−Ｆｃ結合効率を示す。  図１８Ｄは、ＮＫＧ２ＤＬ−  ＣＤ１９−  Ａ２０細胞（Ａ２０）、ＮＫＧ２ＤＬ−ＣＤ１９＋  Ａ２０細胞（Ａ２０−ｈＣＤ１９）、およびＮＫＧ２ＤＬ＋ＣＤ１９−  Ａ５４９細胞（Ａ５４９）の培養上清からのＧＭ−ＣＳＦの産生を示す。標的細胞は、非形質導入対照Ｔ細胞、ＣＤ１９  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＴＮＦＲ２  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、またはＮＫＧ２Ｄ．ＴＮＦＲ２  ＤＡＲＩＣ：ＣＤ１９  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞とともに１：１のＥ：Ｔ比率で２４時間、ＡＰ２１９６７の存在下で共培養された。
【発明を実施するための形態】
【０１７７】
配列番号に関する簡単な説明
配列番号１は、ＦＲＢ  Ｔ２０９８Ｌ−ＣＤ８ａＴＭ−ＣＤ１３７−ＣＤ３ｚ  ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素のアミノ酸配列を記載する。
【０１７８】
配列番号２は、ＦＲＢ  Ｔ２０９８Ｌ−ＣＤ８ａＴＭ−ＣＤ１３７−ＣＤ３ｚ  ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素のアミノ酸配列を記載する。
【０１７９】
配列番号３は、ＮＫＧ２Ｄ−ＦＫＢＰ１２−ＣＤ４ＴＭ  ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素のアミノ酸配列を記載する。
【０１８０】
配列番号４は、ＮＫＧ２Ｄ−ＦＫＢＰ１２−ＣＤ４ＴＭ  ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素のアミノ酸配列を記載する。
【０１８１】
配列番号５は、ウイルスＰ２Ａドメインにより分離されるＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素とＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素を含有するＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣポリプロテインのアミノ酸配列を記載する。
【０１８２】
配列番号６は、ＮＫＧ２Ｄ−ＦＫＢＰ１２−ＣＤ４ＴＭ−ＯＸ４０  ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素のアミノ酸配列を記載する。
【０１８３】
配列番号７は、ＮＫＧ２Ｄ−ＦＫＢＰ１２−ＣＤ４ＴＭ−ＴＮＦＲ２  ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素のアミノ酸配列を記載する。
【０１８４】
配列番号８は、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素、ウイルスＰ２Ａドメイン、およびＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ．ＯＸ４０結合構成要素を含有し、分離されるＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣポリプロテインのアミノ酸配列を記載する。
【０１８５】
配列番号９は、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素、ウイルスＰ２Ａドメイン、およびＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ．ＴＮＦＲ２結合構成要素を含有するＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣポリプロテインのアミノ酸配列を記載する。
【０１８６】
配列番号１０は、ＮＫＧ２Ｄポリペプチドのアミノ酸配列を記載する。
【０１８７】
配列番号１１は、ＮＫＧ２Ｄリガンド結合ドメインのアミノ酸配列を記載する。
【０１８８】
配列番号１２〜２２は、様々なリンカーのアミノ酸配列を記載する。
【０１８９】
配列番号２３〜４７は、プロテアーゼ切断部位および自己切断性ポリペプチドの切断部位のアミノ酸配列を記載する。
【０１９０】
（詳細な説明）
Ａ．概要
癌は、世界の主要な死因の１つである。近年、癌専門医は免疫認識と癌細胞の排除を強化する可能性のある手段として遺伝的アプローチを導入している。期待の持てる１つの戦略は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するよう遺伝子操作された免疫エフェクター細胞を使用した養子細胞免疫療法であり、ＣＡＲはこれらＣＡＲ  Ｔ細胞の細胞障害性を、癌細胞へと再指向化させる。ＣＡＲ  Ｔ細胞療法の大きな欠点は、ＣＡＲ  Ｔ細胞の活性を空間的および時間的に制御できないことである。ＣＡＲ  Ｔ細胞活性を制御できないことで、広範な副作用を誘発する可能性がある。副作用の多くは静かに始まり、そして急速に悪化し得る。特に重大な合併症は、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）または「サイトカインストーム」であり、ＣＡＲ  Ｔ細胞は大量で、そして致死的ですらあるサイトカインの放出を誘導する。ＣＲＳは危険な高熱、極度の疲労、呼吸困難および血圧の急激な低下をもたらし得る。さらにＣＲＳは副作用の第二波も生じさせる場合があり、この第二波には神経毒性、振戦、頭痛、錯乱、平衡感覚の消失、発話困難、発作および幻覚を含む神経系が含まれる。本明細書に予期される組成物および方法は、養子細胞療法を巡るこれら、および他の課題に対する解決法を提供するものである。
【０１９１】
本開示は概して、二量体化剤により制御される免疫受容体複合体（ＤＡＲＩＣ：ｄｉｍｅｒｉｚｉｎｇ  ａｇｅｎｔ  ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｃｏｍｐｌｅｘ）を使用して、養子細胞療法の空間的および時間的な制御を調節するための組成物および方法の改善に関する。ＤＡＲＩＣは、１つもしくは複数のＤＡＲＩＣ結合構成要素、および／または１つもしくは複数のＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素を含有する。特定の学説のいずれにも拘束されることは望まないが、本明細書に予期されるＤＡＲＩＣ組成物および方法は、当分野において既存のＣＡＲ  Ｔ細胞療法に、限定されないが免疫エフェクター細胞のシグナル伝導性結合およびシグナル伝達活性に対する空間的および時間的の両方の制御をはじめとする多くの利益をもたらす。ＤＡＲＩＣの時間的制御は、ＤＡＲＩＣ結合構成要素とＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素の架橋因子介在性会合を通じて、シグナル伝達のＤＡＲＩＣ機構を誘発する。ＤＡＲＩＣの空間的制御は、ＤＡＲＩＣ結合構成要素上の結合ドメインによる標的抗原認識を通じて、シグナル伝達機構を関与させる。この様式において、ＤＡＲＩＣ免疫エフェクター細胞は、標的抗原と架橋因子の両方が存在するときに活性化される。
【０１９２】
Ｎａｔｕｒａｌ  Ｋｉｌｌｅｒ  Ｇｒｏｕｐ  ２Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）受容体は免疫細胞で発現され、感染性疾患および癌に対する宿主防御において重要な役割を果たしている。ＮＫＧ２Ｄ  ｌｉｇａｎｄｓ（ＮＫＧ２ＤＬ）リガンドは、健康な成人の組織ではあまり発現されていないが、様々な癌細胞上では種々に発現されている。
【０１９３】
様々な実施形態では、本開示は、ＮＫＧ２Ｄリガンドを発現する細胞を標的とするＤＡＲＩＣを予期するものである。特定の学説のいずれにも拘束されることは望まないが、本発明者らは、ＮＫＧ２Ｄ受容体のリガンド結合ドメインがＤＡＲＩＣ構造へと再形成され、それによりＮＫＧ２Ｄリガンド発現標的細胞に対するＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞介在性細胞障害活性の空間的および時間的な制御の改善がもたらされるという予想外の結果を見出した。
【０１９４】
特定の実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣは、多量体化ドメインポリペプチドもしくはそのバリアント、膜貫通ドメイン、共刺激性ドメイン、および／または一次シグナル伝達ドメインを含むポリペプチド（ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素）、ならびにＮＫＧ２Ｄ受容体のＮＫＧ２Ｄリガンド結合ドメインまたはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片、多量体化ドメインポリペプチドまたはそのバリアント、および任意選択で、膜貫通ドメインおよび／または共刺激性ドメインを含むポリペプチド（ＤＡＲＩＣ結合構成要素）、を含む。架橋因子の存在下で、ＤＡＲＩＣ結合構成要素およびＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は当該架橋因子を通じて相互に会合し、機能的に活性なＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣを形成する。
【０１９５】
好ましい実施形態では、ＤＡＲＩＣ結合構成要素およびＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素の多量体化ドメインは、細胞外に配置される。多量体化ドメインの細胞外配置によって、限定されないが、結合ドメインのさらに効率的な配置、架橋因子制御に対する高い時間的感受性、および特定の架橋因子の非免疫抑制性用量を使用することによる毒性の低さをはじめとする、細胞内配置に対して多くの利点が提供される。
【０１９６】
ＤＡＲＩＣ、ＤＡＲＩＣ結合構成要素、およびＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素をコードするポリヌクレオチド；ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素、ＤＡＲＩＣタンパク質複合体、ＤＡＲＩＣ融合タンパク質；ＤＡＲＩＣ、ＤＡＲＩＣ結合構成要素およびＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素をコードするポリヌクレオチドを含み、および／またはそれらを発現する細胞；ならびにそれらを使用して免疫障害を治療する方法、が本明細書において予期される。
【０１９７】
組み換え（すなわち操作された）ＤＮＡ、ペプチドおよびオリゴヌクレオチドの合成、免疫アッセイ、組織培養、形質転換（例えばエレクトロポレーション法、リポフェクション法）、酵素反応、精製に関する方法、ならびに関連する技術および手順は概して、本明細書全体を通じて引用および検討されるように、微生物学、分子生物学、生化学、分子遺伝学、細胞生物学、ウイルス学および免疫学の概論ならびに各論の様々な参照文献において記載されるように実施されてもよい。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，３ｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，ｕｐｄａｔｅｄ  Ｊｕｌｙ  ２００８）；Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｒｏｍ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ；Ｇｌｏｖｅｒ，ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ｖｏｌ．Ｉ  ＆  ＩＩ（ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ  ＵＳＡ，１９８５）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ：Ｊｏｈｎ  Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａｄａ  Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄａｖｉｄ  Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅｔｈａｎ  Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗａｒｒｅｎ  Ｓｔｒｏｂｅｒ  ２００１  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ，ＮＹ）；Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ：Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｊｕｌｉｅ  Ｌｏｇａｎ，Ｋｉｒｓｔｉｎ  Ｅｄｗａｒｄｓ  ａｎｄ  Ｎｉｃｋ  Ｓａｕｎｄｅｒｓ，２００９，Ｃａｉｓｔｅｒ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｏｒｆｏｌｋ，ＵＫ；Ａｎａｎｄ，Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｃｏｍｐｌｅｘ  Ｇｅｎｏｍｅｓ，（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９２）；Ｇｕｔｈｒｉｅ  ａｎｄ  Ｆｉｎｋ，Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｙｅａｓｔ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９１）；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｎ．Ｇａｉｔ，Ｅｄ．，１９８４）；Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｔｈｅ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｈａｍｅｓ  ＆  Ｓ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｅｄｓ．，１９８５）；Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｈａｍｅｓ  ＆  Ｓ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｅｄｓ．，１９８４）；Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｅｄ．，１９８６）；Ｐｅｒｂａｌ，Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）；Ｎｅｘｔ−Ｇｅｎ��ｒａｔｉｏｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ（Ｊａｎｉｔｚ，２００８  Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ）；ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）（Ｐａｒｋ，Ｅｄ．，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０１０  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ）；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ｃｅｌｌｓ  Ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６）；ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｉｓｅ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ．）；Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  Ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｈ．Ｍｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ  ｅｄｓ．，１９８７，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）；Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９９８）；Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｍａｙｅｒ  ａｎｄ  Ｗａｌｋｅｒ，ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，１９８７）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ  Ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  Ｉ−ＩＶ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ  ａｎｄ  ＣＣ  Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．，１９８６）；Ｒｏｉｔｔ，Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，１９８８）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｑ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａ．Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄ．Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅ．Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ  ａｎｄ  Ｗ．Ｓｔｒｏｂｅｒ，ｅｄｓ．，１９９１）；Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ；ならびに例えばＡｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙなどの雑誌の研究論文を参照のこと。
【０１９８】
Ｂ．定義
本開示を詳細に記載する前に、本明細書において使用される用語の定義を提供することで、その理解の助けとなるであろう。
【０１９９】
別段の規定がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって普遍的に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似した、または均等の方法および材料を、特定の実施形態の実施または検証に使用することができるが、本明細書においては好ましい組成物、方法および材料の実施形態を開示する。本開示の目的に対し、以下の用語を、以下に規定する。
【０２００】
「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」といった冠詞は、本明細書において、当該冠詞の文法上の対象の１つまたは複数（すなわち少なくとも１つ、または１つもしくは複数）を指すために使用される。例示として、「ａｎ  ｅｌｅｍｅｎｔ」とは、１つの要素、または１つもしくは複数の要素を意味する。
【０２０１】
選択肢（例えば「または」）の使用は、いずれか１つ、両方、またはその選択肢の任意の組み合わせを意味すると理解されたい。
【０２０２】
「および／または」という用語は、いずれか１つ、またはその選択肢の両方を意味すると理解されたい。
【０２０３】
本明細書において使用される場合、「約」または「およそ」という用語は、基準の数量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、大きさ、量、重さ、または長さに対し、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％または１％までも変化する数量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、大きさ、量、重さ、または長さを指す。１つの実施形態では、「約」または「およそ」という用語は、基準の数量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、大きさ、量、重さ、または長さに関し、±１５％、±１０％、±９％、±８％、±７％、±６％、±５％、±４％、±３％、±２％または±１％の数量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、大きさ、量、重さ、または長さの範囲を指す。
【０２０４】
本明細書全体を通じて、別段であることが要求されない限り、「含む」および「含むこと」という文言は、記載される工程、または要素、または工程もしくは要素の群の含有を示唆するが、任意の他の工程、または要素、または工程もしくは要素の群の除外は示唆しないことを理解されたい。「〜からなる」とは、「〜からなる」という文言に続くものを含むが、それらに限定されることを意味する。ゆえに、「〜からなる」という文言は、列記される要素が必要または義務であり、他の要素は存在し得ないことを示す。「本質的に〜からなる」とは、当該文言の後に列記される任意の要素、および列記される要素に対し、本開示中に特定される活性もしくは作用に干渉しない、または寄与しない他の要素に限定される任意の要素を含むことを意味する。ゆえに、「本質的に〜からなる」という文言は、列記される要素が必須または義務であり、しかし列記される要素の活性または作用に実質的に影響を与える他の要素は存在しないことを示す。
【０２０５】
本明細書全体を通じて「１つの実施形態」、「実施形態」、「特定の実施形態」、「関連する実施形態」、「ある実施形態」、「追加的実施形態」、もしくは「さらなる実施形態」、またはそれらの組み合わせに対する参照は、当該実施形態と関連付けて記載される特定の性質、構造または特徴が、少なくとも１つの実施形態に含まれることを意味する。ゆえに本明細書全体の様々な箇所での前述の文言の出現は、必ずしもすべてが同じ実施形態を指しているわけではない。さらに特定の性質、構造または特徴は、１つまたは複数の実施形態において任意の適切な様式で組み合わされ得る。さらに、１つの実施形態でのある性質の肯定的な列挙は、特定の実施形態では当該性質の除外の根拠として機能することを理解されたい。
【０２０６】
「抗原（Ａｇ）」とは、動物へ注射される、または吸収される組成物（例えば癌特異的タンパク質を含む組成物など）を含む、動物において抗体産生またはＴ細胞反応を刺激し得る化合物、組成物または物質を指    抗原の例としては限定されないが、脂質、炭水化物、多糖、糖タンパク質、ペプチドまたは核酸が挙げられる。抗原は、例えば本開示抗原などの異種抗原により誘導される産物を含む、特異的な液性免疫または細胞性免疫の産物と反応する。
【０２０７】
「標的抗原」または「対象の標的抗原」は、本明細書に予期される結合ドメインが結合するよう設計された抗原である。特定の実施形態では、標的抗原は、以下からなる群から選択される：アルファ葉酸受容体（ＦＲα）、αｖβ６インテグリン、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ６、炭酸脱水素酵素ＩＸ型（ＣＡＩＸ）、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、Ｃ−ｔｙｐｅ  ｌｅｃｔｉｎ−ｌｉｋｅ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ−１（ＣＬＬ−１）、ＣＤ２  ｓｕｂｓｅｔ  １（ＣＳ−１）、ｃｈｏｎｄｒｏｉｔｉｎ  ｓｕｌｆａｔｅ  ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎ  ４（ＣＳＰＧ４）、ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ａｎｔｉｇｅｎ  １（ＣＴＡＧＥ１）、上皮細胞増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、上皮細胞増殖因子受容体バリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  ２（ＥＧＰ２），ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  ４０（ＥＧＰ４０）、上皮細胞接着分子（ＥＰＣＡＭ）、ｅｐｈｒｉｎ  ｔｙｐｅ−Ａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ２（ＥＰＨＡ２）、ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ（ＦＡＰ）、Ｆｃ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｌｉｋｅ  ５（ＦＣＲＬ５）、ｆｅｔａｌ  ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＡｃｈＲ）、ガングリオシドＧ２（ＧＤ２）、ガングリオシドＧ３（ＧＤ３）、グリピカン−３（ＧＰＣ３）、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）を含むＥＧＦＲファミリー、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ−１３Ｒα２、Ｋａｐｐａ、ｃａｎｃｅｒ／ｔｅｓｔｉｓ  ａｎｔｉｇｅｎ  ２（ＬＡＧＥ−１Ａ），Ｌａｍｂｄａ、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ（ＬｅＹ）、Ｌ１  ｃｅｌｌ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ（Ｌ１−ＣＡＭ）、ｍｅｌａｎｏｍａ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｇｅｎｅ（ＭＡＧＥ）−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥＡ１０、ｍｅｌａｎｏｍａ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ  ｂｙ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  １（ＭｅｌａｎＡまたはＭＡＲＴ１）、メソテリン（ＭＳＬＮ）、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）、ｃａｎｃｅｒ／ｔｅｓｔｉｓ  ａｎｔｉｇｅｎ  １（ＮＹ−ＥＳＯ−１）、ポリシアル酸；ｐｌａｃｅｎｔａ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  １（ＰＬＡＣ１）、ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｉｎ  ｍｅｌａｎｏｍａ（ＰＲＡＭＥ）、ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ  ａｎｔｉｇｅｎ（ＰＳＣＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅ−ｌｉｋｅ  ｏｒｐｈａｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  １（ＲＯＲ１）、ｓｙｎｏｖｉａｌ  ｓａｒｃｏｍａ，Ｘ  ｂｒｅａｋｐｏｉｎｔ  ２（ＳＳＸ２）、Ｓｕｒｖｉｖｉｎ、ｔｕｍｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  ７２（ＴＡＧ７２）、ｔｕｍｏｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｍａｒｋｅｒ  １（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）、ｔｕｍｏｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｍａｒｋｅｒ  ７−ｒｅｌａｔｅｄ（ＴＥＭ７Ｒ）、ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ（ＴＰＢＧ）、血管内皮細胞増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）、Ｗｉｌｍｓ  ｔｕｍｏｒ  １（ＷＴ−１）。１つの実施形態では、抗原は、例えばクラスＩ  ＭＨＣ−ペプチド複合体またはクラスＩＩ  ＭＨＣ−ペプチド複合体などのＭＨＣ−ペプチド複合体である。
【０２０８】
「ＮＫＧ２Ｄリガンド」とは、ｎａｔｕｒａｌ−ｋｉｌｌｅｒ  ｇｒｏｕｐ  ２，ｍｅｍｂｅｒ  Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）受容体により認識され、および／または結合されるポリペプチドを指す。ＮＫＧ２Ｄリガンドに関し、以下の２つのファミリーがヒトにおいて特定されている：ＭＨＣ  ｃｌａｓｓ  Ｉ  ｃｈａｉｎ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  Ａ（ＭＩＣＡ）およびＢ（ＭＩＣＢ）、ならびにＨＣＭＶのＵＬ１６−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ（ＵＬＢＰ）、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５およびＵＬＢＰ６。ＭＩＣＡおよびＭＩＣＢはそれぞれα１、α２、α３、および膜貫通ドメインを有している。ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３およびＵＬＢＰ６はそれぞれα１およびα２ドメインを有し、細胞膜にグリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）−結合されている。ＵＬＢＰ４とＵＬＢＰ５はそれぞれ、α１およびα２ドメイン、ならびに膜貫通ドメインを有している。ＮＫＧ２Ｄリガンドは、多くのヒト癌細胞、および免疫抑制性細胞（腫瘍微小環境中のＴ−ｒｅｇおよび骨髄由来抑制性細胞（ＭＤＳＣ））上で様々な組み合わせで発現されている。１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄリガンドを発現する癌としては限定されないが、癌腫（卵巣癌、膀胱癌、乳癌、肺癌、肝癌、結腸癌、腎癌、前立腺癌、メラノーマ、ユーイング肉腫、神経膠腫、および神経芽細胞腫）、白血病（ＡＭＬ、ＣＭＬ、ＣＬＬ）、リンパ腫、および多発性骨髄腫が挙げられる。ＮＫＧ２Ｄリガンドは、慢性炎症部位で、何らかの感染の後に一過性で、局所照射の後に、ならびに例えばＨＤＡＣ阻害剤およびボルテゾミブなどの特定の薬剤を用いた処置の後に、誘導される場合もある。
【０２０９】
本明細書において使用される場合、「結合ドメイン」、「細胞外ドメイン」、「抗原結合ドメイン」、「細胞外結合ドメイン」、「細胞外抗原結合ドメイン」、「抗原特異的結合ドメイン」、および「細胞外抗原特異的結合ドメイン」という用語は相互交換可能に使用され、対象の標的抗原に特異的に結合する能力を有するポリペプチドを提供する。結合ドメインは、天然源、合成源、半合成源、または組み換え源のいずれかから誘導されてもよい。
【０２１０】
「ＮＫＧ２Ｄ受容体結合ドメイン、またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合部分」とは、１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄリガンドに結合するために必要な、もしくは充分なＮＫＧ２Ｄ受容体またはその部分を指す。Ｋｌｒｋ１としても知られているＮａｔｕｒａｌ−ｋｉｌｌｅｒ  ｇｒｏｕｐ  ２，ｍｅｍｂｅｒ  Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）は、Ｃ型レクチン様受容体であり、活性化型免疫受容体としてナチュラルキラー（ＮＫ）細胞において最初に特定された。ヒトにおいて、ＮＫＧ２Ｄは、ＮＫ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞サブセット、およびγδＴ細胞サブセット上に共刺激性受容体として発現されている。ＮＫＧ２Ｄ受容体結合ドメイン、またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合部分は、限定されないが、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、およびＵＬＢＰ６を含む１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄリガンドに結合する。ＮＫＧ２Ｄのアミノ酸配列の例は、配列番号１０に記載されている。
【０２１１】
「抗体」とは、抗原のエピトープを特異的に認識し、結合する少なくとも軽鎖または重鎖の免疫グロブリン可変領域を含有するポリペプチドである結合物質を指し、そうした抗原としては例えば脂質、炭水化物、多糖、糖タンパク質、ペプチドまたは核酸が挙げられ、免疫細胞により認識されるものなどの抗原性決定基を含有する。
【０２１２】
「エピトープ」または「抗原性決定基」とは、結合物質が結合する抗原の領域を指す。
【０２１３】
抗体は、例えばラクダＩｇ、リャマＩｇ、アルパカＩｇ、Ｉｇ  ＮＡＲ、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、二特異性Ｆａｂ二量体（Ｆａｂ２）、三特異性Ｆａｂ三量体（Ｆａｂ３）、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖタンパク質（ｓｃＦｖ）、ｂｉｓ−ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（ｄｓＦｖ）、およびシングルドメイン抗体（ｓｄＡｂ、ラクダ科ＶＨＨ、ナノボディ）、ならびに全長抗体の抗原結合に寄与する部分などのその抗原結合断片を含む。当該用語はさらに、例えばキメラ抗体（例えばヒト化マウス抗体）、ヘテロ複合体化抗体（例えば二特異性抗体）、およびその抗原結合断片などの遺伝子操作型も含む。Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃａｔａｌｏｇ  ａｎｄ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，１９９４−１９９５（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）；Ｋｕｂｙ，Ｊ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，３ｒｄ  Ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ＆  Ｃｏ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９７も参照のこと。
【０２１４】
「リンカー」とは、様々なポリペプチドドメイン間の複数のアミノ酸残基を指し、分子の適切な間隔および立体構造のために付加される。特定の実施形態では、リンカーは、可変領域を結合させる配列である。「可変領域を結合させる配列」は、ＶＨとＶＬを繋げるアミノ酸配列であり、２つの下位結合ドメインの相互作用と適合可能なスペーサー機能を提供し、得られたポリペプチドは、同じ軽鎖可変領域と重鎖可変領域を含む抗体と同じ標的分子に対する特異的結合アフィニティを保持する。特定の実施形態では、リンカーは、１つもしくは複数の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメイン、ヒンジドメイン、多量体化ドメイン、膜貫通ドメイン、共刺激性ドメイン、および／または一次シグナル伝達ドメインを分離させる。
【０２１５】
本明細書において予期される特定の実施形態での使用に適したリンカーの例示としては、限定されないが、以下のアミノ酸配列が挙げられる：ＧＧＧ；ＤＧＧＧＳ（配列番号１２）；ＴＧＥＫＰ（配列番号１３）（例えば、Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ５５２５−５５３０（１９９７）を参照のこと）；ＧＧＲＲ（配列番号１４）（Ｐｏｍｅｒａｎｔｚ  ｅｔ  ａｌ．１９９５、上記）；（ＧＧＧＧＳ）ｎ  式中、ｎ  ＝  １、２、３、４または５（配列番号１５）（Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ９３，１１５６−１１６０（１９９６．）；ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＶＤ（配列番号１６）（Ｃｈａｕｄｈａｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８７：１０６６−１０７０）；ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号１７）（Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６）、ＧＧＲＲＧＧＧＳ（配列番号１８）；ＬＲＱＲＤＧＥＲＰ（配列番号１９）；ＬＲＱＫＤＧＧＧＳＥＲＰ（配列番号２０）；ＬＲＱＫＤ（ＧＧＧＳ）２  ＥＲＰ（配列番号２１）。あるいは、ＤＮＡ結合部位とそのペプチドの両方をモデリングすることができるコンピュータープログラム（Ｄｅｓｊａｒｌａｉｓ  ＆  Ｂｅｒｇ，ＰＮＡＳ  ９０：２２５６−２２６０（１９９３）、ＰＮＡＳ  ９１：１１０９９−１１１０３（１９９４））を使用して、またはファージディスプレイ法により、可塑性リンカーが合理的に設計されてもよい。１つの実施形態では、リンカーは、以下のアミノ酸配列を含む：ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号２２）（Ｃｏｏｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１０１（４）：１６３７−１６４４（２００３））。
【０２１６】
「スペーサードメイン」とは、２つのドメインを分離させるポリペプチドを指す。１つの実施形態では、スペーサードメインは、エフェクター細胞の表面から抗原結合ドメインを離れさせ、適切な細胞／細胞の接触、抗原結合、および活性化を可能にする（Ｐａｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，１９９９；６：４１２−４１９）。特定の実施形態では、スペーサードメインは、１つもしくは複数の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメイン、多量体化ドメイン、膜貫通ドメイン、共刺激性ドメイン、および／または一次シグナル伝達ドメインを分離させる。スペーサードメインは、天然源、合成源、半合成源、または組み換え源のいずれかから誘導されてもよい。ある実施形態では、スペーサードメインは、１つまたは複数の重鎖定常領域、例えばＣＨ２およびＣＨ３などを含む免疫グロブリンの部分である。スペーサードメインは、天然免疫グロブリンヒンジ領域、または改変免疫グロブリンヒンジ領域のアミノ酸配列を含んでもよい。
【０２１７】
「ヒンジドメイン」とは、エフェクター細胞の表面から抗原結合ドメインを離れて配置させ、適切に細胞／細胞を接触させる、抗原結合させる、および活性化させることに重要な役割を果たすポリペプチドを指す。特定の実施形態では、ポリペプチドは、結合ドメインと多量体化ドメインの間、結合ドメインと膜貫通ドメイン（ＴＭ）の間、または多量体化ドメインと膜貫通ドメインの間に１つまたは複数のヒンジドメインを含んでもよい。ヒンジドメインは、天然源、合成源、半合成源、または組み換え源のいずれかから誘導されてもよい。ヒンジドメインは、天然免疫グロブリンヒンジ領域、または改変免疫グロブリンヒンジ領域のアミノ酸配列を含んでもよい。
【０２１８】
本明細書において使用される場合、「多量体化ドメイン」とは、別の異なるポリペプチドと直接、または化学誘導性二量体化剤などの架橋分子を介して優先的に相互作用する、または会合するポリペプチドを指し、この場合において異なる多量体化ドメインとの相互作用は、多量体化に大きく貢献し、または多量体化を効率的に促進する（すなわち、二量体、三量体または多分節複合体の形成であり、それらはホモ二量体、ヘテロ二量体、ホモ三量体、ヘテロ三量体、ホモ多量体、ヘテロ多量体であり得る）。多量体化ドメインは、天然源、合成源、半合成源、または組み換え源のいずれかから誘導されてもよい。
【０２１９】
本明細書において予期される特定の実施形態での使用に適した多量体化ドメインの例示としては、ＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ）ポリペプチドもしくはそのバリアント、ＦＫＢＰ−ラパマイシン結合（ＦＲＢ）ポリペプチドもしくはそのバリアント、カルシニューリンポリペプチドもしくはそのバリアント、サイクロフィリンポリペプチドもしくはそのバリアント、細菌性ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）ポリペプチドもしくはそのバリアント、ＰＹＲ１−ｌｉｋｅ  １（ＰＹＬ１）ポリペプチドもしくはそのバリアント、ａｂｓｃｉｓｉｃ  ａｃｉｄ  ｉｎｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  １（ＡＢＩ１）ポリペプチドもしくはそのバリアント、ＧＩＢ１ポリペプチドもしくはそのバリアント、またはＧＡＩポリペプチドもしくはそのバリアントが挙げられる。
【０２２０】
本明細書において使用される場合、「ＦＫＢＰ−ラパマイシン結合ポリペプチド」という用語は、ＦＲＢポリペプチドを指す。特定の実施形態では、ＦＲＢポリペプチドは、ＦＫＢＰ１２−ラパマイシン結合ポリペプチドである。本明細書において予期される特定の実施形態での使用に適したＦＲＢポリペプチドは、少なくとも約８５〜約１００アミノ酸残基を含有する。ある実施形態では、ＦＲＢポリペプチドは、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｌ３４０７５．１に関して、Ｉｌｅ−２０２１〜Ｌｙｓ  −２１１３の９３アミノ酸配列、およびＴ２０９８Ｌの変異を含む。本明細書において予期されるＦＲＢポリペプチドは、架橋因子を介してＦＫＢＰポリペプチドに結合し、それにより三重複合体を形成する。
【０２２１】
本明細書において使用される場合、「ＦＫ５０６結合タンパク質」という用語は、ＦＫＢＰポリペプチドを指す。特定の実施形態では、ＦＫＢＰポリペプチドは、ＦＫＢＰ１２ポリペプチド、またはＦ３６Ｖ変異を含むＦＫＢＰ１２ポリペプチドである。ある実施形態では、ＦＫＢＰドメインは、「ラパマイシン結合ドメイン」とも呼称される場合がある。様々なＦＫＢＰ種のヌクレオチド配列、クローニング、および他の態様に関する情報は、当分野に公知である（例えば、Ｓｔａｅｎｄａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４６：６７１，１９９０（ｈｕｍａｎ  ＦＫＢＰ１２）；Ｋａｙ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３１４：３６１，１９９６を参照のこと）。本明細書において予期されるＦＫＢＰポリペプチドは、架橋因子を介してＦＲＢポリペプチドに結合し、それにより三重複合体を形成する。
【０２２２】
「架橋因子」とは、２つ以上の多量体化ドメインと関連付けられ、それらの間に配置される分子を指す。特定の実施形態では、多量体化ドメインは、架橋因子の存在下でのみ、ポリペプチド複合体の形成に大きく貢献し、または効率的に促進する。特定の実施形態では、多量体化ドメインは、架橋因子の非存在下では、ポリペプチド複合体の形成に貢献せず、または効率的に促進しない。本明細書において予期される特定の実施形態での使用に適した架橋因子の例示としては限定されないが、ＡＰ２１９６７、ラパマイシン（シロリムス）もしくはそのラパログ（ｒａｐａｌｏｇ）、クメルマイシン（ｃｏｕｍｅｒｍｙｃｉｎ）もしくはその誘導体、ジベレリンもしくはその誘導体、アブシシン酸（ＡＢＡ：ａｂｓｃｉｓｉｃ  ａｃｉｄ）もしくはその誘導体、メトトレキサートもしくはその誘導体、シクロスポリンＡもしくはその誘導体、ＦＫＣｓＡもしくはそれらの誘導体、トリメトプリム（Ｔｍｐ）−ＦＫＢＰの合成リガンド（ＳＬＦ：ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｌｉｇａｎｄ  ｆｏｒ  ＦＫＢＰ）もしくはその誘導体、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。
【０２２３】
ラパマイシンアナログ（ラパログ）としては限定されないが、米国特許第  ６，６４９，５９５号に記載されるものが挙げられる。当該特許は、その全体で参照により本明細書に組み込まれる。ある実施形態では、架橋因子は、ラパマイシンと比較して免疫抑制性効果が大きく減少したラパログである。好ましい実施形態では、ラパログは、ＡＰ２１９６７（Ｃ−１６−（Ｓ）−７−メチルインドールラパマイシンとしても知られている、ＩＣ５０  ＝  １０ｎＭ、化学的に改変された非免疫抑制性ラパマイシンアナログ）である。本明細書において予期される特定の実施形態での使用に適したラパログの他の例としては限定されないが、エベロリムス（ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ）、ノボリムス（ｎｏｖｏｌｉｍｕｓ）、ピメクロリムス（ｐｉｍｅｃｒｏｌｉｍｕｓ）、リダフォロリムス（ｒｉｄａｆｏｒｏｌｉｍｕｓ）、タクロリムス（ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ）、テムシロリムス（ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）、ウミロリムス（ｕｍｉｒｏｌｉｍｕｓ）およびゾタロリムス（ｚｏｔａｒｏｌｉｍｕｓ）が挙げられる。
【０２２４】
「免疫抑制性効果が大きく減少した」とは、臨床的に、もしくはインビトロで適切に（例えばＴ細胞増殖の阻害など）、またはヒト免疫抑制活性のインビボサロゲートのいずれかで測定される同じ投与量に対して観察される、または予測される免疫抑制性効果の少なくとも０．１〜０．００５倍未満を指す。
【０２２５】
「膜貫通ドメイン」または「ＴＭドメイン」は、ポリペプチドを細胞膜に固定させるドメインである。ＴＭドメインは、天然源、合成源、半合成源、または組み換え源のいずれかから誘導されてもよい。
【０２２６】
「エフェクター機能」または「エフェクター細胞機能」という用語は、免疫エフェクター細胞の専門的な機能を指す。エフェクター機能としては限定されないが、活性化、サイトカイン産生、増殖、および細胞障害性因子の放出を含む細胞障害活性、または免疫エフェクター細胞上に発現される受容体への抗原結合で惹起される他の細胞反応が挙げられる。
【０２２７】
「細胞内シグナル伝達ドメイン」または「エンドドメイン」とは、エフェクター機能シグナルを伝達するタンパク質部分を指し、細胞に専門的機能を実行するよう指示を出す。通常は細胞内シグナル伝達ドメインの全体が使われ得るが、多くの場合、ドメイン全体を使用する必要はない。細胞内シグナル伝達ドメインの切断部分が使用される範囲について、エフェクター機能シグナルが伝達される限りにおいて、ドメイン全体に代わり、そうした切断部分が使用されてもよい。細胞内シグナル伝達ドメインという用語は、エフェクター機能シグナルの伝達に必要な、または充分な細胞内シグナル伝達ドメインの任意の切断部分を含むことが意図される。
【０２２８】
ＴＣＲのみを通じて生じたシグナルは、Ｔ細胞の完全な活性化には不充分であること、および二次的シグナルまたは共刺激性シグナルも必要であることが知られている。ゆえにＴ細胞の活性化は、２つの別種の細胞内シグナル伝達ドメインにより介在されると言うこともできる。一次シグナル伝達ドメインは、ＴＣＲ（例えばＴＣＲ／ＣＤ３複合体）を通じて抗原依存性の一次活性化を開始させる。そして共刺激性シグナル伝達ドメインは、抗原依存性の様式で作用して、二次性または共刺激性のシグナルを生じさせる。
【０２２９】
「一次シグナル伝達ドメイン」とは、刺激性または阻害性のいずれかで、ＴＣＲ複合体の一次活性化を制御する細胞内シグナル伝達ドメインを指す。刺激性に作用する一次シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシン系活性化モチーフ（ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ−ｂａｓｅｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｍｏｔｉｆｓ）またはＩＴＡＭとして知られているシグナル伝達モチーフを含有する場合がある。特定の実施形態での使用に適したＩＴＡＭ含有一次シグナル伝達ドメインの例示としては限定されないが、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄに由来するものが挙げられる。
【０２３０】
本明細書において使用される場合、「共刺激性シグナル伝達ドメイン」または「共刺激性ドメイン」とは、共刺激性分子の細胞内シグナル伝達ドメインを指す。共刺激性分子は、抗原受容体またはＦｃ受容体以外の細胞表面分子であり、抗原が結合したときのＴリンパ球の効率的な活性化および機能に必要とされる二次的なシグナルを生じさせる。共刺激性ドメインが単離され得る共刺激性分子の例示としては限定されないが、以下が挙げられる：Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  １（ＴＬＲ１）、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ｃａｓｐａｓｅ  ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ  ｄｏｍａｉｎ  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １１（ＣＡＲＤ１１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ９４、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＮＡＸ−Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  １０（ＤＡＰ１０）、Ｌｉｎｋｅｒ  ｆｏｒ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔ−ｃｅｌｌｓ  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １（ＬＡＴ）、ＳＨ２  Ｄｏｍａｉｎ−Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｏｆ  ７６  ｋＤ（ＳＬＰ７６）、Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ａｄａｐｔｏｒ  １（ＴＲＡＴ１）、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １４（ＴＮＦＲＳ１４；ＨＶＥＭ）、ＴＮＦ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １８（ＴＮＦＲＳ１８；ＧＩＴＲ）、ＴＮＦ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  ２５（ＴＮＦＲＳ２５；ＤＲ３）、およびｚｅｔａ  ｃｈａｉｎ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  ７０（ＺＡＰ７０）。
【０２３１】
「免疫障害」とは、免疫系からの反応を引き起こす疾患を指す。特定の実施形態では、「免疫障害」という用語は、癌、自己免疫性疾患、または免疫不全を指す。１つの実施形態では、免疫障害は、感染性疾患を包含する。
【０２３２】
本明細書において使用される場合、「癌」という用語は概して、異常な細胞が制御されずに分裂し、近傍組織へと浸潤し得る、ある種の疾患または状態に関連する。
【０２３３】
本明細書において使用される場合、「悪性」という用語は、腫瘍細胞群が、制御不能な増殖（すなわち正常限界を超える分裂）、浸潤（すなわち隣接組織への侵入と破壊）、および転移（すなわちリンパまたは血液を介して身体の他の場所へ拡散）のうちの１つまたは複数を呈する癌を指す。本明細書において使用される場合、「転移する」という用語は、身体の一部分から、別の部分へと癌が拡散することを指す。拡散した細胞により形成された腫瘍は、「転移腫瘍」または「転移癌」と呼ばれる。転移腫瘍は、元の腫瘍（原発腫瘍）の細胞と似た細胞を含有する。
【０２３４】
本明細書において使用される場合、「良性」または「非悪性」という用語は、大きく成長するが、身体の他の部分に拡散しない腫瘍を指す。良性腫瘍は自己限定的であり、多くの場合、浸潤せず、または転移しない。
【０２３５】
「癌細胞」とは、癌性増殖または癌性組織の個々の細胞を指す。癌細胞には、固形癌と液性癌の両方が含まれる。「腫瘍」または「腫瘍細胞」とは概して、細胞の異常な増殖による膨張、または細胞の異常な増殖により形成された病変を指し、良性、前癌性、または悪性であり得る。殆どの癌は腫瘍を形成するが、例えば白血病などの液性癌は必ずしも腫瘍を形成するわけではない。腫瘍を形成する癌に関し、癌（細胞）という用語、および腫瘍（細胞）という用語は相互交換可能に使用される。個体中の腫瘍の量は、「腫瘍組織量（ｔｕｍｏｒ  ｂｕｒｄｅｎ）」であり、腫瘍の数、体積または重量で測定され得る。
【０２３６】
「再発」という用語は、ある期間の改善または寛解の後に、癌の復活の診断、または癌の復活の徴候および症状の診断がされたことを指す。
【０２３７】
「寛解」とは、「臨床的寛解」とも呼ばれ、部分寛解と完全寛解の両方を含む。部分寛解では、すべてではなく一部の癌の徴候および症状が消失する。完全寛解では、すべての癌の徴候および症状が消失するが、癌はまだ体内に存在する場合がある。
【０２３８】
「難治性」とは、特定の治療剤を用いた療法に抵抗性である、または非反応性である癌を指す。癌は、治療の開始時から難治性である場合（すなわち治療剤の初回暴露に非反応性）、または最初の治療期間、もしくはその後の治療期間のいずれかのうちに治療剤に対して抵抗性を発現した結果として難治性となる場合がある。
【０２３９】
「抗原陰性」とは、抗原を発現しない細胞、または検出できないごく少量の抗原を発現する細胞を指す。１つの実施形態では、抗原陰性細胞は、抗原の目的となる受容体に結合しない。１つの実施形態では、抗原陰性細胞は、抗原の目的となる受容体に実質的に結合しない。
【０２４０】
「自己免疫性疾患」とは、身体が、自身の組織の構成物質の一部に対し、免疫原性（すなわち免疫系）反応を生じさせる疾患を指す。言い換えると、免疫系が、身体内の組織またはシステムの一部を「自己」として認識する能力を失い、外来性であるとして攻撃してしまう。自己免疫性疾患は、主に１つの器官が影響を受けるもの（例えば溶血性貧血および自己免疫性甲状腺炎など）と、自己免疫性疾患プロセスが多くの組織に拡散されるもの（例えば全身性エリテマトーデスなど）に分類され得る。例えば多発性硬化症は、脳および脊髄の神経線維を取り囲む鞘をＴ細胞が攻撃することで発生すると考えられている。これによって、協調運動障害、脱力、および視力障害が生じる。自己免疫疾患は当分野に公知であり、例えば橋本甲状腺炎、グレーブス病、紅斑性狼瘡、多発性硬化症、リウマチ性関節炎、溶血性貧血、抗免疫性甲状腺炎、全身性エリテマトーデス、セリアック病、クローン病、大腸炎、糖尿病、強皮症、乾癬などが挙げられる。
【０２４１】
「免疫不全」とは、疾患または化学物質投与によって免疫系が機能障害を受けた患者の状態を意味する。これにより、外来性物質に対する防御に必要とされる血液細胞の数とタイプにおいて免疫系が不完全な状態となる。免疫不全状態または免疫不全疾患は当分野に公知であり、例えばＡＩＤＳ（後天性免疫不全症候群）、ＳＣＩＤ（重症複合型免疫不全症）、選択的ＩｇＡ欠損症、分類不能型免疫不全症、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症、慢性肉芽腫症、抗ＩｇＭ症候群、および糖尿病が挙げられる。
【０２４２】
「感染性疾患」とは、ヒトからヒトへと伝達され得る、または生物から生物へと伝達され得る疾患を指し、微生物またはウイルスにより発生する（例えば、風邪）。感染性疾患は当分野に公知であり、例えば肝炎、性感染症（例えば、クラミジア、淋病）、結核、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、ジフテリア、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、コレラ、およびインフルエンザが挙げられる。
【０２４３】
本明細書において使用される場合、「個体」および「対象」という用語はしばしば相互交換可能に使用され、癌の症状または他の免疫性障害の症状を呈する任意の動物を指し、本明細書に別段に予期される組成物および方法で治療され得る。適切な対象（例えば、患者）としては、実験動物（例えば、マウス、ラット、ウサギまたはモルモット）、家畜（ｆａｒｍ  ａｎｉｍａｌ、ｄｏｍｅｓｔｉｃ  ａｎｉｍａｌ）、およびペット（例えば、ネコまたはイヌ）が挙げられる。非ヒト霊長類、好ましくはヒト患者も含まれる。典型的な対象としては、癌もしくは別の免疫性障害と診断された、またはそのリスクのある、または癌もしくは別の免疫性障害を有するヒト患者が挙げられる。
【０２４４】
本明細書において使用される場合、「患者」という用語は、本明細書の別段に開示される組成物および方法で治療され得る癌または別の免疫障害と診断された対象を指す。
【０２４５】
本明細書において使用される場合、「治療」または「治療すること」には、疾患の症状もしくは病理、または病的状態に対する何らかの有益な効果または望ましい効果が含まれ、治療される疾患もしくは状態の１つまたは複数の測定可能なマーカーの最小の減少であっても含まれ得る。治療には、任意選択で、疾患もしくは状態の減少、または疾患もしくは状態の進行の遅延、例えば腫瘍増生の遅延が含まれてもよい。「治療」は必ずしも、疾患もしくは状態、またはその関連症状の完全な排除または治癒を示すものではない。
【０２４６】
本明細書において使用される場合、「予防する」、および例えば「予防される」、「予防すること」といった類似の文言は、疾患もしくは状態の予防、阻害、または発生もしくは再発の可能性の低下を目的としたアプローチを示す。さらに、疾患もしくは状態の発生または再発の遅延、または疾患もしくは状態の症状の発生または再発の遅延も指す。本明細書において使用される場合、「予防」およびその類似文言も、疾患もしくは症状の発生または再発の前の、疾患もしくは状態の強度、作用、症状、および／または負荷量の低下を含む。
【０２４７】
本明細書において使用される場合、「〜の少なくとも１つの症状の改善」とは、対象が治療される疾患もしくは状態の１つまたは複数の症状の減少を指す。特定の実施形態では、治療される疾患または状態は、癌であり、この場合において改善される１つまたは複数の症状としては限定されないが、脱力、疲労、息切れ、あざができやすい、および出血しやすい、頻発する感染、リンパ節の拡張、腹部膨張または腹部疼痛（膨張した腹部臓器が原因）、骨または関節の疼痛、骨折、予期せぬ体重減少、食欲低下、寝汗、持続性の微熱、および排尿減少（腎機能の障害が原因）が挙げられる。
【０２４８】
「強化する」、または「促進する」、または「増加する」、または「拡張する」とは概して、本明細書において予期される組成物が、ビヒクルまたは対照の分子／組成物による反応と比較して、大きな生理学的反応（すなわち下流効果）をもたらす、惹起させる、または発生させる能力を指す。測定可能な生理学的反応としては特にＴ細胞の拡張の増加、活性化、持続性、サイトカイン分泌、および／または癌細胞殺傷能力の増加が挙げられ、当分野および本明細書の記載の理解から明白である。「増加した」または「強化された」量は、典型的には「統計的に有意な」量であり、ビヒクルまたは対照組成物によりもたらされる反応の１．１、１．２、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０またはそれ以上（例えば５００倍、１０００倍）（その間および１を超えるすべての整数および小数点を含む、例えば１．５、１．６、１．７、１．８など）である増加を含む場合がある。
【０２４９】
「減少する」、または「下げる」、または「低める」、または「低下する」、または「弱める」とは概して、本明細書において予期される組成物が、ビヒクルまたは対照の分子／組成物による反応と比較して、小さな生理学的反応（すなわち下流効果）をもたらす、惹起させる、または発生させる能力を指す。「減少」または「低下した」量は、典型的には「統計的に有意な」量であり、ビヒクル、対照組成物によりもたらされる反応、または特定の細胞株での反応の１．１、１．２、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０またはそれ以上（例えば５００倍、１０００倍）（その間および１を超えるすべての整数および小数点を含む、例えば１．５、１．６、１．７、１．８など）である減少を含む場合がある。
【０２５０】
「維持する」、または「保存する」、または「維持」、または「変化がない」、または「実質的な変化がない」、または「実質的な減少が無い」とは概して、本明細書において予期される組成物が、ビヒクル、対照の分子／組成物により生じた反応、または特定の細胞株での反応と比較して、細胞において実質的に類似した、または同等の生理学的反応（すなわち、下流効果）をもたらす、惹起させる、または生じさせる能力を指す。同等の反応は、基準反応と実質的に違わない、または測定可能な程度に違わない反応である。
【０２５１】
追加の定義は、本開示全体を通じて記載されている。
【０２５２】
Ｃ．ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体
特定の実施形態では、免疫エフェクター細胞を、少なくとも１つまたは複数の標的抗原を発現する癌細胞へと再指向化させる１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体が予期される。本明細書において使用される場合、「ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体」という用語は、多量体化剤または架橋因子に暴露されたときに免疫エフェクター細胞において免疫刺激性シグナルを伝達する１つまたは複数の天然ポリペプチドを指し、例えば免疫エフェクター細胞の活性および機能を刺激する、炎症促進性サイトカインの産生および／または分泌を増加させる。好ましい実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体は、ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素と、１つまたは複数のＤＡＲＩＣ結合構成要素を含有する多重鎖受容体である。好ましい実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体は、ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素と、ＤＡＲＩＣ結合構成要素を含有する多重鎖受容体である。
【０２５３】
１つの実施形態では、ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素とＤＡＲＩＣ結合構成要素は、同じ細胞から発現される。別の実施形態では、ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素とＤＡＲＩＣ結合構成要素は、異なる細胞から発現される。特定の実施形態では、ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、細胞から発現され、ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、ポリペプチドなど外来性に供給される。１つの実施形態では、ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、架橋因子が前もって搭載され、ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素を発現する細胞に外来性に供給される。
【０２５４】
１．ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素
「ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素」または「ＤＡＲＩＣシグナル伝達ポリペプチド」とは、１つまたは複数の多量体化ドメイン、膜貫通ドメイン、および１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含有するポリペプチドを指す。特定の実施形態では、ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、多量体化ドメイン、膜貫通ドメイン、共刺激性ドメイン、および／または一次シグナル伝達ドメインを含有する。
【０２５５】
本明細書において予期される特定のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素における使用に適した多量体化ドメインの例示としては限定されないが、ＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ）ポリペプチドもしくはそのバリアント、またはＦＫＢＰ−ラパマイシン結合（ＦＲＢ）ポリペプチドもしくはそのバリアントが挙げられる。特定の好ましい実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、Ｔ２０９８Ｌ変異を含むＦＲＢポリペプチドまたはそのバリアントを含有する。ある好ましい実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、ＦＫＢＰ１２ポリペプチドまたはそのバリアントを含有する。
【０２５６】
本明細書において予期される特定のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素における使用に適した膜貫通ドメインの例示としては限定されないが、Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、またはデルタ鎖、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ  １６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ７１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ  １３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、ＣＤ  １５４、ＣＤ２７８、ＡＭＮ、ＰＤ１、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｂ、ＮＫＧ２ＣおよびＮＫＧ２Ｄの膜貫通領域が挙げられる。特に好ましい実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、ＣＤ８α膜貫通ドメインを含有する。ある好ましい実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、ＣＤ４膜貫通ドメインを含有する。
【０２５７】
様々な好ましい実施形態では、短オリゴペプチドリンカー、またはポリペプチドリンカー、好ましくは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０アミノ酸の長さのリンカーが、膜貫通ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインを結合する。グリシン−セリンを基にしたリンカーが、特に適切なリンカーを提供する。
【０２５８】
本明細書において予期されるＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含有する。１つの実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、１つまたは複数の共刺激性シグナル伝達ドメイン、および／または一次シグナル伝達ドメインを含有する。１つの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシン活性化モチーフ（ＩＴＡＭ：ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｍｏｔｉｆ）を含有する。
【０２５９】
本明細書において予期される特定のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素での使用に適したＩＴＡＭ含有一次シグナル伝達ドメインの例示としては限定されないが、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄに由来するものが挙げられる。特定の好ましい実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、ＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメイン、および１つまたは複数の共刺激性シグナル伝達ドメインを含有する。一次シグナル伝達ドメインおよび共刺激性シグナル伝達ドメインは、任意の順序でタンデムに、膜貫通ドメインのカルボキシル末端に結合されてもよい。
【０２６０】
本明細書において予期される特定のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素での使用に適した共刺激性分子の例示としては限定されないが、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＣＡＲＤ１１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＮＫＤ２Ｃ、ＳＬＰ７６、ＴＲＩＭ、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＲＳ１４、ＴＮＦＲＳ１８、ＴＮＦＲＳ２５およびＺＡＰ７０が挙げられる。特定の実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、ＣＤ２８、ＣＤ１３７およびＣＤ１３４からなる群から選択される１つまたは複数の共刺激性シグナル伝達ドメインを含有する。特定の実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、ＣＤ２８、ＣＤ１３７およびＣＤ１３４からなる群から選択される１つまたは複数の共刺激性シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含有する。特定の好ましい実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、ＣＤ１３７共刺激性ドメインと、ＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含有する。
【０２６１】
特定の実施形態では、本明細書において予期されるＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、例えば分泌シグナルペプチドなどのシグナルペプチドを含有し、膜貫通ドメインを含有しない。特定のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素での使用に適したシグナルペプチドの例示としては限定されないが、ＩｇＧ１重鎖シグナルポリペプチド、Ｉｇκ軽鎖シグナルポリペプチド、ＣＤ８αシグナルポリペプチド、またはヒトＧＭ−ＣＳＦ受容体アルファシグナルポリペプチドが挙げられる。様々な好ましい実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、ＣＤ８αシグナルポリペプチドを含有する。
【０２６２】
ある好ましい実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、ＦＲＢ  Ｔ２０９８Ｌ多量体化ドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激性ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含有する。
【０２６３】
２．ＤＡＲＩＣ結合構成要素
「ＤＡＲＩＣ結合構成要素」または「ＤＡＲＩＣ結合ポリペプチド」とは、ＮＫＧ２Ｄ受容体結合ドメインまたはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合部分、１つまたは複数の多量体化ドメイン、および膜貫通ドメインを含有するポリペプチドを指す。特定の実施形態では、ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、ＮＫＧ２Ｄ受容体結合ドメインまたはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合部分、多量体化ドメイン、および膜貫通ドメインを含有する。特定の実施形態では、「ＤＡＲＩＣ結合構成要素」または「ＤＡＲＩＣ結合ポリペプチド」とは、ＮＫＧ２Ｄ受容体結合ドメインまたはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合部分、１つまたは複数の多量体化ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含有するポリペプチドを指す。特定の実施形態では、ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、多量体化ドメイン、膜貫通ドメイン、共刺激性ドメイン、および／または一次シグナル伝達ドメインを含有する。
【０２６４】
ＮＫＧ２Ｄ受容体、またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合部分は、限定されないが、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、およびＵＬＢＰ６を含む１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄリガンドに結合するために必要な、または充分なＮＫＧ２Ｄポリペプチドである。特定の好ましい実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄリガンドに結合するために必要な、または充分なＮＫＧ２Ｄポリペプチドの細胞外部分を含有する。ある好ましい実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、配列番号１０または配列番号１１に記載されるアミノ酸配列を含むＮＫＧ２Ｄポリペプチドを含有する。
【０２６５】
本明細書において予期される特定のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素における使用に適した多量体化ドメインの例示としては限定されないが、ＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ）ポリペプチドもしくはそのバリアント、またはＦＫＢＰ−ラパマイシン結合（ＦＲＢ）ポリペプチドもしくはそのバリアントが挙げられる。特定の好ましい実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、ＦＫＢＰ１２ポリペプチドまたはそのバリアントを含有する。ある好ましい実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、Ｔ２０９８Ｌ変異を含むＦＲＢポリペプチドまたはそのバリアントを含有する。
【０２６６】
本明細書において予期される特定のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素における使用に適した膜貫通ドメインの例示としては限定されないが、Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、またはデルタ鎖、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ７１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ  １３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、ＣＤ  １５４、ＣＤ２７８、ＡＭＮ、ＰＤ１、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｂ、ＮＫＧ２ＣおよびＮＫＧ２Ｄの膜貫通領域が挙げられる。特に好ましい実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、ＣＤ４膜貫通ドメインを含有する。ある好ましい実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、ＣＤ８α膜貫通ドメインを含有する。一部の好ましい実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、ＡＭＮ膜貫通ドメインを含有する。
【０２６７】
様々な好ましい実施形態では、短オリゴペプチドリンカー、またはポリペプチドリンカー、好ましくは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０アミノ酸の長さのリンカーが、膜貫通ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインを結合する。グリシン−セリンを基にしたリンカーが、特に適切なリンカーを提供する。
【０２６８】
特定の実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、例えば共刺激性ドメインなどの細胞内シグナル伝達ドメインを１つまたは複数含有する。特定の実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣは、第一の共刺激性ドメインを含むＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素、および１つまたは複数の共刺激性ドメインを含むＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素を含有する。当該第一の共刺激性ドメイン、および当該１つまたは複数の共刺激性ドメインは、同一または異なってもよい。
【０２６９】
特定の実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣは、第一の共刺激性ドメインを含むＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素、および第二の共刺激性ドメインを含むＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素を含有する。当該第一および第二の共刺激性ドメインは、同一または異なってもよい。好ましい実施形態では、当該第一の共刺激性ドメインは、当該第二の共刺激性ドメインとは異なっている。
【０２７０】
ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素の特定の実施形態での使用に適した共刺激性ドメインの例示は、以下からなる群から選択される共刺激性分子から単離される：Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  １（ＴＬＲ１）、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ｃａｓｐａｓｅ  ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ  ｄｏｍａｉｎ  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １１（ＣＡＲＤ１１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ９４、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＮＡＸ−Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  １０（ＤＡＰ１０）、Ｌｉｎｋｅｒ  ｆｏｒ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔ−ｃｅｌｌｓ  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １（ＬＡＴ）、ＳＨ２  Ｄｏｍａｉｎ−Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｏｆ  ７６  ｋＤ（ＳＬＰ７６）、Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ａｄａｐｔｏｒ  １（ＴＲＡＴ１）、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １４（ＴＮＦＲＳ１４）、ＴＮＦ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １８（ＴＮＦＲＳ１８）、ＴＮＦ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  ２５（ＴＮＦＲＳ２５）、およびｚｅｔａ  ｃｈａｉｎ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  ７０（ＺＡＰ７０）。
【０２７１】
特定の実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、以下からなる群から選択される共刺激性分子の１つまたは複数の共刺激性ドメインを含有する：ＤＡＰ１０、ＴＮＦＲ２、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２７８、ＴＮＦＲＳ１４、ＴＮＦＲＳ１８およびＴＮＦＲＳ２５。
【０２７２】
特定の実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、以下からなる群から選択される共刺激性分子の共刺激性ドメインを含有する：ＴＮＦＲ２、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２７８、ＴＮＦＲＳ１４、ＴＮＦＲＳ１８およびＴＮＦＲＳ２５。
【０２７３】
好ましい実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、ＴＮＦＲ２共刺激性ドメインを含有する。
【０２７４】
特定の実施形態では、本明細書において予期されるＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、例えば分泌シグナルペプチドなどのシグナルペプチドを含有し、膜貫通ドメインを含有しない。特定のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素での使用に適したシグナルペプチドの例示としては限定されないが、ＩｇＧ１重鎖シグナルポリペプチド、Ｉｇκ軽鎖シグナルポリペプチド、ＣＤ８αシグナルポリペプチド、またはヒトＧＭ−ＣＳＦ受容体アルファシグナルポリペプチドが挙げられる。様々な好ましい実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、ＣＤ８αシグナルポリペプチドを含有する。
【０２７５】
特定の好ましい実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、ＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合部分、ＦＫＢＰ１２多量体化ドメイン、およびＣＤ４膜貫通ドメインを含有する。
【０２７６】
特定の好ましい実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、ＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合部分、ＦＫＢＰ１２多量体化ドメイン、ＣＤ４膜貫通ドメイン、およびＴＮＦＲ２共刺激性ドメインを含有する。
【０２７７】
ある好ましい実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、ＣＤ８αシグナルペプチド、ＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合部分、およびＦＫＢＰ１２多量体化ドメインを含有する。
【０２７８】
特定の実施形態では、ＤＡＲＩＣは、２、３、４またはそれ以上のＤＡＲＩＣ結合構成要素を含有し、多重標的化戦略を可能とする。
【０２７９】
ある実施形態では、ＤＡＲＩＣは、ＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合部分、ＦＫＢＰ１２多量体化ドメイン、膜貫通ドメイン、および任意で１つまたは複数の共刺激性ドメインを含むＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ならびにＢＣＭＡ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ１９  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、Ｂ７−Ｈ３  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ１９  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ２０  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ２２  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ３３  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ７９Ａ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ７９Ｂ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＥＧＦＲ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、およびＥＧＦＲｖＩＩＩ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素を含有する。
【０２８０】
ある実施形態では、ＤＡＲＩＣは、ＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合部分、ＦＫＢＰ１２多量体化ドメイン、ＣＤ４膜貫通ドメイン、および任意で１つまたは複数の共刺激性ドメインを含むＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ならびにＢＣＭＡ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ１９  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、Ｂ７−Ｈ３  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ１９  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ２０  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ２２  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ３３  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ７９Ａ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ７９Ｂ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＥＧＦＲ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、およびＥＧＦＲｖＩＩＩ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素を含有する。
【０２８１】
ある実施形態では、ＤＡＲＩＣは、ＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合部分、ＦＫＢＰ１２多量体化ドメイン、ＣＤ４膜貫通ドメイン、ならびに任意で、ＤＡＰ１０、ＴＮＦＲ２、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２７８、ＴＮＦＲＳ１４、ＴＮＦＲＳ１８およびＴＮＦＲＳ２５からなる群から選択される共刺激性分子の１つまたは複数の共刺激性ドメインを含むＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素；ならびにＢＣＭＡ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ１９  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、Ｂ７−Ｈ３  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ１９  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ２０  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ２２  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ３３  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ７９Ａ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ７９Ｂ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＥＧＦＲ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、およびＥＧＦＲｖＩＩＩ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素を含有する。
【０２８２】
特定の実施形態では、ＤＡＲＩＣは、ＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合部分、ＦＫＢＰ１２多量体化ドメイン、ＣＤ４膜貫通ドメイン、ならびに任意で、ＴＮＦＲ２、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＴＮＦＲＳ１４、ＴＮＦＲＳ１８およびＴＮＦＲＳ２５からなる群から選択される共刺激性分子の共刺激性ドメインを含むＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素；ならびに第二のＤＡＲＩＣ結合構成要素を含み、この場合において当該第二の結合構成要素は、ＢＣＭＡ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ１９  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、Ｂ７−Ｈ３  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ１９  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ２０  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ２２  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ３３  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ７９Ａ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ７９Ｂ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＥＧＦＲ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、およびＥＧＦＲｖＩＩＩ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素であり、当該第二の結合構成要素は、ＣＤ４膜貫通ドメインおよび任意で１つまたは複数の共刺激性ドメインを含有する。
【０２８３】
特定の実施形態では、ＤＡＲＩＣは、ＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合部分、ＦＫＢＰ１２多量体化ドメイン、ＣＤ４膜貫通ドメイン、ならびに任意で、ＴＮＦＲ２、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＴＮＦＲＳ１４、ＴＮＦＲＳ１８およびＴＮＦＲＳ２５からなる群から選択される共刺激性分子の共刺激性ドメインを含むＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素；ならびに第二のＤＡＲＩＣ結合構成要素を含み、この場合において当該第二の結合構成要素は、ＢＣＭＡ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ１９  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、Ｂ７−Ｈ３  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ１９  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ２０  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ２２  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ３３  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ７９Ａ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ７９Ｂ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＥＧＦＲ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、およびＥＧＦＲｖＩＩＩ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素であり、当該第二の結合構成要素は、ＣＤ４膜貫通ドメイン、および任意で以下からなる群から選択される共刺激性分子の１つまたは複数の共刺激性ドメインを含有する：ＤＡＰ１０、ＴＮＦＲ２、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２７８、ＴＮＦＲＳ１４、ＴＮＦＲＳ１８およびＴＮＦＲＳ２５。
【０２８４】
特定の実施形態では、ＤＡＲＩＣは、ＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合部分、ＦＫＢＰ１２多量体化ドメイン、ＣＤ４膜貫通ドメイン、ならびに任意で、ＴＮＦＲ２、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＴＮＦＲＳ１４、ＴＮＦＲＳ１８およびＴＮＦＲＳ２５からなる群から選択される共刺激性分子の共刺激性ドメインを含むＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素；ならびに第二のＤＡＲＩＣ結合構成要素を含み、この場合において当該第二の結合構成要素は、ＢＣＭＡ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ１９  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、Ｂ７−Ｈ３  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ１９  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ２０  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ２２  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ３３  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ７９Ａ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ７９Ｂ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＥＧＦＲ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、およびＥＧＦＲｖＩＩＩ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素であり、当該第二の結合構成要素は、ＣＤ４膜貫通ドメイン、および以下からなる群から選択される共刺激性分子の共刺激性ドメインを含有する：ＴＮＦＲ２、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＴＮＦＲＳ１４、ＴＮＦＲＳ１８およびＴＮＦＲＳ２５。
【０２８５】
３．架橋因子
本明細書において予期される架橋因子は、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素とＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素の会合を、構成要素多量体化ドメインを通じて介在または促進する。架橋因子は、多量体化ドメインと関連付けられ、その間に配置されて、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素とＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素の会合を促進する。架橋因子の存在下で、ＤＡＲＩＣ結合構成要素とＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は会合し、ＤＡＲＩＣ結合ポリペプチドが標的細胞上の標的抗原に結合したときに、標的細胞に対する免疫エフェクター細胞活性を開始させる。架橋因子の非存在下では、ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素と会合しない。
【０２８６】
特定の実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素とＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、１つもしくは複数のＦＲＢおよび／またはＦＫＢＰ多量体化ドメイン、またはそのバリアントを含有する。ある実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、ＦＲＢ多量体化ドメインまたはそのバリアントを含有し、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、ＦＫＢＰ多量体化ドメインまたはそのバリアントを含有する。特定の好ましい実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、ＦＲＢ  Ｔ２０９８Ｌ多量体化ドメインまたはそのバリアントを含有し、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、ＦＫＢＰ１２もしくはＦＫＢＰ１２  Ｆ３６Ｖ多量体化ドメインまたはそのバリアントを含有する。
【０２８７】
本明細書において予期される特定の実施形態での使用に適した架橋因子の例示としては限定されないが、ＡＰ１９０３、ＡＰ２０１８７、ＡＰ２１９６７（Ｃ−１６−（Ｓ）−７−メチルインドールラパマイシンとしても知られている）、エベロリムス、ノボリムス、ピメクロリムス、リダフォロリムス、タクロリムス、テムシロリムス、ウミロリムス、およびゾタロリムスが挙げられる。特定の好ましい実施形態では、架橋因子は、ＡＰ２１９６７である。ある好ましい実施形態では、架橋因子は、シロリムス（ラパマイシン）である。
【０２８８】
Ｄ．操作された抗原受容体
特定の実施形態では、細胞は、１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣポリペプチド、および操作された抗原受容体を発現するように操作され、または改変される。特定の実施形態では、融合ポリペプチドをコードする核酸またはベクターは、操作された受容体、ならびにＮＫＧ２Ｄ結合構成要素および／またはＮＫＧ２Ｄシグナル伝達構成要素、ならびに当該受容体と当該構成要素の間に散在する１つまたは複数のポリペプチド切断シグナルを含有する。他の特定の実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体をコードするポリヌクレオチドまたはベクターは、操作された抗原受容体を含む免疫エフェクター細胞内に導入される。何らかの特定の学説に拘束されることは望まないが、特定の実施形態では、当分野に公知の任意のメカニズムを使用して、操作された抗原受容体、およびＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体を、同じ免疫エフェクター細胞、または細胞群に導入し、共発現させて、免疫エフェクター細胞反応の効率、有効性および耐久性を高め得ることが予期される。
【０２８９】
特定の実施形態では、本明細書において予期される免疫エフェクター細胞は、操作された抗原受容体、およびＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体の１つまたは複数の構成要素を含有する。特定の実施形態では、当該操作された抗原受容体は、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、またはゼータカインである。
【０２９０】
１．操作されたＴＣＲ
特定の実施形態では、本明細書において予期される免疫エフェクター細胞は、操作されたＴＣＲ、およびＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体の１つまたは複数の構成要素を含有する。１つの実施形態では、Ｔ細胞は、１つまたは複数のポリペプチド切断シグナルにより分離された、操作されたＴＣＲ、およびＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体の１つまたは複数の構成要素をコードするポリヌクレオチドまたはベクターを導入することにより操作される。１つの実施形態では、Ｔ細胞は、操作されたＴＣＲをコードするポリヌクレオチドまたはベクター、およびＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体の１つまたは複数の構成要素をコードするポリヌクレオチドまたはベクターを導入することにより操作される。１つの実施形態では、Ｔ細胞は、操作されたＴＣＲを発現するように操作され、さらに、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体の１つまたは複数の構成要素をコードするポリヌクレオチドまたはベクターを導入することにより操作される。
【０２９１】
天然のＴ細胞受容体は２つのサブユニット、つまりアルファ鎖とベータ鎖のサブユニット（αβＴＣＲ）、またはガンマ鎖とデルタ鎖のサブユニット（γδＴＣＲ）を含有し、それら各々が、各Ｔ細胞ゲノムの組み換え事象により生成される固有タンパク質である。ＴＣＲのライブラリは、特定の標的抗原に対する選択性に関してスクリーニングされてもよい。このようにして、標的抗原に対する高いアビディティと反応性を有する天然ＴＣＲが選択され、クローニングされ、そしてその後、養子免疫療法に使用されるＴ細胞群内に導入される。１つの実施形態では、ＴＣＲは、αβＴＣＲである。１つの実施形態では、ＴＣＲは、δγＴＣＲである。
【０２９２】
１つの実施形態では、Ｔ細胞は、標的抗原を発現する腫瘍細胞に対する特異性をＴ細胞に付与するＴＣＲを形成する能力を有するＴＣＲサブユニットを導入することにより改変される。特定の実施形態では、サブユニットは、天然サブユニットと比較して、１つもしくは複数のアミノ酸の置換、欠失、挿入または改変を有するが、ただし当該サブユニットは、ＴＣＲを形成し、トランスフェクトされたＴ細胞に標的細胞へと戻る能力を付与し、そして免疫学的に関連性のあるサイトカインシグナル伝達に関与する能力を保持するものとする。操作されたＴＣＲはさらに、関連性のある腫瘍関連ペプチドを呈する標的細胞に高いアビディティで結合し、任意で関連ペプチドを提示する標的細胞の効率的な殺傷をインビボで介在することが好ましい。
【０２９３】
操作されたＴＣＲをコードする核酸は、Ｔ細胞の（天然）染色体における本来の状況から単離されることが好ましく、本明細書において別段に記載されるように適切なベクター内に導入されることができる。核酸、および当該核酸を含むベクターの両方が、細胞、好ましくは特定の実施形態ではＴ細胞内にトランスファーされることができる。その後、改変Ｔ細胞は、形質導入された核酸によりコードされるＴＣＲの１つまたは複数の鎖を発現することができる。好ましい実施形態では、操作されたＴＣＲは、当該特定のＴＣＲを通常は発現しないＴ細胞内に導入されるという点で、外来性のＴＣＲである。操作されたＴＣＲの本質的側面は、主要組織適合性遺伝子複合体（ＭＨＣ）または類似の免疫構成要素により提示される腫瘍抗原に対し高いアビディティを有するということである。操作されたＴＣＲとは対照的に、ＣＡＲは、ＭＨＣ非依存性の様式で、標的抗原に結合するよう操作される。
【０２９４】
ＴＣＲは、ＴＣＲのアルファ鎖もしくはベータ鎖、またはガンマ鎖もしくはデルタ鎖のアミノ末端部分またはカルボキシル末端部分に付加された追加ポリペプチドとともに発現されてもよいが、ただし当該付加された追加ポリペプチドは、アルファ鎖またはベータ鎖が、機能性Ｔ細胞受容体を形成する能力、およびＭＨＣ依存性の抗原認識能力に干渉しないものとする。
【０２９５】
特定の実施形態において予期される操作されたＴＣＲにより認識される抗原としては限定されないが、血液癌または固形腫瘍の両方での抗原を含む、癌抗原が挙げられる。抗原の例示としては限定されないが、アルファ葉酸受容体、アルファ葉酸受容体、５Ｔ４、αｖβ６インテグリン、ＢＣＭＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ６、ＣＡＩＸ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）を含むＥＧＦＲファミリー、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０、ＥＰＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、胎児性ＡｃｈＲ、ＦＲα、ＧＤ２、ＧＤ３、グリピカン−３（ＧＰＣ３）、ＨＬＡ−Ａ１＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ２＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ１＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ２＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ−１３Ｒα２，Ｌａｍｂｄａ、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ，Ｋａｐｐａ、メソテリン、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６、ＮＣＡＭ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＳＳＸ、サバイビン、ＴＡＧ７２、ＴＥＭｓ、ＶＥＧＦＲ２、およびＷＴ−１が挙げられる。
【０２９６】
好ましい実施形態では、標的抗原、および１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄリガンドは、１つまたは複数の癌細胞上で共発現される。
【０２９７】
２．キメラ抗原受容体
様々な実施形態では、免疫エフェクター細胞は、腫瘍細胞へ細胞障害活性を再指向化させるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する。ＣＡＲは、標的抗原（例えば腫瘍抗原）に対する抗体系の特異性と、Ｔ細胞受容体活性化細胞内ドメインを組み合わせて、特異的な抗腫瘍細胞性免疫活性を呈するキメラタンパク質を生成する分子である。本明細書において使用される場合、「キメラ」という用語は、異なる起源に由来する異なるタンパク質部分またはＤＮＡ部分から構成されるものを表す。
【０２９８】
特定の実施形態では、本明細書において予期される免疫エフェクター細胞は、ＣＡＲ、および１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体構成要素を含有する。１つの実施形態では、Ｔ細胞は、１つまたは複数のポリペプチド切断シグナルにより分離された、ＣＡＲ、および１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体構成要素をコードするポリヌクレオチドまたはベクターを導入することにより操作される。１つの実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドまたはベクター、および１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体構成要素をコードするポリヌクレオチドまたはベクターを導入することにより操作される。１つの実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＡＲを発現するように操作され、さらに、１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体構成要素をコードするポリヌクレオチドまたはベクターを導入することにより操作される。
【０２９９】
様々な実施形態では、ＣＡＲは、特異的標的抗原に結合する細胞外ドメイン（結合ドメイン、または抗原特異的結合ドメインとも呼称される）、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含有する。ＣＡＲの主な特徴は、免疫エフェクター細胞の特異性を再指向化させる能力であり、この能力によって、増殖、サイトカイン産生、ファゴサイトーシス、または標的抗原発現細胞の細胞死を、主要組織適合性遺伝子複合体（ＭＨＣ）非依存性の様式で介在し得る分子の産生が誘発され、モノクローナル抗体、可溶性リガンドまたは細胞特異的コレセプターの細胞特異的標的化能力が引き出される。
【０３００】
特定の実施形態では、ＣＡＲは、標的ポリペプチドに特異的に結合する細胞外結合ドメインを含有する。結合ドメインは、対象の生物分子に対する任意の天然結合パートナー、合成パートナー、半合成パートナー、または組み換え産生された結合パートナーを含有する。
【０３０１】
特定の実施形態では、細胞外結合ドメインは、抗体またはその抗原結合断片を含有する。
【０３０２】
１つの好ましい実施形態では、結合ドメインは、ｓｃＦｖである。
【０３０３】
別の好ましい実施形態では、結合ドメインは、ラクダ科抗体である。
【０３０４】
特定の実施形態では、ＣＡＲは、以下からなる群から選択される抗原に結合する細胞外ドメインを含有する：アルファ葉酸受容体、５Ｔ４、αｖβ６インテグリン、ＢＣＭＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ６、ＣＡＩＸ、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）を含むＥＧＦＲファミリー、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０、ＥＰＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、胎児性ＡｃｈＲ、ＦＲα、ＧＤ２、ＧＤ３、グリピカン−３（ＧＰＣ３）、ＨＬＡ−Ａ１＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ２＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ１＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ２＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ−１３Ｒα２，ラムダ、ルイス−Ｙ，カッパ、メソテリン、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６、ＮＣＡＭ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＳＳＸ、サバイビン、ＴＡＧ７２、ＴＥＭｓ、ＶＥＧＦＲ２、およびＷＴ−１。
【０３０５】
特定の実施形態では、ＣＡＲは、例えば抗体、または抗原に結合するその抗原結合断片などの細胞外結合ドメインを含有し、この場合において当該抗原は、例えばクラスＩ  ＭＨＣ−ペプチド複合体、またはクラスＩＩ  ＭＨＣ−ペプチド複合体などのＭＨＣ−ペプチド複合体である。
【０３０６】
好ましい実施形態では、標的抗原、および１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄリガンドは、１つまたは複数の癌細胞上で共発現される。
【０３０７】
１つの実施形態では、スペーサードメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４またはＩｇＤのＣＨ２およびＣＨ３を含有する。
【０３０８】
本明細書に記載されるＣＡＲにおける使用に適したヒンジドメインの例示としては、例えばＣＤ８αおよびＣＤ４といった１型膜タンパク質の細胞外領域に由来するヒンジ領域が挙げられ、これら分子の野生型ヒンジ領域であってもよく、または改変されてもよい。別の実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ８αヒンジ領域を含有する。
【０３０９】
１つの実施形態では、ヒンジは、ＰＤ−１ヒンジまたはＣＤ１５２ヒンジである。
【０３１０】
ＣＡＲの膜貫通（ＴＭ）ドメインは、細胞外結合部分と細胞内シグナル伝達ドメインを結合させ、ＣＡＲを、免疫エフェクター細胞の細胞膜に固定する。ＴＭドメインは、天然源、合成源、半合成源、または組み換え源のいずれかから誘導されてもよい。
【０３１１】
ＴＭドメインの例示としては、Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖またはデルタ鎖、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ  １６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ  １３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＣＤ２７８、ＡＭＮ、およびＰＤ−１の少なくとも膜貫通領域に由来してもよい（すなわち含有してもよい）。
【０３１２】
１つの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ８α由来のＴＭドメインを含有する。別の実施形態では、本明細書において予期されるＣＡＲは、ＣＤ８α由来のＴＭドメインと、好ましくは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０アミノ酸の長さの短オリゴリンカーまたはポリペプチドリンカーを含有し、当該リンカーは、ＣＡＲのＴＭドメインと細胞内シグナル伝達ドメインを結合させる。グリシン−セリンリンカーが、特に適切なリンカーを提供する。
好ましい実施形態では、ＣＡＲは、１つまたは複数の「共刺激性シグナル伝達ドメイン」と、「一次シグナル伝達ドメイン」を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含有する。
【０３１３】
刺激性に作用する一次シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシン系活性化モチーフ（ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ−ｂａｓｅｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｍｏｔｉｆｓ）またはＩＴＡＭとして知られているシグナル伝達モチーフを含有する場合がある。
【０３１４】
特定の実施形態で予期されるＣＡＲにおける使用に適したＩＴＡＭ含有一次シグナル伝達ドメインの例示としては、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄに由来するものが挙げられる。特定の好ましい実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメイン、および１つまたは複数の共刺激性シグナル伝達ドメインを含有する。細胞内の一次シグナル伝達ドメインおよび共刺激性シグナル伝達ドメインは、任意の順序でタンデムに、膜貫通ドメインのカルボキシル末端に結合されてもよい。
【０３１５】
特定の実施形態では、ＣＡＲは、１つまたは複数の共刺激性シグナル伝達ドメインを含有し、ＣＡＲ受容体を発現するＴ細胞の有効性および拡張を強化する。
【０３１６】
特定の実施形態で予期されるＣＡＲにおける使用に適した共刺激性分子の例示としては、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＣＡＲＤ１１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＮＫＤ２Ｃ、ＳＬＰ７６、ＴＲＩＭ、およびＺＡＰ７０が挙げられる。１つの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２８、ＣＤ１３７およびＣＤ１３４からなる群から選択される１つまたは複数の共刺激性シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含有する。
【０３１７】
様々な実施形態では、ＣＡＲは、以下からなる群から選択される抗原に結合する細胞外ドメイン：ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＳＰＧ４、ＰＳＣＡ、ＲＯＲ１、およびＴＡＧ７２；以下からなる群から選択されるポリペプチドから単離される膜貫通ドメイン：ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ１５４、およびＰＤ−１；以下からなる群から選択されるポリペプチドから単離される１つまたは複数の細胞内共刺激性シグナル伝達ドメイン：ＣＤ２８、ＣＤ１３４、およびＣＤ１３７；ならびに以下からなる群から選択されるポリペプチドから単離されるシグナル伝達ドメイン、を含有する：ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄ。
【０３１８】
様々な実施形態では、ＣＡＲは、以下からなる群から選択される抗原に結合する細胞外ドメイン：ＢＣＭＡ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＥＧＦＲ、およびＥＧＦＲｖＩＩＩ；以下からなる群から選択されるポリペプチドから単離される膜貫通ドメイン：ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ１５４、およびＰＤ−１；以下からなる群から選択されるポリペプチドから単離される１つまたは複数の細胞内共刺激性シグナル伝達ドメイン：ＣＤ２８、ＣＤ１３４、およびＣＤ１３７；ならびに以下からなる群から選択されるポリペプチドから単離されるシグナル伝達ドメイン、を含有する：ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄ。
【０３１９】
３．ゼータカイン
様々な実施形態では、免疫エフェクター細胞は、腫瘍細胞へ細胞障害活性を再指向化させるキメラサイトカイン受容体を含有する。ゼータカインは、キメラ膜貫通免疫受容体であり、支持領域に結合された可溶性受容体リガンドを含む細胞外ドメインを含有し、当該支持領域は、細胞外ドメインを、細胞表面、膜貫通領域および細胞内シグナル伝達ドメインに繋ぐことができる。Ｔリンパ球表面上でゼータカインが発現される場合、ゼータカインは、Ｔ細胞活性を、可溶性受容体リガンドに対して特異的な受容体を発現する細胞へと指向させる。ゼータカインキメラ免疫受容体は、特にヒト悪性腫瘍に利用されるオートクライン／パラクラインのサイトカインシステムを介してＴ細胞の抗原特異性を再指向化させ、様々な癌の治療に適用される。
【０３２０】
特定の実施形態では、本明細書において予期される免疫エフェクター細胞は、ゼータカイン受容体の１つまたは複数の鎖、および１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体構成要素を含有する。１つの実施形態では、Ｔ細胞は、１つまたは複数のポリペプチド切断シグナルにより分離された、ゼータカイン受容体の１つまたは複数の鎖、および１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体構成要素をコードするポリヌクレオチドまたはベクターを導入することにより操作される。１つの実施形態では、Ｔ細胞は、ゼータカイン受容体の１つまたは複数の鎖をコードするポリヌクレオチドまたはベクター、および１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体構成要素をコードするポリヌクレオチドまたはベクターを導入することにより操作される。１つの実施形態では、Ｔ細胞は、ゼータカイン受容体の１つまたは複数の鎖を発現するように操作され、さらに、１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体構成要素をコードするポリヌクレオチドまたはベクターを導入することにより操作される。
【０３２１】
特定の実施形態では、ゼータカインは、免疫抑制性サイトカインまたはそのサイトカイン受容体結合バリアント、リンカー、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含有する。
【０３２２】
特定の実施形態では、サイトカイン、またはそのサイトカイン受容体結合バリアントは、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、インターロイキン−１０（ＩＬ−１０）、およびインターロイキン−１３（ＩＬ−１３）からなる群から選択される。
【０３２３】
ある実施形態では、リンカーは、ＣＨ２ＣＨ３ドメイン、ヒンジドメインなどを含有する。１つの実施形態では、リンカーは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４またはＩｇＤのＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインを含有する。１つの実施形態では、リンカーは、ＣＤ８αまたはＣＤ４のヒンジドメインを含有する。
【０３２４】
特定の実施形態では、膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖またはデルタ鎖、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ  １６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ  １３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＣＤ２７８、ＡＭＮ、およびＰＤ−１からなる群から選択される。
【０３２５】
特定の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ含有一次シグナル伝達ドメイン、および／または共刺激性ドメインからなる群から選択される。
【０３２６】
特定の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、以下からなる群から選択される：ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄ。
【０３２７】
特定の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、以下からなる群から選択される：ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＣＡＲＤ１１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＮＫＤ２Ｃ、ＳＬＰ７６、ＴＲＩＭ、およびＺＡＰ７０。
【０３２８】
１つの実施形態では、キメラサイトカイン受容体は、ＣＤ２８、ＣＤ１３７およびＣＤ１３４からなる群から選択される１つまたは複数の共刺激性シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含有する。
【０３２９】
Ｅ．ポリペプチド
様々なポリペプチドが本明細書において予期され、限定されないが、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素、操作されたＴＣＲ、ＣＡＲ、ゼータカイン、前述のポリペプチドおよびその断片を含有する融合タンパク質が挙げられる。好ましい実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１〜９のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含有する。「ポリペプチド」「ペプチド」、および「タンパク質」は、相互交換可能に使用され、反対であることが明記されない限り、従来的な意味に従う。すなわちアミノ酸配列として使用される。１つの実施形態では、「ポリペプチド」は、融合ポリペプチドおよび他のバリアントを含む。ポリペプチドは、様々な公知の組み換え技術および／または合成技術のいずれかを使用して調製され得る。ポリペプチドは特定の長さに限定されない。例えばポリペプチドは、全長タンパク質配列、全長タンパク質の断片、または融合タンパク質を含有してもよい。ポリペプチドは、例えばグリコシル化、アセチル化、リン酸化などのポリペプチドの翻訳後修飾を含んでもよく、ならびに当分野に公知の天然および非天然の他の修飾を含んでもよい。特定の好ましい実施形態では、融合ポリペプチド、ポリペプチド、断片、およびそれらの他のバリアントは、１つまたは複数のヒトポリペプチドから調製され、取得され、または単離される。
【０３３０】
本明細書において使用される場合、「単離ペプチド」または「単離ポリペプチド」などは、細胞環境からの、および細胞の他の構成要素との会合からの、ペプチド分子またはポリペプチド分子のインビトロでの単離および／または精製を指す。すなわち、インビボでの物質と実質的に関連づけられていない。特定の実施形態では、単離ポリペプチドは、合成ポリペプチド、半合成ポリペプチド、または組み換え源から取得された、もしくは誘導されたポリペプチドである。
【０３３１】
ポリペプチドは、「ポリペプチドバリアント」を含む。ポリペプチドバリアントは、１つまたは複数の置換、欠失、付加および／または挿入により、天然ポリペプチドとは異なっている場合がある。そうしたバリアントは、天然であってもよく、または例えば上述のポリペプチド配列の１つまたは複数を改変することにより合成的に生成されてもよい。例えば特定の実施形態では、１つまたは複数の置換、欠失、付加および／または挿入をポリペプチドに導入することにより、ポリペプチドの結合アフィニティおよび／または他の生物学的性質を改善することが望ましい場合がある。特定の実施形態では、ポリペプチドは、本明細書において予期される参照配列のいずれかに対し、少なくとも約６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、８６％、９７％、９８％、または９９％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含み、典型的には、当該バリアントは、参照配列の少なくとも１つの生物学的活性を維持している。特定の実施形態では、生物学的活性は、結合アフィニティである。特定の実施形態では、生物学的活性は、酵素活性である。
【０３３２】
ある実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体は、（ｉ）第一のポリペプチド、例えば第一の多量体化ドメインを有する第一の融合ポリペプチド、および（ｉｉ）第二のポリペプチド、例えば第二の多量体化ドメインを有する第一の融合ポリペプチド、を含有するポリペプチド複合体を含有する。特定の実施形態では、多量体化ドメインは同一である。ある実施形態では、第一の多量体化ドメインは、第二の多量体化ドメインとは異なっている。第一および第二の多量体化ドメインは、架橋因子の存在下で、ポリペプチド複合体の形成に大きく貢献し、または効率的に促進する。第一の多量体化ドメイン、第二の多量体化ドメインまたは架橋因子の非存在下で、第一の融合ポリペプチドと第二の融合ポリペプチドの間の会合が統計的に有意に低下する場合、第一の多量体化ドメインと第二の多量体化ドメインの間の相互作用は、第一の融合ポリペプチドと第二の融合ポリペプチドの多量体化に大きく貢献し、または効率的に促進する。ある実施形態では、第一の融合ポリペプチドと第二の融合ポリペプチドが共発現される場合、第一の一本鎖ポリペプチドと第二の一本鎖ポリペプチドの少なくとも約６０％、例えば少なくとも約６０％〜約７０％、少なくとも約７０％〜約８０％、少なくとも約８０％〜約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％、および少なくとも約９０％〜約９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％が、架橋因子の存在下で互いに多量体を形成する。
【０３３３】
ポリペプチドバリアントは、生物学的に活性な「ポリペプチド断片」を含む。生物学的に活性なポリペプチド断片の例示としては、結合ドメイン、シグナル伝達ドメイン、ＮＫＧ２Ｄリガンド結合ドメインなどが挙げられる。本明細書において使用される場合、「生物学的に活性な断片」または「最小の生物学的に活性な断片」という用語は、天然ポリペプチドの少なくとも１００％、少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、少なくとも５０％、少なくとも４０％、少なくとも３０％、少なくとも２０％、少なくとも１０％、または少なくとも５％の活性を保持するポリペプチド断片を指す。ある実施形態では、ポリペプチド断片は、少なくとも５〜約１７００アミノ酸の長さのアミノ酸鎖を含有し得る。ある実施形態では、断片は、少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、またはそれ以上のアミノ酸の長さである。
【０３３４】
特定の実施形態では、本明細書に記載されるポリペプチドは、「Ｘ」と示される１つまたは複数のアミノ酸を含有してもよい。アミノ酸配列番号中にある場合、「Ｘ」とは、いずれか１つまたは複数のアミノ酸を指す。特定の実施形態では、融合タンパク質を示す配列番号は、任意のアミノ酸配列を累積的に表す、連続するＸ残基の配列を含有する。
【０３３５】
上述のように、ポリペプチドは、アミノ酸の置換、欠失、切断および挿入を含む、様々な方法で改変されてもよい。そうした操作のための方法は、当分野において一般的に公知である。例えば、参照ポリペプチドのアミノ酸配列バリアントは、ＤＮＡ中の突然変異により作製され得る。突然変異誘導およびヌクレオチド配列改変のための方法は、当分野に公知である。例えば、Ｋｕｎｋｅｌ（１９８５，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８２：４８８−４９２）、Ｋｕｎｋｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８７，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌ，１５４：３６７−３８２）、米国特許第  ４，８７３，１９２号、Ｗａｔｓｏｎ，Ｊ．Ｄ．ｅｔ  ａｌ．、（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｇｅｎｅ，Ｆｏｕｒｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ，Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ，Ｃａｌｉｆ．，１９８７）、およびそれらにおいて引用される参照文献を参照のこと。対象タンパク質の生物活性に影響を与えない適切なアミノ酸置換に関するガイダンスは、Ｄａｙｈｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，（１９７８）Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）のモデルに見出され得る。
【０３３６】
ある実施形態では、ポリペプチドバリアントは、１つまたは複数の保存的置換を含有する。「保存的置換」は、アミノ酸が、類似した性能を有する別のアミノ酸に置換される置換であり、ペプチド化学分野の当業者であれば、そうした置換によって、当該ポリペプチドの二次構造および疎水親水的性質が実質的に変化しないと予測するであろう。特定の実施形態において予期されるポリヌクレオチドおよびポリペプチドの構造に改変を行ってもよく、それでも所望の特徴を有するバリアントポリペプチドまたは誘導体ポリペプチドをコードする機能性分子が取得される。ポリペプチドのアミノ酸配列を変更し、均等な、または改善されたバリアントポリペプチドを生成することが望ましい場合、当業者は、例えば表１に従い、コードＤＮＡ配列のコドンのうちの１つまたは複数を変えることができる。
表１−アミノ酸コドン
【表１】
2021506262.tif 000003
【０３３７】
どのアミノ酸残基が、生物活性を無効化することなく置換、挿入または欠失させ得るかを決定するガイダンスは、当分野に公知のコンピュータープログラム、例えばＤＮＡＳＴＡＲ、ＤＮＡ  Ｓｔｒｉｄｅｒ、Ｇｅｎｅｉｏｕｓ、Ｍａｃ  Ｖｅｃｔｏｒ、またはＶｅｃｔｏｒ  ＮＴＩソフトウェアなどを使用して見出すことができる。本明細書に開示されるタンパク質バリアント中のアミノ酸の変化は、保存的アミノ酸変化、すなわち類似した荷電アミノ酸、または非荷電アミノ酸の置換であることが好ましい。保存的アミノ酸変化には、その側鎖で関連付けられているアミノ酸ファミリーの１つの置換を含む。天然アミノ酸は一般的に以下の４つのファミリーに分けられる：酸性アミノ酸（アスパラギン酸、グルタミン酸）、塩基性アミノ酸（リシン、アルギニン、ヒスチジン）、非極性アミノ酸（アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、および非荷電極性アミノ酸（グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、チロシン）。フェニルアラニン、トリプトファンおよびチロシンは、合わせて芳香族アミノ酸として分類される場合もある。ペプチドまたはタンパク質において、アミノ酸の適切な保存的置換は当業者に公知であり、一般的に得られる分子の生物活性を変化させることなく行うことができる。当業者であれば、ポリペプチドの非必須領域中の一アミノ酸置換は概して、生物活性を大きくは変化させないと認識している（例えば、Ｗａｔｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｇｅｎｅ，４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９８７，Ｔｈｅ  Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ  Ｐｕｂ．Ｃｏ．，ｐ．２２４を参照のこと）。
【０３３８】
１つの実施形態では、２つ以上のポリペプチドの発現が望ましい場合、それらをコードするポリヌクレオチド配列は、本明細書において別段に開示されるようにＩＲＥＳ配列により分離されてもよい。
【０３３９】
特定の実施形態において予期されるポリペプチドは、融合ポリペプチドを含む。特定の実施形態では、融合ポリペプチド、および融合ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが提供される。融合ポリペプチドおよび融合タンパク質とは、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９または１０個以上のポリペプチドセグメントを有するポリペプチドを指す。好ましい実施形態では、融合ポリペプチドは、１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ構成要素を含有する。特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体を含有する。
【０３４０】
特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素、ＮＫＧ２Ｄ結合構成要素、および別の標的抗原に対して指向される別のＤＡＲＩＣ結合構成要素を含有する。
【０３４１】
融合ポリペプチドは、限定されないが、シグナルペプチド、細胞透過性ペプチドドメイン（ＣＰＰ：ｃｅｌｌ  ｐｅｒｍｅａｂｌｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ）、ＤＮＡ結合ドメイン、シグナル伝達ドメインなど、エピトープタグ（例えばマルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）、グルタチオンＳトランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、ＨＩＳ６、ＭＹＣ、ＦＬＡＧ、Ｖ５、ＶＳＶ−Ｇ、およびＨＡ）、ポリペプチドリンカー、およびポリペプチド切断シグナルをはじめとする１つまたは複数のポリペプチドドメインまたはポリペプチドセグメントを含有してもよい。融合ポリペプチドは、典型的にはＣ末端〜Ｎ末端で結合されるが、Ｃ末端〜Ｃ末端、Ｎ末端〜Ｎ末端、またはＭ末端〜Ｃ末端で結合されることもできる。特定の実施形態では、融合タンパク質のポリペプチドは、任意の順序であってもよい。融合ポリペプチドまたは融合タンパク質は、保存的に改変されたバリアント、多型バリアント、アレル、突然変異体、下位配列、および種間ホモログを含み得るが、ただし融合ポリペプチドの望ましい活性は保存されるものとする。融合ポリペプチドは、化学合成法により、または２つの部分の間の化学的結合により作製されてもよく、または他の標準的な方法を使用して一般的に調製されてもよい。融合ポリペプチドを含むライゲーションされたＤＮＡ配列は、本明細書において別段に開示されるように適切な転写制御因子または翻訳制御因子に操作可能に連結される。
【０３４２】
融合ポリペプチドは任意で、１つまたは複数のリンカーを含んでもよく、それらリンカーを使用して、１つもしくは複数のポリペプチド、またはポリペプチド内のドメインを結合することができる。ペプチドリンカー配列を採用して任意の２つ以上のポリペプチド構成要素を、各ポリペプチドが適切な二次構造および三次構造へとフォールディングされるために充分な距離をとって分離させてもよく、それによりポリペプチドドメインが、その望ましい機能を発揮することが可能となる。そうしたペプチドリンカー配列は、当分野において標準的な技術を使用して融合ポリペプチドへと組み込まれる。適切なペプチドリンカー配列は、以下の因子に基づき選択されてもよい：（１）柔軟な拡張立体構造をとる能力、（２）第一のポリペプチドおよび第二のポリペプチド上の機能性エピトープと相互作用し得る二次構造をとらない能力、および（３）ポリペプチドの機能性エピトープと反応する可能性がある疎水性または荷電性の残基の欠落。特定の実施形態では、好ましいペプチドリンカー配列は、Ｇｌｙ残基、Ａｓｎ残基およびＳｅｒ残基を含有する。他の近しい中性アミノ酸、例えばＴｈｒやＡｌａなどもリンカー配列に使用され得る。リンカーとして有用に採用され得るアミノ酸配列は、Ｍａｒａｔｅａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  ４０：３９−４６，１９８５；Ｍｕｒｐｈｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８３：８２５８−８２６２，１９８６、米国特許第４，９３５，２３３号および米国特許第４，７５１，１８０号に記載されるものが挙げられる。特定の融合ポリペプチドセグメントが非必須Ｎ末端アミノ酸領域を含有し、当該領域を使用して機能性ドメインを分離させ、立体干渉を防ぐことができる場合には、リンカー配列は必要ない。特定の実施形態では、好ましいリンカーは、典型的には、柔軟性のあるアミノ酸下位配列であり、当該配列は組み換え融合タンパク質の一部として合成される。リンカーポリペプチドは、１〜２００アミノ酸の長さ、１〜１００アミノ酸の長さ、または１〜５０アミノ酸の長さであってもよく、当該数値の間のすべての整数値が含まれる。
【０３４３】
ポリペプチド切断シグナルの例としては、例えばプロテアーゼ切断部位、ヌクレアーゼ切断部位（例えば、稀な制限酵素認識部位、自己切断リボザイム認識部位）、および自己切断ウイルスオリゴペプチド（ｄｅＦｅｌｉｐｅ  ａｎｄ  Ｒｙａｎ，２００４．Ｔｒａｆｆｉｃ，５（８）；６１６−２６を参照のこと）といったポリペプチド切断認識部位が挙げられる。
【０３４４】
別の実施形態では、２つ以上のポリペプチドが、本明細書において別段に開示されるように、１つまたは複数の自己切断ポリペプチド配列を含有する融合タンパク質として発現されてもよい。
【０３４５】
適切なプロテアーゼ切断部位および自己切断ペプチドは、当業者に公知である（例えば、Ｒｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７．Ｊ．Ｇｅｎｅｒ．Ｖｉｒｏｌ．７８，６９９−７２２；Ｓｃｙｍｃｚａｋ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．５，５８９−５９４を参照のこと）。プロテアーゼ切断部位の例としては限定されないが、ポチウイルスＮＩａプロテアーゼ（例えばタバコエッチ病ウイルスプロテアーゼ）、ポチウイルスＨＣプロテアーゼ、ポチウイルスＰ１（Ｐ３５）プロテアーゼ、ビオウイルス（ｂｙｏｖｉｒｕｓ）ＮＩａプロテアーゼ、ビオウイルスＲＮＡ−２−コードプロテアーゼ、アフトウイルスＬプロテアーゼ、エンテロウイルス２Ａプロテアーゼ、ライノウイルス２Ａプロテアーゼ、ピコルナ３Ｃプロテアーゼ、コモウイルス２４Ｋプロテアーゼ、ネポウイルス２４Ｋプロテアーゼ、ＲＴＳＶ（ワイカウイルス）３Ｃ様プロテアーゼ、ＰＹＶＦ（パースニップ黄斑ウイルス）３Ｃ様プロテアーゼ、ヘパリン、トロンビン、第Ｘａ因子、およびエンテロキナーゼの切断部位が挙げられる。切断ストリンジェンシーが高いために、１つの実施形態ではＴＥＶ（タバコエッチ病ウイルス）プロテアーゼ切断部位、例えばＥＸＸＹＸＱ（Ｇ／Ｓ）（配列番号２３）、例えばＥＮＬＹＦＱＧ（配列番号２４）およびＥＮＬＹＦＱＳ（配列番号２５）が好ましく、式中、Ｘは、任意のアミノ酸を表している（ＴＥＶによる切断は、ＱとＧの間、またはＱとＳの間で発生する）。
【０３４６】
特定の実施形態では、ポリペプチド切断シグナルは、ウイルス自己切断ペプチドまたはリボソームスキッピング配列である。
【０３４７】
リボソームスキッピング配列の例示としては限定されないが、２Ａもしくは２Ａ様の部位、配列またはドメインが挙げられる（Ｄｏｎｎｅｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００１．Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．８２：１０２７−１０４１）。特定の実施形態では、ウイルス２Ａペプチドは、アフトウイルス２Ａペプチド、ポチウイルス２Ａペプチド、またはカルジオウイルス２Ａペプチドである。
【０３４８】
１つの実施形態では、ウイルス２Ａペプチドは、以下からなる群から選択される：口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）（Ｆ２Ａ）ペプチド、ウマ鼻炎Ａウイルス（ＥＲＡＶ）（Ｅ２Ａ）ペプチド、Ｔｈｏｓｅａ  ａｓｉｇｎａウイルス（ＴａＶ）（Ｔ２Ａ）ペプチド、ブタテッショウウイルス−１（ＰＴＶ−１）（Ｐ２Ａ）ペプチド、タイロウイルス２Ａペプチド、および脳心筋炎ウイルス２Ａペプチド。
【０３４９】
２Ａ部位の例示を表２に提示する。
表２：
【表２】
2021506262.tif 000004
【０３５０】
好ましい実施形態では、ポリペプチドまたは融合ポリペプチドは、１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ構成要素またはＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体を含有する。
【０３５１】
特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、ＦＲＢ  Ｔ２０９８Ｌ多量体化ドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激性ドメインおよびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含むＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素；ウイルス自己切断２Ａポリペプチド；ならびにＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片、ＦＫＢＰ１２多量体化ドメインポリペプチド、ＣＤ４膜貫通ドメインを含むＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、を含有する。
【０３５２】
特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、ＦＲＢ  Ｔ２０９８Ｌ多量体化ドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激性ドメインおよびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含むＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素；ウイルス自己切断２Ａポリペプチド；ならびにＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片、ＦＫＢＰ１２多量体化ドメインポリペプチド、ＣＤ４膜貫通ドメイン、および任意でＣＤ２７、ＣＤ２８、ＴＮＦＲＳ１４、ＴＮＦＲＳ１８、ＴＮＦＲＳ２５、ＯＸ４０またはＴＮＦＲ２共刺激性ドメインを含むＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、を含有する。
【０３５３】
特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、ＦＲＢ  Ｔ２０９８Ｌ多量体化ドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激性ドメインおよびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含むＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素；ＮＫＧ２Ｄ受容体またはそのＮＫＧ２Ｄリガンド結合断片、ＦＫＢＰ１２多量体化ドメインポリペプチド、ＣＤ４膜貫通ドメイン、および任意でＣＤ２７、ＣＤ２８、ＴＮＦＲＳ１４、ＴＮＦＲＳ１８、ＴＮＦＲＳ２５、ＯＸ４０またはＴＮＦＲ２共刺激性ドメインを含むＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素；ならびにＢ７−Ｈ３、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＥＧＦＲまたはＥＧＦＲｖＩＩＩに結合する結合ドメイン、ＣＤ４膜貫通ドメイン、および任意でＣＤ２７、ＣＤ２８、ＴＮＦＲＳ１４、ＴＮＦＲＳ１８、ＴＮＦＲＳ２５、ＯＸ４０またはＴＮＦＲ２共刺激性ドメインを含むＤＡＲＩＣ結合構成要素、を含有し、この場合において当該ＤＡＲＩＣ構成要素は、ウイルス自己切断２Ａポリペプチドにより互いに分離されている。
【０３５４】
Ｆ．ポリヌクレオチド
特定の実施形態では、１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ構成要素、操作されたＴＣＲ、ＣＡＲ、ゼータカイン、前述のポリペプチドおよびその断片を含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドが提供される。本明細書において使用される場合、「ポリヌクレオチド」または「核酸」という用語は、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）、およびＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッドを指す。ポリヌクレオチドは、一本鎖または二本鎖であってもよく、および組み換え、合成または単離されていてもよい。ポリヌクレオチドとしては限定されないが、以下が挙げられる：プレメッセンジャーＲＮＡ（ｐｒｅ−ｍＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、ＲＮＡ、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、短ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、リボザイム、ゲノムＲＮＡ（ｇＲＮＡ）、プラス鎖ＲＮＡ（ＲＮＡ（＋））、マイナス鎖ＲＮＡ（ＲＮＡ（−））、ｔｒａｃｒＲＮＡ、ｃｒＲＮＡ、シングルガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）、合成ＲＮＡ、合成ｍＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ（ｇＤＮＡ）、ＰＣＲ増幅ＤＮＡ、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）、合成ＤＮＡ、または組み換えＤＮＡ。ポリヌクレオチドとは、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００、少なくとも５００、少なくとも１０００、少なくとも５０００、少なくとも１００００、または少なくとも１５０００以上のヌクレオチドの長さのヌクレオチドの多量体型を指し、リボヌクレオチドもしくはデオキシリボヌクレオチド、またはいずれかタイプのヌクレオチドの改変型、ならびにすべての中間の長さのものを指す。本文脈において、「中間の長さ」とは、例えば６、７、８、９など、１０１、１０２、１０３など、１５１、１５２、１５３など、２０１、２０２、２０３などの引用されている値の間の任意の長さを意味すると容易に理解されるであろう。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドまたはバリアントは、参照配列に対し、少なくとも、もしくは約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％，７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する。
【０３５５】
特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、コドン最適化されてもよい。本明細書において使用される場合、「コドン最適化された」という用語は、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド中のコドンを置換して、ポリペプチドの発現、安定性および／または活性を向上させることを指す。コドン最適化に影響を及ぼす因子としては限定されないが、以下のうちの１つまたは複数が挙げられる：（ｉ）２つ以上の生物体または遺伝子または合成構築されたバイアステーブルの間のコドンバイアスの変動、（ｉｉ）生物体、遺伝子または遺伝子セット内のコドンバイアスの程度の変動、（ｉｉｉ）コンテキストを含むコドンの体系的変動、（ｉｖ）その解読ｔＲＮＡに伴うコドンの変動、（ｖ）三つ組全体または三つ組の１つの位置のいずれかのＧＣ％に伴うコドンの変動、（ｖｉ）例えば天然配列などの参照配列に対する類似性における変動、（ｖｉｉ）コドン頻度のカットオフにおける変動、（ｖｉｉｉ）ＤＮＡ配列から転写されたｍＲＮＡの構造的性質、（ｉｘ）コドン置換セットの設計の基礎となるＤＮＡ配列の機能に関する予備知識、（ｘ）各アミノ酸に対するコドンセットの合成的変動、および／または（ｘｉ）誤った翻訳開始位置の分離された除去。
【０３５６】
本明細書において使用される場合、「ヌクレオチド」という用語は、リン酸化糖とＮ−グリコシド結合した複素環の窒素含有塩基を指す。ヌクレオチドは、天然塩基、および当分野に認識される広範な改変塩基を含むと理解される。そうした塩基は一般的に、ヌクレオチド糖部分の１’位に配置される。ヌクレオチドは一般的に、塩基、糖およびリン酸基を含有する。リボ核酸（ＲＮＡ）では、糖はリボースであり、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）では、糖はデオキシリボースである。すなわち、デオキシリボースは、リボース中に存在するヒドロキシル基を欠いた糖である。天然の窒素含有塩基の例としては、プリン類のアデノシン（Ａ）およびグアニジン（Ｇ）、そしてピリミジン類のシチジン（Ｃ）とチミジン（Ｔ）（またはＲＮＡの場合には、ウラシル（Ｕ））が挙げられる。デオキシリボースのＣ−１原子は、ピリミジンのＮ−１、またはプリンのＮ−９に結合される。ヌクオチドは通常、一、二または三リン酸塩である。ヌクレオチドは、非改変であっても、または糖部分、リン酸部分、および／もしくは塩基部分で改変されてもよい（ヌクレオチドアナログ、ヌクレオチド誘導体、改変ヌクレオチド、非天然ヌクレオチド、および非標準ヌクレオチドと相互交換可能に言及される。例えばＷＯ  ９２／０７０６５およびＷＯ  ９３／１５１８７を参照のこと）。改変核酸塩基の例は、Ｌｉｍｂａｃｈら（１９９４，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２２，２１８３−２１９６）に要約されている。
【０３５７】
ヌクレオチドは、ヌクレオシドのリン酸エステルとみなすこともでき、エステル化は、糖のＣ−５に結合したヒドロキシル基上で発生する。本明細書において使用される場合、「ヌクレオシド」という用語は、糖とＮ−グリコシド結合した複素環の窒素含有塩基を指す。ヌクレオシドは当分野において、天然塩基を含むと認識されており、そして公知の改変塩基も含むと認識されている。そうした塩基は一般的に、ヌクレオシド糖部分の１’位に配置される。ヌクレオシドは一般的に塩基と糖類を含有する。ヌクレオシドは、非改変であっても、または糖部分および／もしくは塩基部分で改変されてもよい（ヌクレオシドアナログ、ヌクレオシド誘導体、改変ヌクレオシド、非天然ヌクレオシド、または非標準ヌクレオシドと相互交換可能に言及される）。上述のように、改変核酸塩基の例は、Ｌｉｍｂａｃｈら（１９９４，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２２，２１８３−２１９６）に要約されている。
【０３５８】
ポリヌクレオチドの例示としては限定されないが、配列番号１〜９に記載されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが挙げられる。
【０３５９】
様々な実施形態において、本明細書において予期されるポリヌクレオチドとしては限定されないが、１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ構成要素、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体、操作された抗原受容体、融合ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、ならびに本明細書において予期されるポリヌクレオチドを含む発現ベクター、ウイルスベクターおよびトランスファープラスミドが挙げられる。
【０３６０】
本明細書において使用される場合、「ポリヌクレオチドバリアント」および「バリアント」などの用語は、参照ポリヌクレオチド配列と相当の配列同一性を呈するポリヌクレオチド、または本明細書において規定されるストリンジェントな条件下で参照配列とハイブリダイズするポリヌクレオチドを指す。これらの用語には、少なくとも１つのヌクレオチドの付加、欠失、置換または改変によって参照ポリヌクレオチドと識別されるポリヌクレオチドも包含される。従って、「ポリヌクレオチドバリアント」および「バリアント」という用語には、１つまたは複数のヌクレオチドが付加もしくは欠失もしくは改変され、または別のヌクレオチドと置換されたポリヌクレオチドが含まれる。この点に関し、当分野において、参照ポリヌクレオチドに対し、変異、付加、欠失および置換を含むある変更が為され、変更されたポリヌクレオチドは、参照ポリヌクレオチドの生物学的機能または生物活性を保持し得ると理解されている。
【０３６１】
１つの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ストリンジェントな条件下で標的核酸配列にハイブリダイズするヌクレオチド配列を含有する。「ストリンジェントな条件下」でハイブリダイズするとは、互いに少なくとも６０％同一であるヌクレオチド配列がハイブリダイズした状態を維持するハイブリダイゼーションプロトコールを説明するものである。一般的に、規定のイオン強度およびｐＨで、特有の配列の熱融解点（Ｔｍ）よりも約５℃低いストリンジェントな条件が選択される。Ｔｍは、標的配列に対して相補的なプローブの５０％が、平衡状態で標的配列に（規定のイオン強度、ｐＨ、および核酸濃度で）ハイブリダイズする温度である。標的配列は一般的に過剰状態で存在するため、Ｔｍでは、プローブの５０％が平衡状態で占有される。
【０３６２】
「配列同一性」、または例えば「〜に対して５０％同一の配列」を含む、という文章は、本明細書において使用される場合、比較ウィンドウ上で配列が、ヌクレオチド毎で同一である、またはアミノ酸ごとで同一である程度を指す。ゆえに「配列同一性の百分率」は、比較ウィンドウ上の２つの最適アライメント配列を比較する工程、同一核酸塩基（例えばＡ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｉ）または同一アミノ酸残基（例えば、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＣｙｓおよびＭｅｔ）が、両方の配列中に存在する位置の数を決定して、合致位置数を算出する工程、合致位置数を、比較ウィンドウ中の総位置数（すなわちウィンドウサイズ）で割る工程、および結果に１００を掛けて、配列同一性の百分率を算出する工程、により計算されてもよい。本明細書に記載される参照配列のいずれかに対し、少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、８６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するヌクレオチドおよびポリペプチドが含まれ、典型的には、当該ポリペプチドバリアントは、参照ポリペプチドの少なくとも１つの生物活性を維持している。
【０３６３】
２つ以上のポリヌクレオチドまたはポリペプチドの間の配列相関性を記載するために使用される用語としては、「参照配列」、「比較ウィンドウ」、「配列同一性」、「配列同一性の百分率」、および「実質的同一性」が挙げられる。「参照配列」は、少なくとも１２個、しばしば１５〜１８個、通常は少なくとも２５個の単量体単位の長さであり、単位にはヌクレオチド残基およびアミノ酸残基が含まれる。２つのポリヌクレオチドはそれぞれ、（１）当該２つのポリヌクレオチドの間で似ている配列（すなわち、完全ポリヌクレオチド配列の一部のみ）と、（２）２つのポリヌクレオチドの間で相違する配列、を含み得るため、２つ（またはそれ以上）のポリヌクレオチドの間の配列比較は、多くの場合、２つのポリヌクレオチドの配列を「比較ウィンドウ」上で比較し、配列類似性の局所領域を特定および比較することにより実施される。「比較ウィンドウ」とは、少なくとも６個の連続する位置、通常は約５０〜１００個、より普遍的には約１００〜１５０個の連続する位置の概念的なセグメントを指し、２つの配列が最適にアライメントされた後、そのセグメント中で配列は同じ連続位置数の参照配列と比較される。比較ウィンドウは、２つの配列の最適アライメントを目的として、参照配列（付加または欠失を含まない）と比較し約２０％以下の付加または欠失（すなわちギャップ）を含む場合がある。比較ウィンドウの整列のための最適な配列アライメントは、アルゴリズム（米国ウィスコンシン州マジソン、サイエンスドライブ５７５、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  ＧｒｏｕｐのＷｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ７．０のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡおよびＴＦＡＳＴＡ）をコンピューター実装することで実施されてもよく、または選択される様々な方法のいずれかにより行われる検査と最適アライメント（すなわち比較ウィンドウ上で最も高い相同性百分率を生じさせるアライメント）により実施されてもよい。参照も、例えばＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９により開示されるように、ＢＬＡＳＴファミリーのプログラムに対して為されてもよい。配列解析の詳細な検討については、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  Ｉｎｃ，１９９４−１９９８，Ｃｈａｐｔｅｒ  １５のＵｎｉｔ  １９．３に見出すことができる。
【０３６４】
本明細書において使用される場合、「単離ポリヌクレオチド」とは、自然状態で隣接する配列から精製されたポリヌクレオチドを指し、例えば、通常では当該断片と隣接する配列から取り出されたＤＮＡ断片を指す。「単離ポリヌクレオチド」はさらに、自然界では存在せず、ヒトの手により作製された相補的ＤＡＮ（ｃＤＮＡ）、組み換えＤＮＡ、または他のポリヌクレオチドも指す。特定の実施形態では、単離ポリヌクレオチドは、合成ポリヌクレオチド、半合成ポリヌクレオチド、または組み換え源から取得された、もしくは誘導されたポリヌクレオチドである。
【０３６５】
様々な実施形態では、ポリヌクレオチドは、本明細書において予期されるポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含有する。ある実施形態では、ｍＲＮＡは、キャップ、１つまたは複数のヌクレオチド、そしてポリ（Ａ）尾部を含有する。
【０３６６】
ポリヌクレオチドの方向性を説明する用語としては、５’（通常、遊離リン酸基を有するポリヌクレオチド末端）、および３’（通常、遊離ヒドロキシル（ＯＨ）基を有するポリヌクレオチド末端）が挙げられる。ポリヌクレオチド配列は、５〜３’の方向で、または３’〜５’の方向でアノテーションされることができる。ＤＮＡおよびｍＲＮＡに関しては、５’〜３’鎖が、「センス」鎖、「プラス」鎖または「コーディング」鎖と指定される。その理由は、当該配列は、プレメッセンジャー（ｐｒｅｍＲＮＡ）の配列と［ＤＮＡのチミン（Ｔ）の代わりのＲＮＡのウラシル（Ｕ）を除き］同一であるためである。ＤＮＡおよびｍＲＮＡに関し、相補的な３’〜５’鎖は、ＲＮＡポリメラーゼにより転写された鎖であり、「鋳型」鎖、「アンチセンス」鎖、「マイナス」鎖または「非コーディング」鎖と指定される。本明細書において使用される場合、「逆方向」という用語は、３’〜５’方向で記載された５’〜３’配列を指し、または５’〜３’の方向で記載された３’〜５’配列を指す。
【０３６７】
「相補的」または「相補性」という用語は、塩基対形成の規則に関連するポリヌクレオチド（すなわちヌクレオチド配列）を指す。例えばＤＮＡ配列の５’Ａ  Ｇ  Ｔ  Ｃ  Ａ  Ｔ  Ｇ  ３’の相補鎖は、３’Ｔ  Ｃ  Ａ  Ｇ  Ｔ  Ａ  Ｃ  ５’である。後者の配列はしばしば、左側に５’末端、右側に３’末端を置いて、５’Ｃ  Ａ  Ｔ  Ｇ  Ａ  Ｃ  Ｔ  ３’のように逆相補として記載される。自身の逆相補と同一である配列は、パリンドローム配列と呼ばれる。相補性は「部分的」であってもよく、その場合、核酸の塩基の一部のみが、塩基対形成規則に従い合致する。または核酸の間に、「完全な」または「全体の」相補性があってもよい。
【０３６８】
さらに当業者であれば、遺伝子コードの縮重の結果として、本明細書に記載されるポリペプチドまたはそのバリアント断片をコードするヌクレオチド配列は多数存在することを認識するであろう。これらポリヌクレオチドの一部は、任意の天然遺伝子のヌクレオチド配列に対し、最小の相同性を担持する。とはいえコドン使用頻度の差異によって変化するポリヌクレオチドが予期され、特定の実施形態では例えばヒトおよび／または霊長類のコドン選択に最適化されたポリヌクレオチドが予期される。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、発現および／または安定性を目的としてコドン最適化される。さらに本明細書に提供されるポリヌクレオチド配列を含む遺伝子のアレルも使用され得る。アレルは、例えばヌクレオチドの欠失、付加および／または置換などの１つまたは複数の変異の結果として変化する内因性の遺伝子である。
【０３６９】
本明細書において使用される場合、、「核酸カセット」または「発現カセット」という用語は、ＲＮＡを発現し、その後にポリペプチドを発現することができるベクター中の遺伝子配列を指す。１つの実施形態では、核酸カセットは、対象遺伝子、例えば対象ポリヌクレオチドを含有する。別の実施形態では、核酸カセットは、１つまたは複数の発現制御配列、例えばプロモーター、エンハンサー、ポリ（Ａ）配列、および例えば対象ポリヌクレオチドなどの対象遺伝子を含有する。ベクターは、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個以上の核酸カセットを含有してもよい。核酸カセットは、ベクター内で位置的に、そして連続的に方向付けられる。それにより、カセット中の核酸はＲＮＡに転写され得、必要な場合にはタンパク質またはポリペプチドへと翻訳され、形質転換細胞での活動に必要とされる適切な翻訳後修飾を受け、適切な細胞内コンパートメントに標的化することで、生物活性に適したコンパートメントへと移行され、または細胞外コンパートメントへと分泌されることができる。カセットは、ベクター内への即時の挿入に適合された３’末端および５’末端を有することが好ましく、例えば各末端に制限エンドヌクレアーゼ部位を有している。カセットは、取り出され、そして単一ユニットとしてプラスミドまたはウイルスベクター内に挿入されることができる。
【０３７０】
ポリヌクレオチドは、対象ポリヌクレオチドを含む。本明細書において使用される場合、「対象ポリヌクレオチド」という用語は、本明細書において予期される、ポリペプチドもしくは融合ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、または阻害性ポリヌクレオチドの転写用の鋳型としての役割を果たすポリヌクレオチドを指す。
【０３７１】
本明細書において予期されるポリヌクレオチドは、本明細書において別段に記載されるように、または当分野に公知のように、それ自体のコード配列の長さに関わらず、例えばプロモーターおよび／またはエンハンサー、非翻訳領域（ＵＴＲ）、シグナル配列、Ｋｏｚａｋ配列、ポリアデニル化シグナル、追加の制限酵素部位、多重クローニングサイト、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、リコンビナーゼ認識部位（例えばＬｏｘＰ、ＦＲＴおよびＡｔｔ部位）、終止コドン、転写終止シグナル、および自己切断ポリペプチド、エピトープタグをコードするポリヌクレオチドなどの他のＤＮＡ配列と組み合わされて、その全体の長さを大幅に変化させてもよい。ゆえに、ほとんどすべての長さのポリヌクレオチド断片が採用され得ること、好ましくは全体の長さは調製の容易さ、および意図される組み換えＤＮＡプロトコールでの用途により制限されることが予期される。
【０３７２】
ポリヌクレオチドは、当分野で公知および利用可能な様々な確立された技術のいずれかを使用して調製され、操作され、発現され、および／または送達されてもよい。所望のポリペプチドを発現するために、当該ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、適切なベクターに挿入されてもよい。
【０３７３】
ベクターの例示としては限定されないが、プラスミド、自己複製配列、および転移性因子、例えばＳｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙ、ＰｉｇｇｙＢａｃなどが挙げられる。
【０３７４】
ベクターの追加的な例示としては限定されないが、プラスミド、ファージミド、コスミド、人工染色体、例えば酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）、バクテリオファージ、例えばラムダファージまたはＭ１３ファージ、および動物ウイルスが挙げられる。
【０３７５】
ベクターとして有用なウイルスの例示としては限定されないが、レトロウイルス（レンチウイルスを含む）、アデノウイルス、アデノ随伴型ウイルス、ヘルペスウイルス（例えば単純ヘルペスウイルス）、ポックスウイルス、バキュロウイルス、パピローマウイルス、およびパポバウイルス（例えばＳＶ４０）が挙げられる。
【０３７６】
発現ベクターの例示としては限定されないが、哺乳動物細胞での発現用のｐＣｌｎｅｏベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ社）、哺乳動物細胞でのレンチウイルス介在型遺伝子移送および発現用のｐＬｅｎｔｉ４／Ｖ５−ＤＥＳＴ（商標）、ｐＬｅｎｔｉ６／Ｖ５−ＤＥＳＴ（商標）、およびｐＬｅｎｔｉ６．２／Ｖ５−ＧＷ／ｌａｃＺ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）が挙げられる。特定の実施形態では、本明細書に開示されるポリペプチドのコード配列は、哺乳動物細胞でのポリペプチドの発現のために、そうした発現ベクター内にライゲートされてもよい。
【０３７７】
特定の実施形態では、ベクターは、エピソーム性ベクター、または染色体外で維持されるベクターである。本明細書において使用される場合、「エピソーム性」という用語は、宿主の染色体ＤＮＡに統合されることなく複製することができるベクターであり、宿主細胞の分裂により徐々に減少することがないということは、当該ベクターが染色体外で、またはエピソーム性に複製することも意味している。
【０３７８】
発現ベクター中に存在する「発現制御配列」、「制御因子」、または「制御性配列」は、ベクターの非翻訳領域であり、限定されないが、複製起源、選択カセット、プロモーター、エンハンサー、翻訳開始シグナル（Ｓｈｉｎｅ  Ｄａｌｇａｒｎｏ配列またはＫｏｚａｋ配列）、イントロン、ポリアデニル化配列、５’および３’非翻訳領域が挙げられ、それらはすべて宿主の細胞タンパク質と相互作用して、転写と翻訳を実行する。そうした因子は、その強度および特異性を変化させてもよい。利用するベクターシステムおよび宿主に応じて、ユビキタスプロモーターおよび誘導性プロモーターをはじめとする任意の数の適切な転写因子および翻訳因子を使用してもよい。
【０３７９】
特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、限定されないが発現ベクターおよびウイルスベクターをはじめとするベクターを含有する。ベクターは、１つまたは複数の外因性、内因性、または異種の制御配列、例えばプロモーターおよび／またはエンハンサーを含有してもよい。「内因性制御配列」は、ゲノム中で所与の遺伝子と本来連結される配列である。「外因性制御配列」は、遺伝子操作の手段（すなわち分子生物学的技術）により、遺伝子に並置して置かれる配列であり、当該遺伝子の転写は、その連結したエンハンサー／プロモーターにより誘導される。「異種制御配列」は、遺伝子操作される細胞とは異なる種に由来する外因性配列である。「合成」制御配列は、特定の療法に対し最適なプロモーター活性および／またはエンハンサー活性を提供する、１つもしくは複数の内因性および／または外因性の配列の因子、ならびに／またはインビトロもしくはインシリコで決定された配列を含有してもよい。
【０３８０】
本明細書において使用される場合、「プロモーター」という用語は、ＲＮＡポリメラーゼが結合するポリヌクレオチド（ＤＮＡまたはＲＮＡ）の認識部位を指す。ＲＮＡポリメラーゼは、プロモーターに操作可能に連結されたポリヌクレオチドの転写を開始させる。特定の実施形態では、哺乳動物細胞で動作するプロモーターは、転写が開始される部位からおよそ２５〜３０塩基上流に位置するＡＴ−リッチ領域、および／または転写開始部位から７０〜８０塩基上流に存在する別の配列であるＣＮＣＡＡＴ領域を含有し、式中、Ｎは任意のヌクレオチドであり得る。
【０３８１】
「エンハンサー」という用語は、転写の強化を提供することができる配列を含むＤＮＡセグメントを指し、一部の場合では、別の制御配列に対する方向性に関係なく機能することができる。エンハンサーは、プロモーター因子および／または他のエンハンサー因子と共同して、または付加的に機能することができる。「プロモーター／エンハンサー」という用語は、プロモーター機能とエンハンサー機能の両方を提供することができる配列を含むＤＮＡセグメントを指す。
【０３８２】
「操作可能に連結された」という用語は、開示される構成要素が、その意図される様式で機能することが可能な関係性にある並置を指す。１つの実施形態では、当該用語は、核酸発現制御配列（例えばプロモーター、および／またはエンハンサー）と、第二のポリヌクレオチド配列、例えば対象ポリヌクレオチドの間の機能的結合を指し、この場合において当該発現制御配列は、第二の配列に対応する核酸の転写を誘導する。
【０３８３】
本明細書において使用される場合、「構造的発現制御配列」という用語は、操作可能に連結された配列の継続的な、または連続的な転写を可能にするプロモーター、エンハンサー、またはプロモーター／エンハンサーを指す。構造的発現制御配列は、様々な細胞型と組織型での発現を可能にする「ユビキタス」なプロモーター、エンハンサー、プロモーター／エンハンサーであってもよく、または限定的な細胞型および組織型での発現を可能にする、それぞれ「細胞特異的」、「細胞型特異的」、「細胞株特異的」、または「組織特異的」なプロモーター、エンハンサー、またはプロモーター／エンハンサーであってもよい。
【０３８４】
特定の実施形態における使用に適したユビキタス発現制御配列の例示としては限定されないが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）前初期プロモーター、ウイルス性シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）（例えば初期または後期）、モロニ−マウス白血病ウイルス（ＭｏＭＬＶ）ＬＴＲプロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）ＬＴＲ、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）（チミジンキナーゼ）プロモーター、ワクシニアウイルス由来のＨ５、Ｐ７．５およびＰ１１プロモーター、伸長因子１α（ＥＦ１ａ）プロモーター、ｅａｒｌｙ  ｇｒｏｗｔｈ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  １（ＥＧＲ１）、フェリチンＨ（ＦｅｒＨ）、フェリチンＬ（ＦｅｒＬ）、グリセルアルデヒド三リン酸脱水素酵素（ＧＡＰＤＨ）、ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ  ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  ４Ａ１（ＥＩＦ４Ａ１）、ｈｅａｔ  ｓｈｏｃｋ  ７０ｋＤａ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ５（ＨＳＰＡ５）、ｈｅａｔ  ｓｈｏｃｋ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ９０ｋＤａ  ｂｅｔａ，ｍｅｍｂｅｒ  １（ＨＳＰ９０Ｂ１）、ｈｅａｔ  ｓｈｏｃｋ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ７０ｋＤａ（ＨＳＰ７０）、β−キネシン（β−ＫＩＮ）、ヒトＲＯＳＡ  ２６座位（Ｉｒｉｏｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２５，１４７７  −  １４８２（２００７））、ユビキチンＣプロモーター（ＵＢＣ）、ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｙｃｅｒａｔｅ  ｋｉｎａｓｅ−１（ＰＧＫ）プロモーター、サイトメガロウイルスエンハンサー／ニワトリβ−アクチン（ＣＡＧ）プロモーター、β−アクチンプロモーターおよび骨髄増殖性肉腫ウイルスエンハンサー、ネガティブ制御領域欠失型、ｄｌ５８７ｒｅｖプライマー結合部位置換（ＭＮＤ）Ｕ３プロモーター（Ｈａａｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ．２００３；７７（１７）：９４３９−９４５０）が挙げられる。
【０３８５】
１つの実施形態では、ベクターは、ＭＮＤＵ３プロモーターを含有する。
【０３８６】
１つの実施形態では、ベクターは、ヒトＥＦ１ａ遺伝子の第一イントロンを含むＥＦ１ａプロモーターを含有する。
【０３８７】
１つの実施形態では、ベクターは、ヒトＥＦ１ａ遺伝子の第一イントロンを欠くＥＦ１ａプロモーターを含有する。
【０３８８】
特定の実施形態では、細胞、細胞型、細胞株、または組織に特異的な発現制御配列を使用して、所望のポリヌクレオチド配列の細胞型特異的、細胞株特異的、または組織特異的な発現を実現することが望ましい場合もある（例えば特定のポリペプチドをコードする核酸を、細胞型、細胞株、または組織のサブセットにおいてのみ、または発生の特定のステージでのみ発現させる）。
【０３８９】
特定の実施形態では、ポリヌクレオチドを、Ｔ細胞特異的プロモーターで発現させることが望ましい場合がある。
【０３９０】
本明細書において使用される場合、「条件付き発現」とは、限定されないが、誘導性発現、抑制性発現、特定の生理学的状態、生物学的状態もしくは疾患状態にある細胞または組織での発現をはじめとする条件付き発現の任意の型を指す場合がある。この定義は、細胞型または組織に特異的な発現を除外することは意図されない。ある実施形態は、対象ポリヌクレオチドの条件付き発現を提供するものであり、例えば発現は、細胞、組織、生物体を、ポリヌクレオチドが発現される処理または条件、または対象ポリヌクレオチドにコードされるポリヌクレオチドの発現が増加もしくは減少する処理または条件に曝すことにより制御される。
【０３９１】
誘導性プロモーター／システムの例示としては限定されないが、ステロイド誘導性プロモーター、例えばグルココルチコイド受容体またはエストロゲン受容体をコードする遺伝子のプロモーター（対応するホルモンの処理で誘導可能）、メタロチオネインプロモーター（様々な重金属の処理で誘導可能）、ＭＸ−１プロモーター（インターフェロンで誘導可能）、「ＧｅｎｅＳｗｉｔｃｈ」ミフェプリストン制御性システム（Ｓｉｒｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｇｅｎｅ，３２３：６７）、クミン酸塩（ｃｕｍａｔｅ）誘導性遺伝子スイッチ（ＷＯ  ２００２／０８８３４６）、テトラサイクリン依存性制御システムなどが挙げられる。誘導物質としては限定されないが、グルココルチコイド、エストロゲン、ミフェプリストン（ＲＵ４８６）、金属、インターフェロン、低分子、クミン酸塩、テトラサイクリン、ドキシサイクリンおよびそれらのバリアントが挙げられる。
【０３９２】
条件付き発現は、部位特異的なＤＮＡリコンビナーゼを使用することでも実現することができる。ある実施形態では、ベクターは、部位特異的リコンビナーゼにより介在される組み換え用の部位を少なくとも１つ（典型的には２つ）含有する。本明細書において使用される場合、「リコンビナーゼ」または「部位特異的リコンビナーゼ」という用語は、除去的または統合的なタンパク質、酵素、補因子または関連タンパク質を含み、それらは１つまたは複数の組み換え部位（例えば２、３、４、５、７、１０、１２、１５、２０、３０、５０など）を含む組み換え反応に関与しており、野生型タンパク質（Ｌａｎｄｙ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ３：６９９−７０７（１９９３）を参照のこと）であってもよく、またはその変異型、誘導体（例えば組み換えタンパク質配列を含む融合タンパク質またはその断片）、断片、およびバリアントであってもよい。特定の実施形態における使用に適したリコンビナーゼの例示としては限定されないが、以下が挙げられる：Ｃｒｅ、Ｉｎｔ、ＩＨＦ、Ｘｉｓ、Ｆｌｐ、Ｆｉｓ、Ｈｉｎ、Ｇｉｎ、ΦＣ３１、Ｃｉｎ、Ｔｎ３リゾルベース、ＴｎｄＸ、ＸｅｒＣ、ＸｅｒＤ、ＴｎｐＸ、Ｈｊｃ、Ｇｉｎ、ＳｐＣＣＥ１、およびＰａｒＡ。
【０３９３】
ポリヌクレオチドは、様々な部位特異的リコンビナーゼのいずれかに対する組み換え部位を１つまたは複数含有してもよい。部位特異的リコンビナーゼの標的部位は、例えばレトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターなどのベクターの統合に必要とされる任意の部位に追加されることを理解されたい。本明細書において使用される場合、「組み換え配列」、「組み換え部位」または「部位特異的組み換え部位」という用語は、リコンビナーゼが認識し、結合する特定の核酸配列を指す。
【０３９４】
例えばＣｒｅリコンビナーゼの１つの認識部位は、ｌｏｘＰであり、これは、８塩基対のコア配列に隣接する１３塩基対の逆位反復（リコンビナーゼ結合部位としての役割を果たす）を２つ含む３４塩基対の配列である（Ｓａｕｅｒ，Ｂ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ５：５２１−５２７（１９９４）の図１を参照のこと）。ｌｏｘＰ部位の他の例としては限定されないが、ｌｏｘ５１１（Ｈｏｅｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６；Ｂｅｔｈｋｅ  ａｎｄ  Ｓａｕｅｒ，１９９７）、ｌｏｘ５１７１（Ｌｅｅ  ａｎｄ  Ｓａｉｔｏ，１９９８）、ｌｏｘ２２７２（Ｌｅｅ  ａｎｄ  Ｓａｉｔｏ，１９９８）、ｍ２（Ｌａｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）、ｌｏｘ７１（Ａｌｂｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５）、およびｌｏｘ６６（Ａｌｂｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５）が挙げられる。
【０３９５】
ＦＬＰリコンビナーゼの適切な認識部位としては限定されないが、以下が挙げられる：ＦＲＴ（ＭｃＬｅｏｄ，ｅｔ  ａｌ．，１９９６）、Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３（Ｓｃｈｌａｋｅ  ａｎｄ  Ｂｏｄｅ，１９９４）、Ｆ４、Ｆ５（Ｓｃｈｌａｋｅ  ａｎｄ  Ｂｏｄｅ，１９９４）、ＦＲＴ（ＬＥ）（Ｓｅｎｅｃｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８）、ＦＲＴ（ＲＥ）（Ｓｅｎｅｃｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８）。
【０３９６】
認識配列の他の例は、ａｔｔＢ配列、ａｔｔＰ配列、ａｔｔＬ配列、およびａｔｔＲ配列であり、これらはリコンビナーゼ酵素のλインテグラーゼ、例えばｐｈｉ−ｃ３１に認識される。φＣ３１  ＳＳＲは、異型部位のａｔｔＢ（３４ｂｐの長さ）とａｔｔＰ（３９ｂｐの長さ）の間でのみ組み換えを介在する（Ｇｒｏｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）。ａｔｔＢとａｔｔＰはそれぞれ細菌ゲノムとファージゲノム上のファージインテグラーゼの結合部位に由来しており、両方とも、φＣ３１ホモ二量体に結合されると推定される不完全な逆位反復を含有する（Ｇｒｏｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）。産生部位のａｔｔＬおよびａｔｔＲは、次のφＣ３１介在組み換えでは事実上、不活性となるため（Ｂｅｌｔｅｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）、反応は不可逆的なものとなる。挿入の触媒について、ａｔｔＢ担持ＤＮＡをゲノムａｔｔＰ部位に挿入することは、ゲノムａｔｔＢ部位にａｔｔＰを挿入するよりも簡単であることが判明している（Ｔｈｙａｇａｒａｊａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００１；Ｂｅｌｔｅｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）。そのため典型的には、ａｔｔＰ担持「ドッキング部位」を規定の座位に相同組み換えし、次いで挿入用のａｔｔＢ担持入配列と組み合わせる戦略が取られている。
【０３９７】
本明細書において使用される場合、「内部リボソーム侵入部位」または「ＩＲＥＳ」とは、シストロン（タンパク質コード領域）の例えばＡＴＧなどの開始コドンに内部リボソームが直接侵入することを促進し、キャップ非依存性の遺伝子翻訳を生じさせる因子を指す。例えば、Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０．Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｃｉ  １５（１２）：４７７−８３）およびＪａｃｋｓｏｎ  ａｎｄ  Ｋａｍｉｎｓｋｉ．１９９５．ＲＮＡ  １（１０）：９８５−１０００を参照のこと。当業者により一般的に採用されるＩＲＥＳの例としては、米国特許第  第６，６９２，７３６号に記載されるものが挙げられる。当分野に公知の「ＩＲＥＳ」のさらなる例としては限定されないが、ピコルナウイルスから取得可能なＩＲＥＳ（Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０）、および例えば免疫グロブリン重鎖結合タンパク質（ＢｉＰ）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）などのウイルスｍＲＮＡまたは細胞ｍＲＮＡを源として取得可能なＩＲＥＳ（Ｈｕｅｚ  ｅｔ  ａｌ．１９９８．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１８（１１）：６１７８−６１９０）、線維芽細胞増殖因子２（ＦＧＦ−２）、およびインスリン様増殖因子（ＩＧＦＩＩ）、翻訳開始因子のｅＩＦ４Ｇ、ならびに酵母転写因子のＴＦＩＩＤおよびＨＡＰ４、Ｎｏｖａｇｅｎ社から販売されている脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）（Ｄｕｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ  ６６（３）：１６０２−９）およびＶＥＧＦ  ＩＲＥＳ（Ｈｕｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８．Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  １８（１１）：６１７８−９０）が挙げられる。ＩＲＥＳは、ピコルナウイルス科、ジシストロウイルス科、およびフラビウイルス科の種のウイルスゲノム、ならびにＨＣＶ、フレンドマウス白血病ウイルス（ＦｒＭＬＶ）、およびモロニーマウス白血病ウイルス（ＭｏＭＬＶ）においても報告されている。
【０３９８】
１つの実施形態では、本明細書において予期されるポリヌクレオチドに使用されるＩＲＥＳは、ＥＭＣＶ  ＩＲＥＳである。
【０３９９】
特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、コンセンサスＫｏｚａｋ配列を有し、所望のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有する。本明細書において使用される場合、「Ｋｏｚａｋ配列」という用語は、リボソーム小サブユニットへのｍＲＮＡの初期結合を大きく促進し、翻訳を増加させる短いヌクレオチド配列を指す。コンセンサスＫｏｚａｋ配列は、（ＧＣＣ）ＲＣＣＡＴＧＧ（配列番号４８）であり、式中、Ｒはプリン（ＡまたはＧ）である（Ｋｏｚａｋ，１９８６．Ｃｅｌｌ．４４（２）：２８３−９２、およびＫｏｚａｋ，１９８７．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１５（２０）：８１２５−４８）。
【０４００】
異種核酸転写物の効率的な終止とポリアデニル化を誘導する因子は、異種遺伝子の発現を増加させる。転写終止シグナルは、一般的にポリアデニル化シグナルの下流に存在する。特定の実施形態では、ベクターは、発現されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの３’側にポリアデニル化配列を含有する。本明細書において使用される場合、「ポリＡ部位」または「ポリＡ配列」という用語は、ＲＮＡポリメラーゼＩＩによる初期ＲＮＡ転写物の終止とポリアデニル化の両方を誘導するＤＮＡ配列を示す。ポリアデニル化配列は、ポリＡ尾部をコード配列の３’末端に付加することでｍＲＮＡの安定性を促進し、それにより翻訳効率の増強に寄与することができる。切断およびポリアデニル化は、ＲＮＡ中のポリ（Ａ）配列により誘導される。哺乳動物のプレｍＲＮＡのコアポリ（Ａ）配列は、切断−ポリアデニル化部位に隣接する２つの認識因子を有する。典型的には、ほぼ不変のＡＡＵＡＡＡ六量体が、Ｕ残基またはＧＵ残基が豊富な可変因子の上流に、２０〜５０ヌクレオチド存在する。初期転写物の切断はこれら２つの因子の間で発生し、５’切断産物に最大で２５０個のアデノシンが付加される。特定の実施形態では、コアポリ（Ａ）配列は、最良のポリＡ配列（例えば、ＡＡＴＡＡＡ、ＡＴＴＡＡＡ、ＡＧＴＡＡＡ）である。特定の実施形態では、ポリ（Ａ）配列は、ＳＶ４０のポリＡ配列、ウシ成長ホルモンポリＡ配列（ＢＧＨｐＡ）、ウサギβ−グロビンポリＡ配列（ｒβｇｐＡ）、それらのバリアント、または当分野に公知の別の適切な異種または内因性ポリＡ配列である。特定の実施形態では、ポリ（Ａ）配列は、合成である。
【０４０１】
一部の実施形態では、ポリヌクレオチド、またはポリヌクレオチドを保有する細胞は、直接的な毒性および／または非制御増幅のリスクを減少させるための誘導性自殺遺伝子をはじめとする自殺遺伝子を利用する。特定の実施形態では、自殺遺伝子は、ポリヌクレオチドを保有する宿主、または細胞に対して免疫原性ではない。使用され得る自殺遺伝子の例は、カスパーゼ−９またはカスパーゼ−８またはシトシンデアミナーゼである。カスパーゼ−９は、二量体化の特定の化学誘導物質（ＣＩＤ）を使用して活性化され得る。
【０４０２】
ある実施形態では、ポリヌクレオチドは、例えばＴ細胞などの免疫エフェクター細胞がインビボでのネガティブ選択に感受性となる遺伝子セグメントを含有する。「ネガティブ選択」とは、注入された細胞が、個々のインビボ条件における変化の結果として排除され得ることを意味する。ネガティブ選択的表現型は、例えば化合物などの投与剤に対する感受性に寄与する遺伝子の挿入から生じ得る。ネガティブ選択的遺伝子は当分野に公知であり、特に以下が挙げられる：ガンシクロビル感受性に寄与する単純ヘルペスウイルスＩ型チミジンキナーゼ（ＨＳＶ−Ｉ  ＴＫ）遺伝子（Ｗｉｇｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  １１：２２３，１９７７）、細胞ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）遺伝子、細胞アデノシンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＡＰＲＴ）遺伝子、および細菌シトシンデアミナーゼ（Ｍｕｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８９：３３（１９９２））。
【０４０３】
一部の実施形態では、例えばＴ細胞などの遺伝子改変免疫エフェクター細胞は、ポジティブマーカーをさらに含むポリヌクレオチドを含有し、それによりインビトロでネガティブ選択的表現型の細胞の選択が可能となる。ポジティブ選択的マーカーは、宿主細胞に導入されたときに優性表現型を発現する遺伝子であってもよく、それにより当該遺伝子を担持する細胞のポジティブ選択が可能となる。このタイプの遺伝子は当分野に公知であり、特に、ハイグロマイシンＢに対する抵抗性に寄与するハイグロマイシンＢホスホトランスフェラーゼ遺伝子（ｈｐｈ）、抗生物質Ｇ４１８に対する抵抗性をコードするＴｎ５に由来するアミノグリコシドホスホトランスフェラーゼ遺伝子（ｎｅｏまたはａｐｈ）、ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）遺伝子、アデノシンデアミナーゼ遺伝子（ＡＤＡ）、および多剤耐性（ＭＤＲ）遺伝子が挙げられる。
【０４０４】
１つの実施形態では、ポジティブ選択的マーカーとネガティブ選択的因子が結合され、ネガティブ選択的因子の消失は必然的にポジティブ選択的マーカーの消失も伴う。特定の実施形態では、ポジティブおよびネガティブの選択的マーカーは融合され、１つが消失すると義務的に他方の消失も生じる。上述の望ましいポジティブ選択およびネガティブ選択の特性の両方に寄与するポリペプチドを発現産物として生じさせる融合ポリヌクレオチドの例は、ハイグロマイシンホスホトランスフェラーゼチミジンキナーゼ融合遺伝子（ＨｙＴＫ）である。この遺伝子の発現によって、インビトロでのポジティブ選択用のハイグロマイシンＢ抵抗性に寄与するポリペプチドと、インビボでのネガティブ選択用のガンシクロビル感受性に寄与するポリペプチドが生じる。さらに、Ｓ．Ｄ．ＬｕｐｔｏｎによるＰＣＴ  ＵＳ９１／０８４４２およびＰＣＴ／ＵＳ９４／０５６０１の公表特許を参照のこと。これらは優性ポジティブ選択的マーカーとネガティブ選択的マーカーを融合させることで得られる、二機能性選択的融合遺伝子の使用について記載している。
【０４０５】
好ましいポジティブ選択的マーカーは、ｈｐｈ、ｎｃｏおよびｇｐｔからなる群から選択される遺伝子に由来するものであり、好ましいネガティブ選択的マーカーは、シトシンデアミナーゼ、ＨＳＶ−Ｉ  ＴＫ、ＶＺＶ  ＴＫ、ＨＰＲＴ、ＡＰＲＴおよびｇｐｔからなる群から選択される遺伝子に由来するものである。特定の実施形態で予期される二機能性選択的融合遺伝子の例としては限定されないが、ポジティブ選択的マーカーが、ｈｐｈまたはｎｅｏに由来し、ネガティブ選択的マーカーが、シトシンデアミナーゼまたはＴＫ遺伝子または選択的マーカーに由来する。
【０４０６】
特定の実施形態では、１つまたは複数のＤＡＲＩＣ構成要素、ポリペプチドまたは融合ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、例えばＴ細胞などの免疫エフェクター細胞に、非ウイルス法またはウイルス法により導入され得る。特定の実施形態では、１つまたは複数のポリヌクレオチドの送達は、同じ方法もしくは異なる方法で提供されてもよく、および／または同じベクターもしくは異なるベクターで提供されてもよい。
【０４０７】
「ベクター」という用語は、本明細書において、もう１つの核酸分子を移送または輸送することができる核酸分子を指すために使用される。移送される核酸は一般的にベクター核酸分子に連結され、例えば挿入される。ベクターは、細胞中での自律的複製を誘導する配列を含んでもよく、または宿主細胞ＤＮＡへの統合が充分に可能となる配列を含んでもよい。特定の実施形態では、非ウイルスベクターを使用して、本明細書に予期される１つまたは複数のポリヌクレオチドがＴ細胞に送達される。
【０４０８】
非ウイルス性ベクターの例示としては限定されないが、プラスミド（例えばＤＮＡプラスミドまたはＲＮＡプラスミド）、トランスポゾン、コスミド、および細菌人工染色体が挙げられる。
【０４０９】
特定の実施形態で予期されるポリヌクレオチドの非ウイルス性の送達法の例示としては限定されないが、エレクトロポレーション法、ソノポレーション法、リポフェクション法、マイクロインジェクション法、バイオリステック法、ウイロゾーム法、リポソーム法、免疫リポソーム法、ナノ粒子法、ポリカチオンまたは脂質：核酸複合体、ネイキッドＤＮＡ法、人工ビリオン、ＤＥＡＥ−デキストラン介在移送、遺伝子銃、およびヒートショックが挙げられる。
【０４１０】
特定の実施形態において予期される特定の実施形態での使用に適したポリヌクレオチド送達システムの例示としては限定されないが、Ａｍａｘａ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍａｘｃｙｔｅ，Ｉｎｃ．、ＢＴＸ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、およびＣｏｐｅｒｎｉｃｕｓ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  Ｉｎｃ．により提供されるシステムが挙げられる。リポフェクション試薬は市販されている（例えば、Ｔｒａｎｓｆｅｃｔａｍ（商標）およびＬｉｐｏｆｅｃｔｉｎ（商標））。ポリヌクレオチドの効率的な受容体−認識リポフェクションに適したカチオン性脂質および中性脂質は、文献に記載されている。例えば、Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ．１０：１８０−１８７；およびＢａｌａｚｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ．  ２０１１：１−１２を参照のこと。抗体標的化送達、細菌誘導送達、非生物ナノセル系送達も特定の実施形態において予期される。
【０４１１】
特定の実施形態において予期される１つまたは複数のＤＡＲＩＣ構成要素をコードするポリヌクレオチドを含有するウイルスベクターは、個々の患者に投与することにより、典型的には以下に記載されるように全身投与（例えば静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下または頭蓋内点滴）または局所適用することによりインビボで送達され得る。あるいはベクターは、例えば個々の患者から外殖された細胞（例えば動員（ｍｏｂｉｌｉｚｅｄ）末梢血、リンパ球、骨髄吸引液、組織生検等）またはユニバーサルドナーの造血幹細胞などの細胞に生体外で送達されてもよく、その後、患者に当該細胞を再移植してもよい。
【０４１２】
１つの実施形態では、本明細書において予期される１つまたは複数のＤＡＲＩＣ構成要素をコードするポリヌクレオチドを含むウイルスベクターは生物体に直接投与され、インビボで細胞に形質導入される。あるいはネイキッドＤＮＡが投与されてもよい。投与は、分子を導入して最終的には血液または組織細胞と接触させるために通常に使用される経路のいずれかによるものであり、限定されないが、注射、点滴、局所適用およびエレクトロポレーションが挙げられる。そうした核酸の適切な投与方法は当業者に利用可能および公知であるが、複数の経路を使用して特定の組成物を投与してもよく、特定の経路はしばしば、別の経路よりも即時性で高い効果的反応を提供することができる。
【０４１３】
特定の実施形態において予期される特定の実施形態での使用に適したウイルスベクターの例示としては限定されないが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、レトロウイルス、例えばレンチウイルス、単純ヘルペスウイルス、アデノウイルス、およびワクシニアウイルスのベクターが挙げられる。
【０４１４】
様々な実施形態では、１つまたは複数のＤＡＲＩＣ構成要素をコードするポリヌクレオチドが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、レトロウイルス、単純ヘルペスウイルス、アデノウイルス、およびワクシニアウイルスのベクターとともに細胞に形質導入されることで、例えばＴ細胞などの免疫エフェクター細胞に導入される。
【０４１５】
様々な実施形態では、１つまたは複数のポリヌクレオチドが、当該１つまたは複数のポリヌクレオチドを含有する組み換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）とともに細胞に形質導入されることで、例えばＴ細胞などの免疫エフェクター細胞に導入される。
【０４１６】
ＡＡＶは、小さな（約２６ｎｍ）の複製能力を欠いた、主にエピソーム性の非エンベロープウイルスである。ＡＡＶは、分裂細胞と非分裂細胞の両方に感染することができ、そのゲノムを宿主細胞のゲノムに組み込む場合がある。組み換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）は典型的には、最小で導入遺伝子とその制御配列、ならびに５’および３’のＡＡＶ逆位末端反復（ＩＴＲ）から構成される。ＩＴＲ配列は約１４５ｂｐの長さである。特定の実施形態では、ｒＡＡＶは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９またはＡＡＶ１０から単離されたＩＴＲとカプシド配列を含有する。
【０４１７】
一部の実施形態では、キメラｒＡＡＶが使用される。ＩＴＲ配列は、１つのＡＡＶ血清型から単離され、カプシド配列は別のＡＡＶ血清型から単離される。例えばＡＡＶ２由来のＩＴＲ配列と、ＡＡＶ６由来のカプシド配列を含むｒＡＡＶは、ＡＡＶ２／ＡＡＶ６と呼ばれる。特定の実施形態では、ｒＡＡＶは、ＡＡＶ２由来のＩＴＲと、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９またはＡＡＶ１０のいずれか１つに由来するカプシドタンパク質を含有してもよい。好ましい実施形態では、ｒＡＡＶは、ＡＡＶ２由来のＩＴＲ配列と、ＡＡＶ６由来のカプシド配列を含有する。好ましい実施形態では、ｒＡＡＶは、ＡＡＶ２由来のＩＴＲ配列と、ＡＡＶ２由来のカプシド配列を含有する。
【０４１８】
一部の実施形態では、操作法と選択法をＡＡＶカプシドに行い、それらが対象細胞に形質導入される確率を高くしてもよい。
【０４１９】
ｒＡＡＶベクターの構築、産生、および精製は、例えば米国特許第９，１６９，４９４号、第９，１６９，４９２号、第９，０１２，２２４号、第８，８８９，６４１号、第８，８０９，０５８号、および第８，７８４，７９９号に開示されている。それら文献はその全体で参照により本明細書に援用される。
【０４２０】
様々な実施形態では、１つまたは複数のポリヌクレオチドが、当該１つまたは複数のポリヌクレオチドを含有する例えばレンチウイルスなどのレトロウイルスとともに細胞に形質導入されることで、例えばＴ細胞などの免疫エフェクター細胞に導入される。
【０４２１】
本明細書において使用される場合、「レトロウイルス」という用語は、自身のゲノムＲＮＡを直線的二本鎖ＤＮＡコピーへと逆転写し、次いで自身のゲノムＤＮＡを宿主ゲノムへと共有結合的に統合させるＲＮＡウイルスを指す。特定の実施形態における使用に適したレトロウイルスの例示としては限定されないが、以下が挙げられる：モロニーマウス白血病ウイルス（Ｍ−ＭｕＬＶ）、モロニーマウス肉腫ウイルス（ＭｏＭＳＶ）、ハーベイマウス肉腫ウイルス（ＨａＭｕＳＶ）、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭｕＭＴＶ）、テナガザル白血病ウイルス（ＧａＬＶ）、ネコ白血病ウイルス（ＦＬＶ）、スプマウイルス、フレンドマウス白血病ウイルス、マウス幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）、およびラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）、およびレンチウイルス。
【０４２２】
本明細書において使用される場合、「レンチウイルス」という用語は、複合的なレトロウイルスの群（または属）を指す。レンチウイルスの例としては、以下が挙げられる：ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス、ＨＩＶ１型およびＨＩＶ２型を含む）、ビスナ−マエディウイルス（ＶＭＶ）、ヤギ関節炎−脳炎ウイルス（ＣＡＥＶ）、ウマ感染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）、ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）、およびサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）。１つの実施形態では、ＨＩＶをベースとしたベクター骨格（すなわちＨＩＶシス作用性配列因子）が好ましい。
【０４２３】
様々な実施形態では、本明細書に予期されるレンチウイルスベクターは、１つまたは複数のＬＴＲ、および以下のアクセサリー因子のうちの１つまたは複数またはすべてを含有する：ｃＰＰＴ／ＦＬＡＰ、Ｐｓｉ（Ψ）パッケージシグナル、輸出因子（ｅｘｐｏｒｔ  ｅｌｅｍｅｎｔ）、ポリ（Ａ）配列。および任意で、本明細書において別段に検討されるように、ＷＰＲＥまたはＨＰＲＥ、インシュレーター因子、選択的マーカー、および細胞自殺遺伝子を含有してもよい。
【０４２４】
特定の実施形態では、本明細書において予期されるレンチウイルスベクターは、統合的、または非統合的、または統合能力を欠くレンチウイルスであってもよい。本明細書において使用される場合、「統合能力を欠くレンチウイルス」または「ＩＤＬＶ」という用語は、ウイルスゲノムを宿主細胞ゲノムに統合させる能力を欠くインテグラーゼを有するレンチウイルスを指す。統合能力のないウイルスベクターは、特許出願ＷＯ２００６／０１０８３４に記載されており、当該出願はその全体で参照により本明細書に援用される。
【０４２５】
インテグラーゼ活性の低下に適したＨＩＶ−１  ｐｏｌ遺伝子中の変異の例としては限定されないが、以下が挙げられる：Ｈ１２Ｎ、Ｈ１２Ｃ、Ｈ１６Ｃ、Ｈ１６Ｖ、Ｓ８１  Ｒ、Ｄ４１Ａ、Ｋ４２Ａ、Ｈ５１Ａ、Ｑ５３Ｃ、Ｄ５５Ｖ、Ｄ６４Ｅ、Ｄ６４Ｖ、Ｅ６９Ａ、Ｋ７１Ａ、Ｅ８５Ａ、Ｅ８７Ａ、Ｄ１１６Ｎ、Ｄ１１６１、Ｄ１１６Ａ、Ｎ１２０Ｇ、Ｎ１２０１、Ｎ１２０Ｅ、Ｅ１５２Ｇ、Ｅ１５２Ａ、Ｄ３５Ｅ、Ｋ１５６Ｅ、Ｋ１５６Ａ、Ｅ１５７Ａ、Ｋ１５９Ｅ、Ｋ１５９Ａ、Ｋ１６０Ａ、Ｒ１６６Ａ、Ｄ１６７Ａ、Ｅ１７０Ａ、Ｈ１７１Ａ、Ｋ１７３Ａ、Ｋ１８６Ｑ、Ｋ１８６Ｔ、Ｋ１８８Ｔ、Ｅ１９８Ａ、Ｒ１９９ｃ、Ｒ１９９Ｔ、Ｒ１９９Ａ、Ｄ２０２Ａ、Ｋ２１１Ａ、Ｑ２１４Ｌ、Ｑ２１６Ｌ、Ｑ２２１  Ｌ、Ｗ２３５Ｆ、Ｗ２３５Ｅ、Ｋ２３６Ｓ、Ｋ２３６Ａ、Ｋ２４６Ａ、Ｇ２４７Ｗ、Ｄ２５３Ａ、Ｒ２６２Ａ、Ｒ２６３ＡおよびＫ２６４Ｈ。
【０４２６】
「長末端反復（ＬＴＲ：ｌｏｎｇ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｒｅｐｅａｔ）」という用語は、レトロウイルスＤＮＡの末端に位置する塩基対のドメインを指し、本来の配列コンテキストではＬＴＲはダイレクトリピートであり、Ｕ３、ＲおよびＵ５領域を含有する。
【０４２７】
本明細書において使用される場合、「ＦＬＡＰ因子」、または「ｃＰＰＴ／ＦＬＡＰ」という用語は、その配列が、例えばＨＩＶ−１およびＨＩＶ−２などのレトロウイルスの中心ポリプリン帯（ｃｅｎｔｒａｌ  ｐｏｌｙｐｕｒｉｎｅ  ｔｒａｃｔ）と中心末端配列（ｃｅｎｔｒａｌ  ｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ）（ｃＰＰＴおよびＣＴＳ）を含む核酸を指す。適切なＦＬＡＰ因子は、米国特許第  ６，６８２，９０７号およびＺｅｎｎｏｕ，ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｃｅｌｌ，１０１：１７３に記載されている。
【０４２８】
本明細書において使用される場合、「パッケージシグナル」または「パッケージ配列」という用語は、レトロウイルスゲノム内に位置するｐｓｉ［Ψ］配列を指し、ウイルスカプシドまたはウイルス粒子内にウイルスＲＮＡを挿入するために必要とされる。例えば、Ｃｌｅｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５．Ｊ．ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６９，Ｎｏ．４；ｐｐ．２１０１−２１０９を参照のこと。
【０４２９】
「輸出因子」という用語は、シス作用性の転写後制御因子を指し、核から細胞質へのＲＮＡ転写物の輸送を制御する。ＲＮＡ輸出因子の例としては限定されないが、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）のｒｅｖ反応性因子（ＲＲＥ）（例えば、Ｃｕｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６５：１０５３；およびＣｕｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１．Ｃｅｌｌ  ５８：４２３を参照のこと）およびＢ型肝炎ウイルスの転写後制御因子（ＨＰＲＥ）が挙げられる。
【０４３０】
特定の実施形態では、ウイルスベクター中の異種配列の発現は、転写後制御因子、効率的ポリアデニル化部位、および任意で転写終止シグナルをベクターに組み込むことで増加する。様々な転写後制御因子が、タンパク質での異種核酸の発現を増加させることができる。例えばウッドチャック肝炎ウイルスの転写後制御因子（ＷＰＲＥ；Ｚｕｆｆｅｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７３：２８８６）；Ｂ型肝炎ウイルス中に存在する転写後制御因子（ＨＰＲＥ）（Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，５：３８６４）；など（Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．，９：１７６６）が挙げられる。
【０４３１】
レンチウイルスベクターは、ＬＴＲ改変を行い、いくつかの安全性強化因子を含有することが好ましい。「自己不活化」（ＳＩＮ：ｓｅｌｆ−ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇ）ベクターとは、複製能力を欠いたベクターを指し、例えば右（３’）ＬＴＲエンハンサー−プロモーター領域はＵ３領域として知られているが、この領域が（例えば欠失または置換により）改変されて、ウイルス複製の最初のラウンドを超えたウイルス転写が阻害される、レトロウイルスまたはレンチウイルスのベクターなどがある。自己不活化は、ベクターＤＮＡ、すなわちベクターＲＮＡを生成するために使用されるＤＮＡの３’ＬＴＲのＵ３領域に欠失を導入することで実現されることが好ましい。そうすることで、逆転写の間にこの欠失がプロウイルスＤＮＡの５’ＬＴＲに移送される。特定の実施形態では、Ｕ３配列を充分に除去して、ＬＴＲの転写活性を大きく減少させる、または完全に無効化させることが望ましく、それにより形質導入された細胞において全長ベクターＲＮＡの産生が大きく減少または無効化される。ＨＩＶをベースにしたレンチベクターの場合、そうしたベクターは、ＬＴＲ  ＴＡＴＡ  ｂｏｘ（例えば−４１８〜−１８の欠失）の除去を含む大幅なＵ３欠失に耐用性があり、ベクター力価の大きな低下は伴わないことが判明している。
【０４３２】
追加的な安全性の向上は、５’ＬＴＲのＵ３領域を、ウイルス粒子の産生中にウイルスゲノムの転写を誘導する異種プロモーターと置き換えることで提供される。使用され得る異種プロモーターの例としては例えば、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）（例えば初期または後期）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）（例えば前初期）、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭｏＭＬＶ）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）、および単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）（チミジンキナーゼ）のプロモーターが挙げられる。
【０４３３】
本明細書において使用される場合、「偽型」または「偽型の」という用語は、そのウイルスエンベロープタンパク質が、好ましい特性を有する別のウイルスのエンベロープと置き換えられたウイルスを指す。例えば、ＨＩＶエンベロープタンパク質（ｅｎｖ遺伝子にコードされる）は通常、ＣＤ４＋提示細胞に対してウイルスを標的化するが、水泡性口炎ウイルスのＧ−タンパク質（ＶＳＶ−Ｇ）エンベロープタンパク質でＨＩＶを偽型化することで、広範な細胞にＨＩＶが感染できるようになる。
【０４３４】
ある実施形態では、レンチウイルスベクターは、公知の方法により産生される。例えば、Ｋｕｔｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＢＭＣ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００９；９：１０．ｄｏｉ：１０．１１８６／１４７２−６７５０−９−１０；Ｋｕｔｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｔｏｃ．２００９；４（４）：４９５−５０５．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｐｒｏｔ．２００９．２２を参照のこと。
【０４３５】
本明細書に予期されるある特定の実施形態によると、ほとんど、またはすべてのウイルスベクターの骨格配列は、例えばＨＩＶ−１などのレンチウイルスに由来する。ただし、レトロウイルス配列および／またはレンチウイルス配列の多くの様々な源を使用してもよく、もしくは組み合わせてもよく、そして本明細書に記載される機能を実行するトランスファーベクターの能力を損なうことなく、特定のレンチウイルス配列に多くの置換および変更を含ませてもよいことを理解されたい。さらに、様々なレンチウイルスベクターが当分野に公知である。Ｎａｌｄｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９６ａ，１９９６ｂ，ａｎｄ  １９９８）；Ｚｕｆｆｅｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）；Ｄｕｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８、米国特許第  ６，０１３，５１６号および第５，９９４，１３６号を参照のこと。それらの多くが、本明細書に予期されるウイルスベクターまたはトランスファープラスミドの産生に適合され得る。
【０４３６】
様々な実施形態では、１つまたは複数のポリヌクレオチドが、当該１つまたは複数のポリヌクレオチドを含有する組み換えアデノウイルスとともに細胞に形質導入されることで、免疫エフェクター細胞に導入される。
【０４３７】
アデノウイルス系のベクターは、多くの細胞型で非常に高い効率で形質導入を行うことができ、そして細胞分裂を必要としない。そうしたベクターを用いることで、高い力価と、高レベルの発現が得られる。このベクターは、比較的シンプルなシステムで大量に作製することができる。ほとんどのアデノウイルスベクターが、導入遺伝子がＡｄ  Ｅ１ａ、Ｅ１ｂ、および／またはＥ３遺伝子を置換するよう操作されている。その結果、複製能力を欠くベクターはヒト２９３細胞中で増幅され、当該細胞が失われた遺伝子機能をトランスで供給する。Ａｄベクターは、例えば肝臓、腎臓および筋肉中に存在する細胞などの非分裂細胞、分化細胞を含む、複数のタイプの組織にインビボで形質導入することができる。従来的なＡｄベクターは、大きな運搬能力を有している。
【０４３８】
複製能力を欠く現在のアデノウイルスベクターの作製と増幅は、２９３と呼ばれるユニークなヘルパー細胞株を利用する場合がある。この細胞株は、ヒト胚腎臓細胞からＡｄ５  ＤＮＡ断片により形質転換されたものであり、Ｅ１タンパク質を構造的に発現している（Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９７７）。アデノウイルスゲノムのＥ３領域は必須ではないため（Ｊｏｎｅｓ  ＆  Ｓｈｅｎｋ，１９７８）、現在のアデノウイルスベクターは、２９３細胞の補助を得て、Ｅ１、Ｄ３またはその両方の領域に外来性ＤＮＡを担持している（Ｇｒａｈａｍ  ＆  Ｐｒｅｖｅｃ，１９９１）。アデノウイルスベクターは、真核細胞遺伝子の発現（Ｌｅｖｒｅｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１；Ｇｏｍｅｚ−Ｆｏｉｘ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２）およびワクチン開発（Ｇｒｕｎｈａｕｓ  ＆  Ｈｏｒｗｉｔｚ，１９９２；Ｇｒａｈａｍ  ＆  Ｐｒｅｖｅｃ，１９９２）に使用されている。組み換えアデノウイルスを様々な組織に投与する実験としては、気管滴下（Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２）、筋肉注射（Ｒａｇｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３）、末梢静脈注射（Ｈｅｒｚ  ＆  Ｇｅｒａｒｄ，１９９３）、および脳内への定位性接種（Ｌｅ  Ｇａｌ  Ｌａ  Ｓａｌｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３）が挙げられる。臨床試験におけるＡｄベクターの使用例には、筋肉内注射を用いた抗腫瘍免疫を目的としたポリヌクレオチド療法が含まれる（Ｓｔｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．７：１０８３−９（１９９８））。
【０４３９】
様々な実施形態では、１つまたは複数のポリヌクレオチドが、当該１つまたは複数のポリヌクレオチドを含有する例えばＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２といった単純ヘルペスウイルスとともに細胞に形質導入されることで、免疫エフェクター細胞に導入される。
【０４４０】
成熟ＨＳＶビリオンは、１５２ｋｂの直線型二本鎖ＤＮＡ分子からなるウイルスゲノムを含む、エンベロープ型正２０面体カプシドからなる。１つの実施形態では、ＨＳＶをベースとしたウイルスベクターは、１つもしくは複数の必須または非必須のＨＳＶ遺伝子が欠落している。１つの実施形態では、ＨＳＶをベースとしたウイルスベクターは、複製能力を欠く。殆どの複製能力を欠くＨＳＶベクターは、１つまたは複数の中間−初期、初期、または後期のＨＳＶ遺伝子を除去するための欠失を含有し、複製が阻害されている。例えばＨＳＶベクターは、以下からなる群から選択される前初期遺伝子が欠落していてもよい：ＩＣＰ４、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ４７、およびそれらの組み合わせ。ＨＳＶベクターの利点は、後期ステージに入り、長期的にＤＮＡ発現を生じさせることができる能力と、最大２５ｋｂもの外因性ＤＮＡインサートを収容できる、その巨大なウイルスＤＮＡゲノムである。ＨＳＶ系のベクターは、例えば米国特許第５，８３７，５３２号、第５，８４６，７８２号および第５，８０４，４１３号、ならびに国際特許出願ＷＯ  ９１／０２７８８、ＷＯ９６／０４３９４、ＷＯ９８／１５６３７およびＷＯ９９／０６５８３に記載されており、それらはその全体で参照により本明細書に援用される。
【０４４１】
Ｇ．遺伝子改変細胞
様々な実施形態では、細胞は、癌治療における使用を目的として、本明細書において予期される１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ構成要素、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体、操作されたＴＣＲ、ＣＡＲ、ゼータカイン、および／または融合タンパク質を発現するよう改変される。細胞は、本明細書において予期されるポリペプチドのうちの１つまたは複数を発現するよう非遺伝的に改変されてもよく、または特定の好ましい実施形態では、細胞は、本明細書において予期されるポリペプチドの１つまたは複数を発現するよう遺伝的に改変されてもよい。本明細書において使用される場合、「遺伝子操作された」または「遺伝的に改変された」という用語は、ＤＮＡまたはＲＮＡの形態の追加遺伝物質を、細胞中の総遺伝物質に加えることを指す。「遺伝的に改変された細胞」、「改変細胞」、および「再指向化細胞」という用語は、特定の実施形態において相互交換可能に使用される。
【０４４２】
特定の実施形態では、本明細書において予期される１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ構成要素は、免疫エフェクター細胞に導入および発現され、当該免疫エフェクター細胞の有効性を改善する。特定の実施形態では、１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ構成要素は、細胞中で操作された抗原受容体を共発現することにより標的細胞に再指向化された免疫エフェクター細胞に導入され、および発現される。
【０４４３】
特定の実施形態では、二重標的化免疫エフェクター細胞は、標的細胞が、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体に認識される１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄリガンドと、別のＤＡＲＩＣ結合構成要素に認識される抗原を発現することが予期される。特定の実施形態では、他のＤＡＲＩＣ結合構成要素は、Ｂ７−Ｈ３、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＥＧＦＲまたはＥＧＦＲｖＩＩＩに結合する。
【０４４４】
特定の実施形態では、二重標的化免疫エフェクター細胞は、標的細胞が、操作された抗原受容体に認識される抗原と、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体に認識される１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄリガンドを発現することが予期される。
【０４４５】
「免疫エフェクター細胞」は、１つまたは複数のエフェクター機能（例えば細胞障害性の細胞殺傷活性、サイトカイン分泌、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣの誘導など）を有する免疫系の任意の細胞である。本明細書において予期される免疫エフェクター細胞の例示は、Ｔリンパ球であり、特に細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ；ＣＤ８＋Ｔ細胞）、ＴＩＬ、およびヘルパーＴ細胞（ＨＴＬ；ＣＤ４＋Ｔ細胞）である。特定の実施形態では、細胞は、αβＴ細胞を含む。特定の実施形態では、細胞は、γδＴ細胞を含む。１つの実施形態では、免疫エフェクター細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。１つの実施形態では、免疫エフェクター細胞は、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞を含む。免疫エフェクター細胞は、自己（ｓｅｌｆ）または非自己（ｎｏｎ−ｓｅｌｆ、例えば同種、同系または異種）であってもよい。
【０４４６】
本明細書において使用される場合、「自己」とは、同じ対象に由来する細胞を指す。本明細書において使用される場合、「同種」とは、比較すると当該細胞と遺伝的に異なる同種の細胞を指す。本明細書において使用される場合、「同系」とは、比較すると当該細胞と遺伝的に同一である、異なる対象の細胞を指す。本明細書において使用される場合、「異種」とは、比較すると当該細胞と異なる種の細胞を指す。好ましい実施形態では、細胞は、自己である。
【０４４７】
本明細書において予期される１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ構成要素またはＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体の導入に適した免疫エフェクター細胞の例としては、Ｔリンパ球が挙げられる。「Ｔ細胞」または「Ｔリンパ球」という用語は、当分野において認識されており、胸腺細胞、未成熟Ｔリンパ球、成熟Ｔリンパ球、静止Ｔリンパ球、または活性化Ｔリンパ球を含むことが意図される。Ｔ細胞は、例えばＴヘルパー１（Ｔｈ１）細胞またはＴヘルパー２（Ｔｈ２）細胞などのＴヘルパー（Ｔｈ）細胞であってもよい。Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞（ＨＴＬ；ＣＤ４＋Ｔ細胞）のＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ：ＣＤ８＋Ｔ細胞）、ＣＤ４＋ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４−ＣＤ８−Ｔ細胞、またはＴ細胞の任意の他のサブセットであってもよい。特定の実施形態における使用に適したＴ細胞群の他の例としては、ナイーブＴ細胞およびメモリーＴ細胞が挙げられる。
【０４４８】
当業者に理解されるように、他の細胞も、本明細書において予期される１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ構成要素またはＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体を含む免疫エフェクター細胞として使用され得る。特定の実施形態では、免疫エフェクター細胞は、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、好中球およびマクロファージも含む。免疫エフェクター細胞は、エフェクター細胞の前駆体も含み、この場合においてそうした前駆細胞は、インビボまたはインビトロで免疫エフェクター細胞に分化するように誘導されてもよい。したがって特定の実施形態では、免疫エフェクター細胞は、免疫エフェクター細胞の前駆体を含み、例えば臍帯血、骨髄または動員末梢血に由来する細胞のＣＤ３４＋集団内に含有される造血幹細胞（ＨＳＣ）などの免疫エフェクター細胞の前駆体を含み、それらは対象に投与されたときに成熟免疫エフェクター細胞へと分化し、またはインビトロで誘導されて成熟免疫エフェクター細胞へと分化してもよい。
【０４４９】
本明細書において使用される場合、「ＣＤ３４＋細胞」という用語は、その細胞表面上にＣＤ３４タンパク質を発現する細胞を指す。本明細書において使用される場合、「ＣＤ３４」とは、細胞−細胞付着因子として作用することが多く、リンパ節へのＴ細胞の侵入に関与する細胞表面糖タンパク質（例えばシアロムチンタンパク質）を指す。ＣＤ３４＋細胞集団は、造血幹細胞（ＨＳＣ）を含有し、ＨＳＣは患者に投与されたときに分化し、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、好中球、および単球／マクロファージ系統の細胞を含むすべての造血系の元となる。
【０４５０】
本明細書において予期される１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ構成要素を発現する免疫エフェクター細胞を作成する方法は、特定の実施形態に提示される。１つの実施形態では、方法は、個体から単離された免疫エフェクター細胞にトランスフェクトまたは形質導入することにより、当該免疫エフェクター細胞が、本明細書において予期される１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ構成要素を含有する核酸および／もしくはベクターまたはそれらの組み合わせを１つまたは複数含む工程を含む。１つの実施形態では、方法は、個体から単離された免疫エフェクター細胞にトランスフェクトまたは形質導入することにより、当該免疫エフェクター細胞が、ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、およびＢ７−Ｈ３、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＥＧＦＲまたはＥＧＦＲｖＩＩＩに結合する別のＤＡＲＩＣ結合構成要素を発現する工程を含む。１つの実施形態では、方法は、個体から単離された免疫エフェクター細胞にトランスフェクトまたは形質導入することにより、当該免疫エフェクター細胞が、本明細書において予期されるＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ構成要素および操作された抗原受容体を発現する工程を含む。ある実施形態では、免疫エフェクター細胞は、個体から単離され、および遺伝子改変され、インビトロでさらなる操作は受けない。次いでそうした細胞を当該個体に直接再投与してもよい。さらなる実施形態では、免疫エフェクター細胞は最初にインビトロで活性化され、そして刺激されて増殖し、その後、遺伝子改変される。これに関し、免疫エフェクター細胞は、遺伝子改変される前、および／または後に培養され得る。
【０４５１】
特定の実施形態では、本明細書に記載される免疫エフェクター細胞のインビトロ操作または遺伝子改変の前に、対象から細胞源が取得される。特定の実施形態では、改変免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞を含有する。
【０４５２】
Ｔ細胞は、限定されないが、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位の組織、腹水、胸水、脾臓組織および腫瘍を含む多くの源から取得されることができる。ある実施形態では、Ｔ細胞は、例えばＦＩＣＯＬＬ（商標）分離などの沈殿作用といった当業者に公知の任意の数の技術を使用して、対象から採取された血液ユニットから取得されることができる。
【０４５３】
他の実施形態では、単離された、または精製されたＴ細胞群が使用される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣの単離後、細胞障害性Ｔリンパ球とヘルパーＴリンパ球の両方を、活性化、拡張および／もしくは遺伝子改変の前または後に、ナイーブＴ細胞亜群、メモリーＴ細胞亜群およびエフェクターＴ細胞亜群へとソーティングしてもよい。
【０４５４】
１つの実施形態では、単離された、または精製されたＴ細胞群は、限定されないが、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋またはそれらの組み合わせを含むマーカーのうちの１つまたは複数を発現する。
【０４５５】
ある実施形態では、Ｔ細胞が個体から単離され、インビトロで最初に活性化および刺激されて増殖した後に改変されて、１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ構成要素を発現する。
【０４５６】
Ｔ細胞組成物の充分な治療投与量を獲得するために、しばしばＴ細胞に、１ラウンドまたは複数ラウンドの刺激、活性化および／または拡張が行われる。Ｔ細胞は一般的に、例えば米国特許第６，３５２，６９４号、第６，５３４，０５５号、第６，９０５，６８０号、第６，６９２，９６４号、第５，８５８，３５８号、第６，８８７，４６６号、第６，９０５，６８１号、第７，１４４，５７５号、第７，０６７，３１８号、第７，１７２，８６９号、第７，２３２，５６６号、第７，１７５，８４３号、第５，８８３，２２３号、第６，９０５，８７４号、第６，７９７，５１４号、および第６，８６７，０４１号に記載される方法を使用して活性化および拡張され得る。それら特許はその全体で参照により本明細書に援用される。特定の実施形態では、Ｔ細胞は、約６時間、約１２時間、約１８時間、または約２４時間活性化および拡張され、その後に１つまたは複数のＤＡＲＩＣ免疫受容体ポリペプチドをコードするベクターまたはポリヌクレオチドが導入される。任意で、本明細書において予期される操作された抗原受容体と組み合わされる。
【０４５７】
１つの実施形態では、Ｔ細胞は、改変されるときに同時に活性化される。
【０４５８】
様々な実施形態では、免疫エフェクター細胞の作製方法は、Ｔ細胞を含む細胞群を活性化させる工程、および当該Ｔ細胞群を拡張させる工程を含む。Ｔ細胞活性化は、Ｔ細胞のＴＣＲ／ＣＤ３複合体を介して一次刺激シグナルを提供し、そして例えばＣＤ２８などのアクセサリー分子を介して二次共刺激シグナルを提供することにより達成され得る。
【０４５９】
ＴＣＲ／ＣＤ３複合体は、Ｔ細胞と、適切なＣＤ３結合剤、例えばＣＤ３リガンドや抗ＣＤ３モノクローナル抗体を接触させることにより刺激されてもよい。ＣＤ３抗体の例示としては限定されないが、ＯＫＴ３、Ｇ１９−４、ＢＣ３および６４．１が挙げられる。
【０４６０】
ＴＣＲ／ＣＤ３複合体を介して提供される一次刺激シグナルに加えて、Ｔ細胞反応の誘導には二次的な共刺激性シグナルを必要とする。特定の実施形態では、ＣＤ２８結合剤を使用して、共刺激性シグナルを提供してもよい。ＣＤ２８結合剤の例示としては限定されないが、天然ＣＤ２８リガンド、例えばＣＤ２８に対する天然リガンド（例えばタンパク質のＢ７ファミリーのメンバー、例えばＢ７−１（ＣＤ８０）およびＢ７−２（ＣＤ８６）；および抗ＣＤ２８モノクローナル抗体、またはＣＤ２８分子と交差結合することができるその断片、例えばモノクローナル抗体の９．３、Ｂ−Ｔ３、ＸＲ−ＣＤ２８、ＫＯＬＴ−２、１５Ｅ８、２４８．２３．２、およびＥＸ５．３Ｄ１０が挙げられる。
【０４６１】
１つの実施形態では、一次刺激シグナルを提供する分子、例えばＴＣＲ／ＣＤ３複合体を介して刺激を提供する分子、および共刺激分子は、同じ表面に連結される。
【０４６２】
ある実施形態では、刺激シグナルおよび共刺激シグナルを提供する結合剤は、細胞表面上に局在する。これは、細胞に、結合剤をコードする核酸を、細胞表面上での発現に適した形態でトランスフェクトすることにより、もしくは形質導入することにより、または結合剤と細胞表面を連結させることにより、実現され得る。
【０４６３】
別の実施形態では、一次刺激シグナルを提供する分子、例えばＴＣＲ／ＣＤ３複合体を介して刺激を提供する分子、および共刺激分子は、抗原提示細胞上に提示される。
【０４６４】
１つの実施形態では、一次刺激シグナルを提供する分子、例えばＴＣＲ／ＣＤ３複合体を介して刺激を提供する分子、および共刺激分子は、別の表面上に提示される。
【０４６５】
ある実施形態では、刺激シグナルおよび共刺激シグナルを提供する結合剤のうちの１つは、可溶性であり（溶液で提供される）、他方の剤は、１つまたは複数の表面上に提供される。
【０４６６】
特定の実施形態では、刺激シグナルおよび共刺激シグナルを提供する結合剤は両方とも可溶型で提供される（溶液で提供される）。
【０４６７】
様々な実施形態では、本明細書において予期されるＴ細胞を作製する方法は、Ｔ細胞を、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体を用いて活性化する工程を含む。
【０４６８】
１つの実施形態では、本明細書において予期される方法により活性化されたＴ細胞の拡張は、Ｔ細胞を含む細胞群を、数時間（約３時間）〜約７日〜約２８日、またはその間の任意の整数の時間数の間、培養する工程をさらに含む。別の実施形態では、Ｔ細胞組成物は、１４日間培養されてもよい。特定の実施形態では、Ｔ細胞は、約２１日間培養される。別の実施形態では、Ｔ細胞組成物は、約２〜３日間培養される。数サイクルの刺激／活性化／拡張が望ましい場合もあり、それによりＴ細胞の培養時間は６０日間以上になる可能性もある。
【０４６９】
特定の実施形態では、Ｔ細胞培養に適した条件は、適切な培地（例えばＭｉｎｉｍａｌ  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ＭｅｄｉａまたはＲＰＭＩ  Ｍｅｄｉａ  １６４０またはＸ−ｖｉｖｏ  １５（Ｌｏｎｚａ社））、および増殖と活性に必要な１つまたは複数の因子が含まれ、限定されないが血清（例えばウシ胎児血清またはヒト血清）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、インスリン、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−２１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＴＧＦβおよびＴＮＦ−αまたは当業者に公知の細胞増殖に適した任意の他の添加物が挙げられる。
【０４７０】
細胞培養培地のさらなる例示としては限定されないが、ＲＰＭＩ  １６４０、Ｃｌｉｃｋｓ、ＡＩＭ−Ｖ、ＤＭＥＭ、ＭＥＭ、ａ−ＭＥＭ、Ｆ−１２、Ｘ−Ｖｉｖｏ  １５、およびＸ−Ｖｉｖｏ  ２０、Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒが挙げられ、それらにアミノ酸、ピルビン酸ナトリウムおよびビタミン類が添加され、無血清であるか、または適切な量の血清（または血漿）もしくは所定のホルモンの組み合わせ、および／またはＴ細胞の増殖と拡張に充分な量のサイトカインが補充される。
【０４７１】
例えばペニシリンやストレプトマイシンなどの抗生物質は、実験培養でのみ含有され、対象への注入用の細胞培養には含有されない。標的細胞は、例えば適切な温度（例えば３７℃）および大気（例えば空気に５％ＣＯ２を加える）など、増殖をサポートするために必要な条件下で維持される。
【０４７２】
特定の実施形態では、ＰＢＭＣ、または単離Ｔ細胞は、通常はビーズまたは他の表面上に結合された例えば抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体などの刺激剤および共刺激剤と、例えばＩＬ−２、ＩＬ−７および／またはＩＬ−１５などの適切なサイトカインを含む培養培地中で、接触する。
【０４７３】
他の実施形態では、Ｋ５６２細胞、Ｕ９３７細胞、７２１．２２１細胞、Ｔ２細胞およびＣ１Ｒ細胞を操作して、様々な共刺激分子およびサイトカインの安定的な発現と分泌を誘導することにより、人工ＡＰＣ（ａＡＰＣ）が作製される。特定の実施形態では、Ｋ３２  ａＡＰＣまたはＵ３２  ａＡＰＣを使用して、ＡＡＰＣ細胞表面上の１つまたは複数の抗体系刺激分子の提示が誘導される。Ｔ細胞群は、限定されないがＣＤ１３７Ｌ（４−１ＢＢＬ）、ＣＤ１３４Ｌ（ＯＸ４０Ｌ）および／またはＣＤ８０もしくはＣＤ８６を含む様々な共刺激分子を発現するａＡＰＣにより拡張されてもよい。最終的に、ａＡＰＣは、遺伝子改変されたＴ細胞の拡張と、ＣＤ８  Ｔ細胞上のＣＤ２８発現の維持に効率的なプラットフォームを提供する。ＷＯ  ０３／０５７１７１およびＵＳ２００３／０１４７８６９に提示されるａＡＰＣは、その全体で参照により本明細書に援用される。
【０４７４】
特定の実施形態では、ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、およびＢ７−Ｈ３、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＥＧＦＲまたはＥＧＦＲｖＩＩＩに結合する別のＤＡＲＩＣ結合構成要素をコードするポリヌクレオチドが、Ｔ細胞群に導入される。
【０４７５】
特定の実施形態では、１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ構成要素と、操作された抗原受容体をコードするポリヌクレオチドが、Ｔ細胞群に導入される。特定の実施形態では、１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ構成要素をコードするポリヌクレオチドが、操作された抗原受容体を発現するＴ細胞の群に導入される。ポリヌクレオチドは、マイクロインジェクション、トランスフェクション、リポフェクション、ヒートショック、エレクトロポレーション、形質導入、遺伝子銃、マイクロインジェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン介在移送などによりＴ細胞に導入されてもよい。
【０４７６】
好ましい実施形態では、ポリヌクレオチドは、ウイルス形質導入によりＴ細胞に導入される。
【０４７７】
免疫エフェクター細胞またはＣＤ３４＋細胞へのポリヌクレオチドの導入に適したウイルスベクターシステムの例示としては限定されないが、遺伝子移送用のアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、レトロウイルス、単純ヘルペスウイルス、アデノウイルス、ワクシニアウイルスのベクターが挙げられる。
【０４７８】
１つの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＡＡＶ形質導入によりＴ細胞に導入される。
【０４７９】
１つの実施形態では、ポリヌクレオチドは、レトロウイルス形質導入によりＴ細胞に導入される。
【０４８０】
１つの実施形態では、ポリヌクレオチドは、レンチウイルス形質導入によりＴ細胞に導入される。
【０４８１】
１つの実施形態では、ポリヌクレオチドは、アデノウイルス形質導入によりＴ細胞に導入される。
【０４８２】
１つの実施形態では、ポリヌクレオチドは、単純ヘルペスウイルス形質導入によりＴ細胞に導入される。
【０４８３】
１つの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ワクシニアウイルス形質導入によりＴ細胞に導入される。
【０４８４】
Ｈ．組成物および製剤
本明細書において予期される組成物は、１つまたは複数のポリペプチド、ポリヌクレオチド、それらを含むベクター、遺伝子改変された免疫エフェクター細胞、架橋因子などを含んでもよい。組成物としては限定されないが、医薬組成物が挙げられる。「医薬組成物」とは、細胞または動物への投与に対し、薬学的に許容可能な溶液または生理学的に許容可能な溶液中で、単独で、または１つもしくは複数の他の治療モダリティと併用されて製剤化される組成物を指す。所望の場合には、組成物は、例えばサイトカイン、増殖因子、ホルモン、低分子、化学療法剤、プロドラッグ、薬剤、抗体、または他の様々な薬学的に活性な剤などの他の剤も同様に併用されて投与され得ることも理解されたい。事実上、組成物に含有され得る他の構成要素に制限はないが、追加される剤は、意図される療法を送達する組成物の能力に有害な影響を与えないものとする。
【０４８５】
本明細書において、「薬学的に許容可能」という文言は、適切な医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を伴わずにヒトおよび動物の組織と接触して使用することに適し、合理的な利益／リスク比に見合った、それら化合物、物質、組成物および／または剤型を指すために採用される。
【０４８６】
「薬学的に許容可能な担体」という用語は、架橋因子、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、それらを含むベクター、または遺伝子改変された免疫エフェクター細胞と一緒に投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤またはビヒクルを指す。薬学的な担体の例示は、例えば細胞培養培地、水および油などの滅菌された液体であってもよく、石油、動物、植物または合成を起源とするものが挙げられ、例えばピーナッツ油、大豆油、鉱物油、ごま油などがある。生理食塩水およびブドウ糖液およびグリセロール溶液も、特に注射用溶液に関して液性担体として採用され得る。特定の実施形態における適切な薬学的賦形剤としては、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦粉、白墨、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、滑石、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが挙げられる。任意の従来的な媒または剤が、活性成分と不適合である場合を除き、治療組成物中でのその使用が予期される。補足的な活性成分も、組成物内に組み込まれ得る。
【０４８７】
１つの実施形態では、薬学的に許容可能な担体を含む組成物が、対象への投与に適している。特定の実施形態では、担体を含む組成物は、例えば血管内（静脈内または動脈内）投与、腹腔内投与または筋肉内投与などの非経口投与に適している。特定の実施形態では、薬学的に許容可能な担体を含む組成物は、脳室内投与、髄腔内投与またはくも膜腔内投与に適している。薬学的に許容可能な担体としては、滅菌水溶液、細胞培養培地または分散液が挙げられる。薬学的に活性な物質に対する、そのような媒および剤の使用は、当分野に公知である。任意の従来的な媒または剤が、架橋因子、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、それらを含むベクター、または遺伝子改変された免疫エフェクター細胞と不適合である場合を除き、医薬組成物におけるそれらの使用が予期される。
【０４８８】
特定の実施形態では、本明細書において予期される組成物は、遺伝子改変されたＴ細胞と、薬学的に許容可能な担体を含む。本明細書において予期される細胞をベースとした組成物を含有する組成物は、腸内投与または非経口投与により別個に投与されてもよく、または所望の治療目的を果たすための他の適切な化合物と併用して投与されてもよい。
【０４８９】
特定の実施形態では、本明細書において予期される組成物は、架橋因子と、薬学的に許容可能な担体を含む。
【０４９０】
薬学的に許容可能な担体は、充分に高い純度のものでなくてはならず、そして治療されるヒト対象への投与に適するよう、充分に毒性が低いものでなければならない。さらに組成物の安定性を維持または増加させなければならない。薬学的に許容可能な担体は、液体または固体であってもよく、予定される投与様式を踏まえ、組成物の他の構成要素と混合されたときに、望ましい体積、濃度を提供するよう選択される。例えば薬学的に許容可能な担体は、限定されないが、結合剤（例えば前ゼラチン化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースなど）、充填剤（例えばラクトースまたは他の糖類、微結晶セルロース、ペクチン、ゼラチン、硫酸カルシウム、エチルセルロース、ポリアクリレート、リン酸水素カルシウムなど）、潤滑剤（例えばステアリン酸マグネシウム、滑石、シリカ、コロイド状二酸化シリコン、ステアリン酸、ステアリン酸金属塩、水素化植物油、トウモロコシデンプン、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウムなど）、崩壊剤（例えば、デンプン、グリコール酸ナトリウムデンプンなど）、または湿潤剤（例えばラウリル硫酸ナトリウムなど）であってもよい。本明細書において予期される組成物のための他の適切な薬学的に許容可能な担体としては限定されないが、水、塩溶液、アルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、アミロース、ステアリン酸マグネシウム、滑石、ケイ酸、粘性パラフィン、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドンなどが挙げられる。
【０４９１】
そうした担体溶液は、緩衝剤、希釈剤および他の適切な添加剤を含んでもよい。本明細書において使用される場合、「緩衝剤」という用語は、その化学組成が、ｐＨに大きな変化を与えることなく酸または塩基を中和する溶液または液体を指す。本明細書において予期される緩衝剤の例としては限定されないが、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、リンゲル溶液、５％ブドウ糖溶液（Ｄ５Ｗ）、生理食塩水（０．９％  ＮａＣｌ）が挙げられる。
【０４９２】
薬学的に許容可能な担体は、組成物のｐＨを約７に維持するために充分な量で存在してもよい。あるいは組成物は、約６．８〜約７．４の範囲のｐＨ、例えば６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３および７．４のｐＨを有する。さらに別の実施形態では、組成物は約７．４のｐＨを有する。
【０４９３】
本明細書において予期される組成物は、非毒性の薬学的に許容可能な培地を含有してもよい。組成物は、懸濁液であってもよい。本明細書において使用される場合、「懸濁液」という用語は、細胞が固形支持体に結合しない非接着性の状態を指す。例えば懸濁液として維持される細胞は、攪拌またはかき混ぜられてもよく、例えば培養皿などの支持体に付着しない。
【０４９４】
特定の実施形態では、本明細書において予期される組成物は、懸濁液で製剤化され、この場合、改変Ｔ細胞は、受容可能な液体培地または溶液、例えば生理食塩水中または無血清培地中に、静脈（ＩＶ）バッグなどにおいて分散される。受容可能な希釈剤としては限定されないが、水、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ、リンゲル溶液、等張塩化ナトリウム溶液（生理食塩水）、無血清細胞培養培地、および極低温保存に適した培地、例えばＣｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）培地が挙げられる。
【０４９５】
ある実施形態では、薬学的に許容可能な担体は、ヒトまたは動物を起源とする天然タンパク質を実質的に含まず、改変Ｔ細胞群を含む組成物の保存に適している。治療用組成物は、ヒト患者への投与が意図されており、そのため例えばウシ血清アルブミン、ウマ血清およびウシ胎児血清などの細胞培養成分を実質的に含まない。
【０４９６】
一部の実施形態では、組成物は、薬学的に許容可能な細胞培養培地中で製剤化される。そうした組成物は、ヒト対象への投与に適している。特定の実施形態では、薬学的に許容可能な細胞培養培地は、無血清培地である。
【０４９７】
無血清培地は、血清含有培地を超える利点をいくつか有しており、シンプルでより明白な組成、汚染物質量の低下、感染性実体の源となる可能性の排除、コスト低下が挙げられる。様々な実施形態では、無血清培地は、動物質を含まず、任意で無タンパク質であってもよい。任意で培地はバイオ医薬品的に受容可能な組み換えタンパク質を含有してもよい。「動物質を含まない」培地とは、構成要素が非動物源に由来する培地を指す。組み換えタンパク質は、動物質を含まない培地中で動物性タンパク質を置き換え、その栄養素は合成、植物または微生物の源から取得される。「タンパク質を含まない」培地は、対照的に、実質的にタンパク質を含まないと規定される。
【０４９８】
特定の実施形態において使用される無血清培地の例示としては限定されないが、ＱＢＳＦ−６０（Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ，Ｉｎｃ．）、ＳｔｅｍＰｒｏ−３４（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）、およびＸ−ＶＩＶＯ  １０が挙げられる。
【０４９９】
好ましい実施形態では、改変Ｔ細胞を含む組成物は、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ中で製剤化される。
【０５００】
様々な実施形態では、改変Ｔ細胞を含む組成物は、凍結保存培地中で製剤化される。例えば凍結保存剤を含む凍結保存培地を使用して、融解後に高い細胞活性成績を維持してもよい。特定の組成物において使用される凍結保存培地の例示としては限定されないが、ＣｒｙｏＳｔｏｒ  ＣＳ１０、ＣｒｙｏＳｔｏｒ  ＣＳ５、およびＣｒｙｏＳｔｏｒ  ＣＳ２が挙げられる。
【０５０１】
１つの実施形態では、組成物は、５０：５０のＰｌａｓｍａＬｙｔｅ  ＡとＣｒｙｏＳｔｏｒ  ＣＳ１０を含む溶液中で製剤化される。
【０５０２】
特定の実施形態では、組成物は、マイコプラズマ、エンドトキシンおよび微生物汚染を実質的に含まない。エンドトキシンに関して「実質的に含まない」とは、生物製剤に関してＦＤＡにより許可されるよりも低い細胞投与量当たりのエンドトキシンであることを意味し、１日当たり、５ＥＵ／体重ｋｇの総エンドトキシンであり、平均７０ｋｇのヒトに対し、総投与量の細胞当たり３５０ＥＵである。特定の実施形態では、本明細書において予期される組成物は、約０．５  ＥＵ／ｍＬ〜約５．０  ＥＵ／ｍＬ、または約０．５  ＥＵ／ｍＬ、１．０  ＥＵ／ｍＬ、１．５  ＥＵ／ｍＬ、２．０  ＥＵ／ｍＬ、２．５  ＥＵ／ｍＬ、３．０  ＥＵ／ｍＬ、３．５  ＥＵ／ｍＬ、４．０  ＥＵ／ｍＬ、４．５  ＥＵ／ｍＬ、もしくは５．０  ＥＵ／ｍＬを含有する。
【０５０３】
特定の実施形態では、薬学的に許容可能な担体溶液の製剤は、当分野に公知であり、例えば腸内および非経口、例えば血管内、静脈内、動脈内、骨内、脳室内、大脳内、頭蓋内、髄腔内、クモ膜下腔内、および髄内の投与ならびに製剤を含む様々な治療レジメンにおける、本明細書に記載の特定の組成物の使用に関する適切な投薬レジメンおよび治療レジメンの開発も同様である。当業者であれば、本明細書において予期される特定の実施形態は、例えば薬学分野で公知であり、そして例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，ｖｏｌｕｍｅ  Ｉ  ａｎｄ  ｖｏｌｕｍｅ  ＩＩ．  ２２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．Ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｌｏｙｄ  Ｖ．Ａｌｌｅｎ  Ｊｒ．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ：Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ；２０１２に記載される製剤などの他の製剤を含んでもよいことを理解するであろう。当該文献はその全体で参照により本明細書に援用される。
【０５０４】
特定の実施形態では、組成物は、本明細書において予期される１つまたは複数のＤＡＲＩＣ構成要素を発現するＣＡＲ  Ｔ細胞を含む免疫エフェクター細胞の量を含む。本明細書において使用される場合、「量」という用語は、架橋因子の存在下で、臨床結果を含む有益な、もしくは所望の予防的結果または治療結果を実現するための本明細書において予期される１つまたは複数のＤＡＲＩＣ構成要素を含む細胞の「有効な量」または「有効量」を指す。
【０５０５】
「予防有効量」とは、架橋因子の存在下で所望の予防的結果を実現するのに有効な、本明細書において予期される１つまたは複数のＤＡＲＩＣ構成要素を含む細胞の量を指す。必ずではないが典型的には、予防的投与量は、疾患の早期ステージの前、または早期ステージにある対象において使用されるため、予防的有効量は、治療的有効量よりも少ない。
【０５０６】
「治療有効量」とは、架橋因子の存在下で対象（例えば患者）を「治療する」のに有効な、本明細書において予期される１つまたは複数のＤＡＲＩＣ構成要素を含む細胞の量を指す。治療的な量が示されている場合、投与される組成物、細胞、架橋因子などの正確な量は、患者（対象）の年齢、体重、腫瘍の大きさ、感染または転移の程度、および状態における個々の差を考慮し、医師により決定され得る。
【０５０７】
一般的に、本明細書に記載される免疫エフェクター細胞を含む医薬組成物は、１０２〜１０１０細胞／体重ｋｇ、好ましくは１０５〜１０６細胞／体重ｋｇの用量で、当該範囲内のすべての整数値を含み、投与され得ると言える。細胞数は、組成物の意図される最終用途に依存し、組成物中に含有される細胞のタイプも同様である。本明細書において提示される用途に関し、細胞は一般的に、リットル以下の量であり、５００ｍＬ以下、さらには２５０ｍＬまたは１００ｍＬ以下であり得る。ゆえに所望される細胞の密度は、多くの場合、１０６細胞／ｍＬ超であり、一般的には、１０７細胞／ｍＬ超、一般的には１０８細胞／ｍＬ以上である。臨床的に関連する免疫細胞数は、複数回の点滴に分けられてもよく、累積的には１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１０１０、１０１１または１０１２細胞以上となる。一部の実施形態では、具体的には注入される全細胞は特定の標的抗原へと再指向化されるため、１０６／キログラム（患者当たり１０６−１０１１）の範囲の小数の細胞が投与される場合がある。
【０５０８】
望ましい場合、治療は、本明細書に記載されるようにマイトージェン（例えばＰＨＡ）またはリンホカイン、サイトカインおよび／もしくはケモカイン（例えば、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＴＮＦ−アルファ、ＩＬ−１８、およびＴＮＦ−ベータ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４、ＩＬ−１３、Ｆｌｔ３−Ｌ、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ１αなど）の投与を含み、免疫反応の誘導を強化してもよい。
【０５０９】
一般的に、本明細書に記載されるように活性化および拡張された細胞を含む組成物は、免疫不全状態の個体で生じる疾患の治療および予防に活用されてもよい。特に本明細書において予期される組成物は、癌の治療に使用される。特定の実施形態では、免疫エフェクター細胞は、単独で投与されてもよく、または担体、希釈剤、賦形剤を併用した医薬組成物として、および／または例えばＩＬ−２もしくは他のサイトカインもしくは他の細胞群などの他の構成要素を併用した医薬組成物として投与されてもよい。
【０５１０】
特定の実施形態では、医薬組成物は、遺伝子改変されたＴ細胞の量を、１つもしくは複数の薬学的または生理学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤と併用して含有する。
【０５１１】
特定の実施形態では、医薬組成物は、架橋因子の量を、１つもしくは複数の薬学的または生理学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤と併用して含有する。
【０５１２】
特定の実施形態では、組成物は、本明細書において予期される１つまたは複数のＤＡＲＩＣ構成要素を含む免疫エフェクター細胞の有効量を、単独で、または架橋因子、および／または１つもしくは複数の治療剤、例えば放射線療法、化学療法、移植、免疫療法、ホルモン療法、光線力学的療法などと併用して含有する。組成物は、抗生物質と併用して投与されてもよい。そうした治療剤は、例えば特定の癌などの本明細書に記載の特定の疾患状態に対する標準治療として当分野において承認されている場合がある。予期される治療剤の例としては、サイトカイン、成長因子、ステロイド、ＮＳＡＩＤｓ、ＤＭＡＲＤｓ、抗炎症剤、化学療法剤、放射線療法、治療用抗体、または他の活性で補助的な剤が挙げられる。
【０５１３】
特定の実施形態では、本明細書において予期される１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ構成要素を含む免疫エフェクター細胞の有効量を含む組成物が対象に投与され、続いて架橋因子の有効量を含む組成物が任意で反復して対象に投与される。
【０５１４】
ある実施形態では、本明細書において予期される１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ構成要素をふくむ免疫エフェクター細胞を含む組成物は、任意の数の化学療法剤と併せて投与されてもよい。化学療法剤の例示としては、アルキル化剤、例えばチオテパおよびシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（商標））；スルホン酸アルキル、例えばブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファン；アジリジン、例えばベンゾドーパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）およびウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミドおよびトリメチロロメラミンレジューム（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ  ｒｅｓｕｍｅ）を含むエチレンイミンおよびメチラメラミン；ナイトロジェンマスタード、例えばクロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベムビチン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソウレア、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン；抗生物質、例えば、アクラノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリケアミシン、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン（ｄｅｔｏｒｕｂｉｃｉｎ）、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、ケラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗薬、例えば、メトトレキサートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；葉酸アナログ、例えば、デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート；プリンアナログ、例えば、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジンアナログ、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、５−ＦＵ；アンドロゲン、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗副腎剤（ａｎｔｉ−ａｄｒｅｎａｌ）、例えば、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補液（ｆｏｌｉｃ  ａｃｉｄ  ｒｅｐｌｅｎｉｓｈｅｒ）、例えば、フォリン酸；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド（ａｌｄｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ  ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）；アミノレブリン酸；アムサク��ン；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビスアントレン；エダトラキサート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルチン；ジアジクオン；エルホミチン（ｅｌｆｏｒｍｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダミン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）；ラゾキサン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（Ａｒａ−Ｃ）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ社、ニュージャージー州プリンストン）およびドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｒｈｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ社、フランス、アントニー）；クロラムブシル；ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金アナログ、例えば、シスプラチンおよびカルボプラチン；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；マイトマイシンＣ；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン；ノバントロン；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ  ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸誘導体、例えばＴａｒｇｒｅｔｉｎ（商標）（ベキサロテン）、Ｐａｎｒｅｔｉｎ（商標）（アリトレチノイン）；ＯＮＴＡＫ（商標）（デニロイキン・ディフティトックス）；エスペラミシン；カペシタビン；および上述のいずれかの薬学的に許容可能な塩、酸または誘導体が挙げられる。この定義には、癌に対するホルモンの作用を制御または阻害するように作用する抗ホルモン剤も含まれ、例えばタモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼ阻害性４（５）−イミダゾール、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン（ｋｅｏｘｉｆｅｎｅ）、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、およびトレミフェン（Ｆａｒｅｓｔｏｎ）をはじめとする抗エストロゲン；例えばフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリドおよびゴセレリンなどの抗アンドロゲン；および上述のいずれかの薬学的に許容可能な塩、酸または誘導体がある。
【０５１５】
様々な他の治療剤が、本明細書に記載の組成物と併せて使用されてもよい。１つの実施形態では、本明細書において予期される１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ構成要素をふくむ免疫エフェクター細胞を含む組成物は、抗炎症剤と共に投与される。抗炎症剤または抗炎症薬としては限定されないが、ステロイドおよびグルココルチコイド（ベタメタゾン、ブデソニド、デキサメタゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロン）、アスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン、メトトレキサート、スルファサラジン、レフルノミド、抗ＴＮＦ医薬、シクロホスファミドおよびミコフェノール酸塩を含む非ステロイド系抗炎症剤（ＮＳＡＩＤｓ）が挙げられる。
【０５１６】
他のＮＳＡＩＤｓの例としては、イブプロフェン、ナプロキセン、ナプロキセンナトリウム、Ｃｏｘ−２阻害剤、例えばＶＩＯＸＸ（登録商標）（ロフェコキシブ）およびＣＥＬＥＢＲＥＸ（登録商標）（セレコキシブ）、ならびにシアリレート（ｓｉａｌｙｌａｔｅ）からなる群から選択される。鎮痛剤の例は、アセトアミノフェン、オキシコドン、プロポルキシフェン（ｐｒｏｐｏｒｘｙｐｈｅｎｅ）塩酸塩のトラマドールからなる群から選択される。グルココルチコイドの例は、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロンまたはプレドニゾンからなる群から選択される。生体反応調節物質の例としては、細胞表面マーカー（例えばＣＤ４、ＣＤ５など）に対して指向化された分子、サイトカイン阻害剤、例えばＴＮＦアンタゴニスト（例えばエタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標））、アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））およびインフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））、ケモカイン阻害剤、ならびに付着分子阻害剤が挙げられる。生物反応調節物質には、モノクローナル抗体ならびに組み換え型分子が含まれる。ＤＭＡＲＤｓの例としては、アザチオプリン、シクロホスファミド、シクロスポリン、メトトレキサート、ペニシラミン、レフルノミド、スルファサラジン、ヒドロキシクロロキン、Ｇｏｌｄ（経口（オーラノフィン）および筋肉内）およびミノサイクリンが挙げられる。
【０５１７】
本明細書において予期される１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ構成要素を含む改変Ｔ細胞を用いた併用治療に適した治療用抗体の例示としては限定されないが、アテゾリズマブ、アベルマブ、バビツキシマブ、ベバシズマブ（アバスチン）、ビバツズマブ、ブリナツモマブ、コナツムマブ、ダラツムマブ、デュリゴツマブ（ｄｕｌｉｇｏｔｕｍａｂ）、ダセツズマブ、ダロツズマブ、デュルバルマブ、エロツズマブ（ＨｕＬｕｃ６３）、ゲムツズマブ、イブリツモマブ、インダツキシマブ、イノツズマブ、イピリムマブ、ロルボツズマブ、ルカツムマブ、ミラツズマブ、モキセツモマブ、ニボルマブ、オカラツズマブ、オファツムマブ、ペムブロリズマブ、リツキシマブ、シルツキシマブ、テプロツムマブ、およびウブリツキシマブが挙げられる。
【０５１８】
ある実施形態では、本明細書に記載の組成物は、サイトカインと併せて投与される。本明細書において使用される場合、「サイトカイン」とは、１つの細胞群により放出され、別の細胞に対して細胞間メディエーターとして作用するタンパク質の総称を意味する。そうしたサイトカインの例としては、リンホカイン、モノカインおよび従来的なポリペプチドホルモンである。サイトカインの中でも、成長ホルモン、例えばヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモンおよびウシ成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；サイロキシン；インスリン；プロインスリン；リラキシン；プロリラキシン；糖タンパク質ホルモン、例えば卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、および黄体形成ホルモン（ＬＨ）；肝細胞増殖因子；線維芽細胞増殖因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；腫瘍壊死因子αおよびβ；ミュラー管抑制因子；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮増殖因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；神経成長因子、例えばＮＧＦβ：血小板由来成長因子；形質転換成長因子（ＴＧＦ）、例えばＴＧＦαおよびＴＧＦβ；インスリン様成長因子−Ｉおよび−ＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロン、例えばインターフェロンα、βおよびγ；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、例えばマクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）；顆粒球−マクロファージ−ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）；ならびに顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）；インターロイキン（ＩＬ）、例えばＩＬ−１、ＩＬ−１α、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５；腫瘍壊死因子、例えばＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−β；ならびにＬＩＦおよびｋｉｔリガンド（ＫＬ）を含む他のポリペプチド因子が挙げられる。本明細書において使用される場合、サイトカインという用語は、天然源由来のタンパク質、または組み換え細胞培養に由来するタンパク質、および天然配列サイトカインと均等な生物活性のタンパク質を含む。
【０５１９】
Ｉ．治療方法
本明細書において予期されるＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体および／または操作された抗原受容体を含む免疫エフェクター細胞は、癌、ＧＶＨＤ、感染性疾患、自己免疫性疾患、炎症性疾患、または免疫不全と関連する少なくとも１つの症状の予防、治療および改善における使用のための養子免疫療法、または予防する、治療する、もしくは改善するための養子免疫療法の改善を提供する。
【０５２０】
ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、およびＢ７−Ｈ３、ＢＭＣＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＥＧＦＲまたはＥＧＦＲｖＩＩＩに結合する別のＤＡＲＩＣ結合構成要素、を含む免疫エフェクター細胞は、癌、ＧＶＨＤ、感染性疾患、自己免疫性疾患、炎症性疾患または免疫不全と関連する少なくとも１つの症状の予防、治療および改善における使用のための養子免疫療法、または予防する、治療する、もしくは改善するための養子免疫療法の改善を提供する。
【０５２１】
特定の実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体を含む免疫エフェクター細胞は、標的抗原を発現する例えば腫瘍細胞などの標的細胞に対する細胞障害性反応の安全性および有効性を安定させながら、オンターゲット抗原、オフターゲット細胞障害活性のリスク（正常な非標的細胞上の標的抗原を認識する）を減少させるための養子免疫療法の改善を提供する。
【０５２２】
特定の実施形態では、癌、ＧＶＨＤ、感染性疾患、自己免疫性疾患、炎症性疾患または免疫不全の少なくとも１つの症状を予防する、治療する、または改善する方法は、対象に、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体、および別のＤＡＲＩＣ結合構成要素、操作されたＴＣＲ、ＣＡＲ、または標的細胞に細胞を再指向化させるための他の治療用導入遺伝子のうちの１つまたは複数の構成要素を含む改変された免疫エフェクター細胞またはＴ細胞の有効量を投与する工程を含む。遺伝子改変された細胞は、化学的に制御可能な免疫刺激性シグナルを伝達するという点で、有効性および安全性の高い細胞免疫療法である。
【０５２３】
特定の実施形態では、１つまたは複数の免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞は、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素と、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素の両方を発現するように改変される。この場合、改変細胞は、その必要のある対象に投与され、免疫エフェクター細胞上に発現されたＮＫＧ２Ｄ結合構成要素と、標的細胞上に発現された標的抗原の相互作用を介して、標的細胞に誘導される。架橋因子は、改変細胞の前に、改変細胞とほぼ同じときに、または改変細胞が対象に投与された後に、対象に投与される。架橋因子の存在下では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、架橋因子、およびＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素の間に三重複合体が形成される。三重複合体が形成されると、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体は、免疫刺激性シグナルを免疫エフェクター細胞に伝達し、次いで、当該免疫エフェクター細胞から標的細胞に対して細胞障害性反応が惹起される。
【０５２４】
特定の実施形態では、１つまたは複数の免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞は、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素を発現するように改変される。この場合、改変細胞は、その必要のある対象に投与される。ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、改変細胞の前に、改変細胞とほぼ同じときに、または改変細胞が対象に投与された後に、対象に投与されてもよい。さらにＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、架橋因子とのプリフォーム型複合体で；架橋因子と同時であるが、別個の組成物中で；または架橋因子とは異なるときに、対象に投与されてもよい。ＮＫＧ２Ｄ結合構成要素は、標的細胞上に発現された標的抗原に、架橋因子の存在下、または非存在下のいずれかで結合する。架橋因子の存在下では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、架橋因子、およびＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素の間に三重複合体が形成される。三重複合体が形成されると、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体は、免疫刺激性シグナルを免疫エフェクター細胞に伝達し、次いで、当該免疫エフェクター細胞から標的細胞に対して細胞障害性反応が惹起される。
【０５２５】
様々な実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体および／もしくは別のＤＡＲＩＣ結合構成要素、または操作された抗原受容体を含む免疫エフェクター細胞は、二重標的化戦略を使用して標的細胞に対する細胞障害性反応の安全性と有効性を安定化させ、この場合において、１つまたは複数の標的細胞は、第二のＤＡＲＩＣ結合構成要素または操作された抗原受容体に認識される１つまたは複数の標的抗原、およびＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体に認識される１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄリガンドを発現する。
【０５２６】
特定の実施形態では、１つまたは複数の免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞は、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素およびＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素、ならびに第二のＤＡＲＩＣ結合構成要素または操作された抗原受容体、例えばＣＡＲを発現するように改変される。この場合、改変細胞はその必要のある対象に投与され、両方ともが免疫エフェクター細胞上に発現されるＮＫＧ２Ｄ結合構成要素および第二のＤＡＲＩＣ結合構成要素またはＣＡＲと、標的細胞上に発現された標的抗原の相互作用を介して、標的細胞に誘導される。ＣＡＲと、標的細胞上の標的抗原の相互作用は、標的細胞に対して免疫エフェクター細胞から細胞障害性反応を惹起させ得る。架橋因子は、改変細胞の前に、改変細胞とほぼ同じときに、または改変細胞が対象に投与された後に、対象に投与される。架橋因子の存在下では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素または第二のＤＡＲＩＣ結合構成要素、架橋因子、およびＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素の間に三重複合体が形成される。三重複合体が形成されると、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体は、免疫刺激性シグナルを免疫エフェクター細胞に伝達し、次いで、当該免疫エフェクター細胞から標的細胞に対して細胞障害性反応が惹起され、または増強される。特定の実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体活性化は、寛解または退縮が不完全であり、状態が再発または治療に対し難治性となる場合に誘導され得る。
【０５２７】
特定の実施形態では、１つまたは複数の免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞は、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素を発現するように改変される。この場合、改変細胞は、その必要のある対象に投与される。ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、改変細胞の前に、改変細胞とほぼ同じときに、または改変細胞が対象に投与された後に、対象に投与されてもよい。さらにＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、および任意で第二のＤＡＲＩＣ結合構成要素は、架橋因子とのプリフォーム型複合体で；架橋因子と同時であるが、別個の組成物中で；または架橋因子とは異なるときに、対象に投与されてもよい。ＮＫＧ２Ｄ結合構成要素、および任意で第二のＤＡＲＩＣ結合構成要素は、標的細胞上に発現された標的抗原に、架橋因子の存在下、または非存在下のいずれかで結合する。架橋因子の存在下では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、および／またはもし存在する場合には第二のＤＡＲＩＣ結合構成要素、ならびに架橋因子、およびＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素の間に三重複合体が形成される。三重複合体が形成されると、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体は、免疫刺激性シグナルを免疫エフェクター細胞に伝達し、次いで、当該免疫エフェクター細胞から標的細胞に対して細胞障害性反応が惹起される。特定の実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ受容体活性化は、寛解または退縮が不完全であり、状態が再発または治療に対し難治性となる場合に誘導され得る。
【０５２８】
特定の好ましい実施形態では、初期Ｔ細胞の特異性は、１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ構成要素を用いて、例えば初期Ｔ細胞などのＴ細胞を遺伝子改変することにより、１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄリガンドを発現する腫瘍または癌細胞に対して再指向化される。
【０５２９】
特定の好ましい実施形態では、初期Ｔ細胞の特異性は、１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ構成要素および第二のＤＡＲＩＣ結合構成要素、または標的抗原に指向化された操作された抗原受容体を用いて、例えば初期Ｔ細胞などのＴ細胞を遺伝子改変することにより、標的抗原、および１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄリガンドを発現する腫瘍または癌細胞に対して再指向化される。
【０５３０】
特定の実施形態では、本明細書において予期される改変免疫エフェクター細胞は、固形腫瘍または癌の治療に使用される。
【０５３１】
特定の実施形態では、本明細書において予期される改変免疫エフェクター細胞は、限定されないが、副腎癌、副腎皮質癌、肛門癌、虫垂癌、星状細胞腫、非定型奇形腫様腫瘍／非定型横紋筋様腫瘍、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳／ＣＮＳ癌、乳癌、気管支腫瘍、心臓腫瘍、子宮頸癌、胆管癌、軟骨肉腫、脊索腫、結腸癌、結腸直腸癌、頭蓋咽頭腫、非浸潤性乳管癌（ＤＣＩＳ）、子宮内膜癌、上位腫、食道癌、鼻腔神経芽細胞腫、ユーイング肉腫、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、眼癌、卵管癌、線維性組織肉腫、線維肉腫、胆嚢癌、胃癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、胚細胞腫瘍、神経膠腫、グリア芽腫、頭頚部癌、血管芽細胞腫、肝細胞癌、下咽頭癌、眼内黒色腫、カポジ肉腫、腎癌、咽頭癌、平滑筋肉腫、舌癌、脂肪肉腫、肝癌、肺癌、非小細胞肺癌、胚カルチノイド腫瘍、悪性中皮腫、髄様癌、髄芽腫、髄膜腫、黒色腫、メルケル細胞癌、正中線癌、口腔癌、粘液肉腫、骨髄異形成症候群、骨髄増殖性新生物、鼻腔および副鼻腔の癌、上咽頭癌、神経芽細胞腫、乏突起膠腫、口腔癌（ｏｒａｌ  ｃａｎｃｅｒ、ｏｒａｌ  ｃａｖｉｔｙ  ｃａｎｃｅｒ）、口腔咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、膵島細胞腫瘍、乳頭癌、傍神経節腫、副甲状腺癌、陰茎癌、咽頭癌、褐色細胞腫、松果体腫、下垂体腫瘍、胸膜肺芽腫、原発性胸膜腫、前立腺癌、直腸癌、網膜芽腫、腎細胞癌、腎盂および尿管の癌、横紋筋肉腫、唾液腺癌、皮脂腺癌、皮膚癌、軟部組織肉腫、扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌、小腸癌、胃癌、汗腺癌、滑液腫瘍、精巣癌、咽頭癌、胸腺癌、甲状腺癌、尿道癌、子宮癌、子宮肉腫、膣癌、血管癌、外陰癌、およびウィルムス腫瘍を含む固形腫瘍または癌の治療に使用される。
【０５３２】
特定の実施形態では、本明細書において予期される改変免疫エフェクター細胞は、限定されないが、肝癌、膵臓癌、肺癌、乳癌、膀胱癌、脳腫瘍、骨癌、甲状腺癌、腎癌または皮膚癌を含む固形腫瘍または癌の治療に使用される。
【０５３３】
特定の実施形態では、本明細書において予期される改変免疫エフェクター細胞は、限定されないが、膵臓癌、膀胱癌および肺癌を含む様々な癌の治療に使用される。
【０５３４】
特定の実施形態では、本明細書において予期される改変免疫エフェクター細胞は、液状の癌または血液の癌の治療に使用される。
【０５３５】
特定の実施形態では、本明細書において予期される改変免疫エフェクター細胞は、限定されないが、白血病、リンパ腫および多発性骨髄腫を含むＢ細胞悪性腫瘍の治療に使用される。
【０５３６】
特定の実施形態では、本明細書において予期される改変免疫エフェクター細胞は、限定されないが、白血病、リンパ腫および多発性骨髄腫：急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄芽球性白血病、前骨髄球性白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病、赤白血病、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、および真性多血症、ホジキンリンパ腫、結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、菌状息肉症、未分化大細胞リンパ腫、セザリー症候群、前駆Ｔリンパ芽球性リンパ腫、多発性骨髄腫、顕性多発性骨髄腫、くすぶり型多発性骨髄腫、形質細胞白血病、非分泌性骨髄腫、ＩｇＤ骨髄腫、骨硬化性骨髄腫、孤立性骨形質細胞腫、および髄外形質細胞腫を含む液状の癌の治療に使用される。
【０５３７】
本明細書において予期される方法における使用に好ましい細胞としては、自己（ｓｅｌｆ）細胞、好ましくは造血細胞、より好ましくはＴ細胞、そしてより好ましくは免疫エフェクター細胞が挙げられる。
【０５３８】
特定の実施形態では、方法は、１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ構成要素、および任意で第二のＤＡＲＩＣ結合構成要素または操作された抗原受容体を発現する改変免疫エフェクター細胞の治療有効量、またはそれらを含む組成物を、その必要のある対象に投与する工程を含み、および架橋因子を当該対象に投与する工程も含む。ある実施形態では、細胞は、癌、ＧＶＨＤ、感染性疾患、自己免疫性疾患、炎症性疾患または免疫不全を発症するリスクがある患者の治療に使用される。したがって特定の実施形態は、癌、感染性疾患、自己免疫性疾患、炎症性疾患または免疫不全の少なくとも１つの症状の治療または予防または改善を含み、その必要のある対象に、本明細書において予期される改変免疫エフェクター細胞および架橋因子の治療有効量を投与する工程を含む。
【０５３９】
特定の実施形態では、方法は、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素、および任意で操作された抗原受容体を発現する改変免疫エフェクター細胞の治療有効量、またはそれらを含む組成物を、その必要のある対象に投与する工程、およびＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、そして任意で第二のＤＡＲＩＣ結合構成要素および架橋因子を当該対象に投与する工程も含み、任意でＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素および／または第二の結合構成要素は、対象への投与の前に架橋因子に結合される。ある実施形態では、細胞は、癌、ＧＶＨＤ、感染性疾患、自己免疫性疾患、炎症性疾患または免疫不全を発症するリスクがある患者の治療に使用される。したがって特定の実施形態は、癌、感染性疾患、自己免疫性疾患、炎症性疾患または免疫不全の少なくとも１つの症状の治療または予防または改善を含み、その必要のある対象に、本明細書において予期される改変免疫エフェクター細胞、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、および架橋因子の治療有効量を投与する工程を含む。
【０５４０】
改変免疫エフェクター細胞、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、および／または架橋因子の投与の量ならびに頻度は、患者の状態、患者の疾患のタイプおよび重大度といった因子により決定されるが、適切な用量および投与スケジュールは、臨床試験により決定されてもよい。
【０５４１】
１つの例示的な実施形態では、対象に提供される改変免疫エフェクター細胞の有効量は、少なくとも２ｘ１０６細胞／ｋｇ、少なくとも３ｘ１０６細胞／ｋｇ、少なくとも４ｘ１０６細胞／ｋｇ、少なくとも５ｘ１０６細胞／ｋｇ、少なくとも６ｘ１０６細胞／ｋｇ、少なくとも７ｘ１０６細胞／ｋｇ、少なくとも８ｘ１０６細胞／ｋｇ、少なくとも９ｘ１０６細胞／ｋｇ、または少なくとも１０ｘ１０６細胞／ｋｇ、またはそれ以上であり、すべてのその間の細胞投与量を含む。
【０５４２】
別の例示的な実施形態では、対象に提供される改変免疫エフェクター細胞の有効量は、約２ｘ１０６細胞／ｋｇ、約３ｘ１０６細胞／ｋｇ、約４ｘ１０６細胞／ｋｇ、約５ｘ１０６細胞／ｋｇ、約６ｘ１０６細胞／ｋｇ、約７ｘ１０６細胞／ｋｇ、約８ｘ１０６細胞／ｋｇ、約９ｘ１０６細胞／ｋｇ、または約１０ｘ１０６細胞／ｋｇ、またはそれ以上であり、すべてのその間の細胞投与量を含む。
【０５４３】
別の例示的な実施形態では、対象に提供される改変免疫エフェクター細胞の有効量は、約２ｘ１０６細胞／ｋｇ〜約１０ｘ１０６細胞／ｋｇ、約３ｘ１０６細胞／ｋｇ〜約１０ｘ１０６細胞／ｋｇ、約４ｘ１０６細胞／ｋｇ〜約１０ｘ１０６細胞／ｋｇ、約５ｘ１０６細胞／ｋｇ〜約１０ｘ１０６細胞／ｋｇ、２ｘ１０６細胞／ｋｇ〜約６ｘ１０６細胞／ｋｇ、２ｘ１０６細胞／ｋｇ〜約７ｘ１０６細胞／ｋｇ、２ｘ１０６細胞／ｋｇ〜約８ｘ１０６細胞／ｋｇ、３ｘ１０６細胞／ｋｇ〜約６ｘ１０６細胞／ｋｇ、３ｘ１０６細胞／ｋｇ〜約７ｘ１０６細胞／ｋｇ、３ｘ１０６細胞／ｋｇ〜約８ｘ１０６細胞／ｋｇ、４ｘ１０６細胞／ｋｇ〜約６ｘ１０６細胞／ｋｇ、４ｘ１０６細胞／ｋｇ〜約７ｘ１０６細胞／ｋｇ、４ｘ１０６細胞／ｋｇ〜約８ｘ１０６細胞／ｋｇ、５ｘ１０６細胞／ｋｇ〜約６ｘ１０６細胞／ｋｇ、５ｘ１０６細胞／ｋｇ〜約７ｘ１０６細胞／ｋｇ、５ｘ１０６細胞／ｋｇ〜約８ｘ１０６細胞／ｋｇ、または６ｘ１０６細胞／ｋｇ〜約８ｘ１０６細胞／ｋｇであり、すべてのその間の細胞投与量を含む。
【０５４４】
当業者であれば、所望の治療効果を発揮させるために、特定の実施形態において予期される組成物の複数回の投与が必要とされる場合があることを認識するであろう。例えば組成物は、１週、２週、３週、１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、６カ月、１年、２年、５年、１０年またはそれ以上の期間にわたり、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０回以上投与される場合がある。改変免疫エフェクター細胞、ＤＡＲＩＣ構成要素、および架橋因子は、同じ組成物もしくは異なる組成物中で、同時に１つもしくは複数の組成物中で、または別の時に複数の組成物中で投与されてもよい。改変免疫エフェクター細胞、ＤＡＲＩＣ構成要素、および架橋因子は、同じ投与経路または異なる投与経路を介して投与されてもよい。
【０５４５】
ある実施形態では、対象に活性化Ｔ細胞が投与され、次いで対象から採血して（またはアフェレーシス療法を実施し）、Ｔ細胞を活性化し、そしてこれら活性化および拡張されたＴ細胞を患者に再注入することが望ましい場合がある。このプロセスは、数週ごとに複数回実施されてもよい。ある実施形態では、Ｔ細胞は、１０ｃｃ〜４００ｃｃの採血から活性化されてもよい。ある実施形態では、Ｔ細胞は、２０ｃｃ、３０ｃｃ、４０ｃｃ、５０ｃｃ、６０ｃｃ、７０ｃｃ、８０ｃｃ、９０ｃｃ、１００ｃｃ、１５０ｃｃ、２００ｃｃ、２５０ｃｃ、３００ｃｃ、３５０ｃｃ、または４００ｃｃ以上の採血から活性化される。学説には拘束されないが、複数回の採血／複数回の再注入のプロトコールを使用することで、Ｔ細胞のある群の選択に役立つ場合がある。
【０５４６】
１つの実施形態では、癌と診断された対象を治療する方法は、当該対象から免疫エフェクター細胞を採取する工程、１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ構成要素をコードする１つまたは複数のベクターを細胞に導入することにより当該免疫エフェクター細胞を改変する工程、および改変免疫エフェクター細胞群を生成する工程、ならびに当該対象に、当該改変免疫エフェクター細胞群を投与する工程を含む。好ましい実施形態では、免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞を含有する。
【０５４７】
１つの実施形態では、癌と診断された対象を治療する方法は、当該対象から免疫エフェクター細胞を採取する工程、１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ構成要素、および第二のＤＡＲＩＣ結合構成要素または操作された抗原受容体をコードする１つまたは複数のベクターを細胞に導入することにより当該免疫エフェクター細胞を改変する工程、および改変免疫エフェクター細胞群を生成する工程、ならびに当該対象に、当該改変免疫エフェクター細胞群を投与する工程を含む。好ましい実施形態では、免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞を含有する。
【０５４８】
特定の実施形態において予期される細胞組成物を投与する方法は、生体外で改変された免疫エフェクター細胞の再導入を生じさせるために有効である任意の方法、または対象への導入時に成熟免疫エフェクター細胞へと分化する免疫エフェクター細胞の改変前駆体の再導入を生じさせるために有効である任意の方法を含む。１つの方法は、１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ構成要素、および第二のＤＡＲＩＣ結合構成要素または操作された抗原受容体をコードする１つまたは複数のベクターを導入することにより生体外で末梢血Ｔ細胞を改変する工程、および当該対象に当該形質導入された細胞を戻す工程を含む。
【０５４９】
特定の実施形態において予期される細胞組成物を投与する方法は、生体外で改変された免疫エフェクター細胞の再導入を生じさせるために有効である任意の方法、または対象への導入時に成熟免疫エフェクター細胞へと分化する免疫エフェクター細胞の改変前駆体の再導入を生じさせるために有効である任意の方法を含む。１つの方法は、１つまたは複数のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ構成要素をコードする１つまたは複数のベクターを導入することにより生体外で末梢血Ｔ細胞を改変する工程、および当該対象に当該形質導入された細胞を戻す工程を含む。
【０５５０】
本明細書に引用されるすべての公表文献、特許出願および登録特許が、個々の公表文献、特許出願または登録特許のそれぞれが具体的に、および個々に参照により援用されることが示されているように、参照により本明細書に援用される。
【０５５１】
前述の実施形態は、明確性および理解を目的として、図および実施例により詳細に記載されているが、本明細書に予期される教示に照らし、特定の変化および改変が、添付の請求の範囲の主旨または範囲から逸脱することなく実施され得ることが当業者には容易に明らかであろう。以下の実施例は、解説のみを目的として提供されるものであり、限定ではない。当業者であれば、本質的に類似した結果を得るために特定の実施形態において変えられ得る、または改変され得る重要ではない様々なパラメーターが容易に認識されるであろう。
【実施例】
【０５５２】
実施例１
ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞は、抗腫瘍反応を呈する。
ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素およびシグナル伝達構成要素を設計、構築し、実証した。ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣレンチウイルスベクターは、以下をコードするポリヌクレオチドに操作可能に連結されたＭＮＤＵ３プロモーターを含んで構築された：ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素（ＣＤ８α−シグナルペプチド、ＦＲＢバリアント（Ｔ８２Ｌ）、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、細胞内４−１ＢＢ共刺激性ドメイン、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン）；Ｐ２Ａ配列；およびＤＡＲＩＣ結合構成要素（Ｉｇκ−シグナルペプチド、ＮＫＧ２Ｄリガンド結合ドメイン、Ｇ４Ｓリンカー、ＦＫＢＰ１２ドメイン、および細胞内ドメインが切断されたＣＤ４由来膜貫通ドメイン。ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣレンチウイルスベクターが形質導入されたＴ細胞は、図１に示される膜結合型ポリペプチドを発現する。例えば、配列番号１−５を参照のこと。
【０５５３】
ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞の細胞障害性の可能性は、当該Ｔ細胞と、ＮＫＧ２Ｄリガンド（ＭＩＣＡ、ＵＬＢＰ１およびＵＬＢＰ２／５／６）、ＢＣＭＡおよびＧＦＰ（Ｋ５６２−ＢＣＭＡ−ＧＦＰ）を発現するＫ５６２細胞を、５：１のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比率で、１ｎＭのラパマイシンの存在下／非存在下で培養することにより分析された。図２。
【０５５４】
３名のドナー由来のＴ細胞に、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲまたはＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣをコードするＬＶＶを形質導入した。形質導入されたＴ細胞と、Ｋ５６２−ＢＣＭＡ−ＧＦＰ細胞を、ラパマイシンの存在下または非存在下で、５：１のＥ：Ｔ比で共培養した。抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ラパマイシンの存在下および非存在下で、Ｋ５６２−ＢＣＭＡ−ＧＦＰ細胞に対する細胞障害性を惹起させた。対照的に、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞は、ラパマイシンの存在下でのみ、Ｋ５６２−ＢＣＭＡ−ＧＦＰ細胞に対する細胞障害性を惹起させた。図３。
【０５５５】
Ｔ細胞に、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ、ＮＫＧ２Ｄ  ＣＡＲ、またはＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣをコードするＬＶＶを形質導入した。形質導入されたＴ細胞と、Ｋ５６２−ＢＣＭＡ−ＧＦＰ細胞を、ラパマイシンの存在下または非存在下で２４時間、１：１のＥ：Ｔ比で共培養した。抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ラパマイシンの存在下および非存在下で、Ｋ５６２−ＢＣＭＡ−ＧＦＰ標的細胞と培養されたときにサイトカイン発現を誘導した。対照的に、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞は、ラパマイシンの存在下でのみ、Ｋ５６２−ＢＣＭＡ−ＧＦＰ標的細胞と培養されたときにサイトカイン発現を誘導した。図４。
【０５５６】
実施例２
ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞のサイトカイン発現は、抗ＮＫＧ２Ｄブロッキング抗体（１Ｄ１１）によりブロッキングされ得る。
Ｔ細胞に、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣまたは抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲをコードするＬＶＶを形質導入した。形質導入されたＴ細胞と、結腸癌細胞株のＨＣＴ１１６（ＮＫＧ２Ｄリガンド  ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２／５／６およびＵＬＢＰ３を発現する；図５）を、１ｎＭのラパマイシンおよび５ｕｇ／ｍＬの抗ＮＫＧ２Ｄブロッキング抗体（１Ｄ１１）の存在下および非存在下で、１：１のＥ：Ｔ比で培養した。
【０５５７】
抗ＮＫＧ２Ｄブロッキング抗体の非存在下では、抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ラパマイシンの存在下および非存在下で、ＨＣＴ１１６標的細胞と培養されたときにサイトカイン発現を誘導した。一方で、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞は、ラパマイシンの存在下で、ＨＣＴ１１６標的細胞と培養されたときにサイトカイン発現を誘導した。図６、左のパネル。抗ＮＫＧ２Ｄブロッキング抗体の存在下でも、抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ラパマイシンの存在下および非存在下で、ＨＣＴ１１６標的細胞と培養されたときにサイトカイン発現を誘導した。一方で、抗ＮＫＧ２Ｄブロッキング抗体の存在は、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞のサイトカイン発現の誘導を大きく減少させ、または消失させた。図６、右のパネル。
【０５５８】
実施例３
ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞は、ラパマイシン依存性の抗腫瘍反応を呈する。
複数のドナー由来のＴ細胞に、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣまたは抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲをコードするＬＶＶを形質導入した。形質導入されたＴ細胞と、肺癌細胞株のＡ５４９（ＮＫＧ２Ｄリガンド  ＭＩＣＡ、ＵＬＢＰ１、およびＵＬＢＰ２／５／６を発現する；図７）を、１ｎＭのラパマイシンの存在下および非存在下で、１０：１のＥ：Ｔ比で培養した。抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ラパマイシンの存在下および非存在下で、Ａ５４９細胞に対する細胞障害性を惹起させた。対照的に、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞は、ラパマイシンの存在下でのみ、Ａ５４９細胞に対する細胞障害性を惹起させた。図８。
【０５５９】
Ｔ細胞に、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ、または抗ＣＤ１９  ＣＡＲ、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲもしくは抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲをコードするＬＶＶを形質導入した。形質導入されたＴ細胞と、ＮＫＧ２Ｄリガンド発現細胞株、ＮＡＬＭ−６、ＲＰＭＩ−８２２６、およびＡ５４９（図７）を、ラパマイシンの存在下または非存在下で２４時間、１：１のＥ：Ｔ比で共培養した。抗ＣＤ１９  ＣＡＲ  Ｔ細胞（Ｎａｌｍ−６細胞とともに培養）、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞（ＲＰＭＩ−８２２６細胞とともに培養）、および抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ  Ｔ細胞（Ａ５４９細胞とともに培養）は、ラパマイシンの存在下および非存在下で、ＩＦＮγ発現を誘導した。対照的に、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞は、ラパマイシンの存在下でのみ、標的細胞と培養されたときにＩＦＮγ発現を誘導した。図９。
【０５６０】
実施例４
ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞は、生体外で正常に拡張する
構造的に活性なＮＫＧ２Ｄ  ＣＡＲおよびＧＦＰをコードするポリヌクレオチドに操作可能に連結されたＭＮＤＵ３プロモーターを含むレンチウイルスベクター（ｃｈＮＫＧ２Ｄ−ＧＦＰ）を設計、構築し、実証した。ｃｈＮＫＧ２Ｄ−ＧＦＰレンチウイルスベクターは、全長ＮＫＧ２Ｄ配列、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ配列およびＧＦＰをコードする。
【０５６１】
ヒトＰＢＭＣ（１ｘ１０６細胞／ｍＬ）を、可溶性抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体（５０ｎｇ／ｍＬ）を用いて０日目に活性化した。２４時間のインキュベーション後、１ｘ１０６個の細胞に、抗ＥＧＦＲ−ＣＡＲ、ｃｈＮＫＧ２Ｄ−ＧＦＰまたはＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣをコードするＬＶＶを形質導入した。追加の非形質導入サンプルを対照（ＵＴＤ：ｕｎｔｒａｎｓｄｕｃｅｄ）として含めた。３日目に細胞を洗浄し、０．３ｘ１０６細胞／ｍＬで再懸濁した。拡張のために、ＩＬ−２（２５０ＩＵ／ｍＬ）を含有するＴ細胞増殖培地中、追加で７日間、細胞を培養した。培地は１日おきに交換した。
【０５６２】
細胞を計数し、各培地交換時に規定密度に分割した。１０日間の拡張期間後、Ｔ細胞を計数し、ＣＤ４およびＣＤ８抗体染色を使用して表現型解析した。
【０５６３】
非形質導入対照Ｔ細胞、抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ  Ｔ細胞、およびＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞は、同等レベルの拡張を呈した。一方で、ｃｈＮＫＧ２Ｄ−ＧＦＰ  Ｔ細胞は、拡張速度の大幅な低下を示した。図１０Ｂ。ＵＴＤおよびＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞は、同様のＣＤ４  Ｔ細胞とＣＤ８  Ｔ細胞の比率を有していた。一方で、ｃｈＮＫＧ２Ｄ−ＧＦＰ  Ｔ細胞は、ＣＤ８＋が優勢であった。図１０Ｃ。これらの結果から、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ構造は、Ｔ細胞表面上にＮＫＧ２Ｄリガンドの発現があっても、正常に拡張および増殖できることが示された。
【０５６４】
非形質導入対照Ｔ細胞、抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ  Ｔ細胞、ｃｈＮＫＧ２Ｄ  Ｔ細胞、およびＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞と、ＥＧＦＲ＋ＮＫＧ２ＤＬ＋  Ａ５４９を、１：１のエフェクター：標的比率（Ｅ：Ｔ）で共培養した。ｃｈＮＫＧ２Ｄ−ＧＦＰ  Ｔ細胞と抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ  Ｔ細胞の両方ともが、ＡＰ２１９６７の存在下または非存在下の両方でＡ５４９細胞を殺傷した。図１１Ａ。ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞は、ＡＰ２１９６７の存在下でのみＡ５４９細胞を殺傷した。Ｉｄ．
【０５６５】
サイトカイン産生を分析するために、レンチウイルスで形質導入されたＴ細胞、または非形質導入対照Ｔ細胞を、ＥＧＦＲ＋ＮＫＧ２ＤＬ＋  Ａ５４９腫瘍細胞と、ＡＰ２１９６７の存在下または非存在下で２４時間、１：１のＥ：Ｔ比で共培養した。サイトカイン産生は、Ｑｂｅａｄ  ＰｌｅｘＳｃｒｅｅｎサイトカインアッセイキットを使用して分析された。抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＡＰ２１９６７の存在下および非存在下で、比較的多い量のＩＦＮγを産生し、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞は、ＡＰ２１９６７の存在下でのみＩＦＮγを産生し、そしてｃｈＮＫＧ２Ｄ  Ｔ細胞は、ＡＰ２１９６７の存在下および非存在下でごく少量のＩＦＮγを産生した。図１１Ｂ。
【０５６６】
実施例５
ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ膜貫通ドメインは、発現に寄与し得る。
ＣＤ８α由来シグナルペプチド、ＦＲＢバリアント（Ｔ８２Ｌ）、ＣＤ８α由来膜貫通ドメイン、４−１ＢＢ共刺激性ドメイン、およびＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン；Ｐ２Ａ配列；Ｉｇκ由来シグナルペプチド、ＮＫＧ２Ｄ細胞外ドメイン、ＦＫＢＰ１２ドメインならびにＡＭＮ−由来膜貫通ドメイン（ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ−ＡＭＮ）をコードするポリヌクレオチドに操作可能に連結されたＭＮＤＵ３プロモーターを含むレンチウイルスベクターを設計、構築および実証した。
【０５６７】
ヒトＰＢＭＣは、実施例４に記載されるように活性化、形質導入および拡張された。ＵＴＤ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、およびＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ−ＡＭＮ  Ｔ細胞は、同様の速度の生体外拡張を呈した。図１２Ａ。Ｔ細胞は、抗ＮＫＧ２Ｄ抗体を用いて染色された。ＤＡＲＩＣ結合構成要素発現は、ＣＤ４＋Ｔ細胞上で定量された。ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ−ＡＭＮの発現は、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ（ＣＤ４膜貫通ドメイン）の発現と比較して高かった。図１２Ｂ。
【０５６８】
ＵＴＤ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、およびＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ−ＡＭＮ  Ｔ細胞を、ＮＫＧ２ＤＬ＋  Ａ５４９細胞と１：１の比率で共培養し、サイトカイン産生をＱｂｅａｄ  ＰｌｅｘＳｃｒｅｅｎにより分析した。ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞およびＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ−ＡＭＮ  Ｔ細胞のみが、ラパマイシンの存在下で安定的なサイトカイン産生を示した。図１２Ｃ。ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ−ＡＭＮ  Ｔ細胞は、ＣＤ４膜貫通ドメインを含むＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞と比較して低いサイトカイン産生を示した。
【０５６９】
実施例６
ＮＫＧ２Ｄの配置は、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣの活性に強い影響を与える。
様々なＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ構造用のレンチウイルスベクターを設計、構築し、実証した。図１３Ａ。ＢＷ２７６３は、ＣＤ８α由来シグナルペプチド、ＦＲＢバリアント（Ｔ８２Ｌ）、ＮＫＧ２Ｄ由来膜貫通ドメイン、４−１ＢＢ共刺激性ドメイン、およびＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン；Ｐ２Ａ配列；Ｉｇκ由来シグナルペプチド、ＮＫＧ２Ｄ細胞外ドメイン、ＦＫＢＰ１２ドメイン、ならびにＣＤ４膜貫通ドメインおよび切断細胞内ドメインをコードするポリヌクレオチドに操作可能に連結されたＭＮＤＵ３プロモーターを含む。ＢＷ２７６４は、ＣＤ８α由来シグナルペプチド、ＮＫＧ２Ｄ細胞外ドメイン、ｎＦＫＢＰ１２ドメイン、ＣＤ４膜貫通ドメイン；Ｐ２Ａ配列；ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、ＮＫＧ２Ｄ細胞内ドメインおよび膜貫通ドメイン、ならびにＦＲＢバリアント（Ｔ８２Ｌ）ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに操作可能に連結されたＭＮＤＵ３プロモーターを含む。
【０５７０】
ヒトＰＢＭＣは、実施例４に記載されるように活性化、形質導入および拡張された。ＵＴＤ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、およびＢＷ２７６３またはＢＷ２７６４を形質導入されたＴ細胞は、抗ＮＫＧ２Ｄ抗体を用いて染色された。ＤＡＲＩＣ結合構成要素発現は、ＣＤ４＋Ｔ細胞上で定量された。ＮＫＧ２Ｄ膜貫通ドメインの導入（ＢＷ２７６３）、またはＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣの方向性の転換（ＢＷ２７６４）は、ＮＫＧ２Ｄ＋の％、およびＮＫＧ２Ｄ＋細胞のＭＦＩにより決定された場合に、同様のＮＫＧ２Ｄ発現を生じさせた。図１３Ｂ。
【０５７１】
ＵＴＤ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、およびＢＷ２７６３またはＢＷ２７６４で形質導入されたＴ細胞を、ＮＫＧ２ＤＬ＋  Ａ５４９細胞と１：１の比率で共培養し、サイトカイン産生をＱｂｅａｄ  ＰｌｅｘＳｃｒｅｅｎにより分析した。ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞は、ラパマイシンの存在下でのみ、ＩＦＮγを産生した。一方で、ＢＷ２７６３またはＢＷ２７６４を形質導入されたＴ細胞は、ラパマイシンの存在下または非存在下の両方で、非常に低いレベルのサイトカインを産生した。図１３Ｃ。
【０５７２】
実施例７
共刺激性ドメインを含むＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素
様々な共刺激性シグナル伝達ドメインを含むＤＡＲＩＣ結合構成要素を有するＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣを含むレンチウイルスベクターを設計、構築し、実証した。例えば配列番号６〜９。図１４Ａ。共刺激性ドメインは、ＴＮＦＲ２、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳ１４）、ＧＩＴＲ（ＴＮＦＲＳ１８）、およびＤＲ３（ＴＮＦＲＳ２５）タンパク質から取得された。
【０５７３】
ヒトＰＢＭＣは、実施例４に記載されるように活性化、形質導入および拡張された。ＵＴＤ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＴＮＦＲ２  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＯＸ４０  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＣＤ２７  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＨＶＥＭ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＤＲ３  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、およびＮＫＧ２Ｄ．ＧＩＴＲ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞は、同様の速度の生体外拡張を呈した。図１４Ｂ。Ｔ細胞は、抗ＮＫＧ２Ｄ抗体を用いて染色された。ＤＡＲＩＣ結合構成要素発現は、ＣＤ４＋Ｔ細胞上で定量された。発現は、様々なＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素の間で同等であった。図１４Ｃ。まとめると、これらのデータから、共刺激性ドメインを含むＤＡＲＩＣ結合構成要素は、生体外のＴ細胞の拡張または発現を変化させないことが示唆される。
【０５７４】
ＵＴＤ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＴＮＦＲ２  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＯＸ４０  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＣＤ２７  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＨＶＥＭ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＤＲ３  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、およびＮＫＧ２Ｄ．ＧＩＴＲ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞を、ＮＫＧ２ＤＬ＋  ＨＣＴ１１６細胞と、１：１のＥ：Ｔ比で２４時間、ラパマイシンの存在下または非存在下で共培養し、サイトカイン産生をＱｂｅａｄ  ＰｌｅｘＳｃｒｅｅｎにより分析した。共刺激性ドメインを含むＤＡＲＩＣ結合ドメインは、ラパマイシンの存在下で腫瘍細胞とともにＴ細胞を培養したときに一貫してサイトカイン産生を強化した。図１４Ｄ。すべてのＴ細胞サンプルは、ラパマイシンの非存在下、またはＮＫＧ２ＤＬ＋Ａ５４９細胞の非存在下ではわずかな量のサイトカインを産生した。ＮＫＧ２Ｄ．ＴＮＦＲ２  ＤＡＲＩＣ構造は、他の共刺激性ドメインを発現するＤＡＲＩＣ結合構成要素と比較してサイトカインレベルの増加をもたらした。Ｉｄ．
【０５７５】
実施例８
ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ．ＴＮＦＲ  Ｔ細胞は、
ラパマイシン介在性免疫抑制に抵抗性である。
ヒトＰＢＭＣは、実施例４に記載されるように活性化、形質導入および拡張された。抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＴＮＦＲ２  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞およびＮＫＧ２Ｄ．ＯＸ４０  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞を、ＮＫＧ２ＤＬ＋  Ａ５４９細胞またはＮＫＧ２ＤＬ＋  ＨＴ１０８０細胞と１：１の比率で、ビヒクル、ラパマイシン、または非免疫抑制性のラパログＡＰ２１９６７の存在下で共培養した。
【０５７６】
ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞は、二量体化剤の非存在下で腫瘍細胞と共培養したとき、サイトカインを産生しなかった。図１５Ａおよび１５Ｂ。ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞を、ラパマイシンおよびＡＰ２１９６７の存在下で腫瘍細胞と共培養したときには、安定的にサイトカインが産生された。Ｉｄ．予測されたように、ラパマイシンの添加で、Ｔ細胞活性化の抑制が生じ、抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ  Ｔ細胞からのサイトカイン産生の低下が生じた。Ｉｄ．ラパマイシンおよびＡＰ２１９６７の共培養中のサイトカイン産生を比較したときに、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞およびＮＫＧ２Ｄ．ＯＸ４０  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞に同様の免疫抑制効果が観察された。予想外なことに、ＮＫＧ２Ｄ．ＴＮＦＲ２  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞は、ラパマイシンの存在下で培養されたときの免疫抑制に抵抗性であった。一部の例では、ＡＰ２１９６７と比較し、ラパマイシンの存在下で共培養されたＮＫＧ２Ｄ．ＴＮＦＲ２  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞でのサイトカイン産生は増加さえした。Ｉｄ．
【０５７７】
サイトカイン産生のデータは、ＡＰ２１９６７とラパマイシンの比率を使用して正規化された。図１５Ｃ。レシオ型分析を使用したところ、ラパマイシン介在型の免疫抑制は、１を超える値を生じさせ、一方で１未満の値は、ラパマイシン処理がＴ細胞活性化に対し中立的な効果または相乗的な効果を有していることを示唆する。抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、およびＮＫＧ２Ｄ．ＯＸ４０  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞はすべて、Ａ５４９介在性およびＨＴ１０８０介在性のサイトカイン産生の両方に対し、１を超える比率を有していた。Ｉｄ．対照的に、ＮＫＧ２Ｄ．ＴＮＦＲ２  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞は、すべてのサイトカイン、およびすべての標的細胞株に対して、１よりもずっと低い比率を有していた。これらのデータから、ＴＮＦＲ２共刺激性ドメインの含有は、ＮＫＧ２Ｄ．ＴＮＦＲ２  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞において、ラパマイシン介在性の免疫抑制を部分的に改善し得ることが示唆される。
【０５７８】
実施例９
２つの共刺激性ドメインを含むＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素
一重または二重共刺激性シグナル伝達ドメインを含むＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素をコードするレンチウイルスベクターを設計、構築し、実証した。図１６Ａ。本実施例で使用されるＤＡＲＩＣ結合構成要素に使用された共刺激性ドメインは、ＣＤ２８、ＤＡＰ１０、ＯＸ４０、またはこれらドメインの組み合わせから取得された。
【０５７９】
ヒトＰＢＭＣは、実施例４に記載されるように活性化、形質導入および拡張された。抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＤＡＰ１０  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＣＤ２８  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＣＤ２８．ＤＡＰ１０  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＤＡＰ１０．ＯＸ４０  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、およびＮＫＧ２Ｄ．ＯＸ４０．ＤＡＰ１０  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞は、生体外拡張に関し類似した速度を呈し、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣは、元のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣと比較して同等の発現レベルを有した。
【０５８０】
抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＤＡＰ１０  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＣＤ２８  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＣＤ２８．ＤＡＰ１０  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＤＡＰ１０．ＯＸ４０  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、およびＮＫＧ２Ｄ．ＯＸ４０．ＤＡＰ１０  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞を、ＮＫＧ２ＤＬ＋  Ａ５４９細胞と、１：１のＥ：Ｔ比で２４時間、ラパマイシンの存在下または非存在下で共培養し、サイトカイン産生をＱｂｅａｄ  ＰｌｅｘＳｃｒｅｅｎにより分析した。ＣＤ２８共刺激性ドメイン、ＤＡＰ１０共刺激性ドメイン、またはＣＤ２８共刺激性ドメインとＤＡＰ１０共刺激性ドメインを含むＤＡＲＩＣ結合構成要素は、サイトカイン産生に対し、最小限の影響を与えた。図１６Ｂ。さらにＤＡＰ１０共刺激性ドメインを含み、ＯＸ４０共刺激性ドメインを（いずれか方向性で）含む、または含まないＤＡＲＩＣ結合構成要素は、サイトカイン産生に変化をもたらさなかった。図１６Ｃ。
【０５８１】
実施例１０
ＩＣＯＳドメインを含むＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ
ＩＣＯＳ膜貫通ドメインおよび／または共刺激性ドメインを含むＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ構造をコードするレンチウイルスベクターを設計、構築し、実証した。図１７Ａ。ＤｍｒＡは、ＦＫＢＰ１２である。ＤｍｒＢは、ＦＫＢＰ１２  Ｆ３６Ｖである。ＤｍｒＣは、ＦＲＢ（２０２１−２１１３）Ｔ２０９８Ｌである。
【０５８２】
ヒトＰＢＭＣは、実施例４に記載されるように活性化、形質導入および拡張された。抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞は、対照として使用した。様々なＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞群が、元のＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣと比較して同様の生体外拡張の速度、同様のＣＤ４：ＣＤ８比率を呈し、そして同等の発現レベルを有していた。
【０５８３】
抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ  Ｔ細胞およびＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞を、ＮＫＧ２ＤＬ＋  Ａ５４９細胞と１：１のＥ：Ｔ比で２４時間、ＡＰ２１９６７の存在下または非存在下で共培養し、サイトカイン産生を、Ｑｂｅａｄ  ＰｌｅｘＳｃｒｅｅｎにより分析した。ＩＣＯＳ膜貫通ドメインまたは共刺激性ドメインを単独で、またはＤＡＰ１０と組み合わせて含むＤＡＲＩＣ結合構成要素は、サイトカイン産生に対し最小限の影響を与えた。対照的に、ＩＣＯＳ膜貫通ドメインまたは共刺激性ドメインを含むＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ対照Ｔ細胞と比較して大きくサイトカイン産生を低下させた。図１７Ｂおよび図１７Ｃ。
【０５８４】
実施例１１
二重標的化ＤＡＲＩＣプラットフォーム
ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素（ＦＲＢ  Ｔ２０９８Ｌ−ＣＤ８α  ＴＭ−ＣＤ１３７−ＣＤ３ζ）、ＮＫＧ２Ｄ．ＴＮＦＲ２  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、およびＣＤ１９  ＤＡＲＩＣ結合構成要素（抗ＣＤ１９  ｓｃＦＶ−ＦＫＢＰ１２−ＣＤ４  ＴＭ）を含むレンチウイルスベクターを設計、構築し、実証した。図１８Ａ。
【０５８５】
ヒトＰＢＭＣは、実施例４に記載されるように活性化、形質導入および拡張された。ＵＴＤ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＴＮＦＲ２  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＣＤ１９  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、およびＮＫＧ２Ｄ／ＣＤ１９  ＤＡＲＩＣ二重標的化Ｔ細胞を、抗ＮＫＧ２Ｄ抗体または組み換えＣＤ１９−Ｆｃタンパク質のいずれかで染色した。ＮＫＧ２Ｄ  ＤＡＲＩＣ結合構成要素、およびＣＤ１９  ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、ＤＡＲＩＣ一重標的化Ｔ細胞およびＤＡＲＩＣ二重標的化Ｔ細胞の両方において、同様の発現レベルであった。図１８Ｂおよび１８Ｃ。
【０５８６】
ＵＴＤ  Ｔ細胞、ＮＫＧ２Ｄ．ＴＮＦＲ２  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞、ＣＤ１９  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞およびＮＫＧ２Ｄ／ＣＤ１９  ＤＡＲＩＣ二重標的化Ｔ細胞を、ＮＫＧ２ＤＬ＋  Ａ５４９細胞、ＮＫＧ２ＤＬｎｅｇ  マウスＢ細胞株Ａ２０、およびＣＤ１９を安定的に発現するＡ２０細胞（Ａ２０−ｈＣＤ１９）とともに、ＡＰ２１９６７の存在下または非存在下で２４時間、１：１のＥ：Ｔ比で共培養した。サイトカイン産生は、Ｑｂｅａｄアッセイキットを使用して培養上清から測定した。ＡＰ２１９６７またはラパマイシンの非存在下では、わずかなサイトカイン産生が観察された。ＮＫＧ２Ｄ／ＣＤ１９−ＤＡＲＩＣ二重標的化Ｔ細胞は、Ａ５４９細胞およびＡ２０−ＣＤ１９細胞の両方と培養されたときにＧＭ−ＣＳＦを産生した。ＮＫＧ２Ｄ．ＴＮＦＲ２  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞およびＣＤ１９  ＤＡＲＩＣ  Ｔ細胞は、同系リガンドを発現する標的細胞と共培養されたときにサイトカインを産生した。図１８Ｄ。
【０５８７】
一般的に以下の請求の範囲において、使用される用語は、請求の範囲を本明細書に開示される特定の実施形態に限定するとは解釈されず、請求の範囲は、当該請求の範囲が権利付与される均等の全範囲に沿って、すべての可能性のある実施形態を含むと解釈されるものとする。したがって、請求の範囲は、本開示により限定されない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２Ａ−Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１３】
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【図１４Ａ−Ｃ】
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【図１４Ｄ】
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【図１５Ａ−Ｂ】
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【図１５Ｃ】
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【図１６】
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【図１７Ａ−Ｂ】
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【図１７Ｃ】
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【図１８Ａ−Ｂ】
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【図１８Ｃ−Ｄ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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