(57)【要約】  本発明は免疫療法の分野である。本発明は、ヒトＳＩＲＰａを標的とする治療および診断用途に有用な抗体を提供し、当該抗体は、Ｔ細胞への抗原の交差提示を強化する。本発明はまたＳＩＲＰａの特異的イソ型に対する、およびこれらのＳＩＲＰａのイソ型とヒトＣＤ４７との間の相互作用を破壊することが可能である、疾患の治療もしくは予防、または診断用途への使用のための抗体、および、ヒトＳＩＲＰメンバーの多様なイソ型に異なる親和力で結合する抗ヒトＳＩＲＰａ抗体を生成するおよび／または選択する方法も提供する。【選択図】図１【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗ヒトＳＩＲＰａ抗体、その抗原結合性の断片、またはその改変した抗体であって、
（ａ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含む、重鎖可変ドメインであって、
式中、
ＨＣＤＲ１は、配列番号９に示されるアミノ酸配列を含むまたはからなり、
ＨＣＤＲ２は、配列番号１０またはＳＥＱＩＤ番号１１に示されるアミノ酸配列を含むまたはからなり、
ＨＣＤＲ３は、配列番号１２もしくはＳＥＱＩＤ番号１３、またはＳＥＱＩＤ番号１４もしくはＳＥＱＩＤ番号１５に示されるアミノ酸配列を含むまたはからなる、重鎖可変ドメインと、
（ｂ）配列番号１６または配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインと、を含み、
疾患、具体的には癌の治療、または予防のための使用、または疾患、具体的には癌に対する治療的ワクチン接種のために使用され、前記抗体、その抗原結合性の断片またはその改変した抗体は、前記疾患、具体的には癌で発現した抗原の交差提示を強化し、かつ前記疾患の治療に好適なＴ細胞応答を引き出すものである、抗ヒトＳＩＲＰａ抗体、その抗原結合性の断片、またはその改変した抗体。
【請求項２】
ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１に対し特異的に結合し、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ１への結合を阻害し、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰｇへの結合は防止または阻害せず、具体的には、ヒトＳＩＲＰｇに対して特異的に結合しない、請求項１に記載の使用のための抗ヒトＳＩＲＰａ抗体、その抗原結合性の断片、またはその改変した抗体。
【請求項３】
抗ヒトＳＩＲＰａ抗体、その抗原結合性の断片、またはその改変した抗体であって、
ａ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含む、重鎖可変ドメインであって、
式中、
ＨＣＤＲ１は、配列番号９に示されるアミノ酸配列を含むまたはからなり、
ＨＣＤＲ２は、配列番号１０またはＳＥＱＩＤ番号１１に示されるアミノ酸配列を含むまたはからなり、
ＨＣＤＲ３は、配列番号１２もしくはＳＥＱＩＤ番号１３、またはＳＥＱＩＤ番号１４もしくはＳＥＱＩＤ番号１５に示されるアミノ酸配列を含むまたはからなる、重鎖可変ドメインと、
ｂ）配列番号１６または配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインと、を含み、
前記抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性の断片または抗原結合性の抗体ミメティックは、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ１への結合を阻害し、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ２への結合を防止または阻害せず、
ＳＩＲＰａ  ｖ１ポジティブである対象における疾患の予防および／または治療に使用するための、抗ヒトＳＩＲＰａ抗体、その抗原結合性の断片、またはその改変した抗体。
【請求項４】
前記重鎖可変ドメインが、配列番号１８；または配列番号１９；または配列番号２０；または配列番号２１；または配列番号２２；または配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含むまたはからなり、特に、前記重鎖可変ドメインが、配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含むまたはからなり、
前記軽鎖可変ドメインが、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含むまたはからなる、請求項１〜３のうちいずれか一項に記載の使用のための抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体、またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体。
【請求項５】
前記疾患が、癌、具体的には、炎症性癌および浸潤した骨髄系細胞を有する、具体的は浸潤した樹状細胞および／またはＭＤＳＣおよび／またはＴＡＭ細胞を有する癌、癌転移、具体的には、乳癌転移、メラノーマからなる群より選択されるか、または請求項１または４に記載の前記使用は、これらの疾患のうちの１つに対する治療的ワクチン接種のため、具体的には、メラノーマに対する治療的ワクチン接種のためである、請求項１〜４のうちいずれか一項に記載の使用のための、抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体、またはその抗原結合性の断片、またはその改変した抗体。
【請求項６】
以下の特性：
−ヒトＳＩＲＰａ  ｖ２に対し特異的に結合しない；および
−ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰｇへの結合を阻害または防止しない；特に、ヒトＳＩＲＰｇに対し特異的に結合しない；
−少なくとも１０Ｅ−９Ｍの親和性にてヒトＳＩＲＰａ  ｖ１と結合する；および
−少なくとも１つの抗原の抗原提示細胞による、ヒトＴ細胞への、具体的には、樹状細胞による、具体的にはヒトＣＤ８＋Ｔ細胞への交差提示を強化する；を有し、
かつ任意選択的に、以下の特性：
−インビボでヒトＴ細胞の活性化および／または増殖分化を阻害しない；および／または
−マクロファージの活性化を強化する；のうちの少なくとも１つを有する、請求項１〜５のうちいずれか一項に記載の使用のための、抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体、またはその抗原結合性の断片、またはその改変した抗体。
【請求項７】
前記疾患が癌であり、ヒト乳頭腫ウイルス、エプスタイン・バーウイルス、メルケル細胞ポリオーマウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、ヒトＴ細胞白血病ウイルス、ヒトヘルペスウイルス８型、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ＨＣＶ、ＨＢＣ，サイトメガロウイルスからの抗原からなる群から、またはＣＴＮＮＢ１遺伝子、ＣＡＳＰ８遺伝子、ＨＥＲ２遺伝子、ｐ５３遺伝子、ＫＲＡＳ遺伝子、ＮＲＡＳ遺伝子の抗原からなる群から誘導される一点変異抗原の群から、または腫瘍抗原、具体的には、ｒａｓ遺伝子、ＢＣＲ−ＡＢＬ腫瘍抗原、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１腫瘍抗原、メラノーマ抗原をコードする遺伝子（ＭＡＧＥ）、ＢＡＧＥ抗原、ＧＡＧＥ抗原、ｓｓｘ抗原、ｎｙ−ｅｓｏ−１抗原、ｃｙｃｌｉｎ−Ａ１腫瘍抗原、ＭＡＲＴ−１抗原、ｇｐ１００抗原、ＣＤ１９抗原、前立腺特異抗原、前立腺酸性ホスファターゼ抗原、癌胎児性抗原、αフェトプロテイン抗原、癌腫抗原１２５、ムチン１６抗原、ムチン１抗原、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素抗原、ＥＧＦＲ抗原、ＭＯＫ抗原、ＲＡＧＥ−１抗原、ＰＲＡＭＥ抗原、野生型ｐ５３抗原、発癌遺伝子ＥＲＢＢ２抗原、ｓｉａｌｙｌ−Ｔｎ腫瘍抗原、Ｗｉｌｍｓ腫瘍１抗原、メソテリン抗原、炭水化物抗原、Ｂ−カテニン抗原、ＭＵＭ−１抗原、ＣＤＫ４抗原およびＥＲＢＢ２ＩＰ抗原、具体的にはメランＡメラノーマ腫瘍関連の抗原（ＴＡＡ）からなる群から発するまたは由来の腫瘍抗原、からなる群より選択される、少なくとも１つの抗原が、前記対象に発現している、または検知されている、請求項１〜６のうちいずれか一項に記載の使用のための、抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体、またはその抗原結合性の断片、またはその改変した抗体。
【請求項８】
請求項１〜７のうちいずれか一項に記載の使用のための、抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体、またはその抗原結合性の断片、またはその改変した抗体を含み、少なくとも１つの賦形薬をさらに含む、医薬組成物。
【請求項９】
ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１に対して特異的に結合し、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ１への結合を阻害し、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ２へおよびヒトＳＩＲＰｇへの結合を防止または阻害せず、特に抗原の、抗原提示細胞、具体的には、樹状細胞による、ヒトＴ細胞、具体的には、ＣＤ８＋Ｔ細胞への交差提示を強化する、抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体またはその抗原結合性の断片または抗原結合性の抗体ミメティックまたはその改変した抗体の製造または選択における、ポリペプチドの使用、具体的には、配列番号１または配列番号４または配列番号２５からなるヒトＳＩＲＰａ  ｖ１のエピトープを含むまたはからなる抗原の使用。
【請求項１０】
抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体を調製する方法であって、前記方法は、非ヒト動物、具体的には、非ヒト哺乳動物を、請求項９で定義される少なくとも１つの抗原で、または配列番号１、配列番号４または配列番号２５からなるヒトＳＩＲＰａ  ｖ１のエピトープを含む、またはからなる少なくとも１つの抗原で免疫化すること；および具体的には、前記免疫化された非ヒト動物から得られる血清またはＢ細胞を採取して前記抗原に対する抗体を得ることを含む、方法。
【請求項１１】
さらに抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体の選択および回収工程を含み、前記選択の工程が、以下の工程：
ａ．前記抗体のヒトＳＩＲＰａ  ｖ１への結合能力、具体的には、前記抗体の請求項７に記載の抗原への結合能力を試験する工程；および／または
ｂ．前記抗体の、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ１への結合を減少するまたは阻害する能力を試験する工程；および／または
ｃ．前記抗体の、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ２への結合を防止または阻害する能力を試験する工程；および／または
ｄ．前記抗体の、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰｇへの結合を防止または阻害する能力を試験する工程；
および任意選択的に：
ｅ．前記抗体の、配列番号３のＳＩＲＰａにおける位置１３０および１３２上にそれぞれ位置する；または配列番号２４のＳＩＲＰａにおける位置１００および１０２上にそれぞれ位置する、アミノ酸残基ＤおよびＶに結合する能力を試験する工程；
ｆ．前記抗体の、ヒトＳＩＲＰａ  ｖ２への結合能力を試験する工程；および／または
ｇ．前記抗体の、ヒトＳＩＲＰｇへの結合能力を試験する工程；のうちの少なくとも１つを含み、
前記回収された化合物が、以下の特性：
１．ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１に対し特異的に結合する；
２．ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ１への結合を減少するまたは阻害する；および
３．ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰｇへの結合を減少または阻害しない；および
かつ任意選択的に、以下の特性：
４．少なくとも１０Ｅ−９Ｍの親和性にてヒトＳＩＲＰａ  ｖ１と結合する；および／または
５．前記抗体の、配列番号３のＳＩＲＰａにおける位置１３０および１３２上にそれぞれ位置する；または配列番号２４のＳＩＲＰａにおける位置１００および１０２上にそれぞれ位置する、アミノ酸残基ＤおよびＶに結合する；および／または
６．ヒトＳＩＲＰｇに対し特異的に結合しない；および／または
７．ヒトＳＩＲＰａ  ｖ２に対し特異的に結合しない、のうち少なくとも１つを有する、請求項９に記載の使用、または請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記得られた抗体が、抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体は少なくとも１Ｅ−９Ｍの親和性にてヒトＳＩＲＰａ  ｖ１に対し特異的に結合し、ヒトＳＩＲＰａ  ｖ２に対して特異的に結合せず、特に前記回収された抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体が、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ１への結合の拮抗薬である、請求項９に記載の使用、または請求項１０または１１に記載の方法。
【請求項１３】
ヒト対象における、抗ヒトＳＩＲＰａ抗体、またはその抗原結合の断片、または抗原結合性の抗体ミメティックまたはその改変した抗体を用いた治療の有効性の可能性を評価するインビトロまたはエクスビボの方法であって、より具体的には、抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体、またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体は、ヒト対象に投与されるものであり、前記方法は、対象から事前に取得した生物学的試料にＳＩＲＰａ  ｖ１が存在するかを決定することを含み、前記ＳＩＲＰａ  ｖ１は特に、請求項１〜７のうちいずれか一項で定義される抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体、請求項８に記載の、もしくは請求項９で定義されるように生成される組成物、または請求項１０もしくは１１に従って選択される化合物によって検知され、前記生物学的試料におけるＳＩＲＰａ  ｖ１の存在は前記治療が有効である可能性があることを示す、方法。
【請求項１４】
ヒト対象における、抗ヒトＳＩＲＰａ抗体、またはその抗原結合の断片、または抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体を用いた治療の有効性の可能性を評価するインビトロまたはエクスビボの方法であって、より具体的には、抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体、またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体は、ヒト対象に投与されるものであり、前記方法は、前記対象のＳＩＲＰａ対立遺伝子を決定すること、具体的には、前記対象の少なくとも１つのＳＩＲＰａ対立遺伝子が配列番号１または配列番号４または配列番号２５のアミノ酸残基をコードする核酸配列を含む場合に決定することを含み、前記対象から事前に取得した生物学的試料のＳＩＲＰａ対立遺伝子内の配列番号１または配列番号４または配列番号２５の前記アミノ酸残基をコードする核酸配列の存在は前記治療が有効である可能性があることを示し、特に、ＳＩＲＰａ対立遺伝子の決定は、ヒトＳＩＲＰａのＳＮＰ１５およびＳＮＰ１６を含む、もしくはヒトＳＩＲＰａのＳＮＰ１７を含むＳＩＲＰａ遺伝子またはＳＩＲＰａ転写物の一部、および／または配列番号１、配列番号４もしくは配列番号２５内のアミノ酸残基ＤＤＶをコードする核酸配列を含む一部を増幅させるのに好適なプライマーを使用したポリメラーゼ連鎖反応により生物学的試料で実施される、方法。
【請求項１５】
化合物の組合せであって、
（ｉ）請求項１〜７のうちいずれか一項で定義される抗体、その抗原結合性の断片、またはその改変した抗体；および／または請求項８に記載される組成物と、
（ｉｉ）少なくとも１つの抗原であって、ヒト乳頭腫ウイルス、エプスタイン・バーウイルス、メルケル細胞ポリオーマウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、ヒトＴ細胞白血病ウイルス、ヒトヘルペスウイルス８型、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ＨＣＶ、ＨＢＣ，サイトメガロウイルスからなる群から、またはＣＴＮＮＢ１遺伝子、ＣＡＳＰ８遺伝子、ＨＥＲ２遺伝子、ｐ５３遺伝子、ＫＲＡＳ遺伝子ＮＲＡＳ遺伝子の抗原、または腫瘍抗原、特に、ｒａｓ遺伝子からなる群から発するまたは誘導される腫瘍抗原、ＢＣＲ−ＡＢＬ腫瘍抗原、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１腫瘍抗原、メラノーマ抗原をコードする遺伝子（ＭＡＧＥ）、ＢＡＧＥ抗原、ＧＡＧＥ抗原、ｓｓｘ抗原、ｎｙ−ｅｓｏ−１抗原、ｃｙｃｌｉｎ−Ａ１腫瘍抗原、ＭＡＲＴ−１抗原、ｇｐ１００抗原、ＣＤ１９抗原、前立腺特異抗原、前立腺酸性ホスファターゼ抗原、癌胎児性抗原、αフェトプロテイン抗原、癌腫抗原１２５、ムチン１６抗原、ムチン１抗原、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素抗原、ＥＧＦＲ抗原、ＭＯＫ抗原、ＲＡＧＥ−１抗原、ＰＲＡＭＥ抗原、野生型ｐ５３抗原、発癌遺伝子ＥＲＢＢ２抗原、ｓｉａｌｙｌ−Ｔｎ腫瘍抗原、Ｗｉｌｍｓ腫瘍１抗原、メソテリン抗原、炭水化物抗原、Ｂ−カテニン抗原、ＭＵＭ−１抗原、ＣＤＫ４抗原およびＥＲＢＢ２ＩＰ抗原、特に、メランＡメラノーマ腫瘍関連の抗原（ＴＡＡ）、または任意の特定の変異抗原（新生抗原またはネオエピトープ）からの抗原からなる群より選択される、抗体とを含み、
疾患、具体的には癌の治療もしくは予防のための使用、または疾患、具体的には癌に対する治療的ワクチン接種のために使用され、前記抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体は、前記疾患、具体的には癌で発現する抗原の交差提示を強化し、かつ前記疾患の治療、具体的には、ＳＩＲＰａ  ｖ１ポジティブ対象内の疾患を治療するため、具体的には、ＣＤ４７が過剰発現した疾患を治療または予防するために好適なＴ細胞応答を引き出すものである、化合物の組合せ。
【請求項１６】
化合物の組合せであって、
（ｉ）請求項１〜７のうちいずれか一項で定義される抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体；および／または請求項８に記載される組成物と、
（ｉｉ）少なくとも１つの第２の治療薬剤であって、化学療法薬、放射線療法薬、免疫療法薬、細胞治療薬、抗生剤およびプロバイオティクスからなる群より、具体的には、チェックポイント・ブロッカーまたは適応免疫細胞の活性剤からなる群より選択される免疫療法薬、特に、抗−ＰＤＬ１、抗−ＰＤ１、抗−ＣＴＬＡ４、抗−ＣＤ１３７、抗−ＣＤ２、抗−ＣＤ２８、抗−ＣＤ４０、抗−ＨＶＥＭ、抗−ＢＴＬＡ、抗−ＣＤ１６０、抗−ＴＩＧＩＴ、抗−ＴＩＭ−１／３、抗−ＬＡＧ−３、抗−２Ｂ４、抗−ＶＩＳＴＡ、抗−ＯＸ４０、抗−ＣＤ４０アゴニスト、ＣＤ４０−Ｌ、ＴＬＲアゴニスト、抗−ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＩＤＯ抑制剤、腫瘍溶解性ウイルス、およびＢ−細胞受容体アゴニストからなる群より選択される第２の治療薬剤と、を含み、
疾患、具体的には、癌の治療または予防に使用するための、または疾患に対する、具体的には癌に対する、具体的には、ＳＩＲＰａ  ｖ１ポジティブ対象における、具体的には、ＣＤ４７が過剰発現した疾患を治療または予防する、治療的ワクチン接種に使用するための、化合物の組合せ。
【請求項１７】
請求項１５または１６に記載の使用のための化合物の組合せであって、前記組合せは、対象内の免疫応答を引き出すのに好適であり、特に、前記組合せは、疾患を治療するのに好適なＴ細胞応答を引き出し、前記活性化は、（ｉ）Ｔ細胞、具体的には、ＣＤ８＋Ｔ細胞を活性化すること；および／または（ｉｉ）少なくとも１つの抗原の樹状細胞による、ＣＤ８＋Ｔ細胞への交差提示を強化すること；および／または（ｉｉｉ）マクロファージ分裂、具体的には、Ｍ１マクロファージ分裂を強化すること；または（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｉｉ）を含む、化合物の組合せ。
【請求項１８】
前記疾患が、癌、具体的には、炎症性癌および浸潤した骨髄系細胞の、具体的浸潤した樹状細胞樹状細胞またはＭＤＳＣおよび／またはＴＡＭ細胞の癌、感染症、慢性炎症性疾患、自己免疫疾患、神経疾患、脳損傷、神経損傷、赤血球増加症、血色素症、精神的外傷、敗血症性ショック、慢性の感染症、具体的には、シュードモナスおよびＣＭＶ感染症、線維症、アテローム動脈硬化症、肥満、２型糖尿病、メラノーマおよび移植機能障害、具体的には、メラノーマからなる群より選択される、請求項１５〜１７のうちいずれか一項に記載される使用のための化合物の組合せ。
【請求項１９】
抗原の、抗原提示細胞具体的には、樹状細胞による、Ｔ細胞への、具体的には、ＣＤ８＋Ｔ細胞への交差提示を増加する方法であって、前記方法が、抗ヒトＳＩＲＰａ、抗体、またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体からなる群より選択される化合物を対象に投与することを含み、前記化合物が、少なくとも以下の特性：１．ヒトＳＩＲＰａ  ｖ２に対し特異的に結合しない；および
２．少なくとも１Ｅ−９Ｍの親和性にてヒトＳＩＲＰａ  ｖ１と結合する；および
３．ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ１への結合を減少するまたは阻害する；および
４．ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰｇへの結合を防止または阻害しない、を有し、
前記化合物が、任意選択的に以下の特性：
ｉ）Ｔ細胞増殖分化を阻害しない；および／または
ｉｉ）Ｔ細胞活性化を阻害しない；および／または
ｉｉｉ）マクロファージの活性化を強化する；のうちの少なくとも１つを有する、方法。
【請求項２０】
前記投与された化合物が、以下：
（ａ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含む、重鎖可変ドメインであって、
式中、
ＨＣＤＲ１は、配列番号９に示されるアミノ酸配列を含むまたはからなり、
ＨＣＤＲ２は、配列番号１０またはＳＥＱＩＤ番号１１に示されるアミノ酸配列を含むまたはからなり、
ＨＣＤＲ３は、配列番号１２もしくはＳＥＱＩＤ番号１３またはＳＥＱＩＤ番号１４もしくはＳＥＱＩＤ番号１５に示されるアミノ酸配列を含むまたはからなる、重鎖可変ドメインと、
（ｂ）配列番号１６または配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、を含む抗ヒトＳＩＲＰａ抗体、その抗原結合性の断片、またはその改変した抗体である、請求項１９に記載される抗原の交差提示を増加する方法。
【請求項２１】
ヒト対象内の、抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体またはその抗原結合性の断片、またはその改変した抗体での治療の有効性の可能性を評価する方法であって、前記方法は：
−ＳＩＲＰａ  ｖ１ポジティブであるヒト対象から事前に得た生物学的試料におけるヒトＳＩＲＰａ  ｖ１の存在を決定すること、
−請求項１〜８のうちいずれか一項で定義される抗体、その抗原結合性の断片、またはその改変した抗体；または請求項１５〜１８のうちいずれか一項に記載されるその組み合わせ；または請求項１１または１２に従い選択された化合物を治療上有効量で投与することを含む、方法。
【請求項２２】
前記生物学的試料におけるＳＩＲＰａ  ｖ１の存在は、前記ヒト対象において前記治療が有効である可能性があることを示す、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
治療される前記ヒト対象は、癌を有する、または癌になる可能性がある、請求項２１または２２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、免疫療法の分野に関するものである。本発明は、ヒトＳＩＲＰａを標的とする治療および診断用途に有用な抗体を提供し、当該抗体は、Ｔ細胞への抗原の交差提示を強化する。本発明はまたＳＩＲＰａの特異性イソ型に対する、およびこれらのＳＩＲＰａのイソ型とヒトＣＤ４７との間の相互作用を破壊することが可能である、疾患の治療もしくは予防、または診断用途への使用のための抗体を提供する。本発明は、またヒトＳＩＲＰメンバーの種々のイソ型に異なる親和力で結合する抗ＳＩＲＰａ抗体を製造および／または選択するための方法にも関する。
【背景技術】
【０００２】
適応免疫の免疫チェックポイントを標的にすることは、多数の癌と戦うことに対する大きな治療的効果を示している。マクロファージ、樹状細胞（ＤＣ）、骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）、および多形核白血球のような骨髄系細胞、または好中球上の免疫チェックポイントはいまだ十分に研究がされていないが、これらの細胞は、多くの固形腫瘍において最も多い免疫細胞種を代表するものであり、不良な転帰に関連することが多い。
【０００３】
シグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰａ、ＳＩＲＰ−ａｌｐｈａ，ＳＩＲＰα，ＣＤ１７２ａまたはＳＨＰＳ−１とも示される）は、単球、組織マクロファージのほとんどの亜集団、顆粒球、リンパ組織のＤＣサブセット、いくつかの骨髄前駆細胞上および様々なレベルの神経細胞に発現し、小脳および海馬の顆粒層などの脳のシナプスの豊富な地域において特に発現する。
【０００４】
ＳＩＲＰａは、ＳＩＲＰタンパク質に近いＳＩＲＰペア型レセプターファミリーのプロトタイプメンバーであり、ＳＩＲＰａ、ＳＩＲＰｇ（ＳＩＲＰ−ガンマ，ＳＩＲＰγ，ＣＤ１７２ｇまたはＳＩＲＰｂｅｔａ−２とも示される）およびＳＩＲＰｂ（ａｌｓｏｄｅｓｉｇｎａｔｅｄＳＩＲＰ−ベータ、ＳＩＲＰβ、ＣＤ１７２ｂとも示される）を含む。シグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）は、骨髄性（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇマクロファージ、顆粒球、骨髄樹状細胞および肥満細胞を含む）および神経細胞の細胞を構成する（Ｂａｒｃｌａｙ，Ａ．Ｎ．＆Ｂｒｏｗｎ，Ｍ．Ｈ．，ＮａｔＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌ６，４５７−６４（２００６）に要約される；国際公開第９７／０４８７２３号も参照のこと）。広く発現する膜貫通型糖タンパク質のＣＤ４７は、ＳＩＲＰａの細胞質リガンドとして機能し、ＳＩＲＰａのＮＨ２末端細胞外終端に結合する。マクロファージにより宿主細胞の貪食を抑制する役割に関するものがＳＩＲＰａの役割として文書化されている。具体的には、標的細胞に発現したＣＤ４７によるＳＩＲＰａのマクロファージへの結合が、貪食をネガティブに調節する阻害シグナルを生成する。しかしながら、より最近の研究結果で、ＳＩＲＰａ結合と媒介した追加的ポジティブシグナル効果が例証されている（１９９５）ＪＩｍｍｕｎｏｌ１５４，１８０−９１）。
【０００５】
ＳＩＲＰａをコードする遺伝子は、多形性遺伝子であり、ヒト集団にていくつかの変異体が記載されている。最も一般的なヒトＳＩＲＰａ変異体はＳＩＲＰａｖ１およびＳＩＲＰａｖ２（受入番号はそれぞれＮＰ＿５４２９７０（Ｐ７８３２４）およびＣＡＡ７１４０３）であり、ＳＩＲＰａファミリーは通常これらのサブセットに分けられる；すなわちＳＩＲＰａ  ｖ１ファミリーおよびＳＩＲＰａ  ｖ２イソ型ファミリー。
【０００６】
骨髄系細胞によって発現され、ＳＩＲＰａは遍在する受容体ＣＤ４７と相互作用し、この相互作用は先天的応答の重要な免疫チェックポイントである。ＳＩＲＰａおよびＣＤ４７間の相互作用は、宿主細胞貪食を阻害するダウンレギュレーションシグナルを提供する。ＣＤ４７はいくつかの癌細胞において広く過剰発現していることから、ＣＤ４７は、これらの細胞を有するいくつかの腫瘍内にて「ｄｏｎ’ｔ  ｅａｔ  ｍｅ」シグナルとして機能し、それによって貪食を防ぐ。癌細胞クリアランスにおけるＣＤ４７ＳＩＲＰａ相互作用の潜在的貢献が近年しっかりと研究されている。腫瘍における多数のＣＤ４７受容体が患者全体の生存と逆相関し、いくつかの癌タイプにとって有害予後因子を構成することが示されている。
【０００７】
従ってＳＩＲＰａ／ＣＤ４７経路が異なる薬学的発展に供されマクロファージ貪食を強化している。生物学的結果をもたらすための努力として、ＣＤ４７／ＳＩＲＰａ相互作用を破壊するための多様なアプローチが提案されている。これらには断片化／短縮されたＳＩＲＰａおよび／またはＣＤ４７タンパク質およびその抗体の使用を包含する。癌細胞によるＣＤ４７の過剰発現は、これらの細胞が治療抗体で被覆されている場合でも、マクロファージに耐性を与える。ＣＤ４７を標的とする薬剤を介したＳＩＲＰａ／ＣＤ４７の経路の封鎖は、マクロファージによる抗体依存性貪食作用を強化することを示している。これらの療法は、Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ（ａｎｔｉ−Ｈｅｒ２）、Ｃｅｔｕｘｉｍａｂ（ａｎｔｉ−ＥＧＦＲ）、Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ（ａｎｔｉ−Ｃｄ２０）およびＡｌｅｍｔｕｚｕｍａｂ（ａｎｔｉ−ＣＤ５２）など治療抗癌抗体を減少させることと協同することも記載されている。
【０００８】
しかしながら、ＣＤ４７薬剤は、ＣＤ４７生理学的役割に関連した血液学的な有毒性を呈することが最近では示されている。例えば、これらの抗薬剤は、または血小板減少症を引き起こし得る。さらには、ＣＤ４７はＳＩＲＰファミリーの他のメンバーと共に他の経路でも関わっている。実際、ＣＤ４７はヒトＴ細胞の表面に存在するＳＩＲＰｇとも連動する。ＳＩＲＰｇ／ＣＤ４７相互作用は細胞−細胞結合を媒介し、超抗原依存Ｔ−細胞媒介増殖分化およびＴ−細胞活性化の同時刺激を強化する（Ｐｉｃｃｉｏｅｔａｌ．，２００５）。
【０００９】
従って、ＳＩＲＰ１種のみ結合することができ、ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を破壊することができるヒトＳＩＲＰ抗体が、Ｔ細胞の増殖分化の阻害などの望まれない効果を防止するために近年開発されてきた。残念ながら、タンパク質のＳＩＲＰａファミリーの性質上、先行技術の抗体は、ＳＩＲＰａが、患者の細胞によって発現されたＳＩＲＰａタンパク質がＳＩＲＰａ  ｖ１、またはＳＩＲＰａ  ｖ２である場合にＳＩＲＰａが関係する疾患を治療するには有効的ではない可能性がある。いくつかの抗体は、ＳＩＲＰａ  ｖ１−患者を治療するのに有用であるかもしれないが、ＳＩＲＰａ  ｖ２患者を治療するための治療上の作用が半減する場合があり、その逆もしかりである。いくつかの癌の治療は、患者の表現型に深く関わっているため、各患者の細胞によって発現されたイソ型に対する抗体の必要性がある。従って、先行技術において新しくかつ向上した薬剤、高い特異性を有するＳＩＲＰａを標的とする、具体的には、抗体への必要性がいまだ存在する。係る特異的抗体を製造するための方法、これらの抗体を選択するための方法、および係る治療を受ける前に、患者がヒトＳＩＲＰａ抗体を用いた治療に反応する可能性を特定するための方法も必要とされている。
【００１０】
本分野において、抗原提示細胞（ＡＰＣ）による抗原の交差提示を強化することへの必要性もまた存在する。ＡＰＣ、具体的に、樹状細胞は、腫瘍の発生、疾患の発達、疾患の進行および療法への反応において特殊であり且つ多様な役割を担う。例として、樹状細胞は活発に腫瘍−関連抗原を取り込み、それらを処理し、Ｔ細胞に抗原ペプチドを示し、それによって腫瘍−特異性Ｔ細胞反応を誘発し維持する。樹状細胞（ＤＣ）はプロフェッショナルＡＰＣとも呼ばれる。異なる免疫エフェクター細胞と相互作用する樹状細胞は、自然的抗腫瘍免疫もサポートし得、ある特定の症例において、体液性応答もまた腫瘍の発達を阻害することが知られている。その一方で、特異的腫瘍由来およびストローマ由来因子によってＤＣが腫瘍部位に動員され、それらの成熟期、それらの分化および／またはそれらの機能を害し得、従って、不十分な腫瘍免疫応答の形成、または樹状細胞−媒介耐性および免疫抑制の発達を引き起こす。腫瘍環境でのＤＣ−刺激およびＤＣ−抑圧／分極化因子並びにＤＣ変調の仕組みを特定することは、ＤＣベースのワクチンを設計するために、かつ癌を有する患者の臨床的に関連する抗腫瘍免疫を維持させる免疫不全のレジデントＤＣを回収するために重要である。樹状細胞ＳＩＲＰａネガティブは、マウスおよびヒトの抗原の交差提示をするために最も有力なＡＰＣであると記載されている。樹状細胞ＳＩＲＰａポジティブは、交差提示では最も効果が薄いことが知られている（Ｍｅｒａｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；Ｎｉｅｒｋｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；Ｓｅｇｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）
【００１１】
癌細胞が、非同義の変異によって生成される新生抗原を含む、腫瘍抗原を発現するが、抗原提示には貧しい。癌を有する患者における臨床的に関連する抗腫瘍免疫の維持の役割を有する免疫不全のレジデント樹状細胞の回収は、考慮すべき重要な治療アイテムである。特異的癌に存在する腫瘍抗原、または変異した抗原と抗体との交差提示を強化することは、癌を含むいくつかの疾患の治療、または予防において主に求められていることである。ＣＤ４７／ＳＩＲＰａシグナル経路が、Ｔ細胞への抗原の交差提示の調節について求められていることであり得る（Ｃｒｉｓｃｉｔｉｅｌｌｏ，２０１２；Ｉｌｙａｓ  ａｎｄ  Ｙａｎｇ，２０１５；Ｖｉｇｎｅｒｏｎ，２０１５）。
【００１２】
抗原提示における欠陥は、主な癌の免疫逃避機構を表し、抗原提示のダウンレギュレーション／損失は主な癌の免疫逃避機構を表す（Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｐａｕｌｅｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１７）。従って、使用されたときに抗原の交差提示を強化させる生成物が必要とされている。
【００１３】
ＰＣＴ／ＥＰ／２０１７／０５９０７１は、ＳＩＲＰｇおよびＣＤ４７間の相互作用に影響を与えることなく、特にＳＩＲＰａおよびＣＤ４７間の相互作用を減少させることが可能な新しいＳＩＲＰａ抗体を記載している。国際公開第２０１３／０５６３５２号は、ＳＩＲＰａ  ｖ１およびｖ２のバインダー並びにＳＩＲＰｂおよびＳＩＲＰｇのネガティブを選択するために使用されるライブラリーＦと呼ばれるファージ提示ライブラリーから、抗ＳＩＲＰａ抗体（ＳＩＲＰ２９）を選択することが記載されている。そこで開示されている抗体は集団における両方の変異体を認識することが可能である。また、本発明の発明者らは、ＳＩＲＰ２９抗体は事実ＳＩＲＰｇを結合し、ＳＩＲＰｇ−ＣＤ４７の相互作用を破壊することが可能であることを示した。
【００１４】
国際公開第２０１５／１３８６００号は、ＳＩＲＰａ抗体に関連した組成物および方法を提供している。本開示での抗体は、ヒトＳＩＲＰａに結合し、食細胞上に発現したＳＩＲＰａと目的の標的細胞上に発現したＣＤ４７との相互作用をブロックすることができる。対象の抗体は多様な治療方法で重宝される。いくつかの症例では、ＳＩＲＰａ抗体はＳＩＲＰａに結合することができるが、ＳＩＲＰａを発現している細胞でじゃＳＩＲＰａシグナルを刺激しない。さらには、そこに記載された抗体は、ＳＩＲＰｇに結合することができ、ＣＤ４７およびＳＩＲＰｇ間の相互作用をブロックする。
【００１５】
従って、先行技術にて記載される抗体は、ＳＩＲＰファミリーの多様なメンバー間の弁別能力が欠けており、具体的には複数の疾患を予防または治療するために使用されるより特異的抗体が必要とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１６】
【特許文献１】国際公開第９７／０４８７２３号
【特許文献２】ＰＣＴ／ＥＰ／２０１７／０５９０７１
【特許文献３】国際公開第２０１３／０５６３５２号
【特許文献４】国際公開第２０１５／１３８６００号
【非特許文献】
【００１７】
【非特許文献１】Ｂａｒｃｌａｙ，Ａ．Ｎ．＆Ｂｒｏｗｎ，Ｍ．Ｈ．，ＮａｔＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌ６，４５７−６４（２００６）
【非特許文献２】（１９９５）ＪＩｍｍｕｎｏｌ１５４，１８０−９１
【非特許文献３】Ｐｉｃｃｉｏｅｔａｌ．，２００５
【非特許文献４】Ｍｅｒａｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３
【非特許文献５】Ｎｉｅｒｋｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５
【非特許文献６】Ｓｅｇｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５
【非特許文献７】Ｃｒｉｓｃｉｔｉｅｌｌｏ，２０１２
【非特許文献８】Ｉｌｙａｓ  ａｎｄ  Ｙａｎｇ，２０１５
【非特許文献９】Ｖｉｇｎｅｒｏｎ，２０１５
【非特許文献１０】Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｐａｕｌｅｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
一態様において、患者がＳＩＲＰａ  ｖ１−ポジティブ（すなわち、ＳＩＲＰａ対立遺伝子のホモ接合（ｖ１／ｖ１）またはＳＩＲＰａ対立遺伝子のヘテロ接合（ｖ１／ｖ２）のどちらか）で治療を受けている、状態の治療に使用される、抗ヒトＳＩＲＰａ抗体、またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体が提供される。
【課題を解決するための手段】
【００１９】
一特定の実施形態では、抗ヒトＳＩＲＰａ抗体、またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体であって、
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメインであって、
式中、
ＨＣＤＲ１は、配列番号９に示されるアミノ酸配列を含む、またはからなり、
ＨＣＤＲ２は、配列番号１０または配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含む、またはからなり、具体的には、ＨＣＤＲ２は、配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含む、またはからなり、
ＨＣＤＲ３は、配列番号１２または配列番号１３または配列番号１に示され１４、または配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含む、またはからなり；具体的には、ＨＣＤＲ３は、配列番号１３、または配列番号１４、または配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含む、またはからなり、具体的には、ＨＣＤＲ３は、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含む、またはからなる、重鎖可変ドメインと、
軽鎖可変ドメインであって配列番号１６および配列番号１７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、またはからなり；具体的には、軽鎖可変ドメイン配列番号１７のアミノ酸配列を含む、またはからなる軽鎖可変ドメインと、を含み、
抗ヒトＳＩＲＰａ抗体、またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティックが、ヒトＣＤ４７がヒトＳＩＲＰａ  ｖ１に結合するのを阻害し、ヒトＣＤ４７がヒトＳＩＲＰａ  ｖ２に結合するのを防止または阻害せず；対象のＳＩＲＰａ  ｖ１ポジティブである疾患の予防および／または治療に使用するための、抗ヒトＳＩＲＰａ抗体、またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体が提供される。
【００２０】
さらなる実施形態において、抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体であって、
ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１および／またはヒトＳＩＲＰａ  ｖ２に特異的に結合し、具体的には、ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１およびヒトＳＩＲＰａ  ｖ２に結合し、かつヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ１および／またはヒトＳＩＲＰａ  ｖ２への結合をそれぞれ阻害し、具体的には、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ１およびヒトＳＩＲＰａ  ｖ２への結合を阻害し；
ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰｇへの結合は防止または阻害せず；具体的には、ヒトＳＩＲＰｇへ特異的に結合せず；
疾患、具体的には癌の治療、または予防のための使用、または疾患、具体的には癌に対する治療的ワクチン接種のために使用され、抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体は、当該疾患、具体的には、癌で発現した抗原の交差提示を強化し、かつ当該疾患の治療に好適なＴ細胞応答を引き出すものである、抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティック抗体ミメティック、または改変した抗体もまた提供される。
【００２１】
ある特定の実施形態において、本発明による使用のための抗体その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体は、特異的にヒトＳＩＲＰａ  ｖ１へ結合し、ヒトＣＤ４７のＳＩＲＰａ  ｖ１への結合を阻害する。そのような、本発明による使用のための、抗体その抗原結合性の断片抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体は、疾患、具体的には癌の治療、もしくは予防、または疾患特に、癌に対する治療的ワクチン接種での使用のために特に好適である。
【００２２】
本発明は、抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体であって、
ＨＣＤＲ１，ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含む、重鎖可変ドメインであって、
式中、
ＨＣＤＲ１は、配列番号９に示されるアミノ酸配列を含む、またはからなり、
ＨＣＤＲ２は、配列番号１０または配列番号：１１に示されるアミノ酸配列を含む、またはからなり、
具体的にはＨＣＤＲ２は、配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含む、またはからなり；ＨＣＤＲ３は、配列番号１２、または配列番号１３、または配列番号１４、または配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含む、またはからなり；具体的にはＨＣＤＲ３は、配列番号１３、または配列番号１４、または配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含む、またはからなり；具体的にはＨＣＤＲ３は、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含む、またはからなる、重鎖可変ドメインと、
軽鎖可変ドメインであって、配列番号１６および配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含む、またはからなり；具体的には軽鎖可変ドメインは配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含む、またはからなる軽鎖可変ドメインと、を含み、
抗原提示細胞によって、特に、樹状細胞よって抗原、具体的には癌抗原の、ヒトＴ細胞、特に、ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞への交差提示を強化し、
疾患、具体的には癌の治療、または予防のための使用、または疾患、具体的には癌に対する治療的ワクチン接種のために使用され、抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体は、当該疾患、具体的には癌で発現した抗原の交差提示を強化し、かつ当該疾患の治療に好適なＴ細胞応答を引き出すものである、抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体もまた提供される。
【００２３】
本発明のある特定の実施形態において、疾患、具体的には、本明細書に記載される特異的疾患のための予防および／または治療における使用のための抗体、またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体は、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２および配列番号２３からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、またはからなり；具体的には、重鎖可変ドメインは、配列番号２０のアミノ酸配列を含む、またはからなる。
【００２４】
「抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体」は、ＳＩＲＰａ  ｖ１への明らかな結合親和性を呈し、ヒトＳＩＲＰａ  ｖ２および／またはヒトＳＩＲＰｇへの明らかな結合親和性は呈さない抗体であり、結合親和性は、各症例において、限定されないが、Ｂｉａｃｏｒｅ解析、Ｂｌｉｔｚ解析、ＥＬＩＳＡアッセイまたはＳｃａｔｃｈａｒｄプロット等の当分野で公知の方法によって検出可能である。「抗ＳＩＲＰａ  ｖ１抗体」は、ＳＩＲＰａ  ｖ１への明らかな結合親和性を呈する抗体と定義され得、ヒトＣＤ４７およびヒトＳＩＲＰａ  ｖ１間の相互作用をブロックするが、ヒトＣＤ４７およびヒトＳＩＲＰａ  ｖ２間の相互作用はブロックしない、および好ましい実施形態において、ヒトＣＤ４７およびヒトＳＩＲＰｇ間の相互作用をブロックしない。「相互作用をブロックする」とは、抗体がＣＤ４７／ＳＩＲＰａ相互作用において拮抗作用を有すると理解されるべきである。ネガティブフォームで使用されるという用語は、ＣＤ４７／ＳＩＲＰａ  ｖ２相互作用に拮抗作用を有さない抗体を意味し、好ましい実施形態においては。さらにＣＤ４７／ＳＩＲＰｇ相互作用に拮抗作用を有さない。
【００２５】
本明細書において使用される場合、「抗体」という用語は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組み換え抗体、キメラ抗体およびヒト化抗体など、あらゆる種の抗体を意味する。
【００２６】
本発明の抗体は、モノクローナルおよびポリクローナル抗体を含む。本明細書において使用される場合、「モノクローナル抗体」とは、異なるアミノ酸配列の抗体の混合物を含有する「ポリクローナル」抗体の調製に対し、共通の重鎖および共通の軽鎖アミノ酸配列を共有する抗体の抗体分子の調製を意味することを意図している。モノクローナル抗体は、ファージ、細菌、イースト、またはリボソーム表示のようないくつかの既知の技術およびハイブリドーマ由来抗体によって例示される古典的方法によって生成することができる。従って、「モノクローナル」という用語は、１つの核酸クローンから誘導される全ての抗体を意味するのに使用される。
【００２７】
本発明の抗体は、組み換え抗体を含む。本明細書において使用される場合、「組み換え抗体」という用語は、宿主細胞に遺伝子導入された組み換え発現ベクターを使用して発現された抗体などの組み換えを用いることによって製造、発現、生成、または分離された抗体；組み換えコンビナトリアル抗体ライブラリーから分離された抗体；ヒト免疫グロブリン遺伝子によりトランスジェニック動物（例：マウス）から分離された抗体；、または特異的免疫グロブリン遺伝子配列（ヒト免疫グロブリン遺伝子配列）が他のＤＮＡ配列に組み立てられるあらゆる他の方法で製造、発現、生成、または分離された抗体を意味する。組み換え抗体は、例えば、キメラおよびヒト化抗体を含む。
【００２８】
本発明の抗体は、キメラ抗体を含む。本明細書において使用される場合、「キメラ抗体」は、マウスなどの哺乳類種の生殖系列から誘導された可変ドメインの配列が、ヒトなどの他の哺乳類種の生殖系列から誘導された定常ドメインの配列にグラフトされている抗体を意味する。
【００２９】
本発明の抗体は、ヒト化抗体を含む。本明細書において使用される場合、「ヒト化抗体」は、マウスなどの他の哺乳類種の生殖系列から誘導されたＣＤＲの配列が、ヒトフレームワーク配列にグラフトされている抗体を意味する。
【００３０】
本明細書において使用される場合、「抗体の抗原結合性の断片」は、抗体の一部分、すなわち、ＳＩＲＰａｖに可能であればその天然の形で、抗原結合が可能であることを呈する、本発明の抗体の構造の一部に対応する分子を意味し、対応する４本の鎖の抗原結合の特異性と比べて、そのような断片は同じまたは実質的に同じである抗原結合の特異性を該抗原に対し特に呈する。有利に、抗原結合の断片は対応する４本の鎖の抗体と同様の結合親和性を有する。しかしながら、対応する４本の鎖に対し、低減された結合親和性を有する抗原結合の断片もまた本発明に包含される。抗原結合の能力は抗体および標的断片間の親和性を計測することによって特定することができる。これらの抗原結合の断片は、抗体の「機能的断片」もまた示す。
【００３１】
抗体の抗原結合の断片は、指定のＣＤＲ（相補性決定領域）、またはその一部が抗原の認識部位、すなわち、ＳＩＲＰａ  ｖ１の細胞外ドメインを包囲し、それによって抗原認識特異性を定義する、高頻度可変性のドメインを含む断片である。
【００３２】
４本の鎖免疫グロブリンの各軽鎖および重鎖可変ドメイン（それぞれＶＬおよびＶＨ）は、３つのＣＤＲ、指定のＶＬ−ＣＤＲ１（、またはＬＣＤＲ１），ＶＬ−ＣＤＲ２（、またはＬＣＤＲ２），ＶＬ−ＣＤＲ３（またはＬＣＤＲ３）、およびＶＨ−ＣＤＲ１（またはＨＣＤＲ１）、ＶＨ−ＣＤＲ２（またはＨＣＤＲ２）、ＶＨ−ＣＤＲ３（またはＨＣＤＲ３）をそれぞれ有する。
【００３３】
当業者は、参照番号付けシステム、ＫＡＢＡＴ番号付けシステムの参照、またはＩＭＧＴ「ｃｏｌｌｉｅｒ  ｄｅ  ｐｅｒｌｅ」アルゴリズムの適用によることを含む、記載される標準的な定義を参照することにより抗体の多様な領域／ドメインの位置を特定することが可能である。この点について、本発明の配列の定義について、領域／ドメインの区切りは参照システムによってそれぞれ異なることに留意されたい。従って、本発明で定義される領域／ドメインは、長さまたは対象の配列の位置が、約＋／−１０％にて、抗体の可変ドメインの全長配列内で変形を示す配列を包含する。
【００３４】
４本の鎖免疫グロブリンの構造に基づいて、したがって、抗原結合の断片は、利用可能なデータベースおよび先行技術における抗体の配列と比較することによって、特に、これらの配列内の機機能ドメインの位置を比較することによって定義することがき、特にＩｇＧｓ、具体的には哺乳類のＩｇＧｓの抗体の多様なクラスのフレームワークおよび定常ドメインの位置は明確であることが留意される。そのような比較は抗体の３次元構造に関するデータも必要とする。
【００３５】
本発明の特定の実施形態を例証する目的において、可変ドメインを含有する抗体の抗原結合断片は、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２を含む該抗体のＣＤＲを含む。抗体のＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片は疎水性相互作用によって会合される；ｄｓＦｖ断片では、ＶＨ：ＶＬヘテロ二量体はジスルフィド結合によって安定化される；ｓｃＦｖ断片では、ＶＬおよびＶＨドメインは、可撓性ペプチドリンカ―を介してお互いが結合し、単鎖タンパク質を形成する。Ｆａｂ断片は抗体のパパイン消化によって得ることのできる単量体の断片であり；Ｌ鎖全体、およびＨ鎖のＶＨ−ＣＨ１断片を含み、ジスルフィド結合を通じて結合されている。Ｆ（ａｂ’）２断片は、ヒンジジスルフィドより下で抗体をペプシン処理することによって製造することができる；２つのＦａｂ’断片、および追加的に免疫グロブリン分子のヒンジ領域の一部分を含む。Ｆａｂ’断片は、ヒンジ領域でジスルフィド結合を切断することによってＦ（ａｂ’）２断片から得ることができる。Ｆ（ａｂ’）２断片は、天然免疫グロブリン分子のように二価であり、すなわち２つの抗原結合部位を含む；一方で、Ｆｖ（Ｆａｂの可変部分を構成するＶＨＶＬダイマー）、ｓＦｖ、ｓｃＦｖ、ＦａｂおよびＦａｂ’断片は一価であり、すなわち、１つの抗原結合性部位を含む。これらの本発明の基本的な抗原結合の断片を組み合わせて、二重特異性抗体、三重特異性抗体、または四重特異性抗体などの多価抗原結合の断片を得ることができる。これらの多価抗原結合の断片もまた本発明の一部である。
【００３６】
本明細書において使用される場合、改変した抗体という用語は、「二重特異性」の抗体を含み、第１の抗原に特異的である、少なくとも１つの領域（すなわち、第１の抗体の可変領域から誘導される）、および第２の抗原に特異的である、少なくとも第２の領域（すなわち。第２の抗体の可変領域から誘導される）を所有していることによって２つの異なる抗原を認識する抗体を意味する。二重特異性抗体は、２つの標的抗原に対して特異的に結合することから多特異性の抗体の一種である。２つ以上の異なる抗原を認識する多特異性の抗体は、組み換えＤＮＡ方法によって製造することができる、または任意の便利な方法により化学的に製造された抗体を含むが、これに限定されない。二重特異性抗体は全ての抗体、または抗体の共役、または２つの異なる抗原を認識することができる抗体のポリマー形態を含む。二重特異性抗体は、二価の特性を保持するために還元および改質された抗体、並びにＢｉＭＥ（二重特異性マクロファージ増強）、ＢｉＴＥ（二重特異性Ｔ細胞誘導）、ＤＡＲＴ（デュアルアフィニティリターゲティング）、ＤＮＬ（ドック−アンド−ロック）、ＤＶＤ−Ｉｇ（二重可変ドメイン免疫グロブリン）、ＨＡＳ（ヒト血清アルブミン）、ｋｉｈ（ノブイントゥホール）などの各抗原に複数の抗原認識部位を有することができるように化学的に結合された抗体を含む。
【００３７】
抗原結合性の抗体ミメティックは、特異的に結合する抗原である有機的化合物であるが、構造的に抗体に関連していない。それらは通常は人工的ペプチドであるか、または約３〜２０ｋＤａのモル質量を有する小さなタンパク質である。核酸および小さな分子は時に抗体ミメティックともみなされるが、これらから構成された人工的抗体、抗体断片および融合タンパク質ではない。一般的な抗体の利点は、良好な可溶性、組織の穿刺、熱および酵素に対する安定性並びに比較的生産コストが低いことである。抗体ミメティックは治療および診断薬として開発されている。抗原結合性の抗体ミメティックは、また、ａｆｆｉｂｏｄｙ、ａｆｆｉｌｉｎ、ａｆｆｉｍｅｒ、ａｆｆｉｔｉｎ、ＤＡＲＰｉｎおよびＭｏｎｏｂｏｄｙを含む群より選択され得る。
【００３８】
抗原結合性の抗体ミメティックは、より好ましくは、ａｆｆｉｔｉｎおよびａｎｔｉｃａｌｉｎを含む群より選択される。ａｆｆｉｔｉｎは、選択的に抗原を結合することができる人工的タンパク質である。古細菌のドメインに所属される微生物スルホロブス・アシドカルダリウスに見つけることができるＤＮＡ結合タンパク質Ｓａｃ７ｄから構造的に誘導される。例えばＳａｃ７ｄの結合面の１１残留物のランダムな置換に対応して変異体を生成することによって、Ｓａｃ７ｄの結合の表面上のアミノ酸をランダム化することによって、ａｆｆｉｔｉｎライブラリーが生成され得、得られたタンパク質ライブラリーをリボソームディスプレイに供し、親和性が、ペプチド、タンパク質、ウイルスおよび細菌などの種々の標的の方向に向けられる。ａｆｆｉｔｉｎは抗体ミメティックであり、バイオテクノロジーにおけるツールとして開発されている。種々の酵素の特異的阻害剤としても使用されている（Ｋｒｅｈｅｎｂｒｉｎｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３８３：５，２００８）。当業者は、当該技術分野において周知であり、具体的には国際特許出願第２００８０６８６３７号および上で参照した出版物で開示された、具体的には本明細書で開示されるように、抗原を使用したファージディスプレイおよび／またはリボソームディスプレイライブラリー並びにそのスクリーニングの方法を使用して、必要な結合特性を有するａｆｆｉｔｉｎを容易に作製することができる。Ａｎｔｉｃａｌｉｎａｒｅは、、タンパク質または小さい分子のどちらかへの抗原に結合することができる、人工的タンパク質である。天然結合タンパク質のファミリーであるヒトリポカリンから誘導される抗体ミメティックである。ａｎｔｉｃａｌｉｎは約８倍小さく、約１８０のサイズを有するアミノ酸、および約２０ｋＤａの質量を有する（Ｓｋｅｒｒａ，ＦｅｂｓＪ．，２７５：１１，２００８）。Ａｎｔｉｃａｌｉｎファージディスプレイライブラリーが生成されており、具体的には特異的結合特性を有するａｎｔｉｃａｌｉｎのスクリーニングおよび選択ができる。当業者は、当該技術分野において周知であり、具体的には欧州特許第１２７０７２５Ｂ１号、米国特許第８５３６３０７Ｂ２号、Ｓｃｈｌｅｈｕｂｅｒ  ａｎｄ  Ｓｋｅｒｒａ，Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｃｈｅｍ．，９６：２−３，２００２、および上で参照した出版物で開示された、具体的には本明細書で開示されるように、抗原を使用したファージディスプレイおよび／またはリボソームディスプレイライブラリー並びにそのスクリーニングの方法を使用して、必要な結合特性を有するａｎｔｉｃａｌｉｎを容易に作製することができる。ａｎｔｉｃａｌｉｎおよびａｆｆｉｔｉｎは両方とも、細菌発現系を含む多くの発現系にて作製され得る。従って、本発明は、具体的には全て本発明に記載されるミメティックとして企図される、ＳＩＲＰａ  ｖ１への結合能力、ヒトＣＤ４７のＳＩＲＰａ  ｖ１への結合の阻害、ヒトＳＩＲＰａ  ｖ２への非結合特性、および／またはヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ２への結合を防止または阻害する能力の欠如、に関する本明細書に記載される抗体の特徴を有する、ａｆｆｉｔｉｎ、ａｎｔｉｃａｌｉｎおよび他の同様な抗体ミメティックの使用を含む。
【００３９】
従って、本発明の二重特異性抗体は、ＳＩＲＰａ  ｖ１およびヒトＳＩＲＰａ  ｖ２、ヒトＳＩＲＰｇのどちらにも存在しない第２の抗原を対象とする。本発明による任意の実施形態において、改変された抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体は、二重特異性であり得、改変された抗体、または改変されたその抗原結合性の断片、または改変された抗原結合性の抗体ミメティック、または二重特異性のキメラ分子であり得る。
【００４０】
本明細書において使用される場合、「改変した抗体」は、また抗体、またはその抗原結合性の断片を含む分子に対応し得、当該モノクローナル抗体、またはその機能的断片は機能的に異なる分子に会合する。本発明の改変した抗体は、安定性および／または抗体、または機能的断片の半減期を向上するための、融合キメラタンパク質、または共有結合、グラフト結合、化学的もしくは生物的グループとの、またはＰＥＧポリマー、または他の保護基もしくはインビボでのプロテアーゼ分裂を保護するのに好適な分子などの分子との化学結合を含む任意の好適な連結形態から得られる結合体のいずれかであり得る。同様の技術を用いて、特に化学結合、またはグラフト結合によって、改変した抗体は、生物学的活性分子を用いて調製することができ、当該活性分子は、例えば毒素類、特に、シュードモナス属毒素Ａから選択されるものであり、植物毒性リシンもしくはサポリン毒素のＡ−鎖であり、具体的には治療有効成分であり、抗体もしくは機能的断片を特異的細胞または組織に標的にするのに好適なベクター（特にタンパク質ベクターを含む）であり、または抗体の断片が使用された場合は特に、標識もしくはリンカーに関連し得る。抗体、または機能的断片のペグ化は、治療用途において特に、活性物質をホストへ送達する条件を向上することから格別の関心のある実施形態である。ペグ化は抗体、または機能的断片の認識部位との干渉を防止するために部位特異的であることができ、高分子量ＰＥＧと実行することができる。ペグ化は、抗体、または機能的断片の配列に存在する遊離システイン残基を通じて、または抗体または機能的断片のアミノ配列に遊離システイン残基を追加することで達成することができる。本発明によると、「抗体」という用語が使用された場合、それは抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体を意味する。
【００４１】
一実施形態において、抗ＳＩＲＰａ  ｖ１抗体、またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティックは改変されている。
【００４２】
本発明のある特定の実施形態において、ＳＩＲＰａ  ｖ１ポジティブである対象における疾患の予防および／または治療における使用のための抗体、またはその抗原結合断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体は、配列番号１８；配列番号１９；配列番号２０；配列番号２１、配列番号２２；および配列番号２３からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、またはからなる重鎖可変ドメイン；具体的には配列番号２０のアミノ酸配列を含む、またはからなる重鎖可変ドメインを含む。
【００４３】
本発明のある特定の実施形態において、ＳＩＲＰａ  ｖ１ポジティブであるヒト対象における、本明細書で記載される疾患の予防および／または治療における使用のための抗体、またはその抗原結合断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体は、
配列番号２０のアミノ酸配列を含む、またはからなる重鎖可変ドメイン、
配列番号２０のアミノ酸配列を含む、またはからなる軽鎖可変ドメイン、を含む、またはからなる。
【００４４】
従って、本発明は、ＳＩＲＰａ  ｖ１ポジティブ対象における疾患の治療、または予防における使用のための、特異的にヒトＳＩＲＰａ  ｖ１に結合し、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ１への結合を阻害し、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ２への結合を防止、または阻害しない抗体、またはその抗原結合性の断片にも関する。抗体、またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体は、ＳＩＲＰａ  ｖ１に特異的に結合し、ＳＩＲＰａ  ｖ１およびＣＤ４７間の相互作用を拮抗する。
【００４５】
「特異的に結合」という表現、またはあらゆる同等の用語は、抗体、またはその抗原結合性断片の、ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１との相互作用する、およびヒトＳＩＲＰａ  ｖ１へ結合する一方で、他の分子、具体的にはＳＩＲＰａ  ｖ２、具体的にはヒトＳＩＲＰｇ、具体的にはヒトＳＩＲＰａ  ｖ２およびＳＩＲＰｇに結合しない、または著しく弱い結合親和性で結合する能力を指す。結合性および特異性は、ＳＰＲ（表面プラズモン共鳴法、例Ｂｉａｃｏｒｅ）、ＥＬＩＳＡまたはウエスタンブロット解析法によって評価することができる。ある特定の実施形態において、抗体、またはその抗原結合性の断片、またはキメラ分子は、該抗体、または抗原結合性の抗体ミメティック標的を含み、少なくとも１０Ｅ−９Ｍ、具体的には少なくともｔｈａｎ１０Ｅ−１０Ｍの親和性（ＫＤ）を有する分離タンパク質としてＳＩＲＰａ  ｖ１に結合する。本発明に記載される使用のための抗体は、特にＢｌｉｔｚ解析による、ＳＩＲＰａ  ｖ１に対して１０Ｅ−８Ｍ〜１０Ｅ−１１Ｍを含む、好ましくは、１０Ｅ−９Ｍ〜１０Ｅ−１０Ｍ含むＫＤ値を呈する。
【００４６】
疾患の予防および／または治療における使用のための抗体は、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ２への結合を防止または阻害しない。言い換えると、この抗体、またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体は、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ１への結合とは反対に、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ２への結合に顕著な作用を有さない。具体的には、抗体、または抗原結合の断片は、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ２への結合を、結合アッセイでは、ネガティブ対照分子と比較して７０％超、好ましくは、６０％、好ましくは、５０％、および最も好ましくは、２５％防止または阻害しない。ＣＤ４７およびＳＩＲＰｖ２（またはＳＩＲＰｇ）間の結合は、本発明の実施例にて開示される方法、具体的には、実施例６に開示されるＢｌｉｔｚ法に従って評価することができるが、ＳＩＲＰａ  ｖ２および／またはＳＩＲＰｇを発現している細胞を用いてＢｉａｃｏｒｅ解析、ＥＬＩＳＡアッセイ、またはフローサイトメトリーによっても評価することができる。結合は、ＣＤ４７のＳＩＲＰａ  ｖ２（またはＳＩＲＰｇ）に対する親和性に対応するＫＤ値が１Ｅ−７Ｍを超えると防止したまたは阻害したと考えられる。
【００４７】
結合の予防または阻害は、当業者にとって周知である多様な方法によって決定され得、これらの方法としてＢｉａｃｏｒｅ解析、Ｂｌｉｔｚ解析およびＳｃａｔｃｈａｒｄプロットが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４８】
ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ１への結合の減少または阻害とは、抗体、またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体がＳＩＲＰａ  ｖ１およびＣＤ４７間の相互作用を減少させることを意味し、すなわち、抗体またはその抗原結合性の断片が、部分的にまたは全体的にヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ１への結合を阻害する、または言い換えると、ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１に対して特異的に結合し、ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１およびヒトＣＤ４７間の相互作用を拮抗する。具体的には、抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体またはその抗原結合性の断片は、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ１への結合を、結合アッセイにてネガティブ対照分子と比較して、少なくとも５０％、好ましくは６０％、より好ましくは７０％、より好ましくは８０％、最好ましくは９０％、特定の実施形態においては１００％減少するまたは阻害する能力を有する。具体的には、抗ＳＩＲＰａ  ｖ１抗体またはその抗原結合性の断片は、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ１への結合を、結合アッセイにてネガティブ対照分子と比較して、５０％〜１００％、より好ましくは６０％〜９０％低減または阻害する能力を有する。
【００４９】
本発明によると、もし、抗体（またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体）が、具体的にはＢｌｉｔｚアッセイによるＳＩＲＰａ  ｖ２結合競合アッセイにおいて、ヒトＣＤ４７のＫＤ値を５ｌｏｇよりも上、好ましくは、４ｌｏｇより上ではない、より好ましくは、３ｌｏｇより上ではない、より好ましくは、２ｌｏｇより上ではない、最も好ましくは、１ｌｏｇよりも上ではない増加を引き起こさなければ、抗体（またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体）は、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ２への結合を防止または阻害しないと考えられる。代替的に、もし抗体または抗原結合の断片または抗原結合性の抗体ミメティックが、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ２への結合を、結合アッセイにてネガティブ対照分子と比較して、２５％超低減しなければ、抗体またはその抗原結合性の断片または抗原結合性の抗体ミメティックは、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ２への結合を防止または阻害しないと考えられる。
【００５０】
本発明のある特定の実施形態において、本発明に記載される使用のための抗体またはその抗原結合性の断片は、ＳＩＲＰａ  ｖ２へ移行結合を示し得るが、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ２への結合を防止または阻害しない。本発明に記載される使用のための抗体、またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体は、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ１への結合を有意に阻害する、減少させる、拮抗する、または競合するが、その一方で、同じ抗体、その抗原結合性の断片または抗原結合性の抗体ミメティックは、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ２への結合を有意に阻害しない、減少させない、拮抗しない、または競合しない。拮抗作用は、本出願の実施例にて例証する方法を使用して特定され得る。
【００５１】
ＳＩＲＰａ  ｖ１ポジティブ対象は、少なくとも１つのＳＩＲＰａ  ｖ１対立遺伝子を含むヒトであり、すなわちＳＩＲＰａ  ｖ１（ＳＩＲＰａ  ｖ１およびＳＩＲＰａ  ｖ２対立遺伝子を含む）にヘテロ接合するか、またはＳＩＲＰａ  ｖ１（２つのＳＩＲＰａ  ｖ１対立遺伝子を含む）にホモ接合するかのどちらかであるヒトである。本発明によると、ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１は、配列番号３における位置４４もしくは配列番号２４における位置１４にアミノ酸残基Ｌを含む；または配列番号３における位置５０もしくは配列番号２４における位置２０にアミノ酸残基Ｔを含む；または配列番号３における位置５２にもしくは配列番号２４における位置２２アミノ酸残基Ｔを含む；または配列番号３における位置５４もしくは配列番号２４における位置２４にアミノ酸残基Ｒを含む；または配列番号３における位置５７もしくは配列番号２４における位置２７にアミノ酸残基Ａを含む；または配列番号３における位置７５もしくは配列番号２４における位置４５にアミノ酸残基Ｇを含む；または配列番号３における位置９５もしくは配列番号２４における位置６５にアミノ酸残基Ｄを含む；または配列番号３における位置９６もしくは配列番号２４における位置３６にアミノ酸残基Ｌを含む；または配列番号３における位置１００もしくは配列番号２４における位置７０にアミノ酸残基Ｎを含む；または配列番号３における位置１０７もしくは配列番号２４における位置７７にアミノ酸残基Ｒを含む；または配列番号３における位置１０９もしくは配列番号２４における位置７９にアミノ酸残基Ｇを含む；または配列番号３における位置１３０もしくは配列番号２４における位置１００にアミノ酸残基Ｄを含む；または配列番号３における位置１３２もしくは配列番号２４における位置１０２にアミノ酸残基Ｖを含む。本発明のある特定の実施形態において、ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１は、アミノ酸残基Ｖを配列番号３における位置１３２、およびアミノ酸残基Ｄを、配列番号３における位置１３０に含む、またはアミノ酸残基ＤおよびＶを、配列番号２４における位置１００および１０２にそれぞれ含む。代替的に、ＳＩＲＰａ  ｖ１は、そのアミノ酸配列内にアミノ酸配列１を含むＳＩＲＰａイソ型として定義され得、ＳＩＲＰａ  ｖ２イソ型はそのアミノ酸配列内にアミノ酸配列２を含むＳＩＲＰａイソ型として定義され得る。代替的に、ＳＩＲＰａ  ｖ１ポジティブ対象は、そのゲノムが、ＳＩＲＰａ対立遺伝子内でアミノ酸残基ＤおよびＶを、配列番号３における位置１３０および１３２にそれぞれ有する、または配列番号２４における位置１００および１０２にそれぞれ有する、ＳＩＲＰａタンパク質に翻訳されるＳＩＲＰａＲＮＡをコードする遺伝子を含む対象として定義される。
【００５２】
本発明は発明者らによってなされた予期せぬ観察に基づいており、その観察とは、いくつかの抗ヒトＳＩＲＰａ抗体は、ＳＩＲＰａの異なるイソ型に平等に結合しないというものであり、いくつかの抗体は、治療、予防に有用となり得、それによって具体的にはＳＩＲＰａ  ｖ１ポジティブ対象における疾患または疾患、具体的には、ＣＤ４７および／またはＳＩＲＰａが関係する疾患、具体的には、ＣＤ４７がＳＩＲＰａ  ｖ１ポジティブ対象において過剰発現される疾患を阻害する、疾患の進行を緩める、疾患に関連した症状の軽減をもたらす。
【００５３】
本発明のある特定の実施形態において、抗体またはその抗原結合性の断片は、感染症、慢性炎症性疾患、自己免疫疾患、神経疾患、脳損傷、神経損傷、赤血球増加症、血色素症、精神的外傷、敗血症性ショック、慢性感染症、特に、シュードモナスおよびサイトメガロウイルス感染症、線維症、アテローム動脈硬化症、肥満、２型糖尿病、メラノーマおよび移植機能障害からなる群より選択される疾患の治療および／または予防に使用される。ある特定の実施形態において、抗体は、癌、具体的には、炎症性癌および浸潤した骨髄系細胞を有する癌具体的には浸潤した樹状細胞および／または骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）および／または腫瘍関連マクロファージ細胞（ＴＡＭ）の予防および／または治療に使用される。本発明のある特定の実施形態において、抗体はメラノーマ、精神的外傷または敗血症性ショックに使用される。ある特定の実施形態において、抗体またはその抗原結合性の断片は、疾患に対する、具体的には癌に対する、具体的には炎症性癌および浸潤した骨髄系細胞、具体的には浸潤した樹状細胞および／またはＭＤＳＣおよび／またはＴＡＭ細胞の癌に対する治療的ワクチン接種に使用される。ある特定の実施形態において、抗体またはその抗原結合性の断片は、ＣＤ４７が過剰発現した疾患の治療および／または予防に使用される。他の実施形態において、抗体またはその抗原結合性の断片は、メラノーマの治療および／または予防に使用される。本発明における抗体またはその抗原結合性の断片の使用は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、具体的には、ＡＰＣによる抗原のＴ細胞への抗原の交差提示、具体的には、樹状細胞による抗原のＣＤ８＋Ｔ細胞への交差提示を強化する。抗原の交差提示が増加することによって、抗体またはその抗原結合性の断片の使用が、ＳＩＲＰａ  ｖ１ポジティブである対象における、上述した疾患、具体的には癌に対する治療的ワクチン接種に有用であり、具体的には、疾患がＣＤ４７の過剰発現に関連するものである場合、より具体的には、疾患が癌細胞または腫瘍細胞によるＣＤ４７の過剰発現に関連したものである場合に有用である。ＣＤ４７の過剰発現は、同じ組織か取り出された癌細胞と健康な細胞におけるＣＤ４７の発現を比較することによって評価することができ得る。ｍＲＮＡの定量等、例えばＲＴ−ｑＰＣＲによって、またはフローサイトメトリー、ウエスタンブロット解析、ＥＬＩＳＡ等によるタンパク質定量など当該技術分野において周知である方法によって評価することができ得る。
【００５４】
ある特定の実施形態において、抗体、またはその抗原結合性の断片は、癌の予防および／または治療に使用され、ヒト乳頭腫ウイルス、エプスタイン・バーウイルス、メルケル細胞ポリオーマウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、ヒトＴ細胞白血病ウイルス、ヒトヘルペスウイルス８型、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、サイトメガロウイルスからなる群から、またはＣＴＮＮＢ１遺伝子、ＣＡＳＰ８遺伝子、ＨＥＲ２遺伝子、ｐ５３遺伝子、ＫＲＡＳ遺伝子ＮＲＡＳ遺伝子の抗原、または腫瘍抗原、具体的にはｒａｓ遺伝子からなる群から発するまたは誘導される腫瘍抗原、ＢＣＲ−ＡＢＬ腫瘍抗原、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１腫瘍抗原、メラノーマ抗原をコードする遺伝子（ＭＡＧＥ）、ＢＡＧＥ抗原、ＧＡＧＥ抗原、ｓｓｘ抗原、ｎｙ−ｅｓｏ−１抗原、ｃｙｃｌｉｎ−Ａ１腫瘍抗原、ＭＡＲＴ−１抗原、ｇｐ１００抗原、ＣＤ１９抗原、前立腺特異抗原、前立腺酸性ホスファターゼ抗原、癌胎児性抗原、αフェトプロテイン抗原、癌腫抗原１２５、ムチン１６抗原、ムチン１抗原、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素抗原、ＥＧＦＲ抗原、ＭＯＫ抗原、ＲＡＧＥ−１抗原、ＰＲＡＭＥ抗原、野生型ｐ５３抗原、発癌遺伝子ＥＲＢＢ２抗原、ｓｉａｌｙｌ−Ｔｎ腫瘍抗原、Ｗｉｌｍｓ腫瘍１抗原、メソテリン抗原、炭水化物抗原、Ｂ−カテニン抗原、ＭＵＭ−１抗原、ＣＤＫ４抗原およびＥＲＢＢ２ＩＰ抗原、特に、メランＡメラノーマ腫瘍関連の抗原（ＴＡＡ）からなる群から誘導される一点変異抗原の群から選択される少なくとも１つの抗原が発現する、具体的には過剰発現する。代替的、または相補的に、抗体、またはその抗原結合性の断片は、癌に対する治療的ワクチン接種として使用され、上記の抗原からなる群より選択される少なくとも１つの抗原が発現する、具体的には過剰発現する。
【００５５】
本発明のある特定の実施形態において、使用のための、抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体、またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体は以下の特性を有する：
ヒトＳＩＲＰａ  ｖ２に対し特異的に結合しない；
ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰｇへの結合を阻害または防止しない、具体的には、ヒトＳＩＲＰｇに結合しない。
【００５６】
本発明によると、もし、抗体またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、またはその改変した抗体が、具体的にはＢｌｉｔｚ解析による、ＳＩＲＰａ  ｖ２に対して１Ｅ−８Ｍよりも低い、より好ましくは、１Ｅ−７Ｍよりも低い結合親和性を有する場合、抗体またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、またはその改変した抗体はヒトＳＩＲＰａ  ｖ２に対し特異的に結合しないと考えることができる。ヒトＳＩＲＰａ  ｖ２に対し特異的に結合しない、抗体、またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティックのバイオアベイラビリティーは、ＳＩＲＰａ  ｖ１ポジティブ対象がＳＩＲＰａ  ｖ１にヘテロ接合性である場合に高まり得る。
【００５７】
本発明によると、もし、抗体またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体が、増加を引き起こさない、または例えばＢｌｉｔｚ解析によるＳＩＲＰｇ結合競合アッセイにおいて、のＳＩＲＰｇ結合５ｌｏｇよりも低い、より好ましくは、４ｌｏｇよりも低い、より好ましくは、３ｌｏｇよりも低い、より好ましくは、２ｌｏｇよりも低い、最も好ましくは、１ｌｏｇよりも低いヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰｇへのＫＤ値の増加を引き起こす場合、抗体またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体はヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰｇへの結合を阻害または防止しないと考えることができる。ある特定の実施形態において、抗体、またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性抗体ミメティックが、具体的にはＢｌｉｔｚ解析による、ＳＩＲＰｇへの１０Ｅ−８Ｍよりも高い、好ましくは、１０Ｅ−７Ｍよりも高い、より好ましくは、１０Ｅ−６Ｍよりも高いＫＤ値を有する場合、抗体、またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性ミメティックは、ヒトＳＩＲＰｇに対し特異的に結合しない。
【００５８】
ＳＩＲＰａ  ｖ１ポジティブ対象における疾患の治療および／または予防に使用される抗体またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体は、少なくとも１つの以下の特性、具体的には少なくとも２つの以下の特性、具体的には少なくとも３つの以下の特性、具体的には全ての以下の特性をさらに有し得る：
少なくとも、具体的には少なくとも１０Ｅ−９Ｍ、より好ましくは、少なくとも１０Ｅ−１０Ｍの親和性（ＫＤ）にてヒトＳＩＲＰａ  ｖ１と結合する；および／または
特に、インビボで増殖分化および／またはヒトＴ細胞の活性化を阻害しない；および／または
マクロファージの活性化を強化する；および／または
抗原提示細胞のヒトＴ細胞へ、具体的には、ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞への提示によって、少なくとも１つの抗原の交差提示を強化する、
抗体またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体のヒトＳＩＲＰａ  ｖ１への結合能力は既に説明した通りに、例えば、ＳＰＲ（表面プラズモン共鳴法、例：Ｂｉａｃｏｒｅ）、ＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリーまたはウエスタンブロット解析法によって評価することができる。
【００５９】
ヒトＴ細胞の、特にインビボでの、増殖分化および／または活性化は、当該技術分野において周知の方法で評価することができ、具体的には、チミジン取り込みのような本発明の実施例にて記載される方法である。ある特定の実施形態において、ＳＩＲＰａ  ｖ１抗体またはその抗原結合性の断片またはその抗原結合性の抗体ミメティックまたは抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体の使用は、ネガティブ対照と比較して、Ｔ細胞の増殖分化を２０％を超えて低減しないまたは阻害しない。抗ヒトＣＤ４７抗体の使用とは対照的に、抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体またはその抗原結合性の断片または抗原結合性の抗体ミメティックの使用は、抗ＣＤ４７抗体がヒトＴ細胞の増殖分化を阻害する一方で、ヒトＴ細胞の増殖分化において有意に作用しない。
【００６０】
ヒトマクロファージの活性化は、本発明の実施例にて記載される方法を含む多様な方法に従って評価することができる。ある特定の実施形態において、マクロファージは、そのケモカインＭＩＰ−１ａ／ＣＣＬ−３および／またはケモカインＭＩＰ−１ｂ／ＣＣＬ４の分泌がネガティブ対照と比較して増加した場合に、具体的には、ケモカインＩＰ−１ａ／ＣＣＬ−３および／またはケモカインＭＩＰ−１ｂ／ＣＣＬ４の分泌がネガティブ対照と比較して少なくとも２０％増加した場合に活性化される。
【００６１】
抗原存在細胞のヒトＴ細胞への、具体的には、ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞への少なくとも１つの抗原の交差提示が、本発明の実施例に記載される方法を含む、多様な方法にて評価することができる。具体的には、Ｔ細胞によるＩＬ−２の分泌が、具体的には、少なくとも２０％、より好ましくは、少なくとも５０％向上した場合に、交差提示が向上したと考えられる。代替的に、Ｔ細胞によるＩＦＮｇの分泌が、具体的には、少なくとも２０％、より好ましくは、少なくとも５０％向上した場合に、交差提示は向上する。
【００６２】
本発明は、上述の使用のための抗体、またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体の製造および／または選択での、ポリペプチド、具体的には、抗原の使用にも関する。従って、本明細書では、具体的には、抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体の製造、および／または係る抗体の選択および／または製造に、および／または係る抗体の結合親和性を試験するのに有用なポリペプチドが提供される。この目標を達成するために、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ１への結合を阻害し、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ２への結合を防止または減少させない、具体的にはヒトＳＩＲＰａ  ｖ２に対し特異的に結合しない、抗体、その抗原結合性の断片または抗原結合性の抗体ミメティックを選択するために使用される配列番号１（ＫＧＳＰＤＤＶ）または配列番号４（ＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥ）または配列番号２５（ＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲ）からなるヒトＳＩＲＰａ  ｖ１を含む、またはからなるポリペプチド、具体的には抗原、ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１もまた提供される。
【００６３】
配列番号１は、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ１への結合を阻害し、ヒトＣＤ４７のＳＩＲＰａ  ｖ２への結合を阻害しない、ＳＩＲＰａ  ｖ１イソ型への有意な結合能力を有する、抗ヒトＳＩＲＰａ抗体によって認識されるエピトープ配列に対応する。従って、配列番号１、配列番号４、または配列番号２５のアミノ酸エピトープ配列を含むポリペプチドが、ＳＩＲＰａ  ｖ１ポジティブ対象における疾患の治療および／または予防に使用することができる抗体の製造に有用であり得る。抗体、またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体と、エピトープ（またはエピトープを含む領域）との間の特異的結合は、抗体が特定のタンパク質または抗原（ここではＳＩＲＰａ  ｖ１）のエピトープ（エピトープを含む領域）への明らかな親和性を呈することを意味する。「明らかな親和性」、または「特異的結合」、または「に対し特異的に結合する」には、約１０Ｅ−８Ｍ（ＫＤ）以上の親和性にて結合することを含む。好ましくは、結合親和性が１０Ｅ−８Ｍ（ＫＤ）〜１０Ｅ−１２Ｍ（ＫＤ）、任意選択的に１０−８Ｍ（ＫＤ）〜１０Ｅ−１０Ｍ（ＫＤ）、具体的には、少なくとも１０Ｅ−８Ｍ（ＫＤ）である場合に、結合は特異的であると考えられる。結合ドメインが標的に対し特異的に反応する、または結合するかどうかは、特に該結合ドメインの標的タンパク質または抗原への反応と、該結合ドメインの標的タンパク質意外のタンパク質または抗原への反応とを比較することによって容易に試験することができる。「特異的結合」、または「に対し特異的に結合」という用語は、抗体が、単一標的分子を認識し結合することを意味せず、抗体が、他の分子と比較してより高い結合親和性をその標的分子に有すること、具体的には、抗体が、上述した所与の親和性よりも高い標的分子への結合親和性を有することを意味する。ネガティブ形態で使用される場合、「特異的結合」、または「に対し特異的に結合」という用語は、抗体が、標的分子に低い親和性で認識するか、または標的分子を認識しない、すなわち抗体と標的分子との間の結合は特異的ではないことを意味する。好ましくは、結合親和性が、１０−８Ｍ（ＫＤ）より低い場合には結合は特異的ではないと認識される。どの結合が特異的であるとみなされるのかに関して比較した分子は、具体的には、ＳＩＲＰｇおよびＳＩＲＰａイソ型である。
【００６４】
発明者らは本発明の実施例にて、２つの特異的一塩基多型（ＳＮＰ）（すなわちＳＮＰ１５およびＳＮＰ１６、その組み合わせはＳＮＰ１７に対応する）、本発明に従い使用される抗体またはその抗原結合断片または抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体によってヒトＳＩＲＰａ  ｖ２が非認識であることの原因であることを例証した。両方のＳＮＰが、配列番号１、配列番号４、配列番号２５のエピトープ内に位置するアミノ酸残基をコードする。このＳＩＲＰａの特異的領域の多形性によって、抗体またはその抗原結合断片または抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体は、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ２への結合を損なうことなく、ＳＩＲＰａ  ｖ１に結合し、かつヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ１への結合を破壊することができる。さらに、そのような抗体またはその抗原結合断片または抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体は、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰｇへの結合を防止または阻害することができない。具体的には、そのような抗体またはその抗原結合断片または抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体は、ヒトＳＩＲＰｇに対し特異的に結合しない。
【００６５】
配列番号１のエピトープを含むポリペプチドは、配列番号５（ＳＬＩＰＶＧＰ）のエピトープおよび／または配列番号６（ＧＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨ）のエピトープである、少なくとも１つの他のエピトープも含み得、両方とも、抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体、その抗原結合性の断片および抗原結合性の抗体ミメティックまたは抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体により認識される直鎖状エピトープである。代替的に、ポリペプチドは、配列番号７（ＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲ）および配列番号８（ＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮ）を含む群から選択される少なくとも１つのエピトープもさらに含み得、両方とも抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティック、および改変した抗体により認識される立体構造のエピトープである。
【００６６】
ポリペプチドまたは配列番号１または配列番号４、または配列番号２５を含む抗原が、抗体またはその抗原結合性の断片または抗原結合性の抗体ミメティックまたは抗原結合性の抗体ミメティックのまたは改変した抗体の調製（または製造）に使用され得、その調製（または製造）は、例えば、非ヒト動物、具体的には、非ヒト哺乳動物を免疫し、その免疫した非ヒト動物から得られた血清またはＢ細胞を採取して、ポリペプチド内に含まれる抗原に対する抗体を得ることによる。回収された抗体は、その抗原結合性の断片または二重機能的または二重特異性の抗体を得るために、次にヒト化または改変され得る。回収されたＢ細胞は、抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体の製造のためにハイブリドーマへと変換され得る。製造された抗体は回収され、以下に説明される選択の方法に従って選択され得る。
【００６７】
本発明はまた、ポリペプチド、具体的には、配列番号１または配列番号４または配列番号２５のエピトープを含む抗原の製造のためのヒトＳＩＲＰａ  ｖ１の抗原をコードするポリヌクレオチドの使用にも関する。ポリヌクレオチドは、少なくとも配列番号２６の一部を含み得、この一部には、配列番号１または配列番号４または配列番号２５のエピトープをコードする核酸残留物を含む。配列番号２６は、ＳＩＲＰａ  ｖ１タンパク質をコードするｃＤＮＡに対応する。ポリヌクレオチドは、例えば、ポリヌクレオチドが、配列番号１、配列番号４または配列番号２５のアミノ酸残基アミノ酸残基を含むＳＩＲＰａ  ｖ１のエピトープを含むポリペプチドを製造するために、プラスミドのような発現ベクター内に挿入された場合に、製造系に使用され得る。ある特定の実施形態において、ポリヌクレオチドは、少なくとも配列番号１または配列番号４または配列番号２５のアミノ酸残基および配列番号５および／または配列番号６のアミノ酸残基；または配列番号７および／または８のアミノ酸残基のアミノ酸残基を含む配列番号２６の一部をコードする。
【００６８】
本発明はまた、ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１に対し特異的に結合し、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ１への結合を減少または阻害し、かつヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ２への結合を防止または阻害しない、抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体の選択および回収する方法にも関する。選択および回収の方法は以下の工程を含む：
化合物（すなわち抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体）の、ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１に対する特異的な結合能力、具体的には、化合物の、配列番号１、配列番号４または配列番号２５を含む、またはからなるエピトープに対する特異的な結合能力；具体的には、化合物の、配列番号３のＳＩＲＰａにおける位置１３０および１３２上にそれぞれ位置する；または配列番号２４のＳＩＲＰａにおける位置１００および１０２上にそれぞれ位置する、アミノ酸残基ＤおよびＶに対する特異的な結合能力を試験する；
化合物の、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ１への結合を減少するまたは阻害する能力を試験する；
化合物の、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ２への結合を防止または阻害しない能力を試験する；および／または
具体的には、化合物の、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰｇへの結合を防止または阻害しない能力を試験する；
および任意選択的に：
化合物の、ヒトＳＩＲＰａ  ｖ２に対し特異的に結合しない能力を試験する；
化合物の、ヒトＳＩＲＰｇに対し特異的に結合しない能力を試験する；および／または
選択されたおよび回収された化合物は、以下の特性を含むべきである：
ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１に対し特異的に結合し、具体的には、少なくとも１Ｅ−９Ｍ、具体的には、１０Ｅ−９Ｍの親和性を有し、より好ましくは、少なくとも１Ｅ−１０Ｍ、特に、１０Ｅ−１０Ｍの親和性を有する；
ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ１への結合を減少するまたは阻害する；
ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ２への結合を防止または阻害しない；
具体的には、ヒトＳＩＲＰｇに対し特異的に結合しない。
選択されたおよび回収された化合物は、また、以下の特性のうちの少なくとも１つ、好ましくは、以下の特性のうちの少なくとも２つを呈し得る：
ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰｇへの結合を防止または阻害しない；かつ／または
ヒトＳＩＲＰａ  ｖ２に対し特異的に結合しない。
【００６９】
化合物の結合特異性は、ＳＰＲ（表面プラズモン共鳴法、例Ｂｉａｃｏｒｅ）、ＥＬＩＳＡまたはウエスタンブロット解析法によって評価することができる。具体的には、結合親和性が、少なくとも１０Ｅ−８Ｍ，より好ましくは、少なくとも１０Ｅ−９Ｍの場合，、または結合親和性が１０Ｅ−８Ｍ〜１０Ｅ−１１Ｍ、より好ましくは、１０Ｅ−９Ｍ〜１０Ｅ−１０Ｍを含む場合に化合物がＳＩＲＰａ  ｖ１に対し特異的に結合する。結合親和性が、１Ｅ−８Ｍよりも低い場合には、化合物はヒトＳＩＲＰａ  ｖ２またはＳＩＲＰｇに対して特異的に結合しない。ＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ１、ＳＩＲＰａ  ｖ２およびＳＩＲＰｇへの結合の予防性または阻害性は、本明細書で既に記載れた方法具体的には、競合アッセイ、具体的には、Ｂｌｉｔｚアッセイによって評価することができる。化合物が、ＳＩＲＰａ  ｖ１、ＳＩＲＰａ  ｖ２またはＳＩＲＰｇ結合競合アッセイ、具体的には、Ｂｌｉｔｚアッセイにおいて、ヒトＣＤ４７のＫＤ値を５ｌｏｇよりも上、好ましくは、４ｌｏｇよりも上ではない、より好ましくは、３ｌｏｇより上ではない、より好ましくは、２ｌｏｇより上ではない、最も好ましくは、１ｌｏｇよりも上ではない増加を引き起こさなければ、化合物は、ヒトＣＤ４７の、ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１、ＳＩＲＰａ  ｖ２またはＳＩＲＰｇへの結合を防止または阻害しないと考えられる。対照的に、化合物が、ＳＩＲＰａ  ｖ１、ＳＩＲＰａ  ｖ２またはＳＩＲＰｇ結合競合アッセイ、具体的には、Ｂｌｉｔｚアッセイにおいて、ヒトＣＤ４７のＫＤ値を１ｌｏｇよりも上、好ましくは、２ｌｏｇよりも上、より好ましくは、３ｌｏｇより上、より好ましくは、ｌｏｇより上ではない、最も好ましくは、５ｌｏｇよりも上の増加を引き起こした場合、化合物は、ヒトＣＤ４７の、ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１、ＳＩＲＰａ  ｖ２またはＳＩＲＰｇへの結合を防止または阻害すると考えられる。
【００７０】
ある特定の態様において、化合物を選択する方法は、以下の工程のうち少なくとも１つ、具体的には、以下の工程のうち少なくとも２つ、具体的には、以下の工程のうち少なくとも３つ、および以下の工程のうち少なくとも４つを含み得る：
化合物に存在するＴ細胞増殖分化を試験する；および／または
化合物に存在するＴ細胞活性化を試験する；および／または
化合物に存在するマクロファージ活性化を試験する；および／または
抗原、具体的には、腫瘍抗原、具体的には、メランＡメラノーマ腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）の、化合物の存在下で、抗原提示細胞、具体的には、樹状細胞による、ヒトＴ細胞への交差提示、具体的には、抗原の、樹状細胞によるＣＤ８＋Ｔ細胞への交差提示を試験する。
【００７１】
特定の実施形態によると、選択された化合物は、以下の特性のうち少なくとも１つ、好ましくは、少なくとも２つ、より好ましくは、少なくとも３つ、最も好ましくは、４つを含み得る：
ヒトＴ細胞増殖分化を阻害しない；および／または
ヒトＴ細胞活性化を阻害しない；および／または
マクロファージの活性化を強化する；および／または
抗原の抗原提示細胞によるヒトＴ細胞への交差提示を強化する。
【００７２】
Ｔ細胞増殖分化およびＴ細胞活性化は、多様な方法によって決定され得る。例えば、Ｔ細胞の増殖分化は、Ｈ３−チミジンの組み込みによって測定することができる。具体的には、Ｔ−細胞の増殖分化の減少がネガティブ対照と比較して、２０％以下であった場合、化合物はＴ−細胞の増殖分化を阻害しないと考えられる。Ｔ細胞活性化は、ＣＤ２５および／またはＣＤ６９の発現を、例えば、フローサイトメトリー、ウエスタンブロット解析評、ＥＬＩＳＡ等により分析することにより、および／または本発明の実施例で開示されるようにＩＦＮｇおよび／またはＩＬ２の分泌物を評価することにより評価することができる。交差提示は、多様な方法、具体的には、本発明の実施例に従って評価することができる。具体的には、Ｔ細胞によるＩＬ−２の分泌が、ネガティブ対照と比較して、少なくとも２０％、より好ましくは、少なくとも５０％向上した場合に、交差提示が向上したと考えられる。代替的に、Ｔ細胞によるＩＦＮｇの分泌が、ネガティブ対照と比較して、少なくとも２０％、より好ましくは、少なくとも５０％向上した場合に、交差提示は向上した。マクロファージ活性化は多様な方法、具体的には、本発明の実施例に従って評価することができる。具体的には、マクロファージ活性化は、ケモカイン分泌の量によって評価することができる。具体的には、マクロファージは、ケモカインＭＩＰ−１ａ／ＣＣＬ−３および／またはケモカインＭＩＰ−１ｂ／ＣＣＬ４の分泌がネガティブ対照と比較して増加した場合に、具体的には、ケモカインの分泌の増加が、ネガティブ対照と比較して２０％超であった場合に活性化されている。
【００７３】
本明細書では、抗ヒトＳＩＲＰａ化合物（すなわち、抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体）が、ヒト対象に投与される、具体的には、化合物が抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１化合物である場合の治療への有効性の可能性を評価するための、インビトロまたはエクスビボの方法も提供される。方法は、対象から事前に得た、血液、細胞、生検等の生物学的試料におけるＳＩＲＰａ  ｖ１の存在の決定を含む。ＳＩＲＰａ  ｖ１の存在は、本明細書で定義される通りの、または本明細書で定義される方法で製造された、または本明細書で定義される方法で選択された、ＳＩＲＰａ  ｖ１化合物を使用することによって決定され得る。試料中にＳＩＲＰａ  ｖ１が検出されるということは、抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１化合物を用いた治療が有効で可能性を示す。言い換えると、本発明は、ＳＩＲＰａ化合物を用いた治療が有効である可能性のある患者を特定するためのインビトロまたはエクスビボの方法を提供し、該方法は、ＳＩＲＰａ  ｖ１／ｖ１患者、ｖ１／ｖ２患者およびｖ２／ｖ２患者からなる集団から患者のステータスを特定し、ｖ１／ｖ１集団またはｖ１／ｖ２集団に分類される患者は、本発明に従って使用される抗ＳＩＲＰａ化合物による治療が有効である可能性があり、具体的には、ＳＩＲＰａ  ｖ１／ｖ２患者に投与される投薬量とは、ＳＩＲＰａ  ｖ１／ｖ１患者に投与される抗ＳＩＲＰａ化合物の投薬量は異なり得る（すなわち重要性が低い）。代替的に、方法は、ＳＩＲＰａ  ｖ１タンパク質をコードする遺伝子産物（ＲＮＡまたはＤＮＡ）の検出を含む。より具体的には、方法は、対象（ｖ１対立遺伝子またはｖ２対立遺伝子のどちらか）のＳＩＲＰａ対立遺伝子を特定する工程を含む。ヒト対象は、少なくとも１つのＳＩＲＰａ対立遺伝子が、配列番号１または配列番号４または配列番号２５のアミノ酸残基をコードする核酸配列を含む場合に、ＳＩＲＰａ  ｖ１ポジティブと考えられる。代替的に、少なくとも１つのＳＩＲＰａ対立遺伝子が、そのｅｘｏｎ３内に、ＳＩＲＰａ  ｖ１ＳＮＰｓ１５（ｒｓ１１５２８７９４８）および１６（ｒｓ１１４４９９６８２）からなる変異、または配列番号３の位置１３２上にもしくは配列番号２４の位置１０２上にアミノ酸残基Ｖをコードする、または配列番号１または４中にアミノ酸残基Ｖを、または配列番号２５上に第１のアミノ酸残基ＶをコードするＳＩＲＰａ  ｖ１ＳＮＰ１７を含み、かつ少なくとも１つのＳＩＲＰａ対立遺伝子が、そのｅｘｏｎ３内に、ＳＩＲＰａ内のアミノ酸残基５’ＤＤＶ３’をコードする細胞核配列を有する場合に、対象はＳＩＲＰａ  ｖ１ポジティブと考えられる。ＳＩＲＰａのＳＮＰは明確に文書化されており、Ｇｅｎｂａｎｋのようなオンラインデータベースにて参照可能である。参照ＳＮＰＩＤ番号または「ｒｓ」は、ＮＣＢＩデータベースにて参照可能である。ＳＩＲＰａ  ｖ１  ＳＮＰ１５および１６は、本発明の実施例で説明されるように、核酸残留物ｇおよびｔにそれぞれ対応する。従って、方法は、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応によるＳＩＲＰａ対立遺伝子の決定を含み得、ＳＩＲＰａ  ｖ１ポジティブ対象を決定することは、少なくともヒトＳＩＲＰａｅｘｏｎ３の一部分に対応��る核酸残留物を含むＳＩＲＰａ配列を検出することを含み、上述されるように、ＳＩＲＰａＳ  ＮＰｓ１５および１６が少なくとも１つのＳＩＲＰａ対立遺伝子内にて、具体的には、ＳＩＲＰａ対立遺伝子の両方にて、決定される。
【００７４】
この目標を達成するために、本発明は、また、対象のステータスを決定するためのパーツのキットにも関し、該キットは、具体的には、ポリメラーゼ連鎖反応増（ＰＣＲ）によって、または具体的には、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）によって、少なくともＳＩＲＰａ遺伝子（例えば、ｇＤＮＡのような）またはＳＩＲＰａ転写（例えば、ｍＲＮＡまたはｃＤＮＡのような）の一部を増幅するのに好適な一対のプライマーを含み、具体的には、該一部は少なくともＳＩＲＰａ  ｅｘｏｎ３の一部分を含み、該一部は上述されるような、または本発明実施例における、少なくともＳＩＲＰａ  ＳＮＰ１５およびＳＮＰ１６の定位、または上述されるような、または本発明実施例における、ＳＩＲＰａＳＮＰ１７の定位を含み；コドンの定位が、配列番号１または配列番号４または配列番号２５のＳＩＲＰａ  ｖ１エピトープ内の第１のアミノ酸残基Ｄをコードする。ＳＩＲＰａ  ｖ２をコードする核酸配列中に無いコドンの定位は、配列番号２７（ＳＩＲＰａ  ｖ１ｅｘｏｎ３）および配列番号３１（ＳＩＲＰａ  ｖ２  ｅｘｏｎ３）を整列させることによって評価することができる。従って、一対のプライマーは、コードするＳＩＲＰａ  ｖ１およびＳＩＲＰａ  ｖ２をコードする両方の核酸配列とアニールすることができる第１のプライマーと、ＳＩＲＰａ  ｖ１の核酸配列とのみアニールすることができる第２のプライマーとを含み得る。そのようなプライマーの核酸配列は、配列番号２７（ＳＩＲＰａ  ｖ１ｅｘｏｎ３）および配列番号３１（ＳＩＲＰａ  ｖ２ｅｘｏｎ３）を整列させることにより、当業者によって決定され得る。ある特定の実施形態において、ＳＩＲＰａ  ｖ１をコードする核酸配列とアニールすることができるが、ＳＩＲＰａ  ｖ２をコードする核酸配列とはできないプライマーは、ＳＩＲＰａ  ｖ１の定位に従い決定され得、複数のＳＩＲＰａ  ｖ１  ＳＮＰｓを含み得る。ある特定の実施形態において、ＳＩＲＰａ  ｖ１特異的プライマーは、具体的には、緊縮条件下で、配列番号１または配列番号４または配列番号２５のＳＩＲＰａ  ｖ１のエピトープ内の、少なくともアミノ酸残基アミノ酸残基５’ＤＤＶ３’をコードする核酸配列内でアニールすることができる。代替的に、キットは一対のプライマーを含み、両方がＳＩＲＰａ  ｖ１またはＳＩＲＰａ  ｖ２のどちらかをコードする核酸配列とアニールすることができ、それによって、少なくともＳＩＲＰａ  ｅｘｏｎ３の一部を含む遺伝子または転写を増幅させ、該一部は、少なくともＳＩＲＰａ  ｅｘｏｎ３の一部分を含み、該一部は上述されるような、または本発明実施例における、少なくともＳＩＲＰａ  ＳＮＰ１５およびＳＮＰ１６の定位、または上述されるような、または本発明実施例における、ＳＩＲＰａ  ＳＮＰ１７の定位を含み；コドンの定位が、配列番号１または配列番号４または配列番号２５のＳＩＲＰａ  ｖ１エピトープ内の第１のアミノ酸残基Ｄをコードし、キットは、さらに、配列番号１または配列番号４または配列番号２５のＳＩＲＰａ  ｖ１のエピトープ内の少なくともアミノ酸残基５’ＤＤＶ３’をコードする核酸配列とアニールすることができるプローブ（すなわち核酸プローブ）、具体的には、タグ化プローブを含む。
【００７５】
また、インビトロまたはエクスビボでの疾患の重症度を診断する方法、具体的には個別化医療で使用するのに好適な診断の方法も提供され、本明細書に記載される方法に従い製造された、または本明細書に記載される方法に従い選択された、抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１化合物（すなわち、抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性のミメティックまたは改変した抗体）が、対象から事前に得た試料中のＳＩＲＰａ  ｖ１ポジティブ細胞を検出するために使用され、該方法は、ＳＩＲＰａ  ｖ１の発現の定量を含む。ＳＩＲＰａ  ｖ１の発現の定量は、当該技術分野において周知の方法に従い、例えば、標的タンパク質に結合された抗体の定量により評価することができる。
【００７６】
患者を抗ヒトＳＩＲＰａ抗体、または抗原結合の断片、または抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体を用いて治療するかを決定するのに臨床医を援助する方法もまた提供され、該方法は、具体的には、本明細書に開示される抗ＳＩＲＰａ化合物を使用することによって、または遺伝子型同定によって、患者のＳＩＲＰａ対立遺伝子を決定することを含み、本発明による抗ＳＩＲＰａ  ｖ１化合物の第１の治療量での治療は、ＳＩＲＰａ  ｖ１ホモ接合である患者に有効である可能性があり；本発明による抗ＳＩＲＰａ  ｖ１化合物での治療はＳＩＲＰａ  ｖ２ホモ接合である患者には有効ではない可能性があり；本発明による抗ＳＩＲＰａ  ｖ１化合物の第２の治療量での治療は、ＩＲＰａｖ１／ｖ２ヘテロ接合である患者に有効である可能性があり、具体的には、第２の治療量は第１の治療量よりも高い。
【００７７】
患者を抗ヒトＳＩＲＰａ抗体、または抗原結合の断片、または抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体を用いて治療するかを決定するのに臨床医を援助する方法もまた提供され、抗ヒトＳＩＲＰａ化合物で患者を治療するのに必要な治療量は、患者がＳＩＲＰａ  ｖ１／ｖ１ホモ接合であるかＳＩＲＰａ  ｖ１／ｖ２ヘテロ接合であるかで異なる。
【００７８】
抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体、具体的には、本明細書に記載される任意の使用のための抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体、あるいは本明細書に記載される任意の方法で製造された抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体、あるいは本明細書に記載される任意の方法で選択された抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体含む化合物と、少なくとも１つの第２の治療薬剤との組み合わせも提供される。第２の治療薬剤は、化学療法薬、放射線療法薬、免疫療法薬、細胞治療薬、抗生剤およびプロバイオティクスからなる群より選択され得、特に、チェックポイント・ブロッカーまたは適応免疫細胞の活性剤からなる群より選択される、具体的には、抗−ＰＤＬ１、抗−ＰＤ１、抗−ＣＴＬＡ４、抗−ＣＤ１３７、抗−ＣＤ２、抗−ＣＤ２８、抗−ＣＤ４０、抗−ＨＶＥＭ、抗−ＢＴＬＡ、抗−ＣＤ１６０、抗−ＴＩＧＩＴ、抗−ＴＩＭ−１／３、抗−ＬＡＧ−３、抗−２Ｂ４、抗−ＶＩＳＴＡ、抗−ＯＸ４０、抗−ＣＤ４０アゴニスト、ＣＤ４０−Ｌ、ＴＬＲアゴニスト、抗−ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＩＤＯ抑制剤、腫瘍溶解性ウイルスアゴニスト、およびＢ−細胞受容体アゴニストからなる群より選択される免疫療法薬剤であり得る。生成物の組合せは、ＳＩＲＰａ  ｖ１ポジティブ対象における疾患の治療または予防に使用するためのものである。組成物は、具体的には、医薬組成物であり得る。そのような組成物は、全身または局所投与に使用される場合、薬学的に許容される成分を含み得、薬学的に好適な賦形剤または担体またはビヒクルのような成分であるが、これらに限定されない。薬学的に好適な担体、またはビヒクルとは、非毒性の固体、半固体または液体の充填剤、希釈剤、カプセル封じ材料およびリン酸緩衝生理食塩水のような製剤、蒸留水、油／水乳化剤などの乳化剤、湿潤剤等、ぶどう糖、衝生理食塩水、エタノールおよびそれらの組合せを意味する。
【００７９】
本発明は、また以下：
（ｉ）抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体であって、
ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１および／またはＳＩＲＰａ  ｖ２に、具体的には、ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１およびヒトＳＩＲＰａ  ｖ２に対し特異的に結合し、ヒトＣＤ４７のＳＩＲＰａ  ｖ１および／またはＳＩＲＰａ  ｖ２への結合を阻害する、具体的には、ヒトＣＤ４７のＳＩＲＰａ  ｖ１およびＳＩＲＰａ  ｖ２への結合を阻害し；
ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰｇへの結合は防止または阻害せず；具体的には、ヒトＳＩＲＰｇに対して特異的に結合せず；
抗原提示細胞によって、具体的には、樹状細胞よって抗原、具体的には癌抗原の、ヒトＴ細胞、具体的にはヒトＣＤ８＋Ｔ細胞への交差提示を強化する、抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体と、
（ｉｉ）少なくとも１つの第２の治療薬剤であって、化学療法薬、放射線療法薬、免疫療法薬、細胞治療薬、抗生剤およびプロバイオティクスからなる群より選択され得、具体的には、チェックポイント・ブロッカーまたは適応免疫細胞の活性剤からなる群より選択される、特に、抗−ＰＤＬ１、抗−ＰＤ１、抗−ＣＴＬＡ４、抗−ＣＤ１３７、抗−ＣＤ２、抗−ＣＤ２８、抗−ＣＤ４０、抗−ＨＶＥＭ、抗−ＢＴＬＡ、抗−ＣＤ１６０、抗−ＴＩＧＩＴ、抗−ＴＩＭ−１／３、抗−ＬＡＧ−３、抗−２Ｂ４、抗−ＶＩＳＴＡ、抗−ＯＸ４０、抗−ＣＤ４０アゴニスト、ＣＤ４０−Ｌ、ＴＬＲアゴニスト、抗−ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＩＤＯ抑制剤、腫瘍溶解性ウイルス、およびＢ−細胞受容体アゴニストからなる群より選択される免疫療法薬剤と、を含み、
疾患、具体的には、癌の治療または予防に使用するための、または疾患に対する、具体的には癌に対する治療的ワクチン接種に使用するためのものである化合物の組合せに関する。
【００８０】
ある特定の実施形態において、抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体は、ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１に対して特異的に結合し、ヒトＣＤ４７のＳＩＲＰａ  ｖ１への結合を阻害する。
【００８１】
本発明は、また、抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体、具体的には、本明細書に記載される任意の使用のための抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体、あるいは本明細書に記載される任意の方法で製造された抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体、あるいは本明細書に記載される任意の方法で選択された抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体含む化合物と、ヒト乳頭腫ウイルス、エプスタイン・バーウイルス、メルケル細胞ポリオーマウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、ヒトＴ細胞白血病ウイルス、ヒトヘルペスウイルス８型、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、サイトメガロウイルスからなる群から、またはＣＴＮＮＢ１遺伝子、ＣＡＳＰ８遺伝子、ＨＥＲ２遺伝子、ｐ５３遺伝子、ＫＲＡＳ遺伝子ＮＲＡＳ遺伝子の抗原、または腫瘍抗原、具体的には、ｒａｓ遺伝子からなる群から発するまたは誘導される腫瘍抗原、ＢＣＲ−ＡＢＬ腫瘍抗原、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１腫瘍抗原、メラノーマ抗原をコードする遺伝子（ＭＡＧＥ）、ＢＡＧＥ抗原、ＧＡＧＥ抗原、ｓｓｘ抗原、ｎｙ−ｅｓｏ−１抗原、ｃｙｃｌｉｎ−Ａ１腫瘍抗原、ＭＡＲＴ−１抗原、ｇｐ１００抗原、ＣＤ１９抗原、前立腺特異抗原、前立腺酸性ホスファターゼ抗原、癌胎児性抗原、αフェトプロテイン抗原、癌腫抗原１２５、ムチン１６抗原、ムチン１抗原、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素抗原、ＥＧＦＲ抗原、ＭＯＫ抗原、ＲＡＧＥ−１抗原、ＰＲＡＭＥ抗原、野生型ｐ５３抗原、発癌遺伝子ＥＲＢＢ２抗原、ｓｉａｌｙｌ−Ｔｎ腫瘍抗原、Ｗｉｌｍｓ腫瘍１抗原、メソテリン抗原、炭水化物抗原、Ｂ−カテニン抗原、ＭＵＭ−１抗原、ＣＤＫ４抗原およびＥＲＢＢ２ＩＰ抗原、具体的には、メランＡメラノーマ腫瘍関連の抗原（ＴＡＡ）からなる群から供給または誘導された少なくとも１つの抗原と、の組合せに関する。そのような化合物の組合せは、薬剤として、またはワクチン組成物として使用するために、またはＳＩＲＰａ  ｖ１ポジティブ対象における疾患の治療または予防に使用するために有用であり得る。
【００８２】
本発明は、また、以下：
抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体であって、
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含む、重鎖可変ドメインであって、
式中、
ＨＣＤＲ１は、配列番号９に示されるアミノ酸配列を含むまたはからなり、
ＨＣＤＲ２は、配列番号１０または配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含むまたはからなり、具体的には、ＨＣＤＲ２は、配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含むまたはからなり；
ＨＣＤＲ３は、配列番号１２または配列番号１３または配列番号１４または配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含むまたはからなり；具体的には、ＨＣＤＲ３は、配列番号１３または配列番号１４または配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含むまたはからなり、具体的には、ＨＣＤＲ３配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含むまたはからなる、重鎖可変ドメインと、
軽鎖可変ドメインであって、配列番号１６および配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含む、またはからなり；具体的には、軽鎖可変ドメインは配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含む、またはからなる軽鎖可変ドメインと、を含み、
抗原提示細胞によって、具体的には、樹状細胞よって抗原、具体的には癌抗原の、ヒトＴ細胞、具体的には、ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞への交差提示を強化する軽鎖可変ドメインを含む、抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体と、
少なくとも１つの抗原であって、ヒト乳頭腫ウイルス、エプスタイン・バーウイルス、メルケル細胞ポリオーマウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、ヒトＴ細胞白血病ウイルス、ヒトヘルペスウイルス８型、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ＨＣＶ、ＨＢＣ，サイトメガロウイルスからなる群から、またはＣＴＮＮＢ１遺伝子、ＣＡＳＰ８遺伝子、ＨＥＲ２遺伝子、ｐ５３遺伝子、ＫＲＡＳ遺伝子ＮＲＡＳ遺伝子の抗原、または腫瘍抗原、具体的には、ｒａｓ遺伝子からなる群から発するまたは誘導される腫瘍抗原、ＢＣＲ−ＡＢＬ腫瘍抗原、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１腫瘍抗原、メラノーマ抗原をコードする遺伝子（ＭＡＧＥ）、ＢＡＧＥ抗原、ＧＡＧＥ抗原、ｓｓｘ抗原、ｎｙ−ｅｓｏ−１抗原、ｃｙｃｌｉｎ−Ａ１腫瘍抗原、ＭＡＲＴ−１抗原、ｇｐ１００抗原、ＣＤ１９抗原、前立腺特異抗原、前立腺酸性ホスファターゼ抗原、癌胎児性抗原、αフェトプロテイン抗原、癌腫抗原１２５、ムチン１６抗原、ムチン１抗原、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素抗原、ＥＧＦＲ抗原、ＭＯＫ抗原、ＲＡＧＥ−１抗原、ＰＲＡＭＥ抗原、野生型ｐ５３抗原、発癌遺伝子ＥＲＢＢ２抗原、ｓｉａｌｙｌ−Ｔｎ腫瘍抗原、Ｗｉｌｍｓ腫瘍１抗原、メソテリン抗原、炭水化物抗原、Ｂ−カテニン抗原、ＭＵＭ−１抗原、ＣＤＫ４抗原およびＥＲＢＢ２ＩＰ抗原、具体的にはメランＡメラノーマ腫瘍関連の抗原（ＴＡＡ）、または任意の特定の変異抗原（新生抗原またはネオエピトープ）からの抗原からなる群より選択され、
疾患、具体的には癌の治療または予防に使用するための、または疾患に対する、具体的には癌に対する治療的ワクチン接種に使用するためのものであり、少なくとも１つの抗原の、抗原提示細胞による、具体的には樹状細胞による、Ｔ細胞への、特に、ＣＤ８＋Ｔ細胞への交差提示が強化される、抗原と、を含む化合物の組合せを提供する。
【００８３】
疾患は、具体的には感染症、慢性炎症性疾患、自己免疫疾患、神経疾患、脳損傷、神経損傷、赤血球増加症、血色素症、精神的外傷、敗血症性ショック、慢性感染症、具体的にはシュードモナスおよびサイトメガロウイルス感染症、線維症、アテローム動脈硬化症、肥満、２型糖尿病、および移植機能障害からなる群より選択される。疾患は、また、癌、具体的には炎症性癌および浸潤した骨髄系細胞、具体的には浸潤したＭＤＳＣおよび／またはＴＡＭ細胞を有する癌、癌転移、特に、乳癌癌転移、メラノーマからなる群より選択され得る。ある特定の実施形態において、疾患は、少なくとも１つの抗原を発現する癌細胞を含む癌である。
【００８４】
本発明のある特定の実施形態において、組合せは、疾患、具体的には癌の治療、または予防のための使用、または疾患、具体的には癌に対する治療的ワクチン接種のために使用され、抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体は、当該疾患、具体的には、癌で発現した抗原の交差提示を強化し、かつ当該疾患の治療に好適なＴ細胞応答を引き出す、抗体またはその抗原結合断片または抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体を含む。
【００８５】
本発明のある特定の実施形態において、組合せは、配列番号１８；配列番号１９；配列番号２０；配列番号２１、配列番号２２；および配列番号２３からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、またはからなる重鎖可変ドメイン；具体的には配列番号２０のアミノ酸配列を含む、またはからなる重鎖可変ドメインを含む。
【００８６】
本発明のある特定の実施形態において、組合せは、
配列番号２０のアミノ酸配列を含むまたはからなる重鎖可変ドメインと、
配列番号１７のアミノ酸配列を含むまたはからなる軽鎖可変ドメインと、を含むまたはからなる、疾患の予防および／または治療に使用するための抗体またはその抗原結合断片または抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体を含む。
【００８７】
ＤＮＡおよびＲＮＡウイルスの両方が、ヒトにおける癌を引き起こす能力を示している。エプスタイン・バーウイルス、ヒト乳頭腫ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルスおよびヒトヘルペスウイルス８（ＨＨＶ−８、カポジ肉腫ヘルペスウイルスでも知られる）は、ヒト癌の発達を引き起こす能力を有するＤＮＡウイルスである。ヒトＴリンパ増殖性ウイルス１型および肝炎Ｃウイルスが、ヒト癌に貢献する２つのＲＮＡウイルスである。従って、抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１化合物とこれらのウイルスから供給されたまたは誘導された抗原とを含む化合物の組合せを投与することにより、ヒトＴ細胞へのこれらの抗原の交差提示を強化させることにつながり、従って係る抗原を示す癌細胞に対する反応性を増強する。
【００８８】
化合物の組合せは、また、癌腫、具体的には子宮頸管癌腫、鼻咽腔癌腫、肝細胞癌、カポジ肉腫およびいくつかの白血病におけるような、ウイルス抗原が発現する場合での治療に使用するために有用である（Ｌｉａｏ，２００６）。化合物の組合せは、また、サイトメガロウイルスタンパク質が発現する神経膠芽腫の治療に使用するために有用である。例として、メルケル細胞癌（ＭＣＣ）が、増えている皮膚の神経内分泌癌であり、非メラノーマ性の皮膚癌死の主な原因であり、ヒト癌に直結する第１のポリオーマウイルスである、メルケル細胞ポリオーマウイルス（ＭＣＶ）に関連すると記載されている（Ｃｈａｎｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ，２０１２）。化合物の組合せは、また、Ｂ型肝炎ウイルスタンパク質が発現する子宮頸管癌、および／または具体的には免疫不全患者にける頸部腫瘍、皮膚癌、および／または肛門性器癌の治療に使用するために有用である。化合物の組合せは、また、エプスタイン・バーウイルスに関連した悪性腫瘍、バーキットリンパ腫のようなＢ細胞およびＴ細胞のようなリンパ腫、ホジキン病、移植後リンパ増殖性疾患、平滑筋肉腫、および鼻咽腔癌腫および胃癌の一部の症例の治療に使用するために有用である。化合物の組合せは、また、肛門癌を含むＨＩＶ感染症、ホジキン病、肺癌、口腔癌、咽喉癌、一部の種類の皮膚癌および肝臓癌の治療に使用するために有用である。
【００８９】
化合物の組合せは、また、一部の抗原ペプチドが発癌性の変異によるものである癌の治療に使用するために有用である。具体的には、ＣＴＮＮＢ１、ＣＡＳＰ８およびＨＥＲ２遺伝子から供給された抗原は点変異を含み得る。結腸直腸癌で見られる、メラノーマ、肺癌またはマイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ）などの突然変異率が高い腫瘍は、変異抗原により耐えられることが期待されている。他の発癌遺伝子もまたＰ５３、ＫＲＡＳまたはＮＲＡＳの多様な癌に関わっている。血液の癌におけるＢＣＲ−ＡＢＬまたはＥＴＶ６−ＡＭＬ１などの染色体転座由来のペプチドまたは腫瘍抗原も同定される。ｒａｓ遺伝子をいつまでも活動的にする変異が、全てのヒト腫瘍の２０％〜２５％に見つかり、膵癌のような特定の種類の癌では最大９０％見つかる。化合物の組合せは、また、抗原が、癌生殖系列細胞によってコードされる癌の治療に使用するために有用である。癌生殖系列細胞に関連する腫瘍抗原はメラノーマ抗原コードする遺伝子（ＭＡＧＥ）である。２５を超えるＸ染色体上の機能遺伝子は、ＭＡＧＥ遺伝子（ＭＡＧＥＡ、ＭＡＧＥＢおよびＭＡＧＥＣ）と定義され、ＭＡＧＥＡ１、ＭＡＧＥＡ２およびＭＡＧＥＡ３は多様な癌に関与している。その他のＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ、ＬＡＧＥ／ＮＹ−ＥＳＯ１、ＳＳＸのような遺伝子もまたＸ染色体に関連しており、多様な癌に発現し、生殖系列細胞および栄養膜細胞を除き正常組織には発現しない。ＮＹ−ＥＳＯ−１は、おおよそ８０％の滑膜細胞肉腫に、１０〜５０％の転移性メラノーマ、乳癌、卵巣癌および肺癌に発現することが報告されている。ＭＡＧＥＡ３は、メラノーマを含む、多様な腫瘍においてより頻繁に発現するＴＡＡ（腫瘍関連抗原）のうちの１つである。プロ増殖および抗アポトーシス性の特性を有するタンパク質である、サイクリンＡ１由来のペプチドまたは腫瘍抗原が同定される。これらの抗原は精巣および急性骨髄性白血病において発現する。
【００９０】
化合物の組合せは、また、癌細胞が低い腫瘍特異性を有する抗原を発現する、癌の治療に使用するために有用である。最も同定される分化抗原は、メラノーマ細胞上に存在するが、健康な細胞にも存在する。チロシナーゼ、ｇｐ１００／ｐｍｅｌ１７、メランＡ／ＭＡＲＴ−１、ｇｐ７５／ＴＲＰ１またはＴＲＰ２などのタンパク質由来のペプチドまたは腫瘍抗原は、メラノーマ患者および健常者に頻繁に存在する。ＭＡＲＴ−１、ｇｐ１００、ＣＥＡ、ＣＤ１９は、組織分化抗原であり、ＣＤ１９は正常細胞および悪性Ｂ細胞のみに発現する腫瘍抗原である。ペプチドまたは腫瘍抗原もまた、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）および前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）、正常な前立腺および腫瘍状前立腺組織に発現する２つのタンパク質から同定される。癌胎児性抗原（ＣＥＡ）は結腸直腸癌および他の上皮性腫瘍に頻繁に発現し、腸管の多様な正常の上皮性細胞にも低いレベルで存在するが、結腸直腸癌、胃癌、膵臓癌、非小細胞肺癌および乳癌にも存在する。アルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）およびＣＥＡは、胎生初期に製造される癌胎児性抗原であり、通常は免疫システムが発達すると消滅するが、一部の癌で肝細胞癌として異常に存在する。ＣＡ−１２５（癌関連抗原１２５またはムチン１６として知られるＭＵＣ１６）は、上皮性卵巣癌で高くなるが、多くの婦人科（子宮内膜癌、卵管癌）および非婦人科（膵臓癌、乳癌、結腸癌および肺癌）でも発現し得る。ＭＵＣ１（ムチン１，細胞表面関連タンパク質）過剰発現の多くは、結腸癌、乳癌、卵巣癌、肺癌、消化管癌および膵癌に関連している。
【００９１】
化合物の組合せは、また、癌細胞が過剰発現した腫瘍抗原癌の治療に使用するために有用である。過剰発現抗原は、多くの腫瘍の種類に分けられ、ｈＴＥＲＴ、ＥＧＦＲ、メソテリンは癌細胞によって過剰発現した正常タンパク質である。ｈＴＥＲＴ（ヒトテロメラーゼ逆転写酵素）は、全ての癌の８５％で発現する約一般的な腫瘍抗原である。多くの抗原ペプチド、または腫瘍抗原が、「過剰発現」として報告されており、興味深い過剰発現抗原の例は、遺伝子ＭＯＫ−ＲＡＧＥ−１により細胞癌腫においてコードされたペプチドである。ＲＡＧＥ−１はまた、異なる組織学の種類の腫瘍に発現する。ＰＲＡＭＥ遺伝子から供給される抗原もまた多くの腫瘍の種類において過剰発現しており、多様な正常組織においては低レベルでの発現である。その他の過剰発現遺伝子には、生存しているアポトーシスタンパク質の阻害物質、野生型ｐ５３タンパク質、または卵巣癌および乳癌などの多くの上皮性腫瘍において過剰発現した発癌遺伝子および増殖因子ＥＲＢＢ２（ＨＥＲ２／ＮＥＵ）が挙げられる。ＨＥＲ２は、多くの上皮性腫瘍に発現し、全ての原発性乳癌癌のおおよそ２５％にて過剰発現し、ＨＥＲ２の過剰発現は予後不良に関連している。Ｓｉａｌｙｌ−Ｔｎ（ＳＴｎ）腫瘍抗原（コア領域炭水化物抗原）転移性乳癌およびその他の癌に見つかる。ペプチドまたは腫瘍抗原もまた、タンパク質ウィルムス腫瘍１（ＷＴ１は遺伝的なウィルムス腫瘍の症例で最初に記載されている）由来であると同定されている。正常の細胞と比較して白血病の細胞にて１０から１０００倍の高いレベルで発現する転写因子であり、  急性白血病、慢性の骨髄性白血病および骨髄異形成症候群にて過剰発現する。メソテリンは、肋膜、腹膜および心膜を覆う中皮細胞に限定して正常発現するが、悪性中皮腫癌、膵癌、卵巣癌、肺腺癌、子宮内膜癌、胆道癌、胃癌および小児急性脊髄性白血病を含む、多くの癌でも高発現する、細胞表面糖タンパク質である。
【００９２】
化合物の組合せは、また、腫瘍特異的変異抗原が発現する癌の治療に使用するために有用である。変異抗原は、同定のアプローチ（エクソーム解析または質量分析）によって表され、個別化腫瘍抗原として分類することができる。これらの抗原の交差提示を増加する本発明による化合物の組合せの特異的標的でもある。ＭＵＭ−１は、メラノーマ、Ｂ−カテニン、ＣＤＫ４、ＥＲＢＢ２ＩＰで最初に記載され、腫瘍特異的変異抗原の例である。ＣＥＡ、ＨＥＲ２、ＭＵＣ−１、炭水化物抗原（Ｔｎ、ＴＦ、ＳＴｎ）、癌におけるｐ５３-ａ腫瘍抑制因子遺伝子変異、ｈＴＥＲＴ、およびＷＴ１は、乳癌に関与する腫瘍−特異的変異抗原である。
【００９３】
他の態様において、本発明は、本明細書にて上述される、改善または予防することが可能である任意の状態または任意の疾患の予防または治療またはワクチン接種の同時、別個または連続した使用のための任意の化合物の組合せに関する。具体的には、改善が可能である状態または疾患とは、ＣＤ４７が関与する、具体的にはＣＤ４７が過剰発現する状態または疾患であり、該状態または疾患は、具体的には癌、具体的には、炎症性癌および浸潤した骨髄系細胞の癌、具体的には、浸潤したＭＤＳＣおよび／またはＴＡＭ細胞のもの、感染症、慢性炎症性疾患、自己免疫疾患、神経疾患、脳損傷、神経損傷、赤血球増加症、血色素症、精神的外傷、敗血症性ショック、慢性感染症、特に、シュードモナスおよびＣＭＶ感染症、線維症、アテローム動脈硬化症、肥満、２型糖尿病、メラノーマおよび移植機能障害、具体的には、メラノーマ、具体的には、ＣＤ４７が過剰発現した癌細胞からなる群より選択される。
【００９４】
一態様において、本発明は、本明細書にて上述される、単球骨髄由来抑制細胞（Ｍｏ−ＭＤＳＣ）を非抑制細胞に分化することによって、改善または予防することが可能である任意の状態の治療における同時、別個または連続した使用のための生成物の組合せに関する。
【００９５】
一実施形態において、本発明は、改善または予防することが可能である任意の状態を治療する方法に関し、それを必要とする対象の単球骨髄由来抑制細胞（Ｍｏ−ＭＤＳＣ）を非抑制細胞に分化することによるものであり、該方法は、該対象に有効量の上述される組合せ生成物を同時、別個または連続して投与することを含み、該対象は、ＳＩＲＰａ  ｖ１ポジティブである。
【００９６】
一実施形態において、本発明は、ＳＩＲＰａ  ｖ１ポジティブである対象において、単球骨髄由来抑制細胞（Ｍｏ−ＭＤＳＣ）を非抑制細胞に分化することによって、改善または予防することが可能である任意の状態の治療のための薬剤の製造における、上述される組合せ生成物の使用に関する。
【００９７】
一態様において、本発明は、マクロファージ分裂を炎症誘発性マクロファージに変性することによって、改善または予防することが可能である任意の状態の治療における同時、別個または連続した使用のための上述される組合せ生成物に関する。
【００９８】
一実施形態において、本発明は、改善または予防することが可能である任意の状態を治療する方法に関し、それを必要とする対象においてマクロファージ分裂を炎症誘発性マクロファージに変性することによるものであり、該方法は、該対象に有効量の上述される組合せ生成物を同時、別個または連続して投与することを含み、該対象は、ＳＩＲＰａ  ｖ１ポジティブである。
【００９９】
一実施形態において、本発明は、マクロファージ分裂を炎症誘発性マクロファージに変性することによって、改善または予防することが可能である任意の状態の治療のための薬剤の製造における、上述される組合せ生成物の使用に関する。
【０１００】
一態様において、本発明は、癌、感染症、慢性炎症性疾患、自己免疫疾患、神経疾患、脳損傷、神経損傷、赤血球増加症、血色素症、精神的外傷、敗血症性ショック、慢性感染症（シュードモナスまたはＣＭＶによる）線維症、アテローム動脈硬化症、肥満、２型糖尿病および移植機能障害からなる群より選択される病状の治療において同時、別個または連続して使用するため、またはワクチン接種において使用するための上述される組合せ生成物に関する。
【０１０１】
一実施形態において、本発明は、必要とする対象において癌、感染症、慢性炎症性疾患、自己免疫疾患、神経疾患、脳損傷、神経損傷、赤血球増加症、血色素症、精神的外傷、敗血症性ショック、慢性感染症（シュードモナスまたはＣＭＶによる）線維症、アテローム動脈硬化症、肥満、２型糖尿病および移植機能障害からなる群より選択される病状を治療する方法に関し、該方法は、該対象に有効量の上述される組合せ生成物を同時、別個または連続して投与することを含む。
【０１０２】
一実施形態において、本発明は、癌、感染症、慢性炎症性疾患、自己免疫疾患、神経疾患、脳損傷、神経損傷、赤血球増加症、血色素症、精神的外傷、敗血症性ショック、慢性感染症（シュードモナスまたはＣＭＶによる）線維症、アテローム動脈硬化症、肥満、２型糖尿病および移植機能障害からなる群より選択される病状の治療のため、またはワクチン接種において使用するための薬剤の製造において使用するための上述される組合せ生成物の使用に関する。
【０１０３】
本発明はまた、本明細書に記載されるような任意の化合物の組合せにも関する。
【０１０４】
本発明は、また、患者を抗ヒトＳＩＲＰａ抗体、またはその抗原結合の断片、または抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体を用いて治療するかを決定するのに臨床医を援助するインビトロまたはエクスビボの方法にも関し、より具体的には、抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体、またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体が患者に投与される場合、方法は、患者から事前に取得した生物学的試料にＳＩＲＰａ  ｖ１が存在するかを決定することを含み、該ＳＩＲＰａ  ｖ１は、具体的には、本明細書で定義される抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体によって検出されるか、または本明細書定義されるように製造されるか、または本明細書に開示される方法に従い選択される化合物であり、生物学的試料におけるＳＩＲＰａ  ｖ１の存在は治療が有効である可能性があることを示す。
【０１０５】
本発明はまた、ＳＩＲＰａ  ｖ２ポジティブである患者の状態の治療または予防において使用するための、抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体、または抗ＳＩＲＰａ  ｖ２抗体、またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体を製造するための、かつまたは選択するための方法に関する。そのような用途における抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体は、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ２への結合を阻害し、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ１への結合を防止または阻害せず、具体的には、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰｇへの結合を防止または阻害しない。そのような抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体は、本発明に記載される抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１化合物と同じ結合能力を有し得るが、これらの能力はそのヒトＳＩＲＰａ  ｖ２への結合能力に関することを除く。さらに、そのような抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ２化合物は、以下の特徴のうち少なくとも１つ、具体的には複数、具体的には全ての以下の特徴を有し得る：
ヒトＳＩＲＰａ  ｖ２に結合し、少なくとも１０Ｅ−８Ｍ、具体的には少なくとも１０Ｅ−９Ｍ、少なくとも１０Ｅ−１０Ｍの親和性（ＫＤ）を有する；および／または
ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ２への結合を減少するまたは阻害する；および／または
ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ１への結合を防止または阻害しない；および／または
ヒトＴ細胞増殖分化を阻害しない；および／または
ヒトＴ細胞活性化を阻害しない；および／または
マクロファージの活性化を強化する；および／または
少なくとも１つの抗原の抗原提示細胞によるヒトＴ細胞へ、具体的にはヒトＣＤ８＋Ｔ細胞への交差提示を強化する。
【０１０６】
本発明は、使用のための抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ２抗体、またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体の製造および／または選択における、ポリペプチド、具体的には、抗原の使用にも関する。従って、本明細書では、具体的には、抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ２抗体の製造、および／または係る抗体の選択および／または製造に、および／または係る抗体の結合親和性を試験するのに有用なポリペプチドが提供される。この目標を達成するために、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ２への結合を阻害し、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ１への結合を防止または減少させない、具体的にはヒトＳＩＲＰａ  ｖ１に対し特異的に結合しない、具体的には、ヒトＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、抗体、その抗原結合性の断片または抗原結合性の抗体ミメティックを選択するために使用される配列番号２（ＫＧＳＰＤＴ）または配列番号２９（ＫＦＲＫＧＳＰＤＴＥ）または配列番号３０（ＴＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲ）からなるヒトＳＩＲＰａ  ｖ２を含む、またはからなるポリペプチド、具体的には抗原もまた提供される。
【０１０７】
そのようなポリペプチドは、抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ２化合物の製造および／または選択のために、ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１のエピトープを含むポリペプチドのように使用され得る。本発明は、ＳＩＲＰａ  ｖ１で説明されるように、係るポリペプチドをコードするポリヌクレオチドにも関する。化合物の組合せは、抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１化合物の代わりに、係る抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ２化合物を含み得る。治療の有効性の可能性を評価するエクスビボまたはインビボの方法は、例えば、抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ２化合物を使用することによる、または本明細書で定義されるようにＳＩＲＰａ  ｖ２対立遺伝子を検出することによる、ＩＲＰａ−ｖ２ポジティブ対象を検出すること、またはＳＩＲＰａ  ｖ２を検出することに関する。
【０１０８】
本発明は、本発明に記載される使用のための（抗ヒトＳＩＲＰａ化合物も参照）、抗体、またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体を含む医薬組成物、または本明細書に記載される抗ＳＩＲＰａ化合物の組合せにも関し；該医薬組成物は、賦形薬を含み、該医薬組成物は任意選択的に異なる有効成分をさらに含む。従って、医薬組成物も提供され、該医薬組成物は少なくとも抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体および少なくとも１つの薬学的に許容されるまたは相溶性成分を含む。「薬学的に許容される薬学的に許容されるまたは相溶性成分を含む」という用語は、抗ヒトＳＩＲＰａ抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体と一緒に投与され得る、薬学的に許容される希釈剤、アジュバント、賦形剤またはビヒクルを意味する。医薬組成物医薬組成物は、局所投与、具体的には、皮下投与、腫瘍内投与によって投与され得る。
【０１０９】
本発明に記載される使用のための抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体は、カテーテルにより、坐薬により、移植により注入することによって投与され得、移植は、具体的には長期にわたる投与にためにシリコーン膜などの膜または繊維を含む多孔性、非多孔性またはゼラチン状材料である。その他の実施形態において、本発明に記載される使用のための、抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体は、放出制御系にて投与され得る。その他の実施形態において、本発明に記載される使用のための、抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体は、結合薬剤および１つ以上の薬学的に相溶性のある成分を療治効果的な量で含む医薬組成物として投与することができる。例えば、医薬組成物は典型的には１つ以上の医薬担体（例えば、落花生油、大豆油、石油、鉱油、ゴマ油等などの動物、植物または合成由来のものを含む水および油などの無菌液体）を含む。医薬組成物が投与静脈内投与される場合は、水がより典型的な担体である。生理食塩水および水性ぶどう糖およびグリセリン溶液もまた、特に注射剤のために液体担体として用いることができる。好適な医薬賦形剤には、例えば、でんぷん、ぶどう糖、乳糖、蔗糖、ゼラチン、麦芽、米粉、白亜、シリカゲル、ナトリウムステアリン酸塩、グリセリン、グリセロールモノステアレート、滑石、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセリン、プロピレングリコール、水、エタノール等が挙げられる。所望であれば、組成物は、湿潤剤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤を少量で含有することもできる。これらの組成物は、溶液、懸濁液、乳状液、錠剤、丸薬、カプセル、粉末、徐放性製剤等の形態を取ることができる。組成物は、トリグリセリドなどの従来のバインダーおよび担体を用いて坐薬として配合することができる。経口製剤には、医薬品グレードのマンニトール、乳糖、でんぷん、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウム等など標準的な担体を含有することができる。好適な医薬担体の例は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に記載されている。そのような組成物は、患者の投与に適切である形態を提供するために、療治効果的な量の化合物を、典型的には精製した形態で、好適な量の担体と共に含有するであろう。
【０１１０】
典型的な実施形態において、医薬組成物は、ヒトへの静脈内投与に適合された医薬組成物にとっての常法に従って配合される。典型的には、静脈内投与のための組成物は、無菌等張性水性緩衝液の溶液である。必要であれば、製剤は溶解補助剤および注入箇所の痛みを和らげるためのリグノカインなどの局所麻酔剤を含有することができる。一般的に、成分は活性剤の分量を示す、例えば、凍結乾燥粉末または活性剤アンプルなどの密閉容器中の無水濃縮物として、別個または混合された配合剤のいずれかで供給される。製剤が点滴で投与される場合、滅菌製薬等級水または衝生理食塩水を含有する輸液ボトルを用いて分注することができる。製剤が注射で投与される場合、注射のための滅菌水のアンプルが提供され得、成分を投与の前に混合することができる。
【０１１１】
さらに、医薬組成物は、製剤キットとしても提供することができ、本キットには、（ａ）凍結乾燥形態で抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１結合化合物（例えば、抗体または誘導体）を含有する容器、および（ｂ）薬学的に許容される希釈剤（例えば、滅菌水）を含有する第２の容器が含まれる。凍結乾燥抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１化合物の再構成または希釈に、薬学的に許容される希釈剤を使用することができる。場合によっては、そのような容器には、製薬または生物薬品の製造、使用または販売を規制する政府機関によって規定された通知が伴い得、通知にはヒト投与について製造、使用または販売が機関によって承認されていることを裏付ける。代替的に、キットは、局所投与、具体的には、皮下投与または経口投与に好適であり得、従って、特に、投与される組成物が皮下投与または経口投与される場合にそれぞれ、プレフィルド注射器のようなプレフィルド容器、バイアルのようなまたは針を用いない装置を含む。
【０１１２】
抗ヒトＳＩＲＰａ化合物（例えば、抗体または誘導体）の、疾患の治療または予防、または疾患に対するワクチン接種に有効な量は、標準的な臨床技術によって決定することができる。
【０１１３】
本発明はまた、他の治療または予防処置と併用する、具体的には、放射線療法、化学療法、免疫療法、インドールアミン−２、３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）刺激薬または阻害剤、ＳＴｉｍｕｌａｔｏｒｏｆＩＮｔｅｒｆｅｒｏｎＧｅｎｅｓ（ＳＴＩＮＧ）作動薬、アポトーシス促進性の癌治療薬、血管新生抑制癌治療薬と併用する、本発明に記載される使用のための抗ＳＩＲＰａ化合物に関する。
【０１１４】
本発明のある特定の実施形態において、本発明に記載される使用のための抗ＳＩＲＰａ化合物は、新生抗原または新生エピトープと併用して提供され、抗ＳＩＲＰａ化合物が新生抗原または新生エピトープの、抗原提示細胞による、特にヒトＣＤ８＋Ｔ細胞への交差提示を強化する。新生抗原および新生エピトープは、当該技術分野において周知である方法によって腫瘍内で同定または検知される。
【０１１５】
本発明はまた、ヒト対象内の抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体またはその抗原結合性の断片またはその改変した抗体治療の有効性の可能性を評価する方法にも関し、該方法は以下を含む：
−ＳＩＲＰａ  ｖ１ポジティブであるヒト対象から事前に得た生物学的試料におけるヒトＳＩＲＰａ  ｖ１の存在を決定すること、
−本明細書で開示される；本明細書で開示されるいずれかの組合せ；本明細書で開示されるいずれかの化合物の、抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性の断片またはその改変した抗体の治療上有効量を投与すること。
【０１１６】
そのような方法は、ヒト対象が癌である、または癌になる可能性があると診断されている場合に特に必要とされる。好ましい実施形態において、抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合の断片、その改変した抗体を用いた治療は、ヒト対象が少なくとも１つの対立遺伝子、すなわちヒト対象からの生物学的試料がＳＩＲＰａ  ｖ１ポジティブである場合に有効である可能性がある。
【０１１７】
対象からの生物学的試料内のＳＩＲＰａ  ｖ１の存在は、ヒト対象においてＳＩＲＰａをコードする対立遺伝子を同定することができる当該技術分野において周知であるいずれかの方法によって実施され得る。そのような方法として、ＦＡＣＳのような細胞選別、遺伝子型同定、遺伝子配列、ｉｎｓｉｔｕハイブリダイゼーション、ウエスタンブロット解析、ＥＬＩＳＡ等が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１８】
本発明はまた、以下の実施形態に関する：
１．抗ヒトＳＩＲＰａ抗体、またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体であって、
ａ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含む、重鎖可変ドメインであって、
式中、
ＨＣＤＲ１は、配列番号９に示されるアミノ酸配列を含むまたはからなり、
ＨＣＤＲ２は、配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含むまたはからなり；
ＨＣＤＲ３は、配列番号１３または配列番号１４または配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含むまたはからなり、具体的には、ＨＣＤＲ３配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含むまたはからなる、重鎖可変ドメイン；
および
ｂ）配列番号１６または配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインであって、
抗ヒトＳＩＲＰａ抗体、またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティックが、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ１への結合を阻害し、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ２への結合は防止または阻害しない、軽鎖可変ドメイン；を含み、
ＳＩＲＰａ  ｖ１ポジティブである対象における疾患の予防および／または治療に使用するための、抗ヒトＳＩＲＰａ抗体、またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体。
【０１１９】
２．前記重鎖可変ドメインが、配列番号１８または配列番号１９または配列番号２０または配列番号２１または配列番号２２または配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含むまたはからなり、具体的には、前記重鎖可変ドメインが、配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含むまたはからなり、
前記軽鎖可変ドメインが、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含むまたはからなる、実施形態１に記載の使用のための、抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体、またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体。
【０１２０】
３．前記疾患が、感染症、慢性炎症性疾患、自己免疫疾患、神経疾患、脳損傷、神経損傷、赤血球増加症、血色素症、精神的外傷、敗血症性ショック、慢性感染症、具体的にはシュードモナスおよびサイトメガロウイルス感染症、線維症、アテローム動脈硬化症、肥満、２型糖尿病、および移植機能障害からなる群より選択される、実施形態１または２に記載の使用のための、抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体、またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体。
【０１２１】
４．前記疾患が、癌、具体的には、炎症性癌および浸潤した骨髄系細胞を有する、具体的は浸潤したＭＤＳＣおよび／またはＴＡＭ細胞を有する癌、メラノーマからなる群より選択されるか、実施形態１または２に記載の前記使用は、これらの疾患に対する治療的ワクチン接種のため、具体的には、メラノーマに対する治療的ワクチン接種のためである、実施形態１または２に記載の使用のための、抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体、またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体。
【０１２２】
５．前記疾患が癌であり、ヒト乳頭腫ウイルス、エプスタイン・バーウイルス、メルケル細胞ポリオーマウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、ヒトＴ細胞白血病ウイルス、ヒトヘルペスウイルス８型、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ＨＣＶ、ＨＢＣ，サイトメガロウイルスからの抗原からなる群から、またはＣＴＮＮＢ１遺伝子、ＣＡＳＰ８遺伝子、ＨＥＲ２遺伝子、ｐ５３遺伝子、ＫＲＡＳ遺伝子、ＮＲＡＳ遺伝子の抗原からなる群から誘導される一点変異抗原の群から、または腫瘍抗原、具体的には、ｒａｓ遺伝子、ＢＣＲ−ＡＢＬ腫瘍抗原、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１腫瘍抗原、メラノーマ抗原をコードする遺伝子（ＭＡＧＥ）、ＢＡＧＥ抗原、ＧＡＧＥ抗原、ｓｓｘ抗原、ｎｙ−ｅｓｏ−１抗原、ｃｙｃｌｉｎ−Ａ１腫瘍抗原、ＭＡＲＴ−１抗原、ｇｐ１００抗原、ＣＤ１９抗原、前立腺特異抗原、前立腺酸性ホスファターゼ抗原、癌胎児性抗原、αフェトプロテイン抗原、癌腫抗原１２５、ムチン１６抗原、ムチン１抗原、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素抗原、ＥＧＦＲ抗原、ＭＯＫ抗原、ＲＡＧＥ−１抗原、ＰＲＡＭＥ抗原、野生型ｐ５３抗原、発癌遺伝子ＥＲＢＢ２抗原、ｓｉａｌｙｌ−Ｔｎ腫瘍抗原、Ｗｉｌｍｓ腫瘍１抗原、メソテリン抗原、炭水化物抗原、Ｂ−カテニン抗原、ＭＵＭ−１抗原、ＣＤＫ４抗原およびＥＲＢＢ２ＩＰ抗原、具体的にはメランＡメラノーマ腫瘍関連の抗原（ＴＡＡ）からなる群から発するまたは由来の腫瘍抗原、からなる群より選択される、少なくとも１つの抗原が、前記対象に発現している、または検知されている、実施形態４に記載の使用のための、抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体、またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体。
【０１２３】
６．抗体が、ＣＤ４７が細胞に、特に癌細胞に、特に癌細胞によりＣＤ４７が過剰発現した癌に過剰発現した疾患が存在するＳＩＲＰａ  ｖ１ポジティブ対象に投与される、実施形態１〜５のいずれかに記載の使用のための、抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体、またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体。
【０１２４】
７．以下の特性：
−  ヒトＳＩＲＰａ  ｖ２に対し特異的に結合しない；および
−  ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰｇへの結合を防止または阻害しない、
任意選択的に、以下の特性のうち少なくとも１つ：
−  少なくとも１Ｅ−９Ｍの親和性にてヒトＳＩＲＰａ  ｖ１と結合する；および／または
−  ヒトＳＩＲＰｇに対し特異的に結合しない；および／または
−  インビボでヒトＴ細胞の活性化および／または増殖分化を阻害しない；および／または
−  マクロファージの活性化を強化する；および／または
−  少なくとも１つの抗原の抗原提示細胞によるヒトＴ細胞へ、具体的にはヒトＣＤ８＋Ｔ細胞への交差提示を強化する、を有する、実施形態１〜６のいずれかに記載の使用のための、抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体、またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体。
【０１２５】
８．ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１に特異的に結合し、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ１への結合を阻害し、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ２への結合を防止または阻害しない抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体またはその抗原結合性の断片または抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体の生成における、または選択における、ポリペプチドの使用、具体的には、配列番号１または配列番号４または配列番号２５を含むヒトＳＩＲＰａ  ｖ１のエピトープを含むまたはからなる、特に、配列番号５および／または配列番号６［直鎖状エピトープ］および／または配列番号７および／または配列番号８［立体構造のエピトープ］からなる少なくとも１つのヒトＳＩＲＰａ  ｖ１のエピトープをさらに含む抗原の使用。
【０１２６】
９．ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１の抗原をコードするポリヌクレオチドの使用であって、実施形態８に記載されるポリペプチド、具体的には、抗原の生成のために、前記分離ポリヌクレオチドが、配列番号１、配列番号４または配列番号２５のアミノ酸残基を含む、特に、配列番号５および／または配列番号６［直鎖状エピトープ］および／または配列番号７および／または配列番号８［立体構造のエピトープ］を含む、またはからなる少なくとも１つのヒトＳＩＲＰａ  ｖ１のエピトープをさらに含む、ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１のエピトープをコードする、使用。
【０１２７】
１０．抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体を調製スルタンの方法であって、前記方法は、非ヒト動物、具体的には、非ヒト哺乳動物を、実施形態９に定義される少なくとも１つの抗原で、または配列番号１、配列番号４または配列番号２５からなるヒトＳＩＲＰａ  ｖ１のエピトープ  を含むまたはからなる少なくとも１つの抗原で免疫化すること、および特に、前記免疫化された非ヒト動物から得られるまたは細胞Ｂを採取して前記抗原に対する抗体を得ることを含み、特に、前記抗原は、配列番号１または配列番号４または配列番号２５からなるヒトＳＩＲＰａ  ｖ１のエピトープを含むまたはからなり、少なくとも１つのヒトＳＩＲＰａ  ｖ１のエピトープは、配列番号５および／または配列番号６および／または配列番号７および／または配列番号８からなる、方法。
【０１２８】
１１．抗原提示細胞、具体的には樹状細胞による、抗原の、Ｔ細胞、具体的には、ＣＤ８＋Ｔ細胞への交差提示を増加する方法であって、前記方法が、抗ヒトＳＩＲＰａ、抗体、またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体からなる群より選択される化合物を対象に投与することを含み、前記化合物が、少なくとも以下の特性を有する：
１．ヒトＳＩＲＰａ  ｖ２に対し特異的に結合しない；および
２．少なくとも１Ｅ−９Ｍの親和性にてヒトＳＩＲＰａ  ｖ１と結合する；および
３．ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ１への結合を減少するまたは阻害する；および
４．ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ２への結合を防止または阻害しない；および任意選択的に、
前記化合物が、任意選択的に以下の特性のうち少なくとも１つを有する：
ｉ）Ｔ細胞増殖分化を阻害しない；および／または
ｉｉ）Ｔ細胞活性化を阻害しない；および／または
ｉｉｉ）マクロファージの活性化を強化する；および／または
ｉｖ）ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰｇへの結合を防止または阻害しない、方法。
【０１２９】
１２．患者を抗ヒトＳＩＲＰａ抗体、またはその抗原結合の断片、または抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体を用いて治療するかを決定するのに臨床医を援助するインビトロまたはエクスビボの方法であって、より具体的には、抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体、またはその抗原結合性の断片、または抗原結合性の抗体ミメティック、または改変した抗体が患者に投与される場合、前記方法は、患者から事前に取得した生物学的試料にＳＩＲＰａ  ｖ１が存在するかを決定することを含み、前記ＳＩＲＰａ  ｖ１は特に、本明細書で定義される抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体によって検知されるか、または本明細書定義されるように製造されるか、または本明細書に開示される方法に従い選択される化合物であり、生物学的試料におけるＳＩＲＰａ  ｖ１の存在は治療が有効である可能性があることを示す、方法。
【０１３０】
１３．回収された抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体は少なくとも１Ｅ−９Ｍの親和性にてヒトＳＩＲＰａ  ｖ１に対し特異的に結合し、ヒトＳＩＲＰａ  ｖ２に対して特異的に結合せず、特に前記回収された抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体は、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ１への結合の拮抗薬であり、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ２およびヒトＳＩＲＰｇへの結合を防止または阻害しない、実施形態１０に記載される方法。
【０１３１】
１４．抗体、その抗原結合性の断片または抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体からなる群から、化合物を選択および回収する方法であって、前記方法は、少なくとも以下の工程：
ａ）前記化合物の、ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１に対して特異的に結合する能力を試験すること；および
ｂ）前記化合物の、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ１への結合を減少するまたは阻害する能力を試験すること；および
ｃ）前記化合物の、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ２への結合を防止または阻害しない能力を試験すること；および
ｄ）前記化合物の、配列番号３のＳＩＲＰａにおける位置１３０および１３２上にそれぞれ位置する；または配列番号２５のＳＩＲＰａにおける位置１００および１０２上にそれぞれ位置する、アミノ酸残基ＤおよびＶに結合する能力を試験すること、
および、任意選択的に、
ｅ）前記化合物の、ヒトＳＩＲＰａ  ｖ２に対し特異的に結合しない能力を試験すること；および／または
ｆ）前記化合物の、ヒトＳＩＲＰｇに対し特異的に結合しない能力を試験すること；および／または
ｇ）前記化合物の、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰｇへの結合を防止または阻害しない能力を試験すること；を含み、
前記回収された化合物が、以下の特性を有し：
１．ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１に対し特異的に結合する；
２．ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ１への結合を減少するまたは阻害する；および
３．ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ２への結合を防止または阻害しない；
かつ任意選択的に、以下の特性のうち少なくとも１つ：
４．ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰｇへの結合を防止または阻害しない；かつ／または
５．少なくとも１Ｅ−９Ｍの親和性にてヒトＳＩＲＰａ  ｖ１と結合する；および／または
６．ヒトＳＩＲＰｇに対し特異的に結合しない；および／または
７．ヒトＳＩＲＰａ  ｖ２に対し特異的に結合しない、を有する、方法。
【０１３２】
１５．さらに以下の工程の少なくとも１つ：
ｉ）化合物に存在するＴ細胞増殖分化を試験すること；および／または
ｉｉ）化合物に存在するＴ細胞活性化を試験すること；および／または
ｉｉｉ）化合物に存在するマクロファージ活性化を試験すること；および／または
ｉｖ）抗原、具体的には、腫瘍抗原、具体的には、メランＡメラノーマ腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）の、化合物の存在下で、抗原提示細胞、具体的には、樹状細胞による、ヒトＴ細胞への交差提示、具体的には、抗原の、樹状細胞によるヒトＣＤ８＋Ｔ細胞への交差提示を試験することを含み、
回収された化合物が、少なくとも以下の特性：
１．ヒトＴ細胞増殖分化を阻害しない；および／または
２．ヒトＴ細胞活性化を阻害しない；および／または
３．マクロファージの活性化を強化する；および／または
４．抗原の抗原提示細胞によるヒトＴ細胞への交差提示を強化する、を含む、実施形態１４に記載される化合物を選択および回収する方法。
【０１３３】
１６．ヒト対象において、インビトロまたはエクスビボでの疾患の重症度を診断する方法、特に個別化医療で使用するのに好適な診断の方法であって、本発明のいずれかの実施形態で定義された抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性の断片または抗原結合性の抗体ミメティック、または本発明で定義さるように製造された、または本発明に従って選択された化合物が、対象から事前に得た生物学的試料中のＳＩＲＰａポジティブ細胞を検知するために使用され、ＳＩＲＰａ  ｖ１の発現が場合によって定量化される、方法。
【０１３４】
１７．ヒト対象において、インビトロまたはエクスビボでの疾患の重症度を診断する方法、特に個別化医療で使用するのに好適な診断の方法であって、本発明のいずれかの実施形態で定義された抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性の断片または抗原結合性の抗体ミメティック、または本発明のいずれかの実施形態で定義さるように製造された、または本発明のいずれかの実施形態に従って選択された化合物が、対象から事前に得た生物学的試料中のＳＩＲＰａポジティブ細胞を検知するために使用され、ＳＩＲＰａ  ｖ１の発現が場合によって定量化される方法。
【０１３５】
１８．実施形態１〜７のいずれかに記載される使用のための抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体を含む組成物、および少なくとも１つの賦形薬。
【０１３６】
１９．キットであって、実施形態１〜７および１８のいずれかに記載される使用のための抗体、その抗原結合性の断片、抗原結合性の抗体ミメティックまたは改変した抗体と、局所投与に好適な装置、具体的には皮下または経口送達装置、具体的には、プレフィルド注射器を含む装置、または具体的には、無針装置とを含む、キット。
【０１３７】
２０．化合物の組合せであって、ＳＩＲＰａ  ｖ１ポジティブ対象において、疾患の治療または予防に使用するための薬剤またはワクチン組成物として使用するための、実施形態１〜７に記載される、もしくは本明細書に開示されるいずれかの実施形態に従って生成された抗体か、または本明細書に開示されるいずれかの実施形態に従って選択された化合物と、少なくとも１つの抗原であって、ヒト乳頭腫ウイルス、エプスタイン・バーウイルス、メルケル細胞ポリオーマウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、ヒトＴ細胞白血病ウイルス、ヒトヘルペスウイルス８型、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ＨＣＶ、ＨＢＣ，サイトメガロウイルスからなる群から、またはＣＴＮＮＢ１遺伝子、ＣＡＳＰ８遺伝子、ＨＥＲ２遺伝子、ｐ５３遺伝子、ＫＲＡＳ遺伝子ＮＲＡＳ遺伝子の抗原、または腫瘍抗原であって、具体的には、ｒａｓ遺伝子ＢＣＲ−ＡＢＬ腫瘍抗原、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１腫瘍抗原、メラノーマ抗原をコードする遺伝子（ＭＡＧＥ）、ＢＡＧＥ抗原、ＧＡＧＥ抗原、ｓｓｘ抗原、ｎｙ−ｅｓｏ−１抗原、ｃｙｃｌｉｎ−Ａ１腫瘍抗原、ＭＡＲＴ−１抗原、ｇｐ１００抗原、ＣＤ１９抗原、前立腺特異抗原、前立腺酸性ホスファターゼ抗原、癌胎児性抗原、αフェトプロテイン抗原、癌腫抗原１２５、ムチン１６抗原、ムチン１抗原、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素抗原、ＥＧＦＲ抗原、ＭＯＫ抗原、ＲＡＧＥ−１抗原、ＰＲＡＭＥ抗原、野生型ｐ５３抗原、発癌遺伝子ＥＲＢＢ２抗原、ｓｉａｌｙｌ−Ｔｎ腫瘍抗原、Ｗｉｌｍｓ腫瘍１抗原、メソテリン抗原、炭水化物抗原、Ｂ−カテニン抗原、ＭＵＭ−１抗原、ＣＤＫ４抗原およびＥＲＢＢ２ＩＰ抗原、具体的にはメランＡメラノーマ腫瘍関連の抗原（ＴＡＡ）からなる群から発するまたは誘導される腫瘍抗原、の抗原からなる群から誘導された一点変異抗原の群から供給されたまたは誘導された少なくとも１つの抗原と、を含む化合物の組合せ。
【０１３８】
２１．
−ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１に対して特異的に結合し、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａ  ｖ１への結合を阻害する；
−ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰへの結合を防止または阻害せず；かつ特に、ヒトＳＩＲＰｇに対して特異的に結合しない、
疾患、具体的には、癌の治療もしくは予防に使用するため、または疾患具体的には、癌に対する治療的ワクチン接種に使用するための、抗原結合性の抗体ミメティックであって、前記疾患具体的には、前記癌で発現する抗原の交差提示を強化し、前記疾患の治療に好適なＴ細胞の応答を引き出すものである、抗原結合性の抗体ミメティック。
【０１３９】
２２．ＳＩＲＰａ  ｖ１ポジティブである対象における疾患の予防および／または治療に使用される、実施形態２１に記載される使用するための抗原結合性の抗体ミメティック。
【０１４０】
２３．前記疾患が、癌、具体的には、浸潤した骨髄系細胞を有する炎症性癌、より具体的は浸潤した樹状細胞および／もしくはＭＤＳＣおよび／もしくはＴＡＭ細胞を有する癌、癌転移、具体的には、乳癌癌転移、メラノーマであり、実施形態２１または２２に記載される前記使用が、これらの疾患のうちの１つ対する治療的ワクチン接種、具体的にはメラノーマに対する治療的ワクチン接種である、実施形態２１または２２に記載される使用のための抗原結合性の抗体ミメティック。
【０１４１】
２４．以下の特性：
−ヒトＳＩＲＰａ  ｖ２に対し特異的に結合しない；
−ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰｇへの結合を阻害または防止しない；具体的には、ヒトＳＩＲＰｇに結合しない；
−少なくとも１０Ｅ−９Ｍの親和性にてヒトＳＩＲＰａ  ｖ１と結合する；
−少なくとも１つの抗原の抗原提示細胞によるヒトＴ細胞へ、具体的には、樹状細胞によって、具体的にはヒトＣＤ８＋Ｔ細胞への交差提示を強化する；を有する、実施形態２１〜２３に記載される使用のための抗原結合性の抗体ミメティック。
【０１４２】
２５．さらに以下の特性：
−インビボでヒトＴ細胞の活性化および／または増殖分化を阻害しない；および／または
−マクロファージの活性化を強化する；のうちの少なくとも１つを有する、実施形態２４に記載される使用のための抗原結合性の抗体ミメティック。
【０１４３】
２６．さらに少なくとも１つの賦形薬を含む、実施形態２１〜２５に記載される使用のための抗原結合性の抗体ミメティック。
【０１４４】
２７．前記疾患が癌であり、少なくとも１つの抗原であって、ヒト乳頭腫ウイルス、エプスタイン・バーウイルス、メルケル細胞ポリオーマウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、ヒトＴ細胞白血病ウイルス、ヒトヘルペスウイルス８型、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ＨＣＶ、ＨＢＣ，サイトメガロウイルスからなる群から、またはＣＴＮＮＢ１遺伝子、ＣＡＳＰ８遺伝子、ＨＥＲ２遺伝子、ｐ５３遺伝子、ＫＲＡＳ遺伝子ＮＲＡＳ遺伝子の抗原、または腫瘍抗原であって、具体的には、ｒａｓ遺伝子ＢＣＲ−ＡＢＬ腫瘍抗原、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１腫瘍抗原、メラノーマ抗原をコードする遺伝子（ＭＡＧＥ）、ＢＡＧＥ抗原、ＧＡＧＥ抗原、ｓｓｘ抗原、ｎｙ−ｅｓｏ−１抗原、ｃｙｃｌｉｎ−Ａ１腫瘍抗原、ＭＡＲＴ−１抗原、ｇｐ１００抗原、ＣＤ１９抗原、前立腺特異抗原、前立腺酸性ホスファターゼ抗原、癌胎児性抗原、αフェトプロテイン抗原、癌腫抗原１２５、ムチン１６抗原、ムチン１抗原、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素抗原、ＥＧＦＲ抗原、ＭＯＫ抗原、ＲＡＧＥ−１抗原、ＰＲＡＭＥ抗原、野生型ｐ５３抗原、発癌遺伝子ＥＲＢＢ２抗原、ｓｉａｌｙｌ−Ｔｎ腫瘍抗原、Ｗｉｌｍｓ腫瘍１抗原、メソテリン抗原、炭水化物抗原、Ｂ−カテニン抗原、ＭＵＭ−１抗原、ＣＤＫ４抗原およびＥＲＢＢ２ＩＰ抗原、具体的にはメランＡメラノーマ腫瘍関連の抗原（ＴＡＡ）からなる群から発するまたは誘導される腫瘍抗原、の抗原からなる群から誘導された一点変異抗原の群から供給されたまたは誘導された少なくとも１つの抗原が、対象に発現する、または検知されている、実施形態２１〜２６に記載される使用のための抗原結合性の抗体ミメティック。
【０１４５】
２８．ＳＩＲＰａ  ｖ１ポジティブである対象における疾患の予防および／または治療に使用される、薬剤としてまたはワクチン組成物として使用するための、少なくとも１つの抗原であって、ヒト乳頭腫ウイルス、エプスタイン・バーウイルス、メルケル細胞ポリオーマウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、ヒトＴ細胞白血病ウイルス、ヒトヘルペスウイルス８型、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ＨＣＶ、ＨＢＣ，サイトメガロウイルスからなる群から、またはＣＴＮＮＢ１遺伝子、ＣＡＳＰ８遺伝子、ＨＥＲ２遺伝子、ｐ５３遺伝子、ＫＲＡＳ遺伝子ＮＲＡＳ遺伝子の抗原、または腫瘍抗原であって、具体的には、ｒａｓ遺伝子ＢＣＲ−ＡＢＬ腫瘍抗原、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１腫瘍抗原、メラノーマ抗原をコードする遺伝子（ＭＡＧＥ）、ＢＡＧＥ抗原、ＧＡＧＥ抗原、ｓｓｘ抗原、ｎｙ−ｅｓｏ−１抗原、ｃｙｃｌｉｎ−Ａ１腫瘍抗原、ＭＡＲＴ−１抗原、ｇｐ１００抗原、ＣＤ１９抗原、前立腺特異抗原、前立腺酸性ホスファターゼ抗原、癌胎児性抗原、αフェトプロテイン抗原、癌腫抗原１２５、ムチン１６抗原、ムチン１抗原、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素抗原、ＥＧＦＲ抗原、ＭＯＫ抗原、ＲＡＧＥ−１抗原、ＰＲＡＭＥ抗原、野生型ｐ５３抗原、発癌遺伝子ＥＲＢＢ２抗原、ｓｉａｌｙｌ−Ｔｎ腫瘍抗原、Ｗｉｌｍｓ腫瘍１抗原、メソテリン抗原、炭水化物抗原、Ｂ−カテニン抗原、ＭＵＭ−１抗原、ＣＤＫ４抗原およびＥＲＢＢ２ＩＰ抗原、具体的にはメランＡメラノーマ腫瘍関連の抗原（ＴＡＡ）からなる群から発するまたは誘導される腫瘍抗原、の抗原からなる群から誘導された一点変異抗原の群から供給されたまたは誘導された少なくとも１つの抗原をさらに含む、実施形態２１〜２７に記載される使用のための抗原結合性の抗体ミメティック。
【図面の簡単な説明】
【０１４６】
【図１】ＳＩＲＰファミリー配列アラインメントＳＩＲＰａ変異体ｖ１およびｖ２、ＳＩＲＰｂおよびＳＩＲＰｇの膜遠位ドメインタンパク質配列、およびタンパク質配列へのＳＮＰの定位（番号付けされた矢印１〜１６）。グレーの枠はペプチドシグナル配列に対応し、太い下線は抗ヒトＳＩＲＰａ抗体によって認識された直鎖状エピトープを表し、グレーの点線枠は抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体によって認識された立体構造のエピトープを表す。配列番号３２〜３５は図１に「Ｐ７８３２８＿ＳＩＲＰＡ＿ＨＵＭＡＮ＿Ｖａｒｉａｎｔ１」；「ＳＩＲＰＡ＿ＨＵＭＡＮ＿Ｖａｒｉａｎｔ」；「Ｏ００２４１＿ＳＩＲＰＢ＿ＨＵＭＡＮ」；および「Ｑ９Ｐ１Ｗ８＿ＳＩＲＰＧ＿ＨＵＭＡＮ」と示される配列にそれぞれ対応している。
【図２】血中単球によって発現されるヒトＳＩＲＰａ変異体Ｖ１およびＶ２に対する抗体の結合。ＳＩＲＰａ  ｅｘｏｎ３に既に配列された健常ドナーが選択される。蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）によって、インハウス抗ＳＩＲＰａ抗体（図面左側がＡｎｔｉ−ＳＩＲＰａ  ｖ１−ＦＩＴＣ）および商業ＳＥ７Ｃ２（図面右側）の結合が、ＳＩＲＰａ  ｖ１／Ｖ１およびＳＩＲＰａ  ｖ２／Ｖ２ホモ接合並びにＳＩＲＰａ  ｖ１／Ｖ２ヘテロ接合から選択されたドナーからの血中単球上で試験された。
【図３】ＳＩＲＰａ  ｖ１ｖ１／ｖ１ホモ接合ドナー、ＳＩＲＰａ  ｖ１／ｖ２ヘテロ接合ドナーまたはＳＩＲＰａ  ｖ２／ｖ２ホモ接合ドナーであるドナーからの血中単球上の抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体の拮抗作用。ホモ接合体またはヘテロ接合体ドナー細胞を使用したＳＩＲＰａＣＤ４７相互作用における１つの抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体のＦＡＣＳによる拮抗実験。抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体の用量反応を使用して、異なるドナーからのＣＤ４７のＳＩＲＰａ変異体への結合と拮抗させる。ＣＤ４７結合の百分率は対照に対して正規化され、結果は各細胞ドナーについて表される。Ｖ２／Ｖ２ホモ接合体（三角）、Ｖ１／Ｖ２ヘテロ接合体（四角）およびホモ接合体Ｖ１／Ｖ１（丸）。
【図４】Ｅｌｉｓａによる抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体およびＫｗａｒ抗体を使用したＳＩＲＰａ変異体結合試験。ＥＬＩＳＡによる、マウスＦｃドメインに連結した、固定化ＳＩＲＰａ変異変異体（ＳＩＲＰａ  ｖ１〜ｖ８  、実施例１の表２を参照）の結合評価。抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体およびＫｗａｒ抗体（ＳＩＲＰａ  ｖ１およびＳＩＲＰａ  ｖ２の両方に結合することが知られている）の、異なるＳＩＲＰａ変異変異体に対する結合能力が比較される。ロバの抗ヒト抗体に顕色を実施し、ＴＭＢ基質を使用して４５０ｎｍでの比色分析によって明らかにした。ＥＤ５０（ｎｇ／ｍｌ）は、本アッセイでの５０％のシグナルに達する示された抗体の濃度である。
【図５】樹状細胞（ＤＣ）によるマウス抗原交差提示マウスＤＣをオボアルブミン抗原で事前負荷し、次にＯＴＩまたはＯＴＩＩマウスからのトランスジェニックＴ細胞（それらのＴＣＲ発現をＯＶＡＭＨＣＩまたはＩＩ専用にするための遺伝子導入）と培養する。Ｔ細胞増殖分化を異なる条件におけるチミジン取り込み（ＯＴＩＣＤ８＋ＴｏｒＯＴＩＩＣＤ４＋Ｔ細胞）によって測定する：Ａｇ無しの対照（白丸）またはアイソタイプ抗体対照（クロス）、マウス抗ＳＩＲＰａ抗体Ｐ８４（四角）およびＭＹ１（黒丸）または抗ＣＤ４７抗体（三角）。Ａ：ＯＴＩＣＤ８ポジティブＴ細胞で得た結果。Ｂ：ＯＴ−ＩＩＣＤ４ポジティブＴ細胞で得た結果。
【図６】樹状細胞によるヒト抗原交差提示ＨＬＡ−Ａ２＋ＨＶからの単球をＳＩＲＰａについて表現型を決定し、２つの種類の実験にてホモ接合（ｖ１／ｖ１）およびヘテロ接合（ｖ１／ｖ２）単球の両方が使用される。Ａ．ＣＤ８＋ＴＴ細胞におけるＩＬ−２発現。ＳＩＲＰａ  ｖ１ホモ接合体未熟ＤＣで得られた結果は黒丸で、ＳＩＲＰａ  ｖ１／ｖ２ヘテロ接合体未熟ＤＣでの結果は四角で表される。メランＡを負荷した未熟ＤＣを、メランＡ／ＨＬＡ−Ａ２＋特異的胸腺腫クローンを活性化するために使用し、４８時間の培養後にＩＬ−２分泌物によって測定した。Ｂ．メランＡ負荷ｉＤＣで刺激したＩＦＮｇのＣＤ８＋Ｔ細胞における発現であり、ｉＤＣを事前に負荷段階中にインキュベートした：抗ＳＩＲＰａ  ｖ１（黒丸）、抗ＳＩＲＰａ／ｇ（四角）、抗ＳＩＲＰａ  ｖ１＋ａｎｔｉ−ＳＩＲＰａ／ｇ（ひし形）、Ｂ６Ｈ１２（逆三角）およびＣＣ２Ｃ６（三角）。フローサイトメトリーによりＩＦＮｇの発現を評価した。
【図７】樹状細胞の存在下における抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１および抗ヒトＣＤ４７抗体に対するＴ細胞のアロジェニック応答（ＣＤ４およびＣＤ８ポジティブ細胞）。健常者からの末梢血単核球細胞から分離したヒトＴ細胞を、５Ｔ細胞で、アロジェネイック樹状細胞（ＤＣ）で刺激した。５日間の１ＤＣ比率。抗体を培養０日目に添加した。Ａ：培養の最後１２時間中にＨ３−チミジンを組み込むことによって測定した増殖分化。Ｂ：ＥＬＩＳＡによって測定したＩＦＮｇ分泌物の百分率。結果を対照条件に正規化した。抗ＳＩＲＰａ  ｖ１（四角）は、ＳＩＲＰａ  ｖ２およびＳＩＲＰｇには結合せずＳＩＲＰａ  ｖ１に特異的であるインハウス抗体を投与した細胞に対応する。ＣＤ４７ｍＡｂ（三角）は、ＣＤ４７に結合する抗体を投与した細胞に対応する。
【図８】抗ＳＩＲＰａ  ｖ１ＳＩＲＰａ  ｖ１抗体を投与したＶ１／Ｖ１およびＶ１／Ｖ２ドナー単球を比較したマクロファージ分裂バイオアッセイ抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体を投与していない（白丸）または投与した（四角）細胞の上澄部中のＭＩＰ−１ａ／ＣＣＬ−３およびＭＩＰ−１ｂ／ＣＣＬ−４分泌物を、ＥＬＩＳＡによって測定した。Ａ：ホモ接合体ドナーＶ１／Ｖ１からの細胞で得た結果。Ｂ：ヘテロ接合体ドナーＶ１／Ｖ１からの細胞で得た結果。
【図９】ＦＡＣＳによるＳＩＲＰａ  ｖ２についてのヒト単球ホモ接合体における抗ＳＩＲＰａ抗体の結合分析およびＥＬＩＳＡによるＳＩＲＰａ  ｖ２に対する抗体のＥＤ５０の決定。キメラ１８Ｄ５抗体またはＳＩＲＰ２９抗体または異なるヒト化抗ＳＩＲＰａ抗体のヒト単球細胞ｖ２／ｖ２（事前にヒトＦｃ受容体結合阻害剤で染色した）についての蛍光測定による評価Ｃａｎｔｏｌｌサイトメータ−にてＰＥ標識されたマウス抗ヒトＦｃｍＡｂを用いて顕色を実施した。ＥＤ５０は、５０％のシグナルに達する示された抗体の濃度である。Ａ：染色されたポジティブ細胞ｖ２／ｖ２の平均蛍光強度。Ｂ：各抗体についてのＥＬＩＳＡによるＥＤ５０の決定。ほとんどのヒト化１８Ｄ５抗体でＥＤ５０は検知できなかた。
【図１０】Ｂｌｉｔｚによる抗ＳＩＲＰ抗体によって事前インキュベートしたヒトＳＩＲＰｇ組み換えタンパク質におけるＣＤ４７の拮抗分析。ＳＩＲＰｇ−Ｈｉｓ組み換えタンパク質を１０μｇ／ｍｌでＮＩＮＴＡバイオセンサー上に固定し、表示される抗体を２０μｇ／ｍｌで添加した（飽和濃度）。次に、ＣＤ４７Ｆｃを１００μｇ／ｍｌで添加し、１２０秒の会合期間（Ｋａ）の後親和性値を推定し、続いて１２０秒の（ｋｄ）分離機関の後親和性定数（ＫＤ）を決定した。ＣＤ４７のＳＩＲＰｇへのＫＤ親和性を異なる条件で決定した：ＬＳＢ２．２０抗体（ＳＩＲＰｇに特異的に結合する抗体）；ｋｗａｒ抗体、およびＳＩＲＰ２９抗体の存在下。
【図１１】乳癌のマウス転移モデルにおける抗ＳＩＲＰａ抗体の有効性。４Ｔ１乳癌モデルを使用してマウス抗ＳＩＲＰａ（ｐ８４抗体およびＭＹ−１抗体）の肺転移における有効性を実験した。数字は、抗ＳＩＲＰａ抗体を投与した、または投与していないマウスの肺転移結節の数を表す。同位体対照を投与したマウスをひし形で表し、ｐ８４抗体を投与したマウスを黒丸で表し、ＭＹ−１抗体を投与したマウスを四角で表す。対照と各抗ＳＩＲＰａ抗体との間の結果は有意なものであった。
【発明を実施するための形態】
【実施例１】
【０１４７】
抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体を生成させるエピトープの同定
ヒトＳＩＲＰａは、ＣＤ４７と相互作用するＩｇＶドメインにおいていくらかの多型性レベルを表すことが前述されている。この多型性はＳＩＲＰａ遺伝子（配列番号２７）のｅｘｏｎ３に主に位置している（Ｔａｋｅｎａｋａ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。元の異なる３７の異なるドナーのゲノム配列にて、Ｔａｋｅｎａｋａらは、２つの主要な対立遺伝子：変異体１（ｖ１）および変異体２（ｖ２）を含む１０の異なる配列／対立遺伝子を同定した。他の対立遺伝子は、Ｖ１またはＶ２配列と１つまたは２つＳＮＰが異なるのみである。従って、ＳＩＲＰａファミリーは２つのサブファミリーに分類される：ＳＩＲＰａ  ｖ１イソ型およびＳＩＲＰａ  ｖ２イソ型。これらの異なる対立遺伝子は、大きく異なるタンパク質をもたらすが、全ての変異体はＣＤ４７リガンドと同様に結合する。Ｔａｋｅｎａｋａらものでは、ｖ１の対立遺伝子頻度は７８％（Ｖ１およびＶ１−様では８９％）であり、ホモ接合Ｖ１／Ｖ１−ｌ様ドナーの遺伝子型頻度は６５％である。彼らの３７のドナーの２４％がヘテロ接合遺伝子型を示した。
【０１４８】
ＤＮＡのコーディングおよびＳＩＲＰａ  ｖ１およびＶ２のタンパク質配列：
ヒトＳＩＲＰａ配列のＶ１をｎｃｂｉ（遺伝子ＩＤ：１４０８８５）で得た。
【０１４９】
ＳＩＲＰａ  ｖ１ｅｘｏｎ３のゲノムＤＮＡ参照配列（転写ＳＩＲＰＡ−２０１ＩＤＥＮＳＴ０００００４０００６８．７）（配列番号２７）：
ＧＡＧＴＧＧＣＧＧＧＴＧＡＧＧＡＧＧＡＧＣＴＧＣＡＧＧＴＧＡＴＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＡＧＴＣＣＧＴＧＴＴＧＧＴＴＧＣＡＧＣＴＧＧＡＧＡＧＡＣＡＧＣＣＡＣＴＣＴＧＣＧＣＴＧＣＡＣＴＧＣＧＡＣＣＴＣＴＣＴＧＡＴＣＣＣＴＧＴＧＧＧＧＣＣＣＡＴＣＣＡＧＴＧＧＴＴＣＡＧＡＧＧＡＧＣＴＧＧＡＣＣＡＧＧＣＣＧＧＧＡＡＴＴＡＡＴＣＴＡＣＡＡＴＣＡＡＡＡＡＧＡＡＧＧＣＣＡＣＴＴＣＣＣＣＣＧＧＧＴＡＡＣＡＡＣＴＧＴＴＴＣＡＧＡＣＣＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＡＡＡＣＡＡＣＡＴＧＧＡＣＴＴＴＴＣＣＡＴＣＣＧＣＡＴＣＧＧＴＡＡＣＡＴＣＡＣＣＣＣＡＧＣＡＧＡＴＧＣＣＧＧＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＴＧＡＡＧＴＴＣＣＧＧＡＡＡＧＧＧＡＧＣＣＣＣＧＡＴＧＡＣＧＴＧＧＡＧＴＴＴＡＡＧＴＣＴＧＧＡＧＣＡＧＧＣＡＣＴＧＡＧＣＴＧＴＣＴＧＴＧＣＧＣＧ
【０１５０】
一ＳＩＲＰａ  ｖ１アミノ酸配列（Ｇｅｎｂａｎｋ参照ＮＰ＿００１０３５１１１．１（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ７８３２４）（ＳＥＱＩＤ番号３）：
ＭＥＰＡＧＰＡＰＧＲＬＧＰＬＬＣＬＬＬＡＡＳＣＡＷＳＧＶＡＧＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＡＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＤＬＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳＡＰＶＶＳＧＰＡＡＲＡＴＰＱＨＴＶＳＦＴＣＥＳＨＧＦＳＰＲＤＩＴＬＫＷＦＫＮＧＮＥＬＳＤＦＱＴＮＶＤＰＶＧＥＳＶＳＹＳＩＨＳＴＡＫＶＶＬＴＲＥＤＶＨＳＱＶＩＣＥＶＡＨＶＴＬＱＧＤＰＬＲＧＴＡＮＬＳＥＴＩＲＶＰＰＴＬＥＶＴＱＱＰＶＲＡＥＮＱＶＮＶＴＣＱＶＲＫＦＹＰＱＲＬＱＬＴＷＬＥＮＧＮＶＳＲＴＥＴＡＳＴＶＴＥＮＫＤＧＴＹＮＷＭＳＷＬＬＶＮＶＳＡＨＲＤＤＶＫＬＴＣＱＶＥＨＤＧＱＰＡＶＳＫＳＨＤＬＫＶＳＡＨＰＫＥＱＧＳＮＴＡＡＥＮＴＧＳＮＥＲＮＩＹＩＶＶＧＶＶＣＴＬＬＶＡＬＬＭＡＡＬＹＬＶＲＩＲＱＫＫＡＱＧＳＴＳＳＴＲＬＨＥＰＥＫＮＡＲＥＩＴＱＤＴＮＤＩＴＹＡＤＬＮＬＰＫＧＫＫＰＡＰＱＡＡＥＰＮＮＨＴＥＹＡＳＩＱＴＳＰＱＰＡＳＥＤＴＬＴＹＡＤＬＤＭＶＨＬＮＲＴＰＫＱＰＡＰＫＰＥＰＳＦＳＥＹＡＳＶＱＶＰＲＫ
【０１５１】
一ＳＩＲＰａ  ｖ２アミノ酸配列（ＳＥＱＩＤ番号２８）：
変異体２タンパク質配列がＴａｋｅｎａｋａｅｔａｌ．，２００７で参照される。コーディングＤＮＡ配列をｎｃｂｉで得た（ＧｅｎＢａｎｋ：ＢＣ０７５８４９．１）。この変異体の遺伝子配列関してはｎｃｂｉデータベースでは見つからなかった。
ＭＥＰＡＧＰＡＰＧＲＬＧＰＬＬＣＬＬＬＡＡＳＣＡＷＳＧＶＡＧＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＡＩＬＨＣＴＶＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＥＳＴＫＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＴＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳＡＰＶＶＳＧＰＡＡＲＡＴＰＱＨＴＶＳＦＴＣＥＳＨＧＦＳＰＲＤＩＴＬＫＷＦＫＮＧＮＥＬＳＤＦＱＴＮＶＤＰＶＧＥＳＶＳＹＳＩＨＳＴＡＫＶＶＬＴＲＥＤＶＨＳＱＶＩＣＥＶＡＨＶＴＬＱＧＤＰＬＲＧＴＡＮＬＳＥＴＩＲＶＰＰＴＬＥＶＴＱＱＰＶＲＡＥＮＱＶＮＶＴＣＱＶＲＫＦＹＰＱＲＬＱＬＴＷＬＥＮＧＮＶＳＲＴＥＴＡＳＴＶＴＥＮＫＤＧＴＹＮＷＭＳＷＬＬＶＮＶＳＡＨＲＤＤＶＫＬＴＣＱＶＥＨＤＧＱＰＡＶＳＫＳＨＤＬＫＶＳＡＨＰＫＥＱＧＳＮＴＡＡＥＮＴＧＳＮＥＲＮＩＹＩＶＶＧＶＶＣＴＬＬＶＡＬＬＭＡＡＬＹＬＶＲＩＲＱＫＫＡＱＧＳＴＳＳＴＲＬＨＥＰＥＫＮＡＲＥＩＴＱＤＴＮＤＩＴＹＡＤＬＮＬＰＫＧＫＫＰＡＰＱＡＡＥＰＮＮＨＴＥＹＡＳＩＱＴＳＰＱＰＡＳＥＤＴＬＴＹＡＤＬＤＭＶＨＬＮＲＴＰＫＱＰＡＰＫＰＥＰＳＦＳＥＹＡＳＶＱＶＰＲＫ
【０１５２】
ＳＩＲＰａ  ｖ２  ｅｘｏｎ３のゲノムＤＮＡ参照配列（配列番号３１）：
ＧＡＧＴＧＧＣＧＧＧＴＧＡＧＧＡＧＧＡＧＣＴＧＣＡＧＧＴＧＡＴＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＡＧＴＣＣＧＴＡＴＣＡＧＴＴＧＣＡＧＣＴＧＧＡＧＡＧＴＣＧＧＣＣＡＴＴＣＴＧＣＡＣＴＧＣＡＣＴＧＴＧＡＣＣＴＣＣＣＴＧＡＴＣＣＣＴＧＴＧＧＧＧＣＣＣＡＴＣＣＡＧＴＧＧＴＴＣＡＧＡＧＧＡＧＣＴＧＧＡＣＣＡＧＣＣＣＧＧＧＡＡＴＴＡＡＴＣＴＡＣＡＡＴＣＡＡＡＡＡＧＡＡＧＧＣＣＡＣＴＴＣＣＣＣＣＧＧＧＴＡＡＣＡＡＣＴＧＴＴＴＣＡＧＡＧＴＣＣＡＣＡＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＣＡＴＧＧＡＣＴＴＴＴＣＣＡＴＣＡＧＣＡＴＣＡＧＴＡＡＣＡＴＣＡＣＣＣＣＡＧＣＡＧＡＴＧＣＣＧＧＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＴＧＡＡＧＴＴＣＣＧＧＡＡＡＧＧＧＡＧＣＣＣＴＧＡＣＡＣＧＧＡＧＴＴＴＡＡＧＴＣＴＧＧＡＧＣＡＧＧＣＡＣＴＧＡＧＣＴＧＴＣＴＧＴＧＣＧＴＧＣ
【０１５３】
ＳＩＲＰａ  ｖ１、ＳＩＲＰａ  ｖ２、ＳＩＲＰｂおよびＳＩＲＰｇのＤ１ドメインのアミノ酸配列が図１にて例証されるように整列する。
【０１５４】
生物情報学による遺伝子型頻度分析
ヒトにおけるＳＩＲＰａ多型性に関するデータをより探るために、「１０００Ｇｅｎｏｍｅｓｐｒｏｊｅｃｔ」（１ＫＧ，＞２５００異なるヒトゲノム））を使用して、ヒトＳＩＲＰａｅｘｏｎ３における関連したＳＮＰを同定した。発明者らは、Ｈａｐｌｏｖｉｅｗ（データは示せず）を使用して２つのハプロタイプブロックに分離したＳＩＲＰａ  ＳＮＰを同定した。
【０１５５】
遺伝子型頻度を探るために、ホモ接合ドナーとヘテロ接合ドナーとの差を分析するために、発明者らはまず、ヒトＳＩＲＰａｅｘｏｎ３（文献から多型性ｅｘｏｎとして知られ、リガンドと共に結合する原因であるｅｘｏｎ）内の１８ＳＮＰを同定し（表１）、コドン変化に関連したＳＮＰを保持した。ＳＮＰに１〜１８の番号を付けた。１つのＳＮＰは文献で知られていないため分析をしていない。ＳＮＰ７およびＳＮＰ１８の遺伝子型頻度も、同義コドンに対応するため（タンパク質レベルに変化なし）分析していない。次に発明者らは、５つのスーパー集団から５０００以上のドナーを含む１０００ゲノムフェーズ３プロジェクトにおいてＳＮＰ対立遺伝子および遺伝子型頻度を同定した：ｎ＝１０３０東アジア人（ＥＡＳ）、ｎ＝１０１０欧州人（ＥＵＲ）、ｎ＝１３３８アフリカ人（ＡＦＲ）、ｎ＝７０４混合米国人（ＡＭＲ）およびｎ＝９８８南アジア人（ＳＡＳ）。１０００ゲノムフェーズ３プロジェクトからの全ての個人が考慮される。
【０１５６】
【表１】
2021517130.tif 000002
【０１５７】
次に、発明者らはおおよそ同様の頻度（差異＜１％）を有する物理的に隣接しているＳＮＰをクラスター化し、これらのクラスター化したＳＮＰの平均頻度を集団遺伝学に従ったパイグラフにプロットした。最後に、２つの方法（直鎖状または立体構造方法）により決定されるインハウス抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体エピトープとの相関を実行した。（Ｖ２／Ｖ２ドナーに対し低い結合性を示し、ＣＤ４７のＶ２／Ｖ２への結合を防ぐ能力が低いため、データには示せず）ＳＩＲＰガンマにおける突然変異に関係するＳＮＰも考慮した（インハウス抗体はＳＩＲＰガンマに結合しないため）。最後に、発明者らはまた、インハウス抗体はサルとの交差反応性が無いため、ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１ヒトＳＩＲＰａ  ｖ２ＳＩＲＰａ  ｖ２とカニクイザル（Ｍａｃａｃａｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）またはアカゲザル（Ｍａｃａｃａｍｕｌａｔｔａ）に見られる変異との配列差異を比較することによってこの分析を強化した。
【０１５８】
ＳＮＰとの抗ＳＩＲＰａ結合の関係性
方法：抗ＳＩＲＰａ抗体の結合活動をＥＬＩＳＡにより評価した。ＥＬＩＳＡアッセイについて、インハウス抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体およびＫｗａｒ抗体が８つの異なる変異ｈＳＩＲＰａにおいて試験した（ＳＩＲＰａ  ｖ１対ｖ８；表２を参照のこと）。変異ｈＳＩＲＰａ（ＳＩＲＰａ  ｖ１ｔｏｖ８）の異なる変異体が炭酸塩バッファー中（ｐＨ９．２）０．５μｇ／ｍｌにてプラスチック上に固定され、精製した抗体を添加して結合を測定した。インキュベーションおよび洗浄した後、ペルオキシダーゼ標識ロバ抗ヒトＩｇＧ（ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ；ＵＳＡ；参照７０９−０３５−１４９）を添加し、従来の方法により明らかにした。
【０１５９】
結果：ヒトＳＩＲＰａＳＮＰのインハウス抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体結合能力に対する影響力を評価するために、８つの異なる組み換えヒトＳＩＲＰａタンパク質を生成した（表２）。これらのＳＩＲＰａタンパク質の細胞外ドメインをＩｇＧ２ａからのマウスＦｃと融合し、インハウス抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体のこれらのＳＩＲＰａ変異体に対する結合能力を評価した（図４）。ＥＬＩＳＡにおいて、ＳＮＰ１５＋１６がＶ１配列にいて変異した場合、インハウス抗体はその結合特性を失った。本願で開示される実験において、配列番号２０のアミノ酸配列を含むまたはからなる重鎖可変ドメイン；および配列番号１７のアミノ酸配列を含むまたはからなる軽鎖可変ドメインを有する抗体に対応する、抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体を使用した。他のＳＮＰ変異は、インハウス抗体結合特性を変更しなかった。比較して、ＫＷＡＲ２３（Ｖ１およびＶ２の両方に結合することが記載される）結合特性がＳＮＰ変異のいずれに対しても改変しなかったことは（図４Ｂ）、ＳＩＲＰａ  Ｖ８（ＳＮＰｓ１５＋１６）タンパク質が官能的であり、ＳＮＰｓ１５＋１６の周りでローカライズしたエピトープを含む抗原が、ＳＩＲＰａ  ｖ２に対して特異的に認識または結合しない抗ＳＩＲＰａ  ｖ１抗体を生成させることを確証する。
【０１６０】
【表２】
2021517130.tif 000003
【０１６１】
ＳＩＲＰａ多型性の抗体特性に対する影響−ＦＡＣＳによる単球の拮抗アッセイＳＩＲＰａ−ＣＤ４７
方法：ヒト単球（ＤＴＣプラットフォーム、ナントのヒトＰＢＭＣから水簸により精製し、１０Ｍ／ｍｌ、−８０°Ｃまたは液体窒素で、ＤＭＳＯ内で凍らせた）を、４０ｍＬのＲＰＭＩ完全溶媒で解凍した。続いてすぐに、１０００ｒｐｍで１０分遠心分離機にかけた。細胞は１０ｍＬのＲＰＭＩ溶媒中で再懸濁され、Ｍａｌａｓｓｅｚ細胞を数えた。凍結したヒト単球を解凍し、希釈した試料を転化し、ビオチン化ＣＤ４７Ｆｃを続いて添加した。ビオチン化ＣＤ４７Ｆｃを次にストレプトアビジン−ＰＥで顕色し、蛍光発光をフローサイトメトリーによって測定した。次のプロトコルを適用した：−１ウェル当たり１００，０００のヒト単球をＶ字底Ｐ９６プレートに置く；−１分間、２５００ｒｐｍで遠心分離機にかけ、はじいてウェルを空にする；−細胞を２回、２００μＬのＰＳＥで洗浄する（１分間、２５００ｒｐｍで遠心分離機にかけウェルを空にする）；−１０μｇ／ｍＬから始め試料の希釈液を８つ調製する（２倍濃縮、最終濃度５μｇ／ｍＬ）、工程３によって希釈する；−細胞上に１２．５μＬの試料／ウェルを添加し混合する；−氷の上で１５分間インキュベートする；−２倍濃縮ＣＤ４７Ｆｃビオチン化溶液を調製し、パラグラフ関数で決定し、１２．５μＬのこの溶液／ウェルを細胞上に添加し混合する；−氷上で３０分間インキュベートする；−１７５μＬのＰＳＥ／ｗを添加し１分間、２５００ｒｐｍで遠心分離機にかけ、ウェルを空にする；−細胞を２００μＬのＰＳＥで２回洗浄する（１分間、２５００ｒｐｍで遠心分離機にかけ、ウェルを空にする）。ＣＤ４７Ｆｃビオチン化には中間濃度が選択される。ここで、５μｇ／ｍＬのＣＤ４７Ｆｃビオチン化物が拮抗試験に掛けられる。ＣＤ４７ポジティブ細胞の百分率が個々のドナーに依存するため、この工程は毎回行う必要がある；−１／１０００でストレプトアビジン−ＰＥを希釈し、２５μＬ／ｗ添加し氷上で１５分間インキュベートする；−１７５μＬのＰＳＥ／ｗを添加する；−１分間、２５００ｒｐｍで遠心分離機にかけウェルを空にする；−細胞を２００μＬのＰＳＥで２回洗浄する（１分間、２５００ｒｐｍで遠心分離機にかけ、ウェルを空にする）；−染色した細胞をＶ字底Ｐ９６カントプレートに移し、ＢＤカントＩＩで読み取る。
【０１６２】
結果：発明者らは、フローサイトメトリーによって、ＳＩＲＰａ  ｅｘｏｎ３について既に配列された健常ドナーからの血中単球におけるインハウス抗ＳＩＲＰａ  ｖ１抗体の結合特性を分析した（図２）。Ｖ１／Ｖ１ホモ接合ドナー、Ｖ２／Ｖ２ホモ接合ドナー、Ｖ１／Ｖ２ヘテロ接合ドナーを選択した。図３は、抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体のＶ２／Ｖ２ドナーに対する結合が大幅に少ないことを示す。これに対して、発明者らは商業的抗ＳＩＲＰａ  ｍＡｂ（クローンＳＥ７Ｃ２）はＶ２に対してのみ結合することを見出した。ＳＥ７Ｃ２データは、Ｖ２／Ｖ２ドナーが、Ｖ１／Ｖ２ドナーと比較してその表面に同レベルのＳＩＲＰａタンパク質を発現することを示し、Ｖ２／Ｖ２に対する抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体の結合が減少していることは発現が低いことによるのではなく、本抗体の本ＳＩＲＰａ  ｖ２タンパク質への結合が低いことによるものであることを確認した（図２）。
【０１６３】
次に発明者らはフローサイトメトリーによって、健常ドナーからの血中単球の結合している組み換えヒトＣＤ４７タンパク質の結合を防止する、インハウス抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体拮抗特性を分析した。ＣＤ４７−Ｆｃの結合に対する拮抗作用におけるＳＩＲＰａ多型性の影響を研究するために、ＳＩＲＰａについて拮抗アッセイを凍結ヒト単球遺伝子型において実行した。図３で例証されるデータは、抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体が、Ｖ１／Ｖ１ドナー（ｎ＝３）へのＣＤ４７の結合を大幅に拮抗する一方で、ヘテロ接合Ｖ１／Ｖ２ドナー（ｎ＝５）へのＣＤ４７の結合は半分のみ減少したことを示す。抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体の弱い（２５％）拮抗作用がホモ接合Ｖ２／Ｖ２ドナー（ｎ＝３）において観察された。図３に示されるように、インハウス抗体はＳＩＲＰａ  ｖ１を認識し、ＳＩＲＰａ  ｖ２の認識は非常に弱い。インハウス抗体がＣＤ４７−ＦｃのＳＩＲＰａのホモ接合Ｖ１／Ｖ１であるヒト単球への結合に対して強い拮抗作用を有し、ホモ接合Ｖ２／Ｖ２ヒト単球への拮抗作用は非常に弱く、ヘテロ接合Ｖ１／Ｖ２ヒト単球への拮抗作用は中間であることを示す。
【０１６４】
結論
ＳＩＲＰａの多型性はＣＤ４７結合に影響することは明示されないが、抗ヒトＳＩＲＰａモノクローナル抗体による認識に影響することができる。Ｖ１またはＶ２配列との高い配列同族関係を有する  複数の変異体がＴａｋｅｎａｋａらによって特定されている。他の変異体はＶ１およびＶ２配列間の異なる組合せを示し、その大部分の遺伝子型によってＶ１−様またはＶ２−ｌ様変異体としてみなさすことができる。これらの結果は、ＳＩＲＰａについて２つの主な変異体：Ｖ１およびＶ２があることを示す１０００のゲノムからのデータによって確証される。変異体１は、東アジア人スーパー集団を除き、世界的集団において最も頻発する。本発明におけるＳＮＰ分析は、エピトープに関連するＳＩＲＰａ  ｖ１対立遺伝子頻度（（Ｖ１／Ｖ１およびＶ１／Ｖ２）が、抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体の生成および／または選択がＵＳおよびＥＵで７６〜８６％、ＵＳおよびＥＵの集団の４０〜５０％がＶ１／Ｖ１ホモ接合患者であることを示す（ＳＮＰ１５および１６頻度に基づく）。ｎ＝１８４ドナーの発明者の分析は、インハウス抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体が８３〜８６％のｖ１ドナー（Ｖ１／Ｖ１およびＶ１／Ｖ２）に強力に結合することを示す。４０〜５０％の分析群がＶ１／Ｖ１ホモ接合ドナーであることを示す。一方で、ＣＤ４７拮抗アッセイは、興味深いことに、インハウス抗体が結合の半分のみを防止したことを示し、図８で示したマクロファージ分裂の機能的アッセイおよび図６で示したヒト樹状細胞による腫瘍−抗原交差提示では、インハウス抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体は同じ生物学的効果をＶ１／Ｖ１およびＶ１／Ｖ２の両方に有することを示している。
【実施例２】
【０１６５】
マウスおよびヒト間の免疫交差提示におけるＳＩＲＰａ−ＣＤ４７相互作用封鎖の比較
マウス交差提示（図５）
薬剤：マウスＳＩＲＰα（Ｐ８４クローン−ラットＩｇＧ１）のドメイン２を標的とするアロステリックアンタゴニストモノクローナル抗体をハイブリドーマから精製した。マウスＳＩＲＰａ（ＭＹ−１クローンーマウスＩｇＧ２ａ）（Ｇａｒｃｉａｅｔａｌ．，２０１１）のドメイン１を標的とするオルソステリックなアンタゴニストモノクローナル抗体を親ハイブリドーマからＩｇＧ１Ｆｃドメインへと再操作した。両方の抗ＳＩＲＰａ抗体が骨髄系細胞におけるＳＩＲＰａを通るシグナルを遮断する。アイソタイプ対照マウスＩｇＧ１（３Ｇ８クローン）を精製した。サロゲート拮抗性抗マウスＣＤ４７モノクローナル抗体（ＭＩＡＰ４１０クローン）をＢｉｏＸＣｅｌｌ（＃ＢＥ０２８３）から購入した。
【０１６６】
膵臓ＤＣによるマウスＳＩＲＰａ発現：ＣＤ１１ｃポジティブ磁気選別によって然ＤＣをナイーブマウスの脾臓から分離し、ＢＤＦＡＣＳＡＲＩＡＩＩを用いたセルソーティングによってそのＣＤ８α発現について分けた。文献に記載されるように、交差提示にとって最高の抗原提示細胞（ＡＰＣ）であるＣＤ８α＋／＋ＤＣはＳＩＲＰａのネガティブレベルに発現が低く、一方で、ＣＤ８α−／−ＤＣはＳＩＲＰａを発現する（低作用交差提示抗原として知られている）。
【０１６７】
膵臓ＤＣによる抗原提示機能：文献によると、抗原（Ａｇ）交差提示にとって、ＣＤ８α−／−ＤＣ（ハイレベルのＳＩＲＰａを発現する）と比較してＳＩＲＰａｌ低／ネガＣＤ８α＋／＋ＤＣが最高の抗原提示細胞（ＡＰＣ）である（Ｈａａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０００；Ｈｏｃｈｒｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）。しかしながら、ＤＣの２つのサブタイプが負荷され、ＭＨＣクラスＩＩ分子に対して外因性のＡｇを同等に示した。発明者らは、ＯＶＡおよびＯＴ−ＩＴ細胞を用いたＡｇ交差提示におけるＳＩＲＰａの役割を評価するのに使用されたプロトコルがこれらＤＣの特性を再現することを示した。実際、ＭＨＣクラスＩ分子においてより優れたＡｇ処理、負荷および提示を示すＣＤ８α−／−ＤＣよりもＣＤ８α＋／＋ＤＣが優れたＯＴ−ＩＴＴ細胞（ＣＤ８＋オボアルブミン−特異的ＴＣＲ−トランスジェニックマウス）の増殖分化を誘発するのに対して、ＯＴ−ＩＩＴＴ細胞（ＣＤ４＋オボアルブミン特異的ＴＣＲトランスジェニックマウスからの）増殖分化に伴い観察されることから、外因性の抗原提示は膵臓ＤＣの両方のサブタイプにとって高い。従って、ＳＩＲＰａの発現は樹状細胞の抗原をＣＤ８＋ＴＴ細胞に交差提示する収容能力と逆に相関することは、ＳＩＲＰａがマウスにおける交差提示を抑えることを示唆している。
【０１６８】
マウス抗原交差提示：ＣＤ８α＋／＋ａｎｄＣＤ８α−／−ＤＣを一晩Ｇ、Ｍ−ＣＳＦの存在下にて、オボアルブミン（ＯＶＡ）で負荷した。次に、ＯＴ−Ｉトランスジェニックマウスの脾臓から分離したＣＤ８＋Ｔ細胞、ＯＴ−ＩＩトランスジェニックマウスの脾臓から分離したＣＤ４＋Ｔ細胞を、ＯＶＡ負荷ＤＣサブタイプで３日間培養した。トランスジェニックマウスが、ＯＶＡＭＨＣＩ（ＯＴ−Ｉ）およびＩＩ（ＯＴ−ＩＩ）に特異的なＴＣＲを発現した。増殖分化を、培養の最後の１６時間中のＨ３−チミジン取り込みによって評価した。抗ＳＩＲＰａ  ｍＡｂを、１０μｇ／ｍｌで、ＯＶＡタンパク質とのＤＣのインキュベーション中に、ＯＶＡ−負荷ＤＣとのＴ細胞増殖分化中に添加した。このプロトコルによりＤＣによるタンパク質処理中のＳＩＲＰａ封鎖の影響を評価することができ、次に、ＤＣによる、ＭＨＣクラスＩ分子によるＣＤ８ＯＴ−ＩＴ細胞への、およびＭＨＣクラスＩＩ分子によるＣＤ４ＯＴ−ＩＩＴ細胞へのＯＶＡペプチドの提示は、それぞれ抗原交差提示および外因性の抗原提示を強調する。
【０１６９】
発明者らは、マウスにおけるＳＩＲＰａまたはＣＤ４７の封鎖がＳＩＲＰａ＋膵臓樹状細胞による抗原提示を増強することを示した。ＣＤ８α＋／＋ＤＣ（ＳＩＲＰａ低／ネガ）は、そのＯＶＡをＯＴ−ＩＴ細胞へ交差提示する能力に関してはＳＩＲＰａ／ＣＤ４７経路の封鎖により影響を受けない（図示せず）。しかしながら、Ｐ８４によるＳＩＲＰａの、またはＭＩＡＰ４１０によるＭＹ−１封鎖抗体もしくはＣＤ４７のどちらかの封鎖が、ＣＤ８＋ＯＴ−Ｉ増殖分化の増加により反映される、ＣＤ８α−／−ＳＩＲＰａ＋ＤＣによるＡｇ交差提示を強化する（図５Ａ）。
【０１７０】
外因性の抗原提示：発明者らは外因性のＡｇ提示におけるＳＩＲＰａ／ＣＤ４７封鎖の影響を分析し、ＳＩＲＰａ  低／ネガ−ＣＤ８α＋／＋ＤＣによるＡｇ提示はＳＩＲＰａ／ＣＤ４７経路の封鎖により改変されないことを見出した（図示せず）。交差提示プロセスと同様に、ＣＤ４＋ＯＴ−ＩＩ細胞増殖分化によって測定される、ＳＩＲＰａポジティブＣＤ８α−／−ＤＣにおけるＳＩＲＰａ／ＣＤ４７封鎖が外因性の抗原処理およびＭＨＣクラスＩＩ分子における提示を増加した（図５Ｂ）。
【０１７１】
結論
発明者らは、マウスにおけるＳＩＲＰａ／ＣＤ４７経路を封鎖が（抗ＳＩＲＰａまたは抗ＣＤ４７ＣＤ４＋ＯＴ−ＩＩによって）、ＭＨＣ−Ｉ抗原交差提示（ＴＣＤ８反応）およびＭＨＣ−ＩＩ抗原提示（（ＴＣＤ４反応）の両方を増加させたことを論証した。これらの結果によって（Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６，２０１５；Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１７）など他のものによって提唱されたことを確認した。
【０１７２】
ヒト交差提示（図６）
薬剤：発明者らによる、生成、精製されヒトＳＩＲＰα（インハウス抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体−ヒトＩｇＧ４）を標的とする拮抗性モノクローナル抗体。アイソタイプ対照ヒトＩｇＧ４をＢｉｏｌｅｇｅｎｄ（ＱＡ１６Ａ１５クローン）から購入した．ヒトＣＤ４７（Ｂ６Ｈ１２クローン）を標的とする拮抗性モノクローナル抗体をＢｉｏＸＣｅｌｌ（＃ＢＥ００１９−１）から購入し、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（＃ＴＢＤ２）からのＣＣ２Ｃ６クローンを使用した。いくつかの実験において、抗−ＳＩＲＰａ：ｇ抗体（ＷＯ２０１３５６３５２からのクローンＳＩＲＰ）を単体で、またはインハウス抗−ＳＩＲＰａ  ｖ１抗体と組み合わせて使用した。
【０１７３】
メランＡ特異的応答：ヒト細胞による交差提示を、ＨＬＡ−Ａ２＋ＤＣによるＨＬＡ−Ａ２／メランＡ錯体を特異的に認識するＴＣＲ特異的Ｔ細胞へのメランＡメラノーマ腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）の長いペプチドの提示によって評価した。２つの異なるＴＣＲ−特異的Ｔ細胞を使用して抗原交差提示を評価した。１つ目は、メラノーマ患者からの、これらのＨＬＡ−Ａ２／メランＡ錯体に対して特異的であるＴリンパ球クローンである（Ｄｒ．Ｎ．Ｌａｂａｒｒｉｅｒｅ，Ｕｎｉｖ．Ｎａｎｔｅｓ，Ｆｒａｎｃｅ，Ｖｉｇｎａｒｄａｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ２００５からの贈与）。２つ目のクローンは、同じメラノーマ患者のＴ−細胞クローンのＴＣＲが導入され、ヒトＣＤ８共受容体が遺伝子導入された  トランスジェニックマウスの胸腺腫細胞株であった。ＤＣをＨＬＡ−Ａ２＋健常者（ＨＶ：Ｅｔａｂｌｉｓｓｅｍｅｎｔ  Ｆｒａｎｃａｉｓｄｅ  Ｓａｎｇ，Ｎａｎｔｅｓからの健常者）の血中単球からインビトロで生成した。その一方で、単球はＳＩＲＰａの多型性として表現型が決定された。ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４と培養をして７日間後に、未熟ＤＣ（ｉＤＣ）を誘発した。次にｉＤＣを一晩、ＳＩＲＰａ／ＣＤ４７経路を標的とする拮抗性抗体の存在下でメランＡの長い２５−ｍｅｒペプチドと負荷し、最終的に２つの異なるメランＡ／ＨＬＡ−Ａ２特異的Ｔ細胞クローンと独立して培養した。メラノーマ患者からのヒトＴ細胞クローンを、メランＡ−負荷ｉＤＣと５時間培養し、ＩＦＮｇの細胞内染色によるフローサイトメトリーによってＴ細胞活性化を評価した。
【０１７４】
ＴＣＲトランスジェニック胸腺腫クローンをメランＡ−負荷ｉＤＣと４８時間培養し、ＩＬ−２分泌物についてＥＬＩＳＡによってＴ細胞活性化を評価した。
【０１７５】
プロトコルを確証するために、ＨＬＡ−Ａ２ネガティブドナーからのメランＡ−負荷ｉＤＣ、およびＨＬＡ−Ａ２＋ＨＶからの無負荷−ｉＤＣをネガティブ対照として使用した。結果（図示せず）は、ＨＬＡ−Ａ２＋メランＡ−負荷ｉＤＣのみが、ヒトＴ細胞クローンによってＩＦＮｇ分泌物を誘発することができることを示した。マウスの胸腺腫細胞によるＩＬ−２の分泌物を、ＨＬＡ−Ａ２ポジティブドナーにおいてのみ計測し、ＨＬＡ−Ａ２−メランＡ負荷ＤＣと比較され、２つの異なるＨＬＡ−Ａ２／メランＡ特異的Ｔ細胞クローンの特異性を論証した。
【０１７６】
ＨＬＡ−Ａ２＋ＨＶからの単球をＳＩＲＰａについて表現型を決定し、２つの種類の実験にてホモ接合（ｖ１／ｖ１）およびヘテロ接合（ｖ１／ｖ２）単球の両方が使用される。
【０１７７】
胸腺腫細胞クローン操作インビトロ：ＴＣＲ−トランスジェニック胸腺腫細胞クローンをメランＡ負荷ヒトｉＤＣと刺激してから４８時間後に、ＩＬ−２を計測した。第１の抗原交差提示の読出において、発明者らは、メランＡの負荷および刺激アッセイ中にＳＩＲＰａが特異的抗ＳＩＲＰａ抗体（インハウス抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体）によって封鎖された場合に、胸腺腫クローンによるＩＬ−２分泌物の増加をほとんどのドナーにて観察した（図６Ａ）。ＤＣのＶ１ホモ接合およびＶ１／Ｖ２ヘテロ接合ドナー間における差は観察されなかった。
【０１７８】
ヒトＴ細胞クローンＦＲＯＭメラノーマ患者：ａｆｔｅｒ５ｈｏｕｒｓｏｆｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＣＤ８ヒトＴ細胞クローンｗｉｔｈメランＡｌｏａｄｅｄヒトｉＤＣ，フローサイトメトリーによりＩＦＮｇの発現を評価した。図６Ｂは、ＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＩＦＮｇ発現を示す。ＳＩＲＰａまたはＣＤ４７はメランＡの負荷中、Ｔ細胞刺激中に封鎖された。多数の抗体を試験した：抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１；抗ＳＩＲＰａ／ｇ（ＳＩＲＰ２９）、抗ＣＤ４７（Ｂ６Ｈ１６およびＣＣ２Ｃ６）。図６Ｂは、インハウス抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体により封鎖されたＳＩＲＰａが、ホモ接合体またはヘテロ接合体ドナーからのｉＤＣ二より誘発された腫瘍抗原特異的ヒトＴ−細胞によるＩＦＮｇ発現の増加を引き起こすことを示す。興味深いことに、発明者らは、Ａｇ表示において封鎖されたＳＩＲＰａのポジティブ効果は、同様の増加がほとんどのＶ１／Ｖ２ヘテロ接合ドナーによって観察されたことから、ＳＩＲＰａ  ｖ１ホモ接合ｉＤＣに限定されないことを示した。予期せぬことに、マウス交差提示とは対照的に、発明者らはヒトにおいて、２つの抗ＣＤ４７ｍＡｂがほとんどのドナーのＩＦＮｇ分泌物にポジティブな影響が無く、最悪なことに大多数のドナーにおいてＴ−細胞活性化の基礎レベルを強力に抑制することを見出した。より驚くべきことに、ＳＩＲＰａ特異的ではないが、ＳＩＲＰｇも結合しＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害する抗−ＳＩＲＰａが、Ｔ細胞によるＩＦＮｇ発現を誘発しないことは、ｉＤＣによるＴ細胞への交差提示が抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体の特異性であることを示している。まれに、非選択的ＳＩＲＰａ／ｇ抗体の選択的インハウスＳＩＲＰａ  ｖ１抗体への添加が、ＳＩＲＰアルファでありガンマではないＳＩＲＰの選択的封鎖により増加したＩＦＮｇ分泌物を防止する。異なる抗ＣＤ４７抗体および抗ＳＩＲＰａ／ｇ抗体を有するヒトで得たこれらの結果は、マウスモデルでの結果に予測できるものではなく、ポリクローナルヒトＴ−細胞増殖分化およびヒト混合リンパ球反応が、異なる抗ＣＤ４７ｍＡｂおよび抗ＳＩＲＰｇにより、ヒトで強力に阻害されることを示す発明者らからのいくつかの興味深い結果を説明することができるが（Ｐｉｃｃｉｏｅｔａｌ．，２００５）本発明の特異的抗ＳＩＲＰａ  ｖ１抗体によるものではない。
【０１７９】
結論
抗原交差提示を評価するために使用された２つの異なるクローンは、Ａｇ負荷およびＡｇのＴ細胞への提示中に、ｉＤＣにおけるＳＩＲＰａ封鎖と同様の結果を示した。発明者らは、ヒトＳＩＲＰａが、ＩＦＮｇまたはＩＬ２分泌物によって計測される、選択的抗ＳＩＲＰａ抗原ｍＡｂｓによって緩和することができる交差提示に対して阻害する役割を有することを初めて示した。異なる抗ＣＤ４７抗体または非選択的抗−ＳＩＲＰａ／ｇ抗体でのＣＤ４７の封鎖がこの作用をヒトＴ細胞に対して示さなかったためこれは予期することはできず、ヒトにおけるがマウスではない抗ＣＤ４７ｍＡｂの免疫抑制の特性における以前の観察を考慮することによって説明ができる。先行技術はＳＩＲＰａ阻害がマウスＤＣ成熟を阻害することを示している。初めて、発明者らは特異的抗ＳＩＲＰａ抗体が、ヒトにおいてＡｇ交差提示を増強する治療化合物となり得ることを開示した。マウスにおける抗ＣＤ４７ｍＡｂがマウス抗ＳＩＲＰａと同様の増強する作用を有する一方で、ヒト抗ＳＩＲＰａのヒトＤＣ交差提示に対する作用は予期できない。ＳＩＲＰａＣＤ４７相互作用を媒介する免疫機構への我々の理解が、ヒトにおける抗ＣＤ４７の免疫抑制特性が、マウスでは発現されないＳＩＲＰｇとのその相互作用に起因するということを仮定するに至らせた。驚くべきことに、ＳＩＲＰａ  ｖ１ホモ接合体またはヘテロ接合体におけるＤＣドナーの遺伝子的規則では、ヒトＴ細胞活性化においてはいずれの違いも示さなかった。
【実施例３】
【０１８０】
ポリクローナル刺激におけるＳＩＲＰ／ＣＤ４７封鎖の影響
方法：ｈＰＢＭＣを健常者のバフィーコートから分離した。ＣＤ４、またはＣＤ８Ｔ細胞を、ＡｕｔｏＭＡＣＳ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用してポジティブ選択によって選択し、９６−ラウンドウェルプレートに配置した（５００００細胞／ウェル）．増殖シグナルは、３日間の間に１Ｔ細胞に対して１ビーズの比率で、抗ＣＤ３／抗−ＣＤ２８被覆マイクロビーズ（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）か、または５日間の間に５Ｔ細胞に対して１ｍＤＣでインビトロ生成されたアロジェネイック成熟樹状細胞のどちらかによって提供された。ＳＩＲＰａ／ＣＤ４７および／またはＳＩＲＰｇ／ＣＤ４７経路を標的とする抗体を増殖分化試験の最初から飽和濃度（１０μｇ／ｍＬ）で添加された。増殖分化を、培養の最後１２時間中のＨ３−チミジン取り込みによって測定した。抗ＣＤ４７抗体（商業用参照：Ｂ６Ｈ１２）、抗ＳＩＲＰａ抗体（特許（ＷＯ２０１７１７８６５３）にてＨＥＦＬＢと称される）。
【０１８１】
結果：ヒトＴリンパ球におけるＣＤ４７の封鎖の免疫抑制効果を調査するために、３人の異なる健常者からＰＢＭＣを分離し細胞の一部を照射した（３５Ｇｙ））。各ドナー（レスポンダー）を残り２人のドナーの各々と混合リンパ球反応に含めた（照射した刺激要因）。封鎖抗体をＭＬＲの最初に添加し、Ｔ細胞増殖分化を５日間培養の最後の１６時間にチミジン取り込みによって測定された。発明者らは、抗ＣＤ４７ｍＡｂにてＴ細胞増殖分化の強力な阻害を見出したが、抗ＳＩＲＰａ（インハウス抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体）は対照の状態とは大きくは異ならなかった（図７）。細胞活性化を反映するＩＦＮｇ分泌物も４日間培養の上澄部に投与した。発明者らは、サイトカインの分泌物の劇的な阻害を抗ＣＤ４７ｍＡｂ（Ｂ６Ｈ１２）でも観察し、ＣＤ４７はヒトにおいてＴ細胞活性化に重要であるという、発明者らおよび他のグループによる以前の結果を表しかつ確証する。
【実施例４】
【０１８２】
健常ドナーからの単球を使用したマクロファージ分裂バイオアッセイにおける抗ＳＩＲＰａ抗体の効果ケモカイン生成を測定するバイオアッセイＭＩＰ−１ａ／ＣＣＬ−３およびＭＩＰ−１ｂ／ＣＣＬ−４
マクロファージ分裂および活性化におけるインハウス抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体の影響を調査するために、いくつかのケモカインの分泌物、より特異的にはＭＩＰ−１ａ／ＣＣＬ−３およびＭＩＰ−１ｂ／ＣＣＬ−４を、非極性の未熟マクロファージを誘発するためにＧＭ−ＣＳＦで培養した、新鮮または冷凍ヒト単球遺伝子型のＳＩＲＰａではホモ接合Ｖ１、またはヘテロ接合Ｖ１／Ｖ２の上澄部にて測定した（図８）。組み換えＣＤ４７−Ｆｃの２つのソースを１０μｇ／ｍｌで試験した：ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ＃１２２８３−Ｈ０２ＨおよびＲ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓ＃４６７０−ＣＤ−０５０。ＭＩＰ−１ａ／ＣＣＬ−３およびＭＩＰ−１ｂ／ＣＣＬ４の定量化をＥＬＩＳＡによって培養上澄部にて実現した（Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓ：ＨｕｍａｎＣＣＬ３／ＭＩＰ−１ａｌｐｈａＤｕｏＳｅｔＥＬＩＳＡ＃ＤＹ２７０およびＨｕｍａｎ  ＣＣＬ４／ＭＩＰ−１  ｂｅｔａ  Ｄｕｏ  Ｓｅｔ  ＥＬＩＳＡ  ＃ＤＹ２７１）。総合的に、被覆ＣＤ４７−Ｆｃの存在下において、インハウス抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体は、ＭＩＰ−１ａおよびＭＩＰ−１ｂの分泌を、Ｖ１ＳＩＲＰａについてホモ接合（図８Ａ）またはヘテロ接合（Ｖ１／Ｖ２遺伝子型）ドナー（図８Ｂ）の両方において大きく増加した。
【０１８３】
結論
発明者らはＭ１−関連ケモカインＭＩＰ−１ａ／ＣＣＬ−３およびＭＩＰ−１ｂ／ＣＣＬ−４分泌は、被覆ＣＤ４７−Ｆｃの存在下において、インハウス抗ヒトＳＩＲＰａ  ｖ１抗体で大幅に増加した。ＣＤ４７−Ｆｃは、ヒト骨髄系細胞の機能的抑制を、具体的には、ＭＩＰ−１ａ／ＣＣＬ−３およびＭＩＰ−１ｂ／ＣＣＬ−４の基礎分泌を減少させることによって誘発する。抗ＳＩＲＰａ抗体によるＳＩＲＰａＣＤ４７相互作用の封鎖は、上澄部中のＭＩＰ−１ａおよびＭＩＰ−１ｂの分泌によって示されるように骨髄性機能を復活させる。ＳＩＲＰａ  ｖ１対立遺伝子発現に関するドナーの遺伝子型は、これらのケモカインの誘導に影響は無く、ＳＩＲＰａ封鎖におけるしきい値効果で機能的効果を観察することが示唆される。
【実施例５】
【０１８４】
細胞蛍光測定によるヒト単球ｖ２／ｖ２におけるＳＩＲＰａ結合アッセイ
方法：ヒト単球における抗ＳＩＲＰａ抗体の結合を測定するために、ヒトＦｃ受容体結合阻害（ＢＤｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ；ＵＳＡ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ５６４２２０）を、室温で３０分間最初に添加し、ヒト単球におけるヒトＦｃ受容体を封鎖してバックグラウンドを低減させる。次に、抗体を４°Ｃで３０分間インキュベートし、染色する前に、ＰＥ標識抗ヒトＩｇＧＦｃ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ；ＵＳＡ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ４０９３０３）で、４°Ｃで３０分間洗浄する。マウス抗体については、ＰＥ標識抗マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ７１５−１１６−１５１）を使用した。試料をＢＤＬＳＲＩＩまたはＣａｎｔｏＩＩｃｙｔｏｆｌｕｏｒｏｍｅｔｅｒで分析した。
【０１８５】
結果：図９し示されるように、結果は、本発明の親抗体であるＳＩＲＰ２９抗体およびキメラ１８Ｄ５抗体のヒト単球ＳＩＲＰａ  ｖ２／ｖ２における結合、および全てのヒト化抗ＳＩＲＰａ抗体の非結合を示し（ＭＦＩ（中央蛍光強度）に従って測定される）、抗体のヒト化ＳＩＲＰａ  ｖ２特異性の損失を誘発することを示唆している。
【実施例６】
【０１８６】
ＢｌｉｔｚによるＣＤ４７ＳＩＲＰｇ相互作用における抗ＳＩＲＰａ抗体の拮抗分析
方法：本アッセイをＢｌｉｔｚ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ；ＵＳＡ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅＣ２２−２Ｎｏ６１０１０−１）によって実施した。第１の工程にて、ｈＳＩＲＰｇ−Ｈｉｓ（ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ１１８２８−Ｈ０８Ｈ）を、ヒスチジンテールによってＮｉ−ＮＴＡバイオセンサーに１０μｇ／ｍｌで固定化した。第２の工程にて、抗体を２０μｇ／ｍＬ（飽和濃度）で１２０秒添加した。次に、ヒトＣＤ４７Ｆｃ（（ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ１２２８３−Ｈ０２Ｈ）を異なる抗体と競争して、１２０秒間１００μｇ／ｍＬで関連付けした（ＬＳＢ２．２０，ＫｗａｒまたはＳＩＲＰ２９抗体）。ＣＤ４７Ｆｃの分離を動態バッファー中で１２０秒間行った。分析データを、会合定数（ｋａ）および分離定数（ｋｄ）を計算し、親和性定数ＫＤ（ｋａ／ｋｄ）を決定するＢｌｉｔｚｐｒｏ１．２ソフトウェアを用いて作成した。
【０１８７】
結果：図１０にて示されるように、基準状態において、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する親和性は約６．１０−８Ｍであり、Ｋｗａｒ２３およびＩＲＰ２９がＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を大幅に低減する一方で、商業用抗ＳＩＲＰｇ抗体であるＬＳＢ２．２０はＣＤ４７−ＳＩＲＰｇの相互作用を破壊しない。これらの結果は、先行技術の抗体と比較して、本発明のインハウス抗ＳＩＲＰａ  ｖ１抗体のＳＩＲＰａに対する特異性をはっきりと示す。
【実施例７】
【０１８８】
乳房４Ｔ１前臨床モデル
本同所性および同一遺伝子４Ｔ１前臨床モデルを使用して、骨髄性細胞の浸潤が重要であるモデルにおける２つの異なる特異的抗マウスＳＩＲＰａ単独療法の効果を評価し、説明する。実際、４Ｔ１モデルは主にＣＤ１１ｂ＋骨髄系細胞により浸潤することが以前に報告されており（ＤｕＰｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）、具体的には、ＭＤＳＣである（Ｍａｒｋｏｗｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【０１８９】
このモデルは転移を誘発することが知られている。従って発明者らは肝臓および肺を採取し、マウス抗ＳＩＲＰａ抗体を投与したマウスの腫瘍転移に番号を付けた。アイソタイプ対照および抗−ＳＩＲＰａ抗体を、Ｄ４〜Ｄ２８に８ｍｇ／ｋｇで使用した（３回／週）。特異的にＳＩＲＰａを標的とする２つの異なる抗体によるＳＩＲＰａの封鎖は、ＴＮＢＣの攻撃的モデルの腫瘍発達における単独療法で有力な臨床効果を論証する。発明者らはまた、Ｐ８４（Ｒｅｆ：ＭｅｒｃｋＭｉｌｌｉｐｏｒｅからのＭＡＢＳ１６４  抗−ＳＨＰＳ−１抗体、クローンＰ８４）と、ＭＹ１−ｍＧ１（Ｙａｎａｇｉｔａｅｔａｌ．にて記載される）サロゲートと、を比較することにより犠牲にした後肺および肝臓転移を分析した。対照マウスは肺腫瘍転移を発症したが、ＭＹ１−ｍＧ１またはＰ８４を投与したマウスで発症したものはいなかった。図１１はＰ８４およびＭＹ−１抗−ＳＩＲＰａｍＡｂｓについての肺転移の結果を示し、両方とも肺転移に対して同様の効果を示した。
【０１９０】
これらのマウスモデルおいて細胞にＳＩＲＰｇを発現しなかったという結果は、癌用途およびより具体的は転移治療または予防のためには特異的にＳＩＲＰａを標的にすることの重要性をはっきりと示す。細胞がＳＩＲＰｇを発現するヒトにおいて、本発明の抗体などＣＤ４７−ＳＩＲＰｇ相互作用を破壊せずに特異的にＳＩＲＰａを標的にするのに有用であるだろう。
【０１９１】
参考文献
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【図１】
2021517130.tif 000004
【図２】
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【図３】
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【図４Ａ）】
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【図４Ｂ）】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
2021517130.tif 000013
【図１０】
2021517130.tif 000014
【図１１】
2021517130.tif 000015
【配列表】
2021517130000001.app
【国際調査報告】
2021517130.tif 000016
2021517130.tif 000017
2021517130.tif 000018