(57)【要約】  式ＩまたはＩ’で表されるリンカー、それを含む抗体薬物コンジュゲートおよびそれらの使用、抗体薬物コンジュゲートを含む医薬組成物、並びに疾患の治療および／または予防のための抗体薬物コンジュゲートの使用が提供される。2021536430.tif 000237
2021536430.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉまたは式Ｉ’：
【化１】
2021536430.tif 000188
（式中、
Ｗは、
【化２】
2021536430.tif 000189
であり、その２つのカルボニル基はＣ＝Ｃ二重結合の同じ側に位置し、それはシス構造であり；
Ｒ１は、Ｃ１−６直鎖状または分枝状アルキルであり、そしてＲ１は、任意に、ハロゲン、Ｃ１−４アルコキシから成る群より選択された１つ以上の置換基で単置換または多置換され；
Ｌ１は、
【化３】
2021536430.tif 000190
から成る群より選択され；
Ｌ２は、
【化４】
2021536430.tif 000191
であり；
Ｌ３は、
【化５】
2021536430.tif 000192
であり；
Ｒ２は、
【化６】
2021536430.tif 000193
から成る群より選択され；
Ｒ’２はハロゲンであり；
Ｒ３は、水素、ハロゲン、メチル、エチル、ニトロ、メトキシおよびエトキシから成る群より選択され；
ｑは、０または１であり；
ｍ、ｒ、ｔ、ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｊおよびｋは、各々独立に、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０および１１から成る群より選択され；
各ｐは、独立に０、１、２、３または４であり；
Ｙは、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ｇｌｙ、Ｖａｌ−Ｔｈｒ、Ｖａｌ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ｉｌｅ、Ｖａｌ−ＡｓｎおよびＰｈｅ−Ｌｙｓから成る群より選択されたジペプチドを構成するアミノ酸残基であり、ここでＮ末端は、カルボニルに連結され、そしてＣ末端は、Ｎ原子に結合され；
Ｚは−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−または−Ｃ（ＣＨ３）２−である）
により表される化合物、またはその塩もしくは溶媒和物。
【請求項２】
Ｌ１が、
【化７】
2021536430.tif 000194
から成る群より選択され；
ｍ、ｔおよびｒが、各々独立に０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０および１１から成る群より選択される、
請求項１に記載の式Ｉまたは式Ｉ’により表される化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項３】
式ＩＩまたは式ＩＩ’：
【化８】
2021536430.tif 000195
（式中、
Ｗが、
【化９】
2021536430.tif 000196
であり、その２つのカルボニル基はＣ＝Ｃ二重結合の同じ側に位置し、それはシス構造であり；
Ｂが、薬物、細胞毒素、検出試薬、診断試薬およびターゲティングキャリアから成る群より選択された活性化合物であり；好ましくは、Ｂが、細胞毒素、抗腫瘍薬、抗ウイルス薬または抗感染症薬であり；更に好ましくは、Ｂが、細胞毒素、例えばチューブリン阻害剤、ＤＮＡアルキル化剤、ＤＮＡインターカレーター、酵素阻害剤、代謝拮抗薬、ペプチドまたはヌクレオチドであり；
Ｂが、活性化合物分子中のＮ原子またはＯ原子を介して部位＊に連結され；またはＢが、活性化合物分子中のＮ原子またはＯ原子を介してＬ３に連結され；
Ｒ１が、Ｃ１−６直鎖状または分枝状アルキルであり、そしてＲ１は、任意に、ハロゲンおよびＣ１−４アルコキシから成る群より選択された１つ以上の置換基により単置換または多置換され；
Ｌ１が、
【化１０】
2021536430.tif 000197
から成る群より選択され；
Ｌ２が、
【化１１】
2021536430.tif 000198
であり；
Ｌ３が、
【化１２】
2021536430.tif 000199
であり；
Ｒ３が、水素、ハロゲン、メチル、エチル、ニトロ、メトキシおよびエトキシから成る群より選択され；
ｑが、０または１であり；
ｍ、ｒ、ｔ、ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｊおよびｋは、各々独立に０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０および１１から成る群より選択され；
各ｐは、独立に０、１、２、３または４であり；
Ｙが、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ｇｌｙ、Ｖａｌ−Ｔｈｒ、Ｖａｌ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ｉｌｅ、Ｖａｌ−ＡｓｎおよびＰｈｅ−Ｌｙｓから成る群より選択されたジペプチドを構成するアミノ酸残基であり、ここでＮ末端はカルボニルに連結されそしてＣ末端はＮ原子に連結され；
Ｚが、−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−または−Ｃ（ＣＨ３）２−である）
により表される化合物、その塩または溶媒和物。 
【請求項４】
Ｌ１が、
【化１３】
2021536430.tif 000200
から成る群より選択され； 
ｍ、ｔおよびｒが、各々独立に０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０および１１から成る群より選択される、
請求項３に記載の式ＩＩまたは式ＩＩ’により表される化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項５】
式ＩＩＩまたは式ＩＩＩ’：
【化１４】
2021536430.tif 000201
（式中、
Ａは、タンパク質、抗体、ポリペプチド、酵素および小分子から成る群より選択されたターゲティング化合物であり；Ａは、ターゲティング化合物分子中のＳ原子を介して部位＃または＃＃に連結され；好ましくは、Ａは、標的化合物分子中のＳ原子を介して部位＃に連結され；
Ｂは、薬物、細胞毒素、検出試薬、診断薬およびターゲティングキャリアから成る群より選択された化合物であり；好ましくは、Ｂは、細胞毒素、抗腫瘍薬、抗ウイルス薬または抗感染症薬であり；更に好ましくは、Ｂは、細胞毒素、例えばチューブリン阻害剤、ＤＮＡアルキル化剤、ＤＮＡインターカレーター、酵素阻害剤、代謝拮抗薬、ペプチドまたはヌクレオチドであり；
Ｂは、活性化合物分子中のＮ原子またはＯ原子を介して部位＊に連結され；またはＢは、活性化合物分子中のＮ原子またはＯ原子を介してＬ３に連結され；
ｎは、０．５〜８．５の間の数であり、例えば０．８〜５の間の数、１〜４の間の数、２〜６の間の数、３〜７の間の数、４〜８の間の数、３．５〜８．５の間の数、３．５〜４．５の間の数、６．５〜８．５の間の数であり、好ましくは、ｎは、約４、５、６、７または８であり；
Ｒ１は、Ｃ１−６直鎖状または分枝状アルキルであり、そしてＲ１は、任意に、ハロゲンおよびＣ１−４アルコキシから成る群より選択された１つ以上の置換基により単置換または多置換され；
Ｌ１は、
【化１５】
2021536430.tif 000202
から成る群より選択され；
Ｌ２は、
【化１６】
2021536430.tif 000203
であり；
Ｌ３は、
【化１７】
2021536430.tif 000204
であり；
Ｒ３は、水素、ハロゲン、メチル、エチル、ニトロ、メトキシ、エトキシから成る群より選択され；
ｑは、０または１であり；
ｍ、ｒ、ｔ、ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｊおよびｋは、各々独立に０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０および１１から成る群より選択され；
各ｐは、独立に０、１、２、３または４であり；
Ｙは、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ｇｌｙ、Ｖａｌ−Ｔｈｒ、Ｖａｌ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ｉｌｅ、Ｖａｌ−ＡｓｎおよびＰｈｅ−Ｌｙｓから成る群より選択されたジペプチドを形成するアミノ酸残基であり、ここでＮ末端はカルボニルに連結され、そしてＣ末端はＮ原子に結合され；
Ｚは−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−または−Ｃ（ＣＨ３）２−である）
により表される化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項６】
Ｌ１が、
【化１８】
2021536430.tif 000205
から成る群より選択され；
ｍ、ｔおよびｒが、各々独立に０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０および１１から成る群より選択される、
請求項５に記載の式ＩＩＩまたは式ＩＩＩ’により表される化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項７】
Ｌ１が、
【化１９】
2021536430.tif 000206
から成る群より選択され；
Ｒ３が、水素、ハロゲン、メチル、エチル、ニトロ、メトキシおよびエトキシから成る群より選択され；好ましくは、Ｒ３が、水素、ハロゲン、メチルおよびエチルから成る群より選択され；
ｍが、０、１、２、３、４および５から成る群より選択され；好ましくは、ｍが、０、１、２、３、４から成る群より選択され；
各ｐが、独立に０、１、２、３または４であり；好ましくは、各ｐが、独立に０、１、２または３であり；より好ましくは、各ｐが、独立に０、１または２であり；より好ましくは、各ｐが、独立に０である、
請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項８】
Ｌ１が、−（ＣＨ２）ｅ−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｆ−（ＣＨ２）ｇ−または−（ＣＨ２）ｈ−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−ＣＨ［（ＣＨ２）ｉ−ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−（ＣＨ２）ｋ−ＣＨ３］−であり；
ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｊおよびｋが、各々独立に０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０および１１から成る群より選択され、
例えば、ｅが、１、２、３、４、５、６、７または８であり、
例えば、ｆが、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または１１であり、
例えば、ｇが、１、２、３、４、５または６であり、
例えば、ｈが、１、２、３、４、５、６、７または８であり、
例えば、ｉが、１、２、３、４、５、６、７または８であり、
例えば、ｊが、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または１１であり、
例えば、ｋが、０、１、２、３、４または５である、
請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項９】
Ｌ１が、
【化２０】
2021536430.tif 000207
から成る群より選択され；
Ｒ３が、水素、ハロゲン、メチル、エチル、ニトロ、メトキシおよびエトキシから成る群より選択され；好ましくは、Ｒ３が、水素、ハロゲン、メチルおよびエチルから成る群より選択され；
ｍが、０、１、２、３、４であり；
各ｐが、独立に０、１、２、３または４であり；好ましくは、各ｐが、独立に０、１、２または３であり；より好ましくは、各ｐが、独立に０、１または２であり；より好ましくは、各ｐが、独立に０である、
請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項１０】
Ｌ２が、
【化２１】
2021536430.tif 000208
（式中、
Ｙは、Ｖａｌ−ＣｉｔまたはＶａｌ−Ａｌａを構成するアミノ酸残基であり、ここでＮ末端がカルボニルに連結されそしてＣ末端がＮ原子に連結され；
Ｚが、−ＣＨ２−であり；
Ｒ３とｐの定義は、請求項１〜６のいずれか１項に記載の通りである）
である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項１１】
Ｒ２が、
【化２２】
2021536430.tif 000209
であり；
ｑが、０であるか；または
Ｒ２が、
【化２３】
2021536430.tif 000210
（式中、
Ｒ３とｐの定義は、請求項１〜４のいずれか１項に記載した通りである）；
ｑが、１である、
請求項１〜２および７〜１０のいずれか１項に記載の化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項１２】
前記化合物が、式ＩＶ：
【化２４】
2021536430.tif 000211
（式中、
Ｗは、
【化２５】
2021536430.tif 000212
であり、その２つのカルボニル基はＣ＝Ｃ二重結合の同じ側に存在し、それはシス構造であり；
Ｒ１は、Ｃ１−６直鎖状または分枝状アルキルであり、そしてＲ１は、任意に、ハロゲンおよびＣ１−４アルコキシから成る群より選択された１つ以上の置換基により単置換または多置換され；
Ｌ１は、
【化２６】
2021536430.tif 000213
から成る群より選択され；好ましくは、Ｌ１は、
【化２７】
2021536430.tif 000214
から成る群より選択され；
Ｒ’は、アミノ酸残基の可変基（Ｒ）中の置換基側鎖であり；Ｒ’は、−ＣＨ３、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２、−（ＣＨ２）４−ＮＨ２、−Ｈ、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＯＨ、−ＣＨ−（ＣＨ３）２、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ３または−ＣＨ２−ＣＯＮＨ２であり；Ｒ’は、好ましくは、−ＣＨ３または−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２であり；
Ｒ２は、
【化２８】
2021536430.tif 000215
から成る群より選択され；
Ｒ３は、水素、ハロゲン、メチル、エチル、ニトロ、メトキシおよびエトキシから成る群より選択され；Ｒ３は、好ましくは、水素、ハロゲン、メチルおよびエチルから成る群より選択され；
m、r、tは、各々独立に０、１、２、３および４から成る群より選択され；
ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｊおよびｋは、各々独立に０、１、２、３、４、５、６、７、８、９および１０から成る群より選択され；
各ｐは、独立に０、１、２、３または４から成る群より選択され；好ましくは、各ｐは、独立に０、１、２または３であり；より好ましくは、各ｐは、独立に０、１または２であり；より好ましくは、各ｐは、独立に０である）
により表される、請求項１〜２および７〜１１のいずれか一項に記載の化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項１３】
前記化合物が、式ＶまたはＶ'：
【化２９】
2021536430.tif 000216
（式中、
Ｗは、
【化３０】
2021536430.tif 000217
であり、その２つのカルボニル基はＣ＝Ｃ二重結合の同じ側に位置し、それはシス構造であり；
Ｂは、薬物、細胞毒素、検出試薬、診断試薬およびターゲティングキャリアから成る群より選択された活性化合物であり；好ましくは、Ｂは、細胞毒素、抗腫瘍薬、抗ウイルス薬または抗感染症薬であり；更に好ましくは、Ｂは、細胞毒素、例えばチューブリン阻害剤、ＤＮＡアルキル化剤、ＤＮＡインターカレーター、酵素阻害剤、代謝拮抗薬、ペプチドまたはヌクレオチドであり；
Ｂは、前記活性化合物中のＮ原子またはＯ原子を介して部位＊に連結され；
Ｒ１は、Ｃ１−４直鎖状または分枝状アルキルであり、そしてＲ１は、任意に、ハロゲンおよびＣ１−４  アルコキシから成る群より選択された１つ以上の置換基により単置換または多置換され；
Ｌ１は、
【化３１】
2021536430.tif 000218
から成る群より選択され；
好ましくは、Ｌ１は、
【化３２】
2021536430.tif 000219
から成る群より選択され；
Ｒ’は、アミノ酸残基の可変基（Ｒ）中の置換基側鎖であり；
Ｒ’は、−ＣＨ３、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２、−（ＣＨ２）４−ＮＨ２、−Ｈ、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＯＨ、−ＣＨ−（ＣＨ３）２、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ３または−ＣＨ２−ＣＯＮＨ２から選択され；Ｒ’は、好ましくは−ＣＨ３または−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２から選択され；
Ｒ３は、水素、ハロゲン、メチル、エチル、ニトロ、メトキシおよびエトキシから成る群より選択され；好ましくは、Ｒ３は、水素、ハロゲン、メチルおよびエチルから成る群より選択され；
ｍ、ｒおよびｔは、各々独立に０、１、２、３および４から成る群より選択され；
ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｊおよびｋは、各々独立に０、１、２、３、４、５、６、７、８、９および10から成る群より選択され；
各ｐは、独立に０、１、２、３または４であり；好ましくは、各ｐは、独立に０、１、２または３であり；より好ましくは、各ｐは、独立に０、１または２であり；より好ましくは、各ｐは、独立に０である）
により表される化合物である、請求項３〜４および７〜１０のいずれか一項に記載の化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項１４】
前記化合物が、式ＶＩまたは式ＶＩ’：
【化３３】
2021536430.tif 000220
（式中、
Ａは、タンパク質、抗体、ポリペプチド、酵素および小分子から成る群より選択されたターゲティング化合物であり；Ａは、ターゲティング化合物分子中のＳ原子を介して部位＃または＃＃に連結され；
Ｂは、薬物、細胞毒素、検出試薬、診断試薬およびターゲティングキャリアから成る群より選択された活性化合物であり；好ましくは、Ｂは、細胞毒素、抗腫瘍薬、抗ウイルス薬または抗感染症薬であり；更に好ましくは、Ｂは、細胞毒素、例えばチューブリン阻害剤、ＤＮＡアルキル化剤、ＤＮＡインターカレーター、酵素阻害剤、代謝拮抗薬、ペプチドまたはヌクレオチドであり；
Ｂは、前記活性化合物中のＮ原子またはＯ原子を介して部位＊または＊＊に連結され；
ｎは、０．５〜８．５の間の数、例えば０．８〜５の間の数、１〜４の間の数、２〜６の間の数、３〜７の間の数、４〜８の間の数、３．５〜８．５の間の数、３．５〜４．５の間の数、または６．５〜８．５の間の数であり、好ましくは、ｎは、約４、５、６、７または８であり；
Ｒ１は、Ｃ１−６直鎖状または分枝状アルキル基であり、そしてＲ１は、任意に、ハロゲンおよびＣ１−４アルコキシから成る群より選択された１つ以上の置換基により単置換または多置換され；
Ｌ１は、
【化３４】
2021536430.tif 000221
から成る群より選択され；
好ましくは、Ｌ１は、
【化３５】
2021536430.tif 000222
から成る群より選択され；
Ｒ’は、アミノ酸残基の可変基（Ｒ）中の置換基側鎖であり；好ましくは、Ｒ’は−ＣＨ３、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２、−（ＣＨ２）４−ＮＨ２、−Ｈ、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＯＨ、−ＣＨ−（ＣＨ３）２、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ３または−ＣＨ２−ＣＯＮＨ２であり、Ｒ’は、好ましくは、−ＣＨ３または−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２であり；
各Ｒ３は、独立に水素、ハロゲン、メチル、エチル、ニトロ、メトキシおよびエトキシから成る群より選択され；好ましくは、各Ｒ３は、独立に水素、ハロゲン、メチルおよびエチルから成る群より選択され；
ｍ、ｒおよびｔは、独立に０、１、２、３および４から成る群より選択され；
ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｊおよびｋは、各々独立に０、１、２、３、４、５、６、７、８、９および１０から成る群より選択され；
各ｐは、独立に０、１、２、３または４であり；好ましくは、各ｐは、独立に０、１、２または３であり；より好ましくは、各ｐは、独立に０、１または２であり；より好ましくは、各ｐは、独立に０である）
により表される化合物である、請求項５〜１０のいずれか１項に記載の化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項１５】
Ｒ１が、Ｃ１−４アルキル、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチルおよびｔｅｒｔ−ブチルであり、好ましくはメチルである、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項１６】
Ｂが、アウリスタチン、メチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、メイタンシンおよびその誘導体（例えばメイタンシノイド、ＤＭ１、ＤＭ３、ＤＭ４）、パクリタキセル、カリチアマイシン、デュオカルミシン、ドキソルビシン、カンプトテシン、ＰＢＤ（ピロロベンゾジアゼピン）細胞毒素およびその誘導体から成る群より選択される、請求項３〜６、１３〜１５のいずれか１項に記載の化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項１７】
Ｂが、モノメチルアウリスタチン（ＭＭＡＥ）である、請求項３〜６、１３〜１６のいずれか１項に記載の化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項１８】
Ａが、モノクローナル抗体（ＭＡＢ）であるか、または
Ａが、抗体フラグメントまたはその代替物もしくは変異体、タンパク質リガンドまたはタンパク質足場を含み；
好ましくは、Ａが、Ａ中のＳ原子を介して部位#に連結され；
好ましくは、Ａが、Ａ中のシステイン残基のＳ原子を介して部位#に連結され；
好ましくは、Ａが、カップリング部位としてスルフヒドリルを有するモノクローナル抗体であるかまたは部位特異的変異もしくは修飾を有し、かつカップリング部位としてスルフヒドリルを有するモノクローナル抗体であり；
好ましくは、Ａが、抗ＨＥＲ２ヒト化モノクローナル抗体ｍｉｌ４０、トラスツズマブ（ハーセプチン；ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ）、ペルツズマブ（パージェタ；ＰＥＲＪＥＴＡ）、セツキシマブ（アービタックス；ＥＲＢＩＴＵＸ）、パニツムマブ（ベクティビックス；ＶＥＣＴＩＢＩＸ）、リツキシマブ（リツキサン；ＲＩＴＵＸＡＮ）、アレムツズマブ（キャンパス；ＣＡＭＰＡＴＨ）、イブリツモマブ（ゼヴァリン；ＺＥＶＡＬＩＮ）、トシツモマブ（ベキサール；ＢＥＸＸＡＲ）、オファツムマブ（アーゼラ；ＡＲＺＥＲＲＡ）、ベバシズマブ（アバスチン；ＡＶＡＳＴＩＮ）、イピリムマブ（ヤーボイ；ＹＥＲＶＯＹ）、デノスマブ（ザイゲバ；ＸＧＥＶＡ）、ペムブロリズマブ（キートルダ；ＫＥＹＴＲＵＤＡ）、ニボルマブ（オプジーボ；Ｏｐｄｉｖｏ、アベルマブ（バベンチオ；Ｂａｖｅｎｃｉｏ）、アテゾリズマブ（テセントリク；Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ、デュルバルマブ（イミフィンジ；Ｉｍｆｉｎｚｉ）、サシツズマブ、ロバルピツズマブ、およびそれら生物学的類似体から成る群より選択され；
より好ましくは、Ａが、抗ＨＥＲ２ヒト化モノクローナル抗体ｍｉｌ４０である、
請求項５〜６、１４〜１６のいずれか１項に記載の化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項１９】
前記化合物が、
【化３６】
2021536430.tif 000223
から成る群より選択される、請求項１に記載の化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項２０】
前記化合物が、
【化３７】
2021536430.tif 000224
から成る群より選択される、請求項３に記載の化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項２１】
前記化合物が、
【化３８】
2021536430.tif 000225
から成る群より選択され、
ここで、ＭＡＢが抗体であり、そしてｎが、請求項５に定義される通りであり、
好ましくは、ｎが、約４または８であり；
好ましくは、ＭＡＢが、抗ＨＥＲ２ヒト化モノクローナル抗体ｍｉｌ４０、トラスツズマブ（ハーセプチン；ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ）、ペルツズマブ（パージェタ；ＰＥＲＪＥＴＡ）、セツキシマブ（アービタックス；ＥＲＢＩＴＵＸ）、パニツムマブ（ベクティビックス；ＶＥＣＴＩＢＩＸ）、リツキシマブ（リツキサン；ＲＩＴＵＸＡＮ）、アレムツズマブ（キャンパス；ＣＡＭＰＡＴＨ）、イブリツモマブ（ゼヴァリン；ＺＥＶＡＬＩＮ）、トシツモマブ（ベキサール；ＢＥＸＸＡＲ）、オファツムマブ（アーゼラ；ＡＲＺＥＲＲＡ）、ベバシズマブ（アバスチン；ＡＶＡＳＴＩＮ）、イピリムマブ（ヤーボイ；ＹＥＲＶＯＹ）、デノスマブ（ザイゲバ；ＸＧＥＶＡ）、ペムブロリズマブ（キートルダ；ＫＥＹＴＲＵＤＡ）、ニボルマブ（オプジーボ；Ｏｐｄｉｖｏ）、アベルマブ（バベンチオ；Ｂａｖｅｎｃｉｏ）、アテゾリズマブ（テセントリク；Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ）、デュルバルマブ（イミフィンジ；Ｉｍｆｉｎｚｉ）、サシツズマブ、ロバルピツズマブ、およびそれら生物学的類似体から成る群より選択され、より好ましくは、ＭＡＢが、抗ＨＥＲ２ヒト化モノクローナル抗体ｍｉｌ４０である、請求項５に記載の化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項２２】
抗体薬物コンジュゲートの製造における請求項１〜４、７〜１３、１５〜１７、１９〜２０のいずれか１項に記載の化合物、その塩または溶媒和物の使用であって、好ましくは、前記抗体薬物コンジュゲートが、請求項５〜６、７〜１０、１４〜１５、１８および２１のいずれか１項に記載の化合物である使用。
【請求項２３】
請求項１〜２、７〜１２、１５および１９のいずれか一項に記載の式Ｉにより表される化合物、その塩または溶媒和物を調製する方法であって、
１）ｑが、０であり、そしてＲ２が、
【化３９】
2021536430.tif 000226
である場合、その調製方法は、
ａ）無水マレイン酸を式ｉにより表される化合物と反応させ、式ｉｉにより表される化合物を得る工程
【化４０】
2021536430.tif 000227
ｂ）式ｉｉにより表される化合物を、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＳｕＯＨ）と反応させ、式ｉｉｉにより表される化合物を生成する工程
【化４１】
2021536430.tif 000228
ｃ）式ｉｉｉにより表される化合物をヨウ化アルキルＲ１−Ｉと反応させ、目的化合物Ｉ−１を生成する工程
【化４２】
2021536430.tif 000229
を含み；
２）ｑが、１であり、そしてＲ２が、
【化４３】
2021536430.tif 000230
である場合、その調製方法は、
ａ）Ｆｍｏｃ−Ｙ−ＯＨを、式ｉｖにより表される化合物と反応させ、式ｖにより表される化合物を生成する工程
【化４４】
2021536430.tif 000231
ｂ）式ｖにより表される化合物からＦｍｏｃ保護基を除去し、式ｖｉにより表される化合物を得る工程
【化４５】
2021536430.tif 000232
ｃ）化合物Ｉ−１を、式ｖｉにより表される化合物と反応させ、式ｖｉｉにより表される化合物を生成する工程
【化４６】
2021536430.tif 000233
ｄ）式ｖｉｉにより表される化合物を式ｖｉｉｉにより表される化合物と反応させて目的化合物Ｉ−２を生成する工程
【化４７】
2021536430.tif 000234
（ここで、Ｌ１、Ｙ、Ｚ、Ｒ１、Ｒ３およびｐは、請求項１〜２、７〜１２、１５および１９のいずれか１項に定義される通りである）
を含む方法。
【請求項２４】
請求項３〜４、７〜１０、１３、１５〜１７および２０のいずれか１項に記載の式ＩＩもしくは式ＩＩ’により表される化合物、その塩または溶媒和物を調製する方法であって、
請求項１に記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を、Ｂにより表される薬物、細胞毒素、検出試薬、診断試薬またはターゲティングキャリアと反応させて、式ＩＩまたは式ＩＩ’により表される化合物を得る工程：
【化４８】
2021536430.tif 000235
（ここで、各置換基は、それぞれ請求項３〜４、７〜１０、１３、１５〜１７および２０のいずれか１項に定義される通りである）
を含む方法。
【請求項２５】
請求項５〜６、７〜１０、１４〜１５、１８および２１のいずれか一項に記載の式ＩＩＩまたは式ＩＩＩ’により表される化合物、その塩または溶媒和物を調製する方法であって、請求項２に記載の化合物またはその塩または溶媒和物を、Ａと反応させ、ここでＡはターゲティング（標的指向）化合物分子中のＳ原子を介して部位＃または＃＃に連結され、式ＩＩＩまたは式ＩＩＩ’により表される化合物を得る工程：
【化４９】
2021536430.tif 000236
を含み、該反応がｐＨ＝５〜１０および０℃〜４０℃の温度の条件下で実施され；
前記置換基は各々、請求項５〜６、７〜１０、１４〜１５、１８および２１のいずれか１項に定義される通りである、方法。
【請求項２６】
医薬組成物であって、請求項５〜６、７〜１０、１４〜１５、１８、２１、１〜６、７〜１０、１４〜１５、１８および２１のいずれか１項に記載の少なくとも１つの化合物、その塩または溶媒和物と、１つ以上の薬学的に許容されるキャリアまたは賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項２７】
疾病もしくは状態の診断、予防または治療のためのまたは疾病もしくは状態の重症度を低減するための医薬の製造における、請求項５〜６、７〜１０、１４〜１５、１８、２１、１〜６、７〜１０、１４〜１５、１８および２１のいずれか１項に記載の化合物、その塩または溶媒和物の使用であって、前記疾病または状態が、腫瘍、感染症、血液疾患、代謝性疾患、炎症から成る群より選択され、好ましくは、前記腫瘍は、癌、リンパ腫、リンパ系腫瘍、芽腫、肉腫および白血病から選択され、好ましくは、前記癌は、乳癌（例えばＨＥＲ２陽性乳癌）；扁平細胞癌（例えば表皮扁平細胞癌）；肺癌、例えば小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺および肺の扁平細胞癌の腺癌；腹腔癌；肝臓癌；胃癌；消化器癌；膵臓癌；神経膠芽腫；子宮頸癌；卵巣癌；肝臓癌；膀胱癌；尿道癌；肝細胞癌；乳癌；大腸癌；結腸癌；直腸癌；結直腸癌；子宮内膜癌；子宮癌；唾液腺癌；腎臓癌または腎癌；前立腺癌；外陰癌；甲状腺癌；肝臓癌；肛門癌；陰茎癌；黒色腫；多発性骨髄腫およびＢ細胞リンパ腫；脳腫瘍；胆のう癌；食道癌；胆管細胞癌；頭頸部癌および関連の転移性腫瘍から成る群より選択される使用。
【請求項２８】
疾病もしくは状態の診断、予防または治療のためのまたは疾病もしくは状態の重症度を
低減するための方法であって、該方法は請求項５〜６、７〜１０、１４〜１５、１８、２１、１〜６、７〜１０、１４〜１５、１８および２１のいずれか一項に記載の化合物、その塩または溶媒和物の有効量を、そのような処置を必要とする患者に投与することを含み、前記疾病もしくは状態が、腫瘍、感染症、血液疾患、代謝性疾患、炎症から成る群より選択され、好ましくは、前記腫瘍が、癌、リンパ腫、リンパ系腫瘍、芽腫、肉腫および白血病から選択され、好ましくは、前記癌が、乳癌（例えばＨＥＲ２陽性乳癌）；扁平細胞癌（例えば表皮扁平細胞癌）；肺癌、例えば小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺および肺の扁平細胞癌の腺癌；腹腔癌；肝臓癌；胃癌；消化器癌；膵臓癌；神経膠芽腫；子宮頸癌；卵巣癌；肝臓癌；膀胱癌；尿道癌；肝細胞癌；乳癌；大腸癌；結腸癌；直腸癌；結直腸癌；子宮内膜癌；子宮癌；唾液腺癌；腎臓癌または腎癌；前立腺癌；外陰癌；甲状腺癌；肝臓癌；肛門癌；陰茎癌；黒色腫；多発性骨髄腫およびＢ細胞リンパ腫；脳腫瘍；胆のう癌；食道癌；胆管細胞癌；頭頸部癌および関連の転移性腫瘍から成る群より選択される方法。
【請求項２９】
疾病もしくは状態の診断、予防または治療においてまたは疾病もしくは状態の重症度を低減することにおいて使用するための化合物、その塩または溶媒和物であって、前記疾病もしくは状態が、腫瘍、感染症、血液疾患、代謝性疾患、炎症から成る群より選択され、好ましくは、前記腫瘍は、癌、リンパ腫、リンパ系腫瘍、芽腫、肉腫および白血病から選択され、好ましくは、前記癌は、乳癌（例えばＨＥＲ２陽性乳癌）；扁平細胞癌（例えば表皮扁平細胞癌）；肺癌、例えば小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺および扁平細胞癌の腺癌；腹腔癌；肝臓癌；胃癌；消化器癌；膵臓癌；神経膠芽腫；子宮頸癌；卵巣癌；肝臓癌；膀胱癌；尿道癌；肝細胞癌；乳癌；大腸癌；結腸癌；直腸癌；結直腸癌；子宮内膜癌；子宮癌；唾液腺癌；腎臓癌または腎癌；前立腺癌；外陰癌；甲状腺癌；肝臓癌；肛門癌；陰茎癌；黒色腫；多発性骨髄腫およびＢ細胞リンパ腫；脳腫瘍；胆のう癌；食道癌；胆管細胞癌；頭頸部癌および関連の転移性腫瘍から成る群より選択される、請求項５〜６、７〜１０、１４〜１５、１８、２１、１〜６、７〜１０、１４〜１５、１８、２１のいずれか一項に記載の化合物、その塩または溶媒和物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は２０１８年８月１７日に出願された中国特許出願第201810939770.0号に基づき、それからの優先権の利益を主張し、その出願の開示は全内容が参照により本明細書中に援用される。
【０００２】
本出願は、薬品化学の分野に属し、具体的にはリンカー、リンカーを含む抗体薬物コンジュゲートおよび該リンカーの使用、並びに抗体が結合した薬物を含む医薬組成物、疾病を治療および／または予防するための抗体薬物コンジュゲートの使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
腫瘍は依然として病気による人間の主な死因である。新たな療法の継続的な出現が癌治療に革命的な変化をもたらしている。近年、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法とＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１抗体免疫療法は、画期的な進歩を遂げたが、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法の適応症は血液学的悪性に限られており、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１抗体免疫療法の客観的奏効率はわずか２０％から３０％である。ほとんどの悪性腫瘍の場合、治療法はまだ限られており、現存する治療法を拡張し、そして連続したシナジー（協働作用）を構築することが依然として必要である。
【０００４】
近年、悪性腫瘍の治療戦略は、伝統的な化学療法から抗体ベースのターゲット療法へと徐々に移行しつつある。しかしながら、一般に、伝統的な治療法は、臨床診療において依然として第一選択肢であり、化学療法薬は製品数の点で、いまだ癌治療の市場の最大のシェアを占めている。それらの貧弱な標的指向性（ターゲティング能力）と生体分布のために、小分子の化学療法薬は、重篤な毒性と副作用を生じる傾向があり、乏しい患者コンプライアンスと十分な臨床上の利点（ベネフィット）を得る上で難点がある。化学療法薬と比較して、モノクローナル抗体薬は、優れた標的指向性と薬物動態特性を有し、悪性腫瘍の治療にますます重要な役割を果たしてきている。しかしながら、それらは組織浸透性が乏しく、生物活性が弱く、かつ耐性を生じやすい。
【０００５】
新薬の開発のための全体的に高品質の標的が深刻に不足している状況では、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の出現は、小分子化学療法薬と抗体のそれぞれの利点の強力な組み合わせを果たし、それは腫瘍免疫療法以外の最も有望な方向性の１つとなった。抗体薬物コンジュゲートの構造は３つの部分を含む：抗体、小分子細胞毒素、および、前者の２部分の有機的組み合わせを実現するリンカー。抗体の標的能力という特性により、ＡＤＣの細胞毒素は、腫瘍標的部位の上に蓄積されて、効力を高める効果と毒性を減少させる効果を果たす。また放出された細胞毒素は、バイスタンダー効果を通して周辺の腫瘍細胞を死滅させることができる。細胞毒素のＩＣ５０は通常１０−１０〜１０−１２モル／Ｌであり、一般的な細胞毒素はチューブリン阻害剤であるＭＭＡＥとＤＭ１である。従来の化学療法薬に比較して、ＡＤＣは有意に改善された治療指数を示す。
【０００６】
抗体に基づいた標的指向型薬物送達に加えて、ＡＤＣの別の主な利点は、抗体ではなくむしろ細胞毒素に依存しており、その標的とされる結合が、ある程度の腫瘍変異によって影響を受けないだろうと考えられるために、モノクローナル抗体により引き起こされる二次的な薬物耐性が、ある程度克服され得ることである。例えば、モノクローナル抗体ハーセプチンと細胞毒素DM1とから構成されているＡＤＣ薬のカドサイラ（Ｋａｄｃｙｌａ）は、ハーセプチン耐性後もまだ効果的にＨＥＲ２＋乳癌を治療することができ、カペシタビン／ラパチニブの標準療法と比較してほぼ６か月だけ、総生存率（ＯＳ）を実質的に延長することができる。加えて、ＭＡＲＩＡＮＮＥ、ＫＡＭＩＬＬＡ等のコードネームを有する第ＩＩＩ相臨床試験のエビデンスに基づく医療研究において、カドサイラの単独薬は効果を示さないが、標準療法のものに劣らない効能とより優れた安全性を有することが確証された。この薬は、現在、第一線の代替抗ＨＥＲ２レジメンとして乳癌ガイドラインに含められている。ＡＤＣは、高活性、低毒性と低副作用、および長期作用時間により特徴付けられ、そのような薬物の出現は、腫瘍の「精密治療」のための新規戦略を提供する。
【０００７】
抗体などの生体高分子では、重鎖と軽鎖が、多くの場合、規定の位置でジスルフィド結合によって連結されている。抗体分子の軽鎖と重鎖の間のジスルフィド結合の選択的還元により作成された遊離スルフヒドリル基は、ＡＤＣ薬を得るための抗体修飾部位として広く利用されており、その場合には抗体のシステイン残基がカップリング部位として用いられ、最初の成功した市販のＡＤＣ薬であるブレンツキシマブ・ベドチン（Ｂｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ Ｖｅｄｏｔｉｎ）（Ａｄｃｅｔｒｉｓ（登録商標））は、このカップリング法を採用している。加えて、スルフヒドリル部位特異的な突然変異誘発（ＴＨＩＯＭＡＢ法）により操作された抗体は、ＡＤＣ薬の均質性をある程度向上させ、このタイプの抗体のカップリング部位もまたスルフヒドリル型カップリング部位である。上記の様々なタイプのＡＤＣの調製方法において、抗体構造中の遊離スルフヒドリル基とマレイミド基との間のマイケル付加反応によって、チオスクシンイミドが作成され、抗体中の小分子薬の改変方法（図１）を実現することができ、この付加反応は、現在市場に出ているＡＤＣの調製方法においておよび臨床研究において、今や無くてはならないツールとなっている。
【０００８】
チオスクシンイミドの構造は、ＡＤＣリンカーで広く使用されている。現在では、２つの主流のＡＤＣ薬であるアドセトリス（Ａｄｃｅｔｒｉｓ；登録商標）とカドサイラ（Ｋａｄｃｙｌａ；登録商標）、および多数の臨床研究されているＡＤＣは、すべてチオスクシンイミド構造のフラグメントを含んでいる。生物学的カップリングにおけるチオスクシンイミド構造の広範な用途は、主に次の２点に基づいている：（１）その構造は、穏和な生物学的条件下でマレイミド構造とスルフヒドリル基との間のマイケル付加反応を通して直接得ることができる；（２）その付加反応は、高選択性でかつ良好な反応速度論的性質を有し、カップリング工程は、非常に短い時間で、過剰の基質を使用せずに、定量的に完結することができる。
【０００９】
【化１】
2021536430.tif 000003
【００１０】
チオスクシンイミドは明白な利点と広範な適用性を有するが、多くの生物学的カップリング分野における研究は、自発的なチオスクシンイミドの逆マイケル付加反応がコンジュゲートのほぼ半分の緩徐な分解を引き起こし（図２）、それによって毒素に自身の標的を失わせることになることを明らかにした。上述の不安定な性質により引き起こされるオフターゲット毒素は、確実にADCの効果の減少と、毒性および副作用の増加をもたらすだろう（Nature Biotech., 2014, 32(10): 1059-1062; Nature Biotech., 2012, 30(2): 184-189.; Bioconjugate Chem., 2008, 19(3): 759-765; Bioconjug Chem., 2016, 27(7): 1588-1598; J Med Chem., 2014, 57(19): 7890-7899）。
【００１１】
チオスクシンイミドを含むＡＤＣを調製し精製する方法は、どの時点でも上記逆マイケル付加反応が付随して起こる。逆マイケル付加反応により生じるマレイミドとチオールとの間の再付加反応は急速に起こるので、その過程は、通常検出不可能である。しかしながら、別のチオールが存在すると、オフターゲットであるマレイミドがＡＤＣ抗体から任意の別の利用可能なチオールへと転移される。この過程は、血漿中で起こることが確認されており、そこではＡＤＣのマレイミドが血清アルブミンの３４番目のシステイン残基に転移される（Bioconjugate Chem., 2008, 19(3): 759-765）。システインやグルタチオンのようなスルフヒドリル基を含む物質が存在すると、ＡＤＣは上記の毒素オフターゲット過程に入るだろう（Nature Biotech., 2012, 30(2): 184-189)。
【００１２】
研究者らは、チオスクシンイミドにより引き起こされるＡＤＣ中の毒素のオフターゲット問題を長い間取り扱っており、世界中の多数の製薬企業が上記課題を解決する解決策を見つけようと専心している。ＡＤＣ製薬会社であるＧｅｎｅｎｔｅｃｈ社の研究者であるＪｕｎｕｔｕｌａ ＪＲ氏の研究結果は、チオスクシンイミドの構造が逆マイケル付加反応を受けると、競合的な加水分解による開環反応が同時に起こり、その加水分解による開環反応によって得られる生成物の構造が安定であるので、それに連結した毒素は、長時間の間オフターゲットにならないだろう（Nature Biotech., 2012, 30(2): 184-189., 図３）。更なる研究により、開環構造が非常に安定であり、その分解半減期が２年くらいの長期間であり得ることが分かった（Bioconjug Chem., 2015, 26(1): 145-152）。しかしながら、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社の上記研究は、インビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）薬物動態レベルでの研究と分析を含むにすぎず、安定なＡＤＣ生成物は得られなかった。文献調査と本発明者らの更なる実験の結果は、構造安定性のリンカー開環カップリング生成物が、カップリング反応によって直接調製できないことを確証する（Biochem J., 1979, 179(1): 191-197）。
【００１３】
スクシンイミド構造が原因となるＡＤＣ不安定性の問題はまだ上手く解決されておらず、開環型リンカーを用いた安定型ＡＤＣの調製は、まだ大きな問題に直面している。ファイザー社のＬ．Ｎａｔｈａｎ Ｔｕｍｅｙ氏は、スクシンイミドの不安定性により引き起こされる毒素オフターゲットを克服する開環生成物を得るために、アルカリ性条件下で加熱することによってＡＤＣ構造中のスクシンイミドの開環工程を実施しようと試みた（図４）。しかしながら、抗体の等電点に近いアルカリ性条件（ｐＨ＝９．２）中での長時間（４８時間）の加熱（４５℃で）は、抗体の構造の破壊を引き起こし、抗体の約７０％がアスパラギンの脱アミド化変異を有した（Bioconjug Chem., 2014, 25(10): 1871-1880）。この方法は、ＡＤＣ開発において用いる場合にまだ有意な欠陥と限界を有している。
【００１４】
Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ社の研究員であるＬｙｏｎ  ＲＰ氏は、スクシンイミド基の近くに分子内アミノ基を導入し、スクシンイミドの開環過程を誘導し促進した（Nature Biotech., 2014, 32(10): 1059-1062., 図５）。しかしながら、この方策は様々なコントロール不可能な因子を調製工程にもたらし、構造の変化が最終生成物の分布、代謝、薬物動態および効能に様々な影響を引き起こし、それが開環構造を誘導する調製工程を複雑にするので、結果として得られる新規化学物質のｄｒｕｇｇａｂｉｌｉｔｙ（ドラッガビリティ；創薬可能性）と薬物の安全性を更に確かめる必要がある。
【００１５】
現在の研究では、チオスクシンイミドリンカーを上手く置き換えることができる理想的な選択肢はまだ全く存在しない。主流のＡＤＣに共通するチオスクシンイミド構造により引き起こされる毒素のオフターゲット問題をいかに解決するかは、依然として大きな問題に直面している。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１は、抗体カップリングの間にチオスクシンイミドを生成する工程の概略図を示す。
【図２】図２は、チオスクシンイミド構造の不安定性に起因する毒素オフターゲット効果の概略図を示す。
【図３】図３は、チオスクシンイミド構造の２通りの分解方法の概略図を示す。
【図４】図４は、非穏和条件下でのスクシンイミドの加水分解の概略図を示す。
【図５】図５は、スクシンイミド基の近くにアミノ基を導入してスクシンイミドの開環工程を誘導し促進することを示す概略図である。
【図６】図６は、異なる構造のリンカーを含むＡＤＣの経時的なＤＡＲ曲線を示し、ここでＤＡＲの初期値は約８であった。この結果は、マレイン酸メチルリンカー（Ｗ’）を含むＡＤＣが、スクシンイミドリンカー（Ｓｕ）よりもｉｎ ｖｉｔｒｏ（試験管内）安定性が有意に優れていることを示し、更に捕捉剤ＮＡＣの存在下で２１日間以内に有意な毒素オフターゲット効果を示さなかった；対照的に、スクシンイミドリンカー（Ｓｕ）を含むＡＤＣは、同条件下で約３５％の毒素オフターゲット効果を示した。
【図７】図７は、投与後の経時的な腫瘍体積の曲線を示す。結果は、溶媒対照群と比較して、陽性対照群１の全ての動物の腫瘍が縮小したが、部分的にしか抑制されず、全ての動物の腫瘍がまだ残存していた；一方で試験化合物治療群（２．５ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ））では、全ての試験動物の腫瘍が消失し、長期間出現せず、全ての動物が薬剤中断後１カ月間は腫瘍の再発を示さなかった。
【図８】図８は、同じ投与量における異なる構造リンカーを含むＡＤＣの抗腫瘍効果を示す。結果は、２．５ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）の用量で、陽性対照群２のマウスの腫瘍が完全には消失しなかったが、一方で試験化合物治療群のマウスの腫瘍は完全に消失し（治療の終了時、ｐ＝０．００６１）、閉環型スクシンイミドリンカーを含むＡＤＣと比較して、本明細書に提供される開環型マレイン酸メチルリンカーを含むＡＤＣは良好な効果を奏した。
【図９】図９は、異なる投与量の下でのＡＤＣの抗腫瘍効果を示す。結果は、本願の開環型マレイン酸メチルリンカー（Ｗ’）を含むＡＤＣが有意な用量依存性抗腫瘍活性を示し、そして中用量および高用量群の腫瘍は消失した。
【図１０】図１０は、本願の開環型マレイン酸メチルリンカー（Ｗ’）を含むＡＤＣの治療を受けた後の動物の体重変化の曲線を示す。結果は、試験化合物治療群と溶媒対照群との間には基本的に全く有意な差がないことを示し、全ての試験動物が体重の一定な増加を示した。この結果は、本明細書に提供される開環型マレイン酸メチルリンカーを含むＡＤＣがほとんど副作用を生じないことを示唆する。
【図１１】図１１は、本願の開環型マレイン酸メチルリンカー（Ｗ’）を含むＡＤＣの治療を受けた後の３つの投与群（１ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ）の動物についての血液分析の結果を示し、ここで数字「１」と「２」は、投与後２８日目と５８日目の試験動物の全血分析の結果をそれぞれ表す。その結果は、溶媒対照群と試験化合物治療群（１ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇおよび５ｍｇ／ｋｇ）との間に全く有意な差がないことを示した。上記結果は、本明細書に提供される開環型マレイン酸メチルリンカーを含むＡＤＣが、低い血液毒性とオフターゲット骨髄毒性を有することを示し、そのようなＡＤＣが何故十分に忍容されるのかの主な理由であるように見えた。
【図１２】図１２は、顕微鏡下で採取した組織片と骨髄スメア（陽性像）の結果を示し、ここで各投与群が６匹の動物を含み、図の原寸は４２５×３２０μｍであった。結果は、溶媒対照群と比較して、試験化合物治療群が有意な差を呈さなかったことを示した。この実験は、本明細書に提供されるＡＤＣの薬物安全性を更に確証した。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本願の内容
本発明の第１態様は、式Ｉまたは式Ｉ’により表される化合物、その塩または溶媒和物に関する：
【化２】
2021536430.tif 000004
（式中、
Ｗは、
【化３】
2021536430.tif 000005
であり、ここで２つのカルボニル基はＣ＝Ｃ二重結合の同じ側に位置し、それはシス構造であり；
Ｒ１は、Ｃ１−６直鎖状または分枝状アルキルであり、そしてＲ１は、場合により、ハロゲン、Ｃ１−４アルコキシから成る群より選択される１つ以上の置換基で単置換または多置換されることがあり；
Ｌ１は、
【化４】
2021536430.tif 000006
から成る群より選択され；
Ｌ２は、
【化５】
2021536430.tif 000007
であり；
Ｌ３は、
【化６】
2021536430.tif 000008
であり；
Ｒ２は、
【化７】
2021536430.tif 000009
から成る群より選択され；
Ｒ’２は、ハロゲンであり；
Ｒ３は、水素、ハロゲン、メチル、エチル、ニトロ、メトキシ、およびエトキシから成る群より選択され；
ｑは、０または１であり；
ｍ、ｒ、ｔ、ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｊおよびｋは、各々独立に、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０および１１から成る群より選択され；
各ｐは、独立に０、１、２、３または４であり；
Ｙは、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ｇｌｙ、Ｖａｌ−Ｔｈｒ、Ｖａｌ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ｉｌｅ、Ｖａｌ−ＡｓｎおよびＰｈｅ−Ｌｙｓから成る群より選択されたジペプチドを構成するアミノ酸残基であり、ここで、Ｎ末端は、カルボニルに連結され、そしてＣ末端は、Ｎ原子に結合され；
Ｚは、−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−またはＣ（ＣＨ３）２−である。）
【００１８】
本発明の第２態様は、式ＩＩまたは式ＩＩ’により表される化合物、その塩または溶媒和物に関する：
【化８】
2021536430.tif 000010
（式中、
Ｗは、
【化９】
2021536430.tif 000011
であり、その２つのカルボニル基は、Ｃ＝Ｃ結合の同じ側に位置し、それはシス構造であり；
Ｂは、薬物、細胞毒素、検出試薬、診断薬およびターゲティングキャリアから成る群より選択された化合物であり；好ましくは、Ｂは、細胞毒素、抗腫瘍薬、抗ウイルス薬または抗感染症薬であり；更に好ましくは、Ｂは、細胞毒素、例えばチューブリン阻害剤、ＤＮＡアルキル化剤、ＤＮＡインターカレーター（嵌入剤）、酵素阻害剤、代謝拮抗薬、ペプチドまたはヌクレオチドであり；
Ｂは、活性化合物分子中のＮ原子またはＯ原子を介して部位＊に連結され；またはＢは、活性化合物分子中のＮ原子またはＯ原子を介してＬ３に連結され；
Ｒ１は、Ｃ１−６直鎖状または分枝状アルキルであり、そしてＲ１は、ハロゲンおよびＣ１−４アルコキシから成る群より選択された１つ以上の置換基により単置換または多置換されていてもいなくてもよく；
Ｌ１は、
【化１０】
2021536430.tif 000012
から成る群より選択され；
Ｌ２は、
【化１１】
2021536430.tif 000013
であり；
Ｌ３は、
【化１２】
2021536430.tif 000014
であり；
Ｒ３は、水素、ハロゲン、メチル、エチル、ニトロ、メトキシ、エトキシから成る群より選択され；
ｑは、０または１であり；
ｍ、ｒ、ｔ、ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｊおよびｋは、各々独立に０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０および１１から成る群より選択され；
各ｐは、独立に０、１、２、３または４であり；
Ｙは、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ｇｌｙ、Ｖａｌ−Ｔｈｒ、Ｖａｌ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ｉｌｅ、Ｖａｌ−ＡｓｎおよびＰｈｅ−Ｌｙｓから成る群より選択されたジペプチドを形成するアミノ酸残基であり、ここでＮ末端は、カルボニルに連結され、そしてＣ末端はＮ原子に結合され；
Ｚは、−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−またはＣ（ＣＨ３）２−である。）
【００１９】
本発明の第３態様は、式IIIまたは式III’により表される化合物、その塩または溶媒和物に関する：
【化１３】
2021536430.tif 000015
（式中、
Ａは、タンパク質、抗体、ポリペプチド、酵素および小分子化合物から成る群より選択されたターゲティング（標的指向）化合物であり；Ａは、ターゲティング化合物分子中のＳ原子を介して部位＃または＃＃に連結され；
Ｂは、薬物、細胞毒素、検出試薬、ターゲティングキャリアから成る群より選択された活性化合物であり；好ましくは、Ｂは、細胞毒素、抗腫瘍薬、抗ウイルス薬または抗感染症薬であり；更に好ましくは、Ｂは、細胞毒素、例えばチューブリン阻害剤、ＤＮＡアルキル化剤、ＤＮＡインターカレーター（嵌入剤）、酵素阻害剤、代謝拮抗薬、ペプチドまたはヌクレオチドであり；
Ｂは、活性化合物分子中のＮ原子またはＯ原子を介して部位＊に連結され；またはＢは、活性化合物分子中のＮ原子またはＯ原子を介してＬ３に連結され；
ｎは、０．５〜８．５の間の数であり、例えば０．８〜５の間の数、１〜４の間の数、２〜６の間の数、３〜７の間の数、４〜８の間の数、３．５〜８．５の間の数、３．５〜４．５の間の数、６．５〜８．５の間の数であり、好ましくは、ｎは約４、５、６、７または８であり；
Ｒ１は、Ｃ１−６直鎖状または分枝状アルキルであり、そしてＲ１は場合により、ハロゲンおよびＣ１−４アルコキシから成る群より選択された１つ以上の置換基により単置換または多置換されていてもいなくてもよく；
Ｌ１は、
【化１４】
2021536430.tif 000016
から成る群より選択され；
Ｌ２は、
【化１５】
2021536430.tif 000017
であり；
Ｌ３は、
【化１６】
2021536430.tif 000018
であり；
Ｒ３は、水素、ハロゲン、メチル、エチル、ニトロ、メトキシ、エトキシから成る群より選択され；
ｑは、０または１であり；
ｍ、ｒ、ｔ、ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｊおよびｋは、各々独立に０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０および１１から成る群より選択され；
各ｐは、独立に０、１、２、３または４であり；
Ｙは、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ｇｌｙ、Ｖａｌ−Ｔｈｒ、Ｖａｌ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ｉｌｅ、Ｖａｌ−ＡｓｎおよびＰｈｅ−Ｌｙｓから成る群より選択されたジペプチドを形成するアミノ酸残基であり、ここでＮ末端はカルボニルに連結され、そしてＣ末端はＮ原子に結合され；
Ｚは、−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−またはＣ（ＣＨ３）２−である。）
【００２０】
幾つかの実施形態では、本願は、式Ｉ、式Ｉ’、式II、式II’、式III、式III’により表される化合物、その塩または溶媒和物に関する：
（式中、
Ｗは、
【化１７】
2021536430.tif 000019
であり、その２つのカルボニル基は、Ｃ＝Ｃ二重結合の同じ側に位置し、それはシス構造であり；
Ｒ１は、Ｃ１−６直鎖状または分枝状アルキルであり、そしてＲ１はハロゲンおよびＣ１−４アルコキシから成る群より選択された１つ以上の置換基で、単置換または多置換されていてもいなくてもよく；
Ｌ１は、
【化１８】
2021536430.tif 000020
から成る群より選択され；
Ｌ２は、
【化１９】
2021536430.tif 000021
であり；
Ｌ３は、
【化２０】
2021536430.tif 000022
であり；
Ｒ３は、水素、ハロゲン、メチル、エチル、ニトロ、メトキシおよびエトキシから成る群より選択され；
ｑは、０または１であり；
ｍ、ｔ、ｒは、各々独立に０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０および１１から成る群より選択され；
各ｐは、独立に０、１、２、３または４であり；
Ｙは、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ｇｌｙ、Ｖａｌ−Ｔｈｒ、Ｖａｌ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ｉｌｅ、Ｖａｌ−ＡｓｎおよびＰｈｅ−Ｌｙｓから成る群より選択されたジペプチドを形成するアミノ酸残基であり、ここでＮ末端はカルボニルに連結され、そしてＣ末端はＮ原子に結合され；
Ｚは、−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−または−Ｃ（ＣＨ３）２−である。
【００２１】
本願発明の幾つかの態様によれば、本願発明は、式Ｉ、式Ｉ’、式ＩＩ、式ＩＩ’、式ＩＩＩ、式ＩＩＩ’により表される化合物、その塩または溶媒和物に関する：
（式中、
Ｗは、
【化２１】
2021536430.tif 000023
であり、その２つのカルボニル基はＣ＝Ｃ二重結合の同じ側に位置し、それはシス構造であり；
Ｒ１は、Ｃ１−６直鎖状または分枝状アルキルであり、そしてＲ１はハロゲンおよびＣ１−４アルコキシから成る群より選択された１つ以上の置換基で、単置換または多置換されていてもいなくてもよく；
Ｌ１は、−（ＣＨ２）ｅ−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｆ−（ＣＨ２）ｇ−および
−（ＣＨ２）ｈ−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−ＣＨ［（ＣＨ２）ｉ−ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−（ＣＨ２）ｋ−ＣＨ３］−
から成る群より選択され；
Ｌ２は、
【化２２】
2021536430.tif 000024
であり；
Ｌ３は、
【化２３】
2021536430.tif 000025
であり；
Ｒ３は、水素、ハロゲン、メチル、エチル、ニトロ、メトキシおよびエトキシから成る群より選択され；
ｑは、０または１であり；
ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｊおよびｋは、各々独立に０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０および１１から成る群より選択され；
各ｐは、独立に０、１、２、３または４であり；
Ｙは、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ｇｌｙ、Ｖａｌ−Ｔｈｒ、Ｖａｌ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ｉｌｅ、Ｖａｌ−ＡｓｎおよびＰｈｅ−Ｌｙｓから成る群より選択されたジペプチドを形成するアミノ酸残基であり、ここでＮ末端はカルボニルに連結され、そしてＣ末端はＮ原子に結合され；
Ｚは、−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−または−Ｃ（ＣＨ３）２−である。）
【００２２】
幾つかの実施形態では、本願発明は、式ＩＩＩまたは式ＩＩＩ’により表される化合物、その塩または溶媒和物に関する：
（式中、
Ａは、式ＩＩＩ−１または式ＩＩＩ’−１に示されるようなターゲティング（標的指向）化合物中のＳ原子を介して部位＃に連結され；
【化２４】
2021536430.tif 000026
ここで置換基の定義は本願明細書に記載される通りである。）
【００２３】
幾つかの実施形態では、本願明細書に記載されるような式Ｉ、式Ｉ’、式ＩＩ、式ＩＩ’、式ＩＩＩ、式ＩＩＩ’、式ＩＩＩ−１または式ＩＩＩ’−１により表される化合物、その塩または溶媒和物において、
Ｌ１は、
【化２５】
2021536430.tif 000027
から成る群より選択され；
Ｒ３は水素、ハロゲン、メチル、エチル、ニトロ、メトキシおよびエトキシから成る群より選択され；好ましくは、Ｒ３は水素、ハロゲン、メチルおよびエチルから成る群より選択され；
ｍは、０、１、２、３、４および５から成る群より選択され；好ましくは、ｍは、０、１、２、３、４から成る群より選択され；
各pは、独立に０、１、２、３または４であり；好ましくは、各pは、独立に０、１、２または３であり；より好ましくは、各pは、独立に０、１または２であり；より好ましくは、各pは、独立に０である。
【００２４】
幾つかの実施形態では、本願明細書中に記載される式Ｉ、式Ｉ’、式ＩＩ、式ＩＩ’、式ＩＩＩ、式ＩＩＩ’、式ＩＩＩ−１または式ＩＩＩ’−１により表される化合物、その塩または溶媒和物において、
Ｌ１は、
【化２６】
2021536430.tif 000028
【００２５】
から成る群より選択され；
Ｒ３は、水素、ハロゲン、メチル、エチル、ニトロ、メトキシおよびエトキシから成る群より選択され；好ましくは、Ｒ３は水素、ハロゲン、メチルおよびエチルから成る群より選択され；
ｍは、０、１、２、３、４から成る群より選択され；
各ｐは、独立に０、１、２、３または４であり；好ましくは、各ｐは、独立に０、１、２または３であり；より好ましくは、各ｐは、独立に０、１または２であり；より好ましくは、各ｐは、独立に０である。
【００２６】
幾つかの実施形態では、本願明細書中に記載される式Ｉ、式Ｉ’、式ＩＩ、式ＩＩ’、式ＩＩＩ、式ＩＩＩ’、式ＩＩＩ−１または式ＩＩＩ’−１により表される化合物、その塩または溶媒和物において、
Ｌ２は、
【化２７】
2021536430.tif 000029
であり、ここで
Ｙは、Ｖａｌ−ＣｉｔまたはＶａｌ−Ａｌａを形成するアミノ酸残基であり、ここでＮ末端はカルボニルに連結されそしてＣ末端はＮ原子に連結され；
Ｚは、−ＣＨ２−であり；
Ｒ３およびｐの定義は本明細書中に記載の通りである。
【００２７】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩまたは式ＩＩＩ−１により表される化合物において、
Ｌ２は、
【化２８】
2021536430.tif 000030
であり、ここで
Ｙは、Ｖａｌ−Ｃｉｔを構成するアミノ酸残基であり、ここでＮ末端はカルボニルに連結されそしてＣ末端はＮ原子に連結され；
Ｚ、Ｒ３およびｐの定義は、本明細書中に記載の通りである。
【００２８】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩまたは式ＩＩＩ−１により表される化合物中、
Ｌ２は、
【化２９】
2021536430.tif 000031
であり、ここで
Ｙは、Ｖａｌ−Ａｌａを構成するアミノ酸残基であり、ここでＮ末端はカルボニルに連結されそしてＣ末端はＮ原子に連結され；
Ｚ、Ｒ３およびｐの定義は、本明細書中に記載の通りである。
【００２９】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉにより表される化合物、その塩または溶媒和物中、
Ｒ２は、
【化３０】
2021536430.tif 000032
である。
【００３０】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉにより表される化合物、その塩または溶媒和物中、
Ｒ２が、
【化３１】
2021536430.tif 000033
であり；
ｑが、０であるか、または
Ｒ２が、
【化３２】
2021536430.tif 000034
（Ｒ３とｐは本明細書に記載の通りである）
であり；
ｑが、１である。
【００３１】
幾つかの実施形態では、式Ｉにより表される化合物、その塩または溶媒和物中、
Ｒ２は、
【化３３】
2021536430.tif 000035
であり；
ｑが、０であるか、または
Ｒ２が
【化３４】
2021536430.tif 000036
（Ｒ３とｐは本明細書に記載の通りである）
であり；
ｑが、１である。
【００３２】
幾つかの実施形態では、本発明は、式Ｉの化合物、その塩または溶媒和物に関し、ここでＲ２は、
【化３５】
2021536430.tif 000037
である。
【００３３】
幾つかの実施形態では、本発明は、式Ｉの化合物、その塩または溶媒和物に関し、ここでＲ２は、
【化３６】
2021536430.tif 000038
（Ｒ３とｐは本明細書に記載の通りである）
である。
【００３４】
幾つかの実施形態では、本発明は、式Ｉの化合物、その塩または溶媒和物に関し、ここで該化合物は式ＩＶにより表され：
【化３７】
2021536430.tif 000039
（式中、
Ｗは、
【化３８】
2021536430.tif 000040
であり、その２つのカルボニル基はＣ＝Ｃ二重結合の同じ側に存在し、それはシス構造であり；
Ｒ１は、Ｃ１−６直鎖状または分枝状アルキルであり、そしてＲ１は、ハロゲンおよびＣ１−４アルコキシから成る群より選択された１つ以上の置換基により単置換または多置換されていてもいなくてもよく；
Ｌ１は、
【化３９】
2021536430.tif 000041
から成る群より選択され；
好ましくは、Ｌ１は、
【化４０】
2021536430.tif 000042
から成る群より選択され；
Ｒ’は、アミノ酸残基の可変基（Ｒ）中の置換基側鎖であり；Ｒ’は、−ＣＨ３、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２、−（ＣＨ２）４−ＮＨ２、−Ｈ、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＯＨ、−ＣＨ−（ＣＨ３）２、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ３または−ＣＨ２−ＣＯＮＨ２であり；Ｒ’は、好ましくは、−ＣＨ３または−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２であり；
Ｒ２は、
【化４１】
2021536430.tif 000043
から成る群より選択され；
Ｒ３は水素、ハロゲン、メチル、エチル、ニトロ、メトキシおよびエトキシから成る群より選択され；好ましくは、Ｒ３は、水素、ハロゲン、メチルおよびエチルから成る群より選択され；
ｍ、ｒ、ｔは、各々独立に０、１、２、３および４から成る群より選択され；
ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｊおよびｋは、各々独立に０、１、２、３、４、５、６、７、８、９および１０から成る群より選択され；
各ｐは、独立に０、１、２、３または４から成る群より選択され；好ましくは、各ｐは、独立に０、１、２または３であり；より好ましくは、各ｐは、独立に０、１または２であり；より好ましくは、各ｐは、独立に０である。
【００３５】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式ＩＶにより表される化合物中、Ｌ１は、−（ＣＨ２）ｅ−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｆ−（ＣＨ２）ｇ−、および−（ＣＨ２）ｈ−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−ＣＨ［（ＣＨ２）ｉ−ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−（ＣＨ２）ｋ−ＣＨ３］−から成る群より選択され；
ここでｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｊ、ｋは、本明細書中に定義される通りである。
【００３６】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式IVにより表される化合物中、Ｌ1 は
【化４２】
2021536430.tif 000044
から成る群より選択され；
ここでＲ３とｐは、本明細書中に定義される通りである。
【００３７】
幾つかの実施形態では、本発明は、式Ｉ’により表される化合物、その塩または溶媒和物に関し、ここで該化合物は式ＩＶ’により表される化合物であり：
【化４３】
2021536430.tif 000045
（式中、
Ｗは、
【化４４】
2021536430.tif 000046
であり、その２つのカルボニル基は、Ｃ＝Ｃ二重結合の同じ側に位置し、それはシス構造であり；
Ｒ１は、Ｃ１−６直鎖状または分枝状アルキルであり、そしてＲ１  は場合によりハロゲンおよびＣ１−４アルコキシから成る群より選択された１つ以上の置換基により単置換または多置換されていてもいなくてもよく；
Ｌ１は、
【化４５】
2021536430.tif 000047
から成る群より選択され；好ましくは、Ｌ１は、
【化４６】
2021536430.tif 000048
から成る群より選択され；
Ｒ’は、アミノ酸残基の可変基（Ｒ）であり；Ｒ’は、−ＣＨ３、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２、−（ＣＨ２）４−ＮＨ２、−Ｈ、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＯＨ、−ＣＨ−（ＣＨ３）２、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ３または−ＣＨ２−ＣＯＮＨ２であり；Ｒ’は、好ましくは、−ＣＨ３または−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２であり；
Ｒ３は、水素、ハロゲン、メチル、エチル、ニトロ、メトキシおよびエトキシから成る群より選択され；好ましくは、Ｒ３は、水素、ハロゲン、メチルおよびエチルから成る群より選択され；
ｍ、ｒ、ｔは、各々独立に０、１、２、３および４から成る群より選択され；
ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｊおよびｋは、各々独立に０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から成る群より選択され；
各ｐは、独立に０、１、２、３または４であり；好ましくは、各ｐは、独立に０、１、２または３であり；より好ましくは、各ｐは独立に０、１または２であり；更により好ましくは、各ｐは、独立に０である。
【００３８】
幾つかの実施形態において、本明細書中に記載の式ＩＶ’により表される化合物中、Ｌ１は、−（ＣＨ２）ｅ−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｆ−（ＣＨ２）ｇ−、および
−（ＣＨ２）ｈ−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−ＣＨ［（ＣＨ２）ｉ−ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−（ＣＨ２）ｋ−ＣＨ３］−
から成る群より選択され、ここでｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｊおよびｋは本明細書中に定義される通りである。
【００３９】
幾つかの実施形態において、本明細書中に記載の式ＩＶ’により表される化合物において、Ｌ１は、
【化４７】
2021536430.tif 000049
から成る群より選択され、ここでＲ３とｐは本明細書中に定義される通りである。
【００４０】
幾つかの実施形態では、本発明は、式ＩＩ’により表される化合物、その塩または溶媒和物に関し、ここで該化合物は式Ｖにより表される化合物であり：
【化４８】
2021536430.tif 000050
（式中、
Ｗは、
【化４９】
2021536430.tif 000051
であり、その２つのカルボニル基はＣ＝Ｃ二重結合の同じ側に位置し、それはシス構造であり；
Ｂは、薬物、細胞毒素、検出試薬、診断試薬およびターゲティングキャリアから成る群より選択された活性化合物であり；好ましくは、Ｂは細胞毒素、抗腫瘍薬、抗ウイルス薬または抗感染症薬であり；更に好ましくは、Ｂは細胞毒素、例えばチューブリン阻害剤、代謝拮抗薬、ペプチドまたはヌクレオチドであり；
Ｂは、前記活性化合物中のＮ原子またはＯ原子を介して部位＊＊に連結され；
Ｒ１は、Ｃ１−４直鎖状または分枝状アルキルであり、そしてＲ１は、ハロゲンおよびＣ１−４アルコキシから成る群より選択された１つ以上の置換基により単置換または多置換されていてもいなくてもよく；
Ｌ１は、
【化５０】
2021536430.tif 000052
から成る群より選択され；
好ましくは、Ｌ１は、
【化５１】
2021536430.tif 000053
から成る群より選択され；
Ｒ’は、アミノ酸残基の可変基（Ｒ）中の置換基側鎖であり；
Ｒ’は、−ＣＨ３、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２、−（ＣＨ２）４−ＮＨ２、−Ｈ、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＯＨ、−ＣＨ−（ＣＨ３）２、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ３または−ＣＨ２−ＣＯＮＨ２から成る群より選択され；  Ｒ’は、好ましくは−ＣＨ３または−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２から成る群より選択され；
Ｒ３は、水素、ハロゲン、メチル、エチル、ニトロ、メトキシおよびエトキシから成る群より選択され；好ましくは、Ｒ３は、水素、ハロゲン、メチルおよびエチルから成る群より選択され；
ｍ、ｒおよびｔは、各々独立に０、１、２、３および４から成る群より選択され；
ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｊおよびｋは、各々独立に０、１、２、３、４、５、６、７、８、９および１０から成る群より選択され；
各ｐは、独立に０、１、２、３または４であり；好ましくは、各ｐは、独立に０、１、２または３であり；より好ましくは、各ｐは、独立に０、１または２であり；より好ましくは、各ｐは、独立に０である。
【００４１】
幾つかの実施形態において、本明細書中に記載の式Ｖにより表される化合物において、  Ｌ１は、−（ＣＨ２）ｅ−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｆ−（ＣＨ２）ｇ−  および
−（ＣＨ２）ｈ−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−ＣＨ［（ＣＨ２）ｉ−ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−（ＣＨ２）ｋ−ＣＨ３］−
から成る群より選択され、ここでｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｊおよびｋは、本明細書中に定義される通りである。
【００４２】
幾つかの実施形態において、本明細書中に記載の式Ｖにより表される化合物において、
Ｌ１は、
【化５２】
2021536430.tif 000054
から成る群より選択され、ここでＲ３とｐは、本明細書中に定義される通りである。
【００４３】
幾つかの実施形態では、本発明は、式ＩＩＩにより表される化合物、その塩または溶媒和物に関し、前記化合物は式ＶＩにより表され、
【化５３】
2021536430.tif 000055
（式中、
Ａは、タンパク質、抗体、ポリペプチド、酵素および低分子化合物から成る群より選択されたターゲティング（標的指向）化合物であり；Ａは、ターゲティング化合物分子中のＳ原子を介して部位＃または＃＃に連結され；
Ｂは、薬物、細胞毒素、検出試薬、診断試薬およびターゲティングキャリアから成る群より選択された活性化合物であり；好ましくは、Ｂは、細胞毒素、抗腫瘍薬、抗ウイルス薬または抗感染症薬であり、更に好ましくは、Ｂは、活性化合物分子中のＮ原子またはＯ原子を介して部位＊に連結され；
ｎは、０．５〜８．５の間の数、例えば０．８〜５の間の数、１〜４の間の数、２〜６の間の数、３〜７の間の数、４〜８の間の数、３．５〜８．５の間の数、３．５〜４．５の間の数、または６．５〜８．５の間の数であり、好ましくは、ｎは、約４、５、６、７または８であり；
Ｒ１は、Ｃ１−６  直鎖状または分枝状アルキル基であり、そしてＲ１は、ハロゲンおよびＣ１−４アルコキシから成る群より選択された１つ以上の置換基により単置換または多置換されていてもいなくてもよく；
Ｌ１は、
【化５４】
2021536430.tif 000056
から成る群より選択され；
好ましくは、Ｌ１は、
【化５５】
2021536430.tif 000057
から成る群より選択され；
Ｒ’は、アミノ酸残基の可変基（Ｒ）中の置換基側鎖であり；好ましくは、Ｒ’は、−ＣＨ３、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２、−（ＣＨ２）４−ＮＨ２、−Ｈ、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＯＨ、−ＣＨ−（ＣＨ３）２、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ３またはＣＨ２−ＣＯＮＨ２であり、Ｒ’は、好ましくは、−ＣＨ３または−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２であり；
各Ｒ３は、独立に水素、ハロゲン、メチル、エチル、ニトロ、メトキシおよびエトキシから成る群より選択され；好ましくは、各Ｒ３は、独立に水素、ハロゲン、メチルおよびエチルから成る群より選択され；
ｍ、ｒおよびｔは、独立に０、１、２、３および４から成る群より選択され；
ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｊおよびｋは、各々独立に０、１、２、３、４、５、６、７、８、９および１０から成る群より選択され；
各ｐは、独立に０、１、２、３または４であり；好ましくは、各ｐは、独立に０、１、２または３であり；より好ましくは、各ｐは独立に０、１または２であり；より好ましくは、各ｐは、独立に０である。
【００４４】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式VIにより表される化合物において、Ｌ1 は
−（ＣＨ２）ｅ−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｆ−（ＣＨ２）ｇ−および
−（ＣＨ２）ｈ−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−ＣＨ［（ＣＨ２）ｉ−ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−（ＣＨ２）ｋ−ＣＨ３］−
から成る群より選択され；
ここでｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｊおよびｋは、本明細書中に定義される通りである。
【００４５】
幾つかの実施形態では、本明細書中に記載の式VIにより表される化合物において、Ｌ1は、
【化５６】
2021536430.tif 000058
から成る群より選択され、ここでＲ３とｐは、本明細書に定義される通りである。
【００４６】
幾つかの実施形態では、本発明は、式ＩＩＩ’により表される化合物、その塩または溶媒和物に関し、ここで前記化合物は式ＶＩ’の化合物である：
【化５７】
2021536430.tif 000059
（式中、
Ａは、タンパク質、抗体、ポリペプチド、酵素および小分子から成る群より選択されたターゲティング（標的指向）化合物であり；Ａはターゲティング化合物分子中のＳ原子を介して部位＃  または＃＃に連結され；
Ｂは、薬物、細胞毒素、検出試薬、診断試薬およびターゲティングキャリアから成る群より選択された活性化合物であり；好ましくは、Ｂは、細胞毒素、抗腫瘍薬、抗ウイルス薬または抗感染症薬であり；さらに好ましくは、Ｂは、細胞毒素、抗腫瘍薬、抗ウイルス薬または抗感染症薬であり；さらに好ましくは、Ｂは細胞毒素、例えばチューブリン阻害剤、ＤＮＡアルキル化剤、ＤＮＡインターカレーター（嵌入剤）、酵素阻害剤、代謝拮抗薬、ペプチドまたはヌクレオチドであり；Ｂは、活性化合物分子中のＮ原子またはＯ原子を介して部位＊＊に連結され；
ｎは、０．５〜８．５の間の数であり；例えば０．８〜５の間の数、１〜４の間の数、２〜６の間の数、３〜７の間の数、４〜８の間の数、３．５〜８．５の間の数、３．５〜４．５の間の数、または６．５〜８．５の間の数であり、好ましくは、ｎは、約４、５、６、７または８であり；
Ｒ１は、Ｃ１−６直鎖状または分枝状アルキル基であり、そしてＲ１は、ハロゲンおよびＣ１−４アルコキシから成る群より選択された１つ以上の置換基により単置換または多置換されていてもいなくてもよく；
Ｌ１は、
【化５８】
2021536430.tif 000060
から成る群より選択され；好ましくは、Ｌ１は、
【化５９】
2021536430.tif 000061
から成る群より選択され；
Ｒ’は、アミノ酸残基中の置換基側鎖であり；好ましくは、Ｒ’は、−ＣＨ３、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２、−（ＣＨ２）４−ＮＨ２、−Ｈ、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＯＨ、−ＣＨ−（ＣＨ３）２、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ３または−ＣＨ２−ＣＯＮＨ２であり、Ｒ’は、好ましくは、−ＣＨ３または−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２であり；
各Ｒ３は、独立に水素、ハロゲン、メチル、エチル、ニトロ、メトキシおよびエトキシから成る群より選択され；好ましくは、各Ｒ３は、独立に水素、ハロゲン、メチルおよびエチルから成る群より選択され；
ｍ、ｒおよびｔは、各々独立に０、１、２、３および４から成る群より選択され；
ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｊおよびｋは、各々独立に０、１、２、３、４、５、６、７、８、９および１０から成る群より選択され；
ｐは、０、１、２、３または４であり；好ましくは、ｐは、０、１、２または３であり；より好ましくは、ｐは、０、１または２であり；より好ましくは、ｐは、０である。）
【００４７】
幾つかの実施形態では、本明細書中に記載の式ＶＩ’により表される化合物において、Ｌ１は−（ＣＨ２）ｅ−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｆ−（ＣＨ２）ｇ−および
−（ＣＨ２）ｈ−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−ＣＨ［（ＣＨ２）ｉ−ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−（ＣＨ２）ｋ−ＣＨ３］−
から成る群より選択され、ここでｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｊおよびｋは、本明細書中に定義される通りである。
【００４８】
幾つかの実施形態では、本明細書中に記載の式ＶＩ’により表される化合物において、
Ｌ１は、
【００４９】
【化６０】
2021536430.tif 000062
から成る群より選択され；ここでＲ３とｐは、本明細書中に定義される通りである。
【００５０】
幾つかの実施形態では、本発明は、式ＶＩまたは式ＶＩ’により表される化合物、その塩または溶媒和物に関し、ここでＡは、ターゲティング（標的指向）化合物分子中のＳ原子を介して部位＃に連結され。そして該化合物は式ＶＩ−１または式ＶＩ’−１に示される通りである：
【化６１】
2021536430.tif 000063
（式中、
Ａは、タンパク質、抗体、ポリペプチド、酵素および小分子から成る群より選択されるターゲティング（標的指向）化合物であり；Ａは、ターゲティング化合物分子中のＳ原子を介して部位＃に連結され；
Ｂは、薬物、細胞毒素、検出試薬、診断薬およびターゲティングキャリアから成る群より選択された活性化合物であり；好ましくは、Ｂは、細胞毒素、例えばチューブリン阻害剤、ＤＮＡアルキル化剤、ＤＮＡインターカレーター（嵌入剤）、酵素阻害剤、代謝拮抗薬、ペプチドまたはヌクレオチドであり；Ｂは、活性化合物分子中のＮ原子またはＯ原子を介して部位＊または＊＊に連結され；
ｎは、０．５〜８．５の間の数、０．８〜５の間の数、１〜４の間の数、２〜６の間の数、３〜７の間の数、４〜８の間の数、３．５〜８．５の間の数、３．５〜４．５の間の数、または６．５〜８．５の間の数であり、好ましくは、ｎは、約４、５、６、７または８であり；
Ｒ１は、Ｃ１−６直鎖状または分枝状アルキル基であり、そしてＲ１は、ハロゲンおよびＣ１−４アルコキシから成る群より選択された１つ以上の置換により単置換または多置換されていてもいなくてもよく；
Ｌ１は、
【化６２】
2021536430.tif 000064
から成る群より選択され；
好ましくは、Ｌ１は、
【化６３】
2021536430.tif 000065
から成る群より選択され；
Ｒ’は、アミノ酸残基中の可変基（Ｒ）中の置換基側鎖であり；Ｒ’は、−ＣＨ３、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２、−（ＣＨ２）４−ＮＨ２、−Ｈ、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＯＨ、−ＣＨ−（ＣＨ３）２、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ３または−ＣＨ２−ＣＯＮＨ２であり、Ｒ’は、好ましくは−ＣＨ３または−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２であり；
Ｒ３は、水素、ハロゲン、メチル、エチル、ニトロ、メトキシおよびエトキシから成る群より選択され；好ましくは、Ｒ３は、水素、ハロゲン、メチルおよびエチルから成る群より選択され；
ｍ、ｒおよびｔは、各々独立に０、１、２、３および４から成る群より選択され；
ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｊおよびｋは、各々独立に０、１、２、３、４、５、６、７、８、９および１０から成る群より選択され；
各ｐは、独立に０、１、２、３または４であり；好ましくは、各ｐは、独立に０、１、２または３であり；より好ましくは、各ｐは、独立に０、１または２であり；より好ましくは、各ｐは、独立に０である。
【００５１】
幾つかの実施形態では、本明細書中に記載の式ＶＩ’−１により表される化合物において、  Ｌ１は、
−（ＣＨ２）ｅ−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｆ−（ＣＨ２）ｇ−および
−（ＣＨ２）ｈ−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−ＣＨ［（ＣＨ２）ｉ−ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−（ＣＨ２）ｋ−ＣＨ３］−
から成る群より選択され、
ここで各ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｊおよびｋは、本明細書中に定義される通りである。
【００５２】
幾つかの実施形態では、本明細書中に記載の式ＶＩ’−１により表される化合物において、  Ｌ１は、
【化６４】
2021536430.tif 000066
から成る群より選択され、ここでＲ３とｐは、本明細書中に定義される通りである。
【００５３】
幾つかの実施形態では、本明細書中に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、Ｌ１は、−（ＣＨ２）ｅ−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｆ−（ＣＨ２）ｇ−であり、ここでｅ、ｆおよびｇは、本明細書中に定義される通りである。
【００５４】
幾つかの実施形態では、本明細書中に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、Ｌ１は、−（ＣＨ２）ｈ−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−ＣＨ［（ＣＨ２）ｉ−ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−（ＣＨ２）ｋ−ＣＨ３］−であり、ここでｈ、ｉ、ｊおよびｋは、本明細書に定義される通りである。
【００５５】
幾つかの実施形態では、本明細書中に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１または式ＶＩ’−１中、ｅ、ｆおよびｇは、各々独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９および１０から成る群より選択される。
【００５６】
幾つかの実施形態では、本明細書中に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１または式ＶＩ’−１中、ｈ、ｉ、ｊおよびｋは、各々独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９および１０から成る群より選択される。
【００５７】
幾つかの実施形態では、本願明細書に記載の式Ｉ〜VI、式I’〜VI’、式III-1、式III’-1、式VI-1、または式VI’-1中、eは、１、２、３、４、５、６、７または８である。
【００５８】
幾つかの実施形態では、本願明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、ｅは、１または２である。
【００５９】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、ｅは、３または４である。
【００６０】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、ｅは、５または６である。
【００６１】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、ｅは、７または８である。
【００６２】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、ｆは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または１１である。
【００６３】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、ｆは、１または２である。
【００６４】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、ｆは、３または４である。
【００６５】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、ｆは、５または６である。
【００６６】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、ｆは、７または８である。
【００６７】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、ｆは、９、１０または１１である。
【００６８】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、ｇは、１、２、３、４、５または６である。
【００６９】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、ｇは、１または２である。
【００７０】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、ｇは、３または４である。
【００７１】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、ｇは、５または６である。
【００７２】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、ｈは、１、２、３、４、５、６、７または８である。
【００７３】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜VI、式Ｉ’〜VI’、式III-1、式III’-1、式VI-1、または式VI’-1中、hは、１または２である。
【００７４】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜VI、式Ｉ’〜VI’、式III-1、式III’-1、式VI-1、または式VI’-1中、hは、３または４である。
【００７５】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜VI、式Ｉ’〜VI’、式III-1、式III’-1、式VI-1、または式VI’-1中、hは、５または６である。
【００７６】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜VI、式Ｉ’〜VI’、式III-1、式III’-1、式VI-1、または式VI’-1中、hは、７または８である。
【００７７】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜VI、式Ｉ’〜VI’、式III-1、式III’-1、式VI-1、または式VI’-1中、iは、１、２、３、４、５、６、７または８である。
【００７８】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜VI、式Ｉ’〜VI’、式III-1、式III’-1、式VI-1、または式VI’-1中、iは、１または２である。
【００７９】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、ｉは、３または４である。
【００８０】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、ｉは、５または６である。
【００８１】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、ｉは、７または８である。
【００８２】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、ｊは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または１１である。
【００８３】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、ｊは、１または２である。
【００８４】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、ｊは、３、４または５である。
【００８５】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、ｊは、６または７である。
【００８６】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、ｊは、８または９である。
【００８７】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、ｊは、１０または１１である。
【００８８】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、ｋは、０、１、２、３、４または５である。
【００８９】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、ｋは、０である。
【００９０】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、ｋは、１または２である。
【００９１】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、ｋは、３、４または５である。
【００９２】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、ｑは、０である。
【００９３】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、ｑは、１である。
【００９４】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、Ｒ３は、水素である。
【００９５】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、Ｒ３は、ハロゲンである。
【００９６】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、Ｒ３は、メチルである。
【００９７】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、Ｒ３は、エチルである。
【００９８】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、Ｒ３は、ニトロである。
【００９９】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、Ｒ３は、メトキシである。
【０１００】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、Ｒ３は、エトキシである。
【０１０１】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、Ｌ１は、−（ＣＨ２）ｍ−であり、ｍは、１または２である。
【０１０２】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、Ｌ１は、−（ＣＨ２）ｍ−であり、ｍは、３または４である。
【０１０３】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、Ｌ１は、−（ＣＨ２）ｍ−であり、ｍは、５または６である。
【０１０４】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、Ｌ１は、−（ＣＨ２）ｍ−であり、ｍは、７または８である。
【０１０５】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、Ｌ１は、
【化６５】
2021536430.tif 000067
である。
【０１０６】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式Ｉ〜ＶＩ、式Ｉ’〜ＶＩ’、式ＩＩＩ−１、式ＩＩＩ’−１、式ＶＩ−１、または式ＶＩ’−１中、Ｒ１は、Ｃ１−４アルキル基、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチルであり、好ましくはメチルである。
【０１０７】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＩ’、式ＩＩＩ’、式ＩＩＩ−１または式ＩＩＩ’−１により表される化合物、またはその塩もしくは溶媒和物中、Ｂは、アウリスタチン、メチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、メイタンシンまたはその誘導体（メイタンシノイド、ＤＭ１，ＤＭ３，ＤＭ４）、パクリタキセル、カリケアミシン、デュオカルミシン、ドキソルビシン、カンプトテシン、ＰＢＤ（ピロロベンゾジアゼピン）細胞毒素およびその誘導体から成る群より選択される。
【０１０８】
幾つかの実施形態では、本願明細書に記載の式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＩ’、式ＩＩＩ’、式ＩＩＩ−１または式ＩＩＩ’−１により表される化合物、またはその塩もしくは溶媒和物中、Ｂは、モノメチル−アウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）である。
【０１０９】
幾つかの実施形態では、本願明細書に記載の式ＩＩＩ、式ＩＩＩ’、式ＩＩＩ−１または式ＩＩＩ’−１により表される化合物、またはその塩もしくは溶媒和物中、Ａは、モノクローナル抗体（ＭＡＢ）であり、または
Ａは、抗体断片またはその代替物または変異体、タンパク質リガンドまたはタンパク質足場を含み；
好ましくは、Ａは、Ａ中のＳ原子を介して部位＃に連結され、
好ましくは、Ａは、Ａ中のシステイン残基のＳ原子を介して部位＃に連結される。
【０１１０】
幾つかの実施形態では、式ＩＩＩ、式ＩＩＩ’、式ＩＩＩ−１もしくは式ＩＩＩ’−１により表される化合物、またはその塩もしくは溶媒和物中、Ａは、カップリング部位としてスルフヒドリルを有するモノクローナル抗体、または部位特異的変異誘発または修飾を有しかつカップリング部位としてスルフヒドリルを有するモノクローナル抗体である。
【０１１１】
幾つかの実施形態では、式ＩＩＩ、式ＩＩＩ’、式ＩＩＩ−１もしくは式ＩＩＩ’−１により表される化合物、またはその塩もしくは溶媒和物中、Ａは、抗ＨＥＲ２ヒト化モノクローナル抗体ｍｉｌ４０、抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体トラスツズマブ（ハーセプチン；ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））およびペルツズマブ（パージェタ；ＰＥＲＪＥＴＡ（登録商標））、抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体セツキシマブ（アービタックス；ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標））およびパニツムマブ（ベクティビックス；ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標））、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体リツキシマブ（リツキサン；ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））、抗ＣＤ５２モノクローナル抗体アレムツズマブ（キャンパス；ＣＡＭＰＡＴＨ（登録商標））、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体イブリツモマブ（ゼヴァリン；ＺＥＶＡＬＩＮ（登録商標））、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体トシツモマブ（ベキサール；ＢＥＸＸＡＲ（登録商標））、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体オファツムマブ（アーゼラ；ＡＲＺＥＲＲＡ（登録商標））、抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体ベバシズマブ（アバスチン；ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））、抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体イピリムマブ（ヤーボイ；ＹＥＲＶＯＹ（登録商標））、抗ＲＡＮＫＬモノクローナル抗体デノスマブ（ザイゲバ；ＸＧＥＶＡ（登録商標））、抗ＰＤ−１モノクローナル抗体ペムブロリズマブ（キートルダ；ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標））、ニボルマブ  （オプジーボ；Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標））およびアベルマブ（バベンチオ；Ｂａｖｅｎｃｉｏ（登録商標））、抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体アテゾリズマブ（テセントリク；Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ（登録商標））およびデュルバルマブ（イミフィンジ；Ｉｍｆｉｎｊｉ（登録商標））、抗ＴＲＯＰ−２モノクローナル抗体サシツズマブ、抗ＤＬＬ−３モノクローナル抗体ロバルピツズマブ、並びにその生物学的類似体から成る群より選択される。
【０１１２】
幾つかの実施形態では、式ＩＩＩ、式ＩＩＩ’、式ＩＩＩ−１もしくは式ＩＩＩ’−１により表される化合物、またはその塩もしくは溶媒和物中、Ａは、抗ＨＥＲ２ヒト化モノクローナル抗体ｍｉｌ４０である。
【０１１３】
幾つかの実施形態では、式ＩＩＩ、式ＩＩＩ’、式ＩＩＩ−１もしくは式ＩＩＩ’−１により表される化合物、または式ＶＩ、式ＶＩ’、式ＶＩ−１もしくは式ＶＩ’−１により表される化合物、またはその塩もしくは溶媒和物中、Ａは、モノクローナル抗体（ＭＡＢ）であり、ｎは、ＤＡＲ（薬物／抗体モル比）である。
【０１１４】
幾つかの実施形態では、本発明は、式Ｉにより表される化合物、その塩または溶媒和物に関し、ここで該化合物は、
【０１１５】
【化６６】
2021536430.tif 000068
から成る群より選択される。
【０１１６】
幾つかの実施形態では、本発明は、式ＩＩにより表される化合物、その塩または溶媒和物に関し、ここで該化合物は、
【０１１７】
【化６７】
2021536430.tif 000069
から成る群より選択される。
【０１１８】
幾つかの実施形態では、本発明は、式ＩＩＩにより表される化合物、その塩または溶媒和物に関し、該化合物は、
【化６８】
2021536430.tif 000070
から成る群より選択され、ここでＭＡＢは、抗体であり、ｎは本明細書に定義された通りであり、好ましくは、ｎは、約４または８であり、
好ましくは、ＭＡＢは、抗ＨＥＲ２ヒト化モノクローナル抗体ｍｉｌ４０、トラスツズマブ（ハーセプチン；ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））、ペルツズマブ（パージェタ；ＰＥＲＪＥＴＡ（登録商標））、セツキシマブ（アービタックス；ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標））、パニツムマブ  （ベクティビックス；ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標））、リツキシマブ（リツキサン；  ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））、アレムツズマブ（キャンパス；ＣＡＭＰＡＴＨ（登録商標））、イブリツモマブ（ゼヴァリン；ＺＥＶＡＬＩＮ（登録商標））、トシツモマブ（ベキサール；ＢＥＸＸＡＲ（登録商標））、オファツムマブ（アーゼラ；ＡＲＺＥＲＲＡ（登録商標））、ベバシズマブ  （アバスチン；ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））、イピリムマブ（ヤーボイ；ＹＥＲＶＯＹ（登録商標））、デノスマブ（ザイゲバ；ＸＧＥＶＡ（登録商標））、ペムブロリズマブ（キートルダ；ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標））、ニボルマブ（オプジーボ；Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標））、アベルマブ（バベンチオ；Ｂａｖｅｎｃｉｏ（登録商標））、アテゾリズマブ（テセントリク；Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ（登録商標））、デュルバルマブ（イミフィンジ；Ｉｍｆｉｎｚｉ（登録商標））、サシツズマブ、ロバルピツズマブ、およびその生物学的類似体から成る群より選択され、より好ましくは、ＭＡＢは、抗ＨＥＲ２ヒト化モノクローナル抗体ｍｉｌ４０である。
【０１１９】
本発明の第４の態様は、抗体薬物コンジュゲートの製造における、本発明の第１態様において記載した式Ｉもしくは式Ｉ’により表される化合物、または本発明の第２態様において記載した式ＩＩもしくは式ＩＩ’により表される化合物、またはその塩もしくは溶媒和物の使用に関し、好ましくは、前記抗体薬物コンジュゲートは、本発明の第３態様に記載した式ＩＩＩもしくは式ＩＩＩ’により表される化合物である。
【０１２０】
本発明は、抗体薬物コンジュゲートの製造における、式Ｉ’により表される化合物もしくは式ＩＩ’により表される化合物、またはその塩もしくは溶媒和物の使用に関し；好ましくは、前記抗体薬物コンジュゲートは本明細書に記載の式ＩＩＩ−１または式ＩＩＩ’−１により表される化合物である。
【０１２１】
本発明の第５の態様は、本発明の第１態様に記載の式Ｉにより表される化合物またはその塩もしくは溶媒和物を調製する方法に関する、
１）ｑが、０であり、そしてＲ２が、
【化６９】
2021536430.tif 000071
である場合、その調製方法は、
ａ）無水マレイン酸を式ｉにより表される化合物と反応させ、式ｉｉにより表される化合物を得る工程
【化７０】
2021536430.tif 000072
ｂ）式ｉｉにより表される化合物をＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＳｕＯＨ）と反応させ、式ｉｉｉにより表される化合物を生成する工程
【化７１】
2021536430.tif 000073
ｃ）式ｉｉｉにより表される化合物をヨウ化アルキルＲ１−Ｉと反応させ、目的化合物Ｉ−１を生成する工程
【化７２】
2021536430.tif 000074
を含み；
２）ｑが１であり、そしてＲ２が、
【化７３】
2021536430.tif 000075
である場合、その調製方法は
ａ）Ｆｍｏｃ−Ｙ−ＯＨを式ｉｖにより表される化合物と反応させ、式ｖにより表される化合物を生成する工程
【化７４】
2021536430.tif 000076
ｂ）式ｖにより表される化合物からＦｍｏｃ保護基を除去し、式ｖｉにより表される化合物を得る工程
【化７５】
2021536430.tif 000077
ｃ）化合物Ｉ−１を式ｖｉにより表される化合物と反応させ、式ｖｉｉにより表される化合物を生成する工程
【化７６】
2021536430.tif 000078
ｄ）式ｖｉｉにより表される化合物を式ｖｉｉｉにより表される化合物と反応させて目的化合物Ｉ−２を生成する工程
【化７７】
2021536430.tif 000079
（式中、Ｌ１、Ｙ、Ｚ、Ｒ１、Ｒ３およびｐは本明細書に定義される通りである）
を含む。
【０１２２】
本発明の第６態様は、式ＩＩもしくは式ＩＩ’により表される化合物、その塩または溶媒和物を調製する方法であって、
本発明の第１態様に記載の式Ｉもしくは式Ｉ’により表される化合物またはその塩もしくは溶媒和物を、Ｂにより表される薬物、細胞毒素、検出試薬またはターゲティングキャリアと反応させ、式ＩＩまたは式ＩＩ’により表される化合物を得る工程
【化７８】
2021536430.tif 000080
（ここで置換基は本願明細書に定義される通りである）
を含む方法に関する。
【０１２３】
本発明の第７の態様は、式ＩＩＩもしくは式ＩＩＩ’により表される化合物またはその塩もしくは溶媒和物を調製する方法であって、
本発明の第２態様に記載の式ＩＩもしくは式ＩＩ’により表される化合物またはその塩もしくは溶媒和物を、Ａと反応させ、ここでＡはターゲティング化合物分子中のＳ原子を介して部位＃または＃＃に連結され、式ＩＩＩまたは式ＩＩＩ’により表される化合物を得る工程
【化７９】
2021536430.tif 000081
を含み、好ましくは、該反応がｐＨ＝５〜１０および０℃〜４０℃の温度の条件下で実施され；
前記置換基は本明細書中に定義される通りである方法に関する。
【０１２４】
本発明の第８態様は、本明細書の第３態様に記載の式ＩＩＩもしくは式ＩＩＩ’により表される少なくとも１つの化合物またはその塩もしくは溶媒和物と、１つ以上の医薬担体または賦形剤とを含む、医薬組成物に関する。
【０１２５】
本発明の第９態様は、疾患もしくは状態の診断、予防または治療のための、または疾患もしくは状態の重症度を軽減するための医薬品の製造における、本明細書の第３態様に記載の式ＩＩＩもしくは式ＩＩＩ’により表される化合物の使用に関する。
【０１２６】
本発明の第10態様は、疾患もしくは状態の診断、予防または治療のための方法に関し、該方法はそのような治療を必要とする患者に、式ＩＩＩもしくは式ＩＩＩ’により表される化合物またはその塩もしくは溶媒和物の治療有効量を投与することを含む方法に関する。
【０１２７】
本発明の第11態様は、疾患もしくは状態の診断、予防または治療のため、または疾患もしくは状態の重症度を軽減するために用いられる、式ＩＩＩもしくは式ＩＩＩ’により表される化合物またはその塩もしくは溶媒和物に関する。
【０１２８】
本発明は、疾患もしくは状態の診断、予防または治療方法であって、そのような治療を必要とする患者に、式ＩＩＩもしくは式ＩＩＩ’により表される化合物またはその塩もしくは溶媒和物の治療有効量を投与することを含む方法に関する。
【０１２９】
幾つかの実施形態では、本明細書中に記載の疾患または状態は、腫瘍、感染症、血液疾患、代謝性疾患、炎症から成る群より選択され、好ましくは、前記腫瘍は、癌、リンパ腫、リンパ系腫瘍、細胞芽腫、肉腫および白血病から選択され、好ましくは、前記癌は、乳癌（例えばHER2陽性乳癌）；扁平細胞癌（例えば表皮扁平細胞癌）；肺癌、例えば小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺および扁平細胞癌の腺癌；腹腔癌；肝臓癌；胃癌；消化器癌；膵臓癌；神経膠芽腫；子宮頸癌；卵巣癌；肝臓癌；膀胱癌；尿道癌；肝細胞癌；乳癌；大腸癌；結腸癌；直腸癌；結直腸癌；子宮内膜癌；子宮癌；唾液腺癌；腎臓癌または腎癌；前立腺癌；外陰癌；甲状腺癌；肝臓癌；肛門癌；陰茎癌；黒色腫；多発性骨髄腫およびＢ細胞リンパ腫；脳腫瘍；胆のう癌；食道癌；胆管細胞癌；頭頸部癌並びに関連の転移性腫瘍から成る群より選択される。
【０１３０】
定義
本明細書中で用いる場合、「抗体」なる用語は、一般的な免疫グロブリンであり、外来物質（例えば細菌やウイルス）を認識し中和するために免疫系により使用されるＹ形タンパク質である。抗体は、Ｙ形タンパク質のそれぞれの先端が抗原を特異的に認識できる部位を含むため、外来標的（抗原と呼ばれる）の特定部分を特異的に認識することができる。抗体が特定の抗原を結合すると、それは多数の関連する生物学的作用を媒介することができる。抗体は二本の同一の重鎖と二本の同一の軽鎖とから構成され、それらの鎖はシステイン残基中のスルフヒドリル基によって形成されるジスルフィド結合を介して結合される。「モノクローナル抗体」は、全ての抗体分子が単一の親細胞のクローンである同じ免疫細胞から誘導され、それゆえ全ての抗体分子が同じ（均一）である、一重特異的（ｓｉｎｇｌｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ）抗体である。
【０１３１】
本明細書中で用いる場合、「細胞毒素」という用語は、細胞中に放出されると癌細胞に対して毒性となり得る分子を指す。本発明の特定の概念の毒素は、モノメチル−アウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、アウリスタチン、タンシノイドまたはそれらの誘導体（例えばメイタンシノイド、ＤＭ１、ＤＭ３、ＤＭ４）、カリケアミシン、デュオカルミシン、ドキソルビシン、カンプトテシンまたはＰＢＤ型細胞毒を含む。
【化８０】
2021536430.tif 000082
【０１３２】
本明細書で使用される場合、「リンカー」という用語は、２つの反応性末端を有する分子であり、その一端は抗体に結合することができ、もう一端は細胞毒素などの活性化合物に結合するのに用いられる。リンカーの抗体結合末端は、通常、抗体中のシステインのスルフヒドリル基またはリジンのアミノ基を経由して結合することができる部位であり、そしてリンカーの毒素結合末端は、通常、毒素分子中のスルフヒドリル基、アミノ基、カルボキシル基またはヒドロキシル基のような活性部位を介して結合することができる部位である。リンカーという用語がカップリング形態でのリンカーを記載するために用いられる場合、該リンカーが抗体と細胞毒素の一方または両方と反応して共有結合を形成しているので、それはもはや反応性末端に１つまたは２つの反応性部位を含むことはできない（例えば、スルフヒドリル反応性基の脱離基、またはアミノ反応基の脱離基）。
【０１３３】
本明細書で使用する場合、用語「抗体薬剤コンジュゲート」または「ＡＤＣ」とは、細胞毒素の複数分子（通常１〜８）が各々リンカーによって結合されている抗体分子、すなわち、１または複数の細胞毒素に結合された抗体により構成される生成物である。抗体は一般に癌特異的抗原に対する選択性を示すモノローナル抗体である。
【０１３４】
本明細書中で用いる場合、「約」という用語は、言及される数値の±２０％、±１８％、±１５％、±１２％、±１０％、±９％、±８％、±７％、±６％、±５％、±６％、±３％、±２％、±１％、±０．５％、±０．４％、±０．３％、±０．２％、±０．１％以内である数値を意味する。文脈から明らかでない限り、本明細書中に提供される全ての数値は「約」という用語により修飾される。
【０１３５】
本明細書中で用いる略語の定義は次の通りである：
ＡＤＣ：抗体薬物コンジュゲート；
Ａｌａ：アラニン；
Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル；
Ｃｉｔ：シトルリン；
ＤＡＲ（薬物：抗体比）：薬物／抗体モル比；
ＤＣＣ：ジシクロヘキシルカルボジイミド；
ＤＣＭ：ジクロロメタン；
ＤＩＰＥＡ：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン；
ＤＭＡＣ：Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド；
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド；
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド；
ＥＥＤＱ：Ｎ−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン；
Ｆｍｏｃ：フルオレニルメチルオキシカルボニル；
ＨＥＲ２：ヒト表皮増殖因子受容体２；
ＨＩＣ：疎水性相互作用クロマトグラフィー；
Ｈｉｓ：ヒスチジン；
ｍＭ：ミリモル濃度；
Ｍａ：マレイミド；
Ｍａａ：マレイン酸アミド；
Ｍｍ：マレイン酸メチル；
Ｍｆ：フマル酸メチル；
ＭＡＢ：モノクローナル抗体；
ＭＭＡＥ：モノメチル−アウリスタチンＥ；
ＮＨＳ／ＳｕＯＨ：Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド；
ＮＭＭ：Ｎ−メチルモルホリン；
ＮＡＣ：Ｎ−アセチルシステイン；
ＰＡＢ：ｐ−アミノベンジルアルコール；
Ｓｕ：スクシンイミド；
ＴＣＥＰ：トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン；
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸；
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン；
Ｔｒｉｓ：トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン；
ＶＡ（バリン−アラニン、Ｖａｌ−Ａｌａ）：バリン−アラニンジペプチド；
Ｖａｌ：バリン；
ＶＣ（バリン−シトルリン、Ｖａｌ−Ｃｉｔ）：バリン−シトルリンジペプチド；
ＤＣＵ：ジシクロヘキシル尿素；
ＨＯＢｔ：１−ヒドロキシベンゾトリアゾール；
ＥＤＣＩ：１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩；
ＴＥＡ：トリエチルアミン；
Ｌｙｓ：リジン；
Ｇｌｙ：グリシン；
Ｔｈｒ：トレオニン；
Ｌｅｕ：ロイシン；
Ｉｌｅ：イソロイシン；
Ａｓｎ：アスパラギン；
Ｐｈｅ：フェニルアラニン。
【０１３６】
本明細書中で用いる場合、用語「塩」は、その塩が由来する化合物の生物学的有効性と特性を保持する塩を指す。多くの場合、本明細書に開示される化合物は、アミノおよび／またはカルボキシル基または類似の基の存在を通して酸および／または塩基を形成することができる。酸付加塩は、無機酸または有機酸を使って形成することができる。塩を形成するように誘導体化できる無機酸には、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、などが挙げられる。塩を形成するように誘導体化することができる有機酸には、例えば、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、p-トルエンスルホン酸、サリチル酸などが含まれる。塩基付加塩は、無機塩基または有機塩基を用いて形成することができる。塩を形成するように誘導体化することができる無機塩基としては、例えば、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウム等が挙げられ；特に好ましいのは、アンモニウム、カリウム、ナトリウム、カルシウムおよびマグネシウムの塩である。塩を形成するように誘導体化することができる有機塩基としては、例えば、第一級、第二級および第三級アミン、天然に存在する置換アミンを含む置換アミン、環状アミン、塩基性イオン交換樹脂等が挙げられ、具体的には、例えば、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミンおよびエタノールアミンが挙げられる。
【０１３７】
本明細書で使用される場合、用語「Ｃ１−６直鎖状または分枝状アルキル」の中の、「１」、「６」は、基の中の炭素原子の数を指す。すなわち、「Ｃ１−６直鎖状または分岐状アルキル」は、「１」から「６」までの数の炭素原子を含むことができる。従って、例えば、「Ｃ１−４アルキル」は、１から４個の炭素原子を有する全てのアルキル基を指し、すなわち、ＣＨ３−、ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２−、（ＣＨ３）２ＣＨ−、ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）−および（ＣＨ３）３Ｃ−を指す。
【０１３８】
本明細書で使用される場合、「Ｃ１−６アルコキシ」という用語は、「Ｃ１−６アルキル−Ｏ−」の構造を有する基を指し、ここで、Ｃ１−６アルキルは、前述の「Ｃ１−６直鎖状または分枝状アルキル」と同じ意味を有する。例えば、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−２アルコキシ、Ｃ１アルコキシ、Ｃ２アルコキシ、Ｃ３アルコキシ、Ｃ４アルコキシ、Ｃ５アルコキシまたはＣ６アルコキシ、好ましくはＣ１−４アルコキシを指す。具体的な例としては、限定されないが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ｎ−ブトキシ、２−ブトキシ、イソプロポキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ｎ−ペントキシ、ｎ−ヘキシルオキシ、等が挙げられる。
【０１３９】
本明細書で使用する場合、用語「ハロゲン」または「ハロ」は、周期表の第17族の放射性安定原子のいずれか１つを指し、例えば、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、等を指す。
【０１４０】
本明細書に記載の医薬組成物は、式ＩＩＩもしくは式ＩＩＩ’により表される化合物、またはその塩もしくは溶媒和物と、常用の医薬担体もしくは賦形剤を含む。医薬組成物は、例えば、経口投与または非経口投与によって投与することができる。
【０１４１】
本明細書で使用する場合、「有効量」という用語は、例えば、所望の治療効果、例えば治療すべき疾患に関連付けられる症状の緩和をはたす量を得るのに十分な量を意味する。
【０１４２】
更に、本出願の化合物の投与量および使用法は、年齢、体重、性別、患者の自然の健康状態および栄養状態、化合物の活性強度、投与時間、代謝速度、疾患の重篤度、並びに診断と治療における医師の主観的判断などの多くの要因に依存することに留意すべきである。好ましい投与量は０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重／日の間である。
【０１４３】
幾つかの実施形態では、本願に含まれるＶａｌ−Ｃｉｔジペプチド含有開環型ＡＤＣの典型的合成経路は、以下の通りである：
【化８１】
2021536430.tif 000083
【０１４４】
Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｖａｌは、ＤＣＣ縮合剤の作用の下でＳｕＯＨ（ＮＨＳ）と縮合させて活性エステルＦｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＳｕを形成させ、その活性エステルＦｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＳｕとＬ−Ｓｉｔがアシル化反応を受けてＦｍｏｃ−Ｖａｌ−Ｃｉｔを得、そのＦｍｏｃ−Ｖａｌ−ＣｉｔをＥＥＤＱの作用の下でｐ−アミノベンジルアルコール（ＰＡＢ）と縮合させてＦｍｏｃ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢを形成させ、そのＦｍｏｃ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢはアルカリ性条件下で保護基の除去を受けてＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢを得、そのＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢはマレイン酸メチル構造を含む活性エステルリンカーＭｍ−Ｃ６−ＯＳｕと反応してＭｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢを生成し、そのＭｍ−Ｃ６−ＯＳｕは更にビス（ｐ−ニトロフェニル）カーボネートと反応してリンカーＭｎ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＰＮＰを生成し、そのリンカーが細胞毒素ＭＭＡＥと反応してＡＤＣの小分子ロードＭｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥを生成し、そして最後にＭｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥを抗体とカップリングさせて、安定なリンカーＷ’を有するＡＤＣ ＭＡＢ−Ｗ’−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥを得る。
【０１４５】
幾つかの実施形態では、本願発明に係るＶａｌ−Ｃｉｔジペプチド含有開環型ＡＤＣ対象物質の一般的合成経路は次の通りである：
【化８２】
2021536430.tif 000084
【０１４６】
Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｌ−ＶａｌをＤＣＣ縮合剤の作用の下でＳｕＯＨ（ＮＨＳ）と縮合させて、活性エステルＦｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＳｕを形成させ、その活性エステルＦｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯｓｕとＬ−Ａｌａがアシル化反応を受けて、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−Ａｌａを得、そのＦｍｏｃ−Ｖａｌ−ＡｌａをＥＥＤＱの作用のもとでｐ−アミノベンジルアルコール（ＰＡＢ）と縮合させてＦｍｏｃ−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢを形成させ、そのＦｍｏｃ−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢをアルカリ性条件下で保護基の除去を受けてＶａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢを生成し、そのＶａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢがマレイン酸メチル構造を含む反応性エステルリンカーＭａ−Ｃ６−ＯＳｕまたはＭａ−Ｃ３−ＯＳｕと反応して、Ｍａ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢまたはＭａ−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢを生成し、そのＭａ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢまたはＭａ−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢが更にビス（ｐ−ニトロフェニル）カーボネートと反応してリンカーＭａ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＰＮＰまたはＭａ−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＰＮＰを生成し、前記リンカーが細胞毒素ＭＭＡＥと反応してＡＤＣの小分子ロードＭａ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥまたはＭａ−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥを生成し、そして最後にＭａ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥまたはＭａ−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥを抗体とカップリングさせて安定なリンカー構造を有するＡＤＣ ＭＡＢ−Ｓｕ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥまたはＭＡＢ−Ｓｕ−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥを得る。
【０１４７】
幾つかの実施形態では、本発明に係るＶａｌ−Ａｌａジペプチド含有安定開環型ＡＤＣの調製工程は次のものであることも可能である：
【化８３】
2021536430.tif 000085
【０１４８】
Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｌ−ＶａｌをＤＣＣ縮合剤の作用の下でＳｕＯＨ（ＮＨＳ）と縮合させて、活性エステルＦｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＳｕを形成させ、その活性エステルＦｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯｓｕとＬ−Ａｌａがアシル化反応を受けて、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−Ａｌａを生成し、そのＦｍｏｃ−Ｖａｌ−ＡｌａをＥＥＤＱの作用の下でｐ−アミノベンジルアルコール（ＰＡＢ）と縮合させてＦｍｏｃ−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢを形成させ、そのＦｍｏｃ−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢがアルカリ性条件下で保護基の除去を受けてＶａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢを生成し、そのＶａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢがマレイン酸メチル構造を含む反応性エステルリンカーＭｍ−Ｃ６−ＯＳｕまたはＭｍ−Ｃ３−ＯＳｕと反応して、Ｍｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢまたはＭｍ−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢを生成し、そのＭｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢまたはＭｍ−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢが更にビス（ｐ−ニトロフェニル）カーボネートと反応してリンカーＭｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＰＮＰまたはＭｍ−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＰＮＰを生成し、前記リンカーが細胞毒素ＭＭＡＥと反応してＡＤＣの小分子ロードＭｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥまたはＭｍ−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥを生成し、そして最後にＭｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥまたはＭｍ−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥを抗体とカップリングさせて安定なリンカー構造を有するＡＤＣ  ＭＡＢ−Ｍｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥまたはＭＡＢ−Ｍｍ−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥを得る。
【０１４９】
幾つかの実施形態では、本発明に係るＶａｌ−Ａｌａジペプチド含有開環型ＡＤＣ対照物質の調製経路は次の通りである：
【化８４】
2021536430.tif 000086
【０１５０】
Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｌ−ＶａｌをＤＣＣ縮合剤の作用の下でＳｕＯＨ（ＮＨＳ）と縮合させて、活性エステルＦｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＳｕを形成させ、その活性エステルＦｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯｓｕとＬ−Ａｌａがアシル化反応を受けて、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−Ａｌａを得、そのＦｍｏｃ−Ｖａｌ−ＡｌａをＥＥＤＱの作用の下でｐ−アミノベンジルアルコール（ＰＡＢ）と縮合させてＦｍｏｃ−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢを形成させ、そのＦｍｏｃ−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢがアルカリ性条件下で保護基の除去を受けてＶａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢを生成し、そのＶａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢがマレイン酸メチル構造を含む反応性エステルリンカーＭａ−Ｃ６−ＯＳｕまたはＭａ−Ｃ３−ＯＳｕと反応して、Ｍａ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢまたはＭａ−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢを生成し、そのＭａ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢまたはＭａ−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢが更にビス（ｐ−ニトロフェニル）カーボネートと反応してリンカーＭａ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＰＮＰまたはＭａ−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＰＮＰを生成し、前記リンカーが細胞毒素ＭＭＡＥと反応してＡＤＣの小分子ロードＭａ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥまたはＭａ−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥを生成し、そして最後にＭａ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥまたはＭａ−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥを抗体とカップリングさせて安定なリンカー構造を有するＡＤＣであるＭＡＢ−Ｓｕ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥまたはＭＡＢ−Ｓｕ−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥを得る。
【０１５１】
有益な技術効果
本願は、開環型リンカーを有する式ＩＩＩまたは式ＩＩＩ’により表される化合物の１クラスを提供し、この化合物は、生物学的環境に類似した穏和な条件下で迅速に調製することができる。この化合物は安定性が高く、現段階ではＡＤＣに共通して認められるチオスクシンイミドの不安定性に起因する毒素オフターゲット問題を効果的に解決することができる。
【０１５２】
〔発明を実施するための特定のモデル〕
本発明の実施形態は、実施例と組み合わせて下記に詳細に記載されるだろう。しかし当業者は次の実施例が本発明を例証するためにだけ用いられ、本発明の範囲を限定するものと解釈すべきでない。特定の条件が実施例中に示されないならば、従来条件または製造業者により推奨される条件に従って実施すべきである。製造業者を指定することなく使用される試薬または機器は、全て市販の従来製品である。
【実施例】
【０１５３】
実施例１：リンカーＭｎ−Ｃ３−ＯＳｕの合成：
【０１５４】
１）Ｍａａ−Ｃ３−ＯＨの調製：
【化８５】
2021536430.tif 000087
３−アミノプロピオン酸（４．１３ｇ、４６．３５ミリモル）を酢酸（２００ｍＬ）に添加し、攪拌して溶解し、無水マレイン酸（５．０ｇ、５１ミリモル）を添加し室温で攪拌すると、生じた反応液は清澄で透明であり、１時間攪拌下で反応させ、次いで白色の不溶性物質を沈澱させ、反応を１０時間続け、次いでろ過し、ろ過ケークをアセトニトリルで洗浄し、白色粉末状固体を得た。その白色粉末状固体は重量が７．７２ｇであり、収率は８９％であった。1H-NMR(400M, DMSO-d6): δ 14.28(br, 1H), 12.72(br, 1H), 9.09(s, 1H), 6.40(d, J = 12.6 Hz, 1H), 6.24(d, J = 12.6, 1H), 3.37(t, 2H), 2.47(t, 2H)。MS m/z 186.04([M-H]-)。
【０１５５】
２）Ｍａａ−Ｃ３−ＯＳｕの合成：
【化８６】
2021536430.tif 000088
Ｍａａ−Ｃ３−ＯＨ（２．０ｇ、１０．６８ミリモル、１当量）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、４５ｍＬ）に溶かし、室温で攪拌し、−５℃の冷却トラップ中に置いて２０分間冷却し、次いで２，４，６−トリメチルピリジン（４．２１ｍＬ、３２．０４ミリモル、３当量）を添加し、−５℃で２０分間攪拌を続けた。無水トリフルオロ酢酸（４．５０ｍＬ，、３当量）を３０分間以内でゆっくり滴下添加した。添加の完了後、反応液を１モル／Ｌの塩酸溶液（ＨＣｌ）中に滴下し、次いでクロロホルムで３〜４回抽出した。有機相を合わせ、水で３回洗浄し、１モル／ＬのＨＣｌで２回洗浄し、次いで飽和ブラインで３回洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、有機相を濃縮して無色油状物として標的生成物を得た。それは室温に置いておくと白色固体になり、乾燥した後、白色固体の重量は２．５ｇであり、収率は８１％であった。1H-NMR(400M, DMSO-d6): δ 8.22(t, 1H), 6.39(d, J = 12.6 Hz, 1H), 6.33(d, J = 12.6 Hz, 1H), 2.95(q, 2H), 2.89(s, 4H)。MS m/z 283.2([M-H]-); 285.2([M+H]+)。
【０１５６】
３）Ｍｎ−Ｃ３−ＯＳｕの調製：
【化８７】
2021536430.tif 000089
Ｍａａ−Ｃ３−ＯＳｕ（２．４ｇ、９．２７ミリモル、１当量）をＤＭＦ（３０ｍＬ）中に溶かし、攪拌して溶解させ、無水炭酸カリウム（２．５６ｇ、１８．５３ミリモル、２当量）を加え、次いでヨードメタン（２．６３ｇ、１８．５３ミリモル、２当量）を滴下添加し、そして室温で２時間反応させた。反応が完了した後、不溶性物質をろ過により除去した。溶媒を減圧下での濃縮により留去し、酢酸エチルを加えて残渣を溶かし、次いでろ過し、ろ液を飽和ブラインで３回洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、そして白色半固体物質を得、それはＭｍ−Ｃ３−ＯＳｕの粗生成物であった。
【０１５７】
実施例２：リンカーＭｍ−Ｃ６−ＯＳｕの合成
【０１５８】
１）Ｍａａ−Ｃ６−ＯＨの調製：
【化８８】
2021536430.tif 000090
６−アミノヘキサン酸（３．９４ｇ、３０ミリモル）を酢酸（１００ｍＬ）に溶かし、攪拌して溶解させ、無水マレイン酸（２．９４ｇ、３０ミリモル）を添加し、室温で攪拌し、生じた反応液は清澄で透明であり、そして連続攪拌して室温で１時間反応させると、白色不溶性物質が沈澱した。反応を１０時間続け、ろ過し、ろ過ケークをアセトニトリルで洗浄し、白色粉末状固体を得、白色粉末状固体の重量は５．７ｇであり、収率は８２％であった。1H-NMR(400M, DMSO-d6): δ 15.08(br, 1H), 11.92(br, 1H), 9.12(t, 1H), 6.40(d, J = 12.6 Hz, 1H), 6.25(d, J = 12.6 Hz, 1H), 3.16(t, 2H), 2.20(t, 2H), 1.54-1.43(m, 4H), 1.29(m, 2H)。MS m/z 228([M-H]-)。
【０１５９】
２）Ｍａａ−Ｃ６−ＯＳｕの調製：
【化８９】
2021536430.tif 000091
Ｍａａ−Ｃ６−ＯＨ（４．００ｇ、１７．４５ミリモル、１当量）をＤＭＦ（７０ｍＬ）に添加し、攪拌して溶解し、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（８．０３ｇ、６９．８０ミリモル、４当量）を添加し、室温で攪拌し、−５℃の冷却トラップ中に置いて２０分間冷却し、次いで２，４，６−トリメチルピリジン（９．３１ｍＬ、６９．８０ミリモル、４当量）を添加し、−５℃で２０分間連続して攪拌した。無水トリフルオロ酢酸（９．８０ｍＬ、４当量）を０．５時間以内でゆっくり滴下添加した。添加が完了した後、反応溶液を１モル／ＬのＨＣｌ中にテク化し、クロロホルムで３〜４回抽出した。有機相を合わせ、水で３回洗浄し、１モル／ＬのＨＣｌで２回洗浄し、飽和ブラインで３回洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、そして有機相を濃縮して白色固体として標的生成物を得た。その白色固体を乾燥すると、白色固体の重量は５．１１ｇであり、収率は８９．７４％であった。1H-NMR(400M, DMSO-d6): δ 15.13(1H), 9.11(t, 1H), 6.40(d, J = 12.6 Hz, 1H), 6.25(d, J = 12.6 Hz, 1H), 3.17(q, 2H), 2.81(s, 4H), 2.76(t, 2H), 1.639(m, 2H), 1.50(m, 2H), 1.38(m, 2H)。MS m/z 325.4([M-H]-); 327.5([M+H]+)。
【０１６０】
３）Ｍｍ−Ｃ６−ＯＳｕの調製
【化９０】
2021536430.tif 000092
Ｍａａ−Ｃ６−ＯＳｕ（１．５０ｇ、４．６ミリモル、１当量）をＤＭＦ（２５ｍＬ）に添加し、攪拌して溶解し、無水炭酸カリウム（１．２７ｇ、９．２ミリモル、２当量）を添加し、次いでヨードメタン（１．３ｇ、９．２ミリモル、２当量）を加え、室温で２時間反応させた。反応が完了した後、不溶性物質をろ過により除去し、溶媒を減圧下での濃縮により留去し、酢酸エチルを加えて残渣を溶かし、次いでろ過し、ろ液を飽和ブラインで３回洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、減圧濃縮し、酢酸エチル中に再溶解した。次いでそれをシリカゲルと混合し、カラムクロマトグラフィーにより精製して白色固体として標的生成物を得、白色固体を乾燥し、重量１．１ｇを得、収率は６６％であった。1H-NMR(400M, CDCl3): δ 8.21(br, 1H), 6.35(d, J = 12.6 Hz, 1H), 6.13(d, J = 12.6 Hz, 1H), 3.80(s, 3H), 3.35(q, 2H), 2.84(s, 4H), 2.63(t, 2H), 1.80(m, 2H), 1.63(m, 2H), 1.49(m, 2H)。MS m/z 341.2([M+H]+); 363.2 ([M+Na]+)。
【０１６１】
実施例３：リンカーＭｍ−ＣＲ−ＯＳｕの合成
【０１６２】
１）Ｍａａ−ＣＲ−ＯＨの調製：
【化９１】
2021536430.tif 000093
４−（アミノメチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸（２．０ｇ、２０．４ミリモル）を酢酸（１００ｍＬ）に添加し、攪拌して溶解し、無水マレイン酸（３．２ｇ、２０．４ミリモル）を添加し、室温で攪拌した。得られた反応液は清澄で透明であり、その溶液を連続して攪拌して室温で１時間反応させ、白色不溶性物質を沈殿させ、反応を１０時間続けた。反応液を濾過し、ろ過ケークをアセトニトリルで洗浄し、白色粉末状固体を得、その白色粉末状固体は、重量が２．９１ｇであり、収率は５６％であった。1H-NMR(400M, DMSO-d6): δ 14.92(br, 1H), 12.13(br, 1H), 9.08(t, 1H), 6.42(d, J = 12.6 Hz, 1H), 6.23(d, J = 12.6 Hz, 1H), 3.03(t, 2H), 2.13(tt, 1H), 1.90(dd, 2H), 1.74(dd, 2H), 1.43(m, 1H), 1.26(qd, 2H), 0.94(qd, 2H)。MS m/z 254.3([M-H]-)。
【０１６３】
２）Ｍａａ−ＣＲ−ＯＳｕの調製：
【化９２】
2021536430.tif 000094
Ｍａａ−ＣＲ−ＯＨ（０．６４ｇ、２．５ミリモル）をＤＭＦ（１５ｍＬ）に溶かし、完全に溶けた後、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（０．５８ｇ、５．０ミリモル）を添加し、攪拌して溶解させ、−５℃のトラップ中に置いて冷却し、２，４，６−トリメチルピリジン（１．３ｍＬ、１０ミリモル）を添加し、１０分間連続攪拌し、無水トリフルオロ酢酸（１．４０ｍＬ、１０ミリモル）をゆっくり滴下添加した。反応が完了した後、反応溶液を１モル／ＬのＨＣｌ中に滴下して０．６９ｇの白色粉末状固体を沈澱させ、収率は７８％であった。1H-NMR(400M, DMSO-d6): δ 14.99(br, 1H), 9.09(t, 1H), 6.42(d, J = 12.6 Hz, 1H), 6.23(d, J = 12.6 Hz, 1H), 3.06(t, 2H), 2.80(s, 4H), 2.69(tt, 1H), 2.02(dd, 2H), 1.79(dd, 2H), 1.43(m, 1H), 1.50(m, 1H), 1.42(qd, 2H), 1.03(qd, 2H)。
【０１６４】
３）Ｍｍ−ＣＲ−ＯＳｕの調製：
【化９３】
2021536430.tif 000095
Ｍａａ−ＣＲ−ＯＳｕ（１．６２ｇ、４．６ミリモル）をＤＭＦ（１５ｍＬ）に添加し、攪拌して溶解させ、無水炭酸カリウム（１．２７ｇ、９．２ミリモル、２当量）を添加し、次いでヨードメタン（１．３ｇ、９．２ミリモル、２当量）を滴下添加し、室温で２時間反応させた。反応が完了した後、不溶性物質をろ過により除去し、溶媒を減圧下での濃縮により留去し、酢酸エチルを加えて残渣を溶かし、次いでろ過した。そのろ液を飽和ブラインで３回洗浄し、無類硫酸マグネシウム上で乾燥し、減圧下で濃縮し、酢酸エチル中で再溶解し、シリカゲルと混合し、カラムクロマトグラフィーにより精製して、標的生成物を白色固体として得た。その白色固体を乾燥すると重量が０．９１ｇであり、収率が５４％であった。1H-NMR(400M, DMSO-d6): δ 9.09(t, 1H), 6.40(d, J = 12.6 Hz, 1H), 6.18(d, J = 12.6 Hz, 1H), 3.81(s, 3H), 3.06(t, 2H), 2.80(s, 4H), 2.69(tt, 1H), 2.02(dd, 2H), 1.79(dd, 2H), 1.43(m, 1H), 1.50(m, 1H), 1.42(qd, 2H), 1.03(qd, 2H)。
【０１６５】
実施例１〜３において調製したマレイン酸メチルを含むリンカーの構造を下記に示す：
【表１】
2021536430.tif 000096
【０１６６】
実施例４：リンカーＭｍ−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＰＮＰの合成
【０１６７】
１）Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−Ａｌａの調製：
【化９４】
2021536430.tif 000097
Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ（２５．０ｇ、７４．０ミリモル）、ＳｕＯＨ（ＮＨＳ、８．５２ｇ、７４．０ミリモル）およびジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、１５．２７ｇ。７４．０ミリモル）のＴＨＦ溶液（２５０ｍＬ）を室温で１６時間攪拌した。反応混合物を０℃に冷却し、２時間攪拌し、次いでろ過して不溶性固体複製生物であるジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＵ）を除去した。そのろ液を回収し、ろ過ケークを更にＴＨＦで洗浄し、洗浄液とろ液とを合わせ、減圧下で濃縮してガラス状固体として粗生成物を得、それを更に精製することなく直接次の工程に使用した。
【０１６８】
そのガラス状固体をＤＭＥ（２００ｍＬ）とＴＨＦ（１００ｍＬ）の混合物に再溶解し、次いで重炭酸ナトリウム水溶液中のＬ−アラニン（６．９５ｇ、７８ミリモル）を添加した。生じた反応混合物を室温で１６時間攪拌し、１５％クエン酸水溶液（４００ｍＬ）中に注ぎ、ろ過し、ろ過ケークを減圧下で乾燥して粗生成物を得た。その粗生成物をジエチルエーテル中に分散させ、超音波とろ過により３回精製して白色固体を得た（１６．２ｇ、収率５３％）。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.48 (s, 1H), 8.25(d, J = 6.7 Hz, 1H), 7.89(d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.74(t, 2H), 7.43(m, 3H), 7.33(m, 2H), 4.22(m, 4H), 3.89(q, 1H), 1.96(m, 1H), 1.27(d, 3H), 0.88(dd, 6H)。MS(ESI)m/z : 411.3 [M+H]+; 433.4 [M+Na]+。
【０１６９】
２）Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢの調製：
【化９５】
2021536430.tif 000098
Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−Ａｌａ（２ｇ、４．８７ミリモル）と４−アミノベンジルアルコール（１．２ｇ、９．７５ミリモル）をジクロロメタン／メタノール混合溶媒（１００ｍＬ、ジクロロメタン／メタノールの容積比は２：１であった）中に溶かし、次いで２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１，２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ、２．４１ｇ、９．７５ミリモル）を添加し、生じた混合溶液を遮光下に置き、１２時間攪拌した。溶媒を減圧下で留去して白色固体残渣を得、それをジエチルエーテル（３００ｍＬ）に添加し、生じた懸濁液を超音波で５分間処理し、次いで３０分間静置し、次いでろ過し、ろ過ケークをジエチルエーテルで洗浄して白色固体を得た (1.92 g、収率77％)。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.96(s, 1H), 8.22(d, J = 6.7 Hz, 1H), 7.89(d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.75(t, 2H), 7.52(q, 3H), 7.41(t, 2H), 7.34(t, 2H), 7.24(t, 2H), 5.13(t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.42(d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.40(br, 1H), 4.30(t, 1H), 4.22(q, 2H), 3.91(t, J = 8.4 Hz, 1H), 2.00(m, 1H), 1.30(d, J = 7.0 Hz, 3H), 0.88(dd, 6H)。MS(ESI)m/z : 516.4 [M+H]+; 538.3 [M+Na]+。
【０１７０】
３）Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢの調製：
【化９６】
2021536430.tif 000099
Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ（４．０ｇ、７．７６ミリモル）をＤＭＦ（４０ｍＬ）中に溶かし、溶解が完了した後、ピペリジン（２ｍＬ）を加えた。生じた混合物を室温で２時間攪拌し、溶媒を減圧下で留去して粗生成物を得、それをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（ｖ／ｖ）＝２０：１）により精製して、白色固体（２．１ｇ、収率９０％）を得た。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.0(s, 1H), 8.18(s, 1H), 7.53(d, 2H), 7.24(d, 2H), 5.13(s, 1H), 4.48(t, 1H), 4.43(s, 1H), 3.00(d, 1H), 2.80(d, 1H), 1.92(m, 1H), 1.29(d, J = 7.0 Hz, 3H), 0.85(dd, 6H)。MS(ESI)m/z: 294.2 [M+H]+; 316.2 [M+Na]+。
【０１７１】
４）Ｍｍ−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢの調製：
【化９７】
2021536430.tif 000100
Ｍｍ−Ｃ３−ＯＳｕの粗生成物（０．６ｇ、２．０ミリモル）を無水ＤＭＦ（２０ｍＬ）中に溶かし、溶解が完了した後、Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ（０．５９ｇ、２．０ミリモル）を添加し、攪拌しながら室温で一晩反応させた。反応が完了した後、ＤＭＦを減圧下での濃縮により留去して粗生成物を得、それをカラムクロマトグラフィーにより更に精製して白色粉末状固体（０．５９ｇ、収率６２％）を得た。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ 9.85(s, 1H), 8.24(t, J = 5.7 Hz, 1H), 8.19(d, J = 7.3 Hz, 2H), 7.96(d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.54(d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.23(d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.27(d, J = 12.6 Hz, 1H), 6.23(d, J=12.6 Hz, 1H), 5.11(t, J = 5.7 Hz, 1H), 4.42(d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.39(t, J = 7.0 Hz, 1H), 4.19(t, J = 7.6 Hz, 1H), 3.64(s, 3H), 3.27(q, J = 5.9 Hz, 2H), 2.38(t, J = 7.0 Hz, 2H), 1.97(m, J = 6.8Hz, 1H), 1.30(d, J = 7.0 Hz, 3H), 0.85(dd, J1 = 15.7 Hz, J2 = 6.8 Hz, 6H)。MS(ESI)m/z: 477.24 [M+H]+; 499.22 [M+Na]+; 975.45 [2M+Na]+。
【０１７２】
５）Ｍｍ−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＰＮＰの調製：
【化９８】
2021536430.tif 000101
Ｍｍ−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢを無水ＤＭＦ（１５ｍＬ）中に溶かし、溶解が完了した後、ビス（ｐ−ニトロフェニル）カーボネート（３６０ｍｇ、１．２ミリモル）とＤＩＰＥＡ（１０４ｍｇ、０．９ミリモル）を順次添加し、室温で攪拌しながら１２時間反応させた。反応が完了した後、減圧下での濃縮により溶媒を留去し、残渣をジエチルエーテル中に分散させてスラリーとし、次いでろ過して粗生成物を得た。それをカラムクロマトグラフィーにより更に精製して白色粉末状固体として目的生成物を得た（収率５５％）。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 10.01(s, 1H), 8.31(d, J = 9.2 Hz, 2H), 8.24(m, 1H), 7.97(d, J=8.4 Hz, 1H), 7.64(d, J=8.7Hz, 2H), 7.57(d, J = 9.3 Hz, 2H), 7.41(d, J = 8.7 Hz, 2H), 6.27(d, J = 12.6 Hz, 1H), 6.23(d, J = 12.6 Hz, 1H), 5.24(s, 2H), 4.39(m, 1H), 4.19(t, J = 15.1Hz, 1H), 3.64(s, 3H), 3.28(q, J = 7.0 Hz, 2H), 2.39(t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.96(m, 1H), 1.31(d, J = 7.0 Hz, 3H), 0.86(dd, J = 6.7 Hz, 6H)。MS (ESI) m/z : 642.4 [M+H]+; 664.5 [M+Na]+; 680.4 [M+K]+。
【０１７３】
実施例５：リンカーＭｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＰＮＰの合成
【０１７４】
１）Ｍｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢの調製：
【化９９】
2021536430.tif 000102
Ｍｍ−Ｃ６−ＯＳｕを原材料として使用し、Ｍｍ−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢのものと同様な方法を使ってＭｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢを合成し、薄黄色固体粉末を得た（収率６０％）。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ 9.99(s, 1H), 8.12(d, J = 6.7 Hz, 1H), 7.89(d, J = 6.7 Hz, 2H), 7.74(t, 2H), 7.54(d, 2H), 7.46(d, 1H), 7.41(m, 2H), 7.32(m, 2H), 7.23(d, 2H), 5.98(t, J = 5.5 Hz, 1H), 5.42(s, 2H), 5.12(t, 1H), 4.41(q, 3H), 4.30(q, 1H), 4.23(q, 2H), 3.92(q, 1H), 3.00(m, 2H), 1.98(m, 1H), 1.69(m, 1H), 1.57(m, 1H), 1.41(m, 2H), 0.86(dd, 6H)。MS(ESI)m/z: 602.7 [M+H]+; 624.5 [M+Na]+。
【０１７５】
２）Ｍｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＰＮＰの調製：
【化１００】
2021536430.tif 000103
中間体Ｍｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢを原材料として使用し、Ｍｍ−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＰＮＰのものと同うような調製方法を使ってＭｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＰＮＰを合成して淡黄色粉末状固体を得た（収率８６％）。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ 10.03(s, 1H), 8.31(d, J = 9.3Hz, 2H), 8.20(m, 1H), 7.84(d, J = 6.7 Hz, 1H), 7.64(d, J = 8.4Hz, 2H), 7.57(d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.41(d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.28(d, J = 12.6 Hz, 1H), 6.23(d, J = 12.6 Hz, 1H), 5.24(s, 2H), 4.38(t, J = 7.0Hz, 1H), 4.18(t, J = 7.6 Hz, 1H), 3.62(s, 3H), 3.05(q, J = 6.3 Hz, 2H), 2.15(m, 2H), 1.96(m, 1H), 1.49(m, 2H), 1.40(m, 2H), 1.31(d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.25(m, 2H), 0.86(m, 6H)。MS(ESI)m/z: 684.30 [M+H]+; 706.28[M+Na]+。
【０１７６】
実施例６：リンカーＭｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＰＮＰの合成
【０１７７】
１）Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−Ｃｉｔの調製：
【化１０１】
2021536430.tif 000104
Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−Ａｌａのものと同様な調製方法を使ってＦｍｏｃ−Ｖａｌ−Ｃｉｔを合成し、淡黄色固体（収率７０％）を得た。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ 12.61(s, 1H), 8.21(d, J = 6.7Hz, 1H), 7.89(d, J = 6.7 Hz, 2H), 7.76(t, 2H), 7.43(q, 3H), 7.33(t, 2H), 5.98(t, J = 5.2 Hz, 1H), 5.43(s, 2H), 4.25(m, 3H), 4.16(q, 1H), 3.94(t, 1H), 2.96(q, 2H), 1.98(m, 1H), 1.72(m, 1H), 1.58(m, 1H), 1.42(m, 2H), 0.89(dd, 6H)。MS(ESI)m/z: 497.6 [M+H]+; 519.6[M+Na]+。
【０１７８】
２）Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢの調製：
【化１０２】
2021536430.tif 000105
Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−Ｃｉｔを原材料として使用し、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢのものと同様な調製方法によりＦｍｏｃ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢを調製し、そして淡黄色粉末状固体を得た（収率６０％）。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 9.99(s, 1H), 8.12(d, J = 6.7Hz, 1H), 7.89(d, J = 6.7Hz, 2H), 7.74(t, 2H), 7.54(d, 2H), 7.46(d, 1H), 7.41(m, 2H), 7.32(m, 2H), 7.23(d, 2H), 5.98(t, J = 5.5Hz, 1H), 5.42(s, 2H), 5.12(t, 1H), 4.41(q, 3H), 4.30(q, 1H), 4.23(q, 2H), 3.92(q, 1H), 3.00(m, 2H), 1.98(m, 1H), 1.69(m, 1H), 1.57(m, 1H), 1.41(m, 2H), 0.86(dd, 6H)。MS(ESI)m/z: 602.7 [M+H]+; 624.5 [M+Na]+。
【０１７９】
３）Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢの調製：
【化１０３】
2021536430.tif 000106
Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢを原材料として使用し、Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢのものと同様な調製方法を使ってＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢを調製し、淡黄色粉末状固体（収率８４％）を得た。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ10.07(s, 1H), 8.17(br, 1H), 7.54(d, 2H), 7.23(d, 2H), 6.01(br, 1H), 5.44(d, 2H), 5.13(br, 1H), 4.47(s, 1H), 4.43(s, 2H), 3.05(d, 1H), 2.95(m, 2H), 1.94(m, 1H), 1.64(m, 2H), 1.38(m, 2H), 0.86(dd, 6H)。MS(ESI)m/z: 380.3 [M+H]+; 402.3 [M+Na]+。
【０１８０】
４）Ｍｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢの調製：
【化１０４】
2021536430.tif 000107
【０１８１】
Ｍｍ−Ｃ６−ＯＳｕ（１．０ｇ、２．９４ミリモル）を無水ＤＭＦ（３０ｍＬ）に溶解し、溶解が完了した後、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ（１．１１ｇ、２．９４ミリモル）を添加し、室温で攪拌しながら一晩反応させた。反応が完了した後、ＤＭＦを減圧下での濃縮により除去して粗生成物を黄色粘性物質として得、それをカラムクロマトグラフィーにより更に精製して淡黄色粉末状固体を得た（１．１９ｇ、収率４１％）。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 9.92(s, 1H), 8.20(t, 1H), 8.09(d, 1H), 7.85(d, 1H), 7.54(d, 2H), 7.22(d, 2H), 6.27(d, J = 12.6 Hz, 1H), 6.23(d, J = 12.6 Hz, 1H), 5.99(br, 1H), 5.43(s, 2H), 5.11(t, 1H), 4.42(d, 2H), 4.37(m, 1H), 4.19(t, 1H), 3.63(s, 3H), 3.05(q, 2H), 2.95(m, 2H), 2.17(m, 2H), 1.95(m, 1H), 1.74-1.55(m, 2H), 1.51-1.48(m, 2H), 1.45-1.37(m, 4H), 1.24(m, 2H), 0.85(dd, 6H)。MS(ESI)m/z: 605.7 [M+H]+; 627.7 [M+Na]+。
【０１８２】
５）Ｍｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＰＮＰの調製
【化１０５】
2021536430.tif 000108
Ｍｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢを原料として使用し、Ｍｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＰＮＰのものと同様な方法を使用してＭｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＰＮＰを調製し、淡黄色粉末状固体を得た（収率８５％）。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 10.08(s, 1H), 8.31(d, J=9.0 Hz, 2H), 8.20(t, J = 5.2 Hz, 1H), 8.13(d, J = 7.3 Hz, 2H), 7.83(d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.65(d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.57(d, J = 9.24 Hz, 2H), 7.41(d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.28(d, J = 12.6 Hz, 1H), 6.23(d, J = 12.6 Hz, 1H), 5.99(s, 1H), 5.43(s, 2H), 4.38(t, J = 6.8 Hz, 1H), 4.19(t, J = 7.6 Hz, 1H), 3.63(s, 3H), 3.08-2.92(m, 4H), 2.17(m, 2H), 1.71(m, 1H), 1.60(m, 2H), 1.52-1.37(m, 6H), 1.25 (q, 2H), 0.85(dd, 6H)。MS(ESI) m/z: 770.7 [M+H]+; 792.6 [M+Na]+。
【０１８３】
実施例４〜６で調製したマレイン酸メチルを含むリンカーの構造を下表に示す：
【表２】
2021536430.tif 000109
【０１８４】
実施例７−１：リンカー−細胞毒素コンジュゲートの合成
【０１８５】
１）Ｍｍ−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥの調製：
【化１０６】
2021536430.tif 000110
リンカーＭｍ−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＰＮＰを原材料として使用し、無水ＤＭＦ（３ｍＬ）中に溶解し、溶解が完了した後、ＨＯＢｔ（８．２８ｍｇ、０．０６ミリモル）、ＭＭＡＥ（４０ｍｇ、０．０６ミリモル）およびＤＩＰＥＡ（１０．６８μＬ）を添加し、室温で攪拌しながら１８時間反応させた。反応が完了した後、減圧下での濃縮により溶媒を留去し、残渣をカラムクロマトグラフィーにより更に精製して白色固体粉末として目的生成物を得た（収率６９％）。MS(ESI)m/z: 1220.72 [M+H]+; 610.87 [M+2H]2+。
【０１８６】
２）Ｍｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥの調製：
【化１０７】
2021536430.tif 000111
リンカーＭｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＰＮＰを原材料として使用し、Ｍｍ−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥのものと同様な調製方法を使ってＭｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥを合成し、白色粉末状固体得た（収率７５％）。MS(ESI)m/z: 1284.75 [M+H]+; 642.88 [M+2H]2+。 
3) Mm-C6-Val-Cit-PAB-MMAEの調製:
【０１８７】
【化１０８】
2021536430.tif 000112
リンカーＭｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＰＮＰを原材料として使用し、Ｍｍ−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥのものと同様な調製方法を使って、Ｍｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥを合成し、白色粉末状固体を得た  （収率６８％）。MS(ESI)m/z: 1349.6 [M+H]+; 1371.3 [M+Na]+; 675.6 [M+2H]2+。
【０１８８】
４）Ｍｍ−Ｃ６−ＰＥＧ４−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥの調製
４．１）Ｍｍ−Ｃ６−ＰＥＧ４−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢの調製
【化１０９】
2021536430.tif 000113
Ｍｍ−Ｃ６−ＰＥＧ４（２００ｍｇ、０．３４ミリモル）を無水ＤＭＦ（１５ｍＬ）中に溶解し、溶解が完了した後、Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ（１１０ｍｇ、０．３７ミリモル）を添加し、次いでＨＯＢｔ（６９ｍｇ、０．５１ミリモル）とＤＩＰＥＡ（６５ｍｇ、０．５１ミリモル）を加え、室温で攪拌しながら一晩反応させた。反応が完了した後、ＤＭＦを減圧下での濃縮により留去し、淡黄色固形物として粗生成物を得、それをカラムクロマトグラフィーにより更に精製して無色透明なガラス状固体を得た（１３７ｍｇ、収率５３％）。MS(ESI) m/z: 766.4229 [M+H]+; 788.4050 [M+Na]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.86(s, 1H), 8.19(m, 2H), 7.92(d, 1H), 7.85(t, 1H), 7.55(d, 2H), 7.24(d, 2H), 6.26(dd, 2H), 5.13(t, 1H), 4.43(d, 2H), 4.38(m, 1H), 4.27(m, 1H), 3.62(s, 3H), 3.59(m, 2H), 3.49(m, 12H), 3.39(m, 2H), 3.19(m, 2H), 3.07(m, 2H), 2.43(m, 1H), 2.07(m, 2H), 1.45(m, 3H), 1.31(d, 3H), 1.23(m, 2H), 0.88(d, 3H), 0.84(d, 3H)。
【０１８９】
４．２）Ｍｍ−Ｃ６−ＰＥＧ４−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥの調製
【化１１０】
2021536430.tif 000114
中間体Ｍｍ−Ｃ６−ＰＥＧ４−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢを原材料として使用し、Ｍｍ−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＰＮＰのものと同様な調製方法を使用してＭｍ−Ｃ６−ＰＥＧ４−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＰＮＰを合成し、黄色粘性固体を得、それを、ＤＣＭを用いたフラッシュクロマトグラフィーにより精製して最終的に淡黄色粘性固体（収率７０％）を得た。そのＭｍ−Ｃ６−ＰＥＧ４−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＰＮＰ（１２８ｍｇ、０．１４ミリモル）を無水ＤＭＦ（１５ｍＬ）中に即座に溶かし、溶解が完了した後、ＭＭＡＥ（９８ｍｇ、０．１４ミリモル）を加え、次いでＨＯＢｔ（２８ｍｇ、０．２１ミリモル）とＤＩＰＥＡ（３５ｍｇ、０．２７ミリモル）を添加し、室温で３６時間攪拌した。反応が完了した後、ＤＭＦを減圧下での濃縮により留去し、淡黄色粘性物質として粗生成物を得た。その粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより更に精製して、無色透明のガラス状固体を得た（１００ｍｇ、収率６３％）。MS(ESI)m/z: 755.4581[M+2H]2+。
【０１９０】
５）Ｍｍ−Ｃ６−ＰＥＧ８−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥの調製
５．１）Ｍｍ−Ｃ６−ＰＥＧ８−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢの調製
【化１１１】
2021536430.tif 000115
Ｍｍ−Ｃ６−ＰＥＧ８（２２０ｍｇ、０．３３ミリモル）を無水ＤＭＦ（１５ｍＬ）中に溶解し、溶解が完了した後、Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ（９６ｍｇ、０．３３ミリモル）を加え、次いでＨＯＢｔ（９５ｍｇ、０．５０ミリモル）とＤＩＰＥＡ（６３ｍｇ、０．５０ミリモル）を加え、室温で攪拌しながら２４時間反応させた。反応が完了した後、ＤＭＦを減圧下での濃縮により留去し、淡黄色固形物として粗生成物を得た。その粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製して無色透明なガラス状固体を得た（２６０ｍｇ、収率７８％）。MS(ESI)m/z: 942.5281[M+H]+; 964.5099 [M+Na]+。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 10.00(s, 1H), 8.33(m, 2H), 8.06(d, 1H), 7.99(t, 1H), 7.69(d, 2H), 7.38(d, 2H), 6.40(dd, 2H), 4.56(s, 2H), 4.36(m, 1H), 3.76(s, 3H), 3.73(m, 2H), 3.62(m, 30H), 3.53(m, 2H), 3.19(m, 2H), 2.61(m, 2H), 1.57(m, 2H), 1.44(m, 3H), 1.23(m, 4H), 1.02(d, 3H), 0.97(d, 3H)。
【０１９１】
５．２）Ｍｍ−Ｃ６−ＰＥＧ８−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥの調製
【化１１２】
2021536430.tif 000116
Ｍｍ−Ｃ６−ＰＥＧ４−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥのものと同様な調製方法によりＭｍ−Ｃ６−ＰＥＧ８−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥを合成し、無色の粘性固体（収率４３％）が得られた。MS(ESI)m/z: 843.5101[M+2H]2+。
【０１９２】
６）Ｍｍ−Ｃ６−ＰＥＧ８’−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥの合成
６．１）Ｍｍ−Ｃ６−ＰＥＧ８’−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢの調製
【化１１３】
2021536430.tif 000117
Ｍｍ−Ｃ６−ＰＥＧ８’（２５２ｍｇ、０．３３ミリモル）を無水ＤＭＦ（１５ｍＬ）中に溶解し、溶解が完了した後、Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ（９６ｍｇ、０．３３ミリモル）を加え、次いでＨＯＢｔ（９５ｍｇ、０．５０ミリモル）とＤＩＰＥＡ（６３ｍｇ、０．５０ミリモル）を添加し、室温で攪拌しながら２４時間反応させた。反応が完了した後、ＤＭＦを減圧下で濃縮して淡黄色固形物として粗生成物を得、それをカラムクロマトグラフィーにより精製して無色ガラス状固体を得た（１６１ｍｇ、収率４７％）。MS(ESI)m/z: 1041.8958[M+H]+; 1063.5775[M+Na]+。
【０１９３】
６．２）Ｍｍ−Ｃ６−ＰＥＧ８’−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥの調製
【０１９４】
【化１１４】
2021536430.tif 000118
Ｍｍ−Ｃ６−ＰＥＧ４−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥのものと同様な調製方法を使ってＭｍ−Ｃ６−ＰＥＧ８’−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥを合成し、淡黄色粘性固体（収率３１％）を得た。MS(ESI) m/z: 893.5463[M+2H]2+。
【０１９５】
実施例７で調製したＭＭＡＥとマレイン酸メチルを含むリンカーとのコンジュゲートの構造を下表に示す：
【表３】
2021536430.tif 000119
【０１９６】
実施例８：リンカー−（ＭＭＡＥ代替物）コンジュゲートの合成
【０１９７】
８．１ ＭＭＡＥ代替物（Ｖａｌ’−Ｖａｌ−Ａｎ）の合成
合成経路は次の通りであった：
【化１１５】
2021536430.tif 000120
【０１９８】
１）Ｂｏｃ−Ｖａｌ−Ａｎの合成：
【化１１６】
2021536430.tif 000121
Ｎ−Ｂｏｃ−バリン（Ｂｏｃ−Ｖａｌ、２．１７ｇ、１０ミリモル）を無水ＴＨＦ（３０ｍＬ）中に溶解し、次いでアニリン（０．９３ｇ、１０ミリモル）とＤＣＣ（２．３９ｇ、１１ミリモル）を加え、室温で攪拌しながら一晩反応させた。反応が完了した後、不溶性物質（ＤＣＵ）をろ過により除去し、得られたろ液を減圧下で濃縮し、そしてカラムクロマトグラフィーにより更に精製して白色粉末状固体として目的生成物を得た（２．２ｇ、収率７５％）。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 9.98(s, 1H), 7.60(d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.30(d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.04(t, J = 7.4 Hz, 1H), 6.90(d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.91(t, J = 7.0 Hz, 1H), 1.96(m, 1H), 1.39(s, 9H), 0.88(d, J = 6.7 Hz, 6H)。MS(ESI) m/z: 293.1 [M+H]+; 315.2 [M+Na]+。
【０１９９】
２）Ｖａｌ−Ａｎの調製：
【化１１７】
2021536430.tif 000122
工程１）で得られた生成物Ｂｏｃ−Ｖａｌ−Ａｎ（５．８５ｇ、２０ミリモル）をＤＣＭ（５０ｍＬ）中に溶かし、次いで生じた反応溶液にＴＦＡ（１２．５ｍＬ）を加え、室温で攪拌しながら一晩反応を行った。反応が完了した後、減圧下での濃縮とカラムクロマトグラフィーによる更なる精製を行って、目的生成物として淡黄色油状液体を得た（２．８ｇ。収率８８％）。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 9.84(br, 1H), 7.63(dd, J = 8.7 Hz, 2H), 7.30(d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.03(td, J = 7.4Hz, 1H), 3.10(d, J = 5.6 Hz, 1H), 1.93(m, 1H), 0.88(d, J = 6.7 Hz, 6H)。MS(ESI)m/z: 193.1 [M+H]+; 215.1 [M+Na]+。
【０２００】
３）Ｂｏｃ−Ｖａｌ’−Ｖａｌ−Ａｎの調製：
【化１１８】
2021536430.tif 000123
Ｎ−メチル−Ｎ−Ｂｏｃ−バリン（Ｖａｌ’、０．５８ｇ、２．５ミリモル）をＤＣＭ（１０ｍＬ）中に溶かし、次いでＥＤＣＩ（０．５８ｇ、３ミリモル）、ＨＯＢｔ（０．４１ｇ、３ミリモル）およびＤＩＰＥＡ（０．５１ｍＬ，３．０ミリモル）を順次添加し、室温で攪拌しながら１時間反応させ、次いでＶａｌ−Ａｎ（０．４８ｇ、２．５ミリモル）を加え、攪拌しながら一晩反応を続けた。反応が完了した後、減圧下での濃縮により溶媒を留去して粗生成物を得、それを更に乾燥して淡ピンク色粉末状固体を得た（０．４３ｇ、収率４２％）。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 10.11(d, 1H), 7.95(d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.58(d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.31(t, J = 8.0 Hz, 2H), 7.05(t, J = 7.4 Hz, 3H), 4.23(t, J = 9.4 Hz, 2H), 2.77(s, 1H), 2.04(m, 2H), 1.43(s, 9H), 0.87-0.78(m, 12H)。MS(ESI)m/z: 406.2 [M+H]+; 428.3 [M+Na]+。
【０２０１】
４）Ｖａｌ’−Ｖａｌ−Ａｎの調製：
【化１１９】
2021536430.tif 000124
工程３）で得られたＢｏｃ−Ｖａｌ’−Ｖａｌ−Ａｎ（０．４２ｇ、１．０４ミリモル）を、ＤＣＭ（５ｍＬ）中に溶かし、次いでＴＦＡ（１．２５ｍＬ）を反応溶液に添加し、室温で攪拌しながら３時間反応を行った。反応が完了した後、減圧下で濃縮を行い、残渣を酢酸エチルで再溶解し、飽和重炭酸ナトリウム溶液で２回洗浄し、次いで濃縮した。得られた生成物を酢酸エチルから再結晶し、白色粉末状固体として生成物を得た（０．３１ｇ、収率９９％）。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 10.16(s, 1H), 8.03(d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.59(d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.30(t, J = 7.1 Hz, 2H), 7.04(t, J = 7.4 Hz, 1H), 4.39(t, J = 8.0 Hz, 1H), 2.69(d, J = 6.2 Hz, 1H), 2.20(s, 3H), 2.03(m, 1H), 1.76(m, 1H), 0.89(m, 12H)。MS(ESI)m/z: 306.22 [M+H]+; 328.20 [M+Na]+。
【０２０２】
８．２ リンカー−（ＭＭＡＥ代替物）コンジュゲートの合成
【化１２０】
2021536430.tif 000125
リンカーＭｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＰＮＰを原材料として使用し、無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）中に溶解し、溶解が完了した後、ＨＯＢｔ（４４．６ｍｇ、０．３３ミリモル）、ＭＭＡＥ代替物（Ｖａｌ’−Ｖａｌ−Ａｎ、１００ｍｇ、０．３３ミリモル）およびＤＩＰＥＡ（８５．３ｍｇ、０．６６ミリモル）を順次添加し、室温で攪拌しながら１８時間反応させた。反応が完了した後、減圧下での濃縮により溶媒を留去し、残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製して白色固体粉末として目的生成物を得た(収率86％)。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 10.07-9.97(m, 2H), 8.19(t, J = 5.7 Hz, 1H), 8.12(d, J = 7.3Hz, 1H), 7.94(d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.83(d, J = 8.4Hz, 2H), 7.60-7.57(m, 4H), 7.34-7.28(m, 4H), 7.05(t, J = 7.4 Hz, 1H), 6.27(d, J = 12.6 Hz, 2H), 6.23(d, J = 12.6Hz, 2H), 5.98(t, J = 5.6Hz, 1H), 5.43(s, 1H), 5.11-5.01(m, 2H), 4.39(m, 2H), 4.18(q, J = 8.2Hz, 2H), 3.63(s, 3H), 3.08-2.95(m, 4H), 2.85(s, 3H), 2.17(m, 2H), 2.09(s, 1H), 1.97(m, 1H), 1.69(m, 1H), 1.61(m, 1H), 1.53-1.31(m, 6H), 1.23(m, 2H), 0.87-0.77(m, 18H)。MS(ESI)m/z: 936.8 [M+H]+; 959.1 [M+Na]+。
【０２０３】
実施例８において調製したマレイン酸メチルを含むリンカーとMMAE代替物とのコンジュゲートの構造を下表に示す。
【表４】
2021536430.tif 000126
【０２０４】
本発明により提供されるリンカーが細胞毒素と連結できることが実施例７と８により証明された。
【０２０５】
実施例９：リンカー−（スルフヒドリル含有小分子）コンジュゲートの合成
【０２０６】
９．１ 次の経路に従ったＷ’基含有リンカー−（スルフヒドリル基含有小分子）コンジュゲートの合成：
【化１２１】
2021536430.tif 000127
ここで、Ｒは、
【化１２２】
2021536430.tif 000128
であり；
Ｒ−SHは、
【化１２３】
2021536430.tif 000129
である。
【０２０７】
１）Ｍａａ−Ｃ６−Ａｎの調製：
【化１２４】
2021536430.tif 000130
Ｍａａ−Ｃ６−ＯＨ（３．０ｇ、１３．１ミリモル）をＴＨＦ（５０ｍＬ）中に溶解し、溶解が完了した後、得られた混合物を−２０℃の低温反応槽の中に置き、冷却しながら１０分間攪拌した。ＮＭＭ（１．５９ｇ、１５．７ミリモル）およびクロロギ酸イソブチル（２．１４ｇ、１５．７ミリモル）をそれぞれ滴下添加し、−２０℃の低温で２０分間反応させ、次いでアニリン（Ａｎ、１．８３ｇ、１９．６ミリモル）を滴下添加し、そして連続攪拌して２時間反応させた。反応が完了した後、１モル／ＬのＨＣｌを反応溶液に添加し、酢酸エチルで抽出した。有機相を合わせ、飽和食塩水で３回洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して白色固体として純粋な生成物を得た(3.2 g、収率81％)。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 11.98(br, 1H), 11.35(s, 1H), 8.68(t, 1H), 7.61(d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.32(t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.07(t, J = 7.4 Hz, 2H), 6.26(dd, 2H), 3.12(q, 2H), 1.54-1.42(m, 4H), 1.30(m, 2H)。
【０２０８】
２）Ｍｍ−Ｃ６−Ａｎの調製：
【０２０９】
【化１２５】
2021536430.tif 000131
Ｍａａ−Ｃ６−Ａｎ（０．３３ｇ、１．１ミリモル）をＤＭＦ中に溶解し、炭酸カリウム（０．２３ｇ、１．６３ミリモル）とヨウ化メチル（０．２３ｇ、１．６３ミリモル）を添加し、室温で攪拌しながら４時間反応させた。反応が完了した後、不溶性塩をろ過により除去し、得られたろ液を酢酸エチル中に分配し、次いでシリカゲルと混合し、カラムクロマトグラフィーにより精製して白色粉末状固体を得た（０．３２ｇ、収率９３％）。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 11.33(s, 1H), 8.67(t, 1H), 7.61(d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.32(t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.07(t, J = 7.4 Hz, 2H), 6.26(dd, 2H), 3.57(s, 3H), 3.12(q, 2H), 2.29(t, 2H), 1.57-1.41(m, 4H), 1.30(m, 2H)。
【０２１０】
３）Ｓ１−Ｗ’−Ｃ６−Ａｎの調製：
【化１２６】
2021536430.tif 000132
Ｍｍ−Ｃ６−Ａｎ（０．１１ｇ、０．３５ミリモル）をメタノール中に溶かし、次いでＳ１（０．１ｇ、０．３８ミリモル）と触媒量のトリエチルアミン（ＴＥＡ）を添加して反応を行った。３０分後、反応が完了し、減圧濃縮により溶媒を留去し、残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製して白色粉末状固体として一対のエナンチオマーを約１：１の含有比で得た（０．２ｇ、収率約１００％）。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 10.00(s, 1H), 8.53(t, 1H), 8.23(d, 2H), 7.97(t, 1H), 7.55(d, 2H), 7.32-7.21(m, 7H), 7.02(t, 1H), 4.49(q, 1H), 4.27(m, 2H), 3.75(t, 2H), 3.57(s, 3H), 3.03(q, 2H), 2.98-2.88(m, 2H), 2.80(m, 1H), 2.66(dd, 1H), 2.24(t, 2H), 1.87(s, 3H), 1.48(m, 2H), 1.38(m, 2H), 1.23(m, 2H)。
【０２１１】
４）Ｓ２−Ｗ’−Ｃ６−Ａｎの調製：
【化１２７】
2021536430.tif 000133
Ｍｍ−Ｃ６−Ａｎ（０．１５ｇ、０．４７ミリモル）をメタノールに溶かし、次いでＳ２（５２μＬ、０．７ミリモル）を加えて反応させた。３０分後、反応が完了し、減圧濃縮により溶媒を留去し、その残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製して白色粉末状固体として生成物を得た（０．２ｇ、収率８０％）。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 10.00(s, 1H), 8.09(d, 2H), 7.28(t, 2H), 7.01(t, 1H), 4.83(br, 1H), 3.70(t, 1H), 3.57(s, 3H), 3.51(t, 2H), 3.02(m, 2H), 2.80(m, 1H), 2.67(m, 3H), 2.25(t, 2H), 1.49(m, 2H), 1.38(m, 2H), 1.25(m, 2H)。
【０２１２】
５）Ｓ３−Ｗ’−Ｃ６−Ａｎの調製：
【化１２８】
2021536430.tif 000134
Ｍｍ−Ｃ６−Ａｎ（０．１５ｇ、０．４７ミリモル）をメタノールに溶かし、次いでＳ３（１６４μＬ、１．４１ミリモル）を添加して反応させた。３０分後、反応が完了し、減圧濃縮により溶媒を留去し、残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製して白色粉末状固体として生成物を得た（０．１７ｇ、収率８２％）。1H-NMR(400 MHz, CDCl3): δ 10.02(s, 1H), 8.09(t, 2H), 7.57(d, 2H), 7.32-7.22(m, 7H), 7.02(t, 1H), 3.86(m, 2H), 3.76(t, 1H), 3.56(s, 3H), 3.05(m, 2H), 2.91(m, 1H), 2.67(m, 1H), 2.24(m, 2H), 1.49(m, 2H), 1.38(m, 2H), 1.25(m, 2H)。
【０２１３】
６）Ｓ４−Ｗ’−Ｃ６−Ａｎの調製：
【化１２９】
2021536430.tif 000135
Ｍｍ−Ｃ６−Ａｎ（０．１５ｇ、０．４７ミリモル）をメタノール／ジクロロメタン混合溶媒（２つの容積比は１：２であった）中に溶かし、次いでＳ４（０．２３ｇ、１．４１ミリモル）と触媒量のトリエチルアミンを加えて反応を行った。４時間後、反応が完了し、減圧濃縮により溶媒を留去し、そして残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製して白色粉末状固体として生成物を得た（０．１７ｇ、収率７５％）。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 12.77(br, 1H), 10.00(s, 1H), 8.23(s, 1H), 7.55(d, 2H), 7.22(m, 2H), 7.02(t, 1H), 4.49(q, 1H), 4.27(m, 2H), 3.75(t, 2H), 3.57(s, 3H), 3.03(q, 2H), 2.98-2.88(m, 2H), 2.80(m, 1H), 2.66(dd, 1H), 2.24(t, 2H), 1.87(s, 3H), 1.48(m, 2H), 1.38(m, 2H), 1.23(m, 2H)。
【０２１４】
実施例９．１において調製した、マレイン酸メチルを含むリンカーと小分子とのコンジュゲートの構造を下表に示す。
【表５】
2021536430.tif 000136
【０２１５】
本願により提供されるリンカー中のマレイン酸メチル基（Ｍｍ）が、様々なタイプのスルフヒドリル基と効率的にカップリングできることが実施例９．１により確かめられた。
【０２１６】
９．２ 次の経路に従ったスクシンイミド（Ｓｕ）含有リンカー−（スルフヒドリル含有小分子）コンジュゲートの合成：
【化１３０】
2021536430.tif 000137
ここで、Ｒは、
【化１３１】
2021536430.tif 000138
であり；Ｒ−ＳＨは
【化１３２】
2021536430.tif 000139
であった。
【０２１７】
１）Ｍａ−Ｃ６−ＯＨの調製：
【化１３３】
2021536430.tif 000140
無水マレイン酸（４．８６ｇ、４９．５５ミリモル）を酢酸（１５０ｍＬ）に溶かし、完全に溶けたら、６−アミノヘキサン酸（５．０ｇ、３８．１１ミリモル）を添加し、次いで得られた反応液を１２０℃に加熱し、６時間還流させた。反応が完了した後、反応液を室温に冷まし、蒸留水中に注ぎ入れ、酢酸エチルで複数回抽出し、有機相を合わせた。酢酸エチル有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で一晩乾燥した。減圧濃縮により溶媒を留去し、残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製して白色粉末状固体として生成物を得た（５．９２ｇ、収率７４％）。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 11.98(br, 1H), 7.01(s, 2H), 3.39(t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.17(t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.51-1.44(m, 2H), 1.24-1.17(m, 2H)。MS(ESI)m/z: 210.0 [M-H]-。
【０２１８】
２）Ｍａ−Ｃ６−Ａｎの調製：
【化１３４】
2021536430.tif 000141
Ｍａ−Ｃ６−ＯＨ（１．０ｇ、４．７３ミリモル）をテトラヒドロフラン（１５ｍＬ）に溶かし、完全に溶けたら、生じた混合物を−２０℃の低温反応槽に入れて冷却し、１０分間攪拌し、次いでＮＭＭ（０．６３ｍＬ、５．６８ミリモル）とクロロギ酸イソブチル（０．７４ｍＬ、５．６８ミリモル）を順次滴下添加し、滴下添加が完了したら、得られた反応液を連続攪拌して−２０℃で３０分間反応させた。次いでアニリン（０．６５ｍＬ、７．１ミリモル）を滴下添加し、−２０℃で２時間反応を続けた。反応が完了したら、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（３０ｍＬ）を反応液に加え、次いでその反応液を酢酸エチルで抽出し、有機相を合わせた。得られた有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で一晩乾燥した。減圧濃縮により溶媒を留去し、残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製して白色粉末状固体として生成物を得た（０．８ｇ、収率５９％）。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 9.85(s, 1H), 7.57(d, 2H), 7.28(t, 3H), 7.03-6.99(m, 3H), 3.40(t, 2H), 2.28(t, 2H), 1.61-1.47(m, 4H), 1.28-1.20(m, 2H)。
【０２１９】
３）Ｓ１−Ｓｕ−Ｃ６−Ａｎの調製：
【化１３５】
2021536430.tif 000142
【０２２０】
Ｍａ−Ｃ６−Ａｎ（１５０ｍｇ、０．５２ミリモル）をメタノール／ジクロロメタン混合溶媒（１５ｍＬ、容積比１：２）中に溶かし、完全に溶解したら、Ｓ１（１４０ｍｇ、０．５５ミリモル）を加え、室温で１０分間反応させ、減圧下で溶媒を留去して粗生成物を得た。その粗生成物を精製のためにジエチルエーテル（１０ｍＬ）中に分散してスラリーにし、白色粉末状固体を得た（０．３ｇ、収率８２％）。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 9.87(s, 1H), 8.63(m, 1H), 8.28(t, 1H), 7.58(d, 2H), 7.33-7.21(m, 7H), 7.01(t, 1H), 4.52(q, 1H), 4.29(d, 2H), 4.00(m, 1H), 3.37(t, 2H), 3.19-3.11(m, 2H), 3.00(d, 1H), 2.82(t, 1H), 2.28(m, 2H), 1.87(t, 3H), 1.61-1.46(m, 4H), 1.26(m, 2H)。
【０２２１】
４）Ｓ２−Ｓｕ−Ｃ６−Ａｎの調製：
【化１３６】
2021536430.tif 000143
Ｍａ−Ｃ６−Ａｎ（２００ｍｇ、０．６９ミリモル）をメタノール／ジクロロメタン混合溶媒（１５ｍＬ、容積比１：２）中に溶かし、完全に溶解したら、Ｓ２（７７μＬ、１．０５ミリモル）を加え、室温で１０分間反応させ、減圧下で溶媒を留去して粗生成物を得た。その粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製して白色粉末状固体を得た（０．２４ｇ、収率９９％）。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 9.86(s, 1H), 7.57(d, 2H), 7.28(t, 2H), 7.01(t, 1H), 4.90(s, 1H), 3.58(t, 2H), 3.37(t, 2H), 3.16(m, 1H), 2.87(m, 1H), 2.71(m, 1H), 2.52(t, 1H), 2.48(t, 1H), 2.28(t, 2H), 1.58(m, 2H), 1.49(m, 2H), 1.26(m, 2H)。
【０２２２】
５）Ｓ３−Ｓｕ−Ｃ６−Ａｎの調製：
【化１３７】
2021536430.tif 000144
Ｍａ−Ｃ６−Ａｎ（２００ｍｇ、０．６９ミリモル）をメタノール／ジクロロメタン混合溶媒（１５ｍＬ、容積比１：２）中に溶かし、完全に溶解したら、Ｓ３（１２３μＬ、１．０５ミリモル）を加え、室温で１０分間反応させ、減圧下で溶媒を留去して粗生成物を得た。その粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製して白色粉末状固体を得た（０．２７ｇ、収率９５％）。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 9.86(s, 1H), 7.58(d, 2H), 7.37-7.24(m, 7H), 7.01(t, 1H), 4.05-4.00(m, 2H), 3.91(d, 1H), 3.75(dd, 1H), 3.35(t, 2H), 3.09(m, 1H), 2.28(t, 2H), 1.58(m, 2H), 1.49(m, 2H), 1.26(m, 2H)。
【０２２３】
６）Ｓ４−Ｓｕ−Ｃ６−Ａｎの調製：
【化１３８】
2021536430.tif 000145
Ｍａ−Ｃ６−Ａｎ（１００ｍｇ、０．３５ミリモル）をメタノール／ジクロロメタン混合溶媒（１５ｍＬ、容積比１：２）中に溶かし、完全に溶解したら、Ｓ４（５７ｍｇ、０．３５ミリモル）を加え、室温で１０分間反応させ、減圧下で溶媒を留去して粗生成物を得た。その粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製して白色粉末状固体を得た（１２０ｍｇ、収率７６％）。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 12.57(br, 1H), 9.86(s, 1H), 8.32(t, 1H), 7.58(d, 2H), 7.27(d, 2H), 7.01(t, 1H), 4.43(m, 1H), 4.00(m, 1H), 3.29(t, 2H), 3.15(m, 1H), 3.04(m, 0.5H), 2.85(m, 0.5H), 2.28(d, 4H), 1.61-1.46(m, 4H), 1.26(m, 2H)。
【０２２４】
実施例９において調製したスクシンイミド基含有リンカーと小分子とのコンジュゲートの構造を下表に示す：
【表６】
2021536430.tif 000146
【０２２５】
実施例１０：マレイン酸アミド構造（Ｍａａ）を含むリンカーと細胞毒素ＭＭＡＥとのコンジュゲートの調製
【０２２６】
１０．１ Ｍａａ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥの調製
１）Ｍａａ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢの調製：
【化１３９】
2021536430.tif 000147
Ｍａａ−Ｃ６−ＯＳｕを原材料として使用し、Ｍｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢのものと同様な方法によりＭａａ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢを合成し、淡黄色粉末状固体を得た（収率７８％）。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ 15.09(br, 1H), 12.03 (br, 1H), 9.86(s, 1H), 9.43(s, 1H), 8.12(d, J = 6.7 Hz, 1H), 7.84(d, J = 6.7 Hz, 2H), 7.53(t, 2H), 7.23(d, 2H), 6.31(d, 1H), 6.21(d, 1H), 5.12(t, 1H), 4.42(s, 2H), 4.37(q, 1H), 4.17(t, 1H), 3.14(q, 2H), 2.24-2.10(m, 2H), 1.97(m, 1H), 1.48(m, 4H), 1.31-1.24(m, 5H), 0.85(dd, 6H)。
【０２２７】
２）Ｍａａ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＰＮＰの調製：
【化１４０】
2021536430.tif 000148
中間体Ｍａａ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢを原材料として使用し、Ｍｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＰＮＰのものと同様な調製方法を使ってＭａａ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＰＮＰを合成し、淡黄色粉末状固体を得た（収率２０％）。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ 15.22(br, 1H), 10.03(s, 1H), 9.18(br, 1H), 8.32(d, J = 9.3Hz, 2H), 8.22(d, 1H), 7.84(d, J = 6.7 Hz, 1H), 7.64(d, J = 8.4Hz, 2H), 7.57(d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.41(d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.37(d, J = 12.6 Hz, 1H), 6.24(d, J = 12.6 Hz, 1H), 5.24(s, 2H), 4.40(m, 1H), 4.18(t, J = 7.6 Hz, 1H), 3.16(q, 2H), 2.22-2.18(m, 2H), 1.96(m, 1H), 1.47(m, 4H), 1.28(m, 5H), 0.86(m, 6H)。
【０２２８】
３）Ｍａａ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥの調製
【化１４１】
2021536430.tif 000149
リンカーＭａａ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＰＮＰを原材料として使用し、Ｍｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥのものと同様な調製方法を使ってＭａａ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥを合成し、白色粉末状固体を得た（収率５７％）。MS(ESI) m/z: 1249.2 [M+H]+; 1266.2 [M+NH4]+; 625.3 [M+2H]2+; 1247.1 [M-H]-。
【０２２９】
１０．２ Ｍａａ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥの調製
１）Ｍａａ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢの調製
【化１４２】
2021536430.tif 000150
Ｍａａ−Ｃ６−ＯＳｕを原材料として使用し、そしてＭｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢのものと同様な方法によりＭａａ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢを合成し、淡黄色粉末状固体を得た（収率８４％）。１Ｈ-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ 11.60(br, 1H), 9.91(s, 1H), 9.62(br, 1H), 8.11(d, J = 6.7 Hz, 1H), 7.89(d, J = 6.7 Hz, 1H), 7.54(d, 2H), 7.23(d, 2H), 6.21(m, 1H), 6.05(m, 1H), 5.45(d, 2H), 5.11(br, 1H), 4.42(s, 2H), 4.37(t, 1H), 4.19(t, 1H), 3.14(m, 2H), 3.05-2.91(m, 2H), 2.23-2.11(m, 2H), 1.96(m, 1H), 1.70(m, 1H), 1.59(m, 1H), 1.54-1.33(m, 6H), 1.26(m, 2H), 0.84(dd, 6H)。
【０２３０】
２）Ｍａａ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＰＮＰの調製
【化１４３】
2021536430.tif 000151
中間体Ｍａａ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢを原材料として使用し、そしてＭｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＰＮＰのものと同様な調製方法を使ってＭａａ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＰＮＰを合成し、淡黄色粉末状固体を得た（収率１６％）。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 15.22(br, 1H), 10.10(s, 1H), 9.31(br, 1H), 8.31(d, J = 9.0 Hz, 2H), 8.15(t, J = 5.2 Hz, 1H), 7.86(d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.65(d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.57(d, J = 9.24 Hz, 2H), 7.41(d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.22(d, 1H), 6.36(d, J = 12.6 Hz, 1H), 6.23(d, J = 12.6 Hz, 1H), 6.03(s, 1H), 5.46(s, 2H), 5.24(s, 2H), 4.42(m, 1H), 4.19(m, 1H), 3.16(q, 2H), 3.05-2.92(m, 2H), 2.17(m, 2H), 1.97(m, 1H), 1.73-1.57(m, 2H), 1.52-1.44(m, 6H), 1.27(m, 2H), 0.85(dd, 6H)。MS(ESI)m/z: 756.7 [M+H]+; 778.4 [M+Na]+; 754.6 [M-H]-。
【０２３１】
３）Ｍａａ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥの調製
【化１４４】
2021536430.tif 000152
リンカーＭａａ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＰＮＰを原材料として使用し、Ｍｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥのものと同様な調製方法を使ってＭａａ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥを合成し、白色粉末状固体を得た（収率５７％）。MS(ESI) m/z: 1334.3 [M+H]+; 689.5 [M+2Na]2+。
【０２３２】
実施例１０において調製したマレイン酸アミド（Ｍａａ）含有リンカーとＭＭＡＥとのコンジュゲートの構造を下表に示す：
【表７】
2021536430.tif 000153
【０２３３】
実施例１１：フマル酸メチル構造（Ｍｆ）を含むリンカーと細胞毒素ＭＭＡＥとのコンジュゲートの調製
【０２３４】
１１．１ Ｍｆ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥの調製
１）Ｍｆ−Ｃ６−ＯＨの調製
【化１４５】
2021536430.tif 000154
フマル酸モノメチル（２．０ｇ、１５．３７ミリモル）をジクロロメタン（５０ｍＬ）に溶かし、そして４−メチルモルホリン（２．５４ｍＬ、２３．０６ミリモル）を添加し、生じた混合溶液を−２０℃に冷却した。そこにクロロギ酸イソブチル（２ｍＬ）を滴下添加し、−２０℃で３時間攪拌した。超音波処理した６−アミノヘキサン酸（２．０２  ｇ、１５．３７ミリモル）のＤＭＦ（６０ｍＬ）中懸濁液を添加し、−２０℃で１時間攪拌し、次いで室温に温め、２時間攪拌した後、溶媒を蒸発させて除去した。生じた残渣は褐色油状物であり、その残渣に水（１５０ｍＬ）を加え、混合物を濃塩酸でｐＨ１に調整して固体を析出させ、その固体を吸引濾過により濾別し、乾燥して淡いピンク色固体を得た（３．３３ｇ、収率８９％）。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 12.02(s, 1H), 8.54(t, 1H), 7.00(d, 1H), 6.57(d, 1H), 3.72(s, 3H), 3.15(m, 2H), 2.19(t, 2H), 1.49(m, 2H), 1.43(m, 2H), 1.27(m, 2H)。MS(ESI)m/z: 242.10 [M-H]-。
【０２３５】
２）Ｍｆ−Ｃ６−ＶＡ−ＰＡＢの調製
【化１４６】
2021536430.tif 000155
Ｍｆ−Ｃ６−ＯＨ（０．６１ｇ、２．５ミリモル）をＤＭＦ（８ｍＬ）中に溶かし、そこにＥＤＣＩ（０．７１ｇ、３．７ミリモル）、ＨＯＢｔ（０．５ｇ、３．７ミリモル）およびＤＩＰＥＡ（０．６１ｍＬ、３．７ミリモル）を加え、室温で１時間攪拌し、次いでＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＯＨ（０．８７ｇ、３．０ミリモル）のＤＭＦ（１２ｍＬ）中溶液を加え、室温で１０時間攪拌し、蒸発して溶媒を除去し、得られた残渣を粗シリカゲルと混合し、シリカゲルカラム上で分離して白色固体生成物を得た（１．０５ｇ、収率８１％）。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 9.91(s, 1H), 8.56(t, 1H), 8.19(d, 1H), 7.86(d, 1H), 7.54(d, 2H), 7.23(d, 2H), 7.01(d, 1H), 6.56(d, 1H), 5.13(br, 1H), 4.42(s, 2H), 4.38(m, 1H), 4.17(q, 1H), 3.72(s, 3H), 3.12(m, 2H), 2.16(m, 2H), 1.96(m, 1H), 1.43(m, 4H), 1.31(s, 2H), 1.30(s, 3H), 0.85(dd, 6H)。MS(ESI)m/z: 541.26 [M+H]+。
【０２３６】
３）Ｍｆ−Ｃ６−ＶＡ−ＰＡＢ−ＰＮＰの調製
【化１４７】
2021536430.tif 000156
Ｍｆ−Ｃ６−ＶＡ−ＰＡＢ（０．５ｇ、０．９６ミリモル）をＤＭＦ（８ｍＬ）中に溶かし、そこにビス（４−ニトロフェニル）カーボネート（０．８８ｇ、２．８９ミリモル）とＤＩＰＥＡ（０．３４ｍＬ、１．９２ミリモル）を添加し、室温で１０時間攪拌し、次いで溶媒を蒸発させて除去した。次いで無水ジエチルエーテルと共に超音波処理し、吸引濾過し、乾燥し、粉砕し、酢酸エチルを２０ｍＬ／ｇの割合で添加し、室温で３時間攪拌し、吸引濾過して固体を得た（０．４９ｇ、収率７５％）。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 10.04(s, 1H), 8.53(br, 1H), 8.31(d, 2H), 8.22(d, 1H), 7.85(d, 1H), 7.64(d, 2H), 7.57(d, 2H), 7.41(d, 2H), 7.01(d, 1H), 6.56(d, 1H), 5.24(s, 2H), 4.39(t, 1H), 4.18(t, 1H), 3.71(s, 3H), 3.13(q, 2H), 2.16(m, 2H), 1.95(m, 1H), 1.49(br, 2H), 1.43(t, 2H), 1.31(d, 3H), 1.24(m, 2H), 0.85(dd, 6H)。MS(ESI) m/z: 684.29 [M+H]+; 706.27 [M+Na]+; 722.24 [M+K]+。
【０２３７】
４）Ｍｆ−Ｃ６−ＶＡ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥの調製
【化１４８】
2021536430.tif 000157
Ｍｆ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＰＮＰ（２９．９９ｍｇ、０．０４３８７ミリモル）をＤＭＦ（２ｍＬ）中に溶かし、そこにＨＯＢｔ（５．９３ｍｇ、０．０４３８７ミリモル）、ＭＭＡＥ（３０ｍｇ、０．０４１７８ミリモル）およびＤＩＰＥＡ（０．００５６ｇ、０．０４３８７ミリモル）を順次添加し、そして室温で８時間攪拌した。生じた反応液を分別漏斗に移し、１５ｍＬの水を加え、生じた混合物を２０ｍＬの酢酸エチルで４回抽出した。有機相を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液で２回洗浄し、次いで１時間静置し、次いで蒸発させて溶媒を除去した。得られた残渣を１００ｍｇの粗シリカゲルと混合し、グラジェント溶出を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して白色固体として生成物を得た（３７ｍｇ、収率７１％）。1H-NMR(400 MHz, CDCl3): δ 9.21(br, 1H), 7.52(t, 4H), 7.31(m, 5H), 7.21(m, 3H), 6.84(dd, 1H), 6.74(m, 1H), 6.56(m, 0.5H), 5.06(m, 2H), 4.91(s, 1H), 4.73(m, 3H), 4.46(t, 1H), 4.23(m, 1H), 4.12(m, 1H), 4.02(m, 1H), 3.79(s, 4H), 3.46(m, 1H), 3.36(s, 5H), 3.25(d, 4H), 3.12(d, 1H), 2.99(s, 2H), 2.88(d, 3H), 2.73(d, 0.5H), 2.43(m, 2H), 2.28(s, 2H), 2.17(m, 1H), 2.02(m, 3H), 1.81(s, 2H), 1.63(m, 3H), 1.51(m, 2H), 1.38(d, 2H), 1.30(t, 3H), 1.21(d, 4H), 1.01(m, 8H), 0.79(m, 24H)。MS(ESI)m/z: 1280.3 [M+NH4]+; 1285.0 [M+Na]+。
【０２３８】
１１．２ Ｍｆ−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥの調製
１） Ｍｆ−Ｃ３−ＯＨの調製
【化１４９】
2021536430.tif 000158
フマル酸モノメチル（２．０ｇ、１５．３７ミリモル）をジクロロメタン（５０ｍＬ）中に溶かし、そこに４−メチルモルホリン（２．５４ｍＬ、２３．０６ミリモル）を加え、生じた溶液を−２０℃に冷却した。クロロギ酸イソブチル（２ｍＬ）を滴下添加し、−２０℃で３時間攪拌した。超音波処理したβ−アラニン（１．３７ｇ、１５．３７ミリモル）のＤＭＦ（６０ｍＬ）中懸濁液を加え、−２０℃で１時間攪拌し、次いで室温に温め、２時間攪拌し、次いで蒸発させて溶媒を除去し、無水ジエチルエーテルと共に超音波処理し、吸引濾過して褐色固体を得た。その褐色固体を粗シリカゲルと共に混合し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーに供して白色粉末状固体を得た（０．７２ｇ、収率２３％）。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 12.32(s, 1H), 8.68(t, 1H), 7.01(d, 1H), 6.60(d, 1H), 3.72(s, 3H), 3.36(t, 2H), 2.44(t, 2H)。MS(ESI) m/z: 200.06 [M-H]- 。
【０２３９】
２）Ｍｆ−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢの調製
【化１５０】
2021536430.tif 000159
Ｍｆ−Ｃ３−ＯＨ（０．５１ｇ、２．５３ミリモル）をＤＭＦ（１０ｍＬ）中に溶かし、そこにＥＤＣＩ（０．７３ｇ、３．７９ミリモル）、ＨＯＢｔ（０．５１ｇ、３．７５ミリモル）およびＤＩＰＥＡ（０．６６ｍＬ、３．７９ミリモル）を順次添加し、室温で１時間攪拌し、次いでＶａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢＯＨ（０．８９ｇ、３．０３ミリモル）のＤＭＦ（２０ｍＬ）中溶液を添加し、室温で１２ｈ攪拌し、次いで蒸発させて溶媒を除去した。生じた残渣を粗シリカゲルと混合し、シリカゲルカラムにより分離して淡黄色固体を得た（０．７ｇ、収率５８％）。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 9.86(s, 1H), 8.63(t, 1H), 8.21(d, 1H), 7.98(d, 1H), 7.54(d, 2H), 7.23(d, 2H), 7.01(d, 1H), 6.56(d, 1H), 5.12(t, 1H), 4.42(d, 2H), 4.39(m, 1H), 4.19(t, 1H), 3.71(s, 3H), 2.41(m, 2H), 1.96(m, 1H), 1.30(d, 3H), 0.85(q, 6H)。MS(ESI)m/z: 477.3 [M+H]+; 494.4 [M+NH4]+; 499.4 [M+Na]+。
【０２４０】
３）Ｍｆ−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＰＮＰの調製
【化１５１】
2021536430.tif 000160
Ｍｆ−Ｃ３−ＶＡ−ＰＡＢ（０．３ｇ、０．６３ミリモル）をＤＭＦ（６ｍＬ）中に溶かし、そこにビス（４−ニトロフェニル）カーボネート（０．５７ｇ、１．８９ミリモル）とＤＩＰＥＡ（０．２２ｍＬ、１．２６ミリモル）を加え、室温で１０時間攪拌した。生じた溶液を蒸留水（６０ｍＬ）中に滴下添加し、吸引濾過して灰色固体を得た。その灰色固体を乾燥し、無水ジエチルエーテル（１５ｍＬ）と共に超音波処理し、室温で３時間攪拌して暗赤色固体を得た（０．３ｇ、収率７４％）。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 10.02(s, 1H), 8.62(br, 1H), 8.32(d, 2H), 8.26(d, 1H), 8.00(d, 1H), 7.64(d, 2H), 7.57(d, 2H), 7.41(d, 2H), 7.01(d, 1H), 6.56(d, 1H), 5.24(s, 2H), 4.38(m, 1H), 4.20(t, 1H), 3.71(s, 3H), 2.41(br, 2H), 1.96(m, 1H), 1.31(d, 3H), 0.86(dd, 6H)。MS(ESI)m/z: 642.3 [M+H]+; 659.6 [M+NH4]+; 664.4 [M+Na]+。
【０２４１】
４）Ｍｆ−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥの調製
【化１５２】
2021536430.tif 000161
Ｍｆ−Ｃ３−ＶＡ−ＰＡＢ−ＰＮＰ（４６．８９ｍｇ、０．０７３１２ミリモル）をＤＭＦ（４ｍＬ）中に溶かし、そこにＨＯＢｔ（９．８８ｍｇ、０．０７３１２ミリモル）、ＭＭＡＥ（５０ｍｇ、０．０７３１２ミリモル）およびＤＩＰＥＡ（１３μＬ、０．０７３１２ミリモル）を順次添加し、室温で８時間攪拌した。生じた溶液を分別漏斗に注ぎ入れ、４０ｍＬの水を加え、生じた混合物を２０ｍＬの酢酸エチルで３回抽出した。有機相を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液で２回洗浄し、生じた飽和塩化ナトリウム溶液を酢酸エチルで１回抽出した。有機相を合わせ、１時間静置し、蒸発させて溶媒を除去した。得られた残渣を１８０ｍｇの粗シリカゲルと混合し、シリカゲルカラムにより分離し、白色固体として生成物を得た（６１ｍｇ、収率６８％）。1H-NMR(400 MHz, CDCl3): δ 7.63(m, 1H), 7.34(m, 6H), 7.16(d, 1H), 6.78(d, 1H), 5.30(s, 2H), 5.01(m, 0.5H), 4.92(m, 1H), 4.73(m, 1H), 4.64(m, 1H), 4.42(m, 0.5H), 4.21(m, 3H), 4.03(m, 0.5H), 3.88(m, 0.5H), 3.76(s, 4H), 3.54(m, 3H), 3.40(s, 5H), 3.36(m, 1H), 3.29(s, 3H), 3.01(s, 2H), 2.89(t, 4H), 2.64(m, 2H), 2.42(m, 2H), 2.19(m, 1H), 2.03(m, 5H), 1.84(br, 6H), 1.45(m, 4H), 0.98(m, 8H), 0.84(m, 24H)。MS(ESI)m/z: 1221.0 [M+H]+; 1238.0 [M+NH4]+; 1243.1 [M+Na]+。
【０２４２】
１１．３ Ｍｆ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥの調製
１）Ｍｆ−Ｃ６−ＶＣ−ＰＡＢの調製
【化１５３】
2021536430.tif 000162
Ｍｆ−Ｃ６−ＯＨ（０．５３ｇ、２．２０ミリモル）をＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶かし、そこにＥＤＣＩ（０．６３ｇ、３．２９ミリモル）、ＨＯＢｔ（０．４４ｇ、３．２９ミリモル）およびＤＩＰＥＡ（０．５７ｍＬ、３．２９ミリモル）を添加し、室温で１時間攪拌し、そこにＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＯＨ（１ｇ、２．６４ミリモル）のＤＭＦ（２０ｍＬ）中溶液を加え、室温で１０時間攪拌し、蒸発させて溶媒を除去し、得られた残渣を粗シリカゲルと共に混合し、シリカゲルカラムにより分離して白色固体として生成物を得た（０．５２ｇ、収率３９％）。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 9.93(s, 1H), 8.54(t, 1H), 8.07(d, 1H), 7.83(d, 1H), 7.55(d, 2H), 7.22(d, 2H), 7.01(d, 1H), 6.56(d, 1H), 6.03(t, 1H), 5.42(s, 2H), 5.10(t, 1H), 4.42(d, 2H), 4.37(m, 1H), 4.19(m, 1H), 3.72(s, 3H), 3.15(m, 2H), 2.99(m, 2H), 2.16(m, 2H), 1.98(m, 1H), 1.66(m, 2H), 1.44(m, 6H), 1.25(m, 2H), 0.84(dd, 6H)。MS(ESI)m/z: 605.5 [M+H]+; 627.5 [M+Na]+。
【０２４３】
２）Ｍｆ−Ｃ６−ＶＣ−ＰＡＢ−ＰＮＰの調製
【化１５４】
2021536430.tif 000163
Ｍｆ−Ｃ６−Ｖｉｔ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ（０．３ｇ、０．４９６ミリモル）をＤＭＦ（８ｍＬ）中に溶かし、そこにビス（４−ニトロフェニル）カーボネート（０．４５ｇ、１．４９ミリモル）とＤＩＰＥＡ（０．１７ｍＬ、０．９９ミリモル）を加え、室温で１２時間攪拌した。生じた反応混合物を７０ｍＬの蒸留水中に滴下添加し、吸引濾過し、得られた固体を乾燥し、無水ジエチルエーテルで処理し、２０ｍＬ／ｇの比で酢酸エチルと混合し、室温で３時間攪拌し、吸引濾過して淡黄色固体を得た（０．２７ｇ、収率７１％）。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 10.09(s, 1H), 8.53(br, 1H), 8.32(d, 2H), 8.15(d, 1H), 7.84(d, 1H), 7.65(d, 2H), 7.57(d, 2H), 7.41(d, 2H), 6.98(d, 1H), 6.56(d, 1H), 5.99(br, 1H), 5.45(s, 2H), 5.24(s, 2H), 4.38(br, 1H), 4.19(t, 1H), 3.71(s, 3H), 3.13(d, 2H), 3.03(m, 1H), 2.93(m, 1H), 2.16(m, 2H), 1.99(s, 1H), 1.93(m, 1H), 1.69(m, 1H), 1.60(m, 1H), 1.49(m, 1H), 1.43(t, 2H), 1.25(m, 4H), 0.84(dd, 6H)。MS(ESI)m/z: 770.6 [M+H]+; 792.4 [M+Na]+。
【０２４４】
３）Ｍｆ−Ｃ６−Ｖｉｔ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥの調製
【化１５５】
2021536430.tif 000164
Ｍｆ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＰＮＰ（６８ｍｇ、０．０８７７ミリモル）をＤＭＦ（６ｍＬ）中に溶かし、そこにＨＯＢｔ（１１．８６ｍｇ、０．０８７７ミリモル）、ＭＭＡＥ（６０ｍｇ、０．０８３６ミリモル）およびＤＩＰＥＡ（１５μＬ、０．０８７７ミリモル）を順次添加し、室温で８時間攪拌した。生じた反応液を分別漏斗に注ぎ入れ、４０ｍＬの水を加え、その混合物２０ｍＬの酢酸エチルで６回抽出した。有機相を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液で２回洗浄し、得られた飽和塩化ナトリウム溶液を酢酸エチルで２回抽出した。有機相を合わせ、１時間静置し、そして蒸発させて溶媒を除去した。得られた残渣を２００ｍｇの粗シリカゲルと混合し、シリカゲルカラムにより分離して白色固体として生成物を得た（６３ｍｇ、収率５６％）。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 10.01(br, 1H), 8.54(t, 1H), 8.13(d, 1H), 7.92(d, 0.5H), 7.84(d, 1H), 7.67(d, 0.5H), 7.58(d, 2H), 7.30(m, 6H), 7.16(m, 1H), 7.01(d, 1H), 6.57(d, 1H), 6.00(br, 1H), 5.45(br, 2H), 5.37(d, 0.5H), 5.01(m, 2H), 4.74(m, 0.5H), 4.64(m, 0.5H), 4.42(m, 3H), 4.23(m, 2H), 3.98(m, 2H), 3.71(s, 3H), 2.91(m, 8H), 2.41(d, 1H), 2.21(m, 6H), 1.98(m, 4H), 1.74(m, 4H), 1.49(m, 8H), 1.26(m, 6H), 1.02(m, 9H), 0.91(m, 4H), 0.82(m, 24H)。MS(ESI)m/z: 1349.3 [M+H]+; 1371.0 [M+Na]+。
【０２４５】
実施例１１において調製したフマル酸メチルを含むリンカーとＭＭＡＥとのコンジュゲートの構造を下表に示す：
【表８】
2021536430.tif 000165
【０２４６】
実施例１２：ＡＤＣの調製
【０２４７】
実施例７で調製したリンカー−MMAEコンジュゲートを、抗HER2ヒト化モノクローナル抗体にカップリングさせた。
【０２４８】
１）汎用される緩衝塩溶液の調製：
緩衝塩溶液１（バッファー１）：３．１１ｇのＬ−ヒスチジンを秤量し、１Ｌの再蒸留水中に溶かし、完全に溶解したら、得られた混合物を、氷酢酸を使って約５．５０（±０．０５）のｐＨになるように調整し、次いで０．２２μｍろ過膜（フィルター）でのろ過により滅菌ろ過し、ボトルに入れ、使用まで短期間４℃で保存した。
【０２４９】
緩衝塩溶液２（バッファー２）：６．０６ｇのトリス塩基（ＴＲＩＳ塩基）と０．９３ｇのＥＤＴＡ・２Ｎａを秤量し、溶解させて１００ｍＬに希釈し、７．８８ｇのトリス塩酸（ＴＲＩＳ・ＨＣｌ）および０．９３ｇのＥＤＴＡ・２Ｎａを秤量し、同様に１００ｍＬに希釈した。得られたＴＲＩＳ・ＨＣｌ溶液を前記ＴＲＩＳ塩基溶液に添加し、ｐＨ＝８．５０（±０．０５）を有するように慎重に調整した。得られた混合物を０．２２μｍろ過膜（フィルター）でのろ過によりろ過滅菌し、ボトルに入れ、使用まで短期間４℃で保存した。
【０２５０】
緩衝塩溶液３（バッファー３）：１．７１５ｍＬの薬用氷酢酸を、ピペットを使って取り、２００ｍＬの再蒸留水に溶かし、０．２２μｍろ過膜でのろ過により滅菌し、次いでボトルに入れ、使用まで短期間４℃で保存した。
【０２５１】
２）抗体カップリング反応：
（ｉ）薬用抗体の置換：カップリング用に使用する抗ＨＥＲ２ヒト化モノクローナル抗体ｍｉｌ４０（Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｈｉｓｕｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．， Ｌｔｄ．より購入）は、ハーセプチン（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ；登録商標）のバイオシミラーであり、その最初の調製液は、ヒスチジン塩酸塩（一水和物）０．６１６ｍｇ／ｍＬ、Ｌ−ヒスチジン０．３６４ｍｇ／ｍＬ、トレハロース２２．７２７ｍｇ／ｍＬ、Ｔｗｅｅｎ２０（登録商標）１００ｍｇ／ｍＬおよび他の薬用賦形剤を含んだ。賦形剤の干渉を取り除くため、凍結解凍した抗体の原液を室温でゆっくりと解凍し、Ｇ２５デキストランゲルカラムを通過させることによりバッファー１に移行した。置換が完了したら、得られたバッファー１中の抗体溶液を限外ろ過と遠心分離により濃縮し（最終濃度＞５ｍｇ／ｍＬ）、その濃度を紫外分光光度計により測定した。
【０２５２】
（ｉｉ）カップリング反応液の調製：カップリング抗体（１当量）の必要量に従って、バッファー１中の抗体溶液を、ピペットを使って正確にピペッティングし、そこに所定量のバッファー１を加えて、抗体濃度を約１０ｍｇ／ｍＬにした。得られたバッファー１中の抗体溶液を、バッファー２を使って約６〜８のｐＨになるように調整し、そしてピペットを使って綺麗な反応バイアルに移した。
【０２５３】
（ｉｉｉ）抗体の還元：バイアル中の反応液をゆっくり攪拌し（１００ｒｐｍ）、そこに２〜５当量の２．８７ｍｇ／ｍＬのＴＣＥＰ・ＨＣｌ溶液を添加した。添加が完了したら、それを室温で６０〜１８０分間ゆっくり攪拌した。
【０２５４】
（ｉｖ）抗体のカップリング：添加すべき有機溶媒（ＤＭＡＣまたはＤＭＳＯ）の容量は、合計量の５％〜１５％を占めるように算出した。同時に、添加すべき小分子ロード（リンカー−ＭＭＡＥコンジュゲート）の質量は、小分子ロードが通常わずかに過剰（通常は８当量）になるような量であり、次いで添加すべき有機溶媒中の前記ロードの濃度を算出した。ロード溶液を正確に調製し、次いで還元した抗体反応溶液中にゆっくり滴下添加し、室温でゆっくり攪拌し、そして特定のカップリング条件に従って０．５〜５時間反応を行った。
【０２５５】
（ｖ）反応の終結：既定されたカップリング時間に達した後、過剰量の水溶性還元性スルフヒドリル基含有小分子Ｎ−アセチルシステイン溶液（１．６３ｍｇ／ｍＬ）  を反応液に添加し、ゆっくり攪拌して反応を３０分間続けた。
【０２５６】
（ｖｉ）生成物の予備精製：カップリング反応の終了後、バッファー３を加えて反応液を約５．５０のｐＨになるように調整した；得られた反応液を濾過し、次いで予備精製のためＧ２５デキストランゲルカラムを使って精製した。構成成分の溶出液の前部分（約８０％）を収集し、限外ろ過により濃縮し、次いで無菌ろ過し、小分け包装した；生成物分析のためにリザーブした幾つかのサンプルを除き、短期保存のため４℃に置き、他の生成物は後の使用のため−８０℃で保管した。
【０２５７】
上記方法を使うことにより、Ｍｍ−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ、Ｍｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ、Ｍｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥおよびＭｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ代替物をそれぞれ抗体とカップリングし、次のＡＤＣを調製した：
ＡＤＣ−Ｉ： ＭＡＢ−Ｗ’−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ：
【化１５６】
2021536430.tif 000166
ＭＡＢは抗体であり、ｎは、約４または８である。
【０２５８】
ＡＤＣ−ＩＩ：ＭＡＢ−Ｗ’−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ：
【化１５７】
2021536430.tif 000167
ＭＡＢは抗体であり、ｎは、約４または８である。
【０２５９】
ＡＤＣ−ＩＩＩ：ＭＡＢ−Ｗ’−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ：
【化１５８】
2021536430.tif 000168
ＭＡＢは抗体であり、ｎは、約４または８である。
【０２６０】
ＡＤＣ−ＩＶ：ＭＡＢ−Ｗ’−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ代替物：
【化１５９】
2021536430.tif 000169
ＭＡＢは抗体であり、ｎは、約４または８である。
【０２６１】
ＡＤＣ−Ａ：ＭＡＢ−Ｗ’−Ｃ６−ＰＥＧ４−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ：
【化１６０】
2021536430.tif 000170
ＭＡＢは抗体であり、ｎは、約４または８である。
【０２６２】
ＡＤＣ−Ｂ：ＭＡＢ−Ｗ’−Ｃ６−ＰＥＧ８−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ：
【化１６１】
2021536430.tif 000171
ＭＡＢは抗体であり、ｎは、約４または８である。
【０２６３】
ＡＤＣ−Ｃ：ＭＡＢ−Ｗ’−Ｃ６−ＰＥＧ８’−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ：
【化１６２】
2021536430.tif 000172
ＭＡＢは抗体であり、ｎは、約４または８である。
【０２６４】
実施例１３：異なる構造を有するリンカーを含むＡＤＣ（ＤＡＲ：約８）の安定性試験
【０２６５】
本実施例では、スクシンイミドリンカーを含有するＡＤＣ（ＭＡＢ−Ｓｕ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ、Ｓｕ−Ｅ８；その調製方法についてはInt J Mol Sci., 2017, 18(9): 1860を参照）およびマレイン酸メチルリンカーを含むＡＤＣ（ＭＡＢ−Ｗ’−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ、Ｗ’−Ｅ８；実施例１２で調製）を、過剰の遊離スルフヒドリル基含有Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）の存在下で、それらの毒素オフターゲット作用を決定する評価を行った。その試験では、２つのＡＤＣについてＤＡＲの経時的変化がモニタリングの指標（インジケータ）であった。試験するＡＤＣをＰＢＳ緩衝液（０．４１ｍｇ／ｍＬのＮＡＣを含有、ｐＨ＝７．４）中への置換により移行し、３７℃インキュベーター中でインキュベートし、そして２００μＬのサンプルを、既定の時点（０、１、２、４、８、１２、２４、４８、７２時間、および７日目）に個別に収集し、サンプリング後に−２０℃で凍結した。サンプリング終了後、ＨＰＬＣ−ＨＩＣを用いて、ＡＤＣについてのＤＡＲの経時変化を検出した（図６）。ＤＡＲの初期値は約８であった。
【０２６６】
図６中に示される実験データは、マレイン酸メチルリンカー（Ｗ’）を含有するＡＤＣが、スクシンイミドリンカー（Ｓｕ）を含有するＡＤＣよりもｉｎ ｖｉｔｒｏ安定性の面で有意に優れていることを示し、かつ捕捉剤の存在下で、２１日以内に毒素オフターゲット作用を全く示さなかった。対照的に、スクシンイミドリンカー（Ｓｕ）を含有するＡＤＣは、同条件下で約３５％の毒素オフターゲット率を示した。
【０２６７】
本実施例で使用する化合物ＭＡＢ−Ｗ’−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥおよびＭＡＢ−Ｓｕ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ（ＤＡＲ：約８）の構造式は次の通りである：
【化１６３】
2021536430.tif 000173
【０２６８】
実施例１４：小分子と種々の構造を有するリンカーとのコンジュゲートの安定性試験
【０２６９】
本実施例では、マレイン酸メチルリンカーを含有する小分子コンジュゲート（実施例９で調製したコンジュゲート−１、コンジュゲート−２、およびコンジュゲート−３）およびスクシンイミドリンカーを含有する小分子コンジュゲート（実施例９で調製したコンジュゲート−１’、コンジュゲート−２’およびコンジュゲート−３’）を評価して、過剰の遊離スルフヒドリル（Ｃｙｓ）の存在下でのそれらの安定性の状態を調べた。この試験では、溶液中の２つの異なるリンカーを含有する小分子コンジュゲートの残存量の経時変化が、モニタリングの指標（インジケータ）であった。被験物質を各々ＤＭＳＯに溶かし、１０倍容のシステインを含むＰＢＳ緩衝液（Ｃｙｓの濃度は０．４１ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ＝７．４であった）を加え、そして３７℃のインキュベータ中でインキュベートした。ｔ＝０の時点で、別の２００μＬの各サンプルを対照として−８０℃で保存した。各溶液を７日間インキュベートした後、サンプルを別々に採取し、対照として−８０℃で保存した。各溶液を７日間インキュベートし、サンプルを別々に採取し、ＲＰ−ＨＰＬＣを用いて基質の残存量の経時変化を検出した。ここでｔ＝０の時点での基質のピーク面積を１００％として定めた。実験結果を下表に示す。
【表９】
2021536430.tif 000174
【０２７０】
安定性の上記実験データは、捕捉剤Ｃｙｓの存在下で、開環型マレイン酸モノメチルエステル（Ｗ’）を含む小分子コンジュゲート（コンジュゲート−１、コンジュゲート−２  およびコンジュゲート−３）は、スクシンイミドリンカー（Ｓｕ）を含む小分子コンジュゲート（コンジュゲート−１’、コンジュゲート−２’およびコンジュゲート−３’）と比較して、ｉｎ ｖｉｔｒｏ安定性が有意に優れていることを示した。３７℃とｐＨ＝７．４の穏和な条件下で、７日間のインキュベーション後、マレイミドリンカーを含有する小分子は全く有意なオフターゲットを示さなかった（＜１０％）。それに対比して、スクシンイミドリンカーを含む小分子コンジュゲートは、同条件下で約５０％のオフターゲットを示した。
【０２７１】
実施例15：異なる構造を有するリンカーと抗体とのカップリング実験
【０２７２】
１５．１ マレイン酸構造（Ｍａａ）を含むリンカーと抗体とのカップリング
【化１６４】
2021536430.tif 000175
本願では、Ｍａａリンカーを有する安定型ＡＤＣの一段階法による調製を実現するために、マレイミドの開環によって得られるマレイン酸アミド構造（Ｍａａ）のリンカーを使って、抗体カップリングを実施することを試みた。まず初めに、マレイン酸アミド構造（Ｍａａ）を有するリンカーを合成し、そして毒素ＭＭＡＥとカップリングさせて２つの対応するロード（負荷物）：Ｍａａ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥおよびＭａａ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ  （実施例１０に記載の方法に従って調製）を得た。マレイン酸アミド構造（Ｍａａ）を有する上記２つのコンジュゲートロードをそれぞれ抗体とカップリングさせることで、プロセス条件の最適化を通して安定なカルボン酸型リンカーを有する目標の（ターゲット）ＡＤＣが得られると期待された。しかしながら、リン酸緩衝液（ＰＢＳ）、ヒスチジン緩衝液（Ｌ−Ｈｉｓ）、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン緩衝液（ＴＲＩＳ）および他の系では、ｐＨ、温度、反応時間、材料の比率などの点で条件を最適化した後でも、ごく少量のＭａａ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥまたはＭａａ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥしか実際に抗体にカップリングしなかった。カップリング結果をＴａｂｌｅ １（表１０）に示す。得られたＡＤＣでは、担持された毒素ＭＭＡＥの量が非常に少量であったため、生成物は必要条件を満たさなかった。理想的なＤＡＲ（薬物−抗体比、ＤＡＥ）は、約４であった。
【化１６５】
2021536430.tif 000176
【０２７３】
【表１０】
2021536430.tif 000177
【０２７４】
上記実験は、マレイン酸アミド構造（Maa）を有するリンカーを含有するADC、すなわちスクシンイミド開環構造を有するリンカーを含有するADCが、調製により直接的には得ることができなかったことを示した。
【０２７５】
１５．２ フマル酸メチル（Ｍｆ）構造を含むリンカーと抗体とのカップリング
逆方向合成分析を通して、新規な安定型リンカー構造を含む、合成が容易でかつ構造的に安定なＡＤＣを得るために、フマル酸メチルリンカー（Ｍｆ）およびマレイン酸メチルリンカー（Ｍｍ）を有するコンジュゲートを更に設計した。理論上は、フマル酸メチルリンカー（Ｍｆ）とマレイン酸メチルリンカー（Ｍｍ）の両方とも、スルフヒドリルとのマイケル付加反応を受け、開環型リンカー構造を有するメチルエステル型生成物を得ることが可能である。
【化１６６】
2021536430.tif 000178
【０２７６】
本実施例では、フマル酸メチル構造（Ｍｆ）を含有する３つのリンカー−細胞毒素コンジュゲート：Ｍｆ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ、Ｍｆ−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥおよびＭｆ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥをまず調製し（実施例１１に記載の方法に従って調製）、それらをそれぞれ抗体にカップリングさせ、カップリング結果をＴａｂｌｅ ２（表１１）に示した。１４．１と同様に、様々なカップリング条件の最適化後でも、少量のリンカー−細胞毒素コンジュゲートのみが抗体を修飾することができ、フマル酸メチルリンカーは開環型ＡＤＣのカップリングを達成できなかったことを確証した。カップリング方法は次の通りであった：
【化１６７】
2021536430.tif 000179
【０２７７】
【表１１】
2021536430.tif 000180
【０２７８】
１５．３ マレイン酸メチル（Ｍｍ）構造を含有するリンカーと抗体とのカップリング
本発明の実施例７で調製したマレイン酸メチル構造（Ｍｍ）を含有するリンカー−細胞毒素コンジュゲート：Ｍｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ、Ｍｍ−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ、Ｍｍ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ、Ｍｍ−Ｃ６−ＰＥＧ４−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ、Ｍｍ−Ｃ６−ＰＥＧ８−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ、Ｍｍ−Ｃ６−ＰＥＧ８’−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥを、それぞれ抗体と結合させた。カップリングの結果は、前記１５．１と１５．２のカップリング結果とは完全に違っていた。マレイン酸メチル構造（Ｍｍ）を含有するリンカーは、理想的な抗体カップリング能力を有し、穏和な条件（ｐＨ＝５〜１０、０℃〜４０℃）下で、様々な緩衝液系（ＰＢＳ、Ｌ−Ｈｉｓ、ＴＲＩＳ）中で、迅速かつ効率的なカップリングを果たすことができた。カップリング結果はＴａｂｌｅ ３（表１２）に示され、カップリング方法は次の通りであった：
【化１６８】
2021536430.tif 000181
【０２７９】
【表１２】
2021536430.tif 000182
【０２８０】
上記実験結果は、本明細書に提供されるマレイン酸メチルリンカー構造（Ｍｍ）が、予想外の結果をもたらすことを示した。マレイン酸メチルリンカー構造（Ｍｍ）は、穏和な生物学的条件下で抗体中のスルフヒドリル基と迅速にカップリングすることができ、そして開環型メチルエステルリンカー構造（Ｗ’）を有する活性剤コンジュゲートを一段階法により調製することができ、その場合のカップリング工程は迅速かつ効率的であり、マレイン酸メチルリンカー構造（Ｍｍ）を有するリンカーの調製方法は単純で、かつ大規模で容易に実施することができる。
【０２８１】
実施例１６：開環型および閉環型リンカー（ＤＡＲ：約４）を有するＡＤＣのｉｎ ｖｉｔｒｏ（試験管内）細胞毒性試験
【０２８２】
試験化合物は: ＭＡＢ−Ｗ’−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ（Ｗ’−Ｃ６−ＶＣ）とＭＡＢ−Ｓｕ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ（Ｓｕ−Ｃ６−ＶＣ）、ＭＡＢ−Ｗ’−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ（Ｗ’−Ｃ６−ＶＡ）とＭＡＢ−Ｓｕ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ（Ｓｕ−Ｃ６−ＶＡ）、ＭＡＢ−Ｗ’−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ（Ｗ’−Ｃ３−ＶＡ）とＭＡＢ−Ｓｕ−Ｃ３−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ（Ｓｕ−Ｃ３−ＶＡ）の３つのペアと、ＰＥＧ構造リンカーを含有する３つのＡＤＣ（ＡＤＣ−Ａ、ＡＤＣ−Ｂ、ＡＤＣ−Ｃ）とから構成された。その構造は次の通りである：
【化１６９】
2021536430.tif 000183
【０２８３】
対照：閉環型構造を有するＡＤＣ（それらの調製方法はＩｎｔ  J Mol Sci., 2017, 18(9): 1860を参照されたい）：
【化１７０】
2021536430.tif 000184
【０２８４】
陽性対照の薬物は、抗ＨＥＲ２ヒト化モノクローナル抗体ｍｉｌ４０（ＭＡＢ）（Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｈｉｓｕｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．， Ｌｔｄ．より購入）および細胞毒素ＭＭＡＥ（Ｃｏｎｃｏｒｔｉｓ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓより購入）であった。選択した細胞系は、抗原ＨＥＲ２陽性乳癌細胞系ＢＴ−４７４およびＨＣＣ１９５４、抗原ＨＥＲ２陽性卵巣癌細胞系ＳＫ−ＯＶ−３、抗原ＨＥＲ２陽性胃癌細胞系ＮＣＩ−Ｎ８７、抗原ＨＥＲ２弱陽性乳癌細胞系ＭＣＦ−７、並びに抗原ＨＥＲ２陰性乳癌細胞系ＭＤＡ−ＭＢ−４６８（ＡＴＣＣから購入）であった。
【０２８５】
試験の際に使用した試薬、機器および消耗品は下表に記載される通りであった：
【表１３】
2021536430.tif 000185
【０２８６】
試験手順は次の通りであった：
１）細胞の解凍
ａ）バイアルを３７℃の湯浴中で穏やかに振盪して解凍させた；ｂ）全ての内容物が融解したら、バイアルを湯浴から取り出し、７０％エタノール中に浸漬するかまたは７０％エタノールを噴霧することにより殺菌した；ｃ）バイアルの内容物を、９ｍＬの完全培地（細胞系ＢＴ−４７４とＭＣＦ−７にはＤＭＥＭ培地を使用し；細胞系ＮＣＩ−Ｎ８７、ＨＣＣ１９５４およびＭＤＡ−ＭＢ−４６８にはＲＰＭＩ１６４０培地を使用し；  そして細胞系ＳＫ−ＯＶ−３にはＭｃｃｏｙ’ｓ ５Ａ培地を使用した；下記に記載の培地は上記のものと同じであった）、約２００×ｇで５分間遠心分離した；ｄ）細胞ペレットを培地中に再懸濁し、そして７５ｃｍ２の培養フラスコ中に入れた；ｅ）生じた培養物を３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター中でインキュベートした。
【０２８７】
２）細胞の繁殖
ａ）細胞を、１０％ＦＢＳ（熱不活性化）および１％ペニシリン／ストレプトマイシン溶液を含む培地中で、１：４の比で週３回継代した；ｂ）継代した細胞について、接着細胞を０．０５％トリプシン／ＥＤＴＡ溶液（３ｍＬ）で最初に洗浄し、次いでトリプシン／ＥＤＴＡ（３ｍＬ）を加え、ボルテックスして細胞を均一にコーティングした。細胞が脱着するまで（顕微鏡で観察して細胞が脱着したことを確かめた）、生じた培養物を３７℃でインキュベートした。等量の細胞培養培地を添加してトリプシンを不活性化し、脱着した細胞を集め、２００×ｇで５分間遠心分離し、次いで新鮮な培地中に再懸濁した。
【０２８８】
３）化合物の調製
ａ）化合物原液を１：３の比で系列希釈し、異なる濃度を有する１０種の希釈溶液を作製した（化合物の原液は、約２ｍｇ／ｍＬの濃度を有するＬ−Ｈｉｓ緩衝塩溶液であり、その原液をＰＢＳで希釈した。試験時の初期最大濃度は約５００μｇ／ｍＬであった）；ｂ）様々な濃度を有する化合物希釈溶液４μＬを３８４ウェルプレート中に分配した。
【０２８９】
４）細胞の接種
ａ）細胞を収集し、カウントして細胞の数を決定した；調整した密度を有する３６μＬの細胞懸濁液を指定の３８４ウェル細胞培養プレートに添加し；そして最終細胞密度は約１，０００細胞／ウェルであった；ｃ）プレートを蓋で覆い、インキュベータ中に置いて３７℃、５％ＣＯ２および０．１％Ｏ２で９６時間反応を行った。
【０２９０】
５）プレートの読み取り
ａ）９６時間後、プレートをインキュベーターから取り出し、室温に１０分間平衡化させた；ｂ）実験前にＣｅｌｌＴｉｔｅｒ Ｇｌｏ試薬を３７℃でインキュベートした；ｃ）４０μＬのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ試薬を試験すべき各ウェルに添加した（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ試薬：培地の比は１：１であった）；ｄ）次いでプレートを室温に３０分間置き、細胞の計数のためＥｎＳｐｉｒｅリーダー上で読み取りを行った。
【０２９１】
６）データの解析
次の式を使って残余活性を算出した：
残余活性（％）＝１００％×（Ｓ−Ｍ）／（Ｖ−Ｍ）
Ｓ：試験サンプルの読み出し
Ｖ：ビヒクルサンプルの読み出し
Ｍ：化合物処理を行ったウェルの読み出し
Ｘｌｆｉｔ（ｖ５．３．１．３）、等式２０１を用いて曲線をフィッティングし、ＩＣ５０値を計算した。
【０２９２】
７）実験結果
実験結果をＴａｂｌｅ ４（表１４）に示す。結果は、開環型マレイン酸メチルリンカーを含むＡＤＣと、閉環型スクシンイミドリンカーを含むＡＤＣは、インビトロ細胞傷害性において実質的に同等であることを示す。
【表１４】
2021536430.tif 000186
【０２９３】
ＰＥＧ構造のリンカーを含むＡＤＣのｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性試験の結果がＴａｂｌｅ ５（表１５）に示される。この結果は、３種の試験したＡＤＣ（ＡＤＣ−Ａ、ＡＤＣ−Ｂ、ＡＤＣ−Ｃ）が、ＨＥＲ２陽性ＢＴ−４７４に対する非常に有意なｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性（０．０６４〜０．０７５ｎｍｏｌ／Ｌ）を有することを示す。抗原ＨＥＲ２陰性ＭＣＦ−７と比較して、ＰＥＧ構造リンカーを含むＡＤＣのＨＥＲ２陽性ＢＴ−４７４に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性は、４７２〜１８６５倍も有意に増加することができ、このＡＤＣのタイプが高度に抗原選択性を有することを示唆する。
【０２９４】
【表１５】
2021536430.tif 000187
【０２９５】
実施例１７：開環型および閉環型リンカーを含むＡＤＣ（ＤＡＲ：約４）のｉｎ ｖｉｖｏ（生体内）薬力学
【０２９６】
本実験では、ＨＥＲ２を発現するヒト乳癌細胞系ＢＴ−４７４の異種移植片モデル（ＡＴＣＣから購入した）を用いて、試験化合物の薬力学を評価した。この場合、試験化合物はＭＡＢ−Ｗ’−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ（Ｗ’−Ｃ６−ＶＡ、ＡＤＣ−ＩＩ）であり、３段階の用量群を設定し、その用量はそれぞれ１ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇであった。同時に、陽性対照群と溶媒対照群を設定した。陽性対照群１には、抗ＨＥＲ２ヒト化モノクローナル抗体ｍｉｌ４０（ＭＡＢ）とＭＭＡＥとの同量の混合物を投与し、陽性対照群２には、開環型スクシンイミドリンカー（Ｓｕ）を含む同量のＡＤＣ（ＭＡＢ−Ｓｕ−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ（Ｓｕ−Ｃ６−ＶＡ））を投与した。溶媒対照群には、同量の生理食塩水を投与した。被験薬を生理食塩水中に溶かし、尾静脈注射により投与した。ＭＭＡＥは水に不溶であるため、抗ＨＥＲ２ヒト化モノクローナル抗体ｍｉｌ４０（ＭＡＢ）とＭＭＡＥとの混合溶液を調製する際には、ＭＭＡＥを最初にＤＭＳＯに溶かして１ｍｇ／ｍＬ溶液を調製し、次いで該溶液を、ｍｉｌ４０抗体を含む生理食塩水中に溶解し、そして十分に混合した。
【０２９７】
１０％不活性化ウシ胎児血清、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシンおよび２ｍＭのグルタミンを含有するＤＭＥＭ培地中で、ＢＴ−４７４ヒト乳癌細胞（ＡＴＣＣから購入）を３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター中で培養した。細胞の初期濃度は培養の際に１×１０６細胞／ｍＬであり、３〜４日毎に継代のため細胞を分割してボトルに入れた。指数増殖期の癌細胞をＳＣＩＤマウス（雌、６〜８週齢、体重１８〜２２ｇ、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ａｎｋａｉ Ｙｉｂｏ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．， Ｌｔｄ．から購入）の右側方胸部の皮膚の下に接種し、そして腫瘍が１５０ｍｍ３の体積に増殖した時、モデル化が確立した。次いで投与を開始し、各用量群の６匹のマウスに週１回設定量を投与した。投与量は５ｍＬ／ｋｇであり、投与は合計４回行った。全てのマウスの皮下にエストロゲン（獣医用安息香酸エストラジオール注射剤、４ｍｇ／２ｍＬ、Ｓｉｃｈｕａｎ Ｌａｎｓｈｅｎｇ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．， Ｌｔｄ．から購入）を、癌細胞の接種の前日から実験の終了まで週２回、各回４０μｇ／２０μＬを投与した。バーニャ式キャリパー（ｖｅｒｎｉｅｒ ｃａｌｉｐｅｒ）を使って腫瘍の長径と短径を測ることにより、腫瘍体積を週２回計測した。体積の計算式は次の通りであった：腫瘍体積＝０．５×長径×（短径）２。腫瘍体積を測定しながら、マウスの体重を測定した。マウスの体重と投与の時間との関係を記録した。同時に、マウスの生存率と健康状態、例えば投与期間の間の動物の活動性と摂餌量を観察した。
【０２９８】
投与後の腫瘍体積の経時変化曲線を図７に示す。その結果は、溶媒対照群と比較して、陽性対照群１の全ての動物の腫瘍が、縮小したが部分的にのみ抑制され、全動物の腫瘍がまだ残存していたことを示した；一方で試験化合物処置群（２．５ｍｇ／ｋｇ）では、全試験動物の腫瘍が消失し、そして長期間出現せず、薬物の中断後１か月間は、どの動物も腫瘍の再発を認めなかった。
【０２９９】
同投与量における、異なる構造を有するリンカーを含有するＡＤＣの抗腫瘍効果が図８に示される。その結果は、２．５ｍｇ／ｋｇの投与量では、陽性対照群２のマウスの腫瘍が完全には消失しなかったのに対し、試験化合物処置群のマウスの腫瘍は完全に消失したことを示した。このことは、閉環型スクシンイミドリンカーを含有するＡＤＣと比較して、開環型マレイン酸メチルリンカーを含有するＡＤＣがより優れた効果を奏することを示す（ｐ＝０．００６１）。
【０３００】
用量依存性の試験において、１．０ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇおよび５．０ｍｇ／ｋｇの３つの用量群を設定した。異なる投与量において、ＡＤＣの抗腫瘍効果が図９に示される。その結果は、本願発明の開環型マレイン酸メチルリンカー（Ｗ’）を含有するＡＤＣの抗腫瘍活性が有意な用量依存を有することを示し、ここで腫瘍は中用量群と高用量群において消失していた。
【０３０１】
本願の開環型マレイン酸メチルリンカー（Ｗ’）を含有するＡＤＣによる治療を受けた後の、動物の体重変化の曲線が図１０に示される。その結果は、試験化合物治療群と溶媒対照群との間には基本的に全く有意な差がなく、試験動物の全てが体重の着実な増加を示した。このことは、本明細書に提供されるＡＤＣがほとんど副作用を持たないことを示す。
【０３０２】
実施例１８：異種移植片モデルにおける治療用量でのＭＡＢ−Ｗ’−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥの組織学的分析
【０３０３】
マレイン酸メチルリンカー（Ｗ’）を含有するＡＤＣ（ＭＡＢ−Ｗ’−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ）を使用する際の安全性を更に確証するため、ＢＴ−４７４異種移植片モデルにおける投与が完了した時（すなわち、初回投与後２８日目）および観察期間が終了した時（すなわち、初回投与後５８日目）に、試験動物を血液サンプリングし、全血分析にかけた。主要な血液学的試験の指標（インジケーター）は、白血球（ＷＢＣ）数、赤血球（ＲＢＣ）数、血小板（ＰＬＴ）数、好中球（Ｎｅｕｔｓ）数およびリンパ球（Ｌｙｍｐｈ）数などであった。１００μＬの白血球を各試験動物から収集した。容量の限界のため、それらの検体を３回希釈して最終血球数を求めた。変更した希釈率の定量分析に基づいて、結果は平均±ＳＤとして表した。
【０３０４】
本発明の開環型マレイン酸メチルリンカー（Ｗ’）を含むＡＤＣでの処置を受けた後、３段階の投与群（１ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ）の動物を血液学的分析にかけ、その結果を図１１に示す。ここで数字「１」と「２」は、それぞれ投与後２８日目と５８日目の、試験動物の全血分析の結果を表す。血液検体の２バッチの血液学的パラメータのＡＮＯＶＡ分析結果は、溶媒対照群と試験化合物処置群（１ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇおよび５ｍｇ／ｋｇ）との間に全く有意な差が認められなかったことを示す。上記結論は、本願明細書に提供される開環型マレイン酸メチルを含有するＡＤＣが、低い血液毒性とオフターゲット骨髄毒性を有することを示し、この事実もまた、それらのＡＤＣが十分に忍容される主な理由であり得る。
【０３０５】
実施例１９：異種移植片モデルにおける治療用量でのＭＡＢ−Ｗ’−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥの組織病理学分析
【０３０６】
ＢＴ−４７４異種移植片モデルでの試験が完了した時、本発明者らは、開環型メチルエステルリンカー（Ｗ’）を含有するＡＤＣ（ＭＡＢ−Ｗ’−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ）により治療した動物に関して組織病理学的研究を行った。被験臓器は主に、骨髄、心臓、肝臓および肺を含んだ。心臓、肝臓および肺の組織標本は、１０％ホルマリン中で２４時間固定し、そして７０％エタノールに移し、７０％エタノール、８５％エタノール、９０％エタノール、９５％エタノール、１００％エタノールを順次用いて脱水し、次いでキシレンで３回処理した。次いでパラフィン包埋し、切片にし、Ｈ＆Ｅ染色にかけた。骨髄は塗抹標本にした。組織片と骨髄塗抹標本は、拡大鏡を用いて観察し、顕微鏡下で写真を撮影した。結果は図１２に示される。各投与群は６匹の動物を含み、写真の原寸は４２５×３２０μｍであった。
【０３０７】
結果は、溶媒対照群と比較して、試験化合物治療群は、全く有意な差を示さなかった。この試験は、本明細書に提供されるADCを使った場合の安全性を更に確証した。
【０３０８】
実施例２０：ＭＡＢ−Ｗ’−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ（ＤＡＲ：約４）の高用量忍容性試験
【０３０９】
本実施例では、正常ＣＤ−１マウスモデルにおいて、開環型メチルエステルリンカー（Ｗ’）を含有するＡＤＣ（ＭＡＢ−Ｗ’−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ、ＤＡＲは約４であった）の最大許容量を評価した。
【０３１０】
実験に使用するＣＤ−１マウス［Ｃｒｌ：ＣＤ−１（ＩＣＲ）］は、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．， Ｌｔｄから購入し、年齢が約７〜９週齢で、雄は体重約２２〜４０ｇで、雌は体重２０〜３５ｇであった。各試験薬投与群は６匹の動物を含んだ（その半数が雄で半数が雌）；それらの動物は、ポリカーボネート固体床を有し、ベッドとしてトウモロコシの穂軸を有するマウス飼育箱中で別々に飼育した。それらの動物は自由にネズミ用餌を摂餌でき、自由にボトル入りの飲料水を摂水できた。飼育環境は２０℃〜２６℃の温度および４０％〜７０％の湿度に制御され、そして動物室の照明は１２時間ごとに明／暗を交互に維持した。
【０３１１】
被験薬は生理食塩水に溶かし、次いで尾静脈から注射した。５つの用量群を投与のために設定した：１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、８０ｍｇ／ｋｇおよび１２０ｍｇ／ｋｇ。投与の容量は５ｍＬ／ｋｇであった。投与後の動物の観察期間は１５日間であり、実験の終了時の動物または試験中に死亡した動物は、７０％ＣＯ２／３０％Ｏ２の吸入により安楽死させた。投与後の観察期間の間、ケージの横からの観察（動物の死亡、一般的な健康状態、および動物の薬物毒性の症状を含む）は１日２回行った；投与の１日前とその後連続１４日間には、試験動物の体重測定を行い、１日１回は入念な臨床観察を行った（動物の皮膚、外皮、眼、および粘膜の変化、並びに呼吸系、循環器系、運動神経系および中枢神経系、身体運動および行動パターンなどを含む）。
【０３１２】
被験薬の上記忍容性試験において、被検薬ＡＤＣ−ＩＩ（ＭＡＢ−Ｗ’−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ）を投与された１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇおよび８０ｍｇ／ｋｇの投与群では、有意な検知できる毒性と動物の死は全く起こらなかった。１２０ｍｇ／ｋｇの最大用量では、マウスの体重が投与後１日目から５日目まで連続して減少し、試験動物に死亡が認められた（６匹の試験動物のうち２匹が死亡した）；加えて、１２０ｍｇ／ｋｇの試験群の生存動物は全て、投与後９日目に首、腹部および肢に様々な程度の脱毛が認められ、ある試験動物には脱毛部位にカサブタおよび皮膚に粒状の突起が認められ、それらの症状は試験期間の終了（投与後１５日目）まで有意には改善しなかった。１２０ｍｇ／ｋｇの用量は、ＡＤＣ−ＩＩ（ＭＡＢ−Ｗ’−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ）の最大許容量（ＭＴＤ）に達していることが分かった。
【０３１３】
一例としてＡＤＣ−ＩＩを取ると、ＨＥＲ２発現型ヒト乳癌細胞ＢＴ−４７４のマウス異種移植片モデル試験では、投与量が２．５ｍｇ／ｋｇの時、試験動物の全ての腫瘍が消失し、休薬後１か月以内に再発しなかった（実施例１６）。忍容性および安全性評価試験では、８０ｍｇ／ｋｇの用量が被験薬の用量依存的な毒性を示さず、用量が１２０ｍｇ／ｋｇの時には、ＡＤＣ試験化合物ＭＡＢ−Ｗ’−Ｃ６−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥが比較的良好な忍容性と高い治療指数を有することを示した。
【０３１４】
最後に、上記実施例は本発明の技術的解決策を例証するためにのみ用いられ、それを限定するためではないことに留意すべきである；本発明を好ましい例を参照にしながら詳細に記載してきたが、当業者は、本発明の精神および技術的範囲から逸脱することなく、本発明の特定の実施を改変できること、または幾つかの技術的特徴を均等物により置換できることを理解すべきであり、そしてそれらの全てが、当技術が本発明により保護しようと求められる技術的解決策の範囲に包含されるべきである。
【図１】
2021536430.tif 000238
【図２】
2021536430.tif 000239
【図３】
2021536430.tif 000240
【図４】
2021536430.tif 000241
【図５】
2021536430.tif 000242
【図６】
2021536430.tif 000243
【図７】
2021536430.tif 000244
【図８】
2021536430.tif 000245
【図９】
2021536430.tif 000246
【図１０】
2021536430.tif 000247
【図１１】
2021536430.tif 000248
【図１２】
2021536430.tif 000249
【手続補正書】
【提出日】令和3年5月25日(2021.5.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉまたは式Ｉ’：
【化１】
2021536430.tif 000250
（式中、
Ｗは、
【化２】
2021536430.tif 000251
であり、その２つのカルボニル基はＣ＝Ｃ二重結合の同じ側に位置し、それはシス構造であり；
Ｒ１は、Ｃ１−６直鎖状または分枝状アルキルであり、そしてＲ１は、任意に、ハロゲン、Ｃ１−４アルコキシから成る群より選択された１つ以上の置換基で単置換または多置換され；
Ｌ１は、
【化３】
2021536430.tif 000252
から成る群より選択され；
Ｌ２は、
【化４】
2021536430.tif 000253
であり；
Ｌ３は、
【化５】
2021536430.tif 000254
であり；
Ｒ２は、
【化６】
2021536430.tif 000255
から成る群より選択され；
Ｒ’２はハロゲンであり；
Ｒ３は、水素、ハロゲン、メチル、エチル、ニトロ、メトキシおよびエトキシから成る群より選択され；
ｑは、０または１であり；
ｍ、ｒ、ｔ、ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｊおよびｋは、各々独立に、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０および１１から成る群より選択され；
各ｐは、独立に０、１、２、３または４であり；
Ｙは、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ｇｌｙ、Ｖａｌ−Ｔｈｒ、Ｖａｌ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ｉｌｅ、Ｖａｌ−ＡｓｎおよびＰｈｅ−Ｌｙｓから成る群より選択されたジペプチドを構成するアミノ酸残基であり、ここでＮ末端は、カルボニルに連結され、そしてＣ末端は、Ｎ原子に結合され；
Ｚは−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−または−Ｃ（ＣＨ３）２−である）
により表される化合物、またはその塩もしくは溶媒和物。
【請求項２】
Ｌ１が、
【化７】
2021536430.tif 000256
から成る群より選択され；
ｍ、ｔおよびｒが、各々独立に０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０および１１から成る群より選択される、
請求項１に記載の式Ｉまたは式Ｉ’により表される化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項３】
式ＩＩまたは式ＩＩ’：
【化８】
2021536430.tif 000257
（式中、
Ｗが、
【化９】
2021536430.tif 000258
であり、その２つのカルボニル基はＣ＝Ｃ二重結合の同じ側に位置し、それはシス構造であり；
Ｂが、薬物、細胞毒素、検出試薬、診断試薬およびターゲティングキャリアから成る群より選択された活性化合物であり；好ましくは、Ｂが、細胞毒素、抗腫瘍薬、抗ウイルス薬または抗感染症薬であり；更に好ましくは、Ｂが、細胞毒素、例えばチューブリン阻害剤、ＤＮＡアルキル化剤、ＤＮＡインターカレーター、酵素阻害剤、代謝拮抗薬、ペプチドまたはヌクレオチドであり；
Ｂが、活性化合物分子中のＮ原子またはＯ原子を介して部位＊に連結され；またはＢが、活性化合物分子中のＮ原子またはＯ原子を介してＬ３に連結され；
Ｒ１が、Ｃ１−６直鎖状または分枝状アルキルであり、そしてＲ１は、任意に、ハロゲンおよびＣ１−４アルコキシから成る群より選択された１つ以上の置換基により単置換または多置換され；
Ｌ１が、
【化１０】
2021536430.tif 000259
から成る群より選択され；
Ｌ２が、
【化１１】
2021536430.tif 000260
であり；
Ｌ３が、
【化１２】
2021536430.tif 000261
であり；
Ｒ３が、水素、ハロゲン、メチル、エチル、ニトロ、メトキシおよびエトキシから成る群より選択され；
ｑが、０または１であり；
ｍ、ｒ、ｔ、ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｊおよびｋは、各々独立に０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０および１１から成る群より選択され；
各ｐは、独立に０、１、２、３または４であり；
Ｙが、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ｇｌｙ、Ｖａｌ−Ｔｈｒ、Ｖａｌ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ｉｌｅ、Ｖａｌ−ＡｓｎおよびＰｈｅ−Ｌｙｓから成る群より選択されたジペプチドを構成するアミノ酸残基であり、ここでＮ末端はカルボニルに連結されそしてＣ末端はＮ原子に連結され；
Ｚが、−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−または−Ｃ（ＣＨ３）２−である）
により表される化合物、その塩または溶媒和物。 
【請求項４】
Ｌ１が、
【化１３】
2021536430.tif 000262
から成る群より選択され； 
ｍ、ｔおよびｒが、各々独立に０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０および１１から成る群より選択される、
請求項３に記載の式ＩＩまたは式ＩＩ’により表される化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項５】
式ＩＩＩまたは式ＩＩＩ’：
【化１４】
2021536430.tif 000263
（式中、
Ａは、タンパク質、抗体、ポリペプチド、酵素および小分子から成る群より選択されたターゲティング化合物であり；Ａは、ターゲティング化合物分子中のＳ原子を介して部位＃または＃＃に連結され；好ましくは、Ａは、標的化合物分子中のＳ原子を介して部位＃に連結され；
Ｂは、薬物、細胞毒素、検出試薬、診断薬およびターゲティングキャリアから成る群より選択された化合物であり；好ましくは、Ｂは、細胞毒素、抗腫瘍薬、抗ウイルス薬または抗感染症薬であり；更に好ましくは、Ｂは、細胞毒素、例えばチューブリン阻害剤、ＤＮＡアルキル化剤、ＤＮＡインターカレーター、酵素阻害剤、代謝拮抗薬、ペプチドまたはヌクレオチドであり；
Ｂは、活性化合物分子中のＮ原子またはＯ原子を介して部位＊に連結され；またはＢは、活性化合物分子中のＮ原子またはＯ原子を介してＬ３に連結され；
ｎは、０．５〜８．５の間の数であり、例えば０．８〜５の間の数、１〜４の間の数、２〜６の間の数、３〜７の間の数、４〜８の間の数、３．５〜８．５の間の数、３．５〜４．５の間の数、６．５〜８．５の間の数であり、好ましくは、ｎは、約４、５、６、７または８であり；
Ｒ１は、Ｃ１−６直鎖状または分枝状アルキルであり、そしてＲ１は、任意に、ハロゲンおよびＣ１−４アルコキシから成る群より選択された１つ以上の置換基により単置換または多置換され；
Ｌ１は、
【化１５】
2021536430.tif 000264
から成る群より選択され；
Ｌ２は、
【化１６】
2021536430.tif 000265
であり；
Ｌ３は、
【化１７】
2021536430.tif 000266
であり；
Ｒ３は、水素、ハロゲン、メチル、エチル、ニトロ、メトキシ、エトキシから成る群より選択され；
ｑは、０または１であり；
ｍ、ｒ、ｔ、ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｊおよびｋは、各々独立に０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０および１１から成る群より選択され；
各ｐは、独立に０、１、２、３または４であり；
Ｙは、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ｇｌｙ、Ｖａｌ−Ｔｈｒ、Ｖａｌ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ｉｌｅ、Ｖａｌ−ＡｓｎおよびＰｈｅ−Ｌｙｓから成る群より選択されたジペプチドを形成するアミノ酸残基であり、ここでＮ末端はカルボニルに連結され、そしてＣ末端はＮ原子に結合され；
Ｚは−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−または−Ｃ（ＣＨ３）２−である）
により表される化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項６】
Ｌ１が、
【化１８】
2021536430.tif 000267
から成る群より選択され；
ｍ、ｔおよびｒが、各々独立に０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０および１１から成る群より選択される、
請求項５に記載の式ＩＩＩまたは式ＩＩＩ’により表される化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項７】
Ｌ１が、
【化１９】
2021536430.tif 000268
から成る群より選択され；
Ｒ３が、水素、ハロゲン、メチル、エチル、ニトロ、メトキシおよびエトキシから成る群より選択され；好ましくは、Ｒ３が、水素、ハロゲン、メチルおよびエチルから成る群より選択され；
ｍが、０、１、２、３、４および５から成る群より選択され；好ましくは、ｍが、０、１、２、３、４から成る群より選択され；
各ｐが、独立に０、１、２、３または４であり；好ましくは、各ｐが、独立に０、１、２または３であり；より好ましくは、各ｐが、独立に０、１または２であり；より好ましくは、各ｐが、独立に０である、
請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項８】
Ｌ１が、−（ＣＨ２）ｅ−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｆ−（ＣＨ２）ｇ−または−（ＣＨ２）ｈ−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−ＣＨ［（ＣＨ２）ｉ−ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−（ＣＨ２）ｋ−ＣＨ３］−であり；
ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｊおよびｋが、各々独立に０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０および１１から成る群より選択され、
例えば、ｅが、１、２、３、４、５、６、７または８であり、
例えば、ｆが、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または１１であり、
例えば、ｇが、１、２、３、４、５または６であり、
例えば、ｈが、１、２、３、４、５、６、７または８であり、
例えば、ｉが、１、２、３、４、５、６、７または８であり、
例えば、ｊが、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または１１であり、
例えば、ｋが、０、１、２、３、４または５である、
請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項９】
Ｌ１が、
【化２０】
2021536430.tif 000269
から成る群より選択され；
Ｒ３が、水素、ハロゲン、メチル、エチル、ニトロ、メトキシおよびエトキシから成る群より選択され；好ましくは、Ｒ３が、水素、ハロゲン、メチルおよびエチルから成る群より選択され；
ｍが、０、１、２、３、４であり；
各ｐが、独立に０、１、２、３または４であり；好ましくは、各ｐが、独立に０、１、２または３であり；より好ましくは、各ｐが、独立に０、１または２であり；より好ましくは、各ｐが、独立に０である、
請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項１０】
Ｌ２が、
【化２１】
2021536430.tif 000270
（式中、
Ｙは、Ｖａｌ−ＣｉｔまたはＶａｌ−Ａｌａを構成するアミノ酸残基であり、ここでＮ末端がカルボニルに連結されそしてＣ末端がＮ原子に連結され；
Ｚが、−ＣＨ２−であり；
Ｒ３とｐの定義は、請求項１〜６のいずれか１項に記載の通りである）
である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項１１】
Ｒ２が、
【化２２】
2021536430.tif 000271
であり；
ｑが、０であるか；または
Ｒ２が、
【化２３】
2021536430.tif 000272
（式中、
Ｒ３とｐの定義は、請求項１〜４のいずれか１項に記載した通りである）；
ｑが、１である、
請求項１〜２および７〜１０のいずれか１項に記載の化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項１２】
前記化合物が、式ＩＶ：
【化２４】
2021536430.tif 000273
（式中、
Ｗは、
【化２５】
2021536430.tif 000274
であり、その２つのカルボニル基はＣ＝Ｃ二重結合の同じ側に存在し、それはシス構造であり；
Ｒ１は、Ｃ１−６直鎖状または分枝状アルキルであり、そしてＲ１は、任意に、ハロゲンおよびＣ１−４アルコキシから成る群より選択された１つ以上の置換基により単置換または多置換され；
Ｌ１は、
【化２６】
2021536430.tif 000275
から成る群より選択され；好ましくは、Ｌ１は、
【化２７】
2021536430.tif 000276
から成る群より選択され；
Ｒ’は、アミノ酸残基の可変基（Ｒ）中の置換基側鎖であり；Ｒ’は、−ＣＨ３、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２、−（ＣＨ２）４−ＮＨ２、−Ｈ、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＯＨ、−ＣＨ−（ＣＨ３）２、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ３または−ＣＨ２−ＣＯＮＨ２であり；Ｒ’は、好ましくは、−ＣＨ３または−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２であり；
Ｒ２は、
【化２８】
2021536430.tif 000277
から成る群より選択され；
Ｒ３は、水素、ハロゲン、メチル、エチル、ニトロ、メトキシおよびエトキシから成る群より選択され；Ｒ３は、好ましくは、水素、ハロゲン、メチルおよびエチルから成る群より選択され；
m、r、tは、各々独立に０、１、２、３および４から成る群より選択され；
ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｊおよびｋは、各々独立に０、１、２、３、４、５、６、７、８、９および１０から成る群より選択され；
各ｐは、独立に０、１、２、３または４から成る群より選択され；好ましくは、各ｐは、独立に０、１、２または３であり；より好ましくは、各ｐは、独立に０、１または２であり；より好ましくは、各ｐは、独立に０である）
により表される、請求項１〜２および７〜１１のいずれか一項に記載の化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項１３】
前記化合物が、式ＶまたはＶ'：
【化２９】
2021536430.tif 000278
（式中、
Ｗは、
【化３０】
2021536430.tif 000279
であり、その２つのカルボニル基はＣ＝Ｃ二重結合の同じ側に位置し、それはシス構造であり；
Ｂは、薬物、細胞毒素、検出試薬、診断試薬およびターゲティングキャリアから成る群より選択された活性化合物であり；好ましくは、Ｂは、細胞毒素、抗腫瘍薬、抗ウイルス薬または抗感染症薬であり；更に好ましくは、Ｂは、細胞毒素、例えばチューブリン阻害剤、ＤＮＡアルキル化剤、ＤＮＡインターカレーター、酵素阻害剤、代謝拮抗薬、ペプチドまたはヌクレオチドであり；
Ｂは、前記活性化合物中のＮ原子またはＯ原子を介して部位＊に連結され；
Ｒ１は、Ｃ１−４直鎖状または分枝状アルキルであり、そしてＲ１は、任意に、ハロゲンおよびＣ１−４  アルコキシから成る群より選択された１つ以上の置換基により単置換または多置換され；
Ｌ１は、
【化３１】
2021536430.tif 000280
から成る群より選択され；
好ましくは、Ｌ１は、
【化３２】
2021536430.tif 000281
から成る群より選択され；
Ｒ’は、アミノ酸残基の可変基（Ｒ）中の置換基側鎖であり；
Ｒ’は、−ＣＨ３、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２、−（ＣＨ２）４−ＮＨ２、−Ｈ、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＯＨ、−ＣＨ−（ＣＨ３）２、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ３または−ＣＨ２−ＣＯＮＨ２から選択され；Ｒ’は、好ましくは−ＣＨ３または−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２から選択され；
Ｒ３は、水素、ハロゲン、メチル、エチル、ニトロ、メトキシおよびエトキシから成る群より選択され；好ましくは、Ｒ３は、水素、ハロゲン、メチルおよびエチルから成る群より選択され；
ｍ、ｒおよびｔは、各々独立に０、１、２、３および４から成る群より選択され；
ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｊおよびｋは、各々独立に０、１、２、３、４、５、６、７、８、９および10から成る群より選択され；
各ｐは、独立に０、１、２、３または４であり；好ましくは、各ｐは、独立に０、１、２または３であり；より好ましくは、各ｐは、独立に０、１または２であり；より好ましくは、各ｐは、独立に０である）
により表される化合物である、請求項３〜４および７〜１０のいずれか一項に記載の化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項１４】
前記化合物が、式ＶＩまたは式ＶＩ’：
【化３３】
2021536430.tif 000282
（式中、
Ａは、タンパク質、抗体、ポリペプチド、酵素および小分子から成る群より選択されたターゲティング化合物であり；Ａは、ターゲティング化合物分子中のＳ原子を介して部位＃または＃＃に連結され；
Ｂは、薬物、細胞毒素、検出試薬、診断試薬およびターゲティングキャリアから成る群より選択された活性化合物であり；好ましくは、Ｂは、細胞毒素、抗腫瘍薬、抗ウイルス薬または抗感染症薬であり；更に好ましくは、Ｂは、細胞毒素、例えばチューブリン阻害剤、ＤＮＡアルキル化剤、ＤＮＡインターカレーター、酵素阻害剤、代謝拮抗薬、ペプチドまたはヌクレオチドであり；
Ｂは、前記活性化合物中のＮ原子またはＯ原子を介して部位＊または＊＊に連結され；
ｎは、０．５〜８．５の間の数、例えば０．８〜５の間の数、１〜４の間の数、２〜６の間の数、３〜７の間の数、４〜８の間の数、３．５〜８．５の間の数、３．５〜４．５の間の数、または６．５〜８．５の間の数であり、好ましくは、ｎは、約４、５、６、７または８であり；
Ｒ１は、Ｃ１−６直鎖状または分枝状アルキル基であり、そしてＲ１は、任意に、ハロゲンおよびＣ１−４アルコキシから成る群より選択された１つ以上の置換基により単置換または多置換され；
Ｌ１は、
【化３４】
2021536430.tif 000283
から成る群より選択され；
好ましくは、Ｌ１は、
【化３５】
2021536430.tif 000284
から成る群より選択され；
Ｒ’は、アミノ酸残基の可変基（Ｒ）中の置換基側鎖であり；好ましくは、Ｒ’は−ＣＨ３、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２、−（ＣＨ２）４−ＮＨ２、−Ｈ、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＯＨ、−ＣＨ−（ＣＨ３）２、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ３または−ＣＨ２−ＣＯＮＨ２であり、Ｒ’は、好ましくは、−ＣＨ３または−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２であり；
各Ｒ３は、独立に水素、ハロゲン、メチル、エチル、ニトロ、メトキシおよびエトキシから成る群より選択され；好ましくは、各Ｒ３は、独立に水素、ハロゲン、メチルおよびエチルから成る群より選択され；
ｍ、ｒおよびｔは、独立に０、１、２、３および４から成る群より選択され；
ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｊおよびｋは、各々独立に０、１、２、３、４、５、６、７、８、９および１０から成る群より選択され；
各ｐは、独立に０、１、２、３または４であり；好ましくは、各ｐは、独立に０、１、２または３であり；より好ましくは、各ｐは、独立に０、１または２であり；より好ましくは、各ｐは、独立に０である）
により表される化合物である、請求項５〜１０のいずれか１項に記載の化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項１５】
Ｒ１が、Ｃ１−４アルキル、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチルおよびｔｅｒｔ−ブチルであり、好ましくはメチルである、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項１６】
Ｂが、アウリスタチン、メチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、メイタンシンおよびその誘導体（例えばメイタンシノイド、ＤＭ１、ＤＭ３、ＤＭ４）、パクリタキセル、カリチアマイシン、デュオカルミシン、ドキソルビシン、カンプトテシン、ＰＢＤ（ピロロベンゾジアゼピン）細胞毒素およびその誘導体から成る群より選択される、請求項３〜６、１３〜１５のいずれか１項に記載の化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項１７】
Ｂが、モノメチルアウリスタチン（ＭＭＡＥ）である、請求項３〜６、１３〜１６のいずれか１項に記載の化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項１８】
Ａが、モノクローナル抗体（ＭＡＢ）であるか、または
Ａが、抗体フラグメントまたはその代替物もしくは変異体、タンパク質リガンドまたはタンパク質足場を含み；
好ましくは、Ａが、Ａ中のＳ原子を介して部位#に連結され；
好ましくは、Ａが、Ａ中のシステイン残基のＳ原子を介して部位#に連結され；
好ましくは、Ａが、カップリング部位としてスルフヒドリルを有するモノクローナル抗体であるかまたは部位特異的変異もしくは修飾を有し、かつカップリング部位としてスルフヒドリルを有するモノクローナル抗体であり；
好ましくは、Ａが、抗ＨＥＲ２ヒト化モノクローナル抗体ｍｉｌ４０、トラスツズマブ（ハーセプチン；ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ）、ペルツズマブ（パージェタ；ＰＥＲＪＥＴＡ）、セツキシマブ（アービタックス；ＥＲＢＩＴＵＸ）、パニツムマブ（ベクティビックス；ＶＥＣＴＩＢＩＸ）、リツキシマブ（リツキサン；ＲＩＴＵＸＡＮ）、アレムツズマブ（キャンパス；ＣＡＭＰＡＴＨ）、イブリツモマブ（ゼヴァリン；ＺＥＶＡＬＩＮ）、トシツモマブ（ベキサール；ＢＥＸＸＡＲ）、オファツムマブ（アーゼラ；ＡＲＺＥＲＲＡ）、ベバシズマブ（アバスチン；ＡＶＡＳＴＩＮ）、イピリムマブ（ヤーボイ；ＹＥＲＶＯＹ）、デノスマブ（ザイゲバ；ＸＧＥＶＡ）、ペムブロリズマブ（キートルダ；ＫＥＹＴＲＵＤＡ）、ニボルマブ（オプジーボ；Ｏｐｄｉｖｏ、アベルマブ（バベンチオ；Ｂａｖｅｎｃｉｏ）、アテゾリズマブ（テセントリク；Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ、デュルバルマブ（イミフィンジ；Ｉｍｆｉｎｚｉ）、サシツズマブ、ロバルピツズマブ、およびそれら生物学的類似体から成る群より選択され；
より好ましくは、Ａが、抗ＨＥＲ２ヒト化モノクローナル抗体ｍｉｌ４０である、
請求項５〜６、１４〜１６のいずれか１項に記載の化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項１９】
前記化合物が、
【化３６】
2021536430.tif 000285
から成る群より選択される、請求項１に記載の化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項２０】
前記化合物が、
【化３７】
2021536430.tif 000286
から成る群より選択される、請求項３に記載の化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項２１】
前記化合物が、
【化３８】
2021536430.tif 000287
から成る群より選択され、
ここで、ＭＡＢが抗体であり、そしてｎが、請求項５に定義される通りであり、
好ましくは、ｎが、約４または８であり；
好ましくは、ＭＡＢが、抗ＨＥＲ２ヒト化モノクローナル抗体ｍｉｌ４０、トラスツズマブ（ハーセプチン；ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ）、ペルツズマブ（パージェタ；ＰＥＲＪＥＴＡ）、セツキシマブ（アービタックス；ＥＲＢＩＴＵＸ）、パニツムマブ（ベクティビックス；ＶＥＣＴＩＢＩＸ）、リツキシマブ（リツキサン；ＲＩＴＵＸＡＮ）、アレムツズマブ（キャンパス；ＣＡＭＰＡＴＨ）、イブリツモマブ（ゼヴァリン；ＺＥＶＡＬＩＮ）、トシツモマブ（ベキサール；ＢＥＸＸＡＲ）、オファツムマブ（アーゼラ；ＡＲＺＥＲＲＡ）、ベバシズマブ（アバスチン；ＡＶＡＳＴＩＮ）、イピリムマブ（ヤーボイ；ＹＥＲＶＯＹ）、デノスマブ（ザイゲバ；ＸＧＥＶＡ）、ペムブロリズマブ（キートルダ；ＫＥＹＴＲＵＤＡ）、ニボルマブ（オプジーボ；Ｏｐｄｉｖｏ）、アベルマブ（バベンチオ；Ｂａｖｅｎｃｉｏ）、アテゾリズマブ（テセントリク；Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ）、デュルバルマブ（イミフィンジ；Ｉｍｆｉｎｚｉ）、サシツズマブ、ロバルピツズマブ、およびそれら生物学的類似体から成る群より選択され、より好ましくは、ＭＡＢが、抗ＨＥＲ２ヒト化モノクローナル抗体ｍｉｌ４０である、請求項５に記載の化合物、その塩または溶媒和物。
【請求項２２】
抗体薬物コンジュゲートの製造における請求項１〜４、７〜１３、１５〜１７、１９〜２０のいずれか１項に記載の化合物、その塩または溶媒和物の使用であって、好ましくは、前記抗体薬物コンジュゲートが、請求項５〜６、７〜１０、１４〜１５、１８および２１のいずれか１項に記載の化合物である使用。
【請求項２３】
請求項１〜２、７〜１２、１５および１９のいずれか一項に記載の式Ｉにより表される化合物、その塩または溶媒和物を調製する方法であって、
１）ｑが、０であり、そしてＲ２が、
【化３９】
2021536430.tif 000288
である場合、その調製方法は、
ａ）無水マレイン酸を式ｉにより表される化合物と反応させ、式ｉｉにより表される化合物を得る工程
【化４０】
2021536430.tif 000289
ｂ）式ｉｉにより表される化合物を、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＳｕＯＨ）と反応させ、式ｉｉｉにより表される化合物を生成する工程
【化４１】
2021536430.tif 000290
ｃ）式ｉｉｉにより表される化合物をヨウ化アルキルＲ１−Ｉと反応させ、目的化合物Ｉ−１を生成する工程
【化４２】
2021536430.tif 000291
を含み；
２）ｑが、１であり、そしてＲ２が、
【化４３】
2021536430.tif 000292
である場合、その調製方法は、
ａ）Ｆｍｏｃ−Ｙ−ＯＨを、式ｉｖにより表される化合物と反応させ、式ｖにより表される化合物を生成する工程
【化４４】
2021536430.tif 000293
ｂ）式ｖにより表される化合物からＦｍｏｃ保護基を除去し、式ｖｉにより表される化合物を得る工程
【化４５】
2021536430.tif 000294
ｃ）化合物Ｉ−１を、式ｖｉにより表される化合物と反応させ、式ｖｉｉにより表される化合物を生成する工程
【化４６】
2021536430.tif 000295
ｄ）式ｖｉｉにより表される化合物を式ｖｉｉｉにより表される化合物と反応させて目的化合物Ｉ−２を生成する工程
【化４７】
2021536430.tif 000296
（ここで、Ｌ１、Ｙ、Ｚ、Ｒ１、Ｒ３およびｐは、請求項１〜２、７〜１２、１５および１９のいずれか１項に定義される通りである）
を含む方法。
【請求項２４】
請求項３〜４、７〜１０、１３、１５〜１７および２０のいずれか１項に記載の式ＩＩもしくは式ＩＩ’により表される化合物、その塩または溶媒和物を調製する方法であって、
請求項１に記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を、Ｂにより表される薬物、細胞毒素、検出試薬、診断試薬またはターゲティングキャリアと反応させて、式ＩＩまたは式ＩＩ’により表される化合物を得る工程：
【化４８】
2021536430.tif 000297
（ここで、各置換基は、それぞれ請求項３〜４、７〜１０、１３、１５〜１７および２０のいずれか１項に定義される通りである）
を含む方法。
【請求項２５】
請求項５〜１０、１４〜１８および２１のいずれか一項に記載の式ＩＩＩまたは式ＩＩＩ’により表される化合物、その塩または溶媒和物を調製する方法であって、請求項２に記載の化合物またはその塩または溶媒和物を、Ａと反応させ、ここでＡはターゲティング（標的指向）化合物分子中のＳ原子を介して部位＃または＃＃に連結され、式ＩＩＩまたは式ＩＩＩ’により表される化合物を得る工程：
【化４９】
2021536430.tif 000298
を含み、該反応がｐＨ＝５〜１０および０℃〜４０℃の温度の条件下で実施され；
前記置換基は各々、請求項５〜６、７〜１０、１４〜１５、１８および２１のいずれか１項に定義される通りである、方法。
【請求項２６】
医薬組成物であって、請求項５〜１０、１４〜１８および２１のいずれか１項に記載の少なくとも１つの化合物、その塩または溶媒和物と、１つ以上の薬学的に許容されるキャリアまたは賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項２７】
請求項５〜１０、１４〜１８および２１のいずれか１項に記載の化合物、その塩または溶媒和物を含む、疾病もしくは状態の診断、予防または治療のためのまたは疾病もしくは状態の重症度を低減するための組成物であって、前記疾病または状態が、腫瘍、感染症、血液疾患、代謝性疾患、炎症から成る群より選択され、好ましくは、前記腫瘍は、癌、リンパ腫、リンパ系腫瘍、芽腫、肉腫および白血病から選択され、好ましくは、前記癌は、乳癌（例えばＨＥＲ２陽性乳癌）；扁平細胞癌（例えば表皮扁平細胞癌）；肺癌、例えば小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺および肺の扁平細胞癌の腺癌；腹腔癌；肝臓癌；胃癌；消化器癌；膵臓癌；神経膠芽腫；子宮頸癌；卵巣癌；肝臓癌；膀胱癌；尿道癌；肝細胞癌；乳癌；大腸癌；結腸癌；直腸癌；結直腸癌；子宮内膜癌；子宮癌；唾液腺癌；腎臓癌または腎癌；前立腺癌；外陰癌；甲状腺癌；肝臓癌；肛門癌；陰茎癌；黒色腫；多発性骨髄腫およびＢ細胞リンパ腫；脳腫瘍；胆のう癌；食道癌；胆管細胞癌；頭頸部癌および関連の転移性腫瘍から成る群より選択される使用。
【国際調査報告】
2021536430.tif 000299
2021536430.tif 000300
2021536430.tif 000301
2021536430.tif 000302
2021536430.tif 000303
2021536430.tif 000304