(57)【要約】本発明は、メサコニンの結晶形に関する。具体的には、本発明は、メサコニンの結晶形Ａ、結晶形Ｂ、および結晶形Ｃ、ならびにそれらの調製方法に関する。当該方法では、メサコニンを溶媒中で結晶化し、次いで粗製物を乾燥させて、目的の結晶形を得る。本発明に係るメサコニンの結晶形は、良好な溶解性、良好な安定性、低い吸湿性、長期的な保存特性、および良好な再現性を有し、薬物として開発される良好な将来性を有している。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
メサコニンの結晶形Ａであって、当該メサコニンの結晶形Ａは、Ｃｕ−Ｋα放射を用いる粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、８．３°±０．２°、１０．６°±０．２°、１３．３°±０．２°、１３．７°±０．２°、および１９．０°±０．２°の２θで特徴的ピークを示すことを特徴とする、メサコニンの結晶形Ａ。
【請求項２】
前記メサコニンの結晶形Ａはまた、Ｃｕ−Ｋα放射を用いる粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、１１．６°±０．２°、１９．８°±０．２°、２４．２°±０．２°、および２６．９°±０．２°の２θで特徴的ピークを示すことを特徴とする、請求項１に記載のメサコニンの結晶形Ａ。
【請求項３】
請求項１または２に記載のメサコニンの結晶形Ａを調製する方法であって、当該方法は、
メサコニンを溶媒中に添加し、次いで得られた溶液を５０〜９０℃に加熱して当該メサコニンを溶解させて、メサコニン溶液を得るステップ（１）と；
前記メサコニン溶液を−１０〜３０℃に冷却し、当該溶液を撹拌して結晶を沈殿させ、次いで濾過を行うステップ（２）と；
前記ステップ（２）における濾過によって得られた固体を真空で乾燥させて、メサコニンの結晶形Ａを得るステップ（３）とを含むことを特徴とする、方法。
【請求項４】
前記溶媒は、水、メタノール、エタノール、イソプロパノール、アセトン、およびアセトニトリルからなる群から選ばれる１つまたは複数であることを特徴とする、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
メサコニンの結晶形Ｂであって、当該メサコニンの結晶形Ｂは、Ｃｕ−Ｋα放射を用いる粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、６．６°±０．２°、９．２°±０．２°、１３．４°±０．２°、１４．３°±０．２°、および１５．５°±０．２°の２θで特徴的ピークを示すことを特徴とする、メサコニンの結晶形Ｂ。
【請求項６】
前記メサコニンの結晶形Ｂはまた、Ｃｕ−Ｋα放射を用いる粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、１８．３°±０．２°、２０．２°±０．２°、２３．６°±０．２°、および２４．２°±０．２°の２θで特徴的ピークを示すことを特徴とする、請求項５に記載のメサコニンの結晶形Ｂ。
【請求項７】
請求項５または６に記載のメサコニンの結晶形Ｂを調製する方法であって、当該方法は、
請求項１に記載のメサコニンの結晶形Ａを有機溶媒中に４０〜６０℃で懸濁および撹拌して、懸濁液を得るステップ（１）と；
前記懸濁液を−１０〜３０℃に冷却し、当該懸濁液を撹拌して結晶を沈殿させ、次いで濾過を行うステップ（２）と；
前記ステップ（２）における濾過によって得られた固体を真空で乾燥させて、メサコニンの結晶形Ｂを得るステップ（３）とを含むことを特徴とする、方法。
【請求項８】
前記有機溶媒は、Ｎ−メチルピロリドンであることを特徴とする、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
メサコニンの結晶形Ｃであって、当該メサコニンの結晶形Ｃは、Ｃｕ−Ｋα放射を用いる粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、７．９０°±０．２°、１０．１°±０．２°、１３．０°±０．２°、１７．４°±０．２°、および１９．４°±０．２°の２θで特徴的ピークを示すことを特徴とする、メサコニンの結晶形Ｃ。
【請求項１０】
前記メサコニンの結晶形Ｃはまた、Ｃｕ−Ｋα放射を用いる粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、１９．９°±０．２°、２１．０°±０．２°、２３．８°±０．２°、及び２６．６°±０．２°の２θで特徴的ピークを示すことを特徴とする、請求項９に記載のメサコニンの結晶形Ｃ。
【請求項１１】
請求項９または１０に記載のメサコニンの結晶形Ｃを調製する方法であって、当該方法は、
請求項５に記載のメサコニンの結晶形Ｂを真空で加熱して、メサコニンの結晶形Ｃを得るステップを含むことを特徴とする、方法。
【請求項１２】
前記加熱の温度は、１４０〜２３０℃、好ましくは１７０〜２００℃であることを特徴とする、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
請求項１もしくは２に記載のメサコニンの結晶形Ａ、請求項５もしくは６に記載のメサコニンの結晶形Ｂ、または請求項９もしくは１０に記載のメサコニンの結晶形Ｃと、薬学的に許容される賦形剤とを含む、薬学的組成物。
【請求項１４】
請求項１もしくは２に記載のメサコニンの結晶形Ａ、請求項５もしくは６に記載のメサコニンの結晶形Ｂ、請求項９もしくは１０に記載のメサコニンの結晶形Ｃ、または請求項１３に記載の薬学的組成物の、強心剤および抗心不全剤の調製における使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
〔技術分野〕
本発明は、結晶形（crystalline form）の分野に関し、具体的にはメサコニンの結晶形およびその調製方法に関する。
【０００２】
〔背景技術〕
漢方薬のトリカブトは、Ａｃｏｎｉｔｕｍ  ｃａｒｍｉｃｈａｅｌｉ  Ｄｅｂｘ．の細根から得られる加工品であり、これは、陽を回復させ、風冷湿気を除去し、経線を加温して疼痛を緩和することによる虚脱からの救出の効果を有する（volume 1, Chinese pharmacopoeia, 2015 edition）。そしてそれは、臨床において有名な漢方薬として広く使用されている。
【０００３】
以下の文献において記録されているように、研究により、メサコニンがトリカブトの主要な強心活性成分であることが見出されている：Xiu-Xiu Liu, et al, Chem. Pharm. Bull, 2012, 60(1), 144-149; Xi-Xian Jian, et al, Nat. Prod. Commun, 2012, 7(6), 713-720; 中国特許, 2012, 第ＣＮ１０２１４６０５７Ｂ号; Zhong-Tang Zhang, et al, Nat. Prod. Commun, 2015, 10(12)，2075-2084。それゆえ、メサコニンは、抗心不全薬およびその他の疾病の治療用薬剤に発展する見込みを有する。
【０００４】
メサコニンは、Ｃ２４Ｈ３９ＮＯ９の分子式およびＣＡＳ番号：６７９２−０９−２とともに、Ｎ−メチル−１α，６α，１６β，１８−テトラメトキシル−４−メチル−アコニット−３α，８β，１３β，１４α，１５α−ペントールの化学名を有し、そして以下の構造式によって表される構造を有する。
【０００５】
【化１】
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【０００６】
中国特許ＣＮ１０２１４６０５７Ｂ号には、メサコニンの調製方法、およびそれによって得られたメサコニンがアモルファス粉末であることが開示されている。しかし、当該アモルファス粉末は吸湿しやすく、長期的保存に適していない。
【０００７】
現在、メサコニンの結晶形に関する報告がないため、物理的および化学的特性、ならびに生物学的利用能（bioavailability）等が改善されたメサコニンの結晶形の研究および開発が必要とされている。
【０００８】
〔発明の概要〕
本発明の目的は、溶解性、安定性、吸湿性、および加工適合性（濾過、乾燥等）が改善されたメサコニンの結晶形を提供することにある。
【０００９】
本発明の第１の態様では、Ｃｕ−Ｋα放射を用いる粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、８．３°±０．２°、１０．６°±０．２°、１３．３°±０．２°、１３．７°±０．２°、および１９．０°±０．２°の２θで特徴的ピークを示す、メサコニンの結晶形（以下、メサコニンの結晶形Ａと称する）を提供する。
【００１０】
さらに、本発明に係るメサコニンの結晶形Ａはまた、Ｃｕ−Ｋα放射を用いる粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、１１．６°±０．２°、１９．８°±０．２°、２４．２°±０．２°、および２６．９°±０．２°の２θで特徴的ピークを示す。
【００１１】
限定されないが、本発明に係るメサコニンの結晶形Ａは、図１に示される粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）スペクトルを示す。
【００１２】
限定されないが、本発明に係るメサコニンの結晶形Ａは、図２に示される熱重量分析（ＴＧＡ）スペクトルを示す。
【００１３】
限定されないが、本発明に係るメサコニンの結晶形Ａは、図３に示される示差走査熱量測定（ＤＳＣ）スペクトルを示す。
【００１４】
本発明はまた、メサコニンの結晶形Ａの調製方法であって、
メサコニンを溶媒中に添加し、次いで得られた溶液を５０〜９０℃（好ましくは６０〜８０℃まで昇温）に加熱して当該メサニコンを溶解させて、メサコニン溶液を得るステップ（１）と；
前記メサコニン溶液を−１０〜３０℃（好ましくは０〜３０℃、より好ましくは２０〜３０℃）に冷却し、当該溶液を撹拌して結晶を沈殿させ、次いで濾過を行うステップ（２）と；
前記ステップ（２）における濾過によって得られた固体を真空で乾燥させて、メサコニンの結晶形Ａを得るステップ（３）とを含む方法を提供する。
【００１５】
本発明に係るメサコニンの結晶形Ａの調製方法において、前記溶媒は、水、メタノール、エタノール、イソプロパノール、アセトン、およびアセトニトリルからなる群から選ばれる１つまたは複数である。
【００１６】
本発明の第２の態様では、Ｃｕ−Ｋα放射を用いる粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、６．６°±０．２°、９．２°±０．２°、１３．４°±０．２°、１４．３°±０．２°、および１５．５°±０．２°の２θで特徴的ピークを示す、他のメサコニンの結晶形（以下、メサコニンの結晶形Ｂと称する）を提供する。
【００１７】
さらに、本発明に係るメサコニンの結晶形Ｂはまた、Ｃｕ−Ｋα放射を用いる粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、１８．３°±０．２°、２０．２°±０．２°、２３．６°±０．２°、および２４．２°±０．２°の２θで特徴的ピークを示す。
【００１８】
限定されないが、本発明に係るメサコニンの結晶形Ｂは、図６に示されるＸＲＰＤスペクトルを示す。
【００１９】
限定されないが、本発明に係るメサコニンの結晶形Ｂは、図７に示されるＴＧＡスペクトルを示す。
【００２０】
限定されないが、本発明に係るメサコニンの結晶形Ｂは、図８に示されるＤＳＣスペクトルを示す。
【００２１】
本発明はまた、メサコニンの結晶形Ｂの調製方法であって、
メサコニンの結晶形Ａを有機溶媒中に投入して４０〜６０℃で懸濁および撹拌して、懸濁液を得るステップ（１）と；
前記懸濁液を−１０〜３０℃（好ましくは０〜３０℃、より好ましくは２０〜３０℃）に冷却し、当該懸濁液を撹拌して結晶を沈殿させ、次いで濾過を行うステップ（２）と；
前記ステップ（２）における濾過によって得られた固体を真空で乾燥させて、メサコニンの結晶形Ｂを得るステップ（３）とを含む方法を提供する。
【００２２】
本発明に係るメサコニンの結晶形Ｂの調製方法において、前記有機溶媒は、Ｎ−メチルピロリドンである。
【００２３】
本発明の第３の態様では、Ｃｕ−Ｋα放射を用いる粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、７．９０°±０．２°、１０．１°±０．２°、１３．０°±０．２°、１７．４°±０．２°、および１９．４°±０．２°の２θで特徴的ピークを示す、他のメサコニンの結晶形（以下、メサコニンの結晶形Ｃと称する）を提供する。
【００２４】
さらに、本発明に係るメサコニンの結晶形Ｃはまた、Ｃｕ−Ｋα放射を用いる粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、１９．９°±０．２°、２１．０°±０．２°、２３．８°±０．２°、および２６．６°±０．２°の２θで特徴的ピークを示す。
【００２５】
限定されないが、本発明に係るメサコニンの結晶形Ｃは、図１０に示されるＸＲＰＤスペクトルを示す。
【００２６】
限定されないが、本発明に係るメサコニンの結晶形Ｃは、図１１に示されるＴＧＡスペクトルを示す。
【００２７】
限定されないが、本発明に係るメサコニンの結晶形Ｃは、図１２に示されるＤＳＣスペクトルを示す。
【００２８】
本発明はまた、メサコニンの結晶形Ｂを真空で加熱して、メサコニンの結晶形Ｃを得るステップを含む、メサコニンの結晶形Ｃの調製方法を提供する。
【００２９】
本発明に係るメサコニンの結晶形Ｃの調製方法において、前記加熱の温度は、１４０℃〜２３０℃、好ましくは１７０℃〜２００℃である。
【００３０】
本発明の第４の態様では、本発明のメサコニンの結晶形Ａ、メサコニンの結晶形Ｂ、またはメサコニンの結晶形Ｃと、薬学的に許容される賦形剤とを含む薬学的組成物を提供する。
【００３１】
本発明の第５の態様では、メサコニンの結晶形Ａ、メサコニンの結晶形Ｂ、もしくはメサコニンの結晶形Ｃ、またはそれらの薬学的組成物の、強心剤および抗心不全剤の調製における使用を提供する。
【００３２】
本発明によって調製されるメサコニンの結晶形は、安定性、吸湿性、および加工適合性において、アモルファスのメサコニンよりも優れている。
【００３３】
〔図面の簡単な説明〕
図１は、メサコニンの結晶形ＡのＸＲＰＤスペクトルである。
【００３４】
図２は、メサコニンの結晶形ＡのＴＧＡスペクトルである。
【００３５】
図３は、メサコニンの結晶形ＡのＤＳＣスペクトルである。
【００３６】
図４は、安定性試験の間のメサコニンの結晶形Ａの試料の比較ＸＲＰＤスペクトルである。
【００３７】
図５は、１８０℃に加熱した前後のメサコニンの結晶形Ａの比較ＸＲＰＤスペクトルである。
【００３８】
図６は、メサコニンの結晶形ＢのＸＲＰＤスペクトルである。
【００３９】
図７は、メサコニンの結晶形ＢのＴＧＡスペクトルである。
【００４０】
図８は、メサコニンの結晶形ＢのＤＳＣスペクトルである。
【００４１】
図９は、１１５℃に加熱した前後のメサコニンの結晶形Ｂの比較ＸＲＰＤスペクトルである。
【００４２】
図１０は、メサコニンの結晶形ＣのＸＲＰＤスペクトルである。
【００４３】
図１１は、メサコニンの結晶形ＣのＴＧＡスペクトルである。
【００４４】
図１２は、メサコニンの結晶形ＣのＤＳＣスペクトルである。
【００４５】
〔発明を実施する形態〕
後述する実施例は、本発明をさらに詳細に説明するが、本発明の範囲はそれらに限定されない。
【００４６】
後述する実施例において使用されたメサコニンは、以下の方法によって調製した。
【００４７】
Ｉ．Ａｃｏｎｉｔｕｍ  ｓｏｏｎｇａｒｉｃｕｍ  Ｓｔａｐｆのトリカブト植物からの全アルカロイドの抽出
（１）Ａｃｏｎｉｔｕｍ  ｓｏｏｎｇａｒｉｃｕｍ  Ｓｔａｐｆのトリカブト植物の乾燥根１０ｋｇを粉砕し、次いで２０メッシュ篩で篩い、粉末を得た；
（２）５‰硫酸および８５％エタノールを含む水溶液８０Ｌ、３６Ｌおよび２４Ｌで、Ａｃｏｎｉｔｕｍ  ｓｏｏｎｇａｒｉｃｕｍ  Ｓｔａｐｆのトリカブト植物の粉末を、各抽出３回および２時間還流下で順に抽出し、次いで混合物を濾過し、濾液を混ぜ合わせた；
（３）濾液を減圧下で濃縮して、流体抽出物の相対密度が１．０５〜１．１０となるまでエタノールを回収し、次いで流体抽出物０．４６ｋｇを収集した；
（４）流体抽出物に１．４Ｌの水で希釈し、アンモニア水でアルカリ化してｐＨ＝１０に調整し、次いで抽出器において酢酸エチルで抽出し（２Ｌ×３回）、各回５〜１０分間撹拌し、抽出物を収集した；
（５）得られた抽出物を減圧下で濃縮して、酢酸エチルを回収し、全アルカロイド１２９ｇを得た。全アルカロイドをサンプリングし、ＨＰＬＣ法によって全アルカロイド中のアコニチンの百分率での含有量を測定した。上記で測定した百分率での含有量および全アルカノイドの湿重量（wet weight）に基づく計算を通して、全アルカロイド中のアコニチン（Ｉ）の全含有量は、収率０．４２％で約４２．５ｇであった。
【００４８】
ＩＩ．メサコニンの調製
（１）アコニン（ＩＩ）の調製
【００４９】
【化２】
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【００５０】
１００ｇの全アルカロイド（３３ｇのアコニチンを含む）を５００ｍｌの９５％エタノールに溶解した後、７．２ｇ（７８ｍｍｏｌ）の水酸化ナトリウムをそれに加え、室温で２時間撹拌し、減圧下で溶媒を回収して、１２０ｇの固体を得た。固体を１０００ｍｌの水で希釈し、ジクロロメタンにて抽出した（５００ｍｌ×２回）。水相は、濃塩酸でｐＨ＝５に調整し、次いでエタノール中の水酸化ナトリウムの希釈溶液でｐＨ＝１１〜１２に調整した。得られた混合物を乾くまで減圧下で濃縮して、９０ｇの固体を得た。ジクロロメタン−無水エタノール（９：１；Ｖ／Ｖ）９００ｍｌを固体に加えて、加熱下で溶解した。結果として得られた混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、固体を得た。結果として得られた固体を加熱沸騰したイソプロパノール−水（１００：５）中で結晶化して、２２．５ｇの目的の化合物を得た。
【００５１】
収率８６％；白色のアモルファス粉末；Ｃ２５Ｈ４１ＮＯ９。
【００５２】
（２）３，１４，１５−トリアセチルアコニン（ＩＩＩ）の調製
【００５３】
【化３】
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【００５４】
１０．０ｇ（２０ｍｍｏｌ）のアコニン（ＩＩ）を７．１ｇ（７０ｍｍｏｌ）の無水酢酸および１００ｍｌのピリジンと混合し、還流下で２．５時間反応させた。反応後、結果として得られた混合物を減圧下で濃縮して、残渣を得た。残渣を１７０ｍｌの水で希釈し、アンモニア水でｐＨ＝９〜１０にアルカリ化し、次いで結果として得られた混合物をジクロロメタンで抽出した（８０ｍｌ×３）。抽出物を混ぜ合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮して、固体を得た。結果として得られた固体を、溶離剤としてジクロロメタン−無水エタノール（２００：１）を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供して、１０．７ｇの目的の化合物を得た。
【００５５】
収率８５．６％；白色のアモルファス粉末；Ｃ３１Ｈ４７ＮＯ１２。
【００５６】
（３）Ｎ−デスエチル−３，１４，１５−トリアセチルアコニン（Ｖ）の調製
【００５７】
【化４】
2021512941.tif 000006
【００５８】
１０．０ｇ（１７ｍｍｏｌ）の３，１４，１５−トリアセチルアコニン（ＩＩＩ）を１００ｍｌの氷酢酸中に溶解し、９．９ｇ（６６ｍｍｏｌ）のＮ−ブロモスクシンイミドをそれに加え、混合物を室温で２時間撹拌した。次いで、得られた混合物を減圧下で濃縮して、固体を得た。固体を少量のジクロロメタン中に溶解し、１５０ｍｌの水をそれに加えた。結果として得られた混合物を濃アンモニア水でｐＨ＝１０にアルカリ化し、次いでジクロロメタンで抽出した（８０ｍｌ×２回）。抽出物を混ぜ合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮して、１０．５ｇの固体を得た。結果として得られた固体を、溶離剤として石油エーテル−アセトン（２：１）を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供して、６．４ｇの目的の化合物を得た。
【００５９】
収率６７．０％；白色のアモルファス粉末；Ｃ２９Ｈ４３ＮＯ１２。
【００６０】
（４）３，１４，１５−トリアセチルメサコニン（ＶＩＩ）の調製
【００６１】
【化５】
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【００６２】
１０ｇ（１７ｍｍｏｌ）のＮ−デスエチル−３，１４，１５−トリアセチルアコニン（Ｖ）を２５ｍｌのテトラヒドロフラン中に溶解し、室温で２ｍｌの４０％ホルムアルデヒド水溶液および１ｍｌの氷酢酸をそれに加え、３０分間撹拌しながら温度を維持した。次いで、７．１ｇ（３３．５ｍｍｏｌ）のＮａＢＨ（ＯＡｃ）３をそれに加え、結果として得られた混合物を３０分間撹拌した。混合物を濃アンモニア水を用いることによってｐＨ９＝に調整し、希釈のために１５ｍｌの水をそれに加えた。結果として得られた混合物を２０ｍｌのジクロロメタンで２回抽出し、抽出物を混ぜ合わせ、順に、水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、乾くまで減圧下で濃縮して、５．５ｇの固体を得た。固体を溶離剤としてクロロホルム−メタノール（９：１）を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供して、５．４１ｇの目的の化合物を得た。
【００６３】
収率５３．１％；白色のアモルファス粉末；Ｃ３０Ｈ４５ＮＯ１２。
【００６４】
（５）メサコニン（ＩＸ）の調製
【００６５】
【化６】
2021512941.tif 000008
【００６６】
１０ｇ（１６．３ｍｍｏｌ）の３，１４，１５−トリアセチルメサコニン（ＶＩＩ）を７５ｍｌの９５％エタノール溶液中に溶解し、２．２９ｇ（５７．２ｍｍｏｌ）の水酸化ナトリウムをそれに加え、混合物を３０分間還流下で反応させた。反応液を室温に冷却し、濃塩酸を用いてｐＨ＝５に調整し、次いでエタノール中の水酸化ナトリウムの希釈溶液を用いてｐＨ＝１１〜１２に調整した。不溶物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、固体を得た。固体を１１０ｍｌのジクロロメタン−無水エタノール（９：１；Ｖ／Ｖ）中に溶解し、結果として得られた溶液を吸引濾過し、濾液を乾くまで減圧下で濃縮して、７．２２ｇのメサコニンを９１．１％の収率で得た。
【００６７】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：３．０７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．４，６．０Ｈｚ，Ｈ−１β），３．７５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３β），４．１５（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，Ｈ−６β），３．９３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，Ｈ−１４β），４．４９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，Ｈ−１５β），３．１９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，Ｈ−１６），２．９１（１Ｈ，ｓ，Ｈ−１７），３．６５，３．７４（各１Ｈ，ＡＢｑ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，Ｈ２−１８），２．４８，２．７９（各１Ｈ，ＡＢｑ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，Ｈ２−１９），２．３４（３Ｈ，ｓ，ＮＣＨ３），３．２６（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ３−１），３．３４（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ３−６），３．６４（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ３−１６），３．３２（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ３−１８）。
【００６８】
〔実施例１：メサコニンの結晶形Ａの調製〕
４０ｍｌのイソプロパノールを１０ｇのメサコニンに加え、混合物を水浴中還流下で加熱して、メサコニンを溶解した。２ｍｌの水をそれに加え、撹拌下でメサコニンを結晶化した。結果として得られた混合物を一晩自然に冷却し、次いで吸引濾過した。濾過ケーキを少量のイソプロパノールで洗浄し、次いで混合物を排水して、結晶を收集した。結晶を８５℃の真空で８時間乾燥させ、白色の固体結晶を得た。試験後、白色の固体結晶はメサコニンの結晶形Ａであることを確認し、そのＸＲＰＤスペクトルを図１に示した。収率：７０％、ＨＰＬＣ：９９．７％。
【００６９】
〔実施例２：メサコニンの結晶形Ａの調製〕
４０ｍｌのイソプロパノールを１０ｇのメサコニンに加え、混合物を水浴中還流下で加熱して、メサコニンを溶解した。メサコニンを撹拌下で結晶化し、結果として得られた混合物を一晩自然に冷却し、次いで吸引濾過した。濾過ケーキを少量のイソプロパノールで洗浄し、次いで混合物を排水して、結晶を收集した。結晶を８５℃の真空で８時間乾燥させて、目的の生成物、即ちメサコニンの結晶形Ａを得た。そのＸＲＰＤスペクトルは図１と一致した。収率：７８％、ＨＰＬＣ：９９．６％。
【００７０】
〔実施例３：メサコニンの結晶形Ａの調製〕
３０ｍｌのエタノールを１０ｇのメサコニンに加え、混合物を水浴中還流下で加熱して、メサコニンを溶解した。メサコニンを撹拌下で結晶化し、結果として得られた混合物を一晩自然に冷却し、次いで吸引濾過した。濾過ケーキを少量のエタノールで洗浄し、混合物を排水して、結晶を收集した。結晶を８５℃の真空で８時間乾燥させて、目的の生成物、即ちメサコニンの結晶形Ａを得た。そのＸＲＰＤスペクトルは図１と一致した。収率：５８％、ＨＰＬＣ：９９．８％。
【００７１】
〔実施例４：メサコニンの結晶形Ａの調製〕
３０ｍｌのメタノールを１０ｇのメサコニンに加え、混合物を水浴中還流下で加熱して、メサコニンを溶解した。メサコニンを撹拌下で結晶化し、得られた混合物を一晩自然に冷却し、次いで吸引濾過した。濾過ケーキを少量のメタノールで洗浄し、次いで混合物を排水して、結晶を收集した。結晶を８５℃の真空で８時間乾燥させて、目的の生成物、即ちメサコニンの結晶形Ａを得た。そのＸＲＰＤスペクトルは図１と一致した。収率：３８％、ＨＰＬＣ：９９．８％。
【００７２】
〔実施例５：メサコニンの結晶形Ａの調製〕
３０ｍｌのイソプロパノールを１０ｇのメサコニンに加え、混合物を水浴中還流下で加熱して、メサコニンを溶解した。１０ｍｌのエタノールをそれに加え、メサコニンを撹拌下で結晶化し、結果として得られた混合物を一晩自然に冷却し、次いで吸引濾過した。濾過ケーキを少量のイソプロパノールで洗浄し、次いで混合物を排水して、結晶を收集した。結晶を８５℃の真空下で８時間乾燥させて、目的の生成物、即ちメサコニンの結晶形Ａを得た。そのＸＲＰＤスペクトルは図１と一致した。収率：６８％、ＨＰＬＣ：９９．８％。
【００７３】
〔実施例６：メサコニンの結晶形Ａの特性化〕
実施例１における方法によって調製されたメサコニンの結晶形Ａをサンプリングし、以下の試験に供した。
【００７４】
１．Ｘ線粉末回折法
メサコニンの結晶形Ａをサンプリングし、Ｃｕ，Ｋα，Ｋα１（Å）：１．５４０５９８；Ｋα２（Å）：１．５４４４２６，Ｋα２／Ｋα１強度比：０．５０、走査範囲：３°〜４０°の条件下でのＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ  Ｅｍｐｙｒｅａｎ＆Ｘ’Ｐｅｒｔ３Ｘ線粉末回折分析装置における試験に供した。メサコニンの結晶形Ａの試料のＸ線回折スペクトルは図１に示し、メサコニンの結晶形Ａの試料のＸＲＰＤスペクトルの基本情報は表１に示した。
【００７５】
【表１】
2021512941.tif 000009
【００７６】
これらの回折ピークは、メサコニンの結晶形Ａの回折ピークの詳細の全てを表すものではないということは当業者によって理解されるべきである。ＸＲＰＤの２θ値は、試験した装置、ならびに調製の間の変動およびバッチの変動により、誤差の範囲内で変化し得るため、挙げられた値は絶対的な値と見なされるべきではない。さらに、ピークの相対強度は配向効果で変化し得るため、本発明に含まれるＸＲＰＤの結果において示される強度は例示的なものであって、絶対的な比較に用いるべきではない。
【００７７】
２．熱分析
（１）．熱重量分析
適量のメサコニンの結晶形Ａの試料を、保護ガスが窒素であり、室温〜３５０℃の範囲内において１０℃／分の一定速度で昇温する条件下でＴＡ  Ｑ５０００／Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ５５００熱重量分析装置に置き、温度に伴う質量の変化を測定し、ＴＧＡ曲線（図２参照）を描いた。ＴＧＡ曲線から、結晶形Ａの試料は、１８０℃に加熱したとき、２．１％の重量損失を有したことが分かった。
【００７８】
（２）．示差走査熱量測定
適量のメサコニンの結晶形Ａの試料を、保護ガスが窒素であり、２５〜２５０℃の範囲内において１０℃／分の一定速度で昇温する条件下でＴＡ  Ｑ２０００／Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ２５００示差走査熱量測定装置に置き、メサコニンの結晶形Ａの試料を測定し、ＤＳＣ曲線（図３参照）を描いた。ＤＳＣの結果によれば、２０７．６℃（開始温度）におけるシャープな吸熱ピークの存在が示され、これはメサコニンの結晶形Ａの溶融吸熱ピークであった。
【００７９】
（３）．融点
メサコニンの結晶形Ａをサンプリングし、「融点の測定法」（『中国薬典』２０１５年版第四部の一般規則０６１２による第１方法（the first method of 0612, general rule, volume 4, the Chinese Pharmacopoeia, 2015 edition））に従って融点を測定した。結果を下記の表２に示した。
【００８０】
【表２】
2021512941.tif 000010
【００８１】
その結果、試料の溶融現象が顕著で、融点が２０６〜２０９℃の範囲内であったことが示された。
【００８２】
〔実施例７：メサコニンの結晶形Ａの安定性、溶解性、および吸湿性〕
実施例１における方法に従って調製されたメサコニンの結晶形Ａをサンプリングし、以下の試験に供した。
【００８３】
Ａ．メサコニンの結晶形Ａの安定性
メサコニンの結晶形Ａの試料を２５℃、６０％ＲＨ、および４０℃、７５％ＲＨで４週間置いた後、ＸＲＰＤ試験を行った。試験結果をメサコニンの結晶形Ａの比較試料のＸＲＰＤスペクトル（安定性試験前のメサコニンの結晶形ＡのＸＲＰＤスペクトル）と比較し、結果を図４に示した。メサコニンの結晶形Ａの他の試料を１８０℃に加熱し、次いでＸＲＰＤ試験を行った。その結果をメサコニンの結晶形Ａの比較試料のＸＲＰＤスペクトル（安定性試験前のメサコニンの結晶形ＡのＸＲＰＤスペクトル）と比較し、結果を図５に示した。
【００８４】
図４によれば、メサコニンの結晶形Ａの試料を２５℃、６０％ＲＨ、および４０℃、７５％ＲＨで４週間置いた後、ＸＲＰＤスペクトルにおける主な回折ピークの位置および相対強度は著しく変化しなかった。これは、結晶形が変化せず、依然として結晶形Ａであることを示した。図５によれば、メサコニンの結晶形Ａの試料を１８０℃に加熱した後、ＸＲＰＤスペクトルにおける主な回折ピークの位置および相対強度は著しく変化しなかった。これは、結晶形が変化せず、依然として結晶形Ａであったことを示した。以上の試験結果から、メサコニンの結晶形Ａが良好な安定性を有することが示された。
【００８５】
さらに、メサコニンの結晶形Ａをサンプリングし、「原料薬物および製剤の安定性試験のガイドライン」（『中国薬典』２０１５年版の一般規則９００１（general rule 9001, the Chinese pharmacopoeia, 2015 edition））に従って影響要因について試験した。
【００８６】
高温試験：試料を、６０℃で１０日間、開口した扁平な秤量瓶（open flat weighing bottle）に入れた。次いで、試料を安定性試験の重要検査項目に応じて試験し、Ｘ線粉末回折によって分析した。
【００８７】
高湿試験：試料を、２５℃および相対湿度９０％で１０日間、開口した扁平な秤量瓶に入れた。次いで、試料を安定性試験の重要検査項目に応じて試験し、Ｘ線粉末回折によって分析した。
【００８８】
強光照射試験：試料を、照度４５００ｌｘの条件下で１０日間、開口した扁平な秤量瓶に入れた。次いで、試料を安定性試験の重要検査項目に応じて試験するとともに、Ｘ線粉末回折によって分析した。
【００８９】
その結果、試料を１０日間、高温試験、高湿試験、および強光照射試験に供した後、Ｘ線粉末回折スペクトルにおける主な回折ピークの位置および相対強度は著しく変化しなかったことが示された。
【００９０】
メサコニンの結晶形Ａの試料をさらにサンプリングし、「融点測定法」（『中国薬典』２０１５年版第四部の一般規則０６１２による第１方法）に従って融点を測定した。結果として、試料を１０日間、上述した高温試験、高湿試験、および強光照射試験に供した後、試料の融点は、それぞれ、２０７．０〜２０８．９℃、２０６．９〜２０９．５℃、および２０７．３〜２０９．２℃であり、試験前の試料の融点（２０６．６〜２０８．４℃）と基本的には一致した。以上の試験結果から、メサコニンの結晶形Ａが良好な安定性を有することが示された。
【００９１】
Ｂ．メサコニンの結晶形Ａの溶解性
メサコニンの結晶形Ａをサンプリングし、『中国薬典』（２０１５年版凡例）による溶解度試験方法に従って試験した。結果を下記の表３に示した。
【００９２】
【表３】
2021512941.tif 000011
【００９３】
表３における結果から、メサコニンの結晶形Ａが水に溶解しやすく、これはメサコニンの結晶形Ａが良好な水溶性を有することを示すことが分かった。
【００９４】
Ｃ．メサコニンの結晶形Ａの吸湿性
『中国薬典』（２０１５年版第四部の一般規則９１０３）における「薬物の吸湿性試験のガイドライン」に従って、試験を行った。２バッチ分のメサコニンの結晶形Ａをサンプリングし、試験し、結果を表４に示した。
【００９５】
【表４】
2021512941.tif 000012
【００９６】
『中国薬典』（２０１５年版第四部の一般規則９１０３）における、吸湿性に関する規定によれば、吸湿による重量増加が２％よりも低いが０．２％以上の場合、弱吸湿性を有する。メサコニンの結晶形Ａの重量増加は、試験条件下で０．８５％であり、弱吸湿性を有し、良好な耐潮解性を有する。
【００９７】
〔実施例８：メサコニンの結晶形Ｂの調製〕
実施例１における方法に従ってメサコニンの結晶形Ａの試料１３０ｍｇを調製した。メサコニンの結晶形Ａの試料を０．３ｍｌのＮ−メチルピロリドン中に懸濁し、５０℃で２４時間撹拌した。次いで、混合物を２０〜３０℃に冷却し、撹拌して結晶化し、次いで濾過した。得られた濾過ケーキを８５℃で１０時間真空乾燥させて、白色の固体結晶を得た。試験後、白色の固体結晶はメサコニンの結晶形Ｂであることを確認し、そのＸＲＰＤスペクトルを図６に示した。ＤＳＣスペクトル（図８）から、本発明のメサコニンの結晶形Ｂは、メサコニンおよびＮ−メチルピロリドンの溶媒和物であることが示された。
【００９８】
〔実施例９：メサコニンの結晶形Ｂの調製〕
実施例１における方法に従ってメサコニンの結晶形Ａの試料４００ｍｇを調製した。メサコニンの結晶形Ａの試料を０．９ｍＬのＮ−メチルピロリドン中に懸濁し、４０℃で３６時間撹拌した。次いで、混合物を２０〜３０℃に冷却し、撹拌して結晶化し、次いで濾過した。得られた濾過ケーキを８５℃で１２時間真空乾燥させて、白色の固体結晶を得た。試験後、白色の固体結晶はメサコニンの結晶形Ｂであることを確認し、そのＸＲＰＤスペクトルは図６と一致した。
【００９９】
〔実施例１０：メサコニンの結晶形Ｂの特性化〕
実施例８における方法に従って調製されたメサコニンの結晶形Ｂをサンプリングし、以下の試験に供した。
【０１００】
１．Ｘ線粉末回折法
メサコニンの結晶形Ｂをサンプリングし、Ｃｕ，Ｋα，Ｋα１（Å）：１．５４０５９８；Ｋα２（Å）：１．５４４４２６，Ｋα２／Ｋα１強度比：０．５０，走査範囲：３°〜４０°の条件下でのＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ  Ｅｍｐｙｒｅａｎ＆Ｘ’Ｐｅｒｔ３Ｘ線粉末回折分析装置における試験に供した。メサコニンの結晶形Ｂの試料のＸ線回折スペクトルは図６に示し、メサコニンの結晶形Ｂの試料のＸＲＰＤスペクトルの基本情報は表５に示した。
【０１０１】
【表５】
2021512941.tif 000013
【０１０２】
これらの回折ピークは、メサコニンの結晶形Ｂにおいて示される回折ピークの詳細の全てを表すものではないということは当業者によって理解されるべきである。ＸＲＰＤの２θ値は、試験した装置、ならびに調製の間の変動およびバッチの変動により、誤差の範囲内で変化し得るため、挙げられた値は絶対的な値と見なされるべきではない。さらに、ピークの相対強度は配向効果で変化し得るため、本発明に含まれるＸＲＰＤの結果において示される強度は例示的なものであって、絶対的な比較に用いるものではない。
【０１０３】
２．熱分析
（１）．熱重量分析
適量のメサコニンの結晶形Ｂの試料を、保護ガスが窒素であり、室温〜３５０℃の範囲内において１０℃／分の一定速度で昇温する条件下でＴＡ  Ｑ５０００／Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ５５００熱重量分析装置に置き、温度に伴う質量の変化を測定し、ＴＧＡ曲線（図７参照）を描いた。ＴＧＡ曲線から、結晶形Ｂの試料は、室温から１１５℃まで加熱したとき、３．０％の重量損失を有し、１８５℃まで加熱したとき、１６．１％の重量損失を有したことが分かった。
【０１０４】
（２）．示差走査熱量測定
適量のメサコニンの結晶形Ｂの試料を、保護ガスが窒素であり、２５〜２５０℃の範囲内において１０℃／分の一定速度で昇温する条件下でＴＡ  Ｑ２０００／Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ２５００示差走査熱量分析装置に置き、メサコニンの結晶形Ｂの試料を測定し、ＤＳＣ曲線（図８参照）を描いた。ＤＳＣ結果によれば、１５８．７℃（ピーク温度）におけるブロードな吸熱ピーク、および２２２．４℃（開始温度）におけるシャープな吸熱ピークの存在が示され、これはメサコニンの結晶形Ｂの溶融吸熱ピークであった。
【０１０５】
〔実施例１１：メサコニンの結晶形Ｂの安定性〕
実施例８における方法に従って調製されたメサコニンの結晶形Ｂをサンプリングし、以下の試験に供した。
【０１０６】
適量のメサコニンの結晶形Ｂをサンプリングし、１１５℃に加熱し、次いでＸＲＰＤ試験を行った。試験結果をメサコニンの結晶形Ｂの比較試料のＸＲＰＤスペクトル（安定性試験前のメサコニンの結晶形ＢのＸＲＰＤスペクトル）と比較し、結果を図９に示した。
【０１０７】
その結果、メサコニンの結晶形Ｂの試料を１１５℃に加熱したとき、ＸＲＰＤスペクトルの主な回折ピークの位置および相対強度は著しく変化しなかった。これは、結晶形が変化せず、依然として結晶形Ｂであったことを示した。以上の試験結果から、メサコニンの結晶形Ｂが良好な安定性を有することが示された。
【０１０８】
〔実施例１２：メサコニンの結晶形Ｃの調製〕
実施例８における方法に従ってメサコニンの結晶形Ｂの試料１００ｍｇを調製した。メサコニンの結晶形Ｂの試料を真空で１８５℃に２４時間加熱し、白色の固体結晶を得た。試験後、白色の固体結晶はメサコニンの結晶形Ｃであることを確認し、そのＸＲＰＤスペクトルを図１０に示した。
【０１０９】
〔実施例１３：メサコニンの結晶形Ｃの調製〕
実施例８における方法に従ってメサコニンの結晶形Ｂの試料１００ｍｇを調製した。メサコニンの結晶形Ｂの試料を真空で１９０℃に１６時間加熱し、白色の固体結晶を得た。試験後、白色の固体結晶はメサコニンの結晶形Ｃであることを確認し、そのＸＲＰＤスペクトルは図１０と一致した。
【０１１０】
〔実施例１４：メサコニンの結晶形Ｃの特性化〕
実施例１１における方法に従って調製されたメサコニンの結晶形Ｃをサンプリングし、以下のとおり測定を行った。
【０１１１】
１．Ｘ線粉末回折法
メサコニンの結晶形Ｃをサンプリングし、Ｃｕ，Ｋα，Ｋα１（Å）：１．５４０５９８；Ｋα２（Å）：１．５４４４２６，Ｋα２／Ｋα１強度比：０．５０，走査範囲：３°〜４０°の条件下でのＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ  Ｅｍｐｙｒｅａｎ＆Ｘ’Ｐｅｒｔ３Ｘ線粉末回折分析装置における試験に供した。メサコニンの結晶形Ｃの試料のＸ線回折スペクトルは図１０に示し、メサコニンの結晶形Ｃの試料のＸＲＰＤスペクトルの基本情報は表６に示した。
【０１１２】
【表６】
2021512941.tif 000014
【０１１３】
これらの回折ピークは、メサコニンの結晶形Ｃにおいて示される回折ピークの詳細の全てを表すものではないということは当業者によって理解されるべきである。ＸＲＰＤの２θ値は、試験した装置、ならびに調製の間の変動およびバッチの変動により、誤差の範囲内で変化し得るため、挙げられた値は絶対的な値と見なされるべきではない。さらに、ピークの相対強度は配向効果で変化し得るため、本発明に含まれるＸＲＰＤの結果において示される強度は例示的なものであって、絶対的な比較に用いるものではない。
【０１１４】
２．熱分析
（１）．熱重量分析
適量のメサコニンの結晶形Ｃの試料を、保護ガスが窒素であり、室温〜３５０℃の範囲内において１０℃／分の一定速度で昇温する条件下でＴＡ  Ｑ５０００／Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ５５００熱重量分析装置に置き、温度に伴う質量の変化を測定し、ＴＧＡ曲線（図１１参照）を描いた。ＴＧＡ曲線から、結晶形Ｃは、室温から１８５℃まで加熱したとき、０．５％の重量損失を有したことが分かった。
【０１１５】
（２）．示差走査熱量測定
適量のメサコニンの結晶形Ｃの試料を、保護ガスが窒素であり、２５〜２５０℃の範囲内において１０℃／分の一定速度で昇温する条件下でＴＡ  Ｑ２０００／Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ２５００示差走査熱量分析装置に置き、メサコニンの結晶形Ｃの試料を測定し、ＤＳＣ曲線（図１２参照）を描いた。ＤＳＣ結果によれば、２２４．４℃（開始温度）におけるシャープな吸熱ピークの存在が示され、これはメサコニンの結晶形Ｃの溶融吸熱ピークであった。
【図面の簡単な説明】
【０１１６】
【図１】メサコニンの結晶形ＡのＸＲＰＤスペクトルである。
【図２】メサコニンの結晶形ＡのＴＧＡスペクトルである。
【図３】メサコニンの結晶形ＡのＤＳＣスペクトルである。
【図４】安定性試験の間のメサコニンの結晶形Ａの試料の比較ＸＲＰＤスペクトルである。
【図５】１８０℃に加熱した前後のメサコニンの結晶形Ａの比較ＸＲＰＤスペクトルである。
【図６】メサコニンの結晶形ＢのＸＲＰＤスペクトルである。
【図７】メサコニンの結晶形ＢのＴＧＡスペクトルである。
【図８】メサコニンの結晶形ＢのＤＳＣスペクトルである。
【図９】１１５℃に加熱した前後のメサコニンの結晶形Ｂの比較ＸＲＰＤスペクトルである。
【図１０】メサコニンの結晶形ＣのＸＲＰＤスペクトルである。
【図１１】メサコニンの結晶形ＣのＴＧＡスペクトルである。
【図１２】メサコニンの結晶形ＣのＤＳＣスペクトルである。
【図１】
2021512941.tif 000015
【図２】
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【図３】
2021512941.tif 000017
【図４】
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【図５】
2021512941.tif 000019
【図６】
2021512941.tif 000020
【図７】
2021512941.tif 000021
【図８】
2021512941.tif 000022
【図９】
2021512941.tif 000023
【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
2021512941.tif 000026
【手続補正書】
【提出日】令和2年7月22日(2020.7.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１０】
〔実施例１４：メサコニンの結晶形Ｃの特性化〕
実施例１２における方法に従って調製されたメサコニンの結晶形Ｃをサンプリングし、以下のとおり測定を行った。
【国際調査報告】
2021512941.tif 000027
2021512941.tif 000028
2021512941.tif 000029
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