(57)【要約】界面活性ペプチドナノ構造が本明細書で開示され、ここで上記ペプチドは、４に等しいかまたは４未満の整数の反復疎水性アミノ酸を有する。上記ペプチドナノ構造は、薬物およびｓｉＲＮＡの送達を含む、治療用途に有用である。いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、ナノスフェア構造を有する。いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、ナノスフェアを形成する。いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、自己アセンブルする界面活性ペプチドを実質的に含まない中心を有するナノスフェア構造を形成する（例えば、球形のナノ小胞）。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ナノスフェア構造を有するペプチドを含む組成物であって、ここで前記ペプチドは、以下の式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、またはＶＩＩＩ：
式Ｉ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｘ）ａ（Ｙ）ｍ
式ＩＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｙ）ｍ（Ｘ）ａ
式ＩＩＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｘ）ａ（Ｙ）ｍ（Ｘ）ｂ
式ＩＶ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｙ）ｍ（Ｘ）ａ（Ｙ）ｎ
式Ｖ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｘ）ａ（Ｚ）ｍ
式ＶＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｚ）ｍ（Ｘ）ａ
式ＶＩＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｘ）ａ（Ｚ）ｍ（Ｘ）ｂ
式ＶＩＩＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｚ）ｍ（Ｘ）ａ（Ｚ）ｎ；
に従う反復疎水性アミノ酸を有し、ここで
（Ｘ）は、生理学的ｐＨにおいて非極性かつ非荷電の側鎖を有するアミノ酸であり；
（Ｙ）は、生理学的ｐＨにおいてカチオン性の側鎖を有するアミノ酸であり；
（Ｚ）は、生理学的ｐＨにおいてアニオン性の側鎖を有するアミノ酸であり；
そしてここで
ａは、４に等しいかまたは４未満の整数であり；
ｂは、４に等しいかまたは４未満の整数であり；
ｍは、１に等しいかまたは１より大きい整数であり；そして
ｎは、１に等しいかまたは１より大きい整数である、
組成物。
【請求項２】
前記（Ｘ）、（Ｙ）、および／または（Ｚ）のアミノ酸は、天然アミノ酸である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記（Ｘ）、（Ｙ）、および／または（Ｚ）のアミノ酸は、非天然アミノ酸である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記ａまたはｂの整数は、４である、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
前記ａまたはｂの整数は、３である、請求項１〜４のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
（Ｘ）は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、またはグリシンである、請求項１〜５のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
（Ｙ）は、アルギニン、リジン、ヒスチジン、またはオルニチンである、請求項１〜６のいずれかに記載の組成物。
【請求項８】
（Ｚ）は、アスパラギン酸またはグルタミン酸である、請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項９】
各アミノ酸は、Ｌ−アミノ酸である、請求項１〜８のいずれかに記載の組成物。
【請求項１０】
各アミノ酸は、Ｄ−アミノ酸である、請求項１〜８のいずれかに記載の組成物。
【請求項１１】
前記ペプチドは、長さが４〜１０アミノ酸である、請求項１〜１０のいずれかに記載の組成物。
【請求項１２】
前記ペプチドは、長さが５アミノ酸である、請求項１〜１０のいずれかに記載の組成物。
【請求項１３】
前記ペプチドは、長さが７アミノ酸である、請求項１〜１０のいずれかに記載の組成物。
【請求項１４】
前記ペプチドは、改変されたＮ末端および／または改変されたＣ末端を含む、請求項１〜１３のいずれかに記載の組成物。
【請求項１５】
前記ペプチドは、アセチル化Ｎ末端および／またはアミノ化Ｃ末端を有する、請求項１〜１４のいずれかに記載の組成物。
【請求項１６】
ナノスフェア構造を有するペプチドを含む組成物であって、ここで前記ペプチドは、配列番号１〜５０のうちのいずれかに従うアミノ酸配列を有する、組成物。
【請求項１７】
ナノスフェア構造を有するペプチドを含む組成物であって、ここで前記ペプチドは、配列番号５１〜１００のうちのいずれかに従うアミノ酸配列を有する、組成物。
【請求項１８】
ナノスフェア構造を有するペプチドを含む組成物であって、ここで前記ペプチドは、アミノ酸配列ＡＡＡＫ（配列番号１）を有する、組成物。
【請求項１９】
ナノスフェア構造を有するペプチドを含む組成物であって、ここで前記ペプチドは、アミノ酸配列ＡＡＡＡＫ（配列番号５）を有する、組成物。
【請求項２０】
ナノスフェア構造を有するペプチドを含む組成物であって、ここで前記ペプチドは、アミノ酸配列ＡＡＡＫＡＡＡ（配列番号１５）を有する、組成物。
【請求項２１】
前記ペプチドは、水性溶液中にある、請求項１〜２１のいずれかに記載の組成物。
【請求項２２】
前記ペプチドは、少なくとも０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度にある、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記水性溶液は、約６〜約８のｐＨを有する、請求項２１〜２２のいずれかに記載の組成物。
【請求項２４】
前記水性溶液は、約０Ｍ〜約０．３Ｍのイオン強度にある、請求項２１〜２３のいずれかに記載の組成物。
【請求項２５】
前記水性溶液は、約０．１５Ｍのイオン強度にある、請求項２１〜２３のいずれかに記載の組成物。
【請求項２６】
前記水性溶液は等張性である、請求項２１〜２５のいずれかに記載の組成物。
【請求項２７】
薬物送達における使用のための、請求項１〜２６のいずれかに記載の組成物。
【請求項２８】
被験体への送達のための薬剤をさらに含む、請求項１〜２６のいずれかに記載の組成物。
【請求項２９】
前記薬剤は治療剤である、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
前記薬剤は薬物である、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３１】
前記薬剤はｓｉＲＮＡである、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３２】
前記ｓｉＲＮＡは、がん細胞への送達のためである、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
被験体への送達のための薬剤を製剤化する方法であって、前記方法は、前記薬剤と請求項１〜２６のいずれかに記載の組成物とを接触させる工程を包含する、方法。
【請求項３４】
被験体に薬剤を送達する方法であって、前記方法は、前記被験体に、ペプチドと製剤化された組成物を投与する工程を包含し、ここで前記ペプチドは、以下の式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、またはＶＩＩＩ：
式Ｉ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｘ）ａ（Ｙ）ｍ
式ＩＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｙ）ｍ（Ｘ）ａ
式ＩＩＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｘ）ａ（Ｙ）ｍ（Ｘ）ｂ
式ＩＶ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｙ）ｍ（Ｘ）ａ（Ｙ）ｎ
式Ｖ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｘ）ａ（Ｚ）ｍ
式ＶＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｚ）ｍ（Ｘ）ａ
式ＶＩＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｘ）ａ（Ｚ）ｍ（Ｘ）ｂ
式ＶＩＩＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｚ）ｍ（Ｘ）ａ（Ｚ）ｎ；
に従う反復疎水性アミノ酸を有し、ここで
（Ｘ）は、生理学的ｐＨにおいて非極性かつ非荷電の側鎖を有するアミノ酸であり；
（Ｙ）は、生理学的ｐＨにおいてカチオン性の側鎖を有するアミノ酸であり；
（Ｚ）は、生理学的ｐＨにおいてアニオン性の側鎖を有するアミノ酸であり；
そしてここで
ａは、４に等しいかまたは４未満の整数であり；
ｂは、４に等しいかまたは４未満の整数であり；
ｍは、１に等しいかまたは１より大きい整数であり；そして
ｎは、１に等しいかまたは１より大きい整数である、
方法。
【請求項３５】
前記（Ｘ）、（Ｙ）、および／または（Ｚ）のアミノ酸は、天然アミノ酸である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記（Ｘ）、（Ｙ）、および／または（Ｚ）のアミノ酸は、非天然アミノ酸である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
前記ａまたはｂの整数は、４である、請求項３４〜３６のいずれかに記載の方法。
【請求項３８】
前記ａまたはｂの整数は、３である、請求項３４〜３７のいずれかに記載の方法。
【請求項３９】
（Ｘ）は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、またはグリシンである、請求項３４〜３８のいずれかに記載の方法。
【請求項４０】
（Ｙ）は、アルギニン、リジン、ヒスチジン、またはオルニチンである、請求項３４〜３９のいずれかに記載の方法。
【請求項４１】
（Ｚ）は、アスパラギン酸またはグルタミン酸である、請求項３４〜４０のいずれかに記載の方法。
【請求項４２】
各アミノ酸はＬ−アミノ酸である、請求項３４〜４１のいずれかに記載の方法。
【請求項４３】
各アミノ酸はＤ−アミノ酸である、請求項３４〜４１のいずれかに記載の方法。
【請求項４４】
前記ペプチドは、長さが４〜１０アミノ酸である、請求項３４〜４２のいずれかに記載の方法。
【請求項４５】
前記ペプチドは、長さが５アミノ酸である、請求項３４〜４２のいずれかに記載の方法。
【請求項４６】
前記ペプチドは、長さが７アミノ酸である、請求項３４〜４２のいずれかに記載の方法。
【請求項４７】
前記ペプチドは、改変されたＮ末端および／または改変されたＣ末端を含む、請求項３４〜４６のいずれかに記載の方法。
【請求項４８】
前記ペプチドは、アセチル化Ｎ末端および／またはアミノ化Ｃ末端を有する、請求項３４〜４７のいずれかに記載の方法。
【請求項４９】
被験体に薬剤を送達する方法であって、前記方法は、前記被験体に、ペプチドと製剤化された組成物を投与する工程を包含し、ここで前記ペプチドは、配列番号１〜５０のうちのいずれかに従うアミノ酸配列を有する、方法。
【請求項５０】
被験体に薬剤を送達する方法であって、前記方法は、前記被験体に、ペプチドと製剤化された組成物を投与する工程を包含し、ここで前記ペプチドは、配列番号５１〜１００のうちのいずれかに従うアミノ酸配列を有する、方法。
【請求項５１】
被験体に薬剤を送達する方法であって、前記方法は、前記被験体に、ペプチドと製剤化された組成物を投与する工程を包含し、ここで前記ペプチドは、アミノ酸配列ＡＡＡＫ（配列番号１）を有する、方法。
【請求項５２】
被験体に薬剤を送達する方法であって、前記方法は、前記被験体に、ペプチドと製剤化された組成物を投与する工程を包含し、ここで前記ペプチドは、アミノ酸配列ＡＡＡＡＫ（配列番号５）を有する、方法。
【請求項５３】
被験体に薬剤を送達する方法であって、前記方法は、前記被験体に、ペプチドと製剤化された組成物を投与する工程を包含し、ここで前記ペプチドは、アミノ酸配列ＡＡＡＫＡＡＡ（配列番号１５）を有する、方法。
【請求項５４】
前記ペプチドは水性溶液中にある、請求項３４〜５３のいずれかに記載の方法。
【請求項５５】
前記ペプチドは、少なくとも０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度にある、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記水性溶液は、約６〜約８のｐＨを有する、請求項５４〜５５のいずれかに記載の方法。
【請求項５７】
前記水性溶液は、約０Ｍ〜約０．３Ｍのイオン強度にある、請求項５４〜５６のいずれかに記載の方法。
【請求項５８】
前記水性溶液は、約０．１５Ｍのイオン強度にある、請求項５４〜５６のいずれかに記載の方法。
【請求項５９】
前記水性溶液は、等張性である、請求項５４〜５８のいずれかに記載の方法。
【請求項６０】
前記薬剤は治療剤である、請求項３５〜５８のいずれかに記載の方法。
【請求項６１】
前記薬剤は薬物である、請求項３５〜５８のいずれかに記載の方法。
【請求項６２】
前記薬剤はｓｉＲＮＡである、請求項３５〜５８のいずれかに記載の方法。
【請求項６３】
前記薬剤はがん細胞に送達される、請求項６２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、２０１７年１２月１５日出願の米国仮特許出願第６２／５９９，５６６号（その内容は、それらの全体において本明細書に参考として援用される）の利益を主張する。
【０００２】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出されており、その全体において参考として援用される配列表を含む。上記ＡＳＣＩＩコピー（作成日：２０１８年１１月３０日）は、ファイル名：２００４８３７−０２２３＿ＳＬ．ｔｘｔであり、サイズ：２９，２４９バイトである。
【背景技術】
【０００３】
背景
界面活性ペプチドは代表的には、親水性ヘッド基および疎水性アミノ酸を有する親油性テールを有する。ある種の界面活性ペプチドは、以前に開示されている（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２００３００６０４３、ＷＯ２０１３１８１５１１、およびＷＯ２００９０１８４６７）。その開示される界面活性ペプチドのうちのいくつかは、オリゴペプチド、ならびに５個またはこれより多くのアミノ酸の反復ユニットの中に荷電性アミノ酸を含む親水性ヘッド基および疎水性アミノ酸を含む親油性テールを含む構造を有する、ジブロックおよびトリブロックペプチドコポリマーである。
４個のアラニンの１個の反復単位を有する他の界面活性ペプチドは、膜タンパク質を安定化することにおける使用について開示されている（例えば、米国特許出願公開番号ＵＳ２００９００６９５４７）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開第２００３／００６０４３号
【特許文献２】国際公開第２０１３／１８１５１１号
【特許文献３】国際公開第２００９／０１８４６７号
【特許文献４】米国特許出願公開第２００９／００６９５４７号明細書
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
要旨
以前に開示された界面活性ペプチドは、平均直径約５０ｎＭを有するナノチューブを形成するように自己アセンブルすることが報告されている。
【０００６】
本開示は、ナノスフェア構造を形成する４個またはこれより少ないアミノ酸の反復疎水性単位を有する短い界面活性ペプチドを提供する。このようなナノスフェア構造は、製剤化および治療剤の送達に特に有用である。
【０００７】
いくつかの実施形態において、本開示は、以下の式に従う反復疎水性アミノ酸：
式Ｉ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｘ）ａ（Ｙ）ｍ
式ＩＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｙ）ｍ（Ｘ）ａ
式ＩＩＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｘ）ａ（Ｙ）ｍ（Ｘ）ｂ
式ＩＶ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｙ）ｍ（Ｘ）ａ（Ｙ）ｎ
式Ｖ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｘ）ａ（Ｚ）ｍ
式ＶＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｚ）ｍ（Ｘ）ａ
式ＶＩＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｘ）ａ（Ｚ）ｍ（Ｘ）ｂ；または
式ＶＩＩＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｚ）ｍ（Ｘ）ａ（Ｚ）ｎ；
を有するペプチドを含む組成物を提供し、ここで
（Ｘ）は、生理学的ｐＨにおいて非極性かつ非荷電の側鎖を有するアミノ酸であり；
（Ｙ）は、生理学的ｐＨにおいてカチオン性の側鎖を有するアミノ酸であり；
（Ｚ）は、生理学的ｐＨにおいてアニオン性の側鎖を有するアミノ酸であり；
そしてここで
ａは、４に等しいかまたは４未満の整数；
ｂは、４に等しいかまたは４未満の整数；
ｍは、１に等しいかまたは１より大きい整数；そして
ｎは、１に等しいかまたは１より大きい整数である。
【０００８】
いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、ナノスフェア構造を有する。いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、ナノスフェアを形成する。いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、自己アセンブルする界面活性ペプチドを実質的に含まない中心を有するナノスフェア構造を形成する（例えば、球形のナノ小胞）。
【０００９】
いくつかの実施形態において、上記（Ｘ）、（Ｙ）、および／または（Ｚ）のアミノ酸は、天然アミノ酸である。いくつかの実施形態において、上記（Ｘ）、（Ｙ）、および／または（Ｚ）のアミノ酸は、非天然アミノ酸である。
【００１０】
いくつかの実施形態において、上記ａまたはｂの整数は、４である。いくつかの実施形態において、上記ａまたはｂの整数は、３である。
【００１１】
いくつかの実施形態において、（Ｘ）は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、またはグリシンである。いくつかの実施形態において、（Ｘ）はアラニンである。いくつかの実施形態において、（Ｙ）は、アルギニン、リジン、ヒスチジン、またはオルニチンである。いくつかの実施形態において、（Ｙ）はリジンである。いくつかの実施形態において、（Ｘ）はアラニンであり、（Ｙ）はリジンである。いくつかの実施形態において、（Ｚ）は、アスパラギン酸またはグルタミン酸である。
【００１２】
いくつかの実施形態において、１個またはこれより多くのアミノ酸は、Ｌ−アミノ酸である。いくつかの実施形態において、各アミノ酸はＬ−アミノ酸である。いくつかの実施形態において、１個またはこれより多くのアミノ酸は、Ｄ−アミノ酸である。いくつかの実施形態において、各アミノ酸はＤ−アミノ酸である。
【００１３】
いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、長さが４〜１０アミノ酸である。いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、長さが５アミノ酸である。いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、長さが６アミノ酸である。いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、長さが７アミノ酸である。
【００１４】
いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、改変されたＮ末端および／または改変されたＣ末端を含む。いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、アセチル化Ｎ末端および／またはアミノ化Ｃ末端を有する。
【００１５】
いくつかの実施形態において、ペプチドは、ナノスフェア構造および配列番号１〜５０のうちのいずれかに従うアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、ペプチドは、ナノスフェア構造および配列番号５１〜１００のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列を有する。
【００１６】
いくつかの実施形態において、ペプチドは、ナノスフェア構造およびアミノ酸配列ＡＡＡＫ（配列番号１）を有する。いくつかの実施形態において、ペプチドは、ナノスフェア構造およびアミノ酸配列ＡＡＡＡＫ（配列番号５）を有する。いくつかの実施形態において、ペプチドは、ナノスフェア構造およびアミノ酸配列ＡＡＡＫＡＡＡ（配列番号１５）を有する。
【００１７】
いくつかの実施形態において、本開示は、水性溶液中にナノスフェアペプチドを含む組成物を提供する。いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、少なくとも０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度にある。いくつかの実施形態において、上記水性溶液は、約６〜約８のｐＨを有する。いくつかの実施形態において、上記水性溶液は、約７のｐＨを有する。いくつかの実施形態において、上記水性溶液は、約０Ｍ〜約０．３Ｍのイオン強度にある。いくつかの実施形態において、上記水性溶液は、約０．１５Ｍのイオン強度にある。いくつかの実施形態において、上記水性溶液は、等張性である。
【００１８】
いくつかの実施形態において、本開示は、薬物送達における使用のための組成物を提供する。いくつかの実施形態において、上記組成物は、被験体への送達のための薬剤を含む。いくつかの実施形態において、上記薬剤は治療剤である。いくつかの実施形態において、上記薬剤は薬物（例えば、低分子）である。いくつかの実施形態において、上記薬剤は生物製剤である。いくつかの実施形態において、上記薬剤はオリゴヌクレオチドである。いくつかの実施形態において、上記薬剤はＲＮＡのインヒビターである。いくつかの実施形態において、上記薬剤はｓｉＲＮＡである。いくつかの実施形態において、上記薬剤はがん細胞への送達のためである。
【００１９】
いくつかの実施形態において、本開示は、被験体への送達のための薬剤を製剤化する方法を提供し、上記方法は、上記薬剤と本明細書で記載されるとおりのナノスフェアペプチド界面活性剤とを接触させる工程を包含する。
【００２０】
いくつかの実施形態において、本開示は、被験体に薬剤を送達する方法を提供し、上記方法は、上記被験体に、以下の式：
式Ｉ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｘ）ａ（Ｙ）ｍ
式ＩＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｙ）ｍ（Ｘ）ａ
式ＩＩＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｘ）ａ（Ｙ）ｍ（Ｘ）ｂ
式ＩＶ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｙ）ｍ（Ｘ）ａ（Ｙ）ｎ
式Ｖ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｘ）ａ（Ｚ）ｍ
式ＶＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｚ）ｍ（Ｘ）ａ
式ＶＩＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｘ）ａ（Ｚ）ｍ（Ｘ）ｂ；または
式ＶＩＩＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｚ）ｍ（Ｘ）ａ（Ｚ）ｎ；
に従う反復疎水性アミノ酸を有するペプチドと製剤化された組成物を投与する工程を包含し、ここで
（Ｘ）は、生理学的ｐＨにおいて非極性かつ非荷電の側鎖を有するアミノ酸であり；
（Ｙ）は、生理学的ｐＨにおいてカチオン性の側鎖を有するアミノ酸であり；
（Ｚ）は、生理学的ｐＨにおいてアニオン性の側鎖を有するアミノ酸であり；
そしてここで
ａは、４に等しいかまたは４未満の整数であり；
ｂは、４に等しいかまたは４未満の整数であり；
ｍは、１に等しいかまたは１より大きい整数であり；そして
ｎは、１に等しいかまたは１より大きい整数である。
【００２１】
いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、ナノスフェア構造を形成する。いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、ナノスフェアを形成する。いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、球状ナノ小胞を形成する。
【００２２】
いくつかの実施形態において、上記（Ｘ）、（Ｙ）、および／または（Ｚ）のアミノ酸は、天然アミノ酸である。いくつかの実施形態において、上記（Ｘ）、（Ｙ）、および／または（Ｚ）のアミノ酸は、非天然アミノ酸である。
【００２３】
いくつかの実施形態において、上記ａまたはｂの整数は、４である。いくつかの実施形態において、上記ａまたはｂの整数は、３である。
【００２４】
いくつかの実施形態において、（Ｘ）は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、またはグリシンである。いくつかの実施形態において、（Ｘ）はアラニンである。いくつかの実施形態において、（Ｙ）は、アルギニン、リジン、ヒスチジン、またはオルニチンである。いくつかの実施形態において、（Ｙ）はリジンである。いくつかの実施形態において、（Ｘ）はアラニンであり、（Ｙ）はリジンである。いくつかの実施形態において、（Ｚ）は、アスパラギン酸またはグルタミン酸である。
【００２５】
いくつかの実施形態において、１個またはこれより多くのアミノ酸は、Ｌ−アミノ酸である。いくつかの実施形態において、各アミノ酸はＬ−アミノ酸である。いくつかの実施形態において、１個またはこれより多くのアミノ酸は、Ｄ−アミノ酸である。いくつかの実施形態において、各アミノ酸はＤ−アミノ酸である。
【００２６】
いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、長さが４〜１０アミノ酸である。いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、長さが５アミノ酸である。いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、長さが６アミノ酸である。いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、長さが７アミノ酸である。
【００２７】
いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、改変されたＮ末端および／または改変されたＣ末端を含む。いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、アセチル化Ｎ末端および／またはアミノ化Ｃ末端を有する。
【００２８】
いくつかの実施形態において、ペプチドは、ナノスフェア構造および配列番号１〜５０のうちのいずれかに従うアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、ペプチドは、ナノスフェア構造および配列番号５１〜１００のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列を有する。
【００２９】
いくつかの実施形態において、ペプチドは、ナノスフェア構造およびアミノ酸配列ＡＡＡＫ（配列番号１）を有する。いくつかの実施形態において、ペプチドは、ナノスフェア構造およびアミノ酸配列ＡＡＡＡＫ（配列番号５）を有する。いくつかの実施形態において、ペプチドは、ナノスフェア構造およびアミノ酸配列ＡＡＡＫＡＡＡ（配列番号１５）を有する。
【００３０】
いくつかの実施形態において、本開示は、水性溶液中にナノスフェアペプチドを含む組成物を提供する。いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、少なくとも０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度にある。いくつかの実施形態において、上記水性溶液は、約６〜約８のｐＨを有する。いくつかの実施形態において、上記水性溶液は、約７のｐＨを有する。いくつかの実施形態において、上記水性溶液は、約０Ｍ〜約０．３Ｍのイオン強度にある。いくつかの実施形態において、上記水性溶液は、約０．１５Ｍのイオン強度にある。いくつかの実施形態において、上記水性溶液は、等張性である。
【００３１】
定義
本開示がより容易に理解されるように、ある種の用語が以下に先ず記載される。以下の用語および他の用語のさらなる定義は、本明細書全体を通じて示される。
【００３２】
用語「薬剤（ａｇｅｎｔ）」とは、本明細書で使用される場合、例えば、ポリペプチド、核酸、サッカリド、脂質、低分子、金属、またはこれらの組み合わせを含む任意の化学的クラスの化合物または実体に言及する。いくつかの実施形態において、薬剤は、これが天然に見出されるおよび／または天然から得られるという点において、天然の生成物であるか、またはその天然の生成物を含む。いくつかの実施形態において、薬剤は、これが人の手による活動を通じて設計、操作、および／もしくは生成される、ならびに／または天然において見出されないという点において、１種もしくはこれより多くの人工の実体であるか、またはその実体を含む。いくつかの実施形態において、薬剤は、単離された形態または純粋な形態で利用され得る；いくつかの実施形態において、薬剤は、粗製形態で利用され得る。本発明に従って利用され得るいくつかの特定の薬剤としては、低分子、抗体、抗体フラグメント、アプタマー、核酸（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッド、アンチセンスオリゴヌクレオチド、およびリボザイム）、ペプチド、ペプチド模倣物などが挙げられる。いくつかの実施形態において、薬剤は、ポリマーであるか、またはポリマーを含む。いくつかの実施形態において、薬剤は、ポリマーではない、および／またはいかなるポリマーをも実質的に含まない。いくつかの実施形態において、薬剤は、少なくとも１種のポリマー部分を含む。いくつかの実施形態において、薬剤は、いかなるポリマー部分をも欠くか、またはいかなるポリマー部分をも実質的に含まない。いくつかの実施形態において、薬剤は、細胞溶解物であるか、または細胞溶解物を含む。
【００３３】
本明細書で使用される場合、用語「アミノ酸（ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ）」は、その最も広い意味において、ポリペプチド鎖へと、例えば、１またはこれより多くのペプチド結合の形成を通じて組み込まれ得る任意の化合物および／または物質に言及する。いくつかの実施形態において、アミノ酸は、一般的構造  Ｈ２Ｎ−Ｃ（Ｈ）（Ｒ）−ＣＯＯＨを有する。いくつかの実施形態において、アミノ酸は、天然に存在するアミノ酸である。いくつかの実施形態において、アミノ酸は、合成アミノ酸である；いくつかの実施形態において、アミノ酸はＤ−アミノ酸である；いくつかの実施形態において、アミノ酸はＬ−アミノ酸である。「標準的アミノ酸（ｓｔａｎｄａｒｄ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ）」とは、天然に存在するペプチドにおいて一般に見出される２０種の標準的Ｌ−アミノ酸のうちのいずれかに言及する。「非標準的アミノ酸（ｎｏｎｓｔａｎｄａｒｄ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ）」とは、それが合成して調製されるか、または天然供給源から得られるかに関わらず、その標準的アミノ酸以外の任意のアミノ酸に言及する。いくつかの実施形態において、アミノ酸は、ポリペプチドにおけるカルボキシ末端および／またはアミノ末端のアミノ酸を含め、上記の一般的構造と比較して、構造的改変を含み得る。例えば、いくつかの実施形態において、アミノ酸は、その一般的構造と比較して、メチル化、アミド化、アセチル化、および／または置換によって改変され得る。状況から明らかであるように、いくつかの実施形態において、用語「アミノ酸」は、遊離アミノ酸をいうために使用される；いくつかの実施形態において、それは、ポリペプチドのアミノ酸残基をいうために使用される。
【００３４】
本明細書で使用される場合、用語「およそ（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」または「約（ａｂｏｕｔ）」とは、目的の１またはこれより多くの値に付与される場合、述べられた参照値に類似である値に言及する。ある種の実施形態において、用語「およそ」または「約」は、その状況から、（このような数字が考えられる値の１００％を超える場合を除いて）別段述べられなければまたは別段明らかでなければ、その述べられた参照値の（より大きいまたはより小さい）いずれに方向においても２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％，３％、２％、１％、もしくはこれより小さい範囲内に入る値の範囲に言及する。
【００３５】
２つの事象または実体は、用語、互いに「関連する（ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ）」が本明細書で使用される場合、一方の存在、レベルおよび／または形態が、他方の存在、レベルおよび／または形態と相関していれば、互いに関連する。いくつかの実施形態において、２種またはこれより多くの実体は、それらが直接的にもしくは間接的に相互作用し、その結果、それらが互いと物理的近位にあるおよび／または物理的近位のままであるのであれば、互いに物理的に「関連する」。いくつかの実施形態において、互いに物理的に関連する２種またはこれより多くの実体は、互いと共有結合的に連結される；いくつかの実施形態において、互いに物理的に関連する２種またはこれより多くの実体は、互いと共有結合的に連結されるのではなく、例えば、水素結合、ファン・デル・ワールス相互作用、疎水性相互作用、磁気、およびこれらの組み合わせによって、非共有結合的に関連する。
【００３６】
用語「匹敵する（ｃｏｍｐａｒａｂｌｅ）」とは、結果の比較が得られるかまたは現象が観察されることを可能にするために互いに十分類似である、条件、環境、個体、または集団の２つ（またはこれより多く）のセットを記載するために本明細書で使用される。いくつかの実施形態において、条件、環境、個体、または集団の匹敵するセットは、複数の実質的に同一の特徴および１または少数の変動した特徴によって特徴づけられる。当業者は、環境、個体、もしくは集団の異なるセットの下で得られる結果の差異、または環境、個体、もしくは集団の異なるセットで観察される現象が、それらの変動した特徴におけるバリエーションによって引き起こされるか、またはそのバリーションを示すという合理的な結論を正当化するために実質的に同一の特徴の十分な数およびタイプによって特徴づけられる場合に、環境、個体、または集団のセットが互いに匹敵することを認識する。当業者は、本明細書で使用される相対的文言（例えば、増強される、活性化される、低減される、阻害されるなど）が、代表的には、匹敵する条件下で行われた比較に言及することを認識する。
【００３７】
「相補的（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ）」とは、隣接するペプチドからの親水性残基間でイオン性または水素結合相互作用を形成し得ること、例えば、シートまたは足場の中で、ペプチドの中の各親水性残基が、水素結合するか、または隣接するペプチド上の親水性残基とイオン的に対形成するか、または溶媒に曝されるかのいずれかを意味する。
【００３８】
ある種の方法論は、「決定する工程（ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ）」を包含し得る。当業者は、本明細書を読んで理解すれば、このような「決定する工程」が、当業者に利用可能な種々の技術のうちのいずれか（例えば、本明細書で明示的に言及される具体的な技術を含む）を利用し得るか、またはそれらの使用を通じて達成され得ることを認識する。いくつかの実施形態において、決定する工程は、物理的サンプルの操作を要する。いくつかの実施形態において、決定する工程は、データまたは情報の考慮および／または操作、例えば、関連する分析を行うように適合されたコンピューターまたは他の処理装置を利用することを要する。いくつかの実施形態において、決定する工程は、供給源からの関連する情報および／または材料を受容する工程を要する。いくつかの実施形態において、決定する工程は、サンプルまたは実体の１またはこれより多くの特徴と、匹敵する参照とを比較する工程を要する。
【００３９】
用語「インビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）」とは、本明細書で使用される場合、多細胞生物内ではなく、人工的な環境において、例えば、試験管または反応容器において、細胞培養などにおいて起こる事象に言及する。
【００４０】
用語「インビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）」とは、本明細書で使用される場合、多細胞生物（例えば、ヒトおよび非ヒト動物）内で起こる事象をいう。細胞ベースのシステムの状況では、その用語は、生きている細胞内で（例えば、インビトロシステムとは対照的に）起こる事象をいうために使用され得る。
【００４１】
本明細書で使用される場合、用語「ナノスフェアの（ｎａｎｏｓｐｈｅｒｉｃ）」とは、ナノメートル範囲の直径を有する球状構造に言及する。本明細書で使用される場合、「ナノスフェア構造（ｎａｎｏｓｐｈｅｒｉｃ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）」とは、ナノスフェアおよび／または球状ナノ小胞（ｓｐｈｅｒｉｃａｌ  ｎａｎｏｖｅｓｉｃｌｅ）を含む。球状ナノ小胞は、ナノスフェアに類似であるが、自己アセンブルする界面活性ペプチドを実質的に含まない中心を有する。
【００４２】
用語「ペプチド（ｐｅｐｔｉｄｅ）」とは、本明細書で使用される場合、アミノ酸の任意のポリマー鎖をいう。いくつかの実施形態において、ペプチドは、天然に存在するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、ペプチドは、天然に存在しないアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、ペプチドは、これが人の手による活動を通じて設計および／または生成されるという点において、操作されているアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、ペプチドは、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、もしくは両方を含むか、または天然アミノ酸、非天然アミノ酸、もしくは両方からなる。いくつかの実施形態において、ペプチドは、天然アミノ酸のみもしくは非天然アミノ酸のみを含むか、または天然アミノ酸のみもしくは非天然アミノ酸のみからなる。いくつかの実施形態において、ペプチドは、Ｄ−アミノ酸、Ｌ−アミノ酸、または両方を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、Ｄ−アミノ酸のみを含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、Ｌ−アミノ酸のみを含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、１個またはこれより多くのペンダント基または他の改変、例えば、そのペプチドのＮ末端において、そのペプチドのＣ末端において、またはこれらの任意の組み合わせにおいて、１個またはこれより多くのアミノ酸側鎖への改変または結合を含む。いくつかの実施形態において、このようなペンダント基または改変は、アセチル化、アミド化、脂質化、メチル化、ｐｅｇ化など（これらの組み合わせを含む）から選択される。いくつかの実施形態において、用語「ペプチド」は、参照ペプチド、活性、または構造の名称に付加され得る；このような場合に、その用語は、関連する活性または構造を共有し、従って、ペプチドの同じクラスまたはファミリーのメンバーであると考えられ得るペプチドに言及するために本明細書で使用される。各々のこのようなクラスに関して、アミノ酸配列および／または機能が公知であるそのクラス内の例示的ペプチドを、本明細書は提供する、および／または当業者は知っている；いくつかの実施形態において、このような例示的ペプチドは、そのペプチドクラスまたはファミリーの参照ペプチドである。いくつかの実施形態において、ペプチドクラスまたはファミリーのメンバーは、そのクラスの参照ペプチドと；いくつかの実施形態では、そのクラス内の全てのペプチドと、顕著な配列相同性または同一性を示す、それらと共通する配列モチーフ（例えば、特徴的な配列エレメント）を共有する、および／またはそれらと共通する活性を（いくつかの実施形態においては、匹敵するレベルでまたは指定された範囲内で）共有する。
【００４３】
用語「純粋な（ｐｕｒｅ）」とは、本明細書で記載されるペプチドが、そのペプチドの欠失付加物（ｄｅｌｅｔｉｏｎ  ａｄｄｕｃｔ）および異なる長さのペプチドを含む他の化学種を含まない程度を示すために使用される。
【００４４】
用語「参照（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）」とは、本明細書で使用される場合、標準またはコントロールであって、これに対して比較が行われるものを記載する。例えば、いくつかの実施形態において、目的の薬剤、動物、個体、集団、サンプル、配列または値は、参照またはコントロールの薬剤、動物、個体、集団、サンプル、配列または値と比較される。いくつかの実施形態において、参照またはコントロールは、目的の試験または決定と実質的に同時に試験および／または決定される。いくつかの実施形態において、参照またはコントロールは、過去の（ｈｉｓｔｏｒｉｃａｌ）参照またはコントロールであり、必要に応じて、有形の媒体の中に具現化される。代表的には、当業者によって理解されるように、参照またはコントロールは、評価中のものに匹敵する条件または環境下で決定または特徴づけられる。当業者は、十分な類似性が、特定の考えられる参照またはコントロールに対する信頼および／または比較を正当化するために存在する場合に認識する。
【００４５】
用語「自己アセンブルする（ｓｅｌｆ−ａｓｓｅｍｂｌｉｎｇ）」とは、適切な条件下で、溶液（例えば、水性溶液）の中で構造（例えば、ナノスフェアおよび球状ナノ症状を含むナノスフェア構造）へと自然発生的に自己会合（ｓｅｌｆ−ａｓｓｏｃｉａｔｅ）し得るある種のペプチドに言及して、本明細書で使用される。いくつかの実施形態において、ナノスフェア構造への自己アセンブリ（および／または脱アセンブリ（ｄｉｓ−ａｓｓｅｍｂｌｙ））は、１種またはこれより多くの環境的誘発因子（例えば、ｐＨ、温度、イオン強度、容量オスモル濃度、重量オスモル濃度、付与される圧、付与される剪断応力などのうちの１またはこれより多くにおける変化）に対して応答性である。いくつかの実施形態において、自己アセンブルするポリペプチドの組成物は、そのポリペプチドがアセンブリした状態にある場合に、検出可能なナノスフェア構造によって特徴づけられる。
【００４６】
本明細書で使用される場合、用語「実質的に（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ）」とは、目的の特性または特質の全体のまたはほぼ全体の程度または度合いを示す定性的条件に言及する。生物学分野の当業者は、生物学的および化学的な現象が、完成に至るおよび／もしくは完成へと進む、または絶対的な結果を達成もしくは回避することはあるとしても希であることを理解する。用語「実質的に」は、従って、多くの生物学的および化学的な現象に固有の完全性が潜在的に欠如しているということを捉えるために本明細書で使用される。
【００４７】
本明細書で使用される場合、語句「治療剤（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｇｅｎｔ）」とは、概して、生物に投与される場合に、所望の薬理学的効果を誘発する任意の薬剤に言及する。いくつかの実施形態において、薬剤は、その薬剤が適切な集団に対して統計的に有意な効果を示す場合に、治療剤であると考えられる。いくつかの実施形態において、その適切な集団は、モデル生物の集団であり得る。いくつかの実施形態において、適切な集団は、種々の基準（例えば、ある種の年齢群、性別、遺伝的バックグラウンド、既存の臨床状態など）によって定義され得る。いくつかの実施形態において、治療剤は、疾患、障害、および／または状態を緩和する（ａｌｌｅｖｉａｔｅ）、改善する（ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ）、軽減する（ｒｅｌｉｅｖｅ）、阻害する（ｉｎｈｉｂｉｔ）、防止する（ｐｒｅｖｅｎｔ）、その発生を遅らせる（ｄｅｌａｙ）、その重篤度を低減する（ｒｅｄｕｃｅ）、および／または１もしくはこれより多くのその症状もしくは特徴の発生率を低減するために使用され得る物質である。いくつかの実施形態において、「治療剤」は、これがヒトへの投与のために市販され得る前に、政府機関によって承認されているかまたは承認される必要がある薬剤である。いくつかの実施形態において、「治療剤」は、ヒトへの投与のために処方箋が必要とされる薬剤である。
【００４８】
本明細書で使用される場合、「治療上有効な量（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ａｍｏｕｎｔ）」とは、その量が投与されることに対して所望の効果を生じる量である。いくつかの実施形態において、その用語は、治療上の投与レジメンに従って、疾患、障害、および／または状態に罹患しているかまたは罹りやすい集団に投与される場合に、その疾患、障害、および／または状態を処置するために十分な量に言及する。いくつかの実施形態において、治療上有効な量は、その疾患、障害、および／もしくは状態の１もしくはこれより多くの症状の発生率および／もしくは重篤度を低減する、ならびに／またはその発生を遅らせるものである。当業者は、用語「治療上有効な量」が、実際に成功裡の処置が特定の個体において達成されることを要しないことを認識する。むしろ、治療上有効な量は、このような処置の必要性のある患者に投与される場合に、かなりの数の被験体において特定の望ましい薬理学的応答を提供する量であり得る。いくつかの実施形態において、治療上有効な量への言及は、１またはこれより多くの特定の組織（例えば、その疾患、障害、もしくは状態に罹患した組織）または体液（例えば、血液、唾液、血清、汗、涙液、尿など）において測定されるとおりの量への言及であり得る。当業者は、いくつかの実施形態において、特定の薬剤または治療の治療上有効な量が、単一用量において製剤化および／または投与され得ることを認識する。いくつかの実施形態において、治療上有効な薬剤は、例えば、投与レジメンの一部として、複数の用量において製剤化および／または投与され得る。
【００４９】
別段定義されなければ、技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。
【００５０】
以下の図面は、例証目的に過ぎず、限定のためではない。
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１】図１は、例示的な界面活性ペプチド；  （Ａ）Ａｃ−Ａ３Ｋ−ＮＨ２（配列番号５１）、（Ｂ）Ａｃ−Ａ４Ｋ−ＮＨ２（配列番号５５）、（Ｃ）Ａｃ−Ａ３ＫＡ３−ＮＨ２（配列番号６５）の分子モデルを示す。Ａｃ−Ａ３Ｋ−ＮＨ２（配列番号５１）およびＡｃ−Ａ４Ｋ−ＮＨ２（配列番号５５）は、１本の短い疎水性の脚を有する。Ａｃ−Ａ３ＫＡ３−ＮＨ２（配列番号５５）は、２本の短い疎水性の脚を有する。
【００５２】
【図２】図２は、従来の界面活性ペプチドの代表的ナノチューブ構造を有するＡｃ−Ａ６Ｋ−ＮＨ２（配列番号１０５）のＡＦＭ画像を示す。
【００５３】
【図３】図３は、０．１％（ｗ／ｖ）でのＡｃ−Ａ６Ｋ−ＮＨ２（配列番号１０５）の二重層構造ＡＦＭ画像を示す。各層の厚みは、０．８ｎｍである。Ａｃ−Ａ６Ｋ−ＮＨ２（配列番号１０５）は、０．１％（ｗ／ｖ）で二重層構造を形成した。
【００５４】
【図４】図４は、Ａｃ−Ａ３Ｋ−ＮＨ２（配列番号５１）のＡＦＭ画像を示す。Ａｃ−Ａ３Ｋ−ＮＨ２（配列番号５１）は、０．１％（ｗ／ｖ）でナノスフェアを形成する。そのナノスフェアの直径は、２８ｎｍである。
【００５５】
【図５】図５は、Ａｃ−Ａ４Ｋ−ＮＨ２（配列番号５５）のＡＦＭ画像を示す。Ａｃ−Ａ４Ｋ−ＮＨ２（配列番号５５）は、ナノスフェア（すなわち、球状ナノ小胞）を形成する。そのナノスフェアの直径は、８５ｎｍである。その高さプロフィールは、マイカ表面上で乾燥させたそのナノスフェアの縁部が、それらの中央部分より大きい高さを有することを示す。これは、Ａ４Ｋ（配列番号５５）ナノスフェアの内部が空である（すなわち、球状ナノ小胞を形成する）ことを示す。
【００５６】
【図６】図６は、Ａｃ−Ａ３ＫＡ３−ＮＨ２（配列番号６５）のＡＦＭ画像を示す。Ａｃ−Ａ３ＫＡ３−ＮＨ２（配列番号６５）は、ナノスフェア（すなわち、球状ナノ小胞）を形成する。そのナノスフェアの直径は、３０ｎｍである。その高さプロフィールは、マイカ表面上で乾燥させたナノスフェアの縁部が、それらの中央部分より大きい高さを有することを示す。これは、Ａｃ−Ａ３ＫＡ３−ＮＨ２（配列番号６５）ナノスフェアの内部が空である（すなわち、球状ナノ小胞を形成する）ことを示す。
【００５７】
【図７】図７Ａおよび８Ｂは、界面活性ペプチドのナノ構造を図示する。図７Ａでは、反復疎水性アミノ酸の数が５に等しいかまたは５より大きい代表的界面活性ペプチド（例えば、Ａｃ−Ａ６Ｋ−ＮＨ２（配列番号１０５））によって形成されるナノチューブ。図７Ｂでは、反復疎水性アミノ酸の数が３または４である本明細書で開示される界面活性ペプチド（例えば、Ａｃ−Ａ３ＫＡ３−ＮＨ２（配列番号６５）およびＡｃ−Ａ４Ｋ−ＮＨ２（配列番号５５））のナノスフェア構造。
【００５８】
【図８】図８は、Ａ６Ｋ／ｓｉＲＮＡ複合体（０．１％／０．０１％）のＡＦＭ画像を示す。そのＡ６Ｋ／ｓｉＲＮＡ複合体は凝集する。
【００５９】
【図９】図９は、Ａｃ−Ａ４Ｋ−ＮＨ２（配列番号５５）／ｓｉＲＮＡ複合体（０．１％／０．０１％）のＡＦＭ画像を示す。そのＡｃ−Ａ４Ｋ−ＮＨ２（配列番号５５）／ｓｉＲＮＡ複合体は、ナノスフェア構造を形成する。
【００６０】
【図１０】図１０は、Ａｃ−Ａ３ＫＡ３−ＮＨ２（配列番号６５）／ｓｉＲＮＡ複合体（０．５％／０．０５％）のＡＦＭ画像を示す。そのＡｃ−Ａ３ＫＡ３−ＮＨ２（配列番号６５）／ｓｉＲＮＡ複合体は、ナノスフェア構造を形成する。
【００６１】
【図１１Ａ】図１１Ａおよび１１Ｂは、実施例１に記載されるとおりの細胞毒性データを示す。そのペプチドのみまたはそのペプチド／陰性コントロールｓｉＲＮＡからのルシフェラーゼ発光データが示される。［Ｉ］または［Ｈ］は、表４において特定される実験条件を示す。図１１Ａおよび１１Ｂは、それぞれ、方法１および方法２からのデータを示す。
【図１１Ｂ】同上。
【００６２】
【図１２Ａ】図１２Ａ〜１２Ｅは、実施例１に記載されるとおりのトランスフェクション有効性データを示す。図１２Ａ〜Ｃは、コントロールサンプル（例えば、モック、Ｄｈｒａｍａ−ｓｉＲＮＡ、Ｄｈｒａｍａ−ＮＣ  ｓｉＲＮＡ、ペプチド／ＮＣ−ｓｉＲＮＡ複合体サンプル）、ペプチド／ｓｉＲＮＡ複合体サンプルからのルシフェラーゼ発光を示す。図１２Ａおよび１２Ｂは、方法１からの結果を示す。図１２Ｃは、方法２からの結果を示す。図１２Ｄ（方法１）および１２Ｅ（方法２）は、ルシフェラーゼ発光の抑制パーセンテージを示す。そのペプチド／ｓｉＲＮＡ複合体からの各ルシフェラーゼ発光データは、ペプチド／ＮＣ  ｓｉＲＮＡ複合体からの相当するルシフェラーゼ発光データによって正規化されている。
【図１２Ｂ】同上。
【図１２Ｃ】同上。
【図１２Ｄ】同上。
【図１２Ｅ】同上。
【００６３】
【図１３】図１３は、種々の電荷比でのＡｃ−Ａ４Ｋ−ＮＨ２（配列番号５５）／ｓｉＲＩＮ複合体のζ電位を示す。そのサンプルサイズは３であり、エラーバーは、標準偏差を表す（ＳＤ）。
【発明を実施するための形態】
【００６４】
詳細な説明
本開示は、界面活性ペプチドナノ構造および被験体への薬剤の送達におけるそれらの使用に関する。本開示は、４個もしくはこれより少ないアミノ酸の疎水性アミノ酸反復を有するある種の界面活性ペプチドが、薬剤の送達に十分に適したナノスフェア構造を形成するという発見を包含する。
【００６５】
とりわけ、本開示は、５個またはこれより多くの疎水性アミノ酸反復を有する、特に、ナノスフェア構造（ナノスフェアまたは球状ナノ小胞）よりむしろナノチューブ構造を形成する傾向にある界面活性ペプチドの欠点を識別する。さらに、それらは、送達のための薬剤（例えば、ｓｉＲＮＡ）と複合体化した場合に、凝集する傾向にある。本開示は、被験体への薬剤、特に、ｓｉＲＮＡまたは他の治療剤の送達によりよく適したナノスフェア構造を提供する。
【００６６】
ペプチド
本開示は、少数（すなわち、４に等しいかもしくは４未満の整数）の反復疎水性アミノ酸を有する界面活性ペプチドナノ構造を提供する。いくつかの実施形態において、ペプチドは、以下の式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、またはＶＩＩＩ：
式Ｉ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｘ）ａ（Ｙ）ｍ
式ＩＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｙ）ｍ（Ｘ）ａ
式ＩＩＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｘ）ａ（Ｙ）ｍ（Ｘ）ｂ
式ＩＶ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｙ）ｍ（Ｘ）ａ（Ｙ）ｎ
式Ｖ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｘ）ａ（Ｚ）ｍ
式ＶＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｚ）ｍ（Ｘ）ａ
式ＶＩＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｘ）ａ（Ｚ）ｍ（Ｘ）ｂ
式ＶＩＩＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｚ）ｍ（Ｘ）ａ（Ｚ）ｎ；
に従うものが提供され、ここで
（Ｘ）は、生理学的ｐＨにおいて非極性かつ非荷電の側鎖を有するアミノ酸であり；
（Ｙ）は、生理学的ｐＨにおいてカチオン性の側鎖を有するアミノ酸であり；
（Ｚ）は、生理学的ｐＨにおいてアニオン性の側鎖を有するアミノ酸であり；
そしてここで
ａは、４に等しいかまたは４未満の整数であり；
ｂは、４に等しいかまたは４未満の整数であり；
ｍは、１に等しいかまたは１より大きい整数であり；そして
ｎは、１に等しいかまたは１より大きい整数である。
【００６７】
いくつかの実施形態において、上記（Ｘ）、（Ｙ）、および／または（Ｚ）のアミノ酸は、天然アミノ酸である。いくつかの実施形態において、上記（Ｘ）、（Ｙ）、および／または（Ｚ）のアミノ酸は、非天然アミノ酸である。いくつかの実施形態において、（Ｘ）は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、またはグリシンである。いくつかの実施形態において、（Ｙ）は、アルギニン、リジン、ヒスチジン、またはオルニチンである。いくつかの実施形態において、（Ｘ）はアルギニンであり、（Ｙ）はリジンである。いくつかの実施形態において、（Ｚ）は、アスパラギン酸またはグルタミン酸である。上記（Ｘ）、（Ｙ）、および／または（Ｚ）のアミノ酸は、Ｌ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸、またはこれらの組み合わせであり得る。
【００６８】
いくつかの実施形態において、疎水性反復アミノ酸の数は、４である。いくつかの実施形態において、疎水性反復アミノ酸の数は、３である。いくつかの実施形態において、疎水性反復アミノ酸の数は、２である。
【００６９】
いくつかの実施形態において、そのペプチド中のアミノ酸の総数は、約４〜約１０である。いくつかの実施形態において、そのペプチド中のアミノ酸の総数は、４、５、６、７、８、９、または１０である。
【００７０】
例示的なペプチド構造のアミノ酸配列は、表１に提供される。
表１．例示的な界面活性ペプチド
【表１−１】
2021506815.tif 000002
【表１−２】
2021506815.tif 000003
【００７１】
いくつかの実施形態において、そのペプチドは、アセチル化Ｎ末端および／またはアミノ化Ｃ末端を有する。アセチル化Ｎ末端および／またはアミノ化Ｃ末端を有する例示的なペプチドは、表２に示される。
表２．アミノ化Ｃ末端およびアセチル化Ｎ末端を有する例示的な界面活性ペプチド
【表２−１】
2021506815.tif 000004
【表２−２】
2021506815.tif 000005
【００７２】
ナノ構造
いくつかの実施形態において、界面活性ペプチドは、ナノスフェア構造を形成するようにアセンブルする。本明細書で使用される場合、ナノスフェア構造は、ナノスフェアおよび／または球状ナノ小胞を含む構造を包含する。球状ナノ小胞は、ナノスフェアに類似であるが、自己アセンブルする界面活性ペプチドを実質的に含まない中心を有する。
【００７３】
ナノ構造は、薬剤（例えば、ｓｉＲＮＡのような治療剤）の製剤化において重要な役割を果たす。原子間力顕微鏡（ＡＦＭ）研究は、５個またはこれより多くの反復疎水性アミノ酸を有する界面活性ペプチドが、代表的には、より望ましいナノスフェア構造とは対照的に、ナノチューブまたは二重層を形成することを示す。対照的に、４個もしくはこれより少ない反復疎水性アミノ酸を有する界面活性ペプチドは、ナノスフェア構造（例えば、球状ナノ小胞）を形成することが見出された。
【００７４】
Ａ３Ｋ（配列番号１）のナノ構造が二重層化膜であることは、以前に報告されている（Ｊ．  Ｐｈｙｓ．  Ｃｈｅｍ．  Ｂ，  ２０１４，  １１８  （４２），  ｐｐ  １２２１５−１２２２２）。Ａ３Ｋ（配列番号１）はまた、ゆるいペプチドの積み重なりとしてナノ構造を有することが報告されている。それは、潜在的に抗細菌能に関して研究されている（Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，  ２０１０，  １１  （２），  ｐｐ  ４０２−４１１）、別の報告では、Ａ３Ｋ（配列番号１）、Ａ６Ｋ（配列番号１０１）、およびＡ９Ｋ（配列番号１０２）は、脂質膜との相互作用に関して試験された（ＲＳＣ  Ａｄｖ．，  ２０１７，  ７，  ３５９７３）。しかし、上記の参考文献において報告されたものとは異なり、適切な条件下では、Ａ３Ｋ（配列番号１）は、図４に示されるとおりのナノスフェア構造を形成し得る。
【００７５】
Ａ４Ｋ（配列番号５）は、高度に水溶性であり、ナノチューブを形成するように自己アセンブルすることを示すＡ６Ｋとは異なって、水の中で関連する自己アセンブリを示さないことが以前に報告されている（Ｌａｎｇｍｕｉｒ，  ２０１４，  ３０  （３３），  ｐｐ  １００７２−１００７９）。しかし、以前に報告されているものとは対照的に、適切な条件下では、Ａ４Ｋ（配列番号５）は、図５に示されるように、水の中でナノスフェア構造（球状ナノ小胞）を形成し得ることが示される。
【００７６】
Ａ３ＫＡ３（配列番号１５）は、エレクトロスプレーイオン化条件の最適化のための試験化合物として以前に使用されている（Ｒａｐｉｄ  Ｃｏｍｍｕｎ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍ．  ２０１７，  ３１（１３）：１１２９−１１３６）。しかし、Ａ３ＫＡ３（配列番号１５）のナノ構造は、上記の参考文献中で記載されていない。適切な条件下では、Ａ３ＫＡ３（配列番号１５）は、図６に示されるとおりのナノスフェア構造（球状ナノ小胞）を形成するように自己アセンブリを受け得ることが本明細書で示される。
【００７７】
本開示は、本明細書で開示される界面活性ペプチドの優れた特質を示す。ペプチドをｐＨ７．５の水性溶液中でｓｉＲＮＡと複合体した実験の結果は、表３に示される。そのペプチドＡＡＡＫ（配列番号１）、ＡＡＡＡＫ（配列番号５）、およびＡＡＡＫＡＡＡ（配列番号１５）は、０．１％（ｗ／ｖ）および０．５％（ｗ／ｖ）のペプチド濃度において、０．０１％（ｗ／ｖ）および０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のｓｉＲＮＡと複合体化した場合に、透過率研究において透明でありかつ実質的に相分離がないことが見出された。対照的に、類似の条件下では、ＡＡＡＡＡＫ（配列番号１０１）およびＡＡＡＡＡＡＫ（配列番号１０２）は、濁りかつ相分離した（表３の結果を参照のこと）。
表３．界面活性ペプチドおよびｐＨ７．５の水性溶液中での界面活性ペプチド／ｓｉＲＮＡ複合体の透過率研究
【表３】
2021506815.tif 000006
＃：  比較のための例示的な従来の自己アセンブリペプチド
＊：  顕著に濁りかつ相分離した。
【００７８】
組成物
４個に等しいかまたはこれより少ない反復疎水性アミノ酸を有する界面活性ペプチドは、送達のための種々の薬剤と製剤化され得る。いくつかの実施形態において、薬剤は、細胞に送達される（インビトロ送達）。いくつかの実施形態において、薬剤は、被験体に送達される（インビボ送達）。いくつかの実施形態において、水性溶液中に界面活性ペプチドを含む組成物が、提供される。
【００７９】
いくつかの実施形態において、そのペプチドは、少なくとも０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度にある。いくつかの実施形態において、そのペプチドは、約０．０１％（ｗ／ｖ）〜約０．５％（ｗ／ｖ）の濃度にある。いくつかの実施形態において、その水性溶液は、約６〜約８のｐＨを有する。いくつかの実施形態において、その水性溶液は、約７．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態において、その水性溶液は、約０Ｍ〜約０．３Ｍのイオン強度にある。いくつかの実施形態において、その水性溶液は、約０．１５Ｍのイオン強度にある。いくつかの実施形態において、その水性溶液は、等張性である。
【００８０】
ペイロード薬剤
いくつかの実施形態において、本発明のペプチドは、１種またはこれより多くのペイロード薬剤、例えば、治療剤または検出薬剤を含む。このような薬剤としては、例えば、ポリペプチド、核酸、サッカリド、脂質、低分子、金属、またはこれらの組み合わせを含む、例えば、任意の化学クラスの化合物または実体が挙げられる。いくつかの実施形態において、薬剤は、それが天然において見出されるおよび／または天然から得られるという点において、天然の生成物であるかまたは天然の生成物を含む。いくつかの実施形態において、薬剤は、それが人の手による活動を通じて設計される、操作されるおよび／もしくは生成されるか、または天然において見出されないという点において、人工の１種またはこれより多くの実体であるか、またはその実体を含む。いくつかの実施形態において、薬剤は、単離された形態または純粋形態で利用され得る；いくつかの実施形態において、薬剤は、粗製形態で利用され得る。本発明に従って利用され得る薬剤のうちのいくつかの特定の実施形態としては、低分子、アプタマー、核酸（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッド、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム）、ペプチド、ペプチド模倣物などが挙げられる。
【００８１】
検出薬剤とは、検出可能である、任意のエレメント、分子、官能基、化合物、フラグメントまたは部分に言及し得る。いくつかの実施形態において、検出実体が提供されるか、または単独で利用される。いくつかの実施形態において、検出実体が提供される、および／または別の薬剤と会合した状態で（例えば、結合して）利用される。検出実体の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：種々のリガンド、放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、１８Ｆ、１９Ｆ、３２Ｐ、３５Ｓ、１３５Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、６４Ｃｕ、１８７Ｒｅ、１１１Ｉｎ、９０Ｙ、９９ｍＴｃ、１７７Ｌｕ、８９Ｚｒなど）、蛍光色素（特定の例示的な蛍光色素に関しては、以下を参照のこと）、化学発光薬剤（例えば、アクリジニウムエステル（ａｃｒｉｄｉｎｕｍ  ｅｓｔｅｒ）、安定化ジオキセタンなどのような）、生物発光薬剤、スペクトル分解可能な無機蛍光半導体ナノ結晶（すなわち、量子ドット）、金属ナノ粒子（例えば、金、銀、銅、白金など）ナノクラスター、常時性金属イオン、酵素（酵素の具体例に関しては、以下を参照のこと）、比色標識（例えば、色素、コロイド金などのような）、ビオチン、ジオキシゲニン、ハプテン、および抗血清またはモノクローナル抗体が入手可能なタンパク質。
【実施例】
【００８２】
例示
実施例１：  インビトロで腫瘍細胞にｓｉＲＮＡを送達するための界面活性ペプチドの使用
本実施例は、とりわけ、インビトロで腫瘍細胞にｓｉＲＮＡを送達するための界面活性ペプチドの例示的使用、ならびにその細胞毒性およびトランスフェクション有効性を記載する。
【００８３】
ｓｉＲＮＡ（ルシフェラーゼＧＬ３二重鎖）を、Ａｃ−Ａ４Ｋ−ＮＨ２（配列番号５５）、Ａｃ−Ａ３ＫＡ３−ＮＨ２（配列番号５５）、Ａｃ−Ａ６Ｋ−ＮＨ２（配列番号１０５）、およびコントロール薬剤（ＤｈａｒｍａＦＥＣＴ  １；  市販の脂質トランスフェクション薬剤）と複合体化した。そのｓｉＲＮＡおよびペプチド複合体を、ナノスフェア構造へと配置した。ナノスフェア構造を含む組成物を、予備的なトランスフェクション有効性および細胞毒性に至るように、腫瘍細胞（ＭＣＦ−７細胞；  乳がん細胞株）にインビトロで提供した。
【００８４】
本実施例のために２つの方法を利用した。方法１に関しては、ＭＣＦ−７細胞を、プレート上で培養した。そのｓｉＲＮＡおよびペプチド複合体を、その細胞を覆う培養培地に添加した。そのｓｉＲＮＡおよびペプチド複合体およびその細胞を含む培養ディッシュ（９６ウェル）を、４８時間インキュベートした。方法２に関しては、ＭＣＦ−７細胞の濃縮培養（５×１０６  細胞／ｍｌ）をチューブ中に調製した。そのｓｉＲＮＡおよびペプチド複合体を、懸濁物へと付与した。その細胞混合物を、そのチューブ中で１時間インキュベートした。その細胞混合物を、その培養ディッシュの中にプレートし、４８時間インキュベートした。各サンプルからのルシフェラーゼ発光を、観察した。
【００８５】
表４は、実験条件、例えば、ｓｉＲＮＡおよびペプチド界面活性剤の濃度、電荷比、ならびにｓｉＲＮＡのタイプ（例えば、ルシフェラーゼＧＬ３二重鎖またはその陰性コントロール）をまとめる。本実施例において使用した緩衝液は、Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ１（無血清）であった。コントロールサンプルとして、緩衝液のみ、ペプチド界面活性剤ありまたはなしの陰性コントロール（ＮＣ）ｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ（もしくはＮＣ  ｓｉＲＮＡ）ありまたはなしのＤｈａｒｍａＦＥＣＴ  １を、その細胞で試験した。
表４．実験条件
【表４】
2021506815.tif 000007
【００８６】
細胞毒性。  この試験に関して、そのサンプルは、ＮＣ  ｓｉＲＮＡを含むか、またはｓｉＲＮＡを全く含まなかった。図１１Ａおよび１１Ｂに示されるように、そのペプチド（Ａｃ−Ａ６Ｋ−ＮＨ２（配列番号１０５）、Ａｃ−Ａ４Ｋ−ＮＨ２（配列番号５５）およびＡｃ−Ａ３ＫＡ３−ＮＨ２（配列番号５５））は、ＤｈａｒｍａＦＥＣＴより小さなルシフェラーゼ発光の減少を示した。これは、そのペプチドがＤｈａｒｍａＦＥＣＴより毒性が低いことを示す。
【００８７】
有効性。  図１２Ｄおよび１２Ｅに示されるように、ルシフェラーゼ発光は、ｓｉＲＮＡのみのサンプルと比較して、その電荷比４．５において全ての界面活性剤に関して減少した。そのｓｉＲＮＡおよびペプチド複合体からのルシフェラーゼ発光の低減は、ＤｈａｒｍａＦＥＣＴからの低減に類似であった（例えば、約２０％）。ルシフェラーゼ発光の増大を、高濃度混合物（ｓｉＲＮＡ  ２５０ｎＭ、Ａ６Ｋ  ５１．７５μＭ）でのＡ６Ｋ／ｓｉＲＮＡに関して観察した。ＤｈａｒｍａＦＥＣＴからのルシフェラーゼ発光の大きな低減は、細胞毒性に由来し得る。
【００８８】
従って、本実施例におけるデータは、そのペプチドまたはそのｓｉＲＮＡおよびペプチド複合体が、公知のトランスフェクション試薬より毒性が低く、かつそのｓｉＲＮＡおよびペプチド複合体が、その標的遺伝子を送達し効果的に抑制することを示す。
【００８９】
実施例２：  インビボで腫瘍細胞にｓｉＲＮＡを送達するための界面活性ペプチドの使用
本実施例は、とりわけ、インビボで腫瘍細胞にｓｉＲＮＡを送達するための界面活性ペプチドの例示的使用を記載する。ｓｉＲＮＡを、Ａｃ−Ａ４Ｋ−ＮＨ２（配列番号５５）、Ａｃ−Ａ３ＫＡ３−ＮＨ２（配列番号５５）、Ａｃ−Ａ６Ｋ−ＮＨ２（配列番号１０５）、またはコントロールペプチドと複合体化する。そのｓｉＲＮＡおよびペプチド複合体を、ナノスフェア構造へと配置する。そのナノスフェア構造を含む組成物を、マウス腫瘍モデルに投与する。１種またはこれより多くのがん関連遺伝子は抑制され、その腫瘍のサイズは減少する。
【００９０】
実施例３：  界面活性ペプチド／ｓｉＲＮＡ複合体の特徴付け
本実施例は、とりわけ、界面活性ペプチド／ｓｉＲＮＡ複合体の例示的特徴付けを記載する。
【００９１】
ζ電位を、Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ  ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ）によって測定して、その複合体の界面動電位を特徴づけた。Ａｃ−Ａ４Ｋ−ＮＨ２（配列番号５５）濃度は、水性溶液中で０．５ｗ／ｖ％であった。ｓｉＲＮＡ（リボフォリンＩＩ、ＲＰＮ２）濃度を、Ａ４Ｋ／ｓｉＲＮＡのそれらの種々の電荷比のために制御した。Ａｃ−Ａ４Ｋ−ＮＨ２（配列番号５５）単独のζ電位は、＋２１．９であった。これは、Ａ４Ｋナノスフェアの表面が、Ａｃ−Ａ４Ｋ−ＮＨ２（配列番号５５）中のリジンの一級アミンが原因で、正に荷電していたことを示す。Ａ４Ｋ／ｓｉＲＮＡ混合物のζ電位は、図１３に示されるように、ｓｉＲＮＡが多くなるほどより大きく負になる。その装置のみが、約３．８ｎｍより大きな分散相を検出し、かつ水の中のｓｉＲＮＡのサイズが直径約２ｎｍであることから、その測定のみが、会合していないｓｉＲＮＡではなく、Ａｃ−Ａ４Ｋ−ＮＨ２（配列番号５５）またはＡｃ−Ａ４Ｋ−ＮＨ２（配列番号５５）／ｓｉＲＮＡ複合体の界面動電位を読み取る。よって、その結果は、負に荷電したｓｉＲＮＡ分子がＡ４Ｋナノスフェアの正に荷電した表面上に結合されたことを示す。従って、そのデータは、ｓｉＲＮＡがＡｃ−Ａ４Ｋ−ＮＨ２（配列番号５５）と成功裡に複合体化されたことを示す。
【図１（Ａ）】
2021506815.tif 000008
【図１（Ｂ）】
2021506815.tif 000009
【図１（Ｃ）】
2021506815.tif 000010
【図２】
2021506815.tif 000011
【図３】
2021506815.tif 000012
【図４】
2021506815.tif 000013
【図５】
2021506815.tif 000014
【図６】
2021506815.tif 000015
【図７Ａ】
2021506815.tif 000016
【図７Ｂ】
2021506815.tif 000017
【図８】
2021506815.tif 000018
【図９】
2021506815.tif 000019
【図１０】
2021506815.tif 000020
【図１１Ａ】
2021506815.tif 000021
【図１１Ｂ】
2021506815.tif 000022
【図１２Ａ】
2021506815.tif 000023
【図１２Ｂ】
2021506815.tif 000024
【図１２Ｃ】
2021506815.tif 000025
【図１２Ｄ】
2021506815.tif 000026
【図１２Ｅ】
2021506815.tif 000027
【図１３】
2021506815.tif 000028
【配列表】
2021506815000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和2年8月13日(2020.8.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ペプチドを含む組成物であって、ここで前記ペプチドは、以下の式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、またはＶＩＩ：
式Ｉ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｘ）ａ（Ｙ）ｍ
式ＩＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｙ）ｍ（Ｘ）ａ
式ＩＩＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｘ）ａ（Ｙ）ｃ（Ｘ）ｂ
式ＩＶ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｙ）ｍ（Ｘ）ｄ（Ｚ）ｍ
式Ｖ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｘ）ａ（Ｚ）ｍ
式ＶＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｚ）ｍ（Ｘ）ａ
式ＶＩＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｘ）ａ（Ｚ）ｃ（Ｘ）ｂ；
に従い、ここで
（Ｘ）は、生理学的ｐＨにおいて非極性かつ非荷電の側鎖を有するアミノ酸であり；
（Ｙ）は、生理学的ｐＨにおいてカチオン性の側鎖を有するアミノ酸であり；
（Ｚ）は、生理学的ｐＨにおいてアニオン性の側鎖を有するアミノ酸であり；
そしてここで
ａは、４に等しいかまたは４未満の整数であり；
ｂは、４に等しいかまたは４未満の整数であり；
ｃは、２に等しいかまたは２未満の整数であり；
ｄは、３に等しいかまたは３未満の整数であり；
ｍは、１に等しい整数であり；そして
ｎは、１に等しいかまたは１より大きい整数である、
組成物。
【請求項２】
前記（Ｘ）、（Ｙ）、および／または（Ｚ）のアミノ酸は、天然アミノ酸および非天然アミノ酸のうちの１つである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ａまたはｂの整数は、３および４のうちの１つである、請求項１〜２のいずれかに記載の組成物。
【請求項４】
（Ｘ）は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、またはグリシンである、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
（Ｙ）は、アルギニン、リジン、ヒスチジン、またはオルニチンである、請求項１〜４のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
（Ｚ）は、アスパラギン酸またはグルタミン酸である、請求項１〜５のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
各アミノ酸は、Ｌ−アミノ酸およびＤ−アミノ酸のうちの１つである、請求項１〜６のいずれかに記載の組成物。
【請求項８】
前記ペプチドは、改変されたＮ末端および／または改変されたＣ末端を含む、請求項１〜６のいずれかに記載の組成物。
【請求項９】
前記ペプチドは、配列番号１〜５０のうちのいずれか、または配列番号５１〜１００のうちのいずれかに従うアミノ酸配列を有する、請求項１〜８のいずれかに記載の組成物。
【請求項１０】
前記ペプチドは、少なくとも０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度で水性溶液中にある、請求項１〜８のいずれかに記載の組成物。
【請求項１１】
前記水性溶液は、約６〜約８のｐＨを有する、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記水性溶液は、約０Ｍ〜約０．３Ｍのイオン強度にあるか、または約０．１５Ｍのイオン強度にある、請求項１０〜１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項１３】
被験体への送達のための薬剤をさらに含み、前記薬剤は、がん細胞への送達のための核酸またはｓｉＲＮＡから選択される、請求項１〜１２のいずれかに記載の組成物。
【請求項１４】
疾患の処置のための請求項１〜１３のいずれかに記載の組成物。
【請求項１５】
がんの処置における使用のための、請求項１〜１３のいずれかに記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９１】
ζ電位を、Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ  ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ）によって測定して、その複合体の界面動電位を特徴づけた。Ａｃ−Ａ４Ｋ−ＮＨ２（配列番号５５）濃度は、水性溶液中で０．５ｗ／ｖ％であった。ｓｉＲＮＡ（リボフォリンＩＩ、ＲＰＮ２）濃度を、Ａ４Ｋ／ｓｉＲＮＡのそれらの種々の電荷比のために制御した。Ａｃ−Ａ４Ｋ−ＮＨ２（配列番号５５）単独のζ電位は、＋２１．９であった。これは、Ａ４Ｋナノスフェアの表面が、Ａｃ−Ａ４Ｋ−ＮＨ２（配列番号５５）中のリジンの一級アミンが原因で、正に荷電していたことを示す。Ａ４Ｋ／ｓｉＲＮＡ混合物のζ電位は、図１３に示されるように、ｓｉＲＮＡが多くなるほどより大きく負になる。その装置のみが、約３．８ｎｍより大きな分散相を検出し、かつ水の中のｓｉＲＮＡのサイズが直径約２ｎｍであることから、その測定のみが、会合していないｓｉＲＮＡではなく、Ａｃ−Ａ４Ｋ−ＮＨ２（配列番号５５）またはＡｃ−Ａ４Ｋ−ＮＨ２（配列番号５５）／ｓｉＲＮＡ複合体の界面動電位を読み取る。よって、その結果は、負に荷電したｓｉＲＮＡ分子がＡ４Ｋナノスフェアの正に荷電した表面上に結合されたことを示す。従って、そのデータは、ｓｉＲＮＡがＡｃ−Ａ４Ｋ−ＮＨ２（配列番号５５）と成功裡に複合体化されたことを示す。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
ナノスフェア構造を有するペプチドを含む組成物であって、ここで前記ペプチドは、以下の式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、またはＶＩＩＩ：
式Ｉ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｘ）ａ（Ｙ）ｍ
式ＩＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｙ）ｍ（Ｘ）ａ
式ＩＩＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｘ）ａ（Ｙ）ｍ（Ｘ）ｂ
式ＩＶ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｙ）ｍ（Ｘ）ａ（Ｙ）ｎ
式Ｖ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｘ）ａ（Ｚ）ｍ
式ＶＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｚ）ｍ（Ｘ）ａ
式ＶＩＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｘ）ａ（Ｚ）ｍ（Ｘ）ｂ
式ＶＩＩＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｚ）ｍ（Ｘ）ａ（Ｚ）ｎ；
に従う反復疎水性アミノ酸を有し、ここで
（Ｘ）は、生理学的ｐＨにおいて非極性かつ非荷電の側鎖を有するアミノ酸であり；
（Ｙ）は、生理学的ｐＨにおいてカチオン性の側鎖を有するアミノ酸であり；
（Ｚ）は、生理学的ｐＨにおいてアニオン性の側鎖を有するアミノ酸であり；
そしてここで
ａは、４に等しいかまたは４未満の整数であり；
ｂは、４に等しいかまたは４未満の整数であり；
ｍは、１に等しいかまたは１より大きい整数であり；そして
ｎは、１に等しいかまたは１より大きい整数である、
組成物。
（項目２）
前記（Ｘ）、（Ｙ）、および／または（Ｚ）のアミノ酸は、天然アミノ酸である、項目１に記載の組成物。
（項目３）
前記（Ｘ）、（Ｙ）、および／または（Ｚ）のアミノ酸は、非天然アミノ酸である、項目１に記載の組成物。
（項目４）
前記ａまたはｂの整数は、４である、項目１〜３のいずれかに記載の組成物。
（項目５）
前記ａまたはｂの整数は、３である、項目１〜４のいずれかに記載の組成物。
（項目６）
（Ｘ）は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、またはグリシンである、項目１〜５のいずれかに記載の組成物。
（項目７）
（Ｙ）は、アルギニン、リジン、ヒスチジン、またはオルニチンである、項目１〜６のいずれかに記載の組成物。
（項目８）
（Ｚ）は、アスパラギン酸またはグルタミン酸である、項目１〜７のいずれかに記載の組成物。
（項目９）
各アミノ酸は、Ｌ−アミノ酸である、項目１〜８のいずれかに記載の組成物。
（項目１０）
各アミノ酸は、Ｄ−アミノ酸である、項目１〜８のいずれかに記載の組成物。
（項目１１）
前記ペプチドは、長さが４〜１０アミノ酸である、項目１〜１０のいずれかに記載の組成物。
（項目１２）
前記ペプチドは、長さが５アミノ酸である、項目１〜１０のいずれかに記載の組成物。
（項目１３）
前記ペプチドは、長さが７アミノ酸である、項目１〜１０のいずれかに記載の組成物。
（項目１４）
前記ペプチドは、改変されたＮ末端および／または改変されたＣ末端を含む、項目１〜１３のいずれかに記載の組成物。
（項目１５）
前記ペプチドは、アセチル化Ｎ末端および／またはアミノ化Ｃ末端を有する、項目１〜１４のいずれかに記載の組成物。
（項目１６）
ナノスフェア構造を有するペプチドを含む組成物であって、ここで前記ペプチドは、配列番号１〜５０のうちのいずれかに従うアミノ酸配列を有する、組成物。
（項目１７）
ナノスフェア構造を有するペプチドを含む組成物であって、ここで前記ペプチドは、配列番号５１〜１００のうちのいずれかに従うアミノ酸配列を有する、組成物。
（項目１８）
ナノスフェア構造を有するペプチドを含む組成物であって、ここで前記ペプチドは、アミノ酸配列ＡＡＡＫ（配列番号１）を有する、組成物。
（項目１９）
ナノスフェア構造を有するペプチドを含む組成物であって、ここで前記ペプチドは、アミノ酸配列ＡＡＡＡＫ（配列番号５）を有する、組成物。
（項目２０）
ナノスフェア構造を有するペプチドを含む組成物であって、ここで前記ペプチドは、アミノ酸配列ＡＡＡＫＡＡＡ（配列番号１５）を有する、組成物。
（項目２１）
前記ペプチドは、水性溶液中にある、項目１〜２１のいずれかに記載の組成物。
（項目２２）
前記ペプチドは、少なくとも０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度にある、項目２１に記載の組成物。
（項目２３）
前記水性溶液は、約６〜約８のｐＨを有する、項目２１〜２２のいずれかに記載の組成物。
（項目２４）
前記水性溶液は、約０Ｍ〜約０．３Ｍのイオン強度にある、項目２１〜２３のいずれかに記載の組成物。
（項目２５）
前記水性溶液は、約０．１５Ｍのイオン強度にある、項目２１〜２３のいずれかに記載の組成物。
（項目２６）
前記水性溶液は等張性である、項目２１〜２５のいずれかに記載の組成物。
（項目２７）
薬物送達における使用のための、項目１〜２６のいずれかに記載の組成物。
（項目２８）
被験体への送達のための薬剤をさらに含む、項目１〜２６のいずれかに記載の組成物。
（項目２９）
前記薬剤は治療剤である、項目２８に記載の組成物。
（項目３０）
前記薬剤は薬物である、項目２８に記載の組成物。
（項目３１）
前記薬剤はｓｉＲＮＡである、項目２８に記載の組成物。
（項目３２）
前記ｓｉＲＮＡは、がん細胞への送達のためである、項目３１に記載の組成物。
（項目３３）
被験体への送達のための薬剤を製剤化する方法であって、前記方法は、前記薬剤と項目１〜２６のいずれかに記載の組成物とを接触させる工程を包含する、方法。
（項目３４）
被験体に薬剤を送達する方法であって、前記方法は、前記被験体に、ペプチドと製剤化された組成物を投与する工程を包含し、ここで前記ペプチドは、以下の式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、またはＶＩＩＩ：
式Ｉ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｘ）ａ（Ｙ）ｍ
式ＩＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｙ）ｍ（Ｘ）ａ
式ＩＩＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｘ）ａ（Ｙ）ｍ（Ｘ）ｂ
式ＩＶ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｙ）ｍ（Ｘ）ａ（Ｙ）ｎ
式Ｖ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｘ）ａ（Ｚ）ｍ
式ＶＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｚ）ｍ（Ｘ）ａ
式ＶＩＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｘ）ａ（Ｚ）ｍ（Ｘ）ｂ
式ＶＩＩＩ（Ｎ→Ｃ）：  （Ｚ）ｍ（Ｘ）ａ（Ｚ）ｎ；
に従う反復疎水性アミノ酸を有し、ここで
（Ｘ）は、生理学的ｐＨにおいて非極性かつ非荷電の側鎖を有するアミノ酸であり；
（Ｙ）は、生理学的ｐＨにおいてカチオン性の側鎖を有するアミノ酸であり；
（Ｚ）は、生理学的ｐＨにおいてアニオン性の側鎖を有するアミノ酸であり；
そしてここで
ａは、４に等しいかまたは４未満の整数であり；
ｂは、４に等しいかまたは４未満の整数であり；
ｍは、１に等しいかまたは１より大きい整数であり；そして
ｎは、１に等しいかまたは１より大きい整数である、
方法。
（項目３５）
前記（Ｘ）、（Ｙ）、および／または（Ｚ）のアミノ酸は、天然アミノ酸である、項目３４に記載の方法。
（項目３６）
前記（Ｘ）、（Ｙ）、および／または（Ｚ）のアミノ酸は、非天然アミノ酸である、項目３４に記載の方法。
（項目３７）
前記ａまたはｂの整数は、４である、項目３４〜３６のいずれかに記載の方法。
（項目３８）
前記ａまたはｂの整数は、３である、項目３４〜３７のいずれかに記載の方法。
（項目３９）
（Ｘ）は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、またはグリシンである、項目３４〜３８のいずれかに記載の方法。
（項目４０）
（Ｙ）は、アルギニン、リジン、ヒスチジン、またはオルニチンである、項目３４〜３９のいずれかに記載の方法。
（項目４１）
（Ｚ）は、アスパラギン酸またはグルタミン酸である、項目３４〜４０のいずれかに記載の方法。
（項目４２）
各アミノ酸はＬ−アミノ酸である、項目３４〜４１のいずれかに記載の方法。
（項目４３）
各アミノ酸はＤ−アミノ酸である、項目３４〜４１のいずれかに記載の方法。
（項目４４）
前記ペプチドは、長さが４〜１０アミノ酸である、項目３４〜４２のいずれかに記載の方法。
（項目４５）
前記ペプチドは、長さが５アミノ酸である、項目３４〜４２のいずれかに記載の方法。
（項目４６）
前記ペプチドは、長さが７アミノ酸である、項目３４〜４２のいずれかに記載の方法。
（項目４７）
前記ペプチドは、改変されたＮ末端および／または改変されたＣ末端を含む、項目３４〜４６のいずれかに記載の方法。
（項目４８）
前記ペプチドは、アセチル化Ｎ末端および／またはアミノ化Ｃ末端を有する、項目３４〜４７のいずれかに記載の方法。
（項目４９）
被験体に薬剤を送達する方法であって、前記方法は、前記被験体に、ペプチドと製剤化された組成物を投与する工程を包含し、ここで前記ペプチドは、配列番号１〜５０のうちのいずれかに従うアミノ酸配列を有する、方法。
（項目５０）
被験体に薬剤を送達する方法であって、前記方法は、前記被験体に、ペプチドと製剤化された組成物を投与する工程を包含し、ここで前記ペプチドは、配列番号５１〜１００のうちのいずれかに従うアミノ酸配列を有する、方法。
（項目５１）
被験体に薬剤を送達する方法であって、前記方法は、前記被験体に、ペプチドと製剤化された組成物を投与する工程を包含し、ここで前記ペプチドは、アミノ酸配列ＡＡＡＫ（配列番号１）を有する、方法。
（項目５２）
被験体に薬剤を送達する方法であって、前記方法は、前記被験体に、ペプチドと製剤化された組成物を投与する工程を包含し、ここで前記ペプチドは、アミノ酸配列ＡＡＡＡＫ（配列番号５）を有する、方法。
（項目５３）
被験体に薬剤を送達する方法であって、前記方法は、前記被験体に、ペプチドと製剤化された組成物を投与する工程を包含し、ここで前記ペプチドは、アミノ酸配列ＡＡＡＫＡＡＡ（配列番号１５）を有する、方法。
（項目５４）
前記ペプチドは水性溶液中にある、項目３４〜５３のいずれかに記載の方法。
（項目５５）
前記ペプチドは、少なくとも０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度にある、項目５４に記載の方法。
（項目５６）
前記水性溶液は、約６〜約８のｐＨを有する、項目５４〜５５のいずれかに記載の方法。
（項目５７）
前記水性溶液は、約０Ｍ〜約０．３Ｍのイオン強度にある、項目５４〜５６のいずれかに記載の方法。
（項目５８）
前記水性溶液は、約０．１５Ｍのイオン強度にある、項目５４〜５６のいずれかに記載の方法。
（項目５９）
前記水性溶液は、等張性である、項目５４〜５８のいずれかに記載の方法。
（項目６０）
前記薬剤は治療剤である、項目３５〜５８のいずれかに記載の方法。
（項目６１）
前記薬剤は薬物である、項目３５〜５８のいずれかに記載の方法。
（項目６２）
前記薬剤はｓｉＲＮＡである、項目３５〜５８のいずれかに記載の方法。
（項目６３）
前記薬剤はがん細胞に送達される、項目６２に記載の方法。
【国際調査報告】
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