(57)【要約】  本発明は、神経変性疾患を治療するための新規な医薬およびその使用に関する。本発明は、新規な式（Ｉ）の化合物を提供する。インビトロとインビボでの実験において、神経幹細胞の増殖を効果的に促進することができ、且つ神経再生促進の治療手段として、老化や神経変性疾患に関連する認知機能の低下を防止することができる。【化１】2021512958.tif 000047
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物又は前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩。
【化１】
2021512958.tif 000035
［ただし、
【化２】
2021512958.tif 000036
は、６員の複素環であり、ＸはＯであり；
ＹはＯ又はＮから選ばれ；  Ｒ１〜Ｒ４は、独立して水素、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ２〜Ｃ４アルケニル、Ｃ２〜Ｃ４アルキニル、ハロゲンからなる群から選ばれ；又は、Ｒ１〜Ｒ４における２つの隣接する基が互いに連結され、親環と一緒に環構造を形成する。］
【請求項２】
Ｒ１〜Ｒ４は、独立して水素、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ２アルキルからなる群から選ばれることを特徴とする、請求項１に記載の式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物又は前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項３】
前記化合物は、下記の式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）で表される化合物であることを特徴とする、請求項１に記載の式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物又は前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩。
【化３】
2021512958.tif 000037
【化４】
2021512958.tif 000038
【化５】
2021512958.tif 000039
【請求項４】
神経変性疾患、うつ病又は脳卒中の予防、緩和又は治療のための医薬又は医薬キットの調製における、請求項１〜３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物又は前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩の使用。
【請求項５】
神経変性疾患は：
脳の神経炎症の発生を特徴とする神経変性疾患；又は
Ａβ生成の著しい増加を特徴とする神経変性疾患；又は
学習および記憶能力の著しい低下を特徴とする神経変性疾患；又は
神経幹細胞機能の低下を特徴とする神経変性疾患；又は
運動協調能の低下を特徴とする神経変性疾患；又は
黒質ドーパミン作動性ニューロンの数の減少を特徴とする神経変性疾患；又は
線条体ドーパミン作動性神経線維の含有量の減少を特徴とする神経変性疾患であることを特徴とする、請求項４に記載の使用。
【請求項６】
前記神経変性疾患には、アルツハイマー病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症が含まれることを特徴とする、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
神経炎症を阻害するための組成物、試薬キット又は医薬キットの調製における、請求項１〜３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物又は前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩の使用。
【請求項８】
神経幹細胞機能を促進するための組成物、試薬キット又は医薬キットの調製における、請求項１〜３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物又は前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩の使用。
【請求項９】
Ａβ生成を減少させるための組成物、試薬キット又は医薬キットの調製における、請求項１〜３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物又は前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩の使用。
【請求項１０】
黒質ドーパミン作動性ニューロンの数を増加させるための組成物、試薬キット又は医薬キットの調製における、請求項１〜３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物又は前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩の使用。
【請求項１１】
線条体ドーパミン作動性神経線維の含有量を増加させるための組成物、試薬キット又は医薬キットの調製における、請求項１〜３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物又は前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩の使用。
【請求項１２】
前記化合物は、下記の式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）または（Ｖ）で表される化合物を含むことを特徴とする、請求項４〜１１のいずれか１項に記載の使用。
【化６】
2021512958.tif 000040
【化７】
2021512958.tif 000041
【化８】
2021512958.tif 000042
【化９】
2021512958.tif 000043
【請求項１３】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物又は前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体を含むことを特徴とする、医薬組成物。
【請求項１４】
前記医薬組成物の剤形は、粉末、散剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、徐放剤、制御放出剤、注射剤、点滴剤、懸濁剤を含むことを特徴とする、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物又は前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩、又は
請求項１３又は１４に記載の医薬組成物を含むことを特徴とする、医薬キット。
【請求項１６】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物又は前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩を、治療を必要とする対象に有効量で投与する工程を含むことを特徴とする神経変性疾患、うつ病又は脳卒中を予防、緩和又は治療する方法。
【請求項１７】
β−ラムノピラノシドを、フッ化テトラブチルアンモニウムと反応させて、式ＩＩＩで表される化合物を得る工程を含むことを特徴とする式ＩＩＩで表される化合物の調製方法。
【化１０】
2021512958.tif 000044
【請求項１８】
前記β−ラムノピラノシドは、２，３，４−Ｏ−トリアセチルラムノースと（４−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−フェルラ酸クロリドとを反応させることにより得られることを特徴とする、請求項１７に記載の調製方法。
【請求項１９】
α−１−アミノラムノシドと、フッ化テトラブチルアンモニウムとを反応させて、式ＩＶで表される化合物を得る工程を含むことを特徴とする式ＩＶで表される化合物の調製方法。
【化１１】
2021512958.tif 000045
【請求項２０】
下記の工程：β  −１−アミノラムノシドと、フッ化テトラブチルアンモニウムとを反応させて、式Ｖで表される化合物を得る工程を含むことを特徴とする式Ｖで表される化合物の調製方法。
【化１２】
2021512958.tif 000046
【請求項２１】
前記α−１−アミノラムノシドおよび／又はβ−１−アミノラムノシドは、２，３，４−Ｏ−トリアセチル−１−アミノラムノースと、（４−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−フェルラ酸クロリドとを反応させることにより得られることを特徴とする、請求項１９又は２０に記載の調製方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【技術分野】
【０００２】
本発明は、薬学の分野に関し、より具体的には、神経変性疾患を治療するための新規な医薬およびその使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
神経変性疾患は、中枢神経組織の慢性進行性変性によって引き起こされる疾患を指す。主な疾患としては、パーキンソン病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ，ＰＤ）、アルツハイマー病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ，ＡＤ）、ハンチントン病（Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ  Ｄｉｓｅａｓｅ，ＨＤ）、筋萎縮性側索硬化症（Ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ  Ｌａｔｅｒａｌ  Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，ＡＬＳ）などが含まれる。
【０００４】
アルツハイマー病は、アルツハイマー病とも呼ばれ、慢性進行性の神経変性疾患で、主に進行性の記憶喪失、認知機能障害、およびセルフケア能力の喪失などの形で表現される。人口の高齢化に伴い、ＡＤの発生率も年々増加になり、公衆に最も注目されている健康問題になっている。アルツハイマー病の主な病理学的特徴は、患者の脳におけるアミロイド斑の形成および神経線維のもつれである。アミロイド斑は、アルツハイマー病の特徴的な病理学的変化であり、主に細胞内で異常に大量に産生されるアミロイドβ（Ａβ）タンパク質の蓄積により形成される。現在、その病原性メカニズムを説明しようとする複数の理論がある。ＨａｒｄｙとＳｅｌｋｏｅによって提案された「Ａβ仮説」は、広く受け入れられている理論である。この理論により、複雑な遺伝的および環境的要因の長期的な影響下で、神経細胞が異常に大量のＡβを生成し、蓄積してオリゴマーおよびアミロイドプラークを形成すると考えられている。Ａβ（特にオリゴマー化Ａβ）は一連のカスケード反応を起こす  （フリーラジカル反応、ミトコンドリアの酸化的損傷、炎症反応がニューロン又はグリア細胞に直接又は間接的に作用することを含む）、異常なシナプス機能およびニューロンの損傷を引き起こし、ミクログリアおよび星状細胞の活性化を引き起こす、神経線維フィラメントのもつれの形成を加速し、長期的な影響の後に認知機能障害を引き起こす。最近の多くの研究により、「Ａβ仮説」を裏付けるさまざまな証拠が提供されており、アルツハイマー病の病因におけるＡβの中心的な役割が示されている。
【０００５】
パーキンソン病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）は一般的な神経変性疾患である。臨床的には主に、反応が遅い、振戦、体のこわばり、さらにバランスが崩れるなどの症状として現れる。ＰＤ患者の脳組織に関する研究により、疾患患者の黒質ドーパミン作動性ニューロンが失われていることを発見した。Ｌｅｗｙ封入体は、パーキンソン病における変性ニューロンの特徴的な病変の一つである。研究により、アルツハイマー病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、パーキンソン病、ＤＬＢ疾患（Ｄｅｍｅｎｔｉａ  ｗｉｔｈ  Ｌｅｗｙ  Ｂｏｄｙ）などの多くの神経変性疾患の場合、Ｌｅｗｙ封入体は患者の脳組織に形成されるが示されている。一部の研究結果も、神経幹細胞の移植がハンチントン病および筋萎縮性側索硬化症の治療に役立つことを支えている。
【０００６】
哺乳動物の脳では、生命過程に亘って、神経幹細胞（Ｎｅｕｒａｌ  Ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ  Ｃｅｌｌｓ、ＮＰＣ）の増殖と自己再生が続き、神経再生（Ｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓ）の重要な一環である。老化、長期ストレス、アルツハイマー病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’  ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ，ＡＤ）などの神経疾患の場合、神経幹細胞の増殖と自己再生能力が減少し、認知機能の障害につながる。神経再生の促進は、老化および老化に関連する神経変性疾患に対する潜在的な治療法であると考えられている。このため、可能な解決
策の一つは、胚性神経幹細胞又は体外で誘導された神経幹細胞を移植することで細胞補充療法を行うことである。ただし、この新しく作成された複雑な技術、特に安全性の問題とセルソースについては、まだいくつかの論争がある。別の方法としては、薬理学的手段を使用して内因性神経幹細胞を活性化し、神経変性疾患を治療する目的を達成することである。薬理学的手法は操作が簡単で、神経幹細胞の特定の機能を特異的に標的とすることができるため、内因性神経幹細胞の活性化は、実行可能な治療法であるだけでなく、予防法でもある。しかしながら、当業者はまた、効果的に治療を達成するために、内因性神経幹細胞を効果的に活性化するための体の障壁をよりよく通過できる適切な薬物を見出す必要がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、神経変性疾患を治療するための新規な医薬およびその使用を提供することを目的とする。  
【０００８】
本発明の一つは、式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物、前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩を提供する。
【化１】
2021512958.tif 000002
ただし、
【化２】
2021512958.tif 000003
は、６員の複素環であり、ＸはＯであり；
Ｙは独立してＯ又はＮから選ばれ；
ＹがＯを表す場合、前記化合物は、β配置、α配置とβ配置の任意の割合の混合物であり、ＹがＮを表す場合、前記化合物は、α配置、β配置、α配置とβ配置の任意の割合の混合物であり；  Ｒ１〜Ｒ４は、独立して水素、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ２〜Ｃ４アルケニル、Ｃ２〜Ｃ４アルキニル、ハロゲンからなる群から選ばれ；
又は、Ｒ１〜Ｒ４における２つの隣接する基が互いに連結され、親環と一緒に環構造を形成する。
【０００９】
好ましい例としては、前記式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物又は前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩において、Ｒ１〜Ｒ４は、独立して水素、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ２アルキルからなる群から選ばれる。
【００１０】
別の好ましい例としては、前記化合物は、
【化３】
2021512958.tif 000004
を含む。
別の好ましい例としては、前記化合物は、
【化４】
2021512958.tif 000005
を含む。
別の好ましい例としては、前記化合物は、
【化５】
2021512958.tif 000006
を含む。
別の好ましい例としては、前記化合物は、
【化６】
2021512958.tif 000007
を含む。
【００１１】
本発明のもう一つは、神経変性疾患、うつ病、又は脳卒中の予防、緩和又は治療のための医薬又は医薬キットの調製における、式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物、前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００１２】
好ましい例としては、神経変性疾患は：
脳の神経炎症を特徴とする神経変性疾患；又は
Ａβ生成の著しい増加を特徴とする神経変性疾患；又は
学習および記憶能力の著しい低下を特徴とする神経変性疾患；又は
神経幹細胞機能の低下を特徴とする神経変性疾患；又は
運動協調能の低下を特徴とする神経変性疾患；又は
黒質ドーパミン作動性ニューロンの数の減少を特徴とする神経変性疾患；又は
線条体ドーパミン作動性神経線維の含有量の減少を特徴とする神経変性疾患である。
【００１３】
別の好ましい例としては、前記脳の神経炎症は、炎症性因子の発現の有意な増加を特徴とし、前記炎症性因子、例えばＴＮＦ−α及びＩＬ−１βである。
【００１４】
別の好ましい例としては、前記神経変性疾患には、アルツハイマー病、パーキンソン病、レビー小体型認知症（ＤＬＢ病）、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症が含まれる。
【００１５】
本発明のもう一つは、神経炎症を阻害するための組成物、試薬キット又は医薬キットの調製における、式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物、前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００１６】
本発明のもう一つは、神経幹細胞機能を促進するための組成物、試薬キット又は医薬キットの調製における、式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物又は前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００１７】
本発明のもう一つは、Ａβ生成を減少させるための組成物、試薬キット又は医薬キットの調製における式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物又は前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００１８】
本発明のもう一つは、黒質ドーパミン作動性ニューロンの数を増加させるための組成物、試薬キット又は医薬キットの調製における、式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物又は前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩の使用を提供する。  
【００１９】
本発明のもう一つは、線条体ドーパミン作動性神経線維の含有量を増加させるための組成物、試薬キット又は医薬キットの調製における式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物又は前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩の使用を提供する。  
【００２０】
好ましい例としては、前記化合物は、下記のものを含む：
【化７】
2021512958.tif 000008
ＰＬ２０１とも呼ばれ；
【化８】
2021512958.tif 000009
ＰＬ２０２とも呼ばれ；
【化９】
2021512958.tif 000010
ＰＬ１７１とも呼ばれ；及び
【化１０】
2021512958.tif 000011
ＰＬ１７２とも呼ばれる。  
【００２１】
本発明のもう一つは、医薬組成物を提供し、当該医薬組成物は、式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物、前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体を含む。
【００２２】
好ましい例としては、式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物、前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩は、医薬組成物において有効量である。好ましくは、前記有効量は、０．０１〜５０重量％であり、例えば、０．０１〜５％、０．０３〜３％
、０．０５〜１％、２０〜３０％、４０〜５０％などであるが、これらに限定されない。より好ましくは  ０．０３〜３０％であり、さらに好ましくは０．０５〜１０％である。
【００２３】
本発明のもう一つは、医薬組成物の剤形を提供し、当該剤型は粉末、散剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、徐放剤、制御放出剤、注射剤、点滴剤、懸濁剤を含む。
【００２４】
本発明のもう一つは、医薬キットを提供し、当該医薬キットは、式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物、前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩、あるいは前記医薬組成物を含む。
【００２５】
本発明のもう一つは、神経変性疾患、うつ病又は脳卒中を予防、緩和又は治療する方法を提供し、当該方法は、有効量の上記式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物、前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩を、治療を必要とする対象に投与する工程を含む。  
【００２６】
本発明のもう一つは、式ＩＩＩ、ＩＶ又はＶで表される化合物の調製方法を提供し、当該方法は、下記の工程を含む：β−ラムノシド、α−１−アミノラムノシド又はβ−１−アミノラムノシドと、それぞれフッ化テトラブチルアンモニウムとを反応させて、式ＩＩＩ−Ｖの化合物を得る。
【化１１】
2021512958.tif 000012
【化１２】
2021512958.tif 000013
【化１３】
2021512958.tif 000014
【００２７】
別の好ましい例としては、β−ラムノシドは、２，３，４−Ｏ−トリアセチルラムノースと、（４−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−フェルラ酸クロリドとを反応させることにより得られる。  
【００２８】
別の好ましい例としては、α−１−アミノラムノシドおよび／又はβ−１−アミノラムノシドは、２，３，４−Ｏ−トリアセチル−１−アミノラムノースと、（４−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−フェルラ酸クロリドとを反応させることにより得られる。
【００２９】
本発明の他の態様は、本願明細書の開示により当業者には明らかである。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】ＰＬ２０１は、ＡＤマウスのＭｏｒｒｉｓ水迷路の指標を改善させる。
【図２】ＰＬ２０１は、インビボで神経発生を促進させる。
【図３】ＰＬ２０１は、インビトロでの神経幹細胞増殖のＡβ阻害を緩和させる。
【図４】ＰＬ２０１は、神経炎症を阻害させる。
【図５】ＰＬ２０１は、体内のＡβプラークの数を減少させる。
【図６】ＰＬ２０１は、インビトロでＡβ生成を減少させる。
【図７】ＰＬ２０１は、ミトコンドリア膜電位を増加させる。
【図８】ＰＬ２０１は、ＡＭＰＫリン酸化レベルを増加させる。
【図９】ＰＬ２０１は、マウスのロッドクライミング法の検出指標を改善させる。
【図１０】ＰＬ２０１は、線条体ドーパミン作動性神経線維の含有量を増加させる。
【図１１】ＰＬ２０２は、Ａβ生成を減少させる。
【図１２】ＰＬ２０２は、炎症性因子ＩＬ−１βおよびｉＮＯＳの発現を減少させる。
【図１３】ＰＬ１７１は、Ａβ生成を減少させる。
【図１４】ＰＬ１７２は、Ａβ生成を減少させる。
【図１５ａ】ＰＬ２０２のＮＭＲスペクトルである。
【図１５ｂ】ＰＬ２０２の１Ｈ  ＮＯＥＳＹスペクトルである。
【図１６ａ】ＰＬ１７１のＮＭＲスペクトルである。
【図１６ｂ】ＰＬ１７１の１Ｈ  ＮＯＥＳＹスペクトルである。
【図１６ｃ】ＰＬ１７１の１Ｈ  ＮＯＥＳＹスペクトルである。
【図１６ｄ】ＰＬ１７１の１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹスペクトルである。
【図１７】ＰＬ１７２のＮＭＲスペクトルである。
【図１８ａ】黒質ＴＨ染色図であり、Ｈ２Ｏ＋ＮＳである
【図１８ｂ】黒質ＴＨ染色図であり、ＰＬ２０１＋ＮＳである。
【図１８ｃ】黒質ＴＨ染色図であり、Ｈ２Ｏ＋ＭＰＴＰである。
【図１８ｄ】黒質ＴＨ染色図であり、ＰＬ２０１＋ＭＰＴＰである。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
本発明者らは、鋭意研究の結果、式（Ｉ）の化合物は、神経変性疾患の症状を著しく改善することができることを見だした。また、インビトロおよびインビボでの実験では、式（Ｉ）の化合物は神経幹細胞の機能を効果的に増強でき；予防できるだけでなく、神経再生促進の治療法の一つとして老化や神経変性疾患に関連する認知減少を防止することができる。
[定義]
【００３２】
本願明細書で使用される「アルキル」という用語は、１〜４個の炭素原子（好ましくは１〜２個の炭素原子）を含む直鎖又は分岐鎖の飽和脂肪族炭化水素基を指す。例えば、アルキルには、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチルが含まれるが、これらに限定されない。
【００３３】
本願明細書で使用される「アルケニル」という用語は、少なくとも一つの炭素−炭素二重結合および２〜４個の炭素原子（好ましくは２〜３個の炭素原子）を含む直鎖および分岐鎖の炭化水素基を含む。
【００３４】
本願明細書で使用される「アルキニル」という用語は、少なくとも一つの炭素−炭素三重結合および２〜４個の炭素原子（好ましくは２〜３個の炭素原子）を含む直鎖および分岐鎖の炭化水素基を含む。
【００３５】
本願明細書で使用される「ハロゲン」という用語は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩを指す。
【００３６】
本願明細書で使用される「異性体」という用語は、幾何異性体、鏡像異性体、およびジアステレオマー（例えば、シス−トランス異性体、配座異性体）を含む。
【００３７】
本願明細書で使用される「
【化１４】
2021512958.tif 000015
」という表現は、当業者に周知であり、X原子を有する複素環式環を意味する。本発明の好ましい実施形態では、「
【化１５】
2021512958.tif 000016
」は、６員の複素環である。
【００３８】
本願明細書で使用される「
【化１６】
2021512958.tif 000017
」又は「
【化１７】
2021512958.tif 000018
」という表現は、当業者に周知であり、それは、基が選択され得るＲ１〜Ｒ４で環上の任意の一つ又は複数の位置が置換されることを意味する。また、異なる置換位置では、基の選択が異なる場合がある。
【００３９】
本願明細書で使用される「溶媒和物」という用語は、溶媒分子を携帯する化合物を指し、例えば、溶媒和物は水和物であってもよい。
【００４０】
本発明において、「含む」という用語は、本発明の混合物又は組成物中に様々な成分を一緒に適用できることを意味する。そのため、「−からなる」および「主に−からなる」という用語は、「含む」という用語に含まれる。
【００４１】
本発明において、「薬学的に許容される」成分は、過度の副作用（毒性、刺激およびアレルギーなど）のない、ヒトおよび／又は動物に適した物質、すなわち、合理的な利益／リスク比を有する物質である。
【００４２】
本発明において、「薬学的に許容される担体」は、本発明の式（Ｉ）の化合物、異性体、溶媒和物、前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩を動物又はヒトに送達するために使用される、薬学的に又は食品上許容される溶媒、懸濁剤又は賦形剤である。担体は液体でも固体でもよい。
[化合物]
【００４３】
本発明は、まず構造式（Ｉ）で表される化合物を提供する。
【化１８】
2021512958.tif 000019
なお、式（Ｉ）において、Ｘの位置は模式的な位置であり、図中のＲ１の側（Ｒ１と
【化１９】
2021512958.tif 000020
基との間の位置）に限らず、Ｒ１とＲ２の間、Ｒ２とＲ３の間、Ｒ３とＲ４の間、Ｒ４と
【化２０】
2021512958.tif 000021
基の間に存在してもよい。例えば、当該化合物はまた、下記化合物であってもよい。
【化２１】
2021512958.tif 000022
ここで、
【化２２】
2021512958.tif 000023
は６員複素環であり、XはＯであり、Ｙは独立してＯ、Ｎからなる群から選ばれる。ＹがＯを表す場合、前記化合物はβ配置、α配置とβ配置の任意の比率の混合物である。ＹがＮを表す場合、前記化合物は、α配置、β配置、α配置とβ配置の任意の比率の混合物である。Ｒ１〜Ｒ４は独立して、水素、ヒドロキシル基、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基、およびＣ２〜Ｃ４アルケニル、Ｃ２〜Ｃ４アルキニル、ハロゲンからなる群から選ばれ、又はＲ１〜Ｒ４における隣接する２つの基は互いに連結され、親環と一緒になって環構造（Ｏを含む環構造の場合もある）を形成する。
【００４４】
本発明の好ましい実施形態として、Ｒ１〜Ｒ４は独立して、水素、ヒドロキシル、およびＣ１〜Ｃ２アルキルからなる群から選ばれる。
【００４５】
本発明はまた、式（Ｉ）の化合物と同じ又は実質的に同じ機能を有する限り、上記式（Ｉ）の化合物の異性体、溶媒和物、前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩も含む。「薬学的に許容される塩」とは、化合物と無機酸、有機酸、アルカリ金属又はアルカリ土類金属との反応により形成される塩をいう。これらの塩（これらに限定されない）には下記塩を含む：（１）塩酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸と形成される塩；（２）酢酸、シュウ酸、コハク酸、酒石酸、メタンスルホン酸、マレイン酸、又はアルギニンなどの
有機酸と形成される塩。他の塩には、アルカリ金属又はアルカリ土類金属（ナトリウム、カリウム、カルシウム、又はマグネシウムなど）と形成される塩も、エステル、カルバメート、又は他の従来の「プロドラッグ」の形態も含まれる。化合物は一つまたは複数の非対称中心を有する。したがって、これらの化合物は、ラセミ混合物、個々のエナンチオマー、個々のジアステレオマー、ジアステレオマーの混合物、シス又はトランス異性体として存在することができる。
【００４６】
「化合物の前駆体」とは、適切な方法で摂取した後、患者の体内で代謝反応又は化学反応により構造式（Ｉ）に変換される化合物、又は化学構造式（Ｉ）で表される一つの化合物からなるされる塩又は溶液を指す。
【００４７】
本発明の好ましい態様として、前記化合物には、式ＩＩ（ＰＬ２０１）、ＩＩＩ（ＰＬ２０２）、ＩＶ（ＰＬ１７１）、およびＶ（ＰＬ１７２）で表される下記の化合物が含まれる。式ＩＩＩおよび式ＩＶの化合物が特に好ましい。。
【００４８】
【表１】
2021512958.tif 000024
【００４９】
式ＩＩの化合物は、（α−Ｌ−ラムノピラノシル）フェルラ酸エステルであり、下記化合物を含むが、これに限定されない。
【化２３】
2021512958.tif 000025
式ＩＩＩの化合物は、（β−Ｌ−ラムノピラノシル）フェルラ酸エステルであり、下記化合物を含むが、これに限定されない。
【化２４】
2021512958.tif 000026
式ＩＶの化合物は、（１−アミノ−α−Ｌ−ラムノピラノシル）フェルラ酸アミドであり、下記化合物を含むが、これに限定されない。
【化２５】
2021512958.tif 000027
式Ｖの化合物は、（１−アミノ−β−Ｌ−ラムノピラノシル）フェルラ酸アミドであり、下記化合物を含むが、これに限定されない。
【化２６】
2021512958.tif 000028
【００５０】
本発明の一実施形態において、式ＩＩＩの化合物を調製する方法は、下記の工程を含む。
第１工程では、２，３，４−Ｏ−トリアセチルラムノースと（４−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−フェルラ酸クロリドを混合し、反応により式ＶＩで表される構造のβ−グリコシル化生成物を得；
第２工程では、式ＶＩで表される構造のβ−グリコシル化生成物をフッ化テトラブチルアンモニウムと混合して、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＳ）生成物を得；
第３ステップでは、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＳ）生成物を加水分解して式ＩＩＩの化合物を得る。
【化２７】
2021512958.tif 000029
【００５１】
本発明の一つの実施形態において、上記第１工程は、氷浴下で、２，３，４−Ｏ−トリアセチルラムノースに（４−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−フェルラ酸クロリドを滴下する。
【００５２】
本発明の一実施形態では、上記第１工程の反応は室温で行われ、室温は１０〜４０℃であり、好ましくは１５〜３０℃であり、より好ましくは２０〜２５℃である。
【００５３】
本発明の一実施形態において、上記第１工程は、さらに、カラムクロマトグラフィーによりαおよびβ−グリコシル化生成物をそれぞれ得る操作をさらに含む。
【００５４】
本発明の一実施形態では、上記第２工程での混合は、室温で、フッ化テトラブチルアンモニウムをβ−グリコシル化生成物に滴下することである。
【００５５】
本発明の一実施形態では、式ＩＶの化合物を調製する方法は、下記の工程を含む。
第１工程では、１−アミノ−２，３，４−Ｏ−トリアセチルラムノースと（４−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−フェルラ酸クロリドを混合して、次のような構造、例えば、式ＶＩＩＩで表されるα−グリコシル化生成物を得る。；
第２工程では、式ＶＩＩＩで表される構造のα−グリコシル化生成物をフッ化テトラブチルアンモニウムと混合して、α−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＳ）生成物を得る。
第３工程では、α−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＳ）生成物を加水分解して式ＩＶの化合物を得る。
【化２８】
2021512958.tif 000030
【００５６】
本発明の一実施形態では、上記第１の工程は、氷浴下で（４−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−フェルラ酸クロリドを１−アミノ−２，３，４−Ｏ−トリアセチルラムノースに滴下することである。
【００５７】
本発明の一実施形態では、上記第１の工程の反応は室温で行われ、室温は１０〜４０℃、好ましくは１５〜３０℃、より好ましくは２０〜２５℃である。
【００５８】
本発明の一実施形態において、上記第１の工程は、カラムクロマトグラフィーによりα−グリコシル化生成物を得る操作をさらに含む。
【００５９】
本発明の一実施形態では、上記第２の工程における混合は、室温で、フッ化テトラブチルアンモニウムをアルファグリコシル化生成物に滴下することである。
【００６０】
本発明の一実施形態では、式Ｖの化合物を調製する方法は、下記の工程を含む。
第１工程では、１−アミノ−２，３，４−Ｏ−トリアセチルラムノースと（４−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−フェルラ酸クロリドを混合し反応させて、式ＩＸで表される構造のβ−グリコシル化生成物を得；
第２工程では、それぞれ式ＩＸで表される構造のβ−グリコシル化生成物をフッ化テトラブチルアンモニウムと混合して、β−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＳ）生成物を得た。
第３工程では、それぞれβ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＳ）生成物を加水分解して式Ｖの化合物を得る。
【化２９】
2021512958.tif 000031
【００６１】
本発明の一実施形態では、上記第１の工程は、氷浴下で（４−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−フェルラ酸クロリドを１−アミノ−２，３，４−Ｏ−トリアセチルラムノースに滴下することである。
【００６２】
本発明の一実施形態では、上記第１の工程の反応は室温で行われ、室温は１０〜４０℃であり、好ましくは１５〜３０℃であり、より好ましくは２０〜２５℃である。
【００６３】
本発明の一実施形態において、上記第１の工程は、カラムクロマトグラフィーによりβ−グリコシル化生成物をそれぞれ得る操作をさらに含む。
【００６４】
本発明の一実施形態では、上記第２の工程での混合は、室温で、フッ化テトラブチルアンモニウムをそれぞれβ−グリコシル化生成物に滴下することである。
【００６５】
本発明の化合物の構造を知った後、当技術分野で周知の様々な方法によって、周知の原材料を使用して、本発明の化合物を得ることができること、例えば、化学合成又は生物（動物又は植物など）から抽出する方法などが本発明に含まれることは、当業者には理解されることである。
【００６６】
合成された化合物は、カラムクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーなどによりさらに精製することができる。
[用途]
【００６７】
本発明者らは研究に基づいて、本発明の式（Ｉ）の化合物が神経変性疾患の症状を有意に改善できることを見出した。本発明の化合物は、神経炎症を抑制し、Ａβ生成を減少させ、神経幹細胞を増強し、ドーパミン作動性ニューロンの機能を増強することができる。実験的実証により、本発明の化合物は、動物の学習および記憶能力を著しく改善した。本発明の化合物の作用機序によれば、神経幹細胞の機能を増強することができるため、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症にも有効である。また、本発明の化合物の作用機序によれば、うつ病および脳卒中にも有効である。うつ病又は脳卒中の発症中、脳における神経炎症の発生も関与し、さらに神経幹細胞の減少および神経機能の変化を引き起こす。本発明の式（Ｉ）の化合物は神経幹細胞の機能を高めることができることから、うつ病や脳卒中にも有効であることが理解される。
【００６８】
本発明者らの新たな発見に基づいて、本発明は、、神経変性疾患、うつ病、又は脳卒中を予防、緩和又は治療するための医薬又は医薬キットの調製における、式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物又は前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００６９】
本発明はまた、神経炎症を抑制するための組成物、試薬キット又は医薬キットの調製における、式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物又は前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００７０】
本発明はまた、神経幹細胞の生成を促進するための組成物、試薬キット又は医薬キットの調製における、式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物又は前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００７１】
本発明はまた、Ａβ生成を減少させるための組成物、試薬キット又は医薬キットの調製における、式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物又は前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００７２】
本発明はまた、黒質ドーパミン作動性ニューロンの数を増加させるための組成物、試薬キット又は医薬キットの調製における、式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物又は前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００７３】
本発明はまた、線条体ドーパミン作動性神経線維含有量を増加させるための組成物、試薬キット又は医薬キットの調製における、式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物又は前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００７４】
本発明により提供される式（ＩＩ）の化合物（ＰＬ２０１）、式（ＩＩＩ）の化合物（ＰＬ２０２）、式（ＩＶ）の化合物（ＰＬ１７１）および式（V）の化合物（ＰＬ１７２）は、上記使用において優れた効果を有する。ここで、特に式（ＩＩＩ）および化合物（ＩＶ）の効果が優れている。
［医薬組成物］
【００７５】
本発明はまた、下記の成分：（ａ）有効量の式（Ｉ）の化合物、又はその異性体、溶媒和物、前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩；および（ｂ）薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【００７６】
本発明において、前記医薬組成物において、式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物、前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩の含有量は有効量である。例えば、、重量比で０．００１〜５０％の式（Ｉ）で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩を含んでもよい。好ましくは、前記医薬組成物は、重量比で０．０１〜２０％の式（Ｉ）で表される化合物又はその医薬上許容される塩を含む。
【００７７】
本発明による医薬組成物の剤形は、有効成分が哺乳動物の生体に効率的に到達できる限り、剤形が様々であってよい。例えば、粉末、散剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、徐放剤、制御放出剤、注射剤、点滴剤、および懸濁剤から選択することができる。本発明の化合物によって治療される疾患に応じて、当業者は、便利な剤形を選択することができる。
【００７８】
調製および保存の容易さの観点から、好ましい医薬組成物は、固体組成物であり、特に錠剤、固体又は液体充填カプセルである。投与しやすい粒子長の観点から、好ましい医薬組成物は経口剤である。本発明の化合物又はその医薬組成物は、注射又は点滴に適した滅菌装置に保存することもできる。
【００７９】
有効成分としての式（Ｉ）の化合物の有効投与量は、投与方法および治療される疾患の重症度に応じて変動し得る。しかしながら、一般に、本発明の化合物が約０．０１〜１００  ｍｇ／ｋｇ動物体重／日の用量で投与される場合、望ましい結果が得られるが、好ましくは１日あたり１〜３回の分割用量で、又は徐放形態で投与する。この投薬計画は、最良の治療反応を提供するように調整することができる。例えば、治療状況の緊急の必要性のために、いくつかの分割された用量を毎日与えることができ、又は用量を比例的に減らすことができる。
【００８０】
下記、具体的な実施例を組み合わせて、本発明をさらに説明する。これらの実施例は、本発明を説明するために使用され、本発明の範囲を限定するものではないことを理解されたい。下記の実施例において特定の条件のない実験方法は、通常、例えばＪ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｇｕｉｄｅ，Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｒｅｓｓ，２００２年に記載されている条件、又は、製造元による推奨する条件に従って進行する。
【００８１】
[データの統計分析]
すべての実験データは、平均値±標準誤差として表される。異なる治療グループ間の比較には、ｔ検定を使用する。複数グループの結果の間に、ｏｎｅ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡを使用して分析し、Ｆｉｓｈｅｒ’ｓ  ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ  ｌｅａｓｔ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ  ｔｅｓｔ又はＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉ  ｔ  ｔｅｓｔを
使用して事後検定を実行するか、ｔｗｏ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡを使用して分析し、Ｔｕｋｅｙ  ｐｏｓｔ  ｈｏｃ  ｔｅｓｔを使用し事後検定を実行する。Ｐ＜０．０５の場合、グループ間に有意差があると認められる。
【００８２】
実施例１．  ＰＬ２０１はＡＤマウスの学習能力と記憶能力を改善させる。
Ｍｏｒｒｉｓ水迷路実験
５〜６ヶ月齢のＡＰＰ／ＰＳ１トランスジェニック雄マウス（ＡＤマウス）を２０匹選び、乱数表法に従ってモデル群と多糖類投与群に分けた。胃内投与で、ＰＬ２０１を、毎日投与（１０ｍｇ／ｋｇマウス体重）した。なお、１０匹の非トランスジェニックマウスを陰性対照群（ＰＬ２０１を投与しない）として選んで、９０日間連続投与した後、Ｍｏｒｒｉｓ水迷路行動実験を採用して、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスの学習および認知機能に対するＰＬ２０１の効果を検出した。
本実験において、クラシカルなＭｏｒｒｉｓ水迷路試験の手順を採用しており、当該手順が二つの部分を含み、すなわち、場所探索試験と空間探査試験を含み、合計７日間を実施し、４日目と７日目から空間探査試験を追加した。
図１の実験結果から分かるように、今回の場所探索試験では、３日間のトレーニングの後、３つのグループの動物の逃避潜時が短縮され、各マウスが水迷路の宇宙学習タスクを正常に完了できたことが分かった。逃避潜時を検出指標とする。
結果として、陰性対照群のマウスは反応が速く、水に入った後すぐにプラットフォームを見つけることができた。トレーニングの数の増加とともに、プラットフォームを見つける潜時が短くなった。一方、モデル群マウスは反応が遅延され、水に入った後にバレル壁に沿って旋回した。エスケープ行動はなかった。人為的にプラットフォームに導いた後、再び水中に飛び込んだ。何回のトレーニングの後、最終的にプラットフォームを見つけたが、プラットフォームを見つける潜時が大幅に長くなった。上記３つのグループはすべて、特定の空間記憶能力を持っており、モデル群マウスの潜時の成績は、対照群より悪かった。これは、モデル群の学習能力と記憶能力が低下し、モデルマウスがＡＤの学習と記憶の障害をよりよくシミュレートしたことを示している。モデル群と比較して、投与群マウスの潜時は統計的に有意差があって、ＰＬ２０１投与後のＡＤマウスの学習および記憶能力が有意に改善されたことが分かった。
【００８３】
実施例２．  ＰＬ２０１はインビボで神経発生を促進させる。
神経発生の異常、神経炎症およびＡβプラークの沈着は、ＡＤの認知能力の低下と密接に関連している。したがって、本実施例では、ＰＬ２０１が神経発生に影響を与えるかどうかをさらに研究した。
本発明者らは、ＡＤマウス（５〜６ヶ月齢程のＡＤマウスを選択）に対してＰＬ２０１投与実験を行い、各マウスにＰＬ２０１を１００  ｌ胃内投与し、投与濃度は１０ｍｇ／ｋｇ体重であった。これに対して、対照グループには、１００  ｌの水を１日１回、持続的に９０日間投与し、６０日目から、マウスの体重５０ｍｇ／ｋｇの５−ブロモ−２’−デオキシウリジン（ＢｒｄＵ）を腹腔内注射し始めた。毎日１回、合計７日間の注射し、９０日間投与後、麻酔されたマウスにＰＦＡを灌流し、脳全体を採取して次の実験に供する。
得られた全脳について、マウス海馬のニューロンマーカーＮｅｕＮの検出を行った。ＰＦＡ灌流マウスの脳を４％ＰＦＡで２４時間固定し続け、その後３０％ショ糖固定液で７２時間静置した。処理した後、小脳を取り出し、濾紙の上に脳の嗅球を垂直に置き、−８０℃で少なくとも２４時間保存した。垂直に３０  ｍの厚さに冷凍下縦切りにし、マウスの脳アトラスに従ってＤＧ部を取り、合計８×９＝７２枚に切り、合計２．１６  ｍｍで、スライス順に並んで、８つのスライスごとに一つを選んで、脳アトラスのグループにまとめて、染色を行った。スライスした脳スライスを組織保護溶液（３０％スクロース、３０％エチレングリコール、０．１ＭＰＢ）に入れ、−２０℃で半年以上保存可能である。染色中、脳スライスの一つのセットを取り、室温でブロッキング溶液（１０％ロバ血清、
０．３％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、ＰＢＳ）で４５分間ブロックし、一次抗体を加え、４℃で一晩インキュベート（一次抗体希釈率：ラット抗ＢｒｄＵ  ，１：２０００；ウサギ抗Ｋｉ６７，１：１０００；ヤギ抗Ｄｃｘ，１：２００；マウス抗ＮｅｕＮ，１：２００；ヤギ抗Ｓｏｘ２，１：６０）した。その後、適切な蛍光二次抗体を入れ、室温で１時間インキュベートした。ＤＡＰＩで細胞核を染色した。その後、染色された脳スライスをオリンパスＦＶ１００Ｉ又はライカＳＰ−８で撮影した。陽性又は二重染色された細胞の数をＩｍａｇｅ  Ｐｒｏ  ｐｌｕｓソフトウェアで分析した。ＢｒｄＵとの共染色のために、脳スライスに対して抗原修復する必要があるため、血清でブロックする前に、抗原修復溶液（１０  ｍｍクエン酸ナトリウム、ｐＨ  ６．５）で９５℃で２０分間処理した。ＢｒｄＵ染色を行った。血清でブロックする前に、脳スライスを２Ｍ塩酸で３７℃で３０分間処理した後、０．１Ｍホウ酸バッファー（ｐＨ  ８．５）で洗浄した。
本発明者らは、図２に示すように、対照マウスと比較して、ＰＬ２０１投与マウスは、海馬においてより多くのＢｒｄＵ／ＮｅｕＮ二重陽性新生ニューロンを有することを見出した。
上記結果に示されるように、ＰＬ２０１がマウスの神経発生を大幅に促進することができる。
【００８４】
実施例３．  ＰＬ２０１は、インビトロでの神経幹細胞増殖に対するＡβの阻害を緩和させる。
ＡβはＡＤの主要な病原性タンパク質として、神経幹細胞の増殖を阻害することができる。本実施例では、本発明者らは、ＥｄＵ取り込みの方法によりヒト神経幹細胞の増殖能力を検出して、ＰＬ２０１が神経幹細胞の増殖に対するＡβの阻害作用を緩和できるかどうかを研究した。
ヒト神経幹細胞３ＬをＤＭＥＭ／Ｆ１２（Ｎ２／Ｂ２７および１０ｎｇ／ｍｌ  ｂＦＧＦを含む）で培養し、９６ウェルプレートに塗布して、２４時間インキュベーション後、Ａβ（５μＭ）を加えて３０分間前処理した後、ＰＬ２０１（３０μＭ）を添加して、添加した後７２時間インキュベーションし、ＥｄＵ染色で神経幹細胞の増殖レベルを検出した。
結果は、図３に示すように、Ａβ処理が神経幹細胞の増殖を阻害するが、ＰＬ２０１の添加は神経幹細胞の増殖に対するＡβの阻害作用を大幅に緩和することを示している。
【００８５】
実施例４．  ＰＬ２０１は神経炎症を阻害する。
ＡＤ脳の神経炎症は、認知機能低下の原因の一つである。ミクログリアは神経炎症を媒介する重要な細胞である。本実施例において、本発明者らは、マウス神経膠腫細胞ＢＶ−２の炎症性因子の発現を検出することにより、ＰＬ２０１が神経炎症に対して阻害作用を有するかどうかを研究した。
マウス神経膠腫細胞ＢＶ−２をＤＭＥＭで培養し、２４ウェルプレートに塗布し、２４時間培養した後、ＰＬ２０１（０、１０、３０、１００μＭの使用量）とＬＰＳ（３００ｎｇ／ｍｌ）を加え、投与後２４時間インキュベートした。ＴｒｉｚｏｌによってＲＮＡを抽出し、ＱＰＣＲによって関連する炎症性因子の発現を検出した。
結果は、図４に示すように、ＰＬ２０１処理が炎症性因子ＴＮＦαおよびＩＬ−１βの発現を有意に阻害することを示している。
【００８６】
実施例５．  ＰＬ２０１は体内のＡβプラークの数を減少させる。
ＡＤ脳におけるＡβプラークの沈着は、神経損傷、ひいては認知能力の低下につながる主要な原因の一つである。したがって、本実施例では、ＰＬ２０１が脳内のＡβプラークの数にも影響を与えるかどうかをさらに研究した。
本発明者らは、実施例２の投与後のＡＤマウスの全脳サンプルを、垂直に３０  ｍの厚さに冷凍縦切りにし、チオフラビンＳおよびＤＡＰＩで染色した。その後、染色された脳スライスをＯｌｙｍｐｕｓ  ＦＶ１００i又はＬｅｉｃａＳＰ−８で撮影した。
本発明者らは、図５に示すように、対照群マウスと比較して、ＰＬ２０１が投与されたマウスは脳内のＡ  がより少ないことを発見した。
上記結果は、ＰＬ２０１がマウスのＡβ生成を大幅に減少させることを示している。
【００８７】
実施例６．  ＰＬ２０１はＡβ産生を減少させる。
ＡβはＡＤの主要な病原性タンパク質である。本実施例では、本発明者らは、神経芽細胞腫細胞ＳＫ−Ｎ−ＳＨ上のＡβのレベルを検出して、ＰＬ２０１がＡβ産生の減少に対して阻害作用を有するかどうかを研究した。
神経芽細胞腫細胞ＳＫ−Ｎ−ＳＨの培養とＡβ検出：ＤＭＥＭで培養したＳＫ−Ｎ−ＳＨを２４ウェルプレートに塗布し、２４時間培養した後、ＰＬ２０１（０、３０、１００、３００μＭの量）を添加し、添加した後合計２４時間のインキュベーションして、培養上清を取り、ＥＬＩＳＡにより総Ａβタンパク質のレベルを検出した。
結果は、図６に示すように、ＰＬ２０１処理がＡβ産生を有意に阻害することを示している。
【００８８】
実施例７．  ＰＬ２０１はミトコンドリア膜電位を増加させる。
ミトコンドリア膜電位はミトコンドリア機能を示す主要な指標であり、ミトコンドリア機能障害はＡＤ発病の重要な指標である。本実施例において、本発明者らは、ＰＬ２０１がヒト神経幹細胞のミトコンドリア膜電位レベルを検出することにより、ミトコンドリア機能を改善する効果を有するかどうかを研究した。
細胞ミトコンドリアをＪＣ−１で２０分間染色し、対応する緩衝液で洗浄した後、免疫蛍光分析を行った。
結果は、図７に示すように、Ａβ処理がミトコンドリア膜電位を低下させ、ＰＬ２０１処理がこの低下の程度を減少させることを示している。
【００８９】
実施例８．  ＰＬ２０１はＡＭＰＫリン酸化レベルを増加させる。
ミトコンドリア機能の変化は、ＡＭＰＫなどの代謝シグナル伝達経路の調節と密接な関連があり、これらのシグナル伝達経路もＡＤの発病と密接に関連していると広く考えられている。本実施例では、本発明者らは、免疫ブロッティング試験によりヒト神経幹細胞におけるＡＭＰＫのリン酸化レベルを検出して、ＰＬ２０１が代謝シグナル伝達経路の調節に役割を果たしているかどうかを研究した。
ヒト神経幹細胞３ＬをＤＭＥＭ／Ｆ１２（Ｎ２／Ｂ２７および１０ｎｇ／ｍｌ  ｂＦＧＦを含む）で培養し、１２ウェルプレートに播種して２４時間培養し、Ａβ（５μＭ）を添加して３０分間前処理した後、ＰＬ２０１（３０  Ｍ）を加えて、７２時間のインキュベーションした後、Ｌａｅｍｍｌｉ’ｓ  ｓａｍｐｌｅ  ｂｕｆｆｅｒで溶解した細胞をＰＢＳで洗浄した後、ＳＤＳ  ＰＡＧＥ電気泳動、ウサギ抗リン酸化ＡＭＰＫおよび総ＡＭＰＫ抗体により関連するタンパク質のバンドを検出した。
結果は、図８に示すように、Ａβ処理がＡＭＰＫリン酸化のレベルを低下させるが、ＰＬ２０１処理がこの低下の程度を減少させることを示している。
【００９０】
実施例９．  ＰＬ２０１は、マウスロッドクライミング法の検出指標を改善する。
ＭＰＴＰは、黒質ドーパミン作動性ニューロンを選択的に破壊する作用を有する。ＭＰＴＰによって引き起こされるＰＤの動物モデルは、人間のパーキンソンの病理学的変化および臨床的特徴に類似した最も代表的な動物モデルである。ＰＤの主な症状は、安静時振戦、筋肉緊張の増加、動きの減少などである。ロッドクライミング実験のＵターン時間とダウンクライム時間は、マウスの全体的な活動協調能を表すことができる。
マウスをランダムに４つの群に分ける。即ち、生理食塩水群（ＮＳ）、ＭＰＴＰモデル胃内投与の生理食塩水群（ＮＳ＋ＭＰＴＰ）、ＰＬ２０１化合物５０ｍｇの胃内投与群（ＰＬ２０１）、ＭＰＴＰモデル胃内投与のＰＬ２０１化合物群（  ＰＬ２０１＋ＭＰＴＰ）。
生理食塩水群（ＮＳ）は１１匹の動物であり、ＭＰＴＰモデル胃内投与の生理食塩水群（ＮＳ＋ＭＰＴＰ）は１４匹の動物であり、ＰＬ２０１化合物５０ｍｇの胃内投与群（ＰＬ２０１）は４匹の動物であり、ＭＰＴＰモデル胃内投与のＰＬ２０１化合物群（ＰＬ２０１＋ＭＰＴＰ）は１５匹の動物である。
群分けの日から投与し始め、生理食塩水群とＭＰＴＰモデル胃内投与の生理食塩水群に生理食塩水を胃内投与し、残りの２つの群にはＰＬ２０１化合物を１日１回、７日間連続投与した。７日目から、モデリング薬剤ＭＰＴＰ又はＮＳを投与した。生理食塩水群（ＮＳ）およびＰＬ２０１化合物５０ｍｇの胃内投与群（ＰＬ２０１）の動物に生理食塩水５ｍｌ／ｋｇを腹腔内注射し、残りの動物にはＭＰＴＰ  ２５ｍｇ／ｋｇを、１日に１回、５日間腹腔内注射した。
実験の３日目に、マウスに対してクライミングロッド実験を行い、マウスの協調能力を評価した。ラフロッド（直径１ｃｍ，高さ５０ｃｍ）の上にマウスの頭をそっと置いた。マウスの頭を上から完全に下がるまで調整する時間は、「レイテンシ時間」（Ｔｉｍｅ  ｔｏ  ｔｕｒｎ  ａｒｏｕｎｄ）として記録され、マウスが下へ移動してからすべての四肢がロッドの下部に到達するまでの時間は、「クライムダウン時間」（Ｔｉｍｅ  ｔｏ  Ｃｌｉｍｂ  ｄｏｗｎ）として記録され、３０秒以上は３０秒として記録した。各マウスは５回テストして、平均値を取った。
結果に示されるように、ＭＰＴＰモデル胃内投与の食塩水群（ＮＳ＋ＭＰＴＰ）のレイテンシ時間とクライムダウン時間が大幅に延長され、生理食塩水群（ＮＳ）と比較して、ある程度の有意差があった。ＰＬ２０１化合物群のレイテンシ時間（Ｔｉｍｅ  ｔｏ  ｔｕｒｎ  ａｒｏｕｎｄ）とクライムダウン時間（Ｔｉｍｅ  ｔｏ  Ｃｌｉｍｂ  ｄｏｗｎ）は、ＭＰＴＰモデル胃内投与の生理食塩水群（ＮＳ＋ＭＰＴＰ）と比較して、ある程度短縮された。
実験の３日目に、ＰＬ２０１化合物群のレイテンシ時間（Ｔｉｍｅ  ｔｏ  ｔｕｒｎ  ａｒｏｕｎｄ）とクライムダウン時間（Ｔｉｍｅ  ｔｏ  Ｃｌｉｍｂ  ｄｏｗｎ）がさまざまな程度に短縮された。ＭＰＴＰモデル胃内投与の生理食塩水群（ＮＳ＋ＭＰＴＰ）と比較して、有意差があった。
結果は、図９に示すように、ＰＬ２０１化合物が投与３日後のＭＰＴＰ  ＰＤマウスモデルの開始と協調能を改善する効果を有することを示している。
【００９１】
実施例１０．  ＰＬ２０１は線条体ドーパミン作動性神経線維含有量を増加させる。
パーキンソン病の主な病理学的特徴は、黒質ドーパミン作動性ニューロンと線条体ドーパミン作動性神経線維の喪失である。イムノブロッティングによって、線条体ドーパミン作動性神経線維の喪失を検出して、ＰＬ２０１が線条体ドーパミン作動性神経線維の含有量を増加させる効果があるかどうかを研究した。
マウスをランダムに４つの群に分けた。即ち、生理食塩水群（ＮＳ）、ＭＰＴＰモデル胃内投与の生理食塩水群（ＮＳ＋ＭＰＴＰ）、ＰＬ２０１化合物５０ｍｇの胃内投与群（ＰＬ２０１）、ＭＰＴＰモデル胃内投与ＰのＬ２０１化合物群（  ＰＬ２０１＋ＭＰＴＰ）。
生理食塩水群（ＮＳ）は１１匹の動物であり、ＭＰＴＰモデル胃内投与の生理食塩水群（ＮＳ＋ＭＰＴＰ）がは４匹の動物であり、ＰＬ２０１化合物５０ｍｇの胃内投与群（ＰＬ２０１）は４匹の動物であり、ＭＰＴＰモデル胃内投与のＰＬ２０１化合物群（ＰＬ２０１＋ＭＰＴＰ）は１５匹の動物である。
群分けの日から投与し始め、生理食塩水群とＭＰＴＰモデル胃内投与の生理食塩水群に生理食塩水を胃内投与し、残りの２つの群にはＰＬ２０１化合物を１日１回、７日間連続投与した。７日目から、モデリング薬剤ＭＰＴＰ又はＮＳを投与した。生理食塩水群（ＮＳ）およびＰＬ２０１化合物５０ｍｇの胃内投与群（ＰＬ２０１）の動物に生理食塩水５ｍｌ／ｋｇを腹腔内注射し、残りの動物にはＭＰＴＰ  ２５ｍｇ／ｋｇを１日に１回、５日間腹腔内注射した。
ＭＰＴＰモデリングの完了後７日目に、各群の動物に１０％抱水クロラールで麻酔をか
けた。灌流後、脳組織を線条体から分離し、１．５ｍｌ  ＥＰチューブに入れた。２５０μｌのＲＩＰＡタンパク質溶解液（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を加えて組織を超音波処理し、上清を収集してタンパク質濃度を検出した。タンパク質濃度を２μｇ／μｌに調整し、５倍のローディングバッファーを加え沸騰してタンパク質を変性させ、サンプルを１０％ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動に加え、１００Ｖウェットトランスファーメソッドでメタノール活性化ＰＶＤＦメンブレンに移した。５％スキムミルクＴＢＳＴを室温で１時間ブロックし、ＴＨ（１：１０００）一次抗体を加え、４℃で一晩インキュベートした。非特異的に結合した一次抗体をＴＢＳＴバッファーで洗浄した後、ヤギ抗マウス／ウサギ蛍光二次抗体（ＬＩ−ＣＯＲ）を追加した。室温で１時間インキュベートした後、ＴＢＳＴバッファーを３回洗浄し、蛍光シグナルを検出してＯｄｙｓｓｅｙ近赤外線蛍光スキャナーで統計した。
結果は、ＭＰＴＰモデリングの７日後に、ＭＰＴＰモデル胃内投与の食塩水群（ＮＳ＋ＭＰＴＰ）と比較して、ＰＬ２０１化合物群の線条体ドーパミン作動性神経線維の含有量が、大幅に増加したことを示している。図１０に示すように、ＰＬ２０１化合物は、マウスの線条体のドーパミン作動性神経線維の損傷に対して保護作用を有し、線条体のドーパミン作動性神経線維の含有量を増加させる。実験結果は、ＰＬ２０１化合物がパーキンソン病の治療に効果があることを示している。
【００９２】
実施例１１．  ＰＬ２０１は黒質ドーパミン作動性ニューロンの数および線条体ドーパミン作動性神経線維含有量を増加させる。
黒質ドーパミン作動性ニューロンと線条体ドーパミン作動性神経線維の喪失は、パーキンソン病の主な病理学的特徴である。チロシンヒドロキシラーゼ（ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ，ＴＨ）免疫反応により、線条体ドーパミン作動性神経線維の喪失を検出して、ＰＬ２０１が黒質ドーパミン作動性ニューロンの数を増加させる効果があるかどうかを研究した。
マウスをランダムに４つの群に分けた。即ち、生理食塩水群（ＮＳ）、ＭＰＴＰモデル胃内投与の生理食塩水群（ＮＳ＋ＭＰＴＰ）、ＰＬ２０１化合物５０ｍｇの胃内投与群（ＰＬ２０１）、ＭＰＴＰモデル胃内投与のＰＬ２０１化合物群（  ＰＬ２０１＋ＭＰＴＰ）。
生理食塩水群（ＮＳ）は１１匹の動物であり、ＭＰＴＰモデル胃内投与の生理食塩水群（ＮＳ＋ＭＰＴＰ）は１４匹の動物であり、ＰＬ２０１化合物５０ｍｇの胃内投与群（ＰＬ２０１）は４匹の動物であり、ＭＰＴＰモデル胃内投与のＰＬ２０１化合物群（ＰＬ２０１＋ＭＰＴＰ）は１５匹の動物である。
群分けの日から投与し始め、生理食塩水群とＭＰＴＰモデル胃内投与の生理食塩水群に生理食塩水を胃内投与し、残りの２つの群にはＰＬ２０１化合物を１日１回、７日間連続投与した。７日目から、モデリング薬剤ＭＰＴＰ又はＮＳを投与した。生理食塩水群（ＮＳ）およびＰＬ２０１化合物５０ｍｇの胃内投与群（ＰＬ２０１）の動物に生理食塩水５ｍｌ／ｋｇを腹腔内注射し、残りの動物にはＭＰＴＰ  ２５ｍｇ／ｋｇを１日に１回、５日間腹腔内注射した。。
ＭＰＴＰモデリングの完了後７日目に、各群の動物に対して、１０％抱水クロラールで麻酔をかけ、４％パラホルムアルデヒドでの灌流後に脳を採取した。４％パラホルムアルデヒドで２４時間固定した後、サンプルを３０％ショ糖溶液に移し、サンプルの底まで脱水した。中脳と線条体の冠状スライスを−２０度の冷凍スライサーで作成し、マウスの脳スライスの厚さが３０μＭであった。一次抗体は、モノクローナルマウス抗ＴＨ（１：１０００、ウサギ抗マウス抗体）、室温で２．５時間インキュベートした。ＴＢＳＴ溶液（８ｇ塩化ナトリウム、０．２ｇ塩化カリウムおよび３ｇ  Ｔｒｉｓ−ｂａｓｅ、蒸留水で１Ｌに定容し、塩酸でｐＨ  ７．４に調整した）で３回洗浄した後、二次抗体（ヒツジ抗ウサギ抗体）を西洋ワサビオキシダーゼ（ＨＰＲ）で標識し、室温で１時間インキュベートした。発色試薬ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）で発色させ、エタノールで勾配脱水し、キシレンで透明とし、中性ガムでシールした。染色切片をＩｍａｇｅ−Ｐｒｏｐｌｕｓソ
フトウェアで分析した。黒質ＴＨ陽性染色の総密度を黒質ドーパミン作動性ニューロンの数の測定値とし、線条体ＴＨ陽性染色の平均光学密度を線条体ドーパミン作動性神経繊維密度の測定値として統計した。
結果は、ＭＰＴＰモデル胃内投与食塩水群（ＮＳ＋ＭＰＴＰ）と比較して、ＭＰＴＰモデリングの７日後、黒質ドーパミン作動性ニューロンの数と線条体ドーパミン作動性神経線維の含有量が、ＰＬ２０１化合物群で有意に増加したことを示している。ＰＬ２０１化合物は、マウスの黒質ドーパミン作動性ニューロンと線条体ドーパミン作動性神経線維の損傷に対して保護効果があり、黒質ドーパミン作動性ニューロンの数と線条体ドーパミン作動性神経線維の含有量を増加させる。実験結果は、図１８に示すように、ＰＬ２０１化合物がパーキンソン病の治療に効果があることを示している。
【００９３】
実施例１２．ＰＬ２０２はＡβ生成を減少させる。
ＡβはＡＤの主要な病原性タンパク質である。本実施例において、本発明者らは、神経芽細胞腫細胞ＳＫ−Ｎ−ＳＨのＡβのレベルを検出することにより、ＰＬ２０１の異性体であるＰＬ２０２がＡβの生成を阻害する効果を有するかどうかを研究した。
神経芽細胞腫細胞ＳＫ−Ｎ−ＳＨの培養とＡβ検出：ＤＭＥＭで培養したＳＫ−Ｎ−ＳＨを２４ウェルプレートに塗布して２４時間培養し、ＰＬ２０２（使用量は０、３０、１００μＭ）を添加し、添加した後２４時間インキュベートした。培養上清を取り、ＥＬＩＳＡにより総Ａβのタンパク質量を検出した。
結果は、図１１に示すように、ＰＬ２０２処理がＡβ生成を有意に阻害できることを示している。
【００９４】
実施例１３．  ＰＬ２０２は神経炎症を阻害する。
ＡＤ脳の神経炎症は、認知機能の低下の原因の一つである。ミクログリアは神経炎症を媒介する重要な細胞である。本実施例において、本発明者らは、マウス神経膠腫細胞ＢＶ−２の炎症性因子の発現を検出することにより、ＰＬ２０２が神経炎症に対して阻害作用を有するかどうかを研究した。
マウス神経膠腫細胞ＢＶ−２をＤＭＥＭで培養し、２４ウェルプレートに塗布して２４時間培養した後、ＰＬ２０２（０、３０、１００、３００μＭ量）とＬＰＳ（３００ｎｇ／ｍｌ）を添加し、添加してから２４時間後インキュベートし、ＴｒｉｚｏｌによってＲＮＡを抽出し、ＱＰＣＲによって関連する炎症性因子の発現を検出した。
結果は、図１２に示すように、ＰＬ２０２治療が炎症性因子ＩＬ−１β、ｉＮＯＳの発現を有意に阻害できる。
【００９５】
実施例１４．  ＰＬ１７１はＡβの生成を減少させる。
ＡβはＡＤの主要な病原性タンパク質である。本実施例において、本発明者らは、神経芽細胞腫細胞ＳＫ−Ｎ−ＳＨのＡβのレベルを検出することにより、ＰＬ１７１がＡβの生成を阻害する効果を有するかどうかを研究した。
神経芽細胞腫細胞ＳＫ−Ｎ−ＳＨの培養とＡβの検出：ＤＭＥＭで培養したＳＫ−Ｎ−ＳＨを２４ウェルプレートに塗布して、２４時間インキュベートした後、ＰＬ１７１（使用量３００μＭ）を添加し、添加した後に合計２４時間インキュベートした。培養上清を取り、総Ａβのタンパク質レベルをＥＬＩＳＡで検出した。
結果は、図１３に示すように、ＰＬ１７１処理がＡβ生成を有意に阻害できることを示している。
【００９６】
実施例１５、ＰＬ１７２はＡβの生成を減少させる。
ＡβはＡＤの主要な病原性タンパク質である。本実施例において、本発明者らは、神経芽細胞腫細胞ＳＫ−Ｎ−ＳＨのＡβのレベルを検出することにより、ＰＬ１７１の異性体でありＰＬ１７２がＡβの生成を阻害する効果を有するかどうかを研究した。
神経芽細胞腫細胞ＳＫ−Ｎ−ＳＨの培養とＡβの検出：ＤＭＥＭで培養したＳＫ−Ｎ−
ＳＨを２４ウェルプレートに塗布して、２４時間インキュベートし、ＰＬ１７２（使用量３００μＭ）を添加し、添加した後に合計２４時間インキュベートした。培養上清を取り、ＥＬＩＳＡにより総Ａβのタンパク質レベルを検出した。
結果は、図１４に示すように、ＰＬ１７２処理がＡβ生成を有意に阻害できることを示している。
【００９７】
実施例１６．ＰＬ２０２の合成
【化３０】
2021512958.tif 000032
２，３，４−Ｏ−トリアセチルラムノース（５．８ｇ，２０  ｍｍｏｌ）を１００ｍｌの無水ジクロロメタンに溶解し、氷浴に（４−Ｏ−ＴＢＳ）−フェルラ酸クロリド（６．５２ｇ，２０  ｍｍｏｌ）（Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃａｌ  Ｒｅｓ．２０１５，１０２）の無水ジクロロメタン溶液および１．０ｍｌの無水ピリジンを滴下した。室温で２時間攪拌した後、反応を停止させた。２００ｍｌのジクロロメタンを添加して希釈し、飽和塩化ナトリウムで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮した。カラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝３：１）により、それぞれ９．１２ｇ（７９％）、１．１ｇ（９％）のαおよびβ−グリコシル化生成物を得た。β−グリコシル化生成物（４９０  ｍｇ，０．８５  ｍｍｏｌ）を乾燥したＴＨＦ（８．０  ｍｌ）に溶解し、希釈し、飽和塩化ナトリウムで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮して、２７５ｍｇのＴＢＳ生成物を得た。得られた生成物２７０ｍｇ（０．５８  ｍｍｏｌ）をメタノール３．０  ｍｌに溶解し、０℃で３３％ＣＨ３ＮＨ２のメタノール溶液０．５  ｍｌを滴下し、０℃で１時間反応させた。すばやく減圧し濃縮して、カラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：メタノール＝６：１）により、５９ｍｇのＰＬ２０２（０．１７  ｍｍｏｌ）を得た。ＥＳＩ（＋）−ＭＳ：３４１．３  ［Ｍ＋１］  ＋；  Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，  ４００  ＭＨｚ）δ７．８０（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１Ｈ）、７．２３（ｄ，Ｊ＝１Ｈｚ，１Ｈ）、７．１２（ｄｄ，Ｊ１＝８Ｈｚ，Ｊ２＝１Ｈｚ，１Ｈ）、６．８４（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ）、６．４２（ｄ，Ｊ＝１３Ｈｚ，１Ｈ）、５．７５（ｄ，Ｊ＝１Ｈｚ，１Ｈ）、３．９９（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ）、３．９２（ｓ，３Ｈ）、３．５５  −３．５３（ｍ，１Ｈ）、３．４１−３．３７（ｍ，２Ｈ）、１．３４（ｄ，Ｊ＝４Ｈｚ，３Ｈ）。
その配置を検証するために、ＮＯＥＳＹ（核オーバーハウザー効果分光、ｎｕｃｌｅａｒ  ｏｖｅｒｈａｕｓｅｒ  ｅｆｆｅｃｔ  ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）実験を行い、１Ｈ−１ＨＮＯＥＳＹスペクトルを得、得られたＰＬ２０２がβ配置であることが証明された。図１５に示されている。
【００９８】
実施例１７．ＰＬ１７１の合成
【化３１】
2021512958.tif 000033
１−アミノ−２，３，４−Ｏ−トリアセチルラムノース（５．８６ｇ，１９ｍｍｏｌ）を１００ｍｌの無水ジクロロメタンに溶解し、氷浴下に（４−Ｏ−ＴＢＳ）−フェルラ酸クロリド（６．５ｇ，２０  ｍｍｏｌ）（Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃａｌ  ＲＥＳ．２０１５，１０２）の無水ジクロロメタン溶液および１．０  ｍｌの無水ピリジンを滴下した。室温で２時間攪拌した後、反応を停止させた。２００ｍｌのジクロロメタンで希釈し、飽和塩化ナトリウムで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮した。カラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１０：１−２：１）により、それぞれ８．２２ｇ（７０％）、１．２ｇ（１０％）のαおよびβ−グリコシル化生成物を得た。α−グリコシル化生成物（５００  ｍｇ，０．８６  ｍｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦ（８．０  ｍｌ）に溶解し、希釈し、飽和塩化ナトリウムで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮して、３００ｍｇのＴＢＳ生成物を得た。得られた生成物３００ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）を塩化メチレン３．０ｍｌに溶解し、０℃で３３％ＣＨ３ＮＨ２のメタノール溶液０．５  ｍｌを滴下し、０℃で１時間反応させた。すばやく減圧して濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝２０：１〜６：１）により、７０ｍｇのＰＬ１７１（０．２１  ｍｍｏｌ）を得た。ＥＳＩ（＋）−ＭＳ：３４０．３  ［Ｍ＋１］  ＋；  Ｈ−  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００  ＭＨｚ）δ７．５６（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１Ｈ）７．１９（ｄ，Ｊ＝４Ｈｚ，１Ｈ）、７．０７（ｄｄ，Ｊ１＝６Ｈｚ，Ｊ２＝１Ｈｚ，１Ｈ）、６．８２（ｄ  ，Ｊ＝４Ｈｚ，１Ｈ）、６．６２（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１Ｈ）、５．２８（ｄ，Ｊ＝１Ｈｚ，１Ｈ）、３．９２（ｓ，３Ｈ）、３．８５（ｄ，Ｊ＝４Ｈｚ，１Ｈ  ）、３．５４−３．５２（ｍ，１Ｈ）、３．３８−３．３４（ｍ，２Ｈ）、１．３２（ｄ，Ｊ＝４Ｈｚ，３Ｈ）。
その配置を検証するために、ＮＯＥＳＹ（核オーバーハウザー効果分光、ｎｕｃｌｅａｒ  ｏｖｅｒｈａｕｓｅｒ  ｅｆｆｅｃｔ  ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）実験と１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹ（相関分光、ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ  ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）実験を行って、その１Ｈ  ＮＯＥＳＹ、１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹスペクトルを得、得られたＰＬ１７１がα配置であることが証明された。図１６に示されている。
【００９９】
実施例１８．ＰＬ１７２の合成
【化３２】
2021512958.tif 000034
１−アミノ−２，３，４−Ｏ−トリアセチルラムノース（５．８６ｇ，１９ｍｍｏｌ）を１００ｍｌの無水ジクロロメタンに溶解し、氷浴下に（４−Ｏ−ＴＢＳ）−フェルラ酸クロリド（６．５ｇ，２０  ｍｍｏｌ）（Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃａｌ  ＲＥＳ．２０１５
，１０２）の無水ジクロロメタン溶液と、１．０ｍｌの無水ピリジンを滴下した。室温で２時間攪拌した後、反応を停止させた。２００ｍｌのジクロロメタンで希釈し、飽和塩化ナトリウムで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮した。カラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１０：１   〜２：１）により、それぞれ８．２２ｇ（７０％）、１．２ｇ（１０％）のα、β−グリコシル化生成物を得た。ここで、β−グリコシル化生成物（５００  ｍｇ，０．８６  ｍｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦ（８．０  ｍｌ）に溶解し、希釈し、飽和塩化ナトリウムで洗浄し、乾燥し、ＭｇＳＯ４で濃縮して、２５０ｍｇのＴＢＳ生成物を得た。得られた生成物３００  ｍｇ（０．５４ｍｍｏｌ）を３．０ｍｌのジクロロメタンに溶解し、０℃で０．５ｍｌの３３％ＣＨ３ＮＨ２のメタノール溶液を滴下し、０℃で１時間反応させた。すばやく減圧し濃縮して、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝２０：１〜６：１）を、４５ｍｇのＰＬ１７２（０．１３  ｍｍｏｌ）を得た。
ＥＳＩ（＋）−ＭＳ：３４０．３  ［Ｍ＋１］  ＋；  Ｈ−  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００  ＭＨｚ）δ７．５３（ｄ，Ｊ＝１６Ｈｚ，１Ｈ）７．１４（ｄ，Ｊ＝４１Ｈｚ，１Ｈ）、７．０５（ｄｄ，Ｊ１＝８Ｈｚ，Ｊ２＝１Ｈｚ，１Ｈ）、６．８０（ｄ  ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、６．５６（ｄ，Ｊ＝１６Ｈｚ，１Ｈ）、５．５６（ｄ，Ｊ＝４Ｈｚ，１Ｈ）、３．８９（ｓ，３Ｈ）、３．８５−３．８３（ｍ，１Ｈ）、３．５４  −３．５２（ｍ，１Ｈ）、３．４４（ｔ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１Ｈ）、３．３１−３．３（ｍ，１Ｈ）１．２７（ｄ，Ｊ＝４Ｈｚ，３Ｈ）。
【０１００】
本発明において言及されるすべて文献は、個別に参照として引用されると同様に、本出願に参照として引用される。また、本発明の上記教示内容を読んだ後、当業者は本発明に様々な変更又は修正を加えることができ、これらの同等の形態もまた、本出願に添付した特許請求の範囲によって定義される範囲内にあることを理解されるはずである。
【図１】
2021512958.tif 000048
【図２】
2021512958.tif 000049
【図３】
2021512958.tif 000050
【図４】
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【図５】
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【図６】
2021512958.tif 000053
【図７】
2021512958.tif 000054
【図８】
2021512958.tif 000055
【図９】
2021512958.tif 000056
【図１０】
2021512958.tif 000057
【図１１】
2021512958.tif 000058
【図１２】
2021512958.tif 000059
【図１３】
2021512958.tif 000060
【図１４】
2021512958.tif 000061
【図１５（ａ）】
2021512958.tif 000062
【図１５（ｂ）】
2021512958.tif 000063
【図１６（ａ）】
2021512958.tif 000064
【図１６（ｂ）】
2021512958.tif 000065
【図１６（ｃ）】
2021512958.tif 000066
【図１６（ｄ）】
2021512958.tif 000067
【図１７】
2021512958.tif 000068
【図１８（ａ）】
2021512958.tif 000069
【図１８（ｂ）】
2021512958.tif 000070
【図１８（ｃ）】
2021512958.tif 000071
【図１８（ｄ）】
2021512958.tif 000072
【手続補正書】
【提出日】令和2年10月16日(2020.10.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
好ましい例としては、前記化合物は、下記のものを含む：
【化７】
2021512958.tif 000073
ＰＬ２０１とも呼ばれ；
【化８】
2021512958.tif 000074
ＰＬ２０２とも呼ばれ；
【化９】
2021512958.tif 000075
ＰＬ１７２とも呼ばれ；及び
【化１０】
2021512958.tif 000076
ＰＬ１７１とも呼ばれる。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３０】
【図１】ＰＬ２０１は、ＡＤマウスのＭｏｒｒｉｓ水迷路の指標を改善させる。
【図２】ＰＬ２０１は、インビボで神経発生を促進させる。
【図３】ＰＬ２０１は、インビトロでの神経幹細胞増殖のＡβ阻害を緩和させる。
【図４】ＰＬ２０１は、神経炎症を阻害させる。
【図５】ＰＬ２０１は、体内のＡβプラークの数を減少させる。
【図６】ＰＬ２０１は、インビトロでＡβ生成を減少させる。
【図７】ＰＬ２０１は、ミトコンドリア膜電位を増加させる。
【図８】ＰＬ２０１は、ＡＭＰＫリン酸化レベルを増加させる。
【図９】ＰＬ２０１は、マウスのロッドクライミング法の検出指標を改善させる。
【図１０】ＰＬ２０１は、線条体ドーパミン作動性神経線維の含有量を増加させる。
【図１１】ＰＬ２０２は、Ａβ生成を減少させる。
【図１２】ＰＬ２０２は、炎症性因子ＩＬ−１βおよびｉＮＯＳの発現を減少させる。
【図１３】ＰＬ１７１は、Ａβ生成を減少させる。
【図１４】ＰＬ１７２は、Ａβ生成を減少させる。
【図１５ａ】ＰＬ２０２のＮＭＲスペクトルである。
【図１５ｂ】ＰＬ２０２の１Ｄ  ＮＯＥスペクトルである。
【図１６ａ】ＰＬ１７１のＮＭＲスペクトルである。
【図１６ｂ】ＰＬ１７１の１Ｄ  ＮＯＥスペクトルである。
【図１６ｃ】ＰＬ１７１の１Ｄ  ＮＯＥスペクトルである。
【図１６ｄ】ＰＬ１７１の１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹスペクトルである。
【図１７】ＰＬ１７２のＮＭＲスペクトルである。
【図１８ａ】黒質ＴＨ染色図であり、Ｈ２Ｏ＋ＮＳである。
【図１８ｂ】黒質ＴＨ染色図であり、ＰＬ２０１＋ＮＳである。
【図１８ｃ】黒質ＴＨ染色図であり、Ｈ２Ｏ＋ＭＰＴＰである。
【図１８ｄ】黒質ＴＨ染色図であり、ＰＬ２０１＋ＭＰＴＰである。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４７】
本発明の好ましい態様として、前記化合物には、式ＩＩ（ＰＬ２０１）、ＩＩＩ（ＰＬ２０２）、ＩＶ（ＰＬ１７２）、およびＶ（ＰＬ１７１）で表される下記の化合物が含まれる。式ＩＩＩおよび式Ｖの化合物が特に好ましい。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７４】
本発明により提供される式（ＩＩ）の化合物（ＰＬ２０１）、式（ＩＩＩ）の化合物（ＰＬ２０２）、式（ＩＶ）の化合物（ＰＬ１７２）および式（V）の化合物（ＰＬ１７１）は、上記使用において優れた効果を有する。ここで、特に式（ＩＩＩ）および化合物（Ｖ）の効果が優れている。
［医薬組成物］
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８３】
実施例２．  ＰＬ２０１はインビボで神経発生を促進させる。
神経発生の異常、神経炎症およびＡβプラークの沈着は、ＡＤの認知能力の低下と密接に関連している。したがって、本実施例では、ＰＬ２０１が神経発生に影響を与えるかどうかをさらに研究した。
本発明者らは、ＡＤマウス（５〜６ヶ月齢程のＡＤマウスを選択）に対してＰＬ２０１投与実験を行い、各マウスにＰＬ２０１を１００μｌ胃内投与し、投与濃度は１０ｍｇ／ｋｇ体重であった。これに対して、対照グループには、１００μｌの水を１日１回、持続的に９０日間投与し、６０日目から、マウスの体重５０ｍｇ／ｋｇの５−ブロモ−２’−デオキシウリジン（ＢｒｄＵ）を腹腔内注射し始めた。毎日１回、合計７日間の注射し、９０日間投与後、麻酔されたマウスにＰＦＡを灌流し、脳全体を採取して次の実験に供する。
得られた全脳について、マウス海馬のニューロンマーカーＮｅｕＮの検出を行った。ＰＦＡ灌流マウスの脳を４％ＰＦＡで２４時間固定し続け、その後３０％ショ糖固定液で７２時間静置した。処理した後、小脳を取り出し、濾紙の上に脳の嗅球を垂直に置き、−８０℃で少なくとも２４時間保存した。垂直に３０μｍの厚さに冷凍下縦切りにし、マウスの脳アトラスに従ってＤＧ部を取り、合計８×９＝７２枚に切り、合計２．１６  ｍｍで、スライス順に並んで、８つのスライスごとに一つを選んで、脳アトラスのグループにまとめて、染色を行った。スライスした脳スライスを組織保護溶液（３０％スクロース、３０％エチレングリコール、０．１ＭＰＢ）に入れ、−２０℃で半年以上保存可能である。染色中、脳スライスの一つのセットを取り、室温でブロッキング溶液（１０％ロバ血清、０．３％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、ＰＢＳ）で４５分間ブロックし、一次抗体を加え、４℃で一晩インキュベート（一次抗体希釈率：ラット抗ＢｒｄＵ  ，１：２０００；ウサギ抗Ｋｉ６７，１：１０００；ヤギ抗Ｄｃｘ，１：２００；マウス抗ＮｅｕＮ，１：２００；ヤギ抗Ｓｏｘ２，１：６０）した。その後、適切な蛍光二次抗体を入れ、室温で１時間インキュベートした。ＤＡＰＩで細胞核を染色した。その後、染色された脳スライスをオリンパスＦＶ１００Ｉ又はライカＳＰ−８で撮影した。陽性又は二重染色された細胞の数をＩｍａｇｅ  Ｐｒｏ  ｐｌｕｓソフトウェアで分析した。ＢｒｄＵとの共染色のために、脳スライスに対して抗原修復する必要があるため、血清でブロックする前に、抗原修復溶液（１０  ｍｍクエン酸ナトリウム、ｐＨ  ６．５）で９５℃で２０分間処理した。ＢｒｄＵ染色を行った。血清でブロックする前に、脳スライスを２Ｍ塩酸で３７℃で３０分間処理した後、０．１Ｍホウ酸バッファー（ｐＨ  ８．５）で洗浄した。
本発明者らは、図２に示すように、対照マウスと比較して、ＰＬ２０１投与マウスは、海馬においてより多くのＢｒｄＵ／ＮｅｕＮ二重陽性新生ニューロンを有することを見出した。
上記結果に示されるように、ＰＬ２０１がマウスの神経発生を大幅に促進することができる。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９７】
実施例１６．ＰＬ２０２の合成
【化３０】
2021512958.tif 000077
２，３，４−Ｏ−トリアセチルラムノース（５．８ｇ，２０  ｍｍｏｌ）を１００ｍｌの無水ジクロロメタンに溶解し、氷浴に（４−Ｏ−ＴＢＳ）−フェルラ酸クロリド（６．５２ｇ，２０  ｍｍｏｌ）（Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃａｌ  Ｒｅｓ．２０１５，１０２）の無水ジクロロメタン溶液および１．０ｍｌの無水ピリジンを滴下した。室温で２時間攪拌した後、反応を停止させた。２００ｍｌのジクロロメタンを添加して希釈し、飽和塩化ナトリウムで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮した。カラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝３：１）により、それぞれ９．１２ｇ（７９％）、１．１ｇ（９％）のαおよびβ−グリコシル化生成物を得た。β−グリコシル化生成物（４９０  ｍｇ，０．８５  ｍｍｏｌ）を乾燥したＴＨＦ（８．０  ｍｌ）に溶解し、反応はＴＢＡＦの作用の下で行い、希釈し、飽和塩化ナトリウムで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮して、２７５ｍｇのＴＢＳ生成物を得た。得られた生成物２７０ｍｇ（０．５８  ｍｍｏｌ）をメタノール３．０  ｍｌに溶解し、０℃で３３％ＣＨ３ＮＨ２のメタノール溶液０．５  ｍｌを滴下し、０℃で１時間反応させた。すばやく減圧し濃縮して、カラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：メタノール＝６：１）により、５９ｍｇのＰＬ２０２（０．１７  ｍｍｏｌ）を得た。ＥＳＩ（＋）−ＭＳ：３４１．３  ［Ｍ＋１］  ＋；  Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，  ４００  ＭＨｚ）δ７．８０（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１Ｈ）、７．２３（ｄ，Ｊ＝１Ｈｚ，１Ｈ）、７．１２（ｄｄ，Ｊ１＝８Ｈｚ，Ｊ２＝１Ｈｚ，１Ｈ）、６．８４（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ）、６．４２（ｄ，Ｊ＝１３Ｈｚ，１Ｈ）、５．７５（ｄ，Ｊ＝１Ｈｚ，１Ｈ）、３．９９（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ）、３．９２（ｓ，３Ｈ）、３．５５  −３．５３（ｍ，１Ｈ）、３．４１−３．３７（ｍ，２Ｈ）、１．３４（ｄ，Ｊ＝４Ｈｚ，３Ｈ）。
その配置を検証するために、１Ｄ  ＮＯＥ実験を行い、ＰＬ２０２の１Ｄ  ＮＯＥスペクトルを得、得られたＰＬ２０２がβ配置であることが証明された。図１５に示されている。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９８】
実施例１７．ＰＬ１７１の合成
【化３１】
2021512958.tif 000078
１−アミノ−２，３，４−Ｏ−トリアセチルラムノース（５．８６ｇ，１９ｍｍｏｌ）を１００ｍｌの無水ジクロロメタンに溶解し、氷浴下に（４−Ｏ−ＴＢＳ）−フェルラ酸クロリド（６．５ｇ，２０  ｍｍｏｌ）（Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃａｌ  ＲＥＳ．２０１５，１０２）の無水ジクロロメタン溶液および１．０  ｍｌの無水ピリジンを滴下した。室温で２時間攪拌した後、反応を停止させた。２００ｍｌのジクロロメタンで希釈し、飽和塩化ナトリウムで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮した。カラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１０：１−２：１）により、それぞれ８．２２ｇ（７０％）、１．２ｇ（１０％）のβおよびα−グリコシル化生成物を得た。β−グリコシル化生成物（５００  ｍｇ，０．８６  ｍｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦ（８．０  ｍｌ）に溶解し、反応は、ＴＢＡＦの作用の下で行い、希釈し、飽和塩化ナトリウムで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮して、３００ｍｇのＴＢＳ生成物を得た。得られた生成物３００ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）を塩化メチレン３．０ｍｌに溶解し、０℃で３３％ＣＨ３ＮＨ２のメタノール溶液０．５  ｍｌを滴下し、０℃で１時間反応させた。すばやく減圧して濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝２０：１〜６：１）により、７０ｍｇのＰＬ１７１（０．２１  ｍｍｏｌ）を得た。ＥＳＩ（＋）−ＭＳ：３４０．３  ［Ｍ＋１］  ＋；  Ｈ−  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００  ＭＨｚ）δ７．５６（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１Ｈ）７．１９（ｄ，Ｊ＝４Ｈｚ，１Ｈ）、７．０７（ｄｄ，Ｊ１＝６Ｈｚ，Ｊ２＝１Ｈｚ，１Ｈ）、６．８２（ｄ  ，Ｊ＝４Ｈｚ，１Ｈ）、６．６２（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１Ｈ）、５．２８（ｄ，Ｊ＝１Ｈｚ，１Ｈ）、３．９２（ｓ，３Ｈ）、３．８５（ｄ，Ｊ＝４Ｈｚ，１Ｈ  ）、３．５４−３．５２（ｍ，１Ｈ）、３．３８−３．３４（ｍ，２Ｈ）、１．３２（ｄ，Ｊ＝４Ｈｚ，３Ｈ）。
その配置を検証するために、１Ｄ  ＮＯＥ実験と１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹ（相関分光、ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ  ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）実験を行って、その１Ｄ  ＮＯＥ、１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹスペクトルを得、得られたＰＬ１７１がβ配置であることが証明された。図１６に示されている。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９９】
実施例１８．ＰＬ１７２の合成
【化３２】
2021512958.tif 000079
１−アミノ−２，３，４−Ｏ−トリアセチルラムノース（５．８６ｇ，１９ｍｍｏｌ）を１００ｍｌの無水ジクロロメタンに溶解し、氷浴下に（４−Ｏ−ＴＢＳ）−フェルラ酸クロリド（６．５ｇ，２０  ｍｍｏｌ）（Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃａｌ  ＲＥＳ．２０１５，１０２）の無水ジクロロメタン溶液と、１．０ｍｌの無水ピリジンを滴下した。室温で２時間攪拌した後、反応を停止させた。２００ｍｌのジクロロメタンで希釈し、飽和塩化ナトリウムで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮した。カラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１０：１ 〜２：１）により、それぞれ８．２２ｇ（７０％）、
１．２ｇ（１０％）のβ、α−グリコシル化生成物を得た。ここで、α−グリコシル化生成物（５００  ｍｇ，０．８６  ｍｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦ（８．０  ｍｌ）に溶解し、反応はＴＢＡＦの作用の下で行い、希釈し、飽和塩化ナトリウムで洗浄し、乾燥し、ＭｇＳＯ４で濃縮して、２５０ｍｇのＴＢＳ生成物を得た。得られた生成物３００  ｍｇ（０．５４ｍｍｏｌ）を３．０ｍｌのジクロロメタンに溶解し、０℃で０．５ｍｌの３３％ＣＨ３ＮＨ２のメタノール溶液を滴下し、０℃で１時間反応させた。すばやく減圧し濃縮して、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝２０：１〜６：１）を、４５ｍｇのＰＬ１７２（０．１３  ｍｍｏｌ）を得た。
ＥＳＩ（＋）−ＭＳ：３４０．３  ［Ｍ＋１］  ＋；  Ｈ−  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００  ＭＨｚ）δ７．５３（ｄ，Ｊ＝１６Ｈｚ，１Ｈ）７．１４（ｄ，Ｊ＝４１Ｈｚ，１Ｈ）、７．０５（ｄｄ，Ｊ１＝８Ｈｚ，Ｊ２＝１Ｈｚ，１Ｈ）、６．８０（ｄ  ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、６．５６（ｄ，Ｊ＝１６Ｈｚ，１Ｈ）、５．５６（ｄ，Ｊ＝４Ｈｚ，１Ｈ）、３．８９（ｓ，３Ｈ）、３．８５−３．８３（ｍ，１Ｈ）、３．５４  −３．５２（ｍ，１Ｈ）、３．４４（ｔ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１Ｈ）、３．３１−３．３（ｍ，１Ｈ）１．２７（ｄ，Ｊ＝４Ｈｚ，３Ｈ）。
【手続補正９】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物又は前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩。
【化１】
2021512958.tif 000080
［ただし、
【化２】
2021512958.tif 000081
は、６員の複素環であり、ＸはＯであり；
ＹはＯ又はＮから選ばれ；  Ｒ１〜Ｒ４は、独立して水素、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ２〜Ｃ４アルケニル、Ｃ２〜Ｃ４アルキニル、ハロゲンからなる群から選ばれ；又は、Ｒ１〜Ｒ４における２つの隣接する基が互いに連結され、親環と一緒に環構造を形成する。］
【請求項２】
Ｒ１〜Ｒ４は、独立して水素、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ２アルキルからなる群から選ばれることを特徴とする、請求項１に記載の式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物又は前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項３】
前記化合物は、下記の式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）又は（Ｖ）で表される化合物であることを特徴とする、請求項１に記載の式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物又は前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩。
【化３】
2021512958.tif 000082
【化４】
2021512958.tif 000083
【化５】
2021512958.tif 000084
【請求項４】
神経変性疾患、うつ病又は脳卒中の予防、緩和又は治療のための医薬又は医薬キットとしての使用のための請求項１〜３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物又は前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項５】
神経変性疾患は：
脳の神経炎症の発生を特徴とする神経変性疾患；又は
Ａβ生成の著しい増加を特徴とする神経変性疾患；又は
学習および記憶能力の著しい低下を特徴とする神経変性疾患；又は
神経幹細胞機能の低下を特徴とする神経変性疾患；又は
運動協調能の低下を特徴とする神経変性疾患；又は
黒質ドーパミン作動性ニューロンの数の減少を特徴とする神経変性疾患；又は
線条体ドーパミン作動性神経線維の含有量の減少を特徴とする神経変性疾患であることを特徴とする、請求項４に記載の使用のための式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物又は前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項６】
前記神経変性疾患には、アルツハイマー病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症が含まれることを特徴とする、請求項５に記載の使用のための式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物又は前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項７】
神経炎症の抑制、神経幹細胞の機能の促進、Ａβ生成の減少、黒質ドーパミン作動性ニュウーロンの数の増加、又は線条体ドーパミン作動性神経線維の含有量の増加のための組成物、試薬キット又は医薬キットとしての使用のための請求項１〜３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物又は前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項８】
前記化合物は、下記の式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）または（Ｖ）で表される化合物を含むことを特徴とする、請求項４〜７のいずれか１項に記載の使用のための式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物又は前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩。
【化６】
2021512958.tif 000085
【化７】
2021512958.tif 000086
【化８】
2021512958.tif 000087
【化９】
2021512958.tif 000088
【請求項９】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物又は前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体を含むことを特徴とする、医薬組成物。
【請求項１０】
前記医薬組成物の剤形は、粉末、散剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、徐放剤、制御放出剤、注射剤、点滴剤、懸濁剤を含むことを特徴とする、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物又は前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩、又は
請求項９又は１０に記載の医薬組成物を含むことを特徴とする、医薬キット。
【請求項１２】
神経変性疾患、うつ病又は脳卒中を予防、緩和又は治療するのに使用するための請求項１〜３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物又は前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項１３】
神経変性疾患が、
脳の神経炎症の発生を特徴とする神経変性疾患；又は
Ａβ生成の著しい増加を特徴とする神経変性疾患；又は
学習および記憶能力の著しい低下を特徴とする神経変性疾患；又は
神経幹細胞機能の低下を特徴とする神経変性疾患；又は
運動協調能の低下を特徴とする神経変性疾患；又は
黒質ドーパミン作動性ニューロンの数の減少を特徴とする神経変性疾患；又は
線条体ドーパミン作動性神経線維の含有量の減少を特徴とする神経変性疾患であり、
好ましくは、  前記神経変性疾患には、アルツハイマー病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症が含まれることを特徴とする、請求項１２に記載の使用のための式（Ｉ）で表される化合物又はその異性体、溶媒和物又は前駆体、又はそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項１４】
式ＩＩＩ、ＩＶ又はＶの化合物を調製する方法であって、
式ＩＩＩの化合物を調製する方法が、
β−ラムノピラノシドを、フッ化テトラブチルアンモニウムと反応させて、式ＩＩＩで表される化合物を得る工程を含む方法である、
【化１０】
2021512958.tif 000089
又は、
式ＩＶの化合物を調製する方法が、α−１−アミノラムノシドと、フッ化テトラブチルアンモニウムとを反応させて、式ＩＶで表される化合物を得る工程を含む方法である、
【化１１】
2021512958.tif 000090
又は、式Ｖの化合物を調製する方法が、β−１−アミノラムノシドと、フッ化テトラブチルアンモニウムとを反応させて、式Ｖで表される化合物を得る工程を含む方法である、式ＩＩＩ、ＩＶ又はＶの化合物を調製する方法。
【化１２】
2021512958.tif 000091
【請求項１５】
式ＩＩＩの化合物を調製する方法において、
前記β−ラムノピラノシドは、２，３，４−Ｏ−トリアセチルラムノースと（４−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−フェルラ酸クロリドとを反応させることにより得られる、又は、
式ＩＶの化合物を調製する方法において、前記α−１−アミノラムノシドが、２，３，４−Ｏ−トリアセチル−１−アミノラムノースと、（４−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−フェルラ酸クロリドとを反応させることにより得られる、又は、
式Ｖの化合物を調製する方法において、β−１−アミノラムノシドは、２，３，４−Ｏ−トリアセチル−１−アミノラムノースと、（４−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−フェルラ酸クロリドとを反応させることにより得られる請求項１４に記載の調製方法。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１６ａ
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１６ａ】
2021512958.tif 000092
【手続補正１１】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１６ｂ
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１６ｂ】
2021512958.tif 000093
【手続補正１２】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１６ｃ
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１６ｃ】
2021512958.tif 000094
【手続補正１３】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１６ｄ
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１６ｄ】
2021512958.tif 000095
【手続補正１４】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１７】
2021512958.tif 000096
【国際調査報告】
2021512958.tif 000097
2021512958.tif 000098
2021512958.tif 000099
2021512958.tif 000100
2021512958.tif 000101
2021512958.tif 000102