(57)【要約】  本発明は、式Iに示す化合物であるアネモシドＢ４またはその薬学的に許容可能な塩の、ウイルス性および／または細菌性疾患を治療するための薬物の製造における使用を開示する。本発明の化合物であるアネモシドＢ４は、比較的強い生物活性を有し、子宮内膜炎、腐蹄症、猫パルボウイルス、犬パルボウイルス、犬ジステンパー、犬の腎不全および犬の急性腎炎に対し、優れた治療効果を有する。【化１】2021512880.tif 000021
2021512880.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Iに示す化合物であるアネモシドＢ４またはその薬学的に許容可能な塩の、ウイルス性および／または細菌性疾患を治療するための薬物の製造における使用。
【化１】
2021512880.tif 000020
【請求項２】
前記薬物が、請求項１に記載の化合物であるアネモシドＢ４またはその薬学的に許容可能な塩を活性成分とし、薬学的に許容可能な補助材料を添加して調製される製剤である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記製剤が注射液、子宮注入剤、散剤、膏剤、ローション剤である、請求項２に記載の使用。
【請求項４】
前記製剤が注射液、子宮注入剤、散剤である、請求項３に記載の使用。
【請求項５】
前記疾患が子宮内膜炎、腐蹄症、パルボウイルス、犬ジステンパー、犬の腎不全、犬の急性腎炎である、請求項１に記載の使用。
【請求項６】
前記子宮内膜炎が臨床型子宮内膜炎であり、前記パルボウイルスが犬パルボウイルス、猫パルボウイルスである、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
請求項１に記載の化合物であるアネモシドＢ４またはその薬学的に許容可能な塩を活性成分とし、薬学的に許容可能な補助材料を添加して調製される製剤である、ウイルス性および／または細菌性疾患を治療するための薬物。
【請求項８】
前記製剤が注射液、子宮注入剤、散剤、膏剤、ローション剤であり、前記製剤が注射液、子宮注入剤、散剤であることが好ましい、請求項７に記載の薬物。
【請求項９】
前記疾患が子宮内膜炎、腐蹄症、パルボウイルス、犬ジステンパー、犬の腎不全、犬の急性腎炎である、請求項７に記載の薬物。
【請求項１０】
前記子宮内膜炎が臨床型子宮内膜炎であり、前記パルボウイルスが犬パルボウイルス、猫パルボウイルスである、請求項９に記載の薬物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、白頭翁抽出物のウイルス性および／または細菌性疾患を治療するための薬物の製造における使用に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
白頭翁Ｐｕｌｓａｔｉｌｌａ  Ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  （Ｂｇｅ．）  Ｒｅｇｅｌは、キンポウゲ科（Ｒａｎｕｎｃｕｌａｃｅａｅ）オキナグサ属の植物であり、主な薬用部位はその乾燥根である。白頭翁に関する最古の記録は『神農本草経』に見られ、味は苦味、性質は涼であり、胃、腎、大腸経に作用し、主な効能には、疣贅の消失、血分の熱の除去、下痢止め、のぼせ解消等がある。従来より細菌性赤痢の治療に用いられ、寒・熱・温証、および目の充血、痛みに対しても比較的優れた治療効果がある。白頭翁の薬理活性は多様で、主に、自己・非自己識別能力の向上、異物の侵入に対する抵抗力の向上、腫瘍細胞の増殖速度の低減、病原微生物の数の減少、およびフリーラジカルの酸化反応に対する効果的な抑制等があり、そのうち最も有望なものは、抗炎症、抗腫瘍の新薬開発への応用である。
【０００３】
また、アポトーシスにおける白頭翁の効果に関する馮秀芝氏らの研究では、白頭翁が胃癌細胞に対して比較的優れた誘導効果を有すると考えられている。さらに、白頭翁の有効成分は、癌細胞の増殖およびＤＮＡの複製に影響を与え、ＨＬ２６０細胞の成長を抑制する効果があり、アポトーシスによって乳癌（ＭＣＦ−７）、肺癌（ＰＧ）、結腸癌（ＳＷ４８０）および悪性グリオーマ細胞（Ｕ８７ＭＧ）などの腫瘍細胞の増殖を抑制することができると考えられている。また、李文超氏らは、白頭翁のアルコール性抽出物を様々な病原菌種に作用させて、異なる溶媒抽出物の抗菌効果について研究した結果、いずれも抗菌効果があるもののその効果は同じではない、ということを見出した。
【０００４】
目下のところ、本発明の化合物を用いて本発明におけるウイルス性および／または細菌性疾患を治療することに関する報道はない。
【発明の概要】
【０００５】
上記の課題を解決するため、本発明は、式Iに示す化合物であるアネモシドＢ４またはその薬学的に許容可能な塩の、ウイルス性および／または細菌性疾患を治療するための薬物の製造における使用を提供する。
【０００６】
【化１】
2021512880.tif 000003
【０００７】
さらに、前記薬物は、前記化合物であるアネモシドＢ４またはその薬学的に許容可能な塩を活性成分とし、薬学的に許容可能な補助材料を添加して調製される製剤である。
【０００８】
さらに、前記製剤は注射液、子宮注入剤、散剤、膏剤、ローション剤である。
【０００９】
さらに、前記製剤は注射液、子宮注入剤、散剤である。
【００１０】
さらに、前記疾患は子宮内膜炎、腐蹄症、パルボウイルス、犬ジステンパー、犬の腎不全、犬の急性腎炎である。
【００１１】
さらに、前記子宮内膜炎は臨床型子宮内膜炎であり、前記パルボウイルスは犬パルボウイルス、猫パルボウイルスである。
【００１２】
本発明はさらに、前記化合物であるアネモシドＢ４またはその薬学的に許容可能な塩を活性成分とし、薬学的に許容可能な補助材料を添加して調製される製剤である、ウイルス性および／または細菌性疾患を治療するための薬物を提供する。
【００１３】
さらに、前記製剤は注射液、子宮注入剤、散剤、膏剤、ローション剤であり、前記製剤は注射液、子宮注入剤、散剤であることが好ましい。
【００１４】
さらに、前記疾患は子宮内膜炎、腐蹄症、パルボウイルス、犬ジステンパー、犬の腎不全、犬の急性腎炎である。
【００１５】
さらに、前記子宮内膜炎は臨床型子宮内膜炎であり、前記パルボウイルスは犬パルボウイルス、猫パルボウイルスである。
【００１６】
本発明が提供する白頭翁抽出物は、化合物であるアネモシドＢ４であり、中国語の別名は白頭翁サポニンＢ４、英語名称はＡｎｅｍｏｓｉｄｅ  Ｂ４である。アネモシドＢ４のＣＡＳ番号は１２９７４１−５７−７、分子式はＣ５９Ｈ９６Ｏ２６、分子量は１２２１．３８であり、性状は白色の結晶状粉末である。
【００１７】
本発明の化合物であるアネモシドＢ４は、比較的強い生物活性を有し、子宮内膜炎、腐蹄症、猫パルボウイルス、犬パルボウイルス、犬ジステンパー、犬の腎不全および犬の急性腎炎に対し、優れた治療効果を有する。
【００１８】
当然ながら、本発明の上記内容に基づき、当分野の一般的な技術的知識や慣用的手段に照らし、本発明の上記基本的な技術的思想を逸脱しないという前提において、他の様々な形態の修正、置換または変更を行うことができる。
【００１９】
以下、実施例の形式を用いた「発明を実施するための形態」によって、本発明の上記内容をさらに詳細に説明する。ただし、これをもって、本発明の上記主題の範囲が以下の実施例に限定されると理解してはならない。本発明の上記内容に基づいて実現される技術は、いずれも本発明の範囲に属する。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】アネモシドＢ４の含有量測定における標準曲線
【発明を実施するための形態】
【００２１】
実施例１  本発明の化合物の調製
白頭翁薬材１００ｋｇに１０倍量の７０％エタノールを加え、加熱還流で２回抽出し、抽出液を７５℃で減圧濃縮し、４０００ｒ／ｍｉｎで１０分間遠心機にかけ、上清液を極性マクロポーラス吸着樹脂カラムに通し、水、３０％エタノール、７０％エタノールをこの順で用いて溶出させ、７０％エタノールの溶出画分を７５℃で減圧濃縮した後に、噴霧乾燥により白頭翁総サポニン抽出物３４５０ｇを得た。抽出物に水を加えて溶解させた後に、濾液を動的軸方向２００調製クロマトグラフィーシステムに通し（充填剤は１０μｍのＯＤＳ）、５０％メタノールで溶離し、クロマトグラムのピークに応じて対応する溶離液を収集し、減圧濃縮した後に、凍結乾燥して、１７００ｇのアネモシドＢ４を得た。
【００２２】
実施例２  本発明の化合物の含有量測定
１．機器および試薬
アジレント・テクノロジー（中国）有限会社より購入したＡｇｉｌｅｎｔ  １２６０型高速液体クロマトグラフィー装置、およびＤＡＤ紫外線検出器、ザルトリウス（ドイツ）社より購入したＢＰ２１１Ｄ型電子分析天秤、昆山市超音波機器有限会社より購入したＫＱ−４００ＤＢ型数値制御超音波洗浄機。
【００２３】
実施例１で調製したアネモシドＢ４サンプル。
【００２４】
中国食品薬品検定研究院より購入したアネモシドＢ４対照物質（ロット番号：１１１７６６−２０１７０２、含有量：９４．７％）。
【００２５】
２．クロマトグラフィーの条件
クロマトグラフィーカラム：Ｓｅｐａｘ  Ｂｉｏ−Ｃ１８（４．６×２５０ｍｍ，５μｍ）。移動相：メタノール−水（６４：３６）。検出波長：２０１ｎｍ。流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ。
【００２６】
３．対照物質溶液の調製
適量のアネモシドＢ４対照物質を用意し、精密に秤量して、１０ｍＬのメスフラスコに入れ、移動相を加えて溶解させ、目盛りまで定容し、対照物質溶液（１ｍＬあたり１ｍｇのアネモシドＢ４を含有）を得た。
【００２７】
４．サンプル溶液の調製
実施例１で調製したアネモシドＢ４サンプル１０ｍｇを用意し、精密に秤量して、１０ｍＬのメスフラスコに入れ、移動相を加えて溶解させ、目盛りまで定容し、サンプル溶液を得た。
【００２８】
５．測定法
対照物質溶液とサンプル溶液をそれぞれ精密に２０μＬ計量し、液体クロマトグラフィー装置に注入し、クロマトグラムを記録し、外部標準法に従って含有量を計算した。
【００２９】
６．標準曲線と線形回帰方程式
アネモシドＢ４対照物質を用意し、精密に秤量して、１０ｍＬのメスフラスコに入れ、移動相を加えて溶解させ、目盛りまで定容し、濃度が約１ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬの対照物質溶液を順次調製し、それぞれ精密に２０μＬ計量し、液体クロマトグラフィー装置に注入して、クロマトグラムを記録した。
【００３０】
【表１】
2021512880.tif 000004
【００３１】
実験結果から分かるように、アネモシドＢ４は、濃度が１．０４〜２０．８０ｍｇ／ｍＬの範囲内において、線形関係が良好であり、Ｒ＝０．９９９９であり、アネモシドＢ４の含有量測定に適している。
【００３２】
７．アネモシドＢ４サンプルの含有量測定
前記「３」で述べた方法に従い、アネモシドＢ４対照物質を２組用意し、それぞれ精密に１０ｍｇ秤量して、１０ｍＬのメスフラスコに入れ、移動相を加えて溶解させ、目盛りまで定容し、対照物質溶液１と対照物質溶液２を得た。
【００３３】
前記「４」で述べた方法に従い、アネモシドＢ４サンプルを２組用意し、それぞれ精密に１０ｍｇ秤量して、１０ｍＬのメスフラスコに入れ、移動相を加えて溶解させ、目盛りまで定容し、サンプル溶液１とサンプル溶液２を得た。
【００３４】
上記のクロマトグラフィーの条件に従って、それぞれ精密に２０μＬ計量し、液体クロマトグラフィー装置に注入して、クロマトグラムを記録した。
【００３５】
【表２】
2021512880.tif 000005
【００３６】
試験結果から分かるように、本実験で得られたアネモシドＢ４の含有量は９９．４％であった。
【００３７】
実施例３  本発明のアネモシドＢ４の注射液の調製
１）処方：５０ｇのアネモシドＢ４に水を加え、１０００ｍＬの注射液を調製した。
【００３８】
２）調製方法：実施例１で調製したアネモシドＢ４を５０ｇ秤量し、注射用水８００ｍＬを加え、完全に溶解させて、濾過し、ｐＨを７．０に調整し、注射用水を１０００ｍＬまで加え、精密濾過し、充填し、密封し、１００℃で３０ｍｉｎ滅菌して、アネモシドＢ４注射液を得た。
【００３９】
実施例４  本発明のアネモシドＢ４の散剤の調製
１）処方：１０００ｇのアネモシドＢ４を用いて１０００ｇの散剤を調製した。
【００４０】
２）調製方法：実施例１で調製したアネモシドＢ４を１０００ｇ秤量し、粉砕して粉末にし、１００メッシュのふるいにかけ、均一に混合して、アネモシドＢ４の散剤を得た。
【００４１】
実施例５  本発明のアネモシドＢ４の子宮注入剤の調製
１）処方：５０ｇのアネモシドＢ４を用いて１０００ｍＬの子宮注入剤を調製した。
【００４２】
２）調製方法：実施例１で調製したアネモシドＢ４を５０ｇ秤量し、蒸留水８００ｍＬを加え、完全に溶解させ、濾過し、ｐＨを７．０に調整し、蒸留水を１０００ｍＬまで加え、精密濾過し、充填し、密封し、１００℃で３０ｍｉｎ滅菌して、アネモシドＢ４の子宮注入剤を得た。
【００４３】
以下、本発明の有益な効果を、試験例によって説明する。
【００４４】
試験例１  子宮内膜炎に対する試験
１．被験薬
実施例３で調製したアネモシドＢ４の注射液、濃度５０ｍｇ／ｍＬ。実施例５で調製したアネモシドＢ４の子宮注入剤、濃度５０ｍｇ／ｍＬ。
【００４５】
陽性薬：ドキシサイクリン塩酸塩（Ｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）子宮注入剤（２４ｇ／本、鄭州百瑞動物薬業有限会社製、ロット番号：１７０９０１）。
【００４６】
２．被験動物
罹患した乳牛１３０頭を選び、無作為に１３群に分け、各群１０頭とした。
【００４７】
本実験・研究において、選んだ牛は全て臨床型子宮内膜炎に罹患した乳牛であり、実験中、乳牛の体温、元気さ、および飲食は正常であった。
【００４８】
３．投与量と方法
【００４９】
【表３】
2021512880.tif 000006
【００５０】
筋肉内注射による投与：アネモシドＢ４注射液を、筋肉内注射により毎日朝晩に１回ずつ、連続４日間投与した。
【００５１】
静脈注射による投与：アネモシドＢ４注射液を静脈注射により１日１回、連続４日間投与した。
【００５２】
子宮注入による投与：アネモシドＢ４子宮注入剤と陽性薬のドキシサイクリン塩酸塩子宮注入剤は、子宮灌流による投与を採用し、隔日に１回、計４回投与した。
【００５３】
各投与経路にそれぞれブランク対照群を１つ設け、等用量の生理食塩水を投与した。
【００５４】
４．子宮内膜炎の診断基準および治療効果の判定基準
【００５５】
【表４】
2021512880.tif 000007
【００５６】
５．実験結果
アネモシドＢ４を用いて乳牛の臨床型子宮内膜炎を治療した実験結果を表５に示す。
【００５７】
【表５】
2021512880.tif 000008
【００５８】
【表６】
2021512880.tif 000009
【００５９】
【表７】
2021512880.tif 000010
【００６０】
実験結果から分かるように、アネモシドＢ４注射液の筋肉内注射の高用量群、アネモシドＢ４注射液の静脈注射の高用量群、アネモシドＢ４子宮注入剤の中用量群、アネモシドＢ４子宮注入剤の高用量群および陽性薬群の、乳牛への投与後における発情率と、出産後の３回の発情期における受胎率とが、ブランク対照群よりも著しく高く、アネモシドＢ４を用いて乳牛の臨床型子宮内膜炎の治療を行った場合に、著しい効果があり、また、ドキシサイクリン塩酸塩子宮注入剤よりも優れていることが分かる。
【００６１】
試験例２  腐蹄症に対する試験
１．被験薬
実施例３で調製したアネモシドＢ４注射液、濃度５０ｍｇ／ｍＬ。実施例４で調製したアネモシドＢ４散剤、含有量９９．４％。
【００６２】
陽性薬：ペニシリン粉末（華北製薬株式会社）。
【００６３】
２．被験動物
腐蹄症に罹患した乳牛１３０頭を選び、無作為に１３群に分け、各群１０頭とした。
【００６４】
３．投与量と投与方法
【００６５】
【表８】
2021512880.tif 000011
【００６６】
皮下注射による投与：アネモシドＢ４注射液を、皮下注射により、患肢部に、１日１回、連続４日間投与した。
【００６７】
静脈注射による投与：アネモシドＢ４注射液を、静脈注射により、１日１回、連続４日間投与した。
【００６８】
外用投与：アネモシドＢ４散剤と陽性薬のペニシリン粉末は包帯投与による投与を採用し、隔日に１回、計４回投与した。５％のＫＭｎＯ４溶液で傷の表面を洗浄し、鮮血が滲出するまで壊死組織を除去し、粉薬を傷の表面に塗布し、８〜１０層の消毒ガーゼで巻いた。
【００６９】
各投与方法にそれぞれブランク対照群を１つ設け、等用量の生理食塩水を投与した。
【００７０】
４．腐蹄症に罹患した乳牛の症状および治療の評価基準
４．１  腐蹄症に罹患した乳牛の症状
腐蹄症に罹患した乳牛は、横たわることが多く、立っている時間が短く、蹄を地面に完全に降ろすのをいやがり、患肢に痛みを感じ、跛行を示す。急性の発作時は、蹄冠や趾間に炎症が起こり、赤く腫れ、敏感になり、熱を帯び、患部をたたくまたは押圧すると痛みを感じ、次いで傷口が視認できるようになり、デブリ後は黒い腐敗液が流出し、趾間に潰瘍面が形成され、潰瘍面が悪臭を放つ壊死物に覆われる。罹患した牛は食欲が減退し、徐々に痩せ、背中の被毛が荒れ、産乳量が減少する。
【００７１】
４．２  治療の評価基準
完全治癒：罹患した牛の元気さ、食事、体温が正常に戻り、患部の臨床症状が完全に消失し、乳汁分泌が正常に戻る。臨床的治癒：罹患した牛の元気さ、食事、体温が正常に戻り、患部の臨床症状がほぼ消失し、乳汁分泌がほぼ正常に戻る。効果なし：患部の臨床症状に明らかな改善がないか更に悪化した場合、または投薬停止後２週間以内に再発した場合は、いずれも効果なしとする。総治癒頭数は、完全に治癒した頭数と臨床的に治癒した頭数の和である。
【００７２】
５．実験結果
【００７３】
【表９】
2021512880.tif 000012
【００７４】
【表１０】
2021512880.tif 000013
【００７５】
【表１１】
2021512880.tif 000014
【００７６】
実験結果から、アネモシドＢ４を用いた乳牛の腐蹄症の治療において、各治療群の乳牛は、元気さ、食事、体温のいずれにおいても比較的大幅な改善が見られ、産乳量も増加した。そのうち、アネモシドＢ４注射液の皮下注射の高用量群、アネモシドＢ４散剤の中用量群およびアネモシドＢ４散剤の高用量群の産乳量は、ブランク対照群よりも著しく多く、かつ陽性薬群よりも効果が優れており、治癒率は８０％以上に達した。
【００７７】
試験例３  犬パルボウイルスに対する試験
１．被験薬
実施例３で調製したアネモシドＢ４注射液、濃度５０ｍｇ／ｍＬ。
【００７８】
２．被験動物
犬パルボウイルスの感染犬。成都市の各動物病院の受診症例より。
【００７９】
３．罹患犬の症状
初期は体温が上昇し、激しく嘔吐し、嘔吐物は白色から黄色、最後は緑色に変化し、少量の血が混ざる。眼の結膜が充血し、流涙を示す。水を飲みたがり、飲んだ後に嘔吐する。下痢の糞便はケチャップのようで悪臭を放つ。横たわることが多い。白血球数が激減し、重度の脱水症状を示し、心不全を起こし、ショックにより死に至る。
【００８０】
４．投与量と投与方法
静脈注射によって、アネモシドＢ４注射液を、低用量群は２ｍＬ／回、中用量群は４ｍＬ／回、高用量群は８ｍＬ／回として、１日１回投与するか、または、筋肉内注射によって、アネモシドＢ４注射液を、低用量群は１ｍＬ／回、中用量群は２ｍＬ／回、高用量群は４ｍＬ／回として、１日２回投与し、連続１４日間治療を行った。
【００８１】
５．実験結果
【００８２】
【表１２】
2021512880.tif 000015
【００８３】
実験結果から分かるように、アネモシドＢ４は犬パルボウイルスに対して一定の治療効果があり、治療における投与量の増加に伴って、罹患した犬の死亡率が低下する傾向が見られた。
【００８４】
試験例４  猫パルボウイルスに対する試験
１．被験薬
実施例３で調製したアネモシドＢ４注射液、濃度５０ｍｇ／ｍＬ。
【００８５】
２．被験動物
猫パルボウイルスに感染した猫。成都市の各動物病院の受診症例より。
【００８６】
３．罹患猫の症状
まれに発熱し、激しく嘔吐し、下痢をし、糞便は灰色から黄色、最後は乳白色に変化し、ゼリーのような粘液を伴う。糞便はケチャップのようで悪臭を放つ。横たわることが多い。白血球数が激減し、四肢が冷え、極度に元気を消失し、ショックにより死に至る。
【００８７】
４．投与量と投与方法
静脈注射によって、アネモシドＢ４注射液を、低用量群は２ｍＬ／回、中用量群は４ｍＬ／回、高用量群は８ｍＬ／回として、１日１回投与するか、または、筋肉内注射によって、アネモシドＢ４注射液を、低用量群は１ｍＬ／回、中用量群は２ｍＬ／回、高用量群は４ｍＬ／回として、１日２回投与し、連続１４日間治療を行った。
【００８８】
５．実験結果
【００８９】
【表１３】
2021512880.tif 000016
【００９０】
実験結果から分かるように、アネモシドＢ４は猫や犬のパルボウイルスに対して一定の治療効果があり、罹患猫の死亡率を著しく低下させ、生存率を上昇させることができた。
【００９１】
試験例５  犬ジステンパーの治療についての試験
１．被験薬
実施例３で調製したアネモシドＢ４注射液、濃度５０ｍｇ／ｍＬ。
【００９２】
２．被験動物
犬ジステンパーの感染犬。成都市の各動物病院の受診症例より。
【００９３】
３．罹患犬の症状
犬ジステンパーの臨床症状によって、初期、中期、末期に分けられる。初期：元気を消失し、動きたがらず、少量の漿液性鼻水と漿液性の眼の分泌物が見られる。中期：漿液性の鼻水と漿液性の眼の分泌物が増加し、食欲が減退する。末期：膿性鼻水があり、鼻が乾燥し、重い場合は鼻がひび割れ、口角に粘液性の分泌物が見られ、極度に元気を消失し、食欲が減退し、重い場合は全く食欲がないが、水を多く飲みたがる。体温は３９．５℃〜４１．５℃、呼吸が早くなり、呼吸音が荒くなり、多くの場合は不整脈を伴う。重い場合は嘔吐、下痢をし、嘔吐物は粘液または黄色の液体であり、糞便は暗褐色か粘液に覆われ、罹患が長期に及ぶほど抵抗力が低下するため、細菌に頻繁に感染する。
【００９４】
４．投与量と投与方法
静脈注射によって、アネモシドＢ４注射液を、低用量群は２ｍＬ／回、中用量群は４ｍＬ／回、高用量群は８ｍＬ／回として、１日１回投与するか、または、筋肉内注射によって、アネモシドＢ４注射液を、低用量群は１ｍＬ／回、中用量群は２ｍＬ／回、高用量群は４ｍＬ／回として、１日２回投与し、連続１４日間治療を行った。
【００９５】
５．実験結果
【００９６】
【表１４】
2021512880.tif 000017
【００９７】
実験結果から分かるように、アネモシドＢ４は犬ジステンパーに対して比較的優れた治療効果を有する。
【００９８】
試験例６  犬の腎不全
１．被験薬
実施例３で調製したアネモシドＢ４注射液、濃度５０ｍｇ／ｍＬ。
【００９９】
２．被験動物
腎不全の罹患犬。成都市の各動物病院の受診症例より。
【０１００】
３．罹患犬の症状
食欲が減退し、元気を消失し、過眠になり、何度も嘔吐し、口臭があり、体温が低下する。ワクチン接種済みでＣＰＶ検査が陰性、血液生化学検査による尿素、クレアチニン、無機リンのいずれも正常値の２倍以上であり、他の臓器の生化学的指標は正常。Ｂモードの腹部超音波検査において、腎臓の大きさ、形態のいずれにも変化が見られる。
【０１０１】
４．投与量と投与方法
静脈注射によって、アネモシドＢ４注射液を、低用量群は２ｍＬ／回、中用量群は４ｍＬ／回、高用量群は８ｍＬ／回として、１日１回投与するか、または、筋肉内注射によって、アネモシドＢ４注射液を、低用量群は１ｍＬ／回、中用量群は２ｍＬ／回、高用量群は４ｍＬ／回として、１日２回投与し、連続１４日間治療を行った。
【０１０２】
５．実験結果
【０１０３】
【表１５】
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【０１０４】
実験結果から分かるように、アネモシドＢ４は犬の腎不全に対して一定の治療効果があり、治療における投与量の増加に伴って、死亡率が低下する傾向が見られた。
【０１０５】
試験例７  犬の急性腎炎
１．被験薬
実施例３で調製したアネモシドＢ４注射液、濃度５０ｍｇ／ｍＬ。
【０１０６】
２．被験動物
急性腎炎の罹患犬。成都市の各動物病院の受診症例より。
【０１０７】
３．罹患犬の症状
主に、食欲が減退し、消化不良を示し、元気を消失し、体温がわずかに上昇する。腎部位の触診により痛みを感じ、排尿回数が著しく増加するが、尿量は少ない。すなわち、尿は少量で回数が多く、暗赤色の血尿が見られる。尿検査では、蛋白質が陽性であり、顕微鏡検査では、尿沈渣に白血球、赤血球、および多数の腎上皮細胞がみとめられる。
【０１０８】
４．投与量と投与方法
静脈注射によって、アネモシドＢ４注射液を、低用量群は２ｍＬ／回、中用量群は４ｍＬ／回、高用量群は８ｍＬ／回として、１日１回投与するか、または、筋肉内注射によって、アネモシドＢ４注射液を、低用量群は１ｍＬ／回、中用量群は２ｍＬ／回、高用量群は４ｍＬ／回として、１日２回投与し、連続１４日間治療を行った。
【０１０９】
５．実験結果
【０１１０】
【表１６】
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【０１１１】
実験結果から分かるように、アネモシドＢ４は犬の急性腎炎に対して一定の治療効果があり、治療における投与量の増加に伴って、死亡率が低下する傾向が見られた。
【０１１２】
以上のように、本発明の化合物であるアネモシドＢ４は、比較的強い生物活性を有し、子宮内膜炎、腐蹄症、猫パルボウイルス、犬パルボウイルス、犬ジステンパー、犬の腎不全および犬の急性腎炎に対し、優れた治療効果を有する。
【図１】
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【国際調査報告】
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