(57)【要約】  野生型p53の構造と機能を効率的に救済するためにp53と密接に関連できる新規のp53複合体と化合物のコレクション、およびp53の診断、予後、治療を含む、複合体と化合物の作成および使用方法 がんや老化などの関連疾患。【選択図】図１６
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＰＡＮＤＡポケット、ＰＡＮＤＡエージェント、およびＰＡＮＤＡポケットとＰＡＮＤＡエージェントの間の少なくとも１つの緊密な関連付けで構成されるｐ５３上に形成された  三次構造（「ＰＡＮＤＡコア」）。
ＰＡＮＤＡ  Ｐｏｃｋｅｔは、１つ以上の適切に折りたたまれたＰＡＮＤＡシステインに隣接するすべてのアミノ酸、１つ以上の適切に折りたたまれたＰＡＮＤＡシステインと接触するすべてのアミノ酸を含む、適切に折りたたまれたＰＡＮＤＡシステインから約７Åの領域から本質的になる領域です。、およびすべてのＰＡＮＤＡシステイン。
ＰＡＮＤＡエージェントは、次のような１つ以上の有用な特性を持つ物質の構成です。
（ａ）適切に折りたたまれたｐ５３の母集団の実質的な増加を引き起こす可能性があり、好ましくはその増加はＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる増加よりも少なくとも約３倍多く、より好ましくは増加は引き起こされる増加より少なくとも約５倍多いＰＲＩＭＡ−１により、さらに好ましくは、増加はＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる増加よりも少なくとも約１０倍大きく、さらに好ましくは、増加はＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる増加より少なくとも約１００倍大きい。
（ｂ）ｐ５３の転写機能に実質的な改善を引き起こすことができ、好ましくは、改善は、ＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる改善よりも少なくとも約３倍大きい。より好ましくは、改善はＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる改善よりも少なくとも約５倍大きく、さらに好ましくは、改善はＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる改善より少なくとも約１０倍大きく、さらに好ましくは改善は少なくとも約１００倍であるＰＲＩＭＡ−１による改善よりもそして
（ｃ）例えば、ｐ５３  Ｔｍの増加によって測定されるように、ｐ５３の安定化の実質的な増強を引き起こすことができ、好ましくは、増強はＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる増強よりも少なくとも約３倍多く、より好ましくは、改善は少なくともＰＲＩＭＡ−１による改善の約５倍、さらに好ましくはＰＲＩＭＡ−１による改善の少なくとも約１０倍、さらに好ましくはＰＲＩＭＡ−１による改善の少なくとも約１００倍の改善である；
ここで、ＰＡＮＤＡ剤は、好ましくは２つ以上の有用な特性を有し、より好ましくは３つ以上の有用な特性を有する。そして
ＰＡＮＤＡシステインは、ｗｔｐ５３位置のシステイン１２４（「Ｃ１２４」）、システイン１３５（「Ｃ１３５」）、およびシステイン１４１（「Ｃ１４１」）（まとめて「ＰＡＮＤＡトライアド」）に対応するシステインです。
【請求項２】
ＰＡＮＤＡポケットが本質的にＰＡＮＤＡトライアドとｗｔｐ５３位置Ｓ１１６、Ｃ２７５、Ｒ２７３、Ｙ２３４、Ｖ１２２、Ｔ１２３、Ｔ１２５、Ｙ１２６、Ｍ１３３、Ｆ１３４、Ｑ１３６に対応するアミノ酸からなる請求項１に記載のＰＡＮＤＡコア。Ｌ１３７、Ｋ１３９、Ｔ１４０、Ｐ１４２、Ｖ１４３、Ｌ１１４、Ｈ１１５、Ｇ１１７、Ｔ１１８、Ａ１１９、Ｋ１２０、Ｓ１２１、Ａ１３８、Ｉ２３２、Ｈ２３３、Ｎ２３５、Ｙ２３６、Ｍ２３７、Ｃ２３８、Ｎ２３９、Ｆ２７０、Ｅ２７１、Ｖ２７２、Ｖ２７４、Ａ２７６、Ｃ２７７、Ｐ２７８、Ｇ２７９、Ｒ２８０、Ｄ２８１、およびＲ２８２。
【請求項３】
ＰＡＮＤＡポケットは、本質的に図１４左パネル、図１４右パネル、および／または図１８のように配置される、請求項１および２に記載のＰＡＮＤＡコア。
【請求項４】
ｐ５３が、すべての天然および人工ｐ５３を含む、任意の野生型ｐ５３（「ｗｔｐ５３」）である、請求項１〜３のいずれかに記載のＰＡＮＤＡコア。すべての天然および人工のｐ５３を含む、変異したｐ５３（「ｍｐ５３」）。またはそれらの組み合わせ。
【請求項５】
請求項１に記載のＰＡＮＤＡコア：
ｗｔｐ５３は、ｐ５３α、ｐ５３β、ｐ５３γ、Δ４０ｐ５３α、Δ４０ｐ５３β、Δ４０ｐ５３γ、または１つまたは複数の一塩基多型（「ＳＮＰ」）を伴う前述のｐ５３のいずれかである；
ｍｐ５３は、ｐ５３に少なくとも１つの変異を含みます。これには、任意の単一アミノ酸変異が含まれます。好ましくは、この変異は、ｐ５３の構造や機能を変更および／または部分的に変更します。たとえば、ｗｔｐ５３位置Ｒ１７５、Ｇ２４５に対応する１つ以上の突然変異など、Ｒ２４８、Ｒ２４９、Ｒ２７３、Ｒ２８２、Ｃ１７６、Ｈ１７９、Ｙ２２０、Ｐ２７８、Ｖ１４３、Ｉ２３２、およびＦ２７０。１つ以上のＲ１７５Ｈ、Ｇ２４５Ｄ  ／  Ｓ、Ｒ２４８Ｑ  ／  Ｗ、Ｒ２４９Ｓ、Ｒ２７３Ｃ  ／  Ｈ、Ｒ２８２Ｗ、Ｃ１７６Ｆ、Ｈ１７９Ｒ、Ｙ２２０Ｃ、Ｐ２７８Ｓ、Ｖ１４３Ａ、Ｉ２３２Ｔ、およびＦ２７０Ｃ変異を含みます。および／または
人工ｐ５３には、ｐ５３融合タンパク質、ｐ５３フラグメント、ｐ５３ペプチド、ｐ５３由来の融合高分子、ｐ５３組換えタンパク質、２番目のサイトサプレッサー変異（「ＳＳＳＭ」）を含むｐ５３を含む、人工的に操作されたｐ５３が含まれます。スーパーｐ５３。
【請求項６】
緊密な結合が、結合、共有結合、非共有結合、およびそれらの組み合わせを含む、請求項１〜５のいずれかに記載のＰＡＮＤＡコア。
【請求項７】
非共有結合が水素結合である、前記請求項のいずれかに記載のＰＡＮＤＡコア。      
【請求項８】
ＰＡＮＤＡエージェントがｐ５３標的遺伝子、好ましくはＡｐａｆ１、Ｂａｘ、Ｆａｓ、Ｄｒ５、ｍｉｒ−３４、Ｎｏｘａ、ＴＰ５３ＡＩＰ１、Ｐｅｒｐ、Ｐｉｄｄ、Ｐｉｇ３、Ｐｕｍａのレベルを調節する、請求項１に記載のＰＡＮＤＡコア。、Ｓｉｖａ、ＹＷＨＡＺ、Ｂｔｇ２、Ｃｄｋｎ１ａ、Ｇａｄｄ４５ａ、ｍｉｒ−３４ａ、ｍｉｒ−３４ｂ  ／  ３４ｃ、Ｐｒｌ３、Ｐｔｐｒｖ、Ｒｅｐｒｉｍｏ、Ｐａｉ１、Ｐｍｌ、Ｄｄｂ２、Ｅｒｃｃ５、Ｆａｎｃｃ、Ｇａｄｄ４５ａ、Ｋｕ８６、Ｍｇｍｔ、Ｍｌｈ１、Ｍｓｈ２、Ｐ５３ｒ２、Ｐｏｌｋ  、Ｘｐｃ、Ａｄｏｒａ２ｂ、Ａｌｄｈ４、Ｇａｍｔ、Ｇｌｓ２、Ｇｐｘ１、Ｌｐｉｎ１、Ｐａｒｋｉｎ、Ｐｒｋａｂ１、Ｐｒｋａｂ２、Ｐｔｅｎ、Ｓｃｏ１、Ｓｅｓｎ１、Ｓｅｓｎ２、Ｔｉｇａｒ、Ｔｐ５３ｉｎｐ１、Ｔｓｃ２、Ａｔｇ１０、Ａｔｇ２ｂ、Ａｔｇ４ａ、Ａｔｇ４ｃ、Ａｔｇ７、Ｃｔｓｄ、Ｄｔｓ１、Ｄｄｉｔ  、Ｆｏｘｏ３、Ｌａｐｔｍ４ａ、Ｌｋｂ１、Ｐｉｋ３ｒ３、Ｐｒｋａｇ２、Ｐｕｍａ、Ｔｐｐ１、Ｔｓｃ２、Ｕｌｋ１、Ｕｌｋ２、Ｕｖｒａｇ、Ｖａｍｐ４、Ｖｍｐ１、Ｂａｉ１、Ｃｘ３ｃｌ１、Ｉｃａｍ１、Ｉｒｆ５、Ｉｒｆ９、Ｉｓｇ１５、Ｍａｓｐｉｎ、Ｍｃｐ１、Ｎｃｆ２、Ｐａｉ１、Ｔｌｒ１-Ｔｌ１  、Ｔｓｐ１、Ｕｌｂｐ１、Ｕｌｂｐ２、ｍｉｒ−３４ａ、ｍｉｒ−２００ｃ、ｍｉｒ−１４５、ｍｉｒ−３４ａ、ｍｉｒ−３４ｂ  ／  ３４ｃ、Ｎｏｔｃｈ１、およびそれらの任意の組み合わせ。
【請求項９】
緊密な会合がｐ５３を実質的に安定化させる、請求項１に記載のＰＡＮＤＡコア。好ましくはｐ５３のＴｍは、少なくとも約０．５℃、好ましくは少なくとも約１℃、より好ましくは少なくとも約２増加する。℃、さらに好ましくは少なくとも約５℃、さらに好ましくは少なくとも約８℃。
【請求項１０】
適切に折りたたまれたｐ５３の集団が、ＰＡｂ１６２０免疫沈降アッセイで測定して少なくとも約３倍、好ましくはＰＡｂ１６２０免疫沈降アッセイで測定して約５倍、より好ましくは約５倍増加する、請求項１に記載のＰＡＮＤＡコア。ＰＡｂ１６２０免疫沈降アッセイで測定して１０倍、さらに好ましくはＰＡｂ１６２０免疫沈降アッセイで測定して約１００倍。
【請求項１１】
ＰＡＮＤＡエージェントが、ＰＡＮＤＡポケット上の１つまたは複数のアミノ酸、好ましくは１つまたは複数のシステインに結合することができる１つまたは複数のＰＡＮＤＡポケット結合基（「Ｒ」）を含む、請求項１から１０のいずれかに記載のＰＡＮＤＡコア。好ましくは２つ以上のシステイン、さらに好ましくは３つを超えるシステイン、さらに好ましくは約３つのシステインから約１２のシステイン。
【請求項１２】
Ｒが金属、半金属、またはマイケルアクセプターおよびチオール基などの基である、請求項１〜１１のいずれかに記載のＰＡＮＤＡコア。好ましくは、ヒ素、アンチモン、ビスマス、前述のいずれかの類似体、またはそれらの組み合わせ。
【請求項１３】
Ｒが３価および／または５価のヒ素原子、３価および／または５価のアンチモン原子、３価および／または５を含む、請求項１から１２のいずれかに記載のＰＡＮＤＡコア。−原子価ビスマス原子、および／またはそれらの組み合わせ。
【請求項１４】
ＰＡＮＤＡエージェントが、表１および表２から選択される化合物または化合物の組み合わせである、請求項１から１３のいずれかに記載のＰＡＮＤＡコア。
【請求項１５】
パンダ剤が、Ａｓ２Ｏ３、Ａｓ２Ｏ５、ＫＡｓＯ２、ＮａＡｓＯ２、ＨＡｓＮａ２Ｏ４、ＨＡｓＫ２Ｏ４、ＡｓＦ３、ＡｓＣｌ３、ＡｓＢｒ３、ＡｓＩ３からなる群から選択される化合物または化合物の組み合わせである、前記請求項のいずれかに記載のＰＡＮＤＡコア。Ａｓ２Ｏ３，  Ａｓ２Ｏ５，  ＫＡｓＯ２，  ＮａＡｓＯ２，  ＨＡｓＮａ２Ｏ４，  ＨＡｓＫ２Ｏ４，  ＡｓＦ３，  ＡｓＣｌ３，  ＡｓＢｒ３，  ＡｓＩ３，  ＡｓＡｃ３，  Ａｓ（ＯＣ２Ｈ５）３，  Ａｓ（ＯＣＨ３）３，  Ａｓ２（ＳＯ４）３，  （ＣＨ３ＣＯ２）３Ａｓ，  Ｃ８Ｈ４Ｋ２Ｏ１２Ａｓ２  ・ｘＨ２Ｏ，  ＨＯＣ６Ｈ４ＣＯＯＡｓＯ，  ［Ｏ２ＣＣＨ２Ｃ（ＯＨ）（ＣＯ２）ＣＨ２ＣＯ２］Ａｓ，  Ｓｂ２Ｏ３，  Ｓｂ２Ｏ５，  ＫＳｂＯ２，  ＮａＳｂＯ２，  ＨＳｂＮａ２Ｏ４，  ＨＳｂＫ２Ｏ４，  ＳｂＦ３，  ＳｂＣｌ３，  ＳｂＢｒ３，  ＳｂＩ３，  ＳｂＡｃ３，  Ｓｂ（ＯＣ２Ｈ５）３，  Ｓｂ（ＯＣＨ３）３，  Ｓｂ２（ＳＯ４）３，  （ＣＨ３ＣＯ２）３Ｓｂ，  Ｃ８Ｈ４Ｋ２Ｏ１２Ｓｂ２  ・ｘＨ２Ｏ，  ＨＯＣ６Ｈ４ＣＯＯＳｂＯ，  ［Ｏ２ＣＣＨ２Ｃ（ＯＨ）（ＣＯ２）ＣＨ２ＣＯ２］Ｓｂ，  Ｂｉ２Ｏ３，  Ｂｉ２Ｏ５，  ＫＢｉＯ２，  ＮａＢｉＯ２，  ＨＢｉＮａ２Ｏ４，  ＨＢｉＫ２Ｏ４，  ＢｉＦ３，  ＢｉＣｌ３，  ＢｉＢｒ３，  ＢｉＩ３，  ＢｉＡｃ３，  Ｂｉ（ＯＣ２Ｈ５）３，  Ｂｉ（ＯＣＨ３）３，  Ｂｉ２（ＳＯ４）３，  （ＣＨ３ＣＯ２）３Ｂｉ，  Ｃ８Ｈ４Ｋ２Ｏ１２Ｂｉ２  ・ｘＨ２Ｏ，  ＨＯＣ６Ｈ４ＣＯＯＢｉＯ，  Ｃ１６Ｈ１８Ａｓ２Ｎ４Ｏ２  （ＮＳＣ９２９０９），  Ｃ１３Ｈ１４Ａｓ２Ｏ６  （ＮＳＣ４８３００），  Ｃ１０Ｈ１３ＮＯ８Ｓｂ  （ＮＳＣ３１６６０），  Ｃ６Ｈ１２ＮａＯ８Ｓｂ＋  （ＮＳＣ１５６０９），  Ｃ１３Ｈ２１ＮａＯ９Ｓｂ＋  （ＮＳＣ１５６２３）。
【請求項１６】
ＰＡＮＤＡエージェントが、ｐ５３と密接に関連することから形成された任意のレデューサートを含む、請求項１から１５のいずれかに記載のＰＡＮＤＡコア。
【請求項１７】
ＰＡＮＤＡ剤がヒ素原子、アンチモン原子、ビスマス原子、それらの任意の類似体、またはそれらの組み合わせである、請求項１から１６のいずれかに記載のＰＡＮＤＡコア。
【請求項１８】
緊密な会合がＲと１つ以上のＰＡＮＤＡシステイン、好ましくは２つ以上のＰＡＮＤＡシステイン、より好ましくは３つすべてのＰＡＮＤＡシステインとの間で形成される、請求項１〜１７のいずれかに記載のＰＡＮＤＡコア。
【請求項１９】
ＰＡＮＤＡ  ＰｏｃｋｅｔとＰＡＮＤＡ  Ａｇｅｎｔの間の反応によって生成された先行する請求項のいずれかに記載のＰＡＮＤＡコア。この反応は、好ましくは、ＰＡＮＤＡの１つ以上のチオール基を酸化するＡｓ、Ｓｂ、および／またはＢｉ基によって媒介されるシステイン（ＰＡＮＤＡシステインは１〜３個の水素を失う）と、ＰＡＮＤＡエージェントのＡｓ、Ｓｂ、および／またはＢｉグループが削減されます（ＰＡＮＤＡエージェントは酸素を失います）。
【請求項２０】
ＰＡＮＤＡコアが、図１４の左パネル、図１４の右パネル、および／または図１８の三次元構造に実質的に類似している、請求項１〜１９のいずれかに記載のＰＡＮＤＡコア。
【請求項２１】
ＰＡＮＤＡコアは、図１４左パネル、図１４右パネルの三次元構造と比較して、ｊＣＥサーキュラー順列比較で約３．００  ＲＭＳＤおよび／または０．５０  ＴＭスコアを有する、先行する請求項のいずれかに記載のＰＡＮＤＡコア。および／または図１８、好ましくは約２．００  ＲＭＳＤおよび／または０．７５  ＴＭスコア適合、さらに好ましくは約１．００  ＲＭＳＤおよび／または０．９０  ＴＭスコア適合。
【請求項２２】
ＰＡＮＤＡコアが、図１４左パネル、図１４右パネル、および／または図１８の三次元構造を有する、請求項１から２１のいずれかに記載のＰＡＮＤＡコア。
【請求項２３】
ｗｔｐ５３アミノ酸１１４−１２６、１３３−１４３、２３２−２３９、および２７０−２８２に対応するアミノ酸の位置が、対応する位置に実質的に類似している、先行する請求項のいずれかに記載のＰＡＮＤＡコア図１４左パネル、図１４右パネル、図１８。
【請求項２４】
ｐ５３および請求項１〜２３のいずれか一項に記載のＰＡＮＤＡコアを含む複合体（「ＰＡＮＤＡ」）。
【請求項２５】
前記請求項のいずれかに記載の精製および単離されたＰＡＮＤＡ。
【請求項２６】
ＰＡＮＤＡエージェントが結合されていない場合と比較して、ＰＡＮＤＡが１つまたは複数のｗｔｐ５３構造、好ましくはＤＮＡ結合構造を獲得している、請求項１から２５のいずれかに記載のＰＡＮＤＡコアまたはＰＡＮＤＡ。１つ以上のｗｔｐ５３機能、好ましくは転写機能を獲得している。および／または１つまたは複数のｍｐ５３機能、好ましくは発癌機能を喪失および／または減少させている。
【請求項２７】
核酸に対する分子レベルの関連、標的遺伝子の転写活性化または抑制、関連への関連などの任意の野生型機能を含む、インビトロおよび／またはインビボで任意の機能を獲得した、先行する請求項のいずれかに記載のＰＡＮＤＡコアまたはＰＡＮＤＡ。ｗｔｐ５３またはｍｐ５３パートナー、ｗｔｐ５３またはｍｐ５３パートナーへの解離、および翻訳後修飾への受信。栄養欠乏、低酸素、酸化ストレス、過剰増殖シグナル、発癌性ストレス、ＤＮＡ損傷、リボヌクレオチド枯渇、複製ストレス、テロメア消耗などのストレスに対する細胞レベルの応答性、細胞周期停止の促進、ＤＮＡ修復の促進、アポトーシスの促進、ゲノム安定性の促進、老化の促進、およびオートファジーの促進、細胞代謝再プログラミングの調節、腫瘍微小環境シグナル伝達の調節、細胞幹細胞性の阻害、生存、浸潤および転移；生物レベルの遅延または癌の再発の防止、癌治療の有効性の増加、癌治療に対する反応率の増加、発生の調節、老化、寿命、免疫学的プロセス、および老化。
【請求項２８】
癌細胞転移、ゲノム不安定性、浸潤、移動、散乱、血管新生を促進する任意の機能を含む、インビトロおよび／またはインビボで機能を喪失、障害および／または無効化した先行する請求項のいずれかに記載のＰＡＮＤＡコアまたはＰＡＮＤＡ  、幹細胞の拡大、生存、増殖、組織の再構築、治療への抵抗、およびマイトジェンの欠陥。
【請求項２９】
生物系において、ＲＮＡレベルおよび／またはタンパク質レベルで、好ましくは約３倍以上、１つ以上のｐ５３下流標的をアップレギュレートまたはダウンレギュレートする能力を有する、先行する請求項のいずれかに記載のＰＡＮＤＡコアまたはＰＡＮＤＡ。好ましくは約５倍、さらに好ましくは約１０〜１００倍。
【請求項３０】
ｍｐ５３を有するおよび／または機能的ｐ５３を有さない対象においてｐ５３関連疾患を治療する能力を有し、疾患が癌、腫瘍、加齢の結果である、先行する請求項のいずれかに記載のＰＡＮＤＡコアまたはＰＡＮＤＡ。、発達疾患、加速老化、免疫疾患、またはそれらの組み合わせ。
【請求項３１】
腫瘍を、好ましくは少なくとも統計的に有意なレベルまで抑制する能力を有する、先行する請求項のいずれかに記載のＰＡＮＤＡコアまたはＰＡＮＤＡ。より好ましくは、統計的に有意なレベルで腫瘍を強力に抑制する能力を有する。
【請求項３２】
細胞増殖または腫瘍増殖を、好ましくはｗｔｐ５３レベルの少なくとも約１０％、さらに好ましくはｗｔｐ５３レベルの少なくとも約１００％、さらに好ましくは調節する能力を有する、先行する請求項のいずれかに記載のＰＡＮＤＡコアまたはＰＡＮＤＡ。ｗｔｐ５３レベルの約１００％を超えています。
【請求項３３】
請求項１〜３２のいずれか一項に記載のＰＡＮＤＡまたはＰＡＮＤＡコアを作製する方法であって、該方法は、１つ以上のＰＡＮＤＡ剤をｐ５３に組み合わせる工程を含む、方法。
【請求項３４】
前記ｐ５３が請求項４〜５のいずれか１つから選択される、３３に記載の方法。
【請求項３５】
請求項１〜３２のいずれか一項に記載のＰＡＮＤＡ剤。
【請求項３６】
請求項１の１つ以上の有用な特徴を有するＰＡＮＤＡエージェント、好ましくは、ＰＡＮＤＡエージェントは、請求項１〜３２のいずれかから選択され、好ましくは、ｍｐ５３は、請求項１〜３２のいずれかから選択される。
【請求項３７】
ＰＡＮＤＡ剤が１つまたは複数のｗｔｐ５３構造、好ましくはＤＮＡ結合構造をレスキューする、請求項３６に記載のＰＡＮＤＡ剤。１つまたは複数のｗｔｐ５３機能、好ましくは転写機能、さらに好ましくは請求項２７〜３２から選択される機能を救助する。１つまたは複数のｍｐ５３機能、好ましくは発癌機能、さらに好ましくは請求項２８から選択される機能を排除および／または減少させること。
【請求項３８】
１つ以上のｗｔｐ５３構造、好ましくはＤＮＡ結合構造を救済する方法；  ３９。１つ以上のｗｔｐ５３機能、好ましくは転写機能、さらに好ましくは請求項２７〜３２から選択される機能を救助すること；  １つまたは複数のｍｐ５３機能、好ましくは発癌機能、さらに好ましくは請求項２８から選択される機能を排除および／または減少させること；請求項２６から３５のいずれか一項に記載のステップを含む方法。
【請求項３９】
１つ以上のｗｔｐ５３構造、好ましくはＤＮＡ結合構造を救済する方法；  ４０。１つ以上のｗｔｐ５３機能、好ましくは転写機能、さらに好ましくは請求項２７〜３２から選択される機能を救助すること；  １つまたは複数のｍｐ５３機能、好ましくは発癌機能、さらに好ましくは請求項２８から選択される機能を排除および／または減少させること；方法は、ＰＡＮＤＡおよび／またはＰＡＮＤＡ剤を細胞、好ましくはヒト細胞、および／または対象、好ましくはヒト対象に添加する工程を含む。
【請求項４０】
ｐ５３が請求項４〜５のいずれか１つから選択される、請求項３９記載の方法。
【請求項４１】
請求項１〜３２、および３６〜３７のいずれか１項に記載のＰＡＮＤＡエージェント。
【請求項４２】
ｍｐ５３のｗｔｐ５３機能をオンおよびオフにする方法。
（ａ）最初のＰＡＮＤＡエージェントをｍｐ５３と組み合わせて、ｍｐ５３のｗｔｐ５３機能をオンにする。そして
（ｂ）（ｉ）ｍｐ５３からＰＡＮＤＡエージェントを削除する第２の化合物（Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ａｎｔｉ−Ｌｅｗｉｓｉｔｅ（ＢＡＬ）、スクシマー（ＤＭＳＡ）、Ｕｎｉｔｈｉｏｌ（ＤＭＰＳ）、および／またはそれらの組み合わせなど）を追加します。（ｉｉ）操作された細胞または対象におけるドキシサイクリンなどのｐ５３の発現を阻害する、および／または（ｉｉｉ）操作された細胞または対象におけるタモキシフェンなどのｐ５３発現をオフにする。
【請求項４３】
請求項１〜３２のいずれか１項に記載のＰＡＮＤＡまたはＰＡＮＤＡコアをインビトロおよび／またはインビボで使用して、１つまたは複数のｗｔｐ５３構造、好ましくはＤＮＡ結合構造を救済する方法。１つまたは複数のｗｔｐ５３機能、好ましくは転写機能、さらに好ましくは請求項２７〜３２から選択される機能を救助する。１つまたは複数のｍｐ５３機能、好ましくは発癌機能、さらに好ましくは請求項２８から選択される機能を排除および／または減少させる方法は、ＰＡＮＤＡまたはＰＡＮＤＡ剤を細胞、好ましくはヒト細胞、および／または対象に加える工程を含む。、好ましくは人間の被験者。
【請求項４４】
ＰＡＮＤＡまたはＰＡＮＤＡコアが請求項１〜３２のいずれか１つから選択される、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
請求項１〜４０、および３６〜３７のいずれか１項に記載のＰＡＮＤＡ剤。
【請求項４６】
ｍｐ５３を有する対象の疾患を治療する能力を有するＰＡＮＤＡ剤、疾患は好ましくは癌である。
【請求項４７】
請求項１〜３２、および３６〜３７のいずれか１項に記載のＰＡＮＤＡエージェント、請求項４６に記載のＰＡＮＤＡエージェント。
【請求項４８】
ｍｐ５３が請求項４〜５のいずれか１つから選択される、請求項４６または４７に記載のＰＡＮＤＡエージェント。
【請求項４９】
それを必要とする対象におけるｐ５３関連障害を治療する方法であって、対象に有効量の治療薬を投与する工程を含む方法であって、治療薬が以下からなる群から選択される方法：
（ａ）請求項１〜３２、および３６〜３７のいずれかに記載のＰＡＮＤＡエージェント。そして
（ｂ）請求項１〜３２のいずれか１つから選択されたＰＡＮＤＡまたはＰＡＮＤＡコア。
【請求項５０】
治療剤が、１つまたは複数の追加の治療剤、好ましくは癌および／またはＤＮＡ損傷剤の治療に有効な任意の既知の治療剤と組み合わせて投与される、請求項４９記載の方法。
【請求項５１】
前記障害が、癌、腫瘍、老化、発達性疾患、加速老化、免疫学的疾患、および／またはそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項４９〜５０に記載の方法。
【請求項５２】
有効性が増加した、それを必要とする対象におけるｐ５３関連障害の個別治療の方法であって、以下のステップを含む方法：
（ａ）対象からｐ５３  ＤＮＡサンプルを入手する。
（ｂ）ｐ５３  ＤＮＡサンプルのシーケンス；
（ｃ）被験者のｐ５３が救助可能かどうかを判断し、被験者のｐ５３を救助するのに最も適切な１つ以上のＰＡＮＤＡエージェントおよび／またはＰＡＮＤＡエージェントの組み合わせを特定します。そして
（ｄ）有効量のＰＡＮＤＡ剤および／またはＰＡＮＤＡ剤の組み合わせを対象に投与すること；
ここで、ステップ（ｃ）にはステップ（ｉ）が含まれます（ｉ）ｐ５３  ＤＮＡサンプルのシーケンスが救済可能なｐ５３のデータベースに匹敵するかどうかをコンピューター内で決定し、対応するＰＡＮＤＡエージェントやＰＡＮＤＡの組み合わせを特定しますデータベースを使用してｐ５３を救助するのに最も適したエージェント。および／または（ｉｉ）被験者のｐ５３を、ＰＡＮＤＡ剤のパネルに対してスクリーニングすることによってそれを救済することができるかどうかをインビトロおよび／またはインビボで決定する。
【請求項５３】
ＰＡＮＤＡまたはＰＡＮＤＡコアを識別する方法で、以下のステップを含みます。免疫沈降を行うために、ＰＡｂ１６２０、ＰＡｂ２４６、ＰＡｂ２４０などの適切に折りたたまれたＰＡＮＤＡに特異的な抗体を使用する。質量分析による分子量の増加の測定；ルシフェラーゼアッセイで転写活性が回復するかどうかを測定します。ｐ５３ターゲットのｍＲＮＡおよびタンパク質レベルを測定します。
三次元構造を構築するための共結晶化；  および／または
Ｔｍの増加を測定する。
【請求項５４】
ｍｐ５３を発現する、または機能的なｐ５３を欠く生物系においてｐ５３ターゲットのレベルを調節する能力を有するＰＡＮＤＡエージェント。
【請求項５５】
請求項１〜３２、および３６〜３７のいずれか１項に記載のＰＡＮＤＡエージェント。
【請求項５６】
ｍｐ５３が請求項１〜３２のいずれか１つから選択される、請求項５４または５５に記載のＰＡＮＤＡエージェント。
【請求項５７】
ｐ５３および／またはＰＡＮＤＡによって調節される１つまたは複数のタンパク質および／またはＲＮＡを制御する方法であって、以下のステップを含む方法：
レギュレーターを生物系に投与することであって、レギュレーターは以下からなる群から選択される：
（ｉ）請求項１〜３２、および３６〜３７のいずれかに記載のＰＡＮＤＡエージェント。
（ｉｉ）請求項１〜３２のいずれか１つから選択されたＰＡＮＤＡまたはＰＡＮＤＡコア。
（ｉｉｉ）ＰＡＮＤＡエージェントをｐ５３から除去する化合物；
（ｉｖ）ｍｐ５３；
（ｖ）抗ｐ５３抗体、ドックスサイクリン、および抗ＰＡＮＤＡ抗体を含むＰＡＮＤＡを除去する化合物；  そして
（ｖｉ）それらの組み合わせ。
【請求項５８】
生物系、好ましくはｍｐ５３を発現する系において腫瘍を抑制する能力を有するＰＡＮＤＡ剤。
【請求項５９】
ＰＡＮＤＡエージェントが請求項１〜３２および３６〜３７のいずれか１つから選択される、請求項５８に記載のＰＡＮＤＡエージェント。
【請求項６０】
ｍｐ５３が請求項１〜３２のいずれか１つから選択される、請求項５８または５９に記載のＰＡＮＤＡエージェント。
【請求項６１】
腫瘍を抑制する方法であって、それを必要とする対象に有効量の治療薬を投与する工程を含む方法であって、サプレッサーが以下からなる群から選択される方法。
（ａ）請求項１〜３２、および３６〜３７のいずれかに記載のＰＡＮＤＡエージェント。そして
（ｂ）請求項１〜３２のいずれか１つから選択されたＰＡＮＤＡまたはＰＡＮＤＡコア。
【請求項６２】
前記サプレッサーが、１つ以上の追加のサプレッサー、好ましくは腫瘍増殖を抑制するのに有効な任意の既知のサプレッサーおよび／またはＤＮＡ損傷剤と組み合わせて投与される、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
生物系、好ましくはｍｐ５３を発現する系における細胞増殖または腫瘍増殖を調節する能力を有するＰＡＮＤＡ剤。
【請求項６４】
前記ＰＡＮＤＡエージェントが、請求項１〜３２、および３６〜３７のいずれか１つから選択される、請求項６３に記載のＰＡＮＤＡエージェント。
【請求項６５】
ｍｐ５３が請求項１〜３２のいずれか１つから選択される、請求項６３または６４に記載のＰＡＮＤＡエージェント。
【請求項６６】
細胞増殖または腫瘍増殖を調節する方法であって、それを必要とする対象に有効量の調節剤を投与する工程を含み、調節剤が以下からなる群から選択される方法：
（ａ）請求項１〜３２、および３６〜３７のいずれかに記載のＰＡＮＤＡエージェント。そして
（ｂ）請求項１〜３２のいずれか１つから選択されたＰＡＮＤＡまたはＰＡＮＤＡコア。
【請求項６７】
レギュレーターが、１つ以上の追加のレギュレーター、好ましくは細胞増殖を遅らせるのに有効な任意の既知のレギュレーターおよび／またはＤＮＡ損傷剤と組み合わせて投与される、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
それを必要とする対象におけるｐ５３関連障害を診断する方法であって、対象に有効量の治療薬を投与する工程、およびＰＡＮＤＡまたはＰＡＮＤＡコアが形成されるかどうかを検出する工程を含む方法であって、治療薬が以下で構成されるグループ：
（ａ）請求項１〜３２、および３６〜３７のいずれかに記載のＰＡＮＤＡエージェント。そして
（ｂ）請求項１〜３２のいずれか１つから選択されたＰＡＮＤＡまたはＰＡＮＤＡコア。
【請求項６９】
前記治療薬が、１つ以上の追加の治療薬、好ましくは癌および／またはＤＮＡ損傷剤を治療するのに有効な任意の既知の治療薬と組み合わせて投与される、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記障害が、癌、腫瘍、老化、発達性疾患、加速老化、免疫学的疾患、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項４９〜５０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
さまざまな生化学的複合体、薬物候補、ならびに癌治療、化粧品、研究、および産業用途を含む、幅広い医学的および治療的用途を備えた複合体および薬物候補を作成および使用する方法が本明細書に開示されている。
【背景技術】
【０００２】
癌などのｐ５３関連障害を治療するための様々な薬物候補および方法が提案されてきた。これらの薬物候補および方法は最適ではないので、改善された薬物候補および方法の分野でのニーズがある。
【発明の概要】
【０００３】
出願人は、本明細書において新規のｐ５３  ＡＮＤエージェント複合体（「ＰＡＮＤＡ」）を記載した。有用な特性を備え、ＰＡＮＤＡ  Ｐｏｃｋｅｔと密接に関連付けられる化合物のコレクション（各化合物は「ＰＡＮＤＡエージェント」“ＰＡＮＤＡ  Ａｇｅｎｔ”）。ＰＡＮＤＡエージェントと相互作用してＰＡＮＤＡを形成するｐ５３上のポケット（ここで、ＰＡＮＤＡエージェントがバインドされていない場合は「ＰＡＮＤＡポケット」“ＰＡＮＤＡ  Ｐｏｃｋｅｔ”、ＰＡＮＤＡエージェントがバインドされている場合は「ＰＡＮＤＡコア」“ＰＡＮＤＡ  Ｃｏｒｅ”）；様々なＰＡＮＤＡおよびＰＡＮＤＡコアの形成に重要なｐ５３上の３つのシステイン残基、すなわちシステインは、ｗｔｐ５３位置のシステイン１２４（「Ｃ１２４」）、システイン１３５（「Ｃ１３５」）、およびシステイン１４１（「  Ｃ１４１」）（それぞれ「ＰＡＮＤＡシステイン」“ＰＡＮＤＡ  Ｃｙｓｔｅｉｎｅ”と一緒に「ＰＡＮＤＡトライアド」“ＰＡＮＤＡ  Ｔｒｉａｄ”）；癌や老化などのｐ５３関連疾患の診断、予後、治療を含む、ＰＡＮＤＡおよび／またはＰＡＮＤＡコアの作成および使用方法；癌や老化などのｐ５３関連疾患の診断、予後、治療を含むＰＡＮＤＡエージェントの使用方法。
【０００４】
特定の実施形態では、ＰＡＮＤＡコアは、ＰＡＮＤＡポケット、ＰＡＮＤＡエージェント、およびＰＡＮＤＡポケットとＰＡＮＤＡエージェントの間の少なくとも１つの緊密な結合を含むｐ５３上に形成される三次構造である。好ましい実施形態では、ＰＡＮＤＡポケットは、適切に折り畳まれたＰＡＮＤＡシステインから約７Åの領域から本質的になる領域であり、１つまたは複数の適切に折り畳まれたＰＡＮＤＡシステインに隣接するすべてのアミノ酸、１つと接触するすべてのアミノ酸を含むまたはより適切に折りたたまれたＰＡＮＤＡシステイン、およびすべてのＰＡＮＤＡシステイン。好ましい実施形態では、ＰＡＮＤＡ剤は、１つまたは複数の有用な特性を有する物質の組成物である。ＰＡＮＤＡエージェントのそのような有用な特性の例には、（ａ）適切に折りたたまれたｐ５３の母集団の実質的な増加を引き起こす可能性があり、好ましくは、ＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる増加よりも少なくとも約３倍多く、より好ましくは、ＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる増加よりも少なくとも約５倍多く、さらに好ましくは、ＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる増加よりも少なくとも約１０倍多く、さらに好ましくは、増加によって引き起こされる増加よりも少なくとも約１００倍多い増加である。ＰＲＩＭＡ−１；  （ｂ）ｐ５３の転写機能に実質的な改善を引き起こすことができ、好ましくは、改善は、ＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる改善よりも少なくとも約３倍大きい。より好ましくは、改善はＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる改善よりも少なくとも約５倍大きく、さらに好ましくは、改善はＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる改善より少なくとも約１０倍大きく、さらに好ましくは改善は少なくとも約１００倍であるＰＲＩＭＡ−１による改善よりも（ｃ）例えば、ｐ５３  Ｔｍの増加によって測定されるように、ｐ５３の安定化の実質的な増強を引き起こすことができ、好ましくは、増強は、ＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる増強よりも少なくとも約３倍大きい、より好ましくは、改善は、ＰＲＩＭＡ−１による改善の少なくとも約５倍、さらに好ましくはＰＲＩＭＡ−１による改善の少なくとも約１０倍、さらに好ましくはＰＲＩＭＡ−１による改善の少なくとも約１００倍の改善。好ましい実施形態では、ＰＡＮＤＡエージェントは、２つ以上の有用な特性を有する。より好ましい実施形態では、ＰＡＮＤＡエージェントは３つ以上の有用な特性を有する。
【０００５】
特定の実施形態では、ＰＡＮＤＡポケットは、本質的にＰＡＮＤＡトライアドおよびｗｔｐ５３位置Ｓ１１６、Ｃ２７５、Ｒ２７３、Ｙ２３４、Ｖ１２２、Ｔ１２３、Ｔ１２５、Ｙ１２６、Ｍ１３３、Ｆ１３４、Ｑ１３６、Ｌ１３７、Ｋ１３９に対応するアミノ酸からなる。Ｔ１４０、Ｐ１４２、Ｖ１４３、Ｌ１１４、Ｈ１１５、Ｇ１１７、Ｔ１１８、Ａ１１９、Ｋ１２０、Ｓ１２１、Ａ１３８、Ｉ２３２、Ｈ２３３、Ｎ２３５、Ｙ２３６、Ｍ２３７、Ｃ２３８、Ｎ２３９、Ｆ２７０、Ｅ２７１、Ｖ２７２、Ｖ２７４、Ａ２７６、Ｃ２７７、Ｐ２７８、Ｇ２７９、Ｒ２８０、Ｄ２８１、およびＲ２８２。特定の好ましい実施形態では、ＰＡＮＤＡポケットは、本質的に図１４の左パネル、図１４の右パネル、および／または図１８のように配置される。
【０００６】
好ましいｐ５３は、任意の野生型ｐ５３（「ｗｔｐ５３」）、任意の変異ｐ５３（「ｍｐ５３」）、ｗｔｐ５３およびｍｐ５３のすべての天然および人工形態、ならびにそれらの任意の組み合わせである。ｗｔｐ５３の好ましい例には、ｐ５３α、ｐ５３β、ｐ５３γ、Δ４０ｐ５３α、Δ４０ｐ５３β、Δ４０ｐ５３γ、および１つまたは複数の一塩基多型（「ＳＮＰ」）を有するものなどの任意の許容される変異体が含まれる。セクション７．２５に示すようなｗｔｐ５３ヒトｗｔｐ５３アイソフォームのサンプル配列。
【０００７】
好ましいｍｐ５３は、任意の単一のアミノ酸変異を含む、ｐ５３上に少なくとも１つの変異を有する。好ましくは、突然変異は、ｐ５３の構造および／または機能を変更および／または部分的に変更するｍｐ５３の好ましい例には、Ｒ１７５、Ｇ２４５、Ｒ２４８、Ｒ２４９、Ｒ２７３、Ｒ２８２、Ｃ１７６、Ｈ１７９、Ｙ２２０、Ｐ２７８、Ｖ１４３、Ｉ２３２、およびＦ２７０。例のｍｐ５３変異には、Ｒ１７５Ｈ、Ｇ２４５Ｄ  ／  Ｓ、Ｒ２４８Ｑ  ／  Ｗ、Ｒ２４９Ｓ、Ｒ２７３Ｃ  ／  Ｈ、Ｒ２８２Ｗ、Ｃ１７６Ｆ、Ｈ１７９Ｒ、Ｙ２２０Ｃ、Ｐ２７８Ｓ、Ｖ１４３Ａ、Ｉ２３２Ｔ、およびＦ２７０Ｃがあります。
【０００８】
好ましい人工ｐ５３には、人工的に操作された任意のｐ５３が含まれる。人工的に操作されたｐ５３の好ましい例には、ｐ５３融合タンパク質、ｐ５３フラグメント、ｐ５３ペプチド、ｐ５３由来融合高分子、ｐ５３組換えタンパク質、第２部位サプレッサー変異（「ＳＳＳＭ」）を有するｐ５３、およびスーパー  ｐ５３。
【０００９】
特定の実施形態では、ＰＡＮＤＡエージェントおよびＰＡＮＤＡポケットによって形成される強固な会合は、結合、共有結合、非共有結合（水素結合など）、およびそれらの組み合わせであり得る。特定の実施形態では、緊密な会合は、ＰＡＮＤＡ剤と１つまたは複数のＰＡＮＤＡシステイン、好ましくは２つ以上のＰＡＮＤＡシステイン、より好ましくは３つすべてのＰＡＮＤＡシステインとの間で形成される。
【００１０】
特定の実施形態では、ＰＡＮＤＡ剤は、１つまたは複数のｐ５３標的遺伝子のレベルを調節することができる。例となる標的遺伝子には、Ａｐａｆ１、Ｂａｘ、Ｆａｓ、Ｄｒ５、ｍｉｒ−３４、Ｎｏｘａ、ＴＰ５３ＡＩＰ１、Ｐｅｒｐ、Ｐｉｄｄ、Ｐｉｇ３、Ｐｕｍａ、Ｓｉｖａ、ＹＷＨＡＺ、Ｂｔｇ２、Ｃｄｋｎ１ａ、Ｇａｄｄ４５ａ、ｍｉｒ−３４ａ、ｍｉｒ−３４ｂ  ／  ３４ｃ、Ｐｒｌ３、Ｐｔｐｒｖ、Ｒｅｐｒｉｍｏ、Ｐａｉ１、Ｐｍｌ、Ｄｄｂ２、Ｅｒｃｃ５、Ｆａｎｃｃ、Ｇａｄｄ４５ａ、Ｋｕ８６、Ｍｇｍｔ、Ｍｌｈ１、Ｍｓｈ２、Ｐ５３ｒ２、Ｐｏｌｋ、Ｘｐｃ、Ａｄｏｒａ２ｂ、Ａｌｄｈ４、Ｇａｍｔ、Ｇｌｓ２、Ｇｐｘ１、Ｌｐｉｎ１、Ｐａｒｋｉｎ、Ｐｒｋａｂ１、Ｐｒｋａｂ２、Ｐｔｅｎ、Ｓｃｏ１、Ｓｅｓｎ１、Ｓｅｓｎ２、Ｔｉｇａｒ、Ｔｐ５３ｉｎｐ１、Ｔｓｃ２、Ａｔｇ１０、Ａｔｇ２ｂ、Ａｔｇ４ａ、Ａｔｇ４ｃ、Ａｔｇ７、Ｃｔｓｄ、Ｄｄｉｔ４、Ｄｒａｍ１、Ｆｏｘｏ３、Ｌａｐｔｍ４ａ、Ｌｋｂ１、Ｐｉｋ３ｒ３、Ｐｒｋａｇ２、Ｐｕｍａ、Ｔｐｐ１、Ｕｋ１、Ｕｌｋ１、Ｕｌｋ１  Ｖａｍｐ４、Ｖｍｐ１、Ｂａｉ１、Ｃｘ３ｃｌ１、Ｉｃａｍ１、Ｉｒｆ５、Ｉｒｆ９、Ｉｓｇ１５、Ｍａｓｐｉｎ、Ｍｃｐ１、Ｎｃｆ２、Ｐａｉ１、Ｔｌｒ１-Ｔｌｒ１０、Ｔｓｐ１、Ｕｌｂｐ１、Ｕｌｂｐ２、ｍｉｒ−３４ａ、ｍｉｒ−２００ｃ、ｍｉｒ−１４５、ｍｉｒ−３４ａ、ｍｉｒ−３４ｂ  ／  ３４ｃ、およびＮｏｔｃｈ１。
【００１１】
特定の実施形態では、ＰＡＮＤＡエージェントとＰＡＮＤＡコアによって形成される強固な会合は、ｐ５３を実質的に安定させる。好ましくは、緊密な会合は、ｐ５３のＴｍを少なくとも約０．５℃、より好ましくは少なくとも約１℃、さらに好ましくは少なくとも約２℃、さらに好ましくは少なくとも約５℃、さらに好ましくは増加させる。少なくとも約８℃。  
【００１２】
特定の実施形態では、ＰＡＮＤＡエージェントおよびＰＡＮＤＡコアによって形成される密接な会合は、適切に折り畳まれたｐ５３の集団を少なくとも約３倍、好ましくは約５倍、より好ましくは約１０倍、さらに好ましくは約１００倍増加させる。回。好ましい実施形態では、増加は、ＰＡｂ１６２０免疫沈降アッセイによって測定される。
【００１３】
特定の実施形態では、ＰＡＮＤＡ剤は、ＰＡＮＤＡポケット上の１つ以上のアミノ酸、好ましくは１つ以上のシステイン、より好ましくは２つ以上のシステインに結合することができる１つ以上のＰＡＮＤＡポケット結合基（「Ｒ」）を含み、さらに好ましくは３個より多いシステイン、さらに好ましくは約３個から約１２個のシステイン。Ｒは、金属基、半金属基、およびマイケルアクセプターおよびチオール基などのパンダポケットに結合することができる他の基を含むことが好ましい。Ｒは、その任意のアナログおよびそれらの任意の組み合わせを含む、１つ以上のヒ素、アンチモン、およびビスマスを含むことがさらに好ましい。例としてのＲには、３価および／または５価のヒ素原子、３価および／または５価のアンチモン原子、３価および／または５価のビスマス原子を含む化合物、および／またはそれらの組み合わせ。例示的なＰＡＮＤＡエージェントには、表１〜表６が含まれます。これは、申請者がＰＡＮＤＡシステインに効率的に結合し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏ、および／またはｉｎ  ｓｉｔｕでｐ５３を効率的にレスキューすると予測したものです。より代表的なＰＡＮＤＡエージェントには、Ａｓ２Ｏ３、Ａｓ２Ｏ５、ＫＡｓＯ２、ＮａＡｓＯ２、ＨＡｓＮａ２Ｏ４、ＨＡｓＫ２Ｏ４、ＡｓＦ３、ＡｓＣｌ３、ＡｓＢｒ３、ＡｓＩ３、ＡｓＡｃ３、Ａｓ（ＯＣ２Ｈ５）３、Ａｓ（ＯＣＨ３）３、Ａｓ２（ＳＯ４）３、（ＣＨ３ＣＯ２）３Ａｓ、Ｃ８Ｈ４Ｋ２Ｏ１２Ａｓ２  ・ｘＨ２Ｏ、ＨＯＣ６Ｈ４ＣＯＯＡｓＯ、［Ｏ２ＣＣＨ２Ｃ（ＯＨ）（ＣＯ２）ＣＨ２ＣＯ２］Ａｓ、Ｓｂ２Ｏ３、Ｓｂ２Ｏ５、ＫＳｂＯ２、ＮａＳｂＯ２、ＨＳｂＮａ２Ｏ４、ＨＳｂＫ２Ｏ４、ＳｂＦ３、ＳｂＣｌ３、ＳｂＢｒ３、ＳｂＩ３、ＳｂＡｃ３、Ｓｂ（ＯＣ２Ｈ５）３、Ｓｂ（ＯＣＨ３）３、Ｓｂ２（ＳＯ４）３、（ＣＨ３ＣＯ２）３Ｓｂ、Ｃ８Ｈ４Ｋ２Ｏ１２Ｓｂ２  ・ｘＨ２Ｏ、ＨＯＣ６Ｈ４ＣＯＯＳｂＯ、［Ｏ２ＣＣＨ２Ｃ（ＯＨ）（ＣＯ２）ＣＨ２ＣＯ２］Ｓｂ、Ｂｉ２Ｏ３、Ｂｉ２Ｏ５、ＫＢｉＯ２、ＮａＢｉＯ２、ＨＢｉＮａ２Ｏ４、ＨＢｉＫ２Ｏ４、ＢｉＦ３、ＢｉＣｌ３、ＢｉＢｒ３、ＢｉＩ３、ＢｉＡｃ３、Ｂｉ（ＯＣ２Ｈ５）３、Ｂｉ（ＯＣＨ３）３、Ｂｉ２（ＳＯ４）３、（ＣＨ３ＣＯ２）３Ｂｉ、Ｃ８Ｈ４Ｋ２Ｏ１２Ｂｉ２  ・ｘＨ２Ｏ、ＨＯＣ６Ｈ４ＣＯＯＢｉＯ、Ｃ１６Ｈ１８Ａｓ２Ｎ４Ｏ２  （ＮＳＣ９２９０９）、Ｃ１３Ｈ１４Ａｓ２Ｏ６  （ＮＳＣ４８３００）、Ｃ１０Ｈ１３ＮＯ８Ｓｂ  （ＮＳＣ３１６６０）、Ｃ６Ｈ１２ＮａＯ８Ｓｂ＋  （ＮＳＣ１５６０９）、Ｃ１３Ｈ２１ＮａＯ９Ｓｂ＋  （ＮＳＣ１５６２３）、およびそれらの組み合わせ。さらなる例のＰＡＮＤＡエージェントには、表７が含まれます。これは、出願人が実験により強力な程度の構造的レスキューと転写活性レスキューを示すことを確認しています。
【００１４】
特定の実施形態では、ＰＡＮＤＡコアは、ＰＡＮＤＡポケットとＰＡＮＤＡエージェントとの間の反応によって生成される。好ましくは、反応は、好ましくは、ＰＡＮＤＡシステインの１つまたは複数のチオール基を酸化するＡｓ、Ｓｂ、および／またはＢｉ基（ＰＡＮＤＡシステインは１〜３個の水素を失う）およびＰＡＮＤＡのＡｓ、Ｓｂ、および／またはＢｉ基によって媒介される  エージェントが減少します（ＰＡＮＤＡエージェントは酸素を失います）。特定の実施形態では、ＰＡＮＤＡ剤は、ｐ５３と密接に関連していることから形成された還元物である。特定の実施形態では、ＰＡＮＤＡ剤は、ヒ素原子、アンチモン原子、ビスマス原子、それらの任意の類似体、またはそれらの組み合わせである。
【００１５】
例示的なＰＡＮＤＡコアは、図１４の左パネル（付録Ａ）、図１４の右パネル（付録Ｂ）および／または図１８の三次元構造上の対応するアミノ酸に実質的に類似している。特定の好ましい実施形態では、ＰＡＮＤＡコアは、図１４の左パネル（付録Ａ）、図１４の右パネル（付録Ｂ）および／または図１８、好ましくは約２．００  ＲＭＳＤおよび／または０．７５  ＴＭスコア適合、さらに好ましくは約１．００  ＲＭＳＤおよび／または０．９０  ＴＭスコア適合。特定の好ましい実施形態において、ＰＡＮＤＡコアは、図１４の左パネル（付録Ａ）、図１４の右パネル（付録Ｂ）および／または図１８の三次元構造上のアミノ酸に対応する。特定の好ましい実施形態において、アミノＰＡＮＤＡコア上のｗｔｐ５３アミノ酸１１４〜１２６、１３３〜１４３、２３２〜２３９、および２７０〜２８２に対応する酸は、対応する位置に実質的に類似しています。図１４左パネル（付録Ａ）、図１４右パネル（付録Ｂ）および／または図１８。
【００１６】
特定の実施形態では、ＰＡＮＤＡの構造は、図１４の左パネル（付録Ａ）、図１４の右パネル（付録Ｂ）、および／または図１８の三次元構造と実質的に同様である。ＰＡＮＤＡは、図１４の左のパネル（付録Ａ）、図１４の右のパネル（付録Ｂ）および／または図１８の３次元構造と比較して、ｊＣＥ循環置換で約３．００  ＲＭＳＤまたは０．５０のＴＭスコアを持っています。約２．００  ＲＭＳＤおよび／または０．７５  ＴＭスコア適合、さらに好ましくは約１．００  ＲＭＳＤおよび／または０．９０  ＴＭスコア適合。特定の好ましい実施形態では、ＰＡＮＤＡは、図１４の左パネル（付録Ａ）、図１４の右パネル（付録Ｂ）および／または図１８の三次元構造に対応する。特定の好ましい実施形態では、ｗｔｐ５３アミノに対応するアミノ酸ＰＡＮＤＡの酸１１４−１２６、１３３−１４３、２３２−２３９、および２７０−２８２は、図１４の左パネル（付録Ａ）、図１４の右パネル（付録Ｂ）および／または図１８の対応する場所とほぼ同じです。
【００１７】
特定の実施形態では、形成されたＰＡＮＤＡは、ＰＡｂ１６２０を使用する免疫沈降などによる、本出願に開示される任意の方法を含む任意の従来の方法を使用して精製および単離され得る。
【００１８】
特定の好ましい実施形態では、ＰＡＮＤＡ剤が結合されていない場合と比較して、形成されたＰＡＮＤＡは、１つまたは複数のｗｔｐ５３構造、好ましくはＤＮＡ結合構造を獲得している。１つ以上のｗｔｐ５３機能、好ましくは転写機能を獲得している。および／または１つまたは複数のｍｐ５３機能、好ましくは発癌機能を喪失および／または減少させている。野生型機能は、インビトロおよび／またはインビボで得ることができる。獲得した模範的な野生型機能は、核酸への関連付け、転写活性化または標的遺伝子の抑制、ｗｔｐ５３またはｍｐ５３パートナーへの関連付け、ｗｔｐ５３またはｍｐ５３パートナーへの関連付け、翻訳後修飾への受け取りなど、分子レベルであり得ます。栄養不足、低酸素、酸化ストレス、過剰増殖シグナル、発がん性ストレス、ＤＮＡ損傷、リボヌクレオチド枯渇、複製ストレス、テロメアの消耗などのストレスに対する応答性、細胞周期停止の促進、ＤＮＡの促進など、細胞レベルで−修復、アポトーシスの促進、ゲノム安定性の促進、老化の促進、およびオートファジーの促進、細胞代謝の再プログラミングの調節、腫瘍微小環境シグナル伝達の調節、細胞幹細胞性の阻害、生存、浸潤および転移；生物レベルでは、癌の再発の遅延または防止、癌治療の有効性の増加、癌治療に対する反応率の増加、発生の調節、老化、寿命、免疫学的プロセス、老化など。ｍｐ５３機能は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ  ｖｉｖｏで失われたり、障害されたり、無効になったりする可能性があります。失われた例のｍｐ５３機能には、がん細胞の転移、ゲノムの不安定性、浸潤、移動、散乱、血管新生、幹細胞の拡大、生存、増殖、組織の再構築、治療抵抗性、および分裂促進性の欠陥を促進する発がん性機能など、あらゆる機能が含まれます。
【００１９】
特定の好ましい実施形態では、形成されたＰＡＮＤＡは、生物系において、好ましくは３倍、ＲＮＡレベルおよび／またはタンパク質レベルで、１つまたは複数のｐ５３下流標的を上方制御または下方制御する能力を獲得および／または喪失することができる。より好ましくは５倍、さらに好ましくは１０−１００倍。
【００２０】
特定の好ましい実施形態において、ｍｐ５３を有するおよび／または機能的ｐ５３を有さない対象においてｐ５３関連疾患を治療する能力を有し、疾患が癌、腫瘍、結果である、先行する請求項のいずれかに記載のＰＡＮＤＡ剤。加齢、発達疾患、加速加齢、免疫疾患、またはそれらの組み合わせの。
【００２１】
特定の好ましい実施形態では、形成されたＰＡＮＤＡは、腫瘍を、好ましくは少なくとも統計的に有意なレベルまで抑制する能力を有する。より好ましくは、統計的に有意なレベルで腫瘍を強力に抑制する能力を有する。特定の好ましい実施形態では、形成されたＰＡＮＤＡは、細胞増殖または腫瘍増殖を、好ましくはｗｔｐ５３レベルの少なくとも約１０％、さらに好ましくはｗｔｐ５３レベルの少なくとも約１００％、さらに好ましくは約１００％を超えるまで調節する能力を有する。ｗｔｐ５３レベル。
【００２２】
特定の好ましい実施形態では、ＰＡＮＤＡまたはＰＡＮＤＡコアは、１つまたは複数のＰＡＮＤＡエージェントをｐ５３、好ましくはｍｐ５３に、単一のアミノ酸変異を含むｐ５３上の少なくとも１つの変異と組み合わせることによって作製することができる。好ましくは、変異は、ｐ５３の構造および／または機能を変更および／または部分的に変更する。ｍｐ５３の好ましい例には、Ｒ１７５、Ｇ２４５、Ｒ２４８、Ｒ２４９、Ｒ２７３、Ｒ２８２、Ｃ１７６、Ｈ１７９、Ｙ２２０、Ｐ２７８、Ｖ１４３、Ｉ２３２、およびＦ２７０での１つまたは複数の変異が含まれます。例のｍｐ５３変異には、Ｒ１７５Ｈ、Ｇ２４５Ｄ  ／  Ｓ、Ｒ２４８Ｑ  ／  Ｗ、Ｒ２４９Ｓ、Ｒ２７３Ｃ  ／  Ｈ、Ｒ２８２Ｗ、Ｃ１７６Ｆ、Ｈ１７９Ｒ、Ｙ２２０Ｃ、Ｐ２７８Ｓ、Ｖ１４３Ａ、Ｉ２３２Ｔ、およびＦ２７０Ｃがあります。
【００２３】
特定の好ましい実施形態では、ＰＡＮＤＡエージェントは、１つまたは複数のｗｔｐ５３構造、好ましくはＤＮＡ結合構造を救済することができる。１つ以上のｗｔｐ５３機能、好ましくは転写機能を救出し、１つ以上のｍｐ５３機能、好ましくは発癌性機能を排除および／または減少させる。
【００２４】
ある好ましい実施形態において、１つ以上のｗｔｐ５３構造、好ましくはＤＮＡ結合構造は、１つ以上のＰＡＮＤＡ剤をｐ５３に組み合わせて、ＰＡＮＤＡ、好ましくは単一のｐ５３上の少なくとも１つの変異を有するｍｐ５３を形成することによって救済され得る。アミノ酸変異。好ましくは、変異は、ｐ５３の構造および／または機能を変更および／または部分的に変更する。ｍｐ５３の好ましい例には、Ｒ１７５、Ｇ２４５、Ｒ２４８、Ｒ２４９、Ｒ２７３、Ｒ２８２、Ｃ１７６、Ｈ１７９、Ｙ２２０、Ｐ２７８、Ｖ１４３、Ｉ２３２、およびＦ２７０での１つまたは複数の変異が含まれます。例のｍｐ５３変異には、Ｒ１７５Ｈ、Ｇ２４５Ｄ  ／  Ｓ、Ｒ２４８Ｑ  ／  Ｗ、Ｒ２４９Ｓ、Ｒ２７３Ｃ  ／  Ｈ、Ｒ２８２Ｗ、Ｃ１７６Ｆ、Ｈ１７９Ｒ、Ｙ２２０Ｃ、Ｐ２７８Ｓ、Ｖ１４３Ａ、Ｉ２３２Ｔ、およびＦ２７０Ｃがあります。
【００２５】
特定の好ましい実施形態において、１つ以上のｗｔｐ５３機能、好ましくは好ましくは転写機能は、１つ以上のＰＡＮＤＡ剤をｐ５３に組み合わせて、ＰＡＮＤＡ、好ましくはｐ５３上の少なくとも１つの変異を有するｍｐ５３を形成することによって救済され得る。単一アミノ酸変異。好ましくは、変異は、ｐ５３の構造および／または機能を変更および／または部分的に変更する。ｍｐ５３の好ましい例には、Ｒ１７５、Ｇ２４５、Ｒ２４８、Ｒ２４９、Ｒ２７３、Ｒ２８２、Ｃ１７６、Ｈ１７９、Ｙ２２０、Ｐ２７８、Ｖ１４３、Ｉ２３２、およびＦ２７０での１つまたは複数の変異が含まれます。例のｍｐ５３変異には、Ｒ１７５Ｈ、Ｇ２４５Ｄ  ／  Ｓ、Ｒ２４８Ｑ  ／  Ｗ、Ｒ２４９Ｓ、Ｒ２７３Ｃ  ／  Ｈ、Ｒ２８２Ｗ、Ｃ１７６Ｆ、Ｈ１７９Ｒ、Ｙ２２０Ｃ、Ｐ２７８Ｓ、Ｖ１４３Ａ、Ｉ２３２Ｔ、およびＦ２７０Ｃがあります。
【００２６】
特定の好ましい実施形態において、１つ以上のｍｐ５３機能、好ましくは発癌性機能は、１つ以上のＰＡＮＤＡ剤をｐ５３に組み合わせてＰＡＮＤＡ、好ましくはｐ５３に少なくとも１つの変異を有するｍｐ５３を形成することにより、排除および／または減少させることができる。、単一のアミノ酸変異を含む。好ましくは、変異は、ｐ５３の構造および／または機能を変更および／または部分的に変更する。ｍｐ５３の好ましい例には、Ｒ１７５、Ｇ２４５、Ｒ２４８、Ｒ２４９、Ｒ２７３、Ｒ２８２、Ｃ１７６、Ｈ１７９、Ｙ２２０、Ｐ２７８、Ｖ１４３、Ｉ２３２、およびＦ２７０での１つまたは複数の変異が含まれます。例のｍｐ５３変異には、Ｒ１７５Ｈ、Ｇ２４５Ｄ  ／  Ｓ、Ｒ２４８Ｑ  ／  Ｗ、Ｒ２４９Ｓ、Ｒ２７３Ｃ  ／  Ｈ、Ｒ２８２Ｗ、Ｃ１７６Ｆ、Ｈ１７９Ｒ、Ｙ２２０Ｃ、Ｐ２７８Ｓ、Ｖ１４３Ａ、Ｉ２３２Ｔ、およびＦ２７０Ｃがあります。
【００２７】
特定の好ましい実施形態において、１つ以上のｗｔｐ５３構造、好ましくはＤＮＡ結合構造は、細胞、好ましくはヒト細胞、および／または対象、好ましくはヒトに、ＰＡＮＤＡおよび／またはＰＡＮＤＡ剤を加えることによって救済され得る。件名。
【００２８】
特定の好ましい実施形態では、１つ以上のｗｔｐ５３機能、好ましくは好ましくは転写機能は、細胞、好ましくはヒト細胞、および／または対象、好ましくは被験体にＰＡＮＤＡおよび／またはＰＡＮＤＡ剤を加えることによって救済され得る。人間の主題。
【００２９】
特定の好ましい実施形態では、１つまたは複数のｍｐ５３機能、好ましくは発癌機能は、細胞、好ましくはヒト細胞、および／または対象にＰＡＮＤＡおよび／またはＰＡＮＤＡ剤を添加することによって、排除および／または減少させることができる。、好ましくは人間の被験者。
【００３０】
出願人は、本明細書において、ｍｐ５３のｗｔｐ５３機能をオンおよびオフにする方法を開示し、この方法は、以下のステップを含む。
（ａ）最初のＰＡＮＤＡエージェントをｍｐ５３と組み合わせて、ｍｐ５３のｗｔｐ５３機能をオンにする。そして
（ｂ）（ｉ）ｍｐ５３からＰＡＮＤＡエージェントを削除する第２の化合物（Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ａｎｔｉ−Ｌｅｗｉｓｉｔｅ（ＢＡＬ）、スクシマー（ＤＭＳＡ）、Ｕｎｉｔｈｉｏｌ（ＤＭＰＳ）、および／またはそれらの組み合わせなど）を追加します。（ｉｉ）操作された細胞または対象におけるドキシサイクリンなどのｐ５３の発現を阻害する、および／または（ｉｉｉ）操作された細胞または対象におけるタモキシフェンなどのｐ５３発現をオフにする。
【００３１】
出願人は、ここで、インビトロおよび／またはインビボでＰＡＮＤＡまたはＰＡＮＤＡコアを使用して、１つ以上のｗｔｐ５３構造、好ましくはＤＮＡ結合構造を救済する方法を開示する。１つ以上のｗｔｐ５３機能、好ましくは転写機能を救助する。１つまたは複数のｍｐ５３機能、好ましくは発癌機能を排除および／または減少させ、この方法は、細胞、好ましくはヒト細胞、および／または対象、好ましくはヒト対象にＰＡＮＤＡまたはＰＡＮＤＡ剤を添加するステップを含む。
【００３２】
出願人は、ｍｐ５３を有する対象の疾患を治療する能力を有するＰＡＮＤＡ剤の群を本明細書に開示し、疾患は好ましくは癌である。
【００３３】
出願人は、癌、腫瘍、加齢、発達疾患、加速加齢、免疫学的疾患、および／またはそれらの組み合わせなど、それを必要とする対象におけるｐ５３関連障害を治療する方法を本明細書で開示する。この方法は、有効量の治療薬を対象に投与するステップを含み、治療薬は、（ａ）１つまたは複数のＰＡＮＤＡ剤または（ｂ）１つまたは複数のＰＡＮＤＡまたはＰＡＮＤＡコアである。好ましい実施形態では、治療薬は、１つまたは複数の追加の治療薬、好ましくは癌および／またはＤＮＡ損傷剤の治療に有効な任意の既知の治療薬と組み合わせて投与される。
【００３４】
出願人はさらに、それを必要とする対象におけるｐ５３関連障害の非常に効率的な個別化された治療方法を開示する。この方法は、以下のステップを含む。（ａ）対象からｐ５３  ＤＮＡサンプルを入手する。（ｂ）ｐ５３  ＤＮＡサンプルのシーケンス；  （ｃ）被験者のｐ５３が救助可能かどうかを判断し、被験者のｐ５３を救助するのに最も適切な１つ以上のＰＡＮＤＡエージェントおよび／またはＰＡＮＤＡエージェントの組み合わせを特定します。（ｄ）有効量のＰＡＮＤＡ剤および／またはＰＡＮＤＡ剤の組み合わせを対象に投与すること；  ここで、ステップ（ｃ）にはステップ（ｉ）が含まれます（ｉ）ｐ５３  ＤＮＡサンプルのシーケンスが救済可能なｐ５３のデータベースに匹敵するかどうかをコンピューター内で決定し、対応するＰＡＮＤＡエージェントやＰＡＮＤＡの組み合わせを特定しますデータベースを使用してｐ５３を救助するのに最も適したエージェント。および／または（ｉｉ）被験者のｐ５３を、ＰＡＮＤＡ剤のパネルに対してスクリーニングすることによってそれを救済することができるかどうかをインビトロおよび／またはインビボで決定する。  
【００３５】
出願人はさらに、ＰＡＮＤＡまたはＰＡＮＤＡコアを識別する方法を開示する。この方法は、以下の工程を含む：免疫沈降を行うために、ＰＡｂ１６２０、ＰＡｂ２４６、および／またはＰＡｂ２４０などの適切に折り畳まれたＰＡＮＤＡに特異的な抗体を使用する。質量分析による分子量の増加の測定；ルシフェラーゼアッセイで転写活性が回復するかどうかを測定します。ｐ５３ターゲットのｍＲＮＡおよびタンパク質レベルを測定します。三次元構造を構築するための共結晶化；および／またはＴｍの増加を測定する。
【００３６】
出願人は、本明細書において、ｍｐ５３を発現するまたは機能的なｐ５３を欠く生物系においてｐ５３標的のレベルを調節する能力を有するＰＡＮＤＡ剤のコレクションを開示する。出願人はさらに、ｐ５３および／またはＰＡＮＤＡによって調節される１つまたは複数のタンパク質および／またはＲＮＡを制御する方法を開示し、この方法はレギュレーターを生体系に投与するステップを含み、レギュレーターは以下からなる群から選択される：
（ｉ）１つ以上のＰＡＮＤＡエージェント。
（ｉｉ）１つ以上のＰＡＮＤＡまたはＰＡＮＤＡコア；
（ｉｉｉ）ＰＡＮＤＡエージェントをｐ５３から除去する１つ以上の化合物。
（ｉｖ）１つ以上のｍｐ５３；
（ｖ）抗ｐ５３抗体、ドックスサイクリン、および抗ＰＡＮＤＡ抗体を含む、ＰＡＮＤＡを除去する１つまたは複数の化合物；そして
（ｖｉ）それらの組み合わせ。
【００３７】
出願人は、本明細書において、生物系、好ましくはｍｐ５３を発現する系において腫瘍を抑制する能力を有するＰＡＮＤＡ剤のコレクションを開示する。出願人は、腫瘍を抑制する方法をさらに開示し、この方法は、それを必要とする対象に有効量の治療薬を投与するステップを含み、サプレッサーは以下からなる群から選択される：
（ｉ）１つ以上のＰＡＮＤＡエージェント。そして
（ｉｉ）１つ以上のＰＡＮＤＡおよび／またはＰＡＮＤＡコア。
好ましい実施形態では、サプレッサーは、１つ以上の追加のサプレッサー、好ましくは腫瘍増殖を抑制するのに有効な任意の既知のサプレッサーおよび／またはＤＮＡ損傷剤と組み合わせて投与される。
【００３８】
出願人は、生物系、好ましくはｍｐ５３を発現する系において細胞増殖または腫瘍増殖を調節する能力を有するＰＡＮＤＡ剤のコレクションを本明細書に開示する。出願人は、細胞増殖または腫瘍増殖を調節する方法をさらに開示し、この方法は、それを必要とする対象に有効量のレギュレーターを投与する工程を含み、レギュレーターは、（ｉ）１つ以上からなる群から選択される。ＰＡＮＤＡエージェント；  （ｉｉ）１つ以上のＰＡＮＤＡおよび／またはＰＡＮＤＡコア。好ましい実施形態では、調節因子は、１つ以上の追加の調節因子、好ましくは細胞増殖を遅らせるのに有効な任意の既知の調節因子および／またはＤＮＡ損傷剤と組み合わせて投与される。
【００３９】
出願人は、本明細書において、それを必要とする対象において、癌、腫瘍、老化、発達疾患、加速老化、免疫学的疾患、またはそれらの組み合わせなどのｐ５３関連障害を診断する方法を開示する。対象に有効量の治療薬を投与するステップと、ＰＡＮＤＡまたはＰＡＮＤＡコアが形成されるかどうかを検出するステップとを含む診断方法であって、治療薬は以下からなる群から選択される：
（ｉ）１つ以上のＰＡＮＤＡエージェント。そして
（ｉｉ）１つ以上のＰＡＮＤＡおよび／またはＰＡＮＤＡコア。
好ましい実施形態では、診断方法は、治療剤が１つ以上の追加のＰＡＮＤＡ剤および／または癌の治療に有効な他の任意の既知の治療剤などの１つ以上の追加の治療剤と組み合わせて投与される治療ステップを含む。またはＤＮＡ損傷剤。対象のｐ５３関連障害を効果的に治療します。
【００４０】
特定の実施形態では、ＰＡＮＤＡエージェントはＣＰ−３１３９８ではない。ＰＲＩＭＡ−１；  ＰＲＩＭＡ−１−ＭＥＴ、ＳＣＨ５２９０７４、亜鉛；スティック酸、ｐ５３Ｒ３；メチレンキヌクリジノン；  ＳＴＩＭＡ−１；  ３−メチレン−２−ノルボルナノン；  ＭＩＲＡ−１；  ＭＩＲＡ−２；  ＭＩＲＡ−３；  ＮＳＣ３１９７２５；  ＮＳＣ３１９７２６；  ＳＣＨ５２９０７４；  ＰＡＲＰ−ＰＩ３Ｋ；  ５，５０−（２，５−フランジイル）ビス−２−チオフェンメタノール；  ＭＰＫ−０９；  Ｚｎ−ｃｕｒｃまたはクルクミンベースのＺｎ（ＩＩ）錯体；  Ｐ５３Ｒ３；  （２−ベンゾフラニル）−キナゾリン誘導体；  ５−フルオロウリジンの核脂質誘導体；  ２−アミノアセトフェノン塩酸塩の誘導体；  ＰＫ０８３；  ＰＫ５１７４；またはＰＫ７０８８；その他の以前に同定されたｍｐ５３レスキュー化合物。
【００４１】
特定の実施形態では、ＰＡＮＤＡ剤は、ｐ５３関連障害を有する対象を治療するのに適した医薬組成物に配合することができる。医薬組成物は、典型的には、医薬的に許容される担体を含むであろう。化合物の経口投与が好ましい投与経路であるが、経鼻、局所または直腸投与、あるいは注射または吸入などの他の投与手段も企図される。意図する投与様式に応じて、医薬組成物は、例えば、錠剤、坐剤、丸剤、カプセル、粉末、液体、懸濁液、軟膏などの固体、半固体、または液体剤形の形態であってよい。またはローション、好ましくは正確な投与量の単回投与に適した単位剤形。当業者は、適切な方法で、そしてレミントンの製薬科学、ジェンナロ編、マック出版社、イーストン、ペンシルバニア州１９９０に開示されているような慣行に従って、化合物をさらに処方することができる。
【００４２】
特定の実施形態では、担体は、ありとあらゆる溶媒、分散媒体、ビヒクル、コーティング、希釈剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤、緩衝液、担体溶液、懸濁液、コロイドなどであり得る。医薬担体は、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、可溶性合成ポリマー、ＤＮＡ複合体、タンパク質−薬物コンジュゲート、担体赤血球、および薬物の送達および有効性を改善するために組み込まれる他の任意の物質を含み得る。医薬活性物質のためのそのような媒体および薬剤の使用は、当技術分野でよく知られている。従来の媒体または薬剤が活性成分と不適合である場合を除いて、治療組成物におけるその使用が企図される。補足的な有効成分も組成物に組み込むことができる。
【００４３】
特定の実施形態では、癌などのｐ５３関連障害の治療に使用される療法には、手術、化学療法、および放射線療法が含まれる。実験的治療には、ウイルスまたはウイルス様粒子ベースの送達ベクターに基づく腫瘍における野生型ｐ５３の発現が含まれるが、これらに限定されない。
【００４４】
特定の実施形態では、ｐ５３癌治療には、一般的な化学療法剤が含まれる。一般的な化学療法剤の例には、アバスチン、リツキサン、ハーセプチン、タキソール、およびグリベックが含まれるが、これらに限定されない。
【００４５】
ある実施形態では、「必要とする人」は、癌などのｐ５３関連障害を有する個体を指すことができ、癌はｐ５３の変異型を発現する。いくつかの実施形態では、ｐ５３変異体はＰＡＮＤＡ剤に対して感受性がある。
【００４６】
特定の実施形態では、ＰＡＮＤＡ剤は、薬学的に許容される塩に配合することができる。薬学的に許容される塩は、中性複合体を形成するために対イオンと組み合わされたイオン化可能な薬物であり得る。このプロセスを通じて薬物を塩に変換すると、その化学的安定性が高まり、複合体の投与が容易になり、薬物の薬物動態プロファイルを操作できるようになります（Ｐａｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。
【００４７】
特定の実施形態では、ＰＡＮＤＡエージェントおよびＰＡＮＤＡは以下の特徴を有する：
（１）ＰＡＮＤＡエージェントＡＴＯは、ｍｐ５３のフォールドを含むｐ５３構造を変更するプロセスで、ｐ５３に直接結合してＰＡＮＤＡを形成します。
（２）ＰＡＮＤＡエージェントを介したＰＡＮＤＡの形成は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏとｉｎ  ｖｉｖｏの両方で起こります。
（３）ＰＡＮＤＡは構造も機能もｗｔｐ５３と非常に似ています。
（４）ＰＡＮＤＡエージェントＡＴＯは、構造ｍｐ５３の構造を非常に高い効率で折りたたむため、ＰＡＮＤＡの構造はｗｔｐ５３の構造と非常に似ています。
（５）ＰＡＮＤＡエージェントＡＴＯは、驚異的な高効率でＰＡＮＤＡを介して構造ｍｐ５３の転写活性を救います。
（６）ＰＡＮＤＡエージェントＡＴＯは、生体外および生体内でＰＡＮＤＡを介してｍｐ５３発現細胞の増殖を阻害します。
（７）ＰＡＮＤＡエージェントＡＴＯで処理されたｍｐ５３発現細胞またはＰＡＮＤＡを含む細胞は、ＤＮＡ損傷処理に積極的に反応します。
（８）ＰＡＮＤＡエージェントＡＴＯは非常に効果的で、ｍｐ５３と効果的なｍｐ５３レスキューエージェントに固有です。
（９）ＰＡＮＤＡエージェントＡＴＯとＰＡＮＤＡは、急性骨髄性白血病（「ＡＭＬ」）や骨髄異形成症候群（「ＭＤＳ」）などの広範囲の癌に直接対抗できます。そして
（１０）ＡＭＬおよびＭＤＳの患者を含む癌患者は、ＡＴＯまたはＰＡＮＤＡで最初に治療されたときに、抗癌治療に対して顕著な反応を示し始めます。
【００４８】
特定の実施形態では、元素ヒ素を含有するものなどのＰＡＮＤＡ剤は、ＰＡＮＤＡの形成を通じて、広く、効率的にｍｐ５３を救出することができる。たとえば、Ａｓ２Ｏ３とその類似体は、最も頻度の高いｍｐ５３をさまざまな程度で救うことができます。これらのｍｐ５３には、６つのホットスポットｍｐ５３（Ｒ１７５、Ｇ２４５、Ｒ２４９、またはＲ２８２（通常、構造ホットスポットｍｐ５３ｓと見なされる）の変異を含むｍｐ５３）、Ｒ２４８またはＲ２７３（通常、接触ホットスポットｍｐ５３と見なされる）の変異を含むｍｐ５３が含まれます。）、およびＣ１７６、Ｈ１７９、Ｙ２２０、またはＰ２７８、Ｖ１４３、Ｆ２７０、またはＩ２３２に変異があるｍｐ５３。
【００４９】
特定の実施形態では、ＰＡＮＤＡ剤は、複数のシステインを結合する可能性があり、ｍｐ５３フォールディングを促進することによって構造的ｍｐ５３発現細胞を選択的に阻害することができる。
【００５０】
特定の実施形態では、ＰＡＮＤＡ剤は、癌促進性ｍｐ５３を腫瘍抑制ＰＡＮＤＡに変換し、患者におけるｗｔｐ５３の再導入または内因性ｍｐ５３の分解／不活性化の促進などによる既存の治療戦略を超える有意な利点を有する。ＰＡＮＤＡエージェントは、ＰＡＮＤＡを介したｍｐ５３レスキュー、高いレスキュー効率、ｍｐ５３選択性を介して、以前に報告された化合物よりも優れた２つの特性を備えています。特定の実施形態では、ＰＡＮＤＡエージェントＡＴＯは、堅牢なＰＡｂ１６２０（ＰＡｂ２４６も）ＩＰアッセイを使用して、ｐ５３−Ｒ１７５Ｈのほぼ完全な救済を、ｗｔｐ５３の約１％からｗｔｐ５３の約９７％に相当するレベルまで提供できます。。特定の実施形態では、ＰＡＮＤＡエージェントＡＴＯはまた、いくつかのプロアポトーシス標的におけるｐ５３−Ｇ２４５Ｓおよびｐ５３−Ｒ２８２Ｗの転写活性のほぼ完全な救済を、ｗｔｐ５３の約４％に相当するレベルから約８０％の標準のルシフェラーゼレポーターアッセイを使用したｗｔｐ５３の値。出願人は、既存の化合物と比較して、これらの優れた結果を数多くの状況で確実に再現し、ホットスポットｍｐ５３の構造または転写活性を、アッセイでｗｔｐ５３の約５％に相当するレベルで救済できる既存の化合物を知りません。
【００５１】
特定の実施形態では、ＰＡＮＤＡエージェントＡＴＯおよびＰＡＮＤＡは、驚くほど高い効率で構造ｍｐ５３を選択的に標的とすることができる。さらに、契約中のｍｐ５３も中程度の効率で救出できます。たとえば、出願人は、大部分のホットスポットｍｐ５３を含む広範囲の構造ｍｐ５３が、ＰＡＮＤＡの形成を通じてＰＡＮＤＡエージェントＡＴＯによって効率的に救出されることを発見しました。さらに、申請者は、連絡先のｍｐ５３がＰＡＮＤＡを介してＡＴＯによって制限された効率で救出できることも見出しました。この注目すべき特性は優れているだけでなく、ＣＰ−３１３９８（Ｆｏｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）、ＰＲＩＭＡ−１（Ｂｙｋｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）、ＳＣＨ５２９０７４（Ｄｅｍｍａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１０）、亜鉛（Ｐｕｃａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）、スチン酸（Ｗａｓｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）、ｐ５３Ｒ３（Ｗｅｉｎｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）、および両方のタイプのｍｐ５３を救うことができると報告されている他の人。
【００５２】
本発明者らの発見は、ＰＡＮＤＡ剤ＡＴＯが臨床試験における広範囲のＡＴＯ応答性癌に使用できることをさらに示している。最大の効果を達成するために、患者の募集は、特定の、非常に正確な募集要件に従うことが好ましい。ＡＴＯは白血病のサブタイプである急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）を治療するためにＦＤＡによって承認されました。ＡＴＯは、過去２０年間にわたって非ＡＰＬのがんの種類への適用を拡大することを目的として集中的に試験されてきましたが、まだこの目的で承認されていません。これは主に、ＡＴＯに影響を与える癌のスペクトルを明らかにできなかったことが原因です。実際、ラインをｍｐ５３グループとｗｔｐ５３グループに区別するだけでは、ＮＣＩ６０セルパネルのＡＴＯの感度プロファイルにｍｐ５３依存性は見られません。ｍｐ５３からＡＴＯレスキュー可能なｍｐ５３をさらに分離することにより、ＡＴＯとＰＡＮＤＡに依存する応答の重要な要素を明らかにしました。私たちが発見したＡＴＯに影響を与える癌のスペクトルはかなり広く、推定１５〜３０％の癌症例をカバーしています。たとえば、６つのホットスポットｍｐ５３のうち少なくとも４つと、多数の非ホットスポットｍｐ５３がＡＴＯとＰＡＮＤＡによって効率的に救出できることが確認されています。実際、１９７１年の中国での最も初期のＡＴＯ臨床試験（ｎ＞  １０００患者）で、ＡＴＯは結腸直腸癌、食道癌、肝臓癌、特にＡＰＬ癌を含む多くの癌タイプの治療に有効性を示しました（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００１；  Ｚｈｕ  ｅｔ  ａｌ  、２００２）。
【００５３】
ＡＴＯおよびＰＡＮＤＡは、広範囲の癌を治療するために使用することができるが、本出願に記載されるいくつかの試験によって実証されるように、ＡＴＯが、救済可能なｍｐ５３を宿す患者に正確に投与されることが好ましい。異なるミスセンス変異はｍｐ５３に異なる活動を付与することが知られており（Ｆｒｅｅｄ−Ｐａｓｔｏｒ  ａｎｄ  Ｐｒｉｖｅｓ、２０１２）、異なるｍｐ５３を持つ患者に異なる治療結果をもたらす可能性があります。したがって、私たちのような他の人は、ｍｐ５３またはｗｔｐ５３が存在するかどうかではなく、存在するｍｐ５３変異のタイプに合わせて治療を調整することを提唱しています（Ｍｕｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｖｏｕｓｄｅｎ、２０１３、２０１４）。注目すべきことに、ＭＤＳ患者由来のｐ５３−Ｓ２４１Ｆ、ｐ５３−Ｓ２４１Ｃ、およびＳ２４１の他の人工的に生成されたｐ５３変異体に関する私たちの発見は、ＡＴＯ救出効率がｐ５３変異部位だけでなく、生成された新しい残基によっても決定されることをサポートしています。小規模ＡＭＬ  ／  ＭＤＳ試験で観察された現在有望な結果に基づいて、ＡＭＬ  ／  ＭＤＳ患者を対象とした２つの大規模多施設前向き試験（ＮＣＴ０３３８１７８１およびＮＣＴ０３３７７７２５）を開始しました。１件の試験では、ｐ５３変異状態に対するＡＴＯの依存性を確認することを目的として、３００人のＭＤＳ患者が盲目的に採用および試験されています。他の試験では、約１５００〜２０００人のＡＭＬ患者が募集されており、サンガーシーケンスによって確認されたｍｐ５３陽性患者は、ｍｐ５３を発現する非ＡＰＬ白血病の治療におけるＡＴＯの有効性を判断するために試験されています。  
【００５４】
提案されている多くの救済原則にもかかわらず、どのようにしてｍｐ５３を薬理学的に救済するかについての原子レベルの理論的根拠の欠如は、癌研究の進歩をあまりにも長い間妨げてきた（Ｂｕｌｌｏｃｋ  ａｎｄ  Ｆｅｒｓｈｔ、２００１；  Ｊｏｅｒｇｅｒ  ａｎｄ  Ｆｅｒｓｈｔ、２００７；  Ｊｏｅｒｇｅｒ）。およびＦｅｒｓｈｔ、２０１６年）。この空洞は、科学者が効率的で選択的なｍｐ５３レスキュー化合物を特定することを著しく妨げてきました（ＢｕｌｌｏｃｋおよびＦｅｒｓｈｔ、２００１年；  ＪｏｅｒｇｅｒおよびＦｅｒｓｈｔ、２００７年；  ＪｏｅｒｇｅｒおよびＦｅｒｓｈｔ、２０１６年）。ｍｐ５３スタビライザーをバインドするためのｐ５３のポケットが知られていないため、ｍｐ５３スタビライザーを合理的に設計およびスクリーニングすることは特に困難です（Ｊｏｅｒｇｅｒ  ａｎｄ  Ｆｅｒｓｈｔ、２０１６）。
【００５５】
出願人はさらに、合理的な４Ｃスクリーニング法について説明している。この方法を使用して、出願人は、ｍｐ５３のシステインペアに共有結合で架橋された化合物を特定しました。共有結合で架橋するシステインは、局所領域を固定化し、近くの変異によって引き起こされる柔軟性を中和し、ｐ５３をグローバルに安定させるのに十分な堅牢性があると出願人は予測しています。
【００５６】
本発明者らの４Ｃスクリーニングを使用して、広範囲のｍｐ５３の救助者として作用することができる少なくとも２つのヒ素含有化合物を首尾よく同定した。これらのヒ素化合物の特性を調査したところ、スタビライザーが結合する予期せぬ深く埋もれたＰＡＮＤＡポケットを特定しました。そうすることで、化合物によってどのように幅広いスペクトルのｍｐ５３を安定化できるかについて、原子レベルのＭＯＡを提供しました。
【００５７】
特定の実施形態では、ＰＡＮＤＡポケットは、ｍｐ５３を全体的に安定させる上で重要な役割を果たす。報告されたＳＳＳＭの多くがＰＡＮＤＡポケットにあることがわかりました。さらに、合理的に設計されたＳＳＳＭもＰＡＮＤＡポケット機能に配置されており、安定させます。私たちのレスキューメカニズムと非常にドラッグ可能なＰＡＮＤＡポケットは、以前に報告されたマイケルアクセプター含有化合物のｍｐ５３レスキュー効率がほとんど検出できない理由を説明できるようになりました（Ｊｏｅｒｇｅｒ  ａｎｄ  Ｆｅｒｓｈｔ、２０１６；  Ｍｕｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｖｏｕｓｄｅｎ、２０１４）。コンピューターモデリングにより、これらの化合物の多くは主要なＰＡＮＤＡトライアドのシステインの１つであるＣ１２４（Ｗａｓｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）に結合することが示唆されましたが、まだ実験的に決定されていません（Ｊｏｅｒｇｅｒ  ａｎｄ  Ｆｅｒｓｈｔ、２０１６）。ＰＡＮＤＡトライアドのリムでは、ＰＡＮＤＡポケットを非常に弱く安定させることができるだけなので、効率が制限されてｍｐ５３を救出できます。    
【００５８】
構造上のｍｐ５３におけるＰＡＮＤＡトライアドのシステインに対するヒ素の選択性は特に魅力的である。これまでのところ、ＰＲＩＭＡ−１、ＳＴＩＭＡ−１、ＭＩＲＡ−１、「化合物１」、ＰＫ１１００７、エリプチシンなどの多くの化合物はマイケルアクセプターグループを持ち、単一のシステインを結合して機能すると予測されています（Ｂａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６；  Ｊｏｅｒｇｅｒ  ａｎｄ  Ｆｅｒｓｈｔ、２０１６；  Ｗａｓｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。ｐ５３は複数の露出したシステインを持っているため、これらの化合物は他の多くの望ましくないシステインに結合する可能性があります。実際、ＰＲＩＭＡ−１と「化合物１」は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでｍｐ５３に１：１より高い比率で結合することが報告されています（Ｂａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６；  Ｌａｍｂｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。これらの化合物は、露出したシステインを含むｗｔｐ５３またはその他の細胞タンパク質に対して、目標を外れた傾向を示すこともあります。
【００５９】
我々の現在のヒ素含有化合物は、その複数のシステイン結合能力のために、以前に報告されたどの化合物とも概念的に異なり、ＰＡＮＤＡトライアドの選択性を説明する可能性がある。ヒ素は、よりアクセスしやすいシステイン（例：Ｃ２７７およびＣ１８２）または他のトリシステインクラスター（例：亜鉛領域のＣ１７６  ／  Ｃ２３８  ／  Ｃ２４２）ではなく、ＰＡＮＤＡトライアド上の不活性システインに選択的に結合します。これは、ＰＡＮＤＡトライアドがユニークであり、ヒ素を特に受け入れやすい特別なパターンで配置されていることを示唆しています。
【００６０】
我々はまた、ＡＴＯがｗｔｐ５３および接触ＭＰ５３に結合してそれらを著しく安定化し、それらの機能を増強するが、断然、構造ＭＰ５３がＡＴＯ結合から最も恩恵を受けることも発見した。１つの理由は、構造ｍｐ５３が非常に不安定であることです。
【００６１】
本出願の他のセクションで議論したように、我々が発見した構造的ｍｐ５３選択性はまた、ＣＰ−３１３９８（Ｆｏｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）、ＰＲＩＭＡ−１（Ｂｙｋｏｖ  ｅｔ  ａｌ。、２００２）、ＳＣＨ５２９０７４（Ｄｅｍｍａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）、亜鉛（Ｐｕｃａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）、スティック酸（Ｗａｓｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）、およびｐ５３Ｒ３（Ｗｅｉｎｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。システイン結合性化合物は、細胞内でのオフターゲティング（したがって毒性）の可能性が高いため、その薬効性について集中的に議論されている（そしてしばしば論争されている）ため、観察された構造ｍｐ５３の選択性も特に高い臨床的価値があります。実際、現在のｍｐ５３レスキュー化合物に関する研究を現在の概念実証研究から臨床試験に変えるための主要なマイルストーンの１つは、ｍｐ５３の選択性を改善することであると特定した人もいます（Ｊｏｅｒｇｅｒ  ａｎｄ  Ｆｅｒｓｈｔ、２０１６；  Ｋａａｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０  ）。フェーズＩＩ臨床試験中（Ｂａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６；  Ｊｏｅｒｇｅｒ  ａｎｄ  Ｆｅｒｓｈｔ、２０１６）であり、ｍｐ５３ではなく細胞内の酸化ストレスシグナル伝達コンポーネントを標的とすることがますます提案されているＰＲＩＭＡ−１およびその類似体と比較して、当社のＰＡＮＤＡエージェントは、ｐ５３に対して非常に効果的で特異的です。
【００６２】
ここで明らかにした明確なレスキューＭＯＡおよびここで特定した薬にできるＰＡＮＤＡポケットは、私たちおよび他の人が超大規模スクリーニングを実行して、癌に対する兵器を大幅に拡大し、癌を打つための努力を大幅に加速することを可能にする。ここに開示されているように、ｍｐ５３を効率的に救うことができる、ヒ素、アンチモン、ビスマスを含む多数の化合物を特定しました。特定されたヒ素類似体のいくつかが、承認された臨床的に承認されたＡＴＯより優れている可能性があることに興奮しています。たとえば、ファウラーのソリューション（ＫＡｓＯ２）には重大な副作用があり、過去１０年間は臨床で使用されなくなっていますが、Ａｓ４Ｓ４は、ＡＰＬ患者の治療に従来の静脈内ＡＴＯと同じくらい効果的であり、経口投与が便利です。（Ｚｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。多くの有機化合物を含む、私たちが特定したＳｂおよびＢｉ化合物の追加のクラスも、体内での毒性が低いことが知られているため、臨床的に非常に価値があります。
【００６３】
最後に、有機Ａｓ、Ｓｂ、および／またはＢｉ化合物が特に興味深い。一方では、有機グループの多様性が何百万もの変更の選択肢を提供し、ｍｐ５３救助者の拡張バージョンを生成します。たとえば、大きな有機基を導入すると、ｍｐ５３の構造により大きな影響を与える可能性があり、効率的なｍｐ５３阻害剤の特定が容易になります。既存のｍｐ５３阻害剤（ＨＳＰ９０阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、ＲＥＴＲＡ、ＡＴＲＡなど）はｍｐ５３を直接ターゲットにせず、まだいくつかの多くのユビキタス細胞経路に多様な効果があるため、原子レベルのＭＯＡが明確な直接ｍｐ５３阻害剤は非常に魅力的です（  Ｓａｂａｐａｔｈｙ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ、２０１８年）。
【００６４】
ここで、無機および有機の両方のＡｓ、Ｓｂ、および／またはＢｉ化合物がｍｐ５３救助者であることを説明する。さらに、システインまたはバイシステインのペアに結合する可能性のあるＡｓ、Ｓｂ、および／またはＢｉ化合物もｍｐ５３を救出できることを説明します。さらに、３つ以上のシステイン結合の可能性があるＡｓ、Ｓｂ、および／またはＢｉ化合物には、いくつかのｗｔｐ５３に匹敵するレベルで、さらに高いレスキュー効率があることを説明します。
【００６５】
ＰＡＮＤＡポケットはｐ５３の安定性を制御するスイッチであることを確認したので、ＰＡＮＤＡポケットに結合できるＡｓ、Ｓｂ、および／またはＢｉを含む化合物に加えて、他の化合物がｐ５３に大きな影響を与えると予測する。構造。これらの化合物は、野生型（または機能的）構造を復元してｍｐ５３を救出し、ｍｐ５３を救済するか、ｍｐ５３の発癌性構造を歪ませてｍｐ５３を阻害します。前者の化合物はｍｐ５３レスキュー剤に開発できますが、後者の化合物もｍｐ５３阻害剤として非常に価値があります。
【００６６】
４Ｃスクリーン法を使用して、我々は初めて、ｍｐ５３−Ｒ１７５Ｈを含む広範囲のｍｐ５３の構造を野生型の構造にほぼ完全に救済することができる驚くべき能力を備えた多数のＰＡＮＤＡエージェントを発見した。。さらに、臨床用医薬品化合物の三酸化ヒ素（「ＡＴＯ」）を含む、少なくとも３１の主要なＰＡＮＤＡエージェント（表７）を特定しました。したがって、ＡＴＯは以下のコンテキストで例として使用されます。以前、私たちの同僚は、ＡＴＯとオールトランスレチノイン酸（「ＡＴＲＡ」）を組み合わせて、ＰＭＬ−ＲＡＲα融合タンパク質（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）のシステインに富む前骨髄球性白血病（「ＰＭＬ」）部分を効率的に標的とし、急性  前骨髄球性白血病（「ＡＰＬ」）は、標的療法によって確実に治癒できる唯一の悪性腫瘍です（Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００９；  Ｌｏ−Ｃｏｃｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【図面の簡単な説明】
【００６７】
【図１】「４Ｃ」画面の概要。
【図２】プロットグラフは、ＮＣＩ６０細胞パネル上のＡＴＯおよびＫＡｓＯ２のＧＩ５０（ＣｅｌｌＭｉｎｅｒにより取り出された）を示す。構造：構造的ホットスポットｍｐ５３（Ｒ１７５、Ｇ２４５、Ｒ２４９、およびＲ２８２）を発現する細胞株。ＷＴ：ｗｔｐ５３を発現する細胞株。その他：残った細胞株。
【図３】ＡＴＯおよびＫＡｓＯ２の計画されたヒドロキシル化およびシステイン反応。
【図４】ｐ５３−Ｒ１７５ＨでトランスフェクトされたＨ１２９９細胞を１μｇ  ／  ｍｌのＡＴＯまたは０．１μｇ  ／  ｍｌのＫＡｓＯ２で２時間処理し、細胞を溶解し、続いてＰＡｂ１６２０（上部パネル）またはＰＡｂ２４０（中央のパネル）。免疫沈降したｐ５３を免疫ブロットした。下のパネル、ＡＴＯおよびＫＡｓＯ２で処理したＴｒｐ５３−Ｒ１７２Ｈ  ／  Ｒ１７２Ｈ  ＭＥＦを溶解し、続いてＰＡｂ２４６  ＩＰを溶解しました。ｐ５３がプローブされました。
【図５】ｍｐ５３の分類。画像は、Ｐｙｍｏｌによって生成されたｐ５３−ＤＮＡ複合体（ＰＤＢアクセッション：１ＴＵＰ）を示しています。６つのｐ５３変異ホットスポットは、灰色の固体球（ＤＮＡに接触する機能：Ｒ２４８およびＲ２７３）または黒色の固体球（ｐ５３構造を維持する機能：Ｒ１７５、Ｇ２４５、Ｒ２４９、およびＲ２８２）としてラベル付けされています。ｐ５３の１０個のシステインにラベルが付けられました。
【図６】細胞選択性。ＮＣＩ６０細胞株は、構造的ホットスポットｍｐ５３を含む株と再掘り出し株の２つのカテゴリーに分類されました。
【図７】化合物分析。２つのマイケルアクセプターグループ、Ｓｂ金属、または２つのチオールを含む化合物など、複数のシステインを結合する可能性のある化合物の例。
【図８】タンパク質の立体配座。漫画の図は、折り畳まれたｐ５３と折り畳まれていないｐ５３にそれぞれ存在する相互に排他的なＰＡｂ１６２０エピトープとＰＡｂ２４０エピトープの位置を示しています。ＰＡｂ２４６エピトープは折り畳まれたマウスｐ５３に特異的に存在し、ＰＡｂ１６２０とは重複しません。
【図９】プロットグラフは、ＮＣＩ６０細胞パネル上のＰＲＩＭＡ−１およびＮＳＣ３１９７２６のＧＩ５０（ＣｅｌｌＭｉｎｅｒにより検索された）を示す。構造：構造的ホットスポットｍｐ５３（Ｒ１７５、Ｇ２４５、Ｒ２４９、およびＲ２８２）を発現する細胞株。その他：残った細胞株。
【図１０】のＡＴＯは、そのＴｍを増加させることにより、ｍｐ５３の安定性を大幅に増加させる。左のパネル、精製されたｐ５３コアドメインＲ２４９Ｓ（９４−２９３）の融解曲線。ＡＴＯの存在下または非存在下で示差走査蛍光分析を介して記録されます。右のパネル、さまざまな濃度のＡＴＯを５μＭの精製ｐ５３コアドメインＲ２４９Ｓ（９４−２９３）で一晩インキュベートしました。ｐ５３コアの融解温度を示した（平均±ＳＤ、ｎ  ＝  ３）。
【図１１】ｐ５３フォールディングアッセイでは、示されたｐ５３でトランスフェクトされたＨ１２９９細胞を１μｇ  ／  ｍｌのＡＴＯで２時間処理し、細胞を溶解し、続いてＰＡｂ１６２０を使用して免疫沈降した。免疫沈降したｐ５３を免疫ブロットした。実験は２回繰り返されます。ｐ５３転写活性アッセイでは、Ｈ１２９９細胞を指定のｐ５３およびＰＵＭＡレポーターで２４時間コトランスフェクトし、続いて１μｇ  ／  ｍｌ  ＡＴＯを２４時間処理しました。プロットは、ｐ５３フォールディングアッセイおよび転写活性アッセイに由来する、ＡＴＯを介したｍｐ５３レスキュープロファイルを示しています。Ｘ軸：ＰＡｂ１６２０  ＩＰ効率。Ｙ軸：ＰＵＭＡルシフェラーゼレポートシグナル。中空サイクル：ＡＴＯ処理なし。固体サイクル：ＡＴＯ処理あり。
【図１２】精製した組換えｐ５３（９４〜２９３）−Ｒ２４９Ｓを、ＤＭＳＯ（左パネル）またはＡＴＯ（右パネル）のいずれかで１：５のモル比で一晩処理し、続いて分子量測定のためのＭＳ分析を行った。スペクトル画像は、ネイティブ変性条件下での精製タンパク質のデコンボリューションされたスペクトルを示しています。
【図１３】上部パネル、示されたｍｐ５３でトランスフェクトされたＨ１２９９細胞を４μｇ  ／  ｍｌのビオチン−Ａｓで２時間処理し、細胞を溶解し、続いてストレプトアビジンビーズを使用したプルダウンアッセイを行った。ｐ５３がプローブされました。下のパネル、表示量のｐ５３−Ｒ１７５Ｈまたはｗｔｐ５３プラスミドをトランスフェクトしたＨ１２９９細胞を４μｇ  ／  ｍｌビオチン−Ａｓで２時間処理し、細胞を溶解した後、ストレプトアビジンビーズを使用したプルダウンアッセイを行いました。ｐ５３がプローブされました。
【図１４】ｐ５３（９４〜２９３）−Ｒ２４９Ｓを発現する細菌をＡｓＩ３とインキュベートし、次いで、ＰＡＮＤＡ複合体（図１８も参照）を結晶化のために精製した（左パネル）。ｐ５３（９４−２９３）−Ｒ２４９Ｓ結晶を２ｍＭ  ＥＤＴＡおよび２ｍＭ  ＡＴＯに１９時間浸しました（右パネル）。ＰＡＮＤＡの３Ｄ構造は、Ｐｙｍｏｌによって生成されました。Ｃ１２４、Ｃ１３５、およびＣ１４１と結合ヒ素原子が表示されます。
【図１５】のヒ素原子は、Ｌ１−Ｓ２−Ｓ３ポケットを通過し、ＰＡＮＤＡトライアドに入る。左のパネル：既存のｍｐ５３レスキュー化合物は、開いている場合にのみＬ１−Ｓ２−Ｓ３ポケットに入ります。右のパネル：ヒ素原子は、報告されているどのｍｐ５３レスキュー化合物よりも１〜２桁小さい（報告されている化合物のサイズの約１／１０〜１／１００）。閉じた状態でも、いつでも自由にＬ１−Ｓ２−Ｓ３ポケットに入れます。さらに、ヒ素原子は非常に小さいため、Ｌ１−Ｓ２−Ｓ３ポケットを自由に通過し、さらに１つの原子しか収容できない非常に小さいポケットであるＰＡＮＤＡトライアドに入ることができます。ＰＡＮＤＡ  Ｔｒｉａｄでは、ヒ素原子が効率的なＰＡＮＤＡエージェントとして機能します。
【図１６】ｐ５３（ＰＤＢ受入：１ＴＵＰ）およびＰｙｍｏｌによって生成されたＰＡＮＤＡの概略３Ｄ構造。左のパネル、６つのｐ５３変異ホットスポットは、灰色の固体球（ＤＮＡに接触する機能：Ｒ２４８およびＲ２７３）または黒い固体球（ｐ５３構造を維持する機能：Ｒ１７５、Ｇ２４５、Ｒ２４９、およびＲ２８２）として表示されます。ＰＡＮＤＡシステイン（Ｃ１２４、Ｃ１３５、およびＣ１４１）にラベルが付けられました。中央のパネルでは、６つのｐ５３変異ホットスポットとＤＮＡが提示用に選択されています。右側のパネル、ＰＡＮＤＡの画像スキーム。接触残留Ｒ２４８が竹を保持しているのに対し、他の接触残留Ｒ２８２は竹を食べる。ＰＡＮＤＡ  Ｐｏｃｋｅｔは、母親につかまれたときにパンダの子を安定させることが知られている後首として機能します。
【図１７】精製された組換えｐ５３（９４〜２９３）−Ｒ２４９Ｓを、示される化合物で１：５のモル比で一晩処理し、続いて分子量決定のためのＭＳ分析を行った。スペクトル画像は、ネイティブ変性条件下での精製タンパク質のデコンボリューションされたスペクトルを示しています。
【図１８】上部パネル、リボンとして示されるＰＡＮＤＡの３Ｄ構造。ＰＡＮＤＡトライアドとヒ素原子は球体として表示され、ＰＡＮＤＡポケットは濃い色で表示されます。真ん中のパネル、ＰＡＮＤＡの３Ｄ構造が球として表示されます。ＰＡＮＤＡポケットは濃い色で表示されています。下のパネル、ＰＡＮＤＡポケットの残り。構造は整理されています。
【図１９】左パネル、Ｈ１２９９細胞は、ｐ５３−Ｇ２４５Ｓプラスミド上の示されたｐ５３突然変異およびＰＵＭＡレポーターまたはＰＩＧ３レポーターのいずれかで２４時間コトランスフェクトされた。棒グラフは、指定されたＳＳＳＭ（平均±ＳＤ、ｎ  ＝  ３）を使用したｐ５３−Ｇ２４５Ｓの転写活性を示します。右のパネル、上向きの矢印と下向きの矢印は、左のパネルでテストされた突然変異の位置を示しています。上向き矢印（Ｓ１１６およびＱ１３６）：変異はｐ５３−Ｇ２４５Ｓを救済し、下向き矢印：変異はｐ５３−Ｇ２４５Ｓを救済できません。
【図２０】ＡＴＯは、折り畳まれていないｐ５３の集団の適切な折り畳みを強く促進する。左のパネルは、ｗｔｐ５３およびｍｐ５３でトランスフェクトされたＨ１２９９細胞が１μｇ  ／  ｍｌ  ＡＴＯで２時間処理されたことを示しています。細胞を溶解した後、ＰＡｂ１６２０を使用して免疫沈降（ＩＰ）を行いました。免疫沈降したｐ５３を免疫ブロットした。右のグラフは、ＰＡｂ１６２０の相対的なＩＰ効率を示しています。ＡＴＯがない場合のｗｔｐ５３のＰＡｂ１６２０  ＩＰ効率は１００％に設定されました。
【図２１】ＡＴＯはｍｐ５３を効率的かつ適切に折り畳む。左のパネル、ｐ５３−Ｒ１７５ＨでトランスフェクトされたＨ１２９９細胞を指示された薬剤で一晩処理し、細胞を溶解した後、ＰＡｂ１６２０  ＩＰで溶解しました。右のグラフは、ＤＭＳＯグループの場合と比較したＰＡｂ１６２０  ＩＰ効率の正規化された変化を示しています。
【図２２】ＡＴＯは、ｍｐ５３を効率的にリフォールディングする。内因性ｐ５３−Ｒ１７５Ｈを発現するデトロイト５６２細胞を、示された条件でＣＨＸで前処理しました。次に、細胞を１μｇ  ／  ｍｌのＡＴＯで２時間処理した後、ＰＡｂ１６２０  ＩＰで処理しました。漫画図は、適切に折りたたまれた、展開された、および集約された状態の間でのｐ５３−Ｒ１７５Ｈの平衡を図式化します。
【図２３】１ｓｔＭ１Ｄ  ＡＴＯは、ｍｐ５３を効率的かつ適切に折り畳む。ｗｔｐ５３およびｐ５３−Ｒ１７５ＨをトランスフェクトしたＳａｏｓ−２細胞を、０、０．２、０．５、および１μｇ  ／  ｍｌのＡＴＯで２４時間処理しました。細胞をＣＨＡＰＳバッファーで４℃または３７℃で１５分間溶解した後、非変性ＰＡＧＥおよびウエスタンブロットを行いました。
【図２４】ＡＴＯは、効率的かつ適切にｍｐ５３を折り畳む。ｗｔｐ５３でトランスフェクトされたＨ１２９９細胞および示されたｍｐ５３は、０または１μｇ  ／  ｍｌのＡＴＯで２時間処理され、その後ＰＡＢ１６２０  ＩＰで処理されました。
【図２５】左上のパネル、ｐ５３−Ｒ１７５Ｈを発現するＨ１２９９細胞は、示された条件下でＡＴＯで処理され、続いてＰＡｂ１６２０  ＩＰで処理された。中央左パネル：Ｔｒｐ５３  ＋  ／  ＋  ＭＥＦ（１０μＭ  Ｎｕｔｌｉｎ３で一晩処理して高レベルのｐ５３を誘導）およびＴｒｐ５３−Ｒ１７２Ｈ  ／  Ｒ１７２Ｈ  ＭＥＦを１μｇ  ／  ｍｌ  ＡＴＯで２時間処理した後、ＰＡｂ２４６  ＩＰで処理。ｐ５３をＣＭ５抗体でプローブした。左下のパネル、ｐ５３−Ｒ１７５Ｈを発現するＨ１２９９細胞を１μｇ  ／  ｍｌ  ＡＴＯで２時間処理した後、ＰＡｂ２４０  ＩＰで処理しました。。右のパネルは、指定された条件下でＡＴＯで処理されたさまざまなｍｐ５３を発現する細胞を示し、その後にＰＡｂ１６２０  ＩＰ（ＭＥＦの場合はＰＡｂ２４６）が続きます。
【図２６】ｐ５３−Ｒ１７５ＨでトランスフェクトされたＨ１２９９細胞を指示された薬剤で一晩処理し、細胞を溶解し、続いてＰＡｂ１６２０  ＩＰを使用した。
【図２７】Ｔｒｐ５３  ＋  ／  ＋  ＭＥＦ（高レベルのｐ５３を誘導するために１０μＭ  Ｎｕｔｌｉｎ３で一晩処理）およびＴｒｐ５３−Ｒ１７２Ｈ  ／  Ｒ１７２Ｈ  ＭＥＦを、指示された濃度のＡＴＯで２時間処理し、その後、ＰＡｂ２４６  ＩＰで処理した。
【図２８】ＩＰＴＧ誘導性ＧＳＴ−ｐ５３−Ｒ１７５Ｈを発現する細菌をＩＰＴＧおよび示された化合物と共に培養した。細菌をＮＰ４０バッファーで溶解した後、ＰＡｂ１６２０を使用してＩＰを溶解しました。ＧＳＴ−ｐ５３−Ｒ１７５ＨはＧＳＴ抗体により免疫ブロットされた。
【図２９】内因性ｗｔｐ５３を発現するＭＣＦ７細胞を、示されるようにＣＨＸで処理し、ｐ５３をプローブした。
【図３０】ｐ５３−Ｒ１７５Ｈを発現するＨ１２９９細胞を、ＤＭＳＯまたは５０μｇ  ／  ｍｌ  ＣＨＸのいずれかで０．５時間前処理し、次いで細胞をＡＴＯで処理し、続いてＰＡｂ１６２０  ＩＰで処理した。
【図３１】ｗｔｐ５３およびｐ５３−Ｒ１７５ＨでトランスフェクトされたＳａｏｓ−２細胞は、示されるようにＡＴＯで処理された。細胞をＭ−ＰＥＲバッファーで４℃で溶解し、非変性ＰＡＧＥとウエスタンブロットを行いました。
【図３２】Ｐｙｍｏｌにより生成されたｐ５３−ＤＮＡ複合体（ＰＤＢアクセッション：１ＴＵＰ）を示す。システインの３つのクラスター（Ｃ１３５  ／  Ｃ１４１、Ｃ２３８  ／  Ｃ２４２、Ｃ２７５  ／  Ｃ２７７）とＲ１７５に隣接するＣ１７６が示されています。Ｆｉｇｕｒｅ  ３２    ｓｈｏｗｓ  ｔｈｅ  ｐ５３−ＤＮＡ  ｃｏｍｐｌｅｘ  （ＰＤＢ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：  １ＴＵＰ）  ｇｅｎｅｒａｔｅｄ  ｂｙ  Ｐｙｍｏｌ．  Ｔｈｅ  ３  ｃｌｕｓｔｅｒｓ  ｏｆ  ｃｙｓｔｅｉｎｅｓ  （Ｃ１３５／Ｃ１４１，  Ｃ２３８／Ｃ２４２，  Ｃ２７５／Ｃ２７７）  ａｎｄ  Ｒ１７５−ｎｅｉｇｈｂｏｒｉｎｇ  Ｃ１７６  ａｒｅ  ｓｈｏｗｎ．
【図３３】ヒ素は、ｐ５３に直接結合してＰＡＮＤＡを形成する。（Ａ）指定されたｗｔｐ５３またはｍｐ５３でトランスフェクトされたＨ１２９９細胞を４μｇ  ／  ｍｌのビオチン−Ａｓで２時間処理した。細胞を溶解した後、ストレプトアビジンビーズを使用したプルダウンアッセイを行いました。ｐ５３がプローブされました。（Ｂ）指示された細胞株を４μｇ  ／  ｍｌのビオチン−Ａｓで２時間処理しました。細胞を溶解した後、ストレプトアビジンビーズを使用したプルダウンアッセイを行いました。（Ｃ）精製された組換えＧＳＴ−ｐ５３−Ｒ１７５Ｈを、指定された濃度のビオチン−Ａｓまたはビオチンとインキュベートしました。混合物を３つのアリコートに分け、変性タンパク質電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）、続いてクーマシーブルー染色、ＤＯ１抗体を使用するｐ５３  ＩＢ、または抗ビオチン抗体を使用するビオチンＩＢに供した。（Ｄ）ｐ５３（６２-２９２）（上のパネル）およびｐ５３（９１-２９２）−Ｒ１７５Ｈ（下のパネル）は、それぞれ１００μＭ  ＺｎＳＯ４および１０μＭ  ＡＴＯで細菌的に発現されました。精製後、組換えタンパク質をＭＳ分析に供し、分子量を測定しました。スペクトル画像は、ネイティブまたは変性条件下での精製組換えタンパク質のデコンボリューションされたスペクトルを示しています。
【図３４】の表は、それぞれ１００μＭ  ＺｎＳＯ４および５０μＭ  ＡＴＯで細菌的に発現された精製組換えｐ５３（６２〜２９２）およびｐ５３（９１〜２９２）−Ｒ１７５Ｈの分子量（Ｍｗ）を示す。Ｍｗを決定するために、ネイティブおよび変性ＭＳを適用しました。
【図３５】の表は、誘導結合プラズマ質量分析（ＩＣＰ−ＭＳ）によって標準のＡｓ２Ｏ３溶液および組換えＰＡＮＤＡ−Ｒ１７５Ｈ溶液で決定されたヒ素含有量を要約している。
【図３６】３  ＰＡＮＤＡは、ＤＮＡ結合能力を回復する。ｐ５３−Ｒ１７５Ｈを発現するＨ１２９９細胞を指示された薬剤で一晩処理し、細胞を溶解した後、１０  ｐＭのビオチン化二本鎖ＤＮＡの存在下でストレプトアビジンビーズを使用してプルダウンアッセイを行いました。ｐ５３−Ｒ１７５Ｈは免疫ブロットされた。
【図３７】ＰＡＮＤＡは転写活性を取り戻す。
【図３８】ＰＡＮＤＡは、ＤＮＡ結合能力およびｐ５３転写活性を回復する。上のパネル、ｔｅｔ−ｏｆｆ調節されたｐ５３−Ｒ１７５Ｈを発現するＨ１２９９細胞を、ドキシサイクリン（「Ｄｏｘ」）あり／なしで４８時間前処理し、続いて、指示された期間１μｇ  ／  ｍｌ  ＡＴＯ処理しました。示されたｐ５３標的のｍＲＮＡレベルはｑＰＣＲにより決定された。Ｎｕｔｌｉｎは、ｗｔｐ５３を発現するＨＣＴ１１６の治療に使用され、コントロールとして機能しました。下のパネル、内因性ｐ５３−Ｒ２４９Ｓを発現するＢＴ５４９細胞を１μｇ  ／  ｍｌ  ＡＴＯで表示された時間処理しました。示されたｐ５３標的のｍＲＮＡレベルはｑＰＣＲにより決定された。
【図３９】ＰＡＮＤＡは、ｐ５３標的のタンパク質レベルを上方制御する。ｔｅｔ−ｏｆｆ調節されたｐ５３−Ｒ１７５Ｈを発現するＨ１２９９細胞を、ドキシサイクリン（Ｄｏｘ）あり／なしで４８時間前処理し、続いて０．２μｇ  ／  ｍｌ  ＡＴＯ処理して４８時間前処理しました。ｐ５３標的のタンパク質レベルが決定された。
【図４０】内因性ｐ５３−Ｒ１７５Ｈを発現  Ｄｅｔｒｏｉｔ  ５６２細胞は、示されるようにＡＴＯで処理され、続いてｐ５３免疫ブロッティングが行われた。
【図４１】Ｈ１２９９細胞を、ｐ５３−Ｇ２４５ＳおよびＰＩＧ３レポーター（左パネル）またはｐ５３−Ｒ２８２ＷおよびＰＵＭＡレポーター（右パネル）で２４時間同時トランスフェクトし、続いて、指示された薬剤を２４時間処理した。棒グラフは、ルシフェラーゼシグナルの正規化された変化を示します（平均±ＳＤ、ｎ  ＝  ３）。
【図４２】示されたｍｐ５３ｓでトランスフェクトされた  ＨＣＴ１１６細胞は、１μｇ／ｍｌのＡＴＯで４８時間処理された。ＰＵＭＡのタンパク質レベルが決定されました。
【図４３】内因性ｐ５３−Ｒ１７５Ｈを発現するＣＥＭ−Ｃ１細胞は、示されるようにＡＴＯで処理され、続いてｐ５３免疫ブロッティングが行われた。
【図４４】ＰＡＮＤＡ媒介性腫瘍抑制。ｔｅｔ−ｏｆｆ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｐ５３−Ｒ１７５Ｈを発現するＨ１２９９細胞を、ドキシサイクリン（ＤＯＸ）あり／なしで４８時間前処理し、ＡＴＯを４８時間追加した後、ＭＴＴ細胞生存率アッセイ（左パネル）およびコロニー形成アッセイ（右パネル）  ）（平均±ＳＤ、ｎ  ＝  ３、＊  ｐ  ＜０．０５）。
【図４５】ＰＡＮＤＡ媒介性腫瘍抑制。４８時間のＡＴＯ（左パネル）またはＮｕｔｌｉｎ（右パネル）処理時の１０細胞株の細胞生存率（値は３つの独立した実験の平均を示します）。
【図４６】ＰＡＮＤＡ媒介腫瘍抑制。プロットグラフは、ＮＣＩ６０セルパネルでのＡＴＯおよびＮｕｔｌｉｎ３のＧＩ５０（ＣｅｌｌＭｉｎｅｒで取得）を示しています（＊  ｐ  ＜０．０５）。構造：Ｒ１７５、Ｇ２４５、Ｒ２４９、およびＲ２８２のホットスポット変異。ヌル：切り捨てられたｐ５３、フレームシフトｐ５３、ヌルｐ５３。連絡先：Ｒ２４８およびＲ２７３のホットスポット変異。ｐ５３ステータスは、ＩＡＲＣ  ＴＰ５３データベースを介してコンパイルされました。
【図４７】ＰＡＮＤＡ媒介性腫瘍抑制。ｔｅｔ−ｏｆｆ調節ｐ５３−Ｒ１７５Ｈを発現するＨ１２９９細胞をヌードマウスの脇腹に皮下注射した。腫瘍面積が０．１  ｃｍに達したときに、５  ｍｇ  ／  ｋｇのＡＴＯが週に６日間連続して腹腔内注射されました（１日目）。ＤＯＸグループでは、飲料水に０．２  ｍｇ  ／  ｍｌのＤＯＸが含まれていました。腫瘍サイズの測定は３日ごとに繰り返されました（左パネル）。マウスを２８日目に屠殺し、分離した腫瘍の重量を測定した後、ｐ５３  ＩＨＣ染色を行いました（右パネル、バー＝  ５０μｍ）。グラフは平均±ＳＥＭを示します（＊  ｐ  ＜０．０５、＊＊  ｐ  ＜０．０１、＊＊＊  ｐ  ＜０．００１、ｎ  ＝  ４  ／グループ）。
【図４８】ＰＡＮＤＡ媒介性腫瘍抑制。ＣＥＭ−Ｃ１細胞を尾静脈を介してＮＯＤ  ／  ＳＣＩＤマウスに注射した。末梢血（ＰＢ）サンプルは、７日目から２６日目までの３または４日ごとにマウスの眼窩後洞から得られました。ＣＥＭ−Ｃ１（ｈＣＤ４５  ＋）陽性細胞がＰＢ（２３日目）で０．１％に達した後、ビヒクル（ｎ  ＝  ６）またはＡＴＯ（５  ｍｇ  ／  ｋｇ、ｎ  ＝  ７）を週に６日間連続して静脈内投与する。上のパネル、１６、２２、および２６日目のＰＢにおけるｍＣＤ４５  ＋およびｈＣＤ４５  ＋細胞のパーセンテージ。下のパネル、ビヒクルまたは処理マウスのマンテルコックス生存曲線。
【図４９】ｐ５３−Ｒ１７２Ｈ／Ｒ１７２Ｈまたはヌルｐ５３を発現するＭＥＦｓは、４８時間ＡＴＯで処理され、その後、細胞生存率アッセイ（左パネル）およびコロニー形成アッセイ（右パネル）（平均±ＳＤ、ｎ  ＝  ３，  ＊ｐ  ＜  ０．０５）。
【図５０】のプロットグラフは、ＮＣＩ６０細胞パネルにおけるＰＲＩＭＡ−１およびＮＳＣ３１９７２６のＧＩ５０（ＣｅｌｌＭｉｎｅｒにより検索された）を示す。構造：Ｒ１７５、Ｇ２４５、Ｒ２４９、およびＲ２８２のホットスポット変異。ヌル：切り捨てられたｐ５３、フレームシフトｐ５３、ヌルｐ５３。連絡先：Ｒ２４８およびＲ２７３のホットスポット変異。ｐ５３ステータスは、ＩＡＲＣ  ＴＰ５３データベースを介してコンパイルされました。
【図５１】非存在下（左パネル）または存在下（右パネル）でのＮｕｔｌｉｎ処理時のＨ１２９９細胞（ヌルｐ５３）、ｐ５３−Ｒ１７５Ｈを発現するＨ１２９９細胞、またはｗｔｐ５３を発現するＨ１２９９細胞（ｗｔｐ５３の発現を誘導するＤＯＸ）の細胞生存率。
【図５２】図４７に記載されているように２８日目に単離された腫瘍で決定されたｐ５３−Ｒ１７５Ｈタンパク質レベル。
【図５３】腫瘍は、図４７に記載されるように２８日目に単離される。単離された腫瘍を固定し、ワックスに包埋し、続いてＨ＆Ｅ染色した（Ｓ４Ｅ、バー＝  ２００μｍ）。代表的な画像を示しています。
【図５４】に記載されるように、２８日目に腫瘍が単離される。単離された腫瘍を固定し、ワックスに包埋し、続いてＤＯ１抗体（Ｓ４Ｆ、バー＝  ２００μｍ）によるｐ５３  ＩＨＣ染色。代表的な画像を示しています。
【図５５】図４８に記載されているように、１６日目、２２日目、および２６日目のＰＢにおけるｍＣＤ４５  ＋およびｈＣＤ４５  ＋細胞の割合。
【図５６】癌細胞に対するＡＴＯおよびＤＮＡ損傷剤の組み合わせ。ｔｅｔ−ｏｆｆで調節されるｐ５３−Ｒ１７５Ｈを発現するＨ１２９９細胞を、ＡＴＯの不在下（ｐ５３−Ｒ１７５Ｈパネル）またはＡＴＯの存在下（ＰＡＮＤＡ−Ｒ１７５Ｈパネル）で、指示された化学療法剤で１２時間処理しました。示されたタンパク質が精査された。低い棒グラフは、プローブされたタンパク質の相対レベルを示します。ＣＩＳ：シスプラチン；  ＥＴＯ：エトポシド。ＡＤＭ：アドリアマイシン（ドキソルビシン）。
【図５７】ＡＭＬ．ＭＤＳを治療するためのＡＴＯおよびＤＮＡ損傷剤の試験。５０のＡＭＬ  ／  ＭＤＳが、ｐ５３変異ベースの正確な試験のために採用されました。ＡＴＯ救済可能なｍｐ５３を保有する２人の患者と、治療関連のｍｐ５３を保有する１人の患者に、ＡＴＯと組み合わせた一次治療薬デシタビンを投与しました。Ｆ
【図５８】Ｓ２４１に突然変異を有するｍｐ５３のバッチは、ＡＴＯによって救済され得る。Ｈ１２９９細胞を指定のｍｐ５３でトランスフェクトし、ＡＴＯで処理した後、ＰＡｂ１６２０  ＩＰ（上パネル）とタンパク質レベル測定（下パネル）を行いました。
【図５９】ｍｐ５３構造の救済およびＰＵＭＡおよびｐ２１の誘導におけるＡＴＯの可能性の要約である。
【図６０】左パネル、ｔｅｔ−ｏｆｆ−レギュレートされたｐ５３−Ｒ１７５Ｈを発現するＨ１２９９細胞は、ＡＴＯの不在下（ｐ５３−Ｒ１７５Ｈパネル）またはＡＴＯの存在下（ＰＡＮＤＡ−Ｒ１７５Ｈパネル）で、示された化学療法剤で１２時間処理された。示されたタンパク質が精査された。ｍｐ５３スイッチオフパネルでは、細胞をＤｏｘで４８時間前処理して、ｐ５３−Ｒ１７５Ｈを削除しました。低い棒グラフは、プローブされたタンパク質の相対レベルを示します。ＣＩＳ：シスプラチン；  ＥＴＯ：エトポシド。ＡＤＭ：アドリアマイシン（ドキソルビシン）；  ５−ＦＵ：５−フルオロウラシル；  ＡＲＡ：シタラビン；  ＡＺＡ：アザシチジン；  ＤＡＣ：デシタビン；税：パクリタキセル。右のパネル、上記のような細胞溶解物をＣＩＰで前処理して、細胞タンパク質を脱リン酸化しました。示されたタンパク質が精査された。
【図６１】Ｈ１２９９細胞は、示されたｍｐ５３でトランスフェクトされ、ＡＴＯで処理され、続いてＰＡｂ１６２０  ＩＰ（上パネル）およびタンパク質レベル測定（下パネル）。
【図６２】ＡＴＯ細胞は、示されたｍｐ５３でトランスフェクトされ、ＡＴＯで処理され、続いてＰＡｂ１６２０  ＩＰで処理された。
【図６３】以前に報告された化合物をモデル化した既知のコンピュータと、本出願に記載されているＰＡＮＤＡエージェントとを比較した漫画。左側のパネル、以前に報告された化合物の一部は、ＰＡＮＤＡポケットにある残基であるＣ１２４に結合すると予測されていました。ただし、これらの化合物はｍｐ５３を効率的にレスキューできません。これらの化合物とＣ１２４の結合は実験的に確認する必要があります。中央パネル、ＰＡＮＤＡの共結晶で、原子がＰＡＮＤＡトライアドにしっかりと結合し、ｍｐ５３を安定させ、その後ｍｐ５３を効率的に救助することを発見しました。５価のヒ素の場合、Ｒ１とＲ２はＰＡＮＤＡトライアドの外側に配置できます。右側のパネル、現在のアプリケーションでは、ＰＡＮＤＡエージェントはＰＡＮＤＡポケットからの１つ以上の残基をしっかりと結合し、ｍｐ５３を安定させてから、ｍｐ５３を効率的に救出します。
【図６４】ＰＡＮＤＡ剤の例示的な反応。最初のシステイン（Ｃ１）および／または２番目のシステイン（Ｃ２）および／または３番目のシステイン（Ｃ３）に結合する能力を持つＸグループを含む化合物は、１つ以上のＰＡＮＤＡシステインに結合します。Ｃ１、Ｃ２、およびＣ３の例には、Ｏ、Ｓ、Ｃｌ、Ｆ、Ｉ、Ｂｒ、ＯＨ、およびＨが含まれます。Ｃ１、Ｃ２、および／またはＣ３は互いに結合できます。Ｘ基は、例えば、ビスマスなどの金属、ヒ素およびアンチモンなどの半金属、マイケルアクセプターおよび／またはチオールなどの基、および／またはシステイン結合能力を有する任意の類似体を含む。ＰＡＮＤＡエージェントは、ｐ５３と反応して結合する前に加水分解を受け、ＰＡＮＤＡを形成します。場合によっては、グループが加水分解を受けることができず、したがってシステインに結合できない場合。そのような場合、システイン結合の可能性がある残りのグループは、ｐ５３に結合します。Ｒ１およびＲ２は、Ｘにバインドされた任意のグループを表します。Ｒ１および／またはＲ２は空でもかまいません。
【図６５】トリシステイン結合能を有するＰＡＮＤＡ剤の例示的な反応。３価のＡＴＯは加水分解を受け、ｐ５３の３つのＰＡＮＤＡシステインに共有結合します。
【図６６】トリシステイン結合能を有するＰＡＮＤＡ剤の例示的な反応である。５価化合物が加水分解を受けると、ｐ５３上の３つのＰＡＮＤＡシステインに共有結合します。
【図６７】バイシステイン結合能を有するＰＡＮＤＡ剤の例示的な反応である。ＰＡＮＤＡエージェントは、ＰＡＮＤＡシステイン、またはＰＡＮＤＡシステイン（Ｃｙｓ１２４、Ｃｙｓ１３５、またはＣｙｓ１４１）、またはＣｙｓ２７５とＣｙｓ２７７、またはＣ２３８とＣ２４２に結合できます。
【図６８】：モノシステイン結合能を有するＰＡＮＤＡ剤の例示的な反応。ＰＡＮＤＡエージェントは、ＰＡＮＤＡシステイン（Ｃｙｓ１２４、Ｃｙｓ１３５、またはＣｙｓ１４１）またはＰＡＮＤＡポケット上の他の３つのシステイン（Ｃｙｓ２３８、Ｃｙｓ２７５、またはＣｙｓ２７７）に結合できます。
【図６９】：選択されたヒトＴＰ５３アイソフォーム。
【図７０】：ＡＴＯは、その融解温度を増加させることにより、ｍｐ５３の安定性を大幅に増加させる。パネルＡは、ｐＨ  ７．５  ＨＥＰＥＳバッファー中のＡＴＯの指示された比率で示差走査蛍光分析を介して記録された精製ｐ５３コアドメインＲ１７５Ｈ（９４−２９３）（「ｐ５３Ｃ」）の融解曲線を示しています。パネルＢは、ＡＴＯを示し、精製された組換えｐ５３Ｃ（ｐ５３Ｃ−ＷＴ、ｐ５３Ｃ−Ｒ１７５Ｈ、ｐ５３Ｃ−Ｇ２４５Ｓ、ｐ５３Ｃ−Ｒ２４９Ｓ、およびｐ５３Ｃ−Ｒ２８２Ｗ、各反応で５μＭ）をｐＨ  ７．５のＨＥＰＥＳバッファーで一晩、示された比率で混合しました。ｐ５３Ｃの融解曲線は、ｐＨ  ７．５  ＨＥＰＥＳバッファー中のＤＳＦによって測定されました。ｐ５３Ｃ−Ｒ１７５Ｈ、ｐ５３Ｃ−Ｇ２４５Ｓ、ｐ５３Ｃ−Ｒ２４９Ｓ、およびｐ５３Ｃ−Ｒ２８２Ｗの見かけのＴｍは、ｐＨ  ７．５  ＨＥＰＥＳバッファーで最大１．１〜６．５℃上げることができます。ｐ５３コアの融解温度を示した（平均±ＳＤ、ｎ  ＝  ３）。パネルＣは、示差比のｐＨ  ７．５  ＨＥＰＥＳ、１５０  ｍＭ  ＮａＣｌバッファー中のＡＴＯの比率で示差走査蛍光分析を介して記録された精製ｐ５３コアドメインＲ１７５Ｈ（９４−２９３）の融解曲線を示しています。パネルＤはＡＴＯを示し、精製された組換えｐ５３Ｃ（ｐ５３Ｃ−ＷＴ、ｐ５３Ｃ−Ｒ１７５Ｈ、ｐ５３Ｃ−Ｇ２４５Ｓ、ｐ５３Ｃ−Ｒ２４９Ｓおよびｐ５３Ｃ−Ｒ２８２Ｗ、各反応で５μＭ）は、ｐＨ  ７．５  ＨＥＰＥＳ、１５０  ｍＭ  ＮａＣｌで示された比率で混合されました。一晩緩衝液。ｐ５３Ｃの融解曲線は、ｐＨ  ７．５  ＨＥＰＥＳ、１５０  ｍＭ  ＮａＣｌバッファー中のＤＳＦによって測定されました。ｐ５３Ｃ−Ｒ１７５Ｈ、ｐ５３Ｃ−Ｇ２４５Ｓ、ｐ５３Ｃ−Ｒ２４９Ｓ、およびｐ５３Ｃ−Ｒ２８２Ｗの見かけのＴｍは、ｐＨ  ７．５  ＨＥＰＥＳ、１５０  ｍＭ  ＮａＣｌバッファーで最大１．０〜５．１℃上昇できます。ｐ５３コアの融解温度を示した（平均±ＳＤ、ｎ  ＝  ３）。パネルＥは、ｐＨ  ７．５  ＨＥＰＥＳバッファーで示される比率のＡＴＯで示差走査蛍光分析を介して、ｐ５３コアドメイン（ｐ５３Ｃ−ＷＴ、ｐ５３Ｃ−Ｇ２４５Ｓ、ｐ５３Ｃ−Ｒ２４９Ｓおよびｐ５３Ｃ−Ｒ２８２Ｗ）の融解曲線が記録されたことを示しています。パネルＦは、ｐＨ  ７．５  ＨＥＰＥＳ、１５０  ｍＭ  ＮａＣｌバッファー中の指示された比率のＡＴＯで示差走査蛍光分析により、ｐ５３コアドメイン（ｐ５３Ｃ−ＷＴ、ｐ５３Ｃ−Ｇ２４５Ｓ、ｐ５３Ｃ−Ｒ２４９Ｓおよびｐ５３Ｃ−Ｒ２８２Ｗ）の融解曲線が記録されたことを示しています。
【図７１】：ＰＡＮＤＡは、ほとんどのｐ５３標的遺伝子に対する転写活性を回復する。ｗｔｐ５３、ｐ５３−Ｒ２７３Ｈ、またはｐ５３−Ｒ２８２ＷをトランスフェクトしたＳａＯＳ−２細胞を１μｇ  ／  ｍｌ  ＡＴＯで２４時間処理しました。ｐ５３ターゲットの発現レベルは、ＲＮＡシーケンスによって決定されました。パネルＡは、報告された一連の１１６のｐ５３活性化ターゲットの倍率変化値（示されたサンプルグループとベクター）のヒートマップを示しています。パネルＢは、報告された１２７のｐ５３ターゲットのセットの倍率変化値のヒートマップを示しています。グレースケールは折り目変更を表します。「ｖｅｃ」はベクトルを意味します。
【発明を実施するための形態】
【００６８】
６．１            解釈と定義  
他に示さない限り、この説明は、この分野の当業者にとって通常の意味を有する従来の化学、生化学、分子生物学、遺伝学および薬理学の方法および用語を使用する。本明細書に引用されるすべての刊行物、参考文献、特許、および特許出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００６９】
本明細書で使用される場合、生物学的サンプルは、対象から採取された任意のサンプルに対応し、組織サンプル、ならびに血液、リンパ液または間質液およびそれらの組み合わせなどの液体サンプルを含むことができる。
【００７０】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、以下の一般的な規則が適用される。単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」には、内容で明確に示されていない限り、複数の参照が含まれます。遺伝子とタンパク質の一般的な命名規則も適用されます。つまり、遺伝子はイタリック体または下線付き（例：ＴＰ５３またはＴＰ５３）ですが、タンパク質やペプチドなどの遺伝子産物は標準フォントであり、イタリック体または下線付きではありません（例：ｐ５３）。アミノ酸の位置の命名法に関する一般的な規則も適用されます。つまり、アミノ酸の略称の後に番号が続きます（例：Ｒ１７５、Ｒ  １７５、Ｒ−１７５）。ここで、アミノ酸名は略語で表されます（例：アルギニンは「Ｒ」、「ａｒｇ」、「Ａｒｇ」当業者によく知られている他の略語）およびタンパク質またはペプチド上のアミノ酸の位置は、番号で表される（例えば、１７５位は１７５）。変異の命名法に関する一般的な規則も適用されます。たとえば、Ｒ１７５Ｈは、位置１７５のアルギニンがヒスチジンで置換されていることを意味します。位置１７５のＲからＨへのｐ５３の別の例の変異として、例えば「ｐ５３−Ｒ１７５Ｈ」または「ｍｐ５３−Ｒ１７５Ｈ」で表すことができる。特に明記しない限り、アミノ酸位置は、野生型ｐ５３、好ましくはセクション７．２４にリストされているヒトｗｔｐ５３アイソフォーム「ａ」上のアミノ酸位置に対応します。生物分類の一般的な命名規則も適用されます。つまり、順序、家族、属、種の名前は斜体になります。
【００７１】
本明細書で使用される場合、以下の用語は特定の意味を有するものとする。「約」という用語は、当業者が理解するように、「おおよそ」というその平易で通常の意味を帯び、特に明記しない限り、一般にプラスまたはマイナス２０％である。「備える」、「備える」、「含む」、「含む」、「含む」、「含む」、「含むがこれらに限定されない」、または「特徴付けられる」という用語は、包括的または自由回答であり、追加を除外しない、非引用の要素。
【００７２】
本明細書で使用される場合、以下の用語は特定の意味を有するものとする：  
【００７３】
「診断」は、特定の疾患を同定する任意の方法を意味し、とりわけ、疾患の症状の検出、疾患の重症度の評価、疾患の病期の決定、および疾患の進行のモニタリングを含む。
【００７４】
「発現」または「発現レベル」は、遺伝子マーカーによってコードされるｍＲＮＡまたはタンパク質のレベルを意味する。  
【００７５】
「予後」は、疾患の可能性のある経過を決定する任意の方法を意味し、とりわけ、疾患の素因の決定、疾患が発症する可能性の決定、疾患の可能性のある重症度の評価、可能性のある決定を含む。病気の段階、および病気の進行の可能性を予測します。
【００７６】
「効果的な治療のスクリーニング」は、特定の疾患の治療のための効果的な治療用製品または方法のスクリーニングを意味する。それは、インビトロおよび／またはエクスビボスクリーニング法を含み得、そしてとりわけ、疾患を処置するための生成物または組成物および処置のための組成物を調製するための方法の両方を含む。
【００７７】
「対象」は、任意の生物を意味する。それには、脊椎動物を含む動物が含まれ、さらにヒトなどの哺乳動物が含まれる。また、生まれていない子供と、２人の親が妊娠していない架空の子供も含まれます。
【００７８】
「治療」は、特定の疾患を有する対象への治療用製品または方法の投与および／または適用を意味し、とりわけ、疾患に対するあるタイプの治療の有効性のモニタリングを含む。
【００７９】
「ＰＡＮＤＡ」は、１つまたは複数のｐ５３および１つまたは複数のＰＡＮＤＡ剤からなる複合体を意味する。
【００８０】
「“ＰＡＮＤＡ”剤」“ＰＡＮＤＡ  Ａｇｅｎｔ”は、１つ以上の有用な特性を有する、パンダポケットに結合することができる物質の組成物を意味し、そのような有用な特性の例には、以下が含まれる。好ましくは、増加はＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる増加より少なくとも約３倍大きい、より好ましくは、増加はＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる増加より少なくとも約５倍大きい、さらに好ましくは増加は少なくとも約１０倍大きいＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる増加よりもさらに好ましくは、その増加はＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる増加よりも少なくとも約１００倍大きい。（ｂ）ｐ５３の転写機能に実質的な改善を引き起こすことができ、好ましくは、改善は、ＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる改善よりも少なくとも約３倍大きい。より好ましくは、改善はＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる改善よりも少なくとも約５倍大きく、さらに好ましくは、改善はＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる改善より少なくとも約１０倍大きく、さらに好ましくは改善は少なくとも約１００倍であるＰＲＩＭＡ−１による改善よりも（ｃ）例えば、ｐ５３  Ｔｍの増加によって測定されるように、ｐ５３の安定化の実質的な増強を引き起こすことができ、好ましくは、増強は、ＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる増強よりも少なくとも約３倍大きい、より好ましくは、改善は、ＰＲＩＭＡ−１による改善の少なくとも約５倍、さらに好ましくはＰＲＩＭＡ−１による改善の少なくとも約１０倍、さらに好ましくはＰＲＩＭＡによる改善の少なくとも約１００倍の改善−１。ＰＡＮＤＡ剤は、２つ以上の有用な特性を有することが好ましく、３つ以上の有用な特性を有することがより好ましい。例ＰＡＮＤＡエージェントはＡＴＯとその類似物です。より典型的なＰＡＮＤＡエージェントは、表１から表７にあります。
【００８１】
「ＰＡＮＤＡポケット」“ＰＡＮＤＡ  Ｐｏｃｋｅｔ”は、１つ以上の適切に折り畳まれたパンダシステインに隣接するすべてのアミノ酸、１つまたは複数と接触するすべてのアミノ酸を含む、適切に折り畳まれたパンダシステインから約７Åの面積から本質的になる領域を意味する。適切に折りたたまれたＰＡＮＤＡシステイン、およびすべてのＰＡＮＤＡシステイン。ＰＡＮＤＡポケットの例３Ｄ構造は、図１４、図１８、付録Ａおよび付録Ｂにあります。例示的な実施形態では、ＰＡＮＤＡポケットは、上記のアミノ酸のすべて、上記のアミノ酸のサブセット、およびおそらく他のＰＡＮＤＡ  Ｐｏｃｋｅｔを構成する結果の三次構造が、このアプリケーションで説明されている１つ以上の有用な特性を示す限り、コンポーネントしたがって、ＰＡＮＤＡポケットは、上記のアミノ酸またはそのサブセットを含むか、またはそれらから本質的になることができる。
【００８２】
「ＰＡＮＤＡコア」“ＰＡＮＤＡ  Ｃｏｒｅ”は、ＰＡＮＤＡエージェントがＰＡＮＤＡポケットとＰＡＮＤＡエージェントとの間に少なくとも１つの密接な関連を形成するときに、ｐ５３のＰＡＮＤＡポケット上に形成される三次構造を意味する。
【００８３】
「ＰＡＮＤＡシステイン」“ＰＡＮＤＡ  Ｃｙｓｔｅｉｎｅ”は、ｗｔｐ５３位置システイン１２４（「Ｃ１２４」または「ｃｙｓ１２４」）、システイン１３５（「Ｃ１３５」または「ｃｙｓ１３５」）、およびシステイン１４１（「Ｃ１４１」または「ｃｙｓ１４１」）に対応するシステインを意味する。）（まとめて「ＰＡＮＤＡトライアド」）。
【００８４】
「ｐ５３」は、すべての天然および人工ｐ５３を含む、任意の野生型ｐ５３（「ｗｔｐ５３」）を意味する。すべての天然および人工のｐ５３を含む、変異したｐ５３（「ｍｐ５３」）。またはそれらの組み合わせ。
【００８５】
「ｗｔｐ５３」は、一般に野生型と考えられるか、または野生型配列を有するすべての野生型ｐ５３を意味し、一塩基多型（「ＳＮＰ」）によって引き起こされる変異などの一般に許容されるあらゆる変異を含む。例のｗｔｐ５３は、図６４−図６８にあります。
【００８６】
「ＳＮＰ」は、ゲノム内の特定の位置で発生する単一ヌクレオチドの変動である単一ヌクレオチド多型を意味し、各変動は、集団内である程度の程度まで提示される。ｐ５３の既知のＳＮＰの例示的なリストは、表８です。
【００８７】
「ｍｐ５３」は、変異ｐ５３を意味し、これは、ｗｔｐ５３ではない、すべてのｐ５３およびｐ５３様高分子を含む。ｍｐ５３には、組換えｐ５３、キメラｐ５３、ｐ５３誘導体、融合ｐ５３、ｐ５３フラグメント、ｐ５３ペプチドなどの人工ｍｐ５３が含まれます。例のｍｐ５３には、ｗｔｐ５３の位置Ｒ１７５、Ｇ２４５、Ｒ２４８、Ｒ２４９、Ｒ２７３、Ｒ２８２、Ｃ１７６、Ｈ１７９、Ｙ２２０、Ｐ２７８、Ｖ１４３、Ｉ２３２、およびＦ２７０に対応する１つ以上の変異が含まれます。例のｍｐ５３変異には、Ｒ１７５Ｈ、Ｇ２４５Ｄ  ／  Ｓ、Ｒ２４８Ｑ  ／  Ｗ、Ｒ２４９Ｓ、Ｒ２７３Ｃ  ／  Ｈ、Ｒ２８２Ｗ、Ｃ１７６Ｆ、Ｈ１７９Ｒ、Ｙ２２０Ｃ、Ｐ２７８Ｓ、Ｖ１４３Ａ、Ｉ２３２Ｔ、およびＦ２７０Ｃ変異があります。
【００８８】
「ｍｐ５３ホットスポット」“ｍｐ５３  ｈｏｔｓｐｏｔ”は、Ｒ１７５、Ｇ２４５、Ｒ２４８、Ｒ２４９、Ｒ２７３、またはＲ２８２に位置するｍｐ５３上の突然変異を意味する。
【００８９】
「ホットスポットｍｐ５３」は、ｍｐ５３ホットスポットに少なくとも１つの変異を有するｍｐ５３、すなわち、Ｒ１７５、Ｇ２４５、Ｒ２４８、Ｒ２４９、Ｒ２７３、Ｒ２８２、およびそれらの組み合わせを意味する。
【００９０】
「生物系」とは、細胞、細菌、ｐ５３経路および関連タンパク質を含む人工系を意味する。
【００９１】
「ｐ５３阻害タンパク質」は、ｐ５３の活性の機能を阻害するタンパク質を意味し、例えば、マウス二重分２（「ＭＤＭ２」）、ｐ５３のアポトーシス刺激タンパク質の阻害剤（「ｉＡＳＰＰ」）および  サーチュイン−１（「ＳＩＲＴ１」）。
【００９２】
「ｍｐ５３との接触」とは、ｐ５３構造に劇的な影響を与えることなく、そのＤＮＡ結合能力を失うｍｐ５３を意味する。接触するｍｐ５３は、たとえば、ｐ５３−Ｒ２７３Ｈ、ｐ５３−Ｒ２７３Ｃ、ｐ５３−Ｒ２４８Ｑ、およびｐ５３−Ｒ２４８Ｗで表されます。
【００９３】
「構造的ｍｐ５３」は、ｗｔｐ５３と比較して三次元構造を著しく破壊したｍｐ５３を意味する。構造ｍｐ５３は、たとえば、ｐ５３−Ｒ１７５Ｈ、ｐ５３−Ｇ２４５Ｄ、ｐ５３−Ｇ２４５Ｓ、ｐ５３−Ｒ２４９Ｓ、およびｐ５３−Ｒ２８２Ｗで表されます。
【００９４】
「有用な特性」とは、ｍｐ５３構造、転写活性、細胞増殖阻害、腫瘍抑制機能のうちの少なくとも１つをｗｔｐ５３のものに効率的かつ効果的に救済できることを意味する。（ａ）適切に折りたたまれたｐ５３の母集団を大幅に増加させることができます。好ましくは、ＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる増加よりも少なくとも約３倍多く、より好ましくは少なくとも約５倍増加します。ＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる増加よりもさらに好ましくは、その増加は、ＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる増加よりも少なくとも約１０倍大きく、さらに好ましくは、ＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる増加よりも少なくとも約１００倍大きい。（ｂ）ｐ５３の転写機能に実質的な改善を引き起こすことができ、好ましくは、改善は、ＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる改善よりも少なくとも約３倍大きい。より好ましくは、改善はＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる改善よりも少なくとも約５倍大きく、さらに好ましくは、改善はＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる改善より少なくとも約１０倍大きく、さらに好ましくは改善は少なくとも約１００倍であるＰＲＩＭＡ−１による改善よりも（ｃ）例えば、ｐ５３  Ｔｍの増加によって測定されるように、ｐ５３の安定化の実質的な増強を引き起こすことができ、好ましくは、増強は、ＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる増強よりも少なくとも約３倍大きい、より好ましくは、改善は、ＰＲＩＭＡ−１による改善の少なくとも約５倍、さらに好ましくはＰＲＩＭＡ−１による改善の少なくとも約１０倍、さらに好ましくはＰＲＩＭＡによる改善の少なくとも約１００倍の改善−１。ＰＡＮＤＡ剤は、２つ以上の有用な特性を有することが好ましく、３つ以上の有用な特性を有することがより好ましい。例ＰＡＮＤＡエージェントはＡＴＯとその類似物です。より典型的なＰＡＮＤＡエージェントは、表１から表７にあります。
【００９５】
「ＤＴＰ」は、当業者によって理解されるような発達治療プログラムを意味する。
【００９６】
「ＡＴＯ」または「Ａｓ２Ｏ３」は、三酸化ヒ素および一般的に三酸化ヒ素として理解される化合物を意味する。
【００９７】
「アナログ」または「アナログ」は、例えば、単純な反応または元の化合物の原子、部分、または官能基の置換を介して、元の化合物の化学構造を変化させることによって得られる化合物を意味する。そのような類似体は、元の化合物の本質的な足場を根本的に変えることなく、１つまたは複数の原子、部分、または官能基の挿入、削除、または置換を含むことができる。そのような原子、部分、または官能基の例には、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ヒドロキシル、エステル、エーテル、アシル、アルキル、カルボキシル、ハライド、ケチル、カルボニル、アルデヒド、アルケニル、アジド、ベンジル、フルオロ、ホルミル、アミド、イミド、フェニル、ニトリル、メトキシ、ホスフェート、ホスホジエステル、ビニル、チオール、スルフィド、またはスルホキシドの原子、部分、または官能基。元の化合物から化学的類似体を作成する多くの方法が当技術分野で知られている。
【００９８】
「治療的有効量」は、障害の症状を予防、緩和、または改善するか、または治療されている対象の生存を延長するのに有効な化合物の量である。治療的有効量の決定は、特に本明細書に提供される詳細な開示に照らして、十分に当業者の能力の範囲内である。インビボで使用される化合物の有効用量、レベル、または量は、治療される障害、個々の患者の状態、送達部位、方法を考慮して、当業者により決定され得る。投与、化合物の効力、バイオアベイラビリティ、代謝特性、およびその他の要因。  
【００９９】
「効率的」とは、１つ以上のｗｔｐ５３構造または機能の救済、１つまたは複数のｗｔｐ５３転写活性、細胞増殖阻害活性、腫瘍抑制機能の救済、一般にｗｔｐ５３のものに対する救済などの有用な特性の強化を説明するために使用される「効率的」  ＰＲＩＭＡ−１による増強と比較して、有用な特性を３倍以上増強することを意味し、好ましくは５倍、より好ましくは１０倍、より好ましくは１００倍である。たとえば、効率的な強化は、ｍｐ５３のＴｍをＰＲＩＭＡ−１のＴｍの３〜１００倍に高め、ｍｐ５３をＰＲＩＭＡ−１の３〜１００倍に折りたたむか、ｍｐ５３の転写活性を刺激することです。ＰＲＩＭＡ−１の３〜１００倍。
【０１００】
ｐ５３関連障害の例には、肺癌、乳癌、結腸直腸癌、卵巣癌、および膵臓癌などの癌が含まれる。腫瘍、老化の結果、発達疾患、加速された老化、免疫疾患。
６．２                ｐ５３は細胞生物学で最も重要なタンパク質の１つ
【０１０１】
ｐ５３は、細胞生物学において最も重要なタンパク質の１つである。どうやら５３キロダルトンのタンパク質ｐ５３は転写因子です。野生型ｐ５３（ｗｔｐ５３）には、特定された配列があります。（遺伝子バンク、タンパク質バンク、ユニポートなどの公共の遺伝子バンクを参照。セクション７．２５も参照）。例となるｗｔｐ５３配列はセクション７．２５にリストされています。特に明記されていない限り、このアプリケーションでは、セクション７．２５にリストされているヒトｐ５３アイソフォーム「ａ」のｗｔｐ５３シーケンスを使用して位置を参照します。
【０１０２】
ヒトｗｔｐ５３は、本質的に無秩序なＮ末端トランス活性化ドメイン（「ＴＡＤ」）、プロリンリッチドメイン（「ＰＲＤ」）、構造化ＤＮＡを含む複数のドメインを有する４×３９３アミノ酸のホモ四量体として活性である。柔軟なリンカーを介して接続された結合ドメイン（「ＤＢＤ」）と四量体化ドメイン（「ＴＥＴ」）、および本質的に無秩序なＣ末端調節ドメイン（「ＣＴＤ」）。複数のアイソフォームを発現する多くのｐ５３ファミリー遺伝子が存在し、しばしば拮抗作用を示します。
【０１０３】
Ｗｔｐ５３は、細胞において中心的な役割を果たし、最も重要な腫瘍抑制因子であるとしばしば考えられている。ＤＮＡ損傷や発癌性ストレスなどの細胞ストレスにより、ｐ５３が活性化され、一連の遺伝子（Ａｐａｆ１、Ｂａｘ、Ｆａｓ、Ｄｒ５、ｍｉｒ−３４、Ｎｏｘａ、ＴＰ５３ＡＩＰ１、Ｐｅｒｐ、Ｐｉｄｄ、Ｐｉｇ３、Ｐｕｍａ、Ｓｉｖａ、ＹＷＨＡＺ、Ｂｔｇ２、Ｃｄｋｎ１ａ、Ｇａｄｄ４５ａ、ｍｉｒ−３４ａ、ｍｉｒ−３４ｂ  ／  ３４ｃ、Ｐｒｌ３、Ｐｔｐｒｖ、Ｒｅｐｒｉｍｏ、Ｐａｉ１、Ｐｍｌ、Ｄｄｂ２、Ｅｒｃｃ５、Ｆａｎｃｃ、Ｇａｄｄ４５ａ、Ｋｕ８６、Ｍｇｍｔ、Ｍｌｈ１、Ｍｓｈ２、Ｐ５３ｒ２、Ｐｏｌｋ、Ｘｐｃ、Ａｄｏｒａ２ｂ、Ａｌｄｈ４、Ｇａｍｔ、Ｇｌｓ２、Ｇｐｘ１、Ｌｐｉｎ１、Ｐａｒｋｉｎ、Ｐｒｋａｂ１、Ｐｒｋａｂ２、Ｐｔｅｎ、Ｓｃｏ１、Ｓｅｓｎ１、Ｓｅｓｎ２、Ｔｉｇａｒ、Ｔｐ５３ｉｎｐ１、Ｔｓｃ２、Ａｔｇ１０、Ａｔｇ２ｂ、Ａｔｇ４ａ、Ａｔｇ４ｃ、Ａｔｇ７、Ｃｔｓｄ、Ｄｄｉｔ４  Ｆｏｘｏ３、Ｌａｐｔｍ４ａ、Ｌｋｂ１、Ｐｉｋ３ｒ３、Ｐｒｋａｇ２、Ｐｕｍａ、Ｔｐｐ１、Ｔｓｃ２、Ｕｌｋ１、Ｕｌｋ２、Ｕｖｒａｇ、Ｖａｍｐ４、Ｖｍｐ１、Ｂａｉ１、Ｃｘ３ｃｌ１、Ｉｃａｍ１、Ｉｒｆ５、Ｉｒｆ９、Ｉｓｇ１５、Ｍａｓｐｉｎ、Ｍｃｐ１、Ｎｃｆ２、Ｐａｉ１、Ｔｌｒ１-Ｔｌｒ  Ｔｓｐ１、Ｕｌｂｐ１、Ｕｌｂｐ２、ｍｉｒ−３４ａ、ｍｉｒ−２００ｃ、ｍｉｒ−１４５、ｍｉｒ−３４ａ、ｍｉｒ−３４ｂ  ／  ３４ｃ、およびＮｏｔｃｈ１）細胞周期停止、ＤＮＡ修復、アポトーシス、細胞修復、細胞死などをトリガーする。抗癌作用とは別に、ｐ５３標的遺伝子は老化、血管新生、オートファジー、接続、酸化ストレスの調節、代謝恒常性の調節、幹細胞の維持などにも重要な役割を果たします。
【０１０４】
ｗｔｐ５３への突然変異は、幅広い意味を持ちうる。ｐ５３タンパク質は非常に強力な腫瘍抑制因子であり、ヒトのすべての癌のほぼ半分で突然変異によって不活化されます。ｗｔｐ５３への変異は、幅広い意味を持ちます。第一に、得られるｐ５３タンパク質である変異型ｐ５３（「ｍｐ５３」）は、その腫瘍抑制機能を実質的に失う。ｍｐ５３を発現するマウスとヒトは、早期に多くの種類のがんを発症します。第二に、ｍｐ５３のいくつかは、さらに、例えば、癌転移の促進、治療への抵抗性の付与、癌患者の再発などの発癌特性を獲得します。
【０１０５】
したがって、ｐ５３を理解すること、さらに重要なことには、ｍｐ５３の構造的および機能的回復を達成することは、現代の細胞生物学、医学、および癌研究の聖杯である。ｐ５３は、癌、医学、生物学で最も活発に研究されているタンパク質です。さらに、ｐ５３での研究は、２番目に最も活発に研究されているタンパク質、すなわちＴＮＦに関して行われている研究を６０％はるかに上回っており、３番目に最も活発に研究されているタンパク質、すなわちＥＧＦＲを８０％超えています（Ｄｏｌｇｉｎ、２０１７）  。２００１年以来、ｐ５３は最も活発に研究されているタンパク質のトップにあり、他のものをはるかに上回っています。この理由の１つは、ｐ５３が癌で最も一般的に変異しているタンパク質であり、他の癌の変異をはるかに上回っていることです（Ｋａｎｄｏｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【０１０６】
６．３              ｐ５３とがん
すべてのヒト腫瘍の約半分は、部分的に機能するがサイレントｗｔｐ５３ｓ  有し、残りの半分は変異体ｐ５３ｓ  保有する（Ｖｏｇｅｌｓｔｅｉｎら、２０００）。マウスの研究では、ｗｔｐ５３機能の回復が腫瘍の成長を完全または部分的に後退させる可能性があることが示唆されています（Ｆｅｌｄｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０；  Ｍａｒｔｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００６；  Ｖｅｎｔｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，２００７；  Ｘｕｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。
【０１０７】
ｗｔｐ５３機能の回復に向けた既存のほとんどの取り組みは、マウスのダブルミニット２（「ＭＤＭ２」）、ｐ５３のアポトーシス刺激タンパク質の阻害剤（「ｉＡＳＰＰ」）、およびサーチュインを含むｐ５３阻害タンパク質（「ＰＩＰ」）に焦点を当てている１（「ＳＩＲＴ１」）。たとえば、ＭＤＭ２の増幅またはその阻害タンパク質であるｐ１４ＡＲＦの損失は、それぞれ肉腫および神経膠芽腫（ＴＣＧＡデータベースを参照）と密接に相関しているため（Ｇａｏ  ｅｔ  ａｌ。）、ＭＤＭ２阻害化合物であるＮｕｔｌｉｎがＭＤＭ２の活動に対抗することが確認されました（Ｖａｓｓｉｌｅｖ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）。別の例として、ｉＡＳＰＰがＲａＤＡＲ核局在化コードを公開し（Ｌｕら、２０１４）、核に入り（Ｌｕら、２０１６ａ）、転移性黒色腫のｗｔｐ５３を阻害する（Ｌｕら、２０１３）  、したがって、私たちはｉＡＳＰＰ阻害化合物を探索しています。これらの抗ＰＩＰ化合物の多くは非常に効率的で、明確な作用メカニズム（「ＭＯＡ」）があり、臨床調査が進んでいます（Ｋｈｏｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【０１０８】
他のものは、腫瘍抑制機能を失うだけでなく、発癌性特性もしばしば得るタンパク質であるｍｐ５３を標的とすることを試みている。ただし、このアプローチは魅力的ではありますが、簡単ではありません。
【０１０９】
ｍｐ５３がドミナントネガティブであり、マウスモデルベースの研究で見られるように、導入された外因性ｗｔｐ５３の効果を弱める可能性があるため、ｍｐ５３発現細胞にｗｔｐ５３を単に導入することは問題がある（Ｗａｎｇら、２０１１）。
【０１１０】
ｍｐ５３上流経路、下流経路、または関連経路を遮断することによりｍｐ５３発現細胞を選択的に阻害することにも問題がある。ｍｐ５３上流阻害剤であるスベラニロヒドロキサム酸（「ＳＡＨＡ」）は、ｍｐ５３上流ヒストン脱アセチル化酵素（「ＨＤＡＣ」）を阻害し、ｍｐ５３分解を促進します（Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）；  ｍｐ５３下流阻害剤であるスタチン（コレステロール阻害剤）は、ｍｐ５３下流メバロン酸経路を遮断し、ｍｐ５３発現細胞の生存率を低下させる可能性があります（Ｐａｒｒａｌｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）；特定のキナーゼ阻害剤は、受容体チロシンキナーゼシグナル伝達のｍｐ５３関連活性化を妨害することによりｍｐ５３発現細胞を選択的に阻害し、それによりインテグリンのリサイクルをブロックすることにより細胞浸潤を阻害します（Ｍｕｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。ｍｐ５３の腫瘍抑制機能。したがって、これらの戦略が癌を長期的に臨床的に治療するのに十分であるかどうかは不明である（Ｍｕｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｖｏｕｓｄｅｎ、２０１４）。実際、マウスの研究では、ｍｐ５３を排除するとｍｐ５３を発現する動物の生存がｐ５３−／−（ｎｕｌｌ）レベルまでしか延長されないことが示されています（Ａｌｅｘａｎｄｒｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。
【０１１１】
６．４              ＭＰ５３を救うことの約束と課題
ｍｐ５３の腫瘍抑制機能は、１９９３年に救済可能であると報告された（Ｈａｌａｚｏｎｅｔｉｓ  ａｎｄ  Ｋａｎｄｉｌ、１９９３；  Ｈｕｐｐ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３）。それ以来、効率的で効果的なｍｐ５３固有のレスキューエージェントを特定することが、がんの生物学と医学の聖杯となっています。実際、２０１７年だけでｍｐ５３患者の直接医療費は約６５０億米ドルに達します。非常に効率的で効果的なｍｐ５３レスキューエージェントを特定することにより、申請者は、これらのｍｐ５３患者とその家族が直面する途方もない財政的、肉体的、感情的な困難に対処しようと努めます。  
【０１１２】
様々な規模の無数のスクリーニング努力にもかかわらず、依然として効率的かつ効果的なｍｐ５３レスキュー剤はない。これは、ｍｐ５３の腫瘍抑制機能の救出（Ｊｏｅｒｇｅｒ  ａｎｄ  Ｆｅｒｓｈｔ、２０１６；  Ｍｕｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｖｏｕｓｄｅｎ、２０１３、２０１４）が非常に困難なためです（Ｊｏｅｒｇｅｒ  ａｎｄ  Ｆｅｒｓｈｔ、２０１６；  Ｍｕｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｖｏｕｓｄｅｎ、２０１３、２０１４）（Ｂｙｋｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，２０１７）。（サバパシーとレーン、２０１８）。実際、それは私たちの世代の最も難しい科学的問題の１つかもしれません。ｍｐ５３のレスキューを成功させるには、レスキューエージェントが特定のｍｐ５３機能を単に抑制または破壊する以上のことを行う必要があります。レスキューエージェントは、ｍｐ５３の野生型機能を修復またはレスキューする必要があります。
【０１１３】
間違いなく、救助は破壊よりもはるかに困難である。当然のことながら、８０以上の臨床的に承認された標的薬物のうち、それらの大多数は腫瘍性タンパク質の阻害剤です。それらのどれも腫瘍抑制因子の機能を救うことができません。  
【０１１４】
ＲＡＳのように課題を追加するために、ｍｐ５３表面は、明らかなドラッグ可能なポケットを提供しない（Ｊｏｅｒｇｅｒ  ａｎｄ  Ｆｅｒｓｈｔ、２０１６）。したがって、過去２０年間に１５を超えるｍｐ５３レスキュー候補者が報告されており、数十、さらには数百万ドルもの投資を集めているにもかかわらず、現在までに１人の候補者（ＰＲＩＭＡ−１  ／  ＡＰＲ−２４６）のみが臨床試験。報告された１５のｍｐ５３レスキュー候補の中でさえ、それらのすべては、構造レスキューでは２倍未満の増加、転写レスキューでは２倍未満の増加で、かろうじて検出可能な有効性を持っています。比較すると、完全に救出されたｐ５３−Ｒ１７５Ｈは、構造的救助では約１００倍です。別の例として、機能的に完全に救助するために完全に救出されたｐ５３−２８２  ２０Ｘ。さらに、これらのレスキューエージェントのＭＯＡはほとんど不明です（Ｂｙｋｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，２０１７）（Ｓａｂａｐａｔｈｙ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ、２０１８）。これらの不利な数があり、明確なＭＯＡがないため、癌治療のためのこれらのレスキュー候補の有用性は非常に限られています。  
【０１１５】
したがって、出願人は、明確なＭＯＡでｍｐ５３を直接救助する非常に効率的で効果的な救急薬を特定することを優先事項とした。
６．４．１        ｉｎ  ｖｉｔｒｏスクリーニングで特定されたｍｐ５３レスキューエージェントは理想的ではない  
【０１１６】
ｍｐ５３レスキュー剤の最初のスクリーニングは、インビトロでのｍｐ５３組換えタンパク質に主に基づいていた。これらには、組換えｍｐ５３の安定性を促進したために特定されたＣＰ−３１３９８（Ｆｏｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）、および組換えｍｐ５３とＤＮＡの結合を改善したために特定されたＳＣＨ５２９０７４およびｐ５３Ｒ３（Ｄｅｍｍａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０；  Ｗｅｉｎｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ  。、２００８）。ただし、これらのレスキューエージェントは非効率的で非特異的であり、細胞内で深刻な課題に直面しています。
【０１１７】
例えば、ＣＰ−３１３９８は、細胞において限られた効率を有することが示された。それらはｍｐ５３に限定された特異性を持っているだけでなく、細胞に実質的な毒性を引き起こす可能性があるだけでなく、それらは細胞に入るのに問題があるかもしれません。さらに、毒性作用はｍｐ５３発現に非特異的で独立していることが報告されており（Ｒｉｐｐｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）、ＣＰ−３１３９８がｍｐ５３を直接標的とすることによって機能しないことを示唆しています。さらに、ＣＰ−３１３９８がｍｐ５３タンパク質に結合することを示す以前のｉｎ  ｖｉｔｒｏ研究とは異なり、後のｉｎ  ｖｉｖｏ研究は、代わりに細胞内のＤＮＡにＣＰ−３１３９８が結合することを示しています（Ｒｉｐｐｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）。
６．４．２        細胞ベースのスクリーニングで特定されたｍｐ５３レスキューエージェントは理想的ではない  
【０１１８】
２００２年、細胞ベースのスクリーニングにより、ＰＲＩＭＡ−１およびＭＩＲＡがｍｐ５３発現細胞を選択的に阻害することが判明した（Ｂｙｋｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）。インシリコスクリーニングでは、ＮＳＣ３１９７２６がｍｐ５３発現細胞株のパネルを選択的に阻害することがわかりました（Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。別の細胞ベースのスクリーニングでは、細胞内のｍｐ５３依存性ルシフェラーゼレポーター活性を増強することがＣｈｅｔｏｍｉｎであることがわかりました（Ｈｉｒａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ただし、ｉｎ  ｖｉｔｒｏスクリーニングと同様に、細胞ベースのスクリーニングによって特定された救急薬も問題があります。
【０１１９】
例としてＰＲＩＭＡ−１を使用して、研究は、他の救急薬と同様に、救急効率が制限されていることを示した。さらに、ＰＲＩＭＡ−１とその構造的類似体ＰＲＩＭＡ−１Ｍｅｔ（「ＡＰＲ−２４６」）がｍｐ５３の存在の有無に関係なく細胞増殖を阻害したという報告が増えています（Ａｒｙｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；  Ｇｒｅｌｌｅｔｙ  ｅｔ  ａｌ。、２０１５；  Ｌｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６ｂ；  Ｐａｔｙｋａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６；  Ｔｅｓｓｏｕｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。さらに、ＰＲＩＭＡ−１が酸化ストレスシグナル伝達成分を標的とする研究（Ｂａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６；  Ｊｏｅｒｇｅｒ  ａｎｄ  Ｆｅｒｓｈｔ、２０１６；  Ｌａｍｂｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）と、ＰＲＩＭＡ−１と他のアルキル化によって引き起こされる観測された感度ＰＫ１１００７などのｍｐ５３発現細胞に対する薬剤は、ｍｐ５３の抗酸化機能の喪失が原因です（Ｂａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６；  Ｊｏｅｒｇｅｒ  ａｎｄ  Ｆｅｒｓｈｔ、２０１６；  Ｌａｍｂｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）  。
【０１２０】
さらに、研究はますます混乱する結果を報告し、それらのＭＯＡに疑問を呈し、それらの限られた効率を指摘した。さらに、ＬａｍｂｅｒｔとＢｙｋｏｖは、ＰＲＩＭＡ−１がｍｐ５３に共有結合し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでｍｐ５３−ＤＮＡ結合活性を促進すると報告した（Ｂｙｋｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，２００２；  Ｌａｍｂｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）が、少なくとも１つの研究では、ＣＰ−３１３９８（ＰＲＩＭＡ−１ではない）は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＤＮＡ結合活性をｍｐ５３に復元します（Ｄｅｍｍａ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）。これらの発見は、ＰＲＩＭＡ−１がｐ５３−Ｒ２７３Ｈを発現するＳａｏｓ−２細胞を選択的に阻害するという最初の報告とは矛盾しているようです（Ｂｙｋｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）。実際、これらの後の研究は、ＰＲＩＭＡ−１がｍｐ５３を直接ターゲットにしてレスキューせず、代わりにｍｐ５３細胞を合成致死によって殺している可能性があることを示唆しています。それはｍｐ５３細胞の生存に不可欠です。（ワイドルら、２０１１）。この理論を支持する研究により、ＣＨＫ１、ＷＥＥ−１、ＰＬＫ−１、ＡＴＭなどの多くのタンパク質がｍｐ５３細胞の合成致死標的であることが示されています（Ｗｅｉｄｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。１つの臨床試験で、ＷＥＥ−１阻害剤はｍｐ５３を発現する患者の治療に有効でした（Ｌｅｉｊｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６ａ；  Ｌｅｉｊｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６ｂ）。
６．４．３        ｍｐ５３の効果的かつ効率的なレスキューエージェントを特定するには、ＭＯＡを確立することが重要です  
【０１２１】
現在、ＣＰ−３１３９８（フォスターら、１９９９）およびＰＲＩＭＡ−１（ビコフら、２００２）を含む既知のｍｐ５３レスキュー剤の大多数は、ｐ５３の野生型構造を安定化すると考えられている。（Ｍｕｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｖｏｕｓｄｅｎ、２０１４年）。ただし、前述のとおり、これらは理想的ではありません。これらのレスキューエージェントの主な問題の１つは、ＭＯＡが不明確であることです。
【０１２２】
報告された救急薬の圧倒的多数は、ランダムなスクリーニングを介して特定された。ＰｈｉＫａｎ０８３やＰＫ７０８８（Ｂａｓｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０；  Ｂｏｅｃｋｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００８；  Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）のように、合理的なスクリーニングで特定されたものはごくわずかです。ただし、これらの化合物はＹ２２０に変異があるｐ５３のみを救出できます。したがって、大多数の救急隊員のＭＯＡはほとんど不明のままです。
【０１２３】
これは、特に問題がある。たとえばＰＲＩＭＡ−１で見られるように、レスキューエージェントのＭＯＡまたはそれが細胞内で標的とするタンパク質を知らない場合（ＪｏｅｒｇｅｒおよびＦｅｒｓｈｔ、２０１６年）、不可解な結果と矛盾する理論につながる可能性があります。さらに説明すると、具体的なＭＯＡがなければ、特定されたレスキューエージェントの多くがｍｐ５３のさまざまなカテゴリをレスキューできる理由がわかりません。
【０１２４】
一般に、ｗｔｐ５３集団の大多数は適切に折り畳まれており、したがって機能的である。ｐ５３が変異すると、それは大まかに２つのカテゴリーに分類されます。（１）ｐ５３の構造に劇的な影響を与えずにＤＮＡ結合能力を失うｍｐ５３に接触します（「ｍｐ５３に接触」）。および（２）野生型と比較して３次元構造を破壊した構造ｍｐ５３（「構造ｍｐ５３」）。代表的な連絡先ｍｐ５３はｐ５３−Ｒ２７３Ｈで、ｐ５３−Ｒ２７３Ｃ、ｐ５３−Ｒ２４８Ｑおよびｐ５３−  Ｒ２４８Ｗ。代表的な構造ｍｐ５３はｐ５３−Ｒ１７５Ｈであり、ｍｐ５３を含む他の一般的な例には、ｐ５３−Ｇ２４５Ｄ、ｐ５３−Ｇ２４５Ｓ、ｐ５３−Ｒ２４９Ｓ、およびｐ５３−Ｒ２８２Ｗが含まれます。構造ｍｐ５３を救出するには、アンフォールドｐ５３の集団をフォールドｐ５３に増やす必要があります。  
【０１２５】
これらのｍｐ５３は様々な方法でそれらの野生型ｐ５３機能を失うので、ｍｐ５３の１つのカテゴリーの救助剤が他のカテゴリーを救わないことは合理的であろう。実際、ｍｐ５３を５つの異なるカテゴリに分類するという命題があり、各カテゴリには独自の特定のレスキュー要件があります（Ｂｕｌｌｏｃｋ  ａｎｄ  Ｆｅｒｓｈｔ、２００１；  Ｂｕｌｌｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０００；  Ｊｏｅｒｇｅｒ  ａｎｄ  Ｆｅｒｓｈｔ、２００７）。
【０１２６】
一般に、接触するｍｐ５３を救助することは、構造的なｍｐ５３よりもかなり困難である。たとえば、Ｒ２４８やＲ２７３などの連絡先ｍｐ５３のＤＮＡ連絡残基の喪失を補うために、救急隊員はＤＮＡ結合のための新しい連絡先を作成する必要があります（Ｊｏｅｒｇｅｒ  ａｎｄ  Ｆｅｒｓｈｔ、２００７）。したがって、ＭＯＡが定義されていない場合、ＣＰ−３１３９８（Ｆｏｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）、ＰＲＩＭＡ−１（Ｂｙｋｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）、ＳＣＨ５２９０７４（Ｄｅｍｍａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）などの単一のレスキューエージェントが困惑します。）、亜鉛（Ｐｕｃａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）、スティスチン酸（Ｗａｓｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）、およびｐ５３Ｒ３（Ｗｅｉｎｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）は、構造ｍｐ５３（ｐ５３−Ｒ１７５Ｈなど）と連絡先ｍｐ５３（  ｐ５３−Ｒ２７３Ｈなど）（Ｊｏｅｒｇｅｒ  ａｎｄ  Ｆｅｒｓｈｔ、２０１６；  Ｋｈｏｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【０１２７】
タンパク質ベースおよび細胞ベースの両方の既存のスクリーニング方法の最も重要な欠点の１つは、それらの選択基準が多かれ少なかれランダムであることであると我々は考えている。したがって、彼らは、彼らが特定した救急隊員のＭＯＡを解明することに失敗しました。ここで、出願人は、ｍｐ５３レスキュー候補を具体的ＭＯＡで合理的かつ効果的にスクリーニングするための新しい方法の開発に着手しました。
６．５              ４Ｃスクリーニング−ｍｐ５３レスキュー候補者の合理的で効果的なスクリーニング方法  
【０１２８】
最初の合理的に設計されたスクリーニングは２００８年に行われ、ｍｐ５３は異なって処理され、構造的に分析された（Ｂａｓｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０；  Ｂｏｅｃｋｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。ｍｐ５３は非常に多様であるため、個々のｍｐ５３を分析するための合理的な根拠が開発されました（ＪｏｅｒｇｅｒおよびＦｅｒｓｈｔ、２００７年；  ＪｏｅｒｇｅｒおよびＦｅｒｓｈｔ、２０１６年；  ＭｕｌｌｅｒおよびＶｏｕｓｄｅｎ、２０１３年；  ＭｕｌｌｅｒおよびＶｏｕｓｄｅｎ、２０１４年）。ＰｈｉＫａｎ０８３とＰＫ７０８８は、このスクリーニングを通じて識別され、ｐ５３−Ｙ２２０Ｃを選択的に結合し、わかりやすいＭＯＡで救助することがわかりました。ただし、ｐ５３−Ｙ２２０Ｃは最も頻繁に発生する６つのｍｐ５３の１つではないため、幅広い範囲のｍｐ５３を救出できる救急隊員を特定する必要があります。
【０１２９】
上記で説明したように、望ましい特性および具体的なＭＯＡを備えたホットスポットｍｐ５３のためのレスキューエージェントを識別するための効率的で合理的なベースのスクリーンが必要である。他の人が試みましたが、この必要性は満たされていません。ここでは、このようなスクリーニング方法、ｍｐ５３のインシリコ合理的分類、化合物構造のインシリコ合理的分析、細胞増殖アッセイ、および実験的ｍｐ５３構造決定（「４Ｃスクリーニング」）を統合する効率的で合理的なスクリーニング方法を開示します。４Ｃスクリーニングメソッドを使用して、ＤＴＰの複合リポジトリなどの複合リポジトリをスクリーニングしました（図１）。私たちの目標は、ｍｐ５３の適切なリフォールディングを促進することにより、構造ｍｐ５３を発現する細胞株を選択的に阻害できる複数のシステイン結合能を持つ化合物を特定することでした。
【０１３０】
４Ｃスクリーニングを通じて、ヒドロキシル化の際に、ｍｐ５３の３つのシステインに同時に結合することができるレスキュー候補を特定することができる。ＰＡｂ１６２０やＰＡｂ２４６免疫沈降などのアッセイで測定したｗｔｐ５３に匹敵するレベルまで、驚くほど高い効率でｐ５３−Ｒ１７５Ｈをリフォールディングできます。ｐ５３−Ｒ２８２Ｗおよびｐ５３−Ｇ２４５Ｓの転写活性を、ルシフェラーゼレポートアッセイで測定したｗｔｐ５３の転写活性に匹敵するレベルまで救うことができます。構造的ホットスポットｍｐ５３を発現するＮＣＩ６０細胞株などのｍｐ５３発現細胞株を選択的に阻害できます。構造ｍｐ５３に依存するマウス異種移植片を阻害できます。また、ＤＮＡ損傷剤と組み合わせて、ｍｐ５３を有するがん患者を治療するために使用できます。
【０１３１】
一例として、我々は、ＡＴＯ（Ａｓ２Ｏ３）およびＮＳＣ３０６０（ＫＡｓＯ２）がヒドロキシル化時に３つのシステインを同時に結合できると予測し（図３）、ＡＴＯおよびＮＳＣ３０６０の両方がＮＣＩ６０細胞株を発現する構造的ホットスポットｍｐ５３を選択的に阻害することを見出した（図）  ２）。興味深いことに、ＰＲＩＭＡ−１やＮＳＣ３１９７２６を含め、テストされた報告化合物はどれも４Ｃスクリーニングを生き延びませんでした（図９）。同じアッセイで、Ｎｕｔｌｉｎ３は予想どおり、ｗｔｐ５３発現細胞株を選択的に阻害することがわかりました（図２）。さらに、ＰＡｂ１６２０エピトープとＰＡｂ２４６（マウスｐ５３−Ｒ１７２Ｈ）エピトープの測定可能な増加とＰＡｂ２４０エピトープの測定可能な減少によって示されるように、ＡＴＯとＮＳＣ３０６０の両方が高効率でｐ５３−Ｒ１７５Ｈをリフォールディングすることがわかりました（図４）。比較研究を行って、ＰＡｂ１６２０が野生型ｐ５３エピトープに特異的であることを確認しました。ＰＡｂ１６２０は効率的に折り畳まれたｗｔｐ５３を免疫沈降させたが、折り畳まれていないｐ５３−Ｒ１７５Ｈは免疫沈降させなかったためです（データ未掲載）。
６．５．１        ｍｐ５３のインシリコ合理的分類  
【０１３２】
ｍｐ５３レスキュー剤の合理的なスクリーニング方法を設計する際の課題の１つは、ｍｐ５３機能不全が多様であることである。したがって、ｍｐ５３変異の種類ごとに特別に設計された合理的なスクリーニング戦略が必要です。さらに、構造ｍｐ５３の構造的欠陥を同時に修正し、接触ｍｐ５３のＤＮＡ接触領域を再導入できるレスキューエージェントをスクリーニングするように設計された戦略は、そのようなレスキューエージェントが存在しない可能性があるため、非現実的かもしれません。
【０１３３】
しかしながら、主に体温でアンフォールドされるが、より低い温度ではリフォールドされる（そして転写活性を回復する）ｍｐ５３のクラスがある（Ｂｕｌｌｏｃｋら、１９９７年；  Ｂｕｌｌｏｃｋら、２０００年）。たとえば、４つのホットスポット構造ｍｐ５３（ｐ５３−Ｒ１７５Ｈ、ｐ５３−Ｇ２４５Ｓ  ／  Ｄ、ｐ５３−Ｒ２４９Ｓ、およびｐ５３−Ｒ２８２Ｗ）（図５）は、さまざまな程度で不安定化され、このクラスに属します（Ｂｕｌｌｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９７；  Ｂｕｌｌｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）。その代表的なメンバーに見られるように、Ｒ２８２Ｗ変異はローカルループシートヘリックスモチーフの水素結合ネットワークを破壊し、融解温度（「Ｔｍ」）を下げ、全体的な構造不安定化を引き起こします。
【０１３４】
したがって、本発明者らは、このクラスのｍｐ５３を救出することができる広域スペクトル救急薬が存在する可能性があると予測した。
【０１３５】
６．５．２          細胞増殖アッセイ
独立して実施されたＮＣＩ６０スクリーニングプロジェクトは、多数のＤＴＰ化合物についての細胞株感受性プロファイルを提供した（Ｓｈｏｏｍａｋｅｒ、２００６）。構造ｍｐ５３を発現するＮＣＩ６０細胞株を選択的に阻害する化合物は、このクラスのｍｐ５３の安定剤として作用する可能性が高いと仮定しました（図６）。
【０１３６】
ＤＴＰに堆積された全体の約２９２０００の構造のうち、約２１０００の化合物が、ＣｅｌｌＭｉｎｅｒ（レインホールドら、２０１２）（図１）による品質管理を通過した感度プロファイルを有する。したがって、構造ホットスポットｍｐ５３を発現する細胞を阻害することを好むもの、たとえば、広域スペクトルの薬物によって救出される可能性のあるｍｐ５３のクラスを選択することにより、約２１  ０００の化合物を絞り込みました（セクション６．５．１を参照）。この基準を使用して、１９７５種類の化合物が構造的ｍｐ５３発現ＮＣＩ６０細胞株を選択的に阻害し、相関スコア＞  ０．３３およびｐ値＜０．０５（図１）、構造的ｍｐ５３発現株のＧＩ５０が低いことがわかりました。
【０１３７】
６．５．３          化合物構造のインシリコ合理的分析
上記のセクション６．５．１で説明したｍｐ５３分類分析に基づいて、構造ホットスポットｍｐ５３のクラス（ｐ５３−Ｒ１７５Ｈ、ｐ５３−Ｇ２４５Ｓ  ／  Ｄ、ｐ５３−Ｒ２４９Ｓ、および  ｐ５３−Ｒ２８２Ｗ）。さらに、突然変異領域を固定すると、このクラスのｍｐ５３がグローバルに安定化する可能性があると仮定します。重要なのは、１０個のｍｐ５３システインのうち８個が構造ｍｐ５３ホットスポットに近接していることです（図５）。さらに、これらのシステインがＣ１７６  ／  Ｃ１８２、Ｃ２３８  ／  Ｃ２４２、Ｃ１３５  ／  Ｃ１４１、Ｃ２７５  ／  Ｃ２７７のようにペアでクラスター化されていることを発見しました。したがって、システインのペアおよび／またはクラスターを共有結合で架橋すると、局所領域が固定化され、その後、近くのホットスポット変異によって引き起こされる柔軟性を相殺するのに十分であると仮定しました。
【０１３８】
ＤＴＰライブラリーからインシリコの化合物をさらに絞り込み、Ｚｎ、Ｈｇ、Ａｓ、およびＡｕなどの重金属を有する化合物など、複数のシステイン結合能を有する化合物を選択した。チオール含有化合物；マイケルのアクセプター（図７）。当社の４Ｃスクリーニング方法は、多くの点で以前のスクリーニング方法とは異なり、それを改良しています。たとえば、少なくとも概念的には、システイン修飾に適した単一のシステイン結合ポテンシャルを持つ救急候補者を選択する代わりに、システイン架橋に適した複数のシステイン結合ポテンシャルを持つ救助候補者を選択しました（Ｋａａｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０；  Ｚａｃｈｅ  ｅｔ  ａｌ  ．，２００８）。
【０１３９】
上記の２段階の合理的な選択プロセスの後、我々は、１９７５個の化合物の最初のプールを約１００  ｍｐ５３レスキュー候補のプールに狭めた。
【０１４０】
６．５．４          実験的なｍｐ５３構造決定
次に、免疫沈降により、ｗｔｐ５３特異的抗体、ＰＡｂ１６２０抗体（Ｗａｎｇら、２００１）を使用して、レスキュー候補の存在下でｐ５３−Ｒ１７５Ｈが適切に折り畳まれたかどうかを実験的に試験した（図８）。これらのテストに合格したレスキュー候補者は、折り畳まれたマウスｐ５３（ＰＡｂ２４６）および折り畳まれていないｐ５３（ＰＡｂ２４０）に特異的な抗体を用いた免疫沈降によってさらに確認されました。これらの立体配座分析により、観察されたレスキュー効果が、合成致死によるのではなく、レスキューエージェントによるｍｐ５３の安定化によって直接引き起こされたものであることが確認されます。次に、制御された実験設定で検証済みのｍｐ５３レスキュー候補の能力を綿密にテストし、構造ｍｐ５３を安定化させ、Ｔｍを増加させ、転写活性を刺激し、ｍｐ５３に依存する方法で癌細胞を阻害する能力を決定しました。
【０１４１】
６．６              ４Ｃ  ＋スクリーニング
救助候補者のプールを拡大するために、超大規模な４Ｃ  ＋スクリーニングを実施した。インシリコでは、ＰｕｂＣｈｅｍ（ｈｔｔｐｓ：／／ｐｕｂｃｈｅｍ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）に由来する約９４２０万の化合物を分析しました。４Ｃスクリーニングで２つのヒ素含有化合物を特定したため、４Ｃ  ＋スクリーニングでは、少なくとも１つのシステイン結合ポテンシャルを持つ金属ヒ素またはその類似体（アンチモンなど）とビスマスを含む化合物を選択しました。約３２９５７の化合物にＡｓ、Ｓｂ、Ｂｉが含まれていることが発見されました。これらの基準の下で、１つ以上のシステインに結合する可能性がある限り、５価の有機ヒ素、５価のアンチモン、および５価のビスマスを含めました。このインシリコプレスクリーニングステップの後、インシリコで約９４２０万の化合物の初期プールを数千のレスキュー候補のプールに絞り込みました。次に、いくつかの構造ｍｐ５３を選択して実験的にテストし、タンパク質のリフォールディング、Ｔｍの増加、および転写活性の刺激を行いました。
６．７              ４Ｃスクリーニングと４Ｃ  ＋スクリーニングによるｍｐ５３レスキューエージェントの識別                
【０１４２】
ヒトの癌のほぼ半分は、その腫瘍抑制機能を喪失し、および／またはしばしばいくつかの発癌性機能を獲得するｍｐ５３を宿している。機能不全のｐ５３変異は、さまざまなサイトでさまざまなメカニズムを介して作成されますが、ｐ５３変異の約３分の１は、Ｒ１７５、Ｇ２４５、Ｒ２４８、Ｒ２４９、Ｒ２７３、およびＲ２８２の６つのｍｐ５３ホットスポットのいずれかにあります（各ａ  「ｍｐ５３ホットスポット」）（Ｆｒｅｅｄ−Ｐａｓｔｏｒ  ａｎｄ  Ｐｒｉｖｅｓ、２０１２）。結果として生じるｍｐ５３は、ｍｐ５３構造を大幅に変更せずにＤＮＡ接触残基を失うＣｏｎｔａｃｔｉｎｇ  ｍｐ５３と、ｗｔｐ５３構造を失うＳｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｍｐ５３として一般的に分類されます。ＤＮＡ結合能力と転写活性は、接触ｍｐ５３と構造ｍｐ５３の両方で大きく損なわれています。さらに、ほとんどの癌由来のｍｐ５３はｗｔｐ５３の腫瘍抑制機能を失い、多くは発癌性も獲得します。
【０１４３】
本発明者らの効率的かつ非常に合理的な４Ｃスクリーニングを使用して、我々は、非常に高いレスキュー効率を有する少なくとも２つの広域スペクトルのｍｐ５３再使用剤を実験的に同定することができる。それらは三酸化ヒ素（ＡＴＯ：ＮＳＣ９２８５９＆ＮＳＣ７５９２７４）と亜ヒ酸カリウム（ＫＡｓＯ２：ＮＳＣ３０６０）です。私たちの結果は、これらのｍｐ５３レスキューエージェントがｍｐ５３の構造をレスキューできることを示しています。熱力学的安定性を向上させます。ｍｐ５３の転写活性を救出する。ｍｐ５３の腫瘍抑制機能をｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏ、および患者で救出する。異なるｍｐ５３を救出する。構造ｍｐ５３の驚くべき救助能力。また、これらのレスキューエージェントに基づいて原子レベルのレスキューメカニズムを特定しました。
【０１４４】
我々の効率的で非常に合理的な超大規模４Ｃ  ＋スクリーニングを使用して、我々はさらに、数千の臨床的に適切で効率的なｍｐ５３安定剤を発見し、その多くはヒ素を含んでいる（表１〜表６）。主要な裏付けデータ（ｍｐ５３の構造と転写活性に対する救助効率）を備えた３１のｍｐ５３再利用剤を実験的に確認しました（表７）。ここではさらに、構造ホットスポットｍｐ５３を薬理学的に安定化できる原子レベルのメカニズムを開示します。
【０１４５】
我々の４Ｃスクリーンを使用して、我々は、元素ヒ素およびその類似体が、単独であれ化合物であれ、ｐ５３を迅速、効果的かつ選択的に安定化することを発見した。特に、ヒ素元素とその類似体は、非常に不安定化されているため、構造ｍｐ５３のクラスに特に有用であることを発見しました。さらに、ヒ素とその類似体がｍｐ５３に直接共有結合し、多数のｐ５３、特に４つのホットスポット構造ｍｐ５３（Ｒ１７５、Ｇ２４５、Ｒ２４９、Ｒ２８２に変異があるｐ５３）を含む構造ｍｐ５３の融解温度を約１−  ８℃、ヒ素が構造ｍｐ５３に共有結合していることを支持します。さらに、ヒ素とその類似体は、非常に安定した複合体であるＰＡＮＤＡの形成を通じて、ｍｐ５３の構造と転写活性を効率的に救済することを発見しました。
【０１４６】
ここで、本発明者らは、ＰＡＮＤＡの高度に分解された結晶構造のバッチを、約１〜３Åで初めて開示する。ＰＡＮＤＡ結晶構造を分析することにより、構造ｍｐ５３などのｍｐ５３が薬理学的に安定化する方法を原子レベルで詳細に分析することができました。そうすることで、ヒ素によって結合および固定化できるｐ５３のドラッグ可能なポケットを発見しました。その結果、ｐ５３コアドメインのグローバルな安定性につながります。これらの発見に基づき、超大規模な４Ｃ  ＋スクリーニング研究を通じて、臨床的に関連のある何千ものｍｐ５３安定剤の膨大な宝庫を発見しました（表１−表６）。
６．８              ３つ以上のシステイン結合能を持つヒ素化合物は、ｍｐ５３の広域スペクトルで効果的な構造的および機能的救助者です
６．８．１        あるクラスのレスキューエージェントはヒ素を含み、ｍｐ５３のＴｍを劇的に上昇させることができます  
【０１４７】
本発明者らは、Ｔｍを増加させることによりｍｐ５３を安定化し、それによりｍｐ５３を安定化させることができる広い範囲の構造ｍｐ５３を救うことができる化合物があるという仮説に基づいて、スクリーニング方法に基づいた。４つの精製された組換え構造ホットスポットｍｐ５３でこの仮説をテストし、ＡＴＯが４つすべてのｍｐ５３のＴｍをｗｔｐ５３に匹敵するレベルまで約１〜８℃上げることができることを発見しました。たとえば、ＡＴＯはｐ５３−Ｒ２４９ＳのＴｍを最大４．９℃上昇させます（図１０）。ＡＴＯ治療の際立ったＴｍ強化は、ｍｐ５３が非常に安定していることを示しています。
６．８．２        ヒ素レスキューエージェントは、ｍｐ５３の構造と機能の救助に非常に効果的です。
【０１４８】
我々は、レスキュー剤ＡＴＯの構造的および転写レスキュープロファイルを体系的かつ定量的に決定した。ＡＴＯ処理の前に、ＰＡｂ１６２０  ＩＰ効率によって決定された６つのホットスポットｍｐ５３の折りたたみ状態が、以前にＢｕｌｌｏｃｋらによって決定された熱力学的安定性とほぼ一致していることを確認しました（Ｂｕｌｌｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）（図１１）。Ａｓ２Ｏ３は、テストされた４つすべての構造ホットスポットｍｐ５３（ｐ５３−Ｒ１７５Ｈ、ｐ５３−Ｇ２４５Ｓ、ｐ５３−Ｒ２４９Ｓ、ｐ５３−Ｒ２８２Ｗ）の構造を救出する際に顕著な効果があることがわかりました（図１１）。たとえば、Ａｓ２Ｏ３をｐ５３−Ｒ１７５Ｈに追加した場合のｗｔｐ５３のような構造の量は、約５０〜１００倍に増加し、ｗｔｐ５３の９５％に相当するレベルになりました。
【０１４９】
機能的には、Ａｓ２Ｏ３はまた、ＰＵＭＡ（図１１）およびその他に対する４つの構造ホットスポットｍｐ５３の転写活性を有意に増強した。たとえば、最も成功したレスキューの１つでは、Ａｓ２Ｏ３がｐ５３−Ｒ２８２Ｗの転写活性を約２０倍、ｗｔｐ５３の８０％に相当するレベルまでレスキューしたことがわかりました。Ａｓ２Ｏ３がｐ５３−Ｇ２４５Ｓの転写活性を効率的に救い、ｗｔｐ５３の７７％に相当するレベルになることもわかりました。
【０１５０】
我々はさらに、Ａｓ２Ｏ３が、構造的および転写的に、ｍｐ５３−Ｒ２４８Ｑおよびｍｐ５３−Ｒ２７３Ｈなどの接触ホットスポットｍｐ５３を救済したが、より低い救助効率であったことを見た。ｍｐ５３の構造的救助効率が機能的救助効率に必ずしも比例していないことは注目に値します。ｐ５３−Ｒ２８２Ｗの構造は完全には救済されていませんが、その転写機能は大幅に救済されています（ｗｔｐ５３レベルの８０％に相当）。これは、ＰＡｂ１６２０エピトープがｐ５３のローカル構造（たとえば、ＤＮＡ結合に応答する主要なＬＳＨモチーフやＬ３ループ）を反映できないためと考えられます。
【０１５１】
６つのホットスポットｍｐ５３に加えて、Ａｓ２Ｏ３はまた、ｐ５３−Ｃ１７６Ｆ、ｐ５３−Ｈ１７９Ｒ、ｐ５３−Ｙ２２０Ｃ（低効率）、およびｐ５３−Ｐ２７８Ｓ（低効率）（ｈｔｔｐ：／／ｐ５３．ｉａｒｃ．ｆｒ／，  ＩＡＣＲ）、およびＤＮＡ結合領域の外側に変異がある代表的なｍｐ５３（ｐ５３−Ｖ１４３Ａ、ｐ５３−Ｆ２７０Ｃ、およびｐ５３−Ｉ２３２Ｔ）（図１１）。
【０１５２】
いくつかのｍｐ５３の構造的および転写レスキュープロファイルを（図１１）に示す。これらの驚くべき結果は、Ａｓ２Ｏ３とＫＡｓＯ２が、スペクトルが広く、効果的で、効率的で、堅牢なｍｐ５３レスキュー化合物であることを確認しています。
６．８．３        ｐ５３は単一のヒ素原子または類似体への結合によって救出される  
【０１５３】
さらに、単一のヒ素原子がｍｐ５３の主要なシステインに結合して、その構造および／または機能を変化させることができると仮定した。これをテストするために、Ｒ２４９Ｓ変異を持つ組換えｍｐ５３（９４−２９３）コアを作成しました（「ｍｐ５３（９４−２９３）−Ｒ２４９Ｓ」）。次に、ｍｐ５３（９４−２９３）−Ｒ２４９Ｓを精製し、精製したｍｐ５３（９４−２９３）−Ｒ２４９ＳとＡｓ２Ｏ３をインキュベートし、変性条件下で質量分析により、得られたｍｐ５３の分子量を測定しました。
【０１５４】
組換えｍｐ５３の分子量は、インキュベーション時に約７２ダルトン（Ｄａ）増加することを発見しました。これは、ヒ素原子の獲得（７４．９）と３つのプロトンの喪失にほぼ対応しています（図１２）。別の例として、ＮａＡｓＯ２、ＳｂＣｌ３、ＨＯＣ６Ｈ４ＣＯＯＢｉＯなどの超大規模４Ｃ  ＋スクリーニングで特定されたＰＡＮＤＡエージェントをｍｐ５３（９４−２９３）−Ｒ２４９Ｓに追加すると、結果として得られるｍｐ５３の分子量は約７２  Ｄａ増加しました。私たちの予測によると、それぞれ１１９  Ｄａ、２０６  Ｄａ（図１７）。これは、単一のヒ素原子（またはアンチモンとビスマスを含むその類似体）がｐ５３に共有結合することを示しています。
６．８．４        ヒ素レスキュー剤のクラスは、複数のシステイン結合能力を介してｐ５３のシステインに結合します  
【０１５５】
このクラスのヒ素救助剤間の相互作用をさらに理解するために、我々はＤＴＰライブラリーに目を向けた。ＤＴＰライブラリには、ヒ素含有化合物（ｎ  ＝  ４７）が多く含まれていることがわかりました。しかし、それらのほとんどは「４Ｃ」スクリーニングでは生き残りませんでした。これは、ｐ５３に結合できるように、ヒ素を正しい足場で提示する必要があることを示唆しています。
【０１５６】
ヒ素レスキュー剤であるための前提条件を理解するために、我々は４７個のヒ素レスキュー剤を比較し、これらの化合物とそれらのＮＣＩ６０細胞株阻害プロファイルを比較した。ＮＳＣ３０６０（ＫＡｓＯ２、ピアソンの相関０．８３７、ｐ  ＜０．０１）、ＮＳＣ１５７３８２（ピアソンの相関０．８１２、ｐ  ＜０．０１）、ＮＳＣ４８３００（ピアソンの相関０．６２７、ｐ  ＜０．０１）など、３つ以上のシステイン結合ポテンシャルを持つヒ素化合物が見つかりました。、ＡＴＯと最も類似したＮＣＩ６０阻害プロファイルを持っています。さらに、バイシステイン結合の可能性がある化合物も、ＡＴＯとほぼ同様のＮＣＩ６０阻害プロファイルを持っていますが、それほど広範囲ではありませんでした（ＮＳＣ９２９０９、ピアソンの相関０．７９７、ｐ  ＜０．０１；  ＮＳＣ９２９１５、ピアソンの相関０．６７０、ｐ  ＜０．０１；  ＮＳＣ３３４２３  、ピアソンの相関０．７１７、ｐ  ＜０．０１）。
【０１５７】
さらに、本発明者らは、モノシステイン結合の可能性のある化合物もＡＴＯと著しく類似したＮＣＩ６０阻害プロファイルを有することを見出したが、程度はさらに低かった（ＮＳＣ７２７２２４、ピアソンの相関０．５９８、ｐ  ＜０．０１；  ＮＳＣ７２４５９７、ピアソンの相関０．３８、ｐ  ＜０．０１；  ＮＳＣ７２４５９９、ピアソンの相関０．５５３）。要約すると、我々の結果は、３つ以上のシステイン結合能、バイシステイン結合能およびモノシステイン結合能を持つ化合物がｍｐ５３発現細胞の増殖を選択的に阻害できることを示した。さらに、これら３つのクラスのヒ素レスキューエージェント間の効率は、システイン結合能力の数とともに低下することを示しました。
【０１５８】
したがって、本発明者らは、救助の可能性が異なるｍｐ５３レスキュー化合物の３つの別々のクラスを初めて発見した。最上部では、３つ以上のシステイン結合の可能性があるものは、ｍｐ５３を野生型に近い状態に復元できます。
【０１５９】
特に、上記のＮＳＣ４８３００は、３つのシステインを同時に結合する可能性を有するだけでなく、４つのシステインを同時に結合する可能性も有する。これは、ヒ素化合物が少なくとも３つのシステインに結合する可能性がある場合、効率的なｍｐ５３救助者であることを示唆しています。３つ以上のシステインが潜在的に結合しているヒ素化合物は、３つだけのシステインが結合している可能性がある化合物と同じレベルのレスキュー効率を持つことができる可能性があります（図５）。
【０１６０】
６．９              ヒ素は構造ｍｐ５３のＰＡＮＤＡポケットに選択的に結合します
我々はｐ５３とヒ素アナログ複合体をＰＡＮＤＡと名付けたので、命名法のテーマに従うことにした。ここで取得したＰＡＮＤＡの結晶構造をもとに、以下の名称を作成しました。Ｃ１２４、Ｃ１３５、またはＣ１４１のいずれかとしてのＰＡＮＤＡシステイン。Ｃ１２４、Ｃ１３５、Ｃ１４１としてのＰＡＮＤＡトライアド。ＰＡＮＤＡ  Ｔｒｉａｄを中心とした立体構造としてのＰＡＮＤＡ  Ｐｏｃｋｅｔ。ＰＡＮＤＡポケットには、ＰＡＮＤＡトライアドと直接接触する残基（Ｓ１１６がＣ１２４、Ｃ２７５およびＲ２７３に接触するＣ１３５、Ｙ２３４がＣ１４１に接触）、ＰＡＮＤＡトライアドに隣接する残基（Ｖ１２２、Ｔ１２３、Ｔ１２５、およびＹ１２６、Ｍ１３３、Ｆ１３４、Ｑ１３６、およびＬ１３７、Ｋ１３９、Ｔ１４０、Ｐ１４２、およびＶ１４３）、およびＰＡＮＤＡトライアド（Ｌ１１４、Ｈ１１５、Ｇ１１７、Ｔ１１８、Ａ１１９、Ｋ１２０、Ｓ１２１、Ａ１３８、Ｉ２３２、Ｈ２３３、Ｎ２３５、Ｙ２３６、Ｍ２３７、Ｃ２３８、Ｎ２３９  、Ｆ２７０、Ｅ２７１、Ｖ２７２、Ｖ２７４、Ａ２７６、Ｃ２７７、Ｐ２７８、Ｇ２７９、Ｒ２８０、Ｄ２８１、およびＲ２８２）（図１８）。ＰＡＮＤＡポケットと少なくとも１つの緊密な関連付けを形成できるレスキューエージェントとしてのＰＡＮＤＡエージェント。ＰＡＮＤＡエージェントは、ポテンシャルをＰＡＮＤＡポケットに結合することでｍｐ５３を効率的に安定させる任意の化合物にすることができます。好ましくは、ＰＡＮＤＡ剤は、ｍｐ５３のＴｍをＰＲＩＭＡ−１のＴｍの３〜１００倍増強し、および／またはｍｐ５３をＰＲＩＭＡ−１のＴｍの３〜１００倍倍にし、および／またはｍｐ５３の転写活性を３〜１００倍刺激するＰＲＩＭＡ−１のそれらの。好ましくは、ＰＡＮＤＡ剤は、少なくとも１つのシステイン結合ポテンシャル、さらに好ましくは２つ以上のシステイン結合ポテンシャル、さらに好ましくは３つ以上のシステイン結合ポテンシャルを有する。さらに好ましくは、１つまたは複数のＡｓ、ＢｉまたはＳｂ原子を含む化合物としてのＰＡＮＤＡ剤。さらに好ましくは、ＰＡＮＤＡ剤は、ＰＡＮＤＡシステインに効率的に結合し、ｉｎ  ｓｉｔｕでｍｐ５３を効率的にレスキューすると予測された表１〜表６に列挙された何千もの化合物から選択することができる。より好ましくは、ＰＡＮＤＡエージェントは、ｍｐ５３の構造と転写活性を救うことが実験的に確認された、表７にリストされている３１の化合物の１つです。より好ましくは、ＰＡＮＤＡ剤は、ｐ５３−Ｒ２４９Ｓに直接結合することが確認されたＡｓ２Ｏ３、ＮａＡｓＯ２、ＳｂＣｌ３、およびＨＯＣ６Ｈ４ＣＯＯＢｉＯなどのヒ素類似体を含む（図１２、図１７）。
【０１６１】
それにバインドされたＰＡＮＤＡエージェントを備えたＰＡＮＤＡポケットとしてのＰＡＮＤＡコア。ｐ５３とＰＡＮＤＡエージェントの複合体としてのＰＡＮＤＡ。ＰＡＮＤＡの特徴は、ＰＡＮＤＡコアが含まれていることです。
【０１６２】
効率的なＰＡＮＤＡエージェントの重要な基準としての３つ以上のシステインポテンシャルの同定により、我々はＰＡＮＤＡポケットの３Ｄ構造の理解に取り組み始めた。特に、ｍｐ５３を安定させるためにＰＡＮＤＡポケットを操作するように取り組みました。
【０１６３】
６．９．１        ＰＡＮＤＡの優れた安定性により、ＰＡＮＤＡの結晶化とＰＡＮＤＡポケットの識別が容易になります。
ｗｔｐ５３のコアは以前に結晶化されているが、構造的ホットスポットｍｐ５３のコアを結晶化することは悪名高く難しい。これは、構造ホットスポットｍｐ５３の安定性が非常に低いためです。
【０１６４】
しかしながら、ｍｐ５３は、４つのＳＳＳＭ（Ｍ１３３Ｌ、Ｖ２０３Ａ、Ｎ２３９Ｙ、およびＮ２６８Ｄ）を導入することにより人工的に安定化され得、四重変異体ｐ５３−ＱＭｓをもたらす。４つのＳＳＳＭは、ｐ５３のＴｍを５．２℃上昇させます。この強化された安定性により結晶化が促進され、ホットスポットｍｐ５３−Ｇ２４５Ｓおよびｍｐ５３−Ｒ２８２Ｗや非ホットスポットｍｐ５３−Ｖ１４３Ａおよびｍｐ５３−Ｆ２７０Ｌなど、多くの構造ｍｐ５３が解決されました。
【０１６５】
私たちのパンダは非常に安定している。
実際、ＰＡＮＤＡエージェントはｍｐ５３のＴｍをＱＭに匹敵するレベルに引き上げることができます（図１０）。
ＰＡＮＤＡの優れた安定性により、ｐ５３−Ｒ２４９ＳとＡｓを含む構造ホットスポットｍｐ５３を、ＳＳＳＭなしの条件とｐ５３−Ｇ２４５Ｓとｐ５３−Ｒ２８２Ｑのバッチで結晶化することができます。
【０１６６】
本発明者らのＰＡＮＤＡ結晶に基づいて、本発明者らは、単一のヒ素（または類似体）原子が３つのシステインに共有結合するという我々の質量分析結果を確認した。これらの３つのシステインは、ＰＡＮＤＡポケット内のＣ１２４、Ｃ１３５、およびＣ１４１（それぞれ「ＰＡＮＤＡシステイン」と一緒に「ＰＡＮＤＡトライアド」）です。
６．９．２        最も効果的なＰＡＮＤＡエージェントは、他のよりアクセス可能なシステインが利用可能であり、代替のトリシステイン金属結合部位が利用可能であるにもかかわらず、非常に不活性なＰＡＮＤＡトライアドに結合します。
【０１６７】
ＰＡＮＤＡトライアドのＭＯＡを理解するために、我々はＰＡＮＤＡトライアドが何であり、それらがどこにあるかを知る必要があることを知っていた。さらに、臨床研究におけるシステイン結合化合物の主要な課題の１つは、望ましくないシステインのターゲットを外すことです（Ｊｏｅｒｇｅｒ  ａｎｄ  Ｆｅｒｓｈｔ、２０１６；  Ｋａａｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）。したがって、ＰＡＮＤＡエージェントの結合に関与するｐ５３のシステインをマッピングすることが重要です。
【０１６８】
我々は、ｐ５３（図５）上の１０個のシステインのすべてをリストし、ヒ素に対するそれらの選択性を調査した。ヒ素はｐ５３のシステインに結合する必要があるため（図３３Ｂ）、ＰＡＮＤＡシステインは、溶液に曝されたｐ５３の外表面に局在すると予想されます。以前のｉｎ−ｓｉｌｉｃｏ研究（Ｋａａｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）と一致して、Ｃ１８２およびＣ２７７がｐ５３の表面に非常に露出していることを発見しました（図５）。これは、ｍｐ５３スタビライザーＰＫ１１０００がＣ１８２およびＣ２７７に結合することを示したバウアーと一致しています（１つのＰＫ１１０００分子が１つのシステインに結合します）（Ｂａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。驚いたことに、露出度が高く反応性の高いＣ２７７およびＣ１８２とは異なり、２つのＰＡＮＤＡシステインが非常に不活性であることがわかりました。実際、ＰＡＮＤＡシステインＣ１３５とＣ１４１は深く埋められています。これは、ＰＡＮＤＡポケットの位置を、システイン結合化合物で結晶を浸したときにＰＡＮＤＡポケットがアルキル化されなかったことを示す報告されているｐ５３結晶と相関させる場合に一貫しています（Ｋａａｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）。  
【０１６９】
我々の結晶において、ヒ素の存在下で、我々はヒ素がインビボで非常に不活性なＰＡＮＤＡシステイン（Ｃ１３５およびＣ１４１）に選択的に結合してＰＡＮＤＡ上にＰＡＮＤＡコアを形成することを見出した（図１４）。強調するために、ＭＰ５３発現細菌をＡＴＯで処理することにより、ＰＡＮＤＡポケットとＰＡＮＤＡシステインを解決できるＰＡＮＤＡ結晶が生体内で形成されました。これらのデータは、通常の期待に反して、生物ではヒ素がＰＡＮＤＡシステインに対して高い親和性を持ち、特にＣ１８２やＣ２７７などのより容易に入手可能なシステインよりもそれらを選択することを明確に示しています。
【０１７０】
我々の結果はまた、これがインビトロの場合であることを示している。ヒ素を使用してｍｐ５３クリスタルを浸すと、ＰＡＮＤＡクリスタルが生成されました。これは、ヒ素が非常に不活性なＰＡＮＤＡに選択されて結合することを再度示しています（図１４）。特に、この特定の条件下では、ＰＡＮＤＡトライアドのアクセスが非常に制限され、構造の可塑性が低下しました。これにもかかわらず、ヒ素はまだＰＡＮＤＡトライアドを見つけてバインドしており、ヒ素もｉｎ  ｖｉｔｒｏでＰＡＮＤＡシステインに対して非常に選択的であるという説得力のある証拠を提供しています。
【０１７１】
我々の結晶構造に基づいて、ヒ素は、Ｃ２７７およびＣ１８２などのより容易に入手可能な反応性システインよりもＰＡＮＤＡポケット上の不活性ＰＡＮＤＡシステインによって引き付けられるのは、ヒ素がトリシステインクラスターに結合することを好むためであろうと推論した。バイシステインクラスターとモノシステイン以上。この理論と一致して、ヒ素は２つのシステインを含むＣＣＨＨ−Ｚｉｎｃ  ｆｉｎｇｅｒドメインではなく、３つおよび４つのシステインを含むＺｉｎｃ  ｆｉｎｇｅｒドメイン（ＣＣＣＣ−Ｚｉｎｃ  ｆｉｎｇｅｒおよびＣＣＨＣ−Ｚｉｎｃ  ｆｉｎｇｅｒ）を結合することを好むと報告されています（Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ。、２０１１）。したがって、Ｃ１７６  ／  Ｃ２３８  ／  Ｃ２４２（「亜鉛領域」）で構成される亜鉛領域など、他のトリシステインクラスターへのヒ素の結合能力を評価しました。  
【０１７２】
この亜鉛領域がヒ素にとって理想的な場所である多くの理由がある。まず、亜鉛地域には、ｍｐ５３変異ホットスポットのうち３つ、つまりＲ１７５、Ｇ２４５、およびＲ２４９があります。これらの変異ホットスポットは、ｍｐ５３−Ｒ２８２Ｗなどの他のｍｐ５３と比較して、Ａｓ２Ｏ３によってより効率的に構造的に救出されます（図１１）。第二に、亜鉛はｍｐ５３−Ｒ１７５Ｈから容易に分離し（Ｂｕｔｌｅｒ  ａｎｄ  Ｌｏｈ、２００３；  Ｌｏｈ、２０１０）、以前に、ヒ素が前骨髄球性白血病タンパク質（「ＰＭＬ」）などのタンパク質の亜鉛結合部位を占有できることを示しました（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１０）。ＡＴＯはＰＭＬ−ＲＡＲαにｉｎ  ｓｉｔｕで結合し、急性前骨髄球性白血病（「ＡＰＬ」）を臨床的に治癒することができます。。第三に、インシリコドッキング研究は、空間的に互いに近接している亜鉛領域のトリシステインＣ１７６  ／  Ｃ２３８  ／  Ｃ２４２が、ヒ素の優れたポケットを形成することを示唆しています。
【０１７３】
驚くべきことに、これらの有望な特徴にもかかわらず、我々の研究は、ヒ素原子が我々のＰＡＮＤＡ結晶構造上の亜鉛領域に結合しなかったことを示している。これは、ヒ素結合を促進するためにＥＤＴＡを使用して亜鉛原子を枯渇させた場合にも当てはまります（データは示していません）。代わりに、私たちの研究では、ヒ素がＰＡＮＤＡポケットの深く埋もれたサイトに結合することが示されています。私たちの結果は、ヒ素のシステイン選択性が重要であることを示しています。ｐ５３のシステインに対するヒ素の選択性は、個々のシステインの接近性に基づくだけではなく、トリシステインクラスターの存在に基づくだけではありません。これは、トリシステイン部位が亜鉛などの他の金属元素を引き付けて結合を形成できる場合でも当てはまります。
【０１７４】
本発明者らの結果は、発見したＰＡＮＤＡトライアド（Ｃ１２４  ／  Ｃ１３５  ／  Ｃ１４１）およびＰＡＮＤＡポケットがヒ素およびその類似体にとって特別で独特であることを強調している。
６．１０          ヒ素原子は自由にＬ１−Ｓ２−Ｓ３ポケットに入り、さらにＬ１−Ｓ２−Ｓ３ポケットを通過し、ＰＡＮＤＡトライアドに到達してとどまります。
【０１７５】
ｐ５３の３Ｄ構造は、２４年以上にわたって解決されており、その表面では、何百もの異なるサイズのポケットを視覚的に識別することができる。ただし、機能的に機能するように実験的にテストされたものはありません。ここでは、Ｌ１ループ、Ｓ２シート、ｐ５３のＳ３ループにまたがるポケットの下にあるＰＡＮＤＡトライアドを特定しました。このＬ１−Ｓ２−Ｓ３ポケットは、以前はＬ１−Ｓ３ポケットまたはＬ１  ／  Ｓ３ポケットと呼ばれていました（Ｊｏｅｒｇｅｒ  ａｎｄ  Ｆｅｒｓｈｔ、２０１６；  Ｗａｓｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【０１７６】
以前に報告された化合物の多くは、コンピュータモデリングにおいてＬ１−Ｓ２−Ｓ３ポケットのＣ１２４に結合すると予測された（Ｊｏｅｒｇｅｒ  ａｎｄ  Ｆｅｒｓｈｔ、２０１６；  Ｗａｓｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。以前に報告されたｍｐ５３レスキュー化合物と同様に、臨床で使用されるほとんどの薬剤は約１０〜１００個の原子を含んでいます。Ｌ１−Ｓ２−Ｓ３ポケットは比較的小さいため、以前に報告されたｍｐ５３レスキュー化合物は、開いている場合にのみ、たまにしか入ることができません（図１５）。
【０１７７】
単一ヒ素原子などの我々の単一原子ＰＡＮＤＡ剤は、それが単一原子であるという事実により、臨床的に使用されている薬剤および以前に報告されたｍｐ５３レスキュー化合物のいずれとも根本的に異なる。ヒ素原子は、報告されているどのｍｐ５３レスキュー化合物よりも１〜２桁小さい（報告されている化合物のサイズの約１／１０〜１／１００）。非常に小さいので、閉じた状態でも、いつでもＬ１−Ｓ２−Ｓ３ポケットに自由に入ることができます（図１５）。ヒ素原子も以前に報告されたｍｐ５３レスキュー化合物とは根本的に異なり、Ｌ１−Ｓ２−Ｓ３ポケットに留まらず、通過します。ヒ素原子は非常に小さいため、Ｌ１−Ｓ２−Ｓ３ポケットを自由に通過し、さらに１つの原子しか収容できない非常に小さなポケットであるＰＡＮＤＡトライアドに入ることができます。
【０１７８】
６．１１          ｍｐ５３を安定させるには、ＰＡＮＤＡポケットの固定で十分です
我々はさらに、ヒ素がＰＡＮＤＡポケットを固定化することによってｍｐ５３を安定化させることを発見した。さらに、ヒ素によってｍｐ５３がどのように安定するかという原子レベルの理論的根拠を利用して、ＰＡＮＤＡポケットが実際にｍｐ５３の安定性を制御するキースイッチであることを発見しました。さらに重要なことに、これはｐ５３レスキューエージェント（またはＰＡＮＤＡエージェント）を識別するために利用できます。
【０１７９】
ＰＡＮＤＡポケットの残基間の分子内相互作用を分析することにより（図１８）、我々はＳ１１６、Ｆ１３４、Ｑ１３６、Ｔ１４０、Ｐ１４２、およびＦ２７０を含む主要な残基のグループを予測し、ＰＡＮＤＡの安定性を制御する上で重要な役割を果たす。ｐ５３のポケット（図１９）。これらの残基に人工変異のバッチを導入することにより、たとえば、Ｓ１１６Ｎ、Ｓ１１６Ｆ、およびＱ１３６ＲがＰＩＧ３上のｐ５３−Ｇ２４５Ｓの転写活性を大幅に救済できることがわかりました（図１９）。さらに、Ｓ１１６ＮやＱ１３６Ｒなどの残基がＰＵＭＡ上のｐ５３−Ｇ２４５Ｓの転写活性を救うことができることを発見しました（図１９）。したがって、Ｓ１１６Ｎ、Ｓ１１６Ｆ、およびＱ１３６ＲがＰＡＮ５３エージェントを模倣してｍｐ５３をレスキューすることでＳＳＳＭとして機能できることを発見しました。私たちの調査結果は、ＰＡＮＤＡエージェントまたは合理的に設計されたＳＳＳＭのいずれかによるＰＡＮＤＡポケットの固定が、ｍｐ５３を安定させるのに十分であることを確認しています。
【０１８０】
多くのＳＳＳＭは、過去２０年間に配列進化分析または機能誘導スクリーニングによって以前に同定された（Ｂａｒｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００４；  Ｎｉｋｏｌｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）。興味深いことに、報告されたＳＳＳＭの大部分はＰＡＮＤＡポケットの近くにあります。さらに、合理的に設計され発見されたＳＳＳＭのバッチは、構造ｍｐ５３を効率的に救い、ＰＡＮＤＡポケットを安定化させ、ヒ素化合物を使用してＰＡＮＤＡポケットを固定化することにより構造ｍｐ５３を救出するための新しい方法の発見を実証しました。
【０１８１】
ＰＡＮＤＡポケットの上部のＬ１ループ（Ｆ１１３−Ｔ１２３）は、それが癌変異（ＩＡＣＲ、ｈｔｔｐ：／／ｐ５３．ｉａｒｃ．ｆｒ／ＴＰ５３ＳｏｍａｔｉｃＭｕｔａｔｉｏｎｓ．ａｓｐｘ）のコールドスポットであり、それが最も多いので、特に興味深い。動的ＤＮＡ結合要素（Ｌｕｋｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。特に、これらの残基の変異はしばしばｐ５３の機能を高め、ＰＡＮＤＡ  Ｐｏｃｋｅｔを操作することでｍｐ５３を救うことができるという我々の発見を再び裏付けています。
【０１８２】
手短に言えば、我々は、ｍｐ５３の安定性を制御する上での主要なスイッチであるＰＡＮＤＡポケットを発見した。ＰＡＮＤＡ  Ｐｏｃｋｅｔは「ＰＡＮＤＡの背側」にあります（図１６）。哺乳類の新生児を背でつかむと、背側の不動反応（ＤＩＲ）が誘発され、人間、マウス、ライオンなどの幼児を落ち着かせることができることが知られています（Ｅｓｐｏｓｉｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。ＰＡＮＤＡ  Ｐｏｃｋｅｔを操作すると、ｍｐ５３の野生型構造と転写機能を救うことができます。ＰＡＮＤＡ  Ｐｏｃｋｅｔ結合化合物は、ＰＡＮＤＡエージェント（ｍｐ５３レスキューエージェント）として機能する可能性があります。ｍｐ５３の救助におけるＰＡＮＤＡポケットの主要な役割を発見することで、Ａｓ、Ｓｂ、またはＢｉを含む追加のＰＡＮＤＡエージェントの４Ｃスクリーニングを４Ｃ  ＋スクリーニングに拡張しましたが、ＰＡＮＤＡポケットへの少なくとも１つの強固な結合を形成できます。さらに、他の非Ａｓ、Ｓｂ、およびＢｉ化合物も効率的なＰＡＮＤＡエージェントとして機能できることを示唆しています。
【０１８３】
６．１２          何千もの効率的で効果的な広域スペクトルｍｐ５３救助者の発見
ＰＡＮＤＡポケットの洞察、ｍｐ５３の救出におけるトリシステイン結合ヒ素の非常に高い効率、およびヒ素のＭＯＡにより、我々は超大規模Ｃ４  ＋スクリーニングを行った。私たちは、何千もの化合物が３つ以上のシステインに効率的に結合し、効率的なｍｐ５３救助者として機能する可能性があると予測しました（表１−表６）。表１〜表６からいくつかの化合物をランダムに選択し、システイン結合能力が１つまたは２つしかない化合物をいくつか選択し、３１のｍｐ５３再利用剤を主要な裏付けデータ（レスキューｍｐ５３の構造、レスキューｍｐ５３の転写活性）で実験的に確認しました。それらは表７にリストされています。
【０１８４】
ヒ素化合物と同様に、ＳｂおよびＢｉ化合物もｍｐ５３を救済できることを発見した（表７）。Ａｓ、Ｓｂ、Ｂｉがｍｐ５３に直接共有結合できることを質量分析で確認しました（図１７）。
【０１８５】
さらに、有機Ａｓ、Ｓｂ、および／またはＢｉ含有化合物が、ｍｐ５３を効率的に救済できることも発見した（表７）。
【０１８６】
さらに、３価および５価のＡｓ、Ｓｂ、および／またはＢｉ含有化合物の両方が、ｍｐ５３を効率的に救済できることを発見した。  
【０１８７】
さらに、我々は、効率的なｍｐ５３救助者であることの前提条件の１つがトリシステイン結合能力であることを発見した。たとえば、ＮＳＣ４３８００（３〜４個のシステインを同時に結合できる）は、ＮＳＣ７２１９５１（１個のシステインしか結合できない）よりも高い効率でｍｐ５３の転写活性を救済します。
【０１８８】
ここで注目に値するのは、ＰＡＮＤＡトライアドのスペースが限られているにもかかわらず、有機Ａｓ、Ｓｂ、および／またはＢｉがｍｐ５３を効率的にｍｐ５３を救出する能力は、有機化合物、特にベンゼンを含むものに対応する可能性が低いことです。ヒ素のシステイン結合ポテンシャルは非常に強いため、ＰＡＮＤＡトライアドの小さなスペースにしっかりと挿入でき、おそらくベンゼンなどのかさばった有機基がＬ１−Ｓ２−Ｓ３ポケットとＰＡＮＤＡトライアドの外側に残る可能性があります。さらに、有機ヒ素が含まれている場合は、ｍｐ５３の構造により大きな影響が及ぶ可能性があります。
【０１８９】
さらに、モノシステイン結合能（例：ＮＳＣ７２１９５１）またはバイシステイン結合能（例：ＮＳＣ９２９０９）を持つＡｓ、Ｓｂ、および／またはＢｉ化合物もｍｐ５３の構造および転写活性を救済できることを見出した。システイン結合能のある化合物と比較した場合、３つ以上のシステイン結合能のある化合物が最も高い救出効率を示し、次にバイシステイン結合能のある化合物、次にモノシステイン結合能のある化合物が続きました（図６４図６８）。
【０１９０】
ｍｐ５３レスキュー能力を有するＢｉおよび／またはＳｂ、ならびに有機Ａｓ、Ｓｂ、および／またはＢｉ化合物を含む化合物の発見は、体内の無機Ａｓ化合物よりも毒性が低いため、非常に臨床的価値がある。
【０１９１】
６．１３          臨床試験
本発明者らは、ＡＴＯ救済可能なｍｐ５３を宿す患者を治療する小規模試験を実施した。ＡＴＯは明確な効果とｍｐ５３の選択性を備えたＰＡＮＤＡエージェントであると結論付けます  現在の知見に基づいて、ＡＭＬ  ／  ＭＤＳ患者を対象とした２つの大規模多施設前向き試験が実施されました（ＮＣＴ０３３８１７８１およびＮＣＴ０３３７７７２５）。
【０１９２】
６．１４          ＡＴＯは、さまざまな要因とは無関係に、幅広い設定の下で、展開されたｐ５３の集団の適切なフォールディングを強く促進します。
我々の４ＣスクリーニングがＡＴＯをＰＡＮＤＡ剤として同定したので、ＡＴＯがｐ５３の折り畳まれていない集団の適切な折り畳みを指示するかどうかを研究した。適切に折り畳まれたｗｔｐ５３、ＰＡｂ１６２０に特異的な抗体を使用して、適切に折り畳まれたｐ５３を免疫沈降（「ＩＰ」）します。私たちの予測と一致して、ｐ５３−Ｒ２７３Ｈ  ／  Ｃなどのｗｔｐ５３およびＣｏｎｔａｃｔｉｎｇ  ｍｐ５３が大きく折りたたまれていることがわかりました（図２０を参照）。対照的に、ｐ５３−Ｒ１７５Ｈ、ｐ５３−Ｇ２４５Ｓ  ／  Ｄ、ｐ５３−Ｒ２４９Ｓ、およびｐ５３−Ｒ２８２Ｗなどの構造ｍｐ５３と、Ｒ２４８Ｑ  ／  Ｗなどの一部の接触するｍｐ５３は、展開して程度が異なることがわかりました（図を参照）  ２０）。ただし、ＡＴＯ処理後、すべてのｐ５３の折りたたまれていない集団は驚くべき効率で折りたたまれ、ｐ５３−Ｒ２８２Ｗを除いて、すべて正しくｗｔｐ５３に匹敵するレベルに折りたたまれました（図２０を参照）。これらの中で、ｐ５３−Ｒ１７５Ｈは最も劇的な変化があり、正しく折りたたまれたｐ５３の割合が９２倍も増加しました（図２０を参照）。ｗｔｐ５３およびｐ５３−Ｒ２７３Ｈ  ／  Ｃの折り畳まれた集団でさえ、ＡＴＯ処理で検出可能に増加し、ＡＴＯが非常に強力な薬剤であることを示し、主に折り畳まれたｗｔｐ５３およびｐ５３−Ｒ２７３Ｈ  ／  Ｃの集団の折り畳みをさらに促進できます（図２０を参照）  ）。
【０１９３】
ｍｐ５３をフォールディングするＡＴＯの能力は、２つの他のｐ５３コンフォメーション特異的抗体、適切にフォールディングされたｐ５３に特異的なＰＡｂ２４６抗体（マウスｐ５３用）およびアンフォールドされたｐ５３に特異的なＰＡｂ２４０抗体を使用してさらにサポートされた（図２５）。
【０１９４】
また、我々は、様々な条件下でのＡＴＯ媒介性のｍｐ５３フォールディングを注意深く特徴付けた。一部のｍｐ５３を適切に折りたたむには、０．１μｇ  ／  ｍｌのＡＴＯで十分であることがわかりました（図２５）。さらに、ＡＴＯが細胞に入り、ｐ５３−Ｒ１７５Ｈを適切に折りたたむのに１５分しかかからなかったため、折りたたみは瞬間的であるように見えました。（図２５を参照）さらに、ＡＴＯを介した折りたたみは、細胞型（ＭＥＦ、Ｈ１２９９、ＥＳＯ５１、ＳＫ−ＭＥＬ２、ＢＴ５４９など、テストしたすべての細胞が反応性を示すなど）を含む多くの要因に大きく依存していました。治療中の合流性（たとえば、４０％と８０％の合流性を含むすべての合流性が反応した）、治療期間（たとえば、２時間と一晩を含むすべての持続期間が反応した）、ｍｐ５３ソース（たとえば、人間のｍｐ５３やマウスのｍｐ５３を含め、テストされたすべてのソースが応答しました）、ＩＰバッファーの種類（たとえば、ＥＤＴＡの有無にかかわらず、テストされたすべてのバッファーが応答しました）。（図２５を参照）。
【０１９５】
私たちが焦点を当てているのは、癌で最も頻繁に見られる個々のｍｐ５３であり、最も代表的な構造ｍｐ５３であるｐ５３−Ｒ１７５Ｈである（Ｆｒｅｅｄ−Ｐａｓｔｏｒ  ａｎｄ  Ｐｒｉｖｅｓ、２０１２）。ＡＴＯを介したｍｐ５３フォールディング効率を、以前に報告されたＰＲＩＭＡ−１、ＮＳＣ３１９７２６、Ｅｌｌｉｐｔｉｃｉｎｅ、ＳＴＩＭＡ、ＰｈＫａｎ０８３などのレスキュー化合物と慎重に比較しました（図２６）。私たちがこれらの化合物を選択した理由の１つは、これらの報告されたレスキュー化合物の効率についてかなりの議論があるためです（Ｊｏｅｒｇｅｒ  ａｎｄ  Ｆｅｒｓｈｔ、２０１６；  Ｍｕｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｖｏｕｓｄｅｎ、２０１３、２０１４）。研究の準備として、報告された化合物の処理条件を慎重に滴定し（図２６を参照）、研究の条件を最適化しました（図２１を参照）  。
【０１９６】
ＰＲＩＭＡ−１処理の際にＰＡｂ１６２０によって測定されるように、適切に折り畳まれたｐ５３−Ｒ１７５Ｈの集団の１．９倍の増加を観察した（図２１を参照）。この結果は、精製された組換えＧＳＴ−ｐ５３Ｒ１７５Ｈが３倍に増加し、ＳＫＯＶ−Ｈｉｓ−１７５細胞ライセート由来のｐ５３−Ｒ１７５Ｈが１．４６倍に増加することを示す以前の研究に匹敵します（Ｂｙｋｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）。ＮＳＣ３１９７２６、ＥｌｌｉｐｔｉｃｉｎｅおよびＳＴＩＭＡもｐ５３−Ｒ１７５Ｈに同様の影響を及ぼし、ｐ５３−Ｒ１７５Ｈの適切に折り畳まれた集団の１．８倍から２．６倍の増加に起因します。ＰｈｉＫａｎ０８３はｐ５３−Ｒ１７５Ｈを効率的に折りたたみませんでした、これはおそらくそれがｐ５３−Ｙ２２０Ｃ固有の救助者であるからです（Ｂｏｅｃｋｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。
【０１９７】
非常に驚くべきことに、ＰＡｂ１６２０によって測定されるように、ＡＴＯがヒトｐ５３−Ｒ１７５Ｈの適切に折り畳まれた集団を約７４倍増加させることを観察した。（図２１を参照）。このレベルでは、ｐ５３−Ｒ１７５Ｈ構造はｗｔｐ５３に匹敵するレベル（またはｗｔｐ５３レベルの約９７％）に復元されています。（図２１を参照）。ヒトｐ５３の復元に加えて、ＡＴＯは、展開されたマウスｐ５３−Ｒ１７２Ｈの個体群を野生型レベルの個体数にほぼ完全に復元したことを観察しました（図２７を参照）。さらに、ＡＴＯは、以前に報告されたすべての化合物よりもはるかに効率的な速度で、ｉｎ  ｖｉｖｏでバクテリア組換えｐ５３を適切に折りたたんだこともわかりました。たとえば、図２８は、細菌で組換えＧＳＴ−ｐ５３−Ｒ１７５ＨにＡＴＯを追加すると、適切に折りたたまれたｐ５３のエピトープ（ＰＡｂ１６２０エピトープ）が大幅に増加したことを示しています。さらに、ＡＴＯを介したｐ５３フォールディングのレベルは、ＭＩＲＡ−１、ＰＲＩＭＡ−１、ＮＳＣ３１９７２６などの既知のレスキュー化合物よりもかなり高かった。（図２８を参照）。
６．１５          ＡＴＯはｍｐ５３の安定化を広く促進し、ｍｐ５３の集約を防止します  
【０１９８】
ｍｐ５３の速度論的安定性が低いため、ｍｐ５３の構造を救う化合物はｍｐ５３翻訳の直後に作用しなければならないことを提案している（Ｊｏｅｒｇｅｒ  ａｎｄ  Ｆｅｒｓｈｔ、２００７）。細胞を翻訳阻害剤シクロヘキシミド（「ＣＨＸ」）で前処理することにより、この仮説をテストしました。その結果、ｐ５３−Ｒ１７５Ｈは、展開された状態または変性状態のままになります。また、ＣＨＸ前処理により、システムでのｐ５３翻訳が効率的にブロックされることも確認しました（図２９を参照）。注目すべきことに、ＣＨＸ前処理を行っても、ＡＴＯは細胞内の内因性ｐ５３−Ｒ１７５Ｈ（図２２を参照）およびＨ１２９９細胞内の外因性ｐ５３−Ｒ１７５Ｈ（図３０を参照）を効率的かつ適切に折りたたむことができます。私たちの結果は、ＡＴＯが変性したｍｐ５３を適切に折りたたむことができることを示唆しています（図２２、３Ｄ構造）。  
【０１９９】
他のものは、その天然の状態でのｐ５３の安定化がｐ５３凝集を阻害し得ることを報告している（Ｂｕｌｌｏｃｋら、１９９７）。ここで、ＡＴＯを介した安定化によりｐ５３−Ｒ１７５Ｈ凝集体の数が減少することを発見しました（図２３および図３１を参照）。これは、ＣＨＡＰＳシステム（図２３）とＭ−ＰＥＲシステム（図３１）の両方を使用したネイティブＰＡＧＥで確認されました。したがって、ＡＴＯを介した復元がｍｐ５３をネイティブな適切に折りたたまれた安定した状態に変換し、ｍｐ５３の凝集を防ぐことを確認しました。
６．１６          Ｒ１７５−ｄｉｓｔａｎｔ  Ｃ１３５  ／  Ｃ１４１クラスターがＡｓバインディングに関与している  
【０２００】
ヒ素は、ペプチド上の単一のシステインではなく、複数の密集したシステインに結合すると報告された（Ｄｏｎｏｇｈｕｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）。したがって、Ａｓを介したｍｐ５３フォールディングを調査しました。Ｃ１３５  ／  Ｃ１４１、Ｃ２３８  ／  Ｃ２４２、およびＣ２７５  ／  Ｃ２７７を含む３組のシステインのすべてと、Ｒ１７５に隣接するシステイン、つまりＣ１７６を研究しました（図３２を参照）。驚いたことに、我々は初めて、Ｒ１７５の遠いＣ１３５  ／  Ｃ１４１クラスターではなく隣接するＣ１７６またはＣ２３８  ／  Ｃ２４２のアラニン変異が、ＰＡＮＤＡコアとＰＡＮＤＡのｐ５３−Ｒ１７５ＨのＡＴＯを介したフォールディングに大きく干渉することを初めて確認しました。（図２４を参照）。
【０２０１】
ＡＴＯ媒介性折りたたみの特徴には、以下が含まれる：
（ａ）テストされたすべてのＳｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｈｏｔｓｐｏｔ  ｍｐ５３を、高効率から非常に高効率まで、さまざまな効率で適切に折りたたむことができます。
（ｂ）インスタントフォールディング（＜１５分）；
（ｃ）折りたたみは、ＩＰバッファー中のＥＤＴＡへの耐性を含め、細胞の種類や治療状況に依存しません。
（ｄ）折りたたみは、報告されているどの化合物よりもはるかに効率的です。
（ｅ）ＰＡｂ１６２０エピトープで測定すると、ｐ５３−Ｒ１７５Ｈはほぼ完全に回復しています。
（ｆ）ヒトｍｐ５３とマウスｍｐ５３の両方に効率的。
（ｇ）哺乳類細胞と細菌細胞の両方で機能します。
（ｈ）以前に展開されたｍｐ５３を折りたたむことができます。
（ｉ）ｍｐ５３凝集を阻害します。そして
（ｊ）Ｃｙｓ１３５およびＣｙｓ１４１はＡｓを介したｍｐ５３フォールディングに関与しています。
【０２０２】
６．１７          Ａｓは、ｐ５３のソースに関係なく、ｐ５３に結合してＰＡＮＤＡを形成する
Ａｓは構造的ｍｐ５３を迅速かつ効果的に適切に折り畳むことができるので、Ａｓがｐ５３−Ｒ１７５Ｈと直接相互作用するかどうかを研究した。我々は、ｐ５３をビオチン標識Ａｓ（「Ｂｉｏ−Ａｓ」）で処理し（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）、Ｂｉｏ−Ａｓをプルダウンして、関連するＡｓ複合体を決定しました。（図３３を参照）Ａｓがｍｐ５３に結合できることを初めて発見しました。（図３３を参照）。さらに、６つのよく知られたｍｐ５３ホットスポット（Ｒ１７５Ｈ、Ｇ２４５Ｓ、Ｒ２４９Ｓ、Ｒ２８２Ｗ、Ｒ２４８Ｑ、およびＲ２７３Ｈ）の中で、より多くの構造ｍｐ５３（例：ｐ５３−Ｒ１７５Ｈ、ｐ５３−Ｇ２４５Ｓ、ｐ５３−Ｒ２４９Ｓ、およびｐ５３−Ｒ２８２Ｗ）  ｗｔｐ５３およびＣｏｎｔａｃｔｉｎｇ  ｍｐ５３と比較してＰＡＮＤＡを形成します（例：ｐ５３−Ｒ２４８Ｑおよびｐ５３−Ｒ２７３Ｈ）。（図３３を参照）。さらに、ｐ５３−Ｒ１７５Ｈの詳細な研究により、Ｂｉｏ−ＡｓなどのＡｓが、ソースに関係なく、ｍｐ５３に迅速かつ効果的に結合できることがわかりました。たとえば、Ｈ１２９９の外因性ｐ５３−Ｒ１７５Ｈ、ＥＳＯ５１の内因性ｐ５３−Ｒ１７５Ｈ、およびマウス胚線維芽細胞のｐ５３−Ｒ１７２Ｈはすべて、Ｂｉｏ−Ａｓに結合してＰＡＮＤＡを形成できます。（図３３を参照）。
【０２０３】
６．１８          ｐ５３間のヒ素の選択性
細胞性ｐ５３間のヒ素の選択性をさらに試験した。ヒ素原子をビオチンで標識してｂｉｏｔｉｎ−Ａｓを形成し、ｂｉｏｔｉｎ−Ａｓをさまざまなｐ５３を発現する細胞とインキュベートしました。次に、細胞を溶解し、ビオチンをイムノブロッティングでプルダウンしました。私たちの結果は、ビオチン−Ａｓがｍｐ５３に接触するよりも構造的ｍｐ５３に結合することを好むことを示しています（図１３）。興味深いことに、ビオチン−Ａｓはｗｔｐ５３に結合し、Ｃｏｎｔａｃｔｉｎｇ  ｍｐ５３よりもさらに低い効率で結合します（図１３）。
【０２０４】
ｂｉｏｔｉｎ−Ａｓとｐ５３−Ｒ１７５Ｈまたはｗｔｐ５３との間の結合効率を注意深く滴定すると、ビオチン−Ａｓがｗｔｐ５３よりも少なくとも１０倍高い効率でｐ５３−Ｒ１７５Ｈに結合することが見出された（図１３）。
【０２０５】
ｂｉｏｔｉｎ−Ａｓ上のシステイン結合の結合がビオチンによって占有され、したがって結果がｗｔｐ５３およびｍｐ５３ｓ上のＡＴＯの選択性を正確に反映しない場合があるため、ビオチン−Ａｓ関連データは注意深く評価する必要がある。これらのデータは、折り畳まれたｍｐ５３およびｗｔｐ５３ではなく、展開されたｍｐ５３を選択的に結合する潜在的なヒ素を意味します。
６．１９          システインはＡｓを介したＰＡＮＤＡ形成に関与する  
【０２０６】
さらに、システインがＡｓ媒介ＰＡＮＤＡ形成に関与することを発見した。たとえば、Ａｓがジチオールで保護されており、システインに結合できない化合物であるＢｉｏ−Ｄｉｔｈｉ−Ａｓを使用した処理では、ｐ５３−Ｒ１７５Ｈをプルダウンできないことがわかりました（Ｈｅｒｅｄｉａ−Ｍｏｙａ  ａｎｄ  Ｋｉｒｋ、２００８）。（図３３を参照）。これは、ｍｐ５３などのｐ５３のシステインがＰＡＮＤＡの形成に関与していることをサポートしています。
６．２０          Ｅｌｅｍｅｎｔａｌ  Ａｓが直接かつ共有的にｐ５３と相互作用する  
【０２０７】
ＰＡＮＤＡをさらに特徴付けるために、組換えＧＳＴと全長ｐ５３−Ｒ１７５Ｈ（「ＧＳＴ−ｐ５３−Ｒ１７５Ｈ」）を組み合わせた融合タンパク質を細菌で発現させ、精製し、その後、インビトロでＢｉｏ−Ａｓとインキュベートした。驚くべきことに、この方法を使用して、タンパク質変性およびＳＤＳ−ＰＡＧＥなどのタンパク質電気泳動を生き延びたＡｓ−ビオチン−ＧＳＴ−ｐ５３−Ｒ１７５Ｈ複合体を発見しました。（図３３を参照）。これは、Ａｓがｍｐ５３などのｐ５３と直接かつ共有的に相互作用することをサポートします。
６．２１          元素Ａｓは、ｐ５３のコアドメインと１：１のＡｓとタンパク質の比率で直接共有結合的に相互作用します  
【０２０８】
さらに、ｐ５３のコアドメインとＡｓ、Ｓｂ、またはＢｉを含有する化合物との間の直接および共有相互作用を決定した。組換えｗｔｐ５３コア（“  ｗｔｐ５３（６２-２９２）”）と組換えｍｐ５３コア（“  ｍｐ５３（９１-２９２）−Ｒ１７５Ｈ”）をそれぞれＺｎＳＯ４とＡＴＯの存在下で発現させました。次に、これらのコアフラグメントを精製し、質量分析（「ＭＳ」）によって分子量を決定しました。本来の状態では、ｗｔｐ５３（６２-２９２）およびｍｐ５３（９１-２９２）−Ｒ１７５Ｈの分子量は予想よりも高く、それぞれ約６４  Ｄａおよび約６９  Ｄａ高くなっています。これは、１：１  ｐ５３：金属比でのｗｔｐ５３（６２-２９２）／  Ｚｎ錯体およびｍｐ５３（９１-２９２）−Ｒ１７５Ｈ  ／  Ａｓ錯体の形成をサポートします。（図３３および図３４を参照）。ただし、変性条件下では、ｗｔｐ５３（６２-２９２）／  Ｚｎの質量が６３．５  Ｄａ減少することがわかりましたが、ｍｐ５３（９１-２９２）−Ｒ１７５Ｈ  ／  Ａｓの質量は減少しませんでした。（図３３および図３４を参照）。これにより、Ａｓがｍｐ５３などのｐ５３に共有結合することがさらに確認されます（図３３を参照）。
【０２０９】
誘導結合プラズマ質量分析（「ＩＣＰ−ＭＳ」）により、Ａｓが１：１の比率でｐ５３に結合することをさらに確認した。たとえば、私たちの結果は、Ａｓがｐ５３に共有結合するだけでなく、各ｐ５３が約１つのＡｓ原子（ｐ５３あたり０．９３±０．１９  Ａｓ）に結合することを示しています。（図３５を参照）。
【０２１０】
ＰＡＮＤＡ形成反応の特徴は、以下を含む：
（ａ）構造ｍｐ５３をバインドすることを好む；  
（ｂ）ヒトｍｐ５３とマウスｍｐ５３の両方で機能します。
（ｃ）哺乳類細胞と細菌細胞の両方で機能します。
（ｄ）ｉｎ  ｖｉｖｏ（細胞内）およびｉｎ  ｖｉｔｒｏ（反応バッファー内）で機能
（ｅ）ｍｐ５３システインが関与している。
（ｆ）反応は、ｍｐ５３とＡｓ原子のモル比が１：１である
（ｇ）直接反応；  そして
（ｈ）共有反応。
【０２１１】
６．２２          ＰＡＮＤＡは野生型ＤＮＡ結合能力と野生型転写活性を取り戻す
ＰＡＮＤＡ形成を媒介し、ｐ５３の構造を効率的に救済するので、我々はさらにＰＡＮＤＡのＤＮＡ結合および転写活性を調べた。
【０２１２】
６．２２．１          ＰＡＮＤＡは野生型ＤＮＡ結合能力を取り戻す
広範囲のｐ５３標的およびｐ５３結合コンセンサス配列をビオチン標識し、ｐ５３−Ｒ１７５Ｈ（「ＰＡＮＤＡ−Ｒ１７５Ｈ」）から形成されたＰＡＮＤＡを含む広範囲のＰＡＮＤＡが、広範囲のｐ５３標的に結合できることを見出した。。たとえば、ｐ５３−Ｒ１７５Ｈから形成されたＰＡＮＤＡを含むＰＡＮＤＡが、ｐ５３の自己制御に関与するＭＤＭ２に結合できることを示しました。ＣＤＫＮ１Ａ、これはｐ２１タンパク質をコードし、老化、浸潤、転移、細胞幹細胞性および細胞周期の停止に関与しています。アポトーシスに関与するＰＩＧ３；アポトーシスに関与するプーマ；アポトーシスに関与するＢＡＸ。そして、ｐ５３結合コンセンサス配列。（図３６を参照）。さらに、ＰＡＮＤＡはこれらのｐ５３ターゲットおよびｐ５３結合コンセンサス配列に対して、対応するｍｐ５３よりも有意に高い親和性を持っていることを確認しました（つまり、ＰＡＮＤＡが形成されていない場合）。Ａｓで形成されたＰＡＮＤＡは、ｍｐ５３がＺＭＣ１、ＰＲＩＭＡ−１、ＭＩＲＡ−１、またはＲＩＴＡなどの他のレスキューエージェントで処理される場合よりも、これらのｐ５３ターゲットおよびｐ５３結合コンセンサスシーケンスに対してかなり高い親和性を持っています。
【０２１３】
Ａｓ２Ｏ３がルシフェラーゼアッセイにおいてｐ５３転写活性を救済する能力を測定したとき、我々は、ＰＡＮＤＡがルシフェラーゼアッセイにおいてＰＵＭＡ、ＣＤＫＮ１ＡおよびＭＤＭ２などの転写活性ｐ５３標的を有意に増強することを発見した。（図３７を参照）。ドキシサイクリン（「ＤＯＸ」）を使用してｐ５３−Ｒ１７５Ｈをオフにすることで強化が大幅に廃止されたため、強化されたルシフェラーゼ信号は主にｍｐ５３に依存しています。また、ＰＵＭＡプロモーターでのＰＡＮＤＡ−Ｒ２８２Ｗ（２１時間増加、ｗｔｐ５３レベルの８４％に相当）（図３７を参照）とＰＩＧ３プロモーターでのＰＡＮＤＡ−Ｇ２４５Ｓ（ほぼ３倍増加、ｗｔｐ５３レベルの７７％）（図４１を参照）。
【０２１４】
他の救急薬と比較して、我々は、ＡＴＯ媒介性のＰＡＮＤＡ形成がｐ５３転写活性のためのはるかに優れた救急薬であることを見出した。特に、ＳＣＨ５２９０７４、ＰＨＩＫａｎ０８３、ＭＩＲＡ−１、ＰＲＩＭＡ−１で無視できる程度に測定された他のレスキューエージェントは、ＮＳＣ３１９７２６で１．５倍、ＣＰ３１３９８で１．５倍、ＲＩＴＡで無視できる、ＳＴＩＭＡ−１で無視できる、エリプチシンは３．３倍、ＡＴＯは２１倍。（図３７および図４１を参照）。
６．２２．２        ＰＡＮＤＡは野生型の転写活性を劇的に増加させる  
【０２１５】
特に、我々は、ＳＣＨ５２９０７４については無視できる程度、ＭＩＲＡ−１については無視できる程度、ＰＲＩＭＡ−１については無視できる程度で無視できる程度に測定された他のレスキューエージェント、ＮＳＣ３１９７２６については１．５倍、ＣＰ３１３９８については１．５倍、ＲＩＴＡについては無視できるほど、ＳＴＩＭＡについては無視できる程度であることがわかった。エリプチシンの場合は−１と３．３倍、ＡＴＯの場合は２１倍。（図３７および図４１を参照）。対照的に、ＰＡＮＤＡは野生型の転写活性を劇的に増加させます。
【０２１６】
ＰＡＮＤＡは、外因性ｍｐ５３または内因性ｍｐ５３を発現する細胞におけるｐ５３下流ｍＲＮＡ産生レベルを劇的に増加させる。外因性のｐ５３−Ｒ１７５Ｈを発現するＨ１２９９細胞にＡＴＯを追加すると、ＭＤＭ２、ＰＩＧ３、ＰＵＭＡ、ＣＤＫＮ１Ａ、ＢＡＸなどのｐ５３下流ｍＲＮＡのレベルを２４時間で劇的に刺激できます。予想通り、ｗｔｐ５３を刺激するＮｕｔｌｉｎは、ｗｔｐ５３を発現しているＨＣＴ１１６細胞のＰＵＭＡ、ＰＩＧ３、ＣＤＫＮ１ＡおよびＭＤＭ２  ｍＲＮＡレベルを大幅に強化しました。
【０２１７】
内因性ｐ５３−Ｒ２４９Ｓを発現するＢＴ５４９細胞にＡＴＯを加えることは、ＰＵＭＡおよびＣＤＫＮ１Ａを含むｐ５３下流ｍＲＮＡｓのレベルを劇的に刺激することができる。（図３８）。
【０２１８】
タンパク質レベルで、ＰＡＮＤＡは、ｍｐ５３を発現する細胞におけるｐ５３下流タンパク質産生レベルを劇的に増加させることができる。たとえば、ｐ５３−Ｒ１７５Ｈを発現するＨ１２９９細胞などのｍｐ５３を発現する細胞にＡＴＯを追加することにより、ＰＵＭＡ、ＢＡＸ、ＰＩＧ３、ｐ２１、ＭＤＭ２などのｐ５３ターゲット（すなわち、下流タンパク質）の増加を検出しました（参照図３９）。ＰＡＮＤＡの形成は、これらのタンパク質の上方制御中に必要です。さらに、ＡＴＯは、ｐ５３−Ｒ１７５Ｈ、ｐ５３−Ｒ２４９Ｓ、またはｐ５３−Ｒ２８２Ｗを含む構造ｍｐ５３を発現するＨＣＴ１１６細胞において、ＰＡＮＤＡの形成を通じてＰＵＭＡタンパク質を大幅に上方制御することを発見しました（図４２）。
【０２１９】
６．２３          ＰＡＮＤＡはｉｎ  ｖｉｔｒｏで腫瘍抑制因子である
さらに、ＰＡＮＤＡ−Ｒ１７５ＨなどのＰＡＮＤＡが、ｗｔｐ５３転写活性を回復するだけでなく、異種移植モデルを含むインビトロおよびインビボでｗｔｐ５３腫瘍抑制能力を回復することを初めて発見した。ＡＴＯをｐ５３−Ｒ１７５Ｈ発現細胞と組み合わせると、Ｈ１２９９細胞などのｍｐ５３発現細胞の細胞死に対する感受性が劇的に増加することがわかりました。図４４を参照）。さらに、ＡＴＯをＨ１２９９などのｐ５３−Ｒ１７５発現細胞と組み合わせると、これらの細胞のコロニー形成も有意に阻害され、形成されたＰＡＮＤＡ−Ｒ１７５Ｈが腫瘍抑制を果たすことをさらに示唆するコロニー形成を抑制することによる役割。（たとえば、図４４のコロニーアッセイの結果を参照してください）。同様の結果が、ＰＡＮＤＡ−Ｒ１７２Ｈの存在が細胞生存率アッセイとコロニー形成アッセイの両方でＡＴＯ治療に対する感受性を付与したマウス胚線維芽細胞（ＭＥＦ）で観察されました。（図４９を参照）。対照的に、ｐ５３が存在しない場合（つまり、ｐ５３  ｎｕｌｌ細胞内）、ＰＡＮＤＡは形成されないため、これらの細胞はＡＴＯ処理に対してより耐性があります（図４９）。これらは、ＡＴＯがマウスｐ５３−Ｒ１７２Ｈに結合して腫瘍抑制因子ＰＡＮＤＡ−Ｒ１７２Ｈを形成し、細胞増殖とコロニー形成を阻害することを示しています。一緒に取られて、私たちの結果は、ＡＴＯがｐ５３−Ｒ１７５Ｈなどのｍｐ５３をｉｎ  ｖｉｔｒｏで腫瘍抑制ＰＡＮＤＡに変換することを示しています。
【０２２０】
ＡＴＯが構造的ｍｐ５３を標的として悪性度を阻害するかどうかを試験するために、本発明者らは、ｗｔｐ５３、ｐ５３−／−（ヌル）、トランケートｐ５３、ｐ５３−Ｒ２４９Ｓ、ｐ５３−Ｒ１７５Ｌ、およびｐ５３を含む、異なるｐ５３状態を有する１０細胞株にＡＴＯを適用した。−Ｒ１７５Ｈ。予想どおり、構造ｍｐ５３（Ｒ１７５およびＲ２４９）を発現する系統は、ＡＴＰ処理のＩＣ５０（０．１-１μｇ  ／  ｍｌの範囲）がｗｔｐ５３またはｎｕｌｌ  ／  ｔｒｕｎｃａｔｅ  ｐ５３（０．５-１０μｇ  ／  ｍｌの範囲）を発現する系統よりも低かった（図４５  ）。対照群では、Ｎｕｔｌｉｎ（ＭＤＭ２阻害剤、したがってｗｔｐ５３再活性化因子）は、テストした細胞株でｗｔｐ５３をターゲットにすることが望ましい（図４５）。
【０２２１】
ＮＣＩ６０薬物スクリーニングプロジェクト（Ｓｈｏｅｍａｋｅｒ、２００６）の６０の細胞株をさらに分析した。この独立して実行されたＮＣＩ６０スクリーンプロジェクトは、化合物と細胞株の遺伝的特徴との関連を反映する、公平な細胞株感受性プロファイルを提供します。ＡＴＯレスキュー可能ｍｐ５３を発現する細胞株（Ｒ１７５、Ｇ２４５、Ｒ２４９、およびＲ２８２）を分離し、それらを「Ｓｔｒｕｃ」と指定しました。また、ＡＴＯによって救出できなかったｗｔｐ５３またはｎｕｌｌ  ／  ｓｐｌｉｃｉｎｇ  ｐ５３を発現する細胞株も分離しました（これらをそれぞれ「ＷＴ」および「Ｎｕｌｌ」と指定）。その後、残りの細胞株をプールし、救助の可能性に関する不確実性のために一緒にプールし、それらを「その他」として指定しました。ＮＳＣ９２８５９（ＡＴＯ）は、低いＧＩ５０（５０％の成長阻害を引き起こす濃度）を示すことにより、構造ｍｐ５３を宿す細胞株を選択的に阻害することを発見しました（Ｓｈｏｅｍａｋｅｒ、２００６）（図４６）。予想通り、Ｎｕｔｌｉｎはｗｔｐ５３を持つ系統を選択的に阻害しました（図４６）。このｐ５３分類によれば、ｐ５３の状態とＮＳＣ２８１６６８（ＰＲＩＭＡ−１）またはＮＳＣ３１９７２６の感度との間に有意な関連は認められませんでした（図５０）。まとめると、これらの結果は、構造的ｍｐ５３が悪性度を阻害する場合のＡＴＯのターゲットであることを示唆しています。
【０２２２】
６．２４          ＰＡＮＤＡはｗｔｐ５３再活性化剤を相乗作用させてｐ５３発現細胞を殺傷する
さらに、ＰＡＮＤＡの効果が、ｍｐ５３発現細胞を殺すことに対する、ＭＤＭ２阻害剤またはＭＤＭ４阻害剤などのｗｔｐ５３再活性化剤の効果と相乗的であることを見出した。ｐ５３救助者とｗｔｐ５３再活性化因子が相乗的に（または少なくとも拮抗的にではなく）機能する能力は、特に重要です。１つの理由は、救出されたｍｐ５３の最初のターゲットの１つに、負のレギュレーターＭＤＭ２およびＭＤＭ４が含まれているためです。たとえば、ＭＤＭ２はｐ５３の強力な阻害剤であり、ｐ５３を効率的に分解するように機能します。つまり、ｍｐ５３が救出されると、そのレベルも低下します。実際、デトロイト５６２のｐ５３−Ｒ１７５Ｈが見つかり、ＣＥＭ−Ｃ１がＡＴＯ処理によってダウンレギュレートされたことがわかりました（図４０および図４３）。は大幅に延長され、ＰＡＮＤＡがＮｕｔｌｉｎ３などのＭＤＭ２阻害剤と連携して機能することで、がん治療に非常に効果的で魅力的な道が開かれます。
【０２２３】
本発明者らは、ＭＤＭ２阻害剤であるＮｕｔｌｉｎ３の効果がＡＴＯの効果と相乗作用することを見出した。（図５１）。たとえば、ＡＴＯがない場合、０−８μｇ  ／  ｍｌのＮｕｔｌｉｎは用量依存的にｗｔｐ５３を発現するＨ１２９９細胞を阻害しますが、ｐ５３−Ｒ１７５Ｈまたはｎｕｌｌ  ｐ５３を発現する細胞は阻害しません（図５１）。ただし、ＡＴＯの存在下では、Ｎｕｔｌｉｎはｐ５３−Ｒ１７５Ｈを発現するＨ１２９９細胞を用量依存的に阻害できます。
【０２２４】
ＡＴＯが他の癌抑制療法と相乗的に機能できること、ＡＴＯを含有する抗癌療法の組み合わせがかなり有望であること、およびＡＴＯがｗｔｐ５３再活性化剤の有効性を高める可能性があることを示したので、我々の発見は有意な臨床的価値がある。ＭＤＭ２阻害剤など、その多くは現在臨床試験中です。
【０２２５】
６．２５          ＰＡＮＤＡはｉｎ  ｖｉｖｏでの腫瘍抑制因子である
さらに、本発明者らは、ＰＡＮＤＡ−Ｒ１７５ＨなどのＰＡＮＤＡが、異種移植モデルを含めて、生体内でｗｔｐ５３腫瘍抑制能力も回復することを初めて発見した。たとえば、ＡＴＯとＰＡＮＤＡが少なくとも２つの異種移植モデルで腫瘍をｉｎ  ｖｉｖｏで抑制することを発見しました。ｔｅｔ−ｏｆｆ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄｐ５３−Ｒ１７５Ｈ（固形腫瘍）（図４７、および図５２−図５４）を発現するＨ１２９９細胞とｐ５３−Ｒ１７５Ｈ（血液悪性腫瘍）を発現する血液学的ＣＥＭ−Ｃ１細胞（図４８および図５５）。Ｈ１２９９システムの場合、ドクスサイクリン（「ＤＯＸ」）を添加することでｍｐ５３を枯渇させることができるように、Ｈ１２９９細胞を再生します。
【０２２６】
Ｈ１２９９システムを使用して、本発明者らは、５ｍｇ  ／  ｋｇのＡＴＯを用いておよび用いずに処置したマウスにＨ１２９９細胞を皮下注射した。２８日目に、腫瘍のサイズと重量の両方に応じて、腫瘍が９０％以上抑制されたことを発見しました。（図４７と図５２−図５４を参照）さらに、ドキサイクリンによるｐ５３−Ｒ１７５Ｈの枯渇により、ＡＴＯおよびＰＡＮＤＡを介した腫瘍抑制が大幅に抑制されたため、腫瘍抑制が主にＰＡＮＤＡ−Ｒ１７５Ｈ依存的であることがわかりました（図４７の黒色の固体を比較）腫瘍の大きさについては黒の点線と線で結ばれ、腫瘍の重量については最後の２つのバーを比較してください）。
【０２２７】
血液学的ＣＥＭ−Ｃ１システムを使用して、細胞を静脈内注射することにより、１日目にマウスにＣＥＭ−Ｃ１細胞を異種移植した。２２日目に、マウス末梢血（「ＰＢ」）の異種移植されたＣＥＭ−Ｃ１がん細胞を検出することができました（図４８および図５５を参照）。ただし、ＡＴＯ  ５  ｍｇ  ／  ｋｇを２４日目から週６日連続で投与します。ＡＴＯの追加により、２６日目にＰＢ内のＣＥＭ−Ｃ１細胞の増殖が著しく遅くなることがわかりました（図４８および図５５）。さらに、ＡＴＯの追加により、注射されたマウスの生存期間が延びることがわかりました（図４８）。
【０２２８】
一緒に取られて、我々は、ＡＴＯおよびＰＡＮＤＡがインビボで固形腫瘍および造血器を有意に抑制し、対象の寿命を延ばすことをここで実証した。
６．２６          ＡＴＯと臨床使用剤の併用は癌の治療に効果的  
【０２２９】
ＡＴＯの併用治療効果を研究するために、我々は、ＡＴＯの存在下または不在下で広く使用されているＤＮＡ損傷剤の効果を研究した。
【０２３０】
ｍｐ５３は、骨髄性白血病（ＡＭＬ  ／  ＭＤＳ）患者を含む広範囲の癌のかなり劣った全生存および予後と関連している（癌ゲノムアトラスリサーチら、２０１３；リンズレイら、２０１７）。ＮＣＣＮガイドラインでは、ＡＰＬを除いて、推奨されるＡＭＬ  ／  ＭＤＳ治療の大部分はＤＮＡ損傷剤です。これらのＤＮＡ損傷剤は、ｐ５３の翻訳後修飾（「ＰＴＭ」）を通じてｗｔｐ５３機能を活性化して癌細胞を殺すことが知られています（Ｍｕｒｒａｙ−Ｚｍｉｊｅｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。これらのＰＴＭには、例えば、リン酸化、アセチル化、ＳＵＭＯ化、ネディル化、メチル化、およびユビキチン化が含まれる。
【０２３１】
特に、我々は、ｍｐ５３（例えば、ｐ５３−Ｒ１７５Ｈ）およびＰＡＮＤＡ（例えば、ＰＡＮＤＡ−Ｒ１７５Ｈ）が、シスプラチン、エトポシド、アドリアマイシン／ドキソルビシン、５−フルオロウラシルなどのＤＮＡ損傷剤に異なる応答をすることを発見した。シタラビン、アザシチジン、デシタビン、およびパクリタキセルは、治療結果を明確に誘発する可能性があることを示唆しています。Ｓｅｒ１５、Ｓｅｒ３７、およびＬｙｓ３８２が、ＤＮＡ損傷処理によりｐ５３−Ｒ１７５Ｈで不活性に修飾されていることを発見しました。ただし、それらはＰＡＮＤＡ−Ｒ１７５ＨではＤＮＡ損傷処理時に積極的に変更されます（このようなＰＴＭをタイプ＃１  ＰＴＭと指定しました）（図５６および図６０）。ＤＮＡ損傷ストレスに関係なく、ｐ５３−Ｒ１７５ＨでＳｅｒ２０が不活性に改変されていることを発見しました。ただし、ＤＮＡ損傷ストレス（タイプ＃２  ＰＴＭとして指定）に関係なく、ＰＡＮＤＡ−Ｒ１７５Ｈでは積極的に変更されます。Ｓｅｒ３９２は、ＤＮＡ損傷ストレス（タイプ＃３  ＰＴＭとして指定）がなくても、ｐ５３−Ｒ１７５ＨとＰＡＮＤＡ−Ｒ１７５Ｈの両方で積極的に変更されていることを発見しました。
【０２３２】
タイプ＃１  ＰＴＭおよびタイプ＃２  ＰＴＭの識別は、ｐ５３−Ｒ１７５ＨおよびＰＡＮＤＡ−Ｒ１７５Ｈが治療に明確に応答することを示唆し、したがって、治療結果を明確に誘発し得る（図５６および図６０）。リン酸化に対する我々の抗体の特異性は、例えば、図６０で確認された。
【０２３３】
ＡＴＯとＤＮＡ損傷剤の併用療法がｍｐ５３  ＰＴＭを刺激し、したがってｍｐ５３を再活性化できることを示すことに加えて、我々は、ｐ５３−Ｒ１７５Ｈと構造的に救出されたＰＡＮＤＡ−Ｒ１７５Ｈの間のＰＴＭの違いがｍｐ５３に接触するという以前の概念をサポートすることを示した（またｗｔｐ５３）は、ＤＮＡ損傷ストレス下でのリン酸化の可能性が構造ｍｐ５３と異なりました（Ｇｉｌｌｏｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）。
【０２３４】
６．２７          ＡＴＯおよびＰＡＮＤＡはＡＭＬ  ／  ＭＤＡＳ患者の治療に効果的であり、患者のスクリーニングにより治療をさらに強化することができます
さらに、ＡＴＯおよびＰＡＮＤＡがＡＭＬ  ／  ＭＤＳ患者の治療に有効であることを発見した。
【０２３５】
例えば、我々は、ＡＭＬ  ／  ＭＤＳ患者をＡＴＯとＤＮＡ損傷剤の組み合わせで治療することの治療効果を試験した。私たちの臨床試験の１つでは、５０人のＡＭＬ  ／  ＭＤＳ患者がＴＰ５３エキソームシーケンスのために採用されました（図５７）。これらのうち、３人の患者はｐ５３変異（ｍｐ５３バリアント対立遺伝子分数＞  １０％）を抱えていることが判明しました。特に、同じ残基にｐ５３変異がある２人の患者を特定しました。患者Ｓ２４１Ｆはｐ５３−Ｓ２４１Ｆを発現し、患者Ｓ２１４Ｃはｐ５３−Ｓ２４１Ｃを発現しました。（図５８）。さらに、２人の患者のｐ５３−Ｓ２４１Ｃとｐ５３−Ｓ２４１Ｆの両方が構造ｍｐ５３のように動作し、ＩＰアッセイでＰＡｂ１６２０に反応しにくいことを発見しました。（図５８）。ただし、ＡＴＯで処理すると、結果のＰＡＮＤＡはｐ５３−Ｓ２４１Ｃとｐ５３−Ｓ２４１Ｆの両方の構造を救うことができます。（図５８）。さらに、ＡＴＯとＰＡＮＤＡはまた、ｐ５３−Ｓ２４１Ｃとｐ５３−Ｓ２４１Ｆの両方の転写活性を、細胞周期の停止、細胞の老化、腫瘍の抑制に関与するｐ５３の標的であるｐ２１を誘導することによって大幅に救済したことを発見しました。（図５８）。
【０２３６】
我々はまた、ｐ５３−Ｒ２７３Ｌを発現する第３の患者Ｒ２７３Ｌを発見し、このｍｐ５３はｗｔｐ５３のように振る舞い、そのＰＡｂ１６２０エピトープは４℃と生理的温度（３７℃）の両方でＡＴＯによってさらに増強できないことを発見した。図６２）。
【０２３７】
Ｓ２４１に焦点を合わせて、我々はこの位置にすべての可能なアミノ酸を置換し、そしてｐ５３−Ｓ２４１Ｒ／Ｎ／Ｃ／Ｑ／Ｌ／Ｆが、それらの適切に折り畳まれたＰＡｂ１６２０エピトープならびにＰＵＭＡおよびｐ２１誘導から実証されるように、ＡＴＯ救済可能であることを発見した。能力（図５８）。
【０２３８】
得られたｐ５３−Ｓ２４１Ａは、明らかな構造的ｍｐ５３ではなく、したがって、ＡＴＯによって救済されない（図５９および図６１）。興味深いことに、明白な構造ｍｐ５３であるｐ５３−Ｓ２４１Ｄは、ＡＴＯによって救出することはできません（図５９および図６１）。まとめた結果を（図５９および図６１）に示します。
【０２３９】
この発見をさらに拡大するために、我々はインビトロで少なくとも３５のＡＭＬ／ＭＤＳ由来のｍｐ５３を試験し、ＡＴＯがこれらのｍｐ５３の構造を多様な効率で救出できることを発見した。
【０２４０】
したがって、我々は、ＡＴＯと最初に使用されたシチジン類似体の併用治療効果を試験するための試験において、ｐ５３−Ｓ２４１Ｆおよびｐ５３−Ｓ２４１Ｃを発現する２人のＡＴＯ救済可能なＭＤＳ患者（ｐ５３−Ｒ２７４Ｌを発現する患者ではない）を選択した。デシタビン（「ＤＡＣ」、ＤＮＡに結合して損傷し、ＤＮＡを脱メチル化する化合物）などのＭＤＳ患者のインライン薬であり、両方の患者で驚くべき完全な寛解を発見しました。標準のファーストラインＤＡＣレジメンと比較して、ｍｐ５３を発現している患者は、ＡＴＯと臨床的にＤＡＣなどの薬物を併用するレジメンのほうが、無再発生存期間の延長から約１１か月と判断すると、より多くの恩恵を受けることがわかりました。まとめると、ＡＴＯとＰＡＮＤＡは、ＡＭＬ  ／  ＭＤＳ患者などの癌患者、特にＰＡＮＤＡで救出可能なｍｐ５３を有する患者の治療に有効であることを確認しました。さらに、最初にｐ５３ステータスをシーケンスし、Ｓ２４１ＣやＳ２４１Ｆの変異など、ＡＴＯに最も反応する残基にｍｐ５３変異がある患者を選択することで、治療を強化できることをさらに発見しました。
【実施例】
【０２４１】
７．１              プラスミド、抗体、細胞株、化合物、マウス
ヒト全長ｐ５３を発現するｐｃＤＮＡ３．１はＸｉｎ  Ｌｕ教授（オックスフォード大学）からの贈り物であり、ＧＳＴとヒト全長ｐ５３を発現するｐＧＥＸ−２ＴＫ発現融合タンパク質はＡｄｄｇｅｎｅ（＃２４８６０）から購入し、ｐ５３を発現するｐＥＴ２８ａコアは、タグを導入せずに結晶化実験のためにクローン化されました。
【０２４２】
一次抗体は以下の会社から購入した：ＤＯ１  （ａｂ１１０１、Ａｂｃａｍ）、ＰＡｂ１６２０  （ＭＡＢＥ３３９、ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、ＰＡｂ２４０  （ＯＰ２９、ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、ＰＡｂ２４６  （ｓｃ−１００、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ）、ＰＵＭＡ  （４９７６、Ｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）、ＰＩＧ３  （ａｂ９６８１９、Ａｂｃａｍ）、ＢＡＸ  （ｓｃ−４９３、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ）、ｐ２１  （ｓｃ−８１７、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ）、ＭＤＭ２  （ＯＰ４６−１００ＵＧ、ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、Ｂｉｏｔｉｎ  （ａｂ１９２２１、Ａｂｃａｍ）、Ｔｕｂｕｌｉｎ  （ａｂ１１３０８、Ａｂｃａｍ）、β−ａｃｔｉｎ  （Ａ００７０２、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ）、ｐ５３−Ｓ１５  （９２８４、Ｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）、ｐ５３−Ｓ２０  （９２８７、Ｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）、ｐ５３−Ｓ３７  （９２８９、Ｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）、ｐ５３−Ｓ３９２  （９２８１、Ｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）、ｐ５３−Ｋ３８２  （ａｂ７５７５４，  Ａｂｃａｍ）、ＫＵ８０  （２７５３，  Ｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）。ＣＭ５抗体はＸｉｎ  Ｌｕ教授からの贈り物でした。ＨＲＰ結合二次抗体は、Ａｂｃａｍの軽鎖と特異的に反応しました（ａｂ９９６３２）。  
【０２４３】
ヌルｐ５３を発現するＨ１２９９およびＳａｏｓ−２細胞株は、Ｘｉｎ  Ｌｕ教授からの贈り物であった。ｔｅｔ−ｏｆｆ調節されたｐ５３−Ｒ１７５Ｈまたはｔｅｔ−ｏｎ調節されたｗｔｐ５３を発現するＨ１２９９細胞株は、以前に報告されたように調製されました（Ｆｏｇａｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）。ＭＥＦは、Ｅ１３．５  ＴＰ５３−／−およびＴＰ５３−Ｒ１７２Ｈ  ／  Ｒ１７２Ｈ胚から調製されました。他の細胞株はＡＴＣＣから入手した。
【０２４４】
化合物は以下の会社から購入した：ＤＭＳＯ（Ｄ２６５０、シグマ）、ＣＰ３１３９８（ＰＺ０１１５、シグマ）、三酸化ヒ素（２０２６７３、シグマ）、ＳＴＩＭＡ−１（５０６１６８、メルクバイオサイエンス）、ＳＣＨ５２９０７４（４２４０、トクリスバイオサイエンス）。）、ＰｈｉＫａｎ  ０８３（４３２６、Ｔｏｃｒｉｓ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ＭｉＲＡ−１（３３６２、Ｔｏｃｒｉｓ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、Ｅｌｌｉｐｔｉｃｉｎｅ（３３５７、Ｔｏｃｒｉｓ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ＮＳＣ  ３１９７２６（Ｓ７１４９、ｓｅｌｌｅｃｋ）、ＰＲＩＭＡ−１（Ｓ７７２３、ｓｅｌｌｅｃｋ）、ＲＩＴＡ（ＮＳＣ  ６５２２８７  、Ｓ２７８１、ｓｅｌｌｅｃｋ）、シクロヘキシミド（Ｃ７６９８、シグマ）、ビオチン（Ａ６０００７８、Ｓａｎｇｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）、ドキシサイクリンハイクレート（Ｄ９８９１、シグマ）、シスプラチン（ＣＩＳ、Ｐ４３９４、シグマ）、エトポシド（ＥＴＯ、Ｅ１３８３、シグマ）、アドリアマイシン（ＡＤＭ  、Ｓ１２０８、セレック）、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ、Ｆ６６２７、シグマ）、シタラビン（ＡＲＡ、Ｓ１６４８、セレック）、アザシチジン（ＡＺＡ、Ａ２３８５、シグマ）、デシタビン（ＤＡＣ、Ａ３６５６、シグマ）、パクリタキセル（ＴＡＸ、Ｓ１１５０、ｓｅｌｌｅｃｋ）。Ｂｉｏ−ＡｓおよびＢｉｏ−Ｄｉｔｈｉ−Ａｓは、Ｋｅｎｎｅｔｈ  Ｌ．  Ｋｉｒｋ（ＮＩＨ；  ＰＭＩＤ：１８３９６４０６）からの贈り物です。
【０２４５】
ＴＰ５３野生型マウス、雌ヌードマウスおよびＮＯＤ  ／  ＳＣＩＤマウスは、中国科学院の上海実験動物センターから入手した。ＴＰ５３−Ｒ１７２Ｈ  ／  Ｒ１７２Ｈマウスは、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂから購入した親マウス（０２６２８３）から生成されました。ＴＰ５３−／−マウス（００２１０１）は、中国のモデルマウスの国家資源センターから購入しました。
【０２４６】
ＤＮＡサンプルは、レインボーゲノムテクニック社（上海）および上海バイオテクノロジー社（上海）で配列決定された。
【０２４７】
７．２              細菌で形成されたＰＡＮＤＡ（ｐ５３のＮ末端およびＣ末端なし、タグなし）の準備
組換えｐ５３コアを発現する構築物を、大腸菌株ＢＬ２１−ゴールドに形質転換した。細胞をＬＢまたはＭ９培地で３７℃から対数期中期まで培養した。０．５  ｍＭイソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）を、５０μＭ  Ａｓ  ／  Ｓｂ  ／  Ｂｉおよび１  ｍＭ  ＺｎＣｌ２の存在下／非存在下、２５℃で一晩添加しました。４  ０００  ＲＰＭで２０分間遠心分離して細胞を回収し（１リットルの培地から約１０  ｇの細胞ペーストが得られた）、溶解液バッファー（５０  ｍＭ  Ｔｒｉｓ、ｐＨ  ７．０、５０  ｍＭ  ＮａＣｌ、１０  ｍＭ  ＤＴＴおよび１  ｍＭフェニルメチルスルホニル）で超音波処理しました。フッ化物）５０μＭ  Ａｓ  ／  Ｓｂ  ／  Ｂｉの存在下／非存在下。可溶性ライセートをＳＰ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ陽イオン交換カラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）にロードし、ＮａＣｌグラジエント（０-１  Ｍ）で溶出し、必要に応じて、Ｔｒｉｓ．ＨＣｌのヘパリン−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）でのアフィニティークロマトグラフィーでさらに精製しました。、ｐＨ  ７．０、１０  ｍＭ  ＤＴＴ、溶出にはＮａＣｌグラジエント（０〜１  Ｍ）。将来の精製は、標準的な手順を使用してＳｕｐｅｒｄｅｘ  ７５カラムを使用したゲルろ過によって行われました。
【０２４８】
細胞溶解後のプロセスは４℃で行われる。タンパク質濃度は、２８０  ｎｍで１６  ５３０  ｃｍ−１Ｍ−１の吸光係数を使用して、分光光度法で測定しました。すべてのタンパク質精製ステップは、４〜２０％のグラジエントＳＤＳ−ＰＡＧＥで監視し、それらが実質的に均一であることを確認しました。
【０２４９】
７．３              細菌で形成されたＰＡＮＤＡ（ＧＳＴタグ付き）の準備
ＧＳＴ−ｐ５３（またはＧＳＴ−ｍｐ５３）を発現する構築物を、大腸菌株ＢＬ２１−ゴールドに形質転換した。細胞を８００  ｍｌのＬＢ培地で３７℃で対数期中期まで増殖させた。５０μＭ  Ａｓ  ／  Ｓｂ  ／  Ｂｉあり／なしの０．３  ｍＭ  ＩＰＴＧを１６℃で２４時間添加しました。４  ０００  ＲＰＭで２０分間遠心して細胞を回収し、３０  ｍｌの溶解バッファー（５８  ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４・１２Ｈ２Ｏ、１７  ｍＭ  ＮａＨ２  ＰＯ４・１２Ｈ２Ｏ、６８  ｍＭ  ＮａＣｌ、１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００）の存在下／非存在下で超音波処理しました。５０μＭ  Ａｓ  ／  Ｓｂ  ／  Ｂｉ。９０００  ＲＭＰで１時間後の細胞上清に４００μｌのグルタチオンビーズ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を加え、一晩インキュベートしました。ビーズをライセートバッファーで３回洗浄しました。次に、組換えタンパク質を３００μｌの溶出バッファー（１０  ｍＭ  ＧＳＨ、１００  ｍＭ  ＮａＣｌ、５  ｍＭ  ＤＴＴおよび５０  ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ  ８．０）で溶出しました。細胞溶解後の処理は４℃で行います。すべてのタンパク質精製ステップは、４〜２０％のグラジエントＳＤＳ−ＰＡＧＥで監視し、それらが実質的に均一であることを確認しました。
【０２５０】
７．４              昆虫細胞で形成されたＰＡＮＤＡの調製
５０μＭのＡｓ  ／  Ｓｂ  ／  Ｂｉの存在下／非存在下で組換えヒト全長ｐ５３またはｐ５３コアを発現するバキュロウイルス感染Ｓｆ９細胞を収集した。５０μＭ  Ａｓ  ／  Ｓｂ  ／  Ｂｉの存在下／非存在下で、溶解液バッファー（５０  ｍＭ  Ｔｒｉｓ・ＨＣｌ、ｐＨ  ７．５、５  ｍＭ  ＥＤＴＡ、１％ＮＰ−４０、５  ｍＭ  ＤＴＴ、１  ｍＭ  ＰＭＳＦ、および０．１５  Ｍ  ＮａＣｌ）で溶解しました。。次にライセートを氷上で３０分間インキュベートした後、１３０００  ｒｐｍで３０分間遠心分離しました。上清を、１５％グリセロール、２５  ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ  ７．６、０．１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、５  ｍＭ  ＤＴＴ、および１  ｍＭベンザミジンを使用して４倍に希釈しました。それらは、０．４５ｍｍフィルターを使用してさらに濾過され、ヘパリン−セファロースカラム（ファルマシア）により精製された。次に、ＹＭ３０  Ｃｅｎｔｒｉｃｏｎ（ＥＭＤ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して精製タンパク質を濃縮しました。すべてのタンパク質精製ステップは、４〜２０％のグラジエントＳＤＳ−ＰＡＧＥで監視し、それらが実質的に均一であることを確認しました。
【０２５１】
７．５              ｉｎ  ｖｉｔｒｏで形成されたＰＡＮＤＡの調製
パンダは、細胞溶解物中の精製されたｐ５３またはｐ５３のいずれかのｐ５３を、パンダ剤と混合することによって効率的に形成することができる。たとえば、反応バッファー（２０  ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１５０  ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ  ７．５）で、精製した組換えｐ５３コアとＡｓ  ／  Ｓｂ  ／  Ｂｉ化合物を４℃で一晩１０：１−１：１００の範囲の比率で混合しました。次に、形成されたＰＡＮＤＡを透析を使用して精製して、化合物を除去した。
【０２５２】
７．６              組換えＧＳＴ−ｐ５３−Ｒ１７５ＨとＡｓのｉｎ  ｖｉｔｒｏ反応
反応緩衝液中の５０μＭ精製組換えタンパク質ＧＳＴ−ｐ５３−Ｒ１７５Ｈ（１０ｍＭ  ＧＳＨ、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＤＴＴおよび５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ８．０）をビオチン−Ａと共に添加して、ヒ素とｐ５３のモル比を得た。１０：１または１：１のいずれかです。混合溶液を４℃で一晩インキュベートした後、３つの部分に分けた。各パーツをＳＤＳ−ＰＡＧＥにかけ、続いてクーマシーブルー染色（５μｇ  ＧＳＴ−ｐ５３−Ｒ１７５Ｈを適用）、ｐ５３イムノブロッティング（０．９μｇ  ＧＳＴ−ｐ５３−Ｒ１７５Ｈを適用）またはビオチンイムノブロッティング（５μｇ  ＧＳＴ−ｐ５３−Ｒ１７５Ｈを適用）  、それぞれ。
【０２５３】
７．７              免疫沈降
免疫沈降のために、哺乳動物細胞または細菌細胞を回収し、プロテアーゼ阻害剤のカクテル（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を含むＮＰ４０緩衝液（５０  ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ  ８．０、１５０  ｍＭ  ＮａＣｌ、１％ＮＰ４０）で溶解した。次に、細胞溶解物を３回超音波処理し、１３，０００  ＲＰＭで２０分間遠心しました。上清を４５０μｌ  ＮＰ４０バッファーを使用して１  ｍｇ  ／  ｍｌ総タンパク質の最終濃度に調整し、２０μｌのプロテインＧビーズおよび１〜３μｇの対応する一次抗体と４℃で２時間インキュベートしました。ビーズを室温で２０−２５℃のＮＰ４０バッファーで３回洗浄した。スピンダウンした後、ビーズを２  ｘ  ＳＤＳローディングバッファーで５分間煮沸し、その後ウエスタンブロッティングを行いました。
【０２５４】
７．８            ビオチン−ヒ素ベースのプルダウンアッセイ
細胞を４μｇ  ／  ｍｌのＢｉｏ−ＡｓまたはＢｉｏ−ｄｉｔｈｉ−Ａｓで２時間処理した。細胞は、プロテアーゼ阻害剤のカクテルを含むＮＰ４０バッファー（５０  ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ  ８．０、１５０  ｍＭ  ＮａＣｌ、１％ＮＰ４０）で溶解しました（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）。次に、細胞溶解物を３回超音波処理し、１３，０００  ＲＰＭで１時間遠心しました。上清を４５０μｌ  ＮＰ４０バッファーを使用して１  ｍｇ  ／  ｍｌ総タンパク質の最終濃度に調整し、２０μｌのストレプトアビジンビーズと４℃で２時間インキュベートした後、ビーズ洗浄とウエスタンブロッティングを行いました。
【０２５５】
７．９              ビオチン−ＤＮＡベースのプルダウンアッセイ
二本鎖オリゴヌクレオチドを調製するために、等量の相補的一本鎖オリゴヌクレオチドを０．２５  Ｍ  ＮａＣｌ中で８０℃で５分間加熱した後、ゆっくりと室温まで冷却した。一本鎖オリゴヌクレオチドの配列を追跡した：
【０２５６】
【表１】
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【０２５７】
細胞を回収し、プロテアーゼ阻害剤のカクテル（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を含むＮＰ４０緩衝液（５０  ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ  ８．０、１５０  ｍＭ  ＮａＣｌ、１％ＮＰ４０）で溶解した。次に、細胞溶解物を３回超音波処理し、１３，０００  ＲＰＭで１時間遠心しました。上清を４５０μｌ  ＮＰ４０バッファーを使用して１  ｍｇ  ／  ｍｌ総タンパク質の最終濃度に調整し、２０μｌのストレプトアビジンビーズ（ｓ−９５１、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、２０  ｐｍｏｌのビオチン化二本鎖オリゴヌクレオチド、および２μｇのポリ（ｄＩ  −ｄＣ）（ｓｃ−２８６６９１、Ｓａｎｔａｚ  ｃｒｕｚ）。ライセートを４℃で２時間インキュベートした後、ビーズ洗浄とイムノブロッティングを行いました。
【０２５８】
７．１０          イムノブロッティング
以前に報告されたように（Ｌｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）、イムノブロッティングを実施した。Ｉｍｍｕｎｏｂｌｏｔｔｉｎｇ  ｗａｓ  ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ  ａｓ  ｒｅｐｏｒｔｅｄ  ｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙ  （Ｌｕ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１３）．
【０２５９】
７．１１          ルシフェラーゼアッセイ  
細胞を２×１０４細胞／ウェルの濃度で２４ウェルプレートに播種し、その後ルシフェラーゼレポータープラスミドを２４時間トランスフェクションした。すべてのトランスフェクションには、ウェルあたり３００  ｎｇのｐ５３発現プラスミド、１００  ｎｇのルシフェラーゼレポータープラスミド、および５  ｎｇのレニラプラスミドが含まれていました。薬剤処理後、細胞をルシフェラーゼレポーターアッセイバッファーで溶解し、ルシフェラーゼアッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して測定しました。ルシフェラーゼの活性をレニラの活性で割って、トランスフェクション効率を標準化しました。詳細については、（Ｌｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）を参照してください。
【０２６０】
７．１２          コロニー形成アッセイ  
処理した細胞をトリプシンで消化した。１００、１０００、または１０，０００細胞／ウェルを１２ウェルプレートに播種し、２〜３週間培養しました。新鮮な培地は３日ごとに交換されました。
【０２６１】
７．１３          非変性ページ
細胞は、ＣＨＡＰＳ緩衝液（１８ｍＭ  ３  −  ［（３−コラミドプロピル）ジメチルアンモニオ］  −１−プロパンスルホン酸中ＴＢＳ）またはＤＮアーゼおよびプロテアーゼ阻害剤を含有するＭ−ＰＥＲ緩衝液（７８５０１、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）のいずれかで１５分間４℃で溶解された。℃または３７℃。細胞溶解物に２０％グリセロールと５  ｍＭクーマシーＧ−２５０を加えた後、３〜１２％Ｎｏｖｅｘ  Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓグラジエントゲルにロードしました。電気泳動は、製造元の指示に従って４℃で行った。タンパク質をポリフッ化ビニリデン膜に移し、８％酢酸で２０分間固定しました。次に、固定された膜を風乾し、１００％メタノールで脱染した。イムノブロッティングの前に、膜を４℃で４％ＢＳＡ  ｉｎ  ＴＢＳで４℃で一晩ブロックしました。
【０２６２】
７．１４          リアルタイムｑＰＣＲ  
全ＲＮＡは、全ＲＮＡ精製キット（Ｂ５１８６５１、Ｓａｎｇｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を使用して細胞から単離された。１μｇのトータルＲＮＡは、メーカーのプロトコルに従ってＧｏＳｃｒｉｐｔ（登録商標）逆転写酵素システム（Ａ５００１、Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して逆転写されました。ＰＣＲは、ＳＹＢＲグリーンミックス（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）とＶｉｉＡ（商標）７リアルタイムＰＣＲシステム（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、トリプリケートで次の条件下で行いました。９５℃で１０分間、その後９５℃で１５秒間、６０秒間４０サイクル℃で１分。ＰＣＲ産物の特異性は、融解曲線分析からの各プライマーセットとサンプルについてチェックされました。標的遺伝子の発現レベルは、比較Ｃｔ法を採用するβ−アクチンのレベルと比較して正規化されました。プライマーシーケンスは次のとおりです。ＭＤＭ２フォワード５’−ＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＴＡＣＧＧＴＴＴＣ−３  ’、リバース５’−ＣＴＣＣＧＴＣＡＴＧＴＧＣＴＧＴＧＡＣＴＧ−３’。ＰＩＧ３フォワード５’−ＣＧＣＴＧＡＡＡＴＴＣＡＣＣＡＡＡＧＧＴＧ−３  ’、リバース５’−ＡＡＣＣＣＡＴＣＧＡＣＣＡＴＣＡＡＧＡＧ−３’；  ＰＵＭＡフォワード５’−ＡＣＧＡＣＣＴＣＡＡＣＧＣＡＣＡＧＴＡＣＧ−３  ’、リバース５’−ＴＣＣＣＡＴＧＡＴＧＡＧＡＴＴＧＴＡＣＡＧＧＡＣ−３’；  ｐ２１フォワード５’−ＧＴＣＴＴＧＴＡＣＣＣＴＴＧＴＧＣＣＴＣ−３  ’、リバース５’−ＧＧＴＡＧＡＡＡＴＣＴＧＴＣＡＴＧＣＴＧＧ−３’；バックスフォワード５’−ＧＡＴＧＣＧＴＣＣＡＣＣＡＡＧＡＡＧＣＴ−３  ’、リバース５’−ＣＧＧＣＣＣＣＡＧＴＴＧＡＡＧＴＴＧ−３’；  β−アクチンフォワード５’−ＡＣＴＴＡＧＴＴＧＣＧＴＴＡＣＡＣＣＣＴＴＴＣＴ−３  ’、リバース５’−ＧＡＣＴＧＣＴＧＴＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＧＴ−３’。
【０２６３】
７．１５          異種移植アッセイ  
Ｈ１２９９異種移植。１００μｌの生理食塩水に懸濁したｔｅｔ−ｏｆｆ調節ｐ５３−Ｒ１７５Ｈ（１  ＊  １０６細胞）を発現するＨ１２９９細胞を、８〜９週齢の雌ヌードマウスの脇腹に皮下注射しました。腫瘍面積が０．１  ｃｍ（１日目）に達したら、５  ｍｇ  ／  ｋｇのＡＴＯを週に６日連続で腹腔内注射した。ＤＯＸグループでは、０．２  ｍｇ  ／  ｍｌのドキシサイクリンが飲料水に追加されました。腫瘍サイズは、バーニアキャリパーで３日ごとに測定されました。腫瘍体積は、次の式を使用して計算されました：（Ｌ  ＊  Ｗ  ＊  Ｗ）／  ２。ここで、Ｌは腫瘍の大径を表し、Ｗは小径を表します。腫瘍面積がいずれのグループでも直径約１  ｃｍに達したら、マウスを犠牲にし、分離した腫瘍の重量を測定しました。グループ間の違いの分析は、Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ補正付きの２元ＲＭ  ＡＮＯＶＡによって実行されました。
【０２６４】
ＣＥＭ−Ｃ１異種移植。８−９週齢のＮＯＤ  ／  ＳＣＩＤマウスに、１  ＊  １０７個のＣＥＭ−Ｃ１  Ｔ−ＡＬＬ細胞（１日目）を尾静脈から静脈内注射した。生着後、末梢血サンプルをマウスの眼窩洞から３〜４日ごとに１６〜２６日目に採取しました。赤血球溶解バッファー（ＮＨ４Ｃｌ  １．５ｍＭ、ＮａＨＣＯ３  １０Ｍｍ、ＥＤＴＡ−２Ｎａ  １ｍＭ）を使用して、残存赤血球を除去しました。。分離された細胞は、ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５結合抗マウスＣＤ４５（ｍＣＤ４５）（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｇｅｎ（商標）、カリフォルニア州サンディエゴ）およびＦＩＴＣ結合抗ヒトＣＤ４５（ｈＣＤ４５）（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｇｅｎ（商標）、サンディエゴ、ＣＡ）フローサイトメトリー分析前の抗体。末梢血中のｈＣＤ４５  ＋細胞の割合が１匹のマウスで０．１％に達したとき（２２日目）、注射用にＡＴＯを準備しました。２３日目に、５  ｍｇ  ／  ｋｇのＡＴＯを０．１  ｍｌの生理食塩水中の尾静脈を介して週に６日連続で静脈内注射した。グループ間のｈＣＤ４５  ＋細胞の割合の比較は、対応のないｔ検定によって行われました。マウスの寿命はログランク（マンテル・コックス）検定で分析されました。  
【０２６５】
すべての統計分析は、ウィンドウズ用グラフパッドプリズム６．００（米国カリフォルニア州ラホーヤ）を使用して行われた。動物は特定の無菌状態で飼育された。実験は、国立衛生研究所の実験動物の管理と使用に関するガイドに従って実施されました。
【０２６６】
７．１６          ＡＴＯは、融点を上げることでｍｐ５３の安定性を大幅に向上させます。
ｐＨ  ７．５  ＨＥＰＥＳバッファー中の示されている比率のＡＴＯで示差走査蛍光分析（ＤＳＦ）を介して記録された精製ｐ５３コアドメインＲ１７５Ｈ（９４−２９３）の融解曲線を測定しました。（図７０Ａを参照）。
ＡＴＯと精製した組換えｐ５３Ｃ（ｐ５３Ｃ−ＷＴ、ｐ５３Ｃ−Ｒ１７５Ｈ、ｐ５３Ｃ−Ｇ２４５Ｓ、ｐ５３Ｃ−Ｒ２４９Ｓおよびｐ５３Ｃ−Ｒ２８２Ｗ、各反応で５μＭ）を、ｐＨ  ７．５  ＨＥＰＥＳバッファーで一晩、図７０Ｂに示す比率でさらに混合しました。。ｐ５３Ｃの融解曲線は、ｐＨ  ７．５  ＨＥＰＥＳバッファー中のＤＳＦによって測定されました。ｐ５３Ｃ−Ｒ１７５Ｈ、ｐ５３Ｃ−Ｇ２４５Ｓ、ｐ５３Ｃ−Ｒ２４９Ｓ、およびｐ５３Ｃ−Ｒ２８２Ｗの見かけのＴｍは、ｐＨ  ７．５  ＨＥＰＥＳバッファーで最大１．１〜６．５℃上昇できます。ｐ５３コアの融解温度を示した（平均±ＳＤ、ｎ  ＝  ３）。（図７０Ｂを参照）。
さらに、示差走査蛍光分析を介してｐＨ  ７．５  ＨＥＰＥＳ、１５０  ｍＭ  ＮａＣｌバッファーで示されるＡＴＯの比率で記録された精製ｐ５３コアドメインＲ１７５Ｈ（９４−２９３）の融解曲線を測定しました。（図７０Ｃを参照）。
さらに、ＡＴＯと精製された組換えｐ５３Ｃ（ｐ５３Ｃ−ＷＴ、ｐ５３Ｃ−Ｒ１７５Ｈ、ｐ５３Ｃ−Ｇ２４５Ｓ、ｐ５３Ｃ−Ｒ２４９Ｓおよびｐ５３Ｃ−Ｒ２８２Ｗ、各反応に対して５μＭ）を、ｐＨ  ７．５  ＨＥＰＥＳ、１５０  ｍＭ  ＮａＣｌの図７０Ｄの比率で混合しました。一晩緩衝液。ｐ５３Ｃの融解曲線は、ｐＨ  ７．５  ＨＥＰＥＳ、１５０  ｍＭ  ＮａＣｌバッファー中のＤＳＦによって測定されました。ｐ５３Ｃ−Ｒ１７５Ｈ、ｐ５３Ｃ−Ｇ２４５Ｓ、ｐ５３Ｃ−Ｒ２４９Ｓ、およびｐ５３Ｃ−Ｒ２８２Ｗの見かけのＴｍは、ｐＨ  ７．５  ＨＥＰＥＳ、１５０  ｍＭ  ＮａＣｌバッファーで最大１．０〜５．１℃上昇できます。ｐ５３コアの融解温度を示した（平均±ＳＤ、ｎ  ＝  ３）。（図７０Ｄを参照）。
精製したｐ５３コアドメイン（ｐ５３Ｃ−ＷＴ、ｐ５３Ｃ−Ｇ２４５Ｓ、ｐ５３Ｃ−Ｒ２４９Ｓおよびｐ５３Ｃ−Ｒ２８２Ｗ）の融解曲線を、ｐＨ  ７．５  ＨＥＰＥＳバッファーで示されるＡＴＯの比率で示差走査蛍光分析によりさらに測定しました。（図７０Ｅを参照）。
精製されたｐ５３コアドメイン（ｐ５３Ｃ−ＷＴ、ｐ５３Ｃ−Ｇ２４５Ｓ、ｐ５３Ｃ−Ｒ２４９Ｓおよびｐ５３Ｃ−Ｒ２８２Ｗ）の融解曲線を、示差比のｐＨ  ７．５  ＨＥＰＥＳ、１５０  ｍＭ  ＮａＣｌバッファー中のＡＴＯの比率で示差走査蛍光分析によりさらに測定しました。（図７０Ｆを参照）。
一緒に、私たちの結果は、ＡＴＯとインキュベートしたｐ５３の融解温度が示差走査蛍光分析を介して記録されたことを示しました。インキュベートしたｐ５３のＴｍは、１５０  ｍＭ  ＮａＣｌの存在下または非存在下で、ｐＨ  ７．５  ＨＥＰＥＳバッファーで上昇させました。ＨＥＰＥＳバッファーでは、ｐ５３Ｃ−Ｒ１７５Ｈ、ｐ５３Ｃ−Ｇ２４５Ｓ、ｐ５３Ｃ−Ｒ２４９Ｓ、およびｐ５３Ｃ−Ｒ２８２ＷのＴｍを、たとえばそれぞれ６．５℃、１．１℃、３．７℃、および４．７℃上げることができます（図７０  Ｂ）。ＨＥＰＥＳでは、１５０  ｍＭ  ＮａＣｌバッファー、ｐ５３Ｃ−Ｒ１７５Ｈ、ｐ５３Ｃ−Ｇ２４５Ｓ、ｐ５３Ｃ−Ｒ２４９Ｓ、およびｐ５３Ｃ−Ｒ２８２ＷのＴｍを、たとえば５．１℃、１．０℃、２．３℃、および３．０℃上昇させることができます。それぞれ（図７０Ｄ）。データは、ｐ５３Ｃ−ＷＴもわずかに安定化できることを示しています。図７０Ａおよび７０Ｃで表されているｐ５３Ｃ−Ｒ１７５Ｈのピーク曲線は、ＡＴＯと一緒に右にインキュベートされるようにシフトし、ＰＡＮＤＡ−Ｒ１７５Ｈが同じ温度でｐ５３Ｃ−Ｒ１７５Ｈよりも安定していることを示しました。同様のデータがｐ５３Ｃ−ＷＴ、ｐ５３Ｃ−Ｇ２４５Ｓ、ｐ５３Ｃ−Ｒ２４９Ｓおよびｐ５３Ｃ−Ｒ２８２Ｗにも記録されました。（図７０Ｅおよび７０Ｆを参照）。
【０２６７】
７．１７          ＰＡＮＤＡはほとんどのｐ５３標的遺伝子の転写活性を取り戻します。
ＳａＯＳ−２細胞にｗｔｐ５３、ｐ５３−Ｒ２７３Ｈ、またはｐ５３−Ｒ２８２Ｗをトランスフェクトし、１μｇ  ／  ｍｌ  ＡＴＯで２４時間処理しました。ｐ５３ターゲットの発現レベルは、ＲＮＡシーケンスによって決定されました。報告された１１６個のｐ５３活性化標的の倍率変化値のヒートマップ（示されたサンプルグループ対ベクター）が測定されました。（図７１Ａを参照）。別の研究で特定された１２７個のｐ５３ターゲットのセットの倍率変化値のヒートマップも測定されました。（図７１Ｂを参照）。
さらに、ＲＮＡシーケンス（ＲＮＡ−ｓｅｑ）を使用して、ｐ５３ターゲット間で形成されたＰＡＮＤＡの機能を決定しました。報告された１１６個の遺伝子ｐ５３活性化標的のうち、遺伝子の大部分は、よく知られているｐ５３標的ＢＢＣ３、ＢＡＸ、ＴＰ５３Ｉ３、ＣＤＫＮ１Ａ、およびＭＤＭ２を含むＰＡＮＤＡ−Ｒ２８２Ｗによってアップレギュレートされたことがわかった（図７１Ａ）  。別の研究で特定された１２７のｐ５３ターゲット（ｐ５３活性化および抑制遺伝子を含む）でも同様の結果が見つかりました（図７１Ｂ）。比較すると、接触変異体ｐ５３を含むＰＡＮＤＡ−Ｒ２７３Ｈの転写活性が同様のレベルで復元されなかったことは明らかではありませんでした。
【０２６８】
７．１８          統計分析  
特に明記しない限り、統計分析はフィッシャーの正確確率検定（両側）を使用して行われた。特に指定のない限り、０．０５未満のｐ値は統計的に有意であると見なされました。
【０２６９】
７．１９          表１  １１００の３価のヒ素（「Ａｓ」）含有化合物は、ＰＡＮＤＡポケットに効率的に結合し、構造ｍｐ５３を効率的に救済すると予測されました。ＰｕｂＣｈｅｍ（ｈｔｔｐｓ：／／ｐｕｂｃｈｅｍ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）に記録された９４２０万の構造すべてが４Ｃ  ＋スクリーニングに適用されました。４Ｃ  ＋スクリーニングでは、２つ以上のシステイン結合の可能性があるものを収集しました。炭素結合のＡｓ  ／  Ｓｂ  ／  Ｂｉ結合は加水分解できないため、システインの結合に欠陥があります。他のＡｓ  ／  Ｓｂ  ／  Ｂｉ結合は細胞内で加水分解され、システインと結合することができます。
【０２７０】
【表２−１】
2021518837.tif 000004
【０２７１】
【表２−２】
2021518837.tif 000005
【０２７２】
【表２−３】
2021518837.tif 000006
【０２７３】
【表２−４】
2021518837.tif 000007
【０２７４】
７．２０          表２  ３０７１の５価のヒ素（Ａｓ）含有化合物は、ＰＡＮＤＡポケットに効率的に結合し、構造ｍｐ５３を効率的に救済すると予測されました。ＰｕｂＣｈｅｍ（ｈｔｔｐｓ：／／ｐｕｂｃｈｅｍ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）に記録された９４２０万の構造すべてが４Ｃ  ＋スクリーニングに適用されました。４Ｃ  ＋スクリーニングでは、２つ以上のシステイン結合の可能性があるものを収集しました。炭素結合のＡｓ  ／  Ｓｂ  ／  Ｂｉ結合は加水分解できないため、システインの結合に欠陥があります。他のＡｓ  ／  Ｓｂ  ／  Ｂｉ結合は細胞内で加水分解され、システインと結合することができます。
【０２７５】
【表３−１】
2021518837.tif 000008
【０２７６】
【表３−２】
2021518837.tif 000009
【０２７７】
【表３−３】
2021518837.tif 000010
【０２７８】
【表３−４】
2021518837.tif 000011
【０２７９】
【表３−５】
2021518837.tif 000012
【０２８０】
【表３−６】
2021518837.tif 000013
【０２８１】
【表３−７】
2021518837.tif 000014
【０２８２】
【表３−８】
2021518837.tif 000015
【０２８３】
【表３−９】
2021518837.tif 000016
【０２８４】
【表３−１０】
2021518837.tif 000017
【０２８５】
７．２１          表３  ５５８の３価ビスマス（「Ｂｉ」）含有化合物は、ＰＡＮＤＡポケットに効率的に結合し、構造ｍｐ５３を効率的に救済すると予測されました。ＰｕｂＣｈｅｍ（ｈｔｔｐｓ：／／ｐｕｂｃｈｅｍ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）に記録された９４２０万の構造すべてが４Ｃ  ＋スクリーニングに適用されました。４Ｃ  ＋スクリーニングでは、２つ以上のシステイン結合の可能性があるものを収集しました。炭素結合のＡｓ  ／  Ｓｂ  ／  Ｂｉ結合は加水分解できないため、システインの結合に欠陥があります。他のＡｓ  ／  Ｓｂ  ／  Ｂｉ結合は細胞内で加水分解され、システインと結合することができます。
【０２８６】
【表４−１】
2021518837.tif 000018
【０２８７】
【表４−２】
2021518837.tif 000019
【０２８８】
７．２２          表４  １２５の５価アンチモン（「Ｓｂ」）構造は、ＰＡＮＤＡポケットに効率的に結合し、構造ｍｐ５３を効率的に救済すると予測されました。ＰｕｂＣｈｅｍ（ｈｔｔｐｓ：／／ｐｕｂｃｈｅｍ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）に記録された９４２０万の構造すべてが４Ｃ  ＋スクリーニングに適用されました。４Ｃ  ＋スクリーニングでは、２つ以上のシステイン結合の可能性があるものを収集しました。炭素結合のＡｓ  ／  Ｓｂ  ／  Ｂｉ結合は加水分解できないため、システインの結合に欠陥があります。他のＡｓ  ／  Ｓｂ  ／  Ｂｉ結合は細胞内で加水分解され、システインと結合することができます。
【０２８９】
【表５】
2021518837.tif 000020
【０２９０】
７．２３          表５  ９３７の３価のビスマス（「Ｂｉ」）構造は、ＰＡＮＤＡポケットに効率的に結合し、構造ｍｐ５３を効率的に救済すると予測されました。ＰｕｂＣｈｅｍ（ｈｔｔｐｓ：／／ｐｕｂｃｈｅｍ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）に記録された９４２０万の構造すべてが４Ｃ  ＋スクリーニングに適用されました。４Ｃ  ＋スクリーニングでは、２つ以上のシステイン結合の可能性があるものを収集しました。炭素結合のＡｓ  ／  Ｓｂ  ／  Ｂｉ結合は加水分解できないため、システインの結合に欠陥があります。他のＡｓ  ／  Ｓｂ  ／  Ｂｉ結合は細胞内で加水分解され、システインと結合することができます。
【０２９１】
【表６−１】
2021518837.tif 000021
【０２９２】
【表６−２】
2021518837.tif 000022
【０２９３】
【表６−３】
2021518837.tif 000023
【０２９４】
７．２４          表６  １８９６の５価のビスマス（「Ｂｉ」）構造は、ＰＡＮＤＡポケットに効率的に結合し、構造ｍｐ５３を効率的に救済すると予測されました。ＰｕｂＣｈｅｍ（ｈｔｔｐｓ：／／ｐｕｂｃｈｅｍ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）に記録された９４２０万の構造すべてが４Ｃ  ＋スクリーニングに適用されました。４Ｃ  ＋スクリーニングでは、２つ以上のシステイン結合の可能性があるものを収集しました。炭素結合のＡｓ  ／  Ｓｂ  ／  Ｂｉ結合は加水分解できないため、システインの結合に欠陥があります。他のＡｓ  ／  Ｓｂ  ／  Ｂｉ結合は細胞内で加水分解され、システインと結合することができます。
【０２９５】
【表７−１】
2021518837.tif 000024
【０２９６】
【表７−２】
2021518837.tif 000025
【０２９７】
【表７−３】
2021518837.tif 000026
【０２９８】
【表７−４】
2021518837.tif 000027
【０２９９】
【表７−５】
2021518837.tif 000028
【０３００】
【表７−６】
2021518837.tif 000029
【０３０１】
７．２５          表７実験によって検証された、構造的および転写的活性救助を備えたＰＡＮＤＡエージェントの例。化合物は、システイン結合能力が１つまたは２つしかない他の化合物とともに表１から表６からランダムに選択され、ＰＡｂ１６２０  ＩＰアッセイおよびルシフェラーゼを使用して、ｐ５３−Ｒ１７５ＨのフォールディングおよびＰＵＭＡプロモーター上のｐ５３−Ｒ１７５Ｈの転写活性化の能力を実験的にテストしました  それぞれレポーターアッセイ。「＋」の増加は、化合物処理時のＰＵＭＡプロモーターに対するｐ５３−Ｒ１７５Ｈの転写活性の増加を表します。
【０３０２】
【表８】
2021518837.tif 000030
【０３０３】
７．２６          表８例ｐ５３  ＳＮＰ  
【０３０４】
【表９】
2021518837.tif 000031
【０３０５】
７．２７          例の野生型ヒトｐ５３  
野生型ヒトｐ５３アイソフォームａ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿０００５３７．３細胞性腫瘍抗原ｐ５３アイソフォームａ  ［ホモサピエンス］；  ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００１１１９５８４．１、ＮＰ＿００１１１９５８４．１細胞性腫瘍抗原ｐ５３アイソフォームａ  ［ホモサピエンス］）、ｐ５３アイソフォーム１とも呼ばれます（ＵｎｉＰｒｏｔデータベース識別子：Ｐ０４６３７−１、ｓｐ  ｜  Ｐ０４６３７  ｜  Ｐ５３＿ＨＵＭＡＮ細胞性腫瘍抗原ｐ５３  ＯＳ  ＝ホモサピエンスＧＮ  ＝  ＴＰ５３  ＰＥ  ＝  １  ＳＶ  ＝  ４）、別名ｐ５３、全長ｐ５３、および  ｐ５３α。ＰＡＮＤＡシステインには下線が引かれています。
【０３０６】
【表１０】
2021518837.tif 000032
【０３０７】
野生型ヒトｐ５３アイソフォームｂ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００１１１９５８６．１、ＮＰ＿００１１１９５８６．１、細胞性腫瘍抗原ｐ５３アイソフォームｂ  ［ホモサピエンス］）、別名ｐ５３アイソフォーム２（ＵｎｉＰｒｏｔデータベース識別子：Ｐ０４６３７−２、ｓｐ  ｜  Ｐ０４６３７  −２  ｜  Ｐ５３＿ＨＵＭＡＮアイソフォーム２の細胞性腫瘍抗原ｐ５３  ＯＳ  ＝  Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  ＧＮ  ＝  ＴＰ５３）、別名ｐ５３β。ＰＡＮＤＡシステインには下線が引かれています。
【０３０８】
【表１１】
2021518837.tif 000033
【０３０９】
野生型ヒトｐ５３アイソフォームｃ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００１１１９５８５．１，  ＮＰ＿００１１１９５８５．１細胞性腫瘍抗原ｐ５３アイソフォームｃ  ［ホモサピエンス］）として知られているｐ５３アイソフォーム３（ＵｎｉＰｒｏｔデータベース識別子：Ｐ０４６３７−３、ｓｐ  ｜  Ｐ０４６３７−  ３  ｜  Ｐ５３＿ＨＵＭＡＮアイソフォーム３の細胞性腫瘍抗原ｐ５３  ＯＳ  ＝  Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  ＧＮ  ＝  ＴＰ５３）、別名ｐ５３γ。ＰＡＮＤＡシステインには下線が引かれています。
【０３１０】
【表１２】
2021518837.tif 000034
【０３１１】
野生型ヒトｐ５３アイソフォームｇ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００１１１９５９０．１、ＮＰ＿００１１１９５９０．１細胞性腫瘍抗原ｐ５３アイソフォームｇ  ［ホモサピエンス］；  ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００１２６３６８９．１、ＮＰ＿００１２６３６８９．１細胞性腫瘍抗原ｐ５３アイソフォームｇ  ［ホモ  ｓａｐｉｅｎｓ］；  ＮＣＢＩリファレンスシーケンス：ＮＰ＿００１２６３６９０．１、ＮＰ＿００１２６３６９０．１細胞性腫瘍抗原ｐ５３アイソフォームｇ  ［ホモサピエンス］）別名ｐ５３アイソフォーム４（ＵｎｉＰｒｏｔデータベース識別子：Ｐ０４６３７−４、ｓｐ  ｜  Ｐ０４６３７−４  ｜  Ｐ５３＿ＨＵＭＡＮアイソフォーム４  ／  細胞性腫瘍抗原ｐ５３  ＯＳ  ＝ホモサピエンスＧＮ  ＝  ＴＰ５３）、Δ４０ｐ５３αとも呼ばれます。ＰＡＮＤＡシステインには下線が引かれています。
【０３１２】
【表１３】
2021518837.tif 000035
【０３１３】
野生型ヒトｐ５３アイソフォームｉ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００１２６３６２５．１、ＮＰ＿００１２６３６２５．１細胞性腫瘍抗原ｐ５３アイソフォームｉ  ［ホモサピエンス］）、別名ｐ５３アイソフォーム５（ＵｎｉＰｒｏｔデータベース識別子：Ｐ０４６３７−５、ｓｐ  ｜  Ｐ０４６３７  −５  ｜  Ｐ５３＿ＨＵＭＡＮアイソフォーム５の細胞性腫瘍抗原ｐ５３  ＯＳ  ＝  Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  ＧＮ  ＝  ＴＰ５３）、Δ４０ｐ５３βとも呼ばれます。ＰＡＮＤＡシステインには下線が引かれています。  
【０３１４】
【表１４】
2021518837.tif 000036
【０３１５】
野生型ヒトｐ５３アイソフォームｈ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００１２６３６２４．１、ＮＰ＿００１２６３６２４．１細胞性腫瘍抗原ｐ５３アイソフォームｈ  ［ホモサピエンス］）、別名ｐ５３アイソフォーム６（ＵｎｉＰｒｏｔデータベース識別子：Ｐ０４６３７−６、ｓｐ  ｜  Ｐ０４６３７  −６  ｜  Ｐ５３＿ＨＵＭＡＮアイソフォーム６の細胞性腫瘍抗原ｐ５３  ＯＳ  ＝  Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  ＧＮ  ＝  ＴＰ５３）、別名Δ４０ｐ５３γ。ＰＡＮＤＡシステインには下線が引かれています。
【０３１６】
【表１５】
2021518837.tif 000037
【０３１７】
８．            参考文献  
以下の刊行物、参考文献、特許および特許出願は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０３１８】
アレクサンドロワ、Ｅ．Ｍ。、ヤロウィッツ、Ａ．Ｒ。、リ、Ｄ。、ク、Ｓ。、シュルツ、Ｒ。、プロイア、Ｄ．Ａ。、ロザノ、Ｇ。、ドベルスタイン、Ｍ。、およびモール、Ｕ．Ｍ。（２０１５）。治療のための安定化変異体ｐ５３への腫瘍依存性を利用することにより、生存率を改善します。Ｎａｔｕｒｅ  ５２３、３５２−３５６。Ａｌｅｘａｎｄｒｏｖａ，  Ｅ．Ｍ．，  Ｙａｌｌｏｗｉｔｚ，  Ａ．Ｒ．，  Ｌｉ，  Ｄ．，  Ｘｕ，  Ｓ．，  Ｓｃｈｕｌｚ，  Ｒ．，  Ｐｒｏｉａ，  Ｄ．Ａ．，  Ｌｏｚａｎｏ，  Ｇ．，  Ｄｏｂｂｅｌｓｔｅｉｎ，  Ｍ．，  ａｎｄ  Ｍｏｌｌ，  Ｕ．Ｍ．  （２０１５）．  Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｂｙ  ｅｘｐｌｏｉｔｉｎｇ  ｔｕｍｏｕｒ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ  ｏｎ  ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ  ｍｕｔａｎｔ  ｐ５３  ｆｏｒ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．  Ｎａｔｕｒｅ  ５２３，  ３５２−３５６．
【０３１９】
Ａｒｙｅｅ、Ｄ．Ｎ．、Ｎｉｅｄａｎ、Ｓ．、Ｂａｎ、Ｊ．、Ｓｃｈｗｅｎｔｎｅｒ、Ｒ．、Ｍｕｅｈｌｂａｃｈｅｒ、Ｋ．、Ｋａｕｅｒ、Ｍ．、Ｋｏｆｌｅｒ、Ｒ。、およびＫｏｖａｒ、Ｈ。（２０１３）。ユーイング肉腫におけるＰＲＩＭＡ−１（Ｍｅｔ）／  ＡＰＲ−２４６による機能的ｐ５３再活性化の変動。英国癌ジャーナル１０９、２６９６−２７０４。Ａｒｙｅｅ，  Ｄ．Ｎ．，  Ｎｉｅｄａｎ，  Ｓ．，  Ｂａｎ，  Ｊ．，  Ｓｃｈｗｅｎｔｎｅｒ，  Ｒ．，  Ｍｕｅｈｌｂａｃｈｅｒ，  Ｋ．，  Ｋａｕｅｒ，  Ｍ．，  Ｋｏｆｌｅｒ，  Ｒ．，  ａｎｄ  Ｋｏｖａｒ，  Ｈ．  （２０１３）．  Ｖａｒｉａｂｉｌｉｔｙ  ｉｎ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｐ５３  ｒｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｂｙ  ＰＲＩＭＡ−１（Ｍｅｔ）／ＡＰＲ−２４６  ｉｎ  Ｅｗｉｎｇ  ｓａｒｃｏｍａ．  Ｂｒｉｔｉｓｈ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ  １０９，  ２６９６−２７０４．
【０３２０】
Ｎ．  Ｂａｓｓｅ、Ｋａａｒ、Ｊ．Ｌ．、Ｓｅｔｔａｎｎｉ、Ｇ．、Ｊｏｅｒｇｅｒ、Ａ．Ｃ．、Ｒｕｔｈｅｒｆｏｒｄ、Ｔ．Ｊ。、およびＦｅｒｓｈｔ、Ａ．Ｒ。（２０１０）。ｐ５３安定化薬の合理的な設計に向けて：発癌性Ｙ２２０Ｃ変異体の表面を精査します。化学と生物学１７、４６−５６。Ｂａｓｓｅ，  Ｎ．，  Ｋａａｒ，  Ｊ．Ｌ．，  Ｓｅｔｔａｎｎｉ，  Ｇ．，  Ｊｏｅｒｇｅｒ，  Ａ．Ｃ．，  Ｒｕｔｈｅｒｆｏｒｄ，  Ｔ．Ｊ．，  ａｎｄ  Ｆｅｒｓｈｔ，  Ａ．Ｒ．  （２０１０）．  Ｔｏｗａｒｄ  ｔｈｅ  ｒａｔｉｏｎａｌ  ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ｐ５３−ｓｔａｂｉｌｉｚｉｎｇ  ｄｒｕｇｓ：  ｐｒｏｂｉｎｇ  ｔｈｅ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ  Ｙ２２０Ｃ  ｍｕｔａｎｔ．  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  ｂｉｏｌｏｇｙ  １７，  ４６−５６．
【０３２１】
バウアー、Ｍ．Ｒ。、ジョーア、Ａ．Ｃ。、およびファーシュ、Ａ．Ｒ。（２０１６）。２−スルホニルピリミジン：ｐ５３が低下した細胞に対して抗癌活性を示す穏やかなアルキル化剤。アメリカ合衆国国立科学アカデミーの議事録１１３、Ｅ５２７１−５２８０。Ｂａｕｅｒ，  Ｍ．Ｒ．，  Ｊｏｅｒｇｅｒ，  Ａ．Ｃ．，  ａｎｄ  Ｆｅｒｓｈｔ，  Ａ．Ｒ．  （２０１６）．  ２−Ｓｕｌｆｏｎｙｌｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅｓ：  Ｍｉｌｄ  ａｌｋｙｌａｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｔｏｗａｒｄ  ｐ５３−ｃｏｍｐｒｏｍｉｓｅｄ  ｃｅｌｌｓ．  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  １１３，  Ｅ５２７１−５２８０．
【０３２２】
Ｂｏｅｃｋｌｅｒ、Ｆ．Ｍ．、Ｊｏｅｒｇｅｒ、Ａ．Ｃ．、Ｊａｇｇｉ、Ｇ．、Ｒｕｔｈｅｒｆｏｒｄ、Ｔ．Ｊ．、Ｖｅｐｒｉｎｔｓｅｖ、Ｄ．Ｂ。、およびＦｅｒｓｈｔ、Ａ．Ｒ。（２００８）。ｉｎ  ｓｉｌｉｃｏでスクリーニングされた薬剤によるｐ５３の不安定化変異体の標的を定めた救助。アメリカ合衆国科学アカデミーの議事録１０５、１０３６０−１０３６５。Ｂｏｅｃｋｌｅｒ，  Ｆ．Ｍ．，  Ｊｏｅｒｇｅｒ，  Ａ．Ｃ．，  Ｊａｇｇｉ，  Ｇ．，  Ｒｕｔｈｅｒｆｏｒｄ，  Ｔ．Ｊ．，  Ｖｅｐｒｉｎｔｓｅｖ，  Ｄ．Ｂ．，  ａｎｄ  Ｆｅｒｓｈｔ，  Ａ．Ｒ．  （２００８）．  Ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｒｅｓｃｕｅ  ｏｆ  ａ  ｄｅｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ  ｍｕｔａｎｔ  ｏｆ  ｐ５３  ｂｙ  ａｎ  ｉｎ  ｓｉｌｉｃｏ  ｓｃｒｅｅｎｅｄ  ｄｒｕｇ．  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  １０５，  １０３６０−１０３６５．
【０３２３】
ブロックＡ．Ｎ．およびファーシュＡ．Ｒ．  （２００１）。変異ｐ５３の機能を救う。ＮａｔｕｒｅはＣａｎｃｅｒ  １、６８−７６をレビューしています。Ｂｕｌｌｏｃｋ，  Ａ．Ｎ．，  ａｎｄ  Ｆｅｒｓｈｔ，  Ａ．Ｒ．  （２００１）．  Ｒｅｓｃｕｉｎｇ  ｔｈｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｕｔａｎｔ  ｐ５３．  Ｎａｔｕｒｅ  ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ  １，  ６８−７６．
【０３２４】
ブロック、Ａ．Ｎ。、ヘンケル、Ｊ。、デデッカー、Ｂ．Ｓ。、ジョンソン、Ｃ．Ｍ。、ニコロバ、Ｐ．Ｖ。、プロクター、Ｍ．Ｒ。、レーン、Ｄ．Ｐ。、およびファーシュト、Ａ．Ｒ。（１９９７）。野生型および変異型ｐ５３コアドメインの熱力学的安定性。アメリカ合衆国の全米科学アカデミーの議事録９４、１４３３８−１４３４２。Ｂｕｌｌｏｃｋ，  Ａ．Ｎ．，  Ｈｅｎｃｋｅｌ，  Ｊ．，  ＤｅＤｅｃｋｅｒ，  Ｂ．Ｓ．，  Ｊｏｈｎｓｏｎ，  Ｃ．Ｍ．，  Ｎｉｋｏｌｏｖａ，  Ｐ．Ｖ．，  Ｐｒｏｃｔｏｒ，  Ｍ．Ｒ．，  Ｌａｎｅ，  Ｄ．Ｐ．，  ａｎｄ  Ｆｅｒｓｈｔ，  Ａ．Ｒ．  （１９９７）．  Ｔｈｅｒｍｏｄｙｎａｍｉｃ  ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｗｉｌｄ−ｔｙｐｅ  ａｎｄ  ｍｕｔａｎｔ  ｐ５３  ｃｏｒｅ  ｄｏｍａｉｎ．  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  ９４，  １４３３８−１４３４２．
【０３２５】
ブロック、Ａ．Ｎ。、ヘンケル、Ｊ。、およびファーシュ、Ａ．Ｒ。（２０００）。変異型ｐ５３コアドメインにおける残留フォールディングとＤＮＡ結合の定量分析：がん治療における救済のための変異型状態の定義。Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １９、１２４５−１２５６。Ｂｕｌｌｏｃｋ，  Ａ．Ｎ．，  Ｈｅｎｃｋｅｌ，  Ｊ．，  ａｎｄ  Ｆｅｒｓｈｔ，  Ａ．Ｒ．  （２０００）．  Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｒｅｓｉｄｕａｌ  ｆｏｌｄｉｎｇ  ａｎｄ  ＤＮＡ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｉｎ  ｍｕｔａｎｔ  ｐ５３  ｃｏｒｅ  ｄｏｍａｉｎ：  ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｕｔａｎｔ  ｓｔａｔｅｓ  ｆｏｒ  ｒｅｓｃｕｅ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｙ．  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １９，  １２４５−１２５６．
【０３２６】
ビコフ、Ｖ．Ｊ。、イッサエバ、Ｎ。、シロフ、Ａ。、フルトクランツ、Ｍ。、プガチェバ、Ｅ。、チュマコフ、Ｐ。、ベルグマン、Ｊ。、ウィマン、Ｋ。、およびセリバノヴァ、Ｇ。（２００２）。低分子化合物による変異型ｐ５３への腫瘍抑制機能の回復。自然医学８、２８２−２８８。Ｂｙｋｏｖ，  Ｖ．Ｊ．，  Ｉｓｓａｅｖａ，  Ｎ．，  Ｓｈｉｌｏｖ，  Ａ．，  Ｈｕｌｔｃｒａｎｔｚ，  Ｍ．，  Ｐｕｇａｃｈｅｖａ，  Ｅ．，  Ｃｈｕｍａｋｏｖ，  Ｐ．，  Ｂｅｒｇｍａｎ，  Ｊ．，  Ｗｉｍａｎ，  Ｋ．Ｇ．，  ａｎｄ  Ｓｅｌｉｖａｎｏｖａ，  Ｇ．  （２００２）．  Ｒｅｓｔｏｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｔｕｍｏｒ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｔｏ  ｍｕｔａｎｔ  ｐ５３  ｂｙ  ａ  ｌｏｗ−ｍｏｌｅｃｕｌａｒ−ｗｅｉｇｈｔ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ．  Ｎａｔｕｒｅ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ８，  ２８２−２８８．
【０３２７】
癌ゲノムアトラスリサーチ、Ｎ。、レイ、ＴＪ、ミラー、Ｃ。、ディン、Ｌ。、ラファエル、ＢＪ、マンガル、ＡＪ、ロバートソン、Ａ。、ホードリー、Ｋ。、トリチェ、ＴＪ、Ｊｒ。、レアード、ＰＷ、等。（２０１３）。成人のｄｅ  ｎｏｖｏ急性骨髄性白血病のゲノムおよびエピゲノムの状況。ニューイングランド医学ジャーナル３６８、２０５９−２０７４。Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｔｌａｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  Ｎ．，  Ｌｅｙ，  Ｔ．Ｊ．，  Ｍｉｌｌｅｒ，  Ｃ．，  Ｄｉｎｇ，  Ｌ．，  Ｒａｐｈａｅｌ，  Ｂ．Ｊ．，  Ｍｕｎｇａｌｌ，  Ａ．Ｊ．，  Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ，  Ａ．，  Ｈｏａｄｌｅｙ，  Ｋ．，  Ｔｒｉｃｈｅ，  Ｔ．Ｊ．，  Ｊｒ．，  Ｌａｉｒｄ，  Ｐ．Ｗ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１３）．  Ｇｅｎｏｍｉｃ  ａｎｄ  ｅｐｉｇｅｎｏｍｉｃ  ｌａｎｄｓｃａｐｅｓ  ｏｆ  ａｄｕｌｔ  ｄｅ  ｎｏｖｏ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．  Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ３６８，  ２０５９−２０７４．
【０３２８】
デマ、Ｍ、マクスウェル、Ｅ、ラモス、Ｒ、リャン、Ｌ、リ、Ｃ、ヘスク、Ｄ、ロスマン、Ｒ、マラムズ、Ａ、人形、Ｒ、リウ、金属。（２０１０）。ＳＣＨ５２９０７４、ｐ５３  ＤＮＡ結合ドメイン（ＤＢＤ）をバインドする変異体ｐ５３の小分子活性化因子は、成長抑制機能を変異体ｐ５３に復元し、野生型ｐ５３のＨＤＭ２を介したユビキチン化を中断します。生化学ジャーナル２８５、１０１９８−１０２１２。Ｄｅｍｍａ，  Ｍ．，  Ｍａｘｗｅｌｌ，  Ｅ．，  Ｒａｍｏｓ，  Ｒ．，  Ｌｉａｎｇ，  Ｌ．，  Ｌｉ，  Ｃ．，  Ｈｅｓｋ，  Ｄ．，  Ｒｏｓｓｍａｎ，  Ｒ．，  Ｍａｌｌａｍｓ，  Ａ．，  Ｄｏｌｌ，  Ｒ．，  Ｌｉｕ，  Ｍ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１０）．  ＳＣＨ５２９０７４，  ａ  ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｏｆ  ｍｕｔａｎｔ  ｐ５３，  ｗｈｉｃｈ  ｂｉｎｄｓ  ｐ５３  ＤＮＡ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｄｏｍａｉｎ  （ＤＢＤ），  ｒｅｓｔｏｒｅｓ  ｇｒｏｗｔｈ−ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｔｏ  ｍｕｔａｎｔ  ｐ５３  ａｎｄ  ｉｎｔｅｒｒｕｐｔｓ  ＨＤＭ２−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｕｂｉｑｕｉｔｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｗｉｌｄ  ｔｙｐｅ  ｐ５３．  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２８５，  １０１９８−１０２１２．
【０３２９】
デマ、Ｍ．Ｊ。、ウォン、Ｓ。、マクスウェル、Ｅ。、およびダスマハパトラ、Ｂ。（２００４）。ＣＰ−３１３９８は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで変異ｐ５３へのＤＮＡ結合活性を回復しますが、ｐ５３ホモログｐ６３およびｐ７３には影響しません。生化学ジャーナル２７９、４５８８７−４５８９６。Ｄｅｍｍａ，  Ｍ．Ｊ．，  Ｗｏｎｇ，  Ｓ．，  Ｍａｘｗｅｌｌ，  Ｅ．，  ａｎｄ  Ｄａｓｍａｈａｐａｔｒａ，  Ｂ．  （２００４）．  ＣＰ−３１３９８  ｒｅｓｔｏｒｅｓ  ＤＮＡ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｔｏ  ｍｕｔａｎｔ  ｐ５３  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｂｕｔ  ｄｏｅｓ  ｎｏｔ  ａｆｆｅｃｔ  ｐ５３  ｈｏｍｏｌｏｇｓ  ｐ６３  ａｎｄ  ｐ７３．  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２７９，  ４５８８７−４５８９６．
【０３３０】
ドルギン、Ｅ。（２０１７）。ヒトゲノムで最も人気のある遺伝子。Ｎａｔｕｒｅ  ５５１、４２７−４３１。Ｄｏｌｇｉｎ，  Ｅ．  （２０１７）．  Ｔｈｅ  ｍｏｓｔ  ｐｏｐｕｌａｒ  ｇｅｎｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｇｅｎｏｍｅ．  Ｎａｔｕｒｅ  ５５１，  ４２７−４３１．
【０３３１】
ドノヒュー、Ｎ。、ヤム、ＰＴ、ジャン、Ｘ．Ｍ。、およびホッグ、Ｐ．Ｊ。（２０００）。哺乳類細胞の表面に密に配置されたタンパク質チオールの存在。タンパク質科学：Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ９、２４３６−２４４５の出版物。Ｄｏｎｏｇｈｕｅ，  Ｎ．，  Ｙａｍ，  Ｐ．Ｔ．，  Ｊｉａｎｇ，  Ｘ．Ｍ．，  ａｎｄ  Ｈｏｇｇ，  Ｐ．Ｊ．  （２０００）．  Ｐｒｅｓｅｎｃｅ  ｏｆ  ｃｌｏｓｅｌｙ  ｓｐａｃｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｈｉｏｌｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｏｆ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌｓ．  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｃｉｅｎｃｅ  ：  ａ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ９，  ２４３６−２４４５．  
【０３３２】
フェルダー、ＤＭ、コストバ、ＫＫ、ウィンスロー、ＭＭ、テイラー、ＳＥ、キャッシュマン、Ｃ。、ウィッテイカー、ＣＡ、サンチェスリベラ、ＦＪ、レズニック、Ｒ。、ブロンソン、Ｒ。、ヘマン、ＭＴなど。（２０１０）。肺癌の進行中のｐ５３回復に対するステージ固有の感度。Ｎａｔｕｒｅ  ４６８、５７２−５７５。Ｆｅｌｄｓｅｒ，  Ｄ．Ｍ．，  Ｋｏｓｔｏｖａ，  Ｋ．Ｋ．，  Ｗｉｎｓｌｏｗ，  Ｍ．Ｍ．，  Ｔａｙｌｏｒ，  Ｓ．Ｅ．，  Ｃａｓｈｍａｎ，  Ｃ．，  Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ，  Ｃ．Ａ．，  Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｒｉｖｅｒａ，  Ｆ．Ｊ．，  Ｒｅｓｎｉｃｋ，  Ｒ．，  Ｂｒｏｎｓｏｎ，  Ｒ．，  Ｈｅｍａｎｎ，  Ｍ．Ｔ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１０）．  Ｓｔａｇｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｔｏ  ｐ５３  ｒｅｓｔｏｒａｔｉｏｎ  ｄｕｒｉｎｇ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ．  Ｎａｔｕｒｅ  ４６８，  ５７２−５７５．
【０３３３】
Ｆｏｇａｌ、Ｖ．、Ｈｓｉｅｈ、Ｊ．Ｋ．、Ｒｏｙｅｒ、Ｃ．、Ｚｈｏｎｇ、Ｓ。およびＬｕ、Ｘ。（２００５）。Ｅ２Ｆ１による細胞周期依存性のｐ５３の核保持には、Ｓｅｒ３１５でのｐ５３のリン酸化が必要です。ＥＭＢＯジャーナル２４、２７６８−２７８２。Ｆｏｇａｌ，  Ｖ．，  Ｈｓｉｅｈ，  Ｊ．  Ｋ．，  Ｒｏｙｅｒ，  Ｃ．，  Ｚｈｏｎｇ，  Ｓ．，  ａｎｄ  Ｌｕ，  Ｘ．  （２００５）．  Ｃｅｌｌ  ｃｙｃｌｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐ５３  ｂｙ  Ｅ２Ｆ１  ｒｅｑｕｉｒｅｓ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐ５３  ａｔ  Ｓｅｒ３１５．  Ｔｈｅ  ＥＭＢＯ  ｊｏｕｒｎａｌ  ２４，  ２７６８−２７８２．
【０３３４】
フォスター、Ｂ．Ａ。、コフィー、Ｈ．Ａ。、モーリン、Ｍ．Ｊ。およびラスチネジャド、Ｆ。（１９９９）。変異体ｐ５３の構造と機能の薬理学的救済。Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８６、２５０７−２５１０。Ｆｏｓｔｅｒ，  Ｂ．Ａ．，  Ｃｏｆｆｅｙ，  Ｈ．Ａ．，  Ｍｏｒｉｎ，  Ｍ．Ｊ．，  ａｎｄ  Ｒａｓｔｉｎｅｊａｄ，  Ｆ．  （１９９９）．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒｅｓｃｕｅ  ｏｆ  ｍｕｔａｎｔ  ｐ５３  ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８６，  ２５０７−２５１０．
【０３３５】
Ｆｒｅｅｄ−Ｐａｓｔｏｒ、Ｗ．Ａ．およびＰｒｉｖｅｓ、Ｃ．（２０１２）。変異体ｐ５３：１つの名前、多くのタンパク質。Ｇｅｎｅｓ＆ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ２６、１２６８−１２８６。Ｆｒｅｅｄ−Ｐａｓｔｏｒ，  Ｗ．Ａ．，  ａｎｄ  Ｐｒｉｖｅｓ，  Ｃ．  （２０１２）．  Ｍｕｔａｎｔ  ｐ５３：  ｏｎｅ  ｎａｍｅ，  ｍａｎｙ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ．  Ｇｅｎｅｓ  ＆  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ２６，  １２６８−１２８６．
【０３３６】
Ｇａｏ、Ｊ．、Ａｋｓｏｙ、ＢＡ、Ｄｏｇｒｕｓｏｚ、Ｕ．、Ｄｒｅｓｄｎｅｒ、Ｇ．、Ｇｒｏｓｓ、Ｂ．、Ｓｕｍｅｒ、ＳＯ、Ｓｕｎ、Ｙ．、Ｊａｃｏｂｓｅｎ、Ａ．、Ｓｉｎｈａ、Ｒ．、Ｌａｒｓｓｏｎ、Ｅ。、等。ｃＢｉｏＰｏｒｔａｌを使用した複雑な癌のゲノミクスと臨床プロファイルの統合分析。Ｓｃｉ  Ｓｉｇｎａｌ  ６、ｐｌ１。    Ｇａｏ，  Ｊ．，  Ａｋｓｏｙ，  Ｂ．Ａ．，  Ｄｏｇｒｕｓｏｚ，  Ｕ．，  Ｄｒｅｓｄｎｅｒ，  Ｇ．，  Ｇｒｏｓｓ，  Ｂ．，  Ｓｕｍｅｒ，  Ｓ．Ｏ．，  Ｓｕｎ，  Ｙ．，  Ｊａｃｏｂｓｅｎ，  Ａ．，  Ｓｉｎｈａ，  Ｒ．，  Ｌａｒｓｓｏｎ，  Ｅ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｖｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｃａｎｃｅｒ  ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｐｒｏｆｉｌｅｓ  ｕｓｉｎｇ  ｔｈｅ  ｃＢｉｏＰｏｒｔａｌ．  Ｓｃｉ  Ｓｉｇｎａｌ  ６，  ｐｌ１．
【０３３７】
ギロチン、Ｓ。、ヤップ、Ｄ。およびル、Ｘ。（２０１０）。Ｓｅｒ３９２での変異は、変異体ｐ５３Ｈ１７５をｍｄｍ２を介した分解に特異的に感受性にします。細胞周期９、１３９０−１３９８。Ｇｉｌｌｏｔｉｎ，  Ｓ．，  Ｙａｐ，  Ｄ．，  ａｎｄ  Ｌｕ，  Ｘ．  （２０１０）．  Ｍｕｔａｔｉｏｎ  ａｔ  Ｓｅｒ３９２  ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ  ｓｅｎｓｉｔｉｚｅｓ  ｍｕｔａｎｔ  ｐ５３Ｈ１７５  ｔｏ  ｍｄｍ２−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ．  Ｃｅｌｌ  ｃｙｃｌｅ  ９，  １３９０−１３９８．
【０３３８】
グレレティ、Ｔ。、ラロッシュ・クラリー、Ａ。、チェアー、Ｖ。、ラガルド、Ｐ。、チボン、Ｆ。、ニュービル、Ａ。、およびイタリアーノ、Ａ。（２０１５）。ＰＲＩＭＡ−１（ＭＥＴ）は、ｐ５３とは無関係に軟部組織肉腫細胞の死を誘導します。ＢＭＣがん１５、６８４。Ｇｒｅｌｌｅｔｙ，  Ｔ．，  Ｌａｒｏｃｈｅ−Ｃｌａｒｙ，  Ａ．，  Ｃｈａｉｒｅ，  Ｖ．，  Ｌａｇａｒｄｅ，  Ｐ．，  Ｃｈｉｂｏｎ，  Ｆ．，  Ｎｅｕｖｉｌｌｅ，  Ａ．，  ａｎｄ  Ｉｔａｌｉａｎｏ，  Ａ．  （２０１５）．  ＰＲＩＭＡ−１（ＭＥＴ）  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｄｅａｔｈ  ｉｎ  ｓｏｆｔ−ｔｉｓｓｕｅ  ｓａｒｃｏｍａｓ  ｃｅｌｌ  ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｏｆ  ｐ５３．  ＢＭＣ  ｃａｎｃｅｒ  １５，  ６８４．
【０３３９】
ヘレディア−モヤ、Ｊ。、およびカーク、Ｋ．Ｌ。（２００８）。ヒ素−ビオチン複合体の改良された合成。生物有機化学および医薬品化学１６、５７４３−５７４６。Ｈｅｒｅｄｉａ−Ｍｏｙａ，  Ｊ．，  ａｎｄ  Ｋｉｒｋ，  Ｋ．Ｌ．  （２００８）．  Ａｎ  ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ａｒｓｅｎｉｃ−ｂｉｏｔｉｎ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ．  Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １６，  ５７４３−５７４６．
【０３４０】
Ｈｕ、Ｊ．、Ｌｉｕ、Ｙ．Ｆ．、Ｗｕ、Ｃ．Ｆ．、Ｘｕ、Ｆ．、Ｓｈｅｎ、Ｚ．Ｘ．、Ｚｈｕ、Ｙ．Ｍ．、Ｌｉ、Ｊ．Ｍ．、Ｔａｎｇ、Ｗ．、Ｚｈａｏ、Ｗ．Ｌ．、Ｗｕ、Ｗ。、他（２００９）。新たに診断された急性前骨髄球性白血病におけるオールトランスレチノイン酸／三酸化ヒ素ベースの治療の長期有効性と安全性。アメリカ合衆国国立科学アカデミーの議事録１０６、３３４２−３３４７。Ｈｕ，  Ｊ．，  Ｌｉｕ，  Ｙ．Ｆ．，  Ｗｕ，  Ｃ．Ｆ．，  Ｘｕ，  Ｆ．，  Ｓｈｅｎ，  Ｚ．Ｘ．，  Ｚｈｕ，  Ｙ．Ｍ．，  Ｌｉ，  Ｊ．Ｍ．，  Ｔａｎｇ，  Ｗ．，  Ｚｈａｏ，  Ｗ．Ｌ．，  Ｗｕ，  Ｗ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２００９）．  Ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ａｎｄ  ｓａｆｅｔｙ  ｏｆ  ａｌｌ−ｔｒａｎｓ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ／ａｒｓｅｎｉｃ  ｔｒｉｏｘｉｄｅ−ｂａｓｅｄ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｎｅｗｌｙ  ｄｉａｇｎｏｓｅｄ  ａｃｕｔｅ  ｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  １０６，  ３３４２−３３４７．
【０３４１】
Ｊｏｅｒｇｅｒ、Ａ．Ｃ．およびＦｅｒｓｈｔ、Ａ．Ｒ．  （２００７）。構造機能救助：一般的なｐ５３癌変異体の多様な性質。Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２６、２２２６−２２４２。Ｊｏｅｒｇｅｒ，  Ａ．Ｃ．，  ａｎｄ  Ｆｅｒｓｈｔ，  Ａ．Ｒ．  （２００７）．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ｆｕｎｃｔｉｏｎ−ｒｅｓｃｕｅ：  ｔｈｅ  ｄｉｖｅｒｓｅ  ｎａｔｕｒｅ  ｏｆ  ｃｏｍｍｏｎ  ｐ５３  ｃａｎｃｅｒ  ｍｕｔａｎｔｓ．  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２６，  ２２２６−２２４２．
【０３４２】
Ｊｏｅｒｇｅｒ、Ａ．Ｃ．およびＦｅｒｓｈｔ、Ａ．Ｒ．  （２０１６）。ｐ５３経路：起源、がんの不活化、および新たな治療アプローチ。生化学の年次レビュー８５、３７５−４０４。Ｊｏｅｒｇｅｒ，  Ａ．Ｃ．，  ａｎｄ  Ｆｅｒｓｈｔ，  Ａ．Ｒ．  （２０１６）．  Ｔｈｅ  ｐ５３  Ｐａｔｈｗａｙ：  Ｏｒｉｇｉｎｓ，  Ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ，  ａｎｄ  Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ．  Ａｎｎｕａｌ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ８５，  ３７５−４０４．
【０３４３】
カンドス、Ｃ、マクレラン、メリーランド州、バンディン、Ｆ、イェ、Ｋ、ニウ、Ｂ、ル、Ｃ、シェ、Ｍ、チャン、Ｑ、マクマイケル、ＪＦ、ウィツァルコウスキー、ＭＡ、他（２０１３）。１２の主要ながんのタイプにおける変異の状況と重要性。Ｎａｔｕｒｅ  ５０２、３３３−３３９。Ｋａｎｄｏｔｈ，  Ｃ．，  ＭｃＬｅｌｌａｎ，  Ｍ．Ｄ．，  Ｖａｎｄｉｎ，  Ｆ．，  Ｙｅ，  Ｋ．，  Ｎｉｕ，  Ｂ．，  Ｌｕ，  Ｃ．，  Ｘｉｅ，  Ｍ．，  Ｚｈａｎｇ，  Ｑ．，  ＭｃＭｉｃｈａｅｌ，  Ｊ．Ｆ．，  Ｗｙｃｚａｌｋｏｗｓｋｉ，  Ｍ．Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１３）．  Ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ  ｌａｎｄｓｃａｐｅ  ａｎｄ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ａｃｒｏｓｓ  １２  ｍａｊｏｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｙｐｅｓ．  Ｎａｔｕｒｅ  ５０２，  ３３３−３３９．
【０３４４】
Ｋｈｏｏ、Ｋ．Ｈ．、Ｖｅｒｍａ、Ｃ．Ｓ。およびＬａｎｅ、Ｄ．Ｐ。（２０１４）。ｐ５３経路への薬物投与：臨床効果への道筋を理解する。ＮａｔｕｒｅはＤｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  １３、２１７−２３６をレビューしています。Ｋｈｏｏ，  Ｋ．Ｈ．，  Ｖｅｒｍａ，  Ｃ．Ｓ．，  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，  Ｄ．Ｐ．  （２０１４）．  Ｄｒｕｇｇｉｎｇ  ｔｈｅ  ｐ５３  ｐａｔｈｗａｙ：  ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ  ｔｈｅ  ｒｏｕｔｅ  ｔｏ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｅｆｆｉｃａｃｙ．  Ｎａｔｕｒｅ  ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｄｒｕｇ  ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  １３，  ２１７−２３６．
【０３４５】
ランバート、Ｊ．Ｍ。、ゴルゾフ、Ｐ。、ヴェプリントセフ、Ｄ．Ｂ。、ソデルクヴィスト、Ｍ。、セガーバック、Ｄ。、ベルグマン、Ｊ。、ファーシュト、Ａ．Ｒ。、ハイナウト、Ｐ。、ウィーマン、Ｋ．Ｇ。、およびビコフ、Ｖ．Ｊ。（２００９）。ＰＲＩＭＡ−１は、コアドメインへの共有結合によって変異型ｐ５３を再活性化します。がん細胞１５、３７６−３８８。Ｌａｍｂｅｒｔ，  Ｊ．Ｍ．，  Ｇｏｒｚｏｖ，  Ｐ．，  Ｖｅｐｒｉｎｔｓｅｖ，  Ｄ．Ｂ．，  Ｓｏｄｅｒｑｖｉｓｔ，  Ｍ．，  Ｓｅｇｅｒｂａｃｋ，  Ｄ．，  Ｂｅｒｇｍａｎ，  Ｊ．，  Ｆｅｒｓｈｔ，  Ａ．Ｒ．，  Ｈａｉｎａｕｔ，  Ｐ．，  Ｗｉｍａｎ，  Ｋ．Ｇ．，  ａｎｄ  Ｂｙｋｏｖ，  Ｖ．Ｊ．  （２００９）．  ＰＲＩＭＡ−１  ｒｅａｃｔｉｖａｔｅｓ  ｍｕｔａｎｔ  ｐ５３  ｂｙ  ｃｏｖａｌｅｎｔ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｃｏｒｅ  ｄｏｍａｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  １５，  ３７６−３８８．
【０３４６】
リー、Ｄ。、マルシェンコ、Ｎ．Ｄ。およびモル、Ｕ．Ｍ。（２０１１）。ＳＡＨＡは、ＨＤＡＣ６−Ｈｓｐ９０シャペロン軸の阻害を介して変異型ｐ５３を不安定化することにより、変異型ｐ５３がん細胞に優先的な細胞毒性を示します。細胞死と分化１８、１９０４−１９１３。  Ｌｉ，  Ｄ．，  Ｍａｒｃｈｅｎｋｏ，  Ｎ．Ｄ．，  ａｎｄ  Ｍｏｌｌ，  Ｕ．Ｍ．  （２０１１）．  ＳＡＨＡ  ｓｈｏｗｓ  ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｉｎ  ｍｕｔａｎｔ  ｐ５３  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｄｅｓｔａｂｉｌｉｚｉｎｇ  ｍｕｔａｎｔ  ｐ５３  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＨＤＡＣ６−Ｈｓｐ９０  ｃｈａｐｅｒｏｎｅ  ａｘｉｓ．  Ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  ａｎｄ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  １８，  １９０４−１９１３．
【０３４７】
リンズリー、Ｒ．Ｃ。、セイバー、Ｗ．、３月、Ｂ．Ｇ。、レッド、Ｒ。、ワン、Ｔ。、ハーゲンソン、Ｍ．Ｄ。、グラウマン、Ｐ．Ｖ。、フー、Ｚ．Ｈ。、スペルマン、Ｓ．Ｒ。、リー、Ｓ．Ｊ。、他（２０１７）。幹細胞移植後の骨髄異形成症候群の予後変異。ニューイングランド医学ジャーナル３７６、５３６−５４７。Ｌｉｎｄｓｌｅｙ，  Ｒ．Ｃ．，  Ｓａｂｅｒ，  Ｗ．，  Ｍａｒ，  Ｂ．Ｇ．，  Ｒｅｄｄ，  Ｒ．，  Ｗａｎｇ，  Ｔ．，  Ｈａａｇｅｎｓｏｎ，  Ｍ．Ｄ．，  Ｇｒａｕｍａｎ，  Ｐ．Ｖ．，  Ｈｕ，  Ｚ．Ｈ．，  Ｓｐｅｌｌｍａｎ，  Ｓ．Ｒ．，  Ｌｅｅ，  Ｓ．Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１７）．  Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｔｉｃ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ  ａｆｔｅｒ  Ｓｔｅｍ−Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．  Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ３７６，  ５３６−５４７．
【０３４８】
リュー、Ｘ。、ウィルケン、Ｒ。、ジョーガー、Ａ．Ｃ。、チャックオーリー、Ｉ．Ｓ。、アミン、Ｊ。、スペンサー、Ｊ。、およびファーシュト、Ａ．Ｒ。（２０１３）。小分子は、癌細胞における変異型ｐ５３の再活性化を誘発した。核酸研究４１、６０３４−６０４４。Ｌｉｕ，  Ｘ．，  Ｗｉｌｃｋｅｎ，  Ｒ．，  Ｊｏｅｒｇｅｒ，  Ａ．Ｃ．，  Ｃｈｕｃｋｏｗｒｅｅ，  Ｉ．Ｓ．，  Ａｍｉｎ，  Ｊ．，  Ｓｐｅｎｃｅｒ，  Ｊ．，  ａｎｄ  Ｆｅｒｓｈｔ，  Ａ．Ｒ．  （２０１３）．  Ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｒｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｕｔａｎｔ  ｐ５３  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ．  Ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４１，  ６０３４−６０４４．  
【０３４９】
ロココ、Ｆ。、アビサティ、Ｇ。、ビグネッティ、Ｍ。、シーデ、Ｃ。、オーランド、ＳＭ、イアコベリ、Ｓ。、フェラーラ、Ｆ。、ファジ、Ｐ。、チッコーニ、Ｌ。、ディＢｏｎａ、Ｅ．、ｅｔ  ａｌ。（２０１３）。急性前骨髄球性白血病に対するレチノイン酸と三酸化ヒ素。ニューイングランド医学ジャーナル３６９、１１１−１２１。Ｌｏ−Ｃｏｃｏ，  Ｆ．，  Ａｖｖｉｓａｔｉ，  Ｇ．，  Ｖｉｇｎｅｔｔｉ，  Ｍ．，  Ｔｈｉｅｄｅ，  Ｃ．，  Ｏｒｌａｎｄｏ，  Ｓ．Ｍ．，  Ｉａｃｏｂｅｌｌｉ，  Ｓ．，  Ｆｅｒｒａｒａ，  Ｆ．，  Ｆａｚｉ，  Ｐ．，  Ｃｉｃｃｏｎｉ，  Ｌ．，  Ｄｉ  Ｂｏｎａ，  Ｅ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１３）．  Ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ａｎｄ  ａｒｓｅｎｉｃ  ｔｒｉｏｘｉｄｅ  ｆｏｒ  ａｃｕｔｅ  ｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．  Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ３６９，  １１１−１２１．
【０３５０】
Ｌｕ、Ｍ．、Ｂｒｅｙｓｅｎｓ、Ｈ．、Ｓａｌｔｅｒ、Ｖ．、Ｚｈｏｎｇ、Ｓ．、Ｈｕ、Ｙ．、Ｂａｅｒ、Ｃ．、Ｒａｔｎａｙａｋａ、Ｉ．、Ｓｕｌｌｉｖａｎ、Ａ．、Ｂｒｏｗｎ、ＮＲ、Ｅｎｄｉｃｏｔｔ、Ｊ  、等。（２０１３）。ＭＤＭ２およびサイクリンＢ１  ／  ＣＤＫ１リン酸化核ｉＡＳＰＰを阻害することにより、ヒトメラノーマ細胞のｐ５３機能を回復します。がん細胞２３、６１８−６３３。Ｌｕ，  Ｍ．，  Ｂｒｅｙｓｓｅｎｓ，  Ｈ．，  Ｓａｌｔｅｒ，  Ｖ．，  Ｚｈｏｎｇ，  Ｓ．，  Ｈｕ，  Ｙ．，  Ｂａｅｒ，  Ｃ．，  Ｒａｔｎａｙａｋａ，  Ｉ．，  Ｓｕｌｌｉｖａｎ，  Ａ．，  Ｂｒｏｗｎ，  Ｎ．Ｒ．，  Ｅｎｄｉｃｏｔｔ，  Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１３）．  Ｒｅｓｔｏｒｉｎｇ  ｐ５３  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ  ＭＤＭ２  ａｎｄ  ｃｙｃｌｉｎ  Ｂ１／ＣＤＫ１−ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｉＡＳＰＰ．  Ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ２３，  ６１８−６３３．  
【０３５１】
Ｌｕ、Ｍ．、Ｍｕｅｒｓ、ＭＲ、およびＬｕ、Ｘ。（２０１６ａ）。ＳＴＲａＮＤの紹介：非ＤＮＡ結合である転写調節因子の往復。Ｎａｔｕｒｅは、分子細胞生物学１７、５２３−５３２をレビューしています。Ｌｕ，  Ｍ．，  Ｍｕｅｒｓ，  Ｍ．Ｒ．，  ａｎｄ  Ｌｕ，  Ｘ．  （２０１６ａ）．  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｉｎｇ  ＳＴＲａＮＤｓ：  ｓｈｕｔｔｌｉｎｇ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ  ｔｈａｔ  ａｒｅ  ｎｏｎ−ＤＮＡ  ｂｉｎｄｉｎｇ．  Ｎａｔｕｒｅ  ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｅｌｌ  ｂｉｏｌｏｇｙ  １７，  ５２３−５３２．  
【０３５２】
Ｌｕ、Ｍ．、Ｂｒｅｙｓｅｎｓ、Ｈ．、Ｓａｌｔｅｒ、Ｖ．、Ｚｈｏｎｇ、Ｓ．、Ｈｕ、Ｙ．、Ｂａｅｒ、Ｃ．、Ｒａｔｎａｙａｋａ、Ｉ．、Ｓｕｌｌｉｖａｎ、Ａ．、Ｂｒｏｗｎ、ＮＲ、Ｅｎｄｉｃｏｔｔ、Ｊ  、等。（２０１３）。ＭＤＭ２およびサイクリンＢ１  ／  ＣＤＫ１リン酸化核ｉＡＳＰＰを阻害することにより、ヒトメラノーマ細胞のｐ５３機能を回復します。がん細胞２３、６１８−６３３。Ｌｕ，  Ｍ．，  Ｂｒｅｙｓｓｅｎｓ，  Ｈ．，  Ｓａｌｔｅｒ，  Ｖ．，  Ｚｈｏｎｇ，  Ｓ．，  Ｈｕ，  Ｙ．，  Ｂａｅｒ，  Ｃ．，  Ｒａｔｎａｙａｋａ，  Ｉ．，  Ｓｕｌｌｉｖａｎ，  Ａ．，  Ｂｒｏｗｎ，  Ｎ．  Ｒ．，  Ｅｎｄｉｃｏｔｔ，  Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１３）．  Ｒｅｓｔｏｒｉｎｇ  ｐ５３  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ  ＭＤＭ２  ａｎｄ  ｃｙｃｌｉｎ  Ｂ１／ＣＤＫ１−ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｉＡＳＰＰ．  Ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ２３，  ６１８−６３３．
【０３５３】
Ｌｕ、Ｍ．、Ｚａｋ、Ｊ．、Ｃｈｅｎ、Ｓ．、Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｐｕｌｉｄｏ、Ｌ．、Ｓｅｖｅｒｓｏｎ、ＤＴ、Ｅｎｄｉｃｏｔｔ、Ｊ．、Ｐｏｎｔｉｎｇ、ＣＰ、Ｓｃｈｏｆｉｅｌｄ、ＣＪ、およびＬｕ、Ｘ（２０１４）  。アンキリンリピートにおけるＲａｎＧＤＰバインディングのコードは、核輸入経路を定義します。セル１５７、１１３０−１１４５。  Ｌｕ，  Ｍ．，  Ｚａｋ，  Ｊ．，  Ｃｈｅｎ，  Ｓ．，  Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｐｕｌｉｄｏ，  Ｌ．，  Ｓｅｖｅｒｓｏｎ，  Ｄ．Ｔ．，  Ｅｎｄｉｃｏｔｔ，  Ｊ．，  Ｐｏｎｔｉｎｇ，  Ｃ．Ｐ．，  Ｓｃｈｏｆｉｅｌｄ，  Ｃ．Ｊ．，  ａｎｄ  Ｌｕ，  Ｘ．  （２０１４）．  Ａ  ｃｏｄｅ  ｆｏｒ  ＲａｎＧＤＰ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｉｎ  ａｎｋｙｒｉｎ  ｒｅｐｅａｔｓ  ｄｅｆｉｎｅｓ  ａ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｉｍｐｏｒｔ  ｐａｔｈｗａｙ．  Ｃｅｌｌ  １５７，  １１３０−１１４５．
【０３５４】
Ｌｕ、Ｔ．、Ｚｏｕ、Ｙ．、Ｘｕ、Ｇ．、Ｐｏｔｔｅｒ、ＪＡ、テイラー、ＧＬ、Ｄｕａｎ、Ｑ．、Ｙａｎｇ、Ｑ．、Ｘｉｏｎｇ、Ｈ．、Ｑｉｕ、Ｈ．、Ｙｅ、Ｄ。、等。（２０１６ｂ）。ＰＲＩＭＡ−１Ｍｅｔは、ＭＥＫを標的とすることにより、ｐ５３とは無関係に大腸癌を抑制します。腫瘍標的。Ｌｕ，  Ｔ．，  Ｚｏｕ，  Ｙ．，  Ｘｕ，  Ｇ．，  Ｐｏｔｔｅｒ，  Ｊ．Ａ．，  Ｔａｙｌｏｒ，  Ｇ．Ｌ．，  Ｄｕａｎ，  Ｑ．，  Ｙａｎｇ，  Ｑ．，  Ｘｉｏｎｇ，  Ｈ．，  Ｑｉｕ，  Ｈ．，  Ｙｅ，  Ｄ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１６ｂ）．  ＰＲＩＭＡ−１Ｍｅｔ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｏｆ  ｐ５３  ｂｙ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＭＥＫ．  Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ．
【０３５５】
Ｎ．ルカシュチュク、およびＫ．Ｈ．  （２００７）。変異ｐ５３のユビキチン化と分解。分子細胞生物学２７、８２８４−８２９５。Ｌｕｋａｓｈｃｈｕｋ，  Ｎ．，  ａｎｄ  Ｖｏｕｓｄｅｎ，  Ｋ．Ｈ．  （２００７）．  Ｕｂｉｑｕｉｔｉｎａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｕｔａｎｔ  ｐ５３．  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ２７，  ８２８４−８２９５．
【０３５６】
マーティンズ、Ｃ．Ｐ。、ブラウン−スウィガート、Ｌ。およびエヴァン、Ｇ。（２００６）。腫瘍におけるｐ５３修復の治療効果のモデリング。セル１２７、１３２３−１３３４。Ｍａｒｔｉｎｓ，  Ｃ．Ｐ．，  Ｂｒｏｗｎ−Ｓｗｉｇａｒｔ，  Ｌ．，  ａｎｄ  Ｅｖａｎ，  Ｇ．Ｉ．  （２００６）．  Ｍｏｄｅｌｉｎｇ  ｔｈｅ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ｐ５３  ｒｅｓｔｏｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｕｍｏｒｓ．  Ｃｅｌｌ  １２７，  １３２３−１３３４．
【０３５７】
Ｍｕｌｌｅｒ、Ｐ．Ａ．、Ｃａｓｗｅｌｌ、ＰＴ、Ｄｏｙｌｅ、Ｂ．、Ｉｗａｎｉｃｋｉ、Ｍ．Ｐ．、Ｔａｎ、Ｅ．Ｈ．、Ｋａｒｉｍ、Ｓ．、Ｌｕｋａｓｈｃｈｕｋ、Ｎ．、Ｇｉｌｌｅｓｐｉｅ、Ｄ．Ａ．、Ｌｕｄｗｉｇ、Ｒ．Ｌ．、Ｇｏｓｓｅｌｉｎ、Ｐ。、他（２００９）。ミュータントｐ５３は、インテグリンのリサイクルを促進することで侵入を促進します。セル１３９、１３２７−１３４１。Ｍｕｌｌｅｒ，  Ｐ．Ａ．，  Ｃａｓｗｅｌｌ，  Ｐ．Ｔ．，  Ｄｏｙｌｅ，  Ｂ．，  Ｉｗａｎｉｃｋｉ，  Ｍ．Ｐ．，  Ｔａｎ，  Ｅ．Ｈ．，  Ｋａｒｉｍ，  Ｓ．，  Ｌｕｋａｓｈｃｈｕｋ，  Ｎ．，  Ｇｉｌｌｅｓｐｉｅ，  Ｄ．Ａ．，  Ｌｕｄｗｉｇ，  Ｒ．Ｌ．，  Ｇｏｓｓｅｌｉｎ，  Ｐ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２００９）．  Ｍｕｔａｎｔ  ｐ５３  ｄｒｉｖｅｓ  ｉｎｖａｓｉｏｎ  ｂｙ  ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ  ｉｎｔｅｇｒｉｎ  ｒｅｃｙｃｌｉｎｇ．  Ｃｅｌｌ  １３９，  １３２７−１３４１．
【０３５８】
Ｍｕｌｌｅｒ、ＰＡ、およびＶｏｕｓｄｅｎ、Ｋ．Ｈ。（２０１３）。癌におけるｐ５３変異。自然細胞生物学１５、２−８。Ｍｕｌｌｅｒ，  Ｐ．Ａ．，  ａｎｄ  Ｖｏｕｓｄｅｎ，  Ｋ．Ｈ．  （２０１３）．  ｐ５３  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｎａｔｕｒｅ  ｃｅｌｌ  ｂｉｏｌｏｇｙ  １５，  ２−８．
【０３５９】
Ｍｕｌｌｅｒ、ＰＡおよびＶｏｕｓｄｅｎ、Ｋ．Ｈ。（２０１４）。癌における変異型ｐ５３：新しい機能と治療の機会。がん細胞２５、３０４−３１７。Ｍｕｌｌｅｒ，  Ｐ．Ａ．，  ａｎｄ  Ｖｏｕｓｄｅｎ，  Ｋ．Ｈ．  （２０１４）．  Ｍｕｔａｎｔ  ｐ５３  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ：  ｎｅｗ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ．  Ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ２５，  ３０４−３１７．
【０３６０】
パラレス、Ａ。、ランジャン、Ａ．、Ｉｙｅｒ、Ｓ．Ｖ。、パディ、Ｓ。、ウィアー、Ｓ．Ｊ。、ロイ、Ａ。、および岩熊、Ｔ。（２０１６）。ＤＮＡＪＡ１は、誤って折り畳まれた変異体ｐ５３の運命をメバロン酸経路を介して制御します。自然細胞生物学１８、１２３３−１２４３。Ｐａｒｒａｌｅｓ，  Ａ．，  Ｒａｎｊａｎ，  Ａ．，  Ｉｙｅｒ，  Ｓ．Ｖ．，  Ｐａｄｈｙｅ，  Ｓ．，  Ｗｅｉｒ，  Ｓ．Ｊ．，  Ｒｏｙ，  Ａ．，  ａｎｄ  Ｉｗａｋｕｍａ，  Ｔ．  （２０１６）．  ＤＮＡＪＡ１  ｃｏｎｔｒｏｌｓ  ｔｈｅ  ｆａｔｅ  ｏｆ  ｍｉｓｆｏｌｄｅｄ  ｍｕｔａｎｔ  ｐ５３  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｔｈｅ  ｍｅｖａｌｏｎａｔｅ  ｐａｔｈｗａｙ．  Ｎａｔｕｒｅ  ｃｅｌｌ  ｂｉｏｌｏｇｙ  １８，  １２３３−１２４３．  
【０３６１】
パティカ、Ｍ。、シャリフィ、Ｚ。、ペトレッカ、Ｋ。、マシュアレス、Ｊ。、ジャン＝クロード、Ｂ。、およびサブリ、Ｓ。（２０１６）。ＰＲＩＭＡ−１ＭＥＴに対する感受性は、ｐ５３の状態に関係なく、ヒト神経膠芽腫細胞および神経膠芽腫幹細胞のＭＧＭＴの低下に関連しています。腫瘍標的。Ｐａｔｙｋａ，  Ｍ．，  Ｓｈａｒｉｆｉ，  Ｚ．，  Ｐｅｔｒｅｃｃａ，  Ｋ．，  Ｍａｎｓｕｒｅ，  Ｊ．，  Ｊｅａｎ−Ｃｌａｕｄｅ，  Ｂ．，  ａｎｄ  Ｓａｂｒｉ，  Ｓ．  （２０１６）．  Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｔｏ  ＰＲＩＭＡ−１ＭＥＴ  ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｄｅｃｒｅａｓｅｄ  ＭＧＭＴ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ  ｉｒｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｏｆ  ｐ５３  ｓｔａｔｕｓ．  Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ．
【０３６２】
Ｐｕｃａ、Ｒ．、Ｎａｒｄｉｎｏｃｃｈｉ、Ｌ．、Ｐｏｒｒｕ、Ｍ．、Ｓｉｍｏｎ、Ａ．Ｊ．、Ｒｅｃｈａｖｉ、Ｇ．、Ｌｅｏｎｅｔｔｉ、Ｃ．、Ｇｉｖｏｌ、Ｄ。およびＤ’Ｏｒａｚｉ、Ｇ。（２０１１）。亜鉛によってｐ５３のアクティブなコンフォメーションを復元すると、抗がん剤に対する変異型ｐ５３腫瘍細胞の応答が増加します。細胞周期１０、１６７９−１６８９。Ｐｕｃａ，  Ｒ．，  Ｎａｒｄｉｎｏｃｃｈｉ，  Ｌ．，  Ｐｏｒｒｕ，  Ｍ．，  Ｓｉｍｏｎ，  Ａ．Ｊ．，  Ｒｅｃｈａｖｉ，  Ｇ．，  Ｌｅｏｎｅｔｔｉ，  Ｃ．，  Ｇｉｖｏｌ，  Ｄ．，  ａｎｄ  Ｄ’Ｏｒａｚｉ，  Ｇ．  （２０１１）．  Ｒｅｓｔｏｒｉｎｇ  ｐ５３  ａｃｔｉｖｅ  ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｚｉｎｃ  ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ｔｈｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｏｆ  ｍｕｔａｎｔ  ｐ５３  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌｓ  ｔｏ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ｄｒｕｇｓ．  Ｃｅｌｌ  ｃｙｃｌｅ  １０，  １６７９−１６８９．
【０３６３】
ライリーＴ．、ソンタグＥ．、チェンＰ．、およびレバインＡ．（２００８）。ヒトｐ５３調節遺伝子の転写制御。Ｎａｔｕｒｅは、分子細胞生物学９、４０２−４１２をレビューしています。Ｒｉｌｅｙ，  Ｔ．，  Ｓｏｎｔａｇ，  Ｅ．，  Ｃｈｅｎ，  Ｐ．，  ａｎｄ  Ｌｅｖｉｎｅ，  Ａ．  （２００８）．  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｐ５３−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｇｅｎｅｓ．  Ｎａｔｕｒｅ  ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｅｌｌ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ９，  ４０２−４１２．
【０３６４】
Ｒｉｐｐｉｎ、Ｔ．Ｍ．、Ｂｙｋｏｖ、Ｖ．Ｊ．、Ｆｒｅｕｎｄ、Ｓ．Ｍ．、Ｓｅｌｉｖａｎｏｖａ、Ｇ．、Ｗｉｍａｎ、Ｋ．Ｇ．およびＦｅｒｓｈｔ、Ａ．Ｒ．  （２００２）。ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよび生細胞におけるｐ５３レスキュー薬ＣＰ−３１３９８の特性。Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２１、２１１９−２１２９。Ｒｉｐｐｉｎ，  Ｔ．Ｍ．，  Ｂｙｋｏｖ，  Ｖ．Ｊ．，  Ｆｒｅｕｎｄ，  Ｓ．Ｍ．，  Ｓｅｌｉｖａｎｏｖａ，  Ｇ．，  Ｗｉｍａｎ，  Ｋ．Ｇ．，  ａｎｄ  Ｆｅｒｓｈｔ，  Ａ．Ｒ．  （２００２）．  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐ５３−ｒｅｓｃｕｅ  ｄｒｕｇ  ＣＰ−３１３９８  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｌｉｖｉｎｇ  ｃｅｌｌｓ．  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２１，  ２１１９−２１２９．
【０３６５】
シューメーカー、Ｒ．Ｈ。（２００６）。ＮＣＩ６０ヒト腫瘍細胞株抗がん剤スクリーニング。ＮａｔｕｒｅはＣａｎｃｅｒ  ６、８１３−８２３をレビューしています。Ｓｈｏｅｍａｋｅｒ，  Ｒ．Ｈ．  （２００６）．  Ｔｈｅ  ＮＣＩ６０  ｈｕｍａｎ  ｔｕｍｏｕｒ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ｄｒｕｇ  ｓｃｒｅｅｎ．  Ｎａｔｕｒｅ  ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ  ６，  ８１３−８２３．
【０３６６】
ソラーニ、Ａ。、ヤンゼン、ＤＭ、ジョンソン、ＬＭ、リンドグレン、ＡＧ、タイ−クイングエン、Ａ。、ティウリン、Ｅ。、ソリアガ、ＡＢ、Ｌｕ、Ｊ。、ジャン、Ｌ。、フォール、ＫＦ  、等。（２０１６）。設計されたｐ５３凝集阻害剤は、卵巣癌におけるｐ５３腫瘍抑制を救います。がん細胞２９、９０−１０３。Ｓｏｒａｇｎｉ，  Ａ．，  Ｊａｎｚｅｎ，  Ｄ．Ｍ．，  Ｊｏｈｎｓｏｎ，  Ｌ．Ｍ．，  Ｌｉｎｄｇｒｅｎ，  Ａ．Ｇ．，  Ｔｈａｉ−Ｑｕｙｎｈ  Ｎｇｕｙｅｎ，  Ａ．，  Ｔｉｏｕｒｉｎ，  Ｅ．，  Ｓｏｒｉａｇａ，  Ａ．Ｂ．，  Ｌｕ，  Ｊ．，  Ｊｉａｎｇ，  Ｌ．，  Ｆａｕｌｌ，  Ｋ．Ｆ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１６）．  Ａ  Ｄｅｓｉｇｎｅｄ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｐ５３  Ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｃｕｅｓ  ｐ５３  Ｔｕｍｏｒ  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ．  Ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ２９，  ９０−１０３．
【０３６７】
テズリン、Ｂ。、デカンプ、Ｇ。、モロー、Ｐ。、マイガ、Ｓ。、ロード、Ｌ。、ゴドン、Ｃ。、マリノー・ランボット、Ｓ。、ウリエ、Ｔ。、ル・グイユ、Ｓ。、アミオット、Ｍ。、等。（２０１４）。ＰＲＩＭＡ−１Ｍｅｔは、ＧＳＨ  ／  ＲＯＳバランスを損なうことにより、ｐ５３とは無関係に骨髄腫細胞死を誘導します。血１２４、１６２６−１６３６。Ｔｅｓｓｏｕｌｉｎ，  Ｂ．，  Ｄｅｓｃａｍｐｓ，  Ｇ．，  Ｍｏｒｅａｕ，  Ｐ．，  Ｍａｉｇａ，  Ｓ．，  Ｌｏｄｅ，  Ｌ．，  Ｇｏｄｏｎ，  Ｃ．，  Ｍａｒｉｏｎｎｅａｕ−Ｌａｍｂｏｔ，  Ｓ．，  Ｏｕｌｌｉｅｒ，  Ｔ．，  Ｌｅ  Ｇｏｕｉｌｌ，  Ｓ．，  Ａｍｉｏｔ，  Ｍ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１４）．  ＰＲＩＭＡ−１Ｍｅｔ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｍｙｅｌｏｍａ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｏｆ  ｐ５３  ｂｙ  ｉｍｐａｉｒｉｎｇ  ｔｈｅ  ＧＳＨ／ＲＯＳ  ｂａｌａｎｃｅ．  Ｂｌｏｏｄ  １２４，  １６２６−１６３６．
【０３６８】
ワシレフ、ＬＴ、Ｖｕ、ＢＴ、グレーブス、Ｂ。、カルバハル、Ｄ。、ポドラスキー、Ｆ。、フィリポビッチ、Ｚ。、コング、Ｎ。、カムムロット、Ｕ。、ルカーチ、Ｃ。、クライン、Ｃ。、等。（２００４）。ＭＤＭ２の小分子拮抗薬によるｐ５３経路のｉｎ  ｖｉｖｏ活性化。Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０３、８４４−８４８。Ｖａｓｓｉｌｅｖ，  Ｌ．Ｔ．，  Ｖｕ，  Ｂ．Ｔ．，  Ｇｒａｖｅｓ，  Ｂ．，  Ｃａｒｖａｊａｌ，  Ｄ．，  Ｐｏｄｌａｓｋｉ，  Ｆ．，  Ｆｉｌｉｐｏｖｉｃ，  Ｚ．，  Ｋｏｎｇ，  Ｎ．，  Ｋａｍｍｌｏｔｔ，  Ｕ．，  Ｌｕｋａｃｓ，  Ｃ．，  Ｋｌｅｉｎ，  Ｃ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２００４）．  Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐ５３  ｐａｔｈｗａｙ  ｂｙ  ｓｍａｌｌ−ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ  ｏｆ  ＭＤＭ２．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０３，  ８４４−８４８．
【０３６９】
ベンチュラ、Ａ。、キルシュ、ＤＧ、マクラフリン、ＭＥ、チューブソン、ＤＡ、グリム、Ｊ。、リントー、Ｌ。、ニューマン、Ｊ。、レック、ＥＥ、ワイスレーダー、Ｒ。、およびジャックス、Ｔ。（  ２００７）。ｐ５３機能の回復により、ｉｎ  ｖｉｖｏで腫瘍が退縮します。Ｎａｔｕｒｅ  ４４５、６６１−６６５。Ｖｅｎｔｕｒａ，  Ａ．，  Ｋｉｒｓｃｈ，  Ｄ．Ｇ．，  ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ，  Ｍ．Ｅ．，  Ｔｕｖｅｓｏｎ，  Ｄ．Ａ．，  Ｇｒｉｍｍ，  Ｊ．，  Ｌｉｎｔａｕｌｔ，  Ｌ．，  Ｎｅｗｍａｎ，  Ｊ．，  Ｒｅｃｚｅｋ，  Ｅ．Ｅ．，  Ｗｅｉｓｓｌｅｄｅｒ，  Ｒ．，  ａｎｄ  Ｊａｃｋｓ，  Ｔ．  （２００７）．  Ｒｅｓｔｏｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐ５３  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｌｅａｄｓ  ｔｏ  ｔｕｍｏｕｒ  ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．  Ｎａｔｕｒｅ  ４４５，  ６６１−６６５．
【０３７０】
フォーゲルスタイン、Ｂ。、レーン、Ｄ。およびレバイン、Ａ．Ｊ。（２０００）。ｐ５３ネットワークをサーフィンします。自然４０８、３０７−３１０。Ｖｏｇｅｌｓｔｅｉｎ，  Ｂ．，  Ｌａｎｅ，  Ｄ．，  ａｎｄ  Ｌｅｖｉｎｅ，  Ａ．Ｊ．  （２０００）．  Ｓｕｒｆｉｎｇ  ｔｈｅ  ｐ５３  ｎｅｔｗｏｒｋ．  Ｎａｔｕｒｅ  ４０８，  ３０７−３１０．
【０３７１】
王、Ｙ。、スー、ＹＡ、フラー、ＭＹ、ジャクソン、ＪＧ、Ｘｉｏｎｇ、Ｓ。、テルジアン、Ｔ。、キンタス−カルダマ、Ａ。、バンクソン、ＪＡ、エルナガー、ＡＫ、およびロザノ、Ｇ．（２０１１）。野生型ｐ５３の発現を元に戻すと、腫瘍の成長は抑制されますが、ｐ５３ミスセンス変異を有するマウスでは腫瘍の退縮は引き起こされません。臨床調査のジャーナル１２１、８９３−９０４。Ｗａｎｇ，  Ｙ．，  Ｓｕｈ，  Ｙ．Ａ．，  Ｆｕｌｌｅｒ，  Ｍ．Ｙ．，  Ｊａｃｋｓｏｎ，  Ｊ．Ｇ．，  Ｘｉｏｎｇ，  Ｓ．，  Ｔｅｒｚｉａｎ，  Ｔ．，  Ｑｕｉｎｔａｓ−Ｃａｒｄａｍａ，  Ａ．，  Ｂａｎｋｓｏｎ，  Ｊ．Ａ．，  Ｅｌ−Ｎａｇｇａｒ，  Ａ．Ｋ．，  ａｎｄ  Ｌｏｚａｎｏ，  Ｇ．  （２０１１）．  Ｒｅｓｔｏｒｉｎｇ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｗｉｌｄ−ｔｙｐｅ  ｐ５３  ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  ｔｕｍｏｒ  ｇｒｏｗｔｈ  ｂｕｔ  ｄｏｅｓ  ｎｏｔ  ｃａｕｓｅ  ｔｕｍｏｒ  ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｗｉｔｈ  ａ  ｐ５３  ｍｉｓｓｅｎｓｅ  ｍｕｔａｔｉｏｎ．  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  １２１，  ８９３−９０４．
【０３７２】
Ｗａｓｓｍａｎ、Ｃ．Ｄ．、Ｂａｒｏｎｉｏ、Ｒ．、Ｄｅｍｉｒ、Ｏ．、Ｗａｌｌｅｎｔｉｎｅ、Ｂ．Ｄ．、Ｃｈｅｎ、Ｃ．Ｋ．、Ｈａｌｌ、Ｌ．Ｖ．、Ｓａｌｅｈｉ、Ｆ．、Ｌｉｎ、Ｄ．Ｗ．、Ｃｈｕｎｇ、Ｂ．Ｐ．、Ｈａｔｆｉｅｌｄ、Ｇ．Ｗ．、ｅｔ  ａｌ。（２０１３）。変異型ｐ５３の再活性化のための一過性に開いたＬ１  ／  Ｓ３ポケットの計算による同定。自然コミュニケーション４、１４０７。Ｗａｓｓｍａｎ，  Ｃ．Ｄ．，  Ｂａｒｏｎｉｏ，  Ｒ．，  Ｄｅｍｉｒ，  Ｏ．，  Ｗａｌｌｅｎｔｉｎｅ，  Ｂ．Ｄ．，  Ｃｈｅｎ，  Ｃ．Ｋ．，  Ｈａｌｌ，  Ｌ．Ｖ．，  Ｓａｌｅｈｉ，  Ｆ．，  Ｌｉｎ，  Ｄ．Ｗ．，  Ｃｈｕｎｇ，  Ｂ．Ｐ．，  Ｈａｔｆｉｅｌｄ，  Ｇ．Ｗ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１３）．  Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｔｒａｎｓｉｅｎｔｌｙ  ｏｐｅｎ  Ｌ１／Ｓ３  ｐｏｃｋｅｔ  ｆｏｒ  ｒｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｕｔａｎｔ  ｐ５３．  Ｎａｔｕｒｅ  ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ４，  １４０７．
【０３７３】
ウェインマン、Ｌ。、ウィシュフセン、Ｊ。、デマ、Ｍ．Ｊ。、ナウマン、Ｕ。、ロス、Ｐ。、ダスマハパトラ、Ｂ。、およびウェラー、Ｍ。（２００８）。新規のｐ５３レスキュー化合物は、ｐ５３依存性成長停止を誘発し、神経膠腫細胞をＡｐｏ２Ｌ  ／  ＴＲＡＩＬ誘導アポトーシスに感受性にします。細胞死と分化１５、７１８−７２９。Ｗｅｉｎｍａｎｎ，  Ｌ．，  Ｗｉｓｃｈｈｕｓｅｎ，  Ｊ．，  Ｄｅｍｍａ，  Ｍ．Ｊ．，  Ｎａｕｍａｎｎ，  Ｕ．，  Ｒｏｔｈ，  Ｐ．，  Ｄａｓｍａｈａｐａｔｒａ，  Ｂ．，  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｅｒ，  Ｍ．  （２００８）．  Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｐ５３  ｒｅｓｃｕｅ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｐ５３−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ａｒｒｅｓｔ  ａｎｄ  ｓｅｎｓｉｔｉｓｅｓ  ｇｌｉｏｍａ  ｃｅｌｌｓ  ｔｏ  Ａｐｏ２Ｌ／ＴＲＡＩＬ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．  Ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  ａｎｄ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  １５，  ７１８−７２９．
【０３７４】
Ｘｕｅ、Ｗ．、Ｚｅｎｄｅｒ、Ｌ．、Ｍｉｅｔｈｉｎｇ、Ｃ．、Ｄｉｃｋｉｎｓ、Ｒ．Ａ．、Ｈｅｒｎａｎｄｏ、Ｅ．、Ｋｒｉｚｈａｎｏｖｓｋｙ、Ｖ．、Ｃｏｒｄｏｎ−Ｃａｒｄｏ、Ｃ．およびＬｏｗｅ、Ｓ．Ｗ．  （２００７）。老化と腫瘍のクリアランスは、マウスの肝臓癌におけるｐ５３の回復によって引き起こされます。Ｎａｔｕｒｅ  ４４５、６５６−６６０。Ｘｕｅ，  Ｗ．，  Ｚｅｎｄｅｒ，  Ｌ．，  Ｍｉｅｔｈｉｎｇ，  Ｃ．，  Ｄｉｃｋｉｎｓ，  Ｒ．Ａ．，  Ｈｅｒｎａｎｄｏ，  Ｅ．，  Ｋｒｉｚｈａｎｏｖｓｋｙ，  Ｖ．，  Ｃｏｒｄｏｎ−Ｃａｒｄｏ，  Ｃ．，  ａｎｄ  Ｌｏｗｅ，  Ｓ．Ｗ．  （２００７）．  Ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｔｕｍｏｕｒ  ｃｌｅａｒａｎｃｅ  ｉｓ  ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ  ｂｙ  ｐ５３  ｒｅｓｔｏｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｕｒｉｎｅ  ｌｉｖｅｒ  ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ．  Ｎａｔｕｒｅ  ４４５，  ６５６−６６０．
【０３７５】
チャン、Ｔ．Ｄ。、チェン、Ｇ．Ｑ。、ワン、Ｚ．Ｇ。、ワン、Ｚ．Ｙ。、チェン、Ｓ．Ｊ。およびチェン、Ｚ。（２００１）。三酸化ヒ素、ＡＰＬの治療薬。Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２０、７１４６−７１５３。Ｚｈａｎｇ，  Ｔ．Ｄ．，  Ｃｈｅｎ，  Ｇ．Ｑ．，  Ｗａｎｇ，  Ｚ．Ｇ．，  Ｗａｎｇ，  Ｚ．Ｙ．，  Ｃｈｅｎ，  Ｓ．Ｊ．，  ａｎｄ  Ｃｈｅｎ，  Ｚ．  （２００１）．  Ａｒｓｅｎｉｃ  ｔｒｉｏｘｉｄｅ，  ａ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｇｅｎｔ  ｆｏｒ  ＡＰＬ．  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２０，  ７１４６−７１５３．
【０３７６】
チャン、Ｘ．Ｗ。、ヤン、Ｘ．Ｊ。、ジョウ、Ｚ．Ｒ。、ヤン、Ｆ．Ｆ。、ウー、Ｚ．Ｙ。、サン、Ｈ．Ｂ。、リャン、Ｗ．Ｘ。、ソング、Ａ．Ｘ。、ラレマンド・ブライテンバッハ、Ｖ。、ジーン、Ｍ。、他（２０１０）。三酸化ヒ素は、ＰＭＬに直接結合することにより、ＰＭＬ−ＲＡＲａｌｐｈａ腫瘍性タンパク質の運命を制御します。Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２８、２４０−２４３。Ｚｈａｎｇ，  Ｘ．Ｗ．，  Ｙａｎ，  Ｘ．Ｊ．，  Ｚｈｏｕ，  Ｚ．Ｒ．，  Ｙａｎｇ，  Ｆ．Ｆ．，  Ｗｕ，  Ｚ．Ｙ．，  Ｓｕｎ，  Ｈ．Ｂ．，  Ｌｉａｎｇ，  Ｗ．Ｘ．，  Ｓｏｎｇ，  Ａ．Ｘ．，  Ｌａｌｌｅｍａｎｄ−Ｂｒｅｉｔｅｎｂａｃｈ，  Ｖ．，  Ｊｅａｎｎｅ，  Ｍ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１０）．  Ａｒｓｅｎｉｃ  ｔｒｉｏｘｉｄｅ  ｃｏｎｔｒｏｌｓ  ｔｈｅ  ｆａｔｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＰＭＬ−ＲＡＲａｌｐｈａ  ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｂｙ  ｄｉｒｅｃｔｌｙ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ＰＭＬ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２８，  ２４０−２４３．
【０３７７】
Ｚｕ、Ｊ．、Ｃｈｅｎ、Ｚ．、Ｌａｌｌｅｍａｎｄ−Ｂｒｅｉｔｅｎｂａｃｈ、Ｖ。およびｄｅ  Ｔｈｅ、Ｈ。（２００２）。急性前骨髄球性白血病がいかにヒ素を復活させたか。ＮａｔｕｒｅはＣａｎｃｅｒ  ２、７０５−７１３をレビューしています。Ｚｈｕ，  Ｊ．，  Ｃｈｅｎ，  Ｚ．，  Ｌａｌｌｅｍａｎｄ−Ｂｒｅｉｔｅｎｂａｃｈ，  Ｖ．，  ａｎｄ  ｄｅ  Ｔｈｅ，  Ｈ．  （２００２）．  Ｈｏｗ  ａｃｕｔｅ  ｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋａｅｍｉａ  ｒｅｖｉｖｅｄ  ａｒｓｅｎｉｃ．  Ｎａｔｕｒｅ  ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ  ２，  ７０５−７１３．
【０３７８】
【表１６−１】
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【０３７９】
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【０４８７】
【表１７−５３】
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【０４８８】
【表１７−５４】
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【０４８９】
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【０４９０】
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【０４９１】
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【０４９３】
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【０４９６】
【表１７−６２】
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【０４９７】
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【０４９８】
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【０４９９】
【表１７−６５】
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【０５００】
【表１７−６６】
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【０５０１】
【表１７−６７】
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【０５０２】
【表１７−６８】
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【０５０３】
【表１７−６９】
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【０５０４】
【表１７−７０】
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【０５０５】
【表１７−７１】
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【０５０６】
【表１７−７２】
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【０５０７】
【表１７−７３】
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【０５０８】
【表１７−７４】
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【０５０９】
【表１７−７５】
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【０５１０】
【表１７−７６】
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【０５１１】
【表１７−７７】
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【０５１２】
【表１７−７８】
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【０５１３】
【表１７−７９】
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【０５１４】
【表１７−８０】
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【０５１５】
【表１７−８１】
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【０５１６】
【表１７−８２】
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【０５１７】
【表１７−８３】
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【０５１８】
【表１７−８４】
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【０５１９】
【表１７−８５】
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【０５２０】
【表１７−８６】
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【０５２１】
【表１７−８７】
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【０５２２】
【表１７−８８】
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【０５２３】
【表１７−８９】
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【０５２４】
【表１７−９０】
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【０５２５】
【表１７−９１】
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【０５２６】
【表１７−９２】
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【０５２７】
【表１７−９３】
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【０５２８】
【表１７−９４】
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【０５２９】
【表１７−９５】
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【０５３０】
【表１７−９６】
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【０５３１】
【表１７−９７】
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【０５３２】
【表１７−９８】
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【０５３３】
【表１７−９９】
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【０５３４】
【表１７−１００】
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【０５３５】
【表１７−１０１】
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【０５３６】
【表１７−１０２】
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【０５３７】
【表１７−１０３】
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【０５３８】
【表１７−１０４】
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【０５３９】
【表１７−１０５】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７】
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【図４８】
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【図４９】
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【図５０】
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【図５１】
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【図５２】
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【図５３】
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【図５４】
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【図５５】
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【図５６】
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【図５７】
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【図５８】
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【図５９】
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【図６０】
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【図６１】
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【図６２】
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【図６３】
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【図６４】
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【図６５】
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【図６６】
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【図６７】
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【図６８】
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【図６９】
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【図７０】
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【図７１】
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【手続補正書】
【提出日】令和3年4月26日(2021.4.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＰＡＮＤＡポケット、ＰＡＮＤＡ剤、およびＰＡＮＤＡポケットとＰＡＮＤＡ剤の間の少なくとも１の強固な会合を含む、ｐ５３上で形成される、三次構造（「ＰＡＮＤＡコア」）であって、ここで：
ＰＡＮＤＡポケットは、１以上の適切に折り重ねられたＰＡＮＤＡシステインに隣接しているすべてのアミノ酸と、１以上の適切に折り重ねられたＰＡＮＤＡシステインと接触するすべてのアミノ酸と、すべてのＰＡＮＤＡシステインとを含む、適切に折り重ねられたＰＡＮＤＡシステインから約７Åの範囲から本質的に成る領域であり；
ＰＡＮＤＡ剤は、以下のような１以上の有用な特性を有する物質の組成物であり、：
（ａ）適切に折り重ねられたｐ５３の集団の実質的な増加を引き起こすことができ、
好ましくは、前記増加は、ＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる増加よりも少なくとも約３倍多く、より好ましくは、前記増加は、ＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる増加よりも少なくとも約５倍多く、さらに好ましくは、前記増加は、ＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる増加よりも少なくとも約１０倍多く、さらに好ましくは、ＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる増加よりも少なくとも約１００倍多い；
（ｂ）ｐ５３の転写機能に実質的な改善を引き起こすことができ、好ましくは、改善は、ＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる改善よりも少なくとも約３倍大きく、より好ましくは、改善は、ＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる改善よりも少なくとも約５倍大きく、さらに好ましくは、改善は、ＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる改善よりも少なくとも約１０倍大きく、さらに好ましくは、改善は、ＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる改善よりも約１００倍大きい；
（ｃ）ｐ５３Ｔｍの増加によって測定されるように、ｐ５３の安定化の実質的な増強を引き起こすことができ、好ましくは、増強は、ＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる増強よりも少なくとも約３倍大きく、より好ましくは、改善は、ＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる改善よりも少なくとも約５倍大きく、さらに好ましくは、改善は、ＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる改善よりも少なくとも約１０倍大きく、さらに好ましくは、改善は、ＰＲＩＭＡ−１によって引き起こされる改善よりも少なくとも約１００倍大きい；
ここで、ＰＡＮＤＡ剤は、好ましくは、２以上の有用な特性を有し、より好ましくは、ＰＡＮＤＡ剤は３以上の有用な特性を有し、および、
ＰＡＮＤＡシステインは、ｗｔｐ５３位置のシステイン１２４（「Ｃ１２４」）、システイン１３５（「Ｃ１３５」）、およびシステイン１４１（「Ｃ１４１」）（一緒に「ＰＡＮＤＡトライアド」）に対応するシステインである、三次構造（「ＰＡＮＤＡコア」）。
【請求項２】
ｐ５３は、天然および人工のｐ５３すべてを含む、任意の野生型ｐ５３（「ｗｔｐ５３」）、天然および人工のｐ５３すべてを含む、任意の変異体ｐ５３（「ｍｐ５３」）、
または、それらの組み合わせである、請求項１に記載のＰＡＮＤＡコア。
【請求項３】
強固な会合は、結合、共有結合、非共有結合、およびそれらの組み合わせを含む、請求項１に記載のＰＡＮＤＡコア。
【請求項４】
ＰＡＮＤＡ剤は、ＰＡＮＤＡポケット上の１以上のアミノ酸、好ましくは１以上のシステイン、より好ましくは２以上のシステイン、さらに好ましくは３以上のシステイン、さらに好ましくは約３から約１２のシステイン、に結合することができる、１以上のＰＡＮＤＡポケット結合基（「Ｒ」）を含む、請求項１に記載のＰＡＮＤＡコア。
【請求項５】
Ｒは、金属、半金属、または、マイケルアクセプターとチオール基を含む基、好ましくは、ヒ素、アンチモン、ビスマス、任意のそれらのアナログ、またはそれらの組み合わせである、請求項４に記載のＰＡＮＤＡコア。
【請求項６】
Ｒは、３価および／または５価のヒ素原子、３価および／または５価のアンチモン原子、３価および／または５価のビスマス原子、および／またはそれらの組み合わせを包含する、請求項５に記載のＰＡＮＤＡコア。
【請求項７】
ＰＡＮＤＡ剤は、表１および表２から選択される化合物または化合物の組み合わせである、請求項１に記載のＰＡＮＤＡコア。
【請求項８】
ＰＡＮＤＡ剤は、化合物または化合物の組み合わせであって、Ａｓ２Ｏ３、Ａｓ２Ｏ５、ＫＡｓＯ２、ＮａＡｓＯ２、ＨＡｓＮａ２Ｏ４、ＨＡｓＫ２Ｏ４、ＡｓＦ３、ＡｓＣｌ３、ＡｓＢｒ３、ＡｓＩ３、ＡｓＡｃ３、Ａｓ（ＯＣ２Ｈ５）３、Ａｓ（ＯＣＨ３）３、Ａｓ２（ＳＯ４）３、（ＣＨ３ＣＯ２）３Ａｓ、Ｃ８Ｈ４Ｋ２Ｏ１２Ａｓ２・ｘＨ２Ｏ、ＨＯＣ６Ｈ４ＣＯＯＡｓＯ、［Ｏ２ＣＣＨ２Ｃ（ＯＨ）（ＣＯ２）ＣＨ２ＣＯ２］Ａｓ、Ｓｂ２Ｏ３、Ｓｂ２Ｏ５、ＫＳｂＯ２、ＮａＳｂＯ２、ＨＳｂＮａ２Ｏ４、ＨＳｂＫ２Ｏ４、ＳｂＦ３、ＳｂＣｌ３、ＳｂＢｒ３、ＳｂＩ３、ＳｂＡｃ３、Ｓｂ（ＯＣ２Ｈ５）３、Ｓｂ（ＯＣＨ３）３、Ｓｂ２（ＳＯ４）３、（ＣＨ３ＣＯ２）３Ｓｂ、Ｃ８Ｈ４Ｋ２Ｏ１２Ｓｂ２・ｘＨ２Ｏ、ＨＯＣ６Ｈ４ＣＯＯＳｂＯ、［Ｏ２ＣＣＨ２Ｃ（ＯＨ）（ＣＯ２）ＣＨ２ＣＯ２］Ｓｂ、Ｂｉ２Ｏ３、Ｂｉ２Ｏ５、ＫＢｉＯ２、ＮａＢｉＯ２、ＨＢｉＮａ２Ｏ４、ＨＢｉＫ２Ｏ４、ＢｉＦ３、ＢｉＣｌ３、ＢｉＢｒ３、ＢｉＩ３、ＢｉＡｃ３、Ｂｉ（ＯＣ２Ｈ５）３、Ｂｉ（ＯＣＨ３）３、Ｂｉ２（ＳＯ４）３、（ＣＨ３ＣＯ２）３Ｂｉ、Ｃ８Ｈ４Ｋ２Ｏ１２Ｂｉ２・ｘＨ２Ｏ、ＨＯＣ６Ｈ４ＣＯＯＢｉＯ、Ｃ１６Ｈ１８Ａｓ２Ｎ４Ｏ２（ＮＳＣ９２９０９）、Ｃ１３Ｈ１４Ａｓ２Ｏ６（ＮＳＣ４８３００）、Ｃ１０Ｈ１３ＮＯ８Ｓｂ（ＮＳＣ３１６６０）、Ｃ６Ｈ１２ＮａＯ８Ｓｂ＋（ＮＳＣ１５６０９）、Ｃ１３Ｈ２１ＮａＯ９Ｓｂ＋（ＮＳＣ１５６２３）、および、それらの組み合わせから成る群から選択される化合物、または化合物の組み合わせである、請求項７に記載のＰＡＮＤＡコア。
【請求項９】
ｐ５３と請求項１のＰＡＮＤＡコアを含む、複合体（「ＰＡＮＤＡ」）。
【請求項１０】
ＰＡＮＤＡ剤が結合されていない場合と比較して、ＰＡＮＤＡコアまたは複合体は、１以上のｗｔｐ５３の構造、好ましくはＤＮＡ結合構造を獲得しており、１以上のｗｔｐ５３の機能、好ましくは転写機能を獲得しており、および／または、１以上のｍｐ５３の機能、好ましくは腫瘍形成性の機能を失っている、および／または、縮小させる、請求項９に記載の複合体。
【請求項１１】
ＰＡＮＤＡコアまたは複合体は、インビボおよび／またはインビトロにおける任意の機能を獲得しており、機能は、任意の野生型機能を含み、任意の野生型機能は、核酸への分子レベルの会合、転写活性化または標的遺伝子の抑制、ｗｔｐ５３またはｍｐ５３パートナーへの会合、ｗｔｐ５３またはｍｐ５３パートナーとの解離、翻訳後修飾への受け取り；栄養不足、低酸素、酸化ストレス、過剰増殖シグナル、発がん性ストレス、ＤＮＡ損傷、リボヌクレオチド枯渇、複製ストレス、テロメアの消耗、を含むストレスに対する細胞レベルの応答性、細胞周期停止の促進、ＤＮＡ修復の促進、アポトーシスの促進、ゲノム安定性の促進、老化の促進、およびオートファジーの促進、細胞代謝の再プログラミングの調節、腫瘍微小環境シグナル伝達の調節、細胞幹細胞性、生存、浸潤、および転移の阻害；癌の再発の生物レベルの遅延または防止、癌治療の有効性の増加、癌治療に対する反応率の増加、発生、老化、寿命、免疫学的プロセス、および加齢の調節、などを含む、請求項９に記載の複合体。
【請求項１２】
ＰＡＮＤＡコアまたは複合体は、がん細胞の転移、ゲノムの不安定性、浸潤、移動、散乱、血管新生、幹細胞の拡大、生存、増殖、組織の再構築、治療抵抗性、および、分裂促進性の欠陥を促進する、任意の機能を含む、インビトロおよび／またはインビボにおける機能を、失っている、障害されている、または、無効にされている、請求項９に記載の複合体。
【請求項１３】
ＰＡＮＤＡコアまたは複合体は、生物系において、ＲＮＡレベル、および／またはタンパク質レベルで、１以上のｐ５３下流標的を上方制御または下方制御する能力を、好ましくは約３倍、より好ましくは約５倍、さらに好ましくは約１０〜１００倍だけ、有する、請求項９に記載の複合体。
【請求項１４】
ＰＡＮＤＡコアまたは複合体は、ｍｐ５３がある、および／または機能的ｐ５３がない対象において、ｐ５３関連疾患を治療する能力を有し、前記疾患が、癌、腫瘍、加齢の結果、発達疾患、加速された加齢、免疫疾患、またはそれらの組み合わせである、請求項９に記載の複合体。
【請求項１５】
ｍｐ５３のｗｔｐ５３機能をオンおよびオフにする方法であって、前記方法は、
（ａ）ｍｐ５３のｗｔｐ５３機能をオンにするために最初のＰＡＮＤＡ剤をｍｐ５３と組み合わせる工程と、
（ｂ）（ｉ）Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ａｎｔｉ−Ｌｅｗｉｓｉｔｅ（ＢＡＬ）、スクシマー（ＤＭＳＡ）、Ｕｎｉｔｈｉｏｌ（ＤＭＰＳ）、および／またはそれらの組み合わせを含む、ｍｐ５３からＰＡＮＤＡ剤を除去し、（ｉｉ）操作された細胞または対象において、ドキシサイクリンを含むｐ５３の発現を阻害し、および／または、（ｉｉｉ）操作された細胞または対象において、タモキシフェンを含むｐ５３の発現をオフにする、第２の化合物を添加する工程と、を含む、方法。
【国際調査報告】
2021518837.tif 000271
2021518837.tif 000272
2021518837.tif 000273