(57)【要約】  肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害を治療する及び／又は予防するビスジアザビシクロ化合物、前記ビスジアザビシクロ化合物を使用して肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害を治療する及び／又は予防する方法、及び肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害を治療する及び／又は予防するため、及び／又は肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害を排除する又は軽減するための薬物の調製における前記ビスジアザビシクロ化合物の使用を開示する。【選択図】図４
2021504294.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物が、肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害の治療及び／又は予防に使用されるビスジアザビシクロ化合物である、化合物。
【請求項２】
前記化合物が、以下：
【化１】
2021504294.tif 000045
（式中、
Ｘが、
【化２】
2021504294.tif 000046
及び−ＳＯ２−から選択され；
Ｙが、−ＮＨ−、−Ｏ−、−Ｓ−から選択され、Ｙが、Ｘが−ＳＯ２−である場合、非存在であり；
Ｒが、
【化３】
2021504294.tif 000047
及び−Ｃ３−６シクロアルキレン
【化４】
2021504294.tif 000048
から選択され；及び
Ｒ１が、
【化５】
2021504294.tif 000049
（式中、
Ｚが、Ｏ、Ｓ又はＮＨである）
から選択され、ここで、Ａ環が、Ｃ４−８脂肪族環であり； 及びＢが、フェニル、ナフチル、ピリジル、ピリダジニル、ピラジニル又はピリミジニルであり、及びハロゲン、−ＯＣＦ３、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＮＣ、−ＯＨ、アミノ、Ｃ１−１０アルキル、Ｃ１−１０アルキルオキシ及びＣ１−１０アルキルアミノから独立して選択される１〜４個の基で任意に置換される）、
の構造を有する、請求項１に記載の化合物又はその医薬的に許容される塩。
【請求項３】
Ｒが、
【化６】
2021504294.tif 000050
（式中、
ｐが、０〜４である）、
である請求項２に記載の化合物又はその医薬的に許容される塩。
【請求項４】
Ｒが、
【化７】
2021504294.tif 000051
（式中、
フェニルが、ハロゲン、−ＯＣＦ３、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＮＣ、−ＯＨ、アミノ、Ｃ１−１０アルキル、Ｃ１−１０アルキルオキシ及びＣ１−１０アルキルアミノから独立して選択される１〜４個の基で任意に置換される）、
である請求項２に記載の化合物又はその医薬的に許容される塩。
【請求項５】
Ｒが、
【化８】
2021504294.tif 000052
である、請求項４に記載の化合物又はその医薬的に許容される塩。
【請求項６】
Ｒ１が、
【化９】
2021504294.tif 000053
（式中、
フェニルが、ハロゲン、−ＯＣＦ３、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＮＣ、−ＯＨ、アミノ、Ｃ１−１０アルキル、Ｃ１−１０アルキルオキシ及びＣ１−１０アルキルアミノから独立して選択される１〜４個の基で任意に置換される）、
である、請求項２〜５の何れか１項に記載の化合物又はその医薬的に許容される塩。
【請求項７】
Ｒ１が、
【化１０】
2021504294.tif 000054
（式中、
フェニルが、ハロゲン、−ＯＣＦ３、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＮＣ、−ＯＨ、アミノ、Ｃ１−１０アルキル、Ｃ１−１０アルキルオキシ及びＣ１−１０アルキルアミノから独立して選択される１〜４個の基で任意に置換される）、
である、請求項２〜５の何れか１項に記載の化合物又はその医薬的に許容される塩。
【請求項８】
Ｒ１が、
【化１１】
2021504294.tif 000055
である、請求項６に記載の化合物又はその医薬的に許容される塩。
【請求項９】
Ｘが、
【化１２】
2021504294.tif 000056
であり、Ｙが、−ＮＨ−である、請求項２に記載の化合物又はその医薬的に許容される塩。
【請求項１０】
Ｘが、
【化１３】
2021504294.tif 000057
であり、Ｙが、−ＮＨ−である、請求項２に記載の化合物又はその医薬的に許容される塩。
【請求項１１】
Ｘが、
【化１４】
2021504294.tif 000058
であり、Ｙが、−Ｏ−である、請求項２に記載の化合物又はその医薬的に許容される塩。
【請求項１２】
【化１５−１】
2021504294.tif 000059
【化１５−２】
2021504294.tif 000060
【化１５−３】
2021504294.tif 000061
から選択される、請求項２に記載の化合物又はその医薬的に許容される塩。
【請求項１３】
【化１６】
2021504294.tif 000062
から選択される、請求項２に記載の化合物又はその医薬的に許容される塩。
【請求項１４】
【化１７】
2021504294.tif 000063
から選択される、請求項２に記載の化合物又はその医薬的に許容される塩。
【請求項１５】
肝炎ウイルスに関連する前記疾患又は障害が、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス又はＣ型肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害である、請求項１〜１４の何れか１項に記載の化合物。
【請求項１６】
肝炎ウイルスに関連する前記疾患又は障害が、限定されないが、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、及び肝硬変を含む、請求項１〜１４の何れか１項に記載の化合物。
【請求項１７】
前記化合物が、免疫応答を調節することにより、肝炎ウイルスに関連する前記疾患又は障害を治療及び／又は予防する、請求項１〜１４の何れか１項に記載の化合物。
【請求項１８】
肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害の治療及び／又は予防のための医薬品の製造における化合物の使用であって、前記化合物が、ビスジアザビシクロ化合物である、使用。
【請求項１９】
前記化合物が、請求項１〜１４の何れか１項で定義された化合物である、請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
肝炎ウイルスに関連する前記疾患又は障害が、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス又はＣ型肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害である、請求項１８又は１９の何れか１項に記載の使用。
【請求項２１】
肝炎ウイルスに関連する前記疾患又は障害が、限定されないが、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、及び肝硬変を含む、請求項１８又は１９の何れか１項に記載の使用。
【請求項２２】
前記医薬品が、ＨＢＶを治療することが知られている薬物をさらに含む、請求項１８〜２１の何れか１項に記載の使用。
【請求項２３】
前記医薬品が、免疫応答を調節することにより、肝炎ウイルスに関連する前記疾患又は障害を治療及び／又は予防する、請求項１８〜２２の何れか１項に記載の使用。
【請求項２４】
肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害の治療及び／又は予防のために化合物を使用する方法であって、前記方法が、肝炎ウイルスに関連する前記疾患又は障害を有する患者に治療的及び／又は予防的有効量の前記化合物を投与することを含み、前記化合物が、ビスジアザビシクロ化合物である、方法。
【請求項２５】
前記化合物が、請求項２〜６の何れか１項で定義される化合物である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
肝炎ウイルスに関連する前記疾患又は障害が、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス又はＣ型肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害である、請求項２４又は２５の何れか１項に記載の方法。
【請求項２７】
肝炎ウイルスに関連する前記疾患又は障害が、限定されないが、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、及び肝硬変を含む、請求項２４又は２５の何れか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記方法が、ＨＢＶを治療することが知られている薬物と組み合わせて前記化合物を使用することを含む、請求項２４〜２７の何れか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記化合物が、免疫応答を調節することにより、肝炎ウイルスに関連する前記疾患又は障害を治療及び／又は予防する、請求項２４〜２８の何れか１項に記載の方法。
【請求項３０】
ビスジアザビシクロ化合物を含む医薬組成物であって、前記医薬組成物が、肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害の治療及び／又は予防のために使用される、医薬組成物。
【請求項３１】
前記化合物が、請求項２〜６の何れか１項で定義される化合物である、請求項３０に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
肝炎ウイルスに関連する前記疾患又は障害が、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス又はＣ型肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害である、請求項３０又は３１の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
肝炎ウイルスに関連する前記疾患又は障害が、限定されないが、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、及び肝硬変を含む、請求項３０〜３２の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
前記医薬組成物が、ＨＢＶを治療することが知られている薬物をさらに含む、請求項３０〜３３の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３５】
前記化合物が、免疫応答を調節することにより、肝炎ウイルスに関連する前記疾患又は障害を治療及び／又は予防する、請求項３０〜３４の何れか１項に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害を治療及び／又は予防するためのジアザビシクロ化合物、それを使用して肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害を治療及び／又は予防する方法、及び肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害を治療及び／又は予防するため又は肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害を除去及び／又は緩和するための医薬品の製造におけるその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
肝炎又は肝疾患は通常、肝炎ウイルスによって引き起こされる。一般的に肝炎ウイルスは、次のタイプに分類される： Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ及びＧ、Ｂ型肝炎ウイルスは、現在世界中に分布している慢性疾患を引き起こし、不適切に管理されていなければ、Ｂ型肝炎のかなりの割合が、疾患の進行の後期に肝臓癌に変わる可能性がある。現在、推定２８０，０００，０００人のＢ型肝炎患者（又はＨＢＶキャリア）が世界中に存在する。
【０００３】
中国の慢性Ｂ型肝炎（ＣＨＢ）２０１５バージョンの予防と治療のガイドラインによると、慢性Ｂ型肝炎治療の目標は、ＨＢＶ複製の長期抑制を最大化し、肝細胞及び肝繊維症の炎症性壊死を軽減し、並びに肝不全、及び肝硬変、ＨＣＣ及び他の合併症の代償不全を遅延及び低減し、それによって生活の質を改善し、生存期間を延長することである。治療プロセスにおいて、一部の適切な患者について、慢性Ｂ型肝炎の臨床的治療を可能な限り追及する必要性があり、すなわち、治療終了後に継続的なウイルス学的反応、ＨＢｓＡｇ陰性化又は抗ＨＢｓ陽性化、正常ＡＬＴ、肝組織の軽度病変又は病変なしを伴う必要がある。完全な治癒とは、抗体、ＨＢＶ ＤＮＡ、様々な抗原、及びｃｃｃＤＮＡを除いて体内で排除されることを意味する。
【０００４】
現在、慢性Ｂ型肝炎の予防及び治療のための多くの国際的なガイドラインは、ＣＨＢ抗ウイルス療法の治療的な標的として、表面抗原（ＨＢｓＡｇ）の陰性化（機能的治療としても知られる）を取り入れている。しかしながら、インターフェロン（インターフェロンアルファ、ＩＦＮ−α）及びヌクレオシド類似体［ＮＵＣ］等の既存の抗ウイルス薬は、ウイルスの複製を阻害できるが、ＨＢｓＡｇの除去又はセロコンバージョンは、限られた又は長期の一連の治療ではほとんど発生しない。現在、通常及びペグ化インターフェロン及び５つの経口ヌクレオシド類似体（すなわち、ラミブジン（ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ）、アデホビルジピボキシル（ａｄｅｆｏｖｉｒ ｄｉｐｉｖｏｘｉｌ）、エンテカビル（ｅｎｔｅｃａｖｉｒ）、テルビブジン（ｔｅｌｂｉｖｕｄｉｎｅ）、及びテノホビルジソプロキシルフマル酸塩（ｔｅｎｏｆｏｖｉｒ ｄｉｓｏｐｒｏｘｉｌ ｆｕｍａｒａｔｅ (TDF)）（ＴＤＦ））を含む慢性Ｂ型肝炎感染の治療のためにＦＤＡによって承認された７つの抗ウイルス薬が存在し、これは、エンテカビル（ＥＴＶ）及びテノホビルジソプロキシルフマル酸塩が治療の第１選択薬として推奨されている（Liaw, Leung et al. 2008; Lok and McMahon 2009; Liu, Yang et al. 2014; Gish, Given et al. 2015）。しかしながら、既存のＮＵＣ薬を５年間臨床的に使用した後、ＨＢｓＡｇの陰性化は、５％未満であり； ペグ化インターフェロン（ＰＥＧ−ＩＦＮ）治療を受けた後に反応を呈した患者について、ＨＢｓＡｇの陰性化は、長期追跡中に１０％未満であった（Sundaram and Kowdley 2015）。ＣＨＢ患者の場合、ＮＵＣ薬は、ヌクレオカプシドにおいてウイルス性プラス鎖及びマイナス鎖の合成のみを阻害することができる。その抗ウイルス治療中に、主に消失したものは、複製ＤＮＡであり、肝細胞の核におけるｃｃｃＤＮＡ及びそれによって転写及び発現されるウイルス抗原に対する直接的な影響はない（Wong, Seto et al. 2013）。他のクラスの薬物であるＩＦＮαは、免疫調節効果と直接的な抗ウイルス効果の両方を有し、ＨＢＶに感染した肝細胞においてＡＰＯＢＥＣ３Ａの発現を誘導することができ、塩基編集によりｃｃｃＤＮＡの分解を促進し、直接的な抗ウイルス効果を発揮することができる（Lucifora, Xia et al. 2014）。しかしながら、ＨＢＶがＩＦＮαシグナル伝達経路に拮抗することができ、ＩＦＮα薬の治療効果が低いことが確認されている（Bertoletti and Ferrari 2012）。従って、現在の抗ウイルス薬の限界を考慮すると、抗ウイルス性免疫の刺激及び／又は回復等の治療戦略は、現在、慢性ＨＢＶ感染の除去に関する研究のホットスポットである（Lucifora and Trepo 2015）。
【０００５】
ホスト特異的な免疫応答は、ＨＢＶの除去に不可欠である。ＨＢＶ特異的Ｔリンパ球応答は、肝細胞のＨＢＶ感染を除去する最も重要なエフェクター細胞である。ＨＢＶが感染し、ナトリウムイオン／タウロコール酸共輸送ポリペプチド受容体を介して肝細胞に侵入した後、ウイルスゲノムは、ホストＤＮＡポリメラーゼによって修復され得、安定した共有結合を有する環状ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ）を形成し、肝細胞の核に寄生する。肝臓でのウイルス複製及び遺伝子発現の元のテンプレートとして、ｃｃｃＤＮＡミクロ染色体の除去の困難さは、臨床的抗ウイルス治療における治癒の困難さの重要な理由である（Nassal 2015）。ＨＢＶエフェクターＴ細胞は、グランザイム、パーフォリン、又はＦａｓＬによって誘導される肝細胞アポトーシスの細胞傷害経路の殺傷効果により、感染した肝細胞を直接殺傷し、標的細胞のアポトーシスを誘導し、ｃｃｃＤＮＡ及びその他のウイルス産物を除去することができる。加えて、エフェクターＴ細胞によって分泌されるＩＦＮγ及びＴＮＦα等のサイトカインはまた、感染した肝細胞に影響を与え、非細胞溶解経路を介して細胞内抗ウイルス遺伝子の発現を誘導し、ウイルスの複製及びｃｃｃＤＮＡ合成を阻害する（Guidotti, Rochford et al. 1999）。最新の研究では、エフェクターＴ細胞は、血小板を介して肝類洞に固定され得、内皮細胞ギャップを介してウイルス抗原を提示する感染肝細胞に直接接触し、次いで、ＩＦＮγ及びＴＦＮα等のサイトカインを分泌し、感染した肝細胞のアポトーシスを直接誘導し、ＨＢＶを除去することが示唆されている（Guidotti, Inverso et al. 2015）。さらに、Ｂ細胞は、ＨＢＶ感染の制御にも非常に重要な役割を果たす。急性ＨＢＶ感染において、Ｂ細胞が産生するＢ型肝炎表面抗原抗体（ＨＢｓＡｂ）が、肝細胞のＨＢＶ感染を中和及び妨害する。
【０００６】
ＩＡＰタンパク質は、アポトーシス調節因子の重要なクラスであり、1つ以上のＢＩＲ（バキュロウイルスＩＡＰリピート）ドメインの存在によって特徴付けられる。ＩＡＰの中で、細胞性ＩＡＰ１（ｃＩＡＰ１）及びｃＩＡＰ２は、細胞死受容体媒介性アポトーシスの調節に重要な役割を果たし、一方、Ｘ−ｌｉｎｋｅｄ ＩＡＰ（ＸＩＡＰ）は、カスパーゼ−３／７及びカスパーゼ−９（アポトーシスの実行に重要な３つのシステインプロテアーゼ）を結合及び阻害することにより、細胞死受容体媒介性及びミトコンドリア媒介性アポトーシスを阻害する。これらのＩＡＰタンパク質は、癌細胞とヒト腫瘍組織の両方で高く過剰発現されており、正常な細胞組織では発現が低い。広範な研究により、ＩＡＰの過剰発現により、様々な抗癌剤によって誘導されるアポトーシスに対して癌細胞が耐性になることが示されている。ＩＡＰタンパク質及びアポトーシス並びに癌に対するそれらの効果の詳細な検討は、米国特許第７，９６０，３７２号に記載されている。
【０００７】
アポトーシスの中心的な負の調節因子の１つのカテゴリーは、アポトーシスタンパク質（ＩＡＰ）の阻害剤である。このカテゴリーは、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１、ｃＩＡＰ２、ＭＬ−ＩＡＰ、ＨＩＡＰ、ＫＩＡＰ、ＴＳＩＡＰ、ＮＡＩＰ、サバイビン、リビン、ＩＬＰ−２、アポロン、及びＢＲＵＣＥ等のタンパク質が含まれる。
【０００８】
ＩＡＰタンパク質の小分子阻害剤も知られている。例えば、米国特許公開２００５／０１９７４０３号及び米国特許７９６０３７２号は、二量体Ｓｍａｃ模倣化合物を開示する。中でも、ビスジアザビシクロ化合物は、ＩＡＰを阻害する化合物のクラスである。
【０００９】
研究により、ペプチドベースの阻害剤は、化学療法剤に対する癌細胞の応答におけるＩＡＰの抗アポトーシス機能及びＩＡＰの役割を解明するためのツールであることが示されている。先行技術は、ビスジアザビシクロ化合物が、肝炎ウイルス、特にＨＢＶウイルスの阻害又は除去に有効であることを開示又は示唆していない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Bertoletti, A. and C. Ferrari (2012). "Innate and adaptive immune responses in chronic hepatitis B virus infections: towards restoration of immune control of viral infection." Gut 61 (12): 1754-1764.
【非特許文献２】Chou, HH, WH Chien, LL Wu, CH Cheng, CH Chung, JH Horng, YH Ni, HT Tseng, D. Wu, X. Lu, HY Wang, PJ Chen and DS Chen (2015). "Age-related immune clearance of hepatitis B virus infection requires the establishment of gut microbiota." Proc Natl Acad Sci USA 112 (7): 2175-2180.
【非特許文献３】European Association For The Study Of The, L. (2012). "EASL clinical practice guidelines: Management of chronic hepatitis B virus infection." J Hepatol 57 (1): 167-185.
【非特許文献４】Gish, RG, BD Given, C.-L. Lai, SA Locarnini, JYN Lau, DL Lewis and T. Schluep (2015). "Chronic hepatitis B: Virology, natural history, current management and a glimpse at future opportunities." Antiviral Research 121: 47-58.
【非特許文献５】Guidotti, LG, D. Inverso, L. Sironi, P. Di Lucia, J. Fioravanti, L. Ganzer, A. Fiocchi, M. Vacca, R. Aiolfi, S. Sammicheli, M. Mainetti, T. Cataudella, A . Raimondi, G. Gonzalez-Aseguinolaza, U. Protzer, ZM Ruggeri, FV Chisari, M. Isogawa, G. Sitia and M. Iannacone (2015). "Immunosurveillance of the liver by intravascular effector CD8 (+) T cells." Cell 161 (3): 486-500.
【非特許文献６】Guidotti, L. G., R. Rochford, J. Chung, M. Shapiro, R. Purcell and F. V. Chisari (1999). "Viral clearance without destruction of infected cells during acute HBV infection." Science 284 (5415): 825-829.
【非特許文献７】Hoh, A., M. Heeg, Y. Ni, A. Schuch, B. Binder, N. Hennecke, HE Blum, M. Nassal, U. Protzer, M. Hofmann, S. Urban and R. Thimme (2015) "Hepatitis B Virus-Infected HepG2hNTCP Cells Serve as a Novel Immunological Tool To Analyze the Antiviral Efficacy of CD8 + T Cells In Vitro." J Virol 89 (14): 7433-7438.
【非特許文献８】Huang, L. R., H. L. Wu, P. J. Chen and D. S. Chen (2006). "An immunocompetent mouse model for the tolerance of human chronic hepatitis B virus infection." Proc Natl Acad Sci U S A 103 (47): 17862-17867.
【非特許文献９】Liaw, YF, N. Leung, JH Kao, T. Piratvisuth, E. Gane, KH Han, R. Guan, GK Lau, S. Locarnini and BGWP ot A.-PA ft S. ot L. Chronic Hepatitis (2008) "Asian-Pacific consensus statement on the management of chronic hepatitis B: a 2008 update." Hepatol Int 2 (3): 263-283.
【非特許文献１０】Liu, J., HI Yang, MH Lee, SN Lu, CL Jen, R. Batrla-Utermann, LY Wang, SL You, CK Hsiao, PJ Chen, CJ Chen and REVEALHS Group (2014). "Spontaneous seroclearance of hepatitis B seromarkers and subsequent risk of hepatocellular carcinoma." Gut 63 (10): 1648-1657.
【非特許文献１１】Lok, A. S. and B. J. McMahon (2009). "Chronic hepatitis B: update 2009." Hepatology 50 (3): 661-662.
【非特許文献１２】Lucifora, J. and C. Trepo (2015). "Hepatitis: After HCV cure, HBV cure?" Nat Rev Gastroenterol Hepatol 12 (7): 376-378.
【非特許文献１３】Lucifora, J., Y. Xia, F. Reisinger, K. Zhang, D. Stadler, X. Cheng, MF Sprinzl, H. Koppensteiner, Z. Makowska, T. Volz, C. Remouchamps, WM Chou, WE Thasler, N. Huser, D. Durantel, TJ Liang, C. Munk, MH Heim, JL Browning, E. Dejardin, M. Dandri, M. Schindler, M. Heikenwalder and U. Protzer (2014). "Specific and nonhepatotoxic degradation of nuclear hepatitis B virus cccDNA." Science 343 (6176): 1221-1228.
【非特許文献１４】Nassal, M. (2015). "HBV cccDNA: viral persistence reservoir and key obstacle for a cure of chronic hepatitis B." Gut 64 (12): 1972-1984.
【非特許文献１５】Sundaram, V. and K. Kowdley (2015). "Management of chronic hepatitis B infection." BMJ 351: h4263.
【非特許文献１６】Wong, D. K., W. K. Seto, J. Fung, P. Ip, F. Y. Huang, C. L. Lai and M. F. Yuen (2013). "Reduction of hepatitis B surface antigen and covalently closed circular DNA by nucleos(t)ide analogues of different potency." Clin Gastroenterol Hepatol 11(8): 1004-1010 e1001.
【非特許文献１７】Yang, D., L. Liu, D. Zhu, H. Peng, L. Su, Y. X. Fu and L. Zhang (2014). "A mouse model for HBV immunotolerance and immunotherapy." Cell Mol Immunol 11(1): 71-78.
【発明の概要】
【００１１】
発明の内容
研究において、本願発明者達は、ビスジアザビシクロ化合物が、肝炎ウイルス、特にＨＢＶウイルスの阻害及び／又は排除に非常に効果的であることを思いがけず発見した。
【００１２】
従って、本発明の第１の態様は、肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害の治療及び／又は予防のためのビスジアザビシクロ化合物に関し、ここで、化合物は、ビスジアザビシクロ化合物である。さらに、ビスジアザビシクロ化合物は、以下の構造を有する化合物又はその医薬的に許容される塩である：
【化１】
2021504294.tif 000003
（式中、
Ｘが、
【化２】
2021504294.tif 000004
及び−ＳＯ２−から選択され；
Ｙが、−ＮＨ−、−Ｏ−、−Ｓ−、及び非存在から選択され；
Ｒが、
【化３】
2021504294.tif 000005
（式中、Ａ環が、Ｃ４−８脂肪族環である）、−Ｃ３−６シクロアルキレン
【化４】
2021504294.tif 000006
及び
【化５】
2021504294.tif 000007
（式中、Ｂ環が、フェニル、ナフチル、ピリジル、ピリダジニル、ピラジニル、又はピリミジニルであり、及びＢ環は、任意に置換される）
から選択され；
Ｒ１が、
【化６】
2021504294.tif 000008
（式中、Ｚが、Ｏ、Ｓ、ＮＨ又は
【化７】
2021504294.tif 000009
である）、
から選択され、ここで、ｎは、０、１、又は２であり、Ｂ環が、フェニル、ナフチル、ピリジル、ピリダジニル、ピラジニル又はピリミジニル、及びＢ環は、任意に置換される）。
【００１３】
好ましくは、化合物において、Ｒは、
【化８】
2021504294.tif 000010
から選択される。
【００１４】
好ましくは、化合物において、Ｒ１は、
【化９】
2021504294.tif 000011
から選択される。
【００１５】
好ましくは、化合物において、Ｘは、ＳＯ２であり、Ｙは、非存在である。
【００１６】
好ましくは、化合物は、
【化１０】
2021504294.tif 000012
である。
【００１７】
好ましくは、化合物は、
【化１１】
2021504294.tif 000013
から選択される。
【００１８】
さらに、肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害は、肝炎ウイルスの感染後期に関連する疾患又は障害である。好ましくは、肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害は、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス又はＣ型肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害である。より好ましくは、肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害は、限定されないが、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎又はＣ型肝炎及び肝硬変が含まれる。さらに、化合物は、免疫応答を改変することにより、肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害を治療及び／又は予防する。
【００１９】
本発明の第２の態様は、肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害の治療及び／又は予防のための医薬の製造における上記で定義された化合物の使用に関する。
【００２０】
本発明の第３の態様は、肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害を治療及び／又は予防する方法に関し、ここで、前記方法は、肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害を患っている患者に治療的及び／又は予防的有効量の化合物を投与することを含み、ここで、化合物は、ビスジアザビシクロ化合物である。
【００２１】
本発明の第４の態様は、上記定義の化合物を含む医薬組成物に関し、ここで、医薬組成物は、肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害の治療及び／又は予防に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】図１は、ｐＡＡＶ−ＨＢＶ１．２プラスミドの高圧尾静脈注射によって確立されたＣ５７ＢＬ／６ＪマウスモデルにおけるＨＢＶに対する化合物１の単回投与の効果を示す。Ａ：各群の血清中のＨＢｓＡｇの動的な変化； Ｂ：各群の血清中のＨＢＶ ＤＮＡの動的な変化； 免疫組織化学的染色により７週間で検出された各群の肝臓組織におけるＨＢｃＡｇの発現； Ｄ： サザンブロットにより７週間で検出された各群の肝臓におけるＨＢＶ複製中間体。
【図２】図２は、ｐＡＡＶ−ＨＢＶ１．２プラスミドの高圧尾静脈注射によって確立されたＣ５７ＢＬ／６ＪマウスモデルにおけるＨＢＶに対するテノホビルジソプロキシルフマル酸塩（ＴＤＦ）と組み合わせた化合物１の投与の効果を示す。Ａ： 異なる時点での異なる群の血清中のＨＢｓＡｇの除去率の比較； Ｂ異なる時点での異なる群の血清中のＨＢＶ ＤＮＡの除去率の比較。
【図３】図３は、ＨＢＶ感染マウスの肝細胞アポトーシスに対する化合物１の効果を示す。Ａ： ｐＡＡＶ−ＨＢＶ１．２プラスミドの高圧尾静脈注射を受けたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス対する化合物１注射後の異なる時点での血清中のＡＬＴ及びＡＳＴの動的変化； Ｂ： 化合物１注射後の様々な時点での肝臓組織におけるｃＩＡＰの発現変化； Ｃ： 化合物１注射後の様々な時点でのマウスの肝臓組織切片のＨＥ染色； Ｄ：ＨＢｃＡｇ免疫蛍光法及びトンネル二重染色法により検出されたＨＢＶ感染肝細胞のアポトーシス。
【図４】図４は、マウスのＨＢＶ免疫応答に対する化合物１処置の影響を示す。Ａ： 化合物１処置群のマウスの肝臓からウイルスが除去された後の肝臓の総リンパ球数の変化； Ｂ： 肝臓の浸潤ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞数の変化； Ｃ： ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−２の分泌に関するＨＢＶ特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞の機能； Ｄ：ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−２の分泌に関するＨＢＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の機能；
【図５】図５は、慢性ＨＢＶ感染のＣ５７ＢＬ／６ＪマウスモデルにおけるＩＦＮαａと組み合わせた化合物１の投与の抗ＨＢＶ効果を示す。図５Ａ： 各群の最初の投与後２１日以内の異なる時点での個々の血清ＨＢｓＡｇレベルの変化（群Ａ（０．９％生理食塩水注射群）： ｐＡＡＶ−ＨＢＶ１．２＋ｐＫＣＭｖｉｎｔ＋０．９％ＮａＣｌ； 群Ｂ（化合物１ １０ｍｇ／ｋｇ静脈内注射群）：ｐＡＡＶ−ＨＢＶ１．２＋ｐＫＣＭｖｉｎｔ＋化合物１ １０ｍｇ／ｋｇ； 群Ｃ（ＩＦＮα−２ａ群）：ｐＡＡＶ−ＨＢＶ１．２＋ｐＫＣＭｖｉｎｔ  ＩＦＮα−２ａ＋０．９％ＮａＣｌ； 群Ｄ（ＩＦＮα−２ａ群と組み合わせた化合物１）： ｐＡＡＶ−ＨＢＶ１．２＋ｐＫＣＭｖｉｎｔ ＩＦＮα−２ａ＋ＡＰＧ １０ｍｇ／ｋｇ）。図５Ｂ： 各群の最初の投与後２１日以内の異なる時点での個々の血清ＨＢｅＡｇレベルの変化（群Ａ（０．９％生理食塩水注射群）： ｐＡＡＶ−ＨＢＶ１．２＋ｐＫＣＭｖｉｎｔ＋０．９％ＮａＣｌ；群Ｂ（化合物１ １０ｍｇ／ｋｇ静脈内注射群）：ｐＡＡＶ−ＨＢＶ１．２＋ｐＫＣＭｖｉｎｔ＋化合物１ １０ｍｇ／ｋｇ群Ｃ（ＩＦＮα−２ａ群）：ｐＡＡＶ−ＨＢＶ１．２＋ｐＫＣＭｖｉｎｔ ＩＦＮα−２ａ＋０．９％ＮａＣｌ；群Ｄ（ＩＦＮα−２ａ群と組み合わせた化合物１）： ｐＡＡＶ−ＨＢＶ１．２＋ｐＫＣＭｖｉｎｔ ＩＦＮα−２ａ＋ＡＰＧ １０ｍｇ／ｋｇ）。
【図６】図６は、ｐＡＡＶ−ＨＢＶ１．２プラスミドの高圧尾静脈注射によって確立された慢性ＨＢＶ感染のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスモデルにおける化合物１及びビリナパントの抗ＨＢＶ効果の比較を示す。図６Ａ： 各群の最初の投与後５週間以内の異なる時点での全体的な血清ＨＢｓＡｇレベルの変化（群Ａ： ０．９％ＮａＣｌ生理食塩水注射群； 群Ｂ： 化合物１ ２０ｍｇ／ｋｇ静脈注射群； 群Ｃ： ビリナパント２０ｍｇ／ｋｇ静脈内注射群）； 図６Ｂ： 各群の最初の投与後５週間以内の異なる時点での全体的なＨＢｓＡｇレベルの変化（群Ａ： ０．９％ＮａＣｌ生理食塩水注射群； 群Ｂ： 化合物１ ２０ｍｇ／ｋｇ静脈注射群； 群Ｃ： ビリナパント２０ｍｇ／ｋｇ静脈内注射群）； 図６Ｃ： 各群の最初の投与後５週間以内の異なる個々の血清ＨＢｓＡｇレベルの変化（群Ａ： ０．９％ＮａＣｌ生理食塩水注射群； 群Ｂ： 化合物１ ２０ｍｇ／ｋｇ静脈注射群； 群Ｃ： ビリナパント２０ｍｇ／ｋｇ静脈内注射群）； 図６Ｄ： 各群の最初の投与後４週間以内の異なる時点での個々の血清ＨＢｓＡｇレベルの変化（群Ａ： ０．９％ＮａＣｌ生理食塩水注射群； 群Ｂ： 化合物１ ２０ｍｇ／ｋｇ静脈注射群； 群Ｃ： ビリナパント２０ｍｇ／ｋｇ静脈内注射群）。
【図７】図７は、ｐＡＡＶ−ＨＢＶ１．２プラスミドの高圧尾静脈注射によって確立された慢性ＨＢＶ感染Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスモデルにおける抗ＰＤ１抗体と組み合わせた化合物１の投与の抗ＨＢＶ効果を示す。図７Ａ： 各群の最初の投与後５週間以内の異なる時点での血清ＨＢｓＡｇレベルの変化（群Ａ： ０．９％ＮａＣｌ生理食塩水注射群； 群Ｂ： 化合物１ ２０ｍｇ／ｋｇ静脈注射群； 群Ｃ： 抗ＰＤ１抗体の腹腔内注射群； 群Ｄ： 抗ＰＤ１抗体群と組み合わせた化合物１）； 図７Ｂ： 各群の最初の投与後５週間以内の異なる時点での血清ＨＢｅＡｇレベルの変化（群Ａ： ０．９％ＮａＣｌ生理食塩水注射群； 群Ｂ： 化合物１ ２０ｍｇ／ｋｇ静脈注射群； 群Ｃ： 抗ＰＤ１抗体の腹腔内注射群； 群Ｄ： 抗ＰＤ１抗体群と組み合わせた化合物１）； 図７Ｃ： 各群の最初の投与後５週間以内の異なる時点での個々の血清ＨＢｓＡｇレベルの変化（群Ａ： ０．９％ＮａＣｌ生理食塩水注射群； 群Ｂ： 化合物１ ２０ｍｇ／ｋｇ静脈注射群； 群Ｃ： 抗ＰＤ１抗体の腹腔内注射群； 群Ｄ： 抗ＰＤ１抗体群と組み合わせた化合物１）； 図７Ｄ：各群の最初の投与後４週間以内の異なる時点での個々の血清ＨＢｅＡｇレベルの変化（群Ａ： ０．９％ＮａＣｌ生理食塩水注射群； 群Ｂ： 化合物１ ２０ｍｇ／ｋｇ静脈注射群； 群Ｃ： 抗ＰＤ１抗体の腹腔内注射群； 群Ｄ： 抗ＰＤ１抗体群と組み合わせた化合物１）。
【図８】図８は、ｒＡＡＶ−ＨＢＶ１．３（ａｙｗ）ウイルスの尾静脈注射によって確立されたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスモデルにおける化合物１及びＳＦ１８の抗ＨＢＶ効果を示す。図８Ａ： 各群の最初の投与後４週間以内の異なる時点での個々のＨＢｓＡｇレベルの変化（群Ａ： ０．９％ＮａＣｌ生理食塩水注射群； 群Ｂ： 化合物１ ２０ｍｇ／ｋｇ静脈注射群； 群Ｃ： ＳＦ１８ ２０ｍｇ／ｋｇ静脈注射群）； 図８Ｂ：各群の最初の投与後４週間以内の異なる時点での個々のＨＢｅＡｇレベルの変化（群Ａ： ０．９％ＮａＣｌ生理食塩水注射群； 群Ｂ： 化合物１ ２０ｍｇ／ｋｇ静脈注射群； 群Ｃ： ＳＦ１８ ２０ｍｇ／ｋｇ静脈注射群）。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
発明の詳細な説明
定義
本明細書で使用される「Ｃ４−８脂肪族環」という用語は、非置換又は１〜３個の基で置換されたシクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル又はシクロオクチルを指す（例えば、Ｃ４−８アルキル、ハロゲン、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ヒドロキシ、アルコキシ、ニトロ、シアノ、アルキルアミノ又はアミノ）。
【００２４】
本明細書で使用される「アルキル」という用語は、直鎖又は分岐鎖の飽和Ｃ１−１０炭化水素基を指し、その非限定的な例には、直鎖又は分岐鎖の形態のメチル、エチル及びプロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル及びデシルが含まれる。
【００２５】
用語「Ｃ３−６シクロアルキレン」は、３〜６個の炭素原子を有するに置換シクロアルカンを指し、例えば、
【化１２】
2021504294.tif 000014
を指す。「Ｃ３−６シクロアルキレン」は、非置換であるか、又はＣ１−４アルキル、ハロゲン、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、アルコキシ、ニトロ、シアノ、アルキルアミノ又はアミノ等の１〜３個の置換基で置換され得る。
【００２６】
本明細書で使用される「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素又はヨウ素として定義される。
【００２７】
本明細書で使用される「ヒドロキシ」という用語は、−ＯＨとして定義される。
【００２８】
本明細書で使用される「アルコキシ」という用語は、−ＯＲとして定義され、ここで、Ｒはアルキルである。
【００２９】
本明細書で使用される「アミノ」という用語は、−ＮＨ２と定義され、「アルキルアミノ」という用語は、−ＮＲ２と定義され、ここで、少なくとも1つのＲは、アルキル基であり、第２のＲは、アルキル基又は水素である。
【００３０】
本明細書で使用される「ニトロ」という用語は、−ＮＯ２として定義される。
【００３１】
本明細書で使用される「シアノ」という用語は、−ＣＮとして定義される。
【００３２】
本明細書で使用される「トリフルオロメチル」という用語は、−ＣＦ３として定義される。
【００３３】
本明細書で使用される「トリフルオロメトキシ」という用語は、−ＯＣＦ３として定義される。
【００３４】
本明細書で使用される「任意に置換された」という用語は、例えば、ハロゲン、アルキル、アルケニル、−ＯＣＦ３、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＮＣ、−ＯＨ、アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２アルキル、アルキニル、シクロアルキル、ニトロ、メルカプト、イミノ、アミド、ホスホネート、ホスフィネート、シリル、アルキルチオ、スルホニル、スルホンアミド、アルデヒド、ヘテロシクロアルキル、トリフルオロメチル、アリール及びヘテロアリールから独立して選択される1つ以上、特に１〜４個の基で置換されることを意味する。
【００３５】
本明細書で使用される「アリール」という用語は、単環式又は多環式芳香族基、好ましくは単環式又は二環式芳香族基、例えばフェニル又はナフチルを指す。
【００３６】
本明細書で使用される「ヘテロアリール」という用語は、1つ又は2つの芳香族環を含み、芳香族環の1つに少なくとも１個〜最大４個の窒素原子を含む単環式又は二環式環系を指す。
【００３７】
「疾患」又は「障害」という用語は、一般に病理学的状態又は機能と見なされる障害及び／又は異常な状態を意味し、特定の兆候、障害、及び／又は機能不全の形で現れることがある。
【００３８】
疾患又は障害を「治療する」という用語は、疾患又は障害を排除、阻害又は低減又は緩和することを意味し、用語「予防」は、疾患又は障害を回避及び除去すること、又は疾患又は障害の発生又は出現を防止することを意味する。
【００３９】
本発明の第１の態様は、ビスジアザビシクロ化合物に関し、当該化合物は、肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害の治療及び／又は予防、又は除去及び／又は緩和に使用され、ここで、当該化合物は、ビスジアザビシクロ化合物である。
【００４０】
さらに、ビスジアザビシクロ化合物は、以下の構造を有する化合物又はその医薬的に許容される塩である：
【化１３】
2021504294.tif 000015
（式中、
Ｘが、
【化１４】
2021504294.tif 000016
及び−ＳＯ２−から選択され；
Ｙが、−ＮＨ−、−Ｏ−、−Ｓ−、及び非存在から選択され；
Ｒが、
【化１５】
2021504294.tif 000017
（式中、Ａ環が、Ｃ４−８脂肪族環である）、−Ｃ３−６シクロアルキレン
【化１６】
2021504294.tif 000018
及び
【化１７】
2021504294.tif 000019
（式中、Ｂ環が、フェニル、ナフチル、ピリジル、ピリダジニル、ピラジニル、又はピリミジニルであり、及びＢ環は、任意に置換される）
から選択され；
Ｒ１が、
【化１８】
2021504294.tif 000020
（式中、Ｚが、Ｏ、Ｓ、ＮＨ又は
【化１９】
2021504294.tif 000021
である）、
から選択され、ここで、ｎは、０、１、又は２であり、Ｂ環が、フェニル、ナフチル、ピリジル、ピリダジニル、ピラジニル又はピリミジニル、及びＢ環は、任意に置換される）。
【００４１】
好ましくは、化合物において、Ｒは、
【化２０】
2021504294.tif 000022
である。
【００４２】
好ましくは、化合物において、Ｒ１は、
【化２１】
2021504294.tif 000023
である。
【００４３】
好ましくは、化合物において、Ｘは、ＳＯ２であり、Ｙは、非存在である。
【００４４】
好ましくは、化合物は、
【化２２】
2021504294.tif 000024
である。
【００４５】
さらに、ビスジアザビシクロ化合物は、以下の構造を有する化合物又はその医薬的に許容される塩である：
【化２３】
2021504294.tif 000025
（式中、
Ｘが、
【化２４】
2021504294.tif 000026
及び−ＳＯ２−から選択され；
Ｙが、−ＮＨ−、−Ｏ−、−Ｓ−から選択され、及びＸが、−ＳＯ２−である場合、非存在であり；
Ｒが、
【化２５】
2021504294.tif 000027
及び−Ｃ３−６シクロアルキレン
【化２６】
2021504294.tif 000028
から選択され； 及び
Ｒ１が、
【化２７】
2021504294.tif 000029
（式中、
Ｚが、Ｏ、Ｓ又はＮＨである）から選択され；
ここで、Ａ環が、Ｃ４−８脂肪族環であり； 及びＢが、フェニル、ナフチル、ピリジル、ピリダジニル、ピラジニル又はピリミジニルであり、及びハロゲン、−ＯＣＦ３、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＮＣ、−ＯＨ、アミノ、Ｃ１−１０アルキル、Ｃ１−１０アルキルオキシ及びＣ１−１０アルキルアミノから独立して選択される１〜４個の基で任意に置換される）。
【００４６】
好ましくは、化合物において、Rは、
【化２８】
2021504294.tif 000030
（式中、
ｐが０〜４である）
である。
【００４７】
好ましくは、化合物において、Rは、
【化２９】
2021504294.tif 000031
（式中、
フェニルが、ハロゲン、−ＯＣＦ３、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＮＣ、−ＯＨ、アミノ、Ｃ１−１０アルキル、Ｃ１−１０アルキルオキシ及びＣ１−１０アルキルアミノから独立して選択される１〜４個の基で任意で置換される）
である。
【００４８】
好ましくは、化合物において、Rは、
【化３０】
2021504294.tif 000032
である。
【００４９】
好ましくは、化合物において、R１は、
【化３１】
2021504294.tif 000033
（式中、
フェニルが、ハロゲン、−ＯＣＦ３、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＮＣ、−ＯＨ、アミノ、Ｃ１−１０アルキル、Ｃ１−１０アルキルオキシ及びＣ１−１０アルキルアミノから独立して選択される１〜４個の基で任意で置換される）
である。
【００５０】
好ましくは、化合物において、R１は、
【化３２】
2021504294.tif 000034
（式中、
フェニルが、ハロゲン、−ＯＣＦ３、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＮＣ、−ＯＨ、アミノ、Ｃ１−１０アルキル、Ｃ１−１０アルキルオキシ及びＣ１−１０アルキルアミノから独立して選択される１〜４個の基で任意で置換される）
である。
【００５１】
好ましくは、化合物において、Ｘは、
【化３３】
2021504294.tif 000035
であり、及びＹが、−ＮＨ−である。
【００５２】
好ましくは、化合物において、Ｘは、
【化３４】
2021504294.tif 000036
であり、及びＹが、−ＮＨ−である。
【００５３】
好ましくは、化合物において、Ｘは、
【化３５】
2021504294.tif 000037
であり、及びＹが、Ｏである。
【００５４】
好ましくは、化合物は、以下から選択される：
【化３６−１】
2021504294.tif 000038
【化３６−２】
2021504294.tif 000039
【化３６−３】
2021504294.tif 000040
【００５５】
好ましくは、化合物は、
【化３７】
2021504294.tif 000041
である。
【００５６】
好ましくは、化合物は、
【化３８】
2021504294.tif 000042
から選択される。
【００５７】
好ましくは、化合物は、以下の構造：
【化３９】
2021504294.tif 000043
を有するＳＦ１８である。
【００５８】
好ましくは、化合物は、以下の構造：
【化４０】
2021504294.tif 000044
を有する、化合物１、すなわち、１，３−ベンゼン−ジ［７−（３Ｓ，５Ｓ，９ａＲ）−５−（（Ｓ）−２−メチルアミノ−プロピオンアミド）−３−ジフェニルメチルアミノカルボニル−４−オキソ−３ａ，７−ジアザ−デカヒドロ−シクロペンタノシクロオクテン）］−スルホンアミドである。
【００５９】
本発明によると、化合物は、ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０５５３８４  （ＷＯ２０１４／０３１４８７）に開示されている調製方法によって得られ、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる。
【００６０】
本発明によると、本発明の化合物は、モノマー又は組成物の形態で使用され得る。さらに、本発明の化合物は、腸、非経口又は局所経路を介して治療を必要とする患者に投与され得る。腸を介した経路には、通常経口投与が含まれ、腸を介して経路の使用のための本発明の化合物の形態には、経口溶液、錠剤、カプセル、顆粒、及び懸濁液が含まれる。非経口経路には、通常、皮下、筋肉内、腹腔内、静脈内等が含まれ、非経口経路用の本発明の化合物の形態には、注射及び凍結乾燥製剤が含まれる。局所使用のための本発明の化合物の形態には、パッチ、ペースト、軟膏等が含まれる。
【００６１】
さらに、肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害は、肝炎ウイルス感染の後期に関連する疾患又は障害である；肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害は、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、又はＣ型肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害である；好ましくは、肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害は、限定されないが、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、及び／又は肝硬変を含む。
【００６２】
さらに、化合物は、免疫応答を調節することにより、肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害を治療及び／又は予防する。好ましくは、免疫応答は、肝炎ウイルス（限定されないが、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、及びＣ型肝炎ウイルス、特にＢ型肝炎ウイルスを含む）に対する特定のＴ細胞応答に関与する。より好ましくは、免疫応答は、ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−２の分泌に関与する。
【００６３】
本発明の第２の態様は、肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害の治療及び／又は予防、又は排除及び／又は緩和のための医薬品の製造におけるビスジアザビシクロ化合物の使用に関する。
【００６４】
さらに、化合物は、上記で定義された化合物である。さらに、医薬品は、肝炎ウイルス、特にＨＢＶの治療のための既知の薬物が含まれ、既知の薬物は、限定されないが、ＩＦＮα−２ａ、ビリナパント、抗ＰＤ１抗体、ペグ化インターフェロンα２ｂ、ペグ化インターフェロンα２ａ、ラミブジン、アデホビル、エンテカビル及び／又はテノホビル（特に、テノホビルジソプロキシルフマル酸塩）を含む。
【００６５】
さらに、肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害は、肝炎ウイルス感染の後期に関連する疾患又は障害である；肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害は、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、又はＣ型肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害である；好ましくは、肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害は、限定されないが、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎。Ｃ型肝炎、及び／又は肝硬変を含む。
【００６６】
さらに、医薬品は、免疫応答を調節することにより、肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害を治療及び／又は予防する。好ましくは、免疫応答は、肝炎ウイルス（限定されないが、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、特にＢ型肝炎ウイルスを含む）に対する特定のＴ細胞応答に関与する。より好ましくは、免疫応答は、ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−２の分泌に関与する。
【００６７】
本発明の第３の態様は、肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害を治療及び／又は予防、又は排除及び／又は緩和する方法に関し、当該方法は、肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害を患っている患者に治療的及び／又は予防的有効量の化合物を投与することを含む。
【００６８】
さらに、化合物は、上記で定義された化合物である。さらに、化合物は、肝炎ウイルス、特にＨＢＶの治療のための既知の薬物がさらに含まれ得、限定されないが、ペグ化インターフェロンα２ｂ、ペグ化インターフェロンα２ａ、ラミブジン、アデホビル（特に、アデホビルジピボキシル）、エンテカビル及び/又はテノホビル（特に、テノホビルジソプロキシルフマル酸塩）を含む肝炎ウイルス、特にＨＢＶの治療のための既知の薬物と組み合わせてさらに使用され得る。
【００６９】
さらに、化合物が、肝炎ウイルス、特にＨＢＶの治療のための既知の薬物と組み合わせて使用される場合、化合物及び肝炎ウイルス、特にＨＢＶの治療のための既知の薬物は、一緒に、別々に、及び連続して投与され得る。
【００７０】
さらに、肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害は、肝炎ウイルス感染の後期に関連する疾患又は障害である；肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害は、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、又はＣ型肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害である；好ましくは、肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害は、限定されないが、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝、及び/又は肝硬変を含む。
【００７１】
さらに、化合物は、免疫応答を調節することにより、肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害を治療及び／又は予防する。好ましくは、免疫応答は、肝炎ウイルス（限定されないが、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、特にＢ型肝炎ウイルスを含む）に対する特定のＴ細胞応答に関与する。より好ましくは、免疫応答は、ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−２の分泌に関与する。
【００７２】
本発明の第４の態様は、ビスジアザビシクロ化合物を含む医薬組成物に関し、当該医薬組成物は、肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害の治療及び／又は予防、又は排除及び／又は緩和に使用される。
【００７３】
さらに、ビスジアザビシクロ化合物は、上記で定義された化合物である。さらに、医薬組成物は、肝炎ウイルス、特にＨＢＶの治療のための既知の薬物がさらに含まれ得、既知の薬物は、限定されないが、インターフェロンα２ｂ、インターフェロンα２ａ、ラミブジン、アデホビル（特にアデホビルピボキシル）、エンテカビル及び/又はテノホビル（特に、テノホビルジソプロキシルフマル酸塩）を含む。
【００７４】
さらに、肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害は、肝炎ウイルス感染の後期に関連する疾患又は障害である；肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害は、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、又はＣ型肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害である；好ましくは、肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害は、限定されないが、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝、及び/又は肝硬変を含む。
【００７５】
さらに、化合物は、免疫応答を調節することにより、肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害を治療及び／又は予防する。好ましくは、免疫応答は、肝炎ウイルス（限定されないが、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、特にＢ型肝炎ウイルスを含む）に対する特定のＴ細胞応答に関与する。より好ましくは、免疫応答は、ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−２の分泌に関与する。
【実施例】
【００７６】
本発明を実施するための特定のモデル
【００７７】
以下の実施例は、本発明をさらに説明するために用いられるが、決して本発明を限定する意図を有するものではない。
【００７８】
実施例１．ｐＡＡＶ−ＨＢＶ１．２プラスミドの高圧尾静脈注射により確立されたＣ５７ＢＬ／６ＪマウスモデルのＨＢＶに対する化合物の単回注射の効果
【００７９】
１．１  実験方法
【００８０】
慢性ＨＢＶ感染マウスモデルは、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを使用してｐＡＡＶ−ＨＢＶ１．２プラスミドの高圧尾静脈注射により確立され、免疫制御を自発的に獲得できる慢性Ｂ型肝炎患者を模擬的に再現した。雄のＣ５７／Ｂ６マウス（６〜８週齢、体重２０±２ｇ）を選択し、高圧尾静脈注射マウスモデルを確立した。このモデルでは、マウスの尾を７５％エタノールで拭いた後、遠赤外線理学療法装置を２〜３分間使用して、マウスの尾静脈が膨らみ、はっきりと見えるようにした。針を尾静脈に沿って平行に挿入し、空になるか又は血液が戻るのを見るまで、これは、針が静脈に入ったことを示す、１０秒以内に押して注射を完了した。各マウスに１０μｇのｐＡＡＶ／ＨＢＶ１．２プラスミドを注射し、注射液（ＰＢＳ）の量は体重の１０％（２ｍＬ／２０ｇ）であった。注射１４日目に、血液を採取し、ＨＢｓＡｇを検出し、さらなる実験のためにＨＢｓＡｇ＞５００ＩＵ／ｍｌのモデル化に成功したマウスをさらなる実験のために選択した（Huang, Wu et al. 2006; Chou, Chien et al. 2015）。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスが首尾よくモデル化された後、４つの群に分割された：０．９％ＮａＣｌ生理食塩水注射群（図１Ａ及び１Ｂの群１、黒い線）、化合物１ １０ｍｇ／ｋｇ静脈内注射群（図１Ａ及び１Ｂの群２、赤い線）、化合物１ ２０ｍｇ／ｋｇ静脈内注射群（図１Ａ及び１Ｂの群３、青い線）。各群に６〜８匹のマウスで実施し、週に１回４回連続で投与し、７週間観察した。
【００８１】
マウス血清をＰＢＳで２０倍に希釈した後、Ａｂｂｏｔｔ ｉ２０００ＳＲ微粒子化学発光自動検出器を使用して、血清のＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇ力価を検出した。血清ＨＢＶ ＤＮＡをＱＩＡａｍｐ ＤＮＡ Ｍｉｎｉキット（Ｑｉａｇｅｎ）で抽出し、血清中のＨＢＶ ＤＮＡレベルをＤＮＡ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎキット（Ｒｏｃｈｅ）を使用してＲｅａｌ−ｔｉｍｅ−ＰＣＲ（ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ４８０、Ｒｏｃｈｅ）で定量し、一連の濃度勾配を有するＨＢＶプラスミドＰＳＭ２製品を標準として使用した。この実験で使用したＨＢＶプライマーは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｓｈａｎｇｈａｉ）Ｔｒａｄｉｎｇ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，によって合成され、プライマーは、次の通りであった：ＨＢＶ  Ｈｏｐｅ−Ｆ（５’〜３’ＴＡＣＴＡＧＧＡＧＧＣＴＧＴＡＧＧＣＡＴＡ）及びＨＢＶ  Ｈｏｐｅ−Ｒ（５’〜３’ＧＧＡＧＡＣＴＣＴＡＡＧＧＣＴＴＣＣＣ）。マウスの肝臓組織に従来のホルマリン固定及びパラフィン包埋を施し、得られた４μｍ切片を６５℃で２時間熱し、従来のエタノール勾配で脱水し、室温で３０分間過酸化水素を浸透させ、ＰＢＳで５分／回、合計３回洗浄し、室温で１時間ブロッキングした。ウサギ抗ヒトＨＢｃＡｇ（Ｂ０５８６、ＤＡＫＯ）を添加し、ウェットボックスで室温１時間インキュベートした後、抗ウサギ抗マウス一般型ＧＴｖｉｓｉｏｎＩＩＩ免疫組織化学検出キット（ＧＫ５００７５、Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｇｅｎｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）を二次抗体のインキュベーション及び発色に使用し、２００倍の倍率の写真を通常の光学正立顕微鏡で撮影した。６０ｍｇの肝臓組織ホモジネートを秤量し、９００μｌのライセート（５０ｍｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ７．５＋１ｍｍｏｌ／Ｌ ＥＤＴＡ）を加え、氷上に置き、全てのサンプルを処理した後、５μｌのＮＰ−１０を加え溶解を氷上で行い、肝臓組織のＨＢＶ ＤＮＡをフェノール／クロロホルムで抽出し、１５μｌのＲＮａｓｅフリー水を加えて溶解し、１％アガロースゲルで泳動し、膜に移した：次に、ジゴキシンで標識された全長ＨＢＶプローブを追加し、４６℃で一晩静置し、ＤＩＧ洗浄バッファーに５分間１回さらし、Ａｎｔｉ−Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ−Ａｐ Ｆａｂフラグメント（１１０９３２７４９１０，Ｒｏｃｈｅ）を加え、Ｉｍａｇｅ Ｑｕａｎｔ ＬＡＳ ４０００ｍｉｎｉが露光及び検出に用いられた。
【００８２】
Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ５．０は、マッピングと関連する統計分析に使用され、Ｋｒｕｓｋａｌ−ＷａｌｌｉｓＨ検定及びＤｕｎｎの多重比較検定は同じ時点での群間の多重検定に使用され、ｌｏｇ−ｒａｎｋ Ｍａｎｔｅｌ−Ｃｏｘ検定は、血清中のＨＢｓＡｇ及びＨＢＶ ＤＮＡ除去率の比較に用いられた。＊はｐ＜０．０５を表し、＊＊はｐ＜０．０１を表し、＊＊＊はｐ＜０．００１を表し、ｐ＜０．０５は統計的に有意な差を示した。
【００８３】
１．２  実験結果
【００８４】
図１に示すように、通常の生理食塩水注射コントロール群と比較して、化合物１注射群は、投与後、血清ＨＢｓＡｇ（図１Ａ）及び血清ＨＢＶ ＤＮＡ（図１Ｂ）の急激な減少を示し、血清ＨＢｓＡｇ及びＨＢＶ ＤＮＡの何れも７週目まで検出限界を下回っていた。これは、化合物１ ２０ｍｇ／ｋｇ注射群は、血清ＨＢｓＡｇ及びＨＢＶ ＤＮＡが５週目に完全に排除されたことを示し、化合物１ １０ｍｇ／ｋｇ投与よりも速かった。肝臓組織のＨＢｃＡｇ免疫組織化学染色の結果は、投与後７週間後に化合物１注射群のマウスの肝臓でＨＢｃＡｇの発現が観察されなかったことを示したが、正常な生理食塩水コントロール群の一部のマウスの肝臓でのＨＢｃＡｇの発現は、依然として検出可能であった（図１Ｃ）。投与後７週間後の肝臓組織におけるＨＢＶ ＤＮＡサザンブロットの結果は、生理食塩水群と比較して、化合物１注射群の肝臓組織では、ＨＢＶ複製中間体が検出されなかったことを示した（図１Ｄ）。
【００８５】
上記結果から、化合物１を２０ｍｇ／ｋｇで４回連続して注射すると、慢性ＨＢＶに感染したマウスモデルの末梢血のＨＢｓＡｇ及びＨＢＶ ＤＮＡが完全に取り除かれ、５週目に肝臓のＨＢｃＡｇの発現及びＨＢＶ複製中間体が完全に取り除かれることが確認された。これらの結果は、化合物１が慢性ＨＢＶ感染患者のウイルス抗原と核酸産物を完全に排除できることを示した（＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０１）。
【００８６】
実施例２．ｐＡＡＶ−ＨＢＶ１．２プラスミドの高圧尾静脈注射によって確立されたＣ５７ＢＬ／６ＪマウスモデルのＨＢＶに対するテノホビルジソプロキシルフマル酸塩（ＴＤＦ）と組み合わせた化合物１の効果
【００８７】
２．１  実験方法
【００８８】
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスモデルは、ｐＡＡＶ−ＨＢＶ１．２プラスミドの高圧尾静脈注射によって確立された。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（６〜８週齢、体重２０±２ｇ）のモデル化に成功し、４つの群、すなわち、０．９％ＮａＣｌ生理食塩水注射群（図２Ａ及び２Ｂの群１、黒い線）、化合物１ １０ｍｇ／ｋｇ静脈注射群（図２Ａ及び２Ｂの群２、赤い線）、ＴＤＦ ５３ｍｇ／ｋｇ強制投与群（図２Ａ及び２Ｂの群３、青い線）、ＴＤＦ ５３ｍｇ／ｋｇ投与と組み合わせた化合物１ １０ｍｇ／ｋｇ投与群（図２Ａ及び２Ｂの群４、紫線）に分けられた。各群６〜８匹のマウスで実施した。化合物１を週４回連続で注射し、ＴＤＦを毎日、合計１０日間強制投与し、マウスを７週間観察した。血清学的ＨＢｓＡｇ及びＨＢＶ ＤＮＡ検出法は、上記と同じであった。
【００８９】
２．２  実験結果
【００９０】
図２に示すように、血清ＨＢｓＡｇ除去率（図２Ａ）に関して、化合物１の単一の群及びＴＤＦと化合物を組み合わせた群は、コントロール群と比較して血清ＨＢｓＡｇ除去率に等径的に有意な差を示し、ＴＤＦと組み合わせた化合物１群は、血清中のＨＢｓＡｇをより速く取り除くことができ、化合物１単一群又はＴＤＦ単一群と比較して統計的に有意な差を示した。上記結果は、ＴＤＦと組み合わせた化合物１が、血清中のＨＢｓＡｇを相乗的に取り除くことができることを示した。血清ＨＢＶ ＤＮＡ除去率に関して（図２Ｂ）、化合物１群、ＴＤＦ群及びＴＤＦと組み合わせた化合物１群は、コントロール群と比較して統計的に有意な差を示し、ＴＤＦと組み合わせた化合物１群は、ＴＤＦ単一群又は化合物１単一群よりも速く血清ＨＢＶ ＤＮＡを除去できた。
【００９１】
上記結果は、ＴＤＦと組み合わせた化合物１が、血清ＨＢＶ ＤＮＡの排除を促進し、それによって、ウイルスに対し相乗効果を発揮できることを示した（＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０１；＊＊＊、ｐ＜０．００１）。
【００９２】
実施例３．ＨＢＶ感染マウスの肝細胞のアポトーシスに対する化合物１の効果
【００９３】
３．１  実験方法
【００９４】
慢性ＨＢＶ感染マウスモデルは、ｐＡＡＶ−ＨＢＶ１．２プラスミドの高圧尾静脈注射又はＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの組換えウイルスｒＡＡＶ８−１．３ＨＢＶ注射によって確立された（６〜８週齢、体重２０±２ｇ）。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスが、ｐＡＡＶ−ＨＢＶ１．２プラスミドの高圧尾静脈注射によって正常にモデル化された後、マウスに１０ｍｇ／ｋｇの化合物１を静脈内注射し、注射後１２、２４、及び４８時間にマウスの血清及び肝臓組織を採取した。グルタミン酸−オキサル酢酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ／ＧＯＴ）キット（Ｎａｎｊｉｎｇ Ｊｉａｎｃｈｅｎｇ， Ｃ００９−２）を使用して、血清ＡＬＴ及びＡＳＴレベルを検出した。ウェスタンブロットを用いて、肝臓組織におけるｃｌＡＰ分子の発現を検出し、βアクチンをコントロールとして用いた。肝内の炎症及び肝細胞壊死は、肝組織切片のＨＥ染色により検出された。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに５×１０５ｖ．ｇ．／マウスのウイルス注射量で、ｒＡＡＶ８−１．３ＨＢＶ（ａｙｗ）ウイルスの従来の尾静脈注射を行い（Yang, Liu et al. 2014）、ｒＡＡＶ８−ＨＢＶ１．３ウイルス注射Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスモデルを確立した。２０ｍｇ／ｋｇの化合物１の静脈内注射の１２時間後にマウスを屠殺し、ＨＢＶに感染した肝細胞アポトーシスをＨＢｃＡｇ免疫蛍光の二重染色検出及びタネル法に供した。
【００９５】
３．２  実験結果
【００９６】
図３に示すように、化合物１の注射後、肝細胞の損傷を反映した血清トランスアミナーゼＡＬＴ及びＡＳＴは、一時的な増加を示した。すなわち、１２時間で最高値に上昇し、その後徐々に減少し、約４８時間で正常レベルに戻った（図３Ａ）。ウェスタンブロットによる肝臓のＩＡＰ分子の検出により、化合物１が、肝臓組織のｃＩＡＰに対して強い阻害効果を示し、１２時間で最も強い値に達したことが明らかになった。また、ｃＩＡＰ１に対する抑制効果もあったが、ｃＩＡＰ２に比べて有意に弱かった。一方、ＸＩＡＰでは、有意な阻害効果が観察されなかった（図３Ｂ）。肝臓組織のＨＥ染色はまた、注射後１２時間に、リンパ球浸潤を伴う散在性壊死性病変が、肝臓組織の門脈領域の近くに現れることを示した（図３Ｃ）。タネル染色とＨＢｃＡｇ蛍光の二重染色実験を用いて、ＨＢＶに感染した肝細胞のアポトーシスを観察し、二重染色３Ｄ画像分析と組み合わせて、化合物１の注射後１２時間に、ＨＢｃＡｇ陽性肝細胞のアポトーシスが誘導されることがわかった（図３Ｄ）。
【００９７】
上記結果は、化合物１が、ＨＢＶに感染した肝細胞のアポトーシスを特異的に誘導し、ウイルスの除去に寄与することを示唆する。加えて、一過性の肝内炎症を誘発するだけであり、劇症肝炎を引き起こさなかったため、治療によって引き起こされる可能性のある副作用を低減した。
【００９８】
実施例４．マウスのＨＢＶ免疫応答に対する化合物１の効果
【００９９】
４．１  実験方法
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（６〜８週齢、体重２０±２ｇ）にｐＡＡＶ−ＨＢＶ１．２プラスミドの高圧尾静脈注射を行い、慢性ＨＢＶ感染マウスモデルを確立した。モデリングが成功した後、マウスを２つの群に分けた：群Ａ：０．９％ＮａＣｌ生理食塩水注射群；群Ｂ：化合物１ ２０ｍｇ／ｋｇ注射群。各群５〜６匹のマウスで実施した、週４回連続して投与し、７週目に屠殺し、マウスの肝臓リンパ球を分離し、細胞カウント及びフローサイトメトリーを使用して肝臓のリンパ球におけるＣＤ４及びＣＤ８の発現を検出した。ＨＢＶ特異的Ｔ細胞応答の検出は、ＨＢＶコアモノペプチド（Ｃｏｒｅ９３−１００）を使用してリンパ球を刺激し、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、及びＩＬ−２を分泌したＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の数が、フローサイトメトリーサイトカイン細胞内染色法によって検出された。
【０１００】
４．２  実験結果
【０１０１】
図４に示すように、化合物１処置群のマウス肝臓からウイルスが取り除かれた後、肝臓の総リンパ球数は、生理食塩水コントロール群のリンパ球数よりも有意に高かった（図４Ａ）。さらなる分析により、コントロールと比較して、肝臓に浸潤したＣＤ４＋細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞の数が有意に増加したことが明らかになった（図４Ｂ）。ＨＢＶコアモノペプチド（Ｃｏｒｅ９３−１００）で刺激した後、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−２を分泌したＣＤ４＋Ｔ細胞の数は大幅に増加し（図４Ｃ）、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−２を分泌したＣＤ８＋Ｔ細胞の数は大幅に増加した（図４Ｄ）。
【０１０２】
上記結果は、化合物１での処理及びウイルスの除去の後、肝臓におけるＨＢＶに対する特異的Ｔ細胞応答機能が有意に増強され、これがウイルスの除去を助けになったことを示した。さらに、化合物１は、ＨＢＶ特異的Ｔ細胞応答を上方制御することにより、ＨＢＶ感染肝細胞のアポトーシスを特異的に誘導し、それによって、ウイルス抗原及び他のウイルス産物を排除する。
【０１０３】
実施例５．  慢性ＨＢＶ感染Ｃ５７ＢＬ／６ＪマウスモデルにおけるＩＦＮα２ａと組み合わせた化合物１の投与の抗ＨＢＶ効果
【０１０４】
５．１  実験方法
【０１０５】
慢性ＨＢＶ感染マウスモデルは、ｐＡＡＶ−ＨＢＶ１．２プラスミド及びｐＫＣＭｖｉｎｔ ＩＦＮα−２ａプラスミド又はｐＫＣＭｖｉｎｔコントロールプラスミド（６μｇ／マウス）の高圧尾静脈注射を受け、ＩＦＮα２ａを発現したＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（６〜８週齢、体重２０±２ｇ）を使用して確立された。モデリングの１日後、マウスを４つの群に分けた。群Ａ（０．９％生理食塩水注射群）：ｐＡＡＶ−ＨＢＶ１．２＋ｐＫＣＭｖｉｎｔ＋０．９％ＮａＣｌ；群Ｂ（化合物１ １０ｍｇ／ｋｇ静脈内注射群）：ｐＡＡＶ−ＨＢＶ１．２＋ｐＫＣＭｖｉｎｔ＋化合物１ １０ｍｇ／ｋｇ； 群Ｃ（ＩＦＮα２ａ群）：ｐＡＡＶ−ＨＢＶ１．２＋ｐＫＣＭｖｉｎｔＩＦＮα２ａ＋０．９％ＮａＣｌ；群Ｄ（ＩＦＮα２ａと化合物１の組み合わせ群）：ｐＡＡＶ−ＨＢＶ１．２＋ｐＫＣＭｖｉｎｔＩＦＮα２ａ＋ＡＰＧ １０ｍｇ／ｋｇ。各群５匹のマウスで実施し（７匹のマウスを含む群Ｄを除く）、投与は、連続して３回、すなわち、モデリング後１日目、及びモデリング後７日目、１４日目で行われた。血液は、投与の１日前に眼窩縁で１回採取され、血清ＨＢｓＡｇ／ＨＢｅＡｇレベルが、Ｒｏｃｈｅ６０１機器を使用して検出された。
【０１０６】
５．２  実験結果
【０１０７】
図５Ａ及び５Ｂに示すように、血清ＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇレベルは、モデリング後７日目、１４日目、及び２１日目に異なる治療群間で統計的に異なっていた。図５Ａに示すように、群Ａと群Ｂ、群Ｃ、群Ｄを比較して、前者３群は、７、１４、２１日目に血清ＨＢｓＡｇに等径的に有意な差を示した。つまり、Ｐ値は、７日目に０．０１０、Ｐ値は、１４日目に０．００８、及び２１日目に０．００４であった。これは、Ｐ値が、０．０５未満の場合に群の間に統計的な差が決められ、併用治療群Ｄにおける血清ＨＢｓＡｇの減少が最も顕著であった。２１日目に、群Ｃと比較して、群Ｂ及び群Ｄの血清が大幅に減少し、それらのＰ値は、両方とも０．００８であった。つまり、群Ｂと比較した群ＣのＰ値は、０．００８であり、群Ｄと比較した群Ｃは、０．００８であった（両方の個別の比較のＰ値は図示されていない）。図５Ｂに示すように、群Ａと群Ｂ、群Ｃ、群Ｄを比較して、前者３群は、７、１４、２１日目に血清ＨＢｅＡｇに等径的に有意な差を示した。つまり、Ｐ値は、７日目に０．００４、Ｐ値は、７日目に０．０２１、及び２１日目に０．００１であった。これは、Ｐ値が、０．０５未満の場合に群の間に統計的な差が決められ、併用治療群Ｄにおける血清ＨＢｅＡｇの減少が最も顕著であった。２１日目に、群Ｃ及び群Ｂと比較して、群Ｄの血清は、有意に減少し、Ｐ値は、両方とも０．００８であった。つまり、群Ｂと比較した群ＤのＰ値は、０．００８、群Ｃと比較した群ＤのＰ値は、０．００８であった（両方の個別の比較のＰ値は図示されていない）。
【０１０８】
上記の結果は、ＩＦＮα２ａと組み合わせた化合物１群が、ＨＢｓＡｇ／ＨＢｅＡｇの減少において最も顕著な効果を有することを示した。従って、ＩＦＮα２ａと組み合わせた化合物１群は、ｐＡＡＶ−ＨＢＶ１．２プラスミドとｐＫＣＭｖｉｎｔＩＦＮα−２ａプラスミド又はｐＫＣＭｖｉｎｔコントロールプラスミドの混合物の高圧尾静脈注射によりＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスで確立された慢性ＨＢＶ感染マウスモデルにおいて抗ＨＢＶ効果を示した。
【０１０９】
実施例６．ｐＡＡＶ−ＨＢＶ１．２プラスミドの高圧尾静脈注射により確立された慢性ＨＢＶ感染Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスモデルにおける化合物１及びビリナパントの抗ＨＢＶ効果の比較
【０１１０】
６．１  実験方法
【０１１１】
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（６〜８週齢、体重２０±２ｇ）にｐＡＡＶ−ＨＢＶ１．２プラスミドの高圧尾静脈注射を行い、慢性ＨＢＶ感染マウスモデルを確立した。モデリングが成功した後、マウスを３つの群に分けた。群Ａ：０．９％ＮａＣｌ生理食塩水注射群；群Ｂ：化合物１ ２０ｍｇ／ｋｇ静脈内注射群、及び群Ｃ：ビリナパント２０ｍｇ／ｋｇ静脈内注射群。そのうち、群Ａ及び群Ｂは各７匹、群Ｃは６匹のマウスで実施した。化合物１及びビリナパントは、５週間連続して週に１回投与された。投与前に毎週、眼窩縁で血液を採取し、Ｒｏｃｈｅ６０１機器を使用して、上清中のＨＢｓＡｇ／ＨＢｅＡｇレベルを検出した。
【０１１２】
６．２  実験結果
【０１１３】
図６Ａに示すように、ＨＢｓＡｇの除去効果に関して、血漿中のＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの全体的なレベルの変化から、化合物１の静脈内注射群と生理食塩水注射群の間に統計的に顕著な差があった。図６Ｂに示すように、ＨＢｅＡｇの除去効果に関して、化合物１の静脈内投与群とビリナパント投与群の間に統計的に顕著な差があった（＊、ｐ＜０．０５）。
【０１１４】
図６Ｃに示すように、血漿中のＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの全体的なレベルの変化から、両薬物処置群の血清ＨＢｓＡｇレベルは、顕著に低下し、化合物１群の血清ＨＢｓＡｇレベルは、ビリナパント群の血清ＨＢｓＡｇレベルよりも顕著に低かった（ｐ＝０．０３５）。
【０１１５】
４週間の投与後、化合物１群のマウスの８６％が、検出下限より低い血清ＨＢｓＡｇレベルであったが、ビリナパント群の対応する割合は、５７％であった。この値は、図６Ａに示された（データは表示されていない）。
【０１１６】
上記結果は、ＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの除去効果に関して、化合物１がビリナパントよりも優れていることを示した。従って、同じ投与量及び投与方法で、化合物１の抗ウイルス効果は、ビリナパントの効果よりも優れていた。
【０１１７】
実施例７．ｐＡＡＶ−ＨＢＶ１．２プラスミドの高圧尾静脈注射により確立された慢性ＨＢＶ感染Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスモデルにおける抗ＰＤ１抗体と組み合わせた化合物１の投与の抗ＨＢＶ効果
【０１１８】
７．１  実験方法
【０１１９】
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（６〜８週齢、体重２０±２ｇ）にｐＡＡＶ−ＨＢＶ１．２プラスミドの高圧尾静脈注射を行い、慢性ＨＢＶ感染マウスモデルを確立した。モデリングが成功した後、マウスを４つの群に分けた。群Ａ：０．９％ＮａＣｌ生理食塩水注射群；群Ｂ：化合物１ ２０ｍｇ／ｋｇ静脈内注射群、群Ｃ：抗ＰＤ１抗体２００μｇ／マウス／回腹膜注射群；群Ｄ：抗ＰＤ１抗体と組み合わせた化合物１群。その中で、各群７匹のマウスで実施した。化合物１を週に１回静脈内投与し、抗ＰＤ１抗体を週２回腹腔内投与した。化合物１を毎週投与する前に、眼窩縁から血液を採取し、Ｒｏｃｈｅ６０１機器を使用して上清のＨＢｓＡｇ／ＨＢｅＡｇレベルを検出した。
【０１２０】
７．２  実験結果
【０１２１】
図７Ａ及び７Ｂに示すように、血漿中のＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの全体的なレベルの変化から、化合物１単一群及び抗ＰＤ１抗体と組み合わせた化合物１群は、血清ＨＢｓＡｇ／ＨＢｅＡｇレベルを顕著に低減させることができた。抗ＰＤ１抗体単一群は、ＨＢｓＡｇ／ＨＢｅＡｇ効果の顕著な減少を示さなかった。
【０１２２】
図７Ｃに示すように、血漿中のＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの個々のレベルの変化から、群Ａを群Ｂ、群Ｃ及び群Ｄと比較すると、異なる薬物の３つの群は、２、３、４週目の血清ＨＢｓＡｇに統計的に有意な差を示した。つまり、２週目のＰ値は、０．０３５、３週目のＰ値は、０．００５、４週目のＰ値は、０．０１３であった。これは、Ｐ値が０．０５未満の場合に群の間の統計な差として決定され、併用処置群Ｄにおける血清ＨＢｓＡｇの減少が最も顕著であった。群Ｃと比較して、群Ｄの血清ＨＢｓＡｇは、投与後２週目と３週目に顕著に減少し、Ｐ値は、それぞれ、０．０１５及び０．０３７であった（２週目及び３週目の両方の個別の比較のＰ値は図示されていない）。図７Ｄに示すように、群Ａと群Ｂ、群Ｃ、群Ｄを比較すると、異なる薬物の３つの群は、１週目と２週目に血清ＨＢｅＡｇに統計的に顕著な差を示し、すなわち、１週目のＰ値は、０．０２９であり、２週目のＰ値は、０．００９であり、Ｐ値が０．０５未満の場合、群間の統計的に差があると決定された。群Ｃと比較して、群Ｂ及び群Ｄの血清ＨＢｅＡｇレベルは、投与後１週目及び２週目で顕著に減少し、１週目のＰ値はそれぞれ、０．０１６及び０．００７であり、２週目のＰ値はそれぞれ、０．００７及び０．００２であったが（１週目及び２週目の両方の個別の比較のＰ値は図示されていない）、群Ｂ及び群Ｄの間に統計的な差はなかった。
【０１２３】
上記の結果は、化合物１及び抗ＰＤ１抗体と組み合わせた化合物１が、ｐＡＡＶ−ＨＢＶ１．２プラスミドの高圧尾静脈注射によって確立された慢性ＨＢＶ感染Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスモデルにおいて抗ＨＢＶ効果を有することを示した。
【０１２４】
実施例８．ｒＡＡＶ８−ＨＢＶ１．３（ａｙｗ）ウイルス尾静脈注射によって確立されたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスモデルにおける化合物１及びＳＦ１８の抗ＨＢＶ効果
【０１２５】
８．１  実験方法
【０１２６】
Ｃ５７ＢＬ／６ＪマウスにｒＡＡＶ８−ＨＢＶ１．３（ａｙｗ）ウイルスの従来の尾静脈注射を行い、ウイルス注射量は、５×１０５ｖｇ／マウスで行い（Yang, Liu et al., 2014）、その後、ｒＡＡＶ８−ＨＢＶ１．３ウイルス注射Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスモデルが確立された。モデリングが成功した後、マウスを３つの群に分けた。群Ａ：０．９％ＮａＣｌ生理食塩水注射群；群Ｂ：化合物１ ２０ｍｇ／ｋｇ静脈内注射群、及び群Ｃ：ＳＦ１８ ２０ｍｇ／ｋｇ静脈注射。その中で、各群３匹のマウスで実施した。投与は、連続して４週間行われ、血液は１週間に１回眼窩縁で採取され、上清中のＨＢｓＡｇ／ＨＢｅＡｇレベルがＲｏｃｈｅ６０１機器によって検出された。
【０１２７】
８．２  実験結果
【０１２８】
図８Ａ及び８Ｂに示すように、ＳＦ１８群のマウス血清におけるＨＢｓＡｇ／ＨＢｅＡｇの減少率は、化合物１群の減少率よりも顕著に速かったが、１匹のマウスは、ＳＦ１８投与の２週目及４週目にそれぞれ死亡した。
【０１２９】
上記結果は、化合物１及びＳＦ１８の両方が抗ＨＢＶ効果を有し、ＳＦ１８の抗ＨＢＶ効果が化合物１の抗ＨＢＶ効果よりも強いことを示した。
【図１】
2021504294.tif 000064
【図２】
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【図３】
2021504294.tif 000066
【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
2021504294.tif 000070
【図６Ｂ】
2021504294.tif 000071
【図６Ｃ】
2021504294.tif 000072
【図６Ｄ】
2021504294.tif 000073
【図７Ａ】
2021504294.tif 000074
【図７Ｂ】
2021504294.tif 000075
【図７Ｃ】
2021504294.tif 000076
【図７Ｄ】
2021504294.tif 000077
【図８Ａ】
2021504294.tif 000078
【図８Ｂ】
2021504294.tif 000079
【手続補正書】
【提出日】令和2年6月26日(2020.6.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害の治療及び／又は予防のための医薬組成物の製造における化合物の使用であって、ここで、肝炎ウイルスに関連する前記疾患又は障害が、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、及び肝硬変から選択され、前記化合物が、以下の構造：
【化１】
2021504294.tif 000080
（式中、
Ｘが、
【化２】
2021504294.tif 000081
及び−ＳＯ２−から選択され；
Ｙが、−ＮＨ−、及び−Ｏ−から選択され、Ｙが、Ｘが−ＳＯ２−である場合、非存在であり；
Ｒが、
【化３】
2021504294.tif 000082
から選択され；及び
Ｒ１が、
【化４】
2021504294.tif 000083
（式中、
Ｚが、Ｏ又はＳである）
から選択され、ここで、Ｂが、Ｃ１−１０アルキルから独立して選択される１〜４個の基で任意に置換されるフェニルである）、
を有する、使用。
【請求項２】
Ｒが、
【化５】
2021504294.tif 000084
である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
Ｒ１が、
【化６】
2021504294.tif 000085
である、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
前記化合物が、
【化７−１】
2021504294.tif 000086
【化７−２】
2021504294.tif 000087
【化７−３】
2021504294.tif 000088
から選択される、請求項１に記載の使用。
【請求項５】
前記化合物が、
【化８】
2021504294.tif 000089
から選択される、請求項１に記載の使用。
【請求項６】
前記化合物が、
【化９】
2021504294.tif 000090
である、請求項１に記載の使用。
【請求項７】
前記化合物が、免疫応答を調節することにより、肝炎ウイルスに関連する前記疾患又は障害を治療及び／又は予防する、請求項１〜６の何れか１項に記載の使用。
【請求項８】
前記医薬組成物が、ＨＢＶを治療することが知られている薬物をさらに含む、請求項１〜６の何れか１項に記載の使用。
【請求項９】
前記医薬組成物が、免疫応答を調節することにより、肝炎ウイルスに関連する前記疾患又は障害を治療及び／又は予防する、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
肝炎ウイルスに関連する疾患又は障害の治療及び／又は予防のための医薬組成物であって、ここで、肝炎ウイルスに関連する前記疾患又は障害が、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、及び肝硬変から選択され、以下の構造：
【化１０】
2021504294.tif 000091
（式中、
Ｘが、
【化１１】
2021504294.tif 000092
及び−ＳＯ２−から選択され；
Ｙが、−ＮＨ−、及び−Ｏ−から選択され、Ｙが、Ｘが−ＳＯ２−である場合、非存在であり；
Ｒが、
【化１２】
2021504294.tif 000093
から選択され；及び
Ｒ１が、
【化１３】
2021504294.tif 000094
（式中、
Ｚが、Ｏ又はＳである）
から選択され、ここで、Ｂが、Ｃ１−１０アルキルから独立して選択される１〜４個の基で任意に置換されるフェニルである）、
を有する、ビスジアザビシクロ化合物を含む、医薬組成物。
【請求項１１】
Ｒが、
【化１４】
2021504294.tif 000095
である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
Ｒ１が、
【化１５】
2021504294.tif 000096
である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記化合物が、
【化１６−１】
2021504294.tif 000097
【化１６−２】
2021504294.tif 000098
【化１６−３】
2021504294.tif 000099
から選択される、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記化合物が、
【化１７】
2021504294.tif 000100
から選択される、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記化合物が、
【化１８】
2021504294.tif 000101
である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
ビスジアザビシクロ化合物を含む医薬組成物であって、前記医薬組成物が、ＨＢＶを治療することが知られている薬物をさらに含む、医薬組成物。
【請求項１７】
ＨＢＶを治療することが知られている前記薬物が、ＩＦＮα−２ａ、ビリナパント、抗ＰＤ１抗体、ペグ化インターフェロンα２ｂ、ペグ化インターフェロンα２ａ、ラミブジン、アデホビル、エンテカビル及び/又はテノホビルである、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
ＨＢＶを治療することが知られている前記薬物が、テノホビルジソプロキシルフマル酸塩である、請求項１７に記載の医薬組成物。
【国際調査報告】
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