(57)【要約】  本発明は、没食子酸エピガロカテキンの安定した医薬用又は皮膚化粧用水溶液に関する。前記溶液は、ＥＧＣＧの溶解性、安定性及びバイオアベイラビリティを改善した。【特許請求の範囲】
【請求項１】
安定した医薬用又は皮膚化粧用水溶液であって、
−１３〜１０７ｍｇ／ｍｌの没食子酸エピガロカテキン、
−少なくとも１種の二糖
−０．１〜１．０ｍｍｏｌ／ｌの少なくとも１種のキレート剤、
−医薬的に許容され得る、又は皮膚化粧用に許容され得るｐＨ調整剤
を含み、
ｐＨが３．０〜４．０の範囲であり、没食子酸エピガロカテキン／二糖のモル比が０．１〜０．８、特には０．２５である、医薬用又は皮膚化粧用水溶液。
【請求項２】
前記二糖がスクロース及びトレハロースから選択される、請求項１に記載の医薬用又は皮膚化粧用水溶液。
【請求項３】
水性系に適しており、そして酸性ｐＨに適合する少なくとも１種の抗酸化剤、特にアスコルビン酸、エリソルビン酸、モノチオグリセロール、メタ重亜硫酸ナトリウム及び重亜硫酸ナトリウム、還元糖から選択される少なくとも１種の抗酸化剤をさらに含む、請求項１又は２に記載の医薬用又は皮膚化粧用水溶液。
【請求項４】
前記溶液が有機溶媒を含まない、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬用又は皮膚化粧用水溶液。
【請求項５】
前記溶液がエタノール、プロピレングリコール、グリセロール、ＰＥＧ４００から選択される有機溶媒をさらに含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬用又は皮膚化粧用水溶液。
【請求項６】
前記キレート剤が、クエン酸、エデト酸二ナトリウムカルシウム、エデト酸二ナトリウム、フマル酸、リンゴ酸、マルトール及びペンテト酸から選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬用又は皮膚化粧用水溶液。
【請求項７】
前記医薬的に許容され得るｐＨ調整剤が、酢酸、アジピン酸、炭酸アンモニウム、水酸化アンモニウム、リン酸アンモニウム、クエン酸、ジエタノールアミン、フマル酸、塩酸、リンゴ酸、硝酸、プロピオン酸、酢酸カリウム、重炭酸カリウム、塩化カリウム、クエン酸カリウム、メタリン酸カリウム、リン酸カリウム、酢酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、グリコール酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、乳酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、コハク酸、硫酸、酒石酸、トリエタノールアミンから選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の医薬用又は皮膚化粧用水溶液。
【請求項８】
−１３〜１０７ｍｇ／ｍｌ、特には２７〜６７ｍｇ／ｍｌ、さらに特には２７〜５３ｍｇ／ｍｌの没食子酸エピガロカテキン、
−０．０５〜３．０ｍｇ／ｍｌ、特には０．０８〜０．２５ｍｇ／ｍｌ、さらに特には０．１０〜０．２０ｍｇ／ｍｌのクエン酸
−２５〜１４０ｍｇ／ｍｌ、特には５０〜１２５ｍｇ／ｍｌ、さらに特定には１００〜１２５ｍｇ／ｍｌのスクロース、
−必要に応じて、２５〜２５０ｍｇ／ｍｌ、特には１００ｍｇ／ｍｌのグルコース及び／又はフルクトース
を含むか又はそれらから成る、請求項１〜７のいずれか一項に記載の医薬用又は皮膚化粧用水溶液。
【請求項９】
−２７ｍｇ／ｍｌの没食子酸エピガロカテキン
−０．１ｍｇ／ｍｌのクエン酸
−１００ｍｇ／ｍｌのスクロース、
−１００ｍｇ／ｍｌのグルコース
を含むか又はそれらから成る、請求項８に記載の医薬用又は皮膚化粧用水溶液。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか一項に記載の医薬用又は皮膚化粧用水溶液を含む、没食子酸エピガロカテキンの単位用量。
【請求項１１】
５〜３０ｍｌの範囲、特には１０〜１５ｍｌの範囲、さらに特には１５ｍｌの容量を有する、請求項１０に記載の単位用量。
【請求項１２】
没食子酸エピガロカテキンが、２００〜１６００ｍｇの範囲、特には４００〜１２００ｍｇの範囲、さらに特には４００ｍｇの重量を有する、請求項１０又は１１に記載の単位用量。
【請求項１３】
請求項１〜９のいずれか一項に記載の医薬用又は皮膚化粧用水溶液の、又は請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の単位用量の、任意の水分除去プロセス、特には凍結乾燥から生じる固体組成物。
【請求項１４】
癌、心臓血管障害、糖尿病、神経変性疾患、又は皮膚科疾患の処置における医薬としての使用のための、請求項１〜９のいずれか１項に記載の医薬水溶液、又は請求項１０〜１２のいずれか１一項に記載の単位用量、又は請求項１３に記載の固体組成物。
【請求項１５】
没食子酸エピガロカテキンと二糖により形成された混合物であって、没食子酸エピガロカテキン／二糖のモル比が０．１〜０．８、特には０．２５である混合物。
【請求項１６】
請求項１〜９のいずれか一項に記載の医薬用水溶液、又は請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の単位用量、又は請求項１３に記載の固体組成物を含む皮膚科医薬品。
【請求項１７】
請求項１〜９のいずれか一項に記載の皮膚化粧組成物又は請求項１３に記載の固体組成物を含む皮膚化粧品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、没食子酸エピガロカテキンを含む安定した医薬用又は皮膚化粧用水溶液に関する。
【０００２】
緑茶（Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）は、数千年にわたって中国や他のアジア諸国で広く消費されてきた。緑茶は、多くの疾患の予防及び／又は処置のための最も有望な栄養物の１つと考えられている（Ｃａｂｒｅｒａ、Ａｒｔａｃｈｏら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ、第２５巻、第２号、７９−９９（２００６））。緑茶にはポリフェノールが多量に含まれている。ポリフェノールカテキンは、強力な抗酸化特性があることでよく知られており、大きな治療域を網羅する薬剤の開発のための候補となっている。緑茶に含まれるほとんどのポリフェノールは、一般にカテキンと呼ばれるフラバノールである（Ａｆｚａｌ、Ｓａｆｅｒら、Ｉｎｆｌａｍｍｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ２０１５年８月；２３（４）：１５１−６１）。
【０００３】
緑茶カテキンの抗酸化特性は、多くのインビトロ及びインビボモデルで調べられた。実験結果と臨床研究は、茶抽出物と茶ポリフェノールの有益な効果に関する説得力のあるデータを提供した（Ｙａｎｇ、Ｗａｎｇら、Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ  ２００９  Ｊｕｎ；９（６）：４２９−４３９）。カテキンは特に、抗癌作用並びにパーキンソン病及びアルツハイマー病などの神経変性疾患に対する防御特性を有すると記載されている。
【０００４】
没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）は、これまでのところ、最も豊富な緑茶カテキンポリフェノールであり、癌、糖尿病及び組織変性などの老化関連疾患の予防又は遅延に大きな可能性があることが認められている（Ｋｒｕｐｋｏｖａら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３７（２０１６）１−１２）。
【０００５】
ＥＧＣＧは、インビトロ及びインビボで、太陽紫外線への曝露によって引き起こされる酸化的損傷及び抗酸化酵素の枯渇を防止することが示されている（Ｖａｙａｌｉｌら、Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ  ２４（２００３）９２７−９３６）。ＥＧＣＧによる局所処置は、炎症性白血球の浸潤とプロスタグランジン代謝産物の産生を阻害することにより、日光への曝露による皮膚の炎症反応を減少させることが判明している（Ｎｉｃｈｏｌｓ及びＫａｔｉｙａｒ、Ｄｅｒｍａｔｏｌ  Ａｒｃ  Ｒｅｓ  ３０２（２０１０）７１−８３）。さらに、ＥＧＣＧは、太陽光による皮膚の免疫系の抑制を防ぎ、太陽紫外線によって引き起こされるマトリックスメタロプロテアーゼの発現を減らすことにより、皮膚の光老化を防ぐことが報告されている（Ｓｈｉｎら、Ｔｒｏｐｉｃａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２０１４）１３（７）：１０７９−１０８４）。
【０００６】
ＥＧＣＧは天然由来のもので、緑茶抽出物に含まれている。その内容は、季節、葉のタイプ及び使用する植物の部分によって異なる。緑茶の乾燥抽出物には約３５％のポリフェノールが含まれているが、その３０％はカテキンによるもので、それには５５〜８０％のＥＧＣＧが含まれている。
【０００７】
ＥＧＣＧは現在、単離されているか又は単離されていない状態で、植物薬又は緑茶抽出物として入手可能である（モノグラフ１４３３、現在のヨーロッパ薬局方；モノグラフ２６６８、２０１７年６月のＰｈａｒｍｅｕｒｏｐａ）。煎茶及びビタミンとともに製剤化されたカプセル又は錠剤は、ＥＧＣＧ摂取の主な経路を占めている。
【０００８】
ＥＧＣＧが顕著な抗酸化特性を示すという事実にもかかわらず、動物及びヒトの疫学研究において観察されるのは限られた効果に過ぎない。経口投与後、ＥＧＣＧのバイオアベイラビリティは、ヒトでは非常に低く、インビトロ系で生物学的活性を発揮することが示されている濃度の５０分の１〜５分の１の血中濃度になることが判明した（Ｃｈｏｗら、Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １１（２００５）４６２７−４６３３）。
【０００９】
他のカテキンと同様に、ＥＧＣＧは溶解性が低く、皮膚透過性が低いという問題がある。
【００１０】
ＥＧＣＧの生物医薬特性が劣っているのは、主に、水への溶解度が比較的低く、化学的安定性が低く、透過性が低く、血漿半減期が短いためである。
【００１１】
実際、通常の状態で、ＥＧＣＧの溶解し得る割合は４．６ｇ／Ｌ（１０ｍＭ）に過ぎない。可溶性ＥＧＣＧの量は、少量で高濃度の有効成分を必要とする医薬品を開発するには十分ではない。
【００１２】
ＥＧＣＧは自動酸化により迅速に反応するため、化学的安定性が非常に低くなる。ＥＧＣＧの自動酸化により、ＥＧＣＧの重合と分解を引き起こすことができる活性酸素種が生成される。生成するキノン誘導体、二量体又はオリゴマーは、腸管吸収率がはるかに低い。
【００１３】
一般に、水の存在、ｐＨ、温度、酸素含有量、抗酸化剤レベル及び微量でも金属イオン（鉄、亜鉛、銅、アルミニウム）などの直接的な環境は、その安定性に直接影響を及ぼす（Ｋｒｕｐｋｏｖａら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３７（２０１６）１−１２）。
【００１４】
ところで、バイオアベイラビリティが低いのは、一つには、共製剤化された賦形剤を含む、存在する栄養素との相互作用に因るものでもある。実際、研究では、カプセルの一般的に難溶性の成分とゼラチンシェル自体の成分が、崩壊後にＥＧＣＧと合わさって、吸収を妨げる溶解性の低い複合体を形成する可能性があることが示されている。
【００１５】
上記の欠点はまた、ＥＧＣＧがスキンケア製品に使用されるのを妨げるものである。その化学的不安定性に加えて、皮膚透過性が乏しく、水への溶解度が低いＥＧＣＧは、紫外線照射に非常に敏感に反応する。ＥＧＣＧは、１時間の紫外線照射後に７０％まで分解することが判明した。ＥＧＣＧは太陽光線の損傷作用から皮膚を保護するための非常に有用な成分であるため、紫外線への曝露下におけるその安定化は、ＥＧＣＧを含む有効な皮膚科製品の調製にとって最も重要である。
【００１６】
局所投与に関連してＥＧＣＧの溶解性及び安定性を改善するために、過去にいくつかの技術が提案されてきた。しかしながら、今日までに報告されたＥＧＣＧ製剤は、ＥＧＣＧの臨床開発の要件を完全に満たすことがまだできていない。
【００１７】
米国特許出願公開第２０１４００８８０３０号明細書は、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ（ロイコノストック）種からのスクロース及びグルカンスクラーゼをフェノール化合物とインキュベートすることにより、フェノール化合物（ＥＧＣＧなど）のＯ−α−グルコシド誘導体を製造する方法を報告した。しかしながら、この方法にはＥＧＣＧの構造変化が含まれる。これらの変化は、ＥＧＣＧの他の特性を損なう可能性がある。
【００１８】
ＥＧＣＧをカプセル化するナノ粒子は、消化管における緑茶ポリフェノール濃縮物の徐放を促進するためにも開発された（Ｋｒｕｐｋｏｖａら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３７（２０１６）１−１２）。しかしながら、放出率と反応速度の変化により、ＥＧＣＧバイオ医薬品フェーズがさらに複雑になり、予測がはるかに困難になる可能性がある。ところで、同等の投与量の場合、ＥＧＣＧを徐々に放出する形態を使用すると、胃腸管に少量で存在することになるため、即時放出形態よりも酵素分解や細菌代謝に多く曝露される可能性がある。
【００１９】
Ｋｒｕｐｋｏｖａら（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３７（２０１６）１−１２）は、１．０９ｍＭの緑茶カテキン（ＧＴＣ）混合物、０．１５ｇ／ｍＬのスクロース及び２ｍｇ／ｍＬのクエン酸を含む緑茶カテキン（ＧＴＣ）の溶液製剤を報告した。しかしながら、６か月の評価では、スクロースの添加はＧＴＣの安定性にほとんど影響を与えないのに対し、クエン酸の添加はＧＴＣを不安定にすることが示された。
【００２０】
溶解性及び安定性が改善され、製剤化が容易で、ＥＧＣＧと不溶性の複合体を形成する可能性のある賦形剤又は成分を除外したＥＧＣＧ含有の医薬又は皮膚化粧品を開発することへの切なる要望がある。
【００２１】
本発明の目的は、没食子酸エピガロカテキン（ＥＣＧＣ）がより優れた水溶性及び安定性を有する没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）の新しいガレヌス製剤を開発することであった。
【００２２】
本発明の第１の実施態様は、没食子酸エピガロカテキンの安定した医薬用又は皮膚化粧用水溶液であって、
−１３〜１０７ｍｇ／ｍｌの没食子酸エピガロカテキン、
−少なくとも１種の二糖
−０．１〜１．０ｍｍｏｌ／ｌの少なくとも１種のキレート剤、
−医薬的に許容され得る、又は皮膚化粧用に許容され得るｐＨ調整剤
を含み、
ｐＨが３．０〜４．０の範囲であり、没食子酸エピガロカテキン／二糖のモル比が０．１〜０．８、特には０．２５である溶液に関するものである。
【００２３】
一実施形態において、本発明は、没食子酸エピガロカテキンの安定した医薬水溶液であって、
−１３〜１０７ｍｇ／ｍｌの没食子酸エピガロカテキン、
−少なくとも１種の二糖
−０．１〜１．０ｍｍｏｌ／ｌの少なくとも１種のキレート剤、
−医薬的に許容され得るｐＨ調整剤
を含み、
ｐＨが３．０〜４．０の範囲であり、没食子酸エピガロカテキン／二糖のモル比が０．１〜０．８、特には０．２５である溶液に関するものである。
【００２４】
特定の実施形態において、前記の安定した溶液は、皮膚科医薬品の調製におけるその使用を目的とするものである。
【００２５】
本発明の別の実施形態は、没食子酸エピガロカテキンの皮膚化粧用水溶液であって、
−１３〜１０７ｍｇ／ｍｌの没食子酸エピガロカテキン、
−少なくとも１種の二糖
−０．１〜１．０ｍｍｏｌ／ｌの少なくとも１種のキレート剤、
−化粧用に許容され得るｐＨ調整剤
を含み、
ｐＨが３．０〜４．０の範囲であり、没食子酸エピガロカテキン／二糖のモル比が０．１〜０．８、特には０．２５である溶液に関するものである。
【００２６】
あらゆる困難にもかかわらず、温度及びＤＭＳＯなどの有機溶媒に頼ることなく、本発明の発明者らは、二糖の存在下で水溶液中のＥＧＣＧ濃度をほぼ２０倍に高めるのに成功した。
【００２７】
さらに、この水溶液は、１８〜２４か月間及び９〜１２か月間、それぞれ２〜８℃及び周囲温度で安定した状態であり得ることが観察されている。
【００２８】
ＥＧＣＧと二糖がある特定の範囲のモル比及び水溶液で存在するとき、ＥＧＣＧのヒドロキシル基とアクセプターとしての二糖のヒドロキシル基との間に水素結合が形成される複合体を形成できることが本発明者らによって初めて観察された。
【００２９】
いかなる理論に縛られるものではないが、ＥＧＣＧ／二糖複合体と水素結合の形成により、水溶液中のＥＧＣＧの溶解度を大幅に増加させることが可能になり、その結果、
−溶存酸素含有量を減らし、
−基質／試薬の比率を上げることにより反応を量的に低下させ、
−一重項酸素の自動クエンチングとクエンチングによるＥＧＣＧの自動保護が向上する
ことにより溶液安定性が増加すると考えられる。
【００３０】
ところで、ＥＧＣＧと二糖との間に形成された水素結合は、エステル官能基が加水分解試薬に曝露されるのを防ぐ。
【００３１】
高濃度の可溶性ＥＧＣＧと高い安定性のおかげで、高濃度のＥＧＣＧは、低い基質／試薬比につながるＥＧＣＧの進行性溶解を回避し、腸の障壁の通過に有利であり、重要であることが知られているＥＧＣＧの肝臓クリアランスを制限することができるため、前記医薬溶液は、これまでに知られているＥＧＣＧ製剤と比較して、ＥＧＣＧのバイオアベイラビリティの向上を示すことができる。
【００３２】
用語「没食子酸エピガロカテキンの安定した医薬用又は皮膚化粧用水溶液」とは、本明細書では、２０〜２５℃の室温で少なくとも９か月間貯蔵又は２〜８℃で少なくとも１８か月間貯蔵した後の前記溶液中の初期ＥＧＣＧ量と比較して、ＥＧＣＧ及びそのトランスエピマーである没食子酸ガロカテキン（ＧＣＧ）を少なくとも９５％（ｗ／ｗ）保つ医薬用又は皮膚化粧用溶液を意味する。
【００３３】
本発明の医薬溶液は、医薬的に許容され得るものであり、すなわち、患者に投与されたときに、有害な、アレルギー性又は他の薬害的反応を引き起こすことがない。
【００３４】
本明細書で使用する場合、本発明における「没食子酸エピガロカテキン」とは、季節を問わず摘み取られたチャノキ（Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）の葉の一部から精製された天然のＥＧＣＧを意味する。
【００３５】
好ましくは、ＥＧＣＧの少なくとも９０重量％、特には少なくとも９５重量％、より特定すれば少なくとも９７重量％の含有量を有するＥＧＣＧの抽出物であれば、本発明の溶液を調製するのに適している。
【００３６】
好ましくは、本発明の溶液を調製するために使用されるＥＧＣＧの抽出物は、関連する現在のヨーロッパ薬局方（モノグラフ１４３３及び２６６８、現在のヨーロッパ薬局方）で指定された要件を満たす。
【００３７】
「二糖」という用語は、グリコシド結合によって結合された２つの単糖の縮合から形成された糖を意味する。
【００３８】
好ましい実施形態において、前記二糖は、２５℃で１００ｍｇ／ｍｌより高い溶解度を有する水に容易に溶解する二糖である。
【００３９】
より好ましい実施形態において、前記二糖はスクロース又はトレハロースである。
【００４０】
本明細書で使用する場合、「キレート剤」という用語は、金属イオンと反応して、安定した水溶性金属錯体を形成する化合物を指す。本発明の医薬溶液において、キレート剤の存在は、溶液中に潜在的に存在するあらゆる微量金属イオンを捕捉し、微量濃度でも金属イオンの存在下で触媒され得るＥＧＣＧ脱プロトン化を防ぐことを目的とする。
【００４１】
本発明の溶液に適したキレート剤の例は、クエン酸、エデト酸二ナトリウムカルシウム、エデト酸二ナトリウム、フマル酸、リンゴ酸、マルトール及びペンテト酸である。
【００４２】
本発明の溶液のｐＨは、より高いｐＨ（＞５．０）でのプロトンの喪失につながるＥＧＣＧの分解のリスクを回避するために、ｐＨ３．０〜４．０の範囲に維持される。
【００４３】
本発明の好ましい実施形態では、本発明の医薬用又は皮膚化粧用溶液は、３．０〜３．５の範囲のｐＨを有する。
【００４４】
溶液のｐＨは、適切な医薬的に又は皮膚化粧用に許容され得るｐＨ調整剤を組み込むことによって調整することができる。
【００４５】
「医薬的に許容され得るｐＨ調整剤」という語は、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応などを伴うことなくヒト組織と接触した状態で使用するのに適した化学薬剤を指す。
【００４６】
用語「皮膚化粧用に許容され得るｐＨ調整剤」は、皮膚化粧品での使用に対して非毒性である任意の化学薬剤を指す。
【００４７】
「皮膚化粧品」という用語は、人体の様々な表面の部分、特に表皮、髪、爪、唇などと接触した状態に置くために使用される製品を意味し、前記製品は美容作用と皮膚科学的作用を併せもつ。
【００４８】
一般に、ｐＨ調整剤は酸性化剤、特に酸であり得る。本発明の医薬溶液では、あらゆる適切な医薬的に許容され得る酸が使用され得る。本発明の皮膚化粧用溶液では、あらゆる適切な皮膚化粧用に許容され得る酸が使用され得る。
【００４９】
場合によっては、溶液のｐＨを上げて所望のｐＨ範囲にするために緩衝剤を組み込むことが必要なこともあり得る。本発明の医薬用又は皮膚化粧用溶液には、任意の適切な医薬用又は皮膚化粧用に許容され得る緩衝剤をそれぞれ使用することができる。
【００５０】
本発明の一実施形態では、ｐＨ調整剤は、酢酸、アジピン酸、炭酸アンモニウム、水酸化アンモニウム、リン酸アンモニウム、クエン酸、ジエタノールアミン、フマル酸、塩酸、リンゴ酸、硝酸、プロピオン酸、酢酸カリウム、重炭酸カリウム、塩化カリウム、クエン酸カリウム、メタリン酸カリウム、リン酸カリウム、酢酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、グリコール酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、乳酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、コハク酸、硫酸、酒石酸、トリエタノールアミン、又はそれらの混合物から選択される。
【００５１】
必要とされるｐＨ調整剤の量は、溶液に所望のｐＨを与えることができる量である。
【００５２】
本発明の一実施形態によれば、キレート剤及びｐＨ調整剤は、同じ化合物であってもよい。例えば、クエン酸は同時にキレート剤でありｐＨ調整剤である。
【００５３】
本発明の一実施形態によれば、本発明の医薬用又は皮膚化粧用溶液は、水性系に適しており、酸性ｐＨと適合性がある少なくとも１種の抗酸化剤をさらに含む。
【００５４】
適切な抗酸化剤の例は、アスコルビン酸、エリソルビン酸、モノチオグリセロール、メタ重亜硫酸ナトリウム、重亜硫酸ナトリウム、又は還元糖である。
【００５５】
「還元糖」という用語は、本明細書では、アルデヒド官能基を含む、又は塩基性溶液中で異性化してアルデヒド官能基を形成することができるあらゆる糖類、例えばグルコース、フルクトース、マルトース、ガラクトース、ラクトース及びキシロースなどのペントース糖を含むと本明細書で定義される。
【００５６】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の医薬用又は皮膚化粧用溶液中の抗酸化剤は、グルコース又はフルクトースである。
【００５７】
好ましい実施形態において、本発明の医薬用又は皮膚化粧用溶液がアスコルビン酸、エリソルビン酸、モノチオグリセロール、メタ重亜硫酸ナトリウム、又は重亜硫酸ナトリウムから選択される抗酸化剤を含む場合、前記抗酸化剤の濃度は０．０１ｍｇ／ｍｌ〜０．５ｍｇ／ｍｌの範囲である。
【００５８】
別の好ましい実施形態において、本発明の医薬用又は皮膚化粧用溶液が還元糖を含む場合、前記還元糖の濃度は、少なくとも１０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは５００ｍｇ／ｍｌ以下、より好ましくは１００ｍｇ／ｍｌである。
【００５９】
本発明の医薬溶液において、有機溶媒の存在は必要ではない。
【００６０】
本発明の特定の実施形態において、前記医薬溶液では有機溶媒の使用が免除されている。
【００６１】
有機溶媒の例は、アセトン、アセトニトリル、クロロホルム、ジメチルスルホキシド、エタノール、プロピレン、グリコール、グリセロール、ＰＥＧ４００である。
【００６２】
本発明の別の特定の実施形態において、前記医薬溶液は、エタノール、プロピレングリコール、グリセロール、ＰＥＧ４００から選択される有機溶媒を含む。
【００６３】
特定の実施形態において、本発明は、
−１３〜１０７ｍｇ／ｍｌ、特には２７〜６７ｍｇ／ｍｌ、さらに特定には２７〜５３ｍｇ／ｍｌの没食子酸エピガロカテキン、
−０，０５〜３．０ｍｇ／ｍｌ、特には０．０８〜０．２５ｍｇ／ｍｌ、さらに特定には０．１０〜０．２０ｍｇ／ｍｌのクエン酸
−２５〜１４０ｍｇ／ｍｌ、特には５０〜１２５ｍｇ／ｍｌ、さらに特定には１００〜１２５ｍｇ／ｍｌのスクロース、
−必要に応じて、２５〜２５０ｍｇ／ｍｌ、特には１００ｍｇ／ｍｌのグルコース及び／又はフルクトース
を含むか又はそれらから成る医薬水溶液を提供する。
【００６４】
さらにより特定の実施形態において、本発明は、
−２７ｍｇ／ｍｌの没食子酸エピガロカテキン
−０．１ｍｇ／ｍｌのクエン酸
−１００ｍｇ／ｍｌのスクロース、
−１００ｍｇ／ｍｌのグルコース
を含むか又はそれらから成る医薬水溶液を提供する。
【００６５】
本発明の一実施形態において、医薬溶液は、経口医薬組成物として、特に飲用医薬組成物として製剤化される。
【００６６】
前記溶液は、１種以上の医薬的に許容され得る甘味料、及び／又は芳香剤を含むことができる。甘味料又は芳香剤は、前記医薬溶液が抗酸化剤としてグルコース又はフルクトースを含まない場合に特に有用である。
【００６７】
甘味料は、アスパルテーム、アセスルファム−Ｋ、マンニトール、ソルビトール、ラクチトール、キシリトール、エリスリトール又はそれらの混合物を含み得るが、これらに限定されない。芳香剤は、任意のフルーツアロマ、又はコーラフレーバーアロマなどの他のアロマ、又はそれらの混合物であり得る。
【００６８】
前記甘味料又は芳香剤の量は、製剤学分野の常識に従って決定され得る。
【００６９】
別の実施形態において、本発明の医薬溶液は、静脈内投与又は皮下投与などの非経口経路によって、又は局所経路によって投与することができる注射可能製剤である。
【００７０】
本発明の医薬溶液は、任意の慣用的溶液調製方法に従って調製され得る。以前に添加した各成分が完全に溶解した後、成分を相次いで添加するべきである。成分の溶解は、室温で攪拌しながら達成され得る。
【００７１】
すべての成分が完全に溶解した後、溶液を１回又は数回の滅菌ろ過にかけ、次いで適切な容量で複数回投与バイアルなどの薬品容器に充填することができる。
【００７２】
別の特定の実施形態において、本発明は、
−１３〜１０７ｍｇ／ｍｌ、特には２７〜６７ｍｇ／ｍｌ、さらに特定には２７〜５３ｍｇ／ｍｌの没食子酸エピガロカテキン、
−０．０５〜３．０ｍｇ／ｍｌ、特には０．０８〜０．２５ｍｇ／ｍｌ、さらに特定には０．１０〜０．２０ｍｇ／ｍｌのクエン酸
−２５〜１４０ｍｇ／ｍｌ、特には５０〜１２５ｍｇ／ｍｌ、さらに特定には１００〜１２５ｍｇ／ｍｌのスクロース、
−必要に応じて、２５〜２５０ｍｇ／ｍｌ、特には１００ｍｇ／ｍｌのグルコース及び／又はフルクトース
を含むか又はそれらから成る皮膚化粧用水溶液を提供する。
【００７３】
さらにより特定の実施形態において、本発明は、
−２７ｍｇ／ｍｌの没食子酸エピガロカテキン
−０．１ｍｇ／ｍｌのクエン酸
−１００ｍｇ／ｍｌのスクロース、
−１００ｍｇ／ｍｌのグルコース
を含むか又はそれらから成る皮膚化粧用水溶液を提供する。
【００７４】
本発明の別の実施態様は、前述の医薬用又は皮膚化粧用水溶液を含む没食子酸エピガロカテキンの単位用量を提供する。
【００７５】
複数回投与バイアルなどのより大きな容量で調整された本発明の溶液と比較して、単位用量での医薬用又は皮膚化粧用溶液は、特に溶液の化学的安定性の維持において、患者により多くの利点を提供する。
【００７６】
本発明の前記単位用量は、５〜３０ｍｌ、特には１０〜１５ｍｌの範囲、さらに特定には１５ｍｌの容積を有する。
【００７７】
本発明によれば、溶液の単位用量は、２００〜１６００ｍｇ、特には４００〜１２００ｍｇの範囲、さらに特定には４００ｍｇの重量の没食子酸エピガロカテキンを含む。
【００７８】
好ましい実施形態において、本発明の単位用量は、２００〜１６００ｍｇ、特には４００〜１２００ｍｇの範囲、さらに特定には４００ｍｇの重量のＥＧＣＧを含有する、５〜３０ｍｌ、特には１０〜１５ｍｌ、さらに特定には１５ｍｌの容量を呈する。
【００７９】
より好ましい実施形態において、本発明の単位用量は、１５ｍｌの容量であり、４００ｍｇのＥＧＣＧ及び１．５ｇのスクロースを含む。
【００８０】
本発明の別の態様は、前述の医薬水溶液の、又は前述の単位用量の、任意の水分除去プロセス、特に凍結乾燥又は噴霧乾燥から生じる固体組成物に関する。
【００８１】
前記固体組成物は、結晶性、水和物又は無水の多形形態であり得る。
【００８２】
前述の医薬溶液は、適切な量の水を加えることにより、前記固体組成物から再構築され得る。
【００８３】
本発明は、医薬水溶液、単位用量での医薬水溶液、又は前記医薬溶液又は前記単位用量の任意の水分除去プロセスから生じる固体組成物を含む医薬組成物を提供する。
【００８４】
特定の実施形態において、本発明の前記医薬組成物は、皮膚科医薬品として使用されるように製剤化される。
【００８５】
前記医薬品は、前記皮膚化粧用溶液を種々のペースト状若しくは半固体の基剤と混合することから生じる半固体若しくはペースト状の局所用組成物であり得る。
【００８６】
本発明は、癌、心血管障害、糖尿病、パーキンソン病やアルツハイマー病などの神経変性疾患、又は皮膚科疾患の処置における医薬としての使用のための、医薬水溶液、単位用量での医薬水溶液、又は前記医薬溶液又は前記単位用量の任意の水分除去プロセスから生じる固体組成物を提供する。
【００８７】
本発明はまた、皮膚化粧用水溶液、単位用量での皮膚化粧用水溶液、又は前記皮膚化粧用溶液又は前記単位用量の任意の水分除去プロセスから生じる固体組成物を含む皮膚化粧品を提供する。
【００８８】
前記皮膚化粧品は、前記皮膚化粧用溶液又は前記固体組成物を種々のペースト状若しくは半固体の基剤と混合することから生じる半固体若しくはペースト状の局所用組成物であり得る。
【００８９】
前記皮膚化粧品は、サンクリーム、昼用クリーム、夜用クリーム、アフターサン製品、メイクアップ用化粧品、口紅、アイ化粧品、シャンプー、シャワー用製品などのスキンケア製品であり得る。
【００９０】
本発明はまた、没食子酸エピガロカテキンと二糖、特にスクロースとによって形成される混合物を提供し、その場合没食子酸エピガロカテキン／二糖のモル比は０．１〜０．８、特には０．２５である。
【００９１】
前記混合物は、２０℃〜２５℃の周囲温度で最良のＥＧＣＧ水溶解率を確実にしている。
【００９２】
本発明はまた、ＥＧＣＧ及び二糖類によって形成される共晶複合体に関するもので、ＥＧＣＧ及び二糖類は、０．７〜０．８５のモル比である。
【００９３】
「共晶複合体」という用語は、特定範囲のモル比で２種以上の成分を特定の温度で溶融した後に得られる複合体を指す。共晶複合体では、成分は、各成分の溶融温度よりも低い同じ温度で溶融して固化する。
【００９４】
前記複合体では、ＥＧＣＧと二糖類は水素結合によって結合されている。
【００９５】
本発明の特定の実施形態によれば、共晶複合体は、ＥＧＣＧ及びスクロースによって形成される複合体であり、ＥＧＣＧ及びスクロースは、０．７〜０．８５のモル比である。
【００９６】
好ましい実施形態において、本発明の共晶複合体ＥＧＣＧ／スクロースは、８０〜９０℃の範囲の共晶温度を有する。
【００９７】
別の態様において、本発明は、ＥＧＣＧの水溶性を改善する方法に関する。
前記方法は、
（ｉ）以下のもの：
−没食子酸エピガロカテキン／二糖のモル比が０．１〜０．８、特には０．２５である、少なくとも１種の二糖、特にスクロース及びトレハロース、
−０．１〜１．０ｍｍｏｌ／ｌの少なくとも１種のキレート剤、
−溶液のｐＨを３．０〜４．０の範囲に調整するための医薬的に許容され得るｐＨ調整剤、
−所望により、水性系に適しており、酸性ｐＨに適合し得る少なくとも１種の抗酸化剤
を含む溶液を調製するステップ、
（ｉｉ）前のステップで調製した溶液に１３〜１０７ｍｇ／ｍｌ、特には２７〜６７ｍｇ／ｍｌ、さらに特定には２７〜５３ｍｇ／ｍｌのＥＧＣＧを溶解するステップ
を含む。
【００９８】
本発明はまた、ＥＧＣＧのバイオアベイラビリティを改善するための方法に関する。
前記方法は、
（ｉ）１３〜１０７ｍｇ／ｍｌ、特には２７〜６７ｍｇ／ｍｌ、さらに特定には２７〜５３ｍｇ／ｍｌのＥＧＣＧを、
−没食子酸エピガロカテキン／二糖のモル比が０．１〜０．８、特には０．２５である、少なくとも１種の二糖、特にはスクロース及びトレハロース、
−０．１〜１．０ｍｍｏｌ／ｌの少なくとも１種のキレート剤、
−溶液のｐＨを３．０〜４．０の範囲に調整するための医薬的に許容され得るｐＨ調整剤、
−所望により、水性系に適しており、酸性ｐＨに適合し得る少なくとも１種の抗酸化剤
を含む溶液に溶解するステップ、
（ｉｉ）ＥＧＣＧによる処置を必要とする患者に前記溶液を投与するステップ
を含む。
【００９９】
好ましい実施形態において、抗酸化剤がアスコルビン酸、エリソルビン酸、モノチオグリセロール、メタ重亜硫酸ナトリウム、又は亜硫酸水素ナトリウムから選択される場合、前述の溶液中の前記抗酸化剤の濃度は、０．０１ｍｇ／ｍｌ〜０．５ｍｇ／ｍｌの範囲である。
【０１００】
別の好ましい実施形態において、本発明の医薬溶液が還元糖を含む場合、前記還元糖の濃度は、少なくとも１０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは５００ｍｇ／ｍｌ以下、さらに好ましくは１００ｍｇ／ｍｌである。
【０１０１】
投与は経口投与又は非経口経路により行うことができる。
【０１０２】
本発明を、以下の図及び実施例によってさらに詳細に説明する。
【図面の簡単な説明】
【０１０３】
【図１】図１は、本発明による１００ｍｇ／ｍＬのスクロースを含む溶液中でのＥＧＣＧの溶解度（ダイヤモンド記号で表される）を、水中でのＥＧＣＧ単独の溶解度（四角記号で表される）と比較して示す。Ｘ軸は溶解時間（時間）を表す。Ｙ軸は、溶液中のＥＧＣＧ含有量（ｇ／Ｌ）を表す。
【図２】図２Ａ、図２Ｂ及び図２Ｃは、下の表１に示されているＥＧＣＧ製剤の安定性（図２Ａ）と、対するＥＧＣＧベースの溶液単独の安定性（図２Ｂ）を示す。どちらの溶液についても、２５〜１３５℃の範囲で、毎分５℃の割合で徐々に加熱した。加熱の最後に、各溶液から形成された残留物を図２Ａに示し、高速液体クロマトグラフィーにより分析する。図２Ｂは、表１に示したＥＧＣＧ製剤のクロマトグラムである。図２Ｃは、他の賦形剤を含まないＥＧＣＧベースの水性懸濁液のクロマトグラムである。
【図３】図３は、ＥＧＣＧとスクロースによって形成された複合体のＡＴＲ−ＩＲスペクトルを示している。
【図４】図４は、６時間までの模擬上部腸液における合成透析膜を通過する本発明の溶液（特許請求の範囲の製剤）の経時的な累積ＥＧＣＧ透過パーセンテージ（ＣＥＰ％）と、対照製剤（カプセル）のそれとを比較している。
【図５】図５は、対照製剤（カプスゲル（Ｃａｐｓｕｇｅｌ）用量２７ｍｇ／ｋｇ）及び本発明の溶液（２７ｍｇ／ｋｇでの製剤）の経口投与後のラットにおける血漿中ＥＧＣＧ濃度の経時的変遷を示す。
【実施例】
【０１０４】
実施例１
１．材料及び方法
１．１  製剤化
ＥＧＣＧ経口液剤は、以下の表１に示す配合に従って調製される。
【表１】
2021504460.tif 000002
【０１０５】
前記溶液を調製するために使用されるＥＧＣＧは、単離されたＥＧＣＧ抽出物である（＞９７％ｗ／ｗの乾燥抽出物）。使用前に、活性物質は徹底的に管理され、その品質がモノグラフ２６６８（Ｐｈａｒｍｅｕｒｏｐａ、２０１７年６月）に確実に準拠するようにした。
【０１０６】
ストレス安定性試験に使用されるＥＧＣＧの参照標準懸濁液は、２６．６ｍｇ／ｍＬの濃度で独自にＥＧＣＧを含む水懸濁液である。標準懸濁液については、適切な量の単離されたＥＧＣＧ抽出物（＞９７％ｗ／ｗの乾燥抽出物）を蒸留水に分散させて、上記の濃度になるように即座に調製する。
【０１０７】
長期及び加速安定性研究に使用されるＥＧＣＧの参照標準溶液は、０．２６ｍｇ／ｍＬの濃度で独自にＥＧＣＧを含む水溶液である。標準溶液については、適切な量の単離されたＥＧＣＧ抽出物（＞９７％ｗ／ｗの乾燥抽出物）を蒸留水に溶解して、上記の濃度になるように即座に調製する。
【０１０８】
１．２  製造工程
製造工程の一例を以下に示す。
【０１０９】
段階１：溶液の調製
工程１：２０リットルのパイレックス（登録商標）ガラス容器に、注射用水により溶液の最終容量の１／３に相当する容量まで満たす。
工程２：表１に記載の適切な分量のＥＧＣＧ、クエン酸、グルコース、スクロース、コーラフレーバーを水に加え、混合して完全に溶解させる。
工程３：注射用水を加えて最終容量にする。
【０１１０】
段階２：ろ過
ろ過は、１μのＭｉｌｌｉｐｏｒｅ（登録商標）ろ過カートリッジによって行われる。ろ過された溶液を、溶液と容器のヘッドスペースを不活性化するための窒素注入口付きの２０リットルのステンレス鋼タンクに貯蔵する。
【０１１１】
段階３：複数回投与ボトルへの充填
溶液を、２５０ｍＬの複数回投与の褐色ガラスボトルに満たす。満たされたボトルを、ポリエチレンシール付きのキャップで閉じる。
【０１１２】
１．３  ストレス安定性試験：
１ｍＬの参照標準懸濁液及び前に表１に開示した本発明の製剤を、５℃／分の割合で２５〜１３５℃の範囲の熱勾配プログラムにかけた。この曝露の最後に、形成された各残留物の一部がスライドガラスに堆積され、残りの部分が高速液体クロマトグラフィーで分析された。結果を図２に示す。
【０１１３】
１．４  長期及び加速安定性試験
貯蔵条件とサンプリングプロトコル
試験バッチを、表１で前述した２５０ｍｌの単位用量の配合に従って調製する。
【０１１４】
ＥＧＣＧの参照標準溶液は、０．２６ｍｇ／ｍＬの濃度で独自にＥＧＣＧを含む水溶液である。
【０１１５】
試験バッチは、ＩＣＨガイドラインＱ１Ａに従って貯蔵されている。各条件のサンプリング時点の詳細を表２に示す。ＨＰＬＣ分析の前に、蒸留水で１／１００に希釈する。
【表２】
2021504460.tif 000003
【０１１６】
安定性試験と許容限界
安定性試験中及び各時点での適切な化学的、物理的及び微生物の特性を監視することで、ＥＧＣＧ経口液剤の安定性を評価することができた。
【０１１７】
ＥＧＣＧの化学的安定性を、ＨＰＬＣによって評価したが、これは安定性を示す方法として検証されたアッセイ法であった。前記手順は、外部標準を使用したＥＧＣＧ治験薬アッセイに適している。ＥＧＣＧのアッセイは、サンプル溶液の応答を、同様の公称濃度で調製され、同じ方法で分析されたＥＧＣＧ参照標準溶液の応答と比較することによって達成される。サンプル及び参照標準溶液は、適切なカラム及びクロマトグラフィー条件を使用して、勾配逆相ＨＰＬＣ及びＵＶ検出によって分析される。
【０１１８】
ＨＰＬＣアッセイは、ＵＶ検出器（可変波長又はダイオードアレイ検出器）を備え、Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ（登録商標）ＶＫＲ５  Ｃ１８（２５０  ｘ  ４．６．０  ｍｍ、５μｍ粒子サイズ）又は同等のカラムを備えた液体クロマトグラフを使用する。
【０１１９】
アセトニトリル、酢酸及び純水を使用して、移動相Ａ（５／９５／０．０７  ｖ／ｖ／ｖアセトニトリル／水／酢酸）及び移動相Ｂ（５０／５０／０．０５  ｖ／ｖ／ｖアセトニトリル／水／酢酸）を調製する。
【０１２０】
クロマトグラフィーの手順
例えば表３に示すような、適切なクロマトグラフィー条件を使用して分析する。
【表３】
2021504460.tif 000004
【０１２１】
システム適合性基準
すべてのシステム適合性基準は、欧州薬局方「第２．２．４６章」に従って計算されている。本手順の特定のパラメータは、必要に応じて、薬局方及び検証済みの制限内で変更して、システムの適合性を達成し得る。
【０１２２】
満たすべきシステム適合性基準を表４に示す。
【表４】
2021504460.tif 000005
【０１２３】
計算
そのサンプルの元の量と比較した、希釈されたサンプル溶液に残っているＥＧＣＧの分量のパーセンテージは、次の式に従って計算される
【数１】
2021504460.tif 000006
式中：
Ａｓｔｄ＝参照標準溶液におけるＥＧＣＧによるピーク面積
Ａｓａｍ＝希釈サンプル溶液におけるＥＧＣＧによるピーク面積
Ｄ＝希釈係数
Ｗｓｔｄ＝参照標準溶液（ｍｇ）に対して取得されたＥＧＣＧの重量
Ｐｓｔｄ＝参照標準溶液の純度（％ｗ／ｗ）
Ｖｓｔｄ＝参照標準溶液の容量（ｍＬ）
【０１２４】
１．５．ＡＴＲ−ＩＲスペクトル画像
スクロース／ＥＧＣＧ複合体のＡＴＲ−ＩＲスペクトル画像は、ＦＴＩＲ分光法によって取得される。実験は、ＦＴ−ＩＲ  Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  ｖ２．００ソフトウェアを備えた拡散反射サンプリングアクセサリに基づくＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  ＢＸ  ＦＴ−ＩＲシステムで行われた。ストレスを受けたサンプルのスペクトルを、ＡＴＲセルを使用し、波数範囲４００〜４０００  ｃｍ−１で室温にて記録した。
【０１２５】
２．結果
２．１．本発明によるＥＧＣＧ溶液の溶解度
１０重量％のスクロースを含む溶液中でのＥＧＣＧの溶解度を、水中でのＥＧＣＧ単独の溶解度と比較する。試験溶液中のＥＧＣＧの濃度は、わずか１時間の溶解後、ほぼ８０ｇ／Ｌに達するが、対照溶液中のＥＧＣＧの溶解度は、４時間の溶解後でも５ｇ／Ｌを超えることはできない（図１）。
【０１２６】
２．２  本発明によるＥＧＣＧ溶液の安定性
１．３節で説明した安定性試験を、表１に示す配合のＥＧＣＧ溶液とＥＧＣＧベースの溶液単独について実行する。２つの溶液は、最初は澄明かつ透明であった。適用された加熱の終了時に、ＥＧＣＧベースの溶液のみの残留物は黒色であるが、本発明における特許請求の範囲のＥＧＣＧ製剤では代わりに透明なガラス状の薄膜が観察された（図２Ａ）。クロマトグラフィーによる分析を行うと、黒い残留物には事実上ＥＧＣＧが含まれていないが、試験された製剤の熱処理で得られた生成物のクロマトグラフィープロファイルは、出発溶液のそれと同じである、すなわち、ＥＧＣＧによるピークと最初に存在する緑茶の別のポリフェノールによるピークと同じピークを示す。（図２Ｂ及び図２Ｃ）。
【０１２７】
長期安定性試験の結果を下の表５に示す。
【表５】
2021504460.tif 000007
【０１２８】
２〜８℃を超えて２５℃／６０％ＲＨで観察される貯蔵損失は、主に没食子酸ガロカテキン（ＧＣＧ）の出現を伴うＥＧＣＧのエピマー化によるものであるが、２５℃／６０％ＲＨと４０℃／７５％ＲＨの間における差異は、主にエピカテキンと没食子酸の出現をもたらすエステル官能基の加水分解に起因する。
【０１２９】
長期安定性試験は、４００ｍｇ／１５ｍＬ溶液に存在するＥＧＣＧレベルが、２〜８℃では変化せず、２５℃での貯蔵については５％の損失のみが記録されたことを示している。ところで、この損失は主にＥＧＣＧのエピマー化によるものであったことが示されている。カテキンのエピマー化は可逆的であり得る。ところで、カテキンのトランスエピマーには毒性作用は無いが、そのシス対応物質と同様の生物活性がある。
【０１３０】
これらの結果は、開発された製剤がＥＧＣＧを自動酸化及び加水分解から保護できたことを示唆している。
【０１３１】
２．３共晶複合体の構造
ＡＴＲ−ＩＲスペクトル画像は、Ｏ−Ｈ伸縮ＩＲ領域に幅広い吸収が存在し、Ｏ−Ｈフリー伸縮ピークが存在しないことを示している（図３）。これは、アクセプターとしてのスクロースのＯＨ官能基により、ＥＧＣＧが強い水素結合ＯＨ−Ｏによってスクロースと複合体を形成することを示唆している。
【０１３２】
振動モードに関与する原子がＨ結合に積極的に関与している限り、Ｈ結合により、振動モードについて以前よりも低い周波数及び／又は相対強度で振動した可能性がある。
【０１３３】
実施例２：インビトロ透過性試験
この試験では、Ｃａｃｏ−２細胞のバリア代替物としての人工再生セルロース膜を使用して、対照製剤及び本発明の溶液からのＥＧＣＧの膜通過を比較した。この人工膜には、比較試験を実施するために培養、洗浄、又はプレインキュベーションのステップを実行する必要がないという利点がある。
【０１３４】
１  材料及び方法
表１に示す配合のＥＧＣＧ溶液を使用した。対照製剤は、ＥＧＣＧの単位用量あたり相当量を含むカプセルであった。
【０１３５】
人工膜挿入システムを使用した透過性評価
両方のＥＧＣＧ製剤の透過性試験は、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｌａｂｓ（ｈｔｔｐ：／／ｆｒ．ｓｐｅｃｔｒｕｍｌａｂｓ．ｃｏｍ／ｄｉａｌｙｓｉｓ／ＦｌｏａｔＡＬｙｚｅｒ．ｈｔｍｌ？Ｌａｎｇ＝Ｅｎｇｌｉｓｈ＆）によって開発された即使用可能な透析装置Ｆｌｏａｔ−Ａ−Ｌｙｚｅｒ（登録商標）Ｇ２を使用して行われた。いわゆる装置は、再生セルロース系生物工学的エステル膜（分子量カットオフ、３．５〜５ｋＤａ、膜の直径、１０ｍｍ及び全長、１００ｍｍ）を特徴としている。この装置は、セルロース系生物工学的エステル膜によって受容体（アクセプター）区画から分離されたドナー区画を備えている。受容体区画の容量は６００ｍＬであった。拡散に利用できる面積は約７．８５  ｃｍ２であった（表６）。
【表６】
2021504460.tif 000008
【０１３６】
ドナー区画及びアクセプター区画の充填液
ドナー区画を満たすために使用される溶液の組成は、十二指腸液を構成するものを模倣しているが、拡散液は、ｐＨ５．５に調整された１０−４ｍｏｌ  Ｌ−１リン酸緩衝液である。
【０１３７】
Ｔｅｎｏｒｅら（Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １６９（２０１５）３２０−３２６）によって提案された模擬十二指腸液は、１０−３ｍｏｌ  Ｌ−１リン酸緩衝液、パンクレアチン（０．４ｍｇ  ｍＬ−１）及び胆汁酸塩（２．５ｍｇ  ｍＬ−１）で構成されている。塩酸を使用して最終混合物をｐＨ６．８に調整する。
【０１３８】
インビトロ比較浸透試験
ドナー区画は、７５０μＬの特許請求の範囲の製剤、又は２０ｍｇのＥＧＣＧとラクトースを含む１つのカプセルのいずれかである各製剤で別々に充填された。ドナーセルをアルミホイルで覆って、基剤の蒸発を防いだ。受容体チャンバー内の流体は、３７±０．５℃に維持され、テフロン（登録商標）コーティングされたビーズを備えたサーモスタット制御式磁気スターラを使用して、非常に低速（３０ｒｐｍ）で連続的に攪拌された。受容体区画内に気泡が存在しないように注意が払われた。
【０１３９】
アリコート（各回１ｍＬ）を上記の受容体セルから事前設定された時間に定期的に抜き取り、１０−４ｍｏｌ  Ｌ−１リン酸緩衝液（ｐＨ５．５）で１０倍に希釈し、０．４５μｍフィルターでろ過した。ＥＧＣＧ含有量をＨＰＬＣにより決定した。同量の拡散液を３７℃に予熱した。抜き取られたサンプルの体積を、予熱した拡散セルへの拡散液に置き換え、シンクの状態を維持できるように体積を一定に保った。実験は６時間まで行われた。異なる時点での薬物透過率を、それぞれの場合で計算した。
【０１４０】
データ分析
各製剤についての透過性試験から得られたデータを使用して、ＣＥＰ％、Ｐａｐｐ（見かけの透過係数）及びＥＲを計算した。
【０１４１】
ＰａｐｐとＥＲは、標準の数式に従って計算された（Ａｒｃｈ  Ａｐｐｌ  Ｓｃｉ  Ｒｅｓ  ２０１０；２：３１−４２；Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  １９９４；２：３１１−３０；Ａｓｉａｎ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｃｌｉｎ  Ｒｅｓ  ２０１０；３：３１−４）：
・透過係数（Ｐａｐｐ）：
Ｐａｐｐ＝（ＶＡ／面積×時間）×（［ＥＧＣＧ］アクセプター／［ＥＧＣＧ］ドナー）
式中、ＶＡ＝アクセプター区画における体積、面積＝膜の表面積、時間＝総輸送時間
・ＥＲ：
ＥＲ＝本出願の製剤のＰａｐｐ／対照（カプセル）のＰａｐｐ。
【０１４２】
ＨＰＬＣ分析
希釈したサンプルを、実施例１に記載の安定性を示す方法として検証されたアッセイ法であるＨＰＬＣにより分析した。この手順は、外部標準を使用するＥＧＣＧアッセイに適している。ＥＧＣＧのアッセイは、サンプル溶液の応答を、同様の公称濃度で調製され、同じ方法で分析されたＥＧＣＧ参照標準溶液の応答と比較することによって達成される。サンプル及び参照標準溶液は、適切なカラム及びクロマトグラフィー条件を使用して、勾配逆相ＨＰＬＣ及びＵＶ検出によって分析される。
【０１４３】
２．結果
ＥＧＣＧの２種の製剤の透過性試験（本発明の溶液対対照、すなわちカプセル中のＥＧＣＧ）を、６時間までの異なる時点で、セルロース系生物工学的エステル膜を拡散膜として使用し、模擬腸液を拡散液として使用して実施した。
【０１４４】
この調査の結果は、表７及び表８に記載されている。ＣＥＰ％とＰａｐｐの値は、すべてのサンプルの場合において、６時間後に決定された。これらの値は、対照製剤（カプセル）の場合には最小／最低であったが、本発明の溶液は最大値を示した。興味深いことに、この試験で見出された対照製剤のＰａｐｐ値は、Ｃａｃｏ−２単層モデルによりＧＴＣ腸管吸収と体内動態を調査しているＺｈａｎｇら（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  ２８７（２００４）１−１２）が見出したものと同等であることが判明しており、したがって、人工膜モデルとｃａｃｏ−２細胞モデルとの間の転移性が立証されることになる。
【０１４５】
上記の結果は、時間に対する様々な時点でのＣＥＰの割合（％）を採ることにより、様々なグラフにも示されている（図４）。
【０１４６】
【表７】
2021504460.tif 000009
【０１４７】
【表８】
2021504460.tif 000010
【０１４８】
この試験の全体的な結果は、本発明の溶液が、約４のＥＲで制御するのに最良の透過結果を与えたことを示している。
【０１４９】
これらの結果は、本発明の溶液がＥＧＣＧのバイオアベイラビリティを改善し、臨床効果を改善する道を開くことができるという概念の証明を提供することに明らかに貢献している。
【０１５０】
実施例３：光照射に対する水溶液の安定性
表１に示す配合のＥＧＣＧ溶液を、１５ｍＬのパイレックス（登録商標）ガラスバイアルに入れ、密閉して、ウィンドウモードで起動するキセノン試験チャンバーＱ−ＳＵＮ  Ｘｅ−１を使用して露光した。３００〜８００ｎｍの範囲の特性スペクトルを示す光線は、１．５０Ｗ  ｍ−２の強度で送達された。サンプルのアリコートを、１時間の曝露後に抜き取った。溶液の色の変化は認められなかった。さらに、試験した溶液のクロマトグラフィープロファイルは、開始溶液のプロファイルと同じであり、すなわち、ＥＧＣＧによるピークと、最初に存在する緑茶の別のポリフェノール（ＥＣＧ）のピークと同じピークを示すということである。
【０１５１】
実施例４：ラットにおけるＥＧＣＧの血漿中濃度
この試験は、本発明のＥＧＣＧの製剤をラットに経口投与した後に得られた血漿中濃度及び曲線下全面積（ＡＵＣｔｏｔａｌ）を、ＥＧＣＧを含有するカプセルの場合と比較するために行われた。
【０１５２】
１  材料及び方法
動物
体重３００ｇ以上の９匹の雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを使用した。Ｊａｎｖｉｅｒ  Ｌａｂｓがそれらを提供した。
【０１５３】
インビボ試験は、Ｅｕｒｏｆｉｎｓ  ＡＤＭＥ  ＢＩＯＡＮＡＬＹＳＥＳのげっ歯類領域で行われた。部屋には完全に人工的な照明があり、１２時間点灯、１２時間消灯という制御されたサイクルである。通常の状態を維持するように設計されたシステムによって空調されている。耳札により各動物を識別した。動物は全般的な健康と福祉について検査された。実験の間、動物は食物と水に自由に接近できた。
【０１５４】
プロセス、処置及び安楽死は、Ｅｕｒｏｆｉｎｓ  ＡＤＭＥ  ＢＩＯＡＮＡＬＹＳＥＳで使用されている現行手順に従って実施された。
【０１５５】
分析試験
分析試験は、ｄｅ  Ｌｏｕｒｄｅｓら（Ｊ  Ａｇｒｉｃ  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ  ２００７、５５、８８５７−８８６３）によって報告された方法に基づいていた。
【０１５６】
ＭＳ−ＭＳシステムに直接注入した後、分子イオンと娘イオンを各分子に対して選択した。分析方法は、適切な溶媒の添加によるタンパク質の沈殿と、それに続くＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析で構成されていた。予想される感度に応じて、血漿中の検量線の作成には少なくとも８つの較正標準を使用した。対応する相関係数を算出したところ、インビボ試験を続行するには０．７５よりも高くなければならなかった。
【０１５７】
試験される較正範囲は、血漿中のＥＧＣＧが４〜５０００ｎｇ／ｍＬとなる。観測された平均濃度と公称濃度の差を使用して、本方法の偏差を推定した。
【０１５８】
インビボ試験用に投与された製剤
実験で投与された２種のＥＧＣＧ製剤（Ｈｅｎｒｉ  Ｍｏｎｄｏｒ  Ｈｏｓｐｉｔａｌの薬局によって調製された本発明の対照製剤及び溶液）を以下の表９に示す。
【０１５９】
【表９】
2021504460.tif 000011
【０１６０】
製剤を室温で貯蔵した。製剤を、投与中、磁気スターラ下に保った。
【０１６１】
採血とサンプリング時間
所定の時間に、血液を採取し、以下に示すように処理した：
採取部位：毛細管の使用で後眼窩
採取した血液の量：１時点につき最小０．３００ｍＬ
抗凝固剤：ヘパリンリチウム
【０１６２】
正確なサンプリング時間を、各血液サンプルで記録した。
【０１６３】
血液サンプルを１０℃で２５００ｒｐｍにて遠心分離し、血漿を除去してラベル付きポリプロピレンチューブに入れた。
【０１６４】
これらの個々の血漿サンプルを、分析するまで冷凍（−２０℃±５℃）で貯蔵した。
【０１６５】
上記の２種の製剤についてのサンプリング時間を表１０に示す。
【表１０】
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【０１６６】
２．結果
濃度とＡＵＣｔｏｔａｌの結果を下の表１１に要約する。
【０１６７】
図５は、血漿中ＥＧＣＧ濃度の経時的変遷を示す。
【０１６８】
これらの結果が示すように、本発明から得られる製剤から生じる全身曝露は、等しい用量で投与すると、１００％のＥＧＣＧ粉末を含む従来のカプセル形態のそれよりもはるかに高い。実際、１用量あたりの総ＡＵＣ比は１８であり、本発明から得られる製剤に有利な結果である。
【０１６９】
【表１１】
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【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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