(57)【要約】  本発明は、血漿カリクレイン阻害剤の新しい固体形態、これを含有する医薬組成物及び治療におけるこの使用に関する。本発明の固体形態を調製するための方法も提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも以下の約６．７、９．５、１１．０、１３．３及び１７．３における特性Ｘ線粉末回折ピーク（Ｃｕ  Ｋα線、°２θで表される）を示す、式Ａ
【化１】
2021504311.tif 000015
の化合物の固体形態。
【請求項２】
図１に示されるＸ線粉末回折パターンと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを有する、請求項１に記載の固体形態。
【請求項３】
ＳＴＡサーモグラフにおいて１６４±３℃に吸熱ピークを示す、請求項１又は２に記載の固体形態。
【請求項４】
図２に示されるＳＴＡサーモグラフと実質的に同じＳＴＡサーモグラフを有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の固体形態。
【請求項５】
ＳＴＡサーモグラフにおいて１６４±３℃に吸熱ピークを示す、式Ａ
【化２】
2021504311.tif 000016
の化合物の固体形態。
【請求項６】
図２に示されるＳＴＡサーモグラフと実質的に同じＳＴＡサーモグラフを有する、請求項５に記載の固体形態。
【請求項７】
少なくとも以下の約７．３、８．６、１１．６、１４．３及び１６．２における特性Ｘ線粉末回折ピーク（Ｃｕ  Ｋα線、°２θで表される）を示す、式Ａ
【化３】
2021504311.tif 000017
の化合物の塩酸塩の固体形態。
【請求項８】
図３に示されるＸ線粉末回折パターンと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを有する、請求項７に記載の固体形態。
【請求項９】
図３に示されるＸ線粉末回折パターンと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを有する、式Ａ
【化４】
2021504311.tif 000018
の化合物の塩酸塩の固体形態。
【請求項１０】
少なくとも以下の約４．７、６．４、９．１、１５．１及び１６．４における特性Ｘ線粉末回折ピーク（Ｃｕ  Ｋα線、°２θで表される）を示す、式Ａ
【化５】
2021504311.tif 000019
の化合物の硫酸塩の固体形態。
【請求項１１】
図４に示されるＸ線粉末回折パターンと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを有する、請求項９に記載の固体形態。
【請求項１２】
図４に示されるＸ線粉末回折パターンと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを有する、式Ａ
【化６】
2021504311.tif 000020
の化合物の硫酸塩の固体形態。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の固体形態並びに薬学的に許容される補助剤、希釈剤及び／又は担体を含む医薬組成物。
【請求項１４】
治療において使用するための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の固体形態。
【請求項１５】
血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態の処置において使用するための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の固体形態。
【請求項１６】
血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態の処置方法であって、そのような処置を必要とする哺乳動物に、治療有効量の、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の固体形態を投与することを含む方法。
【請求項１７】
血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態の処置のための薬物の製造における、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の固体形態の使用。
【請求項１８】
前記血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態が、視力障害、糖尿病性網膜症、糖尿病性網膜症に伴う網膜血管透過性、糖尿病黄斑浮腫、遺伝性血管性浮腫、網膜静脈閉塞症、糖尿病、膵炎、脳出血、腎症、心筋症、神経障害、炎症性腸疾患、関節炎、炎症、敗血症性ショック、低血圧症、がん、成人呼吸促迫症候群、播種性血管内凝固、心肺バイパス手術中の血管凝固及び外科術後の出血から選択される、請求項１５に記載の固体形態、請求項１６に記載の方法又は請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
前記血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態が、糖尿病性網膜症に伴う網膜血管透過性、糖尿病黄斑浮腫及び遺伝性血管性浮腫から選択される、請求項１５に記載の固体形態、請求項１６に記載の方法又は請求項１７に記載の使用。
【請求項２０】
前記血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態が、糖尿病性網膜症に伴う網膜血管透過性及び糖尿病黄斑浮腫から選択される、請求項１５に記載の固体形態、請求項１６に記載の方法又は請求項１７に記載の使用。
【請求項２１】
前記血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態が遺伝性血管性浮腫である、請求項１５に記載の固体形態、請求項１６に記載の方法又は請求項１７に記載の使用。
【請求項２２】
前記血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態が糖尿病黄斑浮腫である、請求項１５に記載の固体形態、請求項１６に記載の方法又は請求項１７に記載の使用。
【請求項２３】
前記患者の眼球領域中への注射に適した形態で、特に、硝子体内注射に適した形態で投与される、請求項２０又は請求項２２に記載の固体形態。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新しい固体形態の血漿カリクレイン阻害剤、これを含有する医薬組成物及び治療におけるこの使用に関する。本発明の固体形態を調製する方法も提供される。
【背景技術】
【０００２】
血漿カリクレインの阻害剤は、特に、糖尿病性網膜症に伴う網膜血管透過性、糖尿病黄斑浮腫及び遺伝性血管性浮腫の処置にいくつかの治療応用がある。
【０００３】
血漿カリクレインは、キニノーゲンからキニンを遊離させることができるトリプシン様セリンプロテアーゼである（Ｋ．Ｄ．Ｂｈｏｏｌａら、「Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ−Ｋｉｎｉｎ  Ｃａｓｃａｄｅ」、Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、４８３〜４９３頁；Ｊ．Ｗ．Ｂｒｙａｎｔら、「Ｈｕｍａｎ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ−ｋｉｎｉｎ  ｓｙｓｔｅｍ：ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ」Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ａｎｄ  ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｇｅｎｔｓ  ｉｎ  ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、７、２３４〜２５０頁、２００９年；Ｋ．Ｄ．Ｂｈｏｏｌａら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖ．、１９９２年、４４、１頁；及びＤ．Ｊ．Ｃａｍｐｂｅｌｌ、「Ｔｏｗａｒｄｓ  ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ  ｔｈｅ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ−ｋｉｎｉｎ  ｓｙｓｔｅｍ：ｉｎｓｉｇｈｔｓ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｋｉｎｉｎ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ」、Ｂｒａｚｉｌｉａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２０００年、３３、６６５〜６７７頁参照）。血漿カリクレインは、内因性血液凝固系の不可欠なメンバーであるが、この系でのその役割は、ブラジキニンの放出も酵素的切断も含まない。血漿プレカリクレインは、単一遺伝子によりコードされ肝臓において合成される。血漿カリクレインは不活性血漿プレカリクレインとして肝細胞により分泌され、高分子量キニノーゲンに結合しているヘテロダイマー複合体として血漿中を循環し、これは活性化されて活性血漿カリクレインを与える。キニンは、Ｇタンパク質共役型受容体を通じて作用する強力な炎症メディエーターであり、ブラジキニンアンタゴニストなどのキニンのアンタゴニストは、いくつかの障害の処置のための有力な治療薬として以前研究されていた（Ｆ．Ｍａｒｃｅａｕ  ａｎｄ  Ｄ．Ｒｅｇｏｌｉ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．、Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、２００４年、３、８４５〜８５２頁）。
【０００４】
血漿カリクレインは、いくつかの炎症性障害に関与していると考えられている。血漿カリクレインの主要な阻害剤は、セルピンＣ１エステラーゼ阻害剤である。Ｃ１エステラーゼ阻害剤の遺伝子欠損を示す患者は、顔、手、喉、消化管及び生殖器の間欠的腫脹をもたらす遺伝性血管性浮腫（ＨＡＥ）を患う。急性エピソード中に形成される疱疹は、高レベルの血漿カリクレインを含有する。血漿カリクレインは、高分子量キニノーゲンを切断してブラジキニンを遊離させ、血管透過性の増加をもたらす。巨大なタンパク質血漿カリクレイン阻害剤を用いた処置は、血管透過性の増加を引き起こすブラジキニンの放出を妨げることによりＨＡＥを効果的に処置することが明らかにされている（Ａ．Ｌｅｈｍａｎｎ「Ｅｃａｌｌａｎｔｉｄｅ（ＤＸ−８８）、ａ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ  ａｎｇｉｏｅｄｅｍａ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂｌｏｏｄ  ｌｏｓｓ  ｉｎ  ｏｎ−ｐｕｍｐ  ｃａｒｄｉｏｔｈｏｒａｃｉｃ  ｓｕｒｇｅｒｙ」Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．８、１１８７〜９９頁）。
【０００５】
血漿カリクレイン−キニン系は、進行した糖尿病黄斑浮腫を抱えた患者では異常なほど大量に存在する。血漿カリクレインが、糖尿病ラットにおいて網膜血管機能障害の一因であることは最近発表されている（Ａ．Ｃｌｅｒｍｏｎｔら、「Ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｔｈｉｃｋｅｎｉｎｇ  ｉｎ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｒａｔｓ」Ｄｉａｂｅｔｅｓ、２０１１年、６０、１５９０〜９８頁）。さらに、血漿カリクレイン阻害剤ＡＳＰ−４４０を投与すると、糖尿病ラットにおいて網膜血管透過性と網膜血流異常の両方が軽快した。したがって、血漿カリクレイン阻害剤は、糖尿病性網膜症に伴う網膜血管透過性及び糖尿病黄斑浮腫を減らすための処置としての有用性があるはずである。
【０００６】
血漿カリクレインは、血液凝固にも関与している。内因性血液凝固系は、第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）により活性化されうる。ＦＸＩＩが（ＦＸＩＩａ）に活性化されると、ＦＸＩＩａは第ＸＩ因子（ＦＸＩ）の活性化を通じてフィブリン形成を始動させ、こうして、血液凝固させる。血漿カリクレインは、内因性血液凝固系において重要な構成成分である。なぜならば、血漿カリクレインは、ＦＸＩＩをＦＸＩＩａに活性化し、こうして、内因性血液凝固経路を活性化するからである。さらに、ＦＸＩＩａはまた、さらなる血漿プレカリクレインを活性化し、血漿カリクレインをもたらす。これにより、血漿カリクレイン系及び内因性血液凝固経路がポジティブフィードバック増幅される（Ｔａｎａｋａら、（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００４年、１１３、３３３〜３３９頁）；Ｂｉｒｄら、（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ、２０１２年、１０７、１１４１〜５０頁）。
【０００７】
血液中のＦＸＩＩが負電荷表面（例えば、心肺バイパス手術中に血液が通過する外部管の表面又は人工肺の膜）と接触すると、酵素前駆体ＦＸＩＩの立体構造変化が誘導され、少量の活性ＦＸＩＩ（ＦＸＩＩａ）が生じる。上記の通り、ＦＸＩＩａの形成は血漿カリクレインの形成を始動させ、血液凝固が生じる。ＦＸＩＩのＦＸＩＩａへの活性化は、種々の供給源（例えば、敗血症中の細菌、分解中の細胞由来のＲＮＡ）上の負電荷表面との接触によっても身体中で起こることがあり、こうして播種性血管内凝固が生じる（Ｔａｎａｋａら、（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００４年、１１３、３３３〜３３９頁））。
【０００８】
したがって、血漿カリクレインを阻害すれば、上記の血液凝固系が阻害され、よって、血液凝固が望ましくない心肺バイパス手術中の播種性血管内凝固及び血液凝固の処置に有用でもあると考えられる。例えば、Ｋａｔｓｕｕｒａら、（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１９９６年、８２、３６１〜３６８頁）は、ＬＰＳ誘導播種性血管内凝固に対して血漿カリクレイン阻害剤、ＰＫＳＩ−５２７を投与すると、血小板数及びフィブリノーゲンレベルの減少並びに通常播種性血管内凝固で起きるＦＤＰレベルの増加が著しく抑制されることを明らかにした。Ｂｉｒｄら、（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ、２０１２年、１０７、１１４１〜５０頁）は、血漿カリクレイン欠損マウスでは凝固時間が増加し、血栓症が著しく減少することを示した。Ｒｅｖｅｎｋｏら、（Ｂｌｏｏｄ、２０１１年、１１８、５３０２〜５３１１頁）は、アンチセンスオリゴヌクレオチド処置を使用するマウスでの血漿プレカリクレインレベルの減少により抗血栓作用が生じることを示した。Ｔａｎａｋａら、（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００４年、１１３、３３３〜３３９頁）は、血液をＤＸ−８８（血漿カリクレイン阻害剤）と接触させると、活性化凝固時間（ＡＣＴ）が増加することを示した。Ｌｅｈｍａｎｎら、（Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．２００８年、１１８７〜９９頁）は、エカランチド（血漿カリクレイン阻害剤）が接触活性化誘導凝固を遅延することが見出されたことを示した。Ｌｅｈｍａｎｎら、は、エカランチドが「血漿カリクレインを阻害することにより内因性凝固経路を阻害するのでインビトロ抗凝固作用を有している」と結論付けている。
【０００９】
血漿カリクレインは、血小板活性化の阻害、したがって、出血の停止の阻害にも関与している。血小板活性化は止血におけるもっとも初期のステップの１つであり、これにより血管への損傷に続いて血小板血栓形成及び出血の急速な停止がもたらされる。血管損傷部位では、露出したコラーゲンと血小板の間の相互作用は血小板の保持及び活性化並びにそれに続く出血の停止に極めて重要である。
【００１０】
活性化すると、血漿カリクレインはコラーゲンに結合し、それによってＧＰＶＩ受容体により媒介される血小板のコラーゲン媒介活性化を妨害する（Ｌｉｕら、（Ｎａｔ  Ｍｅｄ．、２０１１年、１７、２０６〜２１０頁））。上で議論したように、血漿カリクレイン阻害剤は、第ＸＩＩ因子の血漿カリクレイン媒介活性化を阻害し、それによって、接触活性化システムによるカリクレイン系のポジティブフィードバック増幅を減らすことにより血漿プレカリクレイン活性化を減らす。
【００１１】
したがって、血漿カリクレインを阻害すれば、血漿カリクレインのコラーゲンへの結合を減らし、こうして出血の停止への血漿カリクレインの干渉を減らす。したがって、血漿カリクレイン阻害剤は、脳出血及び外科術後の出血を処置する治療に有用であると考えられる。例えば、Ｌｉｕら、（Ｎａｔ  Ｍｅｄ．、２０１１年、１７、２０６〜２１０頁）は、ラットにおいて、小分子ＰＫ阻害剤、ＡＳＰ−４４０の全身投与により、血腫拡大が減少することを実証した。脳血腫は脳内出血に続いて起こることがあり、血管損傷の結果として血管から周囲の脳組織への出血により引き起こされる。Ｌｉｕら、により報告されている脳出血モデルでの出血は、血管を損傷する脳実質での切開を含む外科的介入により誘導された。これらのデータは、血漿カリクレイン阻害により外科術後の出血及び血腫容積が減少することが実証された。Ｂｊｏｒｋｑｖｉｓｔら、（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ、２０１３年、１１０、３９９〜４０７頁）は、アプロチニン（血漿カリクレインを含むセリンプロテアーゼを阻害するタンパク質）を使用して術後出血を減少しうることを実証した。
【００１２】
脳出血、腎症、心筋症及び神経障害などの糖尿病の他の合併症は、そのすべてが血漿カリクレインと関連があり、これらも血漿カリクレイン阻害剤の標的と見なしうる。
【００１３】
合成及び小分子血漿カリクレイン阻害剤は、以前、例えば、Ｇａｒｒｅｔｔら、（「Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｌｄｅｈｙｄｅ・・・．」Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｒｅｓ．５２、６２〜７１頁（１９９８年））、Ｔ．Ｇｒｉｅｓｂａｃｈｅｒら、（「Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｉｓｓｕｅ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｙｍｐｔｏｍｓ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｋｉｎｉｎｓ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ  ｉｎ  ｒａｔｓ」Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １３７、６９２〜７００頁（２００２年））、Ｅｖａｎｓ（「Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｄｉｐｅｐｔｉｄｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ」国際公開第０３／０７６４５８号）、Ｓｚｅｌｋｅら、（「Ｋｉｎｉｎｏｇｅｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」国際公開第９２／０４３７１号）、Ｄ．Ｍ．Ｅｖａｎｓら、（Ｉｍｍｕｎｏｌｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、３２、１１５〜１１６頁（１９９６年））、Ｓｚｅｌｋｅら、（「Ｋｉｎｉｎｏｇｅｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」国際公開第９５／０７９２１号）、Ａｎｔｏｎｓｓｏｎら、（「Ｎｅｗ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ」国際公開第９４／２９３３５号）、Ｊ．Ｃｏｒｔｅら、（「Ｓｉｘ  ｍｅｍｂｅｒｅｄ  ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ  ｕｓｅｆｕｌ  ａｓ  ｓｅｒｉｎｅ  ｐｒｏｔｅａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」国際公開第２００５／１２３６８０号）、Ｊ．Ｓｔｕｒｚｂｅｃｈｅｒら、（Ｂｒａｚｉｌｉａｎ  Ｊ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｓ  ２７、１９２９〜３４頁（１９９４年））、Ｋｅｔｔｎｅｒら、（米国特許第５，１８７，１５７号）、Ｎ．Ｔｅｎｏら、（Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．４１、１０７９〜１０９０頁（１９９３年））、Ｗ．Ｂ．Ｙｏｕｎｇら、（「Ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ」Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｓ．１６、２０３４〜２０３６頁（２００６年））、Ｏｋａｄａら、（「Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｐｌａｓｍｉｎ  ａｎｄ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ」Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．４８、１９６４〜７２頁（２０００年））、Ｓｔｅｉｎｍｅｔｚｅｒら、（「Ｔｒｙｐｓｉｎ−ｌｉｋｅ  ｓｅｒｉｎｅ  ｐｒｏｔｅａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｕｓｅ」国際公開第０８／０４９５９５号）、Ｚｈａｎｇら、（「Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ｈｉｇｈｌｙ  ｐｏｔｅｎｔ  ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２、５４５〜５５３頁（２００６年））、Ｓｉｎｈａら、（「Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ」国際公開第０８／０１６８８３号）、Ｓｈｉｇｅｎａｇａら、（「Ｐｌａｓｍａ  Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  Ｉｎ��ｉｂｉｔｏｒｓ」国際公開第２０１１／１１８６７２号）、及びＫｏｌｔｅら、（「Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｈｉｇｈ−ａｆｆｉｎｉｔｙ  ａｎｄ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ」、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（２０１１年）、１６２（７）、１６３９〜１６４９頁）により記載されている。その上、Ｓｔｅｉｎｍｅｔｚｅｒら、（「Ｓｅｒｉｎｅ  ｐｒｏｔｅａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」国際公開第２０１２／００４６７８号）は、ヒトプラスミン及び血漿カリクレインの阻害剤である環化ペプチド類似物を記載している。
【００１４】
現在まで、医学的用途を承認された唯一の選択的血漿カリクレインの阻害剤はエカランチドである。エカランチドは注射用溶液として処方される。エカランチドは、アナフィラキシー反応のリスクを示す巨大なタンパク質血漿カリクレイン阻害剤である。当技術分野で公知である他の血漿カリクレイン阻害剤は一般には小分子であり、その一部は、グアニジン又はアミジンなどの高極性及びイオン化可能な官能基を含む。最近、グアニジン又はアミジン官能性を備えていない血漿カリクレイン阻害剤が報告されている。例えば、Ｂｒａｎｄｌら、（「Ｎ−（（６−ａｍｉｎｏ−ｐｙｒｉｄｉｎ−３−ｙｌ）ｍｅｔｈｙｌ）−ｈｅｔｅｒｏａｒｙｌ−ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅｓ  ａｓ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ」国際公開第２０１２／０１７０２０号）、Ｅｖａｎｓら、（「Ｂｅｎｚｙｌａｍｉｎｅ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ａｓ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ」国際公開第２０１３／００５０４５号）、Ａｌｌａｎら、（「Ｂｅｎｚｙｌａｍｉｎｅ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ」国際公開第２０１４／１０８６７９号）、Ｄａｖｉｅら、（「Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  ｄｅｒｉｖａｔｅｓ」国際公開第２０１４／１８８２１１号）、及びＤａｖｉｅら、（「Ｎ−（（ｈｅｔ）ａｒｙｌｍｅｔｈｙｌ）−ｈｅｔｅｒｏａｒｙｌ−ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅｓ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ａｓ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」国際公開第２０１６／０８３８２０号）。
【００１５】
医薬製剤の製造では、活性化合物が、商業的に実現可能な製造方法を得るために都合よく取り扱い加工できる形態であることが重要である。したがって、活性化合物の化学的安定性及び物理的安定性が重要な因子である。活性化合物及びこれを含有する製剤は、活性化合物の物理化学的特徴（例えば、化学組成、密度、吸湿性及び可溶性）のいかなる著しい変化を示すことなく、かなりの期間にわたり効果的に貯蔵できなければならない。
【００１６】
特定の固体形態の医薬成分を製造すると、その固体物性が多くの面に影響を及ぼし、可溶性、溶解速度、化学的安定性、機械的特性、技術的実行可能性、加工性、薬物動態及び生物学的利用能の面に利点を提供することができることは公知である。これらの一部は、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ；Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ、Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｕｓｅ」、Ｐ．Ｈｅｉｎｒｉｃｈ  Ｓｔａｈｌ、Ｃａｍｉｌｌｅ  Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（編）（Ｖｅｒｌａｇ  Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ、Ｚｕｒｉｃｈ）に記載されている。固体形態の製造方法は、「Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ」、Ｎｅａｌ  Ｇ．Ａｎｄｅｒｓｏｎ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ）ａｎｄ「Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ：Ｉｎ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ」Ｒｏｌｆ  Ｈｉｌｆｉｋｅｒ（編）（Ｗｉｌｅｙ  ＶＣＨ）にも記載されている。製薬結晶の多形は、Ｂｙｒｎ（Ｂｙｒｎ、Ｓ．Ｒ．、Ｐｆｅｉｆｆｅｒ、Ｒ．Ｒ．、Ｓｔｏｗｅｌｌ、Ｊ．Ｇ．、「Ｓｏｌｉｄ−Ｓｔａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ」、ＳＳＣＩ  Ｉｎｃ．、Ｗｅｓｔ  Ｌａｆａｙｅｔｔｅ、Ｉｎｄｉａｎａ、１９９９年）、Ｂｒｉｔｔａｉｎ、Ｈ．Ｇ．、「Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｏｌｉｄｓ」、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｂａｓｅｌ、１９９９年）又はＢｅｒｎｓｔｅｉｎ（Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ、Ｊ．、「Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｒｙｓｔａｌｓ」、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、２００２年）に記載されている。
【００１７】
出願者は、血漿カリクレインの阻害剤である新規一連の化合物を開発しており、これらの化合物はＰＣＴ／ＧＢ２０１７／０５１５４６に開示されている。これらの化合物は、血漿カリクレインに対する良好な選択性を示し、糖尿病性網膜症、黄斑浮腫及び遺伝性血管性浮腫の処置に潜在的に有用である。１つのそのような化合物は、Ｎ−［（３−フルオロ−４−メトキシピリジン−２−イル）メチル］−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）−３−（トリフルオロメチル）ピラゾール−４−カルボキサミド（ＰＣＴ／ＧＢ２０１７／０５１５４６の実施例６）である。
【００１８】
名称Ｎ−［（３−フルオロ−４−メトキシピリジン−２−イル）メチル］−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）−３−（トリフルオロメチル）ピラゾール−４−カルボキサミドは、式Ａに描かれる構造を表す。
【００１９】
【化１】
2021504311.tif 000002
に描かれる構造を表す。
【００２０】
出願者は、関連する化合物、Ｎ−［（３−フルオロ−４−メトキシピリジン−２−イル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド及びその塩の新しい固体形態も開発しており、これはＰＣＴ／ＧＢ２０１７／０５１５７９に開示されている。これらの固体形態が有する有利な物理化学的特性のおかげで、この固体形態は開発に適している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２１】
【特許文献１】国際公開第２００３／０７６４５８号
【特許文献２】国際公開第９２／０４３７１号
【特許文献３】国際公開第９５／０７９２１号
【特許文献４】国際公開第９４／２９３３５号
【特許文献５】国際公開第２００５／１２３６８０号
【特許文献６】米国特許第５，１８７，１５７号
【特許文献７】国際公開第２００８／０４９５９５号
【特許文献８】国際公開第２００８／０１６８８３号
【特許文献９】国際公開第２０１１／１１８６７２号
【特許文献１０】国際公開第２０１２／００４６７８号
【特許文献１１】国際公開第２０１２／０１７０２０号
【特許文献１２】国際公開第２０１３／００５０４５号
【特許文献１３】国際公開第２０１４／１０８６７９号
【特許文献１４】国際公開第２０１４／１８８２１１号
【特許文献１５】国際公開第２０１６／０８３８２０号
【特許文献１６】ＰＣＴ／ＧＢ２０１７／０５１５４６
【特許文献１７】ＰＣＴ／ＧＢ２０１７／０５１５７９
【非特許文献】
【００２２】
【非特許文献１】Ｋ．Ｄ．Ｂｈｏｏｌａら、「Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ−Ｋｉｎｉｎ  Ｃａｓｃａｄｅ」、Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、４８３〜４９３頁
【非特許文献２】Ｊ．Ｗ．Ｂｒｙａｎｔら、「Ｈｕｍａｎ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ−ｋｉｎｉｎ  ｓｙｓｔｅｍ：ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ」Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ａｎｄ  ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｇｅｎｔｓ  ｉｎ  ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、７、２３４〜２５０頁、２００９年
【非特許文献３】Ｋ．Ｄ．Ｂｈｏｏｌａら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖ．、１９９２年、４４、１頁
【非特許文献４】Ｄ．Ｊ．Ｃａｍｐｂｅｌｌ、「Ｔｏｗａｒｄｓ  ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ  ｔｈｅ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ−ｋｉｎｉｎ  ｓｙｓｔｅｍ：ｉｎｓｉｇｈｔｓ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｋｉｎｉｎ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ」、Ｂｒａｚｉｌｉａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２０００年、３３、６６５〜６７７頁
【非特許文献５】Ｆ．Ｍａｒｃｅａｕ  ａｎｄ  Ｄ．Ｒｅｇｏｌｉ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．、Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、２００４年、３、８４５〜８５２頁
【非特許文献６】Ａ．Ｌｅｈｍａｎｎ「Ｅｃａｌｌａｎｔｉｄｅ（ＤＸ−８８）、ａ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ  ａｎｇｉｏｅｄｅｍａ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂｌｏｏｄ  ｌｏｓｓ  ｉｎ  ｏｎ−ｐｕｍｐ  ｃａｒｄｉｏｔｈｏｒａｃｉｃ  ｓｕｒｇｅｒｙ」Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．８、１１８７〜９９頁
【非特許文献７】Ａ．Ｃｌｅｒｍｏｎｔら、「Ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｔｈｉｃｋｅｎｉｎｇ  ｉｎ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｒａｔｓ」Ｄｉａｂｅｔｅｓ、２０１１年、６０、１５９０〜９８頁
【非特許文献８】Ｔａｎａｋａら、（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００４年、１１３、３３３〜３３９頁）
【非特許文献９】Ｂｉｒｄら、（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ、２０１２年、１０７、１１４１〜５０頁）
【非特許文献１０】Ｋａｔｓｕｕｒａら、（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１９９６年、８２、３６１〜３６８頁）
【非特許文献１１】Ｒｅｖｅｎｋｏら、（Ｂｌｏｏｄ、２０１１年、１１８、５３０２〜５３１１頁）
【非特許文献１２】Ｌｉｕら、（Ｎａｔ  Ｍｅｄ．、２０１１年、１７、２０６〜２１０頁）
【非特許文献１３】Ｂｊｏｒｋｑｖｉｓｔら、（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ、２０１３年、１１０、３９９〜４０７頁）
【非特許文献１４】Ｇａｒｒｅｔｔら、（「Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｌｄｅｈｙｄｅ・・・．」Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｒｅｓ．５２、６２〜７１頁（１９９８年））
【非特許文献１５】Ｔ．Ｇｒｉｅｓｂａｃｈｅｒら、（「Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｉｓｓｕｅ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｙｍｐｔｏｍｓ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｋｉｎｉｎｓ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ  ｉｎ  ｒａｔｓ」Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １３７、６９２〜７００頁（２００２年））
【非特許文献１６】Ｄ．Ｍ．Ｅｖａｎｓら、（Ｉｍｍｕｎｏｌｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、３２、１１５〜１１６頁（１９９６年））
【非特許文献１７】Ｊ．Ｓｔｕｒｚｂｅｃｈｅｒら、（Ｂｒａｚｉｌｉａｎ  Ｊ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｓ  ２７、１９２９〜３４頁（１９９４年））
【非特許文献１８】Ｎ．Ｔｅｎｏら、（Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．４１、１０７９〜１０９０頁（１９９３年））
【非特許文献１９】Ｗ．Ｂ．Ｙｏｕｎｇら、（「Ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ」Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｓ．１６、２０３４〜２０３６頁（２００６年））
【非特許文献２０】Ｏｋａｄａら、（「Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｐｌａｓｍｉｎ  ａｎｄ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ」Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．４８、１９６４〜７２頁（２０００年））
【非特許文献２１】Ｚｈａｎｇら、（「Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ｈｉｇｈｌｙ  ｐｏｔｅｎｔ  ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２、５４５〜５５３頁（２００６年））
【非特許文献２２】Ｋｏｌｔｅら、（「Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｈｉｇｈ−ａｆｆｉｎｉｔｙ  ａｎｄ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ」、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（２０１１年）、１６２（７）、１６３９〜１６４９頁）
【非特許文献２３】「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ；Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ、Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｕｓｅ」、Ｐ．Ｈｅｉｎｒｉｃｈ  Ｓｔａｈｌ、Ｃａｍｉｌｌｅ  Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（編）（Ｖｅｒｌａｇ  Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ、Ｚｕｒｉｃｈ）
【非特許文献２４】「Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ」Ｎｅａｌ  Ｇ．Ａｎｄｅｒｓｏｎ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ）
【非特許文献２５】「Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ：Ｉｎ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ」Ｒｏｌｆ  Ｈｉｌｆｉｋｅｒ（編）（Ｗｉｌｅｙ  ＶＣＨ）
【非特許文献２６】Ｂｙｒｎ（Ｂｙｒｎ、Ｓ．Ｒ．、Ｐｆｅｉｆｆｅｒ、Ｒ．Ｒ．、Ｓｔｏｗｅｌｌ、Ｊ．Ｇ．、「Ｓｏｌｉｄ−Ｓｔａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ」、ＳＳＣＩ  Ｉｎｃ．、Ｗｅｓｔ  Ｌａｆａｙｅｔｔｅ、Ｉｎｄｉａｎａ、１９９９年）
【非特許文献２７】Ｂｒｉｔｔａｉｎ、Ｈ．Ｇ．、「Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｏｌｉｄｓ」、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｂａｓｅｌ、１９９９年
【非特許文献２８】Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ（Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ、Ｊ．、「Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｒｙｓｔａｌｓ」、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、２００２年）
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２３】
出願者は、今や式Ａの化合物の新規固体形態を開発し、この固体形態は本明細書では「フォーム１」と呼ばれる。フォーム１が持つ有利な物理化学的特性のおかげでこの固体形態は開発に適しており、特に、結晶化によるその調製は簡単で拡張性が高い。結晶性固体形態の利点は、そのほうが容易に処理可能である点である。すなわち、結晶化によるその調製は望ましくない不純物を取り除くのに一般的で容易に拡張可能な製法である。
【００２４】
さらに、式Ａの化合物は、驚くほど良好な薬物動態特性、特に、インビトロ浸透性を示すことが見出されている。
【００２５】
したがって、本発明の態様に従って、式Ａの化合物の固体形態が提供される。本出願では、この固体形態は「フォーム１」と呼ばれる。
【００２６】
出願者は、式Ａの化合物の塩酸塩の新規固体形態も開発した。新規固体形態が有する有利な物理化学的特性のおかげで、この固体形態は開発に適しており、特に、結晶化によるその調製は簡単でスケーラブルである。
【００２７】
本発明は、本明細書では「フォーム２」と呼ばれる式Ａの化合物の塩酸塩の固体形態を提供する。
【００２８】
出願者は、式Ａの化合物の硫酸塩の新規固体形態も開発した。新規固体形態が有する有利な物理化学的特性のおかげで、この固体形態は開発に適しており、特に、結晶化によるその調製は簡単で拡張性が高い。
【００２９】
本発明は、本明細書では「フォーム３」と呼ばれる式Ａの化合物の硫酸塩の固体形態を提供する。
【００３０】
式Ａの化合物の塩に言及する場合の本明細書で使用される用語「硫酸塩」は、モノ硫酸塩とヘミ硫酸塩の両方を包含することが意図されている。一実施形態では、式Ａの化合物のフォーム３はモノ硫酸塩である。別の実施形態では、式Ａの化合物のフォーム３はヘミ硫酸塩である。
【００３１】
本明細書に記載される用語「固体形態」は、結晶形を含む。任意選択的に、本発明の固体形態は結晶形である。
【００３２】
本明細書では、Ｘ線粉末回折ピーク（°２θで表される）はＣｕ  Ｋα線を使用して測定される。
【００３３】
本発明は、少なくとも以下の特性Ｘ線粉末回折ピーク（Ｃｕ  Ｋα線、°２θで表される）を、約
（１）６．７、９．５、１１．０、１３．３及び１７．３；又は
（２）６．７、８．２、９．５、１１．０、１３．３、１５．６及び１７．３；又は
（３）６．７、８．２、９．５、１１．０、１３．３、１４．５、１５．６、１７．３及び２０．５
に示す、式Ａの化合物の固体形態（フォーム１）を提供する。
【００３４】
用語「約」は、この文脈では、°２θの測定値に±０．３（°２θで表される）、好ましくは±０．２（°２θで表される）の不確定性があることを意味する。
【００３５】
本発明は、特性ピーク（°２θで表される）を約６．７、８．２、９．５、１１．０、１３．３、１３．７、１４．５、１５．６、１７．３、１９．１及び２０．５で含むＸ線粉末回折パターンを有する、式Ａの化合物の固体形態（フォーム１）も提供する。
【００３６】
本発明は、図１に示されるパターンと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを有する、式Ａの化合物の固体形態（フォーム１）も提供する。
【００３７】
固体形態のＸ線粉末回折パターンは、本明細書では図に描かれているパターンと「実質的に」同じであると記載されうる。Ｘ線粉末回折パターンにおけるピークは、当業者には公知である種々の要因のせいでその位置及び相対強度がわずかに移動している場合があることは認識されている。例えば、パターンのピークのピーク位置及び相対強度の移動は、使用される装置、試料調製の方法、好ましいパッキング及び配向、放射線源並びにデータ収集の方法及び長さのせいで起こりうる。しかし、当業者であれば、本明細書の図に示されるＸ線粉末回折パターンを未知の固体形態のパターンと比較してその固体形態の正体を確かめることができる。
【００３８】
本発明は、少なくとも以下の特性Ｘ線粉末回折ピーク（Ｃｕ  Ｋα線、°２θで表される）を、約：
（１）７．３、８．６、１１．６、１４．３及び１６．２；又は
（２）７．３、８．６、１１．６、１３．５、１４．３、１６．２及び１８．３；又は
（３）７．３、８．６、１１．２、１１．６、１３．５、１４．３、１４．７、１６．２及び１８．３
に示す、式Ａの化合物の塩酸塩の固体形態（フォーム２）を提供する。
【００３９】
本発明は、特性ピーク（°２θで表される）を約７．３、７．８、８．６、１１．２、１１．６、１３．５、１４．３、１４．７、１６．２、１７．２、１７．７及び１８．３で含むＸ線粉末回折パターンを有する、式Ａの化合物の塩酸塩の固体形態（フォーム２）も提供する。
【００４０】
本発明は、図３に示されるパターンと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを有する、式Ａの化合物の塩酸塩の固体形態（フォーム２）も提供する。
【００４１】
本発明は、少なくとも以下の特性Ｘ線粉末回折ピーク（Ｃｕ  Ｋα線、°２θで表される）を、約：
（１）４．７、６．４、９．１、１５．１及び１６．４；又は
（２）４．７、６．４、９．１、１５．１、１６．４、１８．４及び１９．５
に示す、式Ａの化合物の硫酸塩の固体形態（フォーム３）を提供する。
【００４２】
本発明は、特性ピーク（°２θで表される）を約４．７、６．４、９．１、１２．８、１５．１、１６．４、１８．４、１８．８及び１９．５で含むＸ線粉末回折パターンを有する、式Ａの化合物の硫酸塩の固体形態（フォーム３）も提供する。
【００４３】
本発明は、図４に示されるパターンと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを有する、式Ａの化合物の硫酸塩の固体形態（フォーム３）も提供する。
【００４４】
当業者であればＸＲＰＤパターンを測定するための技法に精通している。特に、化合物の試料のＸ線粉末回折パターンは、以下の実験条件でＰｈｉｌｉｐｓ  Ｘ−Ｐｅｒｔ  ＭＰＤ回折計を使用して記録しうる。
【００４５】
スキャンパラメータ：
【００４６】
【表１】
2021504311.tif 000003
【００４７】
本発明は、そのＳＴＡサーモグラフにおいて１６４±３℃、好ましくは１６４±２℃、さらに好ましくは１６４±１℃に吸熱ピークを示す、式Ａの化合物の固体形態（フォーム１）を提供する。
【００４８】
本発明は、図２に示されるサーモグラフと実質的に同じであるＳＴＡサーモグラフを有する、式Ａの化合物の固体形態（フォーム１）を提供する。
【００４９】
当業者であればＳＴＡサーモグラフを測定するための技法に精通している。特に、化合物の試料のＳＴＡサーモグラフは、
（ａ）約５ｍｇの試料の目方を量ってセラミックス製るつぼに入れ；
（ｂ）試料をＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  ＳＴＡ  ６００  ＴＧＡ／ＤＴＡ分析器のチャンバーに環境温度で入れ；
（ｃ）試料を２５℃から３００℃まで１０℃／分の速度で加熱し、２０ｃｍ３／分窒素置換を使用しつつ、試料の重量並びにＤＴＡシグナルの変化をモニターする
ことにより記録しうる。
【００５０】
本発明は、上記のＸ線粉末回折パターン及び上記のＳＴＡサーモグラフを有する、式Ａの化合物の固体形態（フォーム１）を提供する。
【００５１】
本発明の固体形態は非溶媒和と溶媒和型の両方で存在することができる。用語「溶媒和させる」とは、本発明の化合物とある量の１種以上の薬学的に許容される溶媒、例えば、エタノールを含む分子複合体を記載するために本明細書では使用される。用語「水和物」は溶媒が水の場合に用いられる。
【００５２】
本発明は、本明細書に記載される式Ａの化合物の固体形態及びその塩の溶媒和化合物（例えば、水和物）を包含する。
【００５３】
本発明の態様では、式Ａの化合物のフォーム１は溶媒和化合物でも水和物でもない。
【００５４】
本発明の態様では、式Ａの化合物のフォーム２は二水和物である。
【００５５】
本発明の態様では、式Ａの化合物のフォーム３は一水和物である。
【００５６】
特定の化合物への言及はすべての同位体変異体も含む。
【００５７】
本発明は、本発明のフォーム１の調製のための方法も包含しており、前記方法は溶媒又は溶媒の混合物中の式Ａの化合物の溶液からの前記固体形態の結晶化を含む。溶媒又は溶媒の混合物はイソプロパノール（ＩＰＡ）を含んでいてもよい。好ましくは、溶媒はイソプロパノールである。式Ａの化合物を溶媒又は溶媒（例えば、イソプロパノール）の混合物に添加した後、複合型混合物（化合物プラス溶媒（複数可））は約６０〜８５℃の温度に加熱しうる。あるいは、複合型混合物は約７０〜８５℃の温度に加熱しうる。あるいは、複合型混合物は約８０〜８５℃の温度に加熱しうる。あるいは、複合型混合物は約８０、８１、８２、８３、８４又は８５℃の温度に加熱しうる。あるいは、複合型混合物は約８２℃の温度に加熱しうる。あるいは、複合型混合物は還流するまで加熱しうる。加熱に続いて、複合型混合物は冷却しうる。あるいは、複合型混合物は約０〜４０℃の温度に冷却しうる。あるいは、複合型混合物は約１０〜３０℃の温度に冷却しうる。あるいは、複合型混合物は室温に冷却しうる。あるいは、複合型混合物は約０℃に冷却しうる。
【００５８】
本発明は、式Ａの化合物の固体形態の調製のための方法も包含しており、前記方法はイソプロパノール（ＩＰＡ）中の式Ａの化合物の溶液からの前記固体形態の結晶化を含む。式Ａの化合物のイソプロパノールへの添加後、複合型混合物（化合物プラスイソプロパノール）は約６０〜８５℃の温度に加熱しうる。あるいは、複合型混合物は約７０〜８５℃の温度に加熱しうる。あるいは、複合型混合物は約８０〜８５℃の温度に加熱しうる。あるいは、複合型混合物は約８０、８１、８２、８３、８４又は８５℃の温度に加熱しうる。あるいは、複合型混合物は約８２℃の温度に加熱しうる。あるいは、複合型混合物は還流するまで加熱しうる。加熱に続いて、複合型混合物は冷却しうる。あるいは、複合型混合物は約０〜４０℃の温度に冷却しうる。あるいは、複合型混合物は約１０〜３０℃の温度に冷却しうる。あるいは、複合型混合物は室温に冷却しうる。あるいは、複合型混合物は約０℃に冷却しうる。
【００５９】
本発明は、イソプロパノール（ＩＰＡ）中の式Ａの化合物の溶液からの固体形態の結晶化を含む方法により得ることが可能な式Ａの化合物の前記固体形態も包含する。式Ａの化合物のイソプロパノールへの添加後、複合型混合物（化合物プラスイソプロパノール）は約６０〜８５℃の温度に加熱しうる。あるいは、複合型混合物は約７０〜８５℃の温度に加熱しうる。あるいは、複合型混合物は約８０〜８５℃の温度に加熱しうる。あるいは、複合型混合物は約８０、８１、８２、８３、８４又は８５℃の温度に加熱しうる。あるいは、複合型混合物は約８２℃の温度に加熱しうる。あるいは、複合型混合物は還流するまで加熱しうる。加熱に続いて、複合型混合物は冷却しうる。あるいは、複合型混合物は約０〜４０℃の温度に冷却しうる。あるいは、複合型混合物は約１０〜３０℃の温度に冷却しうる。あるいは、複合型混合物は室温に冷却しうる。あるいは、複合型混合物は約０℃に冷却しうる。
【００６０】
本発明は、本発明のフォーム２の調製のための方法も包含しており、前記方法は溶媒又は溶媒の混合物中の式Ａの化合物の塩酸塩の溶液からの前記固体形態の結晶化を含む。任意選択的に、式Ａの化合物の塩酸塩の前記溶液は、塩酸を溶媒又は溶媒の混合物中の式Ａの化合物の溶液又は懸濁液に添加することにより形成しうる。
【００６１】
本発明は、本発明のフォーム３の調製のための方法も包含し、前記方法は、溶媒又は溶媒の混合物中の式Ａの化合物の硫酸塩の溶液からの前記固体形態の結晶化を含む。任意選択的に、式Ａの化合物の硫酸塩の前記溶液は、硫酸を溶媒又は溶媒の混合物中の式Ａの化合物の溶液又は懸濁液に添加することにより形成しうる。
【００６２】
本発明の方法は、本発明の固体形態の結晶種の添加も含みうる。
【００６３】
態様では、本発明は、本発明に従った方法により製造される場合、本発明の固体形態を提供する。
【００６４】
前述のように、本発明の固体形態は、特に、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態の処置において、いくつかの治療適用を有する。
【００６５】
したがって、本発明は、治療において使用するための、上文で定義された式Ａの化合物及びその塩の固体形態を提供する。好ましい実施形態では、固体形態はフォーム１である。
【００６６】
本発明は、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態の処置のための薬物の製造における、上文で定義された式Ａの化合物及びその塩の固体形態の使用も提供する。好ましい実施形態では、固体形態はフォーム１である。
【００６７】
本発明は、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態の処置方法において使用するための、上文で定義された式Ａの化合物及びその塩の固体形態も提供する。好ましい実施形態では、固体形態はフォーム１である。
【００６８】
本発明は、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態の処置方法も提供し、前記方法は、そのような処置を必要とする哺乳動物に、上文で定義された式Ａの化合物及びその塩の固体形態の治療有効量を投与することを含む。好ましい実施形態では、固体形態はフォーム１である。
【００６９】
態様では、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態は、視力障害、糖尿病性網膜症、糖尿病性網膜症に伴う網膜血管透過性、糖尿病黄斑浮腫、遺伝性血管性浮腫、網膜静脈閉塞症、糖尿病、膵炎、脳出血、腎症、心筋症、神経障害、炎症性腸疾患、関節炎、炎症、敗血症性ショック、低血圧症、がん、成人呼吸促迫症候群、播種性血管内凝固、心肺バイパス手術中の血管凝固及び外科術後の出血から選択される。好ましい実施形態では、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態は、糖尿病黄斑浮腫である。別の好ましい実施形態では、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態は、遺伝性血管性浮腫である。
【００７０】
あるいは、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態は、糖尿病性網膜症に伴う網膜血管透過性、糖尿病黄斑浮腫及び遺伝性血管性浮腫から選択してもよい。あるいは、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態は、糖尿病性網膜症に伴う網膜血管透過性又は糖尿病黄斑浮腫でもよい。式Ａの化合物及びその塩の固体形態は、患者の眼球領域中への注射に適した形態で、特に、硝子体内注射に適した形態で投与しうる。
【００７１】
本発明の文脈では、「処置」への本明細書での言及は、それとは反対の特定の指示がなければ、治癒、緩和及び予防処置への言及を含む。用語「治療（ｔｈｅｒａｐｙ）」、「治療的（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）」及び「治療的に（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ）」は同じように解釈するべきである。
【００７２】
本発明の固体形態は、単独で又は１種以上の他の薬物と組み合わせて投与してもよい。一般的に、本発明の固体形態は、１種以上の薬学的に許容される賦形剤を伴った製剤として投与される。用語「賦形剤」は、製剤に機能的（すなわち、薬物放出速度制御）及び／又は非機能的（すなわち、加工助剤又は希釈剤）特性を分け与えうる本発明の化合物（複数可）以外の任意の成分を記載するのに本明細書では使用される。賦形剤の選択は、特定の投与様式、可溶性及び安定性に対する賦形剤の効果並びに剤形の性質などの要因に大いに依存する。
【００７３】
別の態様では、本発明の化合物は、網膜のレーザー処置と組み合わせて投与してもよい。レーザー療法と糖尿病黄斑浮腫の処置のためのＶＥＧＦの阻害剤の硝子体内注射の組合せは公知である（Ｅｌｍａｎ  Ｍ、Ａｉｅｌｌｏ  Ｌ、Ｂｅｃｋ  Ｒら、「Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｔｒｉａｌ  ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ  ｒａｎｉｂｉｚｕｍａｂ  ｐｌｕｓ  ｐｒｏｍｐｔ  ｏｒ  ｄｅｆｅｒｒｅｄ  ｌａｓｅｒ  ｏｒ  ｔｒｉａｍｃｉｎｏｌｏｎｅ  ｐｌｕｓ  ｐｒｏｍｐｔ  ｌａｓｅｒ  ｆｏｒ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｍａｃｕｌａｒ  ｅｄｅｍａ」Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ．２０１０年４月２７日）。
【００７４】
本発明の固体形態の送達に適した医薬組成物及びその調製方法は、当業者にはすぐに明らかになる。そのような組成物及びその調製のための方法は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１９版（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、１９９５年）に見出しうる。
【００７５】
ヒト患者への投与では、本発明の固体形態の全一日量は典型的には、当然のことながら投与様式に応じて、０．１ｍｇ〜１０，０００ｍｇの範囲、又は１ｍｇ〜５０００ｍｇの間、又は１０ｍｇ〜１０００ｍｇの間である。硝子体内注射により投与される場合、眼あたり０．０００１ｍｇ（０．１μｇ）〜０．２ｍｇ（２００μｇ）の間、又は眼あたり０．０００５ｍｇ（０．５μｇ）〜０．０５ｍｇ（５０μｇ）の間のもっと低い用量が想定されている。
【００７６】
全一日量は、単一用量又は分割用量で投与してもよく、医師の判断で、本明細書に与えられる典型的な範囲から外れてもよい。これらの投与量は、約６０ｋｇ〜７０ｋｇの体重を有する平均ヒト対象に基づいている。医師は、幼児及び高齢者などのこの範囲から外れた体重の対象についての用量を容易に決定することができる。
【００７７】
したがって、本発明は、上文で定義される式Ａの化合物の固体形態、並びに薬学的に許容される担体、希釈剤及び／又は賦形剤を含む医薬組成物を提供する。好ましい実施形態では、固体形態はフォーム１である。上文で定義される式Ａの化合物の固体形態への言及は、上文に記載された遊離塩基とその塩の両方を含むことは認識される。
【００７８】
医薬組成物は、例えば、点眼薬、クリーム、溶液、懸濁液、ヘプタフルオロアルカン（ＨＦＡ）エアロゾル及び乾燥粉末製剤の形態で局所的に（例えば、眼に、皮膚に又は肺及び／若しくは気道に）；又は、例えば、錠剤、カプセル、シロップ、粉末若しくは顆粒の形態で経口投与により全身的に；又は溶液若しくは懸濁液の形態で非経口投与により；又は皮下投与により；又は坐薬の形態で直腸内投与により；又は経皮的に投与してもよい。さらなる実施形態では、医薬組成物は懸濁液、錠剤、カプセル、粉末、顆粒又は坐薬の形態である。
【００７９】
本発明の実施形態では、活性成分は経口的に投与される。経口投与は、化合物が消化管に入るように嚥下、及び／又は化合物が口から直接血流に入るよう、頬側、舌又は舌下投与を含んでいてよい。
【００８０】
経口投与に適した製剤は、固体プラグ、固体マイクロ微粒子、錠剤などの半固体及び液体（複数相又は分散系を含む）；マルチ若しくはナノ粒子、液体、乳濁液若しくは粉末を含有する軟若しくは硬カプセル剤；トローチ（液体充填を含む）；チューズ；ゲル；急速分散剤形；フィルム；胚珠；スプレー；及び頬側／粘着付着性パッチを含む。
【００８１】
液体（複数相又は分散系を含む）製剤は、乳濁液、懸濁液、溶液、シロップ及びエリキシルを含む。そのような製剤は、軟又は硬カプセル剤中の充填剤として提示してもよい。液体製剤は、例えば、サシェからの固体の復元により調製してもよい。
【００８２】
本発明の固体形態は、Ｌｉａｎｇ  ａｎｄ  Ｃｈｅｎ、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐａｔｅｎｔｓ、２００１年、１１（６）、９８１〜９８６頁に記載される剤形などの速溶性、速崩壊性剤形でも使用しうる。
【００８３】
錠剤の製剤は、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ、Ｖｏｌ．１、ｂｙ  Ｈ．Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ  ａｎｄ  Ｌ．Ｌａｃｈｍａｎ（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８０年）において考察されている。
【００８４】
本発明は、この時点で、以下の非限定的実施例により例示される。実施例では、以下の図が提示される。
【図面の簡単な説明】
【００８５】
【図１】式Ａの化合物のフォーム１のＸ線粉末回折パターン（実施例１）
【図２】式Ａの化合物のフォーム１のＳＴＡ（実施例１）
【図３】式Ａの化合物の塩酸塩のフォーム２のＸ線粉末回折パターン（実施例２）
【図４】式Ａの化合物の硫酸塩のフォーム３のＸ線粉末回折パターン（実施例３）
【実施例】
【００８６】
＜全般的実験詳細＞
以下の実施例では、以下の略語及び定義が使用される。
【００８７】
【表２】
2021504311.tif 000004
【００８８】
すべての反応は、他に明示されなければ、窒素雰囲気下で実行した。
【００８９】
１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ（４００ＭＨｚ）上で又はＪＥＯＬ（４００ＭＨｚ）分光計上で重水素溶媒を基準として室温で記録した。
【００９０】
分子イオンは、１３分かけて、直線勾配１０％〜９０％  ０．１％  ＨＣＯ２Ｈ／ＭｅＣＮから０．１％  ＨＣＯ２Ｈ／Ｈ２Ｏへ、流速１．５ｍＬ／分でＣｈｒｏｍｏｌｉｔｈ  Ｓｐｅｅｄｒｏｄ  ＲＰ−１８ｅカラム５０×４．６ｍｍを使用して、又は４分かけて、Ａｇｉｌｅｎｔ、Ｘ−Ｓｅｌｅｃｔ、酸性、５〜９５％  ＭｅＣＮ／水を使用して実行するＬＣＭＳを使用して得た。データは、Ｔｈｅｒｍｏｆｉｎｎｉｇａｎ  Ｓｕｒｖｅｙｏｒ  ＬＣシステムと併せてエレクトロスプレーイオン化付きのＴｈｅｒｍｏｆｉｎｎｉｇａｎ  Ｓｕｒｖｅｙｏｒ  ＭＳＱ質量分析計を使用して収集した。
【００９１】
あるいは、分子イオンは、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｐｏｒｏｓｈｅｌｌ  １２０  ＥＣ−Ｃ１８（２．７μｍ、３．０×５０ｍｍ）カラム、水中０．１％ｖ／ｖギ酸［溶離液Ａ］；ＭｅＣＮ［溶離液Ｂ］；流速０．８ｍＬ／分及び試料間の１．５分の平衡化時間、下に示す勾配を使用して実行されるＬＣＭＳを使用して得た。質量検出はＡＰＩ２０００質量分析計（エレクトロスプレー）を用いて与えられた。
【００９２】
勾配：
【００９３】
【表３】
2021504311.tif 000005
【００９４】
生成物をフラッシュクロマトグラフィーにより精製する場合、「シリカ」とは、クロマトグラフィー用のシリカゲル、０．０３５〜０．０７０ｍｍ（２２０〜４４０メッシュ）（例えば、Ｍｅｒｃｋシリカゲル６０）のことであり、１０ｐ．ｓ．ｉ．までの窒素の加圧によりカラム溶出を加速させた。逆相分取ＨＰＬＣ精製は、Ｗａｔｅｒｓ  ２９９６フォトダイオードアレイ検出器を使用して典型的には２０ｍＬ／分の流速でＷａｔｅｒｓ  ２５２５二元勾配ポンプシステムを使用して実行した。
【００９５】
すべての溶媒及び市販の試薬は受け取ったままのものを使用した。
【００９６】
化学名は、ＭＤＬ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ＳｙｓｔｅｍｓからＩＳＩＳ  Ｄｒａｗパッケージの一部として提供されたＡｕｔｏｎｏｍソフトウェア又はＭａｒｖｉｎＳｋｅｔｃｈの構成成分として若しくはＩＤＢＳ  Ｅ−ＷｏｒｋＢｏｏｋの構成成分として提供されたＣｈｅｍａｘｏｎソフトウェアなどの自動化ソフトウェアを使用して作成した。
【００９７】
Ｘ線粉末回折パターンはＰｈｉｌｉｐｓ  Ｘ−Ｐｅｒｔ  ＭＰＤ回折計で収集し、以下の実験条件を使用して分析した：
【００９８】
スキャンパラメータ：
【００９９】
【表４】
2021504311.tif 000006
【０１００】
約５ｍｇの分析用の試料を、ＸＲＰＤゼロバックグラウンドの単一斜めにカットされたシリカ試料ホルダー上で穏やかに加圧した。次に、試料は分析のために回折計に取り付けた。
【０１０１】
同時熱分析（ＳＴＡ）データは以下の方法を使用して収集した。約５ｍｇの試料の目方を正確に量ってセラミックス製るつぼに入れ、試料をＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  ＳＴＡ  ６００  ＴＧＡ／ＤＴＡ分析器のチャンバーに環境温度で置いた。次に、試料を典型的には２５℃から３００℃まで１０℃／分の速度で加熱し、その間重量並びにＤＴＡシグナルの変化をモニターした。使用したパージガスは窒素で、流速は２０ｃｍ３／分であった。
【０１０２】
＜合成例＞
【０１０３】
［実施例１］Ｎ−［（３−フルオロ−４−メトキシピリジン−２−イル）メチル］−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）−３−（トリフルオロメチル）ピラゾール−４−カルボキサミドのフォーム１
【０１０４】
＜３−フルオロ−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボニトリル＞
大型マイクロ波バイアルにおいて、シアノ銅（１．３０４ｇ、１４．６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍＬ）中２−ブロモ−３−フルオロ−４−メトキシピリジン（１ｇ、４．９ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応バイアルは密封し、１００℃まで１６時間加熱した。反応混合物は水（２０ｍＬ）及びＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で希釈した。濃い懸濁液は超音波処理した。沈澱した固体を粉砕するには水（４０ｍＬ）及びＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）を追加し、超音波処理をする必要があった。複合層はＣｅｌｉｔｅのプラグを通して濾過し、有機層を単離し、塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過して減圧下で溶媒を取り除き、３−フルオロ−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボニトリルとして同定される薄緑色の固体（１００ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ、１２％収率）を得た。
【０１０５】
＜（３−フルオロ−４−メトキシ−ピリジン−２−イルメチル）−カルバミン酸ｔ−ブチルエステル＞
３−フルオロ−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボニトリル（１００ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）を無水ＭｅＯＨ（１０ｍＬ、２４７ｍｍｏｌ）に溶解させ、塩化ニッケル６水和物（１４ｍｇ、０．０５８ｍｍｏｌ）、続いてジ−ｔ−ブチルジカーボネート（２５５ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）を添加した。得られた薄緑色溶液を氷塩浴槽で−５℃に冷却し、次に、水素化ホウ素ナトリウム（１５３ｍｇ、４．１ｍｍｏｌ）を、反応温度を約０℃に維持しつつ少量ずつ添加した。濃褐色溶液を０℃で攪拌させておき、室温までゆっくり温めさせ、次に室温で３時間攪拌させておいた。反応混合物は４０℃で蒸発乾燥させて黒色の残留物を得、これをＤＣＭ（１０ｍｌ）で希釈して、炭酸水素ナトリウム（ａｑ）（１０ｍＬ）で洗浄した。乳濁液が形成され、したがって有機物は相分離カートリッジにより分離され、濃縮された。粗液体はクロマトグラフィーにより精製され、ＥｔＯＡｃ／イソヘキサンで溶出させ、透明な黄色油として（３−フルオロ−４−メトキシ−ピリジン−２−イルメチル）−カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（１０８ｍｇ、６２％収率）を得た。
［ＭＨ］＋＝２５７
【０１０６】
＜（３−フルオロ−４−メトキシ−ピリジン−２−イル）−メチルアミンジヒドロクロリド塩＞
（３−フルオロ−４−メトキシ−ピリジン−２−イルメチル）−カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（１０８ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）をイソプロピルアルコール（１ｍＬ）に吸収させ、次に、ＨＣｌ（イソプロピルアルコール中６Ｎ）（１ｍＬ、０．５８ｍｍｏｌ）を室温で添加し、４０℃で２時間攪拌させておいた。反応混合物は減圧下で濃縮し、次に、ジエチルエーテルで粉砕し超音波処理して、（３−フルオロ−４−メトキシ−ピリジン−２−イル）−メチルアミンジヒドロクロリド塩として同定される黄色味がかった固体（７５ｍｇ、５５％収率）を得た。
［ＭＨ］＋＝１５７
【０１０７】
＜１−（４−クロロメチル−ベンジル）−３−トリフルオロメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチルエステル＞
ポリマー担持トリフェニルホスフィン（３．０ｍｍｏｌ／ｇ、１．０ｇ）をＴＨＦ／ＤＣＭ（１対１、１００ｍＬ）に膨潤させた。窒素雰囲気下で、エチル３−トリフルオロメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸塩（１．０ｇ、４．８ｍｍｏｌ）及び４−（クロロメチル）ベンジルアルコール（９０３ｍｇ、５．８ｍｍｏｌ）、続いてＴＨＦ／ＤＣＭ（１対１、１０ｍＬ）中のジイソプロピルアゾジカルボキシレート（１．４６ｇ、７．２ｍｍｏｌ）の溶液を３０分の時間をかけて添加した。反応混合物は室温で１８時間攪拌し、混合物は濾過し樹脂はＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１５ｍＬ）の３サイクルで洗浄した。複合型濾液は真空中で蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー（シリカ）、溶出剤２０％のＥｔＯＡｃ、８０％のＰｅｔエーテルにより分離した２つの主要な生成物を同定し、無白色固体を得た。溶出した第２の生成物は、標記化合物（７９０ｍｇ、４７％）として同定した。
［ＭＨ］＋＝３４７．１
【０１０８】
＜１−［４−（２−オキソ−２Ｈ−ピリジン−１−イルメチル）−ベンジル］−３−トリフルオロメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチルエステル＞
１−（４−クロロメチル−ベンジル）−３−トリフルオロメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチルエステル（７９０ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）をアセトン（１５０ｍＬ）に溶解させた。２−ヒドロキシピリジン（２６０ｍｇ、２．７ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（９４５ｍｇ、６．８ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物は５０℃で３時間攪拌し、その時間の後、溶媒は真空中で取り除いた。残留物はＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）に吸収させ、水（１×３０ｍＬ）、塩水（１×３０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空中で蒸発させた。残留物は、フラッシュクロマトグラフィー（シリカ）、溶出剤３％のＭｅＯＨ、９７％のＣＨＣｌ３により精製し、標記化合物として同定される無色の油を得た（６７０ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）。
［Ｍ＋Ｈ］＋＝４０６．２
【０１０９】
＜１−［４−（２−オキソ−２Ｈ−ピリジン−１−イルメチル）−ベンジル］−３−トリフルオロメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸＞
１−［４−（２−オキソ−２Ｈ−ピリジン−１−イルメチル）−ベンジル］−３−トリフルオロメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチルエステル（６７０ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５０ｍＬ）及び水（５ｍＬ）に溶解し、水酸化リチウム（１９８ｍｇ、８．３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物は５０℃で１８時間攪拌し、その時間の後、溶媒は真空中で濃縮させ、残留物はＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）に吸収させた。水層は分離させ、１ＭのＨＣｌでｐＨ２まで酸性化し、ＣＨＣｌ３（３×５０ｍＬ）で抽出した。複合型有機抽出物は、水（１×３０ｍＬ）、塩水（１×３０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、真空中で蒸発させ、標記化合物として同定される白色固体を得た（５８０ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ、９３％）。
［Ｍ＋Ｈ］＋＝３７８．２
【０１１０】
＜Ｎ−［（３−フルオロ−４−メトキシピリジン−２−イル）メチル］−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）−３−（トリフルオロメチル）ピラゾール−４−カルボキサミド＞
１−［４−（２−オキソ−２Ｈ−ピリジン−１−イルメチル）−ベンジル］−３−トリフルオロメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸（１５０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（３０ｍＬ）に溶解させた。Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（１８１ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（７７ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）を室温で添加した。２０分後、（３−フルオロ−４−メトキシ−ピリジン−２−イル）メチルアミン（６８ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物は室温で１８時間攪拌した。反応混合物はＣＨＣｌ３（５０ｍＬ）で希釈し、この溶液は飽和ＮａＨＣＯ３（ａｑ）（１×３０ｍＬ）、水（１×３０ｍＬ）、塩水（１×３０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空中で蒸発させて黄色の油を得た。残留物は、フラッシュクロマトグラフィー（シリカ）、溶出剤３％のＭｅＯＨ、９７％のＣＨＣｌ３により精製し、真空中で減少させて、標記化合物のフォーム１として同定される白色固体を得た（１１６ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ、５７％）。
［Ｍ＋Ｈ］＋＝５１６．３
【０１１１】
１Ｈ  ＮＭＲ  （ｄ６−ＤＭＳＯ，  ４００ＭＨｚ）  δ  ３．９２  （３Ｈ，  ｓ），  ４．４９  （２Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ５．６，  ２．０Ｈｚ），  ５．０８  （２Ｈ，  ｓ），  ５．４０  （２Ｈ，  ｓ），  ６．２１−６．２４  （１Ｈ，  ｍ），  ６．４０  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ９．０Ｈｚ），  ７．１６−７．２５  （１Ｈ，  ｍ），  ７．２９  （４Ｈ，  ｓ），  ７．３９−７．４３  （１Ｈ，  ｍ），  ７．７６  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ６．８，  ２．０Ｈｚ），  ８．２１  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ５．５Ｈｚ），  ８．４４  （１Ｈ，  ｓ），  ８．７０  （１Ｈ，  ｔ，  Ｊ  ＝  ５．４Ｈｚ）  ｐｐｍ．
【０１１２】
フォーム１のＸＲＰＤディフラクトグラムは図１に示されている。
【０１１３】
ピーク位置表
【０１１４】
【表５】
2021504311.tif 000007
【０１１５】
＜同時熱分析（ＳＴＡ）＞
フォーム１についてのＳＴＡデータは図２に示されている。
【０１１６】
［実施例２］Ｎ−［（３−フルオロ−４−メトキシピリジン−２−イル）メチル］−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）−３−（トリフルオロメチル）ピラゾール−４−カルボキサミド塩酸塩のフォーム２
アセトニトリル（１００μＬ）中Ｎ−［（３−フルオロ−４−メトキシピリジン−２−イル）メチル］−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）−３−（トリフルオロメチル）ピラゾール−４−カルボキサミド（１０ｍｇ）の懸濁液に、５Ｍの塩酸（ａｑ）の１．１当量（４．３μＬ）を添加した。混合物はよく混合し環境温度と４０℃の間で１８〜２４時間温度サイクルにかけた。溶媒は、窒素下で蒸発させ、残留物は４０℃で２４時間、真空中で乾燥させ、Ｎ−［（３−フルオロ−４−メトキシピリジン−２−イル）メチル］−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）−３−（トリフルオロメチル）ピラゾール−４−カルボキサミド塩酸塩のフォーム２を得た。
【０１１７】
フォーム２のＸＲＰＤディフラクトグラムは図３に示されている。
【０１１８】
ピーク位置表
【０１１９】
【表６】
2021504311.tif 000008
2021504311.tif 000009
【０１２０】
［実施例３］Ｎ−［（３−フルオロ−４−メトキシピリジン−２−イル）メチル］−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）−３−（トリフルオロメチル）ピラゾール−４−カルボキサミド硫酸塩のフォーム３
アセトニトリル（１００μＬ）中Ｎ−［（３−フルオロ−４−メトキシピリジン−２−イル）メチル］−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）−３−（トリフルオロメチル）ピラゾール−４−カルボキサミド（７ｍｇ）の懸濁液に、５Ｍの硫酸（ａｑ）の１．１当量（４．３μＬ）を添加した。混合物はよく混合し環境温度と４０℃の間で１８〜２４時間温度サイクルにかけた。溶媒は、窒素下で蒸発させ、残留物は４０℃で２４時間、真空中で乾燥させ、Ｎ−［（３−フルオロ−４−メトキシピリジン−２−イル）メチル］−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）−３−（トリフルオロメチル）ピラゾール−４−カルボキサミド硫酸塩のフォーム３を得た。
【０１２１】
フォーム３のＸＲＰＤディフラクトグラムは図４に示されている。
【０１２２】
ピーク位置表
【０１２３】
【表７】
2021504311.tif 000010
【０１２４】
＜生物学的方法＞
血漿カリクレインを阻害する式Ａの化合物の能力は、以下の生物学的アッセイを使用して決定しうる。国際公開第２０１６／０８３８２０号の実施例４１である参照化合物（Ｎ−［（３−フルオロ−４−メトキシピリジン−２−イル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド）についてのデータも、比較目的で提供される。
【０１２５】
＜血漿カリクレインについてのＩＣ５０の決定＞
インビトロでの血漿カリクレイン阻害活性は、標準的な公表されている方法（例えば、Ｊｏｈａｎｓｅｎら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｔｉｓｓ．Ｒｅａｃ．１９８６年、８、１８５頁；Ｓｈｏｒｉら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１９９２年、４３、１２０９頁；Ｓｔｕｒｚｅｂｅｃｈｅｒら、Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｈｏｐｐｅ−Ｓｅｙｌｅｒ、１９９２年、３７３、１０２５頁参照）を使用して決定した。ヒト血漿カリクレイン（Ｐｒｏｔｏｇｅｎ）は、蛍光発生基質Ｈ−ＤＰｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＡＦＣ及び種々の濃度の試験化合物と一緒に２５℃でインキュベートした。残留酵素活性（反応の初速度）は、４１０ｎｍでの光学吸光度の変化を測定することにより決定し、試験化合物についてのＩＣ５０値を決定した。
【０１２６】
このアッセイから得られたデータは表１に示されている。
【０１２７】
化合物を、関連する酵素ＫＬＫ１に対する阻害活性を求めてさらにスクリーニングした。ＫＬＫ１を阻害する化合物の能力は以下の生物学的アッセイを使用して決定しうる。
【０１２８】
＜ＫＬＫ１についてのＩＣ５０の決定＞
インビトロでのＫＬＫ１阻害活性は、標準的な公表されている方法（例えば、Ｊｏｈａｎｓｅｎら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｔｉｓｓ．Ｒｅａｃ．１９８６年、８、１８５頁；Ｓｈｏｒｉら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１９９２年、４３、１２０９頁；Ｓｔｕｒｚｅｂｅｃｈｅｒら、Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｈｏｐｐｅ−Ｓｅｙｌｅｒ、１９９２年、３７３、１０２５頁参照）を使用して決定した。ヒトＫＬＫ１（Ｃａｌｌｂｉｏｃｈｅｍ）は、蛍光発生基質Ｈ−ＤＶａｌ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−ＡＦＣ及び種々の濃度の試験化合物と一緒に２５℃でインキュベートした。残留酵素活性（反応の初速度）は、４１０ｎｍでの光学吸光度の変化を測定することにより決定し、試験化合物についてのＩＣ５０値を決定した。
【０１２９】
このアッセイから得られたデータは表１に示されている。
【０１３０】
化合物を、関連する酵素ＦＸｌａに対する阻害活性も求めてスクリーニングした。ＦＸｌａを阻害する化合物の能力は以下の生物学的アッセイを使用して決定しうる。
【０１３１】
＜ＦＸｌａについての％阻害の決定＞
インビトロでのＦＸｌａ阻害活性は、標準的な公表されている方法（例えば、Ｊｏｈａｎｓｅｎら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｔｉｓｓ．Ｒｅａｃ．１９８６年、８、１８５頁；Ｓｈｏｒｉら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１９９２年、４３、１２０９頁；Ｓｔｕｒｚｅｂｅｃｈｅｒら、Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｈｏｐｐｅ−Ｓｅｙｌｅｒ、１９９２年、３７３、１０２５頁参照）を使用して決定した。ヒトＦＸｌａ（Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）は、蛍光発生基質Ｚ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＡＦＣ及び４０μＭの試験化合物（又は代わりにＩＣ５０を決定するために試験化合物の種々の濃度で）と一緒に２５℃でインキュベートした。残留酵素活性（反応の初速度）は、４１０ｎｍでの光学吸光度の変化を測定することにより決定し、試験化合物についてのＩＣ５０値を決定した。
【０１３２】
このアッセイから得られたデータは表１に示されている。
【０１３３】
化合物を、関連する酵素ＦＸｌｌａに対する阻害活性も求めてスクリーニングした。ＦＸｌｌａを阻害する化合物の能力は以下の生物学的アッセイを使用して決定しうる。
【０１３４】
＜ＦＸｌｌａについてのＩＣ５０の決定＞
インビトロでのファクターＸｌｌａ阻害活性は、標準的な公表されている方法（例えば、Ｓｈｏｒｉら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１９９２年、４３、１２０９頁；Ｂａｅｒｉｓｗｙｌら、ＡＣＳ  Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．、２０１５年、１０（８）１８６１頁；Ｂｏｕｃｋａｅｒｔら、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １１０（２０１６年）１８１頁参照）を使用して決定した。ヒトファクターＸｌｌａ（Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）は、蛍光発生基質Ｈ−ＤＰｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＡＦＣ及び種々の濃度の試験化合物と一緒に２５℃でインキュベートした。残留酵素活性（反応の初速度）は、４１０ｎｍでの光学吸光度の変化を測定することにより決定し、試験化合物についてのＩＣ５０値を決定した。
【０１３５】
このアッセイから得られたデータは表１に示されている。
【０１３６】
【表８】
2021504311.tif 000011
【０１３７】
＜酵素選択性の決定＞
ヒトセリンプロテアーゼ酵素であるプラスミン、トロンビン及びトリプシンは、適切な蛍光発生基質を使用して酵素活性についてアッセイした。プロテアーゼ活性は、５分間にわたり基質からの遊離した蛍光の蓄積をモニターすることにより測定した。１分あたりの蛍光増加の直線速度はパーセント（％）活性として表した。それぞれの基質の切断についてのｋｍは、ミカエリスメンテン式の標準変換により決定した。化合物阻害剤アッセイは基質ｋｍ濃度で実施し、活性は阻害されていない酵素活性（１００％）の５０％阻害（ＩＣ５０）を与える阻害剤の濃度として計算した。
【０１３８】
このアッセイから得られたデータは下の表２に示されている。
【０１３９】
【表９】
2021504311.tif 000012
【０１４０】
＜インビトロＡＤＭＥデータ＞
インビトロ浸透性は、経口吸収についてＣａｃｏ−２モデルを使用して決定した。方法は、標準的な公表されている方法（Ｗａｎｇ  Ｚ、Ｈｏｐ  Ｃ．Ｅ．、Ｌｅｕｎｇ  Ｋ．Ｈ．ａｎｄ  Ｐａｎｇ  Ｊ．（２０００年）Ｊ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍ  ３５（１）；７１〜７６頁）から適応させた。Ｃａｃｏ−２単層は、２００，０００細胞がそれぞれのインサートに播種され、浸透性アッセイにおいて利用される前の３日間にわたり維持される、Ｂｉｏｃｏａｔ（商標）ＨＴＳ線維性コラーゲン２４ウェルマルチウェルインサートシステム（１．０μｍ、ＰＥＴ膜、Ｃｏｒｎｉｎｇ３５４８０３）において確立させた。アッセイでは、５０μＭの試験化合物をインサートの頂端側に添加し、振盪台（１２０ｒｐｍ）上、３７℃で１時間インキュベートした。頂端側から基底側への輸送は、１時間のインキュベーションに続いてＬＣＭＳにより両区画において試験物を測定することにより判定した。Ｃａｃｏ−２単層の完全性は、２つの方法、（ｉ）実験前と後の経上皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）の比較、及び（ｉｉ）ルシファーイエロー流動の評価、により確かめた。結果は下の表３に示されている。
【０１４１】
【表１０】
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【０１４２】
＜薬物動態＞
表４の化合物の薬物動態研究は、オスのスプラーグドーリーラットでの単回経口投与に続く薬物動態を評価するために実施した。２匹のラットは、溶媒中の試験化合物の名目２ｍｇ／ｍＬ（１０ｍｇ／ｋｇ）組成物の５ｍＬ／ｋｇの単回経口投与を与えられた。投与に続いて、血液試料は２４時間の期間にわたって収集した。サンプル時間は５、１５及び３０分、次に１、２、４、６、８及び１２時間であった。収集に続いて、血液試料は遠心分離し、血漿分画はＬＣＭＳにより試験化合物の濃度について分析した。これらの研究から得られた経口曝露データは下の表４に示されている。
【０１４３】
【表１１】
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【図１】
2021504311.tif 000021
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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