(57)【要約】  単離された抗ＣＤ３８抗体を低用量で皮下投与する方法が開示されている。この方法は、血液疾患を含む自己免疫疾患および癌の効果的な治療を提供する。抗ＣＤ３８抗体の単位剤形も開示されている。【選択図】図１
2021510737.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象においてＣＤ３８への結合が示される疾患を治療するための方法であって、前記方法が、前記対象に、単離されたヒト抗ＣＤ３８抗体の単位剤形を投与することを含み、前記抗ＣＤ３８抗体が、配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、および配列番号５を有するＣＤＲ３を含む可変重（ＶＨ）鎖領域と、配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、および配列番号８を有するＣＤＲ３を含む可変軽（ＶＬ）鎖領域と、を含み、前記単位剤形が、３ｍＬ以下の容量である、方法。
【請求項２】
前記抗体が、体重１キログラムあたり０．０３〜０．６ミリグラムの用量で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＶＨ鎖領域が、配列番号９のアミノ酸配列を有し、前記ＶＬ鎖領域が、配列番号１０のアミノ酸配列を有する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記抗ＣＤ３８抗体が、配列番号１１の重鎖アミノ酸配列と、配列番号１２の軽鎖アミノ酸配列と、を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記単位剤形が、２ｍＬ以下の容量である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記単位剤形が、１ｍＬ以下の容量である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記抗ＣＤ３８抗体を投与することが、溶血性貧血または血小板減少症を引き起こさない、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記抗ＣＤ３８抗体を投与することが、貧血、溶血性貧血、血小板減少症、疲労、輸注関連反応（ＩＲＲ）、白血球減少症、およびリンパ球減少症からなる群から選択される１つ以上の治療中に発生した有害事象（ＴＥＡＥ）のグレード３または４の、１０％未満、２０％未満、３０％未満、４０％未満、または５０％未満の発生率をもたらす、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記抗ＣＤ３８抗体を投与することが、ＲＢＣの１０％未満、２０％未満、３０％未満、４０％未満、または５０％未満の枯渇をもたらす、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗ＣＤ３８抗体を投与することが、血小板の１０％未満、２０％未満、３０％未満、４０％未満、または５０％未満の枯渇をもたらす、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記疾患が、自己免疫疾患および癌からなる群から選択される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記疾患が、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、関節リウマチ（ＲＡ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、重症筋無力症（ＭＧ）、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）、免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、抗リン脂質症候群（ＡＰＳ）、尋常性天疱瘡（ＰＶ）、葉状天疱瘡（ＰＦ）、抗ＮＭＤＡＲ脳炎（ＮＭＤＲ）、自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）、グレーブス病、膜性腎症、シェーグレン症候群（ＳＳ）、ＡＮＣＡ血管炎、表皮水疱症（ＥＢＡ）、類天疱瘡（ＢＰ）、橋本甲状腺炎、強皮症、ＩｇＧ４関連疾患、および移植片対宿主病からなる群から選択される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記疾患が、多発性骨髄腫、慢性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、形質細胞性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、およびバーキットリンパ腫からなる群から選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記疾患が、多発性骨髄腫である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記疾患が、再発性多発性骨髄腫（ＲＭＭ）、再発性および難治性多発性骨髄腫（ＲＲＭＭ）、または新たに診断された多発性骨髄腫（ＮＳＭＭ）である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記ヒト抗ＣＤ３８抗体が、薬学的に許容される組成物の形態で投与される、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
配列番号９を含む重鎖可変領域と、配列番号１０を含む軽鎖可変領域と、を含む、単離された抗体を含む、単位剤形であって、前記単離された抗体が、ＣＤ３８に結合し、前記単位剤形が、体重１キログラムあたり０．０３〜０．６ミリグラムの用量での前記抗体の皮下投与用に製剤化される、単位剤形。
【請求項１８】
単離された抗体が、配列番号１１を含む重鎖と、配列番号１２を含む軽鎖と、を含む、請求項１７に記載の単位剤形。
【請求項１９】
前記単位剤形が、３ｍＬ以下の容量である、請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記単位剤形が、２ｍＬ以下の容量である、請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記単位剤形が、１ｍＬ以下の容量である、請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２２】
前記単位剤形が、多発性骨髄腫、慢性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、形質細胞性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、およびバーキットリンパ腫からなる群から選択される血液癌の治療における抗体の皮下投与用に製剤化される、請求項１７〜２１のいずれか一項に記載の単位剤形。
【請求項２３】
前記血液癌が、多発性骨髄腫である、請求項２２に記載の単位剤形。
【請求項２４】
前記疾患が、再発性多発性骨髄腫（ＲＭＭ）、再発性および難治性多発性骨髄腫（ＲＲＭＭ）、または新たに診断された多発性骨髄腫（ＮＳＭＭ）である、請求項２３に記載の単位剤形。
【請求項２５】
前記抗ＣＤ３８抗体を投与することが、溶血性貧血または血小板減少症を引き起こさない、請求項１７〜２４のいずれか一項に記載の単位剤形。
【請求項２６】
前記抗ＣＤ３８抗体を投与することが、貧血、溶血性貧血、血小板減少症、疲労、輸注関連反応（ＩＲＲ）、白血球減少症、およびリンパ球減少症からなる群から選択される１つ以上の治療中に発生した有害事象（ＴＥＡＥ）のグレード３または４の１０％未満、２０％未満、３０％未満、４０％未満、または５０％未満の発生率をもたらす、請求項１７〜２４のいずれか一項に記載の単位剤形。
【請求項２７】
前記抗ＣＤ３８抗体を投与することが、ＲＢＣの１０％未満、２０％未満、３０％未満、４０％未満、または５０％未満の枯渇をもたらす、請求項１７〜２４のいずれか一項に記載の単位剤形。
【請求項２８】
前記抗ＣＤ３８抗体を投与することが、血小板の１０％未満、２０％未満、３０％未満、４０％未満、または５０％未満の枯渇をもたらす、請求項１７〜２４のいずれか一項に記載の単位剤形。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
この出願は、その開示全体を参照により本明細書に組み込む、２０１８年１月１２日に出願された米国仮出願第６２／６１７，１４６号に対する、米国特許法第１１９条（ｅ）の下で優先権を主張する。
【０００２】
電子的に提出された資料の参照による組み込み
参照により全体が組み込まれるのは、本明細書と同時に提出され、２０１８年１２月４日に作成された、次のように：２０キロバイトのＡＳＣＩＩ（テキスト）ファイル、名称「１０１５８８−５００９−ＷＯ−Ｓｅｑｕｅｎｃｅ−Ｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ，」と特定される、コンピューター読み取り可能なヌクレオチド／アミノ酸配列リストである。
【０００３】
単離された抗ＣＤ３８抗体を低用量かつ低容量で皮下（ＳＣ）投与により投与する方法が開示されている。
【背景技術】
【０００４】
環状ＡＤＰリボースヒドロラーゼとしても知られているＣＤ３８は、長いＣ末端の細胞外ドメインと短いＮ末端の細胞質ドメインとを有するＩＩ型膜貫通糖タンパク質である。ＣＤ３８は、ＣＤ１５７およびアメフラシ（Ａｐｌｙｓｉａ）ＡＤＰＲシクラーゼを含む、関連する膜結合または可溶性酵素のグループのメンバーである。この酵素ファミリーは、ＮＡＤを環状ＡＤＰリボースまたはニコチン酸−アデニンジヌクレオチドリン酸に変換する独自の能力を有している。ＣＤ３８は、Ｃａ２＋動員と、ホスホリパーゼＣγ、ＺＡＰ−７０、ｓｙｋ、およびｃ−ｃｂｌなどの多数のシグナル伝達分子のチロシンリン酸化によるシグナル伝達に関与している。これらの観察に基づいて、ＣＤ３８はリンパ系細胞の正常な発達中の成熟および活性化における重要なシグナル伝達分子である。造血細胞の中で、リンパ球増殖、サイトカイン放出、Ｂ細胞および骨髄細胞の発生ならびに生存の調節、および樹状細胞（ＤＣ）成熟の誘導を含む、ＣＤ３８介在シグナル伝達に様々な機能的影響があるとされている。
【０００５】
ＣＤ３８は未成熟造血細胞で発現し、成熟造血細胞ではダウンレギュレートされ、活性化リンパ球および形質細胞では高レベルで再発現される。例えば、活性化Ｂ細胞、形質細胞、活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞、活性化ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、成熟ＤＣ、および活性化単球で高いＣＤ３８発現が見られる（米国特許第８，３６２，２１１号）。マウスのＣＤ３８欠乏症は、末梢Ｔ調節性およびインバリアントＮＫＴ細胞のレベルの低下、体液性Ｂ細胞応答およびＤＣトラフィッキングの欠陥、ならびにコラーゲン誘発関節炎（ＣＩＡ）の減衰型と関連している（Ｃｈｉｂａ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ａｒｔｈｒｉｔ．Ｒｈｅｕｍ．５２：１９４１−４８）。
【０００６】
ＣＤ３８に対する自己抗体の存在は、糖尿病、慢性自己免疫性甲状腺炎、およびグレーブス病などの多くの疾患に関連している（Ａｎｔｏｎｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２６：４２６−４３１；Ｍａｌｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ５０：７５２およびＡｎｔｏｎｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｉｎｖｅｓｔ．２７：６９５−７０７）。
【０００７】
ＣＤ３８の発現増加は、自己免疫疾患および癌を含む様々な疾患で報告されている。このような疾患としては、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、関節リウマチ（ＲＡ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、重症筋無力症（ＭＧ）（Ｙｉｌｍａｚ  ｅｔ  ａｌ．（２０１８）Ａｎｎ．Ｃｌｉｎ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｎｅｕｒｏｌ．５（１１）：１４０８−１４１４）、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）（Ｃｈｉｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０８（９）：３７０１−６）、免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）（Ｂｅｈｚａｄ  ｅｔ  ａｌ．（２０１８）ＡＰＭＩＳ  １２６（６）：５２３−５３２）、抗リン脂質症候群（ＡＰＳ）（Ａｌｖａｒｅｚ−Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ  ｅｔ  ａｌ．（２０１８）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｃｉ．１９（２）：ｐｉｉ）、尋常性天疱瘡（ＰＶ）、葉状状天疱瘡（ＰＦ）、抗ＮＭＤＡＲ脳炎（ＮＭＤＲ）、自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）、グレーブス病、膜性腎症、シェーグレン症候群（ＳＳ）、ＡＮＣＡ血管炎、表皮水疱性膿疱症（ＥＢＡ）、水疱性類天疱瘡（ＢＰ）、橋本甲状腺炎、強皮症、およびＩｇＧ４関連疾患が挙げられる。ＲＡ患者では、対照と比較して関節組織の形質細胞が増加している。ＳＬＥの患者では、より活発な疾患の患者の末梢血で形質芽球が増加している。しかしながら、リツキシマブなどの現在のＣＤ２０ベースのＢ細胞枯渇療法は、ＣＤ２０＋Ｂ細胞を効果的に枯渇させるが、ＣＤ２０を発現しないため、直接かつ効果的に形質細胞または形質芽細胞を枯渇させることはできない。したがって、高レベルの形質細胞または形質芽細胞を有するＲＡまたはＳＬＥの患者は、ＣＤ２０ベースの療法から実質的な臨床的利益を得る可能性は低い。
【０００８】
形質細胞、形質芽細胞、ＮＫ細胞、活性化Ｂリンパ球、形質細胞様樹状細胞、および活性化Ｔ細胞で高度に発現されるＣＤ３８を標的とする療法は、ＲＡおよびＳＬＥならびにＣＤ３８発現を特徴とする他の疾患に対しても効果的な治療を提供することができる。リツキシマブおよび経口ステロイドで治療された成人のＳＬＥ患者の末梢血におけるＣＤ３８を発現する形質芽細胞のレベルは、再発時間の最良の予測因子であった。さらに、高レベルのＣＤ３８を発現する循環免疫グロブリン（Ｉｇ）分泌細胞が活動性疾患のＳＬＥ患者の末梢血で同定されており、このサブセットのレベルは、治療により誘発された抗二本鎖ＤＮＡ（抗ｄｓＤＮＡ）抗体レベル、タンパク尿、および疾患活動性を減少させる（Ｇｒａｍｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１２：１５０６−１５２０）。さらに、形質細胞はプロテアソーム阻害に敏感であり、ボルテゾミブに曝露された非常に難治性のＳＬＥ患者の末梢血で低減される（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．７４（７）：１４７４−１４７８）。この低減は、抗ｄｓＤＮＡ抗体の減少および各患者の疾患活動性における対応する改善と一致した。残念ながら、療法は非リンパ系細胞（例えば、ニューロン、上皮）のプロテアソーム阻害に起因する可能性のある、治療中に発生した有害事象（ＴＥＡＥ、例えば、神経障害、下痢）に関連していた。総じて、これらのデータは、ＣＤ３８を発現する形質細胞を特異的に低減させると、難治性のＳＬＥ患者のリスクプロファイルに改善された利益をもたらす可能性があることを示している。ＲＡとＳＬＥの両方に対する現在の療法は、少数の患者でのみ主要な臨床応答および持続的寛解を生み出すため、追加の治療メカニズムを模索することが急務である。
【０００９】
ＣＤ３８の発現の増加は、造血系由来の様々な疾患、ならびにそれに由来する細胞株で報告されており、血液癌の陰性予後マーカーとして報告されている。このような疾患には、多発性骨髄腫（ＭＭ）、慢性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞性急性リンパ性白血病、ＢおよびＴ急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）を含むＢ細胞性慢性リンパ性白血病（Ｂ−ＣＬＬ）、急性リンパ芽球性白血病、ウォルデンストレームマクログロブリン血症、マントル細胞リンパ腫、前リンパ球性／骨髄性白血病、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、濾胞性リンパ腫、ＮＫ細胞白血病、形質細胞白血病、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、Ｔ細胞リンパ腫（ＴＣＬ）、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、およびホジキンリンパ腫（ＨＬ）が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、ＣＤ３８の発現は、例えば、Ｂ−ＣＬＬ（Ｄｕｒｉｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｌｅｕｋｅｍｉａ  １６：３０−３５；およびＭｏｒａｂｉｔｏ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｌｅｕｋｅｍｉａ  Ｒｅｓ．２５：９２７−９３２）ならびに急性骨髄性白血病（Ｋｅｙｈａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｌｅｕｋｅｍｉａ  Ｒｅｓ．２４：１５３−１５９））などの病態を有する患者についての予後指標である。したがって、ＣＤ３８は、造血系の疾患の治療に有用な標的を提供する。
【００１０】
いくつかの抗ＣＤ３８抗体では、ＣＤ３８関連癌の治療を目的とした臨床試験が行われている。しかし、これらの先行技術の治療用抗ＣＤ３８抗体は赤血球（ＲＢＣ）と血小板に結合するため、ＲＢＣへの結合によって生じるこのようなシンクを克服するために、なぜより高い必要投与量が要求されるかを説明することができる。例えば、ダラツムマブ（抗ＣＤ３８  ＩｇＧ１  ｍＡｂ  Ｄａｒｚａｌｅｘ（登録商標）、ＦＤＡ承認済みであり、Ｊａｎｓｓｅｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙから市販されている）による治療には、非常に高い用量（≧  １６ｍｇ／ｋｇ）および最適な抗腫瘍活性のための集中的なレジメン（毎週８回、隔週８回、その後毎月）を必要とする（Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．１０１（６）：７２１−７２４）。ＲＢＣおよび血小板上のダラツムマブのＣＤ３８への結合により、陽性の抗グロブリン試験（間接クームス試験）をもたらし、最後のダラツムマブ注入後６ヶ月間持続する可能性がある（Ｓｕｌｌｉｖａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｂｌｏｏｄ  １２９（２２）：３０３３−３０３７）。これは、ダラツムマブおよび赤血球に結合するその他の抗体の重要な特性である。ＣＤ３８はＲＢＣで骨髄腫細胞よりも約１０００倍低いレベルで発現するが（ｄｅＷｅｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８６（３）：１８４０−１８４８）、活動性疾患のＭＭ患者の血液中の骨髄腫細胞ごとに約３６，０００個の赤血球が存在する（Ｗｉｔｚｉｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ  ７２（１）：１０８−１１３）。したがって、腫瘍細胞集団と比較して、ＲＢＣ集団によって発現されるＣＤ３８分子は３６倍多い。したがって、ＲＢＣは投与されるかなりの量の抗ＣＤ３８抗体に結合し、その結果、腫瘍細胞に対する治療効果を達成するのに十分なレベルの抗ＣＤ３８抗体を有するために大用量を投与する必要が生じると仮定されている。
【００１１】
したがって、抗ＣＤ３８抗体を使用する治療は現在、治療効果を達成するために必要な大量の抗体のため、このような大量が、皮下投与には好適ではなく、濃縮されたＡｂが製剤化され得る限界があるために、静脈内（ＩＶ）投与に焦点が当てられている。例えば、１２００ｍｇの用量のダラツムマブを２時間以上かけてＩＶ投与することは、再発性および難治性の多発性骨髄腫（ＲＲＭＭ）と新たに診断された多発性骨髄腫（ＮＤＭＭ）の治療に承認されている。Ｅｎｈａｎｃｅ（商標）（吸収を速めるためにハロザイムを含む）との共製剤でなければならない１５ｍＬ中の１８００ｍｇからなるダラツムマブの皮下（ＳＣ）製剤は、毎週８回、隔週８回、その後月１回投与され、現在、ＲＲＭＭの第３相試験中である。
【００１２】
別の抗ＣＤ３８抗体であるイサツキシマブ（Ｓａｎｏｆｉ  Ｇｅｎｚｙｍｅから市販されており、現在第３相臨床試験中）は、１０ｍｇ／ｋｇおよび２０ｍｇ／ｋｇで投与され、これは７０ｋｇの患者あたり７００〜１４００ｍｇに相当し、３．５〜１４ｍＬの予測注入量と一致する。
【００１３】
現在診療所において先行技術の抗ＣＤ３８抗体に必要とされるより高い用量および容量はまた、例えば、ＲＢＣが、それが交換されるよりも速く破壊される病態である溶血性貧血などの深刻な副作用を引き起こす可能性がある。非盲検単群試験では、イサツキシマブが２週間ごとに３ｍｇ／ｋｇ（Ｑ２Ｗ；ｎ＝２３）、１０ｍｇ／ｋｇ  Ｑ２Ｗで２サイクル、続いてＱ４Ｗ（ｎ＝２５）、１０ｍｇ／ｋｇ  Ｑ２Ｗ（ｎ＝２４）、および毎週２０ｍｇ／ｋｇで４用量（１サイクル）、続いてＱ２Ｗ（ｎ＝２５）で、合計９７人の患者に静脈内投与された。最も一般的な重度（グレード３／４）の有害事象は貧血であって、患者の２４％が影響を受けた（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｏｎｃｌｉｖｅ．ｃｏｍ／ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ−ｃｏｖｅｒａｇｅ／ａｓｃｏ−２０１６／ｉｓａｔｕｘｉｍａｂ−ｍｏｎｏｔｈｅｒａｐｙ−ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ−ｆｏｒ−ｈｅａｖｉｌｙ−ｐｒｅｔｒｅａｔｅｄ−ｍｙｅｌｏｍａ，ｔｈｅ  ２０１６  ＡＳＣＯ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ；Ｒｉｃｈｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．３４（ｓｕｐｐｌ）：ａｂｓｔｒ  ８００５を参照されたい）。１つのダラツムマブの試験では、全患者の４５％が貧血を経験し（そのうち１９％がグレード３であった）、４８％の患者が血小板減少症（そのうち１０％がグレード３であり、そのうち８％がグレード４で会った）を経験した（例えば、ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｒｘｌｉｓｔ．ｃｏｍ／ｄａｒｚａｌｅｘ−ｓｉｄｅ−ｅｆｆｅｃｔｓ−ｄｒｕｇ−ｃｅｎｔｅｒ．ｈｔｍ；Ｃｏｓｔｅｌｌｏ（２０１７）Ｔｈｅｒ．Ａｄｖ．Ｈｅｍａｔｏｌ．８（１）：２８−３７を参照されたい）。したがって、イサツキシマブまたはダラツムマブで処置される患者は、これらの生命を脅かす副作用および他の深刻な副作用について注意深く監視する必要がある。
【００１４】
より強力な抗体がより少ない量／容量で所望の薬理学的効果を達成し、それにより、投与の形態をより効果的にすることができるため、患者に大量の抗ＣＤ３８  ｍＡｂを皮下投与する際の身体的課題は、より強力な抗ＣＤ３８抗体の当該技術分野における必要性を例示している。より強力な抗体は、自己免疫疾患および血液癌形態の治療のためなどの、ＣＤ３８発現細胞の枯渇が是認されている患者に、ダラツムマブ（Ｄａｒｚａｌｅｘ）よりも効果的にＳＣ投与されるより少ない量を配合する結果をもたらし得る。少量の薬物を投与することの利点には、ＳＣ投与したダラツムマブの場合は数分、ＩＶ投与したダラツムマブ、イサツキシマブ、ＭＯＲ２０２の場合は数時間かかる投与と比べて、数秒を要する投与、ならびにより少ない注入反応が挙げられる（ダラツムマブのＳＣ投与で見られたように）。患者が輸注センターで費やす必要がある時間を短縮するとは、在宅治療の選択肢、投与の効率の向上、および輸注センターの生産性の向上（施設の効率が向上した結果、患者１人あたりの医療費が削減された）、および輸注センターにアクセスすることなく患者が薬剤を使用できる場合のより広い有用性を可能にすることになる。
【００１５】
ＡＢ７９は、ＣＤ３８に高親和性（Ｋｄ＝３．５ｎＭ）で特異的に結合する完全ヒト免疫グロブリンＩｇＧ１モノクローナル抗体である（その内容全体が、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第８，３６２，２１１号）。ＡＢ７９は、ＣＤ３８を発現する腫瘍細胞の増殖を、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を介した細胞枯渇によって阻害する。ＡＢ７９は、健康な対象と全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）患者とから分離された血液中の形質細胞と形質芽細胞のレベルも低下させる。ＳＬＥの場合、短命および長命の形質細胞を含む形質細胞集団のうちの８０％が低下される。さらに、ＶＨ４−３４  ９Ｇ４＋抗体（７０％低下）、抗Ｒｏ抗体（７０％低下）、および抗ｄｓＤＮＡ抗体（８０％低下）など、病原性自己抗体を産生する細胞の数も低下された。抗ヒトＣＤ３８  ｍＡｂのダラツムマブはまた、インビトロで用量依存的にＳＬＥおよびＲＡ患者からのサンプル中でＣＤ３８を発現する形質芽球および形質細胞を枯渇させる。ダラツムマブとは対照的に、ＡＢ７９はカニクイザルによって発現されるＣＤ３８と交差反応し、ＣＤ３８を発現する細胞のレベルを低下させる場合に、自己免疫疾患の非ヒト霊長類モデルにおける炎症および組織の損傷に影響するかどうかを判定するためのまたとない機会を提供する。健康なカニクイザルでは、リンパ球、Ｂ、Ｔ、およびＮＫ細胞の枯渇効率は、ＣＤ３８発現レベルおよびＡＢ７９用量レベルと正の相関があった（ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０４２１２８号、米国特許第８，３６２，２１１号）。
【００１６】
診療所における多くのＣＤ３８抗体が、低用量または低容量の皮下投与には適さず、危険な副作用を有するため、当技術分野では、自己免疫疾患および血液癌形態などの、ＣＤ３８への結合が示される疾患を治療するために、より安全で、より便利で、かつより効果的な抗体製剤へ必要性が残っている。
【発明の概要】
【００１７】
本明細書で提供されるのは、例えば、自己免疫疾患および血液癌などのＣＤ３８への結合が示される疾患を治療するための方法であり、単離された抗ＣＤ３８抗体を予想外に低い用量および／または少量で皮下投与することを含む。
【００１８】
一態様では、本発明は、対象においてＣＤ３８への結合が示される疾患を治療する方法を提供し、この方法は、ＣＤ３８への結合が示される疾患を有する対象に、疾患を治療するのに十分な、治療有効量の、単離されたヒト抗ＣＤ３８抗体を皮下投与することを含み、抗ＣＤ３８抗体は、配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、および配列番号５を有するＣＤＲ３を含む可変重（ＶＨ）鎖領域と、配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、および配列番号８を有するＣＤＲ３を含む可変軽（ＶＬ）鎖領域と、を含む。
【００１９】
別の態様では、本発明は、対象においてＣＤ３８への結合が示される疾患を治療する方法を提供し、この方法は、ＣＤ３８への結合が示される疾患を有する対象に、疾患を治療するのに十分な、治療有効量の、単離されたヒト抗ＣＤ３８抗体を皮下投与することを含むみ、抗ＣＤ３８抗体は、配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、および配列番号５を有するＣＤＲ３を含むＶＨ鎖領域と、配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、および配列番号８を有するＣＤＲ３を含むＶＬ鎖領域と、を含み、抗ＣＤ３８抗体は、３ミリリットル以下の容量で投与される。
【００２０】
別の態様では、本発明は、対象においてＣＤ３８への結合が示される疾患を治療する方法を提供し、この方法は、ＣＤ３８への結合が示される疾患を有する対象に、疾患を治療するのに十分な、治療有効量の、単離されたヒト抗ＣＤ３８抗体を皮下投与することを含むみ、抗ＣＤ３８抗体は、配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、および配列番号５を有するＣＤＲ３を含むＶＨ鎖領域と、配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、および配列番号８を有するＣＤＲ３を含むＶＬ鎖領域と、を含み、抗ＣＤ３８抗体は、体重１キログラム当たり０．０３〜０．６ミリグラムの用量で投与される。
【００２１】
一態様では、抗ＣＤ３８抗体は、溶血性貧血または血小板減少症を引き起こさない。
【００２２】
一態様では、抗ＣＤ３８抗体の投与は、貧血、溶血性貧血、血小板減少症、疲労、輸注関連反応（ＩＲＲ）、白血球減少症、およびリンパ球減少症からなる群から選択される１つ以上の治療中に発生した有害事象（ＴＥＡＥ）のグレード３または４の、６０％未満、５０％未満、４０％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、または５％未満の発生率をもたらす。
【００２３】
一態様では、抗ＣＤ３８抗体は、ＲＢＣの１０％未満、２０％未満、３０％未満、４０％未満、５０％未満の枯渇をもたらす。
【００２４】
一態様では、抗ＣＤ３８抗体は、血小板の１０％未満、２０％未満、３０％未満、４０％未満、５０％未満の枯渇をもたらす。
【００２５】
一態様では、疾患は、自己免疫疾患および癌からなる群から選択される。
【００２６】
一態様では、自己免疫疾患は、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、関節リウマチ（ＲＡ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、潰瘍性大腸炎、重症筋無力症（ＭＧ）、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）、免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、抗リン脂質症候群（ＡＰＳ）、尋常性天疱瘡（ＰＶ）、葉状天疱瘡（ＰＦ）、抗ＮＭＤＡＲ脳炎（ＮＭＤＲ）、自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）、グレーブス病、膜性腎症、シェーグレン症候群（ＳＳ）、ＡＮＣＡ血管炎、表皮水疱症（ＥＢＡ）、類天疱瘡（ＢＰ）、橋本甲状腺炎、強皮症、ＩｇＧ４関連疾患、および移植片対宿主病からなる群から選択される。（Ｙｉｌｍａｚ  Ｖ，ｅｔ．ａｌ．，Ａｎｎ  Ｃｌｉｎ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｎｅｕｒｏｌ．２０１８  Ｓｅｐ  ２２；５（１１）：１４０８−１４１４；Ｃｈｉｈａｒａ  Ｎ，Ａｒａｎａｍｉ  Ｔ，Ｓａｔｏ  Ｗ，Ｍｉｙａｚａｋｉ  Ｙ，Ｍｉｙａｋｅ  Ｓ，Ｏｋａｍｏｔｏ  Ｔ，Ｏｇａｗａ  Ｍ，Ｔｏｄａ  Ｔ，Ｙａｍａｍｕｒａ  Ｔ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．２０１１  Ｍａｒ  １；１０８（９）：３７０１−６；Ｂｅｈｚａｄ  ＭＭ，ｅｔ  ａｌ．，ＡＰＭＩＳ．２０１８  Ｊｕｎ；１２６（６）：５２３−５３２；またはＡｌｖａｒｅｚ−Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ  Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｓｃｉ．２０１８  Ｆｅｂ  １６；１９（２）。
【００２７】
一態様では、血液癌は、多発性骨髄腫、ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、慢性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、形質細胞性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、およびバーキットリンパ腫からなる群から選択される。
【００２８】
一態様では、血液癌は、多発性骨髄腫である。ある特定の実施形態では、多発性骨髄腫は、ＲＲＭＭおよびＥＤＭＭからなる群から選択される。
【００２９】
一態様では、ＶＨ鎖領域は、配列番号９のアミノ酸配列を有し、ＶＬ鎖領域は、配列番号１０のアミノ酸配列を有する。
【００３０】
一態様では、抗ＣＤ３８抗体は、配列番号１１の重鎖アミノ酸配列と、配列番号１２の軽鎖アミノ酸配列と、を含む。
【００３１】
一態様では、治療有効量は、体重１キログラム当たり０．０３〜０．６ミリグラムの用量である。
【００３２】
一態様では、治療有効量は、３ミリリットル以下の容量である。
【００３３】
一態様では、治療有効量は、２ミリリットル以下の容量である。
【００３４】
一態様では、治療有効量は、１ミリリットル以下の容量である。
【００３５】
一態様では、ヒト抗ＣＤ３８抗体は、薬学的に許容される組成物の形態で投与される。
【００３６】
別の態様では、本発明は、対象において血液癌を治療する方法を提供し、この方法は、血液癌を有する対象に、血液癌を治療するのに十分な、治療有効量の、単離されたヒト抗ＣＤ３８抗体を皮下投与することを含むみ、抗ＣＤ３８抗体は、配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、および配列番号５を有するＣＤＲ３を含むＶＨ鎖領域と、配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、および配列番号８を有するＣＤＲ３を含む可変ＶＬ鎖領域と、を含む。
【００３７】
別の態様では、本発明は、対象において血液癌を治療する方法を提供し、この方法は、血液癌を有する対象に、血液癌を治療するのに十分な、治療有効量の、単離されたヒト抗ＣＤ３８抗体を皮下投与することを含むみ、抗ＣＤ３８抗体は、配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、および配列番号５を有するＣＤＲ３を含むＶＨ鎖領域と、配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、および配列番号８を有するＣＤＲ３を含むＶＬ鎖領域と、を含み、抗ＣＤ３８抗体は、３ミリリットル以下、２ｍＬ以下、または１ｍＬ以下の容量で投与される。
【００３８】
別の態様では、本発明は、対象において血液癌を治療する方法を提供し、この方法は、血液癌を有する対象に、血液癌を治療するのに十分な、治療有効量の、単離されたヒト抗ＣＤ３８抗体を皮下投与することを含むみ、抗ＣＤ３８抗体は、配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、および配列番号５を有するＣＤＲ３を含むＶＨ鎖領域と、配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、および配列番号８を有するＣＤＲ３を含むＶＬ鎖領域と、を含み、抗ＣＤ３８抗体は、体重１キログラム当たり０．０３〜０．６ミリグラムの用量で投与される。
【００３９】
一態様では、抗ＣＤ３８抗体は、溶血性貧血または血小板減少症を引き起こさない。
【００４０】
一態様では、抗ＣＤ３８抗体の投与は、６０％未満、５０％未満、４０％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、または５％未満の、溶血性貧血を含む貧血、血小板減少症、疲労、輸注関連反応（ＩＲＲ）、白血球減少症、およびリンパ球減少症からなる群から選択される１つ以上のＴＥＡＥのグレード３または４の発生率をもたらす。
【００４１】
一態様では、抗ＣＤ３８抗体は、ＲＢＣの１０％未満、２０％未満、３０％未満、４０％未満、または５０％未満の枯渇をもたらす。
【００４２】
一態様では、抗ＣＤ３８抗体は、血小板の１０％未満、２０％未満、３０％未満、４０％未満、または５０％未満の枯渇をもたらす。
【００４３】
一態様では、血液癌は、多発性骨髄腫、慢性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、形質細胞性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、およびバーキットリンパ腫からなる群から選択される。
【００４４】
一態様では、血液癌は、多発性骨髄腫である。ある特定の実施形態では、多発性骨髄腫は、ＲＲＭＭおよびＥＤＭＭからなる群から選択される。
【００４５】
一態様では、ＶＨ鎖領域は、配列番号９のアミノ酸配列を有し、ＶＬ鎖領域は、配列番号１０のアミノ酸配列を有する。
【００４６】
一態様では、抗ＣＤ３８抗体は、配列番号１１の重鎖アミノ酸配列と、配列番号１２の軽鎖アミノ酸配列と、を含む。
【００４７】
一態様では、治療有効量は、体重１キログラム当たり０．０３〜０．６ミリグラムの用量である。
【００４８】
一態様では、治療有効量は、３ミリリットル以下の容量である。
【００４９】
一態様では、治療有効量は、２ミリリットル以下の容量である。
【００５０】
一態様では、治療有効量は、１ミリリットル以下の容量である。
【００５１】
一態様では、ヒト抗ＣＤ３８抗体は、薬学的に許容される組成物の形態で投与される。
【００５２】
別の態様では、本発明は、配列番号９の重鎖可変領域アミノ酸配列と、配列番号１０の軽鎖可変領域アミノ酸配列と、を含む単離された抗体を含む単位剤形を提供し、単離された抗体はＣＤ３８に結合し、単位剤形は、体重１キログラムあたり０．０３〜０．６ミリグラムの用量での抗体の皮下投与用に製剤化される。
【００５３】
一態様では、重鎖は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。
【００５４】
一態様では、単位剤形は、３ミリリットル以下の容量である。
【００５５】
一態様では、単位剤形は、２ミリリットル以下の容量である。
【００５６】
一態様では、単位剤形は、１ミリリットル以下の容量である。
【００５７】
一態様では、単位剤形は、多発性骨髄腫、慢性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、形質細胞性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、およびバーキットリンパ腫からなる群から選択される血液癌の治療における抗体の皮下投与用に製剤化される。
【００５８】
一態様では、血液癌は、多発性骨髄腫である。ある特定の実施形態では、多発性骨髄腫は、ＲＲＭＭおよびＥＤＭＭからなる群から選択される。
【００５９】
一態様では、抗ＣＤ３８抗体は、溶血性貧血または血小板減少症を引き起こさない。
【００６０】
一態様では、抗ＣＤ３８抗体は、ＲＢＣの１０％未満、２０％未満、３０％未満、４０％未満、または５０％未満の枯渇をもたらす。
【００６１】
一態様では、抗ＣＤ３８抗体は、血小板の１０％未満、２０％未満、３０％未満、４０％未満、または５０％未満の枯渇をもたらす。
【００６２】
これらおよび他の実施形態、特徴、および潜在的な利点は、以下の説明および図面を参照して明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００６３】
本発明の目的および特徴は、以下に記載される図面を参照することによって、よりよく理解され得る。
【図１】表２に記載されているＳＣ投与群のカニクイザル（ｃｙｎｏ）ＰＫデータを示している。抗薬物抗体（ＡＤＡ）は、検証済みの定性的電気化学発光（ＥＣＬ）アッセイで検出された。発生率は時間とともに増加し、ＰＫが約１０００の特定の閾値力価（約ｌｏｇ（７））に達したときに影響を受けた。
【図２】ＡＢ７９のサイノ（ｃｙｎｏ）のＰＫデータおよびＰＫモデルを示している。パネルＡおよびＢは、８匹のサルの試験からのＩＶデータの生のＰＫデータを示しており、パネルＡは、初回投与後の最初の７日間であり、パネルＢは、全観察期間である。ＳＣデータは省略された（ＳＣデータについては図１を参照されたい）。パネルＣは、青いボックスでマークされた標的介在性薬物動態（ＴＭＤＤ）を含む最終的なＰＫモデル構造を描写している。ＶＣは、ＡＢ７９濃度が観察される中央区画の容量を示している（Ｃｏｎｃでマークされている）。ＶＰは、周辺区画の容積を示している。Ｒｔｏｔａｌは、結合した抗体および非結合受容体ＣＤ３８の区画を表している。ＫＳＹＮおよびＫＤＥＧは、受容体の産生および分解速度定数を示し、ＫＩＮＴは、内在化速度定数（複合体消失速度定数）を示している。ＫＳＳは、定常状態定数であり、ＫＳＳ＝（ＫＯＦＦ＋ＫＩＮＴ）／ＫＯＮとして定義され、ここで、ＫＯＦＦは解離速度定数であり、ＫＯＮは、結合速度定数である。パネルＤ〜Ｆは、ＴＭＤＤ構成要素なしの線形２区画モデル予測（中央値、９５％予測区間）のオーバーレイと最低３投与量の観察データ（試験８）を示している。パネルＤ、Ｅ、Ｆ間の時間スケールが異なることに注意していただきたい。
【図３】１３週目のカニクイザルの毒性試験におけるＡＤＡ効果およびＰＫを示している。評価は、最終的な集団ＰＫモデルに言及する（図２、表２）。投与量および投与経路によって層別化された以下の適合度（ＧＯＦ）プロットが提示されている（Ｋｅｉｚｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）ＣＰＴ  Ｐｈａｒｍａｃｏｍｅｔｒｉｃｓ  Ｓｙｓｔ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２：ｅ５０）：（１）条件付き重み付き残差（ＣＷＲＥＳ）対時間；（２）観察された濃度対集団モデル予測値；（３）ＣＷＲＥＳ対集団モデル予測値；および（４）観察された濃度対個々のモデル予測値。
【図４】投与量および投与経路（ＩＶ−十字形、ＳＣ−三角形）によって層別化された最終集団ＰＫモデルについてのＧＯＦプロットを示している。図４Ａは、全体を示し、図４Ｂは、０．０３ｍｇ／ｋｇの投与量であり、図４Ｃは、０．１ｍｇ／ｋｇの投与量であり、図４Ｄは、０．３ｍｇ／ｋｇの投与量であり、図４Ｅは、１．０ｍｇ／ｋｇの投与量であり、図４Ｆは、２．０ｍｇ／ｋｇの投与量であり、図４Ｇは、３．０ｍｇ／ｋｇの投与量であり、図４Ｈは、３０ｍｇ／ｋｇの投与量であり、図４Ｉは、８０ｍｇ／ｋｇの投与量であり、および図４Ｊは、１００ｍｇ／ｋｇの投与量である。
【図５】ヒトおよびサルのＮＫ、Ｂ、およびＴ細胞の表面におけるＣＤ３８の発現の比較を示している。フローサイトメトリー測定は標準化され、シグナルは可溶性蛍光分子等量（ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｏｆ  ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ）（ＭＯＥＦ）で報告される。ヒトおよびサルの血液リンパ球は、同様のレベルのＡＢ７９に結合する。サルＮＫ細胞（ＣＤ３−、ＣＤ１５９ａ＋）、Ｂ細胞（ＣＤ３−、ＣＤ２０＋）、Ｔ細胞（ＣＤ３＋）およびヒトＮＫ細胞（ＣＤ３−、ＣＤ１６／ＣＤ５６＋）、Ｂ細胞（ＣＤ３−、ＣＤ１９＋）ならびにＴ細胞（ＣＤ３＋）のＣＤ３８発現レベルの直接比較を、フローサイトメトリーで評価した。各細胞集団のＡＢ７９染色の蛍光強度の中央値（ＭＦＩ）は、Ｒａｉｎｂｏｗ  Ｂｅａｄｓ（Ｓｐｈｅｒｏｔｅｃｈ；Ｌａｋｅ  Ｆｏｒｅｓｔ，ＩＬ）を使用して作成された標準曲線を用いて、ＭＯＥＦ単位に変換された。示されているデータは、各種の３つ個体からのものであり、各細胞型についてのＭＯＥＦ±ＳＤを示している。血液リンパ球間でのＣＤ３８発現には違いがあり、ＮＫ細胞＞Ｂ細胞＞Ｔ細胞へのＡＢ７９の結合のレベルが高くなっている。ＡＢ７９結合のパターンは、サルの血液細胞で類似しているが、ＡＢ７９結合／ＣＤ３８発現のレベルはより低い。
【図６】図５に示した試験からのプラセボ処置動物のＴ細胞、Ｂ細胞、およびＮＫ細胞数の個体間および個体内変動を示している。図６Ａは、ＮＫ細胞であり、図６Ｂは、Ｂ細胞であり、および図６Ｃは、Ｔ細胞である。
【図７】試験（上段）または性別（下段）によって層別化された、投与前のＮＫ、Ｂ、およびＴ細胞数（細胞／μＬ）を示している。図７Ａは、試験によるＮＫ細胞であり、図７Ｂは、試験によるＢ細胞であり、図７Ｃは、非県によるＴ細胞であり、図７Ｄは、男性／女性によるＮＫ細胞であり、図７Ｅは、男性／女性によるＢ細胞であり、および図７Ｆは、男性／女性によるＴ細胞である。
【図８】ＡＢ７９依存性ＮＫ細胞、Ｂ細胞、およびＴ細胞の枯渇を示している。グラフは、ＡＢ７９の初回投与による治療後、最初の７日以内に発生した変化に焦点を当てている。毎週または隔週の投薬スケジュールで、単回および複数回投与の試験からのデータをプールすることが可能であった。図８Ａは、ＮＫ細胞の最下層細胞枯渇であり、図８Ｂは、ＮＫ細胞の初回投与後１週間であり、図８Ｃは、ＮＫ細胞の投与群当たりの平均プロファイルであり、図８Ｄは、Ｂ細胞の最下層細胞枯渇であり、図８Ｅは、Ｂ細胞の初回投与後１週間であり、図８Ｆは、Ｂ細胞の投与群当たりの平均プロファイルであり、図８Ｇは、Ｔ細胞の最下層細胞枯渇であり、図８Ｈは、Ｔ細胞の初回投与後１週間であり、および図８Ｉは、Ｔ細胞の用量群当たりの平均プロファイルである。グラフＡ〜Ｃは、個々の最小細胞数（すなわち、最大ＰＤ効果）、最初の投与から７日後の個々の細胞数、およびＮＫ細胞の用量当たりの平均細胞枯渇プロファイルおよびＰＫ−ＰＤモデル構造をそれぞれ示している。グラフＤ〜Ｆは、Ｂ細胞についての同じ情報を示し、グラフＧ〜Ｉは、Ｔ細胞についての同じ情報を示している。
【図９】試験７（表２）投与後２日目のＡＢ７９処置のＲＢＣに対する効果（図９Ａ）および投与後初日における総リンパ球数（図９Ｂ）を示している。
【図１０】ＡＢ７９のシミュレーションされたヒトＰＫおよびＮＫ細胞、Ｂ細胞およびＴ細胞枯渇プロファイルを示している。スケーリングされたサルのＰＫおよびＰＫ−ＰＤモデルに基づいて、５つの単回ＩＶならびにＳＣ投与ＰＫおよび細胞枯渇プロファイルがシミュレーションされた（０．０００３〜１ｍｇ／ｋｇ）。左側のプロットはＩＶ投与後のデータを示し、右側のプロットはＳＣ投与後のデータを示している。プロットの第１の列は、ＰＫプロファイルを表示している。０．０５μｇ／ｍＬの定量下限（ＬＬＯＱ）は、水平の破線で示されている。最低用量のＰＫは、ノイズによって完全に重なっており、０．０３ｍｇ／ｋｇの用量でのみ、ＰＫはＬＬＯＱを超えるレベルに達した。図９Ａは、ＩＶ経由のＡＢ７９であり、図９Ｂは、ＳＣ経由のＡＢ７９であり、図９Ｃは、ＮＫ細胞におけるＩＶ経由であり、図９Ｄは、ＮＫ細胞におけるＳＣ経由であり、図９ＥはＢ細胞におけるＩＶ経由であり、図９Ｆは、Ｂ細胞におけるＳＣ経由であり、図９Ｇは、Ｔ細胞におけるＩＶ経由であり、および図９Ｈは、Ｔ細胞におけるＳＣ経由である。
【図１１】健康なボランティアにおけるＡＢ７９単回投与増量毒性試験についての計画を示している。７４人の対象の合計６つのＩＶコホートおよび４つのＳＣコホートが無作為化され、ＡＢ７９の単回投与を受けた。広範な盲検安全性、ＰＫ、およびＰＤデータは、用量増加の前に各コホートの後で見直された。中止基準には、健康なボランティアの潜在的な免疫抑制を回避するための標的細胞の枯渇が含まれていた。各対象は、投与後９２日間追跡調査された。
【図１２】投与経路で階層化された（ＩＶ−赤、ＳＣ−青）ＰＫ−ＰＤモデルのＧＯＦプロットを示し、図１２ＡはＮＫ細胞であり、図１２Ｂは、Ｂ細胞であり、および図１２Ｃは、Ｔ細胞である。
【図１３】ＡＢ７９が、サルリンパ球の枯渇を媒介することを示している。フローサイトメトリーを使用してＦｌｏｗ−Ｃｏｕｎｔ商標フルオロスフェア（Ｂｅｃｋｍａｎ−Ｃｏｕｌｔｅｒ）で定量化したとき、ＡＢ７９の単回ＩＶ投与後の雌カニクイザル（ｎ＝４／投与群）において、ＡＢ７９は、用量依存的に血液ＮＫ細胞＞Ｂ細胞＞Ｔ細胞で枯渇させた。サンプルを、前処理（１週目）、１日目：投与前、１０、１５、２２、２９、３６、４３、５０、および５７日目の投与後、１５、３０分、１、４、８、２４、４８、９６、および１６８時間目に採取した。明確にするために、２週間のデータのみが表示されている。平均細胞数の値は、各時点で計算され、ベースライン数に対する％を計算するために使用された。図１３Ａは、Ｔ細胞であり、図１３Ｂは、Ｂ細胞であり、および図１３Ｃは、ＮＫ細胞である。
【図１４】ヒト破傷風トキソイド（ＴＴｄ）の想起反応が、ＡＢ７９治療により減少することを示している。ＣＢ１７／ＳＣＩＤマウスを抗アシアロＧＭ１で処置してＮＫ細胞を除去し、２５×１０６のヒト末梢血リンパ球を投与した。７〜１０日後、血清サンプルを採取してヒトＩｇを評価し、Ｉｇのレベルを無作為化の基準とした。マウスにＴＴｄを与えて想起応答を誘発させ、指示された抗体で週２回、１０日間処置した。最後の治療から３日後、血清を採取し、抗ＴＴｄ抗体について分析した。ＡＢ７９は、リツキサン（Ｒｔｘ）（アイソタイプ（Ｉｓｏ）、ＲｔｘおよびＡＢ７９は全て１０ｍｇ／ｋｇ）と同程度に、用量依存的にＴＴｄ想起応答を抑制した。
【図１５】ＡＢ７９が、サイトカイン誘導を誘発しないことを示している。ＡＢ７９は、ＩｇＧ１アイソタイプコントロールと比較して、２４時間のインキュベーション後に４人の異なる対象から採取されたＰＢＭＣ中のＩＬ−６レベルを上昇させなかった。陽性対照のＰＨＡおよび抗ＣＤ３は、全ての対象においてサイトカインレベルを上昇させ、細胞がＩＬ−６を産生する能力を有することを裏付けた。ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγおよびＴＮＦαを試験すると、４８時間刺激されたＰＢＭＣで同様の結果が見られた（データは図示せず）。バーは各対象について次のとおりである：（ｉ）Ａｂなし、（ｉｉ）アイソタイプ対照、（ｉｉｉ）ＡＢ７９、（ｉｖ）抗ＣＤ３、（ｖ）ＰＨＡ。各値は、インキュベーション後２４時間で測定された３連のウェルの平均±ＳＤである。
【図１６Ａ】図１６Ｂのドライバインド、乾式結合、湿式結合、および可溶性の実験の設定を示している（Ｓｔｅｂｂｉｎｇｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７９：３３２５−３３３１から修正）。
【図１６Ｂ】ＡＢ７９が、アゴニスト活性を有さないことを示している。ＡＢ７９は、溶液でウェルに結合させる（湿式結合）か、またはＰＢＭＣに直接添加する（可溶性）と対比して、ＡＢ７９が溶液でウェルに添加されて液体を蒸発させると（乾式結合）、非常に濃縮された。ＡＢ７９は、２４時間後に試験されたいずれの条件下でも、ＩＬ−６もしくはＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγ、またはＴＮＦαを刺激しなかった。ＩＬ−８はＰＢＭＣによって構成的に産生され、いかなる処置によっても変化しなかった（データは図示せず）。各測定値は、単一の対象からのインキュベーション後２４時間に測定された３連のウェルの平均値である。
【図１７】ＡＢ７９のヒトＲＢＣへの結合の評価を示している。この試験では、３０人のヒトボランティアの全血におけるＡＢ７９（塗りつぶしヒストグラム）またはアイソタイプ対照（網掛けヒストグラム）のＲＢＣへの結合は観察されなかった。３０人のヒトボランティアのうちの１５人からの代表的なデータが示されている。
【図１８】ＡＢ７９のカニクイザルＲＢＣへの結合の評価を示している。この試験では、３０匹のカニクイザルの全血におけるＡＢ７９（塗りつぶしヒストグラム）またはアイソタイプ対照（網掛けヒストグラム）のＲＢＣへの結合は観察されなかった。３０匹のサイノのうちの１５匹からの代表的なデータが示されている。
【図１９】ＡＢ７９のヒト血小板への結合の評価を示している。この試験では、３０人のヒトボランティアの全血におけるＡＢ７９（塗りつぶしヒストグラム）またはアイソタイプ対照（網掛けヒストグラム）のＣＤ６１＋ゲートをかけた血小板への結合は観察されなかった。３０人のヒトボランティアのうちの１５人からの代表的なデータが示されている。
【図２０】ＡＢ７９のカニクイザル血小板への結合の評価を示している。この試験では、３０匹のカニクイザルの全血におけるＡＢ７９（塗りつぶしヒストグラム）またはアイソタイプ対照（網掛けヒストグラム）のＣＤ６１＋ゲートをかけた血小板への結合は観察されなかった。３０匹のサイノのうちの１５匹からの代表的なデータが示されている。
【図２１】ＡＢ７９のカニクイザルＣＤ４５＋リンパ球への結合の評価を示している。溶解していないカニクイザルの全血におけるＡＢ７９のＣＤ４５＋リンパ球への結合。ＣＤ４５＋リンパ球にゲートをかけ、次いで、ＡＢ７９の結合（塗りつぶしヒストグラム）またはアイソタイプ対照（網掛けヒストグラム）の結合を評価した。縦の破線の右側の細胞の割合に示されているように、ＡＢ７９結合がリンパ球のサブセットで検出された。リンパ球へのアイソタイプ対照の結合はほとんどまたはまったく観察されなかった。
【図２２】（Ａ）ＲＢＣ同定と（Ｂ）ヒトＲＢＣのリンパ球同定のゲーティング階層を示している。
【図２３】ビオチン−ストレプトアビジン−ＢＶ４２１  ＡＢ７９およびビオチン−ストレプトアビジン−ＢＶ４２１ダラツムマブについての抗体結合能を示している。バーは、（ｉ）陰性ビーズ、（ｉｉ）Ｓａｖ−Ｂｖ４２１のみの陰性対照、（ｉｉｉ）ＡＢ７９−ビオチン／Ｓａｖ−ＢＶ４２１（５μｇ／ｍｌ）、（ｉｖ）ダラツムマブ−ビオチン／Ｓａｖ−ＢＶ４２１（５μｇ／ｍｌ）、（ｖ）ＡＢ７９−ビオチン／Ｓａｖ−ＢＶ４２１（１０μｇ／ｍｌ）、（ｖｉ）ダラツムマブ−ビオチン／Ｓａｖ−ＢＶ４２１（１０μｇ／ｍｌ）を表す。ＭＦＩ＝蛍光中央値、Ｓａｖ＝ストレプトアビジン。２７５の光電子増倍管（ＰＭＴ）電圧を使用した。
【図２４】ビオチン−ストレプトアビジン−ＢＶ４２１  ＡＢ７９およびビオチン−ストレプトアビジン−ＢＶ４２１ダラツムマブのＣＤ３８＋リンパ球への結合を示している。バーは、（ｉ）ＡＢ７９−ビオチン−ｓｔｒｅｐ−ＢＶ４２１（０μｇ／ｍｌ）、（ｉｉ）非標識ＡＢ７９およびＡＢ７９−ビオチン−ｓｔｒｅｐ−ＢＶ４２１（１０μｇ／ｍｌ）、（ＩＩＩ）ＡＢ７９−ビオチン−ｓｔｒｅｐ−ＢＶ４２１（１０μｇ／ｍｌ）、（ｉｖ）ダラツムマブ−ビオチン−ｓｔｒｅｐ−ＢＶ４２１（０μｇ／ｍｌ）、（ｖ）非標識ダラツムマブおよびダラツムマブ−ビオチン−ｓｔｒｅｐ−ＢＶ４２１（１０μｇ／ｍｌ）、（ｖｉ）ダラツムマブ−ビオチン−ｓｔｒｅｐ−ＢＶ４２１（１０μｇ／ｍｌ）を表す。縦線は標準偏差を表し、ｎ＝４人のドナー（非標識状態では３人のドナー）。ＭＦＩ＝蛍光中央値。
【図２５】ＡＢ７９およびダラツムマブのヒトＲＢＣへの結合を示す（個々のドナーの陽性結果％）。４人の健康なボランティアからの末梢血を、ビオチン−ストレプトアビジン−ＢＶ４２１  ＡＢ７９（０、０．１、１０、１００μｇ／ｍｌ）またはビオチン−ストレプトアビジン−ＢＶ４２１ダラツムマブ（０、０．１、１、１０、１００μｇ／ｍｌ）と、非標識ＡＢ７９（５００μｇ／ｍｌ）または非標識ダラツムマブ（５００μｇ／ｍｌ）の存在下、または非存在下で穏やかな振蕩器上、ＲＴで３時間インキュベートした。キー：
【数１】
2021510737.tif 000003
ＡＢ７９−ビオチン−ｓｔｒｅｐ−ＢＶ４２１、
【数２】
2021510737.tif 000004
冷ＡＢ７９およびＡＢ７９−ビオチン−ｓｔｒｅｐ−ＢＶ４２１、
【数３】
2021510737.tif 000005
ダラツムマブ−ビオチン−ｓｔｒｅｐ−ＢＶ４２１、
【数４】
2021510737.tif 000006
冷ダラツムマブおよびダラツムマブ−ビオチン−ストレプトアビジンＢＶ４２１。
【図２６】ＡＢ７９およびダラツムマブのヒトＲＢＣへの結合を示す（陽性データ％の概要）。４人の健康なボランティアからの末梢血を、ビオチン−ストレプトアビジン−ＢＶ４２１  ＡＢ７９（０、０．１、１０、１００μｇ／ｍｌ）またはビオチン−ストレプトアビジン−ＢＶ４２１ダラツムマブ（０、０．１、１、１０、１００μｇ／ｍｌ）と、非標識ＡＢ７９（５００μｇ／ｍｌ）または非標識ダラツムマブ（５００μｇ／ｍｌ）の存在下、または非存在下で穏やかな振蕩器上、ＲＴで３時間インキュベートした。キー：
【数５】
2021510737.tif 000007
ＡＢ７９−ビオチン−ｓｔｒｅｐ−ＢＶ４２１、
【数６】
2021510737.tif 000008
冷ＡＢ７９およびＡＢ７９−ビオチン−ｓｔｒｅｐ−ＢＶ４２１、
【数７】
2021510737.tif 000009
ダラツムマブ−ビオチン−ｓｔｒｅｐ−ＢＶ４２１、
【数８】
2021510737.tif 000010
冷ダラツムマブおよびダラツムマブ−ビオチン−ｓｔｒｅｐ−ＢＶ４２１。
【図２７】ＡＢ７９およびダラツムマブのヒトＲＢＣへの結合を示す（個々のドナーの蛍光中央値）。４人の健康なボランティアからの末梢血を、ビオチン−ストレプトアビジン−ＢＶ４２１  ＡＢ７９（０、０．１、１０、１００μｇ／ｍｌ）またはビオチン−ストレプトアビジン−ＢＶ４２１ダラツムマブ（０、０．１、１、１０、１００μｇ／ｍｌ）と、非標識ＡＢ７９（５００μｇ／ｍｌ）または非標識ダラツムマブ（５００μｇ／ｍｌ）の存在下、または非存在下で穏やかな振蕩器上、ＲＴで３時間インキュベートした。キー：
【数９】
2021510737.tif 000011
ＡＢ７９−ビオチン−ｓｔｒｅｐ−ＢＶ４２１、
【数１０】
2021510737.tif 000012
冷ＡＢ７９およびＡＢ７９−ビオチン−ｓｔｒｅｐ−ＢＶ４２１、
【数１１】
2021510737.tif 000013
ダラツムマブ−ビオチン−ｓｔｒｅｐ−ＢＶ４２１、
【数１２】
2021510737.tif 000014
冷ダラツムマブおよびダラツムマブ−ビオチン−ｓｔｒｅｐ−ＢＶ４２１。
【図２８】ＡＢ７９およびダラツムマブのヒトＲＢＣへの結合を示す（蛍光中央値の概要）。４人の健康なボランティアからの末梢血を、ビオチン−ストレプトアビジン−ＢＶ４２１  ＡＢ７９（０、０．１、１０、１００μｇ／ｍｌ）またはビオチン−ストレプトアビジン−ＢＶ４２１ダラツムマブ（０、０．１、１、１０、１００μｇ／ｍｌ）と、非標識ＡＢ７９（５００μｇ／ｍｌ）または非標識ダラツムマブ（５００μｇ／ｍｌ）の存在下、または非存在下で穏やかな振蕩器上、ＲＴで３時間インキュベートした。キー：
【数１３】
2021510737.tif 000015
ＡＢ７９−ビオチン−ｓｔｒｅｐ−ＢＶ４２１、
【数１４】
2021510737.tif 000016
冷ＡＢ７９およびＡＢ７９−ビオチン−ｓｔｒｅｐ−ＢＶ４２１、
【数１５】
2021510737.tif 000017
ダラツムマブ−ビオチン−ｓｔｒｅｐ−ＢＶ４２１、
【数１６】
2021510737.tif 000018
冷ダラツムマブおよびダラツムマブ−ビオチン−ｓｔｒｅｐ−ＢＶ４２１。
【図２９】以下によるヒト赤血球の溶血（正規化％）を示す：
【数１７】
2021510737.tif 000019
ヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照、  
【数１８】
2021510737.tif 000020
ダラツムマブ、  
【数１９】
2021510737.tif 000021
ＡＢ７９、および
【数２０】
2021510737.tif 000022
サポニン対照（μｇ／ｍｌ単位）。各記号は、ヒト（ｎ＝５人のドナー）の３回の反復実験の平均値を表す。
【図３０】以下によるカニクイザル赤血球の溶血（正規化％）を示す：
【数２１】
2021510737.tif 000023
ヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照、
【数２２】
2021510737.tif 000024
ダラツムマブ、
【数２３】
2021510737.tif 000025
ＡＢ７９、および
【数２４】
2021510737.tif 000026
サポニン対照（μｇ／ｍｌ単位）。各記号は、サイノ（ｎ＝５匹のドナー）の３回の反復実験の平均値を表す。
【図３１】（Ａ）ＡＢ７９でＩＶ注入したサルからの血清中のＡＢ７９の平均濃度、およびＡＢ７９のＩＶ注入後のサルの末梢血における（Ｂ）ＣＤ２０−／ＣＤ３−／ＣＤ１６＋ＮＫ細胞、（Ｃ）ＣＤ３−／ＣＤ２０＋Ｂ細胞、および（Ｄ）ＣＤ３＋Ｔ細胞の平均絶対細胞数における投与前のベースラインからの変化率を示す。ビヒクル対照（白四角）、０．１ｍｇ／ｋｇ（白ひし形）、０．３ｍｇ／ｋｇ（白三角）、１．０ｍｇ／ｋｇ（真円）、３．０ｍｇ／ｋｇ（黒四角）、３０．０ｍｇ／ｋｇ（黒ひし形））および８０．０ｍｇ／ｋｇ（黒三角）のＡＢ７９。白記号で表記されたコホート（ｎ＝７匹の動物）は毎週投与され、黒記号（ｎ＝５匹の動物）は、隔週で３か月間投与された。エラーバーは、標準偏差を表記する。
【図３２】ＡＢ７９の（Ａ）組換えカニクイザルＣＤ３８を発現するＣＨＯ細胞への濃度依存的結合、および（Ｂ）ＣＤ３＋Ｔリンパ球、ＣＤ３−ＣＤ２０＋Ｂリンパ球、ＣＤ３−／ＣＤ２０−／ＣＤ１６＋ＮＫ細胞上で発現された内因性カニクイザルＣＤ３８への濃度依存的結合を示す。培地中でのＡＢ７９との４８時間インキュベートした後の、カニクイザル（ｎ＝３）の全血中のＮＫ細胞のレベルを、図２２Ｃに描写している。
【図３３】実施例７の投与戦略のスケジュールを示す。
【図３４】（Ａ）登録時からの変化率に対して正規化された体重測定値（非関節炎対照動物（白丸）；未処置の関節炎の動物（黒丸）、ＡＢ７９で予防的に処置した動物（白四角）、ＡＢ７９で治療的に処置した動物（黒四角）、デキサメタゾンで治療的に処置された動物（白三角））、（Ｂ）１６個の関節の平均臨床関節炎スコア（未処置の関節炎の動物（黒丸）、ＡＢ７９で予防的に処置した動物（白四角）、ＡＢ７９で治療的に処置した動物（白四角）、デキサメタゾンで治療的に処置した動物（白三角））（Ｃ）関節腫脹を伴うＰＩＰ関節の数、および（Ｄ）各動物の平均関節腫脹として計算および報告された１６個のＰＩＰ関節の平均楕円面積を示す。放射線写真検査は、（Ｅ）ＤＩＰおよび（Ｆ）ＭＣＰの全ての関節のＸ線撮像に続いて行われた。データは各群についての平均値±標準誤差である。未処置群と比較すると、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１である（一元配置分散分析（ｏｎｅ−ＡＮＯＶＡ）／ダンの多重比較検定）。
【図３５】（Ａ）登録時からの変化率に対して正規化された体重測定値（非関節炎対照動物（白丸）、未処置の関節炎の動物（黒丸）、ＡＢ７９で予防的に処置した動物（白四角）、ＡＢ７９で治療的に処置した動物（黒四角）、デキサメタゾンで治療的に処置された動物（白三角））を示す。（Ｂ）ＣＲＰおよび（Ｃ）ＡＬＰの経時的な血清化学レベルであり、データは、各群の平均値±標準誤差である。未処置群と比較すると、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１である（一元配置分散分析（ｏｎｅ−ＡＮＯＶＡ）／ダンの多重比較検定）。
【図３６】トルイジンブルー染色スライド（３２×２２匹の動物＝７０４枚のスライド）を使用して骨組織病理学者が盲検化した関節面積およびＤＩＰ関節の表面の定量的組織形態計測を示している。各動物の個々の結果を、各群の平均値±標準誤差としてプロットした。上のグラフで指定されているように、統計分析を行った。（Ａ）総関節軟骨面積、（Ｂ）損傷した関節軟骨の厚さ、（Ｃ）損傷した関節面の割合、および（Ｄ）骨棘面積である。データは各群についての平均値±標準誤差である。未処置群と比較すると、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１である（一元配置分散分析（ｏｎｅ−ＡＮＯＶＡ）／ダンの多重比較検定）。
【図３７】（Ａ）ＣＲＰおよび（Ｂ）ＡＬＰの経時的なの血清化学レベルを示している。非関節炎対照動物（白丸）、未処置の関節炎の動物（黒丸）、ＡＢ７９で予防的に処置した動物（白四角）、ＡＢ７９で治療的に処置した動物（黒四角）、デキサメタゾンで治療的に処置された動物（白三角）を示す。データは各群についての平均値±標準誤差である。未処置群と比較すると、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１である（一元配置分散分析（ｏｎｅ−ＡＮＯＶＡ）／ダンの多重比較検定）。
【図３８】動物の（Ａ）赤血球、（Ｂ）ヘマトクリット、（Ｃ）網状赤血球、（Ｄ）血小板、（Ｅ）好中球、および（Ｆ）リンパ球の経時的なレベルを示し、非関節炎対照動物（白丸）、未処置の関節炎の動物（黒丸）、ＡＢ７９で予防的に処置した動物（白四角）、ＡＢ７９で治療的に処置した動物（黒四角）、デキサメタゾンで治療的に処置された動物（白三角）を示す。データは各群についての平均値±標準誤差である。未処置群と比較すると、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１である（一元配置分散分析（ｏｎｅ−ＡＮＯＶＡ）／ダンの多重比較検定）。
【図３９】末梢血における（Ａ）ＮＫ細胞、（Ｂ）Ｂ細胞、（Ｃ）Ｔ細胞、および（Ｄ単球の経時的なレベルを示し、非関節炎対照動物（白丸）、未処置の関節炎の動物（黒丸）、ＡＢ７９で予防的に処置した動物（白四角）、ＡＢ７９で治療的に処置した動物（黒四角）、デキサメタゾンで治療的に処置された動物（白三角）を示す。データは各群についての平均値±標準誤差である。未処置群と比較すると、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１である（一元配置分散分析（ｏｎｅ−ＡＮＯＶＡ）／ダンの多重比較検定）。
【図４０】は、（Ａ）予防的または（Ｂ）治療的投与時の個々のサルのＡＢ７９の血清濃度を示している。（Ｃ）予防的または（Ｄ）治療的投与時の個々のサルの抗ＡＢ７９抗体の血清濃度である。
【図４１】健康な対象へのＡＢ７９の０．０３（四角）および０．０６（三角）ｍｇでの単回の２時間ＩＶ注入後、またはＡＢ７９の０．６ｍｇ  ｋｇ−１（円）での単回ＳＣ注射後のＡＢ７９の平均血清濃度−時間プロファイルを示している。エラーバーは、標準偏差を表す（ｎ＝６）。ＩＶは静脈内であり、ＳＣは皮下である。
【図４２Ａ−Ｂ】ＡＢ７９の単回ＩＶまたはＳＣ投与後の健康な対象の末梢血中のＮＫ細胞のレベルを示している。ＩＶは静脈内であり、ＳＣは皮下である。
【図４３】プラセボ対照、０．１、０．３、または０．６ｍｇ  ｋｇ−１のＡＢ７９のＳＣの単回注射後の健康な対照からの末梢血における形質芽細胞、単球、Ｂ細胞、Ｔ細胞、およびＮＫ細胞のレベルを示している。
【数２５】
2021510737.tif 000027
絶対単球（細胞／μＬ）、
【数２６】
2021510737.tif 000028
ＮＫ細胞（細胞／μＬ）、
【数２７】
2021510737.tif 000029
総Ｔ細胞（細胞／μＬ）、
【数２８】
2021510737.tif 000030
Ｂ細胞（細胞／μＬ）、
【数２９】
2021510737.tif 000031
形質芽細胞（細胞／μＬ）である。中央の曲線は、中央値を表す。ＮＫは、ナチュラルキラー（細胞）であり、ＳＣは皮下である。
【図４４】プラセボまたは０．００３〜０．０６ｍｇ  ｋｇ−１のＡＢ７９のＩＶ、プラセボまたは０．０３〜０．６ｍｇ  ｋｇ−１のＡＢ７９のＳＣの単回投与後の、健康な対象からの血清における総ＩｇＡ、ＩｇＧ、およびＩｇＭのベースラインレベルからの変化を示している。記号はコホートの平均値を表し、エラーバーは標準誤差を表す。
【数３０】
2021510737.tif 000032
プラセボ、
【数３１】
2021510737.tif 000033
ＡＢ７９  ０．０００３ｍｇ／ｋｇ
【数３２】
2021510737.tif 000034
ＡＢ７９  ０．００１ｍｇ／ｋｇ
【数３３】
2021510737.tif 000035
ＡＢ７９  ０．００３ｍｇ／ｋｇ
【数３４】
2021510737.tif 000036
ＡＢ７９  ０．０１ｍｇ／ｋｇ
【数３５】
2021510737.tif 000037
ＡＢ７９  ０．０３ｍｇ／ｋｇ
【数３６】
2021510737.tif 000038
ＡＢ７９  ０．０６ｍｇ／ｋｇ
【数３７】
2021510737.tif 000039
ＡＢ７９  ０．１ｍｇ／ｋｇ
【数３８】
2021510737.tif 000040
ＡＢ７９  ０．３ｍｇ／ｋｇ
【数３９】
2021510737.tif 000041
ＡＢ７９  ０６ｍｇ／ｋｇ。Ｉｇは免疫グロブリンであり、ＩＶは静脈内であり、ＳＣは皮下である。
【発明を実施するための形態】
【００６４】
本発明は、低い用量（≦６００ｍｇ）かつ容量（≦３ｍＬ）の抗ＣＤ３８抗体の皮下投与による、ＣＤ３８関連疾患を治療するための方法に関する。
【００６５】
ＡＢ７９、ダラツムマブ、イサツキシマブ、およびＭＯＲ２０２は、主に抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）によって腫瘍を殺傷するＩｇＧ１である。このメカニズムでは、ＮＫ細胞などのエフェクター細胞が標的細胞上の抗体に結合し、溶解性シナプスを形成して細胞傷害性物質を集中的に分泌する必要がある。血液中のこれらのエフェクター細胞の頻度は、ＲＢＣおよび血小板の頻度よりも桁違いに低い。例えば、血液中のＲＢＣとＮＫ細胞との比率は、２０，０００：１である。さらに、活動性疾患を有する患者の骨髄腫細胞よりもＲＢＣで発現されるＣＤ３８分子は約３６倍多くなる。ダラツムマブ、イサツキシマブ、およびＭＯＲ２０２のエフェクター活性は、ＲＢＣおよび血小板に結合した抗ＣＤ３８抗体によって主に結合され、腫瘍との溶解性シナプスの形成を妨げるために、腫瘍から転用されると仮定されており、これがＡＤＣＣの低効率をもたらす。対照的に、ダラツムマブと比べてＡＢ７９によるＲＢＣと血小板の結合の減少またはより一過性により、エフェクター細胞が腫瘍に集中できるようになり、ＡＤＣＣがより効率的になり、殺腫瘍活性が高くなり、有効量が低くなる。
【００６６】
ＲＢＣおよび血小板に結合する抗ＣＤ３８抗体による患者の治療も、生命にかかわる副作用を引き起こす可能性がある。例えば、ＭＯＲ２０２によるＲＲＭＭの治療は、いくつかの深刻な治療中に発生した有害事象（ＴＥＡＥ）をもたらしている（例えば、Ｒａａｂ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｂｌｏｏｄ  １２６：３０３５を参照されたい）。どのグレードでも最も一般的なＴＥＡＥは、貧血（１５人の患者、３４％）、疲労（１４人の患者、３２％）、輸注反応（ＩＲＲ）および白血球減少症（１３人の患者、それぞれ３０％）、リンパ球減少症および悪心（１１人の患者、それぞれ２５％）であった。グレード≧３のＴＥＡＥは、２８人の患者（６４％）に対して報告されており、最も一般的なものとしては、リンパ球減少症（８人の患者、１８％）、白血球減少症（５人の患者、１１％）および高血圧（４人の患者、９％）が含まれた。ＩＲＲは、主に初回注入時に発生し、１人の患者（グレード３）を除いて、全てグレード１〜２であった。感染症は一般的に報告されたが（２６人の患者、５９％）、ほとんどの場合、治療に関連しているとは見なされなかった。ＭＯＲ２０２は、ＩＶ注入を介して臨床的にのみ使用されている。これは、本明細書に記載されるように、低用量かつ低容量でのＡＢ７９の皮下投与を可能にする本発明とは対照的である。
【００６７】
ＣＤ３８を標的とする他のＭｏｒｐｈｏｓｙｓ抗体が知られている（例えば、４つのヒト抗体：ＭＯＲ０３０７７、ＭＯＲ０３０７９、ＭＯＲ０３０８０、ならびにＭＯＲ０３１００、および２つのマウス抗体：ＯＫＴ１０ならびにＩＢ４を開示するＷＯ  ２００６／１２５６４０を参照されたい）。これらの先行技術の抗体は、様々な理由でＡＢ７９よりも劣っている。ＭＯＲ０３０８０は、ヒトＣＤ３８およびカニクイザルＣＤ３８に結合するが、ヒトＣＤ３８には低い親和性を有する（Ｂｉａｃｏｒｅ  ＫＤ＝２７．５ｎｍ）。ＯＫＴ１０は、ヒトＣＤ３８およびカニクイザルＣＤ３８に結合するが、ヒトＣＤ３８には低い／中程度の親和性を有する（Ｂｉａｃｏｒｅ  ＫＤ＝８．２８ｎｍ）。ＭＯＲ０３０７９は、高い親和性でヒトＣＤ３８に結合する（Ｂｉａｃｏｒｅ  ＫＤ＝２．４ｎｍ）が、カニクイザルＣＤ３８には結合しない。ＭＯＲ０３１００およびＭＯＲ０３０７７は、中程度または低い親和性でヒトＣＤ３８に結合する（それぞれ、Ｂｉａｃｏｒｅ  ＫＤ＝１０ｎｍおよび５６ｎｍ）。比較すると、ＡＢ７９は、ヒトＣＤ３８およびカニクイザルＣＤ３８に高い親和性で結合する（ヒトＣＤ３８に対して、Ｂｉａｃｏｒｅ  ＫＤ＝５．４ｎｍ）。さらに、先行技術の抗体は、不十分なＡＤＣＣならびにＣＤＣ活性を有する。
【００６８】
より効率的なＡＤＣＣの利点は、抗ＣＤ３８治療薬を少量の注射として提供できることである。ＡＢ７９が１３５ｍｇ／ｍＬの濃度で配合されている場合、８０ｋｇの骨髄腫患者に有効な用量を、２．５ｍＬ未満のＳＣ単回注射として投与することができる。対照的に、第３相臨床試験で試験されているダラツムマブのＳＣ投与量は、Ｅｎｈａｎｃｅ（商標）（Ｈａｌｏｚｙｍｅ）の１５ｍＬの共製剤に懸濁した１８００ｍｇである。
【００６９】
ＩＶおよびＳＣ投与したＡＢ７９の安全性、忍容性、薬物動態、および薬力学は、当初サルで特性化された。ＡＢ７９は、単回投与として、０．０３、０．１、および０．３ｍｇ／ｋｇの滅菌生理食塩水（ＩＶ）またはＳＣ希釈溶液中のカニクイザルにＩＶボーラスまたはＳＣ注射によって投与された（４匹の雌／群）。ＩＶ経路の場合、Ｃｍａｘは、０．０３から０．３ｍｇ／ｋｇまでのＡＢ７９の用量におおよそ比例し、ＡＵＣ（０−ｔ）は、０．０３から０．１ｍｇ／ｋｇまでのＡＢ７９に比例する用量よりも大きかったが、おおよそ０．１から０．３ｍｇ／ｋｇまでのＡＢ７９の用量におおよそ比例した。ＳＣ経路では、ＣｍａｘとＡＵＣ（０−ｔ）とは用量とともに増加したが、ＡＵＣ（０−ｔ）は、ＳＣ投与後に０．０３〜０．３ｍｇ／ｋｇの範囲にわたって用量に比例して増加した。Ｔ１／２は、１２０〜１４４時間と推定された。ＳＣ経路の平均バイオアベイラビリティは、おおよそ１００％（０．０３、０．１、０．３ｍｇ／ｋｇでそれぞれ１２０％、７３％、１２０％）であった。雌カニクイザルへの単回の静脈内または皮下注射による０．０３、０．１、または０．３ｍｇ／ｋｇのＡＢ７９の投与は、忍容性が良好であった。リンパ球（Ｔリンパ球、Ｂリンパ球）の軽度から中程度の減少およびＮＫ細胞集団の用量依存的減少の予想される薬理効果は、全ての用量レベルで、かつ両方の経路で観察され、ＳＣ投与後の最大細胞枯渇効果は、同じ投与量レベルでのＩＶ投与後に観察されたものと同様であるか、またはそれよりわずかに少なかった（Ｒｏｅｐｃｋｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０１８）Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｓ．Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．６（３）：ｅ００４０２）。この試験の結果に基づいて、無有害作用量（ＮＯＡＥＬ）は、ＩＶ経路とＳＣ経路の両方で０．３ｍｇ／ｋｇであると見なされた。リンパ球およびＮＫ細胞における変化は、５６日間の無ＡＢ７９期間後に解消された。ＮＯＡＥＬに関連する血清ＡＵＣおよびＣｍａｘは、それぞれＩＶでは５７４時間＊μｇ／ｍＬおよび７．９４μｇ／ｍＬであって、ＳＣでは６９８時間＊μｇ／ｍＬおよび２．１５μｇ／ｍＬであった。
【００７０】
次いで、ＡＢ７９の安全性、忍容性、薬物動態、および薬力学を、健康なヒトの対象の段階的用量コホートにおける単回静脈内（ＩＶ）注入または１ｍＬ皮下（ＳＣ）注射の無作為化二重盲検プラセボ対照試験で臨床的に特性化した。ＡＢ７９の忍容性は良好であって、全ての有害事象（ＡＥ）は軽度または中程度であり、ＡＥまたは輸注反応による離脱はなかった（Ｆｅｄｙｋ  ｅｔ  ａｌ．（２０１８）Ｂｌｏｏｄ  １３２：３２４９）。高用量コホートでは、サイトカインレベルの一時的、軽度から中程度の増加が、ＣＤ３８発現細胞の低減と一致し、臨床症状には、主に発熱、頭痛、起立性低血圧が含まれていた。ＡＢ７９治療に関連して、実験室検査、心電図、バイタルサイン、または身体検査の顕著な所見は報告されなかった。ＡＢ７９は、同様の用量で形質芽細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞のレベルを低下させ、最大有効用量（ＥＤ５０）の５０％で、０．００３ｍｇ／ｋｇのＩＶおよび０．１ｍｇ／ｋｇのＳＣであった。総免疫グロブリン（Ｉｇ）ＭおよびＡの低減は、ＩｇＧに匹敵する変化なしに発生した。白血球、顆粒球、リンパ球、赤血球、血小板の総数は、全ての用量レベルで正常範囲内であった。要約すると、ＡＢ７９は、ＩＶまたはＳＣ投与した場合、健康な対象の末梢血中の形質芽細胞およびＮＫ細胞のレベルを選択的に低下させ、全体的に安全で忍容性が高かった。この形質細胞溶解プロファイルは、形質細胞またはＮＫ細胞、悪性の対応物（例えば、多発性骨髄腫およびＮＫ細胞白血病）、および病原性抗体またはＩｇによって引き起こされる障害の治療に役立つことができる。
【００７１】
ＡＢ７９は、形質細胞のＢ細胞前駆細胞を標的とする治療薬（例えば、抗ＢＡＦＦ  ｍＡｂ（例えば、ベリムマブ）、抗ＣＤ２０  ｍＡｂ（例えば、リツキシマブ）、およびＢＴＫ阻害剤（例えば、バリシチニブ））とは異なり、形質細胞を直接標的とするため、Ｉｇまたは抗体媒介性疾患に比較的迅速に治療反応（例えば、疾患寛解）を誘発する可能性がある。これらの後者の戦略は、形質細胞を間接的に標的とし、前者の分化を阻害することにより、形質細胞の新たな生成を本質的に排除する。形質細胞の既存のプールは、比較的影響を受けないままであり、その寿命にわたって病原性抗体／Ｉｇを産生し続ける。したがって、既存の形質細胞の寿命は、その一部が数十年生き残るため、病原性抗体／Ｉｇの潜在的な減少を引き起こし、そのため、間接戦略ではＡＢ７９よりも活性および有効性の発現が遅くなる可能性がある。形質細胞を直接低減させることが実証されている他の唯一の治療薬はプロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ）であり、この部類の薬剤は比較的忍容性が低く、非形質細胞におけるプロテアソーム阻害に起因する用量制限有害事象（例えば、神経障害、下痢）を含み、これはプロテオゾームが、これらの組織で偏在的に発現されるためである。したがって、ＣＤ３８の制限された発現プロファイルと組み合わされたＣＤ３８に対するＡＢ７９の特異性は、非形質細胞の影響を最小限に抑えながら形質細胞を直接標的とする作用メカニズムを作成し、形質細胞、形質転換した対応物および／または病原性抗体／Ｉｇによって引き起こされる疾患において迅速な有効性をもたらす可能性を有する。
【００７２】
本開示の抗ＣＤ３８方法および単位投与量は、初めて、治療的に有効な低用量かつ低容量の抗ＣＤ３８抗体の皮下投与を提供し、これにより、予期しない利益を提供し、副作用、不便さ、および高用量を投与する費用負担、全身抗ＣＤ３８抗体療法を防止する。
【００７３】
本発明は、血液癌を含む、ＣＤ３８への結合が示される疾患を治療するために、それを必要とする患者に治療有効量の単離された抗ＣＤ３８抗体を皮下投与するための方法および単位剤形を提供する。いくつかの実施形態では、皮下投与用の抗体は、配列番号９を含む重鎖可変領域と、配列番号１０を含む軽鎖可変領域と、を含む。本明細書で提供される抗ＣＤ３８抗体は、予想外に低い投与量で投与される場合に治療的に有効であり得、したがって、驚くほど少量で投与され得、皮下投与を容易にする。
【００７４】
本発明の抗ＣＤ３８抗体の別の利点は、診療所における他のいくつかの抗ＣＤ３８抗体とは異なり、本発明の抗ＣＤ３８抗体（例えば、ＡＢ７９）がカニクイザル（サイノ）ＣＤ３８に結合でき、投与の忍容性、毒性、および有効性などの前臨床評価のための有用な動物モデルを提供することである。
【００７５】
本発明の抗ＣＤ３８抗体の別の利点は、それらを使用して、同じエピトープでのＣＤ３８への結合について競合する他の抗体をスクリーニングすることができ、本発明の方法および単位投与量において有用であり得ることである。
【００７６】
本発明の抗ＣＤ３８抗体の別の利点は、ダラツムマブと比較してＲＢＣおよび／または血小板への結合が減少または代替的（例えば、より一時的）な他の抗体、例えば、ＡＢ７９と同じエピトープと競合するか、またはそれと結合する抗体をスクリーニングするために使用でき、本発明の方法および単位投与量において有用であり得ることである。
【００７７】
本明細書で別段の定めがない限り、本発明に関連して使用される科学用語および専門用語は、当業者によって一般に理解される意味を有するものとする。用語の意味と範囲は、明確でなければならない。しかしながら、潜在的なあいまいさが発生した場合は、ここで提供される定義が、辞書または外部の定義よりも優先される。さらに、文脈で特に必要とされない限り、単数形の用語は、複数形を含み、複数形の用語は、単数形を含むものとする。「または」という用語は、特に明記しない限り「および／または」を含む。さらに、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、または「含まれる」という用語の使用は、限定的なものではない。「要素」および「構成要素」などの用語は、特に明記しない限り、１つのユニットを構成する要素および構成要素、ならびに２つ以上のサブユニットを構成する要素および構成要素の両方を包含する。
【００７８】
本発明の方法および技術は、一般に、当技術分野で周知の従来の方法に従って、特に明記しない限り、本明細書全体で引用および議論される様々な一般的でより具体的な参考文献に記載されているように行われる。細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、タンパク質ならびに核酸の化学およびハイブリダイゼーション、分析化学、有機合成化学、および医薬品および製薬化学の実験室手順および技術は、当該技術分野において周知であり、一般的に使用されている。標準的な技法は、化学合成、化学分析、医薬品調合剤、製剤、送達、および患者の治療に使用される。市販の酵素反応および精製技法は、当技術分野で一般的に達成されるように、または本明細書に記載されるように、製造業者の仕様書に従って実行される。
【００７９】
全ての見出しおよびセクションの指定は、明確さおよび参照目的のためだけに使用されているにすぎず、決して限定的であると見なされるべきではない。例えば、当業者は、本明細書に記載される本発明の趣旨および範囲に従って、必要に応じて異なる見出しおよびセクションからの開示の様々な態様を組み合わせることの有用性を理解するであろう。
【００８０】
本発明をより容易に理解するために、選択用語を以下に定義する。
【００８１】
「ヒトＣＤ３８」および「ヒトＣＤ３８抗原」という用語は、本明細書で定義されるように（表１）、配列番号１のアミノ酸配列、またはエピトープなどのその機能的画分を指す。一般に、ＣＤ３８は短い細胞質内尾部、膜貫通ドメイン、および細胞外ドメインを有している「カニクイザルＣＤ３８」および「カニクイザルＣＤ３８抗原」という用語は、配列番号２のアミノ酸配列を指し、これはヒトＣＤ３８のアミノ酸配列と９２％同一である（表１）。ＣＤ３８の同義語には、環状ＡＤＰリボース加水分解酵素、環状ＡＤＰリボース−加水分解酵素１；ＡＤＰリボシルシクラーゼ；ＡＤＰ−リボシルシクラーゼ１；ｃＡＤＰｒ加水分解酵素１；ＣＤ３８−ｒｓ１；Ｉ−１９；ＮＩＭ−Ｒ５抗原；２’−ホスホ−サイクリック−ＡＤＰ−リボーストランスフェラーゼ；２’−ホスホ−ＡＤＰ−リボシルシクラーゼ；２’−ホスホ−サイクリック−ＡＤＰ−リボーストランスフェラーゼ；２’−ホスホ−ＡＤＰ−リボシルシクラーゼ；およびＴ１０が挙げられる。
【表１】
2021510737.tif 000042
【００８２】
「治療有効量」および「治療有効投与量」という用語は、障害またはその１つ以上の症状の重症度および／または持続時間を軽減または改善するために、障害の進行を防ぐために、障害の後退を引き起こすために、障害に関連する１つ以上の症状の再発、発生、発症、または進行を防止するために、または、所望の治療結果を達成するために必要な投与量および期間で、別の療法（例えば、予防薬もしくは治療薬）の予防または治療効果（複数可）を増強または改善するために十分である治療薬の量を指す。治療有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別、および体重、ならびに個体において所望の応答を誘発する薬剤の能力などの因子によって異なり得る。治療有効量の抗体はまた、抗体または抗体部分のいずれの毒性または有害な効果よりも治療上有益な効果が勝る量である。腫瘍療法のための治療有効量の抗体は、疾患の進行を安定化するその能力によっても測定することができる。癌を阻害する化合物の能力は、ヒトの癌における有効性を予測する動物モデル系において評価してもよい。
【００８３】
「患者」および「対象」という用語は、ヒトおよび他の動物の両方を含む。したがって、本明細書に開示される組成物、投与量、および方法は、ヒトおよび獣医学治療の両方に適用可能である。一実施形態では、患者は哺乳動物、例えばヒトである。
【００８４】
「ＣＤ３８への結合が示される疾患」という用語は、ＣＤ３８への結合パートナー（例えば、本開示の抗ＣＤ３８抗体）の結合が、疾患の１つ以上の症状の改善を含む予防または治療効果を提供する疾患を意味する。このような結合は、ＣＤ３８、ＣＤ３８、ＡＤＣＣ、ＣＤＣの中和、補体活性化、または疾患が予防または治療される他の何らかのメカニズムのための他の因子または結合パートナーの遮断をもたらす可能性がある。ＣＤ３８の因子および結合パートナーには、本発明の抗ＣＤ３８抗体によって遮断されるＣＤ３８に対する自己抗体が含まれる。このような結合は、細胞または細胞のサブセット、例えば、ＭＭ細胞によるＣＤ３８の発現の結果として示されることができ、それにより、対象へのＣＤ３８の結合パートナーの提供は、例えば、用結またはアポトーシスを介しての、それらの細胞の除去、例えば、溶解をもたらす。このようなＣＤ３８の発現は、例えば、正常な細胞と比較して、または非疾患状態または疾患状態のいずれかの間の他の細胞型と比較して、ＣＤ３８の正常な発現、過剰発現、不適切に発現された、または活性化の結果であり得る。
【００８５】
「血液癌」という用語は、造血組織の悪性新生物を指し、白血病、リンパ腫および多発性骨髄腫を包含する。異常なＣＤ３８発現に関連する病態の非限定的な例には、再発性難治性ＭＭ（ＲＲＭＭ）または新たに診断されたＭＭ（ＮＤＭＭ）を含む、多発性骨髄腫（ＭＭ）（Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７２：３５１−３５６）；Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（Ｂ−ＣＬＬ）（Ｄｕｒｉｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｌｅｕｋｅｍｉａ  １６：３０−３５；Ｍｏｒａｂｉｔｏ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｌｅｕｋｅｍｉａ  Ｒｅｓ．２５：９２７−９３２；Ｍａｒｉｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｎｅｏｐｌａｓｍａ  ４０（６）：３５５−３５８；およびＪｅｌｉｎｅｋ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．１１５：８５４−８６１）；急性リンパ芽球性白血病（Ｋｅｙｈａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｌｅｕｋｅｍｉａ  Ｒｅｓ．２４：１５３−１５９；およびＭａｒｉｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｎｅｏｐｌａｓｍａ  ４０（６）：３５５−３５８）；慢性骨髄性白血病（Ｋｅｙｈａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｌｅｕｋｅｍｉａ  Ｒｅｓ．２４：１５３−１５９；およびＭａｒｉｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｎｅｏｐｌａｓｍａ  ４０（６）：３５５−３５８）；急性骨髄性白血病（Ｋｅｙｈａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｌｅｕｋｅｍｉａ  Ｒｅｓ．２４：１５３−１５９）；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；慢性骨髄性白血病または慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）；急性骨髄性白血病または急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）；急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；有毛細胞白血病（ＨＣＬ）；ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）（Ｎｕｒｕｌｈｕｄａ  ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｂｌｏｏｄ  １３０：２８１４）；および当業者に周知である形態学的、組織化学的および免疫学的技法によって定義される、これらの白血病ならびに他の血液疾患の全てのサブタイプおよび病期（例えば、ＣＭＬ急性期（ＢＰ）、慢性期（ＣＰ）、または加速期（ＡＰ））が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８６】
「新生物」および「新生物状態」という用語は、無秩序な成長、分化の欠如、脱分化、局所組織浸潤、および転移を含む１つ以上の症状をもたらす正常対照の喪失を特徴とする細胞の増殖に関連する病態を指す。
【００８７】
「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指す。例えば、ＣＤ３８に特異的に結合する単離された抗体は、ＣＤ３８以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない。しかしながら、ヒトＣＤ３８またはカニクイザルＣＤ３８のエピトープ、アイソフォームまたは変異体に特異的に結合する単離された抗体は、例えばＣＤ３８種ホモログのような他の種由来の他の関連抗原に対して交差反応性を有する可能性がある。さらに、単離された抗体は、他の細胞物質および／または化学物質を実質的に含まない可能性がある。
【００８８】
「赤血球（ｒｅｄ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌｓ）」、「ＲＢＣ」、および「赤血球（ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｓ）」という用語は、酸素を細胞および組織に運び、二酸化炭素を呼吸器に戻す骨髄由来のヘモグロビン含有血液細胞を指す。ＲＢＣは、赤血球、赤血球（ｒｅｄ  ｂｌｏｏｄ  ｃｏｒｐｕｓｃｌｅ）、ヘマタイド、赤血球系細胞などとも称される。
【００８９】
特定の抗体、タンパク質、またはペプチドと抗原、エピトープ、または他の化学種との相互作用に関して「特異的結合」、「特異的に結合する」、および「特異的である」という用語は、非特定の相互作用とは測定できるほどに異なる。特異的結合は、例えば、一般に結合活性を有さない同様の構造の分子である対照分子の結合と比較した分子の結合を決定することによって、測定することができる。例えば、特異的結合は、標的と同様である対照分子との競合によって決定することができる。本発明の抗ＣＤ３８抗体は、ＣＤ３８リガンドに特異的に結合する。「特異的結合」、「特異的に結合する」、および「特異的である」という用語は、相互作用が化学種上の特定の構造、例えば、抗原決定基またはエピトープ）の存在に依存することも意味し、例えば、抗体は一般にタンパク質ではなく、特定のタンパク質構造を認識して結合する。抗体がエピトープ「Ａ」に特異的である場合、標識「Ａ」と抗体とを含む反応において、エピトープＡ（または遊離の非標識Ａ）を含む分子の存在は、抗体に結合した標識Ａの量が低減させるであろう。特定の抗原またはエピトープに対する特異的結合は、例えば、抗原またはエピトープに対して少なくとも約１０−４Ｍ、少なくとも約１０−５Ｍ、少なくとも約１０−６Ｍ、少なくとも約１０−７Ｍ、少なくとも約１０−８Ｍ、少なくとも約１０−９Ｍ、少なくとも約１０−１０Ｍ、少なくとも約１０−１１Ｍ、少なくとも約１０−１２Ｍ、またはそれ以上のＫＤを有する抗体によって示され得、ＫＤとは特定の抗体−抗原相互作用の解離速度を指す。典型的には、抗原に特異的に結合する抗体は、抗原またはエピトープと比べて、対照分子に対して２０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１０００倍、５，０００倍、１０，０００倍、またはそれを超えて大きいＫＤを有することになる。また、特定の抗原またはエピトープへの特異的結合は、例えば、抗原またはエピトープに対するＫＡまたはＫａが、対照と比べて、そのエピトープに対して少なくとも２０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１０００倍、５，０００倍、１０，０００倍、またはそれを超えて大きい抗体によって示され得、ＫＡまたはＫａは、特定の抗体−抗原相互作用の会合速度を指す。
【００９０】
「ある期間にわたって」という用語は、任意の期間、例えば、分、時間、日、月、または年を指す。例えば、ある期間にわたってとは、少なくとも１０分、少なくとも１５分、少なくとも３０分、少なくとも６０分、少なくとも７５分、少なくとも９０分、少なくとも１０５分、少なくとも１２０分、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも７時間、少なくとも８時間、少なくとも９時間、少なくとも１０時間、少なくとも１２時間、少なくとも１４時間、少なくとも１６時間、少なくとも１８時間、少なくとも２０時間、少なくとも２２時間、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも１週間、少なくとも１ヶ月、少なくとも１年、またはその間の任意の時間間隔を指すことができる。換言すれば、組成物からの抗体は、少なくとも１０分、少なくとも１５分、少なくとも３０分、少なくとも６０分、少なくとも７５分、少なくとも９０分、少なくとも１０５分、少なくとも１２０分、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも７時間、少なくとも８時間、少なくとも９時間、少なくとも１０時間、少なくとも１２時間、少なくとも１４時間、少なくとも１６時間、少なくとも１８時間、少なくとも２０時間、少なくとも２２時間、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも１週間、少なくとも１ヶ月、少なくとも１年、またはその間の任意の時間間隔のある期間にわたって抗体が投与される個体によって、吸収され得る。
【００９１】
「実質的に」成分を含む組成物は、組成物が約８０重量％を超える、いくつかの実施形態では約９０重量％を超える、いくつかの実施形態では約９５重量％を超える、いくつかの実施形態では約９７重量％を超える、いくつあの実施形態では約９８重量％を超える、いくつかの実施形態では約９９重量％を超える成分を含有することを意味する。
【００９２】
「約」という用語は、最大１０％の寸法におけるわずかな変動を伴う、数、程度、体積、時間などに近い程度を指す。
【００９３】
「薬学的に許容される担体」という用語は、本発明の化合物を哺乳動物に投与するのに適した、薬学的に許容される材料、組成物またはビヒクルを指す。担体には、対象化合物を１つの臓器、または体の一部から別の臓器、または体の一部に運搬または輸送することに関与する、液体または固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒または封入材料が含まれる。担体は、製剤の他の成分と適合し、患者に有害でないという意味で、「許容される」でなければならない。一実施形態では、薬学的に許容される担体は、静脈内投与に好適である。別の実施形態では、薬学的に許容される担体は局所領域注射に好適である。別の実施形態では、薬学的に許容される担体は、皮下投与に好適である。別の実施形態では、薬学的に許容される担体は、皮下注射に好適である。
【００９４】
「薬学的組成物」という用語は、対象への投与および疾患の治療に好適な調製物を指す。本発明の抗ＣＤ３８抗体が哺乳動物、哺乳動物、例えばヒトに医薬品として投与される場合、それらは「そのまま」、または薬学的に許容される担体および／または他の賦形剤と組み合わせた抗ＣＤ３８抗体を含有する薬学的組成物として投与することができる。薬学的組成物は、特定の濃度、特定の量、または特定の容量で特定の投与量の抗ＣＤ３８抗体を投与するための単位剤形の形態であり得る。抗ＣＤ３８抗体を単独で、または予防剤、治療剤、および／または薬学的に許容される担体と組み合わせて含む薬学的組成物が提供される。
【００９５】
従来の抗体構造単位は、典型的には四量体を含む。各四量体は、典型的には、２本の同一のポリペプチド鎖対からなり、各対は、１本の「軽」鎖（典型的には、約２５ｋＤａの分子量）と、１本の「重」鎖（典型的には、約５０〜７０ｋＤａの分子量）とを有する。ヒト軽鎖は、κ軽鎖およびλ軽鎖として分類される。重鎖はミュー、デルタ、ガンマ、アルファ、イプシロンに分類され、抗体のアイソタイプをそれぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥとして定義する。ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４が挙げられるが、これらに限定されないいくつかのサブクラスを有する。ＩｇＭは、ＩｇＭ１およびＩｇＭ２が挙げられるが、これらに限定されないサブクラスを有する。したがって、「アイソタイプ」は、それらの定常領域の化学的および抗原的特徴によって定義される免疫グロブリンのサブクラスのいずれかを意味する。既知のヒト免疫グロブリンアイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＭ１、ＩｇＭ２、ＩｇＤ、およびＩｇＥである。治療用抗体は、アイソタイプおよび／またはサブクラスのハイブリッドも含み得る。
【００９６】
各可変重（ＶＨ）鎖および可変軽（ＶＬ）鎖領域（約１００〜１１０個のアミノ酸長）は、「相補性決定領域」（ＣＤＲ）と呼ばれる３つの超可変領域と、４つのフレームワーク領域（ＦＲ）（約１５〜３０個のアミノ酸長）とから構成されており、アミノ末端からカルボキシ末端まで次の順序で配置されている：ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４。「可変」とは、ＣＤＲの配列が抗体間で大きく異なり、それによって独特の抗原結合部位を決定するという事実を指す。
【００９７】
超可変領域は、一般に、軽鎖可変領域における、およそアミノ酸残基約２４〜３４（ＬＣＤＲ１；「Ｌ」は軽鎖を意味する）、５０〜５６（ＬＣＤＲ２）および８９〜９７（ＬＣＤＲ３）と重鎖可変領域における、約３１〜３５Ｂ（ＨＣＤＲ１；「Ｈ」は重鎖を意味する）、５０〜６５（ＨＣＤＲ２）および９５〜１０２（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸残基（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  Ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  Ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈＥｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）、および／または超可変性ループを形成するそれらの残基（例えば、軽鎖可変領域における残基２６〜３２（ＬＣＤＲ１）、５０〜５２（ＬＣＤＲ２）および９１〜９６（ＬＣＤＲ３）と、重鎖可変領域における２６〜３２（ＨＣＤＲ１）、５３〜５５（ＨＣＤＲ２）および９６〜１０１（ＨＣＤＲ３）（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７）を包含する。
【００９８】
可変ドメイン内の残基（およそ、軽鎖可変領域の残基１〜１０７と重鎖可変領域の残基１〜１１３）に言及する場合、Ｋａｂａｔナンバリングシステムが一般的に使用され（例えば、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  Ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  Ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈＥｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）、Ｆｃ領域には、ＥＵ番号システムが使用される。
【００９９】
「免疫グロブリン（Ｉｇ）ドメイン」という用語は、明確な三次構造を有する免疫グロブリンの領域を指す。可変ドメインに加えて、各重鎖と軽鎖とは、定常ドメイン：定常重鎖（ＣＨ）ドメイン、定常軽鎖（ＣＬ）ドメインおよびヒンジドメインを有する。ＩｇＧ抗体の関連において、ＩｇＧアイソタイプは、それぞれ３つのＣＨ領域を有する。各ＨＣおよびＬＣのカルボキシ末端部分は、エフェクター機能に主に関与する定常領域を画定する。したがって、ＩｇＧの関連における「ＣＨ」ドメイン  は以下のとおりである。「ＣＨ１」は、ＫａｂａｔにあるようなＥＵインデックスに従う１１８〜２２０位を指す。「ＣＨ２」は、ＫａｂａｔにあるようなＥＵインデックスに従う２３７〜３４０位を指し、「ＣＨ３」は、ＫａｂａｔにあるようなＥＵインデックスに従う３４１〜４４７位を指す。
【０１００】
重鎖のＩｇドメインの別の種類は、ヒンジ領域である。「ヒンジ領域」という用語は、抗体の第１の定常ドメインと第２の定常ドメインとの間にアミノ酸を含む柔軟なポリペプチドを指す。構造に関して、ＩｇＧ  ＣＨ１ドメインはＥＵの２２０位で終了し、ＩｇＧ  ＣＨ２ドメインは残基ＥＵの２３７位で開始する。したがって、ＩｇＧについては、抗体ヒンジは、２２１位（ＩｇＧ１中のＤ２２１）から２３６位（ＩｇＧ１中のＧ２３６）を含むように本明細書で定義され、付番は、Ｋａｂａｔと同様にＥＵインデックスに従う。いくつかの実施形態では、例えば、Ｆｃ領域に関連して、下側ヒンジが含まれ、「下側ヒンジ」は一般に２２６位または２３０位を指す。
【０１０１】
本明細書で使用される「Ｆｃ領域」とは、第１の定常領域免疫グロブリンドメインを除く抗体の定常領域、および場合によってはヒンジの一部を含む、ポリペプチドを意味する。したがって、Ｆｃは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＧの最後の２つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ＩｇＥおよびＩｇＭの最後の３つの定常領域免疫グロブリンドメイン、およびこれらのドメインに対する可動性ヒンジＮ末端を指す。ＩｇＡおよびＩｇＭの場合、ＦｃはＪ鎖を含んでもよい。ＩｇＧの場合は、Ｆｃドメインは、免疫グロブリンドメインＣγ２およびＣγ３（Ｃγ２およびＣγ３）、ならびにＣγ１（Ｃγ１）とＣγ２（Ｃγ２）との間の下部ヒンジ領域を含む。Ｆｃ領域の境界は異なり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、そのカルボキシ末端に残基Ｃ２２６またはＰ２３０を含むものと定義され、ここでの付番はＫａｂａｔと同様のＥＵインデックスに従う。いくつかの実施形態において、以下でより詳細に説明されるように、例えば、１つ以上のＦｃγＲ受容体またはＦｃＲｎ受容体との結合を変化させるために、Ｆｃ領域に対してアミノ酸修飾が行われる。
【０１０２】
ＣＤ３８抗体
したがって、本発明は、ヒトおよび霊長類のＣＤ３８タンパク質に特異的に結合し、ダラツムマブと比較した場合に、減少した、または１０％未満、２０％未満、３０％未満、４０％未満、５０％未満のヒトＲＢＣへの結合を有し、それによって、皮下投与方法および単位剤形における使用を見出す単離された抗ＣＤ３８抗体を提供する。本発明で特に有用なのは、ヒトおよび霊長類の両方のＣＤ３８タンパク質、特に臨床試験で使用される霊長類、例えばカニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ、カニクイザル、本明細書では「サイノ（ｃｙｎｏ）」とも称される）に結合する抗体である。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＤ３８抗体は、ＡＢ７９のエピトープの、Ｋ１２１、Ｆ１３５、Ｑ１３９、Ｄ１４１、Ｍ１４２、Ｄ２０２、Ｖ２０３、Ｈ２０５、Ｑ２３６、Ｅ２３９、Ｗ２４１、Ｓ２７４、Ｃ２７５、Ｋ２７６、Ｆ２８４、Ｃ２８７、Ｖ２８８、Ｋ２８９、Ｎ２９０、Ｐ２９１、Ｅ２９２、およびＤ２９３を含む多くのアミノ酸残基でＣＤ３８と相互作用する。これらの残基と相互作用する任意の抗体もまた、本発明の治療方法および単位投与量における使用を見出す。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＤ３８抗体は、Ｋ１２１、Ｆ１３５、Ｑ１３９、Ｄ１４１、Ｍ１４２、Ｅ２３９、Ｗ２４１、Ｓ２７４、Ｃ２７５、Ｋ２７６、Ｆ２８４、Ｖ２８８、Ｋ２８９、Ｎ２９０、Ｐ２９１、Ｅ２９２、およびＤ２９３を含む多くのアミノ酸残基でＣＤ３８と相互作用する。これらの残基は、カニクイザルでは実際にＳ２７４がＦ２７４であることを除いて、ヒトとカニクイザルの両方で同一であることに留意されたい。これらの残基は、免疫優性エピトープおよび／または特異的抗原結合ペプチドのフットプリント内の残基を表す場合がある。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、以下のＣＤＲアミノ酸配列を含む重鎖を含む：ＧＦＴＦＤＤＹＧ（配列番号３；ＨＣＤＲ１  ＡＢ７９）、ＩＳＷＮＧＧＫＴ（配列番号４；ＨＣＤＲ２  ＡＢ７９）、およびＡＲＧＳＬＦＨＤＳＳＧＦＹＦＧＨ（配列番号５；ＨＣＤＲ３  ＡＢ７９）。いくつかの実施形態では、抗体は、以下のＣＤＲアミノ酸配列を含む軽鎖を含む：ＳＳＮＩＧＤＮＹ（配列番号６；ＬＣＤＲ１  ＡＢ７９）、ＲＤＳ（配列番号７；ＬＣＤＲ２  ＡＢ７９）、およびＱＳＹＤＳＳＬＳＧＳ（配列番号８；ＬＣＤＲ３  ＡＢ７９。いくつかの実施形態では、抗体は、以下のＣＤＲアミノ酸配列を含む重鎖：ＧＦＴＦＤＤＹＧ（配列番号３；ＨＣＤＲ１  ＡＢ７９）、ＩＳＷＮＧＧＫＴ（配列番号４；ＨＣＤＲ２  ＡＢ７９）、ＡＲＧＳＬＦＨＤＳＳＧＦＹＦＧＨ（配列番号５；ＨＣＤＲ３  ＡＢ７９）と、以下のＣＤＲアミノ酸配列を含む軽鎖：ＳＳＮＩＧＤＮＹ（配列番号６；ＬＣＤＲ１  ＡＢ７９）、ＲＤＳ（配列番号７；ＬＣＤＲ２  ＡＢ７９）、およびＱＳＹＤＳＳＬＳＧＳ（配列番号８；ＬＣＤＲ３  ＡＢ７９）と、を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９の可変重（ＶＨ）鎖アミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【０１０６】
【化１】
2021510737.tif 000043
【０１０７】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１０の可変軽（ＶＬ）鎖アミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０１０８】
【化２】
2021510737.tif 000044
【０１０９】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９のＶＨ鎖アミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１０のＶＬ鎖アミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む。
【０１１０】
当業者によって理解されるように、可変重鎖および軽鎖は、ヒトＩｇＧ定常ドメイン配列、一般的にはＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４に結合され得る。
【０１１１】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１１の重鎖（ＨＣ）鎖アミノ酸配列を含む。
【０１１２】
【化３】
2021510737.tif 000045
【０１１３】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１２の軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列を含む。
【０１１４】
【化４】
2021510737.tif 000046
【０１１５】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１１のＨＣアミノ酸配列と、配列番号１２のＬＣアミノ酸配列と、を含む。
【０１１６】
本発明は、ヒトおよびサイノＣＤ３８の両方に結合し、これらのアミノ酸残基の少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％と相互作用する抗体を包含する。
【０１１７】
いくつかの実施形態では、抗体は、完全長である。本明細書における「完全抗体」とは、抗体の天然の生物学的形態を構成する構造を意味し、これは、可変および定常領域を含み、本明細書で概説するとおり１つ以上の修飾を含む。
【０１１８】
あるいは、抗体は、抗体断片、モノクローナル抗体、二重特異性抗体、ミニボディ、ドメイン抗体、合成抗体（本明細書では「抗体模倣物」と称する場合もある）、キメラ抗体、ヒト化抗体、抗体融合物（「抗体コンジュゲート」とも称される場合がある）、およびそれぞれの断片などが挙げられるが、これらに限定されない、様々な構造であり得る。具体的な抗体断片としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなるＦａｂ断片、（ｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、（ｉｉｉ）単一抗体のＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｉｖ）単一の可変領域からなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６）、（ｖ）単離されたＣＤＲ領域、（ｖｉ）２つの結合したＦａｂ断片を含む二価の断片であるＦ（ａｂ’）２断片、（ｖｉｉ）単鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）であって、ＶＨドメインおよびＶＬドメインが、２つのドメインが会合して抗原結合部位を形成することができるペプチドリンカーにより結合されているもの（Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２：４２３−４２６、Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３）、（ｖｉｉｉ）二重特異性単鎖Ｆｖ（ＷＯ０３／１１１６１）、および（ｉｘ）遺伝子融合により構築された多価または多重特異性（ｍｕｌｔｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）断片である「ダイアボディ」または「トリアボディ」（Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．３２６：４６１−４７９；ＷＯ９４／１３８０４；Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８）。
【０１１９】
抗体修飾
本発明はさらに、変異抗ＣＤ３８抗体も提供する。すなわち、本開示の抗体には多数の修飾がなされてよく、これには、ＣＤＲにおけるアミノ酸修飾（親和性成熟）、Ｆｃ領域におけるアミノ酸修飾、グリコシル化変異体、他のタイプの共有結合修飾などが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２０】
「変異体」という用語は、親ポリペプチドのポリペプチドとは異なるポリペプチドを意味する。アミノ酸変異体は、アミノ酸の置換、挿入および欠失を含み得る。一般的に、本明細書に記載するとおり、タンパク質の機能が依然として存在する限り、変異体には任意の数の修飾が含まれ得る。すなわち、ＡＢ７９のいずれかのＣＤＲで生成されたアミノ酸変異体の場合、例えば、抗体は、ヒトおよびカニクイザルＣＤ３８の両方に依然として、特異的に結合し、ＲＢＣに結合しないか、またはダラツムマブと比較して、減少した、もしくは１０％未満、２０％未満、３０％未満、４０％未満、５０％未満の結合を有する。「変異体Ｆｃ領域」とは、少なくとも１つのアミノ酸修飾によって、野生型または親Ｆｃ配列のものとは異なるＦｃ配列を意味する。Ｆｃ変異体は、Ｆｃポリペプチド自体、Ｆｃ変異体ポリペプチドを含む組成物、またはアミノ酸配列を指すこともある。例えば、アミノ酸変異体がＦｃ領域で生成される場合、変異体抗体は、抗体の特定の用途または適応症に必要な機能を維持する必要がある。例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸置換、例えば、１〜１０、１〜５、１〜４、１〜３、および１〜２個の置換を利用することができる。例えば米国特許第６，０８６，８７５号、同第６，７３７，０５６号、同第７，３１７，０９１号、同第７，６７０，６００号、同第８，０８４，５８２号、同第８，１８８，２３１号、同第８，３６７，８０５号、同第８，９３７，１５８号、および同第９，０４０，０４１号（これらの全ては、その全体が参照により明示的に組み込まれている）に概説されているように、１つ以上の位置で、特にＦｃ受容体への結合を増加させる特定のアミノ酸置換のために、適切な修飾を行うことができる。
【０１２１】
例えば、野生型または操作されたタンパク質のＦｃ領域に１〜５個の修飾、ならびにＦｖ領域に１〜５個の修飾があることが望ましい場合がある。変異体ポリペプチド配列は、親配列（例えば、ＡＢ７９の可変領域、定常領域、および／または重鎖ならびに軽鎖配列）と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有することが好ましい。
【０１２２】
「アミノ酸置換」という用語は、親ポリペプチド配列の特定の位置にあるアミノ酸を別のアミノ酸で置き換えることを意味する。例えば、置換Ｓ１００Ａは、１００位のセリンがアラニンで置換されている変異体ポリペプチドを指す。「アミノ酸挿入」という用語は、親ポリペプチド配列の特定の位置におけるアミノ酸の付加を意味する。「アミノ酸欠失」という用語は、親ポリペプチド配列の特定の位置にあるアミノ酸の除去を意味する。
【０１２３】
「親抗体」および「前駆抗体」という用語は、その後修飾されて変異体を生成する未修飾抗体を意味する。一実施形態では、本明細書の親抗体はＡＢ７９である。親抗体は、ポリペプチド自体、親ポリペプチドを含む組成物、またはそれをコードするアミノ酸配列を指してもよい。したがって、「親Ｆｃポリペプチド」という用語は、変異体を生成するように修飾されたＦｃポリペプチドを意味する。
【０１２４】
本明細書における「野生型」または「ＷＴ」、および「天然」は、対立遺伝子変異を含む、天然に見出されるアミノ酸配列またはヌクレオチド配列を意味する。ＷＴタンパク質、ポリペプチド、抗体、免疫グロブリン、ＩｇＧなどは、意図的に修飾されていないアミノ酸配列またはヌクレオチド配列を有する。
【０１２５】
いくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸修飾が、抗ＣＤ３８抗体のＣＤＲのうちの１つ以上において行われる。一般に、１、２、または３個のアミノ酸のみが、いずれかの単一のＣＤＲにおいて置換され、通常は４から、５、６、７、８、９または１０個以上の変化はＣＤＲのセット内ではなされない。しかしながら、任意のＣＤＲにおける無置換、１、２、または３置換の任意の組み合わせが、独立してかつ任意選択で、任意の他の置換と組み合わされ得ることを理解されたい。
【０１２６】
いくつかの場合において、ＣＤＲにおけるアミノ酸修飾は、「親和性成熟」と称される。「親和性成熟」抗体は、１つ以上のＣＤＲにおいて１つ以上の改変（複数可）を有するものであり、この改変は、それらの改変（複数可）を有しない親抗体と比較して抗原に対する抗体の親和性の改善をもたらす。いくつかの場合において、抗体のその抗原に対する親和性を低下させることが望ましい場合がある。
【０１２７】
親和性成熟は、「親」抗体と比較して、少なくとも約１０％〜５０％、１００％、１５０％以上、または１〜５倍、抗原に対する抗体の結合親和性を増加させるためになされ得る。好ましい親和性成熟抗体は、標的抗原に対して、ナノモル、またはさらにはピコモル親和性を有する。親和性成熟抗体は、既知の手順により製造される（例えば、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１０：７７９−７８３；Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：３８０９−３８１３；Ｓｈｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｇｅｎｅ  １６９：１４７−１５５；Ｙｅｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４−２００４；Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０−９；およびＨａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９−８９６を参照されたい）。
【０１２８】
代替的に、例えば、抗原に対する抗体の親和性を著しく改変しない「サイレント」なアミノ酸修飾が、本発明の抗体のＣＤＲのうちの１つ以上で行われ得る。これらは、（本発明の抗体をコードする核酸に対して行われ得るような）発現の最適化を含むいくつかの理由で行われ得る。
【０１２９】
したがって、変異体ＣＤＲおよび抗体は、本発明のＣＤＲおよび抗体の定義内に含まれ、すなわち、本発明の抗体は、ＡＢ７９ＣＤＲのうちの１つ以上において、アミノ酸修飾を含み得る。さらに、以下に概説されるように、アミノ酸修飾は、独立してかつ任意選択で、フレームワークおよび定常領域を含む、ＣＤＲ外の任意の領域でも行われ得る。
【０１３０】
いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ３８（配列番号１）およびカニクイザルＣＤ３８（配列番号２）に対して特異的な、ＡＢ７９の変異体抗体が記載されている。この抗体は６つのＣＤＲからなり、この抗体の各ＣＤＲは、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、および／または配列番号８と、機能を大幅に変更または阻害することなく、０、１、２個以上のアミノ酸置換により異なり得る。
【０１３１】
上記で概説された修飾に加えて、他の修飾がなされ得る。例えば、分子は、ＶＨドメインとＶＬドメインとを連結するジスルフィド架橋の組み込みにより安定化されてもよい（Ｒｅｉｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．１４：１２３９−１２４５）。さらに、以下に概説するようになされ得る抗体の様々な共有結合修飾が存在する。
【０１３２】
抗体の共有結合修飾は、本発明の範囲内に含まれ、常にではないが通常は、翻訳後に行われる。例えば、選択された側鎖またはＮ末端もしくはＣ末端残基と反応可能な有機誘導体化剤を抗体の特定のアミノ酸残基と反応させることにより、複数のタイプの抗体の共有結合修飾が分子に導入される。
【０１３３】
いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＤ３８抗体は、ＣＤ３８の１つ以上の残基または領域に特異的に結合するが、ＢＳＴ−１（骨髄間質細胞抗原−１）およびＭｏ５（ＣＤ１５７とも呼ばれる）などのＣＤ３８と相同性の他のタンパク質とも交差反応しない。
【０１３４】
典型的には、交差反応性の欠如は、適切なアッセイ条件下、十分量の分子を用いたＥＬＩＳＡおよび／またはＦＡＣＳ分析により評価される場合、分子間の相対的競合阻害が約５％未満であることを意味する。
【０１３５】
ＣＤ３８活性の阻害および副作用の軽減
開示された抗体は、リガンド−受容体相互作用のブロック、または受容体コンポーネント相互作用の阻害での使用が見出され得る。本発明の抗ＣＤ３８は、「遮断（ｂｌｏｃｋｉｎｇ）」または「中和」するものであってよい。「中和抗体」は、ＣＤ３８への結合により、ＣＤ３８の生物活性、例えば、リガンドと相互作用する能力、酵素活性、シグナリング能力、および特に活性化リンパ球を生じさせる能力を阻害する抗体を指す。ＣＤ３８の生物活性の阻害は、当該技術分野において既知の複数の標準的インビトロまたはインビボアッセイのうちの１つ以上により評価され得る。
【０１３６】
「結合を阻害する」および「結合を遮断する」という用語（例えば、ＣＤ３８抗体のＣＤ３８への結合の阻害／遮断を指す場合）は、部分的および完全な阻害／遮断の両方を包含する。ＣＤ３８へのＣＤ３８抗体の結合の阻害／遮断は、ＣＤ３８抗体が阻害または遮断なしでＣＤ３８に結合するときに起こる細胞シグナル伝達の正常レベルまたはタイプを低下または変更し得る。阻害および遮断はまた、抗ＣＤ３８抗体と接触しないリガンドと比較して、抗ＣＤ３８抗体と接触させた場合のＣＤ３８抗体のＣＤ３８への結合親和性が、測定可能に減少することを含むことが意図され、例えば、ＣＤ３８抗体のＣＤ３８への結合が、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９９％、または１００％遮断されることなどである。
【０１３７】
開示された抗ＣＤ３８抗体はまた、細胞増殖を阻害し得る。「増殖を阻害する」という用語は、抗ＣＤ３８抗体と接触していない同じ細胞の増殖と比較した場合の、抗ＣＤ３８抗体と接触したときの細胞増殖の測定可能な減少を指し、例えば、細胞培養物の増殖が少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９９％、または１００％阻害されることなどである。
【０１３８】
いくつかの実施形態では、開示された抗ＣＤ３８抗体は、活性化されたリンパ球および形質細胞を枯渇させることができる。この文脈における「枯渇」という用語は、未治療の対象と比較した、対象における活性化リンパ球および／または形質細胞の血清レベルの測定可能な減少を意味する。一般に、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９９％、または１００％の枯渇が見られる。下記実施例で示すとおり、本発明の抗体が示す特定の利点の一つは、投与後にこれらの細胞が復元可能なことであり、すなわち、いくつかの治療で知られるように（例えば、抗ＣＤ２０抗体を用いた場合など）、細胞枯渇が長期間継続すると、所望しない副作用が生じ得る。本明細書に示されるように、活性化リンパ球および／または形質細胞に対する効果は復元可能である。
【０１３９】
本発明の抗ＣＤ３８抗体は、先行技術の抗ＣＤ３８抗体と比較して副作用の低下を可能にする。いくつかの実施形態では、ＡＢ７９はＴＥＡＥを誘発しない。いくつかの実施形態では、ＡＢ７９は、ＭＯＲ２０２などの他の抗ＣＤ３８抗体と比較して、ＴＥＡＥの低減を可能にする。ＴＥＡＥは通常、グレード１、２、３、４、および５と表記され、グレード１は最も重症度が低く、グレード５は最も重度のＴＥＡＥである。腫瘍薬についての有害事象共通用語（Ｃｏｍｍｏｎ  Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  Ａｄｖｅｒｓｅ  Ｅｖｅｎｔｓ（ＣＴＣＡＥ）規準に関するＦＤＡおよびその他のガイドラインに基づき（例えば、ｈｔｔｐｓ：／／ｅｖｓ．ｎｃｉ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｆｔｐ１／ＣＴＣＡＥ／ＣＴＣＡＥ＿４．０３＿２０１０−０６−１４＿ＱｕｉｃｋＲｅｆｅｒｅｎｃｅ＿５ｘ７．ｐｄｆ；ならびにｈｔｔｐｓ：／／ｃｔｅｐ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖ／ｐｒｏｔｏｃｏｌｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ／ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ＿ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ／ｃｔｃ．ｈｔｍ；およびＮｉｌｓｓｏｎ  ａｎｄ  Ｋｏｋｅ（２００１）Ｄｒｕｇ  Ｉｎｆｏｒｍ．Ｊ．３５：１２８９−１２９９）、このようなグレードの一般的な決定方法を下記に示す。グレード１は軽症であり、無症候性または軽度の症状がある、臨床的または診断的観察のみで、介入を要さないものである。グレード２は中等症であり、最小、局所的、または非侵襲的な介入を要し、年齢相応の日常生活動作（ＡＤＬ）を制限するものである。グレード３は重症または医学的に重大であるが、ただちに声明を脅かすわけではなく、入院または入院の延長を要し、不自由であり、セルフケアＡＤＬを制限するものである。グレード４は生命にかかわる結果であり、緊急の介入を要するものである。グレード５は、ＡＥ関連する死である。
【０１４０】
いくつかの実施形態では、ＡＢ７９は、ＭＯＲ２０２などの他の抗ＣＤ３８抗体と比較して、ＴＥＡＥのグレードの低減を可能にする。いくつかの実施形態では、ＡＢ７９は、他の抗ＣＤ３８抗体と比較して、グレード５からのグレード４へのＴＥＡＥのグレードの低減を可能にする。いくつかの実施形態では、ＡＢ７９は、他の抗ＣＤ３８抗体と比較して、グレード４からのグレード３へのＴＥＡＥのグレードの低下を可能にする。いくつかの実施形態では、ＡＢ７９は、他の抗ＣＤ３８抗体と比較して、グレード３からのグレード２へのＴＥＡＥのグレードの低下を可能にする。いくつかの実施形態では、ＡＢ７９は、他の抗ＣＤ３８抗体と比較して、グレード２からのグレード１へのＴＥＡＥのグレードの低下を可能にする。
【０１４１】
いくつかの実施形態では、ＡＢ７９は、貧血（溶血性貧血を含む）、血小板減少症、疲労、輸注関連反応（ＩＲＲ）、白血球減少症、リンパ球減少症、および悪心からなる群から選択される１つ以上のＴＥＡＥのグレードの低下を可能にする。いくつかの実施形態では、ＡＢ７９は、貧血（溶血性貧血を含む）、血小板減少症、疲労、輸注関連反応（ＩＲＲ）、白血球減少症、リンパ球減少症、および悪心からなる群から選択される１つ以上のＴＥＡＥの発生の低下を可能にする。
【０１４２】
いくつかの実施形態では、溶血性貧血を含む貧血の存在および／またはグレードを決定するために診断試験が使用される。溶血性貧血を含む貧血の診断試験は、ヘモグロビンレベルの測定を含む。一般に、ヘモグロビンレベルは次のように解釈される：（ｉ）非常に軽度の貧血／貧血の不在：≧１２．０ｇ／ｄＬ、（ｉｉ）軽度：１０〜１２ｇ／ｄＬ、（ｉｉｉ）中程度：８〜１０ｇ／ｄＬ、（ｉｖ）重度：６〜８ｇ／ｄＬ、（ｖ）非常に重度：≦６ｇ／ｄＬ。溶血性貧血を含む貧血の他の診断試験は、ハプトグロビンレベルの測定を含む。一般的に、ハプトグロビンレベル≦２５ｍｇ／ｄＬは、溶血性貧血を含む貧血の存在を示す。その他の診断テストには、直接抗グロブリン試験（ＤＡＴ）（直接クームズ試験とも称される）が含まれ、これは、ＲＢＣがインビボで免疫グロブリン、補体、またはその両方でコーティングされているかどうかを判定する多面使用される。
【０１４３】
いくつかの実施形態では、血小板減少症の存在および／またはグレードを決定するために診断試験が使用される。一般に、血小板減少症の診断テストは、血液１マイクロリットル（μＬ）あたりの血小板数の測定を含む。正常には、血液１μＬ当たり１５０×１０３〜４５０×１０３個の血小板がある。一般に、血小板減少症は、血液１μＬあたり１５０×１０３個未満血小板の場合に診断される。軽度の血小板減少症は、血液１μＬあたり７０〜１５０×１０３個であれば一般に診断される。中程度の血小板減少症は、１μＬあたり２０〜７０×１０３個であれば一般に診断される。重度の血小板減少症は、血液１μＬあたり＜２０×１０３個であれば一般に診断される。
【０１４４】
疾患の適応症
本発明の抗体、方法、および投与単位は、ＣＤ３８関連疾患の治療または改善を含む、様々な用途での使用を見出す。
【０１４５】
ＣＤ３８は未成熟造血細胞で発現し、成熟細胞ではダウンレギュレートされ、活性化リンパ球および形質細胞では高レベルで再発現される。例えば、活性化Ｂ細胞、形質細胞、活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞、活性化ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、成熟樹状細胞（ＤＣ）、および活性化単球で高いＣＤ３８発現が見られる。特定の条件は、ＣＤ３８を発現する細胞に関連し、特定の条件は、細胞表面でのＣＤ３８の過剰発現、高密度発現、またはアップレギュレートされた発現に関連している。細胞集団がＣＤ３８を発現するか否かは、当技術分野において既知の方法、例えば、診断的用途について以下に概ね記載されるように、ＣＤ３８に特異的に結合する抗体または免疫組織化学アッセイによって標識される所与の集団における細胞の割合のフローサイトメトリー測定により決定できる。例えば、細胞の約１０〜３０％でＣＤ３８発現が検出される細胞の集団は、ＣＤ３８に対して弱い陽性を有すると見なすことができ、細胞の約３０％以上でＣＤ３８発現が検出された細胞集団は、ＣＤ３８の明確な陽性と見なすことができる（Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７２：３５１−３５６のように）が、細胞集団がＣＤ３８を発現するかどうかを判定するために他の基準を使用することができる。細胞の表面上の発現の密度は、例えば、ＣＤ３８に特異的に結合する抗体を使用して蛍光標識された細胞の平均蛍光強度のフローサイトメトリー測定など、当技術分野において既知の方法を使用して決定することができる。
【０１４６】
本発明の治療用抗ＣＤ３８抗体は、ＣＤ３８陽性細胞に結合し、ＣＤＣおよびＡＤＣＣ経路の両方を含む複数の作用機序を介してこれらの細胞の枯渇をもたらす。
【０１４７】
特定の条件が、ＣＤ３８を発現する細胞に関連し、特定の条件は、細胞表面でのＣＤ３８の過剰発現、高密度発現、またはアップレギュレートされた発現に関連していることは当該技術分野において既知である。細胞集団がＣＤ３８を発現するか否かは、当技術分野において既知の方法、例えば、診断的用途について以下に概ね記載されるように、ＣＤ３８に特異的に結合する抗体または免疫組織化学アッセイによって標識される所与の集団における細胞の割合のフローサイトメトリー測定により決定することができる。例えば、細胞の約１０〜３０％でＣＤ３８発現が検出される細胞の集団は、ＣＤ３８に対して弱い陽性を有すると見なすことができ、細胞の約３０％以上でＣＤ３８発現が検出された細胞集団は、ＣＤ３８の明確な陽性と見なすことができる（Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７２：３５１−３５６）が、細胞集団がＣＤ３８を発現するかどうかを判定するために他の基準を使用することができる。細胞の表面上の発現の密度は、例えば、ＣＤ３８に特異的に結合する抗体を使用して蛍光標識された細胞の平均蛍光強度のフローサイトメトリー測定など、当技術分野において既知の方法を使用して決定することができる。
【０１４８】
一態様では、本発明は、開示される抗体の薬学的有効量を患者に投与することを含む、ＣＤ３８を発現する細胞の増殖に関連する病態を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態では、病態は癌であり、特定の実施形態では、癌は血液癌である。いくつかの実施形態では、病態は、多発性骨髄腫、慢性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、および形質細胞白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、またはバーキットリンパ腫である。
【０１４９】
いくつかの実施形態では、病態は多発性骨髄腫であり、治療用抗ＣＤ３８抗体は、ダラツムマブと比較して、ヒトＲＢＣに結合しないか、またはヒトＲＢＣへの減少した結合を有する。いくつかの実施形態では、病態は多発性骨髄腫であり、治療用抗ＣＤ３８抗体は、ダラツムマブと比較して、カニクイザルＲＢＣに結合しないか、またはカニクイザルＲＢＣへの減少した結合を有する。いくつかの実施形態では、病態は多発性骨髄腫であり、治療用抗ＣＤ３８抗体は、ヒトもしくはカニクイザルＲＢＣに結合しないか、またはヒトもしくはカニクイザルＲＢＣへの減少した結合を有する。
【０１５０】
ＣＬＬは、西側諸国における成人の最も一般的な白血病である。ＣＬＬは、リンパ節および他のリンパ系組織に関与する、成熟した外観を有するリンパ球のクローン性増殖であり、骨髄への進行性浸潤を有し、末梢血での存在が見られる。Ｂ細胞型（Ｂ−ＣＬＬ）が、大部分の症例の代表である。
【０１５１】
慢性リンパ性白血病（Ｂ−ＣＬＬ）のＢ細胞型
Ｂ−ＣＬＬは、長年にわたり、持続的な形で骨髄および末梢血に蓄積する反応不顕性の単クローン性Ｂ系細胞の進行性の増加により特徴付けられる難病である。ＣＤ３８の発現は、Ｂ−ＣＬＬに対する独立した予後不良因子と考えられる。（Ｈａｍｂｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｂｌｏｏｄ  ９９：１０２３−９）。
【０１５２】
Ｂ−ＣＬＬは、緩慢性と進行性の２つのサブタイプにより特徴付けられる。これらの臨床表現型は、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＩｇＶＨ）遺伝子における体細胞突然変異の有無と相関する。本明細書で使用される場合、緩慢性Ｂ−ＣＬＬとは、変異したＩｇＶＨ遺伝子を有し、かつ／または緩慢性Ｂ−ＣＬＬと関連する１つ以上の臨床表現型を示す対象における障害を指す。本明細書で使用される場合、進行性Ｂ−ＣＬＬとは、変異していないＩｇＶＨ遺伝子を有し、かつ／または進行性Ｂ−ＣＬＬと関連する１つ以上の臨床表現型を示す対象における障害を指す。
【０１５３】
Ｂ−ＣＬＬの現在の標準的治療法は、一時的な緩和であり、細胞増殖抑制剤であるクロラムブシルまたはフルダラビンを用いて主に実施される。再発した場合には、リツキシマブ（ＣＤ２０に対するモノクローナル抗体）またはアレムツズマブ（ＣＤ５２に対するモノクローナル抗体）と組み合わせてフルダラビン、シクロホスファミドを用いる併用療法が多くの場合開始される。ある試験では、再発性または難治性の進行性のＢ細胞ＮＨＬを有する３５人の患者に高用量化学療法（ＨＣＴ）が行われ、続いてリツキシマブ３７５ｍｇ／ｍ２が４０日目に開始された４用量で、さらに１８０日目に開始したさらに４用量を繰り返した。リツキシマブ注入は、１つのグレードの３／４の注入関連毒性のみで十分に忍容された。この試験で指摘された予期しない有害事象は、患者の半数以上の好中球減少症の遅延であった（グレード３または４の好中球減少症の４６のエピソードを伴う１９／３５人の患者；ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎａｔｕｒｅ．ｃｏｍ／ａｒｔｉｃｌｅｓ／２４０２６３９でオンラインで見出すことができる、Ｋｏｓｍａｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｌｅｕｋｅｍｉａ  １６：２００４−２０１５）。別の試験では、６人の患者が１日置きに週３回で１２週間、静脈内注入によりアレムツズマブを投与された。患者に忍容されるまで、用量を毎日徐々に増やした（３、１０、次いで３０ｍｇ）。主要なＴＥＡＥは、血液学的有害事象における貧血、好中球減少症（各６／６人の患者）および血小板減少症（５／６人の患者）であった（Ｉｓｈｉｚａｗａ  ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．４７（１）：５４−６０）。したがって、血液学的有害事象の減少を伴うＢ−ＣＬＬの治療に対する重大な満たされていない医学的必要性がある。いくつかの実施形態では、開示される抗ＣＤ３８抗体を使用してＢ−ＣＬＬを治療する方法が提供され、以下に概説されるように、これは、任意でかつ独立して上記の薬物のいずれかを含む併用療法を使用して行われ得る。
【０１５４】
多発性骨髄腫（ＭＭ）
多発性骨髄腫は、骨髄における形質細胞の新生増殖により特徴付けられるＢ細胞系の悪性障害である。骨髄腫細胞の増殖は、様々な作用を引き起こし、これには、骨における溶解性病変（穴）、赤血球数の減少、異常タンパク質の産生（腎臓、神経および他の臓器へのダメージを伴う）、免疫系機能の低下および血中カルシムレベルの上昇（高カルシウム血症）が挙げられる。現在、治療の選択肢には、化学療法、好ましくは、可能であれば自家幹細胞移植（ＡＳＣＴ）と関連する化学療法が含まれる。これらの治療レジメンは、中程度の奏効率を呈する。ただし、全生存期間のわずかな変化のみが観察され、生存期間の中央値はおよそ３年である。したがって、多発性骨髄腫の治療には重大な満たされていない医学的必要性がある。いくつかの実施形態では、開示される抗体を使用して多発性骨髄腫を治療するための方法が提供される。
【０１５５】
新たに診断されたＭＭ（ＮＤＭＭ）は、再発性ＭＭまたは再発性および難治性のＭＭ（ＲＲＭＭ）とは区別される。再発性ＭＭは、以前の反応後の疾患の再発と見なされ、客観的な検査室および放射線学的基準に基づいて定義されており：≧２５％の血清または尿のモノクローナルタンパク質（Ｍタンパク質）の増加、または≧２５％の、それぞれ、最下点からの関与する無血清軽鎖と関与しない無血清軽鎖との間の差異、または新しい形質細胞腫もしくは高カルシウム血症の発生である。非分泌性疾患の患者では、再発は骨髄形質細胞の増加として定義される。一般に、再発治療の適応症は、上記の１つ以上のＭＭ症状の出現もしくは再発のいずれか、または迅速かつ一貫した生化学的再発として定義されている。再発性／難治性ＭＭ（ＲＲＭＭ）は、療法に対して非応答性または進行性になるか、または以前の療法に対して最小応答（ＭＲ）または良好な応答を達成した患者における最後の処置から６０日以内に療法に対して非応答性または進行性になる疾患として定義される（Ｓｏｎｎｅｖｅｌｄ  ａｎｄ  Ｂｒｏｉｊｌ（２０１６）Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ  １０１（４）：３９６−４０６）。
【０１５６】
意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）およびくすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）
意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）およびくすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）は、骨髄における単クローン性形質細胞増殖と、末端器官障害の欠如とにより特徴付けられる無症候性の前腫瘍性障害である。
【０１５７】
くすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）は、症候性または活動型多発性骨髄腫への高い進行リスクを有する、形質細胞の無症候性増殖障害である（Ｋｙｌｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．”Ｍｅｄ．“３５６（２５）：２５８２−２５９０）。ＳＭＭを定義する国際コンセンサス基準が２００３年に採択され、当該基準は、患者が、＞３０ｇ／ＬのＭタンパク質レベル、および／または＞１０％の骨髄クローン性形質細胞を有することを必要とする（Ｉｎｔｅｒｎａｔ．Ｍｙｅｌｏｍａ  Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ（２００３）Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．１２１：７４９−７５７）。患者は、骨病変または症状を含む臓器または関連組織の損傷を有してはならない。最近の試験により、２つのＳＭＭサブセットが同定されている：ｉ）進行性疾患を有する患者およびｉｉ）非進行性疾患を有する患者（Ｉｎｔｅｒｎａｔ．Ｍｙｅｌｏｍａ  Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ（２００３）Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．１２１：７４９−７５７）。
【０１５８】
ＳＭＭは、末端器官障害が存在しないことから、意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）と類似する（Ｋｙｌｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．”Ｍｅｄ．“３５６（２５）：２５８２−２５９０）。しかしながら、臨床的には、ＳＭＭは、２０年で活動型多発性骨髄腫またはアミロイドーシスに進行する可能性がはるかに高い（ＳＭＭでは７８％の確率であるのに対し、ＭＧＵＳでは２１％）（Ｋｙｌｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．”Ｍｅｄ．“３５６（２５）：２５８２−２５９０）。
【０１５９】
ＭＧＵＳを定義する国際コンセンサス基準は、患者が、＜３０ｇ／ＬのＭタンパク質レベル、＜１０％の骨髄形質細胞のレベルを有し、かつ骨病変または症状を含む臓器または関連組織の損傷がないことを必要とする（Ｉｎｔｅｒｎａｔ．Ｍｙｅｌｏｍａ  Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ（２００３）Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．１２１：７４９−７５７）。
【０１６０】
ＣＤ３８関連病態
本発明の抗体、方法、および投与単位は、炎症および免疫疾患に関連する疾患ならびに病態、特に活性化リンパ球に関連する疾患などのＣＤ３８関連疾患の治療または改善を含む、様々な用途での用途を見出す。本発明の抗ＣＤ３８抗体は、ＣＤ３８陽性細胞に結合し、ＣＤＣおよびＡＤＣＣ経路の両方を含む複数の作用機序を介してこれらの細胞の、例えば、活性化リンパ球の枯渇をもたらす。
【０１６１】
したがって、本発明の抗体を用いて、疾患要素としてＣＤ３８発現の増加またはＣＤ３８発現細胞数の増加を示す任意の自己免疫疾患を治療してよい。これら疾患として、以下の疾患が挙げられるが、これらに限定されない：同種膵島移植片拒絶（ａｌｌｏｇｅｎｉｃ  ｉｓｌｅｔ  ｇｒａｆｔ  ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ）、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫性アジソン病、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）、副腎の自己免疫疾患、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性心筋炎、自己免疫性好中球減少症、自己免疫性卵巣炎および精巣炎、自己免疫性血小板減少症、自己免疫性蕁麻疹、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、真菌ミオパチー、キャッスルマン症候群、セリアックスプルー皮膚炎、慢性疲労免疫機能障害症候群、慢性炎症性脱髄性多発性神経障害、チャーグ−ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、ＣＲＥＳＴ症候群、寒冷凝集素病、クローン病、皮膚筋炎、円板状狼瘡、本態性混合型寒冷グロブリン血症、第８因子欠乏症、線維筋痛−線維筋炎、糸球体腎炎、グレーブス病、ギランバレー、グッドパスチャー症候群、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、橋本甲状腺炎、血友病Ａ、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡ腎症、ＩｇＭ多発ニューロパシー、免疫介在性血小板減少症、若年性関節炎、川崎病、扁平苔癬、エリテマトーデス、メニエール病、混合性結合組織病、多発性硬化症、１型糖尿病、重症筋無力症、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発性動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群、リウマチ性多発筋痛、多発性筋炎および皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー現象、ライター症候群、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、固形臓器移植拒絶、スティッフマン症候群、全身性エリテマトーデス、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、血栓性血小板減少性紫斑病、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、血管炎、例えば、疱疹状皮膚炎型血管炎（ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ  ｈｅｒｐｅｔｉｆｏｒｍｉｓ  ｖａｓｃｕｌｉｔｉｓ）、白斑、およびウェジナー肉芽腫症。
【０１６２】
特定の使用は、いくつかの実施形態では、多数の疾患の診断および／または治療に使用するための本発明の抗体の使用であり、これらの疾患としては、限定されないが自己免疫疾患が挙げられ、自己免疫疾患としては、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、関節リウマチ（ＲＡ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、潰瘍性大腸炎、および移植片対宿主病が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６３】
したがって、例えば、高い形質細胞レベルを示すＳＬＥ患者、ならびにＣＤ２０ベースの治療に反応しないことが示されているＲＡ患者などの、高い形質細胞含量を有する患者を選択できる。
【０１６４】
インビボ投与のための抗体組成物
本発明に従って使用される抗体の製剤は、任意の薬学的に許容される担体、賦形剤または安定化剤とともに、所望の純度を有する抗体を混合することにより保存のために凍結乾燥製剤または水溶性の形態で調製される（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ（１９８０）Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．）。
【０１６５】
本明細書の製剤はまた、治療される特定の適応症に必要な２つ以上の活性化合物、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有するものも含有し得る。例えば、抗体に他の特異性を提供することが望ましい場合がある。あるいは、またはさらに、組成物は、細胞傷害剤、サイトカイン、増殖阻害剤、および／または小分子アンタゴニストを含み得る。かかる分子は、意図する目的に有効な量で組み合わせて存在するのが好適である。
【０１６６】
皮下投与
本発明は、ＡＢ７９などの本明細書に記載される抗ＣＤ３８抗体が治療的に有効である十分に低い投与量で投与することができ、それに低容量の液体製剤の皮下投与を可能にするという予想外の発見に基づく。皮下投与は、最小侵襲的な投与方法であり、短期および長期の治療に使用できる最も用途が広く、したがって望ましい投与方法であると考えられている。いくつかの実施形態では、皮下投与は注射により行うことができる。いくつかの実施形態では、注射または装置の部位は、複数の注射または装置が必要なときに交替させることができる。
【０１６７】
したがって、特に患者の生涯の間（例えば、早ければ子供の生後１年目から）から定期的に製剤を服用しなければならない場合があるため、皮下製剤は患者にとって自己投与するのにはるかに容易である。さらに、皮下送達の容易さおよび速度により、患者のコンプライアンスが向上し、必要に応じて薬物へのより迅速なアクセスが可能になる。したがって、本明細書で提供される抗ＣＤ３８抗体の皮下製剤は、先行技術を超える実質的な利益を提供し、特定の満たされていないニーズを解決する。
【０１６８】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、皮下経路を介して既知の方法に従って対象に投与される。いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、皮下注射によって投与することができる。特定の実施形態では、皮下製剤は、反復または連続注射のために患者の同じ部位に皮下注射される（例えば、上腕、大腿の前面、腹部の下部、または上背部に投与される）。他の実施形態では、皮下製剤は、患者の異なるまたは交替する部位に皮下注射される。製剤の単回投与または複数回投与を使用されてもよい。
【０１６９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の皮下単位剤形は、癌の治療に使用することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の皮下単位剤形は、血液癌の治療に使用することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の皮下単位剤形は、多発性骨髄腫の治療に使用することができる。
【０１７０】
いくつかの実施形態では、ヒトＲＢＣに結合する本発明の抗体は、一時的に増加した生物学的利用能を有する。いくつかの実施形態では、ＲＢＣに一時的に結合する本発明の抗体の生物学的利用能は、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％以上増加している。いくつかの実施形態では、ＲＢＣに一時的に結合する本発明の抗体の生物学的利用能は、１１０％、１２０％、１３０％、１４０％、１５０％、１６０％、１７０％、１８０％、１９０％、２００％、２５０％、または３００％以上である。
【０１７１】
いくつかの実施形態では、生物学的利用能の増加により、皮下投与が可能になる。いくつかの実施形態では、生物学的利用能の増加は、本発明の抗体がＲＢＣに一時的に結合するという事実によるものである。いくつかの実施形態では、ヒトの生物学的利用能の増加は、本発明の抗体がＲＢＣに差次的に結合するという事実によるものである。
【０１７２】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、および／またはＴ細胞の枯渇をもたらす。いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、Ｂ細胞またはＴ細胞の枯渇と比較して、ＮＫ細胞の増大した枯渇を可能にする。いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、Ｂ細胞と比較して、ＮＫ細胞の増大した枯渇、ならびにＴ細胞と比較して、ＮＫ細胞の増大した枯渇を可能にする。いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、Ｂ細胞と比較して、ＮＫ細胞の増大した枯渇、ならびにＴ細胞と比較して、Ｂ細胞の増大した枯渇を可能にする。いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、Ｂ細胞と比較して、ＮＫ細胞の増大した枯渇およびＴ細胞と比較して、Ｂ細胞の増大した枯渇を可能にする。
【０１７３】
ある特定の実施形態では、皮下投与後の本明細書に記載の抗ＣＤ３８抗体の生物学的利用能は、同じ用量で正規化された静脈内投与と比較して、少なくとも５０％〜少なくとも８０％である。ある特定の実施形態では、皮下投与後の本明細書に記載の抗ＣＤ３８抗体の生物学的利用能は、同じ用量で正規化された静脈内投与と比較して、少なくとも６０％〜少なくとも８０％である。ある特定の実施形態では、皮下投与後の本明細書に記載の抗ＣＤ３８抗体の生物学的利用能は、同じ用量で正規化された静脈内投与と比較して、少なくとも５０％〜少なくとも７０％である。ある特定の実施形態では、皮下投与後の本明細書に記載の抗ＣＤ３８抗体の生物学的利用能は、同じ用量で正規化された静脈内投与と比較して、少なくとも５５％〜少なくとも６５％である。ある特定の実施形態では、皮下投与後の本明細書に記載の抗ＣＤ３８抗体の生物学的利用能は、同じ用量で正規化された静脈内投与と比較して、少なくとも５５％〜少なくとも７０％である。
【０１７４】
ある特定の実施形態では、皮下投与後の本明細書に記載の抗ＣＤ３８抗体の生物学的利用能は、同じ用量で正規化された静脈内投与と比較して、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５１％、少なくとも５２％、少なくとも５３％、少なくとも５４％、少なくとも５５％、少なくとも５６％、少なくとも５７％、少なくとも５８％、少なくとも５９％、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、または少なくとも８５％である。
【０１７５】
いくつかの実施形態では、本開示は、皮下投与後にヒトＲＢＣに一時的に結合する本発明の抗体の生物学的利用能が、同じ用量で正規化された静脈内投与と比較して５０％〜８０％である方法を提供する。
【０１７６】
いくつかの実施形態では、本開示は、皮下投与後にヒトＲＢＣに一時的に結合する本発明の抗体の生物学的利用能が、同じ用量で正規化された静脈内投与と比較して少なくとも５０％である方法を提供する。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、本開示は、皮下投与後にヒトＲＢＣに一時的に結合する本発明の抗体の生物学的利用能が、同じ用量で正規化された静脈内投与と比較して少なくとも５５％である方法を提供する。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、本開示は、皮下投与後にヒトＲＢＣに一時的に結合する本発明の抗体の生物学的利用能が、同じ用量で正規化された静脈内投与と比較して少なくとも６０％である方法を提供する。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、本開示は、皮下投与後にヒトＲＢＣに一時的に結合する本発明の抗体の生物学的利用能が、同じ用量で正規化された静脈内投与と比較して少なくとも６５％である方法を提供する。
【０１８０】
いくつかの実施形態では、本開示は、皮下投与後にヒトＲＢＣに一時的に結合する本発明の抗体の生物学的利用能が、同じ用量で正規化された静脈内投与と比較して少なくとも７０％である方法を提供する。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、本開示は、皮下投与後にヒトＲＢＣに一時的に結合する本発明の抗体の生物学的利用能が、同じ用量で正規化された静脈内投与と比較して少なくとも７５％である方法を提供する。
【０１８２】
いくつかの実施形態では、本開示は、皮下投与後にヒトＲＢＣに一時的に結合する本発明の抗体の生物学的利用能が、同じ用量で正規化された静脈内投与と比較して少なくとも８０％である方法を提供する。
【０１８３】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ３８抗体は、単回ボーラス注射で皮下投与される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ３８抗体は、毎月皮下投与される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ３８抗体は、３週間ごとに１回皮下投与される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ３８抗体は、２週間ごとに皮下投与される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ３８抗体は、毎週皮下投与される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ３８抗体は、週に２回皮下投与される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ３８抗体は、毎日皮下投与される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ３８抗体は、１２時間ごとに皮下投与される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ３８抗体は、８時間ごとに皮下投与される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ３８抗体は、６時間ごとに皮下投与される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ３８抗体は、４時間ごとに皮下投与される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ３８抗体は、２時間ごとに皮下投与される。
【０１８４】
いくつかの実施形態では、皮下単位剤形は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．８ｍｇ／ｋｇ体重の投与量で投与される。いくつかの実施形態では、皮下単位剤形は、約０．０２ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．７５ｍｇ／ｋｇ体重の投与量で投与するのに十分な量を含む。いくつかの実施形態では、皮下単位剤形は、約０．０２ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．７ｍｇ／ｋｇ体重の投与量で投与するのに十分な量を含む。いくつかの実施形態では、皮下単位剤形は、約０．０３ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．６ｍｇ／ｋｇ体重の投与量で投与するのに十分な量を含む。いくつかの実施形態では、量は、約０．２５ミリリットル（ｍＬ）と約３．５ミリリットル（ｍＬ）との間の容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約０．５ｍＬと約３ｍＬとの間の容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約０．５ｍＬと約２．５ｍＬとの間の容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約０．５ｍＬと約２ｍＬとの間の容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約１ｍＬと約２ｍＬとの間の容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約０．２５ｍＬと約１．２５ｍＬとの間の容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約０．５ｍＬと約１．２５ｍＬとの間の容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約０．７５ｍＬと約１．２５ｍＬとの間の容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約０．７５ｍＬと約１ｍＬとの間の容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約０．９ｍＬと約１．５ｍＬとの間の容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約０．９ｍＬと約１．１ｍＬとの間の容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約１ｍＬと約１．０ｍＬとの間の容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約０．９５ｍＬと約１．０５ｍＬとの間の容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約３．５ｍＬの容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約３ｍＬの容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約２．５ｍＬの容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約２ｍＬの容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約１．５ｍＬの容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約１ｍＬの容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約０．５ｍＬの容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約０．２５ｍＬの容量で処方される。
【０１８５】
単位剤形
いくつかの実施形態では、治療用抗ＣＤ３８抗体は、単位剤形の一部として処方される。いくつかの実施形態では、抗体は、以下のＣＤＲアミノ酸配列を含む重鎖を含む：ＧＦＴＦＤＤＹＧ（配列番号３；ＨＣＤＲ１  ＡＢ７９）、ＩＳＷＮＧＧＫＴ（配列番号４；ＨＣＤＲ２  ＡＢ７９）、およびＡＲＧＳＬＦＨＤＳＳＧＦＹＦＧＨ（配列番号５；ＨＣＤＲ３  ＡＢ７９）。いくつかの実施形態では、抗体は、以下のＣＤＲアミノ酸配列を含む軽鎖を含む：ＳＳＮＩＧＤＮＹ（配列番号６；ＬＣＤＲ１  ＡＢ７９）、ＲＤＳ（配列番号７；ＬＣＤＲ２  ＡＢ７９）、およびＱＳＹＤＳＳＬＳＧＳ（配列番号８；ＬＣＤＲ３  ＡＢ７９。いくつかの実施形態では、抗体は、以下のＣＤＲアミノ酸配列を含む重鎖：ＧＦＴＦＤＤＹＧ（配列番号３；ＨＣＤＲ１  ＡＢ７９）、ＩＳＷＮＧＧＫＴ（配列番号４；ＨＣＤＲ２  ＡＢ７９）、ＡＲＧＳＬＦＨＤＳＳＧＦＹＦＧＨ（配列番号５；ＨＣＤＲ３  ＡＢ７９）と、以下のＣＤＲアミノ酸配列を含む軽鎖：ＳＳＮＩＧＤＮＹ（配列番号６；ＬＣＤＲ１  ＡＢ７９）、ＲＤＳ（配列番号７；ＬＣＤＲ２  ＡＢ７９）、およびＱＳＹＤＳＳＬＳＧＳ（配列番号８；ＬＣＤＲ３  ＡＢ７９）と、を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９の可変重（ＶＨ）鎖アミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【０１８６】
【化５】
2021510737.tif 000047
【０１８７】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１０の可変軽（ＶＬ）鎖アミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０１８８】
【化６】
2021510737.tif 000048
【０１８９】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９のＶＨ鎖アミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１０のＶＬ鎖アミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む。
【０１９０】
当業者によって理解されるように、可変重鎖および軽鎖は、ヒトＩｇＧ定常ドメイン配列、一般的にはＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４に結合され得る。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１１の重鎖（ＨＣ）鎖アミノ酸配列を含む。
【０１９１】
【化７】
2021510737.tif 000049
【０１９２】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１２の軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列を含む。
【０１９３】
【化８】
2021510737.tif 000050
【０１９４】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１１のＨＣアミノ酸配列と、配列番号１２のＬＣアミノ酸配列と、を含む。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８抗体を含む製剤は、単位剤形である。いくつかの実施形態では、単位剤形は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．８ｍｇ／ｋｇ体重の投与量で投与するのに十分な量を含む。いくつかの実施形態では、単位剤形は、約０．０２ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．７５ｍｇ／ｋｇ体重の投与量で投与するのに十分な量を含む。いくつかの実施形態では、単位剤形は、約０．０２ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．７ｍｇ／ｋｇ体重の投与量で投与するのに十分な量を含む。いくつかの実施形態では、単位剤形は、約０．０３ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．６ｍｇ／ｋｇ体重の投与量で投与するのに十分な量を含む。いくつかの実施形態では、量は、約０．２５ミリリットル（ｍＬ）と約３．５ミリリットル（ｍＬ）との間の容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約０．５ｍＬと約３ｍＬとの間の容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約０．５ｍＬと約２．５ｍＬとの間の容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約０．５ｍＬと約２ｍＬとの間の容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約１ｍＬと約２ｍＬとの間の容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約０．２５ｍＬと約１．２５ｍＬとの間の容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約０．５ｍＬと約１．２５ｍＬとの間の容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約０．７５ｍＬと約１．２５ｍＬとの間の容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約０．７５ｍＬと約１ｍＬとの間の容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約０．９ｍＬと約１．５ｍＬとの間の容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約０．９ｍＬと約１．１ｍＬとの間の容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約１ｍＬと約１．１ｍＬとの間の容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約０．９５ｍＬと約１．０５ｍＬとの間の容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約３．５ｍＬの容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約３ｍＬの容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約２．５ｍＬの容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約２ｍＬの容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約１．５ｍＬの容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約１ｍＬの容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約０．５ｍＬの容量で処方される。いくつかの実施形態では、量は、約０．２５ｍＬの容量で処方される。
【０１９６】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ３８抗体の単位剤形は、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤、担体、および／または希釈剤をさらに含むことができる。
【０１９７】
投薬レジメンは、最適な所望の応答（例えば、治療応答）を提供するように調節される。例えば、単回のボーラスを投与してもよく、いくつかの分割用量を経時的に投与してもよく、または治療状況の緊急性によって示されるように用量を比例して減少または増加させてもよい。組成物は、投与の容易性および投与量の均一性のために、単位剤形で処方され得る。本明細書で使用される単位剤形とは、いくつかの実施形態では、処置される対象のための単位投与量として好適な物理的に別個の単位を指し、各単位は、必要とされる薬学的担体に関連して所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性化合物を含有する。
【０１９８】
本発明の単位剤形形態の仕様は、（ａ）活性化合物の固有の特性および達成すべき特定の治療効果、ならびに（ｂ）個体の治療に対して、このような活性化合物を調合する技術分野において付いて回る制限によって決定付けられ、かつそれらに直接的に依存する。
【０１９９】
本発明で使用される抗ＣＤ３８抗体の効率的な投与量および投与レジメンは、治療される疾患または病態に依存し、当業者によって決定され得る。
【０２００】
本明細書で提供される剤形は、ダラツムマブと比較して、ＲＢＣに結合するか、または結合したままであるより低い能力に少なくとも部分的に基づいて達成される皮下投与に基づく。特定の理論に拘束されるわけではないが、このような結合活性は、ＡＢ７９が赤血球に結合する一次的な性質によるものであり得る。いくつかの実施形態では、治療用抗体は、ヒトＲＢＣに一時的に結合する。いくつかの実施形態では、治療用抗ＣＤ３８抗体は、カニクイザルＲＢＣに一時的に結合する。いくつかの実施形態では、治療用抗ＣＤ３８抗体は、ヒトまたはカニクイザルＲＢＣに一時的に結合する。いくつかの実施形態では、治療用抗ＣＤ３８抗体は、ヒトおよびカニクイザルＲＢＣに一時的に結合する。
【０２０１】
一実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、約０．０１〜約１ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．０２〜約０．８ｍｇ／ｋｇの週用量で皮下投与により投与される。このような投与は、例えば、１〜１４回、例えば３〜５回繰り返されてもよい。本発明で使用される抗ＣＤ３８抗体の治療的有効量の例示的な非限定的な範囲は、約０．０１〜１ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．０１〜０．８ｍｇ／ｋｇ、約０．０２〜０．７５ｍｇ／ｋｇ、約０．０２〜０．７ｍｇ／ｋｇ、または約０．０３〜０．６ｍｇ／ｋｇである。
【０２０２】
非限定的な例として、本発明による治療は、単回または分割量を２４、１８、１２、８、６、４、もしくは２時間ごとに、または任意の組み合わせで使用して、治療の開始後、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、または４０日目に少なくとも１回、あるいはまた１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０週目に少なくとも１回、またはその任意の組み合わせで、一日当たり、約０．０１〜約１ｍｇ／ｋｇ、例えば０．００９、０．０１、０．０３、０．０５、０．０７、０．０９、０．１１、０．１３、０．１５、０．１７、０．１９、０．２１、０．２３、０．２５、０．２７、０．２９、０．３１、０．３３、０．３５、０．３７、０．３９、０．４１、０．４３、０．４５、０．４７、０．４９、０．５１、０．５３、０．５５、０．５７、０．５９、０．６１、０．６３、０．６５、０．６７、０．６９、０．７１、０．７２、０．７３、０．７５、０．７７、０．７９、０．８１、０．８３、０．８５、０．８７、０．８９、０．９１、０．９３、０．９５、０．９７または０．９９、１．０、もしくは１．１ｍｇ／ｋｇの抗体量を一日当たりの用量として提供してよい。
【０２０３】
一実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、約０．０１〜約１ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．０２〜約０．８ｍｇ／ｋｇの毎週投与量で投与される。このような投与は、例えば、１〜１４回、例えば３〜５回繰り返されてもよい。投与は、２〜２４時間にわたる、例えば２〜１２時間にわたる持続注入によって行われ得る。このようなレジメンは、必要に応じて、例えば、６ヶ月または１２ヶ月後に、１回以上繰り返されてもよい。投与量は、投与時に血中の本発明の化合物の量を測定することにより、例えば、生体サンプルを採取し、抗ＣＤ３８抗体の抗原結合領域を標的とする抗イディオタイプ抗体を使用することにより、決定または調整することができる。
【０２０４】
さらなる実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、２〜１２週間、例えば３〜１０週間、例えば４〜８週間、毎週１回投与される。
【０２０５】
一実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、例えば、週に１回、６ヶ月以上の期間などの維持療法によって投与される。
【０２０６】
一実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、抗ＣＤ３８抗体の１回の注入と、その後の放射性同位元素に結合した抗ＣＤ３８抗体の注入を含むレジメンによって投与される。このレジメンは、例えば７〜９日後に繰り返されてもよい。
【０２０７】
いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＤ３８抗体は、１つ以上の追加の治療剤、例えば化学療法剤と組み合わせて使用される。ＤＮＡ損傷化学療法剤の非限定例として、トポイソメラーゼＩ阻害剤（例えば、イリノテカン、トポテカン、カムトテシンおよびそのアナログまたは代謝物、ドキソルビシンなど）；トポイソメラーゼＩＩ阻害剤（例えば、エトポシド、テニポシド、ダウノルビシンなど）；アルキル化剤（例えば、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、チオテパ、イフォスファミド、カルムスチン、ロムスチン、セムスチン、ストレプトゾシン、デカルバジン、メトトレキサート、マイトマイシンＣ、シクロホスファミドなど）；ＤＮＡインターカレーター（例えば、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン）；ＤＮＡインターカレーターおよびフリーラジカルジェネレーター（ブレオマイシンなど）；およびヌクレオシド模倣物（例えば、５−フルオロウラシル、カペシチビン、ゲムシタビン、フルダラビン、シタラビン、メルカプトプリン、チオグアニン、ペントスタチン、ヒドロキシウレア）が挙げられる。
【０２０８】
細胞複製を妨げる化学療法剤として、以下が挙げられる：パクリタキセル、ドセタキセルおよび関連アナログ；ビンクリスチン、ビンブラスチンおよび関連アナログ；サリドマイド、レナリドミドおよび関連アナログ（例えば、ＣＣ−５０１３、ＣＣ−４０４７など）；タンパク質チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、イマチニブメシレートおよびゲフィチニブ）；プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ）；ＮＦ−κＢ阻害剤（ＩκＢキナーゼの阻害剤を含む）；癌で過剰発現するタンパク質と結合し、それにより細胞複製をダウンレギュレートする抗体（例えば、トラスツズマブ、リツキシマブ、セツキシマブ、ベバシズマブなど）；および癌でアップレギュレート、過剰発現または活性化されることが既知のタンパク質または酵素の他の阻害剤であって、その阻害が細胞複製をダウンレギュレートするもの。
【０２０９】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ベルケード（登録商標）（ボルテゾミブ）での治療の前、同時、または後に使用することができる。
【０２１０】
治療法
本発明の方法において、治療は、疾患または病状に関して肯定的な治療応答を提供するために使用される。「肯定的な治療応答」という用語は、疾患もしくは病態の改善、および／または疾患もしくは病態に関連する症状の改善を指す。例えば、肯定的な治療応答は、疾患における以下の改善のうちの１つ以上を指し得る：（１）腫瘍細胞の数の減少、（２）腫瘍細胞死の増加、（３）腫瘍細胞の生存の阻害、（５）腫瘍増殖の阻害（すなわち、ある程度の減速、好ましくは停止）、（６）患者生存率の増加、および（７）疾患または病状に関連する１つ以上の症状からのいくらかの解放。
【０２１１】
任意の所与の疾患または病状における肯定的な治療応答は、その疾患または病状に特有の標準化された応答基準によって決定され得る。腫瘍応答は、磁気共鳴画像（ＭＲＩ）スキャン、Ｘ線撮影、コンピューター断層撮影（ＣＴ）スキャン、骨スキャン撮影、内視鏡検査、ならびに骨髄穿刺（ＢＭＡ）および循環中の腫瘍細胞の計数を含む腫瘍生検サンプリングなどのスクリーニング技法を使用して、腫瘍形態（すなわち、全身腫瘍組織量、腫瘍サイズなど）の変化について評価され得る。
【０２１２】
これらの肯定的な治療応答に加えて、治療を受けている対象は、疾患に関連する症状の改善の有益な効果を経験し得る。Ｂ細胞腫瘍の場合、対象は、いわゆるＢ症状、例えば、寝汗、発熱、体重減少、および／または蕁麻疹の軽減を経験する可能性がある。前悪性状態の場合、抗ＣＤ３８治療用抗体を用いる治療は、関連する悪性状態の発症、例えば、重要度不明のモノクローナル免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）に罹患している対象における多発性骨髄腫の発症までの時間を遮断または延長する可能性がある。
【０２１３】
病気の改善は完全奏効として特徴付けられる可能性がある。「完全奏効」という用語は、骨髄腫の場合、任意の以前の異常な放射線検査、骨髄、および髄液（ＣＳＦ）または異常なモノクローナルタンパク質の正常化を伴う臨床的に検出可能な疾患がないことを指す。
【０２１４】
そのような奏効は、本発明の方法による治療後、少なくとも４〜８週間、または少なくとも６〜８週間持続する場合がある。あるいは、疾患の改善は、部分奏効として分類される場合がある。「部分奏効」という用語は、新規な病変がない場合、測定可能な全ての腫瘍量（すなわち、対象に存在する悪性細胞の数、または腫瘍塊の測定されたバルクまたは異常なモノクローナルタンパク質の量）における少なくとも約５０％の減少を指し、４〜８週間、または６〜８週間持続する場合がある。
【０２１５】
本発明に従う治療には、使用される医薬品の「治療有効量」が含まれる。「治療有効量」は、所望の治療結果を達成するために、必要な投薬量および期間で有効な量をいう。
【０２１６】
「治療有効量」および「治療有効投与量」という用語は、障害またはその１つ以上の症状の重症度および／または持続時間を軽減または改善するために、障害の進行を防ぐために、障害の後退を引き起こすために、障害に関連する１つ以上の症状の再発、発生、発症、または進行を防止するために、または、所望の治療結果を達成するために必要な投与量および期間で、別の療法（例えば、予防薬もしくは治療薬）の予防または治療効果（複数可）を増強または改善するために十分である治療薬の量を指す。治療有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別、および体重、ならびに個体において所望の応答を誘発する薬剤の能力などの因子によって異なり得る。治療有効量はまた、抗体または抗体部分のいずれの毒性または有害な効果よりも治療上有益な効果が勝る量である。腫瘍療法のための治療有効量の抗体は、疾患の進行を安定化するその能力によっても測定することができる。癌を阻害する化合物の能力は、ヒト腫瘍における有効性を予測する動物モデル系において評価してもよい。
【０２１７】
あるいは、組成物のこの特性は、当業者に知られているインビトロアッセイによって、化合物が細胞増殖を阻害するか、またはアポトーシスを誘導する能力を検査することによって評価してもよい。治療有効量の治療用化合物は、腫瘍サイズを減少させるか、さもなければ対象の症状を軽減し得る。当業者であれば、対象のサイズ、対象の症状の重症度、および選択される特定の組成物または投与経路などの因子に基づいて、そのような量を決定することができるであろう。
【０２１８】
抗ＣＤ３８抗体キット
本発明の別の態様では、血液癌に関連する疾患または病態を治療するためのキットが提供される。一実施形態では、キットは、ＡＢ７９などの、本明細書に記載される抗ＣＤ３８抗体の用量を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるキットは、本明細書で提供される液体または凍結乾燥製剤の１回以上の用量を含み得る。キットがＡＢ７９などの本明細書に記載の抗ＣＤ３８抗体の凍結乾燥製剤を含む場合、一般にキットは、液体製剤の再構成に適した液体、例えば滅菌水または薬学的に許容される緩衝液も含有する。いくつかの実施形態では、キットは、医療専門家による皮下投与または家庭での使用のためにシリンジに予めパッケージされた、本明細書に記載の抗ＣＤ３８抗体製剤を含み得る。
【０２１９】
ある特定の実施形態では、キットは、ＡＢ７９などの本明細書に記載される抗ＣＤ３８抗体の単回投与または用量のためのものである。他の実施形態では、キットは、皮下投与のために、ＡＢ７９などの本明細書に記載される抗ＣＤ３８抗体の複数回用量を含み得る。一実施形態では、キットは、医療専門家による皮下投与または家庭での使用のためにシリンジに予めパッケージされた、本明細書に記載の抗ＣＤ３８抗体製剤を含み得る。
【０２２０】
製造物品
他の実施形態では、上記の障害の治療に有用な材料を含む製造物品が提供される。製造物品は、容器およびラベルを含む。適切な容器には、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、および試験管が挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの、様々な材料から形成されてもよい。容器は、病態を治療するのに有効であり、無菌アクセスポートを有し得る組成物を保持することができる（例えば、容器は、静脈内溶液バッグまたは皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有するバイアルであってもよい）。組成物中の活性剤は、抗体である。容器上の、またはそれに付随するラベルは、組成物が選択された病態を治療するために使用されることを表示している。製造物品は、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液またはデキストロース溶液などの薬学的に許容される緩衝液を含む第２の容器をさらに含んでもよい。それは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、および使用説明書付きの添付文書を含む、商業的およびユーザーの観点から望ましい他の材料をさらに含み得る。
【実施例】
【０２２１】
実施例１：カニクイザルにおける抗ＣＤ３８抗体のモデルベースの特性評価
抗ＣＤ３８抗体ＡＢ７９は、カニクイザル（サイノ（ｃｙｎｏ））ＣＤ３８に結合し、それを多発性骨髄腫の治療に最近承認された細胞溶解性ＣＤ３８モノクローナル抗体であるダラツムマブ（ダラザレックス（Ｄａｒｚａｌｅｘ）商標）から区別する。このユニークな機能は、ＡＢ７９の薬物動態（ＰＫ）、薬力学（ＰＤ）および安全性を特徴付ける前臨床試験でのサイノの使用を支持した。この目的のために、薬物濃度、免疫原性を測定し、カニクイザル（ｃｙｎｏ  ｍｏｎｋｅｙｓ）の血液中のＴ、Ｂ、およびＮＫリンパ球を定量化するためのアッセイが開発された。本発明者らは、これらのパラメータを８つの薬理学的および毒性学的前臨床試験で評価した。テストした細胞集団のうち、ＣＤ３８はＮＫ細胞で最も高発現しており、したがって、本発明者らは、ＮＫ細胞に対する薬物の効果は、考慮される標的細胞、形質芽球、形質細胞、およびその他の活性化リンパ球に対する効果に最も近いと想定している。
【０２２２】
０．０３〜１００ｍｇ／ｋｇの用量範囲を使用した健康なサルでの８つの試験からデータをプールし、細胞型のそれぞれの薬物動態および曝露と効果の関係を説明する数学的モデルを作成した。ＮＫ細胞の枯渇は、ＡＢ７９の最も敏感な薬力学的効果として特定された。この枯渇は代謝回転モデル（ＥＣ５０＝３４．８μｇ／ｍＬの枯渇速度）で説明され、完全な枯渇は０．３ｍｇ／ｋｇのＩＶ投与量を用いて達成された。直接応答モデル（ＥＣ５０＝９．４３μｇ／ｍＬ）を使用したＴ細胞数、および４−トランジットコンパートメントモデル枯渇速度のＥＣ５０＝１９．３μｇ／ｍＬ）を使用したＢ細胞数に対する中間効果もまた観測された。これらの分析は、測定されたリンパ球サブセットのそれぞれがＡＢ７９によって異なる速度でクリアされ、血液コンパートメントを枯渇させるために異なる時間間隔を必要とするという観察を実証した。
【０２２３】
ＰＫとＰＤのデータを説明する数学的モデルは、薬物曝露と効果の間の関係についての機構的および定量的な洞察を獲得ための有用なツールである（Ｆｒｉｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２０：４７１３−４７２１；Ｍａｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ．Ｄｉｓｐｏｓ．３１：５１０−５１８；Ｈａｎ  ａｎｄ  Ｚｈｏｕ（２０１１）Ｔｈｅｒ．Ｄｅｌｉｖ．２：３５９−３６８）。サルとヒトの間の分布と排除、生理学的および遺伝的類似性を含むＩｇＧ抗体の典型的なＰＫ特徴は、ＡＢ７９の薬理学を説明するために活用することができる（Ｇｌａｓｓｍａｎ  ａｎｄ  Ｂａｌｔｈａｓａｒ（２０１４）Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ．”Ｍｅｄ．“１１：２０−３３；Ｋａｍａｔｈ（２０１６）Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．Ｔｏｄａｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．２１−２２：７５−８３）。加えて、それらのモデルは、健康なヒト対象のＰＫ濃度とＰＤ効果を予測するためにうまく適用されている（Ｈａｎ  ａｎｄ  Ｚｈｏｕ（２０１１）Ｔｈｅｒ．Ｄｅｌｉｖ．２：３５９−３６８）。
【０２２４】
材料および方法
サルの試験の要約を、年代順に表２に示している。単回投与試験２、７、および８は主に、静脈内（ＩＶ）および皮下（ＳＣ）投与されたＡＢ７９のＰＫおよびＰＤを評価するために実行された（図１）。安全性、ＰＫおよびＰＤを評価するために、２つの４週間の試験（試験１および３）、３つのＧＬＰ条件下での１３週間の試験（試験４、５、および６）を含む反復投与試験が実行された。１３週間の試験５では、投与エラーが発生した。最低用量グループの動物は、意図された０．１ｍｇ／ｋｇの代わりに０．０１ｍｇ／ｋｇを１回投与し（２回目の用量）、その後０．１ｍｇ／ｋｇを継続した。これらのデータは、実際に投与された投与量の正しい情報とともにデータセットに追加された。試験６は、試験５の０．１ｍｇ／ｋｇのＱＷ群の低用量を繰り返した。全ての動物試験は、米国国立衛生研究所（Ｕ．Ｓ．Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ）によって採用および公布された実験動物の管理ならびに使用に関するガイドに従って実施された。
【表２】
2021510737.tif 000051
【０２２５】
生物学的分析
ＰＫは、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｒｅｎｏ、ＮＶ）によって開発および実行された検証済みの方法を使用して分析した。簡単にいうと、ＡＢ７９の濃度は、間接酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）を使用して、サルの血清で測定された。９６ウェルマイクロタイターフォーマットを、ＡＢ７９に対する抗イディオタイプ抗体でコーティングした。様々な濃度のＡＢ７９を含むブランク、標準、および品質管理（ＱＣ）試料をプレートに添加し、室温（ＲＴ）で５５〜６５分間インキュベートした。マイクロタイタープレートを洗浄した後、ペルオキシダーゼ結合アフィニティー精製マウス抗ヒトＩｇＧ（Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ  ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ  Ｍｏｕｓｅ  Ａｎｔｉ−Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ、Ｆｃγ断片特異的；Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を添加し、プレート上でさらに５５〜６５分間インキュベートした。プレートを再度洗浄し、ウェルにテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を加えて発色団を生成させ、停止液（２Ｎ硫酸）を加えて発色を停止させた。ＳＰＥＣＴＲＡｍａｘ（登録商標）１９０マイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して４５０ｎｍでの吸光度を測定し、４パラメータロジスティック加重（１／ｙ２）標準検量線を使用してＡＢ７９濃度を計算した。試験１（表２）では、血清中のＡＢ７９の定量下限（ＬＬＯＱ）は０．０６１μｇ／ｍＬで、他の全ての試験では、０．０５μｇ／ｍＬであった。
【０２２６】
抗ＡＢ７９抗体の決定（免疫原性）
サル血清の抗薬物抗体（ＡＤＡ）スクリーニングは、定性的電気化学発光（ＥＣＬ）メソッドを使用して分析され、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｒｅｎｏ，ＮＶ）によって検証および実行された。簡単にいえば、希釈されていない血清サンプルを、３００ｍＭの酢酸とともにインキュベートした。酸解離したサンプルを、ビオチン化ＡＢ７９、ＳＵＬＦＯ−ＴＡＧ（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓで標識）で標識されたＡＢ７９、および１．５ＭのＴｒｉｚｍａ塩基の混合物中でインキュベートし、酸を中和して免疫複合体を形成した。次に、この複合体をストレプトアビジンでコーティングされたＭＳＤプレート（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）に添加し、結合させた。洗浄後、ＭＳＤ読み取りバッファーＴ（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）をプレートに添加し、Ｒｕ（ｂｐｙ）３の電気化学反応を介してＳＵＬＦＯ−ＴＡＧ（商標）を励起して発光（光）を生成さすることによって、複合体を検出し、ＭＳＤ  Ｓｅｃｔｏｒ６０００（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を使用して読み取った。発光量は、個々のサンプルの血清中に存在するサル抗ＡＢ７９抗体のレベルと相関していた。
【０２２７】
血球の特性評価
ヒトとサルの間のＡＢ７９結合のレベルを評価および比較するために、それぞれからの血液サンプルをナトリウムヘパリンチューブに採取した。血液のアリコート（１００μＬ）を適切な量の特性化抗体（表３）と混合し、暗所で、室温で１５〜２０分間インキュベートした。インキュベーション後、１ｍＬのＢＤ  ＦＡＣＳ溶解（１Ｘ；ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ）を添加して赤血球を溶解し、細胞を、室温で、暗所で１０分間インキュベートし、次いで遠心分離し、デカントし、１ｍＬのウシ血清アルブミンを含む染色緩衝液（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に再懸濁した。細胞を２回遠心分離し、２５０μＬのＦｌｏｗ  Ｆｉｘ（カルシウムおよびマグネシウムを含まないダルベッコＰＢＳ中の１％のパラホルムアルデヒド（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）でデカントし、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ（商標）ＩＩフローサイトメータ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してフローサイトメトリー分析により蛍光を測定した。サルＮＫ細胞（ＣＤ３−、ＣＤ１５９ａ＋）、Ｂ細胞（ＣＤ３−、ＣＤ２０＋）およびＴ細胞（ＣＤ３＋）、ならびにヒトＮＫ細胞（ＣＤ３−、ＣＤ１６／ＣＤ５６＋）、Ｂ細胞（ＣＤ３−、ＣＤ１９＋）およびＴ細胞（ＣＤ３＋）を測定した。各細胞集団のＡＢ７９染色の平均蛍光強度を、Ｒａｉｎｂｏｗ  Ｂｅａｄｓ（Ｓｐｈｅｒｏｔｅｃｈ；Ｌａｋｅ  Ｆｏｒｅｓｔ、ＩＬ）を使用して作成した標準曲線を用いて、系高分子等量（ＭＯＥＦ）の単位に変換した。
【表３】
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【０２２８】
表２に概説された試験では、細胞を染色し、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｒｅｎｏ、ＮＶ）によって開発および実行された検証済みの方法を使用して分析した。サルの血液サンプルを、ＡＢ７９処理の前後に複数回ナトリウムヘパリンチューブに収集し、特定のリンパ球集団をＦＡＣＳＣａｎｔｏ（商標）ＩＩフローサイトメータ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用したフローサイトメトリー分析で測定した。市販の抗体およびＣＤ３８抗体（ＡＢ１９；表３）；米国特許第８，３６２，２１１号）を、染色に最適な濃度に滴定した。サルＣＤ３８＋／−、Ｔ細胞（ＣＤ３＋）、Ｂ細胞（ＣＤ３−／ＣＤ２０＋）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞（ＣＤ３−／ＣＤ２０−／ＣＤ１６＋）の集団を特定し、ＣＤ４５ＴｒｕＣｏｕｎｔ（商標）チューブ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してリンパ球を定量した。各血液サンプルの約１００μＬアリコートを９６ウェルプレートの適切なウェルに入れ、示された量の抗体を添加し、混合し、室温で、暗所で最低３０分間インキュベートした。インキュベーション後、赤血球を溶解し、サンプルを混合して、室温でさらに１０分間、暗所でインキュベートした。プレートを遠心分離し、上清をデカントした。次いで、細胞ペレットを１，８００μＬの染色緩衝液に再懸濁し、試料を混合して遠心分離し、上清をデカントした。細胞ペレットを、ウシ胎仔血清を含む５００μＬの染色緩衝液に再懸濁し、分析のために約３００μＬの細胞懸濁液を９６ウェルＶ底プレートに移した。ＮＫ細胞の割合、およびＴ細胞とＢ細胞の合計を、ＴｒｕＣｏｕｎｔ（商標）チューブ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）で取得した細胞数の値に適用し、各細胞集団の絶対細胞数を決定するために使用した。試験１〜４では、標識された抗ＣＤ３８抗体ＡＢ７９またはＡＢ１９を用いて、ベースラインでＣＤ３８＋ＮＫ、Ｂ、およびＴ細胞サブセットを評価した。ＡＢ１９は異なるエピトープに結合するが、結果は非常に類似しており、したがって、個別に提示されていない。処理されたサンプルは、すぐに分析された。
【０２２９】
ＰＫモデルの開発
ＰＫモデルの開発中に、１−、２−、および３−コンパートメントモデル構造が調査された。適合度（ＧＯＦ）プロットと目的関数値（ＯＦＶ）の減少によって判定されるように、２−コンパートメントモデルは１−コンパートメントモデルよりも明らかに優れていた。診断プロットの目視検査に基づくと、データを適切に説明するために第３のコンパートメントを導入する必要はなかった。生物学的利用能（Ｆ）は、ロジット変換Ｆ＝ｅｘｐ（ＰＡＲ）／（１＋ｅｘｐ（ＰＡＲ））を使用してモデル化され、式中、ＰＡＲはモデルパラメータを表しており、推定値が０〜１の範囲に収まるようにした。低濃度での非線形ＰＫは、標的媒介薬物動態（ＴＭＤＤ）プロセスの準定常状態（ＱＳＳ）近似モデルでモデル化された（Ｇｉｂｉａｎｓｋｙ  ａｎｄ  Ｇｉｂｉａｎｓｋｙ（２００９）Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．５：８０３−８１２）。
【０２３０】
モデルの概略図を、図２Ｃに提供する。ＱＳＳ近似では、遊離薬物Ｃ、標的Ｒおよび薬物標的複合体ＲＣの定常状態濃度が、他の全てのプロセスと比較して非常に迅速に確立されると想定している。結合プロセスが解離プロセスと内部化プロセスとバランスが取れていること、および次の方程式が適切な単位で保持されることを意味する：ＫＯＮ＊Ｃ＊Ｒ＝（ＫＯＦＦ＋ＫＩＮＴ）＊ＲＣ、式中、ＫＯＮは結合速度定数を示し、ＫＯＦＦは、解離速度定数を示し、およびＫＩＮＴは、内部移行速度定数を示す。
【０２３１】
対象間変動（ＢＳＶ）が全てのパラメータについて調査され、次のタイプの指数モデルでモデル化され：ＰＡＲｉ＝ＴＶＰＡＲを＊ｅＥＴＡＰＡＲｉ、式中、ＰＡＲｉは、個体であり、ＴＶＰＡＲは、典型的なパラメータの推定値であり、ＥＴＡＰＡＲｉは、個体ｉの偏差の推定値である。ＥＴＡＰＡＲｉ値は、平均がゼロの正規分布に従うと想定された。残差は、加法誤差と比例誤差を組み合わせたモデルで記述された（Ｂｅａｌ  ａｎｄ  Ｓｈｅｉｎｅｒ（１９９２）ＮＯＮＭＥＭ  Ｕｓｅｒ  Ｇｕｉｄｅｓ，ｉｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  ＣＡ）。
【０２３２】
ＡＢ７９のＰＫに対する潜在的な共変量効果を特定するために、以下のパラメータを調査した：体重、性別、用量、投与経路、および試験。
【０２３３】
ＰＫ−ＰＤモデルの開発
３つの細胞型のそれぞれについて、ＰＫ−ＰＤモデルの開発を個別に実行した。薬物投与に近いモデル開発測定（投与後８時間未満）では、多数の血液サンプルが短時間に採取されたために、非特異的な薬物非依存性の影響を受ける可能性があるため、使用されなかったことに留意されたい。ＰＫモデルおよびパラメータの推定値が修正された。ターンオーバー、通過コンパートメント、および様々な形式の直接応答モデルがテストされた（Ｆｒｉｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２０：４７１３−４７２１；Ｍａｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ．Ｄｉｓｐｏｓ．３１：５１０−５１８）。ターンオーバーモデルでは、薬物効果がヒル係数の有無にかかわらずＥｍａｘタイプモデルの形で細胞消失速度に導入された。この表記では、Ｅｍａｘモデルは次の形の薬物濃度ｃの関数ｆである：ｆ（ｃ）＝ＥＭＡＸ＊ｃＨ／（ｃＨ＋Ｃ５０Ｈ）、ＥＭＡＸは最大効果を示し、Ｃ５０は最大効果の半分が達成され濃度を示し、Ｈは、ヒル係数を示す。通過コンパートメントモデル（ＴＣＭ）では、薬物の効果が導入され、異なる位置で、増殖速度、循環細胞、および第３の通過コンパートメントでテストされた。これらの効果の組み合わせと、データが循環から増殖速度へのフィードバックメカニズムの存在を支持しているかどうかもテストされた。さらに、Ｅｍａｘタイプの直接応答モデルとヒル係数の有無をテストして、薬物濃度効果曲線を記述した。
【０２３４】
ランダム効果パラメータは、ベースライン細胞数、細胞産生速度（ＫＩＮ）、通過コンパートメントモデル（ＭＴＴ）の通過時間、Ｃ５０およびＥＭＡＸに関する対象間変動を推定するために導入された。個々の平均ベースライン細胞レベルが、データセット（立てれつＢＬ）に提供された。これはモデルにおける典型的な値として使用された。ランダム効果パラメータが追加されて、個体の全ての測定値に基づいて、個々のベースライン推定値を調整することを可能にした。ＰＤ残差は、比例誤差モデルで記述された。
【０２３５】
モデリング（ＰＫおよびＰＫ−ＰＤ）ＯＦＶの過程でのモデル検証では、標準誤差、ＧＯＦプロット、および個々の予測対データプロットを使用して、モデルを評価し、それらを代替的なモデルと比較した。
【０２３６】
次のソフトウェアパッケージを利用した：ＮＯＮＭＥＭ（バージョン７．２）、ＫＩＷＩ（バージョン１．６）、バークレーマドンナ（バージョン８．３．１４）、ＰＳＮ（バージョン４）、およびＲ（バージョン３．３．０）。
【０２３７】
データセットの準備
８つのサルの試験からのデータセットを収集し、単一の形式で再編成し、３つの個別のＮＯＮＭＥＭで読み取り可能なＰＫ−ＰＤデータセットにマージされた。３つのデータセットのそれぞれには、サルの個々の特性（試験、ＩＤ、群、体重、性別）、投与情報、ＰＫ、およびＮＫ、Ｂ、またはＴ細胞のいずれかのデータを含んでいた。対照群の動物の場合、ＡＢ７９の血清レベルが暗黙的に存在しないと仮定して、細胞数のみがＰＫデータはデータセットに追加されなかった。抗薬物免疫原性状態（ＡＤＡ）に関する時間分解情報、つまり、定量測定結果と０／１フラグ変数ＡＤＡＦ（ＡＤＡがＡＢ７９の濃度に影響する場合はＡＤＡＦ＝１、影響しない場合はＡＤＡＦ＝０）を含有するＴＩＴＥＲが、各観測に別々の列に追加された。ＡＤＡ力価は異なる試験で異なる方法仕様で測定されたため、試験間で値は直接比較できない。全ての試験で一貫した方法でＡＤＡ情報を利用するために、各動物に以下の手順を個別に適用した：最初に測定されたレベルを超えて７日より後の時点で増加したＡＤＡ力価は、ＡＤＡ陽性と見なされ、データセットにおいてフラグ付けされた（ＡＤＡＦ＝１）。ある時点の試料にＡＤＡ陽性がフラグ付けされた場合、その時点の後に採取された全ての試料にも、測定された力価に関わらず、この動物においてＡＤＡ陽性がフラグ付けされた。ＡＤＡ陽性観測は、モデル開発中のパラメータ推定のために使用されなかった。ＡＤＡに影響されたＰＫ濃度のサンプリング時点からのＰＤ測定にもＡＤＡＦ＝１のフラグ付けがされたことに留意されたい。
【０２３８】
細胞数データの場合、各細胞型（ＮＫ、Ｂ、およびＴ細胞）の個々のベースライン値は、所与の動物の全ての利用可能な投与前測定の平均値として計算された。ほとんどの試験では、これは単一の測定であった。次いで、各動物のベースライン値を、第１の投与事象時（ＴＩＭＥ＝０）の観測値として、および列ＢＬの定数値として、各動物の各観測値に追加した。このベースライン値に基づいて、観測された各細胞数のベースラインのパーセントが計算され、データセットに追加された。
【０２３９】
サルＰＫパラメータのスケーリング
最終的なＰＫモデルとＰＫ−ＰＤモデルは、ヒトの臨床試験の第１のＰＫプロファイルとＰＫ−ＰＤプロファイルをシミュレートするための開始点として使用された。決して決定的ではないが、治療用モノクローナル抗体のデータの比較分析は、サルの調査から得られたＰＫパラメータをスケーリングして、許容可能な精度でヒトのＰＫプロファイルの予測を助けることができることを示している（Ｈａｎ  ａｎｄ  Ｚｈｏｕ（２０１１）Ｔｈｅｒ．Ｄｅｌｉｖ．２：３５９−３６８）。この刊行物は、０．８５の固定指数を使用して、モノクローナル抗体のヒトクリアランスを確実に予測できることを示した。その結果、この関係は、ヒトのクリアランスパラメータ（ＣＬ、Ｑ）のスケーリングに適用されたが、体積パラメータ（ＶＣ、ＶＰ）は、体重（ＢＷ）間の直接的な関係を使用してスケーリングされた。
【０２４０】
【数４０】
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【０２４１】
結果
ＡＢ７９の薬物動態
ＰＫデータセットは、プラセボ群を除く健康なサルを対象とした８つ全ての試験からプールされた（表２）。合計で、セットには１４０匹の動物からのデータが含まれ、そのうち５８匹は雄で、８２匹は雌であった。試験した動物の体重は２．１〜４．７ｋｇの範囲であり、用量は体重１ｋｇ当たり０．０３〜１００ｍｇ（ｍｇ／ｋｇ）の範囲であった。試験７のうちの１坪群および試験８のうちの３つの群では、０．０３、０．１、０．３、１ｍｇ／ｋｇの用量でＳＣ投与された（合計で１５匹の動物）。プールされたデータセットには、ＬＬＯＱより大きい２，１９９個の測定可能なＰＫ観測結果を含有していた（図２Ａおよび２Ｂ）。ＰＫは第１の投与後に最も密にサンプリングされ、長期毒性試験でも、ほとんどの動物は９８日目前に終了した。試験４のみに回復グループが含まれており、４匹の動物、８０ｍｇ／ｋｇの群から２匹、および３０ｍｇ／ｋｇならびに３ｍｇ／ｋｇの群のそれぞれから１匹ずつから、ＰＫデータを収集できたにすぎなかった（図２Ｂ）。ＡＢ７９濃度と並行して、ＡＤＡが評価された。２２９個のＰＫ観測結果が、ＡＤＡの影響を受けた（図３）。
【０２４２】
最初に、サルの試験のそれぞれについて、標準の非コンパートメント手法（ＮＣＡ）を使用してＰＫ分析を実行した。単回投与試験（ＩＶボーラス注射または３０分間のＩＶ注入）に基づいて、終末期の分布容積（Ｖｚ）が６４〜１１６ｍＬ／ｋｇ、クリアランスが６．０４〜１４．７ｍＬ／ｋｇ／日、および最終排出半減期（Ｔ１／２）が４．７５〜１１．２日の範囲であると計算した。濃度時間曲線下面積（ＡＵＣ）および最大濃度（Ｃｍａｘ）の値は、広範囲にわたって用量に比例して増加することが判明した。最低用量群（＜１ｍｇ／ｋｇ、図２Ｄ〜２Ｆ）のＰＫプロファイルのみが、０．５μｇ／ｍＬ未満の濃度で非線形的に増加するクリアランスの証拠を提供している（ＴＭＤＤ）（Ｋａｍａｔｈ（２０１６）Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．Ｔｏｄａｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．２１−２２：７５−８３）。２つの最低用量群（用量＞０．３ｍｇ／ｋｇ）を除く全てのサルの試験のデータに基づいて、線形２−コンパートメントモデルが作成された。最低用量群のＰＫがシミュレートされ、測定された濃度で重ね合わされる場合、線形モデルは濃度を予測していることが明らかであった（図２Ｄ〜２Ｆ）。
【０２４３】
単回投与のＳＣ投与後の利用可能なＰＫデータは、Ｃｍａｘが同じ用量のＩＶグループと比較してＳＣグループで７０〜８０％低く、ＡＵＣが同等であることを明らかにした。雄サルと雌サルとの間のＰＫパラメータにおける差異は、観測されなかった。これらの初期分析の結果は、モデル開発の開始点として使用された。
【０２４４】
ＰＫモデル開発
モデル開発は大会ＩＶ投与データから始まり、その後、より複雑なデータを利用して初期モデルが徐々に拡張された。他の治療用抗体と同様に、ＰＫは全体的に線形２−コンパートメントモデルに従う（Ｋａｍａｔｈ（２０１６）Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．Ｔｏｄａｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．２１−２２：７５−８３）。低濃度での加速クリアランスを記述する非線形排泄コンポーネント（ＴＭＤＤ）は、準定常状態（ＱＳＳ）近似でモデル化された（Ｇｉｂｉａｎｓｋｙ  ａｎｄ  Ｇｉｂｉａｎｓｋｙ（２００９）Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．５：８０３−８１２）。薬物と標的との関連付けプロセスが、薬物の解離、分布、および除去のプロセス、ならびに標的と薬物と標的の複雑な除去のプロセスよりもはるかに高速であるという仮定は、簡略化されたＴＭＤＤモデルをもたらす（図２、表４）。低濃度でのデータ量は比較的少なく、そのため、ソフトウェアプログラムの１回の推定実行で全てのパラメータが推定されなかった。したがって、ＴＭＤＤモデルのパラメータは、低用量単回投与試験７および８のデータに焦点を当てることによって最初に推定された。結果として得られたＴＭＤＤパラメータ推定値は、次いで、データセット全体に対する最終推定中に固定されなかった（表４）。
【０２４５】
【表４】
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【０２４６】
吸収パラメータＫＡおよびＦについての推定値は、ＳＣ群のデータが追加されたときに取得された。全てのＳＣデータは、試験７および８の４つの低用量単回投与群から得られた。これらのより低い用量（≦１ｍｇ／ｋｇ）は臨床的に適切な範囲をカバーしたが、高用量のパラメータ推定値の一般化可能性を制限する場合がある。
【０２４７】
ＰＫパラメータについての対象間変動（ＢＳＶ）は、指数モデルで記述された。吸収速度（ＫＡ）、クリアランス（ＣＬ）、および末梢分布容積（ＶＰ）は、約４０％の推定されたＢＳＶを有し、中枢分布容積（ＶＣ）は約２０％の推定されたＢＳＶを有した（表４）。共変量分析により、ＶＣに対する投与経路の影響が確認された。ＶＣの一般的な値は、ＩＶ投与の場合は０．１４１Ｌであって、ＳＣ投与の場合は０．０４３Ｌ（約７０％小さい）であった。他の有意な共変量効果は確認されなかった。低濃度ではデータの量が限られているため、ＴＭＤＤパラメータの対象の変動と個々の予測との間は、内在化速度ＫＩＮＴについてのみ推定された（ＢＳＶ：４９％）。残差、ＯＦＶ、標準誤差、ＧＯＦプロット、および個々の曲線適合に基づくモデル評価は、最終的なモデルが健康なサルのＡＢ７９のＰＫを適切に記述していることを裏付けている（表４、図４Ａ〜４Ｊ）。
【０２４８】
薬力学
ヒトおよびサルの血液ＮＫ細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞へのＡＢ７９結合のレベルを、フローサイトメトリー分析で比較した。図５に示すように、サルのリンパ球は、ＡＢ７９の蛍光分子等量（ＭＯＥＦ）に基づくＣＤ３８発現レベルを有しており、これは、ヒトの対応物と比較してわずかに低かったが、細胞型間で同様の関係であり、例えば、ＮＫ細胞でのＣＤ３８発現＞Ｂ細胞でのＣＤ３８発現＞Ｔ細胞でのＣＤ３８発現であった。これらのデータは、この非ヒト霊長類種の、ヒトにおけるＰＤ活性に対するＡＢ７９の可能性を予測するのを助けるための関連モデルとしての使用を支援している。
【０２４９】
薬物曝露（ＰＫ）と細胞枯渇の程度および期間（ＰＤ）との関係の徹底定量分析のために、利用可能な場合、プラセボ処置動物を含む、８つのサルの試験全てのＰＫ濃度、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞数からのデータセットをコンパイルした（表２）。データセットの最初の特性評価は、ベースラインで、Ｔ細胞が、１μＬ当たり３，７３２細胞の中央値を有し（四分位範囲（ＩＱＲ）：２，８８１〜５，１７６）、１μＬ当たり１，２７９細胞を有するＢ細胞（ＩＱＲ：８６０．８〜１，８９０）および１μＬ当たり６８５細胞を有するＮＫ細胞（ＩＱＲ：４８２．８〜９７０．１）と比較して、最も豊富なリンパ球サブタイプであることを示した。これらの細胞集団におけるベースラインＣＤ３８発現を、試験１〜４で評価した（表２、ｎ＝６７）。ＮＫ細胞の８６．７％（ＳＤ１１．３）は、より小さい変動でＣＤ３８を発現した。対照的に、Ｂ細胞の５８．７％（ＳＤ  ２７．０）およびＴ細胞の３４．５％（ＳＤ  ２４．５）は、より大きい変動でＣＤ３８を発現した。
【０２５０】
プラセボで処置された動物からのデータは、各細胞型のそれぞれの平均数が、１つの個体内の変動から予想されるものを超えて、個々の動物間で時間とともに変動することを示した（図６）。例えば、個々のプラセボ曲線のＢ細胞数の平均変動係数は２７％であったが、個々の平均Ｂ細胞レベルは４３６．６〜４，３８９の範囲であった。さらに、雄と雌の動物からの平均ベースラインのリンパ球数と、異なる試験の動物からの平均ベースラインリンパ球数との間にも差があり、変動を追加した（図７）。これらの結果に基づいて、各処置後の細胞数は、各時点での絶対細胞数ではなく、その個々のベースライン値に対してパーセントで計算された。例えば、３３％という値は、サンプルの細胞数がベースライン細胞数の１／３であることを意味する。これにより、データセット全体にわたって比較できる標準化された値が提供された。
【０２５１】
ＡＢ７９結合細胞の枯渇の急速な開始は、初期血中濃度がリンパ球数の減少を促進することを示唆している（図８）。０．３ｍｇ／ｋｇのＡＢ７９のＩＶ用量では、ＮＫ細胞に対する最大効果の中央値は、９３．９％の枯渇であった（すなわち、ベースラインの細胞数の６．１％が残存している）。０．１ｍｇ／ｋｇでは、ピーク枯渇は７１％であった（ベースラインの２９％が残存している）。＞０．３ｍｇ／ｋｇの用量では、ＮＫ細胞は血液コンパートメントでほぼ完全に枯渇した（最低値（Ｎａｄｉｒ）（範囲）：ベースラインの１．０６％（０．１７、６．２３）；図８Ａ）。０．３ｍｇ／ｋｇの単回投与後、ＮＫ細胞がベースラインの平均５０％に回復するまで約７日かかったが、回復の動態は個体間で非常に変動的であった（図８Ｂおよび８Ｃ）。これらの結果と一致して、ＮＫ機能も試験７の動物のサブセットでテストした（ｎ＝３／群；表２）。この実験は、０．１ｍｇ／ＫｇのＡＢ７９で処置された動物の処置後４８時間での血中ＮＫ活性における最小変化を伴う用量依存的な低下（１００：１のエフェクターでの溶解率：ターゲット比率±ＳＤ；４４．５％±２３．６％対４１．４％±２５．８％）および１．０ｍｇ／ｋｇで処置された動物のＮＫ活性のほぼ完全な喪失（１００：１のエフェクターでの溶解率：ターゲット比率±ＳＤ；３７．４％±１０．３％対．６．８％±１２．５％）を示した。ＮＫ細胞機能は、５７日間で回復を示し、次の時点が測定された（１００：１のエフェクターでの溶解率：ターゲット比率±ＳＤ、１６．０％±１１．９％）。
【０２５２】
Ｂ細胞およびＴ細胞は、ＮＫ細胞と比較して比較的規模は小さいが枯渇し、それらのＣＤ３８の発現レベルが低いことと一致している（図５）。例えば、０．３ｍｇ／ｋｇのＩＶ  ＡＢ７９では、Ｂ細胞はベースラインの４５％までの最大枯渇の中央値を有し、Ｔ細胞はベースラインの４３％まで枯渇した（図８Ｄおよび８Ｇ）。この用量レベルでは、Ｂ細胞数のベースラインからの５０％の低下は、全ての動物で達成されたわけではなかった。≧３０ｍｇ／ｋｇの最高用量でのみ、Ｂ細胞がほぼ完全に枯渇していた（図８Ｄ）。Ｔ細胞はＢ細胞と同程度まで枯渇したが、回復はより速かった（図８Ｇ〜８Ｉ）。
【０２５３】
２つの試験７および８では、ＩＶおよびＳＣ投与（図８Ｃ、８Ｆ、および８Ｉ）が比較された。投与経路間の細胞枯渇に明らかな差異はなかった。低用量（試験８）では、全ての細胞は、初期の時点で特定の細胞枯渇を示したが。ベースライン値を５０％下回る持続した（＞２４時間）細胞枯渇はＮＫ細胞集団でのみ見られ、ＴおよびＢ細胞では見られなかった。ＮＫ細胞の枯渇の開始のタイミングは、投与経路に関係なく、用量群間で同様に見え、枯渇の持続時間は用量依存的であった。全てのテスト群における細胞回復は、５７日目までに見られた。
【０２５４】
ＰＫ−ＰＤモデル
ＮＫ、Ｂ、およびＴ細胞に対するＡＢ７９曝露の効果を記述するために、別個のＰＫ−ＰＤモデルを開発した。ＰＫ−ＰＤモデリング中に、ＰＫパラメータは最終的なＰＫモデルの推定値に固定され、様々なＰＤモデルが試された。末梢血中のＮＫ細胞集団は、ターンオーバーモデルで適切に記述され、枯渇薬物効果は、ＰＫ濃度を介してＥｍａｘタイプモデルと枯渇速度とに関連付けられた。このモデルでは、ＥＭＡＸは追加のＮＫ細胞枯渇の最大速度を表し、Ｃ５０は追加のＮＫ細胞枯渇の速度が最大の半分になる濃度を表す。ＮＫ細胞についての構造ＰＫ−ＰＤモデルは次の形式のものであった。
【０２５５】
【数４１】
2021510737.tif 000055
【０２５６】
数式では、ＮＫは実際のＮＫ細胞数を表し、ＫＩＮは産生速度を表し、ＫＯＵＴは薬物が存在しない場合の排泄速度を表す。所与のベースライン測定値を用いて、ＢＬＫＯＵＴは、等式ＫＯＵＴ＝ＫＩＮ／ＢＬで定義されることに留意されたい。ｃは中枢コンパートメントにおけるＡＢ７９濃度を表す。全てのパラメータを一度に推定したところ、ソフトウェアプログラムは安定した結果を生成しなかった。ＫＩＮ、ＥＭＡＸ、およびＣ５０の個々の推定値には、高い相関関係があった。さらに、異なる用量の最大効果（前のセクションを参照）と大きな個体間の変動との間の限定的な差異のために、全てのパラメータの正確な推定は期待できなかった。一連の推定では、３つのパラメータＫＩＮ、ＥＭＡＸ、およびＣ５０のうちの１つまたは２つを異なる値に固定し、他のパラメータを推定した。ＫＩＮを１０，０００に、ＥＭＡＸを３２２に固定して、安定した実施と適度な適合度を達成した。典型的なＣ５０推定値は２９．０μｇ／ｍＬであった（表５）。加えて、選択されたＫＩＮ値とＥＭＡＸ値の感度は、より高い値とより低い値の異なる組み合わせを選択することによってテストした。対象間の変動性は、ＮＫ産生速度ＫＩＮは１１３％、Ｃ５０は１４９％で大きく、これは、ベースライン時および処置された動物間の大きな個体差による。モデルは、残差、ＯＦＶ、標準誤差、ＧＯＦプロット、および個々の曲線適合に基づいて評価された（表５、図９）。
【０２５７】
【表５】
2021510737.tif 000056
【０２５８】
通過コンパートメントモデルは、ＡＢ７９によって誘発されたＢ細胞の枯渇を記述するために、直接応答またはターンオーバーモデルより優れていた。４つの通過コンパートメントが適切であることが判明し、薬剤効果は枯渇速度に関するＥｍａｘタイプモデルで記述された。ＮＫ細胞枯渇モデルと同様に、ＥＭＡＸは最大速度を表し、Ｃ５０は速度が最大の半分になる濃度を表している。したがって、Ｂ細胞についての構造ＰＫ−ＰＤモデルは、次の５つの方程式で与えられる。
【０２５９】
【数４２】
2021510737.tif 000057
【０２６０】
ＴＲｉ（ｉ＝１〜４）は４つの通過コンパートメントを表す。ＫＴＲ、ＫＰＲＯＬおよびＫＣＩＲＣは、次の等式、ＫＴＲ＝ＫＰＲＯＬ＝ＫＣＩＲＣ＝４／ＭＴＴで定義され、ここでは、ＭＴＴは、平均通過時間である（Ｆｒｉｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２０：４７１３−４７２１）。Ｂは血中のＢ細胞数を表し、ｃは中枢コンパートメントのＡＢ７９濃度を表す。
【０２６１】
ＥＭＡＸが２．３７に固定されている場合、典型的なＣ５０は１９．５μｇ／ｍＬであり、典型的な平均通過時間（ＭＴＴ）は８．４８日であった（表５）。最大のＡＢ７９濃度に対する最大の効果の遅延は、十分に捕らえられた。モデルは、ＡＢ７９が主に循環Ｂ細胞に影響を与えることを示している。利用可能なサルＢ細胞データを記述するために、前駆細胞に対する追加の効果およびフィードバックループは必要なかった。１３５％のＭＴＴと２４．１％のベースラインＢ細胞レベル（ＢＡＳＥ）の対象間変動は、動物間の大きな個体差を示している。
【０２６２】
薬物が誘発する急速な回復を伴うＴ細胞の枯渇は、直接応答モデルで適切に記述されている：Ｔ（ｃ）ＢＬＴ＊（１−ＥＭＡＸ＊ｃ／（＋Ｃ５０））、ここでＴは実際のＴ細胞数を表し、ＢＬＴは、ベースラインでのＴ細胞数を表し、ｃは、中枢コンパートメントにおけるＡＢ７９濃度を表す。典型的なＣ５０は１１．８６μｇ／ｍＬと推定され、典型的なＥＭＡＸは０．４７であり、この場合、Ｔ細胞の約半分だけしかＡＢ７９によって枯渇できないことを示している（表５）。しかしながら、ＥＭＡＸでの対象間の変動が、約７０％であったことに留意されたい。このモデルでは、ＮＫおよびＢ細胞消耗モデルとは異なり、Ｃ５０はＴ細胞の枯渇が最大値の半分であった濃度を表している。
【０２６３】
ＮＫセルに関しては、残差、ＯＦＶ、標準エラー、ＧＯＦプロット、および個々の曲線適合に基づくＢおよびＴ細胞の最終ＰＫ−ＰＤモデルのモデル評価により、利用可能なサルデータが適切に記述されていることが裏付けられた（表５、図９）。
【０２６４】
ヒトＰＫおよび細胞枯渇のシミュレーション
サルのＰＫモデルとＰＫ−ＰＤモデルは、ヒトＰＫと細胞数データのモデルベースのシミュレーションの開始点として、設計を支持するため、および健康なボランティアにおけるヒト初回投与（ｆｉｒｓｔ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ）（ＦＩＨ）臨床試験の選択された用量を正当化するために使用された。この目的のために、サルのデータから派生したＴＭＤＤを含むモデル構造も、ヒトＰＫとそれに続くリンパ球の枯渇の主要な特徴を記述していると想定された。ヒトのＰＫパラメータの予測を取得するために、以下のサルのＰＫパラメータの推定値をスケーリングした：中枢ならびに末梢分布容積（ＶＣ、ＶＰ）、およびモノクローナル抗体への真正面からに攻める手法を用いたクリアランス（ＣＬ）およびコンパートメント間のクリアランス（Ｑ）（Ｈａｎ  ａｎｄ  Ｚｈｏｕ（２０１１）Ｔｈｅｒ．Ｄｅｌｉｖ．２：３５９−３６８）。ＡＢ７９は完全にヒトのモノクローナル抗体であるため、サルで観察される免疫原性よりもヒトでの免疫原性は低いと予想される。したがって、モデリングおよびシミュレーションのために、ＡＤＡ陽性のサンプルをデータセットから除外した。
【０２６５】
スケールモデルを使用して、暴露をシミュレートし、ＦＩＨ試験で計画されたように、０．０００３〜１．０ｍｇ／ｋｇの２時間の注入（ＩＶ）を介した、または皮下注射（ＳＣ）を介した単回投与についての、ＮＫ、Ｂ、およびＴ細胞の枯渇プロファイルをシミュレートした（図１０）。シミュレーションによれば、０．０００３ｍｇ／ｋｇのＩＶ投与後には、リンパ球数に及ぼすいかなる観察可能な薬物誘発効果も、およびＬＬＯＱを超える測定可能なＰＫ濃度でさえも予想されない。変動性のため、かつ用量群のサイズが限られているため、ＮＫ細胞数に対する検出可能な最小の薬物効果は、少なくとも１０％の低下であると想定された。０．０１ｍｇ／ｋｇのＩＶおよび０．０３ｍｇ／ｋｇのＳＣの用量では、ＮＫ細胞がベースラインの残りの９０％未満まで枯渇することが予測された。
【０２６６】
０．３ｍｇ／ｋｇのＩＶ用量では、本発明者らは、注入の終了後３時間以内にベースラインの残り１７％までのＮＫ細胞の枯渇、および１１日後に５０％を超えるまでの回復を予測した（図１０）。同じ用量で、モデルは、Ｂ細胞が２．５日後にベースラインの６７％まで最大に枯渇し、Ｔ細胞がベースラインの８６％まで直ちに枯渇することを予測している。同じ用量の０．３ｍｇ／ｋｇの皮下投与について、モデルは、それがより少ない、そしてその後で最大の消耗をもたらすことを予測した（ベースラインに対して最下点：ＮＫ細胞３７％、Ｂ細胞７４％、Ｔ細胞９４％）。
【０２６７】
これらのインビトロおよびインビボでの前臨床試験は、サルが、ＡＢ７９の薬理学を試験するための適切な動物モデルであることを実証している。多様な用量および投与計画を用いた８つのサルの試験から、ＮＫ、Ｂ、Ｔリンパ球のＰＫと細胞数データの緻密なサンプリングは、ＡＢ７９用量、曝露、および細胞枯渇の関係の包括的かつ定量的な理解のための豊富なデータソースを提供する。生成された集団のＰＫモデルとＰＫ−ＰＤモデルは、観測されたデータを適切に説明し、サルでの将来の試験だけでなく、ヒト対象での臨床試験でも、曝露とリンパ球の消耗を予測する強力なツールを提供する。
【０２６８】
健康なボランティアにおけるヒト初回投与（ＦＩＨ）の単回上昇用量試験が実施され（ｗｗｗ．ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ：ＮＣＴ０２２１９２５６）（図１１）。ＡＢ７９の意図された薬理効果は、活性化リンパ球の枯渇である。しかしながら、リンパ球の深在性かつ持続的な枯渇（薬理の強化）は、免疫系の障害につながる可能性があり、これは患者または健康な試験参加者にとって許容できないものである。したがって、ＦＩＨ試験では、０．０００３ｍｇ／ｋｇの安全なＩ．Ｖ．開始用量が選択された。
【０２６９】
サルのデータは、ＮＫ細胞の枯渇が最も敏感な生物学的効果であると判定されたことを示唆している。ＰＫ−ＮＫシミュレーションの結果は、ヒトにおいて検出可能な最も敏感な薬理学的効果（ＮＫ細胞枯渇）が予想される０．０１ｍｇ／ｋｇのＩＶの最小用量レベルを決定するために役立った。ＦＩＨ試験の新たなデータは、ＡＢ７９の用量依存的で細胞タイプ固有の消耗効果の全体的なパターンは、モデルベースの予測（原稿は準備中）に従っていることを明らかにした。ＡＢ７９は予測されたものよりもさらに効率が良いように見えた。例えば、０．０３ｍｇ／ｋｇのＩＶ用量では、ヒト対象のＮＫ細胞は、ベースラインの１０％未満まで枯渇された。この用量でのサルの最下点の中央値（最低枯渇点）は、２０．０％であった（図８）。
【０２７０】
３つの細胞溶解性抗ＣＤ３８モノクローナル抗体（ダラツムマブ、ＳＡＲ６５０９８４およびＭＯＲ２０２）は、多発性骨髄腫のために臨床開発中である（ｖａｎ  ｄｅ  Ｄｏｎｋ  ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．２７０：９５−１１２）。ダラツムマブ（Ｄａｒｚａｌｅｘ（商標）、静脈内注入として投与）は最近、米国では多発性骨髄腫に対して、ヨーロッパでは非ホジキンリンパ腫に対して承認された。ＡＢ７９とは異なり、ダラツムマブはサルＣＤ３８と交差反応しない。したがって、我々の結果とダラツムマブを用いたカニクイザルにおけるＡＢ７９との比較は不可能であった。さらに、多発性骨髄腫患者は高レベルのＣＤ３８陽性の悪性細胞を有しており、この癌の徴候に対してより高い有効抗体濃度が必要になる可能性がある（ｄｅ  Ｗｅｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８６：１８４０−１８４８）。
【０２７１】
しかしながら、ＡＢ７９が約１ｍｇ／ｋｇで末梢のＮＫ細胞の完全な枯渇を、約３ｍｇ／ｋｇでＢ細胞の完全な枯渇を達成したとしても（図８）、多発性骨髄腫においてダラツムマブが週１回の１６ｍｇ／ｋｇのＩＶ用量で承認されることは注目に値する。
【０２７２】
８つのサルの試験からの豊富なデータベースにもかかわらず、いくつかの制限が認識された。ＡＢ７９は、試験された最低用量である０．０３ｍｇ／ｋｇでさえも、ＮＫ細胞を効果的に枯渇させる。このような低用量では、ＰＫはすぐに生物分析アッセイの定量限界を下回り、これが、低用量での曝露と効果との関係の解明を妨げた。さらに、前臨床開発中、最大の細胞枯渇は最大薬物濃度の直後に発生することが認識されたが、枯渇の初期段階の解明は、全体的なサンプル数によって、および潜在的に繰り返される採血による非特異的な細胞の枯渇（採血の影響）によって技術的に制限される。採血の影響は、ＡＢ７９に結合しない細胞型（例えば、ＲＢＣ）の枯渇を特徴とする一過性汎血球減少症として観察され、用量依存的ではなく、これが、ＡＢ７９のいかなる特異的な影響でもなく、複数回の採血の結果としての失血量が原因であることを示唆した（図１２）。その結果、特にＮＫ細胞枯渇のモデルパラメータを正確に推定する能力は制限され、ＫＩＮとＥＭＡＸの典型的な値は、安定した適切な推定結果を達成するために修正が必要であった。
【０２７３】
組織の形質細胞または形質芽細胞に対するＡＢ７９の効果は測定できなかった。しかしながら、形質細胞や形質芽細胞と同様に、ＮＫ細胞はそれらの表面に高レベルのＣＤ３８を有し、特定のリンパ球サブセットの細胞枯渇効率は、少なくとも部分的にはＣＤ３８の発現レベルに依存していた。したがって、形質芽細胞および形質細胞に対するＡＢ７９の細胞溶解効果は、ＮＫ細胞に対する効果に匹敵する可能性がある。現在、サルにおけるＡＢ７９治療の長期的影響に関する情報は限られている。１３週間の毒物学試験における動物のごく一部だけが、回復グループで長期間調査され、全ての用量群のほとんどの動物がＡＤＡを発症した（図３）。さらに、異なるリンパ球サブセットのベースライン値と枯渇プロファイルは、個体間で非常に変動した。したがって、ＡＢ７９の長期的な影響をサルで調査することはできず、ヒトで試験する必要がある。
【０２７４】
ヒトのデータが出現することで、ヒトとサルのＰＫデータとＰＤデータを詳細に比較することは興味深いものとなろう。ヒトのデータに基づくＰＫモデルの構築およびサルモデルとの比較により、ＡＢ７９のＴＭＤＤモデルを改良することが可能となるであろう。患者の試験で生成されたデータは、Ｂ系統細胞のＡＢ７９を介した枯渇が、ＲＡ患者とＳＬＥ患者、および多発性骨髄腫患者と健康な対象のそれとどのように比較されるかに関する洞察を提供する。ＣＤ３８発現レベルに加えて細胞枯渇効率に影響を与える可能性のある対象または疾患関連要因の調査も重要であり、治療の個別化につながる可能性がある。さらに、ＡＢ７９とダラツムマブおよび／または他のＣＤ３８抗体をインビトロおよびインビボで徹底的に比較すると、抗ＣＤ３８抗体の薬理学とその最適な用途に関する貴重な情報が明らかになるであろう。
【０２７５】
豊富な薬理学的データとＰＫおよびＰＫ−ＰＤモデルは、カニクイザルにおける曝露と影響との関係の特性評価を可能にした。ＮＫ、Ｂ、およびＴ細胞のモデルベースの分析は、血液リンパ球サブセットのそれぞれが異なる速度で抗体によって枯渇され、血液コンパートメントを補充するために異なる期間を必要とするという発見を支援し、定量化した。モデルは、臨床試験の準備における様々な投与シナリオ下でのＰＫおよびＰＤデータのシミュレーションのための優れた手段であることが判明した。
【０２７６】
実施例２：ＡＢ７９によるＣＤ３８＋細胞枯渇
表６は、ＡＢ７９が抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）によって細胞枯渇を媒介することを示している。ＣＤ３８発現が増加した細胞株は、ＡＤＣＣに対してより感受性が高かった。ＣＤ３８を発現しないヒトリンパ芽球細胞株（ＭＶ−４−１１）や、ＣＤ３８と密接に関連する分子であるＣＤ１５７を遺伝子導入したチャイニーズハムスター卵巣細胞株では、ＡＤＣＣは見られなかった（データは示さず）。ＣＤ２０を標的とし、プラズマ芽細胞を直接的に枯渇させない他のＢ細胞選択的治療とは異なり、ＣＤ２０は、低／陰性であり、ＣＤ３８は形質芽細胞および形質細胞に高レベルで発現し、これらの細胞をＡＢ７９の直接的な標的にする。ヒト血液細胞および細胞株を用いたインビトロでの試験は、ＡＢ７９がＣＤ３８への結合がＰＢＭＣサイトカインの活性化をもたらさないことを示し、下記で議論されるように、ＡＢ７９がアゴニストではないことを実証した。むしろ、ＡＢ７９はＡＤＣＣとＣＤＣによるヒトＢ系統細胞株の細胞枯渇を媒介し、ほとんどの場合、ＣＤ３８発現が増加した細胞株は細胞溶解の影響を受けやすかった。
【０２７７】
【表６】
2021510737.tif 000058
【０２７８】
これは、枯渇の効率がＣＤ３８の発現レベルとＡＢ７９用量レベルと相関している健康的なカニクイザルにおける発見と一致している。高レベルのＣＤ３８を発現するＮＫ細胞は、ＣＤ３８の発現が少ないＣＤ２０＋Ｂ細胞およびＣＤ３＋Ｔ細胞よりも多く枯渇した（図１３）。インビボで、ＡＢ７９はマウスの養子移入モデルで抗原に対するヒトＢ細胞の想起（ｒｅｃａｌｌ）応答を強力に抑制した（図１４）。これらのデータはともに、自己免疫疾患におけるＡＢ７９のさらなる調査を支援する。
【０２７９】
ヒトＰＢＭＣを複数の条件下でＡＢ７９を用いて処理し、炎症性サイトカインの放出を測定した。ＡＢ７９はヒトのタンパク質と９１％のタンパク質同一性を共有するサルＣＤ３８と交差反応するため、カニクイザルは細胞型に特異的な固有の枯渇とＡＢ７９用量との関係を示すために使用した。第２の動物モデル、マウス養子移入されたヒトＰＢＭＣを使用して、ＡＢ７９がヒト抗体産生細胞を標的とするかどうかを決定した。
【０２８０】
ＡＢ７９はＣＤ３８と結合し、ＡＤＣＣおよびＣＤＣを媒介する。
受容体数は、マウス抗ヒトＣＤ３８抗体（クローンＨＩＴ２）を使用してＦＩＫＩＴ（ＤＡＫＯ、ネコ＃Ｋ００７８）で決定され、染色された試料の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を、定義された数の抗体分子が結合したビーズの５つの集団のＭＦＩから生成された検量線に変換することで計算された。絶対受容体＃は、抗ＣＤ３８抗体ＭＦＩからアイソタイプ対象（マウスＩｇＧ１）ＭＦＩを差し引くことで計算された。
【０２８１】
ＣＤＣは、細胞株を１０，０００細胞／ウェルで播種し、ＡＢ７９、対照ＩｇＧまたは培地を添加することで評価した。５点の用量反応曲線（０．００１〜１０ｍｇ／ｍｌ）を典型的に実行した。ウサギ補体（２〜１５ｕｌ；＃ＣＬ  ３４４１  ＣｅｄａｒＬａｎｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を、対照ウェル以外の各ウェルに添加した。ＣｙｔｏＴｏｘ−Ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｇ７５７１／Ｇ７５７３）を使用して、発光により細胞傷害性を検出した。テストされた群：細胞のみ；細胞＋補体；細胞＋ＩｇＧ対照＋補体；細胞＋ＡＢ７９＋補体。％ＣＤＣ方程式：％ＣＤＣ＝１００−（（ＲＬＵ（テスト）／ＲＬＵ（補体のみ））×１００）。
【０２８２】
ＡＤＣＣは、５０００個の標的細胞／ウェル（Ｔ、細胞株）に５０ｍｌのＡＢ７９、対照ＩｇＧ、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００（１％；Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ）、または培地のみ、および１：２５〜１：５０のＴ：Ｅ細胞の比率でのヒトエフェクター（Ｅ）ＰＢＭＣの５０ｍｌを播種することでテストした。９点の抗体用量反応曲線（０．０００００１〜１００ｎＭ）を、典型的に実行した。実験的溶解＝ＰＢＭＣ＋細胞株＋抗体。自発的溶解＝ＰＢＭＣ＋抗体を含まない細胞株。最大溶解＝細胞株＋Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００。細胞傷害性を、ＣｙｔｏＴｏｘ−Ｇｌｏ（商標）細胞傷害性発光アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して評価した。
【０２８３】
ＡＢ７９には、アゴニスト活性を有さない。
ヒトＰＢＭＣでサイトカイン産生を誘導するＡＢ７９処理の能力を、陰性ＩｇＧ１アイソタイプ対照および陽性対照、ＰＨＡ、抗ＣＤ３（クローンＯＫＴ３）または抗ＣＤ５２（Ｃａｍｐａｔｈ）抗体と比較した（図１５および１６）。
【０２８４】
可溶性ＡＢ７９は、ＩｇＧ１アイソタイプコントロールと比較して、２４時間のインキュベーション後に４人の異なる対象から採取されたＰＢＭＣ中のＩＬ−６レベル（平均値±ＳＤ）を上昇させなかった。ＰＨＡは全ての対象のサイトカインレベルを上昇させ、細胞がＩＬ−６を産生する能力を有していることを示した（図１５）。ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγおよびＴＮＦαを試験すると、４８時間刺激されたＰＢＭＣで同様の結果が見られた（データは図示せず）。
【０２８５】
抗体が細胞に示されることによる方法は、抗体の結果に寄与し得る：リガンド結合と細胞応答（Ｓｔｅｂｂｉｎｇｓ  ｅｔ  ａｌ（２００７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７９：３３２５−３３３１）。Ｓｔｅｂｂｉｎｇｓらは、アゴニスト抗体に対する最大の細胞応答（サイトカイン放出）が、抗体を溶液中のウェルに添加し、溶液中のウェルに結合させた抗体（湿潤結合）またはＰＢＭＣに直接添加した抗体（可溶性）と比較して、液体を蒸発させた（乾燥結合）ときなどの、抗体が高濃度でウェル表面に付着しているときに発生することを示した（図１６Ａ）。ＡＢ７９は、これらのアプローチのいずれを使用することにおいても、サイトカイン産生を刺激しなかった（図１６Ｂ）。
【０２８６】
ＡＢ７９（１００ｍｇ／ｍｌ）は、２４時間後に試験されたいずれの条件下でも、ＩＬ−２、−４、−６、−８、−１０、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγ、またはＴＮＦαを刺激しなかった。ＡＢ７９はＩＬ−１０またはＧＭ−ＣＳＦを誘発しなかったが、どちらも抗ＣＤ３によって誘発された（示されていないが、抗ＣＤ３以外の全ての値はＬＬＯＱ未満であった）。ＩＬ−８はＰＢＭＣによって構成的に産生され、いかなる処置によっても変化しなかった（データは図示せず）（表７）。
【０２８７】
【表７−１】
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【０２８８】
【表７−２】
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【０２８９】
ＡＢ７９はＣＤ３８＋細胞を枯渇させる
ＡＢ７９はＣＤ３８に高い親和性で結合し、ＣＤＣおよびＡＤＣＣを媒介する。ＡＢ７９はアゴニストではなく、ヒトＰＢＭＣからのサイトカイン放出を誘発しなかった。ＡＢ７９は、ヒトおよびカニクイザルの両方からのＣＤ３８に結合した。両方の種からのリンパ球は、ＡＢ７９染色の中央値蛍光強度に基づき、ＮＫ細胞＞Ｂ細胞＞Ｔ細胞のＣＤ３８発現の同様の細胞特異的パターンを有していた。ＡＢ７９を用いた治療は、可逆的で細胞特異的かつ用量依存的な手法でサルリンパ球を枯渇させた。ＡＢ７９は、マウスの養子移入モデルにおいて、ヒト抗体の想起応答を効果的にブロックした。
【０２９０】
実施例３：ヒトおよびカニクイザルの赤血球および血小板へのＡＢ７９結合の評価
ヒトＣＤ３８を目的とした、完全にヒトの、高親和性の、非アゴニストの、ＩｇＧ１モノクローナルＡｂであるＡＢ７９を、ヒトまたはカニクイザル（サイノ）赤血球（ＲＢＣ）または血小板へのその結合を決定するために評価した。健康なヒトのボランティアからの３０個の血液サンプルおよび健康的なサイノ（ｃｙｎｏ）からの３０個の全血サンプルを、ＡＢ７９結合について、ＲＢＣまたは血小板に結合しない無関係な特異性のアイソタイプが一致する対照モノクローナル抗体、パリビズマブと比較して評価した。
【０２９１】
方法
正常なヒト対象３０人（血小板については男性１５人および女性１５人、ＲＢＣについては、弾性２５人および女性５人）由来の血液サンプル、および中国起源の３０匹のサイノ（オス１５匹、メス１５匹）由来の血液サンプルを、Ｂｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎ（Ｌｏｎｇ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）から購入した。全血をクエン酸ナトリウムチューブに採取し、周囲温度で一晩かけて輸送した。
【０２９２】
血小板へのＡＢ７９結合の評価では、５０μＬの全血をサイノ交差反応性抗ヒトＣＤ６１  ＦＩＴＣ  ｍＡｂ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｃａｔ＃５５５７５３）で染色して、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７（ＡＦ６４７）結合ＡＢ７９またはアイソタイプ一致対照、ＡＦ６４７結合パリビズマブ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ  ｃａｔ＃６０５７４−４１１３−１）、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）のＦタンパク質のＡ抗原部位のエピトープに対して特異的なヒト化モノクローナル抗体、ＲＢＣまたは血小板には存在しない抗原と組み合わせて、血小板を同定した。染色後に赤血球溶解を行い、ＢＤ  Ｃａｎｔｏフローサイトメータを使用してサンプルを分析した。ＣＤ６１＋血小板は、分析のためにゲートされた。
【０２９３】
ＡＢ７９のＲＢＣへの結合を評価では、全血５０μｌをＡＦ６４７結合ＡＢ７９またはアイソタイプ一致対照、ＡＦ６４７結合パリビズマブで染色した。いくつかの実験では、以前の試験で観察されたようなリンパ球のサブセットへのＡＢ７９結合の証拠を提供するために、サイノ交差反応性抗ヒトＣＤ４５  ＰＥＲＣＰ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｃａｔ＃５５２７２４）を使用して、リンパ球を染色した。ＢＤ  Ｃａｎｔｏフローサイトメータを使用してサンプルを分析した。データは、ＡＢ７９またはアイソタイプ対照の平均蛍光強度（ＭＦＩ）として表された。
【０２９４】
結果および考察
ＡＢ７９が３０人の健康的なヒトのボランティアと３０人の健康的なサイノのＲＢＣとに結合する能力を、フローサイトメトリーを使用して評価した。ＡＢ７９によるＲＢＣの染色は、ヒトの血液サンプル（図１７および表８）またはサイノの血液サンプル（図１８および表８）のいずれにおいても、アイソタイプ対照抗体で見られる染色レベルを超えていなかった。検出可能な結合はどちらの種でも観察されず、ＡＢ７９／アイソタイプ対照についてのＭＦＩの比率におけるヒトとサイノとの間で差は観察されなかった。
【０２９５】
【表８】
2021510737.tif 000061
【０２９６】
ＡＢ７９が３０人の健康なヒトのボランティアと３０人の健康なサイノ（ドナー１〜１５は雄であって、ドナー１６〜３０は雌であった）に由来のＣＤ６１＋血小板に結合する能力を、フローサイトメトリーを使用して評価した。血小板のＡＢ７９染色は、ヒトの血液サンプル（図１９および表９）またはサイノの血液サンプル（図２０および表９）のいずれにおいても、アイソタイプ対照で観察された染色レベルを超えていなかった。検出可能な結合はどちらの種でも観察されず、ＡＢ７９／アイソタイプ対照についてのＭＦＩの比率におけるヒトとサイノとの間で差は観察されなかった。
【０２９７】
【表９】
2021510737.tif 000062
【０２９８】
ＡＢ７９染色の陽性対照として、ＡＢ７９染色を血液サンプルの一部で測定した。血液中の赤血球の優勢が高いため、２００，０００件の事象が発生し、ＣＤ４５＋リンパ球の少数の集団がさらなる評価のためにゲートされた。アイソタイプ対照では結合は観察されなかったが、ＡＢ７９はＣＤ４５＋リンパ球の少数の集団に結合した（図２１）。この確認されたＡＢ７９は、ＡＢ７９の検出可能なＲＢＣまたは血小板への結合が観察されなかった条件下で、血液細胞を染色することができた。
【０２９９】
実施例４：より高感度のフローサイトメトリーを使用したヒトおよびカニクイザルの赤血球および血小板へのＡＢ７９結合の評価
以前のアッセイがＲＢＣ上の低レベルのＣＤ３８発現を検出するために十分な感度を有し得ない場合に備えて、ＡＢ７９がヒトまたはカニクイザル（サイノ）のＲＢＣに結合するかどうかをさらに評価するために、高感度フローサイトメトリーアッセイを開発した。４人の健康なヒトボランティアの血液サンプルを、蛍蛍光標識されたＡＢ７９またはＲＢＣ上のＣＤ３８に結合することが知られている、別の抗ＣＤ３８抗体である蛍光標識されたダラツムマブとインキュベートした。各サンプルをそれぞれの非標識医薬品とプレインキュベートして、蛍光標識医薬品とのＣＤ３８結合をブロックし、アッセイの陰性対照として機能させた。ＣＤ４５およびＣＤ２３５ａに対する抗体をサンプルに添加して、ＲＢＣ陽性細胞を特定した後、フローサイトメータで分析した。蛍光標識されたダラツムマブを陽性対照として使用した。結果は、ＡＢ７９およびダラツムマブが健康なヒトのドナーからの赤血球に結合することを示した。
【０３００】
方法
４人の健康なヒトのドナー（ミレニアムの血液ドナープログラム）からの血液サンプルを、会社のプロトコルに従って採取した。簡単にいえばＲＢＣ結合決定のための末梢血サンプルをヘパリンナトリウムチューブに採取し、リンパ球染色のために、末梢血サンプルをＢＤＶａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）ＣＰＴ（商標）チューブ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ、ＮＪ、ＵＳＡ）に採取した。別のチューブを使用して、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を採取し、蛍光標識されたＡＢ７９および蛍光標識されたダラツムマブのＣＤ３８＋リンパ球への結合を確認した。ＲＢＣ結合実験とリンパ球染色実験の両方で、末梢血サンプルをＲＴで保存し、細胞の生存率を維持するために採取から２時間以内に処理した。ＲＢＣ結合の場合、末梢血サンプルを最初に染色緩衝液（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ、ＮＪ、ＵＳＡ）で１：１０，０００に希釈して、サンプルに存在する多数のＲＢＣを希釈した。健康なヒトの血液サンプルにおけるＲＢＣの正常範囲はマイクロリットル当たり約５００万細胞であるため、フローサイトメトリー分析で染色するために許容可能な数のＲμＢＣを有するために、サンプルを実質的に希釈する必要がある。次いで、サンプルをＶ底の９６ウェルプレートに移送し、非標識の２５μＬ／ウェルのＡＢ７９（５００μｇ／ｍＬ）、非標識のダラツムマブ（５００μｇ／ｍＬ）、またはＢＤ緩衝液のみ（薬物なし）を用いて、穏やかなシェーカーで、４℃で一晩インキュベートした。プレートシェーカーを使用して、インキュベーション時間中のＲＢＣの沈降を防止した。ＲＢＣの表面のＣＤ３８抗原部位をブロックするために、末梢血サンプルを非標識医薬品とプレインキュベートした。これは、アッセイの陰性対称として機能した。このインキュベーション時間の後、臨床的に適切な濃度のビオチン−ストレプトアビジン−ＢＶ４２１ダラツムマブ（０、０．１、１、１０、および１００μｇ／ｍＬ）またはビオチン−ストレプトアビジン−ＢＶ４２１  ＡＢ７９（０、０．１、１、１０、および１００μｇ／ｍＬ）を、穏やかなシェーカーで、室温で３時間サンプルに添加した。次いで、サンプルをＢＤ緩衝液で数回洗浄し、ＲＢＣ同定のために細胞表面マーカーＣＤ４５およびＣＤ２３５ａ（ＲＢＣはＣＤ４５−ＣＤ２３５ａ＋）を用いて染色し、ストレプトアビジン−ＢＶ４２１をビオチン化抗体に結合させた。ビオチン−ストレプトアビジンを使用することによって、ＲＢＣ上の低レベルのＣＤ３８発現を増幅できる。ＢＶ４２１蛍光色素は、市販の最も明るい蛍光色素分子の１つであり、フローサイトメータで紫レーザーを使用し、それにより、パネル内の他のチャネル／マーカーとのスペクトルのオーバーラップの量を最小化するため、選択された。それとともに、このシグナル増幅アプローチは、さもなければ機器のノイズの範囲に含まれる細胞表面の分子を検出する機会を提供する。続いてサンプルを洗浄し、ＢＤ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏ（商標）ＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ、ＮＪ、ＵＳＡ）で取得した。標的細胞の取得は、１０，０００個のＣＤ２３５ａ＋事象に設定された。リンパ球��合については、ＣＰＴチューブに採取された同じ健康的なドナーからの末梢血を遠心分離し、標準的な手法を使用して末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を単離した。細胞を洗浄し、染色し、ＲＢＣ実験について説明されたように処理した。
【０３０１】
ビオチン化抗体を調製するに、ＡＢ７９（２１．４ｍｇ／ｍＬ、Ｔａｋｅｄａ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、ＵＳＡ）およびダラツムマブ（２０ｍｇ／ｍＬ、Ｊａｎｓｓｅｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｈｏｒｓｈａｍ、ＰＡ、ＵＳＡ）を、ビオチン化手順を妨害する可能性のある物質を除去するために、市販のプロテインＡカラムキット（Ａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）を使用して、同じ日に同時に精製した。精製産物のタンパク質濃度をＡ２８０／２６０によって決定し、Ｌｉｇｈｔｎｉｎｇ  Ｌｉｎｋ  Ｒａｐｉｄ  Ｂｉｏｔｉｎ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎキット（Ｉｎｎｏｖａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）を使用して、各抗体の等量のタンパク質をビオチンに結合させた。手順の最後に、Ａ２８０／２６０を使用してタンパク質濃度を再び測定した。両方の抗体は、任意の抗体アイソタイプまたは不活性ビーズ（陰性ビーズ）に対する抗体結合能力を有する市販のポリスチレンミクロスフェアに結合された。ビーズをビオチン−ストレプトアビジン−ＢＶ４２１  ＡＢ７９またはビオチン−ストレパビジン−ＢＶ４２１ダラツムマブと混合した後、一緒に混合された２つの成分は、フローサイトメトリーによる各試験抗体の中央値蛍光（ＭＦＩ）を推定するために使用できる適切な負の集団を有する明確な高信号陽性対照を提供する。サンプルは、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＦＡＣＳＣＡＮＴＯ（商標）ＩＩ機器でＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＦＡＣＳＤｉｖａ（商標）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ、ＮＪ、ＵＳＡ）を使用して取得した。生データファイルは安全なサーバーに転送され、次いで、ＦｌｏｗＪｏ（登録商標）バージョン１０（ＦｌｏｗＪｏ、ＬＬＣ；Ａｓｈｌａｎｄ、ＯＲ、ＵＳＡ）を使用してオフラインで分析された。ＲＢＣ同定のために、ＣＤ２３５ａ＋細胞を最初にゲートさせた。次いで、幾何学的ＭＦＩとパーセント陽性ビオチン−ストレパビジン−ＢＶ４２１  ＡＢ７９およびビオチン−ストレパビジン−ＢＶ４２１ダラツムマブ事象を、ゲートされた細胞に対して決定し、ヒストグラムとしてプロットした（図２２）。これをアイソタイプ対照と比較した（サンプルは非標識のＡＢ７９または非標識のダラツムマブとプレインキュベートされ、次いで、それらそれぞれのビオチン−ストレパビジン−ＢＶ４２１標識製剤とインキュベートされた）。リンパ球の同定では、まず、前方散乱と側方散乱（ＦＳＣ−ＡとＳＳＣ−Ａ）を使用して破片を除外した。次いで、ＣＤ４５陽性集団にゲートし、ＭＦＩとパーセント陽性ビオチン−ストレパビジン−ＢＶ４２１  ＡＢ７９およびビオチン−ストレパビジン−ＢＶ４２１ダラツムマブを、ゲートされた細胞に対して決定し、ヒストグラムとしてプロットした（図２２）。これをアイソタイプ対照と比較した（サンプルは非標識のＡＢ７９または非標識のダラツムマブとプレインキュベートされ、次いで、それらそれぞれのビオチン−ストレパビジン−ＢＶ４２１製剤とインキュベートされた）。
【０３０２】
【表１０】
2021510737.tif 000063
【０３０３】
結果および考察
ＡＢ７９およびダラツムマブ上のビオチンの量は、高感度フローサイトメトリーアッセイを使用して決定された。結果が図２３に示すように、ビオチン−ストレパビジン−ＢＶ４２１ダラツムマブは、ビオチン−ストレパビジン−ＢＶ４２１  ＡＢ７９よりも１．６〜２．０倍多くの抗体結合ビーズに結合する。したがって、ビオチン−ストレパビジン−ＢＶ４２１ダラツムマブは、ビオチン−ストレパビジン−ＢＶ４２１  ＡＢ７９と比較して「明るい」抗体である。結果的に、ＭＦＩ強度の比較は、この標識付けにおける違いに対して調整される必要がある。
【０３０４】
ビオチン標識製剤の特異性を確認することは、観察された結果が標的タンパク質への特異的結合の結果であることにおいて保証する上で重要な工程であった。競合アッセイは、抗体の特異性をテストする一般的な方法であった。この競合評価には、フローサイトメトリーアッセイを使用した。簡単にいうと、健康的なボランティアの末梢血サンプルを、非標識のＡＢ７９または非標識のダラツムマブでプレインキュベートし、次いで、ビオチン化ＡＢ７９またはビオチン化ダラツムマブでそれぞれ染色した。非標識製剤とともにプレインキュベートされたサンプルは、ビオチン化製剤の結合をブロックすると予想された。図２４に例証されているように、ビオチン化ＡＢ７９およびビオチン化ダラツムマブは、非標識製剤を使用して、末梢血リンパ球をブロックすることができた。
【０３０５】
ＲＢＣへのビオチン−ストレパビジン−ＢＶ４２１  ＡＢ７９およびビオチン−ストレパビジン−ＢＶ４２１ダラツムマブの結合の百分率は、健康的なボランティアからの４つの末梢血サンプルの合計を使用して決定された。図２５および２６に示されるように、ＡＢ７９は、試験した４人のドナー全てにおいて、用量依存的な様式でＣＤ３８を発現するＲＢＣに結合した。ピークＲＢＣ結合レベルは健康的なボランティア間で異なり、両方の製剤で１〜１０μｇ／ｍＬの間で観察された。１０および１００μｇ／ｍＬのビオチン−ストレプトアビジン−ＢＶ４２１  ＡＢ７９またはビオチン−ストレプトアビジン−ＢＶ４２１ダラツムマブのいずれかで、ＲＢＣレベルは試験した４人のドナーのうちの３人で低かった。ＲＢＣ溶血における増加や細胞外から細胞内への触媒ドメインの反転を含む、ＣＤ３８への薬物結合レベルの低下を説明し得るいくつかの要因がある（Ｙｏｓｈｉｇａ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．”Ｍｅｄ．“２２：３６９−３７４）。加えて、ダラツムマブは、少なくとも部分的には、食作用によりＣＤ３８の発現レベルを低下させ（Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０１８）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ．Ｔｈｅｒ．２０（１）：８５）；ＣＤ３８複合体および付随する細胞膜は、多発性骨髄腫細胞から単球および顆粒球に活発に移行した（Ｋｒａａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ（Ｏｘｆｏｒｄ）３８（１１）：１０７４−１０８０）。あるドナー（ドナー３）は、おそらくより多くの表面ＲＢＣ  ＣＤ３８発現を有する結果として、薬物量の増加とともに増加したＲＢＣレベルを有していた。テストされた最高濃度での薬物結合の低下をよりよく理解するには、追加の実験を行う必要がある。
【０３０６】
ＡＢ７９とダラツムマブのＲＢＣ結合プロファイルを比較した。表１０および図２７と２８に描写されているように、テストした４人のドナーのうち３人の製剤間で、ＲＢＣ結合の大きさ（つまり、ＭＦＩ）に違いがあるように見えたが、この差は各抗体のビオチン濃度の違いに起因する可能性があり、ダラツムマブのビオチンはＡＢ７９より１．６〜２．０倍多いビオチンを有する。抗体の蛍光標識の潜在的な違いを制御する代替的な分析は、各抗体の濃度対結合プロファイルを比較することであり、有用な測定基準は、最大の結合が発生する濃度（すなわち、抗原の最大の特異的な結合（Ｂｍａｘ））である。Ｂｍａｘは、４人のドナーのうちの３人における両方の抗体で同一である（例えば、ドナー１については１μｇ／ｍＬ）。まとめると、これらのデータは、両方の抗体が、係数が１０である、現在のアッセイの分解能限界内で、類似の親和性で結合することを示している。結論として、ＡＢ７９およびダラツムマブの両方は、このアッセイで互いに１０倍以内の親和性でＲＢＣに結合し、これらの抗体の赤血球に対する結合親和性の１０倍以上の違いは、このアッセイシステム内には存在しなかった。
【０３０７】
実施例５：インビトロでのヒトまたはサルＲＢＣのＡＢ７９溶血の評価
正常で健康なヒトのボランティアおよびカニクイザル（サイノ）からの新鮮な全血、種当たり５個体（ｎ＝５）を、ＡＢ７９（２７．３ｍｇ／ｍＬ；Ｔａｋｅｄａ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、ＵＳＡ）、ヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照（７．１４ｍｇ／ｍＬのＢｉｏ  Ｘ  Ｃｅｌｌ）、およびダラツムマブ（２０ｍｇ／ｍＬ；Ｊａｎｓｓｅｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｈｏｒｓｈａｍ、ＰＡ、ＵＳＡ）を用いたインビトロでの処理に応答するインビトロ溶血について評価した。所望のテスト物品についての用量反応を、０、０．０３、０．０８、０．２５、０．７４、２．２、６．６、および２０μｇ／ｍｌで調べた。サポニンの半対数希釈を評価し、上部の１％サポニン溶液から始めて、血液反応性の技術的陽性対照として使用した。急性溶血測定のために、３７℃、５％のＣＯ２で１時間処置を行った。分光光度計を使用して、５４０ｎｍの波長で吸光度を測定し、溶血率を以下のように計算した。
【０３０８】
【数４３】
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【０３０９】
溶血指数は以下のように評価される（溶血指数＝溶血グレード）：０〜２＝非溶血性；２〜５＝わずかに溶血性；＞５＝溶血性。
結果：各種、ヒトおよびサイノの全ての個体のＲＢＣは、溶血指数が５より大きい１％のサポニン溶液滴定に反応して、インビトロでの急性溶血を呈した。ＡＢ７９、ダラツムマブ、およびヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照は、非溶血性指数がゼロであると評価された種全体で、いかなる赤血球サンプルにも検出可能な溶血を誘発しなかった（図２９および３０）。
【０３１０】
実施例６：カニクイザルのコラーゲン誘発関節炎モデルにおけるＡＢ７９の評価
細胞外酵素ＣＤ３８の発現は、抗原チャレンジに応答してリンパ球で増加し、これらの活性化リンパ球を標的とすることで、自己免疫疾患の病理学的活動性を改善できるという仮説が立てられている。カニクイザルはヒトのＣＤ３８を標的とする潜在的な影響を評価するための適切なモデルであり、なぜなら、この種が、同様のＣＤ３８発現プロファイルを示し、ヒト抗ＣＤ３８抗体ＡＢ７９が、サルＣＤ３８に親和性（ＥＣ５０＝４．５ｎＭ）で結合し、薬理学的介入を可能にするためである。したがって、ＡＢ７９の潜在的な活性は、自己免疫疾患のサルコラーゲン誘発関節炎（ＣＩＡ）モデルで調査された。ＡＢ７９の予防的投与（毎週３ｍｇ／ｋｇ静脈内注射で）は、Ｘ線撮影による損傷を伴う進行性疾患を示し、試験の過程で臨床スコアが悪化した、ビヒクル処置された対照動物とは対照的に、忍容性が高く、かつ関節炎の発症を予防した。ＡＢ７９（毎週３ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｖ．）による関節炎のサルの治療的処置も、忍容性が高く、かつ疾患の進行および症状を軽減した。関節炎スコアおよび関節腫脹は、ビヒクル対照よりも有意に低く、ＣＲＰ、ＡＬＰ、ＮＫ、Ｂ、およびＴ細胞の血中濃度における低下を伴った。組織病理学、形態計測および放射線学は、ビヒクル処置動物と比較して、ＡＢ７９処置に予防的に曝された動物の関節損傷が有意に少なく、ＡＢ７９またはデキサメタゾン（毎日０．１ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ．）で処置された動物の損傷が有意に少ない（ｐ＜０．０５）ことを明らかにして、潜在的な疾患修正活性を示している。結論として、これらのデータは、ＣＤ３８発現細胞の枯渇が、ステロイドの有害な影響なしに、自己免疫疾患を治療するための治療法の選択肢となり得ることを示している。
【０３１１】
方法および材料
抗体
ＡＢ７９は社内で入手可能であった。蛍光色素標識済み抗マウスＩｇＧは、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ、ＰＡ）から購入した。Ｐｈａｒｍｌｙｓｅ緩衝液はＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ）から入手した。サルのタンパク質に対する蛍光色素標識済み抗体は、様々な供給元から購入し、ＣＤ２０は、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ）から、ＣＤ３に対するマウス抗体は、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）から、ＣＤ１６に対するウマウス抗体は、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（Ａｕｂｕｒｎ、ＣＡ）から、ＣＤ４およびＣＤ８に対するマウス抗体は、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓから購入した。Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７結合ＡＢ７９に加えて、ＡＢ７９に対する非結合抗体および抗原特異性が異なるが同じＦｃ  ＩｇＧ１を有するヒト化対照抗体は、社内で入手可能であった。サル組織の交差反応性調査の一次抗体は、ウサギ抗ＡＢ７９（社内で生成）および陰性対照ヒトＩｇＧ１（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ，Ｔｅｍｅｃｕｌａ、ＣＡ）であった。
【０３１２】
組織の免疫組織化学
ＣＤ３８抗原の発現プロファイルは、免疫組織化学を使用して、健康的なヒトおよびカニクイザルのドナーから採取された１５の異なる組織型間で比較された。ＣＤ３８を検出するための各組織の適合性は、関連する膜貫通受容体ＣＤ３１（Ｄａｋｏ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ、Ｉｎｃ．）に対する陽性対照抗体を使用して検証された。切片（５μｍ）をＯＣＴ化合物（Ｓａｋｕｒａ  Ｆｉｎｅｔｅｋ  ＵＳＡ、Ｉｎｃ．，Ｔｏｒｒａｎｃｅ，ＣＡ）に埋め込んだ新鮮な凍結組織サンプルから切り取り、室温で１０分間アセトンに固定した。染色直前に、スライドを１０％中性緩衝ホルマリンで１０秒間固定した。アセトン／ホルマリン固定凍結切片をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で２回濯ぎ、非特異的結合を低減するように設計されたタンパク質ブロック（ＰＢＳ；０．５％のカゼイン；５％のヒトガンマグロブリン；０．０２％のヤギＩｇＧ；１ｍｇ／ｍｌの熱凝集ヒトＩｇＧ）と２０分間インキュベートした。非結合ＡＢ７９または陰性対照のヒトＩｇＧ１（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ）を５または２５μｇ／ｍｌで切片に塗布し、ＲＴで１時間インキュベートした。次いで、スライドをＰＢＳで２回濯ぎ、間接イムノペルオキシダーゼ手順を実行して、これらの一次試薬を検出した。次いで、二次抗体であるウサギ抗ＡＢ７９を５μｇ／ｍｌで３０分間塗布し、ＰＢＳで２回濯いだ。内因性ペルオキシダーゼは、Ｄａｋｏ  ＥｎＶｉｓｉｏｎ＋キットで提供されるペルオキシダーゼ溶液でスライドを５分間インキュベートし、次いで、ＰＢＳで２回濯ぐことによってブロックされた。次いで、スライドを、Ｄａｋｏ  ＥｎＶｉｓｉｏｎ＋キットに付属のペルオキシダーゼ標識ヤギ抗ウサギＩｇＧポリマーで３０分間処理し、ＰＢＳで２回濯ぎ、Ｄａｋｏ  ＥｎＶｉｓｉｏｎ＋キットに供給される基質色素原（ＤＡＢ＋）溶液で８分間処理した。全てのスライドを水道水で濯ぎ、ヘマトキシリンで対比染色し、洗浄し、飽和炭酸リチウムで「青色にし」、洗浄し、アルコールを通して脱水し、キシレンで透明にし、標準的な方法に従ってカバーガラスを被せた。染色強度は、盲検化された米国獣医病理学者協会（ＡＣＶＰ）によって認定された解剖病理学者によって半定量的に等級付けされた。
【０３１３】
組換えＣＤ３８に結合するＡＢ７９
ヒト、マウス、またはサルのいずれかのＣＤ３８を安定して発現するチャイニーズハムスター卵巣Ｋ１（ＣＨＯ−Ｋ１）細胞を生成して、抗ＣＤ３８抗体の細胞表面結合を試験した。ＣＨＯ−Ｋ１細胞（Ｌｏｎｚａ、ＵＳＡ）に、ヒト、マウス、またはカニクイザルＣＤ３８（Ｏｒｉｇｅｎｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ）の完全長ｃＤＮＡクローンをトランスフェクトした。選択後、プールをフローサイトメトリーで分別し、最高のヒト、マウス、またはカニクイザルＣＤ３８発現クローン（上位１５％の平均蛍光強度（ＭＦＩ））を結合試験に利用した。ウェル当たり２００，０００個の細胞を９６ウェルの丸底プレートに播種し、３０分〜１時間、氷上で５０μｌのＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ中１％のＢＳＡ）中のＡｂｓに直接的に結合された６６．７ｎＭのＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）４８８を用いて染色した。細胞を、最終容量２００〜２５０μｌのＦＡＣＳ緩衝液で３〜４回洗浄した。最終的な細胞ペレットを、１％のパラホルムアルデヒドを含有する１００μｌのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。サンプルを、ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩ  ＨＴＳ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で評価し、Ｆｌｏｊｏソフトウェア（Ｔｒｅｅ  Ｓｔａｒ、ＵＳＡ）を使用して分析した。
【０３１４】
細胞株および全血のフローサイトメトリー
細胞株の染色のために、細胞を２×１０６／ｍｌでＦＡＣＳ緩衝液（５％のウシ胎児血清および０．０５％のアジ化ナトリウムを含むＤ−ＰＢＳ（カルシウムおよびマグネシウムを含まないダルベッコのリン酸緩衝液生理食塩水）（ＶＷＲ，Ｗｅｓｔ  Ｃｈｅｓｔｅｒ，ＰＡ））に再懸濁し、２００μｌのサンプルを適切なモノクローナル抗体を用いて、４℃で３０分間染色した。サンプルをＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ，ＢＤ）で分析した。全血の染色のために、サルからの２００μｌのサンプルを適切なモノクローナル抗体で４℃で３０分間染色した。赤血球をＢＤ  ＦＡＣＳ溶解液で溶解し、サンプルをＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、フローサイトメトリーで分析した。全ての場合において、抗体は飽和濃度で使用され、多くの場合、サンプル当たり最大４つの抗体が使用された。
【０３１５】
カニクイザルからの全血におけるＡＢ７９活性
カニクイザルの全血は、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）から入手した。結合アッセイのために、抗凝固処理したカニクイザル末梢全血（１００μｌ）を、漸増濃度のＡＢ７９抗体（４３−６９０ｎＭ）を用いてＲＴで３０分間インキュベートした。細胞へのＡＢ７９の結合は、ＰＥ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ抗体（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用してアッセイした。抗体の結合後、固定液を含まない高収量溶解液（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して赤血球（ＲＢＣ）を溶解した。次いで、細胞を、０．５％のＢＳＡ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）を含有する磁気活性化細胞選別（ＭＡＣＳ）緩衝液で２回洗浄した。細胞染色データを、フローサイトメトリー（Ａｔｔｕｎｅ  ＮｘＴ  Ａｃｏｕｓｔｉｃ  Ｆｏｃｕｓｉｎｇ  Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ）によって収集し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して分析した。
【０３１６】
細胞溶解アッセイでは、全血の９０μＬを９６ウェルＵ底プレートの各ウェルに播種した。播種後すぐに、全血を０．６９、２．０６、６．１７、１８．５２、５５．５６、１６６．６７および５００ｎＭのＡＢ７９またはＰＢＳ対照で６、２４、および４８時間処理した。各時点で、９６ウェルＵ底プレート内の対照および試験用分子処理全血を、ＲＢＣ溶解のために深型ウェルプレートに移した。溶解後、表面マーカー染色のために、ＣＤ１６−ＢＶ６０５、ＣＤ５６−ＰＥ、およびＣＤ３８−ＦＩＴＣ抗体を有する染色緩衝液に細胞を再懸濁した。細胞を光から保護し、４℃で２０分間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を、室温で、３５０ｇで５分間遠心分離し、１ＸアネキシンＶ結合緩衝液で洗浄した。細胞を、アネキシンＶ  Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７を含有する１ＸアネキシンＶ結合緩衝液にＲＴで１５分間再懸濁した。染色された細胞をＢＤ  ＦＡＣＳＣｅｌｅｓｔａフローサイトメータを使用して分析し、データはＢＤ  ＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェア、バージョン８．０．１で記録した。各試験濃度でのＮＫ細胞生存率と各時点でのＡＢ７９のＮＫ細胞枯渇のＩＣ５０値をグラフ化し、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ７．０４で適合させた。
【０３１７】
健康なサルの用量範囲設定試験
一連の調査で、健康的で、目的に応じて飼育された、実験的に未処理なカニクイザルは、ビヒクル対照を受け、０．０３、０．１、０．３、および１ｍｇ／ｋｇのＡＢ７９を毎週、または隔週で３、３０、または８０ｍｇ／ｋｇで、２０分の静脈内注入を介して投与された（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）。全ての調査で、動物の臨床症状の変化を評価した（１日に２回のケージ側の観察、投与後の観察、毎週の詳細な検査、摂餌量、および毎週の体重）。薬物動態、薬力学、および霊長類の抗ヒト抗体（ＰＡＨＡ）の評価のために、全ての調査で投与前および投与後に血液サンプルを採取した。調査は、ＵＳＤＡ動物福祉法（９ＣＦＲ、Ｐａｒｔ１、２、および３）で概説されている規制と、実験動物の手入れと使用のためのガイド（ＩＬＡＲ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，１９９６，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  Ｐｒｅｓｓ）で指定された条件に準拠している、試験施設ＳＯＰ（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）に従って、カニクイザルにおいて実施された。
【０３１８】
ＡＢ７９血清濃度の決定のための生物分析手順
カニクイザル血清中のＡＢ７９の濃度は、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）法を使用して測定した。この方法は、９６ウェルマイクロタイターフォーマットを利用した間接ＥＬＩＳＡである。プレートをＡＢ７９に対するマウス抗イディオタイプ抗体でコーティングした。様々な濃度のＡＢ７９を含有するブランク、標準、および品質管理（ＱＣ）サンプルとサルの血清サンプルをコーティングしたマイクロタイタープレートに添加し、室温で５５〜６５分間インキュベートした。マイクロタイタープレートを洗浄した後、検出抗体（ペルオキシダーゼ結合アフィニピュアマウス抗ヒトＩｇＧ）を添加し、プレートをさらに５５〜６５分間インキュベートした。プレートを再度洗浄し、ウェルにテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を加えて発色団を生成させ、停止液（２Ｎ硫酸）を加えて発色を停止させた。４５０ｎｍでの吸光度を測定し、４パラメータのロジスティック加重（１／ｙ２）標準検量線を使用してＡＢ７９濃度を計算した。
【０３１９】
抗ＡＢ７９抗体の決定のための生物分析手順
カニクイザル血清の抗ＡＢ７９抗体スクリーニングは、強化化学発光（ＥＣＬ）法を使用して測定した。この定性的ＥＣＬ法の設計は、希釈されていないカニクイザルの血清サンプルを３００ｍＭの酢酸とインキュベートされるようにしたものである。酸解離したサンプルを、ビオチン化ＡＢ７９、ＳＵＬＦＯ−ＴＡＧで標識されたＡＢ７９、および１．５ＭのＴｒｉｚｍａ塩基の混合物中でインキュベートし、酸を中和して免疫複合体を形成した。次いで、この複合体をストレプトアビジンでコーティングされたＭＳＤプレートに添加し、結合させた。洗浄後、ＭＳＤ読み取りバッファーＴをプレートに添加し、Ｒｕ（ｂｐｙ）３の電気化学反応を介してＳＵＬＦＯ−ＴＡＧ（商標）を励起して発光を生成さすることによって、複合体を検出し、ＭＳＤ  Ｓｅｃｔｏｒ  ６０００を使用して読み取った。発光量は、個々のサンプルの血清中に存在するカニクイザル抗ＡＢ７９抗体のレベルと相関していた。このアッセイのカニクイザル血清の最小必要希釈（ＭＲＤ）を、１／３０に設定した。グラフ表示のために、全ての動物を抗体価と登録日数の関数として個別にプロットした（図３１）。プレート固有のカットポイント以下の値を有する血清サンプルを、公称力価値を使用してプロットし、プロットを容易にした。
【０３２０】
サルコラーゲン誘発関節炎モデル
カニクイザルのＡＢ７９に対する薬力学的応答をモデル化し、ＰＤ応答に統計的に有意な差を生み出すために処置群ごとに必要な動物の最小数を外挿することにより、非ヒト霊長類の倫理的に責任ある使用が保証された。３〜４歳、２．５〜３．３ｋｇの３４匹の未処理の雌のカニクイザルは、Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（ＧＺ）Ｌｔｄ（ＳＮＢＬ  Ｃｈｉｎａ）から入手した。受領後、受託研究機関（ＰｈａｒｍａＬｅｇａｃｙ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｎｃ．、中国）によって各動物の健康検査を実行した。動物をケージごとに１匹ずつ収容し、実験手順の開始前に最低１４日間順応させた。動物室は、２０〜２９℃の温度、４０〜７０％の相対湿度、および１２時間の明／暗サイクルで維持された。試験開始前に、静脈内注入または強制経口投与を受けるように動物を訓練した。サルは、従来のプロトコルに従って、野菜、果物、固形飼料（Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｓｈｉｌｉｎ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃ  Ｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．Ｌｔｄ．，Ｃｈｉｎａ）および水に自由にアクセスできた。ケージはラック内で層別化され、いかなる環境への影響が試験に与える影響を軽減させた。この実験計画書、全ての試験プロトコル、および実験手順は、動物実験に関する中国の法律に従って、主催者の倫理委員会（ＰｈａｒｍａＬｅｇａｃｙ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ）によって検討および承認された。
【０３２１】
サルは事前スクリーニング基準に基づいて、試験用に選択された。１匹の未処置動物にはコラーゲンを投与せず、疾患誘発の陰性対照として維持した。残りの動物には、０．０１Ｎ酢酸（ＳＰＧＣ  Ｓｉｎｏｐｈａｒｍ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ；Ｓｈａｎｇｈａｉ，Ｃｈｉｎａ）に溶解したウシＩＩ型コラーゲン（Ｓｉｃｈｕａｎ，Ｃｈｉｎａ）を最終濃度４ｍｇ／ｍＬで（Ｍｉｈａｒａ  Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００１；９８（３）：３１９−２６；Ｕｃｈｉｙａｍａ  Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｌ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｕｌｌ．２００８；３１（６）：１１５９−６３；Ｕｃｈｉｙａｍａ  Ｙ，Ｋｏｉｋｅ  Ｎ，Ｍｉｈａｒａ  Ｍ．Ａｎｅｍｉａ  ｉｎ  ｍｏｎｋｅｙ  ｃｏｌｌａｇｅｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｉｓ  ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｓｅｒｕｍ  ＩＬ−６，ｂｕｔ  ｎｏｔ  ＴＮＦａ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  Ｉｎｔ  ２００８  ２８：８７９−８８３；Ｋａｔｏ  Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ２００８  ８４：２６２−２７０）、０日目と２１日目に皮下に投与された（Ｍｉｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９８（３）：３１９−２６；Ｕｃｈｉｙａｍａ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．３１（６）：１１５９−６３；Ｕｃｈｉｙａｍａ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．Ｉｎｔ．２８：８７９−８８３；Ｋａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｏｌ．Ｐａｔｈ．８４：２６２−２７０）。コラーゲンは、等量の完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ；Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＵＳＡ）で乳化させた。動物はケタミン（筋肉内注射で４ｍｇ／ｋｇ）で前鎮静され、必要な場合、１．５〜５％イソフルラン（吸入麻酔機で、Ｍａｔｒｉｘ  ｖｉｐ３０００イソフルラン）として追加の麻酔が適用され、０．８〜１．５リットルの酸素の流量で効果が得られた。予防接種部位に発生した潰瘍性皮膚病変は、感染を防ぐために動物が鎮静されるたびにヨウ素で処置した。
【０３２２】
コラーゲンを投与された７匹の動物を、０日目に予防的なＡＢ７９群に割り当てた（図３１Ａ）。予防的ＡＢ７９動物は、７日目から開始して毎週３ｍｇ／ｋｇのＡＢ７９の注入を受け、５６日目に最後の用量が投与され、合計８回投与された（図３１Ａ）。この群の動物は、６３日目に屠殺された。残りの免疫動物を１つの群として扱い、７日目から開始して、動物が≧１５％の最大臨床関節炎スコア（ＣＩＡ）に達するか、またはそれを超えまで、ビヒクル（生理食塩水）を毎週３０分間静脈内注入した。この時点で、動物はビヒクル対照群、治療的ＡＢ７９群、または治療的デキサメタゾン群に登録され、発症は時間差があるため、順調に登録が続けられた（図３１Ａ）。ビヒクル対照群に登録された動物については、ビヒクルの毎週の注入が５週間行われた（図３１Ａ）。この群の動物は、最後の投与の７日後に屠殺された。治療的ＡＢ７９群に登録された動物については、毎週の注入が５週間行われた（図３１Ａ）。この群の動物は、最後の投与の７日後に屠殺された。治療的デキサメタゾン群に登録された動物は、５週間にわたって毎日強制経口投与され（図３１Ａ）、最後の投与の１日後に屠殺された。動物の健康状態の徴候および処置に対する一般的な反応を毎日観察した。通常の健康的な外見および行動に対する全ての例外が記録され、標準的な臨床観察フォームに詳細が記録された。
【０３２３】
関節炎活動性の評価
サルの体重を、順応期間中（実験の開始の５日前）に１回、疾患誘発の各サイクルの前日に測定し、その後、試験の終わりまで週に１回測定した。関節の腫脹がある群の動物の数を、０日目と２１日目に記録し、その後、試験の終わりまで毎日記録した。関節腫脹を伴う近位指節間（ＰＩＰ）関節（それぞれ手と足）の数を、０日目、２１日目に記録し、その後、試験の終わりまで週１回記録した。前肢と後肢（親指なし）のＰＩＰ関節の縦軸と横軸を、０日目、２１日目にキャリパーで測定し、その後、関節炎を有する全てのＰＩＰについて、疾患の発症から試験の終了まで週１回測定した。１６個のＰＩＰ関節の平均楕円面積が計算され、個々のデータとして採用された。各ＰＩＰの楕円形面積は、以下の式を使用して計算した：楕円形面積＝縦軸×横軸×３．１４×１／４。楕円形面積の変化率と関節腫脹は、以下の式を使用して計算した：楕円形面積の変化率＝（Ｘ日目の平均楕円形面積／１回目の感作の日の平均楕円形面積）×１００。関節腫脹＝（Ｘ日目の平均楕円形面積−１回目の感作の日の平均楕円形面積）。
【０３２４】
臨床関節炎スコア
サルの各肢の関節炎の重症度を、０日目と２１日目に記録し、その後、以下の基準に従って、研究の終わりまで週１回記録した：（０）正常；（１）軽度の関節炎、軽度だが明確なもの；（２）中程度の腫脹；（３）著しい腫脹および／または顕著な関節変形を伴う重度の関節炎。各足の以下の関節を検査し、スコア付けした：５個の中手指節（ＭＣＰ）関節、４個のＰＩＰ（近位指節間）関節を含む合計１５個の関節；４個のＤＩＰ（遠位指節間）関節、１つの第１の指の指節間関節；各手首または足首は、単一の複合関節としてスコア付けした。各肢の膝／肘も、疾患の重症度について評価された。各動物の関節炎スコアは、個々の関節の合計スコアであり、最大スコアは１９２であった（１６×３×４）（１６：関節と各四肢の膝／肘の合計数、３：個々の関節の最大スコア、４：サル１匹当たりの手足の数）。
【０３２５】
採血および分析
血液サンプルは、ＣＢＣ、血液化学、抗体の血清調製、ＰＫ、ＡＤＡの測定のために使用され、以下に示す時点で動物から採取された。ビヒクル対照群および予防的なＡＢ７９群の動物：１週目と５週目の間、投与前と翌日に１回、２回採血した。２、３、４、６、７、８週目に、ＡＢ７９投与直前に血液サンプルを採取した。９週目の間、動物が終了されたときに血液サンプルを採取した。全ての他の動物は、疾患が関節炎の最大スコアの１５％の閾値に達するまで、毎週採血した。ビヒクル群、治療的ＡＢ７９群、または治療的デキサメタゾン群に割り当てた後、血液サンプルを投与直前および終了時に毎週採取した。加えて、薬物の１回目の投与の翌日および５回目の投与の翌日にサンプルを採取した。ビヒクル対照、予防的ＡＢ７９、治療的ＡＢ７９、およびデキサメタゾン群では、フローサイトメトリー用の血液サンプルを１日目の投与の前（注入の日）、１回目の投与の翌日、２回目の投与の前（投与の日）、５回目の投与の前（投与の日）、および終了日に採取した。治療用ＡＢ７９群では、フローサイトメトリー用の血液サンプルを、薬物の最初の投与前、最初の投与の翌日、８番目の投与前、２９番目の投与前、および終了日に採取した。
【０３２６】
Ｘ線写真検査
試験終了時に、麻酔をかけた生きている動物の手と足の各関節（ＤＩＰ、ＰＩＰ、第１ＩＰおよびＭＣＰ−典型的には、ヒトのＲＡに関与する部位）について検査を実行した。Ｘ線による等級付けは、０〜４の等級付けシステムに基づき、盲検法で実行された：（０）正常；（１）関節軟骨層および／または軟骨下骨領域の軽度の変形；（２）関節軟骨層および軟骨下骨領域の重度の変形、骨膜表面および関節縁に存在する少量の骨棘が、不明瞭であるが依然として視認できる；（３）グレード２で観察されたものと同じ種類の変化がさらに進行し、骨膜表面に大量の骨棘が存在し、関節腔は見分けがつかないか、視認できない；（４）グレード３と同じタイプの変化であるが、さらに進行すると、関節腔が検出できなくなり、骨が硬化性または無血管性になり、大きな変形が生じる。
【０３２７】
関節炎のサルからの組織の組織病理学および組織形態計測
試験の最後に、麻酔下で失血によって動物を安楽死させた。足、脾臓、結腸およびリンパ節（腸間膜および鼠径部）を採取し、中性緩衝ホルマリンで固定した。ＰＩＰ関節とＤＩＰ関節を１５％のＥＤＴＡで脱灰し、脱水し、パラフィンに包埋した（８ブロック／足×４足×２２動物＝７０４ブロック）。関節の前頭冠状断面は、回転式ミクロトームを使用して得られた。組織病理学スコアリングは、トルイジンブルー染色切片（３２×２２動物＝７０４スライド）を使用して、骨組織病理学者によって盲検法で実行された。組織切片は、以下の組織病理学的特徴について定性的に評価された：組織浸潤、パンヌス、軟骨病変、および骨吸収。定量的組織形態計測は、Ｎｉｋｏｎ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  Ｅ４００光／蛍光顕微鏡およびビデオサブシステムとインターフェース接続されたＯｓｔｅｏｍｅａｓｕｒｅソフトウェア（ＯｓｔｅｏＭｅｔｒｉｃｓ、Ｉｎｃ．，Ａｔｌａｎｔａ、ＧＡ）を使用して実行した。関節領域および表面の組織形態計測測定は、トルイジンブルー染色スライド（７０４スライド）を使用して、骨組織病理学者によって盲検法で実行された。
【０３２８】
統計分析
データは、平均値±標準誤差（ＳＥＭ）として表示される。統計分析は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍを使用して、未処理、モデル、および関連作用薬（デキサメタゾン）ならびにテスト物品群の間の各パラメータで実施した。ｐ＜０．０５が、有意差があると見なされた。
【０３２９】
結果
カニクイザルにおけるＣＤ３８の発現プロファイル
カニクイザルがヒトのＣＤ３８を標的とする潜在的な影響を評価するための適切なモデルであるかどうかを決定するために、ＣＤ３８抗原の発現プロファイルを、健康的なヒトおよびカニクイザルドナーから採取した１５の異なる種類の組織で比較した。免疫組織化学により、ＡＢ７９が結腸、胃、小腸、骨髄、およびリンパ節の単核白血球、ならびに両種の結腸、胃、および小腸の固有層の内皮に結合することが明らかになった（表１１）。
【０３３０】
【表１１】
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【０３３１】
逆に、ヒトではなく、サルのＡＢ７９は、肝臓、肺、前立腺、子宮（子宮頸部）の単核白血球、および前立腺腺房上皮にも結合した。ＡＢ７９結合は、いずれかの種の子宮の心臓、腎臓、膵臓、皮膚、子宮内膜でも観察されなかった。ＡＢ７９染色は一般に、ヒト組織では強度が中程度〜著しい（３＋〜４＋）で、カニクイザル組織では強度が最小〜軽度（１＋〜２＋）であり（表１１）、これは、ヒト対サルＣＤ３８に対するＡＢ７９の親和性の違い、および／またはＣＤ３８の発現の大きさの違いを反映している可能性がある。染色パターンは主に細胞質であり、いくつかの細胞では細胞膜が染色されていた（表１１）。全体として、サルは自己免疫疾患のモデルにおいてＣＤ３８を標的とすることの潜在的な薬理効果（複数可）を評価するために適切なモデル種であると結論付けられた。
【０３３２】
ＡＢ７９はカニクイザルによって発現されるＣＤ３８に結合する
ヒトＣＤ３８タンパク質のアミノ酸配列は、カニクイザルのオルソログと９１％、マウスおよびラットのそれと５９％、ウサギのそれと５４％のアミノ酸同一性を示す。ヒトＣＤ３８のＡＢ７９の結合エピトープとサルＣＤ３８の対応する配列との比較は、２７４位のグルタミン酸を用いたリジンの単一アミノ酸置換を明らかにした。サルでＣＤ３８を標的化することの潜在的な影響を評価するためにＡＢ７９を利用できるかどうかを決定するため、サルのＣＤ３８はチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞で発現し、ＡＢ７９は、４．５ｎＭの半最大有効濃度（ＥＣ５０）でサルＣＤ３８に結合した（図３２Ａ）。この値は、ＣＨＯ細胞によって発現されたヒトのＣＤ３８に対するＡＢ７９の結合親和性（ＫＤ＝０．７ｎＭ）より約１０分倍少なく、ＡＢ７９は、カニクイザルではヒトのＣＤ３８よりもＣＤ３８に強く結合しないことを示している。ＡＢ７９は、全血におけるサルのＢ、ＮＫ、およびＴ細胞にも結合し、ＮＫ細胞はＢ細胞およびＴ細胞よりも高い平均蛍光強度を示し（図３２Ｂ）、サルのＮＫ細胞が細胞当たりのＣＤ３８の密度が高いことを示している。インビトロでサル全血とインキュベーションした後、ＡＢ７９はＮＫ細胞を用量依存的に細胞溶解し（図３２Ｃ）、平均ＥＣ５０が２９．６ｎＭであり、ＡＢ７９によるヒト末梢血からのＮＫ細胞の細胞溶解よりも約３０倍効力が低かった（データは示さず）。まとめると、これらのデータは、カニクイザルがＡＢ７９の薬理効果に対する感受性がヒトよりも低い可能性があることを示している。それにもかかわらず、この交差反応プロファイル、ならびにＣＤ３８の発現プロファイルの類似性は、カニクイザルがＡＢ７９の潜在的な薬理効果（複数可）をインビボで調査するための好適なモデル種であることを示唆している。
【０３３３】
健康なサルにおけるＡＢ７９の薬理作用
インビボでのＡＢ７９の薬理作用を特徴付けるために、健康的なカニクイザルに、ＡＢ７９を毎週０．０３、０．１、０．３、１ｍｇ／ｋｇ、隔週３、３０、８０ｍｇ／ｋｇでＡＢ７９を３ヶ月間ＩＶ注入し、最後の投与から３ヶ月間、動物のサブセットをモニタリングした（図３１Ａ）。ピークＡＢ７９濃度は、概ね、注入の最後に発生し、一般に用量に比例していた（表１２）。
【０３３４】
【表１２】
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【０３３５】
曝露は、一般的に、抗ＡＢ７９抗体を示さなかった動物の定常状態で用量比例的に増加し、１３週目までに１．７から２．４倍に蓄積し（表１２）、これは、ＡＢ７９の標的媒介薬物動態によるクリアランスの低下と一致している。抗ＡＢ７９抗体を示さなかった３および８０ｍｇ／ｋｇのコホートの動物の最後の投与後の半減期は、それぞれ、２３７時間および４１５時間であった（表１２）。ＰＫ特性の性差は観察されなかった。
【０３３６】
ＮＫ細胞集団は均一に高密度でＣＤ３８を発現し（図３２Ｂ）、０．３ｍｇ／ｋｇのＥＤ５０を用いたＡＢ７９の最初の注入後に末梢血で減少され（図３１Ｂ）、対応するＣｍａｘは７．６３ｕｇ／ｍＬであり、１３週目での全体平均曝露量は、６６５時間＊μｇ／ｍＬである（表１２）。対照的に、Ｂ細胞集団は、より低いＮＫ密度中央値で、不均一にＣＤ３８を発現し（図３２Ｂ）、１．０ｍｇ／ｋｇのＥＤ５０のＡＢ７９の最初の注入後に末梢血で低減し（図３１Ｃ）、Ｃｍａｘは２１．１ｕｇ／ｍＬであり、１３週目での全体平均曝露量は、２７００時間＊μｇ／ｍＬである（表１２）。Ｔ細胞集団もまた、Ｂ細胞よりもさらに低い中央値密度で不均一にＣＤ３８を発現し（で多は示さず）、３０ｍｇ／ｋｇのＥＤ５０を用いたＡＢ７９の最初の注入後に末梢血で減少され（図３１Ｄ）、Ｃｍａｘは６２．１ｕｇ／ｍＬであり、１３週目での全体平均曝露量は、１８４００時間＊μｇ／ｍＬである（表１２）。総じて、３ｍｇ／ｋｇの毎週の用量よりも多く示されるこれらの用量範囲所見データは、末梢血中のベースラインレベルからそれぞれＮＫ、Ｂ、およびＴ細胞の総数をそれぞれ８０、６０、および２０％以上維持する。
【０３３７】
コラーゲン誘発関節炎におけるＡＢ７９のプロファイル
ＡＢ７９の潜在的な有効性は、その免疫系、関節、および骨格の解剖学が、臨床指標の使用を可能にするために十分に人間の対応物に類似している種である、カニクイザルのＣＩＡモデルで調査された。関節炎を誘発するために、サルを０日目と２１日目にＩＩ型コラーゲンを用いて皮内処理し（図３３）、抗コラーゲン抗体の出現により各動物の免疫が成功したことが確認された（データは示されず）。動物の１つの群は、８週間継続される３ｍｇ／ｋｇの予防的ＡＢ７９治療計画で７日目に処置された。３つの治療的な群では、明白な疾患のあるサルを無作為化し、ビヒクル対照として３ｍｇ／ｋｇのＴＡＫ  ０７９、または０．１ｍｇ／ｋｇのデキサメタゾンを投与した。治療的処置は治療開始後５週間継続した（図３３）。
【０３３８】
ＡＢ７９は、予防的レジメンと治療的レジメンとの両方で忍容性が良好であった。健康な対照サルは時間とともに体重が増加したが、他の４つの群のコラーゲン免疫サルは、関節炎の発症に関連する全身的影響を示している、体重の減少が７日目から始まった（図３４Ａ）。登録時のベースライン体重に対する体重の変化率に基づいて、予防的なＡＢ７９群、治療的なＡＢ７９群、および治療的なデキサメタゾン群の動物は、治療開始の１４日後に体重が再び回復することが分かり、ＡＢ７９とデキサメタゾンの陽性対照治療の両方からの治療効果を示唆している。体重増加は、健康的な未処置の対照と比較して、ＡＢ７９とデキサメタゾンで処置されたサルにおける正常レベルに近づき；ビヒクル処置された関節炎の動物は、体重が減少した（図３４Ａ）。関節炎の重症度は、１９２ポイントのスコア付けシステムを使用した研究の過程で、動物の全ての測定可能な関節を考慮した疾患活動のグローバル評価である臨床関節炎スコアを使用して評価された。ビヒクル処置された動物は進行性の疾患を示し、試験の過程で臨床スコアが増加した（図３４Ｂ）。ＡＢ７９への予防的曝露は、ビヒクル対照と比較して、関節炎の発症を有意に防止した（ｐ＜０．０１）。同様に、ＡＢ７９またはデキサメタゾンによる処置は、ビヒクル対照と比較して関節炎の発症を有意に抑制し（ｐ＜０．０５）、処置前のベースラインから関節炎スコアを低下させた（図３４Ｂ）。同様の効果が、炎症を起こしたＰＩＰ関節の数（図３４Ｃ）と全てのＰＩＰ関節の全体的な平均腫脹（図３４Ｄ）の両方に関して、ＰＩＰ関節のサブセットで観察された。関節炎の関節の包括的な評価とＡＢ７９がヒトの関節炎で「疾患の修正」活性を有する可能性を得るために、全てのＩＰおよびＭＣＰ関節についてＸ線写真検査を行ったＡＢ７９への予防的曝露により、ＰＩＰ（データは示さず）、ＤＩＰ（図３４Ｅ）、およびＭＣＰ（図３４Ｆ）関節の損傷が、ビヒクル対照と比較して有意に防止された（ｐ＜０．０１）。同様に、ＡＢ７９またはデキサメタゾンへの治療的曝露により、ビヒクル対照動物よりも有意に（ｐ＜０．０５）少ないＰＩＰ（データは示されていない）、ＤＩＰ（図３４Ｅ）およびＭＣＰ（図３４Ｆ）関節の損傷をもたらした。進行性関節炎の構成要素を特徴付けるために、ＤＩＰおよびＰＩＰ関節を、細胞浸潤、パンヌス重症度、軟骨損傷、骨吸収および骨棘形成に関して組織学的に分析した。ＡＢ７９への予防的な曝露は、ビヒクル対照値よりも有意に低く（ｐ＜０．０１）、コラーゲンで免疫されていない動物と同等の大きさの複合スコアをもたらした（図３５Ａ）。ＡＢ７９は各要素に同様の影響を及ぼし；スコアは、パンヌス（図３５Ｂ）、浸潤白血球（図３５Ｃ）、軟骨病変（図３５Ｄ）、骨吸収（図３５Ｅ）および骨棘形成（図３５Ｆ）のビヒクル対照値よりも有意に低かった（ｐ＜０．０１）。ＡＢ７９またはデキサメタゾンを使用した治療法でも、同様の差が小さいことも観察されたが（図３５Ａ〜Ｅ）、全ての差が統計的有意性に達したわけではなかった。
【０３３９】
関節軟骨領域（図３６Ａ）、損傷した関節軟骨の厚さ（図３６Ｂ）、損傷した関節表面の割合（図３６Ｃ）、骨棘領域対骨膜表面全体（図３６Ｄ）を含まれる定量的組織形態計測は、有資格者の獣医病理学者による盲検法において全てのＤＩＰおよびＰＩＰ関節で行われた。全てのパラメータは、ＡＢ７９への予防的曝露が関節損傷の発生を有意に防止したことを示していた。ＡＢ７９による処置は疾患の重症度を軽減したが、いくつかの組織形態計測的測定は、統計的有意性を達成しなかった。ＡＢ７９の治療効果は、治療的に投与されたデキサメタゾンと同様であった。
【０３４０】
Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）（図３７Ａ）、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）（図３７Ｂ）、およびアルブミン（ＡＬＢ）（データは示されていない）のレベルは、疾患の重症度と相関関係があった。ＡＢ７９による予防的治療により、ビヒクル対照動物で観察されたＣＲＰ（図３７Ａ）およびＡＬＰ（図３７Ｂ）の炎症関連の増加が防止された。ＡＢ７９による治療はＣＲＰとＡＬＰの急激な減少を引き起こしたが、デキサメタゾンによる長期治療は、ＣＲＰとＡＬＰレベルを低下させるために必要であった（それぞれ図３７Ａと３７Ｂ）。肝臓の損傷の証拠は、血清化学パラメータ（例えば、ＡＬＴまたはＡＳＴの増加）見出されず、ＡＬＰの増加はＣＩＡの動物の骨疾患の発症によるものであり、ＡＬＰの低減はＡＢ７９に曝露した動物の骨損傷の低減によるものであることを示唆している。クレアチニン、血中尿素窒素、グルコース、および総タンパク質の血清化学値は、時間の経過とともに変動したが、関節炎の重症度や治療計画との一貫した相関関係を示さなかった（データは示さず）。
【０３４１】
試験の間、血液学、全血球計算、および示差分析が行われ、主要なパラメータが報告された。ＡＢ７９またはデキサメタゾンへの曝露後のＲＢＣレベルの変化は観察されなかった（図３８Ａ）。さらに、ヘマトクリット数は関節炎の発症後に減少し、ＡＢ７９またはデキサメタゾンによる処置後、未処置対照レベルに向かって増加した（図３８Ｂ）。関節炎の発症後、網状赤血球が上昇し、ＡＢ７９とデキサメタゾンとの両方による処置は、網状赤血球数を未処置対照で見出される正常レベルに向かって低減させた（図３８Ｃ）。血小板と好中球の両方のレベルが関節炎で上昇し、ＡＢ７９処置は血小板と好中球の両方のレベルを未処置対照に向かって低減させたが、デキサメタゾンは効果がなかった（それぞれ、図３８Ｄおよび３８Ｅ）。対照的に、総リンパ球レベルは、予想どおり、未処置対照およびＡＢ７９による処置と比較して、疾患により、リンパ球レベルはさらに低下したが、デキサメタゾンによる処置は効果がなかった（図３８Ｆ）。
【０３４２】
末梢血中のリンパ球のサブセットの中で、ＮＫ細胞はＡＢ７９への曝露から２４時間以内にベースラインレベル（図３９Ａ）より９５％以上低下したが、Ｂ細胞（図３９Ｂ）、Ｔ細胞（図３９Ｃ）、および単球（図３９Ｄ）のベースラインレベルは、それぞれ、最大６０％、５５％、および５０％低下した。ＮＫおよびＢ細胞の低減は投与全体を通して持続したが、Ｔ細胞および単球の低減は一過性であり、１回目の注入後にのみ観察された。ＡＢ７９予防的治療後の各細胞集団で同様の低減パターンが見られたが、この動物群は治療前の単球レベルが低く、単球レベルは治療に反応して変化しなかった。ビヒクルとデキサメタゾンで処置した動物の間で、Ｂ、ＮＫ、Ｔ細胞、または単球の数に違いは見られなかった（それぞれ図３９Ａ、２９  Ｄ、および２９Ｆ）。
ＡＢ７９および抗ＡＢ７９抗体の濃度を測定するために、血清生物分析を実施した。予防的投与（図４０Ａ）または治療的投与（図４０Ｂ）を行った各動物で、Ｃｍａｘが２４〜９７ｕｇ／ｍＬの範囲で実質的な曝露が達成された。ＡＢ７９に曝露された全ての動物は、インビトロでＣＤ３８飽和（図３２Ａ）およびＮＫ細胞溶解（図３２Ｃ）についてのＥＣ５０を超えるトラフ濃度を示した。抗ＡＢ７９抗体は、予防群の７匹中４匹の動物で、最初の投与から１４〜３０日後および試験終了まで検出された（図４０Ｃ）。２匹の動物は、３１日目までにこれらの動物の低濃度のＡＢ７９に対応する高力価を示し（図４０Ａ）、これらの抗ＡＢ７９抗体がクリアランスに影響を及ぼしている可能性があることを示している。抗ＡＢ７９抗体は、治療群の５匹中４匹の動物でも検出され（図４０Ｄ）、最初の投与後２１日から試験の終了まで、２匹の動物も、試験の終了までこれらの動物におけるＡＢ７９の低濃度に対応する高力価を示した（図４０Ｂ）。それにもかかわらず、２回目の治療投与後のＴ細胞（図３９Ｇ）を除いて、全ての動物はデータ分析に含まれ、これは、ほとんどの標的細胞が試験期間にわたってベースラインレベルから減少したままであるためである（図３９Ｅおよび３９Ｆ）。
【０３４３】
考察
マウスにおけるＣＤ３８の欠乏は、自己免疫疾患のモデルにおけるこの分子の非冗長機能を示す、ＣＩＡの減弱化をもたらすと報告されているが、霊長類モデルにおけるＣＤ３８細胞の役割は調査されていない。加えて、多数の試験により、末梢血細胞におけるＣＤ３８発現の全体的なレベルが、ヒトのＲＡおよびＳＬＥ患者の疾患活動性と正の相関があることが示されている（Ｃｏｌｅ  Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ  Ｔｈｅｒ．２０１８  Ｍａｙ２；２０（１）：８５；Ｋｒａａｎ  Ｍ．Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ（Ｏｘｆｏｒｄ）．１９９９  Ｎｏｖ；３８（１１）：１０７４−８０；Ｖｉｔａｌ  Ｅ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．２０１１  Ｏｃｔ；６３（１０）：３０３８−４７；ｏｒ  Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ  Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ．２０１６  Ａｐｒ  ２１；１６５（３）：５５１−６５）。抗ＣＤ３８ｍＡｂのＡＢ７９は、インビトロでのＲＡまたはＳＬＥ患者の血液または骨髄サンプルの形質細胞を枯渇させた（Ｓｍｉｔｈｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８（１  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）２２４．２０；Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０１８）Ａｒｔｈｒｉｔ．Ｒｅｓ．Ｔｈｅｒ．２０（１）：８５；Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ａｒｔｈｒｉｔ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．６８（ｓｕｐｐｌ  １０）．２０１６  ＡＣＲ／ＡＲＨＰ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，１０８５；Ｍｉｈａｒａ  Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００１；９８（３）：３１９−２６；ａｎｄ  Ｕｃｈｉｙａｍａ  Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｌ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｕｌｌ．２００８；３１（６）：１１５９−６３）。開発中の他の抗ＣＤ３８ｍＡｂ（例えば、ダラツムマブ、イサツキシマブ、およびＭＯＲ２０２）とは対照的に、ＡＢ７９はカニクイザルによって発現されるＣＤ３８によって結合し、ＣＤ３８を発現する細胞のレベルを低下させる場合、非ヒト霊長類の自己免疫モデルにおける炎症および組織損傷を予防および／または改善するかどうかを判定するユニークな機会を提供した。ＡＢ７９は、ＣＤ３８＋細胞の枯渇を効果的に媒介する高親和性モノクローナル抗体である（Ｓｍｉｔｈｓｏｎ，Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍａｙ１，２０１７，１９８（１  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）２２４．２０）。統合分析は、ＣＤ３８が形質細胞に富む前疾患および確立された関節リウマチと全身性エリテマトーデスの治療標的であることが明らかにしている（Ｃｏｌｅ  Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ  Ｔｈｅｒ．２０１８Ｍａｙ２；２０（１）：８５）。
【０３４４】
カニクイザルは、自己免疫疾患におけるＡＢ７９の潜在的な効果を評価するのに適したモデルであると決定され、これは、これらのサルのＣＩＡが、ヒトのＲＡに似た対称性の小さな関節多発性関節炎を特徴としているためであり（Ｍｉｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９８（３）：３１９−２６；Ｕｃｈｉｙａｍａ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．３１（６）：１１５９−６３；Ｕｃｈｉｙａｍａ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．Ｉｎｔ．２８：８７９−８８３；Ｋａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｏｌ．Ｐａｔｈ．８４：２６２−２７０）、ＣＤ３８についての発現プロファイルはこれらの種間で類似しており（表１１）、ＡＢ７９はヒトＣＤ３８の親和性の１０分の１の親和性でサルＣＤ３８に結合した（図３２）。健康なサルでの用量範囲の研究により、ＡＢ７９を３ｍｇ／ｋｇの週用量で投与すると、総ＮＫ、ＢおよびＴ細胞集団を、末梢血のベースラインレベルからそれぞれ８０％超、６０％超および２０％超、低下することが示されたため（図３１Ｂ、３１Ｃおよび３１Ｄ）、ＣＩＡにおけるＣＤ３８の潜在的な役割を評価するには、ＡＢ７９の週用量が３ｍｇ／ｋｇで十分であると結論付けた。一部の動物での抗ＡＢ７９抗体の出現（図３９Ｃおよび３９Ｄ）にもかかわらず、予防的投与のためのＣＩＡモデル（図３７Ｅ、３７Ｆおよび３７Ｇ）では、ＮＫ、Ｂ、およびＴ細胞の同様の低減が達成された。予防的に曝露した３匹の動物におけるＡＢ７９濃度の経時的減少（図３９Ａ）は、これらの抗体がクリアランスを増加させた可能性があることを示しているが、Ｂ、ＮＫおよびＴ細胞は、試験終了までにベースラインレベルに回復しておらず（図３７Ｅ、３７Ｆおよび３７Ｇ）、ＡＢ７９への暴露が、調査全体を通じてＰＤの効果を維持するのに十分であったことを示している。したがって、これらの動物は全ての分析に含まれていた。これはＡＢ７９による治療的処置にも一般的に当てはまった。ＮＫおよびＢ細胞は試験終了までにベースラインレベルに回復しておらず（図３７Ｅ、３７Ｆ、および３７Ｇ）、これは、ＡＢ７９への曝露が調査全体でＰＤ効果を維持するのに十分であることを示している対照的に、Ｔ細胞数は試験の終了までにベースラインレベルに回復し（図３７Ｇ）、抗ＡＢ７９抗体が治療データの解釈を部分的に混乱させる可能性があることを示唆している（すなわち、サルＣＩＡにおけるＣＤ３８発現Ｔ細胞の寄与を過小評価している）。
【０３４５】
ＡＢ７９の予防的投与が、全ての評価にわたって一貫して示されたように、関節炎の発症を阻害したのに対し、ＡＢ７９の治療的処置は、関節炎および関節損傷の発症を阻害した（図３４、３５、および３６）。関節の組織学的評価は、ＡＢ７９が比較的広範な効果を発揮し、パンヌス形成（図３５Ｂ）、浸潤（図３５Ｃ）、軟骨病変（図３５Ｄ）、骨びらん（図３５Ｅ）および骨棘形成（図３５Ｆ）を予防することを実証した。ＡＢ７９およびデキサメタゾンによる治療的処置も、予防的投与よりも程度は小さいものの、これらの進行性の組織学的変化を阻害したことは注目に値する。関節炎スコアは治療的処置により経時的に減少し（図３４Ｂ、３４Ｃおよび３４Ｄ）、損傷の潜在的な逆転を示している。総じて、これらのデータは、予防的および治療的にＡＢ７９に曝露すると、一貫した疾患修飾効果を実証した。
【０３４６】
これらの治療用ＡＢ７９およびデキサメタゾン治療の効果は、研究したレジームでは互いに匹敵するように見える。デキサメタゾンなどのステロイドの治療的使用は、ＲＡやＳＬＥなどのヒト自己免疫疾患の治療に非常に効果的であるが、有害な副作用（例えば、骨粗鬆症、高血圧、糖尿病、体重増加、白内障、緑内障、皮膚の薄化、および紫斑）が、これらの治療薬の慢性使用を制限する。ステロイドの有害な副作用なしにヒトの自己免疫疾患に匹敵する有効性を提供するための標的ＣＤ３８細胞枯渇の可能性は、将来の臨床的調査を保証する。
【０３４７】
ＡＢ７９の予防および治療効果は、全リンパ球（図３８Ｆ）、ＮＫ、ＢおよびＴ細胞（図３７Ｃ〜３７Ｅ）の血中レベルの持続的な低下、一時的な単球の低減（図３７Ｆ）、および赤血球（図３８Ａ）、血小板（図３８Ｄ）および好中球（図３８Ｅ）の変化がないことに関連付けられた。これらの薬力学的データは、ＣＤ３８を発現する細胞のＡＢ７９による低減に対する感受性に違いがあることを示している。低減は一般に、細胞によるＣＤ３８発現の密度と相関しており、ＮＫ細胞集団は、調査した全ての細胞型の中でＣＤ３８の最高中央値密度を均一に発現し（図３２Ｂ）、ＡＢ７９に最も感受性があった（図３１Ｂおよび３７Ｃ）。Ｂ細胞上で発現するＣＤ３８の最高密度は、ＮＫ細胞上の発現よりも約３倍低く（図３２Ｂ）、Ｂ細胞集団は、ＮＫ細胞よりもＡＢ７９に対して感受性が低かった（図３１Ｃおよび３７Ｃ）。ＣＤ３８は一般に、Ｂ細胞上よりもＴ細胞上で低い中央値密度で発現し（図３２Ｂ）、Ｔ細胞は、Ｂ細胞およびＮＫ細胞よりもＡＢ７９による低減に対して感受性が低かった（図３１Ｄおよび３７Ｄ）。低密度のＣＤ３８を発現する細胞（例えば、赤血球）またはＣＤ３８を発現しない細胞（例えば、好中球）は、ＡＢ７９によって影響を受けなかった（図３７Ａ、３７Ｄ、および３７Ｅ）。例外は、ＣＤ３８を中間密度で均一に発現し、ＡＢ７９によって一時的にのみ低減した単球である（図３７Ｆ）。単球における一時的な低減の動態は、Ｂ、Ｔ、およびＮＫ細胞で観察された持続的な低減とは異なり、異なるメカニズムを示している。ＡＢ７９によるＮＫ細胞の直接的な細胞溶解がインビトロで観察され（図３２Ｃ）、ＮＫ、Ｂ、およびＴ細胞の持続的な低減は、ＡＢ７９のインビボでの単回投与後に発生し（データは示さず）、ＣＤＣおよび／またはＡＤＣＣが、これらのＢ、Ｔ、ＮＫ細胞の低減をインビボで媒介することを示している。対照的に、単球はインビトロで細胞溶解されず（データは示さず）、インビボで持続的な低減を呈さず（図３７Ｆ）、代替機構（例えば、辺縁趨向（ｍａｒｇｉｎａｔｉｏｎ））が、インビボでの一時的低減を媒介することを示している。ＡＢ７９による細胞溶解に対するヒト単球の耐性も健康な対象で観察されており（未発表）、多発性骨髄腫患者においてダラツムマブについて説明されている（Ｎｉｊｈｏｆ  ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｂｌｏｏｄ  １２８（７）：９５９−７０）。ヒト単球によるＣＤＣおよびＡＤＣＣの阻害剤の発現は、ダラツムマブによる細胞溶解に対する耐性とは有意に相関せず、単球がダラツムマブおよびＡＢ７９に比較的鈍感である理由は不明のままである。
【０３４８】
ＡＢ７９で観察されたＮＫ細胞の低減は、難治性骨髄腫患者におけるダラツムマブによるＮＫ細胞の低減と質的に一致している一方で、定量的な違いが存在する。サルで末梢血ＮＫ細胞をベースラインレベルの５０％未満に維持するために必要なＡＢ７９のＩＶ注入用量（０．３ｍｇ／ｋｇ）、最大濃度（Ｃｍａｘ＝４．３２ｕｇ／ｍＬ）、および暴露（ＡＵＣ３６６  ＝３２７μｇ時間／ｍＬ）（図３１Ｂ）は、難治性骨髄腫患者でダラツムマブによるＮＫ細胞の同等の低減に必要な、対応するＩＶ注入用量（２４ｍｇ／ｋｇ）、最大濃度（Ｃｍａｘ約５７３ｕｇ／ｍＬ）および曝露（ＡＵＣｉｎｆ約９７１７５μｇ時間／ｍＬ）よりも、約８０倍、１１６倍および２９７倍低かった（Ｃａｓｎｅｕｆ  ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｂｌｏｏｄ  Ａｄｖ．１（２３）：２１０５−２１１４；Ｃｌｅｍｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ．５６（８）：９１５−９２４）。ＡＢ７９が、ヒトＣＤ３８を発現する細胞へのダラツムマブの結合（ＫＤ＝４ｎＭ）と同様の親和性（ＫＤ＝４ｎＭ）でサルのリンパ球に結合することは注目に値する（Ｃｅｎｔｅｒ  Ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｕｍｂｅｒ：７６１０３６ｏｒｉｇ１ｓ００  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  Ｒｅｖｉｅｗ（ｓ））、しかし、これらの違いが、それぞれの抗体の種、病状、および／または効力の間の潜在的な違いに起因するかどうかは不明である。それでも、より確定的な比較には、ダラツムマブがマウス、ラット、ウサギ、ブタ、カニクイザルおよびアカゲザルからのＣＤ３８と交差反応しないため、難治性骨髄腫患者におけるＡＢ７９の薬物動態および動的データが必要である（２０１６年４月１日ＥＭＡ／２７８０８５／２０１６ヒト用医薬品委員会（ＣＨＭＰ）評価レポートダラザレックス（Ｄａｒｚａｌｅｘ）医薬品国際一般名称（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｎｏｎ−ｐｒｏｐｒｉｅｔａｒｙ  ｎａｍｅ）：ダラツムマブ手順Ｎｏ．ＥＭＥＡ／Ｈ／Ｃ／００４０７７／００００）。
【０３４９】
結論として、細胞溶解性抗体ＡＢ７９でＣＤ３８を発現する細胞が低減すると、予防的に投与するとサルにおけるＣＩＡの発症が防止され、治療的に投与すると疾患の進行が逆転する。ＳＬＥ患者の血液および骨髄のサンプルを利用した以前の研究では、ＡＢ７９が短命および長命の形質細胞の８０％を枯渇させ、インビトロで自己抗体（例えば、ＶＨ４−３４  ９Ｇ４＋、抗Ｒｏ、および抗ｄｓＤＮＡ）を低減させた（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．６８（ｓｕｐｐｌ  １０）．２０１６  ＡＣＲ／ＡＲＨＰ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，１０８５）。これらの集約的なデータは、この治療戦略がヒトのＲＡ、ＳＬＥ、および他の自己免疫疾患の治療に効果的である可能性があることを示唆している。
【０３５０】
実施例７：健康なヒトのボランティアにおけるＡＢ７９の評価
この調査は、ＡＢ７９の安全性、忍容性、薬物動態、および薬力学を、健康な対象の漸増用量でのＡＢ７９の単回静脈内（ＩＶ）注入または皮下（ＳＣ）注射の無作為化二重盲検プラセボ対照試験によって特性評価した。
【０３５１】
結果
ＡＢ７９は忍容性が良好であった。全ての有害事象（ＡＥ）は軽度または中程度であり、それぞれ最大０．０６および０．６ｍｇ  ｋｇ−１の試験されたＩＶおよびＳＣ用量でのＡＥまたは注入もしくは注射部位反応による離脱はなかった。高用量では、主にＩＶ投与後のサイトカインレベルの一時的な増加が、ＣＤ３８発現細胞における低減と一致し、臨床症状には、主に軽度の発熱、頭痛、および起立性低血圧が含まれていた。ＡＢ７９治療に関連して、実験室検査、心電図、バイタルサイン、または身体検査の顕著な所見は報告されなかった。ＡＢ７９は、同様の用量で形質が細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞レベルを低下させ、ＩＶおよびＳＣ投与について、それぞれ約０．００３および０．１ｍｇ  ｋｇ−１の最大有効用量の５０％で低下させた。免疫グロブリン（Ｉｇ）ＭおよびＩｇＡにおける低減は、ＩｇＧにおける匹敵する変化なしに発生した。白血球、顆粒球、リンパ球、赤血球、血小板の総数は、全ての用量レベルで正常範囲内であった。
【０３５２】
結論
ＡＢ７９は、ＩＶまたはＳＣ投与した場合、健康な対象の末梢血中の形質芽細胞およびＮＫ細胞のレベルを低下させ、全体的に安全で忍容性が高かった。ＳＣ投与は、ＩＶ投与よりも耐久性のある標的細胞枯渇でより忍容性が高かった。この形質細胞溶解プロファイルは、形質細胞またはＮＫ細胞、悪性の対応物（例えば、多発性骨髄腫およびＮＫ細胞白血病）、および病原性免疫グロブリンによって引き起こされる障害の治療に役立つことができる。
【０３５３】
試験設計および目的
これは、健康な成人対象におけるＡＢ７９のヒト初回投与（ｆｉｒｓｔ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ）（ＦＩＨ）第１相の無作為化二重盲検プラセボ対照単回投与試験であった。試験の主な目的は、ＩＶ注入またはＳＣ注射後のＡＢ７９の単回漸増用量の安全性および忍容性を評価することであった。二次的な目的は、血球集団および免疫原性のＰＫならびにＰＤを評価することであった。合計７４人の対象がこの研究に登録された。無作為化前の２８日のウィンドウ内で最低５日間隔てられた２回のスクリーニング検査後、ベースライン評価のために投与する前の２日目に対象が入院した。ＡＢ７９は、６つのコホートで０．０００３、０．００１、０．００３、０．０１、０．０３、または０．０６ｍｇ  ｋｇ−１の連続的な漸増用量で２時間のＩＶ注入により、または別の４つのコホートで、０．０３、０．１、０．３、または０．６ｍｇ  ｋｇ−１の用量でＳＣ注射により、１日目に投与された。用量選択は、カニクイザルにおける一連の研究に由来するＰＫ／ＰＤモデルに基づいていた（Ｒｏｅｐｃｋｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０１８）Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｒｅｓ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．６（３）：ｅ００４０２）。各用量レベルで、６〜８人の対象がＡＢ７９（ｎ＝４〜６）またはプラセボ（ｎ＝２）に無作為に割り付けられた。
【０３５４】
各コホートにセンチネル投与を使用し、最初の２人の対象はＡＢ７９またはプラセボ（１：１）のいずれかを投与された。各コホートの残りの対象に投与する前に、これら２人の対象からの２４時間の投与後の安全性および忍容性のデータを検証した。参加者は、８日目まで入院患者の臨床薬理学ユニット（ＣＰＵ）に留まり、その後毎週または隔週のフォローアップが続き、７８日目に、一般的な安全性評価およびＰＫ、ＰＤ、ならびに免疫原性の分析のための最後の計画された診療所来院となった。最終フォローアップの電話を、９２日目にかけた。
【０３５５】
用量漸増は、有害事象共通用語規準（Ｃｏｍｍｏｎ  Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  Ａｄｖｅｒｓｅ  Ｅｖｅｎｔｓ）等級付け基準を使用して等級付けされたＡＥの重症度に主に基づいていた。中程度の臨床症候群または中程度から重度の投与反応を引き起こすサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）を経験している１つのコホートに少なくとも２人の対象がいる場合、用量漸増は中止された。ＡＢ７９がリンパ球細胞枯渇抗体であることを考えると、リンパ球数の合計またはサブタイプの臨床的に関連する低減が観察される場合（名目上、対象の投与前の最低値から通常＞５０％低下し、かつ正常基準範囲（ＮＲＲ）の下限を下回る場合）、それ以上の用量増加は許可されず、≧２９日間維持された。治験責任医師およびスポンサーは、次の高用量に進む前に、各用量レベルでの全参加者の全ての盲検安全データを検証した。
【０３５６】
この試験は、英国ハローのノースウィックパーク病院にあるパレクセルインターナショナルの第１相試験ＣＰＵの良き臨床上の基準（Ｇｏｏｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ）に従って実施された。治験実施計画書は、地元の独立した倫理委員会であるロンドンブレント研究倫理委員会（Ｌｏｎｄｏｎ−Ｂｒｅｎｔ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｅｔｈｉｃｓ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ））．によって検討され、承認された（承認番号１６／ＬＯ／２０６７）。全ての対象は、試験手順の開始前にインフォームドコンセントフォームに署名した。
【０３５７】
試験参加者
適格な参加者は、１８歳から５５歳までの、５０〜１００ｋｇの体重の、１８．５〜３０ｋｇ  ｍ−２のボディーマスインデックス（ＢＭＩ）を有する、健康な男性または女性（妊娠の可能性がない）であった。
【０３５８】
ＣＤ４５＋リンパ球、Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＢ細胞のフローサイトメトリーに基づく数は、ＣＤ３８がＮＫ細胞で高度に発現していることを考えると、ＮＲＲの上位５０パーセンタイルの範囲内でＮＲＲおよびＮＫ細胞数の下限を超える必要があった。ＮＲＲは、フローサイトメトリー分析を実施した武田によって定義された。
【０３５９】
参加者は、既知の免疫不全、感染リスクの上昇、悪性腫瘍の既往、試験前に治験薬の効果に影響を与える可能性のある別の治験薬の服用など、治験実施計画書で定義された除外基準を満たしていた場合は除外された。
【０３６０】
血清ＡＢ７９濃度を測定するために、投与前および投与後最長１６８時間まで一連の血液サンプルを採取し、追加の血液サンプルを投与後の中間時点または早期中止日（ＥＴ）で採取した。血清ＡＢ７９濃度は、ＩＣＯＮ（Ｗｈｉｔｅｓｂｏｒｏ、ＮＹ）で検証された酵素結合免疫吸着測定法を使用して決定された。
【０３６１】
ＡＢ７９のＰＤ応答を評価するために、スクリーニング検査時、投与後、−１、１、２日目（ＳＣのみ）、３日目（ＳＣのみ）、４日目（ＩＶのみ）、５日目（ＳＣのみ）、６、８、１５、２２、２９、５０、および７８日目、またはＥＴで、末梢血サンプルを採取した。主要および副次的ＰＤ評価項目は、それぞれ、血中で測定された形質芽細胞およびＮＫ細胞数であった。追加の評価には、総白血球数ならびに百分率、総Ｔ細胞、ＣＤ４ならびにＣＤ８  Ｔ細胞サブセット、Ｂ細胞、単球、および顆粒球数が含まれていた。リンパ球サブセット、単球および形質芽球は、Ｃｏｖａｎｃｅ（Ｂｒｕｓｓｅｌｓ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）でフローサイトメトリーによって測定された。電気化学発光アッセイは、ＩＣＯＮでヒト血清中の抗ＡＢ７９抗体の検出のために検証された。
【０３６２】
ＡＥ、臨床検査室パラメータ、身体的検査、心電図（ＥＣＧ）、およびバイタルサインなどの日常的な安全パラメータは、スクリーニング時、投与前、および閉じ込め期間ならびにフォローアップの来院中に監視された。
【０３６３】
輸注反応は、ＩＶ注入後にＭＭ患者に投与された他の抗ＣＤ３８抗体の臨床試験で報告されている（Ｖｏｏｒｈｅｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｂｌｏｏｄ  １２６：１８２９）。エクスビボ実験では、ＡＢ７９によるヒト血球でのアゴニスト活性の証拠は示されておらず、ＡＢ７９の注入はサルの非臨床試験で注入反応を示唆する観察可能な所見を誘発しなかったが、注入反応またはＣＲＳの兆候（頭痛、発熱、悪寒、低血圧、吐き気、および嘔吐）を注意深く監視した。血清Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）および腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）αならびにインターロイキン１（ＩＬ−１）および６（ＩＬ−６）レベルを含む炎症性メディエーターを、１日目と２日目、および４日目の様々な時点で評価した（ＳＣコホートのみ）。必要に応じて、パラセタモール（アセトアミノフェン）と抗ヒスタミン薬（抗Ｈ１および抗Ｈ２）の注入および／または経口予防前投薬の割合を減らすことで、副作用を最小限に抑えることができた。
【０３６４】
ＳＣコホートでは、注射部位の痛み、火傷、発赤、かゆみ、腫れ、硬結などの注射部位反応（ＩＳＲ）の兆候を監視した。
【０３６５】
要約統計量およびデータ分析は、ＳＡＳバージョン９．２およびＲバージョン３．５．１を使用して行った。ＰＫパラメータは、非コンパートメント分析を使用して計算した。ＰＤ変数を評価し、活性な投与群間および各ＡＢ７９用量レベルとプラセボとの間で比較した。
【０３６６】
結果
【０３６７】
７４人の対象が登録され、ＡＢ７９（ｎ＝５４）またはプラセボ（ｎ＝２０）の単回投与を受けた。０．０００３、０．００１，０．００３、０．０１、０．０３、または０．０６ｍｇ  ｋｇ−１の用量のＡＢ７９もしくは釣り合う用量のプラセボを投与された６つのＩＶコホート、および０．０３、０．１、０．３、または０．６ｍｇ  ｋｇ−１の用量のＡＢ７９もしくは釣り合う用量のプラセボを投与された４つのＳＣコホートを、９２日間監視し、全てが試験を完了した。参加者は、ＳＣプラセボ群の女性１人を除いて、全て男性であった。試験対象集団は、白人（ｎ＝５１）、アジア人（ｎ＝１３）、アフリカ人（ｎ＝４）、および多民族（ｎ＝６）の民族で構成されていた。平均年齢（３４．４歳、１９〜５５歳の範囲）およびＢＭＩ（２４〜２５ｋｇ  ｍ−２）は、ＩＶコホートとＳＣコホートの間、およびＡＢ７９とプラセボ処置群との間で類似していた。
【０３６８】
この試験では、ＡＢ７９の全ての投与量は忍容性が良好であった。ＡＥは軽度から中程度の強さであって、ほとんどのＡＥは軽度であり、プラセボ群とＡＢ７９治療群との間でバランスが取れていた（表１３）。重篤有害事象（ＳＡＥ）または死亡はなく、有害事象による試験または来院の中止はなかった。ＡＢ７９治療に関連して、実験室検査、ＥＣＧ、バイタルサイン、または身体的検査の顕著な所見は報告されなかった。
【０３６９】
【表１３】
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【０３７０】
表１３に示すように、頭痛、めまい、および悪寒を除き、ほとんどのＡＥは、用量関係の傾向なしで散発的であり、これは、ＣＲＳのより高い発生率と一致して、より高いＩＶ  ＡＢ７９用量でより頻繁に見られた。これらの効果（表１４）は、高用量を投与された対象（１人の対象および６人の対象が、それぞれ０．０３および０．０６ｍｇ  ｋｇ−１ＩＶ投与され、１人の対象および２人の対象が、それぞれ０．３および０．６ｍｇ  ｋｇ−１ＳＣ投与された）で、大部分が観察された。これらの対象は形質芽細胞およびＮＫ細胞の低下を呈し、これらの症状がＣＤ３８を発現する細胞の枯渇から生じることを示唆している。
【０３７１】
【表１４】
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【０３７２】
ＳＣ注射後に軽度の一時的なＩＳＲのみが観察され、そのほとんどは７日以内に解消した。これらの反応は、最低ＳＣ用量で処置された６人の対象のうち５人と、２つの最高用量コホートのそれぞれで１人の対象のみが反応したので、逆の用量効果関係を示した。
【０３７３】
ＩＶコホート１（０．０００３ｍｇ  ｋｇ−１）からコホート４（０．０１ｍｇ  ｋｇ−１）までの全てのＰＫサンプリング時点でのＡＢ７９の血清濃度は、検出アッセイの定量下限（ＬＬＯＱ）（すなわち、１０ｎｇ  ｍＬ−１）未満であって、おそらく低用量のため、かつ抗薬物抗体が存在しないためである（データは示さず）。０．０３および０．０６ｍｇ  ｋｇ−１のＡＢ７９のＩＶ注入後に、観察された最大血清濃度（Ｃｍａｘ）はそれぞれ２１．４および１００．４ｎｇ  ｍＬ−１であり、注入終了後５分で発生した（表１５および図４１）。その後、血清濃度は注入終了後それぞれ１時間または４時間以内にＬＬＯＱ未満まで急速に減少し、曝露量を正確に計算できなかった。Ｃｍａｘは、０．０３から０．０６ｍｇ  ｋｇ−１への２倍の用量増加を超えて、約５倍増加するようであった。ＩＶの０．０３および０．０６ｍｇ  ｋｇ−１コホートから利用できるＡＢ７９血清濃度（対象あたり１〜３時点）が制限されているため、最大血清中濃度までの時間（ｔｍａｘ）とＣｍａｘ以外のＰＫパラメータは確実に推定できなかった。
【０３７４】
【表１５】
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【０３７５】
ＳＣコホート１（０．０３ｍｇ  ｋｇ−１）からＳＣコホート３（０．３ｍｇ  ｋｇ−１）の全ての対象のＡＢ７９の血清濃度は、全ての時点で検出アッセイのＬＬＯＱ未満であった。単回の０．６ｍｇ  ｋｇ−１のＡＢ７９のＳＣ注射後、このコホートにおける５人の対象は、注射後約２４時間でｔｍａｘの中央値を呈した。このコホートにおける６人の対象全て（血清濃度がＬＬＯＱ未満の１人の対象を含む）の平均Ｃｍａｘは２３．０ｎｇ  ｍＬ−１であり、これは０．０６ｍｇ  ｋｇ−１での２時間のＩＶ注入後のＣｍａｘ値の約２３％であった（このコホートにおけるＳＣ用量の１／１０）。ＡＢ７９の血清濃度は、注射後３〜１４日までに徐々に低下し、ＬＬＯＱを下回った。（図４１）。０．６ｍｇ  ｋｇ−１のＳＣコホートにおける１人の対象は、ＰＫサンプリング期間を通じて検出可能なレベルのＡＢ７９を呈さなかった。ＩＶコホートからのＰＫパラメータと比較して、０．６ｍｇ  ｋｇ−１でのＳＣ注射後に、対象間の変動性が高かった。個々のｔｍａｘは、このコホートで測定可能な濃度を有する５人の対象について、注射後約８〜９６時間（０．３３〜４日）の範囲であった。
【０３７６】
ＩＶ注入によってＡＢ７９を投与されたコホートでは、ＮＫ細胞の用量依存的な低減が、≧０．００３ｍｇ  ｋｇ−１の用量で観察され、≧９０％の低下が、０．０６ｍｇ  ｋｇ−１の注入を受けた全ての対象で発生した（図４２）。最大応答の５０％の有効濃度（ＥＣ５０）は、ＰＫアッセイのＬＬＯＱ（すなわち、１０ｎｇ  ｍＬ−１）未満で発生したとはいえ、ＡＢ７９のＩＶ投与によるＮＫ細胞の低減についての最大有効濃度の７５％（ＥＣ７５）は、２１．４ｎｇ  ＭＬ−１であった（表１５）。ＮＫ細胞のレベルは注入の終わりまでにベースラインから一貫して低下したが、ベースラインレベルへの回復（＜−２０％）の期間は変動し、一般に用量に関連しており、０．００３、０．０１、０．０３、および０．０６ｍｇ  ｋｇ−１の用量についてのベースラインレベルへの回復には、それぞれ平均４、４、６、および８日が必要であった（図４３）。ＡＢ７９のＩＶ投与による、総リンパ球、ＢおよびＴ細胞、ヘルパーＴ細胞および細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、赤血球、または血小板では、臨床的に意味のある低減は観察されなかった（データは示さず）。
【０３７７】
ＳＣ注射によってＡＢ７９で処置されたコホートでは、ＮＫ細胞（図４２）および形質芽細胞（図４３）の用量依存的な低減が、≧０．１ｍｇ  ｋｇ−１の用量で観察され、≧９０％の低下が、０．６ｍｇ  ｋｇ−１の注射を受けた全ての対象で発生した。ＮＫ細胞の７５％の低下は、０．６ｍｇ  ｋｇ−１で発生し（データは示さず）、２３．０ｎｇ  ｍＬ−１のＣｍａｘを伴った（表１５）。形質芽細胞およびＮＫ細胞のレベルは、注射後８時間以内にベースラインから低下し、４８時間のｔｍａｘを呈した。ベースラインレベルへの回復期間は変動しており、０．１、０．３、および０．６ｍｇ  ｋｇ−１用量についてのベースラインへの回復（すなわち、ベースラインレベルの−２０％以内）には、それぞれ平均４、７８、および５０日が必要であった（データは示さず）。総リンパ球、ＢおよびＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、単球（図４３）、ならびに顆粒球、赤血球および血小板（データは示さず）で観察された低減は最小限であったか、または低減は観察されなかった。
【０３７８】
総ＩｇのレベルはＮＲＲ内に留まったが、０．０３および０．０６ｍｇ  ｋｇ−１のＡＢ７９のＩＶ投与したコホートでは総ＩｇＭレベルが低下し、１５〜６４日目の時間一致プラセボ対照コホートよりも有意に低かった（Ｐ＜０．０５）（図４４、上部パネル）。０．３および０．６ｍｇｋｇ−１のＳＣで投与されたＡＢ７９については、１５〜６４日目に、総ＩｇＭレベルの有意な（Ｐ＜０．０１）低減も観察された（図４４、下部パネル）。ＩｇＭレベルは、７８日目にベースラインに回復する傾向を呈した。ＩｇＡおよびＩｇＧのレベルに対する有意な効果は、ＩＶまたはＳＣで投与されたＡＢ７９については、観察されなかった（データは示さず）。
【０３７９】
ＡＢ７９を投与された５４人の対象のうち、０．０３ｍｇ  ｋｇ−１のＳＣコホートの１人の対象は、抗ＡＢ７９の持続性（すなわち、１５、２９、および７８日目）、より高い力価（すなわち、１６０、１２８０、および３２０）を呈した（データは示さず）。この対象のＡＢ７９の血清濃度は、同じコホートにおける抗薬物抗体（ＡＤＡ）陰性の対象のＡＢ７９レベルと同様に、試験期間全体にわたってＬＬＯＱを下回り、したがってＡＢ７９のＰＫに対するＡＤＡの潜在的な影響を決定することができなかった。ＡＤＡがＡＥ一致しなかったことにも言及する必要がある。
【０３８０】
ＳＬＥおよびＲＡを治療するための１つの治療戦略は、ＣＤ３８＋リンパ球のレベルと疾患活動との関連を示すいくつかの報告に基づいて、ＣＤ３８＋リンパ球のレベルを下げることである（Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０１８）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ．Ｔｈｅｒ．２０（１）：８５；Ｋｒａａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ（Ｏｘｆｏｒｄ）３８（１１）：１０７４−１０８０；Ｖｉｔａｌ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．６３（１０）：３０３８−３０４７；Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ  ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｃｅｌｌ  １６５（３）：５５１−５６５；およびＧｒａｍｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１２（１０）：１５０６−１５２０）。ＡＢ７９が、ＣＤ３８に特異的に結合して細胞を枯渇させるため（Ｓｍｉｔｈｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８（１  Ｓｕｐｐｌ）：２２４．２０）、これはＡＢ７９で実現することができる。ＳＬＥまたはＲＡを有する患者からの血液または骨髄サンプルにＡＢ９を追加すると、ＰＣ集団を低減させ、かつ自己抗原特異的抗体の産生を減少させた（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２０１６  ＡＣＲ／ＡＲＨＰ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  ａｂｓｔｒａｃｔ  １０８５）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．６８（ｓｕｐｐｌ  １０）。ＡＢ７９は、サルで高レベルのＣＤ３８を発現するリンパ球も低減させ（Ｒｏｅｐｃｋｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０１８）Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｒｅｓ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．６（３）：ｅ００４０２）、予防的に投与するとＣＩＡの発症を防ぎ、また治療的に投与すると関節炎の進行を阻害した（Ｓｍｉｔｈｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８（１  Ｓｕｐｐｌ）：１２７．１７）。したがって、この研究の目的は、健康な対象におけるＡＢ７９の単回ＩＶ注入およびＳＣ注射の安全性、忍容性、ＰＫ、およびＰＤを特性評価し、患者での臨床試験が必要かどうかを判定することであった。
【０３８１】
これは、健康な対象に投与された細胞溶解性ＣＤ３８抗体の忍容性、ＰＫ、およびＰＤの初めての特性評価である。この試験では、ＡＢ７９の全ての投与量は忍容性が良好であった。ＡＥは軽度から中程度の強度であり、大部分は軽度であった（表１３）。ＳＡＥまたは死亡はなく、有害事象による試験または来院の中止はなかった。ＡＢ７９治療に関連して、実験室検査、ＥＣＧ、バイタルサイン、または身体的検査の顕著な所見は報告されなかった。この試験では輸注関連反応は観察されず、ＣＲＳはＡＢ７９のＩＶ注入群の７人の対象およびＡＢ７９のＳＣ群の３人の対象で観察された（表１４）。ＣＲＳの症例は、形質芽細胞およびＮＫ細胞の低減（図４２および４３）、サイトカイン（例えば、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、データは示されず）の中程度の増加、および血中のＣ反応性タンパク質（データは示されず）と一致した。これらのデータはサルにおける試験と一致しており、細胞の枯渇がＴＮＦ−αの血清レベルの上昇と一致したことを示している（Ｒｏｅｐｃｋｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０１８）Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｒｅｓ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．６（３）：ｅ００４０２）。ＩＶ治療群と比較して、ＳＣ治療コホートは、末梢血中のＡＢ７９の同等の濃度（例えば、０．０３ｍｇ  ｋｇ−１のＩＶ対０．６ｍｇ  ｋｇ−１のＳＣ）で、ＣＲＳの発生率が低く、サイトカインレベルの増加が最小限であった。これらの結果は、難治性骨髄腫患者におけるダラツムマブのＳＣ投与がＩＶ投与に対比して輸注反応の発生率が低いことと一致している。ダラツムマブのＩＶ投与はＳＣ投与に対比して異なる製剤が使用されているが、健康な対象へのＡＢ７９のＩＶ投与はＳＣ投与に対比して、同じ製剤が使用された。ＡＢ７９のデータは、ＣＲＳの割合が低いのは、製剤の違いとは対照的に、主にＳＣ投与経路に起因することを示している。
【０３８２】
サルにおけるＡＢ７９の非臨床評価は、ＡＢ７９の単回ＩＶおよびＳＣ投与後、血清濃度−時間曲線下の面積が用量を超えて比例して増加したことを示唆した（Ｒｏｅｐｃｋｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０１８）Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｒｅｓ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．６（３）：ｅ００４０２）。健康な対象の血清濃度データの量が限られていたため、ＡＢ７９の用量比例性またはＳＣの生物学的利用能に関する正式な評価は実施できなかった。しかしながら、ＩＶ注入後のＣｍａｘは、用量を超えて比例して増加するように見え（すなわち、用量の０．０３から０．０６ｍｇ  ｋｇ−１への２倍増加を超えて約５倍増加する）、これは、ＡＢ７９のサルで観察された同様の傾向と、および標的媒介除去を伴う他のモノクローナル抗体について発表されたものと一致する。ＳＣ注射後の用量正規化Ｃｍａｘは、２時間のＩＶ注入後のそれよりも実質的に低かった。Ｃｍａｘに達した後、血清濃度は、ＳＣ注射後にはるかにゆっくりと減少し、ＩＶ注入と比較してＬＬＯＱをはるかに超えて長く維持した。
【０３８３】
ＡＢ７９のＩＶに対する健康な対象のＰＤ応答は、これまでに説明されている抗ＣＤ３８モノクローナル抗体によるＮＫ細胞の枯渇の最も強力な例である。０．０６ｍｇ  ｋｇ−１でのＡＢ７９は、１００．４ｎｇ  ｍＬ−１の平均Ｃｍａｘを生じさせ、各健康な対象の末梢血ＮＫ細胞をベースラインレベルよりも少なくとも９０％低下させた（図４２）。ＮＫ細胞の低下のこの範囲は、最大２４ｍｇ  ｋｇ−１のダラツムマブでＩＶ注入され、最大５７３μｇ  ｍＬ−１の平均Ｃｍａｘを用いた、再発性／難治性ＭＭ患者においては達成されなかった（Ｃｌｅｍｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ．５６（８）：９１５−９２４；Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．１０１（６）：７２１−７２４）。この効力の違いが、試験集団および／またはそれぞれの抗体の特性の違いに起因するかどうかは不明である。健康な対象および骨髄腫患者は同じ数のＮＫ細胞を有し、これらの細胞は同様の密度のＣＤ３８を発現するが（Ｋｒｅｊｃｉｋ  ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｂｌｏｏｄ  １２８（３）：３８４−３９４）、骨髄腫患者は、他のＣＤ３８＋標的細胞（すなわち、骨髄腫細胞）のより高いレベルを有し、これは、これらの集団間のＮＫ細胞枯渇の効力の違いに寄与する可能性がある。より確実な分析には、再発性／難治性骨髄腫患者の同様の集団におけるＡＢ７９のＰＫおよびＰＤデータが必要である。
【０３８４】
より高い効力の属性は、治療薬のより少ない量および容量が、同等のＰＤ効果を引き出すために必要となることである。抗ＣＤ３８  ｍＡｂのＩＶ注入による患者の治療の有効性は、少量のＳＣ注射として投与することによって改善することができ、なぜなら、ＳＣ注射が、通常はＩＶ注入を受けるのに必要な２〜４時間とは対照的に、１分以内に投与でき、慢性治療では、患者が自宅で安全に自己投与でき、利便性および薬理学的利点があるためである。これは、細胞溶解性抗ＣＤ３８抗体のヒト対象へのＳＣ注射後の細胞低減の最初の実例であり、ＳＣ注射がＩＶ注入よりも忍容性が優れていることを示した。また、０．１〜０．６ｍｇ  ｋｇ−１の抗ＣＤ３８抗体の１  ｍＬのＳＣ注射をすると、末梢血で最大のＰＤ活性（例えば、形質芽球の＞９０％低下）が誘発されることも初めて報告されている。ＡＢ７９は、≧０．１ｍｇ  ｋｇ−１のＩＶ用量で、形質芽細胞およびＮＫ細胞を用量依存的に低減させた（図４２および４３）。形質芽細胞の低減に対応するＥＣ９０は、約２３．０ｎｇ  ｍＬ−１であったが、ＮＫ細胞低減については、１００．４ｎｇ  ｍＬ−１であった（表１５）。感受性のこの潜在的な違いは、これらの集団によって発現されるＣＤ３８発現のレベルに関連している可能性があり、形質芽細胞は、ＮＫ細胞よりも約５倍高い密度のＣＤ３８を発現する（Ｋｒｅｊｃｉｋ  ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｂｌｏｏｄ  １２８（３）：３８４−３９４）。これらの患者集団における形質芽細胞およびＮＫ細胞のレベルを説明するデータが今日まで報告されていないため、この違いがＳＬＥ、ＲＡ、および／またはＭＭ患者に存在するかどうかは不明である。患者で同等の活性が観察されるならば、そのときは、少量のＳＣ注射の効率は、輸注施設にアクセスすることなく患者に治療を提供し、全体的な医療費を下げる可能性がある。
【０３８５】
循環血液中の単球、ＢおよびＴ細胞は、健康な対象においてより低いレベルのＣＤ３８を発現し、これらの細胞型は、ＡＢ７９によって形質芽細胞およびＮＫ細胞と同じ程度に低減しなかった。これらのデータは、ＡＢ７９の初回投与後、ならびに３か月間の慢性暴露後のカニクイザルについて記述されたものと一致しており、ＮＫ細胞は、均一に高レベルのＣＤ３８を発現し、ＣＤ３８を不均一に、一般的にＮＫ細胞よりも低レベルで発現するＢおよびＴリンパ球よりも、ＡＢ７９に対して感受性が高い（Ｒｏｅｐｃｋｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０１８）Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｒｅｓ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．６（３）：ｅ００４０２）。これらのデータはまた、ダラツムマブに慢性的に曝露された再発性／難治性骨髄腫患者について記載されたものと一致しており、単球は影響を受けず、ＣＤ３８＋ＢおよびＴ細胞の亜集団は末梢血で低減する（Ｋｒｅｊｃｉｋ  ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｂｌｏｏｄ  １２８（３）：３８４−３９）。
【０３８６】
Ｉｇは主にリンパ様組織（例えば、骨髄、リンパ節、脾臓など）に存在するＰＣによって産生される。同様の効果が、プロテアソーム阻害剤のボルテゾミブの複数回投与に曝されたＳＬＥ患者で報告されており、総ＩｇＭ（３４％）、ＩｇＡ（３４％）、およびＩｇＧ（１５％）の血清レベルに有意な減少があり、これは血中形質芽細胞（５４％）、骨髄ＰＣ（５０％）、および疾患活動性スコアの低減に対応した（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．７４（７）：１４７４−１４７８）。まとめると、これらのデータは、ＡＢ７９がＩｇレベルを下降させるのに効果的である可能性があり、ＩｇＭおよびＩｇＡが、ＩｇＧに比べて選択的に低減させ得ることを示している。このプロファイルは、免疫系の他の成分の抑制を最小限に抑えながら、ＩｇＭ、ＩｇＡ、およびＩｇＧ腎障害に治療上的有用性を提供することができる。
【０３８７】
結論として、ＩＶまたはＳＣを投与したＡＢ７９の単回投与は、健康な対象によって十分に許容された。ＡＢ７９は、形質芽細胞およびＮＫ細胞を枯渇させ、血清ＩｇＭおよびＩｇＡのレベルを低下させた。この形質細胞溶解活性は、調節不全のＰＣ、病原性抗体、Ｉｇ、および／またはＮＫ細胞が関与する、様々な血液悪性腫瘍および／または免疫学的障害の治療に有益であり得る。
【０３８８】
参照による組み込み
本出願全体を通じて引用され得る全ての引用文献（参照文献、特許、特許出願、およびウェブサイトを含む）の内容は、同じ目的で、そこに引用された参照文献と同様に、あらゆる目的で、あたかも個々の参考文献が具体的かつ個別に、あらゆる目的のためにその全体が参考として援用されることが示されているかのように、その全体が参照により明示的に組み込まれる。
【０３８９】
等価物
本開示は、その精神または本質的な特性から逸脱することなく、他の特定の形態で具現化され得る。したがって、前述の実施形態は、あらゆる点で、本開示を限定するのではなく、例示と見なされるべきである。したがって、本開示の範囲は、前述の説明ではなく添付の特許請求の範囲によって示され、したがって、特許請求の範囲の意味および同等の範囲内にある全ての変更は、本明細書に含まれるものとする。当業者に明らかである本発明を実施するための上記の様式の修正は、添付の特許請求の範囲の範囲内にあることが意図される。
【図１】
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【図２Ａ】
2021510737.tif 000071
【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ−Ｆ】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図４Ｅ】
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【図４Ｆ】
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【図４Ｇ】
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【図４Ｈ】
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【図４Ｉ】
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【図４Ｊ】
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【図５】
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【図６Ａ−Ｃ】
2021510737.tif 000087
【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図７Ｅ】
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【図７Ｆ】
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【図８】
2021510737.tif 000094
【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
2021510737.tif 000104
【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１Ａ】
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【図３１Ｂ】
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【図３１Ｃ】
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【図３１Ｄ】
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【図３２Ａ】
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【図３２Ｂ】
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【図３２Ｃ】
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【図３３】
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【図３４Ａ】
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【図３４Ｂ】
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【図３４Ｃ】
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【図３４Ｄ】
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【図３４Ｅ】
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【図３４Ｆ】
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【図３５Ａ】
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【図３５Ｂ】
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【図３５Ｃ】
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【図３５Ｄ】
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【図３５Ｅ】
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【図３５Ｆ】
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【図３６Ａ】
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【図３６Ｂ】
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【図３６Ｃ】
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【図３６Ｄ】
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【図３７Ａ】
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【図３７Ｂ】
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【図３８Ａ】
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【図３８Ｂ】
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【図３８Ｃ】
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【図３８Ｄ】
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【図３８Ｅ】
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【図３８Ｆ】
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【図３９Ａ】
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【図３９Ｂ】
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【図３９Ｃ】
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【図３９Ｄ】
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【図４０Ａ】
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【図４０Ｂ】
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【図４０Ｃ】
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【図４０Ｄ】
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【図４１】
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【図４２Ａ】
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【図４２Ｂ】
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【図４３】
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【図４４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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