(57)【要約】  本発明は、前立腺がんの治療又は予防のためのＴ細胞媒介免疫応答を誘導するための組成物であって、ポックスウイルスＦ１１プロモーターの制御下で５Ｔ４抗原ポリペプチドを発現する改変ワクシニアウイルスアンカラ（ＭＶＡ、modified Vaccinia virus Ankara）ベクターを含む組成物に関する。適切には、前記ポックスウイルスＦ１１プロモーターは、内在性ＭＶＡ  Ｆ１１プロモーターである。より適切には、前記ベクターは、配列番号１のアミノ酸配列を有するポリペプチドを発現する、又は前記ベクターは、配列番号２の核酸配列を有するポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドを発現する。本発明はまた、使用及び方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
前立腺がんの治療又は予防のためのＴ細胞媒介免疫応答を誘導するための組成物であって、ポックスウイルスＦ１１プロモーターの制御下で５Ｔ４抗原ポリペプチドを発現する改変ワクシニアウイルスアンカラ（ＭＶＡ、modified Vaccinia virus Ankara）ベクターを含む、前記組成物。
【請求項２】
ポックスウイルスＦ１１プロモーターが、内在性ＭＶＡ  Ｆ１１プロモーターである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
ベクターが、配列番号１のアミノ酸配列を有するポリペプチドを発現する、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
ベクターが、配列番号２の核酸配列を有するポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドを発現する、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項５】
アジュバントをさらに含む、請求項１〜４のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
５Ｔ４抗原ポリペプチドに対するＴ細胞媒介免疫応答の誘導に使用するための、請求項１〜５のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
Ｔ細胞媒介免疫応答がＣＤ８＋Ｔ細胞応答を含む、請求項６に記載の使用のための組成物。
【請求項８】
前立腺がんの治療又は予防に使用するための、請求項１〜６のいずれかに記載の組成物。
【請求項９】
対象において５Ｔ４抗原ポリペプチドに対するＴ細胞媒介免疫応答を誘導する方法であって、請求項１〜６のいずれかに記載の組成物を、前記対象に投与するステップを含む、前記方法。
【請求項１０】
組成物が、１×１０６〜５×１０８プラーク形成単位（ｐｆｕ）の用量で投与される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
組成物が、１×１０７ｐｆｕの用量で投与される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
Ｔ細胞媒介免疫応答がＣＤ８＋Ｔ細胞応答を含む、請求項９〜１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
投与が、プライム−ブーストワクチン接種プロトコルの一部として実行される、請求項９〜１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
投与が、以前のプライムワクチン接種へのブーストとして提供される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
以前のプライムワクチン接種が、５Ｔ４抗原ポリペプチドを発現するアデノウイルスを投与するステップによって提供される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
アデノウイルスがＣｈＡｄＯｘ１である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
アデノウイルスが、１×１０８〜１×１０１２ウイルス粒子（ＶＰ）の用量で投与される、請求項１５又は１６に記載の方法。
【請求項１８】
アデノウイルスが、１×１０９〜１×１０１１ＶＰの用量で投与される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
アデノウイルスが、１×１０１０ＶＰの用量で投与される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
対象における前立腺がんの治療又は予防のためのＴ細胞媒介免疫応答を誘導する方法であって、請求項１〜６のいずれかに記載の組成物を、前記対象に投与するステップを含む、前記方法。
【請求項２１】
組成物が、１×１０６〜５×１０８プラーク形成単位（ｐｆｕ）の用量で投与される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
組成物が、１×１０７ｐｆｕの用量で投与される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
Ｔ細胞媒介免疫応答がＣＤ８＋Ｔ細胞応答を含む、請求項２０〜２２のいずれかに記載の方法。
【請求項２４】
投与が、プライム−ブーストワクチン接種プロトコルの一部として実行される、請求項２０〜２３のいずれかに記載の方法。
【請求項２５】
投与が、以前のプライムワクチン接種へのブーストとして提供される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
以前のプライムワクチン接種が、５Ｔ４抗原ポリペプチドを発現するアデノウイルスを投与するステップによって提供される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
アデノウイルスがＣｈＡｄＯｘ１である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
アデノウイルスが、１×１０８〜１×１０１２ＶＰの用量で投与される、請求項２６又は２７に記載の方法。
【請求項２９】
アデノウイルスが、１×１０９〜１×１０１１ＶＰの用量で投与される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
アデノウイルスが、１×１０１０ＶＰの用量で投与される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
免疫チェックポイント阻害剤化合物を投与するステップをさらに含む、請求項２０〜３０のいずれかに記載の方法。
【請求項３２】
免疫チェックポイント阻害剤化合物が、抗ＰＤ１モノクローナル抗体である、請求項３１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、前立腺がんに伴う腫瘍抗原に対する、免疫応答、適切には防御免疫応答の誘導に関する。
【背景技術】
【０００２】
前立腺がんは、最も一般的な非皮膚がんであり、男性におけるがん死の第２の主要な死因である。２０１２年には世界的におよそ１１０万人の男性が本疾患と診断され、その結果、男性のすべてのがん診断の１５％を占めている。前立腺がんの症例の７０％超が、先進諸国で発生している。例えば、米国だけでも２０１４年に、推定２３３，０００人の男性が本疾患と診断され、およそ３０，０００人の死亡が予測された（Siegel et al (2014). CA Cancer J Clin 64:9-29）。前立腺がんの治療には大幅な進歩があったが、本疾患の進行期に有効な治療はほんのわずかで、これらは不十分な効力を示してきた。したがって、効果的な療法の開発は、本疾患の治療の優先度が依然として高いままである。
【０００３】
前立腺がんを含めてがんに対する能動免疫療法（ワクチン）を開発するための取組みが強化されてきた。従来のワクチンは、外来の「非自己」抗原の認識に基づいて、病原体に対する防御免疫を誘導する際に効果的であった。しかし、今日までに特徴づけられているがん抗原の大多数は、腫瘍細胞及び正常細胞によって発現される未変化の「自己」抗原である。このことは、がんに対する効果的な能動免疫療法の開発に課題をもたらす。免疫監視とがんの除去に関するこのような制限にもかかわらず、がん免疫は様々な腫瘍の形態において臨床的に観察されてきた（Challis & Stam (1990). Acta Oncol. 29:545-550）。加えて、腫瘍切片の組織病理学によって、腫瘍床周辺でのリンパ球の浸潤が明らかになり、最近の研究が指示するところは、腫瘍周囲にそのような浸潤がある卵巣がん患者は、リンパ球浸潤のない同様の病期の患者と比較して、予後が改善することである（Zhang et al (2003). N Engl J Med. 348:203-213）。したがって、免疫レパートリーには、適切に活性化される場合、腫瘍を拒絶することができる自己反応性免疫細胞が含まれる。こういった自己反応性細胞はまた、正常細胞上の標的分子を認識すると、組織破壊を誘導して毒性の自己免疫を招く可能性を持っている。したがって、適切な免疫学的標的を使用して宿主の抗腫瘍免疫を活性化することを目的とする療法の開発は、依然として、前立腺がんを含めてがんの治療において成功への見込みのあるルートである。
【０００４】
Ｔ細胞はがんの免疫制御に重要であることが知られており、この２０年間にわたり蓄積された多大な一連の証拠が示したところは、同じ抗原をコードする異なるベクターの逐次投与を含むプライム−ブーストプロトコルによって、いくつかの動物モデル及び治験において防御能力とともにかなり高度の免疫応答がもたらされることである。実際、サルアデノウイルスプライム及びＭＶＡブーストに基づいたワクチン接種戦略は、治験において一部のヒト病原体に対する多機能性防御Ｔ細胞応答を誘導するための最もパワフルなアプローチであることが判明した（Ewer et al (2013). Nat Commun. 4:2836; Antrobus et al (2014). J Am Soc Gene Therapy. 22:668-674; Borthwick et al. (2014). Mol Ther. 22:464-475; Swadling et al (2014). Science translational medicine. 6:261ra153; Hodgson et al (2015). J Inf Dis. 211:1076-1086; and Ewer et al (2016). New Engl J Med. 374:1635-1646）。
【０００５】
見込みはあるが、がんにおける治療的ワクチン接種の使用は多くの課題をもたらし、自己抗原に対する寛容と腫瘍によって据え付けられる能動的な免疫抑制メカニズムとが効力を妨害する主要な２つの要因である。最も先端的な２つ前立腺がん免疫療法剤、Sipuleucel-T及びProstVacは、それぞれ、明確である２つの前立腺がん抗原、前立腺酸性フォスファターゼ（ＰＡＰ、prostatic acid phosphatase）及び前立腺特異的抗原（ＰＳＡ、prostate-specific antigen）を標的としている。５Ｔ４は、共有腫瘍抗原のファミリーに属する癌胎児性糖タンパク質であるが、前立腺がんワクチン用の見込みのある別の抗原候補物質である。これは、１９９０年に、ヒト栄養膜及びがん細胞の共有表面分子を探索することにより、それらが半異物としての胎児の生存において機能を果たす可能性があるという理論的根拠を持って、同定された（Southall et al (1990). Br J Cancer. 61:89-95）。５Ｔ４は、広範囲のヒト固形悪性腫瘍で高度に発現していることから（Southall et al. (1990). Br J Cancer. 61:89-95; Starzynska et al (1994). Br J Cancer. 69:899-902; and Amato & Stepankiw (2012). Future Oncol. 8:231-237）、その発現が疾患の進行と明白に相関していることから（Stern et al (2014). Seminars in Cancer Biology. 29:13-20; and Stern & Harrop (2016). Cancer Immunology, Immunotherapy. 2016:1-12）、がん免疫療法の潜在的な標的として集中的探査の対象であった。
【０００６】
改変ワクシニアアンカラウイルス（ＭＶＡ）から発現された５Ｔ４タンパク質を用いて、５Ｔ４を標的とするワクチンの治験が１０年よりも前に始まった。このワクチンは、TroVaxの商品名で知られる同種のプライム−ブーストワクチンとして後期結腸直腸がん患者に投与され、第Ｉ〜第III相治験の過程で今日までに結腸直腸がん、乳がん、腎がん、前立腺がん、及び中皮腫の５００人超の患者に与えられてきた（Kim et al (2010). Human Vaccines. 6:784-791; and Al-Taei et al (2012). Lung Cancer. 77:312-318）。TroVaxは良好な安全性プロファイルを有し、５Ｔ４特異的抗体価が最も高い患者で無増悪生存率が改善するという傾向を持って、認容性は良好であった；しかし、ワクチン特異的細胞免疫応答及び臨床的効能は中程度であった（Harrop et al (2010). J immunotherapy. 33:999-1005; and Harrop et al (2012). Cancer Immunology, Immunotherapy. 61:2283-2294）。
【０００７】
Harrop et al（Cancer Immunology, Immunotherapy 2014, 62(9);1511-1520）は、TroVax（登録商標）の臨床投与の結果を開示したが、ＭＶＡは、去勢抵抗性前立腺がんの患者においてドセタキセルとともに、ｍＨ５（改変Ｈ５）初期プロモーターの制御下で、５Ｔ４抗原を発現した。この研究が実証したところは、すべての患者におけるワクチン忍容性及びドセタキセル単独を受けている患者に比べて、ドセタキセルをプラスしたTroVax（登録商標）を受けている患者については、無増悪生存率の中央値がより大きいこと、である。しかし、評価したところ治療効能の向上は中程度であった。
【０００８】
Cappuccini et al（Oncotarget 2017, 8(29);47474-47489）は、前立腺がんのマウスモデルにおいて、異種プライム−ブーストレジメンの一部として、ｐ７．５後期プロモーターの制御下で、未改変５Ｔ４抗原と、ＭＨＣクラス２関連不変鎖（Iｉ）に融合した同じ抗原とを発現するＭＶＡの投与を比較した。この研究が実証したところは、未改変の５Ｔ４への抗体応答であるが、改変抗原を除いて、測定可能なＴ細胞応答については報告されなかった。未改変の「自己」抗原へのＴ細胞免疫応答のこういった欠如が示すところは、ｐ７．５プロモーターの制御下で未改変の５Ｔ４を発現するＭＶＡが効果的な抗腫瘍ワクチンではありそうにないことである。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Siegel et al (2014). CA Cancer J Clin 64:9-29
【非特許文献２】Challis & Stam (1990). Acta Oncol. 29:545-550
【非特許文献３】Zhang et al (2003). N Engl J Med. 348:203-213
【非特許文献４】Ewer et al (2013). Nat Commun. 4:2836
【非特許文献５】Antrobus et al (2014). J Am Soc Gene Therapy. 22:668-674
【非特許文献６】Borthwick et al. (2014). Mol Ther. 22:464-475
【非特許文献７】Swadling et al (2014). Science translational medicine. 6:261ra153
【非特許文献８】Hodgson et al (2015). J Inf Dis. 211:1076-1086
【非特許文献９】Ewer et al (2016). New Engl J Med. 374:1635-1646
【非特許文献１０】Southall et al (1990). Br J Cancer. 61:89-95
【非特許文献１１】Starzynska et al (1994). Br J Cancer. 69:899-902
【非特許文献１２】Amato & Stepankiw (2012). Future Oncol. 8:231-237
【非特許文献１３】Stern et al (2014). Seminars in Cancer Biology. 29:13-20
【非特許文献１４】Stern & Harrop (2016). Cancer Immunology, Immunotherapy. 2016:1-12
【非特許文献１５】Kim et al (2010). Human Vaccines. 6:784-791
【非特許文献１６】Al-Taei et al (2012). Lung Cancer. 77:312-318
【非特許文献１７】Harrop et al (2010). J immunotherapy. 33:999-1005
【非特許文献１８】Harrop et al (2012). Cancer Immunology, Immunotherapy. 61:2283-2294）
【非特許文献１９】Harrop et al（Cancer Immunology, Immunotherapy 2014, 62(9);1511-1520）
【非特許文献２０】Cappuccini et al (Oncotarget 2017, 8(29);47474-47489)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
したがって、単独で、又は他の任意の治療剤との組合せのいずれかで、前立腺がんに対する効果的な治療又は防御（protection）を達成することが実証されているワクチンは、先行技術にはない。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、先行技術に関連する問題を解決することを意図するものである。
【００１２】
内在性ウイルスＦ１１プロモーターの制御下で５Ｔ４タンパク質抗原を発現する改変ワクシニアウイルスアンカラ（ＭＶＡ）ベクターを含む組合せについて記載する。本発明は、ＭＶＡの内在性Ｆ１１プロモーターからの５Ｔ４の発現が、５Ｔ４を発現するアデノウイルスコンストラクトによる初期免疫に続いて、プライム−ブーストレジメンの一部として使用される場合、寛容性を破壊し、５Ｔ４特異的Ｔ細胞免疫応答を誘導するのに十分であった、という本発明者らによる驚くべき発見に基づくものである。したがって、本発明の組成物は、寛容性を破壊して抗原特異的免疫応答を誘導し、その結果、前立腺がんを治療する上で有用である。これらの利点を実証するデータを、以下の図及び実施例に提供する。
【００１３】
第１の態様では、本発明は、前立腺がんの治療又は予防のためのＴ細胞媒介免疫応答を誘導するための組成物であって、ポックスウイルスＦ１１プロモーターの制御下で５Ｔ４抗原ポリペプチドを発現する改変ワクシニアウイルスアンカラ（ＭＶＡ）ベクターを含む組成物を提供する。
【００１４】
第１の態様の組成物は、５Ｔ４抗原への免疫寛容を破壊し、これに対するＴ細胞媒介免疫応答を誘導するために有利に使用することができ、これによって、前立腺がんの効果的な治療又は予防が可能となる。
【００１５】
第１の態様の組成物によって発現される５Ｔ４ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を有することができ、又は配列番号２の核酸配列によってコードされるアミノ酸配列を有することができる。
【００１６】
有利には、組成物は、アジュバントをさらに含むことができ、組成物は、対象において５Ｔ４抗原ポリペプチドに対するＴ細胞媒介免疫応答を誘導し、前立腺がんを治療又は予防するために使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
次に、本発明を添付の図面を参照して一例として説明する。
【図１】５Ｔ４抗原のアミノ酸配列（配列番号１）を示す図である。
【図２】全長５Ｔ４抗原をコードする核酸配列（配列番号２）を示す図である。
【図３】ｍＨ５プロモーターでドライブされる発現と比較して、Ｆ１１プロモーターの制御下で５Ｔ４を発現するＭＶＡ．５Ｔ４によるブーストに続いて、血中の５Ｔ４特異的Ｔ細胞応答の大きさが有意により高いことを、例示する図である。Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、ｈ５Ｔ４抗原を発現するＣｈＡｄＯｘ１ベクター１０１０ＶＰを用いて、これに続いて、ｐ７．５、Ｆ１１、及びｍＨ５の各プロモーターの制御下でｈ５Ｔ４を発現するＭＶＡベクター１０７ｐｆｕを用いて、３週間間隔で筋肉内免疫するか、或いは、上記マウスに、Ｆ１１プロモーターによってドライブされる抗原発現による１０７ｐｆｕでの同種のＭＶＡ．ｈ５Ｔ４プライム−ブーストを与えた。グラフは、プライム−ブースト免疫後に実行されたエクスビボでの血液（Ａ）及び脾臓（Ｂ）のＥＬＩＳＰＯＴの代表的なデータを示す。Ｘ軸：群１〜４の投与レジメン。Ｙ軸：１０６ＰＢＭＣ当たりのスポット形成細胞（ＳＦＣ、spot forming cell）の数。バーは中央値を表す。（Ｃ＝ＣｈＡｄＯｘ１、Ｍ＝ＭＶＡ）。有意なｐ値が示されている。
【図４】ＣｈＡｄＯｘ１．５Ｔ４でプライミングし、ＭＶＡ．５Ｔ４＿Ｆ１１でブーストしたマウスからの血液及び脾臓における５Ｔ４特異的Ｔ細胞のフローサイトメトリー解析を例示し、多重のサイトカインを分泌する多機能性ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の生成を実証する図である。細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ、Intracellular cytokine staining）を、Ｆ１１プロモーターによってドライブされる抗原発現によるＭＶＡ．５Ｔ４ブーストに続いて、ＣｈＡｄＯｘ１．５Ｔ４で免疫したマウスから単離されたＰＢＭＣ及び脾細胞で実施した。グラフは、ｈ５Ｔ４ペプチドプールによる一晩のインビトロ刺激に応答してＩＦＮ−γ（Ａ）、ＴＮＦ−α（Ｂ）及びＩＬ−２（Ｃ）を分泌するＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージを示す。Ｘ軸：血液及び脾臓におけるＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の応答。Ｙ軸：Ｔ細胞を分泌する５Ｔ４特異的サイトカインの％。Δ値は、ｈ５Ｔ４ペプチドプールへの曝露に続くサイトカイン分泌Ｔ細胞のパーセンテージから、バックグラウンド（すなわち、特定の刺激なしに自発的にサイトカインを分泌するＴ細胞のパーセンテージ）を差し引くことによって算出される。バーは中央値を表す。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
第１の態様では、本発明は、前立腺がんの治療又は予防のためのＴ細胞媒介免疫応答を誘導するための組成物であって、ポックスウイルスＦ１１プロモーターの制御下で５Ｔ４抗原ポリペプチドを発現する改変ワクシニアウイルスアンカラ（ＭＶＡ）ベクターを含む組成物を提供する。ポックスウイルスＦ１１プロモーターの制御下で発現される５Ｔ４抗原ポリペプチドを発現するＭＶＡは、これまでに開示されておらず、したがって新規である。かかる組成物は、５Ｔ４抗原への免疫寛容を破壊し、これに対するＴ細胞媒介免疫応答を誘導するために有利に使用することができ、これによって、前立腺がんの効果的な治療又は予防が可能となる。
【００１９】
先行技術では、前立腺がんの治療又は予防のためのワクチンにおける未改変の５Ｔ４抗原の使用に対する思いこみが示唆されている。Cappuccini 2017 (ibid.)は、５Ｔ４への抗体応答が、同種又は異種のプライム−ブーストレジメンの一部としての未改変５Ｔ４抗原のＭＶＡ発現によって可能であることを確認した。しかし、異種プライム−ブーストレジメンでＭＶＡによって発現される５Ｔ４抗原へのインビトロＴ細胞媒介免疫応答の生成には、抗原とＭＨＣクラス２関連不変鎖（Ｉｉ）との融合が必要であった。本発明の利点は、内在性Ｆ１１プロモーターの制御下でＭＶＡによって発現される未改変の５Ｔ４抗原によって堅牢な細胞性免疫応答が誘導されることである。
【００２０】
ＭＶＡベースのワクチン候補物質を使用する従来技術のプライム−ブーストは、種々の適応症において、多数の様々な「非自己」抗原に対して堅牢なＴ細胞免疫応答を産生する。本発明の利点は、免疫寛容が破壊され、同様に堅牢なＴ細胞媒介免疫応答が「自己」抗原に対して生成されることである。この応答は、予想外であり、抗原の改変又は融合が不要であることから、より効果的な治療やより簡単な開発及び製造スキームを含めて、いくつかのメリットをもたらす。
【００２１】
好ましくは、ＭＶＡベクターは、ＭＶＡの内在性Ｆ１１プロモーターの制御下で５Ｔ４抗原ポリペプチドを発現する。内在性Ｆ１１プロモーターの制御下でのＭＶＡのＦ１１遺伝子座への抗原をコードするポリヌクレオチドの挿入は、国際刊行物である国際公開第２０１１／１２８７０４号パンフレットに先に記載されている。内在性Ｆ１１プロモーターの制御下で５Ｔ４抗原ポリペプチドを発現するそのようなベクターは、先に開示されておらず、したがって新規である。有利には、このコンフォメーションは、ＭＶＡベクターの製造を単純化する。加えて、Ｆ１１隣接配列のコザック様配列は、真核細胞での翻訳開始を助け、したがって、ＭＶＡによる５Ｔ４抗原の発現を強化すると考えられている。
【００２２】
本発明者らは、前立腺がんの治療又は予防のためのワクチンであって、配列番号１のアミノ酸配列を有する完全長の未改変ヒト５Ｔ４抗原ポリペプチドをコードする核酸配列を含有するＭＶＡウイルスベクターを含むワクチンを提供する。ＭＶＡコンストラクトは、組換えウイルスにマーカー遺伝子が存在しないように作製されている。
【００２３】
本発明のＭＶＡワクチンコンストラクト（（Ｆ１１）５Ｔ４）を、マウスモデルにおいて、改変Ｈ５初期プロモーター（（ｍＨ５）５Ｔ４）の制御下で又はｐ７．５初期／後期プロモーター（（ｐ７．５）５Ｔ４）の制御下で、５Ｔ４抗原を発現するＭＶＡコンストラクトと比較して、Ｔ細胞媒介免疫応答を評価した。異種プライム−ブーストレジメンの一部として投与した場合、ＭＶＡ（Ｆ１１）５Ｔ４コンストラクトによって、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ、peripheral blood mononuclear cell）及び脾細胞でＩＦＮγ  ＥＬＩＳＰＯＴアッセイを使用して評価して、堅牢な５Ｔ４特異的Ｔ細胞応答が誘導された（図３）。ＰＢＭＣでのこの応答は、ＭＶＡ（ｐ７．５）５Ｔ４によって誘導された応答よりも３倍超大きかったが、一方、ＭＶＡ（ｍＨ５）５Ｔ４を使用してＰＢＭＣで検出可能な応答は誘導されなかった（図３Ａ）。同じＭＶＡ（Ｆ１１）５Ｔ４コンストラクトは、同種のプライム−ブーストレジメンで単独で投与された場合、同じ５Ｔ４特異的応答を誘導できなかった。有利には、ＭＶＡ（Ｆ１１）５Ｔ４は、寛容性を破壊して５Ｔ４に対する堅牢なＴ細胞応答を誘導する上で効果的であった、したがって、前立腺がんを治療し又は予防する上で効果的であると期待される。
【００２４】
ある特定の実施形態では、ポックスウイルスＦ１１プロモーターが、内在性ＭＶＡ  Ｆ１１プロモーターである。ＭＶＡ  Ｆ１１プロモーターの領域にある内在性エンハンサー配列及びコザック様配列が、ヒト細胞における５Ｔ４抗原の転写を増強する働きをする。
【００２５】
特定の実施形態では、５Ｔ４抗原ポリペプチドが、配列番号１で提供されるアミノ酸配列を有する。
【００２６】
別の特定の実施形態では、５Ｔ４抗原ポリペプチドが、配列番号２に提供される核酸配列によってコードされるアミノ酸配列を有する。５Ｔ４抗原ポリペプチドをコードするそのようなコドン最適化配列の使用が、組成物の投与後の対象における抗原ポリペプチドの発現を改善する。
【００２７】
ある特定の実施形態では、組成物がアジュバントをさらに含む。アジュバントの包含によって、対象への組成物の投与時に生成される免疫応答を改善することができる。
【００２８】
本発明はまた、５Ｔ４抗原ポリペプチドへのＴ細胞媒介免疫応答の誘導における上で定義の組成物の使用を提供する。本発明者らは、組成物の投与が、「自己」抗原である５Ｔ４に対するそのような免疫応答を誘導する上で効果的であることを見いだした。本発明の組成物を使用して、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を誘導するのが好ましい。
【００２９】
有利には、組成物を、対象の前立腺がんの治療又は予防において役立つように投与することができる。
【００３０】
別の態様では、本発明は、５Ｔ４抗原ポリペプチドに対するＴ細胞媒介免疫応答を誘導し、前立腺がんの治療又は予防のためのＴ細胞媒介免疫応答を誘導する方法であって、かかるＴ細胞媒介免疫応答を必要とする対象に第１の態様の組成物を投与することを含む方法を提供する。
【００３１】
好ましい実施形態では、本発明の組成物が、１×１０６〜５×１０８プラーク形成単位（ｐｆｕ、plaque forming unit）の用量で、上記方法により投与される。最も好ましい実施形態では、組成物が、１×１０７ｐｆｕの用量で、上記方法により投与される。かかる用量は、堅牢な免疫応答を提供し、一方、組成物の不要な投与及び浪費を最小限に抑える。
【００３２】
ある特定の実施形態では、上記方法によって誘導されるＴ細胞媒介免疫応答が、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を含む。かかる細胞溶解性Ｔ細胞応答が、対象による５Ｔ４抗原を発現する細胞の効果的な排除に適している。
【００３３】
好ましい実施形態では、上記方法は、第１の態様の組成物を対象に投与して一次Ｔ細胞媒介免疫応答を誘導するか又は既存のＴ細胞媒介免疫応答を強化する、プライム−ブースト法である。特に好ましい実施形態では、第１の態様の組成物は、以前に投与されたプライムワクチン接種へのブーストとして投与される。かかる投与スケジュールによって、寛容性を有利には破壊し、堅牢な抗５Ｔ４Ｔ細胞応答の誘導が可能となることが示された。
【００３４】
上記方法の好ましいプライムワクチン接種が、５Ｔ４抗原ポリペプチドを発現するアデノウイルスの投与によって提供され、最も好ましい実施形態では、使用されるアデノウイルスがＣｈＡｄＯｘ１である。
【００３５】
好ましい実施形態では、５Ｔ４抗原ポリペプチドを発現するアデノウイルスを、１×１０８〜１×１０１２ウイルス粒子（ＶＰ、virus particle）の用量として上記方法で投与し、より好ましくはアデノウイルスが１×１０９〜１×１０１１ＶＰである。最も好ましい実施形態では、アデノウイルスが、１×１０１０ＶＰの用量で、上記方法により投与される。かかる用量は、堅牢な免疫応答を提供し、一方、組成物の不要な投与及び浪費を最小限に抑える。
【００３６】
さらなる実施形態では、本発明の方法は、免疫チェックポイント阻害剤化合物と組み合わせた本発明の第１の態様の組成物の投与をさらに含む。好ましいかかる実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤化合物が、抗ＰＤ１モノクローナル抗体である。
【００３７】
本明細書及び添付の特許請求の範囲全体を通して、「含む（comprise）」及び「含む（include）」という用語、並びに「含む（comprises）」、「含んでいる（comprising）」、「含む（includes）」及び「含んでいる（including）」などの変化形は、包括的に解釈されるべきである。すなわち、これらの単語は、文脈が許す限り、具体的に記載されていない他の要素又は整数が包含される可能性もあることを伝えることを意図するものである。
［実施例］
【００３８】
ＭＶＡコンストラクト
５Ｔ４抗原ポリペプチドをコードするコドン最適化ポリヌクレオチド（NCBI Reference Sequence: NM_006670.4）を、GeneArt Gene Synthesis（Thermo Fisher Scientific社）によって合成した。次いで、５Ｔ４導入遺伝子を、相同配列アームとしてＦ１１Ｌ  ＯＲＦの上流と下流（隣接）を有するように設計したシャトルプラスミドベクターにクローン化した。これらのアーム内に５Ｔ４導入遺伝子を挿入することにより、右相同アームの一部である内在性Ｆ１１プロモーターの利用を可能とし、一方、天然Ｆ１１Ｌ  ＯＲＦを欠失させた。この結果、ＭＶＡ．（Ｆ１１）５Ｔ４を生成するためのシャトルベクター（Ｆ１１シャトルベクター）が得られた。
【００３９】
ＭＶＡ．（ｍＨ５）５Ｔ４及びＭＶＡ．（ｐ７．５）５Ｔ４を、それぞれ、Harrop et al (2010)及びCappuccini et al (2017)に先に記載されているように構築した。
【００４０】
ＭＶＡコンストラクトは、組換えウイルスにマーカー遺伝子が存在しないように作製した。
【００４１】
５Ｔ４免疫原性
６匹の雄Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Harlan社、ＵＫ）の群は、１×１０１０ＶＰのＣｈＡｄＯｘ１．５Ｔ４（群１〜３）又は１×１０７ｐｆｕのＭＶＡ．（Ｆ１１）５Ｔ４（群４）の筋肉内（ｉ．ｍ．、intramuscular）投与からなるプライム免疫を０日目に受けた。
【００４２】
同じ動物は、１×１０７ｐｆｕのＭＶＡ．（ｐ７．５）５Ｔ４（群１）、１×１０７ｐｆｕのＭＶＡ．（Ｆ１１）５Ｔ４（群２）、１×１０７ｐｆｕのＭＶＡ．（ｍＨ５）５Ｔ４（群３）又は１×１０７ｐｆｕのＭＶＡ．（Ｆ１１）５Ｔ４（群４）のｉ．ｍ投与からなる、ブースト免疫を２１日目に受けた。
【００４３】
ブーストの３週間後（４２日目）に各マウスから血液と脾臓を採取し、ＰＢＭＣと脾細胞についてＩＦＮｇ  ＥＬＩＳＰＯＴによって５Ｔ４特異的Ｔ細胞の存在について試験した。ＥＬＩＳＰＯＴ解析の結果を図３に提供する。
【００４４】
５Ｔ４特異的Ｔ細胞のフローサイトメトリー解析も、ＣｈＡｄＯｘ１．５Ｔ４でプライミングし、ＭＶＡ．（Ｆ１１）５Ｔ４でブーストしたマウスからのＰＢＭＣ及び脾細胞で実施した。フローサイトメトリー解析の結果を図４に提供する。
【００４５】
すべての動物の手順は、プロジェクトライセンス３０／２９４７の英国動物（科学的処置）法（ＡＳＰＡ、the UK Animals (Scientific Procedures) Act）の条項に従って実行され、オックスフォード大学の動物管理及び倫理審査委員会によって承認されたものである。すべてのマウスは、特定病原体除去（ＳＰＦ、Specific Pathogen Free）条件下で、英国オックスフォードの大学の動物施設でのあらゆる手順の前に、落ち着かせるため少なくとも７日間収容した。
【００４６】
ヒト対象におけるＭＶＡ−（Ｆ１１）５Ｔ４の安全性及び免疫原性
ＭＶＡ−（Ｆ１１）５Ｔ４を、後期転移性前立腺がんを治療するための治験でヒト対象に投与した。
【００４７】
この前立腺がん患者は、２×１０１０ｖｐの用量で５Ｔ４をコードするサルアデノウイルスベクターＣｈＡｄＯｘ１の筋肉内（ｉ．ｍ．）投与からなるプライミング免疫を０週目に受け、及びチェックポイント阻害剤抗ＰＤ１の静脈内用量と一緒にＭＶＡ−（Ｆ１１）５Ｔ４のブースト筋肉内用量を４週目に受けた。同じ患者は、第２回目の免疫を１２週目と１６週目に受け、標準的なｉ．ｖ．用量の抗ＰＤ１を８週目と１２週目にさらに受けている。血液試料を、免疫応答を測定するために０、２、５、９、１３、１７、２４、及び３６週目に収集し、あらゆる有害事象（ＡＥ、adverse event）について文書化し、調査している。
【００４８】
１１人の患者がＭＶＡ−（Ｆ１１）５Ｔ４を投与されたが、安全性プロファイルは非常に良好であった。患者の５０％が、ワクチン接種の翌日に注射部位に痛みや圧痛を報告した。３件の深刻な有害事象（ＳＡＥ）があったが、調査により結論したことは、どの事象もＭＶＡ−（Ｆ１１）５Ｔ４に起因するものではなかったことである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和3年1月8日(2021.1.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
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【国際調査報告】
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