(57)【要約】  本開示は、免疫細胞の活性を誘導するための系、および免疫療法の方法を提供する。免疫細胞活性を誘導するための本開示の系は、キメラ抗原受容体、Ｔ細胞受容体、および様々なそれらの組み合わせを含む。
2021528049.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
免疫細胞および／または標的細胞の活性を誘導するための系であって、
（ａ）第１のエピトープへの特異的な結合を示す第１の抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）と、
第２のエピトープへの特異的な結合を示す第２の抗原結合ドメインを含む改変Ｔ細胞受容体（改変ＴＣＲ）複合体とを備え、前記第２の抗原結合ドメインは、
（ｉ）Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される少なくとも１つのＴＣＲ鎖、
（ｉｉ）表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／もしくはガンマ鎖、または
（ｉｉｉ）ＣＤ３ゼータ鎖
に連結される、
系。
【請求項２】
前記第１のエピトープへの前記第１の抗原結合ドメインの結合、および／または前記第２のエピトープへの前記第２の抗原結合ドメインの結合は、前記系を発現する免疫細胞の免疫細胞活性を活性化する、請求項１に記載の系。
【請求項３】
２つ以上の抗原結合ドメインは、任意選択でタンデムに、（ｉ）Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される少なくとも１つのＴＣＲ鎖、（ｉｉ）表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／またはガンマ鎖、（ｉｉｉ）ＣＤ３ゼータ鎖に連結され、前記２つ以上の抗原結合ドメインの、それぞれのエピトープへの結合は、前記系を発現する免疫細胞の免疫細胞活性を活性化する、請求項１に記載の系。
【請求項４】
前記免疫細胞活性は、前記免疫細胞のクローン増殖；前記免疫細胞によるサイトカイン放出；前記免疫細胞の細胞傷害性；前記免疫細胞の増殖；前記免疫細胞の分化、脱分化、または分化転換；前記免疫細胞の移動および／または輸送；前記免疫細胞の疲弊および／または再活性化；ならびに前記免疫細胞による、他の細胞間分子、代謝物、化学物質、またはそれらの組み合わせの放出からなる群より選択される、請求項２または３に記載の系。
【請求項５】
前記第１のエピトープへの前記第１の抗原結合ドメインの結合、および前記第２のエピトープへの前記第２の抗原結合ドメインの結合は、前記系を発現する免疫細胞の細胞傷害性を活性化し、前記細胞傷害性は、前記第１のエピトープへの前記第１の抗原結合ドメインの結合のみ、または前記第２のエピトープへの前記第２の抗原結合ドメインの結合のみと比較して増強される、請求項１に記載の系。
【請求項６】
前記第１のエピトープへの前記第１の抗原結合ドメインの結合、および前記第２のエピトープへの前記第２の抗原結合ドメインの結合は、前記系を発現する免疫細胞の細胞傷害性を活性化し、前記第１のエピトープへの前記第１の抗原結合ドメインの結合のみ、または前記第２のエピトープへの前記第２の抗原結合ドメインの結合のみと比較して、前記細胞傷害性の持続性を増大する、請求項１に記載の系。
【請求項７】
前記２つ以上の抗原結合ドメインのそれぞれのエピトープへの結合は、前記系が被験体の免疫細胞において発現されるとき、前記系を発現する免疫細胞の細胞傷害性を活性化し、前記第１のエピトープへの前記第１の抗原結合ドメインの結合のみと比較して、前記細胞傷害性の持続性を増大する、請求項３に記載の系。
【請求項８】
前記改変ＴＣＲは、
（ｉ）前記第２の抗原結合ドメイン、
（ｉｉ）Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される前記少なくとも１つのＴＣＲ鎖、
（ｉｉｉ）表面抗原分類３（ＣＤ３）の前記イプシロン鎖、前記デルタ鎖、および／もしくは前記ガンマ鎖、または、
（ｉｖ）前記ＣＤ３ゼータ鎖
に連結される第３の抗原結合ドメインを含む、請求項１に記載の系。
【請求項９】
前記ＣＡＲは、１または複数の追加の抗原結合ドメインを含む、請求項１に記載の系。
【請求項１０】
前記１または複数の追加の抗原結合ドメインは、１または複数の追加のエピトープへの特異的な結合を示す、請求項９に記載の系。
【請求項１１】
前記１または複数の追加のエピトープは、前記第１のエピトープまたは前記第２のエピトープと同じである、請求項１０に記載の系。
【請求項１２】
前記１または複数の追加のエピトープは、前記第１のエピトープおよび前記第２のエピトープと異なる、請求項１０に記載の系。
【請求項１３】
前記１または複数の追加の抗原結合ドメインおよび前記第１の抗原結合ドメインは、タンデムに連結される、請求項９に記載の系。
【請求項１４】
前記ＣＡＲの前記細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を含む、請求項１に記載の系。
【請求項１５】
前記ＣＡＲの前記細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体抑制チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）を含む、請求項１に記載の系。
【請求項１６】
前記ＣＡＲの前記細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）、Ｆｃε受容体（ＦｃεＲ）、Ｆｃα受容体（ＦｃαＲ）、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）、ＣＤ３、ＣＤ３ζ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２８、ＣＤ３２、ＣＤ４０Ｌ（ＣＤ１５４）、ＣＤ４５、ＣＤ６６ｄ、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳとしても公知である）、ＣＤ２４７ζ、ＣＤ２４７η、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＦＹＮ、ＬＡＴ、Ｌｃｋ、ＭＡＰＫ、ＭＨＣ複合体、ＮＦＡＴ、ＮＦ−κＢ、ＰＬＣ−γ、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、Ｃ３ｄ、およびＺａｐ７０のシグナル伝達ドメインを含む、請求項１に記載の系。
【請求項１７】
前記細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメインを含む、請求項１６に記載の系。
【請求項１８】
前記ＣＡＲは、共刺激ドメインをさらに含む、請求項１に記載の系。
【請求項１９】
前記共刺激ドメインは、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、またはＴｏｌｌリガンド受容体のシグナル伝達ドメインを含む、請求項１８に記載の系。
【請求項２０】
前記共刺激ドメインは、２Ｂ４／ＣＤ２４４／ＳＬＡＭＦ４、４−１ＢＢ／ＴＮＦＳＦ９／ＣＤ１３７、Ｂ７−１／ＣＤ８０、Ｂ７−２／ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ１／ＰＤ−Ｌ１、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ６、Ｂ７−Ｈ７、ＢＡＦＦ−Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＢＡＦＦ／ＢｌｙＳ／ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＢＴＬＡ／ＣＤ２７２、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤ１５０、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２、ＣＤ２００、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＣＤ２７リガンド／ＴＮＦＳＦ７、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ２Ｆ−１０／ＳＬＡＭＦ９、ＣＤ３０リガンド／ＴＮＦＳＦ８、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＣＤ３００ａ／ＬＭＩＲ１、ＣＤ４、ＣＤ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＣＤ４８／ＳＬＡＭＦ２、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５３、ＣＤ５８／ＬＦＡ−３、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ８２／Ｋａｉ−１、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＣＤ９０／Ｔｈｙ１、ＣＤ９６、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＣＲＴＡＭ、ＣＴＬＡ−４、ＤＡＰ１２、デクチン−１／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６、ＤＲ３／ＴＮＦＲＳＦ２５、ＥｐｈＢ６、ＧＡＤＳ、Ｇｉ２４／ＶＩＳＴＡ／Ｂ７−Ｈ５、ＧＩＴＲリガンド／ＴＮＦＳＦ１８、ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８、ＨＬＡクラスＩ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＩＡ４、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、イカロス、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、インテグリンα４／ＣＤ４９ｄ、インテグリンα４β１、インテグリンα４β７／ＬＰＡＭ−１、ＩＰＯ−３、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＧ−３、ＬＡＴ、ＬＩＧＨＴ／ＴＮＦＳＦ１４、ＬＴＢＲ、Ｌｙ１０８、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、リンホトキシン−α／ＴＮＦ−β、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＴＢ−Ａ／ＳＬＡＭＦ６、ＯＸ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ４、ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＰＤ−１、ＰＤＣＤ６、ＰＤ−Ｌ２／Ｂ７−ＤＣ、ＰＳＧＬ１、ＲＥＬＴ／ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１）、ＳＬＡＭ／ＣＤ１５０、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ−７６、ＴＡＣＩ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＣＬ１Ａ、ＴＣＬ１Ｂ、ＴＩＭ−１／ＫＩＭ−１／ＨＡＶＣＲ、ＴＩＭ−４、ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５、ＴＮＦ  ＲＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＮＦ−α、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰ  Ｒ、ＶＬＡ１、およびＶＬＡ−６から選択される分子のシグナル伝達ドメインを含む、請求項１８に記載の系。
【請求項２１】
前記第１の抗原結合ドメインおよび／または前記第２の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ミニボディ、ダイアボディ、単一ドメイン抗体、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、またはラクダ科動物抗体の可変ドメイン（ＶＨＨ）を含む、請求項１に記載の系。
【請求項２２】
前記第１の抗原結合ドメインおよび前記第２の抗原結合ドメインのうちの少なくとも１つは、受容体を含む、請求項１に記載の系。
【請求項２３】
前記第１の抗原結合ドメインおよび前記第２の抗原結合ドメインのうちの少なくとも１つは、受容体のためのリガンドを含む、請求項１に記載の系。
【請求項２４】
前記第１のエピトープおよび前記第２のエピトープは、異なる抗原上に存在する、請求項１に記載の系。
【請求項２５】
前記第１のエピトープおよび前記第２のエピトープは、共通の抗原上に存在する、請求項１に記載の系。
【請求項２６】
少なくとも１つのエピトープは、１または複数の細胞表面抗原上に存在する、請求項１または１０に記載の系。
【請求項２７】
前記１または複数の細胞表面抗原は、腫瘍関連抗原、チロシンキナーゼ受容体、セリンキナーゼ受容体、およびＧタンパク質共役受容体である、請求項２６に記載の系。
【請求項２８】
前記第１のエピトープおよび／または前記第２のエピトープは、普遍的抗原上に存在する、請求項１に記載の系。
【請求項２９】
前記第１のエピトープおよび／または前記第２のエピトープは、ネオ抗原上に存在する、請求項１に記載の系。
【請求項３０】
前記第１のエピトープおよび／または前記第２のエピトープは、ネオエピトープである、請求項１に記載の系。
【請求項３１】
前記第１のエピトープおよび／または前記第２のエピトープは、腫瘍関連抗原上に存在する、請求項１に記載の系。
【請求項３２】
前記腫瘍関連抗原は、７０７−ＡＰ、ビオチン化分子、ａ−アクチニン−４、ａｂｌ−ｂｃｒ  ａｌｂ−ｂ３（ｂ２ａ２）、ａｂｌ−ｂｃｒ  ａｌｂ−ｂ４（ｂ３ａ２）、アディポフィリン、ＡＦＰ、ＡＩＭ−２、アネキシンＩＩ、ＡＲＴ−４、ＢＡＧＥ、ＢＣＭＡ、ｂ−カテニン、ｂｃｒ−ａｂｌ、ｂｃｒ−ａｂｌ  ｐ１９０（ｅ１ａ２）、ｂｃｒ−ａｂｌ  ｐ２１０（ｂ２ａ２）、ｂｃｒ−ａｂｌ  ｐ２１０（ｂ３ａ２）、ＢＩＮＧ−４、ＣＡ−１２５、ＣＡＧ−３、ＣＡＩＸ、ＣＡＭＥＬ、カスパーゼ−８、ＣＤ１７１、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤＣ２７、ＣＤＫ−４、ＣＥＡ、ＣＬＣＡ２、ＣＬＬ−１、ＣＴＡＧ１Ｂ、Ｃｙｐ−Ｂ、ＤＡＭ−１０、ＤＡＭ−６、ＤＥＫ−ＣＡＮ、ＤＬＬ３、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ−２、ＥＧＰ−４０、ＥＬＦ２、Ｅｐ−ＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ｅｒｂ−Ｂ２、ｅｒｂ−Ｂ３、ｅｒｂ−Ｂ４、ＥＳ−ＥＳＯ−１ａ、ＥＴＶ６／ＡＭＬ、ＦＡＰ、ＦＢＰ、胎児アセチルコリン受容体、ＦＧＦ−５、ＦＮ、ＦＲ−α、Ｇ２５０、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＧＡＧＥ−３、ＧＡＧＥ−４、ＧＡＧＥ−５、ＧＡＧＥ−６、ＧＡＧＥ−７Ｂ、ＧＡＧＥ−８、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧｎＴ−Ｖ、Ｇｐ１００、ｇｐ７５、ＧＰＣ３、ＧＰＣ−２、Ｈｅｒ−２、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１−Ｒ１７０Ｉ、ＨＭＷ−ＭＡＡ、ＨＳＰ７０−２Ｍ、ＨＳＴ−２（ＦＧＦ６）、ＨＳＴ−２／ｎｅｕ、ｈＴＥＲＴ、ｉＣＥ、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ−１３Ｒα２、ＫＤＲ、ＫＩＡＡ０２０５、Ｋ−ＲＡＳ、Ｌ１−細胞接着分子、ＬＡＧＥ−１、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、ルイスＹ、Ｌ１−ＣＡＭ、ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−１０、ＭＡＧＥ−１２、ＭＡＧＥ−２、ＭＡＧＥ−３、ＭＡＧＥ−４、ＭＡＧＥ−６、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ｂ１、ＭＡＧＥ−Ｂ２、リンゴ酸酵素、マンマグロビン−Ａ、ＭＡＲＴ−１／メラン−Ａ、ＭＡＲＴ−２、ＭＣ１Ｒ、Ｍ−ＣＳＦ、メソテリン、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ２、ＭＵＭ−１、ＭＵＭ−２、ＭＵＭ−３、ミオシン、ＮＡ８８−Ａ、ネオ−ＰＡＰ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＰＭ／ＡＬＫ、Ｎ−ＲＡＳ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＯＡ１、ＯＧＴ、腫瘍胎児抗原（ｈ５Ｔ４）、ＯＳ−９、Ｐポリペプチド、Ｐ１５、Ｐ５３、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＡ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＰＴＰＲＫ、ＲＡＧＥ、ＲＯＲ１、ＲＵ１、ＲＵ２、ＳＡＲＴ−１、ＳＡＲＴ−２、ＳＡＲＴ−３、ＳＯＸ１０、ＳＳＸ−２、サバイビン、サバイビン−２Ｂ、ＳＹＴ／ＳＳＸ、ＴＡＧ−７２、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、ＴＧＦαＲＩＩ、ＴＧＦβＲＩＩ、ＴＰ１、ＴＲＡＧ−３、ＴＲＧ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ＴＲＰ−２／ＩＮＴ２、ＴＲＰ−２−６ｂ、チロシナーゼ、ＶＥＧＦ−Ｒ２、ＷＴ１、α−葉酸受容体、およびκ−軽鎖からなる群より選択される、請求項３１に記載の系。
【請求項３３】
少なくとも１つのエピトープは、免疫チェックポイント受容体または免疫チェックポイント受容体リガンド上に存在する、請求項１または１０に記載の系。
【請求項３４】
前記免疫チェックポイント受容体または免疫チェックポイント受容体リガンドは、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、ＢＬＴＡ、ＣＤ４７、またはＣＤ４０である、請求項３３に記載の系。
【請求項３５】
少なくとも１つのエピトープは、サイトカインまたはサイトカイン受容体上に存在する、請求項１または１０に記載の系。
【請求項３６】
前記サイトカインまたはサイトカイン受容体は、ＣＣＲ２ｂ、ＣＸＣＲ２（ＣＸＣＬ１受容体）、ＣＣＲ４（ＣＣＬ１７受容体）、Ｇｒｏ−ａ、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＩＬ−１２、ヘパラナーゼ、ＣＤ１３７Ｌ、ＬＥＭ、Ｂｃｌ−２、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１９、またはＣＣＬ２である、請求項３５に記載の系。
【請求項３７】
少なくとも１つのエピトープは、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）によって提示される抗原上に存在する、請求項１または１０に記載の系。
【請求項３８】
前記ＭＨＣはＨＬＡクラス１である、請求項３７に記載の系。
【請求項３９】
前記ＭＨＣはＨＬＡクラス２である、請求項３７に記載の系。
【請求項４０】
請求項１〜３９のいずれか一項に記載の系を発現する単離された宿主細胞。
【請求項４１】
前記宿主細胞は、免疫細胞である、請求項４０に記載の宿主細胞。
【請求項４２】
前記免疫細胞は、リンパ球である、請求項４１に記載の宿主細胞。
【請求項４３】
前記リンパ球はＴ細胞である、請求項４２に記載の宿主細胞。
【請求項４４】
前記リンパ球はα／βＴ細胞、および／またはγ／δＴ細胞である、請求項４２に記載の宿主細胞。
【請求項４５】
前記Ｔ細胞はＣＤ８＋Ｔ細胞である、請求項４３に記載の宿主細胞。
【請求項４６】
前記Ｔ細胞はＣＤ４＋Ｔ細胞である、請求項４３に記載の宿主細胞。
【請求項４７】
前記リンパ球はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、請求項４２に記載の宿主細胞。
【請求項４８】
前記宿主細胞は、標的細胞中に同時に存在する２つの抗原に対して特異的な結合を示す、請求項４０〜４７のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項４９】
少なくとも２つの外因的に導入される抗原結合ドメインを含む抗原特異的免疫細胞であって、前記抗原結合ドメインのうちの１つは、Ｔ細胞受容体複合体（ＴＣＲ複合体）に連結され、もう１つはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に連結され、前記抗原特異的免疫細胞は、前記少なくとも２つの外因的に導入される抗原結合ドメインによって認識される１または複数の抗原を発現する標的細胞に特異的に結合する、抗原特異的免疫細胞。
【請求項５０】
前記ＣＡＲに連結される前記抗原結合ドメインは主に、前記抗原特異的免疫細胞と前記標的細胞との間の相互作用を媒介し、前記ＴＣＲ複合体に連結される前記抗原結合ドメインは主に、前記抗原特異的免疫細胞と前記標的細胞との間の前記相互作用が生じるとき、免疫細胞活性を媒介する、請求項４９に記載の抗原特異的免疫細胞。
【請求項５１】
前記免疫細胞活性は、前記抗原特異的免疫細胞のクローン増殖；前記抗原特異的免疫細胞によるサイトカイン放出；前記抗原特異的免疫細胞の細胞傷害性；前記抗原特異的免疫細胞の増殖；前記抗原特異的免疫細胞の分化、脱分化、または分化転換；前記抗原特異的免疫細胞の移動および／または輸送；前記抗原特異的免疫細胞の疲弊および／または再活性化；ならびに前記抗原特異的免疫細胞による、他の細胞間分子、代謝物、化学物質、またはそれらの組み合わせの放出からなる群より選択される、請求項５０に記載の抗原特異的免疫細胞。
【請求項５２】
前記抗原特異的免疫細胞は、リンパ球である、請求項４９〜５１のいずれか一項に記載の抗原特異的免疫細胞。
【請求項５３】
前記リンパ球はＴ細胞である、請求項５２に記載の抗原特異的免疫細胞。
【請求項５４】
前記リンパ球はα／βＴ細胞、および／またはγ／δＴ細胞である、請求項５２に記載の抗原特異的免疫細胞。
【請求項５５】
前記Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞である、請求項５３に記載の抗原特異的免疫細胞。
【請求項５６】
２つ以上の抗原結合ドメインは、任意選択でタンデムに、（ｉ）Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される少なくとも１つのＴＣＲ鎖、（ｉｉ）表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／またはガンマ鎖、（ｉｉｉ）ＣＤ３ゼータ鎖に連結される、請求項４９に記載の抗原特異的免疫細胞。
【請求項５７】
前記リンパ球はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、請求項５２に記載の抗原特異的免疫細胞。
【請求項５８】
免疫細胞の集団であって、個々の免疫細胞は、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の系を発現し、前記免疫細胞の集団を被験体における標的細胞集団に暴露させると、前記免疫細胞の集団は、約２日以内に少なくとも５％の前記標的細胞を死滅に誘導する点において、特徴付けられる、免疫細胞の集団。
【請求項５９】
前記免疫細胞の集団は、最大で約１０１１個の細胞を含む、請求項５８に記載の免疫細胞の集団。
【請求項６０】
前記免疫細胞はリンパ球を含む、請求項５８に記載の免疫細胞の集団。
【請求項６１】
前記リンパ球はＴ細胞である、請求項６０に記載の免疫細胞の集団。
【請求項６２】
前記リンパ球はα／β  Ｔ細胞および／またはγ／δＴ細胞である、請求項６０に記載の免疫細胞の集団。
【請求項６３】
前記Ｔ細胞はＣＤ４＋Ｔ細胞である、請求項６１に記載の免疫細胞の集団。
【請求項６４】
前記Ｔ細胞はＣＤ８＋Ｔ細胞である、請求項６１に記載の免疫細胞の集団。
【請求項６５】
前記リンパ球はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、請求項６０に記載の免疫細胞の集団。
【請求項６６】
免疫細胞および／または標的細胞の活性を誘導する方法であって、
（ａ）免疫細胞中の系を発現する段階と、
（ｂ）標的細胞を、前記免疫細胞および／または前記標的細胞の前記活性を誘導する条件下で、前記免疫細胞に接触させる段階と、を備え、
前記免疫細胞において発現される前記系は、
第１のエピトープへの結合特異性を有する第１の抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）と、
（ｉ）Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される少なくとも１つのＴＣＲ鎖、
（ｉｉ）表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／もしくはガンマ鎖、または
（ｉｉｉ）ＣＤ３ゼータ鎖に連結される、第２の抗原結合ドメインを含む改変Ｔ細胞受容体（改変ＴＣＲ）複合体と、を有する、
方法。
【請求項６７】
前記第１のエピトープへの前記第１の抗原結合ドメインの結合、および／または第２のエピトープへの前記第２の抗原結合ドメインの結合は、前記免疫細胞の細胞傷害性を活性化する、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
２つ以上の抗原結合ドメインは、任意選択でタンデムに、（ｉ）Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される少なくとも１つのＴＣＲ鎖、（ｉｉ）表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／またはガンマ鎖、（ｉｉｉ）ＣＤ３ゼータ鎖に連結される、請求項６６に記載の方法。
【請求項６９】
前記第１のエピトープへの前記第１の抗原結合ドメインの結合、および第２のエピトープへの前記第２の抗原結合ドメインの結合は、前記免疫細胞の細胞傷害性を活性化し、前記細胞傷害性は、前記第１のエピトープへの前記第１の抗原結合ドメインの結合のみ、または第２のエピトープへの前記第２の抗原結合ドメインの結合のみと比較して増強される、請求項６６に記載の方法。
【請求項７０】
前記第１のエピトープへの前記第１の抗原結合ドメインの結合、および前記第２の抗原結合ドメインの結合は、前記免疫細胞の細胞傷害性を活性化し、前記第１のエピトープへの前記第１の抗原結合ドメインの結合のみ、または第２のエピトープへの前記第２の抗原結合ドメインの結合のみと比較して、前記細胞傷害性の持続性を増大する、請求項６６に記載の方法。
【請求項７１】
前記免疫細胞の細胞傷害性は、前記標的細胞の死滅を誘導する、請求項６７〜７０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
前記標的細胞はがん細胞である、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記標的細胞は造血細胞である、請求項７１に記載の方法。
【請求項７４】
前記標的細胞は固形腫瘍細胞である、請求項７１に記載の方法。
【請求項７５】
前記標的細胞は、心臓、血管、唾液腺、食道、胃、肝臓、胆嚢、膵臓、腸、結腸、直腸、肛門、内分泌腺、副腎、腎臓、尿管、膀胱、リンパ節、扁桃腺、咽頭扁桃腺、胸腺、脾臓、皮膚、筋肉、脳、脊髄、神経、卵巣、卵管、子宮、膣、乳腺、精巣、前立腺、陰茎、咽頭、喉頭、気管、気管支、肺、横隔膜、軟骨、靭帯、および腱のうちの１または複数において同定される細胞である、請求項７１に記載の方法。
【請求項７６】
前記免疫細胞はリンパ球である、請求項６６〜７５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７７】
前記リンパ球はＴ細胞である、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
前記リンパ球はα／βＴ細胞、および／またはγ／δＴ細胞である、請求項７６に記載の方法。
【請求項７９】
前記Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞である、請求項７７に記載の方法。
【請求項８０】
２つ以上の抗原結合ドメインの、それぞれのエピトープへの結合は、前記系が被験体の免疫細胞において発現されるとき、前記系を発現する免疫細胞の細胞傷害性を活性化し、前記第１のエピトープへの前記第１の抗原結合ドメインの結合のみと比較して、前記細胞傷害性の持続性を増大する、請求項６６に記載の方法。
【請求項８１】
前記リンパ球はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、請求項７６に記載の方法。
【請求項８２】
１または複数のポリヌクレオチドを含む組成物であって、前記１または複数のポリヌクレオチドは、
（ａ）第１のエピトープへの結合特異性を有する第１の抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）と、
（ｂ）第２のエピトープへの特異的な結合を示す第２の抗原結合ドメインを含む改変Ｔ細胞受容体（改変ＴＣＲ）複合体と、
をコードし、前記第２の抗原結合ドメインは、
（ｉ）Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される少なくとも１つのＴＣＲ鎖、
（ｉｉ）表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／もしくはガンマ鎖、または
（ｉｉｉ）ＣＤ３ゼータ鎖
に連結される、
組成物。
【請求項８３】
前記１または複数のポリヌクレオチドは、それに動作可能に連結されるプロモータを含む、請求項８２に記載の組成物。
【請求項８４】
改変免疫細胞を作製する方法であって、
請求項８２または８３に記載の組成物を免疫細胞において発現させることによって、前記免疫細胞を遺伝子改変し、それにより前記改変免疫細胞を作製する段階
を含む、方法。
【請求項８５】
（ａ）第１の抗原結合ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）および第２の抗原結合ドメインを含む改変Ｔ細胞受容体（改変ＴＣＲ）複合体を有する抗原特異的免疫細胞を、被験体に投与する段階であって、前記被験体のがんの標的細胞は、前記第１の抗原結合ドメインおよび／または前記第２の抗原結合ドメインによって認識される１または複数の抗原を発現し、前記抗原特異的免疫細胞は前記標的細胞に特異的に結合する、段階と、
（ｂ）前記標的細胞に対する、前記抗原特異的免疫細胞の免疫細胞活性を誘導する条件下で、前記第１の抗原結合ドメインおよび／または前記第２の抗原結合ドメインを介して前記標的細胞を前記抗原特異的免疫細胞と接触させる段階であって、それにより前記がんの前記標的細胞の死滅を誘導する、段階と
を備える、被験体のがんを治療する方法。
【請求項８６】
（ａ）抗原特異的免疫細胞を、被験体に投与する段階であって、前記抗原特異的免疫細胞は、請求項１〜３６のいずれか一項に記載の系を発現する遺伝子改変免疫細胞である段階と、
（ｂ）前記被験体のがんの標的細胞に対する、前記抗原特異的免疫細胞の免疫細胞活性を誘導する条件下で、前記標的細胞を前記抗原特異的免疫細胞と接触させる段階であって、それにより前記がんの前記標的細胞の死滅を誘導する、段階と
を含む、被験体のがんを治療する方法。
【請求項８７】
免疫細胞を遺伝子改変して前記抗原特異的免疫細胞を得る段階をさらに含む、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
前記免疫細胞活性は、前記抗原特異的免疫細胞のクローン増殖；前記抗原特異的免疫細胞によるサイトカイン放出；前記抗原特異的免疫細胞の細胞傷害性；前記抗原特異的免疫細胞の増殖；前記抗原特異的免疫細胞の分化、脱分化、または分化転換；前記抗原特異的免疫細胞の移動および／または輸送；前記抗原特異的免疫細胞の疲弊および／または再活性化；ならびに前記抗原特異的免疫細胞による、他の細胞間分子、代謝物、化学物質、またはそれらの組み合わせの放出からなる群より選択される、請求項８５または８６に記載の方法。
【請求項８９】
前記免疫細胞活性は、前記抗原特異的免疫細胞の細胞傷害性である、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
前記標的細胞に対する前記抗原特異的免疫細胞の前記細胞傷害性は、前記被験体の前記がんの、少なくとも１０％の低減をもたらす、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
前記免疫細胞活性は、前記抗原特異的免疫細胞によるサイトカイン放出である、請求項８８に記載の方法。
【請求項９２】
前記第１の抗原結合ドメインの結合のみ、または前記第２の抗原結合ドメインの結合のみと比較して、前記第１の抗原結合ドメインおよび前記第２の抗原結合ドメインの両方が、それぞれのエピトープに結合するとき、前記免疫細胞活性の持続性は増大する、請求項８５〜９１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９３】
前記がんは、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、子宮頸癌、大腸癌、食道癌、胃癌、神経膠腫、頭頚部癌、腎臓癌、白血病、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、黒色腫、中皮腫、髄芽腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、直腸癌、皮膚癌、精巣癌、気管癌、および外陰部癌から選択される、請求項８５〜９２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９４】
前記抗原特異的免疫細胞はリンパ球である、請求項８５〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９５】
前記リンパ球はＴ細胞である、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
前記リンパ球はα／βＴ細胞、および／またはγ／δＴ細胞である、請求項９４に記載の方法。
【請求項９７】
前記Ｔ細胞はＣＤ４＋Ｔ細胞である、請求項９５に記載の方法。
【請求項９８】
前記Ｔ細胞はＣＤ８＋Ｔ細胞である、請求項９５に記載の方法。
【請求項９９】
前記リンパ球はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、請求項９４に記載の方法。
【請求項１００】
式：
Ａ−Ｘ−Ｂ−Ｙ−Ｃ−Ｚ−Ｄ
（式中、
Ａは、配列番号４７〜５６からなる群より選択される任意の１つに対して少なくとも８０％または９０％の同一性を有する配列を含み、
Ｂは、配列番号５７〜６６からなる群より選択される任意の１つに対して少なくとも８０％または９０％の同一性を有する配列を含み、
Ｃは、配列番号６７〜７６からなる群より選択される任意の１つに対して少なくとも８０％または９０％の同一性を有する配列を含み、
Ｄは、配列番号７７〜８６からなる群より選択される任意の１つに対して少なくとも８０％または９０％の同一性を有する配列を含み、
Ｘは、配列番号８７〜９６からなる群より選択される任意の１つに対して少なくとも８０％または９０％の同一性を有する配列を含み、
Ｙは、配列番号９７〜１０６からなる群より選択される任意の１つに対して少なくとも８０％または９０％の同一性を有する配列を含み、かつ、
Ｚは、配列番号１０７〜１１６からなる群より選択される任意の１つに対して少なくとも８０％または９０％の同一性を有する配列を含む。）
を有する抗原結合分子。
【請求項１０１】
前記抗原結合分子は、３７℃で表面プラズモン共鳴法によって測定されるとき、１００ｎｍ、９０ｎｍ、８０ｎｍ、７０ｎｍ、６０ｎｍ、５０ｎｍ、４０ｎｍ、３０ｎｍ、２０ｎｍ、１０ｎｍ、または１ｎｍ、またはそれより低い、ヒトＢＣＭＡに対する結合親和性（ＫＤ）を示す、請求項１００に記載の抗原結合分子。
【請求項１０２】
前記抗原結合分子は、配列番号１４〜２３からなる群より選択される任意の１つに対して少なくとも８０％または９０％の同一性を有する配列を含む、請求項１００に記載の抗原結合分子。
【請求項１０３】
前記抗原結合分子は、配列番号１４〜２３からなる群より選択される配列を含む、請求項１００に記載の抗原結合分子。
【請求項１０４】
１または複数の抗原結合ドメインを含む改変Ｔ細胞受容体（改変ＴＣＲ）複合体であって、前記１または複数の抗原結合ドメインは、
（ｉｖ）Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される少なくとも１つのＴＣＲ鎖、
（ｖ）表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／もしくはガンマ鎖、または
（ｖｉ）ＣＤ３ゼータ鎖、
に連結され、前記１または複数の抗原結合ドメインのうちの少なくとも１つまたは２つは、請求項１００〜１０３のいずれか一項に記載の抗原結合分子を含む、改変ＴＣＲ複合体。
【請求項１０５】
前記１または複数の抗原結合ドメインのうちの少なくとも１つまたは２つは、配列番号３〜２３および３８〜４６からなる群より選択される任意の１つに対して少なくとも８０％または９０％の同一性を有する配列を含む、請求項１０４に記載の改変ＴＣＲ複合体。
【請求項１０６】
２つ以上の抗原結合ドメインを含む、請求項１０４に記載の改変ＴＣＲ複合体。
【請求項１０７】
前記２つ以上の抗原結合ドメインは、前記改変ＴＣＲ複合体の別々の鎖に連結される、請求項１０４に記載の改変ＴＣＲ複合体。
【請求項１０８】
前記２つ以上の抗原結合ドメインは、前記改変ＴＣＲ複合体の１本の鎖に連結される、請求項１０４に記載の改変ＴＣＲ複合体。
【請求項１０９】
前記２つ以上の抗原結合ドメインは、前記改変ＴＣＲ複合体の１本の鎖にタンデムに連結される、請求項１０４に記載の改変ＴＣＲ複合体。
【請求項１１０】
前記改変ＴＣＲ複合体の別の鎖に連結される１または複数の抗原結合ドメインをさらに含む、請求項１０９に記載の改変ＴＣＲ複合体。
【請求項１１１】
２つ以上のエピトープへの特異的結合を示す２つ以上の抗原結合ドメインを含む、改変Ｔ細胞受容体（改変ＴＣＲ）複合体であって、前記２つ以上の抗原結合ドメインは、
（ｉ）Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される少なくとも１つのＴＣＲ鎖、
（ｉｉ）表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／もしくはガンマ鎖、または
（ｉｉｉ）ＣＤ３ゼータ鎖
に連結される、改変ＴＣＲ複合体。
【請求項１１２】
前記２つ以上の抗原結合ドメインは、前記改変ＴＣＲ複合体の別々の鎖に連結される、請求項１１１に記載の改変ＴＣＲ複合体。
【請求項１１３】
前記２つ以上の抗原結合ドメインは、前記改変ＴＣＲ複合体の１本の鎖に連結される、請求項１１１に記載の改変ＴＣＲ複合体。
【請求項１１４】
前記２つ以上の抗原結合ドメインは、前記改変ＴＣＲ複合体の１本の鎖にタンデムに連結される、請求項１１３に記載の改変ＴＣＲ複合体。
【請求項１１５】
前記改変ＴＣＲ複合体の別の鎖に連結される１または複数の抗原結合ドメインをさらに含む、請求項１１４に記載の改変ＴＣＲ複合体。
【請求項１１６】
前記２つ以上の抗原結合ドメインは、ＢＣＭＡに結合する、請求項１１１に記載の改変ＴＣＲ複合体。
【請求項１１７】
前記２つ以上の抗原結合ドメインは、ＢＣＭＡの同じエピトープに結合する、請求項１１６に記載の改変ＴＣＲ複合体。
【請求項１１８】
前記２つ以上の抗原結合ドメインは、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂである、請求項１１１に記載の改変ＴＣＲ複合体。
【請求項１１９】
前記２つ以上の抗原結合ドメインは、配列番号３〜２３のうちの任意の１つに対して少なくとも８０％の配列同一性を有する配列から選択される、請求項１１１に記載の改変ＴＣＲ複合体。
【請求項１２０】
前記２つ以上の抗原結合ドメインは、表面抗原分類３（ＣＤ３）の前記イプシロン鎖、前記デルタ鎖、および／または前記ガンマ鎖にタンデムに連結される、請求項１１１に記載の改変ＴＣＲ複合体。
【請求項１２１】
請求項１０４〜１２０のいずれか一項に記載の改変ＴＣＲ複合体を含む、抗原特異的免疫細胞。
【請求項１２２】
それぞれのエピトープへの特異的な結合を示す１または複数の抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をさらに備える、請求項１２１に記載の抗原特異的免疫細胞。
【請求項１２３】
前記ＣＡＲの１または複数の抗原結合ドメインは、タンデムに配置される、請求項１２２に記載の抗原特異的免疫細胞。
【請求項１２４】
それぞれのエピトープへの特異的な結合を示す１または複数の抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを、それぞれが含む２つ以上のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をさらに備える、請求項１２１に記載の抗原特異的免疫細胞。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
［関連出願の相互参照］
本出願は、２０１８年６月１９日に出願された特許協力条約出願番号ＰＣＴ／ＣＮ２０１８／０９１７８９の優先権を主張し、上記出願は、あらゆる目的のために、その全体が参照により本明細書に引用される。
エフェクタ細胞活性においては、細胞外抗原結合ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインを含む膜結合型受容体に結合するリガンドが関与し得る。抗原結合ドメインとそれに対応する標的との複合体の形成により、受容体そのものへのコンフォメーション的かつ／または化学的な改変がもたらされ得、これにより次には、細胞内に伝達される一連のシグナルが発生され得る。この相互作用を免疫細胞療法の開発のために利用する試みによって、期待できる有効性が示されてきたが、サイトカイン放出症候群などの望ましくない副作用を治療対象にもたらすオフターゲット毒性も示されてきた。これと他の副作用により、炎症性応答、臓器不全、および極端な例では、死亡にさらに至るおそれがある。
【０００２】
すべてのＴ細胞の発達および機能は、その抗原受容体に依存する。Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）は、多タンパク質複合体であり、２つの機能的に異なるモジュール、つまりリガンド結合モジュールおよびシグナル伝達モジュールからなる。リガンド結合モジュールは、２つの可変ポリペプチド鎖、ＴＣＲαおよびＴＣＲβで構成され、当該２つの可変ポリペプチド鎖は、共有結合したヘテロ二量体を形成し、ＴＣＲのリガンド特異性を担う。ＴＣＲ複合体のシグナル伝達モジュールは、ＣＤ３ｅ、ＣＤ３ｇ、ＣＤ３ｄ、およびｚなどの、不変ポリペプチド鎖で構成される。これらの中で、ＣＤ３ｅ、ＣＤ３ｇ、およびＣＤ３ｄは、非共有結合したＣＤ３ｅｇおよびＣＤ３ｅｄヘテロ二量体を形成するのに対し、ｚは共有結合したｚｚホモ二量体を形成する。ＴＣＲ複合体の表面発現には、完全にアセンブルされた一組の複合体サブユニットが必要である。アセンブリは、小胞体においてＣＤ３ｅｄおよびＣＤ３ｅｇのヘテロ二量体が形成されることから始まる。次いで、これらはそれぞれ、ＴＣＲαおよびＴＣＲβと会合し、中間複合体を生成する。ｚｚホモ二量体は、最後に接合するサブユニットであり、それが組み込まれると同時に、ＴＣＲ複合体全体が原形質膜に輸送される（Ｋｌａｕｓｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、（１９９０）；Ｅｘｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．、（１９９１）；Ｄａｖｅ  ｅｔ  ａｌ．、（１９９７）；Ｍａｒｉｅ−Ｃａｒｄｉｎｅ  ａｎｄ  Ｓｃｈｒａｖｅｎ、（１９９９）；Ｋａｎｅ  ｅｔ  ａｌ．、（２０００）；Ｍａｔｔｈｅｗ  ｅｔ  ａｌ．、（２００４））。ＴＣＲ−ＣＤ３クラスタ化およびコンフォメーション変化を伴って、ＴＣＲαβに結合するｐＭＨＣは、ＣＤ３シグナル伝達単位を介して細胞中に伝達される。多くの実験において、Ｔ細胞活性化には、ＣＤ３鎖（ＣＤ３ｚｚ、ＣＤ３ｅｇ、およびＣＤ３ｅｄ）の細胞質側末端内に位置する３つの異なる細胞内シグナル伝達モチーフによって調節されるＴＣＲ媒介シグナルのカスケードが伴うことが証明されている（Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（１８５）、（２０１０））。キメラ分子を用いた研究により、ＴＣＲのすべてのシグナル伝達鎖の細胞質側末端は独立して、ＴＣＲのαβ認識モダリティを迂回して、細胞傷害性および／またはサイトカイン産生に至るシグナルを伝達することができることが実証されている。しかしながら、実験結果に基づいて、ＣＤ３ゼータ鎖のみによるシグナルは、休止Ｔリンパ球を刺激するには不十分であること（Ｔｈｏｍａｓ  ｅｔ  ａｌ、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，（１９９５））、マウスの突然変異ＣＤ３ｅシグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞の不完全な機能を示すこと（Ｍａｔｔｈｅｗ  ｅｔ  ａｌ、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９３）、（２０１４））が、先に報告された。ＣＤ３ｅｇ鎖、ＣＤ３ｅｄ鎖、およびｚｚ鎖は、Ｔ細胞の機能への貢献、さらには相乗効果において相補的な役割を果たす（Ｂｏｒｒｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（１６３）、（１９９９））。
【０００３】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、結合ドメイン、スペーサドメイン、膜貫通ドメイン、および１つまたは２つの共刺激分子と連結されるＣＤ３ｚを含有する細胞内シグナル伝達ドメインを含む、モジュラ融合タンパク質である。ＣＡＲ構造は、「第１世代ＣＡＲ」と呼ばれるＣＤ３ζシグナル伝達ドメインのみを包含する初期の組成から著しく進化した。それ以来、Ｔ細胞の持続性および増殖を強化するために共刺激末端ドメインが追加され、第２世代ＣＡＲ（たとえば、ＣＤ３ζプラス４−１ＢＢシグナル伝達ドメインまたはＣＤ２８シグナル伝達ドメイン）および第３世代ＣＡＲ（たとえば、ＣＤ３ζプラス４−１ＢＢシグナル伝達ドメインおよびＣＤ２８シグナル伝達ドメイン）が生まれた。
【０００４】
ＣＡＲ  Ｔ細胞の養子移入は、血液由来腫瘍の治療において目覚ましい成功、顕著には、白血病におけるＣＤ１９  ＣＡＲの使用（Ｇｉｌｌ，Ｓ，ｅｔ  ａｌ、Ｂｌｏｏｄ  Ｒｅｖ、（２０１５））を示し、リンパ腫および骨髄腫を有する患者における効能が研究されている。さらに多数の臨床試験が固形腫瘍を中心に行われてきた。残念ながら、臨床結果はあまり望みを与えるものではない。これまで、報告されている最も肯定的な２つの試験では、ＧＤ２  ＣＡＲを使用して神経芽細胞腫（１１患者中３人が完全寛解）（Ｌｏｕｉｓ  ｅｔ  ａｌ、Ｂｌｏｏｄ（１１８）、（２０１１））を、およびＨＥＲ２  ＣＡＲを使用して肉腫（１７患者中４人が安定状態を示す）（Ａｈｍｅｄ  ｅｔ  ａｌ、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ（３３）、（２０１５））を標的とした。
【０００５】
患者の血清中での不良な輸送、限定的な持続性、およびＴ細胞阻害活性が、観察される有効性の欠如の一因となったことが示唆されている（Ｋｅｒｓｈａｗ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ（１２）、（２００６））。より良好な細胞殺傷効果、インビボでの持続性、および腫瘍微小環境に対するより良好な耐性を有する遺伝子改変Ｔ細胞の包括的機能を向上するための新規の設計への必要は依然として満たされていない。
【発明の概要】
【０００６】
前述のことを考慮すると、免疫療法を行うための代替の組成物および方法への必要が少なからず存在する。本開示の組成物および方法はこの必要に対処し、さらなる利点も提供する。本開示の様々な態様は、免疫細胞の活性を誘導するための系、組成物、および方法を提供する。
【０００７】
一態様において提供されるのは、免疫細胞および／または標的細胞の活性を誘導するための系であり、当該系は、（ａ）第１のエピトープへの特異的な結合を示す第１の抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）；ならびに（ｂ）第２のエピトープへの特異的な結合を示す第２の抗原結合ドメインを含む改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体を含み、ここで、上記第２の抗原結合ドメインは、（ｉ）Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される少なくとも１つのＴＣＲ鎖、（ｉｉ）表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／もしくはガンマ鎖、または（ｉｉｉ）ＣＤ３ゼータ鎖に連結される。
【０００８】
いくつかの実施形態において、第１のエピトープへの第１の抗原結合ドメインの結合、および／または第２のエピトープへの第２の抗原結合ドメインの結合は、系を発現する免疫細胞の免疫細胞活性を活性化する。
【０００９】
いくつかの実施形態において、２つ以上の抗原結合ドメインは、任意選択でタンデムに、（ｉ）Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される少なくとも１つのＴＣＲ鎖、（ｉｉ）表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／またはガンマ鎖、（ｉｉｉ）ＣＤ３ゼータ鎖に連結され、ここで、２つ以上の抗原結合ドメインの、それぞれのエピトープへの結合は、系を発現する免疫細胞の免疫細胞活性を活性化する。
【００１０】
いくつかの実施形態において、上記免疫細胞活性は、免疫細胞のクローン増殖；免疫細胞によるサイトカイン放出；免疫細胞の細胞傷害性；免疫細胞の増殖；免疫細胞の分化、脱分化、または分化転換；免疫細胞の移動および／または輸送；免疫細胞の疲弊および／または再活性化；ならびに免疫細胞による、他の細胞間分子、代謝物、化学物質、またはそれらの組み合わせの放出からなる群より選択される。
【００１１】
いくつかの実施形態において、第１のエピトープへの第１の抗原結合ドメインの結合、および第２のエピトープへの第２の抗原結合ドメインの結合は、系を発現する免疫細胞の細胞傷害性を活性化し、細胞傷害性は、第１のエピトープへの第１の抗原結合ドメインの結合のみ、または第２のエピトープへの第２の抗原結合ドメインの結合のみと比較して増強される。
【００１２】
いくつかの実施形態において、第１のエピトープへの第１の抗原結合ドメインの結合、および第２のエピトープへの第２の抗原結合ドメインの結合は、系を発現する免疫細胞の細胞傷害性を活性化し、第１のエピトープへの第１の抗原結合ドメインの結合のみ、または第２のエピトープへの第２の抗原結合ドメインの結合のみと比較して、上記細胞傷害性の持続性を増大する。
【００１３】
いくつかの実施形態において、２つ以上の抗原結合ドメインの、それぞれのエピトープへの結合は、系が被験体の免疫細胞において発現されるとき、上記系を発現する免疫細胞の細胞傷害性を活性化し、第１のエピトープへの第１の抗原結合ドメインの結合のみと比較して、上記細胞傷害性の持続性を増大する。
【００１４】
いくつかの実施形態において、上記改変ＴＣＲは、（ｉ）上記第２の抗原結合ドメイン、（ｉｉ）Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される少なくとも１つのＴＣＲ鎖、（ｉｉｉ）表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／もしくはガンマ鎖、または（ｉｖ）ＣＤ３ゼータ鎖に連結される第３の抗原結合ドメインを含む。
【００１５】
いくつかの実施形態において、上記ＣＡＲは、１または複数の追加の抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態において、上記１または複数の追加の抗原結合ドメインは、１または複数の追加のエピトープへの特異的な結合を示す。いくつかの実施形態において、上記１または複数の追加のエピトープは、第１のエピトープまたは第２のエピトープと同じである。いくつかの実施形態において、上記１または複数の追加のエピトープは、第１のエピトープおよび第２のエピトープと異なる。いくつかの実施形態において、上記１または複数の追加の抗原結合ドメインおよび第１の抗原結合ドメインは、タンデムに連結される。
【００１６】
いくつかの実施形態において、上記ＣＡＲの上記細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。いくつかの実施形態において、上記ＣＡＲの上記細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）を含む。
【００１７】
いくつかの実施形態において、上記ＣＡＲの上記細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）、Ｆｃε受容体（ＦｃεＲ）、Ｆｃα受容体（ＦｃαＲ）、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）、ＣＤ３、ＣＤ３ζ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２８、ＣＤ３２、ＣＤ４０Ｌ（ＣＤ１５４）、ＣＤ４５、ＣＤ６６ｄ、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳとしても公知である）、ＣＤ２４７ζ、ＣＤ２４７η、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＦＹＮ、ＬＡＴ、Ｌｃｋ、ＭＡＰＫ、ＭＨＣ複合体、ＮＦＡＴ、ＮＦ−κＢ、ＰＬＣ−γ、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、Ｃ３ｄ、およびＺａｐ７０のシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態において、上記細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメインを含む。
【００１８】
いくつかの実施形態において、上記ＣＡＲは、共刺激ドメインをさらに含む。いくつかの実施形態において、上記共刺激ドメインは、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、またはＴｏｌｌリガンド受容体のシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態において、上記共刺激ドメインは、２Ｂ４／ＣＤ２４４／ＳＬＡＭＦ４、４−１ＢＢ／ＴＮＦＳＦ９／ＣＤ１３７、Ｂ７−１／ＣＤ８０、Ｂ７−２／ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ１／ＰＤ−Ｌ１、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ６、Ｂ７−Ｈ７、ＢＡＦＦ−Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＢＡＦＦ／ＢＬｙＳ／ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＢＴＬＡ／ＣＤ２７２、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤ１５０、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２、ＣＤ２００、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＣＤ２７リガンド／ＴＮＦＳＦ７、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ２Ｆ−１０／ＳＬＡＭＦ９、ＣＤ３０リガンド／ＴＮＦＳＦ８、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＣＤ３００ａ／ＬＭＩＲ１、ＣＤ４、ＣＤ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＣＤ４８／ＳＬＡＭＦ２、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５３、ＣＤ５８／ＬＦＡ−３、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ８２／Ｋａｉ−１、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＣＤ９０／Ｔｈｙ１、ＣＤ９６、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＣＲＴＡＭ、ＣＴＬＡ−４、ＤＡＰ１２、デクチン−１／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６、ＤＲ３／ＴＮＦＲＳＦ２５、ＥｐｈＢ６、ＧＡＤＳ、Ｇｉ２４／ＶＩＳＴＡ／Ｂ７−Ｈ５、ＧＩＴＲリガンド／ＴＮＦＳＦ１８、ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８、ＨＬＡクラスＩ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＩＡ４、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、イカロス、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、インテグリンα４／ＣＤ４９ｄ、インテグリンα４β１、インテグリンα４β７／ＬＰＡＭ−１、ＩＰＯ−３、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＧ−３、ＬＡＴ、ＬＩＧＨＴ／ＴＮＦＳＦ１４、ＬＴＢＲ、Ｌｙ１０８、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、リンホトキシン−α／ＴＮＦ−β、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＴＢ−Ａ／ＳＬＡＭＦ６、ＯＸ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ４、ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＰＤ−１、ＰＤＣＤ６、ＰＤ−Ｌ２／Ｂ７−ＤＣ、ＰＳＧＬ１、ＲＥＬＴ／ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１）、ＳＬＡＭ／ＣＤ１５０、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ−７６、ＴＡＣＩ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＣＬ１Ａ、ＴＣＬ１Ｂ、ＴＩＭ−１／ＫＩＭ−１／ＨＡＶＣＲ、ＴＩＭ−４、ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５、ＴＮＦ  ＲＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＮＦ−α、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰ  Ｒ、ＶＬＡ１、およびＶＬＡ−６から選択される分子のシグナル伝達ドメインを含む。
【００１９】
いくつかの実施形態において、上記第１の抗原結合ドメインおよび／または上記第２の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ミニボディ、ダイアボディ、単一ドメイン抗体、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、またはラクダ科動物抗体の可変ドメイン（ＶＨＨ）を含む。
【００２０】
いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインのうちの少なくとも１つは、受容体を含む。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインのうちの少なくとも１つは、受容体のためのリガンドを含む。
【００２１】
いくつかの実施形態において、上記第１のエピトープおよび上記第２のエピトープは、異なる抗原上に存在する。いくつかの実施形態において、上記第１のエピトープおよび上記第２のエピトープは、共通の抗原上に存在する。
【００２２】
いくつかの実施形態において、少なくとも１つのエピトープは、１または複数の細胞表面抗原上に存在する。いくつかの実施形態において、上記１または複数の細胞表面抗原は、腫瘍関連抗原、チロシンキナーゼ受容体、セリンキナーゼ受容体、およびＧタンパク質共役受容体である。
【００２３】
いくつかの実施形態において、上記第１のエピトープおよび／または上記第２のエピトープは、普遍的抗原上に存在する。
【００２４】
いくつかの実施形態において、上記第１のエピトープおよび／または上記第２のエピトープは、ネオ抗原上に存在する。いくつかの実施形態において、上記第１のエピトープおよび／または上記第２のエピトープは、ネオエピトープである。
【００２５】
いくつかの実施形態において、上記第１のエピトープおよび／または上記第２のエピトープは、腫瘍関連抗原上に存在する。いくつかの実施形態において、腫瘍関連抗原は、７０７−ＡＰ、ビオチン化分子、ａ−アクチニン−４、ａｂｌ−ｂｃｒ  ａｌｂ−ｂ３（ｂ２ａ２）、ａｂｌ−ｂｃｒ  ａｌｂ−ｂ４（ｂ３ａ２）、アディポフィリン、ＡＦＰ、ＡＩＭ−２、アネキシンＩＩ、ＡＲＴ−４、ＢＡＧＥ、ＢＣＭＡ、ｂ−カテニン、ｂｃｒ−ａｂｌ、ｂｃｒ−ａｂｌ  ｐ１９０（ｅ１ａ２）、ｂｃｒ−ａｂｌ  ｐ２１０（ｂ２ａ２）、ｂｃｒ−ａｂｌ  ｐ２１０（ｂ３ａ２）、ＢＩＮＧ−４、ＣＡ−１２５、ＣＡＧ−３、ＣＡＩＸ、ＣＡＭＥＬ、カスパーゼ−８、ＣＤ１７１、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤＣ２７、ＣＤＫ−４、ＣＥＡ、ＣＬＣＡ２、ＣＬＬ−１、ＣＴＡＧ１Ｂ、Ｃｙｐ−Ｂ、ＤＡＭ−１０、ＤＡＭ−６、ＤＥＫ−ＣＡＮ、ＤＬＬ３、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ−２、ＥＧＰ−４０、ＥＬＦ２、Ｅｐ−ＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ｅｒｂ−Ｂ２、ｅｒｂ−Ｂ３、ｅｒｂ−Ｂ４、ＥＳ−ＥＳＯ−１ａ、ＥＴＶ６／ＡＭＬ、ＦＡＰ、ＦＢＰ、胎児アセチルコリン受容体、ＦＧＦ−５、ＦＮ、ＦＲ−α、Ｇ２５０、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＧＡＧＥ−３、ＧＡＧＥ−４、ＧＡＧＥ−５、ＧＡＧＥ−６、ＧＡＧＥ−７Ｂ、ＧＡＧＥ−８、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧｎＴ−Ｖ、Ｇｐ１００、ｇｐ７５、ＧＰＣ３、ＧＰＣ−２、Ｈｅｒ−２、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１−Ｒ１７０Ｉ、ＨＭＷ−ＭＡＡ、ＨＳＰ７０−２Ｍ、ＨＳＴ−２（ＦＧＦ６）、ＨＳＴ−２／ｎｅｕ、ｈＴＥＲＴ、ｉＣＥ、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ−１３Ｒα２、ＫＤＲ、ＫＩＡＡ０２０５、Ｋ−ＲＡＳ、Ｌ１−細胞接着分子、ＬＡＧＥ−１、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、ルイスＹ、Ｌ１−ＣＡＭ、ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−１０、ＭＡＧＥ−１２、ＭＡＧＥ−２、ＭＡＧＥ−３、ＭＡＧＥ−４、ＭＡＧＥ−６、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ｂ１、ＭＡＧＥ−Ｂ２、リンゴ酸酵素、マンマグロビン−Ａ、ＭＡＲＴ−１／メラン−Ａ、ＭＡＲＴ−２、ＭＣ１Ｒ、Ｍ−ＣＳＦ、メソテリン、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ２、ＭＵＭ−１、ＭＵＭ−２、ＭＵＭ−３、ミオシン、ＮＡ８８−Ａ、ネオ−ＰＡＰ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＰＭ／ＡＬＫ、Ｎ−ＲＡＳ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＯＡ１、ＯＧＴ、腫瘍胎児抗原（ｈ５Ｔ４）、ＯＳ−９、Ｐポリペプチド、Ｐ１５、Ｐ５３、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＡ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＰＴＰＲＫ、ＲＡＧＥ、ＲＯＲ１、ＲＵ１、ＲＵ２、ＳＡＲＴ−１、ＳＡＲＴ−２、ＳＡＲＴ−３、ＳＯＸ１０、ＳＳＸ−２、サバイビン、サバイビン−２Ｂ、ＳＹＴ／ＳＳＸ、ＴＡＧ−７２、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、ＴＧＦαＲＩＩ、ＴＧＦβＲＩＩ、ＴＰ１、ＴＲＡＧ−３、ＴＲＧ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ＴＲＰ−２／ＩＮＴ２、ＴＲＰ−２−６ｂ、チロシナーゼ、ＶＥＧＦ−Ｒ２、ＷＴ１、α−葉酸受容体、およびκ−軽鎖からなる群より選択される。
【００２６】
いくつかの実施形態において、少なくとも１つのエピトープは、免疫チェックポイント受容体または免疫チェックポイント受容体リガンド上に存在する。いくつかの実施形態において、上記免疫チェックポイント受容体または免疫チェックポイント受容体リガンドは、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、ＢＬＴＡ、ＣＤ４７、またはＣＤ４０である。
【００２７】
いくつかの実施形態において、少なくとも１つのエピトープは、サイトカインまたはサイトカイン受容体上に存在する。いくつかの実施形態において、上記サイトカインまたはサイトカイン受容体は、ＣＣＲ２ｂ、ＣＸＣＲ２（ＣＸＣＬ１受容体）、ＣＣＲ４（ＣＣＬ１７受容体）、Ｇｒｏ−ａ、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＩＬ−１２、ヘパラナーゼ、ＣＤ１３７Ｌ、ＬＥＭ、Ｂｃｌ−２、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１９、またはＣＣＬ２である。
【００２８】
いくつかの実施形態において、少なくとも１つのエピトープは、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）によって提示される抗原上に存在する。いくつかの実施形態において、ＭＨＣはＨＬＡクラス１である。いくつかの実施形態において、ＭＨＣはＨＬＡクラス２である。
【００２９】
別の態様において、提供されるのは、本開示の系を発現する単離された宿主細胞である。
【００３０】
いくつかの実施形態において、宿主細胞は、免疫細胞である。いくつかの実施形態において、免疫細胞は、リンパ球である。いくつかの実施形態において、リンパ球は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、リンパ球は、α／βＴ細胞および／またはγ／δＴ細胞である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、リンパ球は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。
【００３１】
いくつかの実施形態において、宿主細胞は、標的細胞中に同時に存在する２つの抗原に特異的な結合を示す。
【００３２】
別の態様において提供されるのは、少なくとも２つの外因的に導入される抗原結合ドメインを含む抗原特異的免疫細胞であり、当該抗原結合ドメインのうちの１つは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体に連結され、もう１つはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に連結され、ここで、免疫細胞は、少なくとも２つの外因的に導入される抗原結合ドメインによって認識される１または複数の抗原を発現する標的細胞に特異的に結合する。
【００３３】
いくつかの実施形態において、ＣＡＲに連結される上記抗原結合ドメインは主に、免疫細胞と標的細胞との間の相互作用を媒介し、ＴＣＲ複合体に連結される上記抗原結合ドメインは主に、免疫細胞と標的細胞との間の相互作用が生じるとき、免疫細胞活性を媒介する。
【００３４】
いくつかの実施形態において、上記免疫細胞活性は、免疫細胞のクローン増殖；免疫細胞によるサイトカイン放出；免疫細胞の細胞傷害性；免疫細胞の増殖；免疫細胞の分化、脱分化、または分化転換；免疫細胞の移動および／または輸送；免疫細胞の疲弊および／または再活性化；ならびに免疫細胞による、他の細胞間分子、代謝物、化学物質、またはそれらの組み合わせの放出からなる群より選択される。
【００３５】
いくつかの実施形態において、上記免疫細胞は、リンパ球である。いくつかの実施形態において、上記リンパ球は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、上記リンパ球は、α／βＴ細胞および／またはγ／δＴ細胞である。いくつかの実施形態において、上記Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、上記リンパ球は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。いくつかの実施形態において、２つ以上の抗原結合ドメインは、任意選択でタンデムに、（ｉ）Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される少なくとも１つのＴＣＲ鎖、（ｉｉ）表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／またはガンマ鎖、（ｉｉｉ）ＣＤ３ゼータ鎖に連結される。
【００３６】
別の態様において提供されるのは、免疫細胞の集団であり、ここで、個々の免疫細胞は本開示の系を発現し、上記免疫細胞の集団を被験体における標的細胞集団に暴露させると、上記免疫細胞の集団は、約２日以内に少なくとも５％の標的細胞を死滅に誘導する点において、特徴付けられる。いくつかの実施形態において、上記免疫細胞の集団は、最大で約１０１１個の細胞を含む。
【００３７】
いくつかの実施形態において、上記免疫細胞は、リンパ球を含む。いくつかの実施形態において、リンパ球は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、リンパ球は、α／βＴ細胞および／またはγ／δＴ細胞である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、リンパ球は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。
【００３８】
別の態様において提供されるのは、免疫細胞および／または標的細胞の活性を誘導する方法であり、当該方法は、（ａ）免疫細胞において系を発現する段階；および（ｂ）免疫細胞および／または標的細胞の上記活性を誘導する条件下で標的細胞を免疫細胞に接触させる段階を含み、ここで、免疫細胞において発現される系は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する第１の抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）；ならびに第２の抗原結合ドメインを含む改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体を含み、当該第２の抗原結合ドメインは、（ｉ）Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される少なくとも１つのＴＣＲ鎖、（ｉｉ）表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／またはガンマ鎖、または（ｉｉｉ）ＣＤ３ゼータ鎖に連結される。
【００３９】
いくつかの実施形態において、第１のエピトープへの第１の抗原結合ドメインの結合、および／または第２のエピトープへの第２の抗原結合ドメインの結合は、免疫細胞の細胞傷害性を活性化する。
【００４０】
いくつかの実施形態において、２つ以上の抗原結合ドメインは、任意選択でタンデムに、（ｉ）Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される少なくとも１つのＴＣＲ鎖、（ｉｉ）表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／またはガンマ鎖、（ｉｉｉ）ＣＤ３ゼータ鎖に連結される。
【００４１】
いくつかの実施形態において、第１のエピトープへの第１の抗原結合ドメインの結合、および第２のエピトープへの第２の抗原結合ドメインの結合は、免疫細胞の細胞傷害性を活性化し、細胞傷害性は、第１のエピトープへの第１の抗原結合ドメインの結合のみ、または第２のエピトープへの第２の抗原結合ドメインの結合のみと比較して増強される。
【００４２】
いくつかの実施形態において、第１のエピトープへの第１の抗原結合ドメインの結合、または第２の抗原結合ドメインの結合は、免疫細胞の細胞傷害性を活性化し、第１のエピトープへの第１の抗原結合ドメインの結合のみ、または第２のエピトープへの第２の抗原結合ドメインの結合のみと比較して、上記細胞傷害性の持続性を増大する。
【００４３】
いくつかの実施形態において、免疫細胞の細胞傷害性は、標的細胞の死滅を誘導する。いくつかの実施形態において、標的細胞は、がん細胞である。いくつかの実施形態において、標的細胞は、造血細胞である。いくつかの実施形態において、標的細胞は、固形腫瘍細胞である。いくつかの実施形態において、標的細胞は、心臓、血管、唾液腺、食道、胃、肝臓、胆嚢、膵臓、腸、結腸、直腸、肛門、内分泌腺、副腎、腎臓、尿管、膀胱、リンパ節、扁桃腺、咽頭扁桃腺、胸腺、脾臓、皮膚、筋肉、脳、脊髄、神経、卵巣、卵管、子宮、膣、乳腺、精巣、前立腺、陰茎、咽頭、喉頭、気管、気管支、肺、横隔膜、軟骨、靭帯、および腱のうちの１または複数において同定される細胞である。
【００４４】
いくつかの実施形態において、上記免疫細胞は、リンパ球である。いくつかの実施形態において、リンパ球は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、リンパ球は、α／βＴ細胞および／またはγ／δＴ細胞である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、リンパ球は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。
【００４５】
いくつかの実施形態において、２つ以上の抗原結合ドメインの、それぞれのエピトープへの結合は、系が被験体の免疫細胞において発現されるとき、上記系を発現する免疫細胞の細胞傷害性を活性化し、第１のエピトープへの第１の抗原結合ドメインの結合のみと比較して、上記細胞傷害性の持続性を増大する。
【００４６】
別の態様において提供されるのは、１または複数のポリヌクレオチドを含む組成物であり、当該１または複数のポリヌクレオチドは、（ａ）第１のエピトープに対して結合特異性を有する第１の抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）；ならびに（ｂ）第２のエピトープへの特異的な結合を示す第２の抗原結合ドメインを含む改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体をコードし、ここで、上記第２の抗原結合ドメインは、（ｉ）Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される少なくとも１つのＴＣＲ鎖、（ｉｉ）表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／もしくはガンマ鎖、または（ｉｉｉ）ＣＤ３ゼータ鎖に連結される。いくつかの実施形態において、１または複数のポリヌクレオチドは、それに動作可能に連結されるプロモータを含む。
【００４７】
別の態様において提供されるのは、改変免疫細胞を作製する方法であり、当該方法は、免疫細胞において本開示の組成物を発現することによって、上記免疫細胞を遺伝子改変し、それにより上記改変免疫細胞を作製する段階を含む。
【００４８】
別の態様において提供されるのは、被験体のがんを治療する方法であり、当該方法は、（ａ）第１の抗原結合ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）および第２の抗原結合ドメインを含む改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体を含む抗原特異的免疫細胞を被験体に投与する段階であって、ここで、上記被験体のがんの標的細胞は、第１および／または第２の抗原結合ドメインによって認識される１または複数の抗原を発現し、かつ免疫細胞は標的細胞に特異的に結合する段階、ならびに（ｂ）標的細胞に対する、免疫細胞の免疫細胞活性を誘導する条件下で、第１および／または第２の抗原結合ドメインを介して標的細胞を抗原特異的免疫細胞と接触させ、それによりがんの標的細胞の死滅を誘導する段階を含む。
【００４９】
別の態様において提供されるのは、被験体のがんを治療する方法であり、当該方法は、（ａ）抗原特異的免疫細胞を被験体に投与する段階であって、ここで、上記抗原特異的免疫細胞は、本開示の系を発現する遺伝子改変免疫細胞である段階、および（ｂ）上記被験体のがんの標的細胞に対する、免疫細胞の免疫細胞活性を誘導する条件下で、標的細胞を抗原特異的免疫細胞と接触させ、それによりがんの標的細胞の死滅を誘導する段階を含む。
【００５０】
いくつかの実施形態において、方法は、免疫細胞を遺伝子改変して上記抗原特異的免疫細胞を得る段階をさらに含む。
【００５１】
いくつかの実施形態において、上記免疫細胞活性は、免疫細胞のクローン増殖；免疫細胞によるサイトカイン放出；免疫細胞の細胞傷害性；免疫細胞の増殖；免疫細胞の分化、脱分化、または分化転換；免疫細胞の移動および／または輸送；免疫細胞の疲弊および／または再活性化；ならびに免疫細胞による、他の細胞間分子、代謝物、化学物質、またはそれらの組み合わせの放出からなる群より選択される。
【００５２】
いくつかの実施形態において、上記免疫細胞活性は、免疫細胞の細胞傷害性である。いくつかの実施形態において、標的細胞に対する免疫細胞の上記細胞傷害性は、上記被験体の上記がんの少なくとも１０％の低減をもたらす。いくつかの実施形態において、上記免疫細胞活性は、免疫細胞によるサイトカイン放出である。いくつかの実施形態において、第１の抗原結合ドメイン単独のみの結合、または第２の抗原結合ドメインの結合のみと比較して、第１および第２の抗原結合ドメインの両方が、それぞれのエピトープに結合するとき、免疫細胞活性の持続性は増大する。
【００５３】
いくつかの実施形態において、上記がんは、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、子宮頸癌、大腸癌、食道癌、胃癌、神経膠腫、頭頚部癌、腎臓癌、白血病、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、黒色腫、中皮腫、髄芽腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、直腸癌、皮膚癌、精巣癌、気管癌、および外陰部癌から選択される。
【００５４】
いくつかの実施形態において、上記免疫細胞は、リンパ球である。いくつかの実施形態において、リンパ球は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、リンパ球は、α／βＴ細胞および／またはγ／δＴ細胞である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、リンパ球は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。
【００５５】
別の態様において提供されるのは、式Ａ−Ｘ−Ｂ−Ｙ−Ｃ−Ｚ−Ｄを有する抗原結合分子であり、式中、Ａは、配列番号４７〜５６からなる群より選択される任意の１つに対して少なくとも８０％または９０％の同一性を有する配列を含み、Ｂは、配列番号５７〜６６からなる群より選択される任意の１つに対して少なくとも８０％または９０％の同一性を有する配列を含み、Ｃは、配列番号６７〜７６からなる群より選択される任意の１つに対して少なくとも８０％または９０％の同一性を有する配列を含み、Ｄは、配列番号７７〜８６からなる群より選択される任意の１つに対して少なくとも８０％または９０％の同一性を有する配列を含み、Ｘは、配列番号８７〜９６からなる群より選択される任意の１つに対して少なくとも８０％または９０％の同一性を有する配列を含み、Ｙは、配列番号９７〜１０６からなる群より選択される任意の１つに対して少なくとも８０％または９０％の同一性を有する配列を含み、かつ、Ｚは、配列番号１０７〜１１６からなる群より選択される任意の１つに対して少なくとも８０％または９０％の同一性を有する配列を含む。
【００５６】
いくつかの実施形態において、抗原結合分子は、３７℃で表面プラズモン共鳴法によって測定されるとき、１００ｎｍ、９０ｎｍ、８０ｎｍ、７０ｎｍ、６０ｎｍ、５０ｎｍ、４０ｎｍ、３０ｎｍ、２０ｎｍ、１０ｎｍ、または１ｎｍ、またはそれより低い、ヒトＢＣＭＡに対する結合親和性（ＫＤ）を示す。
【００５７】
いくつかの実施形態において、抗原結合分子は、配列番号１４〜２３からなる群より選択される任意の１つに対して少なくとも８０％または９０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、抗原結合分子は、配列番号１４〜２３からなる群より選択される配列を含む。
【００５８】
別の態様において提供されるのは、１または複数の抗原結合ドメインを含む改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体であり、ここで、上記１または複数の抗原結合ドメインは、（ｉｖ）Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される少なくとも１つのＴＣＲ鎖；（ｖ）表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／もしくはガンマ鎖；または（ｖｉ）ＣＤ３ゼータ鎖に連結され、かつ、１または複数の抗原結合ドメインのうちの少なくとも１つは、本開示の抗原結合分子を含む。
【００５９】
いくつかの実施形態において、１または複数の抗原結合ドメインのうちの少なくとも１つまたは２つは、配列番号３〜２３および３８〜４６からなる群より選択される任意の１つに対して少なくとも８０％または９０％の同一性を有する配列を含む。
【００６０】
いくつかの実施形態において、改変ＴＣＲ複合体は、２つ以上の抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態において、２つ以上の抗原結合ドメインは、ＴＣＲ複合体の別々の鎖に連結される。いくつかの実施形態において、２つ以上の抗原結合ドメインは、ＴＣＲ複合体の１本の鎖に連結される。いくつかの実施形態において、２つ以上の抗原結合ドメインは、ＴＣＲ複合体の１本の鎖にタンデムに連結される。いくつかの実施形態において、改変ＴＣＲ複合体は、ＴＣＲ複合体の別の鎖に連結される１または複数の抗原結合ドメインをさらに含む。
【００６１】
別の態様において提供されるのは、２つ以上のエピトープへの特異的結合を示す２つ以上の抗原結合ドメインを含む改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体であり、ここで、上記２つ以上の抗原結合ドメインは、（ｉ）Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される少なくとも１つのＴＣＲ鎖；（ｉｉ）表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／もしくはガンマ鎖；または（ｉｉｉ）ＣＤ３ゼータ鎖に連結される。
【００６２】
いくつかの実施形態において、２つ以上の抗原結合ドメインは、ＴＣＲ複合体の別々の鎖に連結される。いくつかの実施形態において、２つ以上の抗原結合ドメインは、ＴＣＲ複合体の１本の鎖に連結される。いくつかの実施形態において、２つ以上の抗原結合ドメインは、ＴＣＲ複合体の１本の鎖にタンデムに連結される。
【００６３】
いくつかの実施形態において、改変ＴＣＲ複合体は、ＴＣＲ複合体の別の鎖に連結される１または複数の抗原結合ドメインをさらに含む。
【００６４】
いくつかの実施形態において、２つ以上の抗原結合ドメインは、ＢＣＭＡに結合する。いくつかの実施形態において、２つ以上の抗原結合ドメインは、ＢＣＭＡの同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、２つ以上の抗原結合ドメインは、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂである。いくつかの実施形態において、２つ以上の抗原結合ドメインは、配列番号３〜２３のうちの任意の１つに対して少なくとも８０％の配列同一性を有する配列から選択される。
【００６５】
いくつかの実施形態において、２つ以上の抗原結合ドメインは、表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／またはガンマ鎖にタンデムに連結される。
【００６６】
別の態様において提供されるのは、本開示の改変ＴＣＲ複合体を含む抗原特異的免疫細胞である。
【００６７】
いくつかの実施形態において、抗原特異的免疫細胞は、それぞれのエピトープに特異的な結合を示す１または複数の抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をさらに含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲの１または複数の抗原結合ドメインは、タンデムに配置される。
【００６８】
いくつかの実施形態において、抗原特異的免疫細胞は、それぞれのエピトープに特異的な結合を示す１または複数の抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインをそれぞれが含む、２つ以上のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をさらに含む。
【００６９】
本明細書で開示される方法は、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、子宮頸癌、大腸癌、食道癌、胃癌、神経膠腫、頭頚部癌、腎臓癌、白血病、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、黒色腫、中皮腫、髄芽腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、直腸癌、皮膚癌、精巣癌、気管癌、および外陰部癌から選択されるがんを含むがこれらに限定されない、各種のがんの治療において、実用性を見出す。参照による引用
【００７０】
本明細書において言及されるすべての公報、特許、および出願特許は、各個別の公報、特許、または出願特許が具体的にかつ個別に参照により引用されることを示された場合と同じ程度に、本明細書において参照により引用される。
【図面の簡単な説明】
【００７１】
本発明の新規の特徴を、添付した特許請求の範囲において詳細に記述する。本発明の原理が用いられる例証的な実施形態を記述する以下の詳細な説明、および添付の図面を参照することにより、本発明の特徴および利点のよりよい理解が得られる。
【図１】黒色と白色の縞をつけた楕円ならびに黒色の楕円で示され、抗原、たとえば腫瘍関連抗原を結合することができる抗原結合ドメインを含むＣＡＲ−ＴＣＲ−Ｔ系の概略図を示す。
【図２Ａ】イプシロン鎖に融合された抗原結合ドメインを含む改変ＴＣＲ複合体を示す。
【図２Ｂ】デルタ鎖に融合された抗原結合ドメインを含む改変ＴＣＲ複合体を示す。
【図２Ｃ】ガンマ鎖に融合された抗原結合ドメインを含む改変ＴＣＲ複合体を示す。
【図２Ｄ】アルファ鎖に融合された抗原結合ドメインを含む改変ＴＣＲ複合体を示す。
【図２Ｅ】ベータ鎖に融合された抗原結合ドメインを含む改変ＴＣＲ複合体を示す。
【図２Ｆ】２つの異なる抗原結合ドメインを含む改変ＴＣＲ複合体を示す。第１の抗原結合ドメインは、第１のイプシロン鎖に融合され、第２の抗原結合ドメインは、第２のイプシロン鎖に融合される。
【図２Ｇ】２つの異なる抗原結合ドメインを含む改変ＴＣＲ複合体を示す。第１の抗原結合ドメインは、イプシロン鎖に融合され、第２の抗原結合ドメインは、ガンマ鎖に融合される。
【図２Ｈ】第１の抗原結合ドメイン、それが融合される第２の抗原結合ドメイン、次にそれが融合されるイプシロン鎖を含む改変ＴＣＲ複合体を示す。
【図２Ｉ】２つの異なる抗原結合ドメインを含む改変ＴＣＲ複合体を示す。第１の抗原結合ドメインは、アルファ鎖に融合され、第２の抗原結合ドメインは、ベータ鎖に融合される。
【図２Ｊ】２つの同一の抗原結合ドメインを含む改変ＴＣＲ複合体を示す。第１の抗原結合ドメインは、アルファ鎖に融合され、第２の抗原結合ドメインは、ベータ鎖に融合される。
【図２Ｋ】第１の抗原結合ドメイン、それが融合される第２の抗原結合ドメイン、次にそれが融合されるデルタ鎖を含む、改変ＴＣＲ複合体を示す。
【図２Ｌ】第１の抗原結合ドメイン、それが融合される第２の抗原結合ドメイン、次にそれが融合されるガンマ鎖を含む改変ＴＣＲ複合体を示す。
【図２Ｍ】第１の抗原結合ドメイン、それが融合される第２の抗原結合ドメイン、次にそれが融合されるアルファ鎖を含む、改変ＴＣＲ複合体を示す。
【図２Ｎ】第１の抗原結合ドメイン、それが融合される第２の抗原結合ドメイン、次にそれが融合されるベータ鎖を含むＴＣＲを含む改変ＴＣＲ複合体を示す。
【図２Ｏ】２つの異なる抗原結合ドメインを含む改変ＴＣＲ複合体を示す。第１の抗原結合ドメインは、イプシロン鎖に融合され、第２の抗原結合ドメインは、デルタ鎖に融合される。
【図２Ｐ】２つの異なる抗原結合ドメインを含む改変ＴＣＲ複合体を示す。第１の抗原結合ドメインは、デルタ鎖に融合され、第２の抗原結合ドメインは、ガンマ鎖に融合される。
【図２Ｑ】２つの異なる抗原結合ドメインを含む改変ＴＣＲ複合体を示す。第１の抗原結合ドメインは、アルファ鎖に融合され、第２の抗原結合ドメインは、イプシロン鎖に融合される。
【図２Ｒ】２つの異なる抗原結合ドメインを含む改変ＴＣＲ複合体を示す。第１の抗原結合ドメインは、ベータ鎖に融合され、第２の抗原結合ドメインは、イプシロン鎖に融合される。
【図２Ｓ】２つの異なる抗原結合ドメインを含む改変ＴＣＲ複合体を示す。第１の抗原結合ドメインは、アルファ鎖に融合され、第２の抗原結合ドメインは、ガンマ鎖に融合される。
【図２Ｔ】２つの異なる抗原結合ドメインを含む改変ＴＣＲ複合体を示す。第１の抗原結合ドメインは、ベータ鎖に融合され、第２の抗原結合ドメインは、ガンマ鎖に融合される。
【図２Ｕ】２つの異なる抗原結合ドメインを含む改変ＴＣＲ複合体を示す。第１の抗原結合ドメインは、アルファ鎖に融合され、第２の抗原結合ドメインは、デルタ鎖に融合される。
【図２Ｖ】２つの異なる抗原結合ドメインを含む改変ＴＣＲ複合体を示す。第１の抗原結合ドメインは、ベータ鎖に融合され、第２の抗原結合ドメインは、デルタ鎖に融合される。
【図３】膜貫通ドメインに融合された抗原結合ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメイン（たとえば、ＣＤ３−ゼータシグナル伝達鎖）を含む、ＣＡＲを示す。
【図４Ａ】第１の抗原結合ドメイン、それが融合される第２の抗原結合ドメイン、次にそれが融合されるイプシロン鎖を含む、改変ＴＣＲ複合体を示す。
【図４Ｂ】第１の抗原結合ドメイン、それが融合される第２の抗原結合ドメイン、次にそれが融合されるデルタ鎖を含む、改変ＴＣＲ複合体を示す。
【図４Ｃ】第１の抗原結合ドメイン、それが融合される第２の抗原結合ドメイン、次にそれが融合されるガンマ鎖を含む、改変ＴＣＲ複合体を示す。
【図４Ｄ】第１の抗原結合ドメイン、それが融合される第２の抗原結合ドメイン、それが融合される第３の抗原結合ドメイン、次にそれが融合されるイプシロン鎖を含む、改変ＴＣＲ複合体を示す。
【図４Ｅ】第１の抗原結合ドメイン、それが融合される第２の抗原結合ドメイン、それが融合される第３の抗原結合ドメイン、次にそれが融合されるデルタ鎖を含む、改変ＴＣＲ複合体を示す。
【図４Ｆ】第１の抗原結合ドメイン、それが融合される第２の抗原結合ドメイン、それが融合される第３の抗原結合ドメイン、次にそれが融合されるガンマ鎖を含む、改変ＴＣＲ複合体を示す。
【図４Ｇ】第１の抗原結合ドメイン、それが融合される第２の抗原結合ドメイン、次にそれが融合されるイプシロン鎖を含み、第３の抗原結合ドメイン、それが融合される第４の抗原結合ドメイン、次にそれが融合されるデルタ鎖も含む、改変ＴＣＲ複合体を示す。
【図４Ｈ】第１の抗原結合ドメイン、それが融合される第２の抗原結合ドメイン、次にそれが融合されるイプシロン鎖を含み、第３の抗原結合ドメイン、それが融合される第４の抗原結合ドメイン、次にそれが融合されるガンマ鎖も含む、改変ＴＣＲ複合体を示す。
【図４Ｉ】第１の抗原結合ドメイン、それが融合される第２の抗原結合ドメイン、次にそれが融合されるデルタ鎖を含み、第３の抗原結合ドメイン、それが融合される第４の抗原結合ドメイン、次にそれが融合されるガンマ鎖も含む、改変ＴＣＲ複合体を示す。
【図４Ｊ】第１の抗原結合ドメイン、それが融合される第２の抗原結合ドメイン、次にそれが融合されるイプシロン鎖を含み、第３の抗原結合ドメイン、それが融合されるガンマ鎖も含む、改変ＴＣＲ複合体を示す。
【図４Ｋ】第１の抗原結合ドメイン、それが融合される第２の抗原結合ドメイン、それが融合される第３の抗原結合ドメイン、次にそれが融合されるイプシロン鎖を含み、第４の抗原結合ドメイン、それが融合される第５の抗原結合ドメイン、それが融合される第６の抗原結合ドメイン、次にそれが融合されるデルタ鎖も含む、改変ＴＣＲ複合体を示す。
【図４Ｌ】第１の抗原結合ドメイン、それが融合される第２の抗原結合ドメイン、それが融合される第３の抗原結合ドメイン、次にそれが融合されるイプシロン鎖を含み、第４の抗原結合ドメイン、それが融合される第５の抗原結合ドメイン、それが融合される第６の抗原結合ドメイン、次にそれが融合されるガンマ鎖も含む、改変ＴＣＲ複合体を示す。
【図４Ｍ】第１の抗原結合ドメイン、それが融合される第２の抗原結合ドメイン、それが融合される第３の抗原結合ドメイン、次にそれが融合されるデルタ鎖を含み、第４の抗原結合ドメイン、それが融合される第５の抗原結合ドメイン、それが融合される第６の抗原結合ドメイン、次にそれが融合されるガンマ鎖も含む、改変ＴＣＲ複合体を示す。
【図５Ａ】イプシロン鎖に融合された第１の抗原結合ドメインを含む、改変ＴＣＲ複合体、ならびに膜貫通ドメインに融合された第２の抗原結合ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメイン（たとえば、ＣＤ３−ゼータシグナル伝達鎖）を含む、ＣＡＲを示す。
【図５Ｂ】デルタ鎖に融合された第１の抗原結合ドメインを含む、改変ＴＣＲ複合体、ならびに膜貫通ドメインに融合された第２の抗原結合ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメイン（たとえば、ＣＤ３−ゼータシグナル伝達鎖）を含む、ＣＡＲを示す。
【図５Ｃ】ガンマ鎖に融合された第１の抗原結合ドメインを含む、改変ＴＣＲ複合体、ならびに膜貫通ドメインに融合された第２の抗原結合ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメイン（たとえば、ＣＤ３−ゼータシグナル伝達鎖）を含む、ＣＡＲを示す。
【図５Ｄ】イプシロン鎖に融合された第１の抗原結合ドメイン、デルタ鎖に融合された第２の抗原結合ドメインを含む、改変ＴＣＲ複合体、ならびに膜貫通ドメインに融合された第３の抗原結合ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメイン（たとえば、ＣＤ３−ゼータシグナル伝達鎖）を含む、ＣＡＲを示す。
【図５Ｅ】イプシロン鎖に融合された第１の抗原結合ドメイン、ガンマ鎖に融合された第２の抗原結合ドメインを含む、改変ＴＣＲ複合体、ならびに膜貫通ドメインに融合された第３の抗原結合ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメイン（たとえば、ＣＤ３−ゼータシグナル伝達鎖）を含む、ＣＡＲを示す。
【図５Ｆ】デルタ鎖に融合された第１の抗原結合ドメイン、ガンマ鎖に融合された第２の抗原結合ドメインを含む、改変ＴＣＲ複合体、ならびに膜貫通ドメインに融合された第３の抗原結合ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメイン（たとえば、ＣＤ３−ゼータシグナル伝達鎖）を含む、ＣＡＲを示す。
【図５Ｇ】第１の抗原結合ドメイン、それが融合される第２の抗原結合ドメイン、次にそれが融合されるイプシロン鎖を含む、改変ＴＣＲ複合体、ならびに膜貫通ドメインに融合された第３の抗原結合ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメイン（たとえば、ＣＤ３−ゼータシグナル伝達鎖）を含む、ＣＡＲを示す。
【図５Ｈ】イプシロン鎖に融合された第１の抗原結合ドメイン含む、改変ＴＣＲ複合体、ならびに膜貫通ドメインに融合された第３の抗原結合ドメインに融合された第２の抗原結合ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメイン（たとえば、ＣＤ３−ゼータシグナル伝達鎖）を含む、ＣＡＲを示す。
【図６Ａ】抗ＢＣＭＡイプシロンＴＣＲのベクタ構造を示す。
【図６Ｂ】抗ＢＣＭＡ−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲのベクタ構造を示す。
【図６Ｃ】抗ＢＣＭＡまたはＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ、および抗ＣＤ１９またはＢＣＭＡ−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲのベクタ構造を示す。
【図６Ｄ】抗ＢＣＭＡまたはＣＤ１９ガンマまたはデルタＴＣＲ、および抗ＣＤ１９またはＢＣＭＡ−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲのベクタ構造を示す。
【図６Ｅ】タンデムの抗ＢＣＭＡイプシロンＴＣＲのベクタ構造を示す。
【図６Ｆ】タンデムの抗ＢＣＭＡイプシロンＴＣＲおよびタンデムの抗ＣＤ１９またはＢＣＭＡ−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲのベクタ構造を示す。
【図７】種々の腫瘍細胞および操作された細胞株でのＣＤ１９およびＢＣＭＡの発現レベルを示す。
【図８Ａ】形質導入後３日目の細胞傷害性アッセイの結果を示し、ここで、０．５：１、および３：１のエフェクタ細胞と標的細胞の比（Ｅ：Ｔ）で、イプシロンＴＣＲに抗ＢＣＭＡ抗体（ＢＣＭＡ１−１２）が融合された。
【図８Ｂ】形質導入後６日目の細胞傷害性アッセイの結果を示し、ここで、０．５：１のエフェクタ細胞と標的細胞の比（Ｅ：Ｔ）で、イプシロンＴＣＲに抗ＢＣＭＡ抗体（ＢＣＭＡ１−１２）が融合された。
【図８Ｃ】形質導入後６日目の細胞傷害性アッセイの結果を示し、ここで、０．５：１、および１．５：１のエフェクタ細胞と標的細胞の比（Ｅ：Ｔ）で、イプシロンＴＣＲに抗ＢＣＭＡ抗体（ＢＣＭＡ１−１２）が融合された。
【図８Ｄ】ＨＴＲＦを用いることによる、図８Ａの細胞傷害性アッセイから収集した上清中のＩＦＮγの量を示す。
【図８Ｅ】ＨＴＲＦを用いることによる、図８Ｂの細胞傷害性アッセイから収集した上清中のＩＦＮγの量を示す。
【図８Ｆ】ＨＴＲＦを用いることによる、図８Ｃの細胞傷害性アッセイから収集した上清中のＩＦＮγの量を示す。
【図９】トランスフェクション後６日目の細胞傷害性アッセイの結果を示し、ここで、０．３３：１のエフェクタ細胞と標的細胞の比（Ｅ：Ｔ）で、抗ＢＣＭＡ系：抗ＢＣＭＡ３−イプシロン−ＴＣＲ（ＢＣＭＡ３  ｅＴＣＲ）、抗ＢＣＭＡ２−イプシロン−ＴＣＲ（ＢＣＭＡ２  ｅＴＣＲ）、抗ＢＣＭＡ２−抗ＢＣＭＡ３−イプシロンＴＣＲ（タンデムのＢＣＭＡ２＆３  ｅＴＣＲ）、および抗ＢＣＭＡ１−抗ＢＣＭＡ２−抗ＢＣＭＡ３−ガンマＴＣＲ（タンデムのＢＣＭＡ１＆２＆３  ｇＴＣＲ）、ならびに形質導入されていない対照細胞を、ＲＰＭＩ−８２２６細胞（ＢＣＭＡ＋）と共培養した。
【図１０】トランスフェクション後６日目の細胞傷害性アッセイの結果を示し、ここで、１．５：１および０．５：１のエフェクタ細胞と標的細胞の比（Ｅ：Ｔ）で、抗ＢＣＭＡ系、抗ＢＣＭＡ２−抗ＢＣＭＡ３イプシロン−ＴＣＲ（タンデムのＢＣＭＡ２−３  ｅＴＣＲ）、抗ＢＣＭＡ４−抗ＢＣＭＡ５イプシロン−ＴＣＲ（タンデムのＢＣＭＡ４−５  ｅＴＣＲ）、抗ＢＣＭＡ２−抗ＢＣＭＡ３−抗ＢＣＭＡ４イプシロン−ＴＣＲ（タンデムのＢＣＭＡ２−３−４  ｅＴＣＲ）、ならびに形質導入されていない対照細胞を、ＣＨＯ／ＢＣＭＡ／ＣＤ１９細胞（ＢＣＭＡ＋ＣＤ１９＋）と共培養した。
【図１１Ａ】トランスフェクション後１１日目の細胞傷害性アッセイの結果を示し、ここで、１０：１および５：１のエフェクタ細胞と標的細胞の比（Ｅ：Ｔ）で、抗ＢＣＭＡおよび／または抗ＣＤ１９系：抗ＢＣＭＡ１イプシロン−ＴＣＲ（ＢＣＭＡ１  ｅＴＣＲ）、抗ＢＣＭＡ１  ４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータ−ＣＡＲ（ＢＣＭＡ１  ＢＢｚＣＡＲ）、抗ＣＤ１９イプシロン−ＴＣＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ）、および抗ＢＣＭＡ１−抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ（タンデムのＢＣＭＡ１／ＣＤ１９  ｅＴＣＲ）、ならびに形質導入されていない対照細胞を、ＮＣＩ−Ｈ９２９細胞（ＢＣＭＡ＋）と共培養した。
【図１１Ｂ】ＨＴＲＦを用いることによる、図１１Ａの細胞傷害性アッセイから収集した上清中のＩＦＮγの量を示す。
【図１２Ａ】トランスフェクション後６日目の細胞傷害性アッセイの結果を示し、ここで、２０：１、１０：１および５：１のエフェクタ細胞と標的細胞の比（Ｅ：Ｔ）で、抗ＢＣＭＡおよび／または抗ＣＤ１９系：抗ＢＣＭＡ１−イプシロン−ＴＣＲ（ＢＣＭＡ  ｅＴＣＲ）、抗ＢＣＭＡ１−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータ−ＣＡＲ（ＢＣＭＡ  ＢＢｚＣＡＲ）、抗ＣＤ１９−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＣＤ１９  ＢＢｚＣＡＲ）、抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ）、抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ１−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ  ＢＢｚＣＡＲ）、および抗ＢＣＭＡ１−イプシロンＴＣＲ／抗ＣＤ１９−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＢＣＭＡ  ｅＴＣＲ／ＣＤ１９  ＢＢｚＣＡＲ）、ならびに形質導入されていない対照細胞を、ＣＨＯ／ＢＣＭＡ／ＣＤ１９細胞（ＢＣＭＡ＋およびＣＤ１９＋）と共培養した。
【図１２Ｂ】ＨＴＲＦを用いることによって、図１２Ａの細胞傷害性アッセイから収集した上清中のＩＦＮγの量を示す。
【図１３Ａ】トランスフェクション後５日目の細胞傷害性アッセイの結果を示し、ここで、１０：１および５：１のエフェクタ細胞と標的細胞の比（Ｅ：Ｔ）で、抗ＢＣＭＡおよび／または抗ＣＤ１９系：抗ＣＤ１９イプシロン−ＴＣＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ）、抗ＢＣＭＡ１−抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ（タンデムのＢＣＭＡ１／ＣＤ１９  ｅＴＣＲ）、抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ１−デルタＴＣＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ１  ｄＴＣＲ）、抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ１−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ１  ＢＢｚＣＡＲ）、および抗ＢＣＭＡ１−イプシロンＴＣＲ／抗ＣＤ１９−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＢＣＭＡ１  ｅＴＣＲ／ＣＤ１９  ＢＢｚＣＡＲ）、ならびに形質導入されていない対照細胞を、ＣＨＯ−ＢＣＭＡ−ＣＤ１９細胞（ＢＣＭＡ＋およびＣＤ１９＋）と共培養した。
【図１３Ｂ】トランスフェクション後５日目の細胞傷害性アッセイの結果を示し、ここで、２．５：１および５：１のエフェクタ細胞と標的細胞の比（Ｅ：Ｔ）で、抗ＢＣＭＡおよび／または抗ＣＤ１９系：抗ＢＣＭＡ１−イプシロンＴＣＲ（ＢＣＭＡ１  ｅＴＣＲ）、抗ＢＣＭＡ１−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＢＣＭＡ１  ＢＢｚＣＡＲ）、抗ＢＣＭＡ１／抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ（タンデムのＢＣＭＡ１／ＣＤ１９  ｅＴＣＲ）、抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ１−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ１  ＢＢｚＣＡＲ）、および抗ＢＣＭＡ１−イプシロンＴＣＲ／抗ＣＤ１９−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＢＣＭＡ１  ｅＴＣＲ／ＣＤ１９  ＢＢｚＣＡＲ）、ならびに形質導入されていない対照細胞を、ＮＣＩ−Ｈ９２９細胞（ＢＣＭＡ＋）と共培養した。
【図１４Ａ】トランスフェクション後６日目の細胞傷害性アッセイの結果を示し、ここで、１．３：１のエフェクタ細胞と標的細胞の比（Ｅ：Ｔ）で、抗ＢＣＭＡおよび／または抗ＣＤ１９系：抗ＢＣＭＡ１イプシロン−ＴＣＲ（ＢＣＭＡ１  ｅＴＣＲ）、抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ１−ガンマＴＣＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ１  ｇＴＣＲ）、抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ１−デルタＴＣＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ１  ｄＴＣＲ）、抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ１−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ１  ＢＢｚＣＡＲ）、ならびに形質導入されていない対照細胞を、ＣＨＯ−ＢＣＭＡ１−ＣＤ１９細胞（ＢＣＭＡ＋およびＣＤ１９＋）と共培養した。
【図１４Ｂ】ＨＴＲＦを用いることによる、図１４Ａの細胞傷害性アッセイから収集した上清中のＩＦＮγの量を示す。
【図１４Ｃ】ＨＴＲＦを用いることによる、図１４Ａの細胞傷害性アッセイから収集した上清中のＴＮＦαの量を示す。
【図１５Ａ】トランスフェクション後６日目の細胞傷害性アッセイの結果を示し、ここで、１．３：１のエフェクタ細胞と標的細胞の比（Ｅ：Ｔ）で、抗ＢＣＭＡおよび／または抗ＣＤ１９系：抗ＢＣＭＡイプシロン−ＴＣＲ（ＢＣＭＡ  ｅＴＣＲ）、抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ  ＢＢｚＣＡＲ）、抗ＢＣＭＡおよび抗ＣＤ１９−イプシロン−ＴＣＲ（タンデムのＢＣＭＡ／ＣＤ１９  ｄＴＣＲ）、ならびに形質導入されていない対照細胞を、ＣＨＯ−ＢＣＭＡ−ＣＤ１９細胞（ＢＣＭＡ＋およびＣＤ１９＋）と共培養した。
【図１５Ｂ】ＨＴＲＦを用いることによる、図１５Ａの細胞傷害性アッセイから収集した上清中のＩＦＮγの量を示す。
【図１５Ｃ】ＨＴＲＦを用いることによる、図１５Ａの細胞傷害性アッセイから収集した上清中のＴＮＦαの量を示す。
【図１６Ａ】トランスフェクション後４日目の細胞傷害性アッセイの結果を示し、ここで、０．５：１のエフェクタ細胞と標的細胞の比（Ｅ：Ｔ）で、抗ＢＣＭＡ系：抗ＢＣＭＡ２イプシロン−ＴＣＲ（ＢＣＭＡ２  ｅＴＣＲ）、抗ＢＣＭＡ２−イプシロンＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ３−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＢＣＭＡ２  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ３  ＢＢｚＣＡＲ）、抗ＢＣＭＡ２−ガンマＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ３−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＢＣＭＡ２  ｇＴＣＲ／ＢＣＭＡ３  ＢＢｚＣＡＲ）、抗ＢＣＭＡ２−デルタＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ３−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＢＣＭＡ２  ｄＴＣＲ／ＢＣＭＡ３  ＢＢｚＣＡＲ）、ならびに形質導入されていない対照細胞を、ＲＰＭＩ−８２２６細胞（ＢＣＭＡ＋）と共培養した。
【図１６Ｂ】ＨＴＲＦを用いることによる、図１６Ａの細胞傷害性アッセイから収集した上清中のＩＦＮγの量を示す。
【図１７Ａ】トランスフェクション後６日目の細胞傷害性アッセイの結果を示し、ここで、０．３３：１のエフェクタ細胞と標的細胞の比（Ｅ：Ｔ）で、抗ＢＣＭＡ系：抗ＢＣＭＡ２−抗ＢＣＭＡ３イプシロン−ＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ２−抗ＢＣＭＡ３ガンマ−ＴＣＲ（タンデムのＢＣＭＡ２＆３  ｅＴＣＲ／ｇＴＣＲ）、抗ＢＣＭＡ２−抗ＢＣＭＡ３ガンマ−ＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ２−抗ＢＣＭＡ３  ４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（タンデムのＢＣＭＡ２＆３  ｇＴＣＲ／ＢＢｚＣＡＲ）、ならびに形質導入されていない対照細胞を、ＲＰＭＩ−８２２６細胞（ＢＣＭＡ＋）と共培養した。
【図１７Ｂ】ＨＴＲＦを用いることによる、図１７Ａの細胞傷害性アッセイから収集した上清中のＩＦＮγの量を示す。
【図１８Ａ】多発性骨髄腫の腫瘍異種移植片を有するＮＣＧマウスモデル（ＮＯＤ＿Ｐｒｋｄｃｅｍ２６Ｃｄ５２／ＮｊｕＣｒｌ）において評価した、三重特異性ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｔ細胞、三重特異性ＢＣＭＡ  ＴＣＲ−Ｔ細胞、および三重特異性ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−ＴＣＲ−Ｔ細胞のインビボ抗腫瘍効力を示す。
【図１８Ｂ】多発性骨髄腫の腫瘍異種移植片を有するＮＣＧマウスモデル（ＮＯＤ＿Ｐｒｋｄｃｅｍ２６Ｃｄ５２／ＮｊｕＣｒｌ）において評価した、三重特異性ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｔ細胞、三重特異性ＢＣＭＡ  ＴＣＲ−Ｔ細胞、および三重特異性ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−ＴＣＲ−Ｔ細胞のインビボ抗腫瘍効力を示す。
【図１９】ＯＶＣＡＲ−８異種移植片モデルにおいて評価した、抗ＭＳＬＮ／ＦＳＨＲ二重ＣＡＲ−Ｔ（ＭＳＬＮ  ＣＡＲ＋ＦＳＨＲ  ＣＡＲ）、抗ＭＳＬＮ／ＦＳＨＲ二重ｅＴＣＲ−Ｔ（ＭＳＬＮ  ｅＴＣＲ＋ＦＳＨＲ  ｅＴＣＲ）、および抗ＭＳＬＮ  ＣＡＲ／ＦＳＨＲ  ｅＴＣＲ−Ｔ（ＭＳＬＮ  ＣＡＲ＋ＦＳＨＲ  ｅＴＣＲ）のインビボ抗腫瘍力を示す。０日目に１０×１０６個のＯＶＣＡＲ−８細胞をＮＯＤ  ｓｃｉｄガンマ（ＮＳＧ）マウスに皮下移植した。腫瘍が１５０〜２００ｍｍ３になったとき、マウスを治療群にランダム化した。０．３３×１０６個のＣＡＲ陽性Ｔ細胞を２００μｌの投与量で、静脈内投与した。腫瘍細胞移植後約６０日間、マウスとマウスの腫瘍を観察した。
【発明を実施するための形態】
【００７２】
本明細書で開示されるいくつかの方法の実践では、別段の指示がない限り、当分野の技能範囲内である、免疫学、生化学、化学、分子生物学、微生物学、細胞生物学、ゲノミクス、および組換えＤＮＡの従来の手法を用いる。たとえば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ａｎｄ  Ｇｒｅｅｎ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（２０１２）；ｔｈｅ  ｓｅｒｉｅｓ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ，  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．）；ｔｈｅ  ｓｅｒｉｅｓ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｉｎｃ．），ＰＣＲ  ２：  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｍ．Ｊ．ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎ，Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ  ａｎｄ  Ｇ．Ｒ．Ｔａｙｌｏｒ  ｅｄｓ．（１９９５）），Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，ｅｄｓ．（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ａｎｄ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌｓ：Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ  ａｎｄ  Ｓｐｅｃｉａｌｉｚｅｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，６ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．（２０１０））を参照されたい。
【００７３】
本明細書および請求項において用いられるように、文脈上明確に別段の指示がない限り、単数形の「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、複数の指示対象を含む。たとえば、「抗原結合ドメイン」という用語は、複数の抗原結合ドメインを含む。
【００７４】
「約（ａｂｏｕｔ）」または「約（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」という用語は、当業者によって決定される特定の値の許容誤差の範囲内であることを意味し、許容誤差の範囲は、値を測定または決定する方法に部分的に依存することになり、すなわち、測定系の限界である。たとえば、「約（ａｂｏｕｔ）」は、当技術分野で通常実践されるように、１または１より多い標準偏差内であることを意味し得る。代替的には、「約（ａｂｏｕｔ）」は、所与の値の最大２０％まで、最大１０％まで、最大５％まで、または最大１％までの範囲を意味し得る。代替的には、特に生体系またはプロセスに関して、当該用語は、値の１桁以内、好ましくは５倍以内、より好ましくは２倍以内を意味し得る。特定の値が本出願および特許請求の範囲において記載される場合、別段に定めがない限り、当該特定の値の許容誤差の範囲内を意味する「ａｂｏｕｔ（約）」という用語が想定されるべきである。
【００７５】
本明細書で用いられるように、「細胞」は一般に、生体細胞を指す。細胞は、生体の基本的な構造的、機能的、かつ／または生物学的単位であり得る。細胞は、１または複数の細胞を有する任意の生物に由来し得る。いくつかの非限定的な例としては、原核細胞、真核細胞、細菌性細胞、古細菌細胞、単細胞真核生物の細胞、原生動物細胞、植物由来の細胞（たとえば、植物作物、果物、野菜、穀物、大豆、コーン、トウモロコシ、小麦、種子、トマト、米、カッサバ、サトウキビ、カボチャ、乾草、ジャガイモ、綿、大麻、タバコ、顕花植物、針葉樹、裸子植物、シダ類、ヒカゲノカズラ類、ツノゴケ類、苔類、コケ由来の細胞）、藻類細胞、（たとえば、ボツリオコッカス・ブラウニー（Ｂｏｔｒｙｏｃｏｃｃｕｓ  ｂｒａｕｎｉｉ）、コナミドリムシ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ  ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉ）、ナンノクロロプシス・ガディタナ（Ｎａｎｎｏｃｈｌｏｒｏｐｓｉｓｇａｄｉｔａｎａ）、クロレラ・ピレノイドーサ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｐｙｒｅｎｏｉｄｏｓａ）、ヤツマタモク（Ｓａｒｇａｓｓｕｍ  ｐａｔｅｎｓ  Ｃ．Ａｇａｒｄｈ）など）、海藻（たとえば、ケルプ）、真菌細胞（たとえば、酵母細胞、キノコ由来の細胞）、動物細胞、無脊椎動物由来の細胞（たとえば、ショウジョウバエ、刺胞動物、棘皮動物、線形動物など）、脊椎動物由来の細胞（たとえば、魚、両生類、爬虫類、鳥類、哺乳類）、哺乳類由来の細胞（たとえば、ブタ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、げっ歯類、ラット、マウス、非ヒト霊長類、ヒトなど）などが挙げられる。細胞は、天然の生物由来でないことがある（たとえば、細胞は合成で作製され得、人工細胞と呼ばれることがある）。
【００７６】
本明細書で用いられるように、「Ｔ細胞」または「Ｔリンパ球」という用語は、細胞媒介性免疫において中心的な役割を果たすリンパ球の一種を指す。Ｔ細胞は、Ｔ細胞受容体が細胞表面上に存在することによって、Ｂ細胞およびナチュラルキラー細胞などの他のリンパ球から区別され得る。
【００７７】
本明細書で用いられるように、「Ｔ細胞受容体」または「ＴＣＲ」という用語は、抗原の認識を担うＴ細胞またはＴリンパ球の表面上の分子を指す。ＴＣＲは、２つの異なるタンパク質鎖で構成されるヘテロ二量体である。いくつかの実施形態において、本開示のＴＣＲは、アルファ（α）鎖およびベータ（β）鎖からなり、αβＴＣＲと呼ばれる。αβＴＣＲは、細胞表面で主要組織適合性複合体分子（ＭＨＣ）に結合されるタンパク質から分解される抗原ペプチドを認識する。いくつかの実施形態において、本開示のＴＣＲは、ガンマ（γ）鎖およびデルタ（δ）鎖からなり、γδＴＣＲと呼ばれる。γδＴＣＲは、ＭＨＣから独立したやり方で、ペプチド抗原および非ペプチド抗原を認識する。γδＴ細胞は、脂質抗原の認識において主な役割を果たすことを示している。具体的には、ＴＣＲのγ鎖としては、Ｖγ２、Ｖγ３、Ｖγ４、Ｖγ５、Ｖγ８、Ｖγ９、Ｖγ１０、それらの機能的変異体、およびそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない；ＴＣＲのδ鎖としては、δ１、δ２、δ３、それらの機能的変異体、およびそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、γδＴＣＲは、Ｖγ２／Ｖδ１  ＴＣＲ、Ｖγ２／Ｖδ２  ＴＣＲ、Ｖγ２／Ｖδ３  ＴＣＲ、Ｖγ３／Ｖδ１  ＴＣＲ、Ｖγ３／Ｖδ２  ＴＣＲ、Ｖγ３／Ｖδ３  ＴＣＲ、Ｖγ４／Ｖδ１  ＴＣＲ、Ｖγ４／Ｖδ２  ＴＣＲ、Ｖγ４／Ｖδ３  ＴＣＲ、Ｖγ５／Ｖδ１  ＴＣＲ、Ｖγ５／Ｖδ２  ＴＣＲ、Ｖγ５／Ｖδ３  ＴＣＲ、Ｖγ８／Ｖδ１  ＴＣＲ、Ｖγ８／Ｖδ２  ＴＣＲ、Ｖγ８／Ｖδ３  ＴＣＲ、Ｖγ９／Ｖδ１  ＴＣＲ、Ｖγ９／Ｖδ２  ＴＣＲ、Ｖγ９／Ｖδ３  ＴＣＲ、Ｖγ１０／Ｖδ１  ＴＣＲ、Ｖγ１０／Ｖδ２  ＴＣＲ，および／またはＶγ１０／Ｖδ３  ＴＣＲであってよい。いくつかの例において、γδＴＣＲは、Ｖγ９／Ｖδ２  ＴＣＲ、Ｖγ１０／Ｖδ２  ＴＣＲ、および／またはＶγ２／Ｖδ２  ＴＣＲであってよい。
【００７８】
本明細書で用いられるように、「アルファベータＴ細胞」、「αβＴ細胞」、および「ＡＢ  Ｔ細胞」という用語は、交換可能に使用され得、αβＴＣＲまたはそれの変異体もしくは断片を含むＴ細胞（Ｔリンパ球）を指すのに対し、「ガンマデルタＴ細胞」、「γδＴ細胞」、および「ＧＤ  Ｔ細胞」という用語は、交換可能に使用され得、γδＴＣＲ、またはそれの変異体もしくは断片、たとえば、Ｖγ９δ２  Ｔ細胞、Ｖδ１  Ｔ細胞、Ｖδ３  Ｔ細胞、もしくはＶδ５  Ｔ細胞を含むＴ細胞（Ｔリンパ球）を指す。いくつかの実施形態において、γδＴ細胞は、Ｖγ２／Ｖδ１  Ｔ細胞、Ｖγ２／Ｖδ２  Ｔ細胞、Ｖγ２／Ｖδ３  Ｔ細胞、Ｖγ３／Ｖδ１  Ｔ細胞、Ｖγ３／Ｖδ２  Ｔ細胞、Ｖγ３／Ｖδ３  Ｔ細胞、Ｖγ４／Ｖδ１  Ｔ細胞、Ｖγ４／Ｖδ２  Ｔ細胞、Ｖγ４／Ｖδ３  Ｔ細胞、Ｖγ５／Ｖδ１  Ｔ細胞、Ｖγ５／Ｖδ２  Ｔ細胞、Ｖγ５／Ｖδ３  Ｔ細胞、Ｖγ８／Ｖδ１  Ｔ細胞、Ｖγ８／Ｖδ２  Ｔ細胞、Ｖγ８／Ｖδ３  Ｔ細胞、Ｖγ９／Ｖδ１  Ｔ細胞、Ｖγ９／Ｖδ２  Ｔ細胞、Ｖγ９／Ｖδ３  Ｔ細胞、Ｖγ１０／Ｖδ１  Ｔ細胞、Ｖγ１０／Ｖδ２  Ｔ細胞、および／またはＶγ１０／Ｖδ３  Ｔ細胞であってよい。いくつかの例において、γδＴ細胞は、Ｖγ９／Ｖδ２  Ｔ細胞、Ｖγ１０／Ｖδ２  Ｔ細胞、および／またはＶγ２／Ｖδ２  Ｔ細胞であってよい。
【００７９】
本明細書で用いられる「活性化」という用語およびその文法的相当語句は、細胞が休止状態から活性状態へ移行するプロセスを指し得る。このプロセスは、抗原への応答、遊走、および／または機能活性状態への表現型もしくは遺伝的変化を含み得る。たとえば、「活性化」という用語は、Ｔ細胞活性化の段階的プロセスを指し得る。いくつかの場合において、Ｔ細胞は、完全に活性化されるために、少なくとも２つのシグナルを必要とし得る。第１のシグナルは、抗原ＭＨＣ複合体によるＴＣＲの結合後、生じ得、第２のシグナルは、共刺激分子の結合によって生じ得る。いくつかの場合において、インビトロで、抗ＣＤ３は第１のシグナルを模倣し得、抗ＣＤ２８は第２のシグナルを模倣し得る。
【００８０】
本明細書で用いられる「抗原」という用語は、選択的結合剤によって結合されることができる分子またはそれらの断片を指す。例として、抗原は、受容体などの選択的結合剤によって結合され得るリガンドであり得る。いくつかの場合において、受容体は抗原として機能してよく、リガンドは選択的結合剤として機能してよい。別の例として、抗原は、免疫学的タンパク質（たとえば、抗体）などの選択的結合剤によって結合され得る抗原性分子であり得る。いくつかの場合において、免疫学的タンパク質は抗原として機能してよく、抗原性分子は選択的結合剤として機能してよい。抗原はまた、動物において使用されて、その抗原に結合することができる抗体を作製することができる、分子またはそれらの断片を指し得る。
【００８１】
本明細書で用いられる「エピトープ」という用語およびその文法的相当語句は、抗原結合ドメインによって認識され得る抗原の一部を指し得る。抗原結合ドメインは、たとえば、表面、たとえば、細胞表面（たとえば、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ＣＡＲ−Ｔ細胞、または操作された細胞）上に存在するタンパク質（たとえば、抗体、抗体断片）を含み得る。たとえば、エピトープは、ＴＣＲによって認識されるがんエピトープであり得る。抗原内の複数のエピトープも、認識され得る。エピトープはまた、突然変異され得る。
【００８２】
本明細書で用いられる「抗原結合分子」という用語は、抗原またはエピトープに特異的に結合する分子を指す。抗原結合分子の例としては、抗体およびそれらの誘導体、たとえば、それらの断片が挙げられるが、これらに限定されない。「特異的に結合する」によって、結合が抗原またはエピトープに対して選択的であり、望ましくない、または非特異的な相互作用から区別され得ることを意味する。
【００８３】
本明細書で用いられる「結合親和性」という用語は、結合ペアのメンバ、たとえば、抗原結合分子とその抗原、または受容体とそのリガンドの間の結合相互作用の強度を指す。
【００８４】
主題の抗体の、そのパートナに対する結合親和性は、ｋｏｎ、ｋｏｆｆ、またはＫＤによって特徴付けられてよい。本明細書で用いられる「ｋｏｎ」という用語は、抗体の抗原に対する結合の速度定数を指すことが意図される。本明細書で用いられる「ｋｏｆｆ」という用語は、抗体の抗体／抗原複合体からの解離の速度定数を指すことが意図される。本明細書で用いられる「ＫＤ」という用語は、抗体−抗原相互作用の平衡解離定数を指すことが意図される。本開示の目的で、ＫＤは、２つの動的速度定数ｋｏｎ／ｋｏｆｆの比と定義される。平衡解離定数が小さいほど、主題の抗体およびそのパートナは、より強く互いに結合する。
【００８５】
本明細書で用いられる「抗体」という用語は、免疫グロブリン様機能を有するタンパク質性結合分子を指す。抗体という用語は、抗体（たとえば、モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体）ならびにその誘導体、変異体、および断片を含む。抗体としては、異なるクラスの免疫グロブリン（Ｉｇ）（すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ）およびサブクラス（たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２など）が挙げられるが、これらに限定されない。それらの誘導体、変異体、または断片は、対応する抗体の結合特異性（たとえば、完全および／または部分的）を維持する、機能的誘導体または断片を指し得る。抗原結合断片としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、可変断片（Ｆｖ）、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ミニボディ、ダイアボディ、および単一ドメイン抗体（「ｓｄＡｂ」または「ナノボディ」または「ラクダ科動物」またはＶＨＨ）が挙げられる。抗体という用語は、最適化された、操作された、または化学的に共役された、抗体および抗体の抗原結合断片を含む。最適化された抗体の例としては、親和性成熟抗体が挙げられる。操作された抗体の例としては、Ｆｃ最適化抗体（たとえば、結晶化可能断片領域において最適化された抗体）および多重特異性抗体（たとえば、二重特異性抗体）が挙げられる。
【００８６】
本明細書で用いられる「抗原結合ドメイン」という用語は、抗原またはエピトープを結合することができる、タンパク質またはそれらの断片を指す。例として、抗原結合ドメインは、細胞受容体であり得る。例として、抗原結合ドメインは、操作された細胞受容体であり得る。例として、抗原結合ドメインは、可溶性受容体であり得る。いくつかの場合において、抗原結合ドメインは、細胞受容体によって結合されるリガンド、操作された細胞受容体、および／または可溶性受容体であり得る。
【００８７】
本明細書で用いられる「自家」という用語およびその文法的相当語句は、同じ個体に由来することを指し得る。たとえば、自家試料（たとえば、細胞）は、取り出され、処理され、それから後に、同じ被験体（たとえば、患者）に戻される試料を指し得る。プロセスに関して、自家は、試料（たとえば、細胞）のドナーおよび試料のレシピエントが同じ被験体ではない同種異系プロセスとは区別され得る。
【００８８】
本明細書で用いられる「がんネオ抗原」、「ネオ抗原」、および「ネオエピトープ」という用語、ならびにそれらの文法的相当語句は、変異していない正常な宿主ゲノムにおいてコードされない抗原を指し得る。いくつかの例において、「ネオ抗原」は、体細胞突然変異の結果として生じる腫瘍形成性のウイルスタンパク質または異常タンパク質のいずれかを表し得る。たとえば、ネオ抗原は、ウイルスタンパク質の活性による細胞機構の破壊によって生じ得る。別の例として、ネオ抗原は、場合によっては体細胞突然変異に至る可能性がある、発がん性化合物への暴露から生じ得る。この体細胞突然変異は、腫瘍／がんの形成に至り得る。
【００８９】
本明細書で用いられる「細胞傷害性」という用語は、細胞の正常状態における意図しないまたは望ましくない変性を指す。細胞の正常状態は、細胞傷害性組成物、薬剤、および／または条件に細胞が暴露されるより前に現れている、または存在する状態を指してもよい。正常状態にある細胞は、ホメオスタシスにあり得る。細胞の正常状態における意図しないまたは望ましくない変性は、たとえば、細胞死（たとえば、プログラムされた細胞死）、複製能の低下、膜の完全性などの細胞の完全性の低下、代謝活性の低下、発達可能性の低下、または本明細書で開示される細胞傷害性効果のうち任意のものの形で、現れ得る。
【００９０】
本明細書で用いられる「細胞傷害性を低減すること」および「細胞傷害性を低減する」という語句は、細胞傷害性組成物、薬剤、および／または条件に暴露されたときの、細胞の正常状態における意図しないまたは望ましくない変性の程度または頻度の低減を指す。この語句は、細胞傷害性組成物、薬剤、および／または条件に暴露される個々の細胞中の細胞傷害性の程度を低減すること、または、細胞傷害性組成物、薬剤、および／または条件に細胞の集団が暴露されるとき、細胞傷害性を示す集団の細胞の数を低減することを指し得る。
【００９１】
「発現」という用語は、ポリヌクレオチドがＤＮＡテンプレートから（たとえば、ｍＲＮＡまたは他のＲＮＡ転写物へ）転写される１または複数のプロセス、および／または転写されたｍＲＮＡがその後、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質に翻訳されるプロセスを指す。転写物およびコードされたポリペプチドは、集合的に「遺伝子産物」と呼ばれ得る。ポリヌクレオチドがゲノムＤＮＡに由来する場合、発現は、真核細胞におけるｍＲＮＡのスプライシングを含み得る。
【００９２】
「誘導体」、「変異体」、および「断片」という用語は、ポリペプチドに関して本明細書で使用されるとき、たとえば、アミノ酸配列、構造（たとえば、二次および／または三次）、活性（たとえば、酵素活性）、および／または機能のいずれかによって、野性型ポリペプチドに関連したポリペプチドを指す。野性型ポリペプチドと比較して、ポリペプチドの誘導体、変異体、および断片は、１または複数のアミノ酸変異（たとえば、突然変異、挿入、および欠失）、トランケーション、改変、またはそれらの組み合わせを含み得る。
【００９３】
本明細書で用いられる「パーセント（％）同一性」という用語は、最大パーセント同一性を達成するために、配列を整列させ、必要であればギャップを導入した後、参照配列のアミノ酸（または核酸）残基と同一である候補配列のアミノ酸（または核酸）残基のパーセンテージを指す（すなわち、最適な整列のために候補配列および参照配列の一方または両方においてギャップを導入し得、非相同配列は比較の目的で無視され得る）。パーセント同一性を決定する目的での整列は、当技術分野の範囲内である様々なやり方、たとえば、ＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ社）ソフトウェアなどの公に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成し得る。２つの配列のパーセント同一性は、ＢＬＡＳＴを使用して試験配列を比較配列に整列させ、比較配列の同じ位置にあるアミノ酸またはヌクレオチドと同一である、整列された試験配列中のアミノ酸またはヌクレオチドの数を決定し、同一であるアミノ酸またはヌクレオチドの数を比較配列中のアミノ酸またはヌクレオチドの数で割ることによって算出することができる。
【００９４】
「被験体」、「個体」、および「患者」という用語は、本明細書において交換可能に使用され、脊椎動物、好ましくはヒトなどの哺乳類を指す。哺乳類としては、ネズミ、サル、ヒト、家畜、スポーツ動物、およびペットが挙げられるが、これらに限定されない。組織、細胞、およびインビボで得られる、またはインビトロで培養される生物学的存在の、細胞の子孫も包含される。
【００９５】
本明細書で用いられるように、「治療」および「治療する」という用語は、治療効果および／または予防効果を含むがこれらに限定されない、有益なまたは望ましい結果を得るための手法を指す。たとえば、治療は本明細書で開示される系または細胞集団を投与することを含み得る。治療効果は、治療中の１または複数の疾患、状態、または症状における、治療に関連する任意の改善、またはそれらへの効果を指し得る。予防効果に関して、組成物は特定の疾患、状態、もしくは症状を発症するリスクのある被験体、または、疾患、状態、もしくは症状がまだ現れていないかもしれないが、疾患の生理学的症状のうちの１または複数を訴える被験体に投与され得る。
【００９６】
「治療効果」は、治療されている状態に変化がある場合、生じてよい。変化は、肯定的な変化であっても、否定的な変化であってよい。たとえば、「肯定的な効果」は、被験体における活性化されたＴ細胞の数の増大に相当してもよい。別の例において、「否定的な効果」は、被験体における腫瘍の量またはサイズの減少に相当してよい。治療されている状態における「変化」は、状態における、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、２５％、５０％、７５％、または１００％の変化を指してよい。変化は、個体において治療される状態の重症度の改善に、または、治療の投与の有りと無しでの、個体の集団での状態の改善の頻度における差異に基づき得る。同様に、本開示の方法は、「治療効果のある」量の細胞を被験体に投与することを含んでよい。「治療効果のある」という用語は、「治療効果を有する」に相当する定義を有すると理解されるべきである。
【００９７】
「有効量」または「治療効果のある量」という用語は、それを必要とする被験体に投与されたときに望ましい活性をもたらすのに十分な、組成物、たとえば、リンパ球（たとえば、Ｔリンパ球および／またはＮＫ細胞）などの免疫細胞を含む組成物の数量を指す。「治療効果のある」という用語は、本開示の方法によって治療される障害の症状発現を遅延し、進行を阻止し、少なくとも１つの症状を軽減または緩和するのに十分な組成物の数量を指し得る。
【００９８】
本明細書で用いられる「ＴＩＬ」または腫瘍浸潤リンパ球という用語およびその文法的相当語句は、腫瘍から単離される細胞を指し得る。ＴＩＬは、腫瘍内に見いだされる任意の細胞であり得る。たとえば、ＴＩＬは、腫瘍に遊走した細胞であり得る。ＴＩＬは、腫瘍に浸潤した細胞であり得る。ＴＩＬは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。ＴＩＬは、細胞の混合集団であり得る。ＴＩＬの集団は、表現型が異なる細胞、分化の程度が異なる細胞、系譜が異なる細胞、またはそれらの任意の組み合わせを含み得る。
【００９９】
「Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡまたはＢＣＭ）」という用語は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリメンバ１７（ＴＮＦＲＳＦ１７）としても公知であり、ヒトのＴＮＦＲＳＦ１７遺伝子によってコードされるタンパク質を指す。ＢＣＭＡは、成熟Ｂリンパ球において優先的に発現され、Ｂ細胞の発達および自己免疫応答に関して重要な役割を有することが証明されている。ＢＣＭＡはまた、腫瘍関連抗原とみなされており、ＢＣＭＡの異常発現も、いくつかのがん、ならびに自己免疫障害および感染性疾患に関連付けられている。
【０１００】
一態様において、本明細書において提供されるのは、式Ａ−Ｘ−Ｂ−Ｙ−Ｃ−Ｚ−Ｄを有する抗原結合分子である。いくつかの実施形態において、本開示は、式Ａ−Ｘ−Ｂ−Ｙ−Ｃ−Ｚ−Ｄを有する抗原結合分子を提供し、上記Ａは、配列番号４７〜５６からなる群より選択される任意の１つに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示は、式Ａ−Ｘ−Ｂ−Ｙ−Ｃ−Ｚ−Ｄを有する抗原結合分子を提供し、上記Ｂは、配列番号５７〜６６からなる群より選択される任意の１つに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示は、式Ａ−Ｘ−Ｂ−Ｙ−Ｃ−Ｚ−Ｄを有する抗原結合分子を提供し、上記Ｃは、配列番号６７〜７６からなる群より選択される任意の１つに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示は、式Ａ−Ｘ−Ｂ−Ｙ−Ｃ−Ｚ−Ｄを有する抗原結合分子を提供し、上記Ｄは、配列番号７７〜８６からなる群より選択される任意の１つに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示は、式Ａ−Ｘ−Ｂ−Ｙ−Ｃ−Ｚ−Ｄを有する抗原結合分子を提供し、上記Ｘは、配列番号８７〜９６からなる群より選択される任意の１つに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示は、式Ａ−Ｘ−Ｂ−Ｙ−Ｃ−Ｚ−Ｄを有する抗原結合分子を提供し、上記Ｙは、配列番号９７〜１０６からなる群より選択される任意の１つに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示は、式Ａ−Ｘ−Ｂ−Ｙ−Ｃ−Ｚ−Ｄを有する抗原結合分子を提供し、上記Ｚは、配列番号１０７〜１１６からなる群より選択される任意の１つに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有する配列を含む。
表１  抗原結合分子のＡの配列
【表１】
2021528049.tif 000003
表２  抗原結合分子のＢの配列
【表２】
2021528049.tif 000004
表３  抗原結合分子のＣの配列
【表３】
2021528049.tif 000005
表４  抗原結合分子のＤの配列
【表４】
2021528049.tif 000006
表５  抗原結合分子のＸの配列
【表５】
2021528049.tif 000007
表６  抗原結合分子のＹの配列
【表６】
2021528049.tif 000008
表７  抗原結合分子のＺの配列
【表７】
2021528049.tif 000009
【０１０１】
いくつかの実施形態において、本開示は、式Ａ−Ｘ−Ｂ−Ｙ−Ｃ−Ｚ−Ｄを有する抗原結合分子提供し、式中、Ａは、配列番号４７〜５６からなる群より選択される任意の１つに対して少なくとも８０％または９０％の同一性を有する配列を含み、Ｂは、配列番号５７〜６６からなる群より選択される任意の１つに対して少なくとも８０％または９０％の同一性を有する配列を含み、Ｃは、配列番号６７〜７６からなる群より選択される任意の１つに対して少なくとも８０％または９０％の同一性を有する配列を含み、Ｄは、配列番号７７〜８６からなる群より選択される任意の１つに対して少なくとも８０％または９０％の同一性を有する配列を含み、Ｘは、配列番号８７〜９６からなる群より選択される任意の１つに対して少なくとも８０％または９０％の同一性を有する配列を含み、Ｙは、配列番号９７〜１０６からなる群より選択される任意の１つに対して少なくとも８０％または９０％の同一性を有する配列を含み、かつ、Ｚは、配列番号１０７〜１１６からなる群より選択される任意の１つに対して少なくとも８０％または９０％の同一性を有する配列を含む。
【０１０２】
いくつかの実施形態において、抗原結合分子は、ヒトＢＣＭＡに対する結合親和性（ＫＤ）を示す。いくつかの実施形態において、ＫＤは、３７℃で表面プラズモン共鳴法によって測定されるとき、１００ｎｍより低い、９０ｎｍ、８０ｎｍ、７０ｎｍ、６０ｎｍ、５０ｎｍ、４０ｎｍ、３０ｎｍ、２０ｎｍ、１０ｎｍ、または１ｎｍ、またはそれより低い。
【０１０３】
いくつかの実施形態において、抗原結合分子は、配列番号１４〜２３からなる群より選択される任意の１つに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、抗原結合分子は、配列番号１４〜２３からなる群より選択される配列を含む。
【０１０４】
一態様において、本開示は、エピトープへの特異的結合を示す抗原結合ドメインを含む改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体を提供し、ここで、抗原結合ドメインは、（ｉ）ＴＣＲのアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される少なくとも１つのＴＣＲ鎖；（ｉｉ）表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／もしくはガンマ鎖；または（ｉｉｉ）ＣＤ３ゼータ鎖に連結される。
【０１０５】
いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、相互作用する対の一方のメンバを含み得る。たとえば、抗原結合ドメインは、受容体およびリガンドを含む相互作用する対の一方のメンバ、またはそれの断片であってよい。受容体もしくはリガンドのいずれか、またはそれの断片は、抗原結合ドメインと呼ばれてよい。抗原結合ドメインと呼ばれない他方のメンバは、抗原結合ドメインが特異的に結合するエピトープを含み得る。
【０１０６】
ＴＣＲ複合体の抗原結合ドメインの非限定的な例としては、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはそれらの機能的誘導体、変異体、または断片が挙げられるが、これらに限定されず、断片としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ミニボディ、ダイアボディ、および重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、ラクダ科動物由来ナノボディの可変ドメイン（ＶＨＨ）などの単一ドメイン抗体が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、ＴＣＲ複合体の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、Ｆｖ、およびｓｃＦｖのうちの少なくとも１つを含む。いくつかの実施形態において、ＴＣＲ複合体の抗原結合ドメインは、抗体ミメティックを含む。抗体ミメティックは、抗体と同等の親和性で標的分子を結合し得る分子を指し、単鎖結合分子、シトクロムｂ５６２ベースの結合分子、フィブロネクチンまたはフィブロネクチン様タンパク質足場（たとえば、アドネクチン）、リポカリン足場、カリックスアレーン足場、Ａドメイン、およびその他の足場を含む。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、膜貫通受容体、またはそれの任意の誘導体、変異体、または断片を含む。たとえば、抗原結合ドメインは、膜貫通受容体の少なくともリガンド結合ドメインを含み得る。
【０１０７】
いくつかの実施形態において、本明細書において提供されるのは、１または複数の抗原結合ドメインを含む改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体であり、ここで、上記１または複数の抗原結合ドメインは、（ｉ）Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される少なくとも１つのＴＣＲ鎖；（ｉｉ）表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／もしくはガンマ鎖；または（ｉｉｉ）ＣＤ３ゼータ鎖に連結され、かつ、１または複数の抗原結合ドメインのうちの少なくとも１つまたは２つは、本明細書で説明される抗原結合分子を含む。
【０１０８】
いくつかの実施形態において、改変ＴＣＲ複合体の少なくとも１つの抗原結合ドメインは、配列番号３〜２３、および３８〜４６からなる群より選択される任意の１つに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有する配列を含む。
【０１０９】
いくつかの実施形態において、ＴＣＲ複合体の抗原結合ドメインは、単一ドメイン抗体を含む。いくつかの実施形態において、上記単一ドメイン抗体は、本明細書で開示される抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂである。いくつかの実施形態において、上記抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３〜２３から選択される任意の１つに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、上記抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３〜２３から選択される任意の１つの配列を含む。
【０１１０】
改変ＴＣＲ複合体の抗原結合ドメインは、ＴＣＲ複合体の任意のメンバに連結され得る。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、ＴＣＲ鎖、ＣＤ３鎖、またはＣＤ３ゼータ鎖のうちの少なくとも１つに連結され得る。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、ＴＣＲ、たとえば、ＴＣＲ−イプシロン、ＴＣＲ−デルタ、ＴＣＲ−ガンマ、ＴＣＲ−アルファ、またはＴＣＲ−ベータの膜貫通受容体に連結され得る。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、ＣＤ３鎖、たとえば、ＣＤ３−イプシロン、ＣＤ３−デルタ、またはＣＤ３−ガンマに連結され得る。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、ＣＤ３ゼータ鎖に連結され得る。
【０１１１】
本開示の改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体は、第２のエピトープへの結合を示す第２の抗原結合ドメインを含み得る。第２の抗原結合ドメインは、エピトープに結合し得る任意のタンパク質または分子を含み得る。ＴＣＲ複合体の第２の抗原結合ドメインの非限定的な例としては、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはそれらの機能的誘導体、変異体、または断片が挙げられるが、これらに限定されず、断片としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ミニボディ、ダイアボディ、および重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、ラクダ科動物由来ナノボディの可変ドメイン（ＶＨＨ）などの単一ドメイン抗体が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、ＴＣＲ複合体の第２の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、Ｆｖ、およびｓｃＦｖのうちの少なくとも１つを含む。いくつかの実施形態において、ＴＣＲ複合体の第２の抗原結合ドメインは、抗体ミメティックを含む。抗体ミメティックは、抗体と同等の親和性で標的分子を結合し得る分子を指し、単鎖結合分子、シトクロムｂ５６２ベースの結合分子、フィブロネクチンまたはフィブロネクチン様タンパク質足場（たとえば、アドネクチン）、リポカリン足場、カリックスアレーン足場、Ａドメイン、およびその他の足場を含む。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、膜貫通受容体、またはそれの任意の誘導体、変異体、または断片を含む。たとえば、抗原結合ドメインは、膜貫通受容体の少なくともリガンド結合ドメインを含み得る。
【０１１２】
いくつかの実施形態において、ＴＣＲ複合体の第２の抗原結合ドメインは、本明細書で開示される抗原結合分子を含む。いくつかの実施形態において、ＴＣＲ複合体の第２の抗原結合ドメインは、単一ドメイン抗体を含む。いくつかの実施形態において、上記単一ドメイン抗体は抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂである。いくつかの実施形態において、上記抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３〜２３から選択される任意の１つに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、上記抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３〜２３から選択される任意の１つの配列を含む。いくつかの実施形態において、ＴＣＲ複合体の第２の抗原結合ドメインは、配列番号３８〜４６からなる群より選択される任意の１つに対して少なくとも８０％または９０％の同一性を有する配列を含む。
【０１１３】
第２の抗原結合ドメインは、ＴＣＲ複合体の任意のメンバに連結され得る。いくつかの実施形態において、第２の抗原結合ドメインは、ＴＣＲ鎖、表面抗原分類３（ＣＤ３）鎖、またはＣＤ３ゼータ鎖のうちの少なくとも１つに連結され得る。第２の抗原結合ドメインは、ＴＣＲ、たとえば、ＴＣＲ−イプシロン、ＴＣＲ−デルタ、ＴＣＲ−ガンマ、ＴＣＲ−アルファ、またはＴＣＲ−ベータの膜貫通受容体に連結され得る。第２の抗原結合ドメインは、ＣＤ３鎖、たとえば、ＣＤ３−イプシロン、ＣＤ３−デルタ、またはＣＤ３−ガンマに連結され得る。第２の抗原結合ドメインは、ＣＤ３ゼータ鎖に連結され得る。
【０１１４】
いくつかの実施形態において、２つ以上の抗原結合ドメインは、ＴＣＲ複合体の別々の鎖に連結される。いくつかの実施形態において、２つ以上の抗原結合ドメインは、ＴＣＲ複合体の１本の鎖に連結される。任意の数の抗原結合ドメインが、本開示の改変ＴＣＲ複合体において使用され得、抗原結合ドメインの数は、１、２、または３に限定されない。
【０１１５】
いくつかの実施形態において、２つ以上の抗原結合ドメインは、同じ抗原結合ドメインであり得る。たとえば、２つ以上の抗原結合ドメインは、同じリガンドに結合することができる同一の分子であってよい。いくつかの実施形態において、２つ以上の抗原結合ドメインは、異なる抗原結合ドメインであり得る。たとえば、２つ以上の抗原結合ドメインは、同じリガンドまたは異なるリガンドに結合することができる異なる分子であってよい。
【０１１６】
いくつかの実施形態において、２つ以上の抗原結合ドメインは、（ｉ）Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される少なくとも１つのＴＣＲ鎖、（ｉｉ）表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／もしくはガンマ鎖、または（ｉｉｉ）ＣＤ３ゼータ鎖に、タンデムに連結される。いくつかの実施形態において、２つ以上の抗原結合ドメインは、表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／またはガンマ鎖のうちの少なくとも１つに、タンデムに連結される。いくつかの実施形態において、２つ以上の抗原結合ドメインは、ＴＣＲ複合体の別々の鎖にタンデムに連結される。いくつかの実施形態において、２つ以上の抗原結合ドメインは、改変ＴＣＲ複合体の１本の鎖にタンデムに連結される。いくつかの実施形態において、２つ以上の抗原結合ドメインは、改変ＴＣＲ複合体の２本以上の鎖にタンデムに連結される。
【０１１７】
いくつかの実施形態において、本開示の改変ＴＣＲ複合体は、２つ以上のｓｄＡｂを含み、当該２つ以上のｓｄＡｂは、（ｉ）Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される少なくとも１つのＴＣＲ鎖、（ｉｉ）表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／もしくはガンマ鎖、または（ｉｉｉ）ＣＤ３ゼータ鎖に連結される。いくつかの実施形態において、本開示の改変ＴＣＲ複合体は、２つ以上のｓｄＡｂを含み、当該２つ以上のｓｄＡｂは、（ｉ）Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される少なくとも１つのＴＣＲ鎖、（ｉｉ）表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／もしくはガンマ鎖、または（ｉｉｉ）ＣＤ３ゼータ鎖に、タンデムに連結される。いくつかの実施形態において、本開示の改変ＴＣＲ複合体は、改変ＴＣＲ複合体の１本の鎖にタンデムに連結される２つ以上のｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態において、本開示の改変ＴＣＲ複合体は、改変ＴＣＲ複合体の２本以上の鎖にタンデムに連結される２つ以上のｓｄＡｂを含む。
【０１１８】
いくつかの実施形態において、本開示の改変ＴＣＲ複合体は、２つ以上の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含み、当該２つ以上の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、（ｉ）Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される少なくとも１つのＴＣＲ鎖、（ｉｉ）表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／もしくはガンマ鎖、または（ｉｉｉ）ＣＤ３ゼータ鎖に、タンデムに連結される。いくつかの実施形態において、２つ以上の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは同じ配列を有する。いくつかの実施形態において、２つ以上の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは異なる配列を有する。いくつかの実施形態において、本開示の改変ＴＣＲ複合体は、ＴＣＲ複合体の１本の鎖にタンデムに連結される２つ以上の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態において、本開示の改変ＴＣＲ複合体は、ＴＣＲ複合体の２本以上の鎖にタンデムに連結される２つ以上の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む。
【０１１９】
いくつかの実施形態において、本開示の改変ＴＣＲ複合体は、本明細書で開示される２つ以上の抗ＢＣＭＡ抗原結合分子を含み、当該２つ以上の抗ＢＣＭＡ抗原結合分子は、（ｉ）Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される少なくとも１つのＴＣＲ鎖、（ｉｉ）表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／もしくはガンマ鎖、または（ｉｉｉ）ＣＤ３ゼータ鎖に、タンデムに連結される。いくつかの実施形態において、本開示の改変ＴＣＲ複合体は、２つ以上の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含み、当該２つ以上の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、（ｉ）Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される少なくとも１つのＴＣＲ鎖、（ｉｉ）表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／もしくはガンマ鎖、または（ｉｉｉ）ＣＤ３ゼータ鎖に、タンデムに連結され、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３〜２３から選択される任意の１つに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、２つ以上の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは同じ配列を有し、配列は、配列番号３〜２３から選択される任意の１つに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有する。いくつかの実施形態において、２つ以上の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは異なる配列を有し、配列は、配列番号３〜２３から選択される任意の１つに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有する。いくつかの実施形態において、本開示の改変ＴＣＲ複合体は、ＴＣＲ複合体の１本の鎖にタンデムに連結される２つ以上の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含み、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３〜２３から選択される任意の１つに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示の改変ＴＣＲ複合体は、ＴＣＲ複合体の２本以上の鎖にタンデムに連結される２つ以上の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含み、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３〜２３から選択される任意の１つに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有する配列を含む。
【０１２０】
いくつかの実施形態において、改変ＴＣＲ複合体の２つ以上の抗原結合ドメインは、異なる抗原上に存在するエピトープに結合し得る。いくつかの実施形態において、改変ＴＣＲ複合体の２つ以上の抗原結合ドメインは、共通の抗原上に存在するエピトープに結合し得る。いくつかの実施形態において、２つ以上の抗原結合ドメインは、２つ以上のエピトープへの特異的結合を示す。いくつかの実施形態において、２つ以上の抗原結合ドメインは、同じエピトープへの特異的結合を示す。
【０１２１】
したがって、本明細書においてさらに提供されるのは、２つ以上のエピトープへの特異的結合を示す２つ以上の抗原結合ドメインを含む改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体であり、ここで、上記２つ以上の抗原結合ドメインは、（ｉ）Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される少なくとも１つのＴＣＲ鎖；（ｉｉ）表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／もしくはガンマ鎖；または（ｉｉｉ）ＣＤ３ゼータ鎖に連結される。いくつかの実施形態において、２つ以上の抗原結合ドメインのうちの少なくとも１つまたは２つは、本明細書で開示される抗原結合ドメインまたは抗原結合分子から選択される。
【０１２２】
いくつかの実施形態において、改変ＴＣＲ複合体の抗原結合ドメインが結合するエピトープは、１または複数の細胞表面抗原上に存在してよい。１または複数の細胞表面抗原は、チロシンキナーゼ受容体、セリンキナーゼ受容体、ヒスチジンキナーゼ受容体、およびＧタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）などであり得る。
【０１２３】
いくつかの実施形態において、改変ＴＣＲ複合体の抗原結合ドメインが結合するエピトープは、免疫チェックポイント受容体または免疫チェックポイント受容体リガンド上に存在してよい。いくつかの実施形態において、免疫チェックポイント受容体または免疫チェックポイント受容体リガンドは、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、ＢＬＴＡ、ＣＤ４７、またはＣＤ４０であり得る。
【０１２４】
いくつかの実施形態において、改変ＴＣＲ複合体の抗原結合ドメインが結合するエピトープは、サイトカインまたはサイトカイン受容体上に存在してよい。サイトカイン受容体は、たとえば、ＣＣＲ２ｂ、ＣＸＣＲ２（ＣＸＣＬ１受容体）、ＣＣＲ４（ＣＣＬ１７受容体）、Ｇｒｏ−ａ、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＩＬ−１２、ヘパラナーゼ、ＣＤ１３７Ｌ、ＬＥＭ、Ｂｃｌ−２、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１９、またはＣＣＬ２であり得る。
【０１２５】
いくつかの実施形態において、改変ＴＣＲ複合体の抗原結合ドメインが結合するエピトープは、腫瘍関連抗原上に存在してよい。エピトープは、たとえば、腫瘍エピトープであってよい。腫瘍関連抗原は、７０７−ＡＰ、ビオチン化分子、ａ−アクチニン−４、ａｂｌ−ｂｃｒ  ａｌｂ−ｂ３（ｂ２ａ２）、ａｂｌ−ｂｃｒ  ａｌｂ−ｂ４（ｂ３ａ２）、アディポフィリン、ＡＦＰ、ＡＩＭ−２、アネキシンＩＩ、ＡＲＴ−４、ＢＡＧＥ、ＢＣＭＡ、ｂ−カテニン、ｂｃｒ−ａｂｌ、ｂｃｒ−ａｂｌ  ｐ１９０（ｅ１ａ２）、ｂｃｒ−ａｂｌ  ｐ２１０（ｂ２ａ２）、ｂｃｒ−ａｂｌ  ｐ２１０（ｂ３ａ２）、ＢＩＮＧ−４、ＣＡ−１２５、ＣＡＧ−３、ＣＡＩＸ、ＣＡＭＥＬ、カスパーゼ−８、ＣＤ１７１、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤＣ２７、ＣＤＫ−４、ＣＥＡ、ＣＬＣＡ２、ＣＬＬ−１、ＣＴＡＧ１Ｂ、Ｃｙｐ−Ｂ、ＤＡＭ−１０、ＤＡＭ−６、ＤＥＫ−ＣＡＮ、ＤＬＬ３、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ−２、ＥＧＰ−４０、ＥＬＦ２、Ｅｐ−ＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ｅｒｂ−Ｂ２、ｅｒｂ−Ｂ３、ｅｒｂ−Ｂ４、ＥＳ−ＥＳＯ−１ａ、ＥＴＶ６／ＡＭＬ、ＦＡＰ、ＦＢＰ、胎児アセチルコリン受容体、ＦＧＦ−５、ＦＮ、ＦＲ−α、Ｇ２５０、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＧＡＧＥ−３、ＧＡＧＥ−４、ＧＡＧＥ−５、ＧＡＧＥ−６、ＧＡＧＥ−７Ｂ、ＧＡＧＥ−８、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧｎＴ−Ｖ、Ｇｐ１００、ｇｐ７５、ＧＰＣ３、ＧＰＣ−２、Ｈｅｒ−２、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１−Ｒ１７０Ｉ、ＨＭＷ−ＭＡＡ、ＨＳＰ７０−２Ｍ、ＨＳＴ−２（ＦＧＦ６）、ＨＳＴ−２／ｎｅｕ、ｈＴＥＲＴ、ｉＣＥ、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ−１３Ｒα２、ＫＤＲ、ＫＩＡＡ０２０５、Ｋ−ＲＡＳ、Ｌ１−細胞接着分子、ＬＡＧＥ−１、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、ルイスＹ、Ｌ１−ＣＡＭ、ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−１０、ＭＡＧＥ−１２、ＭＡＧＥ−２、ＭＡＧＥ−３、ＭＡＧＥ−４、ＭＡＧＥ−６、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ｂ１、ＭＡＧＥ−Ｂ２、リンゴ酸酵素、マンマグロビン−Ａ、ＭＡＲＴ−１／メラン−Ａ、ＭＡＲＴ−２、ＭＣ１Ｒ、Ｍ−ＣＳＦ、メソテリン、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ２、ＭＵＭ−１、ＭＵＭ−２、ＭＵＭ−３、ミオシン、ＮＡ８８−Ａ、ネオ−ＰＡＰ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＰＭ／ＡＬＫ、Ｎ−ＲＡＳ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＯＡ１、ＯＧＴ、腫瘍胎児抗原（ｈ５Ｔ４）、ＯＳ−９、Ｐポリペプチド、Ｐ１５、Ｐ５３、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＡ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＰＴＰＲＫ、ＲＡＧＥ、ＲＯＲ１、ＲＵ１、ＲＵ２、ＳＡＲＴ−１、ＳＡＲＴ−２、ＳＡＲＴ−３、ＳＯＸ１０、ＳＳＸ−２、サバイビン、サバイビン−２Ｂ、ＳＹＴ／ＳＳＸ、ＴＡＧ−７２、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、ＴＧＦαＲＩＩ、ＴＧＦβＲＩＩ、ＴＰ１、ＴＲＡＧ−３、ＴＲＧ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ＴＲＰ−２／ＩＮＴ２、ＴＲＰ−２−６ｂ、チロシナーゼ、ＶＥＧＦ−Ｒ２、ＷＴ１、α−葉酸受容体、およびκ−軽鎖からなる群より選択され得る。いくつかの実施形態において、改変ＴＣＲ複合体の２つ以上の抗原結合ドメインが結合するエピトープは、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＰＣ３、ＧＰＣ−２、ＤＬＬ３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ１２３、ＣＬＬ−１、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＨＥＲ２、ＭＳＬＮ、ＰＳＭＡ、ＣＥＡ、ＧＤ２、ＩＬ１３Ｒα２、ＣＡＩＸ、Ｌ１−ＣＡＭ、ＣＡ１２５、ＣＤ１３３、ＦＡＰ、ＣＴＡＧ１Ｂ、ＭＵＣ１、ＦＲ−α、ＣＤ７０、ＣＤ１７１、ＲＯＲ１、およびそれらの任意の組み合わせであり得る。
【０１２６】
いくつかの実施形態において、改変ＴＣＲ複合体の抗原結合ドメインのうちの少なくとも１つは、ＢＣＭＡ上に存在するエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、改変ＴＣＲ複合体の２つ以上の抗原結合ドメインは、ＢＣＭＡ上に存在するエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、改変ＴＣＲ複合体の２つ以上の抗原結合ドメインは、ＢＣＭＡの同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、改変ＴＣＲ複合体の２つ以上の抗原結合ドメインは、ＢＣＭＡの異なるエピトープに結合する。
【０１２７】
いくつかの実施形態において、改変ＴＣＲ複合体の２つ以上の抗原結合ドメインは、（ｉ）Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される少なくとも１つのＴＣＲ鎖、（ｉｉ）表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／もしくはガンマ鎖、または（ｉｉｉ）ＣＤ３ゼータ鎖に、タンデムに連結され、結合ドメインのうちの少なくとも１つは、ＢＣＭＡに結合し得る。いくつかの実施形態において、改変ＴＣＲ複合体の２つ以上の抗原結合ドメインは、（ｉ）Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される少なくとも１つのＴＣＲ鎖、（ｉｉ）表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／もしくはガンマ鎖、または（ｉｉｉ）ＣＤ３ゼータ鎖に、タンデムに連結され、抗原結合ドメインのうちの２つ以上は、ＢＣＭＡに結合し得る。いくつかの実施形態において、改変ＴＣＲ複合体の２つ以上の抗原結合ドメインは、（ｉ）Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される少なくとも１つのＴＣＲ鎖、（ｉｉ）表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／もしくはガンマ鎖、または（ｉｉｉ）ＣＤ３ゼータ鎖に、タンデムに連結され、２つ以上の抗原結合ドメインは、ＢＣＭＡの同じエピトープに結合し得る。いくつかの実施形態において、ＴＣＲ複合体の２つ以上の抗原結合ドメインは、（ｉ）Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される少なくとも１つのＴＣＲ鎖、（ｉｉ）表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／もしくはガンマ鎖、または（ｉｉｉ）ＣＤ３ゼータ鎖に、タンデムに連結され、２つ以上の抗原結合ドメインは、ＢＣＭＡの異なるエピトープに結合し得る。
【０１２８】
いくつかの実施形態において、改変ＴＣＲ複合体の抗原結合ドメインが結合するエピトープは、ネオ抗原上に存在してよい。たとえば、エピトープは、ネオエピトープであってよい。
【０１２９】
ネオ抗原およびネオエピトープは一般に、場合によっては抗腫瘍Ｔ細胞応答を誘発する腫瘍特異的突然変異を指す。たとえば、これらの内因性突然変異は、全エキソーム解析法を用いて同定され得る。Ｔｒａｎ  Ｅ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｍｕｔａｔｉｏｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ＣＤ４＋Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ａ  ｐａｔｉｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｃａｎｃｅｒ，"Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３４４：６４１−６４４（２０１４）。抗原結合ドメイン、たとえば、主題のＣＡＲまたは改変ＴＣＲ複合体の抗原結合ドメインは、腫瘍特異的ネオ抗原への特異的結合を示し得る。改変ＴＣＲ複合体の抗原結合ドメインによって結合されるネオ抗原は、標的細胞上で発現され得、たとえば、任意の内因性遺伝子における突然変異によってコードされるネオ抗原およびネオエピトープである。いくつかの場合において、２つ以上の抗原結合ドメインは、突然変異遺伝子によってコードされるネオ抗原またはネオエピトープを結合する。遺伝子は、ＡＢＬ１、ＡＣＯｌ１９９７、ＡＣＶＲ２Ａ、ＡＦＰ、ＡＫＴ１、ＡＬＫ、ＡＬＰＰＬ２、ＡＮＡＰＣ１、ＡＰＣ、ＡＲＩＤ１Ａ、ＡＲ、ＡＲ−ｖ７、ＡＳＣＬ２、β２Μ、ＢＲＡＦ、ＢＴＫ、Ｃ１５ＯＲＦ４０、ＣＤＨ１、ＣＬＤＮ６、ＣＮＯＴ１、ＣＴ４５Ａ５、ＣＴＡＧ１Ｂ、ＤＣＴ、ＤＫＫ４、ＥＥＦ１Ｂ２、ＥＥＦ１ＤＰ３、ＥＧＦＲ、ＥＩＦ２Ｂ３、ｅｎｖ、ＥＰＨＢ２、ＥＲＢＢ３、ＥＳＲ１、ＥＳＲＰ１、ＦＡＭ１１ＩＢ、ＦＧＦＲ３、ＦＲＧ１Ｂ、ＧＡＧＥ１、ＧＡＧＥ１０、ＧＡＴＡ３、ＧＢＰ３、ＨＥＲ２、ＩＤＨ１、ＪＡＫ１、ＫＩＴ、ＫＲＡＳ、ＬＭＡＮ１、ＭＡＢＥＢ１６、ＭＡＧＥＡ１、ＭＡＧＥＡ１０、ＭＡＧＥＡ４、ＭＡＧＥＡ８、ＭＡＧＥＢ１７、ＭＡＧＥＢ４、ＭＡＧＥＣ１、ＭＥＫ、ＭＬＡＮＡ、ＭＬＬ２、ＭＭＰ１３、ＭＳＨ３、ＭＳＨ６、ＭＹＣ、ＮＤＵＦＣ２、ＮＲＡＳ、ＮＹ−ＥＳＯ、ＰＡＧＥ２、ＰＡＧＥ５、ＰＤＧＦＲａ、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＭＥＬ、ｐｏｌタンパク質、ＰＯＬＥ、ＰＴＥＮ、ＲＡＣ１、ＲＢＭ２７、ＲＮＦ４３、ＲＰＬ２２、ＲＵＮＸ１、ＳＥＣ３１Ａ、ＳＥＣ６３、ＳＦ３Ｂ１、ＳＬＣ３５Ｆ５、ＳＬＣ４５Ａ２、ＳＭＡＰ１、ＳＭＡＰ１、ＳＰＯＰ、ＴＦＡＭ、ＴＧＦＢＲ２、ＴＨＡＰ５、ＴＰ５３、ＴＴＫ、ＴＹＲ、ＵＢＲ５、ＶＨＬ、およびＸＰＯＴからなる群より選択され得る。
【０１３０】
いくつかの実施形態において、改変ＴＣＲ複合体の抗原結合ドメインが結合するエピトープは、ストローマ上に存在してよい。ストローマは一般に、とりわけ、生体細胞、組織、または器官の接続的および機能的支持を提供する組織を指す。ストローマは、腫瘍微小環境のストローマであり得る。エピトープは、ストローマ抗原上に存在してよい。そのような抗原は、腫瘍微小環境のストローマ上にあり得る。ネオ抗原およびネオエピトープは、たとえば、腫瘍内皮細胞、腫瘍脈管構造、腫瘍線維芽細胞、腫瘍周皮細胞、腫瘍ストローマ、および／または腫瘍間葉系細胞上に存在し得る。抗原の例としては、ＣＤ３４、ＭＣＳＰ、ＦＡＰ、ＣＤ３１、ＰＣＮＡ、ＣＤ１１７、ＣＤ４０、ＭＭＰ４、およびテネイシンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３１】
いくつかの実施形態において、エピトープは、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）によって提示される抗原上に存在し得る。ＭＨＣは、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩまたはクラスＩＩであり得る。ＨＬＡは、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｆ、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−ＤＰ、ＨＬＡ−ＤＱ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＭ、またはＨＬＡ−ＤＯであり得る。いくつかの実施形態において、エピトープは、ＨＬＡ−Ａ＊０１、ＨＬＡ−Ａ＊０２、ＨＬＡ−Ａ＊０３、ＨＬＡ−Ａ＊１１、ＨＬＡ−Ａ＊２３、ＨＬＡ−Ａ＊２４、ＨＬＡ−Ａ＊２５、ＨＬＡ−Ａ＊２６、ＨＬＡ−Ａ＊２９、ＨＬＡ−Ａ＊３０、ＨＬＡ−Ａ＊３１、ＨＬＡ−Ａ＊３２、ＨＬＡ−Ａ＊３３、またはＨＬＡ−Ａ＊２４、ＨＬＡ−Ｂ＊２７、ＨＬＡ−Ｂ＊３５、ＨＬＡ−Ｂ＊４８、およびＨＬＡ−Ｂ＊５５など上に存在し得る。
【０１３２】
いくつかの実施形態において、エピトープは、可溶性であり得る（たとえば、細胞に結合されない）。いくつかの場合において、抗原は可溶性、たとえば、可溶性抗原であり得る。エピトープは、普遍的抗原上に存在してよい。いくつかの場合において、改変ＴＣＲ複合体の抗原結合ドメインは、複数のエピトープ、たとえば、複数の特異性に結合し得る。
【０１３３】
いくつかの実施形態において、改変ＴＣＲ複合体は、ＣＤ３−イプシロン鎖に融合された抗原結合ドメインを含む、図２Ａ。いくつかの実施形態において、改変ＴＣＲ複合体は、ＣＤ３−デルタ鎖に融合された抗原結合ドメインを含む、図２Ｂ。いくつかの実施形態において、改変ＴＣＲ複合体は、ＣＤ３−ガンマ鎖に融合された抗原結合ドメインを含む、図２Ｃ。いくつかの実施形態において、改変ＴＣＲ複合体は、ＴＣＲ−アルファ鎖に融合された抗原結合ドメインを含む、図２Ｄ。いくつかの実施形態において、改変ＴＣＲ複合体は、ＴＣＲ−ベータ鎖に融合された抗原結合ドメインを含む、図２Ｅ。いくつかの実施形態において、改変ＴＣＲ複合体は、ＴＣＲ−ガンマ鎖に融合された抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態において、改変ＴＣＲ複合体は、ＴＣＲ−デルタ鎖に融合された抗原結合ドメインを含む。
【０１３４】
本明細書で開示される改変ＴＣＲ複合体は、１より多い抗原結合ドメイン、たとえば、少なくとも２つの抗原結合ドメイン（たとえば、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、または１０個の抗原結合ドメイン）を含む。いくつかの実施形態において、主題の系の改変ＴＣＲ複合体は、少なくとも２つの抗原結合ドメインを含む。少なくとも２つの抗原結合ドメインは、同じ抗原結合ドメインであり得る。たとえば、２つの抗原結合ドメインは、同じリガンドに結合することができる同一の分子であってよい。少なくとも２つの抗原結合ドメインは、異なる抗原結合ドメインであり得る。たとえば、２つの抗原結合ドメインは、同じまたは異なるリガンドに結合することができる異なる分子であってよい。いくつかの場合において、改変ＴＣＲは、（ｉ）第２の抗原結合ドメイン、（ｉｉ）ＴＣＲのアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖のうち任意のもの、（ｉｉｉ）表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／もしくはガンマ鎖、または（ｉｖ）ＣＤ３ゼータ鎖に連結される第３の抗原結合ドメインを含む。
【０１３５】
いくつかの実施形態において、第１の抗原結合ドメインは、第１のＣＤ３−イプシロン鎖に融合され、第２の抗原結合ドメインは、ＴＣＲ複合体の第２のＣＤ３イプシロン鎖に融合される、図２Ｆ。いくつかの実施形態において、第１の抗原結合ドメインは、ＣＤ３−イプシロン鎖に融合され、第２の抗原結合ドメインは、ＣＤ３−ガンマ鎖に融合される、図２Ｇ。いくつかの実施形態において、第１および第２の抗原結合ドメインは同じ鎖に連結される。たとえば、本明細書で開示される改変ＴＣＲ複合体は、第１の抗原結合ドメイン、それが融合される第２の抗原結合ドメイン、次にそれが融合されるＣＤ３−イプシロン鎖を含み得る、図２Ｈ。いくつかの実施形態において、第１の抗原結合ドメインは、ＴＣＲ−アルファ鎖に融合され、第２の抗原結合ドメインは、ＴＣＲ−ベータ鎖に融合される。第１および第２の抗原結合ドメインは、黒色の楕円および黒色と白色の縞をつけた楕円によって表されるように、異なる抗原結合ドメインであってよい（図２Ｉ）。第１および第２の抗原結合ドメインは、同様の陰影をつけた楕円によって表されるように、同じ抗原結合ドメインであってよい（図２Ｊ）。
【０１３６】
いくつかの実施形態において、本明細書で開示される改変ＴＣＲ複合体は、第１の抗原結合ドメイン、それが融合される第２の抗原結合ドメイン、次にそれが融合されるＣＤ３−デルタ鎖を含む、図２Ｋ。いくつかの実施形態において、本明細書で開示される改変ＴＣＲ複合体は、第１の抗原結合ドメイン、それが融合される第２の抗原結合ドメイン、次にそれが融合されるＣＤ３−ガンマ鎖を含む、図２Ｌ。いくつかの実施形態において、本明細書で開示される改変ＴＣＲ複合体は、第１の抗原結合ドメイン、それが融合される第２の抗原結合ドメイン、次にそれが融合されるＴＣＲ−アルファ鎖を含む、図２Ｍ。いくつかの実施形態において、本明細書で開示される改変ＴＣＲ複合体は、第１の抗原結合ドメイン、それが融合される第２の抗原結合ドメイン、次にそれが融合されるＴＣＲ−ベータ鎖を含む、図２Ｎ。第１および第２の抗原結合ドメインは、異なる抗原結合ドメインであってよい。第１および第２の抗原結合ドメインは、同じ抗原結合ドメインであってよい。
【０１３７】
いくつかの実施形態において、本明細書で開示される改変ＴＣＲ複合体は、ＣＤ３−イプシロン鎖に融合された第１の抗原結合ドメイン、およびＣＤ３−デルタ鎖に融合された第２の抗原結合ドメインを含む（図２Ｏ）。いくつかの実施形態において、本明細書で開示される改変ＴＣＲ複合体は、ＣＤ３−デルタ鎖に融合された第１の抗原結合ドメイン、およびＣＤ３−ガンマ鎖に融合された第２の抗原結合ドメインを含む（図２Ｐ）。いくつかの実施形態において、本明細書で開示される改変ＴＣＲ複合体は、ＴＣＲ−アルファ鎖に融合された第１の抗原結合ドメイン、およびＣＤ３−イプシロン鎖に融合された第２の抗原結合ドメインを含む（図２Ｑ）。いくつかの実施形態において、本明細書で開示される改変ＴＣＲ複合体は、ＴＣＲ−ベータ鎖に融合された第１の抗原結合ドメイン、およびＣＤ３−イプシロン鎖に融合された第２の抗原結合ドメインを含む（図２Ｒ）。いくつかの実施形態において、本明細書で開示される改変ＴＣＲ複合体は、アルファ鎖に融合された第１の抗原結合ドメイン、およびＣＤ３−ガンマ鎖に融合された第２の抗原結合ドメインを含む（図２Ｓ）。いくつかの実施形態において、本明細書で開示される改変ＴＣＲ複合体は、ＴＣＲ−ベータ鎖に融合された第１の抗原結合ドメイン、およびＣＤ３−ガンマ鎖に融合された第２の抗原結合ドメインを含む（図２Ｔ）。いくつかの実施形態において、本明細書で開示される改変ＴＣＲ複合体は、ＴＣＲ−アルファ鎖に融合された第１の抗原結合ドメイン、およびＣＤ３−デルタ鎖に融合された第２の抗原結合ドメインを含む（図２Ｕ）。いくつかの実施形態において、本明細書で開示される改変ＴＣＲ複合体は、ベータ鎖に融合された第１の抗原結合ドメイン、およびデルタ鎖に融合された第２の抗原結合ドメインを含む（図２Ｖ）。
【０１３８】
本明細書における態様の様々な実施形態において、改変ＴＣＲ複合体は、先に同定されているＴＣＲを含む。いくつかの場合において、ＴＣＲは、全エキソーム解析を用いて同定され得る。たとえば、ＴＣＲは、標的細胞の全エキソーム解析によって同定されるネオ抗原またはネオエピトープを標的し得る。代替的には、ＴＣＲは自家、同種異系、または異種のレパートリから同定され得る。自家および同種異系の同定には、多段階プロセスが伴い得る。自家および同種異系の同定両方において、樹状細胞（ＤＣ）は、ＣＤ１４選択単球から生成され得、成熟後、特異的なペプチドをパルスされ得る、またはトランスフェクションされ得る。Ｔ細胞などの自家または同種異系免疫細胞は、ペプチドパルスＤＣを用いて刺激され得る。単一細胞でのペプチド特異的Ｔ細胞クローンは、限界希釈法によって、これらのペプチドパルスＴ細胞株から単離され得る。関心対象の主題のＴＣＲは、同定および単離され得る。関心対象のＴＣＲのアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖は、クローニングされ、コドン最適化され、ベクタ、たとえばレンチウイルスベクタにコードされ得る。いくつかの実施形態において、ＴＣＲの部分は、置き換えられ得る。たとえば、ヒトＴＣＲの定常領域は、対応するマウスの領域で置き換えられ得る。ヒト定常領域を対応するマウスの領域で置き換えることは、ＴＣＲ安定性を増大させるために実施され得る。ＴＣＲはまた、エクスビボで高いまたは超生理的なアビディティがあると同定され得る。いくつかの場合において、ＴＣＲを同定する方法は、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）系を発現するトランスジェニックマウスにヒト腫瘍タンパク質を免疫して、ヒト抗原に対するＴＣＲを発現するＴ細胞を生成することを含み得る（たとえば、Ｓｔａｎｉｓｌａｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｉｒｃｕｍｖｅｎｔｉｎｇ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ｔｏ  ａ  ｈｕｍａｎ  ＭＤＭ２−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｔｕｍｏｒ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｂｙ  ＴＣＲ  ｇｅｎｅ  ｔｒａｎｓｆｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２，９６２−９７０（２００１）を参照されたい）。代替のアプローチは、同種異系ＴＣＲ遺伝子導入であり得、当該遺伝子導入では、腫瘍寛解を経験している被験体から腫瘍特異的Ｔ細胞を単離して、反応性ＴＣＲ配列を、疾患を同じくするが非応答であってよい別の被験体由来のＴ細胞に移入し得る（ｄｅ  Ｗｉｔｔｅ，Ｍ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｓｅｌｆ−ａｎｔｉｇｅｎｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ  ＴＣＲ  ｇｅｎｅ  ｔｒａｎｓｆｅｒ，Ｂｌｏｏｄ  １０８，８７０‐８７７（２００６））。いくつかの場合において、インビトロ手法を用いて、ＴＣＲの配列を変更し、標的抗原との反応性が弱い腫瘍特異的ＴＣＲの相互作用（アビディティ）の強度を増大することによって、腫瘍殺傷活性を増強し得る（Ｓｃｈｍｉｄ，Ｄ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｆｏｒ  ａ  ＴＣＲ  ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ  ｄｅｌｉｍｉｔｉｎｇ  ｍａｘｉｍａｌ  ＣＤ８  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８４，４９３６‐４９４６（２０１０））。
【０１３９】
別の態様において、本開示は、免疫細胞および／または標的細胞の活性を誘導するための系を提供する。系は、（ａ）第１のエピトープに特異的な結合を示す第１の抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）；ならびに（ｂ）本明細書で開示される改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体を含む。
【０１４０】
いくつかの実施形態において、系は、（ａ）第１のエピトープへの特異的な結合を示す第１の抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）；ならびに（ｂ）第２のエピトープへの特異的な結合を示す第２の抗原結合ドメインを含む改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体を含み、ここで、第２の抗原結合ドメインは、（ｉ）ＴＣＲのアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される少なくとも１つのＴＣＲ鎖、（ｉｉ）表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／もしくはガンマ鎖、または（ｉｉｉ）ＣＤ３ゼータ鎖のうちの少なくとも１つに連結される。
【０１４１】
主題の系のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、第１のエピトープに特異的な結合を示す第１の抗原結合ドメインを含み得る。第１の抗原結合ドメインは、エピトープに結合し得る任意のタンパク質または分子を含み得る。第１の抗原結合ドメインの非限定的な例としては、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、マウス抗体、またはそれらの機能的誘導体、変異体、または断片が挙げられるが、これらに限定されず、断片としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ミニボディ、ダイアボディ、および重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、ラクダ科動物由来ナノボディの可変ドメイン（ＶＨＨ）などの単一ドメイン抗体が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、第１の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、Ｆｖ、およびｓｃＦｖのうちの少なくとも１つを含む。いくつかの実施形態において、第１の抗原結合ドメインは、抗体ミメティックを含む。抗体ミメティックは、抗体と同等の親和性で標的分子を結合し得る分子を指し、単鎖結合分子、シトクロムｂ５６２ベースの結合分子、フィブロネクチンまたはフィブロネクチン様タンパク質足場（たとえば、アドネクチン）、リポカリン足場、カリックスアレーン足場、Ａドメイン、およびその他の足場を含む。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、膜貫通受容体、またはそれの任意の誘導体、変異体、または断片を含む。たとえば、抗原結合ドメインは、膜貫通受容体の少なくともリガンド結合ドメインを含み得る。
【０１４２】
いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含み得る。ｓｃＦｖは、可変領域の配列が公知である抗体に由来し得る。いくつかの実施形態において、ｓｃＦｖは、入手可能なマウスハイブリドーマから得られる抗体配列に由来し得る。ｓｃＦｖは、腫瘍細胞または初代細胞の全エキソーム解析から得られ得る。いくつかの実施形態において、ｓｃＦｖは、変更され得る。たとえば、ｓｃＦｖは、様々なやり方で改変されてよい。いくつかの場合において、ｓｃＦｖがその標的に対してより高い親和性を有し得るように、ｓｃＦｖを変異させ得る。いくつかの場合において、ｓｃＦｖのその標的に対する親和性は、正常組織上で低いレベルで発現される標的のために最適化され得る。この最適化は、サイトカイン放出症候群などの、毒性の可能性を最小化するために行われ得る。他の場合において、標的の膜結合形態に対してより高い親和性を有するｓｃＦｖのクローニングが、その可溶性形態の対応物より好ましくあり得る。この改変は、いくつかの標的が、異なるレベルで可溶性形態でも検出され得、それらを標的することがサイトカイン放出症候群などの意図しない毒性を引き起こすおそれがある場合、行われ得る。
【０１４３】
いくつかの実施形態において、ＣＡＲの第１の抗原結合ドメインは、本明細書で開示される抗原結合分子を含む。いくつかの実施形態において、第１の抗原結合ドメインは、単一ドメイン抗体を含む。いくつかの実施形態において、上記単一ドメイン抗体は抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂである。いくつかの実施形態において、第１の抗原結合ドメインは、配列番号３〜２３および３８〜４６から選択される任意の１つに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、上記抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３〜２３から選択される任意の１つの配列を含む。
【０１４４】
いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、相互作用する対の一方のメンバを含み得る。たとえば、抗原結合ドメインは、受容体およびリガンドを含む相互作用する対の一方のメンバ、またはそれの断片であってよい。受容体もしくはリガンドのいずれか、またはそれの断片は、抗原結合ドメインと呼ばれてよい。抗原結合ドメインと呼ばれない他方のメンバは、抗原結合ドメインが特異的に結合するエピトープを含み得る。いくつかの実施形態において、第１の抗原結合ドメインおよび／または第２の抗原結合ドメインは、リガンドに特異的に結合する受容体を含む。受容体は、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）；インテグリン受容体；カドヘリン受容体；酵素活性を有する受容体、および内因性酵素活性を有する代わりに、非共有結合で結合する酵素（たとえば、キナーゼ）を刺激することにより作用する受容体を含む、触媒受容体；腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）スーパーファミリのメンバなどの細胞死受容体；サイトカイン受容体；免疫受容体などを含み得る。いくつかの実施形態において、第１の抗原結合ドメインおよび／または第２の抗原結合ドメインは、受容体によって結合されるリガンドを含む。
【０１４５】
主題の系のＣＡＲの抗原結合ドメインは、膜貫通ドメインを介して細胞内シグナル伝達ドメインに連結され得る。膜貫通ドメインは、膜通過セグメントであり得る。主題のＣＡＲの膜貫通ドメインは、細胞、たとえば免疫細胞の原形質膜に、ＣＡＲを固定し得る。いくつかの実施形態において、膜通過セグメントは、ポリペプチドを含む。ＣＡＲの抗原結合ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとを連結する膜通過ポリペプチドは、任意の適切なポリペプチド配列を有し得る。いくつかの場合において、膜通過ポリペプチドは、内因性または野性型膜通過タンパク質の膜通過部分のポリペプチド配列を含む。いくつかの実施形態において、膜通過ポリペプチドは、内因性または野性型膜通過タンパク質の膜通過部分と比較して、アミノ酸置換、欠失、および挿入のうちの少なくとも１つ（たとえば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれより多い）を有するポリペプチド配列を含む。いくつかの実施形態において、膜通過ポリペプチドは、ポリペプチドリンカの配列などの非天然のポリペプチド配列を含む。ポリペプチドリンカは、フレキシブルであっても剛性であってもよい。ポリペプチドリンカは、構造化され得るか、または構造不定であり得る。いくつかの実施形態において、膜通過ポリペプチドは、細胞の細胞外領域から抗原結合ドメインを介して細胞内領域にシグナルを伝達する。ＣＤ２８の天然の膜貫通部分は、ＣＡＲにおいて使用され得る。他の場合において、ＣＤ８アルファの天然の膜貫通部分も、ＣＡＲにおいて使用され得る。
【０１４６】
主題の系のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫細胞シグナル伝達に関与するシグナル伝達ドメイン、またはそれの任意の誘導体、変異体、もしくは断片を含み得る。ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、当該ＣＡＲを含む免疫細胞の活性を誘導し得る。細胞内シグナル伝達ドメインは、エフェクタ機能シグナルを伝達し、特殊化した機能を実行させるように細胞に指示を出し得る。シグナル伝達ドメインは、他の分子のシグナル伝達ドメインを含み得る。通常は、ＣＡＲにおいて、別の分子のシグナル伝達ドメインが用いられ得るが、多くの場合、鎖全体を使用する必要がない。いくつかの場合において、ＣＡＲにおいて、シグナル伝達ドメインのトランケートされた部分が使用される。
【０１４７】
いくつかの実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫細胞シグナル伝達に関与する複数のシグナル伝達ドメイン、またはそれの任意の誘導体、変異体、もしくは断片を含む。たとえば、細胞内シグナル伝達ドメインは、少なくとも２つの免疫細胞シグナル伝達ドメイン、たとえば、少なくとも２、３、４、５、７、８、９、または１０個の免疫細胞シグナル伝達ドメインを含み得る。免疫細胞シグナル伝達ドメインは、刺激するやり方、または抑制するやり方のいずれかで、ＴＣＲ複合体の一次活性化を調節することに関与し得る。細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体の細胞内シグナル伝達ドメインであってよい。主題のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）、Ｆｃε受容体（ＦｃεＲ）、Ｆｃα受容体（ＦｃαＲ）、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）、ＣＤ３、ＣＤ３ζ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２８、ＣＤ３２、ＣＤ４０Ｌ（ＣＤ１５４）、ＣＤ４５、ＣＤ６６ｄ、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳとしても公知である）、ＣＤ２４７ζ、ＣＤ２４７η、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＦＹＮ、ＬＡＴ、Ｌｃｋ、ＭＡＰＫ、ＭＨＣ複合体、ＮＦＡＴ、ＮＦ−κＢ、ＰＬＣ−γ、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、Ｃ３ｄ、およびＺａｐ７０のシグナル伝達ドメインを含み得る。いくつかの実施形態において、シグナル伝達ドメインは、免疫受容体活性化チロシンモチーフすなわちＩＴＡＭを含む。ＩＴＡＭを含むシグナル伝達ドメインは、６〜８つのアミノ酸によって区切られるアミノ酸配列ＹｘｘＬ／Ｉの反復２つを含み得、ここで、各ｘは独立して任意のアミノ酸であり、保存モチーフＹｘｘＬ／Ｉｘ（６〜８）ＹｘｘＬ／Ｉを生成する。抗原結合ドメインがエピトープに結合されるとき、ＩＴＡＭを含むシグナル伝達ドメインは、たとえば、リン酸化によって改変され得る。リン酸化されたＩＴＡＭは、他のタンパク質、たとえば、様々なシグナル伝達経路に関与するタンパク質のためのドッキング部位として機能し得る。いくつかの実施形態において、一次シグナル伝達ドメインは、改変ＩＴＡＭドメイン、たとえば、変異された、トランケートされた、かつ／または最適化されたＩＴＡＭドメインを含み、当該改変ＩＴＡＭドメインは、天然のＩＴＡＭドメインと比較して、変更された（たとえば、増大された、または減少された）活性を有する。
【０１４８】
いくつかの実施形態において、主題のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＦｃγＲシグナル伝達ドメイン（たとえば、ＩＴＡＭ）を含む。ＦｃγＲシグナル伝達ドメインは、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）、およびＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）から選択され得る。いくつかの実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＦｃεＲシグナル伝達ドメイン（たとえば、ＩＴＡＭ）を含む。ＦｃεＲシグナル伝達ドメインは、ＦｃεＲＩおよびＦｃεＲＩＩ（ＣＤ２３）から選択され得る。いくつかの実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＦｃαＲシグナル伝達ドメイン（たとえば、ＩＴＡＭ）を含む。ＦｃαＲシグナル伝達ドメインは、ＦｃαＲＩ（ＣＤ８９）およびＦｃα／μＲから選択され得る。いくつかの実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態において、一次シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζのＩＴＡＭを含む。
【０１４９】
いくつかの実施形態において、主題のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体抑制性チロシンモチーフすなわちＩＴＩＭを含む。ＩＴＩＭを含むシグナル伝達ドメインは、免疫系のいくつかの抑制性受容体の細胞質側末端に見いだされるアミノ酸の保存配列（Ｓ／Ｉ／Ｖ／ＬｘＹｘｘＩ／Ｖ／Ｌ）を含み得る。ＩＴＩＭを含む一次シグナル伝達ドメインは、Ｓｒｃキナーゼファミリメンバ（たとえば、Ｌｃｋ）などの酵素によって、改変され得る、たとえば、リン酸化され得る。リン酸化に続いて、酵素を含む他のタンパク質が、ＩＴＩＭに漸加され得る。これらの他のタンパク質としては、リン酸化チロシンホスファターゼＳＨＰ−１およびＳＨＰ−２、ＳＨＩＰと呼ばれるイノシトールホスファターゼ、ならびに１または複数のＳＨ２ドメインを有するタンパク質（たとえば、ＺＡＰ７０）などの酵素が挙げられるが、これらに限定されない。細胞内シグナル伝達ドメインは、ＢＴＬＡ、ＣＤ５、ＣＤ３１、ＣＤ６６ａ、ＣＤ７２、ＣＭＲＦ３５Ｈ、ＤＣＩＲ、ＥＰＯ−Ｒ、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２）、Ｆｃ受容体様タンパク質２（ＦＣＲＬ２）、Ｆｃ受容体様タンパク質３（ＦＣＲＬ３）、Ｆｃ受容体様タンパク質４（ＦＣＲＬ４）、Ｆｃ受容体様タンパク質５（ＦＣＲＬ５）、Ｆｃ受容体様タンパク質６（ＦＣＲＬ６）、タンパク質Ｇ６ｂ（Ｇ６Ｂ）、インターロイキン４受容体（ＩＬ４Ｒ）、免疫グロブリンスーパーファミリ受容体転座関連１（ＩＲＴＡ１）、免疫グロブリンスーパーファミリ受容体転座関連２（ＩＲＴＡ２）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体２ＤＬ１（ＫＩＲ２ＤＬ１）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体２ＤＬ２（ＫＩＲ２ＤＬ２）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体２ＤＬ３（ＫＩＲ２ＤＬ３）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体２ＤＬ４（ＫＩＲ２ＤＬ４）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体２ＤＬ５（ＫＩＲ２ＤＬ５）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体３ＤＬ１（ＫＩＲ３ＤＬ１）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体３ＤＬ２（ＫＩＲ３ＤＬ２）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリＢメンバ１（ＬＩＲ１）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリＢメンバ２（ＬＩＲ２）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリＢメンバ３（ＬＩＲ３）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリＢメンバ５（ＬＩＲ５）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリＢメンバ８（ＬＩＲ８）、白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ−１）、マスト細胞機能関連抗原（ＭＡＦＡ）、ＮＫＧ２Ａ、細胞傷害誘発受容体２（ＮＫｐ４４）、ＮＴＢ−Ａ、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）、ＰＩＬＲ、ＳＩＧＬＥＣＬ１、シアル酸結合Ｉｇ様レクチン２（ＳＩＧＬＥＣ２またはＣＤ２２）、シアル酸結合Ｉｇ様レクチン３（ＳＩＧＬＥＣ３またはＣＤ３３）、シアル酸結合Ｉｇ様レクチン５（ＳＩＧＬＥＣ５またはＣＤ１７０）、シアル酸結合Ｉｇ様レクチン６（ＳＩＧＬＥＣ６）、シアル酸結合Ｉｇ様レクチン７（ＳＩＧＬＥＣ７）、シアル酸結合Ｉｇ様レクチン１０（ＳＩＧＬＥＣ１０）、シアル酸結合Ｉｇ様レクチン１１（ＳＩＧＬＥＣ１１）、シアル酸結合Ｉｇ様レクチン４（ＳＩＧＬＥＣ４）、シアル酸結合Ｉｇ様レクチン���（ＳＩＧＬＥＣ８）、シアル酸結合Ｉｇ様レクチン９（ＳＩＧＬＥＣ９）、血小板および内皮細胞接着分子１（ＰＥＣＡＭ−１）、シグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ２）、およびシグナル伝達閾調節膜貫通アダプタ（ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ  ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ  ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ａｄａｐｔｏｒ）１（ＳＩＴ）のシグナル伝達ドメイン（たとえば、ＩＴＩＭ）を含み得る。いくつかの実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、改変ＩＴＩＭドメイン、たとえば、変異された、トランケートされた、かつ／または最適化されたＩＴＩＭドメインを含み、当該改変ＩＴＩＭドメインは、天然のＩＴＩＭドメインと比較して、変更された（たとえば、増大された、または減少された）活性を有する。
【０１５０】
いくつかの実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、少なくとも２つのＩＴＡＭドメイン（たとえば、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、または１０個のＩＴＡＭドメイン）を含む。いくつかの実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、少なくとも２つのＩＴＩＭドメイン（たとえば、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、または１０個のＩＴＩＭドメイン）（たとえば、少なくとも２つの一次シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭドメインおよびＩＴＩＭドメインの両方を含む。
【０１５１】
いくつかの場合において、主題のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激ドメインを含み得る。いくつかの実施形態において、たとえば共刺激分子由来の共刺激ドメインは、ＩＴＡＭドメインおよび／またはＩＴＩＭドメインからのシグナル伝達などの免疫細胞シグナル伝達のための、たとえば、免疫細胞活性の活性化および／または不活性化のための、共刺激シグナルを提供し得る。いくつかの実施形態において、共刺激ドメインは、免疫細胞中の増殖シグナルおよび／または生存シグナルを調節するように動作可能である。いくつかの実施形態において、共刺激シグナル伝達ドメインは、ＭＨＣクラスＩタンパク質、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、またはＴｏｌｌリガンド受容体のシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態において、共刺激ドメインは、２Ｂ４／ＣＤ２４４／ＳＬＡＭＦ４、４−１ＢＢ／ＴＮＦＳＦ９／ＣＤ１３７、Ｂ７−１／ＣＤ８０、Ｂ７−２／ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ１／ＰＤ−Ｌ１、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ６、Ｂ７−Ｈ７、ＢＡＦＦ  Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＢＡＦＦ／ＢｌｙＳ／ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＢＴＬＡ／ＣＤ２７２、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤ１５０、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２、ＣＤ２００、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＣＤ２７リガンド／ＴＮＦＳＦ７、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ２Ｆ−１０／ＳＬＡＭＦ９、ＣＤ３０リガンド／ＴＮＦＳＦ８、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＣＤ３００ａ／ＬＭＩＲ１、ＣＤ４、ＣＤ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＣＤ４８／ＳＬＡＭＦ２、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５、ＣＤ５３、ＣＤ５８／ＬＦＡ−３、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ８２／Ｋａｉ−１、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＣＤ９０／Ｔｈｙ１、ＣＤ９６、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＣＲＴＡＭ、ＣＴＬＡ−４、ＤＡＰ１２、デクチン−１／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６、ＤＲ３／ＴＮＦＲＳＦ２５、ＥｐｈＢ６、ＧＡＤＳ、Ｇｉ２４／ＶＩＳＴＡ／Ｂ７−Ｈ５、ＧＩＴＲリガンド／ＴＮＦＳＦ１８、ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８、ＨＬＡクラスＩ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＩＡ４、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、イカロス、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、インテグリンα４／ＣＤ４９ｄ、インテグリンα４β１、インテグリンα４β７／ＬＰＡＭ−１、ＩＰＯ−３、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＧ−３、ＬＡＴ、ＬＩＧＨＴ／ＴＮＦＳＦ１４、ＬＴＢＲ、Ｌｙ１０８、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、リンパ球機能関連抗原１（ＬＦＡ−１）、リンホトキシン−α／ＴＮＦ−β、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、Ｎ���ｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＴＢ−Ａ／ＳＬＡＭＦ６、ＯＸ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ４、ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＰＤ−１、ＰＤＣＤ６、ＰＤ−Ｌ２／Ｂ７−ＤＣ、ＰＳＧＬ１、ＲＥＬＴ／ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１）、ＳＬＡＭ／ＣＤ１５０、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ−７６、ＴＡＣＩ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＣＬ１Ａ、ＴＣＬ１Ｂ、ＴＩＭ−１／ＫＩＭ−１／ＨＡＶＣＲ、ＴＩＭ−４、ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５、ＴＮＦ  ＲＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＮＦ−α、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰ  Ｒ、ＶＬＡ１、およびＶＬＡ−６からなる群より選択される分子のシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、複数の共刺激ドメイン、たとえば、少なくとも２つ、たとえば、少なくとも３、４、または５つの共刺激ドメインを含む。共刺激シグナル伝達領域は、一次エフェクタ活性化シグナルと相乗的なシグナルを提供してもよく、Ｔ細胞の活性化のための要件を満たし得る。いくつかの実施形態において、共刺激ドメインのＣＡＲへの付加は、本明細書において提供される免疫細胞の有効性および持続性を増強し得る。共刺激シグナル伝達ドメインの例が表８に提供される。
表８：細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン
【表８】
2021528049.tif 000010
【０１５２】
例として、ＣＡＲは、ＣＤ３ゼータ鎖（第１世代ＣＡＲと呼ばれることがある）を含み得る。別の例として、ＣＡＲは、ＣＤ−３ゼータ鎖および単一の共刺激ドメイン（たとえば、ＣＤ２８または４−１ＢＢ）（第２世代ＣＡＲと呼ばれることがある）を含み得る。別の例として、ＣＡＲは、ＣＤ−３ゼータ鎖および２つの共刺激ドメイン（ＣＤ２８／ＯＸ４０またはＣＤ２８／４−１ＢＢ）（第３世代ＣＡＲと呼ばれることがある）を含み得る。ＣＤ８などの共受容体とともに、これらのシグナル伝達部分は、遺伝子転写および機能的細胞応答を支持するキナーゼ経路の下流活性化をもたらし得る。
【０１５３】
いくつかの実施形態において、主題のＣＡＲは、ヒンジまたはスペーサを含み得る。ヒンジまたはスペーサは、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインとの間のセグメントを指し得る。いくつかの実施形態において、ヒンジを用いて抗原結合ドメイン、たとえば、ｓｃＦｖに可動性を付与し得る。いくつかの実施形態において、たとえば、ｓｃＦｖを検知するための抗体が機能していない、または入手可能でない場合、ヒンジを用いて細胞の表面上でのＣＡＲの発現を検知し得る。いくつかの場合において、ヒンジは、免疫グロブリン分子に由来しており、標的上の第１のエピトープまたは第２のエピトープの位置に応じて、最適化を必要する場合がある。いくつかの場合において、ヒンジは、免疫グロブリン分子に属しないが、その代わりに別の分子に属する場合があり、ＣＤ８アルファ分子の天然のヒンジなどである。ＣＤ８アルファヒンジは、ＣＤ８共受容体とＭＨＣ分子との相互作用において役割を果たす場合がある、システイン残基およびプロリン残基を含有し得る。いくつかの実施形態において、システイン残基およびプロリン残基は、ＣＡＲの性能に影響し得、したがって、ＣＡＲの性能に影響するように操作されてよい。
【０１５４】
ヒンジは、任意の適切な長さであり得る。いくつかの実施形態において、ＣＡＲのヒンジは、サイズ調整可能であり得、ＣＡＲ発現細胞と標的細胞との間の直交シナプス距離を正規化する際に、ある程度、補償し得る。この、ＣＡＲ発現細胞と標的細胞との間の免疫学的シナプスの形態は、ＣＡＲのヒンジが短くてもシナプス距離をシグナル伝達のために接近させることができない細胞表面の標的分子上の膜遠位エピトープに起因して、ＣＡＲによって機能的につなぐことができない距離を規定し得る。同様に、シグナル伝達出力が、ＣＡＲのヒンジ長い状況においてのみ観察される、膜近位ＣＡＲの標的抗原エピトープが説明されている。本明細書で開示されるヒンジは、使用され得る単鎖可変断片領域に従って調整され得る。
【０１５５】
例として、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含み得、図３に例示される。ＣＡＲは一般に、単鎖抗体に由来する抗原結合ドメイン、ヒンジドメイン（Ｈ）またはスペーサ、原形質膜への固定部を提供する膜貫通ドメイン（ＴＭ）、およびＴ細胞活性化を担うシグナル伝達ドメインを含んでよい。ＣＡＲは、ＣＤ３ζ鎖などの免疫細胞シグナル伝達ドメインを含み得る。ＣＡＲは、ＣＤ３ζ鎖および４−１ＢＢなどの、免疫細胞シグナル伝達ドメインおよび第１の共刺激ドメインを含み得る。ＣＡＲは、ＣＤ３ζ鎖、４−１ＢＢ、およびＯＸ４０などの、免疫細胞シグナル伝達ドメイン、および少なくとも２つの共刺激ドメインを含み得る。いくつかの実施形態において、普遍的ＣＡＲも、系に含まれ得る。普遍的ＣＡＲは、モノクローナル抗体上のタグ（たとえば、フルオレセインイソチオシアネートまたはビオチン）を結合するタンパク質ドメインに融合される細胞内シグナル伝達ドメインを含み得る。主題のＣＡＲにおいて、免疫細胞シグナル伝達ドメインおよび共刺激ドメインの様々な組み合わせが、利用されてよい。いくつかの実施形態において、免疫細胞シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３、ＣＤ４、および／またはＣＤ８由来であってよい。共刺激ドメインは、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、およびＣＤ２８など由来であり得る。
【０１５６】
いくつかの実施形態において、本開示の主題の系のＣＡＲは、１または複数の追加のエピトープへの特異的な結合を示す、１または複数の追加の抗原結合ドメインを含み得る。たとえば、主題の系のＣＡＲは、少なくとも２つの抗原結合ドメイン（たとえば、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、または１０個の抗原結合ドメイン）を含み得る。いくつかの実施形態において、ＣＡＲの上記少なくとも２つの抗原結合ドメインは、タンデムに連結される。いくつかの実施形態において、上記少なくとも２つの抗原結合ドメインは、同じ抗原結合ドメインであり得る。たとえば、少なくとも２つの抗原結合ドメインは、同じエピトープに結合することができる同一の分子であってよい。いくつかの実施形態において、上記少なくとも２つの抗原結合ドメインは、異なる抗原結合ドメインであり得る。たとえば、少なくとも２つの抗原結合ドメインは、１または複数の抗原上の異なるエピトープに結合することができる異なる分子であってよい。
【０１５７】
主題のＣＡＲの抗原結合ドメインおよび主題の系の改変ＴＣＲ複合体は、異なる抗原上に存在するエピトープに結合し得る。いくつかの場合において、ＣＡＲの抗原結合ドメインおよび主題の系の改変ＴＣＲ複合体は、共通の抗原上に存在するエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、第１のエピトープおよび第２のエピトープは同じエピトープであり得る。いくつかの実施形態において、第１のエピトープおよび第２のエピトープは異なるエピトープであり得る。
【０１５８】
第１のエピトープおよび／または第２のエピトープは、１または複数の細胞表面抗原上に存在してよい。１または複数の細胞表面抗原は、チロシンキナーゼ受容体、セリンキナーゼ受容体、ヒスチジンキナーゼ受容体、およびＧタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）などであり得る。
【０１５９】
第１のエピトープおよび／または第２のエピトープは、免疫チェックポイント受容体または免疫チェックポイント受容体リガンド上に存在してよい。いくつかの実施形態において、免疫チェックポイント受容体または免疫チェックポイント受容体リガンドは、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、ＢＬＴＡ、ＣＤ４７、またはＣＤ４０であり得る。
【０１６０】
第１のエピトープおよび／または第２のエピトープは、サイトカインまたはサイトカイン受容体上に存在してよい。サイトカイン受容体は、たとえば、ＣＣＲ２ｂ、ＣＸＣＲ２（ＣＸＣＬ１受容体）、ＣＣＲ４（ＣＣＬ１７受容体）、Ｇｒｏ−ａ、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＩＬ−１２、ヘパラナーゼ、ＣＤ１３７Ｌ、ＬＥＭ、Ｂｃｌ−２、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１９、またはＣＣＬ２であり得る。
【０１６１】
第１のエピトープおよび／または第２のエピトープは、腫瘍関連抗原上に存在し得る。エピトープは、たとえば、腫瘍エピトープであってよい。腫瘍関連抗原は、７０７−ＡＰ、ビオチン化分子、ａ−アクチニン−４、ａｂｌ−ｂｃｒ  ａｌｂ−ｂ３（ｂ２ａ２）、ａｂｌ−ｂｃｒ  ａｌｂ−ｂ４（ｂ３ａ２）、アディポフィリン、ＡＦＰ、ＡＩＭ−２、アネキシンＩＩ、ＡＲＴ−４、ＢＡＧＥ、ＢＣＭＡ、ｂ−カテニン、ｂｃｒ−ａｂｌ、ｂｃｒ−ａｂｌ  ｐ１９０（ｅ１ａ２）、ｂｃｒ−ａｂｌ  ｐ２１０（ｂ２ａ２）、ｂｃｒ−ａｂｌ  ｐ２１０（ｂ３ａ２）、ＢＩＮＧ−４、ＣＡ−１２５、ＣＡＧ−３、ＣＡＩＸ、ＣＡＭＥＬ、カスパーゼ−８、ＣＤ１７１、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤＣ２７、ＣＤＫ−４、ＣＥＡ、ＣＬＣＡ２、ＣＬＬ−１、ＣＴＡＧ１Ｂ、Ｃｙｐ−Ｂ、ＤＡＭ−１０、ＤＡＭ−６、ＤＥＫ−ＣＡＮ、ＤＬＬ３、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ−２、ＥＧＰ−４０、ＥＬＦ２、Ｅｐ−ＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ｅｒｂ−Ｂ２、ｅｒｂ−Ｂ３、ｅｒｂ−Ｂ４、ＥＳ−ＥＳＯ−１ａ、ＥＴＶ６／ＡＭＬ、ＦＡＰ、ＦＢＰ、胎児アセチルコリン受容体、ＦＧＦ−５、ＦＮ、ＦＲ−α、Ｇ２５０、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＧＡＧＥ−３、ＧＡＧＥ−４、ＧＡＧＥ−５、ＧＡＧＥ−６、ＧＡＧＥ−７Ｂ、ＧＡＧＥ−８、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧｎＴ−Ｖ、Ｇｐ１００、ｇｐ７５、ＧＰＣ３、ＧＰＣ−２、Ｈｅｒ−２、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１−Ｒ１７０Ｉ、ＨＭＷ−ＭＡＡ、ＨＳＰ７０−２Ｍ、ＨＳＴ−２（ＦＧＦ６）、ＨＳＴ−２／ｎｅｕ、ｈＴＥＲＴ、ｉＣＥ、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ−１３Ｒα２、ＫＤＲ、ＫＩＡＡ０２０５、Ｋ−ＲＡＳ、Ｌ１−細胞接着分子、ＬＡＧＥ−１、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、ルイスＹ、Ｌ１−ＣＡＭ、ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−１０、ＭＡＧＥ−１２、ＭＡＧＥ−２、ＭＡＧＥ−３、ＭＡＧＥ−４、ＭＡＧＥ−６、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ｂ１、ＭＡＧＥ−Ｂ２、リンゴ酸酵素、マンマグロビン−Ａ、ＭＡＲＴ−１／メラン−Ａ、ＭＡＲＴ−２、ＭＣ１Ｒ、Ｍ−ＣＳＦ、メソテリン、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ２、ＭＵＭ−１、ＭＵＭ−２、ＭＵＭ−３、ミオシン、ＮＡ８８−Ａ、ネオ−ＰＡＰ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＰＭ／ＡＬＫ、Ｎ−ＲＡＳ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＯＡ１、ＯＧＴ、腫瘍胎児抗原（ｈ５Ｔ４）、ＯＳ−９、Ｐポリペプチド、Ｐ１５、Ｐ５３、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＡ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＰＴＰＲＫ、ＲＡＧＥ、ＲＯＲ１、ＲＵ１、ＲＵ２、ＳＡＲＴ−１、ＳＡＲＴ−２、ＳＡＲＴ−３、ＳＯＸ１０、ＳＳＸ−２、サバイビン、サバイビン−２Ｂ、ＳＹＴ／ＳＳＸ、ＴＡＧ−７２、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、ＴＧＦαＲＩＩ、ＴＧＦβＲＩＩ、ＴＰ１、ＴＲＡＧ−３、ＴＲＧ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ＴＲＰ−２／ＩＮＴ２、ＴＲＰ−２−６ｂ、チロシナーゼ、ＶＥＧＦ−Ｒ２、ＷＴ１、α−葉酸受容体、およびκ−軽鎖からなる群より選択され得る。いくつかの実施形態において、第１のエピトープおよび／または第２のエピトープは、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＰＣ３、ＧＰＣ−２、ＤＬＬ３、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ１２３、ＣＬＬ−１、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＨＥＲ２、ＭＳＬＮ、ＰＳＭＡ、ＣＥＡ、ＧＤ２、ＩＬ１３Ｒα２、ＣＡＩＸ、Ｌ１−ＣＡＭ、ＣＡ１２５、ＣＤ１３３、ＦＡＰ、ＣＴＡＧ１Ｂ、ＭＵＣ１、ＦＲ−α、ＣＤ７０、ＣＤ１７１、ＲＯＲ１、およびそれらの任意の組み合わせであり得る。
【０１６２】
いくつかの実施形態において、第１のエピトープまたは第２のエピトープは、ＢＣＭＡ上に存在する。いくつかの実施形態において、第１のエピトープおよび第２のエピトープの両方は、ＢＣＭＡ上に存在する。いくつかの実施形態において、第１のエピトープおよび第２のエピトープは、ＢＣＭＡの同じエピトープである。いくつかの実施形態において、第１のエピトープおよび第２のエピトープは、ＢＣＭＡの異なるエピトープである。
【０１６３】
第１のエピトープおよび／または第２のエピトープは、ネオ抗原上に存在してよい。第１のエピトープおよび／または第２のエピトープは、ネオエピトープであってよい。
【０１６４】
ネオ抗原およびネオエピトープは一般に、場合によっては抗腫瘍Ｔ細胞応答を誘発する腫瘍特異的突然変異を指す。たとえば、これらの内因性突然変異は、全エキソーム解析法を用いて同定され得る。Ｔｒａｎ  Ｅ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｍｕｔａｔｉｏｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ＣＤ４＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ａ  ｐａｔｉｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｃａｎｃｅｒ，"Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３４４：６４１−６４４（２０１４）。抗原結合ドメイン、たとえば、主題のＣＡＲまたは改変ＴＣＲ複合体の抗原結合ドメインは、腫瘍特異的ネオ抗原への特異的結合を示し得る。ＣＡＲまたは改変ＴＣＲ複合体の抗原結合ドメインによって結合されるネオ抗原は、標的細胞上で発現され得、たとえば、任意の内因性遺伝子における突然変異によってコードされるネオ抗原およびネオエピトープである。いくつかの場合において、第１および／または第２の抗原結合ドメインは、突然変異遺伝子によってコードされるネオ抗原またはネオエピトープを結合する。遺伝子は、ＡＢＬ１、ＡＣＯｌ１９９７、ＡＣＶＲ２Ａ、ＡＦＰ、ＡＫＴ１、ＡＬＫ、ＡＬＰＰＬ２、ＡＮＡＰＣ１、ＡＰＣ、ＡＲＩＤ１Ａ、ＡＲ、ＡＲ−ｖ７、ＡＳＣＬ２、β２Μ、ＢＲＡＦ、ＢＴＫ、Ｃ１５ＯＲＦ４０、ＣＤＨ１、ＣＬＤＮ６、ＣＮＯＴ１、ＣＴ４５Ａ５、ＣＴＡＧ１Ｂ、ＤＣＴ、ＤＫＫ４、ＥＥＦ１Ｂ２、ＥＥＦ１ＤＰ３、ＥＧＦＲ、ＥＩＦ２Ｂ３、ｅｎｖ、ＥＰＨＢ２、ＥＲＢＢ３、ＥＳＲ１、ＥＳＲＰ１、ＦＡＭ１１ＩＢ、ＦＧＦＲ３、ＦＲＧ１Ｂ、ＧＡＧＥ１、ＧＡＧＥ１０、ＧＡＴＡ３、ＧＢＰ３、ＨＥＲ２、ＩＤＨ１、ＪＡＫ１、ＫＩＴ、ＫＲＡＳ、ＬＭＡＮ１、ＭＡＢＥＢ１６、ＭＡＧＥＡ１、ＭＡＧＥＡ１０、ＭＡＧＥＡ４、ＭＡＧＥＡ８、ＭＡＧＥＢ１７、ＭＡＧＥＢ４、ＭＡＧＥＣ１、ＭＥＫ、ＭＬＡＮＡ、ＭＬＬ２、ＭＭＰ１３、ＭＳＨ３、ＭＳＨ６、ＭＹＣ、ＮＤＵＦＣ２、ＮＲＡＳ、ＮＹ−ＥＳＯ、ＰＡＧＥ２、ＰＡＧＥ５、ＰＤＧＦＲａ、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＭＥＬ、ｐｏｌタンパク質、ＰＯＬＥ、ＰＴＥＮ、ＲＡＣ１、ＲＢＭ２７、ＲＮＦ４３、ＲＰＬ２２、ＲＵＮＸ１、ＳＥＣ３１Ａ、ＳＥＣ６３、ＳＦ３Ｂ１、ＳＬＣ３５Ｆ５、ＳＬＣ４５Ａ２、ＳＭＡＰ１、ＳＭＡＰ１、ＳＰＯＰ、ＴＦＡＭ、ＴＧＦＢＲ２、ＴＨＡＰ５、ＴＰ５３、ＴＴＫ、ＴＹＲ、ＵＢＲ５、ＶＨＬ、およびＸＰＯＴからなる群より選択され得る。
【０１６５】
いくつかの実施形態において、第１および／または第２の抗原結合ドメインによって結合され得る第１のエピトープおよび／または第２のエピトープは、ストローマ上に存在し得る。ストローマは一般に、とりわけ、生体細胞、組織、または器官の接続的および機能的支持を提供する組織を指す。ストローマは、腫瘍微小環境のストローマであり得る。第１のエピトープおよび／または第２のエピトープは、ストローマ抗原上に存在してよい。そのような抗原は、腫瘍微小環境のストローマ上にあり得る。ネオ抗原およびネオエピトープは、たとえば、腫瘍内皮細胞、腫瘍脈管構造、腫瘍線維芽細胞、腫瘍周皮細胞、腫瘍ストローマ、および／または腫瘍間葉系細胞上に存在し得る。抗原としては、ＣＤ３４、ＭＣＳＰ、ＦＡＰ、ＣＤ３１、ＰＣＮＡ、ＣＤ１１７、ＣＤ４０、ＭＭＰ４、およびテネイシンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６６】
いくつかの実施形態において、第１のエピトープおよび／または第２のエピトープは、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）によって提示される抗原上に存在し得る。ＭＨＣは、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩまたはクラスＩＩであり得る。ＨＬＡは、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｆ、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−ＤＰ、ＨＬＡ−ＤＱ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＭ、またはＨＬＡ−ＤＯであり得る。いくつかの実施形態において、第１のエピトープおよび／または第２のエピトープは、ＨＬＡ−Ａ＊０１、ＨＬＡ−Ａ＊０２、ＨＬＡ−Ａ＊０３、ＨＬＡ−Ａ＊１１、ＨＬＡ−Ａ＊２３、ＨＬＡ−Ａ＊２４、ＨＬＡ−Ａ＊２５、ＨＬＡ−Ａ＊２６、ＨＬＡ−Ａ＊２９、ＨＬＡ−Ａ＊３０、ＨＬＡ−Ａ＊３１、ＨＬＡ−Ａ＊３２、ＨＬＡ−Ａ＊３３、またはＨＬＡ−Ａ＊２４、ＨＬＡ−Ｂ＊２７、ＨＬＡ−Ｂ＊３５、ＨＬＡ−Ｂ＊４８、およびＨＬＡ−Ｂ＊５５など上に存在し得る。
【０１６７】
いくつかの実施形態において、第１のエピトープおよび／または第２のエピトープは、可溶性であり得る（たとえば、細胞に結合されない）。いくつかの場合において、抗原は可溶性、たとえば、可溶性抗原であり得る。第１のエピトープおよび／または第２のエピトープは、普遍的抗原上に存在してよい。いくつかの場合において、主題のＣＡＲおよび／または改変ＴＣＲ複合体の抗原結合ドメインはそれぞれ、複数のエピトープ、たとえば、複数の特異性に結合し得る。いくつかの実施形態において、第１のエピトープおよび第２のエピトープは同じエピトープであり得る。
【０１６８】
いくつかの実施形態において、少なくとも１つの抗原結合ドメインのそれのエピトープへの結合は、本開示の改変ＴＣＲ複合体を発現する免疫細胞の免疫細胞活性を活性化し得る。いくつかの実施形態において、２つ以上の抗原結合ドメインのそれらのエピトープへの結合は、本開示の改変ＴＣＲ複合体を発現する免疫細胞の免疫細胞活性を活性化し得る。いくつかの実施形態において、第１のエピトープへの第１の抗原結合ドメインの結合、または第２のエピトープへの第２の抗原結合ドメインの結合は、主題の系を発現する免疫細胞の免疫細胞活性を活性化し得る。いくつかの場合において、第１のエピトープへの第１の抗原結合ドメインの結合、および第２のエピトープへの第２の抗原結合ドメインの結合は、系を発現する免疫細胞の免疫細胞活性を活性化する。
【０１６９】
いくつかの実施形態において、免疫細胞および／または標的細胞の活性を誘導するための系は、２つより多い抗原結合ドメインを含み得る。たとえば、系は、第１の、第２の、第３の、第４の、第５の、第６の、第７の、第８の、第９の、または第１０の、またはさらに多くの抗原結合ドメインを含み得る。いくつかの実施形態において、第３のエピトープへの第３の抗原結合ドメインの結合は、系を発現する免疫細胞の免疫細胞活性を活性化する。いくつかの実施形態において、第１のエピトープへの第１の抗原結合ドメインの結合、第２のエピトープへの第２の抗原結合ドメインの結合、および第３のエピトープへの第３の抗原結合ドメインの結合は、系を発現する免疫細胞の免疫細胞活性を活性化する。任意の数の抗原結合ドメインが、本開示の系において使用され得、抗原結合ドメインの数は、１、２、または３に限定されない。
【０１７０】
いくつかの実施形態において、主題の系の２つ以上の抗原結合ドメインは、任意選択でタンデムに、（ｉ）Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される少なくとも１つのＴＣＲ鎖、（ｉｉ）表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／またはガンマ鎖、（ｉｉｉ）ＣＤ３ゼータ鎖に連結され、ここで、２つ以上の抗原結合ドメインの、それぞれのエピトープへの結合は、系を発現する免疫細胞の免疫細胞活性を活性化する。望ましい場合は、２つ以上の抗原結合ドメインは、ＴＣＲ複合体の別々の鎖に連結される。代替方法として、２つ以上の抗原結合ドメインは、ＴＣＲ複合体の１本の鎖に連結される。主題の系のいくつかの実施形態において、２つ以上の抗原結合ドメインは、表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／またはガンマ鎖にタンデムに連結される。いくつかの実施形態において、主題の系の２つ以上の抗原結合ドメインは、任意選択でタンデムに、主題の系のＣＡＲに連結される。
【０１７１】
本開示の改変ＴＣＲ複合体および／または系を発現する免疫細胞において活性化される免疫細胞活性は、様々な細胞活性のうち任意のものであり得る。いくつかの実施形態において、免疫細胞活性は、免疫細胞のクローン増殖；免疫細胞によるサイトカイン放出；免疫細胞の細胞傷害性；免疫細胞の増殖；免疫細胞の分化、脱分化、または分化転換；免疫細胞の移動および／または輸送；免疫細胞の疲弊および／または再活性化；ならびに免疫細胞による、他の細胞間分子、代謝物、化学物質、またはそれらの組み合わせの放出からなる群より選択される。
【０１７２】
いくつかの実施形態において、免疫細胞活性は、免疫細胞のクローン増殖を含む。クローン増殖は、免疫細胞から生じる娘細胞の生成を含み得る。クローン増殖において、免疫細胞の子孫は、本明細書において提供される改変ＴＣＲ複合体および／または系を含み得る。クローン増殖において、免疫細胞の子孫は、本明細書において提供されるＣＡＲを含み得る。クローン増殖において、免疫細胞の子孫は、本明細書において提供される改変ＴＣＲ複合体を含み得る。クローン増殖において、免疫細胞の子孫は、本明細書において提供されるＣＡＲおよびＴＣＲを含み得る。本明細書において提供される改変ＴＣＲ複合体および／または系を含む免疫細胞のクローン増殖は、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系を欠く同等の免疫細胞、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系（たとえば、ＣＡＲ、改変ＴＣＲ複合体）の１または複数の成分を欠く同等の免疫細胞、ならびに／または第１および第２の抗原結合ドメインのうちの１つのみがそれぞれのエピトープに結合される同等の免疫細胞の、クローン増殖より進み得る。本明細書において提供される改変ＴＣＲ複合体および／または系を含む免疫細胞のクローン増殖は、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系を欠く同等の免疫細胞、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系（たとえば、ＣＡＲ、改変ＴＣＲ複合体）の１または複数の成分を欠く同等の免疫細胞、ならびに／または第１および第２の抗原結合ドメインのうちの１つのみがそれぞれのエピトープに結合される同等の免疫細胞より、約５倍から約１０倍、約１０倍から約２０倍、約２０倍から約３０倍、約３０倍から約４０倍、約４０倍から約５０倍、約５０倍から約６０倍、約６０倍から約７０倍、約７０倍から約８０倍、約８０倍から約９０倍、約９０倍から約１００倍、約１００倍から約２００倍、約２００倍から約３００倍、約３００倍から約４００倍、約４００倍から約５００倍、約５００倍から約６００倍、約６００倍から約７００倍、進み得る。いくつかの実施形態において、クローン増殖は、免疫細胞の数を定量化することを含み得る。免疫細胞の数を定量化することは、フローサイトメトリ、トリパンブルー色素排除法、および／または血球計算法を含み得る。
【０１７３】
いくつかの実施形態において、免疫細胞活性は、免疫細胞によるサイトカイン放出を含む。いくつかの実施形態において、免疫細胞活性は、細胞間分子、代謝物、化学物質、またはそれらの組み合わせの放出を含む。免疫細胞によるサイトカイン放出は、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、ＩＬ−１７、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＣＳＦ、ＴＧＦβ、およびグランザイムなどの放出を含み得る。いくつかの実施形態において、サイトカイン放出は、ＨＴＲＦ、フローサイトメトリ、およびウエスタンブロットなどを用いて定量化してよい。本明細書において提供される改変ＴＣＲ複合体および／または系を含む免疫細胞によるサイトカイン放出は、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系を欠く同等の免疫細胞、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系（たとえば、ＣＡＲ、改変ＴＣＲ複合体）の１または複数のおよび／または成分を欠く同等の免疫細胞、ならびに／または第１および第２の抗原結合ドメインのうちの１つのみがそれぞれのエピトープに結合される同等の免疫細胞の、サイトカイン放出より多くあり得る。本明細書において提供される改変ＴＣＲ複合体および／または系を含む免疫細胞は、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系を欠く同等の免疫細胞、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系（たとえば、ＣＡＲ、改変ＴＣＲ複合体）の１または複数の成分を欠く同等の免疫細胞、ならびに／または第１および第２の抗原結合ドメインのうちの１つのみがそれぞれのエピトープに結合される同等の免疫細胞と比較して、約１倍から、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、１５０倍、２００倍、２５０倍、または３００倍超、多いサイトカイン放出を生じ得る。いくつかの実施形態において、サイトカイン放出はインビトロまたはインビボで定量化され得る。
【０１７４】
いくつかの実施形態において、免疫細胞活性は、免疫細胞の細胞傷害性を含む。いくつかの例において、本開示の改変ＴＣＲ複合体、主題の系、および組成物は、免疫細胞において発現されるとき、標的細胞を殺傷するために使用され得る。改変ＴＣＲ複合体および／または主題の系を発現する、免疫細胞または免疫細胞の集団は、標的細胞の死滅を誘導し得る。標的細胞の殺傷は、細胞集団が排除されることが望ましい、または細胞集団の増殖が抑制されることが望ましい疾患または障害を治療することを含むが、これらに限定されない、様々な用途に有用であり得る。細胞傷害性は、標的細胞の殺傷を指し得る。細胞傷害性はまた、免疫細胞による、細胞傷害性サイトカイン、たとえば、ＩＦＮγまたはグランザイムの放出を指す。いくつかの場合において、免疫細胞において発現される改変ＴＣＲ複合体および／または主題の系は、（ｉ）パーフォリン、グランザイム、およびグラニュリシンなどの細胞毒の放出、ならびに／または（ｉｉ）Ｔ細胞と標的細胞との間のＦａｓ−Ｆａｓリガンド相互作用によるアポトーシスの誘導を変更し、それにより標的細胞の破壊を誘発し得る。いくつかの実施形態において、細胞傷害性は、共培養アッセイ、ＥＬＩＳＰＯＴ、およびクロム放出細胞傷害性アッセイなどを含む、細胞傷害性アッセイによって定量化され得る。本明細書において提供される改変ＴＣＲ複合体および／または系を含む免疫細胞の細胞傷害性は、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系を欠く同等の免疫細胞、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系（たとえば、ＣＡＲ、改変ＴＣＲ複合体）の１または複数の成分を欠く同等の免疫細胞、ならびに／または第１および第２の抗原結合ドメインのうちの１つのみがそれぞれのエピトープに結合される同等の免疫細胞の、細胞傷害性より大きくあり得る。本明細書において提供される改変ＴＣＲ複合体および／または系を含む免疫細胞は、標的細胞に対して、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系を欠く同等の免疫細胞、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系（たとえば、ＣＡＲ、改変ＴＣＲ複合体）の１または複数の成分を欠く同等の免疫細胞、ならびに／または第１および第２の抗原結合ドメインのうちの１つのみがそれぞれのエピトープに結合される同等の免疫細胞と比較して、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１２５％、１５０％、１７５％、または２００％、より細胞傷害性であり得る。本明細書において提供される改変ＴＣＲ複合体および／または系を含む免疫細胞は、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系を欠く同等の免疫細胞、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系（たとえば、ＣＡＲ、改変ＴＣＲ複合体）の１または複数の成分を欠く同等の免疫細胞、ならびに／または第１および第２の抗原結合ドメインのうちの１つのみがそれぞれのエピトープに結合される同等の免疫細胞による標的細胞の死滅より、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１２５％、���５０％、１７５％、または２００％高い、標的細胞の死滅を誘導し得る。いくつかの実施形態において、改変ＴＣＲ複合体および／または主題の系を発現する免疫細胞は、表面上に標的エピトープを表示する標的細胞におけるアポトーシスを誘導し得る。いくつかの実施形態において、細胞傷害性はインビトロまたはインビボで決定され得る。いくつかの実施形態において、細胞傷害性を決定することは、本明細書において提供される改変ＴＣＲ複合体および／または系を含む細胞の投与後、投与前の疾患のレベルと比較して、疾患のレベルを決定することを含み得る。いくつかの実施形態において、細胞傷害性を決定することは、本明細書において提供される改変ＴＣＲ複合体および／または系を含む細胞の投与後の疾患のレベルと、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系を欠く同等の免疫細胞、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系（たとえば、ＣＡＲ、改変ＴＣＲ複合体）の１または複数の成分を欠く同等の免疫細胞、ならびに／または第１および第２の抗原結合ドメインのうちの１つのみがそれぞれのエピトープに結合される同等の免疫細胞の投与後の疾患のレベルとを、決定することを含み得る。いくつかの実施形態において、標的病変上の疾患のレベルは、完全奏功（ＣＲ）；標的病変の消失、部分奏功（ＰＲ）；ベースライン和ＬＤを基準とした、標的病変の最長径（ＬＤ）の和における少なくとも３０％の減少、進行（ＰＤ）；治療の開始時、または１または複数の新たな病変の出現時から記録される、最小和ＬＤを基準とした、標的病変のＬＤの和における少なくとも２０％の増大、安定（ＳＤ）；または、最小和ＬＤを基準として、ＰＲに適するのに十分な縮小でも、ＰＤに適するのに十分な増大でもない、として測定され得る。いくつかの実施形態において、非標的病変は、測定され得る。非標的病変の疾患のレベルは、完全奏功（ＣＲ）；すべての非標的病変の消失および腫瘍マーカレベルの正常化、非完全奏功；１または複数の非標的病変の持続、進行（ＰＤ）；または１または複数の新たな病変の出現であり得る。
【０１７５】
いくつかの実施形態において、免疫細胞活性は、免疫細胞の増殖である。免疫細胞の増殖は、免疫細胞の拡大を指し得る。免疫細胞の増殖は、免疫細胞の表現型の変化を指し得る。本明細書において提供される改変ＴＣＲ複合体および／または系を含む免疫細胞の増殖は、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系を欠く同等の免疫細胞、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系（たとえば、ＣＡＲ、改変ＴＣＲ複合体）の１または複数の成分を欠く同等の免疫細胞、ならびに／または第１および第２の抗原結合ドメインのうちの１つのみがそれぞれのエピトープに結合される同等の免疫細胞の、クローン増殖より進み得る。本明細書において提供される改変ＴＣＲ複合体および／または系を含む免疫細胞の増殖は、本明細書において提供される改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系を欠く同等の免疫細胞、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系（たとえば、ＣＡＲ、改変ＴＣＲ複合体）の１または複数の成分を欠く同等の免疫細胞、ならびに／または第１および第２の抗原結合ドメインのうちの１つのみがそれぞれのエピトープに結合される同等の免疫細胞の増殖より、約５倍から約１０倍、約１０倍から約２０倍、約２０倍から約３０倍、約３０倍から約４０倍、約４０倍から約５０倍、約５０倍から約６０倍、約６０倍から約７０倍、約７０倍から約８０倍、約８０倍から約９０倍、約９０倍から約１００倍、約１００倍から約２００倍、約２００倍から約３００倍まで、約３００倍から約４００倍まで、約４００倍から約５００倍まで、約５００倍から約６００倍まで、約６００倍から約７００倍まで、進み得る。いくつかの実施形態において、増殖は、免疫細胞の数を定量化することを含み得る。免疫細胞の数を定量化することは、フローサイトメトリ、トリパンブルー色素排除法、および／または血球計算法を含み得る。増殖はまた、免疫細胞の表現型解析によって決定され得る。たとえば、培養物中の免疫細胞の凝集は、改変ＴＣＲ複合体および／または系を欠く同等の免疫細胞と比較して、免疫細胞の増殖があることを意味する。
【０１７６】
いくつかの実施形態において、免疫細胞活性は、分化、脱分化、または分化転換であり得る。免疫細胞の分化、脱分化、または分化転換は、フローサイトメトリによって細胞表面上にある分化、脱分化、または分化転換のマーカの表現型発現を評価することによって、決定され得る。いくつかの実施形態において、本明細書において提供される改変ＴＣＲ複合体および／または系を含む免疫細胞は、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系を欠く同等の免疫細胞、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系（たとえば、ＣＡＲ、改変ＴＣＲ複合体）の１または複数の成分を欠く同等の免疫細胞、ならびに／または第１および第２の抗原結合ドメインのうちの１つのみがそれぞれのエピトープに結合される同等の免疫細胞と比較して、分化能を増大する。いくつかの実施形態において、本明細書において提供される改変ＴＣＲ複合体および／または系を含む免疫細胞は、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系を欠く同等の免疫細胞、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系（たとえば、ＣＡＲ、改変ＴＣＲ複合体）の１または複数の成分を欠く同等の免疫細胞、ならびに／または第１および第２の抗原結合ドメインのうちの１つのみがそれぞれのエピトープに結合される同等の免疫細胞と比較して、脱分化能を増大する。いくつかの実施形態において、本明細書において提供される改変ＴＣＲ複合体および／または系を含む免疫細胞は、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系を欠く同等の免疫細胞、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系（たとえば、ＣＡＲ、改変ＴＣＲ複合体）の１または複数の成分を欠く同等の免疫細胞、ならびに／または第１および第２の抗原結合ドメインのうちの１つのみがそれぞれのエピトープに結合される同等の免疫細胞と比較して、より高い分化転換能を有する。
【０１７７】
いくつかの実施形態において、免疫細胞活性は、改変ＴＣＲ複合体および／または系を含む免疫細胞の移動および／または輸送であり得る。いくつかの実施形態において、移動は、標的部位への免疫細胞の局在を定量化することによって決定され得る。たとえば、改変ＴＣＲ複合体および／または主題の系を含む免疫細胞は、たとえば、標的部位ではない部位での投与後、標的部位で定量化され得る。定量化は、病変を単離し、改変ＴＣＲ複合体および／または系を含む、免疫細胞、たとえば、腫瘍浸潤リンパ球の数を定量化することによって実行され得る。本明細書において提供される改変ＴＣＲ複合体および／または系を含む免疫細胞の移動および／または輸送は、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系を欠く同等の免疫細胞、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系（たとえば、ＣＡＲ、改変ＴＣＲ複合体）の１または複数の成分を欠く同等の免疫細胞、ならびに／または第１および第２の抗原結合ドメインのうちの１つのみがそれぞれのエピトープに結合される同等の免疫細胞の、移動および／または輸送より多くあり得る。いくつかの実施形態において、標的部位、たとえば腫瘍病変での、改変ＴＣＲ複合体および／または系を含む免疫細胞の数は、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系を欠く同等の免疫細胞、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系（たとえば、ＣＡＲ、改変ＴＣＲ複合体）の１または複数の成分を欠く同等の免疫細胞、ならびに／または第１および第２の抗原結合ドメインのうちの１つのみがそれぞれのエピトープに結合される同等の免疫細胞の数の、約５倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、または４０倍であり得る。輸送は、トランスウェル遊走アッセイを利用してインビトロで決定され得る。いくつかの実施形態において、たとえばトランスウェル遊走アッセイにおいて、標的部位での、改変ＴＣＲ複合体および／または系を含む免疫細胞の数は、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系を欠く同等の免疫細胞、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系（たとえば、ＣＡＲ、改変ＴＣＲ複合体）の１または複数の成分を欠く同等の免疫細胞、ならびに／または第１および第２の抗原結合ドメインのうちの１つのみがそれぞれのエピトープに結合される同等の免疫細胞の数の、約５倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、または４０倍であり得る。
【０１７８】
いくつかの実施形態において、免疫細胞活性は、免疫細胞の疲弊および／または活性化であり得る。免疫細胞の疲弊および／または活性化は、フローサイトメトリまたは顕微鏡的解析による表現型解析によって決定され得る。たとえば、疲弊マーカ、たとえば、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ１）、リンパ球活性化遺伝子３タンパク質（ＬＡＧ３）、２Ｂ４、ＣＤ１６０、Ｔｉｍ３、ならびに免疫グロブリンおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の発現レベルは、定量的かつ／または定性的に決定され得る。いくつかの場合において、Ｔ細胞などの免疫細胞は、階層的にエフェクタ機能を失い、疲弊し得る。疲弊の結果、ＩＬ−２産生およびサイトカイン発現などの機能、ならびに高い増殖能が失われ得る。また、疲弊の後に、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、およびケモカインの産生の不足、ならびに脱顆粒の不足が続き得る。本明細書において提供される改変ＴＣＲ複合体および／または系を含む免疫細胞の疲弊または活性化は、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系を欠く同等の免疫細胞、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系（たとえば、ＣＡＲ、改変ＴＣＲ複合体）の１または複数の成分を欠く同等の免疫細胞、ならびに／または第１および第２の抗原結合ドメインのうちの１つのみがそれぞれのエピトープに結合される同等の免疫細胞の、疲弊または活性化より大きくあり得る。いくつかの実施形態において、本明細書において提供される改変ＴＣＲ複合体および／または系を含む免疫細胞は、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系を欠く同等の免疫細胞、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系（たとえば、ＣＡＲ、改変ＴＣＲ複合体）の１または複数の成分を欠く同等の免疫細胞、ならびに／または第１および第２の抗原結合ドメインのうちの１つのみがそれぞれのエピトープに結合される同等の免疫細胞と比較して、少なくとも約１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、１５０倍、２００倍、２５０倍、または３００倍超、疲弊または活性化が増大され得る。いくつかの実施形態において、本明細書において提供される改変ＴＣＲ複合体および／または系を含む免疫細胞は、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系を欠く同等の免疫細胞、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系（たとえば、ＣＡＲ、改変ＴＣＲ複合体）の１または複数の成分を欠く同等の免疫細胞、ならびに／または第１および第２の抗原結合ドメインのうちの１つのみがそれぞれのエピトープに結合される同等の免疫細胞と比較して、少なくとも約１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、１５０倍、２００倍、２５０倍、または３００倍超、疲弊または活性化が減少され得る。
【０１７９】
いくつかの実施形態において、第１のエピトープへの第１の抗原結合ドメインの結合、および第２のエピトープへの第２の抗原結合ドメインの結合は、系を発現する主題の免疫細胞の細胞傷害性を活性化する。細胞傷害性は、（ｉ）第１のエピトープへの第１の抗原結合ドメインの結合のみ、または（ｉｉ）第２のエピトープへの第２の抗原結合ドメインの結合のみと比較して、増強され得る。細胞傷害性は、細胞傷害性アッセイにおいてパーセント殺傷によって測定されるとき、（ｉ）第１のエピトープへの第１の抗原結合ドメインの結合のみ、または（ｉｉ）第２のエピトープへの第２の抗原結合ドメインの結合のみと比較して、増強され得る。パーセント殺傷は、（ｉ）第１のエピトープへの第１の抗原結合ドメインの結合のみ、または（ｉｉ）第２のエピトープへの第２の抗原結合ドメインの結合のみと比較して、接触の後の標的細胞の約５％から、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または最大約１００％までであり得る。
【０１８０】
いくつかの実施形態において、第１のエピトープへの第１の抗原結合ドメインの結合、および第２のエピトープへの第２の抗原結合ドメインの結合は、系を発現する免疫細胞の細胞傷害性を活性化し、（ｉ）第１のエピトープへの第１の抗原結合ドメインの結合のみ、または（ｉｉ）第２のエピトープへの第２の抗原結合ドメインの結合のみと比較して、細胞傷害性に関連付けられる副作用を低減する。いくつかの実施形態において、細胞傷害性に関連付けられる副作用は、サイトカイン放出症候群である。サイトカイン放出症候群の減少などの、副作用の低減は、（ｉ）第１のエピトープへの第１の抗原結合ドメインの結合のみ、または（ｉｉ）第２のエピトープへの第２の抗原結合ドメインの結合のみと比較して、約５％から、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または最大約１００％までの低減であり得る。
【０１８１】
いくつかの実施形態において、第１のエピトープへの第１の抗原結合ドメインの結合、および第２のエピトープへの第２の抗原結合ドメインの結合は、系を発現する免疫細胞の細胞傷害性を活性化し、第１のエピトープへの第１の抗原結合ドメインの結合のみ、または第２のエピトープへの第２の抗原結合ドメインの結合のみと比較して、細胞傷害性の持続性を増大する。第１のエピトープへの第１の抗原結合ドメインの結合、および第２のエピトープへの第２の抗原結合ドメインの結合は、系が被験体の免疫細胞において発現されるとき、上記系を発現する免疫細胞の細胞傷害性を活性化し得、第１のエピトープへの第１の抗原結合ドメインの結合のみ、または第２のエピトープへの第２の抗原結合ドメインの結合のみと比較して、上記細胞傷害性の持続性を増大する。持続性の増大は、投与後に、系を含む免疫細胞のレベルを定量化することによって、決定され得る。持続性の増大は、系を欠く同等の免疫細胞、系（たとえば、ＣＡＲ、改変ＴＣＲ複合体）の１または複数の成分を欠く同等の免疫細胞、および／または第１および第２の抗原結合ドメインのうちの１つのみがそれぞれのエピトープに結合される同等の免疫細胞と比較して、投与後、１日から、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２５日、３０日、３５日、４０日、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、７か月、８か月、９か月、１０か月、１年、またはそれより長い、本明細書において提供される系を含む免疫細胞の存在を指し得る。
【０１８２】
ある態様において、本開示は、本明細書における様々な実施形態の任意の改変ＴＣＲ複合体および／または系（たとえば、ＣＡＲ、改変ＴＣＲ複合体）を発現する、単離された宿主細胞を提供する。単離された宿主細胞は、宿主細胞の集団を含み得る。宿主細胞は、改変ＴＣＲ複合体および／または主題の系を発現するために適切な、任意の細胞であり得る。いくつかの場合において、宿主細胞は、免疫細胞である。免疫細胞は、Ｔ細胞などのリンパ球であり得る。Ｔ細胞の非限定的な例としては、ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、Ｖγ９δ２  Ｔ細胞、Ｖδ１  Ｔ細胞、Ｖδ３  Ｔ細胞およびＶδ５  Ｔ細胞が挙げられる。いくつかの場合において、改変ＴＣＲ複合体および／または主題の系を発現するリンパ球は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、エフェクタＴ細胞、メモリＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ＮＫＴ、および／またはＴヘルパ細胞である。いくつかの場合において、改変ＴＣＲ複合体および／または主題の系を発現するリンパ球は、ＫＨＹＧ−１細胞などのＫＨＹＧ細胞、またはそれの誘導体である。
【０１８３】
ある態様において、本開示は、少なくとも２つの外因的に導入される抗原結合ドメインを含む抗原特異的免疫細胞を提供し、当該抗原結合ドメインのうちの１つは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体に連結され、もう１つはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に連結される。抗原特異的免疫細胞は、少なくとも２つの外因的に導入される抗原結合ドメインによって認識される１または複数の抗原を発現する標的細胞に、特異的に結合し得る。免疫細胞は、Ｔ細胞などのリンパ球であり得る。Ｔ細胞の非限定的な例としては、ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、Ｖγ９δ２  Ｔ細胞、Ｖδ１  Ｔ細胞、Ｖδ３  Ｔ細胞およびＶδ５  Ｔ細胞が挙げられる。いくつかの場合において、改変ＴＣＲ複合体および／または主題の系を発現するリンパ球は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、エフェクタＴ細胞、メモリＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ＮＫＴ、および／またはＴヘルパ細胞である。いくつかの場合において、主題の系を発現するリンパ球は、ＫＨＹＧ−１細胞などのＫＨＹＧ細胞、またはそれの誘導体である。
【０１８４】
ある態様において、本開示は、免疫細胞の集団を提供し、個々の免疫細胞は、本明細書における様々な実施形態の任意の改変ＴＣＲ複合体および／または系を発現し、ここで、免疫細胞の集団を、被験体における標的細胞集団に暴露させると、免疫細胞の集団は標的細胞を死滅に誘導する点において、特徴付けられる。免疫細胞の集団は、標的細胞の少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または最大約１００％までの、かつ暴露後、約１日以内、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２５日、３０日、３５日、４０日、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、７か月、８か月、９か月、１０か月、１年、またはそれより長い、の死滅を誘導し得る。
【０１８５】
免疫細胞の集団は、様々な免疫細胞のうち任意のものを含み得る。いくつかの場合において、免疫細胞の集団は、リンパ球を含む。リンパ球は、Ｔ細胞であり得る。Ｔ細胞の非限定的な例としては、ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、Ｖγ９δ２  Ｔ細胞、Ｖδ１  Ｔ細胞、Ｖδ３  Ｔ細胞およびＶδ５  Ｔ細胞が挙げられる。いくつかの場合において、リンパ球は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、エフェクタＴ細胞、メモリＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ＮＫＴ、および／またはＴヘルパ細胞である。いくつかの実施形態において、改変ＴＣＲ複合体および／または主題の系を発現するリンパ球は、ＫＨＹＧ−１細胞などのＫＨＹＧ細胞、またはそれの誘導体である。
【０１８６】
免疫細胞の集団は、任意の適切な数の細胞を含み得る。免疫細胞の数は、インビトロアッセイにおいて使用される細胞の数として決定され得る。免疫細胞の数は、被験体に投与される細胞の数として決定され得る。免疫細胞の数は、増殖および／または拡大などの任意の免疫細胞活性が活性化される前の細胞の数として決定され得る。免疫細胞の集団は、被験体に投与される、少なくとも約１×１０６個の細胞、少なくとも約２×１０６個の細胞、少なくとも約３×１０６個の細胞、少なくとも約４×１０６個の細胞、少なくとも約５×１０６個の細胞、少なくとも約６×１０６個の細胞、少なくとも約７×１０６個の細胞、少なくとも約８×１０６個の細胞、少なくとも約９×１０６個の細胞、１×１０７個の細胞、少なくとも約２×１０７個の細胞、少なくとも約３×１０７個の細胞、少なくとも約４×１０７個の細胞、少なくとも約５×１０７個の細胞、少なくとも約６×１０７個の細胞、少なくとも約７×１０７個の細胞、少なくとも約８×１０７個の細胞、少なくとも約９×１０７個の細胞、少なくとも約１×１０８個の細胞、少なくとも約２×１０８個の細胞、少なくとも約３×１０８個の細胞、少なくとも約４×１０８個の細胞、少なくとも約５×１０８個の細胞、少なくとも約６×１０８個の細胞、少なくとも約７×１０８個の細胞、少なくとも約８×１０８個の細胞、少なくとも約９×１０８個の細胞、少なくとも約１×１０９個の細胞、少なくとも約２×１０９個の細胞、少なくとも約３×１０９個の細胞、少なくとも約４×１０９個の細胞、少なくとも約５×１０９個の細胞、少なくとも約６×１０９個の細胞、少なくとも約７×１０９個の細胞、少なくとも約８×１０９個の細胞、少なくとも約９×１０９個の細胞、少なくとも約１×１０１０個の細胞、少なくとも約２×１０１０個の細胞、少なくとも約３×１０１０個の細胞、少なくとも約４×１０１０個の細胞、少なくとも約５×１０１０個の細胞、少なくとも約６×１０１０個の細胞、少なくとも約７×１０１０個の細胞、少なくとも約８×１０１０個の細胞、少なくとも約９×１０１０個の細胞、少なくとも約１×１０１１個の細胞、少なくとも約２×１０１１個の細胞、少なくとも約３×１０１１個の細胞、少なくとも約４×１０１１個の細胞、少なくとも約５×１０１１個の細胞、少なくとも約６×１０１１個の細胞、少なくとも約７×１０１１個の細胞、少なくとも約８×１０１１個の細胞、少なくとも約９×１０１１個の細胞、または少なくとも約１×１０１２個の細胞を含み得る。いくつかの実施形態において、免疫細胞の集団は、最大で約５×１０１０個の細胞、最大で約４×１０１０個の細胞、最大で約３×１０１０個の細胞、最大で約２×１０１０個の細胞、最大で約１×１０１０個の細胞、最大で約９×１０９個の細胞、最大で約８×１０９個の細胞、最大で約７×１０９個の細胞、最大で約６×１０９個の細胞、最大で約５×１０９個の細胞、最大で約４×１０９個の細胞、最大で約３×１０９個の細胞、最大で約２×１０９個の細胞、最大で約１×１０９個の細胞、最大で約９×１０８個の細胞、最大で約８×１０８個の細胞、最大で約７×１０８個の細胞、最大で約６×１０８個の細胞、最大で約５×１０８個の細胞、最大で約４×１０８個の細胞、最大で約３×１０８個の細���、最大で約２×１０８個の細胞、最大で約１×１０８個の細胞、最大で約９×１０７個の細胞、最大で約８×１０７個の細胞、最大で約７×１０７個の細胞、最大で約６×１０７個の細胞、最大で約５×１０７個の細胞、最大で約４×１０７個の細胞、最大で約３×１０７個の細胞、最大で約２×１０７個の細胞、最大で約１×１０７個の細胞、最大で約９×１０６個の細胞、最大で約８×１０６個の細胞、最大で約７×１０６個の細胞、最大で約６×１０６個の細胞、最大で約５×１０６個の細胞、最大で約４×１０６個の細胞、最大で約３×１０６個の細胞、最大で約２×１０６個の細胞、最大で約１×１０６個の細胞、最大で約９×１０５個の細胞、最大で約８×１０５個の細胞、最大で約７×１０５個の細胞、最大で約６×１０５個の細胞、最大で約５×１０５個の細胞、最大で約４×１０５個の細胞、最大で約３×１０５個の細胞、最大で約２×１０５個の細胞、または最大で約１×１０５個の細胞を含み得る。免疫細胞の集団は、それを必要とする被験体に投与され得る。たとえば、約５×１０１０個の細胞が被験体に投与されてよい。いくつかの場合において、細胞の集団は、治療に十分な数に拡大され得る。たとえば、５×１０７個の細胞は、急速に拡大されて治療上の使用に十分な数を生成し得る。任意の数の細胞が、治療上の使用のために、たとえば注入によって、被験体に投与され得る。患者は、たとえば、両端値を含む、約１×１０６個から５×１０１２個の間の数の細胞を注入されてよい。患者は、それらのために生成され得る数の細胞を注入されてよい。
【０１８７】
本明細書における様々な態様の細胞のうち任意のものにおいて、細胞は、標的細胞中に同時に存在する２つの抗原に対して特異的な結合を示してよい。抗原は、標的細胞表面上に存在してよく、または、いくつかの場合において、ＭＨＣとの関係においてなど、別の細胞によって表示される標的細胞の細胞内タンパク質であり得る。
【０１８８】
本明細書における態様の様々な実施形態において、ＣＡＲに連結される抗原結合ドメインは主に、免疫細胞と標的細胞との間の相互作用を媒介してよく、改変ＴＣＲ複合体に連結される抗原結合ドメインは主に、免疫細胞と標的細胞との間の相互作用が生じるとき、免疫細胞活性を媒介してよい。本明細書で先に説明されるように、免疫細胞活性は、免疫細胞のクローン増殖；免疫細胞によるサイトカイン放出；免疫細胞の細胞傷害性；免疫細胞の増殖；免疫細胞の分化、脱分化、または分化転換；免疫細胞の移動および／または輸送；免疫細胞の疲弊および／または再活性化；ならびに免疫細胞による、他の細胞間分子、代謝物、化学物質、またはそれらの組み合わせの放出を含み得る。
【０１８９】
ある態様において、本明細書において提供されるのは、免疫細胞および／または標的細胞の活性を誘導する方法であり、当該方法は、（ａ）免疫細胞において、本明細書で開示される改変ＴＣＲ複合体および／または系を発現する段階；および（ｂ）免疫細胞および／または標的細胞の活性を誘導する条件下で標的細胞を免疫細胞に接触させる段階を含む。いくつかの実施形態において、免疫細胞において発現される系は、２つ以上の抗原結合ドメインを含む改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体を含み、当該改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体は、任意選択でタンデムに、（ｉ）ＴＣＲのアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される少なくとも１つのＴＣＲ鎖、（ｉｉ）表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／もしくはガンマ鎖、または（ｉｉｉ）ＣＤ３ゼータ鎖に連結される。いくつかの実施形態において、免疫細胞において発現される系は、（ａ）第１のエピトープへの結合特異性を有する第１の抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）；ならびに（ｂ）第２の抗原結合ドメインを含む改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体を含み、当該第２の抗原結合ドメインは、（ｉ）Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される少なくとも１つのＴＣＲ鎖、（ｉｉ）表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／もしくはガンマ鎖、または（ｉｉｉ）ＣＤ３ゼータ鎖のうちの少なくとも１つに連結される。
【０１９０】
標的細胞を、系を発現する免疫細胞と接触させると、第１の抗原結合ドメインおよび／または第２の抗原結合ドメインは、それぞれのエピトープに結合してよい。これらのエピトープは、たとえば、標的細胞上に存在する。第１の抗原結合ドメイン、および／または第２の抗原結合ドメインのそれぞれのエピトープへの結合は、免疫細胞の細胞傷害性を活性化し得る。いくつかの場合において、第１の抗原結合ドメインおよび第２の抗原結合ドメインの両方が増強されるとき、細胞傷害性は、系を欠く同等の免疫細胞、系（たとえば、ＣＡＲ、改変ＴＣＲ複合体）の１または複数の成分を欠く同等の免疫細胞、ならびに／または系を発現し、第１の抗原結合ドメインおよび第２の抗原結合ドメインのうちの１つのみがそれぞれのエピトープに結合される同等の免疫細胞と比較して、免疫細胞において活性化した。それぞれのエピトープへの、第１の抗原結合ドメインの結合、および／または第２の抗原結合ドメインの結合は、免疫細胞の細胞傷害性を活性化し、細胞傷害性に関連付けられる副作用を低減し得る。いくつかの場合において、細胞傷害性に関連付けられる副作用の低減は、系を欠く同等の免疫細胞、系（たとえば、ＣＡＲ、改変ＴＣＲ複合体）の１または複数の成分を欠く同等の免疫細胞、ならびに／または系を発現し、第１の抗原結合ドメインおよび第２の抗原結合ドメインのうちの１つのみがそれぞれのエピトープに結合される同等の免疫細胞と比較して、より大きい。いくつかの場合において、低減される副作用は、サイトカイン放出症候群である。それぞれのエピトープへの、第１の抗原結合ドメインの結合、および／または第２の抗原結合ドメインの結合は、免疫細胞の細胞傷害性を活性化し、細胞傷害性の持続性を増大し得る。いくつかの場合において、細胞傷害性の持続性は、系を欠く同等の免疫細胞、系（たとえば、ＣＡＲ、改変ＴＣＲ複合体）の１または複数の成分を欠く同等の免疫細胞、ならびに／または系を発現し、第１の抗原結合ドメインおよび第２の抗原結合ドメインのうちの１つのみがそれぞれのエピトープに結合される同等の免疫細胞と比較して、増大される。いくつかの場合において、免疫細胞の細胞傷害性は、標的細胞の死滅を誘導する。
【０１９１】
免疫細胞および／または標的細胞の活性を誘導する方法の様々な実施形態において、免疫細胞は、様々な免疫細胞のうち任意のものであり得る。いくつかの場合において、免疫細胞は、リンパ球を含む。リンパ球は、Ｔ細胞であり得る。Ｔ細胞の非限定的な例としては、ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、Ｖγ９δ２  Ｔ細胞、Ｖδ１  Ｔ細胞、Ｖδ３  Ｔ細胞およびＶδ５  Ｔ細胞が挙げられる。いくつかの場合において、リンパ球は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、エフェクタＴ細胞、メモリＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ＮＫＴ、および／またはＴヘルパ細胞である。いくつかの場合において、改変ＴＣＲ複合体および／または主題の系を発現するリンパ球は、ＫＨＹＧ−１細胞などのＫＨＹＧ細胞、またはそれの誘導体である。
【０１９２】
免疫細胞および／または標的細胞の活性を誘導する方法の様々な実施形態において、標的細胞は、様々な細胞型のうち任意のものであり得る。標的細胞は、たとえば、がん細胞、造血細胞、または固形腫瘍細胞であり得る。いくつかの場合において、標的細胞は、心臓、血管、唾液腺、食道、胃、肝臓、胆嚢、膵臓、腸、結腸、直腸、肛門、内分泌腺、副腎、腎臓、尿管、膀胱、リンパ節、扁桃腺、咽頭扁桃腺、胸腺、脾臓、皮膚、筋肉、脳、脊髄、神経、卵巣、卵管、子宮、膣、乳腺、精巣、前立腺、陰茎、咽頭、喉頭、気管、気管支、肺、横隔膜、軟骨、靭帯、および腱のうちの１または複数において同定される細胞であり得る。標的細胞は、疾患細胞であり得る。
【０１９３】
ある態様において、本開示は、被験体のがんを治療する方法を提供する。いくつかの実施形態において、方法は、本明細書で開示される改変ＴＣＲ複合体または系を含む抗原特異的免疫細胞を被験体に投与する段階を含む。いくつかの実施形態において、抗原特異的免疫細胞は、２つ以上の抗原結合ドメインを含む改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体を含み、当該改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体は、任意選択でタンデムに、（ｉ）ＴＣＲのアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される少なくとも１つのＴＣＲ鎖、（ｉｉ）表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／もしくはガンマ鎖、または（ｉｉｉ）ＣＤ３ゼータ鎖に連結される。いくつかの実施形態において、抗原特異的免疫細胞は、第１の抗原結合ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、および第２の抗原結合ドメインを含む改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体を含む。いくつかの実施形態において、方法は、（ａ）第１の抗原結合ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）および第２の抗原結合ドメインを含む改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体を含む抗原特異的免疫細胞を被験体に投与する段階であって、ここで、被験体のがんの標的細胞は、第１および／または第２の抗原結合ドメインによって認識される１または複数の抗原を発現し、かつ免疫細胞は標的細胞に特異的に結合する段階、ならびに（ｂ）標的細胞に対する、免疫細胞の免疫細胞活性を誘導する条件下で、第１および／または第２の抗原結合ドメインを介して標的細胞を抗原特異的免疫細胞と接触させ、それによりがんの標的細胞の死滅を誘導する段階を含む。
【０１９４】
ある態様において、本開示は、被験体のがんを治療する方法を提供し、当該方法は、（ａ）抗原特異的免疫細胞を被験体に投与する段階であって、ここで、抗原特異的免疫細胞は、本明細書において提供される実施形態の任意の改変ＴＣＲ複合体および／または系を発現する遺伝子改変免疫細胞である段階、ならびに（ｂ）被験体のがんの標的細胞に対する、免疫細胞の免疫細胞活性を誘導する条件下で、標的細胞を抗原特異的免疫細胞と接触させ、それによりがんの標的細胞の死滅を誘導する段階を含む。
【０１９５】
いくつかの実施形態において、被験体のがんを治療する方法は、免疫細胞を遺伝子改変して抗原特異的免疫細胞を得る段階を含む。
【０１９６】
標的細胞を抗原特異的免疫細胞と接触させると、被験体のがんの標的細胞に対する免疫細胞活性は、標的細胞の死滅を誘導し得る。免疫細胞活性は、免疫細胞のクローン増殖；免疫細胞によるサイトカイン放出；免疫細胞の細胞傷害性；免疫細胞の増殖；免疫細胞の分化、脱分化、または分化転換；免疫細胞の移動および／または輸送；免疫細胞の疲弊および／または再活性化；ならびに免疫細胞による、他の細胞間分子、代謝物、化学物質、またはそれらの組み合わせの放出からなる群より選択され得る。いくつかの場合において、免疫細胞活性は、免疫細胞の細胞傷害性である。標的細胞に対する免疫細胞の細胞傷害性は、被験体のがんの、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または最大約１００％までの低減をもたらし得る。いくつかの実施形態において、免疫細胞活性は、免疫細胞によるサイトカイン放出であり得る。いくつかの場合において、サイトカインは、免疫細胞によって放出される。免疫細胞によって放出されるサイトカインの量は、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系を欠く同等の免疫細胞、改変ＴＣＲ複合体および／もしくは系（たとえば、ＣＡＲ、改変ＴＣＲ）の１または複数の成分を欠く同等の免疫細胞、ならびに／または第１および第２の抗原結合ドメインのうちの１つのみがそれぞれのエピトープに結合される同等の免疫細胞のサイトカインの量より、少なくとも３％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、最大約１００％まで、低くあり得る。いくつかの場合において、第１の抗原結合ドメイン単独のみの結合、または第２の抗原結合ドメインの結合のみと比較して、第１および第２の抗原結合ドメインの両方が、それぞれのエピトープに結合するとき、免疫細胞活性の持続性はより大きい。
【０１９７】
被験体のがんを治療する方法の様々な実施形態において、免疫細胞は、様々な免疫細胞のうち任意のものであり得る。いくつかの場合において、免疫細胞は、リンパ球を含む。リンパ球は、Ｔ細胞であり得る。Ｔ細胞の非限定的な例としては、ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞が挙げられる。いくつかの場合において、リンパ球は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。いくつかの場合において、改変ＴＣＲ複合体および／または主題の系を発現するリンパ球は、ＫＨＹＧ−１細胞などのＫＨＹＧ細胞、またはそれの誘導体である。
【０１９８】
被験体のがんを治療する方法の様々な実施形態において、がんは、様々ながんのうち任意のものであり得る。がんは、たとえば、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、子宮頸癌、大腸癌、食道癌、胃癌、神経膠腫、頭頚部癌、腎臓癌、白血病、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、黒色腫、中皮腫、髄芽腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、直腸癌、皮膚癌、精巣癌、気管癌、または外陰部癌から選択される。ある態様において、本開示は、組成物を提供する。いくつかの実施形態において、組成物は、本明細書で開示される、改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体および／または系を含む。いくつかの実施形態において、組成物は、２つ以上のエピトープへの特異的結合を示す２つ以上の抗原結合ドメインを含む改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体を含み、ここで、上記抗原結合ドメインは、任意選択でタンデムに、（ｉ）Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される少なくとも１つのＴＣＲ鎖；（ｉｉ）表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／もしくはガンマ鎖；または（ｉｉｉ）ＣＤ３ゼータ鎖に連結される。いくつかの実施形態において、組成物は、１または複数のポリヌクレオチドを含み、当該１または複数のポリヌクレオチドは、（ａ）第１のエピトープに対して結合特異性を有する第１の抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）；ならびに（ｂ）第２のエピトープへの特異的な結合を示す第２の抗原結合ドメインを含む改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体をコードし、ここで、上記第２の抗原結合ドメインは、Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、およびデルタ鎖から選択される少なくとも１つのＴＣＲ鎖、表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／もしくはガンマ鎖；またはＣＤ３ゼータ鎖に連結される。組成物は、１または複数のポリヌクレオチドを含み得、当該１または複数の１または複数のポリヌクレオチドは、（ａ）第１のエピトープに対して結合特異性を有する第１の抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）；ならびに（ｂ）Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、ガンマ鎖、および／またはデルタ鎖；表面抗原分類３（ＣＤ３）のイプシロン鎖、デルタ鎖、および／もしくはガンマ鎖；またはＣＤ３ゼータ鎖に連結される、第２の抗原結合ドメインをコードする。いくつかの実施形態において、１または複数のポリヌクレオチドは、それに動作可能に連結されるプロモータを含む。１または複数のポリヌクレオチドは、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）および／またはリボ核酸（ＲＮＡ）を含み得る。いくつかの実施形態において、１または複数のポリヌクレオチドによってコードされる、改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体または系の成分のうちの１または複数は、２つ以上の核酸コード領域を分けるリンカによって接合される。リンカは、２Ａ配列およびフューリン−Ｖ５−ＳＧＳＧＦ２Ａなどであり得る。
【０１９９】
ある態様において、本開示は、改変免疫細胞を作製する方法を提供し、当該方法は、本明細書において提供される組成物を、免疫細胞において発現することによって、免疫細胞を遺伝子改変し、それにより上記改変免疫細胞を作製する段階を含む。
【０２００】
本明細書における態様の様々な実施形態において、本明細書において提供される改変ＴＣＲ複合体および／または系を含む免疫細胞を用いて、標的細胞の死滅を誘導し得る。様々な標的細胞は、本開示の改変ＴＣＲ複合体および／または系、ならびに方法を用いて、殺傷され得る。この方法が適用され得る標的細胞は、多種多様の細胞型を含む。標的細胞は、インビトロであり得る。標的細胞は、インビボであり得る。標的細胞は、エクスビボであり得る。標的細胞は、単離された細胞であり得る。標的細胞は、生物体内の細胞であり得る。標的細胞は、生物であり得る。標的細胞は、細胞培養物中の細胞であり得る。標的細胞は、一群の細胞のうちの１つであり得る。標的細胞は、哺乳類細胞であるか、または哺乳類細胞に由来し得る。標的細胞は、げっ歯類細胞であるか、またはげっ歯類細胞に由来し得る。標的細胞は、ヒト細胞であるか、またはヒト細胞に由来し得る。標的細胞は、原核細胞であるか、または原核細胞に由来し得る。標的細胞は、細菌性細胞であるか、または細菌性細胞に由来し得る。標的細胞は、古細菌細胞であるか、または古細菌細胞に由来し得る。標的細胞は、真核細胞であるか、または真核細胞に由来し得る。標的細胞は、多能性幹細胞であり得る。標的細胞は、植物細胞であるか、または植物細胞に由来し得る。標的細胞は、動物細胞であるか、または動物細胞に由来し得る。標的細胞は、無脊椎動物細胞であるか、または無脊椎動物細胞に由来し得る。標的細胞は、脊椎動物細胞であるか、または脊椎動物細胞に由来し得る。標的細胞は、微生物細胞であるか、または微生物細胞に由来し得る。標的細胞は、真菌細胞であるか、または真菌細胞に由来し得る。標的細胞は、特定の器官または組織由来であり得る。
【０２０１】
標的細胞は、幹細胞または前駆細胞であり得る。標的細胞は、幹細胞（たとえば、成体幹細胞、胚性幹細胞、誘導多能性幹（ｉＰＳ）細胞）、および前駆細胞（たとえば、心臓前駆細胞、神経前駆細胞など）を含み得る。標的細胞は、げっ歯類幹細胞、げっ歯類前駆細胞、ヒト幹細胞、ヒト前駆細胞などを含む、哺乳類幹細胞および前駆細胞を含み得る。クローン細胞は、細胞の子孫を含み得る。標的細胞は、生体中にあり得る。標的細胞は、遺伝子改変細胞であり得る。
【０２０２】
標的細胞は、初代細胞であり得る。たとえば、初代細胞の培養物は、０回、１回、２回、４回、５回、１０回、１５回、またはそれより多く、継代培養され得る。細胞は、単細胞生物であり得る。細胞は、培養物中で成長させ得る。
【０２０３】
標的細胞は、疾患細胞であり得る。疾患細胞は、変更された代謝、遺伝子発現、および／または形態の特徴を有し得る。疾患細胞は、がん細胞、糖尿病細胞および／またはアポトーシス細胞であり得る。疾患細胞は、疾患のある被験体由来の細胞であり得る。例示的な疾患としては、血液障害、がん、代謝障害、眼科障害、臓器障害、筋骨格障害、および心臓疾患などが挙げられ得る。
【０２０４】
標的細胞が初代細胞である場合、標的細胞は、たとえばインビトロ実験において、任意の方法によって個体から採取されてよい。たとえば、白血球細胞は、アフェレーシス、白血球アフェレーシス（ｌｅｕｋｏｃｙｔａｐｈｅｒｅｓｉｓ）、密度勾配分離などによって採取されてよい。たとえば、皮膚、筋肉、骨髄、脾臓、肝臓、膵臓、肺、腸、胃などの組織由来の細胞は、生検によって採取され得る。適切な溶液が、採取した細胞の分散または懸濁に使用されてよい。そのような溶液は一般に、低濃度の許容される緩衝液と共に、ウシ胎仔血清または他の天然に存在する因子を好都合に補った、平衡塩類溶液（たとえば、通常の生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、ハンクス平衡塩類溶液など）であり得る。緩衝液は、ＨＥＰＥＳ、リン酸緩衝液、乳酸緩衝液などを含み得る。細胞は、即時に使用されても、保管されてもよい（たとえば、凍結によって）。凍結した細胞は、解凍され得、再利用することが可能であり得る。細胞は、ＤＭＳＯ、血清、培養緩衝液（たとえば、１０％ＤＭＳＯ、５０％血清、４０％緩衝培養液）、および／または、凍結温度で細胞を保存するために使用される何らかの他のそのような一般的な溶液中で凍結され得る。
【０２０５】
標的細胞は、心臓、血管、唾液腺、食道、胃、肝臓、胆嚢、膵臓、腸、結腸、直腸、肛門、内分泌腺、副腎、腎臓、尿管、膀胱、リンパ節、扁桃腺、咽頭扁桃腺、胸腺、脾臓、皮膚、筋肉、脳、脊髄、神経、卵巣、卵管、子宮、膣、乳腺、精巣、前立腺、陰茎、咽頭、喉頭、気管、気管支、肺、横隔膜、軟骨、靭帯、および腱のうちの１または複数において同定され得る。
【０２０６】
標的細胞であり得る細胞の非限定的な例としては、造血細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞（細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、調節性Ｔ細胞、Ｔヘルパ細胞）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ナチュラルキラー細胞、サイトカイン誘導性キラー（ＣＩＫ）細胞などのリンパ系細胞；顆粒球（好塩基性顆粒球、好酸性顆粒球、好中性顆粒球／過分葉好中球）、単球／マクロファージ、赤血球（網状赤血球）、マスト細胞、血小板／巨核球、樹状細胞などの骨髄性細胞；甲状腺（甲状腺上皮細胞、傍濾胞細胞）、副甲状腺（副甲状腺主細胞、好酸性細胞）、副腎細胞（クロム親和性細胞）、松果体（松果体細胞）細胞を含む内分泌系由来の細胞；グリア細胞（アストロサイト、ミクログリア）、巨大細胞神経分泌細胞、星状細胞、ベッチェル細胞、および下垂体（性腺刺激ホルモン産生細胞、副腎皮質刺激ホルモン産生細胞、甲状腺刺激ホルモン産生細胞、成長ホルモン産生細胞、乳腺刺激ホルモン分泌細胞）を含む神経系の細胞；肺細胞（Ｉ型肺細胞、ＩＩ型肺細胞）、クララ細胞、杯細胞、塵埃細胞を含む呼吸器系の細胞；心筋細胞、周皮細胞を含む循環系の細胞；胃（胃主細胞、壁細胞）、杯細胞、パネート細胞、Ｇ細胞、Ｄ細胞、ＥＣＬ細胞、Ｉ細胞、Ｋ細胞、Ｓ細胞を含む消化器系の細胞；腸クロム親和性細胞、ＡＰＵＤ細胞、肝臓（肝細胞、クッパ細胞）、軟骨／骨／筋肉を含む腸内分泌細胞；骨芽細胞、骨細胞、破骨細胞、歯（セメント芽細胞、エナメル芽細胞）を含む骨細胞；軟骨芽細胞、軟骨細胞を含む軟骨細胞；毛胞、ケラチン生成細胞、メラニン細胞（母斑細胞）を含む皮膚細胞；筋細胞を含む筋肉細胞；足細胞、傍糸球体細胞、糸球体内メサンギウム細胞／糸球体外メサンギウム細胞、腎臓近位尿細管刷子縁細胞、緻密斑細胞を含む泌尿器系細胞；精子、セルトリ細胞、ライディッヒ細胞、卵子を含む生殖器系細胞；ならびに、脂肪細胞、繊維芽細胞、腱細胞、表皮角化細胞（分化表皮細胞）、表皮基底細胞（幹細胞）、手の爪と足の爪のケラチン生成細胞、爪床基底細胞（幹細胞）、髄質毛幹細胞、皮質毛幹細胞、クチクラ毛幹細胞、クチクラ毛根鞘細胞、ハクスリ層の毛根鞘細胞、ヘンレ層の毛根鞘細胞、外部毛根鞘細胞、毛母細胞（幹細胞）、湿性重層障壁上皮細胞（ｗｅｔ  ｓｔｒａｔｉｆｉｅｄ  ｂａｒｒｉｅｒ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌ）、角膜、舌、口腔、食道、肛門管、遠位尿道、および膣の層状扁平上皮の表面上皮細胞、角膜、舌、口腔、食道、肛門管、遠位尿道、および膣の上皮の基底細胞（幹細胞）、尿路上皮細胞（膀胱および尿管の内側を覆う）、外分泌上皮細胞、唾液腺粘膜細胞（多糖に富む分泌物）、唾液腺漿液細胞（糖タンパク質酵素に富む分泌物）、舌のフォン・エブネル腺細胞（味蕾を洗う）、乳腺細胞（乳汁の分泌）、涙腺細胞（涙の分泌）、耳の耳道腺細胞（耳垢の分泌）、エクリン汗腺暗細胞（糖タンパク質分泌）、エクリン汗腺明細胞（小分子の分泌）を含む、他の細胞が挙げられるが、これらに限定されない。アポクリン汗腺細胞（臭分泌物、性ホルモン感受性）、まぶたのモル腺細胞（特殊な汗腺）、脂腺細胞（脂質が豊富な皮脂の泌物）、鼻のボーマン腺細胞（嗅上皮を洗う）、十二指腸のブルンネル腺細胞（酵素およびアルカリ性粘液）、精嚢細胞（���泳する精子のためのフルクトースを含む精液成分を分泌する）、前立腺細胞（精液成分を分泌する）、尿道球腺細胞（粘液の分泌）、バルトリン腺細胞（膣液の分泌）、リトレ腺細胞（粘液の分泌）、子宮子宮内膜細胞（炭水化物の分泌）、気道および消化管の単離された杯細胞（粘液の分泌）、胃内壁粘液細胞（粘液の分泌）、胃腺酵素原細胞（ペプシノーゲンの分泌）、胃腺酸分泌細胞（塩酸の分泌）、膵臓腺房細胞（重炭酸塩および消化酵素の分泌）、小腸のパネート細胞（リゾチームの分泌）、肺のＩＩ型肺細胞（サーファクタントの分泌）、肺のクララ細胞、ホルモン分泌細胞、下垂体前葉細胞、成長ホルモン産生細胞、乳腺刺激ホルモン産生細胞、甲状腺刺激ホルモン産生細胞、性腺刺激ホルモン産生細胞、副腎皮質刺激ホルモン産生細胞、下垂体中葉細胞、巨細胞神経分泌細胞、腸管および呼吸管細胞、甲状腺細胞、甲状腺上皮細胞、傍濾胞細胞、副甲状腺細胞、副甲状腺主細胞、好酸性細胞、副腎細胞、クロム親和性細胞、精巣のライディッヒ細胞、卵巣濾胞の内卵胞膜細胞、破裂した卵巣濾胞の黄体細胞、顆粒膜黄体細胞、卵胞膜黄体細胞、傍糸球体細胞（レニンの分泌）、腎臓の緻密斑細胞、代謝および貯蔵細胞、バリア機能細胞（肺、腸、外分泌腺および尿生殖路）、腎臓、Ｉ型肺細胞（肺の気腔の内側を覆う）、膵管細胞（腺房中心細胞）、筋のない管細胞（汗腺、唾液腺、乳腺などの）、導管細胞（精嚢、前立腺などの）、閉じた内部体腔の内側を覆う上皮細胞、推進機能を備えた繊毛細胞、細胞外マトリックス分泌細胞、収縮性細胞；骨格筋細胞、幹細胞、心筋細胞、血液および免疫系細胞、赤血球（赤血球）、巨核球（血小板前駆細胞）、単球、結合組織マクロファージ（様々な種類）、表皮ランゲルハンス細胞、破骨細胞（骨内）、樹状細胞（リンパ組織内）、ミクログリア細胞（中枢神経系内）、好中性顆粒球、好酸性顆粒球、好塩基性顆粒球、マスト細胞、ヘルパＴ細胞、サプレッサＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、網状赤血球、血液および免疫系のための、幹細胞およびコミットされた前駆細胞（様々なタイプ）、多能性幹細胞、全能性幹細胞、誘導多能性幹細胞、成体幹細胞、感覚変換器細胞、自律神経ニューロン細胞、感覚器官および末梢ニューロン支持細胞、中枢神経系ニューロンおよびグリア細胞、水晶体細胞、色素細胞、メラニン細胞、網膜色素上皮細胞、生殖細胞、卵原細胞／卵母細胞、精子細胞、精母細胞、精原細胞（精母細胞の幹細胞）、精子、ナース細胞、卵胞細胞、セルトリ細胞（精巣内）、胸腺上皮細胞、間質細胞、間質腎臓細胞。
【０２０７】
特に関心対象であるのは、がん細胞である。いくつかの実施形態において、標的細胞は、がん細胞である。がんは、固形腫瘍または血液腫瘍であり得る。がんは、転移性であり得る。がんは、再発性がんであり得る。がん細胞の非限定的な例としては、棘細胞腫、腺房細胞癌、聴神経腫、末端黒子型黒色腫、先端汗腺腫、急性好酸球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性巨核芽球性白血病、急性単球性白血病、成熟を伴う急性骨髄芽球性白血病、急性骨髄性樹状細胞白血病、急性骨髄性白血病、急性前骨髄球性白血病、アダマンチノーマ、腺癌、腺様嚢胞癌、腺腫、腺様歯原性腫瘍、副腎皮質癌、成人Ｔ細胞白血病、侵攻性ＮＫ細胞白血病、ＡＩＤＳ関連癌、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、胞巣状軟部肉腫、エナメル芽細胞線維腫、肛門癌、未分化大細胞リンパ腫、未分化甲状腺癌、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、血管筋脂肪腫、血管肉腫、虫垂癌、星状細胞腫、非定型奇形性ラブドイド腫瘍、基底細胞癌、基底様癌、Ｂ細胞白血病、Ｂ細胞リンパ腫、ベリニ管癌、胆道癌、膀胱癌、芽細胞腫、骨癌、骨腫瘍、脳幹神経膠腫、脳腫瘍、乳癌、ブレンナー腫瘍、気管支腫瘍、細気管支肺胞癌、褐色腫瘍、バーキットリンパ腫、原発部位不明の癌、カルチノイド腫瘍、癌腫、上皮内癌、陰茎癌、原発部位不明の癌腫、癌肉腫、キャッスルマン病、中枢神経系胚芽腫、小脳星状細胞腫、脳星状細胞腫、子宮頸癌、胆管癌、軟骨腫、軟骨肉腫、脊索腫、繊毛癌、脈絡叢乳頭腫、慢性リンパ球性白血病、慢性単球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性障害、慢性好中球性白血病、明細胞腫瘍、大腸癌、結腸直腸癌、頭蓋咽頭腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、デゴス病、隆起性皮膚線維肉腫、皮様嚢腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、胚芽異形成性神経上皮腫瘍、胚性癌、内胚葉洞腫瘍、子宮内膜癌、子宮内膜子宮癌、子宮内膜性腫瘍、腸症関連Ｔ細胞リンパ腫、上衣芽細胞腫、上衣腫、類上皮肉腫、赤白血病、食道癌、感覚神経芽細胞腫、ユーイング・ファミリ腫瘍、ユーイング・ファミリ肉腫、ユーイング肉腫、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管癌、乳房外ページェット病、卵管癌、胎児封入奇形、線維腫、線維肉腫、濾胞性リンパ腫、濾胞性甲状腺癌、胆嚢癌、胆嚢癌、神経節膠腫、神経節神経腫、胃癌、胃リンパ腫、胃腸癌、胃腸カルチノイド腫瘍、胃腸間質性腫瘍、胃腸間質性腫瘍、胚細胞腫瘍、胚腫、妊娠性絨毛癌、妊娠性繊毛性腫瘍、骨の巨大細胞腫瘍、多形性神経膠芽腫、神経膠腫、大脳神経膠腫症、グロムス腫瘍、グルカゴン産生腫瘍、性腺芽細胞腫、顆粒膜細胞腫、有毛細胞白血病、有毛細胞白血病、頭頚部癌、頭頚部癌、心臓癌、血管芽細胞腫、血管周囲細胞腫、血管肉腫、血液悪性腫瘍、肝細胞癌、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、遺伝性乳房卵巣癌症候群、ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、視床下部神経膠腫、炎症性乳癌、眼内黒色腫、島細胞癌、島細胞腫瘍、若年性骨髄単球性白血病、カポシ肉腫、カポシ肉腫、腎臓癌、クラツキン腫瘍、クルケンベルグ腫瘍、喉頭癌、喉頭癌、悪性黒子型黒色腫、白血病、白血病、唇および口腔癌、脂肪肉腫、肺癌、黄体腫、リンパ管腫、リンパ管肉腫、リンパ上皮腫、リンパ性白血病、リンパ腫、マクログロブリン血症、悪性線維性組織球腫、悪性線維性組織球腫、骨の悪性線維性組織球腫、悪性神経膠腫、悪性中皮腫、悪性末梢神経鞘腫瘍、悪性ラブドイド腫瘍、悪性トリトン腫瘍、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、マスト細胞白血病、縦隔胚細胞腫瘍、縦隔腫瘍、甲状腺髄様癌、髄芽細胞腫、髄芽細胞腫、髄様皮腫、黒色腫、黒色腫、髄膜腫、メルケル細胞癌、中皮腫、中皮腫、原発不明の転移性頸部扁平上皮癌、転移性尿路上皮癌、ミュラー混合腫瘍、単球性白血病、口腔癌、粘液性腫瘍、多発性内分泌腫瘍症候群、多発性骨髄腫、多発性骨髄腫、菌状息肉腫、菌状息肉腫、骨髄異形成性疾患、骨髄異形成性症候群、骨髄性白血病、骨髄性肉腫、骨髄増殖性疾患、粘液腫、鼻腔癌、上咽頭がん、上咽頭癌、新生物、神経鞘腫、神経線維腫、神経芽細胞腫、神経線維腫、神経腫、結節性黒色腫、非ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、非黒色腫皮膚癌、非小細胞肺癌、眼腫瘍学、乏突起星細胞腫、乏突起膠腫、膨大細胞腫、視神経鞘髄膜腫、口腔癌、口腔癌、中咽頭癌、骨肉腫、骨肉腫、卵巣癌、卵巣癌、卵巣上皮癌、卵巣胚細胞腫瘍、卵巣低悪性度腫瘍、乳房パジェット病、パンコースト腫瘍、膵臓癌、膵臓癌、甲状腺乳頭癌、乳頭腫症、傍神経節腫、副鼻腔癌、副甲状腺癌、陰茎癌、血管周囲類上皮細胞腫瘍、咽頭癌、褐色細胞腫、中間分化型松果体実質腫瘍、松果体芽細胞腫、下垂体細胞腫、下垂体腺腫、下垂体腫瘍、形質細胞腫瘍、胸膜肺芽細胞腫、多胚腫、前駆Ｔリンパ芽球性リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、原発性肝細胞癌、原発性肝癌、原発性腹膜癌、原始神経外胚葉性腫瘍、前立腺癌、腹膜偽粘液腫、直腸癌、腎細胞癌、１５番染色体上のＮＵＴ遺伝子が関与する気道癌、網膜芽細胞腫、横紋筋腫、横紋筋肉腫、リヒター形質転換、仙尾部奇形腫、唾液腺癌、肉腫、神経鞘腫症、脂腺癌、二次腫瘍、セミノーマ、漿液性腫瘍、セルトリ−ライディッヒ細胞腫瘍、性索間質性腫瘍、セザリ症候群、印環細胞癌、皮膚癌、小円形青色細胞腫瘍、小細胞癌、小細胞肺癌、小細胞リンパ腫、小腸癌、軟部組織肉腫、ソマトスタチン産生腫瘍、煤煙性いぼ、脊髄腫瘍、脊椎腫瘍、脾臓辺縁帯リンパ腫、扁平上皮癌、胃癌、表在性拡大型黒色腫、テント上原始神経外胚葉性腫瘍、表面上皮間質性腫瘍、滑膜肉腫、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病、Ｔ細胞大顆粒リンパ球白血病、Ｔ細胞白血病、Ｔ細胞リンパ腫、Ｔ細胞前リンパ球性白血病、奇形腫、末期リンパ腺癌、精巣癌、莢膜細胞腫、咽喉癌、胸腺癌、胸腺腫、甲状腺癌、腎盤および尿管の移行細胞癌、移行細胞癌、尿膜管癌、尿道癌、泌尿生殖器腫瘍、子宮肉腫、ブドウ膜黒色腫、膣癌、ヴェルナー・モリソン症候群、いぼ状癌、視経路神経膠腫、外陰癌、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、ワルチン腫瘍、ウィルムス腫瘍、およびこれらの組合せを含む、がんの細胞が挙げられる。いくつかの実施形態において、標的がん細胞は、がん幹細胞などのがん細胞集団内のサブ集団を表す。いくつかの実施形態において、がんは、リンパ腫などの造血系である。第１および／または第２の抗原結合ドメインは、がん細胞の抗原上に存在するエピトープに結合し得る。
【０２０８】
いくつかの実施形態において、標的細胞は、腫瘍を形成し得る。本明細書における方法で治療される腫瘍は、安定化した腫瘍成長（たとえば、１または複数の腫瘍のサイズが１％、５％、１０％、１５％、または２０％より多くは増大せず、かつ／または転移しない）をもたらし得る。いくつかの実施形態において、腫瘍は、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、またはそれより多い週数の間、安定化している。いくつかの実施形態において、腫瘍は、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、またはそれより多い月数の間、安定化している。いくつかの実施形態において、腫瘍は、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれより多い年数の間、安定化している。いくつかの実施形態において、本明細書において提供される方法による治療の結果として、腫瘍のサイズまたは腫瘍細胞の数は、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれより高い％で、低減し得る。いくつかの実施形態において、腫瘍は、完全に排除されるか、または検出のレベル未満に低減される。いくつかの実施形態において、被験体は、治療後、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、またはそれより多い週数の間、腫瘍のないまま（たとえば、寛解）である。いくつかの実施形態において、被験体は、治療後、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、またはそれより多い月数の間、腫瘍のないままである。いくつかの実施形態において、被験体は、治療後、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれより多い年数の間、腫瘍のないままである。
【０２０９】
標的細胞の死滅は、治療の前後で細胞を計数すること、または生細胞もしくは死細胞（たとえば、標的の生細胞もしくは死細胞）に関連付けられるマーカのレベルを測定することを含むが、これらに限定されない、任意の適切な方法によって決定され得る。
【０２１０】
細胞死の度合いは、任意の適切な方法によって決定され得る。いくつかの実施形態において、細胞死の度合いは、出発条件に関して決定される。たとえば、個体は、公知のサイズの出発細胞塊、または公知の濃度の循環標的細胞などの、公知の出発量の標的細胞を有し得る。そのような場合において、細胞死の度合いは、出発細胞集団への治療後の生存細胞の比として表され得る。いくつかの実施形態において、細胞死の度合いは、適切な細胞死アッセイによって決定され得る。様々な細胞死アッセイが利用可能であり、様々な検出方法論を利用し得る。検出方法論の例としては、限定することなく、細胞染色、顕微鏡法、フローサイトメトリ、細胞選別の使用、およびこれらの組み合わせが挙げられる。
【０２１１】
腫瘍が、治療期間の完了後、外科的切除の対象となるとき、腫瘍サイズの低減における治療の有効性は、切除された壊死している組織の百分率を測定することによって決定され得る。いくつかの実施形態において、切除した組織の壊死百分率が、約２０％より大きい（たとえば、少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％）場合、治療には治療効果がある。いくつかの実施形態において、切除した組織の壊死百分率は１００％であり、すなわち、生きている腫瘍組織は存在しないか、または検出可能ではない。
【０２１２】
本明細書において提供される態様の様々な実施形態において、標的細胞を免疫細胞もしくは免疫細胞の集団に、暴露させるか、または接触させることは、インビトロまたはインビボのいずれかで行われ得る。標的細胞を免疫細胞または免疫細胞の集団に暴露させることは一般に、標的細胞を免疫細胞に、接触させること、ならびに／または、標的細胞（たとえば、膜結合型または膜非結合型）の抗原（たとえば、エピトープを含む）が、第１の抗原結合ドメインおよび／もしくは第２の抗原結合ドメインの抗原結合ドメインに結合し得るように、十分に近接させることを指す。標的細胞を免疫細胞または免疫細胞の集団にインビトロで暴露させることは、標的細胞と免疫細胞とを共培養することによって達成され得る。標的細胞および免疫細胞は、たとえば、接着細胞として、または代替的に懸濁液中で、共培養され得る。標的細胞および免疫細胞は、たとえば、サプリメント、成長因子、イオンなどを有する、様々な適切な種類の細胞培養培地中で、共培養され得る。標的細胞を免疫細胞または免疫細胞の集団にインビボで暴露させることは、いくつかの場合において、免疫細胞を被験体、たとえば、ヒト被験体に投与し、循環系を介して免疫細胞を標的細胞に局在化させることによって達成され得る。いくつかの場合において、免疫細胞は、標的細胞が局在化される隣接領域に、たとえば、直接注入によって、送達され得る。
【０２１３】
暴露させること、または接触させることは、任意の適切な時間の長さ、たとえば、少なくとも１分、少なくとも５分、少なくとも１０分、少なくとも３０分、少なくとも１時間、少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも７時間、少なくとも８時間、少なくとも１２時間、少なくとも１６時間、少なくとも２０時間、少なくとも２４時間、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも１か月、またはそれより長い、の間、実施され得る。
【０２１４】
本明細書における態様の様々な実施形態において、本明細書において提供される改変ＴＣＲ複合体および／または系は、宿主細胞（たとえば、免疫細胞、たとえば、抗原特異的免疫細胞）において発現される。宿主細胞は、ヒト細胞であり得る。宿主細胞は、非ヒト細胞であり得る。宿主細胞は、それを必要とする被験体に対して自家または同種異系であり得る。いくつかの場合において、宿主細胞は、異種であり得る。宿主細胞は、リンパ球または骨髄性細胞などの免疫細胞であり得る。宿主細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、およびＮＫ細胞などであり得る。いくつかの実施形態において、宿主細胞は、ＣＤ３＋細胞、ＣＤ３−細胞、ＣＤ５＋細胞、ＣＤ５−細胞、ＣＤ７＋細胞、ＣＤ７−細胞、ＣＤ１４＋細胞、ＣＤ１４−細胞、ＣＤ８＋細胞、ＣＤ８−細胞、ＣＤ１０３＋細胞、ＣＤ１０３−細胞、ＣＤ１１ｂ＋細胞、ＣＤ１１ｂ−細胞、ＢＤＣＡ１＋細胞、ＢＤＣＡ１−細胞、Ｌ−セレクチン＋細胞、Ｌ−セレクチン−細胞、ＣＤ２５＋、ＣＤ２５−細胞、ＣＤ２７＋、ＣＤ２７−細胞、ＣＤ２８＋細胞、ＣＤ２８−細胞、ＣＤ４４＋細胞、ＣＤ４４−細胞、ＣＤ５６＋細胞、ＣＤ５６−細胞、ＣＤ５７＋細胞、ＣＤ５７−細胞、ＣＤ６２Ｌ＋細胞、ＣＤ６２Ｌ−細胞、ＣＤ６９＋細胞、ＣＤ６９−細胞、ＣＤ４５ＲＯ＋細胞、ＣＤ４５ＲＯ−細胞、ＣＤ１２７＋細胞、ＣＤ１２７−細胞、ＣＤ１３２＋細胞、ＣＤ１３２−細胞、ＩＬ−７＋細胞、ＩＬ−７−細胞、ＩＬ−１５＋細胞、ＩＬ−１５−細胞、レクチン様受容体Ｇ１陽性細胞、レクチン様受容体Ｇ１陰性細胞、またはそれらの分化細胞または脱分化細胞であり得る。いくつかの実施形態において、宿主細胞は、２つ以上の因子に対して陽性であってよい。たとえば、宿主細胞は、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋であってよい。いくつかの実施形態において、宿主細胞は、２つ以上の因子に対して陰性であってよい。たとえば、宿主細胞は、ＣＤ２５−、ＣＤ４４−、およびＣＤ６９−であってよい。いくつかの実施形態において、宿主細胞は、１または複数の因子に対して陽性であり、かつ１または複数の因子に対して陰性であってよい。たとえば、細胞は、ＣＤ４＋およびＣＤ８−であってよい。いくつかの実施形態において、宿主細胞は、１または複数の所与の因子を有するか、または有しないかに関して選択されてよい（たとえば、細胞は、本明細書で説明される１または複数のマーカの有無に基づいて分けられてよい）。
【０２１５】
いくつかの実施形態において、選択される宿主細胞はまた、選択されるインビトロで拡大されてよく、かつ／または拡大された宿主細胞は、それを必要とする被験体に投与されてよい。本明細書で開示される方法のうち任意のものにおいて使用される細胞は、本明細書で開示される細胞のうち任意のものの混合物（たとえば、２つ以上の異なる細胞）であってよいことが理解されるべきである。たとえば、組成物は異なる細胞、たとえば、Ｔ細胞およびＢ細胞の混合物を含んでよい。混合物は、たとえば、ＣＤ４５ＲＯ（−）、ＣＣＲ７（＋）、ＣＤ４５ＲＡ（＋）、ＣＤ６２Ｌ＋（Ｌ−セレクチン）、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、およびＩＬ−７Ｒα＋を含む幹メモリＴＳＣＭ細胞を含み得、幹メモリ細胞はまた、ＣＤ９５、ＩＬ−２Ｒβ、ＣＸＣＲ３、およびＬＦＡ−１を発現し、幹メモリ細胞に特有の多数の機能的属性を示し得る。混合物は、たとえば、Ｌ−セレクチンおよびＣＣＲ７を含むセントラルメモリＴＣＭ細胞を含み得、ここで、セントラルメモリ細胞は、たとえば、ＩＬ−２を分泌し得るが、ＩＦＮγまたはＩＬ−４は分泌し得ない。混合物は、たとえば、Ｌ−セレクチンまたはＣＣＲ７を含むエフェクタメモリＴＥＭ細胞を含み得、たとえば、ＩＦＮγおよびＩＬ−４などのエフェクタサイトカインを産生し得る。
【０２１６】
宿主細胞は、被験体から得られ得る。いくつかの場合において、宿主細胞は、被験体から得られるＴ細胞、ＮＫ細胞、およびＢ細胞などの集団であり得る。Ｔ細胞は、ＰＢＭＣ、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来の組織、腹水、胸水液、脾臓組織、および腫瘍を含む、いくつかの供給源から得られ得る。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、フィコール（登録商標）分離法などの、任意の数の手法を用いて被験体から採取される１単位の血液から得られ得る。一実施形態において、個体の循環する血液由来の細胞は、アフェレーシスによって得られる。アフェレーシス生成物は典型的に、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球、赤血球、および血小板を含むリンパ球を含有する。アフェレーシスによって収集された細胞は、洗浄されて、血しょう画分を除去され、次の処理工程のために適切な緩衝液または培地に入れられてよい。
【０２１７】
いくつかの実施形態において、本明細書において提供される免疫細胞の集団は、異種混合であり得る。いくつかの実施形態において、使用される細胞は、ＣＤ４Ｔ細胞およびＣＤ８Ｔ細胞の、異種混合の混合物で構成され得る。上記ＣＤ４細胞およびＣＤ８細胞は、循環エフェクタＴ細胞の表現型特徴を有し得る。上記ＣＤ４細胞およびＣＤ８細胞はまた、エフェクタ−メモリ細胞の表現型特徴を有し得る。いくつかの実施形態において、細胞は、セントラル−メモリ細胞であり得る。
【０２１８】
いくつかの実施形態において、宿主細胞は、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）、末梢血リンパ球（ＰＢＬ）、および、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、単球、ナチュラルキラーＴ細胞、単球前駆体細胞、造血幹細胞、または非多能性幹細胞などの、しかしこれらに限定されない、他の血液細胞サブセットを含む。いくつかの場合において、細胞は、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞などの腫瘍浸潤細胞（ＴＩＬ）、または任意の他の種類のＴ細胞などの、任意のＴ細胞を含む任意の免疫細胞であり得る。Ｔ細胞はまた、メモリＴ細胞、メモリ幹Ｔ細胞、またはエフェクタＴ細胞を含み得る。Ｔ細胞はまた、たとえば、Ｔ細胞を全血から選択して、バルク集団から選択され得る。Ｔ細胞はまた、バルク集団から拡大され得る。Ｔ細胞はまた、特定の集団および表現型に偏り得る。たとえば、表現型が偏り得るＴ細胞は、ＣＤ４５ＲＯ（−）、ＣＣＲ７（＋）、ＣＤ４５ＲＡ（＋）、ＣＤ６２Ｌ（＋）、ＣＤ２７（＋）、ＣＤ２８（＋）、および／またはＩＬ−７Ｒα（＋）を含む。ＣＤ４５ＲＯ（−）、ＣＣＲ７（＋）、ＣＤ４５ＲＡ（＋）、ＣＤ６２Ｌ（＋）、ＣＤ２７（＋）、ＣＤ２８（＋）、および／またはＩＬ−７Ｒα（＋）を含むリストから選択される１または複数のマーカを含む適切な細胞が、選択され得る。宿主細胞はまた、例として、胚性幹細胞、誘導多能性幹細胞、造血幹細胞、ニューロン幹細胞、および間葉系幹細胞などの幹細胞を含む。宿主細胞は、ヒト細胞、非ヒト細胞、および／またはマウス細胞などの任意の数の初代細胞を含み得る。宿主細胞は、前駆細胞であり得る。宿主細胞は、治療される被験体（たとえば、患者）に由来し得る。宿主細胞は、ヒトドナーに由来し得る。宿主細胞は、ＣＤ４５ＲＯ（−）、ＣＣＲ７（＋）、ＣＤ４５ＲＡ（＋）、ＣＤ６２Ｌ＋（Ｌ−セレクチン）、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、およびＩＬ−７Ｒα＋で構成される幹メモリＴＳＣＭ細胞であり得、上記幹メモリ細胞はまた、ＣＤ９５、ＩＬ−２Ｒβ、ＣＸＣＲ３、およびＬＦＡ−１を発現し、上記幹メモリ細胞に特有の多数の機能的属性を示し得る。宿主細胞は、Ｌ−セレクチンおよびＣＣＲ７を含むセントラルメモリＴＣＭ細胞であり得、上記セントラルメモリ細胞は、たとえば、ＩＬ−２を分泌し得るが、ＩＦＮγまたはＩＬ−４は分泌し得ない。宿主細胞はまた、Ｌ−セレクチンまたはＣＣＲ７を含むエフェクタメモリＴＥＭ細胞であり得、たとえば、ＩＦＮγおよびＩＬ−４などのエフェクタサイトカインを産生し得る。
【０２１９】
いくつかの、ウイルスを用いた系が、哺乳類細胞への遺伝子導入のために開発されている。たとえば、レトロウイルス、レンチウイルス、およびアデノウイルスは、遺伝子送達系のための簡便なプラットフォームを提供する。当技術分野で公知の手法を用いて、主題の系を、ベクタに挿入し、レトロウイルス粒子にパッケージし得る。レンチウイルスなどのレトロウイルスに由来するベクタは、導入遺伝子の長期安定的な組み込み、および娘細胞における導入遺伝子の増殖を可能にするため、長期遺伝子導入を達成するために好適なツールである。レンチウイルスベクタは、非増殖性細胞に形質導入できるという点で、マウス白血病ウイルスなどの腫瘍レトロウイルスに由来するベクタに対して、追加の利点を有する。レンチウイルスベクタはまた、低免疫原性という追加の利点を有する。
【０２２０】
ある態様において、改変ＴＣＲ複合体および／またはＣＡＲを含む系をコードする核酸は、ウイルスによって、またはウイルスによらずに送達され得る。ウイルス送達系（たとえば、本開示の医薬組成物を含むウイルス）は、直接注入、定位固定注入によって、脳室内に、ミニポンプ注入システムによって、対流、カテーテル、静脈内、非経口、腹腔内、および／または皮下注入によって、必要とする被験体の細胞、組織、または器官に投与され得る。いくつかの場合において、細胞は、インビトロまたはエクスビボで、ウイルスによる送達系を形質導入され得る。形質導入された細胞は、疾患を有する被験体に投与され得る。たとえば、幹細胞は、医薬組成物を含むウイルスによる送達系を形質導入され得、当該幹細胞は、疾患を治療するために、患者に移植され得る。いくつかの場合において、被験体に与えられる形質導入された細胞の投与量は、１単回投与で、約１×１０５細胞／ｋｇ、約５×１０５細胞／ｋｇ、約１×１０６細胞／ｋｇ、約２×１０６細胞／ｋｇ、約３×１０６細胞／ｋｇ、約４×１０６細胞／ｋｇ、約５×１０６細胞／ｋｇ、約６×１０６細胞／ｋｇ、約７×１０６細胞／ｋｇ、約８×１０６細胞／ｋｇ、約９×１０６細胞／ｋｇ、約１×１０７細胞／ｋｇ、約５×１０７細胞／ｋｇ、約１×１０８細胞／ｋｇ、それより多い、であり得る。
【０２２１】
パッケージング細胞株を使用して、本明細書において提供される改変ＴＣＲ複合体および／または主題の系を含むウイルス粒子を生成し得る。また、パッケージング細胞株を利用して、本明細書において提供される方法を実施し得る。使用され得るパッケージング細胞は、数例を挙げると、ＨＥＫ２９３細胞、ヒーラ細胞、およびベロ細胞を含むが、これらに限定されない。いくつかの場合において、パッケージング細胞株の上清は、ウイルス粒子を濃縮するために、ＰＥＧ沈殿によって処理される。他の場合において、遠心分離工程を使用して、ウイルス粒子を濃縮し得る。たとえば、遠心分離中、カラムを使用して、ウイルスを濃縮し得る。いくつかの場合において、沈殿は、約４℃以下（たとえば、約３°Ｃ、約２°Ｃ、約１°Ｃ、または約１℃）で、少なくとも約２時間、少なくとも約３時間、少なくとも約４時間、少なくとも約６時間、少なくとも約９時間、少なくとも約１２時間、または少なくとも約２４時間、生じる。いくつかの場合において、ウイルス粒子は、低速遠心分離、それに続くＣｓＣｌ勾配によって、ＰＥＧ沈殿した上清から単離され得る。低速遠心分離は、約２０分、約３０分、約４０分、約５０分、または約６０分の間、約４０００ｒｐｍ、約４５００ｒｐｍ、約５０００ｒｐｍ、または約６０００ｒｐｍであり得る。いくつかの場合において、ウイルス粒子は、約３０分間、約５０００ｒｐｍでの遠心分離、それに続くＣｓＣｌ勾配によって、ＰＥＧ沈殿した上清から単離される。
【０２２２】
ウイルス（たとえば、レンチウイルス）は、刺激または活性化の工程、たとえば、抗ＣＤ３、抗ＣＤ２８、またはそれらの組み合わせの後、約、少なくとも、または最大で、約１〜３時間、３〜６時間、６〜９時間、９〜１２時間、１２〜１５時間、１５〜１８時間、１８〜２１時間、２１〜２３時間、２３〜２６時間、２６〜２９時間、２９〜３１時間、３１〜３３時間、３３〜３５時間、３５〜３７時間、３７〜３９時間、３９〜４１時間、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１４日、１６日、２０日、または２０日より長くで、これらの時間または日数から、主題の細胞、または主題の細胞の集団に導入され得る。いくつかの場合において、ウイルスベクタは、改変ＴＣＲ複合体および／または系、たとえば、ＣＡＲ−Ｔ、改変ＴＣＲ複合体、またはそれらの組み合わせのためにコードする。いくつかの場合において、ウイルスベクタは、ＣＡＲ−Ｔのためにコードする。いくつかの場合において、ウイルスベクタは、改変ＴＣＲ複合体のためにコードする。免疫細胞は、ＣＡＲおよび改変ＴＣＲ複合体の両方のためにコードするウイルス粒子を形質導入され得る。免疫細胞は、ＣＡＲのためにコードするウイルス粒子を形質導入され得る。免疫細胞は、改変ＴＣＲ複合体のためにコードするウイルス粒子を形質導入され得る。改変ＴＣＲ複合体および／または主題の系をコードする核酸は、細胞のゲノムにランダムに挿入され得る。改変ＴＣＲ複合体および／または系をコードする核酸は、それ自身のプロモータをコードし得るか、または細胞の内因性プロモータの制御下にある位置へと挿入され得る。代替的には、改変ＴＣＲ複合体および／または系をコードする核酸は、遺伝子のイントロン、遺伝子のエキソン、プロモータ、または非コード領域などの、遺伝子へと挿入され得る。改変ＴＣＲ複合体および／または系の発現は、発現アッセイによって、たとえば、ｑＰＣＲ、または形質導入された細胞のＲＮＡのレベルを測定することによって、確認され得る。発現レベルは、コピー数も意味し得る。たとえば、発現レベルが高ければ、このことは、改変ＴＣＲ複合体および／または系をコードする核酸の１より多いコピーが、細胞のゲノムに組み込まれたことを示し得る。代替的には、高い発現レベルは、改変ＴＣＲ複合体および／または系をコードする核酸が、高度に転写された領域、たとえば、高度に発現されたプロモータの近くに組み込まれたことを示し得る。発現はまた、ウエスタンブロット法によってなど、タンパク質レベルを測定することによって、確認され得る。
【０２２３】
主題の細胞または主題の細胞の集団の細胞生存率は、蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣＳ）によって、測定され得る。いくつかの場合において、細胞生存率は、改変ＴＣＲ複合体および／または主題の系をコードする核酸を含む、ウイルスベクタまたは非ウイルスベクタが、細胞または細胞の集団に導入された後、測定される。いくつかの場合において、ウイルスベクタが、細胞または細胞の集団に導入された後、細胞の集団の細胞の、少なくとも約、または最大で約、または約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．８％、または１００％は、生存している。いくつかの場合において、ウイルスベクタが細胞および／または細胞の集団に導入された後、細胞生存率は、約、少なくとも約、または最大で約４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１８時間、２０時間、２４時間、３０時間、３６時間、４０時間、４８時間、５４時間、６０時間、７２時間、８４時間、９６時間、１０８時間、１２０時間、１３２時間、１４４時間、１５６時間、１６８時間、１８０時間、１９２時間、２０４時間、２１６時間、２２８時間、２４０時間、または２４０時間より長く、測定される。いくつかの場合において、細胞生存率は、ウイルスベクタが、細胞または細胞の集団に導入された後、約、少なくとも約、または最大で約１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日、３０日、３１日、４５日、５０日、６０日、７０日、９０日、または９０日より長く、測定される。いくつかの場合において、ウイルスベクタが細胞または細胞の集団に導入された後、細胞毒性は、約、少なくとも約、または最大で約４時間、６時間、８時間、１２時間、１８時間、２４時間、３０時間、３６時間、４２時間、４８時間、５４時間、６０時間、６６時間、７２時間、７８時間、８４時間、９０時間、９６時間、１０２時間、１０８時間、１１４時間、１２０時間、１２６時間、１３２時間、１３８時間、１４４時間、１５０時間、１５６時間、１６８時間、１８０時間、１９２時間、２０４時間、２１６時間、２２８時間、２４０時間、または２４０時間より長く、測定される。
【０２２４】
いくつかの実施形態において、改変ＴＣＲ複合体、ならびに／または改変ＴＣＲ複合体および／もしくはＣＡＲを含む系をコードする、１または複数の核酸は、ウイルスまたはバクテリオファージの感染、トランスフェクション、接合、原形質融合、リポフェクション、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）媒介トランスフェクション、ＤＥＡＥデキストラン媒介トランスフェクション、リポソーム媒介トランスフェクション、パーティクルガン法、リン酸カルシウム沈殿、直接マイクロインジェクション、およびナノ粒子媒介性核酸送達などによって送達され得る。
【０２２５】
いくつかの実施形態において、本明細書において提供される改変ＴＣＲ複合体および／または系を発現する免疫細胞が、投与される。免疫細胞は、疾患または症状の発生の前、その間、その後、投与され得、免疫細胞を投与するタイミングは様々であり得る。たとえば、改変ＴＣＲ複合体および／または主題の系を発現する免疫細胞は、予防薬として使用され得、症状または疾患を患う傾向の被験体に、疾患または症状の発生を防ぐために、連続的に投与され得る。免疫細胞は、症状の発症中、または発症後できるだけ早く、被験体に投与され得る。投与は、症状の発症の最初の４８時間以内、症状の発症の最初の２４時間以内、症状の発症の最初の６時間以内、または症状の発症の最初の３時間以内に開始され得る。初回の投与は、本明細書で説明される任意の配合物を使用して、本明細書で説明される任意の経路によってなどの、任意の適切な経路を介してであり得る。免疫細胞は、疾患または症状の発症が検知された、または疑われた後、投与可能になるとすぐに、たとえば、約１か月から約３か月などの、疾患の治療に必要な時間の長さの間、投与され得る。治療の長さは、被験体ごとに異なり得る。
【０２２６】
改変ＴＣＲ複合体および／または主題の系を発現する免疫細胞を含む、本明細書において提供される組成物は、公知の方式および手法を用いて、被験体に投与されてよい。例示的な方式は、静脈内注射を含むが、これに限定されない。他の方式は、限定することなく、腫瘍内、真皮内、皮下（Ｓ．Ｃ．、ｓ．ｑ．、ｓｕｂ−Ｑ、皮下注射）、筋肉内（ｉ．ｍ．）、腹腔内、（ｉ．ｐ．）、動脈内、髄内、心臓内、関節内（関節）、滑液嚢内（関節流体領域）、頭蓋内、脊髄内、および髄腔内（脊髄液）を含む。配合物の注入を非経口注入するのに有用な、任意の公知の装置が、そのような投与を行うために用いられ得る。主題の組成物を含む配合物は、特定の適応症または疾患の治療および／または予防のために有効な量で被験者に投与され得る。医師は、適切な使用量を決定し得る。改変ＴＣＲ複合体および／または主題の系を発現する、免疫細胞を含む組成物は独立して、１日４、３、２、または１回、２日ごとに、３日ごとに、４日ごとに、５日ごとに、６日ごとに、週１回、８日ごとに、９日ごとに、１０日ごとに、２週間に１回、月に１回、および２か月に１回、投与されてよい。
【０２２７】
本明細書において提供される組成物および方法は、細胞傷害性薬／抗腫瘍性薬および抗血管新生薬を含む、二次治療と組み合わせられ得る。細胞傷害性薬／抗腫瘍性薬は、がん細胞を攻撃し、殺傷する薬剤と定義され得る。いくつかの細胞傷害性薬／抗腫瘍性薬は、腫瘍細胞中の遺伝子材料をアルキル化するアルキル化剤、たとえば、シスプラチン、シクロホスファミド、ナイトロジェンマスタード、トリメチレンチオホスホルアミド、カルムスチン、ブスルファン、クロラムブシル、ベルスチン、ウラシルマスタード、クロマファジン（ｃｈｌｏｍａｐｈａｚｉｎ）、およびダカバジン（ｄａｃａｂａｚｉｎｅ）であり得る。他の細胞傷害性薬／抗腫瘍性薬は、腫瘍細胞に対する代謝拮抗薬、たとえば、シトシンアラビノシド、フルオロウラシル、メトトレキサート、メルカプトプイリン（ｍｅｒｃａｐｔｏｐｕｉｒｉｎｅ）、アザチオプライム（ａｚａｔｈｉｏｐｒｉｍｅ）、およびプロカルバジンであり得る。他の細胞傷害性薬／抗腫瘍性薬は、抗生物質、たとえば、ドキソルビシン、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ミトラマイシン、ミトマイシン、マイトマイシン（ｍｙｔｏｍｙｃｉｎ）Ｃ、およびダウノマイシンであり得る。さらに他の細胞傷害性薬／抗腫瘍性薬は、有糸分裂阻害剤（ビンカアルカロイド）であり得る。これらは、ビンクリスチン、ビンブラスチン、およびエトポシドを含む。種々雑多の細胞傷害性薬／抗腫瘍性薬は、タキソールおよびその誘導体、Ｌ−アスパラギナーゼ、抗腫瘍抗体、ダカルバジン、アザシチジン、アムサクリン、メルファラン、ＶＭ−２６、イホスファミド、ミトキサントロン、およびビンデシンを含む。抗血管新生薬も、使用され得る。開示される方法および組成物において使用するための適切な抗血管新生剤は、ヒト化およびキメラ抗体、抗ＶＥＧＦアプタマ、およびアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む、抗ＶＥＧＦ抗体を含む。血管新生の他の阻害剤は、アンジオスタチン、エンドスタチン、インターフェロン、インターロイキン１（αおよびβを含む）、インターロイキン１２、レチノイン酸、およびメタロプロテイナーゼ‐１および‐２の組織阻害剤を含む。（ＴＩＭＰ−１および−２）。抗血管新生活性を有するトポイソメラーゼＩＩ阻害剤であるラゾキサンを含む、小分子も使用され得る。
【０２２８】
組合せで使用され得る他の抗がん剤は、アシビシン；アクラルビシン；アコダゾール塩酸塩；アクロニン；アドゼレシン；アルデスロイキン；アルトレタミン；アンボマイシン；アメタントロン酢酸塩；アミノグルテチミド；アムサクリン；アナストロゾール；アントラマイシン；アスパラギナーゼ；アスペルリン；アバスチン；アザシチジン；アゼテパ；アゾトマイシン；バチマスタット；ベンゾデパ；ビカルタミド；ビサントレン塩酸塩；ビスナフィドジメシラート；ビゼレシン；ブレオマイシン硫酸塩；ブレキナルナトリウム；ブロピリミン；ブスルファン；カクチノマイシン；カルステロン；カラセミド；カルベチマー；カルボプラチン；カルムスチン；カルビシン塩酸塩；カルゼレシン；セデフィンゴール；クロラムブシル；シロレマイシン；シスプラチン；クラドリビン；メシル酸クリスナトール；シクロホスファミド；シタラビン；ダカルバジン；ダクチノマイシン；ダウノルビシン塩酸塩；デシタビン；デキソルマプラチン；デザグアニン；メシル酸デザグアニン；ジアジクオン；ドセタキセル；ドキソルビシン；ドキソルビシン塩酸塩；ドロロキシフェン；ドロロキシフェンクエン酸塩；プロピオン酸ドロモスタノロン；デュアゾマイシン；エダトレキサート；エフロルニチン塩酸塩；エルサミトルシン；エンロプラチン；エンプロマート；エピプロピジン；エピルビシン塩酸塩；エルブロゾール；エソルビシン塩酸塩；エストラムスチン；リン酸エストラムスチンナトリウム；エタニダゾール；エトポシド；エトポシドリン酸塩；エトプリン；ファドロゾール塩酸塩；ファザラビン；フェンレチニド；フロクスウリジン；フルダラビンリン酸塩；フルオロウラシル；フルロシタビン；ホスキドン；ホストリエシンナトリウム；ゲムシタビン；ゲムシタビン塩酸塩；ヒドロキシ尿素；イダルビシン塩酸塩；イホスファミド；イルモホシン；インターロイキンＩＩ（組換えインターロイキンＩＩ、またはｒＩＬ２を含む）、インターフェロンアルファ−２ａ；インターフェロンアルファ−２ｂ；インターフェロンアルファ−ｎ１；インターフェロンアルファ−ｎ３；インターフェロンベータＩ；インターフェロンガンマ−Ｉｂ；イプロプラチン；イリノテカン塩酸塩；ランレオチド酢酸塩；レトロゾール；ロイプロリド酢酸塩；リアゾール塩酸塩；ロメトレキソールナトリウム；ロムスチン；ロソキサントロン塩酸塩；マソプロコール；メイタンシン；メクロレタミン塩酸塩；メゲストロール酢酸塩；メレンゲストロール酢酸塩；メルファラン；メノガリル；メルカプトプリン；メトトレキサート；メトトレキサートナトリウム；メトプリン；メツレデパ；ミチンドミド；ミトカルシン；ミトクロミン；ミトギリン；ミトマルシン；ミトマイシン；ミトスペル；ミトタン；ミトキサントロン塩酸塩；ミコフェノール酸；ノコダゾール；ノガラマイシン；オルマプラチン；オキシスラン；パクリタキセル；ペグアスパラガーゼ；ペリオマイシン；ペンタムスチン；ペプロマイシン硫酸塩；ペルホスファミド；ピポブロマン；ピポスルファン；ピロキサントロン塩酸塩；プリカマイシン；プロメスタン；ポルフィマーナトリウム；ポルフィロマイシン；プレドニムスチン；プロカルバジン塩酸塩；ピューロマイシン；ピューロマイシン塩酸塩；ピラゾフリン；リボプリン；ログレチミド；サフィンゴール；サフィンゴール塩酸塩；セムスチン；シムトラゼン；スパルホサートナトリウム；スパルソマイシン；スピロゲルマニウム塩酸塩；スピロムスチン；スピロプラチン；ストレプトニグリン；ストレプトゾシン；スロフェヌル；タリソマイシン；テコガランナトリウム；テガフール；テロキサントロン塩酸塩；テモポルフィン；テニポシド；テロキシロン；テストラクトン；チアミプリン；チオグアニン；チオテパ；チアゾフリン；チラパザミン；トレミフェンクエン酸塩；トレストロン酢酸塩；トリシリビンリン酸塩；トリメトレキサート；グルクロン酸トリメトレキサート；トリプトレリン；ツブロゾール塩酸塩；ウラシルマスタード；ウレデパ；バプレオチド；ベルテポルフィン；ビンブラスチン硫酸塩；ビンクリスチン硫酸塩；ビンデシン；ビンデシン硫酸塩；ビネピジン硫酸塩；ビングリシナート硫酸塩；ビンロイロシン硫酸塩；ビノレルビン酒石酸塩；ビンロシジン硫酸塩；ビンゾリジン硫酸塩；ボロゾール；ゼニプラチン；ジノスタチン；ゾルビシン塩酸塩を含むが、これらに限定されない。他の抗がん薬は、２０−エピ−１，２５ジヒドロキシビタミンＤ３；５−エチニルウラシル；アビラテロン；アクラルビシン；アシルフルベン；アデシペノール；アドゼレシン；アルデスロイキン；ＡＬＬ−ＴＫ拮抗剤；アルトレタミン；アンバムスティン；アミドックス；アミホスチン；アミノレブリン酸；アムルビシン；アムサクリン；アナグレリド；アナストロゾール；アンドログラホリド；血管新生阻害剤；拮抗薬Ｄ；拮抗薬Ｇ；アンタレリクス；抗背側形態形成タンパク質−１（ａｎｔｉ−ｄｏｒｓａｌｉｚｉｎｇ  ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ−１）；抗アンドロゲン薬、前立腺癌；抗エストロゲン薬；アンチネオプラストン；アンチセンスオリゴヌクレオチド；アフィジコリングリシナート；アポトーシス遺伝子モジュレータ；アポトーシス調節因子；アプリン酸；ａｒａ−ＣＤＰ−ＤＬ−ＰＴＢＡ；アルギニンデアミナーゼ；アスラクリン；アタメスタン；アトリムスチン；アキシナスタチン１；アキシナスタチン２；アキシナスタチン３；アザセトロン；アザトキシン；アザチロシン；バッカチンＩＩＩ誘導体；バラノール；バチマスタット；ＣＡＲ／ＡＢＬ拮抗薬；ベンゾクロリン類；ベンゾイルスタウロスポリン；ベータラクタム誘導体；ベータアレチン；ベタクラマイシンＢ；ベツリン酸；ｂＦＧＦ阻害剤；ビカルタミド；ビサントレン；ビサジリジニルスペルミン；ビスナフィド；ビストラテンＡ；ビゼレシン；ブレフラート；ブロピリミン；ブドチタン；ブチオニンスルホキシミン；カルシポトリオール；カルホスチンＣ；カンプトテシン誘導体；カナリア痘ＩＬ−２；カペシタビン；カルボキサミド−アミノ−トリアゾール；カルボキシアミドトリアゾール；ＣａＲｅｓｔ  Ｍ３；ＣＡＲＮ７００；軟骨由来阻害剤；カルゼレシン；カゼインキナーゼ阻害剤（ＩＣＯＳ）；カスタノスペルミン；セクロピンＢ；セトロレリックス；クロリン類；クロロキノキサリンスルホンアミド；シカプロスト；シス−ポルフィリン；クラドリビン；クロミフェン類似体；クロトリマゾール；コリスマイシンＡ；コリスマイシンＢ；コンブレタスタチンＡ４；コンブレタスタチン類似体；コナゲニン；クランベシジン８１６；クリスナトール；クリプトフィシン８；クリプトフィシンＡ誘導体；クラシンＡ；シクロペンタントラキノン類；シクロプラタム；シペマイシン；シタラビンオクホスファート；細胞溶解因子；サイトスタチン；ダクリキシマブ；デシタビン；デヒドロジデムニンＢ；デスロレリン；デキサメタゾン；デキシホスファミド；デキスラゾキサン；デクスベラパミル；ジアジクオン；ジデムニンＢ；ジドックス；ジエチルノルスペルミン；ジヒドロ−５−アザシチジン；ジヒドロタキソール、９−；ジオキサマイシン；ジフェニルスピロムスチン；ドセタキセル；ドコサノール；ドラセトロン；ドキシフルリジン；ドロロキシフェン；ドロナビノール；デュオカルマイシンＳＡ；エブセレン；エコムスティン；エデルホシン；エドレコロマブ；エフロルニチン；エレメン；エミテフル；エピルビシン；エプリステリド；エストラムスチン類似体；エストロゲン作用薬；エストロゲン拮抗薬；エタニダゾール；エトポシドリン酸塩；エキセメスタン；ファドロゾール；ファザラビン；フェンレチニド；フィルグラスチム；フィナステリド；フラボピリドール；フレゼラスティン；フルアステロン；フルダラビン；フルオロダウノルニシン塩酸塩；ホルフェニメックス；ホルメスタン；ホストリエシン；ホテムスチン；ガドリニウムテキサフィリン；硝酸ガリウム；ガロシタビン；ガニレリックス；ゼラチナーゼ阻害剤；ゲムシタビン；グルタチオン阻害剤；ヘプスルファム；ヘレグリン；ヘキサメチレンビスアセトアミド；ヒペリシン；イバンドロン酸；イダルビシン；イドキシフェン；イドラマントン；イルモホシン；イロマスタット；イミダゾアクリドン類；イミキモド；免疫賦活ペプチド；インスリン様成長因子１受容体阻害剤；インターフェロン作用薬；インターフェロン；インターロイキン；イオベングアン；ヨードドキソルビシン；イポメアノール、４−；イロプラクト；イルソグラジン；イソベンガゾール；イソホモハリコンドリンＢ；イタセトロン；ジャスプラキノリド；カハラリドＦ；ラメラリン−Ｎトリアセテート；ランレオチド；レイナマイシン；レノグラスチム；レンチナン硫酸塩；レプトルスタチン；レトロゾール；白血病抑制因子；白血球アルファインターフェロン；ロイプロリド＋エストロゲン＋プロゲステロン；ロイプロレリン；レバミゾール；リアロゾール；直鎖ポリアミン類似体；親油性二糖ペプチド；親油性白金化合物；リソクリナミド７；ロバプラチン；ロンブリシン；ロメトレキソール；ロニダミン；ロソキサントロン；ロバスタチン；ロキソリビン；ルルトテカン；ルテチウムテキサフィリン；リソフィリン；溶解性ペプチド；マイタンシン；マンノスタチンＡ；マリマスタット；マソプロコール；マスピン；マトリライシン阻害剤；マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤；メノガリル；メルバロン；メテレリン；メチオニナーゼ；メトクロプラミド；ＭＩＦ阻害剤；ミフェプリストン；ミルテホシン；ミリモスチム；ミスマッチの二本鎖ＲＮＡ；ミトグアゾン；ミトラクトール；ミトマイシン類似体；ミトナフィド；ミトトキシン線維芽細胞成長因子−サポリン；ミトキサントロン；モファロテン；モルグラモスチム；モノクローナル抗体、ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン；モノホスホリルリピドＡ＋ミオバクテリウム細胞壁ｓｋ；モピダモール；多剤耐性遺伝子阻害剤；多腫瘍抑制因子１に基づく療法；マスタード抗がん剤；ミカペルオキシドＢ；マイコバクテリア細胞壁抽出物；ミリアポロン；Ｎ−アセチルジナリン；Ｎ−置換ベンズアミド；ナファレリン；ナグレスチップ；ナロキソン＋ペンタゾシン；ナパビン；ナフテルピン；ナルトグラスチム；ネダプラチン；ネモルビシン；ネリドロン酸；中性エンドペプチダーゼ；ニルタミド；ニサマイシン；一酸化窒素モジュレータ；ニトロキシド抗酸化剤；ニトルリン；Ｏ６−ベンジルグアニン；オクトレオチド；オキセノン；オリゴヌクレオチド；オナプリストン；オンダンセトロン；オンダンセトロン；オラシン；経口サイトカイン誘導剤；オルマプラチン；オサテロン；オキサリプラチン；オキサウノマイシン；パクリタキセル；パクリタキセル類似体；パクリタキセル誘導体；パラウアミン；パルミトイルリゾキシン；パミドロン酸；パナキシトリオール；パノミフェン；パラバクチン；パゼリプチン；ペグアスパラガーゼ；ペルデシン；ペントサンポリ硫酸ナトリウム；ペントスタチン；ペントロゾール；ペルフルブロン；ペルホスファミド；ペリリルアルコール；フェナジノマイシン；フェニル酢酸塩；ホスファターゼ阻害剤；ピシバニール；ピロカルピン塩酸塩；ピラルビシン；ピリトレキシム；プラセチンＡ；プラセチンＢ；プラスミノーゲン活性化因子阻害剤；白金錯体；白金化合物；白金−トリアミン錯体；ポルフィマーナトリウム；ポルフィロマイシン；プレドニゾン；プロピルビス−アクリドン；プロスタグランジンＪ２；プロテアソーム阻害剤；プロテインＡに基づく免疫モジュレータ；タンパク質キナーゼＣ阻害剤；タンパク質キナーゼＣ阻害剤、微細藻類；タンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤；プリンヌクレオシドホスホリラーゼ阻害剤；プルプリン；ピラゾロアクリジン；ピリドキシル化ヘモグロビンポリオキシエチレン接合体；ｒａｆ拮抗薬；ラルチトレキセド；ラモセトロン；ｒａｓファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤；ｒａｓ阻害剤；ｒａｓ−ＧＡＰ阻害剤；脱メチル化レテリプチン；レニウムＲｅ１８６エチドロナート；リゾキシン；リボザイム；ＲＩＩレチナミド；ログレチミド；ロヒツキン；ロムルチド；ロキニメックス；ル
ビギノンＢ１；ルボキシル；サフィンゴール；サイントピン；ＳａｒＣＮＵ；サルコフィトールＡ；サルグラモスチム；Ｓｄｉ１ミメティック；セムスチン；老化由来阻害剤１；センスオリゴヌクレオチド；シグナル伝達阻害剤；シグナル伝達モジュレータ；一本鎖抗原結合タンパク質；シゾフィラン；ソブゾキサン；ボロカプタートナトリウム；フェニル酢酸ナトリウム；ソルベロール；ソマトメジン結合タンパク質；ソネルミン；スパルホシン酸；スピカマイシンＤ；スピロムスチン；スプレノペンチン；スポンジスタチン１；スクアラミン；幹細胞阻害剤；幹細胞分裂阻害剤；スティピアミド；ストロメライシン阻害剤；スルフィノシン；超活性血管作用性小腸ペプチド拮抗薬；スラジスタ；スラミン；スワインソニン；合成グリコサミノグリカン；タリムスチン；タモキシフェンメチオジド；タウロムスチン；タザロテン；テコガランナトリウム；テガフール；テルラピリリウム；テロメラーゼ阻害剤；テモポルフィン；テモゾロミド；テニポシド；テトラクロロデカオキシド；テトラゾミン；タリブラスチン；チオコラリン；トロンボポイエチン；トロンボポイエチンミメティック；チマルファシン；チモポイエチン受容体作用剤；チモトリナン；甲状腺刺激ホルモン；エチルエチオプルプリンスズ；チラパザミン；二塩化チタノセン；トプセンチン；トレミフェン；全能性幹細胞因子；翻訳阻害剤；トレチノイン；トリアセチルウリジン；トリシリビン；トリメトレキサート；トリプトレリン；トロピセトロン；ツロステリド；チロシンキナーゼ阻害剤；チルホスチン類；ＵＢＣ阻害剤；ウベニメクス；泌尿生殖洞由来成長阻害因子；ウロキナーゼ受容体拮抗薬；バプレオチド；バリオリンＢ；ベクタ系、赤血球遺伝子治療；ベラレソール；ベラミン；ベルジン（ｖｅｒｄｉｎ）；ベルテポルフィン；ビノレルビン；ビンキサルチン；ビタキシン；ボロゾール；ザノテロン；ゼニプラチン；ジラスコルブ；およびジノスタチンスチマラメルを含むが、これらに限定されない。
【０２２９】
本明細書において提供される任意の改変ＴＣＲ複合体および／または系を含む免疫細胞は、抗ウイルス療法、シドホビルおよびインターロイキン２、またはシタラビン（ＡＲＡ−Ｃとしても公知である）などの薬剤を用いた治療を含むが、これらに限定されない、任意の数の関連する治療モダリティと共に（たとえば、前に、同時に、または後に）、被験体に投与され得る。いくつかの場合において、主題の免疫細胞は、化学療法、放射線照射、シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸、およびＦＫ５０６などの免疫抑制剤、抗体、またはＣＡＭＰＡＴＨなどの他の免疫除去剤、抗ＣＤ３抗体もしくは他の抗体療法、シトキシン（ｃｙｔｏｘｉｎ）、フルダリビン（ｆｌｕｄａｒｉｂｉｎｅ）、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコプリノール酸（ｍｙｃｏｐｌｉｅｎｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、ステロイド剤、ＦＲ９０１２２８、サイトカイン、および照射と組み合わせて、使用され得る。操作された細胞組成物はまた、骨髄移植、たとえばフルダラビンなどの化学療法剤、外照射療法（ＸＲＴ）、シクロホスファミド、またはＯＫＴ３もしくはＣＡＭＰＡＴＨなどの抗体のいずれかを使用するＴ細胞除去療法と共に（たとえば、前に、同時に、または後に）、患者に投与され得る。いくつかの場合において、主題の免疫細胞組成物は、ＣＤ２０に反応する薬剤、たとえばリツキサンなどのＢ細胞除去療法後に投与され得る。たとえば、被験体は、高用量化学療法、続いて末梢血幹細胞移植を用いた標準治療を受け得る。特定の実施形態において、移植に続いて、被験体は免疫細胞、たとえば、改変ＴＣＲ複合体および／または主題の系を含む拡大された免疫細胞の注入を受け得る。さらに、拡大された免疫細胞は、外科手術の前または後に投与され得る。
【０２３０】
いくつかの場合において、たとえば、がんを治療する組成物、配合物、および方法において、投与される組成物または配合物の単位用量は、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または１００ｍｇであり得る。いくつかの場合において、投与される組成物または配合物の総量は、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または１００ｇであり得る。
【実施例】
【０２３１】
以下の実施例は、本発明を純粋に例示することを意図するものであり、したがって、決して本発明を限定するものとみなされるべきではない。以下の実施例および詳細な説明は、実例として提示され、限定として提示されるものではない。以下の非限定的な実施例によって、本開示の様々な態様をさらに詳細に説明する。
実施例１：抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂの生成
免疫化
【０２３２】
２頭のラクダを、すべての現行の動物福祉法令に従って、組換えＢＣＭＡ  ＥＣＤタンパク質（ＡＣＲＯ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社，Ｃａｔ．＃：ＢＣＡ−Ｈ５２２ｙ、配列番号１）で免疫した。免疫化のために、抗原をＣＦＡ（一次免疫）またはＩＦＡ（追加免疫）と共に、エマルジョンとして調製した。抗原を、ダブルスポット注射によって、頚部に筋肉内投与した。各動物に、１週間間隔で、１００μｇのＢＣＭＡ  ＥＣＤを含有するエマルジョンの注射を２回、それに続いて５０μｇの抗原を含有する注射を４回受けさせた。免疫化中の種々の時間点で、動物から１０ｍｌの血液試料を採取し、血清を調製した。固定化したＢＣＭＡ  ＥＣＤタンパク質を用いたＥＬＩＳＡベースの実験において、血清試料を用い、抗原特異的な液性免疫応答の誘導を確認した。最後の免疫化から５日後、各動物から１５０ｍｌの血液試料を収集した。ラクダ重鎖免疫グロブリン（ＨＣＡｂ）の遺伝的供給源としての末梢血リンパ球（ＰＢＬ）を、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ勾配（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）を用いて３００ｍｌの血液試料から単離し、〜１×１０９個のＰＢＬを得た。抗体の最大限の多様性は、サンプルされたＢリンパ球の数と等しいと推測され、その数はＰＢＬの数（１×１０８）の約１０％である。ラクダの重鎖抗体の画分は、Ｂリンパ球の数の最大２０％までである。したがって、３００ｍｌの血液試料中のＨＣＡｂの最大限の多様性は、約２×１０７個の種々の分子であると推定される。
ライブラリ構築
【０２３３】
ＲＴ−ＰＣＲの出発材料として、ＰＢＬから抽出されたＲＮＡを使用して、ｓｄＡｂをコードする遺伝子断片を増幅した。これらの断片を、自家ファージミドベクタにクローニングした。ｓｄＡｂコード配列とインフレームで、ベクタはＣ末端（Ｈｉｓ）６タグもコードする。ライブラリのサイズは、１×１０９より大きい。標準的なプロトコルに従って、ライブラリファージを調製し、さらなる使用のために、４℃でろ過滅菌後、保管した。
バインダ単離および高スループットスクリーニング
【０２３４】
固相パニングおよび細胞ベースのパニングを用いて、上述のライブラリを用いて、バインダを単離した。両方の条件で１回のパニングを実施した。各選択アウトプットを、全アウトプットクローンの数、ＢＣＭＡ陽性クローンの百分率（ＥＬＩＳＡによる）、およびＢＣＭＡ特異的バインダの配列多様性に関して分析した。これらのパラメータに基づいて、高スループットスクリーニングのために最良のパニングアウトプットを選択した。この目的のために、選択されたアウトプットファージを使用して、指数関数的に成長する大腸菌細胞に感染させた。高スループットスクリーニングのために、アウトプットの二本鎖ＤＮＡプールを抽出し、ｓｄＡｂインサートをファージミドベクタから切断して可溶性発現ベクタに挿入した。ｓｄＡｂコード配列とインフレームで、ベクタはＣ末端（Ｈｉｓ）６タグもコードする。コロニーを採集して、１ｍｌの２ＹＴ培地を含有する９６ディープウェルプレート内で成長させた。ｓｄＡｂの発現を、上清に１ｍＭのＩＰＴＧを添加することによって誘導した。
【０２３５】
上清中のｓｄＡｂを、そのＢＣＭＡ  ＥＣＤタンパク質に結合する能力に関してはＥＬＩＳＡによって、ＢＣＭＡ安定細胞株に結合する能力に関してはＦＡＣＳによって、分析した。すべてのバインダを配列決定し、一部に対し、ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｔ２００機器で表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）による親和性ランキングを含む、さらなる特徴付けを行った。実験を以下のとおり実施した：粗精製のｓｄＡｂタンパク質を親和性タグによってセンサチップ上に捕獲した。捕獲した抗体の量は、上清中の粗精製のタンパク質の濃度に依存した。高濃度（１００ｎＭ）の抗原タンパク質、すなわち、Ｈｉｓタグ化ヒトＢＣＭＡ（ＡＣＲＯ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社、Ｃａｔ．＃：ＢＣＡ−Ｈ５２２ｙ）およびＦｃ融合カニクイザルＢＣＭＡ（ＡＣＲＯ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社、Ｃａｔ．＃：ＢＣＡ−Ｃ５２５３、配列番号：２）を、センサチップ表面上に流し、ｓｄＡｂを結合させた。オン率（ｋｏｎ）およびオフ率（ｋｏｆｆ）を、抗原濃度１００ｎＭでの結合および解離に基づいて概算し、それを使用して平衡解離定数（ＫＤ）を推定した。
表９  ＳＰＲ親和性ランキングによる抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂの推定結合親和性
【表９】
2021528049.tif 000011
実施例２：ウイルストランスフェクションおよびウイルス粒子生成
【０２３６】
本明細書で開示される系のうち任意のものをコードするポリ核酸を含むウイルス粒子を生成するためには、ｐＭＤＬｇ／ｐＲＲＥ（Ａｄｄｇｅｎｅ＃１２２５１）、ｐＲＳＶ−Ｒｅｖ（Ａｄｄｇｅｎｅ＃１２２５３）、およびｐＭＤ２．Ｇ（Ａｄｄｇｅｎｅ＃１２２５９）を含む、レンチウイルスパッケージングプラスミド混合物を、ポリエーテルイミド（ＰＥＩ）と事前最適化した比で、ＰＬＶＸ−ＥＦ１Ａ（標的系を含む）ベクタと適切に事前混合し、５分間、室温にてインキュベートした。トランスフェクション混合物を２９３−Ｔ細胞に滴下し、次いで細胞と穏やかに混合した。トランスフェクションされた２９３−Ｔ細胞を、３７℃、５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。トランスフェクションの２４時間後、上清を収集し、４℃で１０分間、５００ｇで遠心分離してすべての細胞破片を除去し、続いて超遠心分離工程にかけた。遠心分離した上清を０．４５μｍのＰＥＳフィルタによってろ過し、超遠心分離後のウイルス上清を濃縮した。遠心分離後、上清を注意深く捨て、ウイルスペレットを事前冷却したＤＰＢＳでリンスした。ウイルスの濃度を測定した。ウイルスをアリコートし、−８０℃で保管した。ウイルス力価をＴ細胞株上の機能的形質導入によって決定した。
【０２３７】
簡潔には、ｐＬＶＸ−Ｐｕｒｏ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社＃６３２１６４）を使用して、元のプロモータをヒト伸長因子１αプロモータ（ｈＥＦ１α）と置き換えることによって、かつＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社によるＥｃｏＲＩおよびＢａｍＨＩを用いてピューロマイシン耐性遺伝子を除去することによって、レンチウイルスベクタを改変した。ＰＬＶＸ−ＥＦ１Ａをさらに、上述したようにレンチウイルスパッケージング手順に供した。
実施例３：免疫細胞の調製
【０２３８】
白血球をＲ１０培地に収集し、次いで、０．９％ＮａＣｌ溶液と１：１（ｖ／ｖ）の比で混合した。３ｍＬのリンホプレップ（ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ）培地を、１５ｍＬ遠心分離管に加えた。リンホプレップをゆっくりと層状にし、６ｍｌの希釈リンパ球混合物を形成した。リンパ球混合物を、２０℃で、制動せずに３０分間８００ｇで遠心分離した。次いで、リンパ球のバフィコートを２００μＬピペットで収集した。回収した画分を、０．９％ＮａＣｌまたはＲ１０で少なくとも６倍に希釈して、溶液の密度を低減させた。次いで、回収した画分を２０℃で１０分間、２５０ｇで遠心分離した。上清を完全に吸引し、１０ｍＬのＲ１０を細胞ペレットに加えた。混合物を、２０℃で１０分間、２５０ｇでさらに遠心分離した。次いで、上清を吸引した。１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ‐２を含む、３７℃にあらかじめ温めた２ｍＬのＲ１０を細胞ペレットに加え、細胞ペレットを穏やかに再懸濁した。細胞を定量し、実験のためにＰＢＭＣ試料を準備した。ＭｉｌｔｅｎｙｉのパンＴ細胞単離キット（Ｃａｔ＃１３０−０９６−５３５）を用いて、ＰＢＭＣからヒトＴ細胞を精製した。
【０２３９】
その後、調製されたＴ細胞を、ヒトＴ細胞活性化／拡大キット（Ｍｉｌｔｅｎｙ、＃１３０−０９１−４４１）を用いて、２細胞ごとに１つ装填された抗ビオチンＭＡＣＳｉＢｅａｄ  Ｐａｒｔｉｃｌｅ（ビーズ対細胞の比１：２）を使用することによって、４８時間事前活性化した。
実施例４：Ｔ細胞トランスフェクション
【０２４０】
事前活性化されたＴ細胞を収集し、懸濁し、３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含有する１６４０培地に再懸濁させた。系をコードするレンチウイルスベクタを同じ培地でＭＯＩ＝５に希釈し、１Ｅ＋０６個の活性化Ｔ細胞を感染させた。３２℃、１時間、１０００ｇで遠心分離によって、８μｇ／ｍｌのポリブレンの存在下で、  事前活性化Ｔ細胞を、レンチウイルスストックにより形質導入した。次いで、形質導入された細胞を、適切な条件下で導入遺伝子を発現させるために、細胞培養インキュベータに移した。翌日、形質導入された細胞を遠心分離し、新鮮な培地と交換し、細胞濃度を２日ごとに測定し、新鮮な培地を加えて拡大を継続させた。
実施例５：受容体発現の定量化
【０２４１】
形質導入後、３日目およびその先（典型的には３日目から８日目）に、フローサイトメトリによって、細胞を系の発現に関して評価した。培養物から１アリコートの細胞を収集し、洗浄し、ペレット化し、０．５％ＦＢＳおよび１／１００希釈した結合抗体または抗原タンパク質で補った、１００ｕｌのＰＢＳ中に再懸濁する。再懸濁された細胞は、約１００ｕｌのＡｂ中にある。細胞を４℃で３０分間、インキュベートした。製造業者の取扱説明書に従って、Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  ｄｙｅ  ｅＦｌｕｏｒ７８０またはＳＹＴＯＸ  Ｂｌｕｅ  ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  ｓｔａｉｎも加えた。インキュベーション後、細胞を、ＰＢＳ中で２回洗浄し、１００から２００ｕｌのＰＢＳに再懸濁させて分析した。系の平均蛍光をフローサイトメトリによって定量した。
【０２４２】
抗ＢＣＭＡ染色に関しては、ポリクローナルビオチン標識ヤギ抗ヒトＢＣＭＡ抗体（Ｒ＆Ｄ社、カタログ番号ＢＡＦ１９３）、続いてストレプトアビジン（ＢＤ社）を用いて、細胞を染色した。ＦｌｏｗＪｏ（Ｔｒｅｅ  Ｓｔａｒ，Ｉｎｃ．社）を使用して、フローサイトメトリ分析をすべての実験に関して実施した。
実施例６：細胞傷害性アッセイ
イプシロンＴＣＲプラットフォームのＢＣＭＡ抗体スクリーニング
【０２４３】
ＲＰＭＩ−８２２６細胞に対する細胞傷害性効果を評価するために、抗ＢＣＭＡ抗体（ＢＣＭＡ１−１２）を個別にイプシロンＴＣＲに融合した。形質導入後３日目または６日目に、エフェクタ細胞を、９６ウェルプレート中で、３７℃で２０時間、エフェクタと標的の種々の比（０．５：１、１．５：１、および３：１）で共培養した。他のウェルは、アッセイ緩衝液（１６４０フェノールレッド不含培地と２％ｈｉＦＢＳ）のみ、標的細胞のみ（Ｔ）、エフェクタ細胞のみ（Ｅ）、および標的細胞の最大放出（トリトン−Ｘ１００の１％溶液と合わせた標的細胞）を含有した。各条件を３連で実施し、エフェクタ細胞の細胞傷害性をＬＤＨアッセイキット（Ｒｏｃｈｅ社）によって検出した。２０時間共培養した後、アッセイプレートを遠心分離し、上清を収集し、新しい９６−ｗプレートに移した。製造業者の取扱説明書に従って、上清プレートを等体積のＬＤＨアッセイ試薬で希釈した。１５℃〜２５℃で約３０分間、アッセイプレートをインキュベートした。Ｆｌｅｘｓｔａｔｉｏｎリーダ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ社）を使用して、プレートの吸光度を４９２ｎｍおよび６５０ｎｍで測定し、算出した。
【０２４４】
図８Ａ、図８Ｂ、および図８Ｃに見られるように、結果は、種々のＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを発現するエフェクタ細胞は、異なる細胞殺傷効果を有することを示し、ＢＣＭＡ１、ＢＣＭＡ２、ＢＣＭＡ５、ＢＣＭＡ６、ＢＣＭＡ８、ＢＣＭＡ９、およびＢＣＭＡ１２などの抗体は、より良好な細胞殺傷効果を示した。
【０２４５】
図８Ｄ、図８Ｅ、および図８Ｆに見られるように、ＩＦＮ−γ発現を、ＨＴＲＦによってアッセイした。ＩＦＮ−γ検出のためのアッセイ（ヒトＩＦＮγキット、Ｇｉｓｂｉｏ社）において、３８４ウェル低容量白色プレートを使用した。細胞傷害性アッセイにおいて分泌されたＩＦＮ−γの量は、細胞殺傷効果として同様の傾向を示した。
複数成分系
【０２４６】
抗ＢＣＭＡ３−イプシロン−ＴＣＲ（ＢＣＭＡ３  ｅＴＣＲ）、抗ＢＣＭＡ２−イプシロン−ＴＣＲ（ＢＣＭＡ２  ｅＴＣＲ）、抗ＢＣＭＡ２−抗ＢＣＭＡ３−イプシロンＴＣＲ（タンデムのＢＣＭＡ２＆３  ｅＴＣＲ）、および抗ＢＣＭＡ１−抗ＢＣＭＡ２−抗ＢＣＭＡ３−ガンマＴＣＲ（タンデムのＢＣＭＡ１＆２＆３  ｇＴＣＲ）、および形質導入していない対照細胞の細胞傷害性を、２０時間共培養アッセイにおいて決定し、ここで、ＲＰＭＩ−８２２６細胞（ＢＣＭＡ＋）を、エフェクタと標的細胞の比（Ｅ：Ｔ）０．３３：１で、共培養した。各条件を３連で実施し、エフェクタ細胞の細胞傷害性をＬＤＨアッセイキット（Ｒｏｃｈｅ社）によって検出した。２０時間共培養した後、アッセイプレートを遠心分離し、上清を収集し、新しい９６ウェルプレートに移した。製造業者の取扱説明書に従って、上清プレートを等体積のＬＤＨアッセイ試薬で希釈した。１５℃〜２５℃で約３０分間、アッセイプレートをインキュベートした。Ｆｌｅｘｓｔａｔｉｏｎリーダ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ社）を使用して、プレートの吸光度を４９２ｎｍおよび６５０ｎｍで測定し、算出した。
【０２４７】
結果は、ＴＣＲサブユニット上のタンデムのＢＣＭＡ抗体は、単一抗体融合ｅＴＣＲより著しく良好な細胞殺傷効果を提供したことを示し、ＴＣＲ上のタンデムのＢＣＭＡ抗体は細胞殺傷効果のためにより良い選択であることを示唆した（図９に示すように）。
【０２４８】
抗ＢＣＭＡ１−抗ＢＣＭＡ２−抗ＢＣＭＡ３イプシロン−ＴＣＲ（タンデムのＢＣＭＡ１−２−３  ｅＴＣＲ）、抗ＢＣＭＡ２−抗ＢＣＭＡ３イプシロン−ＴＣＲ（タンデムのＢＣＭＡ２−３  ｅＴＣＲ）、抗ＢＣＭＡ４−抗ＢＣＭＡ５イプシロン−ＴＣＲ（タンデムのＢＣＭＡ４−５  ｅＴＣＲ）、抗ＢＣＭＡ２−抗ＢＣＭＡ３−抗ＢＣＭＡ４イプシロン−ＴＣＲ（タンデムのＢＣＭＡ２−３−４  ｅＴＣＲ）、抗ＢＣＭＡ１−抗ＢＣＭＡ４−抗ＢＣＭＡ５イプシロン−ＴＣＲ（タンデムのＢＣＭＡ１−４−５  ｅＴＣＲ）、および形質導入されていない対照細胞の細胞傷害性を、２０時間の共培養アッセイにおいて決定し、ここで、０．５：１および１．５：１のエフェクタ細胞と標的細胞の比（Ｅ：Ｔ）で、ＣＨＯ／ＢＣＭＡ／ＣＤ１９細胞（ＢＣＭＡ＋ＣＤ１９＋）と共培養した。各条件を３連で実施し、エフェクタ細胞の細胞傷害性をＬＤＨアッセイキット（Ｒｏｃｈｅ社）によって検出した。２０時間共培養した後、アッセイプレートを遠心分離し、上清を収集し、新しい９６ウェルプレートに移した。製造業者の取扱説明書に従って、上清プレートを等体積のＬＤＨアッセイ試薬で希釈した。１５℃〜２５℃で約３０分間、アッセイプレートをインキュベートした。Ｆｌｅｘｓｔａｔｉｏｎリーダ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ社）を使用して、プレートの吸光度を４９２ｎｍおよび６５０ｎｍで測定し、算出した。
【０２４９】
結果は、タンデムの組み合わせでｅＴＣＲに連結される５つの選択されたＢＣＭＡ抗体を有する構築物のすべては、より優れたインビトロ細胞殺傷効果を有することを示した（図１０に示すように）。
【０２５０】
抗ＢＣＭＡ１イプシロン−ＴＣＲ（ＢＣＭＡ１  ｅＴＣＲ）、抗ＢＣＭＡ１  ４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータ−ＣＡＲ（ＢＣＭＡ１  ＢＢｚＣＡＲ）、抗ＣＤ１９イプシロン−ＴＣＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ）、および抗ＢＣＭＡ１−抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ（タンデムのＢＣＭＡ１／ＣＤ１９  ｅＴＣＲ）、ならびに対照の形質導入していない免疫細胞の細胞傷害性を、２０時間共培養アッセイにおいて決定した。実験において、エフェクタ細胞を遠心分離で収集し、次いで、２％の加熱不活性化したＦＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）で補った、１６４０フェノールレッド不含培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）で、望ましい濃度に希釈した。標的細胞ＮＣＩ−Ｈ９２９は、標的抗原ＢＣＭＡの強い発現を示した。エフェクタ細胞を、９６ウェルプレート中で、３７℃で２０時間、エフェクタと標的の種々の比（Ｅ：Ｔ＝５：１および１０：１）で共培養した。他のウェルは、アッセイ緩衝液（１６４０フェノールレッド不含培地と２％ｈｉＦＢＳ）のみ、標的細胞のみ（Ｔ）、エフェクタ細胞のみ（Ｅ）、および標的細胞の最大放出（トリトン−Ｘ１００の１％溶液と合わせた標的細胞）を含有した。各条件を３連で実施し、エフェクタ細胞の細胞傷害性をＬＤＨアッセイキット（Ｒｏｃｈｅ社）によって検出した。２０時間共培養した後、アッセイプレートを遠心分離し、上清を収集し、新しい９６−ｗプレートに移した。製造業者の取扱説明書に従って、上清プレートを等体積のＬＤＨアッセイ試薬で希釈した。１５℃〜２５℃で約３０分間、アッセイプレートをインキュベートした。Ｆｌｅｘｓｔａｔｉｏｎリーダ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ社）を使用して、プレートの吸光度を４９２ｎｍおよび６５０ｎｍで測定し、算出した。
【０２５１】
結果は、ＢＣＭＡ１  ｅＴＣＲ、ＢＣＭＡ１  ＢＢｚＣＡＲ、およびタンデムのＢＣＭＡ１／ＣＤ１９  ｅＴＣＲなどの、ＢＣＭＡ結合ドメインを発現するエフェクタ細胞（たとえば、抗ＢＣＭＡ１）は、形質導入されていない細胞対照およびＣＤ１９  ｅＴＣＲと比較して、より高い細胞殺傷活性を有することを示した。タンデムのＢＣＭＡ１／ＣＤ１９  ｅＴＣＲは、ＢＣＭＡ１  ｅＴＣＲまたはＢＣＭＡ１  ＢＢｚＣＡＲと比較して、より高い細胞殺傷活性を示した（図１１Ａ、トランスフェクション後１１日目に示すように）。
【０２５２】
図１１Ｂに示すように、ＩＦＮ−γ発現をＨＴＲＦによってアッセイした。ＩＦＮ−γ検出のためのアッセイ（ヒトＩＦＮγキット、Ｇｉｓｂｉｏ社）において、３８４ウェル低容量白色プレートを使用した。
【０２５３】
第２の複数成分細胞傷害性アッセイにおいて、５：１、１０：１、および２０：１のエフェクタと標的細胞の比で、抗ＢＣＭＡ１−イプシロン−ＴＣＲ（ＢＣＭＡ１  ｅＴＣＲ）、抗ＢＣＭＡ１−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータ−ＣＡＲ（ＢＣＭＡ１  ＢＢｚＣＡＲ）、抗ＣＤ１９−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＣＤ１９  ＢＢｚＣＡＲ）、抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ）、抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ１−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ１  ＢＢｚＣＡＲ）、および抗ＢＣＭＡ１−イプシロンＴＣＲ／抗ＣＤ１９−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＢＣＭＡ１  ｅＴＣＲ／ＣＤ１９  ＢＢｚＣＡＲ）、ならびに形質導入されていない対照細胞を、ＣＨＯ−ＢＣＭＡ−ＣＤ１９細胞（ＢＣＭＡ＋およびＣＤ１９＋）と共培養した。各条件を３連で実施し、エフェクタ細胞の細胞傷害性をＬＤＨアッセイキット（Ｒｏｃｈｅ社）によって検出した。２０時間共培養した後、アッセイプレートを遠心分離し、上清を収集し、新しい９６ウェルプレートに移した。製造業者の取扱説明書に従って、上清プレートを等体積のＬＤＨアッセイ試薬で希釈した。１５℃〜２５℃で約３０分間、アッセイプレートをインキュベートした。Ｆｌｅｘｓｔａｔｉｏｎリーダ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ社）を使用して、プレートの吸光度を４９２ｎｍおよび６５０ｎｍで測定し、算出した。
【０２５４】
結果は、抗ＢＣＭＡおよび／または抗ＣＤ−１９系：抗ＢＣＭＡ１イプシロン−ＴＣＲ（ＢＣＭＡ  ｅＴＣＲ）、抗ＢＣＭＡ１−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータ−ＣＡＲ（ＢＣＭＡ  ＢＢｚＣＡＲ）、抗ＣＤ１９−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＣＤ１９  ＢＢｚＣＡＲ）、抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ）、抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ−抗ＢＣＭＡ１−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ  ＢＢｚＣＡＲ）、抗ＢＣＭＡ１−イプシロンＴＣＲ／抗ＣＤ１９−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＢＣＭＡ  ｅＴＣＲ／ＣＤ１９  ＢＢｚＣＡＲ）は、２０：１のＥ：Ｔ比で、形質導入されていない対照細胞と比較して、より高い細胞殺傷活性を有することを示した。より低いＥ：Ｔ比、特に５：１においてではあるものの、抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ１−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ  ＢＢｚＣＡＲ）、抗ＢＣＭＡ１−イプシロンＴＣＲ／抗ＣＤ１９−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＢＣＭＡ  ｅＴＣＲ／ＣＤ１９  ＢＢｚＣＡＲ）は、単一抗体融合ＣＡＲまたはＴＣＲと比較して、より高い細胞殺傷活性を示した（図１２Ａに示すように）。
【０２５５】
ＩＦＮ−γ発現をＨＴＲＦによってアッセイした、図１２Ｂ。ＩＦＮ−γ検出のためのアッセイ（ヒトＩＦＮγキット、Ｇｉｓｂｉｏ社）において、３８４ウェル低容量白色プレートを使用した。
【０２５６】
第３の複数成分細胞傷害性アッセイにおいて、抗ＣＤ１９イプシロン−ＴＣＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ）、抗ＢＣＭＡ１−抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ（タンデムのＢＣＭＡ１／ＣＤ１９  ｅＴＣＲ）、抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ１−デルタＴＣＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ１  ｄＴＣＲ）、抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ１−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ１  ＢＢｚＣＡＲ）、および抗ＢＣＭＡ１−イプシロンＴＣＲ／抗ＣＤ１９−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＢＣＭＡ１  ｅＴＣＲ／ＣＤ１９  ＢＢｚＣＡＲ）、ならびに形質導入されていない対照細胞を、ＣＨＯ−ＢＣＭＡ−ＣＤ１９細胞（ＢＣＭＡ＋およびＣＤ１９＋）と、１０：１および５：１のエフェクタと標的の比で共培養した。各条件を３連で実施し、エフェクタ細胞の細胞傷害性をＬＤＨアッセイキット（Ｒｏｃｈｅ社）によって検出した。２０時間共培養した後、アッセイプレートを遠心分離し、上清を収集し、新しい９６ウェルプレートに移した。製造業者の取扱説明書に従って、上清プレートを等体積のＬＤＨアッセイ試薬で希釈した。１５℃〜２５℃で約３０分間、アッセイプレートをインキュベートした。Ｆｌｅｘｓｔａｔｉｏｎリーダ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ社）を使用して、プレートの吸光度を４９２ｎｍおよび６５０ｎｍで測定し、算出した。
【０２５７】
結果は、抗ＢＣＭＡおよび抗ＣＤ１９系：抗ＣＤ１９イプシロン−ＴＣＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ）、抗ＢＣＭＡ１−抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ（タンデムのＢＣＭＡ１／ＣＤ１９  ｅＴＣＲ）、抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ１−デルタＴＣＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ１  ｄＴＣＲ）、抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ１−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ１  ＢＢｚＣＡＲ）、抗ＢＣＭＡ１−イプシロンＴＣＲ／抗ＣＤ１９−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＢＣＭＡ１  ｅＴＣＲ／ＣＤ１９  ＢＢｚＣＡＲ）は、形質導入されていない対照細胞と比較して、抗腫瘍活性を有することを示した。より高いＥ：Ｔ比（１０：１）で、抗ＢＣＭＡ１−抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ（タンデムのＢＣＭＡ１／ＣＤ１９  ｅＴＣＲ）、抗ＢＣＭＡ１−イプシロンＴＣＲ／抗ＣＤ１９−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＢＣＭＡ１  ｅＴＣＲ／ＣＤ１９  ＢＢｚＣＡＲ）は、抗ＣＤ１９イプシロン−ＴＣＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ）、および抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ１−デルタＴＣＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ１  ｄＴＣＲ）より高い、同様の細胞殺傷活性を示した。より低いＥ：Ｔ比（５：１）で、抗ＣＤ１９イプシロン−ＴＣＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ）、および抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ１−デルタＴＣＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ１  ｄＴＣＲ）は、細胞殺傷活性をほとんど示さず、一方で抗ＢＣＭＡ１−抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ（タンデムのＢＣＭＡ１／ＣＤ１９  ｅＴＣＲ）、抗ＢＣＭＡ１−イプシロンＴＣＲ／抗ＣＤ１９−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＢＣＭＡ１  ｅＴＣＲ／ＣＤ１９  ＢＢｚＣＡＲ）はなおも、約４０％の標的細胞の溶解を伴う細胞殺傷活性を示した（図１３Ａに示すように）。
【０２５８】
第４の複数成分細胞傷害性アッセイにおいて、抗ＢＣＭＡおよび／または抗ＣＤ１９系：抗ＢＣＭＡ１−イプシロンＴＣＲ（ＢＣＭＡ１  ｅＴＣＲ）、抗ＢＣＭＡ１−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＢＣＭＡ１  ＢＢｚＣＡＲ）、抗ＢＣＭＡ１−抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ（タンデムのＢＣＭＡ１／ＣＤ１９  ｅＴＣＲ）、抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ１−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ１  ＢＢｚＣＡＲ）、抗ＢＣＭＡ１−イプシロンＴＣＲ／抗ＣＤ１９−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＢＣＭＡ１  ｅＴＣＲ／ＣＤ１９  ＢＢｚＣＡＲ）を、ＮＣＩ−Ｈ９２９細胞（ＢＣＭＡ＋）と、２．５：１および５：１のエフェクタと標的の比で共培養した。各条件を３連で実施し、エフェクタ細胞の細胞傷害性をＬＤＨアッセイキット（Ｒｏｃｈｅ社）によって検出した。２０時間共培養した後、アッセイプレートを遠心分離し、上清を収集し、新しい９６ウェルプレートに移した。製造業者の取扱説明書に従って、上清プレートを等体積のＬＤＨアッセイ試薬で希釈した。１５℃〜２５℃で約３０分間、アッセイプレートをインキュベートした。Ｆｌｅｘｓｔａｔｉｏｎリーダ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ社）を使用して、プレートの吸光度を４９２ｎｍおよび６５０ｎｍで測定し、算出した。
【０２５９】
結果は、抗ＢＣＭＡおよび抗ＣＤ１９系：抗ＢＣＭＡ１−イプシロンＴＣＲ（ＢＣＭＡ１  ｅＴＣＲ）、抗ＢＣＭＡ１−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＢＣＭＡ１  ＢＢｚＣＡＲ）、抗ＢＣＭＡ１−抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ（タンデムのＢＣＭＡ１／ＣＤ１９  ｅＴＣＲ）、抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ１−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ１  ＢＢｚＣＡＲ）、抗ＢＣＭＡ１−イプシロンＴＣＲ／抗ＣＤ１９−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＢＣＭＡ１  ｅＴＣＲ／ＣＤ１９  ＢＢｚＣＡＲ）は、形質導入されていない対照と比較して、より高い細胞殺傷活性を有することを示した（図１３Ｂに示すように）。
【０２６０】
第５の複数成分細胞傷害性アッセイにおいて、１．３：１のエフェクタと標的の比で、抗ＢＣＭＡおよび／または抗ＣＤ１９系：抗ＢＣＭＡ１イプシロン−ＴＣＲ（ＢＣＭＡ１  ｅＴＣＲ）、抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ１−ガンマＴＣＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ１  ｇＴＣＲ）、抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ１−デルタＴＣＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ１  ｄＴＣＲ）、抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ１−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ１  ＢＢｚＣＡＲ）、ならびに形質導入されていない対照細胞を、ＣＨＯ−ＢＣＭＡ−ＣＤ１９細胞（ＢＣＭＡ＋およびＣＤ１９＋）と共培養した。各条件を３連で実施し、エフェクタ細胞の細胞傷害性をＬＤＨアッセイキット（Ｒｏｃｈｅ社）によって検出した。２０時間共培養した後、アッセイプレートを遠心分離し、上清を収集し、新しい９６ウェルプレートに移した。製造業者の取扱説明書に従って、上清プレートを等体積のＬＤＨアッセイ試薬で希釈した。１５℃〜２５℃で約３０分間、アッセイプレートをインキュベートした。Ｆｌｅｘｓｔａｔｉｏｎリーダ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ社）を使用して、プレートの吸光度を４９２ｎｍおよび６５０ｎｍで測定し、算出した。
【０２６１】
結果は、抗ＢＣＭＡ１イプシロン−ＴＣＲ（ＢＣＭＡ１  ｅＴＣＲ）、抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ１−ガンマＴＣＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ１  ｇＴＣＲ）、抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ１−デルタＴＣＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ１  ｄＴＣＲ）、抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ１−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ１  ＢＢｚＣＡＲ）は、形質導入されていない対照と比較して、より高い細胞殺傷活性を有することを示した。抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ１−ガンマＴＣＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ１  ｇＴＣＲ）、抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ１−デルタＴＣＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ１  ｄＴＣＲ）、抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ１−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ１  ＢＢｚＣＡＲ）は、抗ＢＣＭＡ１イプシロン−ＴＣＲ（ＢＣＭＡ１  ｅＴＣＲ）と比較して、より高い細胞殺傷活性を有することを示した。抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ１−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ１  ＢＢｚＣＡＲ）は、抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ１−ガンマＴＣＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ１  ｇＴＣＲ）、抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ１−デルタＴＣＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ１  ｄＴＣＲ）と比較して、より高い細胞殺傷活性を有することを示した（図１４Ａに示すように）。図１４Ｂおよび図１４Ｃの結果は、共培養系において、Ｔ細胞から分泌されるＩＦＮγおよびＴＮＦαの量が、細胞殺傷効果として、同様の傾向を有することを示した。
【０２６２】
第６の複数成分細胞傷害性アッセイにおいて、抗ＢＣＭＡおよび／または抗ＣＤ１９系：抗ＢＣＭＡ１イプシロン−ＴＣＲ（ＢＣＭＡ１  ｅＴＣＲ）、抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ１−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ１  ＢＢｚＣＡＲ）、抗ＢＣＭＡ１、および抗ＣＤ１９−イプシロン−ＴＣＲ（タンデムのＢＣＭＡ１／ＣＤ１９  ｄＴＣＲ）、ならびに形質導入されていない対照細胞を、ＣＨＯ−ＢＣＭＡ−ＣＤ１９細胞（ＢＣＭＡ＋およびＣＤ１９＋）と、１．３：１のエフェクタと標的の比で共培養した。各条件を３連で実施し、エフェクタ細胞の細胞傷害性をＬＤＨアッセイキット（Ｒｏｃｈｅ社）によって検出した。２０時間共培養した後、アッセイプレートを遠心分離し、上清を収集し、新しい９６ウェルプレートに移した。製造業者の取扱説明書に従って、上清プレートを等体積のＬＤＨアッセイ試薬で希釈した。１５℃〜２５℃で約３０分間、アッセイプレートをインキュベートした。Ｆｌｅｘｓｔａｔｉｏｎリーダ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ社）を使用して、プレートの吸光度を４９２ｎｍおよび６５０ｎｍで測定し、算出した。
【０２６３】
結果は、抗ＢＣＭＡ１イプシロン−ＴＣＲ（ＢＣＭＡ１  ｅＴＣＲ）、抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ１−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ１  ＢＢｚＣＡＲ）、および抗ＢＣＭＡ１−抗ＣＤ１９−イプシロン−ＴＣＲ（タンデムのＢＣＭＡ１／ＣＤ１９  ｄＴＣＲ）は、形質導入されていない対照と比較して、より高い細胞殺傷活性を有することを示した。抗ＣＤ１９−イプシロンＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ１−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＣＤ１９  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ１  ＢＢｚＣＡＲ）、および抗ＢＣＭＡ１−抗ＣＤ１９−イプシロン−ＴＣＲ（タンデムのＢＣＭＡ１／ＣＤ１９  ｄＴＣＲ）は、抗ＢＣＭＡ１イプシロン−ＴＣＲ（ＢＣＭＡ１  ｅＴＣＲ）と比較して、より高い細胞殺傷活性を有した（図１５Ａに示すように）。図１５Ｂおよび図１５Ｃの結果は、共培養系において、Ｔ細胞から分泌されるＩＦＮγおよびＴＮＦαの量が、細胞殺傷効果として、同様の傾向を有することを示した。
【０２６４】
第７の複数成分細胞傷害性アッセイにおいて、抗ＢＣＭＡ系：抗ＢＣＭＡ２イプシロン−ＴＣＲ（ＢＣＭＡ２  ｅＴＣＲ）、抗ＢＣＭＡ２−イプシロンＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ３−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＢＣＭＡ２  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ３  ＢＢｚＣＡＲ）、抗ＢＣＭＡ２−ガンマＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ３−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＢＣＭＡ２  ｇＴＣＲ／ＢＣＭＡ３  ＢＢｚＣＡＲ）、抗ＢＣＭＡ２−デルタＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ３−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＢＣＭＡ２  ｄＴＣＲ／ＢＣＭＡ３  ＢＢｚＣＡＲ）、ならびに形質導入されていない対照細胞を、ＲＰＭＩ−８２２６細胞（ＢＣＭＡ＋）と、０．５：１のエフェクタと標的の比で共培養した。各条件を３連で実施し、エフェクタ細胞の細胞傷害性をＬＤＨアッセイキット（Ｒｏｃｈｅ社）によって検出した。２０時間共培養した後、アッセイプレートを遠心分離し、上清を新しい９６ウェルプレートに収集した。製造業者の取扱説明書に従って、上清プレートを等体積のＬＤＨアッセイ試薬で希釈した。１５℃〜２５℃で約３０分間、アッセイプレートをインキュベートした。Ｆｌｅｘｓｔａｔｉｏｎリーダ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ社）を使用して、プレートの吸光度を４９２ｎｍおよび６５０ｎｍで測定し、算出した。
【０２６５】
結果は、抗ＢＣＭＡ２イプシロン−ＴＣＲ（ＢＣＭＡ２  ｅＴＣＲ）、抗ＢＣＭＡ２−イプシロンＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ３−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＢＣＭＡ２  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ３  ＢＢｚＣＡＲ）、抗ＢＣＭＡ２−ガンマＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ３−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＢＣＭＡ２  ｇＴＣＲ／ＢＣＭＡ３  ＢＢｚＣＡＲ）、抗ＢＣＭＡ２−デルタＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ３−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＢＣＭＡ２  ｄＴＣＲ／ＢＣＭＡ３  ＢＢｚＣＡＲ）は、形質導入されていない対照と比較して、より高い細胞殺傷活性を有することを示した。抗ＢＣＭＡ２−イプシロンＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ３−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＢＣＭＡ２  ｅＴＣＲ／ＢＣＭＡ３  ＢＢｚＣＡＲ）、抗ＢＣＭＡ２−ガンマＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ３−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＢＣＭＡ２  ｇＴＣＲ／ＢＣＭＡ３  ＢＢｚＣＡＲ）、抗ＢＣＭＡ２−デルタＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ３−４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（ＢＣＭＡ２  ｄＴＣＲ／ＢＣＭＡ３  ＢＢｚＣＡＲ）は、抗ＢＣＭＡ２イプシロン−ＴＣＲ（ＢＣＭＡ２  ｅＴＣＲ）と比較して、著しくより高い細胞殺傷活性を有した（図１６Ａに示すように）。図１６Ｂは、共培養系において、Ｔ細胞から分泌されるＩＦＮγの量を示す。
【０２６６】
第８の複数成分細胞傷害性アッセイにおいて、抗ＢＣＭＡ系：抗ＢＣＭＡ２−抗ＢＣＭＡ３イプシロン−ＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ２−抗ＢＣＭＡ３ガンマ−ＴＣＲ（タンデムのＢＣＭＡ２＆３  ｅＴＣＲ／ｇＴＣＲ）、抗ＢＣＭＡ２−抗ＢＣＭＡ３ガンマ−ＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ２−抗ＢＣＭＡ３  ４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（タンデムのＢＣＭＡ２＆３  ｇＴＣＲ／ＢＢｚＣＡＲ）、ならびに形質導入されていない対照細胞を、ＲＰＭＩ−８２２６細胞（ＢＣＭＡ＋）と、０．３３：１のエフェクタと標的の比で共培養した。各条件を３連で実施し、エフェクタ細胞の細胞傷害性をＬＤＨアッセイキット（Ｒｏｃｈｅ社）によって検出した。２０時間共培養した後、アッセイプレートを遠心分離し、上清を収集し、新しい９６ウェルプレートに移した。製造業者の取扱説明書に従って、上清プレートを等体積のＬＤＨアッセイ試薬で希釈した。１５℃〜２５℃で約３０分間、アッセイプレートをインキュベートした。Ｆｌｅｘｓｔａｔｉｏｎリーダ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ社）を使用して、プレートの吸光度を４９２ｎｍおよび６５０ｎｍで測定し、算出した。
【０２６７】
結果は、抗ＢＣＭＡ２−抗ＢＣＭＡ３イプシロン−ＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ２−抗ＢＣＭＡ３ガンマ−ＴＣＲ（タンデムのＢＣＭＡ２＆３  ｅＴＣＲ／ｇＴＣＲ）、抗ＢＣＭＡ２−抗ＢＣＭＡ３ガンマ−ＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ２−抗ＢＣＭＡ３  ４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（タンデムのＢＣＭＡ２＆３  ｇＴＣＲ／ＢＢｚＣＡＲ）は、形質導入されていない対照と比較して、より高い細胞殺傷活性を有することを示した。図１７Ａに示すように、抗ＢＣＭＡ２−抗ＢＣＭＡ３ガンマ−ＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ２−抗ＢＣＭＡ３  ４−１ＢＢ−ＣＤ３ゼータＣＡＲ（タンデムのＢＣＭＡ２＆３  ｇＴＣＲ／ＢＢｚＣＡＲ）は、抗ＢＣＭＡ２−抗ＢＣＭＡ３イプシロン−ＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ２−抗ＢＣＭＡ３ガンマ−ＴＣＲ（タンデムのＢＣＭＡ２＆３  ｅＴＣＲ／ｇＴＣＲ）と比較して、著しく高い細胞殺傷活性を有した。図１７Ｂは、共培養系において、Ｔ細胞から分泌されるＩＦＮγの量を示す。
実施例７：細胞の細胞傷害性アッセイ（ルシフェラーゼアッセイ）
【０２６８】
本明細書において提供される系、のうち任意のものを発現する改変免疫細胞の細胞傷害性を評価するために、ＣＡＲ−Ｔ細胞、ＴＣＲ−Ｔ細胞、およびトランスフェクションされていないＴ細胞（ＵｎＴ）を、遠心分離で収集し、２％の加熱不活性化したＦＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）で補った、１６４０フェノールレッド不含培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を用いて、望ましい濃度に希釈した。ＢＣＭＡおよびルシフェラーゼの強い発現を示す腫瘍細胞を標的細胞として用いた。ＴＣＲ−Ｔ細胞またはＣＡＲ−Ｔ細胞、および標的細胞を、９６ウェルプレート中で、３７℃で２０時間、エフェクタと標的の種々の比（Ｅ：Ｔ）で共培養した。他のウェルは、対照条件：標的細胞のみ（Ｔ）、および標的細胞の最大放出（トリトン−Ｘ１００の１％溶液）を含有した。各条件を３連で実施し、ＣＡＲ−Ｔ細胞の細胞傷害性をＯｎｅ−Ｇｌｏアッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ社）を用いて検出した。
【０２６９】
２０時間の共培養後、製造業者の取扱説明書に従って、アッセイプレートを遠心分離し、等体積のＯｎｅ−Ｇｌｏアッセイ試薬を加えた。室温にて約３分間、プレートをインキュベートした。インキュベーション後、ＰｈｅｒａＳｔａｒｐｌｕｓリーダ（ＢＭＧ  ｌａｂｔｅｃｈ社）を使用して、ルシフェラーゼシグナルを測定した。式を用いて腫瘍細胞溶解の百分率を算出した。
％標的細胞溶解＝（１−（ＲＬＵＥ：Ｔ−ＲＬＵ最大放出）／（ＲＬＵＴ−ＲＬＵ最大放出））×１００
実施例８：サイトカイン放出の検出（ＩＦＮγおよびＴＮＦα）
【０２７０】
細胞傷害性アッセイプレートの上清をサイトカイン放出分析（ヒトＩＦＮガンマキット、Ｃｉｓｂｉｏ社、Ｃａｔ＃６２ＨＩＦＮＧＰＥＨ、ヒトＴＮＦアルファキット、Ｃｉｓｂｉｏ社、Ｃａｔ＃６２ＨＴＮＦＡＰＥＨ）ヒトＩＬ６キット、Ｃｉｓｂｉｏ社、Ｃａｔ＃６２ＨＩＬ０６ＰＥＧ、およびヒトＩＬ２キット、Ｃｉｓｂｉｏ社、Ｃａｔ＃６２ＨＩＬ０２ＰＥＨ）のために収集した。ＨＴＲＦ（登録商標）試薬を用いたサイトカイン検出のために、細胞上清および標準をアッセイプレートに直接分注した。ＨＴＲＦドナーおよびアクセプタで標識された抗体を事前混合し、単回の分注工程で加えた。４係数ロジスティック（４ＰＬ）曲線を用いてＨＴＲＦ標準曲線を生成した。標準曲線回帰は、線形解析より広い範囲の濃度にわたる未知の試料濃度を正確に測定することを可能とし、サイトカイン放出などの生体系の分析に適切となった。適用可能なアッセイキットは、ヒトＩＦＮガンマキット、Ｃｉｓｂｉｏ社、Ｃａｔ＃６２ＨＩＦＮＧＰＥＨ；ヒトＴＮＦアルファキット、Ｃｉｓｂｉｏ社、Ｃａｔ＃６２ＨＴＮＦＡＰＥＨ；ヒトＩＬ６キット、Ｃｉｓｂｉｏ社、Ｃａｔ＃６２ＨＩＬ０６ＰＥＧ；およびヒトＩＬ２キット、Ｃｉｓｂｉｏ社、Ｃａｔ＃６２ＨＩＬ０２ＰＥＨを含む。
実施例９：インビボでの有効性
多発性骨髄腫の腫瘍異種移植によるＢＣＭＡ  ＣＡＲ−ＴＣＲ−Ｔのインビボでの有効性
【０２７１】
多発性骨髄腫の腫瘍異種移植片を有するＮＣＧマウスモデル（ＮＯＤ＿Ｐｒｋｄｃｅｍ２６Ｃｄ５２／ＮｊｕＣｒｌ）において、ＣＡＲ−ＴＣＲ−Ｔ細胞のインビボ抗腫瘍効力を評価した。
【０２７２】
ＮＯＤ／ＮｊｕマウスのＰｒｋｄｃおよびＩ１２ｒｇの遺伝子座を逐次ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９編集することによって、ＮＣＧマウスモデルを生成し、ＮＯＤ／Ｎｊｕに類遺伝子性のマウスを得た。ＮＯＤ／Ｎｊｕマウスは、外来性造血幹細胞の移植を可能にするＳｉｒｐａ（ＳＩＲＰα）遺伝子での突然変異を担持する。Ｐｒｋｄｃノックアウトにより、適切なＴ細胞およびＢ細胞形成を欠くＳＣＩＤ様表現型が生成される。Ｉ１２ｒｇ遺伝子のノックアウトは、ＳＣＩＤ様表現型をさらに悪化させると共に、ＮＫ細胞産生の減少をさらにもたらす。したがって、ＮＣＧマウスは、ＳＣＩＤおよびヌードマウスを含む一般に使用される免疫不全マウス株よりもさらに免疫不全である「三重免疫不全」マウス株である。ＰｒｋｄｃおよびＩｌ２ｒｇは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、およびより低い程度で樹状細胞の、成熟化および形成に影響を与える遺伝子のＳＣＩＤ（重症複合免疫不全）ファミリの一部である。Ｐｒｋｄｃは、ＤＮＡ依存性タンパク質キナーゼ酵素の触媒サブユニットをコードし、これは、Ｔ細胞およびＢ細胞を成熟させる際に抗体多様性を広めるのに必要なプロセスであるＶ（Ｄ）Ｊ組換えに必要である。Ｉｌ２ｒｇは、ＩＬ−２および複数のＩＬ受容体（ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１５、及びＩＬ−２１）に見いだされる共通ガンマサブユニットをコードし、これらは、未成熟リンパ球（たとえば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、およびＮＫ細胞）および他の白血球の成熟のためにサイトカイン媒介性シグナル伝達を誘導するために必要とされる。ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｔ細胞を、インビトロでＲＰＭＩ８２２６−Ｌｕｃ細胞の殺傷に最も高い有効性を有するＣＡＲ−Ｔを産出するＴ細胞源のためにスクリーニングするために、様々なドナーからのＴ細胞を用いて調製した。ＣＡＲ−Ｔ細胞を、インビボ動物アッセイのために選択されたドナーのＴ細胞を用いて調製した。腫瘍異種移植片を作製するために、ＮＣＧマウスにＲＰＭＩ８２２６−Ｌｕｃ細胞を静脈内注射した。１４日後、腫瘍移植マウスを、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｔ細胞（１．５ｅ５陽性細胞）または形質導入されていないＴ細胞で処理し、続いて、インビボ生物発光画像法（ＢＬＩ）を行った。
【０２７３】
抗ＢＣＭＡ１−抗ＢＣＭＡ２−抗ＢＣＭＡ３  ＢＢｚＣＡＲ（三重特異性ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｔ）細胞、抗ＢＣＭＡ１−抗ＢＣＭＡ２−抗ＢＣＭＡ３  ｅＴＣＲ（三重特異性ＢＣＭＡ  ＴＣＲ−Ｔ）細胞、および抗ＢＣＭＡ２  ｅＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ１−抗ＢＣＭＡ３  ＢＢｚＣＡＲ（三重特異性ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−ＴＣＲ−Ｔ）細胞を、多発性骨髄腫の腫瘍異種移植片を有するＮＣＧマウスモデル（ＮＯＤ＿Ｐｒｋｄｃｅｍ２６Ｃｄ５２／ＮｊｕＣｒｌ）において評価した。図１８Ａおよび図１８Ｂに示すように、抗ＢＣＭＡ２  ｅＴＣＲ／抗ＢＣＭＡ１−抗ＢＣＭＡ３  ＢＢｚＣＡＲ（三重特異性ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−ＴＣＲ−Ｔ）は、低用量で高い抗腫瘍活性を示した。
ＮＳＧマウスにおけるＯＶＣＡＲ−８異種移植モデルによるＭＳＬＮ  ＦＳＨＲ  ＣＡＲ−ＴＣＲ−Ｔのインビボでの有効性
【０２７４】
ＯＶＣＡＲ−８異種移植モデルにおいて、抗メソテリンＣＡＲ−Ｔの抗腫瘍活性をインビボで評価した。０日目に１０×１０６個のＯＶＣＡＲ−８細胞をＮＯＤ  ｓｃｉｄガンマ（ＮＳＧ）マウスに皮下移植した。腫瘍が１５０〜２００ｍｍ３になったとき、マウスを治療群にランダム化した。１ｅ５個のＣＡＲ陽性Ｔ細胞を２００μｌの用量で、静脈内投与した。腫瘍細胞移植後約６０日間、マウスと腫瘍を観察した。
【０２７５】
結果は、抗ＭＳＬＮ／ＦＳＨＲ二重ＣＡＲ−Ｔ（ＭＳＬＮ  ＣＡＲ＋ＦＳＨＲ  ＣＡＲ）、抗ＭＳＬＮ／ＦＳＨＲ二重ｅＴＣＲ−Ｔ（ＭＳＬＮ  ｅＴＣＲ＋ＦＳＨＲ  ｅＴＣＲ）、および抗ＦＳＨＲ  ｅＴＣＲ／ＭＳＬＮ  ＣＡＲ−Ｔ（ＦＳＨＲ  ｅＴＣＲ＋ＭＳＬＮ  ＣＡＲ）は、インビボでの異なる抗腫瘍活性を有し、抗ＦＳＨＲ  ｅＴＣＲ／ＭＳＬＮ  ＣＡＲ−Ｔ（ＦＳＨＲ  ｅＴＣＲ＋ＭＳＬＮ  ＣＡＲ）は、抗ＭＳＬＮ／ＦＳＨＲ二重ＣＡＲ−Ｔ（ＭＳＬＮ  ＣＡＲ＋ＦＳＨＲ  ＣＡＲ）、抗ＭＳＬＮ／ＦＳＨＲ二重  ｅＴＣＲ−Ｔ（ＭＳＬＮ  ｅＴＣＲ＋ＦＳＨＲ  ｅＴＣＲ）と比較して、低用量において、より高い抗腫瘍活性を示すことを示した（図１９に示すように）。
実施例１０：急速拡大プロトコル
【０２７６】
多数の形質導入細胞を生成するために、急速拡大プロトコル（ｒａｐｉｄ  ｅｘｐａｎｓｉｏｎ  ｐｒｏｔｏｃｏｌ：ＲＥＰ）を用いて、Ｔ細胞を誘導して増殖させた。Ｔ細胞を、ＲＥＰにおいて使用する前に、初めに抗ＣＤ３、抗ＣＤ２８、およびＩＬ−２と共に培養し、２日目に形質導入した。細胞を、７５ｃｍ２フラスコ中で、３７℃、５％ＣＯ２で培養した。細胞を計数し、２日ごとに３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２で補った、新鮮なＴ細胞培地中で０．５×１０６細胞／ｍＬの濃度で懸濁し、残りの時間は、培養物中に保持された。
【０２７７】
多種多様の抗原結合ドメイン配列が、本明細書で開示されるベクタ構築物および系を構築するのに適用可能であり、たとえば、国際公開第２０１７／０２５０３８号を参照されたく、当該文献は、その全体が本明細書に引用される（ＢＣＭＡ２からＢＣＭＡ４、ＢＣＭＡ１４からＢＣＭＡ２１）。非限定的な例示的配列を、以下のとおり表１０および１１に示す。
表１０  例示的配列
【表１０】
2021528049.tif 000012
【表１１】
2021528049.tif 000013
【表１２】
2021528049.tif 000014
表１１  抗ＣＤ１９  ＶＨＨの配列
【表１３】
2021528049.tif 000015
表１２  抗ＭＳＬＮ  ｓｃＦｖおよびＦＳＨβ３３−５３の配列
【表１４】
2021528049.tif 000016
【０２７８】
本明細書において、本発明の好ましい実施形態を示し、説明してきたが、そのような実施形態は例としてのみ提供されることは、当業者には明らかであろう。今では、本発明から逸脱することなく、数多くの変形、変更、および置換が、当業者には思い付かれるであろう。本明細書で説明される本発明の実施形態の様々な代替物が、本発明を実行する際に用いられる場合があることが理解されるべきである。以下の特許請求の範囲は、本発明の範囲を定義し、これらの特許請求の範囲の範囲内の方法および構成、ならびにそれらの均等物は、特許請求の範囲により包含されることが意図される。
【図１】
2021528049.tif 000017
【図２Ａ】
2021528049.tif 000018
【図２Ｂ】
2021528049.tif 000019
【図２Ｃ】
2021528049.tif 000020
【図２Ｄ】
2021528049.tif 000021
【図２Ｅ】
2021528049.tif 000022
【図２Ｆ】
2021528049.tif 000023
【図２Ｇ】
2021528049.tif 000024
【図２Ｈ】
2021528049.tif 000025
【図２Ｉ】
2021528049.tif 000026
【図２Ｊ】
2021528049.tif 000027
【図２Ｋ】
2021528049.tif 000028
【図２Ｌ】
2021528049.tif 000029
【図２Ｍ】
2021528049.tif 000030
【図２Ｎ】
2021528049.tif 000031
【図２Ｏ】
2021528049.tif 000032
【図２Ｐ】
2021528049.tif 000033
【図２Ｑ】
2021528049.tif 000034
【図２Ｒ】
2021528049.tif 000035
【図２Ｓ】
2021528049.tif 000036
【図２Ｔ】
2021528049.tif 000037
【図２Ｕ】
2021528049.tif 000038
【図２Ｖ】
2021528049.tif 000039
【図３】
2021528049.tif 000040
【図４Ａ】
2021528049.tif 000041
【図４Ｂ】
2021528049.tif 000042
【図４Ｃ】
2021528049.tif 000043
【図４Ｄ】
2021528049.tif 000044
【図４Ｅ】
2021528049.tif 000045
【図４Ｆ】
2021528049.tif 000046
【図４Ｇ】
2021528049.tif 000047
【図４Ｈ】
2021528049.tif 000048
【図４Ｉ】
2021528049.tif 000049
【図４Ｊ】
2021528049.tif 000050
【図４Ｋ】
2021528049.tif 000051
【図４Ｌ】
2021528049.tif 000052
【図４Ｍ】
2021528049.tif 000053
【図５Ａ】
2021528049.tif 000054
【図５Ｂ】
2021528049.tif 000055
【図５Ｃ】
2021528049.tif 000056
【図５Ｄ】
2021528049.tif 000057
【図５Ｅ】
2021528049.tif 000058
【図５Ｆ】
2021528049.tif 000059
【図５Ｇ】
2021528049.tif 000060
【図５Ｈ】
2021528049.tif 000061
【図６Ａ】
2021528049.tif 000062
【図６Ｂ】
2021528049.tif 000063
【図６Ｃ】
2021528049.tif 000064
【図６Ｄ】
2021528049.tif 000065
【図６Ｅ】
2021528049.tif 000066
【図６Ｆ】
2021528049.tif 000067
【図７】
2021528049.tif 000068
【図８Ａ】
2021528049.tif 000069
【図８Ｂ】
2021528049.tif 000070
【図８Ｃ】
2021528049.tif 000071
【図８Ｄ】
2021528049.tif 000072
【図８Ｅ】
2021528049.tif 000073
【図８Ｆ】
2021528049.tif 000074
【図９】
2021528049.tif 000075
【図１０】
2021528049.tif 000076
【図１１Ａ】
2021528049.tif 000077
【図１１Ｂ】
2021528049.tif 000078
【図１２Ａ】
2021528049.tif 000079
【図１２Ｂ】
2021528049.tif 000080
【図１３Ａ】
2021528049.tif 000081
【図１３Ｂ】
2021528049.tif 000082
【図１４Ａ】
2021528049.tif 000083
【図１４Ｂ】
2021528049.tif 000084
【図１４Ｃ】
2021528049.tif 000085
【図１５Ａ】
2021528049.tif 000086
【図１５Ｂ】
2021528049.tif 000087
【図１５Ｃ】
2021528049.tif 000088
【図１６Ａ】
2021528049.tif 000089
【図１６Ｂ】
2021528049.tif 000090
【図１７Ａ】
2021528049.tif 000091
【図１７Ｂ】
2021528049.tif 000092
【図１８Ａ】
2021528049.tif 000093
【図１８Ｂ】
2021528049.tif 000094
【図１９】
2021528049.tif 000095
【国際調査報告】
2021528049.tif 000096
2021528049.tif 000097
2021528049.tif 000098
2021528049.tif 000099
2021528049.tif 000100