(57)【要約】本発明は、ナノ分散物に基づく組成物に関し、組成物は、好ましくはそのようなナノ分散物を含む電界紡糸繊維にさらに加工される。ナノ分散物は、任意選択で、カバノキ樹皮抽出物を含み得る。電界紡糸繊維は、特に創傷の処置に用いることができる。この目的のために、電界紡糸繊維を含有する組成物は、好ましくは、そのまま、または噴霧剤もしくはフォームで、適用される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１種のリン脂質で安定化されたナノ分散物を含有する組成物。
【請求項２】
前記ナノ分散物は、カバノキ樹皮抽出物をさらに含有することを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ナノ分散物は、医薬として許容可能なポリマー担体を組み込まれた電界紡糸繊維内に含有されることを特徴とする、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記リン脂質は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｃ  ａｃｉｄ）、およびホスファチジルセリン、またはそれらの組み合わせからなる群から選択されることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
前記ナノ分散物は、高せん断乳化もしくは超音波乳化、または高圧均質化もしくはマイクロ流体化によって調製されることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
前記ナノ分散物の粒子の少なくとも９５％は、１μｍ未満の粒径を有することを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
前記ナノ分散物中のカバノキ樹皮抽出物は、重量パーセントで計算された下記の成分：
７４〜８５重量％のベツリン、
１．０〜４．０重量％のルペオール、
３．０〜５．０重量％のベツリン酸、
０．３〜２．８重量％のエリトロジオール、
および
２〜１３重量％の、特にオレアノール酸、ベツリン酸、ベツリン酸のメチルエステルのようなカバノキ樹皮に由来する他の成分を含有し、すべての成分は合計で１００重量％となることを特徴とする、請求項２〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
前記ナノ分散物は、０．１重量％〜５．０重量％未満のカバノキ樹皮抽出物を含有することを特徴とする、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
前記ナノ分散物は、乳化剤としての前記リン脂質および水を、任意選択でカバノキ樹皮抽出物とともに、医薬として許容可能な油と混合することと、次に、ナノ分散物を得るために、混合物の高せん断乳化もしくは超音波乳化または高圧均質化を実施することとによって調製され、それにより、粒子液滴の少なくとも９５％が１μｍ未満の直径を有することを特徴とする、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記組成物は、医薬として許容可能なポリマー担体を組み込まれた電界紡糸繊維内に含有されることを特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
ポリマーは、ポリビニルアルコール、ポリ（グリコリド）、ポリラクチド−ポリグリコリド−コポリマー、ポリウレタン、ポリビニルアルコール／酢酸セルロース、絹フィブロイン、絹／キトサン、ゼラチン、コラーゲン／キトサンを含む群から選択されることを特徴とする、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
請求項１０または１１に記載の電界紡糸繊維を含有する組成物であって、電界紡糸ナノ繊維は、前記電界紡糸繊維の総重量に基づいて計算された、１．０〜６０重量％の請求項１〜９のいずれか１項に記載のナノ分散物を含有することを特徴とする、組成物。
【請求項１３】
電界紡糸繊維内に含有されるナノ分散物の製造方法であって、前記方法は、
ａ）リン脂質、油および水、ならびに任意選択でカバノキ樹皮抽出物の、ナノ分散物を調製することと、
ｂ）工程ａ）において得られた前記ナノ分散物をＰＶＡポリマー溶液と配合することと、
ｃ）その混合物を電界紡糸してフリースを形成することとを含む、方法。
【請求項１４】
創傷の処置に使用するための請求項１〜１２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１５】
創傷の処置に使用するための噴霧剤またはフォームの形態にある請求項１〜１２のいずれか１項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ナノ分散物に基づく組成物に関するものであり、この組成物は、好ましくは、そのようなナノ分散物を含む電界紡糸繊維にさらに加工される。ナノ分散物は、任意選択で、カバノキ樹皮抽出物（ｂｉｒｃｈ  ｂａｒｋ  ｅｘｔｒａｃｔ）を含み得る。電界紡糸繊維は、特に創傷の処置に用いることができる。この目的のために、電界紡糸繊維を含有する組成物は、好ましくは、そのままで、または噴霧剤もしくはフォーム（泡状物質）で適用される。
【背景技術】
【０００２】
特許文献１は、水溶性電界紡糸シート、および医療における水溶性電界紡糸シートの使用を記載している。
【０００３】
非特許文献１は、カバノキ樹皮（ベトゥラ  アルバ  コルテックス（ｂｅｔｕｌａ  ａｌｂａ  ｃｏｒｔｅｘ））からのトリテルペン乾燥抽出物およびその有望な医薬用途について記載している。カバノキ樹皮抽出物は、抗菌活性を有しており、またプラズモディウムまたはウイルスに対する活性も有する。さらに、カバノキ樹皮抽出物は、抗炎症性であり、創傷の治癒に有用である。抗腫瘍活性さえ記載されている。それらの高度に望ましい特性にもかかわらず、カバノキ樹皮抽出物の使用は、適当な医薬製剤を調製することが困難であることによって妨げられてきた。そのように困難であることの原因は、抽出物の水への溶解度が低いことにあり、また抽出物を油に溶解させる場合のゲル構造の形成による問題にもある。
【０００４】
特許文献２では、１種以上の非極性液体中に分散された固体カバノキ樹皮抽出物を含むベツリン含有油中水フォームが開示されている。このフォームは、油中水型エマルションの固体カバノキ樹皮抽出物を含む乳化オレオゲルである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許出願公開第２０１０／０２５４９６１号明細書
【特許文献２】国際公開第２０１８／０１７５７６号
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｍ．Ｌａｓｚｃｚｙｋ、博士論文（ｄｏｃｔｏｒａｌ  ｔｈｅｓｉｓ）、Ｆｒｅｉｂｕｒｇ、２００７年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、任意選択で、カバノキ樹皮抽出物を含有する、電界紡糸繊維を含有した改善された医薬製剤に関する。ヒトの皮膚は、身体と環境との間のバリアとして機能する。したがって、ヒトの皮膚は、微生物による脅威、熱的脅威、機械的脅威、および化学的脅威にさらされがちであり、これらの脅威は急性または慢性の創傷の原因となる可能性がある。カバノキの外樹皮からのトリテルペンは高い創傷治癒作用を含む様々な薬理作用で知られている。生分解性および生体適合性の合成ポリマーまたは天然ポリマーから作られたポリマーナノ繊維は、様々な疾患を治療するための薬物送達システムを開発するために利用されてきており、それらを用いる有望な分野の１つは薬物添加創傷被覆材である。したがって、本発明の１つの目的は、最近、創傷治癒を促進すると臨床的に証明されたカバノキ樹皮乾燥抽出物を用いること、および生物活性ナノ繊維創傷被覆材を提供することにある。活性物質のカバノキ樹皮乾燥抽出物を含有するサブミクロンＯ／Ｗ型エマルションが、高圧均質化（ｈｉｇｈ−ｐｒｅｓｓｕｒｅ  ｈｏｍｏｇｅｎｉｚａｔｉｏｎ：ＨＰＨ）プロセス、および乳化剤としてレシチンベースのリン脂質によって、最初に生成される。一実施形態において、上記のエマルションは、市販の生分解性および生体適合性ポリマーと配合され、電界紡糸技術を用いて、創傷処置用のナノ繊維を形成する。調製プロセスおよびエマルション組成（例えばポリマー／カバノキ樹皮乾燥抽出物／リン脂質／ひまわり油）は、足場の構造形態、表面特性および熱的特性とともに、足場の薬物放出挙動に影響を及ぼす。
【０００８】
カバノキ樹皮抽出物は油を濃厚化することができ、これにより、いわゆるオレオゲルが生じる。オレオゲルは、ヒドロゲルに匹敵する柔軟で変形可能な系である。ヒドロゲルとは違って、オレオゲルは親油性相に基づく。そのようなオレオゲルは、速く攪拌することにより粘度は低下するが、せん断力が適用されないと粘度はより高くなることを意味する、チキソトロピー挙動を示し得る。チキソトロピー性が有用な用途もある可能性はあるが、チキソトロピー性は医薬目的のためには常に好都合だとは限らない。したがって、本発明の目的は、医薬用途に適したカバノキ樹皮抽出物の代替製剤を提供することにある。
【０００９】
本発明の１つの目的は、生物活性、取扱い、および患者の受容性に関して有利な特性を有する代替医薬製剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
カバノキ樹皮抽出物は、生物学的に活性な植物二次代謝産物であるトリテルペンを高含有量で有する。トリテルペンの抗炎症活性、抗ウイルス活性、抗癌活性、および創傷治癒作用のような様々な薬理学的性質は、よく調査され、文献に明記されている。これらの物質は植物に広く分布しているが、シラカバ（ｗｈｉｔｅ  ｂａｒｋｅｄ  ｂｉｒｃｈｅｓ）の外樹皮だけが、最高３４％（ｗ／ｗ）のベツリン、すなわち分子の両側に位置する２つの極性ヒドロキシル基を有した５環性のルパン型トリテルペンを含有している。よく特徴付けられた市販の、カバノキの外樹皮からのトリテルペン乾燥抽出物（ＴＥ）は、約８０％（ｗ／ｗ）のベツリンを含有する。この抽出物は、ｎ−ヘプタンによる高速溶媒抽出によって得られる。さらに開示される乾燥抽出物の構成要素は、ルペオール（Ｌｕ）、エリトロジオール（ＥＲ）、ベツリン酸（ＢＡ）およびオレアノール酸（ＯＡ）である。しかしながら、極性溶媒中および無極性溶媒中におけるこれらのトリテルペンの溶解度が不十分であることにより、生物学的利用能が劣るため、トリテルペンの治療適用が制限される恐れがある。今のところ、利用可能な局所適用形態は、オレオゲルおよび化粧用の油中水型クリーム（例えば、Ｉｍｌａｎ  Ｃｒｅｍｅ  ｐｕｒ、ビルケン  アーゲー（Ｂｉｒｋｅｎ  ＡＧ））である。ひまわり油を含有したオレオゲルは、２０１６年１月に欧州の販売許可を受けた。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】リン脂質−カバノキ樹皮抽出物のナノ分散物（６０％／４０％）を含有する１０％ＰＶＡナノ繊維を示す図である。
【図２】エクスビボ創傷治癒アッセイを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
カバノキ樹皮は、林業において大量に発生する低価値の廃棄物である。したがって、カバノキ樹皮抽出物のための出発材料は、低コストで容易に入手可能である。
【００１３】
カバノキ樹皮は、カバノキ内樹皮と、カバノキ外樹皮とからなる。カバノキ内樹皮は、カバノキ外樹皮よりもより稠密で、よりざらざらとしており、一方、カバノキ外樹皮はカバノキ内樹皮よりもより柔軟で、より繊維質である。カバノキ外樹皮は白色であり、薄く、強靭であり、カバノキ内樹皮と比較して、水分含有量が少ない。カバノキ内樹皮はより暗色であり、カバノキ内樹皮の断片からカバノキ外樹皮の断片を分離することにより、所望のカバノキ樹皮抽出物の収率の増大がもたらされる。カバノキ外樹皮は、高濃度の興味深い化学成分を含有しており、そのような化学成分は、例えば、超臨界流体によって抽出することができ、超臨界流体としては、Ｃ５〜Ｃ１０を有するアルカン、好ましくはヘプタン（ｈｅｐｔａｎ）が好ましい。
【００１４】
いくつかの異なる抽出方法が知られている。１つのプロセスにおいて、トリテルペンは、カバノキ樹皮から熱ｎ−ヘプタン中で抽出され、その場合、温度は約１１０℃を超えなければならない。熱ｎ−ヘプタンが冷却されると、トリテルペンは結晶化し、結晶をろ過して乾燥させることによって、トリテルペンを得ることができる。また、抽出に、他の抽出流体を用いたり、ＣＯ２を用いたりすることも可能である。カバノキ樹皮抽出物は天然物であるため、単一成分の組成は、樹皮が得られるカバノキの種、カバノキ樹皮抽出物の調製モード、および後の精製ステップのようないくつかの要因に強く依存する。
【００１５】
カバノキ樹皮抽出物は、抗ウイルス活性、抗菌活性および抗炎症活性が報告されているため、医薬用途に有用な化学的構成要素を含有している。したがって、カバノキ樹皮抽出物は、抗菌剤または抗真菌剤として用いることができ、また創傷治癒に用いることができる。
【００１６】
原産地および製造方法によって、カバノキ樹皮抽出物はいくつかの成分を含有している。主成分は、通常、約７５〜８５重量％の量で抽出物中に存在するベツリンである。ルペオールは、約１．５〜２．８重量％の量で存在し、ベツロン酸（ｂｅｔｕｌｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）は約３．０〜４．５重量％の量で存在する。微量濃度のエリトロジオール、オレアノール酸およびベツリン酸メチルエステルが存在する。さらに、カバノキ樹皮抽出物中には、ベツリンアルデヒド、ウルソル酸、α−ボスウェリン酸およびβ−ボスウェリン酸などのような、いくつかの微量成分も存在する。すべての成分が合計で１００％にならなくてはならないことは言うまでもないが、その場合、抽出に用いられた微量の溶媒が抽出物中に存在している可能性がある。
【００１７】
カバノキ樹皮抽出物の成分が、水素結合によって、十分な生物学的利用能を有した適切な形態に容易になることができない三次元構造を構築する可能性があるため、カバノキ樹皮抽出物は、医薬製剤の調製において問題を引き起こすことがある。様々なサイズの粒子およびゲルの形成が生じることがあり、これにより、医薬成分が制御された方法で放出されることができないために、適当な医薬製剤の調製が困難となる。例えば、創傷の上にオレオゲルの薄い、均一に分散された層を適用するのは困難である。
【００１８】
本発明によれば、優れた生物学的利用能を示すカバノキ樹皮抽出物のナノ分散物が提供される。本発明によるナノ分散物は、好ましくは、プレエマルションを均質化することによって調製される。プレエマルションはカバノキ樹皮抽出物、医薬として許容可能な油、乳化剤および水相を含有する。油は、ヒマシ油、トウモロコシ油、ヤシ油、アマニ油、オリーブ油または落花生油のような任意の適当な医薬として許容可能な油とすることができ、その場合、ヒマワリ油が好ましい。そのような油は、医薬品規格に準拠するために、通常は精製される。
【００１９】
好ましい実施形態において、Ｏ／Ｗ型エマルションは、活性物質（カバノキ樹皮乾燥抽出物）、乳化剤としてのリン脂質、油相、および水相を含む４つの重要な構成要素からなる。組成および処理条件が、これらのサブミクロン分散物の特質に重大な影響を与えるものと予想される。また、エマルション−電界紡糸ナノ繊維の特性は、トリテルペン・サブミクロンエマルションの特性によって高度に支配されるであろう。それは別として、制御された薬物放出は、分散性の変化によって得ることができる。リン脂質を含有するエマルションの電界紡糸は一般には行われていない。
【００２０】
本発明によって用いられる乳化剤はリン脂質である。リン脂質は、液液界面および液固界面における混和性を保証するものであり、市販レシチンに由来してもよい。リン脂質は、動物細胞および植物細胞の原形質の必須構成要素である。一般に、天然の（ｎａｔｉｖｅ）リン脂質および／または水和したリン脂質のような様々な種類のリン脂質を用いることができる。本発明によって用いられる好ましいリン脂質は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸、およびホスファチジルセリン、ならびにそれらの混合物である。本発明によって好ましく用いられるリン脂質は、例えば「ホスフォリポン（Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｎ）（登録商標）９０Ｈ」という名称で市販されている。これは主に水添ホスファチジルコリンであるが、また医薬用リン脂質の他の市販製品も成功裡に用いることができる。
【００２１】
ナノエマルション中、リン脂質は、ナノエマルションの重量に関連して、０．０１〜８重量％、好ましくは０．１〜５．０重量％の量で存在する。特に好ましい実施形態では、ナノエマルションは、約０．５重量％のカバノキ樹皮抽出物を含有する。
【００２２】
ナノエマルションの調製の第１工程において、カバノキ樹皮抽出物、油、好ましくはヒマワリ油またはアマニ油のような医薬として許容可能な油からなるプレエマルションは、ホモジナイザー内でリン脂質および水と混合される。次に、この混合物は、単一液滴粒子の粒径を平均２〜１０μｍの液滴粒径から約１μｍ未満のサブミクロンサイズに、好ましくは４００ｎｍ未満に低減させるように、さらに処理される。これは、液滴サイズの低減に非常に効率的である高せん断乳化または超音波乳化によって行われ得る。これに代わって、高圧ホモジナイザー／ピストンホモジナイザーが使用される高圧均質化を用いて、数ナノメートルまで低下した極めて低粒子径のナノエマルションを生成することができる。
【００２３】
ナノ分散物の利点は、カバノキ樹皮抽出物の医薬活性成分が、生物学的利用能の改善をもたらす極めて微細な粒子または液滴に分散されるということである。そのようなナノ分散物は、例えば、身体の患部上に噴霧することにより、創傷または感染した皮膚に直接適用することができる。本発明によるナノ分散物は、取扱特性に関して、オレオゲルと比較して優れている。このナノ分散物は、感染した皮膚領域上に一様に噴霧または分散されることが可能な流体である。
【００２４】
電界紡糸は、活性化合物をポリマー溶液と単に混合し、適切な設備を用いて後処理することにより、ナノ繊維への薬物の組み込みを可能にするため、電界紡糸は益々注目されている。このプロセスは当該技術分野において周知であり、したがって、この点についてはさらに説明する必要はない。生成されたフリースは、高い空隙率、高いカプセル化効率、および高い表面積対体積比、よって高い薬物充填量などの独特の特性を有する。加えて、電界紡糸繊維から作られた創傷被覆材は、ヒト組織中の天然細胞外マトリックスを模倣し、よって細胞増殖を促進し、ガス交換および滲出物の除去を改善し、創傷治癒中に微生物の進入および乾燥に対する物理的なバリアの役割を果たす。好ましくは親水性ポリマーであるポリビニルアルコール（ＰＶＡ）が用いられ、ＰＶＡはヒトに使用するためにＦＤＡによって既に承認されている。ＰＶＡポリマーは、良好な耐薬品性、熱的安定性、生分解性、生体適合性および非毒性などの独特の特性を有し、これらの特性により、ＰＶＡポリマーは創傷被覆材用のポリマー−薬物担体として電界紡糸されるのに適当なものとなっている。
【００２５】
しかしながら、カバノキ樹皮乾燥抽出物のナノ繊維内へのカプセル化は困難を生じる場合がある。例えば、早期の研究は、高エネルギー分散技術、例えば、音波処理または高圧均質化が材料の水性懸濁液および有機懸濁液とともに用いられた場合でさえ、カバノキ樹皮乾燥抽出物の独特の構造により、乾燥抽出物の粒子径を、十分に小さな粒子に達するように粉砕することができないことを示した。これは、均質化および乳化剤としてのリン脂質の使用による、活性物質としてカバノキ樹皮乾燥抽出物を有するサブミクロンエマルションの処理によって、解決される可能性がある。この現象は、恐らく、乳化剤としてのリン脂質の使用に直接関係しているものと思われる。これに関連して、驚いたことに、トリテルペン抽出物とリン脂質との混合物の界面張力が協同効果を示すことが分かった。高圧ホモジナイザーでトリテルペン抽出物、リン脂質および油の混合物を処理することで、サブミクロンサイズの分散物（ナノ分散物）が得られた。これらのサブミクロン液滴は、難溶性薬物をカプセル化するための薬物担体として機能し得る。これは、疎水性カバノキ樹皮乾燥抽出物の溶解度を増大させることができ、局所的な生物学的利用能の改善をもたらす。さらに、リン脂質はまた、Ｏ／Ｗエマルション中で疎水性のカバノキ樹皮乾燥抽出物を安定化させるのを助け、それにより電界紡糸前に親水性のＰＶＡポリマー溶液に対するカバノキ樹皮乾燥抽出物の相溶性を増大させるであろう。さらに、電界紡糸ナノ繊維もまた、通常、サブミクロン範囲内にあるので、サブミクロンのエマルションの生成により、ポリマーマトリックスの全体にわたって、カバノキ樹皮乾燥抽出物のより良好なカプセル化および均一な分散が高められるであろう。
【００２６】
別法として、ナノエマルションの調製を以下の通りに行うことができる。１種以上のリン脂質と水との混合物からなるプレエマルションは、ホモジナイザー内で処理される。次に、この混合物は、単一液滴粒子の粒径を平均２〜１０μｍの液滴粒径から約１μｍ未満（＜１μｍ）のサブミクロンサイズに、好ましくは４００ｎｍ未満に低減させるように、さらに処理される。これは、液滴サイズの低減に非常に効率的である高せん断乳化または超音波乳化によって行うことができる。これに代わって、高圧ホモジナイザー／ピストンホモジナイザーが使用される高圧均質化を用いて、数ナノメートルまで低下した極めて低粒子径のナノエマルションを生成することができる。
【００２７】
前述したように、ナノ分散物中のリン脂質は、生物学的利用能の改善をもたらす極めて微細な粒子または液滴に分散される。カバノキ樹皮抽出物を有さないそのようなナノ分散物は、例えば、身体の患部上に噴霧することにより、創傷または感染した皮膚に直接適用することができる。このナノ分散物は、感染した皮膚領域上に一様に噴霧するか、または分散させることができる流体である。
【００２８】
さらに、ナノ分散物は、皮膚に適用するのが容易で、ほとんど触れなくてよく、多くの患者によって好まれるフォームに変換することができる。そのような用途のために、ナノ分散物は、単に標準的なエアゾール缶に充填され、プロパン／ブタン、Ｎ２Ｏ、ジメチルエーテルなどのような推進ガスが追加され（２〜２０重量％）、缶は標準的なフォームヘッドで閉鎖される。
【００２９】
本発明の好ましい態様では、ナノ分散物は電界紡糸繊維にさらに処理され、それによりナノ分散物の利点、すなわち、カバノキ樹皮抽出物の微細な分散および高い生物学的利用能がより長期間にわたって保存されることが可能である。この実施形態の別の利点は、そのような繊維の取扱いが容易なことである。電界紡糸繊維は、創傷に適用することができるフリースまたはネット構造物を形成するために容易に用いることができる。創傷の処置用のそのようなフリースまたはネットが非常に有用な場合は多数存在する。例えば、交通事故の場合、または火傷後に、例えば、大面積の表皮が損傷していたり、剥がれてさえいたりする場合には、そのようなフリース構造物は非常に有用である。これに代わって、特に高齢者では、例えば、褥瘡に起因する重篤な創傷の問題が頻繁に生じる。この種の創傷は処置するのが困難であり、深刻な不快感を引き起こす可能性がある。そのような創傷については、抗菌活性および抗ウイルス活性を有するフリースは、繊維が身体によって溶解され吸収されるので、特にファブリック構造物を除去してはいけない場合に非常に有用である。
【００３０】
本発明の好ましい実施形態において、カバノキ樹皮抽出物は、第１工程において、本願で前述したようなナノ分散物にされる。次に、このナノ分散物は、繊維形成剤を含む電界紡糸繊維に変換される。好ましくは、カバノキ樹皮抽出物のナノ分散物は、担体と、組み合わせられる（ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ）、混ぜられる（ａｄｍｉｘｅｄ）、混ぜ合わせられる（ｃｏｍｉｎｇｌｅｄ）、または合わせられる（ｉｎｔｅｒｍｉｘｅｄ）。具体的には、電界紡糸繊維は、医薬活性剤（カバノキ樹皮抽出物）および担体の双方をともに均質な方法で含有する。
【００３１】
医薬活性剤（カバノキ樹皮抽出物）および担体の双方をともに均質な方法で含有する電界紡糸繊維の比較調査中に、驚いたことに、カバノキ樹皮抽出物を有さないナノ分散物を含有したリン脂質から作られた電界紡糸繊維が優れた特性を有しており、そのような電界紡糸繊維を創傷処置用の組成物の生成に用いることができることが分かった。したがって、本発明のさらなる目的は、カバノキ樹皮抽出物を本質的に含まないナノ分散物を含有するリン脂質から作られた電界紡糸繊維、および創傷処置用組成物を製造するための電界紡糸繊維の使用である。
【００３２】
電界紡糸は、繊維を生成するプロセスであり、それにより繊維の直径を約５０ｎｍ〜２μｍの範囲、好ましくは２００ｎｍ〜８００ｎｍの範囲とすることができる。このプロセスは、ポリマージェットを生成するために、ポリマー溶液に高い電圧を印加することを含む。ジェットが空気を通って進むにつれて、ジェットは反発静電力下で伸長され、それによりナノ繊維が生成される。
【００３３】
本発明によれば、リン脂質を含有するナノ分散物が形成され、ポリマーと混合される。任意選択で、カバノキ樹皮抽出物は、最初にナノ分散物へ可溶化され、このナノ分散物が次に適当なポリマーと混合される。ナノ分散物−ポリマー溶液（カバノキ樹皮抽出物を有するか、または有さない）は、例えばシリンジポンプによって射出され、ポリマージェットは、高圧界下で、繊維が収集され得る標的へと進む。そのような繊維では、ナノ分散物の極めて小さい液滴が担体ポリマー内に分散されている。カバノキ樹皮抽出物のナノ液滴は、ポリマーマトリックス内に微細に分散され、その場合、超均質化ステップも有用であり得る。液滴が非常に小さく、電界紡糸繊維内に均一に分散されているため、ナノ分散物は、カバノキ樹皮抽出物の活性成分の制御された放出を可能にする固体状態に移行されている。電界紡糸繊維は、ナノ分散物の生物学的利用能を維持する。
【００３４】
好ましい実施形態に使用可能なポリマーは、医薬として許容可能でなければならない。そのようなポリマーは、ポリエチレンオキシド、ポリビニルアルコール、ポリ酢酸ビニル、ポリビニルピロリドン、ヒアルロン酸、アルギナート、カラギーナン、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロースナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、酢酸フタル酸セルロースなどのセルロース誘導体、ヒドロキシエチルデンプン、デンプングリコール酸ナトリウムなどのデンプン誘導体、キトサンおよび誘導体、アルブミン、ゼラチン、コラーゲン、ポリアクリレート、ならびにそれらの誘導体から選択され得る。特に好ましいのは、創傷に対して望ましくない特性を有さない、容易に溶解可能である、このようなポリマーである。特に好ましいのは、ポリビニルアルコールまたはポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）である。
【００３５】
ナノ分散物とともに電界紡糸繊維を形成するポリマーが創傷内で溶解し、足場を除去する必要がないということは、本発明による電界紡糸繊維の利点である。電界紡糸繊維の特定の必要性に応じて、適当なポリマーまたはポリマーの配合物の選択により、溶解時間を調整することができる。例えば、ポリラクチド／ポリグリコリドコポリマー中のモノマーの比率を変更することによって、体内（または創傷上）における溶解時間を調整することができることは、よく知られている。２種または３種の異なるポリマーを選択し、それらのポリマーをともに混合してコポリマーにすることによって、繊維のマトリックスの特性を正確に調整してもよい。
【００３６】
医療目的のためのファブリック用またはフリース用のナノ繊維を調製するための電界紡糸プロセスが知られている。電界紡糸プロセスでは、いくつかのパラメータを容易に調整することができ、それにより電界紡糸繊維の特性に影響を及ぼすことができる。適当な電圧の選択は、繊維の特性、ならびにポリマーと混合されたナノ分散物の粘度に影響をもたらす。さらに、ポリマーの濃度と相関関係にあるナノ分散物の濃度、ポリマーの分子量、表面張力および均質性、ならびに溶液の伝導度は、電界紡糸繊維の特性に本質的な影響をもたらす。
【００３７】
供給速度（流量）、印加電圧、シリンジの先端からコレクタまでの距離のようなパラメータは、最適化されなければならず、周囲パラメータ、特に、温度、湿気および圧力は制御されなければならない。繊維を電界紡糸するための装置に応じて、パラメータは、意図した応用分野のために最適化された所望の繊維の特性を得るために調整され得る。
【００３８】
電界紡糸繊維の形成に用いられる材料は液体であるため、繊維が紡糸された後に、液体を少なくとも部分的に除去することが有利である場合がある。これは、アルコールまたはエーテルのような高揮発性液体の添加により、またはナノ分散物（任意選択でカバノキ樹皮抽出物を含有）およびポリマーが紡糸されるチャンバに減圧を加えることにより達成され得る。減圧下において、液体は気化し、繊維は乾燥されて、より堅くなる。
【００３９】
カバノキ樹皮抽出物を任意選択で含有するナノ分散物を含む電界紡糸繊維は、創傷の処置に有利に用いられ得る。そのような繊維は、所望厚さのフリースに容易に変換され、また容易に滅菌され得る。そのような滅菌したフリースまたはマットまたはネットは、高い表面積対体積比を有し、これは高い薬物充填能力をもたらす。電界紡糸マイクロファイバーの別の利点は、微生物に対する物理的なバリアの役割を果たし得るファブリックの空隙率が高いことである。したがって、皮膚患部は非常に良好に治癒することができ、その場合、環境からの望ましくない微生物の侵入は防止される。
【００４０】
しばしば創傷治癒に用いられる、親水コロイドのような活性薬剤を含有する市場の多くの創傷被覆材または銀被覆材は、アレルギー性接触皮膚炎のような悪影響を示してきており、また抗生物質が充填された被覆材の使用は、抗生物質に対する細菌の耐性を発現させるリスクを抱えている。
【００４１】
したがって、１つの目的は、長期的な使用の後にさえ、有効な治療法による創傷治癒においてヒトに使用するのに適した、約２日〜約１０日、好ましくは約５日の持続的な薬物放出を行う被覆材（任意選択でカバノキ樹皮抽出物を充填したもの）を開発することにある。成分はすべて人体において生体適合性であり、生分解性であるので、深い創傷におけるような、被覆材を除去するための侵襲的および／または外傷性の介入は不要である。さらに、持続的な薬物放出は、特に慢性的な創傷の処置において痛みを伴う被覆材の交換の頻度を減らせる可能性があり、それにより、より良好な患者コンプライアンスをもたらす。
【００４２】
本発明によるナノ繊維は、細胞の接着、移動、増殖および分化における優れた性能、ならびに細胞間マトリックスに類似した物理的特性のような他の利点も有する。本発明による電界紡糸繊維の別の利点は、カバノキ樹皮抽出物の経時的な持続放出である。カバノキ樹皮抽出物のナノ分散物に由来する液滴が電界紡糸繊維内に分散されているため、医薬活性物質は、電界紡糸繊維の溶解に応じて放出される。
【００４３】
繊維を形成する適切なポリマーの選択は、溶解の速度を決定する別の尺度である。いくつかのポリマーは迅速に溶解するが、他のポリマーは長時間にわたって完全なままである。繊維が溶解されると、繊維内に閉じ込められていた液滴が解放され、最適な濃度のカバノキ樹皮抽出物の化合物が、この化合物を必要とする場所に正確に提供される。
【００４４】
意図した用途に応じて、ポリマーに対するナノ分散物の適切な比率が用いられる。通常、ポリマーに対するナノ分散物の比率は、９９〜４０重量％のポリマーに対して、ナノ分散物が約１．０〜６０重量部に及び、好ましくは９５〜５０％のポリマーに対して５〜５０％のナノ分散物であり、特に好ましくは、５５〜７５％のポリマーに対して２５〜４５％のナノ分散物である。
【００４５】
さらに、カバノキ樹皮抽出物を任意選択で含有する電界紡糸繊維でさえもフォームに変換できることが分かった。前述したように、そのようなフォームは、皮膚に適用するのが容易で、ほとんど触れなくてよく、多くの患者によって好まれる。そのようなフォーム製剤を提供するためには、電界紡糸繊維は、攪拌しながら水と混合されて、分散物を形成しなければならない。この分散物は、次に標準的なエアゾール缶に充填され、プロパン／ブタン、Ｎ２Ｏ、ジメチルエーテルなどのような推進ガスが追加され（２〜２０重量％）、缶は標準的なフォームヘッドで閉鎖される。そのようなエアゾール缶によって提供することができるフォームは、火傷、擦過傷または褥瘡などのあらゆる種類の創傷に適用するのが容易で、ほとんど触れなくてよい。
【００４６】
本発明のさらなる態様を以下の実施例に示す。
【００４７】
実施例
以下の実施例では、様々な量のカバノキ樹皮抽出物を有する異なるナノ分散物を用いた。ナノ分散物をＰＶＡ溶液と混合し、混合物を電界紡糸した。実施例１〜４の異なる混合物を以下に示す。
【００４８】
【表１】
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【００４９】
【表２】
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【００５０】
実施例１の混合物で得られたマットの特性を表１に示す。
【００５１】
【表３】
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【００５２】
図１に、リン脂質およびカバノキ樹皮抽出物のナノ分散物（６０％／４０％）を含有する１０％ＰＶＡナノ繊維の電子顕微鏡写真を示す。
【００５３】
実施例５
本発明の実施形態の優れた活性を示すために、ブタのエクスビボ創傷治癒アッセイを実施した。簡潔に言うと、屠畜場（食用）から得られたブタの耳を虐殺後に実験室に直接運んで、洗浄し消毒した。その後、耳のひだから６ｍｍのパンチ生検片を採取し、脂肪および皮下組織を除去した。したがって、７．１ｍｍ２の中央領域において表皮および真皮上層を除去することによって創傷を生じさせた。次に、そのように形成したエクスビボの創傷治癒モデルを、培養皿内のガーゼ上に真皮を下にして配置し、ヒドロコルチゾン、２％のウシ胎児血清、ペニシリンおよびストレプトマイシンを添加したダルベッコ改変イーグル培地によって気液界面で培養した。４ｃｍ２の電界紡糸マット／５μｌのオレオゲルを、傷をつけた後、直ちに適用し、このモデルを３７℃および５％二酸化炭素（ＣＯ２）中で４８時間にわたって培養した。さらなる工程は急速冷凍を含み、創傷治癒モデルの中央部のクライオスタット部分を、顕微鏡でルーラーを用いて識別し、評価中に創傷の全長をチェックすることにより、ヘマトキシリン−エオジンで染色した。創傷治癒プロセス（表皮再形成）は、顕微鏡で創縁と再生成された表皮の先端部との間の距離を測定することにより評価した。
【００５４】
対照としての実施例では、創傷を全く処置しなかった。従来技術との比較として、オレオゲルを用いた。若干の改善を観察することができた。さらに、カバノキ樹皮抽出物を有さないポリビニルアルコールマット（ＰＶＡマット）を用いた。治癒特性は、対照におけるよりも良好であり、オレオゲルにおけるよりも、さらに良好であることが分かる。
【００５５】
ポリビニルアルコールマットがカバノキ樹皮抽出物を含有した場合に、治癒活性の著しい改善を観察することができた。これは、５％のカバノキ樹皮抽出物（ＴＥ）で見られ、より効果的には０．５％のカバノキ樹皮抽出物（ＴＥ）で見られる。
【００５６】
実施例６
ａ）さらなる実験では（結果は図２に図示せず）、実施例５による調製物を、カバノキ樹皮抽出物を本質的に含まない調製物と比較する。驚いたことに、カバノキ樹皮抽出物を含まない調製物で得られた結果は、カバノキ樹皮抽出物を有するものに匹敵する。
【００５７】
ｂ）追加実験では（結果は図２に図示せず）、実施例１〜４による電界紡糸繊維を含有する調製物をフォーム調製物に変換し、フォーム調製物を実施例５に記載したように用いる。この場合も、カバノキ樹皮抽出物を含まないフォーム調製物で得られた結果は、カバノキ樹皮抽出物を有するそれらのフォーム調製物に匹敵する。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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