(57)【要約】  本発明は、それを必要とする患者における損傷性前庭障害の処置で使用するための前庭神経核細胞の小コンダクタンスカルシウム活性化Ｋ＋チャネルのモジュレーター、および当該使用のための当該モジュレーターを含む医薬組成物に関する。【選択図】図１
2021517149.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
それを必要とする患者における損傷性前庭障害の処置での使用のための前庭神経核細胞の小コンダクタンスカルシウム活性化Ｋ＋チャネルの阻害剤。
【請求項２】
前記障害が、損傷性末梢性前庭障害である、請求項１に記載の使用のための阻害剤。
【請求項３】
前記損傷性前庭障害が、回転性めまい、眼振、平衡不安定および筋緊張の喪失からなる群から選択される、先行する請求項のいずれか１項に記載の使用のための阻害剤。
【請求項４】
前記阻害剤が、アパミン、ＵＬＣ１６８４、タパミン、ＮＳ８５９３、タパミン２、リューロトキシンＩ、ＰＯｉ、ＰＯ２、およびＰＯ５、ｔｉｔｙｕｓ  Ｋ、ＢｍＳＫＴｘ１、ツボクラリン、アトラクリウム、デカリニウム、またはＡＧ５２５Ｅ１である、先行する請求項のいずれか１項に記載の使用のための阻害剤。
【請求項５】
前記阻害剤が、アパミン、ＮＳ８５９３またはＡＧ５２５Ｅ１である、請求項４に記載の使用のための阻害剤。
【請求項６】
前記阻害剤が、アパミンである、請求項５に記載の使用のための阻害剤。
【請求項７】
アパミンが、０．１ｍｇ／ｋｇ〜０．５ｍｇ／ｋｇの範囲の量で投与される、請求項６に記載の使用のための阻害剤。
【請求項８】
アパミンが、約０．３ｍｇ／ｋｇのレベルで投与される、請求項７に記載の使用のための阻害剤。
【請求項９】
小コンダクタンスカルシウム活性化Ｋ＋チャネルが、３つのサブユニットＳＫ１、ＳＫ２およびＳＫ３を含みかつ前記阻害剤が、これらのサブユニットの少なくとも１つに対する作用において前記チャネルを阻害する、先行する請求項のいずれか１項に記載の使用のための阻害剤。
【請求項１０】
前記阻害剤が、小コンダクタンスカルシウム活性化Ｋ＋チャネルのＳＫ２サブユニットに作用する、請求項９に記載の使用のための阻害剤。
【請求項１１】
前記阻害剤が、侵襲後３０分間〜５時間および、好ましくは、３０分間〜２時間および、より好ましくは、３０分〜１時間投与される、先行する請求項のいずれか１項に記載の使用のための阻害剤。
【請求項１２】
それを必要とする患者における損傷性前庭障害の処置での使用のための、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の少なくとも１つの阻害剤と、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項１３】
前記組成物が、腹腔内経路により投与される、請求項１２に記載の使用のための医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、それを必要とする患者における損傷性前庭障害の処置で使用するための、小コンダクタンスカルシウム活性化Ｋ＋チャネルのモジュレーターおよび当該モジュレーターを含む医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
２つの内耳に位置する前庭の終末器官から生じる平衡感覚入力は、何らかの頭部の加速度の高忠実度のシグナリングを達成するために必須である。これらの前庭の入力と視覚および固有受容覚の入力の中枢性の統合は、前庭系を、姿勢および平衡を維持するのに適切な運動応答を設定する際に頭部の加速に対し永続的に反応させる。末梢性前庭受容体から生じる感覚入力の突然の変化は、認知障害および自律神経系障害に関連する、休息時および移動中の姿勢の不均衡、自発眼振、ならびに動揺視を含む機能障害のカスケードを特徴とする特徴的な前庭症候群を誘発する。これらの前庭障害は、前庭脊髄および前庭動眼反射（ｖｅｓｔｉｂｕｌｏ  ｏｃｕｌｏｍｏｔｏｒ  ｒｅｆｌｅｘ）の変化、ならびに前庭小脳および前庭皮質の経路に沿った変調からもたらされる。前庭性症候群はヒトにおいて、迷路瘻孔、前庭神経炎、またはメニエール病などの一側性の前庭機能不全の下で特に顕著である。ヒトでは、末梢起源の前庭障害、すなわち前庭末梢性眩暈症の動物モデルと同様に、前庭症候群は全般的にいくつかのフェーズから構成され、その大きさは末梢の損傷の種類、ステージ、および重症度に応じて変化する。「急性」のフェーズは、静的障害（姿勢−自発運動の症状および休息時の自発眼振）が最も顕著である期間を特徴とする。このフェーズは全般的に、数時間持続するが、数日間まで延長する場合がある。その後、前庭性の症状の大きさの自然に起こる低減が、「前庭性の補償（ｖｅｓｔｉｂｕｌａｒ  ｃｏｍｐｅｎｓａｔｉｏｎ）」と呼ばれる現象を介して起こる。前庭性損傷から数日以内に起こるこの初期のフェーズでは、機能的なホメオスタシスの変化を相殺するために、脳幹前庭神経核で複雑な生体変化のカスケードが起こる。数カ月持続し得る長い期間にわたって、残りの前庭障害が次第に消失し、「補償された」状態になる。初期および後期の補償のプロセスの両方は、姿勢および平衡を回復させるために協調するが、大部分の場合、動的な欠陥が完全に消失することはない。
【０００３】
上記に基づき、特に「急性の」フェーズに関連する前庭障害を制限する補償された状態に達することを可能にする有効成分および医薬組成物を発見する必要が依然として存在する。言い換えると、前庭障害を処置することを可能にする、特に、上記障害の「急性の」フェーズを、有効な方法で、特には脳幹前庭神経核における静的障害および複合的な生体変化を処置することを可能にする、有効成分および医薬組成物を発見することが依然として必要とされている。
【発明の概要】
【０００４】
第１の態様では、本発明は、それを必要とする患者における損傷性前庭障害の処置で使用するための、前庭神経核細胞の小コンダクタンスカルシウム活性化Ｋ＋チャネルのモジュレーターに関する。
【０００５】
好ましくは、本モジュレーターは、損傷性末梢性前庭障害の処置での使用のためであり；−この障害は、回転性めまい、眼振、平衡不安定、および筋緊張の喪失からなる群から選択され；−本モジュレーターは、小コンダクタンスカルシウム活性化Ｋ＋チャネルの阻害剤であり；−上記阻害剤は、アパミン、ＵＬＣ１６８４、タパミン（ｔａｐａｍｉｎ）、タパミン２、ＮＳ８５９３、リューロトキシンＩ、ＰＯｉ、ＰＯ２、およびＰＯ５、ｔｉｔｙｕｓ  Ｋ、ＢｍＳＫＴｘ１、ツボクラリン、アトラクリウム、デカリニウム、またはＡＧ５２５Ｅ１であり；−上記阻害剤は、アパミンであり；−本モジュレーターは、０．１ｍｇ／ｋｇ〜０．５ｍｇ／ｋｇの範囲の量で投与され；−約０．３ｍｇ／ｋｇのレベルで投与されるアパミンであり；−本モジュレーターは、小コンダクタンスカルシウム活性化Ｋ＋チャネルのアクチベーターであり；上記アクチベーターは、１−ＥＢＩＯ、ＳＫＡ−３１、クロルゾキサゾン、ＣｙＰＰＡ、ＳＫＡ−１１１、ＮＳ３０９、またはＮＳ１３００１であり；−小コンダクタンスカルシウム活性化Ｋ＋チャネルは、３つのサブユニットＳＫ１、ＳＫ２、およびＳＫ３を含み、本モジュレーターは、これらのサブユニットの少なくとも１つに対する作用において上記チャネルを阻害または活性化し；−本モジュレーターは、小コンダクタンスカルシウム活性化Ｋ＋チャネルのＳＫ２サブユニットに作用し；−本モジュレーターは、侵襲後３０分間〜５時間、好ましくは３０分間〜２時間、より好ましくは３０分〜１時間、投与される。
【０００６】
第２の態様では、本発明は、それを必要とする患者における損傷性前庭障害の処置で使用するための、上記の少なくとも１つのモジュレーターと、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物に関する。
【０００７】
好ましくは、本組成物は、腹腔内経路により投与される。
【０００８】
本発明の他の性質および態様は、以下の説明および添付の図面から明らかである。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】図１は、前庭神経核（ＶＮ）および関連する構造におけるＳＫチャンネルの発現に及ぼす一側性前庭神経切除（ＵＶＮ）の作用（ｎ＝グループあたり６匹の動物）、ならびに眼球運動および姿勢−自発運動の機能の回復の経時変化に及ぼすアパミンの腹腔内注射の結果（ｎ＝グループあたり４匹の動物）を試験するために作製された実験プロトコルを示す。
【図２】図２は、ネコの脳幹における［１２５Ｉ］アパミン結合部位を示し、図は脳幹の頭側（６）〜尾側（１０）の部分で収集した連続切片について提供される。
【図３】図３は、前庭神経核における［１２５Ｉ］アパミン結合部位の密度に及ぼす一側性前庭神経切除の作用を示す。
【図４】図４は、下オリーブの３つの部分：ＩＯＤ、ＩＯＭ、およびＩＯＰ、それぞれ、下オリーブの背側副オリーブ核、内側副オリーブ核、および主核、における、［１２５Ｉ］アパミン結合部位の密度に及ぼす一側性前庭神経切除の作用を示す。
【図５】図５は、一側性前庭神経切除後のアパミンの処置により加速され得る、行動の回復の経時変化を示す。Ａでの曲線は、ネコの２つの実験グループ（ＵＶＮ−ＮａＣｌおよびＵＶＮ−アパミン）における支持面の手術後の回復の平均を示す。Ｂでの曲線は、異なる手術の後の日数で前庭求心路遮断されたネコの各グループにおける水平自発眼振（ＨＳＮ）の頻度の消失（縦座標）の経時変化（横座標）を示す。Ｃでの曲線は、４回連続する交差での降下をもたらさなかった最大はり回転速度として定義される、最大パフォーマンス（Ｍａｘ．Ｐ．）を示す。
【図６】図６は、日数での時間の関数としての、前庭症候群の重症度（図６Ａ）、動物の速度（図６Ｂ）、カバーされる距離の合計（図６Ｃ）、不動時間（図６Ｄ）、および動物の経路の形状（正規化した蛇行）（図６Ｅ）に及ぼすアパミン処置の作用を示す。図６では、２元ＡＮＯＶＡにより陰性対照グループと比較して、「＊」は、有意差を表し（ｐ＜０．００５）、「＊＊」は、高い有意差を表し（ｐ＜０．０１）、「＊＊＊」は、著しい有意差を表す（ｐ＜０．００１）。
【図７】図７は、日数での時間の関数としての、前庭症候群の重症度（図７Ａ、図７Ｃ）、および不動時間（図７Ｂ）に及ぼすＡＧ５２５Ｅ１（１０ｍｇ／ｋｇ）およびＮＳ８５９３（３０ｍｇ／ｋｇ）の処置の作用を示す。図７では、２元ＡＮＯＶＡにより陰性対照と比較して、「＊」は、有意差を表す（ｐ＜０．０５）。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本明細書中使用される場合、用語「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、および「療法（ｔｈｅｒａｐｙ）」は、治癒的療法または対処療法を指す。よって、本発明の目的は、症状（眼振、姿勢の不均衡、移動の誤った感覚、浮動性めまい）を軽減すること、および前庭機能の回復（注視の安定化、静止および動態の均衡）を促進することにより、前庭障害の緩和または患者の病態の寛解を提供することである。
【００１１】
用語「前庭障害」または「前庭症候群」は、均衡および眼球運動の制御に関与する感覚的な情報を処理する内耳および脳の一部を含む前庭系の障害を指す。損傷または疾患がこの領域に損傷を与える場合に、前庭障害が出現する。
【００１２】
用語「損傷性前庭障害」または「損傷性前庭欠損」または「損傷性前庭症候群」は、内耳細胞および／または前庭神経に関する病変が障害の経時変化の間に存在しているかまたは出現するであろう前庭障害を指す。この場合、前庭の機能性が損なわれている。損傷性前庭障害としては、以下が挙げられる：−感染症が内耳および／または前庭神経を刺激することにより、可逆的および／または不可逆的な損傷を誘導する前庭障害（このグループ由来の病態の一例は前庭神経炎である）；−内耳液のレベルが冒されている前庭障害（内リンパ液の量、組成、および／または圧力の異常）（これらの障害、メニエール病および続発性内リンパ水腫などは、通常、疾患の時間経過の間に病変を発達させる）；−局所的な虚血、興奮毒性により引き起こされる回転性めまいなどの、前庭終末器官の侵襲または病変により誘導される前庭障害。本発明により企図される損傷性前庭障害の例としては、限定するものではないが、神経炎、ウイルス性ニューロン炎、迷路炎、ウイルス性内リンパ迷路炎、薬物誘導性中毒性難聴、メニエール病、内リンパ水腫、損傷性前庭欠損を伴う頭部外傷、迷路性出血、慢性または急性の迷路性感染症、重篤な迷路性障害（ｓｅｒｉｏｕｒｓ  ｌａｂｙｒｉｎｔｈｉｎｅ）、気圧障害（ｂａｒｏｔｒａｕｍａｔｉｓｍ）、自己免疫内耳疾患、老年性前庭（ｐｒｅｓｂｙｖｅｓｔｉｂｕｌｉａ）、中毒性前庭機能不全が挙げられる。
【００１３】
異なるフェーズの前庭症候群は、脳幹前庭神経核（ＶＮ）内の前庭二次ニューロン（ＶＳＮ）の興奮性における著しい変化により裏付けられる。一側性前庭の病変は、求心路遮断された側のＶＳＮの自発的な休息時活性（ｒｅｓｔｉｎｇ  ａｃｔｉｖｉｔｙ）を急激に抑制し、それは逆に、病変の対側にあるＶＮに位置するＶＳＮの興奮性を増大させる。これらの反対の作用は、求心路遮断された側のＶＳＮ上の前庭一次ニューロン（ＶＰＮ）からの興奮性グルタミン酸作動性の入力の除去に依存する。これらはまた、同側のＶＳＮにより行使される交連神経の阻害の減量による、侵襲とは反対側でのＶＳＮの興奮性の暴走（ｒｕｎａｗａｙ）からもたらされる。同側のＶＳＮの自発的な放電の低下が、対側のＶＳＮにより行使される交連神経の阻害の増量により、さらに強調される。この状況は、対向するＶＮ間に活性の不均衡をもたらす。その後、求心路遮断された側のＶＳＮの放電活性は、自然に回復する。この現象は最初に、一側性迷路切除（ＵＬ）または一側性前庭神経切除（ＵＶＮ）のネコのモデルにおいて侵襲の誘発から離れて観察され（数週間）、後に、ＵＬのラットのモデルのＶＮの切片の標本において末梢損傷の翌日からすでに存在することが示されている。
【００１４】
本発明は、それを必要とする患者における損傷性前庭障害の処置で使用するための、小コンダクタンスカルシウム活性化Ｋ＋チャネルのモジュレーターおよび当該モジュレーターを含む医薬組成物を提供する。
【００１５】
本明細書中使用される場合、用語「モジュレーター」は、小コンダクタンスカルシウム活性化Ｋ＋チャネルの活性を増大または減少させるいずれかの分子、作用物質、または化合物を指し、このモジュレーターは、本明細書中以下で定義されるように、アクチベーターまたは阻害剤である。
【００１６】
患者は、哺乳類、より具体的にはヒトである。
【００１７】
末梢性前庭入力の突然かつ一側性の喪失は、脳幹前庭神経核におけるＳＫ型チャネルの発現を変える。このプロセスは、急性前庭症候群およびその補償機構に関与している。小コンダクタンスカルシウム活性化Ｋ＋チャネルの少なくとも１つのモジュレーターの投与は、顕著な抗回転性めまい作用を呈する。
【００１８】
小コンダクタンスカルシウム活性化Ｋ＋チャネルのモジュレーターは、このような小コンダクタンスカルシウム活性化Ｋ＋チャネルの活性の阻害剤またはアクチベーターである。
【００１９】
本モジュレーターが当該チャネルの阻害剤である場合、それはＳＫチャネルに及ぼす直接的なアンタゴニスト作用または負の調節作用を有する。
【００２０】
用語「阻害剤」は、本明細書中使用される場合、ＳＫチャネルに対しアンタゴニスト作用または負の調節作用を有する作用物質を指す。特に、本発明に係る阻害剤は、ペプチド、ペプチド模倣体、有機小分子、抗体、アプタマー、ポリヌクレオチド、および当該分子を含む化合物、またはそれらの組み合わせから選択される分子であり得る。好ましくは、上記阻害剤は、ペプチドまたは有機小分子である。
【００２１】
たとえば、本阻害剤は、アパミン（アピトキシンで見出される１８アミノ酸のペプチド神経毒−ＣＡＳ番号２４３４５−１６−２）；ＵＬＣ１６８４（６，１２，１９，２０，２５，２６−ヘキサヒドロ−５，２７：１３，１８：２１，２４−トリエテノ−１１，７−メテノ−７Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｎ］［１，５，１２，１６］テトラアザシクロトリコシン（ｔｒｉｃｏｓｉｎｅ）−５，１３−ジイウム（ｄｉｉｕｍ）ジブロミドとも呼ばれる、Ｃａｍｐｏｓ  Ｒｏｓａ，  Ｊ．，  Ｇａｌａｎａｋｉｓ，  Ｄ．，  Ｇａｎｅｌｌｉｎ，  Ｃ．Ｒ．，  Ｄｕｎｎ，  Ｐ．Ｍ．，  Ｊｅｎｋｉｎｓｏｎ，  Ｄ．Ｈ．，  １９９８．  ”Ｂｉｓ−ｑｕｉｎｏｌｉｎｉｕｍ  ｃｙｃｌｏｐｈａｎｅｓ：６，１０−ｄｉａｚａ−３（１，３），８（１，４）−ｄｉ−ｂｅｎｚａ−１，５（１，４）ｄｉｑｕｉｎｏｌｉｎａｃｙｃｌｏｄｅｃａｐｈａｎｅ（ＵＣＬ  １６８４），  ｔｈｅ  ｆｉｒｓｔ  ｎａｎｏｍｏｌａｒ，  ｎｏｎ−ｐｅｐｔｉｄｉｃ  ｂｌｏｃｋｅｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｐａｍｉｎ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  Ｃａ２＋  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｋ＋ｃｈａｎｎｅｌ”．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ４１，  ２−５を参照）；ｔａｍａｐｉｎ（Ｐｅｄａｒｚａｎｉ  Ｐ，  Ｄ’ｈｏｅｄｔ  Ｄ，  Ｄｏｏｒｔｙ  ＫＢ，  Ｗａｄｓｗｏｒｔｈ  ＪＤ，  Ｊｏｓｅｐｈ  ＪＳ，  Ｊｅｙａｓｅｅｌａｎ  Ｋ，  Ｋｉｎｉ  ＲＭ，  Ｇａｄｒｅ  ＳＶ，  Ｓａｐａｔｎｅｋａｒ  ＳＭ，  Ｓｔｏｃｋｅｒ  Ｍ，  Ｓｔｒｏｎｇ  ＰＮ  （２００２）．”Ｔａｍａｐｉｎ，  ａ  ｖｅｎｏｍ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  Ｉｎｄｉａｎ  ｒｅｄ  ｓｃｏｒｐｉｏｎ（Ｍｅｓｏｂｕｔｈｕｓ  ｔａｍｕｌｕｓ）ｔｈａｔ  ｔａｒｇｅｔｓ  ｓｍａｌｌ  ｃｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ  Ｃａ２＋−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｋ＋  ｃｈａｎｎｅｌｓ  ａｎｄ  ａｆｔｅｒ  ｈｙｐｅｒｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ  ｃｕｒｒｅｎｔｓ  ｉｎ  ｃｅｎｔｒａｌ  ｎｅｕｒｏｎｓ”．Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７７  （４８）：４６１０１−９．を参照）；ｔａｍａｐｉｎ−２（チロシンがヒスチジンにより置き換えられているｔａｍａｐｉｎのアイソフォーム）；ＮＳ８５９３（Ｎ−（１Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフタレニル］−１Ｈ−ベンズイミダゾール（ｂｅｎｚｉｍｉｄａｚｏ１）−２−アミンヒドロクロリドとも呼ばれる）；リューロトキシンＩ（シラトキシン（Ｓｃｙｌｌａｔｏｘｉｎ）とも呼ばれる）；ＰＯｉ、ＰＣ２、ＰＯ５、ＰＯ５−ＮＨ２；ｔｉｔｙｕｓ  ｋ（Ｌｅｇｒｏｓ  ｅｔ  ａｌ  ．  ”Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｅｗ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｆｒｏｍ  Ｔｉｔｙｕｓ  ｓｅｒｒｕｌａｔｕｓ  ｓｃｏｒｐｉｏｎ  ｖｅｎｏｍ  ｗｈｉｃｈ  ｉｓ  ａ  ｌｉｇａｎｄ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｐａｍｉｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ，  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ３９０  （１９９６）８１−８４を参照）；ＢｍＳＫＴｘ１（Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ  ．  ”Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｓｃｏｒｐｉｏｎ  ｔｏｘｉｎ  ｂｌｏｃｋｉｎｇ  ｓｍａｌｌ  ｃｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ  Ｃａ２＋  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｋ＋  ｃｈａｎｎｅｌ．”，  Ｔｏｘｉｃｏｎ．  ２００４  Ｊｕｎ  １５；  ４３  （８）：９６１−７１を参照）；ツボクラリン（ｄ−ツボクラリンまたは６��６’−ジメトキシ２，２’，２’−トリメチルツボクララン（ｔｕｂｏｃｕｒａｒａｎ）−２，２’−ジイウム（ｄｉｉｕｍ）−７’，１２’−ジオール、ＣＡＳ番号５７−９５−４としても知られている）；アトラクリウム（３−［１−［（３，４−ジメトキシフェニル）メチル］−６，７−ジメトキシ−２−メチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン（ｉｓｏｑｕｉｎｏｌｅｉｎｅ）−２−イル］プロパノアートｄｅ５−［３−［１−［（３，４−ジメトキシフェニル）メチル］−６，７−ジメトキシ−２−メチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン（ｉｓｏｑｕｉｎｏｌｅｉｎｅ）−２−イル］プロパノイルオキシ］ペンチル（ｐｅｎｔｙｌｅ）としても知られている）；デカリニウム（１，１’−デカン−１，１０−ジイルビス（４−アミノ−２−メチルキノリニウム）デシル］−２−メチル−４−キノリン−１−イウムアミンジクロリド）または化合物ＡＧ５２５Ｅ１（１，１’−（プロパン−１，３−ジイル）−ビス−（６，７−ジメトキシ−２−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン）とも呼ばれる）である。
【００２２】
好ましくは、本阻害剤は、アパミンである。
【００２３】
本モジュレーターが、当該チャネルのアクチベーターである場合、それはＳＫチャネルに対し直接的なアゴニスト作用または正の調節作用を有する。
【００２４】
用語「アクチベーター」は、本明細書中使用される場合、ＳＫチャネルに対しアゴニスト作用または正の調節作用を有する作用物質を指す。特に、本発明に係る阻害剤は、ペプチド、ペプチド模倣体、有機小分子、抗体、アプタマー、ポリヌクレオチド、および当該分子を含む化合物、またはそれらの組み合わせから選択される分子であり得る。好ましくは、上記アクチベーターは、ペプチドまたは有機小分子である。
【００２５】
たとえば、本アクチベーターは、１−ＥＢＩＯ（１−エチル−２−ベンゾイミダゾリノン）、ＳＫＡ−３１（ナフト［１，２−ｄ］チアゾール−２−イルアミン）、クロルゾキサゾン、ＣｙＰＰＡ（Ｎ−シクロヘキシル−Ｎ−［２−（３，５−ジメチルピラゾール−１−イル）−６−メチル−４−ピリミジンアミン）、ＳＫＡ−１１１（５−メチルナフト［１，２−ｄ］チアゾール−２−アミン）、ＮＳ３０９（６，７−ジクロロ−１Ｈ−インドール−２，３−ジオン−３−オキシム）、またはＮＳ１３００１（（４−クロロフェニル）［２−（３，５−ジメチルピラゾール−１−イル）−９−メチル−９Ｈ−プリン−６−イル］アミン）である。
【００２６】
用語「抗体」は、最も広い意味で使用され、所望の生体活性を呈する限りは、
モノクローナル抗体（完全長のモノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異的な抗体、キメラ抗体、抗体フラグメント、およびヒト化抗体を包有する。抗体フラグメントは、完全長の抗体の一部、全般的にはその抗原結合領域または可変領域を含む。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、およびＦｖフラグメント、ジアボディ、直鎖状抗体、一本鎖抗体分子、シングルドメイン抗体（たとえばラクダ科由来）、サメのＮＡＲシングルドメイン抗体、ならびに複数の抗体フラグメントから形成される多重特異的な抗体が挙げられる。
【００２７】
たとえば、アパミンの即時型の調節作用を、損傷部位での興奮性のＩ型ＶＳＮに対する刺激作用と組み合わせることができ、その興奮性はＵＶＮの後に著しく低下され、反対側のＩ型阻害性ＶＳＮへの同時の作用を有した。アパミンの抗回転性めまい作用は、対向するＶＮ間の自然に発生する活性の再平衡化からもたらされ得る。この仮説は興味深い。なぜなら、同時に起こる阻害作用により対向するＶＮ間の不均衡を低減することを目的とする前庭抑制剤とは反対に、アパミンの興奮作用は、超興奮性を増幅させつつ同様の結果に達するからである。補償の急性のフェーズで観察され、かつその後のフェーズに延長する、アパミン投与下での前庭の補償の加速は、このような現象の例である。単独でのアパミン以外に、以前に記載されたＵＣＬ１６８４、ｔａｍａｐｉｎ、ＮＳ８５９３、ＡＧ５２５Ｅ１の阻害剤などのＳＫチャネルに直接的なアンタゴニスト作用または負の調節作用を有する他の分子もまた、前庭症候群の軽減に有効である。局所部位および他の部位の両方に作用する興奮性ニューロン対阻害性ニューロンを含む、前庭神経核に存在する神経集団の多様性および複雑さを考慮すると、以前に記載された１−ＥＢＩＯ、ＳＫＡ−３１、クロルゾキサゾン、ＣｙＰＰＡ、ＳＫＡ−１１１、ＮＳ３０９、およびＮＳ１３００１のアクチベーターなどの、直接的なアゴニストまたは正のモジュレーターによるＳＫチャネルの刺激（ａｇｏｎｉｚａｔｉｏｎ）もまた、対向する前庭神経核間での再平衡化する自然発生的な活性を介して利点を促進し得る。
【００２８】
本発明の医薬組成物は、それを必要とする患者における前庭障害の処置で使用するための、ニューロンおよび他の細胞種などの前庭神経核細胞の小コンダクタンスカルシウム活性化Ｋ＋チャネルの少なくとも１つのモジュレーターと、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤とを含む。このモジュレーターは、小コンダクタンスカルシウム活性化Ｋ＋チャネルの阻害剤またはアクチベーターである。
【００２９】
カルシウム活性化Ｋ＋チャネルは、カルシウムによりゲートが開閉されるカリウムチャネル、またはカルシウムゲート化チャネルに構造的もしくは系統的に関連するカリウムチャネルである。これらのチャネルは、３つのサブタイプ：（ｉ）大コンダクタンスまたはＢＫチャネル、（ｉｉ）中間コンダクタンスまたはＩＫチャネル、および（ｉｉｉ）小コンダクタンスまたはＳＫチャネル、に分けられる。このイオンチャネルのファミリーは、特に、細胞内Ｃａ２＋により活性化される。特に、ＳＫチャネルは、電圧不感受性カルシウム活性化カリウムチャネルのファミリーのメンバーである。細胞質のカルシウム濃度が上昇すると、このチャネルが開き、Ｋ＋イオンを、Ｋ＋平衡電位に応じて細胞から放出させる。これらの活性化は、細胞の過分極をもたらす。より具体的には、ＳＫチャネルは、シナプスの後過分極（ＡＨＰ）のゆっくりとした構成要素に寄与することにより、神経の興奮を調節する。これらの活性化またはアップレギュレーションは、反復的な作用電位の着火頻度（ｆｉｒｉｎｇ  ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ）を限定することが予測される。これらの特定のゲーティングの性質に関しては、細胞の種類および企図される側部に応じて、ＶＮにおけるＳＫチャネルのアップレギュレーションの予測される機能的な結果に関して精緻化できる。脳幹のＶＮでは、観察されるＳＫチャネルの発現のアップレギュレーションは、特にミクログリア細胞、アストロサイト、およびＶＳＮ（３つの細胞種は以前に、このＳＫチャネルのサブタイプを発現することが報告されている）で起こり得ることが想定され得る。
【００３０】
特定の実施形態では、小コンダクタンスカルシウム活性化Ｋ＋チャネルは、３つのサブユニットＳＫ１、ＳＫ２、およびＳＫ３を含み、本モジュレーターは、これらのサブユニットの少なくとも１つを阻害または活性化する。より好ましい実施形態では、本モジュレーターは、サブユニットのＳＫ２またはＳＫ３を阻害または活性化する。
【００３１】
本医薬組成物は、末梢性前庭障害、すなわち、前庭末梢性眩暈症の処置における使用に適している。末梢性前庭障害は、半規管、前庭（卵形嚢および球形嚢）；または前庭神経の機能障害により引き起こされる。例として、末梢性前庭症候群の主因は、良性発作性頭位めまい症、（ＢＰＰＶ）、メニエール病、前庭神経炎、および迷路炎である。たとえば、前庭障害は、多くの場合、吐き気、嘔吐、および流涎などの自律神経系の症状、ならびに身体図式、主観的な垂直性の知覚の変化、空間識失調などの知覚性−認知性の症状を伴う、回転性めまい／浮動性めまい、眼振、平衡不安定、筋緊張の喪失からなる群から選択される。
【００３２】
別の好ましい実施形態では、小コンダクタンスカルシウム活性化Ｋ＋チャネルのモジュレーターは、アパミンである。アパミンは、ハチまたはカリバチなどの刺咬昆虫の毒であるアピトキシンで見出される１８アミノ酸の神経毒である。この神経毒は、神経系の小コンダクタンスカルシウム活性化カリウムチャネルを遮断する。これは、パーキンソン病に対する実験的な処置として医薬で使用されている。
【００３３】
本発明の特定の実施形態では、本医薬組成物は、腹腔内経路、静脈内経路、および経口投与により投与され得、好ましくは腹腔内経路により投与され得る。アパミンは、本発明では、ＵＶＮ後３日間、１日１回、腹腔内に、０．１ｍｇ／ｋｇ〜０．８ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇ〜０．６ｍｇ／ｋｇ、たとえば０．１ｍｇ／ｋｇ〜０．５ｍｇ／ｋｇの量で投与され、好ましくは、約０．３ｍｇ／ｋｇまたは０．６ｍｇ／ｋｇのレベルで投与される。
【００３４】
本発明に係る医薬組成物は特に、侵襲または侵襲の誘導の後３０分間〜５時間、好ましくは３０分間〜２時間、より好ましくは３０分〜１時間、投与される。前庭障害の診断は、侵襲または侵襲の誘導の後３０分間〜５時間、好ましくは３０分間〜２時間、より好ましくは３０分〜１時間、評価した。
【００３５】
方法および実施例
方法
本発明の実施に関して以下の方法を、実施例に使用した。
【００３６】
動物
実験を、”Ｃｅｎｔｒｅ  ｄ’  ｅｌｅｖａｇｅ  ｄｕ  Ｃｏｎｔｉｇｎｅ”（Ｃｏｎｔｉｇｎｅ，  Ｆｒａｎｃｅ）から入手した１８匹の成年のイエネコ（３〜５ｋｇ）で行った。全ての実験を、Ａｎｉｍａｌｓ（ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ）Ａｃｔ，  １９８６および関連するガイドライン、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓ  Ｃｏｕｎｃｉｌ  Ｄｉｒｅｃｔｉｖｅ  ｏｆ  ２４  Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  １９８６（８６／６０９／ＥＥＣ）；ならびにアメリカ国立衛生研究所の研究動物のケアおよび使用に関するガイド（ＮＩＨ公開番号第８０２３号、１９７８年改訂版）に従い行った。全ての試みを、この実験で使用される動物の数および苦痛の両方を最小限にするように行った。ネコを、正常な日周光のバリエーションにて、水および餌に自由にアクセスする大きな密閉された空間で収容した。１８匹の動物を、前庭神経核および関連する脳幹構造におけるＳＫチャネルの結合試験に使用した。インタクトな動物のグループ（ｎ＝６）を、対照グループとして使用した。残りの１２匹のネコを、左ＵＶＮに供し、２つの生存期間：１週目（ｎ＝６）および３週目（ｎ＝６）に屠殺した。生存期間は、本出願人らの以前のネコにおける行動および電気生理学の調査から選択し、それは急性期のネコで主要な姿勢の欠陥を示し（１週目）、補償された動物においてほぼ完全な回復を示した（３週目）。行動のレベルでのネコの回復の経時変化に及ぼすアパミン処置の作用を決定するために、８匹のさらなるＵＶＮのネコを、この試験に使用し、ＵＶＮ後３日間にわたり、ＮａＣｌ（ｎ＝４）またはアパミン（ｎ＝４）の腹腔内注射を行った（図１参照）。
【００３７】
前庭の神経切除
左側の前庭神経の切開を、無菌条件下にて解剖顕微鏡を介して行った。動物に、最初にケタミン（２０ｍｇ／ｋｇ，ｉ．ｍ．；Ｒｈｏｎｅ  Ｐｏｕｌｅｎｃ，  Ｍｅｒｉｅｕｘ，  Ｆｒａｎｃｅ）で麻酔をかけ、鎮痛剤（Ｔｏｌｆｅｄｉｎｅ，０．５ｍｌ，ｉ．ｍ．；Ｖｅｔｏｑｕｉｎｏｌ，  Ｌｕｒｅ，  Ｆｒａｎｃｅ）を投与し、フローセン麻酔薬（２％）下で維持し、毛布を使用して生理的な体温に保った。前庭神経を、節後レベルで左側にて切開して、乳突削開術、骨性迷路の部分的な破壊、および内耳道の外科的な露出の後に、聴覚部分をインタクトな状態にしておいた（Ｘｅｒｒｉ  ａｎｄ  Ｌａｃｏｕｒ，  １９８０による）。動物を、抗生剤の下で７日間、鎮痛剤の下で３日間維持した。神経切断後数日以内に動物が示す古典的な姿勢、自発運動、および眼球運動の欠陥を、前庭神経病変の有効性を示す基準として使用した。前庭神経の切片の完全性はすでに、以前の研究の組織学的な手法（Ｌａｃｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ  ．  ，  １９７６）により評価されていた。
【００３８】
組織の調製
各グループのネコを、ケタミンジヒドロクロリド（２０ｍｇ／ｋｇ，ＩＭ，Ｍｅｒｉａｌ，  Ｌｙｏｎ，  Ｆｒａｎｃｅ）を用いて深く麻酔し、頭切除術により屠殺し；これらの脳（ｒａｉｎｓ）を、頭蓋から取り出した後に、脳幹構造（ＶＮおよびＩＯ）を含むいくつかのブロックに切断し、これらのブロックを、ＣＯ２ガスで迅速に凍結した。冠状切片（厚さ１０ｍｍ）を、クリオスタット（Ｌｅｉｃａ，  Ｒｅｕｉｌ−Ｍａｌｍａｉｓｏｎ，  Ｆｒａｎｃｅ）で切断し、スーパーフロスト＋＋のスライドガラス（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，  Ｅｌａｎｃｏｕｒｔ，  Ｆｒａｎｃｅ）上で解凍し、オートラジオグラフィー（ｒａｄｉｏ  ａｕｔｏｇｒａｐｈｙ）まで−８０℃で保存した。実験は、盲検で行い、ネコが属していたグループは、結合を行う人物に知られていなかった。
【００３９】
アパミン結合実験
結合実験では、組織切片を、以前に記載されたように（Ｍｏｕｒｒｅ  ｅｔ  ａｌ  ．  ，  １９８６）、［１２５Ｉ］（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で標識した放射活性の高いアパミンとインキュベートした。脳の切片を、０．５％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）（ｐＨ７．４）を含む１００ｍＭのＴｒｉｓ−Ｃｌバッファー中で、２５ｐＭの［１２５Ｉ］−アパミンと４℃でインキュベートした。非特異的な結合を、［１２５Ｉ］−アパミンを添加する前に大量の過剰なネイティブのアパミン（Ｓｉｇｍａ，０．１ｍＭ）を添加することにより、評価した。切片を、６０分間インキュベートし、同じバッファーで３回、各２０秒間すすいだ。これらの切片を４回目に、水で、２０秒間すすいだ。乾燥した切片を、Ｋｏｄａｋ  ＢｉｏＭａｘ  ＭＲフィルムに載置した。１匹のナイーブなネコの連続切片を、実験の切片と共に加え、異なるフィルム上での標識の内部標準として提供した。オートラジオグラムを、１２日間露出させて、不飽和の標識を得ることにより、標識における増大または減少の検出を可能にした。フィルムを次に、Ｋｏｄａｋ  Ｉｎｄｕｓｔｒｅｘの現像剤で処置した。オートラジオグラムを解析し、ＮＩＨの画像ソフトウェアで放射活性を定量化した。プラスチックの標準物質（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を、［１２５Ｉ］の濃度を較正するために使用した。平均受容体密度を、各動物についてそれぞれ定位的なレベルで２〜３回の測定を使用して、各一側性の核で計算した。非特異的な結合を、総結合の約１５％に対応する、標識されていない０．１μＭのアパミンとインキュベートした切片のオートラジオグラムで検出した。特異的な結合を、所定の領域での総結合と非特異的な結合の間の差異として計算した。Ａｚｕｒ  ＩＩで染色した切片を、参照用に使用した。４つの主要な前庭神経核（前庭神経内側核、前庭神経下核、前庭神経上核、および前庭神経外側核）ならびに下オリーブの３つの小部分（下オリーブの主核（ＩＯＰ）、内側副オリーブ核（ＩＯＭ）、および背側副オリーブ核（ＩＯＤ））のそれぞれを含むネコの脳幹構造を、同定し、ネコの脳地図であるＢｅｒｍａｎの定位地図（Ｂｅｒｍａｎ，  １９６８）を使用して命名した。
【００４０】
アパミンの投与
アパミン（０．３ｍｇ／ｋｇ、ＮａＣｌ（０．９％）に溶解、Ｇｅｎｅｐｅｐ，  Ｆｒａｎｃｅ）を、それぞれの行動試験の３０分前に腹腔内（ｉ．ｐ．）注射した。血液脳関門を通ることが見出されていたため、アパミンの全身投与を選択した。動物を、２つの異なる下位グループ（ビヒクルによる損傷およびアパミンによる損傷（０．３ｍｇ／ｋｇ））に割り当てた。各下位グループについて、適切な行動試験を介して姿勢−自発運動および眼球運動の機能の回復に及ぼすこれらの薬剤の作用を決定する。アパミン投与の作用の行動学的な評価は、盲検条件で行った。
【００４１】
行動試験
自発眼振の回復：ＵＶＮにより誘導される前庭の水平自発眼振を、以前に詳述されているように（Ｔｉｇｈｉｌｅｔ  ｅｔ  ａｌ  ．  ２００６）、眼の運動のビデオによる追跡（ｖｉｄｅｏｔｒａｃｋｉｎｇ）により記録した。水平自発眼振の頻度を、１０秒でのＵＶＮと比較して対側に向かう迅速な位相の拍動の数の観点から測定した（サンプリング時間あたり、動物あたり５回の反復測定）。各記録期間（持続期間＝１５分間）を、動物の覚醒状態による可能なバリエーションに対処するために、当日の同じ時間（午前中）に設定した。完全な回復は、前庭の眼振がこの観点で完全に消失した場合に達成された。
【００４２】
姿勢の回復：支持面の測定は、動物の姿勢の安定性を評価するのに有用である。姿勢の欠陥および回復を、歩行していない休息時に垂直に立っている間のネコの四本足により区切られる表面を測定することにより評価した。支持面は、それが前庭病変により誘導される静的な前庭脊髄の欠陥を補償するネコの行動学的な適応を反映するため、姿勢の制御の良好な推定とみなされる（Ｔｉｇｈｉｌｅｔ  ｅｔ  ａｌ  ．  ，  １９９５）。一般に、この面は、正常なネコでは非常に小さく（約５０〜１００ｃｍ２）、一側性前庭病変の後数日以内に著しく増大した。支持面を定量化するために、ネコを、底面から撮影できる目盛りのついた透明な床を有する装置に載置した。５回の反復測定を、各術後時間で試験した各ネコについて行い、各実験期間での平均を、計算した。支持面を、画像解析システム（Ｃａｎｖａｓ，  ９ＴＭ，  Ｄｅｎｅｂａ  ｓｏｆｔｗａｒｅ，  Ｍｉａｍｉ，  ＦＬ）により四本足により区切られる面として測定した。前庭病変後に記録したデータを、各動物が自身の対照として行動することを可能にする、個々の参照を使用することにより病変前の値と比較した。
【００４３】
平衡機能の回復：自発運動平衡機能を、適切な回転はりの実験装置（Ｘｅｒｒｉ  ａｎｄ  Ｌａｃｏｕｒ，  １９８０）を使用して定量化した。２つの区画（０．５×０．６×０．５ｍ）を、水平はり（長さ：２ｍ；直径：０．１２ｍ）により接続した。床から１．２ｍ離れて載置されたはりは、０°〜５８８．４°／ｓの範囲の一定の角速度（約１．５回転／ｓ）で、その長軸に沿って回転させることができる。回転はりでの行動の訓練は、最初の訓練期間の前に一晩動物を絶食させることから構成された。動物を、はりを渡るように条件付けし、標的の区画の小さなボウルに載置された魚（または肉）の小片により報酬を与えた。最初の横断を、固定されたはりで行い、その後は回転はりで行った。原則として、はりの回転速度を、落下のない４回連続試験の後に、漸進的に増大させた。よって、平衡機能を、落下をもたらさなかった最も高速のはりの回転速度を測定することにより定量化した。この最大回転速度は、最大自発運動平衡パフォーマンス（Ｍａｘ  Ｐ．）を決定した。回転はりでの手術前の訓練は、ネコに応じて、６〜１０回の期間を必要とした。訓練を、ネコのＭａｘ  Ｐ．が達成され、最も高いレベルで安定した後に、中止した。
【００４４】
統計解析
Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ６（ＴＭ）ソフトウェアを使用して、異なるグループのアパミン結合部位密度に及ぼす病変および経時変化の作用を、二元ＡＮＯＶＡ、次に適切なグループ間でのポストホック検定（ｔｕｋｅｙの検定）（Ｐ＜０．０５）により試験した。全てのデータを、平均値＋平均の標準誤差（Ｓ．Ｅ．Ｍ．）として表し、０．０５未満のＰ値を、有意性の最小レベルととらえた。グループごとのネコの数が４匹であるため、行動パフォーマンスに及ぼす病変および経時の作用を、ノンパラメトリック検定、クラスカル・ウォリス検定、次いでグループ間での適切なポストホック検定（Ｄｕｎｎ検定）（Ｐ＜０．０５）により試験した。
【００４５】
実施例
実施例１：ＳＫチャネルの結合部位密度は、一側性前庭神経切除の後に増大する。
図２は、一匹の対照のネコ（シャム）、およびＵＶＮから１週間後（１Ｗ）または３週間後（３Ｗ）に屠殺した２匹の代表的なネコの脳幹の頭側（６）〜尾側（１０）の部分から収集した代表的な連続した前頭部の切片におけるアパミン結合部位密度の空間分布を示す。ＩＶＮ、前庭神経下核；ＬＶＮ、前庭神経外側核；ＭＶＮ、前庭神経内側核；ＳＶＮ、前庭神経上核；ＩＯＤ、ＩＯＭ、およびＩＯＰ、それぞれ、下オリーブの背側副オリーブ核、内側副オリーブ核、および主核。バー：１ｍｍ。代表的なシャムおよび一側性前庭神経切除したネコ由来の冠状切片は、シャム（Ａ）と比較して、一側性前庭神経切除から１Ｗ後または３Ｗ後に、病変の対側および同側にある脳幹の異なる構造において、アパミンに対し感受性であるＳＫタンパク質結合の増大を示している。図２によると、対照のネコでは、アパミン結合のパターンは不均一であり：中間〜低いレベルの結合部位が前庭複合体で見出され、これより高いレベルが下オリーブの複合体で見出された。特に、前庭内側核および前庭下側核は、前庭神経上核および前庭神経外側核よりも高いアパミン結合部位密度を含んだ。
【００４６】
結論
これらの知見は、一側性神経切除が、前庭神経核においてアパミン結合部位密度の両側での増大を誘導することを示す。この増大は、侵襲とは反対側の脳の側部でより顕著である。
【００４７】
図３により、前庭神経核、特に内側核（ＭＶＮ）、上側核（ＳＶＮ）、および外側核（ＬＶＮ）における［１２５Ｉ］アパミン結合部位の密度に及ぼす一側性前庭神経切除の作用が示される。シャムのネコのグループ（ｎ＝４）ならびに一側性前庭神経切除から１週間後（１Ｗ）および３週間後（３Ｗ）のネコのグループ（ｎ＝グループごとに４）の結合レベルのバリエーションを、評価する。データを、この構造における同側および対側のＵＶＮに関する結合の値として提供する。結果を、オートラジオグラム由来のタンパク質１ｍｇあたりに特異的に結合するフェムトモルの［１２５Ｉ］アパミンの平均値およびＳ．Ｅ．Ｍ．として表す。「＊」、Ｐ＜０．０５（各グループにおける損傷した側対インタクトな側）；「＃」，Ｐ＜０．０５（それぞれのインタクトな側および損傷した側について１Ｗまたは３Ｗのグループ対シャムのグループ）、および「§」、Ｐ＜０．０５（それぞれのインタクトな側および損傷した側について１Ｗのグループ対３Ｗのグループ）。
【００４８】
表１は、前庭複合体および関連する核におけるアパミン結合部位のレベルを表す。特に、放射活性アパミンタンパク質の結合部位の標識の密度の測定の生の値が示される。このような値は、図３および４に示される結果を裏付けており、それらを以下の静的な処置の説明に使用する。
【００４９】
【表１】
2021517149.tif 000003
データを、ｆｍｏｌ／ｍｇのタンパク質において、平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍ．で表す。
対側および同側：ＵＶＮに関連する側、１Ｗおよび３Ｗ：ＵＶＮから１週間後および３週間後。
表１：前庭複合体および関連する核におけるアパミン結合部位のレベル
【００５０】
図３および表１により、前庭神経内側核（ＭＶＮ）において、２元ＡＮＯＶＡは、アパミン結合部位のレベルに関する、病変および損傷後の時間の間の相互作用（Ｆ２，２３８＝４．２０、Ｆ値は、２元ＡＮＯＶＡの結果であり、２は、ｎ−１に対応し、ｎは、グループ番号−シャム／１週間／３週間であり；２３８は、サンプル番号であり、Ｐ＜０．０５）、損傷後の時間の作用（Ｆ２，２３８＝３１．５９、Ｐ＜０．０１）、ならびに病変（Ｆ１，２３８＝５．２３，Ｐ＜０．０５）を明らかにした。
【００５１】
ＵＶＮから１週間後に、アパミン結合部位密度は、対照と比較して同側で有意に増大した（テューキーの検定，＋５２％，Ｐ＜０．０１）。この増大したアパミン結合部位密度は、ＵＶＮから３週間後持続した。病変と対側のＭＶＮでは、損傷から１週間後のグループにおけるアパミン結合部位密度の増大は、対照および損傷から３週間後のグループと比較して、同側の場合よりも有意に強かった（それぞれ、＋９０％，３７％、Ｐ＜０．０１）。さらに、損傷から１週間後のグループ（ａｔ  ｔｈｅ  ｏｎｅ  ｗｅｅｋ  ｐｏｓｔ−ｌｅｓｉｏｎ  ｄｅｌａｙ）では、アパミン結合部位密度は、同側でよりも対側で有意に高かった（＋２９％，Ｐ＜０．０１）。損傷から３週間後では、結合レベルは、対照グループと比較して両側双方で増大した（テューキーの検定、＋４０％、Ｐ＜０．０５）。
【００５２】
前庭神経上核（ＳＶＮ、図３、表１）に関して、２元ＡＮＯＶＡは、アパミン結合部位のレベルに対する、相互作用（Ｆ２，１７４＝１４．４６，Ｐ＜０．００１）および損傷後の時間の作用（Ｆ２，１７４＝１５３．１，Ｐ＜０．００１）、および病変の有意な作用（Ｆ１，１７４＝４．９５，Ｐ＜０．００３）を示した。ＵＶＮから１週間後では、アパミン結合部位密度は、対照と比較して同側で有意に増大し、対側の病変部位でさらにより有意に増大した（それぞれ＋１２９および＋２４９％、Ｐ＜０．００１）。結合レベルは、同側よりも対側で有意に高かった（Ｐ＜０．０１）。さらに、ＵＶＮから３週間後では、アパミン結合は、対照と比較して両側で有意に増大したが、損傷から１週間後で観察した値と比較して有意に減少していた（それぞれ、Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５）。この時点で、２つの側部の間に結合のバリエーションは観察されなかった。
【００５３】
前庭神経外側核（ＬＶＮ，図３，表１）では、データ解析は、アパミン結合に関する、病変の作用（Ｆ１，１９６＝５．６４、Ｐ＜０．０５）、および損傷後の時間の作用（Ｆ２，１９６＝１９．２３、Ｐ＜０．０１）を明らかにしたが、２つの要因の間に相互作用はなかった（Ｆ２，１９６＝０．８６，ＮＳ）。テューキーの検定は、ＵＶＮから１週間後で、結合レベルが、ＳＶＮおよびＭＶＮのように対照と比較して病変の対側（＋１４０％，Ｐ＜０．０１）および同側（＋１０８％，Ｐ＜０．０５）で有意に増大したことを示した。有意な結合のバリエーションは、対側の結合レベルが同側のレベルより高い場合であっても、この時点で２つの側部の間では見出されなかった。さらに、ＵＶＮから３週間後では、結合レベルは、対照と同様であった。対照的に、前庭神経下核では、アパミン結合レベルのバリエーションは、対照と比較して、かつ損傷後の時点に関わらず、ＵＶＮの後に見出されなかった（表１）。
【００５４】
結論：まとめると、これらの知見は、一側性前庭神経切除が、侵襲とは反対の脳側部でより顕著である、前庭神経核でのアパミン結合部位密度の両側での増大を誘導することを裏付けた。アパミン結合部位の密度の増大は、それがＵＶＮ後１Ｗで統計的に有意であるが、ＵＶＮ後３Ｗではもはや有意でないため、一過性である。
【００５５】
実施例２：前庭複合体に関連する核
図４により、下オリーブの３つの部分：ＩＯＤ、ＩＯＭ、およびＩＯＰ、それぞれ下オリーブの背側副オリーブ核、内側副オリーブ核、および主核における、［１２５Ｉ］アパミン結合部位の密度に及ぼす一側性前庭神経切除の作用が示される。シャムのネコのグループ（ｎ＝４）および一側性前庭神経切除から１週間後（１Ｗ）および３週間後（３Ｗ）のネコのグループ（ｎ＝グループごとに４）における結合レベルのバリエーションを評価する。データを、構造におけるＵＶＮの同側および対側での結合の値として提供する。結果を、オートラジオグラム由来のタンパク質１ｍｇあたりに特異的に結合するフェムトモルの［１２５Ｉ］アパミンの平均値およびＳ．Ｅ．Ｍ．として表す。「＃」，Ｐ＜０．０５（それぞれ、各インタクトな側および損傷した側について１Ｗまたは３Ｗのグループ対シャムのグループ）。
【００５６】
より具体的には、図４および表１によると、下オリーブ（ＩＯ）の複合体で、ＵＶＮは、下オリーブの主核（ＩＯＰ）、内側副オリーブ核（ＩＯＭ）、および背側副オリーブ核（ＩＯＤ）においてアパミン結合部位のレベルの減少を誘導した。全ての小部分において、２元ＡＮＯＶＡは、アパミン結合部位レベルに対する、損傷後の時間の作用（Ｆ２，９２≧５．３２，Ｐ＜０．０１）を明らかにしたが、有意な相互作用（Ｆ２．９２≦０．７４，有意性なし）および病変の作用（Ｆ１．９２≦０．４２，ＮＳ）はなかった。テューキーの検定は、ＩＯＭおよびＩＯＤにおけるアパミン結合部位密度が、試験される病変の側部が何かに関わらず、ＵＶＮから１週間後および３週間後に有意に低下したことを示した（Ｐ＜０．０５）。下オリーブの主核では、両側での結合レベルの低下の傾向のみが、ＵＶＮから１週間後および３週間後に観察された。孤束の内側核および迷走神経背側運動核（表１）では、データ解析は、ＵＶＮが、損傷後の時間および病変の側部が何であるかに関わらず、アパミン結合部位のレベルの差異をもたらさなかったことを示した（相互作用および時間、Ｆ２，４４≦０．５８，ＮＳ；病変  Ｆ１，４４≦１．３２，  ＮＳ）。
【００５７】
結論
前庭神経核とは反対に、下オリーブ複合体では、ＳＫチャネルの発現は、ＵＶＮから１週間後および３週間後に、内側副オリーブ核および背側副オリーブ核（ＩＯＭおよびＩＯＤ）で有意に低減されるが、下オリーブの主核では低減されない。インタクトな側および損傷した側の間の発現の差異は、このレベルでは観察されない。
【００５８】
実施例３：一側性前庭神経切除の後の機能的な変化
姿勢機能の回復：曲線Ａで示されるように、前庭の求心路遮断の後に記録したデータは、個別の参照と関連し、１と呼ばれる手術前の値（１は５０ｃｍ２近くである）で正規化される。平均の標準誤差（Ｓ．Ｅ．Ｍ．）を、垂直線として記録する。直立する四本足の動物では、前庭症候群は、４つの肉球により区切られた支持面の増大をもたらす。このパラメータは、姿勢の安定性および回復の良好な推定を提供する。これは、前庭の求心路遮断により誘導される前足および後足の伸筋および屈筋の非対称的な緊張（ｔｏｎｉｃ  ａｓｙｍｍｅｔｒｉｅｓ）を呈する。手術前の対照の値への戻り（２６日）は、ＵＶＮ−ＮａＣｌのグループ（４２日）よりもＵＶＮ−アパミンのグループで速かった（ｐ＜０．０００１）（図５）。
【００５９】
眼振：曲線Ｂに示されるように、各データ点は、４匹の動物に関する１０秒でのＨＳＮの迅速な位相の移動の平均数を表す（サンプリングあたり、動物あたり５回の反復測定）。エラーバーは、Ｓ．Ｅ．Ｍ．を表す。
【００６０】
特に、ＵＶＮの翌日では、自発眼振の頻度は、それぞれ、ＵＶＮ−ＮａＣｌのグループで１５の拍動／１０秒およびＵＶＮ−アパミンのグループで１１の拍動／１０秒であった。これらの２つの実験グループにおける眼の拍動の回数は有意に減少し、ＵＶＮ−アパミンのグループで５日目に、ＵＶＮ−ＮａＣｌのグループで８日目に対照の値に達した（ｐ＜０．０００１）（図５）。
【００６１】
自発運動平衡の回復：曲線Ｃに示されるように、手術後の最大パフォーマンスのパーセント（縦座標）を、日数での手術後の時間（横座標）の関数として表す。Ｓ．Ｅ．Ｍ．を、垂直線として記録する。姿勢の機能および眼振のデータと一致して、ＵＶＮ−アパミンのグループの動物は、求心路遮断から２６日後に、動的な自発運動平衡をより迅速に回復し、最大パフォーマンス（Ｍａｘ  Ｐ．）で回転はりを横切った。ＵＶＮ−ＮａＣｌのグループのネコは、求心路遮断から４２日後に、Ｍａｘ  Ｐ．に達した（ｐ＜０．０００１；図５）。
【００６２】
結論
アパミン感受性ＳＫチャネルの拮抗は、ＵＶＮにより誘導される前庭症候群の経時変化を有意に変える。眼球運動および姿勢−自発運動の欠陥の低減は、最初のアパミン投与後２４時間から顕著であり、この作用は、薬物適用期間にわたり十分に持続する。実際に、水平自発眼振の有意な低減は、アパミンの最初の投与から顕著であり、この作用は、自発眼振の発現の期間を有意に低減する。静的な前庭の欠陥（姿勢表面および水平眼振のパラメーター）および動的な前庭の欠陥（自発運動平衡機能）に及ぼす即時的なアパミンの作用を、アパミンの持続作用と区別しなければならない。
【００６３】
実施例４：ラットの一側性前庭神経切除のモデルに及ぼすアパミン、ＡＧ５２５Ｅ１およびＮＳ８５９３の処置の作用
材料および方法
一側性前庭神経切除（ＵＶＮ）を、成年の雌性のラットに行って一側性前庭障害を誘導した。次に、小コンダクタンスカルシウム活性化Ｋ＋チャネルのアンタゴニストであるアパミン、ＡＧ５２５Ｅ１およびＮＳ８５９３を、４日間、すなわちこの症候群の急性のフェーズの間、１日１回、二重盲検条件で、ＵＶＮ動物に腹腔内投与した。その後、ＵＶＮ後１０日間にわたり、適切な行動試験を使用して、姿勢−自発運動の欠陥の重症度を評価した。前庭症候群の主観的なスコア付けを、以前公開されている方法（Ｐｅｒｉｃａｔ  ｅｔ  ａｌ  ．  ２０１７；  Ｔｉｇｈｉｌｅｔ  ｅｔ  ａｌ  ．  ２０１７）により行った。この方法により、損傷した動物の前庭症候群の重症度を、観察される様々な前庭の兆候（ＶＳ）にスコアを主観的に割り当てることにより評価した：−左右軸での動物の自発的または誘発される回転（宙返り）：０〜３のスコア（０：ＶＳの不存在；１：わずかな前庭の兆候；２：顕著なＶＳ；３：最大のＶＳ）−縦軸による動物からの自発的なまたは誘発される回転（旋回）：０〜２のスコア（０：ＶＳの不存在；１：顕著なＶＳ；２：最大のＶＳ）−反復する頭部の垂直移動（上下運動）：０〜１のスコア（０：ＶＳの不存在；１：ＶＳの存在）−病変の側部での頭部の症状：０〜３のスコア（以下を参照）−壁に対して立つことができない：０〜１のスコア（以下を参照）−前進移動が困難であることおよび／または運動パターンの変化：０〜４のスコア（０：ＶＳの不存在；１：わずかな前庭の兆候；２：明白なＶＳ；３：顕著なＶＳ；４：最大のＶＳ）−迅速な垂直方向の牽引を経験する際の動物の身体の回転：０〜３のスコア（以下を参照）。各動物の総スコアを、これらの異なるスコアを合計することにより得た。
【００６４】
アパミン
図６は、経時的な前庭症候群の重症度（図６Ａ）、動物の速度（図６Ｂ）、カバーされる距離の合計（図６Ｃ）、不動時間（図６Ｄ）、および動物の経路の形状（正規化した蛇行）（図６Ｅ）に及ぼすアパミン処置の作用を示す。図６では、２元ＡＮＯＶＡにて、陰性対照グループと比較して、「＊」は、有意差を表し（ｐ＜０．００５）、「＊＊」は、高い有意差を表し（ｐ＜０．０１）、「＊＊＊」は、著しい有意差を表す。（ｐ＜０．００１）。
【００６５】
図６で明らかであるように、一側性の前庭の喪失後に投与される０．６ｍｇ／ｋｇのアパミンは、姿勢−自発運動の欠陥の低減をもたらし、前庭症候群のより迅速な減弱（７日目で統計的に有意である）（図６Ａ）、７日目および１０日目での動物の速度およびカバーされる距離の有意な増大（図６Ｂ、６Ｃ）、神経切除後１日での不動時間の低下、ならびに自発運動パターンの改善（図６Ｄ、６Ｅ）をもたらす。
【００６６】
ＡＧ５２５Ｅ１およびＮＳ８５９３：
図７は、前庭症候群の重症度（図７Ａ、７Ｃ）、および不動時間（図７Ｂ）に及ぼすＡＧ５２５Ｅ１（１０ｍｇ／ｋｇ）およびＮＳ８５９３（３０ｍｇ／ｋｇ）の処置の作用を示す。図７では、２元ＡＮＯＶＡにより陰性対照と比較して、「＊」は、有意差を表す（ｐ＜０．０５）。２つの他のＳＫチャネルアンタゴニストであるＡＧ５２５Ｅ１またはＮＳ８５９３の投与は、ＡＧ５２５Ｅ１では１日目に（図２Ａ）、ＮＳ８５９３では１日目および２日目（図２Ｃ）に、前庭症候群の有意な減少を誘導するようである。ＡＧ５２５Ｅ１の投与はまた、１日目からＵＶＮにより引き起こされる不動時間を減少させる傾向をもたらす（図２Ｂ）。
【００６７】
論述／結論
前庭症候群の急性のフェーズの間の小コンダクタンスカルシウム活性化Ｋ＋チャネルの阻害剤、特にアパミン、またＡＧ５２５Ｅ１およびＮＳ８５９３などの他の阻害剤の投与は、症候群の重症度（アパミン、ＡＧ５２５Ｅ１、ＮＳ８５９３）および不動時間（アパミン）の有意な低下、動物の速度の増大（アパミン）、カバーされる距離の合計（アパミン）、ならびに動物の経路の形状−正規化した蛇行の変化（アパミン）により示される有意な抗回転性めまい作用を提供する。
【００６８】
これらの阻害剤、特にアパミンの即時性の調節作用は、その興奮性がＵＶＮ後に著しく低減される、損傷した側でのＶＳＮに対する強力な刺激作用からもたらされ得、その興奮性がすでに同側のＶＮの阻害性の制御の除去により強力に刺激されている、反対側のＶＳＮに対しそれほど有効でない作用を有する。よって、抗回転性めまい作用は、対向するＶＮ間の活性の不均衡の低減の結果であると思われる。最終的に、同時に起こる阻害性作用により対向するＶＮ間の不均衡を低減することを目的とする前庭抑制剤の作用とは反対に、アパミンの興奮性作用は、神経の超興奮性を増幅させることを介して、同様の結果に達する。補償の急性のフェーズですでに観察され、かつその後のフェーズに延長する、アパミン投与下での前庭性の補償の加速は、このような現象の例である。
【００６９】
参照文献
【表２】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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