(57)【要約】  本発明は、コロイドビスマスペクチン又はコロイドビスマスペクチン含有製剤中の遊離ビスマスの測定方法を提供し、この測定方法は、コロイドビスマスペクチン又はコロイドビスマスペクチン含有製剤に体積濃度が７〜２０％のエタノール水溶液を加え、振とうして均一に溶解・分散させ、若しくは体積濃度が５％以下のエタノール水溶液を加え、振とうして分散させた後、分散液中のエタノールの体積濃度が３０〜５０％となるまでエタノールを加え、振とうして均一に溶解・分散させ、コロイド溶液を得て、遠心分離して上澄みを取り、錯化滴定法又は紫外分光光度法により測定して、コロイドビスマスペクチン又はコロイドビスマスペクチン含有製剤中の遊離ビスマスの含有量を算出する。エタノール水溶液は遊離ビスマスに対して優れた溶解性を有するだけでなく、コロイドビスマスペクチン分子をある程度ブロックして、コロイドビスマスペクチンによるビスマス塩の動的放出プロセスを効果的に防止することができ、本発明では、エタノール水溶液を用いてコロイドビスマスペクチンを分散させて遊離ビスマスを測定するものであり、遊離ビスマスの測定結果がより正確で確実である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
コロイドビスマスペクチン又はコロイドビスマスペクチン含有製剤中の遊離ビスマスの測定方法であって、
コロイドビスマスペクチン又はコロイドビスマスペクチン含有製剤をプラスチック製遠心分離管に入れ、体積濃度が７〜２０％のエタノール水溶液を加え、振とうして均一に溶解・分散させ、コロイド溶液を得て、遠心分離して上澄みを取り、錯化滴定法又は紫外分光光度法により上澄み中のビスマス含有量を測定して、コロイドビスマスペクチン又はコロイドビスマスペクチン含有製剤中の遊離ビスマスの含有量を算出する、測定方法。
【請求項２】
前記エタノール水溶液の体積濃度は１０〜１６％である、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
コロイドビスマスペクチン又はコロイドビスマスペクチン含有製剤中の遊離ビスマスの測定方法であって、
コロイドビスマスペクチン又はコロイドビスマスペクチン含有製剤をプラスチック製遠心分離管に入れ、体積濃度が５％以下のエタノール水溶液を加え、振とうして分散させた後、分散液中のエタノールの体積濃度が３０〜５０％となるまでエタノールを加え、振とうして均一に溶解・分散させ、コロイド溶液を得て、遠心分離して上澄みを取り、錯化滴定法又は紫外分光光度法により上澄み中のビスマス含有量を測定して、コロイドビスマスペクチン又はコロイドビスマスペクチン含有製剤中の遊離ビスマスの含有量を算出する、測定方法。
【請求項４】
前記分散液中のエタノールの体積濃度は３０〜４０％である、ことを特徴とする請求項３に記載の方法。
【請求項５】
均一に溶解・分散させた前記コロイド溶液を、１００００回転／ｍｉｎ以上の回転数で少なくとも５ｍｉｎ高速遠心分離する、ことを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記コロイド溶液を１２０００回転／ｍｉｎの回転数で３０ｍｉｎ高速遠心分離する、ことを特徴とする請求項５に記載の方法。
【請求項７】
まず、前記コロイド溶液を７０００〜１００００回転／ｍｉｎの回転数で少なくとも５ｍｉｎ高速遠心分離し、次に、遠心分離液を０．１μｍ以下のろ過膜でろ過する、ことを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記コロイド溶液を８０００回転／ｍｉｎの回転数で１０ｍｉｎ遠心分離する、ことを特徴とする請求項７に記載の方法。
【請求項９】
まず、前記コロイド溶液を３０００〜７０００回転／ｍｉｎの回転数で少なくとも１０ｍｉｎ遠心分離し、遠心分離液と低級アルコールを同じ比率で混合した後、５０００〜７０００回転／ｍｉｎの回転数で少なくとも１０ｍｉｎ遠心分離する、ことを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記２回の遠心分離は、すべて６０００回転／ｍｉｎの回転数で１０ｍｉｎ行われる、ことを特徴とする請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記低級アルコールは、エタノール、メタノール又はイソプロパノールである、ことを特徴とする請求項９又は１０に記載の方法。
【請求項１２】
まず、前記コロイド溶液を３０００〜７０００回転／ｍｉｎの回転数で少なくとも１０ｍｉｎ遠心分離し、遠心分離液と低級アルコールを同じ比率で混合した後、３０００〜７０００回転／ｍｉｎの回転数で少なくとも１０ｍｉｎ遠心分離し、遠心分離液を０．１μｍ以下のろ過膜でろ過する、ことを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記低級アルコールは、エタノール、メタノール又はイソプロパノールである、ことを特徴とする請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
コロイドビスマスペクチン又はコロイドビスマスペクチン含有製剤に一定のエタノール水溶液を加えて、コロイドビスマスペクチン０．０３〜３ｍｇ／ｍｌを含むコロイド溶液とする、ことを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
クエン酸又はアスコルビン酸とヨウ化カリウムの酸性発色溶液で上澄みを発色させ、３８０〜４７０ｎｍの波長で溶液の吸光度を測定し、同じ条件下で濃度が既知のビスマス対照溶液の吸光度と比較し、コロイドビスマスペクチン又はコロイドビスマスペクチン含有製剤中の遊離ビスマスの含有量を計算する、ことを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記吸光度を測定するための溶液を、溶液中のビスマスの濃度が０．１〜５０μｇ／ｍｌとなるまで希釈する、ことを特徴とする請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記発色溶液は、水溶液又は０．２〜２ｍｏｌ／Ｌ硝酸又は酢酸溶液であり、クエン酸又はアスコルビン酸０．５〜１０ｗｔ％、ヨウ化カリウム２．５〜２５ｗｔ％を含有する、ことを特徴とする請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記発色溶液は、水溶液又は１ｍｏｌ／Ｌ硝酸又は酢酸溶液であり、クエン酸又はアスコルビン酸２．５ｗｔ％、ヨウ化カリウム１２．５ｗｔ％を含有する、ことを特徴とする請求項１５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はコロイドビスマスペクチンの品質管理の技術分野に属し、遊離ビスマスの限界を制御して使用の安全性を向上させるためのコロイドビスマスペクチン又はコロイドビスマスペクチン含有製剤中の遊離ビスマスの測定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
コロイドビスマスペクチン及びそのカプセルは、山西振東安特生物製薬有限公司の前身である太原市紅星製薬場により最初に開発された医薬品である。元の国家衛生部は、１９９２年７月に太原市紅星製薬場がこの医薬品を生産・市販することを承認した。
【０００３】
コロイドビスマスペクチンカプセルの活性成分であるコロイドビスマスペクチンは、エタノール、アセトン、エチルエーテルなどの有機溶剤に不溶の黄色粉末であり、水中では安定したコロイド分散系を形成し、人工胃液中ではゲルを形成することができる。コロイドビスマスペクチン及びそのカプセルは、『中国薬局方』２０１５年版２部に記載されている。コロイドビスマスペクチンの含有量は、ビスマス（Ｂｉ）換算で、１４．０〜１６．０％である。コロイドビスマスペクチン５０ｍｇに水５０ｍｌを加えて振とうすると、ｐＨ値は８．５〜１０．５になる。コロイドビスマスペクチン０．２５ｇを１００ｍｌ栓付きメスシリンダに入れ、１００ｍｌとなるまで水を加え、１分間激しく振とうしてコロイド溶液とし、１ｈｒ静置し、コロイド状物の上面が９７ｍｌの目盛りを下回ってはならない。
【０００４】
コロイドビスマスペクチンは胃粘膜の保護剤であり、胃酸環境で安定したゲルを形成し、粘膜表面を覆い、糜爛表面や潰瘍部位を胃酸及びペプシンから隔離し、損傷した粘膜を保護し、潰瘍組織の修復と癒合を促進し、内因性プロスタグランジンと上皮成長因子の産生を刺激し、潰瘍表面の癒合及び炎症の消失を促進し、また、一定の止血作用がある。コロイドビスマスペクチンは、ヘリコバクター・ピロリに作用することができ、ヘリコバクター・ピロリを徹底的に除去することに有利である。
【０００５】
于学敏らによる（コロイドビスマスペクチンカプセルのさまざまな試験研究の結論のまとめ［Ｊ］.中国新薬雑誌，１９９３，２（３）：３４−３６）研究から、人工胃液中の安特（登録商標）コロイドビスマスペクチンカプセルの固有粘度は１２６であり、コロイド状次クエン酸ビスマスカリウムの固有粘度は１７であり、前者は後者の７．４倍である。魯巍峰（中国の健康な成人におけるビスマス剤の吸収及び薬物動態学の研究［Ｄ］．北京：中国協和医科大学，２００１）の報告によれば、安特コロイドビスマスペクチンカプセルは人体によりほとんど吸収されず、コロイド状次クエン酸ビスマス錠剤のＡＵＣ０−２４ｈｒは安特コロイドビスマスペクチンカプセルの１５．６倍である。
【０００６】
さらなる研究から明らかなように、ビスマスの吸収がビスマス粒子のサイズに直接関係している。コロイドビスマスペクチンカプセルがコロイド状次クエン酸ビスマス錠剤よりも吸収が少ないのは、主にコロイドビスマスペクチンのビスマス粒子がコロイド状次クエン酸ビスマスのビスマス粒子よりもはるかに大きいためである。ビスマスイオン、低分子ビスマスのビスマス粒子は小さく、人体への吸収が多く、逆に、高分子ビスマスのビスマス粒子は大きく、人体への吸収が少ない。
【０００７】
コロイドビスマスペクチンは、ペクチンとビスマスで形成される組成が不明確な複合物である。ペクチン分子は高分子物質であり、分子組成が不明確であるため、コロイドビスマスペクチンの合成プロセスには、完全に合成されていないビスマス、及び低分子ビスマスが存在する場合があり、これらは遊離ビスマスと総称される。
【０００８】
重金属であるビスマスは、人体に吸収されすぎると、毒性反応を引き起こし、腎臓、骨関節や中枢神経系などに損傷を与える。
【０００９】
国家食品薬品監督管理総局による『消化管局所作用薬、電解質バランス薬のジェネリック医薬品の品質と有効性の一貫性評価、並びに特別な医薬品の生物学的同等性試験の出願に関連する事項に関するコメント（コメントを求めるドラフト）』には、クエン酸ビスマスカリウム顆粒、クエン酸ビスマスカリウムカプセル、クエン酸ビスマスカリウム錠剤、及びコロイドビスマスペクチンカプセルを含むビスマス剤は、一貫性評価のために最初に選択された１０品種としてリストされ、過量のビスマス塩による既知の毒性や副作用を考慮して、既存の医薬品原料及び製剤の品質基準に遊離ビスマス塩の限界管理を追加する必要があることを強調している。
【００１０】
『中国薬局方』２０１５年版２部では、コロイドビスマスペクチンの含有量は、ビスマス（Ｂｉ）換算で、１４．０〜１６．０％であるが、コロイドビスマスペクチンと遊離ビスマスの区別もなく、遊離ビスマスの含有量については規定がなく、コロイドビスマスペクチンの含有量は、硝酸で溶解した後に錯化滴定を行う方法によって測定されるが、それによっても、高分子コロイドビスマスペクチンと遊離ビスマスを区別することはできない。
【００１１】
ＣＮ１０４８８０４２８Ｂは、コロイドビスマスペクチン又はコロイドペクチン含有製剤中のビスマス含有量の測定方法に関するものであり、コロイドビスマスペクチン又はコロイドペクチン含有製剤を水に分散させ、プロトン酸解離剤を加えて分散液中の水素イオンの濃度を０．８〜１．２ｍｏｌ／Ｌとし、完全に解離した後、遠心分離し、上澄みを分離し、クエン酸又はアスコルビン酸とヨウ化カリウムの発色溶液を加えて発色させ、試験溶液を得て、３８０〜４７０ｎｍの波長で吸光度を測定し、同じ条件下で濃度が既知のビスマス対照溶液の吸光度と比較し、コロイドビスマスペクチン又はコロイドビスマスペクチン含有製剤中のビスマス含有量を計算する。この方法は、分光光度法を使用してコロイドビスマスペクチン又はコロイドビスマスペクチン含有製剤中のビスマス含有量を直接測定する場合、高分子酸根のペクチンによる干渉が深刻であるという問題を解決し、測定結果は高精度で再現性が高く、コロイドビスマスペクチン及びその製剤の品質を効果的に制御できる。
【００１２】
しかしながら、この方法によるコロイドビスマスペクチン又はコロイドペクチン含有ビスマス製剤における最終的なビスマス含有量も遊離ビスマスの含有量を含み、高分子コロイドビスマスペクチンを遊離ビスマスと区別できないことには変わりがない。
【００１３】
中国特許出願２０１８１００００９３０．５は、コロイドビスマスペクチン又はコロイドペクチン含有製剤中の遊離ビスマスの検出方法に関するものであり、コロイドビスマスペクチン又はコロイドペクチン含有製剤をプラスチック製遠心分離管に入れ、水を加えて、１分以内に振とうして、均一に溶解・分散させたコロイド溶液を得て、コロイド溶液を直ちに遠心分離し、上澄みを分離し、錯化滴定法又は紫外分光光度法により上澄み中のビスマス含有量を検出し、コロイドビスマスペクチン又はコロイドビスマスペクチン含有製剤中の遊離ビスマスの含有量を算出する。この方法は、コロイドビスマスペクチン又はコロイドビスマスペクチン含有製剤を水に分散させて遠心分離することによって、高分子コロイドビスマスペクチンを遊離ビスマスと区別するものであり、遊離ビスマスの含有量の測定結果は高精度であり、コロイドビスマスペクチン及びその製剤の品質を効果的に制御できる。
【００１４】
コロイドビスマスペクチンを水に分散させてコロイド溶液とすると、コロイドビスマスペクチンの分子構造におけるビスマス塩とペクチンとの結合力の影響により、コロイドビスマスペクチンには、ビスマス塩が動的に放出されるプロセスがある。したがって、コロイドビスマスペクチン中の遊離ビスマスの含有量を水溶液法で測定する場合、測定結果は時間に依存する。コロイドビスマスペクチンのコロイド溶液を長時間放置すると、得られる遊離ビスマスの測定結果には、本来の遊離ビスマスの含有量だけでなく、経時的に動的に放出されるビスマス塩の含有量も含まれ、測定結果は実際の遊離ビスマスの含有量を反映できない。したがって、２０１８１００００９３０．５の特許出願では、水を加えた後の振とう時間を１ｍｉｎ以下に厳密に制御し、均一に分散させた直後に遠心分離している。これは実験操作にある程度の困難をもたらし、各実験の振とう時間と遠心分離時間を正確に制御できないため、測定結果の再現性が悪くなることは避けられない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本発明の目的は、静置するとコロイドビスマスペクチンのコロイド溶液が遊離ビスマスを放出するという問題を解決し、測定方法を簡素化し、遊離ビスマス測定の再現性が向上するコロイドビスマスペクチン又はコロイドビスマスペクチン含有製剤中の遊離ビスマスの測定方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明は、エタノールを含有する水溶液において一定のゲル化特性を有する安定したコロイド分散系を形成できること、及びコロイドビスマスペクチンと低分子遊離ビスマスには分子量の差異が存在するというコロイドビスマスペクチンの特性を利用して、高速遠心分離手段によってコロイドビスマスペクチンと遊離ビスマスを分離することで、遊離ビスマスの含有量を精密に測定する。
【００１７】
本発明の前記コロイドビスマスペクチン又はコロイドビスマスペクチン含有製剤中の遊離ビスマスの測定方法では、コロイドビスマスペクチン又はコロイドビスマスペクチン含有製剤をプラスチック製遠心分離管に入れ、体積濃度が７〜２０％のエタノール水溶液を加え、振とうして均一に溶解・分散させ、コロイド溶液を得て、遠心分離して上澄みを取り、錯化滴定法又は紫外分光光度法により上澄み中のビスマス含有量を測定して、コロイドビスマスペクチン又はコロイドビスマスペクチン含有製剤中の遊離ビスマスの含有量を算出する。
【００１８】
さらに、前記エタノール水溶液の体積濃度は好ましくは１０〜１６％である。
【００１９】
適切な濃度のエタノール水溶液は、コロイドビスマスペクチン分子を容易に均一に分散させるだけでなく、コロイドビスマスペクチン中の遊離ビスマスを完全に溶出させることができ、且つ、エタノールはコロイドビスマスペクチン分子に対して一定のゲル化作用を有するため、コロイドビスマスペクチン分子の安定性を向上させ、加水分解してビスマス塩を放出することを遅延させる。したがって、本発明の上記方法を使用してコロイドビスマスペクチンを溶解・分散させると、溶解分散時間を厳密に制御する必要がなく、比較的安定なコロイド溶液を得ることができ、遠心分離処理により高分子コロイドビスマスペクチンを沈降させると、遊離ビスマスの測定に使用することができる、干渉なしに要件を満たす上澄みを得ることができる。
【００２０】
しかしながら、エタノール水溶液の濃度が高すぎる場合、分解してビスマス塩を放出するというコロイドビスマスペクチン分子の挙動をより効果的に抑制できる反面、遊離ビスマスの迅速な溶出も妨げられ、その結果、測定結果が低下する。したがって、本発明は、適切な濃度のエタノール水溶液でコロイドビスマスペクチンを溶解・分散できることに加えて、下記方法によってコロイドビスマスペクチン又はコロイドビスマスペクチン含有製剤中の遊離ビスマスの含有量を測定することもできる。この場合も、遊離ビスマスの迅速な溶出及びコロイドビスマスペクチン分子の安定性が確保できる。
【００２１】
コロイドビスマスペクチン又はコロイドビスマスペクチン含有製剤をプラスチック製遠心分離管に入れ、体積濃度が５％以下のエタノール水溶液を加え、振とうして分散させた後、エタノールを加えて分散液中のエタノールの体積濃度を３０〜５０％に調整し、振とうして均一に溶解・分散させ、コロイド溶液を得て、遠心分離して上澄みを取り、錯化滴定法又は紫外分光光度法により上澄み中のビスマス含有量を測定して、コロイドビスマスペクチン又はコロイドビスマスペクチン含有製剤中の遊離ビスマスの含有量を算出する。
【００２２】
さらに、前記分散液中のエタノールの体積濃度は好ましくは３０〜４０％である。
【００２３】
本発明の上記方法では、まず、低濃度のエタノール溶液を加え、振とうして分散させて遊離ビスマスを迅速に溶出し、均一な分散を必要とせず、次にエタノール濃度を増加させてゲルを形成し、コロイドビスマスペクチン分子の安定性を増加させ、分解してビスマス塩を放出するという挙動を抑制する。
【００２４】
コロイドビスマスペクチンはエタノール中で一定のゲル化特性を有している。実験は、本発明の上記２つの方法で使用されるエタノール水溶液が遊離ビスマスに対して優れた溶解性を有するだけでなく、コロイドビスマスペクチン分子をある程度ブロックして、コロイドビスマスペクチンによるビスマス塩の動的放出を効果的に防止できることを示している。一定濃度のエタノール水溶液を使用すると、コロイドビスマスペクチンを完全に分散させることができ、遊離ビスマスの含有量は一定時間内に安定する傾向があり、溶液の静置時間に伴い変化せず、遊離ビスマスとコロイドビスマスペクチンのコロイド溶液が一定のバランスを取り、遊離ビスマスの測定結果がより正確で確実になり、実際の遊離ビスマスの含有量に近く、そして、実験結果の再現性に寄与する。
【００２５】
エタノール水溶液中に形成されているコロイドビスマスペクチン分散系の粒度分布結果の分析によれば、コロイドビスマスペクチンのビスマス分子は基本的に０．１μｍより大きい。しかし、エタノール水溶液中に形成されている安定したコロイドビスマスペクチン分散系の粘度が高いため、直接濾過は非常に困難である。したがって、本発明で均一に溶解・分散させた前記コロイド溶液を１００００回転／ｍｉｎ以上の回転数で少なくとも５min高速遠心分離することにより、エタノール水溶液に分散させた高分子コロイドビスマスペクチンを完全に沈降させ、遊離ビスマスの測定に使用することができる、干渉のないテストに必要な上澄みを得ることができる。
【００２６】
本発明では、遠心分離条件は、最も好ましくは、１２０００回転／ｍｉｎの回転数で３０ｍｉｎ高速遠心分離する。
【００２７】
さらに、本発明では、まず、前記コロイド溶液を７０００〜１００００回転／ｍｉｎの回転数で少なくとも５ｍｉｎ高速遠心分離し、次に、遠心分離液を０．１μｍ以下のろ過膜でろ過することによっても、干渉のないテストに必要な遊離ビスマス検出用の上澄みを得ることができる。
【００２８】
上記方法では、遠心分離条件は、最も好ましくは、８０００回転／ｍｉｎの回転数で１０ｍｉｎ遠心分離する。
【００２９】
本発明では、まず、前記コロイド溶液を３０００〜７０００回転／ｍｉｎの回転数で少なくとも１０ｍｉｎ遠心分離し、遠心分離液と低級アルコールを同じ比率で混合した後、５０００〜７０００回転／ｍｉｎの回転数で少なくとも１０ｍｉｎ遠心分離するようにしてもよく、それによっても、干渉のないテストに必要な遊離ビスマス検出用の上澄みを得ることができる。
【００３０】
上記方法では、遠心分離条件は、最も好ましくは、２回の遠心分離ともに６０００回転／ｍｉｎの回転数で１０ｍｉｎ遠心分離する。
【００３１】
さらに、また、本発明では、まず、前記コロイド溶液を３０００〜７０００回転／ｍｉｎの回転数で少なくとも１０ｍｉｎ遠心分離し、遠心分離液と低級アルコールを同じ比率で混合した後、３０００〜７０００回転／ｍｉｎの回転数で少なくとも１０ｍｉｎ遠心分離し、次に、遠心分離液を０．１μｍ以下のろ過膜でろ過するようにしてもよく、それにより得られた上澄みは同様に遊離ビスマスの検出要件を満たす。
【００３２】
前記低級アルコールは、エタノール、メタノール又はイソプロパノールなど、一般的なアルコール系有機溶剤である。
【００３３】
コロイドビスマスペクチンは、コロイド特性が高く、高粘度であり、物体の表面へ粘着しやすいことを特徴とする。コロイドビスマスペクチンのコロイド溶液を調製する場合、表面エネルギーの高いガラス容器に入れて溶解・分散させると、コロイドビスマスペクチンがゲル状物を形成して、ガラス容器の表面に付着しやすいため、均一に分散させにくく、持続的な激しい振とうが必要とされる。したがって、本発明では、好ましくは、コロイドビスマスペクチンが迅速に分散できるように、表面エネルギーの小さいＰＰ（ポリプロピレン）、ＰＣ（ポリカーボネート）、ＰＥ（ポリエチレン）などのプラスチック容器が使用される。
【００３４】
さらに、本発明では、好ましくは、コロイドビスマスペクチン又はコロイドビスマスペクチン含有製剤にエタノール水溶液を加え、コロイドビスマスペクチン０．０３〜３ｍｇ／ｍｌを含む均一な分散溶液とする。
【００３５】
好ましくは、本発明では、コロイドビスマスペクチン又はコロイドビスマスペクチン含有製剤中の遊離ビスマスの含有量は紫外分光光度法によって測定され、即ち、クエン酸又はアスコルビン酸とヨウ化カリウムの酸性発色溶液で上澄みを発色させ、３８０〜４７０ｎｍの波長で溶液の吸光度を測定し、同じ条件下で濃度が既知のビスマス対照溶液の吸光度と比較し、コロイドビスマスペクチン又はコロイドビスマスペクチン含有製剤中の遊離ビスマスの含有量を計算する。
【００３６】
本発明の上記測定方法では、吸光度を測定するための前記溶液は、試験溶液又はビスマス対照溶液を含み、溶液中のビスマス濃度が０．１〜５０μｇ／ｍｌになるまで希釈する必要がある。好ましくは、前記測定溶液中のビスマス濃度は２〜２０μｇ／ｍｌである。より好ましくは、測定溶液中のビスマス濃度は５〜１２μｇ／ｍｌである。
【００３７】
上記測定方法では、前記発色溶液は、水溶液又は０．２〜２ｍｏｌ／Ｌ硝酸又は酢酸溶液であり、クエン酸又はアスコルビン酸０．５〜１０ｗｔ％、ヨウ化カリウム２．５〜２５ｗｔ％を含有する。
【００３８】
さらに、前記発色溶液は、水溶液又は１ｍｏｌ／Ｌ硝酸又は酢酸溶液であり、クエン酸又はアスコルビン酸２．５ｗｔ％、ヨウ化カリウム１２．５ｗｔ％を含有する。
【００３９】
上記測定方法では、測定遊離ビスマスの含有量は単一波長法によって測定できるが、干渉をより効果的に解消するために、２波長法が使用されてもよい。
【００４０】
その中でも、単一波長法では、３８０〜４７０ｎｍの範囲、好ましくは３９９ｎｍ、４３３ｎｍ、４６３ｎｍの波長が使用され、２波長法では、３９８ｎｍと４３３ｎｍ、又は４３３ｎｍと４６３ｎｍの組み合わせ、好ましくは４３３ｎｍと４６３ｎｍの組み合わせが使用され得る。
【００４１】
本発明による遊離ビスマスの含有量の測定方法は、様々な方法によって調製されるコロイドビスマスペクチンの医薬品原料、及び通常の錠剤、カプセル、分散性錠剤、顆粒剤、乾燥懸濁剤、散剤、腸溶性錠剤、結腸溶性錠剤、腸溶性カプセル、結腸溶性カプセルなどの適切な剤形を含む、コロイドビスマスペクチンを含む任意の単一又は復方製剤に適している。
【発明の効果】
【００４２】
本発明によるコロイドビスマスペクチン又はコロイドビスマスペクチン含有製剤中の遊離ビスマスの測定方法は、特異性が高く、２０１８１００００９３０．５の特許出願における方法よりも簡単であり、操作が容易であり、遊離ビスマス測定の再現性が向上する。
【発明を実施するための形態】
【００４３】
下記実施例は、本発明の好ましい技術案にすぎず、本発明を何ら限定するものではない。当業者にとって、本発明は、様々な修正及び変更を有し得る。本発明の精神及び原理の範囲内で行われるあらゆる修正、同等置換、改良などは、本発明の保護範囲に含まれるものとする。
【００４４】
実施例１
コロイドビスマスペクチン医薬品原料中の遊離ビスマスの含有量の測定
１）発色溶液の調製
アスコルビン酸約２．５ｇ、ヨウ化カリウム約１２．５ｇを取り、２００ｍｌメスフラスコに入れ、水約１００ｍｌを加え、振とうして溶解し、１ｍｏｌ／Ｌ硝酸溶液２５ｍｌを加え、水で希釈して所定の目盛りまで定容し、アスコルビン酸１．２５％、ヨウ化カリウム６．２５％を含む溶液を調製した。
【００４５】
２）ビスマス対照溶液の調製
金属ビスマス約２５０ｍｇを取り、精密に計量して、１００ｍｌメスフラスコに入れ、硝酸６．４ｍｌを加えて溶解し、水で所定の目盛りまで希釈し、ビスマス標準ストック液とした。ビスマス標準ストック液１ｍｌを精密に量り取り、５０ｍｌメスフラスコに入れ、１ｍｏｌ／Ｌ硝酸溶液を加えて所定の目盛りまで希釈し、１ｍｌあたりビスマスを約５０μｇ含む溶液を調製して、ビスマス標準溶液とした。ビスマス標準溶液５ｍｌを精密に量り取り、５０ｍｌメスフラスコに入れ、発色剤で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、ビスマス対照溶液とした。
【００４６】
３）試験溶液の調製
コロイドビスマスペクチン粉末約１５ｍｇをＰＣ遠心分離管に入れ、精密に計量して、１０％エタノール溶液６ｍｌを精密に加え、振とうして均一に溶解・分散させた。ＰＣ遠心分離管を高速遠心分離機に入れ、１６０００回転／ｍｉｎの回転数で２０ｍｉｎ遠心分離した。上澄み２ｍｌを精密に量り取り、１０ｍｌメスフラスコに入れ、発色剤で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、試験溶液１とした。コロイドビスマスペクチン粉末約１５ｍｇをＰＣ遠心分離管に入れ、精密に計量して、１％エタノール溶液４．４２ｍｌを精密に加え、振とうして分散させた後、無水エタノール１．５８ｍｌを加え、振とうして均一に溶解・分散させた。ＰＣ遠心分離管を高速遠心分離機に入れ、１６０００回転／ｍｉｎの回転数で２０ｍｉｎ遠心分離した。上澄み２ｍｌを精密に量り取り、１０ｍｌメスフラスコに入れ、発色剤で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、試験溶液２とした。
【００４７】
４）ブランク溶液の調製
１０％エタノール溶液５ｍｌを精密に量り取り、２５ｍｌメスフラスコに入れ、発色溶液で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、ブランク溶液１とした。３０％エタノール溶液５ｍｌを精密に量り取り、２５ｍｌメスフラスコに入れ、発色溶液で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、ブランク溶液２とした。
【００４８】
５）測定
ビスマス対照溶液、試験溶液１及び試験溶液２を準備し、ブランク溶液１及びブランク溶液２をそれぞれ参照として、紫外可視分光光度法によって、１ｃｍ石英キュベットを用いて、４６３ｎｍの波長で吸光度を測定し、医薬品原料中の遊離ビスマスの含有量を外部標準法によって算出した。試験溶液１の測定平均値は０．６２％、試験溶液２の測定平均値は０．６３％であった。
６）上記の2つのデータに対してt検定分析を行った結果、Ｐ＝０．６６、Ｒ−Ｓｑ＝２．００％であり、2つの溶解分散方法の間に有意差がないことが確認された。
【００４９】
実施例２
コロイドビスマスペクチンカプセル（規格４０ｍｇ、ビスマス換算）中の遊離ビスマスの含有量の測定
１）発色溶液の調製
アスコルビン酸５ｇ、ヨウ化カリウム１２．５ｇを取り、２００ｍｌメスフラスコに入れ、水１００ｍｌを加え、振とうして溶解し、１ｍｏｌ／Ｌ硝酸溶液２５ｍｌを加え、水で希釈して所定の目盛りまで定容し、アスコルビン酸２．５％、ヨウ化カリウム６．２５％を含む発色溶液を調製した。
【００５０】
２）ビスマス対照溶液の調製
金属ビスマス約２７５ｍｇを取り、精密に計量して、１００ｍｌメスフラスコに入れ、硝酸６．４ｍｌを加えて溶解し、水で所定の目盛りまで希釈し、ビスマス標準ストック液とした。ビスマス標準ストック液２ｍｌを精密に量り取り、１００ｍｌメスフラスコに入れ、０．８ｍｏｌ／Ｌ硝酸溶液を加えて所定の目盛りまで希釈し、１ｍｌあたりビスマスを約５５μｇ含む溶液を調製し、ビスマス標準溶液とした。ビスマス標準溶液５ｍｌを精密に量り取り、５０ｍｌメスフラスコに入れ、発色剤で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、ビスマス対照溶液とした。
【００５１】
３）試験溶液の調製
コロイドビスマスペクチンカプセル内容物約１０ｍｇをＰＰ遠心分離管に入れ、精密に計量して、１％エタノール２．６３ｍｌを精密に加え、振とうして分散させた後、無水エタノール１．３７ｍｌを加え、振とうして均一に溶解・分散させた。高速遠心分離機に入れ、１２０００回転／ｍｉｎの回転数で３０ｍｉｎ遠心分離した。上澄み２ｍｌを精密に量り取り、１０ｍｌメスフラスコに入れ、発色剤で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、試験溶液とした。
【００５２】
４）ブランク溶液の調製
３５％エタノール溶液５ｍｌを精密に量り取り、２５ｍｌメスフラスコに入れ、発色溶液で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、ブランク溶液とした。
【００５３】
５）測定
ビスマス対照溶液及び試験溶液を準備し、ブランク溶液を参照として、紫外可視分光光度法によって、１ｃｍ石英キュベットを用いて、４６３ｎｍの波長で吸光度を測定し、外部標準法により計算したところ、ビスマス４０ｍｇあたり遊離ビスマス２．７３ｍｇが含まれ、標識された量の６．８３％であった。
【００５４】
実施例３
コロイドビスマスペクチンカプセル（規格５０ｍｇ、ビスマス換算）中の遊離ビスマスの含有量の測定
１）発色溶液の調製
アスコルビン酸２０ｇ、ヨウ化カリウム５０ｇを取り、２００ｍｌメスフラスコに入れ、水１００ｍｌを加え、振とうして溶解し、１ｍｏｌ／Ｌ酢酸溶液２５ｍｌを加え、水で希釈して所定の目盛りまで定容し、アスコルビン酸１０％、ヨウ化カリウム２５％を含む発色溶液を調製した。
【００５５】
２）ビスマス対照溶液の調製
金属ビスマス約２７５ｍｇを取り、精密に計量して、１００ｍｌメスフラスコに入れ、硝酸６．４ｍｌを加えて溶解し、水で所定の目盛りまで希釈し、ビスマス標準ストック液とした。ビスマス標準ストック液１ｍｌを精密に量り取り、１００ｍｌメスフラスコに入れ、１ｍｏｌ／Ｌ硝酸溶液を加えて所定の目盛りまで希釈し、１ｍｌあたりビスマスを約２７．５μｇ含む溶液を調製し、ビスマス標準溶液とした。ビスマス標準溶液５ｍｌを精密に量り取り、２５ｍｌメスフラスコに入れ、発色剤で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、ビスマス対照溶液とした。
【００５６】
３）試験溶液の調製
コロイドビスマスペクチンカプセル内容物約１０ｍｇをＰＥ遠心分離管に入れ、精密に計量して、１２％エタノール溶液４ｍｌを精密に加え、振とうして均一に溶解・分散させた。高速遠心分離機に入れ、１８０００回転／ｍｉｎの回転数で１５ｍｉｎ遠心分離した。上澄み５ｍｌを精密に量り取り、２５ｍｌメスフラスコに入れ、発色剤で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、試験溶液１とした。コロイドビスマスペクチンカプセル内容物約１０ｍｇをＰＥ遠心分離管に入れ、精密に計量して、２％エタノール溶液２．６５ｍｌを精密に加え、振とうして分散させた後、無水エタノール１．３５ｍｌを加え、振とうして均一に溶解・分散させた。高速遠心分離機に入れ、１８０００回転／ｍｉｎの回転数で１５ｍｉｎ遠心分離した。上澄み５ｍｌを精密に量り取り、２５ｍｌメスフラスコに入れ、発色剤で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、試験溶液２とした。
【００５７】
４）ブランク溶液の調製
１２％エタノール溶液５ｍｌを精密に量り取り、２５ｍｌメスフラスコに入れ、発色溶液で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、ブランク溶液１とした。３５％エタノール溶液５ｍｌを精密に量り取り、２５ｍｌメスフラスコに入れ、発色溶液で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、ブランク溶液２とした。
【００５８】
５）測定
ビスマス対照溶液、試験溶液１及び試験溶液２を準備し、ブランク溶液１及びブランク溶液２をそれぞれ参照として、紫外可視分光光度法によって、１ｃｍ石英キュベットを用いて、４６３ｎｍの波長で吸光度を測定し、標識された量に対する遊離ビスマスの百分率を外部標準法によって計算した。試験溶液１の測定平均値は６．２５％、試験溶液２の測定平均値は６．２４％であった。
【００５９】
６）上記の2つのデータに対してt検定分析を行った結果、Ｐ＝０．７５、Ｒ−Ｓｑ＝１．０７％であり、2つの溶解分散方法の間に有意差がないことが確認された。
【００６０】
実施例４
コロイドビスマスペクチンカプセル（規格１００ｍｇ、ビスマス換算）中の遊離ビスマスの含有量の測定
１）発色溶液の調製
クエン酸４ｇ、ヨウ化カリウム２０ｇを取り、２００ｍｌメスフラスコに入れ、水１００ｍｌを加え、振とうして溶解し、水で希釈して所定の目盛りまで定容し、クエン酸２％、ヨウ化カリウム１０％を含む発色溶液を調製した。
【００６１】
２）ビスマス対照溶液の調製
金属ビスマス２７５ｍｇを精密に計量して、１００ｍｌメスフラスコに入れ、硝酸６．４ｍｌを加えて溶解し、水で所定の目盛りまで希釈し、ビスマス標準ストック液とした。ビスマス標準ストック液１．５ｍｌを精密に量り取り、１００ｍｌメスフラスコに入れ、０．５ｍｏｌ／Ｌ硝酸溶液で所定の目盛りまで希釈し、１ｍｌあたりビスマスを約４１．２５μｇ含む溶液を調製し、ビスマス標準溶液とした。ビスマス標準溶液２ｍｌを精密に量り取り、２５ｍｌメスフラスコに入れ、発色剤で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、ビスマス対照溶液とした。
【００６２】
３）試験溶液の調製
コロイドビスマスペクチンカプセル内容物約３０ｍｇをＰＰ遠心分離管に入れ、精密に計量して、１１％エタノール溶液１０ｍｌを精密に加え、振とうして均一に溶解・分散させた。高速遠心分離機に入れ、１２０００回転／ｍｉｎの回転数で３０ｍｉｎ遠心分離した。上澄み１０ｍｌを精密に量り取り、５０ｍｌメスフラスコに入れ、発色剤で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、試験溶液１とした。コロイドビスマスペクチンカプセル内容物約３０ｍｇをＰＰ遠心分離管に入れ、精密に計量して、１％エタノール溶液６．８７ｍｌを精密に加え、振とうして分散させた後、無水エタノール３．１３ｍｌを加え、振とうして均一に溶解・分散させた。高速遠心分離機に入れ、１２０００回転／ｍｉｎの回転数で３０ｍｉｎ遠心分離した。上澄み１０ｍｌを精密に量り取り、５０ｍｌメスフラスコに入れ、発色剤で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、試験溶液２とした。
【００６３】
４）ブランク溶液の調製
１１％エタノール溶液５ｍｌを精密に量り取り、２５ｍｌメスフラスコに入れ、発色溶液で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、ブランク溶液１とした。３２％エタノール溶液５ｍｌを精密に量り取り、２５ｍｌメスフラスコに入れ、発色溶液で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、ブランク溶液２とした。
【００６４】
５）測定
ビスマス対照溶液、試験溶液１及び試験溶液２を準備し、ブランク溶液１及びブランク溶液２をそれぞれ参照として、紫外可視分光光度法によって、１ｃｍ石英キュベットを用いて、４６３ｎｍの波長で吸光度を測定し、ビスマス１００ｍｇに含有される遊離ビスマスの標識された量に対する百分率を外部標準法によって計算した。試験溶液１の測定平均値は５．７５％、試験溶液２の測定平均値は５．７２％であった。
【００６５】
６）上記の2つのデータに対してt検定分析を行った結果、Ｐ＝０．６６、Ｒ−Ｓｑ＝１．９６％であり、2つの溶解分散方法の間に有意差がないことが確認された。
【００６６】
実施例５
コロイドビスマスペクチン分散錠剤（規格５０ｍｇ、ビスマス換算）中の遊離ビスマスの含有量の測定
１）発色溶液の調製
クエン酸２０ｇ、ヨウ化カリウム２５ｇを取り、２００ｍｌメスフラスコに入れ、水１００ｍｌを加え、振とうして溶解し、５ｍｏｌ／Ｌ硝酸溶液２５ｍｌを加え、水で希釈して所定の目盛りまで定容し、クエン酸１０％、ヨウ化カリウム１２．５％を含む発色溶液を調製した。
【００６７】
２）ビスマス対照溶液の調製
金属ビスマス２７５ｍｇを精密に計量して、１００ｍｌメスフラスコに入れ、硝酸６．４ｍｌを加えて溶解し、水で所定の目盛りまで希釈し、ビスマス標準ストック液とした。ビスマス標準ストック液１．２ｍｌを精密に量り取り、１００ｍｌメスフラスコに入れ、０．８ｍｏｌ／Ｌ硝酸溶液で所定の目盛りまで希釈し、１ｍｌあたりビスマスを約３３μｇ含む溶液を調製し、ビスマス標準溶液とした。ビスマス標準溶液５ｍｌを精密に量り取り、２５ｍｌメスフラスコに入れ、発色剤で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、ビスマス対照溶液とした。
【００６８】
３）試験溶液の調製
コロイドビスマスペクチン分散錠剤２０錠を細かく粉砕して、粉末約６０ｍｇをＰＥ遠心分離管に入れ、精密に計量して、４％エタノール溶液１２．５ｍｌを精密に加え、振とうして分散させた後、無水エタノール７．５ｍｌを加えて、均一に溶解・分散させた。遠心分離機に入れ、８０００回転／ｍｉｎの回転数で１０ｍｉｎ遠心分離した。上澄みを０．１μｍの精密ろ過膜で吸引ろ過し、次のろ液２ｍｌを精密に量り取り、１０ｍｌメスフラスコに入れ、発色剤で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、試験溶液とした。
【００６９】
４）ブランク溶液の調製
４０％エタノール溶液５ｍｌを精密に量り取り、２５ｍｌメスフラスコに入れ、発色溶液で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、ブランク溶液とした。
【００７０】
５）測定
ビスマス対照溶液及び試験溶液を準備し、ブランク溶液を参照として、紫外可視分光光度法によって、１ｃｍ石英キュベットを用いて、４６３ｎｍの波長で吸光度を測定し、外部標準法により計算したところ、ビスマス５０ｍｇあたり遊離ビスマス３．１７ｍｇが含まれ、標識された量の６．３４％であった。
【００７１】
実施例６
コロイドビスマスペクチン顆粒（規格１５０ｍｇ、ビスマス換算）中の遊離ビスマスの含有量の測定
１）発色溶液の調製
アスコルビン酸１０ｇ、ヨウ化カリウム３０ｇを取り、２００ｍｌメスフラスコに入れ、水１００ｍｌを加え、振とうして溶解し、１ｍｏｌ／Ｌ硝酸溶液２５ｍｌを加え、水で希釈して所定の目盛りまで定容し、アスコルビン酸５％、ヨウ化カリウム１５％を含む発色溶液を調製した。
【００７２】
２）ビスマス対照溶液の調製
金属ビスマス５０ｍｇを精密に計量して、１００ｍｌメスフラスコに入れ、硝酸６．４ｍｌを加えて溶解し、水で所定の目盛りまで希釈し、ビスマス標準ストック液とした。ビスマス標準ストック液１ｍｌを精密に量り取り、２５ｍｌメスフラスコに入れ、１．１ｍｏｌ／Ｌ硝酸溶液で所定の目盛りまで希釈し、１ｍｌあたりビスマスを約２０μｇ含む溶液を調製し、ビスマス標準溶液とした。ビスマス標準溶液５ｍｌを精密に量り取り、２５ｍｌメスフラスコに入れ、発色剤で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、ビスマス対照溶液とした。
【００７３】
３）試験溶液の調製
コロイドビスマスペクチン顆粒を細かく粉砕して、粉末約３０ｍｇをＰＰ遠心分離管に入れ、精密に計量して、１６％エタノール溶液４ｍｌを精密に加え、振とうして均一に溶解・分散させた。６０００回転／ｍｉｎの回転数で３０ｍｉｎ遠心分離した。上澄み５ｍｌを精密に量り取り、エタノール５ｍｌを加えて振とうし、次に、６０００回転／ｍｉｎの回転数で３０ｍｉｎ遠心分離した。上澄み２ｍｌを精密に量り取り、１０ｍｌメスフラスコに入れ、発色剤で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、試験溶液とした。
【００７４】
４）ブランク溶液の調製
１６％エタノール溶液５ｍｌを精密に量り取り、２５ｍｌメスフラスコに入れ、発色溶液で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、ブランク溶液とした。
【００７５】
５）測定
ビスマス対照溶液及び試験溶液を準備し、ブランク溶液を参照として、紫外可視分光光度法によって、１ｃｍ石英キュベットを用いて、４６３ｎｍの波長で吸光度を測定し、外部標準法により計算したところ、ビスマス１５０ｍｇあたり遊離ビスマス８．４３ｍｇが含まれ、標識された量の５．６２％であった。
【００７６】
実施例７
復方コロイドビスマスペクチンカプセル（コロイドビスマスペクチン、メトロニダゾール、テトラサイクリン塩酸塩から構成され、ビスマス換算で、カプセル１粒にコロイドビスマスペクチン３５ｍｇが含まれる）中の遊離ビスマスの含有量の測定
１）発色溶液の調製
アスコルビン酸２０ｇ、ヨウ化カリウム４０ｇを取り、２００ｍｌメスフラスコに入れ、水１００ｍｌを加え、振とうして溶解し、１ｍｏｌ／Ｌ硝酸溶液２５ｍｌを加え、水で希釈して所定の目盛りまで定容し、アスコルビン酸１０％、ヨウ化カリウム２０％を含む発色溶液を調製した。
【００７７】
２）ビスマス対照溶液の調製
金属ビスマス８０ｍｇを精密に計量して、１００ｍｌメスフラスコに入れ、硝酸６．４ｍｌを加えて溶解し、水で所定の目盛りまで希釈し、ビスマス標準ストック液とした。ビスマス標準ストック液２ｍｌを精密に量り取り、５０ｍｌメスフラスコに入れ、０．７ｍｏｌ／Ｌ硝酸溶液で所定の目盛りまで希釈し、１ｍｌあたりビスマスを約３２μｇ含む溶液を調製し、ビスマス標準溶液とした。ビスマス標準溶液５ｍｌを精密に量り取り、２５ｍｌメスフラスコに入れ、発色剤で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、ビスマス対照溶液とした。
【００７８】
３）試験溶液の調製
復方コロイドビスマスペクチンカプセル内容物約６０ｍｇをＰＥ遠心分離管に入れ、精密に計量して、１％エタノール溶液１２．５３ｍｌを精密に加え、振とうして分散させた後、無水エタノール７．４７ｍｌを加え、振とうして均一に溶解・分散させた。７０００回転／ｍｉｎの回転数で２０ｍｉｎ遠心分離した。上澄み５ｍｌを精密に量り取り、イソプロパノール５ｍｌを加えて振とうし、次に、７０００回転／ｍｉｎの回転数で２０ｍｉｎ遠心分離し、上澄みを０．１μｍのシリンジフィルタでろ過し、次のろ液２ｍｌを精密に量り取り、１０ｍｌメスフラスコに入れ、発色剤で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、試験溶液とした。
【００７９】
４）ブランク溶液の調製
３８％エタノール溶液５ｍｌを精密に量り取り、２５ｍｌメスフラスコに入れ、発色溶液で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、ブランク溶液とした。
【００８０】
５）測定
ビスマス対照溶液及び試験溶液を準備し、ブランク溶液を参照として、紫外可視分光光度法によって、１ｃｍ石英キュベットを用いて、４６３ｎｍの波長で吸光度を測定し、外部標準法により計算したところ、ビスマス３５ｍｇあたり遊離ビスマス２．２８ｍｇが含まれ、標識された量の６．５２％であった。
【００８１】
実施例８
コロイドビスマスペクチン散剤（規格１５０ｍｇ、ビスマス換算）中の遊離ビスマスの含有量の測定
１）発色溶液の調製
アスコルビン酸１ｇ、ヨウ化カリウム５ｇを取り、２００ｍｌメスフラスコに入れ、水１００ｍｌを加え、振とうして溶解し、５ｍｏｌ／Ｌ酢酸溶液２５ｍｌを加え、水で希釈して所定の目盛りまで定容し、アスコルビン酸０．５％、ヨウ化カリウム２．５％を含む発色溶液を調製した。
【００８２】
２）ビスマス対照溶液の調製
金属ビスマス１２０ｍｇを精密に計量して、１００ｍｌメスフラスコに入れ、硝酸６．４ｍｌを加えて溶解し、水で所定の目盛りまで希釈し、ビスマス標準ストック液とした。ビスマス標準ストック液１ｍｌを精密に量り取り、１００ｍｌメスフラスコに入れ、１ｍｏｌ／Ｌ硝酸溶液で所定の目盛りまで希釈し、１ｍｌあたりビスマスを約１２μｇ含む溶液を調製し、ビスマス標準溶液とした。ビスマス標準溶液５ｍｌを精密に量り取り、２５ｍｌメスフラスコに入れ、発色剤で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、ビスマス対照溶液とした。
【００８３】
３）試験溶液の調製
コロイドビスマスペクチン約３５ｍｇをＰＣ遠心分離管に入れ、精密に計量して、２％エタノール溶液１０．７１ｍｌを精密に加え、振とうして分散させた後、無水エタノール４．２９ｍｌを加え、振とうして均一に溶解・分散させた。８０００回転／ｍｉｎの回転数で３０ｍｉｎ遠心分離した。上澄み５ｍｌを精密に量り取り、メタノール５ｍｌを加えて振とうし、次に、８０００回転／ｍｉｎの回転数で２０ｍｉｎ遠心分離し、上澄みを０．１μｍシリンジフィルタでろ過し、次のろ液２ｍｌを精密に量り取り、１０ｍｌメスフラスコに入れ、発色剤で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、試験溶液とした。
【００８４】
４）ブランク溶液の調製
３０％エタノール溶液５ｍｌを精密に量り取り、２５ｍｌメスフラスコに入れ、発色溶液で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、ブランク溶液とした。
【００８５】
５）測定
ビスマス対照溶液及び試験溶液を準備し、ブランク溶液を参照として、紫外可視分光光度法によって、１ｃｍ石英キュベットを用いて、４６３ｎｍの波長で吸光度を測定し、外部標準法により計算したところ、ビスマス１５０ｍｇあたり遊離ビスマス１０．６６ｍｇが含まれ、標識された量の７．１１％であった。
【００８６】
実施例９
コロイドビスマスペクチン乾燥懸濁剤（規格１５０ｍｇ、ビスマス換算）中の遊離ビスマスの含有量の測定
１）発色溶液の調製
アスコルビン酸１０ｇ、ヨウ化カリウム２５ｇを取り、２００ｍｌメスフラスコに入れ、水１００ｍｌを加え、振とうして溶解し、１ｍｏｌ／Ｌ硝酸溶液２５ｍｌを加え、水で希釈して所定の目盛りまで定容し、アスコルビン酸５％、ヨウ化カリウム１２．５％を含む発色溶液を調製した。
【００８７】
２）ビスマス対照溶液の調製
金属ビスマス２７５ｍｇを精密に計量して、１００ｍｌメスフラスコに入れ、硝酸６．４ｍｌを加えて溶解し、水で所定の目盛りまで希釈し、ビスマス標準ストック液とした。ビスマス標準ストック液１ｍｌを精密に量り取り、１００ｍｌメスフラスコに入れ、１ｍｏｌ／Ｌ硝酸溶液で所定の目盛りまで希釈し、１ｍｌあたりビスマスを約２７．５μｇ含む溶液を調製し、ビスマス標準溶液とした。ビスマス標準溶液４ｍｌを精密に量り取り、１０ｍｌメスフラスコに入れ、発色溶液で所定の目盛りまで希釈して、ビスマス対照溶液とした。
【００８８】
３）試験溶液の調製
コロイドビスマスペクチン乾燥懸濁剤約１５ｍｇをＰＰ遠心分離管に入れ、精密に計量して、１３％エタノール溶液１０ｍｌを精密に加え、振とうして均一に溶解・分散させた。１６０００回転／ｍｉｎの回転数で２０ｍｉｎ遠心分離した。上澄み２ｍｌを精密に量り取り、１０ｍｌメスフラスコに入れ、発色溶液で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、試験溶液とした。
【００８９】
４）ブランク溶液の調製
１３％エタノール溶液２ｍｌを精密に量り取り、１０ｍｌメスフラスコに入れ、発色溶液で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、ブランク溶液とした。
【００９０】
５）測定
ビスマス対照溶液及び試験溶液を準備し、ブランク溶液を参照として、紫外可視分光光度法によって、１ｃｍ石英キュベットを用いて、４６３ｎｍの波長で吸光度を測定し、外部標準法により計算したところ、コロイドビスマスペクチン１５０ｍｇあたり遊離ビスマス１０．２７ｍｇが含まれ、標識された量の６．８５％であった。
【００９１】
実施例１０
さまざまな遠心分離条件による遊離ビスマスの含有量の測定結果への影響
コロイドビスマスペクチンカプセル内容物約０．５ｇを取り、精密に計量して、２００ｍｌメスフラスコに入れ、１０％エタノール溶液を所定の目盛りまで加え、激しく振とうし、均一に分散させてコロイド溶液とした。下記３種類の分離方式で上澄みを得て、遊離ビスマスの含有量を測定した。
【００９２】
１、上記コロイド溶液４ｍｌを、１２０００回転／ｍｉｎの回転数で３０ｍｉｎ高速遠心分離し、次に、上澄み２ｍｌを精密に量り取り、１０ｍｌメスフラスコに入れ、発色溶液で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、４６３ｎｍの波長で吸光度を測定し、遊離ビスマスの含有量を計算した。合計６回測定したところ、測定平均値は標識された量の６．４６％であった。
【００９３】
２、上記コロイド溶液８ｍｌを、８０００回転／ｍｉｎの回転数で１０ｍｉｎ遠心分離した。上澄みを、０．１μｍろ過膜でろ過し、次のろ液２ｍｌを精密に量り取り、１０ｍｌメスフラスコに入れ、発色溶液で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、４６３ｎｍの波長で吸光度を測定し、遊離ビスマスの含有量を計算した。合計６回測定したところ、測定平均値は標識された量の６．４５％であった。
【００９４】
３、上記コロイド溶液８ｍｌを、６０００回転／ｍｉｎの回転数で１０ｍｉｎ遠心分離した。上澄み５ｍｌを精密に量り取り、エタノール５ｍｌを加えて振とうし、次に、６０００回転／ｍｉｎの回転数で１０ｍｉｎ遠心分離した。上澄み２ｍｌを精密に量り取り、１０ｍｌメスフラスコに入れ、発色溶液で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、４６３ｎｍの波長で吸光度を測定し、遊離ビスマスの含有量を計算した。合計６回測定したところ、測定平均値は標識された量の６．４８％であった。
【００９５】
上記の3つのデータに対して一元配置分散分析を行った結果、Ｒ−Ｓｑ＝０．７２％、Ｒ−Ｓｑ（調整）＝０．００％であり、3つの分離方式には有意差がないことが確認された。
【００９６】
実施例１１
機器精度試験
ビスマス対照溶液について４６３ｎｍの波長で吸光度を測定し、測定を６回繰り返したところ、吸光度値は順に０．３２０４、０．３２０６、０．３２０７、０．３２０９、０．３２０３、０．３２０１であり、相対標準偏差ＲＳＤは０．０９％であり、機器精度は良好であった。
【００９７】
実施例１２
検出限界及び定量限界
２１のブランク溶液を調製して、４６３ｎｍの波長で吸光度を測定したところ、それぞれ０．００６５、０．００２０、０．００３０、０．００２７、０．０００３、０．０１５４、０．００３１、０．００４０、０．００１１、０．０１９０、０．００８６、０．０１１６、０．００３５、０．００９５、０．０１３９、０．００８７、０．００９３、０．００３１、０．００１２、０．００３３、０．０００７であり、算出の標準偏差ＳＤ＝０．００５３１７であった。
【００９８】
国際純正応用化学連合（ＩＵＰＡＣ）による検出限界に対する規定に従って、検出限界と定量限界を計算したところ、検出限界＝３ｘ０．００５３１７＝０．０１５９５であり、０．３μｇ／ｍｌビスマス参照溶液中のビスマスイオンの濃度に相当し、定量限界＝１０×０．００５３１７＝０．０５３１７であり、０．９μｇ／ｍｌビスマス参照溶液中のビスマスの濃度に相当した。
【００９９】
実施例１３
線形範囲
ビスマス標準溶液（２７．５μｇ／ｍｌ）１０．０ｍｌ、５．０ｍｌ、２．５ｍｌ、１．０ｍｌ、０．５ｍｌ、０．２５ｍｌを精密に量り取り、それぞれ２５ｍｌメスフラスコに入れ、発色溶液で所定の目盛りまで希釈して、４６３ｎｍの波長で吸光度を測定した。最小二乗法によって吸光度とビスマス標準溶液の濃度について線形回帰したところ、回帰方程式Ａ＝０．０５７６Ｃ＋０．００９８、相関係数Ｒ２＝０．９９９７であり、線形関係は良好であった。
【０１００】
実施例１４
再現性試験
下記方法によって、コロイドビスマスペクチン医薬品原料、コロイドビスマスペクチンカプセル（規格１００ｍｇ）、コロイドビスマスペクチンカプセル（規格５０ｍｇ）の試験溶液をそれぞれ６つ調製し、吸光度を測定して、遊離ビスマスの含有量を計算した。具体的な測定結果を表１〜表３に示した。
【０１０１】
コロイドビスマスペクチン医薬品原料、コロイドビスマスペクチンカプセル（規格１００ｍｇ）内容物約１０ｍｇをそれぞれ精密に計量して、プラスチック製遠心分離管に入れ、１０％エタノール溶液４ｍｌを精密に加え、振とうして均一に溶解・分散させ、１２０００回転／ｍｉｎの回転数で３０ｍｉｎ以上遠心分離した。上澄み２ｍｌを精密に量り取り、１０ｍｌメスフラスコに入れ、発色溶液で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、試験溶液とした。
【０１０２】
コロイドビスマスペクチンカプセル（規格５０ｍｇ）内容物約１０ｍｇを精密に計量して、プラスチック製遠心分離管に入れ、５％エタノール溶液２．９５ｍｌを精密に加え、振とうして分散させた後、無水エタノール１．０５ｍｌを加え、振とうして均一に溶解・分散させた。１２０００回転／ｍｉｎの回転数で３０ｍｉｎ以上遠心分離した。上澄み２ｍｌを精密に量り取り、１０ｍｌメスフラスコに入れ、発色溶液で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、試験溶液とした。
【０１０３】
（表１）コロイドビスマスペクチン医薬品原料の再現性の測定結果
2021513079.tif 000002
【０１０４】
（表２）コロイドビスマスペクチンカプセル（１００ｍｇ規格）の再現性の測定結果
2021513079.tif 000003
【０１０５】
（表３）コロイドビスマスペクチンカプセル（５０ｍｇ規格）の再現性の測定結果
2021513079.tif 000004
【０１０６】
結果：コロイドビスマスペクチン医薬品原料及び各規格のコロイドビスマスペクチンカプセルのそれぞれの６つのサンプルの測定結果のＲＳＤはすべて２．０％以下であり、方法の再現性は良好であった。
【０１０７】
実施例１５
回収率試験
コロイドビスマスペクチン粉末約１０ｍｇを精密に計量して、プラスチック製遠心分離管に入れ、１０％エタノール溶液４ｍｌを精密に加え、振とうして均一に溶解・分散させ、１２０００回転／ｍｉｎの回転数で３０ｍｉｎ以上遠心分離した。上澄み２ｍｌを精密に量り取り、次に、ビスマス標準溶液２ｍｌを精密に加え、１０ｍｌメスフラスコに入れ、発色溶液で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、試験溶液とした。合計６つ調製して、吸光度を測定し、回収率を計算して、結果を表４に示した。
【０１０８】
（表４）コロイドビスマスペクチン原料の回収率の測定結果
2021513079.tif 000005
【０１０９】
コロイドビスマスペクチンカプセル（１００ｍｇ規格）内容物約１０ｍｇを精密に計量して、プラスチック製遠心分離管に入れ、１０％エタノール溶液４ｍｌを精密に加え、振とうして均一に溶解・分散させ、１２０００回転／ｍｉｎの回転数で３０ｍｉｎ以上遠心分離した。上澄み２ｍｌを精密に量り取り、次に、ビスマス標準溶液２ｍｌを精密に加え、１０ｍｌメスフラスコに入れ、発色溶液で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、試験溶液とした。合計６つ調製し、吸光度を測定して、回収率を計算し、結果を表５に示した。
【０１１０】
（表５）コロイドビスマスペクチンカプセル（１００ｍｇ規格）の回収率の測定結果
2021513079.tif 000006
【０１１１】
コロイドビスマスペクチンカプセル（５０ｍｇ規格）内容物約１０ｍｇを精密に計量して、プラスチック製遠心分離管に入れ、５％エタノール溶液２．９５ｍｌを精密に加え、振とうして分散させた後、無水エタノール１．０５ｍｌを加え、振とうして溶解・分散させ、均一に混合し、１２０００回転／ｍｉｎの回転数で３０ｍｉｎ以上遠心分離した。上澄み２ｍｌを精密に量り取り、次に、ビスマス標準溶液２ｍｌを精密に加え、１０ｍｌメスフラスコに入れ、発色溶液で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、試験溶液とした。合計６つ調製し、吸光度を測定して、回収率を計算し、結果を表６に示した。
【０１１２】
（表６）コロイドビスマスペクチンカプセル（５０ｍｇ規格）の回収率の測定結果
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【０１１３】
測定結果から明らかなように、本発明の方法は、回収率がよく、測定精度が良好であった。
【０１１４】
実施例１６
各静置時間によるコロイドビスマスペクチン原料の遊離ビスマスの含有量の測定結果への影響
１、コロイドビスマスペクチン粉末約０．５ｇを取り、精密に計量して、２００ｍｌメスフラスコに入れ、水を所定の目盛りまで加え、激しく振とうし、均一に分散させてコロイド溶液とし、それぞれ１ｍｉｎ、１０ｍｉｎ、２０ｍｉｎ、４０ｍｉｎ、６０ｍｉｎ、９０ｍｉｎ、１２０ｍｉｎで上記コロイド溶液４ｍｌを取り、１２０００回転／ｍｉｎの回転数で３０ｍｉｎ高速遠心分離し、次に、上澄み２ｍｌを精密に量り取り、１０ｍｌメスフラスコに入れ、発色溶液で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、４６３ｎｍの波長で吸光度を測定し、遊離ビスマスの含有量を計算したところ、その値は、それぞれ０．７１％、０．８１％、０．９５％、１．０２％、１．１３％、１．２１％、１．２３％であった。
【０１１５】
２、コロイドビスマスペクチン粉末約０．５ｇを取り、精密に計量して、２００ｍｌメスフラスコに入れ、１０％エタノール溶液を所定の目盛りまで加え、激しく振とうし、均一に分散させてコロイド溶液とし、それぞれ１ｍｉｎ、１０ｍｉｎ、２０ｍｉｎ、４０ｍｉｎ、６０ｍｉｎ、９０ｍｉｎ、１２０ｍｉｎで上記コロイド溶液４ｍｌを取り、１２０００回転／ｍｉｎの回転数で３０ｍｉｎ高速遠心分離し、次に、上澄み２ｍｌを精密に量り取り、１０ｍｌメスフラスコに入れ、発色溶液で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、４６３ｎｍの波長で吸光度を測定し、遊離ビスマスの含有量を計算したところ、その値はそれぞれ０．６９％、０．７０％、０．７２％、０．７５％、０．７６％、０．７９％、０．８１％であった。
【０１１６】
３、コロイドビスマスペクチン粉末約０．５ｇを取り、精密に計量して、２００ｍｌメスフラスコに入れ、５％エタノール溶液１４７．３７ｍｌを加えて振とうして分散させた後、無水エタノールを所定の目盛りまで加え、激しく振とうし、均一に分散させてコロイド溶液とし、それぞれ１ｍｉｎ、１０ｍｉｎ、２０ｍｉｎ、４０ｍｉｎ、６０ｍｉｎ、９０ｍｉｎ、１２０ｍｉｎで上記コロイド溶液４ｍｌを取り、１２０００回転／ｍｉｎの回転数で３０ｍｉｎ高速遠心分離し、次に、上澄み２ｍｌを精密に量り取り、１０ｍｌメスフラスコに入れ、発色溶液で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、４６３ｎｍの波長で吸光度を測定し、遊離ビスマスの含有量を計算したところ、その値はそれぞれ０．７０％、０．７２％、０．７６％、０．７９％、０．８０％、０．８１％、０．８２％であった。
【０１１７】
測定結果から明らかなように、時間を1min以内に制御する場合、3つの方法の測定結果は基本的に同じであった。ただし、分散媒として水を使用する場合、コロイド溶液の静置時間が長くなるに伴い、測定される遊離ビスマス量が増加した。分散媒としてエタノール水溶液を使用する場合、コロイド溶液の静置時間とともに遊離ビスマスの含有量の値がゆっくり変化し、それは、コロイド安定性が向上し、遊離ビスマスの含有量の測定結果がより正確で確実であり、実際の遊離ビスマスの含有量に近く、実験結果の再現性に寄与することを示した。
【０１１８】
実施例１７
各静置時間によるコロイドビスマスペクチンカプセル（規格１００ｍｇ、ビスマス換算）の遊離ビスマスの含有量の測定結果への影響
１、コロイドビスマスペクチンカプセル内容物約０．５ｇを取り、精密に計量して、２００ｍｌメスフラスコに入れ、水を所定の目盛りまで加え、激しく振とうし、均一に分散させてコロイド溶液とし、それぞれ１ｍｉｎ、１０ｍｉｎ、２０ｍｉｎ、４０ｍｉｎ、６０ｍｉｎ、９０ｍｉｎ、１２０ｍｉｎで上記コロイド溶液４ｍｌを取り、１２０００回転／ｍｉｎの回転数で３０ｍｉｎ高速遠心分離し、次に、上澄み２ｍｌを精密に量り取り、１０ｍｌメスフラスコに入れ、発色溶液で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、４６３ｎｍの波長で吸光度を測定し、標識された量に占める遊離ビスマスの百分率を計算したところ、その値はそれぞれ４．９２％、５．５６％、６．２６％、７．１３％、７．５４％、８．２５％、８．４６％であった。
【０１１９】
２、コロイドビスマスペクチンカプセル内容物約０．５ｇを取り、精密に計量して、２００ｍｌメスフラスコに入れ、１０％エタノール溶液を所定の目盛りまで加え、激しく振とうし、均一に分散させてコロイド溶液とし、それぞれ１ｍｉｎ、１０ｍｉｎ、２０ｍｉｎ、４０ｍｉｎ、６０ｍｉｎ、９０ｍｉｎ、１２０ｍｉｎで上記コロイド溶液４ｍｌを取り、１２０００回転／ｍｉｎの回転数で３０ｍｉｎ高速遠心分離し、次に、上澄み２ｍｌを精密に量り取り、１０ｍｌメスフラスコに入れ、発色溶液で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、４６３ｎｍの波長で吸光度を測定し、標識された量に占める遊離ビスマスの百分率を計算したところ、その値はそれぞれ４．７３％、４．７８％、４．８４％、４．９８％、５．２３％、５．４８％、５．５５％であった。
【０１２０】
３、コロイドビスマスペクチンカプセル内容物約０．５ｇを取り、精密に計量して、２００ｍｌメスフラスコに入れ、５％エタノール溶液１４７．３７ｍｌを加えて振とうして分散させた後、無水エタノールを所定の目盛りまで加え、激しく振とうし、均一に分散させてコロイド溶液とし、それぞれ１ｍｉｎ、１０ｍｉｎ、２０ｍｉｎ、４０ｍｉｎ、６０ｍｉｎ、９０ｍｉｎ、１２０ｍｉｎで上記コロイド溶液４ｍｌを取り、１２０００回転／ｍｉｎの回転数で３０ｍｉｎ高速遠心分離し、次に、上澄み２ｍｌを精密に量り取り、１０ｍｌメスフラスコに入れ、発色溶液で所定の目盛りまで希釈して、均一に振とうし、４６３ｎｍの波長で吸光度を測定し、標識された量に占める遊離ビスマスの百分率を計算したところ、その値はそれぞれ４．８８％、４．９２％、４．９６％、５．１７％、５．３９％、５．６２％、５．８３％であった。
【国際調査報告】
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