(57)【要約】  本開示は、赤血球の機能障害を改善するか、又は異常ヘモグロビン症若しくはサラセミア（例えば、鎌状赤血球症又はβサラセミア）を処置するための組成物及び方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
赤血球の機能、代謝回転、若しくは合成；ヘモグロビンの機能、代謝回転、若しくは合成；又は血管機能のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、又はそれ以上（例えば全て）を改善する方法であって、
ａ）ロイシンアミノ酸実体、
ｂ）アルギニンアミノ酸実体、
ｃ）グルタミンアミノ酸実体；及び
ｄ）Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）−実体、
を含む組成物であって、２０を超えるアミノ酸残基長のペプチド（例えば乳清タンパク質）を含まないか、又は２０を超えるアミノ酸残基長のペプチドが存在する場合、前記ペプチドが（例えば乾燥形態の）前記組成物の総重量の１０ｗｔ．％未満で存在する前記組成物を有効量でそれを必要とする対象に投与し、
それにより、前記対象における赤血球の機能、代謝回転、若しくは合成；ヘモグロビンの機能、代謝回転、若しくは合成；又は血管機能のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、又はそれ以上（例えば全て）を改善することを含む、方法。
【請求項２】
異常ヘモグロビン症又はサラセミアを処置する方法であって、
ａ）ロイシンアミノ酸実体、
ｂ）アルギニンアミノ酸実体、
ｃ）グルタミンアミノ酸実体；及び
ｄ）Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）−実体、
を含む組成物であって、２０を超えるアミノ酸残基長のペプチド（例えば乳清タンパク質）を含まないか、又は２０を超えるアミノ酸残基長のペプチドが存在する場合、前記ペプチドが（例えば乾燥形態の）前記組成物の総重量の１０ｗｔ．％未満で存在する前記組成物を有効量でそれを必要とする対象に投与し、
それにより、前記対象における前記異常ヘモグロビン症又は前記サラセミアを処置することを含む、方法。
【請求項３】
それを必要とする対象における赤血球の機能、代謝回転、若しくは合成；ヘモグロビンの機能、代謝回転、若しくは合成；又は血管機能のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、又はそれ以上（例えば全て）を改善する方法における使用を意図した組成物であって、
ａ）ロイシンアミノ酸実体、
ｂ）アルギニンアミノ酸実体、
ｃ）グルタミンアミノ酸実体；及び
ｄ）Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）−実体、
を有効量で含み、２０を超えるアミノ酸残基長のペプチド（例えば乳清タンパク質）を含まないか、又は２０を超えるアミノ酸残基長のペプチドが存在する場合、前記ペプチドが（例えば乾燥形態の）前記組成物の全成分の総重量の１０ｗｔ．％未満で存在する、組成物。
【請求項４】
それを必要とする対象における異常ヘモグロビン症又はサラセミアを処置する方法における使用を意図した組成物であって、
ａ）ロイシンアミノ酸実体、
ｂ）アルギニンアミノ酸実体、
ｃ）グルタミンアミノ酸実体；及び
ｄ）Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）−実体、
を有効量で含み、２０を超えるアミノ酸残基長のペプチド（例えば乳清タンパク質）を含まないか、又は２０を超えるアミノ酸残基長のペプチドが存在する場合、前記ペプチドが（例えば乾燥形態の）前記組成物の全成分の総重量の１０ｗｔ．％未満で存在する、組成物。
【請求項５】
前記組成物が、（ｅ）セリンアミノ酸実体若しくはカルニチン実体の一方若しくは双方；及び／又は
（ｆ）バリンアミノ酸実体、（ｇ）ヒスチジンアミノ酸実体、（ｈ）リジンアミノ酸実体、又は（ｉ）シトルリンアミノ酸実体のうちの１つ、２つ、３つ、若しくはそれ以上（例えば全て）
をさらに含む、請求項１若しくは２に記載の方法又は請求項３若しくは４に記載の使用を意図した組成物。
【請求項６】
ａ）ロイシンアミノ酸実体、
ｂ）アルギニンアミノ酸実体、
ｃ）グルタミンアミノ酸実体、
ｄ）Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）実体、
ｅ）シトルリンアミノ酸実体、
ｆ）カルニチン実体、
ｇ）セリンアミノ酸実体、
ｈ）バリンアミノ酸実体、
ｉ）ヒスチジンアミノ酸実体、及び
ｊ）リジンアミノ酸実体
を含む組成物。
【請求項７】
前記組成物が、２０を超えるアミノ酸残基長のペプチド（例えば乳清タンパク質）を含まないか、又は２０を超えるアミノ酸残基長のペプチドが存在する場合、前記ペプチドが（例えば乾燥形態の）前記組成物の全成分の総重量の１０ｗｔ．％未満、９ｗｔ．％未満、８ｗｔ．％未満、７ｗｔ．％未満、６ｗｔ．％未満、５ｗｔ．％未満、４ｗｔ．％未満、３ｗｔ．％未満、２ｗｔ．％未満、１ｗｔ．％未満、０．５ｗｔ．％未満、０．１ｗｔ．％未満、０．０５ｗｔ．％未満、０．０１ｗｔ．％未満、０．００１ｗｔ．％未満、若しくはそれ以下で存在する、請求項１若しくは２に記載の方法、請求項３若しくは４に記載の使用を意図した組成物、又は請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
（ａ）〜（ｊ）又は（ａ）〜（ｉ）のうちの２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、若しくはそれ以上（例えば全て）が、前記組成物中の遊離アミノ酸形態であり、例えば、（例えば乾燥形態の）前記組成物の総重量の少なくとも４２ｗｔ．％、４５ｗｔ．％、５０ｗｔ．％、５５ｗｔ．％、６０ｗｔ．％、６５ｗｔ．％、７０ｗｔ．％、７５ｗｔ．％、８０ｗｔ．％、８５ｗｔ．％、９０ｗｔ．％、９５ｗｔ．％、９７ｗｔ．％、９８ｗｔ．％、若しくはそれ以上が、前記組成物中の遊離アミノ酸形態で、（ａ）〜（ｊ）のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、若しくはそれ以上（例えば全て）である、請求項１若しくは２に記載の方法、請求項３若しくは４に記載の使用を意図した組成物、又は請求項６若しくは７に記載の組成物。
【請求項９】
（ａ）〜（ｊ）又は（ａ）〜（ｉ）の総重量％が、（例えば乾燥形態の）前記組成物中の他のアミノ酸実体成分、非アミノ酸実体タンパク質成分、又は非タンパク質成分の１つ、２つ、又は３つの総重量％よりも大きい、例えば、（ａ）〜（ｊ）又は（ａ）〜（ｉ）が、（例えば乾燥形態の）前記組成物中の他のアミノ酸実体成分、非アミノ酸実体タンパク質成分、又は全成分の１つ、２つ、又は３つの総重量の少なくとも５０ｗｔ．％、５５ｗｔ．％、６０ｗｔ．％、６５ｗｔ．％、７０ｗｔ．％、７５ｗｔ．％、８０ｗｔ．％、８５ｗｔ．％、９０ｗｔ．％、９５ｗｔ．％、９７ｗｔ．％、９８ｗｔ．％、若しくはそれ以上である、請求項１若しくは２に記載の方法、請求項３若しくは４に記載の使用を意図した組成物、又は請求項６〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記組成物が、１８若しくはそれ以下、１７若しくはそれ以下、１６若しくはそれ以下、１５若しくはそれ以下、１４若しくはそれ以下、１３若しくはそれ以下、１２若しくはそれ以下、又は１１若しくはそれ以下のアミノ酸実体の組み合わせを含む、請求項１若しくは２に記載の方法、請求項３若しくは４に記載の使用を意図した組成物、又は請求項６〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記組成物（例えば活性部分）が、
ａ）前記ロイシンアミノ酸実体が、
ｉ）Ｌ−ロイシン若しくはその塩、
ｉｉ）Ｌ−ロイシンを含む、ジペプチド若しくはその塩、若しくはトリペプチド若しくはその塩、又は
ｉｉｉ）β−ヒドロキシ−β−酪酸メチル（ＨＭＢ）若しくはその塩；
から選択される；
ｂ）前記アルギニンアミノ酸実体が、
ｉ）Ｌ−アルギニン若しくはその塩、
ｉｉ）Ｌ−アルギニンを含む、ジペプチド若しくはその塩、若しくはトリペプチド若しくはその塩、
ｉｉｉ）クレアチン若しくはその塩、又は
ｖ）クレアチンを含む、ジペプチド若しくはその塩、若しくはトリペプチド若しくはその塩
から選択される；
ｃ）前記グルタミンアミノ酸実体が、Ｌ−グルタミン若しくはその塩、又はＬ−グルタミンを含む、ジペプチド若しくはその塩、若しくはトリペプチド若しくはその塩である；
ｄ）前記ＮＡＣ実体が、ＮＡＣ若しくはその塩、又はＮＡＣを含むジペプチド若しくはその塩である；
ｅ）前記シトルリンアミノ酸実体が、Ｌ−シトルリン若しくはその塩、又はＬ−シトルリンを含む、ジペプチド若しくはその塩、若しくはトリペプチド若しくはその塩である；
ｆ）前記カルニチン実体が、Ｌ−カルニチン若しくはその塩、又はＬ−カルニチンを含むジペプチド若しくはその塩である；
ｇ）前記セリンアミノ酸実体が、Ｌ−セリン若しくはその塩、又はＬ−セリンを含む、ジペプチド若しくはその塩、若しくはトリペプチド若しくはその塩である；
ｈ）前記バリンアミノ酸実体が、Ｌ−バリン若しくはその塩、又はＬ−バリンを含む、ジペプチド若しくはその塩、若しくはトリペプチド若しくはその塩である；
ｉ）前記ヒスチジンアミノ酸実体が、Ｌ−ヒスチジン若しくはその塩、又はＬ−ヒスチジンを含む、ジペプチド若しくはその塩、若しくはトリペプチド若しくはその塩である；及び
ｊ）前記リジンアミノ酸実体が、Ｌ−リジン若しくはその塩、又はＬ−リジンを含む、ジペプチド若しくはその塩、若しくはトリペプチド若しくはその塩である
を含む、請求項１若しくは２に記載の方法、請求項３若しくは４に記載の使用を意図した組成物、又は請求項６〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記組成物（例えば活性部分）が、
ａ）Ｌ−ロイシン又はその塩、
ｂ）Ｌ−アルギニン又はその塩、
ｃ）Ｌ−グルタミン又はその塩、
ｄ）ＮＡＣ又はその塩、
ｅ）Ｌ−シトルリン又はその塩、
ｆ）Ｌ−カルニチン又はその塩、
ｇ）Ｌ−セリン又はその塩、
ｈ）Ｌ−バリン又はその塩、
ｉ）Ｌ−ヒスチジン又はその塩、及び
ｊ）Ｌ−リジン又はその塩
を含む、請求項１若しくは２に記載の方法、請求項３若しくは４に記載の使用を意図した組成物、又は請求項６〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
赤血球の機能、代謝回転、若しくは合成；ヘモグロビンの機能、代謝回転、若しくは合成；血管機能；酸化ストレス（例えば、血液又は全身性酸化ストレスの一方又は双方）；又は炎症のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、若しくはそれ以上（例えば全て）を改善する方法であって、請求項６〜１２のいずれか一項に記載の組成物（例えば活性部分）を有効量でそれを必要とする対象に投与し、それにより、前記対象における赤血球の機能、代謝回転、若しくは合成；ヘモグロビンの機能、代謝回転、若しくは合成；血管機能、酸化ストレス（例えば、血液又は全身性酸化ストレスの一方又は双方）；又は炎症のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、若しくはそれ以上（例えば全て）を改善することを含む、方法。
【請求項１４】
異常ヘモグロビン症又はサラセミアを処置する方法であって、請求項６〜１２のいずれか一項に記載の組成物（例えば活性部分）を有効量でそれを必要とする対象に投与し、それにより前記対象における異常ヘモグロビン症又はサラセミアを処置することを含む、方法。
【請求項１５】
赤血球の機能、代謝回転、若しくは合成；ヘモグロビンの機能、代謝回転、若しくは合成；血管機能；酸化ストレス（例えば、血液又は全身性酸化ストレスの一方又は双方）；又は炎症のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、若しくはそれ以上（例えば全て）を改善する方法における使用を意図した組成物であって、請求項６〜１２のいずれか一項に記載の組成物（例えば活性部分）を有効量で含む、組成物。
【請求項１６】
異常ヘモグロビン症又はサラセミアを処置する方法における使用を意図した組成物であって、請求項６〜１２のいずれか一項に記載の組成物（例えば活性部分）を有効量で含む、組成物。
【請求項１７】
前記対象が、異常ヘモグロビン症（例えばβ異常ヘモグロビン症）若しくはサラセミアのリスクがあるか、又はそのように診断されており、任意選択的には、前記異常ヘモグロビン症又はサラセミアが、鎌状赤血球症（例えば、鎌状赤血球貧血（ＨｂＳＳ）、ヘモグロビンＳＣ症（ＨｂＳＣ）、鎌状β＋サラセミア（ＨｂＳ／β＋）、鎌状β０サラセミア（ＨｂＳ／β０）、ヘモグロビンＳＥ症、ヘモグロビンＳＤ症、又はヘモグロビンＳＯ症）、αサラセミア、又はβサラセミアから選択される、請求項１、２、５、若しくは７〜１４のいずれか一項に記載の方法又は請求項３、４、５、７〜１２、１５、若しくは１６のいずれか一項に記載の使用を意図した組成物。
【請求項１８】
前記組成物が、薬学的に許容できる担体とともに製剤化される、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法又は組成物。
【請求項１９】
前記組成物が、食事組成物として製剤化される、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法又は組成物。
【請求項２０】
前記組成物が、乾燥ブレンド調製物、例えば医薬品グレードの乾燥ブレンド調製物（ＰＧＤＢＰ）である、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法又は組成物。
【請求項２１】
少なくとも４つの医薬品グレードのアミノ酸実体を含む乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰを製造するための方法であって、
少なくとも４つの医薬品グレードのアミノ酸実体の組み合わせを形成すること、及び前記組み合わせを、乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰを達成するのに十分な時間ブレンドすることを含み、
前記乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰが、
ａ）ロイシンアミノ酸実体、
ｂ）アルギニンアミノ酸実体、
ｃ）グルタミンアミノ酸実体；及び
ｄ）Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）−実体
を含む、方法。
【請求項２２】
前記乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰが、
ｅ）シトルリンアミノ酸実体、
ｆ）カルニチン実体、
ｇ）セリンアミノ酸実体、
ｈ）バリンアミノ酸実体、
ｉ）ヒスチジンアミノ酸実体、及び
ｊ）リジンアミノ酸実体
のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれ以上（例えば全て）をさらに含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
（ｉ）ブレンドが４０℃より低い温度で行われるか；
（ｉｉ）ブレンドが、１０００ｒｐｍ未満の速度でブレンダー若しくはミキサー内でブレンド若しくは混合することを含むか；又は
（ｉｉｉ）前記方法が、前記乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰの直接ブレンド、ローラー圧縮、及び湿式造粒のうちの１つ、２つ、又は３つをさらに含む、
請求項２０〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
ａ）アルギニンアミノ酸実体、
ｂ）シトルリンアミノ酸実体；及び
ｃ）Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）−実体
を含む組成物であって、
（ｉ）前記組成物が、２０を超えるアミノ酸残基長のペプチド（例えば乳清タンパク質）を含まないか、又は２０を超えるアミノ酸残基長のペプチドが存在する場合、前記ペプチドが（例えば乾燥形態の）前記組成物の総重量の１０ｗｔ．％未満で存在すること；
（ｉｉ）（例えば乾燥形態の）前記組成物の総重量の少なくとも５０ｗｔ．％が遊離型の１つ又は複数のアミノ酸実体であること；及び
（ｉｉｉ）前記シトルリンアミノ酸実体のｗｔ．％が前記ＮＡＣ−実体のｗｔ．％よりも大きい、
組成物。
【請求項２５】
以下：
（ｉ）（例えば乾燥形態の）前記組成物中の前記シトルリンアミノ酸実体のｗｔ．％が、前記ＮＡＣ−実体のｗｔ．％よりも少なくとも５０％大きい、例えば、前記シトルリンアミノ酸実体のｗｔ．％が、前記ＮＡＣ−実体のｗｔ．％よりも少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、若しくは８０％大きいか；
（ｉｉ）前記ロイシンアミノ酸実体、前記シトルリンアミノ酸実体、及び前記ＮＡＣ実体のｗｔ．％が、（例えば乾燥形態の）前記組成物中の前記アミノ酸実体成分若しくは全成分の少なくとも２０ｗｔ．％、２５ｗｔ．％、３０ｗｔ．％、若しくは３５ｗｔ．％であるが、（例えば乾燥形態の）前記組成物中の前記アミノ酸実体成分若しくは全成分の８０ｗｔ．％以下であるか；又は
（ｉｉｉ）前記シトルリンアミノ酸実体のｗｔ．％が、（例えば乾燥形態の）前記組成物中の前記アミノ酸実体成分の少なくとも５ｗｔ．％、１０ｗｔ．％、１１ｗｔ．％、１２ｗｔ．％、１３ｗｔ．％、若しくはそれ以上であるが、（例えば乾燥形態の）前記組成物中の前記アミノ酸実体成分の６０ｗｔ．％以下である、
の１つ、２つ、又は３つである、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記組成物が、（ｄ）カルニチンアミノ酸実体；又は（ｅ）グルタミンアミノ酸実体の一方又は双方をさらに含む、請求項２４又は２５に記載の組成物。
【請求項２７】
以下：
（ｉ）前記ロイシンアミノ酸実体、前記シトルリンアミノ酸実体、前記ＮＡＣ実体、前記カルニチンアミノ酸実体、及び前記グルタミンアミノ酸実体のｗｔ．％が、（例えば乾燥形態の）前記組成物中の前記アミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも４０ｗｔ．％、４５ｗｔ．％、５０ｗｔ．％、５５ｗｔ．％、若しくは６０ｗｔ．％であるが、（例えば乾燥形態の）前記組成物中の前記アミノ酸実体成分又は全成分の９０ｗｔ．％以下であるか；
（ｉｉ）（例えば乾燥形態の）前記組成物中の前記シトルリンアミノ酸実体のｗｔ．％が、前記カルニチンアミノ酸実体のｗｔ．％よりも大きい、例えば、（例えば乾燥形態の）前記組成物中の前記シトルリンアミノ酸実体のｗｔ．％が、前記カルニチンアミノ酸実体のｗｔ．％よりも少なくとも５０％大きい、例えば、前記シトルリンアミノ酸実体のｗｔ．％が、前記カルニチンアミノ酸実体のｗｔ．％よりも少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、若しくは８０％大きいか；
（ｉｉｉ）（例えば乾燥形態の）前記組成物中の前記グルタミンアミノ酸実体のｗｔ．％が、前記シトルリンアミノ酸実体のｗｔ．％よりも大きい、例えば、（例えば乾燥形態の）前記組成物中の前記グルタミンアミノ酸実体のｗｔ．％が、前記シトルリンアミノ酸実体のｗｔ．％よりも少なくとも４０％大きい、例えば、前記グルタミンアミノ酸実体のｗｔ．％が、前記シトルリンアミノ酸実体のｗｔ．％よりも少なくとも６０％、４５％、５０％、５５％、６０％、若しくは６５％大きいか；又は
（ｉｖ）（例えば乾燥形態の）前記組成物中の組み合わせ中の前記シトルリンアミノ酸実体及び前記アルギニンアミノ酸実体のｗｔ．％が、前記グルタミンアミノ酸実体のｗｔ．％よりも大きい、例えば、（例えば乾燥形態の）前記組成物中の前記シトルリンアミノ酸実体のｗｔ．％が、前記カルニチンアミノ酸実体のｗｔ．％よりも少なくとも２０％大きい、例えば、前記シトルリンアミノ酸実体のｗｔ．％が、前記カルニチンアミノ酸実体のｗｔ．％よりも少なくとも３０％、３５％、４０％、４５％、若しくは５０％大きい、
の１つ、２つ、３つ、又は４つである、請求項２４〜２６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２８】
（ｆ）ロイシンアミノ酸実体、（ｇ）セリンアミノ酸実体、（ｈ）バリンアミノ酸実体、（ｉ）ヒスチジンアミノ酸実体、又は（ｊ）リジンアミノ酸実体のうちの１つ、２つ、又は３つをさらに含む、請求項２４〜２７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２９】
異常ヘモグロビン症又はサラセミアを処置する方法であって、請求項２４〜２９のいずれか一項に記載の組成物（例えば活性部分）を有効量でそれを必要とする対象に投与し、それにより前記対象における前記異常ヘモグロビン症又は前記サラセミアを処置することを含む、方法。
【請求項３０】
異常ヘモグロビン症又はサラセミアを処置する方法における使用を意図した組成物であって、請求項２４〜２９のいずれか一項に記載の組成物（例えば活性部分）を有効量で含む、組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本願は、それら全体の参照によりそれらの内容が本明細書に組み込まれる、２０１９年６月２０日に出願された米国特許出願第６２／６８７７２１号明細書及び２０１９年２月１３日に出願された米国特許出願第６２／８０４８７９号明細書の優先権を主張する。
【背景技術】
【０００２】
異常ヘモグロビン症、例えば鎌状赤血球症は、世界中で有意な健康負担を引き起こす、非常に蔓延する遺伝性赤血球障害である。異常ヘモグロビン症は、赤血球の産生減少及び／又は溶血増加が生じる遺伝的起源のいくつかの貧血を包含する。特に、鎌状赤血球症は、鎌状赤血球の産生を呈し、疼痛、臓器不全、及び早期死亡の集中期間に加えて、溶血性貧血及び血管閉塞事象によって特徴づけられる遺伝性障害の一群である。鎌状赤血球貧血は、鎌状赤血球症（ＳＣＤ）の最も一般的な重症型であり、米国内で約１００，０００人、世界中で４４０万人に罹患する。多数の患者において、ＳＣＤは、急性合併症によって中断される慢性臓器不全及び早期死亡によって規定される。ＳＣＤに対する現在の治療法は、合併症、赤血球輸血、ヒドロキシ尿素、及び幹細胞移植の支持的処置に限られる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
利用可能な治療法がないと仮定すると、対象における異常ヘモグロビン症、例えばＳＣＤを治療するための作用剤、例えば食事組成物及び治療薬が依然として求められている。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
対象、例えば異常ヘモグロビン症（例えば鎌状赤血球症）又はサラセミア（例えば、αサラセミア又はβサラセミア）を有する対象における赤血球及び／又はヘモグロビンの機能、代謝回転、及び合成；血管機能；炎症；及び／又は酸化ストレスを改善するのに有用であるアミノ酸実体を含む組成物（例えば活性部分）が本明細書に提供される。組成物は、それを必要とする対象（例えばヒト）における異常ヘモグロビン症又はサラセミアの１つ又は複数の症状を処置する（例えば、回復させる、低減する、寛解させる、又は予防する）方法において使用可能である。この方法は、組成物の投与後、異常ヘモグロビン症又はサラセミアの１つ又は複数の症状における改善について対象を監視することをさらに含み得る。
【０００５】
一態様では、本発明は、赤血球の機能、代謝回転、若しくは合成；ヘモグロビンの機能、代謝回転、若しくは合成；又は血管機能のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、又はそれ以上（例えば全て）を改善する方法であって、
ａ）ロイシンアミノ酸実体、
ｂ）アルギニンアミノ酸実体、
ｃ）グルタミンアミノ酸実体；及び
ｄ）Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）−実体；
を含む組成物（例えば活性部分）であって、２０を超えるアミノ酸残基長のペプチド（例えば乳清タンパク質）を含まないか、又は２０を超えるアミノ酸残基長のペプチドが存在する場合、ペプチドが（例えば乾燥形態の）組成物の総重量の１０ｗｔ．％未満で存在する組成物（例えば活性部分）を有効量でそれを必要とする対象に投与し、
それにより、対象における赤血球の機能、代謝回転、若しくは合成；ヘモグロビンの機能、代謝回転、若しくは合成；又は血管機能のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、又はそれ以上（例えば全て）を改善することを含む、方法を特徴とする。
【０００６】
別の態様では、本発明は、赤血球機能を改善する方法であって、本明細書に記載の組成物を有効量でそれを必要とする対象に投与することを含む方法を特徴とする。
【０００７】
別の態様では、本発明は、赤血球の代謝回転を改善する方法であって、本明細書に記載の組成物を有効量でそれを必要とする対象に投与することを含む方法を特徴とする。
【０００８】
別の態様では、本発明は、赤血球の合成を改善する方法であって、本明細書に記載の組成物を有効量でそれを必要とする対象に投与することを含む方法を特徴とする。
【０００９】
別の態様では、本発明は、ヘモグロビン機能を改善する方法であって、本明細書に記載の組成物を有効量でそれを必要とする対象に投与することを含む方法を特徴とする。
【００１０】
別の態様では、本発明は、ヘモグロビンの代謝回転を改善する方法であって、本明細書に記載の組成物を有効量でそれを必要とする対象に投与することを含む方法を特徴とする。
【００１１】
別の態様では、本発明は、ヘモグロビンの合成を改善する方法であって、本明細書に記載の組成物を有効量でそれを必要とする対象に投与することを含む方法を特徴とする。
【００１２】
別の態様では、本発明は、血管機能を改善する方法であって、本明細書に記載の組成物を有効量でそれを必要とする対象に投与することを含む方法を特徴とする。別の態様では、本発明は、異常ヘモグロビン症又はサラセミアを処置する方法であって、
ａ）ロイシンアミノ酸実体、
ｂ）アルギニンアミノ酸実体、
ｃ）グルタミンアミノ酸実体；及び
ｄ）Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）−実体；
を含む組成物（例えば活性部分）であって、２０を超えるアミノ酸残基長のペプチド（例えば乳清タンパク質）を含まないか、又は２０を超えるアミノ酸残基長のペプチドが存在する場合、ペプチドが（例えば乾燥形態の）組成物の総重量の１０ｗｔ．％未満で存在する組成物（例えば活性部分）を有効量でそれを必要とする対象に投与し、
それにより対象における異常ヘモグロビン症又はサラセミアを処置することを含む、方法を特徴とする。
【００１３】
別の態様では、本発明は、酸化ストレス（例えば、血液及び全身性酸化ストレスの一方又は双方）又は炎症を低減する方法であって、本明細書に記載の態様又は実施形態のいずれかの組成物（例えば活性部分）を有効量でそれを必要とする対象に投与することを含む方法を特徴とする。いくつかの実施形態では、対象は、異常ヘモグロビン症（例えば、β異常ヘモグロビン症）又はサラセミアのリスクがあるか、又はそのように診断されている。特定の実施形態では、異常ヘモグロビン症は、鎌状赤血球症である。別の実施形態では、αサラセミアは、αサラセミア又はβサラセミアである。
【００１４】
別の態様では、本発明は、それを必要とする対象における赤血球の機能、代謝回転、若しくは合成；ヘモグロビンの機能、代謝回転、若しくは合成；又は血管機能のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、又はそれ以上（例えば全て）を改善する方法における使用を意図した組成物であって、組成物が、
ａ）ロイシンアミノ酸実体、
ｂ）アルギニンアミノ酸実体、
ｃ）グルタミンアミノ酸実体；及び
ｄ）Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）−実体
を有効量で含み、２０を超えるアミノ酸残基長のペプチド（例えば乳清タンパク質）を含まないか、又は２０を超えるアミノ酸残基長のペプチドが存在する場合、ペプチドが（例えば乾燥形態の）組成物の全成分の総重量の１０ｗｔ．％未満で存在する、組成物を特徴とする。
【００１５】
別の態様では、本発明は、それを必要とする対象における異常ヘモグロビン症又はサラセミアを処置する方法であって、組成物が、
ａ）ロイシンアミノ酸実体、
ｂ）アルギニンアミノ酸実体、
ｃ）グルタミンアミノ酸実体；及び
ｄ）Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）−実体
を有効量で含み、ここで２０を超えるアミノ酸残基長のペプチド（例えば乳清タンパク質）を含まないか、又は２０を超えるアミノ酸残基長のペプチドが存在する場合、ペプチドが（例えば乾燥形態の）組成物の全成分の１０ｗｔ．％未満で存在する、方法を特徴とする。いくつかの実施形態では、鎌状赤血球症は、鎌状赤血球貧血（ＨｂＳＳ）、ヘモグロビンＳＣ症（ＨｂＳＣ）、鎌状β＋サラセミア（ＨｂＳ／β＋）、鎌状β０サラセミア（ＨｂＳ／β０）、ヘモグロビンＳＥ症（ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ  ＳＥ  ｄｉｓｅａｓｅ）、ヘモグロビンＳＤ症（ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ  ＳＤ  ｄｉｓｅａｓｅ）、又はヘモグロビンＳＯ症（ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ  ＳＯ  ｄｉｓｅａｓｅ）から選択される。
【００１６】
いくつかの実施形態では、組成物の投与により、反応性酸素種生成における減少；血漿アルギナーゼのレベル若しくは活性における低下；グルタチオン合成における増加；内皮及び他の細胞に対する赤血球接着における減少；鎌状化に対する赤血球抵抗性における増加；赤血球へのカルシウム流入における増加；同化における増加；一酸化窒素合成における増加；又はヘモグロビン合成における増加のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、又はそれ以上（例えば全て）がもたらされる。
【００１７】
いくつかの実施形態では、組成物の投与により、貧血；溶血；血管閉塞；虚血；又は疼痛のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、若しくはそれ以上（例えば全て）における改善がもたらされる。
【００１８】
いくつかの実施形態では、組成物は、（ｅ）グリシンアミノ酸実体又はカルニチン実体の一方又は双方をさらに含む。
【００１９】
別の態様では、本発明は、
ａ）ロイシンアミノ酸実体、
ｂ）アルギニンアミノ酸実体、
ｃ）グルタミンアミノ酸実体；
ｄ）Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）実体；及び
ｅ）グリシンアミノ酸実体又はカルニチン実体の一方又は双方
を含むか、本質的にそれらからなるか、又はそれらからなる組成物を特徴とする。
【００２０】
いくつかの実施形態では、カルニチン実体のｗｔ．％は、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも１ｗｔ．％である。
【００２１】
いくつかの実施形態では、グリシンアミノ酸実体のｗｔ．％は、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも３ｗｔ．％である。
【００２２】
いくつかの実施形態では、イソロイシンは、組成物に不在であるか、又は存在する場合、例えば、（例えば乾燥形態の）組成物の総重量の１０ｗｔ．％未満、１ｗｔ．％未満、０．５ｗｔ．％未満、０．１ｗｔ．％未満、０．０５ｗｔ．％未満、０．０１ｗｔ．％未満、０．００１ｗｔ．％未満、又はそれ以下で存在する。
【００２３】
いくつかの実施形態では、組成物は、（ｆ）バリンアミノ酸実体、（ｇ）ヒスチジンアミノ酸実体、又は（ｈ）リジンアミノ酸実体のうちの１つ、２つ、又はそれ以上（例えば全て）をさらに含む。
【００２４】
いくつかの実施形態では、（ａ）〜（ｈ）のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、又はそれ以上（例えば全て）は、表１から選択される。
【００２５】
いくつかの実施形態では、組成物は、２０を超えるアミノ酸残基長のペプチド（例えば乳清タンパク質）を含まないか、又は２０を超えるアミノ酸残基長のペプチドが存在する場合、ペプチドは、（例えば乾燥形態の）組成物の全成分の総重量の１０ｗｔ．％未満、１ｗｔ．％未満、０．５ｗｔ．％未満、０．１ｗｔ．％未満、０．０５ｗｔ．％未満、０．０１ｗｔ．％未満、０．００１ｗｔ．％未満、又はそれ以下で存在する。
【００２６】
いくつかの実施形態では、（ａ）〜（ｈ）のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、若しくはそれ以上（例えば全て）は、組成物中の遊離アミノ酸形態であり、例えば、（例えば乾燥形態の）組成物の総重量の少なくとも４２ｗｔ．％、少なくとも７５ｗｔ．％、少なくとも９０ｗｔ．％、又はそれ以上は、組成物中の遊離アミノ酸形態で、（ａ）〜（ｆ）のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれ以上（例えば全て）である。
【００２７】
いくつかの実施形態では、（ａ）〜（ｄ）、（ａ）〜（ｅ）、（ａ）〜（ｆ）、又は（ａ）〜（ｈ）の総重量％は、（例えば乾燥形態の）組成物中の非アミノ酸実体タンパク質成分（例えば乳清タンパク質）又は非タンパク質成分（又は双方）の総重量％よりも大きい、例えば、（ａ）〜（ｄ）、（ａ）〜（ｅ）、（ａ）〜（ｆ）、又は（ａ）〜（ｈ）は、（例えば乾燥形態の）組成物中の全成分の総重量の少なくとも５０ｗｔ．％、少なくとも７５ｗｔ．％、又は少なくとも９０ｗｔ．％である。
【００２８】
いくつかの実施形態では、組成物は、１８若しくはそれ以下、１５若しくはそれ以下、又は１２若しくはそれ以下のアミノ酸実体の組み合わせ、例えば、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の総重量の少なくとも４２ｗｔ．％、少なくとも７５ｗｔ．％、又は少なくとも９０ｗｔ．％を含む組み合わせを含む。
【００２９】
いくつかの実施形態では、トリプトファンは、組成物に不在であるか、又は存在する場合、例えば、（例えば乾燥形態の）組成物の総重量の１０ｗｔ．％未満、１ｗｔ．％未満、０．５ｗｔ．％未満、０．１ｗｔ．％未満、０．０５ｗｔ．％未満、０．０１ｗｔ．％未満、０．００１ｗｔ．％未満、又はそれ以下で存在する。いくつかの実施形態では、トリプトファンは、存在する場合、遊離型で存在する。いくつかの実施形態では、トリプトファンは、存在する場合、塩型で存在する。
【００３０】
いくつかの実施形態では、トリプトファンは、存在する場合、タンパク質が、インタクトなタンパク質又はタンパク質加水分解物として存在するかとは無関係に、乳清、カゼイン、ラクトアルブミン、又は栄養補助剤、医療食、若しくは類似製品として使用される任意の他のタンパク質でないという条件で、オリゴペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質で存在してもよい。
【００３１】
いくつかの実施形態では、ロイシンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、及びＮＡＣ実体のｗｔ．比は、３．６＋／−２０％：４．５＋／−２０％：１１＋／−２０％：１．２＋／−２０％である。いくつかの実施形態では、ロイシンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、ＮＡＣ実体、カルニチン実体、及びグリシンアミノ酸実体のｗｔ．比は、３．６＋／−２０％：４．５＋／−２０％：１１＋／−２０％：１．２＋／−２０％：１＋／−２０％：２．７＋／−２０％である。
【００３２】
いくつかの実施形態では、組成物（例えば活性部分）は、
ａ）ロイシンアミノ酸実体が、
ｉ）Ｌ−ロイシン若しくはその塩、
ｉｉ）Ｌ−ロイシンを含む、ジペプチド若しくはその塩、若しくはトリペプチド若しくはその塩、又は
ｉｉｉ）β−ヒドロキシ−β−酪酸メチル（ＨＭＢ）若しくはその塩
から選択される；
ｂ）アルギニンアミノ酸実体が、
ｉ）Ｌ−アルギニン若しくはその塩、
ｉｉ）Ｌ−アルギニンを含む、ジペプチド若しくはその塩、若しくはトリペプチド若しくはその塩、
ｉｉｉ）クレアチン若しくはその塩、又は
ｖ）クレアチンを含む、ジペプチド若しくはその塩、若しくはトリペプチド若しくはその塩
から選択される；
ｃ）グルタミンアミノ酸実体が、Ｌ−グルタミン若しくはその塩、又はＬ−グルタミンを含む、ジペプチド若しくはその塩、若しくはトリペプチド若しくはその塩である；
ｄ）ＮＡＣ実体が、ＮＡＣ若しくはその塩、又はＮＡＣを含むジペプチド若しくはその塩である；及び
ｅ）
ｉ）グリシンアミノ酸実体が、Ｌ−グリシン若しくはその塩、又はＬ−グリシンを含む、ジペプチド若しくはその塩、若しくはトリペプチド若しくはその塩である；又は
ｉｉ）カルニチン実体が、Ｌ−カルニチン若しくはその塩、又はＬ−カルニチンを含むジペプチド若しくはその塩である
の一方又は双方
を含むか、本質的にそれらからなるか、又はそれらからなる。
【００３３】
いくつかの実施形態では、組成物（例えば活性部分）は、
（ｆ）バリンアミノ酸実体が、Ｌ−バリン若しくはその塩、又はＬ−バリンを含む、ジペプチド若しくはその塩、若しくはトリペプチド若しくはその塩である；
（ｇ）ヒスチジンアミノ酸実体が、Ｌ−ヒスチジン若しくはその塩、又はＬ−ヒスチジンを含む、ジペプチド若しくはその塩、若しくはトリペプチド若しくはその塩である；又は
（ｈ）リジンアミノ酸実体が、Ｌ−リジン若しくはその塩、又はＬ−リジンを含む、ジペプチド若しくはその塩、若しくはトリペプチド若しくはその塩である、
のうちの１つ、２つ、又はそれ以上（例えば全て）をさらに含む。
【００３４】
いくつかの実施形態では、組成物（例えば活性部分）は、
ａ）ロイシンアミノ酸実体がＬ−ロイシン又はその塩である；
ｂ）アルギニンアミノ酸実体がＬ−アルギニン又はその塩である；
ｃ）グルタミンアミノ酸実体がＬ−グルタミン又はその塩である；
ｄ）ＮＡＣ実体がＮＡＣ又はその塩である；及び
ｅ）グリシンアミノ酸実体がＬ−グリシン若しくはその塩である、又はカルニチン実体がＬ−カルニチン若しくはその塩である、の一方又は双方
を含むか、本質的にそれらからなるか、又はそれらからなる。
【００３５】
いくつかの実施形態では、組成物（例えば活性部分）は、
ａ）ロイシンアミノ酸実体がＬ−ロイシン又はその塩である；
ｂ）アルギニンアミノ酸実体がＬ−アルギニン又はその塩である；
ｃ）グルタミンアミノ酸実体がＬ−グルタミン又はその塩である；
ｄ）ＮＡＣ実体がＮＡＣ又はその塩である；
ｅ）グリシンアミノ酸実体がＬ−グリシン若しくはその塩である、又はカルニチン実体がＬ−カルニチン若しくはその塩である、の一方又は双方；
ｆ）バリンアミノ酸実体がＬ−バリン又はその塩である；
ｇ）ヒスチジンアミノ酸実体がＬ−ヒスチジン又はその塩である；及び
ｈ）リジンアミノ酸実体がＬ−リジン又はその塩である、
を含むか、本質的にそれらからなるか、又はそれらからなる。
【００３６】
別の態様では、本発明は、
ａ）ロイシンアミノ酸実体、
ｂ）アルギニンアミノ酸実体、
ｃ）グルタミンアミノ酸実体、
ｄ）Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）実体、
ｅ）シトルリンアミノ酸実体、
ｆ）カルニチン実体、
ｇ）セリンアミノ酸実体、
ｈ）バリンアミノ酸実体、
ｉ）ヒスチジンアミノ酸実体、及び
ｊ）リジンアミノ酸実体
を含むか、本質的にそれらからなるか、又はそれらからなる組成物を特徴とする。
【００３７】
いくつかの実施形態では、イソロイシンは、組成物に不在であるか、又は存在する場合、例えば、（例えば乾燥形態の）組成物の総重量の、１０ｗｔ．％未満、９ｗｔ．％未満、８ｗｔ．％未満、７ｗｔ．％未満、６ｗｔ．％未満、５ｗｔ．％未満、４ｗｔ．％未満、３ｗｔ．％未満、２ｗｔ．％未満、１ｗｔ．％未満、０．５ｗｔ．％未満、０．１ｗｔ．％未満、０．０５ｗｔ．％未満、０．０１ｗｔ．％未満、０．００１ｗｔ．％未満、又はそれ以下で存在する。
【００３８】
いくつかの実施形態では、（ａ）〜（ｊ）のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、又はそれ以上（例えば全て）は、表１から選択される。
【００３９】
いくつかの実施形態では、組成物は、２０を超えるアミノ酸残基長のペプチド（例えば乳清タンパク質）を含まないか、又は２０を超えるアミノ酸残基長のペプチドが存在する場合、ペプチドは、（例えば乾燥形態の）組成物の全成分の総重量の１０ｗｔ．％未満、９ｗｔ．％未満、８ｗｔ．％未満、７ｗｔ．％未満、６ｗｔ．％未満、５ｗｔ．％未満、４ｗｔ．％未満、３ｗｔ．％未満、２ｗｔ．％未満、１ｗｔ．％未満、０．５ｗｔ．％未満、０．１ｗｔ．％未満、０．０５ｗｔ．％未満、０．０１ｗｔ．％未満、０．００１ｗｔ．％未満、又はそれ以下で存在する。
【００４０】
いくつかの実施形態では、（ａ）〜（ｊ）のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、若しくはそれ以上（例えば全て）は、組成物中の遊離アミノ酸形態であり、例えば、（例えば乾燥形態の）組成物の総重量の少なくとも４２ｗｔ．％、少なくとも４５ｗｔ．％、少なくとも５０ｗｔ．％、少なくとも５５ｗｔ．％、少なくとも６０ｗｔ．％、少なくとも６５ｗｔ．％、少なくとも７０ｗｔ．％、少なくとも７５ｗｔ．％、少なくとも８０ｗｔ．％、少なくとも８５ｗｔ．％、少なくとも９０ｗｔ．％、少なくとも９５ｗｔ．％、少なくとも９７ｗｔ．％、少なくとも９８ｗｔ．％、又はそれ以上は、組成物中の遊離アミノ酸形態で、（ａ）〜（ｊ）のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、又はそれ以上（例えば全て）である。
【００４１】
いくつかの実施形態では、（ａ）〜（ｊ）の総重量％は、（例えば乾燥形態の）組成物中の非アミノ酸実体タンパク質成分（例えば乳清タンパク質）又は非タンパク質成分（又は双方）の総重量％よりも大きい、例えば、（ａ）〜（ｊ）は、（例えば乾燥形態の）組成物中の全成分の総重量の少なくとも５０ｗｔ．％、少なくとも５５ｗｔ．％、少なくとも６０ｗｔ．％、少なくとも６５ｗｔ．％、少なくとも７０ｗｔ．％、少なくとも７５ｗｔ．％、少なくとも８０ｗｔ．％、少なくとも８５ｗｔ．％、少なくとも９０ｗｔ．％、少なくとも９５ｗｔ．％、少なくとも９７ｗｔ．％、少なくとも９８ｗｔ．％、又はそれ以上である。
【００４２】
いくつかの実施形態では、組成物は、１８若しくはそれ以下、１７若しくはそれ以下、１６若しくはそれ以下、１５若しくはそれ以下、１４若しくはそれ以下、１３若しくはそれ以下、１２若しくはそれ以下、又は１１若しくはそれ以下のアミノ酸実体の組み合わせを含む。
【００４３】
いくつかの実施形態では、組成物（例えば活性部分）は、
ａ）ロイシンアミノ酸実体が、
ｉ）Ｌ−ロイシン若しくはその塩、
ｉｉ）Ｌ−ロイシンを含む、ジペプチド若しくはその塩、若しくはトリペプチド若しくはその塩、又は
ｉｉｉ）β−ヒドロキシ−β−酪酸メチル（ＨＭＢ）若しくはその塩
から選択される；
ｂ）アルギニンアミノ酸実体が、
ｉ）Ｌ−アルギニン若しくはその塩、
ｉｉ）Ｌ−アルギニンを含む、ジペプチド若しくはその塩、若しくはトリペプチド若しくはその塩、
ｉｉｉ）クレアチン若しくはその塩、又は
ｖ）クレアチンを含む、ジペプチド若しくはその塩、若しくはトリペプチド若しくはその塩
から選択される；
ｃ）グルタミンアミノ酸実体が、Ｌ−グルタミン若しくはその塩、又はＬ−グルタミンを含む、ジペプチド若しくはその塩、若しくはトリペプチド若しくはその塩である；
ｄ）ＮＡＣ実体が、ＮＡＣ若しくはその塩、又はＮＡＣを含むジペプチド若しくはその塩である；
ｅ）シトルリンアミノ酸実体が、Ｌ−シトルリン若しくはその塩、又はＬ−シトルリンを含む、ジペプチド若しくはその塩、若しくはトリペプチド若しくはその塩である；
ｆ）カルニチン実体が、Ｌ−カルニチン若しくはその塩、又はＬ−カルニチンを含むジペプチド若しくはその塩である；
ｇ）セリンアミノ酸実体が、Ｌ−セリン若しくはその塩、又はＬ−セリンを含む、ジペプチド若しくはその塩、若しくはトリペプチド若しくはその塩である；
ｈ）バリンアミノ酸実体が、Ｌ−バリン若しくはその塩、又はＬ−バリンを含む、ジペプチド若しくはその塩、若しくはトリペプチド若しくはその塩である；
ｉ）ヒスチジンアミノ酸実体が、Ｌ−ヒスチジン若しくはその塩、又はＬ−ヒスチジンを含む、ジペプチド若しくはその塩、若しくはトリペプチド若しくはその塩である；及び
ｊ）リジンアミノ酸実体が、Ｌ−リジン若しくはその塩、又はＬ−リジンを含む、ジペプチド若しくはその塩、若しくはトリペプチド若しくはその塩である
を含むか、本質的にそれらからなるか、又はそれらからなる。
【００４４】
いくつかの実施形態では、組成物（例えば活性部分）は、
ａ）Ｌ−ロイシン又はその塩、
ｂ）Ｌ−アルギニン又はその塩、
ｃ）Ｌ−グルタミン又はその塩、
ｄ）ＮＡＣ又はその塩、
ｅ）Ｌ−シトルリン又はその塩、
ｆ）Ｌ−カルニチン又はその塩、
ｇ）Ｌ−セリン又はその塩、
ｈ）Ｌ−バリン又はその塩、
ｉ）Ｌ−ヒスチジン又はその塩、及び
ｊ）Ｌ−リジン又はその塩
を含むか、本質的にそれらからなるか、又はそれらからなる。
【００４５】
別の態様では、本発明は、赤血球の機能、代謝回転、若しくは合成；ヘモグロビンの機能、代謝回転、若しくは合成；血管機能；酸化ストレス（例えば、血液又は全身性酸化ストレスの一方又は双方）；又は炎症のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、若しくはそれ以上（例えば全て）を改善する方法であって、本明細書に記載の態様又は実施形態のいずれかの組成物（例えば活性部分）を有効量でそれを必要とする対象に投与し、それにより、対象における赤血球の機能、代謝回転、若しくは合成；ヘモグロビンの機能、代謝回転、若しくは合成；血管機能、酸化ストレス（例えば、血液又は全身性酸化ストレスの一方又は双方）；又は炎症のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、又はそれ以上（例えば全て）を改善することを含む、方法を特徴とする。
【００４６】
別の態様では、本発明は、異常ヘモグロビン症又はサラセミアを処置する方法であって、本明細書に記載の態様又は実施形態のいずれかの組成物（例えば活性部分）を有効量でそれを必要とする対象に投与することを含み、それにより対象における異常ヘモグロビン症又はサラセミアを処置する、方法を特徴とする。
【００４７】
別の態様では、本発明は、赤血球の機能、代謝回転、若しくは合成；ヘモグロビンの機能、代謝回転、若しくは合成；血管機能；酸化ストレス（例えば、血液又は全身性酸化ストレスの一方又は双方）；又は炎症のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、又はそれ以上（例えば全て）を改善する方法における使用を意図した組成物であって、本明細書に記載の態様又は実施形態のいずれかの組成物（例えば活性部分）を有効量で含む組成物を特徴とする。
【００４８】
別の態様では、本発明は、異常ヘモグロビン症又はサラセミアを処置する方法における使用を意図した組成物であって、本明細書に記載の態様又は実施形態のいずれかの組成物（例えば活性部分）を有効量で含む組成物を特徴とする。
【００４９】
いくつかの実施形態では、対象は、異常ヘモグロビン症（例えばβ異常ヘモグロビン症）又はサラセミアのリスクがあるか、又はそのように診断されている。特定の実施形態では、異常ヘモグロビン症は、鎌状赤血球症である。別の実施形態では、αサラセミアは、αサラセミア又はβサラセミアである。
【００５０】
いくつかの実施形態では、鎌状赤血球症は、鎌状赤血球貧血（ＨｂＳＳ）、ヘモグロビンＳＣ症（ＨｂＳＣ）、鎌状β＋サラセミア（ＨｂＳ／β＋）、鎌状β０サラセミア（ＨｂＳ／β０）、ヘモグロビンＳＥ症、ヘモグロビンＳＤ症、又はヘモグロビンＳＯ症から選択される。
【００５１】
いくつかの実施形態では、組成物の投与により、反応性酸素種生成における減少、血漿アルギナーゼのレベル若しくは活性における低下、グルタチオン合成における増加、内皮及び他の細胞に対する赤血球接着における減少、鎌状化に対する赤血球抵抗性における増加、赤血球へのカルシウム流入における増加、同化における増加、一酸化窒素合成における増加、又はヘモグロビン合成における増加のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、又はそれ以上（例えば全て）がもたらされる。
【００５２】
いくつかの実施形態では、組成物の投与により、貧血、溶血、血管閉塞、虚血、又は疼痛のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、若しくはそれ以上（例えば全て）における改善がもたらされる。
【００５３】
いくつかの実施形態では、組成物（活性部分）は、薬学的に許容できる担体とともに製剤化される。
【００５４】
いくつかの実施形態では、組成物（例えば活性部分）は、食事組成物として製剤化される。いくつかの実施形態では、食事組成物は、医療食、機能性食品、又はサプリメントから選択される。
【００５５】
いくつかの実施形態では、組成物は、乾燥ブレンド調製物（ｄｒｙ  ｂｌｅｎｄｅｄ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）、例えば、医薬品グレードの乾燥ブレンド調製物（ＰＧＤＢＰ）である。
【００５６】
別の態様では、本発明は、少なくとも４つの医薬品グレードのアミノ酸実体を含む乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰを製造するための方法であって、
少なくとも４つの医薬品グレードのアミノ酸実体の組み合わせを形成し、組み合わせを乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰを達成するのに十分な時間ブレンドすることを含み、
乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰが、ａ）ロイシンアミノ酸実体、ｂ）アルギニンアミノ酸実体、ｃ）グルタミンアミノ酸実体；及びｄ）Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）−実体を含む、方法を特徴とする。
【００５７】
いくつかの実施形態では、乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰは、ｅ）シトルリンアミノ酸実体、ｆ）カルニチン実体、ｇ）セリンアミノ酸実体、ｈ）バリンアミノ酸実体、ｉ）ヒスチジンアミノ酸実体、及びｊ）リジンアミノ酸実体のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれ以上（例えば全て）をさらに含む。
【００５８】
いくつかの実施形態では、（ｉ）４０℃より低い温度でブレンドが行われる；（ｉｉ）ブレンドが１０００ｒｐｍ未満の速度でブレンダー若しくはミキサー内でブレンド又は混合することを含む；又は（ｉｉｉ）この方法が、乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰに対して、直接ブレンド、ローラー圧縮、若しくは湿式造粒の１つ、２つ、若しくは３つを実施することをさらに含む、のうちの１つ、２つ、又は３つである。
【００５９】
別の態様では、本発明は、少なくとも４つの医薬品グレードのアミノ酸実体を含む乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰを製造する方法であって、
少なくとも４つの医薬品グレードのアミノ酸実体の組み合わせを形成し、組み合わせを乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰを達成するのに十分な時間ブレンドすることを含み、
乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰが、
ａ）アルギニンアミノ酸実体、
ｂ）シトルリンアミノ酸実体、及び
ｃ）Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）実体
を含む、方法を特徴とする。
【００６０】
いくつかの実施形態では、乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰは、ａ）ロイシンアミノ酸実体、ｂ）グルタミンアミノ酸実体、ｃ）カルニチン実体、ｄ）セリンアミノ酸実体、ｅ）バリンアミノ酸実体、ｆ）ヒスチジンアミノ酸実体、及びｇ）リジンアミノ酸実体のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、又は７つをさらに含む。
【００６１】
別の態様では、本発明は、
ａ）アルギニンアミノ酸実体、
ｂ）シトルリンアミノ酸実体；及び
ｃ）Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）−実体、
を含む組成物であって、ここで
（ｉ）組成物が、２０を超えるアミノ酸残基長のペプチド（例えば乳清タンパク質）を含まないか、又は２０を超えるアミノ酸残基長のペプチドが存在する場合、ペプチドが（例えば乾燥形態の）組成物の総重量の１０ｗｔ．％未満で存在する；
（ｉｉ）（例えば乾燥形態の）組成物の総重量の少なくとも５０ｗｔ．％が遊離型の１つ又は複数のアミノ酸実体である；又は
（ｉｉｉ）シトルリンアミノ酸実体のｗｔ．％がＮＡＣ−実体のｗｔ．％より大きい
のうちの１つ、２つ、又は３つである、組成物を特徴とする。
【００６２】
いくつかの実施形態では、組成物は、以下の特徴：
（ｉ）（例えば乾燥形態の）組成物中のシトルリンアミノ酸実体のｗｔ．％がＮＡＣ−実体のｗｔ．％よりも少なくとも５０％大きい、例えばシトルリンアミノ酸実体のｗｔ．％がＮＡＣ−実体のｗｔ．％よりも少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、若しくは少なくとも８０％大きい；
（ｉｉ）ロイシンアミノ酸実体、シトルリンアミノ酸実体、及びＮＡＣ実体のｗｔ．％が、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分若しくは全成分の少なくとも２０ｗｔ．％、少なくとも２５ｗｔ．％、少なくとも３０ｗｔ．％、若しくは少なくとも３５ｗｔ．％であるが、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の８０ｗｔ．％以下である；又は
（ｉｉｉ）シトルリンアミノ酸実体のｗｔ．％が、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分の少なくとも５ｗｔ．％、少なくとも１０ｗｔ．％、少なくとも１１ｗｔ．％、少なくとも１２ｗｔ．％、少なくとも１３ｗｔ．％、若しくはそれ以上であるが、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分の６０ｗｔ．％以下である、
のうちの１つ、２つ、又は３つを有する。
【００６３】
いくつかの実施形態では、組成物は、（ｄ）カルニチンアミノ酸実体；又は（ｅ）グルタミンアミノ酸実体の一方又は双方をさらに含む。
【００６４】
いくつかの実施形態では、組成物は、
ａ）アルギニンアミノ酸実体が、
ｉ）Ｌ−アルギニン若しくはその塩、
ｉｉ）Ｌ−アルギニンを含む、ジペプチド若しくはその塩、若しくはトリペプチド若しくはその塩、
ｉｉｉ）クレアチン若しくはその塩、又は
ｖ）クレアチンを含む、ジペプチド若しくはその塩、若しくはトリペプチド若しくはその塩
から選択される；
ｂ）シトルリンアミノ酸実体が、Ｌ−シトルリン若しくはその塩、又はＬ−シトルリンを含む、ジペプチド若しくはその塩、若しくはトリペプチド若しくはその塩である；及び
ｃ）ＮＡＣ実体が、ＮＡＣ若しくはその塩、又はＮＡＣを含むジペプチド若しくはその塩である、
を含む。
【００６５】
別の態様では、本発明は、
ａ）アルギニンアミノ酸実体、
ｂ）シトルリンアミノ酸実体；
ｃ）Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）−実体；
（ｄ）カルニチンアミノ酸実体；及び
（ｅ）グルタミンアミノ酸実体、
を含む組成物であって、
（ｉ）２０を超えるアミノ酸残基長のペプチド（例えば乳清タンパク質）を含まないか、又は２０を超えるアミノ酸残基長のペプチドが存在する場合、ペプチドが（例えば乾燥形態の）組成物の総重量の１０ｗｔ．％未満で存在する；
（ｉｉ）（例えば乾燥形態の）組成物の総重量の少なくとも５０ｗｔ．％が、遊離型の１つ又は複数のアミノ酸実体である；又は
（ｉｉｉ）シトルリンアミノ酸実体のｗｔ．％がＮＡＣ−実体のｗｔ．％よりも大きい、
のうちの１つ、２つ、又は３つである、組成物を特徴とする。
【００６６】
いくつかの実施形態では、組成物が、以下の特徴：
（ｉ）ロイシンアミノ酸実体、シトルリンアミノ酸実体、ＮＡＣ実体、カルニチンアミノ酸実体、及びグルタミンアミノ酸実体のｗｔ．％が、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも４０ｗｔ．％、少なくとも４５ｗｔ．％、少なくとも５０ｗｔ．％、少なくとも５５ｗｔ．％、若しくは少なくとも６０ｗｔ．％であるが、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の９０ｗｔ．％以下である；
（ｉｉ）（例えば乾燥形態の）組成物中のシトルリンアミノ酸実体のｗｔ．％が、カルニチンアミノ酸実体のｗｔ．％よりも大きい、例えば、（例えば乾燥形態の）組成物中のシトルリンアミノ酸実体のｗｔ．％が、カルニチンアミノ酸実体のｗｔ．％よりも少なくとも５０％大きい、例えば、シトルリンアミノ酸実体のｗｔ．％が、カルニチンアミノ酸実体のｗｔ．％よりも少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、若しくは少なくとも８０％大きい；
（ｉｉｉ）（例えば乾燥形態の）組成物中のグルタミンアミノ酸実体のｗｔ．％が、シトルリンアミノ酸実体のｗｔ．％よりも大きい、例えば、（例えば乾燥形態の）組成物中のグルタミンアミノ酸実体のｗｔ．％が、シトルリンアミノ酸実体のｗｔ．％よりも少なくとも４０％大きい、例えば、グルタミンアミノ酸実体のｗｔ．％が、シトルリンアミノ酸実体のｗｔ．％よりも少なくとも６０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、若しくは少なくとも６５％大きい；又は
（ｉｖ）（例えば乾燥形態の）組成物中の組み合わせ中のシトルリンアミノ酸実体及びアルギニンアミノ酸実体のｗｔ．％が、グルタミンアミノ酸実体のｗｔ．％より大きい、例えば、（例えば乾燥形態の）組成物中のシトルリンアミノ酸実体のｗｔ．％が、カルニチンアミノ酸実体のｗｔ．％よりも少なくとも２０％大きい、例えば、シトルリンアミノ酸実体のｗｔ．％が、カルニチンアミノ酸実体のｗｔ．％よりも少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、若しくは少なくとも５０％大きい、
のうちの１つ、２つ、３つ、又は４つを有する。
【００６７】
いくつかの実施形態では、組成物は、（ｆ）ロイシンアミノ酸実体、（ｇ）セリンアミノ酸実体、（ｈ）バリンアミノ酸実体、（ｉ）ヒスチジンアミノ酸実体、又は（ｊ）リジンアミノ酸実体のうちの１つ、２つ、又は３つをさらに含む。
【００６８】
いくつかの実施形態では、組成物は、
ａ）アルギニンアミノ酸実体が、
ｉ）Ｌ−アルギニン若しくはその塩、
ｉｉ）Ｌ−アルギニンを含む、ジペプチド若しくはその塩、若しくはトリペプチド若しくはその塩、
ｉｉｉ）クレアチン若しくはその塩、又は
ｖ）クレアチンを含む、ジペプチド若しくはその塩、若しくはトリペプチド若しくはその塩
から選択される；
ｂ）シトルリンアミノ酸実体が、Ｌ−シトルリン若しくはその塩、又はＬ−シトルリンを含む、ジペプチド若しくはその塩、若しくはトリペプチド若しくはその塩である；及び
ｃ）ＮＡＣ実体が、ＮＡＣ若しくはその塩、又はＮＡＣを含むジペプチド若しくはその塩である；
ｄ）カルニチン実体が、Ｌ−カルニチン若しくはその塩、又はＬ−カルニチンを含むジペプチド若しくはその塩である；及び
ｅ）グルタミンアミノ酸実体が、Ｌ−グルタミン若しくはその塩、又はＬ−グルタミンを含む、ジペプチド若しくはその塩、若しくはトリペプチド若しくはその塩である、
を含む。
【図面の簡単な説明】
【００６９】
【図１】溶媒又はアミノ酸で前処置された、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシドの存在下及び非存在下での全血（ドナー１）の生体外酸化後のＲＢＣの変形能特性を示す。
【図２−１】図２：２Ａは、ＰＧＤＢＰの増加するブレンド時点（０、４、８、１２、１６、及び２０分）で取られたＮＩＲスペクトログラフの整列を示す。２Ｂは、ＰＧＤＢＰ（図１ＡのＰＧＤＢＰ）の２０分のブレンド時間からの４つの無作為試料中のアミノ酸の平均量及び標準誤差を示すグラフである。
【図２−２】（上記の通り。）
【図３】アミノ酸組成物の鎌状赤血球症を有する対象への投与を特徴とする臨床試験の設計を示す模式図である。
【発明を実施するための形態】
【００７０】
赤血球（ＲＢＣ）に関する身体及び代謝機能障害は、ほぼすべての臓器系、例えば異常ヘモグロビン症（例えば鎌状赤血球症）又はサラセミア（例えばαサラセミア又はβサラセミア）における急性及び慢性合併症を駆動する。ＲＢＣ機能障害及び溶解は、血管閉塞、臓器不全、及び感染などの種々の臨床的続発症を駆動する。ＲＢＣ機能障害は、ＲＢＣの微小血管の通過を複雑化させることがある、細胞鎌状化、酸化ストレス、脱水、及び内皮への接着によって特徴づけることができる。慢性合併症は、生涯にわたる貧血及び成人期にかけての臓器損傷の自然増加に起因し得、血管閉塞及び急性臓器不全などの急性事象によって中断され得る。
【００７１】
鎌状赤血球症（ＳＣＤ）は、概ね米国で成人８５，０００人及び小児１５，０００人と世界中で４４０万人に罹患する重篤な血液障害の一群を表す。ＳＣＤの特徴である鎌状赤血球は、血液及び血管系の正常機能における攪乱に起因する複雑な多因子性の病態生理のほんの一部を表すに過ぎない。現在のケアは、効果の範囲及び規模双方において限られており、血液及び血管機能障害に起因する多面的合併症を軽減することに役立つ薬剤が不十分なことから切望されている。
【００７２】
本発明の組成物は、血液の健康及び機能を維持するため、主要な系（血管、ＲＢＣ）を交差させる複数の経路（血液の生成及び完全性、血管機能、並びに血漿及びＲＢＣのアミノ酸不均衡）を標的にするように設計される。
【００７３】
本明細書に開示される組成物中のアミノ酸実体及びアミノ酸実体の相対量は、例えば、［１］血管接着を低減するため、［２］血管炎症の症状を軽減するため、［３］赤血球（ＲＢＣ）の変形能及び機能に対する侵襲に対して保護し、且つ多数の生物学的な細胞及び分子過程の協調を必要とする対象におけるＳＣＤに関連する合併症（例えば、溶血、血管接着、血管炎症、血管機能低下、急性及び慢性臓器不全）を低減するため、最適化されている。いかなる理論にも拘束されないが、本発明の組成物が、［１］ＲＢＣの硬直及び脆弱性、［２］溶血、［３］血管接着、［４］血管炎症、及び［５］血管機能障害といった障害された多因子性生物学を再プログラム化し得ることは理解されている。
【００７４】
本明細書に記載の組成物は、赤血球機能障害、溶血（例えば、貧血、慢性低酸素症、酸化ストレス、一酸化窒素の枯渇、及び／又は血管機能障害を含む）、血管閉塞（例えば、虚血傷害、炎症、凝固、及び／又は急性臓器損傷を含む）、造血の変化、及び／又は鎌状赤血球症の病態生理を改善するためのマルチモーダル及びコンビナトリアル手法を提供する。いくつかの実施形態では、組成物の投与により、改善された血管緊張、血管拡張、及び／又は血管閉塞（例えば、改善されたＮＯの有効性、ＮＯ依存性内皮機能、及び／又は血圧）がもたらされる。いくつかの実施形態では、組成物の投与により、改善されたＲＢＣ変形能、溶血の低下、及び／又は血管炎症の低下（例えば、グルタチオン（例えば血漿又はＲＢＣグルタチオン）、酸化ストレスマーカー、溶血マーカー、サイトカイン、及び／又は接着マーカーのレベルによって判定された場合）がもたらされる。いくつかの実施形態では、組成物の投与により、タンパク質合成の増加及び／又はヘモグロビンがヘム合成を支持するためのタンパク質新生基質の増加がもたらされる。いくつかの実施形態では、組成物の投与により、改善された造血及び／又は改善された赤血球集団（例えば、改善された網状赤血球、ヘモグロビン、胎児ヘモグロビン、及び／又は高密度若しくは不可逆的鎌状赤血球）がもたらされる。本明細書に記載の組成物は、（ｉ）血管損傷を改善するための血漿アルギニン及び一酸化窒素の回復；（ｉｉ）赤血球、血漿、及び系全体における改善された抗酸化剤防御；又は（ｉｉｉ）対象、例えば異常ヘモグロビン症（例えば鎌状赤血球症）若しくはサラセミア（例えばαサラセミア又はβサラセミア）を有する対象における造血要求の増加に対するタンパク質同化及びエネルギーの支持のうちの１つ、２つ、又は３つを標的にするように最適化される。
【００７５】
いくつかの実施形態では、組成物（例えば活性部分）は、ＮＯ媒介性血管機能、タンパク質合成、細胞エネルギー、炎症、又はヘム合成のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、又はそれ以上（例えば全て）を改善する能力がある。いくつかの実施形態では、組成物は、ＮＯ依存性内皮機能を回復させ、血管閉塞事象のリスクを低減し、血管の健康を改善し、溶血を低減し、且つ／又は酸化ストレスを低減する能力がある。いくつかの実施形態では、組成物は、ＮＯ合成におけるアルギニンバイオアベイラビリティの増加をもたらす能力がある。いくつかの実施形態では、組成物は、ＲＢＣの代謝回転、タンパク質合成（例えば造血前駆体及び／又は網状赤血球における、例えばヘモグロビン合成）、及び／又はヘム合成を増強する能力がある。いくつかの実施形態では、組成物は、高度に増殖性の細胞（例えば、造血前駆体及び／又は免疫細胞）にエネルギーの支持をもたらす能力がある。
【００７６】
部分的には、アミノ酸実体を含む組成物（活性部分）、並びに有効量の組成物を投与することによる、赤血球の機能、代謝回転、若しくは合成；ヘモグロビンの機能、代謝回転、若しくは合成；血管機能；酸化ストレス（例えば、血液及び全身性酸化ストレスの一方又は双方）；又は炎症のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、又はそれ以上（例えば全て）を改善する方法が、本明細書に記載される。それを必要とする対象における異常ヘモグロビン症（例えば鎌状赤血球症）又はサラセミア（例えばαサラセミア又はβサラセミア）を処置するため、組成物が投与されてもよい。組成物中のアミノ酸実体及びアミノ酸実体の相対量は、例えば、多数の生物学的な細胞及び分子過程の協調を必要とする対象（例えば、異常ヘモグロビン症（例えばＳＣＤ）又はサラセミアを有する対象）における赤血球及び／又はヘモグロビンの機能、代謝回転、若しくは合成を改善するため、慎重に選択されている。組成物は、異常ヘモグロビン症又はサラセミアの系レベルの病理に対する複数経路の有益な効果を可能にする。特に、組成物は、酸化ストレス、血管病、炎症、並びに赤血球及びヘモグロビンの増加した代謝回転、合成、及び機能不全を処置することを目的に個別に適合されている。
【００７７】
複合疾患、例えば異常ヘモグロビン症（例えば鎌状赤血球症）又はサラセミア（例えば、αサラセミア又はβサラセミア）は、複数の生物学的経路に影響する。健康の欠如は、維持又は支持されていない代謝経路及び機能の直接的結果であり得る。結果的に、ホメオスタシスを回復させ、健康を維持するには、多因子性手法を必要とする。本明細書に記載の組成物は、身体の正常な構造及び機能の支持に役立つホメオスタシスを支持及び維持するため、調節不全代謝の系全体への影響に対処するための介入候補である。
【００７８】
本明細書に記載の組成物は、複合疾患（例えば、異常ヘモグロビン症（例えばＳＣＤ）又はサラセミアを有する対象）及び健康全般の双方に関与する複数の代謝経路を直接的且つ同時に標的にするため、最適化されている。組成物中のアミノ酸実体各々の異なる比は、複数の代謝機能（例えば、赤血球の機能、代謝回転、若しくは合成；ヘモグロビンの機能、代謝回転、若しくは合成；血管機能；酸化ストレス（例えば、血液及び全身性酸化ストレスの一方又は双方）のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、又はそれ以上（例えば全て））を調節する場合の組成物の基本的役割を標的にし、最大化するように設計される。特に、本明細書に記載の組成物は、身体全体にわたる数多くの代謝機能にとって重要である、血液の健康を支持及び維持し得る。本明細書に記載の組成物は、血液の正常な構造及び機能を支持することを目的に、複数の生物学的経路を標的にするように設計されている。特に、本明細書に記載の組成物の投与により、例えば、異常ヘモグロビン症（例えば鎌状赤血球症）又はサラセミア（例えば、αサラセミア又はβサラセミア）を有する対象における、低下した血液生成、低下した血液の完全性、血漿及び／又はＲＢＣのアミノ酸不均衡、低下した血管の健康、又は炎症のうちの１つ、２つ、３つ、又はそれ以上が改善及び／又は治療され得る。いくつかの実施形態では、組成物の対象への投与により、以下：（ａ）造血要求の間での血球の増殖及び／若しくは成熟；（ｂ）脱水に対するＲＢＣの形態及び／若しくは機能；（ｃ）硬直；（ｄ）酸素運搬；（ｅ）ＲＢＣ代謝（例えば、グルタチオン及び一酸化窒素合成のための基質）を支持するためのアミノ酸平衡；（ｆ）ＲＯＳの生成；（ｇ）アミノ酸の末梢組織への送達；（ｈ）血管接着に対する防御；（ｉ）炎症；又は（ｊ）うっ滞のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、若しくはそれ以上が改善又は維持される。
【００７９】
定義
特許請求の範囲及び明細書で使用される用語は、特に明記しない限り、以下に記載するように定義される。
【００８０】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈が明確に別段の指示をしない限り、複数の指示対象を含むことに留意されたい。
【００８１】
本明細書で使用される用語「アミノ酸実体」は、遊離型又は塩型（又は双方）でのレボ（Ｌ）−アミノ酸、２０より少ないアミノ酸残基のペプチド（例えばオリゴペプチド、例えばジペプチド又はトリペプチド）中のＬ−アミノ酸残基、アミノ酸の誘導体、アミノ酸の前駆体、又はアミノ酸の代謝産物を指す（例えば、表１を参照）。アミノ酸実体は、遊離Ｌ−アミノ酸の生物学的機能性をもたらす能力がある、アミノ酸の誘導体、アミノ酸の前駆体、アミノ酸の代謝産物、又はアミノ酸の塩型を含む。アミノ酸実体は、全形態又は修飾形態のいずれか、例えば加水分解形態での、２０より多いアミノ酸残基の天然に存在するポリペプチド又はタンパク質を含まない。
【００８２】
アミノ酸の塩は、任意の摂取可能な塩を含む。医薬組成物の場合、組成物（例えば活性部分）中に存在するアミノ酸の塩型は、薬学的に許容できる塩である必要がある。具体例では、塩型は、アミノ酸の塩酸（ＨＣｌ）塩型である。
【００８３】
いくつかの実施形態では、アミノ酸実体の誘導体は、アミノ酸エステル（例えばアルキルエステル、例えばアミノ酸実体のエチルエステル又はメチルエステル）又はケト酸を含む。
【００８４】
【表１】
2021528414.tif 000002
【００８５】
【表２】
2021528414.tif 000003
【００８６】
【表３】
2021528414.tif 000004
【００８７】
「約」及び「およそ」は、一般に、測定の性質又は精度を考慮した、測定された量の許容可能な誤差の程度を意味する。例示的な誤差の程度は、所与の値又は値の範囲の１５パーセント（％）以内、典型的には１０％以内、より典型的には５％以内である。
【００８８】
「アミノ酸」とは、アミノ基（−ＮＨ２）、カルボン酸基（−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ）、及び中心の炭素原子を介して結合した側鎖を有する有機化合物を指し、必須及び非必須アミノ酸、並びに天然、非タンパク質原性、及び非天然アミノ酸を含む。
【００８９】
本明細書で使用される「活性部分」という用語は、全体として、本明細書に記載のような生物学的又は治療効果、例えば、赤血球の機能、代謝回転、若しくは合成；ヘモグロビンの機能、代謝回転、若しくは合成；又は血管機能に対する効果を有する能力を有する２つ以上のアミノ酸実体の組み合わせを意味する。例えば、活性部分は、病気又は障害に苦しんでいる対象の代謝機能障害をリバランスすることができる。本発明の活性部分は、他の生物学的に活性な成分を含有し得る。いくつかの例では、活性部分は、以下に詳細に説明されるように、４つ以上のアミノ酸実体の定義された組み合わせを含む。他の実施形態では、活性部分は、以下に詳細に説明されるように、アミノ酸実体の定義された組み合わせからなる。
【００９０】
個々のアミノ酸実体は、様々な量又は比率で組成物、例えば活性部分に存在し、これは、重量（例えば、グラム単位）、アミノ酸実体の相互の重量比、モル量、組成物の重量パーセント量、組成物のモルパーセント量、カロリー含量、組成物に寄与するパーセントカロリーなどとして説明することができる。一般に、本開示は、剤形におけるアミノ酸実体のグラム数、組成物の重量に対するアミノ酸実体の重量パーセント、即ち、組成物に存在するすべてのアミノ酸実体と任意のその他の生物学的に活性な成分の重量又は比率を提供する。いくつかの実施形態では、組成物、例えば活性部分は、薬学的に許容できる調製物（例えば医薬製品）として提供される。
【００９１】
本明細書で使用される「有効量」という用語は、症状を低減し、且つ／又は処置されるべき状態を改善する（例えば、所望される臨床反応を提供する）のに十分である、本発明の組成物中、特に本発明の医薬組成物中の活性部分の量を意味する。組成物で使用するための活性部分の有効量は、処置される特定の状態、状態の重症度、処置の期間、同時治療の性質、使用される特定の活性部分、利用される特定の薬学的に許容される賦形剤及び／又は担体、並びに主治医の知識及び専門技術による同様の要因によって変化する。
【００９２】
本明細書に記載の「医薬組成物」は、少なくとも１つの「活性部分」及び薬学的に許容できる担体又は賦形剤を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、治療薬として使用される。医薬品基準（ＧＭＰ；医薬品グレード成分）を満たす必要がない他の組成物は、栄養補助食品、医療食、又はサプリメントとして使用可能であり、これらは「消費者健康組成物」と称される。
【００９３】
本明細書で使用される用語「薬学的に許容できる」は、合理的なリスク・ベネフィット比に見合う、過剰な毒性、刺激作用、アレルギー反応、又は他の問題若しくは合併症を伴わない、ヒト及び動物の組織との接触における使用に適した、健全な医学的判断の範囲内である、アミノ酸、材料、賦形剤、組成物、及び／又は剤形を指す。具体的な実施形態では、「薬学的に許容できる」は、検出可能な内毒素がないことを意味する、又は内毒素レベルは、医薬製品において許容できるレベル未満である。
【００９４】
具体的な実施形態では、「薬学的に許容できる」は、製薬業界によって、又は製薬業界が１つ又は複数の製品品質パラメータを保証することを規制する機関若しくは団体（例えば、政府又は貿易機関若しくは団体）によって使用される基準が、医薬、医薬組成物、処置、又は他の治療において許容できる範囲内であることを意味する。製品品質パラメータは、製薬業界によって、又は機関若しくは団体、例えば政府又は貿易機関若しくは団体によって規制される任意のパラメータ、例えば限定はされないが、組成物；組成物の均一性；用量；用量の均一性；汚染物質又は不純物の存在、非存在、及び／又はレベル；並びに無菌性のレベル（例えば、微生物の存在、非存在、及び／又はレベル）であり得る。例示的な政府規制機関には：連邦医薬品局（ＦＤＡ）、欧州医薬品庁（ＥＭＡ）、ＳｗｉｓｓＭｅｄｉｃ、中国国家食品薬品監督管理局（ＣＦＤＡ）、又は日本の独立行政法人医薬品医療機器総合機構（ＰＭＤＡ）が含まれる。
【００９５】
用語「薬学的に許容できる賦形剤」は、生理学的に適合する活性物以外の医薬製剤中の成分を指す。薬学的に許容できる賦形剤は、限定はされないが、緩衝剤、甘味料、分散促進剤、香味料、苦味マスキング剤、天然着色料、人工着色料、安定剤、溶媒、又は保存剤を含み得る。具体的な実施形態では、薬学的に許容できる賦形剤は、クエン酸又はレシチンの一方又は双方を含む。
【００９６】
本明細書で使用される用語「非アミノ酸実体タンパク質成分」は、ペプチド（例えば、ポリペプチド又はオリゴペプチド）、その断片、又は分解ペプチドを指す。例示的な非アミノ酸実体タンパク質成分として、限定はされないが、乳清タンパク質、卵白タンパク質、大豆タンパク質、カゼイン、麻タンパク質、エンドウマメタンパク質、褐色米タンパク質、又はそれらの断片若しくは分解ペプチドの１つ又は複数が挙げられる。
【００９７】
本明細書で使用される用語「非タンパク質成分」は、タンパク質成分以外の組成物の任意の成分を指す。例示的な非タンパク質成分は、限定はされないが、糖（例えば、単糖（例えば、デキストロース、グルコース、又はフルクトース）、二糖、オリゴ糖、又は多糖）；脂質（例えば、硫黄含有脂質（例えばα−リポ酸）、長鎖トリグリセリド、オメガ３脂肪酸（例えば、ＥＰＡ、ＤＨＡ、ＳＴＡ、ＤＰＡ、又はＡＬＡ）、オメガ６脂肪酸（ＧＬＡ、ＤＧＬＡ、又はＬＡ）、中鎖トリグリセリド、又は中鎖脂肪酸）；ビタミン（例えば、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビオチン、又はパントテン酸）；ミネラル（亜鉛、セレン、鉄、銅、葉酸塩、亜リン酸、カリウム、マンガン、クロム、カルシウム、又はマグネシウム）；又はステロール（例えば、コレステロール）を含み得る。
【００９８】
組成物、製剤又は製品は、所望される臨床効果をもたらす場合、「治療的」である。所望される臨床効果は、疾患の進行を低下させ、且つ／又は疾患の１つ又は複数の症状を軽減することにより示すことができる。
【００９９】
「単位用量」又は「単位投与量」は、（例えば、複数のスティックパックで）特定の用量に配分された、特定の構成（例えば、カプセルシェルなど）の、活性成分と不活性成分（賦形剤）の特定の混合物と共に使用するために市場で販売されている形態のうちの１つ又は複数の製品を含む。
【０１００】
異常ヘモグロビン症（例えば鎌状赤血球症）又はサラセミアの本明細書で使用される「処置する」、「処置（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、又は「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は、異常ヘモグロビン症又はサラセミアを寛解させる（例えば、異常ヘモグロビン症又はサラセミア又はその臨床症状の少なくとも１つの発生を遅らせる、停止させる、又は減らす）こと；少なくとも１つの物理パラメータ、例えば患者により識別可能でなくてもよいものを軽減若しくは寛解すること；及び／又は異常ヘモグロビン症（例えば鎌状赤血球症）若しくはサラセミアの発症若しくは発生若しくは進行を予防するか若しくは遅らせることを指す。
【０１０１】
ブレンドの文脈において本明細書で使用される「十分な時間（ｔｉｍｅ  ｓｕｆｆｉｃｉｅｎｔ）」又は「十分な時間（ｓｕｆｆｉｃｉｅｎｔ  ｔｉｍｅ）」は、不純物を生成することも不均一性を誘発することもなくブレンド及び組成物均一性を達成するのに十分な時間を意味する。
【０１０２】
本明細書に記載の乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰは、「医薬組成物」として製剤化することができる。本明細書に記載の医薬組成物は、少なくとも１つのアミノ酸実体、例えば活性部分、及び薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、治療用又は医療用の食品として使用される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、栄養補助食品又はサプリメントとして使用される。
【０１０３】
本明細書で使用される「医薬品グレード」という用語は、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、又はその他の問題や合併症を引き起こすことのない、合理的な利益／リスク比に見合ったものである、ヒト及び動物の組織に接触して使用するのに適したアミノ酸、材料、賦形剤、組成物、及び／又は剤形を指す。いくつかの実施形態では、医薬品グレードとは、アミノ酸、材料、又は賦形剤が、モノグラフ、例えば、試験及び許容基準を詳述する米国薬局方（ＵＳＰ）、国民医薬品集（ＮＦ）、英国薬局方（ＢＰ）、欧州薬局方（ＥＰ）、又は日本薬局方（ＪＰ）のモノグラフの規格を満たすことを意味する。いくつかの実施形態では、医薬品グレードの意味は、アミノ酸、賦形剤、又は材料が少なくとも９９％の純度であることを含む。
【０１０４】
本明細書で使用される乾燥ブレンド調製物は、実質的に水を含まない複数のアミノ酸実体の組み合わせを意味する。いくつかの実施形態では、乾燥ブレンド調製物は粉末である。いくつかの実施形態では、乾燥ブレンド調製物は、１０重量％以下、９重量％以下、８重量％以下、７重量％以下、６重量％以下、５重量％以下、４重量％以下、３重量％以下、２重量％以下、又は１重量％以下の水を含む。いくつかの実施形態では、乾燥ブレンド調製物は、少なくとも４つのアミノ酸実体、例えば、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０のアミノ酸実体を含む。
【０１０５】
本明細書で使用される医薬品グレードの乾燥ブレンド調製物（ＰＧＤＢＰ）は、参照基準（例えば、１つ又は複数の参照基準）を満たし、複数の医薬品グレードのアミノ酸実体を含む乾燥ブレンド調製物である。ＰＧＤＢＰは、医薬組成物として製剤化することができ、例えば、ＰＧＤＢＰは、１つ又は複数の賦形剤及び／又は経口投与成分をさらに含み得る。いくつかの実施形態では、ＰＧＤＢＰを満たす参照基準は組成物均一性である。
【０１０６】
本明細書で使用される組成物均一性は、ブレンド均一性、部分均一性、又はその両方を含む、組み合わせ、例えば、乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰの成分の均一性の基準である。いくつかの実施形態では、組み合わせは、組み合わせのサンプリング点での成分（例えば、医薬品グレードのアミノ酸実体、賦形剤、又は経口投与成分）の量が参照値と所定量未満しか異ならない場合、組成物均一性、例えばブレンド均一性の基準を満たす。いくつかの実施形態では、参照値は、組み合わせの第２のサンプリング点における成分の量である。いくつかの実施形態では、参照値は、組み合わせ（例えば、乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰ）中に存在する成分（例えば、医薬品グレードのアミノ酸実体、賦形剤、又は経口投与成分）の量である。
【０１０７】
組み合わせ（例えば、乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰ）が部分に分割されるいくつかの実施形態では、一部における成分（例えば、医薬品グレードのアミノ酸実体、賦形剤、又は経口投与成分）の量が参照値と所定量未満しか異ならない場合、組み合わせの部分は、組成物均一性、例えば部分均一性の基準を満たす。いくつかの実施形態では、参照値は、第２の部分の成分の量である。いくつかの実施形態では、参照値は、Ｎ個の追加部分における成分の量を含み、ここで、ｎは、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、又は１００である。いくつかの実施形態では、参照値は、組み合わせ（例えば、乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰ）中に存在する成分（例えば、医薬品グレードのアミノ酸実体、賦形剤、又は経口投与成分）の量である。量は、絶対的（例えば、質量又は重量）又は相対的（例えば、全成分のパーセント）であり得る。いくつかの実施形態では、所定量は、例えば、参照値の２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、又は１％などであり得る。いくつかの実施形態では、所定量は１０％である（例えば、成分の量は、参照値と１０％未満しか異ならない）。
【０１０８】
本明細書で使用される分割は、患者又は対象に投与するために乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰの全部又は一部を部分に分割することを意味する。分割によって形成された部分は、小袋、バイアル、又は他の容器、例えばスティックパックで提供することができる。一実施形態では、分割によって形成される部分は、単位投与量の量、例えば、１つの単位投与量又は単位投与量の一部である（例えば、スティックパックは、２つのスティックパックが一緒に使用されて１回の単位用量を提供するように、単位用量の半分を含み得る）。いくつかの実施形態では、ＰＧＤＢＰ（例えば、参照基準を満たす）のみが、分割によって部分に分けられる。いくつかの実施形態では、分割によって形成される部分も参照基準を満たす。
【０１０９】
アミノ酸実体を含む組成物（例えば活性部分）
本明細書に記載のような本発明の組成物（活性部分）は、アミノ酸実体、例えば表１に示されるアミノ酸実体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ａ）ロイシンアミノ酸実体、ｂ）アルギニンアミノ酸実体、ｃ）グルタミンアミノ酸実体；ｄ）Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）実体；及びｅ）グリシンアミノ酸実体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ａ）ロイシンアミノ酸実体、ｂ）アルギニンアミノ酸実体、ｃ）グルタミンアミノ酸実体；ｄ）ＮＡＣ実体；及びｅ）カルニチン実体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ａ）ロイシンアミノ酸実体、ｂ）アルギニンアミノ酸実体、ｃ）グルタミンアミノ酸実体；ｄ）ＮＡＣ実体；並びにｅ）グリシンアミノ酸実体及びカルニチン実体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、（ｆ）バリンアミノ酸実体、（ｇ）ヒスチジンアミノ酸実体、又は（ｈ）リジンアミノ酸実体のうちの１つ、２つ、又はそれ以上（例えば全て）をさらに含む。
【０１１０】
いくつかの実施形態では、組成物は、（ａ）シトルリンアミノ酸実体又はアルギニンアミノ酸実体の一方又は双方、及び（ｂ）ＮＡＣ実体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、カルニチン実体又はグルタミンアミノ酸実体の一方又は双方をさらに含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ロイシンアミノ酸実体、ヒスチジンアミノ酸実体、リジンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、又はセリンアミノ酸実体のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、又はそれ以上（例えば全て）をさらに含む。
【０１１１】
特定の実施形態では、ロイシンアミノ酸実体は、Ｌ−ロイシン、β−ヒドロキシ−β−酪酸メチル（ＨＭＢ）、オキソ−ロイシン（α−ケトイソカプロン酸（ＫＩＣ））、イソバレリル−ＣｏＡ、ｎ−アセチル−ロイシン、又はこれらの組み合わせから選択される。
【０１１２】
特定の実施形態では、アルギニンアミノ酸実体は、Ｌ−アルギニン、クレアチン、アルギニノコハク酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、アグマチン、Ｎ−アセチル−アルギニン、又はこれらの組み合わせから選択される。
【０１１３】
特定の実施形態では、グルタミンアミノ酸実体は、Ｌ−グルタミン、グルタミン酸、カルバモイル−Ｐ、ｎ−アセチルグルタミン、又はこれらの組み合わせから選択される。
【０１１４】
特定の実施形態では、ＮＡＣ−アミノ酸実体は、ＮＡＣ、セリン、アセチルセリン、シスタチオニン、ホモシステイン、グルタチオン、又はこれらの組み合わせから選択される。
【０１１５】
特定の実施形態では、シトルリンアミノ酸実体は、Ｌ−シトルリン、オルニチン、カルバモイル−Ｐ、カルバモイル−Ｐ及びオルニチン、Ｎ−ヒドロキシル−アルギニン、アルギニノコハク酸、一酸化窒素、又はこれらの組み合わせから選択される。
【０１１６】
特定の実施形態では、カルニチン実体は、Ｌ−カルニチン、６−Ｎ−トリメチルリジン、Ｎ６−トリメチル−３−ＯＨ−リジン、アセチル−Ｌ−カルニチン、プロピオニル−Ｌ−カルニチン、Ｌ−カルニチンＬ−酒石酸、又はこれらの組み合わせから選択される。
【０１１７】
特定の実施形態では、セリンアミノ酸実体は、Ｌ−セリン、ホスホセリン、ｐ−ヒドロキシピルビン酸、Ｌ−グリシン、アセチルセリン、シスタチオニン、ホスファチジルセリン、又はこれらの組み合わせから選択される。
【０１１８】
特定の実施形態では、グリシンアミノ酸実体は、Ｌ−グリシン、Ｌ−セリン、サルコシン、ベタイン、ジメチルグリシン、グルタチオン、クレアチン、又はこれらの組み合わせから選択される。
【０１１９】
特定の実施形態では、バリンアミノ酸実体は、Ｌ−バリン、２−オキソ−吉草酸、イソブトリル−ＣｏＡ、Ｎ−アセチル−バリン、又はこれらの組み合わせから選択される。
【０１２０】
特定の実施形態では、ヒスチジンアミノ酸実体は、Ｌ−ヒスチジン、ヒスチジノール、ヒスチジナール、リボース−５−リン酸塩、カルノシン、ヒスタミン、ウロカニン酸、Ｎ−アセチル−ヒスチジン、又はこれらの組み合わせから選択される。
【０１２１】
特定の実施形態では、リジンアミノ酸実体は、Ｌ−リジン、ジアミノピメリン酸、アスパラギン酸、トリメチルリジン、サッカロピン、Ｎ−アセチル−リジン、又はこれらの組み合わせから選択される。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、（ａ）〜（ｈ）のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、又はそれ以上（例えば全て）は、組成物中の遊離アミノ酸形態であり、例えば、アミノ酸実体成分又は全成分の総重量の少なくとも４２ｗｔ．％、少なくとも７５ｗｔ．％、又は少なくとも９０ｗｔ．％が、（例えば乾燥形態の）組成物中の遊離アミノ酸形態での（ａ）〜（ｈ）のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、又はそれ以上（例えば全て）である。
【０１２３】
いくつかの実施形態では、（ａ）〜（ｈ）のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、又はそれ以上（例えば全て）は、組成物中の塩型であり、例えば、アミノ酸実体成分又は全成分の総重量の少なくとも０．０１ｗｔ．％、少なくとも０．１ｗｔ．％、少なくとも０．５ｗｔ．％、少なくとも１ｗｔ．％、少なくとも５ｗｔ．％、又は少なくとも１０ｗｔ．％、又はそれ以上が、組成物中の塩型での（ａ）〜（ｈ）のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれ以上（例えば全て）である。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、（ａ）〜（ｈ）のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、又はそれ以上（例えば全て）は、例えば、組成物のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも０．０１ｗｔ．％、少なくとも０．１ｗｔ．％、少なくとも０．５ｗｔ．％、少なくとも１ｗｔ．％、少なくとも５ｗｔ．％、若しくは少なくとも１０ｗｔ．％、又はそれ以上の量で、ジペプチド又はトリペプチドの一部として提供される。
【０１２５】
いくつかの実施形態では、（ａ）〜（ｊ）のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、又はそれ以上（例えば全て）は、組成物中の遊離アミノ酸形態であり、例えば、（例えば乾燥形態の）組成物の総重量の少なくとも４２ｗｔ．％、少なくとも４５ｗｔ．％、少なくとも５０ｗｔ．％、少なくとも５５ｗｔ．％、少なくとも６０ｗｔ．％、少なくとも６５ｗｔ．％、少なくとも７０ｗｔ．％、少なくとも７５ｗｔ．％、少なくとも８０ｗｔ．％、少なくとも８５ｗｔ．％、少なくとも９０ｗｔ．％、少なくとも９５ｗｔ．％、少なくとも９７ｗｔ．％、少なくとも９８ｗｔ．％、又はそれ以上は、組成物中の遊離アミノ酸形態での（ａ）〜（ｊ）のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、又はそれ以上（例えば全て）である。
【０１２６】
いくつかの実施形態では、（ａ）〜（ｊ）のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、又はそれ以上（例えば全て）は、組成物中の塩型であり、例えば、（例えば乾燥形態の）組成物の総重量の少なくとも０．０１ｗｔ．％、少なくとも０．１ｗｔ．％、少なくとも０．５ｗｔ．％、少なくとも１ｗｔ．％、少なくとも２ｗｔ．％、少なくとも３ｗｔ．％、少なくとも４ｗｔ．％、少なくとも５ｗｔ．％、少なくとも６ｗｔ．％、少なくとも７ｗｔ．％、少なくとも８ｗｔ．％、少なくとも９ｗｔ．％、若しくは少なくとも１０ｗｔ．％、又はそれ以上は、組成物中の塩型での（ａ）〜（ｊ）のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、又はそれ以上（例えば全て）である。
【０１２７】
いくつかの実施形態では、（ａ）〜（ｊ）のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、又はそれ以上（例えば全て）は、例えば、組成物のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも０．０１ｗｔ．％、少なくとも０．１ｗｔ．％、少なくとも０．５ｗｔ．％、少なくとも１ｗｔ．％、少なくとも２ｗｔ．％、少なくとも３ｗｔ．％、少なくとも４ｗｔ．％、少なくとも５ｗｔ．％、少なくとも６ｗｔ．％、少なくとも７ｗｔ．％、少なくとも８ｗｔ．％、少なくとも９ｗｔ．％、若しくは少なくとも１０ｗｔ．％、又はそれ以上の量で、ジペプチド又はトリペプチドの一部として提供される。
【０１２８】
特定の実施形態では、組成物（例えば活性部分）は、例えば実施例１に記載の通り、例えばマクロファージ細胞におけるＩＬ−６のアッセイを用いて、例えば抗体に基づく検出アッセイ、例えばＥＬＩＳＡを用いて検出されるとき、例えば参照組成物（例えば、溶媒対照；Ｌ−ロイシン、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−バリンを含むアミノ酸組成物；Ｌ−ロイシン、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−バリン、Ｌ−アルギニン、及びＬ−グルタミンを含むアミノ酸組成物；Ｌ−アルギニン単独；Ｌ−グルタミン単独；Ｌ−ロイシン単独；又はＬ−バリン単独）と比べて、炎症を少なくとも６０％、少なくとも７５％、又は少なくとも９０％低減する能力があるか、又は低減する。
【０１２９】
特定の実施形態では、組成物（例えば活性部分）は、例えば実施例１に記載の通り、例えばマクロファージ細胞におけるＴＮＦαのアッセイを用いて、例えば抗体に基づく検出アッセイ、例えばＥＬＩＳＡを用いて検出されるとき、例えば参照組成物（例えば、溶媒対照；Ｌ−ロイシン、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−バリンを含むアミノ酸組成物；Ｌ−アルギニン、Ｌ−グルタミン、及びＮＡＣを含むアミノ酸組成物；Ｌ−ロイシン、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−バリン、Ｌ−アルギニン、及びＬ−グルタミンを含むアミノ酸組成物；バリン；グルタミン；アルギニン；イソロイシン；ロイシン；又はＮＡＣ）と比べて、炎症を少なくとも６０％、少なくとも７５％、又は少なくとも９０％低減する能力があるか、又は低減する。
【０１３０】
ｉ．量
例示的な組成物（例えば活性部分）は、１．２ｇのロイシンアミノ酸実体；１．５ｇのアルギニンアミノ酸実体；３．６７ｇのグルタミンアミノ酸実体；０．４ｇのＮＡＣ実体；０．３３ｇのカルニチン実体；０．９ｇのグリシンアミノ酸実体；０．６ｇのバリンアミノ酸実体；０．６ｇのヒスチジンアミノ酸実体；及び０．６ｇのリジンアミノ酸実体を含み得る（例えば、表２中のｇ／用量を参照）。例示的な組成物は、０．６ｇのロイシンアミノ酸実体；０．７５ｇのアルギニンアミノ酸実体；１．８３ｇのグルタミンアミノ酸実体；０．２ｇのＮＡＣ実体；０．１７ｇのカルニチン実体；０．４５ｇのグリシンアミノ酸実体；０．３ｇのバリンアミノ酸実体；０．３ｇのヒスチジンアミノ酸実体；及び０．３ｇのリジンアミノ酸実体を含み得る。
【０１３１】
【表４】
2021528414.tif 000005
【０１３２】
いくつかの実施形態では、組成物は、１．２ｇ＋／−２０％のロイシンアミノ酸実体；１．５ｇ＋／−２０％のアルギニンアミノ酸実体；３．６７ｇ＋／−２０％のグルタミンアミノ酸実体；０．４ｇのＮＡＣ実体；０．３３ｇ＋／−２０％のカルニチン実体；０．９ｇ＋／−２０％のグリシンアミノ酸実体；０．６ｇ＋／−２０％のバリンアミノ酸実体；０．６ｇ＋／−２０％のヒスチジンアミノ酸実体；及び０．６ｇ＋／−２０％のリジンアミノ酸実体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、１．２ｇ＋／−１５％のロイシンアミノ酸実体；１．５ｇ＋／−１５％のアルギニンアミノ酸実体；３．６７ｇ＋／−１５％のグルタミンアミノ酸実体；０．４ｇのＮＡＣ実体；０．３３ｇ＋／−１５％のカルニチン実体；０．９ｇ＋／−１５％のグリシンアミノ酸実体；０．６ｇ＋／−１５％のバリンアミノ酸実体；０．６ｇ＋／−１５％のヒスチジンアミノ酸実体；及び０．６ｇ＋／−１５％のリジンアミノ酸実体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、１．２ｇ＋／−１０％のロイシンアミノ酸実体；１．５ｇ＋／−１０％のアルギニンアミノ酸実体；３．６７ｇ＋／−１０％のグルタミンアミノ酸実体；０．４ｇのＮＡＣ実体；０．３３ｇ＋／−１０％のカルニチン実体；０．９ｇ＋／−１０％のグリシンアミノ酸実体；０．６ｇ＋／−１０％のバリンアミノ酸実体；０．６ｇ＋／−１０％のヒスチジンアミノ酸実体；及び０．６ｇ＋／−１０％のリジンアミノ酸実体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、１．２ｇ＋／−５％のロイシンアミノ酸実体；１．５ｇ＋／−５％のアルギニンアミノ酸実体；３．６７ｇ＋／−５％のグルタミンアミノ酸実体；０．４ｇのＮＡＣ実体；０．３３ｇ＋／−５％のカルニチン実体；０．９ｇ＋／−５％のグリシンアミノ酸実体；０．６ｇ＋／−５％のバリンアミノ酸実体；０．６ｇ＋／−５％のヒスチジンアミノ酸実体；及び０．６ｇ＋／−５％のリジンアミノ酸実体を含む。
【０１３３】
いくつかの実施形態では、組成物は、０．６ｇ＋／−２０％のロイシンアミノ酸実体；０．７５ｇ＋／−２０％のアルギニンアミノ酸実体；１．８３ｇ＋／−２０％のグルタミンアミノ酸実体；０．２ｇ＋／−２０％のＮＡＣ実体；０．１７ｇ＋／−２０％のカルニチン実体；０．４５ｇ＋／−２０％のグリシンアミノ酸実体；０．３ｇ＋／−２０％のバリンアミノ酸実体；０．３ｇ＋／−２０％のヒスチジンアミノ酸実体；及び０．３ｇ＋／−２０％のリジンアミノ酸実体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、０．６ｇ＋／−１５％のロイシンアミノ酸実体；０．７５ｇ＋／−１５％のアルギニンアミノ酸実体；１．８３ｇ＋／−１５％のグルタミンアミノ酸実体；０．２ｇ＋／−１５％のＮＡＣ実体；０．１７ｇ＋／−１５％のカルニチン実体；０．４５ｇ＋／−１５％のグリシンアミノ酸実体；０．３ｇ＋／−１５％のバリンアミノ酸実体；０．３ｇ＋／−１５％のヒスチジンアミノ酸実体；及び０．３ｇ＋／−１５％のリジンアミノ酸実体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、０．６ｇ＋／−１０％のロイシンアミノ酸実体；０．７５ｇ＋／−１０％のアルギニンアミノ酸実体；１．８３ｇ＋／−１０％のグルタミンアミノ酸実体；０．２ｇ＋／−１０％のＮＡＣ実体；０．１７ｇ＋／−１０％のカルニチン実体；０．４５ｇ＋／−１０％のグリシンアミノ酸実体；０．３ｇ＋／−１０％のバリンアミノ酸実体；０．３ｇ＋／−１０％のヒスチジンアミノ酸実体；及び０．３ｇ＋／−１０％のリジンアミノ酸実体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、０．６ｇ＋／−５％のロイシンアミノ酸実体；０．７５ｇ＋／−５％のアルギニンアミノ酸実体；１．８３ｇ＋／−５％のグルタミンアミノ酸実体；０．２ｇ＋／−５％のＮＡＣ実体；０．１７ｇ＋／−５％のカルニチン実体；０．４５ｇ＋／−５％のグリシンアミノ酸実体；０．３ｇ＋／−５％のバリンアミノ酸実体；０．３ｇ＋／−５％のヒスチジンアミノ酸実体；及び０．３ｇ＋／−５％のリジンアミノ酸実体を含む。
【０１３４】
ｉｉ．比
例示的な組成物は、ロイシンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、及びＮＡＣ実体を３．６：４．５：１１：１．２の重量（ｗｔ．）比で含み得る。いくつかの実施形態では、ロイシンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、及びＮＡＣ実体のｗｔ．比は、３．６＋／−１５％：４．５＋／−１５％：１１＋／−１５％：１．２＋／−１５％である。いくつかの実施形態では、ロイシンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、及びＮＡＣ実体のｗｔ．比は、３．６＋／−１０％：４．５＋／−１０％：１１＋／−１０％：１．２＋／−１０％である。いくつかの実施形態では、ロイシンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、及びＮＡＣ実体のｗｔ．比は、３．６＋／−５％：４．５＋／−５％：１１＋／−５％：１．２＋／−５％である。
【０１３５】
例示的な組成物は、ロイシンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、ＮＡＣ実体、カルニチン実体、及びグリシンアミノ酸実体を３．６：４．５：１１：１．２：１：２．７の重量（ｗｔ．）比で含み得る。いくつかの実施形態では、ロイシンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、ＮＡＣ実体、カルニチン実体、及びグリシンアミノ酸実体のｗｔ．比は、３．６＋／−１５％：４．５＋／−１５％：１１＋／−１５％：１．２＋／−１５％：１＋／−１５％：２．７＋／−１５％である。いくつかの実施形態では、ロイシンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、ＮＡＣ実体、カルニチン実体、及びグリシンアミノ酸実体のｗｔ．比は、３．６＋／−１０％：４．５＋／−１０％：１１＋／−１０％：１．２＋／−１０％：１＋／−１０％：２．７＋／−１０％である。いくつかの実施形態では、ロイシンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、ＮＡＣ実体、カルニチン実体、及びグリシンアミノ酸実体のｗｔ．比は、３．６＋／−５％：４．５＋／−５％：１１＋／−５％：１．２＋／−５％：１＋／−５％：２．７＋／−５％である。
【０１３６】
ｉｉｉ．アミノ酸実体の関係
いくつかの実施形態では、ロイシンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、及びＮＡＣ実体のｗｔ．％は、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも４０ｗｔ．％、少なくとも５０ｗｔ．％、又は少なくとも６０ｗｔ．％であるが、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の８０ｗｔ．％以下である。
【０１３７】
いくつかの実施形態では、ロイシンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、ＮＡＣ実体、カルニチン実体、及びグリシン実体のｗｔ．％は、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも５０ｗｔ．％、少なくとも６０ｗｔ．％、又は少なくとも７０ｗｔ．％であるが、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の９５ｗｔ．％以下である。
【０１３８】
いくつかの実施形態では、ＮＡＣ実体のｗｔ．％は、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも２ｗｔ．％、少なくとも３ｗｔ．％、又は少なくとも４ｗｔ．％であるが、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の１０ｗｔ．％以下である。
【０１３９】
いくつかの実施形態では、グルタミンアミノ酸実体は、（例えば乾燥形態の）組成物中の任意の他のアミノ酸実体、非アミノ酸実体のタンパク質成分、又は非タンパク質成分の１つ、２つ、又はそれ以上（例えば全て）よりも大きいｗｔ．％で存在する。いくつかの実施形態では、グルタミンアミノ酸実体のｗｔ．％は、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも２０ｗｔ．％、少なくとも３０ｗｔ．％、又は少なくとも３５ｗｔ．％であるが、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の７０ｗｔ．％以下である。
【０１４０】
いくつかの実施形態では、カルニチン実体のｗｔ．％は、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも１ｗｔ．％、少なくとも２ｗｔ．％、又は少なくとも３ｗｔ．％であるが、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の１０ｗｔ．％以下である。
【０１４１】
いくつかの実施形態では、グリシンアミノ酸実体のｗｔ．％は、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも３ｗｔ．％、少なくとも５ｗｔ．％、又は少なくとも７ｗｔ．％であるが、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の２０ｗｔ．％以下である。
【０１４２】
いくつかの実施形態では、（例えば乾燥形態の）組成物中のグルタミンアミノ酸実体のｗｔ．％は、ロイシンアミノ酸実体のｗｔ．％よりも大きく、例えば、（例えば乾燥形態の）組成物中のグルタミンアミノ酸実体のｗｔ．％は、ロイシンアミノ酸実体のｗｔ．％よりも少なくとも３０％大きく、例えば、グルタミンアミノ酸実体のｗｔ．％は、ロイシンアミノ酸実体のｗｔ．％よりも少なくとも４０％、少なくとも５０％、又は少なくとも６０％大きい。
【０１４３】
いくつかの実施形態では、（例えば乾燥形態の）組成物中のグルタミンアミノ酸実体のｗｔ．％は、アルギニンアミノ酸実体のｗｔ．％よりも大きく、例えば、（例えば乾燥形態の）組成物中のグルタミンアミノ酸実体のｗｔ．％は、アルギニンアミノ酸実体のｗｔ．％よりも少なくとも２５％大きく、例えば、グルタミンアミノ酸実体のｗｔ．％は、アルギニンアミノ酸実体のｗｔ．％よりも少なくとも３５％、少なくとも４５％、又は少なくとも５５％大きい。
【０１４４】
いくつかの実施形態では、（例えば乾燥形態の）組成物中のグリシンアミノ酸実体のｗｔ．％は、カルニチン実体のｗｔ．％よりも大きく、例えば、（例えば乾燥形態の）組成物中のグリシンアミノ酸実体のｗｔ．％は、カルニチン実体のｗｔ．％よりも少なくとも３０％大きく、例えば、グリシンアミノ酸実体のｗｔ．％は、カルニチン実体のｗｔ．％よりも少なくとも４０％、少なくとも５０％、又は少なくとも６０％大きい。
【０１４５】
ｉｖ．組成物から排除又は制限するためのアミノ酸分子
いくつかの実施形態では、組成物は、卵白タンパク質、大豆タンパク質、カゼイン、麻タンパク質、エンドウマメタンパク質、又は褐色米タンパク質のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ若しくはそれ以上（例えば全て）から選択又は誘導される、２０を超えるアミノ酸残基長のペプチド（例えばタンパク質添加物）を含まないか、又はペプチドが存在する場合、ペプチドは、（例えば乾燥形態の）組成物中の非アミノ酸実体タンパク質成分又は全成分の総重量の１０重量（ｗｔ．）％未満、５ｗｔ．％未満、１ｗｔ．％未満、０．１ｗｔ．％未満、０．０５ｗｔ．％未満、０．０１ｗｔ．％未満で存在する。
【０１４６】
いくつかの実施形態では、組成物は、３〜１８、３〜１６、又は３〜１４の異なるアミノ酸実体の組み合わせを含み、例えば、この組み合わせは、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の総重量％の少なくとも４２ｗｔ．％、少なくとも７５ｗｔ．％、又は少なくとも９０ｗｔ．％を含む。
【０１４７】
いくつかの実施形態では、ジペプチド若しくはその塩又はトリペプチド若しくはその塩は、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の総重量の１０ｗｔ．％未満、０．５ｗｔ．％未満、０．１ｗｔ．％未満、０．０５ｗｔ．％未満、０．０１ｗｔ．％未満、０．００１ｗｔ．％未満、又はそれ以下で存在する。
【０１４８】
いくつかの実施形態では、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分の全グラムの少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、又はそれ以上は、（ａ）〜（ｈ）のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、又はそれ以上（例えば全て）からのものである。
【０１４９】
いくつかの実施形態では、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分からのカロリーの少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、又はそれ以上は、（ａ）〜（ｈ）のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、又はそれ以上（例えば全て）からのものである。
【０１５０】
いくつかの実施形態では、トリプトファンは、組成物に不在であるか、又は存在する場合、例えば、（例えば乾燥形態の）組成物の総重量の１０ｗｔ．％未満、９ｗｔ．％未満、８ｗｔ．％未満、７ｗｔ．％未満、６ｗｔ．％未満、５ｗｔ．％未満、４ｗｔ．％未満、３ｗｔ．％未満、２ｗｔ．％未満、１ｗｔ．％未満、０．５ｗｔ．％未満、０．１ｗｔ．％未満、０．０５ｗｔ．％未満、０．０１ｗｔ．％未満、０．００１ｗｔ．％未満、又はそれ以下で存在する。いくつかの実施形態では、トリプトファンは、存在する場合、遊離型で存在する。いくつかの実施形態では、トリプトファンは、存在する場合、塩型で存在する。いくつかの実施形態では、トリプトファンは、存在する場合、タンパク質が、インタクトなタンパク質又はタンパク質加水分解物として存在するかとは無関係に、乳清、カゼイン、ラクトアルブミン、又は栄養補助剤、医療食、若しくは類似製品として使用される任意の他のタンパク質でないという条件で、オリゴペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質で存在してもよい。いくつかの実施形態では、メチオニンは、組成物に不在であるか、又は存在する場合、例えば、（乾燥形態の）組成物の総重量の１０ｗｔ．％未満、５ｗｔ．％未満、１ｗｔ．％未満、０．５ｗｔ．％未満、０．１ｗｔ．％未満、０．０５ｗｔ．％未満、０．０１ｗｔ．％未満、０．００１ｗｔ．％未満、又はそれ以下で存在する。いくつかの実施形態では、プロリンは、組成物に不在であるか、又は存在する場合、例えば、（乾燥形態の）組成物の総重量の１０ｗｔ．％未満、５ｗｔ．％未満、１ｗｔ．％未満、０．５ｗｔ．％未満、０．１ｗｔ．％未満、０．０５ｗｔ．％未満、０．０１ｗｔ．％未満、０．００１ｗｔ．％未満、又はそれ以下で存在する。いくつかの実施形態では、メチオニン、プロリン、又はトリプトファンのうちの１つ、２つ、又は３つは、組成物に不在であるか、又は存在する場合、例えば、（乾燥形態の）組成物の総重量の１０ｗｔ．％未満、５ｗｔ．％未満、１ｗｔ．％未満、０．５ｗｔ．％未満、０．１ｗｔ．％未満、０．０５ｗｔ．％未満、０．０１ｗｔ．％未満、０．００１ｗｔ．％未満、又はそれ以下で存在する。
【０１５１】
いくつかの実施形態では、炭水化物（例えば、デキストロース、マルトデキストロース、スクロース、デキストリン、フルクトース、ガラクトース、グルコース、グリコゲン、高フルクトースコーンシロップ、ハチミツ、イノシトール、転化糖、ラクトース、レブロース、マルトース、糖蜜、サトウキビ、又はキシロースの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、又は１８）は、組成物に不在であるか、又は存在する場合、例えば、（乾燥形態の）組成物の総重量の１０ｗｔ．％未満、５ｗｔ．％未満、１ｗｔ．％未満、０．５ｗｔ．％未満、０．１ｗｔ．％未満、０．０５ｗｔ．％未満、０．０１ｗｔ．％未満、０．００１ｗｔ．％未満、又はそれ以下で存在する。
【０１５２】
いくつかの実施形態では、ビタミン（例えば、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ３、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、又はビタミンＤのうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、又は７つ）は、組成物に不在であるか、又は存在する場合、例えば、（乾燥形態の）組成物の総重量の１０ｗｔ．％未満、５ｗｔ．％未満、１ｗｔ．％未満、０．５ｗｔ．％未満、０．１ｗｔ．％未満、０．０５ｗｔ．％未満、０．０１ｗｔ．％未満、０．００１ｗｔ．％未満、又はそれ以下で存在する。
【０１５３】
いくつかの実施形態では、硝酸又は亜硝酸の一方又は双方は、組成物に不在であるか、又は存在する場合、例えば、（乾燥形態の）組成物の総重量の１０ｗｔ．％未満、５ｗｔ．％未満、１ｗｔ．％未満、０．５ｗｔ．％未満、０．１ｗｔ．％未満、０．０５ｗｔ．％未満、０．０１ｗｔ．％未満、０．００１ｗｔ．％未満、又はそれ以下で存在する。
【０１５４】
いくつかの実施形態では、４−ヒドロキシイソロイシンは、組成物に不在であるか、又は存在する場合、例えば、（乾燥形態の）組成物の総重量の１０ｗｔ．％未満、５ｗｔ．％未満、１ｗｔ．％未満、０．５ｗｔ．％未満、０．１ｗｔ．％未満、０．０５ｗｔ．％未満、０．０１ｗｔ．％未満、０．００１ｗｔ．％未満、又はそれ以下で存在する。
【０１５５】
いくつかの実施形態では、生菌（例えば、バチルス・プロバイオティック（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ））は、組成物に不在であるか、又は存在する場合、例えば、（乾燥形態の）組成物の総重量の１０ｗｔ．％未満、５ｗｔ．％未満、１ｗｔ．％未満、０．５ｗｔ．％未満、０．１ｗｔ．％未満、０．０５ｗｔ．％未満、０．０１ｗｔ．％未満、０．００１ｗｔ．％未満、又はそれ以下で存在する。
【０１５６】
いくつかの実施形態では、フェニル酢酸は、組成物に不在であるか、又は存在する場合、例えば、（乾燥形態の）組成物の総重量の１０ｗｔ．％未満、５ｗｔ．％未満、１ｗｔ．％未満、０．５ｗｔ．％未満、０．１ｗｔ．％未満、０．０５ｗｔ．％未満、０．０１ｗｔ．％未満、０．００１ｗｔ．％未満、又はそれ以下で存在する。
【０１５７】
いくつかの実施形態では、ゼラチン（例えば、ゼラチンカプセル）は、組成物に不在であるか、又は存在する場合、例えば、（乾燥形態の）組成物の総重量の１０ｗｔ．％未満、５ｗｔ．％未満、１ｗｔ．％未満、０．５ｗｔ．％未満、０．１ｗｔ．％未満、０．０５ｗｔ．％未満、０．０１ｗｔ．％未満、０．００１ｗｔ．％未満、又はそれ以下で存在する。
【０１５８】
いくつかの実施形態では、Ｓ−アリルシステイン、Ｓ−アリルメルカプトシステイン、又はフルクトシル−アルギニンのうちの１つ、２つ、又は３つは、組成物に不在であるか、又は存在する場合、例えば、（乾燥形態の）組成物の総重量の１０ｗｔ．％未満、５ｗｔ．％未満、１ｗｔ．％未満、０．５ｗｔ．％未満、０．１ｗｔ．％未満、０．０５ｗｔ．％未満、０．０１ｗｔ．％未満、０．００１ｗｔ．％未満、又はそれ以下で存在する。
【０１５９】
ｖ．量及び比
例示的な組成物（例えば活性部分）は、０．６ｇ＋／−２０％のロイシンアミノ酸実体、１．４ｇ＋／−２０％のアルギニンアミノ酸実体、１．５ｇ＋／−２０％のグルタミンアミノ酸実体、０．２６ｇ＋／−２０％のＮＡＣ実体、０．２ｇ＋／−２０％のカルニチン実体、０．７５ｇ＋／−２０％のセリンアミノ酸実体、０．３ｇ＋／−２０％のバリンアミノ酸実体、０．３ｇ＋／−２０％のヒスチジンアミノ酸実体、０．３ｇ＋／−２０％のリジンアミノ酸実体、及び０．９ｇ＋／−２０％のシトルリンアミノ酸実体を含み得る（例えば、表３中の毎日２回投与される５スティックパックに対するｇ／スティックパックを参照）。
【０１６０】
【表５】
2021528414.tif 000006
【０１６１】
例示的な組成物（例えば活性部分）は、０．７５ｇ＋／−２０％のロイシンアミノ酸実体、１．７５ｇ＋／−２０％のアルギニンアミノ酸実体、１．８７５ｇ＋／−２０％のグルタミンアミノ酸実体、０．３２５ｇ＋／−２０％のＮＡＣ実体、０．２５ｇ＋／−２０％のカルニチン実体、０．９３７５ｇ＋／−２０％のセリンアミノ酸実体、０．３７５ｇ＋／−２０％のバリンアミノ酸実体、０．３７５ｇ＋／−２０％のヒスチジンアミノ酸実体、０．３７５ｇ＋／−２０％のリジンアミノ酸実体、及び１．１２５ｇ＋／−２０％のシトルリンアミノ酸実体を含み得る（例えば、表３中の毎日２回投与される４スティックパックに対するｇ／スティックパックを参照）。
【０１６２】
例示的な組成物（例えば活性部分）は、１ｇ＋／−２０％のロイシンアミノ酸実体、２．３３ｇ＋／−２０％のアルギニンアミノ酸実体、２．５ｇ＋／−２０％のグルタミンアミノ酸実体、０．４３ｇ＋／−２０％のＮＡＣ実体、０．３３ｇ＋／−２０％のカルニチン実体、１．２５ｇ＋／−２０％のセリンアミノ酸実体、０．５ｇ＋／−２０％のバリンアミノ酸実体、０．５ｇ＋／−２０％のヒスチジンアミノ酸実体、０．５ｇ＋／−２０％のリジンアミノ酸実体、及び１．５ｇ＋／−２０％のシトルリンアミノ酸実体を含み得る（例えば、表３中の毎日２回投与される３スティックパックに対するｇ／スティックパックを参照）。
【０１６３】
例示的な組成物（例えば活性部分）は、３ｇ＋／−２０％のロイシンアミノ酸実体、７ｇ＋／−２０％のアルギニンアミノ酸実体、７．５ｇ＋／−２０％のグルタミンアミノ酸実体、１．３ｇ＋／−２０％のＮＡＣ実体、１ｇ＋／−２０％のカルニチン実体、３．７５ｇ＋／−２０％のセリンアミノ酸実体、１．５ｇ＋／−２０％のバリンアミノ酸実体、１．５ｇ＋／−２０％のヒスチジンアミノ酸実体、１．５ｇ＋／−２０％のリジンアミノ酸実体、及び４．５ｇ＋／−２０％のシトルリンアミノ酸実体を含み得る（例えば、表３中の毎日２回投与されるｇ／用量を参照）。
【０１６４】
例示的な組成物（例えば活性部分）は、６ｇ＋／−２０％のロイシンアミノ酸実体、１４ｇ＋／−２０％のアルギニンアミノ酸実体、１５ｇ＋／−２０％のグルタミンアミノ酸実体、２．６ｇ＋／−２０％のＮＡＣ実体、２ｇ＋／−２０％のカルニチン実体、７．５ｇ＋／−２０％のセリンアミノ酸実体、３ｇ＋／−２０％のバリンアミノ酸実体、３ｇ＋／−２０％のヒスチジンアミノ酸実体、３ｇ＋／−２０％のリジンアミノ酸実体、及び９ｇ＋／−２０％のシトルリンアミノ酸実体を含み得る（例えば、表３中の１日総用量を参照）。
【０１６５】
例示的な組成物は、ロイシンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、ＮＡＣ実体、カルニチン実体、セリンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、ヒスチジンアミノ酸実体、リジンアミノ酸実体、及びシトルリンアミノ酸実体の重量（ｗｔ．）比を３＋／−１５％：７＋／−１５％：７．５＋／−１５％：１．３＋／−１５％：１＋／−１５％：３．７５＋／−１５％：１．５＋／−１５％：１．５＋／−１５％：１．５＋／−１５％：４．５＋／−１５％で含み得る（例えば、表３中の重量比を参照）。
【０１６６】
例示的な組成物（例えば活性部分）は、０．３５ｇ＋／−２０％のロイシンアミノ酸実体、０．８ｇ＋／−２０％のアルギニンアミノ酸実体、１ｇ＋／−２０％のグルタミンアミノ酸実体、０．１８ｇ＋／−２０％のＮＡＣ実体、０．２ｇ＋／−２０％のカルニチン実体、０．４３ｇ＋／−２０％のセリンアミノ酸実体、０．１８ｇ＋／−２０％のバリンアミノ酸実体、０．１８ｇ＋／−２０％のヒスチジンアミノ酸実体、０．１８ｇ＋／−２０％のリジンアミノ酸実体、及び０．５２ｇ＋／−２０％のシトルリンアミノ酸実体を含み得る（例えば、表４Ａ中の毎日２回投与された５スティックパックに対するｇ／スティックパックを参照）。
【０１６７】
【表６】
2021528414.tif 000007
【０１６８】
例示的な組成物（例えば活性部分）は、０．４４ｇ＋／−２０％のロイシンアミノ酸実体、１ｇ＋／−２０％のアルギニンアミノ酸実体、１．２５ｇ＋／−２０％のグルタミンアミノ酸実体、０．２３ｇ＋／−２０％のＮＡＣ実体、０．２５ｇ＋／−２０％のカルニチン実体、０．５４ｇ＋／−２０％のセリンアミノ酸実体、０．２３ｇ＋／−２０％のバリンアミノ酸実体、０．２３ｇ＋／−２０％のヒスチジンアミノ酸実体、０．２３ｇ＋／−２０％のリジンアミノ酸実体、及び０．６５ｇ＋／−２０％のシトルリンアミノ酸実体を含み得る（例えば、表４Ａ中の毎日２回投与された４スティックパックに対するｇ／スティックパックを参照）。
【０１６９】
例示的な組成物（例えば活性部分）は、０．５８ｇ＋／−２０％のロイシンアミノ酸実体、１．３３ｇ＋／−２０％のアルギニンアミノ酸実体、１．６７ｇ＋／−２０％のグルタミンアミノ酸実体、０．３ｇ＋／−２０％のＮＡＣ実体、０．３３ｇ＋／−２０％のカルニチン実体、０．７２ｇ＋／−２０％のセリンアミノ酸実体、０．３ｇ＋／−２０％のバリンアミノ酸実体、０．３ｇ＋／−２０％のヒスチジンアミノ酸実体、０．３ｇ＋／−２０％のリジンアミノ酸実体、及び０．８７ｇ＋／−２０％のシトルリンアミノ酸実体を含み得る（例えば、表４Ａ中の毎日２回投与された３スティックパックに対するｇ／スティックパックを参照）。
【０１７０】
例示的な組成物（例えば活性部分）は、１．７５ｇ＋／−２０％のロイシンアミノ酸実体、４ｇ＋／−２０％のアルギニンアミノ酸実体、５ｇ＋／−２０％のグルタミンアミノ酸実体、０．９ｇ＋／−２０％のＮＡＣ実体、１ｇ＋／−２０％のカルニチン実体、２．１５ｇ＋／−２０％のセリンアミノ酸実体、０．９ｇ＋／−２０％のバリンアミノ酸実体、０．９ｇ＋／−２０％のヒスチジンアミノ酸実体、０．９ｇ＋／−２０％のリジンアミノ酸実体、及び２．６ｇ＋／−２０％のシトルリンアミノ酸実体を含み得る（例えば、表４Ａ中のｇ／用量を参照）。
【０１７１】
例示的な組成物（例えば活性部分）は、３．５ｇ＋／−２０％のロイシンアミノ酸実体、８ｇ＋／−２０％のアルギニンアミノ酸実体、１０ｇ＋／−２０％のグルタミンアミノ酸実体、１．８ｇ＋／−２０％のＮＡＣ実体、２ｇ＋／−２０％のカルニチン実体、４．３ｇ＋／−２０％のセリンアミノ酸実体、１．８ｇ＋／−２０％のバリンアミノ酸実体、１．８ｇ＋／−２０％のヒスチジンアミノ酸実体、１．８ｇ＋／−２０％のリジンアミノ酸実体、及び５．２ｇ＋／−２０％のシトルリンアミノ酸実体を含み得る（例えば、表４Ａ中の１日総用量を参照）。
【０１７２】
例示的な組成物は、ロイシンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、ＮＡＣ実体、カルニチン実体、セリンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、ヒスチジンアミノ酸実体、リジンアミノ酸実体、及びシトルリンアミノ酸実体の重量（ｗｔ．）比を、１．９４＋／−１５％：４．４４＋／−１５％：５．５６＋／−１５％：１＋／−１５％：１．１１＋／−１５％：２．３９＋／−１５％：１＋／−１５％：１＋／−１５％：１＋／−１５％：２．８９＋／−１５％で含み得る。
【０１７３】
【表７】
2021528414.tif 000008
【０１７４】
例示的な組成物（例えば活性部分）は、３ｇ＋／−２０％のロイシンアミノ酸実体、６ｇ＋／−２０％のアルギニンアミノ酸実体、５ｇ＋／−２０％のグルタミンアミノ酸実体、１．３ｇ＋／−２０％のＮＡＣ実体、１ｇ＋／−２０％のカルニチン実体、２．５ｇ＋／−２０％のセリンアミノ酸実体、１ｇ＋／−２０％のバリンアミノ酸実体、１ｇ＋／−２０％のヒスチジンアミノ酸実体、１．５ｇ＋／−２０％のリジンアミノ酸実体、及び４ｇ＋／−２０％のシトルリンアミノ酸実体を含み得る（例えば、表４Ｂ中のｇ／用量を参照）。例示的な組成物（例えば活性部分）は、６ｇ＋／−２０％のロイシンアミノ酸実体、１２ｇ＋／−２０％のアルギニンアミノ酸実体、１０ｇ＋／−２０％のグルタミンアミノ酸実体、２．６ｇ＋／−２０％のＮＡＣ実体、２ｇ＋／−２０％のカルニチン実体、５ｇ＋／−２０％のセリンアミノ酸実体、２ｇ＋／−２０％のバリンアミノ酸実体、２ｇ＋／−２０％のヒスチジンアミノ酸実体、３ｇ＋／−２０％のリジンアミノ酸実体、及び８ｇ＋／−２０％のシトルリンアミノ酸実体を含み得る（例えば、表４Ｂ中の１日総用量を参照）。
【０１７５】
例示的な組成物は、ロイシンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、ＮＡＣ実体、カルニチン実体、セリンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、ヒスチジンアミノ酸実体、リジンアミノ酸実体、及びシトルリンアミノ酸実体の重量（ｗｔ．）比を、３＋／−１５％：６＋／−１５％：５＋／−１５％：１．３＋／−１５％：１＋／−１５％：２．５＋／−１５％：１＋／−１５％：１＋／−１５％：１．５＋／−１５％：４＋／−１５％で含み得る。
【０１７６】
ｖ．アミノ酸実体の関係
いくつかの実施形態では、ロイシンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、ＮＡＣ実体、カルニチン実体、セリンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、ヒスチジンアミノ酸実体、リジンアミノ酸実体、及びシトルリンアミノ酸実体のｗｔ．％は、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも７０ｗｔ．％、少なくとも７５ｗｔ．％、少なくとも８０ｗｔ．％、少なくとも８５ｗｔ．％、少なくとも９０ｗｔ．％、少なくとも９５ｗｔ．％、少なくとも９７ｗｔ．％、少なくとも９８ｗｔ．％、又はそれ以上である。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、ロイシンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、セリンアミノ酸実体、及びシトルリンアミノ酸実体のｗｔ．％は、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも５０ｗｔ．％、少なくとも５５ｗｔ．％、少なくとも６０ｗｔ．％、少なくとも６５ｗｔ．％、少なくとも７０ｗｔ．％、少なくとも７５ｗｔ．％、少なくとも７６ｗｔ．％、少なくとも７７ｗｔ．％、又はそれ以上である。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、ロイシンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、及びセリンアミノ酸実体のｗｔ．％は、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも４０ｗｔ．％、少なくとも４５ｗｔ．％、少なくとも５０ｗｔ．％、少なくとも５５ｗｔ．％、少なくとも６０ｗｔ．％、少なくとも６１ｗｔ．％、少なくとも６２ｗｔ．％、少なくとも６３ｗｔ．％、少なくとも６５ｗｔ．％、又はそれ以上である。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、ロイシンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、セリンアミノ酸実体、シトルリンアミノ酸、及びカルニチン実体のｗｔ．％は、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも５０ｗｔ．％、少なくとも５５ｗｔ．％、少なくとも６０ｗｔ．％、少なくとも６５ｗｔ．％、少なくとも７０ｗｔ．％、少なくとも７５ｗｔ．％、少なくとも８０ｗｔ．％、少なくとも８１ｗｔ．％、少なくとも８２ｗｔ．％、又はそれ以上である。
【０１８０】
いくつかの実施形態では、ロイシンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、シトルリンアミノ酸、及びグルタミンアミノ酸実体のｗｔ．％は、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも５０ｗｔ．％、少なくとも５５ｗｔ．％、少なくとも６０ｗｔ．％、少なくとも６１ｗｔ．％、少なくとも６２ｗｔ．％、少なくとも６３ｗｔ．％、少なくとも６４ｗｔ．％、少なくとも６５ｗｔ．％、少なくとも６６ｗｔ．％、又はそれ以上である。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、ロイシンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、及びグルタミンアミノ酸実体のｗｔ．％は、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも３０ｗｔ．％、少なくとも３５ｗｔ．％、少なくとも４０ｗｔ．％、少なくとも４５ｗｔ．％、少なくとも５０ｗｔ．％、少なくとも５１ｗｔ．％、少なくとも５２ｗｔ．％、少なくとも５３ｗｔ．％、又はそれ以上である。
【０１８２】
いくつかの実施形態では、ロイシンアミノ酸実体のｗｔ．％は、（例えば乾燥形態の）組成物中のＮＡＣ実体、カルニチン実体、バリンアミノ酸実体、ヒスチジンアミノ酸実体、又はリジンアミノ酸実体の１つ、２つ、３つ、４つ、又は５つのｗｔ．％よりも大きい、例えば、少なくとも５０ｗｔ．％、少なくとも５５ｗｔ．％、少なくとも６０ｗｔ．％、少なくとも６５ｗｔ．％、少なくとも７０ｗｔ．％、少なくとも７１ｗｔ．％、少なくとも７２ｗｔ．％、少なくとも７３ｗｔ．％、少なくとも７４ｗｔ．％、少なくとも７５ｗｔ．％、又はそれ以上大きい。
【０１８３】
いくつかの実施形態では、アルギニンアミノ酸実体又はグルタミンアミノ酸実体のｗｔ．％は、単独で又は組み合わせて、（例えば乾燥形態の）組成物中のロイシンアミノ酸実体、ＮＡＣ実体、カルニチン実体、バリンアミノ酸実体、ヒスチジンアミノ酸実体、又はリジンアミノ酸実体の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つのｗｔ．％よりも大きい、例えば、少なくとも５０ｗｔ．％、少なくとも５５ｗｔ．％、少なくとも６０ｗｔ．％、少なくとも６５ｗｔ．％、少なくとも７０ｗｔ．％、少なくとも７５ｗｔ．％、少なくとも８０ｗｔ．％、少なくとも８５ｗｔ．％、少なくとも９０ｗｔ．％、少なくとも９５ｗｔ．％、又はそれ以上大きい。
【０１８４】
いくつかの実施形態では、ＮＡＣ実体のｗｔ．％は、（例えば乾燥形態の）組成物中のカルニチン実体のｗｔ．％よりも大きい、例えば、少なくとも５ｗｔ．％、少なくとも１０ｗｔ．％、少なくとも１５ｗｔ．％、少なくとも２０ｗｔ．％、少なくとも２５ｗｔ．％、少なくとも２５ｗｔ．％、少なくとも２８ｗｔ．％、少なくとも２９ｗｔ．％、少なくとも３０ｗｔ．％、又はそれ以上大きい。
【０１８５】
いくつかの実施形態では、カルニチン実体のｗｔ．％は、（例えば乾燥形態の）組成物中のＮＡＣ実体のｗｔ．％よりも大きい、例えば、少なくとも２ｗｔ．％、少なくとも３ｗｔ．％、少なくとも４ｗｔ．％、少なくとも５ｗｔ．％、少なくとも６ｗｔ．％、少なくとも７ｗｔ．％、少なくとも８ｗｔ．％、少なくとも９ｗｔ．％、少なくとも１０ｗｔ．％、少なくとも１１ｗｔ．％、又はそれ以上大きい。
【０１８６】
いくつかの実施形態では、シトルリンアミノ酸又はセリンアミノ酸のｗｔ．％は、単独で又は組み合わせて、（例えば乾燥形態の）組成物中のロイシンアミノ酸実体、ＮＡＣ実体、カルニチン実体、バリンアミノ酸実体、ヒスチジンアミノ酸実体、又はリジンアミノ酸実体のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つのｗｔ．％よりも大きい、例えば、少なくとも５ｗｔ．％、少なくとも１０ｗｔ．％、少なくとも１５ｗｔ．％、少なくとも１６ｗｔ．％、少なくとも１７ｗｔ．％、少なくとも１８ｗｔ．％、少なくとも１９ｗｔ．％、少なくとも２０ｗｔ．％、少なくとも２１ｗｔ．％、少なくとも２２ｗｔ．％、又はそれ以上大きい。
【０１８７】
いくつかの実施形態では、バリンアミノ酸実体、ヒスチジンアミノ酸実体、及びリジンアミノ酸実体のｗｔ．％は、組み合わせて、（例えば乾燥形態の）組成物中のロイシンアミノ酸実体、ＮＡＣ実体、又はカルニチン実体のうちの１つ、２つ、又は３つのｗｔ．％よりも大きい、例えば、少なくとも２０ｗｔ．％、少なくとも２５ｗｔ．％、少なくとも３０ｗｔ．％、少なくとも３５ｗｔ．％、少なくとも４０ｗｔ．％、少なくとも４５ｗｔ．％、少なくとも４７ｗｔ．％、少なくとも４８ｗｔ．％、少なくとも５０ｗｔ．％、又はそれ以上大きい。
【０１８８】
いくつかの実施形態では、ロイシンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、及びグルタミンアミノ酸実体のｗｔ．％は、組み合わせて、ＮＡＣ実体、カルニチン実体、セリンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、ヒスチジンアミノ酸実体、リジンアミノ酸実体、又はシトルリンアミノ酸実体のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、又は７つのｗｔ．％よりも大きい、例えば、少なくとも３０ｗｔ．％、少なくとも３５ｗｔ．％、少なくとも４０ｗｔ．％、少なくとも４５ｗｔ．％、少なくとも５０ｗｔ．％、少なくとも５５ｗｔ．％、少なくとも６０ｗｔ．％、少なくとも６５ｗｔ．％、又はそれ以上大きい。
【０１８９】
いくつかの実施形態では、アルギニンアミノ酸実体及びシトルリンアミノ酸実体のｗｔ．％は、組み合わせて、ロイシンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、ＮＡＣ実体、カルニチン実体、セリンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、ヒスチジンアミノ酸実体、又はリジンアミノ酸実体のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、又は８つのｗｔ．％よりも大きい、例えば、少なくとも５ｗｔ．％、少なくとも１０ｗｔ．％、少なくとも１５ｗｔ．％、少なくとも２０ｗｔ．％、少なくとも２５ｗｔ．％、少なくとも２５ｗｔ．％、少なくとも２８ｗｔ．％、少なくとも２９ｗｔ．％、少なくとも３０ｗｔ．％、又はそれ以上大きい。
【０１９０】
いくつかの実施形態では、ロイシンアミノ酸実体のｗｔ．％は、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも３ｗｔ．％、少なくとも４ｗｔ．％、少なくとも５ｗｔ．％、少なくとも６ｗｔ．％、少なくとも７ｗｔ．％、少なくとも８ｗｔ．％、又はそれ以上であるが、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の４０ｗｔ．％以下である。特定の実施形態では、ロイシンアミノ酸実体のｗｔ．％は、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも９ｗｔ．％である。
【０１９１】
いくつかの実施形態では、アルギニンアミノ酸実体のｗｔ．％は、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも５ｗｔ．％、少なくとも１０ｗｔ．％、少なくとも１１ｗｔ．％、少なくとも１２ｗｔ．％、少なくとも１３ｗｔ．％、少なくとも１４ｗｔ．％、少なくとも１５ｗｔ．％、少なくとも１６ｗｔ．％、少なくとも１７ｗｔ．％、少なくとも１８ｗｔ．％、少なくとも１９ｗｔ．％、又はそれ以上であるが、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の６０ｗｔ．％以下である。いくつかの実施形態では、アルギニンアミノ酸実体のｗｔ．％は、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも２０ｗｔ．％である。
【０１９２】
いくつかの実施形態では、グルタミンアミノ酸実体のｗｔ．％は、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも５ｗｔ．％、少なくとも１０ｗｔ．％、少なくとも１５ｗｔ．％、少なくとも２０ｗｔ．％、少なくとも２１ｗｔ．％、少なくとも２２ｗｔ．％、少なくとも２３ｗｔ．％、少なくとも２４ｗｔ．％、又はそれ以上であるが、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の６０ｗｔ．％以下である。
【０１９３】
いくつかの実施形態では、ＮＡＣ実体のｗｔ．％は、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも１ｗｔ．％、少なくとも２ｗｔ．％、少なくとも３ｗｔ．％、少なくとも４ｗｔ．％、又はそれ以上であるが、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の３０ｗｔ．％以下である。
【０１９４】
いくつかの実施形態では、カルニチン実体のｗｔ．％は、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも１ｗｔ．％、少なくとも２ｗｔ．％、少なくとも３ｗｔ．％、少なくとも４ｗｔ．％、又はそれ以上であるが、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の３０ｗｔ．％以下である。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、セリンアミノ酸実体のｗｔ．％は、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも５ｗｔ．％、少なくとも６ｗｔ．％、少なくとも７ｗｔ．％、少なくとも８ｗｔ．％、少なくとも９ｗｔ．％、少なくとも１０ｗｔ．％、又はそれ以上であるが、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の５０ｗｔ．％以下である。いくつかの実施形態では、セリンアミノ酸実体のｗｔ．％は、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも１１ｗｔ．％、又はそれ以上である。
【０１９６】
いくつかの実施形態では、バリンアミノ酸実体のｗｔ．％は、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも１ｗｔ．％、少なくとも２ｗｔ．％、少なくとも３ｗｔ．％、少なくとも４ｗｔ．％、又はそれ以上であるが、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の３５ｗｔ．％以下である。
【０１９７】
いくつかの実施形態では、ヒスチジンアミノ酸実体のｗｔ．％は、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも１ｗｔ．％、少なくとも２ｗｔ．％、少なくとも３ｗｔ．％、少なくとも４ｗｔ．％、又はそれ以上であるが、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の３５ｗｔ．％以下である。
【０１９８】
いくつかの実施形態では、リジンアミノ酸実体のｗｔ．％は、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも１ｗｔ．％、少なくとも２ｗｔ．％、少なくとも３ｗｔ．％、少なくとも４ｗｔ．％、又はそれ以上であるが、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の３５ｗｔ．％以下である。
【０１９９】
いくつかの実施形態では、シトルリンアミノ酸実体のｗｔ．％は、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも５ｗｔ．％、少なくとも１０ｗｔ．％、少なくとも１１ｗｔ．％、少なくとも１２ｗｔ．％、少なくとも１３ｗｔ．％、又はそれ以上であるが、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の６０ｗｔ．％以下である。
【０２００】
いくつかの実施形態では、ロイシンアミノ酸実体のｗｔ．％は、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも５ｗｔ．％、少なくとも６ｗｔ．％、少なくとも７ｗｔ．％、少なくとも８ｗｔ．％、少なくとも９ｗｔ．％、少なくとも１０ｗｔ．％、又はそれ以上であるが、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の４０ｗｔ．％以下である。
【０２０１】
いくつかの実施形態では、アルギニンアミノ酸実体のｗｔ．％は、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも１０ｗｔ．％、少なくとも１１ｗｔ．％、少なくとも１２ｗｔ．％、少なくとも１３ｗｔ．％、少なくとも１４ｗｔ．％、少なくとも１５ｗｔ．％、少なくとも１６ｗｔ．％、少なくとも１７ｗｔ．％、少なくとも１８ｗｔ．％、少なくとも１９ｗｔ．％、少なくとも２０ｗｔ．％、少なくとも２１ｗｔ．％、又はそれ以上であるが、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の６０ｗｔ．％以下である。
【０２０２】
いくつかの実施形態では、グルタミンアミノ酸実体のｗｔ．％は、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも５ｗｔ．％、少なくとも１０ｗｔ．％、少なくとも１５ｗｔ．％、少なくとも１６ｗｔ．％、少なくとも１７ｗｔ．％、少なくとも１８ｗｔ．％、少なくとも１９ｗｔ．％、又はそれ以上であるが、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の５０ｗｔ．％以下である。
【０２０３】
いくつかの実施形態では、リジンアミノ酸実体のｗｔ．％は、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも１ｗｔ．％、少なくとも２ｗｔ．％、少なくとも３ｗｔ．％、少なくとも４ｗｔ．％、少なくとも５ｗｔ．％、又はそれ以上であるが、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の３５ｗｔ．％以下である。
【０２０４】
いくつかの実施形態では、シトルリンアミノ酸実体のｗｔ．％は、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも５ｗｔ．％、少なくとも１０ｗｔ．％、少なくとも１１ｗｔ．％、少なくとも１２ｗｔ．％、少なくとも１３ｗｔ．％、少なくとも１４ｗｔ．％、少なくとも１５ｗｔ．％、又はそれ以上であるが、（例えば乾燥形態の）組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の６０ｗｔ．％以下である。
【０２０５】
使用、例えば処置の方法
本開示は、赤血球の機能、代謝回転、若しくは合成；ヘモグロビンの機能、代謝回転、若しくは合成；血管機能；酸化ストレス（例えば、血液及び全身性酸化ストレスの一方又は双方）；又は炎症のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、又はそれ以上（例えば全て）を改善するための方法であって、本明細書に開示される組成物（活性部分）を有効量でそれを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。組成物は、対象（例えばヒト）における、赤血球の機能、代謝回転、若しくは合成；ヘモグロビンの機能、代謝回転、若しくは合成；血管機能；酸化ストレス（例えば、血液及び全身性酸化ストレスの一方又は双方）；又は炎症のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、又はそれ以上（例えば全て）を改善するため、本明細書に記載の投与計画に従って投与され得る。
【０２０６】
本開示は、対象における、異常ヘモグロビン症又はサラセミアを処置すること、又は異常ヘモグロビン症若しくはサラセミアの１つ又は複数の症状を阻止することの一方又は双方を意図した方法であって、本明細書に開示される組成物（例えば活性部分）を有効量でそれを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。組成物は、対象（例えばヒト）における、異常ヘモグロビン症若しくはサラセミアを処置し、且つ／又は異常ヘモグロビン症若しくはサラセミアの１つ又は複数の症状を予防するため、本明細書に記載の投与計画に従って投与され得る。
【０２０７】
いくつかの実施形態では、対象は、異常ヘモグロビン症又はサラセミアと診断されている。いくつかの実施形態では、対象は、異常ヘモグロビン症又はサラセミアと診断されていない。いくつかの実施形態では、対象は、ヒト（例えば、小児対象又は成人対象）である。
【０２０８】
いくつかの実施形態では、対象は、幼児、小児、青年、又は成人である。特定の実施形態では、対象は、青年であり、例えば、対象は、１２＋／−２０％歳〜１６＋／−２０％歳である。特定の実施形態では、対象は、４０ｋｇ＋／−２０％〜６０ｋｇ＋／−２０％の体重を有する。特定の実施形態では、対象は、６０ｋｇ＋／−２０％を上回る体重を有する。
【０２０９】
いくつかの実施形態では、対象は、本明細書に記載の組成物による先行治療を受けていない（例えば未処置対象）。
【０２１０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物（活性部分）は、対象（例えば、異常ヘモグロビン症又はサラセミアを有する対象）における、赤血球の機能、代謝回転、若しくは合成；ヘモグロビンの機能、代謝回転、若しくは合成；又は血管機能のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、又はそれ以上（例えば全て）を改善する場合の薬剤としての使用が意図される。いくつかの実施形態では、組成物は、対象における異常ヘモグロビン症又はサラセミアを処置する（例えば、回復させる、減らす、又は寛解させる）場合の薬剤としての使用が意図される。いくつかの実施形態では、組成物は、対象における異常ヘモグロビン症又はサラセミアの１つ又は複数の症状を予防する場合の薬剤としての使用が意図される。
【０２１１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物（活性部分）は、対象（例えば、異常ヘモグロビン症又はサラセミアを有する対象）における、赤血球の機能、代謝回転、若しくは合成；ヘモグロビンの機能、代謝回転、若しくは合成；又は血管機能のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、又はそれ以上（例えば全て）を改善するための薬剤、サプリメント、医療食、又は機能性食品の製造における使用が意図される。いくつかの実施形態では、組成物（例えば活性部分）は、対象における異常ヘモグロビン症又はサラセミアを処置する（例えば、回復させる、減らす、又は寛解させる）ための薬剤、サプリメント、医療食、又は機能性食品の製造における使用が意図される。いくつかの実施形態では、組成物（例えば活性部分）は、対象における異常ヘモグロビン症又はサラセミアの１つ又は複数の症状を予防するための薬剤の製造における使用が意図される。
【０２１２】
いくつかの実施形態では、対象は、異常ヘモグロビン症（例えば鎌状赤血球症）又はサラセミアのリスクがある。特定の実施形態では、対象は、ＨＢＢ遺伝子における突然変異を有する。
【０２１３】
一実施形態では、異常ヘモグロビン症は、β異常ヘモグロビン症である。別の実施形態では、異常ヘモグロビン症は、α異常ヘモグロビン症である。
【０２１４】
いくつかの実施形態では、対象は、貧血、組織低酸素症、臓器機能障害、血管閉塞発作、異常なヘマトクリット値、無効な赤血球生成、異常な網状赤血球数、異常な鉄負荷、環状鉄芽球の存在、脾腫、肝腫大、末梢血流障害、呼吸困難、溶血増加、黄疸、貧血痛発作（ａｎｅｍｉｃ  ｐａｉｎ  ｃｒｉｓｅｓ）、急性胸部症候群、脾臓隔離、持続勃起症、脳卒中、手足症候群、疼痛（例えば、狭心症）、又はこれらの組み合わせから選択される、異常ヘモグロビン症に関連する１つ又は複数の症状を呈する。本明細書に記載の組成物の投与は、異常ヘモグロビン症又はサラセミアに関連する症状の１つ以上を治療するために有効であり得る。
【０２１５】
いくつかの実施形態では、異常ヘモグロビン症は、鎌状赤血球症、例えば、鎌状赤血球貧血（ＨｂＳＳ）、ヘモグロビンＳＣ症（ＨｂＳＣ）、鎌状β＋サラセミア（ＨｂＳ／β＋）、鎌状β０サラセミア（ＨｂＳ／β０）、ヘモグロビンＳＥ症、ヘモグロビンＳＤ症、又はヘモグロビンＳＯ症から選択される鎌状赤血球症である。特定の実施形態では、対象は、小児鎌状赤血球貧血を有する。いくつかの実施形態では、対象は、神経認知機能障害、髄膜炎、脳卒中、間接高ビリルビン血症、鎌状肝障害、胆石、アルブミン尿、等張尿、実質腎損傷、乳頭壊死、思春期遅発症、勃起不全、持続勃起症、無腐性壊死、骨髄梗塞、骨髄炎、網膜症、前房出血後緑内障、網膜梗塞、肺高血圧症、急性胸痛症候群、急性疼痛イベント、心肥大、拡張期心不全、貧血、白血球増多、敗血症、機能的無脾、脾臓梗塞、脾臓隔離、妊娠合併症、皮膚潰瘍、又は慢性疼痛から選択される、異常ヘモグロビン症（例えば、鎌状赤血球症）に関連する１つ又は複数の疾患又は障害を有する。本明細書に記載の組成物の投与は、異常ヘモグロビン症（例えば鎌状赤血球症）に関連する疾患又は障害の１つ以上を治療するために有効であり得る。
【０２１６】
いくつかの実施形態では、対象は、溶血、黄疸、胆石症、無形成発作、溶血性発作、血管閉塞性疾患（指炎を引き起こす）、自己脾臓摘出（ａｕｔｏｓｐｌｅｎｅｃｔｏｍｙ）、急性胸部症候群、脳卒中、持続勃起症、腎乳頭壊死、梗塞性発作、血球貯留クリーゼ（ｓｅｑｕｅｓｔｒａｔｉｏｎ  ｃｒｉｓｉｓ）、下腿潰瘍、又はこれらの組み合わせから選択される、鎌状赤血球症に関連する１つ又は複数の症状を呈する。本明細書に記載の組成物の投与は、鎌状赤血球症に関連する症状の１つ以上を治療するために有効であり得る。
【０２１７】
いくつかの実施形態では、サラセミアは、αサラセミア、βサラセミア、ヘモグロビンＣＣ症、又はヘモグロビンＥＥ症である。特定の実施形態では、βサラセミアは、小／トレイトβサラセミア（β／β０又はβ／β＋）、中間βサラセミア（β０／β＋）、及び大βサラセミア（β０／β０又はβ＋／β＋）から選択される。
【０２１８】
いくつかの実施形態では、対象は、溶血、貧血、脾腫、無効な赤血球生成、肝脾腫、血液若しくは血清中の高尿酸、下腿潰瘍、感染、又はこれらの組み合わせから選択される、βサラセミアに関連する１つ又は複数の症状を呈する。本明細書に記載の組成物の投与は、βサラセミアに関連する症状の１つ以上を治療するために有効であり得る。
【０２１９】
投与計画
組成物（例えば活性部分）は、対象における赤血球及び／若しくはヘモグロビンの機能、代謝回転、及び／若しくは合成；血管機能；炎症；及び／又は酸化ストレスを改善するため、例えば、異常ヘモグロビン症（例えば鎌状赤血球症）又はサラセミアを低減又は処置するため、本明細書に記載の投与計画に従って投与され得る。例えば、組成物は、例えば、２週、３週、４週、５週、６週、７週、８週、９週、１０週、１１週、１２週、１３週、１４週、１５週、１６週、又はそれ以上の治療期間にわたり、毎日２ｇ＋／−２０％〜毎日９０ｇ＋／−２０％の用量で、対象に投与されてもよい。特定の実施形態では、組成物は、総アミノ酸実体が４０ｇ＋／−２０％〜８０ｇ＋／−２０％の用量で毎日３回、例えば総アミノ酸実体が５９ｇ＋／−２０％の用量で毎日、投与される。
【０２２０】
特定の実施形態では、組成物は、総アミノ酸実体が３０ｇ＋／−２０％〜８０ｇ＋／−２０％の用量で毎日、例えば総アミノ酸実体が６５．１ｇ＋／−２０％の用量で毎日、対象に（例えば成人対象に）投与される。特定の実施形態では、組成物は、総アミノ酸実体が１５ｇ＋／−２０％〜６０ｇ＋／−２０％の用量で毎日２回、例えば総アミノ酸実体が３２．５５ｇ＋／−２０％の用量で毎日２回、対象に（例えば成人対象に）投与される。
【０２２１】
特定の実施形態では、組成物は、総アミノ酸実体が２０ｇ＋／−２０％〜６０ｇ＋／−２０％の用量で毎日、例えば総アミノ酸実体が４０．２ｇ＋／−２０％の用量で毎日、対象に（例えば小児対象に）投与される。特定の実施形態では、組成物は、総アミノ酸実体が１０ｇ＋／−２０％〜３０ｇ＋／−２０％の用量で毎日２回、例えば総アミノ酸実体が２０．１ｇ＋／−２０％の用量で毎日２回、対象に（例えば小児対象に）投与される。
【０２２２】
いくつかの実施形態では、組成物は、単回又は複数回投与計画のいずれかで、異常ヘモグロビン症（例えば鎌状赤血球症）を有する対象に提供され得る。いくつかの実施形態では、ある用量が、毎日２回、毎日３回、毎日４回、毎日５回、毎日６回、毎日７回、又はそれ以上投与される。特定の実施形態では、組成物は、毎日、１回、２回、又は３回投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、少なくとも２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、又は２週間投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、慢性的に（例えば３０日超、例えば、３１日、４０日、５０日、６０日、３か月、６か月、９か月、１年、２年、又は３年）投与される。
【０２２３】
いくつかの実施形態では、組成物は、食事（例えば、朝食、昼食又は夕食）前に投与される。他の実施形態では、組成物は、食事（例えば、朝食、昼食又は夕食）と同時に投与される。他の実施形態では、組成物は、食事（例えば、朝食、昼食又は夕食）後に投与される。特定の実施形態では、組成物は、朝食及び夕食とともに投与される。
【０２２４】
組成物は、対象（例えば、異常ヘモグロビン症、例えば鎌状赤血球症を有する対象）における赤血球機能を改善するため、２時間ごと、３時間ごと、４時間ごと、５時間ごと、６時間ごと、７時間ごと、８時間ごと、９時間ごと、１０時間ごと、１１時間ごと、又は１２時間ごとに投与され得る。
【０２２５】
いくつかの実施形態では、組成物は、３つのスティックパックを含み、例えば各スティックパックは、本明細書に記載の組成物中に含まれる各アミノ酸実体の量の３３．３％＋／−１５％を含む。特定の実施形態では、３つのスティックパックは、毎日２回投与される。
【０２２６】
いくつかの実施形態では、組成物は、５つのスティックパックを含み、例えば各スティックパックは、本明細書に記載の組成物中に含まれる各アミノ酸実体の量の２０％＋／−１５％を含む。特定の実施形態では、５つのスティックパックは、毎日２回投与される。
【０２２７】
いくつかの実施形態では、組成物は、４つのスティックパックを含み、例えば各スティックパックは、本明細書に記載の組成物中に含まれる各アミノ酸実体の量の２５％＋／−１５％を含む。特定の実施形態では、４つのスティックパックは、毎日２回投与される。
【０２２８】
いくつかの実施形態では、組成物は、総アミノ酸実体が約２ｇ＋／−２０％〜８０ｇ＋／−２０％の用量で、例えば、毎日１回、毎日２回、毎日３回、毎日４回、毎日５回、又は毎日６回（例えば毎日２回）投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、総アミノ酸実体が２ｇ＋／−２０％〜１０ｇ＋／−２０％、２０ｇ＋／−２０％〜５０ｇ＋／−２０％、又は５０ｇ＋／−２０％〜８０ｇ＋／−２０％の用量で、例えば、毎日１回、毎日２回、又は毎日３回（例えば、１日２回）投与される。特定の実施形態では、組成物は、総アミノ酸実体が２０ｇ＋／−２０％〜５０ｇ＋／−２０％の用量で毎日２回、例えば総アミノ酸実体が２９ｇ＋／−２０％の用量で毎日２回投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、総アミノ酸実体が約２ｇ＋／−２０％〜８０ｇ＋／−２０％の用量で、例えば、毎日１回、毎日２回、毎日３回、毎日４回、毎日５回、又は毎日６回（例えば、毎日２回）投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、総アミノ酸実体が１０ｇ＋／−２０％〜３０ｇ＋／−２０％、２０ｇ＋／−２０％〜６０ｇ＋／−２０％、又は４０ｇ＋／−２０％〜８０ｇ＋／−２０％の用量で、例えば、毎日１回、毎日２回、又は毎日３回（例えば１日２回）投与される。特定の実施形態では、組成物は、総アミノ酸実体が２０ｇ＋／−２０％〜６０ｇ＋／−２０％で毎日２回、例えば総アミノ酸実体が３２．５５ｇ＋／−２０％で毎日２回、対象に（例えば成人対象に）投与される。特定の実施形態では、組成物は、総アミノ酸実体が１０ｇ＋／−２０％〜３０ｇ＋／−２０％の用量で毎日２回、例えば総アミノ酸実体が２０．１ｇ＋／−２０％の用量で毎日２回、対象に（例えば小児対象に）投与される。
【０２２９】
いくつかの実施形態では、組成物は、２ｇ＋／−２０％〜１５ｇ＋／−２０％のアミノ酸実体（例えば、２ｇ＋／−２０％、３ｇ＋／−２０％、４ｇ＋／−２０％、５ｇ＋／−２０％、６ｇ＋／−２０％、７ｇ＋／−２０％、８ｇ＋／−２０％、９ｇ＋／−２０％、１０ｇ＋／−２０％、１１ｇ＋／−２０％、１２ｇ＋／−２０％、１３ｇ＋／−２０％、１４ｇ＋／−２０％、又は１５ｇ＋／−２０％のアミノ酸実体）を含む単位剤形中に存在する。特定の実施形態では、組成物は、６．５１ｇ＋／−２０％のアミノ酸実体を含む単位剤形中に存在する。特定の実施形態では、組成物は、８．１４ｇ＋／−２０％のアミノ酸実体を含む単位剤形中に存在する。特定の実施形態では、組成物は、１０．８５ｇ＋／−２０％のアミノ酸実体を含む単位剤形中に存在する。特定の実施形態では、組成物は、４．０２ｇ＋／−２０％のアミノ酸実体を含む単位剤形中に存在する。特定の実施形態では、組成物は、５．０３ｇ＋／−２０％のアミノ酸実体を含む単位剤形中に存在する。特定の実施形態では、組成物は、６．７ｇ＋／−２０％のアミノ酸実体を含む単位剤形中に存在する。
【０２３０】
活性部分及び医薬組成物の作製
本開示は、前記発明の組成物（例えば活性部分）を製造又は作製する方法を特徴する。組成物を作製するために使用されるアミノ酸実体は、凝集させ、且つ／又はインスタント化し、分散及び／又は可溶化を助けてもよい。
【０２３１】
組成物は、以下の供給源からのアミノ酸実体を用いて作製されてもよい、又は他の供給源が使用されてもよく、例えば、ＦＵＳＩ−ＢＣＡＡ（商標）Ｉｎｓｔａｎｔｉｚｅｄ  Ｂｌｅｎｄ（重量比２：１：１のＬ−ロイシン、Ｌ−イソロイシン及びＬ−バリン）、インスタント化されたＬ−ロイシン、及びその他の酸は、味の素株式会社から入手されてもよい。アミノ酸実体製品の製造において、医薬品グレードのアミノ酸実体原料が使用されてもよい。アミノ酸実体食品の製造において、食品（又はサプリメント）グレードのアミノ酸実体原料が使用されてもよい。
【０２３２】
本開示の組成物を作製するため、以下の一般的ステップが使用されてもよい：出発物質（個別のアミノ酸実体及び賦形剤）は、混合単位でのブレンド、続いてブレンド均一性及びアミノ酸実体内容物の検証、及びブレンド粉末のスティックパック又は他の単位剤形への充填がなされてもよい。スティックパック又は他の単位剤形の内容物は、経口投与における使用時に水に分散されてもよい。
【０２３３】
本発明の栄養補助食品及び医学的栄養組成物は、経口投与に適した形態となる。
【０２３４】
原料、例えば医薬品グレードのアミノ酸実体及び／又は賦形剤を組成物に結合させるとき、組成物中に汚染物質が存在することがある。組成物が汚染物質を実質的に含まない（例えば、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１、０．１５、０．１、０．０５、０．０１、又は０．００１％（ｗ／ｗ）未満を含む）とき、組成物は、汚染のレベルについての基準を満たす。いくつかの実施形態では、本明細書の方法に記載される組成物は、汚染物質を含まない。汚染物質は、組成物中に計画的に存在しない任意の物質を含む（例えば、医薬品グレードのアミノ酸実体及び賦形剤、例えば経口投与成分は、計画的に存在してもよい）、又は組成物の製品品質パラメータに対して負の効果（例えば、対象における副作用、効力低下、安定性／有効期間の減少、変色、匂い、悪味、悪いテクスチャー／食感、又は組成物の成分の分離増加）を有する任意の物質を含む。いくつかの実施形態では、汚染物質は、微生物、内毒素、金属、又はこれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、例えば、組成物の各部分の金属、レシチン、コリン、内毒素、微生物、又は他の汚染物質（例えば、原料由来の汚染物質）による汚染のレベルは、食品中で許容されるレベルに満たない。
【０２３５】
賦形剤
本開示のアミノ酸組成物は、１つ又は複数の賦形剤と配合又は製剤化されてもよい。適切な賦形剤の非限定的な例には、味物質、風味材料、緩衝剤、保存剤、安定剤、結合剤、コンパクション剤、潤滑剤、分散促進剤、崩壊剤、香味料、甘味料、及び着色料が含まれる。
【０２３６】
いくつかの実施形態では、賦形剤は、緩衝剤を含む。適切な緩衝剤の非限定的な例には、クエン酸、クエン酸ナトリウム、炭酸マグネシウム、重炭酸マグネシウム、炭酸カルシウム、及び重炭酸カルシウムが含まれる。
【０２３７】
いくつかの実施形態では、賦形剤は、保存剤を含む。適切な保存剤の非限定的な例には、抗酸化剤、例えばα−トコフェロール及びアスコルビン酸塩、及び抗菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、及びフェノールが含まれる。
【０２３８】
いくつかの実施形態では、組成物は、賦形剤として結合剤を含む。適切な結合剤の非限定的な例には、デンプン、アルファ化デンプン、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、セルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、ポリアクリルアミド、ポリビニルオキソアゾリドン、ポリビニルアルコール、Ｃ１２〜Ｃ１８脂肪酸アルコール、ポリエチレングリコール、ポリオール、糖類、オリゴ糖、及びこれらの組み合わせが含まれる。
【０２３９】
いくつかの実施形態では、組成物は、賦形剤として潤滑剤を含む。適切な潤滑剤の非限定的な例には、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、水素化植物油、ステロテックス、ポリオキシエチレンモノステアレート、タルク、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム、及び軽質鉱油が含まれる。
【０２４０】
いくつかの実施形態では、組成物は、賦形剤として分散促進剤を含む。適切な分散剤の非限定的な例には、デンプン、アルギン酸、ポリビニルピロリドン、グアーゴム、カオリン、キサンタンガム、ベントナイト、精製木材セルロース、デンプングリコール酸ナトリウム、イソアモルファスシリケート、及び高ＨＬＢ乳化剤の界面活性剤としての微結晶性セルロースが含まれる。
【０２４１】
いくつかの実施形態では、組成物は、賦形剤として崩壊剤を含む。いくつかの実施形態では、崩壊剤は、非発泡性崩壊剤である。適切な非発泡性崩壊剤の非限定的な例には、デンプン、例えば、コーンスターチ、ジャガイモデンプン、それらのアルファ化及び修飾デンプン、甘味料、ベントナイトなどの粘土、微結晶性セルロース、アルギン酸塩、デンプングリコール酸ナトリウム、寒天、グアー、ローカストビーン、カラヤ、ペクチン、及びトラガントなどのガムが含まれる。いくつかの実施形態では、崩壊剤は、発泡性崩壊剤である。適切な発泡性崩壊剤の非限定的な例には、クエン酸と組み合わせた重炭酸ナトリウム、及び酒石酸と組み合わせた重炭酸ナトリウムが含まれる。
【０２４２】
いくつかの実施形態では、賦形剤は、香料を含む。香料は、合成香味油及び香味芳香剤；天然油；植物、葉、花、及び果実からの抽出物；並びにそれらの組み合わせから選択され得る。いくつかの実施形態では、香料は、シナモン油；ウィンターグリーン油；ペパーミント油；クローバー油；干し草油（ｈａｙ  ｏｉｌ）；アニス油；ユーカリ；バニラ；レモン油、オレンジ油、ブドウ、及びグレープフルーツ油などの柑橘油；並びにリンゴ、モモ、西洋ナシ、イチゴ、ラズベリー、サクランボ、プラム、パイナップル、及びアプリコットを含むフルーツエッセンスから選択される。
【０２４３】
いくつかの実施形態では、賦形剤は、甘味料を含む。適切な甘味料の非限定的な例には、グルコース（コーンシロップ）、デキストロース、転化糖、フルクトース、及びそれらの混合物（担体として使用されない場合）；サッカリン及びナトリウム塩などのその様々な塩；アスパルテームなどのジペプチド甘味料；ジヒドロカルコン化合物、グリチルリチン；ステビア（Ｓｔｅｖｉａ  Ｒｅｂａｕｄｉａｎａ）（ステビオシド）；スクラロースなどのスクロースのクロロ誘導体；並びにソルビトール、マンニトール、キシリトールなどの糖アルコールが含まれる。水素化デンプン加水分解物及び合成甘味料３，６−ジヒドロ−６−メチル−１，２，３−オキサチアジン−４−オン−２，２−ジオキシド、特にそのカリウム塩（アセスルファム−Ｋ）、及びナトリウム塩やカルシウム塩も企図される。
【０２４４】
いくつかの実施形態では、組成物は、着色剤を含む。適切な着色剤の非限定的な例には、食品、薬物及び化粧品の色（ＦＤ＆Ｃ）、薬物及び化粧品の色（Ｄ＆Ｃ）、並びに外部の薬品及び化粧品の色（Ｅｘｔ．Ｄ＆Ｃ）が含まれる。着色剤は、染料又はそれに対応するレーキとして使用することができる。
【０２４５】
特定の賦形剤は、クエン酸、レシチン、（例えば、Ａｌｃｏｌｅｃ  Ｆ１００）、甘味料（例えば、スクラロース、スクラロース微粒子ＮＦ、アセスルファムカリウム（例えば、Ａｃｅ−Ｋ））、分散促進剤（例えばキサンタンガム（例えば、Ｔｉｃａｘａｎ  Ｒａｐｉｄ−３））、香味料（例えば、バニラカスタード＃４３０６、Ｎａｔ  Ｏｒａｎｇｅ  ＷＯＮＦ＃１３２６、ライム８６５．００３２Ｕ、及びレモン８６２．２１６９Ｕ）、苦味マスキング剤（例えば、９３６．２１６０Ｕ）、及び天然又は人工着色料（例えば、ＦＤ＆Ｃ  Ｙｅｌｌｏｗ  ６）の１つ以上を含んでもよい。各スティックパック中の例示的な成分内容物が表５に示される。
【０２４６】
【表８】
2021528414.tif 000009
【０２４７】
別の実施形態では、賦形剤は、クエン酸、甘味料（例えばスクラロース）、キサンタンガム、芳香料（例えば、バニラカスタード＃４０３６）、香料（例えば、Ｎａｔ  Ｏｒａｎｇｅ  ＷＯＮＦ＃１３６２）、及び着色剤（例えば、ＦＤ＆Ｃイエロー６）に制限され、例えば、賦形剤は、具体的にはレシチンを含まない（表６）。
【０２４８】
【表９】
2021528414.tif 000010
【０２４９】
乾燥ブレンド調製物の作製
本開示の乾燥ブレンド調製物を製造するために、以下の一般的な工程を使用することができる：個々の医薬品グレードのアミノ酸実体（及び、任意選択により１つ又は複数の賦形剤及び／又は経口投与成分）を組み合わせることにより組み合わせ、１つ又は複数のブレンド条件（例えば、ブレンド及び混合）に供することができる。いくつかの実施形態では、ブレンド条件は、組み合わせが１つ又は複数の参照基準を満たすまで続けられる。いくつかの実施形態では、得られるＰＧＤＢＰは、複数の部分に分割される。いくつかの実施形態では、複数の部分のうちの一部の少なくともあるパーセンテージは、１つ又は複数の参照基準、例えばＰＧＤＢＰが満たす参照基準も満たす。いくつかの実施形態では、複数の部分のうちの一部の少なくともあるパーセンテージは１つ又は複数の参照基準を満たす。
【０２５０】
いくつかの実施形態では、乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰもまた、大型調製物である。本明細書で使用される大型は、参照値よりも（例えば、重量、質量、又は体積が）大きい調製物を表す。いくつかの実施形態では、参照値は、典型的な実験的（例えば、非製造用）調製物のサイズである。いくつかの実施形態では、参照値は、１０ｋｇ、１１ｋｇ、１２ｋｇ、１３ｋｇ、１４ｋｇ、又は１５ｋｇである。いくつかの実施形態では、大型調製物は、少なくとも２５ｋｇ、３０ｋｇ、４０ｋｇ、５０ｋｇ、６０ｋｇ、７０ｋｇ、８０ｋｇ、９０ｋｇ、１００ｋｇ、１２０ｋｇ、１４０ｋｇ、１６０ｋｇ、１８０ｋｇ、２００ｋｇ、３００ｋｇ、４００ｋｇ、５００ｋｇ、６００ｋｇ、７００ｋｇ、８００ｋｇ、９００ｋｇ、１０００ｋｇ、２０００ｋｇ、３０００ｋｇ、４０００ｋｇ、５０００ｋｇ、６０００ｋｇ、７０００ｋｇ、８０００ｋｇ、９０００ｋｇ、又は１００００ｋｇを含む。いくつかの実施形態では、大型調製物は、１００００ｋｇ以下、５０００ｋｇ以下、１０００ｋｇ以下、９００ｋｇ以下、８００ｋｇ以下、７００ｋｇ以下、６００ｋｇ以下、５００ｋｇ以下、４００ｋｇ以下、又は３００ｋｇ以下を含む。いくつかの実施形態では、大型調製物は、１００〜５００ｋｇ、１００〜４００ｋｇ、１００〜３００、１００〜２００ｋｇ、２００〜３００ｋｇ、２００〜４００ｋｇ、２００〜５００ｋｇ、３００〜４００ｋｇ、３００〜５００ｋｇ、４００〜５００、又は５００〜１０００ｋｇを含む。
【０２５１】
ブレンド技術
本明細書に開示される方法は、医薬品グレードのアミノ酸実体の組み合わせをブレンド及び混合して、参照基準を満たすＰＧＤＢＰを製造するブレンド工程を含む。本明細書に記載の方法によって使用されるブレンド条件は、任意の既知のブレンドメカニズム又はブレンドメカニズムの組み合わせを利用することができる。ブレンドメカニズムには、対流、拡散、及び剪断が含まれる。対流ブレンドは、例えばブレンダー／ミキサー内での穏やかな回転による、粒子の全体的な動きを利用する。拡散は、粒子のゆっくりとした受動的なブレンドである。剪断ブレンドは、粒子の組み合わせの一部を一方向に押し、粒子の組み合わせの別の部分を同じ平行面に沿って別の方向に押す。本明細書に記載の方法によって使用されるブレンド条件は、組み合わせ成分（例えば、医薬品グレードのアミノ酸実体）の粒子のサイズ及び／又は形状を変更するための造粒機又は他の装置の使用をさらに含み得る。
【０２５２】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法によって採用されるブレンド又はブレンド条件は対流ブレンドを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法によって採用されるブレンド又はブレンド条件は拡散ブレンドを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法によって採用されるブレンド又はブレンド条件は、剪断ブレンドを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法によって採用されるブレンド又はブレンド条件は、対流及び拡散ブレンドを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法によって採用されるブレンド又はブレンド条件は、対流及び剪断ブレンドを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法によって採用されるブレンド又はブレンド条件は、拡散及び剪断ブレンドを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法によって採用されるブレンド又はブレンド条件は、対流、拡散、及び剪断ブレンドを含む。
【０２５３】
本明細書に開示される方法によって使用されるブレンド条件は、あらゆる既知のブレンド又は混合装置を利用することができ；ブレンド又は混合装置は、１つ又は複数のブレンドメカニズムに基づいて作動し得る。ブレンド又は混合装置には、主に４タイプ：対流、ホッパー（即ち、重量測定）、タンブラー、及び流動化が存在する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法のブレンド条件又はブレンド工程は、１つ又は複数（例えば、１つ、２つ、３つ、又は４つ）のタイプのブレンド又は混合装置を利用することができる。いくつかの実施形態では、乾燥ブレンド調製物（例えば、ＰＧＤＢＰ）はバッチで調製される。いくつかの実施形態では、乾燥ブレンド調製物（例えば、ＰＧＤＢＰ）は、連続的に調製され、例えばブレンド又は混合を中断することなく、ブレンド／混合調製物が収集される。
【０２５４】
本明細書に開示される方法のブレンド又は混合工程は、参照基準を満たす乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰを製造するのに十分な継続時間のブレンド又は混合工程である。いくつかの実施形態では、ブレンド条件の継続時間は、少なくとも１０分、１５分、２０分、２５分、３０分、３５分、４０分、４５分、５０分、５５分、６０分、７５分、９０分、１０５分、又は１２０分である。いくつかの実施形態では、ブレンド条件の継続時間は、１８０分以下、１６５分以下、１５０分以下、１３５分以下、１２０分以下、１０５分以下、９０分以下、７５分以下、６０分以下、５５分以下、５０分以下、４５分以下、４０分以下、３５分以下、３０分以下、２５分以下、又は２０分以下である。いくつかの実施形態では、ブレンド条件の継続時間は、２０〜９０分、２０〜６０分、２０〜５０分、２０〜４０分、２０〜３０分、３０〜９０分、３０〜６０分、３０〜５０分、３０〜４０分、４０〜９０分、４０〜６０分、４０〜５０分、５０〜９０分、５０〜６０分、又は６０〜９０分である。いくつかの実施形態では、ブレンド条件の継続時間は、２０〜４０分、例えば、２０分、３０分、又は４０分である。いくつかの実施形態では、ブレンド条件の継続時間は、ブレンド及び混合により、組み合わせ又は乾燥ブレンド調製物に、例えば過剰混合によって不均一性が導入されない十分な継続時間である。いくつかの実施形態では、ブレンド条件の継続時間は、参照基準が満たされているかどうかの評価によって決定される。例えば、ブレンド条件は、参照基準が満たされたことを評価が示すまで継続し得る。参照基準が組成物均一性、例えばブレンド均一性であるいくつかの実施形態では、参照基準が満たされているかどうかを評価することは、近赤外分光法（ＮＩＲ）を使用することを含む。一実施形態では、ブレンド条件は、観察されたＮＩＲスペクトルが、組成物均一性、例えばブレンド均一性の基準が満たされたことを示すまで維持される。
【０２５５】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、医薬品グレードのアミノ酸実体の組み合わせをブレンド及び混合してＰＧＤＢＰを製造するブレンド工程を含み、このブレンド工程は、室温、例えば、１５〜３５℃、例えば２０〜３０℃、例えば約２５℃で行われる。いくつかの実施形態では、ブレンド工程は、２０℃未満、２１℃未満、２２℃未満、２３℃未満、２４℃未満、２５℃未満、２６℃未満、２７℃未満、２８℃未満、２９℃未満、３０℃未満、３１℃未満、３２℃未満、３３℃未満、３４℃未満、３５℃未満、３６℃未満、３７℃未満、３８℃未満、３９℃未満、又は４０℃未満（及び任意選択により少なくとも５℃、６℃、７℃、８℃、９℃、１０℃、１１℃、１２℃、１３℃、１４℃、１５℃、１６℃、１７℃、１８℃、１９℃、２０℃、２１℃、２２℃、２３℃、２４℃、又は２５℃の温度で）で行われる。いくつかの実施形態では、ブレンド工程は、約２０℃、２１℃、２２℃、２３℃、２４℃、２５℃、２６℃、２７℃、２８℃、２９℃、又は３０℃の温度で行われる。
【０２５６】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、医薬品グレードのアミノ酸実体の組み合わせをブレンド及び混合してＰＧＤＢＰを製造するブレンド工程を含み、このブレンド工程は、１０，０００ｒｐｍ未満、９，０００ｒｐｍ未満、８，０００ｒｐｍ未満、７，０００ｒｐｍ未満、６，０００ｒｐｍ未満、５，０００ｒｐｍ未満、４，０００ｒｐｍ未満、３，０００ｒｐｍ未満、２，０００ｒｐｍ未満、１，０００ｒｐｍ未満、５００ｒｐｍ未満、２５０ｒｐｍ未満、１００ｒｐｍ未満、９０ｒｐｍ未満、８０ｒｐｍ未満、７０ｒｐｍ未満、６０ｒｐｍ未満、５０ｒｐｍ未満、４０ｒｐｍ未満、３０ｒｐｍ未満、２０ｒｐｍ未満、又は１０ｒｐｍ（回転／分）未満（及び任意選択により少なくとも５ｒｐｍ、１０ｒｐｍ、１５ｒｐｍ、２０ｒｐｍ、２５ｒｐｍ、３０ｒｐｍ、３５ｒｐｍ、４０ｒｐｍ、４５ｒｐｍ、５０ｒｐｍ、６０ｒｐｍ、７０ｒｐｍ、８０ｒｐｍ、９０ｒｐｍ、又は１００ｒｐｍ）のブレンダー又はミキサー回転速度（例えば、ブレンダー又はミキサーローター回転速度）の使用を含む。いくつかの実施形態では、ブレンド工程は、約２０ｒｐｍ、３０ｒｐｍ、４０ｒｐｍ、５０ｒｐｍ、６０ｒｐｍ、７０ｒｐｍ、８０ｒｐｍ、９０ｒｐｍ、又は１００ｒｐｍのブレンダー又はミキサー回転速度（例えば、ブレンダー又はミキサーローター回転速度）の使用を含む。いくつかの実施形態では、ブレンド工程は、５〜５０ｒｐｍ、５〜４５ｒｐｍ、５〜４０ｒｐｍ、５〜３５ｒｐｍ、５〜３０ｒｐｍ、５〜２５ｒｐｍ、５〜２０ｒｐｍ、５〜１５ｒｐｍ、５〜１０ｒｐｍ、１０〜５０ｒｐｍ、１０〜４５ｒｐｍ、１０〜４０ｒｐｍ、１０〜３５ｒｐｍ、１０〜３０ｒｐｍ、１０〜２５ｒｐｍ、１０〜２０ｒｐｍ、１０〜１５ｒｐｍ、１５〜５０ｒｐｍ、１５〜４５ｒｐｍ、１５〜４０ｒｐｍ、１５〜３５ｒｐｍ、１５〜３０ｒｐｍ、１５〜２５ｒｐｍ、１５〜２０ｒｐｍ、２０〜５０ｒｐｍ、２０〜４５ｒｐｍ、２０〜４０ｒｐｍ、２０〜３５ｒｐｍ、２０〜３０ｒｐｍ、２０〜２５ｒｐｍ、２５〜５０ｒｐｍ、２５〜４５ｒｐｍ、２５〜４０ｒｐｍ、２５〜３５ｒｐｍ、２５〜３０ｒｐｍ、３０〜５０ｒｐｍ、３０〜４５ｒｐｍ、３０〜４０ｒｐｍ、３０〜３５ｒｐｍ、３５〜５０ｒｐｍ、３５〜４５ｒｐｍ、３５〜４０ｒｐｍ、４０〜５０ｒｐｍ、４０〜４５ｒｐｍ、又は４５〜５０ｒｐｍのブレンダー又はミキサー回転速度（例えば、ブレンダー又はミキサーローター回転速度）の使用を含む。
【０２５７】
いくつかの実施形態では、この方法は、ローラー圧縮及び／又は湿式造粒をさらに含む。いくつかの実施形態では、この方法は、例えば、直接ブレンド、ローラー圧縮、又は湿式造粒を包含する自動充填をさらに含む。
【０２５８】
ブレンド若しくは混合、部分の分割、又は下流処理中の組み合わせ（例えば、乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰ）における異なる種の粒子の分離は、参照基準、例えば組成物均一性の基準を満たすこと及び維持することへの障壁である。２種類以上の粒子の混合物は、分離に対して脆弱であり得る。分離は、ふるい分け、流動化、及びダスティングを含むいくつかのメカニズムの１つ又は複数によって行うことができる（例えば、Ｐｕｒｕｔｙａｎ，Ｈ，ａｎｄ  Ｃａｒｓｏｎ，Ｊ．Ｗ．Ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ，ｄｉａｇｎｏｓｉｎｇ，ａｎｄ  ｓｏｌｖｉｎｇ  ｍｉｘｔｕｒｅ  ｓｅｇｒｅｇａｔｉｏｎ  ｐｒｏｂｌｅｍｓ．Ｊｅｎｉｋｅ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ，ＣＳＣ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｐｏｗｄｅｒ  ａｎｄ  Ｂｕｌｋ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，２０１３を参照）。
【０２５９】
サンプリング及び測定
参照基準を満たす乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰを製造するための本明細書に記載の方法は、参照基準が満たされているかどうかを評価することをさらに含み得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰ中の１つ又は複数のサンプリング点から値、例えば医薬品グレードのアミノ酸実体の量を得ることを含む。サンプリング点は、乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰ中の、例えば空間的及び時間的に定義された位置である。いくつかの実施形態では、値を得るために、サンプリング点にアクセスすることができる。サンプリング点にアクセスすることは、サンプリング点の乾燥ブレンド調製物に対して診断技術を使用することを含み得る。いくつかの実施形態では、例えば診断技術を使用してアクセスすることは、サンプリング点にアクセスするためにブレンド又は混合又はブレンド条件を中断又は一時中断することを含む。いくつかの実施形態では、例えば診断技術を使用してアクセスすることは、サンプリング点にアクセスするためにブレンド又は混合又はブレンド条件を中断又は一時中断することを含まない。サンプリング点は、当技術分野で公知の方法によって指定及び／又はアクセスすることができる。
【０２６０】
いくつかの実施形態では、組み合わせ又は乾燥ブレンド調製物（例えば、ＰＧＤＢＰ）又は乾燥ブレンド調製物の一部（例えば、ＰＧＤＢＰ）のサンプリング点から得られた試料を、（例えば、組成物均一性、例えば、ブレンド均一性の）値を得るために近赤外（ＮＩＲ）分光法を使用して分析することができる。ＮＩＲ分光法は、ＮＩＲ波長領域（７８０〜２５００ｎｍ）の化合物の吸収スペクトルを分析する。化合物、例えば医薬品グレードのアミノ酸実体の吸収ピークは、倍音と組み合わせの２種類に分類される分子振動によって生成される。ＣＨ、ＯＨ、又はＮＨ結合を含む化合物は、ＮＩＲを使用して分析することができる。ＮＩＲスペクトルを解釈する方法は当技術分野で公知である。いくつかの実施形態では、ＮＩＲ分光法を使用して、複数のサンプリング点でのアミノ酸実体の量が類似しているかどうか、例えば均一性の基準（例えば、組成物均一性、例えばブレンド均一性）が満たされているかどうかを決定する。いくつかの実施形態では、この方法は、決定に応じて、工程を選択及び／又は実施すること、例えば、ブレンド若しくは混合技術又はブレンド条件を選択して使用すること、又はブレンド、混合、若しくはブレンド条件を終了することをさらに含む。
【０２６１】
いくつかの実施形態では、組み合わせ又は乾燥ブレンド調製物（例えば、ＰＧＤＢＰ）又は乾燥ブレンド調製物（例えば、ＰＧＤＢＰ）の一部のサンプリング点から得られた試料を、値（例えば、医薬品グレードのアミノ酸実体の量）を得るために、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ、高圧力液体クロマトグラフィーとも呼ばれる）を使用して分析することができる。
【０２６２】
いくつかの実施形態では、組み合わせ又は乾燥ブレンド調製物（例えば、ＰＧＤＢＰ）又は乾燥ブレンド調製物（例えば、ＰＧＤＢＰ）の一部のサンプリング点から得られた試料は、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ−ＭＳ）を使用して分析されてもよい。いくつかの実施形態では、ＬＣ−ＭＳを使用して、サンプリング点で又は一部に存在する医薬品グレードのアミノ酸実体の同一性及び／又は量を決定する。いくつかの実施形態では、ＬＣ−ＭＳを使用して、乾燥ブレンド調製物が組成物均一性、例えば部分又はブレンド均一性の基準を満たすかどうかを決定する。いくつかの実施形態では、方法は、存在する医薬品グレードのアミノ酸実体の量に応じて、工程、例えばブレンド若しくは混合技術又はブレンド条件を選択及び使用すること、又はブレンド、混合、若しくはブレンド条件を終了することを選択及び／又は実施することをさらに含む。
【０２６３】
参照基準
本明細書に記載の方法により、１つ又は複数の参照基準を満たす乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰが製造される。参照基準は、本明細書で用いられるとき、１つ又は複数の製品の品質パラメータが医薬品、医薬組成物、処置、又はその他の治療薬の許容範囲内であるように、
（１）組み合わせ（例えば乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰ）の製造業者、例えば、政府機関からＰＧＤＢＰを市場で販売することを承認された製造業者、又は
（２）製薬業界又は製薬業界を規制する機関若しくは団体（例えば政府若しくは貿易機関若しくは団体）
によって使用又は設定される基準を意味する。製品品質パラメータは、限定されるものではないが、組成物；組成物均一性；投与量；投与量均一性；汚染物質又は不純物の存在、非存在、及び／又はレベル；並びに無菌のレベル（例えば、微生物の存在、非存在、及び／又はレベル）を含む、製造業者によって、又は製薬業界によって、又は機関若しくは団体、例えば政府若しくは貿易機関若しくは団体によって規制されている任意のパラメータであり得る。例示的な政府規制機関には：連邦医薬品局（ＦＤＡ）、欧州医薬品庁（ＥＭＡ）、ＳｗｉｓｓＭｅｄｉｃ、中国国家食品薬品監督管理局（ＣＦＤＡ）、日本の独立行政法人医薬品医療機器総合機構（ＰＭＤＡ）、カナダ保健省、及び英国医薬品庁（ＭＨＲＡ）が含まれる。製品の品質パラメータは、パラメータでもあり得る。製品品質パラメータはまた、米国薬局方（ＵＳＰ）、英国薬局方（ＢＰ）、国民医薬品集（ＮＦ）、欧州薬局方（ＥＰ）、日本薬局方（ＪＰ）、又は医薬品規制調和国際会議（ＩＣＨ）を含む、国又は地域の薬局方又は医薬品集によって指定されるパラメータであり得る。
【０２６４】
１つ又は複数の参照基準は、製薬業界によって、或いは１つ又は複数の製品品質パラメータが医薬品、医薬組成物、処置、又は他の治療薬で許容範囲であるように製薬業界を規制する機関若しくは団体、例えば政府若しくは貿易機関若しくは団体によって使用又は公布される基準であり得る。１つ又は複数の参照基準は、１つ又は複数の製品の品質パラメータがサプリメント、栄養補助食品、医薬品、医薬組成物、処置、又はその他の治療薬の許容範囲内であるように、組み合わせ（例えば、乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰ）の製造業者、例えば、政府機関からＰＧＤＢＰを市場で販売することを承認された製造業者によって使用又は設定される基準であり得る。製品の品質パラメータは、限定されるものではないが、組成物；組成物均一性；投与量；投与量均一性；汚染物質又は不純物の存在、非存在、及び／又はレベル；並びに無菌のレベル（例えば、微生物の存在、非存在、及び／又はレベル）、色、又は粒子形態（例えば、サイズ又は形状）を含む、製造業者によって、又は製薬業界によって、又は機関若しくは団体、例えば政府若しくは貿易機関若しくは団体によって規制されている任意のパラメータであり得る。
【０２６５】
組成物均一性
いくつかの実施形態では、参照基準は組成物均一性である。組成物均一性は、一般に、均一性の基準である。組成物均一性は、異なるが関連する２種類の均一性：ブレンド均一性及び部分均一性（部分均一性は、本明細書では含量均一性及び投与量均一性と互換的に使用される）に分類することができる。組成物均一性は、使用法と状況に応じて、１種類又は２種類を含み得る。組成物均一性は、１つ又は複数の成分に関する組み合わせ（例えば、乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰ）の均一性の基準を含み得る。いくつかの実施形態では、組成物均一性の基準を満たす組み合わせは、１つ、２つ、３つ、４つ、又はそれ以上（例えば、すべて）の成分（例えば、医薬品グレードのアミノ酸実体）に関しても基準を満たす。
【０２６６】
ブレンド均一性
ブレンド均一性は、組み合わせ、例えば、乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰ中の成分の分布の均一性のレベルを指す。いくつかの実施形態では、組成物均一性、例えばブレンド均一性の基準は、組み合わせ（例えば、乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰ）における第１のサンプリング点の成分（例えば、医薬品グレードのアミノ酸実体）の量が基準値と所定量以下しか異ならない場合に満たされる。量は、絶対値、例えばグラム、又は相対値、例えば重量／重量（例えば、サンプリング点のＹｇにおけるＸｇの成分）であり得る。吸光度値を吸光度値と比較する場合又は曲線、例えばスペクトルの統計的比較の場合のように、量は任意の値にすることができる。いくつかの実施形態では、ブレンド均一性の値を得ることは、組み合わせの最初のサンプリング点での成分の量の値を得て、この値を参照値と比較することによって、組成物均一性、例えばブレンド均一性の基準を評価することを含む。
【０２６７】
いくつかの実施形態では、ＮＩＲを使用して、組み合わせ（例えば、乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰ）の最初のサンプリング点での成分（例えば、医薬品グレードのアミノ酸実体）の量が、第２又はさらなるサンプリングと所定量以下しか異ならないかどうかを決定する。ＮＩＲを使用して、サンプリング点の近赤外スペクトルを得て、これを、第２又はさらなるサンプリング点（例えば、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、及び／又は第１０のサンプリング点）の近赤外スペクトル、又は参照基準、例えば組成物均一性、例えばブレンド均一性の基準を満たすことが知られている試料の近赤外スペクトルと比較することができる。この比較が、スペクトルが互いに十分に類似していることを示す場合、ブレンド均一性の基準が満たされている。ＮＩＲスペクトルの類似性は、サンプリング点の一致指数を比較することによって評価することができる。一致指数は、得られたＮＩＲスペクトルによって生成される値であり、記載される一致指数の例は、考えられるすべての一致指数の完全なリストではない。一致指数は、特定の波長又は近赤外範囲の波長での吸光度であり得る。一致指数は、複数のサンプリング点での特定の波長又は近赤外範囲の波長での平均吸光度の標準偏差であり得る。一致指数の重要な特徴は、どの値が選択されても、アクセスされたサンプリング点の一致指数が、ブレンド／混合時間が長くなると収束（特定の波長での吸光度の場合）又は減少（標準偏差の場合）することである。例えば、一致指数は、近赤外範囲のＸｎｍの波長であるように選択することができる。Ｘｎｍでの吸光度は、ブレンド中の時点における複数のサンプリング点で測定される。ブレンドが続くと、各サンプリング点におけるＸｎｍでの吸光度が互いにより類似することになる。
【０２６８】
いくつかの実施形態では、参照値は、組み合わせ（例えば、乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰ）における第２又はさらなるサンプリング点（例えば、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、及び／又は第１０のサンプリング点）サンプリング点での成分の量である。第２のサンプリング点又はさらなるサンプリング点（例えば、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、及び／又は第１０のサンプリング点）点は、組み合わせにおける異なる空間位置であり得、例えば、試料を、例えばブレンダー又はミキサー内の様々な位置を表す試料を得るために、所定の分散した一連の空間位置から、例えばサンプリングされるべき所定の位置での層化サンプリング計画により収集することができる。
【０２６９】
いくつかの実施形態では、第２のサンプリング点は、最初のサンプリング点から１分後、２分後、３分後、４分後、５分後、６分後、７分後、８分後、９分後、１０分後、又はそれ以降である。いくつかの実施形態では、時間的に分離された多数のサンプリング点が、乾燥ブレンド調製物（例えば、ＰＧＤＢＰ）を製造するプロセス全体を通して取られる。いくつかの実施形態では、時間的に分離されたサンプリング点は、乾燥ブレンド調製物（例えば、ＰＧＤＢＰ）を製造するプロセス全体を通して、例えば、１分ごと、２分ごと、３分ごと、４分ごと、５分ごと、６分ごと、７分ごと、８分ごと、９分ごと、又は１０分ごとの間隔である。いくつかの実施形態では、多数のサンプリング点が互いに比較される（例えば、最新のサンプリング点が互いに比較される）。
【０２７０】
いくつかの実施形態では、組成物均一性、例えば、ブレンド均一性の基準は、最初のサンプリング点での成分の量が、参照値、例えば、第２又はさらなるサンプリング点で（例えば、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、及び／又は第１０のサンプリング点）の成分の量と１％以下、２％以下、３％以下、４％以下、５％以下、６％以下、７％以下、８％以下、９％以下、又は１０％以下、例えば１０％しか異ならない場合に満たされる。いくつかの実施形態では、組成物均一性の基準は、最初のサンプリングでの成分の量が、第２又はさらなるサンプリング点（例えば、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、及び／又は第１０のサンプリング点）での成分の量と１０％以下しか異ならない場合に満たされる。いくつかの実施形態では、組成物均一性の基準は、最初のサンプリングでの成分の量が、組み合わせ（例えば、乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰ）中に存在する成分の量と１０％以下しか異ならない場合に満たされる。いくつかの実施形態では、組成物均一性の基準は、最新のサンプリング点での成分の量が、次の最新のサンプリング点で存在する成分の量と１０％以下しか異ならない場合に満たされる。サンプリング点に存在する成分の量の値は、ＮＩＲスペクトルを含み得る。第１、第２、又はさらなるサンプリング点に存在する成分の量の値の比較は、ＮＩＲスペクトルの比較、例えば、ＮＩＲスペクトルのオーバーレイ、又は第１、第２、若しくはさらなるサンプリング点の一致指数の比較を含み得る。ブレンド均一性は、ＮＩＲスペクトル、例えば一致指数が類似又は重複した閾値に達した場合に満たされ得る。
【０２７１】
部分均一性
部分均一性は、成分（例えば、医薬品グレードのアミノ酸実体）の量に関する乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰの部分均一性を指す。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、乾燥ブレンド調製物（例えば、ＰＧＤＢＰ）の複数の部分への分割を含む。いくつかの実施形態では、組成物均一性、例えば部分均一性の基準は、第１の部分の成分（例えば、医薬品グレードのアミノ酸実体）の量が、参照値と所定量以下しか異ならない場合に満たされる。量は、絶対値、例えばグラム、又は相対値、例えば重量／重量（例えば、サンプリング点のＹｇにおけるＸｇの成分）であり得る。いくつかの実施形態では、第１、第２、又はさらなる部分（例えば、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、又は第１０の部分）中の成分（例えば、医薬品グレードのアミノ酸実体）の量はＨＰＬＣを使用して決定される。
【０２７２】
いくつかの実施形態では、参照値は、第２の部分の成分の量である。いくつかの実施形態では、参照値は、複数の部分、例えば複数の試験部分における成分の量である（例えば、第１の部分は、複数の試験部分と比較される）。一実施形態では、参照値は、複数の試験部分における成分の平均値又は中央値である。
【０２７３】
いくつかの実施形態では、組成物均一性、例えば部分均一性の基準は、複数の試験部分における成分（例えば、医薬品グレードのアミノ酸実体）の量が、参照値と所定量以下しか異ならない場合に満たされる。量は、絶対値、例えばグラム、又は相対値、例えば重量／重量（例えば、サンプリング点のＹｇにおけるＸｇの成分）であり得る。いくつかの実施形態では、参照値は、複数の試験部分における成分の平均値又は中央値である。
【０２７４】
いくつかの実施形態では、参照値は、組み合わせ（例えば、乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰ）における成分の量である。例えば、参照値は、組み合わせ全体に存在する成分の全重量／重量にすることができる。いくつかの実施形態では、組成物均一性の基準が満たされているかどうかを評価することは、最初のサンプリング点での成分の相対量（例えば、サンプリング点のＹｇにおけるＸｇの成分）を組み合わせ中の成分の相対量（例えば、組み合わせ全体のＺｇにおけるＷｇの成分）と比較することを含む；言い換えれば、組成物均一性の基準を評価することは、Ｘ／ＹをＷ／Ｚと比較することを含み得る。
【０２７５】
一実施形態では、乾燥ブレンド調製物（例えば、ＰＧＤＢＰ）の複数の部分のうちの一部の少なくともＸ％は、試験部分であり、Ｘは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、又は５０である。いくつかの実施形態では、乾燥ブレンド調製物（例えば、ＰＧＤＢＰ）の複数の部分のうちの一部のＸ％以下が試験部分であり、Ｘは、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１である。一実施形態では、試験部分は、参照基準（例えば、組成物均一性、例えば部分均一性）が満たされているかどうかを決定するために、参照値、例えば、互いに、又は乾燥ブレンド調製物（例えば、ＰＧＤＢＰ）中に存在する成分の量と比較される部分である。いくつかの実施形態では、組成物均一性、例えば、部分均一性の基準は、試験部分の少なくともＸ％に存在する成分の量が、参照値と１％以下、２％以下、３％以下、４％以下、５％以下、６％以下、７％以下、８％以下、９％以下、又は１０％以下しか異ならない場合に満たされ、Ｘは５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９９、又は１００％であり、参照値は、試験部分に存在する成分の平均値、試験部分に存在する成分の中央値、又は乾燥ブレンド調製物（例えば、ＰＧＤＢＰ）に存在する成分の量から選択される。
【０２７６】
いくつかの実施形態では、乾燥ブレンド調製物（例えば、ＰＧＤＢＰ）の一部は、スティックパック又は他の単位剤形であり得る。
【０２７７】
汚染レベル
いくつかの実施形態では、参照基準は汚染レベルである。原料、例えば医薬品グレードのアミノ酸実体及び／又は賦形剤を組み合わせ、例えば乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰに混合すると、汚染物質が組み合わせ中に存在し得る。組み合わせ、例えば、乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰは、この組み合わせが汚染物質を実質的に含まない（例えば、１０％（ｗ／ｗ）未満、９％（ｗ／ｗ）未満、８％（ｗ／ｗ）未満、７％（ｗ／ｗ）未満、６％（ｗ／ｗ）未満、５％（ｗ／ｗ）未満、４％（ｗ／ｗ）未満、３％（ｗ／ｗ）未満、２％（ｗ／ｗ）未満、１％（ｗ／ｗ）未満、０．１５％（ｗ／ｗ）未満、０．１％（ｗ／ｗ）未満、０．０５％（ｗ／ｗ）未満、０．０１％（ｗ／ｗ）未満、又は０．００１％（ｗ／ｗ）未満を含む）場合、汚染レベルの基準を満たす。いくつかの実施形態では、組み合わせ、例えば、乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰは、０．１５％（ｗ／ｗ）未満の汚染物質を含む。いくつかの実施形態では、組み合わせ、例えば、乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰは、食品で許容されるレベル（例えば、当技術分野で公知の適切な規制機関によって定義されている）よりも低いレベルの汚染物質を含む。いくつかの実施形態では、組み合わせ、例えば、本明細書の方法に記載される乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰは汚染物質を含まない。汚染物質には、組み合わせ、例えば、乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰ（例えば、医薬品グレードのアミノ酸実体及び賦形剤、例えば経口投与成分が意図的に存在する）に意図的に存在しないあらゆる物質、又はＰＧＤＢＰ又はＰＧＤＢＰの複数の部分の製品の品質パラメータに対して意図しない悪影響（例えば、対象の副作用、効力の低下、安定性の低下／保存可能期間の短縮、変色、臭気、味の悪さ、食感／口当たりの悪さ、又はＰＧＤＢＰの成分の分離の増加）を有するあらゆる物質が含まれる。いくつかの実施形態では、汚染物質には、微生物、エンドトキシン、金属（例えば、重金属）、残留溶媒、原料不純物、抽出物、及び／又は浸出物が含まれる。いくつかの実施形態では、組み合わせ、例えば、乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰは、参照基準、例えば、当業者に公知又は本明細書に記載の機関によって公布された基準に適合する汚染物質のレベルを含む（例えば、汚染物質を実質的に含まない）。いくつかの実施形態では、組み合わせ、例えば、乾燥ブレンド調製物、例えばＰＧＤＢＰは、ＩＣＨの基準、例えば、ＩＣＨ  Ｑ３Ａ  Ｉｍｐｕｒｉｔｉｅｓ  ｉｎ  Ｎｅｗ  Ｄｒｕｇ  Ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓの基準に適合するレベルの汚染物質を含む（例えば、汚染物質を実質的に含まない）。
【０２７８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、組み合わせ又はＰＧＤＢＰの一方又は両方におけるサンプリング点での汚染物質のレベルの値を得ることをさらに含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、組み合わせ又はＰＧＤＢＰの一方又は両方、又は（例えば、組み合わせ又はＰＧＤＢＰの）試験部分における複数の点それぞれでの汚染物質のレベルの値を得ることをさらに含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、複数の部分のうちの一部、例えば試験部分における汚染物質のレベルの値を得ることをさらに含む。いくつかの実施形態では、例えば、汚染物質のレベルの値に応じて、汚染レベルの基準が満たされていると判断し、本明細書に記載の方法は、下流処理工程、例えばＰＧＤＢＰを部分に分割すること（例えば、分けること）、並びに充填−仕上げ（例えば、製剤（例えば、賦形剤を含む）、包装、及びラベル付け）及び分配を選択して実施することをさらに含む。いくつかの実施形態では、例えば、汚染物質のレベルの値に応じて、汚染レベルの基準が満たされていないと判断し、本明細書に記載の方法は、異なる下流処理工程、例えば、汚染物質の精製及び／若しくは除去、又は一部、複数の部分、若しくはＰＧＤＢＰの廃棄を選択して実施することをさらに含む。
【０２７９】
食事組成物
アミノ酸実体を含む組成物（例えば活性部分）は、例えば、医療食、機能性食品、又はサプリメントから選択される食事組成物として製剤化及び使用され得る。かかる実施形態では、原料及び最終生成物は、食品の基準を満たす必要がある。
【０２８０】
本明細書に開示される態様及び実施形態のいずれかの組成物は、例えば、医療食、機能性食品、又はサプリメントから選択される食事組成物としての使用が意図され得る。いくつかの実施形態では、食事組成物は、組成物を対象に投与することを含む方法における使用が意図される。組成物は、赤血球の機能、代謝回転、若しくは合成；ヘモグロビンの機能、代謝回転、若しくは合成；血管機能；酸化ストレス（例えば、血液及び全身性酸化ストレスの一方又は双方）；又は炎症のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、又はそれ以上（例えば全て）を改善することを目的とした食事組成物における使用が意図され得る。
【０２８１】
いくつかの実施形態では、食事組成物は、医療食、機能性食品、又はサプリメントから選択される。いくつかの実施形態では、組成物は、本明細書に記載の組成物を含む、栄養補助剤、食事製剤、機能性食品、医療食、食料、又は飲料の形態である。いくつかの実施形態では、栄養補助剤、食事製剤、機能性食品、医療食、食料、又は飲料は、異常ヘモグロビン症（例えば、鎌状赤血球症を有する対象）又はサラセミアの管理における使用が意図された本明細書に記載の組成物を含む。
【０２８２】
本開示は、赤血球の機能、代謝回転、若しくは合成；ヘモグロビンの機能、代謝回転、若しくは合成；血管機能；酸化ストレス（例えば、血液及び全身性酸化ストレスの一方又は双方）；又は炎症のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、又はそれ以上（例えば全て）を改善する方法であって、本明細書に記載の食事組成物を有効量で対象に投与することを含む方法を特徴とする。
【０２８３】
本開示は、異常ヘモグロビン症を有する対象（例えば、鎌状赤血球症を有する対象）又はサラセミアを有する対象に栄養支持又は補給を提供する方法であって、本明細書に記載の組成物を有効量で対象に投与することを含む方法を特徴とする。
【０２８４】
本開示は、異常ヘモグロビン症（例えば鎌状赤血球症）又はサラセミアの管理を補助する栄養支持又は補給を提供する方法であって、本明細書に記載の組成物を有効量でそれを必要とする対象に投与することを含む方法を特徴とする。
【０２８５】
いくつかの実施形態では、この方法は、非治療的方法である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の活性部分を含む組成物は、例えば、健常対象における栄養を提供するか、健康を維持するか、又は美容的外観を改善するため、非治療的様式で使用される。例として、限定はされないが、栄養補助食品として、又は食品としての本明細書に記載の組成物の使用が挙げられる。本願の組成物は、循環系、例えば、血管、血液、赤血球、ヘモグロビン、及び／若しくは血管系における様々な要素の健康を育てるか又は維持するため、使用され得る。
【０２８６】
組成物は、対象（例えば、異常ヘモグロビン症又はサラセミアを有しない対象）の食事管理の方法において使用され得る。いくつかの実施形態では、対象は、異常ヘモグロビン症又はサラセミアを有しない。
【０２８７】
いくつかの実施形態では、対象は、異常ヘモグロビン症（例えばβ異常ヘモグロビン症）又はサラセミアのリスクがあるか、又はそのように診断されている。特定の実施形態では、異常ヘモグロビン症は、鎌状赤血球症である。特定の実施形態では、サラセミアは、βサラセミアである。
【０２８８】
いくつかの実施形態では、鎌状赤血球症は、鎌状赤血球貧血（ＨｂＳＳ）、ヘモグロビンＳＣ症（ＨｂＳＣ）、鎌状β＋サラセミア（ＨｂＳ／β＋）、鎌状β０サラセミア（ＨｂＳ／β０）、ヘモグロビンＳＥ症、ヘモグロビンＳＤ症、又はヘモグロビンＳＯ症から選択される。
【実施例】
【０２８９】
以下の実施例は、本発明の理解を助けるために記載されるが、決してその範囲を制限することを意図するものでも、そのように解釈されるべきものでもない。
【０２９０】
導入
正常及び疾患特異的ヒト初代細胞モデルにおいて、アミノ酸実体を含む組成物を試験した。モデル系は、生体液及び栄養分の生理学的レベルをシミュレートすることを目標とする環境下で実施した。これらのモデルは、代謝経路のサブセットに対する組成物の効果を特定し、より理解するため、病状（例えば炎症）を含む。これらモデルのハイスループット性により、異常ヘモグロビン症（例えば鎌状赤血球症）又はサラセミア（例えばαサラセミア又はβサラセミア）を有する対象における有利な多重経路効果を有することがあるアミノ酸実体の具体的組み合わせの発見が可能になった。
【０２９１】
実施例１．初代ヒトマクロファージにおけるサイトカイン分泌
末梢血単核球（ＰＢＭＣ）の単離
未精製バフィーコート（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ）を、５０ｍＬの遠心管に慎重に注ぎ、カルシウム及びマグネシウムを有する室温のダルベッコリン酸緩衝食塩水（ｄＰＢＳ）（Ｇｉｂｃｏ）で希釈した。希釈したバフィーコートを、４つの５０ｍＬの遠心管全部に管あたり２０ｍＬでさらに分割した。リンパ球分離培地（Ｃｏｒｎｉｎｇ）を各遠心管の底部に慎重にピペッティングした。混合物を２０℃、８５０×ｇで３２分間、減速及び加速を０で遠心分離した。
【０２９２】
遠心分離後、ＰＢＭＣ層を他の成分から分離し、２５ｍＬのｄＰＢＳを有する新しい５０ｍＬの遠心管に添加した。ｄＰＢＳを用いて総体積を最大５０ｍＬにし、２０℃、６００×ｇで１０分間、加速を９、減速を５で遠心分離した。上清を細胞ペレットから慎重に除去した。１０ｍＬのｄＰＢＳを用いて、細胞ペレットを再懸濁した。次に、ｄＰＢＳを用いて総体積を最大５０ｍＬにし、２０℃、４５０×ｇで５分間、加速を９、減速を９で遠心分離した。上清除去及び細胞ペレット再懸濁を再び繰り返した。
【０２９３】
次に、上清を細胞ペレットから慎重に除去した。細胞ペレットを、カルシウム又はマグネシウムを有しない１０ｍＬのｄＰＢＳに再懸濁し、７０μＭのセルストレーナーを通して濾過した。Ｃｅｌｌｏｍｅｔｅｒ  Ｋ２自動セルカウンターを用いて、総ＰＢＭＣ数を測定した。全部で５×１０６個の細胞をフローサイトメトリー分析用に保存した。残存細胞を２０℃、４９０×ｇで５分間、９の加速、９の減速で遠心分離した。
【０２９４】
ＣＤ１４＋細胞の選択
ＥａｓｙＳｅｐ（商標）ヒトＣＤ１４陽性選択キットＩＩ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて、ＣＤ１４＋細胞を選択した。細胞を冷却ＥａｓｙＳｅｐ（商標）緩衝液（ＳＴＥＭＣＥＬＬ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に１×１０８個の細胞／ｍＬで再懸濁した。全部で１００ｕＬ／ｍＬのＥａｓｙＳｅｐ（商標）ヒトＣＤ１４陽性選択カクテルＩＩを細胞懸濁液に添加し、混合し、室温で１０分間インキュベートした。全部で１００ｕＬ／ｍＬのＲａｐｉｄＳｐｈｅｒｅｓを混合物に添加し、混合後、室温で３分間インキュベートし、次にＲｏｂｏＳｅｐ緩衝液を添加し、総体積を１０ｍＬにした。１５ｍＬの管内の混合物を磁場内に置き、室温で３分間インキュベートした。上清を廃棄し、１０ｍＬの新しいＥａｓｙＳｅｐ（商標）緩衝液を１５ｍＬの管に添加した。ＲｏｂｏＳｅｐ緩衝液の添加、混合、及び上清の廃棄をさらに２回繰り返した。
【０２９５】
陰性及び陽性画分を２０℃、４９０×ｇで５分間、９の加速、９の減速で遠心分離し、ＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）及び１０％熱不活性化ウシ胎仔血清（Ａｔｌａｎｔａ  Ｂｉｏ）及びペニシリン／ストレプトマイシンに再懸濁した。細胞を計数し、再び、２０℃、４９０×ｇで５分間、９の加速、９の減速で遠心分離した。遠心分離後、細胞を、ＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）及び１０％熱不活性化ウシ胎仔血清（Ａｔｌａｎｔａ  Ｂｉｏ）及びペニシリン／ストレプトマイシン（５００Ｕ／ｍＬのＧＭ−を含有する）に再懸濁し、１０ｃｍの組織培養プレート上に１〜２×１０６個の細胞／ｍＬで蒔いた。供給／収集の間に、細胞を３７℃、５％ＣＯ２で維持した。
【０２９６】
ＣＤ１４＋細胞供給
培地及び非付着性細胞を除去し、２０℃、４９０×ｇで５分間、９の加速、９の減速で遠心分離し、新しいＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）及び１０％熱不活性化ウシ胎仔血清（Ａｔｌａｎｔａ  Ｂｉｏ）及びペニシリン／ストレプトマイシン（ＧＭ−ＣＳＦを含有する）に再懸濁することにより、３〜４日ごとに細胞を供給した。再懸濁細胞を１０ｃｍの組織培養プレート上に再び播種し、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。その後の実験用に、分化したマクロファージを使用した。
【０２９７】
スクリーン
一次ヒトＰＭＢＣ由来マクロファージを、０日目、３．０×１０４個の細胞／ウェルで、９６ウェルマイクロプレート（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）内、ペニシリン−ストレプトマイシン（Ｈｙｃｌｏｎｅ）及び１０％熱不活性化ウシ胎仔血清（ＨＩ−ＦＢＳ）（Ａｔｌａｎｔａ  Ｂｉｏ）を添加したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）（Ｇｉｂｃｏ）に播種し、３７℃、５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。１日目、細胞を、１５０ｕＬ／ウェルのＤＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）で１回洗浄し、７５ｕＬの
ａ．６ｍＭグルコース、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、１０ｍＭヘペス、０．２％ｐｒｉｍｏｃｉｎ（ＩｎＶｉｖｏＧｅｎ）を有する、ヒトメタボロームデータベース（ＨＭＤＢ）で公表された値に基づく血液中の平均生理学的濃度に基づいて規定されたカスタムアミノ酸の濃度を有するアミノ酸フリーのＤＭＥＭ（ＵＳ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）；又は
ｂ．完全脱落を含む、１つのアミノ酸を様々な濃度で有する上記と同じ培地
で処置した。
【０２９８】
２日目、細胞を、０．３０ｎｇ／ｍＬのリポ多糖（ＬＰＳ）（Ｓｉｇｍａ）をＬＰＳの最終濃度が０．１５ｎｇ／ｍＬになるように添加した上記と同じ培地７５ｕＬで処置した。対照ウェルを、１μＭのＢＸ−７９５（Ｔｏｃｉｓ）、１μＭのＴＡＫ２４２（Ｓｉｇｍａ）、０．１５ｎｇ／ｍＬのＬＰＳ、又はリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で処置した。
【０２９９】
３日目、上清を収集し、直ぐに−８０℃の冷凍庫で凍結させた。細胞を１５０ｕＬのＤＰＢＳで１回洗浄し、ＷＳＴ−８細胞増殖細胞毒性アッセイ（同仁堂）を用いて生存度を評価した。アッセイ後、細胞を１５０ｕＬのＰＢＳで２回洗浄し、４％パラホルムアルデヒドで５分間固定し、続いて１５０ｕＬのＰＢＳで２回追加洗浄した。ＩＬ−６及びＴＮＦａについて、上清試料中のタンパク質レベルを、市販のキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて、製造業者提供のプロトコルに従い、ＥＬＩＳＡにより分析した。結果を下の表７〜１２に示す。
【０３００】
【表１０】
2021528414.tif 000011
【０３０１】
【表１１】
2021528414.tif 000012
【０３０２】
ＬＩＶＲＱＮＡＣ、ＬＩＶＲＱＮＡＣ＋Ｇ、ＬＩＶＲＱＮＡＣ＋Ｓ、ＲＱＮＡＣ、及びＮＡＣを用いた処置により、初代ヒト単球由来マクロファージにおけるＬＰＳ誘導性のＩＬ−６分泌が有意に低下した。ＬＩＶＲＱを用いた処置により、ＩＬ−６分泌が有意に増加した一方で、ＬＩＶは効果を有しなかった。アルギニン及びグルタミンの単独投与により、ＩＬ−６分泌が増加した一方で、他のアミノ酸は単独でＩＬ−６分泌をもたらさなかった。統計分析のため、二元配置分散分析のダネット多重比較を実施した。平均値をベースラインが差し引かれた値として表した。
【０３０３】
【表１２】
2021528414.tif 000013
【０３０４】
【表１３】
2021528414.tif 000014
【０３０５】
ＬＩＶＲＱＮＡＣ、ＬＩＶＲＱＮＡＣ＋Ｇ、ＬＩＶＲＱＮＡＣ＋Ｓ、ＲＱＮＡＣ、及びＮＡＣを用いた処置により、初代ヒト単球由来マクロファージにおけるＬＰＳ誘導性のＩＬ−６分泌が有意に低下した。ＬＩＶＲＱ及びＬＩＶを用いた処置により、ＩＬ−６分泌が有意に増加した。グルタミン及びロイシンの単独投与により、ＩＬ−６分泌が増加した一方で、他のアミノ酸は単独で効果を有しなかった。統計分析のため、二元配置分散分析のダネット多重比較を実施した。平均値をベースラインが差し引かれた値として表した。
【０３０６】
【表１４】
2021528414.tif 000015
【０３０７】
【表１５】
2021528414.tif 000016
【０３０８】
ＬＩＶＲＱＮＡＣ＋Ｇ、ＬＩＶＲＱＮＡＣ＋Ｓ、ＲＱＮＡＣ、及びＮＡＣを用いた処置により、初代ヒト単球由来マクロファージにおけるＬＰＳ誘導性のＩＬ−６分泌が有意に低下した。ＬＩＶＲＱを用いた処置により、ＩＬ−６分泌が増加した一方で、ＬＩＶ及びＬＩＶＲＱＮＡＣは、ＩＬ−６分泌に対する統計学的に有意な効果を有しなかった。グルタミンの単独投与により、ＩＬ−６分泌が有意に増加した一方で、他のアミノ酸は単独で効果を有しなかった。統計分析のため、二元配置分散分析のダネット多重比較を実施した。平均値をベースラインが差し引かれた値として表した。
【０３０９】
【表１６】
2021528414.tif 000017
【０３１０】
【表１７】
2021528414.tif 000018
【０３１１】
ＬＩＶＲＱＮＡＣ、ＬＩＶＲＱＮＡＣ＋Ｇ、ＬＩＶＲＱＮＡＣ＋Ｓ、ＲＱＮＡＣ、及びＮＡＣを用いた処置により、初代ヒト単球由来マクロファージにおけるＬＰＳ誘導性のＴＮＦａ分泌が有意に低下した。ＬＩＶを用いた処置により、ＴＮＦａ分泌が増加した一方で、ＬＩＶＲＱは、ＴＮＦａ分泌に対する有意な効果を有しなかった。個別投与したいずれのアミノ酸も、ＴＮＦａ分泌に対する効果を有しなかった。統計分析のため、二元配置分散分析のダネット多重比較を実施した。平均値をベースラインが差し引かれた値として表した。
【０３１２】
【表１８】
2021528414.tif 000019
【０３１３】
【表１９】
2021528414.tif 000020
【０３１４】
ＬＩＶＲＱＮＡＣ、ＬＩＶＲＱＮＡＣ＋Ｇ、ＬＩＶＲＱＮＡＣ＋Ｓ、ＲＱＮＡＣ、及びＮＡＣを用いた処置により、初代ヒト単球由来マクロファージにおけるＬＰＳ誘導性のＴＮＦａ分泌が有意に低下した。ＬＩＶ及びＬＩＶＲＱを用いた処置により、ＴＮＦａ分泌が増加した。ロイシン、イソロイシン、及びグルタミンの個別投与により、ＴＮＦａ分泌が増加した一方で、他のアミノ酸は効果を有しなかった。統計分析のため、二元配置分散分析のダネット多重比較を実施した。平均値をベースラインが差し引かれた値として表した。
【０３１５】
【表２０】
2021528414.tif 000021
【０３１６】
【表２１】
2021528414.tif 000022
【０３１７】
ＬＩＶＲＱＮＡＣ、ＬＩＶＲＱＮＡＣ＋Ｇ、ＬＩＶＲＱＮＡＣ＋Ｓ、ＲＱＮＡＣ、及びＮＡＣを用いた処置により、初代ヒト単球由来マクロファージにおけるＬＰＳ誘導性のＴＮＦａ分泌が有意に低下した。ＬＩＶ及びＬＩＶＲＱを用いた処置により、ＴＮＦａ分泌が増加した。個別投与したアミノ酸は、ＴＮＦａ分泌を増加させたグルタミンを除いて、ＴＮＦａ分泌に対する有意な効果を有しなかった。統計分析のため、二元配置分散分析のダネット多重比較を実施した。平均値をベースラインが差し引かれた値として表した。
【０３１８】
炎症促進性及び抗炎症性サイトカイン産生の不均衡は、血管閉塞性発作（ＶＯＣ）の発現及び鎌状赤血球症におけるその重症度と相関することが提起されている（Ｓａｒｒａｙ  ｅｔ  ａｌ．２０１５；その全体の参照により本明細書に組み込まれる）。ＶＯＣは、虚血性損傷及び激痛を生じさせる鎌状赤血球症の特徴的な合併症である。Ｓａｒｒａｙ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）は、炎症促進性サイトカインＩＬ−６の上昇が、ＶＯＣ群における高いＩＬ−６及びＴＮＦαの四分位の強化と共にＶＯＣの持続期間と相関することと、炎症促進性ＩＬ−１０の低下が、ＶＯＣの頻度、タイプ、重症度、及び持続期間と相関することを示した。まとめると、それらの結果は、鎌状赤血球症の病理における炎症促進性及び抗炎症バランスの重要性を強調している。
【０３１９】
実施例２．鎌状赤血球症患者における反応性酸素種
ヘモグロビンの脱酸素は、スーパーオキシドの産生をもたらし、それは酸素離脱が増加する、例えば低酸素、血流低下又は貧血の間に生じるとき、増幅される（Ｒｏｇｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．２００９）。そのようなことから、赤血球は、強固な抗酸化剤の防御系を必要とし、全身反応性酸素種のためのシンクとして役立つ（ＲＯＳ，Ｒｏｇｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．２００９）。ＲＯＳは、鎌状赤血球症患者における全血及び赤血球中で、健常対照よりも高率に産生されることが報告されており、低下したグルタチオン（ＧＳＨ）の存在量及びＧＳＨを再循環させる能力の双方が損なわれ、膜タンパク質の酸化、膜脆弱性、及び血管機能障害がもたらされる（Ａｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２００３，２００４，２００５，Ｒｏｇｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．２０１３）。
【０３２０】
過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）を使用し、Ａｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２００４から改変されたプロトコルに従い、健常対照（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ）及び鎌状赤血球症患者（ＩＲＢ認可、Ｂｏｓｔｏｎ  Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ）からの全血の試料中でＲＯＳを誘導した。全血試料をＣａ２＋及びＭｇ２＋を含まないダルベッコリン酸緩衝食塩水（ＤＰＢＳ，Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で適切に希釈し、Ｃｅｌｌｏｍｅｔｅｒ  Ｋ２  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ｃｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｅｒで製造業者のＲＢＣ／ＡＯＰＩプロトコル（Ｎｅｘｃｅｌｏｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に従い、赤血球の濃度（ＲＢＣ／ｍｌ）を測定した。
【０３２１】
次に、細胞を、０．２μで濾過し、２０ｍＭのタンパク新生アミノ酸をＨＭＤＢ中に存在する基礎濃度の１倍で添加した、１４５ｍＭのＮａＣｌ、７．５ｍＭのＫＣｌ、１０ｍＭのグルコース、１０ｍＭのヘペス、２ｍＭのＣａＣｌ２（ｐＨ７．４）を含有する、Ｗｅｓｓｅｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２０１６）から改変された、予熱した３７℃のＤＰＢＳ又はＨＥＰＥＳ緩衝化生理学的溶液（ＨＰＳ）のいずれかに、１×１０６個のＲＢＣ／ｍｌまで希釈した（Ｗｉｓｈａｒｔ  ＤＳ，Ｔｚｕｒ  Ｄ，Ｋｎｏｘ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．，ＨＭＤＢ：ｔｈｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｍｅｔａｂｏｌｏｍｅ  Ｄａｔａｂａｓｅ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２００７  Ｊａｎ；３５（Ｄａｔａｂａｓｅ  ｉｓｓｕｅ）：Ｄ５２１−６．１７２０２１６８））（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｓｉｇｍａ）。ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ，Ｆｉｓｈｅｒ）中の２０ｍＭの２’−７’−ジクロロフルオレセインジアセテート（ＤＣＦ，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｓｉｇｍａ）を１００μＭの作動濃度まで添加した。細胞を組織培養インキュベーター内で色素とともに３７℃、５％ＣＯ２で１５分間インキュベートし、１回洗浄し、０．９体積の同じく予熱した３７℃の緩衝液に再懸濁し、スイングアーム遠心機（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）で５００×ｇ、加速／減速＝５で５分間回転させた。細胞を９６ウェルの透明底の黒色マイクロプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に９０μｌ／ウェルで分布させ、次いで任意選択的には濃度をＨＭＤＢ中に存在する基礎濃度の１倍、５倍、１０倍、又は２０倍に増加させるように設計したアミノ酸の単独若しくは組み合わせ（Ｈｕｍａｎ  Ｍｅｔａｂｏｌｏｍｅ  Ｄａｔａｂａｓｅ（Ｗｉｓｈａｒｔ  ＤＳ，Ｔｚｕｒ  Ｄ，Ｋｎｏｘ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．，ＨＭＤＢ：ｔｈｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｍｅｔａｂｏｌｏｍｅ  Ｄａｔａｂａｓｅ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２００７  Ｊａｎ；３５（Ｄａｔａｂａｓｅ  ｉｓｓｕｅ）：Ｄ５２１−６．１７２０２１６８））又は非タンパク新生アミノ酸を含有する同じ緩衝液を、ウェルあたり１０μｌで、０．１、１、２、又は５ｍＭの最終濃度まで添加した。溶解度制限に応じて可能であれば、ｐＨ−７．４に調節したアミノ酸の保存液を使用した。ウェルをピペッティングにより混合し、プレートを組織培養インキュベーター内、３７℃、５％ＣＯ２で３０分間インキュベートした。任意選択的には、同じ緩衝液中で新規に調製した４０ｍＭのＨ２Ｏ２（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｓｉｇｍａ）を添加し、濃度を２ｍＭにし、ウェルをピペッティングにより混合し、ＲＯＳシグナルの蛍光測定前、プレートを、励起＝４８８ｎｍ及び放射＝５３０ｎｍで、ゲインをオートゲイン、７５、又は１００のいずれかに設定した、Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｈ４（ＢｉｏＴｅｋ）マイクロプレートリーダー上で、さらに３０、６０、１２０、又は２４０分インキュベートした。
【０３２２】
Ｎ−アセチルシステイン（スペクトル）及びシステインにより、Ｈ２Ｏ２で用量応答性に処置した健常対照ドナーの全血中、及びＨ２Ｏ２で処置した鎌状赤血球症患者血液とＤＰＢＳで処置していない同血液の双方の試料中で測定したＲＯＳが減少した。加えて、１０倍のトリプトファンにより、健常ドナー血液と鎌状赤血球症患者血液の双方でＲＯＳシグナルが増加し、組成物からのその除外についての証拠が得られた。試験した他のすべてのアミノ酸は、単独又はＮＡＣ若しくはシステインとの組み合わせのいずれであってもＲＯＳの測定に影響せず、組成物へのそれらの封入が鎌状赤血球症における病理学的酸化ストレスと闘う場合に有害でないことが示された。
【０３２３】
実施例３．赤血球のアミノ酸プロファイリング
鎌状赤血球症における血漿及び赤血球アミノ酸の濃度差は、記載がなされており、内皮機能障害に寄与すると考えられている。例えば、溶血を通じた赤血球アルギナーゼの放出は、血漿アルギニンの減少に寄与し、このアミノ酸の限られたバイオアベイラビリティ及び一酸化窒素（ＮＯ）抵抗性の病理学的状態に寄与することが記載されている（Ｍｏｒｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．２００５）。さらに、メタボロミクス試験では、疾患病理学に寄与することが仮定された、アミノ酸レベル及び経路の調節不全が同定されている（Ｄａｒｇｈｏｕｔｈ  ｅｔ  ａｌ．２０１１）。
【０３２４】
血漿及び赤血球アミノ酸、並びに酸化及び還元グルタチオンを、鎌状赤血球症患者の全血試料中（ＩＲＢ承認、Ｂｏｓｔｏｎ  Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ）、並びに人種適合健常対照からの全血中で分析する。試料の採取時の摂食又は絶食状態について調節することが可能でない一方で、患者及び健常対照における赤血球と血漿との間でのアミノ酸濃度の統計学的差異は、その病態での代謝における強固な差異を表すと考えられ、疾患病理学に寄与することがある。健常対照と鎌状赤血球症患者との間で傾向のレベル又は統計学的有意性のいずれかで差異が認められる場合のアミノ酸は、低酸素下での鎌状化に対する抵抗性及びホスファチジルセリンなどの接着マーカーの曝露などの他のアッセイにおけるスクリーニングにおいて、優先順位がつけられる。
【０３２５】
実施例４．接着バイオマーカー
鎌状赤血球症の特徴は、虚血性損傷及び激痛をもたらす小血管の血管閉塞によって引き起こされる「鎌状赤血球発作」である。いくつかの因子が血管閉塞に向けて共謀し：鎌状ＲＢＣの硬直及び接着の増加により、それらが循環ＷＢＣ及び血管内皮に固着する可能性が高くなり；溶血からのアルギナーゼの増加により、一酸化窒素（ＮＯ）を生成するのに必要な遊離血漿アルギニンが枯渇し、血管拡張作用が損なわれる。鎌状赤血球発作は、患者が診療を求める主な理由であり、任意の臓器で生じ、数日間続く可能性があることから、重篤であり得る。肺脈管構造における発作は、「急性胸部症候群」として出現し；脳における発作は、脳卒中又は「サイレントな」脳梗塞を引き起こす可能性があり；骨における発作は、骨壊死をもたらす可能性があり；且つ他所における発作は、ほぼ全ての臓器における損傷及び不全をもたらす可能性がある。鎌状化は、赤血球膜の物理的破壊及び代謝回転増加、細胞硬直の増加、カリウム欠損による細胞脱水、並びにホスファチジルセリンの外在化を介したＲＢＣの接着増加をもたらす。ホスファチジルセリンの曝露増加によって媒介される白血球及び血管内皮細胞への赤血球接着は、鎌状赤血球症における血管閉塞の機構の中に含まれ、ホスファチジルセリン曝露の測定は、ヒト臍帯静脈上皮細胞への赤血球接着などの接着に関する他のアッセイと十分に相関する。
【０３２６】
ホスファチジルセリン曝露は、処置していない鎌状赤血球症患者血液（ＩＲＢ承認、Ｂｏｓｔｏｎ  Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ）、健常対照ドナー血液（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ）で未処置条件下、又は低酸素などのホスファチジルセリン曝露を誘発することが知られる疾患病理に関連する刺激若しくはカルシウムイオノフォア４−ｂｒ  Ａ２３１８７（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｓｉｇｍａ）で処置されるときのいずれかにおいて、蛍光プローブＡｌｅｘａ  ４８８（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）にコンジュゲートされたアネキシンＶの結合により測定する。アミノ酸処置の、ＨＭＤＢ（Ｈｕｍａｎ  Ｍｅｔａｂｏｌｏｍｅ  Ｄａｔａｂａｓｅ（Ｗｉｓｈａｒｔ  ＤＳ，Ｔｚｕｒ  Ｄ，Ｋｎｏｘ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．，ＨＭＤＢ：ｔｈｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｍｅｔａｂｏｌｏｍｅ  Ｄａｔａｂａｓｅ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２００７  Ｊａｎ；３５（Ｄａｔａｂａｓｅ  ｉｓｓｕｅ）：Ｄ５２１−６．１７２０２１６８））中に見出される複数の基礎レベルで、ホスファチジルセリン曝露を修飾する能力は、これらの条件下で認められる。接着マーカーのホスファチジルセリンの曝露を低減することが可能なアミノ酸の単独又は組み合わせは、血管閉塞を低減するのに有望な治療薬となる。
【０３２７】
実施例５．鎌状化に対する赤血球の抵抗性
低酸素条件下、例えば末梢組織内、又は貧血中の、鎌状赤血球症の赤血球は、鎌状ヘモグロビン（ＨｂＳ）の重合に起因し、それらの形態が特徴的な「鎌状」形状に変化する。これは細胞硬直を増加させ、血管閉塞に寄与する（Ｄｕ  ｅｔ  ａｌ．２０１５）。ヒドロキシ尿素において示されている通り、低酸素下で鎌状化する細胞の割合を減少させる、又は細胞の鎌状化に要する時間を増加させることのいずれかによる、鎌状化に対する抵抗性をもたらす有望な処置であれば、血管閉塞の病状を低減し得る。
【０３２８】
単一のアミノ酸及び組み合わせは、ＨＭＤＢ（Ｈｕｍａｎ  Ｍｅｔａｂｏｌｏｍｅ  Ｄａｔａｂａｓｅ（Ｗｉｓｈａｒｔ  ＤＳ，Ｔｚｕｒ  Ｄ，Ｋｎｏｘ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．，ＨＭＤＢ：ｔｈｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｍｅｔａｂｏｌｏｍｅ  Ｄａｔａｂａｓｅ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２００７  Ｊａｎ；３５（Ｄａｔａｂａｓｅ  ｉｓｓｕｅ）：Ｄ５２１−６．１７２０２１６８））中で見出される複数の基礎レベルで、適切な緩衝液で希釈された鎌状赤血球症患者全血試料に、低酸素ガス混合物（２％Ｏ２、５％ＣＯ２、平衡Ｎ２、Ｍｉｄｄｌｅｓｅｘ  Ｇａｓｓｅｓ  ＆  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中でのインキュベーション下で鎌状化に対する抵抗性を提供するそれらの能力について試験する。試料は、ＩｍａｇｅＥｘｐｒｅｓｓマイクロ共焦点顕微鏡（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）上のオプティカルボトムを有する９６ウェルの黒色蛍光マイクロプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）内で経時的に画像化し、各時点で鎌状赤血球の百分率を同定する。鎌状化に対する抵抗性を与えるアミノ酸又は組み合わせは、これらのアミノ酸についての一連の証拠に対して、組成物中への封入を検討することになる。
【０３２９】
実施例６．赤血球のカルシウム流入
鎌状赤血球は、持続性カルシウム漏出を有するものとして記載されており、低酸素及び鎌状化の下で増悪し、ホスファチジルセリンなどの接着マーカーの曝露をもたらし、疾患病理に寄与する。
【０３３０】
鎌状赤血球へのカルシウム流入は、鎌状赤血球症患者全血に細胞内カルシウムプローブＦｌｕｏ−４  ＡＭ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を製造業者の使用説明書に従って予備充填することにより測定する。単一のアミノ酸及び組み合わせは、ＨＭＤＢ（Ｈｕｍａｎ  Ｍｅｔａｂｏｌｏｍｅ  Ｄａｔａｂａｓｅ（Ｗｉｓｈａｒｔ  ＤＳ，Ｔｚｕｒ  Ｄ，Ｋｎｏｘ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．，ＨＭＤＢ：ｔｈｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｍｅｔａｂｏｌｏｍｅ  Ｄａｔａｂａｓｅ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２００７  Ｊａｎ；３５（Ｄａｔａｂａｓｅ  ｉｓｓｕｅ）：Ｄ５２１−６．１７２０２１６８））中で見出される複数の基礎レベルで、適切な緩衝液で希釈された鎌状赤血球症患者全血試料に、低酸素ガス混合物（２％Ｏ２、５％ＣＯ２、平衡Ｎ２、Ｍｉｄｄｌｅｓｅｘ  Ｇａｓｓｅｓ  ＆  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中でのインキュベーション下でカルシウム流入に対する抵抗性を提供するそれらの能力について試験する。試料は、ＩｍａｇｅＥｘｐｒｅｓｓマイクロ共焦点顕微鏡（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）上のオプティカルボトムを有する９６ウェルの黒色蛍光マイクロプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）内で経時的に画像化し、カルシウム流入は、鎌状表現型を有する赤血球又は全細胞のいずれかの励起＝４８８ｎｍ、放射＝５３０ｎｍでの蛍光強度を観測することにより、測定する。
【０３３１】
実施例７．鎌状赤血球貧血のＢｅｒｋｅｌｅｙマウスモデル
鎌状赤血球症の系性質の病理及び処置について試験するため、いくつかのトランスジェニックマウスモデルが開発されている。Ｂｅｒｋｅｌｅｙマウス（ＢＥＲＫ）と称されるかかる一モデルは、これらのマウスにおいて鎌状赤血球貧血をもたらす、鎌状ヘモグロビン変異型（ＨｂＳ）を含むヒトヘモグロビン鎖を排他的に発現させるため、開発された。（Ｐａｓｚｔｙ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ，１９９７．Ｓｃｉｅｎｃｅ）。ＢＥＲＫモデルは、貧血、網赤血球増加、不可逆的鎌状赤血球、赤血球代謝回転増加、及び多臓器病理を含む、疾患の多種多様な側面を十分に近似している（ｄｅ  Ｊｏｎｇ  Ｋ  ｅｔ  ａｌ，２００１．Ｂｌｏｏｄ）。
【０３３２】
アミノ酸の組み合わせは、ＨＭＤＢ（Ｈｕｍａｎ  Ｍｅｔａｂｏｌｏｍｅ  Ｄａｔａｂａｓｅ（Ｗｉｓｈａｒｔ  ＤＳ，Ｔｚｕｒ  Ｄ，Ｋｎｏｘ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．，ＨＭＤＢ：ｔｈｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｍｅｔａｂｏｌｏｍｅ  Ｄａｔａｂａｓｅ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２００７  Ｊａｎ；３５（Ｄａｔａｂａｓｅ  ｉｓｓｕｅ）：Ｄ５２１−６．１７２０２１６８））中で見出される複数の基礎レベルで、プラセボ及び複数レベルのＬ−グルタミンに対して、ＢＥＲＫマウスモデルにおけるそれら系の治療効果について試験する。６つの治療群：（１）溶媒、（２）低用量のＬ−グルタミン、（３）高用量のＬ−グルタミン、（４）Ｌ  Ｒ  Ｑ  ＮＡＣ  Ｇ  Ｃａｒ  Ｈ  Ｋ  Ｖからなる低用量の組成物、（５）Ｌ  Ｒ  Ｑ  ＮＡＣ  Ｇ  Ｃａｒ  Ｈ  Ｋ  Ｖからなる高用量の組成物、又は（６）Ｌ  Ｒ  Ｑ  ＮＡＣからなる高用量の組成物、の１つにおいて、動物は、ＢＩＤで４週間、経管栄養する。尾静脈穿刺からの毎週の採血は、限定はされないが、ヘマトクリット、ヘモグロビン、赤血球体積、網状赤血球数、ＷＢＣ数、及び血小板数を含む血液学的パラメータ（完全血球数）について分析する。採血は、血漿及びＲＢＣアミノ酸特性、サイトカインパネル、ＲＯＳ、ＰＳ曝露、及び他の関連する細胞又は分子マーカーについても分析する。採血及びフローサイトメトリーによる分析前の赤血球のビオチン化は、赤血球代謝回転の定量化を可能にする。病理組織学では、対照群及び処置群における臓器損傷の比較が可能になる。血液学的パラメータ、赤血球の健康及び代謝回転を改善し、且つ臓器損傷を制限するアミノ酸の組み合わせは、鎌状赤血球貧血の治療のためのサポートを提供する。
【０３３３】
実施例８．アミノ酸前処置による溶血の生体外誘導モデルにおけるＲＢＣ変形能試験
健常なアフリカ系アメリカ人及び／又はヒスパニックドナーからの全血を、以下のドナーの選択基準：成人年齢（１８〜５０歳の間）、正常ＢＭＩ（＜３０）、及び他の交絡する臨床条件の不在に基づき、Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ，ＬＬＣから入手した。ＳＣＤドナーからの全血を、以下のドナーの選択基準：遺伝子型ＨｂＳＳ、ＨｂＳＣ、ＨｂＳ／β０を有する患者及び最終輸血から少なくとも１〜２か月の間隔に基づき、ＢｉｏＩＶＴから入手した。全血は採血と同じ日に氷上で輸送した。受け取り時、血液試料をアリコートし、試験で使用するまで冷蔵庫に貯蔵した。
【０３３４】
ＲＢＣ変形能測定は、ＲＲ  Ｍｅｃｈａｔｒｏｎｉｃｓ製のＬａｓｅｒ  Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｒｏｔａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｄ  Ｃｅｌｌ  Ａｎａｌｙｚｅｒ（ＬＯＲＲＣＡ）を用いて温度制御環境下（３７℃）で実施した。つまり、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）中に懸濁したＲＢＣの平らな層に、２つの同心円筒を通じたずり応力勾配（０．３〜３０Ｐａ）を施し、ＲＢＣの形状又は変形能においてもたらされた変化を、レーザー光回折パターンにより測定する。次に、伸び指数（ＥＩ）を計算するため、ずり応力増加に応答したＲＢＣ形状の取得画像をＬＯＲＲＣＡプログラムにより分析する。
【０３３５】
当該分野におけるＬＯＲＲＣＡ  ｅｋｔａｃｙｔｏｍｅｔｒｙによる試験として、健常ＲＢＣはより高い変形能≧０．５ＥＩを有し、ＳＣＤ  ＲＢＣはより低い変形能又はＥＩ値を有する。先行文献では、１／２ＥＩｍａｘずり応力≦１．６９Ｐａでの変化がＲＢＣ膜の柔軟性における変化を示し、ずり応力≧３．０Ｐａでの変化が、ＲＢＣ細胞表面／体積比、膜の柔軟性に伴う細胞内粘度に対する影響を示すことが示唆されている（Ｒｅｎｏｕｘ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ，Ｓｃｉ  Ｒｅｐ．２０１９  Ｍａｙ  １；９（１）：６７７１）。本開示における誘導溶血モデルは、ＲＢＣのＥＩを低下させるためのｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシド（ＴＢＨＰ）の使用を含む。ＴＢＨＰは、膜を透過性にし、細胞を酸化し、タンパク質加水分解を誘導し、酵素活性を阻害し、溶血を誘導し、それによりＳＣＤの病理をシミュレートすることが示されている（ＲｏｙＡ，ｅｔ  ａｌ，Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ．２０１２  Ａｐｒ；１９（２）：１３７−４８及びＲｕｎｇｅ−Ｍｏｒｒｉｓ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ，Ｃｈｅｍ  Ｒｅｓ  Ｔｏｘｉｃｏｌ．１９８９  Ｍａｒ−Ａｐｒ；２（２）：７６−８３）。
【０３３６】
本開示の生体外溶血試験は、全血の対照としての溶媒及び特定のアミノ酸での一晩処置とそれに続くＴＢＨＰでの迅速な酸化（５分）を含む。全血をｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシドで酸化するための方法は、先行文献において用いられている（Ｄｉｅｄｅｒｉｃｈ  Ｌ，ｅｔ  ａｌ，Ｆｒｏｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．２０１８  Ｍａｙ  １１；９：３３２）。次に、ＲＢＣの変形能又は形状変化をＬＯＲＲＣＡ  ｅｋｔａｃｙｔｏｍｅｔｒｙで測定する。
【０３３７】
冷蔵庫に貯蔵した全血の一定分量を、ロッカー上、低速で１時間、緩やかに振盪しながら室温まで上げ、変形能測定前に赤血球の緩徐且つ均一な懸濁を保証した。試験に使用する溶媒対照は１倍ダルベッコリン酸溶媒）であり、本明細書に開示のアミノ酸を、（指示通りの最終の１０倍又は２．５ｍＭいずれかの濃度で）対応する溶媒及びアミノ酸処置条件に添加した。次に、試料を３７℃で一晩インキュベートした。翌日、２５μＬの全血を各処置条件から取得し、ＲＲ  Ｍｅｃｈａｔｒｏｎｉｃｓ製のＥｌｏｎ  ＩＳＯ粘稠性溶液５ｍＬに添加した。試料を１５〜２０回反転させ、処置されたＲＢＣとＥｌｏｎ  ＩＳＯ溶液との適切な混合を保証し、続いて試料をＬＯＲＲＣＡに負荷し、適用したずり勾配にわたりＲＢＣの変形能又は形状の測定値を取得した。すべての処置について変形能測定が完了するまで、処置した残留全血をインキュベーター（３７℃）に戻した。残留全血の処置試料に対して、ＴＢＨＰ溶液（デカン中５．０〜６．０Ｍ、Ｓｉｇｍａ）を１００ｍＭの新しい調製保存液から２．５ｍＭの最終濃度で添加し、３７℃でさらに５分間インキュベートした。５分間のインキュベーションの終了時、このＴＢＨＰ処置試料２５μＬを直ぐに除去し、Ｅｌｏｎ  ＩＳＯ溶液に添加し、酸化後のＲＢＣ変形能を測定した。表１３〜１５中に、これらの試験からの１／２ＥＩｍａｘずり応力１．６９Ｐａ及びＥＩｍａｘずり応力３０ＰａでのＥＩ測定値を含め、図１は、指定の処置条件におけるすべてのずり応力点についてのＥＩ測定値のキャプチャーを示す。
【０３３８】
結果
生体外溶血モデルにおけるＲＢＣの変形能又は伸び指数（ＥＩ）の測定
図１は、本明細書で開示される特定のアミノ酸又はＤＰＢＳ溶媒での指定の前処置における、全血のＴＢＨＰ酸化の存在下及び非存在下での健常ドナー１からの健常ＲＢＣの変形能における変化を示す。ＲＢＣ変形能の測定値をＥＩの単位でＹ軸に示し、加えられたずり応力（Ｐａ）をＸ軸に示す。各ずり応力に対するＥＩ測定値は、５０の測定値の平均である。実線は、全血のＴＢＨＰ酸化を伴わない一晩の前処置を表し、一点鎖線は、ＴＢＨＰ酸化後を表す。
【０３３９】
表１３は、図１からの半分最大ずり応力（１．６９Ｐａ）及び最大ずり応力（３０Ｐａ）でのＲＢＣ変形能の測定値（ＥＩ）のキャプチャーを示す。２つの異なる倍数変化を表１３に示す。Ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシドによるＥＩの倍数変化は、各前処置群におけるＴＢＨＰ酸化の存在下及び非存在下でのＥＩにおける差異を示す。１／２ＥＩｍａｘずり応力（１．６９Ｐａ）での溶媒対照のＲＢＣ変形能は、ＴＢＨＰで処置されるとき、４．７倍低下し、ＥＩｍａｘ（３０Ｐａ）では、２．０倍低下する。ＲＮａｃＣｉｔＱＣａｒ前処置群における倍数変化は各々、双方のずり応力点において、ＴＢＨＰ酸化によるＲＢＣのＥＩにおける２．９倍及び１．５倍の低下を有した。ＲＮａｃＣｉｔＱＣａｒＬＨＫＶＳ前処置群は、２つのずり応力点において、１．８倍及び１．２倍のＴＢＨＰ酸化による最低の倍数変化を有した。溶媒に対するＥＩの倍数変化は、溶媒対照群に対するＥＩにおける差異を示す。ＲＮａｃＣｉｔＱＣａｒＬＨＫＶＳ前処置群は、ＴＢＨＰ酸化に対して、１／２ＥＩｍａｘ及びＥＩｍａｘにおける各々、２．６倍及び１．９倍で、溶媒群、続いてＲＮａｃＣｉｔＱＣａｒ群を上回る最高の改善を有する。図１及び表１３からの結果は、ＴＢＨＰ酸化によるすべての前処置条件におけるより低いＥＩとともに、溶媒における最低のＥＩ、ＲＮａｃＣｉｔＱＣａｒにおけるより高いＥＩ及びＲＮａｃＣｉｔＱＣａｒＬＨＫＶＳにおける最高のＥＩを示唆し、ＲＢＣに対する酸化及び溶血性損傷に際して変形能又はＥＩの低下を最小化する場合でのこれらのアミノ酸組成物の利益が示唆される。
【０３４０】
表１４からの結果は、健常ドナー２からの健常全血中のＴＢＨＰ酸化時の単一のアミノ酸処置における変形能を示す。溶媒対照を上回る、Ｒ、Ｃｉｔ、Ｎａｃ、Ｑ、Ｃａｒの単一アミノ酸処置におけるＥＩは、１／２ＥＩｍａｘ及びＥＩｍａｘ測定の双方において溶媒よりも高い。１／２ＥＩｍａｘ、ＥＩｍａｘにおける個別のＥＩ測定値と溶媒対照に対する倍数変化又はＥＩの改善の双方によって示されるように、Ｑ処置群は少なくとも有効であり、ＲＮａｃＣｉｔＱＣａｒＬＨＫＶＳはすべての処置群の中で最も有効であった。加えて、健常ドナー１及び２双方は、表１３及び１４に基づき、ＲＮａｃＣｉｔＱＣａｒＬＨＫＶＳ前処置群においてＴＢＨＰ酸化で最高のＥＩを示す。加えて、表１６からの結果は、健常ドナー２からの全血中のＲＮａｃＣｉｔの効果を示す。ＲＮａｃＣｉｔで前処置したＲＢＣのＥＩは、ＴＢＨＰ酸化に応答して、溶媒よりも１／２ＥＩｍａｘずり応力で１．８倍改善された変形能及びＥＩｍａｘで約１．５倍改善された変形能を示す。
【０３４１】
表１５からの結果は、増加用量のアミノ酸ＲＮａｃＣｉｔＱＣａｒＬＨＫＶＳでの生体外前処置時とその後の迅速なＴＢＨＰ酸化時の、ＳＣＤドナーからのＲＢＣの変形能又はＥＩにおける線形増加を示す。ＲＢＣの変形能又はＥＩにおける倍数変化は、溶媒対照と比べて５倍、１０倍及び２０倍のＲＮａｃＣｉｔＱＣａｒＬＨＫＶＳ前処置における用量反応を示し、２０倍の前処置において最高で５．３倍の変化が認められた。
【０３４２】
表１３〜１５及び図１からの組み合わせた結果は、酸化、タンパク質加水分解及び溶血からの損傷に応答した、ＥＩによる測定としてのＲＢＣの変形能又は形状の低下を低減する場合の本明細書で開示される特定のアミノ酸組成物の利益を示す。溶血における低下は、潜在的には鎌状赤血球症患者における血管閉塞性疼痛発作及び臓器損傷を最小化し得る。
【０３４３】
【表２２】
2021528414.tif 000023
【０３４４】
【表２３】
2021528414.tif 000024
【０３４５】
【表２４】
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【０３４６】
【表２５】
2021528414.tif 000026
【０３４７】
実施例９．内皮細胞のスクリーニング
ＳＣＤにおける血管機能障害は、血管内皮細胞（ＶＥＣ）接着マーカーの発現、炎症性サイトカイン、並びに低下した一酸化窒素（ＮＯ）の合成及びＮＯ依存性内皮機能において顕在化し得る。この多面的な病理は、血液灌流の減少及び急性血管閉塞性事象又は進行性臓器損傷の可能性増加に寄与し得る。
【０３４８】
アミノ酸がＳＣＤにおける血管機能障害の局面に影響を及ぼす能力を評価するため、ＶＥＣモデルを利用した。健常ドナーＨＬＭＶＥＣのＴＮＦａ処置は、ＳＣＤの病態を模倣し、接着マーカーＩＣＡＭ−１及びＶＣＡＭ−１の発現、並びに炎症促進性サイトカインＩＬ−６の分泌を誘導する。ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１、及びＩＬ−６のレベルが、ＳＣＤの病理に寄与し、ＳＣＤ患者における合併症の発生率及び重症度と相関し得ることが確立されている。ＶＥＣモデルでは、アミノ酸の、接着マーカー（ＩＣＡＭ−１及びＶＣＡＭ−１）及び炎症性サイトカイン（ＩＬ−６）の発現を低下させる一方でＶＥＣの健康及び生存度を促進することにより、ＴＮＦａ誘発性疾患の表現型を減少させる能力を試験することに努めた。
【０３４９】
初代ヒト肺微小血管内皮細胞（ＨＬＭＶＥＣ；Ｌｏｎｚａ）を、９６ウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）内のウシ胎仔血清（ＦＢＳ；Ｌｏｎｚａ）、ヒトＥＧＦ（Ｌｏｎｚａ）、ヒトＶＥＧＦ（Ｌｏｎｚａ）、Ｒ３−インスリン様増殖因子−１（Ｌｏｎｚａ）、アスコルビン酸（Ｌｏｎｚａ）、ヒドロコルチゾン（Ｌｏｎｚａ）、ヒトＦＧＦ−β（Ｌｏｎｚａ）、及びゲンタマイシン／アムホテリシン−ｂ（Ｌｏｎｚａ）を添加したＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｂａｓａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ−２（Ｌｏｎｚａ）に、６，０００個の細胞／ウェルで播種した。細胞を室温で４５分間インキュベートし、次に３７℃／５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。
【０３５０】
一晩のインキュベーション後、細胞を１５０μＬのダルベッコリン酸緩衝食塩水（ＤＰＢＳ；Ｇｉｂｃｏ）で１回洗浄し、次にＳＣＤを有する患者の血液中の生理学的濃度に基づく規定されたカスタムアミノ酸の濃度を有し（それ故、アルギニン及びアスパラギン酸を含む特定の必須アミノ酸の枯渇、並びにグルタミン酸塩及びアスパラギンを含む特定の非必須アミノ酸の濃縮などの認められる代謝不均衡を再現する）、透析ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、ヒトＥＧＦ（Ｌｏｎｚａ）、ヒトＶＥＧＦ（Ｌｏｎｚａ）、Ｒ３−インスリン様増殖因子−１（Ｌｏｎｚａ）、アスコルビン酸（Ｌｏｎｚａ）、ヒドロコルチゾン（Ｌｏｎｚａ）、ヒトＦＧＦ−β（Ｌｏｎｚａ）、及びゲンタマイシン／アムホテリシン−ｂ（Ｌｏｎｚａ）、グルコース、１０ｍＭヘペス、ピルビン酸ナトリウム、及び重炭酸ナトリウムを有し、以下：
ａ．ＰＢＳ（溶媒対照）、
ｂ．０．５ｎｇ／ｍＬの腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）及びＰＢＳ、又は；
ｃ．０．５ｎｇ／ｍＬのＴＮＦαと、ＰＢＳ中、Ｈｕｍａｎ  Ｍｅｔａｂｏｌｏｍｅ  Ｄａｔａｂａｓｅ（ＨＭＤＢ）において公表された値に基づく血漿中の２０倍平均生理学的濃度でのアミノ酸処置
のうちの１つを添加した、内皮基礎培地ＭＣＢ−１３１（アミノ酸、グルコース、ピルビン酸ナトリウム、及びフェノールレッドフリー；ＵＳ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）で処置した。
【０３５１】
処置の２４時間後、細胞を１５０μＬのＤＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）で１回洗浄し、次に４％パラホルムアルデヒドで固定した。固定後、細胞を、抗ＩＣＡＭ−１［ＭＥＭ−１１１］（マウスＩｇＧ２ａ抗ヒト；ａｂｃａｍ）及び抗ＶＣＡＭ１［１．４Ｃ３］（マウスＩｇＧ１、κ抗ヒト；ａｂｃａｍ）一次抗体で各々、１０００倍及び１００倍希釈で染色した。次に、ヤギ抗マウスＩｇＧ２ａ交差吸着二次抗体、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５９４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及びヤギ抗マウスＩｇＧ１交差吸着二次抗体、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）二次抗体で細胞を染色した。核は、ヘキスト３３４２（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で染色した。
【０３５２】
抗体結合を、ハイコンテントイメージャー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いる蛍光顕微鏡により検出した。ＩＣＡＭ−１又はＶＣＡＭ−１に対応する各波長における１細胞あたりの積分強度を判定するため、ＭｅｔａＸｐｒｅｓｓ  ６ソフトウェアを用いて画像を分析した。
【０３５３】
ヒトサイトカインＦｉｒｅＰｌｅｘ−ＨＴ  Ｐａｎｅｌ  １キット（ａｂｃａｍ）を用いて、製造業者提供の使用説明書に従い、上清をＩＬ−６濃度について分析した。粒子をハイコンテントイメージャー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）で画像化し、製造業者の推奨に従い、ＦｉｒｅＰｌｅｘ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェア（ａｂｃａｍ）による検量線から結果を内挿した。
【０３５４】
【表２６】
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【０３５５】
ＲＣｉｔＮａｃ又はＲＣｉｔＮａｃＱＣａｒを含むアミノ酸組成物で処置したＨＬＭＶＥＣにより、ＴＮＦ−α処置細胞からのＩＬ−６分泌が大幅に低下した。ＲＱＮａｃによっても、ＩＬ−６分泌が低下した。ＲＣｉｔＮａｃＱＬＨＫＶＳにより、ＩＬ−６の分泌レベルが中程度に低下した。
【０３５６】
【表２７】
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【０３５７】
ＲＣｉｔＮａｃにより、ＨＬＭＶＥＣ細胞内でのＴＮＦ−α誘導性ＩＣＡＭ−１の発現レベルが大幅に低下した。Ｇｌｙ、ＣｉｔＮａｃ及びＮａｃによっても、ＩＣＡＭ−１の発現レベルがより低い程度まで低下した。ＲＣｉｔＮａｃＱＣａｒＬＨＫＶＳ及びＲＣｉｔＮａｃＱＣａｒで処置したＨＬＭＶＥＣ細胞では、ＴＮＦ−α誘導性ＩＣＡＭ−１の発現レベルが中程度に低下した。ＲＣｉｔＮａｃ、Ｎａｃ、Ｇｌｙ、及びＣｉｔＮａｃにより、ＨＬＭＶＥＣ細胞内でのＶＣＡＭ−１発現が大幅に低下した。ＲＣｉｔＮａｃＱＣａｒＬＨＫＶＳは、Ｃｉｔ、及びＣａｒと同様、これら細胞内でのＶＣＡＭ−１発現に対して中等度の効果を有した。
【０３５８】
結果のまとめ：記載の通り、理想的な処置は、ＨＬＭＶＥＣによって表されるようなＳＣＤの多因子性病理に、疾患表現型（ＶＣＡＭ１、ＩＣＡＭ１、ＩＬ６）を減少させることにより、対処するものである。単一のアミノ酸及び組み合わせのこれら表現型に同時に影響する能力は、ＭＥＴＡ−ｒａｎｋスコアにより測定した（表１７及び１８）。ＭＥＴＡ−ｒａｎｋスコアは、ＨＬＭＶＥＣモデルにおける３つすべての表現型（例えば、ＶＣＡＭ１、ＩＣＡＭ１、及びＩＬ６を減少させる）に対する最適な影響を考慮した複合的尺度である。最適なアミノ酸又は組み合わせ処置（即ち、すべての尺度に対して所望される効果を有する処置）は、最適以下の処置（即ち、すべての尺度に対して望ましくない効果を有する処置）よりも低いスコアを有する。ＭＥＴＡ−ｒａｎｋに基づくと、ＲＣｉｔＮａｃは最適な処置であり、且つＲＣｉｔＮａｃＱＣａｒ及びＲＣｉｔＮａｃＱＣａｒＬＨＫＶＳの組み合わせは、最適な処置条件の中に含まれた。
【０３５９】
実施例１０．雄スプラーグドーリーラットへの経口用量投与後の複数の化合物の薬物動態の評価
概要
雄スプラーグドーリーラットへの経口経管栄養によって投与するアミノ酸化合物の様々な組み合わせの血漿濃度に対して、薬物動態（ＰＫ）分析を実施した。動物４匹に、１０のアミノ酸成分：アルギニン、シトルリン、Ｎ−アセチルシステイン、グルタミン、カルニチン、ロイシン、ヒスチジン、リジン、バリン、及びセリンを含む被験物質のＲＣｉｔＮａｃＱＣａｒＬＨＫＶＳを投与した（表１９）。動物を用量投与前に２時間絶食させた。血漿試料は、投与直前と、投与から０．５、１、２、３、４、及び５時間後に採取した。
【０３６０】
収集した血漿試料のアミノ酸含量についての生体分析は、ＬＣ−ＭＳ法を用いて、Ａｘｃｅｌｌａ  Ｈｅａｌｔｈで実施した（セクション２．１）。生体分析データは、Ｐｈｏｅｎｉｘ（登録商標）ＷｉｎＮｏｎＬｉｎ（登録商標）（ｖ８．１）を用いる非コンパートメント分析を用いて分析した。
【０３６１】
ＲＣｉｔＮａｃＱＣａｒＬＨＫＶＳの一部として投与した大部分の化合物は、投与後、濃度が上昇し、投与後０．５〜３時間の間に最大濃度に達し、例外はカルニチン及びＮ−アセチルシステインのみであった。カルニチンは、５時間の時間経過にわたり継続的に増加した一方で、Ｎ−アセチルシステインは、血漿中に検出されなかった。ＰＫパラメータ、例えば、Ｔｍａｘ、Ｃｍａｘ、及びＡＵＣ０−５ｈを表にした。
【０３６２】
方法論
試料分析手順の概要
ラット血漿中のアミノ酸を定量するため、ＨＩＬＩＣクロマトグラフィー及び高分解能質量分析を用いるＬＣ／ＭＳ法を使用した。試料は、タンパク質沈殿により調製し、各分析物に対して安定標識アミノ酸内部標準を添加した。絶対定量化のため、較正基準を使用し、各分析物における線形範囲は、一般に１０〜２０００μＭであった。方法の正確さを評価するため、ラット血漿中に添加したＱＣを利用した。
【０３６３】
薬物動態（ＰＫ）分析
被験物質成分のＰＫパラメータは、Ｐｈｏｅｎｉｘ  ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（登録商標）（バージョン８．１）ソフトウェアを用いる非コンパートメント手法を利用することにより、各ラット血漿濃度−時間データから判定した。毒物動態パラメータを計算するため、名目上の時間を使用した。適宜、Ｔｍａｘ、Ｃｍａｘ、及びＡＵＣ０−５ｈなどの血漿薬物動態パラメータを表にした。このプログラムは、Ｇｉｂａｌｄｉ及びＰｅｒｒｉｅｒによって説明された標準的方法を用いて、データを分析した（Ｍ．Ｇｉｂａｌｄｉ  ａｎｄ  Ｄ．Ｐｅｒｒｉｅｒ，Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，２ｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｍａｒｃｅｌ−Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．；１９８２を参照）。
【０３６４】
【表２８】
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【０３６５】
結果
アルギニン
アルギニンのベースライン濃度は、すべての動物を通じて７４．９〜１１２μＭの範囲であった。投与後、ＲＣｉｔＮａｃＱＣａｒＬＨＫＶＳを投与した動物における平均最大アルギニン濃度（Ｃｍａｘ）は、投与後０．５〜２．０時間に生じた５６５μＭであった。動物におけるアルギニンのＡＵＣ０−５ｈは、平均で２２１０μＭ＊時間であった。
【０３６６】
シトルリン
シトルリンのベースライン濃度は、すべての動物を通じて３１．６〜６２．７μＭの範囲であった。投与後、ＲＣｉｔＮａｃＱＣａｒＬＨＫＶＳを投与した動物における平均最大シトルリン濃度（Ｃｍａｘ）は、投与後２．０〜３．０時間に生じた５８３μＭであった。動物におけるシトルリンのＡＵＣ０−５ｈは、平均で２０９０μＭ＊時間であった。
【０３６７】
グルタミン
グルタミンのベースライン濃度は、すべての動物を通じて４０１〜６１５μＭの範囲であった。投与後、ＲＣｉｔＮａｃＱＣａｒＬＨＫＶＳを投与した動物における平均最大グルタミン濃度（Ｃｍａｘ）は、投与後０．５時間に生じた６０５μＭであった。動物におけるグルタミンのＡＵＣ０−５ｈは、平均で２３７０μＭ＊時間であった。
【０３６８】
結論
被験物質ＲＣｉｔＮａｃＱＣａｒＬＨＫＶＳの投与後、アミノ酸成分の血漿濃度は、投与後０．５〜３．０時間で最大値に達し、経時的に低下する傾向にあった。
【０３６９】
【表２９】
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【０３７０】
実施例１１．ＮＩＲ−追加の組み合わせ及びＶ−ブレンダーブレンドを用いて均一性をリアルタイムで監視すること
図２Ａは、Ｖ−ブレンダーを使用する、アミノ酸実体の第３の追加の例示的な組み合わせ（表３の例示的な組み合わせ）の処理中、均一性をブレンドするための時間依存的手法を示す。ＮＩＲスペクトルを生成するための試料を４分ごとに採取した。遅い時点でのＮＩＲスペクトルの崩壊は、組み合わせがブレンド均一性を達成していることを示す。図２Ｂは、４つの無作為に選択した独立したスティックパックの平均を表し、アミノ酸回収データをラベルクレームの９０〜１１０パーセントとして表す。まとめると、データは、ブレンド及び含量均一性が達成されていたことを示す。
【０３７１】
これらの実験は、アミノ酸実体のさらなる組み合わせについてのブレンド及び含量均一性を達成するため、本明細書に記載の方法を使用してもよいことと、Ｖ−ブレンダーブレンドを含む種々のブレンド技術が均一性を達成するために適することを示す。
【０３７２】
実施例１２．アミノ酸組成物による鎌状赤血球症患者の処置
本明細書に記載の試験は、鎌状赤血球症（ＳＣＤ）を有する患者を処置するための、アミノ酸を含む組成物の投与を特徴とする。この試験の目的は、鎌状赤血球症（ＳＣＤ）を有する対象における１２週にわたる組成物の食品安全性及び耐容性を評価することである。
【０３７３】
安全性及び耐容性は、報告された臨床有害事象；身体検査、バイタルサイン及びＥＣＧ；並びに臨床検査、例えば、血液学、化学、血漿アミノ酸及び他の炎症及び血管接着／機能的マーカーにおける変化により評価する。構造的及び機能的変化は、脳及び腎灌流に対する多パラメータ磁気共鳴画像法；６分歩行測定；及びパルスオキシメトリにより評価する。ＳＣＤの先行的な確定診断を有する約４８名の男性及び女性対象≧１２歳を評価する。
【０３７４】
試験は、２つのパートで実施することが想定される（図３）。パートＩ：試験は、ＳＣＤを有する約２４名の成人（≧１８歳）対象において、二重盲検プラセボ対照無作為化（２：１の有効：プラセボ）試験として、組成物の２６．３ｇＢＩＤ（５２．６ｇ／日）での最大１２週の投与について開始する。進行中の耐容性及び安全性の監視に基づき、組成物の量及び／又は投与計画は、下方調節してもよい。パートＩＩ：４週後の暫定分析のいずれかからの結果及び／又はパートＩの１２週目からの試験終了時の結果を保留し、それに続くパートＩＩは、追加の約８名の成人（≧１８歳）対象及び１６名の青年（１２〜１７歳）対象の分離コホートにおいて開始してもよい。パートＩＩにおける成人対象に対する組成物の予測量は、１７．４ｇＢＩＤ（３４．８ｇ／日）であり；青年対象に対する量は、彼らの体重（ＢＷ）に基づいて調節し、ＢＷ＞５０ｋｇの場合、２６．３ｇＢＩＤであり、ＢＷ≦５０ｋｇの場合、１７．４ｇＢＩＤである。組成物の量及び／又は投与計画は、パートＩからの結果を保留しながらさらに調節してもよい。パートＩＩでは、別のプラセボ群は存在しない。
【０３７５】
パートＩ及びパートＩＩ：ベースライン（１日目）〜１２週目：パートＩでは、無作為化は、１日目訪問の約３〜５日前に行う必要があり、２：１の有効：プラセボ比に基づく。指定の試験組成物［２６．３ｇＢＩＤ（５２．６ｇ／日）の組成物又はプラセボ］は、各対象の無作為化時、臨床現場に輸送することになる。一旦無作為化を行っていると、対象は、彼らのベースライン評価のため、１日目に試験場所を訪れる。パートＩＩでは、別のプラセボ群は存在しないことから、すべての対象に、組成物を、成人における一定量（例えば、１７．４ｇＢＩＤ）、又は青年対象における体重調節量（例えば、ＢＷ＞５０ｋｇの場合、２６ｇＢＩＤであり、ＢＷ≦５０ｋｇの場合、１７．４ｇＢＩＤである）のいずれかで投与する。
【０３７６】
組成物は、アミノ酸からなる。プラセボ製品は、組成物に適合する賦形剤である。試験組成物は、各スティックパック内の乾燥粉末として準備する。各スティックパックは、１スティックパックあたり約８．７６ｇのアミノ酸を含有する。試験の期間全体にわたり、各投与に対する処方数のスティックパック［例えば、２つ、３つ、又は４つのスティックパックのいずれかでＢＩＤ］は、次いで約６オンス（約１８０ｍＬ）の水と混合され、そして直ぐに、毎日２回、食事前（例えば、朝食前と夕食前、又は朝食が彼らの毎日のルーチンの日常部分でない場合には昼食前と夕食前）に約３０分（即ち３０±５分）消費される。
【０３７７】
実施例のサマリー
鎌状赤血球症は、複雑であり、多数の固有の機構によって駆動される。血液の健康及び機能を維持するには、多数の生物学的な細胞及び分子過程の協調を必要とする。本明細書の実施例に示す通り、（ＬＲＱＮａｃＨＫＶＳＣｉｔＣａｒ、ＲＣｉｔＮａｃＱＣａｒ、及びＲＣｉｔＮａｃを含む）本願中に開示されるアミノ酸組成物は、［１］ヒト血管内皮細胞内の炎症性サイトカインを軽減し、［２］ヒト血管内皮細胞内での細胞接着分子の発現を低減し、且つ［３］ヒトＲＢＣ変形能への侵襲に対して保護することが可能であった一方で、Ｑ、ＲＣｉｔ、及びＮＡＣなどの組成物は、血液の健康を維持するのに必要な重要な過程の全部ではなく一部に影響を及ぼすことが可能であるに過ぎなかった。事実、グルタミン（Ｑ）（鎌状赤血球症の治療においてＦＤＡで認可されている）は、組み合わせて軽減される、本明細書中の特定のアッセイにおける負の効果又は望ましくない効果を示した。
【０３７８】
本発明は、特に、好ましい実施形態及び様々な代替の実施形態を参照して示し、説明してきたが、当業者であれば、その精神及び範囲から逸脱することなく、形態及び詳細の様々な変更を行うことができることを理解されよう。
【０３７９】
本明細書の本文中に引用されているすべての参考文献、発行された特許、及び特許出願は、あらゆる目的のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【図１】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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2021528414.tif 000036
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