(57)【要約】  本発明は、骨格筋肥大誘発剤として、並びに、骨格筋再生を促進するため、骨格筋萎縮を防止するための、又は骨格筋組織減少及び／若しくは筋衰弱をもたらす疾患若しくは損傷の処置若しくは防止における、ＡＬＫ５阻害剤とその使用とに関する。さらに本発明は、対象における筋量、筋力、及び／又は筋パフォーマンスを増加させるための、そうした化合物の非治療的使用に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
任意でグルココルチコイドと組み合わせられた、骨格筋組織減少及び／又は筋衰弱をもたらす疾患又は障害の処置又は防止における使用のための、ＡＬＫ５阻害剤。
【請求項２】
ＡＬＫ５阻害剤と、グルココルチコイドと、薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項３】
骨格筋組織減少及び／又は筋衰弱をもたらす疾患又は障害の処置又は防止における使用のための、ＡＬＫ５阻害剤と、グルココルチコイドと、薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項４】
共に、個別に、又は連続して使用される組合せ製剤としてのＡＬＫ５阻害剤とグルココルチコイドとを含むキット。
【請求項５】
骨格筋組織減少及び／又は筋衰弱をもたらす疾患又は障害の処置における使用のための、共に、個別に、又は連続的に使用される組合せ製剤としてのＡＬＫ５阻害剤とグルココルチコイドとを含むキット。
【請求項６】
前記ＡＬＫ５阻害剤は、ＲｅｐＳｏｘ、ＳＢ５２５３３４、ＳＤ２０８、ＳＢ５０５１２４、Ｒ２６８７１２、ＬＹ３６４９４７、ＧＷ７８８３８８、Ｄ４４７６、及びＡ８３−０１、及びそれらの任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、又はプロドラッグよりなる群から選択される、請求項１に記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２に記載の医薬組成物、請求項３に記載の医薬組成物、請求項４に記載のキット、又は請求項５に記載のキット。
【請求項７】
前記ＡＬＫ５阻害剤は、ＲｅｐＳｏｘ、ＳＢ５２５３３４、ＳＤ２０８、ＳＢ５０５１２４、Ｒ２６８７１２、ＧＷ７８８３８８、Ｄ４４７６、及びＡ８３−０１、及びそれらの任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、又はプロドラッグよりなる群から選択される、請求項１に記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２に記載の医薬組成物、請求項３に記載の医薬組成物、請求項４に記載のキット、又は請求項５に記載のキット。
【請求項８】
前記ＡＬＫ５阻害剤は、ＲｅｐＳｏｘ、ＳＢ５０５１２４、Ｒ２６８７１２、ＧＷ７８８３８８、Ｄ４４７６、及びＡ８３−０１、及びそれらの任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、又はプロドラッグよりなる群から選択される、請求項１に記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２に記載の医薬組成物、請求項３に記載の医薬組成物、請求項４に記載のキット、又は請求項５に記載のキット。
【請求項９】
前記ＡＬＫ５阻害剤は、ＲｅｐＳｏｘ、及びＧＷ７８８３８８、及びそれらの任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、又はプロドラッグよりなる群から選択される、請求項１に記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２に記載の医薬組成物、請求項３に記載の医薬組成物、請求項４に記載のキット、又は請求項５に記載のキット。
【請求項１０】
前記ＡＬＫ５阻害剤は、ＲｅｐＳｏｘ、又はその任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである、請求項１に記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２に記載の医薬組成物、請求項３に記載の医薬組成物、請求項４に記載のキット、又は請求項５に記載のキット。
【請求項１１】
前記ＡＬＫ５阻害剤は、ＧＷ７８８３８８、又はその任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである、請求項１に記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２に記載の医薬組成物、請求項３に記載の医薬組成物、請求項４に記載のキット、又は請求項５に記載のキット。
【請求項１２】
前記ＡＬＫ５阻害剤は、ＳＢ５２５３３４、又はその任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである、請求項１に記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２に記載の医薬組成物、請求項３に記載の医薬組成物、請求項４に記載のキット、又は請求項５に記載のキット。
【請求項１３】
前記ＡＬＫ５阻害剤は、ＳＤ２０８、又はその任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである、請求項１に記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２に記載の医薬組成物、請求項３に記載の医薬組成物、請求項４に記載のキット、又は請求項５に記載のキット。
【請求項１４】
前記ＡＬＫ５阻害剤は、ＳＢ５０５１２４、又はその任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである、請求項１に記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２に記載の医薬組成物、請求項３に記載の医薬組成物、請求項４に記載のキット、又は請求項５に記載のキット。
【請求項１５】
前記ＡＬＫ５阻害剤は、Ｒ２６８７１２、又はその任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである、請求項１に記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２に記載の医薬組成物、請求項３に記載の医薬組成物、請求項４に記載のキット、又は請求項５に記載のキット。
【請求項１６】
前記ＡＬＫ５阻害剤は、Ｄ４４７６、又はその任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである、請求項１に記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２に記載の医薬組成物、請求項３に記載の医薬組成物、請求項４に記載のキット、又は請求項５に記載のキット。
【請求項１７】
前記ＡＬＫ５阻害剤は、Ａ８３−０１、又はその任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである、請求項１に記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２に記載の医薬組成物、請求項３に記載の医薬組成物、請求項４に記載のキット、又は請求項５に記載のキット。
【請求項１８】
前記グルココルチコイドは、プレドニゾロン、プレドニゾン、コルチゾン、コルチコステロン、ヒドロコルチゾン、フルドロコルチゾン、フルオロメトロン、デオキシコルチコステロン、ケトコナゾール、ブデソニド、メチルプレドニゾロン、フルチカゾン、クロベタゾール、クロベタゾン、フルオシノロン、フルニソリド、モメタゾン、プレドニカルベート、アムシノニド、ジフルコルトロン、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、デキサメタゾン、トリアムシノロン、及びデフラザコート、及びそれらの任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、又はプロドラッグよりなる群から、好ましくは、プレドニゾロン、プレドニゾン、及びデフラザコート、及びそれらの任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、又はプロドラッグよりなる群から選択される、請求項１及び６〜１７のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項３及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜１７のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜１７のいずれかに記載のキット。
【請求項１９】
前記グルココルチコイドは、プレドニゾロン、プレドニゾン、コルチゾン、コルチコステロン、フルドロコルチゾン、フルオロメトロン、デオキシコルチコステロン、ケトコナゾール、ブデソニド、メチルプレドニゾロン、フルチカゾン、クロベタゾール、クロベタゾン、フルオシノロン、フルニソリド、モメタゾン、プレドニカルベート、アムシノニド、ジフルコルトロン、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、トリアムシノロン、及びデフラザコート、及びそれらの任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、又はプロドラッグよりなる群から選択される、請求項１及び６〜１７のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項３及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜１７のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜１７のいずれかに記載のキット。
【請求項２０】
前記グルココルチコイドは、プレドニゾロン、又はプレドニゾン、又はそれらの任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである、請求項１及び６〜１７のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項３及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜１７のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜１７のいずれかに記載のキット。
【請求項２１】
前記グルココルチコイドは、プレドニゾロン、又はその任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである、請求項１及び６〜１７のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項３及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜１７のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜１７のいずれかに記載のキット。
【請求項２２】
前記グルココルチコイドは、プレドニゾン、又はその任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである、請求項１及び６〜１７のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項３及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜１７のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜１７のいずれかに記載のキット。
【請求項２３】
前記グルココルチコイドは、コルチゾン、又はその任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである、請求項１及び６〜１７のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項３及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜１７のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜１７のいずれかに記載のキット。
【請求項２４】
前記グルココルチコイドは、コルチコステロン、又はその任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである、請求項１及び６〜１７のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項３及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜１７のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜１７のいずれかに記載のキット。
【請求項２５】
前記グルココルチコイドは、ヒドロコルチゾン、又はその任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである、請求項１及び６〜１７のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項３及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜１７のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜１７のいずれかに記載のキット。
【請求項２６】
前記グルココルチコイドは、フルドロコルチゾン、又はその任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである、請求項１及び６〜１７のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項３及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜１７のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜１７のいずれかに記載のキット。
【請求項２７】
前記グルココルチコイドは、フルオロメトロン、又はその任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである、請求項１及び６〜１７のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項３及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜１７のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜１７のいずれかに記載のキット。
【請求項２８】
前記グルココルチコイドは、デオキシコルチコステロン、又はその任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである、請求項１及び６〜１７のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項３及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜１７のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜１７のいずれかに記載のキット。
【請求項２９】
前記グルココルチコイドは、ケトコナゾール、又はその任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである、請求項１及び６〜１７のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項３及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜１７のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜１７のいずれかに記載のキット。
【請求項３０】
前記グルココルチコイドは、ブデソニド、又はその任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである、請求項１及び６〜１７のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項３及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜１７のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜１７のいずれかに記載のキット。
【請求項３１】
前記グルココルチコイドは、メチルプレドニゾロン、又はその任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである、請求項１及び６〜１７のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項３及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜１７のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜１７のいずれかに記載のキット。
【請求項３２】
前記グルココルチコイドは、フルチカゾン、又はその任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである、請求項１及び６〜１７のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項３及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜１７のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜１７のいずれかに記載のキット。
【請求項３３】
前記グルココルチコイドは、クロベタゾール、又はその任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである、請求項１及び６〜１７のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項３及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜１７のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜１７のいずれかに記載のキット。
【請求項３４】
前記グルココルチコイドは、クロベタゾン、又はその任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである、請求項１及び６〜１７のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項３及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜１７のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜１７のいずれかに記載のキット。
【請求項３５】
前記グルココルチコイドは、フルオシノロン、又はその任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである、請求項１及び６〜１７のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項３及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜１７のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜１７のいずれかに記載のキット。
【請求項３６】
前記グルココルチコイドは、フルニソリド、又はその任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである、請求項１及び６〜１７のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項３及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜１７のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜１７のいずれかに記載のキット。
【請求項３７】
前記グルココルチコイドは、モメタゾン、又はその任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである、請求項１及び６〜１７のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項３及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜１７のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜１７のいずれかに記載のキット。
【請求項３８】
前記グルココルチコイドは、プレドニカルベート、又はその任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである、請求項1及び６〜１７のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項３及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜１７のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜１７のいずれかに記載のキット。
【請求項３９】
前記グルココルチコイドは、アムシノニド、又はその任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである、請求項１及び６〜１７のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項３及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜１７のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜１７のいずれかに記載のキット。
【請求項４０】
前記グルココルチコイドは、ジフルコルトロン、又はその任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである、請求項１及び６〜１７のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項３及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜１７のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜１７のいずれかに記載のキット。
【請求項４１】
前記グルココルチコイドは、ベクロメタゾン、又はその任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである、請求項１及び６〜１７のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項３及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜１７のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜１７のいずれかに記載のキット。
【請求項４２】
前記グルココルチコイドは、ベタメタゾン、又はその任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである、請求項１及び６〜１７のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項３及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜１７のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜１７のいずれかに記載のキット。
【請求項４３】
前記グルココルチコイドは、デキサメタゾン、又はその任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである、請求項１及び６〜１７のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項３及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜１７のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜１７のいずれかに記載のキット。
【請求項４４】
前記グルココルチコイドは、トリアムシノロン、又はその任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである、請求項１及び６〜１７のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項３及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜１７のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜１７のいずれかに記載のキット。
【請求項４５】
前記グルココルチコイドは、デフラザコート、又はその任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである、請求項１及び６〜１７のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項３及び６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜１７のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜１７のいずれかに記載のキット。
【請求項４６】
前記ＡＬＫ５阻害剤、前記医薬組成物、又は前記キットは、オキシトシン受容体アゴニストと組み合わせて使用しない、請求項１及び６〜４５のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２及び６〜４５のいずれかに記載の医薬組成物、請求項３及び６〜４５のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜４５のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜４５のいずれかに記載のキット。
【請求項４７】
前記骨格筋組織減少及び／又は筋衰弱をもたらす疾患又は障害は、サルコペニア、悪液質、神経筋疾患、廃用性筋萎縮、食欲不振性飢餓により誘発された萎縮、及び急性筋損傷又はオーバーユース筋損傷を含む筋損傷から選択され、好ましくは、悪液質、神経筋疾患、廃用性筋萎縮、食欲不振性飢餓により誘発された萎縮、及び急性筋損傷又はオーバーユース筋損傷を含む筋損傷から選択される、請求項１及び６〜４６のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項３及び６〜４６のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜４６のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜４６のいずれかに記載のキット。
【請求項４８】
前記骨格筋組織減少及び／又は筋衰弱をもたらす疾患又は障害は、筋ジストロフィーである、請求項１及び６〜４７のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項３及び６〜４７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜４７のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜４７のいずれかに記載のキット。
【請求項４９】
前記骨格筋組織減少及び／又は筋衰弱をもたらす疾患又は障害は、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー、筋強直性筋ジストロフィー、三好型筋ジストロフィーなどの遠位型筋ジストロフィー、及び肢帯型筋ジストロフィーよりなる群から選択される筋ジストロフィーである、請求項１及び６〜４８のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項３及び６〜４８のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜４８のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜４８のいずれかに記載のキット。
【請求項５０】
前記骨格筋組織減少及び／又は筋衰弱をもたらす疾患又は障害は、デュシェンヌ型筋ジストロフィーである、請求項１及び６〜４９のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項３及び６〜４９のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜４９のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜４９のいずれかに記載のキット。
【請求項５１】
前記骨格筋組織減少及び／又は筋衰弱をもたらす疾患又は障害は、サルコペニアである、請求項１及び６〜４７のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項３及び６〜４７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜４７のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜４７のいずれかに記載のキット。
【請求項５２】
前記骨格筋組織減少及び／又は筋衰弱をもたらす疾患又は障害は、悪液質である、請求項１及び６〜４７のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項３及び６〜４７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜４７のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜４７のいずれかに記載のキット。
【請求項５３】
前記骨格筋組織減少及び／又は筋衰弱をもたらす疾患又は障害は、好ましくは、筋萎縮性側索硬化症、原発性側索硬化症、進行性筋萎縮、進行性球麻痺、偽性球麻痺、及び脊髄性筋萎縮よりなる群から選択される運動ニューロン疾患である、請求項１及び６〜４７のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項３及び６〜４７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜４７のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜４７のいずれかに記載のキット。
【請求項５４】
前記骨格筋組織減少及び／又は筋衰弱をもたらす疾患又は障害は、脊髄性筋萎縮である、請求項１及び６〜４７のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項３及び６〜４７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜４７のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜４７のいずれかに記載のキット。
【請求項５５】
前記骨格筋組織減少及び／又は筋衰弱をもたらす疾患又は障害は、好ましくは、重症筋無力症、自己免疫性神経性筋強直（アイザックス症候群）、ランバート・イートン筋無力症候群、及びヘビ毒又は神経毒などの神経筋接合部機能に作用する毒の形態に起因する神経筋接合部疾患よりなる群から選択される神経筋接合部疾患である、請求項１及び６〜４７のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項３及び６〜４７のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜４７のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜４７のいずれかに記載のキット。
【請求項５６】
前記ＡＬＫ５阻害剤、前記医薬組成物、又は前記キットは、他の有効成分、好ましくは、抗炎症剤、タンパク質同化剤、抗悪性腫瘍剤、抗生物質、局所麻酔剤、アナボリック／アンドロジェニックステロイド、グルココルチコイド、食欲刺激剤、サイトカインモジュレーター、アンジオテンシン及びβ−アドレノレセプター阻害剤、ＮＨＥ−１阻害剤、抗線維化剤、ホスホジエステラーゼ５(PDE5)阻害剤、デヒドロエピアンドロステロン、ビタミンＤ、ウルソール酸、オメガ3酸(omega 3 acid)、アンジオテンシン変換酵素(ACE)阻害剤、プロテアソーム阻害剤、シクロフィリンＤ阻害剤、ＰＧＣ−１α（アルファ）経路モジュレーター、ミオスタチン及びアクチビンＡアンタゴニスト、グレリンアゴニスト、β２−アドレノレセプターアゴニスト、クレアチンサプリメント、抗線維化剤、筋虚血治療剤、突然変異特異的治療剤、治療的ナンセンス抑制用薬剤、ユートロフィン上方調節因子、筋前駆細胞又は幹細胞を使用する遺伝子置換治療剤又は細胞治療剤よりなる群から選択される活性成分と組み合わせて使用される、請求項１及び６〜５５のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２及び６〜５５のいずれかに記載の医薬組成物、請求項３及び６〜５５のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜５５のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜５５のいずれかに記載のキット。
【請求項５７】
前記ＡＬＫ５阻害剤、前記医薬組成物、又は前記キットは、遺伝子置換治療剤と組み合わせて使用される、請求項１及び６〜５５のいずれかに記載のＡＬＫ５阻害剤、請求項２及び６〜５５のいずれかに記載の医薬組成物、請求項３及び６〜５５のいずれかに記載の医薬組成物、請求項４及び６〜５５のいずれかに記載のキット、又は請求項５〜５５のいずれかに記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、骨格筋肥大を誘発する、萎縮を防止する、又は骨格筋組織減少及び／若しくは筋衰弱をもたらす疾患若しくは損傷を処置若しくは防止するための治療方針に関する。本発明はまた、骨格筋肥大誘発剤の非治療的使用にも関する。
【背景技術】
【０００２】
筋消耗及び筋衰弱は、代謝疾患、神経疾患、筋疾患、急性又は慢性の病気（悪液質）、加齢、無活動、飢餓、及びさらに中毒を含む大きな一群の疾患病態及び状態からもたらされ得るものである。この１５年の間に、広範な研究により、筋量減少に関連するとされるシグナル経路のより深い理解につながっている。しかしながら、現在のところ、筋肉を直接的に標的とする治療方針は十分に提供されていない。
【０００３】
筋減少は、特に加齢とともに起こり得、フレイル症候群の要素となる。この退化性の減少は、「サルコペニア」と名付けられ、直接的な筋萎縮をもたらし、転倒、障害の発生、入院、及び死亡を含む結果的な不健康状態のリスクを増大させる。高齢者人口が増加する中、サルコペニアはますます健康における世界的な懸念となっており、サルコペニアの影響に対抗して年齢に関連する衰えや能力低下を抑える手法の開発が大きく注目されている。サルコペニアの可能であり得る治療的介入は身体活動や栄養補助を含み得るが、現在のところ、薬理的介入について有効性は限定的である。
【０００４】
また、筋衰弱は、ミオパチー、神経筋接合部疾患、又は運動ニューロン疾患などの神経筋障害から直接もたらされ得る。
【０００５】
ミオパチーは、骨格筋線維の機能障害による筋衰弱を主要な症状とする神経筋障害である。ミオパチーは、遺伝性又は後天性で有り得、例えば、筋ジストロフィー、ミトコンドリアミオパチー又は薬剤誘発性ミオパチーなどの代謝性ミオパチー、及び皮膚筋炎、多発性筋炎又は封入体筋炎などの自己免疫性ミオパチーを含むものである。
【０００６】
ミオパチーのなかでも、筋ジストロフィーは、筋線維の進行性変性を引き起こして筋量減少をもたらす大グループを代表するものである。筋ジストロフィーを引き起こす３０以上の遺伝子の突然変異が同定されている。デュシェンヌ型筋ジストロフィー(Duchenne Muscular Dystrophy、DMD)は、筋ジストロフィーの最も一般的な形態であり、全世界で３５００人の男性に約１人の発生率である。
【０００７】
神経筋障害の処置は、疾患及び特定の原因に応じたものであるが、現在のところ、いずれかの形態の筋ジストロフィーを止める又は回復させる具体的な処置は存在しない。運動や栄養的介入は、いくつかの筋消耗状態における筋萎縮の速度を遅らせる利点があるが、多くの場合、消耗プロセスを止めることはできない。
【０００８】
ゆえに、筋萎縮を効果的に抑え、筋成長を促進し、筋量を増加させ、最終的に患者の生活の質を向上させることができる新規の治療オプションが強く求められている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の目的は、骨格筋肥大を誘発する、又は筋萎縮を防止する、骨格筋再生を促進する、及び骨格筋消耗を処置若しくは防止する、新規の治療方針を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
したがって、本発明は、任意でグルココルチコイドと組み合わせた、骨格筋組織減少及び／又は筋衰弱をもたらす疾患又は障害の処置又は防止における使用のための、ＡＬＫ５阻害剤に関する。
【００１１】
また、本発明は、特に骨格筋組織減少及び／又は筋衰弱をもたらす疾患又は障害の処置又は防止における使用のための、ＡＬＫ５阻害剤と、グルココルチコイドと、薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物に関する。
【００１２】
本発明は、好ましくは骨格筋組織減少及び／又は筋衰弱をもたらす疾患又は障害の処置における使用のための、共に、個別に、又は連続的に使用される組合せ製剤としてのＡＬＫ５阻害剤とグルココルチコイドとを含むキットにさらに関する。
【００１３】
ＡＬＫ５阻害剤は、ＲｅｐＳｏｘ、ＳＢ５２５３３４、ＳＤ２０８、ＳＢ５０５１２４、Ｒ２６８７１２、ＬＹ３６４９４７、ＧＷ７８８３８８、Ｄ４４７６、及びＡ８３−０１、及びそれらの任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、又はプロドラッグよりなる群から選択することができる。好ましくは、ＡＬＫ５阻害剤は、ＲｅｐＳｏｘ、ＳＢ５２５３３４、ＳＤ２０８、ＳＢ５０５１２４、Ｒ２６８７１２、ＧＷ７８８３８８、Ｄ４４７６、及びＡ８３−０１、及びそれらの任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、又はプロドラッグよりなる群から選択される。より好ましくは、ＡＬＫ５阻害剤は、ＲｅｐＳｏｘ、ＳＢ５０５１２４、Ｒ２６８７１２、ＧＷ７８８３８８、Ｄ４４７６、及びＡ８３−０１、及びそれらの任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、又はプロドラッグよりなる群から選択される。さらにより好ましくは、ＡＬＫ５阻害剤は、ＲｅｐＳｏｘ、及びＧＷ７８８３８８、及びそれらの任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、又はプロドラッグよりなる群から選択される。さらにより好ましくは、ＡＬＫ５阻害剤は、ＲｅｐＳｏｘ、又はその任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである。
【００１４】
グルココルチコイドは、プレドニゾロン、プレドニゾン、コルチゾン、コルチコステロン、ヒドロコルチゾン、フルドロコルチゾン、フルオロメトロン、デオキシコルチコステロン、ケトコナゾール、ブデソニド、メチルプレドニゾロン、フルチカゾン、クロベタゾール、クロベタゾン、フルオシノロン、フルニソリド、モメタゾン、プレドニカルベート、アムシノニド、ジフルコルトロン、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、デキサメタゾン、トリアムシノロン、及びデフラザコート、及びそれらの任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、又はプロドラッグよりなる群から、好ましくは、プレドニゾロン、プレドニゾン、及びデフラザコート、及びそれらの任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、又はプロドラッグよりなる群から選択することができる。好ましくは、グルココルチコイドは、プレドニゾロン、プレドニゾン、コルチゾン、コルチコステロン、フルドロコルチゾン、フルオロメトロン、デオキシコルチコステロン、ケトコナゾール、ブデソニド、メチルプレドニゾロン、フルチカゾン、クロベタゾール、クロベタゾン、フルオシノロン、フルニソリド、モメタゾン、プレドニカルベート、アムシノニド、ジフルコルトロン、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、トリアムシノロン、及びデフラザコート、及びそれらの任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、又はプロドラッグよりなる群から選択される。より好ましくは、グルココルチコイドは、プレドニゾロン又はプレドニゾン、又はそれらの任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである。さらにより好ましくは、グルココルチコイドは、プレドニゾロン、又はその任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである。
【００１５】
好ましくは、本発明のＡＬＫ５阻害剤、医薬組成物、又はキットは、オキシトシン受容体アゴニストと組み合わせて使用しない。
【００１６】
骨格筋組織減少及び／又は筋衰弱をもたらす疾患又は障害は、サルコペニア、悪液質、神経筋疾患、廃用性筋萎縮、食欲不振性飢餓により誘発された萎縮、及び急性筋損傷又はオーバーユース筋損傷を含む筋損傷から選択することができ、好ましくは、悪液質、神経筋疾患、廃用性筋萎縮、食欲不振性飢餓により誘発された萎縮、及び急性筋損傷又はオーバーユース筋損傷を含む筋損傷から選択することができる。好ましくは、骨格筋組織減少及び／又は筋衰弱をもたらす疾患又は障害は、筋ジストロフィーである。より好ましくは、骨格筋組織減少及び／又は筋衰弱をもたらす疾患又は障害は、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー、筋強直性筋ジストロフィー、三好型筋ジストロフィーなどの遠位型筋ジストロフィー、及び肢帯型筋ジストロフィーよりなる群から選択される筋ジストロフィーである。さらにより好ましくは、骨格筋組織減少及び／又は筋衰弱をもたらす疾患又は障害は、デュシェンヌ型筋ジストロフィーである。
【００１７】
また、骨格筋組織減少及び／又は筋衰弱をもたらす疾患又は障害は、好ましくは筋萎縮性側索硬化症、原発性側索硬化症、進行性筋萎縮、進行性球麻痺、偽性球麻痺、及び脊髄性筋萎縮よりなる群から選択される運動ニューロン疾患であり得、より好ましくは脊髄性筋萎縮である。
【００１８】
あるいは、骨格筋組織減少及び／又は筋衰弱をもたらす疾患又は障害は、好ましくは、重症筋無力症、自己免疫性神経性筋強直（アイザックス症候群）、ランバート・イートン筋無力症候群、及びヘビ毒又は神経毒などの神経筋接合部機能に作用する毒の形態に起因する神経筋接合部疾患よりなる群から選択される神経筋接合部疾患であり得る。
【００１９】
本発明のＡＬＫ５阻害剤、医薬組成物、又はキットは、他の有効成分、好ましくは、抗炎症剤、タンパク質同化剤、抗悪性腫瘍剤、抗生物質、局所麻酔剤、アナボリック／アンドロジェニックステロイド、グルココルチコイド、食欲刺激剤、サイトカインモジュレーター、アンジオテンシン及びβ−アドレノレセプター阻害剤、ＮＨＥ−１阻害剤、抗線維化剤、ホスホジエステラーゼ５(PDE5)阻害剤、デヒドロエピアンドロステロン、ビタミンＤ、ウルソール酸、オメガ３酸(omega 3 acid)、アンジオテンシン変換酵素(ACE)阻害剤、プロテアソーム阻害剤、シクロフィリンＤ阻害剤、ＰＧＣ−１α（アルファ）経路モジュレーター、ミオスタチン及びアクチビンＡアンタゴニスト、グレリンアゴニスト、β２−アドレノレセプターアゴニスト、クレアチンサプリメント、抗線維化剤、筋虚血治療剤、突然変異特異的治療剤、治療的ナンセンス抑制用薬剤、ユートロフィン上方調節因子、筋前駆細胞又は幹細胞を使用する遺伝子置換治療剤又は細胞治療剤よりなる群から選択される活性成分と組み合わせて使用することができる。より好ましくは、該他の有効成分は、遺伝子置換治療剤である。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】図１は、ＡｃｈＲクラスター形成におけるＲｅｐＳｏｘ活性を示す。８日間分化した筋管でのＡｃｈＲクラスターにおけるＩＧＦ−１及びＲｅｐＳｏｘの作用を示す。ｎ＝３〜６ウェル、マン−ホイットニー分析により、コントロールの筋管に対して*ｐ≦０．０５。
【図２】図２は、カルシウム流におけるＲｅｐＳｏｘ活性を示す。Ａ：８日間（その７日間はＩＧＦ−１又はＲｅｐＳｏｘの存在下）分化した、２０μＭのＡＣｈ刺激筋管におけるＦｌｕｏ−４蛍光度の平均ピーク振幅を示す。ｎ＝２〜５ウェル、マン−ホイットニー分析により、コントロールの筋管に対して****ｐ≦０．０００１。Ｂ：ＡＣｈでの刺激前（0秒）及び刺激後（3〜19秒）の筋管における細胞内遊離Ｃａ２＋のレベルを示すカルシウム流実験から得た代表的な疑似カラー画像を示す。
【図３】図３は、収縮におけるＲｅｐＳｏｘ活性を示す。２μＭのＲｅｐＳｏｘと共に９６時間筋管を分化する処置は、１００μＭのＡＣｈで刺激されるときマイクロパターンから縮む筋管として検出される、強い収縮を示す筋管のパーセンテージを有意に増加させた。ｎ＝４ウェル、マン−ホイットニー分析により、コントロールの筋管に対して*ｐ≦０．０５。
【図４】図４は、プレドニゾロン、ＲｅｐＳｏｘ、及びプレドニゾロンとＲｅｐＳｏｘとの組合せで得た融合指数を示す。
【図５】図５は、プレドニゾロン、ＲｅｐＳｏｘ、及びプレドニゾロンとＲｅｐＳｏｘとの組合せで得た筋管平均面積を示す。
【図６】図６は、プレドニゾロン、ＧＷ７８８３８８、及びプレドニゾロンとＧＷ７８８３８８との組合せで得た融合指数を示す。
【図７】図７は、プレドニゾロン、ＧＷ７８８３８８、及びプレドニゾロンとＧＷ７８８３８８との組合せで得た筋管平均面積を示す。
【図８】図８は、反復させたれん縮電気刺激に対するドナーＡ(A)及びドナー５(B)の筋管の反応を示す。蛍光強度(F)を、初期時点の平均強度に対してノーマライズした(F/F0)。
【図９】図９は、ドナー５(A)の筋管の強縮反応を示す。蛍光強度(F)を、初期時点の平均強度に対してノーマライズした(F/F0)。ＲｅｐＳｏｘ処置の筋管の強縮反応は、ＲｅｐＳｏｘ濃度により増加し、コントロールの筋管との有意差をもたらす。マン−ホイットニー分析により、コントロールの筋管に対して*ｐ≦０．０５、及び***ｐ≦０．００１。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
アクチビン受容体様キナーゼ(ALK-5)は、トランスフォーミング増殖因子β受容体１(Gene ID: 7046)としても知られている。このタンパク質は、ＴＧＦ−βと結合するとＩＩ型ＴＧＦ−β受容体とのヘテロ複合体を形成して、細胞表面から細胞質にＴＧＦ−βシグナルを伝達する、セリン／スレオニンタンパク質キナーゼである。このタンパク質は、上皮細胞や造血細胞における細胞周期停止、間葉細胞増殖及び分化の制御、創傷治癒、細胞外マトリックス産生、免疫抑制、及び発がんを含む、多くの生理学的及び病理学的なプロセスの調節に関与する。
【００２２】
マイクロパターン技術における確固たる知識と、ヒト一次筋芽細胞の十分な成熟を可能にするとともに高レベルの横紋、アライメントされた核を伴う高い融合指数、及び低い形態学的変動性を有する筋管を得る、所有の生理学的なヒト骨格筋モデル（MyoScreen、サイトー）とにより、本発明者らは、本明細書において、ＡＬＫ５阻害剤が、健常なドナーの筋管だけでなく、ＤＭＤ患者の筋管においても骨格筋肥大を誘発することができるということを驚くことに示した。本発明者らは、ＡＬＫ５阻害剤が、筋管の分化及びサイズを増大させ、強力な収縮能を有する筋管を提供できるだけでなく、筋萎縮を防止することができることを示した。本発明者らは、ＡＬＫ５阻害剤とグルココルチコイドとの組合せが、筋管の分化及びサイズに共に作用することをさらに示した。
【００２３】
したがって、第１の態様において、本発明は、骨格筋再生を促進するため、骨格筋萎縮を防止するため、又は骨格筋組織減少及び／若しくは筋衰弱をもたらす疾患若しくは損傷の処置若しくは防止における、骨格筋肥大誘発剤としての使用のための、ＡＬＫ５阻害剤に関する。
【００２４】
このように、本発明は、骨格筋肥大誘発剤としての使用のためのＡＬＫ５阻害剤に関する。
【００２５】
本明細書において使用するとき、「ＡＬＫ５阻害剤」という用語は、ＡＬＫ５の活性を阻害又は低減する、すなわち細胞表面から細胞質へのＴＧＦ−βシグナルの伝達を阻害又は低減する分子に関する。特に、ＡＬＫ５阻害剤は、ＴＧＦ−β結合の阻害若しくは低減において、ＡＬＫ５発現の阻害若しくは低減において、又はＡＬＫ５キナーゼ活性の阻害若しくは低減において作用し得る。ＴＧＦ−β結合の阻害又は低減を誘導するＡＬＫ５阻害剤は、リガンドと受容体との相互作用を抑止するため、ＴＧＦ−β及び／又はＡＬＫ５と結合することができる。ＡＬＫ５を阻害する化合物の能力は、Ｄｅ  Ｇｏｕｖｉｌｌｅ等の文献に記載されるようなＡＬＫ５結合アッセイ、ＴＧＦ−β細胞アッセイ、又はＡＬＫ５キナーゼアッセイなどの当業者に既知の任意の方法によって評価することができる(Br J Pharmacol.2005 May;145(2):166-77), Huynh et al. (Journal of biomolecular screening 16(7);2011) or Ma et al. (Expert Opin Drug Discov. 2008 June ; 3(6): 607-621)。
【００２６】
ＡＬＫ５阻害剤は、ＡＬＫ５に共有結合又は非共有結合して、立体障害又は修飾によりその活性を変えることができる。この阻害剤は、例えば、低分子、基質様ペプチド阻害剤（すなわちベイト基質）、ＡＬＫ５に対するアプタマー又は抗体であり得る。また、この阻害は、例えば特異的ＲＮＡｉ、アンチセンス、リボザイム、又は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９、ＴＡＬＥＮ、若しくはＺｎフィンガーヌクレアーゼなどのノックアウト若しくは遺伝子編集ツールの使用によって、ＴＧＦＢＲ１遺伝子発現を低下又は抑制させることによるものであり得る。
【００２７】
あるいは、ＡＬＫ５阻害剤は、ＴＧＦ−βに共有結合又は非共有結合して、ＡＬＫ５とのその相互作用を抑止することができる。この阻害剤は、例えば、ＡＬＫ５のドミナントネガティブ突然変異体、すなわち、ＴＧＦ−βと結合可能であるがシグナルを伝達することはできないＡＬＫ５の突然変異形態、又はＴＧＦ−βに対するアプタマー若しくは抗体であり得る。そうしたＡＬＫ５のドミナントネガティブ突然変異体の例は、Ｓｃｈｎｉｅｗｉｎｄ等により記載されるもの(Oncogene. 2007 Jul 19;26(33):4850-62)、ＴＧＦ−βに対するモノクローナル抗体ＬＹ２３８２７７０及びフレソリムマブ(fresolimumab)を含むが、これに限らない。
【００２８】
好ましくは、ＡＬＫ５阻害剤は、低分子、ＡＬＫ５発現に特異的に干渉する核酸分子、ベイト基質、ＡＬＫ５のドミナントネガティブ突然変異体、及びＡＬＫ５に対するアプタマー又は抗体よりなる群から選択される。より好ましくは、ＡＬＫ５阻害剤は、低分子、好ましくはＴＧＦ−β結合又はＡＬＫ５キナーゼ活性を阻害する低分子、ＡＬＫ５発現に特異的に干渉する核酸分子、及びベイト基質よりなる群から選択される。さらにより好ましくは、ＡＬＫ５阻害剤は、低分子、及びＡＬＫ５発現に特異的に干渉する核酸分子よりなる群から選択される。最も好ましい実施形態において、ＡＬＫ５阻害剤は、低分子、好ましくはＴＧＦ−β結合又はＡＬＫ５キナーゼ活性を阻害する低分子、より好ましくはＡＬＫ５キナーゼ活性を阻害する低分子である。
【００２９】
実施形態において、ＡＬＫ５阻害剤は、ＡＬＫ５発現に特異的に干渉する核酸分子である。本明細書において使用するとき、「核酸分子」という用語は、ＲＮＡｉ、アンチセンス、及びリボザイム分子を含むが、これらに限定されない。本発明において、「ＡＬＫ５発現に特異的に干渉する核酸分子」は、特異的方法で、ＴＧＦＢＲ１遺伝子発現を低下又は抑制可能である核酸分子である。本明細書において使用するとき、「ＲＮＡｉ」という用語は、標的タンパク質の発現を下方調節することができる任意のＲＮＡを指す。該用語は、低分子干渉ＲＮＡ（siRNA）、二本鎖ＲＮＡ（dsRNA）、一本鎖ＲＮＡ（ssRNA）、マイクロＲＮＡ（miRNA）、及び短鎖ヘアピンＲＮＡ（shRNA）分子を含む。そうした干渉核酸分子を設計、作製及び使用する方法は、当業者に既知である。そうした干渉核酸分子の例は、Ｗａｎｇ等(J Invest Dermatol. 2014 Jul;134(7):2016-2025)、Ｃｈｅｎｇ等(Mol Pharm. 2009 ; 6(3): 772-779)、又はＣｕｒａｄｏ等(Mol Cell Biol.2014 Dec;34(24):4389-403)によって記載されるＴＧＦＢＲ１を標的とするｓｉＲＮＡを含むが、これらに限定されない。
【００３０】
他の実施形態において、ＡＬＫ５阻害剤はベイト基質である。本明細書において使用するとき、「ベイト基質」という用語は、基質様ペプチド阻害剤、すなわちＡＬＫ５に結合して、その基質、特にＴＧＦ−βとのＡＬＫ５の相互作用を抑止可能なペプチドを指す。そうしたベイト基質の例は、ＴＧＦ−βと複合体を形成するとともにＡＬＫ５とのその相互作用を抑止するＴＧＦ−β潜在型結合ペプチド(LAP)(Bottinger et al. Proc Natl Acad Sci U S A. 1996 Jun 11;93(12):5877-82)を含むが、これに限らない。
【００３１】
他の実施形態において、ＡＬＫ５阻害剤は、ＡＬＫ５に対する、又はＴＧＦ−βに対する抗体であり、好ましくはＡＬＫ５に対する抗体である。本明細書における「抗体」という用語は、対象の分子標的に特異的に結合する限りにおいて、最も広範な意味で使用され、特にモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体フラグメント、及びその誘導体を網羅する。本明細書において使用するとき、「抗体フラグメント」という用語は、抗体全長の一部、一般に抗原結合ドメイン又は可変ドメインを含むタンパク質を指す。抗体フラグメントの例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）２、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）３、Ｆｖ（典型的に、抗体のシングルアームのＶＬ及びＶＨドメイン）、単鎖Ｆｖ（ＳｃＦｖ）、ｄｓＦｖ、Ｆｄ（典型的に、ＶＨ及びＣＨ１ドメイン）、及びｄＡｂ（典型的に、ＶＨドメイン）フラグメント、ナノボディ、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、カッパボディ、直鎖状抗体、並びに抗原結合機能を保持する他の抗体フラグメントを含む（例えば、Holliger及びHudson、Nat Biotechnol.2005 Sep;23(9):1126-36）。抗体フラグメントは、インタクトな抗体のタンパク質消化及び組換え宿主細胞（例えば、大腸菌又はファージ）を含むがこれらに限定されない、様々な技術によって作製可能である。これらの技術は当業者に既知であり、文献に広く記載されている。「抗体誘導体」という用語は、本明細書において使用するとき、１つ以上のアミノ酸が例えばアルキル化、ペグ化、アシル化、エステル又はアミド形成などによって化学的に修飾された、本明細書において提供される抗体、例えば全長抗体又は抗体のフラグメントを指す。
【００３２】
他の実施形態において、ＡＬＫ５阻害剤は、ＡＬＫ５に対するアプタマーである。アプタマーは、ペプチドアプタマー又は核酸アプタマーであってもよい。ペプチドアプタマーは、細菌タンパク質のチオレドキシン−Ａなどのタンパク質足場に両端で付着した可変短鎖ペプチドループからなる。通常、可変ループ長は１０〜２０アミノ酸から構成される。対象の標的に特異的なペプチドアプタマーは、酵母ツーハイブリッドシステム又はファージディスプレイなどの当業者に既知の任意の方法を使用して選択され得る。ペプチドアプタマーは、組換え細菌における化学合成又は作製とその後の精製などの当業者に既知の任意の方法によって作製され得る。核酸アプタマーは、ＲＮＡ又は一本鎖ＤＮＡオリゴヌクレオチドからなる一群の低分子核酸リガンドであり、標的に高い特異性及び親和性を有する。対象の標的に特異的な核酸アプタマーを構築する、指数関数的増加によるリガンドのシステマティックな展開（Systematic Evolution of Ligands by EXponential enrichment、SELEX）技術は、当業者に既知であり、特定の分子標的に特異的なアプタマーを得るために使用することができる。核酸アプタマーは、化学合成又はＲＮＡアプタマーのインビトロ転写などの当業者に既知の任意の方法によって作製され得る。核酸アプタマーは、ＤＮＡアプタマー、ＲＮＡアプタマー、ＸＮＡアプタマー（ゼノヌクレオチドを含む核酸アプタマー）、及びＳｐｉｅｇｅｌｍｅｒ（登録商標）（全体的に非天然Ｌ−リボ核酸骨格から構成される）よりなる群から選択され得る。抗ＡＬＫ５アプタマーの例は、Ｌｉ等(Mol Biosyst.2010 Dec;6(12):2392-402)によって記載されるようなＡＬＫ５の細胞外ドメインに結合するペプチドアプタマーを含むが、これに限らない。
【００３３】
好ましい実施形態において、ＡＬＫ５阻害剤は、ＡＬＫ５の活性を阻害する低分子、好ましくはＡＬＫ５へのＴＧＦ−β結合又はＡＬＫ５キナーゼ活性を阻害又は低減する低分子、より好ましくはＡＬＫ５キナーゼ活性を阻害又は低減する低分子である。
【００３４】
本明細書に使用するとき、「低分子」という用語は、通常１０００ダルトン未満の有機化合物又は無機化合物であり得る低分子を指す。この低分子は、任意の既知の生体（動物、植物、細菌、真菌、及びウイルスを含むがこれらに限定されない）に由来し得る、又は合成分子であり得る。
【００３５】
低分子は、
【表１】
2021517574.tif 000002
2021517574.tif 000003
及びそれらの任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、又はプロドラッグよりなる群から選択することができる。
【００３６】
好ましくは、低分子は、ＲｅｐＳｏｘ、ＳＢ５２５３３４、ＳＤ２０８、ＳＢ５０５１２４、Ｒ２６８７１２、ＧＷ７８８３８８、Ｄ４４７６、及びＡ８３−０１、及びそれらの任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、又はプロドラッグよりなる群から選択される。
【００３７】
より好ましくは、低分子は、ＲｅｐＳｏｘ、ＳＢ５０５１２４、Ｒ２６８７１２、ＧＷ７８８３８８、Ｄ４４７６、及びＡ８３−０１、及びそれらの任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、又はプロドラッグよりなる群から選択される。さらにより好ましくは、低分子は、ＲｅｐＳｏｘ、及びＧＷ７８８３８８、及びそれらの任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、又はプロドラッグよりなる群から選択される。
【００３８】
最も好ましい実施形態において、低分子は、ＲｅｐＳｏｘ、又はその任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである。
【００３９】
本発明者らは、本明細書において、ＡＬＫ５阻害剤とグルココルチコイドとの組合せが、筋管の分化及びサイズに共に作用することを示した。
【００４０】
したがって、本発明のすべての態様（使用、方法、組成物等）において、ＡＬＫ５阻害剤は、１つ又は複数のグルココルチコイドと組み合わせて使用することができる。特に、ＡＬＫ５阻害剤は、１つ又は複数のグルココルチコイドと組み合わせて、骨格筋再生を促進するため、骨格筋萎縮を防止するため、又は骨格筋組織減少及び／若しくは筋衰弱をもたらす疾患若しくは損傷の処置若しくは防止において、骨格筋肥大誘発剤として使用することができる。
【００４１】
このように、本発明は、１つ又は複数のグルココルチコイドと組み合わせた、骨格筋肥大誘発剤としての使用のためのＡＬＫ５阻害剤に関する。
【００４２】
グルココルチコイド、又はグルココルチコステロイドは、グルココルチコイド受容体に結合するコルチコステロイドである。これらは、該グルココルチコイド受容体と結合することで細胞に影響を及ぼし、この特定の受容体によってミネラルコルチコイド及び性ステロイドと区別される。グルココルチコイドは、当業者に既知の任意のグルココルチコイドであり得、好ましくは合成グルココルチコイドであり得る。
【００４３】
好ましくは、グルココルチコイドは、プレドニゾロン、プレドニゾン、コルチゾン、コルチコステロン、ヒドロコルチゾン、フルドロコルチゾン、フルオロメトロン、デオキシコルチコステロン、ケトコナゾール、ブデソニド、メチルプレドニゾロン、フルチカゾン、クロベタゾール、クロベタゾン、フルオシノロン、フルニソリド、モメタゾン、プレドニカルベート、アムシノニド、ジフルコルトロン、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、デキサメタゾン、トリアムシノロン、及びデフラザコート、及びそれらの任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、又はプロドラッグよりなる群から選択される。
【００４４】
より好ましくは、グルココルチコイドは、プレドニゾロン、プレドニゾン、コルチゾン、コルチコステロン、フルドロコルチゾン、フルオロメトロン、デオキシコルチコステロン、ケトコナゾール、ブデソニド、メチルプレドニゾロン、フルチカゾン、クロベタゾール、クロベタゾン、フルオシノロン、フルニソリド、モメタゾン、プレドニカルベート、アムシノニド、ジフルコルトロン、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、トリアムシノロン、及びデフラザコート、及びそれらの任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、又はプロドラッグよりなる群から選択される。
【００４５】
さらにより好ましくは、グルココルチコイドは、プレドニゾロン、プレドニゾン、及びデフラザコート、及びそれらの任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、又はプロドラッグよりなる群から選択される。
【００４６】
最も好ましい実施形態において、グルココルチコイドは、プレドニゾロン又はプレドニゾン、又はそれらの任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、若しくはプロドラッグである。
【００４７】
ＡＬＫ５阻害剤とグルココルチコイドとは、単一の医薬組成物、又は個別の医薬組成物に製剤化されて使用することができる。
【００４８】
これらは、共に、連続して、又は個別に投与することができる。本明細書において使用するとき、「共に」という用語は、第１の化合物の投与と他のものの投与との間が１０分未満での化合物の投与を指す。本明細書において使用するとき、「連続して」という用語は、第１の化合物の投与と他のものの投与との間が１時間未満での化合物の投与を指す。本明細書において使用するとき、「個別に」という用語は、第１の化合物の投与と他のものの投与との間が１時間以上の化合物の投与を指す。
【００４９】
一部の好ましい実施形態において、ＡＬＫ５阻害剤は、ＲｅｐＳｏｘ、及びＧＷ７８８３８８、及びそれらの任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、又はプロドラッグよりなる群から選択され、プレドニゾロン、プレドニゾン、及びデフラザコート、及びそれらの任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、又はプロドラッグよりなる群から選択されるグルココルチコイドと組み合わせて使用される。一部の他の好ましい実施形態において、ＡＬＫ５阻害剤は、ＲｅｐＳｏｘ、及びＧＷ７８８３８８、及びそれらの任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、又はプロドラッグよりなる群から選択され、プレドニゾロン、及びプレドニゾン、及びそれらの任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、又はプロドラッグよりなる群から選択されるグルココルチコイドと組み合わせて使用される。一部の他の好ましい実施形態において、ＡＬＫ５阻害剤は、ＲｅｐＳｏｘ、及びそれらの任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、又はプロドラッグよりなる群から選択され、プレドニゾロン、及びプレドニゾン、及びそれらの任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、又はプロドラッグよりなる群から選択されるグルココルチコイドと組み合わせて使用される。
【００５０】
ＡＬＫ５阻害剤及びグルココルチコイドは、薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、又はプロドラッグの形態、好ましくは薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物の形態、より好ましくは薬学的に許容される塩の形態で使用することができる。好ましい実施形態において、すべてのＡＬＫ５阻害剤及びグルココルチコイドは、薬学的に許容される塩、水和物、又は溶媒和物の形態、より好ましくは薬学的に許容される塩の形態で使用される。
【００５１】
該薬学的に許容される塩、水和物、及び溶媒和物は、適切な場合、当業者に既知の方法で形成されてもよい。
【００５２】
「薬学的に許容される塩」という用語は、患者に非毒性であり、治療剤の安定性を維持するとともに該薬剤を標的細胞又は組織に送達させることに適した塩を指す。薬学的に許容される塩は当該技術分野で既知である。
【００５３】
本明細書において使用するとき、「溶媒和物」という用語は、化学量論的量又は非化学量論的量の溶媒を含有する溶媒付加形態を指す。一部の化合物は、結晶性固体状態で一定のモル比の溶媒分子を捉える傾向があるので、溶媒和物を形成する。溶媒が水である場合、形成される溶媒和物は水和物である。溶媒がアルコールである場合、形成される溶媒和物はアルコラートである。水和物は、水がＨ２Ｏとしてその分子状態を保持する物質の１つと、１つ以上の水分子の組合せによって形成され、そうした組合せは１つ以上の水和物を形成可能である。
【００５４】
ＡＬＫ５阻害剤及びグルココルチコイドはまた、プロドラッグの形態でも使用することができる。プロドラッグは、一般に、個体への投与とそれに続く吸収の後、代謝経路による変換などのいくつかのプロセスによって活性である又はより活性である種に変換される薬剤前駆体である。一部のプロドラッグは、例えばあまり活性でないようにする、その溶解性を増大させる、及び／又は親薬剤の投与よりも安全特性を向上させる、プロドラッグに存在する化学基を有する。一部の態様では、プロドラッグはインビボで分解しにくく、その親薬剤よりも長い半減期を示すことができる。化学基がプロドラッグから切断及び／又は修飾されると、活性薬剤を生じる。プロドラッグは、一部の状況において、親薬剤よりも投与しやすいので有効であることがある。プロドラッグは、例えば、経口投与によって生体に利用可能であるが、親薬剤はそうではない。所定の態様では、プロドラッグはまた、親薬剤よりも医薬組成物における溶解性が向上する。プロドラッグの限定的ではない例は、投与されると続いてインビボで生体内変化を受けて治療上有効な濃度の活性剤を得る、本発明に記載されるような化合物であり得る。さらなる一般の例について、ＢｕｎｄｇａａｒｄによるＡ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔの「Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ」(Krosgaard-Larsen and Bundgaard, Ed., 1991, Chapter 5, 113-191)が参照され、これは参照することにより本明細書に組み込まれる。プロドラッグは、例えば、化合物に存在する官能基を修飾して、修飾が親化合物に対してルーチン操作又はインビボで切断されるようにすることで、調製することができる。
【００５５】
本発明はまた、好ましくは骨格筋肥大誘発剤としての使用のための、ＡＬＫ５阻害剤と薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物にも関する。
【００５６】
骨格筋肥大誘発剤としてのＡＬＫ５阻害剤について上述したすべての実施形態はまた、この態様にも包含される。
【００５７】
本発明の医薬組成物は、当業者に既知の標準的な医薬品基準（例えば、Remington: TheScience and Practice of Pharmacy (20th ed.)、ed. A. R. Gennaro、Lippincott Williams & Wilkins、2000、並びにEncyclopedia of Pharmaceutical Technology、eds. J. Swarbrick及びJ. C. Boylan、1988-1999、Marcel Dekker、New York参照）に従って製剤化される。
【００５８】
可能な医薬組成物は、経口、経粘膜（経鼻、経直腸、若しくは経膣を含む）、局所（経皮、経口腔、及び舌下を含む）、又は非経口（皮下、筋肉内、静脈内、及び皮内を含む）の投与に適するものを含む。これらの製剤には、当業者に既知の技術にしたがって従来の賦形剤を使用可能である。好ましくは、本発明の医薬組成物は経口投与に適する。
【００５９】
非経口投与のための組成物は、固体又は凍結乾燥形態から使用直前に任意で調製可能な、一般に生理学的に適合する滅菌液剤又は懸濁剤である。局所麻酔剤、保存剤、及び緩衝剤などのアジュバントをビヒクルに溶解させてもよく、界面活性剤又は湿潤剤は、有効成分を均一に分散しやすくするために組成物に含むことができる。
【００６０】
経口投与では、組成物は、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、並びにシロップ剤、エリキシル剤、及び濃縮滴剤などの液体製剤などの従来の経口投与剤形に製剤化することができる。非毒性の固体担体又は希釈剤を使用することができ、これらは例として、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルク、セルロース、グルコース、スクロース、マグネシウム、カーボネートなどを含む。圧縮錠剤では、粉末材料に粘着特性を与える薬剤である結合剤も必要とされる。例として、デンプン、ゼラチン、ラクトース又はデキストロースなどの糖、及び天然ガム又は合成ガムを結合剤として使用可能である。また、崩壊剤も錠剤を崩壊しやすくするために錠剤に必要とされる。崩壊剤は、デンプン、クレイ、セルロース、アルギン、ガム、及び架橋ポリマーを含む。さらに、潤滑剤及び滑剤も、製造プロセスにおいて錠剤材料が表面に付着しないように、及び製造時に粉末材料の流動特性を向上させるために、錠剤に含まれる。コロイド状二酸化ケイ素が滑剤として最も一般に使用され、タルク又はステアリン酸などの化合物が潤滑剤として最も一般に使用される。
【００６１】
経皮投与では、組成物は、軟膏剤、クリーム剤、又はゲル剤の形態に製剤化可能であり、ジメチルスルホキシド、ジメチルアセトアミド、及びジメチルホルムアミドなどの適切な浸透剤又は界面活性剤が浸透しやすくするために使用可能である。
【００６２】
経粘膜投与では、経鼻噴霧剤、経直腸又は経膣の坐剤を使用することができる。活性化合物は、当該技術分野で既知の方法で任意の既知の坐剤基剤に取り込むことができる。そうした基剤の例は、カカオ脂、ポリエチレングリコール（カーボワックス）、モノステアリン酸ポリエチレンソルビタン、及びそれらの混合物とともに、融点又は溶解速度を変えるその他の適合した材料を含む。
【００６３】
本発明における医薬組成物は、実質的に投与直後、又は投与後の任意の所定の時点若しくは期間に活性薬剤を放出するように製剤化することができる。
【００６４】
本発明における医薬組成物は、１つ又は複数の薬学的に許容される賦形剤と共に１つ以上のＡＬＫ５阻害剤を含むことができる。これらの賦形剤は、上述のような投与の形態に従って選択される。
【００６５】
本発明の医薬組成物はまた、１つ又は複数のさらなる活性化合物をも含むことができる。該さらなる活性化合物は、例えば、抗炎症剤、タンパク質同化剤（例えば、成長ホルモン又はインスリン様成長因子Ｉ）、抗悪性腫瘍剤、抗生物質、局所麻酔剤、アナボリック／アンドロジェニックステロイド（例えば、テストステロン）、グルココルチコイド、食欲刺激剤（例えば、ドロナビノール）、サイトカインモジュレーター（例えば、サリドマイド）、アンジオテンシン及びβ−アドレノレセプター阻害剤、ＮＨＥ−１阻害剤（例えば、リメポリド（rimeporide））、抗線維化剤（例えば、ロサルタン又はリシノプリル）、ホスホジエステラーゼ５(PDE5)阻害剤（例えば、タダラフィル又はシルデナフィル）、デヒドロエピアンドロステロン、ビタミンＤ、ウルソール酸、オメガ３酸(omega 3 acid)、アンジオテンシン変換酵素(ACE)阻害剤、プロテアソーム阻害剤、シクロフィリンＤ阻害剤、ＰＧＣ−１α（アルファ）経路モジュレーター、ミオスタチン及びアクチビンＡアンタゴニスト、グレリンアゴニスト、β２−アドレノレセプターアゴニスト、クレアチンサプリメント、ロサルタン及びリシノプリルなどの抗線維化剤、タダラフィル及びシルデナフィルなどの筋虚血治療剤、エクソンスキッピング治療などの突然変異特異的治療剤（例えば、ＤＭＤ症例に関する突然変異を標的とするモルフォリノホスホロジアミデートアンチセンスオリゴマーであるエテプリルセン）、並びにアタルレンなどの治療的ナンセンス抑制用薬剤、ＳＭＴ−Ｃ１１００などのユートロフィン上方調節因子よりなる群から選択することができる。
【００６６】
上述のように、本発明の医薬組成物は、１つ若しくは複数のグルココルチコイドを含むことができる、又は１つ若しくは複数のグルココルチコイドと組み合わせて使用することができる。
【００６７】
特定の実施形態において、本発明における医薬組成物は、１つ又は複数のＡＬＫ阻害剤及び１つ又は複数のグルココルチコイド、好ましくは１つのＡＬＫ阻害剤及び１つのグルココルチコイドを含む。
【００６８】
本発明はまた、好ましくは骨格筋肥大誘発剤としての使用のための、共に、個別に、又は連続して使用される、組合せ製剤としてのＡＬＫ５阻害剤とグルココルチコイドとを含むキットにも関する。特に、キットは、ＡＬＫ５阻害剤と、薬学的に許容される賦形剤と、グルココルチコイド及び薬学的に許容される賦形剤を含む他の医薬組成物とを含む医薬組成物を含むことができる。
【００６９】
好ましくは、医薬組成物又はキットは、ＲｅｐＳｏｘ、ＳＢ５２５３３４、ＳＤ２０８、ＳＢ５０５１２４、Ｒ２６８７１２、ＬＹ３６４９４７、ＧＷ７８８３８８、Ｄ４４７６、及びＡ８３−０１、及びそれらの任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、又はプロドラッグよりなる群から選択されるＡＬＫ５阻害剤と、プレドニゾロン、プレドニゾン、コルチゾン、コルチコステロン、ヒドロコルチゾン、フルドロコルチゾン、フルオロメトロン、デオキシコルチコステロン、ケトコナゾール、ブデソニド、メチルプレドニゾロン、フルチカゾン、クロベタゾール、クロベタゾン、フルオシノロン、フルニソリド、モメタゾン、プレドニカルベート、アムシノニド、ジフルコルトロン、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、デキサメタゾン、トリアムシノロン、及びデフラザコート、及びそれらの任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、又はプロドラッグよりなる群から選択されるグルココルチコイドとを含む。
【００７０】
より好ましくは、医薬組成物又はキットは、ＲｅｐＳｏｘ、及びＧＷ７８８３８８、及びそれらの任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、又はプロドラッグよりなる群から選択されるＡＬＫ５阻害剤と、プレドニゾロン、プレドニゾン、及びデフラザコート、及びそれらの任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、又はプロドラッグよりなる群から選択される、好ましくは、プレドニゾロン、及びプレドニゾン、及びそれらの任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、又はプロドラッグよりなる群から選択されるグルココルチコイドとを含む。
【００７１】
さらにより好ましくは、医薬組成物又はキットは、ＲｅｐＳｏｘ、及びその任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、又はプロドラッグよりなる群から選択されるＡＬＫ５阻害剤と、プレドニゾロン、及びプレドニゾン、及びそれらの任意の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、又はプロドラッグよりなる群から選択されるグルココルチコイドとを含む。
【００７２】
実験の項において、本発明者らは、ＡＬＫ５阻害剤が筋芽細胞の筋管への分化を促進させ、筋管の数及びサイズを増大させ、並びに／又は再生する細胞の能力を反映する融合指数を増大させることができることを示した。
【００７３】
したがって、本発明は、骨格筋肥大誘発剤としての使用のための、本発明のＡＬＫ５阻害剤、医薬組成物、又はキットに関する。
【００７４】
骨格筋線維は、筋芽細胞の連続的な融合から発生する合胞体である。プロセスには、ｉ）筋芽細胞の筋細胞への分化、ｉｉ）新生筋管を形成するための筋細胞の融合、及びｉｉｉ）さらに成熟した筋管を形成するための新生筋管との筋細胞のさらなる融合に関する。したがって、本明細書に使用するとき、＜骨格筋肥大＞という表現は、既存の筋線維のサイズの増大、及び／又は筋線維の数の増加、及び／又は筋管毎の核の平均数の増加、及び／又は融合指数の増加（筋芽細胞及び筋管の核の総数によって除算した筋管の核の数）によって特徴づけられる骨格筋量の増加を指す。好ましくは、＜骨格筋肥大＞という表現は、既存の筋線維のサイズの増大、及び／又は筋線維の数の増加、及び／又は融合指数の増加によって示される。本明細書に使用するとき、「筋管」及び「筋線維」という用語は互換的に使用される。
【００７５】
また、本発明は、骨格筋肥大の誘発を必要とする対象に骨格筋肥大を誘発する方法であって、本発明のＡＬＫ５阻害剤又は医薬組成物の治療有効量を該対象に投与することを含む方法にも関する。
【００７６】
投与される治療有効量は、当業者によって容易に選択されることができ、対象の骨格筋量又は骨格筋力を増大させるために十分である必要がある。
【００７７】
本明細書に使用するとき、対象は、動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトである。好ましくは、対象は、以下に記載する疾患又は障害などの骨格筋組織減少及び／若しくは筋衰弱をもたらす疾患若しくは障害に起因する筋消耗又は筋衰弱に罹患した患者である。
【００７８】
本発明は、骨格筋肥大を誘発する薬剤を調製するための、本発明のＡＬＫ５阻害剤又は医薬組成物の使用にさらに関し、任意で、該薬剤は１つ又は複数のグルココルチコイドと組み合わせて使用するように用いられる。
【００７９】
上述のように、本発明のＡＬＫ５阻害剤又は医薬組成物は、１つ若しくは複数のグルココルチコイドと組み合わせて使用することができる。
【００８０】
また、本発明は、好ましくは筋線維の変性による、不随意の骨格筋量減少を防止するように使用するための、骨格筋量増加を促進若しくは刺激するように使用するための、骨格筋量を十分に有するように使用するための、並びに／又は、骨格筋量及び／若しくは骨格筋力を増加させるように使用するための、本発明のＡＬＫ５阻害剤、又は医薬組成物、又はキットにも関する。
【００８１】
また、本発明は、それらを必要とする対象における、好ましくは筋線維の変性による不随意の骨格筋量減少を防止するため、骨格筋量増加を促進若しくは刺激するため、骨格筋量を十分に有するため、並びに／又は、骨格筋量及び／若しくは骨格筋力を増加させるための方法であって、本発明におけるＡＬＫ５阻害剤又は医薬組成物の治療有効量を該対象に投与することを含む方法にも関する。
【００８２】
投与される治療有効量は、当業者によって容易に選択されることができ、不随意の骨格筋量減少を防止するため、骨格筋量増加を促進若しくは刺激するため、骨格筋量を十分に有するため、並びに／又は、骨格筋量及び／若しくは骨格筋力を増加させるために十分である必要がある。
【００８３】
対象は上述のとおりであってもよい。
【００８４】
本発明は、好ましくは筋線維の変性による不随意の骨格筋量減少を防止する、骨格筋量増加を促進若しくは刺激する、骨格筋量を十分に有するようにする、並びに／又は、骨格筋量及び／若しくは骨格筋力を増加させる薬剤を調製するための、本発明におけるＡＬＫ５阻害剤又は医薬組成物の使用にさらに関し、任意で、該薬剤は１つ又は複数のグルココルチコイドと組み合わせて使用するように用いられる。
【００８５】
上述のように、本発明のＡＬＫ５阻害剤又は医薬組成物は、１つ若しくは複数のグルココルチコイドと組み合わせて使用することができる。
【００８６】
実験の項において、本発明者らは、ＡＬＫ５阻害剤が筋芽細胞の筋管への分化を促進して、再生する細胞の能力を反映する融合指数を増大させることができるだけでなく、骨格筋萎縮、特にＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ミオスタチン、ＴＧＦ−β、及びデキサメタゾンによって誘発された萎縮も防止することができると示した。
【００８７】
したがって、本発明はまた、骨格筋再生を促進する、及び／又は骨格筋萎縮を防止するように使用するための、本発明におけるＡＬＫ５阻害剤、又は医薬組成物、又はキットにも関する。
【００８８】
骨格筋肥大誘発剤としてのＡＬＫ５阻害剤について上述したすべての実施形態はまた、この態様にも包含される。
【００８９】
本明細書に使用するとき、「骨格筋再生」という表現は、再生する、すなわち筋芽細胞から新しい筋管を作製する筋細胞又は筋組織の能力を指す。このように、「骨格筋再生を促進する」という表現は、筋芽細胞の筋管への分化を促進する、及び／又は筋管の数を増加させる、及び／又は筋肉組織及び特に筋管の再生能力を向上させる、ＡＬＫ５阻害剤の能力を指す。
【００９０】
本明細書に使用するとき、「骨格筋萎縮を防止する」という用語は、筋消耗を防止、停止、又は遅延させるＡＬＫ５阻害剤の能力を指す。筋萎縮は、例えば疾患状態、又は加齢、飢餓、若しくは無活動などの特定の生理学的な条件、又は薬剤（スタチン）若しくは毒（ボツリヌス毒素）などの萎縮剤に起因し得る。筋萎縮の防止は、好ましくは、筋量産生を増大させて筋減少を補うことで得られる。
【００９１】
上述のように、本発明のＡＬＫ５阻害剤又は医薬組成物は、１つ若しくは複数のグルココルチコイドと組み合わせて使用することができる。
【００９２】
また、本発明は、それらを必要とする対象における、骨格筋再生の促進及び／又は骨格筋萎縮の防止をする方法であって、本発明のＡＬＫ５阻害剤又は医薬組成物の治療有効量を該対象に投与することを含む方法にも関する。
【００９３】
投与される治療有効量は、当業者によって容易に選択されることができ、好ましくは筋量産生を増大させて筋減少を補うことで、骨格筋再生を刺激し、及び／又は筋消耗を防止、停止、又は遅延させるために十分である必要がある。
【００９４】
対象は上述のとおりであってもよい。
【００９５】
本発明は、骨格筋再生を促進する、及び／又は骨格筋萎縮を防止する薬剤を調製するための、本発明のＡＬＫ５阻害剤又は医薬組成物の使用にさらに関し、任意で、該薬剤は１つ又は複数のグルココルチコイドと組み合わせて使用するように用いられる。
【００９６】
上述のように、本発明のＡＬＫ５阻害剤又は医薬組成物は、１つ若しくは複数のグルココルチコイドと組み合わせて使用することができる。
【００９７】
本発明は、筋消耗の処置又は防止、特に骨格筋組織減少及び／又は骨格筋衰弱をもたらす疾患又は障害の処置又は防止における使用のための、本発明におけるＡＬＫ５阻害剤、又は医薬組成物、又はキットにさらに関する。
【００９８】
また、本発明は、筋消耗、特に骨格筋組織減少及び／又は骨格筋衰弱をもたらす疾患又は障害を処置する薬剤を調製するための、本発明におけるＡＬＫ５阻害剤又は医薬組成物の使用にも関し、任意で、該薬剤は１つ又は複数のグルココルチコイドと組み合わせて使用するように用いられる。
【００９９】
そして、本発明は、処置を必要とする対象における、筋消耗、特に骨格筋組織減少及び／又は骨格筋衰弱をもたらす疾患又は障害を処置する方法であって、本発明におけるＡＬＫ５阻害剤又は医薬組成物の治療有効量を該対象に投与することを含む方法に関する。
【０１００】
骨格筋肥大誘発剤としてのＡＬＫ５阻害剤について上述したすべての実施形態はまた、この態様にも包含される。
【０１０１】
上述のように、本発明のＡＬＫ５阻害剤又は医薬組成物は、１つ若しくは複数のグルココルチコイドと組み合わせて使用することができる。
【０１０２】
本明細書において使用するとき、「処置」、「処置する」、又は「処置すること」という用語は、疾患の治療、防止、予防、及び遅延など患者の健康状態を改善することを意図する任意の行為を指す。所定の実施形態において、そうした用語は、疾患の又は疾患に関連した症状の改善又は根絶を指す。他の実施形態において、この用語は、そうした疾患を有する対象に１つ以上の治療剤を投与することでもたらされた疾患の広がり又は悪化の最小化を指す。
【０１０３】
本明細書において使用するとき、「筋消耗の処置」という用語は、好ましくは筋線維の変性による不随意の骨格筋量減少の治療、防止、又は遅延を指し得る。
【０１０４】
特に、「骨格筋組織減少及び／又は骨格筋衰弱をもたらす疾患又は障害の処置」という用語は、患者の骨格筋量及び／若しくは骨格筋力の維持若しくは増加、又は患者の骨格筋量減少及び／若しくは骨格筋力減少の遅延を指し得る。
【０１０５】
有効量は、治療的又は予防的有効量であり得る。「治療有効量」とは、所望の治療的又は予防的結果を得るために、必要な投与量及び期間において有効な量を指す。治療有効量は、個人の疾患又は障害、疾患の段階、年齢、性別、及び体重などの要因に応じて変化し得る。治療有効量は、任意の毒性又は有害な作用を治療的に有益な作用が上回る量を含む。「予防有効量」とは、所望の予防的結果を得るために、必要な投与量及び期間において有効な量を指す。必ずしもそうではないが一般に、予防用量は疾患に先立って又は疾患の早い段階で対象に使用されるので、予防有効量は治療有効量未満であり得る。
【０１０６】
処置される疾患又は障害は、骨格筋組織若しくは骨格筋量の減少及び／又は骨格筋衰弱をもたらす任意の疾患又は障害であり得る。
【０１０７】
筋消耗（すなわち、骨格筋組織減少）及び筋衰弱は、代謝疾患（例えば、糖原蓄積症、脂肪蓄積症、若しくはプリンヌクレオチド代謝障害）、神経疾患（例えば、遺伝性感覚運動性ニューロパチータイプＩＩＩ）及び神経筋疾患、悪液質（すなわち、がん、ＡＩＤＳ、うっ血性心不全、慢性閉塞性肺疾患、重度の熱傷、腎不全、若しくは肝不全などの疾患に起因する筋萎縮）、サルコペニア、廃用性筋萎縮（すなわち、長期無活動に起因する萎縮）、神経性無食欲症による飢餓などの過度の飢餓により誘発された萎縮、又は急性筋損傷、オーバーユース筋損傷若しくは戦傷損傷を含む筋損傷などの大きな一群の疾患又は障害からもたらされ得るものである。
【０１０８】
好ましくは、処置される疾患又は障害は、神経筋疾患、悪液質、サルコペニア、廃用性筋萎縮、食欲不振性飢餓により誘発された萎縮、及び急性筋損傷又はオーバーユース筋損傷を含む筋損傷から選択される。より好ましくは、処置される疾患又は障害は、神経筋疾患、悪液質、及びサルコペニアから選択される。
【０１０９】
特定の実施形態において、疾患又は障害は、好ましくは筋疾患（すなわちミオパチー）、神経筋接合部疾患、又は運動ニューロン疾患から選択される、神経筋疾患である。
【０１１０】
ミオパチーは、骨格筋線維の機能障害による筋衰弱を主要な症状とする神経筋障害である。ミオパチーは、遺伝性又は後天性で有り得、例えば、筋ジストロフィー、ミトコンドリアミオパチー又は薬剤誘発性ミオパチーなどの代謝性ミオパチー、及び皮膚筋炎、多発性筋炎又は封入体筋炎などの自己免疫性ミオパチーを含むものである。
【０１１１】
筋ジストロフィーは、筋線維の進行性変性を引き起こして筋量減少をもたらす大グループのミオパチーを代表するものである。筋ジストロフィーを引き起こす３０以上の遺伝子の突然変異が同定されている。筋ジストロフィーの例は、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー、先天性筋ジストロフィー、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー、筋強直性筋ジストロフィー、三好型筋ジストロフィーなどの遠位型筋ジストロフィー、エメリー・ドレイフス型筋ジストロフィー、肢帯型筋ジストロフィー、及び眼咽頭筋型筋ジストロフィーを含むがこれらに限定されない。
【０１１２】
運動ニューロン疾患は、随意筋を制御する運動ニューロンの緩徐な変性及び死によって特徴づけられる障害である。つまり、運動ニューロンは、筋肉にメッセージを送ることを停止して、筋肉は緩徐に衰弱して萎縮する。運動ニューロン疾患は、例として、筋萎縮性側索硬化症、原発性側索硬化症、進行性筋萎縮、進行性球麻痺、偽性球麻痺、及び脊髄性筋萎縮を含む。
【０１１３】
神経筋接合部疾患には、神経筋接合部を介した神経伝達の混乱が共通してあるとともに筋力低下による進行性衰弱をもたらす障害である。神経筋接合部疾患は、例えば、重症筋無力症、自己免疫性神経性筋強直（アイザックス症候群）、ランバート・イートン筋無力症症候群を含み、又はヘビ毒若しくは神経毒（例えば、クロストリジウム属ボツリヌス毒素）などの神経筋接合部機能に作用する毒の形態に起因し得る。
【０１１４】
好ましくは、疾患又は障害は、筋ジストロフィーから、特にデュシェンヌ型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー、筋強直性筋ジストロフィー、三好型筋ジストロフィーなどの遠位型筋ジストロフィー、及び肢帯型筋ジストロフィーから選択される。
【０１１５】
より好ましくは、疾患又は障害は、デュシェンヌ型筋ジストロフィーである。
【０１１６】
他の特定の実施形態において、疾患又は障害は、悪液質及びサルコペニアから選択され、好ましくはサルコペニアである。
【０１１７】
本発明のすべての方法及び態様において、本発明におけるＡＬＫ５阻害剤又は医薬組成物は、所望される作用、又は、防止若しくは処置される疾患に応じて選択可能な、他の有効成分と組み合わせて使用してもよい。他の有効成分の例は、例えば、抗炎症剤、タンパク質同化剤（例えば、成長ホルモン若しくはインスリン様成長因子Ｉ）、抗悪性腫瘍剤、抗生物質、局所麻酔剤、アナボリック／アンドロジェニックステロイド（例えば、テストステロン）、グルココルチコイド、食欲刺激剤（例えば、ドロナビノール）、サイトカインモジュレーター（例えば、サリドマイド）、アンジオテンシン及びβ−アドレノレセプター阻害剤、ＮＨＥ−１阻害剤（例えば、リメポリド（rimeporide））、抗線維化剤（例えば、ロサルタン若しくはリシノプリル）、ホスホジエステラーゼ５(PDE5)阻害剤（例えば、タダラフィル若しくはシルデナフィル）、デヒドロエピアンドロステロン、ビタミンＤ、ウルソール酸、オメガ３酸(omega 3 acid)、アンジオテンシン変換酵素(ACE)阻害剤、プロテアソーム阻害剤、シクロフィリンＤ阻害剤、ＰＧＣ−１α（アルファ）経路モジュレーター、ミオスタチン及びアクチビンＡアンタゴニスト、グレリンアゴニスト、β２−アドノレセプターアゴニスト、クレアチンサプリメント、ロサルタン及びリシノプリルなどの抗線維化剤、タダラフィル及びシルデナフィルなどの筋虚血治療剤、エクソンスキッピング治療などの突然変異特異的治療剤（例えば、ＤＭＤ症例に関する突然変異を標的とするモルフォリノホスホロジアミデートアンチセンスオリゴマーであるエテプリルセン）、アタルレンなどの治療的ナンセンス抑制用薬剤、ＳＭＴ−Ｃ１１００などのユートロフィン上方調節因子、筋前駆細胞若しくは幹細胞を使用する遺伝子置換治療剤（rAAV2.5-CMV-Mini-dystrophy、rAAVrh74.MCK.Mini-dystrophy、若しくはrAAV1.CMV.huFollistatin344を使用するなど）又は細胞治療剤を含むがこれらに限定されない。
【０１１８】
上述したそうした組合せ治療は、組合せ投与（同じ又は個別の製剤に２つ以上の治療剤を含む）、及び個別投与（この場合、ＡＬＫ５阻害剤の投与は、さらなる治療剤の投与の前に、共に、及び／又は後に行われ得る）を含む。
【０１１９】
ＡＬＫ５阻害剤（及び任意のさらなる治療剤）は、非経口、経口、経粘膜、又は局所の投与、好ましくは経口の投与を含む、任意の適切な手段で投与可能である。
【０１２０】
投与に使用する用量は、種々のパラメータに応じて、特に使用される投与モード、関連する病理学、あるいは求められる治療存続期間に応じて、適応させることができる。ＡＬＫ５阻害剤（及び任意のさらなる治療剤）は単一用量として又は複数用量で投与することができる。
【０１２１】
特定の障害又は状態の処置に有効であるＡＬＫ５阻害剤の量は、障害又は状態の特徴に応じたものであり、標準的な臨床技術によって定めることができる。
【０１２２】
好ましい実施形態において、各用量は、体重キログラムあたり約０．０００１ｍｇ〜約３００ｍｇのＡＬＫ５阻害剤、より好ましくは体重キログラムあたり約０．０００５ｍｇ〜約５０ｍｇのＡＬＫ５阻害剤、さらにより好ましくは体重キログラムあたり約０．００１ｍｇ〜約５ｍｇのＡＬＫ５阻害剤の範囲であってもよい。好ましくは、この用量範囲は１日あたりの用量範囲である。
【０１２３】
ＡＬＫ５阻害剤がグルココルチコイドと組み合わせて使用される一部の実施形態において、各用量は、体重キログラムあたり約０．０５ｍｇ〜約１００ｍｇのグルココルチコイド、好ましくは体重キログラムあたり約０．０５ｍｇ〜約１０ｍｇのグルココルチコイド、より好ましくは体重キログラムあたり約０．１ｍｇ〜約５ｍｇのグルココルチコイド、さらにより好ましくは体重キログラムあたり約０．１ｍｇ〜約２ｍｇのグルココルチコイドの範囲であってもよい。好ましくは、この用量範囲は１日あたりの用量範囲である。
【０１２４】
特定の実施形態において、ＡＬＫ５阻害剤、好ましくはＲｅｐＳｏｘは、グルココルチコイド、好ましくはプレドニゾロン又はプレドニゾンと組み合わせて使用され、ＡＬＫ５阻害剤の用量は、体重キログラムあたり約０．００１ｍｇ〜約５ｍｇのＡＬＫ５阻害剤であり、グルココルチコイドの用量は、体重キログラムあたり約０．１ｍｇ〜約２ｍｇのグルココルチコイドである。
【０１２５】
投与の投薬スケジュールは、疾患のタイプ、疾患の重症度、及び治療剤に対する対象の感受性を含む多くの臨床的要因に応じて月に一回から毎日まで変わり得る。
【０１２６】
ＡＬＫ５阻害剤が１つ又は複数のグルココルチコイドと組み合わせて（同じ又は個別の医薬組成物において）使用される本発明のすべての態様における一部の特定の実施形態において、ＡＬＫ５阻害剤及びグルココルチコイドの量又は相対量は、これらが対象に投与されると、共に作用するようなものである。
【０１２７】
本明細書において使用するとき、「共に作用する」という用語は、ＡＬＫ５阻害剤とグルココルチコイドとの組合せで得られる作用、例えば治療的作用が、単独で使用される各化合物の作用を足すよりも大きいということを意味する。言い換えると、骨格筋再生を促進する、骨格筋萎縮を防止する、又は骨格筋組織減少及び／若しくは筋衰弱をもたらす疾患若しくは損傷を処置若しくは防止する、組合せにおける、骨格筋肥大誘発剤としての作用は、各化合物単独の作用の合計より大きい。
【０１２８】
増強作用は、ＡＬＫ５阻害剤及び／又はグルココルチコイドの量を少なくして使用することを可能にする。このように、ＡＬＫ５阻害剤とグルココルチコイドとを組み合わせることで、有害作用又は毒性作用を低減しながら、処置の効果を維持するか、又はさらに向上することができる。
【０１２９】
このように、好ましい実施形態において、ＡＬＫ５阻害剤及びグルココルチコイドは、共に作用する組成物又は組合せにおいて存在する、又は、治療量以下で、処置を必要とする対象に投与される。
【０１３０】
本明細書において使用するとき、「治療量以下」という用語は、単独で使用されるときに同じ兆候及び同じ投与経路で対象に投与される従来の用量より少ない、治療剤の量又は用量を指す。特に、「治療量以下」という用語は、単独で使用されるとき骨格筋細胞に作用を有しない又は僅かな作用を有する、治療剤の量又は用量を指す。
【０１３１】
１つ又は複数の化合物は治療量で投与することができる一方、他のものは治療量以下で投与することができる。特に、ＡＬＫ５阻害剤は治療量で投与される一方、グルココルチコイドは治療量以下で投与される、又は逆もまた同様である。好ましくは、グルココルチコイドの投与によって誘発される副作用を防止するため、ＡＬＫ５阻害剤は治療量で投与される一方、グルココルチコイドは、体重キログラムあたり約０．０１ｍｇ〜約０．５ｍｇのグルココルチコイド、好ましくは体重キログラムあたり約０．１ｍｇ〜約０．５ｍｇのグルココルチコイドの治療量以下で投与される。特定の実施形態において、ＡＬＫ５阻害剤、好ましくはＲｅｐＳｏｘは、グルココルチコイド、好ましくはプレドニゾロン又はプレドニゾンと組み合わせて使用され、ＡＬＫ５阻害剤の用量は、体重キログラムあたり約０．００１ｍｇ〜約５ｍｇのＡＬＫ５阻害剤であり、グルココルチコイドの用量は、体重キログラムあたり約０．１ｍｇ〜約０．５ｍｇのグルココルチコイドである。
【０１３２】
あるいは、組合せの化合物の量又は投与量を少なくする代わりに、投与頻度又は処置期間を少なくすることができる。
【０１３３】
実験の項で示すように、ＡＬＫ５阻害剤は、筋萎縮を防止することができる。
【０１３４】
このように、本発明はまた、共に、個別に、又は連続して使用するための組合せ製剤として、上述のようなＡＬＫ５阻害剤と骨格筋萎縮を誘発する化合物とを含む製品にも関する。
【０１３５】
骨格筋肥大誘発剤としてのＡＬＫ５阻害剤について上述したすべての実施形態はまた、この態様にも包含される。
【０１３６】
特定の実施形態において、骨格筋萎縮を誘発する化合物は治療剤である。この実施形態において、ＡＬＫ５阻害剤は、薬剤誘発性ミオパチーを防止又は限定的にするために使用される。
【０１３７】
本発明は、対象において治療剤によって誘発された骨格筋萎縮を防止又は限定的にする方法であって、上述のようなＡＬＫ５阻害剤の治療有効量を、該対象に、骨格筋萎縮を誘発する該治療剤の投与に対して共に、個別に、又は連続して投与することを含む方法にもさらに関する。
【０１３８】
骨格筋萎縮を誘発する治療剤の例は、コルチコステロイド、コルヒチン、クロロキン、ヒドロキシクロロキン、Ｄ−ペニシラミン、抗生物質、β遮断薬、アミオダロン、シメチジン、ジドブジン、ビンクリスチン、クロフィブラート、スタチン、フィブラート、シクロスポリン、Ｌ−トリプトファン、低カリウム血症誘発薬剤、及び脂質降下剤、又はフィブラートとスタチン、若しくはシクロスポリンとコルヒチンなどの薬剤の組合せ、並びにワクチンなどの筋肉内経路によって投与される治療剤を含むが、これらに限定されない。
【０１３９】
好ましい実施形態において、骨格筋萎縮を誘発する治療剤は脂質降下剤であり、好ましくはスタチン及びフィブラートから選択される。
【０１４０】
ＡＬＫ５阻害剤及び骨格筋萎縮を誘発する治療剤は、共に投与することができる。あるいは、ＡＬＫ５阻害剤は、骨格筋萎縮を誘発する治療剤の投与前又は投与後に対象に投与することができる。好ましくは、治療剤とＡＬＫ５阻害剤とが個別に投与されるとき、これらは２４時間以内に投与される。
【０１４１】
任意的に、上述のように、ＡＬＫ５阻害剤は、他の有効成分と組み合わせて、好ましくは１つ又は複数のグルココルチコイドと組み合わせて使用することができる。
【０１４２】
上述のようなＡＬＫ５阻害剤、すなわち骨格筋肥大誘発剤はまた、飼料及び食品産業において、特にダイエタリーサプリメントとしての用途も見いだされ得る。
【０１４３】
したがって、さらなる態様において、本発明はまた、ＡＬＫ５阻害剤、及び任意で１つ又は複数のグルココルチコイドを含むダイエタリーサプリメント組成物にも関する。
【０１４４】
本発明はまた、対象における筋量、筋力、及び／又は筋パフォーマンスを増加させるための、上述のようなＡＬＫ５阻害剤若しくはキット、又は本発明のダイエタリーサプリメント組成物の非治療的使用にも関する。
【０１４５】
本発明は、骨格筋量減少、好ましくは不随意及び／又は望ましくない骨格筋量減少を防止するように使用するための、上述のようなＡＬＫ５阻害剤若しくはキット、又は本発明のダイエタリーサプリメント組成物の非治療的使用にさらに関する。
【０１４６】
任意的に、上述のように、ＡＬＫ５阻害剤は、他の有効成分と組み合わせて、好ましくは１つ又は複数のグルココルチコイドと組み合わせて使用することができる。
【０１４７】
対象は、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトである。
【０１４８】
実施形態において、対象は非ヒト動物、好ましくは哺乳動物、さらにより好ましくは家畜動物又は競走馬などのスポーツ若しくはレジャー用動物である。家畜動物は、非ヒト哺乳動物、好ましくは肉用哺乳動物である。特に、家畜動物は、ブタ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ウマ、バイソン、シカ、エルク、又はムースから選択することができる。
【０１４９】
他の実施形態において、対象はヒト、好ましくは成人のヒトである。
【０１５０】
特定の実施形態において、対象は、例えば６０歳を超える高齢の成人のヒトであり、ダイエタリーサプリメント組成物は、筋機能及び／又は筋量低下の停止、遅延、又は防止に使用される又は適する。
【０１５１】
対象は、好ましくは健康な対象、すなわち骨格筋組織減少及び／又は筋衰弱をもたらす疾患又は障害に罹患していない対象である。
【０１５２】
ダイエタリーサプリメント組成物は、粉末、液体、又は固体の形態であってもよい。
【０１５３】
好ましくは、ダイエタリーサプリメント組成物は経口投与用に製剤化される。特に、該ダイエタリーサプリメント組成物は、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、並びにシロップ剤、エリキシル剤、及び濃縮滴剤などの液体製剤などの従来の経口投与剤形に製剤化することができる。非毒性の固体担体又は希釈剤を使用することができ、これらは例として、マンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルク、セルロース、グルコース、スクロース、マグネシウム、カーボネートなどを含む。圧縮錠剤では、粉末材料に粘着特性を与える薬剤である結合剤も必要とされる。例として、デンプン、ゼラチン、ラクトース又はデキストロースなどの糖、及び天然ガム又は合成ガムを結合剤として使用可能である。また、崩壊剤も錠剤を崩壊しやすくするために錠剤に必要とされる。崩壊剤は、デンプン、クレイ、セルロース、アルギン、ガム、及び架橋ポリマーを含む。さらに、潤滑剤及び滑剤も、製造プロセスにおいて錠剤材料が表面に付着しないように、及び製造時に粉末材料の流動特性を向上させるために、錠剤に含まれる。コロイド状二酸化ケイ素が滑剤として最も一般に使用され、タルク又はステアリン酸などの化合物が潤滑剤として最も一般に使用される。
【０１５４】
ダイエタリーサプリメント組成物は、ビタミン（例えばビタミンＤ）、アミノ酸、タンパク質、脂質（オメガ３脂肪酸）、ウルソール酸、トマチジン（tomaditine）、抗酸化剤、ポリフェノール、大豆に存在するイソフラボン及び誘導体、茶葉成分、並びににんにく化合物などの、対象に有益な作用を与えるさらなる成分を含むことができる。
【０１５５】
ＡＬＫ５阻害剤及び特に骨格筋肥大誘発剤としてのその使用について上述したすべての実施形態はまた、この態様にも包含される。
【０１５６】
本発明はまた、動物用飼料組成物のための材料又は動物用飼料組成物のための添加剤としての、上述のようなＡＬＫ５阻害剤の使用にも関する。本発明はまた、動物用飼料組成物のための材料又は添加剤を調製するための、ＡＬＫ５阻害剤の使用にも関する。任意的に、上述のように、ＡＬＫ５阻害剤は、他の有効成分と組み合わせて、好ましくは１つ又は複数のグルココルチコイドと組み合わせて使用することができる。
【０１５７】
本発明は、上述のようなＡＬＫ５阻害剤、及び任意で１つ又は複数のグルココルチコイドを含む動物用飼料組成物のための材料又は添加剤にさらに関する。
【０１５８】
本発明は、材料又は添加剤として、上述のようなＡＬＫ５阻害剤、及び任意で１つ又は複数のグルココルチコイドを含む家畜用飼料組成物にさらに関する。
【０１５９】
本発明の飼料組成物、材料、添加剤、又はダイエタリーサプリメントは、例えばトウモロコシグルテンフィード、ヒマワリ外皮、蒸留かす、グアー外皮、コムギミドリング粉、米籾殻、米糠、油糧種子粉末、乾燥血粉、動物副産物粉末、魚副産物、魚粉、可溶性干し魚、羽毛粉、家禽副産物、肉粉、骨粉、乾燥ホエー、大豆濃縮タンパク質、大豆粉、酵母、コムギ、オートムギ、穀実用モロコシ、トウモロコシフィード粉末、ライムギ、トウモロコシ、オオムギ、吸引穀物画分、乾燥醸造かす、トウモロコシ粉、トウモロコシグルテン粉末、飼料オートムギ粉末、モロコシ穀粒粉、コムギミルラン、コムギレッドドッグ、ホミニーフィード、コムギ粉、コムギふすま、コムギ胚芽粉末、オートムギグローツ、ライムギミドリング粉、子葉繊維、粉砕穀物、又はそれらの混合物などの任意の食用ＧＲＡＳ（一般に安全と認められる（generally recognized as safe））材料をさらに含むことができる。
【０１６０】
好ましくは、本発明の飼料組成物、材料、添加剤、又はダイエタリーサプリメントは、特に家畜の性能を向上させるため、すなわち増体量を増加させるため、非治療的骨格筋肥大誘発剤として使用される。このように、好ましくは、飼料組成物、材料、添加剤、又はダイエタリーサプリメントは、健康な対象、すなわち骨格筋組織減少及び／又は筋衰弱をもたらす疾患又は障害に罹患していない対象に投与するために用いられる。対象は、本発明のダイエタリーサプリメント組成物について上述したとおりであってもよい。
【０１６１】
本発明はまた、家畜の性能及び／又は健康を向上させる方法であって、上述のようなＡＬＫ５阻害剤、及び任意で１つ又は複数のグルココルチコイド、特に本発明の飼料組成物、材料、添加剤、又はダイエタリーサプリメントを該家畜に与えることを含む方法にも関する。好ましくは、本明細書において使用するとき、「家畜の性能を向上させる」という用語は、増体量を増加させることを指す。この使用は上述のような非治療的使用であることを意図し、好ましくは、化合物、飼料組成物、材料、添加剤、又はダイエタリーサプリメントは、健康な家畜、すなわち骨格筋組織減少及び／又は筋衰弱をもたらす疾患又は障害に罹患していない家畜に投与するために用いられる。
【０１６２】
飼料組成物、材料、添加剤、又はダイエタリーサプリメントは、粉末、液体、又は固体の形態であってもよい。
【０１６３】
ＡＬＫ５阻害剤以外の本発明の飼料組成物の成分は、家畜の特徴に応じたものであり、当業者によって容易に選択されることができる。
【０１６４】
好ましくは、本発明の飼料組成物は、国立食品局（例えば、仏国のＡＮＳＥＳ、加国のＡＣＩＡ、又は米国のＦＡＤ）などの政府機関によって承認された形態及び／又は組成物である。
【０１６５】
ＡＬＫ５阻害剤及び特に骨格筋肥大誘発剤としてのその使用について上述したすべての実施形態はまた、この態様にも包含される。
【０１６６】
好ましくは、本発明のすべての態様において、任意でグルココルチコイドと組み合わせたＡＬＫ５阻害剤は、オキシトシン受容体アゴニストと組み合わせて使用しない。特に、好ましい実施形態において、本発明の医薬組成物はオキシトシン受容体アゴニストを含まず、任意でグルココルチコイドと組み合わせたＡＬＫ５阻害剤はオキシトシン受容体アゴニストと組み合わせて使用しない。
【０１６７】
オキシトシン受容体(OXTR)は、ホルモン及び神経伝達物質として作用する、ペプチドオキシトシンのＧ−タンパク質結合受容体である。
【０１６８】
ＯＸＴＲアゴニストは、ＯＸＴＲ発現、ＯＸＴＲシグナリング、又はＯＸＴＲ下流のシグナリングを特異的に高める任意の薬剤である。
【０１６９】
特に、ＯＸＴＲアゴニストは、低分子、ＯＸＴＲ発現に特異的に干渉する核酸分子、ベイト基質、ＯＸＴＲのドミナントネガティブ突然変異体、及びＯＸＴＲに対するアプタマー又は抗体であり得る。
【０１７０】
特に、ＯＸＴＲアゴニストは、オキシトシン及びそのアナログを含み得る。ＯＸＴＲアゴニスト、特にオキシトシンアナログの例は、国際公開第２０１６／０２５６２９号、米国特許第８７４８５６４号、米国特許出願公開第２００７／１１７７９４号、及び米国特許出願公開第２０１３／０８５１０６号に公開されており、例えばデモキシトシン、カルベトシン、ＴＣ  ＯＴ  ３９、及びＷＡＹ−２６７４６４を含む。
【０１７１】
以下の実施例は例示の目的で提供され、限定するものではない。
【実施例】
【０１７２】
〔実施例１〕
［材料及び方法］
＜細胞ソース及び細胞培養＞
健常なドナーの一次骨格細胞（ドナー１、ドナー３、及びドナー５）はクロネテイクス(Clonetics)のヒト骨格筋筋芽細胞(Human Skeletal Muscle Myoblasts(HSMM))であった。さらに、３人のＤＭＤ（デュシェンヌ型筋ジストロフィー）ドナー（ドナーＺ、Ｗ、及びＤ１）、及び健常なドナー（ドナーＡ）の細胞を入手した。
【０１７３】
ドナーの特徴を以下の表２及び表３に詳細に示す。
【表２】
2021517574.tif 000004
【表３】
2021517574.tif 000005
【０１７４】
入手先の指示にしたがって、ロンザより入手したサプリメント及びウシ胎仔血清(FBS)とともに筋細胞を培養液に保持した。スクリーニングプレートに播種するために十分な細胞を得るため、増殖ステップを行った。
【０１７５】
＜肥大アッセイ及び萎縮回復アッセイ＞
ＭｙｏＳｃｒｅｅｎ（サイトー、仏国）と呼称されるインビトロの完全自動ヒト筋管モデルを使用して、肥大及び萎縮回復アッセイを行った。このモデルは、ヒト一次筋芽細胞の分化をガイドするミクロ環境の厳密な制御に基づくものである。ＭｙｏＳｃｒｅｅｎ微小パターンに形成される筋管は、高度に画一化された形態とともに高レベルの成熟性を示す。
【０１７６】
ドナーのヒト一次筋芽細胞をＭｙｏＳｃｒｅｅｎ微小パターンの９６ウェルプレート（サイトー、仏国）に播種し、増殖培地において２４時間接着させ、ウマ低血清培地において少なくとも５日間分化させた。
【０１７７】
０日目に、微小パターンを含むＭｙｏＳｃｒｅｅｎプレート（サイトー、仏国）を２００μｌ／ｗｅｌｌの増殖培地で前もって充填し、インキュベーターに３７℃で保管した。ヒト一次筋芽細胞をフラスコから剥離して、カウントし、１００μｌの増殖培地においてウェルにつき１５０００細胞でプレートに播種した。
【０１７８】
１日目に、増殖培地を３００μｌ／ｗｅｌｌの分化培地（０．１％ウマ血清を含むＤＭＥＭ）に変え、その中で、筋芽細胞が分化及び筋管形成を開始した。
【０１７９】
２日目に、分化培地を交換した。そして、候補の化合物を分化培地で希釈して、プレートに移した。ＤＭＳＯの最終濃度は０．１％以下である必要がある。少なくとも６ウェルを基本コントロールとしてビヒクルで処理し、６ウェルを肥大正コントロールとして１００ｎｇ／ｍｌのＩＧＦ−１で処理した。
【０１８０】
萎縮回復アッセイでは、候補化合物添加の１時間後、萎縮誘発剤である最終濃度が、１５０ｎｇ／ｍＬのミオスタチン、２５ｎｇ／ｍＬのＩＬ−１β、２ｎｇ／ｍＬのＴＮＦ−α、０．５ｎｇ／ｍＬのＴＧＦ−β、及び１００μＭのデキサメタゾンを加えた。
【０１８１】
６日目に、細胞をホルマリン５％で３０分間室温において固定して、ＰＢＳ内にて０．１％トリトンＸ−１００で１５分間透過処理し、ＰＢＳ＋ＢＳＡ１％で２０分間ブロックした。筋管をブロッキングバッファー内で１．５時間トロポニンＴに対する一次抗体とともにインキュベートし、ＰＢＳで３回洗浄して、二次抗体及びヘキスト（１／１００００）とともに１．５時間インキュベートし、ＰＢＳで３回洗浄した。
【０１８２】
＜画像分析＞
オペレッタハイコンテンツイメージングシステムにて画像を１０倍倍率で得た。サイトーによるアカペラハイコンテンツイメージングソフトウエア（Perkin Elmer）において開発された専用のアルゴリズムを用いて、画像処理及び分析を行った。ウェルごとに１１視野を得た。
【０１８３】
まず、それぞれトロポニンＴ染色強度とヘキスト染色とを使用して、筋管及び核のセグメンテーションを行った。通常、微小パターンごとに１〜２の筋管を同定した（筋管は少なくとも２つの核を含むトロポニンＴ染色領域である）。バックグラウンドノイズの検出を回避して異常な小筋管構造を排除するために、セグメンテーションのしきい値を設定した。この第１ステップの終了時に、核カウント及び融合指数（トロポニンＴ染色に含まれる核のパーセンテージ）など、特定の読み取り値を全ウェルにおいて計算した。通常、コントロール条件において約５０〜６０の筋管をウェルごとに検出した。
【０１８４】
そして、画像の境界に接する筋管を取り除くためにトロポニンＴ画像に画像クリーンアップステップを行った。筋管幅及び面積を含む筋管形態パラメータ、並びに筋管ごとの核の数を抽出するために、最終の有効な筋管を使用した。
【０１８５】
筋管分化、並びに萎縮及び肥大誘発に関連し、影響を受ける読み取り値として、核カウント、融合指数、平均筋管面積、及び筋管ごとの核の数を検証した。
【０１８６】
＜一次スクリーニング＞
筋管分化及び筋管サイズを増加させる肥大化合物を特定するために一次スクリーニングを行った。候補化合物を、ドナー３の細胞においてモノプリケートにて１０μＭでテストした。
【０１８７】
＜再テスト＞
再テストをチェリーピッキングにて行った（一次スクリーニングと同じ化合物群）。各ヒットを６ウェルのレプリケートにおいて一次スクリーニングにおけるものと同じ条件（ドナー３、１０μＭ）でテストした。
【０１８８】
＜３人の健常なドナーにおける用量反応＞
用量反応アッセイを３人の健常なドナーにおいて（ドナー３、５、及び１）、３３μＭ〜０．０１５μＭの８用量の候補化合物、用量ごとに２ウェルのレプリケートにて行った。
【０１８９】
＜ＥＣ５０算出＞
用量ごとにトリプリケートのウェルで対象の化合物を用量反応において数回テストした。結果をコントロール条件（基本レベル）に対してノーマライズし、グラフパッドｍプリズムを使用してプロットした。「核カウント」の読み取り値により任意の毒性作用を検出できた。「融合指数」及び「ミオシン面積」の読み取り値は、グラフパッドプリズムフィッティングソリューションを使用して、ＥＣ５０値を決定するために使用した。
【０１９０】
＜萎縮回復評価＞
萎縮誘発剤、すなわち、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ミオスタチン、ＴＧＦ−β、及びデキサメタゾンの存在下でトリプリケートにて萎縮回復アッセイを行った。
【０１９１】
［結果］
以下の表４に示すように、ＲｅｐＳｏｘは、＋１７０％を超える融合指数及び／又は筋管面積の読み取り値増加をもたらして、一次スクリーニング及び再テスト時に骨格筋肥大誘発剤として同定された。
表４は、健常なドナー３における肥大活性を示す。
【表４】
2021517574.tif 000006
（％活性＝筋管融合指数（化合物）×１００／筋管融合指数（基本コントロール））
【０１９２】
３人の健康なドナーにおいて用量反応を行った。結果を表５に示す。ＲｅｐＳｏｘは、すべてのドナーで活性であった。
表５は、種々のドナーにおける第１用量反応アッセイの結果を示す。
【表５】
2021517574.tif 000007
【０１９３】
また、８つのさらなるＡＬＫ５阻害剤、つまり、ＳＢ５２５３３４、ＳＤ２０８、ＳＢ５０５１２４、Ｒ２６８７１２、ＬＹ３６４９４７、ＧＷ７８８３８８、Ｄ４４７６、及びＡ８３−０１をテストした。結果を表６に示す。マイクロモル範囲より低いＥＣ５０値を確認した。
表６は、健常なドナー３における第２用量反応アッセイの結果を示す。
【表６】
2021517574.tif 000008
【０１９４】
また、ＲｅｐＳｏｘ及びＧＷ７８８３８８の活性を、ＤＭＤドナー、つまりドナーＺ、Ｗ、及びＤ１の細胞においてアッセイした。結果を表７に示す。
表７は、ＤＭＤドナーにおける肥大活性を示す。
【表７】
2021517574.tif 000009
（％活性＝筋管融合指数（化合物）×１００／筋管融合指数（基本コントロール））
【０１９５】
ＲｅｐＳｏｘに対して萎縮回復アッセイを行った。健康なドナー３の筋管を種々の誘発剤、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ミオスタチン、ＴＧＦ−β、及びデキサメタゾンを使用して萎縮させた。これらの種々の萎縮誘発剤によって誘発された萎縮を抑制するＲｅｐＳｏｘの能力を測定した。
【０１９６】
表８に示す結果は、ＲｅｐＳｏｘがＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ミオスタチン、ＴＧＦ−β、及びデキサメタゾンにより誘発された萎縮を阻害可能であることを示す。
表８は、萎縮回復アッセイの結果を示す。
【表８】
2021517574.tif 000010
(+++:全回復、++:部分回復、+：低回復)
【０１９７】
〔実施例２：アセチルコリン受容体クラスター形成アッセイ〕
［材料及び方法］
ＭｙｏＳｃｒｅｅｎプロトコルを、実施例１の肥大及び萎縮回復アッセイにおいて記載したように行ったが、６日目ではなく９日目に停止した。アッセイの最後に、トロポニンＴ及び核に加えて、特異的抗体を使用してＡｃｈＲを免疫染色した。ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒのオペレッタハイコンテンツイメージングシステムにて画像を２０倍で得た。アカペラハイコンテンツイメージングソフトウエア（Perkin Elmer）において開発された専用のアルゴリズムを用いて、画像処理及び分析を行った。核カウント及び筋管融合指数、ＡｃｈＲの数、ＡｃｈＲ平均面積、筋管総面積によってノーマライズしたＡｃｈＲ総面積である、特定の読み取り値を各ウェルにおいて計算した。
【０１９８】
［結果］
注目すべきことには、特異性抗ＡｃｈＲ抗体で標識すると、分化後６日のＭｙｏＳｃｒｅｅｎ筋管は、筋管線維の中途部及び筋管端部の特定領域において筋鞘膜に沿って区切るＡｃｈＲクラスターを示す。自動ＡｃｈＲクラスターアッセイを開発するため、オペレッタ／アカペラシステムを使用して画像におけるクラスターの凝集数及びサイズを分析するために十分な感受性があり堅牢なＡｃｈＲ検出ルーチンを開発した。ＡｃｈＲクラスター形成におけるＲｅｐＳｏｘの作用は、神経筋接合部における化合物の正の効果を示すために評価された。７日の薬剤処置を含む８日の分化の後、ＲｅｐＳｏｘ処置の筋管は、実質的により多くのＡＣｈＲクラスターを示し、ＡＣｈＲ総面積は６倍増加する一方、ＩＧＦ−１は作用を有しない（図１）。
【０１９９】
〔実施例３：カルシウム流アッセイ〕
［材料及び方法］
細胞を、１３０のＮａＣｌ、５．４のＫＣｌ、１．８のＣａＣｌ２、０．８のＭｇＣｌ２、５．６のＤ−グルコース、１０のＨｅｐｅｓ、ｐＨ７．４(mM)を含むカルシウムバッファーで洗浄した。その後、細胞を、インキュベーター(37 °C, 5% CO2)で２μＭのＦｌｕｏ−４ＡＭ(F14201-Invitrogen)と共に１時間インキュベートした。ロードされなかった色素を取り除くために洗浄した後、２０μＭのＡＣｈ(A6625-Sigma-Aldrich)に対する筋管の反応をビデオ画像で得た。ストリーム取得を１秒間隔で設定し、ウェル毎に１つの視野を得た。オープンソースのイメージＪフレームワークを統合してインハウスで開発した専用ソフトウエアを使用して、画像を自動的に処理及び分析した。画像分析ツールにより、同じウェルで得た画像において、筋管をセグメンテーションする。Ｆｌｕｏ−４総蛍光強度を各筋管内で測定し、バッグラウンドについて補正した。総強度を筋管面積に対してノーマライズして、平均蛍光強度読み取り値を得た。データ表示のため、蛍光強度(F)を、３つの初期時点の平均強度に対してノーマライズした(F/F0)。
【０２００】
［結果］
興味深いことに、ＡＣｈ刺激後のＣａ２＋流測定の場合、ＲｅｐＳｏｘの存在下で分化した筋管のみが、コントロールの筋管と比較して、［Ｃａ２＋］ｉピーク振幅において、１．５６倍の統計的に有意な増加を示した。ここでもまた、ＩＧＦ−１は作用を有しない。また、カルシウム流の低速度撮影ビデオは、ＲｅｐＳｏｘの存在下で分化した筋管が、ＡＣｈ刺激後に、縮む筋管の数の著しい増加を示すことを示唆した（図２）。
【０２０１】
〔実施例４：収縮活性アッセイ〕
［材料及び方法］
細胞を、上述のようにカルシウムバッファーで洗浄した。１００μＭのＡＣｈを３分間加えることによって、筋管収縮を誘発し、その後、筋管を固定して、トロポニンＴ抗体で免疫染色した。×１０／０．３ＮＡ対物レンズを有するオペレッタプラットフォームにおいて、自動取得を行った。アカペラを使用して、筋管がはがれた個所を標識する、セグメンテーションした筋管の縁部内の高強度領域の検出に基づいて、はがれた筋管を自動的に検出し、定量化した。
【０２０２】
［結果］
収縮力における作用を、４日のＲｅｐＳｏｘ又はＩＧＦ−１での処置を含む５日の分化後に、定量化した。１００μＭのＡＣｈの添加によって刺激したとき、有効な収縮力が、ＲｅｐＳｏｘ(77 ± 5%)及びＩＧＦ−１(67 ± 5%)で処置した筋管において増大した。ＲｅｐＳｏｘは、ＡＣｈ刺激［Ｃａ２＋］ｉ流入及び収縮力を高める（図３）。
【０２０３】
〔実施例５：ＡＬＫ５阻害剤とグルココルチコイドとの組合せ〕
［材料と方法］
ＤＭＤドナーのドナーＺにおいて、実施例１に記載するように、肥大アッセイを行った。処置を２日目に行って、１０ｎＭのプレドニゾロン、３００ｎＭのＲｅｐＳｏｘ若しくはＧＷ７８８３８８、又はプレドニゾロンと、これら２つのＡＬＫ５阻害剤の１つとの組合せを加えた。４日の処置後、実施例１の材料と方法に記載されるような画像分析により、筋管の融合指数及び平均面積を測定した。
【０２０４】
［結果］
図４〜７に示すように、ポジティブコントロールＩＧＦ−１は、融合指数(+160%)及び筋管平均面積(+54%)の両方を増加させ、ＤＭＤドナーＺにおける肥大アッセイを確認する。
【０２０５】
ＡＬＫ５阻害剤ＲｅｐＳｏｘ及びＧＷ７８８３８８の双方は、３００ｎＭ且つ単独で加えたとき、有意な肥大を誘発する。ＲｅｐＳｏｘは最も強力なＡＬＫ５阻害剤であり、融合指数を＋１００％(GW788388の+41%に対して)、筋管面積を＋６８％(GW788388の+21%に対して)増加させるということが留意される。
【０２０６】
１０ｎＭのプレドニゾロン単独は、ドナーＺの筋管の融合指数(+25%)において小さい増加をもたらすが、筋管の平均面積を有意に増加しない。
【０２０７】
１つのＡＬＫ５阻害剤とプレドニゾロンとの組合せはそれぞれ単独での作用を増強し、融合指数及び筋管面積の両方が、それぞれの化合物の処置よりも、組合せ条件において有意に大きい。例えば、プレドニゾロンとＲｅｐＳｏｘとの組合せは、融合指数を＋１４８％（図４）及び筋管面積を＋１０２％（図５）増加させる。
【０２０８】
〔実施例６：電気パルス刺激アッセイ〕
［材料及び方法］
ドナー５及びＡの筋管（表２参照）を、５〜６日の３〜５００ｎＭＲｅｐＳｏｘでの処置を含む６〜７日間分化した。細胞を、１３０のＮａＣｌ、５．４のＫＣｌ、１．８のＣａＣｌ２、０．８のＭｇＣｌ２、５．６のＤ−グルコース、１０のＨｅｐｅｓ、ｐＨ７．４(mM)を含むカルシウムバッファーで洗浄した。その後、細胞を、インキュベーター(37 °C, 5% CO2)で２μＭのＦｌｕｏ−４ＡＭ(F14201-Invitrogen)と共に１時間インキュベートした。ロードされなかった色素を取り除くために洗浄した後、電気パルス刺激に対する筋管の反応を、浜松ホトニクスのＦＤＳＳ／μＣＥＬＬ／ＥＦＳを使用してモニターした。れん縮刺激を、パルス幅５０ｍｓの５Ｖにおいて、０．２Ｈｚで、６０秒与えた。強縮刺激を、パルス幅１５ｍｓの３Ｖにおいて、３０Ｈｚで、２０秒与えた。Ｆｌｕｏ−４総蛍光強度を各ウェルで測定した。データ表示のため、蛍光強度(F)を、初期時点の平均強度に対してノーマライズした(F/F0)。
【０２０９】
［結果］
ドナーＡ及びドナー５の筋管は、図８Ａ及び図８Ｂに示すように、反復させたれん縮電気刺激に反応した。筋管を３００ｎＭのＲｅｐＳｏｘで５日間処置したとき、カルシウムピーク振幅は２倍大きい。
【０２１０】
刺激周波数を上げると、インビボの現象を示す、ウェーブ加重、そして完全な強縮をもたらす。ＲｅｐＳｏｘ処置の筋管の強縮反応は、ＲｅｐＳｏｘ濃度により増加し、コントロールの筋管との有意差をもたらす（図９Ｂ）。
【０２１１】
これらの結果は、ＲｅｐＳｏｘが、化学物質(ACh)又は電気刺激(FDSS/μCELL/EFS)の後、筋管のカルシウム流入を高めるということを裏付ける。
【図１】
2021517574.tif 000011
【図２】
2021517574.tif 000012
【図３】
2021517574.tif 000013
【図４】
2021517574.tif 000014
【図５】
2021517574.tif 000015
【図６】
2021517574.tif 000016
【図７】
2021517574.tif 000017
【図８】
2021517574.tif 000018
【図９】
2021517574.tif 000019
【国際調査報告】
2021517574.tif 000020
2021517574.tif 000021
2021517574.tif 000022
2021517574.tif 000023