(57)【要約】  本発明は、抗ＭＳＬＮ抗体およびそれを含む癌処置用医薬組成物に関する。本発明の抗ＭＳＬＮ抗体は、ＭＳＬＮに対する高い親和性および特異性を有し、したがって癌の予防または治療に効果的に使用することができる。
2021507678.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１のアミノ酸配列との同一性が少なくとも８０％である配列からなる軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）；および
配列番号３〜５のいずれかのアミノ酸配列との同一性が少なくとも８０％である配列からなる重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）
を含む抗体。
【請求項２】
メソテリン（ＭＳＬＮ）に特異的に結合する、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
ＭＳＬＮがヒトＭＳＬＮである、請求項２に記載の抗体。
【請求項４】
ＭＳＬＮ発現癌細胞に特異的に結合する、請求項１に記載の抗体。
【請求項５】
ＭＳＬＮ発現癌細胞がヒト癌細胞である、請求項４に記載の抗体。
【請求項６】
ヒト化抗体である、請求項１に記載の抗体。
【請求項７】
請求項１に記載される抗体の軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）および重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）をコードするポリヌクレオチド。
【請求項８】
請求項７に記載されるポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【請求項９】
請求項８に記載される発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
【請求項１０】
請求項９に記載される宿主細胞を培養することを含む、ＭＳＬＮに特異的に結合する抗体を生産する方法。
【請求項１１】
請求項１に記載される抗体またはそのフラグメントを含む、癌を予防または治療するための医薬組成物。
【請求項１２】
癌が、中皮腫、膵臓癌、卵巣癌、胃癌、肺癌または子宮内膜癌である、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
癌を予防または治療するための、請求項１に記載の抗体の使用。
【請求項１４】
癌の予防または治療用医薬を製造するための、請求項１に記載の抗体の使用。
【請求項１５】
請求項１に記載される抗体を対象に投与することを含む、癌を予防または治療する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗ＭＳＬＮ抗体およびそれを含む癌処置用医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
さまざまな死因のなかで、癌による死亡は高頻度で、２番目に多い。これまでに癌処置のためのさまざまな試みがなされてきた。現在の癌処置方法として、抗癌剤投与、照射、または外科手術が行われている。しかしながら、そのような処置方法は初期の癌には有効かもしれないが、末期癌においては、癌が他の組織に広がっているか、または再発している場合、あまり有効でない。
【０００３】
最近、副作用を伴わずに癌を治療するために、抗体を用いた標的化抗癌剤に関する研究が盛んに行われている。典型的には、抗ＨＥＲ２抗体ハーセプチンが乳癌治療に用いられ、抗血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）抗体アバスチンが結腸直腸癌の治療に用いられている。抗体を用いた標的化抗癌剤の開発の鍵は、癌細胞において過剰に発現される膜表面タンパク質に対する抗体を開発することである。
【０００４】
メソテリン（ＭＳＬＮ）は、前駆ポリペプチドが６９〜７１ｋＤａであり、腹膜、胸膜および心膜腔の中皮層の細胞表面に存在する糖タンパク質である。これまでに、ＭＳＬＮの機能は明確には解明されていないが、中皮腫、卵巣癌、膵臓癌、胃癌、肺癌および子宮内膜癌の癌細胞または腫瘍細胞においてＭＳＬＮの過剰発現が見られることが報告されている。さらに、ＭＳＬＮが過剰発現される癌細胞をマウス／ヒトキメラ抗ＭＳＬＮ抗体で処理すると、癌細胞増殖が抑制されることが、研究により示されている（Hassan R et al., Cancer Immun., 19;7:20, 2007）。
【０００５】
したがって、ＭＳＬＮに特異的に結合するマウス抗体が開発されている。しかしながら、異種対象間で交差反応性がないことから、臨床試験では好結果は得られていない。さらに、マウス由来抗体またはキメラ抗体で処置された患者において産生される抗体が、過剰な傷害性をもたらすか、または治療効果を低下させるという問題が存在する。
【０００６】
したがって、ＭＳＬＮに対する高い親和性を有しながらヒトとの交差反応性を示すことのできる抗ＭＳＬＮ抗体を開発する必要がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、当分野における上記問題を解決するものである。本発明の課題は、メソテリン（ＭＳＬＮ）に対する高い結合親和性を有する抗体、およびそれを使用した癌処置効果に優れる医薬組成物を提供することである。
【０００８】
しかしながら本発明が解決しようとする課題は、上記の課題に限られるものではなく、言及していない他の課題は、以下の説明によって当業者に明確に理解されうる。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の一側面において、配列番号１のアミノ酸配列との同一性が少なくとも８０％である配列からなる軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）、および配列番号３〜５のいずれかのアミノ酸配列との同一性が少なくとも８０％である配列からなる重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）を含む抗体が提供される。
【００１０】
本発明の他の一側面において、抗体の軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）および重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）をコードするポリヌクレオチドが提供される。
【００１１】
本発明のさらなる一側面において、ポリヌクレオチドを含む発現ベクターが提供される。
【００１２】
本発明のさらなる一側面において、発現ベクターで形質転換された宿主細胞が提供される。
【００１３】
本発明のさらなる一側面において、宿主細胞を培養するステップを含む、ＭＳＬＮに特異的に結合する抗体を生産する方法が提供される。
【００１４】
本発明のさらなる一側面において、抗体またはそのフラグメントを含む、癌を予防または治療するための医薬組成物が提供される。
【発明の効果】
【００１５】
本発明の抗ＭＳＬＮ抗体は、ＭＳＬＮに対する親和性および特異性が高いので、癌の予防または治療のために効果的に使用することができる。
【００１６】
本発明の効果は上記の効果に限定されるものではなく、本発明の詳細な説明または特許請求の範囲に記載される発明の構成から導き出されるいずれの効果をも包含することを理解すべきである。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】図１は、マウス／ヒトキメラＭＩ３２３ ＩｇＧ１の、ＭＳＬＮを発現するヒト膵臓癌細胞（ＡｓＰＣ１）に対する親和性を解析した結果を示す。
【図２】図２は、マウス／ヒトキメラＭＩ３２３ ＩｇＧ１の、ＭＳＬＮを発現するヒト膵臓癌細胞（Ｃａｐａｎ２）に対する親和性を解析した結果を示す。
【図３】図３は、マウス／ヒトキメラＭＩ３２３ ＩｇＧ１の、ＭＳＬＮを発現するヒト胸膜中皮腫細胞（Ｈ２２６）に対する親和性を解析した結果を示す。
【図４】図４は、マウス／ヒトキメラＭＩ３２３ ＩｇＧ１の、ＭＳＬＮを発現するヒト膵臓癌細胞（ＰＬ４５）に対する親和性を解析した結果を示す。
【図５】図５は、ヒト化ＭＩ３２３ ＩｇＧ１の、ＭＳＬＮを発現するヒト膵臓癌細胞（ＡｓＰＣ１）に対する親和性を解析した結果を示す。
【図６】図６は、ヒト化ＭＩ３２３ ＩｇＧ１の、ＭＳＬＮを発現するヒト膵臓癌細胞（Ｃａｐａｎ２）に対する親和性を解析した結果を示す。
【図７】図７は、ヒト化ＭＩ３２３ ＩｇＧ１の、ＭＳＬＮを発現するヒト胸膜中皮腫細胞（Ｈ２２６）に対する親和性を解析した結果を示す。
【図８】図８は、ヒト化ＭＩ３２３ ＩｇＧ１の、ＭＳＬＮを発現するヒト膵臓癌細胞（ＰＬ４５）に対する親和性を解析した結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明の一側面において、配列番号１のアミノ酸配列との同一性が少なくとも８０％である配列からなる軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）、および配列番号３〜５のいずれかのアミノ酸配列との同一性が少なくとも８０％である配列からなる重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）を含む抗体が提供される。
【００１９】
軽鎖可変ドメインは、配列番号１のアミノ酸配列との同一性が少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９９％であるアミノ酸配列からなりうる。
【００２０】
重鎖可変ドメインは、配列番号３〜５のいずれかのアミノ酸配列との同一性が少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９９％であるアミノ酸配列からなりうる。
【００２１】
該軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインを含む抗体は、メソテリン（ＭＳＬＮ）に特異的に結合しうる。ここで、抗体が結合するＭＳＬＮは、ヒトＭＳＬＮでありうる。したがって、抗体はヒト由来ＭＳＬＮ、またはそれと結合する癌細胞に、特異的に結合しうる。
【００２２】
本書において、用語「ＭＳＬＮ」は、動物、好ましくはヒトおよびサルに存在する、ＭＳＬＮそのもの、ならびにその任意のバリアント、アイソタイプおよびパラログを集合的にさす概念をさしうる。さらに、本書において、用語「ヒトＭＳＬＮ」とは、ヒト由来ＭＳＬＮをさす。本書において、用語「マウスＭＳＬＮ」とは、マウス由来ＭＳＬＮをさす。
【００２３】
本書において、用語「抗体」は、特定の抗原と免疫学的に反応性の免疫グロブリン（Ｉｇ）分子、すなわち、抗原を特異的に認識する受容体として働くタンパク質分子をさす。さらに、抗体は、完全な抗体または抗体フラグメントであってよい。
【００２４】
軽鎖および重鎖の可変ドメインにおいて、ＭＳＬＮに対する親和性および特異性といった、本発明の目的に合う性質が維持される限り、いくつかのアミノ酸が置換、挿入および／または欠失されてよい。例えば、軽鎖および／または重鎖可変ドメインにおいて、保存的アミノ酸置換があってよい。保存的置換とは、元のアミノ酸配列を、それと同様の性質を有する他のアミノ酸残基で置換することを意味する。
【００２５】
例えば、リジン、アルギニンおよびヒスチジンは、塩基性側鎖を有するという同様の性質を有し、アスパラギン酸およびグルタミン酸は、酸性側鎖を有するという同様の性質を有する。さらに、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システインおよびトリプトファンは、荷電していない極性側鎖を有するという同様の性質を有する。アラニン、バリン、ロイシン、スレオニン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニンおよびメチオニンは、非極性側鎖を有するという同様の性質を有する。チロシン、フェニルアラニン、トリプトファンおよびヒスチジンは、芳香族側鎖を有するという同様の性質を有する。
【００２６】
したがって、上記のような同様の性質を有するアミノ酸群内でのアミノ酸置換により、著しい性質の変化が生じないであろうことは、当業者には明らかである。この理由により、可変ドメイン内における保存的置換による改変がなされた抗体も、そのような抗体が本発明の抗体の性質を維持する限り、本発明の範囲に包含される。
【００２７】
一方、抗体は、ＭＳＬＮとの特異的結合によって、ＭＳＬＮを発現する癌細胞に、特に癌細胞表面に、特異的に結合しうる。ここで、ＭＳＬＮを発現する癌細胞は、ヒト癌細胞を包含するが、それに限定されない。
【００２８】
抗体の軽鎖および重鎖可変ドメインは、相補性決定領域（ＣＤＲ）およびフレームワーク領域（ＦＲ）からなりうる。典型的には、ＣＤＲは特定の抗原に対する結合特異性を提供し、ＦＲは、抗体がその折り畳み構造を形成するため、ＣＤＲの結合を支援するため等の機能を果たす。
【００２９】
抗体は、バックボーンとして、従来のマウス抗ＭＳＬＮ抗体ＭＩ３２３のＣＤＲアミノ酸配列、ならびにＭＩ３２３と同様のヒト抗体のＦＲおよび定常ドメイン（Ｆｃ）のアミノ酸配列を有する抗体であり得、ＣＤＲおよびＦＲ部分のいくつかのアミノ酸残基は、該残基がヒトに特異的に結合できるように置換された形態にある。
【００３０】
抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２；配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；配列番号１２〜１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１；配列番号１５〜１７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２；配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含みうる。
【００３１】
一態様において、抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２；配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；配列番号１２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１；配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２；配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含みうる。
【００３２】
抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２；配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２；配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含みうる。
【００３３】
抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２；配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１；配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２；配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含みうる。
【００３４】
したがって、抗体は、ヒトＭＳＬＮに特異的に結合するヒト化抗体でありうる。本書において、用語「ヒト化抗体」とは、マウス抗体のような非ヒト抗体の免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含むキメラ抗体をさし、超可変領域に相当する配列を除くすべての部分が対応するヒト配列で置換されているような抗体を意味しうる。
【００３５】
さらに、用語「超可変領域（ＨＶＲ）」とは、抗体の配列において超可変性を示すかまたは構造的に限定されたループを形成する可変ドメインの領域をさす。それを特定する定義のなかで、Ｋａｂａｔによる相補性決定領域（ＣＤＲ）の定義が、配列可変性に基づく領域の分類のために最も一般的に用いられる。
【００３６】
抗体の抗体フラグメントも、それが抗体の機能を維持している限り、使用しうる。抗体または抗体フラグメントは、ＭＳＬＮに対する結合機能を維持する、一本鎖抗体、ディアボディ、トリアボディ、テトラボディ、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｄ’、ｓｃＦｖ’、ドメイン抗体、ミニボディ、ｓｃＡｂ’、ＩｇＤ抗体、ＩｇＥ抗体、ＩｇＭ抗体、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ３抗体、ＩｇＧ４抗体、抗体の定常ドメインの誘導体、タンパク質足場に基づく人工抗体等を包含しうるが、それに限定されない。
【００３７】
また、抗体は、腫瘍細胞増殖抑制効果を有する抗癌剤に抗体を結合させることによって得られる抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）形態で使用することもできる。本書において、用語「抗癌」とは、癌に対する「予防」および「治療」効果を包含し、「予防」は、癌を抑制または遅延させる任意の作用を意味する。さらに、「治療」は、癌の症状を軽減または有益に変化させる任意の作用を意味する。
【００３８】
抗体−薬物コンジュゲートにおいて使用することのできる薬物は、細胞傷害または細胞抑制作用を有する任意の化合物、および化合物の一部または官能基を包含する。薬物の例は、マイクロチューブリン構造形成阻害剤、減数分裂阻害剤、ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ＤＮＡインターカレーター、ＤＮＡアルキレーター、リボソーム阻害剤、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、放射性同位体、および毒素を包含し、それらのうちの少なくとも１つの化合物を使用しうる。
【００３９】
薬物は、メイタンシノイド、アウリスタチン、ドラスタチン、トリコテセン、ＣＣ１０６５（ＮＳＣ２９８２２３）、カリケアミシン、タキサン、アントラサイクリン、メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンデシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシン、ダウノマイシン、エトポシド、テニポシド、カルミノマイシン、アミノプテリン、ダクチノマイシン、マイトマイシン、ブレオマイシン、エスペラミシン、他のエンジイン抗生物質、５−フルオロウラシル、他のナイトロジェンマスタードおよびその立体異性体、アイソスター、ホモログまたは誘導体、シスプラチナムおよびシスプラチナムホモログ、他のインターカレーター酵素およびそのフラグメント、例えばヌクレアーゼ、抗生物質、毒素（酵素的に活性な毒素、または細菌、真菌、植物もしくは動物由来の小分子毒素）、ならびにさまざまな抗腫瘍または抗癌剤、例えばシスプラチン、ＣＰＴ−１１、パクリタキセルおよびドセタキセルを包含するが、それに限定されない。
【００４０】
さらに、放射性同位体（放射性核種）は、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、５１Ｃｒ、５７Ｃｏ、５８Ｃｏ、５９Ｆｅ、９０Ｙ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１８６Ｒｅ等を包含する。ある種の癌遺伝子の発現を阻害することのできるマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ等も使用しうる。
【００４１】
抗ＭＳＬＮ抗体と薬物との結合は、好ましくは、抗体中のリジンまたはシステインのようなアミノ酸残基のチオール基といった官能基を用いるコンジュゲート化によって達成される。要すれば、コンジュゲート化を、通常用いられるリンカーを介する形態で行うことも可能である。マレイミドまたはヨウ素アセトアミドに基づくリンカーを用いることもできる。
【００４２】
抗体またはそのフラグメントに薬物をコンジュゲート化させる際、抗体またはフラグメントのＭＳＬＮ結合能およびＭＳＬＮ特異性等に対する影響を少なくする観点から、薬物を抗原結合部位とは反対側のＣ末端部位にコンジュゲート化しうる。フラグメントではなく完全な抗体を使用する場合、薬物をＦｃ領域にコンジュゲート化しうる。
【００４３】
さらに、抗体は、それを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に基づく処置剤として使用することもできる。そのような処置剤の例は、好ましくはキメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）またはキメラ抗原受容体ナチュラルキラー細胞（ＣＡＲ−ＮＫ細胞）療法剤を包含するが、それに限定されない。
【００４４】
抗体は、抗ＭＳＬＮ抗体を含む二重特異性抗体の形態で使用することもできる。二重特異性抗体は、同時に２つの抗原に結合する能力を有する抗体であり、典型的には、異なる抗原に結合する複数の軽鎖・重鎖対が連結された形態で存在する。
【００４５】
さらに、二重特異性抗体は、例えば、ＶＬおよびＶＨが短いリンカーペプチドを介して連結された一本鎖抗体フラグメント（ｓｃＦＶ）がｓｃＦＶ１−ｓｃＦＶ２（−Ｆｃ）の形態に連結された二重特異性一本鎖抗体、ＶＨを用いるシングルドメイン抗体（ｓｄＡｂ）に基づく二重抗体、ならびにドイツのMicrometのＢｉＴＥ技術（http://www.micromet.de参照）を用いて作製される二重特異性抗体のような形態で利用可能である。
【００４６】
二重特異性抗体は、免疫賦活細胞特異的標的分子に対する結合能を有する抗体またはそのフラグメントに抗ＭＳＬＮ抗体が結合された形態で存在しうる。免疫賦活細胞特異的標的分子は、好ましくは、ＴＣＲ／ＣＤ３、ＣＤ１６（ＦｃγＲＩＩＩａ）、ＣＤ４４、ＣＤ５６、ＣＤ６９、ＣＤ６４（ＦｃγＲＩ）、ＣＤ８９、およびＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８（ＣＲ３）から選択しうるが、それに限定されない。
【００４７】
本発明の他の一側面において、本発明の抗体の軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）および重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）をコードするポリヌクレオチド、ならびにそれを含むベクターが提供される。
【００４８】
抗体または抗体フラグメントの重鎖可変ドメインをコードするポリヌクレオチド、すなわち、遺伝子は、抗ＭＳＬＮ抗体のアミノ酸配列から当業者が容易に誘導しうる。
【００４９】
本書において、用語「発現ベクター」は、宿主細胞中で標的タンパク質を発現することのできる組換えベクターをさし、挿入された遺伝子が発現されるように作動可能に連結された必須調節配列を含む遺伝子コンストラクトを意味する。抗ＭＳＬＮ抗体をコードする遺伝子は、別のベクターに挿入されてよく、または同じベクターに挿入された形態で使用されてよい。
【００５０】
特に、抗ＭＳＬＮ抗体のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドは、別の、または同じベクターに挿入された形態で使用されてよく、重鎖またはその可変ドメインをコードするポリヌクレオチドは、別の、または同じベクターに挿入された形態で使用されてよい。
【００５１】
本書において、用語「作動可能に連結される」とは、核酸発現調節配列と、所望のタンパク質をコードする核酸配列とが、所望の機能を果たすように機能的に連結されることを意味する。組換えベクターにおける作動可能な連結は、当分野において知られる遺伝子組換え技術を用いて達成され得、部位特異的ＤＮＡ切断およびライゲーションは、当分野で一般に知られる酵素等を用いて容易に達成されうる。
【００５２】
抗ＭＳＬＮ抗体の生産のために適当な発現ベクターは、発現調節配列、例えばプロモーター、開始コドン、終止コドン、ポリアデニル化シグナルおよびエンハンサーに加えて、膜標的化または分泌のためのシグナル配列を含みうる。開始コドンおよび終止コドンは一般に、免疫原標的タンパク質をコードするヌクレオチド配列の一部であると考えられる。そのようなコドンは、遺伝子コンストラクトが投与されたとき、対象において機能的でなければならず、コーディング配列とインフレームでなければならない。一般に、プロモーターは構成型または誘導型でありうる。プロモーターは、原核生物プロモーター、例えばｌａｃ、ｔａｃ、Ｔ３およびＴ７、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）プロモーター、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーター、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）プロモーター、例えばＨＩＶの長末端反復配列（ＬＴＲ）プロモーター、モロニーウイルスプロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）プロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター、ならびにβ−アクチンプロモーター、ヒトヘモグロビン−、ヒト筋肉クレアチン−、ヒトメタロチオネイン−由来真核生物プロモーター等を包含しうるが、それに限定されない。
【００５３】
発現ベクターは、それを含む宿主細胞の選択を可能にする選択マーカーをさらに含みうる。選択マーカーは、ベクターで形質転換された細胞の選択のために用いられる。選択マーカーとして、選択可能な表現型、例えば薬剤耐性、栄養要求性、細胞傷害物質抵抗性または表面タンパク質発現を付与するマーカーを使用しうる。選択剤で処理される環境において、選択マーカーを発現する細胞のみが生き延びるので、形質転換された細胞の選択が可能である。さらに、ベクターが複製可能な発現ベクターである場合、該ベクターは、そこから複製が開始される特定の核酸配列である複製起点を含みうる。
【００５４】
異種遺伝子の挿入のための組換え発現ベクターとして、プラスミド、ウイルスおよびコスミドといったさまざまな形態のベクターを使用しうる。ベクターが原核生物および／または真核生物細胞を包含するさまざまな宿主細胞中で所望の遺伝子を発現し所望のタンパク質を産生するよう機能する限り、組換えベクターの種類には特に制限はない。ベクターは好ましくは、高活性のプロモーターおよび高発現能力を有し、天然の状態と同様の形態の異種タンパク質を大量に産生することのできるベクターでありうる。
【００５５】
抗ＭＳＬＮ抗体の発現のために、さまざまな発現宿主／ベクター組み合わせを使用しうる。真核生物宿主に適当な発現ベクターは、ＳＶ４０、ウシパピローマウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、サイトメガロウイルス、およびレトロウイルスに由来する発現調節配列を包含するがそれに限定されない。細菌宿主において使用しうる発現ベクターは、大腸菌由来の細菌プラスミド、例えばｐＥＴ、ｐＲＳＥＴ、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ、ｐＧＥＸ２Ｔ、ｐＵＣベクター、ｃｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９およびそれらの誘導体；広宿主範囲のプラスミド、例えばＲＰ４；ファージＤＮＡ、例えば広範なファージλ誘導体、例えばλｇｔ１０、λｇｔ１１、およびＮＭ９８９；ならびに他のＤＮＡファージ、例えばＭ１３および繊維状一本鎖ＤＮＡファージを包含する。酵母細胞に適当な発現ベクターは、２ミクロンプラスミドおよびその誘導体を包含しうる。昆虫細胞に有用なベクターは、ｐＶＬ９４１でありうる。
【００５６】
本発明のさらなる一側面において、本発明の発現ベクターで形質転換された宿主細胞が提供される。発現ベクターは、形質転換体の形成のために宿主細胞に導入されうる。ベクターに適当な宿主細胞は、原核細胞、例えば大腸菌、枯草菌、ストレプトミセス属、シュードモナス属、プロテウス・ミラビリス（Proteus mirabilis）、またはスタフィロコッカス属を包含しうる。さらに、宿主細胞は、真核生物細胞を包含し得、これには、例えばアスペルギルス属のような真菌、ピキア酵母（Pichia pastoris）、出芽酵母（Saccharomyces cerevisiae）、シゾサッカロミセス属のような酵母、およびアカパンカビ（Neurospora crassa）、および他の低級真核生物に由来する低級真核生物細胞、ならびに昆虫細胞のような高級真核生物細胞が包含される。さらに、宿主細胞は、植物または哺乳動物に由来してもよい。好ましくは、使用しうる宿主細胞は、サル腎細胞（ＣＯＳ７細胞）、ＮＳＯ細胞（マウス由来のミエローマ細胞）、ＳＰ２／０細胞（マウス由来のミエローマ細胞）、他のミエローマ細胞株、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、Ｗ１３８細胞（２倍体ヒト細胞培養）、ベビーハムスター腎（ＢＨＫ）細胞、ＭＤＣＫ、ＨｕＴ７８細胞、ＨＥＫ２９３細胞等を包含するが、それに限定されない。ＣＨＯ細胞が好ましい。
【００５７】
本書において、用語「宿主細胞の形質転換」とは、生体、細胞、組織または器官に核酸を導入するための任意の方法を包含することが意図され、そのような形質転換は、宿主細胞の種類に応じて選択される、当分野において知られる標準的な技術を用いて行われうる。特に、エレクトロポレーション、プロトプラスト融合、リン酸カルシウム（ＣａＰＯ４）沈殿、塩化カルシウム（ＣａＣｌ２）沈殿、シリコンカーバイドファイバーを用いる撹拌、アグロバクテリウム仲介導入、ＰＥＧ−、デキストランスルフェート−、リポフェクタミン−またはデシケーション／インヒビション−仲介形質転換等を用いうる。しかしながら、本発明はそれに限定されない。
【００５８】
本発明のさらなる一側面において、宿主細胞を培養することを含む、ＭＳＬＮに特異的に結合する抗体を生産する方法が提供される。特に、抗体を生産する方法は、下記のステップを含みうる：抗ＭＳＬＮ抗体をコードするヌクレオチド配列をベクターに挿入して、組換えベクターを作製するステップ；組換えベクターで宿主細胞を形質転換し、培養を行うステップ；および培養された形質転換体からヒト化抗体を分離し精製ステップ。
【００５９】
ヒト化抗体は、組換えベクターが発現される形質転換体を栄養培地中で培養することによって大量生産し得、培地および培養条件は、宿主細胞の種類に応じて、当分野において知られるものから適当に選択しうる。培養中に、温度、培地ｐＨおよび培養時間といった条件を、細胞増殖およびタンパク質大量生産に適するように適当に調節しうる。
【００６０】
前記のように組換え生産された抗ＭＳＬＮ抗体は、培地または細胞溶解物から回収しうる。抗体が膜結合した形態にある場合、適当な界面活性剤溶液（例えばTriton-X 100）を用いて、または酵素的切断によって、該抗体を膜から解離させうる。ヒト化抗体の発現のために使用した細胞は、凍結−解凍の繰り返し、超音波処理、機械的破壊、または細胞溶解剤のようなさまざまな物理的または化学的手段によって破壊し得、従来の生化学的分離技術を用いて分離および精製を行いうる。使用しうる生化学的分離技術は、電気泳動、遠心分離、ゲル濾過、沈殿、透析、クロマトグラフィー（イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー、免疫吸着クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー等）、等電点電気泳動等を包含するが、それに限定されない。
【００６１】
本発明のさらなる一側面において、本発明の抗体またはそのフラグメントを含む、癌を予防または治療するための医薬組成物が提供される。
【００６２】
医薬組成物で処置することのできる癌の種類は、固形癌および血液癌の両方を包含し得、好ましくは、ＭＳＬＮを発現する任意の癌、例えば中皮腫、膵臓癌、卵巣癌、胃癌、肺癌または子宮内膜癌を包含しうるが、それに限定されない。
【００６３】
医薬組成物は、薬学的に許容しうる担体をさらに含みうる。薬学的に許容しうる担体として、経口投与用には、結合剤、滑剤、崩壊剤、賦形剤、可溶化剤、分散剤、安定剤、懸濁剤、着色剤、香料等を使用し得；注射用には、緩衝剤、保存剤、鎮痛剤、可溶化剤、等張化剤、安定剤等を組み合わせて使用し得；局所投与のためには、基剤、賦形剤、潤滑剤、保存剤等を使用しうる。
【００６４】
本発明の医薬組成物の製剤は、さまざまな方法による、前記のような薬学的に許容しうる担体との混合によって調製しうる。例えば、経口投与用には、医薬組成物を、錠剤、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、ウェハ剤等の形態に調製しうる。注射用には、医薬組成物を、単位用量アンプル剤の形態または多回用量形態に調製しうる。
【００６５】
さらに、医薬組成物は、膜透過性を改善することのできる界面活性剤を含みうる。そのような界面活性剤は、ステロイドから誘導されるものでありうるか、またはカチオン性脂質、例えばＮ−［１−（２，３−ジオレイル）プロピル−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、もしくはコレステロールヘミスクシネートおよびホスファチジルグリセロールといったさまざまな化合物を包含しうる。しかしながら、界面活性剤はそれに限定されない。
【００６６】
本発明の他の一側面において、医薬組成物を対象に投与することを含む、癌処置または癌増殖抑制方法が提供される。抗ＭＳＬＮ抗体を含む医薬組成物を、癌細胞またはその転移を処置するかまたは癌増殖を抑制するために薬学的に有効な量で投与しうる。有効量は、例えば癌の種類、患者の年齢、体重、性質および症状重篤度、現行の治療の種類、処置回数、投与形態、ならびに投与経路といったさまざまな因子によって異なり得、当該分野の専門家によって容易に決定されうる。
【００６７】
医薬組成物は、前記の薬理学的または生理学的成分と一緒にまたは前後して投与し得、さらなる従来の処置剤と組み合わせて投与することもでき、その場合、医薬組成物は、従来の処置剤と前後して、または同時に投与しうる。そのような投与は、単回または多回投与でありうる。前記因子をすべて考慮して、最大の効果を副作用を伴わずにもたらす最小量を投与することが重要であり、そのような量は当業者が容易に決定しうる。
【００６８】
本書において、用語「対象」とは、医薬組成物の投与によって軽減、抑制または処置することのできる状態または疾患を有するかまたは有するリスクのある哺乳動物、好ましくはヒトをさす。
【００６９】
本書において、用語「投与」とは、予め決定された物質を対象に任意の適当な方法で導入することを意味し、医薬組成物は、医薬組成物を標的組織に到達せしめる任意の経路で投与しうる。そのような投与方法は、腹腔内投与、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、皮内投与、経口投与、局所投与、鼻内投与、肺投与、または直腸投与を包含しうるが、それに限定されない。ここで、経口投与の場合、タンパク質は消化されるという観点から、経口投与用の組成物は、活性成分をコーティングするように、または組成物を胃での消化から保護するように調製することが望ましいことがある。さらに、医薬組成物は、活性成分を標的細胞に到達させることのできる任意の手段を用いて投与しうる。
【００７０】
本発明の他の一側面において、癌を予防または治療するための、本発明の抗体の使用が提供される。
【００７１】
本発明の他の一側面において、癌の予防または治療用医薬の製造のための、本発明の抗体の使用が提供される。
【００７２】
本発明の他の一側面において、本発明の抗体を対象に投与することを含む、癌を予防または治療するための方法が提供される。
【実施例】
【００７３】
以下、本発明を実施例によってより詳細に説明する。下記実施例は、本発明の説明ためのものであって、本発明の範囲はそれに限定されない。
【００７４】
実施例１．ヒト化抗ＭＳＬＮ抗体の作製
実施例１．１．ヒト化用候補抗体の選択
抗ＭＳＬＮ抗体として知られるマウスＭＩ３２３の軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）および重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）のアミノ酸配列をウェブのデータベース（IgBLAST）に入力し、最も類似するヒト胚抗体配列を検索した。その結果、マウスＭＩ３２３の軽鎖可変領域とHomo sapiens IGKV7-39*01（IMGT遺伝子名）との間、およびマウスＭＩ３２３の重鎖可変領域とHomo sapiens IGHV1-3*01（IMGT遺伝子名）との間に、最も高いアミノ酸配列同一性が示された。
【００７５】
実施例１．２．軽鎖可変領域ドメインのヒト化
ＭＩ３２３軽鎖可変ドメインとの同一性が最も高い配列を有するヒト胚抗体であるHomo sapiens IGKV7-39*01（IMGT遺伝子名）のＣＤＲアミノ酸配列を、マウスＭＩ３２３のＣＤＲ配列に置き替えて、部分的にヒト化されたＭＩ３２３軽鎖可変ドメインを作製した。
【００７６】
部分的にヒト化されたＭＩ３２３軽鎖可変ドメインの抗原結合性を高めるために、抗原結合性において重要な役割を担うと考えられるＣＤＲ配列中のアミノ酸残基を、Homo sapiens IGKV7-39*01（IMGT遺伝子名）と同じアミノ酸残基で置換した。そのように作製したヒト化ＭＩ３２３軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列を表１に示す。
【００７７】
表１に関し、マウスＭＩ３２３軽鎖可変ドメインの２４番目のアミノ酸残基をリジン（Ｋ）からアルギニン（Ｒ）に変更することによって、ヒト化ＭＩ３２３軽鎖可変ドメインを作製した。ここで、ＭＳＬＮ抗原に対する親和性比較のための対照として、マウスＭＩ３２３軽鎖可変ドメインを用いた。
【００７８】
【表１】
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【００７９】
実施例１．３．重鎖可変領域ドメインのヒト化
ＭＩ３２３重鎖可変ドメインとの同一性が最も高い配列を有するヒト胚抗体であるHomo sapiens IGHV1-3*01（IMGT遺伝子名）のＣＤＲアミノ酸配列を、マウスＭＩ３２３のＣＤＲ配列に置き替えて、部分的にヒト化されたＭＩ３２３重鎖可変ドメインを作製した。
【００８０】
部分的にヒト化されたＭＩ３２３重鎖可変ドメインの抗原結合性を高めるために、抗原結合性において重要な役割を担うと考えられるＣＤＲおよびフレームワーク領域（ＦＲ）配列中のアミノ酸残基を、マウスＭＩ３２３と同じアミノ酸残基で置換した。そのように作製したヒト化ＭＩ３２３重鎖可変ドメインのアミノ酸配列を表２に示す。
【００８１】
表２に関し、マウスＭＩ３２３重鎖可変ドメインのＣＤＲおよびＦＲのアミノ酸残基にランダムな修飾を行って、全部で３のヒト化ＭＩ３２３軽鎖可変ドメインを作製した。ＭＳＬＮ抗原に対する親和性比較のための対照として、マウスＭＩ３２３重鎖可変ドメインを用いた。
【００８２】
【表２】
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【００８３】
実施例１．４．ヒト化抗ＭＳＬＮ抗体のクローニング
前記のように作製した１つの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ−１）の各遺伝子、およびＭＩ３２３軽鎖可変ドメインの遺伝子を、κ軽鎖定常ドメイン（κ−ＣＬ）を含むｐｃＤＮＡ３．４動物細胞発現ベクターに挿入した。さらに、３つの重鎖可変ドメイン（ＶＨ−１、ＶＨ−２、ＶＨ−３）の各遺伝子、およびＭＩ３２３重鎖可変ドメインの遺伝子を、ＩｇＧ１定常ドメイン（ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３）を含むｐｃＤＮＡ３．４動物細胞発現ベクターに挿入した。
【００８４】
κ軽鎖定常ドメインおよびＩｇＧ１重鎖定常ドメインの各アミノ酸配列を、表３に示す。
【表３】
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【００８５】
実施例１．５．ヒト化抗ＭＳＬＮ抗体のトランスフェクション
トランスフェクションの２４時間前に、密度２．０×１０６細胞／ｍｌのExpi293F細胞を、３７℃、８％ＣＯ２の条件の振盪インキュベーター内で１２５±１０ｒｐｍで、Expi293培地を用いて継代した。トランスフェクションを行ったら、細胞数および細胞生存性を調べて、９５％またはそれ以上の細胞生存性が示されたかを確認した。
【００８６】
細胞を、１２５ｍｌ培養フラスコ中に細胞数７．５×１０７で入れ、Expi293培地を加えて最終体積２５ｍｌに調節した（３０ｍｌに基づく）。Opti-MEM I培地を使用し、そこに３０μｇの抗体発現ベクターを混合して総量１．５ｍｌとし、室温で５分間インキュベートした。抗体ベクターに対して、１つの軽鎖可変ドメインの発現ベクターと３つの重鎖可変ドメインの発現ベクターの組み合わせによって得た、全部で３つのヒト化ＭＩ３２３ ＩｇＧ１抗体を用いた。対照抗体ベクターとして、マウス／ヒトキメラＭＩ３２３ ＩｇＧ１抗体を使用した。
【００８７】
Opti-MEM I培地を使用し、そこに８０μｌのトランスフェクション試薬を混合して総量１．５ｍｌとし、室温で５分間インキュベートした。ベクターおよびトランスフェクション試薬をそれぞれ含むOpti-MEM I培地を穏やかに混合し、室温で２０分間反応させた。その後、反応させたものを、Expi293F細胞の入ったフラスコに入れた。３７℃、８％ＣＯ２の条件の振盪インキュベーター内で、１２５±１０ｒｐｍで１６〜２０時間インキュベートした。次いで、１．５ｍｌのトランスフェクションエンハンサーＩ、および１５０μｌのトランスフェクションエンハンサーＩＩを加え、６日間インキュベートして、抗体を得た。
【００８８】
実施例１．６．抗体の精製
インキュベートしたものを４０００ｒｐｍで３０分間遠心分離し、０．２２μｍフィルターで濾過し、細胞デブリを除去して上清を得た。０．２ｍｌのMabselect Xtra樹脂をカラムに入れ、樹脂体積の１０倍相当の体積のプロテインＡ結合バッファーを用いて平衡化した。
【００８９】
その後、上清をカラムに重力を利用してロードした。ローディング完了後、カラムを樹脂体積の１０倍相当の体積のプロテインＡ結合バッファーで洗った。
【００９０】
その後、ＩｇＧ溶出バッファーをカラムに入れて溶出を行った。溶出液を、溶出液１ｍｌ当たり２５μｌの１．５Ｍ Ｔｒｉｓ−Ｃｌの添加により中和した。次いで、溶出液濃度を２８０ｎｍにおけるＯＤで測定した。濃度測定した溶出液を、透析によるＰＢＳとのバッファー交換に付した。
【００９１】
実施例２．組換えＭＳＬＮに対するヒト化抗ＭＳＬＮ抗体の親和性の測定
実施例１にしたがって作製したヒト化抗ＭＳＬＮ抗体（ＨＭＩ３２３）の、組換えＭＳＬＮに対する親和性を、Octetシステムを用いて測定した。「ＨＭＩ３２３」は「ヒト化ＭＩ３２３」のことである。
【００９２】
具体的には、組換えヒトＭＳＬＮを、１×カイネティックバッファー中で５μｇ／ｍｌの濃度で調製し、それを用いて２００μｌ／ウェルで９６ウェルプレートを処理した。処理後、ＭＳＬＮを抗Penta His（HIS1K, Cat # 18-5121, Fortebio）センサーに固定した。
【００９３】
次いで、実施例１にしたがって作製した３つのヒト化抗ＭＳＬＮ抗体、およびマウス／ヒトキメラＭＩ３２３ ＩｇＧ１のクローンを、１×カイネティックバッファー中で５０、２５、１２．５、６．２５または３．１２５ｎＭの濃度に希釈し、それにより２００μｌ／ウェルで処理した。１×カイネティックバッファーは、１０×カイネティックバッファー（ForteBio, Cat # 18-1092）をＰＢＳで１０倍希釈することによって得て使用した。
【００９４】
センサーに固定したＭＳＬＮとさまざまな濃度の抗体との間の相互作用を分析し、抗原−抗体親和性を計算した。結果を表４に示す。
【００９５】
【表４】
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【００９６】
表４の結果からわかるように、ＨＭＩ３２３ＶＬ−１／ＨＭＩ３２３ＶＨ−３の組み合わせはＭＩ３２３に最も近い親和性を維持することがわかった。他の２つのクローンは、ＭＩ３２３抗体と比較してやや低い親和性を示すが、全体的にＭＳＬＮに対する高い親和性を維持することが確認された。
【００９７】
実施例３．ヒト化抗ＭＳＬＮ抗体の、癌細胞表面に発現されたＭＳＬＮに対する親和性の測定
実施例１にしたがって作製されたヒト化抗ＭＳＬＮ抗体（ＨＭＩ３２３）が、癌細胞表面に発現されたＭＳＬＮに対して親和性を示すかを、フローサイトメトリーによって測定した。
【００９８】
具体的には、Ｈ２２６（中皮腫）、ＡｓＰＣ−１（膵臓癌）、Ｃａｐａｎ−２（膵臓癌）、およびＰＬ４５（膵臓癌）の各細胞株を１５００ｒｐｍで５分間遠心分離し、次いでＦＡＣＳバッファー（３％ＦＢＳ含有ＰＢＳ）での洗浄を３回行った。その後、３×１０６細胞／ｍｌで各癌細胞をＦＡＣＳバッファーで希釈し、それを１００μｌ用いて９６ウェルプレートの各ウェルを処理した。
【００９９】
次いで、マウス／ヒトキメラＭＩ３２３ ＩｇＧ１およびＨＭＩ３２３ＶＬ−１／ＨＭＩ３２３ＶＨ−３ ＩｇＧ１の各抗体を各ウェルに５μｇ／ｍｌの濃度で加えて細胞と混合し、その後、４℃で１時間インキュベートした。その後、１５００ｒｐｍで５分間、遠心分離を行い、上清を廃棄した。再懸濁のために２００μｌのＦＡＣＳバッファーをそこに加えて細胞を洗うというプロセスを３回繰り返した。
【０１００】
次いで、フィコエリスリン（ＰＥ）結合ヒトＩｇＧ抗体をＦＡＣＳバッファーで５００倍希釈し、細胞の洗浄に使用するというプロセスを３回繰り返した。洗浄した細胞を１００μｌのBD Cytofix（商標）で固定し、各サンプルの平均蛍光強度（ＭＦＩ）をLSRFortessa（商標）（フローサイトメーター）装置を用いて分析した。分析結果を図１〜８に示す。
【０１０１】
図１〜８に見られるように、組換えヒトＭＳＬＮに結合する抗体すべてが、ヒトＭＳＬＮ発現癌細胞にも特異的に結合することがわかった。
【０１０２】
限られた数の実施例および図面によって態様を説明したが、本発明の精神および範囲を外れることなくさまざまな変更および改変がなされうることは、当業者には明らかであろう。例えば、上記の技術が記載の方法とは異なる順序で実施された、および／または上記の成分が、記載の方法とは異なる形態で組み立てられ、もしくは組み合わされ、または他の成分もしくは等価物で置き替えられた場合でも、所望の結果を達成することが可能である。
【０１０３】
したがって、他の実装、他の実施形態、および特許請求の範囲の等価物は、特許請求の範囲に含まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年7月3日(2020.7.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１のアミノ酸配列との同一性が少なくとも８０％である配列からなる軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）；および
配列番号３〜５のいずれかのアミノ酸配列との同一性が少なくとも８０％である配列からなる重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）
を含む抗体。
【請求項２】
メソテリン（ＭＳＬＮ）に特異的に結合する、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
ＭＳＬＮがヒトＭＳＬＮである、請求項２に記載の抗体。
【請求項４】
ＭＳＬＮ発現癌細胞に特異的に結合する、請求項１に記載の抗体。
【請求項５】
ＭＳＬＮ発現癌細胞がヒト癌細胞である、請求項４に記載の抗体。
【請求項６】
ヒト化抗体である、請求項１に記載の抗体。
【請求項７】
請求項１に記載される抗体の軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）および重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）をコードするポリヌクレオチド。
【請求項８】
請求項７に記載されるポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【請求項９】
請求項８に記載される発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
【請求項１０】
請求項９に記載される宿主細胞を培養することを含む、ＭＳＬＮに特異的に結合する抗体を生産する方法。
【請求項１１】
請求項１に記載される抗体またはそのフラグメントを含む、癌を予防または治療するための医薬組成物。
【請求項１２】
癌が、中皮腫、膵臓癌、卵巣癌、胃癌、肺癌または子宮内膜癌である、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
癌の予防または治療用医薬を製造するための、請求項１に記載の抗体の使用。
【国際調査報告】
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