(57)【要約】  抗ＣＤ２２重鎖抗体（例えば、ＵｎｉＡｂｓ（商標））は、そのような抗体、そのような抗体を含む医薬組成物を含む組成物を作製する方法、及びＣＤ２２の発現を特徴とするＢ細胞障害を処置するためのそれらの使用と共に開示される。【選択図】図５Ｄ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）配列番号１〜１０のアミノ酸配列のいずれかに２つ以下の置換を有するＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）配列番号１１〜１７のアミノ酸配列のいずれかに２つ以下の置換を有するＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）配列番号１８〜２３のアミノ酸配列のいずれかに２つ以下の置換を有するＣＤＲ３、
を含む重鎖可変領域を含む、ＣＤ２２に結合する重鎖のみ抗体。
【請求項２】
前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列が、ヒトフレームワークに存在する、請求項１に記載の重鎖のみ抗体。
【請求項３】
さらに、ＣＨ１配列が存在しない重鎖定常領域配列を含む、請求項１に記載の重鎖のみ抗体。
【請求項４】
（ａ）配列番号１〜１０からなる群より選択されるＣＤＲ１配列、及び／または
（ｂ）配列番号１１〜１７からなる群より選択されるＣＤＲ２配列、及び／または
（ｃ）配列番号１８〜２３からなる群より選択されるＣＤＲ３配列、
を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の重鎖のみ抗体。
【請求項５】
（ａ）配列番号１〜１０からなる群より選択されるＣＤＲ１配列、及び
（ｂ）配列番号１１〜１７からなる群より選択されるＣＤＲ２配列、及び
（ｃ）配列番号１８〜２３からなる群より選択されるＣＤＲ３配列、
を含む、請求項４に記載の重鎖のみ抗体。
【請求項６】
（ａ）配列番号１のＣＤＲ１配列、配列番号１１のＣＤＲ２配列、及び配列番号１８のＣＤＲ３配列、または
（ｂ）配列番号１のＣＤＲ１配列、配列番号１２のＣＤＲ２配列、及び配列番号１９のＣＤＲ３配列、または
（ｃ）配列番号１のＣＤＲ１配列、配列番号１２のＣＤＲ２配列、及び配列番号２０のＣＤＲ３配列、
を含む、請求項５に記載の重鎖のみ抗体。
【請求項７】
配列番号２４〜８４の配列のいずれかと少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の重鎖のみ抗体。
【請求項８】
配列番号２４〜８４からなる群より選択される重鎖可変領域配列を含む、請求項７に記載の重鎖のみ抗体。
【請求項９】
配列番号２４の重鎖可変領域配列を含む、請求項８に記載の重鎖のみ抗体。
【請求項１０】
（ａ）式：
ＧＸ１ＳＩＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｙ
（式中、Ｘ１は、ＤまたはＧであり、
Ｘ２は、Ｓ、Ｔ、Ｉ、またはＮであり、
Ｘ３は、ＳまたはＤであり、
Ｘ４は、Ｇ、Ｓ、またはＮであり、
Ｘ５は、Ｄ、Ｇ、またはＳであり、
Ｘ６は、ＹまたはＨである）のＣＤＲ１配列、及び
（ｂ）式：
Ｘ７Ｘ８ＹＸ９ＧＸ１０Ｘ１１
（式中、Ｘ７は、ＩまたはＶであり、
Ｘ８は、ＹまたはＨであり、
Ｘ９は、ＳまたはＴであり、
Ｘ１０は、Ａ、Ｖ、またはＳであり、
Ｘ１１は、ＴまたはＡである）のＣＤＲ２配列、及び
（ｃ）式：
Ｘ１２ＲＸ１３ＤＳＳＸ１４ＷＲＳ
（式中、Ｘ１２は、Ｔ、Ａ、またはＫであり、
Ｘ１３は、ＤまたはＥであり、
Ｘ１４は、ＮまたはＳである）のＣＤＲ３配列
を含む重鎖可変を含む重鎖可変領域を含む、ＣＤ２２に結合する重鎖のみ抗体。
【請求項１１】
前記ＣＤＲ配列が、配列番号１〜２３からなる群より選択されるＣＤＲ配列に２つ以下の置換を有する配列である、ヒトＶＨフレームワークにＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域を含む、ＣＤ２２に結合する重鎖のみ抗体。
【請求項１２】
前記ＣＤＲ配列が、配列番号１〜２３からなる群より選択される、ヒトＶＨフレームワークにＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１１に記載の重鎖のみ抗体。
【請求項１３】
ヒトＶＨフレームワークに
（ａ）配列番号１のＣＤＲ１配列、配列番号１１のＣＤＲ２配列、及び配列番号１８のＣＤＲ３配列、または
（ｂ）配列番号１のＣＤＲ１配列、配列番号１２のＣＤＲ２配列、及び配列番号１９のＣＤＲ３配列、または
（ｃ）配列番号１のＣＤＲ１配列、配列番号１２のＣＤＲ２配列、及び配列番号２０のＣＤＲ３配列、
を含む重鎖可変領域を含む、ＣＤ２２に結合する重鎖のみ抗体。
【請求項１４】
多重特異性である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の重鎖のみ抗体。
【請求項１５】
二重特異性である、請求項１４に記載の重鎖のみ抗体。
【請求項１６】
２つの異なるＣＤ２２タンパク質に対する結合親和性を有する、請求項１５に記載の重鎖のみ抗体。
【請求項１７】
同じＣＤ２２タンパク質上の２つの異なるエピトープに対する結合親和性を有する、請求項１５に記載の重鎖のみ抗体。
【請求項１８】
エフェクター細胞に対する結合親和性を有する、請求項１４に記載の重鎖のみ抗体。
【請求項１９】
Ｔ細胞抗原に対する結合親和性を有する、請求項１４に記載の重鎖のみ抗体。
【請求項２０】
ＣＤ３に対する結合親和性を有する、請求項１９に記載の重鎖のみ抗体。
【請求項２１】
ＣＡＲ−Ｔフォーマットである、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の重鎖のみ抗体。
【請求項２２】
請求項１〜２１のいずれか１項に記載の重鎖のみ抗体を含む、医薬組成物。
【請求項２３】
ＣＤ２２の発現を特徴とするＢ細胞障害の処置のための方法であって、前記障害を有する対象に、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の抗体または請求項２２に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項２４】
ＣＤ２２の発現を特徴とするＢ細胞障害の処置のための薬品の調製における、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の抗体の使用。
【請求項２５】
ＣＤ２２の発現を特徴とするＢ細胞障害の処置に使用される、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２６】
前記障害が、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である、請求項２３〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記障害が、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である、請求項２３〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記障害が、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）である、請求項２３〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記障害が、関節リウマチ（ＲＡ）である、請求項２３〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記障害が、多発性硬化症（ＭＳ）である、請求項２３〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
請求項１〜２１のいずれかに記載の抗体をコードする、ポリヌクレオチド。
【請求項３２】
請求項３１に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項３３】
請求項３２に記載のベクターを含む、細胞。
【請求項３４】
前記抗体の発現を許容する条件下で、請求項３１に記載の細胞を成長させること、及び前記細胞から前記抗体を単離することを含む、請求項１〜２１のいずれかに記載の抗体を産生する方法。
【請求項３５】
ＣＤ２２でＵｎｉＲａｔ動物を免疫すること及びＣＤ２２結合重鎖配列を同定することを含む、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の抗体を作製する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年１２月２２日に出願された米国仮特許出願第６２／６０９，７５９号の出願日の優先権を主張し、この出願の開示は、本明細書に全体が参照により組み込まれる。
【０００２】
発明の分野
本発明は、ＣＤ２２に結合するヒト重鎖抗体（例えば、ＵｎｉＡｂｓ（商標））に関する。本発明はさらに、そのような抗体を作製する方法、そのような抗体を含む医薬組成物を含む組成物、及びＣＤ２２の発現を特徴とするＢ細胞障害を処置するためのそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
ＣＤ２２
ＳＩＧＬＥＣ−２（ＵｎｉＰｒｏｔ  Ｐ２０２７３）としても知られるＣＤ２２は、成熟Ｂ細胞上で発現される細胞表面受容体である。ＣＤ２２は、複数のＩｇドメインを含有し、免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーである。ＣＤ２２の細胞外ドメインは、ＣＤ４５細胞表面タンパク質に存在するものを含むシアル酸部分と相互作用する。ＣＤ２２は、Ｂ細胞受容体シグナル伝達の抑制性受容体として機能すると考えられる。ＣＤ２０及びＣＤ１９に加えて、ＣＤ２２のＢ細胞発現が制限されるので、Ｂ細胞性悪性腫瘍の治療的処置のための魅力的な標的となる。ＣＤ２２に特異的なモノクローナル抗体は、文献に記載されており（例えば、Ｊａｂｂｏｕｒ，Ｅｌｉａｓ，ｅｔ  ａｌ．“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．”Ｂｌｏｏｄ  １２５．２６（２０１５）：４０１０−４０１６）、標準的なモノクローナル抗体（例えば、エプラツズマブ）及び抗体−薬物コンジュゲート（イノツズマブオゾガマイシン）として治療的に使用されている。加えて、抗ＣＤ２２キメラ抗原受容体Ｔ細胞は、白血病を処置するために診療所で使用されている（Ｆｒｙ，Ｔｅｒｒｙ  Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．“ＣＤ２２−ｔａｒｇｅｔｅｄ  ＣＡＲ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎｄｕｃｅ  ｒｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｂ−ＡＬＬ  ｔｈａｔ  ｉｓ  ｎａｉｖｅ  ｏｒ  ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  ｔｏ  ＣＤ１９−ｔａｒｇｅｔｅｄ  ＣＡＲ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．”Ｎａｔｕｒｅ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２０１７））。
【０００４】
重鎖抗体
従来のＩｇＧ抗体では、重鎖及び軽鎖の会合は、軽鎖定常領域及び重鎖のＣＨ１定常ドメイン間の疎水性相互作用に一部起因している。重鎖及び軽鎖間の疎水性相互作用にも寄与する、重鎖フレームワーク２（ＦＲ２）及びフレームワーク４（ＦＲ４）領域に追加の残基がある。
【０００５】
しかし、ラクダ科の血清（ラクダ、ヒトコブラクダ、及びラマを含むラクダ亜目）は、対をなすＨ鎖のみからなる主要な種類の抗体（重鎖のみ抗体またはＵｎｉＡｂｓ（商標））を含むことが知られている。ラクダ科（Ｃａｍｅｌｕｓ  ｄｒｏｍｅｄａｒｉｕｓ、Ｃａｍｅｌｕｓ  ｂａｃｔｒｉａｎｕｓ、Ｌａｍａ  ｇｌａｍａ、Ｌａｍａ  ｇｕａｎａｃｏ、Ｌａｍａ  ａｌｐａｃａ、及びＬａｍａ  ｖｉｃｕｇｎａ）のＵｎｉＡｂｓ（商標）は、単一の可変ドメイン（ＶＨＨ）、ヒンジ領域、ならびに２つの定常ドメイン（ＣＨ２及びＣＨ３）からなる固有の構造を有し、典型的な抗体のＣＨ２及びＣＨ３ドメインと高度に相同である。これらのＵｎｉＡｂｓ（商標）は、ゲノムに存在する定常領域の最初のドメイン（ＣＨ１）を欠くが、ｍＲＮＡプロセシング中にスプライスアウトされる。ＣＨ１ドメインがないことにより、このドメインが軽鎖の定常ドメインの固定場所であるので、ＵｎｉＡｂｓ（商標）に軽鎖がないことが説明される。そのようなＵｎｉＡｂｓ（商標）は、従来の抗体またはそのフラグメント由来の３つのＣＤＲにより抗原結合特異性及び高親和性がもたらされるように自然に進化した（Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ，２００１；Ｊ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ７４：２７７−３０２、Ｒｅｖｅｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００５；Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｌ  Ｔｈｅｒ  ５：１１１−１２４）。サメなどの軟骨魚は、軽鎖ポリペプチド鎖を欠き且つ完全に重鎖で構成されている、ＩｇＮＡＲと呼ばれる独自のタイプの免疫グロブリンも進化させている。ＩｇＮＡＲ分子は、単一重鎖ポリペプチドの可変ドメイン（ｖＮＡＲ）を生成するために、分子工学により操作することができる（Ｎｕｔｔａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２７０，３５４３−３５５４（２００３）、Ｎｕｔｔａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ５５，１８７−１９７（２００４）、Ｄｏｏｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ４０，２５−３３（２００３））。
【０００６】
軽鎖を欠く重鎖のみ抗体が抗原に結合する能力は、１９６０年代に確立された（Ｊａｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９６８）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，７，４１８５−４１９５）。軽鎖から物理的に分離された重鎖免疫グロブリンは、四量体抗体に対して８０％の抗原結合活性を保持していた。Ｓｉｔｉａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｃｅｌｌ，６０，７８１−７９０は、再配列されたマウスμ遺伝子からＣＨ１ドメインを除去すると、哺乳動物細胞培養において、軽鎖を欠く重鎖のみ抗体が産生されることを実証した。産生された抗体は、ＶＨ結合特異性及びエフェクター機能を保持していた。
【０００７】
高い特異性及び親和性を有する重鎖抗体は、免疫化を通して様々な抗原に対して生成させることができ（ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｌｉｎｄｅｎ，Ｒ．Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．１４３１，３７−４６（１９９９））、ＶＨＨ部分は、容易にクローン化し、酵母中で発現させることができる（Ｆｒｅｎｋｅｎ，Ｌ．Ｇ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７８，１１−２１（２０００））。それらの発現レベル、溶解性、及び安定性は、古典的なＦ（ａｂ）またはＦｖフラグメントのレベルよりも有意に高い（Ｇｈａｈｒｏｕｄｉ，Ｍ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．４１４，５２１−５２６（１９９７））。
【０００８】
λ（ラムダ）軽（Ｌ）鎖遺伝子座、ならびに／または、λ及びκ（カッパ）Ｌ鎖遺伝子座が機能的にサイレンシングされているマウス、ならびにそのようなマウスにより産生される抗体は、米国特許第７，５４１，５１３号及び同第８，３６７，８８８号に記載される。マウス及びラットにおける重鎖のみ抗体の組み換え産生は、例えば、ＷＯ２００６００８５４８、米国特許出願公開第２０１００１２２３５８号、Ｎｇｕｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ；１０９（１），９３−１０１、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．；２００６，２６（５）：３７７−９０、及びＺｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ；２０４（１３）：３２７１−３２８３に報告されている。ジンクフィンガーヌクレアーゼの胚マイクロインジェクションによるノックアウトラットの生成は、Ｇｅｕｒｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３２５（５９３９）：４３３に記載される。可溶性重鎖のみ抗体及びそのような抗体を産生する異種重鎖遺伝子座を含むトランスジェニック齧歯動物は、米国特許第８，８８３，１５０号及び同第９，３６５，６５５号に記載される。結合（標的化）ドメインとして単一ドメイン抗体を含むＣＡＲ−Ｔ構造は、例えば、Ｉｒｉ−Ｓｏｆｌａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ３１７：２６３０−２６４１及びＪａｍｎａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ，１８４０：３７８−３８６に記載される。
【発明の概要】
【０００９】
本発明の態様は、ＣＤ２２に対する結合親和性を有する、限定されないが、ＵｎｉＡｂｓ（商標）を含む重鎖抗体に関する。本発明のさらなる態様は、そのような抗体を作製する方法、そのような抗体を含む組成物、及びＣＤ２２の発現を特徴とするＢ細胞障害の処置におけるそれらの使用に関する。
【００１０】
一部の実施形態では、ＣＤ２２に結合する重鎖のみ抗体は、（ａ）配列番号１〜１０のアミノ酸配列のいずれかに２つ以下の置換を有するＣＤＲ１；及び／または（ｂ）配列番号１１〜１７のアミノ酸配列のいずれかに２つ以下の置換を有するＣＤＲ２；及び／または（ｃ）配列番号１８〜２３のアミノ酸配列のいずれかに２つ以下の置換を有するＣＤＲ３、を含む重鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列は、ヒトフレームワークに存在する。一部の実施形態では、重鎖のみ抗体はさらに、ＣＨ１配列が存在しない重鎖定常領域配列を含む。
【００１１】
一部の実施形態では、重鎖のみ抗体は、（ａ）配列番号１〜１０からなる群より選択されるＣＤＲ１配列；及び／または（ｂ）配列番号１１〜１７からなる群より選択されるＣＤＲ２配列；及び／または（ｃ）配列番号１８〜２３からなる群より選択されるＣＤＲ３配列、を含む。一部の実施形態では、重鎖のみ抗体は、（ａ）配列番号１〜１０からなる群より選択されるＣＤＲ１配列；及び（ｂ）配列番号１１〜１７からなる群より選択されるＣＤＲ２配列；及び（ｃ）配列番号１８〜２３からなる群より選択されるＣＤＲ３配列、を含む。
【００１２】
一部の実施形態では、重鎖のみ抗体は、（ａ）配列番号１のＣＤＲ１配列、配列番号１１のＣＤＲ２配列、及び配列番号１８のＣＤＲ３配列；または（ｂ）配列番号１のＣＤＲ１配列、配列番号１２のＣＤＲ２配列、及び配列番号１９のＣＤＲ３配列；または（ｃ）配列番号１のＣＤＲ１配列、配列番号１２のＣＤＲ２配列、及び配列番号２０のＣＤＲ３配列、を含む。一部の実施形態では、重鎖のみ抗体は、配列番号２４〜８４の配列のいずれかと少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、重鎖のみ抗体は、配列番号２４〜８４からなる群より選択される重鎖可変領域配列を含む。一部の実施形態では、重鎖のみ抗体は、配列番号２４の重鎖可変領域配列を含む。
【００１３】
一部の実施形態では、ＣＤ２２に結合する重鎖のみ抗体は、（ａ）式：
ＧＸ１ＳＩＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｙ
（式中、Ｘ１は、ＤまたはＧであり；Ｘ２は、Ｓ、Ｔ、Ｉ、またはＮであり、Ｘ３は、ＳまたはＤであり；Ｘ４は、Ｇ、Ｓ、またはＮであり；Ｘ５は、Ｄ、Ｇ、またはＳであり；Ｘ６は、ＹまたはＨである）のＣＤＲ１配列、及び（ｂ）式：
Ｘ７Ｘ８ＹＸ９ＧＸ１０Ｘ１１
（式中、Ｘ７は、ＩまたはＶであり；Ｘ８は、ＹまたはＨであり；Ｘ９は、ＳまたはＴであり；Ｘ１０は、Ａ、Ｖ、またはＳであり；Ｘ１１は、ＴまたはＡである）のＣＤＲ２配列、及び（ｃ）式：
Ｘ１２ＲＸ１３ＤＳＳＸ１４ＷＲＳ
（式中、Ｘ１２は、Ｔ、Ａ、またはＫであり；Ｘ１３は、ＤまたはＥであり；Ｘ１４は、ＮまたはＳである）のＣＤＲ３配列を含む重鎖可変を含む重鎖可変領域を含む。
【００１４】
一部の実施形態では、ＣＤ２２に結合する重鎖のみ抗体は、ヒトＶＨフレームワークにＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域を含み、ＣＤＲ配列は、配列番号１〜２３からなる群より選択されるＣＤＲ配列に２つ以下の置換を有する配列である。
【００１５】
一部の実施形態では、重鎖のみ抗体は、ヒトＶＨフレームワーク中にＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域を含み、ＣＤＲ配列は、配列番号１〜２３からなる群より選択される。
【００１６】
一部の実施形態では、ＣＤ２２に結合する重鎖のみ抗体は、ヒトＶＨフレームワークに、（ａ）配列番号１のＣＤＲ１配列、配列番号１１のＣＤＲ２配列、及び配列番号１８のＣＤＲ３配列；または（ｂ）配列番号１のＣＤＲ１配列、配列番号１２のＣＤＲ２配列、及び配列番号１９のＣＤＲ３配列；または（ｃ）配列番号１のＣＤＲ１配列、配列番号１２のＣＤＲ２配列、及び配列番号２０のＣＤＲ３配列、を含む重鎖可変領域を含む。
【００１７】
一部の実施形態では、重鎖のみ抗体は、多重特異性である。一部の実施形態では、重鎖のみ抗体は、二重特異性である。一部の実施形態では、重鎖のみ抗体は、２つの異なるＣＤ２２タンパク質に対する結合親和性を有する。一部の実施形態では、重鎖のみ抗体は、同じＣＤ２２タンパク質上の２つの異なるエピトープに対する結合親和性を有する。一部の実施形態では、重鎖のみ抗体は、エフェクター細胞に対する結合親和性を有する。一部の実施形態では、重鎖のみ抗体は、Ｔ細胞抗原に対する結合親和性を有する。一部の実施形態では、重鎖のみ抗体は、ＣＤ３に対する結合親和性を有する。一部の実施形態では、重鎖のみ抗体は、ＣＡＲ−Ｔフォーマットである。
【００１８】
本発明の態様は、本明細書に記載の重鎖のみ抗体を含む医薬組成物に関する。
【００１９】
本発明の態様は、該障害を有する対象に本明細書に記載の抗体または医薬組成物を投与することを含む、ＣＤ２２の発現を特徴とするＢ細胞障害の処置のための方法に関する。特定の他の態様では、本発明は、ＣＤ２２の発現を特徴とするＢ細胞障害の処置のための薬品の調製における本明細書に記載の抗体の使用に関する。さらに他の態様では、本発明は、ＣＤ２２の発現を特徴とするＢ細胞障害の処置に使用される本明細書に記載の抗体に関する。これらの態様に関して、一部の実施形態では、障害は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である。一部の実施形態では、障害は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。一部の実施形態では、障害は、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）である。一部の実施形態では、障害は、関節リウマチ（ＲＡ）である。一部の実施形態では、障害は、多発性硬化症（ＭＳ）である。
【００２０】
本発明の態様は、本明細書に記載の抗体をコードするポリヌクレオチド、そのようなポリヌクレオチドを含むベクター、及びそのようなベクターを含む細胞に関する。
【００２１】
本発明の態様は、抗体の発現を許容する条件下で本明細書に記載の細胞を成長させること、及び細胞から抗体を単離することを含む、本明細書に記載の抗体を産生する方法に関する。
【００２２】
本発明の態様は、ＣＤ２２でＵｎｉＲａｔ動物を免疫すること、及びＣＤ２２結合重鎖配列を同定することを含む、本明細書に記載の抗体を作製する方法に関する。
【００２３】
これらの、さらなる態様はさらに、実施例を含む本開示の残りの部分で説明されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】抗ＣＤ２２重鎖抗体固有のＣＤＲアミノ酸配列を示す。
【図２】抗ＣＤ２２重鎖抗体可変ドメインのアミノ酸配列を示す。
【図２−０１】抗ＣＤ２２重鎖抗体可変ドメインのアミノ酸配列を示す。
【図２−０２】抗ＣＤ２２重鎖抗体可変ドメインのアミノ酸配列を示す。
【図２−０３】抗ＣＤ２２重鎖抗体可変ドメインのアミノ酸配列を示す。
【図２−０４】抗ＣＤ２２重鎖抗体可変ドメインのアミノ酸配列を示す。
【図３】抗ＣＤ２２重鎖抗体ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列を示す。
【図３−０１】抗ＣＤ２２重鎖抗体ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列を示す。
【図３−０２】抗ＣＤ２２重鎖抗体ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列を示す。
【図４】抗ＣＤ２２重鎖抗体の生物活性を示す。
【図４−０１】抗ＣＤ２２重鎖抗体の生物活性を示す。
【図４−０２】抗ＣＤ２２重鎖抗体の生物活性を示す。
【図５Ａ】Ｄａｕｄｉ細胞に対する抗体濃度の関数として、パーセント特異的溶解を示すグラフである。
【図５Ｂ】Ｒａｊｉ細胞に対する抗体濃度の関数として、パーセント特異的溶解を示すグラフである。
【図５Ｃ】Ｒａｍｏｓ細胞に対する抗体濃度の関数として、パーセント特異的溶解を示すグラフである。
【図５Ｄ】本発明の一実施形態による二重特異性抗ＣＤ２２ｘ抗ＣＤ３の模式図である。
【図６】希釈の関数として、血清力価を示す一連のグラフである。
【図６−０１】希釈の関数として、血清力価を示す一連のグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
本発明の実施は、別途指示のない限り、当該技術分野の範囲内である分子生物学（組み換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学、及び免疫学の従来の技術を用いるであろう。そのような技術は、“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ”，ｓｅｃｏｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９）；“Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）；“Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ”（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．，１９８７）；“Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ”（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ”（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９８７，ａｎｄ  ｐｅｒｉｏｄｉｃ  ｕｐｄａｔｅｓ）；“ＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ”，（Ｍｕｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，１９９４）；“Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ”（Ｐｅｒｂａｌ  Ｂｅｒｎａｒｄ  Ｖ．，１９８８）；“Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ”（Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）；Ｈａｒｌｏｗ，Ｌａｎｅ  ａｎｄ  Ｈａｒｌｏｗ，Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ：Ｐｏｒｔａｂｌｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌ  Ｎｏ．Ｉ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９９８）；及びＨａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ；（１９８８）などの文献で十分に説明される。
【００２６】
値の範囲が提供される場合、文脈に別途明示のない限り、下限値の単位の１０分の１までの、その範囲の上限値及び下限値間の各介在値、ならびにその表示範囲の任意の他の表示値または介在値が、本発明に包含されることが理解される。これらのより小さい範囲の上限値及び下限値は、より小さい範囲内に独立して含まれてもよく、また、記載範囲内の任意の具体的な除外限度を条件に、本発明に包含される。記載範囲が一端または両端を含む場合、それらの含まれる一端または両端を除外する範囲も本発明に含まれる。
【００２７】
別途指示のない限り、本明細書の抗体残基は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従って番号付けされる（例えば、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））。
【００２８】
以下の説明では、多くの具体的な詳細は、本発明の完全な理解を提供するために記載される。しかし、本発明がこれらの具体的な詳細のうちの１つ以上を用いずに実施され得ることは、当業者には明らかであろう。他の例では、本発明を曖昧にすることを避けるために、当業者らに周知の、周知の特徴及び手順は説明されていない。
【００２９】
特許出願及び刊行物を含む、本開示の全体にわたって引用される全ての参考文献は、全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００３０】
Ｉ．定義
「含むこと」は、列挙された要素が組成物／方法／キットに必要とされることを意味するが、請求項の範囲内で組成物／方法／キットなどを形成するために他の要素が含まれてもよい。
【００３１】
「から本質的になること」は、記載された組成物または方法の範囲を、本発明の基本的及び新規な特徴（複数可）に実質的に影響を与えない特定の材料またはステップに限定することを意味する。
【００３２】
「からなること」は、任意の要素の組成、方法、またはキット、請求項で指定されていないステップ、または成分の除外を意味する。
【００３３】
本明細書の抗体残基は、Ｋａｂａｔ番号付けシステム及びＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされる。可変ドメイン中の残基（重鎖の約１〜１１３残基）について言及する時、Ｋａｂａｔ番号付けシステムが一般に使用される（例えば、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））。免疫グロブリン重鎖定常領域の残基について言及する時、「ＥＵ番号付けシステム」または「ＥＵインデックス」が一般に使用される（例えば、上掲のＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．で報告されるＥＵインデックス）。「ＫａｂａｔのようなＥＵインデックス」は、ヒトＩｇＧ１  ＥＵ抗体の残基番号付けを指す。本明細書では別途記載のない限り、抗体の可変ドメインにおける残基番号への言及は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムによる残基番号付けを意味する。本明細書では別途記載のない限り、抗体の定常ドメインにおける残基番号への言及は、ＥＵ番号付けシステムによる残基番号付けを意味する。
【００３４】
「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、その集団に含まれる個々の抗体は、微量で存在し得る可能な自然に発生する変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原部位に対するものである。さらに、通常異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を含む従来の（ポリクローナル）抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。本発明によるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５に最初に記載されるハイブリドーマ法で作製することができ、例えば、組み換えタンパク質産生方法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと）により作製することもできる。
【００３５】
抗体に関連して使用される「可変」という用語は、抗体可変ドメインの特定の部分の配列が抗体間で広範に異なるという事実を指し、その特定の抗原に対する各特定の抗体の結合及び特異性において使用される。しかし、可変性は、抗体の可変ドメイン全体にわたって均等には分布していない。それは、軽鎖及び重鎖の両方の可変ドメイン中の超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集中する。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。本来の重鎖及び軽鎖の可変ドメインはそれぞれ、３つの超可変領域により連結される、βシート構成を主に採用する４つのＦＲを含み、これらは、ループ連結を形成し、一部の場合では、βシート立体配置の一部を形成する。各鎖内の超可変領域は、ＦＲにより近接近し一緒に保持されており、他方の鎖の超可変領域と共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１）を参照のこと）。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接関与しないが、抗体の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）への関与などの種々のエフェクター機能を呈する。
【００３６】
「超可変領域」という用語は、本明細書に使用される時、抗原結合に関与している抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は、一般に、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」由来のアミノ酸残基（例えば、重鎖可変ドメイン中の残基３１〜３５（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）、及び９５〜１０２（Ｈ３）；Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１））、ならびに／または、「超可変ループ」由来のそれらの残基（重鎖可変ドメイン中の残基２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、及び９６〜１０１（Ｈ３）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））を含む。「フレームワーク領域」または「ＦＲ」残基は、本明細書で定義される超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。
【００３７】
例示的なＣＤＲ名称が本明細書に示されるが、当業者は、Ｋａｂａｔの定義（“Ｚｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．Ａ  ｇｅｒｍｌｉｎｅ  ｋｎｏｗｌｅｄｇｅ  ｂａｓｅｄ  ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｆｏｒ  ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ  ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ  ｒｅｇｉｏｎｓ．”Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１０；４７：６９４−７００を参照のこと）を含む多数のＣＤＲの定義が一般に使用されることを理解するであろう。これは、配列可変性に基づいており、最も一般に使用される。Ｃｈｏｔｈｉａ定義は、構造ループ領域の位置に基づく（Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．“Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ  ｒｅｇｉｏｎｓ．”Ｎａｔｕｒｅ．１９８９；３４２：８７７−８８３）。目的の代替のＣＤＲ定義は、Ｈｏｎｅｇｇｅｒ，“Ｙｅｔ  ａｎｏｔｈｅｒ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ  ｓｃｈｅｍｅ  ｆｏｒ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｄｏｍａｉｎｓ：ａｎ  ａｕｔｏｍａｔｉｃ  ｍｏｄｅｌｉｎｇ  ａｎｄ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｔｏｏｌ．”Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．２００１；３０９：６５７−６７０、Ｏｆｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．“Ａｕｔｏｍａｔｅｄ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ  ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ  ｒｅｇｉｏｎｓ（ＣＤＲｓ）ｒｅｖｅａｌｓ  ｐｅｃｕｌｉａｒ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ  ｏｆ  ＣＤＲｓ  ａｎｄ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｅｐｉｔｏｐｅｓ．”Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００８；１８１：６２３０−６２３５、Ａｌｍａｇｒｏ“Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ−ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ  ｒｅｓｉｄｕｅｓ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｈａｔ  ｒｅｃｏｇｎｉｚｅ  ａｎｔｉｇｅｎｓ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｓｉｚｅ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｒａｔｉｏｎａｌ  ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅｓ．”Ｊ  Ｍｏｌ  Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．２００４；１７：１３２−１４３、及びＰａｄｌａｎｅｔ  ａｌ．“Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ−ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ  ｒｅｓｉｄｕｅｓ  ｉｎ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．”ＦａｓｅｂＪ．１９９５；９：１３３−１３９により開示されたものを含むが、これらに限定されず、これらのそれぞれは、参照により本明細書に具体的に組み込まれる。
【００３８】
「重鎖のみ抗体」及び「重鎖抗体」という用語は、本明細書では、互換的に使用され、最も広い意味で、従来の抗体の軽鎖を欠く抗体を指す。これらの用語は、具体的には、ＣＨ１ドメインがない状態で、ＶＨ抗原結合ドメインならびにＣＨ２及びＣＨ３定常ドメインを含むホモ二量体抗体；そのような抗体の機能的（抗原結合）多様体、可溶性ＶＨ多様体、１つの可変ドメイン（Ｖ−ＮＡＲ）及び５つのＣ様定常ドメイン（Ｃ−ＮＡＲ）のホモダイマーを含むＩｇ−ＮＡＲ及びそれらの機能的フラグメント；ならびに可溶性単一ドメイン抗体（ｓＵｎｉＤａｂｓ（商標））を含むが、これらに限定されない。一実施形態では、重鎖のみ抗体は、フレームワーク１、ＣＤＲ１、フレームワーク２、ＣＤＲ２、フレームワーク３、ＣＤＲ３、及びフレームワーク４からなる可変領域抗原結合ドメインから構成される。別の実施形態では、重鎖のみ抗体は、抗原結合ドメイン、ヒンジ領域の少なくとも一部、ならびにＣＨ２及びＣＨ３ドメインから構成される。別の実施形態では、重鎖のみ抗体は、抗原結合ドメイン、ヒンジ領域の少なくとも一部、及びＣＨ２ドメインから構成される。さらなる実施形態では、重鎖のみ抗体は、抗原結合ドメイン、ヒンジ領域の少なくとも一部、及びＣＨ３ドメインから構成される。ＣＨ２及び／またはＣＨ３ドメインがトランケートされている重鎖のみ抗体もまた本明細書に含まれる。さらなる実施形態では、重鎖は、抗原結合ドメイン、及び少なくとも１つのＣＨ（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、またはＣＨ４）ドメインから構成されるが、ヒンジ領域は含まない。重鎖のみ抗体は、２つの重鎖がジスルフィド結合しているか、またはそうでなければ、共有結合もしくは非共有結合で互いに結合している二量体の形態であり得る。重鎖のみ抗体は、ＩｇＧサブクラスに属し得るが、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥサブクラスなどの他のサブクラスに属する抗体もまた本明細書に含まれる。特定の実施形態では、重鎖抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４サブタイプ、特に、ＩｇＧ１サブタイプである。一実施形態では、本明細書の重鎖のみ抗体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の結合（標的化）ドメインとして使用される。定義は、具体的には、ＵｎｉＡｂｓ（商標）と呼ばれるヒト免疫グロブリントランスジェニックラット（ＵｎｉＲａｔ（商標））により産生されるヒト重鎖のみ抗体を含む。ＵｎｉＡｂｓ（商標）の可変領域（ＶＨ）は、ＵｎｉＤａｂｓ（商標）と呼ばれ、効力を増加させ且つ半減期を延長させた、マルチ特異性を有する新規治療薬の開発のために、Ｆｃ領域または血清アルブミンに連結させることができる多機能の構成単位である。ホモ二量体ＵｎｉＡｂｓ（商標）は、軽鎖を欠き、従って、ＶＬドメインを欠くので、抗原は、１つの単一ドメイン、すなわち、重鎖抗体の重鎖の可変ドメイン（ＶＨ）により認識される。
【００３９】
本明細書で使用される「ＣＤ２２」及び「分化２２のクラスター」という用語は、成熟Ｂ細胞の表面上に、一部の未成熟Ｂ細胞上により少ない程度で見出されるレクチンのＳＩＧＬＥＣファミリーに属する分子を指す。「ＣＤ２２」という用語は、任意のヒト及び非ヒト動物種のＣＤ２２タンパク質を含み、具体的には、ヒトＣＤ２２及び非ヒト哺乳動物のＣＤ２２を含む。
【００４０】
本明細書で使用される「ヒトＣＤ２２」という用語は、その供給源または調製の様式に関係なく、ヒトＣＤ２２（ＵｎｉＰｒｏｔ  Ｐ２０２７３）の任意の多様体、アイソフォーム、及び種ホモログを含む。従って、「ヒトＣＤ２２」は、細胞により自然に発現されるヒトＣＤ２２及びヒトＣＤ２２遺伝子でトランスフェクトされた細胞で発現されるＣＤ２２を含む。
【００４１】
「抗ＣＤ２２重鎖のみ抗体」、「ＣＤ２２重鎖のみ抗体」、「抗ＣＤ２２重鎖抗体」、及び「ＣＤ２２重鎖抗体」という用語は、上で定義されたような重鎖のみ抗体を指すために本明細書では互換的に使用され、上で定義されたようなヒトＣＤ２２を含むＣＤ２２に免疫特異的に結合する。定義は、上で定義されたようなヒト抗ＣＤ２２  ＵｎｉＡｂ（商標）抗体を産生するＵｎｉＲａｔｓ（商標）を含む、ヒト免疫グロブリンを発現するトランスジェニックラットまたはトランスジェニックマウスなどのトランスジェニック動物により産生されるヒト重鎖抗体が含まれるが、これらに限定されない。
【００４２】
参照ポリペプチド配列に関して「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、必要に応じて、最大のパーセント配列同一性を達成するように配列をアラインして、ギャップを導入した後の、参照ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基の百分率として定義され、いかなる保存的置換も、配列同一性の一部と考えない。アミノ酸配列同一性パーセントを決定することを目的とするアラインメントは、当該技術分野における技量の範囲内に含まれる種々の方法で、例えば、公的に入手可能なコンピュータソフトウェア、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアを使用して、達成することができる。当業者らであれば、比較される配列の全長にわたって最大限のアラインメントを得るために必要とされる任意のアルゴリズムを含む、配列のアラインメントに適切なパラメータを決定することができる。しかし、本明細書における目的では、アミノ酸配列同一性％値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ−２を使用して生成される。
【００４３】
「単離」抗体は、その自然環境の構成要素から、同定及び分離及び／または回収されているものである。その自然環境の混入構成要素は、抗体の診断上または治療上の使用を妨げる材料であり、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質性または非タンパク質性溶質を含んでもよい。好ましい実施形態では、抗体は、（１）ローリー法で測定された抗体の９５重量％を超える、最も好ましくは、９９重量％を超えるまで、（２）スピニングカップシーケネータ（ｓｐｉｎｎｉｎｇ  ｃｕｐ  ｓｅｑｕｅｎａｔｏｒ）を使用することによりＮ末端もしくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで、または、（３）クーマシーブルー、もしくは、好ましくは、銀染色を使用する還元もしくは非還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥにより均質になるまで、精製されるであろう。単離抗体は、抗体の自然環境の少なくとも１つの構成要素が存在しないので、組み換え細胞内のその場に抗体を含む。しかし、通常、単離抗体は、少なくとも１つの精製ステップにより調製されるであろう。
【００４４】
本発明の抗体は、多重特異性抗体を含む。多重特異性抗体は、複数の結合特異性を有する。「多重特異性」という用語は、具体的には、「二重特異性」及び「三重特異性」、ならびに高次ポリエピトープ特異性などの高次の独立した特異的結合親和性、ならびに四価抗体及び抗体フラグメントを含む。「多重特異性」抗体は、具体的には、異なる結合実体の組み合わせを含む抗体、及び複数の同じ結合実体を含む抗体を含む。「多重特異性抗体」、「多重特異性の重鎖のみ抗体」、「多重特異性重鎖抗体」、及び「多重特異性ＵｎｉＡｂ（商標）」は、最も広い意味で、本明細書中で使用され、複数の結合特異性を有する全ての抗体を網羅する。本発明の多重特異性重鎖抗ＣＤ２２抗体は、具体的には、ヒトＣＤ２２などのＣＤ２２タンパク質上の複数の非重複エピトープに免疫特異的に結合する抗体を含む。
【００４５】
「エピトープ」は、単一の抗体分子が結合する抗原分子の表面上の部位である。一般には、抗原は、いくつかのまたは多くの異なるエピトープを有し、多くの異なる抗体と反応する。用語は、具体的には、線状エピトープ及び立体配座エピトープを含む。
【００４６】
「エピトープマッピング」は、それらの標的抗原上の抗体の結合部位またはエピトープを同定するプロセスである。抗体エピトープは、線状エピトープまたは立体配座エピトープであってよい。線状エピトープは、タンパク質中のアミノ酸の連続配列により形成される。立体配座エピトープは、タンパク質配列において不連続であるが、タンパク質のその３次元構造への折り畳みの際に結合するアミノ酸から形成される。
【００４７】
「ポリエピトープ特異性」は、同じまたは異なる標的（複数可）上の２つ以上の異なるエピトープに特異的に結合する能力を指す。上記のように、本発明は、具体的には、ポリエピトープ特異性を有する抗ＣＤ２２重鎖抗体、すなわち、ヒトＣＤ２２などのＣＤ２２タンパク質上の２つ以上の非重複エピトープに結合する抗ＣＤ２２重鎖抗体、を含む。抗原の「非重複エピトープ（複数可）」または「非競合的エピトープ（複数可）」という用語は、本明細書では、一対の抗原特異的抗体の一方のメンバーに認識されるが、他方のメンバーには認識されないエピトープ（複数可）を意味すると定義される。非重複エピトープを認識する抗体または多重特異性抗体上の同じ抗原を標的とする抗原結合領域のペアは、その抗原への結合について競合せず、その抗原に同時に結合することができる。
【００４８】
２つの抗体が同一または立体的に重複するエピトープを認識する場合、抗体は、参照抗体と「本質的に同じエピトープ」に結合する。２つのエピトープが同一または立体的に重複するエピトープに結合するかを決定するための、最も広く使用され且つ迅速な方法は競合アッセイであり、これは、標識抗原または標識抗体のいずれかを使用して、種々のフォーマットで構成することができる。通常、抗原は、９６ウェルプレートに固定化され、未標識抗体が標識抗体の結合を妨げる能力は、放射性または酵素標識を使用して測定される。
【００４９】
「価」という用語は、本明細書で使用される場合、抗体分子中の特定数の結合部位を指す。
【００５０】
「多価」抗体は、２つ以上の結合部位を有する。従って、「二価」、「三価」、及び「四価」という用語は、それぞれ２つの結合部位、３つの結合部位、及び４つの結合部位の存在を指す。従って、本発明による二重特異性抗体は、少なくとも二価であり、三価、四価、またはそうでなければ多価であってよい。
【００５１】
多種多様な方法及びタンパク質の立体配置が知られており、二重特異性モノクローナル抗体（ＢｓＭＡＢ）、三重特異性抗体などの調製に使用される。
【００５２】
「二重特異性三本鎖抗体様分子」または「ＴＣＡ」という用語は、３つのポリペプチドサブユニットを含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる抗体様分子を指すために本明細書で使用され、このうちの２つは、モノクローナル抗体の１つの重鎖及び１つの軽鎖、または抗原結合領域及び少なくとも１つのＣＨドメインを含むそのような抗体鎖の機能的抗原結合フラグメントを含むか、それらから本質的になるか、またはそれらからなる。この重鎖／軽鎖対は、第１の抗原に対する結合特異性を有する。第３のポリペプチドサブユニットは、ＣＨ１ドメインがない状態で、ＣＨ２及び／またはＣＨ３及び／またはＣＨ４ドメインを含むＦｃ部分を含む重鎖のみ抗体、ならびに、第２の抗原のエピトープまたは第１の抗原の異なるエピトープに結合する抗原結合ドメインを含むか、それらから本質的になるか、またはそれらからなり、そのような結合ドメインは、抗体重鎖または軽鎖の可変領域から誘導されるか、またはそれと配列同一性を有する。そのような可変領域の部分は、ＶＨ及び／またはＶＬ遺伝子セグメント、Ｄ及びＪＨ遺伝子セグメント、またはＪＬ遺伝子セグメントによりコードされてもよい。可変領域は、再配列されたＶＨＤＪＨ、ＶＬＤＪＨ、ＶＨＪＬ、またはＶＬＪＬ遺伝子セグメントによりコードされてもよい。ＴＣＡタンパク質は、上で定義されたような重鎖のみ抗体を利用する。
【００５３】
「キメラ抗原受容体」または「ＣＡＲ」という用語は、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインに対する所望の結合特異性（例えば、モノクローナル抗体または他のリガンドの抗原結合領域）を融合する人工受容体を指すために本明細書では最も広い意味で使用される。通常、受容体は、Ｔ細胞にモノクローナル抗体の特異性を移植して、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を作成するために使用される（Ｊ  Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ，２０１５；１０８（７）：ｄｖｊ４３９；及びＪａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２０１６；１３：３７０−３８３）。
【００５４】
「ヒト抗体」という用語は、本明細書では、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有する抗体を含むために使用される。本明細書のヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によりコードされないアミノ酸残基、例えば、ランダムで導入された変異またはｉｎ  ｖｉｔｒｏでの部位特異的変異導入またはｉｎ  ｖｉｖｏでの体細胞変異、を含んでもよい。「ヒト抗体」という用語は、具体的には、上で定義されたような、トランスジェニック動物、例えば、トランスジェニックラットまたはマウス、により産生されたヒト重鎖可変領域配列を有する重鎖のみ抗体、特に、ＵｎｉＲａｔｓ（商標）により産生されたＵｎｉＡｂｓ（商標）、を含む。
【００５５】
「キメラ抗体」または「キメラ免疫グロブリン」は、少なくとも２つの異なるＩｇ遺伝子座からのアミノ酸配列を含む免疫グロブリン分子、例えば、ヒトＩｇ遺伝子座によりコードされる部分及びラットＩｇ遺伝子座によりコードされる部分を含むトランスジェニック抗体を意味する。キメラ抗体は、非ヒトＦｃ領域または人工Ｆｃ領域を有するトランスジェニック抗体、及びヒトイデオタイプを含む。そのような免疫グロブリンは、そのようなキメラ抗体を産生するように操作されている本発明の動物から単離することができる。
【００５６】
本明細書で使用される場合、「エフェクター細胞」という用語は、免疫応答の認知期及び活性化期ではなく、免疫応答のエフェクター期に関与する免疫細胞を指す。一部のエフェクター細胞は、特定のＦｃ受容体を発現し、特定の免疫機能を行う。一部の実施形態では、ナチュラルキラー細胞などのエフェクター細胞は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導することが可能である。例えば、ＦｃＲを発現する単球及びマクロファージは、標的細胞の特定の死滅及び免疫系の他の構成要素への抗原の提示、または抗原を提示する細胞への結合に関与する。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、標的抗原または標的細胞を貪食し得る。
【００５７】
「ヒトエフェクター細胞」は、Ｔ細胞受容体またはＦｃＲなどの受容体を発現して、エフェクター機能を実施する白血球である。好ましくは、細胞は、少なくともＦｃγＲＩＩＩを発現し、ＡＤＣＣエフェクター機能を果たす。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例としては、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、細胞傷害性Ｔ細胞、及び好中球が挙げられ、ＮＫ細胞が好ましい。エフェクター細胞は、本明細書に記載されるように、その天然源から、例えば、血液またはＰＢＭＣから単離されてもよい。
【００５８】
限定されないが、骨髄またはリンパ起源の細胞、例えば、リンパ球（例えば、Ｂ細胞及び細胞溶解性Ｔ細胞（ＣＴＬ）を含むＴ細胞）、キラー細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、単球、好酸球、多形核細胞、例えば、好中球、顆粒球、肥満細胞、及び好塩基球を含む「免疫細胞」という用語は、最も広い意味で、本明細書で使用される。
【００５９】
抗体の「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域（天然配列のＦｃ領域またはアミノ酸配列多様性Ｆｃ領域）に帰属する生物活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体；ＢＣＲ）などの下方制御を含む。
【００６０】
「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」及び「ＡＤＣＣ」は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する非特異的細胞傷害細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及びマクロファージ）が、標的細胞上に結合した抗体を認識し、続いて、標的細胞の溶解を引き起こす、細胞媒介性反応を指す。ＡＤＣＣを媒介するための初代細胞であるＮＫ細胞がＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  ９：４５７−９２（１９９１）の４６４頁の表３に要約される。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号または同第５，８２１，３３７号に記載されるようなｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＡＤＣＣアッセイが実施されてもよい。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。代替的または追加的に、目的とする分子のＡＤＣＣ活性は、ｉｎ  ｖｉｖｏで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されるような動物モデルで評価されてもよい。
【００６１】
「補体依存性細胞傷害」または「ＣＤＣ」は、補体の存在下で標的を溶解させる分子の能力を指す。補体活性化経路は、補体系（Ｃ１ｑ）の第１の成分が、同種抗原と複合体化された分子（例えば、抗体）に結合することにより開始される。補体活性化を評価するために、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０２：１６３（１９９６）に記載されるＣＤＣアッセイが実施され得る。
【００６２】
「結合親和性」は、分子（例えば、抗体）の単一結合部位及びその結合パートナー（例えば、抗原）間の非共有結合相互作用の合計の強度を指す。別途指示のない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、抗体及び抗原）間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（Ｋｄ）で表すことができる。親和性は、当該技術分野で既知の一般的な方法で測定することができる。低親和性抗体は一般に、抗原に結合するのが遅く、容易に解離する傾向があるが、高親和性抗体は一般に、抗原に結合するのがより速く、結合したままである傾向がある。
【００６３】
本明細書で使用される場合、「Ｋｄ」または「Ｋｄ値」は、動態モードで、Ｏｃｔｅｔ  ＱＫ３８４機器（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ  Ｉｎｃ．，Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ，ＣＡ）を使用して、バイオレイヤー干渉法により決定される解離定数を指す。例えば、抗マウスＦｃセンサーは、濃度依存的会合速度（ｋｏｎ）を測定するために、マウス−Ｆｃ融合抗原が負荷され、次に、抗体含有ウェルに浸漬される。抗体解離速度（ｋｏｆｆ）は、最終ステップで測定され、センサーは、緩衝液のみを含有するウェルに浸漬される。Ｋｄは、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの比である。（さらなる詳細については、Ｃｏｎｃｅｐｃｉｏｎ，Ｊ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｏｍｂ  Ｃｈｅｍ  Ｈｉｇｈ  Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｓｃｒｅｅｎ，１２（８），７９１−８００，２００９を参照のこと）。
【００６４】
「処置」、「処置すること」などの用語は、本明細書では、一般に、所望の薬理学的及び／または生理学的効果を得ることを意味するために使用される。効果は、疾患もしくはその症状を完全にもしくは部分的に予防するという観点で予防的であり得、及び／または疾患及び／または疾患に起因する有害反応の部分的もしくは完全な治癒という観点で治療的であり得る。本明細書で使用される「処置」は、哺乳動物における疾患の任意の処置を網羅し、（ａ）疾患に罹患しやすいが、まだそれを有すると診断されていないことがある対象において、疾患が発生することを予防すること；（ｂ）疾患を抑制すること、すなわち、その発現を阻止すること、または、（ｃ）疾患を軽減すること、すなわち、その疾患の退行を引き起こすこと、を含む。治療薬は、疾患または傷害の発症前、発症中、または発症後に投与されてもよい。進行中の疾患の処置は、処置が患者の望ましくない臨床症状を安定化または軽減する場合、特に興味深い。そのような処置は、罹患組織の機能が完全に喪失する前に実施されることが望ましい。本療法は、疾患の徴候段階の間、一部の場合では、疾患の徴候段階の後に、投与されてもよい。
【００６５】
「治療的有効量」は、対象に治療上の利益を与えるのに必要な活性薬の量を意味する。例えば、「治療的有効量」は、病理学的症状、疾患の進行、もしくは疾患に関連する生理学的状態の改善を誘発するか、高めるか、もしくはそうでなければ、引き起こす量、または障害への抵抗性を改善する量である。
【００６６】
本発明の文脈における「Ｂ細胞新生物」または「成熟Ｂ細胞新生物」という用語は、小リンパ球性リンパ腫、Ｂ細胞前リンパ球性リンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病、マントル細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、多発性骨髄腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、脾辺縁帯リンパ腫、形質細胞腫瘍、形質細胞腫、例えば、形質細胞性骨髄腫、形質細胞腫、単クローン性免疫グロブリン沈着症、重鎖疾患、ＭＡＬＴリンパ腫、節性辺縁Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、毛様細胞性白血病、原発性滲出性リンパ腫、及びＡＩＤＳ関連非ホジキンリンパ腫を含む。
【００６７】
「対象」、「個体」、及び「患者」という用語は、本明細書では互換的に使用され、処置のために評価される及び／または処置される哺乳動物を指す。一実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。「対象」、「個体」、及び「患者」という用語は、がんを有する個体、自己免疫疾患を有する個体、病原体感染を有する個体などを包含するが、これらに限定されない。対象は、ヒトであってよいが、他の哺乳動物、特に、ヒトの疾患の実験室モデルとして有用な哺乳動物、例えば、マウス、ラットなども含む。
【００６８】
「医薬製剤」という用語は、活性成分の生物活性が有効となるのを可能にするような形態であり、且つ、製剤が投与されることになる対象に対して許容し難いほど毒性であるさらなる構成成分を含有していない、調製物を指す。そのような製剤は、滅菌である。「薬学的に許容される」賦形剤（ビヒクル、添加剤）は、用いられる有効用量の活性成分を提供するために、対象哺乳動物に合理的に投与することができるものである。
【００６９】
「滅菌」製剤は、無菌であるか、または、全ての生きている微生物及びそれらの胞子を含まないか、もしくは本質的に含まない。「凍結」製剤は、温度が０℃未満のものである。
【００７０】
「安定な」製剤は、貯蔵した時にその中のタンパク質がその物理的安定性及び／または化学的安定性及び／または生物活性を本質的に保持しているものである。好ましくは、製剤は、貯蔵時にその物理的及び化学的安定性ならびにその生物活性を本質的に保持する。貯蔵期間は一般に、製剤の意図した貯蔵寿命に基づいて選択される。当該技術分野のタンパク質安定性を測定するための種々の分析技術が利用可能であり、例えば、Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，２４７−３０１．Ｖｉｎｃｅｎｔ  Ｌｅｅ  Ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，Ｐｕｂｓ．（１９９１）、及びＪｏｎｅｓ．Ａ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．１０：２９−９０）（１９９３）に概説される。安定性は、選択された温度で、選択された期間にわたって測定することができる。安定性は、陽イオン交換クロマトグラフィー、イメージキャピラリー等電点電気泳動（ｉｃＩＥＦ）、またはキャピラリーゾーン電気泳動；アミノ末端またはカルボキシ末端配列分析；質量分析分析；還元抗体及びインタクト抗体を比較するＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析；ペプチドマップ（例えば、トリプシンまたはＬＹＳ−Ｃ）分析；抗体の生物活性または抗原結合機能の評価などを使用して電荷の不均一性を評価することによる、凝集体形成の評価（例えば、サイズ排除クロマトグラフィーを使用する、濁度の測定による、及び／または目視検査による）を含む様々な異なる方法で定性的及び／または定量的に評価することができる。不安定性は、凝集、脱アミド化（例えば、Ａｓｎ脱アミド化）、酸化（例えば、Ｍｅｔ酸化）、異性化（例えば、Ａｓｐ異性化）、切取り／加水分解／フラグメント化（例えば、ヒンジ領域フラグメント化）、スクシンイミド形成、不対合システイン（複数可）、Ｎ末端伸張、Ｃ末端プロセシング、グリコシル化差異などのうちのいずれか１つ以上を含んでもよい。
【００７１】
ＩＩ．詳細な説明
抗ＣＤ２２抗体
本発明は、密接に関連するヒトＣＤ２２に結合する重鎖のみ抗体のファミリーを提供する。このファミリーの抗体は、本明細書で定義され且つ図１に示されるような一連のＣＤＲ配列を含み、図２に記載の配列番号２４〜８４の提供された重鎖可変領域（ＶＨ）配列で例示される。抗体のファミリーは、臨床治療薬（複数可）としての有用性に寄与する多数の利点を提供する。抗体は、ある範囲の結合親和性を有するメンバーを含み、所望の結合親和性を有する特定の配列の選択を可能にする。
【００７２】
限定されないが、例えば、図５Ｂに示されるような二重特異性抗体としての使用、もしくは三重特異性抗体、もしくはＣＡＲ−Ｔ構造の一部を含む、開発及び治療的使用または他の使用に好適な抗体は、本明細書で提供されるものから選択されてもよい。
【００７３】
候補タンパク質に対する親和性の決定は、Ｂｉａｃｏｒｅ測定などの当該技術分野で既知の方法を使用して実施することができる。抗体ファミリーのメンバーは、限定されないが、約１０−６〜約１０−１０程度；約１０−６〜約１０−９程度；約１０−６〜約１０−８程度；約１０−８〜約１０−１１程度；約１０−８〜約１０−１０程度；約１０−８〜約１０−９程度；約１０−９〜約１０−１１程度；約１０−９〜約１０−１０程度；またはこれらの範囲内の任意の値を含む、約１０−６〜約１０−１１程度のＫｄを有する、ＣＤ２２に対する親和性を有してもよい。親和性の選択は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ、前臨床モデル、及び臨床試験を含む、ＣＤ２２生物活性の調節、例えば、ブロックのための生物学的評価、ならびに潜在的な毒性の評価により確認されてもよい。
【００７４】
本明細書の抗体ファミリーのメンバーは、カニクイザルのＣＤ２２タンパク質と交差反応性ではなく、必要に応じて、カニクイザルのＣＤ２２タンパク質との交差反応性、または任意の他の動物種のＣＤ２２との交差反応性を提供するように設計することができる。
【００７５】
本明細書のＣＤ２２特異的抗体のファミリーは、ヒトＶＨフレームワークにＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含むＶＨドメインを含む。ＣＤＲ配列は、一例として、配列番号２４〜８４に記載の提供される例示的な可変領域配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のそれぞれに対して、アミノ酸残基２６〜３５；５３〜５９；及び９８〜１１７周辺の領域に位置してもよい。ＣＤＲ配列は、異なるフレームワーク配列が選択される場合、異なる位置にあり得るが、一般に配列の順序は同じままであることは、当業者により理解されるであろう。
【００７６】
本発明の抗ＣＤ２２抗体のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列は、以下の構造式に包含されてもよく、Ｘは、以下に示されるような特定のアミノ酸であり得る可変アミノ酸を示す。
ＣＤＲ１
ＧＸ１ＳＩＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｙ
（式中、Ｘ１は、ＤまたはＧであり、
Ｘ２は、Ｓ、Ｔ、Ｉ、またはＮであり、
Ｘ３は、ＳまたはＤであり、
Ｘ４は、Ｇ、Ｓ、またはＮであり、
Ｘ５は、Ｄ、Ｇ、またはＳであり、
Ｘ６は、ＹまたはＨである）
ＣＤＲ２
Ｘ７Ｘ８ＹＸ９ＧＸ１０Ｘ１１
（式中、Ｘ７は、ＩまたはＶであり、
Ｘ８は、ＹまたはＨであり、
Ｘ９は、ＳまたはＴであり、
Ｘ１０は、Ａ、Ｖ、またはＳであり、
Ｘ１１は、ＴまたはＡである）
ＣＤＲ３
Ｘ１２ＲＸ１３ＤＳＳＸ１４ＷＲＳ
（式中、Ｘ１２は、Ｔ、Ａ、またはＫであり、
Ｘ１３は、ＤまたはＥであり、
Ｘ１４は、ＮまたはＳである）。
【００７７】
代表的なＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列は、図１及び図３に示される。
【００７８】
一部の実施形態では、本発明の抗ＣＤ２２重鎖のみ抗体は、配列番号１〜１０のいずれか１つのＣＤＲ１配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲ１配列は、配列番号１である。
【００７９】
一部の実施形態では、本発明の抗ＣＤ２２重鎖のみ抗体は、配列番号１１〜１７のいずれか１つのＣＤＲ２配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲ２配列は、配列番号１１である。
【００８０】
一部の実施形態では、本発明の抗ＣＤ２２重鎖のみ抗体は、配列番号１８〜２３のいずれか１つのＣＤＲ３配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲ２配列は、配列番号１８である。
【００８１】
さらなる実施形態では、本発明の抗ＣＤ２２重鎖のみ抗体は、配列番号１のＣＤＲ１配列；配列番号１１のＣＤＲ２配列；及び配列番号１８のＣＤＲ３配列を含む。
【００８２】
さらなる実施形態では、本発明の抗ＣＤ２２重鎖のみ抗体は、配列番号２４〜８４の重鎖可変領域アミノ酸配列のいずれかを含む（図２）。
【００８３】
さらに別の実施形態では、本発明の抗ＣＤ２２重鎖のみ抗体は、配列番号２４の重鎖可変領域配列を含む。
【００８４】
一部の実施形態では、本発明の抗ＣＤ２２重鎖のみ抗体のＣＤＲ配列は、配列番号１〜２３のいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／もしくはＣＤＲ３配列またはＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列のセットと比較して、１つまたは２つのアミノ酸置換を含む（図１）。一部の実施形態では、該アミノ酸置換（複数可）は、上で提供される式と比較して、ＣＤＲ１のアミノ酸位置４〜６のうちの１つもしくは２つ、ならびに／またはＣＤＲ２の２、４〜７のアミノ酸位置のうちの１つもしくは２つ、ならびに／または、ＣＤＲ３のアミノ酸位置５及び１２のうちの１つもしくは２つに存在する。一部の実施形態では、本明細書の重鎖のみ抗ＣＤ２２抗体は、配列番号２４〜８４の重鎖可変領域配列のいずれかと少なくとも約８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９８％の同一性、または少なくとも９９％の同一性を有する重鎖可変領域配列を含むであろう（図２に示される）。
【００８５】
一部の実施形態では、限定されないが、二重特異性三本鎖抗体様分子を含む、本明細書で考察される立体配置のいずれかを有し得る二重特異性または多重特異性抗体が提供される。一部の実施形態では、二重特異性抗体は、ＣＤ２２に対する結合特異性を有する少なくとも１つの重鎖可変領域、及びＣＤ２２以外のタンパク質に対する結合特異性を有する少なくとも１つの重鎖可変領域を含み得る。一部の実施形態では、二重特異性抗体は、第１の抗原に対する結合特異性を有する重鎖／軽鎖対、ならびにＣＨ１ドメインがない状態で、ＣＨ２及び／またはＣＨ３及び／またはＣＨ４ドメインを含むＦｃ部分を含む、重鎖のみ抗体由来の重鎖、ならびに第２の抗原のエピトープまたは第１の抗原の異なるエピトープに結合する抗原結合ドメインを含み得る。特定の一実施形態では、二重特異性抗体は、エフェクター細胞上の抗原（例えば、Ｔ細胞上のＣＤ３タンパク質）に対する結合特異性を有する重鎖／軽鎖対、及びＣＤ２２に対する結合特異性を有する抗原結合ドメインを含む重鎖のみ抗体由来の重鎖を含む。
【００８６】
本発明のタンパク質が二重特異性抗体である一部の実施形態では、抗体の一方のアーム（１つの結合部分）は、ヒトＣＤ２２に特異的であるが、他方のアームは、標的細胞、腫瘍関連抗原、標的化抗原、例えば、インテグリンなど、病原体抗原、チェックポイントタンパク質などに特異的であり得る。標的細胞は、具体的には、以下で考察されるような、限定されないが、血液腫瘍、例えば、Ｂ細胞腫瘍由来の細胞を含むがん細胞を含む。
【００８７】
限定されないが、一本鎖ポリペプチド、二本鎖ポリペプチド、三本鎖ポリペプチド、四本鎖ポリペプチド、及びそれらの倍数を含む、種々のフォーマットの二重特異性抗体が本発明の範囲内にある。本明細書の二重特異性抗体は、具体的には、成熟Ｂ細胞で選択的に発現される、ＣＤ２２に結合するＴ細胞二重特異性抗体、及びＣＤ３（抗ＣＤ２２ｘ抗ＣＤ３抗体）を含む。そのような抗体は、ＣＤ２２を発現する細胞の強力なＴ細胞媒介性殺傷を誘導する。
【００８８】
抗ＣＤ２２重鎖抗体の調製
本発明の重鎖抗体は、当該技術分野で既知の方法により調製することができる。好ましい実施形態では、本明細書の重鎖抗体は、内因性免疫グロブリン遺伝子がノックアウトまたは無効化されたトランスジェニックマウス及びラット、好ましくは、ラット、を含むトランスジェニック動物により産生される。好ましい実施形態では、本明細書の重鎖抗体は、ＵｎｉＲａｔ（商標）で産生される。ＵｎｉＲａｔ（商標）は、それらの内因性免疫グロブリン遺伝子がサイレンシングされ、完全ヒトＨＣＡｂの多様な天然に最適化されたレパートリーを発現するために、ヒト免疫グロブリン重鎖トランスローカスを使用する。ラットの内因性免疫グロブリン遺伝子座は、様々な技術を使用してノックアウトまたはサイレンシングすることができるが、ＵｎｉＲａｔ（商標）では、亜鉛フィンガー（エンド）ヌクレアーゼ（ＺＮＦ）技術を使用して、内因性ラット重鎖Ｊ遺伝子座、軽鎖Ｃκ遺伝子座、及び軽鎖Ｃλ遺伝子座を不活化した。卵母細胞へのマイクロインジェクションのためのＺＮＦ構築物は、ＩｇＨ及びＩｇＬノックアウト（ＫＯ）株を生成し得る。詳細については、例えば、Ｇｅｕｒｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２５：４３３を参照のこと。Ｉｇ重鎖ノックアウトの特性決定は、Ｍｅｎｏｒｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４０：２９３２−２９４１により報告されている。ＺＮＦ技術の利点は、最大数ｋｂの欠失を介して遺伝子または遺伝子座をサイレンシングする非相同末端結合が、相同的統合のための標的部位も提供し得ることである（Ｃｕｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２９：６４−６７）。ＵｎｉＲａｔ（商標）で産生されたヒト重鎖抗体は、ＵｎｉＡｂｓ（商標）と呼ばれ、従来の抗体を用いて攻撃することができないエピトープと結合し得る。それらの高い特異性、親和性、及び小さいサイズにより、それらは、モノ特異的及びポリ特異的用途に最適になる。
【００８９】
ＵｎｉＡｂｓ（商標）に加えて、具体的には、本明細書では、ラクダ科動物ＶＨＨフレームワーク及び変異を欠く重鎖のみ抗体、ならびにそれらの機能的ＶＨ領域を含む。そのような重鎖のみ抗体は、例えば、トランスジェニックラットまたはマウスで産生させることができ、これは、例えば、ＷＯ２００６／００８５４８に記載されるような完全ヒト重鎖のみ遺伝子座を含むが、ウサギ、モルモット、ラットなどの他のトランスジェニック哺乳動物を使用することもでき、ラット及びマウスが好ましい。それらのＶＨＨもしくはＶＨ機能的フラグメントを含む重鎖のみ抗体は、例えば、哺乳動物細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）、Ｅ．ｃｏｌｉ、または酵母を含む、好適な真核生物または原核生物宿主中でのコード核酸の発現による組み換えＤＮＡ技術により産生することもできる。
【００９０】
重鎖のみ抗体のドメインは、抗体及び低分子薬の利点：一価または多価にすることができる；毒性が低い；製造の費用対効果がよい、を組み合わせる。それらのサイズが小さいため、これらのドメインは、経口または局所投与を含む投与が容易であり、胃腸の安定性を含む高い安定性を特徴とし；それらの半減期は、所望の使用または適応症に合わせて調整することができる。加えて、ＨＣＡｂのＶＨ及びＶＨＨドメインは、費用対効果の高い方法で製造することができる。
【００９１】
特定の実施形態では、ＵｎｉＡｂｓ（商標）を含む本発明の重鎖抗体は、別のアミノ酸残基で置換されたＦＲ４領域の最初の位置（Ｋａｂａｔ番号付けシステムによるアミノ酸位置１０１）の天然アミノ酸残基を有し、これは、その位置の天然アミノ酸残基を含むかまたはそれと会合する表面露出疎水性パッチを破壊することが可能である。そのような疎水性パッチは通常、抗体軽鎖定常領域との界面に埋め込まれるが、ＨＣＡｂ中で表面が露出するようになり、少なくとも部分的に、ＨＣＡｂの望ましくない凝集及び軽鎖会合のためのものである。好ましくは、置換アミノ酸残基は、荷電し、より好ましくは、正に荷電し、例えば、リジン（Ｌｙｓ、Ｋ）、アルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）、またはヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）、好ましくは、アルギニン（Ｒ）である。好ましい実施形態では、トランスジェニック動物に由来する重鎖のみ抗体は、位置１０１にＴｒｐからＡｒｇへの変異を含有する。得られたＨＣＡｂは、好ましくは、凝集がない状態の生理学的条件下で高い抗原結合親和性及び溶解性を有する。
【００９２】
本発明の一部として、ＥＬＩＳＡ（組み換えＣＤ２２細胞外ドメイン）タンパク質及び細胞結合アッセイにおいてヒトＣＤ２２に結合するＵｎｉＲａｔ（商標）動物（ＵｎｉＡｂ（商標））由来の固有の配列を有するヒトＩｇＧ抗ＣＤ２２重鎖抗体が同定された。同定された重鎖可変領域（ＶＨ）配列（図２を参照のこと）は、ヒトＣＤ２２タンパク質結合及び／またはＣＤ２２＋細胞への結合について陽性であり、全ては、ＣＤ２２を発現しない細胞への結合について陰性である。
【００９３】
本明細書に記載の抗体は、ＣＤ２２陽性バーキットリンパ腫細胞株Ｄａｕｄｉ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＣＬ−２１３（商標））、一部は、カニクイザルのＣＤ２２タンパク質と交差反応性である。加えて、必要に応じて、任意の動物種のＣＤ２２タンパク質との交差反応性を提供するように操作することができる。
【００９４】
本明細書のＵｎｉＡｂｓ（商標）などの抗ＣＤ２２重鎖抗体は、限定されないが、約１０−６〜約１０−１０程度；約１０−６〜約１０−９程度；約１０−６〜約１０−８程度；約１０−８〜約１０−１１程度；約１０−８〜約１０−１０程度；約１０−８〜約１０−９程度；約１０−９〜約１０−１１程度；約１０−９〜約１０−１０程度；またはこれらの範囲内の任意の値を含む約１０−６〜約１０−１１程度のＫｄのＣＤ２２に対する親和性を有し得る。親和性の選択は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ、前臨床モデル、及び臨床試験を含む、ＣＤ２２生物活性の調節、例えば、ブロックのための生物学的評価、ならびに潜在的な毒性の評価により確認されてもよい。
【００９５】
ＣＤ２２タンパク質の非重複エピトープに結合する重鎖抗体、例えば、ＵｎｉＡｂｓ（商標）は、酵素結合イムノアッセイ（ＥＬＩＳＡアッセイ）またはフローサイトメトリー競合結合アッセイなどの競合結合アッセイにより同定することができる。例えば、標的抗原に結合する既知の抗体及び目的の抗体間の競合を使用し得る。このアプローチを使用することにより、参照抗体と競合するもの及びそうでないものに、一連の抗体を分け得る。非競合抗体は、参照抗体が結合しているエピトープと重複しない異なるエピトープへの結合として同定される。多くの場合、１つの抗体は固定化され、抗原は結合され、第２の標識された（例えば、ビオチン化）抗体は、捕捉された抗原に結合する能力についてＥＬＩＳＡアッセイで試験される。これは、Ｐｒｏｔｅｏｎ  ＸＰＲ３６（ＢｉｏＲａｄ，Ｉｎｃ）、Ｂｉａｃｏｒｅ  ２０００、及びＢｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ならびにＭＸ９６  ＳＰＲイメージャ（Ｉｂｉｓ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｂ．Ｖ．）を含む、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）のプラットフォームを使用することによっても、ならびに、Ｏｃｔｅｔ  Ｒｅｄ３８４及びＯｃｔｅｔ  ＨＴＸ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，Ｐａｌｌ  Ｉｎｃ）などのバイオレイヤー干渉法プラットフォームで、実施することができる。さらなる詳細については、本明細書の実施例を参照のこと。
【００９６】
通常、抗体は、上記の競合結合アッセイなどの標準的な技術により決定されるように、参照抗体の標的抗原への結合を約１５〜１００％低減させる場合、参照抗体と「競合する」。種々の実施形態では、相対的な抑制は、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、またはそれ以上である。
【００９７】
医薬組成物、使用、及び処置方法
好適な薬学的に許容される担体と混合した本発明の１つ以上の抗体を含む医薬組成物を提供することが本発明の別の態様である。本明細書で使用される薬学的に許容される担体は、限定されないが、アジュバント、固体担体、水、緩衝剤、または治療構成成分を保持するために当該技術分野で使用される他の担体、またはそれらの組み合わせを例示する。
【００９８】
一実施形態では、医薬組成物は、ＣＤ２２に結合する重鎖抗体（例えば、ＵｎｉＡｂ（商標））を含む。別の実施形態では、医薬組成物は、ＣＤ２２タンパク質上の２つ以上の非重複エピトープに対する結合特異性を有する多重特異性（二重特異性を含む）重鎖抗体（例えば、ＵｎｉＡｂ（商標））を含む。好ましい実施形態では、医薬組成物は、ＣＤ２２に対する結合特異性及びエフェクター細胞上の結合標的に対する結合特異性（例えば、Ｔ細胞上の結合標的、例えば、Ｔ細胞上のＣＤ３タンパク質）を有する多重特異性（二重特異性を含む）重鎖抗体（例えば、ＵｎｉＡｂ（商標））を含む。
【００９９】
本発明に従って使用される抗体の医薬組成物は、所望の純度を有するタンパク質を、凍結乾燥製剤または水溶液の形態などの、任意の薬学的に許容される担体、賦形剤または安定剤と混合することにより貯蔵用に調製される（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）を参照のこと）。許容される担体、賦形剤、または安定剤は、用いられる投薬量及び濃度では、レシピエントに無害であり、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；保存剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルもしくはベンジルアルコール；メチルもしくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む単糖類、二糖類、及び他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩生成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；ならびに／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含む。
【０１００】
非経口投与のための医薬組成物は、好ましくは、滅菌であり、実質的に等張性であり、適正製造基準（ＧＭＰ）条件下で製造される。医薬組成物は、単位剤形（すなわち、単回投与のための投薬量）として提供することができる。製剤は、選択される投与経路に依存する。本明細書の抗体は、静脈内注射もしくは輸注により、または皮下に投与することができる。注射投与のためには、本明細書の抗体は、注射部位における不快感を軽減するために、水溶液中で、好ましくは、生理適合性緩衝液中で、製剤化することができる。溶液は、上述のような担体、賦形剤、または安定化剤を含有し得る。あるいは、抗体は、使用前に好適なビヒクル、例えば、滅菌の発熱原不含水で構成するための凍結乾燥形態とし得る。
【０１０１】
抗体製剤は、例えば、米国特許第９，０３４，３２４号に開示される。類似した製剤は、本発明の、ＵｎｉＡｂｓ（商標）を含む重鎖抗体に使用することができる。皮下抗体製剤は、例えば、ＵＳ２０１６０３５５５９１及びＵＳ２０１６０１６６６８９に記載される。
【０１０２】
使用方法
本明細書に記載の重鎖のみ抗ＣＤ２２抗体、多重特異性抗体、及び医薬組成物は、限定しないが、本明細書にさらに記載される状態及び疾患を含む、ＣＤ２２の発現を特徴とする疾患及び状態の処置に使用することができる。本発明の態様はまた、ＣＤ２２の発現を特徴とするＢ細胞障害の処置のための薬剤の調製における、本明細書に記載の抗体の使用に関する。本発明の態様はまた、ＣＤ２２の発現を特徴とするＢ細胞障害の処置に使用される、本明細書に記載の抗体に関する。
【０１０３】
ＣＤ２２は、成熟前及び未成熟Ｂ細胞上で低いレベルで発現され、成熟Ｂ細胞上で最大限に発現され、形質細胞上で最終的に下方制御される、１３５ｋＤａのＩ型膜貫通タンパク質である（例えば、Ｗａｌｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００８  Ｍａｒ；１２３（３）３１４−２５）。ＣＤ２２は、濾胞性（１次及び２次Ｂ細胞ゾーン）、マントル、ならびに辺縁帯Ｂ細胞において強力に発現され、Ｂ細胞悪性腫瘍を有する患者由来の試料の６０％〜８０％で存在することが報告されている（Ａｌｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００９；１５（３）Ｆｅｂｒｕａｒｙ  １１，２００９）。多数の血液悪性腫瘍において観察された発現に起因して、ＣＤ２２は、抗体ベースの治療法の有望な標的である。
【０１０４】
一態様では、ＣＤ２２重鎖抗体（例えば、ＵｎｉＡｂｓ（商標））及び本明細書の医薬組成物は、限定されないが、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、及びＢ細胞急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）を含む、ＣＤ２２の発現を特徴とする血液悪性腫瘍を処置するために使用することができる。
【０１０５】
びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬまたはＤＬＢＬ）は、成人間で最も一般的な形態の非ホジキンリンパ腫であり（Ｂｌｏｏｄ  １９９７  ８９（１１）：３９０９−１８）、推定年間発生率は、米国及び英国において１年間で１００，０００人当たり７〜８症例である。それは、身体の事実上任意の部分に生じ得る中悪性度がんとして特徴付けられる。ＤＬＢＣＬの原因は、よく理解されず、それは、正常Ｂ細胞、及び他の種類のリンパ腫または白血病細胞の悪性転換から生じ得る。処置アプローチは一般に、化学療法及び放射線療法を含み、成人の場合、約５８％の全５年生存率平均をもたらしている。一部のモノクローナル抗体が、ＤＬＢＣＬの処置に有望であることが示されているが、一貫した臨床的有効性は、今なお最終的に実証されていない。従って、免疫療法、例えば、ＤＬＢＣＬ、を含む新しい治療法に対する大きなニーズがある。
【０１０６】
別の態様では、ＣＤ２２重鎖抗体（例えば、ＵｎｉＡｂｓ（商標））及び本明細書の医薬組成物は、限定されないが、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、関節リウマチ（ＲＡ）、及び多発性硬化症（ＭＳ）を含む、ＣＤ２２を発現する病原性Ｂ細胞を特徴とする自己免疫障害を処置するために使用することができる。
【０１０７】
疾患の処置のための本発明の組成物の有効用量は、投与の手段、標的部位、患者の生理的状態、患者がヒトであるか動物であるか、投与される他の薬剤、及び処置が予防的なものであるか治療的なものであるかを含む多くの異なる要因に応じて変動する。通常、患者は、ヒトであるが、非ヒト哺乳動物、例えば、イヌ、ネコ、ウマなどのコンパニオン動物、ウサギ、マウス、ラットなどの実験動物なども処置されてもよい。処置投薬量は、安全性及び有効性を最適化するために滴定することができる。
【０１０８】
投薬量レベルは、当業者により容易に決定することができ、例えば、治療に対する対象の応答を変更するために必要とされる場合、必要に応じて、変更することができる。単一剤形を生成するために担体材料と組み合わせることができる活性成分の量は、処置される宿主及び特定の投与様式に応じて変動する。一般に単位剤形は、約１ｍｇ〜約５００ｍｇの活性成分を含有する。
【０１０９】
一部の実施形態では、薬剤の治療投薬量は、約０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ宿主の体重、より通常では、０．０１〜５ｍｇ／ｋｇ宿主の体重の範囲であってよい。例えば、投薬量は、１ｍｇ／ｋｇ体重もしくは１０ｍｇ／ｋｇ体重、または１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であり得る。例示的な処置レジメンは、２週間に１回または１ヶ月に１回または３〜６ヶ月に１回の投与を必要とする。本発明の治療実体は通常、複数の機会で投与される。単回投薬間の間隔は、毎週、毎月、または毎年であり得る。間隔はまた、患者の治療実体の血中レベルを測定することにより示されるように、不定期であり得る。あるいは、本発明の治療実体は、徐放性製剤として投与することができ、この場合では、あまり頻繁な投与を必要としない。投薬量及び頻度は、患者におけるポリペプチドの半減期に応じて変動する。
【０１１０】
通常、組成物は、液体溶液または懸濁液のいずれかの注射剤として調製され、注射前に液体ビヒクル中の溶解または懸濁に適する固体形態を調製することもできる。本明細書の医薬組成物は、そのままで、または固体（例えば、凍結乾燥）組成物の再構成後に、静脈内または皮下投与に適する。調製物は、上記のように、増強されたアジュバント効果のために、リポソームまたはポリラクチド、ポリグリコリド、もしくはコポリマーなどのマイクロ粒子中に乳化またはカプセル化することもできる。Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７，１９９０及びＨａｎｅｓ，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ２８：９７−１１９，１９９７。本発明の薬剤は、活性成分の持続放出またはパルス放出を可能にするような方法で製剤化することができるデポー注射またはインプラント調製物の形態で投与することができる。医薬組成物は一般に、滅菌であり、実質的に等張性であり、及び米国食品医薬品局の全ての適正製造基準（ＧＭＰ）規制に完全に準拠して製剤化される。
【０１１１】
本明細書に記載の抗体及び抗体構造の毒性は、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に対して致死的な用量）またはＬＤ１００（集団の１００％に対して致死的な用量）を決定することにより、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的手順で決定することができる。毒性及び治療効果間の用量比が治療指数である。これらの細胞培養アッセイ及び動物実験から得られたデータは、ヒトに使用するのに毒性のない投薬量範囲を製剤化する際に使用することができる。本明細書に記載の抗体の投薬量は、好ましくは、毒性がほとんどないかまたは全くない有効用量を含む循環濃度の範囲内にある。投薬量は、用いられる剤形及び利用される投与経路に応じて、この範囲内で変動し得る。正確な製剤、投与経路、及び投薬量は、患者の状態を考慮して、個々の医師が選択することができる。
【０１１２】
投与用組成物は一般に、薬学的に許容される担体、好ましくは、水性担体、に溶解した抗体または他の切除剤を含むであろう。様々な水性担体、例えば、緩衝食塩水などを使用することができる。これらの溶液は、滅菌であり、一般に、望ましくない物質を含まない。これらの組成物は、従来の周知の滅菌技術により滅菌されてもよい。組成物は、生理的条件に近づけるために必要とされるような薬学的に許容される補助物質、例えば、ｐＨ調整剤及び緩衝剤、毒性調整剤などの、例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウムなど、を含有してもよい。これらの製剤中の活性薬の濃度は、広く変動し得、選択される特定の投与様式及び患者のニーズに従って、主に体液量、粘度、体重などに基づいて選択されるであろう（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（１５ｔｈ  ｅｄ．，１９８０）及びＧｏｏｄｍａｎ＆Ｇｉｌｌｍａｎ，Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（Ｈａｒｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９６））。
【０１１３】
本発明の活性薬及びその製剤を含むキット、ならびに使用説明書もまた、本発明の範囲内である。キットはさらに、少なくとも１つの追加の試薬、例えば、化学療法薬などを含有し得る。キットは通常、キットの内容物の意図される使用を示すラベルを含む。本明細書で使用される「ラベル」という用語は、キット上もしくはキットに付随して提供されるか、またはそうでなければキットに付随する任意の文書または記録材料を含む。
【０１１４】
ここで、十分に説明されている本発明は、本発明の趣旨または範囲から逸脱することなく、種々の変更及び修正を行うことができることが当業者に明らかとなるであろう。
【実施例】
【０１１５】
材料及び方法
ＣＤ２２タンパク質結合
抗原抗体親和性を決定するための動態結合実験を、バイオレイヤー干渉法を使用するＯｃｔｅｔ  ＱＫ−３８４システム（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）で実施した。抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃキャプチャー（ＡＨＣ）バイオセンサー（Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ、部品番号：１８−５０６４）をアッセイ緩衝液（１ｘのＰＢＳ、０．１％のＢＳＡ、０．０２％のＴｗｅｅｎ−２０、ｐＨ７．２）で水和し、ｐＨ１．５の１００ｍＭのグリシン中で事前調整した。ベースラインを、アッセイ緩衝液で１２０秒間確立した。次に、ＡＨＣバイオセンサーを、５μｇ／ｍＬの濃度のＵｎｉＡｂｓ（商標）で１２０秒間固定した。別のベースライン（１２０秒）を、アッセイ緩衝液で確立した。次に、それらを、２５０ｎＭから開始する、アッセイ緩衝液中のヒトＣＤ２２タンパク質の７点の１：２希釈系列に浸漬した。検体列の最後のウェルは、緩衝液及びロードされたバイオセンサー間の非特異的結合を試験するために、アッセイ緩衝液のみを含有し、参照ウェルとして使用した。会合を６００秒間観察し、続いて、解離を９００秒間観察した。Ｏｃｔｅｔ  Ｄａｔａ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｖ９．０（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を使用して、データ分析を実施した。標準的な１：１結合モデルを使用して、結合動態を分析した。
ＣＤ２２細胞結合
【０１１６】
Ｄａｕｄｉ細胞株（ＡＴＣＣ）を使用したフローサイトメトリー（Ｇｕａｖａ  ｅａｓｙＣｙｔｅ  ８ＨＴ、ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で、ＣＤ２２陽性細胞への結合を評価した。要約すると、１００，０００の標的細胞を、精製されたＵｎｉＡｂｓ（商標）の希釈系列で、４℃で３０分間染色した。インキュベーション後、細胞をフローサイトメトリー緩衝液（１ＸのＰＢＳ、１％のＢＳＡ、０．１％のＮａＮ３）で２回洗浄し、Ｒ−フィコエリトリン（ＰＥ）（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号２０４２−０９）がコンジュゲートされたヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＧで染色して、細胞結合抗体を検出した。４℃で２０分間のインキュベーション後、細胞をフローサイトメトリー緩衝液で２回洗浄し、次に、平均蛍光強度（ＭＦＩ）をフローサイトメトリーで測定した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ７を使用して、ＥＣ５０値を計算した。以下の変更を含む同じプロトコールを使用して、カニクイザルＣＤ２２陽性細胞への結合を決定した：標的細胞がカニクイザルＣＤ２２の細胞外ドメインを発現するように安定的にトランスフェクトされたＣＨＯ細胞に由来し、各抗体が単一の濃度（〜１．７μｇ／ｍＬ）で試験されたのでＥＣ５０値が計算されなかった。
【０１１７】
実施例１：重鎖のみ抗体を発現する遺伝子操作されたラット
『ヒト−ラット』のＩｇＨ遺伝子座を、いくつかの部分で構築して、組み立てた。これは、ヒトＪＨの下流のラットＣ領域遺伝子の改変及び結合、ならびにその後のヒトＶＨ６−Ｄセグメント領域の上流付加を含む。次に、ヒトＶＨ６、全てのＤ、全てのＪＨ、及び改変ラットＣγ２ａ／１／２ｂ（ΔＣＨ１）を含む、組み立てられて改変された領域をコードするヒトＶＨ遺伝子の別々のクラスターを有する２つのＢＡＣ［ＢＡＣ６及びＢＡＣ３］を、Ｇｅｏｒｇと呼ばれるＢＡＣと共注入した。
【０１１８】
再配置されていない立体配置の人工重鎖免疫グロブリン遺伝子座を有するトランスジェニックラットを生成した。ＩｇＧ２ａ（ΔＣＨ１）、ＩｇＧ１（ΔＣＨ１）、ＩｇＧ２ｂ（ΔＣＨ１）遺伝子は、ＣＨ１セグメントを欠いていた。定常領域遺伝子ＩｇＥ、ＩｇＡ、及び３’エンハンサーが、Ｇｅｏｒｇ  ＢＡＣに含まれていた。トランスジェニックラットのＲＴ−ＰＣＲ及び血清分析（ＥＬＩＳＡ）は、トランスジェニック免疫グロブリン遺伝子座の生産的な再配列及び血清中の種々のアイソタイプの重鎖のみ抗体の発現を明らかにした。トランスジェニックラットを、米国特許公開第２００９／００９８１３４  Ａ１号に以前に記載された変異内因性重鎖及び軽鎖遺伝子座を有するラットと交雑させた。そのような動物の分析は、ラット免疫グロブリン重鎖及び軽鎖発現の不活化、ならびにヒトＶ、Ｄ、及びＪ遺伝子によりコードされる可変領域を有する重鎖抗体の高レベル発現を示した。トランスジェニックラットの免疫化は、高力価血清応答の抗原特異的重鎖抗体の生成をもたらした。ヒトＶＤＪ領域を有する重鎖抗体を発現するこれらのトランスジェニックラットは、ＵｎｉＲａｔｓ（商標）と呼ばれていた。
【０１１９】
実施例２：免疫化
ＣＤ２２の組み換え細胞外ドメインでの免疫化。
１２匹のＵｎｉＲａｔ動物（６匹のＨＣ２７、６匹のＨＣ２８）を組み換えヒトＣＤ２２タンパク質で免疫した。Ｔｉｔｅｒｍａｘ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌアジュバントを使用して標準的なプロトコールに従って動物を免疫した。ＣＤ２２の組み換え細胞外ドメインを、Ｒ＆Ｄシステムズから購入し、滅菌生理食塩水で希釈し、アジュバントと混合した。免疫原をＴｉｔｅｒｍａｘ及びＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌアジュバントと組み合わせた。Ｔｉｔｅｒｍａｘ中の免疫原による初回免疫化（プライミング）を左右の脚に投与した。その後の追加免疫をＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌの存在下で行い、採取３日前に、ＰＢＳ中の免疫原を用いる追加免疫を実施した。最終採血時にラットから血清を収集し、血清力価を決定した。
【０１２０】
血清力価の結果
血清力価の要約情報は、図６に示される。図６に示されるグラフでは、各線は、個々の動物を表す。グラフの凡例は、個々の各動物のＩＤ番号を示す。ｈｕＣＤ２２＋Ｆｃタンパク質、ｈｕＣＤ２２＋Ｈｉｓタグ、アカゲザルＣＤ２２＋Ｈｉｓタグタンパク質タンパク質、及びＨｉｓタグオフターゲットタンパク質に対する血清の８点希釈系列の結合活性をＥＬＩＳＡで試験した。この動物群の中で、ヒト及びアカゲザルの両方のＣＤ２２タンパク質に対する一連の血清反応性レベルが観察された。Ｈｉｓタンパク質タグに対する血清応答も観察された。
【０１２１】
実施例３：ＣＤ２２発現細胞株への結合
図４は、本明細書に記載の抗ＣＤ２２重鎖のみ抗体の標的結合活性をまとめたものである。列１は、抗ＣＤ２２重鎖のみ抗体のクローンＩＤ番号を示す。列２は、モル濃度で測定されたタンパク質（ＫＤ）への結合親和性を示す。列３は、秒単位で測定されたタンパク質への結合の解離定数（Ｋ−ｏｆｆ  ｒａｔｅ）を示す。列４は、バックグラウンドＭＦＩシグナルの倍数として測定されたＤａｕｄｉ細胞への結合を示す。列５は、バックグラウンドＭＦＩシグナルの倍数として測定されたｃｙｎｏ  ＣＤ２２を安定的に発現するＣＨＯ細胞への結合を示す。列６は、バックグラウンドＭＦＩシグナルの倍数として測定されたＣＤ２２タンパク質を発現しないＣＨＯ細胞への結合を示す。
【０１２２】
実施例４：活性化されたＴ細胞のリダイレクトによるヒト腫瘍細胞の二重特異性抗体媒介性殺傷
３つの異なるＣＤ２２陽性バーキットリンパ腫腫瘍細胞株（Ｄａｕｄｉ、Ｒａｊｉ、及びＲａｍｏｓ）を色素標識し、前活性化ヒトＴ細胞の存在下で、漸増量の二重特異性抗体と共にインキュベートした。二重特異性抗体は、図５Ｄに概略的に示されるように、抗ＣＤ２２  ＶＨ結合ドメインと対になった抗ＣＤ３結合アームから構成された。陰性対照抗体は、ＣＤ２２に結合しないＶＨ結合ドメインを含んでいた。ＣＤ２２陰性Ｋ５６２細胞は、特異的溶解を示さなかった（データを示さず）。同じ抗ＣＤ３結合ドメインと対になった３つの異なる抗ＣＤ２２重鎖のみ結合ドメインを組み込んだ３つの二重特異性抗体のデータは、陰性対照と比較して図５Ａに示され、活性化Ｔ細胞のリダイレクトを介してＣＤ２２陽性Ｄａｕｄｉ腫瘍細胞の抗体媒介性殺傷を示す。２つの異なる抗ＣＤ３結合ドメインと対になった同じ抗ＣＤ２２重鎖のみ結合ドメインを組み込む２つの二重特異性抗体のデータは、陰性対照と比較して図５Ｂに示され、活性化Ｔ細胞のリダイレクトを介してＣＤ２２陽性Ｒａｊｉ腫瘍細胞の抗体媒介性殺傷を示す。２つの異なる抗ＣＤ３結合ドメインと対になった同じ抗ＣＤ２２重鎖のみ結合ドメインを組み込む２つの二重特異性抗体のデータは、陰性対照と比較して図５Ｃに示され、活性化Ｔ細胞のリダイレクトを介してＣＤ２２陽性Ｒａｍｏｓ腫瘍細胞の抗体媒介性殺傷を示す。
【０１２３】
本発明の好ましい実施形態が、本明細書に示され、説明されているが、そのような実施形態が単なる例として提供されることが、当業者らには明らかであろう。ここで、当業者らであれば、本発明から逸脱することなく多数の変形形態、変更、及び置換に想到するであろう。本明細書に記載される本発明の実施形態に対する種々の代替物が、本発明の実施において用いられ得ることを理解すべきである。以下の特許請求の範囲が本発明の範囲を定義し、特許請求の範囲内の方法及び構造ならびにその等価物が特許請求に網羅されることが意図される。
【図１】
2021506325.tif 000003
【図２】
2021506325.tif 000004
【図２−０１】
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【図２−０２】
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【図２−０３】
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【図２−０４】
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【図３】
2021506325.tif 000009
【図３−０１】
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【図３−０２】
2021506325.tif 000011
【図４】
2021506325.tif 000012
【図４−０１】
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【図４−０２】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図６】
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【図６−０１】
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【配列表】
2021506325000001.app
【国際調査報告】
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