(57)【要約】  本明細書では、ＣＤ２２の細胞外ドメイン又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に結合する抗体部分を含む抗体（例えば、一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）抗体）及び構築物が記載される。ＣＤ２２の発現によって特徴付けられる疾患、特にＢ細胞リンパ腫、及び白血病の治療のために、上記抗体、構築物、又はその組成物を使用する方法もまた提供される。
2021528995.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ２２に特異的に結合する抗体部分を含む抗ＣＤ２２構築物であって、前記抗体部分は、
（ａ）配列番号２１８又は２１２の軽鎖可変領域（ＶＬ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣ−ＣＤＲ）１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域と、
（ｂ）配列番号２１９又は２１３の重鎖可変領域（ＶＨ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣ−ＣＤＲ）１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域と、を含む、抗ＣＤ２２構築物。
【請求項２】
前記抗体部分は、
ＨＤＩＲＮＹ（配列番号２１４）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、
ＡＡＳ（配列番号２１５）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２、
ＱＱＹＤＧＬＰＬＴ（配列番号２１６）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３、
ＧＦＴＦＳＮＹＡ（配列番号２０９）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１、
ＩＳＧＳＧＧＳＴ（配列番号２１０）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２、及び
ＡＲＹＧＳＡＡＷＭＤＳ（配列番号２１７）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つ以上を含む、請求項１に記載の抗ＣＤ２２構築物。
【請求項３】
前記軽鎖可変領域は、
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＴＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＨＤＩＲＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＮＬＬＩＹＡＡＳＮＬＱＴＧＶＰＳＲＦＳＧＲＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＹＤＧＬＰＬＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫＲ（配列番号２１８）の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する、請求項１又は２に記載の抗ＣＤ２２構築物。
【請求項４】
前記重鎖可変領域は、
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＴＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＹＧＳＡＡＷＭＤＳＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２１９）の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗ＣＤ２２構築物。
【請求項５】
前記抗体部分は、
ＳＳＮＩＧＮＮＹ（配列番号２０６）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、
ＥＮＮ（配列番号２０７）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２、
ＧＴＷＤＳＳＬＳＡＧＡＶ（配列番号２０８）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３、
ＧＦＴＦＳＮＹＡ（配列番号２０９）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１、
ＩＳＧＳＧＧＳＴ（配列番号２１０）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２、及び
ＡＲＰＹＹＤＤ（配列番号２１１）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つ以上を含む、請求項１に記載の抗ＣＤ２２構築物。
【請求項６】
前記軽鎖可変領域は、
ＱＳＶＶＴＱＰＰＳＶＳＡＡＰＧＱＫＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＹＶＳＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＥＮＮＫＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＴＬＧＩＴＧＬＱＴＧＤＥＡＤＹＹＣＧＴＷＤＳＳＬＳＡＧＡＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ（配列番号２１２）の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する、請求項１又は５のいずれか一項に記載の抗ＣＤ２２構築物。
【請求項７】
前記重鎖可変領域は、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＰＹＤＤＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２１３）の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する、請求項１、５又は６のいずれか一項に記載の抗ＣＤ２２構築物。
【請求項８】
前記構築物は、完全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、又は一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗ＣＤ２２構築物。
【請求項９】
前記構築物は、タンデムｓｃＦｖ、ダイアボディ（Ｄｂ）、一本鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、二重親和性再標的化（ＤＡＲＴ）抗体、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）抗体、ノブ・イントゥ・ホール（ＫｉＨ）抗体、ドックアンドロック（ＤＮＬ）抗体、化学的に架橋された抗体、ヘテロマルチマー抗体、又はヘテロコンジュゲート抗体である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の抗ＣＤ２２構築物。
【請求項１０】
前記構築物は、第２の抗原に特異的に結合する第２の抗体部分を更に含み、前記第２の抗原は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、好中球、単球、マクロファージ、又は樹状細胞の表面上の抗原である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗ＣＤ２２構築物。
【請求項１１】
前記抗ＣＤ２２構築物は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の抗ＣＤ２２構築物。
【請求項１２】
前記ＣＡＲは、抗ＣＤ２２抗体部分と、膜貫通ドメインと、免疫細胞シグナル伝達ドメインと、を含み、前記抗ＣＤ２２抗体部分は、配列番号２１４〜２１６の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、を含むｓｃＦｖである、請求項１１に記載の抗ＣＤ２２構築物。
【請求項１３】
前記ＣＡＲは、抗ＣＤ２２抗体部分と、膜貫通ドメインと、免疫細胞シグナル伝達ドメインと、を含み、前記抗ＣＤ２２抗体部分は、配列番号２０６〜２０８の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２０９〜２１１の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、を含むｓｃＦｖである、請求項１１に記載の抗ＣＤ２２構築物。
【請求項１４】
前記抗ＣＤ２２構築物は、ＣＤ２２に結合する細胞外ドメインと、ＴＣＲ膜貫通ドメインを含むＴ細胞受容体（ＴＣＲ）モジュール（ＴＣＲＭ）と、を含む、キメラ抗体−Ｔ細胞受容体（ｃａＴＣＲ）である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の抗ＣＤ２２構築物。
【請求項１５】
前記ｃａＴＣＲは、配列番号２１４〜２１６の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、を含む、請求項１４に記載の抗ＣＤ２２構築物。
【請求項１６】
前記ｃａＴＣＲは、配列番号２０６〜２０８の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２０９〜２１１の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、を含む、請求項１４に記載の抗ＣＤ２２構築物。
【請求項１７】
前記細胞外ドメインは、
（ａ）重鎖可変領域（ＶＨ）とＣＨ１定常ドメインを含む第１の抗原結合領域を含む、第１のポリペプチドと、
（ｂ）軽鎖可変領域（ＶＬ）とＣＬ定常ドメインを含む第２の抗原結合領域を含む、第２のポリペプチド鎖と、を含み、
前記第１の抗原結合領域の前記ＶＨ及び前記ＣＨ１定常ドメイン、並びに前記第２の抗原結合領域の前記ＶＬ及び前記ＣＬ定常ドメインは、ＣＤ２２に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールを形成する、請求項１４〜１６のいずれか一項に記載の抗ＣＤ２２構築物。
【請求項１８】
前記細胞外ドメインは、少なくとも１種類の非ＣＤ２２抗原に特異的に結合する少なくとも１つの追加の抗体部分を更に含む、請求項１４〜１７のいずれか一項に記載の抗ＣＤ２２構築物。
【請求項１９】
前記ｃａＴＣＲは、キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）との組み合わせで発現する、請求項１４〜１８のいずれか一項に記載の抗ＣＤ２２構築物。
【請求項２０】
前記抗ＣＤ２２構築物は、キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）であり、前記ＣＳＲは、
（ａ）抗ＣＤ２２抗体部分と、
（ｂ）膜貫通モジュールと、
（ｃ）免疫細胞に共刺激シグナルを提供可能な共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールと、を含み、
前記ＣＳＲは、機能的一次免疫細胞シグナル伝達ドメインを欠く、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の抗ＣＤ２２構築物。
【請求項２１】
前記抗ＣＤ２２抗体部分は、配列番号２１４〜２１６の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、を含む、請求項２０に記載の抗ＣＤ２２構築物。
【請求項２２】
前記抗ＣＤ２２抗体部分は、配列番号２０６〜２０８の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２０９〜２１１の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、を含む、請求項２０に記載の抗ＣＤ２２構築物。
【請求項２３】
前記ＣＳＲは、ｃａＴＣＲ又はＣＡＲとの組み合わせで発現する、請求項２０〜２２のいずれか一項に記載の抗ＣＤ２２構築物。
【請求項２４】
請求項１〜２３のいずれか一項に記載の抗ＣＤ２２構築物に含有される１つ以上のポリペプチドをコードする、核酸分子。
【請求項２５】
請求項２４に記載の核酸分子を含む、発現カセット。
【請求項２６】
請求項２４に記載の核酸分子又は請求項２５に記載の発現カセットを含む、宿主細胞。
【請求項２７】
請求項１〜２３のいずれか一項に記載の抗ＣＤ２２構築物を発現する、宿主細胞。
【請求項２８】
請求項１〜２３のいずれか一項に記載の抗ＣＤ２２構築物を調製する方法であって、
（ａ）請求項２４に記載の核酸分子又は請求項２５に記載の発現カセットを含む宿主細胞を提供することと、
（ｂ）前記抗ＣＤ２２構築物を形成可能な条件下で、前記宿主細胞内にて前記核酸分子又は前記発現カセットを発現させることと、を含む、方法。
【請求項２９】
治療的に有効な量の、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の抗ＣＤ２２構築物、請求項２４に記載の核酸分子、請求項２５に記載の発現カセット、又は請求項２６若しくは２７に記載の宿主細胞と、１種類以上の薬学的に許容される担体又は賦形剤と、を含む、医薬組成物。
【請求項３０】
必要な対象においてＢ細胞悪性腫瘍を治療する方法であって、治療的に有効な量の、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の抗ＣＤ２２構築物、請求項２４に記載の核酸分子、請求項２５に記載の発現カセット、請求項２６若しくは２７に記載の宿主細胞、又は請求項２９に記載の医薬組成物を、前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項３１】
必要な対象においてＣＤ２２の過剰発現によって特徴付けられる疾患又は障害を治療する方法であって、治療的に有効な量の、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の抗ＣＤ２２構築物、請求項２４に記載の核酸分子、請求項２５に記載の発現カセット、請求項２６若しくは２７に記載の宿主細胞、又は請求項２９に記載の医薬組成物を、前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項３２】
請求項２４に記載の核酸分子又は請求項２５に記載の発現カセットを、対象から単離された１つ以上の初代細胞に導入することと、前記核酸分子又は前記発現カセットを含む細胞を、前記対象に投与することと、を含む、治療方法。
【請求項３３】
試料中のＣＤ２２を検出する方法であって、（ａ）前記試料を請求項１〜２３のいずれか一項に記載の抗ＣＤ２２構築物と接触させることと、（ｂ）前記抗ＣＤ２２構築物と前記試料中の任意のＣＤ２２との結合を直接的又は間接的に検出することと、を含む、方法。
【請求項３４】
ＣＤ２２関連疾患又は障害を有する疑いのある対象を診断する方法であって、
ａ）有効な量の請求項１〜２３のいずれか一項に記載の抗ＣＤ２２構築物を前記対象に投与することと、
ｂ）前記抗ＣＤ２２構築物と前記対象における任意のＣＤ２２との結合のレベルを直接的又は間接的に決定することであって、閾値レベルを上回る結合のレベルは、前記対象が前記ＣＤ２２関連疾患又は障害を有することを示す、ことと、を含む、方法。
【請求項３５】
Ｂ細胞悪性腫瘍に罹患している対象を診断する方法であって、
（ａ）前記対象から得られた試料を請求項１〜２３のいずれか一項に記載の抗ＣＤ２２構築物と接触させることと、
（ｂ）前記試料中の前記抗ＣＤ２２構築物に結合した細胞の数を決定することと、を含み、
閾値レベルを上回る、前記抗ＣＤ２２構築物に結合した細胞の数の値は、前記対象が前記Ｂ細胞悪性腫瘍に罹患していることを示す、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
ＣＤ１９  Ｂ細胞抗原を標的とする免疫療法は、Ｂ細胞悪性腫瘍に対して特に効果を示してきた（Ｌａｒｔｉｇｕｅ，Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ａｕｇｕｓｔ  １，２０１４）。
【背景技術】
【０００２】
しかしながら、腫瘍細胞によるＣＤ１９発現の喪失は、免疫療法の効果を無効にし、癌の再発を引き起こす可能性がある（Ｇｒｕｐｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．３６８：１５０９，２０１３）。ＣＤ１９腫瘍抗原の流出は、ＣＤ２２及びＣＤ５２などの追加的なＢ細胞抗原の標的化の必要性を強調する（Ｇｒｉｌｌｏ−Ｌｏｐｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２：３０１，２００１）。
【発明の概要】
【０００３】
本発明は、とりわけ、ＣＤ２２、特にヒトＣＤ２２に特異的に結合する構築物を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物は、記載される抗ＣＤ２２抗体部分を含むポリペプチド又は組成物であってもよい。例えば、抗ＣＤ２２構築物は、（例えば、細胞の表面上で発現される）天然形態のヒトＣＤ２２に対して高い特異性を示す、抗体、キメラ抗原受容体（chimeric antigen receptor、ＣＡＲ）、キメラ抗体−Ｔ細胞受容体（chimeric antibody-T cell receptor、ｃａＴＣＲ）、又はキメラシグナル伝達受容体（chimeric signaling receptor、ＣＳＲ）であり得る。いくつかの実施形態では、提供される構築物は、ＣＤ２２発現によって特徴付けられる癌細胞（例えば、リンパ腫及び／又は白血病）の殺傷を効果的に媒介してもよい。
【０００４】
ヒト抗体、すなわち、ヒトＣＤＲ配列を含むヒト重鎖可変領域配列及びヒト軽鎖可変領域配列を有するヒト抗体を含有する構築物を採用する実施形態が本明細書で広範囲にわたって論じられているが、本発明はまた、非ヒト抗体を含有する構築物も提供する。いくつかの実施形態では、非ヒト抗体は、本明細書に記載の抗体由来のヒトＣＤＲ配列、及び非ヒトフレームワーク配列を含む。非ヒトフレームワーク配列としては、いくつかの実施形態では、例えば、マウス、ラット、ウサギ、ブタ、ウシ、シカ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、イヌ、サル、ニワトリなどから生成される配列を含む、本明細書に記載の１つ以上のヒトＣＤＲ配列を使用して合成重鎖可変領域及び／又は合成軽鎖可変領域を生成するために使用することができる任意の配列が挙げられる。いくつかの実施形態では、提供される構築物は、本明細書に記載の１つ以上のヒトＣＤＲ配列を、非ヒトフレームワーク配列（例えば、マウス又はニワトリのフレームワーク配列）に移植することによって生成される抗体を含む。多くの実施形態では、提供される構築物は、ヒト抗体（例えば、ヒトモノクローナル抗体又はそのフラグメント、ヒト抗原結合タンパク質又はポリペプチド、ヒト多重特異性抗体（例えば、ヒト二重特異性抗体）、ヒト免疫グロブリンポリペプチドの１つ以上の成分を有するヒトポリペプチド）を含むか、又はヒト抗体である。
【０００５】
一態様では、本発明は、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体部分を含む抗ＣＤ２２構築物を特徴とする。抗体部分は、（ａ）配列番号２１８又は２１２の軽鎖可変領域の軽鎖相補性決定領域（light chain complementarity determining region、ＬＣ−ＣＤＲ）１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（light chain variable region、ＶＬ）と、（ｂ）配列番号２１９又は２１３の重鎖可変領域の重鎖相補性決定領域（heavy chain complementarity determining region、ＨＣ−ＣＤＲ）１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（heavy chain variable region、ＶＨ）と、を含む。
【０００６】
いくつかの実施形態では、抗体部分は、配列番号２１８の軽鎖可変領域のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、配列番号２１２の軽鎖可変領域のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む。
【０００７】
いくつかの実施形態では、抗体部分は、（ａ）配列番号２１８の軽鎖可変領域のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、（ｂ）配列番号２１９の重鎖可変領域のＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含む。
【０００８】
いくつかの実施形態では、抗体部分は、（ａ）配列番号２１２の軽鎖可変領域のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、（ｂ）配列番号２１３の重鎖可変領域のＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含む。
【０００９】
本態様のいくつかの実施形態では、抗体部分は、ＨＤＩＲＮＹ（配列番号２１４）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＡＡＳ（配列番号２１５）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２、ＱＱＹＤＧＬＰＬＴ（配列番号２１６）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３、ＧＦＴＦＳＮＹＡ（配列番号２０９）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＩＳＧＳＧＧＳＴ（配列番号２１０）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２、及びＡＲＹＧＳＡＡＷＭＤＳ（配列番号２１７）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つ以上を含む。特定の実施形態では、抗体部分は、配列番号２０９、２１０、及び２１４〜２１７の配列を含む。
【００１０】
この態様のいくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＴＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＨＤＩＲＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＮＬＬＩＹＡＡＳＮＬＱＴＧＶＰＳＲＦＳＧＲＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＹＤＧＬＰＬＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫＲ（配列番号２１８）の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する。
【００１１】
本態様のいくつかの実施形態では、重鎖可変領域は、
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＴＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＹＧＳＡＡＷＭＤＳＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２１９）の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する。
【００１２】
別の態様では、本発明は、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含む抗ＣＤ２２構築物を特徴とする。軽鎖可変領域は、
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＴＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＨＤＩＲＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＮＬＬＩＹＡＡＳＮＬＱＴＧＶＰＳＲＦＳＧＲＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＹＤＧＬＰＬＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫＲ（配列番号２１８）の配列に対して少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する配列を有し、重鎖可変領域は、
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＴＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＹＧＳＡＡＷＭＤＳＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２１９）の配列に対して少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する配列を有する。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号２１８の配列を含み、重鎖可変領域は、配列番号２１９の配列を含む。
【００１３】
本発明の第１の態様のいくつかの実施形態では、抗体部分は、ＳＳＮＩＧＮＮＹ（配列番号２０６）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＥＮＮ（配列番号２０７）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２、ＧＴＷＤＳＳＬＳＡＧＡＶ（配列番号２０８）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３、ＧＦＴＦＳＮＹＡ（配列番号２０９）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＩＳＧＳＧＧＳＴ（配列番号２１０）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２、及びＡＲＰＹＹＤＤ（配列番号２１１）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、配列番号２０６〜２１１の配列を含む。
【００１４】
この態様のいくつかの実施形態では、構築物の軽鎖可変領域は、ＱＳＶＶＴＱＰＰＳＶＳＡＡＰＧＱＫＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＹＶＳＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＥＮＮＫＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＴＬＧＩＴＧＬＱＴＧＤＥＡＤＹＹＣＧＴＷＤＳＳＬＳＡＧＡＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ（配列番号２１２）の配列と少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％又は９９％同一性）を有する配列を有する。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＰＹＤＤＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２１３）の配列に対して少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する配列を有する。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号２１２の配列を含み、重鎖可変領域は、配列番号２１３の配列を含む。
【００１５】
別の態様では、本発明は、ＣＤ２２への特異的結合について、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物と競合する抗体部分を含む、抗ＣＤ２２構築物を提供する。
【００１６】
別の態様では、本発明は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ２２構築物を提供する。軽鎖可変領域は、
ＱＳＶＶＴＱＰＰＳＶＳＡＡＰＧＱＫＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＹＶＳＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＥＮＮＫＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＴＬＧＩＴＧＬＱＴＧＤＥＡＤＹＹＣＧＴＷＤＳＳＬＳＡＧＡＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ（配列番号２１２）の配列に対して少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する配列を有し、重鎖可変領域は、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＰＹＤＤＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２１３）の配列に対して少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する配列を有する。特定の実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、配列番号２１２の軽鎖可変領域配列と、配列番号２１３の重鎖可変領域配列と、を有する。
【００１７】
いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、リンカー（例えば、ＳＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＥＭＡ（配列番号２３３）の配列を有するリンカー）によって結合されている。
【００１８】
いくつかの実施形態では、構築物は、λアイソタイプ又はκアイソタイプの軽鎖を含む。
【００１９】
本明細書に記載の任意の態様では、抗ＣＤ２２構築物は、ＣＤ２２の細胞外領域に結合する。特定の実施形態では、ＣＤ２２の細胞外領域は、
ＤＶＱＹＰＰＫＫＶＴＴＶＩＱＮＰＭＰＩＲＥＧＤＴＶＴＬＳＣＮＹＮＳＳＮＰＳＶＴＲＹＥＷＫＰＨＧＡＷＥＥＰＳＬＧＶＬＫＩＱＮＶＧＷＤＮＴＴＩＡＣＡＡＣＮＳＷＣＳＷＡＳＰＶＡＬＮＶＱＹＡＰＲＤＶＲＶＲＫＩＫＰＬＳＥＩＨＳＧＮＳＶＳＬＱＣＤＦＳＳＳＨＰＫＥＶＱＦＦＷＥＫＮＧＲＬＬＧＫＥＳＱＬＮＦＤＳＩＳＰＥＤＡＧＳＹＳＣＷＶＮＮＳＩＧＱＴＡＳＫＡＷＴＬＥＶＬＹＡＰＲＲＬＲＶＳＭＳＰＧＤＱＶＭＥＧＫＳＡＴＬＴＣＥＳＤＡＮＰＰＶＳＨＹＴＷＦＤＷＮＮＱＳＬＰＹＨＳＱＫＬＲＬＥＰＶＫＶＱＨＳＧＡＹＷＣＱＧＴＮＳＶＧＫＧＲＳＰＬＳＴＬＴＶＹＹＳＰＥＴＩＧＲＲ（配列番号２０５）の配列のうちの少なくとも７個のアミノ酸を含む。特定の実施形態では、細胞外領域は、配列番号２０５の配列を有する。
【００２０】
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、完全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、単一特異性である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、多重特異性（例えば、二重特異性）である。
【００２１】
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、第２の抗原に特異的に結合する第２の抗体部分を更に含む。第２の抗原は、Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞）の表面上の抗原であってもよい。いくつかの実施形態では、第２の抗原は、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、ＣＤ１６ａ、ＣＤ５６、ＣＤ６８、ＧＤＳ２Ｄ、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＣＤ４０Ｌ、及びＨＶＥＭからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第２の抗原は、ナチュラルキラー細胞、好中球、単球、マクロファージ、又は樹状細胞の表面上の抗原である。
【００２２】
特定の実施形態では、第２の抗原は、ＣＤ３εである。構築物は、配列番号２０５の配列又はその一部を有するＣＤ２２に特異的なＮ末端ｓｃＦｖと、ＣＤ３εに特異的なＣ末端ｓｃＦｖと、を含む、タンデムｓｃＦｖである。
【００２３】
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、タンデムｓｃＦｖ、ダイアボディ（Ｄｂ）、一本鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、二重親和性再標的化（dual-affinity retargeting、ＤＡＲＴ）抗体、二重可変ドメイン（dual variable domain、ＤＶＤ）抗体、ノブ・イントゥ・ホール（knob-into-hole、ＫｉＨ）抗体、ドックアンドロック（dock and lock、ＤＮＬ）抗体、化学的に架橋された抗体、ヘテロマルチマー抗体、又はヘテロ結合抗体である。特定の実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、ペプチドリンカー（例えば、ペプチドリンカーは、配列番号２３３のアミノ酸配列を含む）によって連結された２つのｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖである。
【００２４】
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、構築物は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、抗ＣＤ２２抗体部分と、膜貫通ドメイン（例えば、Ｔ細胞受容体膜貫通ドメイン）と、免疫細胞シグナル伝達ドメインと、を含む。抗ＣＤ２２抗体部分は、配列番号２１４〜２１６の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、を含む、ｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、抗ＣＤ２２抗体部分と、膜貫通ドメインと、免疫細胞シグナル伝達ドメインと、を含む。抗ＣＤ２２抗体部分は、配列番号２０６〜２０８の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２０９〜２１１の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、を含む、ｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、免疫細胞シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ鎖由来である。他の実施形態では、免疫細胞シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、ＩＣＯＳ、又はＯＸ４０由来である。
【００２５】
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、構築物は、ＣＤ２２に結合する細胞外ドメイン（例えば、配列番号２０５又はその一部）を含むキメラ抗体−Ｔ細胞受容体（ｃａＴＣＲ、抗体−ＴＣＲキメラ分子又は構築物（ａｂＴＣＲ）とも呼ばれる）、及びＴＣＲ膜貫通ドメインを含むＴ細胞受容体（ＴＣＲ）モジュール（ＴＣＲＭ）である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、配列番号２１４〜２１６の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、を含む。他の実施形態では、ｃａＴＣＲは、配列番号２０６〜２０８の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２０９〜２１１の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュール（例えば、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びＣＤ３ζ）を動員することができる。
【００２６】
いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲの細胞外ドメインは、（ａ）重鎖可変領域（ＶＨ）及びＣＨ１抗体定常ドメインを含む第１の抗原結合領域を含む第１のポリペプチドと、（ｂ）軽鎖可変領域（ＶＬ）及びＣＬ抗体定常ドメインを含む第２の抗原結合領域を含む第２のポリペプチド鎖と、を含む。第１の抗原結合領域のＶＨ及びＣＨ１抗体定常ドメイン並びに第２の抗原結合領域のＶＬ及びＣＬ抗体定常ドメインは、ＣＤ２２に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールを形成する。
【００２７】
いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、ＣＤ２２に特異的に結合するｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、少なくとも１種類の非ＣＤ２２抗原に特異的に結合する少なくとも１つの追加の抗体部分を更に含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１種類の非ＣＤ２２抗原は、Ｂ細胞悪性腫瘍で発現される。特定の実施形態では、細胞外ドメインは、ＣＤ１９に特異的に結合する抗体部分を更に含む。特定の実施形態では、細胞外ドメインは、ＣＤ２０に特異的に結合する抗体部分を更に含む。特定の実施形態では、細胞外ドメインは、ＣＤ１９に特異的に結合する抗体部分と、ＣＤ２０に特異的に結合する抗体部分と、を更に含む。
【００２８】
いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）との組み合わせで発現される。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、抗ＣＤ２２抗体部分を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、非ＣＤ２２抗原に特異的に結合する抗体部分を含む。
【００２９】
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、構築物は、キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）である。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、（ａ）抗ＣＤ２２抗体部分と、（ｂ）膜貫通モジュールと、（ｃ）免疫細胞に共刺激シグナルを提供することができる共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールと、を含む。ＣＳＲは、機能的一次免疫細胞シグナル伝達ドメインを欠いている。特定の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体部分は、配列番号２１４〜２１６の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体部分は、配列番号２０６〜２０８の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２０９〜２１１の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、ｃａＴＣＲ又はＣＡＲとの組み合わせで使用される（すなわち、発現される）。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、ｃａＴＣＲ又はＣＡＲとの組み合わせで発現される。
【００３０】
いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、ＣＤ２２を特異的に標的とするｃａＴＣＲ又はＣＡＲとの組み合わせで発現される。他の実施形態では、ＣＳＲは、ＣＤ２２を特異的に標的としないｃａＴＣＲ又はＣＡＲとの組み合わせで発現される。
【００３１】
いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、少なくとも１種類の非ＣＤ２２抗原に特異的に結合する少なくとも１つの追加の抗体部分を更に含む。特定の実施形態では、ＣＳＲは、ＣＤ１９に特異的に結合する抗体部分を更に含む。特定の実施形態では、ＣＳＲは、ＣＤ２０に特異的に結合する抗体部分を更に含む。
【００３２】
いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、同じ分子に由来する膜貫通フラグメント及び細胞内フラグメントを含む。特定の実施形態では、分子は、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（lymphocyte function-associated antigen-1、ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンドからなる群から選択される。特定の実施形態では、分子は、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、及びＣＤ２７からなる群から選択される。
【００３３】
他の実施形態では、ＣＳＲは、異なる分子に由来する膜貫通フラグメント及び細胞内フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、Ｔ細胞受容体のα鎖、β鎖、δ鎖、γ鎖、又はζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、及びＣＤ１５４（例えば、ＣＤ８、４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、又はＯＸ４０の膜貫通フラグメント）からなる群から選択される分子の膜貫通フラグメントを含む。特定の実施形態では、膜貫通フラグメントは、配列番号１４５〜１５０のうちのいずれか１つの配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンドからなる群から選択される分子の細胞内フラグメント（例えば、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、及びＣＤ２７からなる群から選択される分子の細胞内フラグメント）を含む。特定の実施形態では、細胞内フラグメントは、配列番号１５１〜１５５のうちのいずれか１つの配列を含む。他の実施形態では、ＣＳＲは、配列番号１５６〜１７１のうちのいずれか１つの配列を含む。
【００３４】
本明細書に記載の任意の態様のいくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、抗体部分及びエフェクタ分子を含む免疫コンジュゲートである。エフェクタ分子は、薬物、毒素、放射性同位体、タンパク質、ペプチド、及び核酸からなる群から選択される治療薬（例えば、薬物又は毒素）であってもよい。いくつかの実施形態では、エフェクタ分子は、ラベルであってもよい。
【００３５】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物に含有される１つ以上のポリペプチドをコードする核酸分子を提供する。例えば、核酸分子は、構築物の軽鎖可変領域（例えば、配列番号２１２又は２１８）又は重鎖可変領域（例えば、配列番号２１３又は２１９）をコードしてもよい。いくつかの実施形態では、核酸分子は、ｓｃＦｖ抗体（例えば、配列番号２３９又は２４０）をコードしてもよい。更なる実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物中の異なるポリペプチド（例えば、抗ＣＤ２２  ＣＡＲ又はｃａＴＣＲ）は、複数の別個の核酸分子によってコードされてもよい。例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物中の２つのポリペプチド（例えば、抗ＣＤ２２  ＣＡＲ又はｃａＴＣＲ）は、２つの別個の核酸分子によってコードされてもよい。いくつかの実施形態では、核酸分子は、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物に含有される全てのポリペプチドをコードする。
【００３６】
本態様のいくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、ｃａＴＣＲであり、ＣＳＲとの組み合わせで発現され、核酸分子は、ｃａＴＣＲに含有される全てのポリペプチド及びＣＳＲのポリペプチドをコードするか、あるいは、抗ＣＤ２２構築物は、ＣＳＲであり、ｃａＴＣＲ又はＣＡＲとの組み合わせで発現され、核酸分子は、ＣＳＲのポリペプチド及びｃａＴＣＲ又はＣＡＲに含有される全てのポリペプチドをコードする。
【００３７】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物に含有される全てのポリペプチドを個別にコードする核酸分子のセットを提供する。
【００３８】
本態様のいくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、ｃａＴＣＲであり、ＣＳＲとの組み合わせで発現され、核酸分子のセットは、ｃａＴＣＲに含有される全てのポリペプチド及びＣＳＲのポリペプチドをコードするか、あるいは、抗ＣＤ２２構築物は、ＣＳＲであり、ｃａＴＣＲ又はＣＡＲとの組み合わせで発現され、核酸分子のセットは、ＣＳＲのポリペプチド及びｃａＴＣＲ又はＣＡＲに含有される全てのポリペプチドをコードする。
【００３９】
別の態様では、本発明はまた、プロモータに操作可能に連結された、上述の核酸分子を含む発現カセットを提供し、これは場合によっては、核酸内のコード配列にとって非相同である。複数の別個の核酸分子が、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物中の複数のポリペプチドをコードするために使用される場合、複数の別個の核酸分子は、複数の発現カセット内に配置されてもよい。
【００４０】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物に含有される全てのポリペプチドを個別にコードする核酸分子を含む発現カセットのセットを提供する。いくつかの実施形態では、発現カセットのセットは、上述の核酸分子のセットを含む。
【００４１】
別の態様では、本発明は、上述の核酸分子、核酸分子のセット、発現カセット、又は発現カセットのセットを含む宿主細胞を提供する。
【００４２】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物を発現する宿主細胞を提供する。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、本明細書に記載の核酸分子、核酸分子のセット、発現カセット、又は発現カセットのセットを含む。
【００４３】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物を調製する方法を提供する。本方法は、（ａ）上述の核酸分子、核酸分子のセット、発現カセット、又は発現カセットのセットを含む宿主細胞を提供することと、ｂ）抗ＣＤ２２構築物の形成を可能にする条件下で、宿主細胞中の核酸分子（複数可）又は発現カセット（複数可）を発現することと、を含む。
【００４４】
別の態様では、本発明は、上述の抗ＣＤ２２構築物、上述の抗ＣＤ２２構築物に含有される１つ以上のポリペプチドをコードする核酸、上述の抗ＣＤ２２構築物に含有される１つ以上のポリペプチドをコードする核酸分子のセット、核酸分子を含む発現カセット、複数の核酸分子を含む発現カセットのセット、又は抗ＣＤ２２構築物を発現する宿主細胞を含む医薬組成物、及び１つ以上の薬学的に許容される担体又は賦形剤を提供する。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の構築物は、治療的に有効な量である。
【００４５】
別の態様では、本発明は、必要な対象においてＢ細胞悪性腫瘍を治療する方法であって、治療的に有効な量の、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物、核酸分子、核酸分子のセット、発現カセット、発現カセットのセット、宿主細胞、又は医薬組成物を、対象に投与することを含む、方法を提供する。
【００４６】
別の態様では、本発明は、必要な対象においてＣＤ２２過剰発現によって特徴付けられる疾患又は障害を治療する方法であって、治療的に有効な量の、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物、核酸分子、核酸分子のセット、発現カセット、発現カセットのセット、宿主細胞、又は医薬組成物を、対象に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本方法は、疾患を治療する方法である。いくつかの実施形態では、本方法は、障害を治療する方法である。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２過剰発現によって特徴付けられる疾患又は障害は、癌（例えば、Ｂ細胞悪性腫瘍）である。
【００４７】
別の態様では、本発明は、治療方法であって、核酸分子、核酸分子のセット、発現カセット、又は発現カセットのセットを、対象から単離された１つ以上の初代細胞に導入することと、１つ以上の核酸を含む細胞を対象に投与することと、を含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、方法は、細胞を対象に投与する前に細胞を増殖させる工程を更に含む。いくつかの実施形態では、初代細胞は、リンパ球である。いくつかの実施形態では、初代細胞は、Ｔ細胞である。
【００４８】
別の態様では、本発明は、試料中のＣＤ２２を検出する方法であって、（ａ）試料を本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物と接触させることと、（ｂ）抗ＣＤ２２構築物と試料中の任意のＣＤ２２との結合を直接的又は間接的に検出することと、を含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、検出可能な標識（例えば、発色剤、酵素、放射性同位体、同位体、蛍光剤、毒物、化学発光剤、又は核磁気共鳴造影剤）にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物と試料中の任意のＣＤ２２との結合は、検出可能な標識を検出することによって直接的に検出される。他の実施形態では、抗ＣＤ２２構築物と試料中の任意のＣＤ２２との結合は、二次抗体を使用して間接的に検出される。
【００４９】
別の態様では、本発明は、ＣＤ２２関連疾患又は障害を有する疑いのある対象を診断する方法であって、ａ）有効量の本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物を対象に投与することと、ｂ）抗ＣＤ２２構築物と対象における任意のＣＤ２２との結合のレベルを直接的又は間接的に決定することと、を含み、閾値レベルを上回る結合のレベルは、対象がＣＤ２２関連疾患又は障害を有することを示す、方法を提供する。
【００５０】
本明細書に記載の方法のいくつかの実施形態では、ＣＤ２２関連疾患又は障害は、癌（例えば、Ｂ細胞悪性腫瘍）である。
【００５１】
別の態様では、本発明は、Ｂ細胞悪性腫瘍を有する対象を診断する方法であって、（ａ）対象から得られた試料を本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物と接触させることと、（ｂ）試料中の抗ＣＤ２２構築物に結合した細胞の数を決定することと、を含み、閾値レベルを上回る抗ＣＤ２２構築物に結合した細胞の数の値は、対象がＢ細胞悪性腫瘍を有することを示す、方法を提供する。
【００５２】
本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、疾患、障害、又はＢ細胞悪性腫瘍は、Ｂ細胞リンパ腫又はＢ細胞白血病である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞悪性腫瘍は、ＣＤ２２＋Ｂ細胞悪性腫瘍又はＢ細胞関連癌である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞悪性腫瘍は、Ｂ細胞リンパ腫（例えば、ＣＤ２２＋Ｂ細胞リンパ腫）又はＢ細胞白血病（例えば、ＣＤ２２＋Ｂ細胞白血病）である。特定の実施形態では、Ｂ細胞悪性腫瘍（例えば、ＣＤ２２＋Ｂ細胞悪性腫瘍）は、急性リンパ芽球性白血病（acute lymphoblastic leukemia、ＡＬＬ）、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（chronic lymphocytic leukemia、ＣＬＬ）、多発性骨髄腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、前リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、共通急性リンパ性白血病、及びｎｕｌｌ細胞型急性リンパ芽球性白血病からなる群から選択される。本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。
【００５３】
別の態様では、本発明は、陽性ＣＤ２２発現に関連する疾患又は障害の治療のための、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物、核酸分子、核酸分子のセット、発現カセット、発現カセットのセット、宿主細胞、又は医薬組成物の使用を提供する。
【００５４】
別の態様では、本発明は、陽性ＣＤ２２発現に関連する疾患又は障害の治療のための薬剤の製造における、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物、核酸分子、核酸分子のセット、発現カセット、発現カセットのセット、宿主細胞、又は医薬組成物の使用を提供する。
【００５５】
別の態様では、本発明は、陽性ＣＤ２２発現に関連する疾患又は障害の診断のための、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物の使用を提供する。いくつかの実施形態では、陽性ＣＤ２２発現に関連する疾患又は障害は、癌である。
定義
【００５６】
本発明の範囲は、本明細書に添付の「特許請求の範囲」によって定義され、本明細書に記載される特定の実施形態によって限定されるものではない。当業者であれば、本開示を読むことで、そのような記載される実施形態と同等であり得る、あるいは請求項の範囲内であり得る、様々な修正を認識するであろう。
【００５７】
一般に、本明細書で使用される用語は、別途明確に示されない限り、当該技術分野において理解されている意味に従う。特定の用語の明示的な定義を以下に示す。本明細書全体をとおして特定の例におけるこれら及び他の用語の意味は、当業者には文脈から明らかであろう。
【００５８】
本発明がより容易に理解され得るように、特定の用語を以下に最初に定義する。以下の用語及び他の用語の更なる定義は、本明細書全体にわたって記載されている。
【００５９】
投与：本明細書で使用するとき、用語「投与」は、対象又は系（例えば、細胞、器官、組織、生物体、又はそれらの関連する構成要素若しくは構成要素のセット）に対する組成物の投与を指す。当業者は、投与経路が、例えば、組成物が投与される対象又は系、組成物の性質、投与の目的などに応じて変化し得ることを理解するであろう。例えば、特定の実施形態では、動物対象（例えば、ヒト）に対する投与は、気管支内（気管支点滴によるものを含む）、口腔内、腸内、真皮内、動脈内、皮内、胃内、肝内、髄内、筋肉内、鼻腔内、腹腔内、髄腔内、腫瘍内、静脈内、脳室内、粘膜内、経鼻、経口、直腸内、皮下、舌下、局所、気管内（気管内点滴によるものを含む）、経皮、膣内、及び／又は硝子体内であってもよい。いくつかの実施形態では、投与は、断続的な投与を伴ってもよい。いくつかの実施形態では、投与は、少なくとも選択された期間の連続的な投与（例えば、潅流）を伴ってもよい。
【００６０】
親和性：当該技術分野において既知であるように、「親和性」は、特定のリガンドがそのパートナーに結合する密着性の尺度である。親和性は、様々な方法で測定することができる。いくつかの実施形態では、親和性は、定量的アッセイによって測定される。いくつかのかかる実施形態では、結合パートナー濃度は、生理学的条件を模倣するように、リガンド濃度を超過して固定されてもよい。代替的に又は追加的に、いくつかの実施形態では、結合パートナー濃度及び／又はリガンド濃度を変化させてもよい。いくつかのかかる実施形態では、親和性は、同等の条件下（例えば、濃度）で基準と比較されてもよい。
【００６１】
親和性成熟（又は親和性成熟抗体）：本明細書で使用するとき、１つ以上のそのＣＤＲ（又はいくつかの実施形態では、フレームワーク領域）において１つ以上の改変を有する抗体を指し、その改変は、それらの改変を有していない親抗体と比較して、抗原に対する抗体の親和性の改善をもたらす。いくつかの実施形態では、親和性成熟抗体は、標的抗原に対してナノモル濃度又は更にはピコモル濃度での親和性を有するであろう。親和性成熟抗体は、当該技術分野において既知の様々な手順のいずれかによって生成されてもよい。Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３は、ＶＨ及びＶＬドメイン・シャフリングによる親和性成熟について記載している。ＣＤＲ及び／又はフレームワーク残基のランダム突然変異誘発は、Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．９１：３８０９−３８１３、Ｓｃｈｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｇｅｎｅ  １６９：１４７−１５５、Ｙｅｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４−２００４、Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０−９、及びＨａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９−８９６により記載されている。結合特性が改善された結合剤の選択は、Ｔｈｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．５２５：３０９−２２により記載されている。
【００６２】
薬剤：本明細書で使用するとき、例えば、ポリペプチド、核酸、糖類、脂質、小分子、金属、又はそれらの組み合わせを含む、任意の化学的分類の化合物又は実体を指し得る。いくつかの実施形態では、薬剤は、自然界に存在する、かつ／又は自然界から得られるという点で、天然産物であるか、又はその天然産物を含むものである。いくつかの実施形態では、薬剤は、人の手の作用を介して設計、操作、及び／若しくは製造されている、かつ／又は自然界には存在しないという点で、人工である１つ以上の実体であるか、又はその実体含むものである。いくつかの実施形態では、薬剤は、単離された形態又は純粋な形態で利用されてもよく、いくつかの実施形態では、薬剤は、粗製形態で利用されてもよい。いくつかの実施形態では、潜在的な薬剤は、例えば、薬剤の中の活性剤を特定又は特徴付けするためにスクリーニングされ得るコレクション又はライブラリとして提供される。本発明に従って利用され得る薬剤のいくつかの特定の実施形態には、小分子、抗体、アプタマー、核酸（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッド、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム）、ペプチド、ペプチド模倣物などが挙げられる。いくつかの実施形態では、薬剤は、ポリマーであるか、又はポリマーを含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、ポリマーではなく、かつ／又はいなかるポリマーも実質的に含まない。いくつかの実施形態では、薬剤は、少なくとも１つのポリマー部分を含有する。いくつかの実施形態では、薬剤は、いかなるポリマー部分も欠いているか、又は実質的に含まない。
【００６３】
アミノ酸：本明細書で使用するとき、用語「アミノ酸」は、その最も広い意味で、ポリペプチド鎖に組み込むことができる任意の化合物及び／又は物質を指す。いくつかの実施形態では、アミノ酸は、一般構造Ｈ２Ｎ−Ｃ（Ｈ）（Ｒ）−ＣＯＯＨを有する。いくつかの実施形態では、アミノ酸は、天然に存在するアミノ酸である。いくつかの実施形態では、アミノ酸は、合成アミノ酸であり、いくつかの実施形態では、アミノ酸は、ｄ−アミノ酸であり、いくつかの実施形態では、アミノ酸は、ｌ−アミノ酸である。「標準アミノ酸」は、天然に存在するペプチド中に一般に見出される２０種の標準的なｌ−アミノ酸のうちのいずれかを指す。「非標準アミノ酸」は、合成的に調製されるか、又は天然源から得られるかにかかわらず、標準アミノ酸以外の任意のアミノ酸を指す。本明細書で使用するとき、「合成アミノ酸」は、塩、アミノ酸誘導体（アミドなど）、及び／又は置換体を含むがこれらに限定されない、化学修飾アミノ酸を包含する。アミノ酸は、ペプチド中のカルボキシ末端アミノ酸及び／又はアミノ末端アミノ酸を含め、メチル化、アミド化、アセチル化、保護基、及び／又はペプチドの活性に悪影響を及ぼすことなくペプチドの循環半減期を変化させることができる他の化学基による置換によって修飾することができる。アミノ酸は、ジスルフィド結合に関与していてもよい。アミノ酸は、例えば、１つ以上の化学実体（例えば、メチル基、アセテート基、アセチル基、リン酸基、ホルミル部分、イソプレノイド基、硫酸基、ポリエチレングリコール部分、脂質部分、炭水化物部分、ビオチン部分など）との会合など、１つ又は翻訳後修飾を含んでいてもよい。用語「アミノ酸」は、「アミノ酸残基」と互換的に使用され、遊離アミノ酸及び／又はペプチドのアミノ酸残基を指す場合もある。アミノ酸が遊離アミノ酸を指すのか、又はペプチドの残基を指すのかは、この用語が用いられる文脈から明らかであろう。
【００６４】
動物：本明細書で使用するとき、動物界の任意のメンバーを指す。いくつかの実施形態では、「動物」は、いずれかの性別、及び任意の発達段階の、ヒトを指す。いくつかの実施形態では、「動物」は、任意の発達段階の非ヒト動物を指す。特定の実施形態では、非ヒト動物は、哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ブタ、ウシ、シカ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、イヌ、又はサル）である。いくつかの実施形態では、動物には、哺乳動物、鳥類、爬虫類、両生類、魚類、昆虫、及び／又は蠕虫が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、動物は、トランスジェニック動物、遺伝子操作された動物、及び／又はクローンであってもよい。
【００６５】
抗体部分：本明細書で使用するとき、この用語は、完全長抗体及びその抗原結合フラグメントを包含する。完全長抗体は、２本の重鎖及び２本の軽鎖を含む。軽鎖及び重鎖の可変領域は、抗原結合に関与する。両方の鎖内の可変領域は、一般に、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる３つの超可変のループ（ＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ）を含有する。本明細書に開示される抗体及び抗原結合フラグメントのＣＤＲ境界は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、又はＡｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ（Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  １９９７、Ｃｈｏｔｈｉａ  １９８５、Ｃｈｏｔｈｉａ  １９８７、Ｃｈｏｔｈｉａ  １９８９、Ｋａｂａｔ  １９８７、Ｋａｂａｔ  １９９１）の慣例によって定義又は特定されてもよい。重鎖又は軽鎖の３つのＣＤＲは、フレームワーク領域（ＦＲ）として知られるフランキングストレッチの間に介在し、フレームワーク領域は、ＣＤＲよりも高度に保存され、超可変ループを支持するスキャフォールドを形成する。重鎖及び軽鎖の定常領域は、抗原結合に関与しないが、様々なエフェクタ機能を示す。抗体は、その抗体の重鎖の定常領域のアミノ酸配列に基づいて、クラスに割り当てられる。抗体の５つの主要なクラス又はアイソタイプは、それぞれα、δ、ε、γ、及びμ重鎖の存在によって特徴付けられる、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭである。主要な抗体クラスのいくつかは、ｌｇＧ１（γ１重鎖）、ｌｇＧ２（γ２重鎖）、ｌｇＧ３（γ３重鎖）、ｌｇＧ４（γ４重鎖）、ｌｇＡ１（α１重鎖）、又はｌｇＡ２（α２重鎖）などのサブクラスに分類される。
【００６６】
抗原結合フラグメント又は抗原結合部分：本明細書で使用するとき、用語「抗原結合フラグメント」又は「抗原結合部分」は、例えば、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖフラグメント、ジスルフィド安定化Ｆｖフラグメント（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ−ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ二量体（二価ダイアボディ）、１つ以上のＣＤＲを含む抗体の一部分から形成される多重特異性抗体、ラクダ化単一ドメイン抗体、ナノボディ、ドメイン抗体、二価ドメイン抗体、又は抗原に結合するが完全な抗体構造を含まない任意の他の抗体フラグメントを含む、抗体フラグメントを指す。抗原結合フラグメントは、親抗体又は親抗体フラグメント（例えば、親ｓｃＦｖ）が結合する同じ抗原に結合することができる。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、１つ以上の異なるヒト抗体からフレームワーク領域に移植された特定のヒト抗体由来の１つ以上のＣＤＲを含んでいてもよい。
【００６７】
生物活性：本明細書で使用するとき、対象の薬剤又は実体によって得られる観察可能な生物学的効果又は結果を指す。例えば、いくつかの実施形態では、特異的結合相互作用は、生物活性である。いくつかの実施形態では、生物学的経路又は事象の調節（例えば、誘導、増強、又は阻害）は、生物活性である。いくつかの実施形態では、生物活性の存在又は規模は、対象の生物学的経路又は事象によって生成される直接的又は間接的産物の検出によって評価される。
【００６８】
二重特異性抗体：本明細書で使用するとき、結合部分のうちの少なくとも１つ、典型的には両方が、抗体部分であるか又は抗体部分を含む、二重特異性結合剤を指す。様々な異なる二重特異性抗体の構造は、当該技術分野において既知である。いくつかの実施形態では、抗体部分であるか又は抗体部分を含む二重特異性抗体におけるそれぞれの結合部分は、ＶＨ及び／又はＶＬ領域を含み、いくつかのかかる実施形態では、ＶＨ領域及び／又はＶＬ領域は、特定のモノクローナル抗体に見出されるものである。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体が２つの抗体部分を含有する場合には、抗体部分はそれぞれ、異なるモノクローナル抗体由来のＶＨ領域及び／又はＶＬ領域を含む。
【００６９】
本明細書で使用するとき、用語「二重特異性抗体」はまた、２つの別個の結合部分を有するポリペプチドを指し、結合部分はそれぞれ、別個の標的に結合する。いくつかの実施形態では、二重特異性結合抗体は、単一のポリペプチドであり、いくつかの実施形態では、二重特異性結合抗体は、いくつかのかかる実施形態では、例えば、架橋によって互いに共有会合し得る、複数のペプチドであるか、又は複数のペプチドを含むものである。いくつかの実施形態では、二重特異性結合抗体の２つの結合部分は、同じ標的（例えば、抗原）の異なる部位（例えば、エピトープ）を認識し、いくつかの実施形態では、異なる標的を認識する。いくつかの実施形態では、二重特異性結合抗体は、異なる構造である２つの標的に同時に結合することができる。
【００７０】
担体：本明細書で使用するとき、組成物とともに投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤、又はビヒクルを指す。いくつかの例示的な実施形態では、担体は、例えば、水及び油などの滅菌された液体を含むことができ、油には、石油、動物、植物、又は合成を起源とする油が挙げられ、例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱物油、ゴマ油などがある。いくつかの実施形態では、担体は、１種類以上の固体成分であるか、又は１種類以上の個体成分を含むものである。
【００７１】
ＣＤＲ：本明細書で使用するとき、用語「ＣＤＲ」又は「相補性決定領域」は、重鎖ポリペプチド及び軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内に見出される非隣接抗原結合部位を意味することが意図される。重鎖及び軽鎖の可変領域のそれぞれには、３つのＣＤＲが存在し、これらは、可変領域のそれぞれについて指定されたＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３である。「ＣＤＲのセット」又は「ＣＤＲセット」は、抗原に結合することができる単一の可変領域のいずれかに存在する３つ又は６つのＣＤＲ、又は抗原に結合することができる同種の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のＣＤＲの群を指す。これらの特定の領域は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９−６６１６（１９７７）、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ」（１９９１）、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７）、Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２７３：９２７−９４８（１９９７）、ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２−７４５（１９９６）、Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ  ａｎｄ  Ｍａｒｔｉｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４５：３８３２−３８３９（２００８）、Ｌｅｆｒａｎｃ  Ｍ．Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２７：５５−７７（２００３）、及びＨｏｎｅｇｇｅｒ  ａｎｄ  Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３０９：６５７−６７０（２００１）により記載されており、ここで定義は、互いに比較される場合、アミノ酸残基の重複又はサブセットを含む。それにもかかわらず、抗体若しくは移植された抗体又はその変異体のＣＤＲを指すためのいずれかの定義の適用は、本明細書で定義及び使用される用語の範囲内であることが意図される。先に引用された参考資料のそれぞれに定義されるＣＤＲを包含するアミノ酸残基を、比較として、以下の表１に示す。ＣＤＲ予測アルゴリズム及びインターフェースは、当該技術分野において既知であり、例えば、Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ  ａｎｄ  Ｍａｒｔｉｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４５：３８３２−３８３９（２００８）、Ｅｈｒｅｎｍａｎｎ  Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，３８：Ｄ３０１−Ｄ３０７（２０１０）、及びＡｄｏｌｆ−Ｂｒｙｆｏｇｌｅ  Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，４３：Ｄ４３２−Ｄ４３８（２０１５）が挙げられる。本段落で引用される参考文献の内容は、本発明で使用するために、かつ本明細書の１つ以上の請求項における可能な包含のために、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００７２】
【表１】
2021528995.tif 000003
１残基の付番は、上記Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．の命名法に従う。
２残基の付番は、上記Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．の命名法に従う。
３残基の付番は、上記ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．の命名法に従う。
４残基の付番は、上記Ｌｅｆｒａｎｃ  ｅｔ  ａｌ．の命名法に従う。
５残基の付番は、上記Ｈｏｎｅｇｇｅｒ  ａｎｄ  Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎの命名法に従う。
【００７３】
表面抗原分類２２又はＣＤ２２：本明細書で使用するとき、特記のない限り、霊長類（例えば、ヒト、カニクイザル（ｃｙｎｏ））及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源に由来する任意の天然のＣＤ２２を指す。この用語は、「完全長」の未処理のＣＤ２２、及び細胞における処理から生じる任意の形態のＣＤ２２を包含する。この用語はまた、ＣＤ２２の天然に存在する変異体、例えば、スプライス変異体、対立遺伝子変異体、及びアイソフォームも包含する。ＣＤ２２の主要なアイソフォーム（ＣＤ２２β）は、細胞外ドメインに、８４７個のアミノ酸及び７つの免疫グロブリン様領域を含む（Ｗｉｌｓｏｎ，Ｇ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１３７−１４６（１９９１）を参照されたい）。マイナーなアイソフォームであるＣＤ２２αは、細胞外ドメインに、６４７個のアミノ酸を含み、免疫グロブリン様ドメイン３及び４を欠いている（Ｓｔａｍｅｎｋｏｖｉｃ，Ｉ．ａｎｄ  Ｓｅｅｄ，Ｂ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４５：７４−７７（１９９０））及び上記Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）を参照されたい）。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物は、ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に結合する。
【００７４】
ＣＤ２２過剰発現によって特徴付けられる疾患：本明細書で使用するとき、細胞表面上でＣＤ２２を過剰発現する細胞によって特徴付けられるか、又は引き起こされる、疾患又は障害を指す。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２過剰発現によって特徴付けられる疾患又は障害は、ＣＤ２２＋Ｂ細胞悪性腫瘍である。
【００７５】
ＣＤ２２＋Ｂ細胞悪性腫瘍：本明細書で使用するとき、細胞表面上でＣＤ２２を過剰発現するＢ細胞によって特徴付けられるか、又は引き起こされる、疾患又は障害を指す。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２＋Ｂ細胞悪性腫瘍は、Ｂ細胞リンパ腫又はＢ細胞白血病である。
【００７６】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）：一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む本発明の構築物は、キメラ抗原受容体の調製に使用されてもよく、その調製及び使用は、当該技術分野において一般的に知られている。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、細胞外抗原結合ドメインの一部として一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含有する人為的に構築されたハイブリッド一本鎖タンパク質又は一本鎖ポリペプチドであり、膜貫通ドメイン（例えば、ＴＣＲ膜貫通ドメイン）に連結され、この膜貫通ドメインは、細胞内免疫細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）シグナル伝達ドメイン（例えば、共刺激ドメイン、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどの細胞内ドメインの一部、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、又はＣＤ６６ｄの細胞内ドメインの一部、ＣＤ３ζの細胞内ドメインの一部）に更に連結されている。ＣＡＲの特性としては、ＭＨＣ制限（ＴＣＲ模倣抗体の場合）様式又は非ＭＨＣ制限（細胞表面タンパク質に対する抗体の場合）様式のいずれかによって、選択された標的に向けて免疫細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の特異性及び反応性を再指向して、モノクローナル抗体の抗原結合特性を利用する能力が挙げられる。非ＭＨＣ制限抗原認識は、ＣＡＲを発現する免疫細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）に対して、抗原プロセシングに依存しない抗原を認識する能力を与えるため、腫瘍エスケープの主要なメカニズムを回避する。
【００７７】
現在、３世代のＣＡＲが存在する。「第１世代」ＣＡＲは、典型的には、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）鎖の細胞質／細胞内ドメインに融合された膜貫通ドメインに融合された抗原結合ドメインとしてｓｃＦｖから構成される一本鎖ポリペプチドである。「第１世代」ＣＡＲは、典型的には、内在性ＴＣＲからのシグナルの主要な伝達物質であるＣＤ３ζ鎖由来の細胞内ドメインを有する。「第１世代」ＣＡＲは、ｄｅ  ｎｏｖｏ抗原認識を提供し、ＨＬＡ媒介性抗原提示に依存しない、単一の融合分子におけるそのＣＤ３ζ鎖シグナル伝達ドメインを介して、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の両方の活性化を引き起こすことができる。
【００７８】
「第２世代」ＣＡＲは、様々な共刺激分子（例えば、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０）由来の細胞内ドメインを、ＣＡＲの細胞質テールに付加して、Ｔ細胞に追加的なシグナルを提供する。「第２世代」ＣＡＲは、共刺激（例えば、ＣＤ２８又は４−ＩＢＢ）及び活性化（例えば、ＣＤ３ζ）の両方を提供するものを含む。前臨床研究によって、「第２世代」ＣＡＲがＴ細胞の抗腫瘍活性を改善し得ることが示された。例えば、慢性リンパ芽球性白血病（ＣＬＬ）及び急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）を有する患者におけるＣＤ１９分子を標的とする臨床試験において、「第２世代」ＣＡＲによって修飾されたＴ細胞の頑強な有効性が実証された。
【００７９】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子操作された免疫細胞は、「第３世代」ＣＡＲを発現する。「第３世代」ＣＡＲは、複数の共刺激（例えば、ＣＤ２８及び４−１ＢＢ）及び活性化（例えば、ＣＤ３ζ）を提供するものを含む。
【００８０】
キメラ抗体−Ｔ細胞受容体構築物又はｃａＴＣＲ：本明細書で使用するとき、この用語は、２本の別個のポリペプチド鎖を含む機能性ポリペプチド複合体を指し、２本の別個のポリペプチド鎖のうちの一方は、抗体重鎖可変領域（ＶＨ）及び抗体重鎖定常領域（ＣＨ）を含み、他方は、抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）及び抗体軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む。したがって、本明細書で定義されるｃａＴＣＲは、２サブユニット構築物であり、各サブユニットは、膜貫通ドメイン（例えば、ＴＣＲ膜貫通ドメイン）及び細胞内免疫細胞シグナル伝達ドメインに融合された、細胞膜に固定された抗体重鎖又は軽鎖に実質的に類似している。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、共刺激ドメイン（例えば、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、又はＣＤ３ζの細胞内ドメインの一部）を含まない。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、ａ）抗体部分を含む細胞外ドメインと、ｂ）少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールを動員することができるＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）と、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲは、ａ）ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に特異的に結合する抗ＣＤ２２抗体部分を含む細胞外ドメインと、ｂ）少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールを動員することができるＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）と、を含む。
【００８１】
本明細書で定義されるｃａＴＣＲは、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、膜貫通ドメイン及び細胞内免疫細胞シグナル伝達ドメインに融合された抗体ＣＨに融合された抗体ＶＨを含み、第２のポリペプチドは、膜貫通ドメイン及び細胞内免疫細胞シグナル伝達ドメインに融合された抗体ＣＬに融合された抗体ＶＬを含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２のポリペプチド鎖は、共有結合（例えば、ペプチド結合又は他の化学結合）又は非共有結合によって連結されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲは、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖を含むヘテロ二量体である。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖は、少なくとも１つのジスルフィド結合によって連結されている。抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲの特異性は、ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に対する結合特異性を付与する抗体部分に由来する。
【００８２】
用語「キメラ抗体−Ｔ細胞受容体（ｃａＴＣＲ）」及び「抗体−ＴＣＲキメラ分子又は構築物（ａｂＴＣＲ）」は、交換可能に使用される。ｃａＴＣＲの更なる説明及び例は、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、２０１７年４月２６日出願の米国特許出願第６２／４９０，５７６号に見出すことができる。
【００８３】
養子細胞療法：養子細胞療法は、例えば、癌の治療のための、免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞又はＴ細胞）の単離、エクスビボ増殖及び／又は操作、並びにその後のこれらの細胞の患者への投与を典型的に含む、治療的アプローチである。投与された細胞は、自家性であってもよいか、又は同種異系であってもよい。細胞は、例えば、ＲＮＡ及びＤＮＡトランスフェクション、ウイルス形質導入、エレクトロポレーション（これらは全て、当該技術分野において既知の技術である）の使用を含む、既知の方法のいずれか１つにおいて遺伝子操作された受容体（ＣＡＲ、ｃａＴＣＲ、及び遺伝子操作されたＴＣＲを含む）を発現するように操作されてもよい。
【００８４】
用語「養子細胞治療組成物」は、養子細胞移入に好適な細胞を含む任意の組成物を指す。例示的な実施形態では、養子細胞治療組成物は、腫瘍浸潤リンパ球（tumor infiltrating lymphocyte、ＴＩＬ）、ＴＣＲ（すなわち、非相同Ｔ細胞受容体）修飾されたリンパ球（例えば、ｅＴＣＲ  Ｔ細胞及びｃａＴＣＲ  Ｔ細胞）、及びＣＡＲ（すなわち、キメラ抗原受容体）修飾されたリンパ球（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞）からなる群から選択される細胞型を含む。別の実施形態では、養子細胞治療組成物は、Ｔ細胞、ＣＤ８＋細胞、ＣＤ４＋細胞、ＮＫ細胞、δγＴ細胞、制御性Ｔ細胞、及び末梢血単核細胞からなる群から選択される細胞型を含む。別の実施形態では、ＴＩＬ、Ｔ細胞、ＣＤ８＋細胞、ＣＤ４＋細胞、ＮＫ細胞、δγＴ細胞、制御性Ｔ細胞、又は末梢血単核細胞は、養子細胞治療組成物を形成する。一実施形態では、養子細胞治療組成物は、Ｔ細胞を含む。
【００８５】
いくつかの実施形態では、細胞内で発現される抗ＣＤ２２構築物は、ＣＡＲ（例えば、上述の「第１世代」、「第２世代」、又は「第３世代」ＣＡＲ）である。本開示の主題によると、本明細書で提供される遺伝子操作された免疫細胞のＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含む。
【００８６】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、ｃａＴＣＲである。上記で定義したように、ｃａＴＣＲは、２サブユニット構築物であり、それぞれのサブユニットは、膜貫通ドメイン（例えば、ＴＣＲ膜貫通ドメイン）に融合された、細胞膜に固定された抗体重鎖又は軽鎖に実質的に類似している。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、免疫細胞シグナル伝達ドメイン（例えば、共刺激ドメイン）を含まない。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ自体は、ＴＣＲ関連シグナル伝達分子（ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及び／又はＣＤ３ζなど）を含まず、少なくとも、機能性ではなく、又はその機能的フラグメントでもない。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、抗原特異性を提供する抗原結合モジュール（すなわち、細胞外抗原結合ドメイン）と、ＣＤ３動員及びシグナル伝達を可能にするＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）と、を含む。抗原結合モジュール（すなわち、細胞外抗原結合ドメイン）は、天然に存在するＴ細胞受容体抗原結合部分ではない。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュール（すなわち、細胞外抗原結合ドメイン）は、ＴＣＲＭ中のポリペプチド鎖のアミノ末端に連結されている。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュール（すなわち、細胞外抗原結合ドメイン）は、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。ＴＣＲＭは、αβＴＣＲ及び／又はγδＴＣＲなどの１つ以上のＴＣＲ（ＴＣＲ−ＴＭ）の膜貫通ドメインに由来する膜貫通モジュールを含み、任意選択的に、ＴＣＲの結合ペプチド若しくはそのフラグメント、及び／又は１つ以上のＴＣＲ細胞内ドメイン若しくはそのフラグメントのうちの一方又は両方を更に含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、２本のポリペプチド鎖を含み、それぞれのポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシ末端へと、結合ペプチド、膜貫通ドメイン、及び任意選択的にＴＣＲ細胞内ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、１つ以上の天然に存在しないＴＣＲドメインを含む。例えば、いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、１つ又は２つの天然に存在しないＴＣＲ膜貫通ドメインを含む。天然に存在しないＴＣＲドメインは、１つ以上のアミノ酸の置換によって、及び／又は対応するドメインの一部を別のＴＣＲ由来の類似ドメインの一部で代替することによって修飾された、天然に存在するＴＣＲの対応するドメインであり得る。ｃａＴＣＲは、第１及び第２のポリペプチド鎖を含むことができ、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖は共に、抗原結合モジュール及びＴＣＲＭを形成する。いくつかの実施形態では、第１及び第２のポリペプチド鎖は、別個のポリペプチド鎖であり、ｃａＴＣＲは、二量体などの多量体である。いくつかの実施形態では、第１及び第２のポリペプチド鎖は、ペプチド結合によって、又はジスルフィド結合などの別の化学結合によって、共有結合されている。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖は、少なくとも１つのジスルフィド結合によって連結されている。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、１つ以上のＴ細胞共刺激シグナル伝達配列を更に含む。ｃａＴＣＲの例は、例えば、国際公開第２０１７／０７０６０８号、及び２０１７年４月２６日出願の米国特許仮出願第６２／４９０，５７６号に記載されており、これらは共に参照によりその全体が本明細書に組み込まれている。
【００８７】
同等の：本明細書で使用するとき、互いに同一ではないが、それらを比較するには充分な類似性があり、それによって、観察された差異又は類似性に基づき合理的に結論を下すことができる、２つ以上の薬剤、実体、状況、条件のセットなどを指す。いくつかの実施形態では、条件、状況、個体、又は集団の同等のセットは、複数の実質的に同一の特徴及び１つ又は少数の異なる特徴によって特徴付けられる。当業者であれば、文脈において、２つ以上のかかる薬剤、実体、状況、条件のセットなどが、任意の所与の環境下で同等と見なされるためにはどの程度の同一性が必要とされるかを理解するであろう。例えば、当業者であれば、異なる状況、個体、若しくは集団のセットの下で、又はそれらによって得られた結果若しくは観察された事象の差異が、異なるそれらの特徴の変動によって引き起されるか、又はその変動を示唆するという合理的な結論を保証するのに十分な数及びタイプの実質的に同一の特徴によって特徴付けられる場合、状況、個体、又は集団のセットが互いに同等であることを認識するであろう。
【００８８】
対照：本明細書で使用するとき、それに対し結果が比較される標準である「対照」の当該技術分野において理解されている意味を指す。典型的には、対照を使用して、変数を単離し、かかる変数に関する結論を出すことにより、実験における完全性を増補する。いくつかの実施形態では、対照は、比較物を提供するために、試験反応又はアッセイと同時に行われる反応又はアッセイである。本明細書で使用するとき、「対照」は、「対照抗体」を指す場合もある。「対照抗体」は、本明細書に記載されるヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ＣＤＲ移植抗体、多重特異性抗体、若しくは二重特異性抗体、本明細書に記載されるものとは異なる抗体、又は親抗体であってもよい。１つの実験では、「試験」（すなわち、試験される変数）が適用される。第２の実験では、「対照」である、試験される変数は適用されない。いくつかの実施形態では、対照は、既存対照（すなわち、以前に行われた試験若しくはアッセイのもの、又は既に知られている量若しくは結果）である。いくつかの実施形態では、対照は、印刷された記録又は他の方法で保存された記録であるか、又はその記録を含む。対照は、陽性対照であってもよいか、又は陰性対照であってもよい。
【００８９】
〜に対応する：本明細書で使用するとき、対象のポリペプチド中のアミノ酸残基の位置／同一性を示す。当業者であれば、簡潔さのために、ポリペプチド中の残基は多くの場合、ポリペプチドに関した基準に基づいて正準番号付けシステムを使用して指定され、それによって、例えば、１９０位の残基に「対応する」アミノ酸は、実際には特定のアミノ酸鎖中の１９０番目のアミノ酸である必要はなく、むしろ基準ポリペプチド中の１９０番目に存在する残基に対応することを認識するであろう。当業者は、「対応する」アミノ酸を特定する方法を容易に理解するであろう。
【００９０】
検出実体／検出剤：本明細書で使用するとき、検出可能な任意の要素、分子、官能基、化合物、フラグメント、又は部分を指す。いくつかの実施形態では、検出実体は、単独で提供又は利用される。いくつかの実施形態では、検出実体は、別の薬剤と会合して（例えば、結合されて）提供され、かつ／又は利用される。検出実体の例としては、様々なリガンド、放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、１８Ｆ、１９Ｆ、３２Ｐ、３５Ｓ、１３５Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、６４Ｃｕ、１８７Ｒｅ、１１１Ｉｎ、９０Ｙ、９９ｍＴｃ、１７７Ｌｕ、８９Ｚｒなど）、蛍光色素（特定の例示的な蛍光色素については、以下を参照されたい）、化学発光剤（例えば、アクリジニウムエステル、安定化ジオキセタンなど）、生物発光剤、スペクトル分解可能無機蛍光半導体ナノ結晶（すなわち、量子ドット）、金属ナノ粒子（例えば、金、銀、銅、白金など）ナノクラスター、常磁性金属イオン、酵素（酵素の具体例については、以下を参照されたい）、比色標識（例えば、色素、コロイド金など）、ビオチン、ジオキシゲニン、ハプテン、及び抗血清又はモノクローナル抗体が利用可能なタンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９１】
エフェクタ機能：本明細書で使用するとき、抗体Ｆｃ領域とＦｃ受容体又はリガンドとの相互作用から生じる生化学的事象を指す。エフェクタ機能には、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞介在性貪食（ＡＤＣＰ）、及び補体介在性細胞傷害（ＣＭＣ）が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、エフェクタ機能は、抗原の結合後に作動するもの、抗原結合とは無関係に作動するもの、又はその両方である。
【００９２】
エフェクタ細胞：本明細書で使用するとき、１つ以上のエフェクタ機能を媒介する免疫系の細胞を指す。いくつかの実施形態では、エフェクタ細胞には、単球、マクロファージ、好中球、樹状細胞、好酸球、肥満細胞、血小板、大型顆粒リンパ球、ランゲルハンス細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球のうちの１つ以上を含んでもよいが、これらに限定されず、また、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、及びサルを含むが、これらに限定されない、任意の生物に由来し得る。
【００９３】
遺伝子操作された：本明細書で使用するとき、一般に、人の手によって操作された態様を指す。例えば、いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、自然にはその順序で共に連結されていない２つ以上の配列が、人の手によって操作され、遺伝子操作されたポリヌクレオチド中では互いに直接連結されている場合、「遺伝子操作された」と見なされ得る。いくつかの特定のこのような実施形態では、遺伝子操作されたポリヌクレオチドは、自然界において、第１のコード配列と操作的に関連して存在しているが、第２のコード配列とは操作的に関連して存在しておらず、人の手によって連結され、それによって、第２のコード配列とも操作的に関連させた、調節配列を含んでいてもよい。代替的に又は追加的に、いくつかの実施形態では、自然界では互いに連結していないポリペプチド要素又はドメインをそれぞれコードする第１及び第２の核酸配列は、単一の遺伝子操作されたポリヌクレオチド中では互いに連結されていてもよい。同様に、いくつかの実施形態では、細胞又は生物は、その遺伝子情報が変更されるように操作されている（例えば、以前には存在していなかった新たな遺伝物質が導入された、あるいは以前には存在していた遺伝物質が変更された又は除去された）場合には、「遺伝子操作された」と見なされ得る。一般的な方法であり、当業者に理解されているように、遺伝子操作されたポリヌクレオチド又は細胞の子孫は、実際の操作が従来の実体に対して行われたものだとしても、典型的には依然として「遺伝子操作された」と呼称される。更に、当業者には理解されるように、様々な技法が利用可能であり、それを介して、本明細書に記載される「遺伝子操作」が達成され得る。例えば、いくつかの実施形態では、「遺伝子操作」は、分析又は比較を実施するようにプログラムされた、あるいは別の方法で配列、改変などを分析、推奨、及び／又は選択するようにプログラムされたコンピュータシステムの使用を介した（例えば、核酸配列、ポリペプチド配列、細胞、組織、及び／又は生物の）選択又は設計を含んでいてもよい。）。代替的に又は追加的に、いくつかの実施形態では、「遺伝子操作」は、インビトロ化学合成法、及び／又は、例えば、核酸増幅（例えば、ポリメラーゼ連鎖反応を介したものなど）ハイブリダイゼーション、突然変異誘発、形質転換、トランスフェクションなどの組み換え核酸法、及び／又は様々な制御された交配法のうちのいずれかの使用を伴ってもよい。当業者には理解されるように、様々な確立されたそのような技術（例えば、組み換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、並びに組織培養及び形質転換（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクションなど）は、当該技術分野において周知であり、それらは本明細書全体をとおして引用及び／又は考察される様々な一般的かつより具体的な参照文献において記載されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２ｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８９）を参照されたい。
【００９４】
エピトープ：本明細書で使用するとき、免疫グロブリン（例えば、抗体又は受容体）結合成分によって特異的に認識される任意の部分を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、抗原上の複数の化学的原子又は基から構成されている。いくつかの実施形態では、このような化学的原子又は基は、抗原が関連する三次元構造をとるときに表面露出される。いくつかの実施形態では、このような化学的原子又は基は、抗原がそのような立体構造をとるとき、空間内で互いに物理的に近接している。いくつかの実施形態では、少なくともいくつかのこのような化学的原子は、基は、抗原が代替的な立体構造（例えば、直線化）をとるとき、互いに物理的に離れている。本発明のいくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物は、配列番号２０５の配列の少なくとも７個のアミノ酸（例えば、配列番号２０５の配列の少なくとも７個の連続するアミノ酸）を含むエピトープに結合する。本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物は、配列番号２０５の配列の７〜５０個のアミノ酸（例えば、７〜５０個の連続するアミノ酸）、例えば、配列番号２０５の配列の７〜４５個、７〜７〜４０個、７〜３５個、７〜３０個、７〜２５個、７〜２０個、７〜１５個、７〜１０個、１０〜５０個、１５〜５０個、２０〜５０個、２５〜５０個、３０〜５０個、３５〜５０個、４０〜５０個、４５〜５０個、１０〜４５個、１５〜４０個、２０〜３５個、又は２５〜３０個のアミノ酸を含むエピトープに結合してもよい。
【００９５】
賦形剤：本明細書で使用するとき、例えば、所望の粘稠度又は安定化効果を提供又は付与するために医薬組成物に含まれ得る非治療薬を指す。好適な医薬賦形剤としては、例えば、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、滑石、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが挙げられる。
【００９６】
発現カセット：本明細書で使用するとき、宿主細胞に導入されると、ＲＮＡ又はポリペプチドの転写及び／又は翻訳をそれぞれもたらす核酸構築物を指す。
【００９７】
非相同：本明細書で使用するとき、宿主細胞又は宿主生物において天然に存在しないポリヌクレオチド又はポリペプチドを指す。非相同ポリヌクレオチド又はポリペプチドは、周知の組み換え方法を用いて、例えば、プロモータに任意選択的に連結された非相同ポリヌクレオチドを含む発現カセットを使用して、宿主細胞又は宿主生物に導入されてもよい。
【００９８】
フレームワーク又はフレームワーク領域：本明細書で使用するとき、ＣＤＲを除いた、可変領域の配列を指す。ＣＤＲ配列は、異なるシステムによって決定され得るため、同様にフレームワーク配列もそれに応じて異なる解釈を受ける。６つのＣＤＲは、重鎖及び軽鎖上のフレームワーク領域を、それぞれの鎖上の４つのサブ領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４）に分割し、ここでＣＤＲ１は、ＦＲ１とＦＲ２との間、ＣＤＲ２は、ＦＲ２とＦＲ３との間、ＣＤＲ３は、ＦＲ３とＦＲ４との間に位置する。特定のサブ領域をＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、又はＦＲ４として指定することなくとも、他で言及されているように、フレームワーク領域とは、単一の天然に存在する免疫グロブリン鎖の可変領域内の混合ＦＲを表す。本明細書で使用するとき、ＦＲは、４つのサブ領域のうちの１つを表しており、例えば、ＦＲ１は、可変領域のアミノ末端に最も近く、かつＣＤＲ１に関しては５’である、第１のフレームワーク領域を表し、複数形ＦＲｓは、フレームワーク領域を構成するサブ領域のうちの２つ以上を表す。
【００９９】
宿主細胞：本明細書で使用するとき、外因性ＤＮＡが（組み換え又は他の方法で）導入された細胞を指す。本開示を読んだ当業者であれば、そのような用語が、特定の対象の細胞だけではなく、そのような細胞の子孫も指すことを理解するであろう。突然変異誘発又は環境の影響のいずれかにより後の世代においてある種の改変が生じ得るため、そのような子孫は、実際には、親細胞と同一でない場合もあるが、本明細書で使用するときは依然として、用語「宿主細胞」の範囲内に含まれる。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、外因性ＤＮＡ（例えば、組み換え核酸配列）を発現するのに好適な、生命界のいずれかから選択される原核細胞及び真核細胞を含む。例示的な細胞としては、原核生物及び真核生物（単細胞又は多細胞）の細胞、細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐｐ．、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐｐ．などの株）、マイコバクテリア細胞、真菌細胞、酵母細胞（例えば、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓ．ｐｏｍｂｅ、Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓ、Ｐ．ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａなど）、植物細胞、昆虫細胞（例えば、ＳＦ−９、ＳＦ−２１、バキュロウイルス感染昆虫細胞、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ  ｎｉなど）、非ヒト動物細胞、ヒト細胞、又は、例えば、ハイブリドーマ若しくはクアドローマなどの細胞融合体が挙げられる。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、ヒト、サル、類人猿、ハムスター、ラット、又はマウスの細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、真核細胞であり、以下の細胞から選択される：ＣＨＯ（例えば、ＣＨＯ  Ｋｌ、ＤＸＢ−１  １  ＣＨＯ、Ｖｅｇｇｉｅ−ＣＨＯ）、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ−７）、網膜細胞、Ｖｅｒｏ、ＣＶ１、腎臓（例えば、ＨＥＫ２９３、２９３  ＥＢＮＡ、ＭＳＲ  ２９３、ＭＤＣＫ、ＨａＫ、ＢＨＫ）、ＨｅＬａ、ＨｅｐＧ２、ＷＩ３８、ＭＲＣ  ５、Ｃｏｌｏ２０５、ＨＢ  ８０６５、ＨＬ−６０、（例えば、ＢＨＫ２１）、Ｊｕｒｋａｔ、Ｄａｕｄｉ、Ａ４３１（表皮）、ＣＶ−１、Ｕ９３７、３Ｔ３、Ｌ細胞、Ｃ１２７細胞、ＳＰ２／０、ＮＳ−０、ＭＭＴ  ０６０５６２、セルトリ細胞、ＢＲＬ  ３  Ａ細胞、ＨＴ１０８０細胞、骨髄腫細胞、腫瘍細胞、及び前述の細胞由来の細胞株。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、１つ以上のウイルス遺伝子、例えば、ウイルス遺伝子を発現する網膜細胞（例えば、ＰＥＲ．Ｃ６（商標）細胞）を含む。
【０１００】
ヒト抗体：本明細書で使用するとき、ヒト免疫グロブリン配列から生成される（又はアセンブルされる）可変領域及び定常領域を有する抗体を含むことが意図される。いくつかの実施形態では、抗体（又は抗体部分）は、例えば、１つ以上のＣＤＲ、特にＣＤＲ３において、それらのアミノ酸配列がヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列によりコードされていない残基又は要素を含む（例えば、インビトロの無作為若しくは部位特異的な突然変異誘発、又はインビボの体細胞突然変異により（元々）導入されていたであろう配列変異を含む）場合であっても、「ヒト」であると見なされる場合がある。ヒト抗体、ヒト抗体部分、及びそれらのフラグメントは、ヒト免疫細胞から単離されてもよいか、又は組み換え的に若しくは合成的（半合成的を含む）に生成されてもよい。
【０１０１】
ヒト化：当該技術分野において既知であるように、用語「ヒト化」は、そのアミノ酸配列が、非ヒト種（例えば、マウス）において産生された参照抗体に由来するＶＨ及びＶＬ領域配列を含むだけではなく、それら配列中に、より「ヒト様」、すなわち、ヒト生殖細胞系列可変配列とより類似させることを意図した参照抗体に対する改変もまた含む、抗体（又は部分）を指すために一般的に使用される。いくつかの実施形態では、「ヒト化」抗体（又は抗体部分）は、対象の抗原に免疫特異的に結合し、実質的にヒト抗体のアミノ酸配列と同様のアミノ酸配列を有するフレームワーク（ＦＲ）領域と、実質的に非ヒト抗体のアミノ酸配列と同様のアミノ酸配列を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）と、を有するものである。ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインのうちの実質的に全て（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦａｂＣ、Ｆｖ）を含み、それらにおいて、ＣＤＲ領域の全て又は実質的に全ては、非ヒト免疫グロブリン（すなわち、ドナー免疫グロブリン）のものに対応し、フレームワーク領域の全て又は実質的に全ては、ヒト免疫グロブリンのコンセンサス配列のものである。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖と、重鎖の少なくとも可変ドメインと、の両方を含有する。抗体はまた、重鎖定常領域のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、及び任意選択的にＣＨ４領域を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト化ＶＬ領域のみを含有する。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト化ＶＨ領域のみを含有する。いくつかの特定の実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト化ＶＨ及びヒト化ＶＬ領域を含有する。
【０１０２】
親水性：本明細書で使用するとき、用語「親水性」及び／又は「極性」は、水と混合するか、又は水に容易に溶解する傾向を指す。
【０１０３】
疎水性：本明細書で使用するとき、用語「疎水性」及び／又は「非極性」は、水に反発するか、水と結合しないか、又は水に容易に溶解できない傾向を指す。
【０１０４】
改善、増加、又は低減：本明細書で使用するとき、又はこれらの文法的に等価なものは、本明細書に記載される治療の開始前の同一個体における測定値、又は本明細書に記載される治療のない対照個体（又は複数の対照個体）における測定値などの基準測定値に対する値を示す。「対照個体」は、治療される個体と同じ形態の疾患又は損傷を患っている個体である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物を使用してＢ細胞悪性腫瘍を治療するための方法は、治療を受ける前の個体、又は対照個体と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、又は少なくとも９０％、個体における細胞アポトーシスを増加（例えば、ＣＤ２２＋腫瘍細胞アポトーシスを増加）させ得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物を使用してＢ細胞悪性腫瘍を治療するための方法は、治療を受ける前の個体、又は対照個体と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、又は少なくとも９０％、個体における腫瘍サイズを低減（例えば、ＣＤ２２＋腫瘍サイズを低減）させ得る。
【０１０５】
インビトロ：本明細書で使用するとき、多細胞生物体内ではなく、例えば、試験管中又は反応管中、細胞培養中などの人工的な環境中で発生する事象を指す。
【０１０６】
インビボ：本明細書で使用するとき、ヒト及び非ヒト動物などの多細胞生物体内で発生する事象を指す。細胞ベースシステムの文脈において、この用語は、（例えば、インビトロ系との対語として）生きている細胞内で発生する事象を指すために使用され得る。
【０１０７】
単離された：本明細書で使用するとき、（１）ある物質及び／又は実体が（自然界において、及び／又は実験的設定において）最初に生成されたときに関連付けられていた成分のうちの少なくとも一部から分離された、かつ／又は（２）人の手によって設計、生成、調製、及び／若しくは製造された、物質及び／又は実体を指す。単離された物質及び／又は実体は、それらが最初に関連付けられていた他の成分の約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約９９％超から分離されていてもよい。いくつかの実施形態では、単離された薬剤は、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約９９％超純粋である。本明細書で使用するとき、物質は、他の成分を実質的に含まない場合、「純粋」である。いくつかの実施形態では、当業者には理解されるように、物質は、例えば、１種類以上の担体又は賦形剤（例えば、緩衝液、溶媒、水など）のような特定の他の成分と組み合わされた後でも、依然として「単離された」又は更には「純粋」と見なされてもよく、このような実施形態では、物質の単離割合、又は純度は、そのような担体又は賦形剤を含まずに算出される。一例を挙げれば、いくつかの実施形態では、天然に存在するポリペプチド又はポリヌクレオチドなどの生物学的ポリマーは、ａ）その由来の起源又は源を理由として、自然界において、天然の状態で生物学的ポリマーに付随する成分の一部又は全てと関連付けられていない場合、ｂ）自然界において、生物学的ポリマーを生成する種と同じ種の他のポリペプチド又は核酸を実質的に含まない場合、ｃ）自然界において、生物学的ポリマーを生成する種のものではない細胞又は他の発現系に由来する成分によって発現されるか、又は他の方法でそれと関連付けられている場合、「単離された」と見なされる。したがって、例えば、いくつかの実施形態では、化学的に合成されるか、又は自然界においてそれを生成する細胞系とは異なる細胞システムで合成されるポリペプチドは、「単離された」ポリペプチドであると見なされる。代替的に又は追加的に、いくつかの実施形態では、１つ以上の精製技術が施されたポリペプチドは、ａ）自然界においてポリペプチドが関連付けられている、かつ／又はｂ）最初に生成されたときにポリペプチドが関連付けられている他の成分から分離されている限り、「単離された」ポリペプチドであると見なされてもよい。
【０１０８】
ＫＤ：本明細書で使用するとき、結合剤（例えば、抗体剤又はその結合成分）の、そのパートナー（例えば、抗体剤又はその結合成分が結合するエピトープ）との複合体からの解離定数を指す。
【０１０９】
ｋｏｆｆ：本明細書で使用するとき、結合剤（例えば、抗体剤又はその結合成分）の、そのパートナー（例えば、抗体剤又はその結合成分が結合するエピトープ）との複合体からの解離に対する速度定数を指す。
【０１１０】
ｋｏｎ：本明細書で使用するとき、結合剤（例えば、抗体剤又はその結合成分）の、そのパートナー（例えば、抗体剤又はその結合成分が結合するエピトープ）との会合に対する速度定数を指す。
【０１１１】
リンカー：本明細書で使用するとき、異なる要素を互いに繋ぐ、多要素ポリペプチドの部分を指すために使用される。例えば、当業者であれば、その構造が２つ以上の機能的ドメイン又は組織的ドメインを含むポリペプチドが、多くの場合、そのようなドメインの間に、それらドメインを互いに連結するアミノ酸のストレッチを含むことを理解するであろう。いくつかの実施形態では、リンカー要素を含むポリペプチドは、一般形態であるＳ１−Ｌ−Ｓ２の全体構造を有し、ここでＳ１及びＳ２は、同じであっても異なっていてもよく、リンカーによって互いに会合された２つのドメインを表す。いくつかの実施形態では、リンカーは、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００個以上のアミノ酸の長さである。いくつかの実施形態では、リンカーは、３〜７個のアミノ酸、７〜１５個のアミノ酸、又は２０〜３０個（例えば、２０〜２５個又は２５〜３０個）のアミノ酸を有する。いくつかの実施形態では、リンカーは、剛性の三次元構造をとる傾向はなく、むしろポリペプチドに柔軟性を与えるという点で特徴付けられている。当該技術分野において既知のポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）を遺伝子操作する際に適切に使用することができる様々な異なるリンカー要素（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：６４４４−６４４８、Ｐｏｌｊａｋ，Ｒ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１１２１−１１２３を参照されたい）。
【０１１２】
多価結合抗体（又は多重特異性抗体）：本明細書で使用するとき、２つ以上の抗原に結合することができる抗体を指し、それら抗原は、同じ分子上又は異なる分子上に存在し得る。本明細書に記載の多価結合抗体は、いくつかの実施形態では、２つ以上の抗原結合部位を有するよう遺伝子操作され、典型的には、天然に存在するタンパク質ではない。本明細書に記載の多価結合抗体は、２つ以上の関連標的又は非関連標的に結合することができる抗体を指す。多価結合抗体は、単一の抗体部分の複数のコピー、又は異なる抗体部分の複数のコピーから構成されていてもよい。このような抗体は、２つ以上の抗原に結合することができ、四価抗体又は多価抗体であってもよい。多価結合抗体は、例えば、免疫調節物質、毒素、又はＲＮａｓｅなどの治療薬を追加的に含んでいてもよい。本明細書に記載の多価結合抗体は、いくつかの実施形態では、異なる構造の少なくとも２つの標的、例えば、２つの異なる抗原、同一抗原上の２つの異なるエピトープ、又はハプテン及び／又は抗原若しくはエピトープ、に同時に結合することができる。本発明の多価結合抗体は、単一特異性（１つの抗原に結合可能）又は多重特異性（２つ以上の抗原に結合可能）であってもよく、２本の重鎖ポリペプチド及び２本の軽鎖ポリペプチドから構成されていてもよい。いくつかの実施形態では、それぞれの結合部位は、１つの抗原結合部位当たり、抗原結合に関与する総数で６つのＣＤＲを有する、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインから構成されている。
【０１１３】
核酸：本明細書で使用するとき、その最も広い意味で、オリゴヌクレオチド鎖に組み込まれているか、又はオリゴヌクレオチド鎖に組み込まれ得る任意の化合物及び／又は物質を指す。いくつかの実施形態では、核酸は、ホスホジエステル連結を介してオリゴヌクレオチド鎖に組み込まれているか、又は組み込まれ得る化合物及び／又は物質である。文脈から明らかなように、いくつかの実施形態では、「核酸」は、個々の核酸残基（例えば、ヌクレオチド及び／又はヌクレオシド）を指し、いくつかの実施形態では、「核酸」は、個々の核酸残基を含むオリゴヌクレオチド鎖を指す。いくつかの実施形態では、「核酸」は、ＲＮＡであるか、又はＲＮＡを含み、いくつかの実施形態では、「核酸」は、ＤＮＡであるか、又はＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上の天然核酸残基であるか、１つ以上の天然核酸残基を含むか、又は１つ以上の天然核酸残基からなる。いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上の核酸類似体であるか、１つ以上の核酸類似体を含むか、又は１つ以上の核酸類似体からなる。いくつかの実施形態では、核酸類似体は、ホスホジエステル骨格を利用しないという点で核酸とは異なる。例えば、いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上の「ペプチド核酸」であるか、１つ以上の「ペプチド核酸」を含むか、又は１つ以上の「ペプチド核酸」からなる。「ペプチド核酸」は、当該技術分野において既知であり、骨格中にホスホジエステル結合の代わりにペプチド結合を有しており、本発明の範囲内であると見なされる。代替的に又は追加的に、いくつかの実施形態では、核酸は、ホスホジエステル結合ではなく、１つ以上のホスホロチオエート連結及び／又は５’−Ｎ−ホスホロアミダイト連結を有する。
【０１１４】
いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上の天然ヌクレオシド（例えば、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウリジン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシグアノシン、及びデオキシシチジン）であるか、１つ以上の天然ヌクレオシドを含むか、又は１つ以上の天然ヌクレオシドからなる。いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上のヌクレオシド類似体（例えば、２−アミノアデノシン、２−チオチミジン、イノシン、ピロロ−ピリミジン、３−メチルアデノシン、５−メチルシチジン、Ｃ−５プロピニル−シチジン、Ｃ−５プロピニル−ウリジン、２−アミノアデノシン、Ｃ５−ブロモウリジン、Ｃ５−フルオロウリジン、Ｃ５−ヨードウリジン、Ｃ５−プロピニル−ウリジン、Ｃ５−プロピニル−シチジン、Ｃ５−メチルシチジン、２−アミノアデノシン、７−デアザアデノシン、７−デアザグアノシン、８−オキソアデノシン、８−オキソグアノシン、０（６）−メチルグアニン、２−チオシチジン、メチル化塩基、挿入塩基、及びこれらの組み合わせ）であるか、１つ以上のヌクレオシド類似体を含むか、又は１つ以上のヌクレオシド類似体からなる。いくつかの実施形態では、核酸は、天然核酸中のものと比較して、１つ以上の修飾糖（例えば、２’−フルオロリボース、リボース、２’−デオキシリボース、アラビノース、及びヘキソース）を含む。いくつかの実施形態では、核酸は、ＲＮＡ又はタンパク質などの機能性遺伝子産物をコードするヌクレオチド配列を有する。いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上のイントロンを含む。いくつかの実施形態では、核酸は、天然源からの単離、相補テンプレートに基づく重合による酵素合成（インビボ又はインビトロ）、組み換え細胞又は系内での複製、及び化学合成のうちの１つ以上によって調製される。いくつかの実施形態では、核酸は、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２０、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００個以上の残基長である。いくつかの実施形態では、核酸は、一本鎖であり、いくつかの実施形態では、核酸は、二本鎖である。いくつかの実施形態では、核酸は、ポリペプチドをコードする少なくとも１つの要素を含むヌクレオチド配列を有しているか、又はポリペプチドをコードする配列の相補体である。いくつかの実施形態では、核酸は、酵素活性を有する。
【０１１５】
操作可能に連結された：本明細書で使用するとき、記載の成分がそれらの意図された様式で機能することを許容する関係にある、並置を指す。コード配列に「操作可能に連結された」制御配列は、コード配列の発現が、制御配列と適合する条件下で達成されるようにライゲーションされる。「操作可能に連結された」配列は、対象遺伝子と隣接している発現制御配列と、当該対象遺伝子を制御するためにトランスで又は距離をとって作用する発現制御配列と、の両方を含む。本明細書で使用するとき、用語「発現制御配列」は、ポリヌクレオチド配列がライゲーションされるコード配列の発現及びプロセシングを生じさせるのに必要なポリヌクレオチド配列を指す。発現制御配列としては、適切な転写開始配列、終結配列、プロモータ配列、及びエンハンサー配列、スプライシングシグナル及びポリアデニレーションシグナルなどの効率的なＲＮＡプロセシングシグナル、細胞質ｍＲＮＡを安定化させる配列、翻訳効率を向上させる配列（すなわち、Ｋｏｚａｋコンセンサス配列）、タンパク質の安定性を向上させる配列、並びに所望により、タンパク質分泌を増強させる配列が挙げられる。このような制御配列の性質は、宿主生物によって異なる。例えば、原核生物では、このような制御配列は、一般的に、プロモータ、リボソーム結合部位、及び転写終結配列を含むが、真核生物では、典型的には、このような制御配列は、プロモータ及び転写終結配列を含む。用語「制御配列」は、その存在が発現及びプロセシングに必須である成分を含むことが意図されており、また、その存在が、例えば、リーダー配列及び融合パートナー配列に対して有利である追加の成分も含み得る。
【０１１６】
生理学的条件：本明細書で使用するとき、細胞又は生物が生存及び／又は繁殖する状態を指す、当該技術分野において理解されている意味を有する。いくつかの実施形態では、この用語は、生物又は細胞系に対して、自然界で発生し得る外部環境又は内部環境の条件を指す。いくつかの実施形態では、生理学的条件は、ヒト又は非ヒト動物の体内に存在する条件、特に手術部位及び／又は手術部位内に存在する条件である。生理的条件は、典型的には、例えば、２０〜４０℃の温度範囲、１の大気圧、６〜８のｐＨ、１〜２０ｍＭのグルコース濃度、大気中の酸素濃度、及び地上で直面する際の重力を含む。いくつかの実施形態では、実験室における条件は、生理学的条件で操作され、かつ／又は維持される。いくつかの実施形態では、生理学的条件は、生物中で直面する。
【０１１７】
ポリペプチド：本明細書で使用するとき、アミノ酸の任意のポリマー鎖を指す。いくつかの実施形態では、アミノ酸は、ペプチド結合又は修飾ペプチド結合によって互いに結合されている。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、天然に存在するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、天然に存在しないアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、合成的に設計され、かつ／又は生成されるという点で遺伝子操作されたアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、若しくはこれらの両方を含んでいてもよいか、又はこれらからなっていてもよい。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、天然アミノ酸のみ若しくは非天然アミノ酸のみを含んでいてもよいか、又はそれからなっていてもよい。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、Ｄ−アミノ酸、Ｌ−アミノ酸、又はこれらの両方を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、Ｄ−アミノ酸のみを含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、Ｌ−アミノ酸のみを含んでいてもよい。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、例えば、１つ以上のアミノ酸側鎖を修飾するか又はそれに付着される１つ以上のペンダント基又は他の修飾を、ポリペプチドのＮ末端に、ポリペプチドのＣ末端に、又はこれらの任意の組み合わせで含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、このようなペンダント基又は修飾は、アセチル化、アミド化、脂質化、メチル化、ＰＥＧ化など（それらの組み合わせを含む）からなる群から選択されてもよい。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、環状であってもよく、かつ／又は環状部分を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、環状ではなく、かつ／又は環状部分を全く含まない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、直線状である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ステープルポリペプチドであってもよいか、又はステープルポリペプチドを含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、用語「ポリペプチド」は、参照ポリペプチドの名称、活性、又は構造に付け加えられてもよく、このような場合、本明細書では、関連する活性又は構造を共有しているために同じクラス又はファミリーのポリペプチドのメンバーであると見なされ得るポリペプチドを指すために使用される。このようなクラスごとに、本明細書は、アミノ酸配列及び／又は機能が既知であるクラス内の例示的なポリペプチドを提供し、当業者もその例示的なポリペプチドを認識するであろう。いくつかの実施形態では、このような代表的なポリペプチドは、ポリペプチドクラスの参照ポリペプチドである。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、ポリペプチドクラス又はファミリーのメンバーは、そのクラスの参照ポリペプチドと、いくつかの実施形態では、クラス内の全てのポリペプチドと）、有意な配列相同性又は同一性を示し、共通の配列モチーフ（例えば、特徴的な配列要素）を共有し、かつ／又は（いくつかの実施態様では、同等のレベルで又は指定の範囲内で）共通の活性を共有している。例えば、いくつかの実施形態では、メンバーのポリペプチドは、少なくとも約３０〜４０％、かつ多くの場合、約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の参照ポリペプチドとの全体的な配列相同性又は同一性を示し、かつ／又は非常に高い、多くの場合９０％、又は更には９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％よりも高い、配列同一性を示す少なくとも１つの領域（すなわち、いくつかの実施形態では、特徴的な配列要素であってもよいか、又はその配列要素を含んでもよい保存領域）を含む。このような保存領域は、通常、少なくとも３〜４個、多くの場合、最大２０個以上のアミノ酸を包含し、いくつかの実施形態では、保存領域は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５個以上の連続するアミノ酸の少なくとも１つのストレッチを包含する。いくつかの実施形態では、有用なポリペプチドは、親ポリペプチドのフラグメントを含んでもよいか、又は親ポリペプチドのフラグメントからなっていてもよい。いくつかの実施形態では、有用なポリペプチドは、複数のフラグメントを含んでもよいか、又は複数のフラグメントからなっていてもよく、複数のフラグメントのそれぞれは、互いに対して、対象のポリペプチド中で見出される場合とは異なる空間配置で、同じ親ポリペプチド中に見出される（例えば、親に直接連結されたフラグメントは、対象のポリペプチド中では空間的に分離されている場合があり、逆もまた然りであり、かつ／又はフラグメントは、対象のポリペプチド中では、親における順序とは異なる順序で存在している場合がある）。そのため、対象のポリペプチドは、その親ポリペプチドの派生物である。
【０１２０】
予防する又は予防：本明細書で使用するとき、疾患、障害、及び／又は状態の発生に関連して使用される場合、疾患、障害、及び／若しくは状態を発現するリスクを低下させること、並びに／又は疾患、障害、若しくは状態の１つ以上の特徴若しくは症状の発症を遅延させることを指す。予防は、疾患、障害、又は状態の発症が所定の期間遅延された場合に、完全と見なされ得る。
【０１２１】
組み換え体：本明細書で使用するとき、組み換え手段によって設計、遺伝子操作、調製、発現、作製、又は単離されたポリペプチド（例えば、抗体又は抗体部分）を指すことが意図される。例えば、宿主細胞にトランスフェクトされた組み換え発現ベクターを用いて発現されたポリペプチド、組み換えコンビナトリアルヒトポリペプチドライブラリから単離されたポリペプチド（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  Ｈ．Ｒ．，１９９７，ＴＩＢ  Ｔｅｃｈ．１５：６２−７０、Ａｚｚａｚｙ  Ｈ．，ａｎｄ  Ｈｉｇｈｓｍｉｔｈ  Ｗ．Ｅ．，２００２，Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３５：４２５−４５、Ｇａｖｉｌｏｎｄｏ  Ｊ．Ｖ．，ａｎｄ  Ｌａｒｒｉｃｋ  Ｊ．Ｗ．，２００２，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ２９：１２８−４５、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  Ｈ．，ａｎｄ  Ｃｈａｍｅｓ  Ｐ．，２０００，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  ２１：３７１−８）、ヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離された抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２０：６２８７−９５、Ｋｅｌｌｅｒｍａｎｎ  Ｓ−Ａ．，ａｎｄ  Ｇｒｅｅｎ  Ｌ．Ｌ．，２００２，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１３：５９３−７、Ｌｉｔｔｌｅ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  ２１：３６４−７０、Ｍｕｒｐｈｙ，Ａ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１１１（１４）：５１５３−８を参照されたい）、又は選択された配列要素の相互スプライシングを伴う任意の他の手段によって調製、発現、作製、又は単離されたポリペプチドである。いくつかの実施形態では、このような選択された配列要素のうちの１つ以上は、自然界に存在する。いくつかの実施形態では、このような選択された配列要素のうちの１つ以上は、インシリコで設計される。いくつかの実施形態では、１つ以上のこのような選択された配列要素は、例えば、天然又は合成供給源からの、既知の配列要素の（例えば、インビボ又はインビトロの）突然変異誘発から生じる。例えば、いくつかの実施形態では、組み換え抗体は、対象の供給源生物（例えば、ヒト、マウスなど）の生殖系列中に存在する配列から構成されている。いくつかの実施形態では、組み換え抗体は、（例えば、トランスジェニック動物における、例えば、インビトロ又はインビボの）突然変異誘発から生じたアミノ酸配列を有しており、それによって、組み換え抗体のＶＨ領域及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、生殖系列のＶＨ配列及びＶＬ配列に由来し、かつそれに関連する一方で、その生殖系列抗体レパートリ内にインビボで天然に存在し得ない配列である。
【０１２２】
基準：本明細書で使用するとき、本明細書に記載されるようにそれに対して比較が行われる、標準、対照、又は他の適切な基準を記載する。例えば、いくつかの実施形態では、基準は、標準又は対照の薬剤、動物、個体、集団、試料、配列、一連の工程、条件のセット、又は値であり、それらに対して、対象の薬剤、動物、個体、集団、試料、配列、一連の工程、条件のセット、又は値の比較が行われる。いくつかの実施形態では、基準は、対象の試験又は決定と実質的に同時に試験され、かつ／又は決定される。いくつかの実施形態では、基準は、任意選択的に有形の培地中で実施される、履歴的基準である。典型的には、当業者には理解されるように、基準は、対象の評価に利用される条件と同等の条件下で決定されるか、又は特徴付けられる。
【０１２３】
特異的結合：本明細書で使用するとき、結合が生じる環境において可能なパートナーを識別する結合剤の能力を指す。他の潜在的な標的が存在するときに１つの特定の標的と相互作用する結合剤は、相互作用する標的に対して「特異的に結合する」と言われる。いくつかの実施形態では、特異的結合は、結合剤とそのパートナーとの会合の程度を検出又は決定することによって評価され、いくつかの実施形態では、特異的結合は、結合剤−パートナー複合体の解離の程度を検出又は決定することによって評価され、いくつかの実施形態では、特異的結合は、そのパートナーと他の実体との代替的相互作用と競合する結合剤の能力を検出又は決定することによって評価される。いくつかの実施形態では、特異的結合は、ある濃度の範囲にわたってそのような検出又は決定を行うことによって評価される。いくつかの実施形態では、特異的結合は、同種の標的と非同種の標的との間の結合親和性の差を決定することによって評価される。例えば、結合剤は、非同種の標的に対する結合親和性と比べて約３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍以上である、同種の標的に対する結合親和性を有していてもよい。
【０１２４】
特異性：当該技術分野において既知であるように、「特異性」は、結合パートナーを他の潜在的な結合パートナーと区別する、特定のリガンドの能力の尺度である。
【０１２５】
対象：本明細書で使用するとき、ヒトを含む任意の哺乳動物を意味する。本発明の特定の実施形態では、対象は、成人、若者、又は乳児である。いくつかの実施形態では、用語「個体」又は「患者」が使用され、「対象」と互換的であることが意図される。また、本発明により、子宮における医薬組成物の投与及び／又は治療の方法の実施が想定される。
【０１２６】
実質的に：本明細書で使用するとき、用語「実質的に」は、対象の特徴又は特性の全て又はほぼ全ての範囲又は程度を示す定性的な状態を指す。生物分野の当業者であれば、生物学的現象及び化学的現象は、完了にまで進行すること、及び／又は完全性にまで進展すること、又は完全な結果に達すること、若しくはそれを回避することが仮にあったとしても稀であることを理解するであろう。したがって、用語「実質的に」は、本明細書では、多くの生物学的現象及び化学的現象に固有の、完全性の潜在的な欠如を捕捉するために使用される。
【０１２７】
実質的な配列相同性：本明細書で使用するとき、文言「実質的な相同性」は、アミノ酸配列間又は核酸配列間の比較を指す。当業者には理解されるように、２つの配列は、対応する位置に相同な残基を含有する場合、「実質的に相同」であると一般的に見なされる。相同の残基は、同一の残基であってもよい。あるいは、相同の残基は、適切に類似した構造特性及び／又は機能特性を有する非同一の残基であってもよい。例えば、当業者に周知であるように、特定のアミノ酸は、典型的には、「疎水性」若しくは「親水性」のアミノ酸として分類され、かつ／又は「極性」若しくは「非極性」の側鎖を有するものとして分類される。１つのアミノ酸を同じ種類の別のアミノ酸で置換することは、多くの場合、「相同な」置換であると見なされ得る。典型的なアミノ酸の分類は、以下のとおり要約される。
【０１２８】
【表２】
2021528995.tif 000004
【０１２９】
【表３】
2021528995.tif 000005
【０１３０】
当該技術分野において周知であるように、アミノ酸配列又は核酸配列は、例えば、ヌクレオチド配列に対してはＢＬＡＳＴＮ、アミノ酸配列に対してはＢＬＡＳＴＰ、ギャップ化ＢＬＡＳＴ、及びＰＳＩ−ＢＬＡＳＴなどの市販のコンピュータプログラムにおいて利用可能なものを含む、様々なアルゴリズムのうちのいずれかを使用して比較することができる。このようなプログラムの例は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５（３）：４０３−４１０、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ２６６：４６０−４８０、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２、Ｂａｘｅｖａｎｉｓ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｗｉｌｅｙ，１９９８、及びＭｉｓｅｎｅｒ，ｅｔ  ａｌ，（ｅｄｓ．），Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１３２），Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，１９９９に記載されている。相同な配列を特定することに加えて、上記のプログラムは、典型的には、相同性の程度の指標を提供する。いくつかの実施形態では、２つの配列は、その対応する残基の少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％以上が、残基の関連するストレッチにわたって相同である場合に、実質的に相同であると見なされる。いくつかの実施形態では、関連するストレッチは、完全な配列である。いくつかの実施形態では、関連するストレッチは、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９５、少なくとも１００、少なくとも１２５、少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２２５、少なくとも２５０、少なくとも２７５、少なくとも３００、少なくとも３２５、少なくとも３５０、少なくとも３７５、少なくとも４００、少なくとも４２５、少なくとも４５０、少なくとも４７５、少なくとも５００個以上の残基である。
【０１３１】
表面プラズモン共鳴：本明細書で使用するとき、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅシステム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ  ａｎｄ  Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ）を使用することなどによって、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化を検出することにより、特異的結合の相互作用をリアルタイムで分析することを可能にする光学現象を指す。更なる説明については、Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｕ．ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ａｎｎ．Ｂｉｏｌ．Ｃｌｉｎ．５１：１９−２６、Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｕ．ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １１：６２０−６２７、Ｊｏｈｎｓｓｏｎ，Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．８：１２５−１３１、及びＪｏｈｎｎｓｏｎ，Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８：２６８−２７７により記載されている。
【０１３２】
治療薬：本明細書で使用するとき、一般に、生物に投与されたときに所望の薬理効果を引き出す任意の薬剤を指す。いくつかの実施形態では、薬剤は、適切な集団にわたって統計的に有意な効果を示す場合、治療薬であると見なされる。いくつかの実施形態では、適切な集団は、モデル生物の集団であってもよい。いくつかの実施形態では、適切な集団は、特定の年齢群、性別、遺伝的背景、既存の臨床状態などの様々な基準によって定義され得る。いくつかの実施形態では、治療薬は、疾患、障害、及び／又は状態の１つ以上の症状又は特徴の軽減、改善、緩和、阻害、予防、発症の遅延、重症度の低減、及び／又は発生率の低減に使用することができる物質である。いくつかの実施形態では、「治療薬」は、ヒトへの投与のために市販され得る前に政府機関によって承認されているか、又は承認される必要がある薬剤である。いくつかの実施形態では、「治療薬」は、ヒトへの投与のために医療処方が必要とされる薬剤である。
【０１３３】
治療的に有効な量：本明細書で使用するとき、そのために投与が実施される所望の効果をもたらす量を意味する。いくつかの実施形態では、この用語は、治療的投与レジメンに従って、疾患、障害、及び／又は状態に罹患しているか、又はそれらに対して感受性がある集団に投与した場合に、その疾患、障害、及び／又は状態を治療するのに十分な量を指す。いくつかの実施形態では、治療的に有効な量は、疾患、障害、及び／又は状態のうちの１つ以上の症状の発生率及び／又は重症度を低下させ、かつ／又はそれらの発症を遅延させるものである。当業者であれば、用語「治療的に有効な量」は、実際には、特定の個体における治療成功の達成が必須ではないことを理解するであろう。むしろ、治療的に有効な量は、そのような治療を必要とする患者に投与された場合に、有意な数の対象において特定の所望の薬理反応をもたらす量であってもよい。いくつかの実施形態では、治療的に有効な量への言及は、１つ以上の特定の組織（例えば、疾患、障害、又は状態によって影響を受ける組織）又は流体（例えば、血液、唾液、血清、汗、涙、尿など）において測定されたときの量への言及であり得る。当業者であれば、いくつかの実施形態では、治療的に有効な量の特定の薬剤又は治療が、単一用量で製剤化され、かつ／又は投与されてもよいことを理解するであろう。いくつかの実施形態では、治療的に有効な薬剤は、例えば、投与レジメンの一部として、複数用量で製剤化され、かつ／又は投与されてもよい。
【０１３４】
治療：本明細書で使用するとき、用語「治療」（また、「治療する」又は「治療すること」）は、その最も広い意味で、特定の疾患、障害、及び／又は状態のうちの１つ以上の症状、特徴、及び／又は原因の、部分的又は完全な、軽減、改善、緩和、阻害、発症の遅延、重症度の低減、及び／又は発生率の低減をもたらす物質（例えば、提供される組成物）の任意の投与を指す。いくつかの実施形態では、そのような治療は、関連する疾患、障害、及び／若しくは状態の兆候を示していない対象、並びに／又は疾患、障害、及び／若しくは状態の早期兆候のみを示している対象に実施されてもよい。代替的に又は追加的に、いくつかの実施形態では、治療は、関連する疾患、障害、及び／又は状態のうちの１つ以上の確立された兆候を示す対象に実施されてもよい。いくつかの実施形態では、治療は、関連する疾患、障害、及び／又は状態に罹患していると診断された対象の治療であってもよい。いくつかの実施形態では、治療は、関連する疾患、障害、及び／又は状態の発症リスクの増加と統計的に相関する、１つ以上の感受性因子を有することが知られている対象の治療であってもよい。
【０１３５】
変異体：本明細書で使用するとき、用語「変異体」は、参照実体と有意な構造的同一性を示すが、参照実体と比較した際、１つ以上の化学部分の存在又はレベルにおいて参照実体とは構造的に異なる、実体を指す。多くの実施形態では、変異体はまた、参照実体とは機能的に異なる。一般に、特定の実体が、参照実体の「変異体」であると適切に見なされるかどうかは、参照実体との構造的同一性の程度に基づく。当業者には理解されるように、任意の生物学的参照実体又は化学的参照実体は、特定の特徴的な構造要素を有する。変異体は、定義によれば、１つ以上のそのような特徴的な構造要素を共有する別個の化学物質である。いくつかではあるが例を挙げると、ポリペプチドは、直鎖若しくは三次元空間において互いに対して指定された位置を有し、かつ／又は特定の生物学的機能に寄与する、複数のアミノ酸で構成される特徴的な配列要素を有していてもよく、核酸は、直鎖若しくは三次元空間において互いに対して指定された位置を有する、複数のヌクレオチド残基で構成される特徴的な配列要素を有していてもよい。例えば、変異体ポリペプチドは、アミノ酸配列における１つ以上相違の結果、及び／又はポリペプチド骨格に共有結合した化学部分（例えば、炭水化物、脂質など）における１つ以上の相違の結果として、参照ポリペプチドと異なっていてもよい。いくつかの実施形態では、変異体ポリペプチドは、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、又は９９％である、参照ポリペプチドとの全体的な配列同一性を示す。代替的に又は追加的に、いくつかの実施形態では、変異体ポリペプチドは、参照ポリペプチドと、少なくとも１つの特徴的な配列要素を共有しない。
【０１３６】
いくつかの実施形態では、参照ポリペプチドは、１つ以上の生物活性を有する。いくつかの実施形態では、変異体ポリペプチドは、参照ポリペプチドの生物活性のうちの１つ以上を共有する。いくつかの実施形態では、変異体ポリペプチドは、参照ポリペプチドの生物活性のうちの１つ以上を欠いている。いくつかの実施形態では、変異体ポリペプチドは、参照ポリペプチドと比較して、１つ以上の生物活性のレベルが低下していることを示す。多くの実施形態では、対象のポリペプチドが、特定の位置での少数の配列改変を除いて親のアミノ酸配列と同一である場合、対象のポリペプチドは、親又は参照ポリペプチドの「変異体」であると見なされる。典型的には、親と比較して、変異体中の残基の２０％、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％未満が置換される。いくつかの実施形態では、変異体は、親と比較して、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１個の置換残基を有する。多くの場合、変異体は、非常に少数の（例えば、５、４、３、２、又は１未満の）数の置換された機能的残基（すなわち、特定の生物活性に関与する残基）を有する。更に、変異体は、典型的には、親と比較して、５、４、３、２、又は１個以下の挿入又は欠失を有し、多くの場合、挿入又は欠失を有さない。更に、任意の付加又は欠失は、典型的には、約２５、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、約１３、約１０、約９、約８、約７、約６個の残基よりも少なく、一般に、約５、約４、約３、又は約２個の残基よりも少ない。いくつかの実施形態では、親ポリペプチド又は参照ポリペプチドは、自然界に存在すものである。当業者には理解されるように、対象の特定のポリペプチドの複数の変異体は、特に対象のポリペプチドが感染性病原体ポリペプチドである場合、一般に、自然界に存在し得る。
【０１３７】
ベクター：本明細書で使用するとき、核酸分子であって、自身が連結されている別の核酸を輸送することができるものを指す。ベクターの１つの型は、「プラスミド」であり、追加のＤＮＡセグメントがライゲーションされ得る環状の二本鎖ＤＮＡループを指す。ベクターの別の型は、ウイルスベクターであり、追加のＤＮＡセグメントは、ウイルスゲノム内にライゲーションされ得る。特定のベクターは、自身が導入される宿主細胞において自律的に複製することができる（例えば、細菌起源の複製を有する細菌ベクター、及びエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入の際に宿主細胞のゲノムに組み込むことができ、それによって宿主ゲノムと共に複製される。更に、特定のベクターは、自身が機能的に連結される遺伝子の発現を指示することができる。このようなベクターは、本明細書では「発現ベクター」と称される。
【０１３８】
野生型：本明細書で使用するとき、用語「野生型」は、当該技術分野において理解されている意味を有し、「正常な」（突然変異の、変異の、疾患のある、改変された、などの対照語として）状態又は文脈において自然界に存在するような構造及び／又は活性を有する実体を指す。当業者であれば、野生型の遺伝子及びポリペプチドは、多くの場合、複数の異なる形態（例えば、アレル）で存在することを理解するであろう。
【図面の簡単な説明】
【０１３９】
【図１】完全長ＣＤ２２のみに結合する市販のマウス抗ヒトＣＤ２２抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社、カタログ番号３６３５０５）の代表的なＭＦＩを示す図である。完全長ＣＤ２２は、Ｊｕｒｋａｔ細胞（Ｂ）及びＲａｊｉ細胞（Ｄ）で発現される。
【図２】フローサイトメトリーアッセイにおいて、完全長ＣＤ２２（Ｊｕｒｋａｔ−ＣＤ２２−ｆｕｌｌ）又はＣＤ２２のドメイン５〜７（Ｊｕｒｋａｔ−ＣＤ２２（Ｄ５〜Ｄ７）−ＧＦＰ）を発現するヒトＣＤ２２＋Ｒａｊｉ細胞（Ｒａｊｉ）及びＪｕｒｋａｔ細胞のファージクローン１及び２の結合の代表的なＭＦＩを示す図である。ＣＤ２２−Ｊｕｒｋａｔ細胞は、陰性対照として使用した。
【図３】フローサイトメトリーアッセイにおいて、ＣＤ２２を自然に発現するＮＡＬＭ−６細胞のファージクローン１及び２の結合の代表的なＭＦＩを示す図である。
【図４Ａ】ＩＦＮ−γ放出アッセイによって測定した際に、抗ＣＤ２２  ＣＡＲ（クローン２）が、ＣＤ２２＋標的細胞に対して特異的かつ強力な殺傷活性を示したことを示す図である。
【図４Ｂ】ＩＦＮ−γ放出アッセイによって測定した際に、抗ＣＤ２２  ＣＡＲ（クローン２）が、ＣＤ２２＋標的細胞に対して特異的かつ強力な殺傷活性を示したことを示す図である。
【図４Ｃ】ＩＦＮ−γ放出アッセイによって測定した際に、抗ＣＤ２２  ＣＡＲ（クローン２）が、ＣＤ２２＋標的細胞に対して特異的かつ強力な殺傷活性を示したことを示す図である。
【図５Ａ】抗ＣＤ２２  ＣＡＲ（クローン２）が、Ｋ５６２＋ＣＤ２２標的細胞に対して特異的な殺傷を示し、Ｋ５６２細胞に対して殺傷を示さなかったことを示す図である。
【図５Ｂ】抗ＣＤ２２  ＣＡＲ（クローン２）が、Ｋ５６２＋ＣＤ２２標的細胞に対して特異的な殺傷を示し、Ｋ５６２細胞に対して殺傷を示さなかったことを示す図である。
【図６】フローサイトメトリーによって測定した際に、ｍ９７１が、抗ＣＤ２２  ＣＡＲ（クローン２）と競合しないことを示す図である。
【図７】構築物２及び４、並びに構築物の組み合わせ１、３、５、及び６のうちのいずれか１つを発現するｃａＴＣＲ  Ｔ細胞が、ＮＡＬＭ６細胞及びＲａｊｉ細胞の両方において高い殺傷効能を有していたことを示す図である。
【図８】構築物２及び４、並びに構築物の組み合わせ１、３、５、及び６のうちのいずれか１つを発現するｃａＴＣＲ  Ｔ細胞が、ＮＡＬＭ６及びＲａｊｉ細胞からの高いＩＦＮ−γ放出レベルを有していたことを示す図である。
【図９Ａ】構築物２及び４、並びに構築物の組み合わせ３、５、及び６のうちのいずれか１つを発現する抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞が、ＮＡＬＭ６細胞において、最大で少なくとも３週間、及び３回以上の標的係合の後に、高い殺傷効能を維持していたことを示す図である。図９Ａは、標的細胞数を示し、図９Ｂは、全細胞数を示している。
【図９Ｂ】構築物２及び４、並びに構築物の組み合わせ３、５、及び６のうちのいずれか１つを発現する抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞が、ＮＡＬＭ６細胞において、最大で少なくとも３週間、及び３回以上の標的係合の後に、高い殺傷効能を維持していたことを示す図である。図９Ａは、標的細胞数を示し、図９Ｂは、全細胞数を示している。
【図１０Ａ】構築物２及び４、並びに構築物の組み合わせ１、３、５、及び６のうちのいずれか１つを発現する抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞が、Ｒａｊｉ細胞において、最大で約５週間、及び合計５回の標的係合の後に、有意な殺傷効能を有していたことを示す図である。
【図１０Ｂ】構築物２及び４、並びに構築物の組み合わせ１、３、５、及び６のうちのいずれか１つを発現する抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞が、Ｒａｊｉ細胞において、最大で約５週間、及び合計５回の標的係合の後に、有意な殺傷効能を有していたことを示す図である。
【図１１】構築物２、１５〜２１、及び２２のうちのいずれか１つを発現するｃａＴＣＲ  Ｔ細胞が、ＮＡＬＭ６細胞、Ｒａｊｉ細胞、及びＫ５６２細胞において、高い殺傷効能を有していたことを示す図である。
【図１２】Ａ〜Ｆは、構築物２、２２、２４〜２７、及び２８のうちのいずれか１つを発現するｃａＴＣＲ  Ｔ細胞が、ＮＡＬＭ６細胞、Ｒａｊｉ細胞、及びＫ５６２細胞において、高い殺傷効能を有していたことを示す図である。
【図１３Ａ】構築物の組み合わせ１及び２３のうちのいずれか１つを発現する抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞が、ＮＡＬＭ６細胞において、高い殺傷効能を維持していたことを示す図である。
【図１３Ｂ】構築物の組み合わせ１及び２３のうちのいずれか１つを発現する抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞が、ＮＡＬＭ６細胞において、高い殺傷効能を維持していたことを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【０１４０】
本発明は、ＣＤ２２の細胞外領域に特異的に結合する能力を有する抗ＣＤ２２構築物の発見に関する。本発明はまた、Ｂ細胞悪性疾患（例えば、ＣＤ２２＋Ｂ細胞悪性疾患）を治療するためのそのような構築物の使用も提供する。
Ｉ．ＣＤ２２
【０１４１】
表面抗原分類２２又はＣＤ２２は、Ｂ細胞の分化の成熟段階の間にのみ発現される１３５−ｋＤａシアル酸結合細胞表面受容体である（Ｄｏｒｋｅｎ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３６：４４７０，１９８６）。ヒトにおけるＣＤ２２の主要な形態は、ＣＤ２２βであり、７つのドメインを含有している（Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１３７，１９９１）。変異型であるＣＤ２２αは、ドメイン３及び４を欠いている（Ｓｔａｍｅｎｋｏｖｉｃ  ａｎｄ  Ｓｅｅｄ，Ｎａｔｕｒｅ  ３４５：７４，１９９０）。ヒトＣＤ２２へのリガンド結合は、ドメイン１及び２（エピトープ１及び２とも呼ばれる）と関係していることが示されている（Ｅｎｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８１：１５８１，１９９５）。完全長ヒトＣＤ２２のアミノ酸配列を、以下の配列番号２０４に示す。配列番号２０５は、抗ＣＤ２２クローン１及びクローン２が結合する、ＣＤ２２のドメイン５〜７を含有する細胞外領域を更に示している（実施例１を参照されたい）。抗ＣＤ２２クローン１は、配列番号２０６〜２０８の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１〜３と、配列番号２０９〜２１１の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１〜３と、を含む。抗ＣＤ２２クローン２は、配列番号２１４〜２１６の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１〜３と、配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１〜３と、を含む。
配列番号２０４（完全長ヒトＣＤ２２、下線部：実施例１に記載のファージディスプレイにおいて使用されるＣＤ２２の部分、太字下線部：ＣＤ２２の膜貫通ドメイン）：
【０１４２】
【表４】
2021528995.tif 000006
配列番号２０５（ＣＤ２２のドメイン５〜７を含有する細胞外領域、配列番号２０４のアミノ酸４１４〜６８７に対応する）：
ＤＶＱＹＰＰＫＫＶＴＴＶＩＱＮＰＭＰＩＲＥＧＤＴＶＴＬＳＣＮＹＮＳＳＮＰＳＶＴＲＹＥＷＫＰＨＧＡＷＥＥＰＳＬＧＶＬＫＩＱＮＶＧＷＤＮＴＴＩＡＣＡＡＣＮＳＷＣＳＷＡＳＰＶＡＬＮＶＱＹＡＰＲＤＶＲＶＲＫＩＫＰＬＳＥＩＨＳＧＮＳＶＳＬＱＣＤＦＳＳＳＨＰＫＥＶＱＦＦＷＥＫＮＧＲＬＬＧＫＥＳＱＬＮＦＤＳＩＳＰＥＤＡＧＳＹＳＣＷＶＮＮＳＩＧＱＴＡＳＫＡＷＴＬＥＶＬＹＡＰＲＲＬＲＶＳＭＳＰＧＤＱＶＭＥＧＫＳＡＴＬＴＣＥＳＤＡＮＰＰＶＳＨＹＴＷＦＤＷＮＮＱＳＬＰＹＨＳＱＫＬＲＬＥＰＶＫＶＱＨＳＧＡＹＷＣＱＧＴＮＳＶＧＫＧＲＳＰＬＳＴＬＴＶＹＹＳＰＥＴＩＧＲＲ
【０１４３】
ＣＤ２２は、様々な癌、例えば、Ｂ細胞関連癌に関与してきた。Ｂ細胞関連癌としては、悪性リンパ腫（非ホジキンリンパ腫）、多発性骨髄腫、及び慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ、Ｂ細胞白血病（ＣＤ５＋Ｂリンパ球））が挙げられるが、これらに限定されない。ＣＤ２２発現は、限界希釈試験により確立されたヒト急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）−マウス異種移植片において再現され、ＣＤ２２が白血病開始細胞で発現され得る可能性を引き起こしている（Ｍｏｒｉｓｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２４：１８５９，２０１０）。更に、ＣＤ２２発現は、４５人の患者の連続研究（３９人が抗ＣＤ２２指向療法で治療された）において維持されることが見出され、これは、ＣＤ２２−Ｂ細胞前駆体急性リンパ芽球性白血病（ＢＣＰ−ＡＬＬ）の発症が珍しいことを示唆している（Ｍｏｒｉｓｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２４：１８５９，２０１０）。ＢＣＰ−ＡＬＬにおけるＣＤ２２の標的化の適合性について試験した（Ｈａｓｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １２１：１１６５，２０１３）。ＢＣＰ−ＡＬＬを有する１１１人の患者からのリンパ芽球をＣＤ２２発現についてアッセイし、全員がＣＤ２２陽性であり、平均ＣＤ２２発現レベルが３５００部位／細胞であることが見出された。
【０１４４】
更に、ＣＤ２２は、非ホジキンリンパ腫集団の９０％超で高度に発現される（Ｃｅｓａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １００：３５０ａ，２００２）。Ｂリンパ球から主に生じる癌の異種群であるＮＨＬは、全ての新たに診断された癌のおよそ４％を示す（Ｊｅｍａｌ  ｅｔ  ａｌ．，ＣＡ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ  Ｃｌｉｎ，５２：２３，２００２）。攻撃型ＮＨＬは、成人ＮＨＬのおよそ３０〜４０％を占めており（Ｈａｒｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｅｍａｔｏｌ  Ｊ．１：５３，２００１）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、及び未分化大細胞型リンパ腫を含む。最前線の併合化学療法は、攻撃型ＮＨＬを有する患者の半数未満のみしか治療することができず、多くの患者は、最終的にその疾患に倒れている（Ｆｉｓｈｅｒ，Ｏｎｃｏｌ．２７（ｓｕｐｐｌ  １２）：２，２０００）。アポトーシスを予防することによってＣＤ２２発現がＢ細胞が腫瘍化することを可能にし得る証拠もまた存在する（Ｏｔｉｐｏｂｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄ）３８４：６３４，１９９６）。ＣＤ２２は、Ｂ細胞活性化複合体の成分として（Ｓａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｍｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０：２８７，１９９８）、かつ接着分子として（Ｅｎｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：４７１９，１９９３）。その天然リガンドとの結合後、ＣＤ２２は、急速に内部に取り入れられ、初代Ｂ細胞中に共刺激シグナルを、新生物のＢ細胞にアポトーシス促進性シグナルを、提供する（Ｓａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ５：５５１，１９９６）。
ＩＩ．抗ＣＤ２２構築物及び構築物の組み合わせ
【０１４５】
一態様では、本発明は、表面抗原分類２２（ＣＤ２２）に特異的に結合する（すなわち、配列番号２０５の配列又はその一部に結合する）抗体部分を含む、抗ＣＤ２２構築物を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、単離された抗ＣＤ２２構築物である。抗ＣＤ２２構築物の特異性は、ＣＤ２２に特異的に結合する（すなわち、配列番号２０５の配列又はその一部に結合する）、完全長抗体又はその抗原結合フラグメントなどの、抗ＣＤ２２抗体部分に由来する。企図される抗ＣＤ２２構築物には、例えば、完全長抗ＣＤ２２抗体、（二重特異性などの）多重特異性抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ２２キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、抗ＣＤ２２キメラ抗体−Ｔ細胞受容体（ｃａＴＣＲ）、抗ＣＤ２２キメラ共刺激受容体（ＣＳＲ）、及び抗ＣＤ２２免疫コンジュゲートが含まれる。本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物は、完全長抗ＣＤ２２抗体又は（二重特異性などの）多重特異性抗ＣＤ２２抗体である抗体部分を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物は、完全長抗ＣＤ２２抗体又は（二重特異性などの）多重特異性抗ＣＤ２２抗体である抗体部分であってもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物は、抗ＣＤ２２キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又は抗ＣＤ２２免疫コンジュゲートであってもよい。
【０１４６】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、多重特異性（例えば、二重特異性）であり得る。多重特異性抗ＣＤ２２構築物は、１つより多い標的に対して抗体部分を有する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＣＤ２２構築物は、ＣＤ２２に対して１つの抗体部分と、１つ以上の非ＣＤ２２抗原（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、Ｂ細胞悪性腫瘍で発現される非ＣＤ２２抗原）に対して１つ以上の追加の抗体部分を有する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＣＤ２２構築物は、二重特異性、三重特異性、四重特異性、又は五重特異性であり得る。いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＣＤ２２構築物は、ｃａＴＣＲ、ＣＳＲ、ＣＡＲ、完全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体、タンデムｓｃＦｖ、ダイアボディ（Ｄｂ）、一本鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、二重親和性再標的化（ＤＡＲＴ）抗体、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）抗体、ノブ・イントゥ・ホール（ＫｉＨ）抗体、ドックアンドロック（ＤＮＬ）抗体、化学的に架橋された抗体、ヘテロマルチマー抗体、又はヘテロ結合抗体であり得る。
【０１４７】
本発明は、抗ＣＤ２２構築物と、ＣＤ２２関連疾患を治療するためにこのような抗体を使用する方法と、を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物は、配列番号２０５の配列中のエピトープを認識し、それに結合する。抗ＣＤ２２構築物は、配列番号２０５の配列中の、少なくとも７個のアミノ酸（例えば、少なくとも８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、又は４０個のアミノ酸）を含む、エピトープに結合していてもよい。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、配列番号２の配列中の、少なくとも７個の連続するアミノ酸（例えば、少なくとも８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、又は４０個のアミノ酸）を含む、エピトープに結合していてもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物は、配列番号２０５の配列に結合する。本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物は、完全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体である抗体部分を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物は、完全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体であってもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物は、ｓｃＦｖ抗体であってもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、又はそのフラグメントからなる群から選択される抗体クラス（すなわち、アイソタイプ）のメンバーである抗体部分を含んでいてもよい。
【０１４８】
抗ＣＤ２２構築物は、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体部分を含んでいてもよく、抗体部分は、本明細書に記載されるような１つ以上のＣＤＲ、重鎖可変領域、及び／又は軽鎖可変領域を含む。一実施形態では、ＣＤ２２に特異的に結合する（すなわち、配列番号２０５の配列又はその一部に結合する）抗ＣＤ２２構築物は、抗体部分を含む。抗体部分は、（１）軽鎖相補性決定領域（ＬＣ−ＣＤＲ）１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、（２）重鎖相補性決定領域（ＨＣ−ＣＤＲ）１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、を含む。抗体部分は、ＳＳＮＩＧＮＮＹ（配列番号２０６）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＥＮＮ（配列番号２０７）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２、ＧＴＷＤＳＳＬＳＡＧＡＶ（配列番号２０８）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３、ＧＦＴＦＳＮＹＡ（配列番号２０９）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＩＳＧＳＧＧＳＴ（配列番号２１０）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２、及びＡＲＰＹＹＤＤ（配列番号２１１）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、配列番号２０６〜２１１の配列を含む。
【０１４９】
いくつかの実施形態では、配列番号２０６の配列のＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号２０７の配列のＬＣ−ＣＤＲ２、及び配列番号２０８の配列のＬＣ−ＣＤＲ３を有する本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物の抗体部分は、
ＱＳＶＶＴＱＰＰＳＶＳＡＡＰＧＱＫＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＹＶＳＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＥＮＮＫＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＴＬＧＩＴＧＬＱＴＧＤＥＡＤＹＹＣＧＴＷＤＳＳＬＳＡＧＡＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ（配列番号２１２）の配列に対して少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する配列を有する軽鎖可変領域を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域（例えば、配列番号２１２）は、更にヒト化されていてもよい。例えば、軽鎖可変領域は、ヒト抗体配列からヒト化されるか、又はそれに由来する、非ヒトＣＤＲ、並びにフレームワーク領域及び／又は定常領域を含んでいてもよい。特定の実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号２１２の配列を含む。いくつかの実施形態では、それぞれ配列番号２０６〜２０８の配列のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を有する抗ＣＤ２２構築物の軽鎖は、λアイソタイプの軽鎖である。
【０１５０】
いくつかの実施形態では、配列番号２０９の配列のＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号２１０の配列のＨＣ−ＣＤＲ２、及び配列番号２１１の配列のＨＣ−ＣＤＲ３を有する本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物の抗体部分は、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＰＹＹＤＤＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２１３）の配列に対して少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する配列を有する重鎖可変領域を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域（例えば、配列番号２１３）は、更にヒト化されていてもよい。例えば、重鎖可変領域は、ヒト抗体配列からヒト化されるか、又はそれに由来する、非ヒトＣＤＲ、並びにフレームワーク領域及び／又は定常領域を含んでいてもよい。特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号２１３の配列を含む。
【０１５１】
別の実施形態では、ＣＤ２２に特異的に結合する（すなわち、配列番号２０５の配列又はその一部に結合する）抗ＣＤ２２構築物は、抗体部分を含む。抗体部分は、（１）軽鎖相補性決定領域（ＬＣ−ＣＤＲ）１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、（２）重鎖相補性決定領域（ＨＣ−ＣＤＲ）１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、を含む。抗体部分は、ＨＤＩＲＮＹ（配列番号２１４）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＡＡＳ（配列番号２１５）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２、ＱＱＹＤＧＬＰＬＴ（配列番号２１６）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３、ＧＦＴＦＳＮＹＡ（配列番号２０９）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＩＳＧＳＧＧＳＴ（配列番号２１０）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２、及びＡＲＹＧＳＡＡＷＭＤＳ（配列番号２１７）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、配列番号２０９、２１０、２１４〜２１７の配列を含む。
【０１５２】
いくつかの実施形態では、配列番号２１４の配列のＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号２１５の配列のＬＣ−ＣＤＲ２、及び配列番号２１６の配列のＬＣ−ＣＤＲ３を有する本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物の抗体部分は、
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＴＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＨＤＩＲＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＮＬＬＩＹＡＡＳＮＬＱＴＧＶＰＳＲＦＳＧＲＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＹＤＧＬＰＬＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫＲ（配列番号２１８）の配列に対して少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する配列を有する軽鎖可変領域を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域（例えば、配列番号２１８）は、更にヒト化されていてもよい。例えば、軽鎖可変領域は、ヒト抗体配列からヒト化されるか、又はそれに由来する、非ヒトＣＤＲ、並びにフレームワーク領域及び／又は定常領域を含んでいてもよい。特定の実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号２１８の配列を含む。いくつかの実施形態では、それぞれ配列番号２１４〜２１６の配列のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を有する抗ＣＤ２２構築物の軽鎖は、λアイソタイプの軽鎖である。
【０１５３】
いくつかの実施形態では、配列番号２０９の配列のＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号２１０の配列のＨＣ−ＣＤＲ２、及び配列番号２１７の配列のＨＣ−ＣＤＲ３を有する本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物の抗体部分は、
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＴＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＹＧＳＡＡＷＭＤＳＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２１９）の配列に対して少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する配列を有する重鎖可変領域を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域（例えば、配列番号２１９）は、更にヒト化されていてもよい。例えば、重鎖可変領域は、ヒト抗体配列からヒト化されるか、又はそれに由来する、非ヒトＣＤＲ、並びにフレームワーク領域及び／又は定常領域を含んでいてもよい。特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号２１９の配列を含む。
【０１５４】
本発明はまた、結合について、配列番号２０６〜２０８の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３、並びに配列番号２０９〜２１１の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を有する抗体部分と競合する抗体部分を含む、抗ＣＤ２２構築物を含む。本発明はまた、結合について、配列番号２１２の配列を有する軽鎖可変領域と配列番号２１３の配列を有する重鎖可変領域とを有する抗体部分と競合する抗体部分を含む、抗ＣＤ２２構築物を含む。当業者であれば、そのような競合する抗体部分を特定するための一般的な知識、スキル、及び方法を有している。
【０１５５】
本発明はまた、結合について、配列番号２１４〜２１６の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３、並びに配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を有する抗体部分と競合する抗体部分を含む、抗ＣＤ２２構築物を含む。本発明はまた、結合について、配列番号２１８の配列を有する軽鎖可変領域と配列番号２１９の配列を有する重鎖可変領域とを有する抗体部分と競合する抗体部分を含む、抗ＣＤ２２構築物を含む。当業者であれば、そのような競合する抗体部分を特定するための一般的な知識、スキル、及び方法を有している。
一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）抗体
【０１５６】
本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物は、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体である抗体部分を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物は、ｓｃＦｖ抗体であってもよい。ｓｃＦｖ抗体は、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含んでいてもよく、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、組み換え方法を用いて合成リンカーによって結合されて、一本鎖のポリペプチド鎖を作製してもよい。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、重鎖可変領域がリンカーを介して軽鎖可変領域のＣ末端に結合されている構造「（Ｎ末端）軽鎖可変領域−リンカー−重鎖可変領域（Ｃ末端）」を有していてもよい。他の実施形態では、ｓｃＦｖは、軽鎖可変領域がリンカーを介して重鎖可変領域のＣ末端に結合されている構造「（Ｎ末端）重鎖可変領域−リンカー−軽鎖可変領域（Ｃ末端）」を有していてもよい。リンカーは、２〜２００個（例えば、２、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、又は２００個）のアミノ酸を含むポリペプチドであってもよい。好適なリンカーは、グリシン及びセリンなどの可撓性アミノ酸残基を含有していてもよい。特定の実施形態では、リンカーは、ＧＳ、ＧＧＳ、ＧＧＧＧＳ（配列番号２２０）、ＧＧＳＧ（配列番号２２１）、又はＳＧＧＧ（配列番号２２２）のモチーフ、例えば、複数のモチーフ又は反復モチーフ、を含有していてもよい。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列ＧＳＧＳ（配列番号２２３）、ＧＳＧＳＧＳ（配列番号２２４）、ＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号２２５）、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号２２６）、ＧＧＳＧＧＳ（配列番号２２７）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号２２８）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号２２９）。ＧＧＳＧ（配列番号２３０）、ＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号２３１）、又はＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号２３２）を有していてもよい。他の実施形態では、リンカーはまた、グリシン及びセリン以外のアミノ酸、例えば、ＳＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＥＭＡ（配列番号２３３）を含有していてもよい。
精製タグ
【０１５７】
いくつかの実施形態では、精製タグは、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物（例えば、抗ＣＤ２２  ｓｃＦｖ）に結合されていてもよい。精製タグとは、ポリペプチドの精製、単離、又は特定に使用できる任意の長さのペプチドを指す。精製タグは、ポリペプチドに結合されて（例えば、ポリペプチドのＮ末端又はＣ末端に結合されて）、ポリペプチドの精製及び／又はポリペプチドの、例えば、細胞溶解混合物からの単離を補助してもよい。いくつかの実施形態では、精製タグは、精製タグに対して特異的親和性を有する別の部分に結合する。いくつかの実施形態では、精製タグに特異的に結合するこのような部分は、マトリックス、樹脂、又はアガロースビーズなどの固体支持体に付着される。抗ＣＤ２２構築物（例えば、抗ＣＤ２２  ｓｃＦｖ）に結合され得る精製タグの例としては、ヘキサヒスチジンペプチド、赤血球凝集素（hemagglutinin、ＨＡ）ペプチド、ＦＬＡＧペプチド、及びｍｙｃペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、構築物、例えば、ヘキサヒスチジンペプチド及びＨＡペプチドに２つ以上の精製タグが結合されていてもよい。ヘキサヒスチジンペプチド（ＨＨＨＨＨＨ（配列番号２３４））は、マイクロモル濃度親和性を有するニッケル官能化アガロース親和性カラムに結合する。いくつかの実施形態では、ＨＡペプチドは、配列ＹＰＹＤＶＰＤＹＡ（配列番号２３５）又はＹＰＹＤＶＰＤＹＡＳ（配列番号２３６）を含む。いくつかの実施形態では、ＨＡペプチドは、タンデムシリーズにおいて、配列ＹＰＹＤＶＰＤＹＡ（配列番号２３５）又はＹＰＹＤＶＰＤＹＡＳ（配列番号２３６）の整数倍、例えば、３ｘＹＰＹＤＶＰＤＹＡ又は３ｘＹＰＹＤＶＰＤＹＡＳを含む。いくつかの実施形態では、ＦＬＡＧペプチドは、配列ＤＹＫＤＤＤＤＫ（配列番号２３７）を含む。いくつかの実施形態では、ＦＬＡＧペプチドは、タンデムシリーズにおいて、配列ＤＹＫＤＤＤＤＫ（配列番号２３７）の整数倍、例えば、３ｘＤＹＫＤＤＤＤＫを含む。いくつかの実施形態では、ｍｙｃペプチドは、配列ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ（配列番号２３８）を含む。いくつかの実施形態では、ｍｙｃペプチドは、タンデムシリーズにおいて、配列ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬの整数倍、例えば、３ｘＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬを含む。
抗ＣＤ２２  ｓｃＦｖ抗体
【０１５８】
いくつかの実施形態では、それぞれ配列番号２０６〜２１１の配列のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、ＬＣ−ＣＤＲ３、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を有する抗ＣＤ２２構築物は、ｓｃＦｖ抗体であってもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２１３の配列に対して少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する重鎖可変領域は、リンカーを介して、配列番号２１２の配列に対して少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する軽鎖可変領域のＮ末端又はＣ末端に結合されていてもよい。特定の実施形態では、抗ＣＤ２２  ｓｃＦｖ抗体は、以下に示す配列番号２３９の配列を有する。
配列番号２３９（抗ＣＤ２２  ｓｃＦｖ抗体、平文部（太字又は下線なし）：軽鎖可変領域及び重鎖可変領域、太字部：リンカー、下線部：精製タグ（ヘキサヒスチジンタグ及びＨＡタグ）
【０１５９】
【表５】
2021528995.tif 000007
【０１６０】
いくつかの実施形態では、それぞれ配列番号２１４〜２１６、２０９、２１０、及び２１７の配列のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、ＬＣ−ＣＤＲ３、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を有する抗ＣＤ２２構築物は、ｓｃＦｖ抗体であってもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２１９の配列に対して少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する重鎖可変領域は、リンカーを介して、配列番号２１８の配列に対して少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する軽鎖可変領域のＮ末端又はＣ末端に結合されていてもよい。特定の実施形態では、抗ＣＤ２２  ｓｃＦｖ抗体は、以下に示す配列番号２４０の配列を有する。
配列番号２４０（抗ＣＤ２２  ｓｃＦｖ抗体、平文部（太字又は下線なし）：軽鎖可変領域及び重鎖可変領域、太字部：リンカー、下線部：精製タグ（ヘキサヒスチジンタグ及びＨＡタグ）
【０１６１】
【表６】
2021528995.tif 000008
多重特異性抗体
【０１６２】
本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物は、多重特異性抗体である抗体部分を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物は、多重特異性抗体であってもよい。多重特異性抗体は、抗ＣＤ２２結合部分及び第２の結合部分（第２の抗原結合部分など）を含んでいてもよい。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる抗原又はエピトープに対して結合特異性を有する抗体である（例えば、二重特異性抗体は、２つの抗原又はエピトープに対して結合特異性を有する）。２つより多い特異性を有する多重特異性抗体もまた想定される。例えば、三重特異性抗体を調製することができる（例えば、Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）を参照されたい）。当業者であれば、本明細書に記載の個々の多重特異性抗体の適切な特徴を選択して、互いに組み合わせて、本発明の多重特異性抗体を形成することができるであろうことを理解されたい。
【０１６３】
したがって、例えば、いくつかの実施形態では、ａ）ＣＤ２２の細胞外領域に特異的に結合する（すなわち、配列番号２０５の配列又はその一部に結合する）抗ＣＤ２２結合部分と、ｂ）第２の結合部分（抗原結合部分など）と、を含む、多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＣＤ２２抗体が提供される。いくつかの実施形態では、第２の結合部分は、異なる抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２の結合部分は、細胞傷害性細胞などの細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２の結合部分は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、好中球、単球、マクロファージ、又は樹状細胞などのリンパ球の表面上の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２の結合部分は、細胞傷害性Ｔ細胞（細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）又はＴキラー細胞としても知られている）などのエフェクタＴ細胞に特異的に結合する。
【０１６４】
いくつかの実施形態では、第２の結合部分は、腫瘍抗原に特異的に結合する。腫瘍抗原の例としては、αフェトプロテイン（alpha fetoprotein、ＡＦＰ）、ＣＡ１５−３、ＣＡ２７−２９、ＣＡ１９−９、ＣＡ−１２５、カルレチニン、癌胎児性抗原、ＣＤ３４、ＣＤ９９、ＣＤ１１７、クロモグラニン、サイトケラチン、デスミン、上皮膜タンパク質（epithelial membrane protein、ＥＭＡ）、第ＶＩＩＩ因子、ＣＤ３１  ＦＬ１、グリア線維酸性タンパク質（glial fibrillary acidic protein、ＧＦＡＰ）、グロス嚢胞性疾患流体タンパク質（ＧＣＤＦＰ−１５）、ＨＭＢ−４５、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、インヒビン、ケラチン、ＣＤ４５、リンパ球マーカー、ＭＡＲＴ−１（Ｍｅｌａｎ−Ａ）、Ｍｙｏ  Ｄ１、筋肉特異的アクチン（muscle-specific actin、ＭＳＡ）、神経フィラメント、神経特異的エノラーゼ（neuron-specific enolase、ＮＳＥ）、胎盤性アルカリホスファターゼ（placental alkaline phosphatase、ＰＬＡＰ）、前立腺特異的抗原、Ｓ１００タンパク質、平滑筋アクチン（smooth muscle actin、ＳＭＡ）、シナプトフィジン、チログロブリン、甲状腺転写因子−１、腫瘍Ｍ２−ＰＫ、及びビメンチンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６５】
いくつかの実施形態では、二重特異性抗体における第２の抗原結合部分は、ＣＤ３に結合する。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合部分は、ＣＤ３εに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合部分は、ＣＤ３εのアゴニストエピトープに特異的に結合する。本明細書で使用するとき、用語「アゴニストエピトープ」は、（ａ）多重特異性抗体の結合時に、任意選択的に同一細胞上のいくつかの多重特異性抗体の結合時に、多重特異性抗体がＴ細胞受容体（ＴＣＲ）シグナル伝達を活性化し、Ｔ細胞活性を誘発することを可能にするエピトープ、及び／又は（ｂ）ＣＤ３のイプシロン鎖のアミノ酸残基のみからなり、Ｔ細胞上でその自然な文脈で存在する（すなわち、ＴＣＲ、ＣＤ３γ鎖などによって囲まれている）とき、多重特異性抗体による結合にアクセス可能である、エピトープ、及び／又は（ｃ）多重特異性抗体の結合時に、ＣＤ３γに対するＣＤ３εの空間位置の安定化をもたらさないエピトープを意味する。
【０１６６】
いくつかの実施形態では、第２の抗原結合部分は、例えば、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、ＣＤ１６ａ、ＣＤ５６、ＣＤ６８、ＧＤＳ２Ｄ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、ＣＤ１６ａ、ＣＤ５６、ＣＤ６８、ＧＤＳ２Ｄ、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＣＤ４０Ｌ、及びＨＶＥＭを含む、エフェクタ細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。他の実施形態では、第２の抗原結合部分は、Ｃ１ｑなどの補体系の成分に結合する。Ｃ１ｑは、血清補体系を活性化するＣ１酵素複合体のサブユニットである。他の実施形態では、第２の抗原結合部分は、Ｆｃ受容体に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合部分は、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）に特異的に結合する。ＦｃγＲは、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の表面上に存在するＦｃγＲＩＩＩ、又はマクロファージ、単球、好中球、及び／若しくは樹状細胞の表面上に存在するＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢＩ、ＦｃγＲＩＩＢ２、及びＦｃγＲＩＩＩＢのうちの１つであってもよい。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合部分は、Ｆｃ領域又はその機能的フラグメントである。本文脈で使用するとき、「機能的フラグメント」は、ＦｃγＲベアリングエフェクタ細胞、特に、マクロファージ、単球、好中球、及び／又は樹状細胞が、細胞傷害性溶解又は貪食作用によって標的細胞を殺傷するのを可能にするために、十分な特異性及び親和性でＦｃＲ、特に、ＦｃγＲに依然として結合することができる、抗体Ｆｃ領域のフラグメントを指す。機能的Ｆｃフラグメントは、元の完全長Ｆｃ部分の、活性化ＦｃγＲＩなどのＦｃＲへの結合を競合的に阻害することができる。いくつかの実施形態では、機能的Ｆｃフラグメントは、活性化ＦｃγＲに対して、その親和性の少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は９５％を保持する。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域又はその機能的フラグメントは、増強されたＦｃ領域又はその機能的フラグメントである。本明細書で使用するとき、用語「増強されたＦｃ領域」は、Ｆｃ受容体媒介エフェクタ機能、特に、抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、及び抗体介在性貪食を増強させるように修飾されたＦｃ領域を指す。これは、当該技術分野において既知のように、例えば、活性化受容体（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上で発現されるＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６Ａ））に対する親和性を増加させ、かつ／又は阻害受容体（例えば、ＦｃγＲＩＩＢ１／Ｂ２（ＣＤ３２Ｂ））に対する結合を低減させるようにＦｃ領域を改変することによって、達成することができる。
【０１６７】
いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＣＤ２２抗体は、ＣＤ２２提示標的細胞の殺傷を可能にし、かつ／又はＣＴＬを効果的に再指向してＣＤ２２提示標的細胞を溶解することができる。いくつかの実施形態では、本発明の多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＣＤ２２抗体は、１０〜５００ｎｇ／ｍＬの範囲のインビトロＥＣ５０を示し、約１：１〜約５０：１（例えば、約１：１〜約１５：１、又は約２：１〜約１０：１）のＣＴＬと標的細胞との比で、ＣＴＬ中の標的細胞の約５０％の再指向された溶解を誘発することができる。
【０１６８】
いくつかの実施形態では、多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＣＤ２２抗体は、標的細胞が溶解されるように、刺激ＣＴＬ又は非刺激ＣＴＬと標的細胞とを架橋することができる。これは、多重特異性抗ＣＤ２２抗体が所望の活性を発揮するために、標的特異的Ｔ細胞クローンの発生又は樹状細胞による共通抗原の提示は必要とされないという利点を提供する。いくつかの実施形態では、本発明の多重特異性抗ＣＤ２２抗体は、他の活性化シグナルの非存在下で標的細胞を溶解するようにＣＴＬを再指向することができる。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合部分は、ＣＤ３に特異的に結合（例えば、ＣＤ３εに特異的に結合）し、ＣＤ２８及び／又はＩＬ−２によるシグナル伝達は、標的細胞を溶解するようにＣＴＬを再指向するために必要ではない。
【０１６９】
２つの抗原（例えば、２つの異なる細胞上の抗原）に同時に結合する多重特異性抗ＣＤ２２抗体の選択を測定するための方法は、当業者の通常の能力の範囲内である。例えば、第２の結合部分がＣＤ３に特異的に結合するとき、多重特異性抗ＣＤ２２抗体は、ＣＤ３＋／ＣＤ２２−細胞とＣＤ３−／ＣＤ２２＋細胞との混合物と接触してもよい。次いで、多重特異性抗ＣＤ２２抗体陽性単一細胞の数、及び多重特異性抗ＣＤ２２抗体によって架橋された細胞の数を、当該技術分野において既知の顕微鏡検査法又は蛍光標識細胞分取（fluorescence-activated cell sorting、ＦＡＣＳ）によって評価してもよい。
【０１７０】
多重特異性抗ＣＤ２２抗体は、ａ）ｉ）配列番号２０６〜２０８の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域、及びｉｉ）配列番号２０９〜２１１の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含む抗ＣＤ２２結合部分と、ｂ）第２の抗原結合部分と、を含んでいてもよい。別の実施形態では、多重特異性抗ＣＤ２２抗体は、ａ）ｉ）配列番号２１４〜２１６の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域、及びｉｉ）配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含む抗ＣＤ２２結合部分と、ｂ）第２の抗原結合部分と、を含んでいてもよい。
【０１７１】
いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＣＤ２２抗体は、例えば、ダイアボディ（Ｄｂ）、一本鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、タンデムｓｃＤｂ（Ｔａｎｄａｂ）、線状二量体ｓｃＤｂ（ＬＤ−ｓｃＤｂ）、環状二量体ｓｃＤｂ（ＣＤ−ｓｃＤｂ）、ジダイアボディ、タンデムｓｃＦｖ、タンデムジｓｃＦｖ（例えば、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャ）、タンデムトリｓｃＦｖ、トリ（ア）ボディ、二重特異性Ｆａｂ２、ジミニ抗体、テトラボディ、ｓｃＦｖ−Ｆｃ−ｓｃＦｖ融合体、二重親和性再標的化（ＤＡＲＴ）抗体、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）抗体、ＩｇＧ−ｓｃＦａｂ、ｓｃＦａｂ−ｄｓ−ｓｃＦｖ、Ｆｖ２−Ｆｃ、ＩｇＧ−ｓｃＦｖ融合体、ドックアンドロック（ＤＮＬ）抗体、ノブ・イントゥ・ホール（ＫｉＨ）抗体（ＫｉＨ技術により調製される二重特異性ＩｇＧ）、デュオボディ（デュオボディ技術により調製される二重特異性ＩｇＧ）、ヘテロマルチマー抗体、又はヘテロ結合抗体である。いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＣＤ２２抗体は、タンデムｓｃＦｖ（例えば、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャなどのタンデムジｓｃＦｖ）である。
タンデムｓｃＦｖ
【０１７２】
いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＣＤ２２抗体は、抗ＣＤ２２結合部分を含む第１のｓｃＦｖと、第２のｓｃＦｖと、を含む、タンデムｓｃＦｖ（本明細書では、「タンデムｓｃＦｖ多重特異性抗ＣＤ２２抗体」とも称される）である。いくつかの実施形態では、タンデムｓｃＦｖ多重特異性抗ＣＤ２２抗体は、少なくとも１つ（例えば、少なくとも約２、３、４、５、又はそれ以上のいずれか）の追加のｓｃＦｖを更に含む。
【０１７３】
いくつかの実施形態では、ａ）ＣＤ２２の細胞外領域に特異的に結合する第１のｓｃＦｖと、ｂ）第２のｓｃＦｖと、を含む、タンデムｓｃＦｖ多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＣＤ２２抗体が提供される。いくつかの実施形態では、第１のｓｃＦｖは、それぞれ配列番号２０６〜２０８の配列のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３、並びに配列番号２１２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列を有する軽鎖可変領域と、それぞれ配列番号２０９〜２１１の配列のＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３、並びに配列番号２１３の配列に対して少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列を有する重鎖可変領域と、を含み、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、リンカー（例えば、ＳＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＥＭＡ（配列番号２３３））を介して互いに結合されている。いくつかの実施形態では、第１のｓｃＦｖは、リンカー（例えば、ＳＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＥＭＡ（配列番号２３３））を介して互いに結合された、配列番号２１２の軽鎖可変領域配列と、配列番号２１３の重鎖可変領域配列と、を含む。第１のｓｃＦｖは、ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に結合していてもよい。
【０１７４】
いくつかの実施形態では、ａ）ＣＤ２２の細胞外領域に特異的に結合する第１のｓｃＦｖと、ｂ）第２のｓｃＦｖと、を含む、タンデムｓｃＦｖ多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＣＤ２２抗体が提供される。いくつかの実施形態では、第１のｓｃＦｖは、それぞれ配列番号２１４〜２１６の配列のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３、並びに配列番号２１８の配列に対して少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列を有する軽鎖可変領域と、それぞれ配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列のＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３、並びに配列番号２１９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列を有する重鎖可変領域と、を含み、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、リンカー（例えば、ＳＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＥＭＡ（配列番号２３３））を介して互いに結合されている。いくつかの実施形態では、第１のｓｃＦｖは、リンカー（例えば、ＳＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＥＭＡ（配列番号２３３））を介して互いに結合された、配列番号２１８の軽鎖可変領域配列と、配列番号２１９の重鎖可変領域配列と、を含む。第１のｓｃＦｖは、ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に結合していてもよい。
【０１７５】
いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、別の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、ＣＤ２２提示細胞などの癌細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、ＣＤ２２を発現しない細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、細胞傷害性細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、好中球、単球、マクロファージ、又は樹状細胞などのリンパ球の表面上の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、細胞傷害性Ｔ細胞などのエフェクタＴ細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、例えば、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、ＣＤ１６ａ、ＣＤ５６、ＣＤ６８、ＧＤＳ２Ｄ、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＣＤ４０Ｌ、及びＨＶＥＭを含む、エフェクタ細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。
【０１７６】
いくつかの実施形態では、第１のｓｃＦｖは、ヒト、ヒト化、又は半合成である。いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、ヒト、ヒト化、又は半合成である。いくつかの実施形態では、第１のｓｃＦｖ及び第２のｓｃＦｖは両方とも、ヒト、ヒト化、又は半合成である。いくつかの実施形態では、タンデムｓｃＦｖ多重特異性抗ＣＤ２２抗体は、少なくとも１つ（例えば、少なくとも約２、３、４、５、又はそれ以上のいずれか）の追加のｓｃＦｖを更に含む。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、ａ）ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部分）に特異的に結合する第１のｓｃＦｖと、ｂ）第２のｓｃＦｖと、を含む、タンデムｓｃＦｖ多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＣＤ２２抗体が提供され、タンデムｓｃＦｖ多重特異性抗ＣＤ２２抗体は、タンデムジｓｃＦｖ又はタンデムトリｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、タンデムｓｃＦｖ多重特異性抗ＣＤ２２抗体は、タンデムジｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、タンデムｓｃＦｖ多重特異性抗ＣＤ２２抗体は、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャである。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、タンデムジｓｃＦｖ二重特異性抗ＣＤ２２抗体は、約０．１ｐＭ〜約５００ｎＭ（例えば、これらの値の任意の範囲を含む、約０．１ｐＭ、１．０ｐＭ、１０ｐＭ、５０ｐＭ、１００ｐＭ、５００ｐＭ、１ｎＭ、１０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭ、又は５００ｎＭのいずれか）のＫｄで、ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に結合する。いくつかの実施形態では、タンデムジｓｃＦｖ二重特異性抗ＣＤ２２抗体は、約１ｎＭ〜約５００ｎＭ（例えば、これらの値の任意の範囲を含む、約１、１０、２５、５０、７５、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、又は５００ｎＭのいずれか）のＫｄで、ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に結合する。
【０１７９】
多重特異性抗体を設計、構築、かつ／又は生成するための様々な技術は、当該技術分野において既知である。全免疫グロブリンフレームワーク（例えば、ＩｇＧ）、一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、又はこれらの組み合わせのいずれかを利用する多重特異性抗体が構築されてもよい。二重特異性抗体は、上述のとおり、タンデムで２つのｓｃＦｖ単位で構成されていてもよい。抗腫瘍免疫療法の場合、タンデムで２つの一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む二重特異性抗体は、腫瘍抗原に結合するｓｃＦｖがＴ細胞と係合するｓｃＦｖと連結するように、すなわち、Ｔ細胞上のＣＤ３を結合することで、設計されてもよい。したがって、Ｔ細胞は、腫瘍細胞の殺傷を媒介するために腫瘍部位に動員される。二重特異性抗体は、例えば、同一の抗原又は異なる抗原の異なるエピトープを認識する重鎖及び／又は軽鎖を組み合わせることによって作製することができる。いくつかの実施形態では、分子機能により、二重特異性結合剤は、その２つの結合アームのうちの一方に１つの抗原（又はエピトープ）を結合し（１つのＶＨ／ＶＬ対）、第２のアームに異なる抗原（又はエピトープ）を結合する（異なるＶＨ／ＶＬ対）。この定義により、二重特異性結合剤は、（特異性及びＣＤＲ配列の両方において）２つの別個の抗原結合アームを有しており、また、二重特異性結合剤が結合する抗原のそれぞれに対して一価である。特定の実施形態では、本発明に係る二重特異性結合剤は、第１及び第２のｓｃＦｖを含む。いくつかの特定の実施形態では、第１のｓｃＦｖは、第２のｓｃＦｖのＣ末端に連結されている。いくつかの特定の実施形態では、第２のｓｃＦｖは、第１のｓｃＦｖのＣ末端に連結されている。いくつかの特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、リンカー（例えば、ＳＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＥＭＡ（配列番号２３３））を介して互いに連結されている。いくつかの特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、リンカーを介することなく互いに連結されている。
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物
【０１８０】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、抗ＣＤ２２  ＣＡＲであり得る。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ＣＡＲは、ａ）ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（配列番号２０５又はその一部）に特異的に結合する抗ＣＤ２２抗体部分を含む細胞外ドメインと、ｂ）細胞内シグナル伝達ドメインと、を含む。膜貫通ドメインは、細胞外ドメインと細胞内ドメインとの間に存在し得る。
【０１８１】
抗ＣＤ２２  ＣＡＲの細胞外ドメインと膜貫通ドメインとの間、又は抗ＣＤ２２  ＣＡＲの細胞内ドメインと膜貫通ドメインとの間には、スペーサドメインが存在し得る。スペーサドメインは、膜貫通ドメインをポリペプチド鎖内の細胞外ドメイン又は細胞内ドメインに結合するように機能する任意のオリゴペプチド又はポリペプチドであり得る。スペーサドメインは、例えば、約１０〜約１００個又は約２５〜約５０個のアミノ酸を含む最大約３００個のアミノ酸を含み得る。
【０１８２】
膜貫通ドメインは、天然供給源又は合成供給源のいずれか一方に由来し得る。供給源が天然である場合、当該ドメインは、任意の膜結合タンパク質又は膜貫通タンパク質に由来し得る。本発明における特定の使用のための膜貫通領域は、Ｔ細胞受容体、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、又はＣＤ１５４のα鎖、β鎖、δ鎖、γ鎖、又はζ鎖に由来し得る（すなわち、少なくともこれらの（複数の）膜貫通領域を含み得る）。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは合成であってもよく、この場合、膜貫通ドメインは、ロイシン及びバリンなどの主に疎水性残基を含み得る。いくつかの実施形態では、フェニルアラニン、トリプトファン、及びバリンのトリプレットは、合成膜貫通ドメインのそれぞれの末端に見出され得る。いくつかの実施形態では、例えば、（約２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個のうちのいずれかなど）約２〜約１０個のアミノ酸の長さを有する、短いオリゴペプチド又はポリペプチドリンカーは、膜貫通ドメインと抗ＣＤ２２  ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインとの間の結合を形成し得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、グリシン−セリンダブレットである。
【０１８３】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ＣＡＲの細胞内ドメイン内の配列のうちの１つに自然に関連付けられている膜貫通ドメインが使用される（例えば、抗ＣＤ２２  ＣＡＲ細胞内ドメインがＣＤ２８共刺激配列を含む場合、抗ＣＤ２２  ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメインに由来する）。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小限に抑えるために、同じ又は異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインへのかかるドメインの結合を回避するように、アミノ酸置換により選択又は修飾され得る。
【０１８４】
抗ＣＤ２２  ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、抗ＣＤ２２  ＣＡＲが配置された免疫細胞の正常なエフェクタ機能のうちの少なくとも１つの活性化に関与する。Ｔ細胞のエフェクタ機能は、例えば、サイトカインの分泌を含む細胞溶解活性又はヘルパー活性であり得る。したがって、用語「細胞内シグナル伝達ドメイン」は、エフェクタ機能のシグナルを伝達し、細胞に特殊機能を実行するように誘導するタンパク質の一部を指す。通常、細胞内シグナル伝達ドメイン全体を用いることができるが、多くの場合、全鎖を使用する必要はない。細胞内シグナル伝達ドメインの切断された一部が使用される範囲では、かかる切断された一部は、エフェクタ機能のシグナルを伝達する限り、無傷鎖の代わりに使用してもよい。したがって、用語「細胞内シグナル伝達配列」は、エフェクタ機能のシグナルを伝達するのに十分な細胞内シグナル伝達ドメインの任意の切断された一部を含むことを意味する。
【０１８５】
本発明の抗ＣＤ２２  ＣＡＲで使用するための細胞内シグナル伝達ドメインの例としては、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の細胞質配列、及び抗原受容体のエンゲージメント後のシグナル伝達を開始するように協力して機能する共受容体の細胞質配列、並びにこれらの配列の任意の誘導体又は変異体、並びに同一の機能を有する任意の合成配列が挙げられる。
【０１８６】
ＴＣＲ単独によって生成されたシグナルでは、Ｔ細胞の完全な活性化に不十分であり、二次シグナル又は共刺激シグナルも必要とされることが既知である。したがって、Ｔ細胞活性化は、２つの別個の部類の細胞内シグナル伝達配列、すなわち、ＴＣＲによって抗原依存的一次活性化を開始させる配列（一次シグナル伝達配列）、及び抗原非依存的に作用して、二次シグナル又は共刺激シグナルを提供する配列（共刺激シグナル伝達配列）によって介在されると言うことができる。
【０１８７】
一次シグナル伝達配列は、刺激的手法又は阻害的手法のいずれか一方で、ＴＣＲ複合体の一次活性化を調節する。刺激的様式で機能する一次シグナル伝達配列は、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ、すなわち、ＩＴＡＭとして既知であるシグナル伝達モチーフを含有し得る。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ＣＡＲ構築物は、１つ以上のＩＴＡＭを含む。
【０１８８】
本発明で特に使用される一次シグナル伝達配列を含有するＩＴＡＭの例としては、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、及びＣＤ６６ｄに由来するものが挙げられる。
【０１８９】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ＣＡＲは、ＣＤ３ζ由来の一次シグナル伝達配列を含む。例えば、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、それ自体がＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含んでもよいか、あるいは本発明の抗ＣＤ２２  ＣＡＲとの関連で有用な任意の他の所望の細胞内シグナル伝達配列（複数可）と組み合わせられてもよい。例えば、抗ＣＤ２２  ＣＡＲの細胞内ドメインは、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列及び共刺激シグナル伝達配列を含んでもよい。共刺激シグナル伝達配列は、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む共刺激分子の細胞内ドメインの一部であってもよい。
【０１９０】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζの細胞内シグナル伝達配列及びＣＤ２８の細胞内シグナル伝達配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζの細胞内シグナル伝達配列及び４−１ＢＢの細胞内シグナル伝達配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζの細胞内シグナル伝達配列及びＣＤ２８及び４−１ＢＢの細胞内シグナル伝達配列を含む。
【０１９１】
したがって、例えば、いくつかの実施形態では、ａ）ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に特異的に結合する抗ＣＤ２２抗体部分を含む細胞外ドメインと、ｂ）膜貫通ドメインと、ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインと、を含む抗ＣＤ２２  ＣＡＲが提供される。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫細胞を活性化することができる。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達配列及び共刺激シグナル伝達配列を含む。いくつかの実施形態では、一次シグナル伝達配列は、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達配列は、ＣＤ２８及び／又は４−１ＢＢ細胞内シグナル伝達配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列、並びにＣＤ２８及び／又は４−１ＢＢ細胞内シグナル伝達配列を含む。
【０１９２】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ＣＡＲは、ｉ）それぞれ配列番号２０６〜２０８の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、ｉｉ）それぞれ配列番号２０９〜２１１の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、を含む、抗ＣＤ２２抗体部分を含む。他の実施形態では、抗ＣＤ２２  ＣＡＲは、ｉ）それぞれ配列番号２０６〜２０８の配列のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２１２の配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列と、を有する軽鎖可変領域と、ｉｉ）それぞれ配列番号２０９〜２１１の配列のＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２１３の配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列と、を有する重鎖可変領域と、を含む、抗ＣＤ２２抗体部分を含み、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、リンカーを介して互いに結合されている。
【０１９３】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ＣＡＲは、ｉ）それぞれ配列番号２１４〜２１６の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、ｉｉ）それぞれ配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、を含む、抗ＣＤ２２抗体部分を含む。他の実施形態では、抗ＣＤ２２  ＣＡＲは、ｉ）配列番号２１４〜２１６の配列のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２１８の配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列と、を有する軽鎖可変領域と、ｉｉ）配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列のＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２１９の配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列と、を有する重鎖可変領域と、を含む、抗ＣＤ２２抗体部分を含み、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、リンカーを介して互いに結合されている。
キメラ抗体−Ｔ細胞受容体（ｃａＴＣＲ）構築物
【０１９４】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、キメラ抗体−Ｔ細胞受容体構築物（本明細書では「ｃａＴＣＲ」と称される）であり、抗ＣＤ２２キメラ抗体−Ｔ細胞受容体は、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲは、ａ）ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に特異的に結合する抗ＣＤ２２抗体部分を含む細胞外ドメインと、ｂ）少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールを動員することができるＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）と、を含む。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲは、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖を含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２のポリペプチド鎖は、共有結合（例えば、ペプチド結合又は他の化学結合）又は非共有結合によって連結されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲは、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖を含むヘテロ二量体である。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖は、少なくとも１つのジスルフィド結合によって連結されている。抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲの特異性は、ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に対する結合特異性を付与する抗体部分に由来する。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ様抗原結合モジュールである。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆｖ様抗原結合モジュールである。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ｓｃＦｖである。ＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールを動員するための抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲの機能は、Ｔ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）に由来する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＴＣＲ（αβＴＣＲ又はγδＴＣＲなど）の膜貫通モジュールを含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＴＣＲの結合ペプチド又はそのフラグメントのうちの一方又は両方を更に含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲは、少なくとも１つの細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲの少なくとも１つの細胞内ドメインのうちの１つ以上は、ＴＣＲの細胞内ドメインからの配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲの細胞外ドメインに含有される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲは、抗体部分とＴＣＲＭとの間に１つ以上のペプチドリンカーを更に含んで、細胞外ドメインの長さを最適化する。
【０１９６】
いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールであり、ａ）ＶＨ抗体ドメイン及びＣＨ１抗体ドメインを含む第１の抗原結合領域を含む第１のポリペプチド鎖と、ｂ）ＶＬ抗体ドメイン及びＣＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合領域を含む第２のポリペプチド鎖と、を含む。いくつかの実施形態では、第１の抗原結合領域は、ＣＨ１抗体ドメインに対するＶＨ抗体ドメインアミノ末端を含み、かつ／又は第２の抗原結合領域は、ＣＬ抗体ドメインに対するＶＬ抗体ドメインアミノ末端を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ抗体ドメインとＣＬ抗体ドメインとの間にペプチドリンカーが存在し、かつ／又はＶＨ抗体ドメインとＣＨ１抗体ドメインとの間にペプチドリンカーが存在する。いくつかの実施形態では、ＶＬ抗体ドメイン及びＶＨ抗体ドメインのＣＤＲの全ては、同じ抗体部分に由来する。いくつかの実施形態では、ＶＬ抗体ドメイン及びＶＨ抗体ドメインは、２つ以上の抗体部分に由来する抗体ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２のポリペプチド鎖は、共有結合（例えば、ペプチド結合又は他の化学結合）又は非共有結合によって連結されている。いくつかの実施形態では、第１及び第２の抗原結合領域は、ジスルフィド結合によって結合されている。いくつかの実施形態では、第１及び第２の抗原結合領域は、ＣＨ１ドメイン内の残基とＣＬドメイン内の残基との間のジスルフィド結合によって結合されている。いくつかの実施形態では、ＣＨ１ドメインは、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）重鎖に由来し、任意選択的にヒトに由来する。いくつかの実施形態では、ＣＨ１ドメインは、由来する配列と比較して、１つ以上の修飾（例えば、アミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失）を含む変異体である。いくつかの実施形態では、ＣＬドメインは、κアイソタイプ又はλアイソタイプの軽鎖に由来する。いくつかの実施形態では、ＣＬドメインは、由来する配列と比較して、１つ以上の修飾（例えば、アミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失）を含む変異体である。いくつかの実施形態では、ＣＨ１及び／又はＣＬドメインは、互いに対する結合親和性を実質的に変更しない１つ以上の修飾を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ１及び／若しくはＣＬドメインは、互いに対する結合親和性を増加させ、かつ／又は天然に存在しないジスルフィド結合を導入する１つ以上の修飾を含む。いくつかの実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成、又は完全合成である。
【０１９７】
いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールであり、ＶＬ抗体ドメイン及びＣＨ１抗体ドメインを含む第１の抗原結合領域を含む第１のポリペプチド鎖と、ｂ）ＶＨ抗体ドメイン及びＣＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合領域を含む第２のポリペプチド鎖と、を含む。いくつかの実施形態では、第１の抗原結合領域は、ＣＨ１抗体ドメインに対するＶＬ抗体ドメインアミノ末端を含み、かつ／又は第２の抗原結合領域は、ＣＬ抗体ドメインに対するＶＨ抗体ドメインアミノ末端を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ抗体ドメインとＣＬ抗体ドメインとの間にペプチドリンカーが存在し、かつ／又はＶＬ抗体ドメインとＣＨ１抗体ドメインとの間にペプチドリンカーが存在する。いくつかの実施形態では、ＶＬ抗体ドメイン及びＶＨ抗体ドメインのＣＤＲの全ては、同じ抗体部分に由来する。いくつかの実施形態では、ＶＬ抗体ドメイン及びＶＨ抗体ドメインは、２つ以上の抗体部分に由来する抗体ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２のポリペプチド鎖は、共有結合（例えば、ペプチド結合又は他の化学結合）又は非共有結合によって連結されている。いくつかの実施形態では、第１及び第２の抗原結合領域は、ジスルフィド結合によって結合されている。いくつかの実施形態では、第１及び第２の抗原結合領域は、ＣＨ１ドメイン内の残基とＣＬドメイン内の残基との間のジスルフィド結合によって結合されている。いくつかの実施形態では、ＣＨ１ドメインは、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）重鎖に由来し、任意にヒトに由来する。いくつかの実施形態では、ＣＨ１ドメインは、由来する配列と比較して、１つ以上の修飾（例えば、アミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失）を含む変異体である。いくつかの実施形態では、ＣＬドメインは、κ又はλアイソタイプの軽鎖に由来する。いくつかの実施形態では、ＣＬドメインは、由来する配列と比較して、１つ以上の修飾（例えば、アミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失）を含む変異体である。いくつかの実施形態では、ＣＨ１及び／又はＣＬドメインは、互いに対する結合親和性を実質的に変更しない１つ以上の修飾を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ１及び／若しくはＣＬドメインは、互いに対する結合親和性を増加させ、かつ／又は天然に存在しないジスルフィド結合を導入する１つ以上の修飾を含む。いくつかの実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成、又は完全合成である。
【０１９８】
いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に特異的に結合するＦｖ様抗原結合モジュールであり、ａ）ＶＨ抗体ドメインと、任意選択的に、Ｔ細胞受容体サブユニットからの第１のＴＣＲ定常ドメインと、を含む第１の抗原結合領域を含む、第１のポリペプチド鎖と、ｂ）ＶＬ抗体ドメインと、任意選択的に、Ｔ細胞受容体サブユニットからの第２のＴＣＲ定常ドメインと、を含む第２の抗原結合領域を含む、第２のポリペプチド鎖と、を含む。いくつかの実施形態では、第１の抗原結合領域は、第１のＴＣＲ定常ドメインに対するＶＨ抗体ドメインアミノ末端を含み、かつ／又は第２の抗原結合領域は、第２のＴＣＲ定常ドメインに対するＶＬ抗体ドメインアミノ末端を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ抗体ドメインと第１のＴＣＲ定常ドメインとの間にペプチドリンカーが存在し、かつ／又はＶＨ抗体ドメインと第２のＴＣＲ定常ドメインとの間にペプチドリンカーが存在する。いくつかの実施形態では、ＶＬ抗体ドメイン及びＶＨ抗体ドメインのＣＤＲの全ては、同じ抗体部分に由来する。いくつかの実施形態では、ＶＬ抗体ドメイン及びＶＨ抗体ドメインは、２つ以上の抗体部分に由来する抗体ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２のポリペプチド鎖は、共有結合（例えば、ペプチド結合又は他の化学結合）又は非共有結合によって連結されている。いくつかの実施形態では、第１及び第２の抗原結合領域は、ジスルフィド結合によって結合されている。いくつかの実施形態では、第１及び第２の抗原結合領域は、第１のＴＣＲ定常ドメイン内の残基と第２のＴＣＲ定常ドメイン内の残基との間のジスルフィド結合によって結合されている。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ定常ドメインは、ＴＣＲαサブユニットに由来し、任意選択的にヒトに由来し、かつ／又は第２のＴＣＲ定常ドメインは、ＴＣＲβサブユニットに由来し、任意選択的にヒトに由来する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ定常ドメインは、ＴＣＲδサブユニットに由来し、任意選択的にヒトに由来し、かつ／又は第２のＴＣＲ定常ドメインは、ＴＣＲγサブユニットに由来し、任意選択的にヒトに由来する。いくつかの実施形態では、第１及び／又は第２のＴＣＲ定常ドメインは、由来する配列と比較して、１つ以上の修飾（例えば、アミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失）を含む変異体である。いくつかの実施形態では、第１及び／又は第２のＴＣＲ定常ドメインは、互いに対する結合親和性を実質的に変更しない１つ以上の修飾を含む。いくつかの実施形態では、第１及び／若しくは第２のＴＣＲ定常ドメインは、互いに対する結合親和性を増加させ、かつ／又は天然に存在しないジスルフィド結合を導入する１つ以上の修飾を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｖ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成、又は完全合成である。
【０１９９】
いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に特異的に結合するｓｃＦｖであり、ａ）ＶＨ抗体ドメイン及びＶＬ抗体ドメインを含むポリペプチド鎖を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、ＶＬ抗体ドメインに対するＶＨ抗体ドメインアミノ末端を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、ＶＨ抗体ドメインに対するＶＬ抗体ドメインアミノ末端を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ抗体ドメインとＶＨ抗体ドメインとの間にペプチドリンカーが存在する。いくつかの実施形態では、ＶＬ抗体ドメイン及びＶＨ抗体ドメインのＣＤＲの全ては、同じ抗体部分に由来する。いくつかの実施形態では、ＶＬ抗体ドメイン及びＶＨ抗体ドメインは、２つ以上の抗体部分に由来する抗体ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成、又は完全合成である。
【０２００】
いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ａ）第１の膜貫通ドメインを含む第１のＴ細胞受容体ドメイン（T cell receptor domain、ＴＣＲＤ）を含む第１のポリペプチド鎖と、ｂ）第２の膜貫通ドメインを含む第２のＴＣＲＤを含む第２のポリペプチド鎖と、を含む。いくつかの実施形態では、第１の膜貫通ドメインは、第１のＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインであり、かつ／又は第２の膜貫通ドメインは、第２のＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲα鎖（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＣＣＩ７３８９５）であり、第２のＴＣＲサブユニットはＴＣＲβ鎖（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＣＣＩ７３８９３）である。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲβ鎖であり、第２のＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲα鎖である。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲγ鎖（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＡＧＥ９１７８８）であり、第２のＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲδ鎖（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＡＡＱ５７２７２）である。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲδ鎖であり、第２のＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲγ鎖である。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、膜貫通ドメインに対する第１の結合ペプチドアミノ末端を更に含み、かつ／又は第２のＴＣＲＤは、膜貫通ドメインに対する第２の結合ペプチドアミノ末端を更に含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ペプチドは、第１のＴＣＲサブユニットの結合ペプチドの全て若しくは一部を含み、かつ／又は第２の結合ペプチドは、第２のＴＣＲサブユニットの結合ペプチドの全て若しくは一部を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１の膜貫通ドメインに対する第１のＴＣＲ細胞内ドメインのカルボキシ末端を更に含み、かつ／又は第２のＴＣＲＤは、第２の膜貫通ドメインに対する第２のＴＣＲ細胞内ドメインのカルボキシ末端を更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメインは、第１のＴＣＲサブユニットの細胞内ドメインの全て若しくは一部を含み、かつ／又は第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、第２のＴＣＲサブユニットの細胞内ドメインの全て若しくは一部を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲサブユニットのフラグメントであり、かつ／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ鎖のフラグメントである。いくつかの実施形態では、第１及び第２のポリペプチド鎖は、共有結合（例えば、ペプチド結合又は他の化学結合）又は非共有結合によって連結されている。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＴＣＲＤは、ジスルフィド結合によって結合されている。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＴＣＲＤは、第１の結合ペプチド中の残基と第２の結合ペプチド中の残基との間のジスルフィド結合によって結合されている。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びＣＤ３ζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールを動員することができる。いくつかの実施形態では、Ｔ��ＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びＣＤ３ζのそれぞれを動員して、八量体型抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体を形成することができる（すなわち、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体形成を促進する）。
【０２０１】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲは、ＴＣＲＭに対する（ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に特異的に結合する）抗体部分の融合体を含む分子である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲは、ＴＣＲＭの第１のポリペプチド鎖に対するＦａｂ様又はＦｖ様抗原結合モジュールアミノ末端の第１のポリペプチド鎖の融合体であって、それにより、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲの第１のポリペプチド鎖を形成する、融合体と、ＴＣＲＭの第２のポリペプチド鎖に対するＦａｂ様又はＦｖ様抗原結合モジュールアミノ末端の第２のポリペプチド鎖の融合体であって、それにより、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲの第２のポリペプチド鎖を形成する、融合体と、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲは、ＴＣＲＭの第１又は第２のポリペプチド鎖に対するｓｃＦｖアミノ末端の融合体を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲは、Ｆａｂ様若しくはＦｖ様抗原結合モジュールの第１のポリペプチド鎖と、ＴＣＲＭの第１のポリペプチド鎖との間のペプチドリンカー、及び／又はＦａｂ様若しくはＦｖ様抗原結合モジュールの第２のポリペプチド鎖と、ＴＣＲＭの第２のポリペプチド鎖との間のペプチドリンカーを更に含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲは、ｓｃＦｖと、ＴＣＲＭの第１又は第２のポリペプチド鎖との間にペプチドリンカーを更に含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーの長さは、（値の間の任意の範囲を含む約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、又は７０個のうちのいずれかなどの）約５〜約７０個のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲの第１のポリペプチド鎖は、アミノ末端の第１のシグナルペプチドを更に含み、かつ／又は抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲの第２のポリペプチド鎖は、アミノ末端の第２のシグナルペプチドを更に含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲの第１のポリペプチド鎖は、第１の膜貫通ドメインに対する第１のアクセサリ細胞内ドメインのカルボキシ末端を更に含み、かつ／又は抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲの第２のポリペプチド鎖は、第２の膜貫通ドメインに対する第２のアクセサリ細胞内ドメインのカルボキシ末端を更に含む。いくつかの実施形態では、第１及び／又は第２のアクセサリ細胞内ドメインは、ＴＣＲ共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲの第１及び第２のポリペプチド鎖は、共有結合（例えば、ペプチド結合又は他の化学結合）又は非共有結合などによって結合されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲは、ヘテロダイマーである。
【０２０２】
したがって、例えば、いくつかの実施形態では、ａ）ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に特異的に結合する抗ＣＤ２２抗体部分を含む細胞外ドメインと、ｂ）少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールを動員することができるＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）と、を含む、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ様抗原結合モジュールである。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆｖ様抗原結合モジュールである。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ｓｃＦｖである。
【０２０３】
いくつかの実施形態では、ａ）ｉ）それぞれ配列番号２０６〜２０８の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、ｉｉ）それぞれ配列番号２０９〜２１１の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、を含む、ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に特異的に結合する抗ＣＤ２２抗体部分を含む細胞外ドメインと、ｂ）少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールを動員することができるＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）と、を含む、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、ａ）ｉ）それぞれ配列番号２０６〜２０８の配列のＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２１２の配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列と、を有する軽鎖可変領域と、ｉｉ）それぞれ配列番号２０９〜２１１の配列のＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２１３の配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列と、を有する重鎖可変領域と、を含む、ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に特異的に結合する抗ＣＤ２２抗体部分を含む細胞外ドメインと、ｂ）少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールを動員することができるＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）と、を含む、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲが提供され、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、リンカーを介して互いに結合されている。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ様抗原結合モジュールである。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆｖ様抗原結合モジュールである。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ｓｃＦｖである。
【０２０４】
いくつかの実施形態では、ａ）ｉ）それぞれ配列番号２１４〜２１６の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、ｉｉ）それぞれ配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、を含む、ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に特異的に結合する抗ＣＤ２２抗体部分を含む細胞外ドメインと、ｂ）少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールを動員することができるＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）と、を含む、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、ａ）ｉ）それぞれ配列番号２１４〜２１６の配列のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２１８の配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列と、を有する軽鎖可変領域と、ｉｉ）それぞれ配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列のＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２１９の配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列と、を有する重鎖可変領域と、を含む、ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に特異的に結合する抗ＣＤ２２抗体部分を含む細胞外ドメインであって、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、リンカーを介して互いに結合されている、細胞外ドメインと、ｂ）少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールを動員することができるＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）と、を含む、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ様抗原結合モジュールである。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆｖ様抗原結合モジュールである。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ｓｃＦｖである。
【０２０５】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）である。例えば、ＣＳＲは、（ａ）本明細書に記載の抗ＣＤ２２抗体部分（例えば、配列番号２１８の配列を有する軽鎖可変領域と、配列番号２１９の配列を有する重鎖可変領域と、を含む、抗ＣＤ２２抗体部分、又は配列番号２１２の配列を有する軽鎖可変領域と、配列番号２１３の配列を有する重鎖可変領域と、を含む、抗ＣＤ２２抗体部分）と、（ｂ）膜貫通モジュールと、（ｃ）ＣＳＲが機能的一次免疫細胞シグナル伝達ドメインを欠失している免疫細胞に共刺激シグナルを提供することができる共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールと、を含み得る。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、ｃａＴＣＲ又はＣＡＲ（例えば、ＣＤ２２を特異的に標的とするｃａＴＣＲ又はＣＡＲ）と組み合わせて使用される。
キメラ共刺激受容体（ＣＳＲ）構築物
【０２０６】
本明細書に記載されるリガンド特異性キメラ共刺激受容体（ＣＳＲ）は、標的リガンド（細胞表面抗原又はペプチド／ＭＨＣ複合体など）に特異的に結合し、標的リガンド結合の際、機能的に発現される表面上の免疫細胞を刺激することができる。ＣＳＲは、リガンド結合特異性を提供するリガンド結合モジュールと、膜貫通モジュールと、免疫細胞の刺激を可能にする共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールと、を含む。ＣＳＲは、機能的一次免疫細胞シグナル伝達配列を欠失している。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、任意の一次免疫細胞シグナル伝達配列を欠失している。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、リガンド結合モジュールと、膜貫通モジュールと、共刺激シグナル伝達モジュールと、を含む、単一のポリペプチド鎖を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖を含み、第１及び第２のポリペプチド鎖は共に、リガンド結合モジュール、膜貫通モジュール、及び共刺激シグナル伝達モジュールを形成する。いくつかの実施形態では、第１及び第２のポリペプチド鎖は、別個のポリペプチド鎖であり、ＣＳＲは、ダイマーなどのマルチマーである。いくつかの実施形態では、第１及び第２のポリペプチド鎖は、ペプチド結合によって、又はジスルフィド結合などの別の化学結合によって、共有結合されている。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖は、少なくとも１つのジスルフィド結合によって連結されている。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞におけるＣＳＲの発現は誘導性である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞におけるＣＳＲの発現は、ｃａＴＣＲを介したシグナル伝達時に誘導性である。ＣＳＲの更なる説明は、参照によりその全体が本明細書に援用されている、２０１７年４月２６日に出願された米国特許出願第６２／４９０，５７８号に見出すことができる。
【０２０７】
本発明のＣＳＲで使用するため共刺激免疫細胞シグナル伝達ドメインの例としては、ｃａＴＣＲのエンゲージメント後のシグナル伝達を開始するように協力して機能することができるＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の共受容体の細胞質配列、並びにこれらの配列の任意の誘導体又は変異体、並びに同一の機能を有する任意の合成配列が挙げられる。
【０２０８】
ＴＣＲ単独によって生成されたシグナルでは、Ｔ細胞の完全な活性化に不十分であり、二次シグナル又は共刺激シグナルも必要とされることが既知である。したがって、Ｔ細胞活性化は、２つの別個の部類の細胞内シグナル伝達配列、すなわち、ＴＣＲによって抗原依存的一次活性化を開始させる配列（本明細書では「初代Ｔ細胞シグナル伝達配列」と称する）、及び抗原非依存的に作用して、二次シグナル又は共刺激シグナルを提供する配列（本明細書では「共刺激Ｔ細胞シグナル伝達配列」と称する）によって介在されると言うことができる。
【０２０９】
刺激的様式で機能する一次免疫細胞シグナル伝達配列は、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ、すなわち、ＩＴＡＭとして既知であるシグナル伝達モチーフを含有し得る。ＩＴＡＭ含有一次免疫細胞シグナル伝達配列の例としては、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、及びＣＤ６６ｄに由来する配列が挙げられる。「機能的」一次免疫細胞シグナル伝達配列は、適切な受容体に動作可能に結合されたときに免疫細胞活性化シグナルを伝達することができる配列である。一次免疫細胞シグナル伝達配列のフラグメント又は変異体を含み得る「非機能的」一次免疫細胞シグナル伝達配列は、免疫細胞活性化シグナルを伝達することができない。本明細書に記載のＣＳＲは、ＩＴＡＭを含む機能的シグナル伝達配列などの機能的一次免疫細胞シグナル伝達配列を欠失している。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、任意の一次免疫細胞シグナル伝達配列を欠失している。
【０２１０】
共刺激免疫細胞シグナル伝達配列は、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む共刺激分子の細胞内ドメインの一部であり得る。
【０２１１】
いくつかの実施形態では、標的リガンドは、細胞表面抗原である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、ペプチド／ＭＨＣ複合体である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現されるｃａＴＣＲの標的抗原と同一である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現されるｃａＴＣＲの標的抗原とは異なる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、標的抗原を提示する細胞の表面上に提示される分子である。例えば、いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲの標的抗原は、癌細胞上に提示される癌関連抗原であり、標的リガンドは、インテグリンなどの癌細胞の表面上に発現される偏在する分子である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、疾患関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、癌関連リガンドである。いくつかの実施形態では、癌関連リガンドは、例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ４７、ＩＬ４、ＧＰＣ−３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、又はＦＣＲＬ５である。いくつかの実施形態では、癌関連リガンドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、及びＰＳＡを含むタンパク質に由来するペプチドを含むペプチド／ＭＨＣ複合体である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、ウイルス関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、免疫チェックポイント分子である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子は、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ４０、及びＧＡＬ９を含む。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、アポトーシス分子である。いくつかの実施形態では、アポトーシス分子は、ＦａｓＬ、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１、及びＴＮＦＲ２を含む。
【０２１２】
いくつかの実施形態では、リガンド結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、細胞表面抗原、例えば、ＣＤ２２と特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤＲ又はＣＤ２２に特異的な抗体部分の可変ドメイン（ＶＨドメイン及び／又はＶＬドメイン）（例えば、配列番号２１９のアミノ酸配列を含む、配列番号２１９のアミノ酸配列から本質的になる、若しくは配列番号２１９のアミノ酸配列からなる、ＶＨドメイン、及び／又は配列番号２１８のアミノ酸配列を含む、配列番号２１８のアミノ酸配列から本質的になる、若しくは配列番号２１８のアミノ酸配列からなる、ＶＬドメイン、又はその中に含まれるＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤＲ又はＣＤ２２に特異的な抗体部分の可変ドメイン（ＶＨドメイン及び／又はＶＬドメイン）（例えば、配列番号２１３のアミノ酸配列を含む、配列番号２１３のアミノ酸配列から本質的になる、若しくは配列番号２１３のアミノ酸配列からなるＶＨドメイン、及び／又は配列番号２１２のアミノ酸配列を含む、配列番号２１２のアミノ酸配列から本質的になる、若しくは配列番号２１２のアミノ酸配列からなるＶＬドメイン、又はその中に含まれるＣＤＲ）を含む。
【０２１３】
いくつかの実施形態では、膜貫通モジュールは、例えば、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、又はＣＤ１５４に由来する１つ以上の膜貫通ドメインを含む。
【０２１４】
いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達モジュールは、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む、免疫細胞共刺激分子の細胞内ドメインの全て又は一部を含むか、全て又は一部から本質的になるか、あるいは全て又は一部からなる。
【０２１５】
いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、リガンド結合モジュール、膜貫通モジュール、及び共刺激シグナル伝達モジュールのうちのいずれかの間にスペーサモジュールを更に含む。いくつかの実施形態では、スペーサモジュールは、２つのＣＳＲモジュールを結合する１つ以上のペプチドリンカーを含む。いくつかの実施形態では、スペーサモジュールは、（値の間の任意の範囲を含む約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、又は７０個のうちのいずれかなどの）約５〜約７０個のアミノ酸の長さの１つ以上のペプチドリンカーを含む。
【０２１６】
いくつかの実施形態では、リガンド結合モジュール（抗体部分など）は、ａ）他の分子に対する結合親和性の約少なくとも１０倍（例えば、少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、７５、１００、２００、３００、４００、５００、７５０、１０００倍以上のうちのいずれかを含む）の親和性、又はｂ）他の分子に結合するためのＫｄの約１／１０倍以下（例えば、約１／１０、１／２０、１／３０、１／４０、１／５０、１／７５、１／１００、１／２００、１／３００、１／４００、１／５００、１／７５０、１／１０００倍以下のうちのいずれかなど）のＫｄで標的抗原に特異的に結合する。結合親和性は、ＥＬＩＳＡ、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）分析、又は放射線免疫沈降アッセイ（radioimmunoprecipitation assay、ＲＩＡ）などの当該技術分野において既知の方法によって判定することができる。Ｋｄは、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ機器、又は例えば、Ｓａｐｉｄｙｎｅ機器を利用する結合平衡除外法（kinetic exclusion assay、ＫｉｎＥｘＡ）を利用する表面プラズモン共鳴（surface plasmon resonance、ＳＰＲ）アッセイなどの当該技術分野において既知の方法によって判定することができる。
【０２１７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＳＲは、標的リガンド（例えば、ＣＤ２２）と特異的に結合し、ａ）標的リガンド結合ドメイン（ligand-binding domain、ＬＢＤ）と、ｂ）膜貫通ドメインと、ｃ）共刺激シグナル伝達ドメインと、を含み、ＣＳＲは、標的リガンド結合の際に機能的に発現される表面上の免疫細胞を刺激することができる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、細胞表面抗原である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、ペプチド／ＭＨＣ複合体である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現されるｃａＴＣＲの標的抗原と同一である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現されるｃａＴＣＲの標的抗原とは異なる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、疾患関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、癌関連リガンドである。いくつかの実施形態では、癌関連リガンドは、例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ４７、ＩＬ４、ＧＰＣ−３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、又はＦＣＲＬ５である。いくつかの実施形態では、癌関連リガンドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、及びＰＳＡを含むタンパク質に由来するペプチドを含むペプチド／ＭＨＣ複合体である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、ウイルス関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、免疫チェックポイント分子である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子は、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ４０、及びＧＡＬ９を含む。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、アポトーシス分子である。いくつかの実施形態では、アポトーシス分子は、ＦａｓＬ、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１、及びＴＮＦＲ２を含む。いくつかの実施形態では、リガンド結合ドメインは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、リガンド結合ドメインは、標的リガンドの受容体の細胞外ドメインの全て又は一部である（あるいは全て又は一部に由来する）。いくつかの実施形態では、受容体は、例えば、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１、ＴＮＦＲ２、ＰＤ−１、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ−３、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、及びＴＩＭ−３を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、例えば、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、又はＣＤ１５４を含む膜貫通タンパク質に由来する膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、膜貫通タンパク質のフラグメント（ｆＴＭＰ）を含み、ｆＴＭＰは、ＣＳＲ膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機��関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む、免疫細胞共刺激分子の細胞内ドメインの全て又は一部を含むか、全て又は一部から本質的になるか、あるいは全て又は一部からなる。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、免疫細胞共刺激分子のフラグメント（ｆＣＳＭ）を含み、ｆＣＳＭは、ＣＳＲ膜貫通ドメイン及びＣＳＲ共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び共刺激シグナル伝達ドメインのうちのいずれかの間にスペーサドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、スペーサドメインは、２つのＣＳＲドメインを結合するペプチドリンカーを含む。
【０２１８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＳＲは、標的リガンド（例えば、ＣＤ２２）と特異的に結合し、ａ）標的リガンド結合ドメインと、ｂ）膜貫通ドメインと、ｃ）共刺激シグナル伝達ドメインと、を含み、標的リガンドは、細胞表面抗原であり、ＣＳＲは、標的リガンド結合時に機能的に発現される表面上の免疫細胞を刺激することができる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現されるｃａＴＣＲの標的抗原と同一である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現されるｃａＴＣＲの標的抗原とは異なる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、疾患関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、癌関連リガンドである。いくつかの実施形態では、癌関連リガンドは、例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ４７、ＩＬ４、ＧＰＣ−３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、又はＦＣＲＬ５である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、ウイルス関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、免疫チェックポイント分子である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子は、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ４０、及びＧＡＬ９を含む。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、アポトーシス分子である。いくつかの実施形態では、アポトーシス分子は、ＦａｓＬ、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１、及びＴＮＦＲ２を含む。いくつかの実施形態では、リガンド結合ドメインは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、リガンド結合ドメインは、標的リガンドの受容体の細胞外ドメインの全て又は一部である（あるいは全て又は一部に由来する）。いくつかの実施形態では、受容体は、例えば、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１、ＴＮＦＲ２、ＰＤ−１、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ−３、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、及びＴＩＭ−３を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、例えば、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、又はＣＤ１５４を含む膜貫通タンパク質に由来する膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、膜貫通タンパク質のフラグメント（ｆＴＭＰ）を含み、ｆＴＭＰは、ＣＳＲ膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む、免疫細胞共刺激分子の細胞内ドメインの全て又は一部を含むか、全て又は一部から本質的になるか、あるいは全て又は一部からなる。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、免疫細胞共刺激分子のフラグメント（ｆＣＳＭ）を含��、ｆＣＳＭは、ＣＳＲ膜貫通ドメイン及びＣＳＲ共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び共刺激シグナル伝達ドメインのうちのいずれかの間にスペーサドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、スペーサドメインは、２つのＣＳＲドメインを結合するペプチドリンカーを含む。
【０２１９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＳＲは、標的リガンド（例えば、ＣＤ２２）に特異的に結合し、ａ）標的リガンド結合ドメインと、ｂ）膜貫通ドメインと、ｃ）共刺激シグナル伝達ドメインと、を含み、標的リガンドは、ペプチド／ＭＨＣ複合体であり、ＣＳＲは、標的リガンド結合時に機能的に発現される表面上の免疫細胞を刺激することができる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現されるｃａＴＣＲの標的抗原と同一である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現されるｃａＴＣＲの標的抗原とは異なる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、疾患関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、癌関連リガンドである。いくつかの実施形態では、癌関連リガンドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、及びＰＳＡを含むタンパク質に由来するペプチドを含むペプチド／ＭＨＣ複合体である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、ウイルス関連リガンドである。いくつかの実施形態では、リガンド結合ドメインは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、例えば、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、又はＣＤ１５４を含む膜貫通タンパク質に由来する膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、膜貫通タンパク質のフラグメント（ｆＴＭＰ）を含み、ｆＴＭＰは、ＣＳＲ膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む、免疫細胞共刺激分子の細胞内ドメインの全て又は一部を含むか、全て又は一部から本質的になるか、あるいは全て又は一部からなる。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、免疫細胞共刺激分子のフラグメント（ｆＣＳＭ）を含み、ｆＣＳＭは、ＣＳＲ膜貫通ドメイン及びＣＳＲ共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び共刺激シグナル伝達ドメインのうちのいずれかの間にスペーサドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、スペーサドメインは、２つのＣＳＲドメインを結合するペプチドリンカーを含む。
【０２２０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＳＲは、標的リガンド（例えば、ＣＤ２２）に特異的に結合し、ａ）標的リガンド結合ドメインと、ｂ）膜貫通ドメインと、ｃ）共刺激シグナル伝達ドメインと、を含み、リガンド結合ドメインは、抗体部分であり、ＣＳＲは、標的リガンド結合の際、機能的に発現される表面上の免疫細胞を刺激することができる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、細胞表面抗原である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、ペプチド／ＭＨＣ複合体である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現されるｃａＴＣＲの標的抗原と同一である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現されるｃａＴＣＲの標的抗原とは異なる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、疾患関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、癌関連リガンドである。いくつかの実施形態では、癌関連リガンドは、例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ４７、ＩＬ４、ＧＰＣ−３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、又はＦＣＲＬ５である。いくつかの実施形態では、癌関連リガンドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、及びＰＳＡを含むタンパク質に由来するペプチドを含むペプチド／ＭＨＣ複合体である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、ウイルス関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、免疫チェックポイント分子である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子は、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ４０、及びＧＡＬ９を含む。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、アポトーシス分子である。いくつかの実施形態では、アポトーシス分子は、ＦａｓＬ、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１、及びＴＮＦＲ２を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、例えば、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、又はＣＤ１５４を含む膜貫通タンパク質に由来する膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、膜貫通タンパク質のフラグメント（ｆＴＭＰ）を含み、ｆＴＭＰは、ＣＳＲ膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む、免疫細胞共刺激分子の細胞内ドメインの全て又は一部を含むか、全て又は一部から本質的になるか、あるいは全て又は一部からなる。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、免疫細胞共刺激分子のフラグメント（ｆＣＳＭ）を含み、ｆＣＳＭは、ＣＳＲ膜貫通ドメイン及びＣＳＲ共刺激シグナル伝達��メインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び共刺激シグナル伝達ドメインのうちのいずれかの間にスペーサドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、スペーサドメインは、２つのＣＳＲドメインを結合するペプチドリンカーを含む。
【０２２１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＳＲは、標的リガンド（例えば、ＣＤ２２）に特異的に結合し、ａ）標的リガンド結合ドメインと、ｂ）膜貫通ドメインと、ｃ）共刺激シグナル伝達ドメインと、を含み、リガンド結合ドメインは、標的リガンドの受容体の細胞外ドメインの全部又は一部であり（あるいは全部又は一部に由来し）、ＣＳＲは、標的リガンドの結合時に機能的に発現する表面上の免疫細胞を刺激することができる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、細胞表面抗原である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現されるｃａＴＣＲの標的抗原と同一である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現されるｃａＴＣＲの標的抗原とは異なる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、疾患関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、癌関連リガンドである。いくつかの実施形態では、癌関連リガンドは、例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ４７、ＩＬ４、ＧＰＣ−３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、又はＦＣＲＬ５である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、免疫チェックポイント分子である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子は、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ４０、及びＧＡＬ９を含む。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、アポトーシス分子である。いくつかの実施形態では、アポトーシス分子は、ＦａｓＬ、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１、及びＴＮＦＲ２を含む。いくつかの実施形態では、標的リガンド受容体は、例えば、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１、ＴＮＦＲ２、ＰＤ−１、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ−３、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、及びＴＩＭ−３を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、例えば、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９，ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、又はＣＤ１５４に由来する膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む、免疫細胞共刺激分子の細胞内ドメインの全て又は一部を含むか、全て又は一部から本質的になるか、あるいは全て又は一部からなる。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び共刺激シグナル伝達ドメインのうちのいずれかの間にスペーサドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、スペーサドメインは、２つのＣＳＲドメインを結合するペプチドリンカーを含む。
【０２２２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＳＲは、ＣＤ２２に特異的に結合し、配列番号２１９のアミノ酸配列を有するＶＨドメインと、配列番号２１８のアミノ酸配列を有するＶＬドメインと、を含む、ｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、アミノ末端からカルボキシ末端まで、ＶＬドメイン、配列番号２３３のアミノ酸配列を含むペプチドリンカー、及びＶＨドメインを含む。
【０２２３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＳＲは、ＣＤ２２に特異的に結合し、配列番号２１３のアミノ酸配列を有するＶＨドメインと、配列番号２１２のアミノ酸配列を有するＶＬドメインと、を含む、ｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、アミノ末端からカルボキシ末端まで、ＶＬドメイン、配列番号２３３のアミノ酸配列を含むペプチドリンカー、及びＶＨドメインを含む。
【０２２４】
いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、抗ＣＤ２２  ＣＳＲ、抗ＣＤ１９  ＣＳＲ、又は抗ＣＤ２０  ＣＳＲであってもよい。ＣＳＲは、共刺激分子の細胞内ドメインの一部であり得る細胞内フラグメント（すなわち、共刺激免疫細胞シグナル伝達配列）を含み得る。共刺激分子の例としては、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、共刺激分子の膜貫通部分のフラグメントであり得る膜貫通フラグメントを含み得る。いくつかの実施形態では、ＣＳＲにおける細胞内フラグメント及び膜貫通フラグメントは、同じ共刺激分子（例えば、ＣＤ２８又はＣＤ３０）由来であり得る。いくつかの実施形態では、ＣＳＲにおける細胞内フラグメント及び膜貫通フラグメントは、異なる共刺激分子由来であり得る。いくつかの実施形態では、細胞内フラグメントは、第１の共刺激分子から取得され、第２の共刺激分子からの膜貫通フラグメントに融合され得る。例えば、膜貫通フラグメントは、ＣＤ８の膜貫通部分由来であってもよく、細胞内フラグメントは、ＣＤ３０の細胞内ドメイン由来であってもよい。いくつかの実施形態では、ＣＳＲにおける細胞内フラグメント及び膜貫通フラグメントが同じ共刺激分子由来である場合、細胞内フラグメント及び膜貫通フラグメントは、単一の共刺激分子（例えば、単一のＣＤ２８又は単一のＣＤ３０）から取得され得る。他の実施形態では、ＣＳＲにおける細胞内フラグメント及び膜貫通フラグメントが同じ共刺激分子由来である場合、細胞内フラグメントは、第１の共刺激分子（例えば、第１のＣＤ２８）から取得され、第２の共刺激分子（例えば、第２のＣＤ２８）から取得された膜貫通フラグメントに融合され得る。
【０２２５】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９  ＣＳＲは、配列番号８１〜９６のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ＣＳＲは、配列番号９７〜１１２のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０  ＣＳＲは、配列番号１１３〜１２８のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、配列番号１２９〜１４４のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を含む。
【０２２６】
いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞におけるＣＳＲの発現は誘導性である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、本明細書に記載の誘導性プロモータのうちのいずれかを含む誘導性プロモータに作動可能に連結されたＣＳＲをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞におけるＣＳＲの発現は、ｃａＴＣＲを介したシグナル伝達時に誘導性である。いくつかのかかる実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、ｃａＴＣＲを介したシグナル伝達に応答してプロモータ又は調節エレメントに作動可能に連結されたＣＳＲをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲをコードする核酸配列は、活性化Ｔ細胞核内因子（nuclear-factor of the activated T-cell、ＮＦＡＴ）由来プロモータに作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、ＮＦＡＴ由来プロモータは、ＮＦＡＴ由来の最小プロモータである（例えば、Ｄｕｒａｎｄ，Ｄ．ｅｔ．ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．８，１７１５−１７２４（１９８８）；Ｃｌｉｐｓｔｏｎｅ，ＮＡ，Ｃｒａｂｔｒｅｅ，ＧＲ．Ｎａｔｕｒｅ．１９９２  ３５７（６３８０）：６９５−７；Ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ７１．１７（２０１１）：５６９７−５７０６；ａｎｄ  Ｚｈａｎｇ，Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｔｈｅｒａｐｙ  １９．４（２０１１）：７５１−７５９）を参照）。
【０２２７】
抗ＣＤ２２  ＣＡＲ、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ、又は抗ＣＤ２２  ＣＳＲなどの抗ＣＤ２２構築物を発現するエフェクタ細胞（例えば、Ｔ細胞などのリンパ球など）もまた提供される。
【０２２８】
抗ＣＤ２２  ＣＡＲ、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ、又は抗ＣＤ２２  ＣＳＲを発現するエフェクタ細胞の生成方法もまた提供され、方法は、抗ＣＤ２２  ＣＡＲ、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ、又は抗ＣＤ２２  ＣＳＲをコードする核酸を含むベクターをエフェクタ細胞内に導入することを含む。いくつかの実施形態では、ベクターをエフェクタ細胞内に導入することは、ベクターでエフェクタ細胞を形質導入することを含む。いくつかの実施形態では、ベクターをエフェクタ細胞に導入することは、ベクターでエフェクタ細胞をトランスフェクトすることを含む。エフェクタ細胞へのベクターの形質導入又はトランスフェクションは、当該技術分野において既知の任意の方法を使用して実施することができる。
単一特異性構築物
【０２２９】
本発明は、標的リガンド（細胞表面抗原又はペプチド／ＭＨＣ複合体など）に特異的に結合する単一特異性構築物を特徴とし、単一特異性構築物は、標的リガンド結合の際、機能的に発現される表面上の免疫細胞を刺激することができる。いくつかの実施形態では、単一特異性構築物は、ＣＤ２２を特異的に標的化する。いくつかの実施形態では、単一特異性構築物は、ｃａＴＣＲ、ＣＳＲ、ＣＡＲ、完全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体、タンデムｓｃＦｖ、ダイアボディ（Ｄｂ）、一本鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、二重親和性再標的化（ＤＡＲＴ）抗体、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）抗体、ノブ・イントゥ・ホール（ＫｉＨ）抗体、ドックアンドロック（ＤＮＬ）抗体、化学的に架橋された抗体、ヘテロマルチマー抗体、又はヘテロ結合抗体であってもよい。
【０２３０】
いくつかの実施形態では、単一特異性構築物は、抗ＣＤ２２抗体部分を含む抗ＣＤ２２構築物である。特定の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体部分は、（ａ）配列番号２１２の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、（ｂ）配列番号２１３の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体部分は、（ａ）配列番号２１８の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、（ｂ）配列番号２１９の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含む。他の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体部分は、配列番号１８６の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を含む抗ＣＤ２２  ｓｃＦｖを含む。
【０２３１】
いくつかの実施形態では、単一特異性抗ＣＤ２２構築物は、ｃａＴＣＲ、ＣＳＲ、ＣＡＲ、又は抗体であり、それぞれは、一価又は多価（例えば、二価、三価、四価）であり得る。例えば、構築物４（配列番号４）は、抗ＣＤ２２  ｓｃＦｖ及び抗ＣＤ２２  Ｆａｂを含み、「二価単一特異性」構築物とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、単一特異性抗ＣＤ２２構築物は、複数のＦａｂ又はＦａｂ及びｓｃＦｖの組み合わせを含有し得る多価のｃａＴＣＲである。
【０２３２】
いくつかの実施形態では、単一特異性構築物は、ｃａＴＣＲ、例えば、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ、抗ＣＤ１９  ｃａＴＣＲ、又は抗ＣＤ２０  ｃａＴＣＲであり得る。いくつかの実施形態では、単一特異性ｃａＴＣＲは、配列番号２、４、２２、２８、及び７６〜８０のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を含む。
【０２３３】
いくつかの実施形態では、単一特異性構築物は、ＣＳＲ、例えば、抗ＣＤ２２  ＣＳＲ、抗ＣＤ１９  ＣＳＲ、又は抗ＣＤ２０  ＣＳＲであり得る。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９  ＣＳＲは、配列番号８１〜９６のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ＣＳＲは、配列番号９７〜１１２のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０  ＣＳＲは、配列番号１１３〜１２８のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を含む。
多重特異性構築物
【０２３４】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、多重特異性（例えば、二重特異性）であり得る。多重特異性抗ＣＤ２２構築物は、２つ以上の標的に対する抗体部分を有する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＣＤ２２構築物は、ＣＤ２２に対する１つの抗体部分と、１つ以上の非ＣＤ２２抗原（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、Ｂ細胞悪性腫瘍で発現される非ＣＤ２２抗原）に対する１つ以上の追加抗体部分を有する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＣＤ２２構築物は、二重特異性、三重特異性、四重特異的、又は五重特異性であってもよい。いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＣＤ２２構築物は、ｃａＴＣＲ、ＣＳＲ、ＣＡＲ、完全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体、タンデムｓｃＦｖ、ダイアボディ（Ｄｂ）、一本鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、二重親和性再標的化（ＤＡＲＴ）抗体、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）抗体、ノブ・イントゥ・ホール（ＫｉＨ）抗体、ドックアンドロック（ＤＮＬ）抗体、化学的に架橋された抗体、ヘテロマルチマー抗体、又はヘテロ結合抗体であってもよい。
多重特異性構築物−二重特異性構築物
【０２３５】
本発明は、２つの標的リガンド（細胞表面抗原又はペプチド／ＭＨＣ複合体など）に特異的に結合する二重特異性構築物を特徴とし、二重特異性構築物は、標的リガンド結合の際に機能的に発現される表面上の免疫細胞を刺激することができる。いくつかの実施形態では、二重特異性構築物は、ＣＤ２２及びＣＤ１９を特異的に標的化する。他の実施形態では、二重特異性構築物は、ＣＤ２２及びＣＤ２０を特異的に標的化する。
【０２３６】
いくつかの実施形態では、二重特異性構築物は、ｃａＴＣＲ、例えば、抗ＣＤ２２−抗ＣＤ１９  ｃａＴＣＲであり得る。いくつかの実施形態では、二重特異性ｃａＴＣＲは、配列番号１５〜２１のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を含む。
【０２３７】
いくつかの実施形態において、二重特異性構築物は、ＣＳＲであり得る。いくつかの実施形態では、二重特異性ＣＳＲは、配列番号１２９〜１４４のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を含む。
多重特異性構築物−三重特異性構築物
【０２３８】
本発明は、３つの標的リガンド（細胞表面抗原又はペプチド／ＭＨＣ複合体など）に特異的に結合する三重特異性構築物を特徴とし、三重特異性構築物は、標的リガンド結合の際に機能的に発現される表面上の免疫細胞を刺激することができる。いくつかの実施形態では、三重特異性構築物は、ＣＤ２２、ＣＤ１９、及びＣＤ２０を特異的に標的化する。
【０２３９】
いくつかの実施形態では、三重特異性構築物は、配列番号２４〜２７のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＬＧＡタグ（配列番号１９５）は、配列番号２４〜２７のうちのいずれか１つの配列から除去される。
構築物の組み合わせ
【０２４０】
本発明は、本発明の少なくとも２つの異なる構築物を含む構築物の組み合わせを特徴とする。いくつかの実施形態では、少なくとも２つの異なる構築物は、同じ種類の構築物、例えば、２つの異なる抗体（例えば、２つの異なる完全長のＩｇＧ又は２つの異なる二重特異性抗体）、２つの異なるＣＡＲ、２つの異なるｃａＴＣＲ、又は２つの異なるＣＳＲである。いくつかの実施形態では、少なくとも２つの異なる構築物は、異なる種類の構築物、例えば、抗体＋ＣＡＲ、抗体＋ｃａＴＣＲ、ＣＡＲ＋ＣＳＲ、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲなどである。いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、少なくとも１つの単一特異性構築物を含む。いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、少なくとも１つの多重特異性構築物を含む。いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、少なくとも１つの単一特異性構築物及び少なくとも１つの多重特異性構築物を含む。いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせにおける少なくとも２つの異なる構築物は、少なくとも１つの共通の標的に対する抗体部分を有する。いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせにおける少なくとも２つの異なる構築物は、任意の共通標的に対する抗体部分を有さない。
【０２４１】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、本発明の少なくとも１つの抗ＣＤ２２構築物を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗ＣＤ２２構築物は、抗体、ＣＡＲ、ｃａＴＣＲ、又はＣＳＲである。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗ＣＤ２２構築物は、単一特異性構築物である。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗ＣＤ２２構築物は、多重特異性構築物である。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗ＣＤ２２構築物は、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲであり、構築物の組み合わせは、ＣＳＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲは、ＣＳＲと組み合わせて発現される。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗ＣＤ２２構築物は、抗ＣＤ２２  ＣＳＲであり、構築物の組み合わせは、ｃａＴＣＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ＣＳＲは、ｃａＴＣＲと組み合わせて発現される。
単一特異性構築物を含む構築物の組み合わせ
【０２４２】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、標的リガンド（細胞表面抗原又はペプチド／ＭＨＣ複合体など）に特異的に結合する少なくとも１つの単一特異性構築物を含み、単一特異性構築物は、標的リガンド結合の際に機能的に発現される表面上の免疫細胞を刺激することができる。いくつかの実施形態では、単一特異性構築物は、ＣＤ２２を特異的に標的化する。
【０２４３】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、単一特異性構築物を含み、構築物の組み合わせは、配列番号１、３、及び５〜１４のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を含む。
【０２４４】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、単一特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号７７の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号８１〜９６のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２４５】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、単一特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号７７の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号９７〜１１２のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２４６】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、単一特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号７７の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１１３〜１２８のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２４７】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、単一特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号７８の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号８１〜９６のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２４８】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、単一特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号７８の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号９７〜１１２のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２４９】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、単一特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号７８の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１１３〜１２８のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２５０】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、単一特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号７７のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、ＣＤ８、４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、又はＯＸ４０の膜貫通フラグメントを含む配列を有する。いくつかの実施形態では、膜貫通フラグメントは、配列番号１４５〜１５０のうちのいずれか１つの配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、抗ＣＤ２２部分を含む。
【０２５１】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、単一特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号７７のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、及びＣＤ２７からなる群から選択される分子の細胞内フラグメントを含む配列を有する。いくつかの実施形態では、細胞内フラグメントは、配列番号１５１〜１５５のうちのいずれか１つの配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、抗ＣＤ２２部分を含む。
【０２５２】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、単一特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号７７のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１５６〜１７１のうちのいずれか１つの配列を含む配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、抗ＣＤ２２部分を含む。
【０２５３】
本明細書に開示される構築物の組み合わせのうちのいずれか１つにおいて、いくつかの実施形態では、それぞれのｃａＴＣＲ及びＣＳＲは、単一の核酸によってコードされ、発現され、単一のポリペプチドとして最初に翻訳され、次いで、別個のポリペプチドに切断され得る。ｃａＴＣＲ及びＣＳＲは、切断可能なＰ２Ａペプチド（例えば、配列番号１９０）を介して結合することができる。他の実施形態では、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲは、２つの異なる核酸によってコードされ、発現され、別個のポリペプチドとして別個に翻訳され得る。
二重特異性構築物を含む構築物の組み合わせ
【０２５４】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、２つの標的リガンド（細胞表面抗原又はペプチド／ＭＨＣ複合体など）に特異的に結合する少なくとも１つの二重特異性構築物を含み、二重特異性構築物は、標的リガンド結合の際、機能的に発現される表面上の免疫細胞を刺激することができる。いくつかの実施形態では、二重特異性構築物は、ＣＤ２２及びＣＤ１９を特異的に標的化する。他の実施形態では、二重特異性構築物は、ＣＤ２２及びＣＤ２０を特異的に標的化する。
【０２５５】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性構築物を含み、構築物の組み合わせは、配列番号２３及び２９〜７５のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を含む。
【０２５６】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１５の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号８１〜９６のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２５７】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１６の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号８１〜９６のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２５８】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１７の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号８１〜９６のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２５９】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１８の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号８１〜９６のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２６０】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１９の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号８１〜９６のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２６１】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２０の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号８１〜９６のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２６２】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２１の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号８１〜９６のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２６３】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１５の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号９７〜１１２のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２６４】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１６の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号９７〜１１２のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２６５】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１７の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号９７〜１１２のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２６６】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１８の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号９７〜１１２のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２６７】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１９の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号９７〜１１２のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２６８】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２０の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号９７〜１１２のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２６９】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２１の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号９７〜１１２のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２７０】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１５の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１１３〜１２８のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２７１】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１６の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１１３〜１２８のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２７２】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１７の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１１３〜１２８のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２７３】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１８の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１１３〜１２８のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２７４】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１９の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１１３〜１２８のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２７５】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２０の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１１３〜１２８のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２７６】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２１の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１１３〜１２８のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２７７】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１５の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１２９〜１４４のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２７８】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１６の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１２９〜１４４のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２７９】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１７の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１２９〜１４４のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２８０】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１８の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１２９〜１４４のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２８１】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１９の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１２９〜１４４のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２８２】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２０の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１２９〜１４４のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２８３】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２１の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１２９〜１４４のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２８４】
本明細書に開示される二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含む構築物の組み合わせのうちのいずれか１つにおいて、いくつかの実施形態では、それぞれのｃａＴＣＲ及びＣＳＲは、単一の核酸によってコードされ、発現され、単一のポリペプチドとして最初に翻訳され、次いで別個のポリペプチドに切断され得る。ｃａＴＣＲ及びＣＳＲは、切断可能なＰ２Ａペプチド（例えば、配列番号１９０）を介して結合することができる。他の実施形態では、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲは、２つの異なる核酸においてコードされ、発現され、別個のポリペプチドとして別個に翻訳され得る。
三重特異性構築物を含む構築物の組み合わせ
【０２８５】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、３つの標的リガンド（細胞表面抗原又はペプチド／ＭＨＣ複合体など）に特異的に結合する少なくとも１つの三重特異性構築物を含み、三重特異性構築物は、標的リガンド結合の際、機能的に発現される表面上の免疫細胞を刺激することができる。いくつかの実施形態では、三重特異性構築物の組み合わせは、ＣＤ２２、ＣＤ１９、及びＣＤ２０を特異的に標的化する。
【０２８６】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、三重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２４の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号８１〜９６のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２８７】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、三重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２５の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号８１〜９６のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２８８】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、三重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２６の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号８１〜９６のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２８９】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、三重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２７の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号８１〜９６のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２９０】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、三重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２４の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号９７〜１１２のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２９１】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、三重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２５の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号９７〜１１２のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２９２】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、三重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２６の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号９７〜１１２のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２９３】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、三重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２７の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号９７〜１１２のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２９４】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、三重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２４の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１１３〜１２８のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２９５】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、三重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２５の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１１３〜１２８のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２９６】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、三重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２６の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１１３〜１２８のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２９７】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、三重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２７の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１１３〜１２８のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２９８】
本明細書に開示される三重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含む構築物の組み合わせのうちのいずれか１つにおいて、いくつかの実施形態では、それぞれのｃａＴＣＲ及びＣＳＲは、単一の核酸によってコードされ、発現され、単一のポリペプチドとして最初に翻訳され、次いで別個のポリペプチドに切断され得る。ｃａＴＣＲ及びＣＳＲは、切断可能なＰ２Ａペプチド（例えば、配列番号１９０）を介して結合することができる。他の実施形態では、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲは、２つの異なる核酸においてコードされ、発現され、別個のポリペプチドとして別個に翻訳され得る。
【０２９９】
いくつかの実施形態では、標的抗原を結合する際、ＣＤ３ζと会合すると、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞を活性化することができる。一般的に、ＣＳＲはＣＤ３ζと会合せず、標的抗原を結合する際、Ｔ細胞を活性化しない。ｃａＴＣＲ及びＣＳＲの更なる説明及び実施例は、それぞれが参照によりその全体が本明細書に援用されている国際公開第２０１８／２００５８２号及び同第２０１８／２００５８３号に見出すことができる。
抗体−薬物コンジュゲート
【０３００】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２抗体部分及び治療薬を含む抗ＣＤ２２免疫コンジュゲート（本明細書では、「抗体−薬物コンジュゲート」、又は「ＡＤＣ」とも称される）が提供される。いくつかの実施形態では、治療薬は、細胞傷害性、細胞増殖抑制性のいずれか一方である毒素であるか、あるいは別の方法で標的細胞が分裂する能力を防止又は低減する毒素である。細胞傷害剤又は細胞増殖抑制剤の局所送達のためのＡＤＣ、すなわち、癌の治療における腫瘍細胞を殺傷又は阻害する薬物（Ｓｙｒｉｇｏｓ  ａｎｄ  Ｅｐｅｎｅｔｏｓ，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １９：６０５−６１４（１９９９）；Ｎｉｃｕｌｅｓｃｕ−Ｄｕｖａｚ  ａｎｄ  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ａｄｖ．Ｄｒｇ．Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．２６：１５１−１７２（１９９７）；米国特許第４，９７５，２７８号）の使用により、標的細胞への薬剤部分の標的化送達、及び標的細胞への細胞内蓄積を可能にし、これらの非コンジュゲート化治療薬の全身投与により、正常細胞並びに排除されることが求められる標的細胞への許容不可能なレベルの毒性がもたらされ得る（Ｂａｌｄｗｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ（Ｍａｒ．１５，１９８６）：６０３−６０５（１９８６）；Ｔｈｏｒｐｅ，（１９８５）「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  Ｏｆ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ，」ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ａ．Ｐｉｎｃｈｅｒａ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．４７５−５０６）。したがって、最小限の毒性による最大有効性が求められている。
【０３０１】
抗ＣＤ２２免疫コンジュゲート（例えば、抗ＣＤ２２  ＡＤＣ）に使用される治療薬としては、例えば、ダウノマイシン、ドキソルビシン、メトトレキサート、及びビンデシンが挙げられる（Ｒｏｗｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２１：１８３−１８７（１９８６）を参照されたい）。抗ＣＤ２２免疫コンジュゲートに使用される毒素としては、ジフテリア毒素などの細菌毒素、リシンなどの植物毒素、ゲルダナマイシンなどの小分子毒素（Ｍａｎｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎａｔ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９２（１９）：１５７３−１５８１（２０００）；Ｍａｎｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ  １０：１０２５−１０２８（２０００）；Ｍａｎｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．１３：７８６−７９１（２００２））、マイタンシノイド（欧州特許第１３９１２１３号；Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：８６１８−８６２３（１９９６））、及びカリケアマイシン（Ｌｏｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５８：２９２８（１９９８）；Ｈｉｎｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５３：３３３６−３３４２（１９９３）を参照されたい）。毒素は、チューブリン結合、ＤＮＡ結合、又はトポイソメラーゼ阻害を含む機構によって、細胞傷害効果及び細胞増殖抑制効果を発揮し得る。いくつかの細胞傷害薬は、大型抗体又はタンパク質受容体リガンドにコンジュゲートした場合、非活性であるか、又は活性が小さくなる傾向がある。
【０３０２】
使用することができる酵素的に活性な毒素及びこれらのフラグメントとしては、例えば、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性フラグメント、（緑膿菌由来の）菌体外毒素Ａ鎖、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、α−サルシン、シナアブラギリタンパク質、ダイアンシンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウタンパク質（Phytolaca americana protein、ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ及びＰＡＰ−Ｓ）、ニガウリ阻害剤、クルシン、クロチン、サボンソウ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン及びトリコセセンズが挙げられる。例えば、１９９３年１０月２８日に発行された国際公開第９３／２１２３２号を参照。
【０３０３】
抗ＣＤ２２抗体部分の抗ＣＤ２２免疫コンジュゲート（例えば、抗ＣＤ２２  ＡＤＣ）、並びに、カリケアマイシン、マイタンシノイド、ドラスタチン、及びＣＣ１０６５、並びに毒素活性を有するこれらの毒素の誘導体などの１種以上の小分子毒素もまた本明細書において想到される。
【０３０４】
いくつかの実施形態では、細胞内活性を有する治療薬を含む抗ＣＤ２２免疫コンジュゲート（例えば、抗ＣＤ２２  ＡＤＣ）が提供される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２免疫コンジュゲートは内在化し、治療薬は、細胞のタンパク質合成を阻害し、細胞死をもたらす細胞毒素である。いくつかの実施形態では、治療薬は、例えば、ゲロニン、ブーゲニン、サポリン、リシン、リシンＡ鎖、ブリオジン（bryodin）、ジフテリア毒素、レストリクトシン、緑膿菌由来菌体外毒素Ａ及びこれらの変異体を含む、リボソーム不活性化活性を有するポリペプチドを含む細胞毒素である。治療薬が、リボソーム不活性化活性を有するポリペプチドを含む細胞毒素であるいくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２免疫コンジュゲートは、タンパク質が細胞に対して細胞傷害性であるように、標的細胞への結合時に内在化していなければならない。
【０３０５】
いくつかの実施形態では、ＤＮＡを破壊するように作用する治療薬を含む抗ＣＤ２２免疫コンジュゲート（例えば、抗ＣＤ２２  ＡＤＣ）が提供される。いくつかの実施形態では、ＤＮＡを破壊するように作用する治療薬は、例えば、エンジイン（例えば、カリケアマイシン及びエスペラマイシン）及び非エンジインである低分子の薬剤（例えば、ブレオマイシン、メチジウムプロピル−ＥＤＴＡ−Ｆｅ（ＩＩ））からなる群から選択される。
【０３０６】
本発明は、抗ＣＤ２２抗体部分と核酸分解活性を有する化合物（例えば、リボヌクレアーゼ又はデオキシリボヌクレアーゼ、すなわち、ＤＮａｓｅなどのＤＮＡエンドヌクレアーゼ）との間に形成された抗ＣＤ２２免疫コンジュゲート（例えば、抗ＣＤ２２  ＡＤＣ）を更に想到している。
【０３０７】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２免疫コンジュゲートは、チューブリンを破壊するように作用する薬剤を含む。このような薬剤としては、例えば、リゾキシン／メイタンシン、パクリタキセル、ビンクリスチン、及びビンブラスチン、コルヒチン、アウリスタチンドラスタチン１０ＭＭＡＥ、並びにペロルシドＡを挙げることができる。
【０３０８】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２免疫コンジュゲート（例えば、抗ＣＤ２２  ＡＤＣ）は、例えば、アサレイ（Ａｓａｌｅｙ）ＮＳＣ１６７７８０、ＡＺＱ  ＮＳＣ１８２９８６、ＢＣＮＵ  ＮＳＣ４０９９６２、ブスルファン（Ｂｕｓｕｌｆａｎ）ＮＳＣ７５０、カルボキシフタラト白金ＮＳＣ２７１６７４、ＣＢＤＣＡ  ＮＳＣ２４１２４０、ＣＣＮＵ  ＮＳＣ７９０３７、ＣＨＩＰ  ＮＳＣ２５６９２７、クロラムブシルＮＳＣ３０８８、クロロゾトシンＮＳＣ１７８２４８、シス−白金ＮＳＣ１１９８７５、クロメゾンＮＳＣ３３８９４７、シアノモルホリノドキソルビシンＮＳＣ３５７７０４、シクロジソンＮＳＣ３４８９４８、ジアンヒドロガラクチトールＮＳＣ１３２３１３、フルオロドパン（ｆｌｕｏｒｏｄｏｐａｎ）ＮＳＣ７３７５４、ヘプスルファム（ｈｅｐｓｕｌｆａｍ）ＮＳＣ３２９６８０、ヒカントン（ｈｙｃａｎｔｈｏｎｅ）ＮＳＣ１４２９８２、メルファランＮＳＣ８８０６、メチルＣＣＮＵ  ＮＳＣ９５４４１、マイトマイシンＣ  ＮＳＣ２６９８０、ミトゾールアミドＮＳＣ３５３４５１、ナイトロジェンマスタードＮＳＣ７６２、ＰＣＮＵ  ＮＳＣ９５４６６、ピペラジンＮＳＣ３４４００７、ピペラジンジオンＮＳＣ１３５７５８、ピポブロマンＮＳＣ２５１５４、ポルフィロマイシンＮＳＣ５６４１０、スピロヒダントインマスタード（ｓｐｉｒｏｈｙｄａｎｔｏｉｎ  ｍｕｓｔａｒｄ）ＮＳＣ１７２１１２、テロキシロン（ｔｅｒｏｘｉｒｏｎｅ）ＮＳＣ２９６９３４、テトラプラチンＮＳＣ３６３８１２、チオテパＮＳＣ６３９６、トリエチレンメラミンＮＳＣ９７０６、ウラシルナイトロジェンマスタードＮＳＣ３４４６２及びヨシ（Ｙｏｓｈｉ）−８６４  ＮＳＣ１０２６２７を含むアルキル化剤を含む。
【０３０９】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２免疫コンジュゲート（例えば、抗ＣＤ２２  ＡＤＣ）は、高放射性原子を含む。放射性コンジュゲートした抗体の生成には、様々な放射性同位体が利用可能である。例としては、２１１Ａｔ、１３１Ｉ、１２５Ｉ、９０Ｙ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１５３Ｓｍ、２１２Ｂｉ、３２Ｐ、２１２Ｐｂ、及びＬｕの放射性同位体が挙げられる。
【０３１０】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２抗体部分は、抗体−受容体コンジュゲートが患者に投与される場所において腫瘍を事前に標的とする際に利用するための「受容体」（ストレプトアビジンなど）にコンジュゲートさせることができ、続いて、クリア剤を使用して循環から非結合コンジュゲートを除去し、次いで、細胞毒性剤（例えば、放射性ヌクレオチド）にコンジュゲートしている「リガンド」（例えば、アビジン）を投与する。
【０３１１】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２免疫コンジュゲート（例えば、抗ＣＤ２２  ＡＤＣ）は、プロドラッグ活性化酵素にコンジュゲートした抗ＣＤ２２抗体部分を含んでもよい。いくつかのこのような実施形態では、プロドラッグ活性化酵素は、プロドラッグを抗ウイルス薬などの活性薬剤に変換する。かかる抗ＣＤ２２免疫コンジュゲートは、いくつかの実施形態では、抗体依存性酵素介在性プロドラッグ療法（「ＡＤＥＰＴ」）において有用である。抗体にコンジュゲートされ得る酵素としては、リン酸塩含有プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用なアルカリホスファターゼ；硫酸塩含有プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用なアリールスルファターゼ；ペプチド含有プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用な、セラチアプロテアーゼ、テルモリシン、サブチリシン、カルボキシペプチダーゼ、及びカテプシン（カテプシンＢ及びＬなど）などのプロテアーゼ；Ｄ−アミノ酸置換基を含有するプロドラッグを変換するのに有用なＤ−アラニルカルボキシペプチダーゼ；グリコシル化プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用な、β−ガラクトシダーゼ及びノイラミニダーゼなどの炭水化物分解酵素；β−ラクタムで誘導化された薬物を遊離薬物に変換するのに有用なβ−ラクタマーゼ；並びにフェノキシアセチル基又はフェニルアセチル基をそれぞれ有するアミン窒素で誘導化された薬物を遊離薬物に変換するのに有用なペニシリンＶアミダーゼ及びペニシリンＧアミダーゼなどのペニシリンアミダーゼが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、酵素は、当該技術分野において周知の組み換えＤＮＡ技術によって抗体部分に共有結合してもよい。例えば、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：６０４−６０８（１９８４）を参照。
【０３１２】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２免疫コンジュゲート（例えば、抗ＣＤ２２  ＡＤＣ）のうち治療に効果的な部分は核酸であり得る。使用され得る核酸としては、チオグアニン及びチオプリンなどの核酸類似体を含む、アンチセンスＲＮＡ、遺伝子又は他のポリヌクレオチドが挙げられるが、これらに限定されない。
【０３１３】
本出願は、エフェクタ分子に付着した抗ＣＤ２２抗体部分を含む抗ＣＤ２２免疫コンジュゲート（例えば、抗ＣＤ２２  ＡＤＣ）を更に提供し、エフェクタ分子は、標識であり、間接的又は直接的に検出可能なシグナルを生成することができる。これらの抗ＣＤ２２免疫コンジュゲートは、癌のインビボでの検出などの研究又は診断用途に使用することができる。標識は、好ましくは、検出可能なシグナルを直接的又は間接的に生成することができる。例えば、標識は、放射線不透過性、若しくは３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉなどの放射性同位体；フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン若しくはルシフェリンなどの蛍光（発蛍光団）化合物若しくは化学発光（発色団）化合物；アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、若しくは西洋ワサビペルオキシダーゼなどの酵素；造影剤；又は金属イオンであってもよい。いくつかの実施形態では、標識は、シンチグラフィ検査用の放射性原子、例えば、９９Ｔｃ若しくは１２３Ｉ、又はジルコニウム−８９、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガン又は鉄などの（磁気共鳴撮像法、すなわち、ＭＲＩとしても既知である）核磁気共鳴（nuclear magnetic resonance、ＮＭＲ）撮像用のスピン標識である。ジルコニウム−８９は、様々な金属キレート剤と錯体化され、例えば、ＰＥＴ画像診断（国際公開第２０１１／０５６９８３号）に関して、抗体にコンジュゲートされ得る。
【０３１４】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２免疫コンジュゲートは、間接的に検出可能である。例えば、抗ＣＤ２２免疫コンジュゲートに特異性であり、検出可能な標識を含有する二次抗体を使用して、抗ＣＤ２２免疫コンジュゲートを検出することができる。
ＩＩＩ．ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞
【０３１５】
本発明は、本明細書に記載されるｃａＴＣＲ及びＣＳＲのうちの任意によるｃａＴＣＲ及びＣＳＲを表面に提示する免疫細胞（Ｔ細胞など）を提供する（かかる免疫細胞は、本明細書において「ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞」とも称される）。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲをコードする核酸を含み、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲは、核酸から発現され、免疫細胞表面に局在化される。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットを発現しない。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞はαβＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭＳは、ＴＣＲδ鎖及びＴＣＲγ鎖に由来する配列を含むか、あるいは、Ｔ細胞は、γδＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲα鎖及びＴＣＲβ鎖に由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、免疫細胞の内因性ＴＣＲサブユニットのうちの一方又は両方の発現を阻害又は減少させるように修飾される。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＴＣＲα鎖及び／又はＴＣＲβ鎖の発現を阻害又は減少させるように修飾されたαβＴ細胞であるか、あるいは免疫細胞は、ＴＣＲγ鎖及び／又はＴＣＲδ鎖の発現を阻害又は減少させるように修飾されたγδＴ細胞である。遺伝子発現を中断させる細胞の修飾としては、例えば、ＲＮＡ干渉（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）、遺伝子編集（例えば、ＣＲＩＳＰＲ又はＴＡＬＥＮ系遺伝子ノックアウト）などを含む、当該技術分野において既知の任意のかかる技術が挙げられる。
【０３１６】
例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるｃａＴＣＲのいずれかによるｃａＴＣＲをコードする核酸と、本明細書に記載されるＣＳＲのいずれかによるＣＳＲと、を含む、免疫細胞（Ｔ細胞など）が提供され、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲは、核酸から発現され、免疫細胞表面に局在化される。いくつかの実施形態では、核酸は、ｃａＴＣＲの第１のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第１のｃａＴＣＲ核酸配列と、ｃａＴＣＲの第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第２のｃａＴＣＲ核酸配列と、ＣＳＲのＣＳＲポリペプチド鎖をコードするＣＳＲ核酸配列と、を含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列並びにＣＳＲ核酸配列はそれぞれ、異なるベクターに含まれる。いくつかの実施形態では、核酸配列の一部又は全ては、同じベクターに含まれる。ベクターは、例えば、哺乳動物発現ベクター及びウイルスベクター（レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、ヘルペスウイルス、及びレンチウイルス由来のものなど）からなる群から選択され得る。いくつかの実施形態では、ベクターのうちの１つ以上は、免疫細胞の宿主ゲノムに組み込まれている。いくつかの実施形態では、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列並びにＣＳＲ核酸配列はそれぞれ、異なるプロモータの制御下にある。いくつかの実施形態では、プロモータの一部又は全ては、同じ配列を有する。いくつかの実施形態では、プロモータの一部又は全ては、異なる配列を有する。いくつかの実施形態では、核酸配列の一部又は全ては、単一のプロモータの制御下にある。いくつかの実施形態では、プロモータの一部又は全ては、誘導性である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０３１７】
したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲのうちのいずれかによるｃａＴＣＲ及び本明細書に記載のＣＳＲのうちのいずれかによるＣＳＲを表面に発現するｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞（Ｔ細胞など）が提供され、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、ａ）ｃａＴＣＲの第１のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第１のｃａＴＣＲ核酸配列と、ｂ）ｃａＴＣＲの第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第２のｃａＴＣＲ核酸配列と、ｃ）ＣＳＲのＣＳＲポリペプチド鎖をコードするＣＳＲ核酸配列と、を含み、第１及び第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖が、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列から発現して、ｃａＴＣＲを形成し、ＣＳＲポリペプチド鎖が、ＣＳＲ核酸から発現されて、ＣＳＲを形成し、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲが、免疫細胞の表面に局在する。いくつかの実施形態では、第１のｃａＴＣＲ核酸配列は、第１のベクター（レンチウイルスベクターなど）に含有され、第２のｃａＴＣＲ核酸配列は、第２のベクター（レンチウイルスベクターなど）に含有され、ＣＳＲ核酸配列は、第３のベクター（レンチウイルスベクターなど）に含有される。いくつかの実施形態では、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列並びにＣＳＲ核酸配列の一部又は全ては、同じベクター（レンチウイルスベクターなど）に含有される。いくつかの実施形態では、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列並びにＣＳＲ核酸配列のそれぞれは、個別に、プロモータに作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、核酸配列の一部又は全ては、単一のプロモータの制御下にある。いくつかの実施形態では、プロモータの一部又は全ては、同じ配列を有する。いくつかの実施形態では、プロモータの一部又は全ては、異なる配列を有する。いくつかの実施形態では、プロモータの一部又は全ては、誘導性である。いくつかの実施形態では、ベクターの一部又は全ては、ウイルスベクター（レンチウイルスベクターなど）である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットを発現しない。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞は、αβＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲδ鎖及びＴＣＲγ鎖に由来する配列を含むか、あるいは免疫細胞は、γδＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲα鎖及びＴＣＲβ鎖に由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、その内在性ＴＣＲサブユニットのうちの１つ又は両方の発現を阻害又は減少させるように修飾される。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＴＣＲα鎖及び／若しくはＴＣＲβ鎖の発現を阻害又は減少させるように修飾されたαβＴ細胞であるか、あるいは免疫細胞は、ＴＣＲγ鎖及び／又はＴＣＲδ鎖の発現を阻害又は減少させるように修飾されたγδＴ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ベクターの一部又は全ては、免疫細胞の宿主ゲノムに組み込まれたウイルスベクター（レンチウイルスベクターなど）である。
【０３１８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるｃａＴＣＲのいずれかによるｃａＴＣＲ及び本明細書に記載のＣＳＲのいずれかによるＣＳＲを表面に発現するｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞（Ｔ細胞など）が提供され、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞が、ａ）ｃａＴＣＲの第１のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第１のｃａＴＣＲ核酸配列に作動可能に連結された第１のプロモータを含む第１のベクターと、ｂ）ｃａＴＣＲの第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第２のｃａＴＣＲ核酸配列に作動可能に連結された第２のプロモータを含む第２のベクターと、ｃ）ＣＳＲのＣＳＲポリペプチド鎖をコードするＣＳＲ核酸配列に作動可能に連結された第３のプロモータを含む第３のベクターと、を含み、第１及び第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖が、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列から発現して、ｃａＴＣＲを形成し、ＣＳＲポリペプチド鎖がＣＳＲ核酸配列から発現して、ＣＳＲを形成し、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲは、免疫細胞の表面に局在する。いくつかの実施形態では、プロモータの一部又は全ては、同じ配列を有する。いくつかの実施形態では、プロモータの一部又は全ては、異なる配列を有する。いくつかの実施形態では、プロモータの一部又は全ては、誘導性である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットを発現しない。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞は、αβＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲδ鎖及びＴＣＲγ鎖に由来する配列を含むか、あるいは免疫細胞は、γδＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲα鎖及びＴＣＲβ鎖に由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、その内在性ＴＣＲサブユニットのうちの１つ又は両方の発現を阻害又は減少させるように修飾される。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＴＣＲα鎖及び／若しくはＴＣＲβ鎖の発現を阻害又は減少させるように修飾されたαβＴ細胞であるか、あるいは免疫細胞は、ＴＣＲγ鎖及び／又はＴＣＲδ鎖の発現を阻害又は減少させるように修飾されたγδＴ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第１及び第２のベクターは、免疫細胞の宿主ゲノムに組み込まれたウイルスベクター（レンチウイルスベクターなど）である。
【０３１９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるｃａＴＣＲのいずれかによるｃａＴＣＲ及び本明細書に記載のＣＳＲのいずれかによるＣＳＲを表面に発現するｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞（Ｔ細胞など）が提供され、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、ａ）ｉ）ｃａＴＣＲの第１のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第１のｃａＴＣＲ核酸配列に作動可能に連結された第１のプロモータと、ｉｉ）ｃａＴＣＲの第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第２のｃａＴＣＲ核酸配列に作動可能に連結された第２プロモータと、を含む、第１のベクターと、ｂ）ＣＳＲのＣＳＲポリペプチド鎖をコードするＣＳＲ核酸配列に作動可能に連結された第３のプロモータを含む第２のベクターと、を含み、第１及び第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖は、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列から発現して、ｃａＴＣＲを形成し、ＣＳＲポリペプチド鎖は、ＣＳＲ核酸配列から発現して、ＣＳＲを形成し、ｃａＴＣＲは免疫細胞の表面に局在する。いくつかの実施形態では、プロモータの一部又は全ては、同じ配列を有する。いくつかの実施形態では、プロモータの一部又は全ては、異なる配列を有する。いくつかの実施形態では、プロモータの一部又は全ては、誘導性である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットを発現しない。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞は、αβＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲδ鎖及びＴＣＲγ鎖に由来する配列を含むか、あるいは免疫細胞は、γδＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲα鎖及びＴＣＲβ鎖に由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、その内在性ＴＣＲサブユニットのうちの１つ又は両方の発現を阻害又は減少させるように修飾される。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＴＣＲα鎖及び／若しくはＴＣＲβ鎖の発現を阻害又は減少させるように修飾されたαβＴ細胞であるか、あるいは免疫細胞は、ＴＣＲγ鎖及び／又はＴＣＲδ鎖の発現を阻害又は減少させるように修飾されたγδＴ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第１及び第２のベクターは、免疫細胞の宿主ゲノムに組み込まれたウイルスベクター（レンチウイルスベクターなど）である。第１又は第２のｃａＴＣＲ核酸配列がＣＳＲ核酸配列と交換される場合など、核酸配列のいずれかが交換される実施形態もまた想到されることを理解されたい。
【０３２０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるｃａＴＣＲのいずれかによるｃａＴＣＲ及び本明細書に記載のＣＳＲのいずれかによるＣＳＲを表面に発現するｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞（Ｔ細胞など）が提供され、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、ａ）ｉ）ｃａＴＣＲの第１のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第１のｃａＴＣＲ核酸配列と、ｉｉ）ｃａＴＣＲの第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第２のｃａＴＣＲ核酸配列と、を含む、第１のベクターと、ｂ）ＣＳＲのＣＳＲポリペプチド鎖をコードするＣＳＲ核酸配列に作動可能に連結された第２のプロモータを含む第２のベクターと、を含み、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列は、第１のプロモータの制御下にあり、第１及び第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖は、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列から発現して、ｃａＴＣＲを形成し、ＣＳＲポリペプチド鎖は、ＣＳＲ核酸配列から発現して、ＣＳＲを形成し、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲは免疫細胞の表面に局在する。いくつかの実施形態では、第１のプロモータは、第１のｃａＴＣＲ核酸配列の５’末端に作動可能に連結され、内部リボソーム進入部位（internal ribosomal entry site、ＩＲＥＳ）、及び第１のｃａＴＣＲ核酸配列の３’末端を第２のｃａＴＣＲ核酸配列の５’末端に連結させる自己切断２Ａペプチド（Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ、又はＦ２Ａなど）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１のｃａＴＣＲ核酸配列及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列は、プロモータの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。いくつかの実施形態では、第１のプロモータは、第２のｃａＴＣＲ核酸配列の５’末端に作動可能に連結され、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列の３’末端を第１のｃａＴＣＲ核酸配列の５’末端に連結させる自己切断２Ａペプチド（Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ、又はＦ２Ａなど）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１のｃａＴＣＲ核酸配列及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列は、プロモータの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。いくつかの実施形態では、第１及び／又は第２のプロモータは、同じ配列を有する。いくつかの実施形態では、第１及び／又は第２のプロモータは、異なる配列を有する。いくつかの実施形態では、第１及び／又は第２のプロモータは誘導性である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットを発現しない。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞は、αβＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲδ鎖及びＴＣＲγ鎖に由来する配列を含むか、あるいは免疫細胞は、γδＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲα鎖及びＴＣＲβ鎖に由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、その内在性ＴＣＲサブユニットのうちの１つ又は両方の発現を阻害又は減少させるように修飾される。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＴＣＲα鎖及び／若しくはＴＣＲβ鎖の発現を阻害又は減少させるように修飾されたαβＴ細胞であるか、あるいは免疫細胞は、ＴＣＲγ鎖及び／又はＴＣＲδ鎖の発現を阻害又は減少させるように修飾されたγδＴ細��である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ベクターは、免疫細胞の宿主ゲノムに組み込まれたウイルスベクター（レンチウイルスベクターなど）である。第１又は第２のｃａＴＣＲ核酸配列がＣＳＲ核酸配列と交換される場合など、核酸配列のいずれかが交換される実施形態もまた想到されることを理解されたい。
【０３２１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲのうちのいずれかによるｃａＴＣＲ及び本明細書に記載のＣＳＲのうちのいずれかによるＣＳＲを表面に発現するｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞（Ｔ細胞など）が提供され、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、ａ）ｃａＴＣＲの第１のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第１のｃａＴＣＲ核酸配列と、ｂ）ｃａＴＣＲの第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第２のｃａＴＣＲ核酸配列と、ｃ）ＣＳＲのＣＳＲポリペプチド鎖をコードするＣＳＲ核酸配列と、を含む、ベクターを含み、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列並びにＣＳＲ核酸配列は、単一のプロモータの制御下にあり、第１及び第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖は、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列から発現して、ｃａＴＣＲを形成し、ＣＳＲポリペプチド鎖は、ＣＳＲ核酸配列から発現して、ＣＳＲを形成し、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲは、免疫細胞の表面に局在する。いくつかの実施形態では、プロモータは、個々に、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）及び自己切断２Ａペプチド（Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ、又はＦ２Ａなど）をコードする核酸からなる群から選択された核酸リンカーによって他の核酸配列に連結される、核酸配列のうちの１つに作動可能に連結され、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列並びにＣＳＲ核酸配列が、プロモータの制御下で単一ＲＮＡとして転写される。いくつかの実施形態では、プロモータは誘導性である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットを発現しない。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞は、αβＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲδ鎖及びＴＣＲγ鎖に由来する配列を含むか、あるいは免疫細胞は、γδＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲα鎖及びＴＣＲβ鎖に由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、その内在性ＴＣＲサブユニットのうちの１つ又は両方の発現を阻害又は減少させるように修飾される。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＴＣＲα鎖及び／若しくはＴＣＲβ鎖の発現を阻害又は減少させるように修飾されたαβＴ細胞であるか、あるいは免疫細胞は、ＴＣＲγ鎖及び／又はＴＣＲδ鎖の発現を阻害又は減少させるように修飾されたγδＴ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ベクターは、免疫細胞の宿主ゲノムに組み込まれたウイルスベクター（レンチウイルスベクターなど）である。
ＩＶ．Ｆｃ変異体
【０３２２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物は、変異型Ｆｃ領域を含んでもよく、変異型Ｆｃ領域は、参照Ｆｃ領域（又は親Ｆｃ領域又は野生型Ｆｃ領域）に対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含んでもよい。アミノ酸修飾は、エフェクタ機能を変更するように、かつ／又は構築物の血清安定性を増大させるように、Ｆｃ領域でなされ得る。変異型Ｆｃ領域を含む構築物は、Ｆｃ受容体（例えば、ＦｃγＲ）に対する改変された親和性を示し得るが、ただし、変異型Ｆｃ領域は、Ｓｏｎｄｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｎａｔｕｒｅ，４０６：２６７−２７３によって開示されるものなどのＦｃ−Ｆｃ受容体相互作用の結晶学的分析及び構造的分析に基づいてＦｃ受容体と直接接触する位置で置換を有さないことを条件とする。ＦｃγＲなどのＦｃ受容体と直接接触するＦｃ領域内の位置の例は、アミノ酸２３４〜２３９（ヒンジ領域）、アミノ酸２６５〜２６９（Ｂ／Ｃループ）、アミノ酸２９７〜２９９（Ｃ’／Ｅループ）、及びアミノ酸３２７〜３３２（Ｆ／Ｇ）ループである。いくつかの実施形態では、変異型Ｆｃ領域を含む構築物は、構造的分析及び結晶学的分析に基づいて、ＦｃγＲと直接接触する少なくとも１つの残基の修飾を含み得る。
【０３２３】
例えば、活性化受容体及び／又は阻害受容体に対する親和性を変更し、例えば、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）などの改善されたエフェクタ機能をもたらし、Ｃ１ｑに対する結合親和性を増大させ、ＦｃＲ結合を低減又は排除させ、半減期を増大させる、変異型Ｆｃ領域を生成するためのＦｃ領域内のアミノ酸修飾は、当該技術分野において既知である（例えば、米国特許第９，０５１，３７３号、同第９，０４０，０４１号、同第８，９３７，１５８号、同第８，８８３，９７３号、同第８，８８３，１４７号、同第８，８５８，９３７号、同第８，８５２，５８６号、同第８，８０９，５０３号、同第８，８０２，８２３号、同第８，８０２，８２０号、同第８，７９５，６６１号、同第８，７５３，６２９号、同第８，７５３，６２８号、同第８，７３５，５４７号、同第８，７３５，５４５号、同第８，７３４，７９１号、同第８，６９７，３９６号、同第８，５４６，５４３号、同第８，４７５，７９２号、同第８，３９９，６１８号、同第８，３９４，９２５号、同第８，３８８，９５５号、同第８，３８３，１０９号、同第８，３６７，８０５号、同第８，３６２，２１０号、同第８，３３８，５７４号、同第８，３２４，３５１号、同第８，３１８，９０７号、同第８，１８８，２３１号、同第８，１２４，７３１号、同第８，１０１，７２０号、同第８，０９３，３５９号、同第８，０９３，３５７号、同第８，０８８，３７６号、同第８，０８４，５８２号、同第８，０３９，５９２号、同第８，０１２，４７６号、同第７，７９９，９００号、同第７，７９０，８５８号、同第７，７８５，７９１号、同第７，７４１，０７２号、同第７，７０４，４９７号、同第７，６６２，９２５号、同第７，４１６，７２７号、同第７，３７１，８２６号、同第７，３６４，７３１号、同第７，３３５，７４２号、同第７，３３２，５８１号、同第７，３１７，０９１号、同第７，２９７，７７５号、同第７，１２２，６３７号、同第７，０８３，７８４号、同第６，７３７，０５６号、同第６，５３８，１２４号、同第６，５２８，６２４号及び同第６，１９４，５５１号を参照）。
【０３２４】
いくつかの実施形態では、変異型Ｆｃ領域は、親Ｆｃ領域と比較して、異なるグリコシル化パターンを有し得る（例えば、アグリコシル化）。いくつかの実施形態では、異なるグリコシル化パターンは、異なる細胞株、例えば、遺伝子操作された細胞株における発現から生じ得る。
【０３２５】
本明細書に記載の構築物は、１つ以上のＦｃγＲにより大きい親和性で結合する変異型Ｆｃ領域を含んでもよい。このような構築物は、好ましくは、以下に記載されるように、エフェクタ機能をより効果的に介在する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の構築物は、１つ以上のＦｃγＲにより低い親和性で結合する変異型Ｆｃ領域を含み得る。エフェクタ機能の低減又は排除は、場合によっては、例えば、その作用機序がブロッキング又は拮抗作用を伴うが、標的抗原を有する細胞の殺傷を伴わない構築物の場合に所望され得る。いくつかの実施形態では、エフェクタ機能の増加は、腫瘍細胞及び外来抗原を発現する細胞を対象とし得る。
Ｖ．構築物の生成
【０３２６】
提供される構築物若しくは構築物の一部、又は構築物をコードする核酸は、任意の利用可能な手段によって生成され得る。構築物の生成方法は、当該技術分野において周知である。抗体（例えば、ｓｃＦｖ抗体、モノクローナル抗体、及び／又はポリクローナル抗体）を生成するための技術は、当該技術分野において利用可能である。抗血清の生成には、例えば、マウス、ラット、ウサギ、ブタ、ウシ、シカ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、イヌ、サル、及びニワトリなど、広範囲の動物種を使用することができることが理解されるであろう。動物の選択は、当業者に既知であるように、操作容易性、コスト、又は所望の血清量に応じて決定することができる。抗体はまた、対象とする免疫グロブリン重鎖及び軽鎖配列導入哺乳動物又は植物（例えば、ヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子及び軽鎖遺伝子導入げっ歯類）の生成によって形質転換によって生成され得ることが理解されよう。哺乳動物における形質転換生成に関連して、抗体は、ヤギ、ウシ、又は他の哺乳動物の母乳において生成され、母乳から回収され得る（本明細書において参照によりその全体が援用されている、例えば、米国特許第５，８２７，６９０号、同第５，７５６，６８７号、同第５，７５０，１７２号、及び同第５，７４１，９５７号を参照）。あるいは、抗体は、ニワトリにおいて製造することができ、ＩｇＹ分子を生成することができる（Ｓｃｈａｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，ＡＬＴＥＸ１３（５）：８０−８５）。
【０３２７】
いくつかの実施形態では、本発明に好適な抗体は、霊長類の抗体である。例えば、ヒヒにおいて治療的に有用な抗体を産生させる一般的な技術は、例えば、国際特許出願第１９９１／１１４６５号及びＬｏｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ４６：３１０に見出され得る。いくつかの実施形態では、抗体（例えば、モノクローナル抗体）は、ハイブリドーマ法を使用して調製され得る（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ，１９８３，Ｎａｔｕｒｅ  ３０５（５９３４）：５３７−４０）。いくつかの実施形態では、抗体（例えば、モノクローナル抗体）はまた、組換え方法によって製造され得る（例えば、米国特許第４，１６６，４５２号を参照）。
【０３２８】
Ｂ細胞不死化による抗体の生成に伴う困難の多くは、ファージディスプレイを使用して、Ｅ．ｃｏｌｉ又は酵母における構築物成分を操作し、発現させることによって克服することができる。高親和性抗体の回収を確実にするために、組み合わせ免疫グロブリンライブラリは、典型的には、大きなレパートリサイズを含有しなければならない。典型的な戦略は、免疫マウスのリンパ球又は脾臓細胞から得られたｍＲＮＡを利用して、逆転写酵素を使用してｃＤＮＡを合成する。重鎖及び軽鎖遺伝子は、ＰＣＲによって別々に増幅され、ファージクローニングベクター内にライゲーションされる。２つの異なるライブラリが生成されてもよく、１つは重鎖遺伝子を含有し、１つは軽鎖遺伝子を含有する。ライブラリは、ナイーブであってもよいか、あるいは半合成であってもよく、すなわち、全てのアミノ酸（システインを除く）は、ＣＤＲ中の任意の所与の位置に存在する可能性が同等である。ファージＤＮＡは、それぞれのライブラリから単離され、重鎖配列及び軽鎖配列は共にライゲーションされ、パッケージ化されて、組み合わせライブラリを形成する。それぞれのファージは、重鎖ｃＤＮＡ及び軽鎖ｃＤＮＡのランダムペアを含有し、Ｅ．ｃｏｌｉの感染時に、感染細胞中の抗ＣＤ２２構築物におけるポリペプチドの発現を誘導する。対象の抗原（例えば、ＣＤ２２）を認識する構築物を同定するために、ファージライブラリを播種し、プラーク内に存在する構築物分子をフィルタに移す。フィルタを放射性活性標識抗原と共にインキュベートし、次いで洗浄して、過剰な非結合リガンドを除去する。オートラジオグラム上の放射性スポットは、抗原に結合する構築物を含有するプラークを同定する。あるいは、対象の抗原（例えば、ＣＤ２２）を認識する構築物の同定は、抗原に対するファージの結合を反復することによって達成することができ、固形支持体、例えば、ビーズ又は哺乳動物細胞に結合し、続いて非結合ファージを除去し、特異的に結合したファージの溶出によって達成することができる。このような実施形態では、抗原は、まず、例えば、ストレプトアビジンにコンジュゲートされたＤｙｎａｂｅａｄｓ  Ｍ−２８０に固定化するためにビオチン化される。ファージライブラリは、細胞、ビーズ、又は他の固形支持体と共にインキュベートされ、非結合ファージは、洗浄によって除去される。対象の抗原に結合する構築物のファージクローンを選択し、更なる特性評価のために試験される。
【０３２９】
選択されると、フローサイトメトリーによって、生細胞の表面に発現した対象の抗原に対する結合について陽性クローンを試験することができる。簡潔には、ファージクローンは、抗原を発現するか、又は抗原を発現しないかのいずれか一方である細胞（例えば、対象の抗原を発現するよう遺伝子操作されているか、又は抗原を自然発現する細胞）と共にインキュベートされ得る。細胞は洗浄され、次いでマウス抗Ｍ１３コートタンパク質モノクローナル抗体で標識され得る。フローサイトメトリーの前に、細胞を再度洗浄し、蛍光コンジュゲート二次抗体（例えば、ＦＩＴＣ−ヤギ（Ｆａｂ）２抗マウスＩｇＧ）で標識してもよい。ヒト免疫グロブリンファージライブラリの生成に有用なクローニング及び発現ベクターは、例えば、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）から得ることができる。
【０３３０】
同様の戦略を用いて、高親和性ｓｃＦｖクローンを得ることができる。大きなレパートリを有するライブラリは、全ての既知のＶＨ、Ｖκ、及びＶλ遺伝子ファミリーに対応するＰＣＲプライマーを使用して、非免疫ヒトドナーからＶ遺伝子を単離することによって構築され得る。増幅後、Ｖκプール及びＶλプールを組み合わせて、１つのプールが形成され得る。これらのフラグメントは、ファージミドベクターにライゲーションされ得る。ｓｃＦｖリンカー（例えば、（Ｇ４Ｓ）ｎ）は、ＶＬフラグメントの上流のファージミド内（又はそのように所望されるようなＶＨフラグメントの上流）にライゲーションされ得る。ＶＨ及びリンカー−ＶＬフラグメント（又はＶＬ及びリンカー−ＶＨフラグメント）は、ＪＨ領域上で増幅及びアセンブルされ得る。得られたＶＨ−リンカーＶＬ（又はＶＬ−リンカー−ＶＨ）フラグメントは、ファージミドベクター内にライゲーションされ得る。ファージミドライブラリは、上述のようにフィルタを使用するか、又は免疫チューブを使用してパニングされ得る（Ｎｕｎｃ；Ｍａｘｉｓｏｒｐ）。同様の結果は、免疫ウサギのリンパ球又は脾臓細胞からの組み合わせ免疫グロブリンライブラリを構築することによって、かつＰ．ｐａｓｔｏｒｉｓにおけるｓｃＦｖ構築物を発現させることによって達成され得る（例えば、Ｒ  ｉｄｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１３：２５５−２６０を参照）。加えて、適切なｓｃＦｖ抗体の単離後、突然変異生成及び鎖混合（ｃｈａｉｎ−ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）などの親和性成熟プロセスによって、より高い結合親和性及びより遅い解離速度を得ることができる（例えば、Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，７８：１８１−１８８）；Ｏｓｂｏｕｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２：１８１−１９６を参照）。
【０３３１】
ヒト抗体は、様々な技術を用いて生成することができ、すなわち、内在性Ｉｇ遺伝子が部分的又は完全に不活性化されているトランスジェニック動物にヒトＩｇ遺伝子を導入することを利用して、ヒト抗体を合成することができる。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２ヒト抗体は、ヒトＣＤ２２との抗原攻撃に応答してヒト抗体を製造するよう遺伝子操作された非ヒト動物の免疫化によって製造され得る。
【０３３２】
提供された構築物は、例えば、構築物をコードする核酸を発現するよう遺伝子操作された宿主細胞系を利用することによっても生成され得る。代替的にあるいは追加的に、提供された構築物は、化学合成によって（例えば、自動ペプチド合成装置又は構築物をコードする核酸の遺伝子合成を使用して）部分的に又は完全に調製され得る。本明細書に記載の構築物は、任意の適切なベクター又は発現カセットを使用して発現させることができる。様々なベクター（例えば、ウイルスベクター）及び発現カセットは、当該技術分野において既知であり、かかるベクター又は発現カセットが導入され得る細胞は、当該技術分野において既知のように（例えば、連続式又は流加式培養系を使用して）培養することができる。いくつかの実施形態では、細胞は、遺伝子操作されてもよく、遺伝子操作されたポリペプチドを発現するように細胞を遺伝子操作する技術は、当該技術分野において周知である（例えば、Ａｕｓａｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９０，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）を参照）。
【０３３３】
本明細書に記載の構築物は、精製されてもよく、すなわち、濾過、遠心分離、及び／又はＨＰＬＣ若しくはアフィニティクロマトグラフィなどの様々なクロマトグラフィ技術を使用して精製されてもよい。いくつかの実施形態では、提供される構築物のフラグメントは、ペプシン若しくはパパインなどの酵素による消化を含む方法、及び／又は化学還元によるジスルフィド結合の切断によって得られる。
【０３３４】
提供された構築物は、構築物の特性及び／又は活性を改善するような方法で遺伝子操作、生成、かつ／又は精製され得ることが理解されるであろう。例えば、改善された特性としては、特に、安定性の向上、結合親和性及び／又は結合活性の向上、結合特異性の向上、生成の増加、凝集の減少、非特異的結合の低下が挙げられるが、これらに限定されない。  いくつかの実施形態では、提供された構築物は、（例えば、免疫グロブリン又はそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ抗体）との関連のフレームワーク領域において）タンパク質安定性、抗原結合、発現レベルを改善するか、あるいは治療薬、診断薬、若しくは検出試薬のコンジュゲーションのための部位若しくは場所を提供する１つ以上のアミノ酸置換を含むことができる。
ＶＩ．治療薬及び検出試薬
【０３３５】
治療薬又は検出試薬は、本明細書に記載される抗ＣＤ２２構築物に付着されてもよい。治療薬は、例えば、タンパク質、炭水化物、脂質、核酸、有機小分子、非生物学的ポリマー、金属、イオン、放射性同位体などが挙げられるが、これらに限定されない、任意の部類の化学物質であってもよい。いくつかの実施形態では、本発明による使用のための治療薬は、１つ以上の症状又は癌の原因の治療に関連する生物学的活性を有し得る。いくつかの実施形態では、本発明による使用のための治療薬は、免疫系の調節及び／又はＴ細胞介在性細胞傷害の増強に関連する生物学的活性を有し得る。いくつかの実施形態では、本発明による使用のための治療薬は、１つ以上の他の活性を有する。
【０３３６】
検出試薬は、例えば、検出試薬の特定の機能特性及び／又は化学的特性に起因して、アッセイを用いて検出され得る任意の部分を含み得る。かかる試薬の非限定的な例としては、酵素、放射標識、ハプテン、蛍光標識、燐光分子、化学発光分子、発色団、発光分子、光親和性分子、着色粒子、又はビオチンなどの配位子が挙げられる。
【０３３７】
構築物への付着のための系であるような多くの検出試薬が当該技術分野において既知である（例えば、米国特許第５，０２１，２３６号、同第４，９３８，９４８号、及び同第４，４７２，５０９号を参照）。このような検出試薬の例としては、とりわけ、常磁性イオン、放射性同位体、蛍光色素、ＮＭＲ検出可能物質、Ｘ線造影剤が挙げられる。例えば、いくつかの実施形態では、常磁性イオンは、クロム（ＩＩＩ）、マンガン（ＩＩ）、鉄（ＩＩＩ）、鉄（ＩＩ）、コバルト（ＩＩ）、ニッケル（ＩＩ）、銅（ＩＩ）、ネオジム（ＩＩＩ）、サマリウム（ＩＩＩ）、イッテルビウム（ＩＩＩ）、ガドリニウム（ＩＩＩ）、バナジウム（ＩＩ）、テルビウム（ＩＩＩ）、ジスプロシウム（ＩＩＩ）、ホルミウム（ＩＩＩ）、エルビウム（ＩＩＩ）、ランタン（ＩＩＩ）、金（ＩＩＩ）、鉛（ＩＩ）、及び／又はビスマス（ＩＩＩ）のうちの１つ以上である。
【０３３８】
放射性同位体は、アクチニウム−２２５、アスタチン−２１１、ビスマス−２１２、炭素１４、クロム−５１、塩素−３６、コバルト−５７、コバルト−５８、銅−６７、ユーロピウム−１５２、ガリウム−６７、水素−３、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１２４、ヨウ素−１２５、ヨウ素−１３１、インジウム−１１１、鉄−５９、鉛−２１２、ルテチウム−１７７、リン−３２、ラジウム−２２３、ラジウム−２２４、レニウム−１８６、レニウム−１８８、セレン−７５、硫黄−３５、テクネチウム−９９ｍ、トリウム−２２７、イットリウム−９０、及びジルコニウム−８９のうちの１つ以上であってもよい。放射線活性標識構築物は、当該技術分野において周知の技術に従って生成することができる。
【０３３９】
蛍光標識は、とりわけ、Ａｌｅｘａ３５０、Ａｌｅｘａ４３０、ＡＭＣＡ、ＢＯＤＩＰＹ６３０／６５０、ＢＯＤＩＰＹ６５０／６６５、ＢＯＤＩＰＹ−ＦＬ、ＢＯＤＩＰＹ−Ｒ６Ｇ、ＢＯＤＩＰＹ−ＴＭＲ、ＢＯＤＩＰＹ−ＴＲＸ、Ｃａｓｃａｄｅ  Ｂｌｕｅ、Ｃｙ３、Ｃｙ５、６−ＦＡＭ、フルオレセインイソチオシアネート、ＨＥＸ、６−ＪＯＥ、Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ４８８、Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ５００、Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ５１４、Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｂｌｕｅ、ＲＥＧ、Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ  Ｇｒｅｅｎ、Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ  Ｒｅｄ、Ｒｅｎｏｇｒａｐｈｉｎ、ＲＯＸ、ＴＡＭＲＡ、ＴＥＴ、テトラメチルローダミン、及び／又はＴｅｘａｓ  Ｒｅｄであってもよく、あるいは、これらのうちの１つ以上を含んでもよい。
ＶＩＩ．治療の方法
【０３４０】
本発明の抗ＣＤ２２構築物及び／又は組成物は、個体（例えば、ヒトなどの哺乳動物）に投与されて、Ｂ細胞リンパ腫又はＢ細胞白血病などのＢ細胞悪性腫瘍（例えば、ＣＤ２２＋Ｂ細胞悪性腫瘍）を治療することができる。Ｂ細胞悪性腫瘍はまた、本明細書で更に説明されるような様々な種類の癌を含む。Ｂ細胞悪性腫瘍の例としては、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、多発性骨髄腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、前リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、共通急性リンパ性白血病、及びｎｕｌｌ細胞型急性リンパ性白血病が挙げられるが、これらに限定されない。本発明は、個体においてＢ細胞悪性腫瘍（例えば、ＣＤ２２＋Ｂ細胞悪性腫瘍）を治療する方法を提供し、方法は、本明細書に記載される抗ＣＤ２２構築物（例えば、抗ＣＤ２２  ｓｃＦｖ）を含む有効量の医薬組成物を個体に投与することを含み、抗ＣＤ２２構築物は、ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に結合する。
癌
【０３４１】
いくつかの実施形態における、抗ＣＤ２２構築物及び抗ＣＤ２２  ＣＡＲ及び及び抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲを含む抗ＣＤ２２構築物を発現する細胞は、Ｂ細胞関連癌の治療に有用であり得る。本明細書に記載される方法のうちのいずれかを使用して治療され得る癌としては、脈管化されていないか、又はまだ実質的に脈管化されていない腫瘍、並びに脈管化腫瘍が挙げられる。癌は、非固形腫瘍（例えば、白血病及びリンパ腫などの血液系腫瘍）を含んでもよく、又は固形腫瘍を含んでもよい。本発明の抗ＣＤ２２構築物及び抗ＣＤ２２  ＣＡＲ細胞で治療される癌の種類としては、癌腫、芽細胞腫、肉腫、黒色腫、神経内分泌腫瘍、及び神経膠腫、並びに特定の白血病又はリンパ系悪性腫瘍、良性腫瘍及び悪性腫瘍、並びに肉腫、癌腫、黒色腫、及び神経膠腫などの悪性腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない。成人腫瘍／癌及び小児腫瘍／癌もまた含まれる。
【０３４２】
本明細書に記載される方法のうちのいずれかによる治療のために想到される固形腫瘍としては、神経膠腫（例えば、脳幹神経膠腫及び混合神経膠腫）、（多形グリア芽細胞腫としても知られる）グリア芽腫、星状細胞腫（高悪性度星状細胞腫など）、小児神経膠腫又はグリア芽腫（例えば、小児高悪性度神経膠腫（high-grade glioma、ＨＧＧ）及びびまん性橋膠腫（diffuse intrinsic pontine glioma、ＤＩＰＧ））、ＣＮＳリンパ腫、胚細胞腫、髄芽腫、シュワン腫、頭蓋骨髄腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、神経芽細胞腫、網膜芽腫、及び脳転移が挙げられる。
【０３４３】
いくつかの実施形態では、Ｂ細胞関連癌は、小児神経膠腫である。いくつかの実施形態では、小児神経膠腫は、低悪性度神経膠腫である。いくつかの実施形態では、小児神経膠腫は、高悪性度神経膠腫（ＨＧＧ）である。いくつかの実施形態では、小児神経膠腫は、多形グリア芽細胞腫である。いくつかの実施形態では、小児神経膠腫は、びまん性橋膠腫（ＤＩＰＧ）である。いくつかの実施形態では、ＤＩＰＧは、グレードＩＩである。いくつかの実施形態では、ＤＩＰＧは、グレードＩＩＩである。いくつかの実施形態では、ＤＩＰＧは、グレードＩＶである。
【０３４４】
治療のために想到される更なる固形腫瘍としては、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫（明細胞軟骨肉腫など）、軟骨芽細胞腫、骨肉腫、及び他の肉腫、滑液腫瘍、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、リンパ悪性腫瘍、膵臓癌、乳癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、肝細胞癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、甲状腺髄様癌、甲状腺乳頭癌、褐色細胞腫、乳頭癌、乳頭腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌、肝腫、胆管癌、絨毛癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸部癌（例えば、子宮頸癌及び子宮頸部異形成）、肛門癌、肛門管癌、肛門直腸癌、膣癌、外陰部癌（例えば、扁平上皮癌、上皮内癌、腺癌、及び線維肉腫）、陰茎癌、口腔咽頭癌、頭部癌（例えば、扁平上皮癌）、頸癌（例えば、扁平上皮癌）、精巣癌（例えば、精上皮腫、奇形腫、胎生期癌、奇形癌、絨毛癌、肉腫、ライディッヒ細胞腫、線維腫、線維腺腫、類腺腫瘍、及び脂肪腫）、膀胱癌、黒色腫、子宮癌（例えば、子宮内膜癌）、及び尿路上皮癌（例えば、扁平上皮癌、転移細胞癌、腺癌、尿管癌、及び膀胱癌）が挙げられる。
【０３４５】
本明細書に記載される方法のうちのいずれかによる治療のために想到される血液癌としては、急性白血病（急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病及び骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性及び赤白血病など）、慢性白血病（慢性骨髄性（顆粒球）白血病、慢性骨髄性白血病、及び慢性リンパ性白血病）、真性赤血球増加症、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫（無痛性及び高悪性度形態）、多発性骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、重鎖病、骨髄異形成症候群、ヘアリー細胞白血病及び骨髄異形成症が挙げられる。
【０３４６】
癌治療は、例えば、腫瘍退縮、腫瘍重量又はサイズ収縮、無増悪期間、生存期間、無増悪生存、全奏功率、奏功期間、生活の質、タンパク質発現量及び／又は活性によって評価することができる。例えば、放射線画像撮影による応答の測定を含む治療の有効性を判定するためのアプローチを用いることができる。
【０３４７】
いくつかの実施形態では、Ｂ細胞悪性腫瘍（例えば、ＣＤ２２＋Ｂ細胞悪性腫瘍）を治療する方法において使用される抗ＣＤ２２構築物は、ｉ）それぞれ配列番号２０６〜２０８の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２及びＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つ以上を含む軽鎖可変領域と、ｉｉ）それぞれ配列番号２０９〜２１１の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つ以上を含む重鎖可変領域と、を含む、抗体部分を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、それぞれ配列番号２０６〜２１１の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、ＬＣ−ＣＤＲ３、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む。他の実施形態では、Ｂ細胞悪性腫瘍を治療する方法において使用される抗ＣＤ２２構築物は、ｉ）それぞれ配列番号２０６〜２０８の配列のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２１２の配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列と、を有する軽鎖可変領域と、ｉｉ）それぞれ配列番号２０９〜２１１の配列のＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２１３の配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列と、を有する重鎖可変領域と、を含む抗体部分を含み、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、リンカーを介して互いに結合されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、完全長抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、ＣＡＲ又はｃａＴＣＲである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、上記の抗体部分及びエフェクタ分子を含む免疫コンジュゲートである。エフェクタ分子は、治療薬（例えば、薬物、毒素、放射性同位体、タンパク質、ペプチド、又は核酸）又は標識であってもよい。いくつかの実施形態では、治療薬は、薬物又は毒素である。いくつかの実施形態では、組成物は、抗ＣＤ２２構築物に関連する細胞（エフェクタ細胞など）を更に含む。
【０３４８】
いくつかの実施形態では、Ｂ細胞悪性腫瘍（例えば、ＣＤ２２＋Ｂ細胞悪性腫瘍）を治療する方法において使用される抗ＣＤ２２構築物は、ｉ）それぞれ配列番号２１４〜２１６の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つ以上を含む軽鎖可変領域と、ｉｉ）それぞれ配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つ以上を含む重鎖可変領域と、を含む抗体部分を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、それぞれ配列番号２１４〜２１６、２０９、２１０、及び２１７の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、ＬＣ−ＣＤＲ３、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む。他の実施形態では、Ｂ細胞悪性腫瘍を治療する方法において使用される抗ＣＤ２２構築物は、ｉ）それぞれ配列番号２１４〜２１６の配列のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２１８の配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列と、を有する軽鎖可変領域と、ｉｉ）それぞれ配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列のＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２１９の配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列と、を有する重鎖可変領域と、を含む抗体部分を含み、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、リンカーを介して互いに結合されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、完全長抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、ＣＡＲ又はｃａＴＣＲである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、上述の抗体部分及びエフェクタ分子を含む免疫コンジュゲートである。エフェクタ分子は、治療薬（例えば、薬物、毒素、放射性同位体、タンパク質、ペプチド、又は核酸）又は標識であってもよい。いくつかの実施形態では、治療薬は、薬物又は毒素である。いくつかの実施形態では、組成物は、抗ＣＤ２２構築物に関連する細胞（エフェクタ細胞など）を更に含む。
【０３４９】
Ｂ細胞悪性腫瘍（例えば、上記のＣＤ２２＋Ｂ細胞悪性腫瘍）を治療するための方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、個体に投与される前に細胞（例えば、Ｔ細胞などの免疫細胞など）にコンジュゲートされる。したがって、例えば、個体におけるＢ細胞悪性腫瘍（例えば、ＣＤ２２＋Ｂ細胞悪性腫瘍）を治療する方法であって、ａ）本明細書に記載される抗ＣＤ２２構築物又は抗ＣＤ２２構築物の抗体部分を細胞（例えば、Ｔ細胞などの免疫細胞など）にコンジュゲートさせて、抗ＣＤ２２構築物／細胞コンジュゲートを形成することと、ｂ）抗ＣＤ２２構築物／細胞コンジュゲートを含む有効量の組成物を個体に投与することと、を含む方法が提供される。いくつかの実施形態では、細胞は、個体に由来する。いくつかの実施形態では、細胞は、個体に由来しない。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、細胞の表面上の分子に共有結合することによって細胞にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、細胞の表面上の分子への非共有結合によって細胞にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、抗ＣＤ２２構築物の一部を細胞の外側膜に挿入することによって細胞にコンジュゲートされる。
【０３５０】
治療は、例えば、腫瘍退縮、腫瘍重量又はサイズ収縮、無増悪期間、生存期間、無増悪生存、全奏功率、奏功期間、生活の質、タンパク質発現量及び／又は活性によって評価することができる。例えば、放射線画像撮影による応答の測定を含む治療の有効性を判定するためのアプローチを用いることができる。
【０３５１】
いくつかの実施形態では、治療の有効性は、式１００−（Ｔ／Ｃ×１００）（式中、Ｔは、治療された腫瘍の平均相対腫瘍体積であり、Ｃは、未治療の腫瘍の平均相対腫瘍体積である）を使用して算出することができる腫瘍成長阻害率（％ＴＧＩ）として測定することができる。いくつかの実施形態では、％ＴＧＩは、約２％、約４％、約６、約８％、１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、又は９５％超である。
ＶＩＩＩ．抗ＣＤ２２構築物エフェクタ細胞療法
【０３５２】
本出願はまた、抗ＣＤ２２構築物（抗ＣＤ２２  ＣＡＲ、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ、又は抗ＣＤ２２  ＣＳＲなど）を使用して、Ｂ細胞悪性腫瘍におけるＣＤ２２＋細胞へエフェクタ細胞（初代Ｔ細胞など）の特異性を向け直す方法を提供する。したがって、本発明はまた、哺乳動物におけるＣＤ２２＋細胞を含む標的細胞集団又は標的細胞組織に対するエフェクタ細胞介在性応答（Ｔ細胞介在性免疫応答など）を刺激する方法を提供し、方法は、抗ＣＤ２２  ＣＡＲ又は抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲを発現するエフェクタ細胞（Ｔ細胞など）を哺乳動物に投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞を「刺激する」とは、免疫細胞の活性化とは異なるエフェクタ細胞介在性応答（Ｔ細胞介在性免疫応答など）を誘発することを指す。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ＣＳＲは、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を刺激することができるが、免疫細胞を活性化しない。
【０３５３】
抗ＣＤ２２構築物を発現する抗ＣＤ２２構築物エフェクタ細胞（抗ＣＤ２２  ＣＡＲ  Ｔ細胞又は抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞など）は、抗ＣＤ２２構築物を必要とするレシピエントに注入され得る。注入された細胞は、レシピエント内のＣＤ２２＋細胞を殺傷することができる。いくつかの実施形態では、抗体療法とは異なり、抗ＣＤ２２構築物エフェクタ細胞（Ｔ細胞など）は、インビボで複製することができ、持続的な腫瘍制御をもたらし得る長期持続性をもたらす。
【０３５４】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物エフェクタ細胞は、ロバストなインビボでのＴ細胞増殖を受けることができ、かつ長時間、存続することができる抗ＣＤ２２  ＣＡＲ  Ｔ細胞又は抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＤ２２  ＣＡＲ  Ｔ細胞又は抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞は、任意の更なる腫瘍形成又は増殖を阻害するように再活性化され得る特定のメモリＴ細胞に進化する。
【０３５５】
本発明の抗ＣＤ２２構築物Ｔ細胞（抗ＣＤ２２  ＣＡＲ  Ｔ細胞又は抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞など）はまた、哺乳動物におけるエクスビボの免疫及び／又はインビボの治療のための一種のワクチンとしても機能し得る。いくつかの実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。
【０３５６】
エクスビボの免疫に関して、以下のうちの少なくとも１つが、細胞を哺乳動物に投与する前にインビトロで生じる。ｉ）細胞の増殖、ｉｉ）抗ＣＤ２２  ＣＡＲ若しくは抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲをコードする核酸を細胞に導入すること、及び／又はｉｉｉ）細胞の冷凍保存。エクスビボの手順は、当該技術分野において周知である。簡潔には、細胞は、哺乳動物（好ましくはヒト）から単離され、本明細書に開示される抗ＣＤ２２  ＣＡＲ又は抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲを発現するベクターにより遺伝子修飾（すなわち、インビトロで形質導入又はトランスフェクト）される。抗ＣＤ２２  ＣＡＲ細胞又は抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ細胞は、治療効果を提供するように、哺乳動物のレシピエントに投与することができる。哺乳動物のレシピエントは、ヒトであってもよく、抗ＣＤ２２  ＣＡＲ細胞又は抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ細胞は、レシピエントに対して自己移植であってもよい。あるいは、細胞は、レシピエントに対して同種異系、同系又は異種であってもよい。造血幹細胞及び前駆細胞のエクスビボ増殖の手順は、参照により本明細書に援用されている米国特許第５，１９９，９４２号に記載されており、本発明の細胞に適用することができる。他の好適な方法は、当該技術分野において既知であるため、本発明は、細胞のエクスビボ増殖の任意の特定の方法に限定されない。簡潔には、Ｔ細胞のエクスビボ培養及びエクスビボ増殖は、（１）末梢血単核細胞（peripheral blood mononuclear cell、ＰＢＭＣ）からＴ細胞を収集することと、（２）かかる細胞をエクスビボで増殖させることと、を含む。米国特許第５，１９９，９４２号に記載の細胞増殖因子に加えて、ｆｌｔ３−Ｌ、ＩＬ−１、ＩＬ−３、及びｃ−ｋｉｔリガンドなどの他の因子を、細胞の培養及び増殖のために使用することができる。
【０３５７】
本発明はまた、エクスビボ免疫化に関して細胞系ワクチンを使用することに加えて、患者内の抗原に対する免疫応答を誘発するためのインビボ免疫化のための組成物及び方法も提供する。本発明の抗ＣＤ２２構築物エフェクタ細胞（抗ＣＤ２２  ＣＡＲ  Ｔ細胞又は抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞など）は、単独で、あるいは希釈剤と組み合わせた、かつ／又はＩＬ−２若しくは他のサイトカインなどの他の成分又は細胞集団と組み合わせた、医薬組成物としてのいずれか一方で投与され得る。簡潔には、本発明の医薬組成物は、１つ以上の薬学的に又は生理学的に許容される担体、希釈剤、若しくは賦形剤と組み合わせて、抗ＣＤ２２構築物エフェクタ細胞（Ｔ細胞など）を含んでもよい。このような組成物は、中性緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水などの緩衝剤と；グルコース、マンノース、スクロース、又はデキストランなどの炭水化物、マンニトールと；タンパク質と；ポリペプチド又はグリシンなどのアミノ酸と；酸化防止剤と；ＥＤＴＡ又はグルタチオンなどのキレート剤と；アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）と；防腐剤と、を含んでもよい。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物エフェクタ細胞（Ｔ細胞など）組成物は、静注経路、髄腔内経路、頭蓋内経路、大脳内経路、脳室内経路による投与のために製剤化される。
【０３５８】
本発明の抗ＣＤ２２構築物エフェクタ細胞（抗ＣＤ２２  ＣＡＲ  Ｔ細胞又は抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞など）組成物の正確な投与量は、患者（対象）の年齢、体重、腫瘍サイズ、感染又は転移の程度、及び病状の個々の差異を考慮して医師によって判定され得る。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物エフェクタ細胞（Ｔ細胞など）を含む医薬組成物は、以下の範囲内のすべての整数値を含む、約１０４〜約１０５、約１０５〜約１０６、約１０６〜約１０７、約１０７〜約１０８個細胞／ｋｇ体重、又は約１０８〜約１０９個細胞／ｋｇ体重のうちの任意など約１０４〜約１０９個細胞／ｋｇ体重の用量で投与される。抗ＣＤ２２構築物効果細胞（Ｔ細胞など）組成物はまた、これらの用量で複数回投与されてもよい。細胞は、免疫療法において一般的に知られている注入手法を使用することによって投与することができる（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇ．Ｊ．ｏｆ  Ｍｅｄ．３１９：１６７６，１９８８）。特定の患者の最適な用量及び治療レジメンは、疾患の徴候について患者をモニタし、それに応じて治療を調整することによって、医療分野の当業者によって容易に決定することができる。
【０３５９】
いくつかの実施形態では、活性化された抗ＣＤ２２構築物Ｔ細胞（例えば、抗ＣＤ２２  ＣＡＲ  Ｔ細胞又は抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞など）を対象に投与し、続いて血液を再び採取して（又はアフェレーシスを行って）、血液由来のＴ細胞を本発明に従って活性化し、これらの活性化され、増殖したＴ細胞を患者に再注入することが所望され得る。このプロセスは、２〜３週毎に複数回実行することができる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、１０ｃｃ〜４００ｃｃの採取血から活性化され得る。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、２０ｃｃ、３０ｃｃ、４０ｃｃ、５０ｃｃ、６０ｃｃ、７０ｃｃ、８０ｃｃ、９０ｃｃ、又は１００ｃｃの採取血から活性化される。
【０３６０】
抗ＣＤ２２構築物エフェクタ細胞（抗ＣＤ２２  ＣＡＲ  Ｔ細胞又は抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞など）の投与は、注射、経口摂取、輸液、植え付け、又は移植によることを含む任意の好都合な方法で実施され得る。本明細書に記載される組成物は、皮下に、皮内に、腫瘍内に、結節内に、髄内に、筋肉内に、髄腔内に、頭蓋内に、大脳内に、脳室内に、静注経路（ｉ．ｖ．）注射によって、又は腹腔内に、患者に投与され得る。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＤ２２構築物エフェクタ細胞（Ｔ細胞など）組成物は、皮内注射又は皮下注射によって患者に投与される。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＤ２２構築物エフェクタ細胞（Ｔ細胞など）組成物は、ｉ．ｖ．注射により投与される。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＤ２２構築物エフェクタ細胞（Ｔ細胞など）組成物は、髄腔内注射によって投与される。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＤ２２構築物エフェクタ細胞（Ｔ細胞など）組成物は、頭蓋内注射によって投与される。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＤ２２構築物エフェクタ細胞（Ｔ細胞など）組成物は、大脳内注射によって投与される。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＤ２２構築物エフェクタ細胞（Ｔ細胞など）組成物は、脳室内注射によって投与される。抗ＣＤ２２構築物エフェクタ細胞（Ｔ細胞など）の組成物は、腫瘍、リンパ節、又は感染部位に直接注入されてもよい。
【０３６１】
したがって、例えば、いくつかの実施形態では、ａ）ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物又はその抗体部分を含む細胞外ドメインと、ｂ）膜貫通ドメインと、ｃ）ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列、並びにＣＤ２８及び／又は４−１ＢＢ細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインと、を含む、抗ＣＤ２２  ＣＡＲを発現するエフェクタ細胞（Ｔ細胞など）を含む有効量の組成物を個体に投与することを含む、個体におけるＢ細胞悪性腫瘍（例えば、ＣＤ２２＋Ｂ細胞悪性腫瘍）を標的化する方法が提供される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２抗体部分は、ｉ）それぞれ配列番号２０６〜２０８の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つ以上を含む軽鎖可変領域と、ｉｉ）それぞれ配列番号２０９〜２１１の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つ以上を含む重鎖可変領域と、を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、それぞれ配列番号２０６〜２１１の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、ＬＣ−ＣＤＲ３、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む。他の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体部分は、ｉ）それぞれ配列番号２０６〜２０８の配列のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２１２の配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列と、を有する軽鎖可変領域と、ｉｉ）それぞれ配列番号２０９〜２１１の配列のＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２１３の配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列と、を有する重鎖可変領域と、を含み、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、リンカーを介して互いに結合されている。
【０３６２】
したがって、例えば、いくつかの実施形態では、ａ）ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に特異的に結合する抗ＣＤ２２抗体部分を含む細胞外ドメインと、ｂ）膜貫通ドメインと、ｃ）ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列、並びにＣＤ２８及び／又は４−１ＢＢ細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインと、を含む、抗ＣＤ２２  ＣＡＲを発現するエフェクタ細胞（Ｔ細胞など）を含む有効量の組成物を個体に投与することを含む、個体におけるＢ細胞悪性腫瘍（例えば、ＣＤ２２＋Ｂ細胞悪性腫瘍）を標的化する方法が提供される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２抗体部分は、ｉ）それぞれ配列番号２１４〜２１６の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つ以上を含む軽鎖可変領域と、ｉｉ）それぞれ配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つ以上を含む重鎖可変領域と、を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、それぞれ配列番号２１４〜２１６、２０９、２１０、及び２１７の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、ＬＣ−ＣＤＲ３、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む。他の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体部分は、ｉ）それぞれ配列番号２１４〜２１６の配列のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２１８の配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列と、を有する軽鎖可変領域と、ｉｉ）それぞれ配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列のＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２１９の配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列と、を有する重鎖可変領域と、を含み、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、リンカーを介して互いに結合されている。
ＩＸ．抗ＣＤ２２構築物を使用した診断及び撮像方法
【０３６３】
細胞の表面上のＣＤ２２に特異的に結合する標識された抗ＣＤ２２抗体部分並びにその誘導体及び類似体を診断目的で使用して、Ｂ細胞悪性腫瘍（例えば、Ｂ細胞関連癌又はＣＤ２２＋Ｂ細胞悪性腫瘍）を検出、診断、又はモニタすることができる。例えば、本発明の抗ＣＤ２２抗体部分は、インシトゥ、インビボ、エクスビボ、及びインビトロ診断アッセイ又は撮像アッセイにおいて使用することができる。
【０３６４】
本発明の更なる実施形態は、個体（例えば、ヒトなどの哺乳動物）におけるＢ細胞悪性腫瘍（例えば、Ｂ細胞関連癌又はＣＤ２２＋Ｂ細胞悪性腫瘍）を診断する方法を含む。本方法は、個体においてＣＤ２２提示細胞を検出することを含む。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞悪性腫瘍は、Ｂ細胞リンパ腫又はＢ細胞白血病である。いくつかの実施形態では、上記の実施形態のうちのいずれかによる有効量の標識された抗ＣＤ２２抗体部分を個体に投与することと、（ｂ）個体における標識のレベルを判定して、閾値レベルを超える標識のレベルが、個体がＢ細胞悪性腫瘍を有することを示すことと、を含む、個体（例えば、ヒトなどの哺乳動物）におけるＢ細胞悪性腫瘍（例えば、Ｂ細胞関連癌又はＣＤ２２＋Ｂ細胞悪性腫瘍）を診断する方法が提供される。閾値レベルは、例えば、Ｂ細胞悪性腫瘍を有する第１のセットの個体、及びＢ細胞悪性腫瘍を有さない第２のセットの個体において、上記の診断方法に従って標識を検出することと、第１のセットと第２のセットとの間の識別を可能にするレベルに閾値を設定することと、を含む、様々な方法によって判定することができる。いくつかの実施形態では、閾値レベルはゼロであり、方法は、個体における標識の有無を判定することを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、工程（ａ）の投与後のある時間待機して、標識された抗ＣＤ２２抗体部分が、ＣＤ２２が発現される個体の部位に優先的に集中すること（及び標識された非結合抗ＣＤ２２抗体部分が排除されること）を可能にすることを更に含む。いくつかの実施形態では、方法は、標識のバックグラウンドレベルを差し引くことを更に含む。バックグラウンドレベルは、例えば、標識された抗ＣＤ２２抗体部分の投与前の個体内の標識を検出すること、又はＢ細胞悪性腫瘍を有さない個体において上記の診断方法に従って標識を検出することを含む、様々な方法によって判定することができる。
【０３６５】
本発明の抗ＣＤ２２抗体部分を使用して、当業者に既知の方法を使用して、生体サンプル中のＣＤ２２提示細胞のレベルをアッセイすることができる。好適な抗体標識は、当該技術分野において既知であり、グルコースオキシダーゼなどの酵素標識と；ヨウ素（１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１１５ｍＩｎ、１１３ｍＩｎ、１１２Ｉｎ、１１１Ｉｎ）、テクネチウム（９９Ｔｃ、９９ｍＴｃ）、タリウム（２０１Ｔｉ）、ガリウム（６８Ｇａ、６７Ｇａ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、キセノン（１３３Ｘｅ）、フッ素（１８Ｆ）、サマリウム（１５３Ｓｍ）、ルテチウム（１７７Ｌｕ）、ガドリニウム（１５９Ｇｄ）、プロメチウム（１４９Ｐｍ）、ランタン（１４０Ｌａ）、イッテルビウム（１７５Ｙｂ）、ホルミウム（１６６Ｈｏ）、イットリウム（９０Ｙ）、スカンジウム（４７Ｓｃ）、レニウム（１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ）、プラセオジム（１４２Ｐｒ）、ロジウム（１０５Ｒｈ）、及びルテニウム（９７Ｒｕ）などの放射性同位体と；ルミノールと；フルオレセイン及びローダミンなどの蛍光標識と；ビオチンと、が挙げられる。
【０３６６】
当該技術分野において既知の手法は、本発明の標識された抗ＣＤ２２抗体部分に適用され得る。このような手法としては、二官能性共役剤の使用が挙げられる（例えば、米国特許第５，７５６，０６５号、同第５，７１４，６３１号、同第５，６９６，２３９号、同第５，６５２，３６１号、同第５，５０５，９３１号、同第５，４８９，４２５号、同第５，４３５，９９０号、同第５，４２８，１３９号、同第５，３４２，６０４号、同第５，２７４，１１９号、同第４，９９４，５６０号、及び同第５，８０８，００３号を参照）。上記アッセイとは別に、様々なインビボ及びエクスビボのアッセイが当業者に利用可能である。例えば、対象の体内の細胞を、検出可能な標識、例えば、放射性同位体で任意に標識された抗ＣＤ２２抗体部分に曝露することができ、例えば、放射能を外部走査することによって、又は抗ＣＤ２２抗体部分に以前に曝露された対象に由来する試料（例えば、生検又は他の生体サンプル）を分析することによって、抗ＣＤ２２抗体部分の細胞への結合を評価することができる。
Ｘ．医薬組成物
【０３６７】
本明細書に記載される抗ＣＤ２２構築物を含む組成物（本明細書では製剤とも呼ばれる医薬組成物など）、本明細書に記載される抗ＣＤ２２構築物に含有される１つ以上のポリペプチドをコードする核酸、核酸を含む発現カセット、又は抗ＣＤ２２構築物を発現する宿主細胞もまた本明細書において提供される。いくつかの実施形態では、組成物は、抗ＣＤ２２構築物に関連する細胞（エフェクタ細胞、例えば、Ｔ細胞など）を更に含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物が提供される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、抗ＣＤ２２構築物に関連する細胞（エフェクタ細胞、例えば、Ｔ細胞など）を更に含む。
【０３６８】
抗ＣＤ２２構築物の好適な製剤は、所望の純度を有する抗ＣＤ２２構築物を、任意の薬学的に許容される担体、賦形剤、又は安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））と混合することによって凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で得られる。許容可能な担体、賦形剤、又は安定剤は、用いられる用量及び濃度においてレシピエントに対して非毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルアルコール、若しくはベンジルアルコール；メチルパラベン若しくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾールなどの）防腐剤；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、若しくは免疫グロブリンなどのタンパク質；オリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、若しくはリシンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、若しくはデキストリンを含む、単糖類、二糖類、及び他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、若しくはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）；並びに／又はＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）若しくはポリエチレングリコール（polyethylene glycol、ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤が挙げられる。例示的な製剤は、参照により本明細書に明示的に援用されている国際公開第９８／５６４１８号に記載されている。皮下投与に適合された凍結乾燥製剤は、国際公開第９７／０４８０１号に記載されている。このような凍結乾燥製剤は、好適な希釈剤で高タンパク質濃度に再構成されてもよく、再構成された製剤は、本明細書において治療される個体に皮下投与されてもよい。リポフェクチン又はリポソームを使用して、本発明の抗ＣＤ２２抗体を細胞に送達することができる。
【０３６９】
本明細書の製剤はまた、治療中の特定の指示に対して必要である場合、抗ＣＤ２２構築物に加えて１種以上の活性化合物を含有してもよく、活性化合物は、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有する。例えば、抗ＣＤ２２構築物に加えて、抗腫瘍剤、増殖抑制剤、細胞毒性剤、又は化学療法剤を更に提供することが所望され得る。このような微量物は、意図される目的に有効な量で組み合わされて好適に存在する。このような他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗ＣＤ２２構築物の量、疾患若しくは障害又は治療の種類、及び上記の他の因子に依存する。これらは、大略的に、同一用量でかつ本明細書に記載される投与経路で、あるいはこれまで使用された用量の約１〜９９％で使用される。
【０３７０】
抗ＣＤ２２抗体は、例えば、コアセルベーション技術によって、又は界面重合によって調製された、それぞれ、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミン微小球、マイクロエマルション、ナノ粒子及びナノカプセル）又はマクロエマルションにおける、例えば、ヒドロキシメチルセルロース又はゼラチンマイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセルなどのマイクロカプセルに封入され得る。このような手法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に開示されている。徐放性調製剤が調製されてもよい。
【０３７１】
抗ＣＤ２２構築物の徐放性調製剤が調製されてもよい。徐放性調製剤の好適な例としては、構築物（又はそのフラグメント）を含有する固形疎水性ポリマーの半透過性マトリックスが挙げられ、マトリックスは、成形物品、例えば、フィルム、又はマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリックスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、又はポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌグルタミン酸とエチル−Ｌグルタミン酸とのコポリマー、非分解性エチレン−酢酸ビニル、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸−グリコール酸コポリマー及び酢酸ロイプロリドからなる注入可能な微小球）などの分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、及びポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が挙げられる。エチレン−酢酸ビニル及び乳酸−グリコール酸などのポリマーは、１００日間にわたって分子の放出を可能にするが、特定のヒドロゲル放出タンパク質は、より短い期間にわたって放出される。カプセル化された構築物が長期にわたって体内に残留すると、３７℃で水分に曝露された結果、変性又は凝集する場合があり、生物学的活性の損失及び免疫原性の潜在的な変化をもたらす場合がある。関与する機構に応じて、抗ＣＤ２２構築物の安定化のための合理的戦略を考案することができる。例えば、凝集機構がチオ−ジスルフィド交換による分子間Ｓ−Ｓ結合形成であることが分かった場合、スルフヒドリル残基を修飾することと、酸性溶液から凍結乾燥することと、含水量を制御することと、適切な添加剤を使用することと、特定のポリマーマトリックス組成物を開発することと、によって、安定化を達成することができる。
【０３７２】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、クエン酸塩、ＮａＣｌ，酢酸塩、コハク酸塩、グリシン、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）、又は前述の任意の組み合わせを含む緩衝液中に配合される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、約１００ｍＭ〜約１５０ｍＭのグリシンを含む緩衝液中に配合される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、約５０ｍＭ〜約１００ｍＭのＮａＣｌを含む緩衝液中に配合される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、約１０ｍＭ〜約５０ｍＭの酢酸塩を含む緩衝液中に配合される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、約１０ｍＭ〜約５０ｍＭのコハク酸塩を含む緩衝液中に配合される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、約０．００５％〜約０．０２％のポリソルベート８０を含む緩衝液中に配合される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、約５．１〜５．６のＰＨを有する緩衝液中に配合される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、１０ｍＭのクエン酸塩、１００ｍＭのＮａＣｌ、１００ｍＭのグリシン、及び０．０１％のポリソルベート８０を含む緩衝液中に配合され、製剤はｐＨ５．５である。
【０３７３】
インビボの投与に使用される製剤は無菌でなければならない。これは、例えば、滅菌濾過膜を介する濾過によって容易に達成される。
ＸＩ．用量及び投与
【０３７４】
（ヒトなどの）個体に投与される抗ＣＤ２２構築物組成物の用量は、特定の組成物、投与様式、及び治療中の疾患の種類によって変化し得る。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物組成物の量は、個体において完全奏効をもたらすのに十分である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物組成物の量は、個体において部分的奏効をもたらすのに十分である。いくつかの実施形態では、（例えば、単独で投与される場合、）投与される抗ＣＤ２２構築物組成物の量は、抗ＣＤ２２構築物組成物で治療された個体の集団の中で、約２％、４％、６％、８％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６４％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、又は９０％のうちのいずれかを超える全奏功率を生じさせるのに十分な量である。本明細書に記載される方法の治療に対する個体の応答は、例えば、腫瘍成長阻害率（％ＴＧＩ）に基づいて判定することができる。
【０３７５】
いくつかの実施形態では、組成物の量は、個体の全生存期間を延長するのに十分である。いくつかの実施形態では、（例えば、投与される場合、）組成物の量は、抗ＣＤ２２構築物組成物で治療された個体の集団の中で、約２％、４％、６％、８％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、又は７７％のうちのいずれかを超える臨床的利益をもたらすのに十分である。
【０３７６】
いくつかの実施形態では、組成物の量は、治療前の同じ対象における、対応する腫瘍サイズ、癌細胞数、又は腫瘍成長率と比較して、あるいは治療を受けていない他の対象における対応する活性と比較して、少なくとも約２％、４％、６％、８％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％又は１００％のうちのいずれかだけ、腫瘍のサイズを縮小させるか、癌細胞（例えば、ＣＤ２２＋細胞）の数を減少させるか、又は腫瘍増殖速度を低下させるのに十分な量である。標準的な方法を使用して、精製酵素、細胞系アッセイ、動物モデル、又はヒト試験によるインビトロでのアッセイなどのこの効果の大きさを測定することができる。
【０３７７】
いくつかの実施形態では、組成物中の抗ＣＤ２２構築物の量は、毒性効果（すなわち、臨床的に許容可能な毒性レベルを上回る効果）を誘発するレベル未満であるか、あるいは組成物が個体に投与される場合、潜在的な副作用を制御又は許容することができるレベルである。いくつかの実施形態では、組成物の量は、同じ投与レジメンに従う組成物の最大耐性用量（maximum tolerated dose、ＭＴＤ）に近い。いくつかの実施形態では、組成物の量は、ＭＴＤの約８０％、９０％、９５％、又は９８％のうちのいずれかを超える。いくつかの実施形態では、組成物中の抗ＣＤ２２構築物の量は、約０．００１μｇ〜約１０００μｇの範囲内に含まれる。上記態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、組成物中の抗ＣＤ２２構築物の有効量は、総体重の約０．１μｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇの範囲内である。
【０３７８】
抗ＣＤ２２構築物組成物は、例えば、静注経路、動脈内、腹腔内、肺内、経口、経鼻、吸入、膀胱内、筋肉内、気管内、皮下、眼内、髄腔内、頭蓋内、大脳内、脳室内、経粘膜、及び経皮を含む様々な経路を介して、（ヒトなどの）個体に投与され得る。いくつかの実施形態では、組成物の徐放性製剤を使用することができる。いくつかの実施形態では、組成物は、静注経路で投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、動脈内投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、腹腔内投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、髄腔内投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、頭蓋内投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、大脳内投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、脳室内投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、経鼻投与される。
【実施例】
【０３７９】
実施例１−ヒト抗ＣＤ２２構築物の生成及び選択
本実施例は、ヒトＣＤ２２に特異なヒト構築物の生成を実証する。特に、本実施例は、ヒトＣＤ２２をネイティブフォーマットで特異的に結合するヒト一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）の生成を実証する。本明細書に記載のヒト構築物は、正常ドナー及び／又は疾患のあるドナーから作成されたナイーブヒトファージライブラリ又は半合成ヒトファージライブラリを使用して作成され、ＣＤ２２に対する高い特異性に基づいて、ネイティブ構造の細胞表面発現ヒトＣＤ２２をパニングすることにより選択された。したがって、このようなヒト構築物は、とりわけ、完全長ＩｇＧ、多重特異性抗体、及び本来見出されるレパートリから削除され得るキメラ抗原受容体の構築のための貴重な供給源として機能し得る。
【０３８０】
簡潔には、抗ヒトＣＤ２２構築物の作成のための例示的な概要を表２に示す。プロセスは、Ｅ−ＡＬＰＨＡ（登録商標）ファージライブラリからのヒトＣＤ２２特異性構築物及び生物学的活性構築物の同定から開始した。Ｅｕｒｅｋａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓにおいて構築された、Ｅ−ＡＬＰＨＡ（登録商標）ファージライブラリと称される、ヒトｓｃＦｖ抗体ファージディスプレイライブラリ（多様性＝１０Ｘ１０１０）の収集物を、ヒトＣＤ２２に特異なヒト構築物の選択に使用した。Ｅ−ＡＬＰＨＡ（登録商標）ファージライブラリには、完全にナイーブなヒト重鎖レパートリ及びヒト軽鎖レパートリからなるナイーブライブラリ、並びに完全にナイーブなヒト軽鎖レパートリ及び完全にランダム化された重鎖ＣＤＲ３領域を有する半合成重鎖を含有する半合成ライブラリが含まれた。ナイーブな抗体レパートリは、健康なドナーのＰＢＭＣ及び脾臓から、又は疾患のあるドナーのＰＢＭＣからクローン化された。ｓｃＦｖライブラリは、Ｒａｊｉ（ＣＤ２２を自然発現するリンパ腫細胞株）、完全長ＣＤ２２を発現するＪｕｒｋａｔ細胞、及びＣＤ２２のドメイン５〜７を発現するＪｕｒｋａｔ細胞を含むヒトＣＤ２２陽性細胞に対するパニングに使用された。Ｊｕｒｋａｔ細胞における完全長ＣＤ２２の発現は、図１Ａ〜図１Ｅのように、完全長ＣＤ２２にのみ結合するＡＰＣマウス抗ヒトＣＤ２２抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ，Ｃａｔ．Ｎｏ．３６３５０５）を使用する抗ＣＤ２２の染色によって確認された。ＣＤ２２のドメイン５〜７を緑色蛍光タンパク質（green fluorescent protein、ＧＦＰ）にコンジュゲートさせ、Ｊｕｒｋａｔ細胞におけるＣＤ２２の発現をＦＩＴＣシグナルによって確認した。ＣＤ２２を発現しないＪｕｒｋａｔ細胞を陰性対照として使用した。細胞パニングに関しては、最初に、完全長ＣＤ２２若しくはＣＤ２２のドメイン５〜７を発現するＪｕｒｋａｔ細胞、又はＲａｊｉ細胞を、ヒトｓｃＦｖファージライブラリと混合させた。ＰＢＳで長時間洗浄した後、結合したｓｃＦｖ抗体ファージを有する細胞をスピンダウンさせた。次いで、結合したクローンを溶出させ、これらを使用して、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＸＬ１−Ｂｌｕｅ細胞に感染させた。ファージクローンを細菌において発現させ、精製した。ヒトＣＤ２２の細胞外領域を特異的に結合したｓｃＦｖファージクローンを濃縮させるように、３〜４ラウンドのパニングを行った。
【０３８１】
【表７】
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【０３８２】
細胞パニングによって選択されたファージクローンは、直接結合している細胞表面ヒトＣＤ２２に関して試験された。ファージディスプレイによってスクリーニングされた１０８０個のクローンのうち、フローサイトメトリーによって確認されたように、細胞表面ＣＤ２２結合クローンとして２つのクローンを同定した。図２Ａ及び図２Ｂに示されるように、クローン１及び２は、ＣＤ２２＋  Ｒａｊｉ細胞及び完全長ＣＤ２２又はＣＤ２２のドメイン５〜７を発現するＪｕｒｋａｔ細胞に対する特異的結合を実証した。更に、クローン１及び２はまた、図３Ａ及び図３Ｂに示されるように、ＮＡＬＭ−６細胞（ＣＤ２２を自然発現する白血病細胞株）に特異的に結合することも実証された。
実施例２−抗ヒトＣＤ２２キメラ抗原受容体（chimeric antigen receptor、ＣＡＲ−Ｔ）を発現するＴ細胞の特性評価
【０３８３】
本実施例は、抗ヒトＣＤ２２抗体を使用したキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の構築について説明する。特に、本実施例は、抗ＣＤ２２抗体の抗原結合部位を含み、Ｔ細胞の表面上に発現されるＣＡＲの構築を具体的に説明する。更に、Ｔ細胞によって発現されたＣＡＲを、ヒトリンパ腫細胞株に対する細胞傷害性アッセイにおいて用いた。したがって、本実施例は、いくつかの実施形態において、本明細書に記載のヒト抗ＣＤ２２抗体由来の抗原結合部位を含むＣＡＲを使用することは、ヒトＣＤ２２を発現する標的細胞（例えば、リンパ腫）を殺傷するのに有用であることを示す。
【０３８４】
ヒトＣＤ２２形質導入Ｔ細胞のインビトロの細胞傷害性。ヒトＣＤ２２特異性キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含有するレンチウイルスを、２９３Ｔ細胞をＣＡＲベクターでトランスフェクションすることによって生成した。いくつかの実施形態では、ヒトＴ細胞を、１００Ｕ／ｍＬにおけるＩＬ−２の存在下でＣＤ３／ＣＤ２８ビーズ（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）による１日間の刺激後の形質導入に使用した。濃縮されたレンチウイルスを、レトロネクチン（Ｔａｋａｒａ）コーティングされた６ウェルプレート中のＴ細胞に７２時間適用した。形質導入Ｔ細胞（ＣＤ２２／ＣＡＲ−Ｔ細胞）の機能評価は、ＬＤＨ細胞傷害性アッセイを使用して実施する。
【０３８５】
更に、同様の実験では、ＣＤ２２陽性癌細胞株及びＣＤ２２陰性癌細胞株の大きなパネルを使用して、ヒトＣＤ２２ＣＡＲ−Ｔ（上述）を試験した。簡潔には、初代Ｔ細胞は、擬似形質導入（Ｍｏｃｋ）されたか、あるいは選択されたＣＡＲコード抗ＣＤ２２抗体により形質導入された。形質導入Ｔ細胞を、抗体を使用するＦＡＣＳにより分析して、ＣＡＲ構築物の細胞外ドメイン内のタグ（例えば、ｍｙｃタグ）を検出した。
【０３８６】
別の実験では、活性化されたヒトＣＤ２２ＣＡＲ−Ｔ細胞のサイトカイン放出プロファイル及び標的細胞の分解が判定された。擬似形質導入Ｔ細胞（擬似）又は選択された抗ＣＤ２２  ＣＡＲ−Ｔを、１６時間、２対１の割合で標的細胞と共にインキュベートした（図４Ａ：Ｋ５６２、Ｋ５６２＋ＣＤ２２、及びＫ５６２＋Ｍ１８＋ＣＤ２２；図４Ｂ：ＡＳＰＣ１、Ｊｕｒｋａｔ、ＩＭ９、ＭＣＦ７、ＨｅｐＧ２、Ｈｅｌａ、ＳＫ−Ｈｅｐ１、及びＳＫＯＶ３；図４Ｃ：Ｋ５６２、Ｋ５６２＋ＣＤ２２、ＬｎＣａＰ、Ｃｏｌｏ２０５、及びＮＡＬＭ６；図５Ａ：Ｋ５６２及びＫ５６２＋ＣＤ２２；図５Ｂ：ＡＳＰＣ１、Ｊｕｒｋａｔ、ＩＭ９、ＭＣＦ７、ＨｅｐＧ２、Ｈｅｌａ、ＳＫ−Ｈｅｐ１、及びＳＫＯＶ３）。インビトロでの殺傷後の培地へのＩＦＮ−γの放出は、Ｂｉｏ−ｐｌｅｘ  Ｐｒｏ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ８−ｐｌｅｘ  Ａｓｓａｙ（ＢｉｏＲａｄ）と共にＢｉｏＰｌｅｘ２００システム（ＢｉＯ−Ｒａｄ）を使用して測定した。培地、標的細胞単独、及びクローン形質導入Ｔ細胞単独からの放出を差しい引いた後、既知の標準曲線を用いてサイトカイン濃度を判定した。ＩＦＮ−γ放出アッセイの結果を図４Ａ、図４Ｂ、及び図４Ｃに示す。図４Ａ、図４Ｂ、及び図４Ｃは、抗ＣＤ２２  ＣＡＲ（クローン２）がＣＤ２２＋標的細胞に対する特異的かつ強力なＩＦＮ−γ放出を示したことを示している。図５Ａ及び図５Ｂは、抗ＣＤ２２  ＣＡＲ（クローン２）が、Ｋ５６２＋ＣＤ２２標的細胞に対する特異的な殺傷及びＫ５６２細胞に対する非殺傷を更に示している。図５Ａはまた、抗ＣＤ２２  ＣＡＲ（クローン２）が、ｍ９７１  ＣＡＲ細胞と比較して優れた殺傷活性を示したことを示している（ｍ９７１は、ＣＤ２２の膜近位領域を標的とする抗体である）。
実施例３−競合アッセイ
【０３８７】
フローサイトメトリー競合アッセイを行って、ｍ９７１が抗ＣＤ２２  ＣＡＲ（クローン２）と競合するかどうかを判定した。ｍ９７１は、ＣＤ２２の膜近位領域を標的とする抗体である。標的細胞Ｋ５６２＋ＣＤ２２を、１０μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ、１μｇ／ｍＬ、０．１μｇ／ｍＬ、０．０１μｇ／ｍＬ、及び０．００１μｇ／ｍＬで３０分間ブロッキング抗体（ｍ９７１又は抗ＣＤ２２  ＣＡＲ（クローン１））と共にプレインキュベートした。プレインキュベーション後、１μｇ／ｍＬの検出抗体（ビオチンにコンジュゲートさせた抗ＣＤ２２  ＣＡＲ（クローン２））を、洗浄せずに試料に直接添加し、更に３０分間インキュベートした。ブロッキング後、ＦＡＣＳを検出及び分析に使用した。結合率をＭＦＩ（平均蛍光強度）から判定し、試料をアイソタイプ対照に対して正規化した。図６は、ｍ９７１が、異なるエピトープに結合する抗ＣＤ２２  ＣＡＲ（クローン２）と競合しないことを示している。図６はまた、抗ＣＤ２２  ＣＡＲ（クローン２）及び抗ＣＤ２２  ＣＡＲ（クローン１）が互いに競合し、同じエピトープ又は重複エピトープに結合する可能性が高いことを示している。抗ＣＤ２２  ＣＡＲ（クローン１）は、ｍ９７１よりも高い親和性を有するように思われた抗ＣＤ２２  ＣＡＲ（クローン２）よりも高い親和性を有するように思われた。
実施例４−ヒト抗ＣＤ２２抗体を使用した二重特異性構築物の生成
【０３８８】
本実施例は、ヒトＣＤ２２に特異的なヒトｓｃＦｖを使用した多重特異性抗体の構築について説明する。特に、本実施例は、ネイティブフォーマットの（細胞表面発現）ヒトＣＤ２２を結合する第１の抗原結合部位及び第２の抗原結合部位を有する二重特異性抗体の構築を具体的に説明する。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合部位は、Ｔ細胞上で発現されるタンパク質（例えば、Ｔ細胞上のＣＤ３）である。したがって、本実施例は、いくつかの実施形態では、本明細書に記載のような抗ＣＤ２２抗体部分を含有する多重特異性抗体を使用して、Ｔ細胞がヒトＣＤ２２を発現する標的細胞を殺傷することを目的とする。
【０３８９】
二重特異性抗体は、ヒトＣＤ２２特異性ファージクローン（例えば、クローン１及び２）のｓｃＦｖ配列を使用して生成される。二重特異性抗体は、Ｎ末端にヒトＣＤ２２特異性ファージクローンのＶＬ−ＶＨｓｃＦｖ配列と、Ｃ末端に抗ヒトＣＤ３εモノクローナルｓｃＦｖと、を含む、一本鎖フォーマットを用いて構築される（例えば、Ｂｒｉｓｃｈｗｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４３：１１２９，２００６）。ヒトＣＤ２２  ｓｃＦｖ及び抗ヒトＣＤ３ε  ｓｃＦｖをコードするＤＮＡフラグメントを合成し、標準的な組み換えＤＮＡ技術を用いて、哺乳動物発現ベクター、例えば、ｐＱＤ−Ｔ（Ｅｕｒｅｋａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．）にサブクローニングされる。精製及び検出のために、ヘキサヒスタミンタグをＣ末端において挿入する。例えば、ＨＥＫ２９３細胞などの哺乳動物細胞を、二重特異性抗体発現ベクターでトランスフェクトし、二重特異性抗体生成のために培養する。続いて、二重特異性抗体は、例えば、ＨｉｓＴｒａｐ  ＨＰカラムを使用して、細胞上清から精製することができる。細胞培養物を清澄化し、低イミダゾール濃度（例えば、２０ｍＭ）でカラムに投入し、次いで、イソクラティック高イミダゾール濃度溶出緩衝液（例えば、５００ｍＭ）を使用して、結合した二重特異性抗体を溶出させる。精製ヒトＣＤ２２二重特異性抗体の分子量は、ゲル電気泳動により非還元条件下で測定される。
実施例５−ヒトＣＤ２２二重特異性抗体の特性評価
【０３９０】
本実施例は、二重特異性抗体の結合プロファイルの特性評価を説明する。
【０３９１】
組み換えヒトＣＤ２２  ＥＣＤ−Ｆｃ融合タンパク質への結合。細胞表面ヒトＣＤ２２、例えば、クローン１及び２に対する特異的結合剤として同定されたファージクローンを、組み換えヒトＣＤ２２  ＥＣＤ−Ｆｃ融合タンパク質への溶液中の結合について試験する。いくつかの実施形態では、ビオチン化ヒトＣＤ２２  ＥＣＤ−Ｆｃ融合タンパク質を、ストレプトアビジンバイオセンサ上に投入する。過剰な抗原を洗い流した後、二重特異性抗体を、会合及び解離のためにＰＢＳ緩衝液中で試験する。
【０３９２】
一次ヒトＢ細胞への結合。ヒトＢ細胞は、例えば、ＰｅｒＣＰ−コンジュゲート抗ヒトＣＤ２０抗体を有するヒトＰＢＭＣ、第２の抗原結合部位を標的とする抗体（例えば、ＡＰＣ標識抗ヒトＣＤ３抗体）、及び抗ＣＤ２２二重特異性抗体を共染色することよって、抗ＣＤ２２抗体結合について試験される。ＰＢＳ緩衝液で短時間洗浄した後、ＦＩＴＣ標識抗ＨｉＳタグ抗体を、二重特異性抗体を検出するための二次抗体としての混合物に添加する。フローサイトメトリーアッセイでは、ヒトＢ細胞は、陽性のＣＤ２０染色及び陰性のＣＤ３染色によってゲーティングされる。抗ＣＤ２２二重特異性抗体は、これらのＣＤ２０＋ＣＤ３細胞で発現されたヒトＣＤ２２を認識する能力について評価される。
【０３９３】
Ｔ細胞殺傷アッセイ。腫瘍細胞傷害性は、例えば、ＬＤＨ細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用してアッセイされる。ヒトＴ細胞（ＡｌｌＣｅｌｌｓ）又は全血からのＦｉｃｏｌｌ精製細胞（Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｎｔｅｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｐａｃｉｆｉｃ）は、例えば、ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で活性化及び増殖される。活性化Ｔ細胞を培養し、例えば、１０％ＦＢＳ及び１００Ｕ／ｍＬのＩＬ−２を有するＲＰＭＩ１６４０培地において培養及び維持される。活性化Ｔ細胞は、活性化後、数日後、例えば、７〜１４日後に使用される。ＦＡＣＳ分析を使用して、Ｔ細胞活性化を確認する。活性化Ｔ細胞及び標的細胞は、二重特異性抗体により５：１の割合で共培養される。細胞傷害性は、培養上清中のＬＤＨ活性を測定することによって判定される。
実施例６−抗ヒトＣＤ２２抗体の親和性成熟
【０３９４】
本実施例は、抗ヒトＣＤ２２抗体の親和性成熟について説明する。具体的には、一連の抗体変異体の生成は、ランダムな変異を選択された抗ヒトＣＤ２２抗体（クローン１及び２）に組み込み、続いて抗体変異体のスクリーニング及び特性評価を行うことによって実施される。
【０３９５】
変異ファージライブラリの生成。抗ヒトＣＤ２２  ｓｃＦｖをコードしているＤＮＡを、例えば、ＧｅｎｅＭｏｒｐｈ  ＩＩ  Ｒａｎｄｏｍ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ  ｋｉｔ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してランダム突然変異生成を受けさせる。突然変異生成後、ＤＮＡ配列をｓｃＦｖ発現ファージミドベクターにクローニングして、変異抗体ファージライブラリを構築する。変異ライブラリは、抗ヒトＣＤ２２特異性クローン毎に別々に構築される。濃縮されたファージパニングプール（例えば、変異体クローン）からの個々のファージクローンを、対応する親クローンと比較して、細胞表面ヒトＣＤ２２への強化された結合について試験される。更に、競合細胞結合アッセイを行って、変異体クローンの結合親和性を親クローンのものと比較する。
実施例７−抗ヒトＣＤ２２変異体クローンに基づく二重特異性抗体の生成及び特性評価
【０３９６】
本実施例は、ヒトＣＤ２２に特異的な変異ヒトｓｃＦｖを使用した多重特異性抗体の構築について説明する。特に、本実施例は、ネイティブフォーマットの（細胞表面発現）ヒトＣＤ２２を結合する第１の抗原結合部位及び第２の抗原結合部位を有する二重特異性抗体の構築を具体的に説明する。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合部位は、Ｔ細胞上でＣＤ３を結合し得る。したがって、本実施例は、いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるような抗体部分を含有する多重特異性抗体を使用して、Ｔ細胞がヒトＣＤ２２を発現する標的細胞を殺傷することを目的とする。
【０３９７】
変異体クローン二重特異性抗体の生成。親和性が改良された変異抗体クローンに由来する二重特異性抗体は、実施例２に記載されるように生成される。
【０３９８】
変異二重特異性抗体の結合親和性の判定。親抗体と比較して、変異体クローンの相対的な結合親和性は、例えば、ヒトＣＤ２２＋癌細胞を使用して、抗体滴定フローサイトメトリーによって判定される。二重特異性抗体クローンは、段階希釈濃度でＲａｊｉ細胞と混合される。抗体ＥＣ５０及び見かけのＫＤは、フローサイトメトリー結合シグナルに基づいて算出される。
【０３９９】
Ｔ細胞殺傷アッセイ。腫瘍細胞傷害性は、例えば、ＬＤＨ細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して判定される。ヒトＴ細胞は、例えば、ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で活性化及び増殖される。活性化Ｔ細胞を培養し、例えば、１０％ＦＢＳ及び１００Ｕ／ｍＬのＩＬ−２を有するＲＰＭＩ１６４０培地において培養及び維持される。活性化Ｔ細胞は、活性化後、数日後、例えば、７〜１４日後に使用される。ＦＡＣＳ分析を使用して、Ｔ細胞活性化を確認する。活性化Ｔ細胞及び標的細胞は、二重特異性抗体により５：１の割合で共培養される。細胞傷害性は、培養上清中のＬＤＨ活性を測定することによって判定される。
実施例８−抗ヒトＣＤ２２キメラ抗原受容体（ＣＡＲ−Ｔ）を発現するＴ細胞の特性評価
【０４００】
別の同様の実験では、本明細書に記載の選択されたヒト抗体から生成されたＣＡＲ−Ｔ及び非ヒト（例えば、マウス）抗体を、上記のようにＣＤ２２陽性癌細胞株及びＣＤ２２陰性癌細胞株のパネルを使用して試験する。簡潔には、初代Ｔ細胞は、擬似形質導入（Ｍｏｃｋ）されているか、あるいは本明細書に記載されるＣＡＲコード抗ヒトＣＤ２２  ｓｃＦｖ（例えば、クローン１又はクローン２）又は抗ヒトＣＤ２２マウス抗体からの可変領域配列を有するＣＡＲコード抗ヒトＣＤ２２  ｓｃＦｖで形質導入される。形質導入Ｔ細胞は、上記のようにＦＡＣＳにより分析される。
【０４０１】
ヒトリンパ腫異種移植片におけるＣＤ２２  ＣＡＲ−Ｔ細胞のインビボの有効性。例示的なＣＡＲ−Ｔ細胞のインビボの抗腫瘍活性は、ＮＯＤ  ＳＣＩＤγ（NOD SCID gamma、ＮＳＧ）マウスにおけるＣＤ２２＋ヒトリンパ腫異種移植片モデルにおいて試験される。細胞株Ｒａｊｉ−ｌｕｃ−ＧＦＰは、生物発光イメージングを使用してインビボで追跡できる細胞をもたらす、ホタルルシフェラーゼ（ｌｕｃ）と緑色蛍光タンパク質との両方をコードしている二重レポーター遺伝子による安定なトランスフェクション後の、ＣＤ２２＋Ｂｕｒｋｉｔｔリンパ腫細胞株、すなわち、Ｒａｊｉに由来する。ＮＳＧマウスは、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ  ＵＳＡ０４６０９）から購入する。Ｒａｊｉ−ｌｕｃ−ＧＦＰ細胞をＰＢＳ中に再懸濁させ、尾静脈を介して、１×１０６個細胞／１００μＬ／マウスで、静注経路（ｉ．ｖ．）でＮＳＧマウスに移植する。移植から５日後に、腫瘍量を評価するためのＸｅｎｏｇｅｎ  ＩＶＩＳ撮像システムを使用して動物を撮像する。マウスは、（ｉ）治療なし、（ｉｉ）擬似（ＣＡＲ−Ｔ細胞の同じドナー由来の非形質導入活性化ヒトＴ細胞）、及び（ｉｉｉ）クローンＣＡＲ−Ｔの３つの群に無作為化される。動物を、マウスあたり、例えば、２週毎に３用量で、（グループ（ｉｉｉ）に関して、１用量あたり６〜８×１０６個のＣＡＲ＋Ｔ細胞を含む）１０７個のＴ細胞の用量で、無作為化直後にＭｏｃｋ又はクローンＣＡＲ−Ｔ細胞によりｉ．ｖ．で治療する。動物は、用量投与後に非常に注意深くモニタされる。Ｘｅｎｏｇｅｎ  ＩＶＩＳシステムを用いた生物発光イメージングが１週間に１回行われる。以下の条件を有する動物を安楽死させ、「条件死」として記録する。（ｉ）初期体重より２５％を超える体重減少、（ｉｉ）マウスの動きに影響を及ぼす肢麻痺がある。
【０４０２】
腫瘍移植後、抗ＣＤ２２  ＣＡＲクローン形質導入Ｔ細胞治療群からのマウスは、Ｒａｊｉリンパ腫細胞によるｉ．ｖ．移植によって再チャレンジされ、抗ＣＤ２２  ＣＡＲ形質導入Ｔ細胞が持続し、抗原（ＣＤ２２）に応答する能力を維持しているかどうかを判定する。ナイーブなＮＳＧマウス（すなわち、Ｒａｊｉリンパ腫細胞が移植されていないか、又はＴ細胞で前処置されていないマウス）に、対照として、擬似形質導入Ｔ細胞の注射の１日後にＲａｊｉリンパ腫細胞を移植する。このような擬似形質導入Ｔ細胞は、Ｒａｊｉリンパ腫細胞の移植前のマウス内の循環Ｔ細胞のレベルが低い状態を模倣し得る。それぞれの群の腫瘍量は、ルシフェラーゼ活性によって測定される。
【０４０３】
別の同様の実験では、ＮＳＧマウス中のＣＤ２２＋ヒト白血病異種移植片モデル（ＮＡＬＭ）において、例示的なＣＡＲ−Ｔ細胞のインビボでの抗腫瘍活性を試験する。ＮＡＬＭ−６−ｌｕｃ−ＧＦＰ細胞は、生物発光イメージングを使用してインビボで追跡できる細胞をもたらす、ホタルルシフェラーゼ（ｌｕｃ）と緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）との両方をコードしている二重レポーター遺伝子による安定なトランスフェクション後の、ＣＤ２２＋急性リンパ性白血病細胞株ＮＡＬＭ−６に由来する。
【０４０４】
簡潔には、ＮＡＬＭ−６−ｌｕｃ−ＧＦＰを、５％ＣＯ２を有する加湿雰囲気中、３７℃でＲＰＭＩ培地＋１０％ＦＢＳにおいて培養する。ＮＳＧマウスは、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ  ＵＳＡ０４６０９）から購入し、実験前に順応させる。ＮＡＬＭ−６−ｌｕｃ−ＧＦＰ細胞をリン酸緩衝生理食塩水（phosphate-buffered saline、ＰＢＳ）中に再懸濁させ、例えば、５Ｘ１０５個細胞／１００μＬ／マウスで、静注経路で（ｉ．ｖ．）尾静脈注射によって雌ＮＳＧマウスに移植する。移植後、腫瘍量評価のためにＸｅｎｏｇｅｎ  ＩＶＩＳ撮像システムを使用して動物を撮像する。ＮＳＧマウスは、（ｉ）ビヒクル（ＰＢＳ）、（ｉｉ）擬似形質導入ヒトＴ細胞、及び（ｉｉｉ）クローン抗ＣＤ２２  ＣＡＲ形質導入Ｔ細胞という３群に無作為化される。動物は、上記のようにＴ細胞又はビヒクルを移植及び投与した後に、非常に注意深くモニタされる。
実施例９−単一特異性抗ヒトＣＤ２２キメラ抗体−Ｔ細胞受容体（ｃａＴＣＲ）を発現するＴ細胞の生成及び特性評価
【０４０５】
本実施例は、本明細書に記載の抗ヒトＣＤ２２Ｆａｂを含む様々な単一特異性ｃａＴＣＲ構築物を発現するＴ細胞の生成及び特性評価を説明する。ｃａＴＣＲ構築物のうちのいくつかは、本明細書に記載の抗ＣＤ２２  Ｆａｂ及び抗ＣＤ２２  ｓｃＦｖの両方を含む。ｃａＴＣＲ−Ｔ細胞のうちの一部は、キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）を更に発現する。
【０４０６】
抗ヒトＣＤ２２−ｃａＴＣＲを発現するＴ細胞の生成。簡潔には、初代Ｔ細胞は、擬似形質導入（Ｍｏｃｋ）されたか、あるいは選択されたｃａＴＣＲコード核酸で形質導入された。特に、以下のｃａＴＣＲ構築物又はｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ構築物の組み合わせをコードしている核酸を生成し、形質導入に使用した。
構築物の組み合わせ１（配列番号１）：抗ＣＤ１９−ｃａＴＣＲ＋抗ＣＤ１９−ＣＳＲ
構築物２（配列番号２）：抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ
構築物の組み合わせ３（配列番号３）：抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ＋抗ＣＤ１９−ＣＳＲ
構築物４（配列番号４）：抗ＣＤ２２−ｓｃＦｖ−抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ（二価単一特異性抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲとも呼ばれる）
構築物の組み合わせ５（配列番号５）：抗ＣＤ２２−ｓｃＦｖ−抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ＋抗ＣＤ１９−ＣＳＲ
構築物の組み合わせ６（配列番号６）：抗ＣＤ２２−ｓｃＦｖ−抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ＋抗ＣＤ２２−ＣＳＲ。
【０４０７】
構築物の組み合わせ１、３、５、及び６において、ＣＳＲは、ＣＤ２８膜貫通領域配列及び細胞内シグナル伝達配列を含む先端切断型ＣＤ２８（配列番号１５７）を含む。
【０４０８】
加えて、以下の構築物の組み合わせをコードする核酸が生成され、初代Ｔ細胞に形質導入される。
構築物の組み合わせ７（配列番号７）：抗ＣＤ２２−ｓｃＦｖ−抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ＋抗ＣＤ２２−（ＣＤ８  ＴＭ配列及び４−１ＢＢ  ＩＣシグナル伝達配列（配列番号１７３）を含む）ＣＳＲ
構築物の組み合わせ８（配列番号８）：抗ＣＤ２２−ｓｃＦｖ−抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ＋抗ＣＤ２２−（先端切断型４−１ＢＢ（配列番号１５９）を含む）ＣＳＲ
構築物の組み合わせ９（配列番号９）：抗ＣＤ２２−ｓｃＦｖ−抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ＋抗ＣＤ２２−（ＣＤ８  ＴＭ配列及びＣＤ２７  ＩＣシグナル伝達配列（配列番号１６７）を含む）ＣＳＲ
構築物の組み合わせ１０（配列番号１０）：抗ＣＤ２２−ｓｃＦｖ−抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ＋抗ＣＤ２２−（先端切断型ＣＤ２７（配列番号１６１）を含む）ＣＳＲ
構築物の組み合わせ１１（配列番号１１）：抗ＣＤ２２−ｓｃＦｖ−抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ＋抗ＣＤ２２−（ＣＤ８  ＴＭ配列及びＣＤ３０  ＩＣシグナル伝達配列（配列番号１６９）を含む）ＣＳＲ
構築物の組み合わせ１２（配列番号１２）：抗ＣＤ２２−ｓｃＦｖ−抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ＋抗ＣＤ２２−（先端切断型ＣＤ３０（配列番号１６３）を含む）ＣＳＲ
構築物の組み合わせ１３（配列番号１３）：抗ＣＤ２２−ｓｃＦｖ−抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ＋抗ＣＤ２２−（ＣＤ８  ＴＭ配列及びＯＸ４０  ＩＣシグナル伝達配列（配列番号１７１）を含む）ＣＳＲ
構築物の組み合わせ１４（配列番号１４）：抗ＣＤ２２−ｓｃＦｖ−抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ＋抗ＣＤ２２−（先端切断型ＯＸ４０を有する（配列番号１６５）を含む）ＣＳＲ。
【０４０９】
更に、構築物の組み合わせ５〜１４（配列番号５〜１４）をコードしているが、ｍｙｃタグ（配列番号１９４）を除去した核酸も生成され、初代Ｔ細胞に形質導入される。
【０４１０】
本実施例に開示される構築物及び構築物の組み合わせでは、各ＣＳＲ及び共発現ｃａＴＣＲは、最初に単一のポリペプチドとして翻訳され、次いで別個のポリペプチドに切断される。他の実施形態では、共発現されたＣＳＲ及びｃａＴＣＲは、同じ核酸上にコードされるか、又は更には異なる核酸上にコードされた別個に翻訳されたポリペプチドとして構築することができる。
【０４１１】
抗ヒトＣＤ２２  ｃａＴＣＲを発現するＴ細胞の特性評価。初代Ｔ細胞は、構築物の組み合わせ１、３、５、及び６（それぞれ配列番号１、３、５、及び６）、構築物２及び４（それぞれ配列番号２及び４）をコードする核酸により形質導入されるか、又は疑似形質導入（核酸なし）された。形質導入効率は、細胞表面染色によって、ｃａＴＣＲ発現のマーカーとしてＦａｂ及びＣＳＲ発現のマーカーとしてｍｙｃタグを用いて判定された。ｃａＴＣＲ＋細胞の割合とＣＳＲ＋細胞の割合は、ｃａＴＣＲ−ＣＳＲ−コード核酸で形質導入された同じＴ細胞サンプルにおいて、ほぼ同じであったという結果が示された。全てのｃａＴＣＲ−形質導入Ｔ細胞を、擬似Ｔ細胞と混合することによって、およそ４６％のｃａＴＣＲの受容体陽性において対応させ（に正規化し）、エフェクタ細胞としてｃａＴＣＲ＋細胞を使用した。
【０４１２】
インビトロの殺傷。ＣＤ８０／８６陰性ＮＡＬＭ６−ｌｕｃ−ＧＦＰ細胞及びＣＤ８０／ＣＤ８６陽性Ｒａｊｉ−ｌｕｃ−ＧＦＰ細胞（ＣＤ２２及びＣＤ１９を発現する白血病及びリンパ腫細胞）を、１：１のエフェクタ対標的の割合で、Ｔ細胞刺激のための別個の実験で標的細胞として使用し、ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞と共に一晩（約１６時間）インキュベートした。Ｃｙｔｏｘ９６非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して一晩インキュベートした後、特異性Ｔ細胞の分解を測定した。生存標的細胞を計数し、各群における生存標的細胞の割合と、標的単独（Ｔ細胞なし）の群の割合との比較による差として、殺傷率を算出した。結果を図７に示す。６つの構築物及び構築物の組み合わせ（配列番号１〜６）のうちのいずれか１つを発現するｃａＴＣＲ  Ｔ細胞は、ＮＡＬＭ６細胞において非常に高い殺傷効果を有した。試験されたエフェクタ対標的の割合１：１では、ＮＡＬＭ６ほど高くないが、Ｒａｊｉ細胞において有意な殺傷効果を有していた。
【０４１３】
ＮＡＬＭ６−ｌｕｃ−ＧＦＰ細胞及びＲａｊｉ−ｌｕｃ−ＧＦＰ細胞を標的細胞として使用し、エフェクタ細胞として構築物の組み合わせ７〜１４をコードする核酸で形質導入された初代Ｔ細胞を使用して同様のインビトロの殺傷実験を実施する。
【０４１４】
サイトカインの分泌。生存標的細胞数を測定することに加えて、インビトロの殺傷反応の上清中に放出されたＩＦＮ−γの濃度を、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ製Ｈｕｍａｎ  ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＡ  ＭＡＸ（商標）キットによる細胞殺傷の別の指標として測定した。結果を図８に示す。６つの構築物及び構築物の組み合わせのうちのいずれか１つを発現するｃａＴＣＲ  Ｔ細胞において、Ｒａｊｉ細胞、特に構築物４（抗ＣＤ２２−ｓｃＦｖ−抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ（二価単一特異性抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲとも呼ばれる））から高いＩＦＮ−γ放出レベルがあった。抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞群の大部分においてもまた、ＮＡＬＭ６細胞から高いＩＦＮ−γ放出レベルがあった。
【０４１５】
同様に、構築物の組み合わせ７〜１４を発現するＴ細胞によるＮＡＬＭ６細胞及びＲａｊｉ細胞からのインビトロの殺傷反応の上清中に放出されたＩＦＮ−γの濃度を同じ方法で測定する。
【０４１６】
標的細胞再チャレンジ。最初に、構築物の組み合わせ３、５、及び６（それぞれ配列番号１、３、５、及び６）並びに構築物２及び４（それぞれ配列番号２及び４）のうちのいずれか１つを発現するＴ細胞を、エフェクタ対標的の割合１：１で、５０，０００個のＮＡＬＭ６−ｌｕｃ−ＧＦＰ標的細胞又はＲａｊｉ−ｌｕｃ−ＧＦＰ標的細胞と共培養した。７日毎に、新たな標的細胞のうちの１００，０００個を、Ｔ細胞を再チャレンジ（又は「エンゲージ」）させるために、同じ共培養物に添加した。共培養物中の残りの標的細胞及びＴ細胞を、フロー分析を用いて週２回計数して、Ｔ細胞の殺傷活性を評価した。標的細胞としてのＮＡＬＭ６による結果を図９Ａ（標的細胞数）及び図９Ｂ（合計Ｔ細胞数）に示し、標的細胞としてのＲａｊｉによる結果を図１０Ａ（標的細胞数）及び図１０Ｂ（合計Ｔ細胞数）に示す。５つの構築物及び構築物の組み合わせ（配列番号２〜６）のうちのいずれか１つを発現する抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞は、ＮＡＬＭ６細胞内で少なくとも最大３週間、かつ３ラウンド以上の標的エンゲージメントの後に（例えば、Ｅ３Ｄ７及びＥ４Ｄ３において）高い殺傷効果を維持した。ＮＡＬＭ６標的細胞では、構築物の組み合わせ５（抗ＣＤ２２−ｓｃＦｖ−抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ＋抗ＣＤ１９−ＣＳＲ）を発現するＴ細胞が、５つの構築物及び構築物の組み合わせのうち最長時間持続した。５つの構築物及び構築物の組み合わせのうちのいずれか１つを発現している抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞はまた、Ｒａｊｉ細胞において、最大約５週間、及び合計５ラウンドの標的エンゲージメント後に、有意な殺傷効果を有した。
【０４１７】
同様の標的細胞再チャレンジ実験は、ＮＡＬＭ６−ｌｕｃ−ＧＦＰ細胞及びＲａｊｉ−ｌｕｃ−ＧＦＰ細胞を標的細胞として使用し、エフェクタ細胞として構築物の組み合わせ１及び７〜１４のそれぞれをコードする核酸により形質導入された初代Ｔ細胞を使用して実施される。
【０４１８】
本実施例に記載された実験の結果は、抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲを発現するように形質導入Ｔ細胞が、ＣＤ２２を発現している標的癌細胞を殺傷させることに成功したことを示している。このような細胞はまた、少なくとも数週間持続し、標的細胞の殺傷能力を維持した。
実施例１０−二重特異性又は三重特異性抗ヒトＣＤ２２−ｃａＴＣＲを発現するＴ細胞の生成及び特性評価
【０４１９】
本実施例は、本明細書に記載されるような非ＣＤ２２抗原を標的化する抗ヒトＣＤ２２Ｆａｂ及び１つ又は２つの追加の抗体可変領域フラグメントを含む、様々な二重特異性又は三特異性ｃａＴＣＲ構築物を発現するＴ細胞の生成及び特性評価を説明する。ｃａＴＣＲ−Ｔ細胞のうちの一部は、ＣＳＲを更に発現する。
【０４２０】
二重特異性又は三重特異性抗ヒトＣＤ２２−ｃａＴＣＲを含む様々なｃａＴＣＲを発現するＴ細胞の生成。簡潔には、初代Ｔ細胞は、擬似形質導入（Ｍｏｃｋ）されたか、あるいは選択されたｃａＴＣＲコード核酸で形質導入された。特に、以下の構築物１５〜２１（それぞれ配列番号１５〜２１）をコードする核酸を生成し、形質導入に使用した。
【０４２１】
インビトロの殺傷。実施例９に記載したものと同様のプロトコルに従い、ＣＤ８０／８６陰性ＮＡＬＭ６−ｌｕｃ−ＧＦＰ細胞、ＣＤ８０／ＣＤ８６陽性Ｒａｊｉ−ｌｕｃ−ＧＦＰ細胞（ＣＤ２２及びＣＤ１９を発現する白血病及びリンパ腫細胞）、及びＫ５６２細胞を、エフェクタ対標的の割合１：１で、Ｔ細胞刺激のための別個の実験で標的細胞として使用し、ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞と共に一晩（約１６時間）インキュベートした。Ｃｙｔｏｘ９６非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して一晩インキュベートした後、特異性Ｔ細胞の分解を測定した。生存標的細胞を計数し、各群における生存標的細胞の割合と、標的単独（Ｔ細胞なし）の群の割合との比較による差として、殺傷率を算出した。結果を図１１及び図１２Ａ〜図１２Ｆに示す。二重特異性構築物のうちのいずれか１つを発現するｃａＴＣＲ  Ｔ細胞（構築物１５〜２１（それぞれ配列番号１５〜２１））又は単一特異性構築物（構築物２、２２、及び２８（それぞれ配列番号２、２２、及び２８））は、細胞内で非常に高い殺傷効果を有した。
【０４２２】
同様のインビトロの殺傷実験は、構築物の組み合わせ２３（配列番号２３）、構築物２４〜２７（それぞれ配列番号２４〜２７）、及び構築物の組み合わせ２９〜７５（それぞれ配列番号２９〜７５）をコードする核酸を使用して、同一の実験プロトコルに従って実施される。
【０４２３】
標的細胞再チャレンジ。実施例９に記載したものと同様のプロトコルに従って、最初に、構築物の組み合わせ１及び２３を発現するＴ細胞を、エフェクタ対標的の割合１：１で、５０，０００個のＮＡＬＭ６−ｌｕｃ−ＧＦＰ標的細胞と共培養した。７日毎に、新たな標的細胞のうちの１００，０００個を、Ｔ細胞を再チャレンジ（又は「エンゲージ」）させるために、同じ共培養物に添加した。共培養物中の残りの標的細胞及びＴ細胞を、フロー分析を用いて週２回計数して、Ｔ細胞の殺傷活性を評価した。標的細胞としてのＮＡＬＭ６による結果を図１３Ａ及び図１３Ｂに示す。
【０４２４】
構築物及び構築物の組み合わせ１５〜２１、２４〜２７、及び２９〜７５（それぞれ配列番号１５〜２１、２４〜２７、及び２９〜７５）のそれぞれをコードしている核酸を使用して、同様の標的細胞再チャレンジ実験を、同一の実験プロトコルに従って実施する。
実施例１１−他の構築物の組み合わせを発現するＴ細胞の生成及び特性評価
【０４２５】
本実施例は、抗ヒトＣＤ２２Ｆａｂと、本明細書に記載のような非ＣＤ２２抗原を標的とする１つ又は２つの追加の抗体可変領域フラグメントと、を含む、様々な他のｃａＴＣＲ−ＣＳＲ構築物の組み合わせを発現するＴ細胞の生成及び特性評価について説明する。ｃａＴＣＲ−Ｔ細胞のうちの一部は、ＣＳＲを更に発現する。
【０４２６】
上記と同様のプロトコルに従い、初代Ｔ細胞は、擬似形質導入（Ｍｏｃｋ）されているか、あるは以下の構築物の組み合わせをコードする核酸で形質導されている。
（１）ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含む構築物の組み合わせであって、ｃａＴＣＲは、配列番号７７の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号８１〜９６のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する、構築物の組み合わせ；
（２）ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含む構築物の組み合わせであって、ｃａＴＣＲは、配列番号７７の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号９７〜１１２のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する、構築物の組み合わせ；
（３）ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含む構築物の組み合わせであって、ｃａＴＣＲは、配列番号７７の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１１３〜１２８のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する、構築物の組み合わせ；
（４）ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含む構築物の組み合わせであって、ｃａＴＣＲは、配列番号７８の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号８１〜９６のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する、構築物の組み合わせ；
（５）ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含む構築物の組み合わせであって、ｃａＴＣＲは、配列番号７８の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号９７〜１１２のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する、構築物の組み合わせ；並びに
（６）ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含む構築物の組み合わせであって、ｃａＴＣＲは、配列番号７８の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１１３〜１２８のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する、構築物の組み合わせ。
【０４２７】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物の組み合わせは、配列番号２１２の配列と少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する配列を有する軽鎖可変領域と、配列番号２１３の配列と少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する配列を有する重鎖可変領域と、を有するｃａＴＣＲを含む。
【０４２８】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物の組み合わせは、配列番号２１８の配列と少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する配列を有する軽鎖可変領域と、配列番号２１９の配列と少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する配列を有する重鎖可変領域と、を有するｃａＴＣＲを含む。
【０４２９】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物の組み合わせは、配列番号２１２の配列と少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する配列を有する軽鎖可変領域と、配列番号２１３の配列と少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する配列を有する重鎖可変領域と、を有するＣＳＲを含む。
【０４３０】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物の組み合わせは、配列番号２１８の配列と少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する配列を有する軽鎖可変領域と、配列番号２１９の配列と少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する配列を有する重鎖可変領域と、を有するＣＳＲを含む。
【０４３１】
上記実施形態のうちのいずれかに記載の抗ＣＤ２２構築物の組み合わせのうちのいずれかをコードしている核酸もまた初代Ｔ細胞に形質導入される。
【０４３２】
上記のような同様のプロトコルに従い、上記実施形態のうちのいずれかに記載の抗ＣＤ２２構築物の組み合わせのうちのいずれも、インビトロの殺傷実験及び標的細胞再チャレンジ実験において試験される。
実施例１２−抗ＣＤ２２構築物又は構築物の組み合わせで形質導入Ｔ細胞のインビボの有効性研究
【０４３３】
本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物及び構築物の組み合わせのうちの１つ以上を発現するＴ細胞のインビボの抗腫瘍活性を、ヒトＣＤ１９＋ＮＡＬＭ−６ｐｒｅ−Ｂ急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）モデルにおいて試験する。ルシフェラーゼ発現ＮＡＬＭ−６細胞を、ＮＯＤ  ＳＣＩＤγ（ＮＳＧ）免疫不全マウスに静注経路（ｉ．ｖ．）で移植し、腫瘍量を、腫瘍由来生物発光を測定することによって評価する。腫瘍移植から６日後、マウスを、全生物発光フラックスに基づいて治療群に無作為化する。（１）５×１０６個の未形質導入ドナーに適合した（Ｍｏｃｋ）Ｔ細胞のｉ．ｖ．注射、（２）抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ構築物のみを発現する２×１０６個のＴ細胞（「ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞」）のｉ．ｖ．注射、及び（３）抗ＣＤ１９  ｃａＴＣＲ及び抗ＣＤ１９  ＣＳＲの両方を発現する２×１０６個のＴ細胞（「ｃａＴＣＲ  ＣＳＲ  Ｔ細胞」；ｎ＝６個のマウス／群）のｉ．ｖ．注射。マウスにおけるＴ細胞注入から生じる健康効果は、全身の外観、体重、及び有害応答の他の臨床的徴候（低体温、腹腔呼吸、及び後肢麻痺／衰弱を含む）をモニタすることによって評価される。
【０４３４】
インビボでのサイトカインの放出レベルを判定するために、ＮＡＬＭ−６腫瘍担持マウスに抗ＣＤ２２  ＣＡＲ−Ｔ細胞又はｃａＴＣＲ  ＣＳＲ  Ｔ細胞を投与後、臨床サイトカイン放出症候群に関連するものを含む重要なサイトカインを２４時間分析する。ＢｉｏＲａｄ  Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘキットを使用して、Ｌｕｍｉｎｅｘ  Ｍａｇｐｉｘ技術によりサイトカインレベルを定量する。
例示的な実施形態
【０４３５】
本開示の主題に従って提供される例示的な実施形態としては、これらの実施形態及び以下の実施形態が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
１．ＣＤ２２に特異的に結合する抗体部分を含む抗ＣＤ２２構築物であって、抗体部分は、
（ａ）配列番号２１８又は２１２の軽鎖可変領域（ＶＬ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣ−ＣＤＲ）１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域と、
（ｂ）配列番号２１９又は２１３の重鎖可変領域（ＶＨ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣ−ＣＤＲ）１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３、を含む、重鎖可変領域と、を含む、抗ＣＤ２２構築物。
２．抗体部分は、配列番号２１８の軽鎖可変領域のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む、実施形態１に記載の抗ＣＤ２２構築物。
３．抗体部分は、配列番号２１２の軽鎖可変領域のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む、実施形態１に記載の抗ＣＤ２２構築物。
４．抗体部分は、
（ａ）配列番号２１８の軽鎖可変領域（ＶＬ）のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域と、
（ｂ）配列番号２１９の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域と、を含む、実施形態１又は２に記載の抗ＣＤ２２構築物。
５．抗体部分は、
（ａ）配列番号２１２の軽鎖可変領域（ＶＬ）のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域と、
（ｂ）配列番号２１３の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域と、を含む、実施形態１又は３に記載の抗ＣＤ２２構築物。
６．抗体部分は、
ＨＤＩＲＮＹ（配列番号２１４）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、
ＡＡＳ（配列番号２１５）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２、
ＱＱＹＤＧＬＰＬＴ（配列番号２１６）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３、
ＧＦＴＦＳＮＹＡ（配列番号２０９）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１、
ＩＳＧＳＧＧＳＴ（配列番号２１０）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２、及び
ＡＲＹＧＳＡＡＷＭＤＳ（配列番号２１７）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つ以上を含む、実施形態１に記載の抗ＣＤ２２構築物。
７．抗体部分は、配列番号２０９、２１０、及び２１４〜２１７の配列を含む、実施形態６に記載の抗ＣＤ２２構築物。
８．軽鎖可変領域は、
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＴＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＨＤＩＲＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＮＬＬＩＹＡＡＳＮＬＱＴＧＶＰＳＲＦＳＧＲＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＹＤＧＬＰＬＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫＲ（配列番号２１８）の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する、実施形態６又は７に記載の抗ＣＤ２２構築物。
９．重鎖可変領域は、
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＴＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＹＧＳＡＡＷＭＤＳＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２１９）の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する、実施形態６〜８のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
１０．軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含む抗ＣＤ２２構築物であって、
軽鎖可変領域は、
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＴＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＨＤＩＲＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＮＬＬＩＹＡＡＳＮＬＱＴＧＶＰＳＲＦＳＧＲＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＹＤＧＬＰＬＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫＲ（配列番号２１８）の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を有し、
重鎖可変領域は、
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＴＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＹＧＳＡＡＷＭＤＳＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２１９）の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する。
１１．軽鎖可変領域は、配列番号２１８の配列を含み、重鎖可変領域は、配列番号２１９の配列を含む、実施形態１０に記載の抗ＣＤ２２構築物。
１２．抗体部分は、
ＳＳＮＩＧＮＮＹ（配列番号２０６）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、
ＥＮＮ（配列番号２０７）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２、
ＧＴＷＤＳＳＬＳＡＧＡＶ（配列番号２０８）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３、
ＧＦＴＦＳＮＹＡ（配列番号２０９）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１、
ＩＳＧＳＧＧＳＴ（配列番号２１０）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２、及び
ＡＲＰＹＹＤＤ（配列番号２１１）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つ以上を含む、実施形態１に記載の抗ＣＤ２２構築物。
１３．抗体部分は、配列番号２０６〜２１１の配列を含む、実施形態１２に記載の抗ＣＤ２２構築物。
１４．軽鎖可変領域は、
ＱＳＶＶＴＱＰＰＳＶＳＡＡＰＧＱＫＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＹＶＳＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＥＮＮＫＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＴＬＧＩＴＧＬＱＴＧＤＥＡＤＹＹＣＧＴＷＤＳＳＬＳＡＧＡＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ（配列番号２１２）の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する実施形態１２又は１３に記載の抗ＣＤ２２構築物。
１５．重鎖可変領域は、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＰＹＤＤＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２１３）の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する実施形態１２又は１３に記載の抗ＣＤ２２構築物。
１６．重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ２２構築物であって、
軽鎖可変領域は、
ＱＳＶＶＴＱＰＰＳＶＳＡＡＰＧＱＫＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＹＶＳＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＥＮＮＫＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＴＬＧＩＴＧＬＱＴＧＤＥＡＤＹＹＣＧＴＷＤＳＳＬＳＡＧＡＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ（配列番号２１２）の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を有し、
重鎖可変領域は、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＰＹＤＤＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２１３）の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する。
１７．軽鎖可変領域は、配列番号２１２の配列を含み、重鎖可変領域は、配列番号２１３の配列を含む、実施形態１６に記載の抗ＣＤ２２構築物。
１８．ＣＤ２２への特異的結合について、実施形態１１又は１７に記載の抗ＣＤ２２構築物と競合する抗体部分を含む、抗ＣＤ２２構築物。
１９．軽鎖可変領域と重鎖可変領域は、リンカーによって結合されている、実施形態１〜１８のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
２０．リンカーは、ＳＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＥＭＡ（配列番号２３３）の配列を有する、実施形態１９に記載の抗ＣＤ２２構築物。
２１．抗体部分は、λ又はκアイソタイプの軽鎖を含む、実施形態１〜２０のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
２２．抗体部分は、ＣＤ２２の細胞外領域に結合する、実施形態１〜２１のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
２３．ＣＤ２２の細胞外領域は、
ＤＶＱＹＰＰＫＫＶＴＴＶＩＱＮＰＭＰＩＲＥＧＤＴＶＴＬＳＣＮＹＮＳＳＮＰＳＶＴＲＹＥＷＫＰＨＧＡＷＥＥＰＳＬＧＶＬＫＩＱＮＶＧＷＤＮＴＴＩＡＣＡＡＣＮＳＷＣＳＷＡＳＰＶＡＬＮＶＱＹＡＰＲＤＶＲＶＲＫＩＫＰＬＳＥＩＨＳＧＮＳＶＳＬＱＣＤＦＳＳＳＨＰＫＥＶＱＦＦＷＥＫＮＧＲＬＬＧＫＥＳＱＬＮＦＤＳＩＳＰＥＤＡＧＳＹＳＣＷＶＮＮＳＩＧＱＴＡＳＫＡＷＴＬＥＶＬＹＡＰＲＲＬＲＶＳＭＳＰＧＤＱＶＭＥＧＫＳＡＴＬＴＣＥＳＤＡＮＰＰＶＳＨＹＴＷＦＤＷＮＮＱＳＬＰＹＨＳＱＫＬＲＬＥＰＶＫＶＱＨＳＧＡＹＷＣＱＧＴＮＳＶＧＫＧＲＳＰＬＳＴＬＴＶＹＹＳＰＥＴＩＧＲＲ（配列番号２０５）の配列のうちの少なくとも７個のアミノ酸を含む、実施形態２２に記載の抗ＣＤ２２構築物。
２４．細胞外領域は、配列番号２０５の配列を有する、実施形態２２又は２３に記載の抗ＣＤ２２構築物。
２５．構築物は、完全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、又は一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体である、実施形態１〜２４のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
２６．構築物は、単一特異性である、実施形態１〜２５のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
２７．構築物は、多重特異性である、実施形態１〜２５のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
２８．構築物は、二重特異性である、実施形態２７に記載の抗ＣＤ２２構築物。
２９．構築物は、タンデムｓｃＦｖ、ダイアボディ（Ｄｂ）、一本鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、二重親和性再標的化（ＤＡＲＴ）抗体、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）抗体、ノブ・イントゥ・ホール（ＫｉＨ）抗体、ドックアンドロック（ＤＮＬ）抗体、化学的に架橋された抗体、ヘテロマルチマー抗体、又はヘテロコンジュゲート抗体である、実施形態２７又は２８に記載の抗ＣＤ２２構築物。
３０．構築物は、ペプチドリンカーによって連結された２つのｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖである、実施形態２５に記載の抗ＣＤ２２構築物。
３１．ペプチドリンカーは、配列番号２３３のアミノ酸配列を含む、実施形態３０に記載の抗ＣＤ２２構築物。
３２．構築物は、第２の抗原に特異的に結合する第２の抗体部分を更に含む、実施形態２７〜３１のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
３３．第２の抗原は、Ｔ細胞の表面上の抗原である、実施形態３２に記載の抗ＣＤ２２構築物。
３４．Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、及びナチュラルキラーＴ細胞からなる群から選択される、実施形態３３に記載の抗ＣＤ２２構築物。
３５．第２の抗原は、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、ＣＤ１６ａ、ＣＤ５６、ＣＤ６８、ＧＤＳ２Ｄ、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＣＤ４０Ｌ、及びＨＶＥＭからなる群から選択される、実施形態３２〜３４のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
３６．第２の抗原は、ＣＤ３εであり、構築物は、配列番号２０５の配列又はその一部を有するＣＤ２２に特異的なＮ末端ｓｃＦｖと、ＣＤ３εに特異的なＣ末端ｓｃＦｖと、を含むタンデムｓｃＦｖである、実施形態３５に記載の抗ＣＤ２２構築物。
３７．第２の抗原は、ナチュラルキラー細胞、好中球、単球、マクロファージ、又は樹状細胞の表面上の抗原である、実施形態３２に記載の抗ＣＤ２２構築物。
３８．抗ＣＤ２２構築物は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、実施形態１〜２４のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
３９．ＣＡＲは、抗ＣＤ２２抗体部分と、膜貫通ドメインと、免疫細胞シグナル伝達ドメインと、を含み、抗ＣＤ２２抗体部分は、配列番号２１４〜２１６の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、を含むｓｃＦｖである、実施形態３８に記載の抗ＣＤ２２構築物。
４０．ＣＡＲは、抗ＣＤ２２抗体部分と、膜貫通ドメインと、免疫細胞シグナル伝達ドメインと、を含み、抗ＣＤ２２抗体部分は、配列番号２０６〜２０８の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２０９〜２１１の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、を含むｓｃＦｖである、実施形態３８に記載の抗ＣＤ２２構築物。
４１．免疫細胞シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ鎖由来である、実施形態３９又は４０に記載の抗ＣＤ２２構築物。
４２．免疫細胞シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、ＩＣＯＳ、又はＯＸ４０由来である、実施形態３９又は４０に記載の抗ＣＤ２２構築物。
４３．膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体膜貫通ドメインである、実施形態３９又は４０のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
４４．抗ＣＤ２２構築物は、ＣＤ２２に結合する細胞外ドメインと、ＴＣＲ膜貫通ドメインを含むＴ細胞受容体（ＴＣＲ）モジュール（ＴＣＲＭ）と、を含む、キメラ抗体−Ｔ細胞受容体（ｃａＴＣＲ）である、実施形態１〜２４のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
４５．ｃａＴＣＲは、配列番号２１４〜２１６の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、を含む、実施形態４４に記載の抗ＣＤ２２構築物。
４６．ｃａＴＣＲは、配列番号２０６〜２０８の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２０９〜２１１の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、を含む、実施形態４４に記載の抗ＣＤ２２構築物。
４７．ＴＣＲＭは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルート可能である、実施形態４４〜４６のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
４８．ＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びＣＤ３ζからなる群から選択される、実施形態４７に記載の抗ＣＤ２２構築物。
４９．細胞外ドメインは、
（ａ）重鎖可変領域（ＶＨ）とＣＨ１定常ドメインを含む第１の抗原結合領域を含む、第１のポリペプチドと、
（ｂ）軽鎖可変領域（ＶＬ）とＣＬ定常ドメインを含む第２の抗原結合領域を含む、第２のポリペプチド鎖と、を含み、
第１の抗原結合領域のＶＨ及びＣＨ１定常ドメイン、並びに第２の抗原結合領域のＶＬ及びＣＬ定常ドメインは、ＣＤ２２に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールを形成する、実施形態４４〜４８のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
５０．細胞外ドメインは、ＣＤ２２に特異的に結合するｓｃＦｖを含む、実施形態４４〜４９のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
５１．細胞外ドメインは、少なくとも１種類の非ＣＤ２２抗原に特異的に結合する少なくとも１つの追加の抗体部分を更に含む、実施形態４４〜５０のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
５２．少なくとも１種類の非ＣＤ２２抗原は、Ｂ細胞悪性腫瘍で発現される、実施形態５１に記載の抗ＣＤ２２構築物。
５３．細胞外ドメインは、ＣＤ１９に特異的に結合する抗体部分を更に含む、実施形態４４〜５０のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
５４．細胞外ドメインは、ＣＤ２０に特異的に結合する抗体部分を更に含む、実施形態４４〜５０のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
５５．細胞外ドメインは、ＣＤ１９に特異的に結合する抗体部分と、ＣＤ２０に特異的に結合する抗体部分と、を更に含む、実施形態４４〜５０のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
５６．ｃａＴＣＲは、キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）との組み合わせで発現する、実施形態４４〜５５のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
５７．ＣＳＲは、抗ＣＤ２２抗体部分を含む、実施形態５６に記載の抗ＣＤ２２構築物。
５８．ＣＳＲは、非ＣＤ２２抗原に特異的に結合する抗体部分を含む、実施形態５６に記載の抗ＣＤ２２構築物。
５９．抗ＣＤ２２構築物は、キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）である、実施形態１〜２４のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
６０．ＣＳＲは、
（ａ）抗ＣＤ２２抗体部分と、
（ｂ）膜貫通モジュールと、
（ｃ）免疫細胞に共刺激シグナルを提供可能な共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールと、を含み、
ＣＳＲは、機能的一次免疫細胞シグナル伝達ドメインを欠く、実施形態５９に記載の抗ＣＤ２２構築物。
６１．抗ＣＤ２２抗体部分は、配列番号２１４〜２１６の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、を含む、実施形態６０に記載の抗ＣＤ２２構築物。
６２．抗ＣＤ２２抗体部分は、配列番号２０６〜２０８の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２０９〜２１１の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、を含む、実施形態６０に記載の抗ＣＤ２２構築物。
６３．ＣＳＲは、ｃａＴＣＲ又はＣＡＲとの組み合わせで発現する、実施形態５９〜６２のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
６４．ｃａＴＣＲ又はＣＡＲは、特異的にＣＤ２２を標的とする、実施形態６３に記載の抗ＣＤ２２構築物。
６５．ｃａＴＣＲ又はＣＡＲは、特異的にＣＤ２２を標的としない、実施形態６３に記載の抗ＣＤ２２構築物。
６６．ＣＳＲは、少なくとも１種類の非ＣＤ２２抗原に特異的に結合する少なくとも１つの追加の抗体部分を更に含む、実施形態５９〜６５のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
６７．ＣＳＲは、ＣＤ１９に特異的に結合する抗体部分を更に含む、実施形態５６〜６６のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
６８．ＣＳＲは、ＣＤ２０に特異的に結合する抗体部分を更に含む、実施形態５６〜６７のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
６９．ＣＳＲは、同じ分子に由来する膜貫通フラグメント及び細胞内フラグメントを含む、実施形態５６〜６８のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
７０．分子は、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンドからなる群から選択される、実施形態６９に記載の抗ＣＤ２２構築物。
７１．分子は、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、及びＣＤ２７からなる群から選択される、実施形態７０に記載の抗ＣＤ２２構築物。
７２．ＣＳＲは、異なる分子に由来する膜貫通フラグメント及び細胞内フラグメントを含む、実施形態５６〜６８のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
７３．ＣＳＲは、Ｔ細胞受容体のα鎖、β鎖、δ鎖、γ鎖、又はζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、及びＣＤ１５４からなる群から選択される分子の膜貫通フラグメントを含む、実施形態７２に記載の抗ＣＤ２２構築物。
７４．ＣＳＲは、ＣＤ８、４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、又はＯＸ４０の膜貫通フラグメントを含む、実施形態７４に記載の抗ＣＤ２２構築物。
７５．膜貫通フラグメントは、配列番号１４５〜１５０のうちのいずれか１つの配列を含む、実施形態７２〜７５のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
７６．ＣＳＲは、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンドからなる群から選択される分子の細胞内フラグメントを含む、実施形態７２〜７５のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
７７．ＣＳＲは、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、及びＣＤ２７からなる群から選択される分子の細胞内フラグメントを含む、実施形態７６に記載の抗ＣＤ２２構築物。
７８．細胞内フラグメントは、配列番号１５１〜１５５のうちのいずれか１つの配列を含む、実施形態７６に記載の抗ＣＤ２２構築物。
７９．ＣＳＲは、配列番号１５６〜１７１のうちのいずれか１つの配列を含む、実施形態５６〜７８のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
８０．抗ＣＤ２２構築物は、抗体部分と、エフェクタ分子と、を含む免疫コンジュゲートである、実施形態１〜２４のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
８１．エフェクタ分子は、薬物、毒素、放射性同位体、タンパク質、ペプチド、及び核酸からなる群から選択される治療薬である、実施形態８０に記載の抗ＣＤ２２構築物。
８２．治療薬は、薬物又は毒素である、実施形態８１に記載の抗ＣＤ２２構築物。
８３．エフェクタ分子は、標識である、実施形態８０に記載の抗ＣＤ２２構築物。
８４．実施形態１〜８３のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物に含有される１つ以上のポリペプチドをコードする核酸分子。
８５．核酸分子は、実施形態１〜８３のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物に含有される全てのポリペプチドをコードする、実施形態８４に記載の核酸分子。
８６．実施形態８５に記載の核酸分子であって、
抗ＣＤ２２構築物は、ｃａＴＣＲであり、かつＣＳＲとの組み合わせで発現し、核酸分子は、ｃａＴＣＲに含有される全てのポリペプチド及びＣＳＲのポリペプチドをコードしているか、又は、
抗ＣＤ２２構築物は、ＣＳＲであり、かつｃａＴＣＲ又はＣＡＲとの組み合わせで発現し、核酸分子は、ＣＳＲのポリペプチド及びｃａＴＣＲ又はＣＡＲに含有される全てのポリペプチドをコードしている、核酸分子。
８７．実施形態１〜８３のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物に含有される全てのポリペプチドを個別にコードする核酸分子のセット。
８８．実施形態８７に記載の核酸分子のセットであって、
抗ＣＤ２２構築物は、ｃａＴＣＲであり、かつＣＳＲとの組み合わせで発現し、核酸分子のセットは、ｃａＴＣＲに含有される全てのポリペプチド及びＣＳＲのポリペプチドをコードしているか、又は、
抗ＣＤ２２構築物は、ＣＳＲであり、かつｃａＴＣＲ又はＣＡＲとの組み合わせで発現し、核酸分子のセットは、ＣＳＲのポリペプチド及びｃａＴＣＲ又はＣＡＲに含有される全てのポリペプチドをコードしている、核酸分子のセット。
８９．実施形態８４〜８６のいずれか１つに記載の核酸分子を含む、発現カセット。
９０．実施形態１〜８３のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物に含有される全てのポリペプチドを個別にコードする核酸分子を含む、発現カセットのセット。
９１．発現カセットのセットは、実施形態８７又は８８に記載の核酸分子のセットを含む、実施形態９０に記載の発現カセットのセット。
９２．実施形態８４〜８６のいずれか１つに記載の核酸分子、実施形態８７若しくは８８に記載の核酸分子のセット、実施形態８９に記載の発現カセット、又は実施形態９０若しくは９１に記載の発現カセットのセットを含む、宿主細胞。
９３．実施形態１〜８３のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物を発現する宿主細胞。
９４．宿主細胞は、実施形態８４〜８６のいずれか１つに記載の核酸分子、実施形態８７若しくは８８に記載の核酸分子のセット、実施形態８９に記載の発現カセット、又は実施形態９０若しくは９１に記載の発現カセットのセットを含む、実施形態９３に記載の宿主細胞。
９５．実施形態１〜８３のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物の調製方法であって、
（ａ）実施形態８４〜８６のいずれか１つに記載の核酸分子、実施形態８７若しくは８８に記載の核酸分子のセット、実施形態８９に記載の発現カセット、又は実施形態９０若しくは９１に記載の発現カセットのセットを含む宿主細胞を提供することと、
（ｂ）抗ＣＤ２２構築物を形成可能な条件下で、宿主細胞内にて１種類若しくは複数種類の核酸分子又は１種類若しくは複数種類の発現カセットを発現させることと、を含む、方法。
９６．治療的に有効な量の、実施形態１〜８３のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物、実施形態８４〜８６のいずれか１つに記載の核酸分子、実施形態８７若しくは８８に記載の核酸分子のセット、実施形態８９に記載の発現カセット、実施形態９０若しくは９１に記載の発現カセットのセット、又は実施形態９２〜９４のいずれか１つに記載の宿主細胞と、１種類以上の薬学的に許容される担体又は賦形剤と、を含む、医薬組成物。
９７．必要な対象においてＢ細胞悪性腫瘍を治療する方法であって、治療的に有効な量の、実施形態１〜８３のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物、実施形態８４〜８６のいずれか１つに記載の核酸分子、実施形態８７若しくは８８に記載の核酸分子のセット、実施形態８９に記載の発現カセット、実施形態９０若しくは９１に記載の発現カセットのセット、実施形態９２〜９４のいずれか１つに記載の宿主細胞、又は実施形態９６に記載の医薬組成物を、対象に投与することを含む、方法。
９８．必要な対象においてＣＤ２２の過剰発現によって特徴付けられる疾患又は障害を治療する方法であって、治療的に有効な量の、実施形態１〜８３のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物、実施形態８４〜８６のいずれか１つに記載の核酸分子、実施形態８７若しくは８８に記載の核酸分子のセット、実施形態８９に記載の発現カセット、実施形態９０若しくは９１に記載の発現カセットのセット、実施形態９２〜９４のいずれか１つに記載の宿主細胞、又は実施形態９６に記載の医薬組成物を、対象に投与することを含む、方法。この方法のいくつかの実施形態では、本方法は、疾患を治療する方法である。いくつかの実施形態では、本方法は、障害を治療する方法である。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２過剰発現によって特徴付けられる疾患又は障害は、癌（例えば、Ｂ細胞悪性腫瘍）である。
９９．実施形態８４〜８６のいずれか１つに記載の核酸分子、実施形態８７若しくは８８に記載の核酸分子のセット、実施形態８９に記載の発現カセット、又は実施形態９０若しくは９１に記載の発現カセットのセットを、対象から単離された１つ以上の初代細胞に導入することと、核酸分子、核酸分子のセット、発現カセット、又は発現カセットのセットを含む細胞を対象に投与することと、を含む、治療方法。
１００．細胞を対象に投与する前に、細胞を増殖させることを更に含む、実施形態９９に記載の方法。
１０１．初代細胞は、リンパ球である、方法実施形態９９又は１００。
１０２．初代細胞は、Ｔ細胞である、実施形態１０１に記載の方法。
１０３．試料中のＣＤ２２を検出する方法であって、（ａ）試料を実施形態１〜２６のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物と接触させることと、（ｂ）抗ＣＤ２２構築物と試料中の任意のＣＤ２２との結合を直接的又は間接的に検出することと、を含む、方法。
１０４．抗ＣＤ２２構築物は、検出可能な標識にコンジュゲートされる、実施形態１０３に記載の方法。
１０５．検出可能な標識は、発色性造影剤、酵素造影剤、放射性同位体造影剤、同位体造影剤、蛍光造影剤、毒性造影剤、化学発光性造影剤、核磁気共鳴造影剤である、実施形態１０４に記載の方法。
１０６．抗ＣＤ２２構築物と試料中の任意のＣＤ２２との結合は、検出可能な標識を検出することによって、直接的に検出される、実施形態１０４又は１０５に記載の方法。
１０７．抗ＣＤ２２構築物と試料中の任意のＣＤ２２との結合は、二次抗体を使用して間接的に検出される、実施形態１０３に記載の方法。
１０８．ＣＤ２２関連疾患又は障害を有する疑いのある対象を診断する方法であって、
ａ）有効な量の実施形態１〜２６のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物を対象に投与することと、
ｂ）抗ＣＤ２２構築物と対象における任意のＣＤ２２との結合のレベルを直接的又は間接的に決定することであって、閾値レベルを上回る結合のレベルは、対象がＣＤ２２関連疾患又は障害を有することを示す、ことと、を含む、方法。
１０９．ＣＤ２２関連疾患又は障害は、癌である、実施形態１０８に記載の方法。
１１０．癌は、Ｂ細胞悪性腫瘍である、実施形態１０９に記載の方法。
１１１．Ｂ細胞悪性腫瘍に罹患している対象を診断する方法であって、
（ａ）対象から得られた試料を実施形態１〜２６のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物と接触させることと、
（ｂ）試料中の抗ＣＤ２２構築物に結合した細胞の数を決定することと、を含み、
閾値レベルを上回る、抗ＣＤ２２構築物に結合した細胞の数の値は、対象がＢ細胞悪性腫瘍に罹患していることを示す、方法。
１１２．Ｂ細胞悪性腫瘍は、ＣＤ２２＋Ｂ細胞悪性腫瘍である、実施形態１１１に記載の方法。
１１３．疾患、障害、又はＢ細胞悪性腫瘍は、Ｂ細胞リンパ腫又はＢ細胞白血病である、実施形態９８、１０８、及び１１１のいずれか１つに記載の方法。
１１４．対象は、ヒトである、実施形態９７〜１１３のいずれか１つに記載の方法。
１１５．陽性ＣＤ２２発現に関連する疾患又は障害の治療のための、実施形態１〜８３のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物、実施形態８４〜８６のいずれか１つに記載の核酸分子、実施形態８７若しくは８８に記載の核酸分子のセット、実施形態８９に記載の発現カセット、実施形態９０若しくは９１に記載の発現カセットのセット、実施形態９２〜９４のいずれか１つに記載の宿主細胞、又は実施形態９６に記載の医薬組成物の使用。
１１６．陽性ＣＤ２２発現に関連する疾患又は障害の治療のための薬剤の製造における、実施形態１〜８３のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物、実施形態８４〜８６のいずれか１つに記載の核酸分子、実施形態８７若しくは８８に記載の核酸分子のセット、実施形態８９に記載の発現カセット、実施形態９０若しくは９１に記載の発現カセットのセット、実施形態９２〜９４のいずれか１つに記載の宿主細胞、又は実施形態９６に記載の医薬組成物の使用。
１１７．陽性ＣＤ２２発現に関連する疾患又は障害の診断のための、実施形態１〜２６のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物の使用。
１１８．陽性ＣＤ２２発現に関連する疾患又は障害は、癌である、実施形態１１５〜１１７のいずれか１つに記載の使用。
【０４３６】
【表８】
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【０４３７】
【表９】
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【０４３８】
【表１０】
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【０４３９】
【表１１】
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【０４４０】
【表１２】
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【０４４１】
【表１３】
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【０４４２】
【表１４】
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【０４４３】
【表１５】
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【０４４４】
【表１６】
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【０４４５】
【表１７】
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【０４４６】
【表１８】
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【０４４７】
【表１９】
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【０４４８】
【表２０】
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【０４４９】
【表２１】
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【０４５０】
【表２２】
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【０４５１】
【表２３】
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【０４５２】
【表２４】
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【０４５３】
【表２５】
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【０４５４】
【表２６】
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【０４５５】
【表２７】
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【０４５６】
【表２８】
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【０４５７】
【表２９】
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【０４５８】
【表３０】
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【０４５９】
【表３１】
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【０４６０】
【表３２】
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【０４６１】
【表３３】
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【０４６２】
【表３４】
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【０４６３】
【表３５】
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【０４６４】
【表３６】
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【０４６５】
【表３７】
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【０４６６】
【表３８】
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【０４６７】
【表３９】
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【０４６８】
【表４０】
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【０４６９】
【表４１】
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【０４７０】
【表４２】
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【０４７１】
【表４３】
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【０４７２】
【表４４】
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【０４７３】
【表４５】
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【０４７４】
【表４６】
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【０４７５】
【表４７】
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【０４７６】
【表４８】
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【０４７７】
【表４９】
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【０４７８】
【表５０】
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【０４７９】
【表５１】
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【０４８０】
【表５２】
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【０４８１】
【表５３】
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【０４８２】
【表５４】
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【０４８３】
【表５５】
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【０４８４】
【表５６】
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【０４８５】
【表５７】
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【０４８６】
【表５８】
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【０４８７】
【表５９】
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【０４８８】
【表６０】
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【０４８９】
【表６１】
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【０４９０】
【表６２】
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【０４９１】
【表６３】
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【０４９２】
【表６４】
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【０４９３】
【表６５】
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【０４９４】
【表６６】
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【０４９５】
【表６７】
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【０４９６】
【表６８】
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【０４９７】
本開示の範囲から逸脱することなく、本明細書又は図面に記載される任意の実施形態の１つ以上の特徴を、図面において本明細書に記載される任意の他の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせてもよい。
【０４９８】
本明細書にて引用された全ての刊行物、特許、及び特許出願は、参照による組み込みが個々の刊行物又は特許出願について具体的かつ個別に示唆されているのと同様に、参照により本明細書に組み込まれている。上記開示内容は、理解を明確にするための例示として、ある程度具体的に記載されているものの、本開示の教示に照らせば、当業者には、添付の特許請求の範囲の趣旨又は範囲から逸脱することなく特定の変更及び修正を行い得ることが、容易に明らかとなるであろう。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年1月22日(2020.1.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
ＣＤ１９  Ｂ細胞抗原を標的とする免疫療法は、Ｂ細胞悪性腫瘍に対して特に効果を示してきた（Ｌａｒｔｉｇｕｅ，Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ａｕｇｕｓｔ  １，２０１４）。
【背景技術】
【０００２】
しかしながら、腫瘍細胞によるＣＤ１９発現の喪失は、免疫療法の効果を無効にし、癌の再発を引き起こす可能性がある（Ｇｒｕｐｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．３６８：１５０９，２０１３）。ＣＤ１９腫瘍抗原の流出は、ＣＤ２２及びＣＤ５２などの追加的なＢ細胞抗原の標的化の必要性を強調する（Ｇｒｉｌｌｏ−Ｌｏｐｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２：３０１，２００１）。
【発明の概要】
【０００３】
本発明は、とりわけ、ＣＤ２２、特にヒトＣＤ２２に特異的に結合する構築物を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物は、記載される抗ＣＤ２２抗体部分を含むポリペプチド又は組成物であってもよい。例えば、抗ＣＤ２２構築物は、（例えば、細胞の表面上で発現される）天然形態のヒトＣＤ２２に対して高い特異性を示す、抗体、キメラ抗原受容体（chimeric antigen receptor、ＣＡＲ）、キメラ抗体−Ｔ細胞受容体（chimeric antibody-T cell receptor、ｃａＴＣＲ）、又はキメラシグナル伝達受容体（chimeric signaling receptor、ＣＳＲ）であり得る。いくつかの実施形態では、提供される構築物は、ＣＤ２２発現によって特徴付けられる癌細胞（例えば、リンパ腫及び／又は白血病）の殺傷を効果的に媒介してもよい。
【０００４】
ヒト抗体、すなわち、ヒトＣＤＲ配列を含むヒト重鎖可変領域配列及びヒト軽鎖可変領域配列を有するヒト抗体を含有する構築物を採用する実施形態が本明細書で広範囲にわたって論じられているが、本発明はまた、非ヒト抗体を含有する構築物も提供する。いくつかの実施形態では、非ヒト抗体は、本明細書に記載の抗体由来のヒトＣＤＲ配列、及び非ヒトフレームワーク配列を含む。非ヒトフレームワーク配列としては、いくつかの実施形態では、例えば、マウス、ラット、ウサギ、ブタ、ウシ、シカ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、イヌ、サル、ニワトリなどから生成される配列を含む、本明細書に記載の１つ以上のヒトＣＤＲ配列を使用して合成重鎖可変領域及び／又は合成軽鎖可変領域を生成するために使用することができる任意の配列が挙げられる。いくつかの実施形態では、提供される構築物は、本明細書に記載の１つ以上のヒトＣＤＲ配列を、非ヒトフレームワーク配列（例えば、マウス又はニワトリのフレームワーク配列）に移植することによって生成される抗体を含む。多くの実施形態では、提供される構築物は、ヒト抗体（例えば、ヒトモノクローナル抗体又はそのフラグメント、ヒト抗原結合タンパク質又はポリペプチド、ヒト多重特異性抗体（例えば、ヒト二重特異性抗体）、ヒト免疫グロブリンポリペプチドの１つ以上の成分を有するヒトポリペプチド）を含むか、又はヒト抗体である。
【０００５】
一態様では、本発明は、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体部分を含む抗ＣＤ２２構築物を特徴とする。抗体部分は、（ａ）配列番号２１８又は２１２の軽鎖可変領域の軽鎖相補性決定領域（light chain complementarity determining region、ＬＣ−ＣＤＲ）１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（light chain variable region、ＶＬ）と、（ｂ）配列番号２１９又は２１３の重鎖可変領域の重鎖相補性決定領域（heavy chain complementarity determining region、ＨＣ−ＣＤＲ）１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（heavy chain variable region、ＶＨ）と、を含む。
【０００６】
いくつかの実施形態では、抗体部分は、配列番号２１８の軽鎖可変領域のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、配列番号２１２の軽鎖可変領域のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む。
【０００７】
いくつかの実施形態では、抗体部分は、（ａ）配列番号２１８の軽鎖可変領域のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、（ｂ）配列番号２１９の重鎖可変領域のＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含む。
【０００８】
いくつかの実施形態では、抗体部分は、（ａ）配列番号２１２の軽鎖可変領域のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、（ｂ）配列番号２１３の重鎖可変領域のＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含む。
【０００９】
本態様のいくつかの実施形態では、抗体部分は、ＨＤＩＲＮＹ（配列番号２１４）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＡＡＳ（配列番号２１５）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２、ＱＱＹＤＧＬＰＬＴ（配列番号２１６）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３、ＧＦＴＦＳＮＹＡ（配列番号２０９）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＩＳＧＳＧＧＳＴ（配列番号２１０）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２、及びＡＲＹＧＳＡＡＷＭＤＳ（配列番号２１７）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つ以上を含む。特定の実施形態では、抗体部分は、配列番号２０９、２１０、及び２１４〜２１７の配列を含む。
【００１０】
この態様のいくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＴＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＨＤＩＲＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＮＬＬＩＹＡＡＳＮＬＱＴＧＶＰＳＲＦＳＧＲＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＹＤＧＬＰＬＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫＲ（配列番号２１８）の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する。
【００１１】
本態様のいくつかの実施形態では、重鎖可変領域は、
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＴＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＹＧＳＡＡＷＭＤＳＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２１９）の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する。
【００１２】
別の態様では、本発明は、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含む抗ＣＤ２２構築物を特徴とする。軽鎖可変領域は、
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＴＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＨＤＩＲＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＮＬＬＩＹＡＡＳＮＬＱＴＧＶＰＳＲＦＳＧＲＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＹＤＧＬＰＬＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫＲ（配列番号２１８）の配列に対して少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する配列を有し、重鎖可変領域は、
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＴＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＹＧＳＡＡＷＭＤＳＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２１９）の配列に対して少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する配列を有する。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号２１８の配列を含み、重鎖可変領域は、配列番号２１９の配列を含む。
【００１３】
本発明の第１の態様のいくつかの実施形態では、抗体部分は、ＳＳＮＩＧＮＮＹ（配列番号２０６）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＥＮＮ（配列番号２０７）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２、ＧＴＷＤＳＳＬＳＡＧＡＶ（配列番号２０８）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３、ＧＦＴＦＳＮＹＡ（配列番号２０９）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＩＳＧＳＧＧＳＴ（配列番号２１０）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２、及びＡＲＰＹＹＤＤ（配列番号２１１）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、配列番号２０６〜２１１の配列を含む。
【００１４】
この態様のいくつかの実施形態では、構築物の軽鎖可変領域は、ＱＳＶＶＴＱＰＰＳＶＳＡＡＰＧＱＫＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＹＶＳＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＥＮＮＫＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＴＬＧＩＴＧＬＱＴＧＤＥＡＤＹＹＣＧＴＷＤＳＳＬＳＡＧＡＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ（配列番号２１２）の配列と少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％又は９９％同一性）を有する配列を有する。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＰＹＤＤＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２１３）の配列に対して少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する配列を有する。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号２１２の配列を含み、重鎖可変領域は、配列番号２１３の配列を含む。
【００１５】
別の態様では、本発明は、ＣＤ２２への特異的結合について、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物と競合する抗体部分を含む、抗ＣＤ２２構築物を提供する。
【００１６】
別の態様では、本発明は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ２２構築物を提供する。軽鎖可変領域は、
ＱＳＶＶＴＱＰＰＳＶＳＡＡＰＧＱＫＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＹＶＳＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＥＮＮＫＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＴＬＧＩＴＧＬＱＴＧＤＥＡＤＹＹＣＧＴＷＤＳＳＬＳＡＧＡＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ（配列番号２１２）の配列に対して少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する配列を有し、重鎖可変領域は、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＰＹＤＤＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２１３）の配列に対して少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する配列を有する。特定の実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、配列番号２１２の軽鎖可変領域配列と、配列番号２１３の重鎖可変領域配列と、を有する。
【００１７】
いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、リンカー（例えば、ＳＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＥＭＡ（配列番号２３３）の配列を有するリンカー）によって結合されている。
【００１８】
いくつかの実施形態では、構築物は、λアイソタイプ又はκアイソタイプの軽鎖を含む。
【００１９】
本明細書に記載の任意の態様では、抗ＣＤ２２構築物は、ＣＤ２２の細胞外領域に結合する。特定の実施形態では、ＣＤ２２の細胞外領域は、
ＤＶＱＹＰＰＫＫＶＴＴＶＩＱＮＰＭＰＩＲＥＧＤＴＶＴＬＳＣＮＹＮＳＳＮＰＳＶＴＲＹＥＷＫＰＨＧＡＷＥＥＰＳＬＧＶＬＫＩＱＮＶＧＷＤＮＴＴＩＡＣＡＡＣＮＳＷＣＳＷＡＳＰＶＡＬＮＶＱＹＡＰＲＤＶＲＶＲＫＩＫＰＬＳＥＩＨＳＧＮＳＶＳＬＱＣＤＦＳＳＳＨＰＫＥＶＱＦＦＷＥＫＮＧＲＬＬＧＫＥＳＱＬＮＦＤＳＩＳＰＥＤＡＧＳＹＳＣＷＶＮＮＳＩＧＱＴＡＳＫＡＷＴＬＥＶＬＹＡＰＲＲＬＲＶＳＭＳＰＧＤＱＶＭＥＧＫＳＡＴＬＴＣＥＳＤＡＮＰＰＶＳＨＹＴＷＦＤＷＮＮＱＳＬＰＹＨＳＱＫＬＲＬＥＰＶＫＶＱＨＳＧＡＹＷＣＱＧＴＮＳＶＧＫＧＲＳＰＬＳＴＬＴＶＹＹＳＰＥＴＩＧＲＲ（配列番号２０５）の配列のうちの少なくとも７個のアミノ酸を含む。特定の実施形態では、細胞外領域は、配列番号２０５の配列を有する。
【００２０】
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、完全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、単一特異性である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、多重特異性（例えば、二重特異性）である。
【００２１】
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、第２の抗原に特異的に結合する第２の抗体部分を更に含む。第２の抗原は、Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞）の表面上の抗原であってもよい。いくつかの実施形態では、第２の抗原は、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、ＣＤ１６ａ、ＣＤ５６、ＣＤ６８、ＧＤＳ２Ｄ、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＣＤ４０Ｌ、及びＨＶＥＭからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第２の抗原は、ナチュラルキラー細胞、好中球、単球、マクロファージ、又は樹状細胞の表面上の抗原である。
【００２２】
特定の実施形態では、第２の抗原は、ＣＤ３εである。構築物は、配列番号２０５の配列又はその一部を有するＣＤ２２に特異的なＮ末端ｓｃＦｖと、ＣＤ３εに特異的なＣ末端ｓｃＦｖと、を含む、タンデムｓｃＦｖである。
【００２３】
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、タンデムｓｃＦｖ、ダイアボディ（Ｄｂ）、一本鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、二重親和性再標的化（dual-affinity retargeting、ＤＡＲＴ）抗体、二重可変ドメイン（dual variable domain、ＤＶＤ）抗体、ノブ・イントゥ・ホール（knob-into-hole、ＫｉＨ）抗体、ドックアンドロック（dock and lock、ＤＮＬ）抗体、化学的に架橋された抗体、ヘテロマルチマー抗体、又はヘテロ結合抗体である。特定の実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、ペプチドリンカー（例えば、ペプチドリンカーは、配列番号２３３のアミノ酸配列を含む）によって連結された２つのｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖである。
【００２４】
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、構築物は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、抗ＣＤ２２抗体部分と、膜貫通ドメイン（例えば、Ｔ細胞受容体膜貫通ドメイン）と、免疫細胞シグナル伝達ドメインと、を含む。抗ＣＤ２２抗体部分は、配列番号２１４〜２１６の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、を含む、ｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、抗ＣＤ２２抗体部分と、膜貫通ドメインと、免疫細胞シグナル伝達ドメインと、を含む。抗ＣＤ２２抗体部分は、配列番号２０６〜２０８の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２０９〜２１１の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、を含む、ｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、免疫細胞シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ鎖由来である。他の実施形態では、免疫細胞シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、ＩＣＯＳ、又はＯＸ４０由来である。
【００２５】
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、構築物は、ＣＤ２２に結合する細胞外ドメイン（例えば、配列番号２０５又はその一部）を含むキメラ抗体−Ｔ細胞受容体（ｃａＴＣＲ、抗体−ＴＣＲキメラ分子又は構築物（ａｂＴＣＲ）とも呼ばれる）、及びＴＣＲ膜貫通ドメインを含むＴ細胞受容体（ＴＣＲ）モジュール（ＴＣＲＭ）である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、配列番号２１４〜２１６の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、を含む。他の実施形態では、ｃａＴＣＲは、配列番号２０６〜２０８の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２０９〜２１１の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュール（例えば、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びＣＤ３ζ）を動員することができる。
【００２６】
いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲの細胞外ドメインは、（ａ）重鎖可変領域（ＶＨ）及びＣＨ１抗体定常ドメインを含む第１の抗原結合領域を含む第１のポリペプチドと、（ｂ）軽鎖可変領域（ＶＬ）及びＣＬ抗体定常ドメインを含む第２の抗原結合領域を含む第２のポリペプチド鎖と、を含む。第１の抗原結合領域のＶＨ及びＣＨ１抗体定常ドメイン並びに第２の抗原結合領域のＶＬ及びＣＬ抗体定常ドメインは、ＣＤ２２に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールを形成する。
【００２７】
いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、ＣＤ２２に特異的に結合するｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、少なくとも１種類の非ＣＤ２２抗原に特異的に結合する少なくとも１つの追加の抗体部分を更に含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１種類の非ＣＤ２２抗原は、Ｂ細胞悪性腫瘍で発現される。特定の実施形態では、細胞外ドメインは、ＣＤ１９に特異的に結合する抗体部分を更に含む。特定の実施形態では、細胞外ドメインは、ＣＤ２０に特異的に結合する抗体部分を更に含む。特定の実施形態では、細胞外ドメインは、ＣＤ１９に特異的に結合する抗体部分と、ＣＤ２０に特異的に結合する抗体部分と、を更に含む。
【００２８】
いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）との組み合わせで発現される。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、抗ＣＤ２２抗体部分を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、非ＣＤ２２抗原に特異的に結合する抗体部分を含む。
【００２９】
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、構築物は、キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）である。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、（ａ）抗ＣＤ２２抗体部分と、（ｂ）膜貫通モジュールと、（ｃ）免疫細胞に共刺激シグナルを提供することができる共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールと、を含む。ＣＳＲは、機能的一次免疫細胞シグナル伝達ドメインを欠いている。特定の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体部分は、配列番号２１４〜２１６の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体部分は、配列番号２０６〜２０８の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２０９〜２１１の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、ｃａＴＣＲ又はＣＡＲとの組み合わせで使用される（すなわち、発現される）。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、ｃａＴＣＲ又はＣＡＲとの組み合わせで発現される。
【００３０】
いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、ＣＤ２２を特異的に標的とするｃａＴＣＲ又はＣＡＲとの組み合わせで発現される。他の実施形態では、ＣＳＲは、ＣＤ２２を特異的に標的としないｃａＴＣＲ又はＣＡＲとの組み合わせで発現される。
【００３１】
いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、少なくとも１種類の非ＣＤ２２抗原に特異的に結合する少なくとも１つの追加の抗体部分を更に含む。特定の実施形態では、ＣＳＲは、ＣＤ１９に特異的に結合する抗体部分を更に含む。特定の実施形態では、ＣＳＲは、ＣＤ２０に特異的に結合する抗体部分を更に含む。
【００３２】
いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、同じ分子に由来する膜貫通フラグメント及び細胞内フラグメントを含む。特定の実施形態では、分子は、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（lymphocyte function-associated antigen-1、ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンドからなる群から選択される。特定の実施形態では、分子は、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、及びＣＤ２７からなる群から選択される。
【００３３】
他の実施形態では、ＣＳＲは、異なる分子に由来する膜貫通フラグメント及び細胞内フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、Ｔ細胞受容体のα鎖、β鎖、δ鎖、γ鎖、又はζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、及びＣＤ１５４（例えば、ＣＤ８、４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、又はＯＸ４０の膜貫通フラグメント）からなる群から選択される分子の膜貫通フラグメントを含む。特定の実施形態では、膜貫通フラグメントは、配列番号１４５〜１５０のうちのいずれか１つの配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンドからなる群から選択される分子の細胞内フラグメント（例えば、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、及びＣＤ２７からなる群から選択される分子の細胞内フラグメント）を含む。特定の実施形態では、細胞内フラグメントは、配列番号１５１〜１５５のうちのいずれか１つの配列を含む。他の実施形態では、ＣＳＲは、配列番号１５６〜１７１のうちのいずれか１つの配列を含む。
【００３４】
本明細書に記載の任意の態様のいくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、抗体部分及びエフェクタ分子を含む免疫コンジュゲートである。エフェクタ分子は、薬物、毒素、放射性同位体、タンパク質、ペプチド、及び核酸からなる群から選択される治療薬（例えば、薬物又は毒素）であってもよい。いくつかの実施形態では、エフェクタ分子は、ラベルであってもよい。
【００３５】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物に含有される１つ以上のポリペプチドをコードする核酸分子を提供する。例えば、核酸分子は、構築物の軽鎖可変領域（例えば、配列番号２１２又は２１８）又は重鎖可変領域（例えば、配列番号２１３又は２１９）をコードしてもよい。いくつかの実施形態では、核酸分子は、ｓｃＦｖ抗体（例えば、配列番号２３９又は２４０）をコードしてもよい。更なる実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物中の異なるポリペプチド（例えば、抗ＣＤ２２  ＣＡＲ又はｃａＴＣＲ）は、複数の別個の核酸分子によってコードされてもよい。例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物中の２つのポリペプチド（例えば、抗ＣＤ２２  ＣＡＲ又はｃａＴＣＲ）は、２つの別個の核酸分子によってコードされてもよい。いくつかの実施形態では、核酸分子は、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物に含有される全てのポリペプチドをコードする。
【００３６】
本態様のいくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、ｃａＴＣＲであり、ＣＳＲとの組み合わせで発現され、核酸分子は、ｃａＴＣＲに含有される全てのポリペプチド及びＣＳＲのポリペプチドをコードするか、あるいは、抗ＣＤ２２構築物は、ＣＳＲであり、ｃａＴＣＲ又はＣＡＲとの組み合わせで発現され、核酸分子は、ＣＳＲのポリペプチド及びｃａＴＣＲ又はＣＡＲに含有される全てのポリペプチドをコードする。
【００３７】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物に含有される全てのポリペプチドを個別にコードする核酸分子のセットを提供する。
【００３８】
本態様のいくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、ｃａＴＣＲであり、ＣＳＲとの組み合わせで発現され、核酸分子のセットは、ｃａＴＣＲに含有される全てのポリペプチド及びＣＳＲのポリペプチドをコードするか、あるいは、抗ＣＤ２２構築物は、ＣＳＲであり、ｃａＴＣＲ又はＣＡＲとの組み合わせで発現され、核酸分子のセットは、ＣＳＲのポリペプチド及びｃａＴＣＲ又はＣＡＲに含有される全てのポリペプチドをコードする。
【００３９】
別の態様では、本発明はまた、プロモータに操作可能に連結された、上述の核酸分子を含む発現カセットを提供し、これは場合によっては、核酸内のコード配列にとって非相同である。複数の別個の核酸分子が、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物中の複数のポリペプチドをコードするために使用される場合、複数の別個の核酸分子は、複数の発現カセット内に配置されてもよい。
【００４０】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物に含有される全てのポリペプチドを個別にコードする核酸分子を含む発現カセットのセットを提供する。いくつかの実施形態では、発現カセットのセットは、上述の核酸分子のセットを含む。
【００４１】
別の態様では、本発明は、上述の核酸分子、核酸分子のセット、発現カセット、又は発現カセットのセットを含む宿主細胞を提供する。
【００４２】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物を発現する宿主細胞を提供する。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、本明細書に記載の核酸分子、核酸分子のセット、発現カセット、又は発現カセットのセットを含む。
【００４３】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物を調製する方法を提供する。本方法は、（ａ）上述の核酸分子、核酸分子のセット、発現カセット、又は発現カセットのセットを含む宿主細胞を提供することと、ｂ）抗ＣＤ２２構築物の形成を可能にする条件下で、宿主細胞中の核酸分子（複数可）又は発現カセット（複数可）を発現することと、を含む。
【００４４】
別の態様では、本発明は、上述の抗ＣＤ２２構築物、上述の抗ＣＤ２２構築物に含有される１つ以上のポリペプチドをコードする核酸、上述の抗ＣＤ２２構築物に含有される１つ以上のポリペプチドをコードする核酸分子のセット、核酸分子を含む発現カセット、複数の核酸分子を含む発現カセットのセット、又は抗ＣＤ２２構築物を発現する宿主細胞を含む医薬組成物、及び１つ以上の薬学的に許容される担体又は賦形剤を提供する。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の構築物は、治療的に有効な量である。
【００４５】
別の態様では、本発明は、必要な対象においてＢ細胞悪性腫瘍を治療する方法であって、治療的に有効な量の、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物、核酸分子、核酸分子のセット、発現カセット、発現カセットのセット、宿主細胞、又は医薬組成物を、対象に投与することを含む、方法を提供する。
【００４６】
別の態様では、本発明は、必要な対象においてＣＤ２２過剰発現によって特徴付けられる疾患又は障害を治療する方法であって、治療的に有効な量の、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物、核酸分子、核酸分子のセット、発現カセット、発現カセットのセット、宿主細胞、又は医薬組成物を、対象に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本方法は、疾患を治療する方法である。いくつかの実施形態では、本方法は、障害を治療する方法である。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２過剰発現によって特徴付けられる疾患又は障害は、癌（例えば、Ｂ細胞悪性腫瘍）である。
【００４７】
別の態様では、本発明は、治療方法であって、核酸分子、核酸分子のセット、発現カセット、又は発現カセットのセットを、対象から単離された１つ以上の初代細胞に導入することと、１つ以上の核酸を含む細胞を対象に投与することと、を含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、方法は、細胞を対象に投与する前に細胞を増殖させる工程を更に含む。いくつかの実施形態では、初代細胞は、リンパ球である。いくつかの実施形態では、初代細胞は、Ｔ細胞である。
【００４８】
別の態様では、本発明は、試料中のＣＤ２２を検出する方法であって、（ａ）試料を本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物と接触させることと、（ｂ）抗ＣＤ２２構築物と試料中の任意のＣＤ２２との結合を直接的又は間接的に検出することと、を含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、検出可能な標識（例えば、発色剤、酵素、放射性同位体、同位体、蛍光剤、毒物、化学発光剤、又は核磁気共鳴造影剤）にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物と試料中の任意のＣＤ２２との結合は、検出可能な標識を検出することによって直接的に検出される。他の実施形態では、抗ＣＤ２２構築物と試料中の任意のＣＤ２２との結合は、二次抗体を使用して間接的に検出される。
【００４９】
別の態様では、本発明は、ＣＤ２２関連疾患又は障害を有する疑いのある対象を診断する方法であって、ａ）有効量の本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物を対象に投与することと、ｂ）抗ＣＤ２２構築物と対象における任意のＣＤ２２との結合のレベルを直接的又は間接的に決定することと、を含み、閾値レベルを上回る結合のレベルは、対象がＣＤ２２関連疾患又は障害を有することを示す、方法を提供する。
【００５０】
本明細書に記載の方法のいくつかの実施形態では、ＣＤ２２関連疾患又は障害は、癌（例えば、Ｂ細胞悪性腫瘍）である。
【００５１】
別の態様では、本発明は、Ｂ細胞悪性腫瘍を有する対象を診断する方法であって、（ａ）対象から得られた試料を本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物と接触させることと、（ｂ）試料中の抗ＣＤ２２構築物に結合した細胞の数を決定することと、を含み、閾値レベルを上回る抗ＣＤ２２構築物に結合した細胞の数の値は、対象がＢ細胞悪性腫瘍を有することを示す、方法を提供する。
【００５２】
本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、疾患、障害、又はＢ細胞悪性腫瘍は、Ｂ細胞リンパ腫又はＢ細胞白血病である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞悪性腫瘍は、ＣＤ２２＋Ｂ細胞悪性腫瘍又はＢ細胞関連癌である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞悪性腫瘍は、Ｂ細胞リンパ腫（例えば、ＣＤ２２＋Ｂ細胞リンパ腫）又はＢ細胞白血病（例えば、ＣＤ２２＋Ｂ細胞白血病）である。特定の実施形態では、Ｂ細胞悪性腫瘍（例えば、ＣＤ２２＋Ｂ細胞悪性腫瘍）は、急性リンパ芽球性白血病（acute lymphoblastic leukemia、ＡＬＬ）、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（chronic lymphocytic leukemia、ＣＬＬ）、多発性骨髄腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、前リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、共通急性リンパ性白血病、及びｎｕｌｌ細胞型急性リンパ芽球性白血病からなる群から選択される。本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。
【００５３】
別の態様では、本発明は、陽性ＣＤ２２発現に関連する疾患又は障害の治療のための、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物、核酸分子、核酸分子のセット、発現カセット、発現カセットのセット、宿主細胞、又は医薬組成物の使用を提供する。
【００５４】
別の態様では、本発明は、陽性ＣＤ２２発現に関連する疾患又は障害の治療のための薬剤の製造における、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物、核酸分子、核酸分子のセット、発現カセット、発現カセットのセット、宿主細胞、又は医薬組成物の使用を提供する。
【００５５】
別の態様では、本発明は、陽性ＣＤ２２発現に関連する疾患又は障害の診断のための、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物の使用を提供する。いくつかの実施形態では、陽性ＣＤ２２発現に関連する疾患又は障害は、癌である。
定義
【００５６】
本発明の範囲は、本明細書に添付の「特許請求の範囲」によって定義され、本明細書に記載される特定の実施形態によって限定されるものではない。当業者であれば、本開示を読むことで、そのような記載される実施形態と同等であり得る、あるいは請求項の範囲内であり得る、様々な修正を認識するであろう。
【００５７】
一般に、本明細書で使用される用語は、別途明確に示されない限り、当該技術分野において理解されている意味に従う。特定の用語の明示的な定義を以下に示す。本明細書全体をとおして特定の例におけるこれら及び他の用語の意味は、当業者には文脈から明らかであろう。
【００５８】
本発明がより容易に理解され得るように、特定の用語を以下に最初に定義する。以下の用語及び他の用語の更なる定義は、本明細書全体にわたって記載されている。
【００５９】
投与：本明細書で使用するとき、用語「投与」は、対象又は系（例えば、細胞、器官、組織、生物体、又はそれらの関連する構成要素若しくは構成要素のセット）に対する組成物の投与を指す。当業者は、投与経路が、例えば、組成物が投与される対象又は系、組成物の性質、投与の目的などに応じて変化し得ることを理解するであろう。例えば、特定の実施形態では、動物対象（例えば、ヒト）に対する投与は、気管支内（気管支点滴によるものを含む）、口腔内、腸内、真皮内、動脈内、皮内、胃内、肝内、髄内、筋肉内、鼻腔内、腹腔内、髄腔内、腫瘍内、静脈内、脳室内、粘膜内、経鼻、経口、直腸内、皮下、舌下、局所、気管内（気管内点滴によるものを含む）、経皮、膣内、及び／又は硝子体内であってもよい。いくつかの実施形態では、投与は、断続的な投与を伴ってもよい。いくつかの実施形態では、投与は、少なくとも選択された期間の連続的な投与（例えば、潅流）を伴ってもよい。
【００６０】
親和性：当該技術分野において既知であるように、「親和性」は、特定のリガンドがそのパートナーに結合する密着性の尺度である。親和性は、様々な方法で測定することができる。いくつかの実施形態では、親和性は、定量的アッセイによって測定される。いくつかのかかる実施形態では、結合パートナー濃度は、生理学的条件を模倣するように、リガンド濃度を超過して固定されてもよい。代替的に又は追加的に、いくつかの実施形態では、結合パートナー濃度及び／又はリガンド濃度を変化させてもよい。いくつかのかかる実施形態では、親和性は、同等の条件下（例えば、濃度）で基準と比較されてもよい。
【００６１】
親和性成熟（又は親和性成熟抗体）：本明細書で使用するとき、１つ以上のそのＣＤＲ（又はいくつかの実施形態では、フレームワーク領域）において１つ以上の改変を有する抗体を指し、その改変は、それらの改変を有していない親抗体と比較して、抗原に対する抗体の親和性の改善をもたらす。いくつかの実施形態では、親和性成熟抗体は、標的抗原に対してナノモル濃度又は更にはピコモル濃度での親和性を有するであろう。親和性成熟抗体は、当該技術分野において既知の様々な手順のいずれかによって生成されてもよい。Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３は、ＶＨ及びＶＬドメイン・シャフリングによる親和性成熟について記載している。ＣＤＲ及び／又はフレームワーク残基のランダム突然変異誘発は、Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．９１：３８０９−３８１３、Ｓｃｈｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｇｅｎｅ  １６９：１４７−１５５、Ｙｅｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４−２００４、Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０−９、及びＨａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９−８９６により記載されている。結合特性が改善された結合剤の選択は、Ｔｈｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．５２５：３０９−２２により記載されている。
【００６２】
薬剤：本明細書で使用するとき、例えば、ポリペプチド、核酸、糖類、脂質、小分子、金属、又はそれらの組み合わせを含む、任意の化学的分類の化合物又は実体を指し得る。いくつかの実施形態では、薬剤は、自然界に存在する、かつ／又は自然界から得られるという点で、天然産物であるか、又はその天然産物を含むものである。いくつかの実施形態では、薬剤は、人の手の作用を介して設計、操作、及び／若しくは製造されている、かつ／又は自然界には存在しないという点で、人工である１つ以上の実体であるか、又はその実体含むものである。いくつかの実施形態では、薬剤は、単離された形態又は純粋な形態で利用されてもよく、いくつかの実施形態では、薬剤は、粗製形態で利用されてもよい。いくつかの実施形態では、潜在的な薬剤は、例えば、薬剤の中の活性剤を特定又は特徴付けするためにスクリーニングされ得るコレクション又はライブラリとして提供される。本発明に従って利用され得る薬剤のいくつかの特定の実施形態には、小分子、抗体、アプタマー、核酸（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッド、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム）、ペプチド、ペプチド模倣物などが挙げられる。いくつかの実施形態では、薬剤は、ポリマーであるか、又はポリマーを含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、ポリマーではなく、かつ／又はいなかるポリマーも実質的に含まない。いくつかの実施形態では、薬剤は、少なくとも１つのポリマー部分を含有する。いくつかの実施形態では、薬剤は、いかなるポリマー部分も欠いているか、又は実質的に含まない。
【００６３】
アミノ酸：本明細書で使用するとき、用語「アミノ酸」は、その最も広い意味で、ポリペプチド鎖に組み込むことができる任意の化合物及び／又は物質を指す。いくつかの実施形態では、アミノ酸は、一般構造Ｈ２Ｎ−Ｃ（Ｈ）（Ｒ）−ＣＯＯＨを有する。いくつかの実施形態では、アミノ酸は、天然に存在するアミノ酸である。いくつかの実施形態では、アミノ酸は、合成アミノ酸であり、いくつかの実施形態では、アミノ酸は、ｄ−アミノ酸であり、いくつかの実施形態では、アミノ酸は、ｌ−アミノ酸である。「標準アミノ酸」は、天然に存在するペプチド中に一般に見出される２０種の標準的なｌ−アミノ酸のうちのいずれかを指す。「非標準アミノ酸」は、合成的に調製されるか、又は天然源から得られるかにかかわらず、標準アミノ酸以外の任意のアミノ酸を指す。本明細書で使用するとき、「合成アミノ酸」は、塩、アミノ酸誘導体（アミドなど）、及び／又は置換体を含むがこれらに限定されない、化学修飾アミノ酸を包含する。アミノ酸は、ペプチド中のカルボキシ末端アミノ酸及び／又はアミノ末端アミノ酸を含め、メチル化、アミド化、アセチル化、保護基、及び／又はペプチドの活性に悪影響を及ぼすことなくペプチドの循環半減期を変化させることができる他の化学基による置換によって修飾することができる。アミノ酸は、ジスルフィド結合に関与していてもよい。アミノ酸は、例えば、１つ以上の化学実体（例えば、メチル基、アセテート基、アセチル基、リン酸基、ホルミル部分、イソプレノイド基、硫酸基、ポリエチレングリコール部分、脂質部分、炭水化物部分、ビオチン部分など）との会合など、１つ又は翻訳後修飾を含んでいてもよい。用語「アミノ酸」は、「アミノ酸残基」と互換的に使用され、遊離アミノ酸及び／又はペプチドのアミノ酸残基を指す場合もある。アミノ酸が遊離アミノ酸を指すのか、又はペプチドの残基を指すのかは、この用語が用いられる文脈から明らかであろう。
【００６４】
動物：本明細書で使用するとき、動物界の任意のメンバーを指す。いくつかの実施形態では、「動物」は、いずれかの性別、及び任意の発達段階の、ヒトを指す。いくつかの実施形態では、「動物」は、任意の発達段階の非ヒト動物を指す。特定の実施形態では、非ヒト動物は、哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ブタ、ウシ、シカ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、イヌ、又はサル）である。いくつかの実施形態では、動物には、哺乳動物、鳥類、爬虫類、両生類、魚類、昆虫、及び／又は蠕虫が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、動物は、トランスジェニック動物、遺伝子操作された動物、及び／又はクローンであってもよい。
【００６５】
抗体部分：本明細書で使用するとき、この用語は、完全長抗体及びその抗原結合フラグメントを包含する。完全長抗体は、２本の重鎖及び２本の軽鎖を含む。軽鎖及び重鎖の可変領域は、抗原結合に関与する。両方の鎖内の可変領域は、一般に、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる３つの超可変のループ（ＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ）を含有する。本明細書に開示される抗体及び抗原結合フラグメントのＣＤＲ境界は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、又はＡｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ（Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  １９９７、Ｃｈｏｔｈｉａ  １９８５、Ｃｈｏｔｈｉａ  １９８７、Ｃｈｏｔｈｉａ  １９８９、Ｋａｂａｔ  １９８７、Ｋａｂａｔ  １９９１）の慣例によって定義又は特定されてもよい。重鎖又は軽鎖の３つのＣＤＲは、フレームワーク領域（ＦＲ）として知られるフランキングストレッチの間に介在し、フレームワーク領域は、ＣＤＲよりも高度に保存され、超可変ループを支持するスキャフォールドを形成する。重鎖及び軽鎖の定常領域は、抗原結合に関与しないが、様々なエフェクタ機能を示す。抗体は、その抗体の重鎖の定常領域のアミノ酸配列に基づいて、クラスに割り当てられる。抗体の５つの主要なクラス又はアイソタイプは、それぞれα、δ、ε、γ、及びμ重鎖の存在によって特徴付けられる、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭである。主要な抗体クラスのいくつかは、ｌｇＧ１（γ１重鎖）、ｌｇＧ２（γ２重鎖）、ｌｇＧ３（γ３重鎖）、ｌｇＧ４（γ４重鎖）、ｌｇＡ１（α１重鎖）、又はｌｇＡ２（α２重鎖）などのサブクラスに分類される。
【００６６】
抗原結合フラグメント又は抗原結合部分：本明細書で使用するとき、用語「抗原結合フラグメント」又は「抗原結合部分」は、例えば、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖフラグメント、ジスルフィド安定化Ｆｖフラグメント（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ−ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ二量体（二価ダイアボディ）、１つ以上のＣＤＲを含む抗体の一部分から形成される多重特異性抗体、ラクダ化単一ドメイン抗体、ナノボディ、ドメイン抗体、二価ドメイン抗体、又は抗原に結合するが完全な抗体構造を含まない任意の他の抗体フラグメントを含む、抗体フラグメントを指す。抗原結合フラグメントは、親抗体又は親抗体フラグメント（例えば、親ｓｃＦｖ）が結合する同じ抗原に結合することができる。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、１つ以上の異なるヒト抗体からフレームワーク領域に移植された特定のヒト抗体由来の１つ以上のＣＤＲを含んでいてもよい。
【００６７】
生物活性：本明細書で使用するとき、対象の薬剤又は実体によって得られる観察可能な生物学的効果又は結果を指す。例えば、いくつかの実施形態では、特異的結合相互作用は、生物活性である。いくつかの実施形態では、生物学的経路又は事象の調節（例えば、誘導、増強、又は阻害）は、生物活性である。いくつかの実施形態では、生物活性の存在又は規模は、対象の生物学的経路又は事象によって生成される直接的又は間接的産物の検出によって評価される。
【００６８】
二重特異性抗体：本明細書で使用するとき、結合部分のうちの少なくとも１つ、典型的には両方が、抗体部分であるか又は抗体部分を含む、二重特異性結合剤を指す。様々な異なる二重特異性抗体の構造は、当該技術分野において既知である。いくつかの実施形態では、抗体部分であるか又は抗体部分を含む二重特異性抗体におけるそれぞれの結合部分は、ＶＨ及び／又はＶＬ領域を含み、いくつかのかかる実施形態では、ＶＨ領域及び／又はＶＬ領域は、特定のモノクローナル抗体に見出されるものである。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体が２つの抗体部分を含有する場合には、抗体部分はそれぞれ、異なるモノクローナル抗体由来のＶＨ領域及び／又はＶＬ領域を含む。
【００６９】
本明細書で使用するとき、用語「二重特異性抗体」はまた、２つの別個の結合部分を有するポリペプチドを指し、結合部分はそれぞれ、別個の標的に結合する。いくつかの実施形態では、二重特異性結合抗体は、単一のポリペプチドであり、いくつかの実施形態では、二重特異性結合抗体は、いくつかのかかる実施形態では、例えば、架橋によって互いに共有会合し得る、複数のペプチドであるか、又は複数のペプチドを含むものである。いくつかの実施形態では、二重特異性結合抗体の２つの結合部分は、同じ標的（例えば、抗原）の異なる部位（例えば、エピトープ）を認識し、いくつかの実施形態では、異なる標的を認識する。いくつかの実施形態では、二重特異性結合抗体は、異なる構造である２つの標的に同時に結合することができる。
【００７０】
担体：本明細書で使用するとき、組成物とともに投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤、又はビヒクルを指す。いくつかの例示的な実施形態では、担体は、例えば、水及び油などの滅菌された液体を含むことができ、油には、石油、動物、植物、又は合成を起源とする油が挙げられ、例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱物油、ゴマ油などがある。いくつかの実施形態では、担体は、１種類以上の固体成分であるか、又は１種類以上の個体成分を含むものである。
【００７１】
ＣＤＲ：本明細書で使用するとき、用語「ＣＤＲ」又は「相補性決定領域」は、重鎖ポリペプチド及び軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内に見出される非隣接抗原結合部位を意味することが意図される。重鎖及び軽鎖の可変領域のそれぞれには、３つのＣＤＲが存在し、これらは、可変領域のそれぞれについて指定されたＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３である。「ＣＤＲのセット」又は「ＣＤＲセット」は、抗原に結合することができる単一の可変領域のいずれかに存在する３つ又は６つのＣＤＲ、又は抗原に結合することができる同種の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のＣＤＲの群を指す。これらの特定の領域は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９−６６１６（１９７７）、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ」（１９９１）、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７）、Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２７３：９２７−９４８（１９９７）、ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２−７４５（１９９６）、Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ  ａｎｄ  Ｍａｒｔｉｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４５：３８３２−３８３９（２００８）、Ｌｅｆｒａｎｃ  Ｍ．Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２７：５５−７７（２００３）、及びＨｏｎｅｇｇｅｒ  ａｎｄ  Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３０９：６５７−６７０（２００１）により記載されており、ここで定義は、互いに比較される場合、アミノ酸残基の重複又はサブセットを含む。それにもかかわらず、抗体若しくは移植された抗体又はその変異体のＣＤＲを指すためのいずれかの定義の適用は、本明細書で定義及び使用される用語の範囲内であることが意図される。先に引用された参考資料のそれぞれに定義されるＣＤＲを包含するアミノ酸残基を、比較として、以下の表１に示す。ＣＤＲ予測アルゴリズム及びインターフェースは、当該技術分野において既知であり、例えば、Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ  ａｎｄ  Ｍａｒｔｉｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４５：３８３２−３８３９（２００８）、Ｅｈｒｅｎｍａｎｎ  Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，３８：Ｄ３０１−Ｄ３０７（２０１０）、及びＡｄｏｌｆ−Ｂｒｙｆｏｇｌｅ  Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，４３：Ｄ４３２−Ｄ４３８（２０１５）が挙げられる。本段落で引用される参考文献の内容は、本発明で使用するために、かつ本明細書の１つ以上の請求項における可能な包含のために、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００７２】
【表１】
2021528995.tif 000090
１残基の付番は、上記Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．の命名法に従う。
２残基の付番は、上記Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．の命名法に従う。
３残基の付番は、上記ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．の命名法に従う。
４残基の付番は、上記Ｌｅｆｒａｎｃ  ｅｔ  ａｌ．の命名法に従う。
５残基の付番は、上記Ｈｏｎｅｇｇｅｒ  ａｎｄ  Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎの命名法に従う。
【００７３】
表面抗原分類２２又はＣＤ２２：本明細書で使用するとき、特記のない限り、霊長類（例えば、ヒト、カニクイザル（ｃｙｎｏ））及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源に由来する任意の天然のＣＤ２２を指す。この用語は、「完全長」の未処理のＣＤ２２、及び細胞における処理から生じる任意の形態のＣＤ２２を包含する。この用語はまた、ＣＤ２２の天然に存在する変異体、例えば、スプライス変異体、対立遺伝子変異体、及びアイソフォームも包含する。ＣＤ２２の主要なアイソフォーム（ＣＤ２２β）は、細胞外ドメインに、８４７個のアミノ酸及び７つの免疫グロブリン様領域を含む（Ｗｉｌｓｏｎ，Ｇ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１３７−１４６（１９９１）を参照されたい）。マイナーなアイソフォームであるＣＤ２２αは、細胞外ドメインに、６４７個のアミノ酸を含み、免疫グロブリン様ドメイン３及び４を欠いている（Ｓｔａｍｅｎｋｏｖｉｃ，Ｉ．ａｎｄ  Ｓｅｅｄ，Ｂ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４５：７４−７７（１９９０））及び上記Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）を参照されたい）。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物は、ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に結合する。
【００７４】
ＣＤ２２過剰発現によって特徴付けられる疾患：本明細書で使用するとき、細胞表面上でＣＤ２２を過剰発現する細胞によって特徴付けられるか、又は引き起こされる、疾患又は障害を指す。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２過剰発現によって特徴付けられる疾患又は障害は、ＣＤ２２＋Ｂ細胞悪性腫瘍である。
【００７５】
ＣＤ２２＋Ｂ細胞悪性腫瘍：本明細書で使用するとき、細胞表面上でＣＤ２２を過剰発現するＢ細胞によって特徴付けられるか、又は引き起こされる、疾患又は障害を指す。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２＋Ｂ細胞悪性腫瘍は、Ｂ細胞リンパ腫又はＢ細胞白血病である。
【００７６】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）：一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む本発明の構築物は、キメラ抗原受容体の調製に使用されてもよく、その調製及び使用は、当該技術分野において一般的に知られている。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、細胞外抗原結合ドメインの一部として一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含有する人為的に構築されたハイブリッド一本鎖タンパク質又は一本鎖ポリペプチドであり、膜貫通ドメイン（例えば、ＴＣＲ膜貫通ドメイン）に連結され、この膜貫通ドメインは、細胞内免疫細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）シグナル伝達ドメイン（例えば、共刺激ドメイン、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどの細胞内ドメインの一部、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、又はＣＤ６６ｄの細胞内ドメインの一部、ＣＤ３ζの細胞内ドメインの一部）に更に連結されている。ＣＡＲの特性としては、ＭＨＣ制限（ＴＣＲ模倣抗体の場合）様式又は非ＭＨＣ制限（細胞表面タンパク質に対する抗体の場合）様式のいずれかによって、選択された標的に向けて免疫細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の特異性及び反応性を再指向して、モノクローナル抗体の抗原結合特性を利用する能力が挙げられる。非ＭＨＣ制限抗原認識は、ＣＡＲを発現する免疫細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）に対して、抗原プロセシングに依存しない抗原を認識する能力を与えるため、腫瘍エスケープの主要なメカニズムを回避する。
【００７７】
現在、３世代のＣＡＲが存在する。「第１世代」ＣＡＲは、典型的には、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）鎖の細胞質／細胞内ドメインに融合された膜貫通ドメインに融合された抗原結合ドメインとしてｓｃＦｖから構成される一本鎖ポリペプチドである。「第１世代」ＣＡＲは、典型的には、内在性ＴＣＲからのシグナルの主要な伝達物質であるＣＤ３ζ鎖由来の細胞内ドメインを有する。「第１世代」ＣＡＲは、ｄｅ  ｎｏｖｏ抗原認識を提供し、ＨＬＡ媒介性抗原提示に依存しない、単一の融合分子におけるそのＣＤ３ζ鎖シグナル伝達ドメインを介して、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の両方の活性化を引き起こすことができる。
【００７８】
「第２世代」ＣＡＲは、様々な共刺激分子（例えば、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０）由来の細胞内ドメインを、ＣＡＲの細胞質テールに付加して、Ｔ細胞に追加的なシグナルを提供する。「第２世代」ＣＡＲは、共刺激（例えば、ＣＤ２８又は４−ＩＢＢ）及び活性化（例えば、ＣＤ３ζ）の両方を提供するものを含む。前臨床研究によって、「第２世代」ＣＡＲがＴ細胞の抗腫瘍活性を改善し得ることが示された。例えば、慢性リンパ芽球性白血病（ＣＬＬ）及び急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）を有する患者におけるＣＤ１９分子を標的とする臨床試験において、「第２世代」ＣＡＲによって修飾されたＴ細胞の頑強な有効性が実証された。
【００７９】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子操作された免疫細胞は、「第３世代」ＣＡＲを発現する。「第３世代」ＣＡＲは、複数の共刺激（例えば、ＣＤ２８及び４−１ＢＢ）及び活性化（例えば、ＣＤ３ζ）を提供するものを含む。
【００８０】
キメラ抗体−Ｔ細胞受容体構築物又はｃａＴＣＲ：本明細書で使用するとき、この用語は、２本の別個のポリペプチド鎖を含む機能性ポリペプチド複合体を指し、２本の別個のポリペプチド鎖のうちの一方は、抗体重鎖可変領域（ＶＨ）及び抗体重鎖定常領域（ＣＨ）を含み、他方は、抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）及び抗体軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む。したがって、本明細書で定義されるｃａＴＣＲは、２サブユニット構築物であり、各サブユニットは、膜貫通ドメイン（例えば、ＴＣＲ膜貫通ドメイン）及び細胞内免疫細胞シグナル伝達ドメインに融合された、細胞膜に固定された抗体重鎖又は軽鎖に実質的に類似している。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、共刺激ドメイン（例えば、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、又はＣＤ３ζの細胞内ドメインの一部）を含まない。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、ａ）抗体部分を含む細胞外ドメインと、ｂ）少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールを動員することができるＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）と、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲは、ａ）ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に特異的に結合する抗ＣＤ２２抗体部分を含む細胞外ドメインと、ｂ）少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールを動員することができるＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）と、を含む。
【００８１】
本明細書で定義されるｃａＴＣＲは、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、膜貫通ドメイン及び細胞内免疫細胞シグナル伝達ドメインに融合された抗体ＣＨに融合された抗体ＶＨを含み、第２のポリペプチドは、膜貫通ドメイン及び細胞内免疫細胞シグナル伝達ドメインに融合された抗体ＣＬに融合された抗体ＶＬを含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２のポリペプチド鎖は、共有結合（例えば、ペプチド結合又は他の化学結合）又は非共有結合によって連結されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲは、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖を含むヘテロ二量体である。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖は、少なくとも１つのジスルフィド結合によって連結されている。抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲの特異性は、ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に対する結合特異性を付与する抗体部分に由来する。
【００８２】
用語「キメラ抗体−Ｔ細胞受容体（ｃａＴＣＲ）」及び「抗体−ＴＣＲキメラ分子又は構築物（ａｂＴＣＲ）」は、交換可能に使用される。ｃａＴＣＲの更なる説明及び例は、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、２０１７年４月２６日出願の米国特許出願第６２／４９０，５７６号に見出すことができる。
【００８３】
養子細胞療法：養子細胞療法は、例えば、癌の治療のための、免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞又はＴ細胞）の単離、エクスビボ増殖及び／又は操作、並びにその後のこれらの細胞の患者への投与を典型的に含む、治療的アプローチである。投与された細胞は、自家性であってもよいか、又は同種異系であってもよい。細胞は、例えば、ＲＮＡ及びＤＮＡトランスフェクション、ウイルス形質導入、エレクトロポレーション（これらは全て、当該技術分野において既知の技術である）の使用を含む、既知の方法のいずれか１つにおいて遺伝子操作された受容体（ＣＡＲ、ｃａＴＣＲ、及び遺伝子操作されたＴＣＲを含む）を発現するように操作されてもよい。
【００８４】
用語「養子細胞治療組成物」は、養子細胞移入に好適な細胞を含む任意の組成物を指す。例示的な実施形態では、養子細胞治療組成物は、腫瘍浸潤リンパ球（tumor infiltrating lymphocyte、ＴＩＬ）、ＴＣＲ（すなわち、非相同Ｔ細胞受容体）修飾されたリンパ球（例えば、ｅＴＣＲ  Ｔ細胞及びｃａＴＣＲ  Ｔ細胞）、及びＣＡＲ（すなわち、キメラ抗原受容体）修飾されたリンパ球（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞）からなる群から選択される細胞型を含む。別の実施形態では、養子細胞治療組成物は、Ｔ細胞、ＣＤ８＋細胞、ＣＤ４＋細胞、ＮＫ細胞、δγＴ細胞、制御性Ｔ細胞、及び末梢血単核細胞からなる群から選択される細胞型を含む。別の実施形態では、ＴＩＬ、Ｔ細胞、ＣＤ８＋細胞、ＣＤ４＋細胞、ＮＫ細胞、δγＴ細胞、制御性Ｔ細胞、又は末梢血単核細胞は、養子細胞治療組成物を形成する。一実施形態では、養子細胞治療組成物は、Ｔ細胞を含む。
【００８５】
いくつかの実施形態では、細胞内で発現される抗ＣＤ２２構築物は、ＣＡＲ（例えば、上述の「第１世代」、「第２世代」、又は「第３世代」ＣＡＲ）である。本開示の主題によると、本明細書で提供される遺伝子操作された免疫細胞のＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含む。
【００８６】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、ｃａＴＣＲである。上記で定義したように、ｃａＴＣＲは、２サブユニット構築物であり、それぞれのサブユニットは、膜貫通ドメイン（例えば、ＴＣＲ膜貫通ドメイン）に融合された、細胞膜に固定された抗体重鎖又は軽鎖に実質的に類似している。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、免疫細胞シグナル伝達ドメイン（例えば、共刺激ドメイン）を含まない。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ自体は、ＴＣＲ関連シグナル伝達分子（ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及び／又はＣＤ３ζなど）を含まず、少なくとも、機能性ではなく、又はその機能的フラグメントでもない。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、抗原特異性を提供する抗原結合モジュール（すなわち、細胞外抗原結合ドメイン）と、ＣＤ３動員及びシグナル伝達を可能にするＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）と、を含む。抗原結合モジュール（すなわち、細胞外抗原結合ドメイン）は、天然に存在するＴ細胞受容体抗原結合部分ではない。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュール（すなわち、細胞外抗原結合ドメイン）は、ＴＣＲＭ中のポリペプチド鎖のアミノ末端に連結されている。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュール（すなわち、細胞外抗原結合ドメイン）は、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。ＴＣＲＭは、αβＴＣＲ及び／又はγδＴＣＲなどの１つ以上のＴＣＲ（ＴＣＲ−ＴＭ）の膜貫通ドメインに由来する膜貫通モジュールを含み、任意選択的に、ＴＣＲの結合ペプチド若しくはそのフラグメント、及び／又は１つ以上のＴＣＲ細胞内ドメイン若しくはそのフラグメントのうちの一方又は両方を更に含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、２本のポリペプチド鎖を含み、それぞれのポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシ末端へと、結合ペプチド、膜貫通ドメイン、及び任意選択的にＴＣＲ細胞内ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、１つ以上の天然に存在しないＴＣＲドメインを含む。例えば、いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、１つ又は２つの天然に存在しないＴＣＲ膜貫通ドメインを含む。天然に存在しないＴＣＲドメインは、１つ以上のアミノ酸の置換によって、及び／又は対応するドメインの一部を別のＴＣＲ由来の類似ドメインの一部で代替することによって修飾された、天然に存在するＴＣＲの対応するドメインであり得る。ｃａＴＣＲは、第１及び第２のポリペプチド鎖を含むことができ、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖は共に、抗原結合モジュール及びＴＣＲＭを形成する。いくつかの実施形態では、第１及び第２のポリペプチド鎖は、別個のポリペプチド鎖であり、ｃａＴＣＲは、二量体などの多量体である。いくつかの実施形態では、第１及び第２のポリペプチド鎖は、ペプチド結合によって、又はジスルフィド結合などの別の化学結合によって、共有結合されている。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖は、少なくとも１つのジスルフィド結合によって連結されている。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、１つ以上のＴ細胞共刺激シグナル伝達配列を更に含む。ｃａＴＣＲの例は、例えば、国際公開第２０１７／０７０６０８号、及び２０１７年４月２６日出願の米国特許仮出願第６２／４９０，５７６号に記載されており、これらは共に参照によりその全体が本明細書に組み込まれている。
【００８７】
同等の：本明細書で使用するとき、互いに同一ではないが、それらを比較するには充分な類似性があり、それによって、観察された差異又は類似性に基づき合理的に結論を下すことができる、２つ以上の薬剤、実体、状況、条件のセットなどを指す。いくつかの実施形態では、条件、状況、個体、又は集団の同等のセットは、複数の実質的に同一の特徴及び１つ又は少数の異なる特徴によって特徴付けられる。当業者であれば、文脈において、２つ以上のかかる薬剤、実体、状況、条件のセットなどが、任意の所与の環境下で同等と見なされるためにはどの程度の同一性が必要とされるかを理解するであろう。例えば、当業者であれば、異なる状況、個体、若しくは集団のセットの下で、又はそれらによって得られた結果若しくは観察された事象の差異が、異なるそれらの特徴の変動によって引き起されるか、又はその変動を示唆するという合理的な結論を保証するのに十分な数及びタイプの実質的に同一の特徴によって特徴付けられる場合、状況、個体、又は集団のセットが互いに同等であることを認識するであろう。
【００８８】
対照：本明細書で使用するとき、それに対し結果が比較される標準である「対照」の当該技術分野において理解されている意味を指す。典型的には、対照を使用して、変数を単離し、かかる変数に関する結論を出すことにより、実験における完全性を増補する。いくつかの実施形態では、対照は、比較物を提供するために、試験反応又はアッセイと同時に行われる反応又はアッセイである。本明細書で使用するとき、「対照」は、「対照抗体」を指す場合もある。「対照抗体」は、本明細書に記載されるヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ＣＤＲ移植抗体、多重特異性抗体、若しくは二重特異性抗体、本明細書に記載されるものとは異なる抗体、又は親抗体であってもよい。１つの実験では、「試験」（すなわち、試験される変数）が適用される。第２の実験では、「対照」である、試験される変数は適用されない。いくつかの実施形態では、対照は、既存対照（すなわち、以前に行われた試験若しくはアッセイのもの、又は既に知られている量若しくは結果）である。いくつかの実施形態では、対照は、印刷された記録又は他の方法で保存された記録であるか、又はその記録を含む。対照は、陽性対照であってもよいか、又は陰性対照であってもよい。
【００８９】
〜に対応する：本明細書で使用するとき、対象のポリペプチド中のアミノ酸残基の位置／同一性を示す。当業者であれば、簡潔さのために、ポリペプチド中の残基は多くの場合、ポリペプチドに関した基準に基づいて正準番号付けシステムを使用して指定され、それによって、例えば、１９０位の残基に「対応する」アミノ酸は、実際には特定のアミノ酸鎖中の１９０番目のアミノ酸である必要はなく、むしろ基準ポリペプチド中の１９０番目に存在する残基に対応することを認識するであろう。当業者は、「対応する」アミノ酸を特定する方法を容易に理解するであろう。
【００９０】
検出実体／検出剤：本明細書で使用するとき、検出可能な任意の要素、分子、官能基、化合物、フラグメント、又は部分を指す。いくつかの実施形態では、検出実体は、単独で提供又は利用される。いくつかの実施形態では、検出実体は、別の薬剤と会合して（例えば、結合されて）提供され、かつ／又は利用される。検出実体の例としては、様々なリガンド、放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、１８Ｆ、１９Ｆ、３２Ｐ、３５Ｓ、１３５Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、６４Ｃｕ、１８７Ｒｅ、１１１Ｉｎ、９０Ｙ、９９ｍＴｃ、１７７Ｌｕ、８９Ｚｒなど）、蛍光色素（特定の例示的な蛍光色素については、以下を参照されたい）、化学発光剤（例えば、アクリジニウムエステル、安定化ジオキセタンなど）、生物発光剤、スペクトル分解可能無機蛍光半導体ナノ結晶（すなわち、量子ドット）、金属ナノ粒子（例えば、金、銀、銅、白金など）ナノクラスター、常磁性金属イオン、酵素（酵素の具体例については、以下を参照されたい）、比色標識（例えば、色素、コロイド金など）、ビオチン、ジオキシゲニン、ハプテン、及び抗血清又はモノクローナル抗体が利用可能なタンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９１】
エフェクタ機能：本明細書で使用するとき、抗体Ｆｃ領域とＦｃ受容体又はリガンドとの相互作用から生じる生化学的事象を指す。エフェクタ機能には、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞介在性貪食（ＡＤＣＰ）、及び補体介在性細胞傷害（ＣＭＣ）が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、エフェクタ機能は、抗原の結合後に作動するもの、抗原結合とは無関係に作動するもの、又はその両方である。
【００９２】
エフェクタ細胞：本明細書で使用するとき、１つ以上のエフェクタ機能を媒介する免疫系の細胞を指す。いくつかの実施形態では、エフェクタ細胞には、単球、マクロファージ、好中球、樹状細胞、好酸球、肥満細胞、血小板、大型顆粒リンパ球、ランゲルハンス細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球のうちの１つ以上を含んでもよいが、これらに限定されず、また、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、及びサルを含むが、これらに限定されない、任意の生物に由来し得る。
【００９３】
遺伝子操作された：本明細書で使用するとき、一般に、人の手によって操作された態様を指す。例えば、いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、自然にはその順序で共に連結されていない２つ以上の配列が、人の手によって操作され、遺伝子操作されたポリヌクレオチド中では互いに直接連結されている場合、「遺伝子操作された」と見なされ得る。いくつかの特定のこのような実施形態では、遺伝子操作されたポリヌクレオチドは、自然界において、第１のコード配列と操作的に関連して存在しているが、第２のコード配列とは操作的に関連して存在しておらず、人の手によって連結され、それによって、第２のコード配列とも操作的に関連させた、調節配列を含んでいてもよい。代替的に又は追加的に、いくつかの実施形態では、自然界では互いに連結していないポリペプチド要素又はドメインをそれぞれコードする第１及び第２の核酸配列は、単一の遺伝子操作されたポリヌクレオチド中では互いに連結されていてもよい。同様に、いくつかの実施形態では、細胞又は生物は、その遺伝子情報が変更されるように操作されている（例えば、以前には存在していなかった新たな遺伝物質が導入された、あるいは以前には存在していた遺伝物質が変更された又は除去された）場合には、「遺伝子操作された」と見なされ得る。一般的な方法であり、当業者に理解されているように、遺伝子操作されたポリヌクレオチド又は細胞の子孫は、実際の操作が従来の実体に対して行われたものだとしても、典型的には依然として「遺伝子操作された」と呼称される。更に、当業者には理解されるように、様々な技法が利用可能であり、それを介して、本明細書に記載される「遺伝子操作」が達成され得る。例えば、いくつかの実施形態では、「遺伝子操作」は、分析又は比較を実施するようにプログラムされた、あるいは別の方法で配列、改変などを分析、推奨、及び／又は選択するようにプログラムされたコンピュータシステムの使用を介した（例えば、核酸配列、ポリペプチド配列、細胞、組織、及び／又は生物の）選択又は設計を含んでいてもよい。）。代替的に又は追加的に、いくつかの実施形態では、「遺伝子操作」は、インビトロ化学合成法、及び／又は、例えば、核酸増幅（例えば、ポリメラーゼ連鎖反応を介したものなど）ハイブリダイゼーション、突然変異誘発、形質転換、トランスフェクションなどの組み換え核酸法、及び／又は様々な制御された交配法のうちのいずれかの使用を伴ってもよい。当業者には理解されるように、様々な確立されたそのような技術（例えば、組み換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、並びに組織培養及び形質転換（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクションなど）は、当該技術分野において周知であり、それらは本明細書全体をとおして引用及び／又は考察される様々な一般的かつより具体的な参照文献において記載されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２ｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８９）を参照されたい。
【００９４】
エピトープ：本明細書で使用するとき、免疫グロブリン（例えば、抗体又は受容体）結合成分によって特異的に認識される任意の部分を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、抗原上の複数の化学的原子又は基から構成されている。いくつかの実施形態では、このような化学的原子又は基は、抗原が関連する三次元構造をとるときに表面露出される。いくつかの実施形態では、このような化学的原子又は基は、抗原がそのような立体構造をとるとき、空間内で互いに物理的に近接している。いくつかの実施形態では、少なくともいくつかのこのような化学的原子は、基は、抗原が代替的な立体構造（例えば、直線化）をとるとき、互いに物理的に離れている。本発明のいくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物は、配列番号２０５の配列の少なくとも７個のアミノ酸（例えば、配列番号２０５の配列の少なくとも７個の連続するアミノ酸）を含むエピトープに結合する。本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物は、配列番号２０５の配列の７〜５０個のアミノ酸（例えば、７〜５０個の連続するアミノ酸）、例えば、配列番号２０５の配列の７〜４５個、７〜７〜４０個、７〜３５個、７〜３０個、７〜２５個、７〜２０個、７〜１５個、７〜１０個、１０〜５０個、１５〜５０個、２０〜５０個、２５〜５０個、３０〜５０個、３５〜５０個、４０〜５０個、４５〜５０個、１０〜４５個、１５〜４０個、２０〜３５個、又は２５〜３０個のアミノ酸を含むエピトープに結合してもよい。
【００９５】
賦形剤：本明細書で使用するとき、例えば、所望の粘稠度又は安定化効果を提供又は付与するために医薬組成物に含まれ得る非治療薬を指す。好適な医薬賦形剤としては、例えば、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、滑石、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが挙げられる。
【００９６】
発現カセット：本明細書で使用するとき、宿主細胞に導入されると、ＲＮＡ又はポリペプチドの転写及び／又は翻訳をそれぞれもたらす核酸構築物を指す。
【００９７】
非相同：本明細書で使用するとき、宿主細胞又は宿主生物において天然に存在しないポリヌクレオチド又はポリペプチドを指す。非相同ポリヌクレオチド又はポリペプチドは、周知の組み換え方法を用いて、例えば、プロモータに任意選択的に連結された非相同ポリヌクレオチドを含む発現カセットを使用して、宿主細胞又は宿主生物に導入されてもよい。
【００９８】
フレームワーク又はフレームワーク領域：本明細書で使用するとき、ＣＤＲを除いた、可変領域の配列を指す。ＣＤＲ配列は、異なるシステムによって決定され得るため、同様にフレームワーク配列もそれに応じて異なる解釈を受ける。６つのＣＤＲは、重鎖及び軽鎖上のフレームワーク領域を、それぞれの鎖上の４つのサブ領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４）に分割し、ここでＣＤＲ１は、ＦＲ１とＦＲ２との間、ＣＤＲ２は、ＦＲ２とＦＲ３との間、ＣＤＲ３は、ＦＲ３とＦＲ４との間に位置する。特定のサブ領域をＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、又はＦＲ４として指定することなくとも、他で言及されているように、フレームワーク領域とは、単一の天然に存在する免疫グロブリン鎖の可変領域内の混合ＦＲを表す。本明細書で使用するとき、ＦＲは、４つのサブ領域のうちの１つを表しており、例えば、ＦＲ１は、可変領域のアミノ末端に最も近く、かつＣＤＲ１に関しては５’である、第１のフレームワーク領域を表し、複数形ＦＲｓは、フレームワーク領域を構成するサブ領域のうちの２つ以上を表す。
【００９９】
宿主細胞：本明細書で使用するとき、外因性ＤＮＡが（組み換え又は他の方法で）導入された細胞を指す。本開示を読んだ当業者であれば、そのような用語が、特定の対象の細胞だけではなく、そのような細胞の子孫も指すことを理解するであろう。突然変異誘発又は環境の影響のいずれかにより後の世代においてある種の改変が生じ得るため、そのような子孫は、実際には、親細胞と同一でない場合もあるが、本明細書で使用するときは依然として、用語「宿主細胞」の範囲内に含まれる。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、外因性ＤＮＡ（例えば、組み換え核酸配列）を発現するのに好適な、生命界のいずれかから選択される原核細胞及び真核細胞を含む。例示的な細胞としては、原核生物及び真核生物（単細胞又は多細胞）の細胞、細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐｐ．、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐｐ．などの株）、マイコバクテリア細胞、真菌細胞、酵母細胞（例えば、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓ．ｐｏｍｂｅ、Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓ、Ｐ．ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａなど）、植物細胞、昆虫細胞（例えば、ＳＦ−９、ＳＦ−２１、バキュロウイルス感染昆虫細胞、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ  ｎｉなど）、非ヒト動物細胞、ヒト細胞、又は、例えば、ハイブリドーマ若しくはクアドローマなどの細胞融合体が挙げられる。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、ヒト、サル、類人猿、ハムスター、ラット、又はマウスの細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、真核細胞であり、以下の細胞から選択される：ＣＨＯ（例えば、ＣＨＯ  Ｋｌ、ＤＸＢ−１  １  ＣＨＯ、Ｖｅｇｇｉｅ−ＣＨＯ）、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ−７）、網膜細胞、Ｖｅｒｏ、ＣＶ１、腎臓（例えば、ＨＥＫ２９３、２９３  ＥＢＮＡ、ＭＳＲ  ２９３、ＭＤＣＫ、ＨａＫ、ＢＨＫ）、ＨｅＬａ、ＨｅｐＧ２、ＷＩ３８、ＭＲＣ  ５、Ｃｏｌｏ２０５、ＨＢ  ８０６５、ＨＬ−６０、（例えば、ＢＨＫ２１）、Ｊｕｒｋａｔ、Ｄａｕｄｉ、Ａ４３１（表皮）、ＣＶ−１、Ｕ９３７、３Ｔ３、Ｌ細胞、Ｃ１２７細胞、ＳＰ２／０、ＮＳ−０、ＭＭＴ  ０６０５６２、セルトリ細胞、ＢＲＬ  ３  Ａ細胞、ＨＴ１０８０細胞、骨髄腫細胞、腫瘍細胞、及び前述の細胞由来の細胞株。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、１つ以上のウイルス遺伝子、例えば、ウイルス遺伝子を発現する網膜細胞（例えば、ＰＥＲ．Ｃ６（商標）細胞）を含む。
【０１００】
ヒト抗体：本明細書で使用するとき、ヒト免疫グロブリン配列から生成される（又はアセンブルされる）可変領域及び定常領域を有する抗体を含むことが意図される。いくつかの実施形態では、抗体（又は抗体部分）は、例えば、１つ以上のＣＤＲ、特にＣＤＲ３において、それらのアミノ酸配列がヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列によりコードされていない残基又は要素を含む（例えば、インビトロの無作為若しくは部位特異的な突然変異誘発、又はインビボの体細胞突然変異により（元々）導入されていたであろう配列変異を含む）場合であっても、「ヒト」であると見なされる場合がある。ヒト抗体、ヒト抗体部分、及びそれらのフラグメントは、ヒト免疫細胞から単離されてもよいか、又は組み換え的に若しくは合成的（半合成的を含む）に生成されてもよい。
【０１０１】
ヒト化：当該技術分野において既知であるように、用語「ヒト化」は、そのアミノ酸配列が、非ヒト種（例えば、マウス）において産生された参照抗体に由来するＶＨ及びＶＬ領域配列を含むだけではなく、それら配列中に、より「ヒト様」、すなわち、ヒト生殖細胞系列可変配列とより類似させることを意図した参照抗体に対する改変もまた含む、抗体（又は部分）を指すために一般的に使用される。いくつかの実施形態では、「ヒト化」抗体（又は抗体部分）は、対象の抗原に免疫特異的に結合し、実質的にヒト抗体のアミノ酸配列と同様のアミノ酸配列を有するフレームワーク（ＦＲ）領域と、実質的に非ヒト抗体のアミノ酸配列と同様のアミノ酸配列を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）と、を有するものである。ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインのうちの実質的に全て（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦａｂＣ、Ｆｖ）を含み、それらにおいて、ＣＤＲ領域の全て又は実質的に全ては、非ヒト免疫グロブリン（すなわち、ドナー免疫グロブリン）のものに対応し、フレームワーク領域の全て又は実質的に全ては、ヒト免疫グロブリンのコンセンサス配列のものである。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖と、重鎖の少なくとも可変ドメインと、の両方を含有する。抗体はまた、重鎖定常領域のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、及び任意選択的にＣＨ４領域を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト化ＶＬ領域のみを含有する。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト化ＶＨ領域のみを含有する。いくつかの特定の実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト化ＶＨ及びヒト化ＶＬ領域を含有する。
【０１０２】
親水性：本明細書で使用するとき、用語「親水性」及び／又は「極性」は、水と混合するか、又は水に容易に溶解する傾向を指す。
【０１０３】
疎水性：本明細書で使用するとき、用語「疎水性」及び／又は「非極性」は、水に反発するか、水と結合しないか、又は水に容易に溶解できない傾向を指す。
【０１０４】
改善、増加、又は低減：本明細書で使用するとき、又はこれらの文法的に等価なものは、本明細書に記載される治療の開始前の同一個体における測定値、又は本明細書に記載される治療のない対照個体（又は複数の対照個体）における測定値などの基準測定値に対する値を示す。「対照個体」は、治療される個体と同じ形態の疾患又は損傷を患っている個体である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物を使用してＢ細胞悪性腫瘍を治療するための方法は、治療を受ける前の個体、又は対照個体と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、又は少なくとも９０％、個体における細胞アポトーシスを増加（例えば、ＣＤ２２＋腫瘍細胞アポトーシスを増加）させ得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物を使用してＢ細胞悪性腫瘍を治療するための方法は、治療を受ける前の個体、又は対照個体と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、又は少なくとも９０％、個体における腫瘍サイズを低減（例えば、ＣＤ２２＋腫瘍サイズを低減）させ得る。
【０１０５】
インビトロ：本明細書で使用するとき、多細胞生物体内ではなく、例えば、試験管中又は反応管中、細胞培養中などの人工的な環境中で発生する事象を指す。
【０１０６】
インビボ：本明細書で使用するとき、ヒト及び非ヒト動物などの多細胞生物体内で発生する事象を指す。細胞ベースシステムの文脈において、この用語は、（例えば、インビトロ系との対語として）生きている細胞内で発生する事象を指すために使用され得る。
【０１０７】
単離された：本明細書で使用するとき、（１）ある物質及び／又は実体が（自然界において、及び／又は実験的設定において）最初に生成されたときに関連付けられていた成分のうちの少なくとも一部から分離された、かつ／又は（２）人の手によって設計、生成、調製、及び／若しくは製造された、物質及び／又は実体を指す。単離された物質及び／又は実体は、それらが最初に関連付けられていた他の成分の約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約９９％超から分離されていてもよい。いくつかの実施形態では、単離された薬剤は、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約９９％超純粋である。本明細書で使用するとき、物質は、他の成分を実質的に含まない場合、「純粋」である。いくつかの実施形態では、当業者には理解されるように、物質は、例えば、１種類以上の担体又は賦形剤（例えば、緩衝液、溶媒、水など）のような特定の他の成分と組み合わされた後でも、依然として「単離された」又は更には「純粋」と見なされてもよく、このような実施形態では、物質の単離割合、又は純度は、そのような担体又は賦形剤を含まずに算出される。一例を挙げれば、いくつかの実施形態では、天然に存在するポリペプチド又はポリヌクレオチドなどの生物学的ポリマーは、ａ）その由来の起源又は源を理由として、自然界において、天然の状態で生物学的ポリマーに付随する成分の一部又は全てと関連付けられていない場合、ｂ）自然界において、生物学的ポリマーを生成する種と同じ種の他のポリペプチド又は核酸を実質的に含まない場合、ｃ）自然界において、生物学的ポリマーを生成する種のものではない細胞又は他の発現系に由来する成分によって発現されるか、又は他の方法でそれと関連付けられている場合、「単離された」と見なされる。したがって、例えば、いくつかの実施形態では、化学的に合成されるか、又は自然界においてそれを生成する細胞系とは異なる細胞システムで合成されるポリペプチドは、「単離された」ポリペプチドであると見なされる。代替的に又は追加的に、いくつかの実施形態では、１つ以上の精製技術が施されたポリペプチドは、ａ）自然界においてポリペプチドが関連付けられている、かつ／又はｂ）最初に生成されたときにポリペプチドが関連付けられている他の成分から分離されている限り、「単離された」ポリペプチドであると見なされてもよい。
【０１０８】
ＫＤ：本明細書で使用するとき、結合剤（例えば、抗体剤又はその結合成分）の、そのパートナー（例えば、抗体剤又はその結合成分が結合するエピトープ）との複合体からの解離定数を指す。
【０１０９】
ｋｏｆｆ：本明細書で使用するとき、結合剤（例えば、抗体剤又はその結合成分）の、そのパートナー（例えば、抗体剤又はその結合成分が結合するエピトープ）との複合体からの解離に対する速度定数を指す。
【０１１０】
ｋｏｎ：本明細書で使用するとき、結合剤（例えば、抗体剤又はその結合成分）の、そのパートナー（例えば、抗体剤又はその結合成分が結合するエピトープ）との会合に対する速度定数を指す。
【０１１１】
リンカー：本明細書で使用するとき、異なる要素を互いに繋ぐ、多要素ポリペプチドの部分を指すために使用される。例えば、当業者であれば、その構造が２つ以上の機能的ドメイン又は組織的ドメインを含むポリペプチドが、多くの場合、そのようなドメインの間に、それらドメインを互いに連結するアミノ酸のストレッチを含むことを理解するであろう。いくつかの実施形態では、リンカー要素を含むポリペプチドは、一般形態であるＳ１−Ｌ−Ｓ２の全体構造を有し、ここでＳ１及びＳ２は、同じであっても異なっていてもよく、リンカーによって互いに会合された２つのドメインを表す。いくつかの実施形態では、リンカーは、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００個以上のアミノ酸の長さである。いくつかの実施形態では、リンカーは、３〜７個のアミノ酸、７〜１５個のアミノ酸、又は２０〜３０個（例えば、２０〜２５個又は２５〜３０個）のアミノ酸を有する。いくつかの実施形態では、リンカーは、剛性の三次元構造をとる傾向はなく、むしろポリペプチドに柔軟性を与えるという点で特徴付けられている。当該技術分野において既知のポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）を遺伝子操作する際に適切に使用することができる様々な異なるリンカー要素（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：６４４４−６４４８、Ｐｏｌｊａｋ，Ｒ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１１２１−１１２３を参照されたい）。
【０１１２】
多価結合抗体（又は多重特異性抗体）：本明細書で使用するとき、２つ以上の抗原に結合することができる抗体を指し、それら抗原は、同じ分子上又は異なる分子上に存在し得る。本明細書に記載の多価結合抗体は、いくつかの実施形態では、２つ以上の抗原結合部位を有するよう遺伝子操作され、典型的には、天然に存在するタンパク質ではない。本明細書に記載の多価結合抗体は、２つ以上の関連標的又は非関連標的に結合することができる抗体を指す。多価結合抗体は、単一の抗体部分の複数のコピー、又は異なる抗体部分の複数のコピーから構成されていてもよい。このような抗体は、２つ以上の抗原に結合することができ、四価抗体又は多価抗体であってもよい。多価結合抗体は、例えば、免疫調節物質、毒素、又はＲＮａｓｅなどの治療薬を追加的に含んでいてもよい。本明細書に記載の多価結合抗体は、いくつかの実施形態では、異なる構造の少なくとも２つの標的、例えば、２つの異なる抗原、同一抗原上の２つの異なるエピトープ、又はハプテン及び／又は抗原若しくはエピトープ、に同時に結合することができる。本発明の多価結合抗体は、単一特異性（１つの抗原に結合可能）又は多重特異性（２つ以上の抗原に結合可能）であってもよく、２本の重鎖ポリペプチド及び２本の軽鎖ポリペプチドから構成されていてもよい。いくつかの実施形態では、それぞれの結合部位は、１つの抗原結合部位当たり、抗原結合に関与する総数で６つのＣＤＲを有する、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインから構成されている。
【０１１３】
核酸：本明細書で使用するとき、その最も広い意味で、オリゴヌクレオチド鎖に組み込まれているか、又はオリゴヌクレオチド鎖に組み込まれ得る任意の化合物及び／又は物質を指す。いくつかの実施形態では、核酸は、ホスホジエステル連結を介してオリゴヌクレオチド鎖に組み込まれているか、又は組み込まれ得る化合物及び／又は物質である。文脈から明らかなように、いくつかの実施形態では、「核酸」は、個々の核酸残基（例えば、ヌクレオチド及び／又はヌクレオシド）を指し、いくつかの実施形態では、「核酸」は、個々の核酸残基を含むオリゴヌクレオチド鎖を指す。いくつかの実施形態では、「核酸」は、ＲＮＡであるか、又はＲＮＡを含み、いくつかの実施形態では、「核酸」は、ＤＮＡであるか、又はＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上の天然核酸残基であるか、１つ以上の天然核酸残基を含むか、又は１つ以上の天然核酸残基からなる。いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上の核酸類似体であるか、１つ以上の核酸類似体を含むか、又は１つ以上の核酸類似体からなる。いくつかの実施形態では、核酸類似体は、ホスホジエステル骨格を利用しないという点で核酸とは異なる。例えば、いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上の「ペプチド核酸」であるか、１つ以上の「ペプチド核酸」を含むか、又は１つ以上の「ペプチド核酸」からなる。「ペプチド核酸」は、当該技術分野において既知であり、骨格中にホスホジエステル結合の代わりにペプチド結合を有しており、本発明の範囲内であると見なされる。代替的に又は追加的に、いくつかの実施形態では、核酸は、ホスホジエステル結合ではなく、１つ以上のホスホロチオエート連結及び／又は５’−Ｎ−ホスホロアミダイト連結を有する。
【０１１４】
いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上の天然ヌクレオシド（例えば、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウリジン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシグアノシン、及びデオキシシチジン）であるか、１つ以上の天然ヌクレオシドを含むか、又は１つ以上の天然ヌクレオシドからなる。いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上のヌクレオシド類似体（例えば、２−アミノアデノシン、２−チオチミジン、イノシン、ピロロ−ピリミジン、３−メチルアデノシン、５−メチルシチジン、Ｃ−５プロピニル−シチジン、Ｃ−５プロピニル−ウリジン、２−アミノアデノシン、Ｃ５−ブロモウリジン、Ｃ５−フルオロウリジン、Ｃ５−ヨードウリジン、Ｃ５−プロピニル−ウリジン、Ｃ５−プロピニル−シチジン、Ｃ５−メチルシチジン、２−アミノアデノシン、７−デアザアデノシン、７−デアザグアノシン、８−オキソアデノシン、８−オキソグアノシン、０（６）−メチルグアニン、２−チオシチジン、メチル化塩基、挿入塩基、及びこれらの組み合わせ）であるか、１つ以上のヌクレオシド類似体を含むか、又は１つ以上のヌクレオシド類似体からなる。いくつかの実施形態では、核酸は、天然核酸中のものと比較して、１つ以上の修飾糖（例えば、２’−フルオロリボース、リボース、２’−デオキシリボース、アラビノース、及びヘキソース）を含む。いくつかの実施形態では、核酸は、ＲＮＡ又はタンパク質などの機能性遺伝子産物をコードするヌクレオチド配列を有する。いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上のイントロンを含む。いくつかの実施形態では、核酸は、天然源からの単離、相補テンプレートに基づく重合による酵素合成（インビボ又はインビトロ）、組み換え細胞又は系内での複製、及び化学合成のうちの１つ以上によって調製される。いくつかの実施形態では、核酸は、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２０、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００個以上の残基長である。いくつかの実施形態では、核酸は、一本鎖であり、いくつかの実施形態では、核酸は、二本鎖である。いくつかの実施形態では、核酸は、ポリペプチドをコードする少なくとも１つの要素を含むヌクレオチド配列を有しているか、又はポリペプチドをコードする配列の相補体である。いくつかの実施形態では、核酸は、酵素活性を有する。
【０１１５】
操作可能に連結された：本明細書で使用するとき、記載の成分がそれらの意図された様式で機能することを許容する関係にある、並置を指す。コード配列に「操作可能に連結された」制御配列は、コード配列の発現が、制御配列と適合する条件下で達成されるようにライゲーションされる。「操作可能に連結された」配列は、対象遺伝子と隣接している発現制御配列と、当該対象遺伝子を制御するためにトランスで又は距離をとって作用する発現制御配列と、の両方を含む。本明細書で使用するとき、用語「発現制御配列」は、ポリヌクレオチド配列がライゲーションされるコード配列の発現及びプロセシングを生じさせるのに必要なポリヌクレオチド配列を指す。発現制御配列としては、適切な転写開始配列、終結配列、プロモータ配列、及びエンハンサー配列、スプライシングシグナル及びポリアデニレーションシグナルなどの効率的なＲＮＡプロセシングシグナル、細胞質ｍＲＮＡを安定化させる配列、翻訳効率を向上させる配列（すなわち、Ｋｏｚａｋコンセンサス配列）、タンパク質の安定性を向上させる配列、並びに所望により、タンパク質分泌を増強させる配列が挙げられる。このような制御配列の性質は、宿主生物によって異なる。例えば、原核生物では、このような制御配列は、一般的に、プロモータ、リボソーム結合部位、及び転写終結配列を含むが、真核生物では、典型的には、このような制御配列は、プロモータ及び転写終結配列を含む。用語「制御配列」は、その存在が発現及びプロセシングに必須である成分を含むことが意図されており、また、その存在が、例えば、リーダー配列及び融合パートナー配列に対して有利である追加の成分も含み得る。
【０１１６】
生理学的条件：本明細書で使用するとき、細胞又は生物が生存及び／又は繁殖する状態を指す、当該技術分野において理解されている意味を有する。いくつかの実施形態では、この用語は、生物又は細胞系に対して、自然界で発生し得る外部環境又は内部環境の条件を指す。いくつかの実施形態では、生理学的条件は、ヒト又は非ヒト動物の体内に存在する条件、特に手術部位及び／又は手術部位内に存在する条件である。生理的条件は、典型的には、例えば、２０〜４０℃の温度範囲、１の大気圧、６〜８のｐＨ、１〜２０ｍＭのグルコース濃度、大気中の酸素濃度、及び地上で直面する際の重力を含む。いくつかの実施形態では、実験室における条件は、生理学的条件で操作され、かつ／又は維持される。いくつかの実施形態では、生理学的条件は、生物中で直面する。
【０１１７】
ポリペプチド：本明細書で使用するとき、アミノ酸の任意のポリマー鎖を指す。いくつかの実施形態では、アミノ酸は、ペプチド結合又は修飾ペプチド結合によって互いに結合されている。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、天然に存在するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、天然に存在しないアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、合成的に設計され、かつ／又は生成されるという点で遺伝子操作されたアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、若しくはこれらの両方を含んでいてもよいか、又はこれらからなっていてもよい。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、天然アミノ酸のみ若しくは非天然アミノ酸のみを含んでいてもよいか、又はそれからなっていてもよい。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、Ｄ−アミノ酸、Ｌ−アミノ酸、又はこれらの両方を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、Ｄ−アミノ酸のみを含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、Ｌ−アミノ酸のみを含んでいてもよい。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、例えば、１つ以上のアミノ酸側鎖を修飾するか又はそれに付着される１つ以上のペンダント基又は他の修飾を、ポリペプチドのＮ末端に、ポリペプチドのＣ末端に、又はこれらの任意の組み合わせで含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、このようなペンダント基又は修飾は、アセチル化、アミド化、脂質化、メチル化、ＰＥＧ化など（それらの組み合わせを含む）からなる群から選択されてもよい。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、環状であってもよく、かつ／又は環状部分を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、環状ではなく、かつ／又は環状部分を全く含まない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、直線状である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ステープルポリペプチドであってもよいか、又はステープルポリペプチドを含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、用語「ポリペプチド」は、参照ポリペプチドの名称、活性、又は構造に付け加えられてもよく、このような場合、本明細書では、関連する活性又は構造を共有しているために同じクラス又はファミリーのポリペプチドのメンバーであると見なされ得るポリペプチドを指すために使用される。このようなクラスごとに、本明細書は、アミノ酸配列及び／又は機能が既知であるクラス内の例示的なポリペプチドを提供し、当業者もその例示的なポリペプチドを認識するであろう。いくつかの実施形態では、このような代表的なポリペプチドは、ポリペプチドクラスの参照ポリペプチドである。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、ポリペプチドクラス又はファミリーのメンバーは、そのクラスの参照ポリペプチドと、いくつかの実施形態では、クラス内の全てのポリペプチドと）、有意な配列相同性又は同一性を示し、共通の配列モチーフ（例えば、特徴的な配列要素）を共有し、かつ／又は（いくつかの実施態様では、同等のレベルで又は指定の範囲内で）共通の活性を共有している。例えば、いくつかの実施形態では、メンバーのポリペプチドは、少なくとも約３０〜４０％、かつ多くの場合、約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の参照ポリペプチドとの全体的な配列相同性又は同一性を示し、かつ／又は非常に高い、多くの場合９０％、又は更には９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％よりも高い、配列同一性を示す少なくとも１つの領域（すなわち、いくつかの実施形態では、特徴的な配列要素であってもよいか、又はその配列要素を含んでもよい保存領域）を含む。このような保存領域は、通常、少なくとも３〜４個、多くの場合、最大２０個以上のアミノ酸を包含し、いくつかの実施形態では、保存領域は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５個以上の連続するアミノ酸の少なくとも１つのストレッチを包含する。いくつかの実施形態では、有用なポリペプチドは、親ポリペプチドのフラグメントを含んでもよいか、又は親ポリペプチドのフラグメントからなっていてもよい。いくつかの実施形態では、有用なポリペプチドは、複数のフラグメントを含んでもよいか、又は複数のフラグメントからなっていてもよく、複数のフラグメントのそれぞれは、互いに対して、対象のポリペプチド中で見出される場合とは異なる空間配置で、同じ親ポリペプチド中に見出される（例えば、親に直接連結されたフラグメントは、対象のポリペプチド中では空間的に分離されている場合があり、逆もまた然りであり、かつ／又はフラグメントは、対象のポリペプチド中では、親における順序とは異なる順序で存在している場合がある）。そのため、対象のポリペプチドは、その親ポリペプチドの派生物である。
【０１２０】
予防する又は予防：本明細書で使用するとき、疾患、障害、及び／又は状態の発生に関連して使用される場合、疾患、障害、及び／若しくは状態を発現するリスクを低下させること、並びに／又は疾患、障害、若しくは状態の１つ以上の特徴若しくは症状の発症を遅延させることを指す。予防は、疾患、障害、又は状態の発症が所定の期間遅延された場合に、完全と見なされ得る。
【０１２１】
組み換え体：本明細書で使用するとき、組み換え手段によって設計、遺伝子操作、調製、発現、作製、又は単離されたポリペプチド（例えば、抗体又は抗体部分）を指すことが意図される。例えば、宿主細胞にトランスフェクトされた組み換え発現ベクターを用いて発現されたポリペプチド、組み換えコンビナトリアルヒトポリペプチドライブラリから単離されたポリペプチド（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  Ｈ．Ｒ．，１９９７，ＴＩＢ  Ｔｅｃｈ．１５：６２−７０、Ａｚｚａｚｙ  Ｈ．，ａｎｄ  Ｈｉｇｈｓｍｉｔｈ  Ｗ．Ｅ．，２００２，Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３５：４２５−４５、Ｇａｖｉｌｏｎｄｏ  Ｊ．Ｖ．，ａｎｄ  Ｌａｒｒｉｃｋ  Ｊ．Ｗ．，２００２，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ２９：１２８−４５、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  Ｈ．，ａｎｄ  Ｃｈａｍｅｓ  Ｐ．，２０００，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  ２１：３７１−８）、ヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離された抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２０：６２８７−９５、Ｋｅｌｌｅｒｍａｎｎ  Ｓ−Ａ．，ａｎｄ  Ｇｒｅｅｎ  Ｌ．Ｌ．，２００２，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１３：５９３−７、Ｌｉｔｔｌｅ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  ２１：３６４−７０、Ｍｕｒｐｈｙ，Ａ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１１１（１４）：５１５３−８を参照されたい）、又は選択された配列要素の相互スプライシングを伴う任意の他の手段によって調製、発現、作製、又は単離されたポリペプチドである。いくつかの実施形態では、このような選択された配列要素のうちの１つ以上は、自然界に存在する。いくつかの実施形態では、このような選択された配列要素のうちの１つ以上は、インシリコで設計される。いくつかの実施形態では、１つ以上のこのような選択された配列要素は、例えば、天然又は合成供給源からの、既知の配列要素の（例えば、インビボ又はインビトロの）突然変異誘発から生じる。例えば、いくつかの実施形態では、組み換え抗体は、対象の供給源生物（例えば、ヒト、マウスなど）の生殖系列中に存在する配列から構成されている。いくつかの実施形態では、組み換え抗体は、（例えば、トランスジェニック動物における、例えば、インビトロ又はインビボの）突然変異誘発から生じたアミノ酸配列を有しており、それによって、組み換え抗体のＶＨ領域及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、生殖系列のＶＨ配列及びＶＬ配列に由来し、かつそれに関連する一方で、その生殖系列抗体レパートリ内にインビボで天然に存在し得ない配列である。
【０１２２】
基準：本明細書で使用するとき、本明細書に記載されるようにそれに対して比較が行われる、標準、対照、又は他の適切な基準を記載する。例えば、いくつかの実施形態では、基準は、標準又は対照の薬剤、動物、個体、集団、試料、配列、一連の工程、条件のセット、又は値であり、それらに対して、対象の薬剤、動物、個体、集団、試料、配列、一連の工程、条件のセット、又は値の比較が行われる。いくつかの実施形態では、基準は、対象の試験又は決定と実質的に同時に試験され、かつ／又は決定される。いくつかの実施形態では、基準は、任意選択的に有形の培地中で実施される、履歴的基準である。典型的には、当業者には理解されるように、基準は、対象の評価に利用される条件と同等の条件下で決定されるか、又は特徴付けられる。
【０１２３】
特異的結合：本明細書で使用するとき、結合が生じる環境において可能なパートナーを識別する結合剤の能力を指す。他の潜在的な標的が存在するときに１つの特定の標的と相互作用する結合剤は、相互作用する標的に対して「特異的に結合する」と言われる。いくつかの実施形態では、特異的結合は、結合剤とそのパートナーとの会合の程度を検出又は決定することによって評価され、いくつかの実施形態では、特異的結合は、結合剤−パートナー複合体の解離の程度を検出又は決定することによって評価され、いくつかの実施形態では、特異的結合は、そのパートナーと他の実体との代替的相互作用と競合する結合剤の能力を検出又は決定することによって評価される。いくつかの実施形態では、特異的結合は、ある濃度の範囲にわたってそのような検出又は決定を行うことによって評価される。いくつかの実施形態では、特異的結合は、同種の標的と非同種の標的との間の結合親和性の差を決定することによって評価される。例えば、結合剤は、非同種の標的に対する結合親和性と比べて約３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍以上である、同種の標的に対する結合親和性を有していてもよい。
【０１２４】
特異性：当該技術分野において既知であるように、「特異性」は、結合パートナーを他の潜在的な結合パートナーと区別する、特定のリガンドの能力の尺度である。
【０１２５】
対象：本明細書で使用するとき、ヒトを含む任意の哺乳動物を意味する。本発明の特定の実施形態では、対象は、成人、若者、又は乳児である。いくつかの実施形態では、用語「個体」又は「患者」が使用され、「対象」と互換的であることが意図される。また、本発明により、子宮における医薬組成物の投与及び／又は治療の方法の実施が想定される。
【０１２６】
実質的に：本明細書で使用するとき、用語「実質的に」は、対象の特徴又は特性の全て又はほぼ全ての範囲又は程度を示す定性的な状態を指す。生物分野の当業者であれば、生物学的現象及び化学的現象は、完了にまで進行すること、及び／又は完全性にまで進展すること、又は完全な結果に達すること、若しくはそれを回避することが仮にあったとしても稀であることを理解するであろう。したがって、用語「実質的に」は、本明細書では、多くの生物学的現象及び化学的現象に固有の、完全性の潜在的な欠如を捕捉するために使用される。
【０１２７】
実質的な配列相同性：本明細書で使用するとき、文言「実質的な相同性」は、アミノ酸配列間又は核酸配列間の比較を指す。当業者には理解されるように、２つの配列は、対応する位置に相同な残基を含有する場合、「実質的に相同」であると一般的に見なされる。相同の残基は、同一の残基であってもよい。あるいは、相同の残基は、適切に類似した構造特性及び／又は機能特性を有する非同一の残基であってもよい。例えば、当業者に周知であるように、特定のアミノ酸は、典型的には、「疎水性」若しくは「親水性」のアミノ酸として分類され、かつ／又は「極性」若しくは「非極性」の側鎖を有するものとして分類される。１つのアミノ酸を同じ種類の別のアミノ酸で置換することは、多くの場合、「相同な」置換であると見なされ得る。典型的なアミノ酸の分類は、以下のとおり要約される。
【０１２８】
【表２】
2021528995.tif 000091
【０１２９】
【表３】
2021528995.tif 000092
【０１３０】
当該技術分野において周知であるように、アミノ酸配列又は核酸配列は、例えば、ヌクレオチド配列に対してはＢＬＡＳＴＮ、アミノ酸配列に対してはＢＬＡＳＴＰ、ギャップ化ＢＬＡＳＴ、及びＰＳＩ−ＢＬＡＳＴなどの市販のコンピュータプログラムにおいて利用可能なものを含む、様々なアルゴリズムのうちのいずれかを使用して比較することができる。このようなプログラムの例は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５（３）：４０３−４１０、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ２６６：４６０−４８０、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２、Ｂａｘｅｖａｎｉｓ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｗｉｌｅｙ，１９９８、及びＭｉｓｅｎｅｒ，ｅｔ  ａｌ，（ｅｄｓ．），Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１３２），Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，１９９９に記載されている。相同な配列を特定することに加えて、上記のプログラムは、典型的には、相同性の程度の指標を提供する。いくつかの実施形態では、２つの配列は、その対応する残基の少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％以上が、残基の関連するストレッチにわたって相同である場合に、実質的に相同であると見なされる。いくつかの実施形態では、関連するストレッチは、完全な配列である。いくつかの実施形態では、関連するストレッチは、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９５、少なくとも１００、少なくとも１２５、少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２２５、少なくとも２５０、少なくとも２７５、少なくとも３００、少なくとも３２５、少なくとも３５０、少なくとも３７５、少なくとも４００、少なくとも４２５、少なくとも４５０、少なくとも４７５、少なくとも５００個以上の残基である。
【０１３１】
表面プラズモン共鳴：本明細書で使用するとき、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅシステム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ  ａｎｄ  Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ）を使用することなどによって、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化を検出することにより、特異的結合の相互作用をリアルタイムで分析することを可能にする光学現象を指す。更なる説明については、Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｕ．ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ａｎｎ．Ｂｉｏｌ．Ｃｌｉｎ．５１：１９−２６、Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｕ．ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １１：６２０−６２７、Ｊｏｈｎｓｓｏｎ，Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．８：１２５−１３１、及びＪｏｈｎｎｓｏｎ，Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８：２６８−２７７により記載されている。
【０１３２】
治療薬：本明細書で使用するとき、一般に、生物に投与されたときに所望の薬理効果を引き出す任意の薬剤を指す。いくつかの実施形態では、薬剤は、適切な集団にわたって統計的に有意な効果を示す場合、治療薬であると見なされる。いくつかの実施形態では、適切な集団は、モデル生物の集団であってもよい。いくつかの実施形態では、適切な集団は、特定の年齢群、性別、遺伝的背景、既存の臨床状態などの様々な基準によって定義され得る。いくつかの実施形態では、治療薬は、疾患、障害、及び／又は状態の１つ以上の症状又は特徴の軽減、改善、緩和、阻害、予防、発症の遅延、重症度の低減、及び／又は発生率の低減に使用することができる物質である。いくつかの実施形態では、「治療薬」は、ヒトへの投与のために市販され得る前に政府機関によって承認されているか、又は承認される必要がある薬剤である。いくつかの実施形態では、「治療薬」は、ヒトへの投与のために医療処方が必要とされる薬剤である。
【０１３３】
治療的に有効な量：本明細書で使用するとき、そのために投与が実施される所望の効果をもたらす量を意味する。いくつかの実施形態では、この用語は、治療的投与レジメンに従って、疾患、障害、及び／又は状態に罹患しているか、又はそれらに対して感受性がある集団に投与した場合に、その疾患、障害、及び／又は状態を治療するのに十分な量を指す。いくつかの実施形態では、治療的に有効な量は、疾患、障害、及び／又は状態のうちの１つ以上の症状の発生率及び／又は重症度を低下させ、かつ／又はそれらの発症を遅延させるものである。当業者であれば、用語「治療的に有効な量」は、実際には、特定の個体における治療成功の達成が必須ではないことを理解するであろう。むしろ、治療的に有効な量は、そのような治療を必要とする患者に投与された場合に、有意な数の対象において特定の所望の薬理反応をもたらす量であってもよい。いくつかの実施形態では、治療的に有効な量への言及は、１つ以上の特定の組織（例えば、疾患、障害、又は状態によって影響を受ける組織）又は流体（例えば、血液、唾液、血清、汗、涙、尿など）において測定されたときの量への言及であり得る。当業者であれば、いくつかの実施形態では、治療的に有効な量の特定の薬剤又は治療が、単一用量で製剤化され、かつ／又は投与されてもよいことを理解するであろう。いくつかの実施形態では、治療的に有効な薬剤は、例えば、投与レジメンの一部として、複数用量で製剤化され、かつ／又は投与されてもよい。
【０１３４】
治療：本明細書で使用するとき、用語「治療」（また、「治療する」又は「治療すること」）は、その最も広い意味で、特定の疾患、障害、及び／又は状態のうちの１つ以上の症状、特徴、及び／又は原因の、部分的又は完全な、軽減、改善、緩和、阻害、発症の遅延、重症度の低減、及び／又は発生率の低減をもたらす物質（例えば、提供される組成物）の任意の投与を指す。いくつかの実施形態では、そのような治療は、関連する疾患、障害、及び／若しくは状態の兆候を示していない対象、並びに／又は疾患、障害、及び／若しくは状態の早期兆候のみを示している対象に実施されてもよい。代替的に又は追加的に、いくつかの実施形態では、治療は、関連する疾患、障害、及び／又は状態のうちの１つ以上の確立された兆候を示す対象に実施されてもよい。いくつかの実施形態では、治療は、関連する疾患、障害、及び／又は状態に罹患していると診断された対象の治療であってもよい。いくつかの実施形態では、治療は、関連する疾患、障害、及び／又は状態の発症リスクの増加と統計的に相関する、１つ以上の感受性因子を有することが知られている対象の治療であってもよい。
【０１３５】
変異体：本明細書で使用するとき、用語「変異体」は、参照実体と有意な構造的同一性を示すが、参照実体と比較した際、１つ以上の化学部分の存在又はレベルにおいて参照実体とは構造的に異なる、実体を指す。多くの実施形態では、変異体はまた、参照実体とは機能的に異なる。一般に、特定の実体が、参照実体の「変異体」であると適切に見なされるかどうかは、参照実体との構造的同一性の程度に基づく。当業者には理解されるように、任意の生物学的参照実体又は化学的参照実体は、特定の特徴的な構造要素を有する。変異体は、定義によれば、１つ以上のそのような特徴的な構造要素を共有する別個の化学物質である。いくつかではあるが例を挙げると、ポリペプチドは、直鎖若しくは三次元空間において互いに対して指定された位置を有し、かつ／又は特定の生物学的機能に寄与する、複数のアミノ酸で構成される特徴的な配列要素を有していてもよく、核酸は、直鎖若しくは三次元空間において互いに対して指定された位置を有する、複数のヌクレオチド残基で構成される特徴的な配列要素を有していてもよい。例えば、変異体ポリペプチドは、アミノ酸配列における１つ以上相違の結果、及び／又はポリペプチド骨格に共有結合した化学部分（例えば、炭水化物、脂質など）における１つ以上の相違の結果として、参照ポリペプチドと異なっていてもよい。いくつかの実施形態では、変異体ポリペプチドは、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、又は９９％である、参照ポリペプチドとの全体的な配列同一性を示す。代替的に又は追加的に、いくつかの実施形態では、変異体ポリペプチドは、参照ポリペプチドと、少なくとも１つの特徴的な配列要素を共有しない。
【０１３６】
いくつかの実施形態では、参照ポリペプチドは、１つ以上の生物活性を有する。いくつかの実施形態では、変異体ポリペプチドは、参照ポリペプチドの生物活性のうちの１つ以上を共有する。いくつかの実施形態では、変異体ポリペプチドは、参照ポリペプチドの生物活性のうちの１つ以上を欠いている。いくつかの実施形態では、変異体ポリペプチドは、参照ポリペプチドと比較して、１つ以上の生物活性のレベルが低下していることを示す。多くの実施形態では、対象のポリペプチドが、特定の位置での少数の配列改変を除いて親のアミノ酸配列と同一である場合、対象のポリペプチドは、親又は参照ポリペプチドの「変異体」であると見なされる。典型的には、親と比較して、変異体中の残基の２０％、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％未満が置換される。いくつかの実施形態では、変異体は、親と比較して、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１個の置換残基を有する。多くの場合、変異体は、非常に少数の（例えば、５、４、３、２、又は１未満の）数の置換された機能的残基（すなわち、特定の生物活性に関与する残基）を有する。更に、変異体は、典型的には、親と比較して、５、４、３、２、又は１個以下の挿入又は欠失を有し、多くの場合、挿入又は欠失を有さない。更に、任意の付加又は欠失は、典型的には、約２５、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、約１３、約１０、約９、約８、約７、約６個の残基よりも少なく、一般に、約５、約４、約３、又は約２個の残基よりも少ない。いくつかの実施形態では、親ポリペプチド又は参照ポリペプチドは、自然界に存在すものである。当業者には理解されるように、対象の特定のポリペプチドの複数の変異体は、特に対象のポリペプチドが感染性病原体ポリペプチドである場合、一般に、自然界に存在し得る。
【０１３７】
ベクター：本明細書で使用するとき、核酸分子であって、自身が連結されている別の核酸を輸送することができるものを指す。ベクターの１つの型は、「プラスミド」であり、追加のＤＮＡセグメントがライゲーションされ得る環状の二本鎖ＤＮＡループを指す。ベクターの別の型は、ウイルスベクターであり、追加のＤＮＡセグメントは、ウイルスゲノム内にライゲーションされ得る。特定のベクターは、自身が導入される宿主細胞において自律的に複製することができる（例えば、細菌起源の複製を有する細菌ベクター、及びエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入の際に宿主細胞のゲノムに組み込むことができ、それによって宿主ゲノムと共に複製される。更に、特定のベクターは、自身が機能的に連結される遺伝子の発現を指示することができる。このようなベクターは、本明細書では「発現ベクター」と称される。
【０１３８】
野生型：本明細書で使用するとき、用語「野生型」は、当該技術分野において理解されている意味を有し、「正常な」（突然変異の、変異の、疾患のある、改変された、などの対照語として）状態又は文脈において自然界に存在するような構造及び／又は活性を有する実体を指す。当業者であれば、野生型の遺伝子及びポリペプチドは、多くの場合、複数の異なる形態（例えば、アレル）で存在することを理解するであろう。
【図面の簡単な説明】
【０１３９】
【図１】完全長ＣＤ２２のみに結合する市販のマウス抗ヒトＣＤ２２抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社、カタログ番号３６３５０５）の代表的なＭＦＩを示す図である。完全長ＣＤ２２は、Ｊｕｒｋａｔ細胞（Ｂ）及びＲａｊｉ細胞（Ｄ）で発現される。
【図２】フローサイトメトリーアッセイにおいて、完全長ＣＤ２２（Ｊｕｒｋａｔ−ＣＤ２２−ｆｕｌｌ）又はＣＤ２２のドメイン５〜７（Ｊｕｒｋａｔ−ＣＤ２２（Ｄ５〜Ｄ７）−ＧＦＰ）を発現するヒトＣＤ２２＋Ｒａｊｉ細胞（Ｒａｊｉ）及びＪｕｒｋａｔ細胞のファージクローン１及び２の結合の代表的なＭＦＩを示す図である。ＣＤ２２−Ｊｕｒｋａｔ細胞は、陰性対照として使用した。
【図３】フローサイトメトリーアッセイにおいて、ＣＤ２２を自然に発現するＮＡＬＭ−６細胞のファージクローン１及び２の結合の代表的なＭＦＩを示す図である。
【図４Ａ】ＩＦＮ−γ放出アッセイによって測定した際に、抗ＣＤ２２  ＣＡＲ（クローン２）が、ＣＤ２２＋標的細胞に対して特異的かつ強力な殺傷活性を示したことを示す図である。
【図４Ｂ】ＩＦＮ−γ放出アッセイによって測定した際に、抗ＣＤ２２  ＣＡＲ（クローン２）が、ＣＤ２２＋標的細胞に対して特異的かつ強力な殺傷活性を示したことを示す図である。
【図４Ｃ】ＩＦＮ−γ放出アッセイによって測定した際に、抗ＣＤ２２  ＣＡＲ（クローン２）が、ＣＤ２２＋標的細胞に対して特異的かつ強力な殺傷活性を示したことを示す図である。
【図５Ａ】抗ＣＤ２２  ＣＡＲ（クローン２）が、Ｋ５６２＋ＣＤ２２標的細胞に対して特異的な殺傷を示し、Ｋ５６２細胞に対して殺傷を示さなかったことを示す図である。
【図５Ｂ】抗ＣＤ２２  ＣＡＲ（クローン２）が、Ｋ５６２＋ＣＤ２２標的細胞に対して特異的な殺傷を示し、Ｋ５６２細胞に対して殺傷を示さなかったことを示す図である。
【図６】フローサイトメトリーによって測定した際に、ｍ９７１が、抗ＣＤ２２  ＣＡＲ（クローン２）と競合しないことを示す図である。
【図７】構築物２及び４、並びに構築物の組み合わせ１、３、５、及び６のうちのいずれか１つを発現するｃａＴＣＲ  Ｔ細胞が、ＮＡＬＭ６細胞及びＲａｊｉ細胞の両方において高い殺傷効能を有していたことを示す図である。
【図８】構築物２及び４、並びに構築物の組み合わせ１、３、５、及び６のうちのいずれか１つを発現するｃａＴＣＲ  Ｔ細胞が、ＮＡＬＭ６及びＲａｊｉ細胞からの高いＩＦＮ−γ放出レベルを有していたことを示す図である。
【図９Ａ】構築物２及び４、並びに構築物の組み合わせ３、５、及び６のうちのいずれか１つを発現する抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞が、ＮＡＬＭ６細胞において、最大で少なくとも３週間、及び３回以上の標的係合の後に、高い殺傷効能を維持していたことを示す図である。図９Ａは、標的細胞数を示し、図９Ｂは、全細胞数を示している。
【図９Ｂ】構築物２及び４、並びに構築物の組み合わせ３、５、及び６のうちのいずれか１つを発現する抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞が、ＮＡＬＭ６細胞において、最大で少なくとも３週間、及び３回以上の標的係合の後に、高い殺傷効能を維持していたことを示す図である。図９Ａは、標的細胞数を示し、図９Ｂは、全細胞数を示している。
【図１０Ａ】構築物２及び４、並びに構築物の組み合わせ１、３、５、及び６のうちのいずれか１つを発現する抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞が、Ｒａｊｉ細胞において、最大で約５週間、及び合計５回の標的係合の後に、有意な殺傷効能を有していたことを示す図である。
【図１０Ｂ】構築物２及び４、並びに構築物の組み合わせ１、３、５、及び６のうちのいずれか１つを発現する抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞が、Ｒａｊｉ細胞において、最大で約５週間、及び合計５回の標的係合の後に、有意な殺傷効能を有していたことを示す図である。
【図１１】構築物２、１５〜２１、及び２２のうちのいずれか１つを発現するｃａＴＣＲ  Ｔ細胞が、ＮＡＬＭ６細胞、Ｒａｊｉ細胞、及びＫ５６２細胞において、高い殺傷効能を有していたことを示す図である。
【図１２】Ａ〜Ｆは、構築物２、２２、２４〜２７、及び２８のうちのいずれか１つを発現するｃａＴＣＲ  Ｔ細胞が、ＮＡＬＭ６細胞、Ｒａｊｉ細胞、及びＫ５６２細胞において、高い殺傷効能を有していたことを示す図である。
【図１３Ａ】構築物の組み合わせ１及び２３のうちのいずれか１つを発現する抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞が、ＮＡＬＭ６細胞において、高い殺傷効能を維持していたことを示す図である。
【図１３Ｂ】構築物の組み合わせ１及び２３のうちのいずれか１つを発現する抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞が、ＮＡＬＭ６細胞において、高い殺傷効能を維持していたことを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【０１４０】
本発明は、ＣＤ２２の細胞外領域に特異的に結合する能力を有する抗ＣＤ２２構築物の発見に関する。本発明はまた、Ｂ細胞悪性疾患（例えば、ＣＤ２２＋Ｂ細胞悪性疾患）を治療するためのそのような構築物の使用も提供する。
Ｉ．ＣＤ２２
【０１４１】
表面抗原分類２２又はＣＤ２２は、Ｂ細胞の分化の成熟段階の間にのみ発現される１３５−ｋＤａシアル酸結合細胞表面受容体である（Ｄｏｒｋｅｎ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３６：４４７０，１９８６）。ヒトにおけるＣＤ２２の主要な形態は、ＣＤ２２βであり、７つのドメインを含有している（Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１３７，１９９１）。変異型であるＣＤ２２αは、ドメイン３及び４を欠いている（Ｓｔａｍｅｎｋｏｖｉｃ  ａｎｄ  Ｓｅｅｄ，Ｎａｔｕｒｅ  ３４５：７４，１９９０）。ヒトＣＤ２２へのリガンド結合は、ドメイン１及び２（エピトープ１及び２とも呼ばれる）と関係していることが示されている（Ｅｎｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８１：１５８１，１９９５）。完全長ヒトＣＤ２２のアミノ酸配列を、以下の配列番号２０４に示す。配列番号２０５は、抗ＣＤ２２クローン１及びクローン２が結合する、ＣＤ２２のドメイン５〜７を含有する細胞外領域を更に示している（実施例１を参照されたい）。抗ＣＤ２２クローン１は、配列番号２０６〜２０８の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１〜３と、配列番号２０９〜２１１の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１〜３と、を含む。抗ＣＤ２２クローン２は、配列番号２１４〜２１６の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１〜３と、配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１〜３と、を含む。
配列番号２０４（完全長ヒトＣＤ２２、下線部：実施例１に記載のファージディスプレイにおいて使用されるＣＤ２２の部分、太字下線部：ＣＤ２２の膜貫通ドメイン）：
【０１４２】
【表４】
2021528995.tif 000093
配列番号２０５（ＣＤ２２のドメイン５〜７を含有する細胞外領域、配列番号２０４のアミノ酸４１４〜６８７に対応する）：
ＤＶＱＹＰＰＫＫＶＴＴＶＩＱＮＰＭＰＩＲＥＧＤＴＶＴＬＳＣＮＹＮＳＳＮＰＳＶＴＲＹＥＷＫＰＨＧＡＷＥＥＰＳＬＧＶＬＫＩＱＮＶＧＷＤＮＴＴＩＡＣＡＡＣＮＳＷＣＳＷＡＳＰＶＡＬＮＶＱＹＡＰＲＤＶＲＶＲＫＩＫＰＬＳＥＩＨＳＧＮＳＶＳＬＱＣＤＦＳＳＳＨＰＫＥＶＱＦＦＷＥＫＮＧＲＬＬＧＫＥＳＱＬＮＦＤＳＩＳＰＥＤＡＧＳＹＳＣＷＶＮＮＳＩＧＱＴＡＳＫＡＷＴＬＥＶＬＹＡＰＲＲＬＲＶＳＭＳＰＧＤＱＶＭＥＧＫＳＡＴＬＴＣＥＳＤＡＮＰＰＶＳＨＹＴＷＦＤＷＮＮＱＳＬＰＹＨＳＱＫＬＲＬＥＰＶＫＶＱＨＳＧＡＹＷＣＱＧＴＮＳＶＧＫＧＲＳＰＬＳＴＬＴＶＹＹＳＰＥＴＩＧＲＲ
【０１４３】
ＣＤ２２は、様々な癌、例えば、Ｂ細胞関連癌に関与してきた。Ｂ細胞関連癌としては、悪性リンパ腫（非ホジキンリンパ腫）、多発性骨髄腫、及び慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ、Ｂ細胞白血病（ＣＤ５＋Ｂリンパ球））が挙げられるが、これらに限定されない。ＣＤ２２発現は、限界希釈試験により確立されたヒト急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）−マウス異種移植片において再現され、ＣＤ２２が白血病開始細胞で発現され得る可能性を引き起こしている（Ｍｏｒｉｓｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２４：１８５９，２０１０）。更に、ＣＤ２２発現は、４５人の患者の連続研究（３９人が抗ＣＤ２２指向療法で治療された）において維持されることが見出され、これは、ＣＤ２２−Ｂ細胞前駆体急性リンパ芽球性白血病（ＢＣＰ−ＡＬＬ）の発症が珍しいことを示唆している（Ｍｏｒｉｓｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２４：１８５９，２０１０）。ＢＣＰ−ＡＬＬにおけるＣＤ２２の標的化の適合性について試験した（Ｈａｓｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １２１：１１６５，２０１３）。ＢＣＰ−ＡＬＬを有する１１１人の患者からのリンパ芽球をＣＤ２２発現についてアッセイし、全員がＣＤ２２陽性であり、平均ＣＤ２２発現レベルが３５００部位／細胞であることが見出された。
【０１４４】
更に、ＣＤ２２は、非ホジキンリンパ腫集団の９０％超で高度に発現される（Ｃｅｓａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １００：３５０ａ，２００２）。Ｂリンパ球から主に生じる癌の異種群であるＮＨＬは、全ての新たに診断された癌のおよそ４％を示す（Ｊｅｍａｌ  ｅｔ  ａｌ．，ＣＡ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ  Ｃｌｉｎ，５２：２３，２００２）。攻撃型ＮＨＬは、成人ＮＨＬのおよそ３０〜４０％を占めており（Ｈａｒｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｅｍａｔｏｌ  Ｊ．１：５３，２００１）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、及び未分化大細胞型リンパ腫を含む。最前線の併合化学療法は、攻撃型ＮＨＬを有する患者の半数未満のみしか治療することができず、多くの患者は、最終的にその疾患に倒れている（Ｆｉｓｈｅｒ，Ｏｎｃｏｌ．２７（ｓｕｐｐｌ  １２）：２，２０００）。アポトーシスを予防することによってＣＤ２２発現がＢ細胞が腫瘍化することを可能にし得る証拠もまた存在する（Ｏｔｉｐｏｂｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄ）３８４：６３４，１９９６）。ＣＤ２２は、Ｂ細胞活性化複合体の成分として（Ｓａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｍｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０：２８７，１９９８）、かつ接着分子として（Ｅｎｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：４７１９，１９９３）。その天然リガンドとの結合後、ＣＤ２２は、急速に内部に取り入れられ、初代Ｂ細胞中に共刺激シグナルを、新生物のＢ細胞にアポトーシス促進性シグナルを、提供する（Ｓａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ５：５５１，１９９６）。
ＩＩ．抗ＣＤ２２構築物及び構築物の組み合わせ
【０１４５】
一態様では、本発明は、表面抗原分類２２（ＣＤ２２）に特異的に結合する（すなわち、配列番号２０５の配列又はその一部に結合する）抗体部分を含む、抗ＣＤ２２構築物を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、単離された抗ＣＤ２２構築物である。抗ＣＤ２２構築物の特異性は、ＣＤ２２に特異的に結合する（すなわち、配列番号２０５の配列又はその一部に結合する）、完全長抗体又はその抗原結合フラグメントなどの、抗ＣＤ２２抗体部分に由来する。企図される抗ＣＤ２２構築物には、例えば、完全長抗ＣＤ２２抗体、（二重特異性などの）多重特異性抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ２２キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、抗ＣＤ２２キメラ抗体−Ｔ細胞受容体（ｃａＴＣＲ）、抗ＣＤ２２キメラ共刺激受容体（ＣＳＲ）、及び抗ＣＤ２２免疫コンジュゲートが含まれる。本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物は、完全長抗ＣＤ２２抗体又は（二重特異性などの）多重特異性抗ＣＤ２２抗体である抗体部分を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物は、完全長抗ＣＤ２２抗体又は（二重特異性などの）多重特異性抗ＣＤ２２抗体である抗体部分であってもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物は、抗ＣＤ２２キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又は抗ＣＤ２２免疫コンジュゲートであってもよい。
【０１４６】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、多重特異性（例えば、二重特異性）であり得る。多重特異性抗ＣＤ２２構築物は、１つより多い標的に対して抗体部分を有する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＣＤ２２構築物は、ＣＤ２２に対して１つの抗体部分と、１つ以上の非ＣＤ２２抗原（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、Ｂ細胞悪性腫瘍で発現される非ＣＤ２２抗原）に対して１つ以上の追加の抗体部分を有する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＣＤ２２構築物は、二重特異性、三重特異性、四重特異性、又は五重特異性であり得る。いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＣＤ２２構築物は、ｃａＴＣＲ、ＣＳＲ、ＣＡＲ、完全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体、タンデムｓｃＦｖ、ダイアボディ（Ｄｂ）、一本鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、二重親和性再標的化（ＤＡＲＴ）抗体、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）抗体、ノブ・イントゥ・ホール（ＫｉＨ）抗体、ドックアンドロック（ＤＮＬ）抗体、化学的に架橋された抗体、ヘテロマルチマー抗体、又はヘテロ結合抗体であり得る。
【０１４７】
本発明は、抗ＣＤ２２構築物と、ＣＤ２２関連疾患を治療するためにこのような抗体を使用する方法と、を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物は、配列番号２０５の配列中のエピトープを認識し、それに結合する。抗ＣＤ２２構築物は、配列番号２０５の配列中の、少なくとも７個のアミノ酸（例えば、少なくとも８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、又は４０個のアミノ酸）を含む、エピトープに結合していてもよい。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、配列番号２の配列中の、少なくとも７個の連続するアミノ酸（例えば、少なくとも８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、又は４０個のアミノ酸）を含む、エピトープに結合していてもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物は、配列番号２０５の配列に結合する。本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物は、完全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体である抗体部分を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物は、完全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体であってもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物は、ｓｃＦｖ抗体であってもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、又はそのフラグメントからなる群から選択される抗体クラス（すなわち、アイソタイプ）のメンバーである抗体部分を含んでいてもよい。
【０１４８】
抗ＣＤ２２構築物は、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体部分を含んでいてもよく、抗体部分は、本明細書に記載されるような１つ以上のＣＤＲ、重鎖可変領域、及び／又は軽鎖可変領域を含む。一実施形態では、ＣＤ２２に特異的に結合する（すなわち、配列番号２０５の配列又はその一部に結合する）抗ＣＤ２２構築物は、抗体部分を含む。抗体部分は、（１）軽鎖相補性決定領域（ＬＣ−ＣＤＲ）１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、（２）重鎖相補性決定領域（ＨＣ−ＣＤＲ）１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、を含む。抗体部分は、ＳＳＮＩＧＮＮＹ（配列番号２０６）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＥＮＮ（配列番号２０７）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２、ＧＴＷＤＳＳＬＳＡＧＡＶ（配列番号２０８）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３、ＧＦＴＦＳＮＹＡ（配列番号２０９）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＩＳＧＳＧＧＳＴ（配列番号２１０）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２、及びＡＲＰＹＹＤＤ（配列番号２１１）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、配列番号２０６〜２１１の配列を含む。
【０１４９】
いくつかの実施形態では、配列番号２０６の配列のＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号２０７の配列のＬＣ−ＣＤＲ２、及び配列番号２０８の配列のＬＣ−ＣＤＲ３を有する本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物の抗体部分は、
ＱＳＶＶＴＱＰＰＳＶＳＡＡＰＧＱＫＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＹＶＳＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＥＮＮＫＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＴＬＧＩＴＧＬＱＴＧＤＥＡＤＹＹＣＧＴＷＤＳＳＬＳＡＧＡＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ（配列番号２１２）の配列に対して少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する配列を有する軽鎖可変領域を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域（例えば、配列番号２１２）は、更にヒト化されていてもよい。例えば、軽鎖可変領域は、ヒト抗体配列からヒト化されるか、又はそれに由来する、非ヒトＣＤＲ、並びにフレームワーク領域及び／又は定常領域を含んでいてもよい。特定の実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号２１２の配列を含む。いくつかの実施形態では、それぞれ配列番号２０６〜２０８の配列のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を有する抗ＣＤ２２構築物の軽鎖は、λアイソタイプの軽鎖である。
【０１５０】
いくつかの実施形態では、配列番号２０９の配列のＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号２１０の配列のＨＣ−ＣＤＲ２、及び配列番号２１１の配列のＨＣ−ＣＤＲ３を有する本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物の抗体部分は、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＰＹＹＤＤＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２１３）の配列に対して少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する配列を有する重鎖可変領域を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域（例えば、配列番号２１３）は、更にヒト化されていてもよい。例えば、重鎖可変領域は、ヒト抗体配列からヒト化されるか、又はそれに由来する、非ヒトＣＤＲ、並びにフレームワーク領域及び／又は定常領域を含んでいてもよい。特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号２１３の配列を含む。
【０１５１】
別の実施形態では、ＣＤ２２に特異的に結合する（すなわち、配列番号２０５の配列又はその一部に結合する）抗ＣＤ２２構築物は、抗体部分を含む。抗体部分は、（１）軽鎖相補性決定領域（ＬＣ−ＣＤＲ）１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、（２）重鎖相補性決定領域（ＨＣ−ＣＤＲ）１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、を含む。抗体部分は、ＨＤＩＲＮＹ（配列番号２１４）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＡＡＳ（配列番号２１５）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２、ＱＱＹＤＧＬＰＬＴ（配列番号２１６）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３、ＧＦＴＦＳＮＹＡ（配列番号２０９）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＩＳＧＳＧＧＳＴ（配列番号２１０）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２、及びＡＲＹＧＳＡＡＷＭＤＳ（配列番号２１７）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、配列番号２０９、２１０、２１４〜２１７の配列を含む。
【０１５２】
いくつかの実施形態では、配列番号２１４の配列のＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号２１５の配列のＬＣ−ＣＤＲ２、及び配列番号２１６の配列のＬＣ−ＣＤＲ３を有する本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物の抗体部分は、
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＴＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＨＤＩＲＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＮＬＬＩＹＡＡＳＮＬＱＴＧＶＰＳＲＦＳＧＲＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＹＤＧＬＰＬＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫＲ（配列番号２１８）の配列に対して少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する配列を有する軽鎖可変領域を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域（例えば、配列番号２１８）は、更にヒト化されていてもよい。例えば、軽鎖可変領域は、ヒト抗体配列からヒト化されるか、又はそれに由来する、非ヒトＣＤＲ、並びにフレームワーク領域及び／又は定常領域を含んでいてもよい。特定の実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号２１８の配列を含む。いくつかの実施形態では、それぞれ配列番号２１４〜２１６の配列のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を有する抗ＣＤ２２構築物の軽鎖は、λアイソタイプの軽鎖である。
【０１５３】
いくつかの実施形態では、配列番号２０９の配列のＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号２１０の配列のＨＣ−ＣＤＲ２、及び配列番号２１７の配列のＨＣ−ＣＤＲ３を有する本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物の抗体部分は、
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＴＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＹＧＳＡＡＷＭＤＳＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２１９）の配列に対して少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する配列を有する重鎖可変領域を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域（例えば、配列番号２１９）は、更にヒト化されていてもよい。例えば、重鎖可変領域は、ヒト抗体配列からヒト化されるか、又はそれに由来する、非ヒトＣＤＲ、並びにフレームワーク領域及び／又は定常領域を含んでいてもよい。特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号２１９の配列を含む。
【０１５４】
本発明はまた、結合について、配列番号２０６〜２０８の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３、並びに配列番号２０９〜２１１の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を有する抗体部分と競合する抗体部分を含む、抗ＣＤ２２構築物を含む。本発明はまた、結合について、配列番号２１２の配列を有する軽鎖可変領域と配列番号２１３の配列を有する重鎖可変領域とを有する抗体部分と競合する抗体部分を含む、抗ＣＤ２２構築物を含む。当業者であれば、そのような競合する抗体部分を特定するための一般的な知識、スキル、及び方法を有している。
【０１５５】
本発明はまた、結合について、配列番号２１４〜２１６の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３、並びに配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を有する抗体部分と競合する抗体部分を含む、抗ＣＤ２２構築物を含む。本発明はまた、結合について、配列番号２１８の配列を有する軽鎖可変領域と配列番号２１９の配列を有する重鎖可変領域とを有する抗体部分と競合する抗体部分を含む、抗ＣＤ２２構築物を含む。当業者であれば、そのような競合する抗体部分を特定するための一般的な知識、スキル、及び方法を有している。
一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）抗体
【０１５６】
本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物は、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体である抗体部分を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物は、ｓｃＦｖ抗体であってもよい。ｓｃＦｖ抗体は、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含んでいてもよく、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、組み換え方法を用いて合成リンカーによって結合されて、一本鎖のポリペプチド鎖を作製してもよい。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、重鎖可変領域がリンカーを介して軽鎖可変領域のＣ末端に結合されている構造「（Ｎ末端）軽鎖可変領域−リンカー−重鎖可変領域（Ｃ末端）」を有していてもよい。他の実施形態では、ｓｃＦｖは、軽鎖可変領域がリンカーを介して重鎖可変領域のＣ末端に結合されている構造「（Ｎ末端）重鎖可変領域−リンカー−軽鎖可変領域（Ｃ末端）」を有していてもよい。リンカーは、２〜２００個（例えば、２、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、又は２００個）のアミノ酸を含むポリペプチドであってもよい。好適なリンカーは、グリシン及びセリンなどの可撓性アミノ酸残基を含有していてもよい。特定の実施形態では、リンカーは、ＧＳ、ＧＧＳ、ＧＧＧＧＳ（配列番号２２０）、ＧＧＳＧ（配列番号２２１）、又はＳＧＧＧ（配列番号２２２）のモチーフ、例えば、複数のモチーフ又は反復モチーフ、を含有していてもよい。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列ＧＳＧＳ（配列番号２２３）、ＧＳＧＳＧＳ（配列番号２２４）、ＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号２２５）、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号２２６）、ＧＧＳＧＧＳ（配列番号２２７）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号２２８）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号２２９）。ＧＧＳＧ（配列番号２３０）、ＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号２３１）、又はＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号２３２）を有していてもよい。他の実施形態では、リンカーはまた、グリシン及びセリン以外のアミノ酸、例えば、ＳＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＥＭＡ（配列番号２３３）を含有していてもよい。
精製タグ
【０１５７】
いくつかの実施形態では、精製タグは、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物（例えば、抗ＣＤ２２  ｓｃＦｖ）に結合されていてもよい。精製タグとは、ポリペプチドの精製、単離、又は特定に使用できる任意の長さのペプチドを指す。精製タグは、ポリペプチドに結合されて（例えば、ポリペプチドのＮ末端又はＣ末端に結合されて）、ポリペプチドの精製及び／又はポリペプチドの、例えば、細胞溶解混合物からの単離を補助してもよい。いくつかの実施形態では、精製タグは、精製タグに対して特異的親和性を有する別の部分に結合する。いくつかの実施形態では、精製タグに特異的に結合するこのような部分は、マトリックス、樹脂、又はアガロースビーズなどの固体支持体に付着される。抗ＣＤ２２構築物（例えば、抗ＣＤ２２  ｓｃＦｖ）に結合され得る精製タグの例としては、ヘキサヒスチジンペプチド、赤血球凝集素（hemagglutinin、ＨＡ）ペプチド、ＦＬＡＧペプチド、及びｍｙｃペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、構築物、例えば、ヘキサヒスチジンペプチド及びＨＡペプチドに２つ以上の精製タグが結合されていてもよい。ヘキサヒスチジンペプチド（ＨＨＨＨＨＨ（配列番号２３４））は、マイクロモル濃度親和性を有するニッケル官能化アガロース親和性カラムに結合する。いくつかの実施形態では、ＨＡペプチドは、配列ＹＰＹＤＶＰＤＹＡ（配列番号２３５）又はＹＰＹＤＶＰＤＹＡＳ（配列番号２３６）を含む。いくつかの実施形態では、ＨＡペプチドは、タンデムシリーズにおいて、配列ＹＰＹＤＶＰＤＹＡ（配列番号２３５）又はＹＰＹＤＶＰＤＹＡＳ（配列番号２３６）の整数倍、例えば、３ｘＹＰＹＤＶＰＤＹＡ又は３ｘＹＰＹＤＶＰＤＹＡＳを含む。いくつかの実施形態では、ＦＬＡＧペプチドは、配列ＤＹＫＤＤＤＤＫ（配列番号２３７）を含む。いくつかの実施形態では、ＦＬＡＧペプチドは、タンデムシリーズにおいて、配列ＤＹＫＤＤＤＤＫ（配列番号２３７）の整数倍、例えば、３ｘＤＹＫＤＤＤＤＫを含む。いくつかの実施形態では、ｍｙｃペプチドは、配列ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ（配列番号２３８）を含む。いくつかの実施形態では、ｍｙｃペプチドは、タンデムシリーズにおいて、配列ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬの整数倍、例えば、３ｘＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬを含む。
抗ＣＤ２２  ｓｃＦｖ抗体
【０１５８】
いくつかの実施形態では、それぞれ配列番号２０６〜２１１の配列のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、ＬＣ−ＣＤＲ３、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を有する抗ＣＤ２２構築物は、ｓｃＦｖ抗体であってもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２１３の配列に対して少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する重鎖可変領域は、リンカーを介して、配列番号２１２の配列に対して少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する軽鎖可変領域のＮ末端又はＣ末端に結合されていてもよい。特定の実施形態では、抗ＣＤ２２  ｓｃＦｖ抗体は、以下に示す配列番号２３９の配列を有する。
配列番号２３９（抗ＣＤ２２  ｓｃＦｖ抗体、平文部（太字又は下線なし）：軽鎖可変領域及び重鎖可変領域、太字部：リンカー、下線部：精製タグ（ヘキサヒスチジンタグ及びＨＡタグ）
【０１５９】
【表５】
2021528995.tif 000094
【０１６０】
いくつかの実施形態では、それぞれ配列番号２１４〜２１６、２０９、２１０、及び２１７の配列のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、ＬＣ−ＣＤＲ３、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を有する抗ＣＤ２２構築物は、ｓｃＦｖ抗体であってもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２１９の配列に対して少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する重鎖可変領域は、リンカーを介して、配列番号２１８の配列に対して少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する軽鎖可変領域のＮ末端又はＣ末端に結合されていてもよい。特定の実施形態では、抗ＣＤ２２  ｓｃＦｖ抗体は、以下に示す配列番号２４０の配列を有する。
配列番号２４０（抗ＣＤ２２  ｓｃＦｖ抗体、平文部（太字又は下線なし）：軽鎖可変領域及び重鎖可変領域、太字部：リンカー、下線部：精製タグ（ヘキサヒスチジンタグ及びＨＡタグ）
【０１６１】
【表６】
2021528995.tif 000095
多重特異性抗体
【０１６２】
本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物は、多重特異性抗体である抗体部分を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物は、多重特異性抗体であってもよい。多重特異性抗体は、抗ＣＤ２２結合部分及び第２の結合部分（第２の抗原結合部分など）を含んでいてもよい。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる抗原又はエピトープに対して結合特異性を有する抗体である（例えば、二重特異性抗体は、２つの抗原又はエピトープに対して結合特異性を有する）。２つより多い特異性を有する多重特異性抗体もまた想定される。例えば、三重特異性抗体を調製することができる（例えば、Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）を参照されたい）。当業者であれば、本明細書に記載の個々の多重特異性抗体の適切な特徴を選択して、互いに組み合わせて、本発明の多重特異性抗体を形成することができるであろうことを理解されたい。
【０１６３】
したがって、例えば、いくつかの実施形態では、ａ）ＣＤ２２の細胞外領域に特異的に結合する（すなわち、配列番号２０５の配列又はその一部に結合する）抗ＣＤ２２結合部分と、ｂ）第２の結合部分（抗原結合部分など）と、を含む、多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＣＤ２２抗体が提供される。いくつかの実施形態では、第２の結合部分は、異なる抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２の結合部分は、細胞傷害性細胞などの細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２の結合部分は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、好中球、単球、マクロファージ、又は樹状細胞などのリンパ球の表面上の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２の結合部分は、細胞傷害性Ｔ細胞（細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）又はＴキラー細胞としても知られている）などのエフェクタＴ細胞に特異的に結合する。
【０１６４】
いくつかの実施形態では、第２の結合部分は、腫瘍抗原に特異的に結合する。腫瘍抗原の例としては、αフェトプロテイン（alpha fetoprotein、ＡＦＰ）、ＣＡ１５−３、ＣＡ２７−２９、ＣＡ１９−９、ＣＡ−１２５、カルレチニン、癌胎児性抗原、ＣＤ３４、ＣＤ９９、ＣＤ１１７、クロモグラニン、サイトケラチン、デスミン、上皮膜タンパク質（epithelial membrane protein、ＥＭＡ）、第ＶＩＩＩ因子、ＣＤ３１  ＦＬ１、グリア線維酸性タンパク質（glial fibrillary acidic protein、ＧＦＡＰ）、グロス嚢胞性疾患流体タンパク質（ＧＣＤＦＰ−１５）、ＨＭＢ−４５、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、インヒビン、ケラチン、ＣＤ４５、リンパ球マーカー、ＭＡＲＴ−１（Ｍｅｌａｎ−Ａ）、Ｍｙｏ  Ｄ１、筋肉特異的アクチン（muscle-specific actin、ＭＳＡ）、神経フィラメント、神経特異的エノラーゼ（neuron-specific enolase、ＮＳＥ）、胎盤性アルカリホスファターゼ（placental alkaline phosphatase、ＰＬＡＰ）、前立腺特異的抗原、Ｓ１００タンパク質、平滑筋アクチン（smooth muscle actin、ＳＭＡ）、シナプトフィジン、チログロブリン、甲状腺転写因子−１、腫瘍Ｍ２−ＰＫ、及びビメンチンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６５】
いくつかの実施形態では、二重特異性抗体における第２の抗原結合部分は、ＣＤ３に結合する。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合部分は、ＣＤ３εに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合部分は、ＣＤ３εのアゴニストエピトープに特異的に結合する。本明細書で使用するとき、用語「アゴニストエピトープ」は、（ａ）多重特異性抗体の結合時に、任意選択的に同一細胞上のいくつかの多重特異性抗体の結合時に、多重特異性抗体がＴ細胞受容体（ＴＣＲ）シグナル伝達を活性化し、Ｔ細胞活性を誘発することを可能にするエピトープ、及び／又は（ｂ）ＣＤ３のイプシロン鎖のアミノ酸残基のみからなり、Ｔ細胞上でその自然な文脈で存在する（すなわち、ＴＣＲ、ＣＤ３γ鎖などによって囲まれている）とき、多重特異性抗体による結合にアクセス可能である、エピトープ、及び／又は（ｃ）多重特異性抗体の結合時に、ＣＤ３γに対するＣＤ３εの空間位置の安定化をもたらさないエピトープを意味する。
【０１６６】
いくつかの実施形態では、第２の抗原結合部分は、例えば、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、ＣＤ１６ａ、ＣＤ５６、ＣＤ６８、ＧＤＳ２Ｄ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、ＣＤ１６ａ、ＣＤ５６、ＣＤ６８、ＧＤＳ２Ｄ、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＣＤ４０Ｌ、及びＨＶＥＭを含む、エフェクタ細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。他の実施形態では、第２の抗原結合部分は、Ｃ１ｑなどの補体系の成分に結合する。Ｃ１ｑは、血清補体系を活性化するＣ１酵素複合体のサブユニットである。他の実施形態では、第２の抗原結合部分は、Ｆｃ受容体に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合部分は、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）に特異的に結合する。ＦｃγＲは、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の表面上に存在するＦｃγＲＩＩＩ、又はマクロファージ、単球、好中球、及び／若しくは樹状細胞の表面上に存在するＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢＩ、ＦｃγＲＩＩＢ２、及びＦｃγＲＩＩＩＢのうちの１つであってもよい。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合部分は、Ｆｃ領域又はその機能的フラグメントである。本文脈で使用するとき、「機能的フラグメント」は、ＦｃγＲベアリングエフェクタ細胞、特に、マクロファージ、単球、好中球、及び／又は樹状細胞が、細胞傷害性溶解又は貪食作用によって標的細胞を殺傷するのを可能にするために、十分な特異性及び親和性でＦｃＲ、特に、ＦｃγＲに依然として結合することができる、抗体Ｆｃ領域のフラグメントを指す。機能的Ｆｃフラグメントは、元の完全長Ｆｃ部分の、活性化ＦｃγＲＩなどのＦｃＲへの結合を競合的に阻害することができる。いくつかの実施形態では、機能的Ｆｃフラグメントは、活性化ＦｃγＲに対して、その親和性の少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は９５％を保持する。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域又はその機能的フラグメントは、増強されたＦｃ領域又はその機能的フラグメントである。本明細書で使用するとき、用語「増強されたＦｃ領域」は、Ｆｃ受容体媒介エフェクタ機能、特に、抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、及び抗体介在性貪食を増強させるように修飾されたＦｃ領域を指す。これは、当該技術分野において既知のように、例えば、活性化受容体（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上で発現されるＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６Ａ））に対する親和性を増加させ、かつ／又は阻害受容体（例えば、ＦｃγＲＩＩＢ１／Ｂ２（ＣＤ３２Ｂ））に対する結合を低減させるようにＦｃ領域を改変することによって、達成することができる。
【０１６７】
いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＣＤ２２抗体は、ＣＤ２２提示標的細胞の殺傷を可能にし、かつ／又はＣＴＬを効果的に再指向してＣＤ２２提示標的細胞を溶解することができる。いくつかの実施形態では、本発明の多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＣＤ２２抗体は、１０〜５００ｎｇ／ｍＬの範囲のインビトロＥＣ５０を示し、約１：１〜約５０：１（例えば、約１：１〜約１５：１、又は約２：１〜約１０：１）のＣＴＬと標的細胞との比で、ＣＴＬ中の標的細胞の約５０％の再指向された溶解を誘発することができる。
【０１６８】
いくつかの実施形態では、多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＣＤ２２抗体は、標的細胞が溶解されるように、刺激ＣＴＬ又は非刺激ＣＴＬと標的細胞とを架橋することができる。これは、多重特異性抗ＣＤ２２抗体が所望の活性を発揮するために、標的特異的Ｔ細胞クローンの発生又は樹状細胞による共通抗原の提示は必要とされないという利点を提供する。いくつかの実施形態では、本発明の多重特異性抗ＣＤ２２抗体は、他の活性化シグナルの非存在下で標的細胞を溶解するようにＣＴＬを再指向することができる。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合部分は、ＣＤ３に特異的に結合（例えば、ＣＤ３εに特異的に結合）し、ＣＤ２８及び／又はＩＬ−２によるシグナル伝達は、標的細胞を溶解するようにＣＴＬを再指向するために必要ではない。
【０１６９】
２つの抗原（例えば、２つの異なる細胞上の抗原）に同時に結合する多重特異性抗ＣＤ２２抗体の選択を測定するための方法は、当業者の通常の能力の範囲内である。例えば、第２の結合部分がＣＤ３に特異的に結合するとき、多重特異性抗ＣＤ２２抗体は、ＣＤ３＋／ＣＤ２２−細胞とＣＤ３−／ＣＤ２２＋細胞との混合物と接触してもよい。次いで、多重特異性抗ＣＤ２２抗体陽性単一細胞の数、及び多重特異性抗ＣＤ２２抗体によって架橋された細胞の数を、当該技術分野において既知の顕微鏡検査法又は蛍光標識細胞分取（fluorescence-activated cell sorting、ＦＡＣＳ）によって評価してもよい。
【０１７０】
多重特異性抗ＣＤ２２抗体は、ａ）ｉ）配列番号２０６〜２０８の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域、及びｉｉ）配列番号２０９〜２１１の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含む抗ＣＤ２２結合部分と、ｂ）第２の抗原結合部分と、を含んでいてもよい。別の実施形態では、多重特異性抗ＣＤ２２抗体は、ａ）ｉ）配列番号２１４〜２１６の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域、及びｉｉ）配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含む抗ＣＤ２２結合部分と、ｂ）第２の抗原結合部分と、を含んでいてもよい。
【０１７１】
いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＣＤ２２抗体は、例えば、ダイアボディ（Ｄｂ）、一本鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、タンデムｓｃＤｂ（Ｔａｎｄａｂ）、線状二量体ｓｃＤｂ（ＬＤ−ｓｃＤｂ）、環状二量体ｓｃＤｂ（ＣＤ−ｓｃＤｂ）、ジダイアボディ、タンデムｓｃＦｖ、タンデムジｓｃＦｖ（例えば、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャ）、タンデムトリｓｃＦｖ、トリ（ア）ボディ、二重特異性Ｆａｂ２、ジミニ抗体、テトラボディ、ｓｃＦｖ−Ｆｃ−ｓｃＦｖ融合体、二重親和性再標的化（ＤＡＲＴ）抗体、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）抗体、ＩｇＧ−ｓｃＦａｂ、ｓｃＦａｂ−ｄｓ−ｓｃＦｖ、Ｆｖ２−Ｆｃ、ＩｇＧ−ｓｃＦｖ融合体、ドックアンドロック（ＤＮＬ）抗体、ノブ・イントゥ・ホール（ＫｉＨ）抗体（ＫｉＨ技術により調製される二重特異性ＩｇＧ）、デュオボディ（デュオボディ技術により調製される二重特異性ＩｇＧ）、ヘテロマルチマー抗体、又はヘテロ結合抗体である。いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＣＤ２２抗体は、タンデムｓｃＦｖ（例えば、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャなどのタンデムジｓｃＦｖ）である。
タンデムｓｃＦｖ
【０１７２】
いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＣＤ２２抗体は、抗ＣＤ２２結合部分を含む第１のｓｃＦｖと、第２のｓｃＦｖと、を含む、タンデムｓｃＦｖ（本明細書では、「タンデムｓｃＦｖ多重特異性抗ＣＤ２２抗体」とも称される）である。いくつかの実施形態では、タンデムｓｃＦｖ多重特異性抗ＣＤ２２抗体は、少なくとも１つ（例えば、少なくとも約２、３、４、５、又はそれ以上のいずれか）の追加のｓｃＦｖを更に含む。
【０１７３】
いくつかの実施形態では、ａ）ＣＤ２２の細胞外領域に特異的に結合する第１のｓｃＦｖと、ｂ）第２のｓｃＦｖと、を含む、タンデムｓｃＦｖ多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＣＤ２２抗体が提供される。いくつかの実施形態では、第１のｓｃＦｖは、それぞれ配列番号２０６〜２０８の配列のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３、並びに配列番号２１２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列を有する軽鎖可変領域と、それぞれ配列番号２０９〜２１１の配列のＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３、並びに配列番号２１３の配列に対して少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列を有する重鎖可変領域と、を含み、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、リンカー（例えば、ＳＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＥＭＡ（配列番号２３３））を介して互いに結合されている。いくつかの実施形態では、第１のｓｃＦｖは、リンカー（例えば、ＳＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＥＭＡ（配列番号２３３））を介して互いに結合された、配列番号２１２の軽鎖可変領域配列と、配列番号２１３の重鎖可変領域配列と、を含む。第１のｓｃＦｖは、ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に結合していてもよい。
【０１７４】
いくつかの実施形態では、ａ）ＣＤ２２の細胞外領域に特異的に結合する第１のｓｃＦｖと、ｂ）第２のｓｃＦｖと、を含む、タンデムｓｃＦｖ多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＣＤ２２抗体が提供される。いくつかの実施形態では、第１のｓｃＦｖは、それぞれ配列番号２１４〜２１６の配列のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３、並びに配列番号２１８の配列に対して少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列を有する軽鎖可変領域と、それぞれ配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列のＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３、並びに配列番号２１９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列を有する重鎖可変領域と、を含み、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、リンカー（例えば、ＳＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＥＭＡ（配列番号２３３））を介して互いに結合されている。いくつかの実施形態では、第１のｓｃＦｖは、リンカー（例えば、ＳＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＥＭＡ（配列番号２３３））を介して互いに結合された、配列番号２１８の軽鎖可変領域配列と、配列番号２１９の重鎖可変領域配列と、を含む。第１のｓｃＦｖは、ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に結合していてもよい。
【０１７５】
いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、別の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、ＣＤ２２提示細胞などの癌細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、ＣＤ２２を発現しない細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、細胞傷害性細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、好中球、単球、マクロファージ、又は樹状細胞などのリンパ球の表面上の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、細胞傷害性Ｔ細胞などのエフェクタＴ細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、例えば、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、ＣＤ１６ａ、ＣＤ５６、ＣＤ６８、ＧＤＳ２Ｄ、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＣＤ４０Ｌ、及びＨＶＥＭを含む、エフェクタ細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。
【０１７６】
いくつかの実施形態では、第１のｓｃＦｖは、ヒト、ヒト化、又は半合成である。いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、ヒト、ヒト化、又は半合成である。いくつかの実施形態では、第１のｓｃＦｖ及び第２のｓｃＦｖは両方とも、ヒト、ヒト化、又は半合成である。いくつかの実施形態では、タンデムｓｃＦｖ多重特異性抗ＣＤ２２抗体は、少なくとも１つ（例えば、少なくとも約２、３、４、５、又はそれ以上のいずれか）の追加のｓｃＦｖを更に含む。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、ａ）ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部分）に特異的に結合する第１のｓｃＦｖと、ｂ）第２のｓｃＦｖと、を含む、タンデムｓｃＦｖ多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＣＤ２２抗体が提供され、タンデムｓｃＦｖ多重特異性抗ＣＤ２２抗体は、タンデムジｓｃＦｖ又はタンデムトリｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、タンデムｓｃＦｖ多重特異性抗ＣＤ２２抗体は、タンデムジｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、タンデムｓｃＦｖ多重特異性抗ＣＤ２２抗体は、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャである。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、タンデムジｓｃＦｖ二重特異性抗ＣＤ２２抗体は、約０．１ｐＭ〜約５００ｎＭ（例えば、これらの値の任意の範囲を含む、約０．１ｐＭ、１．０ｐＭ、１０ｐＭ、５０ｐＭ、１００ｐＭ、５００ｐＭ、１ｎＭ、１０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭ、又は５００ｎＭのいずれか）のＫｄで、ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に結合する。いくつかの実施形態では、タンデムジｓｃＦｖ二重特異性抗ＣＤ２２抗体は、約１ｎＭ〜約５００ｎＭ（例えば、これらの値の任意の範囲を含む、約１、１０、２５、５０、７５、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、又は５００ｎＭのいずれか）のＫｄで、ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に結合する。
【０１７９】
多重特異性抗体を設計、構築、かつ／又は生成するための様々な技術は、当該技術分野において既知である。全免疫グロブリンフレームワーク（例えば、ＩｇＧ）、一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、又はこれらの組み合わせのいずれかを利用する多重特異性抗体が構築されてもよい。二重特異性抗体は、上述のとおり、タンデムで２つのｓｃＦｖ単位で構成されていてもよい。抗腫瘍免疫療法の場合、タンデムで２つの一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む二重特異性抗体は、腫瘍抗原に結合するｓｃＦｖがＴ細胞と係合するｓｃＦｖと連結するように、すなわち、Ｔ細胞上のＣＤ３を結合することで、設計されてもよい。したがって、Ｔ細胞は、腫瘍細胞の殺傷を媒介するために腫瘍部位に動員される。二重特異性抗体は、例えば、同一の抗原又は異なる抗原の異なるエピトープを認識する重鎖及び／又は軽鎖を組み合わせることによって作製することができる。いくつかの実施形態では、分子機能により、二重特異性結合剤は、その２つの結合アームのうちの一方に１つの抗原（又はエピトープ）を結合し（１つのＶＨ／ＶＬ対）、第２のアームに異なる抗原（又はエピトープ）を結合する（異なるＶＨ／ＶＬ対）。この定義により、二重特異性結合剤は、（特異性及びＣＤＲ配列の両方において）２つの別個の抗原結合アームを有しており、また、二重特異性結合剤が結合する抗原のそれぞれに対して一価である。特定の実施形態では、本発明に係る二重特異性結合剤は、第１及び第２のｓｃＦｖを含む。いくつかの特定の実施形態では、第１のｓｃＦｖは、第２のｓｃＦｖのＣ末端に連結されている。いくつかの特定の実施形態では、第２のｓｃＦｖは、第１のｓｃＦｖのＣ末端に連結されている。いくつかの特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、リンカー（例えば、ＳＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＥＭＡ（配列番号２３３））を介して互いに連結されている。いくつかの特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、リンカーを介することなく互いに連結されている。
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物
【０１８０】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、抗ＣＤ２２  ＣＡＲであり得る。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ＣＡＲは、ａ）ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（配列番号２０５又はその一部）に特異的に結合する抗ＣＤ２２抗体部分を含む細胞外ドメインと、ｂ）細胞内シグナル伝達ドメインと、を含む。膜貫通ドメインは、細胞外ドメインと細胞内ドメインとの間に存在し得る。
【０１８１】
抗ＣＤ２２  ＣＡＲの細胞外ドメインと膜貫通ドメインとの間、又は抗ＣＤ２２  ＣＡＲの細胞内ドメインと膜貫通ドメインとの間には、スペーサドメインが存在し得る。スペーサドメインは、膜貫通ドメインをポリペプチド鎖内の細胞外ドメイン又は細胞内ドメインに結合するように機能する任意のオリゴペプチド又はポリペプチドであり得る。スペーサドメインは、例えば、約１０〜約１００個又は約２５〜約５０個のアミノ酸を含む最大約３００個のアミノ酸を含み得る。
【０１８２】
膜貫通ドメインは、天然供給源又は合成供給源のいずれか一方に由来し得る。供給源が天然である場合、当該ドメインは、任意の膜結合タンパク質又は膜貫通タンパク質に由来し得る。本発明における特定の使用のための膜貫通領域は、Ｔ細胞受容体、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、又はＣＤ１５４のα鎖、β鎖、δ鎖、γ鎖、又はζ鎖に由来し得る（すなわち、少なくともこれらの（複数の）膜貫通領域を含み得る）。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは合成であってもよく、この場合、膜貫通ドメインは、ロイシン及びバリンなどの主に疎水性残基を含み得る。いくつかの実施形態では、フェニルアラニン、トリプトファン、及びバリンのトリプレットは、合成膜貫通ドメインのそれぞれの末端に見出され得る。いくつかの実施形態では、例えば、（約２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個のうちのいずれかなど）約２〜約１０個のアミノ酸の長さを有する、短いオリゴペプチド又はポリペプチドリンカーは、膜貫通ドメインと抗ＣＤ２２  ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインとの間の結合を形成し得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、グリシン−セリンダブレットである。
【０１８３】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ＣＡＲの細胞内ドメイン内の配列のうちの１つに自然に関連付けられている膜貫通ドメインが使用される（例えば、抗ＣＤ２２  ＣＡＲ細胞内ドメインがＣＤ２８共刺激配列を含む場合、抗ＣＤ２２  ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメインに由来する）。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小限に抑えるために、同じ又は異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインへのかかるドメインの結合を回避するように、アミノ酸置換により選択又は修飾され得る。
【０１８４】
抗ＣＤ２２  ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、抗ＣＤ２２  ＣＡＲが配置された免疫細胞の正常なエフェクタ機能のうちの少なくとも１つの活性化に関与する。Ｔ細胞のエフェクタ機能は、例えば、サイトカインの分泌を含む細胞溶解活性又はヘルパー活性であり得る。したがって、用語「細胞内シグナル伝達ドメイン」は、エフェクタ機能のシグナルを伝達し、細胞に特殊機能を実行するように誘導するタンパク質の一部を指す。通常、細胞内シグナル伝達ドメイン全体を用いることができるが、多くの場合、全鎖を使用する必要はない。細胞内シグナル伝達ドメインの切断された一部が使用される範囲では、かかる切断された一部は、エフェクタ機能のシグナルを伝達する限り、無傷鎖の代わりに使用してもよい。したがって、用語「細胞内シグナル伝達配列」は、エフェクタ機能のシグナルを伝達するのに十分な細胞内シグナル伝達ドメインの任意の切断された一部を含むことを意味する。
【０１８５】
本発明の抗ＣＤ２２  ＣＡＲで使用するための細胞内シグナル伝達ドメインの例としては、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の細胞質配列、及び抗原受容体のエンゲージメント後のシグナル伝達を開始するように協力して機能する共受容体の細胞質配列、並びにこれらの配列の任意の誘導体又は変異体、並びに同一の機能を有する任意の合成配列が挙げられる。
【０１８６】
ＴＣＲ単独によって生成されたシグナルでは、Ｔ細胞の完全な活性化に不十分であり、二次シグナル又は共刺激シグナルも必要とされることが既知である。したがって、Ｔ細胞活性化は、２つの別個の部類の細胞内シグナル伝達配列、すなわち、ＴＣＲによって抗原依存的一次活性化を開始させる配列（一次シグナル伝達配列）、及び抗原非依存的に作用して、二次シグナル又は共刺激シグナルを提供する配列（共刺激シグナル伝達配列）によって介在されると言うことができる。
【０１８７】
一次シグナル伝達配列は、刺激的手法又は阻害的手法のいずれか一方で、ＴＣＲ複合体の一次活性化を調節する。刺激的様式で機能する一次シグナル伝達配列は、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ、すなわち、ＩＴＡＭとして既知であるシグナル伝達モチーフを含有し得る。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ＣＡＲ構築物は、１つ以上のＩＴＡＭを含む。
【０１８８】
本発明で特に使用される一次シグナル伝達配列を含有するＩＴＡＭの例としては、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、及びＣＤ６６ｄに由来するものが挙げられる。
【０１８９】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ＣＡＲは、ＣＤ３ζ由来の一次シグナル伝達配列を含む。例えば、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、それ自体がＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含んでもよいか、あるいは本発明の抗ＣＤ２２  ＣＡＲとの関連で有用な任意の他の所望の細胞内シグナル伝達配列（複数可）と組み合わせられてもよい。例えば、抗ＣＤ２２  ＣＡＲの細胞内ドメインは、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列及び共刺激シグナル伝達配列を含んでもよい。共刺激シグナル伝達配列は、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む共刺激分子の細胞内ドメインの一部であってもよい。
【０１９０】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζの細胞内シグナル伝達配列及びＣＤ２８の細胞内シグナル伝達配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζの細胞内シグナル伝達配列及び４−１ＢＢの細胞内シグナル伝達配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζの細胞内シグナル伝達配列及びＣＤ２８及び４−１ＢＢの細胞内シグナル伝達配列を含む。
【０１９１】
したがって、例えば、いくつかの実施形態では、ａ）ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に特異的に結合する抗ＣＤ２２抗体部分を含む細胞外ドメインと、ｂ）膜貫通ドメインと、ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインと、を含む抗ＣＤ２２  ＣＡＲが提供される。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫細胞を活性化することができる。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達配列及び共刺激シグナル伝達配列を含む。いくつかの実施形態では、一次シグナル伝達配列は、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達配列は、ＣＤ２８及び／又は４−１ＢＢ細胞内シグナル伝達配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列、並びにＣＤ２８及び／又は４−１ＢＢ細胞内シグナル伝達配列を含む。
【０１９２】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ＣＡＲは、ｉ）それぞれ配列番号２０６〜２０８の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、ｉｉ）それぞれ配列番号２０９〜２１１の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、を含む、抗ＣＤ２２抗体部分を含む。他の実施形態では、抗ＣＤ２２  ＣＡＲは、ｉ）それぞれ配列番号２０６〜２０８の配列のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２１２の配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列と、を有する軽鎖可変領域と、ｉｉ）それぞれ配列番号２０９〜２１１の配列のＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２１３の配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列と、を有する重鎖可変領域と、を含む、抗ＣＤ２２抗体部分を含み、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、リンカーを介して互いに結合されている。
【０１９３】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ＣＡＲは、ｉ）それぞれ配列番号２１４〜２１６の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、ｉｉ）それぞれ配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、を含む、抗ＣＤ２２抗体部分を含む。他の実施形態では、抗ＣＤ２２  ＣＡＲは、ｉ）配列番号２１４〜２１６の配列のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２１８の配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列と、を有する軽鎖可変領域と、ｉｉ）配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列のＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２１９の配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列と、を有する重鎖可変領域と、を含む、抗ＣＤ２２抗体部分を含み、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、リンカーを介して互いに結合されている。
キメラ抗体−Ｔ細胞受容体（ｃａＴＣＲ）構築物
【０１９４】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、キメラ抗体−Ｔ細胞受容体構築物（本明細書では「ｃａＴＣＲ」と称される）であり、抗ＣＤ２２キメラ抗体−Ｔ細胞受容体は、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲは、ａ）ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に特異的に結合する抗ＣＤ２２抗体部分を含む細胞外ドメインと、ｂ）少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールを動員することができるＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）と、を含む。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲは、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖を含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２のポリペプチド鎖は、共有結合（例えば、ペプチド結合又は他の化学結合）又は非共有結合によって連結されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲは、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖を含むヘテロ二量体である。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖は、少なくとも１つのジスルフィド結合によって連結されている。抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲの特異性は、ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に対する結合特異性を付与する抗体部分に由来する。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ様抗原結合モジュールである。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆｖ様抗原結合モジュールである。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ｓｃＦｖである。ＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールを動員するための抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲの機能は、Ｔ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）に由来する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＴＣＲ（αβＴＣＲ又はγδＴＣＲなど）の膜貫通モジュールを含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＴＣＲの結合ペプチド又はそのフラグメントのうちの一方又は両方を更に含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲは、少なくとも１つの細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲの少なくとも１つの細胞内ドメインのうちの１つ以上は、ＴＣＲの細胞内ドメインからの配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲの細胞外ドメインに含有される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲは、抗体部分とＴＣＲＭとの間に１つ以上のペプチドリンカーを更に含んで、細胞外ドメインの長さを最適化する。
【０１９６】
いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールであり、ａ）ＶＨ抗体ドメイン及びＣＨ１抗体ドメインを含む第１の抗原結合領域を含む第１のポリペプチド鎖と、ｂ）ＶＬ抗体ドメイン及びＣＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合領域を含む第２のポリペプチド鎖と、を含む。いくつかの実施形態では、第１の抗原結合領域は、ＣＨ１抗体ドメインに対するＶＨ抗体ドメインアミノ末端を含み、かつ／又は第２の抗原結合領域は、ＣＬ抗体ドメインに対するＶＬ抗体ドメインアミノ末端を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ抗体ドメインとＣＬ抗体ドメインとの間にペプチドリンカーが存在し、かつ／又はＶＨ抗体ドメインとＣＨ１抗体ドメインとの間にペプチドリンカーが存在する。いくつかの実施形態では、ＶＬ抗体ドメイン及びＶＨ抗体ドメインのＣＤＲの全ては、同じ抗体部分に由来する。いくつかの実施形態では、ＶＬ抗体ドメイン及びＶＨ抗体ドメインは、２つ以上の抗体部分に由来する抗体ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２のポリペプチド鎖は、共有結合（例えば、ペプチド結合又は他の化学結合）又は非共有結合によって連結されている。いくつかの実施形態では、第１及び第２の抗原結合領域は、ジスルフィド結合によって結合されている。いくつかの実施形態では、第１及び第２の抗原結合領域は、ＣＨ１ドメイン内の残基とＣＬドメイン内の残基との間のジスルフィド結合によって結合されている。いくつかの実施形態では、ＣＨ１ドメインは、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）重鎖に由来し、任意選択的にヒトに由来する。いくつかの実施形態では、ＣＨ１ドメインは、由来する配列と比較して、１つ以上の修飾（例えば、アミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失）を含む変異体である。いくつかの実施形態では、ＣＬドメインは、κアイソタイプ又はλアイソタイプの軽鎖に由来する。いくつかの実施形態では、ＣＬドメインは、由来する配列と比較して、１つ以上の修飾（例えば、アミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失）を含む変異体である。いくつかの実施形態では、ＣＨ１及び／又はＣＬドメインは、互いに対する結合親和性を実質的に変更しない１つ以上の修飾を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ１及び／若しくはＣＬドメインは、互いに対する結合親和性を増加させ、かつ／又は天然に存在しないジスルフィド結合を導入する１つ以上の修飾を含む。いくつかの実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成、又は完全合成である。
【０１９７】
いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールであり、ＶＬ抗体ドメイン及びＣＨ１抗体ドメインを含む第１の抗原結合領域を含む第１のポリペプチド鎖と、ｂ）ＶＨ抗体ドメイン及びＣＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合領域を含む第２のポリペプチド鎖と、を含む。いくつかの実施形態では、第１の抗原結合領域は、ＣＨ１抗体ドメインに対するＶＬ抗体ドメインアミノ末端を含み、かつ／又は第２の抗原結合領域は、ＣＬ抗体ドメインに対するＶＨ抗体ドメインアミノ末端を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ抗体ドメインとＣＬ抗体ドメインとの間にペプチドリンカーが存在し、かつ／又はＶＬ抗体ドメインとＣＨ１抗体ドメインとの間にペプチドリンカーが存在する。いくつかの実施形態では、ＶＬ抗体ドメイン及びＶＨ抗体ドメインのＣＤＲの全ては、同じ抗体部分に由来する。いくつかの実施形態では、ＶＬ抗体ドメイン及びＶＨ抗体ドメインは、２つ以上の抗体部分に由来する抗体ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２のポリペプチド鎖は、共有結合（例えば、ペプチド結合又は他の化学結合）又は非共有結合によって連結されている。いくつかの実施形態では、第１及び第２の抗原結合領域は、ジスルフィド結合によって結合されている。いくつかの実施形態では、第１及び第２の抗原結合領域は、ＣＨ１ドメイン内の残基とＣＬドメイン内の残基との間のジスルフィド結合によって結合されている。いくつかの実施形態では、ＣＨ１ドメインは、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）重鎖に由来し、任意にヒトに由来する。いくつかの実施形態では、ＣＨ１ドメインは、由来する配列と比較して、１つ以上の修飾（例えば、アミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失）を含む変異体である。いくつかの実施形態では、ＣＬドメインは、κ又はλアイソタイプの軽鎖に由来する。いくつかの実施形態では、ＣＬドメインは、由来する配列と比較して、１つ以上の修飾（例えば、アミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失）を含む変異体である。いくつかの実施形態では、ＣＨ１及び／又はＣＬドメインは、互いに対する結合親和性を実質的に変更しない１つ以上の修飾を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ１及び／若しくはＣＬドメインは、互いに対する結合親和性を増加させ、かつ／又は天然に存在しないジスルフィド結合を導入する１つ以上の修飾を含む。いくつかの実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成、又は完全合成である。
【０１９８】
いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に特異的に結合するＦｖ様抗原結合モジュールであり、ａ）ＶＨ抗体ドメインと、任意選択的に、Ｔ細胞受容体サブユニットからの第１のＴＣＲ定常ドメインと、を含む第１の抗原結合領域を含む、第１のポリペプチド鎖と、ｂ）ＶＬ抗体ドメインと、任意選択的に、Ｔ細胞受容体サブユニットからの第２のＴＣＲ定常ドメインと、を含む第２の抗原結合領域を含む、第２のポリペプチド鎖と、を含む。いくつかの実施形態では、第１の抗原結合領域は、第１のＴＣＲ定常ドメインに対するＶＨ抗体ドメインアミノ末端を含み、かつ／又は第２の抗原結合領域は、第２のＴＣＲ定常ドメインに対するＶＬ抗体ドメインアミノ末端を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ抗体ドメインと第１のＴＣＲ定常ドメインとの間にペプチドリンカーが存在し、かつ／又はＶＨ抗体ドメインと第２のＴＣＲ定常ドメインとの間にペプチドリンカーが存在する。いくつかの実施形態では、ＶＬ抗体ドメイン及びＶＨ抗体ドメインのＣＤＲの全ては、同じ抗体部分に由来する。いくつかの実施形態では、ＶＬ抗体ドメイン及びＶＨ抗体ドメインは、２つ以上の抗体部分に由来する抗体ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２のポリペプチド鎖は、共有結合（例えば、ペプチド結合又は他の化学結合）又は非共有結合によって連結されている。いくつかの実施形態では、第１及び第２の抗原結合領域は、ジスルフィド結合によって結合されている。いくつかの実施形態では、第１及び第２の抗原結合領域は、第１のＴＣＲ定常ドメイン内の残基と第２のＴＣＲ定常ドメイン内の残基との間のジスルフィド結合によって結合されている。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ定常ドメインは、ＴＣＲαサブユニットに由来し、任意選択的にヒトに由来し、かつ／又は第２のＴＣＲ定常ドメインは、ＴＣＲβサブユニットに由来し、任意選択的にヒトに由来する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ定常ドメインは、ＴＣＲδサブユニットに由来し、任意選択的にヒトに由来し、かつ／又は第２のＴＣＲ定常ドメインは、ＴＣＲγサブユニットに由来し、任意選択的にヒトに由来する。いくつかの実施形態では、第１及び／又は第２のＴＣＲ定常ドメインは、由来する配列と比較して、１つ以上の修飾（例えば、アミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失）を含む変異体である。いくつかの実施形態では、第１及び／又は第２のＴＣＲ定常ドメインは、互いに対する結合親和性を実質的に変更しない１つ以上の修飾を含む。いくつかの実施形態では、第１及び／若しくは第２のＴＣＲ定常ドメインは、互いに対する結合親和性を増加させ、かつ／又は天然に存在しないジスルフィド結合を導入する１つ以上の修飾を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｖ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成、又は完全合成である。
【０１９９】
いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に特異的に結合するｓｃＦｖであり、ａ）ＶＨ抗体ドメイン及びＶＬ抗体ドメインを含むポリペプチド鎖を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、ＶＬ抗体ドメインに対するＶＨ抗体ドメインアミノ末端を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、ＶＨ抗体ドメインに対するＶＬ抗体ドメインアミノ末端を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ抗体ドメインとＶＨ抗体ドメインとの間にペプチドリンカーが存在する。いくつかの実施形態では、ＶＬ抗体ドメイン及びＶＨ抗体ドメインのＣＤＲの全ては、同じ抗体部分に由来する。いくつかの実施形態では、ＶＬ抗体ドメイン及びＶＨ抗体ドメインは、２つ以上の抗体部分に由来する抗体ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成、又は完全合成である。
【０２００】
いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ａ）第１の膜貫通ドメインを含む第１のＴ細胞受容体ドメイン（T cell receptor domain、ＴＣＲＤ）を含む第１のポリペプチド鎖と、ｂ）第２の膜貫通ドメインを含む第２のＴＣＲＤを含む第２のポリペプチド鎖と、を含む。いくつかの実施形態では、第１の膜貫通ドメインは、第１のＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインであり、かつ／又は第２の膜貫通ドメインは、第２のＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲα鎖（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＣＣＩ７３８９５）であり、第２のＴＣＲサブユニットはＴＣＲβ鎖（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＣＣＩ７３８９３）である。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲβ鎖であり、第２のＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲα鎖である。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲγ鎖（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＡＧＥ９１７８８）であり、第２のＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲδ鎖（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＡＡＱ５７２７２）である。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲδ鎖であり、第２のＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲγ鎖である。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、膜貫通ドメインに対する第１の結合ペプチドアミノ末端を更に含み、かつ／又は第２のＴＣＲＤは、膜貫通ドメインに対する第２の結合ペプチドアミノ末端を更に含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ペプチドは、第１のＴＣＲサブユニットの結合ペプチドの全て若しくは一部を含み、かつ／又は第２の結合ペプチドは、第２のＴＣＲサブユニットの結合ペプチドの全て若しくは一部を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１の膜貫通ドメインに対する第１のＴＣＲ細胞内ドメインのカルボキシ末端を更に含み、かつ／又は第２のＴＣＲＤは、第２の膜貫通ドメインに対する第２のＴＣＲ細胞内ドメインのカルボキシ末端を更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメインは、第１のＴＣＲサブユニットの細胞内ドメインの全て若しくは一部を含み、かつ／又は第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、第２のＴＣＲサブユニットの細胞内ドメインの全て若しくは一部を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲサブユニットのフラグメントであり、かつ／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ鎖のフラグメントである。いくつかの実施形態では、第１及び第２のポリペプチド鎖は、共有結合（例えば、ペプチド結合又は他の化学結合）又は非共有結合によって連結されている。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＴＣＲＤは、ジスルフィド結合によって結合されている。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＴＣＲＤは、第１の結合ペプチド中の残基と第２の結合ペプチド中の残基との間のジスルフィド結合によって結合されている。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びＣＤ３ζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールを動員することができる。いくつかの実施形態では、Ｔ��ＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びＣＤ３ζのそれぞれを動員して、八量体型抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体を形成することができる（すなわち、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ−ＣＤ３複合体形成を促進する）。
【０２０１】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲは、ＴＣＲＭに対する（ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に特異的に結合する）抗体部分の融合体を含む分子である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲは、ＴＣＲＭの第１のポリペプチド鎖に対するＦａｂ様又はＦｖ様抗原結合モジュールアミノ末端の第１のポリペプチド鎖の融合体であって、それにより、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲの第１のポリペプチド鎖を形成する、融合体と、ＴＣＲＭの第２のポリペプチド鎖に対するＦａｂ様又はＦｖ様抗原結合モジュールアミノ末端の第２のポリペプチド鎖の融合体であって、それにより、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲの第２のポリペプチド鎖を形成する、融合体と、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲは、ＴＣＲＭの第１又は第２のポリペプチド鎖に対するｓｃＦｖアミノ末端の融合体を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲは、Ｆａｂ様若しくはＦｖ様抗原結合モジュールの第１のポリペプチド鎖と、ＴＣＲＭの第１のポリペプチド鎖との間のペプチドリンカー、及び／又はＦａｂ様若しくはＦｖ様抗原結合モジュールの第２のポリペプチド鎖と、ＴＣＲＭの第２のポリペプチド鎖との間のペプチドリンカーを更に含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲは、ｓｃＦｖと、ＴＣＲＭの第１又は第２のポリペプチド鎖との間にペプチドリンカーを更に含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーの長さは、（値の間の任意の範囲を含む約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、又は７０個のうちのいずれかなどの）約５〜約７０個のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲの第１のポリペプチド鎖は、アミノ末端の第１のシグナルペプチドを更に含み、かつ／又は抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲの第２のポリペプチド鎖は、アミノ末端の第２のシグナルペプチドを更に含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲの第１のポリペプチド鎖は、第１の膜貫通ドメインに対する第１のアクセサリ細胞内ドメインのカルボキシ末端を更に含み、かつ／又は抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲの第２のポリペプチド鎖は、第２の膜貫通ドメインに対する第２のアクセサリ細胞内ドメインのカルボキシ末端を更に含む。いくつかの実施形態では、第１及び／又は第２のアクセサリ細胞内ドメインは、ＴＣＲ共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲの第１及び第２のポリペプチド鎖は、共有結合（例えば、ペプチド結合又は他の化学結合）又は非共有結合などによって結合されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲは、ヘテロダイマーである。
【０２０２】
したがって、例えば、いくつかの実施形態では、ａ）ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に特異的に結合する抗ＣＤ２２抗体部分を含む細胞外ドメインと、ｂ）少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールを動員することができるＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）と、を含む、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ様抗原結合モジュールである。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆｖ様抗原結合モジュールである。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ｓｃＦｖである。
【０２０３】
いくつかの実施形態では、ａ）ｉ）それぞれ配列番号２０６〜２０８の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、ｉｉ）それぞれ配列番号２０９〜２１１の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、を含む、ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に特異的に結合する抗ＣＤ２２抗体部分を含む細胞外ドメインと、ｂ）少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールを動員することができるＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）と、を含む、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、ａ）ｉ）それぞれ配列番号２０６〜２０８の配列のＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２１２の配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列と、を有する軽鎖可変領域と、ｉｉ）それぞれ配列番号２０９〜２１１の配列のＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２１３の配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列と、を有する重鎖可変領域と、を含む、ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に特異的に結合する抗ＣＤ２２抗体部分を含む細胞外ドメインと、ｂ）少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールを動員することができるＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）と、を含む、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲが提供され、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、リンカーを介して互いに結合されている。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ様抗原結合モジュールである。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆｖ様抗原結合モジュールである。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ｓｃＦｖである。
【０２０４】
いくつかの実施形態では、ａ）ｉ）それぞれ配列番号２１４〜２１６の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、ｉｉ）それぞれ配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、を含む、ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に特異的に結合する抗ＣＤ２２抗体部分を含む細胞外ドメインと、ｂ）少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールを動員することができるＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）と、を含む、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、ａ）ｉ）それぞれ配列番号２１４〜２１６の配列のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２１８の配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列と、を有する軽鎖可変領域と、ｉｉ）それぞれ配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列のＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２１９の配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列と、を有する重鎖可変領域と、を含む、ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に特異的に結合する抗ＣＤ２２抗体部分を含む細胞外ドメインであって、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、リンカーを介して互いに結合されている、細胞外ドメインと、ｂ）少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールを動員することができるＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）と、を含む、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲが提供される。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ様抗原結合モジュールである。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆｖ様抗原結合モジュールである。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ｓｃＦｖである。
【０２０５】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）である。例えば、ＣＳＲは、（ａ）本明細書に記載の抗ＣＤ２２抗体部分（例えば、配列番号２１８の配列を有する軽鎖可変領域と、配列番号２１９の配列を有する重鎖可変領域と、を含む、抗ＣＤ２２抗体部分、又は配列番号２１２の配列を有する軽鎖可変領域と、配列番号２１３の配列を有する重鎖可変領域と、を含む、抗ＣＤ２２抗体部分）と、（ｂ）膜貫通モジュールと、（ｃ）ＣＳＲが機能的一次免疫細胞シグナル伝達ドメインを欠失している免疫細胞に共刺激シグナルを提供することができる共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールと、を含み得る。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、ｃａＴＣＲ又はＣＡＲ（例えば、ＣＤ２２を特異的に標的とするｃａＴＣＲ又はＣＡＲ）と組み合わせて使用される。
キメラ共刺激受容体（ＣＳＲ）構築物
【０２０６】
本明細書に記載されるリガンド特異性キメラ共刺激受容体（ＣＳＲ）は、標的リガンド（細胞表面抗原又はペプチド／ＭＨＣ複合体など）に特異的に結合し、標的リガンド結合の際、機能的に発現される表面上の免疫細胞を刺激することができる。ＣＳＲは、リガンド結合特異性を提供するリガンド結合モジュールと、膜貫通モジュールと、免疫細胞の刺激を可能にする共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールと、を含む。ＣＳＲは、機能的一次免疫細胞シグナル伝達配列を欠失している。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、任意の一次免疫細胞シグナル伝達配列を欠失している。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、リガンド結合モジュールと、膜貫通モジュールと、共刺激シグナル伝達モジュールと、を含む、単一のポリペプチド鎖を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖を含み、第１及び第２のポリペプチド鎖は共に、リガンド結合モジュール、膜貫通モジュール、及び共刺激シグナル伝達モジュールを形成する。いくつかの実施形態では、第１及び第２のポリペプチド鎖は、別個のポリペプチド鎖であり、ＣＳＲは、ダイマーなどのマルチマーである。いくつかの実施形態では、第１及び第２のポリペプチド鎖は、ペプチド結合によって、又はジスルフィド結合などの別の化学結合によって、共有結合されている。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖は、少なくとも１つのジスルフィド結合によって連結されている。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞におけるＣＳＲの発現は誘導性である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞におけるＣＳＲの発現は、ｃａＴＣＲを介したシグナル伝達時に誘導性である。ＣＳＲの更なる説明は、参照によりその全体が本明細書に援用されている、２０１７年４月２６日に出願された米国特許出願第６２／４９０，５７８号に見出すことができる。
【０２０７】
本発明のＣＳＲで使用するため共刺激免疫細胞シグナル伝達ドメインの例としては、ｃａＴＣＲのエンゲージメント後のシグナル伝達を開始するように協力して機能することができるＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の共受容体の細胞質配列、並びにこれらの配列の任意の誘導体又は変異体、並びに同一の機能を有する任意の合成配列が挙げられる。
【０２０８】
ＴＣＲ単独によって生成されたシグナルでは、Ｔ細胞の完全な活性化に不十分であり、二次シグナル又は共刺激シグナルも必要とされることが既知である。したがって、Ｔ細胞活性化は、２つの別個の部類の細胞内シグナル伝達配列、すなわち、ＴＣＲによって抗原依存的一次活性化を開始させる配列（本明細書では「初代Ｔ細胞シグナル伝達配列」と称する）、及び抗原非依存的に作用して、二次シグナル又は共刺激シグナルを提供する配列（本明細書では「共刺激Ｔ細胞シグナル伝達配列」と称する）によって介在されると言うことができる。
【０２０９】
刺激的様式で機能する一次免疫細胞シグナル伝達配列は、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ、すなわち、ＩＴＡＭとして既知であるシグナル伝達モチーフを含有し得る。ＩＴＡＭ含有一次免疫細胞シグナル伝達配列の例としては、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、及びＣＤ６６ｄに由来する配列が挙げられる。「機能的」一次免疫細胞シグナル伝達配列は、適切な受容体に動作可能に結合されたときに免疫細胞活性化シグナルを伝達することができる配列である。一次免疫細胞シグナル伝達配列のフラグメント又は変異体を含み得る「非機能的」一次免疫細胞シグナル伝達配列は、免疫細胞活性化シグナルを伝達することができない。本明細書に記載のＣＳＲは、ＩＴＡＭを含む機能的シグナル伝達配列などの機能的一次免疫細胞シグナル伝達配列を欠失している。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、任意の一次免疫細胞シグナル伝達配列を欠失している。
【０２１０】
共刺激免疫細胞シグナル伝達配列は、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む共刺激分子の細胞内ドメインの一部であり得る。
【０２１１】
いくつかの実施形態では、標的リガンドは、細胞表面抗原である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、ペプチド／ＭＨＣ複合体である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現されるｃａＴＣＲの標的抗原と同一である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現されるｃａＴＣＲの標的抗原とは異なる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、標的抗原を提示する細胞の表面上に提示される分子である。例えば、いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲの標的抗原は、癌細胞上に提示される癌関連抗原であり、標的リガンドは、インテグリンなどの癌細胞の表面上に発現される偏在する分子である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、疾患関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、癌関連リガンドである。いくつかの実施形態では、癌関連リガンドは、例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ４７、ＩＬ４、ＧＰＣ−３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、又はＦＣＲＬ５である。いくつかの実施形態では、癌関連リガンドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、及びＰＳＡを含むタンパク質に由来するペプチドを含むペプチド／ＭＨＣ複合体である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、ウイルス関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、免疫チェックポイント分子である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子は、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ４０、及びＧＡＬ９を含む。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、アポトーシス分子である。いくつかの実施形態では、アポトーシス分子は、ＦａｓＬ、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１、及びＴＮＦＲ２を含む。
【０２１２】
いくつかの実施形態では、リガンド結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、細胞表面抗原、例えば、ＣＤ２２と特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤＲ又はＣＤ２２に特異的な抗体部分の可変ドメイン（ＶＨドメイン及び／又はＶＬドメイン）（例えば、配列番号２１９のアミノ酸配列を含む、配列番号２１９のアミノ酸配列から本質的になる、若しくは配列番号２１９のアミノ酸配列からなる、ＶＨドメイン、及び／又は配列番号２１８のアミノ酸配列を含む、配列番号２１８のアミノ酸配列から本質的になる、若しくは配列番号２１８のアミノ酸配列からなる、ＶＬドメイン、又はその中に含まれるＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤＲ又はＣＤ２２に特異的な抗体部分の可変ドメイン（ＶＨドメイン及び／又はＶＬドメイン）（例えば、配列番号２１３のアミノ酸配列を含む、配列番号２１３のアミノ酸配列から本質的になる、若しくは配列番号２１３のアミノ酸配列からなるＶＨドメイン、及び／又は配列番号２１２のアミノ酸配列を含む、配列番号２１２のアミノ酸配列から本質的になる、若しくは配列番号２１２のアミノ酸配列からなるＶＬドメイン、又はその中に含まれるＣＤＲ）を含む。
【０２１３】
いくつかの実施形態では、膜貫通モジュールは、例えば、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、又はＣＤ１５４に由来する１つ以上の膜貫通ドメインを含む。
【０２１４】
いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達モジュールは、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む、免疫細胞共刺激分子の細胞内ドメインの全て又は一部を含むか、全て又は一部から本質的になるか、あるいは全て又は一部からなる。
【０２１５】
いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、リガンド結合モジュール、膜貫通モジュール、及び共刺激シグナル伝達モジュールのうちのいずれかの間にスペーサモジュールを更に含む。いくつかの実施形態では、スペーサモジュールは、２つのＣＳＲモジュールを結合する１つ以上のペプチドリンカーを含む。いくつかの実施形態では、スペーサモジュールは、（値の間の任意の範囲を含む約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、又は７０個のうちのいずれかなどの）約５〜約７０個のアミノ酸の長さの１つ以上のペプチドリンカーを含む。
【０２１６】
いくつかの実施形態では、リガンド結合モジュール（抗体部分など）は、ａ）他の分子に対する結合親和性の約少なくとも１０倍（例えば、少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、７５、１００、２００、３００、４００、５００、７５０、１０００倍以上のうちのいずれかを含む）の親和性、又はｂ）他の分子に結合するためのＫｄの約１／１０倍以下（例えば、約１／１０、１／２０、１／３０、１／４０、１／５０、１／７５、１／１００、１／２００、１／３００、１／４００、１／５００、１／７５０、１／１０００倍以下のうちのいずれかなど）のＫｄで標的抗原に特異的に結合する。結合親和性は、ＥＬＩＳＡ、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）分析、又は放射線免疫沈降アッセイ（radioimmunoprecipitation assay、ＲＩＡ）などの当該技術分野において既知の方法によって判定することができる。Ｋｄは、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ機器、又は例えば、Ｓａｐｉｄｙｎｅ機器を利用する結合平衡除外法（kinetic exclusion assay、ＫｉｎＥｘＡ）を利用する表面プラズモン共鳴（surface plasmon resonance、ＳＰＲ）アッセイなどの当該技術分野において既知の方法によって判定することができる。
【０２１７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＳＲは、標的リガンド（例えば、ＣＤ２２）と特異的に結合し、ａ）標的リガンド結合ドメイン（ligand-binding domain、ＬＢＤ）と、ｂ）膜貫通ドメインと、ｃ）共刺激シグナル伝達ドメインと、を含み、ＣＳＲは、標的リガンド結合の際に機能的に発現される表面上の免疫細胞を刺激することができる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、細胞表面抗原である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、ペプチド／ＭＨＣ複合体である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現されるｃａＴＣＲの標的抗原と同一である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現されるｃａＴＣＲの標的抗原とは異なる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、疾患関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、癌関連リガンドである。いくつかの実施形態では、癌関連リガンドは、例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ４７、ＩＬ４、ＧＰＣ−３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、又はＦＣＲＬ５である。いくつかの実施形態では、癌関連リガンドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、及びＰＳＡを含むタンパク質に由来するペプチドを含むペプチド／ＭＨＣ複合体である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、ウイルス関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、免疫チェックポイント分子である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子は、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ４０、及びＧＡＬ９を含む。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、アポトーシス分子である。いくつかの実施形態では、アポトーシス分子は、ＦａｓＬ、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１、及びＴＮＦＲ２を含む。いくつかの実施形態では、リガンド結合ドメインは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、リガンド結合ドメインは、標的リガンドの受容体の細胞外ドメインの全て又は一部である（あるいは全て又は一部に由来する）。いくつかの実施形態では、受容体は、例えば、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１、ＴＮＦＲ２、ＰＤ−１、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ−３、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、及びＴＩＭ−３を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、例えば、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、又はＣＤ１５４を含む膜貫通タンパク質に由来する膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、膜貫通タンパク質のフラグメント（ｆＴＭＰ）を含み、ｆＴＭＰは、ＣＳＲ膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機��関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む、免疫細胞共刺激分子の細胞内ドメインの全て又は一部を含むか、全て又は一部から本質的になるか、あるいは全て又は一部からなる。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、免疫細胞共刺激分子のフラグメント（ｆＣＳＭ）を含み、ｆＣＳＭは、ＣＳＲ膜貫通ドメイン及びＣＳＲ共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び共刺激シグナル伝達ドメインのうちのいずれかの間にスペーサドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、スペーサドメインは、２つのＣＳＲドメインを結合するペプチドリンカーを含む。
【０２１８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＳＲは、標的リガンド（例えば、ＣＤ２２）と特異的に結合し、ａ）標的リガンド結合ドメインと、ｂ）膜貫通ドメインと、ｃ）共刺激シグナル伝達ドメインと、を含み、標的リガンドは、細胞表面抗原であり、ＣＳＲは、標的リガンド結合時に機能的に発現される表面上の免疫細胞を刺激することができる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現されるｃａＴＣＲの標的抗原と同一である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現されるｃａＴＣＲの標的抗原とは異なる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、疾患関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、癌関連リガンドである。いくつかの実施形態では、癌関連リガンドは、例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ４７、ＩＬ４、ＧＰＣ−３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、又はＦＣＲＬ５である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、ウイルス関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、免疫チェックポイント分子である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子は、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ４０、及びＧＡＬ９を含む。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、アポトーシス分子である。いくつかの実施形態では、アポトーシス分子は、ＦａｓＬ、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１、及びＴＮＦＲ２を含む。いくつかの実施形態では、リガンド結合ドメインは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、リガンド結合ドメインは、標的リガンドの受容体の細胞外ドメインの全て又は一部である（あるいは全て又は一部に由来する）。いくつかの実施形態では、受容体は、例えば、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１、ＴＮＦＲ２、ＰＤ−１、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ−３、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、及びＴＩＭ−３を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、例えば、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、又はＣＤ１５４を含む膜貫通タンパク質に由来する膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、膜貫通タンパク質のフラグメント（ｆＴＭＰ）を含み、ｆＴＭＰは、ＣＳＲ膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む、免疫細胞共刺激分子の細胞内ドメインの全て又は一部を含むか、全て又は一部から本質的になるか、あるいは全て又は一部からなる。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、免疫細胞共刺激分子のフラグメント（ｆＣＳＭ）を含��、ｆＣＳＭは、ＣＳＲ膜貫通ドメイン及びＣＳＲ共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び共刺激シグナル伝達ドメインのうちのいずれかの間にスペーサドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、スペーサドメインは、２つのＣＳＲドメインを結合するペプチドリンカーを含む。
【０２１９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＳＲは、標的リガンド（例えば、ＣＤ２２）に特異的に結合し、ａ）標的リガンド結合ドメインと、ｂ）膜貫通ドメインと、ｃ）共刺激シグナル伝達ドメインと、を含み、標的リガンドは、ペプチド／ＭＨＣ複合体であり、ＣＳＲは、標的リガンド結合時に機能的に発現される表面上の免疫細胞を刺激することができる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現されるｃａＴＣＲの標的抗原と同一である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現されるｃａＴＣＲの標的抗原とは異なる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、疾患関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、癌関連リガンドである。いくつかの実施形態では、癌関連リガンドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、及びＰＳＡを含むタンパク質に由来するペプチドを含むペプチド／ＭＨＣ複合体である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、ウイルス関連リガンドである。いくつかの実施形態では、リガンド結合ドメインは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、例えば、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、又はＣＤ１５４を含む膜貫通タンパク質に由来する膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、膜貫通タンパク質のフラグメント（ｆＴＭＰ）を含み、ｆＴＭＰは、ＣＳＲ膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む、免疫細胞共刺激分子の細胞内ドメインの全て又は一部を含むか、全て又は一部から本質的になるか、あるいは全て又は一部からなる。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、免疫細胞共刺激分子のフラグメント（ｆＣＳＭ）を含み、ｆＣＳＭは、ＣＳＲ膜貫通ドメイン及びＣＳＲ共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び共刺激シグナル伝達ドメインのうちのいずれかの間にスペーサドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、スペーサドメインは、２つのＣＳＲドメインを結合するペプチドリンカーを含む。
【０２２０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＳＲは、標的リガンド（例えば、ＣＤ２２）に特異的に結合し、ａ）標的リガンド結合ドメインと、ｂ）膜貫通ドメインと、ｃ）共刺激シグナル伝達ドメインと、を含み、リガンド結合ドメインは、抗体部分であり、ＣＳＲは、標的リガンド結合の際、機能的に発現される表面上の免疫細胞を刺激することができる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、細胞表面抗原である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、ペプチド／ＭＨＣ複合体である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現されるｃａＴＣＲの標的抗原と同一である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現されるｃａＴＣＲの標的抗原とは異なる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、疾患関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、癌関連リガンドである。いくつかの実施形態では、癌関連リガンドは、例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ４７、ＩＬ４、ＧＰＣ−３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、又はＦＣＲＬ５である。いくつかの実施形態では、癌関連リガンドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、及びＰＳＡを含むタンパク質に由来するペプチドを含むペプチド／ＭＨＣ複合体である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、ウイルス関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、免疫チェックポイント分子である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子は、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ４０、及びＧＡＬ９を含む。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、アポトーシス分子である。いくつかの実施形態では、アポトーシス分子は、ＦａｓＬ、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１、及びＴＮＦＲ２を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、例えば、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、又はＣＤ１５４を含む膜貫通タンパク質に由来する膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、膜貫通タンパク質のフラグメント（ｆＴＭＰ）を含み、ｆＴＭＰは、ＣＳＲ膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む、免疫細胞共刺激分子の細胞内ドメインの全て又は一部を含むか、全て又は一部から本質的になるか、あるいは全て又は一部からなる。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、免疫細胞共刺激分子のフラグメント（ｆＣＳＭ）を含み、ｆＣＳＭは、ＣＳＲ膜貫通ドメイン及びＣＳＲ共刺激シグナル伝達��メインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び共刺激シグナル伝達ドメインのうちのいずれかの間にスペーサドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、スペーサドメインは、２つのＣＳＲドメインを結合するペプチドリンカーを含む。
【０２２１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＳＲは、標的リガンド（例えば、ＣＤ２２）に特異的に結合し、ａ）標的リガンド結合ドメインと、ｂ）膜貫通ドメインと、ｃ）共刺激シグナル伝達ドメインと、を含み、リガンド結合ドメインは、標的リガンドの受容体の細胞外ドメインの全部又は一部であり（あるいは全部又は一部に由来し）、ＣＳＲは、標的リガンドの結合時に機能的に発現する表面上の免疫細胞を刺激することができる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、細胞表面抗原である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現されるｃａＴＣＲの標的抗原と同一である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現されるｃａＴＣＲの標的抗原とは異なる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、疾患関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、癌関連リガンドである。いくつかの実施形態では、癌関連リガンドは、例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ４７、ＩＬ４、ＧＰＣ−３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、又はＦＣＲＬ５である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、免疫チェックポイント分子である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子は、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ４０、及びＧＡＬ９を含む。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、アポトーシス分子である。いくつかの実施形態では、アポトーシス分子は、ＦａｓＬ、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１、及びＴＮＦＲ２を含む。いくつかの実施形態では、標的リガンド受容体は、例えば、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１、ＴＮＦＲ２、ＰＤ−１、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ−３、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、及びＴＩＭ−３を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、例えば、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９，ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、又はＣＤ１５４に由来する膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む、免疫細胞共刺激分子の細胞内ドメインの全て又は一部を含むか、全て又は一部から本質的になるか、あるいは全て又は一部からなる。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び共刺激シグナル伝達ドメインのうちのいずれかの間にスペーサドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、スペーサドメインは、２つのＣＳＲドメインを結合するペプチドリンカーを含む。
【０２２２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＳＲは、ＣＤ２２に特異的に結合し、配列番号２１９のアミノ酸配列を有するＶＨドメインと、配列番号２１８のアミノ酸配列を有するＶＬドメインと、を含む、ｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、アミノ末端からカルボキシ末端まで、ＶＬドメイン、配列番号２３３のアミノ酸配列を含むペプチドリンカー、及びＶＨドメインを含む。
【０２２３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＳＲは、ＣＤ２２に特異的に結合し、配列番号２１３のアミノ酸配列を有するＶＨドメインと、配列番号２１２のアミノ酸配列を有するＶＬドメインと、を含む、ｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、アミノ末端からカルボキシ末端まで、ＶＬドメイン、配列番号２３３のアミノ酸配列を含むペプチドリンカー、及びＶＨドメインを含む。
【０２２４】
いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、抗ＣＤ２２  ＣＳＲ、抗ＣＤ１９  ＣＳＲ、又は抗ＣＤ２０  ＣＳＲであってもよい。ＣＳＲは、共刺激分子の細胞内ドメインの一部であり得る細胞内フラグメント（すなわち、共刺激免疫細胞シグナル伝達配列）を含み得る。共刺激分子の例としては、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、共刺激分子の膜貫通部分のフラグメントであり得る膜貫通フラグメントを含み得る。いくつかの実施形態では、ＣＳＲにおける細胞内フラグメント及び膜貫通フラグメントは、同じ共刺激分子（例えば、ＣＤ２８又はＣＤ３０）由来であり得る。いくつかの実施形態では、ＣＳＲにおける細胞内フラグメント及び膜貫通フラグメントは、異なる共刺激分子由来であり得る。いくつかの実施形態では、細胞内フラグメントは、第１の共刺激分子から取得され、第２の共刺激分子からの膜貫通フラグメントに融合され得る。例えば、膜貫通フラグメントは、ＣＤ８の膜貫通部分由来であってもよく、細胞内フラグメントは、ＣＤ３０の細胞内ドメイン由来であってもよい。いくつかの実施形態では、ＣＳＲにおける細胞内フラグメント及び膜貫通フラグメントが同じ共刺激分子由来である場合、細胞内フラグメント及び膜貫通フラグメントは、単一の共刺激分子（例えば、単一のＣＤ２８又は単一のＣＤ３０）から取得され得る。他の実施形態では、ＣＳＲにおける細胞内フラグメント及び膜貫通フラグメントが同じ共刺激分子由来である場合、細胞内フラグメントは、第１の共刺激分子（例えば、第１のＣＤ２８）から取得され、第２の共刺激分子（例えば、第２のＣＤ２８）から取得された膜貫通フラグメントに融合され得る。
【０２２５】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９  ＣＳＲは、配列番号８１〜９６のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ＣＳＲは、配列番号９７〜１１２のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０  ＣＳＲは、配列番号１１３〜１２８のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、配列番号１２９〜１４４のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を含む。
【０２２６】
いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞におけるＣＳＲの発現は誘導性である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、本明細書に記載の誘導性プロモータのうちのいずれかを含む誘導性プロモータに作動可能に連結されたＣＳＲをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞におけるＣＳＲの発現は、ｃａＴＣＲを介したシグナル伝達時に誘導性である。いくつかのかかる実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、ｃａＴＣＲを介したシグナル伝達に応答してプロモータ又は調節エレメントに作動可能に連結されたＣＳＲをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲをコードする核酸配列は、活性化Ｔ細胞核内因子（nuclear-factor of the activated T-cell、ＮＦＡＴ）由来プロモータに作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、ＮＦＡＴ由来プロモータは、ＮＦＡＴ由来の最小プロモータである（例えば、Ｄｕｒａｎｄ，Ｄ．ｅｔ．ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．８，１７１５−１７２４（１９８８）；Ｃｌｉｐｓｔｏｎｅ，ＮＡ，Ｃｒａｂｔｒｅｅ，ＧＲ．Ｎａｔｕｒｅ．１９９２  ３５７（６３８０）：６９５−７；Ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ７１．１７（２０１１）：５６９７−５７０６；ａｎｄ  Ｚｈａｎｇ，Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｔｈｅｒａｐｙ  １９．４（２０１１）：７５１−７５９）を参照）。
【０２２７】
抗ＣＤ２２  ＣＡＲ、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ、又は抗ＣＤ２２  ＣＳＲなどの抗ＣＤ２２構築物を発現するエフェクタ細胞（例えば、Ｔ細胞などのリンパ球など）もまた提供される。
【０２２８】
抗ＣＤ２２  ＣＡＲ、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ、又は抗ＣＤ２２  ＣＳＲを発現するエフェクタ細胞の生成方法もまた提供され、方法は、抗ＣＤ２２  ＣＡＲ、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ、又は抗ＣＤ２２  ＣＳＲをコードする核酸を含むベクターをエフェクタ細胞内に導入することを含む。いくつかの実施形態では、ベクターをエフェクタ細胞内に導入することは、ベクターでエフェクタ細胞を形質導入することを含む。いくつかの実施形態では、ベクターをエフェクタ細胞に導入することは、ベクターでエフェクタ細胞をトランスフェクトすることを含む。エフェクタ細胞へのベクターの形質導入又はトランスフェクションは、当該技術分野において既知の任意の方法を使用して実施することができる。
単一特異性構築物
【０２２９】
本発明は、標的リガンド（細胞表面抗原又はペプチド／ＭＨＣ複合体など）に特異的に結合する単一特異性構築物を特徴とし、単一特異性構築物は、標的リガンド結合の際、機能的に発現される表面上の免疫細胞を刺激することができる。いくつかの実施形態では、単一特異性構築物は、ＣＤ２２を特異的に標的化する。いくつかの実施形態では、単一特異性構築物は、ｃａＴＣＲ、ＣＳＲ、ＣＡＲ、完全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体、タンデムｓｃＦｖ、ダイアボディ（Ｄｂ）、一本鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、二重親和性再標的化（ＤＡＲＴ）抗体、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）抗体、ノブ・イントゥ・ホール（ＫｉＨ）抗体、ドックアンドロック（ＤＮＬ）抗体、化学的に架橋された抗体、ヘテロマルチマー抗体、又はヘテロ結合抗体であってもよい。
【０２３０】
いくつかの実施形態では、単一特異性構築物は、抗ＣＤ２２抗体部分を含む抗ＣＤ２２構築物である。特定の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体部分は、（ａ）配列番号２１２の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、（ｂ）配列番号２１３の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体部分は、（ａ）配列番号２１８の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、（ｂ）配列番号２１９の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含む。他の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体部分は、配列番号１８６の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を含む抗ＣＤ２２  ｓｃＦｖを含む。
【０２３１】
いくつかの実施形態では、単一特異性抗ＣＤ２２構築物は、ｃａＴＣＲ、ＣＳＲ、ＣＡＲ、又は抗体であり、それぞれは、一価又は多価（例えば、二価、三価、四価）であり得る。例えば、構築物４（配列番号４）は、抗ＣＤ２２  ｓｃＦｖ及び抗ＣＤ２２  Ｆａｂを含み、「二価単一特異性」構築物とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、単一特異性抗ＣＤ２２構築物は、複数のＦａｂ又はＦａｂ及びｓｃＦｖの組み合わせを含有し得る多価のｃａＴＣＲである。
【０２３２】
いくつかの実施形態では、単一特異性構築物は、ｃａＴＣＲ、例えば、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ、抗ＣＤ１９  ｃａＴＣＲ、又は抗ＣＤ２０  ｃａＴＣＲであり得る。いくつかの実施形態では、単一特異性ｃａＴＣＲは、配列番号２、４、２２、２８、及び７６〜８０のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を含む。
【０２３３】
いくつかの実施形態では、単一特異性構築物は、ＣＳＲ、例えば、抗ＣＤ２２  ＣＳＲ、抗ＣＤ１９  ＣＳＲ、又は抗ＣＤ２０  ＣＳＲであり得る。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９  ＣＳＲは、配列番号８１〜９６のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ＣＳＲは、配列番号９７〜１１２のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０  ＣＳＲは、配列番号１１３〜１２８のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を含む。
多重特異性構築物
【０２３４】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、多重特異性（例えば、二重特異性）であり得る。多重特異性抗ＣＤ２２構築物は、２つ以上の標的に対する抗体部分を有する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＣＤ２２構築物は、ＣＤ２２に対する１つの抗体部分と、１つ以上の非ＣＤ２２抗原（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、Ｂ細胞悪性腫瘍で発現される非ＣＤ２２抗原）に対する１つ以上の追加抗体部分を有する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＣＤ２２構築物は、二重特異性、三重特異性、四重特異的、又は五重特異性であってもよい。いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＣＤ２２構築物は、ｃａＴＣＲ、ＣＳＲ、ＣＡＲ、完全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体、タンデムｓｃＦｖ、ダイアボディ（Ｄｂ）、一本鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、二重親和性再標的化（ＤＡＲＴ）抗体、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）抗体、ノブ・イントゥ・ホール（ＫｉＨ）抗体、ドックアンドロック（ＤＮＬ）抗体、化学的に架橋された抗体、ヘテロマルチマー抗体、又はヘテロ結合抗体であってもよい。
多重特異性構築物−二重特異性構築物
【０２３５】
本発明は、２つの標的リガンド（細胞表面抗原又はペプチド／ＭＨＣ複合体など）に特異的に結合する二重特異性構築物を特徴とし、二重特異性構築物は、標的リガンド結合の際に機能的に発現される表面上の免疫細胞を刺激することができる。いくつかの実施形態では、二重特異性構築物は、ＣＤ２２及びＣＤ１９を特異的に標的化する。他の実施形態では、二重特異性構築物は、ＣＤ２２及びＣＤ２０を特異的に標的化する。
【０２３６】
いくつかの実施形態では、二重特異性構築物は、ｃａＴＣＲ、例えば、抗ＣＤ２２−抗ＣＤ１９  ｃａＴＣＲであり得る。いくつかの実施形態では、二重特異性ｃａＴＣＲは、配列番号１５〜２１のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を含む。
【０２３７】
いくつかの実施形態において、二重特異性構築物は、ＣＳＲであり得る。いくつかの実施形態では、二重特異性ＣＳＲは、配列番号１２９〜１４４のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を含む。
多重特異性構築物−三重特異性構築物
【０２３８】
本発明は、３つの標的リガンド（細胞表面抗原又はペプチド／ＭＨＣ複合体など）に特異的に結合する三重特異性構築物を特徴とし、三重特異性構築物は、標的リガンド結合の際に機能的に発現される表面上の免疫細胞を刺激することができる。いくつかの実施形態では、三重特異性構築物は、ＣＤ２２、ＣＤ１９、及びＣＤ２０を特異的に標的化する。
【０２３９】
いくつかの実施形態では、三重特異性構築物は、配列番号２４〜２７のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＬＧＡタグ（配列番号１９５）は、配列番号２４〜２７のうちのいずれか１つの配列から除去される。
構築物の組み合わせ
【０２４０】
本発明は、本発明の少なくとも２つの異なる構築物を含む構築物の組み合わせを特徴とする。いくつかの実施形態では、少なくとも２つの異なる構築物は、同じ種類の構築物、例えば、２つの異なる抗体（例えば、２つの異なる完全長のＩｇＧ又は２つの異なる二重特異性抗体）、２つの異なるＣＡＲ、２つの異なるｃａＴＣＲ、又は２つの異なるＣＳＲである。いくつかの実施形態では、少なくとも２つの異なる構築物は、異なる種類の構築物、例えば、抗体＋ＣＡＲ、抗体＋ｃａＴＣＲ、ＣＡＲ＋ＣＳＲ、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲなどである。いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、少なくとも１つの単一特異性構築物を含む。いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、少なくとも１つの多重特異性構築物を含む。いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、少なくとも１つの単一特異性構築物及び少なくとも１つの多重特異性構築物を含む。いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせにおける少なくとも２つの異なる構築物は、少なくとも１つの共通の標的に対する抗体部分を有する。いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせにおける少なくとも２つの異なる構築物は、任意の共通標的に対する抗体部分を有さない。
【０２４１】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、本発明の少なくとも１つの抗ＣＤ２２構築物を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗ＣＤ２２構築物は、抗体、ＣＡＲ、ｃａＴＣＲ、又はＣＳＲである。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗ＣＤ２２構築物は、単一特異性構築物である。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗ＣＤ２２構築物は、多重特異性構築物である。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗ＣＤ２２構築物は、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲであり、構築物の組み合わせは、ＣＳＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲは、ＣＳＲと組み合わせて発現される。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗ＣＤ２２構築物は、抗ＣＤ２２  ＣＳＲであり、構築物の組み合わせは、ｃａＴＣＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ＣＳＲは、ｃａＴＣＲと組み合わせて発現される。
単一特異性構築物を含む構築物の組み合わせ
【０２４２】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、標的リガンド（細胞表面抗原又はペプチド／ＭＨＣ複合体など）に特異的に結合する少なくとも１つの単一特異性構築物を含み、単一特異性構築物は、標的リガンド結合の際に機能的に発現される表面上の免疫細胞を刺激することができる。いくつかの実施形態では、単一特異性構築物は、ＣＤ２２を特異的に標的化する。
【０２４３】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、単一特異性構築物を含み、構築物の組み合わせは、配列番号１、３、及び５〜１４のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を含む。
【０２４４】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、単一特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号７７の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号８１〜９６のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２４５】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、単一特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号７７の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号９７〜１１２のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２４６】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、単一特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号７７の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１１３〜１２８のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２４７】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、単一特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号７８の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号８１〜９６のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２４８】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、単一特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号７８の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号９７〜１１２のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２４９】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、単一特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号７８の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１１３〜１２８のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２５０】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、単一特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号７７のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、ＣＤ８、４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、又はＯＸ４０の膜貫通フラグメントを含む配列を有する。いくつかの実施形態では、膜貫通フラグメントは、配列番号１４５〜１５０のうちのいずれか１つの配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、抗ＣＤ２２部分を含む。
【０２５１】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、単一特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号７７のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、及びＣＤ２７からなる群から選択される分子の細胞内フラグメントを含む配列を有する。いくつかの実施形態では、細胞内フラグメントは、配列番号１５１〜１５５のうちのいずれか１つの配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、抗ＣＤ２２部分を含む。
【０２５２】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、単一特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号７７のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１５６〜１７１のうちのいずれか１つの配列を含む配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、抗ＣＤ２２部分を含む。
【０２５３】
本明細書に開示される構築物の組み合わせのうちのいずれか１つにおいて、いくつかの実施形態では、それぞれのｃａＴＣＲ及びＣＳＲは、単一の核酸によってコードされ、発現され、単一のポリペプチドとして最初に翻訳され、次いで、別個のポリペプチドに切断され得る。ｃａＴＣＲ及びＣＳＲは、切断可能なＰ２Ａペプチド（例えば、配列番号１９０）を介して結合することができる。他の実施形態では、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲは、２つの異なる核酸によってコードされ、発現され、別個のポリペプチドとして別個に翻訳され得る。
二重特異性構築物を含む構築物の組み合わせ
【０２５４】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、２つの標的リガンド（細胞表面抗原又はペプチド／ＭＨＣ複合体など）に特異的に結合する少なくとも１つの二重特異性構築物を含み、二重特異性構築物は、標的リガンド結合の際、機能的に発現される表面上の免疫細胞を刺激することができる。いくつかの実施形態では、二重特異性構築物は、ＣＤ２２及びＣＤ１９を特異的に標的化する。他の実施形態では、二重特異性構築物は、ＣＤ２２及びＣＤ２０を特異的に標的化する。
【０２５５】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性構築物を含み、構築物の組み合わせは、配列番号２３及び２９〜７５のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を含む。
【０２５６】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１５の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号８１〜９６のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２５７】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１６の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号８１〜９６のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２５８】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１７の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号８１〜９６のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２５９】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１８の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号８１〜９６のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２６０】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１９の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号８１〜９６のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２６１】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２０の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号８１〜９６のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２６２】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２１の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号８１〜９６のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２６３】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１５の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号９７〜１１２のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２６４】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１６の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号９７〜１１２のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２６５】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１７の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号９７〜１１２のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２６６】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１８の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号９７〜１１２のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２６７】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１９の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号９７〜１１２のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２６８】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２０の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号９７〜１１２のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２６９】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２１の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号９７〜１１２のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２７０】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１５の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１１３〜１２８のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２７１】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１６の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１１３〜１２８のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２７２】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１７の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１１３〜１２８のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２７３】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１８の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１１３〜１２８のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２７４】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１９の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１１３〜１２８のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２７５】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２０の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１１３〜１２８のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２７６】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２１の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１１３〜１２８のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２７７】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１５の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１２９〜１４４のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２７８】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１６の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１２９〜１４４のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２７９】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１７の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１２９〜１４４のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２８０】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１８の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１２９〜１４４のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２８１】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号１９の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１２９〜１４４のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２８２】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２０の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１２９〜１４４のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２８３】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２１の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１２９〜１４４のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２８４】
本明細書に開示される二重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含む構築物の組み合わせのうちのいずれか１つにおいて、いくつかの実施形態では、それぞれのｃａＴＣＲ及びＣＳＲは、単一の核酸によってコードされ、発現され、単一のポリペプチドとして最初に翻訳され、次いで別個のポリペプチドに切断され得る。ｃａＴＣＲ及びＣＳＲは、切断可能なＰ２Ａペプチド（例えば、配列番号１９０）を介して結合することができる。他の実施形態では、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲは、２つの異なる核酸においてコードされ、発現され、別個のポリペプチドとして別個に翻訳され得る。
三重特異性構築物を含む構築物の組み合わせ
【０２８５】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、３つの標的リガンド（細胞表面抗原又はペプチド／ＭＨＣ複合体など）に特異的に結合する少なくとも１つの三重特異性構築物を含み、三重特異性構築物は、標的リガンド結合の際、機能的に発現される表面上の免疫細胞を刺激することができる。いくつかの実施形態では、三重特異性構築物の組み合わせは、ＣＤ２２、ＣＤ１９、及びＣＤ２０を特異的に標的化する。
【０２８６】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、三重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２４の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号８１〜９６のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２８７】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、三重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２５の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号８１〜９６のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２８８】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、三重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２６の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号８１〜９６のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２８９】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、三重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２７の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号８１〜９６のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２９０】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、三重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２４の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号９７〜１１２のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２９１】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、三重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２５の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号９７〜１１２のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２９２】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、三重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２６の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号９７〜１１２のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２９３】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、三重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２７の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号９７〜１１２のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２９４】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、三重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２４の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１１３〜１２８のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２９５】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、三重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２５の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１１３〜１２８のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２９６】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、三重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２６の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１１３〜１２８のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２９７】
いくつかの実施形態では、構築物の組み合わせは、三重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含み、ｃａＴＣＲは、配列番号２７の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１１３〜１２８のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する。
【０２９８】
本明細書に開示される三重特異性ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含む構築物の組み合わせのうちのいずれか１つにおいて、いくつかの実施形態では、それぞれのｃａＴＣＲ及びＣＳＲは、単一の核酸によってコードされ、発現され、単一のポリペプチドとして最初に翻訳され、次いで別個のポリペプチドに切断され得る。ｃａＴＣＲ及びＣＳＲは、切断可能なＰ２Ａペプチド（例えば、配列番号１９０）を介して結合することができる。他の実施形態では、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲは、２つの異なる核酸においてコードされ、発現され、別個のポリペプチドとして別個に翻訳され得る。
【０２９９】
いくつかの実施形態では、標的抗原を結合する際、ＣＤ３ζと会合すると、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞を活性化することができる。一般的に、ＣＳＲはＣＤ３ζと会合せず、標的抗原を結合する際、Ｔ細胞を活性化しない。ｃａＴＣＲ及びＣＳＲの更なる説明及び実施例は、それぞれが参照によりその全体が本明細書に援用されている国際公開第２０１８／２００５８２号及び同第２０１８／２００５８３号に見出すことができる。
抗体−薬物コンジュゲート
【０３００】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２抗体部分及び治療薬を含む抗ＣＤ２２免疫コンジュゲート（本明細書では、「抗体−薬物コンジュゲート」、又は「ＡＤＣ」とも称される）が提供される。いくつかの実施形態では、治療薬は、細胞傷害性、細胞増殖抑制性のいずれか一方である毒素であるか、あるいは別の方法で標的細胞が分裂する能力を防止又は低減する毒素である。細胞傷害剤又は細胞増殖抑制剤の局所送達のためのＡＤＣ、すなわち、癌の治療における腫瘍細胞を殺傷又は阻害する薬物（Ｓｙｒｉｇｏｓ  ａｎｄ  Ｅｐｅｎｅｔｏｓ，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １９：６０５−６１４（１９９９）；Ｎｉｃｕｌｅｓｃｕ−Ｄｕｖａｚ  ａｎｄ  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ａｄｖ．Ｄｒｇ．Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．２６：１５１−１７２（１９９７）；米国特許第４，９７５，２７８号）の使用により、標的細胞への薬剤部分の標的化送達、及び標的細胞への細胞内蓄積を可能にし、これらの非コンジュゲート化治療薬の全身投与により、正常細胞並びに排除されることが求められる標的細胞への許容不可能なレベルの毒性がもたらされ得る（Ｂａｌｄｗｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ（Ｍａｒ．１５，１９８６）：６０３−６０５（１９８６）；Ｔｈｏｒｐｅ，（１９８５）「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  Ｏｆ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ，」ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ａ．Ｐｉｎｃｈｅｒａ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．４７５−５０６）。したがって、最小限の毒性による最大有効性が求められている。
【０３０１】
抗ＣＤ２２免疫コンジュゲート（例えば、抗ＣＤ２２  ＡＤＣ）に使用される治療薬としては、例えば、ダウノマイシン、ドキソルビシン、メトトレキサート、及びビンデシンが挙げられる（Ｒｏｗｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２１：１８３−１８７（１９８６）を参照されたい）。抗ＣＤ２２免疫コンジュゲートに使用される毒素としては、ジフテリア毒素などの細菌毒素、リシンなどの植物毒素、ゲルダナマイシンなどの小分子毒素（Ｍａｎｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎａｔ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９２（１９）：１５７３−１５８１（２０００）；Ｍａｎｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ  １０：１０２５−１０２８（２０００）；Ｍａｎｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．１３：７８６−７９１（２００２））、マイタンシノイド（欧州特許第１３９１２１３号；Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：８６１８−８６２３（１９９６））、及びカリケアマイシン（Ｌｏｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５８：２９２８（１９９８）；Ｈｉｎｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５３：３３３６−３３４２（１９９３）を参照されたい）。毒素は、チューブリン結合、ＤＮＡ結合、又はトポイソメラーゼ阻害を含む機構によって、細胞傷害効果及び細胞増殖抑制効果を発揮し得る。いくつかの細胞傷害薬は、大型抗体又はタンパク質受容体リガンドにコンジュゲートした場合、非活性であるか、又は活性が小さくなる傾向がある。
【０３０２】
使用することができる酵素的に活性な毒素及びこれらのフラグメントとしては、例えば、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性フラグメント、（緑膿菌由来の）菌体外毒素Ａ鎖、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、α−サルシン、シナアブラギリタンパク質、ダイアンシンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウタンパク質（Phytolaca americana protein、ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ及びＰＡＰ−Ｓ）、ニガウリ阻害剤、クルシン、クロチン、サボンソウ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン及びトリコセセンズが挙げられる。例えば、１９９３年１０月２８日に発行された国際公開第９３／２１２３２号を参照。
【０３０３】
抗ＣＤ２２抗体部分の抗ＣＤ２２免疫コンジュゲート（例えば、抗ＣＤ２２  ＡＤＣ）、並びに、カリケアマイシン、マイタンシノイド、ドラスタチン、及びＣＣ１０６５、並びに毒素活性を有するこれらの毒素の誘導体などの１種以上の小分子毒素もまた本明細書において想到される。
【０３０４】
いくつかの実施形態では、細胞内活性を有する治療薬を含む抗ＣＤ２２免疫コンジュゲート（例えば、抗ＣＤ２２  ＡＤＣ）が提供される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２免疫コンジュゲートは内在化し、治療薬は、細胞のタンパク質合成を阻害し、細胞死をもたらす細胞毒素である。いくつかの実施形態では、治療薬は、例えば、ゲロニン、ブーゲニン、サポリン、リシン、リシンＡ鎖、ブリオジン（bryodin）、ジフテリア毒素、レストリクトシン、緑膿菌由来菌体外毒素Ａ及びこれらの変異体を含む、リボソーム不活性化活性を有するポリペプチドを含む細胞毒素である。治療薬が、リボソーム不活性化活性を有するポリペプチドを含む細胞毒素であるいくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２免疫コンジュゲートは、タンパク質が細胞に対して細胞傷害性であるように、標的細胞への結合時に内在化していなければならない。
【０３０５】
いくつかの実施形態では、ＤＮＡを破壊するように作用する治療薬を含む抗ＣＤ２２免疫コンジュゲート（例えば、抗ＣＤ２２  ＡＤＣ）が提供される。いくつかの実施形態では、ＤＮＡを破壊するように作用する治療薬は、例えば、エンジイン（例えば、カリケアマイシン及びエスペラマイシン）及び非エンジインである低分子の薬剤（例えば、ブレオマイシン、メチジウムプロピル−ＥＤＴＡ−Ｆｅ（ＩＩ））からなる群から選択される。
【０３０６】
本発明は、抗ＣＤ２２抗体部分と核酸分解活性を有する化合物（例えば、リボヌクレアーゼ又はデオキシリボヌクレアーゼ、すなわち、ＤＮａｓｅなどのＤＮＡエンドヌクレアーゼ）との間に形成された抗ＣＤ２２免疫コンジュゲート（例えば、抗ＣＤ２２  ＡＤＣ）を更に想到している。
【０３０７】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２免疫コンジュゲートは、チューブリンを破壊するように作用する薬剤を含む。このような薬剤としては、例えば、リゾキシン／メイタンシン、パクリタキセル、ビンクリスチン、及びビンブラスチン、コルヒチン、アウリスタチンドラスタチン１０ＭＭＡＥ、並びにペロルシドＡを挙げることができる。
【０３０８】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２免疫コンジュゲート（例えば、抗ＣＤ２２  ＡＤＣ）は、例えば、アサレイ（Ａｓａｌｅｙ）ＮＳＣ１６７７８０、ＡＺＱ  ＮＳＣ１８２９８６、ＢＣＮＵ  ＮＳＣ４０９９６２、ブスルファン（Ｂｕｓｕｌｆａｎ）ＮＳＣ７５０、カルボキシフタラト白金ＮＳＣ２７１６７４、ＣＢＤＣＡ  ＮＳＣ２４１２４０、ＣＣＮＵ  ＮＳＣ７９０３７、ＣＨＩＰ  ＮＳＣ２５６９２７、クロラムブシルＮＳＣ３０８８、クロロゾトシンＮＳＣ１７８２４８、シス−白金ＮＳＣ１１９８７５、クロメゾンＮＳＣ３３８９４７、シアノモルホリノドキソルビシンＮＳＣ３５７７０４、シクロジソンＮＳＣ３４８９４８、ジアンヒドロガラクチトールＮＳＣ１３２３１３、フルオロドパン（ｆｌｕｏｒｏｄｏｐａｎ）ＮＳＣ７３７５４、ヘプスルファム（ｈｅｐｓｕｌｆａｍ）ＮＳＣ３２９６８０、ヒカントン（ｈｙｃａｎｔｈｏｎｅ）ＮＳＣ１４２９８２、メルファランＮＳＣ８８０６、メチルＣＣＮＵ  ＮＳＣ９５４４１、マイトマイシンＣ  ＮＳＣ２６９８０、ミトゾールアミドＮＳＣ３５３４５１、ナイトロジェンマスタードＮＳＣ７６２、ＰＣＮＵ  ＮＳＣ９５４６６、ピペラジンＮＳＣ３４４００７、ピペラジンジオンＮＳＣ１３５７５８、ピポブロマンＮＳＣ２５１５４、ポルフィロマイシンＮＳＣ５６４１０、スピロヒダントインマスタード（ｓｐｉｒｏｈｙｄａｎｔｏｉｎ  ｍｕｓｔａｒｄ）ＮＳＣ１７２１１２、テロキシロン（ｔｅｒｏｘｉｒｏｎｅ）ＮＳＣ２９６９３４、テトラプラチンＮＳＣ３６３８１２、チオテパＮＳＣ６３９６、トリエチレンメラミンＮＳＣ９７０６、ウラシルナイトロジェンマスタードＮＳＣ３４４６２及びヨシ（Ｙｏｓｈｉ）−８６４  ＮＳＣ１０２６２７を含むアルキル化剤を含む。
【０３０９】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２免疫コンジュゲート（例えば、抗ＣＤ２２  ＡＤＣ）は、高放射性原子を含む。放射性コンジュゲートした抗体の生成には、様々な放射性同位体が利用可能である。例としては、２１１Ａｔ、１３１Ｉ、１２５Ｉ、９０Ｙ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１５３Ｓｍ、２１２Ｂｉ、３２Ｐ、２１２Ｐｂ、及びＬｕの放射性同位体が挙げられる。
【０３１０】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２抗体部分は、抗体−受容体コンジュゲートが患者に投与される場所において腫瘍を事前に標的とする際に利用するための「受容体」（ストレプトアビジンなど）にコンジュゲートさせることができ、続いて、クリア剤を使用して循環から非結合コンジュゲートを除去し、次いで、細胞毒性剤（例えば、放射性ヌクレオチド）にコンジュゲートしている「リガンド」（例えば、アビジン）を投与する。
【０３１１】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２免疫コンジュゲート（例えば、抗ＣＤ２２  ＡＤＣ）は、プロドラッグ活性化酵素にコンジュゲートした抗ＣＤ２２抗体部分を含んでもよい。いくつかのこのような実施形態では、プロドラッグ活性化酵素は、プロドラッグを抗ウイルス薬などの活性薬剤に変換する。かかる抗ＣＤ２２免疫コンジュゲートは、いくつかの実施形態では、抗体依存性酵素介在性プロドラッグ療法（「ＡＤＥＰＴ」）において有用である。抗体にコンジュゲートされ得る酵素としては、リン酸塩含有プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用なアルカリホスファターゼ；硫酸塩含有プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用なアリールスルファターゼ；ペプチド含有プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用な、セラチアプロテアーゼ、テルモリシン、サブチリシン、カルボキシペプチダーゼ、及びカテプシン（カテプシンＢ及びＬなど）などのプロテアーゼ；Ｄ−アミノ酸置換基を含有するプロドラッグを変換するのに有用なＤ−アラニルカルボキシペプチダーゼ；グリコシル化プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用な、β−ガラクトシダーゼ及びノイラミニダーゼなどの炭水化物分解酵素；β−ラクタムで誘導化された薬物を遊離薬物に変換するのに有用なβ−ラクタマーゼ；並びにフェノキシアセチル基又はフェニルアセチル基をそれぞれ有するアミン窒素で誘導化された薬物を遊離薬物に変換するのに有用なペニシリンＶアミダーゼ及びペニシリンＧアミダーゼなどのペニシリンアミダーゼが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、酵素は、当該技術分野において周知の組み換えＤＮＡ技術によって抗体部分に共有結合してもよい。例えば、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：６０４−６０８（１９８４）を参照。
【０３１２】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２免疫コンジュゲート（例えば、抗ＣＤ２２  ＡＤＣ）のうち治療に効果的な部分は核酸であり得る。使用され得る核酸としては、チオグアニン及びチオプリンなどの核酸類似体を含む、アンチセンスＲＮＡ、遺伝子又は他のポリヌクレオチドが挙げられるが、これらに限定されない。
【０３１３】
本出願は、エフェクタ分子に付着した抗ＣＤ２２抗体部分を含む抗ＣＤ２２免疫コンジュゲート（例えば、抗ＣＤ２２  ＡＤＣ）を更に提供し、エフェクタ分子は、標識であり、間接的又は直接的に検出可能なシグナルを生成することができる。これらの抗ＣＤ２２免疫コンジュゲートは、癌のインビボでの検出などの研究又は診断用途に使用することができる。標識は、好ましくは、検出可能なシグナルを直接的又は間接的に生成することができる。例えば、標識は、放射線不透過性、若しくは３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉなどの放射性同位体；フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン若しくはルシフェリンなどの蛍光（発蛍光団）化合物若しくは化学発光（発色団）化合物；アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、若しくは西洋ワサビペルオキシダーゼなどの酵素；造影剤；又は金属イオンであってもよい。いくつかの実施形態では、標識は、シンチグラフィ検査用の放射性原子、例えば、９９Ｔｃ若しくは１２３Ｉ、又はジルコニウム−８９、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガン又は鉄などの（磁気共鳴撮像法、すなわち、ＭＲＩとしても既知である）核磁気共鳴（nuclear magnetic resonance、ＮＭＲ）撮像用のスピン標識である。ジルコニウム−８９は、様々な金属キレート剤と錯体化され、例えば、ＰＥＴ画像診断（国際公開第２０１１／０５６９８３号）に関して、抗体にコンジュゲートされ得る。
【０３１４】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２免疫コンジュゲートは、間接的に検出可能である。例えば、抗ＣＤ２２免疫コンジュゲートに特異性であり、検出可能な標識を含有する二次抗体を使用して、抗ＣＤ２２免疫コンジュゲートを検出することができる。
ＩＩＩ．ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞
【０３１５】
本発明は、本明細書に記載されるｃａＴＣＲ及びＣＳＲのうちの任意によるｃａＴＣＲ及びＣＳＲを表面に提示する免疫細胞（Ｔ細胞など）を提供する（かかる免疫細胞は、本明細書において「ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞」とも称される）。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲをコードする核酸を含み、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲは、核酸から発現され、免疫細胞表面に局在化される。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットを発現しない。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞はαβＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭＳは、ＴＣＲδ鎖及びＴＣＲγ鎖に由来する配列を含むか、あるいは、Ｔ細胞は、γδＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲα鎖及びＴＣＲβ鎖に由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、免疫細胞の内因性ＴＣＲサブユニットのうちの一方又は両方の発現を阻害又は減少させるように修飾される。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＴＣＲα鎖及び／又はＴＣＲβ鎖の発現を阻害又は減少させるように修飾されたαβＴ細胞であるか、あるいは免疫細胞は、ＴＣＲγ鎖及び／又はＴＣＲδ鎖の発現を阻害又は減少させるように修飾されたγδＴ細胞である。遺伝子発現を中断させる細胞の修飾としては、例えば、ＲＮＡ干渉（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）、遺伝子編集（例えば、ＣＲＩＳＰＲ又はＴＡＬＥＮ系遺伝子ノックアウト）などを含む、当該技術分野において既知の任意のかかる技術が挙げられる。
【０３１６】
例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるｃａＴＣＲのいずれかによるｃａＴＣＲをコードする核酸と、本明細書に記載されるＣＳＲのいずれかによるＣＳＲと、を含む、免疫細胞（Ｔ細胞など）が提供され、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲは、核酸から発現され、免疫細胞表面に局在化される。いくつかの実施形態では、核酸は、ｃａＴＣＲの第１のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第１のｃａＴＣＲ核酸配列と、ｃａＴＣＲの第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第２のｃａＴＣＲ核酸配列と、ＣＳＲのＣＳＲポリペプチド鎖をコードするＣＳＲ核酸配列と、を含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列並びにＣＳＲ核酸配列はそれぞれ、異なるベクターに含まれる。いくつかの実施形態では、核酸配列の一部又は全ては、同じベクターに含まれる。ベクターは、例えば、哺乳動物発現ベクター及びウイルスベクター（レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、ヘルペスウイルス、及びレンチウイルス由来のものなど）からなる群から選択され得る。いくつかの実施形態では、ベクターのうちの１つ以上は、免疫細胞の宿主ゲノムに組み込まれている。いくつかの実施形態では、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列並びにＣＳＲ核酸配列はそれぞれ、異なるプロモータの制御下にある。いくつかの実施形態では、プロモータの一部又は全ては、同じ配列を有する。いくつかの実施形態では、プロモータの一部又は全ては、異なる配列を有する。いくつかの実施形態では、核酸配列の一部又は全ては、単一のプロモータの制御下にある。いくつかの実施形態では、プロモータの一部又は全ては、誘導性である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０３１７】
したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲのうちのいずれかによるｃａＴＣＲ及び本明細書に記載のＣＳＲのうちのいずれかによるＣＳＲを表面に発現するｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞（Ｔ細胞など）が提供され、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、ａ）ｃａＴＣＲの第１のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第１のｃａＴＣＲ核酸配列と、ｂ）ｃａＴＣＲの第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第２のｃａＴＣＲ核酸配列と、ｃ）ＣＳＲのＣＳＲポリペプチド鎖をコードするＣＳＲ核酸配列と、を含み、第１及び第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖が、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列から発現して、ｃａＴＣＲを形成し、ＣＳＲポリペプチド鎖が、ＣＳＲ核酸から発現されて、ＣＳＲを形成し、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲが、免疫細胞の表面に局在する。いくつかの実施形態では、第１のｃａＴＣＲ核酸配列は、第１のベクター（レンチウイルスベクターなど）に含有され、第２のｃａＴＣＲ核酸配列は、第２のベクター（レンチウイルスベクターなど）に含有され、ＣＳＲ核酸配列は、第３のベクター（レンチウイルスベクターなど）に含有される。いくつかの実施形態では、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列並びにＣＳＲ核酸配列の一部又は全ては、同じベクター（レンチウイルスベクターなど）に含有される。いくつかの実施形態では、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列並びにＣＳＲ核酸配列のそれぞれは、個別に、プロモータに作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、核酸配列の一部又は全ては、単一のプロモータの制御下にある。いくつかの実施形態では、プロモータの一部又は全ては、同じ配列を有する。いくつかの実施形態では、プロモータの一部又は全ては、異なる配列を有する。いくつかの実施形態では、プロモータの一部又は全ては、誘導性である。いくつかの実施形態では、ベクターの一部又は全ては、ウイルスベクター（レンチウイルスベクターなど）である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットを発現しない。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞は、αβＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲδ鎖及びＴＣＲγ鎖に由来する配列を含むか、あるいは免疫細胞は、γδＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲα鎖及びＴＣＲβ鎖に由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、その内在性ＴＣＲサブユニットのうちの１つ又は両方の発現を阻害又は減少させるように修飾される。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＴＣＲα鎖及び／若しくはＴＣＲβ鎖の発現を阻害又は減少させるように修飾されたαβＴ細胞であるか、あるいは免疫細胞は、ＴＣＲγ鎖及び／又はＴＣＲδ鎖の発現を阻害又は減少させるように修飾されたγδＴ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ベクターの一部又は全ては、免疫細胞の宿主ゲノムに組み込まれたウイルスベクター（レンチウイルスベクターなど）である。
【０３１８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるｃａＴＣＲのいずれかによるｃａＴＣＲ及び本明細書に記載のＣＳＲのいずれかによるＣＳＲを表面に発現するｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞（Ｔ細胞など）が提供され、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞が、ａ）ｃａＴＣＲの第１のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第１のｃａＴＣＲ核酸配列に作動可能に連結された第１のプロモータを含む第１のベクターと、ｂ）ｃａＴＣＲの第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第２のｃａＴＣＲ核酸配列に作動可能に連結された第２のプロモータを含む第２のベクターと、ｃ）ＣＳＲのＣＳＲポリペプチド鎖をコードするＣＳＲ核酸配列に作動可能に連結された第３のプロモータを含む第３のベクターと、を含み、第１及び第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖が、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列から発現して、ｃａＴＣＲを形成し、ＣＳＲポリペプチド鎖がＣＳＲ核酸配列から発現して、ＣＳＲを形成し、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲは、免疫細胞の表面に局在する。いくつかの実施形態では、プロモータの一部又は全ては、同じ配列を有する。いくつかの実施形態では、プロモータの一部又は全ては、異なる配列を有する。いくつかの実施形態では、プロモータの一部又は全ては、誘導性である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットを発現しない。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞は、αβＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲδ鎖及びＴＣＲγ鎖に由来する配列を含むか、あるいは免疫細胞は、γδＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲα鎖及びＴＣＲβ鎖に由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、その内在性ＴＣＲサブユニットのうちの１つ又は両方の発現を阻害又は減少させるように修飾される。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＴＣＲα鎖及び／若しくはＴＣＲβ鎖の発現を阻害又は減少させるように修飾されたαβＴ細胞であるか、あるいは免疫細胞は、ＴＣＲγ鎖及び／又はＴＣＲδ鎖の発現を阻害又は減少させるように修飾されたγδＴ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第１及び第２のベクターは、免疫細胞の宿主ゲノムに組み込まれたウイルスベクター（レンチウイルスベクターなど）である。
【０３１９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるｃａＴＣＲのいずれかによるｃａＴＣＲ及び本明細書に記載のＣＳＲのいずれかによるＣＳＲを表面に発現するｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞（Ｔ細胞など）が提供され、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、ａ）ｉ）ｃａＴＣＲの第１のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第１のｃａＴＣＲ核酸配列に作動可能に連結された第１のプロモータと、ｉｉ）ｃａＴＣＲの第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第２のｃａＴＣＲ核酸配列に作動可能に連結された第２プロモータと、を含む、第１のベクターと、ｂ）ＣＳＲのＣＳＲポリペプチド鎖をコードするＣＳＲ核酸配列に作動可能に連結された第３のプロモータを含む第２のベクターと、を含み、第１及び第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖は、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列から発現して、ｃａＴＣＲを形成し、ＣＳＲポリペプチド鎖は、ＣＳＲ核酸配列から発現して、ＣＳＲを形成し、ｃａＴＣＲは免疫細胞の表面に局在する。いくつかの実施形態では、プロモータの一部又は全ては、同じ配列を有する。いくつかの実施形態では、プロモータの一部又は全ては、異なる配列を有する。いくつかの実施形態では、プロモータの一部又は全ては、誘導性である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットを発現しない。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞は、αβＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲδ鎖及びＴＣＲγ鎖に由来する配列を含むか、あるいは免疫細胞は、γδＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲα鎖及びＴＣＲβ鎖に由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、その内在性ＴＣＲサブユニットのうちの１つ又は両方の発現を阻害又は減少させるように修飾される。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＴＣＲα鎖及び／若しくはＴＣＲβ鎖の発現を阻害又は減少させるように修飾されたαβＴ細胞であるか、あるいは免疫細胞は、ＴＣＲγ鎖及び／又はＴＣＲδ鎖の発現を阻害又は減少させるように修飾されたγδＴ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第１及び第２のベクターは、免疫細胞の宿主ゲノムに組み込まれたウイルスベクター（レンチウイルスベクターなど）である。第１又は第２のｃａＴＣＲ核酸配列がＣＳＲ核酸配列と交換される場合など、核酸配列のいずれかが交換される実施形態もまた想到されることを理解されたい。
【０３２０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるｃａＴＣＲのいずれかによるｃａＴＣＲ及び本明細書に記載のＣＳＲのいずれかによるＣＳＲを表面に発現するｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞（Ｔ細胞など）が提供され、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、ａ）ｉ）ｃａＴＣＲの第１のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第１のｃａＴＣＲ核酸配列と、ｉｉ）ｃａＴＣＲの第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第２のｃａＴＣＲ核酸配列と、を含む、第１のベクターと、ｂ）ＣＳＲのＣＳＲポリペプチド鎖をコードするＣＳＲ核酸配列に作動可能に連結された第２のプロモータを含む第２のベクターと、を含み、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列は、第１のプロモータの制御下にあり、第１及び第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖は、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列から発現して、ｃａＴＣＲを形成し、ＣＳＲポリペプチド鎖は、ＣＳＲ核酸配列から発現して、ＣＳＲを形成し、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲは免疫細胞の表面に局在する。いくつかの実施形態では、第１のプロモータは、第１のｃａＴＣＲ核酸配列の５’末端に作動可能に連結され、内部リボソーム進入部位（internal ribosomal entry site、ＩＲＥＳ）、及び第１のｃａＴＣＲ核酸配列の３’末端を第２のｃａＴＣＲ核酸配列の５’末端に連結させる自己切断２Ａペプチド（Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ、又はＦ２Ａなど）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１のｃａＴＣＲ核酸配列及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列は、プロモータの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。いくつかの実施形態では、第１のプロモータは、第２のｃａＴＣＲ核酸配列の５’末端に作動可能に連結され、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列の３’末端を第１のｃａＴＣＲ核酸配列の５’末端に連結させる自己切断２Ａペプチド（Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ、又はＦ２Ａなど）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１のｃａＴＣＲ核酸配列及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列は、プロモータの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。いくつかの実施形態では、第１及び／又は第２のプロモータは、同じ配列を有する。いくつかの実施形態では、第１及び／又は第２のプロモータは、異なる配列を有する。いくつかの実施形態では、第１及び／又は第２のプロモータは誘導性である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットを発現しない。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞は、αβＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲδ鎖及びＴＣＲγ鎖に由来する配列を含むか、あるいは免疫細胞は、γδＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲα鎖及びＴＣＲβ鎖に由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、その内在性ＴＣＲサブユニットのうちの１つ又は両方の発現を阻害又は減少させるように修飾される。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＴＣＲα鎖及び／若しくはＴＣＲβ鎖の発現を阻害又は減少させるように修飾されたαβＴ細胞であるか、あるいは免疫細胞は、ＴＣＲγ鎖及び／又はＴＣＲδ鎖の発現を阻害又は減少させるように修飾されたγδＴ細��である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ベクターは、免疫細胞の宿主ゲノムに組み込まれたウイルスベクター（レンチウイルスベクターなど）である。第１又は第２のｃａＴＣＲ核酸配列がＣＳＲ核酸配列と交換される場合など、核酸配列のいずれかが交換される実施形態もまた想到されることを理解されたい。
【０３２１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲのうちのいずれかによるｃａＴＣＲ及び本明細書に記載のＣＳＲのうちのいずれかによるＣＳＲを表面に発現するｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞（Ｔ細胞など）が提供され、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、ａ）ｃａＴＣＲの第１のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第１のｃａＴＣＲ核酸配列と、ｂ）ｃａＴＣＲの第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第２のｃａＴＣＲ核酸配列と、ｃ）ＣＳＲのＣＳＲポリペプチド鎖をコードするＣＳＲ核酸配列と、を含む、ベクターを含み、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列並びにＣＳＲ核酸配列は、単一のプロモータの制御下にあり、第１及び第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖は、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列から発現して、ｃａＴＣＲを形成し、ＣＳＲポリペプチド鎖は、ＣＳＲ核酸配列から発現して、ＣＳＲを形成し、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲは、免疫細胞の表面に局在する。いくつかの実施形態では、プロモータは、個々に、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）及び自己切断２Ａペプチド（Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ、又はＦ２Ａなど）をコードする核酸からなる群から選択された核酸リンカーによって他の核酸配列に連結される、核酸配列のうちの１つに作動可能に連結され、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列並びにＣＳＲ核酸配列が、プロモータの制御下で単一ＲＮＡとして転写される。いくつかの実施形態では、プロモータは誘導性である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットを発現しない。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞は、αβＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲδ鎖及びＴＣＲγ鎖に由来する配列を含むか、あるいは免疫細胞は、γδＴ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ−ＴＭは、ＴＣＲα鎖及びＴＣＲβ鎖に由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、その内在性ＴＣＲサブユニットのうちの１つ又は両方の発現を阻害又は減少させるように修飾される。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＴＣＲα鎖及び／若しくはＴＣＲβ鎖の発現を阻害又は減少させるように修飾されたαβＴ細胞であるか、あるいは免疫細胞は、ＴＣＲγ鎖及び／又はＴＣＲδ鎖の発現を阻害又は減少させるように修飾されたγδＴ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ベクターは、免疫細胞の宿主ゲノムに組み込まれたウイルスベクター（レンチウイルスベクターなど）である。
ＩＶ．Ｆｃ変異体
【０３２２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物は、変異型Ｆｃ領域を含んでもよく、変異型Ｆｃ領域は、参照Ｆｃ領域（又は親Ｆｃ領域又は野生型Ｆｃ領域）に対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含んでもよい。アミノ酸修飾は、エフェクタ機能を変更するように、かつ／又は構築物の血清安定性を増大させるように、Ｆｃ領域でなされ得る。変異型Ｆｃ領域を含む構築物は、Ｆｃ受容体（例えば、ＦｃγＲ）に対する改変された親和性を示し得るが、ただし、変異型Ｆｃ領域は、Ｓｏｎｄｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｎａｔｕｒｅ，４０６：２６７−２７３によって開示されるものなどのＦｃ−Ｆｃ受容体相互作用の結晶学的分析及び構造的分析に基づいてＦｃ受容体と直接接触する位置で置換を有さないことを条件とする。ＦｃγＲなどのＦｃ受容体と直接接触するＦｃ領域内の位置の例は、アミノ酸２３４〜２３９（ヒンジ領域）、アミノ酸２６５〜２６９（Ｂ／Ｃループ）、アミノ酸２９７〜２９９（Ｃ’／Ｅループ）、及びアミノ酸３２７〜３３２（Ｆ／Ｇ）ループである。いくつかの実施形態では、変異型Ｆｃ領域を含む構築物は、構造的分析及び結晶学的分析に基づいて、ＦｃγＲと直接接触する少なくとも１つの残基の修飾を含み得る。
【０３２３】
例えば、活性化受容体及び／又は阻害受容体に対する親和性を変更し、例えば、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）などの改善されたエフェクタ機能をもたらし、Ｃ１ｑに対する結合親和性を増大させ、ＦｃＲ結合を低減又は排除させ、半減期を増大させる、変異型Ｆｃ領域を生成するためのＦｃ領域内のアミノ酸修飾は、当該技術分野において既知である（例えば、米国特許第９，０５１，３７３号、同第９，０４０，０４１号、同第８，９３７，１５８号、同第８，８８３，９７３号、同第８，８８３，１４７号、同第８，８５８，９３７号、同第８，８５２，５８６号、同第８，８０９，５０３号、同第８，８０２，８２３号、同第８，８０２，８２０号、同第８，７９５，６６１号、同第８，７５３，６２９号、同第８，７５３，６２８号、同第８，７３５，５４７号、同第８，７３５，５４５号、同第８，７３４，７９１号、同第８，６９７，３９６号、同第８，５４６，５４３号、同第８，４７５，７９２号、同第８，３９９，６１８号、同第８，３９４，９２５号、同第８，３８８，９５５号、同第８，３８３，１０９号、同第８，３６７，８０５号、同第８，３６２，２１０号、同第８，３３８，５７４号、同第８，３２４，３５１号、同第８，３１８，９０７号、同第８，１８８，２３１号、同第８，１２４，７３１号、同第８，１０１，７２０号、同第８，０９３，３５９号、同第８，０９３，３５７号、同第８，０８８，３７６号、同第８，０８４，５８２号、同第８，０３９，５９２号、同第８，０１２，４７６号、同第７，７９９，９００号、同第７，７９０，８５８号、同第７，７８５，７９１号、同第７，７４１，０７２号、同第７，７０４，４９７号、同第７，６６２，９２５号、同第７，４１６，７２７号、同第７，３７１，８２６号、同第７，３６４，７３１号、同第７，３３５，７４２号、同第７，３３２，５８１号、同第７，３１７，０９１号、同第７，２９７，７７５号、同第７，１２２，６３７号、同第７，０８３，７８４号、同第６，７３７，０５６号、同第６，５３８，１２４号、同第６，５２８，６２４号及び同第６，１９４，５５１号を参照）。
【０３２４】
いくつかの実施形態では、変異型Ｆｃ領域は、親Ｆｃ領域と比較して、異なるグリコシル化パターンを有し得る（例えば、アグリコシル化）。いくつかの実施形態では、異なるグリコシル化パターンは、異なる細胞株、例えば、遺伝子操作された細胞株における発現から生じ得る。
【０３２５】
本明細書に記載の構築物は、１つ以上のＦｃγＲにより大きい親和性で結合する変異型Ｆｃ領域を含んでもよい。このような構築物は、好ましくは、以下に記載されるように、エフェクタ機能をより効果的に介在する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の構築物は、１つ以上のＦｃγＲにより低い親和性で結合する変異型Ｆｃ領域を含み得る。エフェクタ機能の低減又は排除は、場合によっては、例えば、その作用機序がブロッキング又は拮抗作用を伴うが、標的抗原を有する細胞の殺傷を伴わない構築物の場合に所望され得る。いくつかの実施形態では、エフェクタ機能の増加は、腫瘍細胞及び外来抗原を発現する細胞を対象とし得る。
Ｖ．構築物の生成
【０３２６】
提供される構築物若しくは構築物の一部、又は構築物をコードする核酸は、任意の利用可能な手段によって生成され得る。構築物の生成方法は、当該技術分野において周知である。抗体（例えば、ｓｃＦｖ抗体、モノクローナル抗体、及び／又はポリクローナル抗体）を生成するための技術は、当該技術分野において利用可能である。抗血清の生成には、例えば、マウス、ラット、ウサギ、ブタ、ウシ、シカ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、イヌ、サル、及びニワトリなど、広範囲の動物種を使用することができることが理解されるであろう。動物の選択は、当業者に既知であるように、操作容易性、コスト、又は所望の血清量に応じて決定することができる。抗体はまた、対象とする免疫グロブリン重鎖及び軽鎖配列導入哺乳動物又は植物（例えば、ヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子及び軽鎖遺伝子導入げっ歯類）の生成によって形質転換によって生成され得ることが理解されよう。哺乳動物における形質転換生成に関連して、抗体は、ヤギ、ウシ、又は他の哺乳動物の母乳において生成され、母乳から回収され得る（本明細書において参照によりその全体が援用されている、例えば、米国特許第５，８２７，６９０号、同第５，７５６，６８７号、同第５，７５０，１７２号、及び同第５，７４１，９５７号を参照）。あるいは、抗体は、ニワトリにおいて製造することができ、ＩｇＹ分子を生成することができる（Ｓｃｈａｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，ＡＬＴＥＸ１３（５）：８０−８５）。
【０３２７】
いくつかの実施形態では、本発明に好適な抗体は、霊長類の抗体である。例えば、ヒヒにおいて治療的に有用な抗体を産生させる一般的な技術は、例えば、国際特許出願第１９９１／１１４６５号及びＬｏｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ４６：３１０に見出され得る。いくつかの実施形態では、抗体（例えば、モノクローナル抗体）は、ハイブリドーマ法を使用して調製され得る（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ，１９８３，Ｎａｔｕｒｅ  ３０５（５９３４）：５３７−４０）。いくつかの実施形態では、抗体（例えば、モノクローナル抗体）はまた、組換え方法によって製造され得る（例えば、米国特許第４，１６６，４５２号を参照）。
【０３２８】
Ｂ細胞不死化による抗体の生成に伴う困難の多くは、ファージディスプレイを使用して、Ｅ．ｃｏｌｉ又は酵母における構築物成分を操作し、発現させることによって克服することができる。高親和性抗体の回収を確実にするために、組み合わせ免疫グロブリンライブラリは、典型的には、大きなレパートリサイズを含有しなければならない。典型的な戦略は、免疫マウスのリンパ球又は脾臓細胞から得られたｍＲＮＡを利用して、逆転写酵素を使用してｃＤＮＡを合成する。重鎖及び軽鎖遺伝子は、ＰＣＲによって別々に増幅され、ファージクローニングベクター内にライゲーションされる。２つの異なるライブラリが生成されてもよく、１つは重鎖遺伝子を含有し、１つは軽鎖遺伝子を含有する。ライブラリは、ナイーブであってもよいか、あるいは半合成であってもよく、すなわち、全てのアミノ酸（システインを除く）は、ＣＤＲ中の任意の所与の位置に存在する可能性が同等である。ファージＤＮＡは、それぞれのライブラリから単離され、重鎖配列及び軽鎖配列は共にライゲーションされ、パッケージ化されて、組み合わせライブラリを形成する。それぞれのファージは、重鎖ｃＤＮＡ及び軽鎖ｃＤＮＡのランダムペアを含有し、Ｅ．ｃｏｌｉの感染時に、感染細胞中の抗ＣＤ２２構築物におけるポリペプチドの発現を誘導する。対象の抗原（例えば、ＣＤ２２）を認識する構築物を同定するために、ファージライブラリを播種し、プラーク内に存在する構築物分子をフィルタに移す。フィルタを放射性活性標識抗原と共にインキュベートし、次いで洗浄して、過剰な非結合リガンドを除去する。オートラジオグラム上の放射性スポットは、抗原に結合する構築物を含有するプラークを同定する。あるいは、対象の抗原（例えば、ＣＤ２２）を認識する構築物の同定は、抗原に対するファージの結合を反復することによって達成することができ、固形支持体、例えば、ビーズ又は哺乳動物細胞に結合し、続いて非結合ファージを除去し、特異的に結合したファージの溶出によって達成することができる。このような実施形態では、抗原は、まず、例えば、ストレプトアビジンにコンジュゲートされたＤｙｎａｂｅａｄｓ  Ｍ−２８０に固定化するためにビオチン化される。ファージライブラリは、細胞、ビーズ、又は他の固形支持体と共にインキュベートされ、非結合ファージは、洗浄によって除去される。対象の抗原に結合する構築物のファージクローンを選択し、更なる特性評価のために試験される。
【０３２９】
選択されると、フローサイトメトリーによって、生細胞の表面に発現した対象の抗原に対する結合について陽性クローンを試験することができる。簡潔には、ファージクローンは、抗原を発現するか、又は抗原を発現しないかのいずれか一方である細胞（例えば、対象の抗原を発現するよう遺伝子操作されているか、又は抗原を自然発現する細胞）と共にインキュベートされ得る。細胞は洗浄され、次いでマウス抗Ｍ１３コートタンパク質モノクローナル抗体で標識され得る。フローサイトメトリーの前に、細胞を再度洗浄し、蛍光コンジュゲート二次抗体（例えば、ＦＩＴＣ−ヤギ（Ｆａｂ）２抗マウスＩｇＧ）で標識してもよい。ヒト免疫グロブリンファージライブラリの生成に有用なクローニング及び発現ベクターは、例えば、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）から得ることができる。
【０３３０】
同様の戦略を用いて、高親和性ｓｃＦｖクローンを得ることができる。大きなレパートリを有するライブラリは、全ての既知のＶＨ、Ｖκ、及びＶλ遺伝子ファミリーに対応するＰＣＲプライマーを使用して、非免疫ヒトドナーからＶ遺伝子を単離することによって構築され得る。増幅後、Ｖκプール及びＶλプールを組み合わせて、１つのプールが形成され得る。これらのフラグメントは、ファージミドベクターにライゲーションされ得る。ｓｃＦｖリンカー（例えば、（Ｇ４Ｓ）ｎ）は、ＶＬフラグメントの上流のファージミド内（又はそのように所望されるようなＶＨフラグメントの上流）にライゲーションされ得る。ＶＨ及びリンカー−ＶＬフラグメント（又はＶＬ及びリンカー−ＶＨフラグメント）は、ＪＨ領域上で増幅及びアセンブルされ得る。得られたＶＨ−リンカーＶＬ（又はＶＬ−リンカー−ＶＨ）フラグメントは、ファージミドベクター内にライゲーションされ得る。ファージミドライブラリは、上述のようにフィルタを使用するか、又は免疫チューブを使用してパニングされ得る（Ｎｕｎｃ；Ｍａｘｉｓｏｒｐ）。同様の結果は、免疫ウサギのリンパ球又は脾臓細胞からの組み合わせ免疫グロブリンライブラリを構築することによって、かつＰ．ｐａｓｔｏｒｉｓにおけるｓｃＦｖ構築物を発現させることによって達成され得る（例えば、Ｒ  ｉｄｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１３：２５５−２６０を参照）。加えて、適切なｓｃＦｖ抗体の単離後、突然変異生成及び鎖混合（ｃｈａｉｎ−ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）などの親和性成熟プロセスによって、より高い結合親和性及びより遅い解離速度を得ることができる（例えば、Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，７８：１８１−１８８）；Ｏｓｂｏｕｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２：１８１−１９６を参照）。
【０３３１】
ヒト抗体は、様々な技術を用いて生成することができ、すなわち、内在性Ｉｇ遺伝子が部分的又は完全に不活性化されているトランスジェニック動物にヒトＩｇ遺伝子を導入することを利用して、ヒト抗体を合成することができる。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２ヒト抗体は、ヒトＣＤ２２との抗原攻撃に応答してヒト抗体を製造するよう遺伝子操作された非ヒト動物の免疫化によって製造され得る。
【０３３２】
提供された構築物は、例えば、構築物をコードする核酸を発現するよう遺伝子操作された宿主細胞系を利用することによっても生成され得る。代替的にあるいは追加的に、提供された構築物は、化学合成によって（例えば、自動ペプチド合成装置又は構築物をコードする核酸の遺伝子合成を使用して）部分的に又は完全に調製され得る。本明細書に記載の構築物は、任意の適切なベクター又は発現カセットを使用して発現させることができる。様々なベクター（例えば、ウイルスベクター）及び発現カセットは、当該技術分野において既知であり、かかるベクター又は発現カセットが導入され得る細胞は、当該技術分野において既知のように（例えば、連続式又は流加式培養系を使用して）培養することができる。いくつかの実施形態では、細胞は、遺伝子操作されてもよく、遺伝子操作されたポリペプチドを発現するように細胞を遺伝子操作する技術は、当該技術分野において周知である（例えば、Ａｕｓａｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９０，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）を参照）。
【０３３３】
本明細書に記載の構築物は、精製されてもよく、すなわち、濾過、遠心分離、及び／又はＨＰＬＣ若しくはアフィニティクロマトグラフィなどの様々なクロマトグラフィ技術を使用して精製されてもよい。いくつかの実施形態では、提供される構築物のフラグメントは、ペプシン若しくはパパインなどの酵素による消化を含む方法、及び／又は化学還元によるジスルフィド結合の切断によって得られる。
【０３３４】
提供された構築物は、構築物の特性及び／又は活性を改善するような方法で遺伝子操作、生成、かつ／又は精製され得ることが理解されるであろう。例えば、改善された特性としては、特に、安定性の向上、結合親和性及び／又は結合活性の向上、結合特異性の向上、生成の増加、凝集の減少、非特異的結合の低下が挙げられるが、これらに限定されない。  いくつかの実施形態では、提供された構築物は、（例えば、免疫グロブリン又はそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ抗体）との関連のフレームワーク領域において）タンパク質安定性、抗原結合、発現レベルを改善するか、あるいは治療薬、診断薬、若しくは検出試薬のコンジュゲーションのための部位若しくは場所を提供する１つ以上のアミノ酸置換を含むことができる。
ＶＩ．治療薬及び検出試薬
【０３３５】
治療薬又は検出試薬は、本明細書に記載される抗ＣＤ２２構築物に付着されてもよい。治療薬は、例えば、タンパク質、炭水化物、脂質、核酸、有機小分子、非生物学的ポリマー、金属、イオン、放射性同位体などが挙げられるが、これらに限定されない、任意の部類の化学物質であってもよい。いくつかの実施形態では、本発明による使用のための治療薬は、１つ以上の症状又は癌の原因の治療に関連する生物学的活性を有し得る。いくつかの実施形態では、本発明による使用のための治療薬は、免疫系の調節及び／又はＴ細胞介在性細胞傷害の増強に関連する生物学的活性を有し得る。いくつかの実施形態では、本発明による使用のための治療薬は、１つ以上の他の活性を有する。
【０３３６】
検出試薬は、例えば、検出試薬の特定の機能特性及び／又は化学的特性に起因して、アッセイを用いて検出され得る任意の部分を含み得る。かかる試薬の非限定的な例としては、酵素、放射標識、ハプテン、蛍光標識、燐光分子、化学発光分子、発色団、発光分子、光親和性分子、着色粒子、又はビオチンなどの配位子が挙げられる。
【０３３７】
構築物への付着のための系であるような多くの検出試薬が当該技術分野において既知である（例えば、米国特許第５，０２１，２３６号、同第４，９３８，９４８号、及び同第４，４７２，５０９号を参照）。このような検出試薬の例としては、とりわけ、常磁性イオン、放射性同位体、蛍光色素、ＮＭＲ検出可能物質、Ｘ線造影剤が挙げられる。例えば、いくつかの実施形態では、常磁性イオンは、クロム（ＩＩＩ）、マンガン（ＩＩ）、鉄（ＩＩＩ）、鉄（ＩＩ）、コバルト（ＩＩ）、ニッケル（ＩＩ）、銅（ＩＩ）、ネオジム（ＩＩＩ）、サマリウム（ＩＩＩ）、イッテルビウム（ＩＩＩ）、ガドリニウム（ＩＩＩ）、バナジウム（ＩＩ）、テルビウム（ＩＩＩ）、ジスプロシウム（ＩＩＩ）、ホルミウム（ＩＩＩ）、エルビウム（ＩＩＩ）、ランタン（ＩＩＩ）、金（ＩＩＩ）、鉛（ＩＩ）、及び／又はビスマス（ＩＩＩ）のうちの１つ以上である。
【０３３８】
放射性同位体は、アクチニウム−２２５、アスタチン−２１１、ビスマス−２１２、炭素１４、クロム−５１、塩素−３６、コバルト−５７、コバルト−５８、銅−６７、ユーロピウム−１５２、ガリウム−６７、水素−３、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１２４、ヨウ素−１２５、ヨウ素−１３１、インジウム−１１１、鉄−５９、鉛−２１２、ルテチウム−１７７、リン−３２、ラジウム−２２３、ラジウム−２２４、レニウム−１８６、レニウム−１８８、セレン−７５、硫黄−３５、テクネチウム−９９ｍ、トリウム−２２７、イットリウム−９０、及びジルコニウム−８９のうちの１つ以上であってもよい。放射線活性標識構築物は、当該技術分野において周知の技術に従って生成することができる。
【０３３９】
蛍光標識は、とりわけ、Ａｌｅｘａ３５０、Ａｌｅｘａ４３０、ＡＭＣＡ、ＢＯＤＩＰＹ６３０／６５０、ＢＯＤＩＰＹ６５０／６６５、ＢＯＤＩＰＹ−ＦＬ、ＢＯＤＩＰＹ−Ｒ６Ｇ、ＢＯＤＩＰＹ−ＴＭＲ、ＢＯＤＩＰＹ−ＴＲＸ、Ｃａｓｃａｄｅ  Ｂｌｕｅ、Ｃｙ３、Ｃｙ５、６−ＦＡＭ、フルオレセインイソチオシアネート、ＨＥＸ、６−ＪＯＥ、Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ４８８、Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ５００、Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ５１４、Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｂｌｕｅ、ＲＥＧ、Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ  Ｇｒｅｅｎ、Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ  Ｒｅｄ、Ｒｅｎｏｇｒａｐｈｉｎ、ＲＯＸ、ＴＡＭＲＡ、ＴＥＴ、テトラメチルローダミン、及び／又はＴｅｘａｓ  Ｒｅｄであってもよく、あるいは、これらのうちの１つ以上を含んでもよい。
ＶＩＩ．治療の方法
【０３４０】
本発明の抗ＣＤ２２構築物及び／又は組成物は、個体（例えば、ヒトなどの哺乳動物）に投与されて、Ｂ細胞リンパ腫又はＢ細胞白血病などのＢ細胞悪性腫瘍（例えば、ＣＤ２２＋Ｂ細胞悪性腫瘍）を治療することができる。Ｂ細胞悪性腫瘍はまた、本明細書で更に説明されるような様々な種類の癌を含む。Ｂ細胞悪性腫瘍の例としては、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、多発性骨髄腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、前リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、共通急性リンパ性白血病、及びｎｕｌｌ細胞型急性リンパ性白血病が挙げられるが、これらに限定されない。本発明は、個体においてＢ細胞悪性腫瘍（例えば、ＣＤ２２＋Ｂ細胞悪性腫瘍）を治療する方法を提供し、方法は、本明細書に記載される抗ＣＤ２２構築物（例えば、抗ＣＤ２２  ｓｃＦｖ）を含む有効量の医薬組成物を個体に投与することを含み、抗ＣＤ２２構築物は、ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に結合する。
癌
【０３４１】
いくつかの実施形態における、抗ＣＤ２２構築物及び抗ＣＤ２２  ＣＡＲ及び及び抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲを含む抗ＣＤ２２構築物を発現する細胞は、Ｂ細胞関連癌の治療に有用であり得る。本明細書に記載される方法のうちのいずれかを使用して治療され得る癌としては、脈管化されていないか、又はまだ実質的に脈管化されていない腫瘍、並びに脈管化腫瘍が挙げられる。癌は、非固形腫瘍（例えば、白血病及びリンパ腫などの血液系腫瘍）を含んでもよく、又は固形腫瘍を含んでもよい。本発明の抗ＣＤ２２構築物及び抗ＣＤ２２  ＣＡＲ細胞で治療される癌の種類としては、癌腫、芽細胞腫、肉腫、黒色腫、神経内分泌腫瘍、及び神経膠腫、並びに特定の白血病又はリンパ系悪性腫瘍、良性腫瘍及び悪性腫瘍、並びに肉腫、癌腫、黒色腫、及び神経膠腫などの悪性腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない。成人腫瘍／癌及び小児腫瘍／癌もまた含まれる。
【０３４２】
本明細書に記載される方法のうちのいずれかによる治療のために想到される固形腫瘍としては、神経膠腫（例えば、脳幹神経膠腫及び混合神経膠腫）、（多形グリア芽細胞腫としても知られる）グリア芽腫、星状細胞腫（高悪性度星状細胞腫など）、小児神経膠腫又はグリア芽腫（例えば、小児高悪性度神経膠腫（high-grade glioma、ＨＧＧ）及びびまん性橋膠腫（diffuse intrinsic pontine glioma、ＤＩＰＧ））、ＣＮＳリンパ腫、胚細胞腫、髄芽腫、シュワン腫、頭蓋骨髄腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、神経芽細胞腫、網膜芽腫、及び脳転移が挙げられる。
【０３４３】
いくつかの実施形態では、Ｂ細胞関連癌は、小児神経膠腫である。いくつかの実施形態では、小児神経膠腫は、低悪性度神経膠腫である。いくつかの実施形態では、小児神経膠腫は、高悪性度神経膠腫（ＨＧＧ）である。いくつかの実施形態では、小児神経膠腫は、多形グリア芽細胞腫である。いくつかの実施形態では、小児神経膠腫は、びまん性橋膠腫（ＤＩＰＧ）である。いくつかの実施形態では、ＤＩＰＧは、グレードＩＩである。いくつかの実施形態では、ＤＩＰＧは、グレードＩＩＩである。いくつかの実施形態では、ＤＩＰＧは、グレードＩＶである。
【０３４４】
治療のために想到される更なる固形腫瘍としては、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫（明細胞軟骨肉腫など）、軟骨芽細胞腫、骨肉腫、及び他の肉腫、滑液腫瘍、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、リンパ悪性腫瘍、膵臓癌、乳癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、肝細胞癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、甲状腺髄様癌、甲状腺乳頭癌、褐色細胞腫、乳頭癌、乳頭腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌、肝腫、胆管癌、絨毛癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸部癌（例えば、子宮頸癌及び子宮頸部異形成）、肛門癌、肛門管癌、肛門直腸癌、膣癌、外陰部癌（例えば、扁平上皮癌、上皮内癌、腺癌、及び線維肉腫）、陰茎癌、口腔咽頭癌、頭部癌（例えば、扁平上皮癌）、頸癌（例えば、扁平上皮癌）、精巣癌（例えば、精上皮腫、奇形腫、胎生期癌、奇形癌、絨毛癌、肉腫、ライディッヒ細胞腫、線維腫、線維腺腫、類腺腫瘍、及び脂肪腫）、膀胱癌、黒色腫、子宮癌（例えば、子宮内膜癌）、及び尿路上皮癌（例えば、扁平上皮癌、転移細胞癌、腺癌、尿管癌、及び膀胱癌）が挙げられる。
【０３４５】
本明細書に記載される方法のうちのいずれかによる治療のために想到される血液癌としては、急性白血病（急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病及び骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性及び赤白血病など）、慢性白血病（慢性骨髄性（顆粒球）白血病、慢性骨髄性白血病、及び慢性リンパ性白血病）、真性赤血球増加症、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫（無痛性及び高悪性度形態）、多発性骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、重鎖病、骨髄異形成症候群、ヘアリー細胞白血病及び骨髄異形成症が挙げられる。
【０３４６】
癌治療は、例えば、腫瘍退縮、腫瘍重量又はサイズ収縮、無増悪期間、生存期間、無増悪生存、全奏功率、奏功期間、生活の質、タンパク質発現量及び／又は活性によって評価することができる。例えば、放射線画像撮影による応答の測定を含む治療の有効性を判定するためのアプローチを用いることができる。
【０３４７】
いくつかの実施形態では、Ｂ細胞悪性腫瘍（例えば、ＣＤ２２＋Ｂ細胞悪性腫瘍）を治療する方法において使用される抗ＣＤ２２構築物は、ｉ）それぞれ配列番号２０６〜２０８の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２及びＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つ以上を含む軽鎖可変領域と、ｉｉ）それぞれ配列番号２０９〜２１１の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つ以上を含む重鎖可変領域と、を含む、抗体部分を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、それぞれ配列番号２０６〜２１１の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、ＬＣ−ＣＤＲ３、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む。他の実施形態では、Ｂ細胞悪性腫瘍を治療する方法において使用される抗ＣＤ２２構築物は、ｉ）それぞれ配列番号２０６〜２０８の配列のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２１２の配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列と、を有する軽鎖可変領域と、ｉｉ）それぞれ配列番号２０９〜２１１の配列のＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２１３の配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列と、を有する重鎖可変領域と、を含む抗体部分を含み、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、リンカーを介して互いに結合されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、完全長抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、ＣＡＲ又はｃａＴＣＲである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、上記の抗体部分及びエフェクタ分子を含む免疫コンジュゲートである。エフェクタ分子は、治療薬（例えば、薬物、毒素、放射性同位体、タンパク質、ペプチド、又は核酸）又は標識であってもよい。いくつかの実施形態では、治療薬は、薬物又は毒素である。いくつかの実施形態では、組成物は、抗ＣＤ２２構築物に関連する細胞（エフェクタ細胞など）を更に含む。
【０３４８】
いくつかの実施形態では、Ｂ細胞悪性腫瘍（例えば、ＣＤ２２＋Ｂ細胞悪性腫瘍）を治療する方法において使用される抗ＣＤ２２構築物は、ｉ）それぞれ配列番号２１４〜２１６の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つ以上を含む軽鎖可変領域と、ｉｉ）それぞれ配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つ以上を含む重鎖可変領域と、を含む抗体部分を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、それぞれ配列番号２１４〜２１６、２０９、２１０、及び２１７の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、ＬＣ−ＣＤＲ３、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む。他の実施形態では、Ｂ細胞悪性腫瘍を治療する方法において使用される抗ＣＤ２２構築物は、ｉ）それぞれ配列番号２１４〜２１６の配列のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２１８の配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列と、を有する軽鎖可変領域と、ｉｉ）それぞれ配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列のＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２１９の配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列と、を有する重鎖可変領域と、を含む抗体部分を含み、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、リンカーを介して互いに結合されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、完全長抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、ＣＡＲ又はｃａＴＣＲである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、上述の抗体部分及びエフェクタ分子を含む免疫コンジュゲートである。エフェクタ分子は、治療薬（例えば、薬物、毒素、放射性同位体、タンパク質、ペプチド、又は核酸）又は標識であってもよい。いくつかの実施形態では、治療薬は、薬物又は毒素である。いくつかの実施形態では、組成物は、抗ＣＤ２２構築物に関連する細胞（エフェクタ細胞など）を更に含む。
【０３４９】
Ｂ細胞悪性腫瘍（例えば、上記のＣＤ２２＋Ｂ細胞悪性腫瘍）を治療するための方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、個体に投与される前に細胞（例えば、Ｔ細胞などの免疫細胞など）にコンジュゲートされる。したがって、例えば、個体におけるＢ細胞悪性腫瘍（例えば、ＣＤ２２＋Ｂ細胞悪性腫瘍）を治療する方法であって、ａ）本明細書に記載される抗ＣＤ２２構築物又は抗ＣＤ２２構築物の抗体部分を細胞（例えば、Ｔ細胞などの免疫細胞など）にコンジュゲートさせて、抗ＣＤ２２構築物／細胞コンジュゲートを形成することと、ｂ）抗ＣＤ２２構築物／細胞コンジュゲートを含む有効量の組成物を個体に投与することと、を含む方法が提供される。いくつかの実施形態では、細胞は、個体に由来する。いくつかの実施形態では、細胞は、個体に由来しない。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、細胞の表面上の分子に共有結合することによって細胞にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、細胞の表面上の分子への非共有結合によって細胞にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、抗ＣＤ２２構築物の一部を細胞の外側膜に挿入することによって細胞にコンジュゲートされる。
【０３５０】
治療は、例えば、腫瘍退縮、腫瘍重量又はサイズ収縮、無増悪期間、生存期間、無増悪生存、全奏功率、奏功期間、生活の質、タンパク質発現量及び／又は活性によって評価することができる。例えば、放射線画像撮影による応答の測定を含む治療の有効性を判定するためのアプローチを用いることができる。
【０３５１】
いくつかの実施形態では、治療の有効性は、式１００−（Ｔ／Ｃ×１００）（式中、Ｔは、治療された腫瘍の平均相対腫瘍体積であり、Ｃは、未治療の腫瘍の平均相対腫瘍体積である）を使用して算出することができる腫瘍成長阻害率（％ＴＧＩ）として測定することができる。いくつかの実施形態では、％ＴＧＩは、約２％、約４％、約６、約８％、１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、又は９５％超である。
ＶＩＩＩ．抗ＣＤ２２構築物エフェクタ細胞療法
【０３５２】
本出願はまた、抗ＣＤ２２構築物（抗ＣＤ２２  ＣＡＲ、抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ、又は抗ＣＤ２２  ＣＳＲなど）を使用して、Ｂ細胞悪性腫瘍におけるＣＤ２２＋細胞へエフェクタ細胞（初代Ｔ細胞など）の特異性を向け直す方法を提供する。したがって、本発明はまた、哺乳動物におけるＣＤ２２＋細胞を含む標的細胞集団又は標的細胞組織に対するエフェクタ細胞介在性応答（Ｔ細胞介在性免疫応答など）を刺激する方法を提供し、方法は、抗ＣＤ２２  ＣＡＲ又は抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲを発現するエフェクタ細胞（Ｔ細胞など）を哺乳動物に投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞を「刺激する」とは、免疫細胞の活性化とは異なるエフェクタ細胞介在性応答（Ｔ細胞介在性免疫応答など）を誘発することを指す。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２  ＣＳＲは、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を刺激することができるが、免疫細胞を活性化しない。
【０３５３】
抗ＣＤ２２構築物を発現する抗ＣＤ２２構築物エフェクタ細胞（抗ＣＤ２２  ＣＡＲ  Ｔ細胞又は抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞など）は、抗ＣＤ２２構築物を必要とするレシピエントに注入され得る。注入された細胞は、レシピエント内のＣＤ２２＋細胞を殺傷することができる。いくつかの実施形態では、抗体療法とは異なり、抗ＣＤ２２構築物エフェクタ細胞（Ｔ細胞など）は、インビボで複製することができ、持続的な腫瘍制御をもたらし得る長期持続性をもたらす。
【０３５４】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物エフェクタ細胞は、ロバストなインビボでのＴ細胞増殖を受けることができ、かつ長時間、存続することができる抗ＣＤ２２  ＣＡＲ  Ｔ細胞又は抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＤ２２  ＣＡＲ  Ｔ細胞又は抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞は、任意の更なる腫瘍形成又は増殖を阻害するように再活性化され得る特定のメモリＴ細胞に進化する。
【０３５５】
本発明の抗ＣＤ２２構築物Ｔ細胞（抗ＣＤ２２  ＣＡＲ  Ｔ細胞又は抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞など）はまた、哺乳動物におけるエクスビボの免疫及び／又はインビボの治療のための一種のワクチンとしても機能し得る。いくつかの実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。
【０３５６】
エクスビボの免疫に関して、以下のうちの少なくとも１つが、細胞を哺乳動物に投与する前にインビトロで生じる。ｉ）細胞の増殖、ｉｉ）抗ＣＤ２２  ＣＡＲ若しくは抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲをコードする核酸を細胞に導入すること、及び／又はｉｉｉ）細胞の冷凍保存。エクスビボの手順は、当該技術分野において周知である。簡潔には、細胞は、哺乳動物（好ましくはヒト）から単離され、本明細書に開示される抗ＣＤ２２  ＣＡＲ又は抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲを発現するベクターにより遺伝子修飾（すなわち、インビトロで形質導入又はトランスフェクト）される。抗ＣＤ２２  ＣＡＲ細胞又は抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ細胞は、治療効果を提供するように、哺乳動物のレシピエントに投与することができる。哺乳動物のレシピエントは、ヒトであってもよく、抗ＣＤ２２  ＣＡＲ細胞又は抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ細胞は、レシピエントに対して自己移植であってもよい。あるいは、細胞は、レシピエントに対して同種異系、同系又は異種であってもよい。造血幹細胞及び前駆細胞のエクスビボ増殖の手順は、参照により本明細書に援用されている米国特許第５，１９９，９４２号に記載されており、本発明の細胞に適用することができる。他の好適な方法は、当該技術分野において既知であるため、本発明は、細胞のエクスビボ増殖の任意の特定の方法に限定されない。簡潔には、Ｔ細胞のエクスビボ培養及びエクスビボ増殖は、（１）末梢血単核細胞（peripheral blood mononuclear cell、ＰＢＭＣ）からＴ細胞を収集することと、（２）かかる細胞をエクスビボで増殖させることと、を含む。米国特許第５，１９９，９４２号に記載の細胞増殖因子に加えて、ｆｌｔ３−Ｌ、ＩＬ−１、ＩＬ−３、及びｃ−ｋｉｔリガンドなどの他の因子を、細胞の培養及び増殖のために使用することができる。
【０３５７】
本発明はまた、エクスビボ免疫化に関して細胞系ワクチンを使用することに加えて、患者内の抗原に対する免疫応答を誘発するためのインビボ免疫化のための組成物及び方法も提供する。本発明の抗ＣＤ２２構築物エフェクタ細胞（抗ＣＤ２２  ＣＡＲ  Ｔ細胞又は抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞など）は、単独で、あるいは希釈剤と組み合わせた、かつ／又はＩＬ−２若しくは他のサイトカインなどの他の成分又は細胞集団と組み合わせた、医薬組成物としてのいずれか一方で投与され得る。簡潔には、本発明の医薬組成物は、１つ以上の薬学的に又は生理学的に許容される担体、希釈剤、若しくは賦形剤と組み合わせて、抗ＣＤ２２構築物エフェクタ細胞（Ｔ細胞など）を含んでもよい。このような組成物は、中性緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水などの緩衝剤と；グルコース、マンノース、スクロース、又はデキストランなどの炭水化物、マンニトールと；タンパク質と；ポリペプチド又はグリシンなどのアミノ酸と；酸化防止剤と；ＥＤＴＡ又はグルタチオンなどのキレート剤と；アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）と；防腐剤と、を含んでもよい。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物エフェクタ細胞（Ｔ細胞など）組成物は、静注経路、髄腔内経路、頭蓋内経路、大脳内経路、脳室内経路による投与のために製剤化される。
【０３５８】
本発明の抗ＣＤ２２構築物エフェクタ細胞（抗ＣＤ２２  ＣＡＲ  Ｔ細胞又は抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞など）組成物の正確な投与量は、患者（対象）の年齢、体重、腫瘍サイズ、感染又は転移の程度、及び病状の個々の差異を考慮して医師によって判定され得る。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物エフェクタ細胞（Ｔ細胞など）を含む医薬組成物は、以下の範囲内のすべての整数値を含む、約１０４〜約１０５、約１０５〜約１０６、約１０６〜約１０７、約１０７〜約１０８個細胞／ｋｇ体重、又は約１０８〜約１０９個細胞／ｋｇ体重のうちの任意など約１０４〜約１０９個細胞／ｋｇ体重の用量で投与される。抗ＣＤ２２構築物効果細胞（Ｔ細胞など）組成物はまた、これらの用量で複数回投与されてもよい。細胞は、免疫療法において一般的に知られている注入手法を使用することによって投与することができる（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇ．Ｊ．ｏｆ  Ｍｅｄ．３１９：１６７６，１９８８）。特定の患者の最適な用量及び治療レジメンは、疾患の徴候について患者をモニタし、それに応じて治療を調整することによって、医療分野の当業者によって容易に決定することができる。
【０３５９】
いくつかの実施形態では、活性化された抗ＣＤ２２構築物Ｔ細胞（例えば、抗ＣＤ２２  ＣＡＲ  Ｔ細胞又は抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞など）を対象に投与し、続いて血液を再び採取して（又はアフェレーシスを行って）、血液由来のＴ細胞を本発明に従って活性化し、これらの活性化され、増殖したＴ細胞を患者に再注入することが所望され得る。このプロセスは、２〜３週毎に複数回実行することができる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、１０ｃｃ〜４００ｃｃの採取血から活性化され得る。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、２０ｃｃ、３０ｃｃ、４０ｃｃ、５０ｃｃ、６０ｃｃ、７０ｃｃ、８０ｃｃ、９０ｃｃ、又は１００ｃｃの採取血から活性化される。
【０３６０】
抗ＣＤ２２構築物エフェクタ細胞（抗ＣＤ２２  ＣＡＲ  Ｔ細胞又は抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞など）の投与は、注射、経口摂取、輸液、植え付け、又は移植によることを含む任意の好都合な方法で実施され得る。本明細書に記載される組成物は、皮下に、皮内に、腫瘍内に、結節内に、髄内に、筋肉内に、髄腔内に、頭蓋内に、大脳内に、脳室内に、静注経路（ｉ．ｖ．）注射によって、又は腹腔内に、患者に投与され得る。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＤ２２構築物エフェクタ細胞（Ｔ細胞など）組成物は、皮内注射又は皮下注射によって患者に投与される。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＤ２２構築物エフェクタ細胞（Ｔ細胞など）組成物は、ｉ．ｖ．注射により投与される。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＤ２２構築物エフェクタ細胞（Ｔ細胞など）組成物は、髄腔内注射によって投与される。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＤ２２構築物エフェクタ細胞（Ｔ細胞など）組成物は、頭蓋内注射によって投与される。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＤ２２構築物エフェクタ細胞（Ｔ細胞など）組成物は、大脳内注射によって投与される。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＤ２２構築物エフェクタ細胞（Ｔ細胞など）組成物は、脳室内注射によって投与される。抗ＣＤ２２構築物エフェクタ細胞（Ｔ細胞など）の組成物は、腫瘍、リンパ節、又は感染部位に直接注入されてもよい。
【０３６１】
したがって、例えば、いくつかの実施形態では、ａ）ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物又はその抗体部分を含む細胞外ドメインと、ｂ）膜貫通ドメインと、ｃ）ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列、並びにＣＤ２８及び／又は４−１ＢＢ細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインと、を含む、抗ＣＤ２２  ＣＡＲを発現するエフェクタ細胞（Ｔ細胞など）を含む有効量の組成物を個体に投与することを含む、個体におけるＢ細胞悪性腫瘍（例えば、ＣＤ２２＋Ｂ細胞悪性腫瘍）を標的化する方法が提供される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２抗体部分は、ｉ）それぞれ配列番号２０６〜２０８の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つ以上を含む軽鎖可変領域と、ｉｉ）それぞれ配列番号２０９〜２１１の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つ以上を含む重鎖可変領域と、を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、それぞれ配列番号２０６〜２１１の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、ＬＣ−ＣＤＲ３、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む。他の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体部分は、ｉ）それぞれ配列番号２０６〜２０８の配列のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２１２の配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列と、を有する軽鎖可変領域と、ｉｉ）それぞれ配列番号２０９〜２１１の配列のＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２１３の配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列と、を有する重鎖可変領域と、を含み、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、リンカーを介して互いに結合されている。
【０３６２】
したがって、例えば、いくつかの実施形態では、ａ）ＣＤ２２の細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号２０５又はその一部）に特異的に結合する抗ＣＤ２２抗体部分を含む細胞外ドメインと、ｂ）膜貫通ドメインと、ｃ）ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列、並びにＣＤ２８及び／又は４−１ＢＢ細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインと、を含む、抗ＣＤ２２  ＣＡＲを発現するエフェクタ細胞（Ｔ細胞など）を含む有効量の組成物を個体に投与することを含む、個体におけるＢ細胞悪性腫瘍（例えば、ＣＤ２２＋Ｂ細胞悪性腫瘍）を標的化する方法が提供される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２抗体部分は、ｉ）それぞれ配列番号２１４〜２１６の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つ以上を含む軽鎖可変領域と、ｉｉ）それぞれ配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つ以上を含む重鎖可変領域と、を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、それぞれ配列番号２１４〜２１６、２０９、２１０、及び２１７の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、ＬＣ−ＣＤＲ３、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む。他の実施形態では、抗ＣＤ２２抗体部分は、ｉ）それぞれ配列番号２１４〜２１６の配列のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２１８の配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列と、を有する軽鎖可変領域と、ｉｉ）それぞれ配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列のＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２１９の配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％）の同一性を有する配列と、を有する重鎖可変領域と、を含み、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、リンカーを介して互いに結合されている。
ＩＸ．抗ＣＤ２２構築物を使用した診断及び撮像方法
【０３６３】
細胞の表面上のＣＤ２２に特異的に結合する標識された抗ＣＤ２２抗体部分並びにその誘導体及び類似体を診断目的で使用して、Ｂ細胞悪性腫瘍（例えば、Ｂ細胞関連癌又はＣＤ２２＋Ｂ細胞悪性腫瘍）を検出、診断、又はモニタすることができる。例えば、本発明の抗ＣＤ２２抗体部分は、インシトゥ、インビボ、エクスビボ、及びインビトロ診断アッセイ又は撮像アッセイにおいて使用することができる。
【０３６４】
本発明の更なる実施形態は、個体（例えば、ヒトなどの哺乳動物）におけるＢ細胞悪性腫瘍（例えば、Ｂ細胞関連癌又はＣＤ２２＋Ｂ細胞悪性腫瘍）を診断する方法を含む。本方法は、個体においてＣＤ２２提示細胞を検出することを含む。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞悪性腫瘍は、Ｂ細胞リンパ腫又はＢ細胞白血病である。いくつかの実施形態では、上記の実施形態のうちのいずれかによる有効量の標識された抗ＣＤ２２抗体部分を個体に投与することと、（ｂ）個体における標識のレベルを判定して、閾値レベルを超える標識のレベルが、個体がＢ細胞悪性腫瘍を有することを示すことと、を含む、個体（例えば、ヒトなどの哺乳動物）におけるＢ細胞悪性腫瘍（例えば、Ｂ細胞関連癌又はＣＤ２２＋Ｂ細胞悪性腫瘍）を診断する方法が提供される。閾値レベルは、例えば、Ｂ細胞悪性腫瘍を有する第１のセットの個体、及びＢ細胞悪性腫瘍を有さない第２のセットの個体において、上記の診断方法に従って標識を検出することと、第１のセットと第２のセットとの間の識別を可能にするレベルに閾値を設定することと、を含む、様々な方法によって判定することができる。いくつかの実施形態では、閾値レベルはゼロであり、方法は、個体における標識の有無を判定することを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、工程（ａ）の投与後のある時間待機して、標識された抗ＣＤ２２抗体部分が、ＣＤ２２が発現される個体の部位に優先的に集中すること（及び標識された非結合抗ＣＤ２２抗体部分が排除されること）を可能にすることを更に含む。いくつかの実施形態では、方法は、標識のバックグラウンドレベルを差し引くことを更に含む。バックグラウンドレベルは、例えば、標識された抗ＣＤ２２抗体部分の投与前の個体内の標識を検出すること、又はＢ細胞悪性腫瘍を有さない個体において上記の診断方法に従って標識を検出することを含む、様々な方法によって判定することができる。
【０３６５】
本発明の抗ＣＤ２２抗体部分を使用して、当業者に既知の方法を使用して、生体サンプル中のＣＤ２２提示細胞のレベルをアッセイすることができる。好適な抗体標識は、当該技術分野において既知であり、グルコースオキシダーゼなどの酵素標識と；ヨウ素（１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１１５ｍＩｎ、１１３ｍＩｎ、１１２Ｉｎ、１１１Ｉｎ）、テクネチウム（９９Ｔｃ、９９ｍＴｃ）、タリウム（２０１Ｔｉ）、ガリウム（６８Ｇａ、６７Ｇａ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、キセノン（１３３Ｘｅ）、フッ素（１８Ｆ）、サマリウム（１５３Ｓｍ）、ルテチウム（１７７Ｌｕ）、ガドリニウム（１５９Ｇｄ）、プロメチウム（１４９Ｐｍ）、ランタン（１４０Ｌａ）、イッテルビウム（１７５Ｙｂ）、ホルミウム（１６６Ｈｏ）、イットリウム（９０Ｙ）、スカンジウム（４７Ｓｃ）、レニウム（１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ）、プラセオジム（１４２Ｐｒ）、ロジウム（１０５Ｒｈ）、及びルテニウム（９７Ｒｕ）などの放射性同位体と；ルミノールと；フルオレセイン及びローダミンなどの蛍光標識と；ビオチンと、が挙げられる。
【０３６６】
当該技術分野において既知の手法は、本発明の標識された抗ＣＤ２２抗体部分に適用され得る。このような手法としては、二官能性共役剤の使用が挙げられる（例えば、米国特許第５，７５６，０６５号、同第５，７１４，６３１号、同第５，６９６，２３９号、同第５，６５２，３６１号、同第５，５０５，９３１号、同第５，４８９，４２５号、同第５，４３５，９９０号、同第５，４２８，１３９号、同第５，３４２，６０４号、同第５，２７４，１１９号、同第４，９９４，５６０号、及び同第５，８０８，００３号を参照）。上記アッセイとは別に、様々なインビボ及びエクスビボのアッセイが当業者に利用可能である。例えば、対象の体内の細胞を、検出可能な標識、例えば、放射性同位体で任意に標識された抗ＣＤ２２抗体部分に曝露することができ、例えば、放射能を外部走査することによって、又は抗ＣＤ２２抗体部分に以前に曝露された対象に由来する試料（例えば、生検又は他の生体サンプル）を分析することによって、抗ＣＤ２２抗体部分の細胞への結合を評価することができる。
Ｘ．医薬組成物
【０３６７】
本明細書に記載される抗ＣＤ２２構築物を含む組成物（本明細書では製剤とも呼ばれる医薬組成物など）、本明細書に記載される抗ＣＤ２２構築物に含有される１つ以上のポリペプチドをコードする核酸、核酸を含む発現カセット、又は抗ＣＤ２２構築物を発現する宿主細胞もまた本明細書において提供される。いくつかの実施形態では、組成物は、抗ＣＤ２２構築物に関連する細胞（エフェクタ細胞、例えば、Ｔ細胞など）を更に含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物が提供される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、抗ＣＤ２２構築物に関連する細胞（エフェクタ細胞、例えば、Ｔ細胞など）を更に含む。
【０３６８】
抗ＣＤ２２構築物の好適な製剤は、所望の純度を有する抗ＣＤ２２構築物を、任意の薬学的に許容される担体、賦形剤、又は安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））と混合することによって凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で得られる。許容可能な担体、賦形剤、又は安定剤は、用いられる用量及び濃度においてレシピエントに対して非毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルアルコール、若しくはベンジルアルコール；メチルパラベン若しくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾールなどの）防腐剤；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、若しくは免疫グロブリンなどのタンパク質；オリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、若しくはリシンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、若しくはデキストリンを含む、単糖類、二糖類、及び他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、若しくはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）；並びに／又はＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）若しくはポリエチレングリコール（polyethylene glycol、ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤が挙げられる。例示的な製剤は、参照により本明細書に明示的に援用されている国際公開第９８／５６４１８号に記載されている。皮下投与に適合された凍結乾燥製剤は、国際公開第９７／０４８０１号に記載されている。このような凍結乾燥製剤は、好適な希釈剤で高タンパク質濃度に再構成されてもよく、再構成された製剤は、本明細書において治療される個体に皮下投与されてもよい。リポフェクチン又はリポソームを使用して、本発明の抗ＣＤ２２抗体を細胞に送達することができる。
【０３６９】
本明細書の製剤はまた、治療中の特定の指示に対して必要である場合、抗ＣＤ２２構築物に加えて１種以上の活性化合物を含有してもよく、活性化合物は、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有する。例えば、抗ＣＤ２２構築物に加えて、抗腫瘍剤、増殖抑制剤、細胞毒性剤、又は化学療法剤を更に提供することが所望され得る。このような微量物は、意図される目的に有効な量で組み合わされて好適に存在する。このような他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗ＣＤ２２構築物の量、疾患若しくは障害又は治療の種類、及び上記の他の因子に依存する。これらは、大略的に、同一用量でかつ本明細書に記載される投与経路で、あるいはこれまで使用された用量の約１〜９９％で使用される。
【０３７０】
抗ＣＤ２２抗体は、例えば、コアセルベーション技術によって、又は界面重合によって調製された、それぞれ、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミン微小球、マイクロエマルション、ナノ粒子及びナノカプセル）又はマクロエマルションにおける、例えば、ヒドロキシメチルセルロース又はゼラチンマイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセルなどのマイクロカプセルに封入され得る。このような手法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に開示されている。徐放性調製剤が調製されてもよい。
【０３７１】
抗ＣＤ２２構築物の徐放性調製剤が調製されてもよい。徐放性調製剤の好適な例としては、構築物（又はそのフラグメント）を含有する固形疎水性ポリマーの半透過性マトリックスが挙げられ、マトリックスは、成形物品、例えば、フィルム、又はマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリックスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、又はポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌグルタミン酸とエチル−Ｌグルタミン酸とのコポリマー、非分解性エチレン−酢酸ビニル、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸−グリコール酸コポリマー及び酢酸ロイプロリドからなる注入可能な微小球）などの分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、及びポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が挙げられる。エチレン−酢酸ビニル及び乳酸−グリコール酸などのポリマーは、１００日間にわたって分子の放出を可能にするが、特定のヒドロゲル放出タンパク質は、より短い期間にわたって放出される。カプセル化された構築物が長期にわたって体内に残留すると、３７℃で水分に曝露された結果、変性又は凝集する場合があり、生物学的活性の損失及び免疫原性の潜在的な変化をもたらす場合がある。関与する機構に応じて、抗ＣＤ２２構築物の安定化のための合理的戦略を考案することができる。例えば、凝集機構がチオ−ジスルフィド交換による分子間Ｓ−Ｓ結合形成であることが分かった場合、スルフヒドリル残基を修飾することと、酸性溶液から凍結乾燥することと、含水量を制御することと、適切な添加剤を使用することと、特定のポリマーマトリックス組成物を開発することと、によって、安定化を達成することができる。
【０３７２】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、クエン酸塩、ＮａＣｌ，酢酸塩、コハク酸塩、グリシン、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）、又は前述の任意の組み合わせを含む緩衝液中に配合される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、約１００ｍＭ〜約１５０ｍＭのグリシンを含む緩衝液中に配合される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、約５０ｍＭ〜約１００ｍＭのＮａＣｌを含む緩衝液中に配合される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、約１０ｍＭ〜約５０ｍＭの酢酸塩を含む緩衝液中に配合される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、約１０ｍＭ〜約５０ｍＭのコハク酸塩を含む緩衝液中に配合される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、約０．００５％〜約０．０２％のポリソルベート８０を含む緩衝液中に配合される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、約５．１〜５．６のＰＨを有する緩衝液中に配合される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物は、１０ｍＭのクエン酸塩、１００ｍＭのＮａＣｌ、１００ｍＭのグリシン、及び０．０１％のポリソルベート８０を含む緩衝液中に配合され、製剤はｐＨ５．５である。
【０３７３】
インビボの投与に使用される製剤は無菌でなければならない。これは、例えば、滅菌濾過膜を介する濾過によって容易に達成される。
ＸＩ．用量及び投与
【０３７４】
（ヒトなどの）個体に投与される抗ＣＤ２２構築物組成物の用量は、特定の組成物、投与様式、及び治療中の疾患の種類によって変化し得る。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物組成物の量は、個体において完全奏効をもたらすのに十分である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物組成物の量は、個体において部分的奏効をもたらすのに十分である。いくつかの実施形態では、（例えば、単独で投与される場合、）投与される抗ＣＤ２２構築物組成物の量は、抗ＣＤ２２構築物組成物で治療された個体の集団の中で、約２％、４％、６％、８％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６４％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、又は９０％のうちのいずれかを超える全奏功率を生じさせるのに十分な量である。本明細書に記載される方法の治療に対する個体の応答は、例えば、腫瘍成長阻害率（％ＴＧＩ）に基づいて判定することができる。
【０３７５】
いくつかの実施形態では、組成物の量は、個体の全生存期間を延長するのに十分である。いくつかの実施形態では、（例えば、投与される場合、）組成物の量は、抗ＣＤ２２構築物組成物で治療された個体の集団の中で、約２％、４％、６％、８％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、又は７７％のうちのいずれかを超える臨床的利益をもたらすのに十分である。
【０３７６】
いくつかの実施形態では、組成物の量は、治療前の同じ対象における、対応する腫瘍サイズ、癌細胞数、又は腫瘍成長率と比較して、あるいは治療を受けていない他の対象における対応する活性と比較して、少なくとも約２％、４％、６％、８％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％又は１００％のうちのいずれかだけ、腫瘍のサイズを縮小させるか、癌細胞（例えば、ＣＤ２２＋細胞）の数を減少させるか、又は腫瘍増殖速度を低下させるのに十分な量である。標準的な方法を使用して、精製酵素、細胞系アッセイ、動物モデル、又はヒト試験によるインビトロでのアッセイなどのこの効果の大きさを測定することができる。
【０３７７】
いくつかの実施形態では、組成物中の抗ＣＤ２２構築物の量は、毒性効果（すなわち、臨床的に許容可能な毒性レベルを上回る効果）を誘発するレベル未満であるか、あるいは組成物が個体に投与される場合、潜在的な副作用を制御又は許容することができるレベルである。いくつかの実施形態では、組成物の量は、同じ投与レジメンに従う組成物の最大耐性用量（maximum tolerated dose、ＭＴＤ）に近い。いくつかの実施形態では、組成物の量は、ＭＴＤの約８０％、９０％、９５％、又は９８％のうちのいずれかを超える。いくつかの実施形態では、組成物中の抗ＣＤ２２構築物の量は、約０．００１μｇ〜約１０００μｇの範囲内に含まれる。上記態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、組成物中の抗ＣＤ２２構築物の有効量は、総体重の約０．１μｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇの範囲内である。
【０３７８】
抗ＣＤ２２構築物組成物は、例えば、静注経路、動脈内、腹腔内、肺内、経口、経鼻、吸入、膀胱内、筋肉内、気管内、皮下、眼内、髄腔内、頭蓋内、大脳内、脳室内、経粘膜、及び経皮を含む様々な経路を介して、（ヒトなどの）個体に投与され得る。いくつかの実施形態では、組成物の徐放性製剤を使用することができる。いくつかの実施形態では、組成物は、静注経路で投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、動脈内投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、腹腔内投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、髄腔内投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、頭蓋内投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、大脳内投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、脳室内投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、経鼻投与される。
【実施例】
【０３７９】
実施例１−ヒト抗ＣＤ２２構築物の生成及び選択
本実施例は、ヒトＣＤ２２に特異なヒト構築物の生成を実証する。特に、本実施例は、ヒトＣＤ２２をネイティブフォーマットで特異的に結合するヒト一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）の生成を実証する。本明細書に記載のヒト構築物は、正常ドナー及び／又は疾患のあるドナーから作成されたナイーブヒトファージライブラリ又は半合成ヒトファージライブラリを使用して作成され、ＣＤ２２に対する高い特異性に基づいて、ネイティブ構造の細胞表面発現ヒトＣＤ２２をパニングすることにより選択された。したがって、このようなヒト構築物は、とりわけ、完全長ＩｇＧ、多重特異性抗体、及び本来見出されるレパートリから削除され得るキメラ抗原受容体の構築のための貴重な供給源として機能し得る。
【０３８０】
簡潔には、抗ヒトＣＤ２２構築物の作成のための例示的な概要を表２に示す。プロセスは、Ｅ−ＡＬＰＨＡ（登録商標）ファージライブラリからのヒトＣＤ２２特異性構築物及び生物学的活性構築物の同定から開始した。Ｅｕｒｅｋａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓにおいて構築された、Ｅ−ＡＬＰＨＡ（登録商標）ファージライブラリと称される、ヒトｓｃＦｖ抗体ファージディスプレイライブラリ（多様性＝１０Ｘ１０１０）の収集物を、ヒトＣＤ２２に特異なヒト構築物の選択に使用した。Ｅ−ＡＬＰＨＡ（登録商標）ファージライブラリには、完全にナイーブなヒト重鎖レパートリ及びヒト軽鎖レパートリからなるナイーブライブラリ、並びに完全にナイーブなヒト軽鎖レパートリ及び完全にランダム化された重鎖ＣＤＲ３領域を有する半合成重鎖を含有する半合成ライブラリが含まれた。ナイーブな抗体レパートリは、健康なドナーのＰＢＭＣ及び脾臓から、又は疾患のあるドナーのＰＢＭＣからクローン化された。ｓｃＦｖライブラリは、Ｒａｊｉ（ＣＤ２２を自然発現するリンパ腫細胞株）、完全長ＣＤ２２を発現するＪｕｒｋａｔ細胞、及びＣＤ２２のドメイン５〜７を発現するＪｕｒｋａｔ細胞を含むヒトＣＤ２２陽性細胞に対するパニングに使用された。Ｊｕｒｋａｔ細胞における完全長ＣＤ２２の発現は、図１Ａ〜図１Ｅのように、完全長ＣＤ２２にのみ結合するＡＰＣマウス抗ヒトＣＤ２２抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ，Ｃａｔ．Ｎｏ．３６３５０５）を使用する抗ＣＤ２２の染色によって確認された。ＣＤ２２のドメイン５〜７を緑色蛍光タンパク質（green fluorescent protein、ＧＦＰ）にコンジュゲートさせ、Ｊｕｒｋａｔ細胞におけるＣＤ２２の発現をＦＩＴＣシグナルによって確認した。ＣＤ２２を発現しないＪｕｒｋａｔ細胞を陰性対照として使用した。細胞パニングに関しては、最初に、完全長ＣＤ２２若しくはＣＤ２２のドメイン５〜７を発現するＪｕｒｋａｔ細胞、又はＲａｊｉ細胞を、ヒトｓｃＦｖファージライブラリと混合させた。ＰＢＳで長時間洗浄した後、結合したｓｃＦｖ抗体ファージを有する細胞をスピンダウンさせた。次いで、結合したクローンを溶出させ、これらを使用して、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＸＬ１−Ｂｌｕｅ細胞に感染させた。ファージクローンを細菌において発現させ、精製した。ヒトＣＤ２２の細胞外領域を特異的に結合したｓｃＦｖファージクローンを濃縮させるように、３〜４ラウンドのパニングを行った。
【０３８１】
【表７】
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【０３８２】
細胞パニングによって選択されたファージクローンは、直接結合している細胞表面ヒトＣＤ２２に関して試験された。ファージディスプレイによってスクリーニングされた１０８０個のクローンのうち、フローサイトメトリーによって確認されたように、細胞表面ＣＤ２２結合クローンとして２つのクローンを同定した。図２Ａ及び図２Ｂに示されるように、クローン１及び２は、ＣＤ２２＋  Ｒａｊｉ細胞及び完全長ＣＤ２２又はＣＤ２２のドメイン５〜７を発現するＪｕｒｋａｔ細胞に対する特異的結合を実証した。更に、クローン１及び２はまた、図３Ａ及び図３Ｂに示されるように、ＮＡＬＭ−６細胞（ＣＤ２２を自然発現する白血病細胞株）に特異的に結合することも実証された。
実施例２−抗ヒトＣＤ２２キメラ抗原受容体（chimeric antigen receptor、ＣＡＲ−Ｔ）を発現するＴ細胞の特性評価
【０３８３】
本実施例は、抗ヒトＣＤ２２抗体を使用したキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の構築について説明する。特に、本実施例は、抗ＣＤ２２抗体の抗原結合部位を含み、Ｔ細胞の表面上に発現されるＣＡＲの構築を具体的に説明する。更に、Ｔ細胞によって発現されたＣＡＲを、ヒトリンパ腫細胞株に対する細胞傷害性アッセイにおいて用いた。したがって、本実施例は、いくつかの実施形態において、本明細書に記載のヒト抗ＣＤ２２抗体由来の抗原結合部位を含むＣＡＲを使用することは、ヒトＣＤ２２を発現する標的細胞（例えば、リンパ腫）を殺傷するのに有用であることを示す。
【０３８４】
ヒトＣＤ２２形質導入Ｔ細胞のインビトロの細胞傷害性。ヒトＣＤ２２特異性キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含有するレンチウイルスを、２９３Ｔ細胞をＣＡＲベクターでトランスフェクションすることによって生成した。いくつかの実施形態では、ヒトＴ細胞を、１００Ｕ／ｍＬにおけるＩＬ−２の存在下でＣＤ３／ＣＤ２８ビーズ（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）による１日間の刺激後の形質導入に使用した。濃縮されたレンチウイルスを、レトロネクチン（Ｔａｋａｒａ）コーティングされた６ウェルプレート中のＴ細胞に７２時間適用した。形質導入Ｔ細胞（ＣＤ２２／ＣＡＲ−Ｔ細胞）の機能評価は、ＬＤＨ細胞傷害性アッセイを使用して実施する。
【０３８５】
更に、同様の実験では、ＣＤ２２陽性癌細胞株及びＣＤ２２陰性癌細胞株の大きなパネルを使用して、ヒトＣＤ２２ＣＡＲ−Ｔ（上述）を試験した。簡潔には、初代Ｔ細胞は、擬似形質導入（Ｍｏｃｋ）されたか、あるいは選択されたＣＡＲコード抗ＣＤ２２抗体により形質導入された。形質導入Ｔ細胞を、抗体を使用するＦＡＣＳにより分析して、ＣＡＲ構築物の細胞外ドメイン内のタグ（例えば、ｍｙｃタグ）を検出した。
【０３８６】
別の実験では、活性化されたヒトＣＤ２２ＣＡＲ−Ｔ細胞のサイトカイン放出プロファイル及び標的細胞の分解が判定された。擬似形質導入Ｔ細胞（擬似）又は選択された抗ＣＤ２２  ＣＡＲ−Ｔを、１６時間、２対１の割合で標的細胞と共にインキュベートした（図４Ａ：Ｋ５６２、Ｋ５６２＋ＣＤ２２、及びＫ５６２＋Ｍ１８＋ＣＤ２２；図４Ｂ：ＡＳＰＣ１、Ｊｕｒｋａｔ、ＩＭ９、ＭＣＦ７、ＨｅｐＧ２、Ｈｅｌａ、ＳＫ−Ｈｅｐ１、及びＳＫＯＶ３；図４Ｃ：Ｋ５６２、Ｋ５６２＋ＣＤ２２、ＬｎＣａＰ、Ｃｏｌｏ２０５、及びＮＡＬＭ６；図５Ａ：Ｋ５６２及びＫ５６２＋ＣＤ２２；図５Ｂ：ＡＳＰＣ１、Ｊｕｒｋａｔ、ＩＭ９、ＭＣＦ７、ＨｅｐＧ２、Ｈｅｌａ、ＳＫ−Ｈｅｐ１、及びＳＫＯＶ３）。インビトロでの殺傷後の培地へのＩＦＮ−γの放出は、Ｂｉｏ−ｐｌｅｘ  Ｐｒｏ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ８−ｐｌｅｘ  Ａｓｓａｙ（ＢｉｏＲａｄ）と共にＢｉｏＰｌｅｘ２００システム（ＢｉＯ−Ｒａｄ）を使用して測定した。培地、標的細胞単独、及びクローン形質導入Ｔ細胞単独からの放出を差しい引いた後、既知の標準曲線を用いてサイトカイン濃度を判定した。ＩＦＮ−γ放出アッセイの結果を図４Ａ、図４Ｂ、及び図４Ｃに示す。図４Ａ、図４Ｂ、及び図４Ｃは、抗ＣＤ２２  ＣＡＲ（クローン２）がＣＤ２２＋標的細胞に対する特異的かつ強力なＩＦＮ−γ放出を示したことを示している。図５Ａ及び図５Ｂは、抗ＣＤ２２  ＣＡＲ（クローン２）が、Ｋ５６２＋ＣＤ２２標的細胞に対する特異的な殺傷及びＫ５６２細胞に対する非殺傷を更に示している。図５Ａはまた、抗ＣＤ２２  ＣＡＲ（クローン２）が、ｍ９７１  ＣＡＲ細胞と比較して優れた殺傷活性を示したことを示している（ｍ９７１は、ＣＤ２２の膜近位領域を標的とする抗体である）。
実施例３−競合アッセイ
【０３８７】
フローサイトメトリー競合アッセイを行って、ｍ９７１が抗ＣＤ２２  ＣＡＲ（クローン２）と競合するかどうかを判定した。ｍ９７１は、ＣＤ２２の膜近位領域を標的とする抗体である。標的細胞Ｋ５６２＋ＣＤ２２を、１０μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ、１μｇ／ｍＬ、０．１μｇ／ｍＬ、０．０１μｇ／ｍＬ、及び０．００１μｇ／ｍＬで３０分間ブロッキング抗体（ｍ９７１又は抗ＣＤ２２  ＣＡＲ（クローン１））と共にプレインキュベートした。プレインキュベーション後、１μｇ／ｍＬの検出抗体（ビオチンにコンジュゲートさせた抗ＣＤ２２  ＣＡＲ（クローン２））を、洗浄せずに試料に直接添加し、更に３０分間インキュベートした。ブロッキング後、ＦＡＣＳを検出及び分析に使用した。結合率をＭＦＩ（平均蛍光強度）から判定し、試料をアイソタイプ対照に対して正規化した。図６は、ｍ９７１が、異なるエピトープに結合する抗ＣＤ２２  ＣＡＲ（クローン２）と競合しないことを示している。図６はまた、抗ＣＤ２２  ＣＡＲ（クローン２）及び抗ＣＤ２２  ＣＡＲ（クローン１）が互いに競合し、同じエピトープ又は重複エピトープに結合する可能性が高いことを示している。抗ＣＤ２２  ＣＡＲ（クローン１）は、ｍ９７１よりも高い親和性を有するように思われた抗ＣＤ２２  ＣＡＲ（クローン２）よりも高い親和性を有するように思われた。
実施例４−ヒト抗ＣＤ２２抗体を使用した二重特異性構築物の生成
【０３８８】
本実施例は、ヒトＣＤ２２に特異的なヒトｓｃＦｖを使用した多重特異性抗体の構築について説明する。特に、本実施例は、ネイティブフォーマットの（細胞表面発現）ヒトＣＤ２２を結合する第１の抗原結合部位及び第２の抗原結合部位を有する二重特異性抗体の構築を具体的に説明する。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合部位は、Ｔ細胞上で発現されるタンパク質（例えば、Ｔ細胞上のＣＤ３）である。したがって、本実施例は、いくつかの実施形態では、本明細書に記載のような抗ＣＤ２２抗体部分を含有する多重特異性抗体を使用して、Ｔ細胞がヒトＣＤ２２を発現する標的細胞を殺傷することを目的とする。
【０３８９】
二重特異性抗体は、ヒトＣＤ２２特異性ファージクローン（例えば、クローン１及び２）のｓｃＦｖ配列を使用して生成される。二重特異性抗体は、Ｎ末端にヒトＣＤ２２特異性ファージクローンのＶＬ−ＶＨｓｃＦｖ配列と、Ｃ末端に抗ヒトＣＤ３εモノクローナルｓｃＦｖと、を含む、一本鎖フォーマットを用いて構築される（例えば、Ｂｒｉｓｃｈｗｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４３：１１２９，２００６）。ヒトＣＤ２２  ｓｃＦｖ及び抗ヒトＣＤ３ε  ｓｃＦｖをコードするＤＮＡフラグメントを合成し、標準的な組み換えＤＮＡ技術を用いて、哺乳動物発現ベクター、例えば、ｐＱＤ−Ｔ（Ｅｕｒｅｋａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．）にサブクローニングされる。精製及び検出のために、ヘキサヒスタミンタグをＣ末端において挿入する。例えば、ＨＥＫ２９３細胞などの哺乳動物細胞を、二重特異性抗体発現ベクターでトランスフェクトし、二重特異性抗体生成のために培養する。続いて、二重特異性抗体は、例えば、ＨｉｓＴｒａｐ  ＨＰカラムを使用して、細胞上清から精製することができる。細胞培養物を清澄化し、低イミダゾール濃度（例えば、２０ｍＭ）でカラムに投入し、次いで、イソクラティック高イミダゾール濃度溶出緩衝液（例えば、５００ｍＭ）を使用して、結合した二重特異性抗体を溶出させる。精製ヒトＣＤ２２二重特異性抗体の分子量は、ゲル電気泳動により非還元条件下で測定される。
実施例５−ヒトＣＤ２２二重特異性抗体の特性評価
【０３９０】
本実施例は、二重特異性抗体の結合プロファイルの特性評価を説明する。
【０３９１】
組み換えヒトＣＤ２２  ＥＣＤ−Ｆｃ融合タンパク質への結合。細胞表面ヒトＣＤ２２、例えば、クローン１及び２に対する特異的結合剤として同定されたファージクローンを、組み換えヒトＣＤ２２  ＥＣＤ−Ｆｃ融合タンパク質への溶液中の結合について試験する。いくつかの実施形態では、ビオチン化ヒトＣＤ２２  ＥＣＤ−Ｆｃ融合タンパク質を、ストレプトアビジンバイオセンサ上に投入する。過剰な抗原を洗い流した後、二重特異性抗体を、会合及び解離のためにＰＢＳ緩衝液中で試験する。
【０３９２】
一次ヒトＢ細胞への結合。ヒトＢ細胞は、例えば、ＰｅｒＣＰ−コンジュゲート抗ヒトＣＤ２０抗体を有するヒトＰＢＭＣ、第２の抗原結合部位を標的とする抗体（例えば、ＡＰＣ標識抗ヒトＣＤ３抗体）、及び抗ＣＤ２２二重特異性抗体を共染色することよって、抗ＣＤ２２抗体結合について試験される。ＰＢＳ緩衝液で短時間洗浄した後、ＦＩＴＣ標識抗ＨｉＳタグ抗体を、二重特異性抗体を検出するための二次抗体としての混合物に添加する。フローサイトメトリーアッセイでは、ヒトＢ細胞は、陽性のＣＤ２０染色及び陰性のＣＤ３染色によってゲーティングされる。抗ＣＤ２２二重特異性抗体は、これらのＣＤ２０＋ＣＤ３細胞で発現されたヒトＣＤ２２を認識する能力について評価される。
【０３９３】
Ｔ細胞殺傷アッセイ。腫瘍細胞傷害性は、例えば、ＬＤＨ細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用してアッセイされる。ヒトＴ細胞（ＡｌｌＣｅｌｌｓ）又は全血からのＦｉｃｏｌｌ精製細胞（Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｎｔｅｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｐａｃｉｆｉｃ）は、例えば、ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で活性化及び増殖される。活性化Ｔ細胞を培養し、例えば、１０％ＦＢＳ及び１００Ｕ／ｍＬのＩＬ−２を有するＲＰＭＩ１６４０培地において培養及び維持される。活性化Ｔ細胞は、活性化後、数日後、例えば、７〜１４日後に使用される。ＦＡＣＳ分析を使用して、Ｔ細胞活性化を確認する。活性化Ｔ細胞及び標的細胞は、二重特異性抗体により５：１の割合で共培養される。細胞傷害性は、培養上清中のＬＤＨ活性を測定することによって判定される。
実施例６−抗ヒトＣＤ２２抗体の親和性成熟
【０３９４】
本実施例は、抗ヒトＣＤ２２抗体の親和性成熟について説明する。具体的には、一連の抗体変異体の生成は、ランダムな変異を選択された抗ヒトＣＤ２２抗体（クローン１及び２）に組み込み、続いて抗体変異体のスクリーニング及び特性評価を行うことによって実施される。
【０３９５】
変異ファージライブラリの生成。抗ヒトＣＤ２２  ｓｃＦｖをコードしているＤＮＡを、例えば、ＧｅｎｅＭｏｒｐｈ  ＩＩ  Ｒａｎｄｏｍ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ  ｋｉｔ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してランダム突然変異生成を受けさせる。突然変異生成後、ＤＮＡ配列をｓｃＦｖ発現ファージミドベクターにクローニングして、変異抗体ファージライブラリを構築する。変異ライブラリは、抗ヒトＣＤ２２特異性クローン毎に別々に構築される。濃縮されたファージパニングプール（例えば、変異体クローン）からの個々のファージクローンを、対応する親クローンと比較して、細胞表面ヒトＣＤ２２への強化された結合について試験される。更に、競合細胞結合アッセイを行って、変異体クローンの結合親和性を親クローンのものと比較する。
実施例７−抗ヒトＣＤ２２変異体クローンに基づく二重特異性抗体の生成及び特性評価
【０３９６】
本実施例は、ヒトＣＤ２２に特異的な変異ヒトｓｃＦｖを使用した多重特異性抗体の構築について説明する。特に、本実施例は、ネイティブフォーマットの（細胞表面発現）ヒトＣＤ２２を結合する第１の抗原結合部位及び第２の抗原結合部位を有する二重特異性抗体の構築を具体的に説明する。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合部位は、Ｔ細胞上でＣＤ３を結合し得る。したがって、本実施例は、いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるような抗体部分を含有する多重特異性抗体を使用して、Ｔ細胞がヒトＣＤ２２を発現する標的細胞を殺傷することを目的とする。
【０３９７】
変異体クローン二重特異性抗体の生成。親和性が改良された変異抗体クローンに由来する二重特異性抗体は、実施例２に記載されるように生成される。
【０３９８】
変異二重特異性抗体の結合親和性の判定。親抗体と比較して、変異体クローンの相対的な結合親和性は、例えば、ヒトＣＤ２２＋癌細胞を使用して、抗体滴定フローサイトメトリーによって判定される。二重特異性抗体クローンは、段階希釈濃度でＲａｊｉ細胞と混合される。抗体ＥＣ５０及び見かけのＫＤは、フローサイトメトリー結合シグナルに基づいて算出される。
【０３９９】
Ｔ細胞殺傷アッセイ。腫瘍細胞傷害性は、例えば、ＬＤＨ細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して判定される。ヒトＴ細胞は、例えば、ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で活性化及び増殖される。活性化Ｔ細胞を培養し、例えば、１０％ＦＢＳ及び１００Ｕ／ｍＬのＩＬ−２を有するＲＰＭＩ１６４０培地において培養及び維持される。活性化Ｔ細胞は、活性化後、数日後、例えば、７〜１４日後に使用される。ＦＡＣＳ分析を使用して、Ｔ細胞活性化を確認する。活性化Ｔ細胞及び標的細胞は、二重特異性抗体により５：１の割合で共培養される。細胞傷害性は、培養上清中のＬＤＨ活性を測定することによって判定される。
実施例８−抗ヒトＣＤ２２キメラ抗原受容体（ＣＡＲ−Ｔ）を発現するＴ細胞の特性評価
【０４００】
別の同様の実験では、本明細書に記載の選択されたヒト抗体から生成されたＣＡＲ−Ｔ及び非ヒト（例えば、マウス）抗体を、上記のようにＣＤ２２陽性癌細胞株及びＣＤ２２陰性癌細胞株のパネルを使用して試験する。簡潔には、初代Ｔ細胞は、擬似形質導入（Ｍｏｃｋ）されているか、あるいは本明細書に記載されるＣＡＲコード抗ヒトＣＤ２２  ｓｃＦｖ（例えば、クローン１又はクローン２）又は抗ヒトＣＤ２２マウス抗体からの可変領域配列を有するＣＡＲコード抗ヒトＣＤ２２  ｓｃＦｖで形質導入される。形質導入Ｔ細胞は、上記のようにＦＡＣＳにより分析される。
【０４０１】
ヒトリンパ腫異種移植片におけるＣＤ２２  ＣＡＲ−Ｔ細胞のインビボの有効性。例示的なＣＡＲ−Ｔ細胞のインビボの抗腫瘍活性は、ＮＯＤ  ＳＣＩＤγ（NOD SCID gamma、ＮＳＧ）マウスにおけるＣＤ２２＋ヒトリンパ腫異種移植片モデルにおいて試験される。細胞株Ｒａｊｉ−ｌｕｃ−ＧＦＰは、生物発光イメージングを使用してインビボで追跡できる細胞をもたらす、ホタルルシフェラーゼ（ｌｕｃ）と緑色蛍光タンパク質との両方をコードしている二重レポーター遺伝子による安定なトランスフェクション後の、ＣＤ２２＋Ｂｕｒｋｉｔｔリンパ腫細胞株、すなわち、Ｒａｊｉに由来する。ＮＳＧマウスは、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ  ＵＳＡ０４６０９）から購入する。Ｒａｊｉ−ｌｕｃ−ＧＦＰ細胞をＰＢＳ中に再懸濁させ、尾静脈を介して、１×１０６個細胞／１００μＬ／マウスで、静注経路（ｉ．ｖ．）でＮＳＧマウスに移植する。移植から５日後に、腫瘍量を評価するためのＸｅｎｏｇｅｎ  ＩＶＩＳ撮像システムを使用して動物を撮像する。マウスは、（ｉ）治療なし、（ｉｉ）擬似（ＣＡＲ−Ｔ細胞の同じドナー由来の非形質導入活性化ヒトＴ細胞）、及び（ｉｉｉ）クローンＣＡＲ−Ｔの３つの群に無作為化される。動物を、マウスあたり、例えば、２週毎に３用量で、（グループ（ｉｉｉ）に関して、１用量あたり６〜８×１０６個のＣＡＲ＋Ｔ細胞を含む）１０７個のＴ細胞の用量で、無作為化直後にＭｏｃｋ又はクローンＣＡＲ−Ｔ細胞によりｉ．ｖ．で治療する。動物は、用量投与後に非常に注意深くモニタされる。Ｘｅｎｏｇｅｎ  ＩＶＩＳシステムを用いた生物発光イメージングが１週間に１回行われる。以下の条件を有する動物を安楽死させ、「条件死」として記録する。（ｉ）初期体重より２５％を超える体重減少、（ｉｉ）マウスの動きに影響を及ぼす肢麻痺がある。
【０４０２】
腫瘍移植後、抗ＣＤ２２  ＣＡＲクローン形質導入Ｔ細胞治療群からのマウスは、Ｒａｊｉリンパ腫細胞によるｉ．ｖ．移植によって再チャレンジされ、抗ＣＤ２２  ＣＡＲ形質導入Ｔ細胞が持続し、抗原（ＣＤ２２）に応答する能力を維持しているかどうかを判定する。ナイーブなＮＳＧマウス（すなわち、Ｒａｊｉリンパ腫細胞が移植されていないか、又はＴ細胞で前処置されていないマウス）に、対照として、擬似形質導入Ｔ細胞の注射の１日後にＲａｊｉリンパ腫細胞を移植する。このような擬似形質導入Ｔ細胞は、Ｒａｊｉリンパ腫細胞の移植前のマウス内の循環Ｔ細胞のレベルが低い状態を模倣し得る。それぞれの群の腫瘍量は、ルシフェラーゼ活性によって測定される。
【０４０３】
別の同様の実験では、ＮＳＧマウス中のＣＤ２２＋ヒト白血病異種移植片モデル（ＮＡＬＭ）において、例示的なＣＡＲ−Ｔ細胞のインビボでの抗腫瘍活性を試験する。ＮＡＬＭ−６−ｌｕｃ−ＧＦＰ細胞は、生物発光イメージングを使用してインビボで追跡できる細胞をもたらす、ホタルルシフェラーゼ（ｌｕｃ）と緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）との両方をコードしている二重レポーター遺伝子による安定なトランスフェクション後の、ＣＤ２２＋急性リンパ性白血病細胞株ＮＡＬＭ−６に由来する。
【０４０４】
簡潔には、ＮＡＬＭ−６−ｌｕｃ−ＧＦＰを、５％ＣＯ２を有する加湿雰囲気中、３７℃でＲＰＭＩ培地＋１０％ＦＢＳにおいて培養する。ＮＳＧマウスは、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ  ＵＳＡ０４６０９）から購入し、実験前に順応させる。ＮＡＬＭ−６−ｌｕｃ−ＧＦＰ細胞をリン酸緩衝生理食塩水（phosphate-buffered saline、ＰＢＳ）中に再懸濁させ、例えば、５Ｘ１０５個細胞／１００μＬ／マウスで、静注経路で（ｉ．ｖ．）尾静脈注射によって雌ＮＳＧマウスに移植する。移植後、腫瘍量評価のためにＸｅｎｏｇｅｎ  ＩＶＩＳ撮像システムを使用して動物を撮像する。ＮＳＧマウスは、（ｉ）ビヒクル（ＰＢＳ）、（ｉｉ）擬似形質導入ヒトＴ細胞、及び（ｉｉｉ）クローン抗ＣＤ２２  ＣＡＲ形質導入Ｔ細胞という３群に無作為化される。動物は、上記のようにＴ細胞又はビヒクルを移植及び投与した後に、非常に注意深くモニタされる。
実施例９−単一特異性抗ヒトＣＤ２２キメラ抗体−Ｔ細胞受容体（ｃａＴＣＲ）を発現するＴ細胞の生成及び特性評価
【０４０５】
本実施例は、本明細書に記載の抗ヒトＣＤ２２Ｆａｂを含む様々な単一特異性ｃａＴＣＲ構築物を発現するＴ細胞の生成及び特性評価を説明する。ｃａＴＣＲ構築物のうちのいくつかは、本明細書に記載の抗ＣＤ２２  Ｆａｂ及び抗ＣＤ２２  ｓｃＦｖの両方を含む。ｃａＴＣＲ−Ｔ細胞のうちの一部は、キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）を更に発現する。
【０４０６】
抗ヒトＣＤ２２−ｃａＴＣＲを発現するＴ細胞の生成。簡潔には、初代Ｔ細胞は、擬似形質導入（Ｍｏｃｋ）されたか、あるいは選択されたｃａＴＣＲコード核酸で形質導入された。特に、以下のｃａＴＣＲ構築物又はｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ構築物の組み合わせをコードしている核酸を生成し、形質導入に使用した。
構築物の組み合わせ１（配列番号１）：抗ＣＤ１９−ｃａＴＣＲ＋抗ＣＤ１９−ＣＳＲ
構築物２（配列番号２）：抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ
構築物の組み合わせ３（配列番号３）：抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ＋抗ＣＤ１９−ＣＳＲ
構築物４（配列番号４）：抗ＣＤ２２−ｓｃＦｖ−抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ（二価単一特異性抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲとも呼ばれる）
構築物の組み合わせ５（配列番号５）：抗ＣＤ２２−ｓｃＦｖ−抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ＋抗ＣＤ１９−ＣＳＲ
構築物の組み合わせ６（配列番号６）：抗ＣＤ２２−ｓｃＦｖ−抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ＋抗ＣＤ２２−ＣＳＲ。
【０４０７】
構築物の組み合わせ１、３、５、及び６において、ＣＳＲは、ＣＤ２８膜貫通領域配列及び細胞内シグナル伝達配列を含む先端切断型ＣＤ２８（配列番号１５７）を含む。
【０４０８】
加えて、以下の構築物の組み合わせをコードする核酸が生成され、初代Ｔ細胞に形質導入される。
構築物の組み合わせ７（配列番号７）：抗ＣＤ２２−ｓｃＦｖ−抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ＋抗ＣＤ２２−（ＣＤ８  ＴＭ配列及び４−１ＢＢ  ＩＣシグナル伝達配列（配列番号１７３）を含む）ＣＳＲ
構築物の組み合わせ８（配列番号８）：抗ＣＤ２２−ｓｃＦｖ−抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ＋抗ＣＤ２２−（先端切断型４−１ＢＢ（配列番号１５９）を含む）ＣＳＲ
構築物の組み合わせ９（配列番号９）：抗ＣＤ２２−ｓｃＦｖ−抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ＋抗ＣＤ２２−（ＣＤ８  ＴＭ配列及びＣＤ２７  ＩＣシグナル伝達配列（配列番号１６７）を含む）ＣＳＲ
構築物の組み合わせ１０（配列番号１０）：抗ＣＤ２２−ｓｃＦｖ−抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ＋抗ＣＤ２２−（先端切断型ＣＤ２７（配列番号１６１）を含む）ＣＳＲ
構築物の組み合わせ１１（配列番号１１）：抗ＣＤ２２−ｓｃＦｖ−抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ＋抗ＣＤ２２−（ＣＤ８  ＴＭ配列及びＣＤ３０  ＩＣシグナル伝達配列（配列番号１６９）を含む）ＣＳＲ
構築物の組み合わせ１２（配列番号１２）：抗ＣＤ２２−ｓｃＦｖ−抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ＋抗ＣＤ２２−（先端切断型ＣＤ３０（配列番号１６３）を含む）ＣＳＲ
構築物の組み合わせ１３（配列番号１３）：抗ＣＤ２２−ｓｃＦｖ−抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ＋抗ＣＤ２２−（ＣＤ８  ＴＭ配列及びＯＸ４０  ＩＣシグナル伝達配列（配列番号１７１）を含む）ＣＳＲ
構築物の組み合わせ１４（配列番号１４）：抗ＣＤ２２−ｓｃＦｖ−抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ＋抗ＣＤ２２−（先端切断型ＯＸ４０を有する（配列番号１６５）を含む）ＣＳＲ。
【０４０９】
更に、構築物の組み合わせ５〜１４（配列番号５〜１４）をコードしているが、ｍｙｃタグ（配列番号１９４）を除去した核酸も生成され、初代Ｔ細胞に形質導入される。
【０４１０】
本実施例に開示される構築物及び構築物の組み合わせでは、各ＣＳＲ及び共発現ｃａＴＣＲは、最初に単一のポリペプチドとして翻訳され、次いで別個のポリペプチドに切断される。他の実施形態では、共発現されたＣＳＲ及びｃａＴＣＲは、同じ核酸上にコードされるか、又は更には異なる核酸上にコードされた別個に翻訳されたポリペプチドとして構築することができる。
【０４１１】
抗ヒトＣＤ２２  ｃａＴＣＲを発現するＴ細胞の特性評価。初代Ｔ細胞は、構築物の組み合わせ１、３、５、及び６（それぞれ配列番号１、３、５、及び６）、構築物２及び４（それぞれ配列番号２及び４）をコードする核酸により形質導入されるか、又は疑似形質導入（核酸なし）された。形質導入効率は、細胞表面染色によって、ｃａＴＣＲ発現のマーカーとしてＦａｂ及びＣＳＲ発現のマーカーとしてｍｙｃタグを用いて判定された。ｃａＴＣＲ＋細胞の割合とＣＳＲ＋細胞の割合は、ｃａＴＣＲ−ＣＳＲ−コード核酸で形質導入された同じＴ細胞サンプルにおいて、ほぼ同じであったという結果が示された。全てのｃａＴＣＲ−形質導入Ｔ細胞を、擬似Ｔ細胞と混合することによって、およそ４６％のｃａＴＣＲの受容体陽性において対応させ（に正規化し）、エフェクタ細胞としてｃａＴＣＲ＋細胞を使用した。
【０４１２】
インビトロの殺傷。ＣＤ８０／８６陰性ＮＡＬＭ６−ｌｕｃ−ＧＦＰ細胞及びＣＤ８０／ＣＤ８６陽性Ｒａｊｉ−ｌｕｃ−ＧＦＰ細胞（ＣＤ２２及びＣＤ１９を発現する白血病及びリンパ腫細胞）を、１：１のエフェクタ対標的の割合で、Ｔ細胞刺激のための別個の実験で標的細胞として使用し、ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞と共に一晩（約１６時間）インキュベートした。Ｃｙｔｏｘ９６非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して一晩インキュベートした後、特異性Ｔ細胞の分解を測定した。生存標的細胞を計数し、各群における生存標的細胞の割合と、標的単独（Ｔ細胞なし）の群の割合との比較による差として、殺傷率を算出した。結果を図７に示す。６つの構築物及び構築物の組み合わせ（配列番号１〜６）のうちのいずれか１つを発現するｃａＴＣＲ  Ｔ細胞は、ＮＡＬＭ６細胞において非常に高い殺傷効果を有した。試験されたエフェクタ対標的の割合１：１では、ＮＡＬＭ６ほど高くないが、Ｒａｊｉ細胞において有意な殺傷効果を有していた。
【０４１３】
ＮＡＬＭ６−ｌｕｃ−ＧＦＰ細胞及びＲａｊｉ−ｌｕｃ−ＧＦＰ細胞を標的細胞として使用し、エフェクタ細胞として構築物の組み合わせ７〜１４をコードする核酸で形質導入された初代Ｔ細胞を使用して同様のインビトロの殺傷実験を実施する。
【０４１４】
サイトカインの分泌。生存標的細胞数を測定することに加えて、インビトロの殺傷反応の上清中に放出されたＩＦＮ−γの濃度を、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ製Ｈｕｍａｎ  ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＡ  ＭＡＸ（商標）キットによる細胞殺傷の別の指標として測定した。結果を図８に示す。６つの構築物及び構築物の組み合わせのうちのいずれか１つを発現するｃａＴＣＲ  Ｔ細胞において、Ｒａｊｉ細胞、特に構築物４（抗ＣＤ２２−ｓｃＦｖ−抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ（二価単一特異性抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲとも呼ばれる））から高いＩＦＮ−γ放出レベルがあった。抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞群の大部分においてもまた、ＮＡＬＭ６細胞から高いＩＦＮ−γ放出レベルがあった。
【０４１５】
同様に、構築物の組み合わせ７〜１４を発現するＴ細胞によるＮＡＬＭ６細胞及びＲａｊｉ細胞からのインビトロの殺傷反応の上清中に放出されたＩＦＮ−γの濃度を同じ方法で測定する。
【０４１６】
標的細胞再チャレンジ。最初に、構築物の組み合わせ３、５、及び６（それぞれ配列番号１、３、５、及び６）並びに構築物２及び４（それぞれ配列番号２及び４）のうちのいずれか１つを発現するＴ細胞を、エフェクタ対標的の割合１：１で、５０，０００個のＮＡＬＭ６−ｌｕｃ−ＧＦＰ標的細胞又はＲａｊｉ−ｌｕｃ−ＧＦＰ標的細胞と共培養した。７日毎に、新たな標的細胞のうちの１００，０００個を、Ｔ細胞を再チャレンジ（又は「エンゲージ」）させるために、同じ共培養物に添加した。共培養物中の残りの標的細胞及びＴ細胞を、フロー分析を用いて週２回計数して、Ｔ細胞の殺傷活性を評価した。標的細胞としてのＮＡＬＭ６による結果を図９Ａ（標的細胞数）及び図９Ｂ（合計Ｔ細胞数）に示し、標的細胞としてのＲａｊｉによる結果を図１０Ａ（標的細胞数）及び図１０Ｂ（合計Ｔ細胞数）に示す。５つの構築物及び構築物の組み合わせ（配列番号２〜６）のうちのいずれか１つを発現する抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞は、ＮＡＬＭ６細胞内で少なくとも最大３週間、かつ３ラウンド以上の標的エンゲージメントの後に（例えば、Ｅ３Ｄ７及びＥ４Ｄ３において）高い殺傷効果を維持した。ＮＡＬＭ６標的細胞では、構築物の組み合わせ５（抗ＣＤ２２−ｓｃＦｖ−抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ＋抗ＣＤ１９−ＣＳＲ）を発現するＴ細胞が、５つの構築物及び構築物の組み合わせのうち最長時間持続した。５つの構築物及び構築物の組み合わせのうちのいずれか１つを発現している抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞はまた、Ｒａｊｉ細胞において、最大約５週間、及び合計５ラウンドの標的エンゲージメント後に、有意な殺傷効果を有した。
【０４１７】
同様の標的細胞再チャレンジ実験は、ＮＡＬＭ６−ｌｕｃ−ＧＦＰ細胞及びＲａｊｉ−ｌｕｃ−ＧＦＰ細胞を標的細胞として使用し、エフェクタ細胞として構築物の組み合わせ１及び７〜１４のそれぞれをコードする核酸により形質導入された初代Ｔ細胞を使用して実施される。
【０４１８】
本実施例に記載された実験の結果は、抗ＣＤ２２−ｃａＴＣＲを発現するように形質導入Ｔ細胞が、ＣＤ２２を発現している標的癌細胞を殺傷させることに成功したことを示している。このような細胞はまた、少なくとも数週間持続し、標的細胞の殺傷能力を維持した。
実施例１０−二重特異性又は三重特異性抗ヒトＣＤ２２−ｃａＴＣＲを発現するＴ細胞の生成及び特性評価
【０４１９】
本実施例は、本明細書に記載されるような非ＣＤ２２抗原を標的化する抗ヒトＣＤ２２Ｆａｂ及び１つ又は２つの追加の抗体可変領域フラグメントを含む、様々な二重特異性又は三特異性ｃａＴＣＲ構築物を発現するＴ細胞の生成及び特性評価を説明する。ｃａＴＣＲ−Ｔ細胞のうちの一部は、ＣＳＲを更に発現する。
【０４２０】
二重特異性又は三重特異性抗ヒトＣＤ２２−ｃａＴＣＲを含む様々なｃａＴＣＲを発現するＴ細胞の生成。簡潔には、初代Ｔ細胞は、擬似形質導入（Ｍｏｃｋ）されたか、あるいは選択されたｃａＴＣＲコード核酸で形質導入された。特に、以下の構築物１５〜２１（それぞれ配列番号１５〜２１）をコードする核酸を生成し、形質導入に使用した。
【０４２１】
インビトロの殺傷。実施例９に記載したものと同様のプロトコルに従い、ＣＤ８０／８６陰性ＮＡＬＭ６−ｌｕｃ−ＧＦＰ細胞、ＣＤ８０／ＣＤ８６陽性Ｒａｊｉ−ｌｕｃ−ＧＦＰ細胞（ＣＤ２２及びＣＤ１９を発現する白血病及びリンパ腫細胞）、及びＫ５６２細胞を、エフェクタ対標的の割合１：１で、Ｔ細胞刺激のための別個の実験で標的細胞として使用し、ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞と共に一晩（約１６時間）インキュベートした。Ｃｙｔｏｘ９６非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して一晩インキュベートした後、特異性Ｔ細胞の分解を測定した。生存標的細胞を計数し、各群における生存標的細胞の割合と、標的単独（Ｔ細胞なし）の群の割合との比較による差として、殺傷率を算出した。結果を図１１及び図１２Ａ〜図１２Ｆに示す。二重特異性構築物のうちのいずれか１つを発現するｃａＴＣＲ  Ｔ細胞（構築物１５〜２１（それぞれ配列番号１５〜２１））又は単一特異性構築物（構築物２、２２、及び２８（それぞれ配列番号２、２２、及び２８））は、細胞内で非常に高い殺傷効果を有した。
【０４２２】
同様のインビトロの殺傷実験は、構築物の組み合わせ２３（配列番号２３）、構築物２４〜２７（それぞれ配列番号２４〜２７）、及び構築物の組み合わせ２９〜７５（それぞれ配列番号２９〜７５）をコードする核酸を使用して、同一の実験プロトコルに従って実施される。
【０４２３】
標的細胞再チャレンジ。実施例９に記載したものと同様のプロトコルに従って、最初に、構築物の組み合わせ１及び２３を発現するＴ細胞を、エフェクタ対標的の割合１：１で、５０，０００個のＮＡＬＭ６−ｌｕｃ−ＧＦＰ標的細胞と共培養した。７日毎に、新たな標的細胞のうちの１００，０００個を、Ｔ細胞を再チャレンジ（又は「エンゲージ」）させるために、同じ共培養物に添加した。共培養物中の残りの標的細胞及びＴ細胞を、フロー分析を用いて週２回計数して、Ｔ細胞の殺傷活性を評価した。標的細胞としてのＮＡＬＭ６による結果を図１３Ａ及び図１３Ｂに示す。
【０４２４】
構築物及び構築物の組み合わせ１５〜２１、２４〜２７、及び２９〜７５（それぞれ配列番号１５〜２１、２４〜２７、及び２９〜７５）のそれぞれをコードしている核酸を使用して、同様の標的細胞再チャレンジ実験を、同一の実験プロトコルに従って実施する。
実施例１１−他の構築物の組み合わせを発現するＴ細胞の生成及び特性評価
【０４２５】
本実施例は、抗ヒトＣＤ２２Ｆａｂと、本明細書に記載のような非ＣＤ２２抗原を標的とする１つ又は２つの追加の抗体可変領域フラグメントと、を含む、様々な他のｃａＴＣＲ−ＣＳＲ構築物の組み合わせを発現するＴ細胞の生成及び特性評価について説明する。ｃａＴＣＲ−Ｔ細胞のうちの一部は、ＣＳＲを更に発現する。
【０４２６】
上記と同様のプロトコルに従い、初代Ｔ細胞は、擬似形質導入（Ｍｏｃｋ）されているか、あるは以下の構築物の組み合わせをコードする核酸で形質導されている。
（１）ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含む構築物の組み合わせであって、ｃａＴＣＲは、配列番号７７の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号８１〜９６のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する、構築物の組み合わせ；
（２）ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含む構築物の組み合わせであって、ｃａＴＣＲは、配列番号７７の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号９７〜１１２のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する、構築物の組み合わせ；
（３）ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含む構築物の組み合わせであって、ｃａＴＣＲは、配列番号７７の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１１３〜１２８のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する、構築物の組み合わせ；
（４）ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含む構築物の組み合わせであって、ｃａＴＣＲは、配列番号７８の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号８１〜９６のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する、構築物の組み合わせ；
（５）ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含む構築物の組み合わせであって、ｃａＴＣＲは、配列番号７８の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号９７〜１１２のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する、構築物の組み合わせ；並びに
（６）ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含む構築物の組み合わせであって、ｃａＴＣＲは、配列番号７８の配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有し、ＣＳＲは、配列番号１１３〜１２８のうちのいずれか１つの配列と少なくとも９０％（例えば、９２％、９４％、９６％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性を有する配列を有する、構築物の組み合わせ。
【０４２７】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物の組み合わせは、配列番号２１２の配列と少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する配列を有する軽鎖可変領域と、配列番号２１３の配列と少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する配列を有する重鎖可変領域と、を有するｃａＴＣＲを含む。
【０４２８】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物の組み合わせは、配列番号２１８の配列と少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する配列を有する軽鎖可変領域と、配列番号２１９の配列と少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する配列を有する重鎖可変領域と、を有するｃａＴＣＲを含む。
【０４２９】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物の組み合わせは、配列番号２１２の配列と少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する配列を有する軽鎖可変領域と、配列番号２１３の配列と少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する配列を有する重鎖可変領域と、を有するＣＳＲを含む。
【０４３０】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２構築物の組み合わせは、配列番号２１８の配列と少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する配列を有する軽鎖可変領域と、配列番号２１９の配列と少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％、又は９９％の同一性）を有する配列を有する重鎖可変領域と、を有するＣＳＲを含む。
【０４３１】
上記実施形態のうちのいずれかに記載の抗ＣＤ２２構築物の組み合わせのうちのいずれかをコードしている核酸もまた初代Ｔ細胞に形質導入される。
【０４３２】
上記のような同様のプロトコルに従い、上記実施形態のうちのいずれかに記載の抗ＣＤ２２構築物の組み合わせのうちのいずれも、インビトロの殺傷実験及び標的細胞再チャレンジ実験において試験される。
実施例１２−抗ＣＤ２２構築物又は構築物の組み合わせで形質導入Ｔ細胞のインビボの有効性研究
【０４３３】
本明細書に記載の抗ＣＤ２２構築物及び構築物の組み合わせのうちの１つ以上を発現するＴ細胞のインビボの抗腫瘍活性を、ヒトＣＤ１９＋ＮＡＬＭ−６ｐｒｅ−Ｂ急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）モデルにおいて試験する。ルシフェラーゼ発現ＮＡＬＭ−６細胞を、ＮＯＤ  ＳＣＩＤγ（ＮＳＧ）免疫不全マウスに静注経路（ｉ．ｖ．）で移植し、腫瘍量を、腫瘍由来生物発光を測定することによって評価する。腫瘍移植から６日後、マウスを、全生物発光フラックスに基づいて治療群に無作為化する。（１）５×１０６個の未形質導入ドナーに適合した（Ｍｏｃｋ）Ｔ細胞のｉ．ｖ．注射、（２）抗ＣＤ２２  ｃａＴＣＲ構築物のみを発現する２×１０６個のＴ細胞（「ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞」）のｉ．ｖ．注射、及び（３）抗ＣＤ１９  ｃａＴＣＲ及び抗ＣＤ１９  ＣＳＲの両方を発現する２×１０６個のＴ細胞（「ｃａＴＣＲ  ＣＳＲ  Ｔ細胞」；ｎ＝６個のマウス／群）のｉ．ｖ．注射。マウスにおけるＴ細胞注入から生じる健康効果は、全身の外観、体重、及び有害応答の他の臨床的徴候（低体温、腹腔呼吸、及び後肢麻痺／衰弱を含む）をモニタすることによって評価される。
【０４３４】
インビボでのサイトカインの放出レベルを判定するために、ＮＡＬＭ−６腫瘍担持マウスに抗ＣＤ２２  ＣＡＲ−Ｔ細胞又はｃａＴＣＲ  ＣＳＲ  Ｔ細胞を投与後、臨床サイトカイン放出症候群に関連するものを含む重要なサイトカインを２４時間分析する。ＢｉｏＲａｄ  Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘキットを使用して、Ｌｕｍｉｎｅｘ  Ｍａｇｐｉｘ技術によりサイトカインレベルを定量する。
例示的な実施形態
【０４３５】
本開示の主題に従って提供される例示的な実施形態としては、これらの実施形態及び以下の実施形態が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
１．ＣＤ２２に特異的に結合する抗体部分を含む抗ＣＤ２２構築物であって、抗体部分は、
（ａ）配列番号２１８又は２１２の軽鎖可変領域（ＶＬ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣ−ＣＤＲ）１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域と、
（ｂ）配列番号２１９又は２１３の重鎖可変領域（ＶＨ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣ−ＣＤＲ）１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３、を含む、重鎖可変領域と、を含む、抗ＣＤ２２構築物。
２．抗体部分は、配列番号２１８の軽鎖可変領域のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む、実施形態１に記載の抗ＣＤ２２構築物。
３．抗体部分は、配列番号２１２の軽鎖可変領域のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む、実施形態１に記載の抗ＣＤ２２構築物。
４．抗体部分は、
（ａ）配列番号２１８の軽鎖可変領域（ＶＬ）のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域と、
（ｂ）配列番号２１９の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域と、を含む、実施形態１又は２に記載の抗ＣＤ２２構築物。
５．抗体部分は、
（ａ）配列番号２１２の軽鎖可変領域（ＶＬ）のＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域と、
（ｂ）配列番号２１３の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域と、を含む、実施形態１又は３に記載の抗ＣＤ２２構築物。
６．抗体部分は、
ＨＤＩＲＮＹ（配列番号２１４）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、
ＡＡＳ（配列番号２１５）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２、
ＱＱＹＤＧＬＰＬＴ（配列番号２１６）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３、
ＧＦＴＦＳＮＹＡ（配列番号２０９）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１、
ＩＳＧＳＧＧＳＴ（配列番号２１０）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２、及び
ＡＲＹＧＳＡＡＷＭＤＳ（配列番号２１７）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つ以上を含む、実施形態１に記載の抗ＣＤ２２構築物。
７．抗体部分は、配列番号２０９、２１０、及び２１４〜２１７の配列を含む、実施形態６に記載の抗ＣＤ２２構築物。
８．軽鎖可変領域は、
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＴＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＨＤＩＲＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＮＬＬＩＹＡＡＳＮＬＱＴＧＶＰＳＲＦＳＧＲＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＹＤＧＬＰＬＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫＲ（配列番号２１８）の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する、実施形態６又は７に記載の抗ＣＤ２２構築物。
９．重鎖可変領域は、
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＴＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＹＧＳＡＡＷＭＤＳＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２１９）の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する、実施形態６〜８のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
１０．軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含む抗ＣＤ２２構築物であって、
軽鎖可変領域は、
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＴＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＨＤＩＲＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＮＬＬＩＹＡＡＳＮＬＱＴＧＶＰＳＲＦＳＧＲＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＹＤＧＬＰＬＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫＲ（配列番号２１８）の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を有し、
重鎖可変領域は、
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＴＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＹＧＳＡＡＷＭＤＳＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２１９）の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する。
１１．軽鎖可変領域は、配列番号２１８の配列を含み、重鎖可変領域は、配列番号２１９の配列を含む、実施形態１０に記載の抗ＣＤ２２構築物。
１２．抗体部分は、
ＳＳＮＩＧＮＮＹ（配列番号２０６）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１、
ＥＮＮ（配列番号２０７）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２、
ＧＴＷＤＳＳＬＳＡＧＡＶ（配列番号２０８）の配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３、
ＧＦＴＦＳＮＹＡ（配列番号２０９）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１、
ＩＳＧＳＧＧＳＴ（配列番号２１０）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２、及び
ＡＲＰＹＹＤＤ（配列番号２１１）の配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つ以上を含む、実施形態１に記載の抗ＣＤ２２構築物。
１３．抗体部分は、配列番号２０６〜２１１の配列を含む、実施形態１２に記載の抗ＣＤ２２構築物。
１４．軽鎖可変領域は、
ＱＳＶＶＴＱＰＰＳＶＳＡＡＰＧＱＫＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＹＶＳＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＥＮＮＫＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＴＬＧＩＴＧＬＱＴＧＤＥＡＤＹＹＣＧＴＷＤＳＳＬＳＡＧＡＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ（配列番号２１２）の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する実施形態１２又は１３に記載の抗ＣＤ２２構築物。
１５．重鎖可変領域は、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＰＹＤＤＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２１３）の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する実施形態１２又は１３に記載の抗ＣＤ２２構築物。
１６．重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ２２構築物であって、
軽鎖可変領域は、
ＱＳＶＶＴＱＰＰＳＶＳＡＡＰＧＱＫＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＹＶＳＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＥＮＮＫＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＴＬＧＩＴＧＬＱＴＧＤＥＡＤＹＹＣＧＴＷＤＳＳＬＳＡＧＡＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ（配列番号２１２）の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を有し、
重鎖可変領域は、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＰＹＤＤＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２１３）の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を有する。
１７．軽鎖可変領域は、配列番号２１２の配列を含み、重鎖可変領域は、配列番号２１３の配列を含む、実施形態１６に記載の抗ＣＤ２２構築物。
１８．ＣＤ２２への特異的結合について、実施形態１１又は１７に記載の抗ＣＤ２２構築物と競合する抗体部分を含む、抗ＣＤ２２構築物。
１９．軽鎖可変領域と重鎖可変領域は、リンカーによって結合されている、実施形態１〜１８のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
２０．リンカーは、ＳＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＥＭＡ（配列番号２３３）の配列を有する、実施形態１９に記載の抗ＣＤ２２構築物。
２１．抗体部分は、λ又はκアイソタイプの軽鎖を含む、実施形態１〜２０のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
２２．抗体部分は、ＣＤ２２の細胞外領域に結合する、実施形態１〜２１のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
２３．ＣＤ２２の細胞外領域は、
ＤＶＱＹＰＰＫＫＶＴＴＶＩＱＮＰＭＰＩＲＥＧＤＴＶＴＬＳＣＮＹＮＳＳＮＰＳＶＴＲＹＥＷＫＰＨＧＡＷＥＥＰＳＬＧＶＬＫＩＱＮＶＧＷＤＮＴＴＩＡＣＡＡＣＮＳＷＣＳＷＡＳＰＶＡＬＮＶＱＹＡＰＲＤＶＲＶＲＫＩＫＰＬＳＥＩＨＳＧＮＳＶＳＬＱＣＤＦＳＳＳＨＰＫＥＶＱＦＦＷＥＫＮＧＲＬＬＧＫＥＳＱＬＮＦＤＳＩＳＰＥＤＡＧＳＹＳＣＷＶＮＮＳＩＧＱＴＡＳＫＡＷＴＬＥＶＬＹＡＰＲＲＬＲＶＳＭＳＰＧＤＱＶＭＥＧＫＳＡＴＬＴＣＥＳＤＡＮＰＰＶＳＨＹＴＷＦＤＷＮＮＱＳＬＰＹＨＳＱＫＬＲＬＥＰＶＫＶＱＨＳＧＡＹＷＣＱＧＴＮＳＶＧＫＧＲＳＰＬＳＴＬＴＶＹＹＳＰＥＴＩＧＲＲ（配列番号２０５）の配列のうちの少なくとも７個のアミノ酸を含む、実施形態２２に記載の抗ＣＤ２２構築物。
２４．細胞外領域は、配列番号２０５の配列を有する、実施形態２２又は２３に記載の抗ＣＤ２２構築物。
２５．構築物は、完全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、又は一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体である、実施形態１〜２４のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
２６．構築物は、単一特異性である、実施形態１〜２５のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
２７．構築物は、多重特異性である、実施形態１〜２５のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
２８．構築物は、二重特異性である、実施形態２７に記載の抗ＣＤ２２構築物。
２９．構築物は、タンデムｓｃＦｖ、ダイアボディ（Ｄｂ）、一本鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、二重親和性再標的化（ＤＡＲＴ）抗体、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）抗体、ノブ・イントゥ・ホール（ＫｉＨ）抗体、ドックアンドロック（ＤＮＬ）抗体、化学的に架橋された抗体、ヘテロマルチマー抗体、又はヘテロコンジュゲート抗体である、実施形態２７又は２８に記載の抗ＣＤ２２構築物。
３０．構築物は、ペプチドリンカーによって連結された２つのｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖである、実施形態２５に記載の抗ＣＤ２２構築物。
３１．ペプチドリンカーは、配列番号２３３のアミノ酸配列を含む、実施形態３０に記載の抗ＣＤ２２構築物。
３２．構築物は、第２の抗原に特異的に結合する第２の抗体部分を更に含む、実施形態２７〜３１のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
３３．第２の抗原は、Ｔ細胞の表面上の抗原である、実施形態３２に記載の抗ＣＤ２２構築物。
３４．Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、及びナチュラルキラーＴ細胞からなる群から選択される、実施形態３３に記載の抗ＣＤ２２構築物。
３５．第２の抗原は、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、ＣＤ１６ａ、ＣＤ５６、ＣＤ６８、ＧＤＳ２Ｄ、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＣＤ４０Ｌ、及びＨＶＥＭからなる群から選択される、実施形態３２〜３４のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
３６．第２の抗原は、ＣＤ３εであり、構築物は、配列番号２０５の配列又はその一部を有するＣＤ２２に特異的なＮ末端ｓｃＦｖと、ＣＤ３εに特異的なＣ末端ｓｃＦｖと、を含むタンデムｓｃＦｖである、実施形態３５に記載の抗ＣＤ２２構築物。
３７．第２の抗原は、ナチュラルキラー細胞、好中球、単球、マクロファージ、又は樹状細胞の表面上の抗原である、実施形態３２に記載の抗ＣＤ２２構築物。
３８．抗ＣＤ２２構築物は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、実施形態１〜２４のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
３９．ＣＡＲは、抗ＣＤ２２抗体部分と、膜貫通ドメインと、免疫細胞シグナル伝達ドメインと、を含み、抗ＣＤ２２抗体部分は、配列番号２１４〜２１６の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、を含むｓｃＦｖである、実施形態３８に記載の抗ＣＤ２２構築物。
４０．ＣＡＲは、抗ＣＤ２２抗体部分と、膜貫通ドメインと、免疫細胞シグナル伝達ドメインと、を含み、抗ＣＤ２２抗体部分は、配列番号２０６〜２０８の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２０９〜２１１の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、を含むｓｃＦｖである、実施形態３８に記載の抗ＣＤ２２構築物。
４１．免疫細胞シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ鎖由来である、実施形態３９又は４０に記載の抗ＣＤ２２構築物。
４２．免疫細胞シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、ＩＣＯＳ、又はＯＸ４０由来である、実施形態３９又は４０に記載の抗ＣＤ２２構築物。
４３．膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体膜貫通ドメインである、実施形態３９又は４０のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
４４．抗ＣＤ２２構築物は、ＣＤ２２に結合する細胞外ドメインと、ＴＣＲ膜貫通ドメインを含むＴ細胞受容体（ＴＣＲ）モジュール（ＴＣＲＭ）と、を含む、キメラ抗体−Ｔ細胞受容体（ｃａＴＣＲ）である、実施形態１〜２４のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
４５．ｃａＴＣＲは、配列番号２１４〜２１６の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、を含む、実施形態４４に記載の抗ＣＤ２２構築物。
４６．ｃａＴＣＲは、配列番号２０６〜２０８の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２０９〜２１１の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、を含む、実施形態４４に記載の抗ＣＤ２２構築物。
４７．ＴＣＲＭは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルート可能である、実施形態４４〜４６のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
４８．ＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びＣＤ３ζからなる群から選択される、実施形態４７に記載の抗ＣＤ２２構築物。
４９．細胞外ドメインは、
（ａ）重鎖可変領域（ＶＨ）とＣＨ１定常ドメインを含む第１の抗原結合領域を含む、第１のポリペプチドと、
（ｂ）軽鎖可変領域（ＶＬ）とＣＬ定常ドメインを含む第２の抗原結合領域を含む、第２のポリペプチド鎖と、を含み、
第１の抗原結合領域のＶＨ及びＣＨ１定常ドメイン、並びに第２の抗原結合領域のＶＬ及びＣＬ定常ドメインは、ＣＤ２２に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールを形成する、実施形態４４〜４８のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
５０．細胞外ドメインは、ＣＤ２２に特異的に結合するｓｃＦｖを含む、実施形態４４〜４９のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
５１．細胞外ドメインは、少なくとも１種類の非ＣＤ２２抗原に特異的に結合する少なくとも１つの追加の抗体部分を更に含む、実施形態４４〜５０のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
５２．少なくとも１種類の非ＣＤ２２抗原は、Ｂ細胞悪性腫瘍で発現される、実施形態５１に記載の抗ＣＤ２２構築物。
５３．細胞外ドメインは、ＣＤ１９に特異的に結合する抗体部分を更に含む、実施形態４４〜５０のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
５４．細胞外ドメインは、ＣＤ２０に特異的に結合する抗体部分を更に含む、実施形態４４〜５０のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
５５．細胞外ドメインは、ＣＤ１９に特異的に結合する抗体部分と、ＣＤ２０に特異的に結合する抗体部分と、を更に含む、実施形態４４〜５０のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
５６．ｃａＴＣＲは、キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）との組み合わせで発現する、実施形態４４〜５５のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
５７．ＣＳＲは、抗ＣＤ２２抗体部分を含む、実施形態５６に記載の抗ＣＤ２２構築物。
５８．ＣＳＲは、非ＣＤ２２抗原に特異的に結合する抗体部分を含む、実施形態５６に記載の抗ＣＤ２２構築物。
５９．抗ＣＤ２２構築物は、キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）である、実施形態１〜２４のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
６０．ＣＳＲは、
（ａ）抗ＣＤ２２抗体部分と、
（ｂ）膜貫通モジュールと、
（ｃ）免疫細胞に共刺激シグナルを提供可能な共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールと、を含み、
ＣＳＲは、機能的一次免疫細胞シグナル伝達ドメインを欠く、実施形態５９に記載の抗ＣＤ２２構築物。
６１．抗ＣＤ２２抗体部分は、配列番号２１４〜２１６の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２０９、２１０、及び２１７の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、を含む、実施形態６０に記載の抗ＣＤ２２構築物。
６２．抗ＣＤ２２抗体部分は、配列番号２０６〜２０８の配列をそれぞれ有するＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３と、配列番号２０９〜２１１の配列をそれぞれ有するＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３と、を含む、実施形態６０に記載の抗ＣＤ２２構築物。
６３．ＣＳＲは、ｃａＴＣＲ又はＣＡＲとの組み合わせで発現する、実施形態５９〜６２のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
６４．ｃａＴＣＲ又はＣＡＲは、特異的にＣＤ２２を標的とする、実施形態６３に記載の抗ＣＤ２２構築物。
６５．ｃａＴＣＲ又はＣＡＲは、特異的にＣＤ２２を標的としない、実施形態６３に記載の抗ＣＤ２２構築物。
６６．ＣＳＲは、少なくとも１種類の非ＣＤ２２抗原に特異的に結合する少なくとも１つの追加の抗体部分を更に含む、実施形態５９〜６５のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
６７．ＣＳＲは、ＣＤ１９に特異的に結合する抗体部分を更に含む、実施形態５６〜６６のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
６８．ＣＳＲは、ＣＤ２０に特異的に結合する抗体部分を更に含む、実施形態５６〜６７のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
６９．ＣＳＲは、同じ分子に由来する膜貫通フラグメント及び細胞内フラグメントを含む、実施形態５６〜６８のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
７０．分子は、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンドからなる群から選択される、実施形態６９に記載の抗ＣＤ２２構築物。
７１．分子は、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、及びＣＤ２７からなる群から選択される、実施形態７０に記載の抗ＣＤ２２構築物。
７２．ＣＳＲは、異なる分子に由来する膜貫通フラグメント及び細胞内フラグメントを含む、実施形態５６〜６８のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
７３．ＣＳＲは、Ｔ細胞受容体のα鎖、β鎖、δ鎖、γ鎖、又はζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、及びＣＤ１５４からなる群から選択される分子の膜貫通フラグメントを含む、実施形態７２に記載の抗ＣＤ２２構築物。
７４．ＣＳＲは、ＣＤ８、４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、又はＯＸ４０の膜貫通フラグメントを含む、実施形態７２に記載の抗ＣＤ２２構築物。
７５．膜貫通フラグメントは、配列番号１４５〜１５０のうちのいずれか１つの配列を含む、実施形態７２〜７４のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
７６．ＣＳＲは、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンドからなる群から選択される分子の細胞内フラグメントを含む、実施形態７２〜７５のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
７７．ＣＳＲは、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、及びＣＤ２７からなる群から選択される分子の細胞内フラグメントを含む、実施形態７６に記載の抗ＣＤ２２構築物。
７８．細胞内フラグメントは、配列番号１５１〜１５５のうちのいずれか１つの配列を含む、実施形態７６に記載の抗ＣＤ２２構築物。
７９．ＣＳＲは、配列番号１５６〜１７１のうちのいずれか１つの配列を含む、実施形態５６〜７８のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
８０．抗ＣＤ２２構築物は、抗体部分と、エフェクタ分子と、を含む免疫コンジュゲートである、実施形態１〜２４のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物。
８１．エフェクタ分子は、薬物、毒素、放射性同位体、タンパク質、ペプチド、及び核酸からなる群から選択される治療薬である、実施形態８０に記載の抗ＣＤ２２構築物。
８２．治療薬は、薬物又は毒素である、実施形態８１に記載の抗ＣＤ２２構築物。
８３．エフェクタ分子は、標識である、実施形態８０に記載の抗ＣＤ２２構築物。
８４．実施形態１〜８３のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物に含有される１つ以上のポリペプチドをコードする核酸分子。
８５．核酸分子は、実施形態１〜８３のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物に含有される全てのポリペプチドをコードする、実施形態８４に記載の核酸分子。
８６．実施形態８５に記載の核酸分子であって、
抗ＣＤ２２構築物は、ｃａＴＣＲであり、かつＣＳＲとの組み合わせで発現し、核酸分子は、ｃａＴＣＲに含有される全てのポリペプチド及びＣＳＲのポリペプチドをコードしているか、又は、
抗ＣＤ２２構築物は、ＣＳＲであり、かつｃａＴＣＲ又はＣＡＲとの組み合わせで発現し、核酸分子は、ＣＳＲのポリペプチド及びｃａＴＣＲ又はＣＡＲに含有される全てのポリペプチドをコードしている、核酸分子。
８７．実施形態１〜８３のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物に含有される全てのポリペプチドを個別にコードする核酸分子のセット。
８８．実施形態８７に記載の核酸分子のセットであって、
抗ＣＤ２２構築物は、ｃａＴＣＲであり、かつＣＳＲとの組み合わせで発現し、核酸分子のセットは、ｃａＴＣＲに含有される全てのポリペプチド及びＣＳＲのポリペプチドをコードしているか、又は、
抗ＣＤ２２構築物は、ＣＳＲであり、かつｃａＴＣＲ又はＣＡＲとの組み合わせで発現し、核酸分子のセットは、ＣＳＲのポリペプチド及びｃａＴＣＲ又はＣＡＲに含有される全てのポリペプチドをコードしている、核酸分子のセット。
８９．実施形態８４〜８６のいずれか１つに記載の核酸分子を含む、発現カセット。
９０．実施形態１〜８３のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物に含有される全てのポリペプチドを個別にコードする核酸分子を含む、発現カセットのセット。
９１．発現カセットのセットは、実施形態８７又は８８に記載の核酸分子のセットを含む、実施形態９０に記載の発現カセットのセット。
９２．実施形態８４〜８６のいずれか１つに記載の核酸分子、実施形態８７若しくは８８に記載の核酸分子のセット、実施形態８９に記載の発現カセット、又は実施形態９０若しくは９１に記載の発現カセットのセットを含む、宿主細胞。
９３．実施形態１〜８３のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物を発現する宿主細胞。
９４．宿主細胞は、実施形態８４〜８６のいずれか１つに記載の核酸分子、実施形態８７若しくは８８に記載の核酸分子のセット、実施形態８９に記載の発現カセット、又は実施形態９０若しくは９１に記載の発現カセットのセットを含む、実施形態９３に記載の宿主細胞。
９５．実施形態１〜８３のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物の調製方法であって、
（ａ）実施形態８４〜８６のいずれか１つに記載の核酸分子、実施形態８７若しくは８８に記載の核酸分子のセット、実施形態８９に記載の発現カセット、又は実施形態９０若しくは９１に記載の発現カセットのセットを含む宿主細胞を提供することと、
（ｂ）抗ＣＤ２２構築物を形成可能な条件下で、宿主細胞内にて１種類若しくは複数種類の核酸分子又は１種類若しくは複数種類の発現カセットを発現させることと、を含む、方法。
９６．治療的に有効な量の、実施形態１〜８３のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物、実施形態８４〜８６のいずれか１つに記載の核酸分子、実施形態８７若しくは８８に記載の核酸分子のセット、実施形態８９に記載の発現カセット、実施形態９０若しくは９１に記載の発現カセットのセット、又は実施形態９２〜９４のいずれか１つに記載の宿主細胞と、１種類以上の薬学的に許容される担体又は賦形剤と、を含む、医薬組成物。
９７．必要な対象においてＢ細胞悪性腫瘍を治療する方法であって、治療的に有効な量の、実施形態１〜８３のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物、実施形態８４〜８６のいずれか１つに記載の核酸分子、実施形態８７若しくは８８に記載の核酸分子のセット、実施形態８９に記載の発現カセット、実施形態９０若しくは９１に記載の発現カセットのセット、実施形態９２〜９４のいずれか１つに記載の宿主細胞、又は実施形態９６に記載の医薬組成物を、対象に投与することを含む、方法。
９８．必要な対象においてＣＤ２２の過剰発現によって特徴付けられる疾患又は障害を治療する方法であって、治療的に有効な量の、実施形態１〜８３のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物、実施形態８４〜８６のいずれか１つに記載の核酸分子、実施形態８７若しくは８８に記載の核酸分子のセット、実施形態８９に記載の発現カセット、実施形態９０若しくは９１に記載の発現カセットのセット、実施形態９２〜９４のいずれか１つに記載の宿主細胞、又は実施形態９６に記載の医薬組成物を、対象に投与することを含む、方法。この方法のいくつかの実施形態では、本方法は、疾患を治療する方法である。いくつかの実施形態では、本方法は、障害を治療する方法である。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２過剰発現によって特徴付けられる疾患又は障害は、癌（例えば、Ｂ細胞悪性腫瘍）である。
９９．実施形態８４〜８６のいずれか１つに記載の核酸分子、実施形態８７若しくは８８に記載の核酸分子のセット、実施形態８９に記載の発現カセット、又は実施形態９０若しくは９１に記載の発現カセットのセットを、対象から単離された１つ以上の初代細胞に導入することと、核酸分子、核酸分子のセット、発現カセット、又は発現カセットのセットを含む細胞を対象に投与することと、を含む、治療方法。
１００．細胞を対象に投与する前に、細胞を増殖させることを更に含む、実施形態９９に記載の方法。
１０１．初代細胞は、リンパ球である、方法実施形態９９又は１００。
１０２．初代細胞は、Ｔ細胞である、実施形態１０１に記載の方法。
１０３．試料中のＣＤ２２を検出する方法であって、（ａ）試料を実施形態１〜２６のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物と接触させることと、（ｂ）抗ＣＤ２２構築物と試料中の任意のＣＤ２２との結合を直接的又は間接的に検出することと、を含む、方法。
１０４．抗ＣＤ２２構築物は、検出可能な標識にコンジュゲートされる、実施形態１０３に記載の方法。
１０５．検出可能な標識は、発色性造影剤、酵素造影剤、放射性同位体造影剤、同位体造影剤、蛍光造影剤、毒性造影剤、化学発光性造影剤、核磁気共鳴造影剤である、実施形態１０４に記載の方法。
１０６．抗ＣＤ２２構築物と試料中の任意のＣＤ２２との結合は、検出可能な標識を検出することによって、直接的に検出される、実施形態１０４又は１０５に記載の方法。
１０７．抗ＣＤ２２構築物と試料中の任意のＣＤ２２との結合は、二次抗体を使用して間接的に検出される、実施形態１０３に記載の方法。
１０８．ＣＤ２２関連疾患又は障害を有する疑いのある対象を診断する方法であって、
ａ）有効な量の実施形態１〜２６のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物を対象に投与することと、
ｂ）抗ＣＤ２２構築物と対象における任意のＣＤ２２との結合のレベルを直接的又は間接的に決定することであって、閾値レベルを上回る結合のレベルは、対象がＣＤ２２関連疾患又は障害を有することを示す、ことと、を含む、方法。
１０９．ＣＤ２２関連疾患又は障害は、癌である、実施形態１０８に記載の方法。
１１０．癌は、Ｂ細胞悪性腫瘍である、実施形態１０９に記載の方法。
１１１．Ｂ細胞悪性腫瘍に罹患している対象を診断する方法であって、
（ａ）対象から得られた試料を実施形態１〜２６のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物と接触させることと、
（ｂ）試料中の抗ＣＤ２２構築物に結合した細胞の数を決定することと、を含み、
閾値レベルを上回る、抗ＣＤ２２構築物に結合した細胞の数の値は、対象がＢ細胞悪性腫瘍に罹患していることを示す、方法。
１１２．Ｂ細胞悪性腫瘍は、ＣＤ２２＋Ｂ細胞悪性腫瘍である、実施形態１１１に記載の方法。
１１３．疾患、障害、又はＢ細胞悪性腫瘍は、Ｂ細胞リンパ腫又はＢ細胞白血病である、実施形態９８、１０８、及び１１１のいずれか１つに記載の方法。
１１４．対象は、ヒトである、実施形態９７〜１１３のいずれか１つに記載の方法。
１１５．陽性ＣＤ２２発現に関連する疾患又は障害の治療のための、実施形態１〜８３のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物、実施形態８４〜８６のいずれか１つに記載の核酸分子、実施形態８７若しくは８８に記載の核酸分子のセット、実施形態８９に記載の発現カセット、実施形態９０若しくは９１に記載の発現カセットのセット、実施形態９２〜９４のいずれか１つに記載の宿主細胞、又は実施形態９６に記載の医薬組成物の使用。
１１６．陽性ＣＤ２２発現に関連する疾患又は障害の治療のための薬剤の製造における、実施形態１〜８３のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物、実施形態８４〜８６のいずれか１つに記載の核酸分子、実施形態８７若しくは８８に記載の核酸分子のセット、実施形態８９に記載の発現カセット、実施形態９０若しくは９１に記載の発現カセットのセット、実施形態９２〜９４のいずれか１つに記載の宿主細胞、又は実施形態９６に記載の医薬組成物の使用。
１１７．陽性ＣＤ２２発現に関連する疾患又は障害の診断のための、実施形態１〜２６のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２２構築物の使用。
１１８．陽性ＣＤ２２発現に関連する疾患又は障害は、癌である、実施形態１１５〜１１７のいずれか１つに記載の使用。
【０４３６】
【表８】
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【０４３７】
【表９】
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【０４３８】
【表１０】
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【０４３９】
【表１１】
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【０４４０】
【表１２】
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【０４４１】
【表１３】
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【０４４２】
【表１４】
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【０４４３】
【表１５】
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【０４４４】
【表１６】
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【０４４５】
【表１７】
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【表１８】
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【表１９】
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【表２０】
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【表２１】
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【０４５０】
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【表２３】
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【表２４】
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【表２６】
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【０４７０】
【表４２】
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【表４６】
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【表５１】
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【０４８０】
【表５２】
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【０４８１】
【表５３−１】
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【表５３−２】
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【０４８２】
【表５４−１】
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【表５４−２】
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【０４８３】
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【０４８４】
【表５６】
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【０４８５】
【表５７】
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【表５８】
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【０４８７】
【表５９】
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【０４８８】
【表６０】
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【０４８９】
【表６１】
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【０４９０】
【表６２】
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【０４９１】
【表６３】
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【０４９２】
【表６４】
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【０４９３】
【表６５】
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【０４９４】
【表６６】
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【０４９５】
【表６７】
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【０４９６】
【表６８】
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【０４９７】
本開示の範囲から逸脱することなく、本明細書又は図面に記載される任意の実施形態の１つ以上の特徴を、図面において本明細書に記載される任意の他の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせてもよい。
【０４９８】
本明細書にて引用された全ての刊行物、特許、及び特許出願は、参照による組み込みが個々の刊行物又は特許出願について具体的かつ個別に示唆されているのと同様に、参照により本明細書に組み込まれている。上記開示内容は、理解を明確にするための例示として、ある程度具体的に記載されているものの、本開示の教示に照らせば、当業者には、添付の特許請求の範囲の趣旨又は範囲から逸脱することなく特定の変更及び修正を行い得ることが、容易に明らかとなるであろう。
【国際調査報告】
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