(57)【要約】本発明は、式（Ｉ）で示される化合物、またはその薬学的に許容される塩、水和物もしくは溶媒和物に関する。さらに、本発明は、治療に用いるための該化合物、該化合物を含む医薬組成物、および自己免疫疾患の処置に用いるための該化合物に関する。2021528479.tif 000017
2021528479.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）：
【化１】
2021528479.tif 000016
［式中、
Ａは、Ｃ6シクロアルキルを表し；
Ｒ1は、Ｃ1アルキルを表し、ここで、該Ｃ1アルキルは、重水素からなる群から選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ2は、Ｃ1アルキルを表し、ここで、該Ｃ1アルキルは、Ｒ5から選択される置換基で置換されており、ここで、該Ｃ1アルキルは、１個以上の重水素で置換されていてもよく；
Ｒ3は、Ｃ2アルキルを表し、ここで、該Ｃ2アルキルは、Ｒ6から選択される置換基で置換されており、ここで、該Ｃ2アルキルは、１個以上の重水素で置換されていてもよく；
Ｒ4は、水素または重水素を表し；
Ｒ5は、シアノを表し；
Ｒ6は、ヒドロキシルを表す］
で示される化合物、またはその薬学的に許容される塩、水和物もしくは溶媒和物。
【請求項２】
２−[トランス−４−[８−[(１Ｒ)−１−ヒドロキシエチル]−２−(メチルアミノ)プリン−９−イル]シクロヘキシル]アセトニトリル、
２−[トランス−４−[８−(１−ヒドロキシエチル)−２−(メチルアミノ)プリン−９−イル]シクロヘキシル]アセトニトリル、
２−[トランス−４−[８−[(１Ｒ)−１−ヒドロキシエチル]−２−(トリジュウテリオメチルアミノ)プリン−９−イル]シクロヘキシル]アセトニトリル
から選択される請求項１記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、水和物もしくは溶媒和物。
【請求項３】
医薬としての使用のための、請求項１〜２いずれか１項記載の化合物。
【請求項４】
自己免疫疾患などの免疫系の疾患、または免疫系の調節解除に関連する疾患の予防および／または処置における使用のための、請求項１〜２いずれか１項記載の化合物。
【請求項５】
乾癬およびアトピー性皮膚炎から選択される疾患の予防および／または処置における請求項４に記載の使用のための化合物。
【請求項６】
薬学的に許容されるビヒクルもしくは賦形剤または薬学的に許容される担体と一緒に請求項１〜２いずれか１項記載の化合物を含む医薬組成物。
【請求項７】
１種類以上の他の治療活性化合物と合わせた請求項６記載の医薬組成物。
【請求項８】
ＪＡＫ１キナーゼ活性の阻害に応答する疾患の処置において使用するための、請求項１〜２いずれか１項記載の化合物。
【請求項９】
自己免疫疾患などの免疫系の疾患を予防、処置または寛解する方法であって、該疾患の少なくとも１つに罹患しているヒトに、請求項１〜２いずれか１項記載の１種類以上の化合物の有効量を、場合によっては薬学的に許容される担体または１種類以上の賦形剤と一緒に、場合によっては他の治療活性化合物と組み合わせて、投与することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヤヌスキナーゼの阻害剤である化合物およびその誘導体、治療に使用するための該化合物、ならびに該化合物を含む医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
本発明は、ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３およびＴＹＫ２）、特にヤヌスキナーゼ１（ＪＡＫ１）のようなタンパク質チロシンキナーゼの阻害剤である新規化合物に関する。
【０００３】
プロテインチロシンキナーゼは、タンパク質基質中のチロシン残基へのアデノシン三リン酸の末端リン酸の転移を触媒する酵素のファミリーである。タンパク質基質上のチロシン残基のリン酸化によって、細胞増殖分化および活性化、代謝、造血、宿主防御、ならびに免疫調節などの多種多様のプロセスを調節する細胞内シグナルの伝達が生じる。免疫系の多くの炎症状態および他の障害（例えば自己免疫疾患）における分子メカニズムの解明により、これらの細胞内シグナル経路の重要な役割が明確になったので、プロテインチロシンキナーゼの活性の調節が炎症性疾患の管理への魅力的なルートであると思われる。インスリン受容体などの受容体型プロテインチロシンキナーゼ、または非受容体型プロテインチロシンキナーゼであり得る、多数のプロテインチロシンキナーゼが同定されている。
【０００４】
プロテインチロシンキナーゼＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３およびＴＹＫ２は、種々のサイトカイン受容体鎖の細胞質ドメインと選択的に会合し、組織恒常性のサイトカイン依存性調節、自然免疫の開始、ならびに適応免疫応答および炎症過程の形成において極めて重要な役割を果たす。該プロテインチロシンキナーゼは、サイトカイン受容体の刺激によるチロシンリン酸化を介したそれらの活性化に応答するシグナル伝達において重要である。（１）非特許文献１；（２）非特許文献２；（３）非特許文献３；（４）非特許文献４；（５）非特許文献５;（６）非特許文献６。
【０００５】
ＪＡＫ１、ＪＡＫ２およびＴＹＫ２は遍在的に発現するが、ＪＡＫ３は主に造血細胞で発現する。
【０００６】
ＪＡＫ１は生物学的応答の媒介において重要な役割を果たし、ＪＡＫ１は広く発現し、いくつかの主要なサイトカイン受容体ファミリーと会合する。それは、ＩＬ−２受容体γサブユニットファミリーのメンバー（ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７Ｒ、ＩＬ−９Ｒ、ＩＬ−１５ＲおよびＩＬ−２１Ｒ）、ＩＬ−４受容体ファミリーのメンバー（ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−１３Ｒ）、ｇｐ１３０受容体ファミリーのメンバー、ならびにＩＬ−１０受容体ファミリーとＩ型およびＩＩ型ＩＦＮ受容体ファミリーの両方とを含むＩＩ型サイトカイン受容体のメンバーによるシグナル伝達に関与している。
【０００７】
ＪＡＫ２は、いくつかの単鎖受容体（Ｅｐｏ−Ｒ、ＧＨＲ、ＰＲＬ−Ｒを包含する）、ＩＬ−３受容体ファミリー、ｇｐ１３０受容体ファミリー、ＩＬ−１２受容体ファミリー（ＩＬ−１２およびＩＬ−２３）およびいくつかのＩＩ型受容体サイトカインファミリーによるシグナル伝達に関与している。したがって、ＪＡＫ２は、Ｅｐｏ、ＩＬ−３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−５およびＩＦＮγのシグナル伝達において重要な役割を果たしている。ＪＡＫ２ノックアウトマウスは胚性致死表現型を示す。
【０００８】
ＪＡＫ３は、ＩＬ−２受容体ファミリーとしても知られているＩ型サイトカイン受容体ファミリー（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１５およびＩＬ−２１）の共通γ鎖を用いる受容体によるシグナル伝達に関与している。ＸＳＣＩＤ患者集団は、ＪＡＫ３タンパク質のレベルが低下しているか、または共通γ鎖に遺伝子異常があると同定されており、このことは、免疫抑制がＪＡＫ３経路を介したシグナル伝達の遮断により生じるはずであるということを示唆している。動物実験により、ＪＡＫ３がＢリンパ球およびＴリンパ球の成熟において重要な役割を果たすことだけではなく、ＪＡＫ３がＴ細胞機能を維持するために構成的に必要であることも示唆されている。この新規メカニズムを介する免疫活性の調節は、免疫系疾患、特に自己免疫疾患などのＴ細胞増殖性障害の処置に有用であることを証明することができる。
【０００９】
ＴＹＫ２は、Ｉ型インターフェロン、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２およびＩＬ−２３シグナル伝達に関与している。ＴＹＫ２欠損症のヒト患者が報告されており、この患者は、ウイルス、細菌および真菌による多くの日和見感染を伴う高ＩｇＥ様症候群と特徴付けられる原発性免疫不全障害を有していた。ＩＬ−２３は多くの慢性炎症性状態において重要な役割を果たすことが判明しているので、ＴＹＫ２阻害剤は、おそらく、ＩＬ−２３の影響を受けている疾患の処置に非常に有効であり得る。
【００１０】
貧血および好中球減少症はそれぞれＥＰＯおよびＧＭ−ＣＳＦの阻害と関連している可能性がある。これは、これら２つのサイトカインによる生物学的効果が明らかにＪＡＫ２活性化のみに依存しているためである。同様に、ＩＬ−１２およびＩＬ−２３はウイルス、細菌および真菌に対する自然免疫防御および適応免疫防御に関与している。これらのサイトカインはそれらのシグナル伝達カスケードにおいてＪＡＫ２およびＴＹＫ２を動員する受容体に結合するので、選択的ＪＡＫ１阻害剤はそれらの生物学的活性に影響を与えず、したがって、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３およびＴＹＫ２を阻害する化合物と比較して、より安全なプロファイルを有すると考えられる。
【００１１】
ＪＡＫの活性化は、ＳＴＡＴ分子の活性化を引き起こし、したがって、リン酸化事象によって高度に調節されているＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル伝達経路の誘発を引き起こす。ＳＴＡＴ分子の活性化はＪＡＫ活性の有効な薬力学的マーカーと考えられ、特定のＪＡＫ分子の活性は優先的に動員された活性ＳＴＡＴ分子のレベルによって評価され得る。
【００１２】
特に、免疫細胞により発現するＩＬ−４の受容体は、２つの異なる鎖、すなわちリガンド高親和性およびシグナルトランスデューサーＩＬ−４Ｒａと共通γ鎖とで構成されており、リガンド結合するとそれぞれＪＡＫ１およびＪＡＫ３を活性化させ、ＳＴＡＴ６の動員および活性化を引き起こす。同様に、ＩＬ−６受容体は、ＩＬ−６高親和性受容体鎖（ＩＬ−６Ｒａ）、およびＪＡＫ１が優先的に会合するシグナルトランスデューサー糖タンパク質１３０（ｇｐ１３０）鎖によって形成されるヘテロ二量体受容体である。ｇｐ１３０鎖は、リガンド結合するとＪＡＫ１およびＳＴＡＴ３シグナル伝達経路を活性化する。したがって、ＪＡＫ１の活性を調べるために、それぞれＩＬ−４またはＩＬ−６のいずれかで刺激した後の免疫細胞において活性なＳＴＡＴ６またはＳＴＡＴ３のレベルを評価することができる。
【００１３】
さらにまた、エリスロポエチンの受容体（ＥＰＯＲ）は２つの同一受容体鎖によって構成されるホモ二量体受容体である。したがって、ＥＰＯＲ鎖は、高親和性リガンド結合およびシグナルトランスデューサー両方の鎖であり、リガンド結合すると会合したＪＡＫ２分子のみを活性化し、ＳＴＡＴ５の動員および活性化を引き起こす。ＧＭ−ＣＳＦの受容体は、ＪＡＫ２が特異的に会合する、ＧＭ−ＣＳＦ高親和性受容体鎖（ＧＭ−ＣＳＦＲα）およびシグナルトランスデューサー鎖（ＧＭ−ＣＳＦＲβ）によって構成されるヘテロ二量体受容体である。リガンド結合すると、α受容体鎖およびβ受容体鎖の会合により、ＪＡＫ２およびＳＴＡＴ５シグナル伝達経路の活性化が引き起こされる。したがって、ＪＡＫ２の活性を調べるために、ＧＭ−ＣＳＦまたはエリスロポエチン（ＥＰＯ）のいずれかで刺激した後の免疫細胞において活性なＳＴＡＴ５のレベルを評価することができる。
【００１４】
ヤヌスキナーゼの阻害剤は、これらのキナーゼが関与する炎症性および非感染性の自己免疫疾患の処置において有用性を示すことが期待される。最近、汎ＪＡＫ阻害剤（pan-JAK inhibitor）であるトファシチニブおよびルキソリチニブがそれぞれ関節リウマチおよび骨髄線維症の処置のために発売された。
【００１５】
したがって、ＪＡＫ阻害剤は、さらにまた、例えば、乾癬、アトピー性皮膚炎、強皮症、酒さ、皮膚癌、皮膚炎、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、白斑、円形脱毛症、接触性皮膚炎、湿疹、乾皮症、魚鱗癬、じん麻疹および慢性特発性そう痒症などの皮膚疾患；喘息、慢性閉塞性肺疾患、肺線維症、嚢胞性線維症、鼻炎、気管支炎、綿肺症、塵肺症、気管支拡張症、過敏性肺炎、肺癌、中皮腫およびサルコイドーシスなどの呼吸器疾患；炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、後腹膜線維症、セリアック病および癌などの胃腸疾患；重症筋無力症、シェーグレン症候群、結膜炎、強膜炎、ぶどう膜炎、ドライアイ症候群、角膜炎、虹彩炎などの眼疾患；ループス、多発性硬化症、関節リウマチ、Ｉ型糖尿病および糖尿病からの合併症、癌、強直性脊椎炎および乾癬性関節炎のなどの全身適応症；ならびに他の自己免疫疾患、および例えば臓器移植におけるような免疫抑制が望ましい適応症を含む、ヤヌスキナーゼの活性に関連する疾患の処置においても有用であり得る。
【００１６】
特許文献１には、三環式複素環化合物、組成物およびＪＡＫ阻害剤としてのその使用方法が開示されている。
【００１７】
特許文献２には、ヤヌスキナーゼの阻害剤としての使用のための縮合三環式化合物が開示されている。
【００１８】
特許文献３には、三環式複素環化合物、組成物およびその使用方法が開示されている。
【００１９】
特定のＪＡＫ酵素を効果的かつ選択的に阻害する新規化合物、特に全体的な抗炎症効力に影響を与えることなく有害作用を低減させるためにＪＡＫ１対ＪＡＫ２を選択的に阻害する阻害剤が依然として必要とされている
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２０】
【特許文献１】国際公開第２０１３／００７７６８号
【特許文献２】国際公開第２０１３／００７７６５号
【特許文献３】国際公開第２０１１／０８６０５３号
【非特許文献】
【００２１】
【非特許文献１】Schindler C. et al. JAK-STAT signaling: from interferons to cytokines. J. Biol. Chem 2007; 282(28):20059
【非特許文献２】O'Shea J.J. Targeting the Jak/STAT pathway for immunosuppression; Ann. Rheum. Dis. 2004; 63 Suppl 2:ii67
【非特許文献３】Schindler C. Series introduction. JAK-STAT signaling in human disease; J. Clin. Invest. 2002; 109(9):1133)
【非特許文献４】O'Shea et. Al. Cell, Vol. 109, S121-S131, 2002
【非特許文献５】Schwartz D.M. et al. Nat. Rev. Rheumatol., 2016; 12(1): 25-36
【非特許文献６】O'Shea et al. New. Eng. J. Med. 2013; 368(2): 161-170
【発明の概要】
【００２２】
本発明の化合物はヤヌスキナーゼに対して阻害活性を示す；特に本発明の化合物はＪＡＫ１に対して阻害活性を示す。したがって、本発明の化合物はＪＡＫキナーゼ阻害選択性を示す；特に、該化合物はＪＡＫ１対ＪＡＫ２の阻害選択性を示す。その結果として、本発明の化合物はＳＴＡＴ６またはＳＴＡＴ３対ＳＴＡＴ５の阻害選択性を示し得る。
【００２３】
したがって、本発明は、式（Ｉ）
【００２４】
【化１】
2021528479.tif 000003
［式中、
Ａは、Ｃ6シクロアルキルを表し；
Ｒ1は、Ｃ1アルキルを表し、ここで、該Ｃ1アルキルは、重水素からなる群から選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ2は、Ｃ1アルキルを表し、ここで、該Ｃ1アルキルは、Ｒ5から選択される置換基で置換されており、また、ここで、該Ｃ1アルキルは、１個以上の重水素で置換されていてもよく；
Ｒ3は、Ｃ2アルキルを表し、ここで、該Ｃ2アルキルは、Ｒ6から選択される置換基で置換されており、また、ここで、該Ｃ2アルキルは、１個以上の重水素で置換されていてもよく；
Ｒ4は、水素または重水素を表し；
Ｒ5は、シアノを表し；
Ｒ6は、ヒドロキシルを表す］
で示される化合物またはその薬学的に許容される塩、水和物もしくは溶媒和物に関する。
【００２５】
別の態様では、本発明は、薬学的に許容されるビヒクルもしくは賦形剤または薬学的に許容される担体とともに、場合によっては１つ以上の他の治療活性化合物とともに、本明細書で定義される一般式（Ｉ）で示される化合物を含む医薬組成物に関する。
【００２６】
さらに別の態様では、本発明は、医薬としての使用のための本明細書で定義される一般式（Ｉ）で示される化合物に関する。
【００２７】
さらに別の態様では、本発明は、自己免疫疾患のような免疫系の疾患、または免疫系の調節解除に関する疾患の予防および／または処置における使用のための本明細書で定義される一般式（Ｉ）で示される化合物に関する。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
発明の詳細な説明
【００２９】
定義
用語「(Ｃa〜Ｃb)アルキル」とは、分枝鎖状または直鎖状炭化水素から１個の水素原子を除去した場合に得られるラジカルを示すことを意図している。該アルキルは、１〜６個、好ましくは１〜４個、例えば１〜３個、例えば２〜３個、または例えば１〜２個の炭素原子を含む。該用語は、サブクラスであるノルマルアルキル（ｎ−アルキル）、二級および三級アルキル、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシルおよびイソヘキシルを包含する。「アルキル」中の炭素原子の数は、接頭辞「(Ｃa〜Ｃb)」によって示される（ここで、ａは炭化水素ラジカル中の炭素の最小数であり、ｂは最大数である）。したがって、例えば、(Ｃ1〜Ｃ4)アルキルとは、１〜４個の炭素原子を含むアルキルラジカルを示すことを意図している。Ｃ1アルキルとは、１個の炭素原子を含むアルキルラジカル、例えばメチルを示すことを意図している。Ｃ2アルキルとは、２個の炭素原子を含むアルキルラジカル、例えばエチルを示すことを意図している。
【００３０】
用語「シアノ」とは、炭素原子を介して親分子部分に結合している−ＣＮ基を示すことを意図している。
【００３１】
用語「(Ｃa〜Ｃb)シクロアルキル」とは、３〜８個の炭素原子、例えば５〜８個の炭素原子、例えば５〜７個の炭素原子、例えば５〜６個の炭素原子、例えば３〜６個の炭素原子、例えば３〜５個の炭素原子または例えば３〜４個の炭素原子、例えば６個の炭素原子を含む、二環式または三環式ラジカルなどの多環式ラジカルを包含する飽和シクロアルカン炭化水素ラジカルを示すことを意図しており、例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、またはシクロヘプチル、アダマンチル（adamantly）およびクバニル（cubanyl）である。「シクロアルキル」中の炭素原子の数は、接頭辞「(Ｃa〜Ｃb)」によって示される（ここで、ａは炭化水素ラジカル中の炭素の最小数であり、ｂは最大数である）。したがって、例えば(Ｃ5〜Ｃ8)シクロアルキルとは、５〜８個の炭素原子を含むシクロアルキルラジカルを示すことを意図している。
【００３２】
用語「ハロゲン」とは、周期表の第７典型元素族（the 7th main group）からの置換基を示すことを意図しており、例えばフルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードである。
【００３３】
用語「炭化水素ラジカル」とは、水素原子および炭素原子だけを含有するラジカルを示すことを意図しており、１つ以上の二重および／または三重炭素−炭素結合を含有し得、分枝鎖または直鎖部分と組み合わせた環状部分を含み得る。該炭化水素は、１〜１０個の炭素原子を含み、好ましくは１〜４個、例えば１〜３個、例えば１〜２個の炭素原子を含む。該用語は、本明細書において示されるアルキル、シクロアルキルおよびアリールを包含する。
【００３４】
炭化水素ラジカル（例えば、アルキルおよびシクロアルキル）中の炭素原子の数は、接頭辞「(Ｃa〜Ｃb)」によって示される（ここで、ａは炭化水素ラジカル中の炭素の最小数であり、ｂは最大数である）。したがって、例えば(Ｃ1〜Ｃ4)アルキルとは、１〜４個の炭素原子を含むアルキルラジカルを示すことを意図しており、(Ｃ5〜Ｃ8)シクロアルキルとは、５〜８個の炭素環原子を含むシクロアルキルラジカルを示すことを意図している。
【００３５】
用語「ヒドロキシ」または「ヒドロキシル」とは、−ＯＨ基を示すことを意図している。
【００３６】
用語「ヒドロキシ(Ｃa〜Ｃb)アルキル」とは、１個以上のヒドロキシで置換されている上記で定義した(Ｃa〜Ｃb)アルキル基を示すことを意図しており、例えば、ヒドロキシメチル、ヒドロキシエチル、ヒドロキシプロピルである。
【００３７】
アリールアルキル、シクロアルキルアルキルなどのように上記で定義した用語の２つ以上が組み合わせて使用されている場合、最初に記載されているラジカルは後に記載されているラジカルの置換基であり、親分子部分への結合点は後者のラジカル上にあると解されるべきである。
【００３８】
基Ｃ(Ｏ)とは、カルボニル基（Ｃ＝Ｏ）を表すことを意図している。
【００３９】
置換基が独立して群から選択されるように記載されている場合、各置換基は、お互いに独立して選択される。したがって、各置換基は、他の置換基と同一であっても異なっていてもよい。
【００４０】
用語「置換されていてもよい」とは、「非置換であるかまたは置換されている」ことを意味し、したがって、本明細書に記載の一般式は、明記された任意の置換基を含有する化合物および該任意の置換基を含有しない化合物を包含する。
【００４１】
用語「薬学的に許容される塩」とは、塩基性部分を含む式（Ｉ）で示される化合物を、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、ギ酸、酢酸、２,２−ジクロロ酢酸（dichloroaetic）、アジピン酸、アスコルビン酸、Ｌ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸、ガラクタル酸、乳酸、マレイン酸、Ｌ−リンゴ酸、フタル酸、クエン酸、プロピオン酸、安息香酸、グルタル酸、グルコン酸、Ｄ−グルクロン酸、メタンスルホン酸、サリチル酸、コハク酸、マロン酸、酒石酸、ベンゼンスルホン酸、エタン−１,２−ジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、スルファミン酸またはフマル酸などの好適な無機酸または有機酸と反応させることによって調製される塩を示すことを意図している。薬学的に許容される塩のさらなる例は、Berge, S.M.; J. Pharm. Sci.; (1977), 66(1), 1-19（出典明示により本明細書の一部とする）に挙げられている。
【００４２】
用語「溶媒和物」とは、化合物、例えば式（Ｉ）で示される化合物と、溶媒、例えばアルコール、グリセロールまたは水との間の相互作用により形成される種を示すことを意図している。水が溶媒である場合、該種は水和物と称される。
【００４３】
本明細書で用いられる用語「処置」とは、疾患、障害または状態と戦うことを目的とした患者の管理およびケアを意味する。該用語は、疾患、障害もしくは状態の進行の遅延、症状および合併症の寛解、軽減もしくは緩和、ならびに／または疾患、障害もしくは状態の治癒もしくは消失を含むことを意図している。該用語は、状態の予防を含み、ここで、予防とは、疾患、状態または障害と戦うことを目的とした患者の管理およびケアであると解されるべきであり、症状または合併症の発症を予防するための活性化合物の投与を含む。それにもかかわらず、予防的（予防的）処置および治療的（根治的）処置は２つの異なる態様である。
【００４４】
特に明記しない限り、本明細書で提供されるすべての正確な値は、対応する近似値の代表であり、例えば、特定の測定値に関して提供される正確な例示的な値は、適切な場合には「約」によって修正された、対応する近似測定値も提供すると考えることができる。
【００４５】
本明細書において引用される刊行物、特許出願および特許を含む全ての参考文献は、本明細書の他の場所で行われた特定の文書の別個の提供された組み込みに関係なく、出典明示により、その全体として、各参考文献が個別に具体的に示されていた場合と同程度に、本明細書の一部とする。
【００４６】
本発明の実施態様
本発明の実施態様は、上記式（Ｉ）：
【化２】
2021528479.tif 000004
［式中、
Ａは、Ｃ6シクロアルキルを表し；
Ｒ1は、Ｃ1アルキルを表し、ここで、該Ｃ1アルキルは、重水素からなる群から選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ2は、Ｃ1アルキルを表し、ここで、該Ｃ1アルキルは、Ｒ5から選択される置換基で置換されており；
Ｒ3は、Ｃ2アルキルを表し、ここで、該Ｃ2アルキルは、Ｒ6から選択される置換基で置換されており；
Ｒ4は、水素を表し；
Ｒ5は、シアノを表し；
Ｒ6は、ヒドロキシルを表す］
で示される化合物、またはその薬学的に許容される塩、水和物もしくは溶媒和物を提供する。
【００４７】
本発明の実施態様は、下記式（Ｉａ）
【化３】
2021528479.tif 000005
［式中、
Ｒ1は、Ｃ1アルキルを表し、ここで、該Ｃ1アルキルは、重水素からなる群から選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ2は、Ｃ1アルキルを表し、ここで、該Ｃ1アルキルは、Ｒ5から選択される置換基で置換されており、また、ここで、該Ｃ1アルキルは、１個以上の重水素で置換されていてもよく；
Ｒ4は、水素または重水素を表し；
Ｒ5は、シアノを表し；
Ｒ6は、ヒドロキシルを表し；
Ｒa、Ｒb、ＲcおよびＲdは、各々独立して、水素または重水素から選択される］
で示される上記式（Ｉ）で示される化合物、またはその薬学的に許容される塩、水和物もしくは溶媒和物を提供する。
【００４８】
実施態様では、本発明は、一般式（Ｉｂ）
【化４】
2021528479.tif 000006
［式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ4およびＲ6は、上記の定義と同じであり、また、Ｒa、Ｒb、ＲcおよびＲdは、各々独立して、水素および重水素から選択される］
である一般式（Ｉ）で示される化合物、またはその薬学的に許容される塩、水和物もしくは溶媒和物を提供する。
【００４９】
実施態様では、本発明は、一般式（Ｉｃ）
【化５】
2021528479.tif 000007
［式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ4およびＲ6は、上記の定義と同じであり、また、Ｒa、Ｒb、ＲcおよびＲdは、各々独立して、水素および重水素から選択される］
である一般式（Ｉ）で示される化合物、またはその薬学的に許容される塩、水和物もしくは溶媒和物を提供する。
【００５０】
実施態様では、本発明は、一般式（Ｉｄ）
【化６】
2021528479.tif 000008
［式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ4およびＲ6は、上記の定義と同じであり、また、Ｒa、Ｒb、ＲcおよびＲdは、各々独立して、水素および重水素から選択される］
である一般式（Ｉ）で示される化合物、またはその薬学的に許容される塩、水和物もしくは溶媒和物を提供する。
【００５１】
本発明の実施態様は、
２−[トランス−４−[８−[(１Ｒ)−１−ヒドロキシエチル]−２−(メチルアミノ)プリン−９−イル]シクロヘキシル]アセトニトリル、
２−[トランス−４−[８−(１−ヒドロキシエチル)−２−(メチルアミノ)プリン−９−イル]シクロヘキシル]アセトニトリル
から選択される式（Ｉ）で示される化合物、またはその薬学的に許容される塩、水和物もしくは溶媒和物を提供する。
【００５２】
本発明の実施態様は、
２−[トランス−４−[８−[(１Ｒ)−１−ヒドロキシエチル]−２−(メチルアミノ)プリン−９−イル]シクロヘキシル]アセトニトリル、
２−[トランス−４−[８−(１−ヒドロキシエチル)−２−(メチルアミノ)プリン−９−イル]シクロヘキシル]アセトニトリル、
２−[トランス−４−[８−[(１Ｒ)−１−ヒドロキシエチル]−２−(トリジュウテリオメチルアミノ)プリン−９−イル]シクロヘキシル]アセトニトリル
から選択される式（Ｉ）で示される化合物、またはその薬学的に許容される塩、水和物もしくは溶媒和物を提供する。
【００５３】
本発明の実施態様は、
２−[トランス−４−[８−[(１Ｒ)−１−ヒドロキシエチル]−２−(メチルアミノ)プリン−９−イル]シクロヘキシル]アセトニトリル
から選択される式（Ｉ）で示される化合物、またはその薬学的に許容される塩、水和物もしくは溶媒和物を提供する。
【００５４】
本明細書に記載の２つ以上の実施態様の組合せはいずれも本発明の範囲内であると考えられる。
【００５５】
式（Ｉ）で示される化合物またはその薬学的に許容される塩、水和物もしくは溶媒和物は、有機溶媒からの濃縮により直接、または、有機溶媒または該溶媒と有機もしくは無機であり得る共溶媒（例えば、水）との混合物からの結晶化もしくは再結晶により、結晶形態で得ることができる。結晶は、本質的に無溶媒の形態で、または水和物などの溶媒和物として、単離することができる。本発明は、多形体および擬多形体などの全ての結晶形態、ならびにそれらの混合物も対象とする。
【００５６】
式（Ｉ）で示される化合物は、異性体形態、例えばエナンチオマーおよび場合によりジアステレオマーの存在を生じさせる不斉置換された（キラル）炭素原子を含んでもよいし、含まなくてもよい。本発明は、光学的に純粋な形態の、またはそれらの混合物（例えば、ラセミ混合物または部分的に精製された光学混合物）としてのそのような全ての異性体に関する。本発明の化合物および中間体の純粋な立体異性体形態は、当該技術分野で知られている手順の適用により得ることができる。選択的結晶化およびクロマトグラフィー技術、例えばキラル固定相を使用する高速液体クロマトグラフィーなどの物理的分離方法により、種々の異性体形態を分離することができる。エナンチオマーは、ｌ−エフェドリンなどの光学活性アミン、または光学活性酸で形成することができるそれらのジアステレオマー塩の選択的結晶化によりお互いに分離することができる。次に、該精製されたジアステレオマー塩から、光学的に精製された化合物を遊離させることができる。エナンチオマーは、ジアステレオマー誘導体の形成により分割することもできる。別法として、エナンチオマーは、キラル固定相を使用してクロマトグラフィー技術により分離することができる。純粋な立体異性体形態は、適切な出発物質の対応する純粋な立体異性体形態から誘導することもできる。特性の立体異性体が望まれる場合、該化合物は、立体選択的または立体特異的な調製方法により、および／またはキラル純粋な出発物質を用いることにより、合成することができる。さらにまた、二重結合または完全もしくは部分飽和環系が分子内に存在する場合、幾何異性体が形成され得る。分離された幾何異性体、純粋なもしくは部分的に精製された幾何異性体またはそれらの混合物が本発明の範囲内に含まれることが意図されている。
【００５７】
一般式（Ｉ）で示される化合物において、原子はそれらの天然の同位体存在量を示し得るか、または１個以上の原子は、同じ原子番号を有するが自然界に見られる原子量または質量数と異なる原子量または質量数を有する特定の同位体で人工的に濃縮され得る。本発明は、一般式（Ｉ）で示される化合物のすべての好適な同位体バリエーションを含むことを意味する。例えば、水素のさまざまな同位体形態としては1Ｈ、2Ｈおよび3Ｈが挙げられ、炭素のさまざまな同位体形態としては12Ｃ、13Ｃおよび14Ｃが挙げられ、窒素のさまざまな同位体形態としては14Ｎおよび15Ｎが挙げられる。重水素（2Ｈ）の濃縮は、例えば、生体内半減期を延長させるかもしくは投与計画を短縮させることができるか、または、生物学的サンプルの特性評価の標準として有用な化合物を提供することができる。一般式（Ｉ）内の同位体濃縮化合物は、当業者に周知の慣用技術によって、または適切な同位体濃縮試薬および／もしくは中間体を使用する本明細書の一般的手順および実施例に記載されるものと類似のプロセスによって調製することができる。
【００５８】
本発明の１つ以上の実施態様では、上記で定義した式Ｉで示される化合物は、治療に有用であり、特に、例えば、増殖性および炎症性皮膚障害、乾癬、アトピー性皮膚炎、強皮症、酒さ、皮膚癌、皮膚炎（dermatis）、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、白斑、円形脱毛症、接触性皮膚炎、湿疹、乾皮症、魚鱗癬、じん麻疹および慢性特発性そう痒症などの皮膚疾患；喘息、慢性閉塞性肺疾患、肺線維症、嚢胞性線維症、鼻炎、気管支炎、綿肺症、塵肺症、気管支拡張症、過敏性肺炎、肺癌、中皮腫およびサルコイドーシスなどの呼吸器疾患；炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、後腹膜線維症、セリアック病および癌などの胃腸疾患；重症筋無力症、シェーグレン症候群、結膜炎、強膜炎、ぶどう膜炎、ドライアイ症候群、角膜炎、虹彩炎などの眼疾患；ループス、多発性硬化症、関節リウマチ、Ｉ型糖尿病および糖尿病からの合併症、癌、強直性脊椎炎および乾癬性関節炎などの全身適応症；ならびに、例えば臓器移植において免疫抑制が望ましい他の自己免疫疾患および適応症の処置に有用である。
【００５９】
実施態様では、本発明は、乾癬またはアトピー性皮膚炎の予防および／または処置に用いるための上記定義の式Ｉで示される化合物を提供する。
【００６０】
実施態様では、本発明は、自己免疫疾患などの免疫系の疾患を予防、処置または寛解する方法であって、該疾患の少なくとも１つに罹患しているヒトに、上記一般式Ｉで示される１種類以上の化合物の有効量を、場合によっては薬学的に許容される担体または１種類以上の賦形剤と一緒に、場合によっては他の治療活性化合物と組み合わせて、投与することを含む、方法を提供する。
【００６１】
実施態様では、本発明は、乾癬またはアトピー性皮膚炎を予防、処置または寛解する方法であって、該疾患の少なくとも１つに罹患しているヒトに、上記一般式Ｉで示される１種類以上の化合物の有効量を、場合によっては薬学的に許容される担体または１種類以上の賦形剤と一緒に、場合によっては他の治療活性化合物と組み合わせて、投与することを含む、方法を提供する。
【００６２】
実施態様では、本発明は、乾癬またはアトピー性皮膚炎などの自己免疫疾患などの免疫系の疾患の予防および／または処置のための医薬の製造に用いるための式Ｉで示される化合物を提供する。
【００６３】
本発明の１つ以上の実施態様では、上記定義の式Ｉで示される化合物は、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３またはＴＹＫ２プロテインチロシンキナーゼなどのプロテインチロシンキナーゼのＪＡＫファミリーのプロテインチロシンキナーゼの活性を調節することができる抗炎症剤として有用である。
【００６４】
１つ以上の実施態様では、本発明は、ＪＡＫ１キナーゼ活性の阻害に応答する疾患の処置において使用するための一般式（Ｉ）で示される化合物を提供する。
【００６５】
本発明の化合物は、ヒトの処置に有用であることに加えて、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、イヌおよびネコなどの哺乳動物を包含する動物の獣医学的処置にも有用であり得る。
【００６６】
本発明の医薬組成物
治療における使用のために、本発明の化合物は、典型的には医薬組成物の形態である。したがって、本発明は、式（Ｉ）で示される化合物を、薬学的に許容される賦形剤、ビヒクルまたは担体と一緒に、場合によっては１種類以上の他の治療活性化合物と一緒に、含む医薬組成物に関する。賦形剤は、組成物の他の成分と互換性があり、そのレシピエントに有害ではないという意味で「許容できる」ものでなければならない。
【００６７】
好都合には、該活性成分は、製剤の０.０００１〜９９.９重量％含む。
【００６８】
投与単位（dosage unit）の形態において、化合物は、しかしながら、常に、しかしながら、患者の状態に応じて、そして医師によって作成された処方に従って、適切な間隔で１日１回以上投与され得る。好都合には、製剤の投与単位は、式（Ｉ）で示される化合物０.００１ｍｇ〜１０００ｍｇ、好ましくは０.０１ｍｇ〜１００ｍｇ、例えば０.１〜５０ｍｇを含む。
【００６９】
本発明の化合物の好適な投与量（dosage）は、とりわけ、患者の年齢および状態、処置される疾患の重症度、ならびに開業医に周知の他の要因に依存するであろう。該化合物は、経口、非経口、局所、経皮または経皮のいずれか、および異なる投与スケジュールに従って（例えば、毎日、毎週、または１か月間隔で）他の経路で、投与することができる。一般に、単一用量（single dose）は０.００１〜４００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である。該化合物は、ボーラスとして投与され得る（すなわち、一日量全体が一度に投与される）か、または１日２回以上の分割用量で投与され得る。
【００７０】
局所治療の文脈では、患者に投与することができ、容易に取り扱いおよび包装することができ、活性物質それ自体または固体、半固体もしくは液体の医薬希釈剤もしくは担体との混合物を含む物理的および化学的に安定な単位用量（unit dose）として残っている単一用量を意味する「使用単位（usage unit）」と称するのがより適切であり得る。
【００７１】
局所使用に関連する用語「使用単位」とは、治療面積１平方センチメートル当たり、問題の活性成分０.００１μｇ〜１ｍｇ、好ましくは０.０５μｇ〜０.５ｍｇの塗布において患者に局所的に投与することができる単位（unitary）用量、すなわち単一用量を意味する。
【００７２】
また、特定の治療計画において、より長い間隔、例えば隔日、毎週、またはより長い間隔で投与することが有益であり得ることが予想される。
【００７３】
処置が他の治療活性化合物の投与を含む場合、該化合物の有用な投与量については、Goodman & Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics, 9th Ed., J.G. Hardman and L.E. Limbird (Eds.), McGraw-Hill 1995を参考にすることが推奨される。
【００７４】
本発明の化合物と１種以上の他の活性化合物との投与は、同時または連続のいずれかであり得る。
【００７５】
該製剤としては、例えば、経口投与、直腸投与、非経口投与（皮下投与、腹腔内投与、筋肉内投与、関節内投与および静脈内投与を含む）、経皮投与、皮内投与、眼科投与、局所投与、経鼻投与、舌下投与または頬側投与に好適な形態のものが挙げられる。
【００７６】
該製剤は、慣用的には、投与単位形態で提供され得、例えばRemington, The Science and Practice of Pharmacy, 21ed ed., 2005に開示されているような、薬学の技術分野で周知の方法のいずれかによって調製することができるが、これらに限定されるものではない。すべての方法は、活性成分を、１つ以上の付属成分を構成する担体と関連させる工程を含む。一般に、該製剤は、活性成分を液体担体、半固体担体もしくは微粉固体担体、またはこれらの組み合わせと均一かつ親密に関連させ、次いで、必要に応じて、該生成物を所望の製剤に成形することによって調製される。
【００７７】
経口投与および頬側投与に好適な本発明の製剤は、それぞれが所定量の活性成分を含有するカプセル剤、サシェ剤、錠剤、チューインガムまたはロゼンジ剤のような個別単位の形態であってもよく、粉末、顆粒またはペレットの形態であってもよく、水性液体または非水性液体中の溶液または懸濁液の形態であってもよく、またはゲル、ナノエマルション、マイクロエマルション、水中油型エマルション、油中水型エマルション、または他の分散系の形態であってもよい。水性懸濁液のための好適な分散剤または懸濁化剤としては、合成または天然の界面活性剤および粘度調整剤（viscosifying agent）が挙げられる。また、活性成分は、ボーラス剤、舐剤またはペースト剤の形態で投与してもよい。
【００７８】
錠剤は、活性成分を、場合によっては１種類以上の付属成分と一緒に、圧縮、成形または凍結乾燥することにより製造することができる。圧縮錠剤は、結合剤および／または充填剤；滑沢剤；崩壊剤または分散剤と混合していてもよい、粉末または顆粒のような流動性のある形態の活性成分を好適な機械で圧縮することにより調製することができる。成形錠剤は、粉末状の活性成分と不活性液体希釈剤で湿らせた好適な担体との混合物を好適な機械で成形することにより製造することができる。凍結乾燥錠剤は、凍結乾燥機で原薬の溶液から形成することができる。好適な充填剤を含むことができる。
【００７９】
直腸投与用製剤は、本発明の化合物が低融点の水溶性または水不溶性の固体と混合されている坐剤の形態であり得る。
【００８０】
非経口投与に適した製剤は、好都合には、好ましくはレシピエントの血液、例えば等張性生理食塩水、等張性グルコース溶液または緩衝液と等張性である活性成分の滅菌油性または水性製剤を含む。さらにまた、該製剤は、共溶媒、可溶化剤および／または錯化剤を含んでいてもよい。該製剤は、好都合には、例えば細菌保持フィルターによる濾過、製剤への殺菌剤の添加、製剤の照射または製剤の加熱により、殺菌することができる。例えばEncyclopedia of Pharmaceutical Technology, vol.9, 1994に開示されているようなリポソーム製剤もまた、非経口投与に適している。
【００８１】
別法として、式（Ｉ）で示される化合物は、使用直前に滅菌溶媒に容易に溶解する無菌の固体調製物、例えば凍結乾燥粉末として提示され得る。
【００８２】
経皮製剤は、硬膏剤、パッチ剤、マイクロニードル、リポソームまたはナノ粒子送達システム、または皮膚に適用される他の皮膚製剤の剤形であり得る。
【００８３】
眼科投与に適した製剤は、微結晶形態であり得る活性成分の無菌水性製剤の剤形、例えば水性微結晶懸濁液の剤形であり得る。例えばEncyclopedia of Pharmaceutical Technology, vol.2, 1989に開示されているような、リポソーム製剤または生分解性ポリマーシステムもまた、眼科投与に適した活性成分を提供するために使用され得る。
【００８４】
皮膚投与、皮内投与または眼科投与などの局所投与に適した製剤としては、リニメント剤、ローション剤、ゲル剤、塗布剤、スプレー剤、フォーム剤、フィルム形成システム、マイクロニードル、マイクロエマルジョンもしくはナノエマルション、クリーム剤、軟膏剤もしくはペースト剤などの水中油型エマルションもしくは油中水型エマルションのような液体または半固形製剤；または滴剤のような液剤もしくは懸濁剤が挙げられる。
【００８５】
局所投与については、式（Ｉ）で示される化合物は、典型的には組成物の０.００１〜２０重量％、例えば０.０１％〜約１０重量％の量で存在し得るが、組成物の約１００％までの量で存在してもよい。
【００８６】
経鼻投与または頬側投与に適した製剤としては、エアゾール剤およびアトマイザーなどの粉末製剤、自己噴射型（self-propelling）製剤およびスプレー製剤が挙げられる。そのような製剤は、例えば、Modern Pharmaceutics, 2nd ed., G.S. Banker and C.T. Rhodes (Eds.), page 427-432, Marcel Dekker, New York；Modern Pharmaceutics, 3th ed., G.S. Banker and C.T. Rhodes (Eds.), page 618-619 and 718-721, Marcel Dekker, New YorkおよびEncyclopedia of Pharmaceutical Technology, vol. 10, J. Swarbrick and J.C. Boylan (Eds), page 191-221, Marcel Dekker, New Yorkに、より詳細に開示されている。
【００８７】
式（Ｉ）で示される化合物の製剤は、上記成分に加えて、希釈剤、緩衝剤、矯味矯臭剤、着色剤、界面活性剤、増粘剤、浸透促進剤、溶解度向上剤、防腐剤、例えばヒドロキシ安息香酸メチル（抗酸化剤を含む）、乳化剤などの１種以上のさらなる成分を含んでもよい。
【００８８】
製造方法
本発明の化合物は、合成技術分野の当業者に周知の多くの方法で製造することができる。式（Ｉ）で示される化合物は、例えば、有機合成化学の技術分野で既知の方法、または該技術分野の当業者に理解されるようなそのバリエーションとともに、以下に概説される反応および技術を用いて製造することができる。好ましい方法としては、以下に記載される方法が挙げられるが、これらに限定されるものではない。反応は、使用される試薬および物質に適切で、行われる変換に適した溶媒中で行われる。また、以下に記載される合成方法において、溶媒の選択、反応雰囲気、反応温度、実験時間、および後処理手順を含むすべての提案された反応条件は、当業者によって容易に認識されるべきその反応のための標準的な条件であるように選択されると解されるべきである。所与のクラスに属するすべての化合物が、記載されている方法のいくつかで必要とされる反応条件のいくつかに適合するとは限らない。反応条件に適合する置換基へのこのような制限は、当業者には容易に明らかであり、代替的な方法を使用することができる。本発明の化合物または中間体は、必要に応じて、有機合成化学者に周知の標準的な方法、例えば、“Purification of Laboratory Chemicals”, 6th ed. 2009, W. Amarego and C. Chai, Butterworth-Heinemannに記載されている方法を用いて精製することができる。出発物質は、既知化合物もしくは市販の化合物であるか、または当業者に周知の慣用合成法によって製造されてもよい。
【実施例】
【００８９】
一般的な手順、製造例および実施例
出発物質は、市販のものであったか、または文献公知のものであった。試薬および溶媒は、市販のものであり、特記しない限り精製せずに使用された。
クロマトグラフィー精製は、予めパックされたＲＥＶＥＬＥＲＩＳ（登録商標）  Ｓｉｌｉｃａ  Ｆｌａｓｈ  Ｃａｒｔｒｉｄｇｅｓを備えたＧｒａｃｅ  ＲＥＶＥＬＥＲＩＳ（登録商標）システム、もしくはＴｅｌｅｄｙｎｅ  Ｉｓｃｏ  ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（登録商標）  Ｒｆシステムを使用して、またはシリカゲル６０を使用して手動で、行った。1Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、内部標準としてテトラメチルシラン（δ＝０.００ｐｐｍ）を用いて３００、４００または６００ＭＨｚでＢｒｕｋｅｒ装置にて記録した。
【００９０】
全体を通して以下の略語が使用されている：
ＡｃＯＨ        酢酸
ＤＣＭ          ジクロロメタン
ＤＩＰＥＡ      Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ          Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ        ジメチルスルホキシド
Ｅｔ            エチル
ＥｔＯＡｃ      酢酸エチル
ＥｔＯＨ        エタノール
ＨＰＬＣ        高速液体クロマトグラフィー
ＨＲＭＳ        高分解能マススペクトル
ＭｅＣＮ        アセトニトリル
ＭｅＯＨ        メタノール
ｍｉｎ          分
ＭＳ            マススペクトロメトリーまたはマススペクトル
ＮＭＲ          核磁気共鳴分光法
ｒｔ            室温、すなわち１８〜３０℃、典型的には２０℃
ＴＨＦ          テトラヒドロフラン
ＴＬＣ          薄層クロマトグラフィー
ｔR             保持時間
ＵＰＬＣ        超高速液体クロマトグラフィー
ＵＶ            紫外線
【００９１】
分析的ＬＣ−ＭＳ
方法Ａ
ＵＰＬＣ−ＭＳ分析は、２.１×５０ｍｍ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ（登録商標）  ＨＳＳ  Ｔ３  １.８μｍカラムを備えたＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣシステムと正イオン化エレクトロスプレーモードで操作されるＡｃｑｕｉｔｙ  ＳＱ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒとを使用して行われた。バッファーＡについては１０ｍＭ酢酸アンモニウム水溶液中０.１％ギ酸、バッファーＢについてはアセトニトリル中０.１％ギ酸で構成されていた。１.４分間の二成分勾配（Ａ：Ｂ  ９５：５→５：９５）を流速１.２ｍＬ／分で使用し、カラム温度は６０℃であった。
【００９２】
方法Ｂ
高分解能マススペクトルを用いたＵＰＬＣ−ＭＳ分析は、２５４ｎｍでのＵＶ検出を備えたＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣシステムと正イオン化エレクトロスプレーモードで操作されるＷａｔｅｒｓ  ＬＣＴ  Ｐｒｅｍｉｅｒ  ＸＥ高分解能ＴＯＦ質量分析計とを使用して行われた。方法Ａと同じカラムならびに移動相ＡおよびＢを使用したが、より遅い勾配（４.８分間にわたってＡ：Ｂ  ９９：１→１：９９；０.７ｍＬ／分；カラム温度４０℃）を使用した。
【００９３】
分析用キラル固定相ＨＰＬＣ
キラル固定相ＨＰＬＣ分析は、ＰＤＡ検出器を備えたＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ装置と、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｘ（登録商標）  ３μｍ  Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ−２（２５０×４.６ｍｍ）カラムを装着したＷａｔｅｒｓ  ＬＣＴ  Ｐｒｅｍｉｅｒ  ＸＥ質量分析計とを使用して行われた。１０ｍＭ重炭酸アンモニウム水溶液：ＭｅＣＮ ７０:３０からなる移動相および流速１ｍＬ／分を用いるアイソクラチック条件を使用した。カラムは室温で保持した。
【００９４】
中間体
中間体１
２−[トランス−４−[(５−アミノ−２−クロロ−ピリミジン−４−イル)アミノ]シクロヘキシル]アセトニトリル
【化７】
2021528479.tif 000009
２,４−ジクロロ−５−ニトロピリミジン（５.０ｇ、２６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３０ｍＬ）中溶液を氷浴で冷却し、トランス−４−(シアノメチル)シクロヘキシルアンモニウムトリフルオロアセテート（Li, Y.-L. et al.  米国特許出願公開第２０１４０１２１１９８号）（６.５ｇ、２６ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（５.５ｍＬ、３１ｍｍｏｌ）を添加した。該混合物を０℃で２時間撹拌し、次いで、ｒｔで一夜撹拌した。揮発物を蒸発させ、残留物をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）とＮａＨＣＯ3飽和水溶液（２００ｍＬ）とに分配させた。各層を分取し、水層をＥｔＯＡｃで３回抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ4で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。残留物を酢酸（５ｍＬ）に溶解し、鉄粉（１４ｇ、 ２６０ｍｍｏｌ）を１０分間かけて少しずつ添加した。該混合物をｒｔで２時間撹拌し、その後、濾過し、揮発物を蒸発させた。残留物をクロマトグラフィー（１２０ｇプレパックドシリカゲルカラムをＤＣＭ：ＭｅＯＨ  １００：０〜５０：５０で勾配溶離した）によって精製して、次の工程で使用するのに十分に純粋な標記化合物（１.２ｇ）を得た。
ＵＰＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）：ｔR＝０.５３分、ｍ／ｚ＝２６６.１（Ｍ＋Ｈ+）。
【００９５】
実施例１
２−[トランス−４−[８−[(１Ｒ)−１−ヒドロキシエチル]−２−(メチルアミノ)プリン−９−イル]シクロヘキシル]アセトニトリル（化合物１）
【化８】
2021528479.tif 000010
【００９６】
工程１
２−[トランス−４−[２−クロロ−８−[(１Ｒ)−１−ヒドロキシエチル]プリン−９−イル]シクロヘキシル]アセトニトリル
【化９】
2021528479.tif 000011
アルゴン下のトリエチルオキソニウムテトラフルオロボラート（４.３ｇ、２３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）中溶液に(Ｒ)−ラクトアミド（２.０ｇ、２３ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液をｒｔで２時間撹拌し、次いで、中間体１（１.２ｇ、４.５ｍｍｏｌ）の無水エタノール（４０ｍＬ）中溶液に添加した。該混合物を８０℃で一夜撹拌した。完全な変換を達成するために、アルゴン下で別のトリエチルオキソニウムテトラフルオロボラート（２.６ｇ、１４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１５ｍＬ）に溶解し、(Ｒ)−ラクトアミド（１.２ｇ、１４ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液をｒｔで２時間撹拌し、上記の反応混合物に添加した。該混合物を再度８０℃で一夜撹拌し、揮発物を蒸発させ、残留物をクロマトグラフィー（８０ｇプレパックドシリカゲルカラムをＤＣＭ：ＭｅＯＨ  １００：０〜９０：１０で勾配溶離した）によって精製して、不純な生成物（１.９ｇ）を得た。これをエーテルでトリチュレートして、茶色の固体として標記化合物（３０８ｍｇ、２１％）を得た。
ＵＰＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）：ｔR＝０.５６分、ｍ／ｚ＝３２０.２（Ｍ＋Ｈ+）。
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 9.01 (s, 1H), 5.92 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 5.13 (p, J = 6.6 Hz, 1H), 4.66 (tt, J = 12.3, 3.7 Hz, 1H), 2.55 (d, J = 6.2 Hz, 2H), 2.53 - 2.38 (m, 2H), 2.02 - 1.88 (m, 4H), 1.85 - 1.74 (m, 1H), 1.59 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 1.36 - 1.25 (m, 2H)。
【００９７】
工程２
２−[トランス−４−[８−[(１Ｒ)−１−ヒドロキシエチル]−２−(メチルアミノ)プリン−９−イル]シクロヘキシル]アセトニトリル
【化１０】
2021528479.tif 000012
スクリューキャップバイアルに工程１の生成物（３００ｍｇ、０.９４ｍｍｏｌ）およびエタノール中３３％メチルアミン（５ｍＬ）を充填し、該混合物を７０℃で３時間振盪した。揮発物を蒸発させ、残留物をクロマトグラフィー（２４ｇプレパックドシリカゲルカラムをＤＣＭ：ＭｅＯＨ  １００：０〜９０：１０で勾配溶離した）で精製して、標記化合物（２００ｍｇ、６８％）を得た。
ＵＰＬＣ−ＭＳ（方法Ｂ）：ｔR＝１.７９分、ｍ／ｚ＝３１５.１８１１（Ｍ＋Ｈ+）。
分析用キラル固定相ＨＰＬＣ：ｔR＝１０.１分。他のピークは検出されなかった。(Ｓ)エナンチオマーは、ｔR＝１１.０分で予想される。実施例２を参照。
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 8.52 (s, 1H), 6.83 (br s, 1H), 5.63 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 4.95 (p, J = 6.5 Hz, 1H), 4.48 (tt, J = 12.0, 4.0 Hz, 1H), 2.82 (d, J = 4.7 Hz, 3H), 2.69 - 2.56 (m, 2H), 2.54 (d, J = 6.3 Hz, 2H), 1.95 - 1.80 (m, 4H), 1.76 - 1.67 (m, 1H), 1.53 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 1.32 - 1.21 (m, 2H)。
【００９８】
実施例２
２−[トランス−４−[８−(１−ヒドロキシエチル)−２−(メチルアミノ)プリン−９−イル]シクロヘキシル]アセトニトリル（化合物２）
【化１１】
2021528479.tif 000013
ラセミラクトアミドから出発した以外は実施例１と同様に調製した。
ＵＰＬＣ−ＭＳ（方法Ｂ）：ｔR＝１.７９分、ｍ／ｚ＝３１５.１８９４（Ｍ＋Ｈ+）。
分析用キラル固定相ＨＰＬＣ：(Ｒ)エナンチオマー  ｔR＝１０.２分；(Ｓ)エナンチオマー  ｔR＝１１.０分。エナンチオマー的に濃縮された(Ｒ)−ラクトアミドから製造された(Ｒ)エナンチオマーの試料（ｔR＝１０.１分）との比較によって、絶対配置を確立した。実施例１を参照。
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.52 (s, 1H), 6.82 (br q, J = 4.0 Hz, 1H), 4.96 (q, J = 6.5 Hz, 1H), 4.57 - 4.40 (m, 1H), 2.83 (d, J = 4.7 Hz, 3H), 2.74 - 2.56 (m, 2H), 2.54 (d, J = 6.3 Hz, 2H), 1.99 - 1.79 (m, 4H), 1.78 - 1.64 (m, 1H), 1.53 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 1.36 - 1.17 (m, 2H)。
【００９９】
実施例３
２−[トランス−４−[８−[(１Ｒ)−１−ヒドロキシエチル]−２−(トリジュウテリオメチルアミノ)プリン−９−イル]シクロヘキシル]アセトニトリル（化合物３）
【化１２】
2021528479.tif 000014
２−[トランス−４−[２−クロロ−８−[(１Ｒ)−１−ヒドロキシエチル]プリン−９−イル]シクロヘキシル]アセトニトリル（１０ｍｇ、３１μｍｏｌ）、メチル−３Ｄ−アミン塩酸塩（２２ｍｇ、３１３μｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（５６μＬ、３１３μｍｏｌ）およびイソプロパノール（０.２ｍＬ）を充填したスクリューキャップバイアルを１２０℃で一夜振盪した。酸分取ＨＰＬＣ精製後、凍結乾燥により、標記化合物を得た。
ＵＰＬＣ−ＭＳ（方法Ｂ）：ｔR＝１.７９分、ｍ／ｚ＝３１８.２１４（Ｍ＋Ｈ+）。
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 8.52 (s, 1H), 6.80 (br s, 1H), 5.64 (br s, 1H), 4.99 - 4.92 (m, 1H), 4.48 (tt, J = 12.1, 4.1 Hz, 1H), 2.71 - 2.56 (m, 2H), 2.54 (d, J = 6.3 Hz, 2H), 1.96 - 1.80 (m, 4H), 1.76 - 1.67 (m, 1H), 1.53 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 1.26 (qt, J = 4.3, 12.8 Hz, 2H)。
【０１００】
ＪＡＫキナーゼアッセイ
ヒトバキュロウイルス発現ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）１、２、３、およびチロシンキナーゼ（ＴＹＫ）２をCarna Biosciences, Incから購入した（それぞれ、＃０８−１４４、−０４５、−０４６、−１４７）。４種全ての精製酵素は触媒ドメインのみを含む。ＪＡＫ１（アミノ酸８５０−１１５４）およびＴＹＫ２（アミノ酸８７１−１１８７）はＮ末端融合ＧＳＴタグ付きで発現され、ＪＡＫ２およびＪＡＫ３はＮ末端融合Ｈｉｓタグ付きで発現される。合成ペプチドのリン酸化の阻害を、ＨＴＲＦに基づくアッセイ（ＣｉｓＢｉｏ  ＃６２ＴＫ０ＰＥＣ）で測定した。まず、Ｌａｂｃｙｔｅ  ＥＣＨＯ  ５５０液体ハンドラーを用いて、試験化合物溶液（１００％ＤＭＳＯ）７５ｎＬを白色浅型３８４ウェルプレート（ＮＵＮＣ  ＃２６４７０６）に添加した。その後、化合物希釈緩衝液（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、０.０５％ウシ血清アルブミン）１μＬおよびＴＫ溶液（キナーゼ緩衝液［ＨＴＲＦＫｉｎＥＡＳＥ  ＴＫキットからの１×酵素緩衝液、１ｍＭ  ＤＴＴ］中のＴＫ基質−ビオチン）２μＬを添加した。次いで、該ウェルにキナーゼ−ＡＴＰ混合物（キナーゼ緩衝液中で調製）５μＬを添加し、該プレートを室温で２０分間（ＪＡＫ２、３、およびＴＹＫ２）〜４０分間（ＪＡＫ１）インキュベートした。４種全てのキナーゼについて、ＡＴＰのＫmに対応する濃度のＡＴＰを用いた。緩衝液、基質、キナーゼ、およびＡＴＰの最終濃度は、ＪＡＫ１：５０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ緩衝液  ｐＨ７.０、０.０１％ＢＳＡ、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ2、１ｍＭ  ＤＴＴ、７μＭ  ＡＴＰ、５０ｎＭ  ＳＥＢ、１μＭ  ＴＫ基質−ビオチンおよび５ｎｇ  ＪＡＫ１；ＪＡＫ２：５０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ緩衝液  ｐＨ７.０、０.０１％ＢＳＡ、５ｍＭ  ＭｇＣｌ2、１ｍＭ  ＤＴＴ、４μＭ  ＡＴＰ、１μＭ  ＴＫ基質−ビオチンおよび０.１ｎｇ  ＪＡＫ２；ＪＡＫ３：５０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ緩衝液  ｐＨ７.０、０.０１％ＢＳＡ、５ｍＭ  ＭｇＣｌ2、１ｍＭ  ＤＴＴ、２μＭ  ＡＴＰ、１μＭ  ＴＫ基質−ビオチンおよび０.３ｎｇ  ＪＡＫ３；ＴＹＫ２：５０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ緩衝液  ｐＨ７.０、０.０１％ＢＳＡ、５ｍＭ  ＭｇＣｌ2、１ｍＭ  ＤＴＴ、１３μＭ  ＡＴＰ、５０ｎＭ  ＳＥＢ、１μＭ  ＴＫ基質−ビオチンおよび０.８ｎｇ  ＴＹＫ２であった。その後、検出混合物（最終濃度：５０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ緩衝液  ｐＨ７.０、０.０１％ＢＳＡ、０.８Ｍ  ＫＦ、２０ｍＭ  ＥＤＴＡ、４２ｎＭストレプトアビジン−ＸＬ６６５および１：４００  ＳＴＫ  Ａｂ  Ｃｒｙｐｔａｔｅ）４μＬを添加することによってキナーゼ反応を停止させ、該プレートを暗所で一夜インキュベートした。ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｅｎｖｉｓｉｏｎリーダーを使用して、以下のフィルターを用いてＨＴＲＦシグナルを定量した：３２０ｎｍ励起フィルター、６６５ｎｍ発光フィルター、および６１５ｎｍ第２発光フィルター。各ウェルについて比（（６６５／６１５）×１０4）を算出した。
【０１０１】
ＳＴＡＴ６アッセイ
ＳＴＡＴ６  ｂｌａ−ＲＡ１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＃Ｋ１２４３）細胞懸濁液２５μＬを、３０〜４０,０００細胞／ウェルの密度で、透明底の３８４ウェルＢｌａｃｋ  Ｖｉｅｗプレート（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  ＃６００７４６０）において、５５０ｎｇ／ｍＬのＣＤ４０リガンド（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＃ＰＨＰ００２５）を含むアッセイ培地（Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＃１１０５８−０２１）＋０.５％熱不活化ウシ胎仔血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＃１００８２−１４７）＋１％非必須アミノ酸（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＃１１１４０−０５０）＋１％ピルビン酸ナトリウム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＃１１３６０−０７０）＋１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＃１５１４０−１２２））中に播種した。該細胞プレートを、加湿した３７℃の空気／ＣＯ2（９５％／５％）のインキュベーター中で一夜インキュベートした。翌日、Ｌａｂｃｙｔｅ  Ｅｃｈｏ  ５５０液体ハンドラーを用いて、試験化合物および参照化合物の溶液１２５ｎＬを細胞プレートに移した。次いで、該プレートを、加湿した３７℃の空気／ＣＯ2（９５％／５％）のインキュベーター中で１時間インキュベートした。その後、またＬａｂｃｙｔｅ  Ｅｃｈｏ  ５５０を用いて、該プレートに組換えヒトインターロイキン４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＃ＰＨＣ００４５）を１０ｎｇ／ｍＬの最終濃度となるように添加した。次いで、該細胞を、加湿した３７℃の空気／ＣＯ2（９５％／５％）のインキュベーター中で４.５〜５時間インキュベートした。次いで、該アッセイプレートにＬｉｖｅＢＬＡｚｅｒ基質混合物（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＃Ｋ１０９５）８μＬを添加し、これを室温で一夜インキュベートした。次いで、蛍光を測定した：励起：４０５ｎｍ；発光：４６０ｎｍ（緑色チャネル）；発光：５３５ｎｍ（青色チャネル）。両発光チャネルにおいてバックグラウンドを差し引き、各ウェルについて４６０／５３５ｎｍの比を算出した。
【０１０２】
ＳＴＡＴ５アッセイ
ＳＴＡＴ５  ｉｒｆ１−ｂｌａ  ＴＦ１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＃Ｋ１２１９）細胞懸濁液２５μＬを、約１０,０００細胞／ウェルの密度で、透明底の３８４ウェルＢｌａｃｋ  Ｖｉｅｗプレート（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  ＃６００７４６０）において、アッセイ培地（Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＃１１０５８−０２１）＋０.５％熱不活化ウシ胎仔血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＃１００８２−１４７）＋１％非必須アミノ酸（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＃１１１４０−０５０）＋１％ピルビン酸ナトリウム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＃１１３６０−０７０）＋１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＃１５１４０−１２２））中に播種した。該細胞プレートを、加湿した３７℃の空気／ＣＯ2（９５％／５％）のインキュベーター中で一夜インキュベートした。翌日、Ｌａｂｃｙｔｅ  Ｅｃｈｏ  ５５０液体ハンドラーを用いて、試験化合物および参照化合物の溶液１２５ｎＬを細胞プレートに移した。次いで、該プレートを、加湿した３７℃の空気／ＣＯ2（９５％／５％）のインキュベーター中で１時間インキュベートした。その後、またＬａｂｃｙｔｅ  Ｅｃｈｏ  ５５０を用いて、該プレートに組換えヒトエリスロポエチン（ＥＰＯ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＃ＰＨＣ９６３４）を１０ｎｇ／ｍＬの最終濃度となるように添加した。次いで、該細胞を、加湿した３７℃の空気／ＣＯ2（９５％／５％）のインキュベーター中で４.５〜５時間インキュベートした。次いで、該アッセイプレートにＬｉｖｅＢＬＡｚｅｒ基質混合物（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＃Ｋ１０９５）８μＬを添加し、次いで、室温で一夜インキュベートした。次いで、蛍光を測定した：励起：４０５ｎｍ；発光：４６０ｎｍ（緑色チャネル）；発光：５３５ｎｍ（青色チャネル）。両発光チャネルにおいてバックグラウンドを差し引き、各ウェルについて４６０／５３５ｎｍの比を算出した。
【０１０３】
ＪＡＫキナーゼアッセイ、ＳＴＡＴ５およびＳＴＡＴ６アッセイにおいて本発明の化合物を試験した。結果を表１に開示する。
【０１０４】
【表１】
2021528479.tif 000015
【国際調査報告】
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