(57)【要約】  本発明は、約０．８％ｗ／ｗ〜約１％ｗ／ｗのドセタキセル、約３０％ｗ／ｗ〜約３８％ｗ／ｗの大豆ホスファチジルコリン、約０．２％ｗ／ｗ〜約０．８％ｗ／ｗのコレステリル硫酸ナトリウム、約６１％ｗ／ｗ〜約６８％ｗ／ｗのスクロースおよびｐＨ調整剤から構成される医薬リポソーム組成物であって、ここでリポソーム組成物のｐＨが、３．５未満である、前記医薬リポソーム組成物、ならびにこれらの調製のためのプロセスに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
約０．８％ｗ／ｗ〜約１％ｗ／ｗのドセタキセル、約３０％ｗ／ｗ〜約３８％ｗ／ｗの大豆ホスファチジルコリン、約０．２％ｗ／ｗ〜約０．８％ｗ／ｗのコレステリル硫酸ナトリウム、約６１％ｗ／ｗ〜約６８％ｗ／ｗのスクロースおよびｐＨ調整剤から構成される医薬リポソーム組成物であって、ここでリポソーム組成物のｐＨが、３．５未満である、前記医薬リポソーム組成物。
【請求項２】
リポソーム組成物のｐＨが、約３である、請求項１に記載の医薬リポソーム組成物。
【請求項３】
リポソームのｄ９０が、２００ｎｍ未満である、請求項１に記載の医薬リポソーム組成物。
【請求項４】
約０．９％ｗ／ｗのドセタキセル、約３２％ｗ／ｗの大豆ホスファチジルコリン、約０．５％ｗ／ｗのコレステリル硫酸ナトリウムおよび約６６．５％ｗ／ｗのスクロースから構成される、請求項１に記載の医薬リポソーム組成物。
【請求項５】
以下のステップ：
ａ．メタノールおよび第三級ブチルアルコールの溶媒混合物中に大豆ホスファチジルコリンを分散させて、大豆ホスファチジルコリンを可溶化すること；
ｂ．コレステリル硫酸ナトリウムを可溶化した大豆ホスファチジルコリンに添加すること；
ｃ．ドセタキセルをステップｂの内容物に添加すること；
ｄ．純水中にスクロースを溶解し、ｐＨ調整剤を添加することによりスクロース溶液を調製して、スクロース溶液を形成すること、ここで、スクロース溶液のｐＨは約３である；
ｅ．ステップｃの内容物をステップｄの内容物に添加し、１５分間、８０００ＲＰＭにおいて、高剪断で混合すること；
ｆ．回転蒸発；
ｇ．約３のｐＨまでのｐＨ調整剤の添加；
ｈ．ドセタキセルを含有するリポソームの２００ｎｍ未満の粒子サイズｄ９０までの押し出し；
ｉ．濾過；および
ｊ．凍結乾燥
を含む、請求項１に記載のリポソーム組成物を調製する方法。
【請求項６】
メタノールおよび第三級ブチルアルコールの溶媒混合物が、１：１の比である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
濾液の凍結乾燥が、約１０時間〜約２０時間にわたる時間、約−５℃〜約−５０℃にわたる温度で濾液を凍結し；約４０時間〜約８０時間にわたる時間、約−５０℃〜約４０℃にわたる温度で、真空下で乾燥させるステップを含む、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
凍結乾燥サイクルが、以下のステップ：
ａ．−５℃±２℃において、濾液充填バイアルをロードすること；
ｂ．１００分±２０分間、−５℃±２℃において、濾液製剤を凍結すること；
ｃ．別の３００分±２０分間、凍結温度を維持すること；
ｄ．５０分±１０分間、−２５℃±２℃まで、温度を低下させること；
ｅ．別の９０分±１０分間、低下させた温度を維持すること；
ｆ．６０分±１０分間、−５０℃±２℃まで、温度を低下させること；
ｇ．別の３００分±１０分間、低下させた温度を維持すること；
ｈ．７５０ｍ  Ｔｏｒｒの真空を作り出すことにより濾液を蒸発させ、凍結した製剤を得ること；
ｉ．３０分±１０分間、７５０ｍ  Ｔｏｒｒの真空を作り出すことにより、−５０℃±２℃において、凍結した製剤を乾燥させること；
ｊ．１２０分±１０分間、４００ｍ  Ｔｏｒｒの真空を作り出すことにより、−３５℃±２℃において、凍結した製剤を乾燥させること；
ｋ．−３５℃±２℃、かつ４００ｍ  Ｔｏｒｒの真空において、別の１２５５分±２０分間、乾燥を維持すること；
ｌ．１５０分±１０分間、３００ｍ  Ｔｏｒｒの真空を作り出すことにより、−２５℃±２℃において、凍結した製剤を乾燥させること；
ｍ．−２５℃±２℃、かつ３００ｍ  Ｔｏｒｒの真空において、別の６００分±２０分間、乾燥を維持すること；
ｎ．１５０分±１０分間、２００ｍ  Ｔｏｒｒの真空を作り出すことにより、−５℃±２℃において、凍結した製剤を乾燥させること；
ｏ．−５℃±２℃、かつ２００ｍ  Ｔｏｒｒの真空において、別の９００分±２０分間、乾燥を維持すること；
ｐ．１５０分±１０分間、１００ｍ  Ｔｏｒｒの真空を作り出すことにより、２０℃±２℃において、凍結した製剤を乾燥させること；
ｑ．２０℃±２℃、かつ１００ｍ  Ｔｏｒｒの真空において、別の３００分±２０分間、乾燥を維持すること；
ｒ．３０分±１０分間、１００ｍ  Ｔｏｒｒの真空を作り出すことにより、２５℃±２℃において、凍結した製剤を乾燥させること；
ｓ．２５℃±２℃、かつ１００ｍ  Ｔｏｒｒの真空において、別の１５０分±２０分間、乾燥を維持すること；
ｔ．３０分±１０分間、１００ｍ  Ｔｏｒｒの真空を作り出すことにより、４０℃±２℃において、凍結した製剤を乾燥させること；
ｕ．４０℃±２℃、かつ１００ｍ  Ｔｏｒｒの真空において、別の１２０分±２０分間、乾燥を維持すること；
ｖ．３０分±１０分間、１００ｍ  Ｔｏｒｒの真空を作り出すことにより、２５℃±２℃において、凍結した製剤を乾燥させること；
ｗ．２５℃±２℃、かつ１００ｍ  Ｔｏｒｒの真空において、別の６０分±２０分間、乾燥を維持すること
を含む、請求項５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の分野
本発明は、腫瘍部位を標的化するために用いられる注射剤のためのドセタキセルリポソームに関する。これは、血液中の薬物の滞留時間の増加に関する。本発明はまた、様々な溶媒の組み合わせを用いて、９０％超の薬物ローディングを達成することを含む。
【背景技術】
【０００２】
本発明の背景
ドセタキセルは、商標名タキソテール（登録商標）の下でSanofi-Aventisにより市販されている、タキソイドファミリーに属する抗新生物剤である。これは、ドセタキセルは、イチイ属の植物の再生可能な針葉樹のバイオマスから抽出された前駆体から開始する半合成によって調製される。ドセタキセルの化学名は、（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−カルボキシ−３−フェニルイソセリン、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル、５ベータ−２０−エポキシ−ｌ，２α，４，７β，１０β，１３α−ヘキサヒドロキシタキサ−ｌｌ−エン−９−オン４−アセタート２−ベンゾアートとの１３−エステルの三水和物である。ドセタキセルは、以下：
【化１】
2021504433.tif 000002
の構造式を有する。
【０００３】
ドセタキセルは、遊離のチューブリンに結合し、微小管の組み立てを促進し、それは細胞分裂に対するチューブリンの利用可能性を減少させ、それにより細胞分裂を妨ぐ。同時に、ドセタキセルは、微小管の分解を阻害し、アポトーシスを引き起こす。タキソテール（登録商標）の処方情報を参照のこと。
【０００４】
ドセタキセルは、タキソテール（登録商標）として市販されており、乳房がん、非小細胞肺がん、ホルモン不応答性（hormone refractory）前立腺がん、胃部腺癌、および頭頚部がんの扁平上皮細胞癌についてＦＤＡで承認されている。タキソテールは、密封されたバイアル中のドセタキセルの滅菌溶液、すなわち、２０ｍｇ／ｍＬドセタキセル；０．５４ｇ／ｍＬポリソルベート８０、および０．３９５ｇ／ｍＬ脱水アルコール溶液を含有する単一バイアルバイアル注射用濃縮物、として入手可能である。患者への投与では、タキソテール注射用濃縮物の量は、０．９％塩化ナトリウム溶液または５％デキストロース溶液のいずれかの２５０ｍＬ輸液バッグまたはボトルにタキソテール注射濃縮液を注入され、０．３〜０．７４ｍｇ／ｍｌの最終濃度が生産される。推奨される治療法は、３週間毎に１回与えられるドセタキセル、の６サイクルである。ｉｄを参照のこと。
【０００５】
しかしながら、タキソテール中のポリソルベート８０の存在は、しばしば、深刻な副作用をもたらす。一般化された発疹／紅斑、低血圧および／または気管支痙攣、または非常にまれに致命的なアナフィラキシーを特徴とするそのような反応が患者において報告されている。過敏症反応は、タキソテール注入の即時中止と適切な治療の施与を必要とする。
ポリソルベート８０によって引き起こされる副作用を減らすために、患者は治療前に３日間、デキサメタゾンで処置される。デキサメタゾンは、患者の免疫応答を抑制するステロイドであり、化学療法下のがん患者に特に有害となり得、化学療法処置による健康な細胞の破壊によりその免疫はすでに損なわれている可能性がある。結果として、これらの患者は、細菌や真菌の感染症にかかりやすくなり得る。さらに、推奨される３日間のデキサメタゾン前投薬を受けているにもかかわらず、患者のタキソテールによる過敏性副作用はなおも報告されている。
【０００６】
これらの副作用のために、ほとんどの患者は、２番目または３番目のサイクルが終わるまでにタキソテール療法を停止するか、用量をスキップするか、減らされた用量でさらなる療法を継続する。同様に、市販のパクリタキセル製品であるＴＡＸＯＬ（登録商標）に関連して使用されるポリエトキシル化ヒマシ油であるＣＲＥＭＯＰＨＯＲＥＬ（登録商標）などの他の可溶化剤も、同様のアレルギー反応を引き起こし、ステロイドによる前投薬を必要する。
近年、ビタミンＥの誘導体であるＤ−ａ−トコフェリルＰＥＧ１０００コハク酸（ＴＰＧＳ）は、マイクロエマルション、ミセル、グリセロソーム、ナノ粒子、固体分散体などの多くの薬物担体製剤に首尾よく利用されている。これは、分子量１０００ＤのポリエチレングリコールによるビタミンＥのエステル化によって調製された親水性の極性頭部と疎水性の非極性アルキル鎖を有するＦＤＡ承認済みの賦形剤である。主として、これは、脂質製剤の可溶化剤、乳化剤、ビヒクルとして使用される。ＴＰＧＳの最近の適用には、Ｐ−ｇｐ排出阻害による経口吸収エンハンサーが含まれ、細胞取り込みと薬物吸収を促進する。さらに、ＴＰＧＳは、分子内の親水性と親油性のバランスに優れているため、ＰＥＧと比較して脂質二重層に優れた膜安定化効果を提供する。
【０００７】
米国特許第８５９１９４２号は、大豆ホスファチジルコリンおよびオレイン酸ナトリウムを水性媒体中に分散させて、分散されたリポソームを生産することからなる、ドセタキセルを含有するリポソームを調製する方法を開示する。
米国特許第９６５５８４６号は、水性媒体１ｍｌ当たり少なくとも約５ｍｇのドセタキセルの濃度でドセタキセルを封入および可溶化する、水性媒体中のリポソームの懸濁液を開示する。
【０００８】
米国特許第８９１２２２８号は、ドセタキセルまたはその薬学的に許容し得る塩、１以上の可溶化剤、α−リポ酸、ＴＰＧＳ、１以上のヒドロトロープ、および任意に約３〜約６のｐＫａを有する１以上の剤を含む、それを必要とする患者の処置における使用の滅菌医薬製剤を開示する。
米国特許出願第ＵＳ２００８０１６６４０３号は、リン脂質二重層および親水性コアを含む長期循環リポソーム、ここで該リン脂質二重層は、ビタミンＥ誘導体（Ｄ−アルファトコフェリルポリエチレングリコール１０００コハク酸塩、ＴＰＧＳ）を含有する、を開示する。
【０００９】
ＰＣＴ特許公開番号ＷＯ２０１４１６７４３５Ａ２は、活性成分として抗がん剤、Ｄａ−トコフェリルポリエチレングリコール１０００コハク酸（ＴＰＧＳ）の機能化コーティングで囲まれたリポソームを含む、表面機能化リポソーム製剤、ここで該抗がん剤はリポソーム内に封入され、さらにここで、該製剤は、＞７０％のカプセル化効率を有する、を開示する。
中国特許第１０１９９１５３８号は、薬物がロードされたリポソームの調製におけるＴＰＧＳ含有リポソーム組成物の使用を開示する。
【００１０】
Muthu et al.; Biomaterials. 2012 Apr;33(12):3494-501は、溶媒注入法によって調製されたドセタキセルの脳送達のためのＴＰＧＳコートリポソームを最近開示した。報告されている製剤は、本発明（カプセル化効率約８３．６３±１．１６％）よりも著しく低い、約６４．１０±０．５７％のカプセル化効率を示した。本発明におけるカプセル化効率のこの評価についての想定される理由は、様々なプロセスパラメーター、賦形剤の組成およびリポソームの調製の方法の徹底的な最適化に起因し得る。同じ群は、さらに拡張された作業において、量子ドットとの併用療法によってドセタキセルの治療有効性を改善した。しかしながら、本発明は、そのような任意の併用療法を踏襲しない。
しかしながら、これらの副作用、前投薬の要求、およびタキソテールの現在市販されている製剤に関連する患者の非コンプライアンス問題を回避するための、ドセタキセルリポソーム注射製剤を開発する必要が存在する。
【発明の概要】
【００１１】
本発明の概要
１つの目的において、本発明は、本明細書において、静脈内投与を促進する、治療的に有効な量のドセタキセルおよび賦形剤から本質的になるリポソーム注射剤組成物を提供し、これは腫瘍部位を標的化するために用いられる。これは、血液中の薬物の滞留時間の増加に関する。本発明はまた、様々な溶媒の組み合わせ、好ましくは、１：１の比のメタノールおよび第三級ブタノール（Ｔ−ブタノールまたは第三級ブチルアルコール）を用いて、９０％超の薬物ローディングを達成することを含む。
別の目的において、本発明は、さらに、ドセタキセル、リン脂質、コレステロール、凍結乾燥保護剤（lyoprotectant）およびｐＨ調整剤から本質的になる、ドセタキセルリポソーム注射剤を提供する。
【００１２】
選択的な用語の定義
本発明の記載および特許請求の範囲において、以下の専門用語は、以下に記載される定義に従って用いられる。
用語「リポソーム」は、封入された水性の容量を含有する、１以上の同中心の脂質二重層から構成されるベシクルである。二重層は、疎水性の「尾部」領域および親水性の「頭部」領域を有する２つの脂質単層から構成され、ここで、疎水性領域は、二重層の中心に向かって方向づけられ、親水性領域は、内側または外側の水性相に向かって方向づけられている。
数値に関連して、本明細書に使用されるとき、用語「約」は、示された値を含む、示された値の±１０％を意味する。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明の詳細な説明
本発明は、本明細書において、静脈内投与を促進する、治療的に有効な量のドセタキセルおよび賦形剤から本質的になる組成物を提供し、これは腫瘍部位を標的化するために用いられる。これは、血液中の薬物の滞留時間の増加に関する。本発明はまた、様々な溶媒の組み合わせ、好ましくは、１：１の比のメタノールおよび第三級ブタノール（Ｔ−ブタノールまたは第三級ブチルアルコール）を用いて、９０％超の薬物ローディングを達成することを含む。
好ましい態様において、本発明の医薬組成物は、リポソーム注射剤である。
最も好ましい態様において、医薬リポソーム注射剤組成物は、ドセタキセルおよび薬学的に許容し得る賦形剤を含む。
【００１４】
本医薬リポソーム組成物に用いられるドセタキセルは、好ましくは、組成物の総重量に基づいて、約０．８％ｗ／ｗ〜約１％ｗ／ｗである。組成物中のドセタキセルの好ましい濃度は、組成物の総重量に基づいて、約０．８５％ｗ／ｗ〜約０．９５％ｗ／ｗである。最も好ましくは、組成物に用いられるドセタキセルは、組成物の総重量に基づいて、約０．９％ｗ／ｗである。
さらなる態様において、医薬リポソーム組成物は、ドセタキセル、リン脂質、コレステロール、凍結乾燥保護剤およびｐＨ調整剤を含み、ここでリポソーム組成物のｐＨは、３．５未満である。
さらに別の態様において、本発明は、ドセタキセル、リン脂質、コレステロール、可溶化剤、凍結乾燥保護剤、およびｐＨ調整剤を含むドセタキセルリポソーム組成物をさらに提供する。
【００１５】
リン脂質の例は、天然のリン脂質、合成リン脂質、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。レシチンは、リン脂質の天然の供給源の一つである。レシチンは、卵黄および大豆において見出される混合物である。それは、ホスファチジルコリン（ＰＣ、大豆ホスファチジルコリン）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）およびホスファチジルイノシトール（ＰＩ）を含む、数多のリン脂質を含む。天然のリン脂質はまた、例として大豆ホスファチジルコリン（ＳＰＣ）、スフィンゴミエリン、およびホスファチジルグリセロール（ＰＧ）を含む。合成リン脂質はこれらに限定されないが、ホスホコリンの誘導体（例えば、ＤＤＰＣ、ＤＬＰＣ、ＤＭＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＣ、ＤＯＰＣ、ＰＯＰＣ、ＤＥＰＣ）、ホスホグリセロールの誘導体（例えば、ＤＭＰＧ、ＤＰＰＧ、ＤＳＰＧ、ＰＯＰＧ、ＤＳＰＧ−ＮＡ、ＤＳＰＧ−ＮＨ４）、ホスファチジン酸の誘導体（例えば、ＤＭＰＡ、ＤＰＰＡ、ＤＳＰＡ）、ホスホエタノールアミンの誘導体（例えば、ＤＭＰＥ、ＤＰＰＥ、ＤＳＰＥ  ＤＯＰＥ）、ホスホセリンの誘導体（例えば、ＤＯＰＳ）、リン脂質のＰＥＧ誘導体（例えば、ｍＰＥＧ−リン脂質、ｍＰＥＧ  ２０００−ＤＳＰＥ、ポリグリセリン−リン脂質、リン機能化脂質、および末端活性化リン脂質およびそれらの任意の混合物を含む。好ましくは、リン脂質は、大豆ホスファチジルコリン（ＳＰＣ）から選択され、混合リン脂質は、大豆ホスファチジルコリン（ＳＰＣ）およびＮ−カルボニルメトキシポリエチレングリコール−２０００）−１、２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＭＰＥＧ２０００−ＤＳＰＥ）から選択される。本発明の医薬リポソーム組成物において用いられるリン脂質は、好ましくは、大豆ホスファチジルコリンである。本発明において用いられる大豆ホスファチジルコリンは、組成物の総重量に基づいて約３０％ｗ／ｗ〜約４０％ｗ／ｗ、好ましくは組成物の総重量に基づいて約３０％ｗ／ｗ〜約３８％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは組成物の総重量に基づいて約３１％ｗ／ｗ〜約３６％ｗ／ｗ、最も好ましくは組成物の総重量に基づいて約３２％ｗ／ｗである。
【００１６】
コレステロールの例は、コレステロール、コレステリル硫酸およびその塩（例として、ナトリウム塩）、コレステリルヘミスクシナート、コレステリルスクシナート、コレステリルオレアート、コレステロールのポリエチレングリコール誘導体（コレステロール−ＰＥＧ）、コプロスタノール、コレスタノール、コレスタン、コール酸、コルチゾール、コルチコステロン、ヒドロコルチゾンおよびカルシフェロールからなる群から選択される。好ましくは、コレステロールは、コレステリル硫酸ナトリウムから選択される。コレステリル硫酸ナトリウムは、好ましくは、組成物の総重量に基づいて、約０．２％ｗ／ｗ〜約０．８％ｗ／ｗ、より好ましくは、組成物の総重量に基づいて、約０．４％ｗ／ｗ〜約０．６％ｗ／ｗ、および最も好ましくは、組成物の総重量に基づいて、約０．５％ｗ／ｗの範囲において用いられる。
【００１７】
可溶化剤の例は、ビタミンＥ  ＴＰＧＳ、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）４００、およびプロピレングリコール（ＰＧ）ｔｗｅｅｎ８０、ｔｗｅｅｎ２０、グリセロールｓｐａｎ８０およびグリコフロールからなる群から選択される。好ましくは、可溶化剤は、ビタミンＥ  ＴＰＧＳから選択される。医薬リポソーム注射剤組成物に用いられる可溶化剤は、好ましくは、組成物の総重量に基づいて、約０．１％〜約１．５％である。
【００１８】
凍結乾燥保護剤の例は、スクロース、トレハロース、アラビノース、エリスリトール、フルクトース、ガラクトース、グルコース、ラクトース、マルチトール、マルトース、マルトトリオース、マンニトール、マンオビオース、マンノース、リボース、ソルビトール、サッカロース、キシリトール、キシロース、デキストラン、またはそれらの混合物からなる群から選択される。好ましくは、凍結乾燥保護剤は、スクロースから選択される。医薬リポソーム組成物に用いられるスクロースは、好ましくは、組成物の総重量に基づいて約６１％〜約６８％、より好ましくは組成物の総重量に基づいて約６２％〜約６６％、最も好ましくは組成物の総重量に基づいて約６６．５％ｗ／ｗである。
【００１９】
本リポソーム組成物に用いられるｐＨ調整剤の例は、塩酸である。ｐＨ調整剤は、リポソーム組成物のｐＨを、ｐＨ約３．５未満、より好ましくは約３のｐＨに調整するために用いられる。本発明の発明者らは、驚くべきことに、３．５未満のｐＨにより、リポソームへの９０％超のドセタキセルの高薬物ローディングが存在した（９０％超のドセタキセルが、結合した薬物としてリポソームに封入され、１０％未満のドセタキセルが、遊離の薬物として存在する）ことを見出した。
【００２０】
本発明の態様において、本発明は、約０．８％ｗ／ｗ〜約１％ｗ／ｗのドセタキセル、約３０％ｗ／ｗ〜約３８％ｗ／ｗの大豆ホスファチジルコリン、約０．２％ｗ／ｗ〜約０．８％ｗ／ｗのコレステリル硫酸ナトリウム、約６１％ｗ／ｗ〜約６８％ｗ／ｗのスクロースおよびｐＨ調整剤から構成される医薬リポソーム組成物、ここで該リポソーム組成物のｐＨは、３．５未満である、を提供する。
【００２１】
本発明のさらなる態様において、本発明は、約０．８％ｗ／ｗ〜約１％ｗ／ｗのドセタキセル、約３０％ｗ／ｗ〜約３８％ｗ／ｗの大豆ホスファチジルコリン、約０．２％ｗ／ｗ〜約０．８％ｗ／ｗのコレステリル硫酸ナトリウム、約６１％ｗ／ｗ〜約６８％ｗ／ｗのスクロースおよびｐＨ調整剤から本質的になる医薬リポソーム組成物、ここで該リポソーム組成物のｐＨは、３．５未満である、を提供する。
【００２２】
本発明の別の態様において、本発明は、約０．８％ｗ／ｗ〜約１％ｗ／ｗのドセタキセル、約３０％ｗ／ｗ〜約３８％ｗ／ｗの大豆ホスファチジルコリン、約０．２％ｗ／ｗ〜約０．８％ｗ／ｗのコレステリル硫酸ナトリウム、約６１％ｗ／ｗ〜約６８％ｗ／ｗのスクロースおよびｐＨ調整剤からなる医薬リポソーム組成物、ここで該リポソーム組成物のｐＨは、３．５未満である、を提供する。
【００２３】
特定の態様において、本発明は、約０．９％ｗ／ｗのドセタキセル、約３２％ｗ／ｗの大豆ホスファチジルコリン、約０．５％ｗ／ｗのコレステリル硫酸ナトリウム、約６６．５％ｗ／ｗのスクロースおよびｐＨ調整剤から構成される医薬リポソーム組成物、ここで該リポソーム組成物のｐＨは、約３である、を提供する。
【００２４】
別の態様において、本発明は、約０．９％ｗ／ｗのドセタキセル、約３２％ｗ／ｗの大豆ホスファチジルコリン、約０．５％ｗ／ｗのコレステリル硫酸ナトリウム、約６６．５％ｗ／ｗのスクロースおよびｐＨ調整剤から本質的になる医薬リポソーム組成物、ここで該リポソーム組成物のｐＨは、約３である、を提供する。
【００２５】
さらなる態様において、本発明は、約０．９％ｗ／ｗのドセタキセル、約３２％ｗ／ｗの大豆ホスファチジルコリン、約０．５％ｗ／ｗのコレステリル硫酸ナトリウム、約６６．５％ｗ／ｗのスクロースおよびｐＨ調整剤から本質的になる医薬リポソーム組成物、ここで該リポソーム組成物のｐＨは、約３である、を提供する。
【００２６】
特定の態様において、本発明は、約０．９％ｗ／ｗのドセタキセル、約３２％ｗ／ｗの大豆ホスファチジルコリン、約０．５％ｗ／ｗのコレステリル硫酸ナトリウム、約６６．５％ｗ／ｗのスクロースおよびｐＨ調整剤から構成される医薬リポソーム組成物、ここで該リポソーム組成物のｐＨは、約２．５〜約３．２である、を提供する。
【００２７】
別の態様において、本発明は、約０．９％ｗ／ｗのドセタキセル、約３２％ｗ／ｗの大豆ホスファチジルコリン、約０．５％ｗ／ｗのコレステリル硫酸ナトリウム、約６６．５％ｗ／ｗのスクロースおよびｐＨ調整剤から本質的になる医薬リポソーム組成物、ここで該リポソーム組成物のｐＨは、約２．５〜約３．２である、を提供する。
【００２８】
さらなる態様において、本発明は、約０．９％ｗ／ｗのドセタキセル、約３２％ｗ／ｗの大豆ホスファチジルコリン、約０．５％ｗ／ｗのコレステリル硫酸ナトリウム、約６６．５％ｗ／ｗのスクロースおよびｐＨ調整剤から本質的になる医薬リポソーム組成物、ここで該リポソーム組成物のｐＨは、約２．５〜約３．２である、を提供する。
本発明の医薬リポソーム組成物は、ｄ９０  ２００ｎｍ未満、ｄ５０  １５０ｎｍ未満、ｄ１０  １００ｎｍ未満のリポソームを含む。
【００２９】
本発明のドセタキセルリポソームは、以下のステップを含むプロセスにより調製される：
ａ．溶媒混合物中に大豆ホスファチジルコリンを分散させて、大豆ホスファチジルコリンを可溶化すること；
ｂ．コレステリル硫酸ナトリウムを可溶化した大豆ホスファチジルコリンに添加すること；
ｃ．ドセタキセルをステップｂの内容物に添加すること；
ｄ．純水中にスクロースを溶解し、ｐＨ調整剤を添加することによりスクロース溶液を調製して、スクロース溶液を形成すること、ここでスクロース溶液のｐＨは約３である；
ｅ．ステップｃの内容物をステップｄの内容物に添加し、１５分間、８０００ＲＰＭにおいて、高剪断で混合すること；
ｆ．回転蒸発；
ｇ．約３のｐＨまでのｐＨ調整剤の添加
ｈ．ドセタキセルを含有するリポソームの２００ｎｍ未満の粒子サイズｄ９０までの押し出し；
ｉ．濾過；および
ｊ．凍結乾燥。
【００３０】
溶媒の例は、メタノール、エタノール（無水アルコール）、プロパノール、ブタノール（ｔ−ブタノール、第三級ブチルアルコール）、クロロホルム、イソアミルアルコール、イソプロパノール、２−メトキシエタノール、テトラヒドロフラン、ＤＭＳＯ  アセトン、アセトニトリルおよびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。リポソーム組成物の調製に使用される溶媒は、好ましくは、１：１の比の第三級ブチルアルコールおよびメタノールである。
【００３１】
好ましい態様において、本発明は、以下のステップを含む、リポソーム組成物を調製する方法に関する：
ａ．メタノールおよび第三級ブチルアルコールの溶媒混合物中に大豆ホスファチジルコリンを分散させて、大豆ホスファチジルコリンを可溶化すること；
ｂ．コレステリル硫酸ナトリウムを可溶化した大豆ホスファチジルコリンに添加すること；
ｃ．ドセタキセルをステップｂの内容物に添加すること；
ｄ．純水中にスクロースを溶解し、ｐＨ調整剤を添加することによりスクロース溶液を調製し、スクロース溶液を形成すること、ここでスクロース溶液のｐＨは約３である；
ｅ．ステップｃの内容物をステップｄの内容物に添加し、１５分間、８０００ＲＰＭにおいて、高剪断で混合すること；
ｆ．回転蒸発；
ｇ．約３のｐＨまでのｐＨ調整剤の添加
ｈ．ドセタキセルを含有するリポソームの２００ｎｍ未満の粒子サイズｄ９０までの押し出し；
ｉ．濾過；および
ｊ．凍結乾燥。
【００３２】
より好ましい態様において、本発明は、以下のステップを含む、リポソーム組成物を調製する方法に関する：
ａ．１：１の比のメタノールおよび第三級ブチルアルコールの溶媒混合物中に大豆ホスファチジルコリンを分散させて、大豆ホスファチジルコリンを可溶化すること；
ｂ．コレステリル硫酸ナトリウムを可溶化した大豆ホスファチジルコリンに添加すること；
ｃ．ドセタキセルをステップｂの内容物に添加すること；
ｄ．純水中にスクロースを溶解し、ｐＨ調整剤を添加することによりスクロース溶液を調製し、スクロース溶液を形成すること、ここでスクロース溶液のｐＨは約３である；
ｅ．ステップｃの内容物をステップｄの内容物に添加し、１５分間、８０００ＲＰＭにおいて、高剪断で混合すること；
ｆ．回転蒸発；
ｇ．約３のｐＨまでのｐＨ調整剤の添加
ｈ．ドセタキセルを含有するリポソームの２００ｎｍ未満の粒子サイズｄ９０までの押し出し；
ｉ．濾過；および
ｊ．凍結乾燥。
【００３３】
別の態様において、リポソームドセタキセル液体濾液は、約１０時間〜約２０時間にわたる時間、約−５℃〜約−５０℃にわたる温度で濾液を凍結し；約４０時間〜約８０時間にわたる時間、約−５０℃〜約４０℃にわたる温度で、真空下で乾燥させるステップを含むことにより、凍結乾燥される。
【００３４】
さらに特定の態様において、リポソームドセタキセル液体濾液は、以下のステップを含むことにより、凍結乾燥される：
ａ．−５℃±２℃において、濾液充填バイアルをロードすること；
ｂ．−５℃±２℃において、１００分±２０分間、濾液製剤を凍結すること；
ｃ．別の３００分±２０分間、凍結温度を維持すること；
ｄ．５０分±１０分間、−２５℃±２℃まで、温度を低下させること；
ｅ．別の９０分±１０分間、低下させた温度を維持すること；
ｆ．６０分±１０分間、−５０℃±２℃まで、温度を低下させること；
ｇ．別の３００分±１０分間、低下させた温度を維持すること；
ｈ．７５０ｍ  Ｔｏｒｒの真空を作り出すことにより濾液を蒸発させ、凍結した製剤を得ること；
ｉ．３０分±１０分間、７５０ｍ  Ｔｏｒｒの真空を作り出すことにより、−５０℃±２℃において、凍結した製剤を乾燥させること；
ｊ．１２０分±１０分間、４００ｍ  Ｔｏｒｒの真空を作り出すことにより、−３５℃±２℃において、凍結した製剤を乾燥させること；
ｋ．−３５℃±２℃、かつ４００ｍ  Ｔｏｒｒの真空において、別の１２５５分±２０分間、乾燥を維持すること；
ｌ．１５０分±１０分間、３００ｍ  Ｔｏｒｒの真空を作り出すことにより、−２５℃±２℃において、凍結した製剤を乾燥させること；
【００３５】
ｍ．−２５℃±２℃、かつ３００ｍ  Ｔｏｒｒの真空において、別の６００分±２０分間、乾燥を維持すること；
ｎ．１５０分±１０分間、２００ｍ  Ｔｏｒｒの真空を作り出すことにより、−５℃±２℃において、凍結した製剤を乾燥させること；
ｏ．−５℃±２℃、かつ２００ｍ  Ｔｏｒｒの真空において、別の９００分±２０分間、乾燥を維持すること；
ｐ．１５０分±１０分間、１００ｍ  Ｔｏｒｒの真空を作り出すことにより、２０℃±２℃において、凍結した製剤を乾燥させること；
ｑ．２０℃±２℃、かつ１００ｍ  Ｔｏｒｒの真空において、別の３００分±２０分間、乾燥を維持すること；
ｒ．３０分±１０分間、１００ｍ  Ｔｏｒｒの真空を作り出すことにより、２５℃±２℃において、凍結した製剤を乾燥させること；
ｓ．２５℃±２℃、かつ１００ｍ  Ｔｏｒｒの真空において、別の１５０分±２０分間、乾燥を維持すること；
ｔ．３０分±１０分間、１００ｍ  Ｔｏｒｒの真空を作り出すことにより、４０℃±２℃において、凍結した製剤を乾燥させること；
ｕ．４０℃±２℃、かつ１００ｍ  Ｔｏｒｒの真空において、別の１２０分±２０分間、乾燥を維持すること；
ｖ．３０分±１０分間、１００ｍ  Ｔｏｒｒの真空を作り出すことにより、２５℃±２℃において、凍結した製剤を乾燥させること；
ｗ．２５℃±２℃、かつ１００ｍ  Ｔｏｒｒの真空において、別の６０分±２０分間、乾燥を維持すること。
【００３６】
本発明の態様において、本発明の凍結乾燥された組成物は、乳房がん、非小細胞肺がん、去勢抵抗性前立腺がん、胃部腺癌および頭頸部がんの扁平上皮細胞癌およびの処置のために、患者に静脈内投与される。
静脈内投与のための本発明の態様において、凍結乾燥された組成物は、純水で再構成され、さらに０．９％ナトリウム塩化物溶液または５％デキストロース溶液のいずれかで希釈される。
本発明の態様において、本発明のドセタキセルリポソーム組成物は、乳房がん、非小細胞肺がん、去勢抵抗性前立腺がん、胃部腺癌および頭頸部の扁平上皮細胞癌の処置のために用いられ、ここでプレドニゾンによる前投薬は必要とされない。
本発明の態様において、本発明のリポソーム組成物の推奨される用量は、３週間毎に、１時間かけて静脈内に投与される６０ｍｇ／ｍ２〜１００ｍｇ／ｍ２である。
【００３７】
以下の例は、本発明を例証するために提供される。しかしながら、本発明は、特定の条件または以下の例に記載される詳細に限定されないことは理解される。例は、本発明およびその様々な側面の理解および実施に有用な特定の方法論のみを提供するものであるので、例は、本発明を限定するものとして解釈されるべきではない。本発明のある好ましいおよび代替の態様は、本発明を開示する目的のためのみに記載される一方で、開示された態様に対する改変は、当業者において生じ得る。
【実施例】
【００３８】
例１〜３：
以下の組成を有するリポソーム注射剤が調製される。
【表１】
2021504433.tif 000003
【００３９】
これらのリポソーム注射剤を以下のように調製する：
１．  ５０：５０ｖ／ｖのメタノールおよびＴ−ブタノール混合物を混合することにより、脂質および薬物の可溶化の溶媒混合物を調製する。
２．  ６０〜６５℃において、４ｍＬのステップ１の溶媒混合物に、秤量した分量の大豆ホスファチジルコリンを添加し、可溶化する。
３．  ６０〜６５℃において、ステップ２の脂質溶液に、秤量した分量のコレステリル硫酸ナトリウムを添加し、可溶化する。
４．  （任意に）６０〜６５℃において、ステップ３の脂質溶液に、秤量した分量のＭＰＥＧ  ２０００  ＤＳＰＥ／ビタミンＥ  ＴＰＧＳを添加し、可溶化する。
５．  ６０〜６５℃において、ステップ４の脂質混合物に、秤量した分量のドセタキセルを添加し、可溶化する。
６．  ドセタキセルの脂質との均一な結合のために、６０〜６５℃において、１０分間、ステップ４の内容物を混合する。
７．  ７５％のバッチサイズと同じ純水中に秤量した分量のスクロースを溶解することにより、スクロース溶液を調製する。
８．  必要な分量の３７％濃ＨＣｌを希釈することにより、０．１Ｎ塩酸を調製する。
【００４０】
９．  ０．１Ｎ  ＨＣｌを用いて、ステップ７において調製したスクロース溶液のｐＨをｐＨ３．０〜４．０の間に調整する。
１０．  ステップ８のスクロース溶液を６０〜６５℃まで加熱する。
１１．  エタノール注入法により、５０００〜２００００ＲＰＭにおいて高剪断混合下で薬物脂質混合物をスクロース溶液に添加し、１ｍＬの溶媒混合物で脂質薬物混合物を含有する容器をリンスし、２〜３０分間、混合を行う。
１２．  ステップ１１のリポソーム製剤の水準（mark）まで純水で容量を補い、必要な場合、ｐＨを３．０〜４．０の間に調整した。
１３．  ステップ１２のリポソーム製剤のサイズ減少を４００ｎｍ、２００ｎｍ、１００ｎｍおよび５０ｎｍポリカーボネートフィルターによる押し出しを用いて行った。
１４．  サイズ減少後、リポソーム製剤を、０．２２ミクロンフィルターを用いて滅菌濾過する。
１５．  滅菌濾過後、試料を凍結乾燥させ、注射剤のための乾燥リポソームケーキを得た。
【００４１】
例４：
【表２】
2021504433.tif 000004
【００４２】
ドセタキセルを含むカプセル化されたリポソームの調製のためのプロセス：
１．  １４．４６ｇ（３２．０５％ｗ／ｗ）の大豆ホスファチジルコリンを８ｍＬの溶媒混合物（１：１の比の４ｍＬの第三級ブチルアルコールおよび４ｍＬのメタノール）中に分散させ、２５分間、４７℃において、水槽中でマグネチックスターラーにより混合し、大豆ホスファチジルコリンを可溶化した。
２．  可溶化したステップ１のホスファチジルコリンナトリウム溶液に、２２６．６ｍｇ（０．５％ｗ／ｗ）のコレステリル硫酸ナトリウムを添加し、４５分間、４９℃において、水槽中でマグネチックスターラーにより可溶化し、分散されたリポソームを形成した。
３．  ステップ３の内容物に、４１２．１ｍｇ（０．９１％ｗ／ｗ）の固体ドセタキセル無水物を添加し、１０分間、４６℃において、水槽中でマグネチックスターラーにより可溶化し、分散されたリポソームを含有するドセタキセルを形成した。
【００４３】
４．  １５分間、８０００ＲＰＭにおいてultra-turrax T-25 digital高剪断混合機を用いて、ステップ３の内容物を、スクロース溶液に添加した（スクロース溶液を、２分間、４５℃において、水槽中で、マグネチックスターラーにより、必要な分量の純水中に３０．０２ｇ［６６．５４％ｗ／ｗ］のスクロースを溶解することにより調製し、さらにｐＨを、０．１Ｎ塩酸溶液を用いて２．７に調整する）。
５．  ステップ４の内容物を、真空において、２℃の冷却温度、４６℃の槽温度で回転蒸発に供した。
６．  回転蒸発後、ステップ５の内容物に必要な分量の純水を添加し、ｐＨを０．１Ｎ塩酸溶液を用いて３に調整した。
７．  ステップ６の内容物を４７℃において、lipex押出機を用いて、２００ｎｍ、１００ｎｍ、８０ｎｍおよび５０ｎｍポリカーボネート膜により押し出した。３サイクルの通過は、２００ｎｍ未満（すなわち、１７８ｎｍ）のｄ９０、１５０ｎｍ未満（すなわち、１１３ｎｍ）のｄ５０および１００ｎｍ未満（すなわち、７３ｎｍ）のｄ１０の粒子サイズを有するリポソームをもたらした。
８．  ステップ７の内容物を、０．２μｍ膜フィルターを用いて濾過した。
【００４４】
９．  ステップ８の濾液を３０ｍＬ成形バイアルに充填し、以下の凍結乾燥サイクルを用いて凍結乾燥した：
ａ．−５℃±２℃において、濾液充填バイアルをロードすること；
ｂ．１００分±２０分間、−５℃±２℃において、濾液製剤を凍結すること；
ｃ．別の３００分±２０分間、凍結温度を維持すること；
ｄ．５０分±１０分間、−２５℃±２℃まで、温度を低下させること；
ｅ．別の９０分±１０分間、低下させた温度を維持すること；
ｆ．６０分±１０分間、−５０℃±２℃まで、温度を低下させること；
ｇ．別の３００分±１０分間、低下させた温度を維持すること；
ｈ．７５０ｍ  Ｔｏｒｒの真空を作り出すことにより濾液を蒸発させ、凍結した製剤を得ること；
ｉ．３０分±１０分間、７５０ｍ  Ｔｏｒｒの真空を作り出すことにより、−５０℃±２℃において、凍結した製剤を乾燥させること；
ｊ．１２０分±１０分間、４００ｍ  Ｔｏｒｒの真空を作り出すことにより、−３５℃±２℃において、凍結した製剤を乾燥させること；
ｋ．−３５℃±２℃、かつ４００ｍ  Ｔｏｒｒの真空において、別の１２５５分±２０分間、乾燥を維持すること；
ｌ．１５０分±１０分間、３００ｍ  Ｔｏｒｒの真空を作り出すことにより、−２５℃±２℃において、凍結した製剤を乾燥させること；
【００４５】
ｍ．−２５℃±２℃、かつ３００ｍ  Ｔｏｒｒの真空において、別の６００分±２０分間、乾燥を維持すること；
ｎ．１５０分±１０分間、２００ｍ  Ｔｏｒｒの真空を作り出すことにより、−５℃±２℃において、凍結した製剤を乾燥させること；
ｏ．−５℃±２℃、かつ２００ｍ  Ｔｏｒｒの真空において、別の９００分±２０分間、乾燥を維持すること；  
ｐ．１５０分±１０分間、１００ｍ  Ｔｏｒｒの真空を作り出すことにより、２０℃±２℃において、凍結した製剤を乾燥させること；
ｑ．２０℃±２℃、かつ１００ｍ  Ｔｏｒｒの真空において、別の３００分±２０分間、乾燥を維持すること；
ｒ．３０分±１０分間、１００ｍ  Ｔｏｒｒの真空を作り出すことにより、２５℃±２℃において、凍結した製剤を乾燥させること；
ｓ．２５℃±２℃、かつ１００ｍ  Ｔｏｒｒの真空において、別の１５０分±２０分間、乾燥を維持すること；
ｔ．３０分±１０分間、１００ｍ  Ｔｏｒｒの真空を作り出すことにより、４０℃±２℃において、凍結した製剤を乾燥させること；
ｕ．４０℃±２℃、かつ１００ｍ  Ｔｏｒｒの真空において、別の１２０分±２０分間、乾燥を維持すること；
ｖ．３０分±１０分間、１００ｍ  Ｔｏｒｒの真空を作り出すことにより、２５℃±２℃において、凍結した製剤を乾燥させること；
ｗ．２５℃±２℃、かつ１００ｍ  Ｔｏｒｒの真空において、別の６０分±２０分間、乾燥を維持すること。
【００４６】
比較例１：
【表３】
2021504433.tif 000005
調製のためのプロセスは、例４のプロセスと同じであるが、４のｐＨ、１：１の比のメタノールおよびエタノールの溶媒混合物の変更を含み、回転蒸発プロセス（ステップ５）および凍結乾燥サイクルの変更を含まない（４０℃乾燥ステップｔおよびｕを含まない）。
【００４７】
比較例２：
【表４】
2021504433.tif 000006
調製のためのプロセスは、例４のプロセスと同じであるが、４．５に調整された製剤のｐＨの変更を含む。
【００４８】
比較例３：
【表５】
2021504433.tif 000007
調製のためのプロセスは、例４のプロセスと同じであるが、凍結乾燥サイクルの変更を含む（４０℃乾燥ステップｔおよびｕを含まない）。
【００４９】
例５：例４、比較例１、２および３の遊離の薬物、封入された薬物、アッセイ、ｐＨ、残存溶媒。
【表６】
2021504433.tif 000008
【００５０】
ｐＨの測定のために、発明の例４の凍結乾燥されたバイアルを純水で再構成し、２ｍｇ／ｍＬのドセタキセルのリポソーム製剤を生産した。
ドセタキセルリポソーム製剤の遊離の薬物、封入された薬物、アッセイを、ＨＰＬＣにより行い、残存溶媒分析を当業者に入手可能な文献に従って、ガスクロマトグラフィーにより行った。
【００５１】
本発明の発明者らは、驚くべきことに、１：１の比のメタノールおよび第三級ブタノールの溶媒を有し、約３の製剤のｐＨを有し、回転蒸発された、例４の製剤が、、高薬物ローディング効率（約９５％）を有し、さらに、残存溶媒（メタノールおよび第三級ブタノール）は、比較例１（４．１のｐＨにおいて、１：１の比のエタノールおよびメタノールの溶媒混合物を含有する）、比較例２（４．７のｐＨにおいて、１：１の比のメタノールおよびＴ−ブタノールを含有する）および比較例３（例４の凍結乾燥ステップｔおよびｕにおいて、４０℃における乾燥ステップを含まずに、３のｐＨにおいて、１：１の比のメタノールおよびＴ−ブタノールを含有する）と比較して、（ＩＣＨの限界内で）低かったことを見出した。
【国際調査報告】
2021504433.tif 000009
2021504433.tif 000010