(57)【要約】  式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、これらの化合物を含む医薬組成物、およびＲＯＣＫを阻害するための薬物の調製におけるこれらの化合物の使用が提供される。2021517137.tif 000040【選択図】なし
2021517137.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【化１】
2021517137.tif 000036
（式中、
Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＨ２Ｄ、ＣＨＤ２およびＣＤ３から選択され、
Ｒ２は、ＣＨ３、ＣＨ２Ｄ、ＣＨＤ２およびＣＤ３から選択され、
Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ９、Ｙ１０、Ｙ１１、Ｙ１２、Ｙ１４、Ｙ１５およびＹ１６は、水素および重水素からそれぞれ独立に選択され、
各Ｙ８は水素および重水素から独立に選択され、但し、両Ｙ８は同じであり、
各Ｙ１３は水素および重水素から独立に選択され、但し、両Ｙ１３は同じであり、
但し、前記式（Ｉ）の化合物は少なくとも１つの重水素原子を含む。）
【請求項２】
前記Ｙ１が重水素である、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３】
前記Ｙ２が重水素である、請求項１または２に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項４】
前記Ｙ３が重水素である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項５】
前記Ｙ７が重水素である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項６】
前記両Ｙ８が重水素である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項７】
前記両Ｙ１３が重水素である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項８】
前記Ｒ１がＣＨ３およびＣＤ３から選択される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項９】
前記Ｒ２がＣＨ３およびＣＤ３から選択される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１０】
【化２】
2021517137.tif 000037
およびその薬学的に許容される塩から選択される化合物。
【請求項１１】
請求項１０に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩、
【化３】
2021517137.tif 000038
から選択される化合物およびその薬学的に許容される塩。
【請求項１２】
請求項１１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩、
【化４】
2021517137.tif 000039
から選択される化合物およびその薬学的に許容される塩。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物または塩酸塩であるその薬学的に許容される塩。
【請求項１４】
請求項１３に記載の化合物または二塩酸塩であるその薬学的に許容される塩。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩と、少なくとも１つの薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
【請求項１６】
ＲＯＣＫの阻害に応答する状態を治療、改善または予防する方法であって、有効量の請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物もしくはその薬学的に許容される塩またはその医薬組成物を、場合により第２の治療剤と組み合わせて、このような治療を必要とする対象に投与するステップを含む方法。
【請求項１７】
眼圧上昇を治療するための医薬の調製における、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
[1]本出願は、それぞれ全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国仮出願第６２／６４７，５８１号および同第６２／７１１，３７５号に基づく優先権を主張する。
【０００２】
［発明の分野］
[2]Ｒｈｏ結合キナーゼ（ＲＯＣＫ）の酵素活性を阻害することができ、ＲＯＣＫによって媒介される疾患および障害の治療に有用となり得る一定の化合物またはその薬学的に許容される塩が提供される。
【０００３】
［発明の背景］
[3]緑内障は、視神経症として、世界中の６，０５０万人超に発症する不可逆的失明の主因の１つであり、２０２０年までに８，０００万人近くが発症すると予想されている。緑内障では、網膜神経節細胞の進行性の死が、視神経損傷、および最終的には視野喪失をもたらす。現在、眼圧（ＩＯＰ）上昇が緑内障の主な修正可能な危険因子であり、ＩＯＰの低下が唯一の治療的介入であることが広く受け入れられている。健康な眼では、房水（ＡＨ）が主に小柱網（ＴＭ）を通って流出し、ＩＯＰを正常範囲に維持する。緑内障の眼では、ＩＯＰ上昇が、一部は、ＴＭの収縮緊張および剛性の増加、細胞外マトリックス沈着の変化、ならびにシュレム管の内壁の透過性の変化などのＴＭ機能障害の結果として発生する。
【０００４】
[4]病気の小柱経路を効率的に標的化するために、新たな緑内障治療法が緊急に必要である。Ｒｈｏ結合キナーゼ（ＲＯＣＫ）の阻害剤は、近年ＦＤＡに承認されたＲｈｏｐｒｅｓｓａ（ネタルスジル点眼液）などの、緑内障を治療するための新しいクラスの標的療法を表す。ＲＯＣＫには、ＲＯＣＫ１およびＲＯＣＫ２の２つのアイソフォームが含まれ、これらはセリン／スレオニンキナーゼであり、小型ＧＴＰ結合タンパク質Ｒｈｏの下流エフェクターである。ＲＯＣＫは、ＴＭを含むさまざまな種類の組織で広く発現される。ＲＯＣＫはアクチンストレスファイバーと接着斑の会合を駆動し、細胞収縮、運動性、形態、極性、細胞分裂および遺伝子発現を含む重要な細胞機能を多面的に調節する。ＴＭおよびシュレム管細胞におけるＲｈｏ／ＲＯＣＫシグナル伝達経路の活性化は、アクトミオシン収縮を引き起こし、細胞外マトリックス産生を増強し、細胞剛性を高め、その結果、ＡＨ排出が減少し、ＩＯＰが上昇する。逆に、選択的ＲＯＣＫ阻害剤は、細胞収縮および剛性を軽減し、線維症関連タンパク質の発現レベルを低下させ、ＴＭの弛緩、ＡＨ排出の増加、および最終的にはＩＯＰの低下をもたらす。
【０００５】
[5]したがって、ＲＯＣＫに対する阻害活性を有する化合物は、うまく緑内障患者のための治療アプローチとなるだろう。ＲＯＣＫ阻害剤は当技術分野で開示されているが、効力、安定性、選択性、毒性、薬力学特性および薬物動態特性から選択される少なくとも１つの有利な特性を有する新たなＲＯＣＫ阻害剤が必要である。これに関して、ＲＯＣＫ阻害剤の新規なクラスが本明細書で提供される。
【０００６】
［発明の開示］
[6]一定の新規な重水素化合物、その薬学的に許容される塩、およびその医薬組成物、ならびにそれらの医薬としての使用が本明細書で開示される。
【０００７】
[7]一態様では、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩が本明細書で開示される。
【化１】
2021517137.tif 000003
（式中、
Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＨ２Ｄ、ＣＨＤ２およびＣＤ３から選択され；
Ｒ２は、ＣＨ３、ＣＨ２Ｄ、ＣＨＤ２およびＣＤ３から選択され；
Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ９、Ｙ１０、Ｙ１１、Ｙ１２、Ｙ１４、Ｙ１５およびＹ１６は、水素および重水素からそれぞれ独立に選択され；
各Ｙ８は水素および重水素から独立に選択され、但し、両Ｙ８は同じであり；
各Ｙ１３は水素および重水素から独立に選択され、但し、両Ｙ１３は同じであり、
但し、式（Ｉ）の化合物は少なくとも１つの重水素原子を含む。）
【０００８】
[8]別の態様では、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物が本明細書で開示される。
【０００９】
[9]さらに別の態様では、ＲＯＣＫを調節する方法であって、治療上有効量の式（Ｉ）の化合物もしくはその薬学的に許容される塩またはその医薬組成物を、それを必要とする系または対象に投与し、それによって前記ＲＯＣＫを調節するステップを含む方法が本明細書で開示される。
【００１０】
[10]さらに別の態様では、ＲＯＣＫの阻害に応答する状態を治療、改善または予防する方法であって、有効量の式（Ｉ）の化合物もしくはその薬学的に許容される塩またはその医薬組成物を、場合により第２の治療剤と組み合わせて、このような治療を必要とする系または対象に投与し、それによって前記状態を治療するステップを含む方法が開示される。
【００１１】
[11]あるいは、ＲＯＣＫによって媒介される状態を治療するための医薬の製造における、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用が本明細書で開示される。特定の実施形態では、本開示の化合物が、ＲＯＣＫによって媒介される状態を治療するために、単独でまたは第２の治療剤と組み合わせて使用され得る。
【００１２】
[12]あるいは、ＲＯＣＫによって媒介される状態を治療するための、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容される塩が開示される。
【００１３】
[13]具体的には、本明細書の状態には、それだけに限らないが、緑内障、高眼圧症または神経変性眼疾患などの眼障害が含まれる。
【００１４】
[14]さらに、本開示は、眼圧上昇を治療する方法であって、有効量の式（Ｉ）の化合物もしくはその薬学的に許容される塩またはその医薬組成物を、場合により第２の治療剤と組み合わせて、このような治療を必要とする系または対象に投与し、それによって前記状態を治療するステップを含む方法を開示する。
【００１５】
[15]あるいは、本開示は、眼圧上昇を治療するための医薬の製造における、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。特定の例では、本開示の化合物が、眼障害を治療するために、単独でまたは化学療法剤と組み合わせて使用され得る。
【００１６】
[16]具体的には、本明細書に開示される眼障害には、それだけに限らないが、緑内障、高眼圧症および神経変性眼疾患が含まれる。
【００１７】
[17]本開示の化合物を使用する上記の方法では、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩が、細胞もしくは組織を含む系、またはヒトもしくは動物対象などの哺乳動物対象を含む対象に投与され得る。
【００１８】
[18]一定の用語
特に定義しない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、主張される主題が属する分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書の開示全体を通して参照される全ての特許、特許出願、公開された資料は、特に明記しない限り、全体が参照により組み込まれる。本明細書中に用語の定義が複数ある場合は、この節の定義が優先する。
【００１９】
[19]上述の一般的な説明および以下の詳細な説明は、例示的および説明的なものにすぎず、いずれの主張される主題も制限するものではないことが理解されるべきである。本出願では、特に明記しない限り、単数形の使用には複数形が含まれる。本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈がそうでないことを明確に指示しない限り、複数の指示対象を含むことに留意しなければならない。「または」の使用は、特に明記しない限り、「および／または」を意味することにも留意すべきである。さらに、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語、ならびに「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、および「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」などの他の形態の使用は、限定的ではない。同様に、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語、ならびに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、および「含まれる（ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ）」などの他の形態の使用も、限定的ではない。
【００２０】
[20]標準的な化学用語の定義は、Careyand Sundberg “ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY 4th ED.” Vols. A(2000) and B(2001), PlenumPress, New Yorkを含む参考資料に見出され得る。特に指示しない限り、当技術分野の範囲内の質量分析、ＮＭＲ、ＨＰＬＣ、ＩＲおよびＵＶ／Ｖｉｓ分光法ならびに薬理学の従来の方法が使用される。具体的な定義が提供されない限り、本明細書に記載される分析化学、合成有機化学、ならびに医薬品および製薬化学に関連して使用される命名法、ならびにその実験手順および技術は、当技術分野で知られているものである。標準的な技術は、化学合成、化学分析、医薬調製、製剤化、および送達、および患者の治療に使用することができる。反応および精製技術は、例えば、製造業者の仕様のキットを使用して、または当技術分野で一般的に達成されるように、または本明細書に記載されるように実施することができる。上述の技術および手順は、一般に、当技術分野で周知の従来の方法で、本明細書全体で引用および議論されるさまざまな一般的およびより具体的な参考文献に記載されるように実施することができる。本明細書を通して、基およびその置換基は、安定な部分および化合物を提供するように当業者によって選択され得る。
【００２１】
[21]置換基が、左から右に書かれた従来の化学式によって指定されている場合、それらは右から左に構造を書き込んだ結果として生じる化学的に同一の置換基を等しく包含する。非限定的な例として、ＣＨ２ＯはＯＣＨ２と同等である。
【００２２】
[22]本明細書で使用される場合、「場合により置換された」という用語は、置換されていないまたは置換されていることを意味する。「置換された」という用語は、水素原子が除去され、置換基によって置き換えられていることを意味する。所与の原子での置換は原子価によって制限されることを理解すべきである。定義全体を通して、「Ｃｉ〜ｊ」という用語は、ｉおよびｊが整数であり、炭素数を示す、端点を含む範囲を示す。例としては、Ｃ１〜４、Ｃ１〜１０、Ｃ３〜１０などが挙げられる。
【００２３】
[23]「重水素」または「Ｄ」という用語は、核が１つの陽子および１つの中性子を含有する水素の同位体を指す。特定の位置が重水素を有するものとして指定されている場合、その位置での重水素の存在量が、重水素の天然の存在量よりも多いことが理解される。
【００２４】
[24]「重水素で置換された」という用語は、１つまたは複数の水素原子を対応する数の重水素原子で置き換えることを指す。
【００２５】
[25]単独でまたは他の用語と組み合わせて使用される「アルキル」という用語は、指定された数の炭素原子を有する分岐と直鎖の両方の飽和脂肪族炭化水素基を指す。特に指定しない限り、「アルキル」はＣ１〜１０アルキルを指す。例えば、「Ｃ１〜６アルキル」のようなＣ１〜６は、直鎖または分岐配置の１、２、３、４、５または６個の炭素を有する基を含むと定義される。例えば、「Ｃ１〜８アルキル」には、それだけに限らないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ｉ−ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチルおよびオクチルが含まれる。
【００２６】
[26]単独で、または他の用語と組み合わせて使用される「シクロアルキル」という用語は、単環式または架橋した炭化水素環系を指す。単環式シクロアルキルは、３〜１０個の炭素原子、０個のヘテロ原子および０個の二重結合を含有する炭素環式環系である。単環式環系の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルおよびシクロオクチルが挙げられる。単環式環は、環系の２つの非隣接炭素原子をそれぞれ連結する１つ、２つまたは３つの炭素原子からそれぞれなる１つまたは２つのアルキレン架橋を含有し得る。このような架橋シクロアルキル環系の代表的な例としては、それだけに限らないが、ビシクロ［３．１．１］ヘプタン、ビシクロ［２．２．１］ヘプタン、ビシクロ［２．２．２］オクタン、ビシクロ［３．２．２］ノナン、ビシクロ［３．３．１］ノナン、ビシクロ［４．２．１］ノナン、トリシクロ［３．３．１．０３，７］ノナンおよびトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカン（アダマンタン）が挙げられる。単環式および架橋シクロアルキルは、環系内に含有される任意の置換可能な原子を通して親分子部分に結合することができる。
【００２７】
[27]「ハロゲン」（または「ハロ」）という用語は、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素を指す。
【００２８】
[28]単独で、または他の用語と組み合わせて使用される「アルコキシ」という用語は、酸素原子に単結合されたアルキル基を指す。アルコキシ基の分子への結合点は、酸素原子を通す。アルコキシ基は、−Ｏ−アルキルとして表すことができる。「Ｃ１〜１０アルコキシ」という用語は、１〜１０個の炭素原子を含有し、直鎖または分岐部分を有するアルコキシ基を指す。アルコキシ基には、それだけに限らないが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、ヘキシルオキシなどが含まれる。
【００２９】
[29]単独で、または他の用語と組み合わせて使用される「シクロアルコキシ」という用語は、酸素原子に単結合されたシクロアルキル基を指す。シクロアルコキシ基の分子への結合点は、酸素原子を通す。シクロアルコキシ基は、−Ｏ−シクロアルキルとして表すことができる。「Ｃ３〜１０シクロアルコキシ」は、３〜１０個の炭素原子を含有するシクロアルコキシ基を指す。シクロアルコキシ基には、それだけに限らないが、シクロプロポキシ、シクロブトキシ、シクロヘキシルオキシなどが含まれる。
【００３０】
[30]「薬学的に許容される塩」という用語は、無機または有機塩基および無機または有機酸を含む、薬学的に許容される非毒性の塩基または酸から調製される塩を指す。無機塩基から誘導される塩は、例えば、アルミニウム、アンモニウム、カルシウム、銅、第二鉄、第一鉄、リチウム、マグネシウム、第二マンガン、第一マンガン、カリウム、ナトリウムおよび亜鉛塩から選択され得る。さらに、例えば、無機塩基から誘導される薬学的に許容される塩は、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、カリウムおよびナトリウム塩から選択され得る。固体形態の塩は、１つまたは複数の結晶構造で存在することがあり、水和物の形態であることもある。薬学的に許容される有機非毒性塩基から誘導される塩は、例えば、第一級、第二級および第三級アミン、天然に存在する置換アミンを含む置換アミン、環状アミンおよび塩基性イオン交換樹脂の塩、例えばアルギニン、ベタイン、カフェイン、コリン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチル−モルホリン、Ｎ−エチルピペリジン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラバミン、イソプロピルアミン、リジン、メチルグルカミン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂、プロカイン、プリン、テオブロミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、およびトリプロピルアミン、トロメタミンから選択され得る。
【００３１】
[31]本明細書に開示される化合物が塩基性である場合、塩は、無機酸および有機酸から選択される少なくとも１つの薬学的に許容される非毒性酸を使用して調製され得る。このような酸は、例えば、酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコン酸、グルタミン酸、臭化水素酸、塩酸、イセチオン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ムチン酸、硝酸、パモ酸、パントテン酸、リン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸およびｐ−トルエンスルホン酸から選択され得る。いくつかの実施形態では、このような酸が、例えば、クエン酸、臭化水素酸、塩酸、マレイン酸、リン酸、硫酸、フマル酸および酒石酸から選択され得る。
【００３２】
[32]化合物または薬学的に許容される塩「の投与」および／または「を投与する」という用語は、化合物またはその薬学的に許容される塩を、治療の必要性が認められている個体に提供することを意味すると理解されるべきである。
【００３３】
[33]「有効量」という用語は、研究者、獣医、医学博士または他の臨床医が求めている組織、系、動物またはヒトの生物学的または医学的反応を引き出す化合物または薬学的に許容される塩の量を意味する。
【００３４】
[34]本明細書で使用される「組成物」という用語は、指定された量の指定された成分を含む製品、および指定された量の指定された成分の組み合わせから直接または間接的に生じる任意の製品を包含することを意図している。医薬組成物に関連するこのような用語は、１つまたは複数の有効成分と、担体を構成する１つまたは複数の不活性成分とを含む製品、ならびに成分の任意の２つ以上の組み合わせ、錯化もしくは凝集から、または１つもしくは複数の成分の他の種類の反応もしくは相互作用から直接的または間接的に生じる任意の製品を包含することを意図している。
【００３５】
[35]「薬学的に許容される」という用語は、製剤の他の成分と適合し、そのレシピエントに許容できないほど有害ではないことを意味する。
【００３６】
[36]障害、状態などを患っている個体に関して本明細書で使用される「対象」という用語は、哺乳動物および非哺乳動物を包含する。哺乳動物の例としては、それだけに限らないが、哺乳綱の任意のメンバー：ヒト、チンパンジーなどのヒト以外の霊長類、および他の類人猿およびサル種；ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタなどの家畜；ウサギ、イヌおよびネコなどの飼育動物；ラット、マウスおよびモルモットなどのげっ歯類を含む実験動物などが挙げられる。非哺乳動物の例としては、それだけに限らないが、鳥類、魚類などが挙げられる。本明細書で提供される方法および組成物の一実施形態では、哺乳動物がヒトである。
【００３７】
[37]本明細書で使用される「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語、および他の文法上の等価物は、疾患もしくは状態を緩和、軽減もしくは改善する、追加の症状を予防する、症状の根本的な代謝原因を改善もしくは予防する、疾患もしくは状態を阻害する、疾患もしくは状態の発症を停止する、疾患もしくは状態を軽減する、疾患もしくは状態の退行を引き起こす、疾患もしくは状態によって引き起こされる状態を軽減する、または疾患もしくは状態の症状を停止することを含み、予防を含むことを意図している。この用語はさらに、治療上の利益および／または予防上の利益を達成することを含む。治療上の利益とは、治療されている基礎障害の根絶または改善を意味する。また、患者が依然として基礎障害に苦しんでいる可能性があるが、患者で改善が観察されるように、基礎障害に関連する生理学的症状の１つまたは複数の根絶または改善により治療効果が達成される。予防上の利益については、組成物が、特定の疾患を発症するリスクのある患者、またはこの疾患の診断がなされていなくても、疾患の生理学的症状の１つまたは複数を報告している患者に投与され得る。
【００３８】
[38]「保護基」または「Ｐｇ」という用語は、化合物の他の官能基を反応させながら、一定の官能基をブロックまたは保護するために一般的に使用することができる置換基を指す。例えば、「アミノ保護基」は、化合物のアミノ官能基をブロックまたは保護する、アミノ基に結合した置換基である。適切なアミノ保護基には、それだけに限らないが、アセチル、トリフルオロアセチル、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ）および９−フルオレニルメチレンオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）が含まれる。同様に、「ヒドロキシ保護基」は、ヒドロキシ官能基をブロックまたは保護する、ヒドロキシ基の置換基を指す。適切な保護基には、それだけに限らないが、アセチルおよびシリルが含まれる。「カルボキシ保護基」は、カルボキシ官能基をブロックまたは保護する、カルボキシ基の置換基を指す。一般的なカルボキシ保護基には、−ＣＨ２ＣＨ２ＳＯ２Ｐｈ、シアノエチル、２−（トリメチルシリル）エチル、２−（トリメチルシリル）エトキシメチル、２−（ｐ−トルエンスルホニル）エチル、２−（ｐ−ニトロフェニルスルフェニル）エチル、２−（ジフェニルホスフィノ）−エチル、ニトロエチルなどが含まれる。保護基およびそれらの使用の一般的な説明については、T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, JohnWiley&Sons, New York, 1991を参照されたい。
【００３９】
[39]本明細書で使用される「ＮＨ保護基」という用語には、それだけに限らないが、トリクロロエトキシカルボニル、トリブロモエトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、パラ−ニトロベンジルカルボニル、オルト−ブロモベンジルオキシカルボニル、クロロアセチル、ジクロロアセチル、トリクロロアセチル、トリフルオロアセチル、フェニルアセチル、ホルミル、アセチル、ベンゾイル、ｔｅｒｔ−アミルオキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、パラ−メトキシベンジルオキシカルボニル、３，４−ジメトキシベンジル−オキシカルボニル、４−（フェニルアゾ）−ベンジルオキシカルボニル、２−フルフリルオキシカルボニル、ジフェニルメトキシカルボニル、１，１−ジメチルプロポキシ−カルボニル、イソプロポキシカルボニル、フタロイル、スクシニル、アラニル、ロイシル、１−アダマンチルオキシカルボニル、８−キノリルオキシカルボニル、ベンジル、ジフェニルメチル、トリフェニルメチル、２−ニトロフェニルチオ、メタンスルホニル、パラトルエンスルホニル、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメチレン、ベンジリデン、２−ヒドロキシベンジリデン、２−ヒドロキシ−５−クロロベンジリデン、２−ヒドロキシ−１−ナフチルメチレン、３−ヒドロキシ−４−ピリジルメチルレン、シクロヘキシリデン、２−エトキシカルボニルシクロヘキシリデン、２−エトキシカルボニルシクロペンチリデン、２−アセチルシクロヘキシリデン、３，３−ジメチル−５−オキシシクロ−ヘキシリデン、ジフェニルホスホリル、ジベンジルホスホリル、５−メチル−２−オキソ−２Ｈ−１，３−ジオキソール−４−イル−メチル、トリメチルシリル、トリエチルシリルおよびトリフェニルシリルが含まれる。
【００４０】
[40]本明細書で使用される「Ｃ（Ｏ）ＯＨ保護基」という用語には、それだけに限らないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、１，１−ジメチルプロピル、ｎ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、フェニル、ナフチル、ベンジル、ジフェニルメチル、トリフェニルメチル、パラ−ニトロベンジル、パラ−メトキシベンジル、ビス（パラ−メトキシフェニル）メチル、アセチルメチル、ベンゾイルメチル、パラ−ニトロベンゾイルメチル、パラ−ブロモベンゾイルメチル、パラ−メタンスルホニルベンゾイルメチル、２−テトラヒドロピラニル、２−テトラヒドロフラニル、２，２，２−トリクロロ−エチル、２−（トリメチルシリル）エチル、アセトキシメチル、プロピオニルオキシメチル、ピバロイルオキシメチル、フタルイミドメチル、スクシンイミドメチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、メトキシメチル、メトキシエトキシメチル、２−（トリメチルシリル）エトキシメチル、ベンジルオキシメチル、メチルチオメチル、２−メチルチオエチル、フェニルチオメチル、１，１−ジメチル−２−プロペニル、３−メチル−３−ブテニル、アリル、トリメチルシリル、トリエチルシリル、トリイソプロピルシリル、ジエチルイソプロピルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル、ジフェニルメチルシリルおよびｔｅｒｔ−ブチルメトキシフェニルシリルが含まれる。
【００４１】
[41]本明細書で使用される「ＯＨまたはＳＨ保護基」という用語には、それだけに限らないが、ベンジルオキシカルボニル、４−ニトロベンジルオキシカルボニル、４−ブロモベンジルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキシカルボニル、３，４−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、１，１−ジメチルプロポキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、イソブチルオキシカルボニル、ジフェニルメトキシカルボニル、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル、２，２，２−トリブロモエトキシカルボニル、２−（トリメチルシリル）エトキシカルボニル、２−（フェニルスルホニル）エトキシカルボニル、２−（トリフェニルホスホニオ）エトキシカルボニル、２−フルフリルオキシカルボニル、１−アダマンチルオキシカルボニル、ビニルオキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、４−エトキシ−１−ナフチルオキシカルボニル、８−キノリルオキシカルボニル、アセチル、ホルミル、クロロアセチル、ジクロロアセチル、トリクロロアセチル、トリフルオロアセチル、メトキシアセチル、フェノキシアセチル、ピバロイル、ベンゾイル、メチル、ｔｅｒｔ−ブチル、２，２，２−トリクロロエチル、２−トリメチルシリルエチル、１，１−ジメチル−２−プロペニル、３−メチル−３−ブテニル、アリル、ベンジル（フェニルメチル）、パラ−メトキシベンジル、３，４−ジメトキシベンジル、ジフェニルメチル、トリフェニルメチル、テトラヒドロフリル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、メトキシメチル、メチルチオメチル、ベンジルオキシメチル、２−メトキシエトキシメチル、２，２，２−トリクロロエトキシメチル、２−（トリメチルシリル）エトキシメチル、１−エトキシエチル、メタンスルホニル、パラ−トルエンスルホニル、トリメチルシリル、トリエチルシリル、トリイソプロピルシリル、ジエチルイソプロピルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル、ジフェニルメチルシリルおよびｔｅｒｔ−ブチルメトキシフェニルシリルが含まれる。
【００４２】
[42]本化合物には幾何異性体が存在することがある。本発明の化合物は、ＥまたはＺ配置で炭素−炭素二重結合または炭素−窒素二重結合を含有することができ、カーン・インゴルド・プレローグ順位則によって決定されるように、「Ｅ」という用語は、炭素−炭素または炭素−窒素二重結合の反対側の高次置換基を表し、「Ｚ」という用語は、炭素−炭素または炭素−窒素二重結合の同じ側の高次置換基を表す。本発明の化合物はまた、「Ｅ」異性体と「Ｚ」異性体の混合物として存在することもできる。シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルの周りの置換基は、シスまたはトランス配置であると指定される。さらに、本発明は、アダマンタン環系の周りの置換基の配置から生じるさまざまな異性体およびその混合物を企図する。アダマンタン環系内の単一環の周りの２つの置換基は、ＺまたはＥ相対配置として指定される。例えば、C. D. Jones, M. Kaselj, R. N. Salvatore, W. J. le Noble J. Org. Chem.1998, 63, 2758-2760を参照されたい。
【００４３】
[43]本発明の化合物は、ＲまたはＳ配置で非対称に置換された炭素原子を含有することができ、「Ｒ」および「Ｓ」という用語は、IUPAC 1974 Recommendations for Section E, FundamentalStereochemistry, Pure Appl. Chem.(1976)45, 13-10によって定義される通りである。等量のＲ配置およびＳ配置を有する非対称に置換された炭素原子を有する化合物は、それらの炭素原子においてラセミ体である。ある配置が他の配置よりも過剰な原子には、より多量、好ましくは約８５〜９０％過剰、より好ましくは約９５〜９９％過剰、さらにより好ましくは約９９％超過剰に存在する配置が割り当てられる。したがって、本発明は、ラセミ混合物、相対および絶対立体異性体、ならびに相対および絶対立体異性体の混合物を含む。
【００４４】
[44]同位体濃縮または標識化合物
本発明の化合物は、天然に最も豊富に見られる原子質量または質量数とは異なる原子質量または質量数を有する１つまたは複数の原子を含有する同位体標識または濃縮形態で存在することができる。同位体は放射性同位体であっても非放射性同位体であってもよい。水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、塩素およびヨウ素などの原子の同位体には、それだけに限らないが、２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ、３６Ｃｌおよび１２５Ｉが含まれる。これらおよび／または他の原子の他の同位体を含有する化合物は、本発明の範囲内である。
【００４５】
[45]別の実施形態では、同位体標識化合物が、重水素（２Ｈ）、トリチウム（３Ｈ）または１４Ｃ同位体を含有する。したがって、置換基が水素として記載されている場合、置換基は重水素およびトリチウム、特に重水素（Ｄ）などの同位体等価物も組み込む。本発明の同位体標識化合物は、当業者に周知の一般的な方法によって調製することができる。このような同位体標識化合物は、非標識試薬の代わりに容易に入手可能な同位体標識試薬に置換することによって、本明細書に開示される実施例およびスキームに開示される手順を行うことにより、都合よく調製することができる。場合によっては、化合物を同位体標識試薬で処理して、通常の原子をその同位体と交換することができる、例えば、水素をＤ２ＳＯ４／Ｄ２Ｏなどの重水素化酸の作用によって重水素に交換することができる。上記に加えて、関連する手順および中間体は、例えば、Lizondo, J et al, Drugs Fut, 21(11), 1116(1996); Brickner, S J etal., J Med Chem, 39(3), 673(1996); Mallesham, B et al, Org Lett, 5(7), 963(2003)；ＰＣＴ公開、国際公開第１９９７０１０２２３号、国際公開第２００５０９９３５３号、国際公開第１９９５００７２７１号、国際公開第２００６００８７５４号；米国特許第７５３８１８９号明細書；同第７５３４８１４号明細書；同第７５３１６８５号明細書；同第７５２８１３１号明細書；同第７５２１４２１号明細書；同第７５１４０６８号明細書；同第７５１１０１３号明細書；ならびに米国特許出願公開第２００９０１３７４５７号明細書；同第２００９０１３１４８５号明細書；同第２００９０１３１３６３号明細書；同第２００９０１１８２３８号明細書；同第２００９０１１１８４０号明細書；同第２００９０１０５３３８号明細書；同第２００９０１０５３０７号明細書；同第２００９０１０５１４７号明細書；同第２００９００９３４２２号明細書；同第２００９００８８４１６号明細書；および同第２００９００８２４７１号明細書に開示されており、方法が参照により本明細書に組み込まれる。
【００４６】
[46]本発明の同位体標識化合物は、結合アッセイでＳＴＡＴ３阻害剤の有効性を決定するための標準として使用され得る。同位体含有化合物は、非同位体標識親化合物の作用機序および代謝経路を評価することにより化合物のインビボ代謝運命を調査するための製薬研究で使用されてきた（Blake et al.J.Pharm.Sci.64,3,367-391(1975)）。このような代謝研究は、患者に投与されたインビボ活性化合物または親化合物から産生された代謝産物が毒性または発癌性であることが判明するため、安全で有効な治療薬の設計で重要である（Foster et al., Advances in Drug Research Vol. 14, pp. 2-36, Academicpress, London, 1985; Kato et al, J. Labelled Comp. Radiopharmaceut., 36(10): 927-932(1995);Kushner et al., Can. J. Physiol. Pharmacol, 77, 79-88(1999)）。
【００４７】
[47]さらに、「ヘビードラッグ（ｈｅａｖｙ  ｄｒｕｇ）」と呼ばれる重水素化薬物などの非放射性同位体含有薬物は、ＳＴＡＴ３活性に関連する疾患および状態の治療に使用することができる。化合物に存在する同位体の量をその天然の存在量よりも増加させることを濃縮と呼ぶ。濃縮の量の例としては、約０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１６、２１、２５、２９、３３、３７、４２、４６、５０、５４、５８、６３、６７、７１、７５、７９、８４、８８、９２、９６〜約１００ｍｏｌ％が挙げられる。げっ歯類およびイヌを含む哺乳類では、観察される有害効果が最小で、通常の原子の最大約１５％が重い同位体で置き換えられ、数日〜数週間の期間維持されている（Czajka D M and Finkel A J, Ann. N. Y. Acad. Sci. 1960 84: 770; ThomsonJ F, Ann. New York Acad. Sci 1960 84: 736; Czakja D M et al., Am. J. Physiol. 1961201: 357）。ヒト体液中１５％〜２３％もの重水素による急性置き換えが、毒性を引き起こさないことが分かった（Blagojevic N et al. in “Dosimetry&Treatment Planning for NeutronCapture Therapy”, Zamenhof R, Solares G and Harling O Eds. 1994. AdvancedMedical Publishing, Madison Wis. pp.125-134; Diabetes Metab. 23: 251(1997)）。
【００４８】
[48]薬物の安定な同位体標識は、ｐＫａおよび脂溶性などの物理化学的特性を変える可能性がある。同位体置換がリガンド−受容体相互作用に関与する領域に影響を及ぼす場合、これらの効果および変化は薬物分子の薬力学的応答に影響を及ぼす可能性がある。安定な同位体標識分子の物理的特性のいくつかが非標識分子とは異なり、化学的および生物学的特性は同じであるが、重要な例外が１つある：重い同位体の質量が増加しているため、重い同位体と別の原子を含む結合は、軽い同位体とその原子との間の同じ結合よりも強くなる。したがって、代謝または酵素変換の部位での同位体の組み込みにより、前記反応が遅くなり、非同位体化合物と比較して薬物動態プロファイルまたは有効性が変化する可能性がある。
【００４９】
[49]一実施形態では、本発明は、
【化２】
2021517137.tif 000004
【化３】
2021517137.tif 000005
およびその薬学的に許容される塩から選択される化合物を提供する。
【００５０】
[50]実施形態（１）では、本発明は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【化４】
2021517137.tif 000006
（式中、
Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＨ２Ｄ、ＣＨＤ２およびＣＤ３から選択され、
Ｒ２は、ＣＨ３、ＣＨ２Ｄ、ＣＨＤ２およびＣＤ３から選択され、
Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ９、Ｙ１０、Ｙ１１、Ｙ１２、Ｙ１４、Ｙ１５およびＹ１６は、水素および重水素からそれぞれ独立に選択され、
各Ｙ８は水素および重水素から独立に選択され、但し、両Ｙ８は同じであり、
各Ｙ１３は水素および重水素から独立に選択され、但し、両Ｙ１３は同じであり、
但し、式（Ｉ）の化合物は少なくとも１つの重水素原子を含む。）
【００５１】
[51]別の実施形態（２）では、本発明は、Ｙ１が重水素である、実施形態（１）の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００５２】
[52]別の実施形態（３）では、本発明は、Ｙ２が重水素である、実施形態（１）〜（２）のいずれか１つの化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００５３】
[53]別の実施形態（４）では、本発明は、Ｙ３が重水素である、実施形態（１）〜（３）のいずれか１つの化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００５４】
[54]別の実施形態（５）では、本発明は、Ｙ７が重水素である、実施形態（１）〜（４）のいずれか１つの化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００５５】
[55]別の実施形態（６）では、本発明は、両Ｙ８が重水素である、実施形態（１）〜（５）のいずれか１つの化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００５６】
[56]別の実施形態（７）、本発明は、両Ｙ１３が重水素である、実施形態（１）〜（６）のいずれか１つの化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００５７】
[57]別の実施形態（８）では、本発明は、Ｒ１がＣＨ３およびＣＤ３から選択される、実施形態（１）〜（７）のいずれか１つの化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００５８】
[58]別の実施形態（９）では、本発明は、Ｒ２がＣＨ３およびＣＤ３から選択される、実施形態（１）〜（８）のいずれか１つの化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００５９】
[59]別の実施形態（１０）では、本発明は、
【化５】
2021517137.tif 000007
およびその薬学的に許容される塩から選択される化合物を提供する。
【００６０】
[60]別の実施形態（１１）では、本発明は、実施形態（１０）の化合物またはその薬学的に許容される塩、
【化６】
2021517137.tif 000008
から選択される化合物およびその薬学的に許容される塩を提供する。
【００６１】
[61]別の実施形態（１２）では、本発明は、実施形態（１１）の化合物またはその薬学的に許容される塩、
【化７】
2021517137.tif 000009
から選択される化合物およびその薬学的に許容される塩を提供する。
【００６２】
[62]別の実施形態（１３）では、本発明は、実施形態（１）〜（１２）のいずれか１つの化合物または塩酸塩であるその薬学的に許容される塩を提供する。
【００６３】
[63]別の実施形態（１４）では、本発明は、実施形態（１３）の化合物または二塩酸塩であるその薬学的に許容される塩を提供する。
【００６４】
[64]別の実施形態（１５）では、本発明は、実施形態（１４）の化合物または
【化８】
2021517137.tif 000010
2021517137.tif 000011
から選択されるその薬学的に許容される塩を提供する。
【００６５】
[65]別の実施形態（１６）では、本発明は、実施形態（１）〜（１５）のいずれか１つの化合物またはその薬学的に許容される塩と、少なくとも１つの薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。
【００６６】
[66]別の実施形態（１７）では、本発明は、ＲＯＣＫの阻害に応答する状態を治療、改善または予防する方法であって、有効量の実施形態（１）〜（１５）のいずれか１つの化合物もしくはその薬学的に許容される塩またはその医薬組成物を、場合により第２の治療剤と組み合わせて、このような治療を必要とする対象に投与するステップを含む方法を提供する。
【００６７】
[67]別の実施形態（１８）では、本発明は、眼圧上昇を治療するための医薬の調製における、実施形態（１）〜（１６）のいずれか１つの化合物またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００６８】
[68]その態様のさらに別のものでは、本明細書に開示される化合物またはその薬学的に許容される塩と；組成物が投与されるべき病状の指示、組成物の保管情報、投薬情報および組成物の投与方法に関する指示からなる群から選択される１つまたは複数の形の情報を含む指示とを含むキットが提供される。１つの特定の形態では、キットが、複数回投与形態の化合物を含む。
【００６９】
[69]その態様のさらに別のものでは、本明細書に開示される化合物またはその薬学的に許容される塩と；包装材料とを含む製品が提供される。１つの変形では、包装材料が、化合物を収容するための容器を含む。１つの特定の変形では、容器が、化合物が投与されるべき病状、保管情報、投薬情報および／または化合物の投与方法に関する指示からなる群の１つまたは複数のメンバーを示すラベルを含む。別の変形では、製品が、複数回投与形態の化合物を含む。
【００７０】
[70]その態様のさらなるものでは、本明細書に開示される化合物またはその薬学的に許容される塩を投与するステップを含む治療方法が提供される。
【００７１】
[71]その態様の別のものでは、ＲＯＣＫを本明細書に開示される化合物またはその薬学的に許容される塩と接触させるステップを含む、ＲＯＣＫを阻害する方法が提供される。
【００７２】
[72]その態様のさらに別のものでは、ＲＯＣＫをインビボで阻害するために、本明細書に開示される化合物またはその薬学的に許容される塩を対象に存在させるステップを含む、ＲＯＣＫを阻害する方法が提供される。
【００７３】
[73]その態様のさらなるものでは、インビボで第２の化合物に変換される第１の化合物を対象に投与するステップを含む、ＲＯＣＫを阻害する方法であって、第２の化合物がインビボでＲＯＣＫを阻害し、第２の化合物が、上記の実施形態および変形のいずれか１つによる化合物である方法が提供される。
【００７４】
[74]その態様の別のものでは、ＲＯＣＫが病状の病理学および／または症候学に寄与する活性を有する病状を治療する方法であって、本明細書に開示される化合物またはその薬学的に許容される塩を、病状にとって治療上有効量で対象に存在させるステップを含む方法が提供される。
【００７５】
[75]その態様のさらなるものでは、ＲＯＣＫが病状の病理学および／または症候学に寄与する活性を有する病状を治療する方法であって、インビボで第２の化合物に変換される第１の化合物を対象に投与するステップを含み、第２の化合物がインビボでＲＯＣＫを阻害する方法が提供される。本発明の化合物が、第１または第２の化合物であり得ることに留意されたい。
【００７６】
[76]上記の方法の各々の１つの変形では、病状が、緑内障、高眼圧症または神経変性眼疾患などの眼障害から選択される。
【００７７】
[77]その態様の別のものでは、ＲＯＣＫ遺伝子の突然変異が、例えば緑内障、高眼圧症または神経変性眼疾患を含む病状の病理学および/または症候学に寄与する病状を治療する方法が提供される。
【００７８】
[78]その態様のさらに別のものでは、本発明は、医薬としての上記の実施形態および変形のいずれかの化合物の使用に関する。その態様のさらに別のものでは、本発明は、ＲＯＣＫを阻害するための医薬の製造における、上記の実施形態および変形のいずれか１つによる化合物の使用に関する。
【００７９】
[79]その態様のさらなるものでは、本発明は、ＲＯＣＫが病状の病理学および／または症候学に寄与する活性を有する病状を治療するための医薬の製造における、上記の実施形態および変形のいずれか１つによる化合物の使用に関する。
【００８０】
[80]投与および医薬組成物
一般に、本開示の化合物は、単独で、または１つもしくは複数の治療剤と組み合わせて、当技術分野で知られている通常の許容される様式のいずれかを介して治療上有効量で投与される。治療的有効量は、疾患の重症度、対象の年齢および相対的健康、使用される化合物の効力、ならびに当業者に知られている他の因子に応じて大きく異なり得る。例えば、新生物疾患および免疫系障害の治療について、必要な投与量も、投与様式、治療されるべき特定の状態および所望の効果に応じて異なるだろう。
【００８１】
[81]一般に、満足のいく結果は、約０．００１〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重、または特に約０．０３〜２．５ｍｇ／ｋｇ体重の１日投与量で全身的に得られることが示されている。大型哺乳動物、例えばヒトで指示される１日投与量は、約０．５ｍｇ〜約２０００ｍｇ、さらに特に約０．５ｍｇ〜約１０００ｍｇの範囲で好適に投与され、例えば、１日最大４回の分割投与でまたは遅延形態で投与され得る。経口投与に適した単位剤形は、約１〜５０ｍｇの有効成分を含む。
【００８２】
[82]本開示の化合物は、任意の従来の経路によって；例えば、経腸的に、例えば、経口的に、例えば、錠剤もしくはカプセルの形態で；非経口的に、例えば、注射液もしくは懸濁液の形態で；または局所的に、例えば、点眼剤、ローション、ゲル、軟膏もしくはクリームの形態で、または鼻もしくは坐剤形態で、医薬組成物として投与され得る。
【００８３】
[83]遊離形態または薬学的に許容される塩形態の本開示の化合物を少なくとも１つの薬学的に許容される担体または希釈剤と共に含む医薬組成物は、混合、造粒、コーティング、溶解または凍結乾燥工程による従来の方法で製造され得る。例えば、本開示の化合物を少なくとも１つの薬学的に許容される担体または希釈剤と共に含む医薬組成物は、薬学的に許容される担体または希釈剤と混合することによって従来の方法で製造され得る。経口投与用の単位剤形は、例えば、約０．１ｍｇ〜約５００ｍｇの活性物質を含有する。
【００８４】
[84]一実施形態では、医薬組成物が、等張水溶液などの懸濁液または分散液を含む有効成分の溶液である。有効成分を単独でまたはマンニトールなどの担体と共に含む凍結乾燥組成物の場合、分散液または懸濁液を使用前に調製することができる。医薬組成物は、滅菌されてもよい、ならびに／あるいは保存剤、安定剤、湿潤剤または乳化剤、溶解促進剤、浸透圧を調節するための塩および／または緩衝液などのアジュバントを含有してもよい。適切な保存剤には、それだけに限らないが、アスコルビン酸などの抗酸化剤、またはソルビン酸もしくは安息香酸などの殺微生物剤が含まれる。溶液または懸濁液は、それだけに限らないが、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルピロリドン、ゼラチンを含む増粘剤、または可溶化剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ  ８０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート）をさらに含み得る。
【００８５】
[85]油中懸濁液は、注射目的で慣用的な植物油、合成油、または半合成油を油成分として含み得る。例としては、酸成分として、８〜２２個の炭素原子、またはいくつかの実施形態では１２〜２２個の炭素原子を有する長鎖脂肪酸を含有する液体脂肪酸エステルが挙げられる。適切な液体脂肪酸エステルには、それだけに限らないが、ラウリン酸、トリデシル酸、ミリスチン酸、ペンタデシル酸、パルミチン酸、マルガリン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸または対応する不飽和酸、例えばオレイン酸、エライジン酸、エルカ酸、ブラシジン酸およびリノール酸が含まれ、所望であれば、抗酸化剤、例えばビタミンＥ、３−カロテンまたは３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ヒドロキシトルエンを含有してもよい。これらの脂肪酸エステルのアルコール成分は、６個の炭素原子を有し得、一価または多価、例えば、一価、二価または三価のアルコールであり得る。適切なアルコール成分には、それだけに限らないが、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールもしくはペンタノールまたはこれらの異性体；グリコールおよびグリセロールが含まれる。
【００８６】
[86]他の適切な脂肪酸エステルには、それだけに限らないが、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、ＬＡＢＲＡＦＩＬ（登録商標）Ｍ  ２３７５、（ポリオキシエチレングリセロール）、ＬＡＢＲＡＦＩＬ（登録商標）Ｍ  １９４４  ＣＳ（杏仁油のアルコール分解によって調製され、グリセリドおよびポリエチレングリコールエステルを含む不飽和ポリグリコール化（ｐｏｌｙｇｌｙｃｏｌｉｚｅｄ）グリセリド）、ＬＡＢＲＡＳＯＬ（商標）（ＴＣＭのアルコール分解によって調製され、全てフランスのＧａＫｅｆｏｓｓｅから入手可能なグリセリドおよびポリエチレングリコールエステルを含む飽和ポリグリコール化グリセリド）、および/またはＭＩＧＬＹＯＬ（登録商標）８１２（ドイツのＨｕｌｓ  ＡＧ製の鎖長Ｃ８〜Ｃ１２の飽和脂肪酸のトリグリセリド）、ならびに綿実油、アーモンド油、オリーブ油、ヒマシ油、ゴマ油、大豆油または落花生油などの植物油が含まれる。
【００８７】
[87]経口投与用の医薬組成物は、例えば、有効成分を１つまたは複数の固体担体と組み合わせ、所望により、得られた混合物を造粒し、追加の賦形剤を含めることにより混合物または顆粒を処理して錠剤または錠剤コアを形成することによって得ることができる。
【００８８】
[88]適切な担体には、それだけに限らないが、例えばラクトース、サッカロース、マンニトールもしくはソルビトールなどの糖、セルロース調製物、および／またはリン酸カルシウム、例えばリン酸三カルシウムもしくはリン酸水素カルシウムなどの充填剤、ならびにまたデンプン、例えば、トウモロコシ、コムギ、イネもしくはジャガイモデンプン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよび／またはポリビニルピロリドンなどの結合剤、ならびに／あるいは、所望であれな、上記デンプン、カルボキシメチルデンプン、架橋ポリビニルピロリドン、アルギン酸またはその塩、例えばアルギン酸ナトリウムなどの崩壊剤が含まれる。追加の賦形剤には、流動調整剤および潤滑剤、例えばケイ酸、タルク、ステアリン酸もしくはその塩、例えばステアリン酸マグネシウムもしくはステアリン酸カルシウム、および／またはポリエチレングリコール、またはこれらの誘導体が含まれる。
【００８９】
[89]錠剤コアは、とりわけ、耕作ガム（gum arable）、タルク、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコールおよび／または二酸化チタンを含み得る濃縮糖溶液、または適切な有機溶媒または溶媒混合物中のコーティング溶液の使用を通して、あるいは腸溶性コーティング、適切なセルロース調製物、例えばアセチルセルロースフタレートまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートの溶液を調製するために、適切な、場合により腸溶性のコーティングを提供され得る。染料または顔料を、例えば、識別目的のために、または有効成分の異なる用量を示すために、錠剤または錠剤コーティングに添加してもよい。
【００９０】
[90]経口投与用の医薬組成物は、ゼラチンを含むハードカプセル、またはゼラチンとグリセロールまたはソルビトールなどの可塑剤とを含むソフトシールカプセルも含み得る。ハードカプセルは、例えば、コーンスターチなどの充填剤、結合剤、および／またはタルクもしくはステアリン酸マグネシウムなどの滑剤、および場合により安定剤と混和して、顆粒の形態で有効成分を含有することができる。ソフトカプセルでは、有効成分を、脂肪油、パラフィン油または液体ポリエチレングリコールまたはエチレンもしくはプロピレングリコールの脂肪酸エステルなどの適切な液体賦形剤に溶解または懸濁し、そこに安定剤および界面活性剤、例えばポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル型を添加してもよい。
【００９１】
[91]直腸投与に適した医薬組成物は、例えば、有効成分と坐剤基剤の組み合わせを含む坐剤である。適切な坐剤基剤は、例えば、天然もしくは合成トリグリセリド、パラフィン系炭化水素、ポリエチレングリコールまたは高級アルカノールである。
【００９２】
[92]非経口投与に適した医薬組成物は、水溶性形態の、例えば水溶性塩の有効成分の水溶液、あるいは増粘物質、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールおよび／またはデキストラン、および所望であれば安定剤を含有する水性注射懸濁液を含み得る。有効成分は、場合により賦形剤と共に、凍結乾燥物の形態であることができ、適切な溶媒の添加によって非経口投与前に溶液にすることができる。例えば、非経口投与に使用されるような溶液を、輸液として使用することもできる。注射用調製物の製造は、通常、例えばアンプルまたはバイアルへの充填および容器の密封と同様に、無菌条件下で行われる。
【００９３】
[93]本開示はまた、ａ）遊離形態または薬学的に許容される塩形態の、本明細書に開示される本開示の化合物である第１の薬剤と、ｂ）少なくとも１つの共薬剤（co-agent）とを含む、医薬組み合わせ、例えばキットを提供する。キットは、投与のための説明書を含むことができる。
【００９４】
[94]併用療法
本開示の化合物または薬学的に許容される塩は、単独療法として、または１つもしくは複数の他の治療剤と共に投与され得る。
【００９５】
[95]例えば、本明細書に記載される化合物の１つの治療有効性は、アジュバントの投与により増強され得る（すなわち、アジュバント自体は最小限の治療利益しか有し得ないが、別の治療剤と組み合わせて、個体に対する全体的な治療利益が増強される）。あるいは、ほんの一例として、個体が経験する利益は、本明細書に記載される化合物の１つを、同様に治療利益を有する別の治療剤と共に投与することによって増加され得る。ほんの一例として、本明細書に記載される化合物の１つの投与を伴う痛風の治療では、同様に痛風のための別の治療剤を個体に提供することにより、治療利益の増加がもたらされ得る。または、ほんの一例として、本明細書に記載される化合物の１つを受けた際に個体が経験する副作用の１つが悪心である場合、化合物と組み合わせて抗悪心剤を投与することが適切となり得る。または、１つまたは複数の追加の療法には、それだけに限らないが、理学療法、心理療法、放射線療法、患部への湿布の施用、安静、食事の変更などが含まれる。治療される疾患、障害または状態にかかわらず、個体が経験する全体的な利益は２つの療法の相加的であり得る、または個体は相乗的利益を経験し得る。
【００９６】
[96]本明細書に記載される化合物を他の治療剤と組み合わせて投与する場合、本明細書に記載される化合物は、他の治療剤と同じ医薬組成物で投与され得る、または異なる物理的および化学的特性のために、異なる経路で投与され得る。例えば、本明細書に記載される化合物を経口投与してその良好な血中レベルを生成および維持しながら、他の治療剤を静脈内投与することができる。よって、本明細書に記載される化合物は、同時に、順次に、または他の治療剤と別々に投与され得る。
【実施例】
【００９７】
[97]式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を合成するためのさまざまな方法が開発され得る。式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を合成するための代表的な方法を、実施例で提供する。しかしながら、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩は、他の人が考案し得る他の合成経路によっても合成され得ることに留意されたい。
【００９８】
[98]式（Ｉ）の一定の化合物は、化合物に特定の立体化学を与える他の原子との結合を有する原子（例えば、キラル中心）を有することが容易に認識されるだろう。式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩の合成は、異なる立体異性体（エナンチオマー、ジアステレオマー）の混合物の生成をもたらし得ることが認識される。特定の立体化学が指定されない限り、化合物の列挙は、考えられるさまざまな立体異性体の全てを包含することを意図している。
【００９９】
[99]式（Ｉ）の化合物を、例えば、少なくとも１つの化合物の遊離塩基形態を薬学的に許容される無機または有機酸と反応させることによって、薬学的に許容される酸付加塩として調製することもできる。あるいは、式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物の薬学的に許容される塩基付加塩を、例えば、少なくとも１つの化合物の遊離酸形態を薬学的に許容される無機または有機塩基と反応させることによって調製することができる。式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩の調製に適した無機および有機の酸および塩基は、本出願の定義の節に示される。あるいは、式（Ｉ）の化合物の塩形態を、出発物質または中間体の塩を使用して調製することができる。
【０１００】
[100]式（Ｉ）の化合物の遊離酸または遊離塩基の形態は、対応する塩基付加塩または酸付加塩の形態から調製することができる。例えば、酸付加塩形態の式（Ｉ）の化合物を、適切な塩基（例えば、水酸化アンモニウム溶液、水酸化ナトリウムなど）で処理することによって、その対応する遊離塩基に変換することができる。塩基付加塩形態の式（Ｉ）の化合物を、例えば、適切な酸（例えば、塩酸等）で処理することによって、その対応する遊離酸に変換することができる。
【０１０１】
[101]式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩のＮ−オキシドを、当業者に知られている方法によって調製することができる。例えば、Ｎ−オキシドは、式（Ｉ）の化合物の非酸化形態を、適切な不活性有機溶媒（例えば、ジクロロメタンなどのハロゲン化炭化水素）中、およそ０〜８０℃で、酸化剤（例えば、トリフルオロ過酢酸、過マレイン酸、過安息香酸、過酢酸、メタ−クロロ過安息香酸など）で処理することによって調製することができる。あるいは、式（Ｉ）の化合物のＮ−オキシドを、適切な出発物質のＮ−オキシドから調製することができる。
【０１０２】
[102]非酸化形態の式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ）の化合物のＮ−オキシドから、例えば、適切な不活性有機溶媒（例えば、アセトニトリル、エタノール、水性ジオキサンなど）中、０〜８０℃で、還元剤（例えば、硫黄、二酸化硫黄、トリフェニルホスフィン、水素化ホウ素リチウム、水素化ホウ素ナトリウム、三塩化リン、三臭化リンなど）で処理することによって調製することができる。
【０１０３】
[103]式（Ｉ）の化合物の保護された誘導体は、当業者に知られている方法によって調製することができる。保護基の作成およびそれらの除去に適用できる技術の詳細な説明は、T. W. Greene, Protecting Groups in Organic Synthesis, 3rd edition, JohnWiley&Sons, Inc. 1999に見出すことができる。
【０１０４】
[104]本明細書で使用する場合、これらのプロセス、スキーム、および例で使用される記号および記法は、現代の科学文献、例えば、Journal of the American Chemical SocietyまたはJournalof Biological Chemistryで使用されているものと一致する。標準的な１文字または３文字の略語は、一般的に、アミノ酸残基を指定するために使用され、これらのアミノ酸残基は特に明記されていない限り、Ｌ配置であると見なされる。特に明記しない限り、全ての出発物質は商業的供給業者から入手し、さらに精製することなく使用した。例えば、以下の略語が実施例および明細書を通して使用され得る：ｇ（グラム）；ｍｇ（ミリグラム）；Ｌ（リットル）；ｍＬ（ミリリットル）；μＬ（マイクロリットル）；ｐｓｉ（ポンド/平方インチ）；Ｍ（モル濃度）；ｍＭ（ミリモル濃度）；ｉ．ｖ．（静脈内）；Ｈｚ（ヘルツ）；ＭＨｚ（メガヘルツ）；ｍｏｌ（モル）；ｍｍｏｌ（ミリモル）；ＲＴ（室温）；ｍｉｎ（分）；ｈ（時間）；ｍｐ（融点）；ＴＬＣ（薄層クロマトグラフィー）；Ｒｔ（保持時間）；ＲＰ（逆相）；ＭｅＯＨ（メタノール）；ｉ−ＰｒＯＨ（イソプロパノール）；ＴＥＡ（トリエチルアミン）；ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）；ＴＦＡＡ（トリフルオロ酢酸無水物）；ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）；ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）；ＥｔＯＡｃ（酢酸エチル）；ＤＭＥ（１，２−ジメトキシエタン）；ＤＣＭ（ジクロロメタン）；ＤＣＥ（ジクロロエタン）；ＤＭＦ（Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド）；ＤＭＰＵ（Ｎ，Ｎ−ジメチルプロピレン尿素）；ＣＤＩ（１，１−カルボニルジイミダゾール）；ＩＢＣＦ（クロロギ酸イソブチル）；ＨＯＡｃ（酢酸）；ＨＯＳｕ（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）；ＨＯＢＴ（１−ヒドロキシベンゾトリアゾール）；Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）；ＥＤＣＩ（１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩）；ＢＯＣ（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）；ＦＭＯＣ（９−フルオレニルメトキシカルボニル）；ＤＣＣ（ジシクロヘキシルカルボジイミド）；ＣＢＺ（ベンジルオキシカルボニル）；Ａｃ（アセチル）；ａｔｍ（大気）；ＴＭＳＥ（２−（トリメチルシリル）エチル）；ＴＭＳ（トリメチルシリル）；ＴＩＰＳ（トリイソプロピルシリル）；ＴＢＳ（ｔ−ブチルジメチルシリル）；ＤＭＡＰ（４−ジメチルアミノピリジン）；Ｍｅ（メチル）；ＯＭｅ（メトキシ）；Ｅｔ（エチル）；ｔＢｕ（ｔｅｒｔ−ブチル）；ＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）；ＢＯＰ（ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィン酸クロリド）；ＴＢＡＦ（テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフルオリド）；ｍ−ＣＰＢＡ（メタクロロ過安息香酸）。
【０１０５】
[105]エーテルまたはＥｔ２Ｏへの言及は、ジエチルエーテルへの言及である；ブラインは、ＮａＣｌの飽和水溶液を指す。特に指示しない限り、全ての温度は℃（摂氏度）で表される。特に明記しない限り、全ての反応は不活性雰囲気下、ＲＴで行った。
【０１０６】
[106]１Ｈ  ＮＭＲスペクトルはＶａｒｉａｎ  Ｍｅｒｃｕｒｙ  Ｐｌｕｓ  ４００で記録した。化学シフトは百万分率（ｐｐｍ）で表す。カップリング定数はヘルツ（Ｈｚ）単位である。分裂パターンは見かけの多重度を記載し、ｓ（一重項）、ｄ（二重項）、ｔ（三重項）、ｑ（四重項）、ｍ（多重項）、およびｂｒ（ブロード）として指定される。
【０１０７】
[107]低分解能質量スペクトル（ＭＳ）および化合物純度データは、エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）ソース、ＵＶ検出器（２２０および２５４ｎｍ）、および蒸発光散乱検出器（ＥＬＳＤ）を備えたＳｈｉｍａｄｚｕ  ＬＣ／ＭＳシングル四重極システムで取得した。薄層クロマトグラフィーは、０．２５ｍｍ  Ｓｕｐｅｒｃｈｅｍｇｒｏｕｐシリカゲルプレート（６０Ｆ−２５４）で実施し、ＵＶ光、５％エタノール性リンモリブデン酸、ニンヒドリンまたはｐ−アニスアルデヒド溶液で可視化した。フラッシュカラムクロマトグラフィーは、シリカゲル（２００〜３００メッシュ、Ｑｉｎｇｄａｏ  Ｈａｉｙａｎｇ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｌｔｄの支社）で実施した。
【０１０８】
[108]合成スキーム
式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩は、さまざまな反応スキームに従って合成され得る。いくつかの例示的なスキームを、以下および実施例で提供する。他の反応スキームは、本開示を考慮して当業者によって容易に考案され得る。
【０１０９】
[109]以下に記載される反応では、反応性官能基、例えばヒドロキシル、アミノ、イミノ、チオまたはカルボキシル基が最終生成物で望ましい場合、これらの反応性官能基を保護して、反応への望ましくない関与を回避することが必要となり得る。従来の保護基は、標準的な慣行に従って使用することができ、例えば、T. W. Greene and P. G. M. Wuts in “Protective Groups in OrganicChemistry” John Wiley and Sons, 1991を参照されたい。
【０１１０】
[110]本発明の化合物を調製するための合成方法を、以下のスキームおよび実施例に例示する。出発物質は市販されている、または当技術分野で知られている手順に従って、もしくは本明細書に例示されるように調製することができる。
【０１１１】
[111]以下のスキームに示される中間体は、文献で知られている、または当業者によく知られているさまざまな方法によって調製することができる。
【０１１２】
[112]例示として、本開示の式Ｉの化合物の１つの合成を、スキーム１に概説する。スキームに示されるように、式Ｉの化合物を、中間体ＩＩおよびＩＩＩに分解することができ、これらの中間体の調製は、文献で知られている、または当業者によく知られているさまざまな方法によって調製することができる。この経路では、中間体ＩＩを、ＩＶの遊離カルボキシル基の保護、Ｖとのカップリング、および保護基の切断を含む３ステップ順序を介して得ることができる。最後に、縮合反応を介したカルボン酸ＩＩと式ＩＩＩのアミノアレーンなどのアミノアレーンとのカップリングにより、式Ｉの化合物が得られる。
【化９】
2021517137.tif 000012
【０１１３】
[113]式ＩＶの中間体の調製の例示として、中間体ＩＶａの１つの合成経路をスキーム２に示す。市販のＩＶａ−Ａから出発する。カルボニル挿入反応およびＩＶａ−Ｂの遊離ヒドロキシル基のＴＢＳ保護によってＩＶａ−Ｃを調製することができる。ＬｉＡｌＤ４によるエステルＩＶａ−Ｃの還元により、ＩＶａ−Ｄが得られ、これを安息香酸ＶＩとの縮合を通して、ＩＶａ−Ｅにさらに変換することができる。最後に、式ＩＶａの中間体を、一連の酸素上の保護基の開裂および得られたアルコールの酸化を通してＩＶａ−Ｅから得ることができる。
【化１０】
2021517137.tif 000013
【０１１４】
[114]式ＩＶの中間体の調製のさらなる例示として、中間体ＩＶｂの１つの合成経路をスキーム３に提供する。市販のジメチルテレフタレートＩＶｂ−Ａを出発物質として選択する。ＬｉＡｌＤ４によるＩＶｂ−Ａの還元により、ＩＶｂ−Ｂが得られ、これを水酸基の選択的ＴＢＤＰＳ保護およびヨウ素化を通してＩＶｂ−Ｄにさらに変換することができる。ＴＭＳＣＮによるＩＶｂ−Ｄのヨウ化物の求核置換により、中間体ＩＶｂ−Ｅが得られる。ＩＶｂ−Ｅのシアノ基をメチルエステル基に変換すると、式ＩＶｂ−Ｇの中間体が得られる。最後に、安息香酸ＶＩとの縮合、引き続いてＩＶｂ−Ｈの加水分解によって、式ＩＶｂの化合物を調製することができる。
【化１１】
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【０１１５】
[115]式ＩＶの中間体の調製の別の例示を、式ＩＶｃの化合物の調製を示すスキーム４に示す。市販の２，４−ジメチル安息香酸ＩＶｃ−Ａから出発する。ＩＶｃ−Ａをｔ−ＢｕＯＫおよびＤＭＳＯ−ｄ６で処理することによって、中間体２，４−ビス（メチル−ｄ３）安息香酸ＩＶｃ−Ｂを調製することができる。２，４−ビス（メチル−ｄ３）安息香酸ＩＶｃ−Ｂと式ＩＶｃ−Ｃの中間体の縮合反応を介したカップリングにより、式ＩＶｃ−Ｄの化合物が得られる。最後に、ＩＶｃ−Ｄの加水分解により、式ＩＶｃの化合物が得られる。
【化１２】
2021517137.tif 000015
【０１１６】
[116]式ＩＩＩの中間体の調製の例示として、化合物ＩＩＩａの１つの合成経路をスキーム５に示す。市販の１，４−ジブロモベンゼンＩＩＩａ−Ａから出発して、ＩＩＩａ−Ａをｎ−ＢｕＬｉおよびＤＭＦ−ｄ７で処理することによって、アルデヒドＩＩＩａ−Ｂを調製することができる。２，２−ジメトキシエタン−１−アミンおよびＮａＢＤ４を使用した還元的アミノ化、引き続いてＩＩＩａ−Ｄのアミノ基の保護によって、中間体ＩＩＩａ−Ｅを得ることができる。ＡｌＣｌ３などのルイス酸によって促進されるＩＩＩａ−Ｅの環化により、式ＩＩＩａ−Ｆのイソキノリンが得られ、これを、ベンゾフェノンイミンとのパラジウム触媒カップリングを通して、ＩＩＩａ−Ｇにさらに変換することができる。最後に、ＩＩＩａ−Ｇの脱保護により、式ＩＩＩａの化合物が得られる。
【化１３】
2021517137.tif 000016
【０１１７】
[117]式ＩＩＩの中間体の調製のさらなる例示として、化合物ＩＩＩｂの１つの合成経路をスキーム６に示す。市販の２−オキソ酢酸ＩＩＩｂ−Ａから出発する。ＩＩＩｂ−Ａをトリメトキシメタンおよびｐ−ＴｓＯＨで処理することによって、中間体ＩＩＩｂ−Ｂを調製することができる。ＩＩＩｂ−Ｂのアンモノリシスにより、式ＩＩＩｂ−Ｃの化合物が得られ、これを、ＬｉＡｌＤ４によるアミドの還元を介して、式ＩＩＩｂ−Ｄの化合物にさらに変換することができる。中間体ＩＩＩｂ−Ｄから、４−ブロモベンズアルデヒドおよびＮａＢＨ４を使用した還元的アミノ化、引き続いてＩＩＩｂ−Ｆのアミノ基の保護を介して、中間体ＩＩＩｂ−Ｇを得ることができる。ＡｌＣｌ３などのルイス酸によって促進されるＩＩＩｂ−Ｇの環化により、式ＩＩＩｂ−Ｈのイソキノリンが得られ、これを、ベンゾフェノンイミンとのパラジウム触媒カップリングを通して、ＩＩＩｂ−Ｉにさらに変換することができる。最後に、ＩＩＩｂ−Ｉの脱保護により、式ＩＩＩｂの化合物が得られる。
【化１４】
2021517137.tif 000017
【０１１８】
[118]式Ｖの中間体の調製の例示として、化合物Ｖａの１つの合成経路をスキーム７に示す。市販の１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾールＶａ−Ａから出発する。Ｖａ−Ａをホルムアルデヒド−ｄ２で処理することによって、中間体Ｖａ−Ｂを調製することができる。次いで、Ｖａ−Ｂのヒドロキシル基をｔｅｒｔ−ブチルカルバメートおよび４−メチルベンゼンスルホン酸でＢｏｃ保護アミノ基に変換することにより、式Ｖａの化合物を得ることができる。
【化１５】
2021517137.tif 000018
【０１１９】
[119]場合によっては、前記反応スキームを行う順序を変えて、反応を促進する、または望ましくない反応生成物を回避することができる。以下の実施例は、本発明がより完全に理解されるように提供される。これらの実施例は単なる例示であり、決して本発明を限定するものとして解釈されるべきではない。
【０１２０】
[120]中間体Ａ
イソキノリン−１−ｄ−６−アミン（Ａ）
【化１６】
2021517137.tif 000019
【０１２１】
[121]（４−ブロモフェニル）−ジュウテリオ−メタノン（Ａ１）
【０１２２】
[122]１，４−ジブロモベンゼン（２．５０ｇ、１０．６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍＬ）溶液に、−７８℃でｎ−ＢｕＬｉ（１．６Ｍ、７ｍＬ、１１．７ｍｍｏｌ）を滴加し、得られた混合物を−７８℃で０．５時間撹拌した。次いで、ＤＭＦ−ｄ７（１．０８ｍＬ、１２．７ｍｍｏｌ）を混合物に−７８℃で滴加し、得られた混合物を−７８℃〜−３０℃で１．５時間撹拌した。反応物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（２ｍＬ）により−３０℃でクエンチした。混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮して、標記化合物（４−ブロモフェニル）−デューテリオ−メタノン（Ａ１）の粗生成物を得て、これをさらに精製することなく次のステップに使用した。
【０１２３】
[123]Ｎ−（（４−ブロモフェニル）メチル−ｄ２）−２，２−ジメトキシエタン−１−アミン（Ａ２）
【０１２４】
[124]トルエン（３０ｍＬ）中（４−ブロモフェニル）−デューテリオ−メタノン（Ａ１）（２．００ｇ、１０．８ｍｍｏｌ）、ｐ−ＴｓＯＨ・Ｈ２Ｏ（０．２１０ｇ、１．０８ｍｍｏｌ）および２，２−ジメトキシエタン−１−アミン（１．０５ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）の混合物を１３８℃で３．５時間撹拌した。混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（８ｍＬ）に注ぎ入れ、ＮａＨＣＯ３水溶液（２×１００ｍＬ）および水（１×１００ｍＬ）で順次洗浄し、水相をトルエン（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮した。残渣をＥｔＯＨ（２０ｍＬ）に溶解し、次いで、ＮａＢＤ４（２２０ｍｇ、５．５０ｍｍｏｌ）をＲＴで混合物に添加し、得られた混合物をＲＴで２時間撹拌した。次いで、ＨＯＡｃ（０．２ｍＬ）を混合物に添加した。反応混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮して、標記化合物Ｎ−（（４−ブロモフェニル）メチル−ｄ２）−２，２−ジメトキシエタン−１−アミン（Ａ２）の粗生成物を得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：２７６［Ｍ＋１］＋。
【０１２５】
[125]Ｎ−（（４−ブロモフェニル）メチル−ｄ２）−Ｎ−（２，２−ジメトキシエチル）−４−メチルベンゼンスルホンアミド（Ａ３）
【０１２６】
[126]Ｎ−（（４−ブロモフェニル）メチル−ｄ２）−２，２−ジメトキシエタン−１−アミン（Ａ２）（２．５ｇ、９．１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１６ｍＬ）およびピリジン（２ｍＬ）溶液に、ＴｓＣｌ（３．１０ｇ、１６．３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をＲＴで２時間撹拌した。混合物を１Ｎ  ＨＣｌ（３ｘ５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ、濃縮した。残渣を、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ（２０：１〜５：１）で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、標記化合物Ｎ−（（４−ブロモフェニル）メチル−ｄ２）−Ｎ−（２，２−ジメトキシエチル）−４−メチルベンゼンスルホンアミド（Ａ３）を得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：４３０［Ｍ＋１］＋。
【０１２７】
[127]６−ブロモイソキノリン−１−ｄ（Ａ４）
【０１２８】
[128]ＤＣＭ（１０ｍＬ）中ＡｌＣｌ３（２．９５ｇ、２２．０ｍｍｏｌ）の混合物に、Ｎ−（（４−ブロモフェニル）メチル−ｄ２）−Ｎ−（２，２−ジメトキシエチル）−４−メチルベンゼンスルホンアミド（Ａ３）（１．９ｇ、４．４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液を滴加した。ＲＴで４時間撹拌した後、混合物を氷（５０ｇ）に注ぎ入れ、ＤＣＭ（３×１００ｍＬ）で抽出した。有機相を１Ｎ  ＮａＯＨ（２×１００ｍＬ）、ＮａＨＣＯ３水溶液（１×１００ｍＬ）およびブライン（１００ｍＬ）で順次洗浄し、乾燥させ、濃縮した。残渣を、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ（５：１）で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、標記化合物６−ブロモイソキノリン−１−ｄ（Ａ４）を得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：２０９［Ｍ＋１］＋。
【０１２９】
[129]イソキノリン−１−ｄ−６−アミン（Ａ）
【０１３０】
[130]トルエン（１０ｍＬ）中６−ブロモイソキノリン−１−ｄ（Ａ４）（４５５ｍｇ、２．１９ｍｍｏｌ）、ジフェニルメタンイミン（４４１μｌ、２．６２ｍｍｏｌ）およびｔ−ＢｕＯＮａ（６３１ｍｇ、６．５７ｍｍｏｌ）の混合物に、ＢＩＮＡＰ（９５４ｍｇ、１．５３ｍｍｏｌ）およびＰｄ２（ｄｂａ）３（４０１ｍｇ、０．４３８ｍｍｏｌ）をＲＴで添加した。混合物を１００℃で３時間撹拌した。混合物を濃縮した。残渣をＭｅＯＨ（２０ｍＬ）に溶解し、次いで、ＮＨ２ＯＨ・ＨＣｌ（２４１ｍｇ、３．５０ｍｍｏｌ）およびＮａＯＡｃ（３１２ｍｇ、３．８０ｍｍｏｌ）をＲＴで混合物に添加し、得られた混合物をＲＴで１．５時間撹拌した。混合物を濃縮し、残渣をＰＥ／ＥｔＯＡｃ（１：１）で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、標記化合物イソキノリン−１−ｄ−６−アミン（Ａ）を得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：１４６［Ｍ＋１］＋。
【０１３１】
[131]中間体Ｂ
イソキノリン−３−ｄ−６−アミン（Ｂ−ａ）およびイソキノリン−３，４−ｄ２−６−アミン（Ｂ−ｂ）
【化１７】
2021517137.tif 000020
【０１３２】
[132]２，２−ジメトキシエタン−１，１−ｄ２−１−アミン（Ｂ１）
【０１３３】
[133]２，２−ジメトキシアセトアミド（０．１０ｇ、０．８４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３ｍＬ）溶液に、ＬｉＡｌＤ４（４２ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）をＲＴで添加し、混合物を６５℃で１．５時間撹拌した。次いで、ＮａＳＯ４・１０Ｈ２Ｏを氷水浴下で混合物に添加した。２０分間撹拌した後、混合物を濾過した。濾過ケークをＴＨＦで洗浄し、溶液を蒸発させて、２，２−ジメトキシエタン−１，１−ｄ２−１−アミン（Ｂ１）の粗生成物を得て、これをさらに精製することなく次のステップに使用した。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：１０８［Ｍ＋１］＋。
【０１３４】
[134]Ｎ−（４−ブロモベンジル）−２，２−ジメトキシエタン−１，１−ｄ２−１−アミン（Ｂ２）
【０１３５】
[135]トルエン（５０ｍＬ）中２，２−ジメトキシエタン−１，１−ｄ２−１−アミン（Ｂ１）（１００ｍｇ、０．９２０ｍｍｏｌ）、ｐ−ＴｓＯＨ・Ｈ２Ｏ（１７．５ｍｇ、０．０９２０ｍｍｏｌ）および４−ブロモベンズアルデヒド（１７０ｍｇ、０．９２０ｍｍｏｌ）の混合物を１３５℃で４．５時間撹拌した。濃縮した後、残渣をＥｔＯＨ（３０ｍＬ）に溶解し、次いで、ＮａＢＨ４（３００ｍｇ、７．９０ｍｍｏｌ）をＲＴで混合物に添加した。得られた混合物をＲＴで１時間撹拌した。次いで、ＨＯＡｃ（０．２ｍＬ）を混合物に添加した。溶媒を濃縮し、残渣を水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮して、標記化合物Ｎ−（４−ブロモベンジル）−２，２−ジメトキシエタン−１，１−ｄ２−１−アミン（Ｂ２）の粗生成物を得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：２７６［Ｍ＋１］＋。
【０１３６】
[136]イソキノリン−３−ｄ−６−アミン（Ｂ−ａ）およびイソキノリン−３，４−ｄ２−６−アミン（Ｂ−ｂ）
【０１３７】
[137]標記化合物イソキノリン−３−ｄ−６−アミン（Ｂ−ａ）（３０％）およびイソキノリン−３，４−ｄ２−６−アミン（Ｂ−ｂ）（７０％）を、Ｎ−（（４−ブロモフェニル）メチル−ｄ２）−２，２−ジメトキシエタン−１−アミン（Ａ２）をＮ−（４−ブロモベンジル）−２，２−ジメトキシエタン−１，１−ｄ２−１−アミン（Ｂ２）で置き換えることによって、Ａの合成方法に従って調製した。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）Ｂ−ａ：１４６［Ｍ＋１］＋およびＢ−ｂ：１４７［Ｍ＋１］＋
【０１３８】
[138]中間体Ｃ
２，４−ビス（メチル−ｄ３）安息香酸（Ｃ）
【化１８】
2021517137.tif 000021
【０１３９】
[139]２，４−ビス（メチル−ｄ３）安息香酸（Ｃ）
【０１４０】
[140]２，４−ジメチル安息香酸（１．０ｇ、６．１ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ−ｄ６（１０ｍＬ）溶液に、ｔ−ＢｕＯＫ（３．４０ｇ、３０．５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をＮ２下、１２０℃で３時間撹拌した。ＲＴに冷却した後、混合物を水で希釈した。ｐＨを２〜３に調整し、ＥｔＯＡｃ（３ｘ）で抽出した。抽出物を水、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮して、固体を得た。この固体を上記の方法に従って２回処理して、標記化合物２，４−ビス（メチル−ｄ３）安息香酸（Ｃ）を得た。
【０１４１】
[141]中間体Ｄ
（４−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）フェニル）メタン−ｄ２−オール（Ｄ）
【化１９】
2021517137.tif 000022
【０１４２】
[142]エチル  ４−（２−ヒドロキシエチル）ベンゾエート（Ｄ１）
【０１４３】
[143]ＥｔＯＨ（３５ｍＬ）およびＤＭＳＯ（２２ｍＬ）中２−（４−ブロモフェニル）エタン−１−オール（１．０ｇ、５．０ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（０．８３ｍｌ、６．０ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（３６５ｍｇ、０．５００ｍｍｏｌ）の混合物を、ＣＯ雰囲気下８０℃で３．５時間撹拌した。反応混合物をＲＴに冷却し、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出した。抽出物をブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮した。残渣を、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ（５：１〜４：１）で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、標記化合物エチル  ４−（２−ヒドロキシエチル）ベンゾエート（Ｄ１）を得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：１９５［Ｍ＋１］＋。
【０１４４】
[144]エチル  ４−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ベンゾエート（Ｄ２）
【０１４５】
[145]エチル  ４−（２−ヒドロキシエチル）ベンゾエート（Ｄ１）（０．９６ｇ、４．９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍＬ）溶液に、イミダゾール（０．８４ｇ、１２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を０℃に冷却し、次いで、ＴＢＳＣｌ（０．８９４ｇ、５．９１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をＲＴで３０分間撹拌し、水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。抽出物をブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮した。残渣を、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ（５０：１）で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、標記化合物エチル  ４−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ベンゾエート（Ｄ２）を得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：３０９［Ｍ＋１］＋。
【０１４６】
[146]（４−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）フェニル）メタン−ｄ２−オール（Ｄ）
【０１４７】
[147]標記化合物（４−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）フェニル）メタン−ｄ２−オール（Ｄ）を、２，２−ジメトキシアセトアミドをエチル４−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）−ベンゾエート（Ｄ２）で置き換えることによって、２，２−ジメトキシエタン−１，１−ｄ２−１−アミン（Ｂ１）の合成方法に従って調製した。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：２６９［Ｍ＋１］＋。
【０１４８】
[148]中間体Ｅ
メチル  ２−（４−（ヒドロキシメチル−ｄ２）フェニル）アセテート−ｄ２（Ｅ）
【化２０】
2021517137.tif 000023
【０１４９】
[149]１，４−フェニレンビス（メタン−ｄ２−オール）（Ｅ１）
【０１５０】
[150]ジメチル  テレフタレート（５．９ｇ、３０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１００ｍＬ）中溶液に、０℃でＬｉＡｌＤ４（３．５ｇ、５９ｍｍｏｌ）を数回に分けて添加した。混合物を６５℃で１時間撹拌した。０℃に冷却した後、混合物をＮａ２ＳＯ４・１０Ｈ２Ｏで慎重にクエンチし、濾過した。濾液を濃縮して、標記化合物１，４−フェニレンビス（メタン−ｄ２−オール）（Ｅ１）を得た。
【０１５１】
[151]（４−（（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル−ｄ２）フェニル）メタン−ｄ２−オール（Ｅ２）
【０１５２】
[152]１，４−フェニレンビス（メタン−ｄ２−オール）（Ｅ１）（４．３ｇ、３０ｍｍｏｌ）および１Ｈ−イミダゾール（２．２ｇ、３３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５０ｍＬ）中溶液に、ｔｅｒｔ−ブチルクロロジメチルシラン（８．３ｇ、３０ｍｍｏｌ）を滴加した。ＲＴで１８時間撹拌した後、混合物をＨ２Ｏに注ぎ入れ、ＥｔＯＡｃ（３ｘ）で抽出した。抽出物をＨ２Ｏ、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮して、標記化合物（４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル−ｄ２）フェニル）メタン−ｄ２−オール（Ｅ２）を得た。
【０１５３】
[153]ｔｅｒｔ−ブチル（（４−（ヨードメチル−ｄ２）フェニル）メトキシ−ｄ２）ジメチルシラン（Ｅ３）
【０１５４】
[154]ＤＣＭ（６０ｍＬ）中（４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル−ｄ２）フェニル）メタン−ｄ２−オール（Ｅ２）（３．８ｇ、１０ｍｍｏｌ）、１Ｈ−イミダゾール（１．０５ｇ、１５．０ｍｍｏｌ）、ヨウ素（３．３ｇ、１３ｍｍｏｌ）およびトリフェニルホスファン（３．９ｇ、１５ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｎ２雰囲気下、ＲＴで５時間攪拌した。混合物をＤＣＭで希釈し、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮した。残渣を、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ（１０：１）で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、標記化合物ｔｅｒｔ−ブチル（（４−（ヨードメチル−ｄ２）フェニル）メトキシ−ｄ２）ジメチルシラン（Ｅ３）を得た。
【０１５５】
[155]２−（４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル−ｄ２）フェニル）アセトニトリル−ｄ２（Ｅ４）
【０１５６】
[156]アセトニトリル（４０ｍＬ）中ｔｅｒｔ−ブチル（（４−（ヨードメチル−ｄ２）フェニル）メトキシ−ｄ２）ジメチルシラン（Ｅ４）（３．６ｇ、７．３  ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（１．８ｇ、１３ｍｍｏｌ）の混合物に、ＴＭＳＣＮ（１．６  ｍＬ、１３  ｍｍｏｌ）を添加した。２０時間還流した後、混合物をＲＴに冷却し、濾過した。濾液を濃縮した。残渣を、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ（１０：１）で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、標記化合物２−（４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル−ｄ２）フェニル）アセトニトリル−ｄ２（Ｅ５）を得た。
【０１５７】
[157]２−（４−（ヒドロキシメチル−ｄ２）フェニル）酢酸−２，２−ｄ２（Ｅ６）
【０１５８】
[158]ＮａＨ（５．００ｇ、１２０ｍｍｏｌ）のＤ２Ｏ（２０ｍｌ）中溶液に、ＥｔＯＤ（２０ｍＬ）中２−（４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル−ｄ２）フェニル）アセトニトリル−ｄ２（Ｅ５）（２．５ｇ、６．０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を８０℃で１５時間撹拌した。ＲＴに冷却後、混合物をＤ２Ｏ（３０  ｍｌ）で希釈し、ｐＨを２〜３に調整し、ＥｔＯＡｃ（３ｘ）で抽出した。抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。溶媒を濃縮して、標記化合物２−（４−（ヒドロキシメチル−ｄ２）フェニル）酢酸−２，２−ｄ２（Ｅ６）を得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：１６９［Ｍ−１］−。
【０１５９】
[159]メチル２−（４−（ヒドロキシメチル−ｄ２）フェニル）アセテート−ｄ２（Ｅ）
【０１６０】
[160]２−（４−（ヒドロキシメチル−ｄ２）フェニル）酢酸−２，２−ｄ２（Ｅ６）（１．３５ｇ、７．９４ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１３ｍＬ）中溶液に、濃Ｈ２ＳＯ４（１．３ｍＬ）を滴加した。混合物をＲＴで一晩攪拌した。混合物を水に注ぎ入れ、ＥｔＯＡｃ（３ｘ）で抽出した。抽出物を飽和ＮａＨＣＯ３（水溶液）およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮して、標記化合物メチル  ２−（４−（ヒドロキシメチル−ｄ２）フェニル）アセテート−ｄ２（Ｅ）を得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：１８５［Ｍ＋１］＋。
【０１６１】
[161]中間体Ｆ
ｔｅｒｔ−ブチル  （（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］１，２，３］トリアゾール−１−イル）メチル−ｄ２）カルバメート（Ｆ）
【化２１】
2021517137.tif 000024
【０１６２】
[162]（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イル）メタン−ｄ２−オール（Ｆ１）
【０１６３】
[163]１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール（６２５ｍｇ、５．２５ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（４０ｍＬ）中溶液に、ホルムアルデヒド−ｄ２（Ｄ２Ｏ中２０％）（８４０ｍｇ、５．２５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をＲＴで３時間撹拌した。固体を濾過によって回収し、乾燥させて、標記化合物（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イル）メタン−ｄ２−オール（Ｆ１）を得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：１５２［Ｍ＋１］＋。
【０１６４】
[164]ｔｅｒｔ−ブチル  （（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イル）メチル−ｄ２）カルバメート（Ｆ）
【０１６５】
[165]トルエン（５０ｍＬ）中（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イル）メタン−ｄ２−オール（Ｆ１）（６５０ｍｇ、４．２８ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチルカルバメート（５００ｍｇ、４．２８ｍｍｏｌ）および４−メチルベンゼンスルホン酸（２６．７ｍｇ、０．１５５ｍｍｏｌ）の混合物を、ディーンスタークトラップを使用して１時間還流した。ＲＴに冷却した後、混合物を１／４の体積に濃縮した。次いで、固体を濾過によって回収し、乾燥させて、標記化合物ｔｅｒｔ−ブチル（（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イル）メチル−ｄ２）カルバメート（Ｆ）を得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：２５１［Ｍ＋１］＋。
【０１６６】
[166]実施例１
（Ｓ）−４−（３−アミノ−１−（（イソキノリン−６−イル−１−ｄ）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）ベンジル２，４−ジメチルベンゾエート（１）
【化２２】
2021517137.tif 000025
【０１６７】
[167]（Ｓ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−（４−（（（２，４−ジメチルベンゾイル）オキシ）メチル）フェニル）−プロパン酸（１ａ）
【０１６８】
[168]（Ｓ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−（４−（（（２，４−ジメチルベンゾイル）オキシ）メチル）フェニル）プロパン酸（１ａ）を、国際公開第２０１７／０８６９４１号に記載される方法に従って調製した。
【０１６９】
[169]（Ｓ）−４−（３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−１−（（イソキノリン−６−イル−１−ｄ）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）ベンジル２，４−ジメチルベンゾエート（１ｂ）
【０１７０】
[170]ＤＭＦ（１ｍＬ）中（Ｓ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−（４−（（（２，４−ジメチルベンゾイル）オキシ）メチル）フェニル）プロパン酸（１ａ）（５６ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）、イソキノリン−１−ｄ−６−アミン（Ａ）（２５ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）および２，４−ルチジン（１８ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）の混合物に、１，１，１−トリクロロ−２−メチルプロパン−２−イルカルボノクロリデート（４１ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を添加し、ＲＴで３時間撹拌した。混合物を水（２０ｍＬ）に注ぎ入れ、ＥｔＯＡｃ（３ｘ５０ｍＬ）で抽出し、ブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮した。残渣を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１５：１）で溶出する分取ＴＬＣによって精製して、（Ｓ）−４−（３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−１−（（イソキノリン−６−イル−１−ｄ）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）ベンジル２，４−ジメチルベンゾエート（１ｂ）を得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：５５５［Ｍ＋１］＋。
【０１７１】
[171]（Ｓ）−４−（３−アミノ−１−（（イソキノリン−６−イル−１−ｄ）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）ベンジル２，４−ジメチルベンゾエート（１）
【０１７２】
[172]ＤＣＭ（５ｍＬ）中（Ｓ）−４−（３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−１−（（イソキノリン−６−イル−１−ｄ）−アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）ベンジル２，４−ジメチルベンゾエート（１ｂ）（２５ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）の混合物に、ＴＦＡ（１ｍＬ）を滴加した。混合物をＲＴで１時間撹拌した。混合物を飽和ＮａＨＣＯ３に注ぎ入れ、ＤＣＭ（３ｘ３０ｍＬ）で抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮した。残渣を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ中ＮＨ３（２０：１）で溶出する分取ＴＬＣによって精製して、（Ｓ）−４−（３−アミノ−１−（（イソキノリン−６−イル−１−ｄ）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）ベンジル２，４−ジメチルベンゾエート（１）を得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：４５５［Ｍ＋１］＋。
【０１７３】
[173]実施例２
（Ｓ）−４−（３−アミノ−１−（（イソキノリン−６−イル−３−ｄ）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）ベンジル  ２，４−ジメチルベンゾエート（２−Ａ）および（Ｓ）−４−（３−アミノ−１−（（イソキノリン−６−イル−３，４−ｄ２）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）ベンジル  ２，４−ジメチルベンゾエート（２−Ｂ）
【化２３】
2021517137.tif 000026
【０１７４】
[174]（Ｓ）−４−（３−アミノ−１−（（イソキノリン−６−イル−３−ｄ）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）ベンジル  ２，４−ジメチルベンゾエート（２）
【０１７５】
[175]標記化合物（Ｓ）−４−（３−アミノ−１−（（イソキノリン−６−イル−３−ｄ）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）ベンジル  ２，４−ジメチルベンゾエート（２−Ａ）（３０％）および（Ｓ）−４−（３−アミノ−１−（（イソキノリン−６−イル−３，４−ｄ２）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）ベンジル  ２，４−ジメチルベンゾエート（２−Ｂ）（７０％）を、イソキノリン−１−ｄ−６−アミン（Ａ）をイソキノリン−３−ｄ−６−アミン（Ｂ−ａ）およびイソキノリン−３，４−ｄ２−６（Ｂ−ｂ）で置き換えることによって、（Ｓ）−４−（３−アミノ−１−（（イソキノリン−６−イル−１−ｄ）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）ベンジル  ２，４−ジメチルベンゾエート（１）の合成方法に従って調製した。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：２−Ａ：４５５［Ｍ＋１］＋および２−Ｂ：４５６［Ｍ＋１］＋
【０１７６】
[176]実施例３
（Ｓ）−（４−（３−アミノ−１−（イソキノリン−６−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ジメチルベンゾエート（３）
【化２４】
2021517137.tif 000027
【０１７７】
[177]（４−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ジメチルベンゾエート（３ａ）
【０１７８】
[178]２，４−ジメチル安息香酸（３１．０ｍｇ、０．２０４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１ｍＬ）溶液に、ＥＤＣＩ（６５．０ｍｇ、０．３３５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をＲＴで１時間撹拌し、次いで、（４−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）フェニル）メタン−ｄ２−オール（Ｄ）（５０．０ｍｇ、０．１８６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ中溶液およびＤＭＡＰ（５．０ｍｇ、０．０３７２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をＲＴで一晩攪拌した。混合物を水で希釈し、ＤＣＭ（３ｘ２５ｍＬ）で抽出した。抽出物をブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮した。残渣を、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ（５０：１）で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、標記化合物（４−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ジメチルベンゾエート（３ａ）を得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：４０１［Ｍ＋１］＋。
【０１７９】
[179]（４−（２−ヒドロキシエチル）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ジメチルベンゾエート（３ｂ）
【０１８０】
[180]（４−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ジメチルベンゾエート（３ａ）（４．１００ｇ、１０．２５ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中溶液に、１Ｎ  ＨＣｌ（２ｍＬ）を添加した。混合物をＲＴで１時間撹拌した。混合物を水で希釈し、ＤＣＭ（３ｘ２５ｍＬ）で抽出した。抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮して、標記化合物（４−（２−ヒドロキシエチル）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ジメチルベンゾエート（３ｂ）を得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：２８７［Ｍ＋１］＋。
【０１８１】
[181]（４−（２−オキソエチル）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ジメチルベンゾエート（３ｃ）
【０１８２】
[182]（４−（２−ヒドロキシエチル）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ジメチルベンゾエート（３ｂ）（２．９０ｇ、１０．３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１００ｍＬ）中溶液に、ＤＭＰ（５．２０ｇ、１２．３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をＲＴで３０分間撹拌した。反応物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１００ｍＬ）でクエンチし、ＤＣＭで抽出した。有機相をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮した。残渣を、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ（１０：１）で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、標記化合物（４−（２−オキソエチル）フェニル）メチル−ｄ２  ２．４−ジメチルベンゾエート（３ｃ）を得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：２８５［Ｍ＋１］＋。
【０１８３】
[183]２−（４−（（（２，４−ジメチルベンゾイル）オキシ）メチル−ｄ２）フェニル）酢酸（３ｄ）
【０１８４】
[184]（４−（２−オキソエチル）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ジメチルベンゾエート（３ｃ）（５０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍＬ）中溶液に、オキソン（３６ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をＲＴで４時間撹拌した。混合物を水（２０ｍＬ）に注ぎ入れた。沈殿した固体を濾過によって回収し、水（３０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させて、２−（４−（（（２，４−ジメチルベンゾイル）オキシ）−メチル−ｄ２）フェニル）酢酸（３ｄ）の粗生成物を得て、これをさらに精製することなく次のステップに使用した。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：３０１［Ｍ＋１］＋。
【０１８５】
[185]（４−（２−クロロ−２−オキソエチル）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ジメチルベンゾエート（３ｅ）
【０１８６】
[186]２−（４−（（（２，４−ジメチルベンゾイル）オキシ）−メチル−ｄ２）フェニル）酢酸（３ｄ）（１．９ｇ、６．２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（４０ｍＬ）中溶液に、塩化オキサリル（０．７９ｍｌ、７．４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をＲＴで一晩攪拌した。混合物を濃縮して、（４−（２−クロロ−２−オキソエチル）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ジメチルベンゾエート（３ｅ）の粗生成物を得て、これをさらに精製することなく次のステップに使用した。
【０１８７】
[187]（Ｒ）−（４−（２−（４−ベンゾイル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル）−２−オキソエチル）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ジメチルベンゾエート（３ｆ）
【０１８８】
[188]（Ｒ）−４−ベンジルオキサゾリジン−２−オン（１．１ｇ、６．２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４０ｍＬ）中溶液に、−７０℃でｎ−ＢｕＬｉ（１．６Ｍ、４．３ｍＬ、６．８ｍｍｏｌ）を滴加し、次いで、（４−（２−クロロ−２−オキソエチル）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ジメチルベンゾエート（３ｅ）（２．０ｇ、６．２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ中溶液を滴加し、得られた混合物を−７０℃で１時間撹拌した。反応物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（２ｘ５０ｍＬ）で抽出した。抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮した。残渣を、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ（１０：１〜５：１）で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、標記化合物（Ｒ）−（４−（２−（４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル）−２−オキソエチル）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ジメチル−ベンゾエート（３ｆ）を得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：４６０［Ｍ＋１］＋。
【０１８９】
[189]（４−（（Ｓ）−１−（（Ｒ）−４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル）−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ジメチルベンゾエート（３ｇ）
【０１９０】
[190]（Ｒ）−（４−（２−（４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル）−２−オキソエチル）フェニル）−メチル−ｄ２  ２，４−ジメチルベンゾエート（３ｆ）（１．０ｇ、２．２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）中溶液に、−７０℃でＫＨＭＤＳ（１．０Ｍ、２．６ｍＬ、２．６１ｍｍｏｌ）を滴加した。混合物を−７０℃で３０分間撹拌し、次いで、ｔｅｒｔ−ブチル  （（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イル）メチル）カルバメート（０．６５ｇ、２．６ｍｍｏｌ）（国際公開第２０１７／０８６９４１号）のＴＨＦ（３ｍＬ）中溶液を−７０℃で滴加した。混合物を０℃で１時間撹拌した。反応物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮した。残渣をＰＥ／ＥｔＯＡｃ（１０：１〜５：１）で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、標記化合物（４−（（Ｓ）−１−（（Ｒ）−４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル）−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ジメチルベンゾエート（３ｇ）を得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：５８９［Ｍ＋１］＋。
【０１９１】
[191]（Ｓ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−（４−（（（２，４−ジメチルベンゾイル）オキシ）メチル−ｄ２）フェニル）プロパン酸（３ｈ）
【０１９２】
[192]（４−（（Ｓ）−１−（（Ｒ）−４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル）−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ジメチルベンゾエート（３ｇ）（１．１ｇ、１．９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（２２ｍｌ／７ｍＬ）溶液に、０℃でＨ２Ｏ２（３０％、０．８５ｇ、７．５ｍｍｏｌ）およびＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（７８ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ）を順次添加した。混合物を０℃で１０分間撹拌した。反応物を１０％Ｎａ２ＳＯ３水溶液でクエンチした。混合物をＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮した。残渣を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１００：１〜２０：１）で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、標記化合物（Ｓ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−（４−（（（２，４−ジメチルベンゾイル）オキシ）メチル−ｄ２）フェニル）プロパン酸（３ｈ）を得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：４３０［Ｍ＋１］＋。
【０１９３】
[193]（Ｓ）−（４−（３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−１−（イソキノリン−６−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ジメチルベンゾエート（３ｉ）
【０１９４】
[194]イソキノリン−６−アミン（２３ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−（４−（（（２，４−ジメチルベンゾイル）オキシ）メチル−ｄ２）フェニル（プロパン酸（３ｈ）（４３ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍＬ）中溶液に、ＥＤＣＩ（３９ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（３３ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）およびＨＯＢＴ（２７ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をＲＴで一晩攪拌した。混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３ｘ５ｍＬ）で抽出した。抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮した。残渣を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１５：１）で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、標記化合物（Ｓ）−（４−（３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−１−（イソキノリン−６−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ジメチルベンゾエート（３ｉ）を得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：５５６［Ｍ＋１］＋。
【０１９５】
[195]（Ｓ）−（４−（３−アミノ−１−（イソキノリン−６−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ジメチルベンゾエート（３）
【０１９６】
[196]標記化合物（Ｓ）−（４−（３−アミノ−１−（イソキノリン−６−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ジメチルベンゾエート（３）を、（Ｓ）−４−（３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−１−（（イソキノリン−６−イル−１−ｄ）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）ベンジル  ２，４−ジメチルベンゾエート（１ｂ）を（Ｓ）−（４−（３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−１−（イソキノリン−６−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ジメチルベンゾエート（３ｉ）で置き換えることによって、（Ｓ）−４−（３−アミノ−１−（（イソキノリン−６−イル−１−ｄ）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）ベンジル  ２，４−ジメチルベンゾエート（１）の合成方法に従って調製した。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：４５６［Ｍ＋１］＋。
【０１９７】
[197]実施例４
（Ｓ）−４−（３−アミノ−１−（（イソキノリン−６−イル−１−ｄ）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル−３，３−ｄ２）ベンジル  ２，４−ジメチルベンゾエート二塩酸塩（４）
【化２５】
2021517137.tif 000028
【０１９８】
[198]（Ｒ）−４−（２−（４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル）−２−オキソエチル）ベンジル  ２，４−ジメチルベンゾエート（４ａ）
【０１９９】
[199]標記化合物（Ｒ）−４−（２−（４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル）−２−オキソエチル）ベンジル  ２，４−ジメチルベンゾエート（４ａ）を、国際公開第２０１７／０８６９４１号に記載される方法に従って調製した。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：４５８［Ｍ＋１］＋。
【０２００】
[200]４−（（Ｓ）−１−（（Ｒ）−４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル）−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル−３，３−ｄ２）  ２，４−ジメチルベンゾエート（４ｂ）
【０２０１】
[201]標記化合物（Ｒ）−４−（２−（４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル）−２−オキソエチル）ベンジル  ２，４−ジメチルベンゾエート（４ａ）（１．０ｇ、２．２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）中溶液に、−７０℃でＫＨＭＤＳ（１．０Ｍ、２．６ｍＬ、２．６１ｍｍｏｌ）を滴加した。混合物を−７０℃で３０分間撹拌し、次いで、ｔｅｒｔ−ブチル（（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イル）メチル−ｄ２）カルバメート（Ｆ）（０．６５ｇ、２．６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３ｍＬ）溶液を−７０℃で滴加した。混合物を０℃で１時間撹拌した。反応物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮した。残渣を、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ（１０：１〜５：１）で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、標記化合物４−（（Ｓ）−１−（（Ｒ）−４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル）−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル−３，３−ｄ２）ベンジル  ２，４−ジメチルベンゾエート（４ｂ）を得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：５８９［Ｍ＋１］＋。
【０２０２】
[202]（Ｓ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−（４−（（（２，４−ジメチルベンゾイル）オキシ）メチル）フェニル）プロパン−３，３−ｄ２酸（４ｃ）
【０２０３】
[203]標記化合物（Ｓ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−（４−（（（２，４−ジメチルベンゾイル）オキシ）メチル）フェニル）プロパン−３，３−ｄ２酸（４ｃ）を、（４−（（Ｓ）−１−（（Ｒ）−４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル）−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ジメチルベンゾエート（３ｇ）を４−（（Ｓ）−１−（（Ｒ）−４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル）−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル−３，３−ｄ２）ベンジル  ２，４−ジメチルベンゾエート（４ｂ）で置き換えることによって、（Ｓ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−（４−（（（２，４−ジメチルベンゾイル）オキシ）メチル−ｄ２）フェニル）プロパン酸（３ｈ）の合成方法に従って調製した。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：４３０［Ｍ＋１］＋
【０２０４】
[204]（Ｓ）−４−（３−アミノ−１−（（（イソキノリン−６−イル−１−ｄ）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル−３，３−ｄ２）ベンジル  ２，４−ジメチルベンゾエート（４ｄ）
【０２０５】
[205]標記化合物（Ｓ）−４−（３−アミノ−１−（（イソキノリン−６−イル−１−ｄ）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル−３，３−ｄ２）ベンジル  ２，４−ジメチルベンゾエート（４ｄ）を、（Ｓ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−（４−（（（２，４−ジメチルベンゾイル）オキシ）メチル）フェニル）プロパン酸（１ａ）を（Ｓ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−（４−（（（２，４−ジメチルベンゾイル）オキシ）メチル）フェニル）プロパン−３，３−ｄ２酸（４ｃ）で置き換えることによって、（Ｓ）−４−（３−アミノ−１−（（イソキノリン−６−イル−１−ｄ）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）ベンジル  ２，４−ジメチルベンゾエート（１）の合成方法に従って調製した。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：４５７［Ｍ＋１］＋。
【０２０６】
[206]（Ｓ）−４−（３−アミノ−１−（（イソキノリン−６−イル−１−ｄ）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル−３，３−ｄ２）ベンジル  ２，４−ジメチルベンゾエート二塩酸塩（４）
【０２０７】
[207]（Ｓ）−４−（３−アミノ−１−（（イソキノリン−６−イル−１−ｄ）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル−３，３−ｄ２）ベンジル  ２，４−ジメチルベンゾエート（４ｄ）（２２ｍｇ、０．０４８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１ｍＬ）およびＭｅＯＨ（０．１ｍＬ）溶液に、ＨＣｌ（３０％ＥｔＯＨ溶液、０．１０８ｍｍｏｌ）を添加した。１０分間撹拌した後、混合物を濃縮して、標記化合物（Ｓ）−４−（３−アミノ−１−（（イソキノリン−６−イル−１−ｄ）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル−３，３−ｄ２）ベンジル２，４−ジメチルベンゾエート二塩酸塩（４）を得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：４５７  ［Ｍ＋１］＋。
【０２０８】
[208]実施例５
（Ｓ）−（４−（３−アミノ−１−（イソキノリン−６−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イル−２，３，３−ｄ３）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ビス（メチル−ｄ３）ベンゾエート二塩酸塩（５）
【化２６】
2021517137.tif 000029
【０２０９】
[209]（４−（２−メトキシ−２−オキソエチル−１，１−ｄ２）フェニル）メチル−ｄ２２，４−ビス（メチル−ｄ３）ベンゾエート（５ａ）
【０２１０】
[210]ＤＣＭ（２０ｍＬ）中メチル２−（４−（ヒドロキシメチル−ｄ２）フェニル）アセテート−ｄ２（Ｅ）（６１０ｍｇ、３．３０ｍｍｏｌ）、２，４−ビス（メチル−ｄ３）安息香酸（Ｃ）（５１７ｍｇ、３．３０ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（１．２ｇ、６．０ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（８１ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）の混合物をＲＴで一晩攪拌した。混合物をＤＣＭで希釈し、Ｈ２Ｏおよびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮した。残渣を、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ（１０：１）で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、標記化合物（４−（２−メトキシ−２−オキソエチル−１，１−ｄ２）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ビス（メチル−ｄ３）ベンゾエート（５ａ）を得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：３２３［Ｍ＋１］＋。
【０２１１】
[211]２−（４−（（（２，４−ビス（メチル−ｄ３）ベンゾイル）オキシ）メチル−ｄ２）フェニル）酢酸−２，２−ｄ２（５ｂ）
【０２１２】
[212]（４−（２−メトキシ−２−オキソエチル−１，１−ｄ２）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ビス（メチル−ｄ３）ベンゾエート（５ａ）（７５２ｍｇ、２．３３ｍｍｏｌ）のＤ２Ｏ（１５ｍＬ）およびＴＨＦ（１０ｍＬ）中溶液に、ＬｉＯＨ．Ｈ２Ｏ（１０８ｍｇ、２．６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をＲＴで２時間撹拌した。混合物をｐＨ＝２〜３に酸性化し、Ｈ２Ｏで希釈し、ＥｔＯＡｃ（３ｘ）で抽出した。合わせたＥｔＯＡｃ相をＨ２Ｏおよびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮して、標記化合物２−（４−（（（２，４−ビス（メチル−ｄ３）ベンゾイル）オキシ）メチル−ｄ２）フェニル）酢酸−２，２−ｄ２（５ｂ）を得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：３０７［Ｍ−１］−。
【０２１３】
[213]（Ｒ）−（４−（２−（４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル）−２−オキソエチル−１，１−ｄ２）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ビス（メチル−ｄ３）ベンゾエート（５ｃ）
【０２１４】
[214]標記化合物（Ｒ）−（４−（２−（４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル）−２−オキソエチル−１，１−ｄ２）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ビス（メチル−ｄ３）ベンゾエート（５ｃ）を、２−（４−（（（２，４−ジメチルベンゾイル）オキシ）−メチル−ｄ２）フェニル）酢酸（３ｄ）を２−（４−（（（２，４−ビス（メチル−ｄ３）ベンゾイル）オキシ）メチル−ｄ２）フェニル）酢酸−２，２−ｄ２（５ｂ）で置き換えることによって、３ｆの合成方法に従って調製した。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：４６８［Ｍ＋１］＋。
【０２１５】
[215]（Ｓ）−（４−（１−（（Ｒ）−４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル）−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル−２，３，３−ｄ３）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ビス（メチル−ｄ３）ベンゾエート（５ｄ）
【０２１６】
[216]標記化合物（Ｓ）−（４−（１−（（Ｒ）−４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル）−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル−２，３，３−ｄ３）フェニル（メチル−ｄ２  ２，４−ビス（メチル−ｄ３）ベンゾエート（５ｄ）を、（Ｒ）−（４−（２−（４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル）−２−オキソエチル）フェニル）−メチル−ｄ２  ２，４−ジメチルベンゾエート（３ｆ）およびｔｅｒｔ−ブチル（（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イル）メチル）カルバメートを（Ｒ）−（４−（２−（４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル）−２−オキソエチル−１，１−ｄ２）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ビス（メチル−ｄ３）ベンゾエート（５ｃ）およびｔｅｒｔ−ブチル（（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イル）メチル−ｄ２）カルバメート（Ｆ）で置き換えることによって、３ｇの合成方法に従って調製した。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：５９８［Ｍ＋１］＋。
【０２１７】
[217]（Ｓ）−２−（４−（（（２，４−ビス（メチル−ｄ３）ベンゾイル）オキシ）メチル−ｄ２）フェニル）−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロパン−２，３，３−ｄ３酸（５ｅ）
【０２１８】
[218]（Ｓ）−（４−（１−（（Ｒ）−４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル）−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル−２，３，３−ｄ３）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ビス（メチル−ｄ３）ベンゾエート（５ｄ）（５３８ｍｇ、０．９０４ｍｍｏｌ）のＤ２Ｏ（５ｍＬ）およびＴＨＦ（１０ｍＬ）中溶液に、０℃でＨ２Ｏ２（０．４１ｍｌ、３．６１ｍｍｏｌ）、引き続いてＬｉＯＨ．Ｈ２Ｏ（４２ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を０℃で０．５時間撹拌し、次いで、ＮａＨＳＯ３（１０％水溶液）でクエンチした。混合物をｐＨ＝２〜３に酸性化し、ＥｔＯＡｃ（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＣＯ４上で乾燥させ、濃縮した。残渣を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１００：１〜１０：１）で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、標記化合物（Ｓ）−２−（４−（（（２，４−ビス（メチル−ｄ３）ベンゾイル）オキシ）−メチル−ｄ２）フェニル）−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロパン−２，３，３−ｄ３酸（５ｅ）を得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：４３９［Ｍ−１］−。
【０２１９】
[219]（Ｓ）−（４−（３−アミノ−１−（イソキノリン−６−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イル−２，３，３−ｄ３）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ビス（メチル−ｄ３）ベンゾエート（５ｆ）
【０２２０】
[220]標記化合物（Ｓ）−（４−（３−アミノ−１−（イソキノリン−６−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イル−２，３，３−ｄ３）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ビス（メチル−ｄ３）ベンゾエート（５ｆ）を、（Ｓ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−（４−（（（２，４−ジメチルベンゾイル）オキシ）メチル−ｄ２）フェニル）プロパン酸（３ｈ）を（Ｓ）−２−（４−（（（２，４−ビス（メチル−ｄ３）ベンゾイル）オキシ）メチル−ｄ２）フェニル）−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロパン−２，３，３−ｄ３酸（５ｅ）で置き換えることによって、３の合成方法に従って調製した。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：４６５［Ｍ＋１］＋。
【０２２１】
[221]（Ｓ）−（４−（３−アミノ−１−（イソキノリン−６−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イル−２，３，３−ｄ３）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ビス（メチル−ｄ３）ベンゾエート二塩酸塩（５）
【０２２２】
[222]（Ｓ）−（４−（３−アミノ−１−（イソキノリン−６−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イル−２，３，３−ｄ３）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ビス（メチル−ｄ３）ベンゾエート（５ｆ）（２０ｍｇ、０．０４３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１ｍＬ）およびＭｅＯＨ（０．１ｍＬ）中溶液に、ＨＣｌ（３０％ＥｔＯＨ溶液、０．１０８ｍｍｏｌ）を添加した。１０分間撹拌した後、混合物を濃縮して、標記化合物（Ｓ）−（４−（３−アミノ−１−（イソキノリン−６−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イル−２，３，３−ｄ３）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ビス（メチル−ｄ３）ベンゾエート二塩酸塩（５）を得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：４６５［Ｍ＋１］＋。
【０２２３】
[223]実施例６
（Ｓ）−（４−（３−アミノ−１−（イソキノリン−６−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イル−２−ｄ）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ビス（メチル−ｄ３）ベンゾエート二塩酸塩（６）
【化２７】
2021517137.tif 000030
【０２２４】
[224]標記化合物（Ｓ）−（４−（３−アミノ−１−（イソキノリン−６−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イル−２−ｄ）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ビス（メチル−ｄ３）ベンゾエート二塩酸塩（６）を、ｔｅｒｔ−ブチル（（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イル）メチル−ｄ２）カルバメート（Ｆ）をｔｅｒｔ−ブチル（（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イル）メチル）カルバメートで置き換えることによって、５の合成方法に従って調製した。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：４６３［Ｍ＋１］＋。
【０２２５】
[225]参照化合物１
（Ｓ）−４−（３−アミノ−１−（イソキノリン−６−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）ベンジル２，４−ジメチルベンゾエート二塩酸塩（参照化合物１）
【０２２６】
[226]（Ｓ）−４−（３−アミノ−１−（イソキノリン−６−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）ベンジル  ２，４−ジメチルベンゾエートは開示されており、国際公開第２０１７／０８６９４１号の２１頁に概説されるのと本質的に同じ手順に従って調製した。参照化合物１を、（Ｓ）−（４−（３−アミノ−１−（イソキノリン−６−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イル−２，３，３−ｄ３）フェニル）メチル−ｄ２  ２，４−ビス（メチル−ｄ３）ベンゾエート（５ｆ）を（Ｓ）−４−（３−アミノ−１−（イソキノリン−６−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）ベンジル  ２，４−ジメチルベンゾエートで置き換えることによって、（５）の合成方法に従って調製した。
【０２２７】
[227]実施例１〜６について記載されるのと本質的に同じ手順に従って、表１に列挙される実施例７〜２４を、市販されているまたは文献で知られている適切な出発物質から調製した。実施例７〜２４の構造および名称を表１に示す。
【表１】
2021517137.tif 000031
2021517137.tif 000032
【０２２８】
[228]細胞増殖アッセイ
ＲＯＣＫ−Ｉ（ｈ）インビトロ阻害活性−方法Ａ
Ｅｕｒｏｆｉｎｓ  Ｐｈａｒｍａ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ  ＵＫ  ＬｉｍｉｔｅｄのＫｉｎａｓｅＰｒｏｆｉｌｅｒ（商標）サービスを使用して、ＲＯＣＫ−Ｉ（ｈ）キナーゼアッセイを行った。ＲＯＣＫ−Ｉ（ｈ）を、８ｍＭ  ＭＯＰＳ  ｐＨ７．０（ＶＷＲカタログ番号４４１６４４Ｊ）、０．２ｍＭ  ＥＤＴＡ（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｅ５１３４）、３０μＭ  ＫＥＡＫＥＫＲＱＥＱＩＡＫＲＲＲＬＳＳＬＲＡＳＴＳＫＳＧＧＳＱＫ（Ｐｅｐｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、１０ｍＭ酢酸マグネシウム（Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅカタログ番号１０５８１９）および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒカタログ番号ＮＥＧ６０２Ｋ）を含有するアッセイ緩衝液中で試験化合物とインキュベートした。１００％ＤＭＳＯ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍカタログ番号３１７２７５）中の試験化合物を、Ｍｏｓｑｕｉｔｏ  ＸＩ（ＴＴＰ  Ｌａｂｔｅｃｈ）を使用して先に９６ウェルアッセイプレートにスポットした後、反応ミックスを添加した。Ｍａｔｒｉｘ  Ｗｅｌｌｍａｔｅを使用して、Ｍｇ／ＡＴＰミックスを添加することによって、反応を開始した。室温で４０分間インキュベートした後、Ｍａｔｒｉｘ  Ｗｅｌｌｍａｔｅを使用して、３％リン酸溶液（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  カタログ番号Ｏ／０５００／ＰＢ１７）を添加することによって、反応を停止した。次いで、反応物のアリコートをフィルターマットにスポットし、リン酸で洗浄し、引き続いてメタノールですすいだ後、乾燥させ、Ｔｒｉｌｕｘ  Ｗａｌｌａｃ  Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ検出器（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）でシンチレーション測定を行った。結果を、試験化合物の代わりにＤＭＳＯのみを含有する対照に対して表した。該当する場合、ＸＬＦｉｔバージョン５．３（ＩＤ  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）を使用してＩＣ５０曲線分析を実施した。非線形回帰分析を使用して、シグモイド用量−反応（可変勾配）曲線を当てはめる。
【０２２９】
[229]Ｅｕｒｏｆｉｎｓ  Ｐｈａｒｍａ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ  ＵＫ  ＬｉｍｉｔｅｄのＫｉｎａｓｅＰｒｏｆｉｌｅｒ（商標）サービスを使用して、ＲＯＣＫ−ＩＩ（ｈ）キナーゼアッセイを行った。ＲＯＣＫ−ＩＩ（ｈ）を、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．５（ＶＷＲカタログ番号１０３１５７Ｐ）、０．１ｍＭ  ＥＧＴＡ（ＶＷＲカタログ番号２０３０８）、３０μＭ  ＫＥＡＫＥＫＲＱＥＱＩＡＫＲＲＲＬＳＳＬＲＡＳＴＳＫＳＧＧＳＱＫ（Ｐｅｐｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、１０ｍＭ酢酸マグネシウムおよび［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒカタログ番号ＮＥＧ６０２Ｋ）を含有するアッセイ緩衝液中で試験化合物とインキュベートした。１００％ＤＭＳＯ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍカタログ番号３１７２７５）中の試験化合物を、Ｍｏｓｑｕｉｔｏ  ＸＩ（ＴＴＰ  Ｌａｂｔｅｃｈ）を使用して先に９６ウェルアッセイプレートにスポットした後、反応ミックスを添加した。Ｍａｔｒｉｘ  Ｗｅｌｌｍａｔｅを使用して、Ｍｇ／ＡＴＰミックスを添加することによって、反応を開始した。室温で４０分間インキュベートした後、Ｍａｔｒｉｘ  Ｗｅｌｌｍａｔｅを使用して、３％リン酸溶液（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  カタログ番号Ｏ／０５００／ＰＢ１７）を添加することによって、反応を停止した。次いで、反応物のアリコートをフィルターマットにスポットし、リン酸で洗浄し、引き続いてメタノールですすいだ後、乾燥させ、Ｔｒｉｌｕｘ  Ｗａｌｌａｃ  Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ検出器（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）でシンチレーション測定を行った。結果を、試験化合物の代わりにＤＭＳＯのみを含有する対照に対して表した。該当する場合、ＸＬＦｉｔバージョン５．３（ＩＤ  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）を使用してＩＣ５０曲線分析を実施した。非線形回帰分析を使用して、シグモイド用量−反応（可変勾配）曲線を当てはめる。
【０２３０】
[230]上記のように調製された選択化合物を、方法Ａに記載される生物学的手順に従って検定した。結果を表２に示す。
【表２】
2021517137.tif 000033
【０２３１】
[231]ＲＯＣＫ−Ｉ（ｈ）インビトロ阻害活性−方法Ｂ
ＣＩＳＢＩＯのＨＴＲＦ（登録商標）ＫｉｎＥＡＳＥ−ＳＴＫキットサービスを使用して、ＲＯＣＫ−Ｉ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＰＶ３６９１）キナーゼアッセイを行った。Ｅｃｈｏ  ５５０を使用して、１０ｎｌの化合物希釈液をアッセイプレート（７８４０７５、Ｇｒｅｉｎｅｒ）の各ウェルに移す。化合物プレートを１０００  ｇで１分間遠心する。アッセイプレートを密封する。１ｘキナーゼ緩衝液中５Ｘ  ＲＯＣＫ−Ｉ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＰＶ  ３６９１）を調製する（１倍体積の酵素緩衝液５Ｘと４倍体積の蒸留水；５ｍＭ  ＭｇＣｌ２；１ｍＭ  ＤＴＴ）。２μｌの５Ｘ  ＲＯＣＫ−Ｉを３８４ウェルアッセイプレート（７８４０７５、Ｇｒｅｉｎｅｒ）に添加する。４μｌの１ｘキナーゼ緩衝液をアッセイプレートの各ウェルに添加し、プレートを１０００ｇで３０秒間、ＲＴで１０分間遠心分離する。キナーゼ緩衝液中５ｘ  ＴＫ−基質−ビオチン（５μＭ）およびキナーゼ緩衝液中５ｘ  ＡＴＰ（１００μＭ）を調製する。２μｌのＳＴＫ−基質−ビオチンおよび２μｌのＡＴＰを添加して反応を開始する。プレートを１０００ｇで３０秒間遠心分離する。アッセイプレートをＲＴで２０分間密封する。ＨＴＲＦ検出緩衝液で４Ｘ  Ｓａ−ＸＬ  ６６５（２５０ｎＭ）およびＴＫ−抗体−クリプテートを調製する。５μｌのＳａ−ＸＬ  ６６５および５μｌのＴＫ−抗体−クリプテートをアッセイプレートの各ウェルに添加する。プレートを１０００ｇで３０秒間、ＲＴで１時間遠心分離する。Ｅｎｖｉｓｉｏｎ  ２１０４プレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で６１５ｎｍ（Ｃｒｙｐｔａｔｅ）および６６５ｎｍ（ＸＬ６６５）の蛍光シグナルを読み取る。各ウェルについて比（６６５／６１５ｎｍ）を計算する。ＧｒａｐｈＰａｄ  ６．０を使用して、％阻害値および化合物濃度の対数を非線形回帰（用量反応−可変勾配）に当てはめることによって、ＩＣ５０を計算する。
【０２３２】
[232]上記のように調製された選択化合物を、方法Ｂに記載される生物学的手順に従って検定した。結果を表３に示す。
【表３】
2021517137.tif 000034
【０２３３】
[233]ＲＯＣＫインビボ阻害活性−方法Ｃ
オキシブプロカイン（Ｓａｎｔｅｎ  Ｃｏ．ＪＰロット：Ｂ２０３１）；炭酸塩抑制剤（ｈａｒｖａｒｄ  ａｐｐａｒａｔｕｓ）；ＴＯＮＯＶＥＴ  Ｐｌｕｓ（Ｆｉｎｌａｎｄ  ｉｃａｒｅ）；チンチラウサギ：２〜８月齢および体重２．２３〜４．４１ｋｇ（Ｄｏｎｇｆａｎｇ  Ｂｒｅｅｄｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．、Ｐｉｚｈｏｕ、ライセンス：ＳＣＸＫ（ｓｕ）２０１４−０００５、承認番号：２０１８１４４９３，２０１８２６３１４）。
【０２３４】
[234]１８匹の雄ウサギを３つの群（６匹／群）にランダムに割り当てた。ビヒクル対照、Ｒｈｏｐｒｅｓｓａ＠（０．０２％ネタルスジル、０．２ｍｇ／ｍｌネタルスジルに相当）、または０．２ｍｇ／ｍＬの実施例１１を、１日１回、３日間、右眼（３０μＬ／眼／投与）に局所投与し、もう片方の左目を内部対照としての生理食塩水で処置した。臨床観察および眼科検査を１日１回実施した。最初の投与前、ならびに１日目および３日目の各最初の投与の０．５、２、４、６および２４時間後に、ＴＯＮＯＶＥＴ  ＰｌｕｓによってＩＯＰを測定した。
【０２３５】
[235]以下の式を使用して、ＩＯＰの変化％を計算した：ＩＯＰの変化％（△ＩＯＰ％）＝［ＩＯＰ（時間）−ＩＯＰ（対照）］／ＩＯＰ（対照）＊１００）。
【０２３６】
[236]上記のように調製された選択化合物を、方法Ｃに記載される生物学的手順に従って検定した。３日目の２４時間での投与の結果を表４に示す。
【表４】
2021517137.tif 000035
【国際調査報告】
2021517137.tif 000041
2021517137.tif 000042
2021517137.tif 000043
2021517137.tif 000044