(57)【要約】  本発明は、ヒトＭＩＣＡ／Ｂに特異的に結合する抗体およびその使用方法を提供する。ある態様において、本発明は、対象に抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を投与することを含む、対象における癌を処置する方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
重鎖可変領域(ＶＨ)および軽鎖可変領域(ＶＬ)を含む、ヒトＭＨＣクラスＩポリペプチド関連配列Ａ(ＭＩＣＡ)および／またはヒトＭＨＣクラスＩポリペプチド関連配列Ｂ(ＭＩＣＢ)に特異的に結合する抗体であって；ここで、ＶＨは、ＶＨ相補性決定領域(ＣＤＲ)１、ＶＨ−ＣＤＲ２およびＶＨ−ＣＤＲ３を含み、ＶＬは、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２およびＶＬ−ＣＤＲ３を含み；ここで、ＶＨ−ＣＤＲ３は、配列番号７、１７、２７、３７および４７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、抗体。
【請求項２】
ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号６、１６、２６、３６および４６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号５、１５、２５、３５および４５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項４】
ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号８、１８、２８、３８および４８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１〜３の何れかに記載の抗体。
【請求項５】
ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号９、１９、２９、３９および４９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１〜４の何れかに記載の抗体。
【請求項６】
ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１０、２０、３０、４０および５０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１〜５の何れかに記載の抗体。
【請求項７】
(ａ) ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号６に示すアミノ酸配列を含み、ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号７に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号８に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号９に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１０に示すアミノ酸配列を含む；
(ｂ) ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号１５に示すアミノ酸配列を含み、ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号１６に示すアミノ酸配列を含み、ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号１７に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号１８に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号１９に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号２０に示すアミノ酸配列を含む；
(ｃ) ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号２５に示すアミノ酸配列を含み、ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号２６に示すアミノ酸配列を含み、ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号２７に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号２８に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号２９に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号３０に示すアミノ酸配列を含む；
(ｄ) ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号３５に示すアミノ酸配列を含み、ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号３６に示すアミノ酸配列を含み、ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号３７に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号３８に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号３９に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号４０に示すアミノ酸配列を含む；または
(ｅ) ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号４５に示すアミノ酸配列を含み、ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号４６に示すアミノ酸配列を含み、ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号４７に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号４８に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号４９に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号５０に示すアミノ酸配列を含む、
請求項１〜６の何れかに記載の抗体。
【請求項８】
抗体が
(ａ) 抗体は腫瘍細胞によるＭＩＣＡのシェディングを阻止する；
(ｂ) 抗体が腫瘍細胞の膜結合ＭＩＣＡを増加させる；
(ｃ) 抗体が患者血清における可溶性ＭＩＣＡレベルを減少させる；
(ｄ) 抗体がＡＤＣＣおよび／またはＡＤＣＰ増強に介在する；
(ｅ) 抗体が細胞による抗原プロセシングおよび／または交差提示増強に介在する；
(ｆ) 抗体が腫瘍増殖および／または転移を阻止する；
(ｇ) 抗体が腫瘍体積を減少させる；
(ｈ) 抗体が無進行生存を延長させる；
(ｉ) 抗体が全生存を延長する；および
(ｊ) これらの何れかの組み合わせ
からなる群から選択される１個以上の性質を有する、請求項１〜７の何れかに記載の抗体。
【請求項９】
ＶＨが配列番号２、１２、２２、３２および４２からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性であるアミノ酸配列を含む、請求項１〜８の何れかに記載の抗体。
【請求項１０】
ＶＨが配列番号２、１２、２２、３２および４２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１〜９の何れかに記載の抗体。
【請求項１１】
ＶＬが配列番号４、１４、２４、３４および４４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性であるアミノ酸配列を含む、請求項１〜１０の何れかに記載の抗体。
【請求項１２】
ＶＬが配列番号４、１４、２４、３４および４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１〜１１の何れかに記載の抗体。
【請求項１３】
(ａ) ＶＨが配列番号２に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬが配列番号４に示すアミノ酸配列を含む；
(ｂ) ＶＨが配列番号１２に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬが配列番号１４に示すアミノ酸配列を含む；
(ｃ) ＶＨが配列番号２２に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬが配列番号２４に示すアミノ酸配列を含む；
(ｄ) ＶＨが配列番号３２に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬが配列番号３４に示すアミノ酸配列を含む；または
(ｅ) ＶＨが配列番号４２に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬが配列番号４４に示すアミノ酸配列を含む、
請求項１〜１２の何れかに記載の抗体。
【請求項１４】
(ａ) 抗体が配列番号５８に示すアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号６０に示すアミノ酸配列を含む軽鎖を含む；
(ｂ) 抗体が配列番号１３０に示すアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号６０に示すアミノ酸配列を含む軽鎖を含む；
(ｃ) 抗体が配列番号６２に示すアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号６４に示すアミノ酸配列を含む軽鎖を含む；
(ｄ) 抗体が配列番号６６に示すアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号６８に示すアミノ酸配列を含む軽鎖を含む；または
(ｅ) 抗体が配列番号７０に示すアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号７２に示すアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、
請求項１〜１３の何れかに記載の抗体。
【請求項１５】
抗体が、酵母表面ディスプレイにより決定して、配列番号５１に対応するＧ２５４、Ｄ２５５、Ｌ２５７、Ｙ２６４、Ｗ２６７およびこれらの何れかの組み合わせからなる群から選択されるヒトＭＩＣＡの１以上のアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する、請求項１〜１４の何れかに記載の抗体。
【請求項１６】
抗体が、酵母表面ディスプレイにより決定して、配列番号５１に対応するＧ２５４、Ｄ２５５、Ｌ２５７、Ｙ２６４およびＷ２６７を含むヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する、請求項１〜１５の何れかに記載の抗体。
【請求項１７】
抗体が水素／重水素交換マススペクトロメトリー(ＨＤＸ−ＭＳ)により決定して、配列番号５１に対応するアミノ酸残基Ｗ１５０〜Ｍ１６３を含むヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する、請求項１〜１６の何れかに記載の抗体。
【請求項１８】
抗体が水素／重水素交換マススペクトロメトリー(ＨＤＸ−ＭＳ)により決定して、配列番号５１に対応するアミノ酸残基Ｙ２３１〜Ｔ２３８を含むヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する、請求項１〜１７の何れかに記載の抗体。
【請求項１９】
抗体が水素／重水素交換マススペクトロメトリー(ＨＤＸ−ＭＳ)により決定して、配列番号５１に対応するアミノ酸残基Ｄ２５５〜Ｑ２６５を含むヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する、請求項１〜１８の何れかに記載の抗体。
【請求項２０】
エピトープが水素／重水素交換マススペクトロメトリー(ＨＤＸ−ＭＳ)により決定して、配列番号５１に対応するアミノ酸残基Ｗ２５３〜Ｗ２６７を含む、請求項１９に記載の抗体。
【請求項２１】
抗体が水素／重水素交換マススペクトロメトリー(ＨＤＸ−ＭＳ)により決定して、配列番号５１に対応するＬ２０１〜Ｎ２２０を含むヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する、請求項１〜１４の何れかに記載の抗体。
【請求項２２】
抗体が水素／重水素交換マススペクトロメトリー(ＨＤＸ−ＭＳ)により決定して、配列番号５１に対応するＴ２３８〜Ｑ２５２を含むヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する、請求項１〜１４および２１に記載の抗体。
【請求項２３】
抗体が水素／重水素交換マススペクトロメトリー(ＨＤＸ−ＭＳ)により決定して、配列番号５１に対応するＬ２０１〜Ｎ２２０およびＴ２３８〜Ｑ２５２を含むヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する、請求項１〜１４、２１および２２の何れかに記載の抗体。
【請求項２４】
抗体が、酵母表面ディスプレイにより決定して、配列番号５１に対応するＲ２４０、Ｑ２４１、Ｄ２４２、Ｖ２４４およびＲ２７９を含むヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する、請求項１〜１４の何れかに記載の抗体。
【請求項２５】
抗体が、酵母表面ディスプレイにより決定して、配列番号５１に対応するＰ２５８、Ｇ２６０、Ｇ２６２およびＹ２６４を含むヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する、請求項１〜１４の何れかに記載の抗体。
【請求項２６】
抗体が、Ｘ線共結晶構造解析により決定して、Ｔ２２２、Ｔ２２４、Ｒ２２６、Ｗ２３３、Ｎ２３４、Ｈ２４８、Ｄ２４９、Ｑ２５１、Ｑ２５２、Ｗ２５３、Ｇ２５４、Ｄ２５５、Ｖ２５６、Ｌ２５７、Ｐ２５８、Ｄ２５９、Ｇ２６０、Ｎ２６１、Ｙ２６４、Ｑ２６５、Ｗ２６７およびＡ２６９から選択される少なくとも１個の残基を含むヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する、請求項１〜１４の何れかに記載の抗体。
【請求項２７】
抗体が、Ｘ線共結晶構造解析により決定して、Ｔ２２２、Ｔ２２４、Ｒ２２６、Ｗ２３３、Ｎ２３４、Ｈ２４８、Ｄ２４９、Ｑ２５１、Ｑ２５２、Ｗ２５３、Ｇ２５４、Ｄ２５５、Ｖ２５６、Ｌ２５７、Ｐ２５８、Ｄ２５９、Ｇ２６０、Ｎ２６１、Ｙ２６４、Ｑ２６５、Ｗ２６７およびＡ２６９から選択される少なくとも２個の残基を含むヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する、請求項１〜１４の何れかに記載の抗体。
【請求項２８】
抗体が、Ｘ線共結晶構造解析により決定して、Ｔ２２２、Ｔ２２４、Ｒ２２６、Ｗ２３３、Ｎ２３４、Ｈ２４８、Ｄ２４９、Ｑ２５１、Ｑ２５２、Ｗ２５３、Ｇ２５４、Ｄ２５５、Ｖ２５６、Ｌ２５７、Ｐ２５８、Ｄ２５９、Ｇ２６０、Ｎ２６１、Ｙ２６４、Ｑ２６５、Ｗ２６７およびＡ２６９から選択される少なくとも３個の残基を含むヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する、請求項１〜１４の何れかに記載の抗体。
【請求項２９】
抗体が、Ｘ線共結晶構造解析により決定して、Ｔ２２２、Ｔ２２４、Ｒ２２６、Ｗ２３３、Ｎ２３４、Ｈ２４８、Ｄ２４９、Ｑ２５１、Ｑ２５２、Ｗ２５３、Ｇ２５４、Ｄ２５５、Ｖ２５６、Ｌ２５７、Ｐ２５８、Ｄ２５９、Ｇ２６０、Ｎ２６１、Ｙ２６４、Ｑ２６５、Ｗ２６７およびＡ２６９を含むヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する、請求項１〜１４の何れかに記載の抗体。
【請求項３０】
抗体がヒトＭＩＣＡに、約１×１０−４ＭＭ以下のＫＤで特異的に結合し、ここで、ＫＤは表面プラズモン共鳴(Biacore)分析により測定される、請求項１〜２９の何れかに記載の抗体。
【請求項３１】
抗体が約１×１０−４Ｍ  １／Ｍｓ以上のオン速度(ｋｏｎ)でヒトＭＩＣＡに特異的に結合し、ここで、ｋオン速度は表面プラズモン共鳴(Biacore)分析により測定される、請求項１〜３０の何れかに記載の抗体。
【請求項３２】
抗体が約１×１０−４Ｍ  １／ｓ以下のオフ速度(ｋｏｆｆ)でヒトＭＩＣＡに特異的に結合し、ここで、ｋｏｆｆは表面プラズモン共鳴(Biacore)分析により測定される、請求項１〜３１の何れかに記載の抗体。
【請求項３３】
抗体がＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはそのバリアントからなる群から選択される、請求項１〜３２の何れかに記載の抗体。
【請求項３４】
抗体がＩｇＧ１抗体である、請求項１〜３３の何れかに記載の抗体。
【請求項３５】
フコシル化されていない、請求項１〜３４の何れかに記載の抗体。
【請求項３６】
抗体が重鎖に定常領域を含み、ここで、定常領域が配列番号５８の残基２３４に対応する位置で、ＧからＡ変異を含む、請求項１〜３５の何れかに記載の抗体。
【請求項３７】
抗体がヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体である、請求項１〜３６の何れかに記載の抗体。
【請求項３８】
重鎖可変領域(ＶＨ)および軽鎖可変領域(ＶＬ)を含む、ヒトＭＨＣクラスＩポリペプチド関連配列Ａ(ＭＩＣＡ)および／またはヒトＭＨＣクラスＩポリペプチド関連配列Ｂ(ＭＩＣＢ)に特異的に結合する抗体であって；ここで、ＶＨがＶＨ相補性決定領域(ＣＤＲ)１、ＶＨ−ＣＤＲ２およびＶＨ−ＣＤＲ３を含み、ＶＬがＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２およびＶＬ−ＣＤＲ３を含み；
ＶＨ−ＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、
ＶＨ−ＣＤＲ２が配列番号６に示すアミノ酸配列を含み、
ＶＨ−ＣＤＲ３が配列番号７に示すアミノ酸配列を含み、
ＶＬ−ＣＤＲ１が配列番号８に示すアミノ酸配列を含み、
ＶＬ−ＣＤＲ２が配列番号９に示すアミノ酸配列を含み、そして
ＶＬ−ＣＤＲ３が配列番号１０に示すアミノ酸配列を含む；かつ
フコシル化されていない、抗体。
【請求項３９】
ＶＨが配列番号２に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬが配列番号４に示すアミノ酸配列を含む、請求項３８に記載の抗体。
【請求項４０】
抗体が重鎖に定常領域を含み、それが配列番号５８の残基２３４に対応する位置で、ＧからＡ変異を含む、請求項３９に記載の抗体。
【請求項４１】
抗体が配列番号５８に示すアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号６０に示すアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項３８〜４０の何れかに記載の抗体。
【請求項４２】
抗体が配列番号１３０に示すアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号６０に示すアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項３８または３９に記載の抗体。
【請求項４３】
抗体がフコシル化されていない、請求項４１または４２に記載の抗体。
【請求項４４】
抗体が低フコシル化である、請求項４１または４２に記載の抗体。
【請求項４５】
配列番号５８に示すアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号６０に示すアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、ヒトＭＨＣクラスＩポリペプチド関連配列Ａ(ＭＩＣＡ)および／またはヒトＭＨＣクラスＩポリペプチド関連配列Ｂ(ＭＩＣＢ)に特異的に結合する抗体であって、フコシル化されていない、抗体。
【請求項４６】
フコシルトランスフェラーゼ発現が減少または除去された細胞株により産生される、請求項４３〜４５の何れかに記載の抗体。
【請求項４７】
ＦＵＴ８遺伝子を欠くまたは機能的に破壊されたＦＵＴ８遺伝子(α−(１,６)フコシルトランスフェラーゼをコード)を欠く細胞株により産生される、請求項４３〜４５の抗体。
【請求項４８】
請求項１〜４７の何れかに記載の抗体をコードする、１個のポリヌクレオチドまたは複数ポリヌクレオチドのセット。
【請求項４９】
請求項４８に記載の１つのポリヌクレオチドまたは複数ポリヌクレオチドのセットを含む、１つのベクターまたは複数のベクターのセット。
【請求項５０】
請求項１〜４７の何れかに記載の抗体、請求項４８に記載の１つのポリヌクレオチドまたは複数ポリヌクレオチドのセットまたは請求項４９に記載の１つのベクターまたは複数のベクターのセットを含む、宿主細胞。
【請求項５１】
請求項１〜４７の何れかに記載の抗体および治療剤を含む、免疫複合体。
【請求項５２】
治療剤は細胞毒、非細胞毒性薬物、放射性薬剤、第二抗体、酵素、抗新生物剤およびこれらの何れかの組み合わせからなる群から選択される、請求項５１に記載の免疫複合体。
【請求項５３】
細胞毒がドラスタチン、モノメチルアウリスタチンＥ(ＭＭＡＥ)、マイタンシン、デュオカルマイシン、カリケアマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、デュオカルマイシン、センタナマイシン、ＳＮ３８、ドキソルビシン、その誘導体、その合成アナログおよびこれらの何れかの組み合わせからなる群から選択される、請求項５２に記載の免疫複合体。
【請求項５４】
細胞毒はサイトトキシンＡを含む、請求項５３に記載の免疫複合体。
【請求項５５】
請求項１〜４７の何れかに記載の抗体、請求項４８に記載の１つのポリヌクレオチドまたは複数ポリヌクレオチドのセット、請求項４９に記載の１つのベクターまたは複数のベクターのセットまたは請求項５１〜５４の何れかに記載の免疫複合体および薬学的に許容される添加物を含む、医薬組成物。
【請求項５６】
請求項１〜４７の何れかに記載の抗体および第二抗体を含む、医薬組成物。
【請求項５７】
第二抗体がＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＮＫＧ２ａ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ１３７、ＫＩＲ、ＴＧＦβ、ＩＬ−１０、ＩＬ−８、Ｂ７−Ｈ４、Ｆａｓリガンド、ＣＸＣＲ４、メソセリン、ＣＤ２７、ＧＩＴＲおよびこれらの何れかの組み合わせからなる群から選択されるタンパク質に特異的に結合する、請求項５６に記載の医薬組成物。
【請求項５８】
第二抗体が抗ＰＤ−１抗体を含む、請求項５６または５７に記載の医薬組成物。
【請求項５９】
第二抗体がニボルマブまたはペンブロリズマブを含む、請求項５６〜５８の何れかに記載の医薬組成物。
【請求項６０】
第二抗体が抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む、請求項５６または５７に記載の医薬組成物。
【請求項６１】
第二抗体が抗ＣＴＬＡ−４抗体を含む、請求項５６または５７に記載の医薬組成物。
【請求項６２】
抗ＣＴＬＡ−４抗体がトレメリムマブまたはイピリムマブを含む、請求項６１に記載の医薬組成物。
【請求項６３】
第二抗体が抗ＬＡＧ３抗体を含む、請求項５６または５７に記載の医薬組成物。
【請求項６４】
抗ＬＡＧ３抗体が２５Ｆ７を含む、請求項６３に記載の医薬組成物。
【請求項６５】
第二抗体が抗ＣＤ１３７抗体を含む、請求項５６または５７に記載の医薬組成物。
【請求項６６】
抗ＣＤ１３７抗体がウレルマブを含む、請求項６５に記載の医薬組成物。
【請求項６７】
第二抗体が抗ＫＩＲ抗体を含む、請求項５６または５７に記載の医薬組成物。
【請求項６８】
抗ＫＩＲ抗体がリリルマブを含む、請求項５７に記載の医薬組成物。
【請求項６９】
第二抗体が抗ＧＩＴＲ抗体を含む、請求項５６または５７に記載の医薬組成物。
【請求項７０】
抗ＧＩＴＲ抗体がＭＫ４１６６またはＴＲＸ５１８を含む、請求項６９に記載の医薬組成物。
【請求項７１】
静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、髄腔内、リンパ内、病巣内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、髄腔内、硬膜外、胸骨内、局所、上皮または粘膜投与のために製剤化される、請求項５５〜７０の何れかに記載の医薬組成物。
【請求項７２】
対象に請求項１〜４７の何れかに記載の抗体、請求項４８に記載の１つのポリヌクレオチドまたは複数ポリヌクレオチドのセット、請求項４９に記載の１つのベクターまたは複数のベクターのセット、請求項５０に記載の宿主細胞、請求項５１〜５４の何れかに記載の免疫複合体または請求項５５〜７１の何れかに記載の医薬組成物を投与することを含む、処置を必要とする対象における癌を処置する方法。
【請求項７３】
癌は腫瘍を含む、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
癌が小細胞肺癌(ＳＣＬＣ)、非小細胞肺癌(ＮＳＣＬＣ)、扁平ＮＳＣＬＣ、非扁平ＮＳＣＬＣ、神経膠腫、消化器癌、腎臓癌、明細胞癌、卵巣癌、肝臓癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎臓細胞癌(ＲＣＣ)、前立腺癌、ホルモン難治性前立腺腺癌、甲状腺癌、神経芽腫、膵臓癌、神経膠芽腫(多形神経膠芽腫)、子宮頸癌、胃癌、膀胱癌、肝細胞腫(肝細胞癌)、乳癌、結腸癌、頭頸部癌(または癌)、頭頸部扁平上皮細胞癌(ＨＮＳＣＣ)、胃癌、生殖細胞腫瘍、小児肉腫、副鼻腔ナチュラルキラー、黒色腫、転移悪性黒色腫、皮膚または眼球内悪性黒色腫、中皮腫、骨癌、皮膚癌、子宮癌、肛門部癌、精巣癌、卵管癌腫、子宮内膜癌腫、子宮頸部癌腫、膣癌腫、外陰部癌腫、食道癌、小腸癌、内分泌系癌、上皮小体腺癌、副腎癌、柔組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、小児固形腫瘍、尿管癌、腎盂癌腫、中枢神経系(ＣＮＳ)新生物、発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳癌、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮細胞癌、アスベストによって誘導されるものを含む環境誘導性癌、ウイルス関連癌またはウイルス起源の癌、ヒトパピローマウイルス(ＨＰＶ)関連もしくは起源の腫瘍およびこれら癌の組み合わせからなる群から選択される、請求項７２または７３に記載の方法。
【請求項７５】
癌が急性白血病(ＡＬＬ)、急性骨髄性白血病(ＡＭＬ)、慢性リンパ球性白血病(ＣＬＬ)および慢性骨髄性白血病(ＣＭＬ)、未分化ＡＭＬ、骨髄芽球性白血病、骨髄芽球性白血病、前骨髄球性白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病、赤白血病、巨核芽球性白血病、孤立顆粒球性肉腫、緑色腫、ホジキンリンパ腫(ＨＬ)、非ホジキンリンパ腫(ＮＨＬ)、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、単球様Ｂ細胞リンパ腫、粘膜関連リンパ系組織(ＭＡＬＴ)リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病、マントル細胞リンパ腫、血管免疫芽細胞性Ｔ細胞リンパ腫、血管中心性リンパ腫、腸管Ｔ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、前駆体Ｔリンパ芽球性リンパ腫、Ｔリンパ芽球性；末梢Ｔ細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、移植後リンパ増殖性障害、真性組織球性リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫(ＬＢＬ)、リンパ系造血性腫瘍、急性リンパ芽球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性組織球性リンパ腫(ＤＨＬ)、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、前駆体Ｂリンパ芽球性リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫(ＣＴＬＣ)、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症を伴うリンパ形質細胞性リンパ腫(ＬＰＬ)；骨髄腫、ＩｇＧ骨髄腫、軽鎖骨髄腫、非分泌性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫(低悪性度骨髄腫)、孤立性形質細胞腫、多発性骨髄腫、慢性リンパ球性白血病(ＣＬＬ)、ヘアリー細胞リンパ腫；およびこれら癌の何らかの組み合わせから選択される、請求項７２または７３に記載の方法。
【請求項７６】
癌が非小細胞肺癌(ＮＳＣＬＣ)、頭頸部扁平上皮細胞癌(ＨＮＳＣＣ)、黒色腫、膀胱癌、膵臓癌、胃癌、結腸癌、腎臓細胞癌(ＲＣＣ)、小細胞肺癌(ＳＣＬＣ)、中皮腫、肝細胞癌、前立腺癌、多発性骨髄腫およびこれら癌の組み合わせから選択される、請求項７２〜７５の何れかに記載の方法。
【請求項７７】
癌が非小細胞肺癌(ＮＳＣＬＣ)、頭頸部扁平上皮細胞癌(ＨＮＳＣＣ)、黒色腫、膀胱癌、膵臓癌、胃癌、結腸癌およびこれら癌の組み合わせから選択される、請求項７２〜７６の何れかに記載の方法。
【請求項７８】
対象に請求項１〜４７の何れかに記載の抗体、請求項４８に記載の１つのポリヌクレオチドまたは複数ポリヌクレオチドのセット、請求項４９に記載の１つのベクターまたは複数のベクターのセット、請求項５０に記載の宿主細胞、請求項５１〜５４の何れかに記載の免疫複合体または請求項５５〜７１の何れかに記載の医薬組成物を投与することを含む、処置を必要とする対象における腫瘍細胞によるＭＩＣＡのシェディングを阻害する方法。
【請求項７９】
対象に請求項１〜４７の何れかに記載の抗体、請求項４８に記載の１つのポリヌクレオチドまたは複数ポリヌクレオチドのセット、請求項４９に記載の１つのベクターまたは複数のベクターのセット、請求項５０に記載の宿主細胞、請求項５１〜５４の何れかに記載の免疫複合体または請求項５５〜７１の何れかに記載の医薬組成物を投与することを含む、処置を必要とする対象における血清における脱落ＭＩＣＡの減少および／または腫瘍細胞表面のＭＩＣＡを保持する方法。
【請求項８０】
請求項１〜４７の何れかに記載の抗体、請求項４８に記載の１つのポリヌクレオチドまたは複数ポリヌクレオチドのセット、請求項４９に記載の１つのベクターまたは複数のベクターのセット、請求項５０に記載の宿主細胞、請求項５１〜５４の何れかに記載の免疫複合体または請求項５５〜７１の何れかに記載の医薬組成物を投与することを含む、対象における腫瘍細胞を殺滅する方法。
【請求項８１】
対象が非小細胞肺癌(ＮＳＣＬＣ)、頭頸部扁平上皮細胞癌(ＨＮＳＣＣ)、黒色腫、膀胱癌、膵臓癌、胃癌、結腸癌、腎臓細胞癌(ＲＣＣ)、小細胞肺癌(ＳＣＬＣ)、中皮腫、肝細胞癌、前立腺癌、多発性骨髄腫から選択される癌およびこれら癌の組み合わせを有する、請求項７８〜８０の何れかに記載の方法。
【請求項８２】
抗体、１つのポリヌクレオチドまたは複数ポリヌクレオチドのセット、１つのベクターまたは複数のベクターのセット、宿主細胞、免疫複合体または医薬組成物が静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、髄腔内、リンパ内、病巣内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、髄腔内、硬膜外、胸骨内、局所、上皮、粘膜に投与される、請求項６７〜７２の何れかに記載の方法。
【請求項８３】
対象がヒトである、請求項７２〜８２の何れかに記載の方法。
【請求項８４】
対象に第二治療を投与することをさらに含む、請求項７２〜８３の何れかに記載の方法。
【請求項８５】
第二治療が誘導性Ｔ細胞共刺激分子(ＩＣＯＳ)、ＣＤ１３７(４−１ＢＢ)、ＣＤ１３４(ＯＸ４０)、ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ２７、ＣＤ９６、グルココルチコイド誘発ＴＮＦＲ関連タンパク質(ＧＩＴＲ)およびヘルペスウイルス侵入メディエータ(ＨＶＥＭ)、プログラム死−１(ＰＤ−１)、プログラム死リガンド−１(ＰＤ−Ｌ１)、ＣＴＬＡ−４、ＢおよびＴリンパ球アテニュエータ(ＢＴＬＡ)、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン−３(ＴＩＭ−３)、リンパ球活性化遺伝子−３(ＬＡＧ−３)、アデノシンＡ２ａ受容体(Ａ２ａＲ)、キラー細胞レクチン様受容体Ｇ１(ＫＬＲＧ−１)、ナチュラルキラー細胞受容体２Ｂ４(ＣＤ２４４)、ＣＤ１６０、ＩｇおよびＩＴＩＭドメインを伴うＴ細胞免疫受容体(ＴＩＧＩＴ)およびＴ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサの受容体(ＶＩＳＴＡ)、ＫＩＲ、ＴＧＦβ、ＩＬ−１０、ＩＬ−８、Ｂ７−Ｈ４、Ｆａｓリガンド、ＣＸＣＲ４、メソセリン、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＤ５２、ＨＥＲ２およびこれらの何れかの組み合わせから選択されるタンパク質に特異的に結合する、有効量の抗体を含む、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
第二治療剤が抗ＰＤ−１抗体を含む、請求項８４または８５に記載の方法。
【請求項８７】
第二治療剤がニボルマブまたはペンブロリズマブを含む、請求項８４または８５に記載の方法。
【請求項８８】
第二治療剤が抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む、請求項８４または８５に記載の方法。
【請求項８９】
第二治療剤がアテゾリズマブ、デュルバルマブおよびアベルマブから選択される抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む、請求項８４または８５に記載の方法。
【請求項９０】
第二治療剤が抗ＣＴＬＡ−４抗体を含む、請求項８４または８５に記載の方法。
【請求項９１】
第二治療剤がトレメリムマブまたはイピリムマブを含む、請求項８４または８５に記載の方法。
【請求項９２】
第二治療剤が抗ＬＡＧ３抗体を含む、請求項８４または８５に記載の方法。
【請求項９３】
抗ＬＡＧ３抗体が２５Ｆ７を含む、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
第二治療剤が抗ＣＤ１３７抗体を含む、請求項８４または８５に記載の方法。
【請求項９５】
抗ＣＤ１３７抗体がウレルマブを含む、請求項８４または８５に記載の方法。
【請求項９６】
第二治療剤が抗ＫＩＲ抗体を含む、請求項８４または８５に記載の方法。
【請求項９７】
抗ＫＩＲ抗体がリリルマブを含む、請求項８４または８５に記載の方法。
【請求項９８】
第二治療剤が抗ＧＩＴＲ抗体を含む、請求項８４または８５に記載の方法。
【請求項９９】
抗ＧＩＴＲ抗体がＭＫ４１６６またはＴＲＸ５１８を含む、請求項９８に記載の方法。
【請求項１００】
第二治療が癌に対する化学療法剤、放射線、自然免疫細胞を活性化する薬剤および／またはＮＫおよび／またはＣＤ８＋  Ｔ細胞生存を増強する薬剤を含む、請求項８４に記載の方法。
【請求項１０１】
第二治療が腫瘍細胞でＭＩＣＡ／Ｂ発現を誘発する化学療法剤を含む、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
第二治療がプロテアソーム阻害剤、ＩＭｉＤｓおよびＢｅｔ阻害剤から選択される化学療法剤を含む、請求項１００または１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
プロテアソーム阻害剤がボルテゾミブである、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
第二治療がペグ化ＩＬ−１０およびＩＬ−１０−Ｆｃ融合を含む、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０５】
第二治療がペグ化ＩＬ−２から選択されるＮＫおよび／またはＣＤ８＋  Ｔ細胞生存を増強する薬剤を含む、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０６】
第二治療がドキソルビシン(アドリアマイシン(登録商標))、シスプラチン、カルボプラチン、硫酸ブレオマイシン、カルムスチン、クロラムブシル(LEUKERAN(登録商標))、シクロホスファミド(シトキサン(登録商標)；NEOSAR(登録商標))、レナリドマイド(レブラミド(登録商標))、ボルテゾミブ(ベルケイド(登録商標))、デキサメサゾン、ミトキサントロン、エトポシド、シタラビン、ベンダムスチン(TREANDA(登録商標))、リツキシマブ(リツキサン(登録商標))、イホスファミド、ビンクリスチン(オンコビン(登録商標))、フルダラビン(フルダラ(登録商標))、サリドマイド(サロミド(登録商標))、アレムツズマブ(キャンパス(登録商標)、オファツムマブ(アーゼラ(登録商標))、エベロリムス(アフィニトール(登録商標)、ZORTRESS(登録商標))およびカルフィルゾミブ(カイプロリスTM)を含むから選択される薬剤である、請求項８４に記載の方法。
【請求項１０７】
第二治療がＩＤＯアンタゴニストを含む、請求項８４に記載の方法。
【請求項１０８】
請求項４８に記載の１つのポリヌクレオチドまたは複数ポリヌクレオチドのセットまたは請求項４９に記載の１つのベクターまたは複数のベクターのセットを、適当な条件下に宿主細胞で発現させることを含む、抗体を製造する方法。
【請求項１０９】
抗体の採取をさらに含む、請求項１０８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
ＥＦＳ−ＷＥＢにより電子的に提供した配列表についての説明
本出願と共に電子的に提出した、ＡＳＣＩＩテキストファイル(名称：3338_101PC02_Seqlisting_ST25.txt；サイズ：１５４,６６０バイト；および作成日：２０１９年３月１８日)における配列表の内容を、その全体として引用により本明細書に包含させる。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
主要組織適合抗原クラスＩ鎖関連ＡおよびＢ(ＭＩＣＡ／Ｂ)は、ＭＨＣクラスＩ糖タンパク質に関連する高度に多型の細胞表面タンパク質である。それらは、３つの細胞外ドメイン(α１、α２およびα３)、膜貫通領域および細胞質テイルを含み、ＮＫ細胞、γδ  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  αβ  Ｔ細胞およびＮＫＴ細胞に発現される、活性化受容体、ＮＫＧ２Ｄを刺激するためのリガンドとして働く。通常、ＭＩＣＡ／Ｂは、上皮細胞、内皮細胞、線維芽細胞および骨髄細胞において低レベルで構成的に発現される。しかしながら、発癌、感染、ＤＮＡ損傷応答など間のストレス状態および自己免疫状態において、上方制御されるかまたはデノボで発現される。すなわち、ＭＩＣＡ／Ｂ発現は、細胞ストレスのシグナルとして働き、ＭＩＣＡ／ＢによるＮＫＧ２Ｄの結合はＮＫ細胞を誘発し、Ｔ細胞を共刺激し、細胞毒性およびサイトカイン産生などの免疫エフェクター機能をもたらす。Bauer, Science 1999; 285: 727-9. Diefenbach et al., Nat Immunol.  2000; 1:119-26.  Groh et al. , Nat Immunol. 2001; 2:255-60。しかしながら、腫瘍細胞は、ＭＩＣＡ／Ｂを細胞表面から開裂することにより、ＮＫＧ２Ｄが介在する応答を阻止する機序を有し、ＭＩＣＡ／Ｂ表面密度減少および可溶性ＭＩＣＡ／Ｂ(ｓＭＩＣＡ／Ｂ)産生の両者をもたらし、これは、細胞毒性エフェクター細胞におけるＮＫＧ２Ｄを下方制御する。Groh et al. , Nature 2002; 419:734-8. Salih, J. Immunol. 2002; 169:4098-4102。腫瘍細胞で、ＭＩＣＡ／Ｂのα３ドメインはジスルフィドイソメラーゼ／シャペロン、小胞体タンパク質５(ＥＲｐ５)と相互作用し、立体構造変化を誘発して、ジスインテグリンおよびメタロプロテイナーゼ、ＡＤＡＭ１０およびＡＤＡＭ１７を含むプロテアーゼによるＭＩＣＡ／Ｂの開裂を可能とする。Kaiser, Nature 2007; 447:482-6。
【０００３】
現在、ＭＩＣＡの７９タンパク質バリアントをコードする約１００アレルおよびＭＩＣＢの２６タンパク質バリアントをコードする４０アレルが同定されている(European Bioinformatics Institute (EMBL-EBI) Immuno Polymorphism Database: https://www.ebi.ac.uk/ipd/imgt/hla/stats.html(２０１７年１２月８日アクセス))。ＭＩＣＡ／Ｂの発現は、広範な腫瘍タイプで報告されており、高発現は予後不良と関連する。Spear, Cancer Immunity 2013; 13.  Ghadially et al., Br. J. Cancer 2017; 116:1208-17。高濃度のｓＭＩＣＡへの長期暴露がＣＤ８  Ｔ細胞およびＮＫ細胞でＮＫＧ２Ｄ活性を減少させることが示されているため、ｓＭＩＣＡ／Ｂの産生は、腫瘍免疫回避の機構として考えられている。Groh et al., Nat. Immunol. 2001; 2:255-60. Salih, J. Immunol. 2002; 169:4098-4102。ｓＭＩＣＡ／Ｂタンパク質は、黒色腫、肺、結腸、卵巣、乳房、前立腺および骨髄腫を含む、多くのヒト腫瘍タイプで同定されている。Zhang et al., Sci. Adv. 2017; 3:e1602133。ｓＭＩＣＡレベルは、抗ＣＴＬＡ−４抗体、イピリムマブで処置した転移黒色腫の患者の悪い生存率と相関する。Koguchi, Cancer Res. 2015; 75:5084-92。さらに、イピリムマブに応答した黒色腫患者は、治療誘発抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を産生することが示され；これら患者の一部は、ｓＭＩＣＡレベル減少を経験し、抗腫瘍活性の臨床的証拠を示した。Zhang et al., Sci. Adv. 2017; 3:e1602133. Jinushi, PNAS. 2006; 103:9190-9195。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
ウイルスおよび腫瘍がＮＫＧ２Ｄによる検出を回避する工夫された機構を有する程度は、ＮＫ細胞およびＴ細胞のＮＫＧ２Ｄ依存性活性化を回復または増強する治療戦略が有益であり得ることを示す。それ故に、生産的にＮＫＧ２Ｄと結合でき、患者における抗腫瘍活性を増強するように、ＭＩＣＡ／ＢのＥＲｐ５結合部位に近位領域に結合するおよび／または細胞表面にＭＩＣＡ／Ｂを保持する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を産生し、選択する必要がある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
発明の概要
本発明の一つの態様は、重鎖可変領域(ＶＨ)および軽鎖可変領域(ＶＬ)を含む、ヒトＭＨＣクラスＩポリペプチド関連配列Ａ(ＭＩＣＡ)および／またはヒトＭＨＣクラスＩポリペプチド関連配列Ｂ(ＭＩＣＢ)に特異的に結合する抗体に関し；ここで、ＶＨは、ＶＨ相補性決定領域(ＣＤＲ)１、ＶＨ−ＣＤＲ２およびＶＨ−ＣＤＲ３を含み、ＶＬは、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２およびＶＬ−ＣＤＲ３を含み；ここで、ＶＨ−ＣＤＲ３は、配列番号７、１７、２７、３７および４７からなる群から選択される、アミノ酸配列を含む。ある実施態様において、ＶＨ−ＣＤＲ２は、配列番号６、１６、２６、３６および４６からなる群から選択される、アミノ酸配列を含む。ある実施態様において、ＶＨ−ＣＤＲ１は、配列番号５、１５、２５、３５および４５からなる群から選択される、アミノ酸配列を含む。ある実施態様において、ＶＬ−ＣＤＲ１は、配列番号８、１８、２８、３８および４８からなる群から選択される、アミノ酸配列を含む。ある実施態様において、ＶＬ−ＣＤＲ２は、配列番号９、１９、２９、３９および４９からなる群から選択される、アミノ酸配列を含む。ある実施態様において、ＶＬ−ＣＤＲ３は、配列番号１０、２０、３０、４０および５０からなる群から選択される、アミノ酸配列を含む。
【０００６】
ある実施態様において、(ａ)ＶＨ−ＣＤＲ１は、配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、ＶＨ−ＣＤＲ２は、配列番号６に示すアミノ酸配列を含み、ＶＨ−ＣＤＲ３は、配列番号７に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬ−ＣＤＲ１は、配列番号８に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬ−ＣＤＲ２は、配列番号９に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬ−ＣＤＲ３は、配列番号１０に示すアミノ酸配列を含む；(ｂ)ＶＨ−ＣＤＲ１は、配列番号１５に示すアミノ酸配列を含み、ＶＨ−ＣＤＲ２は、配列番号１６に示すアミノ酸配列を含み、ＶＨ−ＣＤＲ３は、配列番号１７に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬ−ＣＤＲ１は、配列番号１８に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬ−ＣＤＲ２は、配列番号１９に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬ−ＣＤＲ３は、配列番号２０に示すアミノ酸配列を含む；(ｃ)ＶＨ−ＣＤＲ１は、配列番号２５に示すアミノ酸配列を含み、ＶＨ−ＣＤＲ２は、配列番号２６に示すアミノ酸配列を含み、ＶＨ−ＣＤＲ３は、配列番号２７に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬ−ＣＤＲ１は、配列番号２８に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬ−ＣＤＲ２は、配列番号２９に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬ−ＣＤＲ３は、配列番号３０に示すアミノ酸配列を含む；(ｄ)ＶＨ−ＣＤＲ１は、配列番号３５に示すアミノ酸配列を含み、ＶＨ−ＣＤＲ２は、配列番号３６に示すアミノ酸配列を含み、ＶＨ−ＣＤＲ３は、配列番号３７に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬ−ＣＤＲ１は、配列番号３８に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬ−ＣＤＲ２は、配列番号３９に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬ−ＣＤＲ３は、配列番号４０に示すアミノ酸配列を含む；または(ｅ)ＶＨ−ＣＤＲ１は、配列番号４５に示すアミノ酸配列を含み、ＶＨ−ＣＤＲ２は、配列番号４６に示すアミノ酸配列を含み、ＶＨ−ＣＤＲ３は、配列番号４７に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬ−ＣＤＲ１は、配列番号４８に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬ−ＣＤＲ２は、配列番号４９に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬ−ＣＤＲ３は、配列番号５０に示すアミノ酸配列を含む。
【０００７】
ある実施態様において、抗体は、(ａ)抗体は腫瘍細胞によるＭＩＣＡのシェディングを阻止する；(ｂ)抗体は腫瘍細胞の膜結合ＭＩＣＡを増加させる；(ｃ)抗体は患者血清における可溶性ＭＩＣＡレベルを減少させる；(ｄ)抗体はＡＤＣＣおよび／またはＡＤＣＰ増強に介在する；(ｅ)抗体は細胞による抗原プロセシングおよび／または交差提示増強に介在する；(ｆ)抗体は腫瘍増殖および／または転移を阻止する；(ｇ)抗体は腫瘍体積を減少させる；(ｈ)抗体は無進行生存を延長させる；(ｉ)抗体は全生存を増加させる；および(ｊ)これらの何れかの組み合わせからなる群から選択される１以上の性質を有する。
【０００８】
ある実施態様において、ＶＨは、配列番号２、１２、２２、３２および４２からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性であるアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、ＶＨは、配列番号２、１２、２２、３２および４２からなる群から選択される、アミノ酸配列を含む。
【０００９】
ある実施態様において、ＶＬは、配列番号４、１４、２４、３４および４４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性であるアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、ＶＬは、配列番号４、１４、２４、３４および４４からなる群から選択される、アミノ酸配列を含む。
【００１０】
ある実施態様において、(ａ)ＶＨは配列番号２に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬは配列番号４に示すアミノ酸配列を含む；(ｂ)ＶＨは配列番号１２に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬは配列番号１４に示すアミノ酸配列を含む；(ｃ)ＶＨは配列番号２２に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬは配列番号２４に示すアミノ酸配列を含む；(ｄ)ＶＨは配列番号３２に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬは配列番号３４に示すアミノ酸配列を含む；または(ｅ)ＶＨは配列番号４２に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬは配列番号４４に示すアミノ酸配列を含む。
【００１１】
ある実施態様において、(ａ)抗体は、配列番号５８に示すアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号６０に示すアミノ酸配列を含む軽鎖を含む；(ｂ)抗体は、配列番号１３０に示すアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号６０に示すアミノ酸配列を含む軽鎖を含む；(ｃ)抗体は、配列番号６２に示すアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号６４に示すアミノ酸配列を含む軽鎖を含む；(ｄ)抗体は、配列番号６６に示すアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号６８に示すアミノ酸配列を含む軽鎖を含む；または(ｅ)抗体は、配列番号７０に示すアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号７２に示すアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００１２】
ある実施態様において、抗体は、酵母表面ディスプレイにより決定して、配列番号５１に対応するＧ２５４、Ｄ２５５、Ｌ２５７、Ｙ２６４、Ｗ２６７およびこれらの何れかの組み合わせからなる群から選択されるヒトＭＩＣＡの１以上のアミノ酸残基を含む、ヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗体は、酵母表面ディスプレイにより決定して、配列番号５１に対応するＧ２５４、Ｄ２５５、Ｌ２５７、Ｙ２６４およびＷ２６７を含むヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗体は、水素／重水素交換マススペクトロメトリー(ＨＤＸ−ＭＳ)により決定して、配列番号５１に対応するアミノ酸残基Ｗ１５０〜Ｍ１６３を含むヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗体は、水素／重水素交換マススペクトロメトリー(ＨＤＸ−ＭＳ)により決定して、配列番号５１に対応するアミノ酸残基Ｙ２３１〜Ｔ２３８を含むヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗体は、水素／重水素交換マススペクトロメトリー(ＨＤＸ−ＭＳ)により決定して、配列番号５１に対応するアミノ酸残基Ｄ２５５〜Ｑ２６５を含むヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、エピトープは、水素／重水素交換マススペクトロメトリー(ＨＤＸ−ＭＳ)により決定して、配列番号５１に対応するアミノ酸残基Ｗ２５３〜Ｗ２６７を含む。ある実施態様において、抗体は、水素／重水素交換マススペクトロメトリー(ＨＤＸ−ＭＳ)により決定して、配列番号５１に対応するＬ２０１〜Ｎ２２０を含むヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗体は、水素／重水素交換マススペクトロメトリー(ＨＤＸ−ＭＳ)により決定して、配列番号５１に対応するＴ２３８〜Ｑ２５２を含むヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗体は、水素／重水素交換マススペクトロメトリー(ＨＤＸ−ＭＳ)により決定して、配列番号５１に対応するＬ２０１〜Ｎ２２０およびＴ２３８〜Ｑ２５２を含むヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗体は、酵母表面ディスプレイにより決定して、配列番号５１に対応するＲ２４０、Ｑ２４１、Ｄ２４２、Ｖ２４４およびＲ２７９を含むヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗体は、酵母表面ディスプレイにより決定して、配列番号５１に対応するＰ２５８、Ｇ２６０、Ｇ２６２およびＹ２６４を含むヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗体は、Ｘ線共結晶構造解析により決定して、Ｔ２２２、Ｔ２２４、Ｒ２２６、Ｗ２３３、Ｎ２３４、Ｈ２４８、Ｄ２４９、Ｑ２５１、Ｑ２５２、Ｗ２５３、Ｇ２５４、Ｄ２５５、Ｖ２５６、Ｌ２５７、Ｐ２５８、Ｄ２５９、Ｇ２６０、Ｎ２６１、Ｙ２６４、Ｑ２６５、Ｗ２６７およびＡ２６９から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９または少なくとも１０残基を含む、ヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗体は、Ｘ線共結晶構造解析により決定して、Ｔ２２２、Ｔ２２４、Ｒ２２６、Ｗ２３３、Ｎ２３４、Ｈ２４８、Ｄ２４９���Ｑ２５１、Ｑ２５２、Ｗ２５３、Ｇ２５４、Ｄ２５５、Ｖ２５６、Ｌ２５７、Ｐ２５８、Ｄ２５９、Ｇ２６０、Ｎ２６１、Ｙ２６４、Ｑ２６５、Ｗ２６７およびＡ２６９から選択される少なくとも２つの残基を含む、ヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗体は、Ｘ線共結晶構造解析により決定して、Ｔ２２２、Ｔ２２４、Ｒ２２６、Ｗ２３３、Ｎ２３４、Ｈ２４８、Ｄ２４９、Ｑ２５１、Ｑ２５２、Ｗ２５３、Ｇ２５４、Ｄ２５５、Ｖ２５６、Ｌ２５７、Ｐ２５８、Ｄ２５９、Ｇ２６０、Ｎ２６１、Ｙ２６４、Ｑ２６５、Ｗ２６７およびＡ２６９から選択される少なくとも４つの残基を含む、ヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗体は、Ｘ線共結晶構造解析により決定して、Ｔ２２２、Ｔ２２４、Ｒ２２６、Ｗ２３３、Ｎ２３４、Ｈ２４８、Ｄ２４９、Ｑ２５１、Ｑ２５２、Ｗ２５３、Ｇ２５４、Ｄ２５５、Ｖ２５６、Ｌ２５７、Ｐ２５８、Ｄ２５９、Ｇ２６０、Ｎ２６１、Ｙ２６４、Ｑ２６５、Ｗ２６７およびＡ２６９から選択される少なくとも６つの残基を含む、ヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗体は、Ｘ線共結晶構造解析により決定して、Ｔ２２２、Ｔ２２４、Ｒ２２６、Ｗ２３３、Ｎ２３４、Ｈ２４８、Ｄ２４９、Ｑ２５１、Ｑ２５２、Ｗ２５３、Ｇ２５４、Ｄ２５５、Ｖ２５６、Ｌ２５７、Ｐ２５８、Ｄ２５９、Ｇ２６０、Ｎ２６１、Ｙ２６４、Ｑ２６５、Ｗ２６７およびＡ２６９を含む、ヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。
【００１３】
ある実施態様において、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはそのバリアントからなる群から選択される。ある実施態様において、抗体はフコシル化されていない。ある実施態様において、抗体は重鎖に定常領域を含み、ここで、定常領域は、配列番号５８の残基２３４に対応する位置で、ＧからＡ変異を含む。
【００１４】
本発明の他の態様は、重鎖可変領域(ＶＨ)および軽鎖可変領域(ＶＬ)を含む、ヒトＭＨＣクラスＩポリペプチド関連配列Ａ(ＭＩＣＡ)および／またはヒトＭＨＣクラスＩポリペプチド関連配列Ｂ(ＭＩＣＢ)に特異的に結合する抗体に関し；ここで、ＶＨは、ＶＨ相補性決定領域(ＣＤＲ)１、ＶＨ−ＣＤＲ２およびＶＨ−ＣＤＲ３を含み、ＶＬは、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２およびＶＬ−ＣＤＲ３を含み；ここで、ＶＨ−ＣＤＲ１は、配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、ＶＨ−ＣＤＲ２は、配列番号６に示すアミノ酸配列を含み、ＶＨ−ＣＤＲ３は、配列番号７に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬ−ＣＤＲ１は、配列番号８に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬ−ＣＤＲ２は、配列番号９に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬ−ＣＤＲ３は、配列番号１０に示すアミノ酸配列を含む；そして抗体はフコシル化されていない。ある実施態様において、ＶＨは配列番号２に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬは配列番号４に示すアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、抗体は重鎖に定常領域を含み、それは、配列番号５８の残基２３４に対応する位置で、ＧからＡ変異を含む。ある実施態様において、抗体は、配列番号５８に示すアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号６０に示すアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある実施態様において、抗体は、配列番号１３０に示すアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号６０に示すアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある実施態様において、抗体はフコシル化されていない。ある実施態様において、抗体は低フコシル化である。
【００１５】
本発明のある態様は、配列番号５８に示すアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号６０に示すアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、ヒトＭＨＣクラスＩポリペプチド関連配列Ａ(ＭＩＣＡ)および／またはヒトＭＨＣクラスＩポリペプチド関連配列Ｂ(ＭＩＣＢ)に特異的に結合する抗体であって、フコシル化されていないものに関する。
【００１６】
ある実施態様において、抗体は、フコシルトランスフェラーゼ発現が減少または除去された細胞株により産生される。
【００１７】
本発明のある態様は、ここに記載する抗体をコードする１つのポリヌクレオチドまたは複数ポリヌクレオチドのセットに関する。本発明の他の態様は、１つのポリヌクレオチドまたは複数ポリヌクレオチドのセットを含む、１つのベクターまたは複数のベクターのセットに関する。本発明の他の態様は、抗体、１つのポリヌクレオチドまたは複数ポリヌクレオチドのセットまたはベクターを含む宿主細胞に関する。
【００１８】
本発明のある態様は、抗体および治療剤を含む免疫複合体に関する。ある実施態様において、治療剤は細胞毒、非細胞毒性薬物、放射性薬剤、第二抗体、酵素、抗新生物剤およびこれらの何れかの組み合わせからなる群から選択される。ある実施態様において、細胞毒は、ドラスタチン、モノメチルアウリスタチンＥ(ＭＭＡＥ)、マイタンシン、デュオカルマイシン、カリケアマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、デュオカルマイシン、センタナマイシン、ＳＮ３８、ドキソルビシン、その誘導体、その合成アナログおよびこれらの何れかの組み合わせからなる群から選択される。ある実施態様において、細胞毒はサイトトキシンＡを含む。
【００１９】
本発明のある態様は、抗体、１つのポリヌクレオチドまたは複数ポリヌクレオチドのセット、１つのベクターまたは複数のベクターのセットまたは免疫複合体および薬学的に許容される添加物を含む医薬組成物に関する。ある実施態様において、医薬組成物は第二抗体を含む。ある実施態様において、第二抗体は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＮＫＧ２ａ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ１３７、ＫＩＲ、ＴＧＦβ、ＩＬ−１０、ＩＬ−８、ＩＬ−２、ＣＤ９６、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７−Ｈ４、Ｆａｓリガンド、ＣＸＣＲ４、メソセリン、ＣＤ２７、ＧＩＴＲおよびこれらの何れかの組み合わせからなる群から選択されるタンパク質に特異的に結合する。
【００２０】
本発明のある態様は、対象に、抗体、１つのポリヌクレオチドまたは複数ポリヌクレオチドのセット、１つのベクターまたは複数のベクターのセット、宿主細胞、免疫複合体または医薬組成物を投与することを含む、処置を必要とする対象における癌を処置する方法に関する。ある実施態様において、癌は腫瘍を含む。ある実施態様において、方法は、対象に第二治療を投与することを含む。ある実施態様において、第二治療は、誘導性Ｔ細胞共刺激分子(ＩＣＯＳ)、ＣＤ１３７(４−１ＢＢ)、ＣＤ１３４(ＯＸ４０)、ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ２７、ＣＤ９６、グルココルチコイド誘発ＴＮＦＲ関連タンパク質(ＧＩＴＲ)およびヘルペスウイルス侵入メディエータ(ＨＶＥＭ)、プログラム死−１(ＰＤ−１)、プログラム死リガンド−１(ＰＤ−Ｌ１)、ＣＴＬＡ−４、ＢおよびＴリンパ球アテニュエータ(ＢＴＬＡ)、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン−３(ＴＩＭ−３)、リンパ球活性化遺伝子−３(ＬＡＧ−３)、アデノシンＡ２ａ受容体(Ａ２ａＲ)、キラー細胞レクチン様受容体Ｇ１(ＫＬＲＧ−１)、ナチュラルキラー細胞受容体２Ｂ４(ＣＤ２４４)、ＣＤ１６０、ＩｇおよびＩＴＩＭドメインを伴うＴ細胞免疫受容体(ＴＩＧＩＴ)およびＴ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサの受容体(ＶＩＳＴＡ)、ＫＩＲ、ＴＧＦβ、ＩＬ−１０、ＩＬ−８、ＩＬ−２、Ｂ７−Ｈ４、Ｆａｓリガンド、ＣＸＣＲ４、メソセリン、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＤ５２、ＨＥＲ２およびこれらの何れかの組み合わせから選択されるタンパク質に特異的に結合する、有効量の抗体を含む。ある実施態様において、第二治療は、有効量のペグ化ＩＬ−１０、ＩＬ−１０−Ｆｃまたはペグ化ＩＬ−２を含む。ある実施態様において、第二治療は、癌に対する化学療法剤、放射線、自然免疫細胞を活性化する薬剤および／またはＮＫおよび／またはＣＤ８＋  Ｔ細胞生存を増強する薬剤を含む。
【００２１】
本発明の他の性質および利点は、限定的と解釈してはならない次の詳細な記載および実施例から明らかとなる。本明細書をとおして引用する、科学文献、新聞報道、ＧｅｎＢａｎｋエントリー、特許および特許出願を含むすべての引用した参考資料は、引用により全体として明示的に本明細書に包含させる。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】図１Ａ〜１Ｄは、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体ＭＩＣＡ.３６(１９Ｇ６)、重鎖可変領域(図１Ａ〜１Ｂ；ヌクレオチド：配列番号１；アミノ酸：配列番号２)および軽鎖可変領域(図１Ｃ〜１Ｄ；ヌクレオチド：配列番号３；アミノ酸：配列番号４)の配列アライメントである。図１Ａおよび１Ｃは、ＭＩＣＡ.３６(１９Ｇ６)、重鎖可変領域(図１Ａ)および軽鎖可変領域(図１Ｃ)のヌクレオチド配列および対応するアミノ酸配列を示す。図１Ｂおよび１Ｄは、ＭＩＣＡ.３６(１９Ｇ６)(「インプット」)配列についてのＭＩＣＡ.３６(１９Ｇ６)(「インプット」)配列に対する生殖細胞系列配列を示す。Kabat番号付けにより決定した相補性決定領域(ＣＤＲ)は横線により印し、それに応じて標識する(図１Ａ〜１Ｄ)。
【００２３】
【図２】図２Ａ〜２Ｆは、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体ＭＩＣＡ.５２(１６Ａ５)、重鎖可変領域(図２Ａ〜２Ｂ；ヌクレオチド：配列番号１１；アミノ酸：配列番号１２)、軽鎖可変領域１(図２Ｃ〜２Ｄ；ヌクレオチド：配列番号１３；アミノ酸：配列番号１４)および軽鎖可変領域２(図２Ｅ〜２Ｆ；ヌクレオチド：配列番号１２７；アミノ酸：配列番号１２８)の配列アライメントである。図２Ａ、２Ｃおよび２Ｅは、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体１６Ａ５、重鎖可変領域(図２Ａ)および軽鎖可変領域１(ＭＩＣＡ.５２)および２(ＭＩＣＡ.５３)(それぞれ図２Ｃおよび２Ｅ)のヌクレオチド配列および対応するアミノ酸配列を示す。図２Ｂ、２Ｄおよび２Ｆは、ＭＩＣＡ.５２またはＭＩＣＡ.５３(１６Ａ５)(「インプット」)配列についてのＭＩＣＡ.５２またはＭＩＣＡ.５３(１６Ａ５)(「インプット」)配列に対する生殖細胞系列配列を示す。Kabat番号付けにより決定した相補性決定領域(ＣＤＲ)は横線により印し、それに応じて標識する(図２Ａ〜２Ｆ)。
【００２４】
【図３】図３Ａ〜３Ｄは、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体ＭＩＣＡ.５４(２４Ｇ１１)、重鎖可変領域(図３Ａ〜３Ｂ；ヌクレオチド：配列番号２１；アミノ酸：配列番号２２)および軽鎖可変領域(図３Ｃ〜３Ｄ；ヌクレオチド：配列番号２３；アミノ酸：配列番号２４)の配列アライメントである。図３Ａおよび３Ｃは、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体ＭＩＣＡ.５４(２４Ｇ１１)、重鎖可変領域(図３Ａ)および軽鎖可変領域(図３Ｃ)のヌクレオチド配列および対応するアミノ酸配列を示す。図３Ｂおよび３Ｄは、ＭＩＣＡ.５４(２４Ｇ１１)(「インプット」)配列についてのＭＩＣＡ.５４(２４Ｇ１１)(「インプット」)配列に対する生殖細胞系列配列を示す。Kabat番号付けにより決定した相補性決定領域(ＣＤＲ)は横線により印し、それに応じて標識する(図３Ａ〜３Ｄ)。
【００２５】
【図４】図４Ａ〜４Ｄは、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体ＭＩＣＡ.２(３Ｆ５)、重鎖可変領域(図４Ａ〜４Ｂ；ヌクレオチド：配列番号３１；アミノ酸：配列番号３２)および軽鎖可変領域(図４Ｃ〜４Ｄ；ヌクレオチド：配列番号３３；アミノ酸：配列番号３４)の配列アライメントである。図４Ａおよび４Ｃは、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体ＭＩＣＡ.２(３Ｆ５)、重鎖可変領域(図４Ａ)および軽鎖可変領域(図４Ｂ)のヌクレオチド配列および対応するアミノ酸配列を示す。図４Ｂおよび４Ｄは、ＭＩＣＡ.２(３Ｆ５)(「インプット」)配列についてのＭＩＣＡ.２(３Ｆ５)(「インプット」)配列に対する生殖細胞系列配列を示す。Kabat番号付けにより決定した相補性決定領域(ＣＤＲ)は横線により印し、それに応じて標識する(図４Ａ〜４Ｄ)。
【００２６】
【図５】図５Ａ〜５Ｄは、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体７１Ｃ２、重鎖可変領域(図５Ａ〜５Ｂ；ヌクレオチド：配列番号４１；アミノ酸：配列番号４２)および軽鎖可変領域(図５Ｃ〜５Ｄ；ヌクレオチド：配列番号４３；アミノ酸：配列番号４４)の配列アライメントである。図５Ａおよび５Ｃは、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体７１Ｃ２、重鎖可変領域(図５Ａ)および軽鎖可変領域(図５Ｂ)のヌクレオチド配列および対応するアミノ酸配列を示す。図５Ｂおよび５Ｄは、７１Ｃ２(「インプット」)配列についての７１Ｃ２(「インプット」)配列に対する生殖細胞系列配列を示す。Kabat番号付けにより決定した相補性決定領域(ＣＤＲ)は横線により印し、それに応じて標識する(図５Ａ〜５Ｄ)。
【００２７】
【図６Ａ−６Ｈ】図６Ａ〜６Ｈは、ＭＩＣＡアレルＭＩＣＡ＊００２(図６Ａおよび６Ｅ)、ＭＩＣＡ＊００４(図６Ｂおよび６Ｆ)、ＭＩＣＡ＊００８(図６Ｃおよび６Ｇ)およびＭＩＣＡ＊００９(図６Ｄおよび６Ｈ)について、表面プラズモン共鳴(ＳＰＲ)により測定した、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の結合親和性動態：ＭＩＣＡ.３６(図６Ａ〜６Ｄ)およびＭＩＣＡ.３８(図６Ｅ〜６Ｈ)のグラフ表示である。
【００２８】
【図６Ｉ−６Ｌ】図６Ｉ〜６Ｌは、ＭＩＣＡアレルＭＩＣＡ＊００２、ＭＩＣＡ＊００４、ＭＩＣＡ＊００８およびＭＩＣＡ＊００９について、Biacore 3000装置を使用したＳＰＲにより測定した、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の結合親和性速度グラフ：ＭＩＣＡ.２(図６Ｉ)、１６Ａ５(図６Ｊ)、１９Ｇ６(図６Ｋ)および７１Ｃ２(図６Ｌ)である。
【００２９】
【図７】図７Ａ〜７Ｇスキャッチャードプロットで分析した、インビトロでの細胞により発現されるＭＩＣＡ／Ｂ抗原に対するＭＩＣＡ.３６の特異的結合活性のグラフ表示である。図７Ａは、関連計数毎分(ｙ軸；ＣＰＭ)に対してプロットした力価した抗体濃度(ｘ軸；nM抗体)の標準曲線である。図７Ｂ〜７Ｆは、チャイニーズハムスター卵巣(ＣＨＯ)細胞で過剰発現されたヒトＭＩＣＡ＊００８(図７Ｂ)、ヒトＭＩＣＢ＊００５(図７Ｃ)およびカニクイザルＭＩＣＡ／Ｂ(クローン＃４および＃６)(図７Ｄ〜７Ｅ)；および７８６−Ｏ細胞(図７Ｆ)およびＳＷ４８０細胞(図７Ｇ)に内因性に発現させたヒトＭＩＣＡ／Ｂに対する、ＭＩＣＡ.３６の特異的結合、総結合および非特異的結合(ＮＳＢ)を示す。
【００３０】
【図８】図８Ａ〜８Ｎは、蛍光標示式細胞分取(ＦＡＣＳ)を使用する、種々の細胞株で発現されるＭＩＣＡまたはＭＩＣＢ高頻度アレルに対するＭＩＣＡ／Ｂ抗体の結合親和性を示す。図８Ａ、８Ｄ、８Ｆ、８Ｈ、８Ｊおよび８Ｌは、増加抗体濃度で、ＣＨＯ細胞表面に発現されるＭＩＣＡ／Ｂ抗原ＭＩＣＡ＊００２(三角)、ＭＩＣＡ＊００４(逆三角)、ＭＩＣＡ＊００８(白菱形)、ＭＩＣＡ＊００９(黒四角)、ＭＩＣＡ＊０１０(黒丸)およびＭＩＣＢ(白四角)に対する、１９Ｇ６(図８Ａ)、２４Ｇ１１(図８Ｄ)、７１Ｃ２(図８Ｆ)、１６Ａ５(図８Ｈおよび８Ｊ、２つのサブクローン)およびＭＩＣＡ.２(図８Ｌ)の結合を示す。図８Ｂ、８Ｅ、８Ｇ、８Ｉ、８Ｋおよび８Ｍは、ＭＩＣＡ発現７８６−Ｏ(四角)、Ａ２０５８(三角)、ＨｅＬａ(逆三角)およびＲＰＭＩ−８２２６(丸)細胞株への１９Ｇ６(図８Ｂ)、２４Ｇ１１(図８Ｅ)、７１Ｃ２(図８Ｇ)、１６Ａ５(図８Ｉおよび８Ｋ)およびＭＩＣＡ.２(図８Ｍ)の結合を示す。図８Ｃおよび８Ｎは、陰性対照(ＣＨＯ)と比較した、ＣＨＯ細胞クローン＃４および＃６表面に発現される、カニクイザルＭＩＣＡ／Ｂへの１９Ｇ６(図８Ｃ)およびＭＩＣＡ.２(図８Ｎ)の交差反応性を示す。
【００３１】
【図９】図９Ａ〜９Ｆは、種々の抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体に対する、水素／重水素交換(ＨＤＸ)マススペクトロメトリー(ＭＳ)を使用するエピトープマッピングの結果を示す。図９Ａ〜９Ｅは、マススペクトロメトリーを使用して測定する、ｍＡｂｓ  ＭＩＣＡ.２(図９Ａ)、ＭＩＣＡ.３９(図９Ｂ)、ＭＩＣＡ.４０(図９Ｃ)、非フコシル化ＭＩＣＡ.３６と、Ｇ２３６Ａ(図９Ｄ)およびＭＩＣＡ.３６(図９Ｅ)を含むＦｃの相互作用による、ＭＩＣＡの差次的ＨＤＸのグラフ表示である。図９Ｆはナチュラルキラー細胞受容体(ＮＫＧ２Ｄ)に結合したヒトＭＩＣＡの結晶構造のリボンダイヤグラムであり、ここで、マッピングしたＭＩＣＡ.３６エピトープはハイライトされる。
【００３２】
【図１０】図１０Ａ〜１０Ｆは、種々の抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体に対する、酵母ディスプレイを使用するエピトープマッピングの結果を示す。図１０Ａ〜１０Ｃは、ＭＩＣＡ.３６(図１０Ａ)、ＭＩＣＡ.２(図１０Ｂ)および２４Ｇ１１(図１０Ｃ)の個々のエピトープを示す。図１０Ｄ〜１０Ｆは、ＭＩＣＡ.２(図１０Ｄ)、ＭＩＣＡ.３６(図１０Ｅ)および２４Ｇ１１(図１０Ｆ)についてＮＫＧ２Ｄに結合したＭＩＣＡの結晶構造のリボンダイヤグラムに重ねた同じエピトープを示す。
【００３３】
【図１１】図１１Ａ〜１１Ｄは、ＦＡＣＳにより測定した、アイソタイプ対照(丸)への暴露と比較した、増加濃度の抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体ＭＩＣＡ.３６(非フコシル化、Ｇ２３６Ａバリアント；逆三角)への暴露後の、ＭＩＣＡ(図１１Ａ〜１１Ｃ)またはＭＩＣＢ(図１１Ｄ)を異所性に発現するＬＬＣ細胞(図１１Ａ)、Ｅ.Ｇ７−Ｏｖａ細胞(図１１Ｂ)およびＢ１６細胞(図１１Ｃおよび１１Ｄ)の最大蛍光強度により測定した、表面ＭＩＣＡまたはＭＩＣＢレベルのグラフ表示である。
【００３４】
【図１２】図１２Ａ〜１２Ｄは、アイソタイプ対照(丸)への暴露と比較した、増加濃度の抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体ＭＩＣＡ.３６(非フコシル化、Ｇ２３６Ａバリアント；逆三角)への暴露後の、ＭＩＣＡ／Ｂ(図１２Ａ〜１２Ｃ)または組み換えＭＩＣＡ＊００８抗原(図１２Ｄ)を異所性に発現するＬＬＣ細胞(図１２Ａ)、Ｅ.Ｇ７−Ｏｖａ細胞(図１２Ｂ)およびＢ１６細胞(図１２Ｃ)およびＣＨＯ細胞(図１２Ｄ)について、ＥＬＩＳＡで測定した、細胞培養上清に存在する可溶性ＭＩＣＡ／Ｂ濃度のグラフ表示である。
【００３５】
【図１３】図１３Ａ〜１３Ｅは、ＭＩＣＡ／Ｂを内因性に発現するヒト細胞株の表面上の、表面ＭＩＣＡ／Ｂレベルのグラフ表示である。ＭＩＣＡ／Ｂの表面局在化を、アイソタイプ対照(丸)への暴露と比較した、増加濃度の抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体ＭＩＣＡ.３６(非フコシル化、Ｇ２３６Ａバリアント；逆三角)への暴露後の、ＳＷ４８０細胞(図１３Ａ)、ＨｅＬａ細胞(図１３Ｂ)、ＨＣＴ−１１６細胞(図１３Ｃ)、７８６−Ｏ細胞(図１３Ｄ)およびＡ２０５８細胞(図１３Ｅ)の表面で、ＦＡＣＳを使用する最大蛍光強度により測定した。
【００３６】
【図１４】図１４Ａ〜１４Ｃは、アイソタイプ対照(丸)への暴露と比較した、増加濃度の抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体ＭＩＣＡ.３６(非フコシル化、Ｇ２３６Ａバリアント；逆三角)への暴露後の、培養ＨｅＬａ細胞(図１４Ａ；ＭＩＣＡ＊００８を発現)、ＨＣＴ−１１６細胞(図１４Ｂ)および７８６−Ｏ細胞(図１４Ｃ)の培地における、ＥＬＩＳＡにより測定した、ＭＩＣＡ／Ｂを内因性に発現するヒト細胞株の培養培地における可溶性ＭＩＣＡ／Ｂ濃度のグラフ表示である。
【００３７】
【図１５】図１５Ａは、増加する濃度のＭＩＣＡ.３６  ＩｇＧ１(丸)、ＭＩＣＡ.３６  ＩｇＧ１  Ｇ２３６Ａ(黒四角)、ＭＩＣＡ.３６  ＩｇＧ１非フコシル化(ＮＦ；逆三角)およびＭＩＣＡ.３６−ＩｇＧ１−ＮＦ−Ｇ２３６Ａ(三角)またはアイソタイプ対照(ｈＩｇＧ１、白四角)との培養後の抗体依存性細胞貪食(ＡＤＣＰ)レベルのグラフ表示である。図１５Ｂは、増加する濃度のＭＩＣＡ.３６  ＩｇＧ１(逆三角)、ＭＩＣＡ.３６  ＩｇＧ１  ＮＦ(丸)、ＭＩＣＡ.３６  ＩｇＧ１  Ｇ２３６Ａ(黒四角)、ＭＩＣＡ.３６−ＩｇＧ１−ＮＦ−Ｇ２３６Ａ(三角)またはアイソタイプ対照(白四角)との培養後のＣＤ８  Ｔ細胞の増殖パーセントにより測定した抗原交差提示のグラフ表示である。
【００３８】
【図１６】図１６Ａおよび１６Ｂは、増加する濃度のＭＩＣＡ.３６  ＮＦ  Ｇ２３６Ａ(三角)、ＭＩＣＡ.３６  ＩｇＧ１(逆三角)、ＭＩＣＡ.３６  ＩｇＧ１  ＮＦ(丸)、ＭＩＣＡ.３６  ＩｇＧ１  Ｇ２３６Ａ(黒四角)またはアイソタイプ対照(白四角)に暴露後の、ＭＩＣＡ／Ｂ発現Ｒａｊｉ細胞(図１６Ａ)およびＡ３７５細胞(図１６Ｂ)の特異的溶解パーセントのグラフ表示である。
【００３９】
【図１７】図１７Ａおよび１７Ｂは、肺で腫瘍を発症するように誘導したマウスにおける、総腫瘍面積に対する投与した抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体ＭＩＣＡ.３６  ＮＦ  Ｇ２３６Ａのインビボ効果(図１７Ａ)および可溶性ＭＩＣＡ／Ｂの血清レベル(図１７Ｂ)を示す。
【００４０】
【図１８】図１８Ａおよび１８Ｂは、種々の用量(１０mg／kg(ｍｐｋ)、３mpk、１mpkまたは０.３mpk)の抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体ＭＩＣＡ.３６  ＮＦ  Ｇ２３６Ａまたはアイソタイプ対照の投与後腫瘍の総サイズを測定した、肺で腫瘍を発症するように誘導したマウスにおける２用量漸増試験の結果を示す。
【００４１】
【図１９】図１９Ａ〜１９Ｅは、ＥＧ７−ＭＩＣＡ腫瘍を示すＭＩＣＡトランスジェニックマウスへの抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体単独または抗ＰＤ−１抗体との組み合わせの投与結果を示す。図１９Ａおよび１９Ｂは、アイソタイプ対照(黒丸)、ＭＩＣＡ.３６  ｍＩｇＧ２ａおよびアイソタイプ対照ｍＩｇＧ１(四角)、ＭＩＣＡ.３６  ｍＩｇＧ１  Ｄ２６５ＡおよびアイソタイプｍＩｇＧ２ａ(三角)、抗ＰＤ−１  ｍＩｇＧ１  Ｄ２６５ＡおよびアイソタイプｍＩｇＧ２ａ(逆三角)、ＭＩＣＡ.３６  ｍＩｇＧ２ａおよび抗ＰＤ−１  ｍＩｇＧ１  Ｄ２６５Ａ(菱形)またはＭＩＣＡ.３６  ｍＩｇＧ１  Ｄ２６５Ａおよび抗ＰＤ−１  ｍＩｇＧ１  Ｄ２６５Ａ(白丸)を投与したマウスの平均(図１９Ａ)および中央(図１９Ｂ)腫瘍体積のグラフ表示である。図１９Ｃは、各処置群の計算したパーセント腫瘍増殖阻害(ＴＧＩ％)のグラフ表示である：１０mg／kg  ＭＩＣＡ.３６  ｍＩｇＧ２ａおよび１０mg／kgアイソタイプｍＩｇＧ１(丸)、１０mg／kg  ＭＩＣＡ.３６  ｍＩｇＧ１  Ｄ２６５Ａおよび１０mg／kgアイソタイプｍＩｇＧ２ａ(四角)、１０  mg／kg抗ＰＤ−１  ｍＩｇＧ１  Ｄ２６５Ａおよび１０mg／kgアイソタイプｍＩｇＧ２ａ(三角)、１０mg／kg  ＭＩＣＡ.３６  ｍＩｇＧ２ａおよび１０mg／kg抗ＰＤ−１  ｍＩｇＧ１  Ｄ２６５Ａ(逆三角)および１０mg／kg  ＭＩＣＡ.３６  ｍＩｇＧ１  Ｄ２６５Ａおよび１０mg／kg抗ＰＤ−１  ｍＩｇＧ１  Ｄ２６５Ａ(菱形)。図１９Ｄは、アイソタイプ１０mg／kgｍＩｇＧ１および１０mg／kgアイソタイプｍＩｇＧ２ａ二重対照(丸)、１０mg／kg  ＭＩＣＡ.３６  ｍＩｇＧ２ａおよび１０mg／kgアイソタイプｍＩｇＧ１(四角)、１０mg／kg抗ＰＤ−１  ｍＩｇＧ１  Ｄ２６５Ａおよび１０mg／kgアイソタイプｍＩｇＧ２ａ(逆三角)または１０mg／kg  ＭＩＣＡ.３６  ｍＩｇＧ２ａおよび１０mg／kg抗ＰＤ−１  ｍＩｇＧ１  Ｄ２６５Ａ(菱形)で処置後のＥＧ７−ＭＩＣＡ腫瘍を提示するトランスジェニックマウスの無進行生存(ＰＦＳ％)を示す。図１９Ｅは、アイソタイプ対照、ＭＩＣＡ.３６  ｍＩｇＧ２ａ、ＭＩＣＡ.３６  ｍＩｇＧ１  Ｄ２６５Ａ、抗ＰＤ−１  ｍＩｇＧ１  Ｄ２６５Ａ、ＭＩＣＡ.３６  ｍＩｇＧ２ａおよび抗ＰＤ−１  ｍＩｇＧ１  Ｄ２６５ＡまたはＭＩＣＡ.３６  ｍＩｇＧ１  Ｄ２６５Ａおよび抗ＰＤ−１  ｍＩｇＧ１  Ｄ２６５Ａで処置後のＥＧ７−ＭＩＣＡ腫瘍を有するトランスジェニックマウスの血清中の可溶性ＭＩＣＡの濃度を示す。
【００４２】
【図２０】図２０Ａ〜２０Ｄは、ＥＧ７−ＭＩＣＡ／Ｂ腫瘍を有するＢ６−ＭＩＣＡトランスジェニックマウスにおける抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体のインビボ効果の結果を示す。図２０Ａおよび２０Ｂは、２０mg／kgアイソタイプｍＩｇＧ２ａ(丸)、１０mg／kg  ＭＩＣＡ.３６  ｍＩｇＧ２ａおよび１０mg／kgアイソタイプ対照ｍＩｇＧ２ａ(四角)、１０mg／kg抗ＣＴＬＡ−４  ｍＩｇＧ２ａおよび１０mg／kgアイソタイプｍＩｇＧ２ａ(三角)または１０mg／kg  ＭＩＣＡ.３６  ｍＩｇＧ２ａおよび１０mg／kg抗ＣＴＬＡ−４  ｍＩｇＧ２ａ(逆三角)で処置したマウスにおける平均(図２０Ａ)および中央(図２０Ｂ)腫瘍体積のグラフ表示である。図２０Ｃは、各処置群について計算したパーセント腫瘍増殖阻害(ＴＧＩ％)を示す：１０mg／kg  ＭＩＣＡ.３６  ｍＩｇＧ２ａおよび１０mg／kgアイソタイプｍＩｇＧ２ａ(丸)、１０mg／kg抗ＣＴＬＡ−４  ｍＩｇＧ２ａおよび１０mg／kgアイソタイプｍＩｇＧ２ａ(四角)および１０mg／kg  ＭＩＣＡ.３６  ｍＩｇＧ２ａおよび１０mg／kg抗ＣＴＬＡ−４  ｍＩｇＧ２ａ(三角)。図２０Ｄは、２０mg／kgアイソタイプｍＩｇＧ２ａ(丸)、１０mg／kg  ＭＩＣＡ.３６  ｍＩｇＧ２ａおよび１０mg／kgアイソタイプ対照ｍＩｇＧ２ａ(四角)、１０mg／kg抗ＣＴＬＡ−４  ｍＩｇＧ２ａおよび１０mg／kgアイソタイプｍＩｇＧ２ａ(三角)または１０mg／kg  ＭＩＣＡ.３６  ｍＩｇＧ２ａおよび１０mg／kg抗ＣＴＬＡ−４  ｍＩｇＧ２ａ(逆三角)で処置後のＥＧ７−ＭＩＣＡ／Ｂ腫瘍を有するトランスジェニックマウスの無進行生存(ＰＦＳ％)を示す。
【００４３】
【図２１】図２１Ａ〜２１Ｄは、ＥＧ７−ＭＩＣＡ／Ｂ腫瘍細胞を皮下注射したＢ６−ＭＩＣＡトランスジェニックマウスにおける抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体のインビボ効果の結果を示す。図２１Ａおよび２１Ｂは、１０mg／kgアイソタイプｍＩｇＧ１および１０mg／kgアイソタイプｍＩｇＧ２ａ(丸)、１０mg／kg  ＭＩＣＡ.３６  ｍＩｇＧ２ａおよび１０mg／kgアイソタイプｍＩｇＧ１(四角)、１０mg／kg抗ＰＤ−１  ｍＩｇＧ１  Ｄ２６５Ａおよび１０mg／kgアイソタイプｍＩｇＧ２ａ(三角)または１０mg／kg  ＭＩＣＡ.３６  ｍＩｇＧ２ａおよび１０mg／kgアイソタイプｍＩｇＧ２ａ抗ＰＤ−１  ｍＩｇＧ１(逆三角)で処置したマウスにおける平均(図２１Ａ)および中央(図２１Ｂ)腫瘍体積のグラフ表示である。図２１Ｃは、各処置群について計算したパーセント腫瘍増殖阻害(ＴＧＩ％)のグラフ表示である：１０mg／kg  ＭＩＣＡ.３６  ｍＩｇＧ２ａおよび１０mg／kgアイソタイプｍＩｇＧ１(丸)、１０mg／kg抗ＰＤ−１  ｍＩｇＧ１  Ｄ２６５Ａおよび１０mg／kgアイソタイプｍＩｇＧ２ａ(四角)および１０mg／kg  ＭＩＣＡ.３６  ｍＩｇＧ２ａおよび１０mg／kg抗ＰＤ−１  ｍＩｇＧ１  Ｄ２６５Ａ(三角)。図２１Ｄは、１０mg／kgアイソタイプｍＩｇＧ１および１０mg／kgアイソタイプｍＩｇＧ２ａ(丸)、１０mg／kg  ＭＩＣＡ.３６  ｍＩｇＧ２ａおよび１０mg／kgアイソタイプｍＩｇＧ１(四角)、１０mg／kg抗ＰＤ−１  ｍＩｇＧ１  Ｄ２６５Ａおよび１０mg／kgアイソタイプｍＩｇＧ２ａ(三角)または１０mg／kg  ＭＩＣＡ.３６  ｍＩｇＧ２ａおよび１０mg／kg抗ＰＤ−１  ｍＩｇＧ１  Ｄ２６５Ａ(逆三角)で処置後のＥＧ７−ＭＩＣＡ腫瘍細胞を皮下注射したトランスジェニックマウスの無進行生存(ＰＦＳ％)を示す。
【００４４】
【図２２】図２２Ａ〜２２Ｃは、Ｘ線共結晶構造解析を使用するエピトープマッピングの結果を示す。図２２Ａは、ＭＩＣＡのα３ドメインの表面表現であり、エピトープ残基は黒色で示し、残存表面残基は灰色で示す。図２２Ｂおよび２２Ｃは、ＭＩＣＡのα３ドメイン(表面表現、図２２Ａに示すとおり)と複合体のＭＩＣＡ.３６  Ｆａｂ(リボン表示)の２配向を示す。ＭＩＣＡのα３ドメインのＭＩＣＡ.３６エピトープは黒色で示し、ＭＩＣＡのα３ドメインの残存残基は灰色で示す。
【００４５】
【図２３】図２３Ａ〜２３Ｂは、ＦＡＣＳを使用する、ＣＨＯ細胞に発現されたＭＩＣＡ高頻度アレルへの抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の結合親和性を示す。図２３Ｂは、図２３Ａと同じデータであるが、組み換え抗体ＭＩＣＡ.５、ＭＩＣＡ.６およびＭＩＣＡ.７およびアイソタイプ対照に対する異なるＹ軸で示す。
【００４６】
【図２４】図２４Ａ〜２４Ｂは、ＦＡＣＳを使用する、ＲＰＭＩ−８２２６細胞に内因性に発現されたＭＩＣＡに対する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の結合親和性を示す。図２４Ｂは、図２４Ａと同じデータであるが、組み換え抗体ＭＩＣＡ.５、ＭＩＣＡ.６およびＭＩＣＡ.７を発現するＣＨＯ細胞株からのＡｂ２、Ａｂ２８、Ａｂ２９、アイソタイプ対照および上清(「ｓｕｐｅ」)に対する異なるＹ軸で示す。
【００４７】
【図２５】図２５は、１mg／kgまたは１０mg／kg抗体ＭＩＣＡ.３６−ｍＩｇＧ２ａまたはアイソタイプ対照投与７２時間および１６８時間後のＢ６−ＭＩＣＡトランスジェニックマウスにおける可溶性ＭＩＣＡ／Ｂの血清レベルを示す。
【００４８】
【図２６】図２６は、ｓＭＩＣＡおよび抗体ＭＩＣＡ.３６−ｍＩｇＧ２ａまたはアイソタイプ対照投与後のＢ６−ＭＩＣＡトランスジェニックマウスにおけるｓＭＩＣＡのＰＫ分析を示す。
【発明を実施するための形態】
【００４９】
発明の詳細な記載
本発明は、ＭＨＣクラスＩポリペプチド関連配列Ａ(ＭＩＣＡ)および／またはＭＨＣクラスＩポリペプチド関連配列Ｂ(ＭＩＣＢ)に特異的結合する抗体およびその抗原結合フラグメント(「抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体」)に関する。ある実施態様において、ＭＩＣＡはヒトＭＩＣＡである。ある実施態様において、ＭＩＣＢはヒトＭＩＣＢである。本発明の他の態様は、対象にＭＩＣＡおよび／またはＭＩＣＢに特異的結合する抗体およびその抗原結合フラグメントを投与することを含む、それを必要とする対象を処置する方法に関する。ある実施態様において、対象は癌を有し、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は対象の癌を処置する。
【００５０】
Ｉ. 用語
本記載がより容易に理解され得るために、いくつかの用語をまず定義する。さらなる定義は、詳細な記載をとおして示される。
【００５１】
単数表現は、そのものが１以上であることをいうことは注意されるべきである；例えば、「ヌクレオチド配列」は、１以上のヌクレオチド配列を表すと理解される。すなわち、単数表現、「１以上」および「少なくとも１つ」は、ここでは相互交換可能に使用され得る。
【００５２】
さらに、「および／または」は、ここで使用されているとき、２つの特定した特性または要素の各々の、他方を伴うまたは伴わない具体的開示と解釈される。故に、ここで「Ａおよび／またはＢ」などの言い回しで使用される用語「および／または」は、「ＡおよびＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」(単独)および「Ｂ」(単独)を含むことを意図する。同様に、「Ａ、Ｂおよび／またはＣ」などの言い回しで使用される用語「および／または」は、次の態様の各々を含むことを意図する：Ａ、ＢおよびＣ；Ａ、ＢまたはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；ＡおよびＣ；ＡおよびＢ；ＢおよびＣ；Ａ(単独)；Ｂ(単独)；およびＣ(単独)。
【００５３】
ここで、態様が「含む」なる用語を用いて記載されているとき、「からなる」および／または「本質的にからなる」の用語以外類似する態様も提供されることは、理解される。
【００５４】
特に断らない限り、ここで使用する全ての技術的および科学的用語は、本開示が関連する分野の当業者に一般に理解されるのと同じ意味を有する。例えば、the Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press; The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3rd ed., 1999, Academic Press;およびthe Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Pressは、本明細書で使用する用語の大部分の総合的辞典を当業者に提供する。
【００５５】
単位、接頭辞および記号は、その国際単位系(ＳＩ)が認めた形態である。数値範囲は、該範囲を定義する数値を含む。特に断らない限り、ヌクレオチド配列は、左から右に５’から３’配向で記載する。アミノ酸配列は、左から右にアミノからカルボキシ配向で記載する。ここに提供する表題は、本明細書を全体として参照して得られ得る種々の態様の開示を制限しない。従って、すぐ下に定義する用語は、本明細書をその全体として参照して、より完全に定義される。
【００５６】
用語「約」は、ここでは、おおよそ、大まか、周辺または幅内を意味する。用語「約」が数値範囲と組み合わせて使用されるとき、示す数値の上および下に境界を拡大することにより、その範囲を修飾する。一般に、用語「約」は、数値を、例えば、１０パーセント上または下(高または低)の分散により、示す数値を上および下に修飾し得る。
【００５７】
ここで使用する用語「ＭＨＣクラスＩポリペプチド関連配列Ａ」または「ＭＩＣＡ」は、非古典的主要組織適合抗原(ＭＨＣ)クラスＩ分子をいう。ここで使用する用語「ＭＨＣクラスＩポリペプチド関連配列Ｂ」または「ＭＩＣＢ」は、非古典的主要組織適合抗原(ＭＨＣ)クラスＩ分子をいう。ここで使用する用語「ＭＩＣＡ／Ｂ」は、ＭＩＣＡおよび／またはＭＩＣＢをいう。
【００５８】
ＭＩＣＡは、一般に細胞膜に固定される、天然に発現されるグリコシル化され、かつ多型のタンパク質である。マトリクスメタロプロテイナーゼおよびＡＤＡＭプロテイナーゼによる膜結合ＭＩＣＡの開裂は、可溶性形態のＭＩＣＡを細胞外マトリクスに放出させる。ＭＩＣＡは、ナチュラルキラー(ＮＫ)細胞、ＣＤ８  Ｔ細胞およびγδ  Ｔ細胞の表面に発現される受容体であるＮＫＧ２Ｄのリガンドである。ＭＩＣＡ発現は、健常細胞でストレスを受けている間に誘導され、ＭＩＣＡは、ＭＩＣＡを発現する細胞のＮＫ細胞およびＴ細胞介在細胞溶解を誘発するシグナルとして働く。効果的に、ＭＩＣＡは、ストレス中、細胞の「キル・ミー(kill me)」シグナルとして働く。ＭＩＣＡは、多様な腫瘍細胞により発現される。
【００５９】
用語「ＭＩＣＡ」は、腫瘍細胞を含むが、これに限定されない細胞により天然に発現される、ＭＩＣＡのあらゆるバリアントまたはアイソフォームを含む。従って、ここに記載する抗体は、ヒト以外の種からのＭＩＣＡと交差反応し得る(例えば、カニクイザルＭＩＣＡ)。あるいは、抗体はヒトＭＩＣＡに特異的であり、他の種と何ら交差反応性を示さないこともあり得る。ＭＩＣＡまたはその何れかのバリアントおよびアイソフォームは、それらを天然に発現する細胞または組織から単離されてよく、または当分野で周知のおよび／またはここに記載する技術を使用して組み換えにより製造され得る。
【００６０】
ヒトＭＩＣＡ(配列番号５１)は、３３２アミノ酸からなる。ヒトＭＩＣＡの少なくとも２つのさらなるアイソフォームが同定されている。アイソフォーム１は、ＭＩＣＡ１(UniProt ID No. Q29983-1；配列番号１０９)として知られ、３８３アミノ酸からなる。アイソフォーム２は、ＭＩＣＡ２(UniProt ID No. Q29983-2；配列番号８８)として知られ、２８７アミノ酸からなる。ＭＩＣＡ２は、ＭＩＣＡ１のアミノ酸配列に対してアミノ酸残基１０９〜２０４を欠く。
【００６１】
以下は、３つの既知ヒトＭＩＣＡアイソフォームのアミノ酸配列である。
(Ａ)ヒトＭＩＣＡ(配列番号５１)：
MGLGPVFLLLAGIFPFAPPGAAAEPHSLRYNLTVLSWDGSVQSGFLAEVHLDGQPFLRYDRQKCRAKPQGQWAEDVLGNKTWDRETRDLTGNGKDLRMTLAHIKDQKEGLHSLQEIRVCEIHEDNSTRSSQHFYYDGELFLSQNLETEEWTVPQSSRAQTLAMNVRNFLKEDAMKTKTHYHAMHADCLQELRRYLESGVVLRRTVPPMVNVTRSEASEGNITVTCRASSFYPRNIILTWRQDGVSLSHDTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRICRGEEQRFTCYMEHSGNHSTHPVPSGKVLVLQSHWQTFHVSAVAAGCCYFCYYYFLCPLL
(Ｂ)ヒトＭＩＣＡアイソフォーム１(UniProt ID No. Q29983-1；配列番号１０９)：
MGLGPVFLLLAGIFPFAPPGAAAEPHSLRYNLTVLSWDGSVQSGFLTEVHLDGQPFLRCDRQKCRAKPQGQWAEDVLGNKTWDRETRDLTGNGKDLRMTLAHIKDQKEGLHSLQEIRVCEIHEDNSTRSSQHFYYDGELFLSQNLETKEWTMPQSSRAQTLAMNVRNFLKEDAMKTKTHYHAMHADCLQELRRYLKSGVVLRRTVPPMVNVTRSEASEGNITVTCRASGFYPWNITLSWRQDGVSLSHDTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRICQGEEQRFTCYMEHSGNHSTHPVPSGKVLVLQSHWQTFHVSAVAAAAIFVIIIFYVRCCKKKTSAAEGPELVSLQVLDQHPVGTSDHRDATQLGFQPLMSDLGSTGSTEGA
(Ｃ)ヒトＭＩＣＡアイソフォーム２(UniProt ID No. Q29983-2；配列番号８８)：
MGLGPVFLLLAGIFPFAPPGAAAEPHSLRYNLTVLSWDGSVQSGFLTEVHLDGQPFLRCDRQKCRAKPQGQWAEDVLGNKTWDRETRDLTGNGKDLRMTLAHIKDQKEVPPMVNVTRSEASEGNITVTCRASGFYPWNITLSWRQDGVSLSHDTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRICQGEEQRFTCYMEHSGNHSTHPVPSGKVLVLQSHWQTFHVSAVAAAAIFVIIIFYVRCCKKKTSAAEGPELVSLQVLDQHPVGTSDHRDATQLGFQPLMSDLGSTGSTEGA
【００６２】
ＭＩＣＡのシグナル配列はアミノ酸１〜２３に対応する(下線)。故に、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＡ１およびＭＩＣＡ２の成熟アイソフォームは、それぞれアミノ酸２４〜３３２、３８３または２８７からなる。成熟ヒトＭＩＣＡの細胞外ドメインは、配列番号５１のアミノ酸２４〜３０７からなり、次のアミノ酸配列を有する。
EPHSLRYNLTVLSWDGSVQSGFLTEVHLDGQPFLRCDRQKCRAKPQGQWAEDVLGNKTWDRETRDLTGNGKDLRMTLAHIKDQKEGLHSLQEIRVCEIHEDNSTRSSQHFYYDGELFLSQNLETKEWTMPQSSRAQTLAMNVRNFLKEDAMKTKTHYHAMHADCLQELRRYLKSGVVLRRTVPPMVNVTRSEASEGNITVTCRASGFYPWNITLSWRQDGVSLSHDTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRICQGEEQRFTCYMEHSGNHSTHPVPSGKVLVLQSHW(配列番号８９)。
【００６３】
多数のＭＩＣＡ(ＭＩＣＡ)アレルが知られる。ある実施態様において、ＭＩＣＡは、ＭＩＣＡ＊００２(ここではＭＩＣＡ＊００２アレルとも称する)であり、これは次のアミノ酸配列を有する。
MGLGPVFLLLAGIFPFAPPGAAAEPHSLRYNLTVLSGDGSVQSGFLAEVHLDGQPFLRCDRQKCRAKPQGQWAEDVLGNKTWDRETRDLTGNGKDLRMTLAHIKDQKEGLHSLQEIRVCEIHEDNSTRSSQHFYYDGELFLSQNLETEEWTMPQSSRAQTLAMNVRNFLKEDAMKTKTHYHAMHADCLQELRRYLKSGVVLRRTVPPMVNVTRSEASEGNITVTCRASGFYPWNITLSWRQDGVSLSHDTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRICQGEEQRFTCYMEHSGNHSTHPVPSGKVLVLQSHWQTFHVSAVAAAAIFVIIIFYVRCCKKKTSAAEGPELVSLQVLDQHPVGTSDHRDATQLGFQPLMSDLGSTGSTEGT(配列番号１１０)
【００６４】
ある実施態様において、ＭＩＣＡは、ＭＩＣＡ＊００４(ここではＭＩＣＡ＊００４抗原とも称する)であり、これは次のアミノ酸配列を有する。
MGLGPVFLLLAGIFPFAPPGAAAEPHSLRYNLTVLSWDGSVQSGFLAEVHLDGQPFLRYDRQKCRAKPQGQWAEDVLGNKTWDRETRDLTGNGKDLRMTLAHIKDQKEGLHSLQEIRVCEIHEDNSTRSSQHFYYDGELFLSQNVETEEWTVPQSSRAQTLAMNVRNFLKEDAMKTKTHYHAMHADCLQELRRYLESSVVLRRRVPPMVNVTRSEASEGNITVTCRASSFYPRNITLSTRQDGVSLSHDTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRICQGEEQRFTCYMEHSGNHSTHPVPSGKVLVLQSHWQTFHVSAVAAAAAAIFVIIIFYVRCCKKKTSAAEGPELVSLQVLDQHPVGTSDHRDATQLGFQPLMSALGSTGSTEGA(配列番号１１１)
【００６５】
ある実施態様において、ＭＩＣＡは、ＭＩＣＡ＊００８(ここではＭＩＣＡ＊００８抗原とも称する)であり、これは次のアミノ酸配列を有する。
MGLGPVFLLLAGIFPFAPPGAAAEPHSLRYNLTVLSWDGSVQSGFLAEVHLDGQPFLRYDRQKCRAKPQGQWAEDVLGNKTWDRETRDLTGNGKDLRMTLAHIKDQKEGLHSLQEIRVCEIHEDNSTRSSQHFYYDGELFLSQNLETEEWTVPQSSRAQTLAMNVRNFLKEDAMKTKTHYHAMHADCLQELRRYLESGVVLRRTVPPMVNVTRSEASEGNITVTCRASSFYPRNIILTWRQDGVSLSHDTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRICRGEEQRFTCYMEHSGNHSTHPVPSGKVLVLQSHWQTFHVSAVAAAAIFVIIIFYVRCC(配列番号１１２)
【００６６】
ある実施態様において、ＭＩＣＡは、ＭＩＣＡ＊００９(ここではＭＩＣＡ＊００９抗原とも称する)であり、これは次のアミノ酸配列を有する。
MGLGPVFLLLAGIFPFAPPGAAAEPHSLRYNLTVLSWDGSVQSGFLAEVHLDGQPFLRYDRQKCRAKPQGQWAEDVLGNKTWDRETRDLTGNGKDLRMTLAHIKDQKEGLHSLQEIRVCEIHEDNSTRSSQHFYYDGELFLSQNLETEEWTVPQSSRAQTLAMNVRNFLKEDAMKTKTHYHAMHADCLQELRRYLESSVVLRRTVPPMVNVTRSEASEGNITVTCRASSFYPRNITLTWRQDGVSLSHDTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRICQGEEQRFTCYMEHSGNHSTHPVPSGKVLVLQSHWQTFHVSAVAAAAIFVIIIFYVRCCKKKTSAAEGPELVSLQVLDQHPVGTSDHRDATQLGFQPLMSALGSTGSTEGT(配列番号１１３)
【００６７】
ある実施態様において、ＭＩＣＡは、ＭＩＣＡ＊００９(ここではＭＩＣＡ＊００９抗原とも称する)であり、これは次のアミノ酸配列を有する。
MGLGPVFLLLAGIFPFAPPGAAAEPHSLPYNLTVLSWDGSVQSGFLAEVHLDGQPFLRYDRQKCRAKPQGQWAEDVLGNKTWDRETRDLTGNGKDLRMTLAHIKDQKEGLHSLQEIRVCEIHEDNSTRSSQHFYYDGELFLSQNLETEEWTVPQSSRAQTLAMNVRNFLKEDAMKTKTHYHAMHADCLQELRRYLESSVVLRRTVPPMVNVTRSEASEGNITVTCRASSFYPRNIILTWRQDGVSLSHDTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRICRGEEQRFTCYMEHSGNHSTHPVPSGKVLVLQSHWQTFHVSAVAAAAAIFVIIIFYVRCCKKKTSAAEGPELVSLQVLDQHPVGTSDHRDATQLGFQPLMSALGSTGSTEGA(配列番号１１４)
【００６８】
７３以上のＭＩＣＡアレルを含む、ヒトＭＩＣＡの多数の異なるアレルが当分野で知られる。Frigoul and Lefranc, Recent Res. Devel. Human Genet. 3:95-145 (2005)参照。本明細書に開示する抗体は、ＭＩＣＡの１以上のアレルと結合できる。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、単一ＭＩＣＡアレルと特異的に結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、高親和性で１以上のＭＩＣＡアレルと結合し、低親和性で他のＭＩＣＡアレルと結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ＭＩＣＡ＊００２、ＭＩＣＡ＊００４、ＭＩＣＡ＊００８およびＭＩＣＡ＊００９からなる群から選択される１以上のＭＩＣＡアレルと結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、高親和性でＭＩＣＡ＊００４、ＭＩＣＡ＊００８およびＭＩＣＡ＊００９と結合し、所望により低親和性でＭＩＣＡ＊００２と結合する。
【００６９】
カニクイザルＭＩＣＡタンパク質は次のアミノ酸配列を含む(シグナル配列を含む)：
ELHSLRYNVTVLSRDGSVQSGFLAEGHLDGQLFLLYDRQKCRARPQGEWSEDVLGAKTWDTETGDLTENGKDLRMTLAHIKGQKGGLHSLQEIKVCEIHEDNSTGGLRHFYYDGELFLSQNLETQEWTELQSSRAQTLALNIRNFWKEDTMKTKTHYRAVQADCLKKLQQYLESGVAVRRTAPPMVNVTHSEASEGNITVTCRASGFYPRNIALTWRQDGVSLNHNAQQWGGILPDQNGTYQTWVATRIRQGEEQRFACYMEHSGNHSTHPVPS(配列番号９０; UniProt ID No. Q2MGE0)。
【００７０】
ＭＩＣＢは、一般に細胞膜に固定された、天然に発現されるグリコシル化され、かつ多型のタンパク質である。膜結合ＭＩＣＢの開裂は、細胞外マトリクスに可溶性形態のＭＩＣＢを放出させる。ＭＩＣＢはＮＫＧ２Ｄのリガンドであり、ＭＩＣＢを発現する細胞のＮＫ細胞およびＴ細胞介在細胞溶解を誘発するシグナルとして働く。ＭＩＣＢは、ストレス中、細胞の「キル・ミー」シグナルとして働き、多様な腫瘍細胞により発現される。用語「ＭＩＣＢ」は、腫瘍細胞を含むが、これに限定されない細胞により天然に発現される、ＭＩＣＢのあらゆるバリアントまたはアイソフォームを含む。
【００７１】
ここに記載する抗体は、ヒト以外の種からのＭＩＣＢと交差反応し得る(例えば、カニクイザルＭＩＣＢ)。あるいは、抗体はヒトＭＩＣＢに特異的であり、他の種と如何なる交差反応性も示さない。ＭＩＣＢまたはその何れかのバリアントおよびアイソフォームは、それらを天然に発現する細胞または組織から単離されてよく、または当分野で周知のおよび／またはここに記載する技術を使用して組み換えにより製造され得る。
【００７２】
ヒトＭＩＣＢ(配列番号１３２)は、下記アミノ酸配列を有する３８３アミノ酸(UniProt ID No. Q29980)からなる。
MGLGRVLLFLAVAFPFAPPAAAAEPHSLRYNLMVLSQDESVQSGFLAEGHLDGQPFLRYD
RQKRRAKPQGQWAEDVLGAKTWDTETEDLTENGQDLRRTLTHIKDQKGGLHSLQEIRVCE
IHEDSSTRGSRHFYYDGELFLSQNLETQESTVPQSSRAQTLAMNVTNFWKEDAMKTKTHY
RAMQADCLQKLQRYLKSGVAIRRTVPPMVNVTCSEVSEGNITVTCRASSFYPRNITLTWR
QDGVSLSHNTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRIRQGEEQRFTCYMEHSGNHGTHPVPSGKV
LVLQSQRTDFPYVSAAMPCFVIIIILCVPCCKKKTSAAEGPELVSLQVLDQHPVGTGDHR
DAAQLGFQPLMSATGSTGSTEGA
【００７３】
ヒトＭＩＣＢのさらなるアイソフォームが同定されている。ＭＩＣＢのアイソフォーム２(UniProt ID No. Q29980-2)は次のアミノ酸配列を有する。
MGLGRVLLFLAVAFPFAPPAAAAEPHSLRYNLMVLSQDESVQSGFLAEGHLDGQPFLRYD
RQKRRAKPQGQWAEDVLGAKTWDTETEDLTENGQDLRRTLTHIKDQKGVPQSSRAQTLAM
NVTNFWKEDAMKTKTHYRAMQADCLQKLQRYLKSGVAIRRTVPPMVNVTCSEVSEGNITV
TCRASSFYPRNITLTWRQDGVSLSHNTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRIRQGEEQRFTCY
MEHSGNHGTHPVPSGKVLVLQSQRTDFPYVSAAMPCFVIIIILCVPCCKKKTSAAEGPEL
VSLQVLDQHPVGTGDHRDAAQLGFQPLMSATGSTGSTEGA(配列番号１３３)。
【００７４】
用語「抗体」は、ある実施態様において、ジスルフィド結合により相互接続された、少なくとも２つの重(Ｈ)鎖および２つの軽(Ｌ)鎖を含むタンパク質をいう。各重鎖は、重鎖可変領域(ここではＶＨと略す)および重鎖定常領域(ここではＣＨと略す)からなる。一部抗体、例えば、天然に存在するＩｇＧ抗体において、重鎖定常領域はヒンジおよび３ドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３からなる。一部抗体、例えば、天然に存在するＩｇＧ抗体において、各軽鎖は軽鎖可変領域(ここではＶＬと略す)および軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域は１ドメイン(ここではＣＬと略す)からなる。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域(ＦＲ)と称される、より保存された領域が散在する、相補性決定領域(ＣＤＲ)と称される超可変性の領域にさらに細分され得る。各ＶＨおよびＶＬは３ＣＤＲおよび４ＦＲからなり、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって、次の順に配置される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、免疫系の種々の細胞(例えば、エフェクター細胞)および古典的補体系の第一成分(Ｃ１ｑ)を含む宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合に介在し得る。重鎖はＣ末端リシンを有しても有さなくてもよい。本明細書で特に断らない限り、可変領域のアミノ酸はＫａｂａｔナンバリングシステムを使用して番号付けし、定常領域のものはＥＵシステムを使用して番号付けする。
【００７５】
ここで使用する「ＩｇＧ抗体」、例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４抗体は、ある実施態様において、天然に存在するＩｇＧ抗体の構造を有する、すなわち、同じサブクラスの天然に存在するＩｇＧ抗体と同じ数の重鎖および軽鎖およびジスルフィド結合を有する。例えば、抗ＭＩＣＡ／Ｂ  ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４抗体は２つの重鎖(ＨＣ)および２つの軽鎖(ＬＣ)からなり、ここで、２つのＨＣおよびＬＣは、それぞれ天然に存在するＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４抗体に存在する同じ数および位置のジスルフィド架橋により結合される(抗体がジスルフィド架橋を修飾するように変異されていない限り)。
【００７６】
抗体は、一般に、１０−5〜１０−11Ｍ以下の解離定数(ＫＤ)により反映される高親和性で、その同族抗原に特異的に結合する。約１０−4Ｍを超えるあらゆるＫＤは、非特異的結合を表すと一般に考えられる。例として、ヒトＭＩＣＡ／Ｂに特異的に結合する抗体は、ある実施態様において、ある霊長類種からのＭＩＣＡ／Ｂ抗原(例えば、カニクイザルＭＩＣＡ／Ｂ)と交差反応性を有し得るが、他の種からのＭＩＣＡ／Ｂ抗原またはＭＩＣＡ／Ｂ以外の抗原と交差反応し得ない。
【００７７】
免疫グロブリンは、ＩｇＡ、分泌型ＩｇＡ、ＩｇＧおよびＩｇＭを含むが、これらに限定されない一般に知られるアイソタイプの何れかに由来し得る。ＩｇＧアイソタイプは、ある種でサブクラスに分割される：ヒトでＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４ならびにマウスでＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂおよびＩｇＧ３。ある実施態様において、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体はＩｇＧ１サブタイプのものである。免疫グロブリン、例えば、ＩｇＧ１は、多くて数アミノ酸互いに異なる、数アロタイプで存在する。「抗体」は、例として、天然に存在するおよび天然に存在しない抗体両者；モノクローナルおよびポリクローナル抗体；キメラおよびヒト化抗体；ヒトおよび非ヒト抗体および完全合成抗体を含む。
【００７８】
ここに使用する抗体の「抗原結合部分」は、抗原(例えば、ヒトＭＩＣＡ／Ｂ)に特異的に結合する能力を保持する、抗体の１以上のフラグメントをいう。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体のフラグメントにより遂行され得ることが示されている。抗体、例えば、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の「抗原結合部分」なる用語内に包含される結合フラグメントの例は、(ｉ)Ｆａｂフラグメント(パパイン開裂からのフラグメント)またはＶＬ、ＶＨ、ＬＣおよびＣＨ１ドメインからなる類似一価フラグメント；(ii)Ｆ(ａｂ’)２フラグメント(ペプシン開裂からのフラグメント)またはヒンジ領域でジスルフィド架橋により結合した２つのＦａｂフラグメントを含む類似二価フラグメント；(iii)ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；(iv)抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖフラグメント、(ｖ)ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント(Ward et al., (1989) Nature 341:544-546)；(vi)単離相補性決定領域(ＣＤＲ)および(vii)合成リンカーにより所望により結合され得る２以上の単離ＣＤＲの組み合わせを含む。さらに、Ｆｖフラグメント、ＶＬおよびＶＨの２ドメインが別々の遺伝子によりコードされ得るが、合成リンカーにより組み換え方法を使用して結合され得て、それは一価分子を形成するように、ＶＬおよびＶＨ領域が対形成する単一タンパク質鎖として製造されることを可能とする(一本鎖Ｆｖ(ｓｃＦｖ)として知られる；例えば、Bird et al. (1988) Science 242:423-426;およびHuston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883参照)。このような一本鎖抗体もまた、抗体の「抗原結合部分」なる用語に含まれることが意図される。これらの抗体フラグメントは当業者に知られる慣用技術を使用して得て、フラグメントをインタクト抗体と同様の方法で有用性についてスクリーニングする。抗原結合部分は、組み換えＤＮＡ技術またはインタクト免疫グロブリンの酵素もしくは化学開裂により製造され得る。
【００７９】
「二特異性」または「二機能性抗体」は、２つの異なる重／軽鎖対および２つの異なる結合部位を有する、人工ハイブリッド抗体である。二特異性抗体は、ハイブリドーマの融合またはＦａｂ’フラグメントの結合を含む、多様な方法により製造され得る。例えば、Songsivilai & Lachmann, Clin. Exp. Immunol. 79:315-321 (1990); Kostelny et al., J. Immunol. 148, 1547-1553 (1992)参照。
【００８０】
ここに使用する用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均一な抗体集団からの抗体をいい、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、モノクローナル抗体の製造中に生じ得る可能性のあるバリアント(このようなバリアントは通常微量に存在する)以外、実質的に類似し、同一エピトープに結合する（例えば、抗体は単一結合特異性および親和性を提示する）。修飾語「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体集団から得られるとして抗体の特徴を示すものであり、何らかの特定の方法による抗体の製造が必要であると解釈されてはならない。用語「ヒトモノクローナル抗体」は、単一結合特異性を提示し、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来の可変領域および必要に応じて定常領域を有する、実質的に均一な抗体の集団からの抗体をいう。ある実施態様において、ヒトモノクローナル抗体は、不死化細胞に融合されたヒト重鎖導入遺伝子および軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有する、トランスジェニック非ヒト動物、例えば、トランスジェニックマウスから得られるＢ細胞を含む、ハイブリドーマにより産生される。
【００８１】
ここに使用する用語「組み換えヒト抗体」は、組み換え手段により製造、発現、作製または単離される全ヒト抗体、例えば、(ａ)ヒト免疫グロブリン遺伝子にトランスジェニックまたはトランスクロモソーマルである動物(例えば、マウス)またはそれから製造したハイブリドーマから単離した抗体、(ｂ)抗体を発現するようにトランスフォームした宿主細胞、例えば、トランスフェクトーマから単離した抗体、(ｃ)組み換え、コンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離した抗体および(ｄ)ヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを含む他の何れかの手段により製造、発現、作製または単離した抗体を含む。このような組み換えヒト抗体は、生殖系列遺伝子によりコードされる特定のヒト生殖系列免疫グロブリン配列を利用する可変領域および定常領域を含むが、例えば、抗体成熟中に生じるその後の再配列および変異を含む。文献(例えば、Lonberg (200５)Nature Biotech. 23(9): 1117- 1125参照)から知られるとおり、可変領域は、ある外来抗原に特異的な抗体を形成するように再配列される種々の遺伝子によりコードされる、抗原結合ドメインを含む。再配列に加えて、可変領域は、該外来抗原への抗体の親和性を高めるために、複数の単一アミノ酸変異(体細胞変異または超変異という)によりさらに修飾され得る。定常領域は、抗原へのさらなる応答において変化する(すなわち、アイソタイプスイッチ)。それ故に、抗原に対する応答により軽鎖および重鎖免疫グロブリンポリペプチドをコードする、再配列され、体細胞変異された核酸分子は、元の核酸分子と配列同一性を有し得ないが、その代わり、実質的に同一または類似である(すなわち、少なくとも８０％同一性を有する)。
【００８２】
「ヒト」抗体(ＨｕＭＡｂ)は、フレームワークおよびＣＤＲ領域両者がヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来である可変領域を有する抗体をいう。さらに、抗体が定常領域を含むならば、定常領域もヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来である。ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によりコードされないアミノ酸残基を含み得る(例えば、インビトロで無作為または部位特異的変異誘発またはインビボで体細胞変異により導入された変異)。しかしながら、ここに使用する用語「ヒト抗体」は、マウスなどの他の哺乳動物種の生殖系列由来のＣＤＲ配列が、ヒトフレームワーク配列に移植されている抗体を含むことを意図しない。用語「ヒト」抗体および「完全ヒト」抗体は、同義的に使用される。
【００８３】
「ヒト化」抗体は、非ヒト抗体のＣＤＲドメイン外のアミノ酸の一部、大部分または全てが、ヒト免疫グロブリン由来の対応するアミノ酸で置換されている抗体をいう。抗体のヒト化形態のある実施態様において、ＣＤＲドメイン外のアミノ酸の一部、大部分または全てはヒト免疫グロブリンからのアミノ酸で置換されおり、一方１以上のＣＤＲ領域内のアミノ酸の一部、大部分または全ては変えられていない。抗体が特定の抗原に結合する能力を廃棄しない限り、アミノ酸の小さな付加、欠失、挿入、置換または修飾は許容される。「ヒト化」抗体は、元の抗体に類似する抗原特異性を保持する。
【００８４】
「キメラ抗体」は、可変領域がマウス抗体由来であり、定常領域がヒト抗体由来であるような、可変領域がある種由来であり、定常領域が他の種由来である抗体をいう。
【００８５】
ここで使用する「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によりコードされる抗体クラス(例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤおよびＩｇＥ抗体)をいう。
【００８６】
「アロタイプ」は、特定のアイソタイプ群内の天然に存在するバリアントをいい、該バリアントは数アミノ酸異なる(例えば、Jefferis et al. (2009) mAbs 1:1参照)。ここに記載する抗「ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、何れかのアロタイプのものであり得る。「ＩｇＧ１ｆ」、「ＩｇＧ１.１ｆ」または「ＩｇＧ１.３ｆ」アイソタイプと称されるここで使用する抗体は、アロタイプ「ｆ」のそれぞれＩｇＧ１、エフェクターレスＩｇＧ１.１およびエフェクターレスＩｇＧ１.３抗体であり、すなわち、例えば、配列番号３に示すＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックスにより２１４Ｒ、３５６Ｅおよび３５８Ｍを有する。
【００８７】
用語「抗原を認識する抗体」および「抗原特異的抗体」は、用語「抗原に特異的に結合する抗体」と相互交換可能に使用される。
【００８８】
ここで使用する「単離抗体」は、実質的に他のタンパク質および細胞物質を含まない抗体をいう。
【００８９】
ここで使用する、「ＭＩＣＡ／Ｂに結合する」抗体は、当分野で認識される方法、例えば、ここに記載するＦＡＣＳベースの結合アッセイで、例えば、ヒトＭＩＣＡ／ＢでトランスフェクトしたＣＨＯ細胞またはＭＩＣＡ／Ｂ発現腫瘍細胞を使用する結合アッセイで、ＭＩＣＡ／Ｂと約２５μg／mL以下、約２３μg／mL以下、約２０μg／mL以下、約１５μg／mL以下、約１０μg／mL以下、約５μg／mL以下、約３μg／mL以下、約２μg／mL以下、約１μg／mL以下、約０.５μg／mL以下、約０.４５μg／mL以下、約０.４μg／mL以下、約０.３５μg／mL以下または約０.３μg／mL以下のＥＣ５０で相互作用する抗体をいう。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、例えば、ＣＨＯ細胞で発現されるヒト−ＭＩＣＡ／Ｂと、約２００nM以下、約１７５nM以下、約１６０nM以下、約１５０nM以下、約１２５nM以下、約１１０nM以下、約１００nM以下、約８０nM以下、約７５nM以下、約６０nM以下、約５０nM以下、約４０nM以下、約３５nM以下、約３０nM以下、約２５nM以下、約２０nM以下、約１５nM以下、約１０nM以下、約９nM以下、約８nM以下、約７nM以下、約６nM以下、約５nM以下、約４nM以下、約３nM以下、約２nM以下、約１.９nM以下、約１.８nM以下、約１.７nM以下、約１.６nM以下、約１.５nM以下、約１.４nM以下、約１.３nM以下、約１.２nM以下、約１.１nM以下、約１.０nM以下、約０.９nM以下、約０.８nM以下、約０.７nM以下、約０.６nM以下、約０.５nM以下、約０.４nM以下、約０.３nM以下、約０.２nM以下または約０.１nM以下のＥＣ５０で結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、約１０nM未満のＥＣ５０で、例えば、ＣＨＯ細胞で発現されるヒト−ＭＩＣＡ／Ｂと結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、約５nM未満のＥＣ５０で、例えば、ＣＨＯ細胞で発現されるヒト−ＭＩＣＡ／Ｂと結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、約１.５nM未満のＥＣ５０で、例えば、ＣＨＯ細胞で発現されるヒト−ＭＩＣＡ／Ｂと結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、約１nM以下のＥＣ５０で、例えば、ＣＨＯ細胞で発現されるヒト−ＭＩＣＡ／Ｂと結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、約０.５nM以下のＥＣ５０で、例えば、ＣＨＯ細胞で発現されるヒト−ＭＩＣＡ／Ｂと結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、約０.３nM以下のＥＣ５０で、例えば、ＣＨＯ細胞で発現されるヒト−ＭＩＣＡ／Ｂと結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、約０.２nM以下のＥＣ５０で、例えば、ＣＨＯ細胞で発現されるヒト−ＭＩＣＡ／Ｂと結合する。
【００９０】
ここで使用する、細胞、例えば、腫瘍細胞による「ＭＩＣＡ／Ｂのシェディングを阻害、阻止または減少する」抗体は、細胞の表面からの可溶性ＭＩＣＡ／Ｂの放出をを阻害、阻止または減少する抗体をいうことを意図する。機構に拘束されないが、ここに開示する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、例えば、開裂により、可溶性ＭＩＣＡ／Ｂとして血漿に放出されるＭＩＣＡ／Ｂの量を減少させる。ある実施態様において、抗体は、細胞の表面の膜結合ＭＩＣＡ／Ｂを増加させる。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ヒトＭＩＣＡ／Ｂでトランスフェクトした細胞への表面ＭＩＣＡ／Ｂの保持を、約１０nM以下、約５nM以下、約１nM以下、約０.８５nM以下、約０.８nM以下、約０.７５nM以下、約０.７nM以下、約０.６５nM以下、約０.６nM以下、約０.５５nM以下、約０.５nM以下、約０.４５nM以下、約０.４nM以下、約０.３５nM以下、約０.３nM以下、約０.２５nM以下、約０.２nM以下、約０.１５nM以下または約０.１nM以下のＭＩＣＡ／Ｂ保持ＥＣ５０で増加させる。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ヒトＭＩＣＡ／Ｂでトランスフェクトした細胞への表面ＭＩＣＡ／Ｂの保持を、少なくとも約１.２倍、少なくとも約１.３倍、少なくとも約１.４倍、少なくとも約１.５倍、少なくとも約１.６倍、少なくとも約１.７倍、少なくとも約１.８倍、少なくとも約１.９倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２.１倍、少なくとも約２.２倍、少なくとも約２.３倍、少なくとも約２.４倍、少なくとも約２.５倍、少なくとも約２.７５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３.５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約４.５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約７.５倍、少なくとも約１０倍または少なくとも約２０倍増加させる。
【００９１】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、患者血清における可溶性ＭＩＣＡ／Ｂ(ｓＭＩＣＡ／Ｂ)レベルを減少させる。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ヒトＭＩＣＡ／Ｂでトランスフェクトした細胞からの可溶性ＭＩＣＡ／Ｂの脱落を、約１０nM以下、約５nM以下、約１nM以下、約０.７nM以下、約０.６nM以下、約０.５nM以下、約０.４５nM以下、約０.４nM以下、約０.３５nM以下、約０.３nM以下、約０.２５nM以下、約０.２nM以下、約０.１９nM以下、約０.１８nM以下、約０.１７nM以下、約０.１６nM以下、約０.１５nM以下、約０.１４nM以下、約０.１３nM以下、約０.１２nM以下、約０.１１nM以下、約０.１nM以下、約０.０９nM以下、約０.０８nM以下、約０.０７nM以下、約０.０６nM以下、約０.０５nM以下、約０.０４nM以下、約０.０３nM以下、約０.０２nM以下または約０.０１nM以下のＩＣ５０で減少させる。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ヒトＭＩＣＡでトランスフェクトした細胞からのＭＩＣＡ／Ｂのシェディングを、約０.９倍以下、約０.８５倍以下、約０.８倍以下、約０.７５倍以下、約０.７倍以下、約０.６５倍以下、約０.６倍以下、約０.５５倍以下、約０.５倍以下、約０.４５倍以下、約０.４倍以下、約０.３５倍以下、約０.３倍以下、約０.２５倍以下、約０.２倍以下、約０.１５倍以下、約０.１倍以下または約０.０５以下に減少させる。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、対象の血清の可溶性ＭＩＣＡ／Ｂを、例えば、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％または少なくとも約９０％減少させ得る。
【００９２】
ここで使用する、用語「脱落」または「シェディング」は、ＭＩＣＡ／Ｂ発現細胞表面からの可溶性ＭＩＣＡ／Ｂの放出をいう。ＭＩＣＡ／Ｂは、細胞表面に局在化する膜貫通タンパク質として発現される。細胞外ドメイン内での開裂は、ここで、「可溶性ＭＩＣＡ／Ｂ」または「ｓＭＩＣＡ／Ｂ」と称するＭＩＣＡ／Ｂの一部を血漿に放出させる。
【００９３】
「エフェクター機能」は、抗体Ｆｃ領域とＦｃ受容体またはリガンドの相互作用、またはそれに由来する生化学的事象をいう。「エフェクター機能」の例は、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害(ＣＤＣ)、Ｆｃ受容体結合、ＦｃγＲ介在エフェクター機能、例えばＡＤＣＣおよび抗体依存性細胞貪食(ＡＤＣＰ)および細胞表面受容体(例えば、Ｂ細胞受容体；ＢＣＲ)下方制御を含む。このようなエフェクター機能は、一般にＦｃ領域が結合ドメイン(例えば、抗体可変ドメイン)と合わさることを必要とする。
【００９４】
「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、免疫グロブリンのＦｃ領域に結合する受容体である。ＩｇＧ抗体に結合するＦｃＲはアレルバリアントを含むＦｃγＲファミリーの受容体またはこれら受容体のオルタナティブスプライシング型を含む。ＦｃγＲファミリーは、３つの活性化(マウスでＦｃγＲＩ、ＦｃγＲIIIおよびＦｃγＲIV；ヒトでＦｃγＲＩＡ、ＦｃγＲIIＡおよびＦｃγＲIIIＡ)および１つの阻害性(ＦｃγＲIIＢ)受容体からなる。ヒトＦｃγＲの様々な性質は当分野で知られる。生来のエフェクター細胞型の大部分は活性化ＦｃγＲの１個以上および阻害性ＦｃγＲIIＢを共発現し、一方ナチュラルキラー(ＮＫ)細胞は１個の活性化Ｆｃ受容体(マウスでＦｃγＲIIIおよびヒトでＦｃγＲIIIＡ)を選択的に発現し、マウスおよびヒトで阻害性ＦｃγＲIIＢを発現しない。ヒトＩｇＧ１は大部分のヒトＦｃ受容体に結合し、それが結合する活性化Ｆｃ受容体のタイプについてマウスＩｇＧ２ａと等価と考えられる。
【００９５】
「Ｆｃ領域」(フラグメント結晶化可能領域)または「Ｆｃドメイン」または「Ｆｃ」は、免疫グロブリンの、免疫系(例えば、エフェクター細胞)の種々の細胞に位置するＦｃ受容体または古典的補体系の第一成分(Ｃ１ｑ)への結合を含む、宿主組織または因子への結合に介在する抗体の重鎖のＣ末端領域をいう。故に、Ｆｃ領域は、第一定常領域免疫グロブリンドメイン(例えば、ＣＨ１またはＣＬ)を除く抗体の定常領域を含む。ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＤ抗体アイソタイプにおいて、Ｆｃ領域は、重鎖の第二(ＣＨ２)および第三(ＣＨ３)定常ドメイン由来の２個の同一タンパク質フラグメントを含む；ＩｇＭおよびＩｇＥでは、Ｆｃ領域は、各ポリペプチド鎖に３個の重鎖定常ドメイン(ＣＨドメイン２〜４)を含む。ＩｇＧでは、Ｆｃ領域は、免疫グロブリンドメインＣＨ２およびＣＨ３ならびにＣＨ１とＣＨ２ドメインの間にヒンジを含む。ここに定義するとおり、免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は多様であるが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、重鎖のＩｇＧ１についてアミノ酸残基Ｄ２２１から、ＩｇＧ２についてＶ２２２から、ＩｇＧ３についてＬ２２１から、そしてＩｇＧ４についてＰ２２４からカルボキシ末端までのストレッチを規定し、ここで、ナンバリングはＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックスに従う。ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインはアミノ酸２３７からアミノ酸３４０まで伸び、ＣＨ３ドメインはＦｃ領域におけるＣＨ２ドメインのＣ末端側に位置し、すなわち、ＩｇＧのアミノ酸３４１〜アミノ酸４４７または４４６(Ｃ末端リシン残基がないならば)または４４５(Ｃ末端グリシンおよびリシン残基がないならば)まで伸びる。ここで使用するＦｃ領域は、あらゆるアロタイプバリアントまたはバリアントＦｃ(例えば、天然に存在しないＦｃ)を含む、天然配列Ｆｃであり得る。
【００９６】
「天然配列Ｆｃ領域」または「天然配列Ｆｃ」は、天然で見られるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列を含む。天然配列ヒトＦｃ領域は、天然配列ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域；天然配列ヒトＩｇＧ２  Ｆｃ領域；天然配列ヒトＩｇＧ３  Ｆｃ領域；および天然配列ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域ならびにその天然に存在するバリアントを含む。天然配列Ｆｃは、Ｆｃの様々なアロタイプを含む(例えば、Jefferis et al. (2009) mAbs 1: 1参照)。
【００９７】
用語「エピトープ」または「抗原決定基」は、例えば、同定のために使用する具体的方法により定義して、免疫グロブリンまたは抗体が特異的に結合する、抗原(例えば、ＭＩＣＡ)上の部位をいう。エピトープは、隣接アミノ酸(通常線状エピトープ)またはタンパク質の三次元折り畳みにより並置される非隣接アミノ酸(通常立体的エピトープ)の両者から形成され得る。隣接アミノ酸から形成されるエピトープは、常にではないが、一般に変性溶媒への暴露により保持されるが、三次元折り畳みにより形成されるエピトープは、一般に変性溶媒での処理により失われる。エピトープは、一般に特有の空間的高次構造で少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５アミノ酸を含む。どのエピトープがある抗体により結合されるかを決定する方法(すなわち、エピトープマッピング)は当分野で周知であり、例えば、免疫ブロットおよび免疫沈降アッセイを含み、ここで(例えば、ＭＩＣＡからの)重複または隣接ペプチドが、ある抗体(例えば、抗ＴＩＭ３抗体)との反応性について試験される。エピトープの空間的高次構造を決定する方法は当分野で知られる技術およびここに記載するもの、例えば、ｘ線結晶構造解析、抗原変異分析、２次元核磁気共鳴およびＨＤＸ−ＭＳを含む(例えば、Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, G. E. Morris, Ed. (1996)参照)。
【００９８】
用語「エピトープマッピング」は、抗体−抗原認識のための分子決定基を同定する過程をいう。
【００９９】
２以上の抗体について「同じエピトープに結合する」なる用語は、これら抗体が、ある方法により決定して、アミノ酸残基の同じセグメントに結合することを意味する。ある抗体が、ここに記載する抗体と「ＭＩＣＡの同じエピトープ」に結合するか否かを決定する技術は、例えば、エピトープの原子分解能を提供する抗原／抗体複合体の結晶ｘ線分析などのエピトープマッピング方法および水素／重水素交換マススペクトロメトリー(ＨＤＸ−ＭＳ)を含む。他の方法は、抗体の抗原フラグメントまたは抗原の変異バリエーションへの結合のモニターであり、ここで、抗原配列内のアミノ酸残基修飾による結合の喪失が、しばしばエピトープ成分の指標であると考えられる。さらに、エピトープマッピングのコンピューターによるコンビナトリアル法も使用され得る。これらの方法は、目的の抗体が、コンビナトリアルファージディスプレーペプチドライブラリーから特異的短ペプチドを親和性単離する能力を利用する。同じＶＨおよびＶＬまたは同じＣＤＲ１、２および３配列を有する抗体は、同じエピトープに結合することが予測される。
【０１００】
「他の抗体と標的への結合について競合する」抗体は、該他の抗体の該標的への結合を(部分的にまたは完全に)阻害する抗体をいう。２つの抗体が互いに標的への結合について競合するか、すなわち、一方の抗体が他方の抗体の標的への結合を阻害するかおよびその程度は、既知競合実験、例えば、BIACORE(登録商標)表面プラズモン共鳴(ＳＰＲ)分析を使用して決定され得る。ある実施態様において、抗体は、他の抗体の標的への結合と、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または１００％競合し、かつ阻害する。阻害または競合のレベルは、どの抗体が「遮断抗体」(すなわち、まず標的とインキュベートされる冷抗体)であるかにより異なり得る。競合アッセイは、例えば、Ed Harlow and David Lane, Cold Spring Harb Protoc; 2006; doi: 10.1101/pdb.prot4277 or in Chapter 11 of "Using Antibodies" by Ed Harlow and David Lane, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, USA 1999に記載のとおり実施され得る。２つの抗体は、抗体が両方向で互いに、すなわち、競合実験において何れか一方または他方の抗体をまず抗原と接触させたかにかかわらず、少なくとも５０％遮断するならば、「交差競合する」。
【０１０１】
２つの抗体が結合について競合するかまたは交差競合するかを決定する競合結合アッセイは、実施例に記載のような、例えば、フローサイトメトリーによる、ＭＩＣＡ／Ｂ発現細胞への結合についての競合を含む。他の方法は、ＳＰＲ(例えば、BIACORE(登録商標))、固相直接的または間接的放射免疫アッセイ(ＲＩＡ)、固相直接的または間接的酵素免疫アッセイ(ＥＩＡ)、サンドイッチ競合アッセイ(Stahli et al., Methods in Enzymology 9:242 (1983)参照)；固相直接的ビオチン−アビジンＥＩＡ(Kirkland et al., J. Immunol. 137:3614 (1986)参照)；固相直接的標識アッセイ、固相直接的標識サンドイッチアッセイ(Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press (1988)参照)；１−１２５標識を使用する固相直接的標識ＲＩＡ(Morel et al., Mol. Immunol. 25(1):7 (1988)参照)；固相直接的ビオチン−アビジンＥＩＡ(Cheung et al., Virology 176:546 (1990))；および直瀬的標識ＲＩＡ(Moldenhauer et al., Scand. J. Immunol. 32:77 (1990))を含む。
【０１０２】
ここで使用する用語「特異的結合」、「選択的結合」、「選択的に結合する」および「特異的に結合する」は、予定された抗原のエピトープへの抗体の結合をいう。一般に、抗体は、(ｉ)例えば、予定された抗原、例えば、組み換えヒトＭＩＣＡまたはＭＩＣＢを検体としておよび抗体をリガンドとして使用するBIACORE(登録商標)２０００装置での表面プラズモン共鳴(ＳＰＲ)テクノロジーまたは抗体の抗原陽性細胞への結合のスキャチャード解析により決定して、約１０−7Ｍ未満、例えば約１０−8Ｍ、１０−9Ｍまたは１０−10Ｍ未満またはそれより低い平衡解離定数(ＫＤ)で結合するおよび(ii)予定された抗原に、予定された抗原または密接に関連する抗原以外のその非特異的抗原(例えば、ＢＳＡ、カゼイン)への結合の親和性より少なくとも２倍大きな親和性で結合する。従って、「ヒトＭＩＣＡ／Ｂに特異的に結合する」抗体は、可溶性または細胞結合ヒトＴＩＭ３に１０−7Ｍ以下、例えば約１０−8Ｍ、１０−9Ｍまたは１０−10Ｍ未満またはそれより低いＫＤで結合する抗体をいう。「カニクイザルカニクイザルＭＩＣＡ／Ｂと交差反応する」抗体は、カニクイザルＭＩＣＡ／Ｂに１０−7Ｍ以下、例えば約１０−8Ｍ、１０−9Ｍまたは１０−10Ｍ未満またはそれより低いＫＤで結合する抗体をいう。ある実施態様において、非ヒト種からのＭＩＣＡ／Ｂと交差反応しないこのような抗体は、標準的結合アッセイでこれらのタンパク質に本質的に検出可能な結合を示さない。
【０１０３】
ここに使用する用語「ｋassoc」または「ｋａ」は、特定の抗体−抗原相互作用の結合速度をいうことを意図し、一方ここに使用する用語「ｋdis」または「ｋｄ」は、特定の抗体−抗原相互作用の解離速度をいうことを意図する。ここに使用する用語「ＫＤ」は解離定数をいうことを意図し、これはｋｄ対ｋａ比(すなわち、ｋｄ／ｋａ)から得られ、モル濃度(Ｍ)として表される。抗体のＫＤ値は、当分野で十分に確立された方法を使用して決定され得る。抗体のＫＤの決定に利用可能な方法は、表面プラズモン共鳴、BIACORE(登録商標)システムなどのバイオセンサーシステムまたはフローサイトメトリーおよびスキャチャード解析を含む。
【０１０４】
ここで使用するＩｇＧ抗体についての用語「高親和性」は、１０−8Ｍ以下、１０−9Ｍ以下または１０−10Ｍ以下のＫＤを有する抗体をいう。しかしながら、「高親和性」結合は、他の抗体アイソタイプについて変わり得る。例えば、ＩｇＭアイソタイプに対する「高親和性」結合は、１０−10Ｍ以下または１０−8Ｍ以下のＫＤを有する抗体をいう。
【０１０５】
抗体またはその抗原結合フラグメントを使用するインビトロまたはインビボアッセイの状況における用語「ＥＣ５０」は、最大応答の５０％、すなわち、最大応答とベースラインの半分の応答を誘発する抗体またはその抗原結合部分の濃度をいう。
【０１０６】
物についてのここに使用する用語「天然に存在する」は、その物が天然で見られることをいう。例えば、天然源から単離でき、実験室で人間により意図的に改変されていない生物(ウイルスを含む)に存在するポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列は、天然に存在する。
【０１０７】
「ポリペプチド」は、少なくとも２個の連続的に結合したアミノ酸残基を含む鎖をいい、鎖長の上限はない。タンパク質中の１個以上アミノ酸残基は、グリコシル化、リン酸化またはジスルフィド結合形成などの、しかしこれらに限定されない修飾を含み得る。「タンパク質」は１以上のポリペプチドを含み得る。
【０１０８】
ここに使用する用語「核酸分子」はＤＮＡ分子およびＲＮＡ分子を含むことを意図する。核酸分子は一本鎖でも二本鎖でもよく、ｃＤＮＡであり得る。
【０１０９】
「保存的アミノ酸置換」は、あるアミノ酸残基の類似側鎖を有するアミノ酸残基への置換をいう。類似側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは当分野で定義されているこれらのファミリーは、塩基性側鎖(例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン)、酸性側鎖(例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸)、非荷電極性側鎖(例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン)、非極性側鎖(例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン)、ベータ−分岐側鎖(例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン)および芳香族側鎖(例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン)を有するアミノ酸を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体中の予測非必須アミノ酸残基を、同じ側鎖ファミリーの他のアミノ酸残基で置き換える。抗原結合を排除しないヌクレオチドおよびアミノ酸保存的置換を同定する方法は、当分野で周知である(例えば、Brummell et al., Biochem. 32: 1180-1187 (1993); Kobayashi et al. Protein Eng. 12(10):879-884 (1999);およびBurks et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:412-417 (1997)参照)。
【０１１０】
核酸について、用語「実質的相同性」は、２個の核酸またはその指定配列が、適切なヌクレオチド挿入または欠失を伴い、最適にアラインおよび比較されたとき、ヌクレオチドの少なくとも約８０％、少なくともヌクレオチドの約９０％〜９５％または少なくとも約９８％〜９９.５％が同一であることを示す。あるいは、実質的相同性は、セグメントが、相補性鎖と選択的ハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズするとき存在する。
【０１１１】
ポリペプチドについて、用語「実質的相同性」は、２個のポリペプチドまたはその指定配列が、適切なアミノ酸挿入または欠失を伴い、最適にアラインおよび比較されたとき、アミノ酸の少なくとも約８０％、アミノ酸の少なくとも約９０％〜９５％または少なくとも約９８％〜９９.５％が同一であることを示す。
【０１１２】
２個の配列間のパーセント同一性は、２個の配列の最適アライメントのために導入する必要があったギャップ数および各ギャップ長を考慮に入れて、配列により共有される同一位置の数の関数(すなわち、％相同性＝同一位置数／位置の総数×１００)である。配列比較および２配列間のパーセント同一性の決定は、下記非限定的例に記載のとおり、数学的アルゴリズムを使用して達成され得る。
【０１１３】
２個のヌクレオチド配列間のパーセント同一性は、ＧＣＧソフトウェアパッケージ(worldwideweb.gcg.comから入手可能)のＧＡＰプログラムを使用して、ＮＷＳｇａｐｄｎａ.ＣＭＰマトリクスおよびギャップ荷重４０、５０、６０、７０または８０および長さ荷重１、２、３、４、５または６を使用して、決定され得る。２個のヌクレオチドまたはアミノ酸配列のパーセント同一性はまたＡＬＩＧＮプログラム(version 2.0)に組み込まれているE. Meyers and W. Miller (CABIOS, 4: 11-17 (1989))のアルゴリズムを使用して、ＰＡＭ１２０荷重残基表、ギャップ長ペナルティ１２およびギャップペナルティ４を使用しても決定され得る。さらに、２個のアミノ酸配列間のパーセント同一性は、ＧＣＧソフトウェアパッケージ(http://www.gcg.comで入手可能)のＧＡＰプログラムに組み込まれているNeedleman and Wunsch (J. Mol. Biol. (48):444-453 (1970))アルゴリズムを使用して、Ｂｌｏｓｓｕｍ  ６２マトリクスまたはＰＡＭ２５０マトリクスおよびギャップ荷重１６、１４、１２、１０、８、６または４および長さ荷重１、２、３、４、５または６を使用して決定できる。
【０１１４】
ここに記載する核酸およびタンパク質配列は、例えば、関連配列同定のために、公開されたデータベースに対するサーチを行うための「クエリー配列」としてさらに使用され得る。このようなサーチは、Altschul, et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-10のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラム(version 2.0)を使用して実施できる。ＢＬＡＳＴヌクレオチドサーチは、ここに記載する核酸分子と相同のヌクレオチド配列を得るために、ＮＢＬＡＳＴプログラムで、スコア＝１００、単語長＝１２で実施され得るＢＬＡＳＴタンパク質サーチは、ここに記載するタンパク質分子と相同のアミノ酸配列を得るために、ＸＢＬＡＳＴプログラムで、スコア＝５０、単語長＝３で実施され得る。比較目的でのギャップ付きアラインメントを得るために、Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴを、Altschul et al., (1997) Nucleic Acids Res. 25(17):3389-3402に記載のとおり利用できる。ＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴプログラムを利用するとき、各プログラム(例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ)のデフォルトパラメータが使用され得る。worldwideweb.ncbi.nlm.nih.gov.参照。
【０１１５】
核酸は細胞全体に、細胞溶解物にまたは部分的に精製されたまたは実質的に純粋な形態で存在し得る。核酸は、アルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンディング、カラムクロマトグラフィー、アガロースゲル電気泳動および当分野で周知のその他を含む標準的技術によりの細胞成分または他の汚染物質、例えば、他の細胞核酸(例えば、染色体の他の部分)またはタンパク質から精製されて分離されたとき、「単離された」または「実質的に純粋にされた」と言える。F. Ausubel, et al., ed. Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New York (1987)参照。
【０１１６】
核酸、例えば、ｃＤＮＡは、遺伝子配列を提供するための標準的技術により変異され得る。コード配列について、これらの変異は所望によりアミノ酸配列に影響し得る。特に、ここに記載する天然Ｖ、Ｄ、Ｊ、定常、スイッチおよび他のこのような配列に実質的に相同なまたはそれに由来するＤＮＡ配列が考慮される(ここで「由来する」は、配列が他の配列と同一であるまたはそれから修飾されていることを示す)。
【０１１７】
ここに使用する用語「ベクター」は、それに結合している他の核酸を輸送できる核酸分子をいうことを意図する。ベクターの一つのタイプは、さらなるＤＮＡセグメントがライゲートされ得る環状二本鎖ＤＮＡループをいう「プラスミド」である。ベクターの他のタイプはウイルスベクターであり、さらなるＤＮＡセグメントがウイルスゲノム内にライゲートされ得る。あるベクターは、導入される宿主細胞で自律複製できる(例えば、細菌複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター)。他のベクター(例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター)は、宿主細胞への導入により宿主細胞ゲノムに統合され、それにより宿主ゲノムと同時に複製され得る。さらに、あるベクターは、操作可能に結合している遺伝子の発現を指示できる。このようなベクターは、「組み換え発現ベクター」(または単に、「発現ベクター」)と称する。一般に、組み換えＤＮＡ技術で有用性のある発現ベクターはしばしばプラスミドの形である。本明細書で、「プラスミド」および「ベクター」は、プラスミドがベクターの最も一般的に使用される形態であるため、相互交換可能に使用され得る。しかしながら、同等の機能を有するウイルスベクター(例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス)などの発現ベクターの他の形態も包含する。
【０１１８】
ここに使用する用語「組み換え宿主細胞」(または単に「宿主細胞」)は、該細胞に天然に存在しない核酸を含む細胞をいうことを意図し、組み換え発現ベクターが導入されている細胞であり得る。このような用語は、特定の対象細胞だけでなく、このような細胞の子孫も含むことが理解されるべきである。後代で変異または環境的影響により何らかの修飾が起こり得るので、実際、このような子孫は親細胞と同一ではあり得ないが、なおここに使用する用語「宿主細胞」の範囲内に含まれる。
【０１１９】
「免疫応答」は、当分野でおよび一般に外来因子または異常、例えば、癌細胞に対する脊椎動物内の生物学的応答をいうと理解され、この応答はこれらの因子およびそれが原因の疾患から生物を保護する。免疫応答は、免疫系の１個以上の細胞(例えば、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、ナチュラルキラー(ＮＫ)細胞、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、樹状細胞または好中球)およびこれらの細胞または肝臓が産生する可溶性巨大分子(抗体、サイトカインおよび補体を含む)の作用が介在し、これは侵入病原体、病原体で感染した細胞または組織、癌または他の異常細胞、または自己免疫または病的炎症の場合、正常ヒト細胞または組織の哺乳動物身体での選択的標的化、結合、損傷、破壊および／または排除をもたらす。免疫反応は、例えば、Ｔ細胞、例えば、エフェクターＴ細胞、Ｔｈ細胞、ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞またはＴｒｅｇ細胞の活性化または阻害または免疫系の何らかの他の細胞、例えば、ＮＫ細胞の活性化または阻害を含む。
【０１２０】
「免疫調節剤」または「イムノレギュレーター」は、ある薬剤、例えば、免疫応答の調節、制御または修飾に関与し得るシグナル伝達経路の成分を標的とする薬剤をいう。免疫応答の「調節」、「制御」または「修飾」は、免疫系細胞またはこのような細胞(例えば、Ｔｈ１細胞などのエフェクターＴ細胞)の活性の何らかの改変をいう。このような調節は、各種細胞型の数の増加または減少、これらの細胞の活性の増加または減少または免疫系内で生じ得る他の何らかの変化により具現され得る免疫系の刺激または抑制を含む。阻害性および刺激性両者の免疫調節剤が同定されており、その一部は腫瘍微小環境で機能が増強されている可能性がある。ある実施態様において、免疫調節剤は、Ｔ細胞表面の分子を標的とする。「免疫調節性標的」または「免疫制御性標的」は、物質、薬剤、部分、化合物または分子による結合の標的とされ、結合により活性が変えられる、分子、例えば、細胞表面分子である。免疫調節性標的は、例えば、細胞表面受容体(「免疫調節性受容体」)および受容体リガンド(「免疫調節性リガンド」)を含む。
【０１２１】
「免疫療法」は、免疫系または免疫応答の誘発、増強、抑制または他の修飾を含む方法による、疾患を有するまたはその発症もしくは再発のリスクのある対象の処置をいう。
【０１２２】
「免疫刺激性治療」または「免疫刺激治療」は、例えば、癌を処置するための、対象の免疫応答の増加(誘発または増強)をもたらす治療をいう。
【０１２３】
「内因性免疫応答増強」は、対象に存在する免疫応答の有効性または効力の増加を意味する。この有効性および効力の増加は、例えば、内因性宿主免疫応答を抑制する機序の克服または内因性宿主免疫応答を増強する機序の刺激により達成され得る。
【０１２４】
「Ｔエフェクター」(「Ｔｅｆｆ」)細胞は、細胞溶解活性を有するＴ細胞(例えば、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋  Ｔ細胞)ならびにサイトカインを分泌し、他の免疫細胞を活性化および指示するＴヘルパー(Ｔｈ)細胞、例えば、Ｔｈ１細胞をいうが、制御性Ｔ細胞(Ｔｒｅｇ細胞)を含まない。あるここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、Ｔｅｆｆ細胞、例えば、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋  Ｔｅｆｆ細胞およびＴｈ１細胞を活性化する。
【０１２５】
免疫応答または免疫系を刺激する能力の増加は、Ｔ細胞共刺激受容体のアゴニスト活性増強および／または阻害性受容体のアンタゴニスト活性増強によりもたらされ得る。免疫応答または免疫系を刺激する能力の増加は、免疫応答を測定するアッセイでのＥＣ５０または活性の最大レベル、例えば、サイトカインまたはケモカイン放出、細胞溶解活性(標的細胞で直接またはＣＤ１０７ａまたはグランザイム検出により間接的に決定)および増殖の変化を測定するアッセイの増加倍率により反映され得る。免疫応答または免疫系活性を刺激する能力は、少なくとも１０％、３０％、５０％、７５％、２倍、３倍、５倍またはそれ以上増強され得る。
【０１２６】
ここで使用する用語「結合」は、２個以上の分子の結合をいう。結合は共有結合または非共有結合であり得る。結合はまた遺伝的(すなわち、組み換え融合)であり得る。このような結合は、化学的コンジュゲーションおよび組み換えタンパク質産生などの当分野で認識されている広範な技術を使用して達成され得る。
【０１２７】
ここで使用する「投与」は、治療剤を含む組成物の、当業者に知られる種々の方法および送達系の何れかを使用する対象への物理的導入をいう。ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の種々の投与経路は、例えば、注射または点滴による、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、脊椎または他の非経腸投与経路を含む。ここで使用する用語「非経腸投与」は、通常、注射による、経腸および局所投与以外の投与方式を意味し、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、髄腔内、リンパ内、病巣内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、髄腔内、硬膜外および胸骨内注射および点滴ならびにインビボエレクトロポレーションを含むが、これらに限定されない。あるいは、ここに記載する抗体を、局所、上皮または粘膜投与経路、例えば、鼻腔内、経口、膣、直腸、舌下または局所的などの非経腸ではない経路で投与し得る。投与はまた、例えば、１回、複数回および／または１回以上の長期に実施し得る。
【０１２８】
ここで使用する用語「Ｔ細胞介在応答」は、エフェクターＴ細胞(例えば、ＣＤ８＋細胞)およびヘルパーＴ細胞(例えば、ＣＤ４＋細胞)を含むＴ細胞が介在する応答をいうＴ細胞介在応答は、例えば、Ｔ細胞の細胞毒性および増殖を含む。
【０１２９】
ここで使用する用語「細胞毒性Ｔリンパ球(ＣＴＬ)応答」は、細胞毒性Ｔ細胞により誘発される免疫応答をいう。ＣＴＬ応答は、主にＣＤ８＋  Ｔ細胞が介在する。
【０１３０】
ここで使用する用語「腫瘍の増殖を阻害する」は、腫瘍増殖の何らかの測定可能な減少、例えば、少なくとも約１０％、例えば、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９９％または１００％の腫瘍増殖阻害を含む。ある実施態様において、腫瘍増殖の阻害は、パーセント腫瘍増殖阻害(ＴＧＩ％)として測定する。ＴＧＩ％は、式：[１−((Ｔｔ／Ｔ０)／(Ｃｔ／Ｃ０))]／[(Ｃｔ−Ｃ０)／Ｃｔ]×１００[式１]に従い、全処置動物から計算される「ｔ」の日のＴＧＩの計算により決定できる(式中、Ｔｔ＝‘ｔ’時点での処置動物の個々の腫瘍サイズ、Ｔ０＝最初の測定時の処置動物の個々の腫瘍サイズ、Ｃｔ＝‘ｔ’時点での対照動物の中央腫瘍サイズ、Ｃ０＝最初の測定時の対照動物の中央腫瘍サイズ)。
【０１３１】
ここで使用する「癌」は、体内の異常細胞の制御されない増殖により特徴づけられる広い一群の疾患をいう。制御されない細胞分裂は、隣接組織に侵襲し、リンパ系または血流を介して体の遠位部分に転移し得る、悪性腫瘍または細胞の形成をもたらし得る。
【０１３２】
ここに使用する用語「処置」および「処置する」は、疾患と関連する症状、合併症、状態または生化学的徴候の進行、進展、重症度または再発の反転、軽減、改善、阻止または減速または予防または全生存期間延長を目的として、対象に行うあらゆるタイプの介入または過程または活性剤の投与をいう。処置は、疾患を有する対象または疾患を有していない対象(例えば、予防目的)に対するものであり得る。
【０１３３】
用語「有効用量」または「有効投与量」は、所望の効果の達成または少なくとも部分的達成に十分な量として定義される。薬物または治療剤の「治療有効量」または「治療有効投与量」は、単独でまたは他の治療剤と組み合わせて使用したときの、疾患症状重症度低減、無疾患症状期間の頻度および期間の増大、全生存(癌などの疾患の診断日または処置開始日から、該疾患を有すると診断された患者がなお生存している期間の長さ)延長または疾患罹患による機能障害または能力障害の予防により証明される疾患退縮を促進する、薬物の何れかの量である。薬物の治療有効量または投与量は「予防有効量」または「予防有効投与量」を含み、これは、疾患を発症するまたは疾患を再発するリスクのある対象に単独でまたは他の治療剤と組み合わせて投与したとき、疾患の発症または再発を阻止する、薬物の何れかの量である。治療剤が疾患退縮を促進するまたは疾患発症もしくは再発を阻止する能力は、治験中のヒト対象で、ヒトでの有効性を予測する動物モデルでまたはインビトロアッセイで薬剤の活性のアッセイによるなど、熟練した技術者に知られる多くの方法を使用して評価され得る。
【０１３４】
例として、抗癌剤は対象の癌退縮を促進する薬物である。ある実施態様において、治療有効量薬物は、癌を除去する点まで癌退縮を促進する。「癌退縮促進」は、単独でまたは抗新生物剤と組み合わせて、腫瘍増殖またはサイズの低減、腫瘍壊死、少なくとも１つの疾患症状の重症度低減、無疾患症状期間の頻度および期間の増大、全生存延長、罹患による機能障害または能力障害の予防または患者における疾患症状の他の改善をもたらす有効量の薬物の投与を意味する。さらに、処置に関連する用語「有効」および「有効性」は、薬理学的有効性および生理学的安全性両者を含む。薬理学的有効性は、患者の癌退縮を促進する薬物の能力をいう。生理学的安全性は、薬物投与に起因する細胞、臓器および／または生物レベルでの毒性または他の有害生理学的効果(有害効果)のレベルをいう。
【０１３５】
腫瘍処置の例として、薬物の治療有効量または投与量は、未処置対象に対して、少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約６０％または少なくとも約８０％細胞増殖または腫瘍増殖を阻害する。ある実施態様において、薬物の治療有効量または投与量は、細胞増殖または腫瘍増殖を完全に阻害する、すなわち、細胞増殖または腫瘍増殖を１００％阻害する。化合物が腫瘍増殖を阻害する能力は、上記アッセイを使用して評価され得る。あるいは、組成物のこの性質は、化合物が細胞増殖を阻害する能力の試験により評価でき、このような阻害は熟練した実施者に知られるアッセイによりインビトロで測定され得る。ここに記載するある実施態様において、腫瘍退縮が少なくとも少なくとも約２０日、少なくとも約４０日または少なくとも約６０日の期間観察され、持続され得る。
【０１３６】
用語「患者」は、予防または治療処置を受ける、ヒトおよび他の哺乳動物対象をいう。
【０１３７】
ここで使用する、用語「対象」は、あらゆるヒトまたは非ヒト動物を含む。例えば、ここに記載する方法および組成物を使用して、癌を有する対象を処置し得る。用語「非ヒト動物」は、全脊椎動物、例えば、哺乳動物および非哺乳動物、例えば非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類などを含む。
【０１３８】
ここでいう用語「体重に基づく」投与量または投与は、患者に投与する投与量が、患者の体重に基づき計算されることを意味する。例えば、６０kg体重の患者が３mg／kgの抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を必要とするとき、投与のための適切な量の抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体(すなわち、１８０mg)を計算し、使用できる。
【０１３９】
ここに記載する組み合わせに関する用語「固定用量」は、２以上の異なる抗体(例えば、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体および第二抗体、例えば、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１抗体)が組成物に存在するかまたは互いに別々に特定の(固定)量または比率で投与されることを意味する。ある実施態様において、固定用量は、抗体重量(例えば、mg)に基づく。ある実施態様において、固定用量は抗体濃度(例えば、mg／ml)に基づく。ある実施態様において、２抗体(例えば、抗ＭＩＣＡ／Ｂおよび抗ＰＤ１または抗ＰＤ−Ｌ１)の比は、少なくとも約１：１、約１：２、約１：３、約１：４、約１：５、約１：６、約１：７、約１：８、約１：９、約１：１０、約１：１５、約１：２０、約１：３０、約１：４０、約１：５０、約１：６０、約１：７０、約１：８０、約１：９０、約１：１００、約１：１２０、約１：１４０、約１：１６０、約１：１８０、約１：２００、約２００：１、約１８０：１、約１６０：１、約１４０：１、約１２０：１、約１００：１、約９０：１、約８０：１、約７０：１、約６０：１、約５０：１、約４０：１、約３０：１、約２０：１、約１５：１、約１０：１、約９：１、約８：１、約７：１、約６：１、約５：１、約４：１、約３：１または約２：１mg  第一抗体(例えば、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体)対mg  第二抗体である。例えば、２：１比の抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体およびニボルマブなどの抗ＰＤ−１抗体は、バイアルまたは注射が、約４８０mgの抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体および２４０mgの抗ＰＤ−１抗体または約２mg／mlの抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体および１mg／mlの抗ＰＤ−１抗体を含み得ることを意味する。
【０１４０】
ここに記載する方法および投与量に関する用語「一定用量」の使用は、患者の体重または体表面積(ＢＳＡ)に関係なく、患者に投与される用量を意味する。一定用量は、それ故に、薬剤(例えば、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体)のmg／kg用量としてではなく、絶対量として提供される。例えば、６０kgの人と１００kgの人は、同じ用量の抗体(例えば、４８０mgの抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体)を受ける。
【０１４１】
ここで使用する、用語「ug」および「uM」は、それぞれ、「μg」および「μM」と相互交換可能に使用される。
【０１４２】
ここに記載する種々の態様を、次のサブセクションにさらに記載する。
【０１４３】
II. 抗ヒトＭＩＣＡ／Ｂ抗体
ここに記載するのは、ＭＨＣクラスＩポリペプチド関連配列Ａ／Ｂ(ＭＩＣＡ／Ｂ)に特異的に結合し、腫瘍細胞によるＭＩＣＡ／Ｂのシェディングを阻止、防止または減少させ、それにより腫瘍細胞表面でのＭＩＣＡ／Ｂの保持を増加させることができる、抗体、例えば、完全ヒト抗体である。例えば、抗体は、ヒトＭＩＣＡ／Ｂ、より具体的に、ヒトＭＩＣＡの細胞外ドメイン内の特定のドメイン(例えば、α３ドメイン)に特異的に結合する。ある実施態様において、抗体はＭＩＣＡ／Ｂに特異的に結合し、それにより血清のＭＩＣＡ／Ｂレベルを減少させ、一方、該抗体は膜結合ＭＩＣＡ／Ｂのレベルを増加させる。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、カニクイザルＭＩＣＡ／Ｂなどの１以上の非ヒト霊長類からのＭＩＣＡ／Ｂと交差反応する。ある実施態様において、抗体は、ヒトＭＩＣＡ／Ｂのα３ドメインおよびカニクイザルＭＩＣＡ／Ｂのα３ドメインと特異的に結合する。ある実施態様において、抗体は、高親和性でヒトＭＩＣＡ／Ｂに結合する。
【０１４４】
ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、次の機能的性質の１以上を示す。
(ａ) 膜結合ヒトＭＩＣＡ／Ｂに結合する；
(ｂ) 膜結合カニクイザルＭＩＣＡ／Ｂに結合する；
(ｃ) 対象の血清の可溶性ＭＩＣＡ／Ｂレベルを減少させる；
(ｄ) 腫瘍細胞の膜結合ＭＩＣＡ／Ｂを増加させる；
(ｅ) 腫瘍細胞によるＭＩＣＡ／Ｂのシェディングを阻止、防止または減少させる；
(ｆ) 細胞による抗原プロセシングおよび／または交差提示の増強に介在する；
(ｇ) ＡＤＣＣおよび／またはＡＤＣＰの増強に介在する；
(ｈ) 腫瘍増殖および／または転移を阻害する；
(ｉ) 腫瘍体積を減少させる；
(ｊ) 無進行生存を延長させる；
(ｋ) 全生存を延長させる；および
(ｌ) これらの何れかの組み合わせ。
【０１４５】
ある実施態様において、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ヒトＭＩＣＡ／Ｂに、高親和性で、例えば、１０−６Ｍ以下、１０−７Ｍ以下、１０−８Ｍ以下、１０−９Ｍ以下、１０−１０Ｍ以下、１０−１１Ｍ以下、１０−１２Ｍ以下、１０−１２Ｍ〜１０−７Ｍ、１０−１１Ｍ〜１０−７Ｍ、１０−１０Ｍ〜１０−７Ｍまたは１０−９Ｍ〜１０−７ＭのＫＤで結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ヒトＭＩＣＡ／Ｂに、例えば、BIACORETM(例えば、実施例に記載)を使用する、例えば、表面プラズモン共鳴により決定して、１０−６Ｍ以下、１０−７Ｍ以下、１０−８Ｍ以下、１０−９Ｍ(１nM)以下、１０−１０Ｍ以下、１０−１２Ｍ〜１０−７Ｍ、１０−１１Ｍ〜１０−７Ｍ、１０−１０Ｍ〜１０−７Ｍ、１０−９Ｍ〜１０−７Ｍまたは１０−８Ｍ〜１０−７ＭのＫＤで結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ヒトｓＭＩＣＡ／Ｂに、例えば、ＥＬＩＳＡ、例えば、ＭＩＣＡ／Ｂ  ＥＬＩＳＡキット、例えば、ＡＢＣＡＭ  ａｂ１００５９２により決定して、１００nM以下、１０nM以下、１nM以下、１００nM〜０.０１nM、１００nM〜０.１nM、１００nM〜１nMまたは１０nM〜１nMまたは１０μg／mL以下、５μg／mL以下、１μg／mL以下、０.９μg／mL以下、０.８μg／mL以下、０.７μg／mL以下、０.６μg／mL以下、０.５μg／mL以下、０.４μg／mL以下、０.３μg／mL以下、０.２μg／mL以下、０.１μg／mL以下、０.０５μg／mL以下または０.０１μg／mL以下のＥＣ５０で結合する。ある実施態様において、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、カニクイザルＭＩＣＡ／Ｂに、例えば、１０−６Ｍ以下、１０−７Ｍ以下、１０−８Ｍ以下、１０−９Ｍ以下、１０−１０Ｍ以下、１０−１１Ｍ以下、１０−１２Ｍ以下、１０−１２Ｍ〜１０−７Ｍ、１０−１１Ｍ〜１０−７Ｍ、１０−１０Ｍ〜１０−７Ｍまたは１０−９Ｍ〜１０−７ＭのＫＤで結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、可溶性カニクイザルＭＩＣＡ／Ｂに、例えば、BIACORETM(例えば、実施例に記載)により決定して、１０−６Ｍ以下、１０−７Ｍ以下、１０−８Ｍ以下、１０−９Ｍ(１nM)以下、１０−１０Ｍ以下、１０−１２Ｍ〜１０−７Ｍ、１０−１１Ｍ〜１０−７Ｍ、１０−１０Ｍ〜１０−７Ｍ、１０−９Ｍ〜１０−７Ｍまたは１０−８Ｍ〜１０−７ＭのＫＤで結合する。抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、カニクイザルｓＭＩＣＡ／Ｂに、例えば、ＥＬＩＳＡ(例えば、実施例に記載)で測定して、例えば、１００nM以下、１０nM以下、１００nM〜０.０１nM、１００nM〜０.１nM、１００nM〜１nMまたは１０nM〜１nMのＥＣ５０で結合できる。
【０１４６】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ヒトＭＩＣＡ／Ｂに、約５×１０−４Ｍ以下、約１×１０−４Ｍ以下、５×１０−５Ｍ以下、約１×１０−５Ｍ以下、約１×１０−６Ｍ以下、約１×１０−７Ｍ以下または約１×１０−８Ｍ以下のＫＤで特異的に結合し、ここで、ＫＤは表面プラズモン共鳴(Biacore)分析により測定される。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ヒトＭＩＣＡアレルＭＩＣＡ＊００２に、約１×１０−４Ｍ以下、約１×１０−５Ｍ以下、１×１０−６Ｍ以下、約１×１０−７Ｍ以下または約１×１０−８Ｍ以下のＫＤで特異的に結合し、ここで、ＫＤは表面プラズモン共鳴(Biacore)分析により測定される。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ヒトＭＩＣＡアレルＭＩＣＡ＊００４に、約１×１０−４Ｍ以下、約１×１０−５Ｍ以下、１×１０−６Ｍ以下、約１×１０−７Ｍ以下または約１×１０−８Ｍ以下のＫＤで特異的に結合し、ここで、ＫＤは表面プラズモン共鳴(Biacore)分析により測定される。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ヒトＭＩＣＡアレルＭＩＣＡ＊００８に、約１×１０−４Ｍ以下、約１×１０−５Ｍ以下、１×１０−６Ｍ以下、約１×１０−７Ｍ以下または約１×１０−８Ｍ以下のＫＤで特異的に結合し、ここで、ＫＤは表面プラズモン共鳴(Biacore)分析により測定される。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ヒトＭＩＣＡアレルＭＩＣＡ＊００９に、約約１×１０−４Ｍ以下、約１×１０−５Ｍ以下、１×１０−６Ｍ以下、約１×１０−７Ｍ以下または約１×１０−８Ｍ以下のＫＤで特異的に結合し、ここで、ＫＤは表面プラズモン共鳴(Biacore)分析により測定される。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ヒトＭＩＣＢアレルＭＩＣＢ＊００５に、約１×１０−４Ｍ以下、約１×１０−５Ｍ以下、１×１０−６Ｍ以下、約１×１０−７Ｍ以下または約１×１０−８Ｍ以下のＫＤで特異的に結合し、ここで、ＫＤは表面プラズモン共鳴(Biacore)分析により測定される。
【０１４７】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ヒトＭＩＣＡ／Ｂに、少なくとも約１×１０３ms−１、少なくとも約５×１０３ms−１、少なくとも約１×１０４ms−１、少なくとも約５×１０４ms−１、少なくとも約１×１０５ms−１、少なくとも約５×１０５ms−１または少なくとも約１×１０６ms−１の結合定数(ｋａ)速度で特異的に結合し、ここで、ｋａは表面プラズモン共鳴(Biacore)分析により測定される。
【０１４８】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ヒトＭＩＣＡ／Ｂに、約０.１ｓ−１以下、０.０５ｓ−１以下、０.０１ｓ−１以下、５×１０−３ｓ−１以下、１×１０−３ｓ−１以下、５×１０−４ｓ−１以下、１×１０−４ｓ−１以下、５×１０−５ｓ−１以下または１×１０−５ｓ−１以下の解離定数(ｋｄ)速度で特異的に結合し、ここで、ＫＤは表面プラズモン共鳴(Biacore)分析により測定される。
【０１４９】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ＭＩＣＡ／Ｂに特異的に結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ＭＩＣＡおよびＭＩＣＢに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ＭＩＣＡ＊００２アレルに特異的に結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ＭＩＣＡ＊００４アレルに特異的に結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ＭＩＣＡ＊００８アレルに特異的に結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ＭＩＣＡ＊００９アレルに特異的に結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ＭＩＣＡ＊００２アレル、ＭＩＣＡ＊００４アレル、ＭＩＣＡ＊００８アレルおよびＭＩＣＡ＊００９アレルに特異的に結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂは、ＭＩＣＡ＊００２アレルに、ＭＩＣＡ＊００４アレル、ＭＩＣＡ＊００８アレルまたはＭＩＣＡ＊００９アレルより高い親和性で結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂは、ＭＩＣＡ＊００４アレルに、ＭＩＣＡ＊００２アレル、ＭＩＣＡ＊００８アレルまたはＭＩＣＡ＊００８アレルより高い親和性で結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂは、ＭＩＣＡ＊００８アレルに、ＭＩＣＡ＊００２アレル、ＭＩＣＡ＊００４アレルまたはＭＩＣＡ＊００９アレルより高い親和性で結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂは、ＭＩＣＡ＊００９アレルに、ＭＩＣＡ＊００２アレル、ＭＩＣＡ＊００４アレルまたはＭＩＣＡ＊００８アレルより高い親和性で結合する。
【０１５０】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は重鎖可変領域(ＶＨ)および軽鎖可変領域(ＶＬ)を含み；ここで、ＶＨはＶＨ相補性決定領域(ＣＤＲ)１(ＶＨ−ＣＤＲ１)、ＶＨ−ＣＤＲ２およびＶＨ−ＣＤＲ３を含み、ＶＬは、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２およびＶＬ−ＣＤＲ３を含み；ここで、ＶＨ−ＣＤＲ３は、配列番号７、１７、２７、３７および４７からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号７、１７、２７、３７および４７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、ＶＨ−ＣＤＲ３を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号７に示すアミノ酸配列を含む、ＶＨ−ＣＤＲ３を含む。
【０１５１】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号６、１６、２６、３６および４６からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＶＨ−ＣＤＲ２を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号６、１６、２６、３６および４６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、ＶＨ−ＣＤＲ２を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号６に示すアミノ酸配列を含む、ＶＨ−ＣＤＲ２を含む。
【０１５２】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号５、１５、２５、３５および４５からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＶＨ−ＣＤＲ１を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号５、１５、２５、３５および４５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、ＶＨ−ＣＤＲ１を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号５に示すアミノ酸配列を含む、ＶＨ−ＣＤＲ１を含む。
【０１５３】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号８、１８、２８、３８および４８からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＶＬ−ＣＤＲ１を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号８、１８、２８、３８および４８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、ＶＬ−ＣＤＲ１を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号８に示すアミノ酸配列を含む、ＶＬ−ＣＤＲ１を含む。
【０１５４】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号９、１９、２９、３９および４９からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＶＬ−ＣＤＲ２を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号９、１９、２９、３９および４９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、ＶＬ−ＣＤＲ２を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号９に示すアミノ酸配列を含む、ＶＬ−ＣＤＲ２を含む。
【０１５５】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号１０、２０、３０、４０および５０からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＶＬ−ＣＤＲ３を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号１０、２０、３０、４０および５０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、ＶＬ−ＣＤＲ３を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号１０に示すアミノ酸配列を含む、ＶＬ−ＣＤＲ３を含む。
【０１５６】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号５に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ１、配列番号６に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ２、配列番号７に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ３、配列番号８に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ１、配列番号９に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ２および配列番号１０に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ３を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体はフコシル化されていない。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は低フコシル化である。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号５に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ１、配列番号６に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ２、配列番号７に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ３、配列番号８に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ１、配列番号９に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ２および配列番号１０に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ３を含む対照抗体と、配列番号５に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ１、配列番号６に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ２、配列番号７に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ３、配列番号８に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ１、配列番号９に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ２および配列番号１０に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ３への結合について交差競合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号５に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ１、配列番号６に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ２、配列番号７に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ３、配列番号８に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ１、配列番号９に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ２および配列番号１０に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ３を含む対照抗体と同じエピトープに結合する。
【０１５７】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号１５に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ１、配列番号１６に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ２、配列番号１７に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ３、配列番号１８に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ１、配列番号１９に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ２および配列番号２０に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ３を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体はフコシル化されていない。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は低フコシル化である。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号１５に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ１、配列番号１６に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ２、配列番号１７に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ３、配列番号１８に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ１、配列番号１９に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ２および配列番号２０に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ３を含む対照抗体と、配列番号１５に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ１、配列番号１６に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ２、配列番号１７に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ３、配列番号１８に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ１、配列番号１９に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ２および配列番号２０に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ３への結合について交差競合する。
【０１５８】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号２５に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ１、配列番号２６に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ２、配列番号２７に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ３、配列番号２８に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ１、配列番号２９に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ２および配列番号３０に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ３を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体はフコシル化されていない。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は低フコシル化である。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号２５に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ１、配列番号２６に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ２、配列番号２７に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ３、配列番号２８に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ１、配列番号２９に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ２および配列番号３０に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ３を含む対照抗体と、配列番号２５に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ１、配列番号２６に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ２、配列番号２７に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ３、配列番号２８に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ１、配列番号２９に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ２および配列番号３０に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ３への結合について交差競合する。
【０１５９】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号３５に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ１、配列番号３６に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ２、配列番号３７に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ３、配列番号３８に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ１、配列番号３９に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ２および配列番号４０に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ３を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体はフコシル化されていない。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は低フコシル化である。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号３５に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ１、配列番号３６に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ２、配列番号３７に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ３、配列番号３８に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ１、配列番号３９に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ２および配列番号４０に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ３を含む対照抗体と、配列番号３５に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ１、配列番号３６に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ２、配列番号３７に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ３、配列番号３８に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ１、配列番号３９に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ２および配列番号４０に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ３への結合について交差競合する。
【０１６０】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号４５に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ１、配列番号４６に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ２、配列番号４７に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ３、配列番号４８に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ１、配列番号４９に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ２および配列番号５０に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ３を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体はフコシル化されていない。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は低フコシル化である。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号４５に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ１、配列番号４６に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ２、配列番号４７に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ３、配列番号４８に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ１、配列番号４９に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ２および配列番号５０に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ３を含む対照抗体と、配列番号４５に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ１、配列番号４６に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ２、配列番号４７に示すアミノ酸配列を含むＶＨ−ＣＤＲ３、配列番号４８に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ１、配列番号４９に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ２および配列番号５０に示すアミノ酸配列を含むＶＬ−ＣＤＲ３への結合について交差競合する。
【０１６１】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号２、１２、２２、３２および４２からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＶＨを含む。ある実施態様において、ＶＨは、配列番号２、１２、２２、３２および４２からなる群から選択される、アミノ酸配列を含む。
【０１６２】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号４、１４、２４、３４および４４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＶＬを含む。ある実施態様において、ＶＬは、配列番号４、１４、２４、３４および４４からなる群から選択される、アミノ酸配列を含む。
【０１６３】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号２に少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある実施態様において、ＶＨは配列番号２に示すアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号４に少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある実施態様において、ＶＬは配列番号４に示すアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、ＶＨは配列番号２に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬは配列番号４に示すアミノ酸配列を含む。他の実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号２に示すアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号４に示すアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗体と、ヒトＭＩＣＡ／Ｂの結合について交差競合する。他の実施態様において、ＶＨは配列番号２に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬは配列番号４に示すアミノ酸配列を含み、ここで、抗体はフコシル化されていない。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号５８における残基２３４に対応する位置でＧからＡ変異を含む、重鎖定常領域を含む(ＥＵに従い、「Ｇ２３６Ａ」とも称する)。
【０１６４】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号１２に少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある実施態様において、ＶＨは配列番号１２に示すアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号１４に少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある実施態様において、ＶＬは配列番号１４に示すアミノ酸配列を含む。他の実施態様において、ＶＨは配列番号１２に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬは配列番号１４に示すアミノ酸配列を含む。他の実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号１２に示すアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１４に示すアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗体と、ヒトＭＩＣＡ／Ｂの結合について交差競合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号５８における残基２３４に対応する位置でＧからＡ変異を含む、重鎖定常領域を含む。
【０１６５】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号２２に少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある実施態様において、ＶＨは配列番号２２に示すアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号２４に少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある実施態様において、ＶＬは配列番号２４に示すアミノ酸配列を含む。他の実施態様において、ＶＨは配列番号２２に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬは配列番号２４に示すアミノ酸配列を含む。他の実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号２２に示すアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２４に示すアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗体と、ヒトＭＩＣＡ／Ｂの結合について交差競合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号５８における残基２３４に対応する位置でＧからＡ変異を含む、重鎖定常領域を含む。
【０１６６】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号３２に少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある実施態様において、ＶＨは配列番号３２に示すアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号３４に少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある実施態様において、ＶＬは配列番号３４に示すアミノ酸配列を含む。他の実施態様において、ＶＨは配列番号３２に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬは配列番号３４に示すアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、ＶＬは、配列番号３４の９５位と９６位の間にＳｅｒ残基の挿入を含む、配列番号３４に示すアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、ＶＬは、配列番号３４の９５位と９６位の間にＡｌａ残基の挿入を含む、配列番号３４に示すアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、ＶＬは、配列番号３４の９５位と９６位の間にＧｌｙ残基の挿入を含む、配列番号３４に示すアミノ酸配列を含む。他の実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号３２に示すアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号３４に示すアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗体と、ヒトＭＩＣＡ／Ｂの結合について交差競合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号５８における残基２３４に対応する位置でＧからＡ変異を含む、重鎖定常領域を含む。
【０１６７】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号４２に少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある実施態様において、ＶＨは配列番号４２に示すアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号４４に少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある実施態様において、ＶＬは配列番号４４に示すアミノ酸配列を含む。他の実施態様において、ＶＨは配列番号４２に示すアミノ酸配列を含み、ＶＬは配列番号４４に示すアミノ酸配列を含む。
【０１６８】
他の実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号４２に示すアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号４４に示すアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗体と、ヒトＭＩＣＡ／Ｂの結合について交差競合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号５８における残基２３４に対応する位置でＧからＡ変異を含む、重鎖定常領域を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号５８、６２、６６、７０および７４から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号５８、１３０、６２、６６、７０および７４から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖を含む。ある実施態様において、重鎖アミノ酸配列は、免疫グロブリン定常領域内、例えば、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメインまたはヒンジ領域内に１以上の欠失、置換または変異を含む。
【０１６９】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号６０、６４、６８、７２および７６から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性を有する、軽鎖を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号６０、６４、６８、７２および７６から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０１７０】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号５８に示すアミノ酸配列と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性を有する重鎖を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号５８に示すアミノ酸配列を含む、重鎖を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号１３０に示すアミノ酸配列を含む、重鎖を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号６０に示すアミノ酸配列と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性を有する軽鎖を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号６０に示すアミノ酸配列を含む、軽鎖を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号５８に示すアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号６０に示すアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号１３０に示すアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号６０に示すアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。他の実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号５８に示すアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号５８に示すアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、ここで、抗体はフコシル化されていない。他の実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号１３０に示すアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１３０に示すアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、ここで、抗体はフコシル化されていない。他の実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ヒトＭＩＣＡ／Ｂへの結合について、配列番号５８に示すアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号６０に示すアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体と交差競合する。
【０１７１】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号６２に示すアミノ酸配列と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性を有する重鎖を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号６２に示すアミノ酸配列を含む、重鎖を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号６４に示すアミノ酸配列と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性を有する軽鎖を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号５８における残基２３４に対応する位置でＧからＡ変異を含む、重鎖定常領域を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号６４に示すアミノ酸配列を含む、軽鎖を含む。他の実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号６２に示すアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号６４に示すアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。他の実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ヒトＭＩＣＡ／Ｂへの結合について、配列番号６２に示すアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号６４に示すアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体と交差競合する。
【０１７２】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号６６に示すアミノ酸配列と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性を有する重鎖を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号６６に示すアミノ酸配列を含む、重鎖を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号６８に示すアミノ酸配列と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性を有する軽鎖を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号５８における残基２３４に対応する位置でＧからＡ変異を含む、重鎖定常領域を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号６８に示すアミノ酸配列を含む、軽鎖を含む。他の実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号６６に示すアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号６８に示すアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。他の実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ヒトＭＩＣＡ／Ｂへの結合について、配列番号６６に示すアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号６８に示すアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体と交差競合する。
【０１７３】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号７０に示すアミノ酸配列と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性を有する重鎖を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号５８における残基２３４に対応する位置でＧからＡ変異を含む、重鎖定常領域を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号７０に示すアミノ酸配列を含む、重鎖を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号７２に示すアミノ酸配列と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性を有する軽鎖を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号７２に示すアミノ酸配列を含む、軽鎖を含む。他の実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号７０に示すアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号７２に示すアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。他の実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ヒトＭＩＣＡ／Ｂへの結合について、配列番号７０に示すアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号７２に示すアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体と交差競合する。
【０１７４】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号７４に示すアミノ酸配列と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性を有する重鎖を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号７４に示すアミノ酸配列を含む、重鎖を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣ／Ｂ  Ａ抗体は、配列番号７６に示すアミノ酸配列と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性を有する軽鎖を含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号７６に示すアミノ酸配列を含む、軽鎖を含む。他の実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号７４に示すアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号７６に示すアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。他の実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ヒトＭＩＣＡ／Ｂへの結合について、配列番号７４に示すアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号７６に示すアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体と交差競合する。
【０１７５】
ある実施態様において、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはそのバリアントからなる群から選択される。ある実施態様において、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体はＩｇＧ１抗体である。ある実施態様において、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体はフコシル化されていない。ある実施態様において、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は低フコシル化である。
【０１７６】
ある実施態様において、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体はヒト抗体である。ある実施態様において、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体はヒト化抗体である。ある実施態様において、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体はキメラ抗体である。
【０１７７】
ある実施態様において、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号５８における残基２３４に対応する位置でＧからＡ変異を含む、重鎖定常領域を含む。
【０１７８】
Ａ. ヒトＭＩＣＡ／Ｂエピトープ
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ヒトＭＩＣＡ／Ｂの特異的エピトープに結合する。ここで使用する、用語「エピトープ」は、抗体などの抗原結合タンパク質と結合できるようになる、あらゆる決定基を含む。エピトープは、抗原を標的とする抗原結合タンパク質により結合される該抗原の領域をいい、抗原がタンパク質であるとき、該抗原結合タンパク質と直接接触する特異的アミノ酸を含む。エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリルまたはスルホニル基などの一群の化学活性表面分子を含んでよく、特異的三次元的構造特徴および／または特異的荷電特性を有し得る。一般に、特定の標的抗原に特異的な抗体は、優先的にタンパク質および／または巨大分子の複雑な混合物における標的抗原のエピトープを認識する。
【０１７９】
ある実施態様において、エピトープは、少なくとも１個のアミノ酸、少なくとも２個のアミノ酸、少なくとも３個のアミノ酸、少なくとも４個のアミノ酸、少なくとも５個のアミノ酸、少なくとも６個のアミノ酸、少なくとも７個のアミノ酸、少なくとも８個のアミノ酸、少なくとも９個のアミノ酸または少なくとも１０個のアミノ酸を含む。エピトープが１を超えるアミノ酸を含むとき、１を超えるアミノ酸は連続的であってよく(例えば、Ｇ２５４およびＤ２５５)または抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体と直接相互作用しないもしくは抗ＭＩＣＡ／Ｂ結合に必要ではない１を超えるアミノ酸により離されていてよい(例えば、Ｄ２５５およびＬ２５７)。ある実施態様において、エピトープは、２連続的アミノ酸、３連続的アミノ酸、４連続的アミノ酸、５連続的アミノ酸、６連続的アミノ酸、７連続的アミノ酸、８連続的アミノ酸、９連続的アミノ酸、１０連続的アミノ酸または１０を超える連続的アミノ酸を含む。ある実施態様において、エピトープは、位置は連続していないが、ヒトＭＩＣＡ／Ｂがその３次元配置で存在するとき、近位に位置する、少なくとも２個のアミノ酸を含む。
【０１８０】
抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体により結合される、抗原のエピトープ、例えば、ヒトＭＩＣＡ／Ｂのエピトープは、当分野で知られる任意の方法を使用して同定され得る。ある実施態様において、エピトープは酵母表面ディスプレイを使用して決定される。ある実施態様において、エピトープは水素／重水素交換マススペクトロメトリー(ＨＤＸ−ＭＳ)により決定される。
【０１８１】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ヒトＭＩＣＡの表面のエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ヒトＭＩＣＡのα３ドメイン内のエピトープに結合する。
【０１８２】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号５１のアミノ酸１９０〜２３０に位置するヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ＨＤＸ−ＭＳにより決定して、配列番号５１のアミノ酸１９５〜２２５に位置するヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号５１のアミノ酸２００〜２２１に位置するヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、水素／重水素交換マススペクトロメトリー(ＨＤＸ−ＭＳ)により決定して、配列番号５１に対応するＬ２０１〜Ｎ２２０を含むヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ＨＤＸ−ＭＳにより決定して、配列番号５６を含む、ヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。
【０１８３】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号５１のアミノ酸２３０〜２６０に位置するヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号５１のアミノ酸２３５〜２５５に位置するヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ＨＤＸ−ＭＳにより決定して、配列番号５１のアミノ酸２３７〜２５３に位置するヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、水素／重水素交換マススペクトロメトリー(ＨＤＸ−ＭＳ)により決定して、配列番号５１に対応するＴ２３８〜Ｑ２５２を含むヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ＨＤＸ−ＭＳにより決定して、配列番号５７を含む、ヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。
【０１８４】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ＨＤＸ−ＭＳにより決定して、配列番号５１に対応するＬ２０１〜Ｎ２２０およびＴ２３８〜Ｑ２５２を含むヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ＨＤＸ−ＭＳにより決定して、配列番号５６および５７を含む、ヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。
【０１８５】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号５１のアミノ酸１４０〜１７０に位置するヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号５１のアミノ酸１４５〜１６５に位置するヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ＨＤＸ−ＭＳにより決定して、配列番号５１のアミノ酸１４９〜１６４に位置するヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ＨＤＸ−ＭＳにより決定して、配列番号５２を含む、ヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。
【０１８６】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号５１のアミノ酸２２０〜２５０に位置するヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号５１のアミノ酸２２５〜２４５に位置するヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ＨＤＸ−ＭＳにより決定して、配列番号５１のアミノ酸２３０〜２３９に位置するヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ＨＤＸ−ＭＳにより決定して、配列番号５３を含む、ヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ＨＤＸ−ＭＳにより決定して、配列番号５１に対応するＮ２３４および／またはＬ２３７を含む、ヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。
【０１８７】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号５１のアミノ酸２４５〜２７５に位置するヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、配列番号５１のアミノ酸２５０〜２７０に位置するヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ＨＤＸ−ＭＳにより決定して、配列番号５１のアミノ酸２５２〜２６８に位置するヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ＨＤＸ−ＭＳにより決定して、配列番号５５を含む、ヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ＨＤＸ−ＭＳにより決定して、配列番号５１のアミノ酸２５４〜２６６に位置するヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ＨＤＸ−ＭＳにより決定して、配列番号５４を含む、ヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ＨＤＸ−ＭＳにより決定して、配列番号５１に対応するアミノ酸Ｄ２５５〜Ｑ２６５およびＷ２６７を含む、ヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。
【０１８８】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ＨＤＸ−ＭＳにより決定して、配列番号５２〜５４を含む、ヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ＨＤＸ−ＭＳにより決定して、配列番号５２、５３および５５を含む、ヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。
【０１８９】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、酵母表面ディスプレイにより決定して、配列番号５１のアミノ酸２３０〜２９０に位置するヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、酵母表面ディスプレイにより決定して、配列番号５１のアミノ酸２３５〜２８５に位置するヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、酵母表面ディスプレイにより決定して、配列番号５１のアミノ酸２３９〜２８０に位置するヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、酵母表面ディスプレイにより決定して、配列番号５１のアミノ酸２３０〜２５０に位置するヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、酵母表面ディスプレイにより決定して、配列番号５１のアミノ酸２３５〜２５０に位置するヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、酵母表面ディスプレイにより決定して、配列番号５１のアミノ酸２３９〜２４５に位置するヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。
【０１９０】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、酵母表面ディスプレイにより決定して、配列番号５１のアミノ酸２４５〜２７５に位置するヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、酵母表面ディスプレイにより決定して、配列番号５１のアミノ酸２５０〜２７０に位置するヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、酵母表面ディスプレイにより決定して、配列番号５１のアミノ酸２５３〜２６８に位置するヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、酵母表面ディスプレイにより決定して、配列番号５１のアミノ酸２５７〜２６５に位置するヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。
【０１９１】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、酵母表面ディスプレイにより決定して、配列番号５１に対応する、Ｒ２４０、Ｑ２４１、Ｄ２４２、Ｖ２４４、Ｇ２５４、Ｄ２５５、Ｌ２５７、Ｐ２５８、Ｇ２６０、Ｇ２６２、Ｙ２６４、Ｗ２６７およびＲ２７９からなる群から選択される１以上のアミノ酸を含むエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、酵母表面ディスプレイにより決定して、配列番号５１に対応する、Ｇ２５４、Ｄ２５５、Ｌ２５７、Ｙ２６４およびＷ２６７からなる群から選択される１以上のアミノ酸を含むエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、酵母表面ディスプレイにより決定して、配列番号５１に対応する、アミノ酸Ｇ２５４、Ｄ２５５、Ｌ２５７、Ｙ２６４およびＷ２６７を含むエピトープに結合する。
【０１９２】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、酵母表面ディスプレイにより決定して、配列番号５１に対応する、Ｒ２４０、Ｑ２４１、Ｄ２４２、Ｖ２４４およびＲ２７９からなる群から選択される１以上のアミノ酸を含むエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、酵母表面ディスプレイにより決定して、配列番号５１に対応する、アミノ酸Ｒ２４０、Ｑ２４１、Ｄ２４２、Ｖ２４４およびＲ２７９を含むエピトープに結合する。
【０１９３】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、酵母表面ディスプレイにより決定して、配列番号５１に対応する、Ｐ２５８、Ｇ２６０、Ｇ２６２およびＹ２６４からなる群から選択される１以上のアミノ酸を含むエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、酵母表面ディスプレイにより決定して、配列番号５１に対応する、アミノ酸Ｐ２５８、Ｇ２６０、Ｇ２６２およびＹ２６４を含むエピトープに結合する。
【０１９４】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体がヒトＭＩＣＡに結合するとき、抗体は、例えば、ここに記載する条件を使用した、結晶構造解析により決定して、配列番号５１に対応する、ヒトＭＩＣＡの次のＲ２４０、Ｑ２４１、Ｄ２４２、Ｖ２４４、Ｇ２５４、Ｄ２５５、Ｌ２５７、Ｐ２５８、Ｇ２６０、Ｇ２６２、Ｙ２６４、Ｗ２６７およびＲ２７９の少なくとも１つから約３０Å以下、２５Å以下、３０Å以下、約１５Å以下、約１０Å以下、約９Å以下、約８Å以下、約７Å以下、約６Å以下、約５Å以下、約４Å以下、約３Å以下または約２Å以下に位置する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体がヒトＭＩＣＡに結合するとき、抗体は、例えば、ここに記載する条件を使用した、結晶構造解析により決定して、配列番号５１に対応する、ヒトＭＩＣＡの次のＲ２４０、Ｑ２４１、Ｄ２４２、Ｖ２４４、Ｇ２５４、Ｄ２５５、Ｌ２５７、Ｐ２５８、Ｇ２６０、Ｇ２６２、Ｙ２６４、Ｗ２６７およびＲ２７９の少なくとも１つから約１０Å以下に位置する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体がヒトＭＩＣＡに結合するとき、抗体は、例えば、ここに記載する条件を使用した、結晶構造解析により決定して、配列番号５１に対応する、ヒトＭＩＣＡの次のＧ２５４、Ｄ２５５、Ｌ２５７、Ｙ２６４およびＷ２６７の少なくとも１つから約１０Å以下に位置する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体がヒトＭＩＣＡに結合するとき、抗体は、例えば、ここに記載する条件を使用した、結晶構造解析により決定して、配列番号５１に対応する、ヒトＭＩＣＡの次のＲ２４０、Ｑ２４１、Ｄ２４２、Ｖ２４４およびＲ２７９の少なくとも１つから約１０Å以下に位置する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体がヒトＭＩＣＡに結合するとき、抗体は、例えば、ここに記載する条件を使用した、結晶構造解析により決定して、配列番号５１に対応する、ヒトＭＩＣＡの次のＰ２５８、Ｇ２６０、Ｇ２６２およびＹ２６４の少なくとも１つから約１０Å以下に位置する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体がヒトＭＩＣＡに結合するとき、抗体は、例えば、ここに記載する条件を使用した、Ｘ線共結晶構造解析により決定して、配列番号５１に対応する、ヒトＭＩＣＡの次のＲ２４０、Ｑ２４１、Ｄ２４２、Ｖ２４４、Ｇ２５４、Ｄ２５５、Ｌ２５７、Ｐ２５８、Ｇ２６０、Ｇ２６２、Ｙ２６４、Ｗ２６７およびＲ２７９の少なくとも１つから約３０Å以下、２５Å以下、２０Å以下、約１５Å以下、約１０Å以下、約９Å以下、約８Å以下、約７Å以下、約６Å以下、約５Å以下、約４Å以下、約３Å以下または約２Å以下に位置する。
【０１９５】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、Ｘ線共結晶構造解析により決定して、Ｔ２２２、Ｔ２２４、Ｒ２２６、Ｗ２３３、Ｎ２３４、Ｈ２４８、Ｄ２４９、Ｑ２５１、Ｑ２５２、Ｗ２５３、Ｇ２５４、Ｄ２５５、Ｖ２５６、Ｌ２５７、Ｐ２５８、Ｄ２５９、Ｇ２６０、Ｎ２６１、Ｙ２６４、Ｑ２６５、Ｗ２６７およびＡ２６９から選択される少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９または少なくとも１０残基を含む、ヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、Ｘ線共結晶構造解析により決定して、Ｔ２２２、Ｔ２２４、Ｒ２２６、Ｗ２３３、Ｎ２３４、Ｈ２４８、Ｄ２４９、Ｑ２５１、Ｑ２５２、Ｗ２５３、Ｇ２５４、Ｄ２５５、Ｖ２５６、Ｌ２５７、Ｐ２５８、Ｄ２５９、Ｇ２６０、Ｎ２６１、Ｙ２６４、Ｑ２６５、Ｗ２６７およびＡ２６９から選択される少なくとも２つの残基を含む、ヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、Ｘ線共結晶構造解析により決定して、Ｔ２２２、Ｔ２２４、Ｒ２２６、Ｗ２３３、Ｎ２３４、Ｈ２４８、Ｄ２４９、Ｑ２５１、Ｑ２５２、Ｗ２５３、Ｇ２５４、Ｄ２５５、Ｖ２５６、Ｌ２５７、Ｐ２５８、Ｄ２５９、Ｇ２６０、Ｎ２６１、Ｙ２６４、Ｑ２６５、Ｗ２６７およびＡ２６９から選択される少なくとも４つの残基を含む、ヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、Ｘ線共結晶構造解析により決定して、Ｔ２２２、Ｔ２２４、Ｒ２２６、Ｗ２３３、Ｎ２３４、Ｈ２４８、Ｄ２４９、Ｑ２５１、Ｑ２５２、Ｗ２５３、Ｇ２５４、Ｄ２５５、Ｖ２５６、Ｌ２５７、Ｐ２５８、Ｄ２５９、Ｇ２６０、Ｎ２６１、Ｙ２６４、Ｑ２６５、Ｗ２６７およびＡ２６９から選択される少なくとも６つの残基を含む、ヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、Ｘ線共結晶構造解析により決定して、Ｔ２２２、Ｔ２２４、Ｒ２２６、Ｗ２３３、Ｎ２３４、Ｈ２４８、Ｄ２４９、Ｑ２５１、Ｑ２５２、Ｗ２５３、Ｇ２５４、Ｄ２５５、Ｖ２５６、Ｌ２５７、Ｐ２５８、Ｄ２５９、Ｇ２６０、Ｎ２６１、Ｙ２６４、Ｑ２６５、Ｗ２６７およびＡ２６９を含む、ヒトＭＩＣＡのエピトープに結合する。
【０１９６】
ここに記載するＶＨドメインまたはその１以上のＣＤＲは、重鎖、例えば、完全長重鎖を形成するように、定常ドメインと結合させ得る。同様に、ここに記載するＶＬドメインまたはその１以上のＣＤＲは、軽鎖、例えば、完全長軽鎖を形成するように、定常ドメインと結合させ得る。完全長重鎖(場合によりなくてよいＣ末端リシン(Ｋ)を例外とするまたはＣ末端グリシンおよびリシン(ＧＫ)を例外とする)および完全長軽鎖を合わせて、完全長抗体を形成し得る。
【０１９７】
ここに記載するＶＨドメインを、例えば、ここにさらに記載するとおり、天然に存在しても修飾されていてもよい、ヒトＩｇＧ、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４の定常ドメインに融合し得る。例えば、ＶＨドメインは、ヒトＩｇＧ、次の野生型ヒトＩｇＧ１定常ドメインアミノ酸配列
【化１】
2021518140.tif 000002
(配列番号９１)
または、配列番号９１のアロタイプバリアントであり、次のアミノ酸配列
【化２】
2021518140.tif 000003
(配列番号９２；アロタイプ特異的アミノ酸残基は、太字かつ下線)
を有するものなどの、例えば、ＩｇＧ１定常領域に融合した、ここに記載する何れかのＶＨドメインのアミノ酸配列を含み得る。
【０１９８】
抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体のＶＨドメインは、エフェクターレス定常領域、例えば、次のエフェクターレスヒトＩｇＧ１定常ドメインアミノ酸配列：
【化３】
2021518140.tif 000004
(配列番号９３；下線を引いた置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓを含む、「ＩｇＧ１.１ｆ」)
または
【化４】
2021518140.tif 000005
(配列番号９４；下線を引いた置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＥおよびＧ２３７Ａを含む、「ＩｇＧ１.３ｆ」)
に融合した、ここに記載する何れかのＶＨドメインのアミノ酸配列を含み得る。
【０１９９】
例えば、ＩｇＧ１のアロタイプバリアントは、配列番号９１に番号付けされた、Ｋ９７Ｒ、Ｄ２３９Ｅおよび／またはＬ２４１Ｍ(上記で下線および太字)を含む。完全長重鎖定常領域、例えば、ＭＩＣＡ.３６(配列番号５８)内でおよびＥＵナンバリングにより、これらアミノ酸置換は、Ｋ２１４Ｒ、Ｄ３５６ＥおよびＬ３５８Ｍの番号である。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の定常領域は、配列番号９２、９３および９４に番号付けされたアミノ酸Ｌ１１７、Ａ１１８、Ｇ１２０、Ａ２１３およびＰ２１４(上記で下線)または、ＥＵナンバリングによりＬ２３４、Ａ２３５、Ｇ２３７、Ａ３３０およびＰ３３１に１以上の変異または置換を含み得る。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の定常領域は、配列番号９１のアミノ酸Ｌ１１７Ａ、Ａ１１８Ｅ、Ｇ１２０Ａ、Ａ２１３ＳおよびＰ２１４Ｓまたは、ＥＵナンバリングによりＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓに１以上の変異または置換を含む。抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の定常領域はまた、配列番号９１のＬ１１７Ａ、Ａ１１８ＥおよびＧ１２０Ａまたは、ＥＵナンバリングによりＬ２３４Ａ、Ｌ２３５ＥおよびＧ２３７Ａに１以上の変異または置換を含み得る。
【０２００】
あるいは、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体のＶＨドメインは、ヒトＩｇＧ４定常領域、例えば、次のヒトＩｇＧ４アミノ酸配列またはそのバリアントに融合した、ここに記載する何れかのＶＨドメインのアミノ酸配列を含み得る。
【化５】
2021518140.tif 000006
(配列番号９５、Ｓ２２８Ｐを含む)
【０２０１】
ここに記載するＶＬドメインは、ヒトカッパまたはラムダ軽鎖の定常ドメインに融合させ得る。例えば、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体のＶＬドメインは、次のヒトＩｇＧ１カッパ軽鎖アミノ酸配列に融合した、ここに記載する何れかのＶＬドメインのアミノ酸配列を含み得る。
【化６】
2021518140.tif 000007
(配列番号９６)
【０２０２】
ある実施態様において、重鎖定常領域は、リシンまたは他のアミノ酸をＣ末端に含み、例えば、次の最後のアミノ酸ＬＳＰＧＫ(配列番号９７)を重鎖に含む。ある実施態様において、重鎖定常領域は、Ｃ末端の１以上のアミノ酸を欠き、例えば、Ｃ末端配列ＬＳＰＧ(配列番号９８)またはＬＳＰ(配列番号９９)を有する。
【０２０３】
重鎖および軽鎖のアミノ酸配列の例を、ここに記載する。
【０２０４】
ここに提供されるのは、
(ａ１)  それぞれ配列番号５８および６０を含む重鎖および軽鎖配列；
(ａ２)  それぞれ配列番号１３０および６０を含む重鎖および軽鎖配列；
(ａ３)  それぞれ配列番号６２および６４を含む重鎖および軽鎖配列；
(ａ４)  それぞれ配列番号６６および６８を含む重鎖および軽鎖配列；
(ａ５)  それぞれＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯｓ：７０および７２を含む重鎖および軽鎖配列；
(ａ６)  それぞれ配列番号７４および７６を含む重鎖および軽鎖配列
を含む単離抗ヒトＭＩＣＡ／Ｂ抗体またはその抗原結合部分であって、ここで、該抗体は、ヒトＭＩＣＡ／Ｂに特異的に結合する。
【０２０５】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ここに、例えば、前の段落に示す重鎖および軽鎖配列の組み合わせを含み、ここで、該抗体は２つの重鎖および２つの軽鎖を含み、さらに２つの重鎖を互いに連結させる少なくとも１つのジスルフィド結合を含み得る。抗体は、重鎖の各々に軽鎖の各々を連結させるジスルフィド結合も含み得る。
【０２０６】
ここに示す重鎖または軽鎖の何れか(またはその可変領域)、例えば、配列番号５８および６０と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％または７０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖および軽鎖を、例えば、さらにここに記載する、所望の特徴を有する抗ヒトＭＩＣＡ／Ｂ抗体の形成に使用し得る。バリアントの例は、例えば、定常ドメインにアロタイプ変化および／または可変または定常領域にここに開示する変異のような変異を含むものである。ここに示す重鎖または軽鎖の何れか(またはその可変領域)から最大で１−３０、１−２５、１−２０、１−１５、１−１０、１−５、１−４、１−３、１−２または１アミノ酸(置換、付加または欠失による)異なるアミノ酸配列を含む重鎖および軽鎖を、例えば、さらにここに記載する、所望の特徴を有する抗ヒトＭＩＣＡ抗体の形成に使用し得る。
【０２０７】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、特定の生殖細胞系列重鎖免疫グロブリン遺伝子からの重鎖可変領域および／または特定の生殖細胞系列軽鎖免疫グロブリン遺伝子からの軽鎖可変領域を含む。
【０２０８】
ここに示されるとおり、ヒト生殖細胞系列の産物であるまたはそこから由来する重鎖可変領域を含む、ＭＩＣＡ／Ｂに特異的なヒト抗体が調製されている。従って、ここに提供されるのは、３−０９、３−１０、３−３３、３−４８、５−５１、６−１３、ＪＨ３ｂ、ＪＨ４ｂ、ＪＨ６ｂおよびこれらの何れかの組み合わせおよびこれらの何れかの組み合わせからなる群から選択されるヒトＶＨ生殖細胞系列遺伝子の産物であるまたはそこから由来する重鎖可変領域を含む、単離モノクローナル抗体またはその抗原結合部分である。
【０２０９】
ヒト生殖細胞系列の産物であるまたはそこから由来する軽鎖可変領域を含む、ＭＩＣＡ／Ｂに特異的なヒト抗体が調製されている。従って、ここに提供されるのは、Ａ２７、Ｌ６、Ｌ１８、ＪＫ１、ＪＫ２、ＪＫ３、ＪＫ５およびこれらの何れかの組み合わせおよびこれらの何れかの組み合わせからなる群から選択されるヒトＶＫ生殖細胞系列遺伝子の産物であるまたはそこから由来する軽鎖可変領域を含む、単離モノクローナル抗体またはその抗原結合部分である。
【０２１０】
ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、図面に示すとおり、上記ヒト生殖細胞系列ＶＨ遺伝子の一つの産物であるまたはそこから由来する重鎖可変領域を含み、また上記ヒト生殖細胞系列ＶＫ遺伝子の一つの産物であるまたはそこから由来する軽鎖可変領域も含む。
【０２１１】
ここで使用する、ヒト抗体は、抗体の可変領域が、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子を使用するシステムから得られるならば、特定の生殖細胞系列配列の「産物である」または「そこから由来する」重鎖および軽鎖可変領域を含む。このような、システムは、目的の抗原で、ヒト免疫グロブリン遺伝子を担持するトランスジェニックマウスを免疫化するかまたは目的の抗原でファージに提示されるヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリーをスクリーニングすることを含む。ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列の「産物である」または「そこから由来する」ヒト抗体は、ヒト抗体のアミノ酸配列とヒト生殖細胞系列免疫グロブリンのアミノ酸配列を比較し、ヒト抗体の配列の配列が最も近い(すなわち、最大％同一性)ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列を選択することにより、それ自体同定され得る。特定のヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列の「産物である」または「そこから由来する」ヒト抗体は、例えば、天然に存在する体細胞変異または部位特異的変異の意図的導入による、生殖細胞系列配列と比較したアミノ酸差異を含み得る。しかしながら、選択したヒト抗体は、一般にヒト生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によりコードされるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列であり、他の種の生殖細胞系列免疫グロブリンアミノ酸配列(例えば、マウス生殖細胞系列配列)と比較したとき、ヒト抗体をヒトとして特定するアミノ酸残基を含む。ある場合、ヒト抗体は、生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によりコードされるアミノ酸配列と少なくとも９５％またはさらに少なくとも９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列である。一般に、特定のヒト生殖細胞系列配列由来のヒト抗体は、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によりコードされるアミノ酸配列と、１０を超えるアミノ酸差異を示さらない。ある場合、ヒト抗体は、生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によりコードされるアミノ酸配列と、アミノ酸差異が５を超えないまたは４、３、２または１を超えない。
【０２１２】
抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域およびＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域を含み、ここで、これらＣＤＲ配列の１以上が、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体に基づき特定されたアミノ酸配列またはその保存的修飾を含み、ここで、該抗体は、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の所望の機能的性質を保持する。
【０２１３】
保存的アミノ酸置換は、抗体のＣＤＲ以外のまたはそれに加えて他の部分になし得る。例えば、保存的アミノ酸修飾はフレームワーク領域またはＦｃ領域になし得る。可変領域または重鎖または軽鎖は、ここに提供する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体配列に比して、１、２、３、４、５、１−２、１−３、１−４、１−５、１−１０、１−１５、１−２０、１−２５または１−５０保存的アミノ酸置換を含み得る。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、保存的および非保存的アミノ酸修飾の組み合わせを含む。
【０２１４】
また提供されるのは、修飾抗体を設計するためにここに開示するＶＨおよび／またはＶＬ配列の１以上を有する抗体を出発物質として使用して製造できる操作され、修飾された抗体であり、その修飾抗体は出発抗体から改変された性質を有し得る。抗体を、一方または両方の可変領域内(すなわち、ＶＨおよび／またはＶＬ)、例えば１以上のＣＤＲ領域内および／または１以上のフレームワーク領域内の１以上の残基の修飾により操作され得る。これに加えてまたはこれとは別に、抗体を、例えば、抗体のエフェクター機能を変えるために、定常領域内の残基の修飾により加工し得る。
【０２１５】
実施され得る可変領域操作の一つのタイプはＣＤＲ移植である。抗体は、標的抗原と、主に６個の重鎖および軽鎖相補性決定領域(ＣＤＲ)に位置するアミノ酸残基を介して相互作用する。このため、ＣＤＲ内のアミノ酸配列は、ＣＤＲ外の配列より個々の抗体間でより多様である。ＣＤＲ配列が抗体−抗原相互作用の大部分を担うため、異なる性質を有する異なる抗体からのフレームワーク配列に移植した特定の天然に存在する抗体からのＣＤＲ配列を含む発現ベクターを構築することにより、該特定の天然に存在する抗体の性質を模倣した組み換え抗体を発現させることが可能である(例えば、Riechmann, L. et al. (1998) Nature 332:323-327; Jones, P. et al. (1986) Nature 321 :522-525; Queen, C. et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 86: 10029-10033；Winterの米国特許５,２２５,５３９およびQueen et al.の米国特許５,５３０,１０１；５,５８５,０８９；５,６９３,７６２および６,１８０,３７０参照)。
【０２１６】
従って、ここに記載するある実施態様は、ここに記載するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域ならびにここに記載するＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域を含む、単離モノクローナル抗体またはその抗原結合部分に関する。故に、このような抗体は、ここに記載するモノクローナル抗体のＶＨおよびＶＬ  ＣＤＲ配列を含み、なお、これら抗体と異なるフレームワーク配列を含み得る。
【０２１７】
このようなフレームワーク配列は、生殖系列抗体遺伝子配列を含む公開されたデータベースまたは公開された文献から得ることができる。例えば、ヒト重鎖および軽鎖可変領域遺伝子の生殖系列ＤＮＡ配列は「ＶＢａｓｅ」ヒト生殖系列配列データベース(インターネットでwww.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbaseで利用可能)、ならびにKabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242; Tomlinson, I. M., et al. (1992) "The Repertoire of Human Germline VH Sequences Reveals about Fifty Groups of VH Segments with Different Hypervariable Loops" /. Mol. Biol. 227:776-798; and Cox, J. P. L. et al. (1994) "A Directory of Human Germ-line VH Segments Reveals a Strong Bias in their Usage" Eur. J. Immunol. 24:827-836に見ることができ；この各々の内容を、全体として本明細書に明示的に包含させる。
【０２１８】
ある実施態様において、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体において使用するフレームワーク配列は、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体により使用されるフレームワーク配列と構造的に類似するものである。ＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列およびＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を、フレームワーク配列が由来する生殖系列免疫グロブリン遺伝子に見られるのと同一配列を有するフレームワーク領域に移植できまたはＣＤＲ配列を生殖系列配列と比較して１以上の変異を含むフレームワーク領域に移植できる。例えば、ある例で、抗体の抗原結合能維持または増強のためにフレームワーク領域内の残基を変異させることが有利であることが判明している(例えば、Queen et al.の米国特許５,５３０,１０１；５,５８５,０８９；５,６９３,７６２；および６,１８０,３７０参照)。
【０２１９】
ここに記載する操作された抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、例えば、抗体の性質を改善するために、ＶＨおよび／またはＶＬ内のフレームワーク残基が修飾されている、例えば、９Ｆ６のアミノ酸１０７に変異があるものを含む。一般にこのようなフレームワーク修飾は、抗体の免疫原性の低減のためになされる。例えば、一つの方法は、１以上のフレームワーク残基の対応する生殖系列配列への「復帰変異」である。より具体的には、体細胞変異を受けた抗体は、抗体が由来する生殖系列配列と異なるフレームワーク残基を含み得る。このような残基を、抗体フレームワーク配列と抗体が由来する生殖系列配列の比較により同定できる。フレームワーク領域配列をその生殖系列配置に戻すために、体細胞変異は、例えば、部位特異的変異誘発またはＰＣＲ介在変異誘発により、生殖系列配列に「復帰変異」される。このような「復帰変異」抗体も、包含されることが意図される。他のタイプのフレームワーク修飾は、フレームワーク領域内または１以上のＣＤＲ領域内の１以上の残基を変異させ、Ｔ細胞エピトープを除去し、それにより抗体の可能性のある免疫原性を低減させることを含む。この方法は「脱免疫化」とも称され、Carr et al.の米国特許公開２００３０１５３０４３に記載される。
【０２２０】
他のタイプの可変領域修飾は、ＶＨおよび／またはＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３領域内のアミノ酸残基を変異させ、それにより、目的の抗体の１以上の結合性(例えば、親和性)を改善することである。部位特異的変異誘発またはＰＣＲ介在変異誘発を使用して変異を導入し、目的の抗体結合または他の機能的性質への影響を、ここに記載するおよび実施例に提供するインビトロまたはインビボアッセイで評価できる。ある実施態様において、保存的修飾(上記)が導入される。変異はアミノ酸置換、付加または欠失であり得る。さらに、一般にＣＤＲ領域内の１、２、３、４または５個を超えない残基が改変される。
【０２２１】
抗体のＣＤＲにおけるメチオニン残基を酸化し、化学的分解と続く抗体能力低減の可能性をもたらし得る。従って、また提供されるのは、重鎖および／または軽鎖ＣＤＲの１以上のメチオニン残基が酸化的分解を受けないアミノ酸残基で置換されている、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体である。ある実施態様において、抗体ＭＩＣＡ.３６、ＭＩＣＡ.５２、ＭＩＣＡ.５４、ＭＩＣＡ.２および７１Ｃ２のＣＤＲのメチオニン残基は、酸化的分解を受けないアミノ酸残基で置換されている。
【０２２２】
同様に、脱アミド化部位を、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体、特にＣＤＲから除去し得る。
【０２２３】
ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ可変領域を、Ｆｃ、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４  Ｆｃと連結(例えば、共有結合または融合)させてよく、Ｆｃは何れかのアロタイプまたは同型アロタイプ、例えば、ＩｇＧ１について：Ｇ１ｍ、Ｇ１ml(ａ)、Ｇ１ｍ２(ｘ)、Ｇ１ｍ３(ｆ)、Ｇ１ｍ１７(ｚ)；ＩｇＧ２について：Ｇ２ｍ、Ｇ２ｍ２３(ｎ)；ＩｇＧ３について：Ｇ３ｍ、Ｇ３ｍ２１(ｇ１)、Ｇ３ｍ２８(ｇ５)、Ｇ３mlｌ(ｂ０)、Ｇ３ｍ５(ｂ１)、Ｇ３ml３(ｂ３)、Ｇ３ml４(ｂ４)、Ｇ３ml０(ｂ５)、Ｇ３ml５(ｓ)、Ｇ３ml６(ｔ)、Ｇ３ｍ６(ｃ３)、Ｇ３ｍ２４(ｃ５)、Ｇ３ｍ２６(ｕ)、Ｇ３ｍ２７(ｖ)；およびＫについて：Ｋｍ、Ｋｍ１、Ｋｍ２、Ｋｍ３であってよい(例えば、Jefferies et al. (2009) mAbs 1:1)参照。
【０２２４】
一般に、ここに記載する可変領域を、一般に、血清半減期、補体結合反応、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞傷害および／または抗体依存性細胞貪食などの、抗体の機能的性質の１以上を変えるために、１以上の修飾を含むＦｃに結合できる。さらに、ここに記載する抗体を、化学的に修飾するか(例えば、１以上の化学部分を抗体に結合できる)またはグリコシル化を変えるため、抗体の機能的性質の１以上を変えるために修飾し得る。これら実施態様の各々を下にさらに詳述する。Ｆｃ領域における残基のナンバリングは、ＫａｂａｔのＥＵインデックスである。
【０２２５】
Ｆｃ領域は、免疫グロブリンの定常領域(定常領域のフラグメント、アナログ、バリアント、変異体または誘導体を含む)に由来するドメインを含む。適当な免疫グロブリンは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４ならびにＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥおよびＩｇＭなどの他のクラスを含む。免疫グロブリンの定常領域は、免疫グロブリンＣ末端領域に相同な天然に存在するまたは合成的に産生されたポリペプチドとして定義され、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメインまたはＣＨ４ドメインを、別々にまたは組み合わせて含み得る。
【０２２６】
Ｉｇ分子は、複数クラスの細胞性受容体と相互作用する。例えばＩｇＧ分子は、ＩｇＧクラスの抗体に特異的な３クラスのＦｃγ受容体(ＦｃγＲ)、すなわちＦｃγＲＩ、ＦｃγＲIIおよびＦｃγＲIIIと相互作用する。ＩｇＧのＦｃγＲ受容体への結合に重要な配列は、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインに位置すると報告されている。抗体の血清半減期は、その抗体がＦｃ受容体(ＦｃＲ)に結合する能力により影響される。
【０２２７】
ある実施態様において、Ｆｃ領域は、望ましい構造的特徴および／または生物学的活性を提供するために、バリアントＦｃ領域、例えば、親Ｆｃ配列(例えば、その後修飾されてバリアントを産生する非修飾Ｆｃポリペプチド)に比して修飾(例えば、アミノ酸置換、欠失および／または挿入による)されているＦｃ配列である。
【０２２８】
一般に、定常領域またはその一部、例えば、ＣＨ１、ＣＬ、ヒンジ、ＣＨ２またはＣＨ３ドメインのバリアントは、その特定のバリアントを含む重鎖定常領域が必要な生物学的活性を保持する限り、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個またはそれ以上の変異および／または最大で１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個または１個の変異または１〜１０個または１〜５個の変異を含んでよくまたは対応する野生型領域またはドメイン(それぞれＣＨ１、ＣＬ、ヒンジ、ＣＨ２またはＣＨ３ドメイン)のものと少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を含んでよい。
【０２２９】
例えば、親Ｆｃに比して、(ａ)抗体依存性細胞介在細胞毒性(ＡＤＣＣ)および／または抗体依存性細胞貪食(ＡＤＣＰ)の増強または低減に介在する、(ｂ)補体依存性細胞傷害(ＣＤＣ)の増強または低減に介在する、(ｃ)Ｃ１ｑに増加または減少した親和性を有するおよび／または(ｄ)Ｆｃ受容体に増加または減少した親和性を有するＦｃバリアントを産生するために、Ｆｃ領域に修飾を付し得る。このようなＦｃ領域バリアントは、一般にＦｃ領域に少なくとも１個のアミノ酸修飾を含み得る。アミノ酸修飾の組み合わせは、特に望ましいと考えられ得る。例えば、バリアントＦｃ領域は、例えばここに記載する特定のＦｃ領域位置に、その中に２個、３個、４個、５個などの置換を含み得る。
【０２３０】
バリアントＦｃ領域は、ジスルフィド結合形成に関与するアミノ酸が除去されるかまたは他のアミノ酸で置き換えられる、配列変更も含み得る。このような除去は、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の産生に使用する宿主細胞に存在する、他のシステイン含有タンパク質との反応を回避させ得る。システイン残基が除去されたときでさえ、一本鎖Ｆｃドメインは、非共有結合的に結合される二量体Ｆｃドメインをなお形成できる。ある実施態様において、Ｆｃ領域は、選択した宿主細胞とより適合性とするために、修飾され得る。例えば、プロリンイミノペプチダーゼなどの大腸菌の消化酵素により認識され得る、典型的天然Ｆｃ領域のＮ末端近くのＰＡ配列を除去し得る。ある実施態様において、Ｆｃドメイン内の１以上のグリコシル化部位が除去され得る。一般にグリコシル化される残基(例えば、アスパラギン)は、細胞溶解性応答を与え得る。このような残基を欠失させるかまたは非グリコシル化残基(例えば、アラニン)で置換し得る。ある実施態様において、Ｃ１ｑ結合部位などの補体との相互作用に関連する部位をＦｃ領域から除去し得る。例えば、ヒトＩｇＧ１のＥＫＫ配列を欠失させるかまたは置換し得る。ある実施態様において、Ｆｃ受容体への結合、好ましくはサルベージ受容体結合部位以外の部位に影響する部位を除去できる。ある実施態様において、Ｆｃ領域を修飾して、ＡＤＣＣ部位を除去し得る。ＡＤＣＣ部位は当分野で知られる；例えば、ＩｇＧ１におけるＡＤＣＣ部位に関してMolec. Immunol. 29 (5): 633-9 (1992)参照。バリアントＦｃドメインの具体例は、例えば、ＷＯ９７／３４６３１、ＷＯ９６／３２４７８およびＷＯ０７／０４１６３５に開示される。
【０２３１】
ある実施態様において、Ｆｃのヒンジ領域は、ヒンジ領域のシステイン残基数が改変されるように、例えば、増加または減少されるように、修飾される。この試みは、Bodmer et al.の米国特許５,６７７,４２５にさらに記載される。Ｆｃのヒンジ領域のシステイン残基数は、例えば、軽鎖および重鎖の集合の促進または抗体の安定性の増加または低減のために、改変される。ある実施態様において、抗体のＦｃヒンジ領域は、抗体の生物学的半減期の減少のために変異される。より具体的に、抗体が、天然Ｆｃ−ヒンジドメインＳｐ結合に比して障害されたブドウ球菌プロテインＡ(ＳｐＡ)結合を有するように、Ｆｃ−ヒンジフラグメントのＣＨ２−ＣＨ３ドメイン界面領域に１以上のアミノ酸変異を導入し得る。この試みは、Ward et al.の米国特許６,１６５,７４５にさらに詳述される。
【０２３２】
さらに他の実施態様において、Ｆｃ領域は、抗体のエフェクター機能を改変するために少なくとも１個のアミノ酸残基を異なるアミノ酸残基に置き換えることにより、改変される。例えば、アミノ酸残基２３４、２３５、２３６、２３７、２９７、３１８、３２０、３２２、３３０および／または３３１から選択される１以上のアミノ酸を、抗体のエフェクターリガンドへの親和性が改変されるが、親抗体の抗原結合能が保持されるように、異なるアミノ酸残基で置き換え得る。親和性が改変されるエフェクターリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体または補体のＣ１成分であり得る。この試みは、両方ともWinter et al.の米国特許５,６２４,８２１および５,６４８,２６０にさらに詳述される。
【０２３３】
他の例において、アミノ酸残基３２９、３３１および３２２から選択される１以上のアミノ酸を、抗体のＣ１ｑ結合が改変されるおよび／または補体依存性細胞傷害(ＣＤＣ)が低減または消失するように、異なるアミノ酸残基で置き換え得る。この試みは、Idusogie et al.の米国特許６,１９４,５５１にさらに詳述される。
【０２３４】
他の例において、アミノ酸２３１〜２３９位内の１以上のアミノ酸残基が改変され、それにより抗体が補体を固定する能力が改変される。この試みは、Bodmer et al.のＰＣＴ公報ＷＯ９４／２９３５１にさらに詳述される。
【０２３５】
他の例において、Ｆｃ領域を、Ｆｃγへの親和性を増強し、マクロファージ介在食作用を増加させるために修飾し得る。例えば、引用により全体を本明細書に包含させるRichard et al., Mo. Cancer. Ther. 7(8):2517-27 (2008)参照。ある実施態様において、Ｆｃ領域を、阻害性ＦｃγＲIIｂに比して、ＦｃγＲIIａに対する親和性を増加させるために修飾する。ある特定の点変異、Ｇ２３６Ａ(ナンバリングはＥＵインデックスによる)は、阻害性ＦｃγＲIIｂに比してＦｃγＲIIａに対する増加した親和性を有するとして同定されている。ＦｃＲIIａに対するこの親和性増加は、天然ＩｇＧ１に比して増加したマクロファージ介在食作用と相関する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体のＦｃ領域は、Ｇ２３６Ａ、Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９／Ｉ３３２Ｅ、Ｉ３３２Ｅ／Ｇ２３６ＡおよびＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ｇ２３６Ａから選択される１以上の変異または変異の組み合わせを含む。Ｆｃ領域に対する他の修飾は、例えば、ＦｃγＲＩおよび／またはＦｃγＲIIIａなどの活性化受容体に対する親和性の増加により、抗体依存性細胞傷害(ＡＤＣＣ)を増加させ得る。例えば、Ｇ２３６Ａ置換およびＧ２３６Ａ置換と、例えば、３３２および２３９の置換を含むが、これらに限定されない活性化受容体(例えば、ＦｃγＲＩおよび／またはＦｃγＲIIIａ)への親和性を改善する修飾の組み合わせは、親ＷＴ抗体に対して、ＡＤＣＣを実質的に改善させる。引用により全体を本明細書に包含させる米国特許９,０４０,０４１参照。
【０２３６】
他の例において、Ｆｃ領域を、次の位置：２３４、２３５、２３６、２３８、２３９、２４０、２４１、２４３、２４４、２４５、２４７、２４８、２４９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６２、２６３、２６４、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１２、３１３、３１５、３２０、３２２、３２４、３２５、３２６、３２７、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、３７８、３８２、３８８、３８９、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３３、４３４、４３５、４３６、４３７、４３８または４３９での１以上のアミノ酸の修飾により、抗体依存性細胞傷害(ＡＤＣＣ)減少および／またはＦｃγ受容体に対する親和性低下のために修飾させ得る。置換の例は、２３６Ａ、２３９Ｄ、２３９Ｅ、２６８Ｄ、２６７Ｅ、２６８Ｅ、２６８Ｆ、３２４Ｔ、３３２Ｄおよび３３２Ｅを含む。バリアントの例は、２３９Ｄ／３３２Ｅ、２３６Ａ／３３２Ｅ、２３６Ａ／２３９Ｄ／３３２Ｅ、２６８Ｆ／３２４Ｔ、２６７Ｅ／２６８Ｆ、２６７Ｅ／３２４Ｔおよび２６７Ｅ／２６８Ｆ７３２４Ｔを含む。ＦｃγＲおよび補体相互作用を増強する他の修飾は、置換２９８Ａ、３３３Ａ、３３４Ａ、３２６Ａ、２４７１、３３９Ｄ、３３９Ｑ、２８０Ｈ、２９０Ｓ、２９８Ｄ、２９８Ｖ、２４３Ｌ、２９２Ｐ、３００Ｌ、３９６Ｌ、３０５１および３９６Ｌを含むが、これらに限定されない。これらおよび他の修飾は、Strohl, 2009, Current Opinion in Biotechnology 20:685-691にレビューされている。
【０２３７】
Ｆｃγ受容体への結合を増加させるＦｃ修は、Ｆｃ領域のアミノ酸位置２３８、２３９、２４８、２４９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７９、２８０、２８３、２８５、２９８、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３０１、３０３、３０５、３０７、３１２、３１５、３２４、３２７、３２９、３３０、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、３７９、３８２、３８８、３８９、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８または４３９の１以上でのアミノ酸修飾を含み、ここで、Ｆｃ領域における残基のナンバリングは、KabatのＥＵインデックスのものである(ＷＯ００／４２０７２)。
【０２３８】
所望により、Ｆｃ領域は、当業者に知られる付加および／または代替位置に天然に存在しないアミノ酸残基を含み得る(例えば、米国特許５,６２４,８２１；６,２７７,３７５；６,７３７,０５６；６,１９４,５５１；７,３１７,０９１；８,１０１,７２０；９,０４０,０４１；ＰＣＴ特許公開ＷＯ００／４２０７２；ＷＯ０１／５８９５７；ＷＯ０２／０６９１９；ＷＯ０４／０１６７５０；ＷＯ０４／０２９２０７；ＷＯ０４／０３５７５２；ＷＯ０４／０７４４５５；ＷＯ０４／０９９２４９；ＷＯ０４／０６３３５１；ＷＯ０５／０７０９６３；ＷＯ０５／０４０２１７；ＷＯ０５／０９２９２５；およびＷＯ０６／０２０１１４参照)。
【０２３９】
Ｆｃ領域のそのリガンドに対する親和性および結合性は、平衡方法(例えば、酵素結合免疫吸着法(ＥＬＩＳＡ)またはラジオイムノアッセイ(ＲＩＡ))または動力学的方法(例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ分析)ならびに間接結合アッセイ、競合的阻害アッセイ、蛍光共鳴エネルギー移動(ＦＲＥＴ)、ゲル電気泳動およびクロマトグラフィー(例えば、ゲル濾過)などの他の方法を含むが、これらに限定されない、多様なインビトロアッセイ方法(生化学または免疫学ベースのアッセイ)により決定し得る。これらおよび他の方法は、試験する成分の１以上における標識を使用するおよび／または発色、蛍光、発光または同位体標識を含むが、これらに限定されない多様な検出方法を用いることができる。結合親和性および動力学の詳細な記載は、抗体−免疫原相互作用に焦点をあてたPaul, W. E., ed., Fundamental Immunology, 4th Ed., Lippincott-Raven, Philadelphia (1999)に見ることができる。
【０２４０】
ある実施態様において、抗体を、その生物学的半減期を延長するために修飾し得る。種々の試みが可能である。例えば、これは、Ｆｃ領域のＦｃＲｎへの結合親和性の増加によりなし得る。例えば、米国特許６,２７７,３７５に記載のとおり、次の残基の１以上を変異させ得る：２５２、２５４、２５６、４３３、４３５、４３６。具体的な例示的置換は、次の１以上を含む：Ｔ２５２Ｌ、Ｔ２５４Ｓおよび／またはＴ２５６Ｆ。あるいは、生物学的半減期を延長させるために、抗体を、Presta et al.の米国特許５,８６９,０４６および６,１２１,０２２に記載のとおり、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインの２個のループから取ったサルベージ受容体結合エピトープを含むように、ＣＨ１またはＣＬ領域内を改変させ得る。ＦｃＲｎへの結合を増加させるおよび／または薬物動態性質を改善する他の例示的バリアントは、例えば２５９I、３０８Ｆ、４２８Ｌ、４２８Ｍ、４３４Ｓ、４３４I  １、４３４Ｆ、４３４Ｙおよび４３４Ｍを含む、２５９位、３０８位、４２８位および４３４位での置換を含む。ＦｃＲｎへのＦｃ結合を増加させる他のバリアントは：２５０Ｅ、２５０Ｑ、４２８Ｌ、４２８Ｆ、２５０Ｑ／４２８Ｌ(Hinton et al., 2004, J. Biol. Chem. 279(8): 6213-6216, Hinton et al. 2006 Journal of Immunology 176:346-356)、２５６Ａ、２７２Ａ、２８６Ａ、３０５Ａ、３０７Ａ、３０７Ｑ、３１１Ａ、３１２Ａ、３７６Ａ、３７８Ｑ、３８０Ａ、３８２Ａ、４３４Ａ(Shields et al, Journal of Biological Chemistry, 2001, 276(9):6591-6604)、２５２Ｆ、２５２Ｔ、２５２Ｙ、２５２Ｗ、２５４Ｔ、２５６Ｓ、２５６Ｒ、２５６Ｑ、２５６Ｅ、２５６Ｄ、２５６Ｔ、３０９Ｐ、３１１Ｓ、４３３Ｒ、４３３Ｓ、４３３Ｉ、４３３Ｐ、４３３Ｑ、４３４Ｈ、４３４Ｆ、４３４Ｙ、２５２Ｙ／２５４Ｔ／２５６Ｅ、４３３Ｋ／４３４Ｆ／４３６Ｈ、３０８Ｔ／３０９Ｐ／３１１Ｓ(Dall Acqua et al. Journal of Immunology, 2002, 169:5171-5180, Dall'Acqua et al., 2006, Journal of Biological Chemistry 281:23514-23524)を含む。ＦｃＲｎ結合調節のための他の修飾は、Yeung et al., 2010, J Immunol, 182:7663-7671に記載される。
【０２４１】
ある実施態様において、特定の生物学的特性を有するハイブリッドＩｇＧアイソタイプが使用され得る。例えば、ＩｇＧ１／ＩｇＧ３ハイブリッドバリアントを、ＣＨ２および／またはＣＨ３領域におけるＩｇＧ１位置を、２アイソタイプが異なる場所である位置でＩｇＧ３からのアミノ酸で置換することにより構築し得る。それ故に、１以上の置換、例えば、２７４Ｑ、２７６Ｋ、３００Ｆ、３３９Ｔ、３５６Ｅ、３５８Ｍ、３８４Ｓ、３９２Ｎ、３９７Ｍ、４２２１、４３５Ｒおよび４３６Ｆを含むハイブリッドバリアントＩｇＧ抗体が構築され得る。ここに記載する他の実施態様において、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２ハイブリッドバリアントを、ＣＨ２および／またはＣＨ３領域におけるＩｇＧ２位置を、２アイソタイプが異なる場所である位置でＩｇＧ１からのアミノ酸で置換することにより構築し得る。それ故に、１以上の置換、例えば、次のアミノ酸置換の１以上：２３３Ｅ、２３４Ｌ、２３５Ｌ、−２３６Ｇ(２３６位へのグリシン挿入をいう)および３２７Ａを含むハイブリッドバリアントＩｇＧ抗体が構築され得る。
【０２４２】
さらに、ヒトＩｇＧ１のＦｃγＲＩ、ＦｃγＲII、ＦｃγＲIIIおよびＦｃＲｎへの結合部位がマッピングされ、結合が改善したバリアントが記載されている(Shields, R.L. et al. (2001) J. Biol. Chem. 276:6591-6604参照)。２５６位、２９０位、２９８位、３３３位、３３４位および３３９位の特異的変異は、ＦｃγＲIIIへの結合を改善することが示された。さらに、次の：Ｔ２５６Ａ／Ｓ２９８Ａ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ、Ｓ２９８Ａ／Ｋ２２４ＡおよびＳ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａの組み合わせ変異は、ＦｃγＲIII結合への結合の改善を示し、ＦｃγＲIII結合およびＡＤＣＣ活性増強を示すことが示された(Shields et al., 2001)。ＦｃγＲIIIａへの結合が強く増強された他のＩｇＧ１バリアントは同定されており、カニクイザルサルでＦｃγＲIIIａに対する親和性の最大増加、ＦｃγＲIIｂ結合減少および強い細胞毒性活性を示した、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２ＥおよびＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌ変異を有するバリアントを含む(Lazar et al., 2006)。アレムツズマブ(ＣＤ５２特異的)、トラスツズマブ(ＨＥＲ２／ｎｅｕ特異的)、リツキシマブ(ＣＤ２０特異的)およびセツキシマブ(ＥＧＦＲ特異的)などの抗体への三重変異導入は、インビトロで大きく増大したＡＤＣＣ活性に反映され、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅバリアントは、サルでＢ細胞を枯渇させる能力の増強を示した(Lazar et al., 2006)。さらに、Ｂ細胞悪性腫瘍および乳癌モデルのヒトＦｃγＲIIIａを発現するトランスジェニックマウスでＦｃγＲIIIａへの結合増強および同時にＡＤＣＣ活性増強を示す、Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００ＬおよびＰ３９６Ｌ変異を含むＩｇＧ１変異体が同定されている(Stavenhagen et al., 2007; Nordstrom et al., 2011)。使用され得る他のＦｃ変異体は、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｌ３３４Ａ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌ、Ｌ２３５Ｖ／Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６ＬおよびＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含む。
【０２４３】
２３４位、２３５位、２３６位、２３９位、２６７位、２６８位、２９３位、２９５位、３２４位、３２７位、３２８位、３３０位および３３２位の特異的変異は、ＦｃγＲIIａへの結合改善および／またはＦｃγＲIIｂへの結合減少を示し、ＡＤＣＣおよび／またはＡＤＣＰ活性の減少をもたらすことが示された(Richards et al., Mol. Cancer Ther. 7(8):2517-2527；米国特許９,０４０,０４１)。特に、ＦｃγＲIIｂに比して１以上のヒト活性化受容体への結合を選択的に改善するまたは１以上活性化受容体に比してＦｃγＲIIｂへの結合を選択的に改善するＦｃバリアントは、２３４Ｇ、２３４Ｉ、２３５Ｄ、２３５Ｅ、２３５Ｉ、２３５Ｙ、２３６Ａ、２３６Ｓ、２３９Ｄ、２６７Ｄ、２６７Ｅ、２６７Ｑ、２６８Ｄ、２６８Ｅ、２９３Ｒ、２９５Ｅ、３２４Ｇ、３２４Ｉ、３２７Ｈ、３２８Ａ、３２８Ｆ、３２８Ｉ、３３０Ｉ、３３０Ｌ、３３０Ｙ、３３２Ｄおよび３３２Ｅからなる群から選択される置換を含み得る。また組み合わせ得るさらなる置換は、２９８Ａ、２９８Ｔ、３２６Ａ、３２６Ｄ、３２６Ｅ、３２６Ｗ、３２６Ｙ、３３３Ａ、３３３Ｓ、３３４Ｌおよび３３４Ａを含むが、これらに限定されないＦｃγＲ親和性および補体活性を調節する他の置換を含む(米国特許６,７３７,０５６; Shields et al, Journal of Biological Chemistry, 2001, 276(9):6591-6604; 米国特許６,５２８,６２４; Idusogie et al., 2001, J. Immunology 166:2571-2572)。他のＦｃバリアントとの組み合わせに特に有用であり得る好ましいバリアントは、置換２９８Ａ、３２６Ａ、３３３Ａおよび３３４Ａを含むものを含む。ＦｃγＲ選択的バリアントと組み合わせ得るさらなる置換は、２４７Ｌ、２５５Ｌ、２７０Ｅ、３９２Ｔ、３９６Ｌおよび４２１Ｋを含む(米国出願１０／７５４,９２２；米国出願１０／９０２,５８８)；および２８０Ｈ、２８０Ｑおよび２８０Ｙ(米国出願１０／３７０,７４９)。
【０２４４】
ＩｇＧ４定常ドメインを使用するとき、ＩｇＧ１のヒンジ配列を模倣し、それによりＩｇＧ４分子を安定化させる置換Ｓ２２８Ｐを含み得る。
【０２４５】
III. 非フコシル化、低フコシル化およびフコシル化低減
ある実施態様において、抗体のグリコシル化が修飾され得る。例えば、非グリコシル化抗体が製造され得る(すなわち、抗体はグリコシル化を欠く)。グリコシル化は、例えば、抗体の抗原への親和性増加のために、改変され得る。このような炭水化物修飾は、例えば、抗体配列内の１以上のグリコシル化部位の改変により達成され得る。例えば、１以上の可変領域フレームワークグリコシル化部位の除去をもたらし、それによりその部位でのグリコシル化を除去する、１以上のアミノ酸置換をなし得る。このような非グリコシル化は、抗体の抗原への親和性を増加させ得る。このような試みは、Co et al.の米国特許５,７１４,３５０および６,３５０,８６１にさらに詳述される。
【０２４６】
定常領域のＮ２９７のグリコシル化を、Ｎ２９７残基を他の残基、例えば、Ｎ２９７Ａに変異させるおよび／または隣接アミノ酸、例えば、２９８を変異させ、それによりＮ２９７のグリコシル化を低減させることにより阻止し得る。
【０２４７】
抗体とＦｃγＲの相互作用も、Ｎ２９７残基で各Ｆｃフラグメントに結合したグリカン部分の修飾により増強できる。特に、コアフコース残基の不在は、抗原結合またはＣＤＣを変えることなく、活性化ＦｃγＲIIIＡへのＩｇＧ結合を改善することにより、ＡＤＣＣを増強する。Natsume et al. (2009) Drug Des. Devel. Ther. 3:7。インビボマウスモデルで、無フコシル化腫瘍特異的抗体が、治療活性増強に反映される説得力がある証拠がある。Nimmerjahn & Ravetch (2005) Science 310:1510;Mossner et al. (2010) Blood 115:4393。抗体グリコシル化の修飾は、例えば、グリコシル化機構が改変された宿主細胞での抗体発現により、達成され得る。グリコシル化機構が改変された細胞は文献に記載されており、本発明の組み換え抗体を発現させる宿主細胞として使用でき、それによりグリコシル化が改変された抗体を産生する。例えば、細胞株Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５およびＭｓ７０９は、フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８(α−(１,６)フコシルトランスフェラーゼを欠き(米国特許出願公開２００４０１１０７０４; Yamane-Ohnuki et al. (2004) Biotechnol. Bioeng. 87: 614)、よって、これら細胞株で発現された抗体は、炭水化物にフコースを欠く。他の例として、ＥＰ１１７６１９５も、ＦＵＴ８遺伝子が機能的に破壊された細胞株ならびに抗体のＦｃ領域に結合するＮ−アセチルグルコサミンにフコースを付加する活性がほとんどまたは全くない細胞株、例えば、ラット骨髄腫細胞株ＹＢ２／０(ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６６２)を記載する。ＰＣＴ公開ＷＯ０３／０３５８３５は、フコースをＡｓｎ(２９７)結合炭水化物に結合する能力が低減したバリアントＣＨＯ細胞株、Ｌｅｃ１３を記載し、またその宿主細胞で発現された抗体の低フコシル化をもたらす。Shields et al. (2002) J. Biol. Chem. 277:26733も参照。グリコシル化プロファイルが修飾された抗体は、ＰＣＴ公開ＷＯ２００６／０８９２３１に記載のとおり、鶏卵でも産生され得る。あるいは、グリコシル化プロファイルが修飾された抗体は、アオウキクサなどの植物細胞で産生される。例えば米国公開２０１２／０２７６０８６参照。ＰＣＴ公開ＷＯ９９／５４３４２は、操作された細胞株で発現される抗体が、抗体のＡＤＣＣ活性を増加させる、二分岐ＧｌｃＮａｃ構造の増加を示すように、糖タンパク質修飾グリコシルトランスフェラーゼ(例えば、ベータ(１,４)−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼIII(ＧｎＴIII))を発現するように操作された細胞株を記載する。Umana et al. (1999) Nat. Biotech. 17:176も参照。あるいは、抗体のフコース残基を、フコシダーゼ酵素を使用して、開裂除去し得る。例えば、酵素アルファ−Ｌ−フコシダーゼは、抗体からフコシル残基を除去する。Tarentino et al. (1975) Biochem. 14:5516。フコシル化低減された抗体は、米国特許８,６４２,２９２に記載のとおり、ＧＤＰ−６−デオキシ−Ｄ−lyxo−４−ヘキシロースレダクターゼ(ＲＭＤ)などのＧＤＰ−６−デオキシ−Ｄ−lyxo−４−ヘキシロースを基質として使用する酵素をコードする組み換え遺伝子を担持する細胞でも産生され得る。あるいは、細胞は、培地で増殖された細胞によるフコース残基のＮ結合グリカンまたは糖タンパク質、例えば抗体への付加を遮断するフコースアナログを含む培地で増殖させ得る。米国特許８,１６３,５５１；ＷＯ���９／１３５１８１。
【０２４８】
非フコシル化抗体がフコシル化抗体と比較して、ＡＤＣＣおよび／またはＡＤＣＰの大きな増強を示すため、抗体調製物は、本発明で有用となるためにフコシル化重鎖を完全になくする必要はない。フコシル化重鎖の残存レベルは、実質的に非フコシル化重鎖の調製物のＡＤＣＣおよび／またはＡＤＣＰ活性を顕著に妨害しない。コアフコースをＮ−グリカンに付加する能力が十部にある慣用のＣＨＯ細胞で産生される抗体は、それにも関わらず、数パーセントから最大１５％の非フコシル化抗体を含み得る。非フコシル化抗体は、ＣＤ１６に１０倍高い親和性およびＡＤＣＣおよび／またはＡＤＣＰ活性の最大３０〜１００倍増強を示し得て、非フコシル化抗体のわずかな増加でさえ、調製物のＡＤＣＣおよび／またはＡＤＣＰ活性を劇的に増加させ得る。培養における正常ＣＨＯ細胞で産生されるより多くの非フコシル化抗体を含むあらゆる調製物は、ＡＤＣＣおよび／またはＡＤＣＰ増強をある手色のレベルで示し得る。このような抗体調製物は、ここでは、フコシル化低減調製物と称する。正常ＣＨＯ細胞から得られた非フコシル化の元のレベルによって、フコシル化低減調製物は、８０％、７０％、６０％５０％、３０％、２０％、１０％および５％非フコシル化抗体を含み得る。フコシル化低減は、正常ＣＨＯ細胞で調製された抗体と比較したＡＤＣＣおよび／またはＡＤＣＰの３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２倍、３倍またはそれ以上の増強を示す調製物として機能的に定義され得て、非フコシル化種の何らかの固定パーセンテージを参照しない。
【０２４９】
非フコシル化レベルは構造的に定義され得る。ここで使用する、「非フコシル化」または「無フコシル化」(これら用語は同義的に使用)は、９５％を超える、例えば９６％を超える、９７％を超える、９８％を超える、９９％を超えるまたは１００％の重鎖がフコースを欠く抗体調製物をいう。用語「低フコシル化」は、８０％を超え、９５％以下の重鎖がフコースを欠く抗体調製物、例えば、重鎖の８５〜９５％、８０〜８５％、８０〜９０％、８５〜９０％または９０〜９５％がフコースを欠く抗体調製物をいう。用語「低フコシル化または非フコシル化」は、８０％以上の重鎖がフコースを欠く抗体調製物をいう。用語「フコシル化低減」は、重鎖の１０〜８０％、例えば２０〜８０％、３０〜８０％、４０〜８０％、５０〜８０％、６０〜８０％、７０〜８０％、２０〜７０％、３０〜７０％、４０〜７０％、５０〜７０％、６０〜７０％、２０〜６０％、３０〜６０％、４０〜６０％、５０〜６０％、２０〜５０％、３０〜５０％、４０〜５０％、２０〜４０％、３０〜４０％、１０〜２０％、１０〜３０％または２０〜３０％がフコースを欠く抗体調製物をいう。
【０２５０】
ある実施態様において、低フコシル化または非フコシル化抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ＦＵＴ８などのフコシル化に必須の酵素を欠く細胞(例えば米国特許７,２１４,７７５)または外因性酵素がフコシル化のための代謝前駆体のプールを部分的に枯渇させる細胞(例えば米国特許８,６４２,２９２)またはフコシル化に関与する酵素の小分子阻害剤存在下培養した細胞(例えばＷＯ０９／１３５１８１)で産生され得る。
【０２５１】
抗体調製物のフコシル化のレベルは、当分野で知られる任意の方法で決定でき、ゲル電気泳動、キャピラリー電気泳動、液体クロマトグラフィーおよびマススペクトロメトリーを含むが、これらに限定されない。ある実施態様において、抗体調製物のフコシル化のレベルは、親水性相互作用クロマトグラフィー(または親水性相互作用液体クロマトグラフィー、ＨＩＬＩＣ)で決定され得る。ある実施態様において、抗体調製物のフコシル化のレベルを決定するために、サンプルを変性させ、ＰＮＧａｓｅ  Ｆで処理してＮ結合グリカンを開裂させ、次いで、フコース含量を分析する。完全長抗体鎖のＬＣ／ＭＳは、抗体調製物のフコシル化のレベルを検出する別の方法であるが、質量分析は、本質的にあまり定量的ではない。
【０２５２】
ある実施態様において、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、フコシル化低減されていても、低フコシル化でも非フコシル化でもよい。ある実施態様において、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体はフコシル化低減されていてよい。ある実施態様において、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は低フコシル化であり得る。ある実施態様において、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は非フコシル化であり得る。
【０２５３】
ある実施態様において、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ｉ)ＦｃγＲ結合を変えるためのＦｃ領域への１以上のアミノ酸変異および所望によりii)低減または除去されたフコシル化を含み得る。ある実施態様において、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ＦｃγＲ結合を変えるためのＦｃ領域への１以上のアミノ酸変異を含んでよく、低フコシル化または非フコシル化であり得る。ある実施態様において、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体はＦｃγＲ結合を変えるためのＦｃ領域への１以上のアミノ酸変異を含んでよく、非フコシル化であり得る。
【０２５４】
ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の他の修飾は、ペグ化である。抗体は、例えば、抗体の生物学的(例えば、血清)半減期を延長するために、ペグ化し得る。抗体をペグ化するために、抗体またはそのフラグメントを、一般にポリエチレングリコール(ＰＥＧ)、例えばＰＥＧの反応性エステルまたはアルデヒド誘導体と、１以上のＰＥＧ基が抗体または抗体フラグメントに結合するようになる条件下で反応させる。好ましくは、ペグ化は、反応性ＰＥＧ分子(または類似の反応性水可溶性ポリマー)とのアシル化反応またはアルキル化反応により行う。ここで使用する用語「ポリエチレングリコール」は、モノ(Ｃ１−Ｃ１０)アルコキシ−またはアリールオキシ−ポリエチレングリコールまたはポリエチレングリコール−マレイミドなどの他のタンパク質の誘導体化に使用されている、ＰＥＧの形態の何れも含むことを意図する。ある実施態様において、ペグ化する抗体は、非グリコシル化抗体である。タンパク質をペグ化する方法は当分野で知られ、ここに記載する抗体に適用し得る。例えば、Nishimura et al. のＥＰ０１５４３１６およびIshikawa et al.のＥＰ０４０１３８４参照。
【０２５５】
IV. 抗体物理的性質
抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体、例えば、例えば、ここに記載するものは、ここに記載する特定の抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の物理的特徴、例えば、実施例に記載される特徴のうちのいくつかまたはすべてを有する。
【０２５６】
ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、軽鎖または重鎖可変領域の何れかに１以上のグリコシル化部位を含有し得る。このようなグリコシル化部位は、抗体の免疫原性の増大または変更された抗原結合による抗体のｐＫの変更をもたらし得る(Marshall et al (1972) Annu. Rev Biochem 41:673-702; Gala and Morrison (2004) J. Immunol. 172:5489-94; Wallick et al., (1988) J Exp Med 168:1099-109; Spiro (2002) Glycobiology 12:43R-56R; Parekh et al., (1985) Nature 316:452-7; Mimura et al., (2000) Mol Immunol 37:697-706)。グリコシル化は、Ｎ−Ｘ−Ｓ／Ｔ配列を含有するモチーフで起こると知られている。いくつかの場合には、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は可変領域グリコシル化を含有しない。これは、可変領域中にグリコシル化モチーフを含有しない抗体を選択することによってか、またはグリコシル化領域内の残基を突然変異させることによって達成され得る。
【０２５７】
ある実施態様において、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、アスパラギン異性部位を含有しない。アスパラギンの脱アミド化は、Ｎ−ＧまたはＤ−Ｇ配列で起こり得、その結果、ポリペプチド鎖中にねじれを導入し、その安定性を低減し得る(イソアスパラギン酸効果)イソアスパラギン酸残基を生成し得る(イソアスパラギン酸効果)。
【０２５８】
各抗体は、独特の等電点(ｐｉ)を有し、これは、一般に、６から９.５の間のｐＨ範囲に入る。ＩｇＧ１抗体のｐｉは、通常、７〜９.５のｐＨ範囲内に入り、ＩｇＧ４抗体のｐｉは、通常、６〜８のｐＨ範囲内に入る。正常範囲の外側のｐｉを有する抗体は、インビボ条件下で幾分かのアンフォールディングおよび不安定性を有し得るという推測がある。したがって、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は正常範囲内に入るｐｉ値を含有し得る。これは、正常範囲のｐｉを有する抗体を選択することによってか、または電荷を有する表面残基を突然変異させることによって達成され得る。
【０２５９】
各抗体は、特徴的な融解温度を有し、融解温度が高いほど、インビボで全体的な安定性が大きいことを示す(Krishnamurthy R and Manning M C (2002) Curr Pharm Biotechnol 3:361-71)。一般に、ＴＭｉ(最初のアンフォールディングの温度)は、６０℃超、６５℃超、または７０℃超であり得る。抗体の融点は、示差走査熱量測定(Chen et al (2003) Pharm Res 20:1952-60; Ghirlando et al (1999) Immunol Lett 68:47-52)または円偏光二色性(Murray et al. (2002) J. Chromatogr Sci 40:343-9)を使用して測定できる。
【０２６０】
ある実施態様において、迅速に分解しない抗体が選択される。抗体の分解は、キャピラリー電気泳動(ＣＥ)およびＭＡＬＤＩ−ＭＳ(Alexander A J and Hughes D E (1995) Anal Chem 67:3626-32)を使用して測定できる。
【０２６１】
ある実施態様において、最小の凝集効果を有する抗体が選択され、凝集効果は、不要な免疫応答および／または変更されたか、もしくは不都合な薬物動態特性の誘発につながり得る。一般に、抗体は、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下または５％以下の凝集を有しても許容される。凝集は、サイズ排除カラム(ＳＥＣ)、高性能液体クロマトグラフィー(ＨＰＬＣ)および光散乱を含めた、いくつかの技術によって測定できる。ある実施態様において、抗体は、望ましい溶解度、例えば、商業生産を可能にする溶解度を示す。ある実施態様において、ここに記載する抗体の溶解度は、中性またはわずかに酸性のｐＨで少なくとも１０mg／ml、少なくとも１５mg／ml、少なくとも２０mg／ml、少なくとも２５mg／ml、少なくとも３０mg／ml、少なくとも４０mg／ml、少なくとも５０mg／ml、少なくとも６０mg／mlまたは少なくとも７０mg／mlであった。
【０２６２】
ある実施態様において、ここに記載する抗体は、対照抗体より高い安定性を有する。ある実施態様において、ここに記載する抗体は、対照抗体より高い融解温度を有する。ある実施態様において、ここに記載する抗体は、対照抗体より低い凝集傾向を有する。ある実施態様において、ここに記載する抗体は、対照抗体より高い溶解度を有する。ある実施態様において、ここに記載する抗体は、対照抗体より高い吸収率、低い毒性、高い生物学的活性および／または標的選択性、良好な製造性および／または低い免疫原性を有する。対照抗体は、ＭＩＣＡ／Ｂに結合する他の抗体またはそのフラグメントまたはそのコンジュゲートであり得る。
【０２６３】
Ｖ. 抗体を操作する方法
上記のとおり、本明細書に開示されるＶＨおよびＶＬ配列を有する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を使用して、ＶＨおよび／もしくはＶＬ配列またはそこに結合した定常領域を修飾することによって、新規抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を作製することができる。したがって、ここに記載する別の態様では、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の構造的特徴を使用して、ヒトＭＩＣＡ／ＢおよびカニクイザルＭＩＣＡ／Ｂへの結合などの、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の少なくとも１つの機能的特徴を保持する、構造的に関連する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を作製する。例えば、１ＭＩＣＡ.３６、ＭＩＣＡ.５２、ＭＩＣＡ.５４、ＭＩＣＡ.２および７１Ｃ２の１以上のＣＤＲ領域を、公知のフレームワーク領域および／または他のＣＤＲと組換えにより組み合わせて、上記のとおり、ここに記載する、組換えにより作製されたさらなる抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体が作製される。他のタイプの修飾は、先のセクションに記載のものを含む。遺伝子操作方法の出発材料は、本明細書に提供されるＶＨおよび／またはＶＬ配列の１以上またはそれらの１以上のＣＤＲ領域である。遺伝子操作された抗体を作製するために、必ずしも、本明細書に提供されるＶＨおよび／またはＶＬ配列の１以上またはそれらの１以上のＣＤＲ領域を有する抗体を実際に調製する(すなわち、タンパク質を発現させる)必要はない。むしろ、配列に含まれる情報は、元の配列に由来する「第２世代」の配列を作製するために出発材料として使用され、次に、この「第２世代」の配列が調製され、タンパク質として発現される。
【０２６４】
従って、ここに提供されるのは、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を製造する方法である。
【０２６５】
改変された抗体は、ここに示す機能的性質の少なくとも１つを示し得る。改変された抗体の機能的性質を、当技術分野で利用可能であるおよび／またはここに記載する標準的アッセイ、例えば実施例に記載されるもの(例えば、ＥＬＩＳＡ、ＦＡＣＳ)を使用して評価すし得る。
【０２６６】
ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を操作するある実施態様において、突然変異を、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体コード配列のすべてまたは一部に沿って無作為にまたは選択的に導入することができ、得られた修飾抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を、結合活性および／またはここに記載する他の機能的特性についてスクリーニングすることができる。突然変異の方法は、当技術分野で知られている。例えば、ShortによるＰＣＴ公開ＷＯ０２／０９２７８０は、飽和突然変異誘発、合成ライゲーションアセンブリまたはこれらの組合せを使用した抗体変異の作製およびスクリーニング方法について記載している。あるいは、Lazar et al.によるＰＣＴ公開ＷＯ０３／０７４６７９は、コンピュータによるスクリーニング方法を使用して抗体の生理化学特性を最適化する方法について記載している。
【０２６７】
VI. 核酸分子
ここに記載する他の態様は、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体をコードする核酸分子に関する。核酸は、アルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンド形成、カラムクロマトグラフィー、制限酵素、アガロースゲル電気泳動および当技術分野で周知のその他のものを含む、標準的技術によって、他の細胞成分または他の夾雑物、例えば、他の細胞性核酸(例えば、他の染色体ＤＮＡ、例えば、自然界では単離されたＤＮＡと連結している染色体ＤＮＡ)またはタンパク質から精製された場合に、全細胞中に、細胞溶解物中に、または部分精製されたかもしくは実質的に純粋な形態で存在し得る。核酸は、「単離されている」かまたは「実質的に純粋にされる」。F. Ausubel, et al., ed. (1987) Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New Yorkを参照のこと。ここに記載する核酸は、例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡであってよく、イントロン配列を含んでも、含まなくてもよい。ある実施態様において、核酸は、ｃＤＮＡ分子である。
【０２６８】
ここに記載する核酸は、標準的分子生物学技術を使用して得ることができる。ハイブリドーマ(例えば、以下にさらに記載されるようなヒト免疫グロブリン遺伝子を保持するトランスジェニックマウスから調製されたハイブリドーマ)によって発現される抗体については、ハイブリドーマによって作製された抗体の軽鎖および重鎖をコードするｃＤＮＡは、標準的ＰＣＲ増幅またはｃＤＮＡクローニング技術によって得ることができる。免疫グロブリン遺伝子ライブラリーから(例えば、ファージディスプレイ技術を使用して)から得られる抗体については、抗体をコードする核酸は、ライブラリーから回収され得る。
【０２６９】
ここに記載するある核酸分子は、ＭＩＣＡ.３６、ＭＩＣＡ.５２、ＭＩＣＡ.５４、ＭＩＣＡ.２および７１Ｃ２抗体のＶＨおよびＶＬ配列をコードするものである。ＭＩＣＡ.３６、ＭＩＣＡ.５２、ＭＩＣＡ.５４、ＭＩＣＡ.２および７１Ｃ２のＶＨ配列をコードするＤＮＡ配列の例は、それぞれ配列番号１、１１、２１、３１および４１に示される。ＭＩＣＡ.３６、ＭＩＣＡ.５２、ＭＩＣＡ.５４、ＭＩＣＡ.２および７１Ｃ２のＶＬ配列をコードするＤＮＡ配列の例は、それぞれ配列番号３、１３、２３、３３および４３に示される。ＭＩＣＡ.３６、ＭＩＣＡ.５２、ＭＩＣＡ.５４、ＭＩＣＡ.２および７１Ｃ２の重鎖配列をコードするＤＮＡ配列の例は、それぞれ配列番号５９、６３、６７、７１および７５に示される。ＭＩＣＡ.３６、ＭＩＣＡ.５２、ＭＩＣＡ.５４、ＭＩＣＡ.２および７１Ｃ２の軽鎖配列をコードするＤＮＡ配列の例は、それぞれ配列番号６１、６５、６９、７３および７７に示される。
【０２７０】
ＭＩＣＡ.３６抗体の成熟ＶＨおよびＶＬドメインをコードする核酸の例は、それぞれ配列番号１および３に示される。ＭＩＣＡ.３６抗体の成熟重鎖をコードする核酸の例は配列番号５９および１３１に示され、ＭＩＣＡ.３６抗体の成熟軽鎖をコードする核酸の例は配列番号６１に示される。
【０２７１】
ＭＩＣＡ.５２抗体の成熟ＶＨおよびＶＬドメインをコードする核酸の例は、それぞれ配列番号１１および１３に示される。ＭＩＣＡ.５２抗体の成熟重鎖をコードする核酸の例は配列番号６３に示され、ＭＩＣＡ.５２抗体の成熟軽鎖をコードする核酸の例は配列番号６５に示される。
【０２７２】
ＭＩＣＡ.５４抗体の成熟ＶＨおよびＶＬドメインをコードする核酸の例は、それぞれ配列番号２１および２３に示される。ＭＩＣＡ.５４抗体の成熟重鎖をコードする核酸の例は配列番号６７に示され、ＭＩＣＡ.５４抗体の成熟軽鎖をコードする核酸の例は配列番号６９に示される。
【０２７３】
ＭＩＣＡ.２抗体の成熟ＶＨおよびＶＬドメインをコードする核酸の例は、それぞれ配列番号３１および３３に示される。ＭＩＣＡ.２抗体の成熟重鎖をコードする核酸の例は配列番号７１に示され、ＭＩＣＡ.２抗体の成熟軽鎖をコードする核酸の例は配列番号７３に示される。
【０２７４】
７１Ｃ２抗体の成熟ＶＨおよびＶＬドメインをコードする核酸の例は、それぞれ配列番号４１および４３に示される。７１Ｃ２抗体の成熟重鎖をコードする核酸の例は配列番号７５に示され、７１Ｃ２抗体の成熟軽鎖をコードする核酸の例は配列番号７７に示される。
【０２７５】
上記例示核酸は、さらに、配列番号１００〜１０５に示すシグナルペプチドを含み得る。シグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列は配列番号１０６〜１０７として示される。ある実施態様において、シグナルペプチドはMRAWIFFLLCLAGRALA(配列番号１０５)を含む。
【０２７６】
ここに記載する核酸分子は、特定の配列、例えば、制限酵素認識配列を欠失するように、またはコドンを最適化するように、修飾され得る。
【０２７７】
ＭＩＣＡ.３６、ＭＩＣＡ.５２、ＭＩＣＡ.５４、ＭＩＣＡ.２および７１Ｃ２を製造する方法は、シグナルペプチドと共に重鎖および軽鎖をコードするヌクレオチド配列、例えば、ＭＩＣＡ.３６について、それぞれ配列番号５９および６１またはそれぞれ配列番号１３１および６１を含む細胞株で重鎖および軽鎖を発現させることを含み得る。ＭＩＣＡ.３６、ＭＩＣＡ.５２、ＭＩＣＡ.５４、ＭＩＣＡ.２および７１Ｃ２を製造する方法は、シグナルペプチドと共に重鎖および軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む細胞株で、重鎖および軽鎖を発現させることを含み得る。該ヌクレオチド配列を含む宿主細胞は、ここに包含される。
【０２７８】
ＶＨおよびＶＬセグメントをコードするＤＮＡフラグメントが得られたら、例えば、可変領域遺伝子を全長抗体鎖遺伝子に、Ｆａｂフラグメント遺伝子に、またはｓｃＦｖ遺伝子に変換するよう、標準的組換えＤＮＡ技術によってこれらのＤＮＡフラグメントをさらに操作できる。これらの操作では、ＶＬまたはＶＨをコードするＤＮＡフラグメントは、抗体定常領域または可動性リンカーなどの別のタンパク質をコードする別のＤＮＡフラグメントと操作可能に結合している。この文脈において使用されるような、用語「操作可能に結合された」は、２個のＤＮＡフラグメントによってコードされるアミノ酸配列がインフレームのままであるように、２個のＤＮＡフラグメントが接続されることを意味するものとする。
【０２７９】
ＶＨ領域をコードする単離ＤＮＡは、ＶＨをコードするＤＮＡを、重鎖定常領域(ヒンジ、ＣＨ１、ＣＨ２、および／またはＣＨ３)をコードする別のＤＮＡ分子と操作可能に結合することによって、全長重鎖遺伝子に変換され得る。ヒト重鎖定常領域遺伝子の配列は、当分野で知られ(例えば、Kabat, E. A., el al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242参照)、これらの領域を包含するＤＮＡフラグメントは、標準的ＰＣＲ増幅によって得ることができる。重鎖定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭまたはＩｇＤ定常領域、例えば、ＩｇＧ１領域であり得る。Ｆａｂフラグメント重鎖遺伝子については、ＶＨをコードするＤＮＡは、重鎖ＣＨ１定常領域のみをコードする別のＤＮＡ分子と操作可能に結合され得る。
【０２８０】
ＶＬ領域をコードする単離ＤＮＡは、ＶＬをコードするＤＮＡを、軽鎖定常領域、ＣＬをコードする別のＤＮＡ分子と操作可能に結合することによって、全長軽鎖遺伝子(およびＦａｂ軽鎖遺伝子)に変換され得る。ヒト軽鎖定常領域遺伝子の配列は、当分野で知られ(例えば、Kabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242参照)、これらの領域を包含するＤＮＡフラグメントは、標準的ＰＣＲ増幅によって得ることができる。軽鎖定常領域は、κまたはλ定常領域であり得る。
【０２８１】
ｓｃＦｖ遺伝子を作製するために、ＶＨおよびＶＬをコードするＤＮＡフラグメントを、例えば、アミノ酸配列(Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ)３をコードする可動性リンカーをコードする別のフラグメントに操作可能に結合し、その結果、ＶＨおよびＶＬ配列が、可動性リンカーによって接続されたＶＬおよびＶＨ領域を有する連続一本鎖タンパク質として発現され得る(例えば、Bird et al., (1988) Science 242:423-426;Huston et al., (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883; McCafferty et al., (1990) Nature 348:552-554を参照のこと)。
【０２８２】
またここに提供されるのは、ＭＩＣＡ.３６、ＭＩＣＡ.５２、ＭＩＣＡ.５４、ＭＩＣＡ.２および７１Ｃ２抗体のものに相同であるＶＨおよびＶＬ配列をコードする核酸分子である。例示的核酸分子は、ＭＩＣＡ.３６、ＭＩＣＡ.５２、ＭＩＣＡ.５４、ＭＩＣＡ.２および７１Ｃ２抗体のＶＨおよびＶＬ配列をコードする核酸分子と少なくとも７０％同一、例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％同一である、ＶＨおよびＶＬ配列をコードする。またここに提供されるのは、例えば、コドン最適化のために、保存的置換(すなわち、核酸分子の翻訳時に得られるアミノ酸配列を変更しない置換)を有する核酸分子である。
【０２８３】
また提供されるのは、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体、例えば、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体のＶＨおよび／またはＶＬ領域をコードする核酸であり、該核酸は、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体のＶＨおよび／またはＶＬ領域をコードするヌクレオチド配列の何れかと少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるヌクレオチド配列を含む。
【０２８４】
また提供されるのは、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体、例えば、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の重鎖および／または軽鎖をコードする核酸であり、該核酸は、ここに記載する抗ＴＩＭ３抗体の重鎖および／または軽鎖をコードするヌクレオチド配列の何れかと少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるヌクレオチド配列を含む。
【０２８５】
VII. 抗体産生
ここに記載するモノクローナル抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、Kohler and Milstein, Nature 256: 495 (1975)によって記載される標準的体細胞ハイブリダイゼーション技術などの種々の既知技術を使用して産生できる。体細胞ハイブリダイゼーション法が好ましいが、原則として、モノクローナル抗体を産生するためのその他の技術、例えば、Ｂリンパ球のウイルス性または発癌性形質転換、ヒト抗体遺伝子のライブラリーを使用するファージディスプレイ技術も使用できる。
【０２８６】
ハイブリドーマを調製するための好ましい動物系として、マウス系がある。マウスにおけるハイブリドーマ産生は、極めて十分に確立された方法である。免疫処置プロトコールおよび技術および融合のために免疫処置された脾細胞を単離するための技術は、当技術分野で公知である。融合パートナー(例えば、マウス骨髄腫細胞)および融合手順も公知である。
【０２８７】
ここに記載するキメラまたはヒト化抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、上記のとおり調製したマウスモノクローナル抗体の配列に基づいて調製できる。標準的分子生物学技術を使用して、重鎖および軽鎖免疫グロブリンをコードするＤＮＡを、対象のマウスハイブリドーマから得、非マウス(例えば、ヒト)免疫グロブリン配列を含有するよう遺伝子操作できる。例えば、当分野で知られる方法を使用して、キメラ抗体を作製するために、マウス可変領域をヒト定常領域に連結できる(例えば、Cabilly et al.の米国特許４,８１６,５６７参照)。ヒト化抗体を作製するために、当分野で知られる方法を使用して、ヒトフレームワーク中にマウスＣＤＲ領域を挿入できる(例えば、Winterの米国特許５,２２５,５３９およびQueen et alの米国特許５,５３０,１０１；５,５８５,０８９；５,６９３,７６２および６,１８０,３７０参照)
【０２８８】
ある実施態様において、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ヒトモノクローナル抗体である。このようなＭＩＣＡ／Ｂに対するヒトモノクローナル抗体は、マウス系ではなくヒト免疫系の部分を保持する、トランスジェニックまたはトランスクロモソミックマウスを使用して作製できる。これらのトランスジェニックおよびトランスクロモソミックマウスは、ここでそれぞれＨｕＭＡｂマウスおよびＫＭマウスと称し、まとめて「ヒトＩｇマウス」と称するマウスを含む。
【０２８９】
ＨＵＭＡＢマウス(登録商標)(Medarex, Inc.)は、再編成されていないヒト重鎖(μおよびγ)およびκ軽鎖免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子ミニ遺伝子座(miniloci)を、内因性μおよびκ鎖遺伝子座を不活性化する標的化された突然変異と共に含有する(例えば、Lonberg, et al., (1994) Nature 368(6474): 856-859参照)。したがって、マウスは、マウスＩｇＭまたはκの発現の低下を示し、免疫処置に応じて、導入されたヒト重鎖および軽鎖 導入遺伝子は、クラススイッチおよび体細胞突然変異を受けて、高親和性ヒトＩｇＧＫモノクローナルを生成する(Lonberg, N. et al. (1994)、前掲; Lonberg, N. (1994) Handbook of Experimental Pharmacology 113:49-101; Lonberg, N. and Huszar, D. (1995) Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93およびHarding, F. and Lonberg, N. (1995) Ann. N.Y. Acad. Sci. 764:536-546に概説されている)。ＨｕＭａｂマウスの調製および使用ならびにこのようなマウスによって保持されるゲノム修飾は、Taylor, L. et al. (1992) Nucleic Acids Research 20:6287-6295;Chen, J. et al., (1993) International Immunology 5: 647-656; Tuaillon et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:3720-3724; Choi et al. (1993) Nature Genetics 4:117-123; Chen, J. et al. (1993) EMBO J. 12: 821-830; Tuaillon et al. (1994) Immunol. 152:2912-2920; Taylor, L. et al. (1994) International Immunology 6: 579-591;およびFishwild, D. et al. (1996) Nature Biotechnology 14: 845-851にさらに記載されている。さらに、すべてLonbergおよびKayの米国特許５,５４５,８０６；５,５６９,８２５；５,６２５,１２６；５,６３３,４２５；５,７８９,６５０；５,８７７,３９７；５,６６１,０１６；５,８１４,３１８；５,８７４,２９９；および５,７７０,４２９；Surani et al.,の米国特許５,５４５,８０７；すべてLonbergおよびKayのＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／０３９１８、ＷＯ９３／１２２２７、ＷＯ９４／２５５８５、ＷＯ９７／１３８５２、ＷＯ９８／２４８８４およびＷＯ９９／４５９６２ならびにKorman et al.のＰＣＴ公開番号ＷＯ０１／１４４２４参照。
【０２９０】
ある実施態様において、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、導入遺伝子および導入染色体上にヒト免疫グロブリン配列を保持するマウス、例えば、ヒト重鎖導入遺伝子およびヒト軽鎖導入染色体を保持するマウスを使用して作製される。ここで「ＫＭマウス」と称するこのようなマウスは、Ishida et al.のＰＣＴ公開ＷＯ０２／４３４７８に詳述されている。
【０２９１】
なおさらに、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する別のトランスジェニック動物系が当分野で利用可能であり、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を作製するために使用できる。例えば、Xenomouse(Abgenix、Inc.)と呼ばれる別のトランスジェニック系を使用でき、このようなマウスは、例えば、Kucherlapati et al.の米国特許５,９３９,５９８；６,０７５,１８１；６,１１４,５９８；６,１５０,５８４および６,１６２,９６３に記載されている。
【０２９２】
さらに、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する別のトランスクロモソミック(transchromosomic)動物系は、当技術分野で利用可能であり、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を作製するために使用できる。例えば、「ＴＣマウス」と呼ばれる、ヒト重鎖導入染色体(transchromosome)およびヒト軽鎖導入染色体(tranchromosome)の両方を保持するマウスを使用でき、このようなマウスは、Tomizuka et al. (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:722-727に記載されている。さらに、ヒト重鎖および軽鎖導入染色体(transchromosome)を保持するウシが、当技術分野で知られており(Kuroiwa et al. (2002) Nature Biotechnology 20:889-894)、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を作製するために使用できる。
【０２９３】
ヒト抗体、例えば、ヒト抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を作製するための文献に記載されるさらなるマウス系は、(ｉ)内因性マウス重鎖および軽鎖可変領域が、相同組換えによって、内因性マウス定常領域に操作可能に結合された、ヒト重鎖および軽鎖可変領域と置換されており、その結果、マウスにおいてキメラ抗体(ヒトＶ／マウスＣ)が作製され、次いで、その後、標準的組換えＤＮＡ技術を使用して完全ヒト抗体に変換される、VELOCLMMUNE(登録商標)マウス(Regeneron Pharmaceuticals, Inc.)および(ii)マウスが再編成されていないヒト重鎖可変領域、しかし単一の再変性されたヒト共通軽鎖可変領域を含有するＭＥＭＯ(登録商標)マウス(Merus Biopharmaceuticals, Inc.)を含む。このようなマウスおよび抗体を作製するためのその使用は、例えば、ＷＯ２００９／１５７７７、ＵＳ２０１０／００６９６１４、ＷＯ２０１１／０７２２０４、ＷＯ２０１１／０９７６０３、ＷＯ２０１１／１６３３１１、ＷＯ２０１１／１６３３１４、ＷＯ２０１２／１４８８７３、ＵＳ２０１２／００７０８６１およびＵＳ２０１２／００７３００４に記載されている。
【０２９４】
ここに記載するヒトモノクローナル抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体はまた、ヒト免疫グロブリン遺伝子のライブラリーをスクリーニングするためのファージディスプレイ法を使用して調製できる。ヒト抗体を単離するためのこのようなファージディスプレイ法は、当技術分野で確立されている。例えば、Ladner et al.の米国特許５,２２３,４０９；５,４０３,４８４；および５,５７１,６９８；Dower et al.の米国特許５,４２７,９０８および５,５８０,７１７； McCafferty et al.の米国特許５,９６９,１０８および６,１７２,１９７；ならびにGriffiths et al.の米国特許５,８８５,７９３；６,５２１,４０４；６,５４４,７３１；６,５５５,３１３；６,５８２,９１５および６,５９３,０８１参照。
【０２９５】
ここに記載するヒトモノクローナル抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体はまた、免疫化によりヒト抗体応答が生じ得るようヒト免疫細胞が再構成されているＳＣＩＤマウスを使用して調製できる。このようなマウスは、例えば、Wilson et alの米国特許５,４７６,９９６および５,６９８,７６７に記載されている。
【０２９６】
VII.Ａ. 免疫化
ＭＩＣＡ／Ｂに対する完全ヒト抗体を作製するために、例えば、Lonberg et al., (1994) Nature 368(6474): 856-859;Fishwild et al., (1996) Nature Biotechnology 14: 845-851およびＷＯ９８／２４８８４により他の抗原について記載されるとおり、ヒト免疫グロブリン遺伝子を含むトランスジェニックまたはトランスクロモソーマルマウス(例えば、ＨＣｏ１２、ＨＣｏ７またはＫＭマウス)を、ヒトＭＩＣＡ／Ｂ抗原、例えば、ＭＩＣＡ＊００２、ＭＩＣＡ＊００４、ＭＩＣＡ＊００８、ＭＩＣＡ＊００９、ＭＩＣＢ＊００５またはこれらの何れかの組み合わせを精製または濃縮させた調製物および／またはＭＩＣＡまたはそのフラグメントを発現する細胞を使用して免疫化できる。あるいは、マウスをヒトＭＩＣＡ／ＢまたはそのフラグメントをコードするＤＮＡを用いて免疫化できる。ある実施態様において、マウスは、最初の注入時６〜１６週齢であり得る。例えば、ＨｕＭＡｂマウスを腹膜内に免疫化するために、組み換えＭＩＣＡ／Ｂ抗原の精製または濃縮された調製物(５〜５０μｇ)を使用できる。ＭＩＣＡ／Ｂ抗原の精製または濃縮された調製物を使用する免疫化が抗体をもたらさない事象では、ＭＩＣＡ／Ｂを発現する細胞、例えば、細胞株を用いてマウスを免疫化して、免疫応答を促進してもよい。細胞株の例は、ＭＩＣＡ／Ｂ過剰発現安定ＣＨＯおよびＲａｊｉ細胞株を含む。
【０２９７】
種々の抗原での経験の蓄積により、ＨｕＭＡｂトランスジェニックマウスは、Ｒｉｂｉアジュバント中の抗原で最初に腹膜内(ＩＰ)または皮下(ＳＣ)免疫化し、その後、Ｒｉｂｉアジュバント中の抗原を用いる隔週でのＩＰ／ＳＣ免疫化(最大合計１０)のときに最良に応答することが示されている。免疫応答は、後眼窩出血によって得られている血漿サンプルを用いて、免疫化プロトコールの過程にわたってモニタリングできる。血漿は、ＥＬＩＳＡおよびＦＡＣＳによってスクリーニングでき(下記)、抗ＭＩＣＡ／Ｂヒト免疫グロブリンの十分な力価を有するマウスを融合のために使用できる。マウスを、抗原を用いて静脈内に追加免疫し、３日後に、屠殺し、脾臓およびリンパ節を採取できる。各免疫化のために２〜３回の融合が実施されることが必要であると予測される。各抗原について、６〜２４匹のマウスが、通常免疫化される。通常、ＨＣｏ７、ＨＣｏ１２およびＫＭ系統が使用される。さらに、ＨＣｏ７およびＨＣｏ１２導入遺伝子は両方とも、２種の異なるヒト重鎖導入遺伝子を有する(ＨＣｏ７／ＨＣｏ１２)単一マウスに一緒に育種され得る。
【０２９８】
VII.Ｂ. ＭＩＣＡ／Ｂに対するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマの作製
ここに記載するヒトモノクローナル抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を産生するハイブリドーマを作製するために、免疫化されたマウスから脾細胞および／またはリンパ節細胞を単離し、マウス骨髄腫細胞系統などの適当な不死化細胞系統と融合できる。得られたハイブリドーマを抗原特異的抗体の産生についてスクリーニングできる。例えば、ＰＥＧを用いて、免疫化マウス由来の脾臓リンパ球の単細胞懸濁液を、Ｓｐ２／０非分泌性マウス骨髄腫細胞(ＡＴＣＣ、ＣＲＬ  １５８１)と融合できる。細胞を、平底マイクロタイタープレートにプレーティングし、続いて、選択培地でインキュベートできる。数週間後、細胞を培地で培養できる。次いで、個々のウェルを、ヒトモノクローナルＩｇＭおよびＩｇＧ抗体についてＥＬＩＳＡによってスクリーニングできる。広範なハイブリドーマ成長が起こると、１０〜１４日後に普通に培地を観察できる。抗体を分泌するハイブリドーマを再配置し、再度スクリーニングでき、ヒトＩｇＧについて依然として陽性である場合に、制限希釈によってモノクローナル抗体を少なくとも２回サブクローニングできる。次いで、安定なサブクローンをインビトロで培養して、特性決定のために組織培養培地において少量の抗体を作製できる。
【０２９９】
ヒトモノクローナル抗体を精製するために、選択されたハイブリドーマを、モノクローナル抗体精製のために２リットルのスピナーフラスコ中で成長させることができる。プロテインＡ−セファロース(Pharmacia, Piscataway, N.J.)を用いるアフィニティークロマトグラフィーの前に、上清を濾過し、濃縮できる。溶出されたＩｇＧを、ゲル電気泳動および高性能液体クロマトグラフィーによって調べ、純度を確実にすることができる。バッファー溶液は、ＰＢＳに交換でき、１.４３吸光係数を使用してＯＤ２８０によって濃度を決定できる。次いで、モノクローナル抗体をアリコートにし保存できる。
【０３００】
VII.Ｃ. ＭＩＣＡ／Ｂに対するモノクローナル抗体を産生するトランスフェクトーマの作製
抗体を、当技術分野で周知であるように、例えば、組換えＤＮＡ技術および遺伝子トランスフェクション法の組合せを使用して宿主細胞トランスフェクトーマにおいて産生できる(Morrison, S.(1985) Science 229:1202)。
【０３０１】
例えば、抗体またはその抗体フラグメントを発現させるために、部分または全長軽鎖および重鎖をコードするＤＮＡを、標準的分子生物学技術(例えば、ＰＣＲ増幅または対象の抗体を発現するハイブリドーマを使用するｃＤＮＡクローニング)によって得ることができ、遺伝子が、転写および翻訳制御配列に操作可能に結合されるように、ＤＮＡを発現ベクター中に挿入することができる。これに関連して、用語「操作可能に結合された」は、ベクター内の転写および翻訳制御配列が、抗体遺伝子の転写および翻訳を調節するというその意図される機能を果たすよう、抗体遺伝子がベクター中にライゲーションされることを意味するものとする。発現ベクターおよび発現制御配列は、使用される発現宿主細胞と適合するよう選択される。抗体軽鎖遺伝子および抗体重鎖遺伝子は、別個のベクター中に挿入されてもよく、または両遺伝子は、同一発現ベクター中に挿入される。抗体遺伝子は、標準的方法(例えば、抗体遺伝子フラグメント上の相補的制限部位およびベクターの連結または制限部位が存在しない場合には平滑末端連結)によって、発現ベクター中に挿入される。ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の軽鎖および重鎖可変領域を使用し、ＶＨセグメントがベクター内のＣＨセグメントと操作可能に結合され、ＶＬセグメントが、ベクター内のＣＬセグメントと操作可能に結合されるように、それらを所望のアイソタイプの重鎖定常および軽鎖定常領域をすでにコードする発現ベクター中に挿入することによって何れかの抗体アイソタイプの全長抗体遺伝子を作製できる。
【０３０２】
これに加えてまたはこれとは別に、組換え発現ベクターは、宿主細胞からの抗体鎖の分泌を促進するシグナルペプチドをコードし得る。抗体鎖遺伝子は、シグナルペプチドが、抗体鎖遺伝子のアミノ末端とインフレームで連結されるように、ベクター中にクローニングできる。シグナルペプチドは、免疫グロブリンシグナルペプチドまたは異種シグナルペプチド(すなわち、非免疫グロブリンタンパク質由来のシグナルペプチド)であり得る。
【０３０３】
ある実施態様において、ヒト抗体重鎖および軽鎖からの次のシグナルペプチドが使用され得る：MDWTWRVFCLLAVAPGAHS(配列番号１００)；METPAQLLFLLLLWLPDTTG(配列番号１０１)；MKHLWFFLLLVAAPRWVLS(配列番号１０２)；MEFGLSWVFLVAIIKGVQC(配列番号１０３)；MDMRVPAQLLGLLLWLPGARC(配列番号１０４)またはMRAWIFFLLCLAGRALA(配列番号１０５)。ある実施態様において、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の何れかの発現に使用するシグナル配列は配列番号１０５でる。抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の重鎖および軽鎖を、それらをクローン化したハイブリドーマの各鎖と連結した各シグナル配列により発現させ得る。下記は、クローン化したハイブリドーマに存在する種々の抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体のシグナル配列であり、該シグナル配列を同じ抗体または他の抗体の発現に使用できる。
【０３０４】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体(例えば、ＭＩＣＡ.３６)の重鎖および軽鎖を、それらをクローン化したハイブリドーマに存在するのと異なるシグナル配列を用いて操作できる。このような配列の例は、次のものを含むが、これらに限定されない。
(ｉ)重鎖シグナル配列の核酸配列：ATGAGGGCTTGGATCTTCTTTCTGCTCTGCCTGGCCGGGAGAGCGCTCGCA(配列番号１０６)
(ii)軽鎖シグナル配列の核酸配列：ATGAGGGCTTGGATCTTCTTTCTGCTCTGCCTGGCCGGGCGCGCCTTGGCC(配列番号１０７)
(iii)重鎖および軽鎖のシグナル配列のアミノ酸配列：MRAWIFFLLCLAGRALA(配列番号１０５)。
【０３０５】
抗体鎖遺伝子に加えて、組換え発現ベクターは、宿主細胞における抗体鎖遺伝子の発現を制御する調節配列を保持し得る。用語「調節配列」とは、プロモーター、エンハンサーおよび抗体鎖遺伝子の転写または翻訳を制御するその他の発現制御エレメント(例えば、ポリアデニル化シグナル)を含むものとする。このような調節配列は、例えば、Goeddel(Gene Expression Technology. Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA (1990))に記載されている。調節配列の選択を含む発現ベクターの設計は、形質転換されるべき宿主細胞の選択、所望のタンパク質の発現のレベルなどの因子より得ることは当業者には明らかである。哺乳動物宿主細胞発現のための好ましい調節配列は、サイトメガロウイルス(ＣＭＶ)、サルウイルス４０(ＳＶ４０)、アデノウイルス(例えば、アデノウイルス主要後期プロモーター(ＡｄＭＬＰ)およびポリオーマ由来のプロモーターおよび／またはエンハンサーなどの、哺乳動物細胞における高レベルのタンパク質発現を指示するウイルスエレメントを含む。あるいは、ユビキチンプロモーターまたはβ−グロビンプロモーターなどの非ウイルス調節配列を使用し得る。なおさらに、ＳＶ４０初期プロモーター由来の配列およびヒトＴ細胞白血病ウイルス１型の長い末端反復配列を含有する、ＳＲａプロモーター系などの異なる供給源に由来する配列からなる調節エレメント(Takebe, Y. et al. (1988) Mol. Cell. Biol. 8:466-472)。
【０３０６】
抗体鎖遺伝子および調節配列に加えて、組換え発現ベクターは、宿主細胞におけるベクターの複製を調節する配列(例えば、複製起点)などのさらなる配列および選択マーカー遺伝子を担持し得る。選択マーカー遺伝子は、ベクターが導入されている宿主細胞の選択を促進する(例えば、すべてAxel et alによる米国特許４,３９９,２１６、４,６３４,６６５および５,１７９,０１７参照)。例えば、通常、選択マーカー遺伝子は、Ｇ４１８、ハイグロマイシンまたはメトトレキサートなどの薬物に対する耐性を、ベクターが導入されている宿主細胞に付与する。好ましい選択マーカー遺伝子は、ジヒドロホレートレダクターゼ(ＤＨＦＲ)遺伝子(メトトレキサート選択／増幅と共に、ｄｈｆｒ−宿主細胞において使用するための)およびｎｅｏ遺伝子(Ｇ４１８選択のため)を含む。
【０３０７】
軽鎖および重鎖の発現のために、重鎖および軽鎖をコードする発現ベクターを、標準的技術によって宿主細胞にトランスフェクトする。用語「トランスフェクション」の種々の形態は、原核生物または真核生物宿主細胞への外因性ＤＮＡの導入のためによく使用される様々な技術、例えば、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクションなどを包含する。
【０３０８】
ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を原核生物または真核生物宿主細胞、例えば哺乳動物細胞で発現させることが可能である。
【０３０９】
ここに記載する組換え抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を発現させるための特定の哺乳動物宿主細胞は、チャイニーズハムスター卵巣(ＣＨＯ細胞)(例えば、R. J. Kaufman and P. A. Sharp (1982) Mol. Biol. 159:601-621に記載されるように、ＤＨＦＲ選択マーカーと共に使用される、Urlaub and Chasin, (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220に記載されたｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞を含む)、ＮＳＯ骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞およびＳＰ２細胞を含む。特に、ＮＳＯ骨髄腫細胞と共に使用するためには、別の発現系として、ＷＯ８７／０４４６２、ＷＯ８９／０１０３６およびＥＰ３３８,８４１に開示されるＧＳ遺伝子発現系がある。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターは、哺乳動物宿主細胞中に導入され、抗体は、宿主細胞を、宿主細胞における抗体の発現、またはより好ましくは、宿主細胞が成長した培養培地への抗体の分泌を可能にするのに十分な期間培養することによって産生される。抗体は、標準的タンパク質精製法を使用して培養培地から回収できる。
【０３１０】
VIII. 免疫複合体、抗体誘導体および診断
ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、サンプルの試験およびインビボ撮像を含む診断目的で使用することができ、この目的で、抗体(またはその結合フラグメント)は、適当な検出可能な薬剤とコンジュゲートして、免疫複合体を形成することができる。診断目的では、適当な薬剤は、全身造影のための放射性同位体ならびにサンプルの試験のための放射性同位体、酵素、蛍光標識および他の好適な抗体タグを含む、検出可能な標識である。
【０３１１】
ここに記載する何れかの抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体と連結させることができる検出可能な標識は、コロイド金などの金属ゾルを含む粒子標識、例えばＮ２Ｓ２、Ｎ３ＳもしくはＮ４型のペプチド性キレート剤と共に提示されるＩ１２５またはＴｃ９９などの同位体、蛍光マーカー、発光マーカー、リン光マーカーなどを含む発色団ならびにある基質を検出可能なマーカーに変換する酵素標識およびポリメラーゼ連鎖反応などの増幅後に示されるポリヌクレオチドタグを含め、インビトロ診断の分野において現在使用されている様々な種類の何れかであり得る。好適な酵素標識は、ホースラディッシュペルオキシダーゼおよびアルカリホスファターゼなどを含む。例えば、標識は、アダマンチルメトキシホスホリルオキシフェニルジオキセタン(ＡＭＰＰＤ)、ジナトリウム３−(４−(メトキシスピロ｛１,２−ジオキセタン−３,２’−(５’−クロロ)トリシクロ｛３.３.１.１３,７｝デカン｝−４−イル)フェニルホスフェート(ＣＳＰＤ)などの１,２ジオキセタン基質ならびにＣＤＰおよびＣＤＰ−ＳＴＡＲ(登録商標)または当業者に周知の他の発光性基質、例えば、テルビウム(III)およびユーロピウム(III)などの好適なランタニドのキレートの変換後の化学発光の存在または形成を測定することによって検出される、酵素アルカリホスファターゼであり得る。検出手段は、選択された標識によって決定される。標識またはその反応産物の出現は、標識が粒子であり、適当なレベルで蓄積する場合には、裸眼で、または分光光度計、ルミノメーター、蛍光光度計などの機器を使用して、達成され得るが、すべて標準的な慣例に従う。
【０３１２】
ある実施態様において、コンジュゲーション法は、実質的に(またはほぼ)非免疫原性である結合、例えば、ペプチド(すなわち、アミド)結合、スルフィド結合(立体障害)、ジスルフィド結合、ヒドラゾン結合およびエーテル結合を生じる。これらの結合は、ほぼ非免疫原性であり、血清内で妥当な安定性を示す(例えば、Senter, P. D., Curr. Opin. Chem. Biol. 13 (2009) 235-244、ＷＯ２００９／０５９２７８、ＷＯ９５／１７８８６参照)。
【０３１３】
部分および抗体の生化学的性質に応じて、異なるコンジュゲーション戦略を用いることができる。部分が、５０〜５００個のアミノ酸の天然に存在するまたは組換えである場合、標準的な方法は、タンパク質コンジュゲートの合成のための化学反応について記載した教則本にあり、当業者であれば容易に従うことができる(例えば、Hackenberger, C. P. R., and Schwarzer, D., Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 47 (2008) 10030-10074参照)。ある実施態様において、抗体または部分内のマレイミド部分とシステイン残基との反応が使用される。これは、例えば、抗体のＦａｂまたはＦａｂ’フラグメントが使用される場合に、特に好適なカップリング化学反応である。あるいは、ある実施態様において、抗体または部分のＣ末端へのカップリングが行われる。タンパク質、例えば、ＦａｂフラグメントのＣ末端修飾は、記載されるように行われ得る(Sunbul, M. and Yin, J., Org. Biomol. Chem. 7 (2009) 3361-3371)。
【０３１４】
一般に、部位特異的反応および共有結合カップリングは、天然アミノ酸を、存在する他の官能基の反応性に直交性である反応性を有するアミノ酸に変換することに基づく。例えば、稀な配列構成内の特定のシステインは、アルデヒドに酵素変換され得る(Frese, M. A., and Dierks, T., ChemBioChem. 10 (2009) 425-427参照)。ある配列構成における特定の酵素の、天然アミノ酸との特異的酵素反応性を利用することによって、所望されるアミノ酸修飾を得ることもまた可能である(例えば、Taki, M. et al., Prot. Eng. Des. Sel. 17 (2004) 119-126、Gautier, A. et al. Chem. Biol. 15 (2008) 128-136参照。プロテアーゼに触媒されるＣ−Ｎ結合の形成は、Bordusa, F., Highlights in Bioorganic Chemistry (2004) 389-403で使用される)。部位特異的反応および共有結合カップリングはまた、末端アミノ酸の、適当な修飾剤との選択的反応によっても達成され得る。
【０３１５】
Ｎ末端システインの、ベンゾニトリルとの反応性(Ren. H. et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 48 (2009) 9658-9662参照)を利用して、部位特異的共有結合カップリングを達成できる。
【０３１６】
天然化学ライゲーションはまた、Ｃ末端システイン残基に依存し得る(Taylor, E. Vogel; Imperiali, B, Nucleic Acids and Molecular Biology (2009), 22 (Protein Engineering), 65-96)。
【０３１７】
ＵＳ６４３７０９５Ｂ１は、負に荷電したアミノ酸のストレッチ内のシステインの、正に荷電したアミノ酸のストレッチ内に位置するシステインを用いて早い反応に基づくコンジュゲーション法について記載する。
【０３１８】
部分はまた、合成ペプチドまたはペプチド模倣体でもあり得る。ポリペプチドが化学合成される場合、直交性化学反応性を有するアミノ酸は、このような合成中に組み込まれ得る(例えば、de Graaf. A. J. et al., Bioconjug. Chem. 20 (2009) 1281-1295参照)。多種多様な直交性官能基が問題となっており、合成ペプチドに導入され得るため、このようなペプチドの、リンカーとのコンジュゲーションは、標準的化学反応である。
【０３１９】
単一標識ポリペプチドを得るために、１：１の化学量論のコンジュゲートを、他のコンジュゲーション副産物からクロマトグラフィーによって分離してもよい。この手順は、色素標識した結合対メンバーおよび荷電リンカーを使用することにより容易となり得る。この種類の標識および高度に負に荷電した結合対メンバーを使用することにより、モノコンジュゲートしたポリペプチドは、非標識ポリペプチドおよび１種を上回るリンカーを有するポリペプチドから容易に分離されるが、これは、電荷および分子量における相違を分離に使用できるためである。蛍光色素は、標識した一価結合剤などの未結合成分から複合体を精製するのに有用であり得る。
【０３２０】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体に結合した部分を、結合部分、標識部分および生物活性部分からなる群から選択する。
【０３２１】
ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体はまた、抗体−薬物コンジュゲート(ＡＤＣ)などの免疫複合体を形成するように、治療剤とコンジュゲートされ得る。好適な治療剤は、抗代謝剤、アルキル化剤、ＤＮＡ副溝結合剤、ＤＮＡインターカレーター、ＤＮＡ架橋剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、核外輸送阻害剤、プロテアソーム阻害剤、トポイソメラーゼＩまたはＩＩ阻害剤、熱ショックタンパク質阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、抗生物質および抗有糸分裂剤を含む。ＡＤＣにおいて、抗体および治療剤は、好ましくは、ペプチジル、ジスルフィドまたはヒドラゾンリンカーなどの切断可能なリンカーを介してコンジュゲートされる。他の実施形態では、リンカーは、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ａｌａ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｖａｌ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｖａｌ(配列番号１０８)、Ａｌａ−Ａｓｎ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ、Ｃｉｔ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ、Ｃｉｔ、ＳｅｒまたはＧｌｕなどのペプチジルリンカーである。ＡＤＣは、米国特許７,０８７,６００、６,９８９,４５２および７,１２９,２６１、ＰＣＴ公開ＷＯ０２／０９６９１０、ＷＯ０７／０３８６５８、ＷＯ０７／０５１０８１、ＷＯ０７／０５９４０４、ＷＯ０８／０８３３１２およびＷＯ０８／１０３６９３、米国特許公開２００６００２４３１７、２００６０００４０８１および２００６０２４７２９５に記載されるとおり調製することができる。
【０３２２】
ある実施態様において、治療剤は細胞毒、非細胞毒性薬物、放射性薬剤、第二抗体、酵素、抗新生物剤およびこれらの何れかの組み合わせからなる群から選択される。
【０３２３】
ある実施態様において、免疫複合体は抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体および細胞毒を含む。細胞毒は、当分野で知られるあらゆる細胞毒から選択され得る。ある実施態様において、細胞毒は、ドラスタチン、モノメチルアウリスタチンＥ(ＭＭＡＥ)、マイタンシン、デュオカルマイシン、カリケアマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、デュオカルマイシン、センタナマイシン、ＳＮ３８、ドキソルビシン、その誘導体、その合成アナログおよびこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。ある実施態様において、免疫複合体は抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体およびサイトトキシンＡを含む。他の実施態様において、免疫複合体は抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体および非細胞毒性薬物を含む。
【０３２４】
ある実施態様において、免疫複合体は抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体および放射性薬剤を含む。ある実施態様において、放射性薬剤は放射性ヌクレオチドである。ある実施態様において、放射性薬剤は放射性ヨウ素を含む。ある実施態様において、放射性薬剤は１３１−ヨウ素を含む。他の実施態様において、放射性薬剤は放射性同位体イットリウム−９０を含む。
【０３２５】
ある実施態様において、免疫複合体は抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体および第二抗体を含む。第二抗体は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＮＫＧ２ａ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ１３７、ＫＩＲ、ＴＧＦβ、ＩＬ−１０、ＩＬ−２、ＩＬ−８、Ｂ７−Ｈ４、Ｆａｓリガンド、ＣＸＣＲ４、メソセリン、ＶＩＳＴＡ、ＣＤ９６、ＣＤ２７、ＧＩＴＲおよびこれらの何れかの組み合わせからなる群から選択されるタンパク質に特異的に結合する抗体を含むが、これらに限定されない本明細書に開示するあらゆる抗体であり得る。ある実施態様において、免疫複合体は、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体および抗ＰＤ−１抗体を含む。他の実施態様において、免疫複合体は、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体およびニボルマブを含む。
【０３２６】
ある実施態様において、免疫複合体は、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体およびペグ化ＩＬ−２またはペグ化ＩＬ−１０を含む。
【０３２７】
ある実施態様において、免疫複合体は、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体および酵素を含む。ある実施態様において、酵素はグルコースオキシダーゼを含む。ある実施態様において、酵素はペルオキシダーゼを含む。ある実施態様において、酵素は骨髄ペルオキシダーゼを含む。ある実施態様において、酵素はグルコースオキシダーゼを含む。ある実施態様において、酵素はホースラディッシュペルオキシダーゼを含む。
【０３２８】
ある実施態様において、免疫複合体は、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体および抗新生物剤を含む。抗新生物剤は、当分野で知られる何れかのこのような薬剤であり得る。ある実施態様において、抗新生物剤はエピルビシンである。ある実施態様において、抗新生物剤はスーパー抗原である。ある実施態様において、スーパー抗原は、ブドウ球菌エンテロトキシンＡ(ＳＥＡ／Ｅ−１２０；エスタフェナトクス)である。
【０３２９】
抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体、例えば、ここに記載のものを、ＭＩＣＡ／Ｂ、例えば、ヒトＭＩＣＡ／Ｂ、例えば、細胞表面のヒトＭＩＣＡ／Ｂまたは血清における可溶性ＭＩＣＡ／Ｂの検出にも使用できる。抗体を、例えば、ＥＬＩＳＡアッセイまたはフローサイトメトリーで使用できる。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を細胞または血清と、特異的結合が生じるのに適切な時間接触させ、次いで、試薬、例えば、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を検出する抗体を加える。アッセイ例は、実施例に提供される。サンプル(血清)中のＭＩＣＡ／Ｂ、例えば、表面発現ＭＩＣＡ／Ｂまたは可溶性ＭＩＣＡ／Ｂ(ｓＭＩＣＡ／Ｂ)を検出する方法の例は、(ｉ)サンプルで抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体とＭＩＣＡ／Ｂの特異的結合を可能とするのに十分な時間、該サンプルと抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を接触させ、そして(２)該サンプルと、検出試薬、例えば、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体のＦｃ領域などの抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体と特異的に結合する抗体を接触させ、それにより抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体によるＭＩＣＡ／Ｂ結合を検出することを含む。抗体および／または検出試薬とのインキュベーション後に洗浄工程を含んでよい。これらの方法で使用する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、別の検出剤を使用できるため、標識または検出剤に連結している必要はない。
【０３３０】
例えば、単剤療法または組み合わせ治療としての、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の他の使用が、本明細書の他の箇所で、例えば、組み合わせ処置に関連するセクションで提供される。
【０３３１】
IX. 二特異的分子
ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、二特異的分子の形成のために使用され得る。抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体またはその抗原結合部分は、誘導体化されるか、または別の機能的分子、例えば、別のペプチドまたはタンパク質(例えば、別の抗体または受容体のリガンド)と連結されて、少なくとも２つの異なる結合部位または標的分子と結合する二特異的分子を生成し得る。例えば、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、組み合わせ処置の可能性のある標的として使用することができるあらゆるタンパク質、例えば、ここに記載するタンパク質に特異的に結合する抗体(例えば、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＮＫＧ２ａ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ１３７、ＫＩＲ、ＴＧＦβ、ＩＬ−１０、ＩＬ−２、ＩＬ−８、Ｂ７−Ｈ４、Ｆａｓリガンド、ＣＸＣＲ４、メソセリン、ＣＤ２７、ＣＤ９６、ＶＩＳＴＡまたはＧＩＴＲに対する抗体またはペグ化ＩＬ−２またはペグ化ＩＬ−１０)またはｓｃＦｖと連結させてもよい。ここに記載する抗体は、実際、誘導されるか、２種以上のその他の機能的分子と連結されて、３種以上の異なる結合部位および／または標的分子と結合する多重特異性分子を生成し得て、このような多重特異性分子もまた、本明細書において、用語「二特異的分子」に包含されるものとする。ここに記載する二特異的分子を作製するために、ここに記載する抗体を、二特異的分子が結果として生じるような別の抗体、抗体フラグメント、ペプチドまたは結合模倣物などの１以上のその他の結合分子と機能的に連結することができる(例えば、化学的カップリング、遺伝子融合、非共有結合による結合または別の方法により)。
【０３３２】
従って、ここに提供されるのは、少なくとも１つのＭＩＣＡ／Ｂに対する第１の結合特異性および第２の標的エピトープに対する第２の結合特異性を含む二特異的分子である。二特異的分子が多重特異性であるここに記載するある実施態様において、分子は、第３の結合特異性をさらに含み得る。
【０３３３】
ある実施態様において、ここに記載する二特異的分子は、結合特異性として少なくとも１種の抗体または例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ(ａｂ’)２、Ｆｖもしくは一本鎖Ｆｖ(ｓｃＦＶ)を含めたその抗体フラグメントを含む。Ladner et al.米国特許４,９４６,７７８に記載されるように、抗体はまた、軽鎖または重鎖二量体またはＦｖもしくは一本鎖コンストラクトなどのその何れかの最小フラグメントであり得る。
【０３３４】
ヒトモノクローナル抗体が好ましいが、ここに記載する二特異的分子において利用することができるその他の抗体は、マウスモノクローナル抗体、キメラモノクローナル抗体およびヒト化モノクローナル抗体である。
【０３３５】
ここに記載する二特異的分子は、当技術分野において公知の方法を使用して、構成要素としての結合特異性をコンジュゲートすることによって調製することができる。例えば、二特異的分子のそれぞれの結合特異性を、別個に生成し、次いで、互いにコンジュゲートすることができる。結合特異性が、タンパク質またはペプチドである場合、様々なカップリング剤または架橋剤を、共有結合によるコンジュゲーションに使用することができる。架橋剤の例は、プロテインＡ、カルボジイミド、Ｎ−スクシンイミジル−Ｓ−アセチル−チオアセテート(ＳＡＴＡ)、５,５’−ジチオビス(２−ニトロ安息香酸)(ＤＴＮＢ)、ｏ−フェニレンジマレイミド(ｏＰＤＭ)、Ｎ−スクシンイミジル−３−(２−ピリジルジチオ)プロピオネート(ＳＰＤＰ)、およびスルホスクシンイミジル４−(Ｎ−マレイミドメチル)シクロヘキサン−１−カルボキシレート(スルホ−ＳＭＣＣ)が挙げられる(例えば、Karpovsky et al. (1984) J. Exp. Med. 160: 1686、Liu, MA et al. (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:8648参照)。他の方法としては、Paulus (1985)Behring Ins. Mitt. No. 78, 118-132、Brennan et al. (1985)Science 229:81-83)およびGlennie et al. (1987) J. Immunol. 139: 2367-2375)に記載されているものを含む。いくつかのコンジュゲーション剤としては、ＳＡＴＡおよびスルホ−ＳＭＣＣがあり、何れも、Pierce Chemical Co.(Rockford, IL)から入手可能である。
【０３３６】
結合特異性が抗体である場合、これらは、２つの重鎖のＣ末端ヒンジ領域のスルフヒドリル結合によってコンジュゲートされ得る。ある実施態様において、ヒンジ領域は、コンジュゲーションの前に、奇数、好ましくは、１つのスルフヒドロリ残基を含むように修飾される。
【０３３７】
あるいは、両方の結合特異性が、同じベクターにおいてコードされて、同じ宿主細胞において発現され、アセンブリーされてもよい。この方法は、二特異的分子が、ｍＡｂ×ｍＡｂ融合タンパク質、ｍＡｂ×Ｆａｂ融合タンパク質、ｍＡｂ×(ｓｃＦｖ)２融合タンパク質、Ｆａｂ×Ｆ(ａｂ’)２融合タンパク質またはリガンド×Ｆａｂ融合タンパク質である場合に、特に有用である。二重特異性抗体は、それぞれの重鎖のＣ末端にｓｃＦｖを含む抗体を含み得る。ここに記載する二特異的分子は、１つの一本鎖抗体および結合性決定基を含む一本鎖分子であってもよく、または２つの結合性決定基を含む一本鎖二特異的分子であってもよい。二特異的分子は、少なくとも２つの一本鎖分子を含み得る。二特異的分子を調製するための方法は、例えば、米国特許５,２６０,２０３、米国特許５,４５５,０３０、米国特許４,８８１,１７５、米国特許５,１３２,４０５、米国特許５,０９１,５１３、米国特許５,４７６,７８６、米国特許５,０１３,６５３、米国特許５,２５８,４９８および米国特許５,４８２,８５８に記載されている。
【０３３８】
二特異的分子の、その特異的標的との結合は、酵素結合免疫吸着測定法(ＥＬＩＳＡ)、ラジオイムノアッセイ(ＲＩＡ)、ＦＡＣＳ分析、生物検定法(例えば、成長阻害)またはウエスタンブロットアッセイなどの当技術分野で認識される方法を使用して確認され得る。これらのアッセイは各々、一般に、対象の複合体に対して特異的な標識試薬(例えば、抗体)を使用することによって、特に対象とされるタンパク質−抗体複合体の存在を検出する。
【０３３９】
Ｘ. 組成物
さらに提供されるのは、薬学的に許容される担体と共に製剤化された、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体、または他の標的に対する抗体との組合せ、またはその抗原結合部分(単数または複数)のうちの１種または組合せを含有する組成物、例えば、医薬組成物である。このような組成物は、(例えば、２以上の異なる)ここに記載する抗体または免疫複合体または二特異的分子のうち１種または組合せを含み得る。例えば、ここに記載する医薬組成物は、標的抗原上の異なるエピトープと結合するか、または補完的活性を有する抗体(または免疫複合体または二重特異性)の組合せを含み得る。
【０３４０】
ある実施態様において、組成物は、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を少なくとも１mg／ml、５mg／ml、１０mg／ml、５０mg／ml、１００mg／ml、１５０mg／ml、２００mg／ml、１〜３００mg／mlまたは１００〜３００mg／mlの濃度で含む。
【０３４１】
ここに記載する医薬組成物はまた、組み合わせ治療において、すなわち、その他の薬剤と組み合わせて投与できる。例えば、組み合わせ治療は、少なくとも１種のその他の抗癌剤および／または例えば、Ｔ細胞刺激(例えば、活性化)剤などの免疫調節物質と組み合わせた、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を含み得る。組み合わせ治療において使用され得る治療薬の例は、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の使用に関するセクションにおいて下に詳述する。
【０３４２】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を、化学療法薬物、小分子薬物およびある癌に対する免疫応答を刺激する抗体から選択される、少なくとも１つの他の薬剤と組み合わせ得る。ある場合、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を、例えば、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＯＸ４０(ＣＤ１３４、ＴＮＦＲＳＦ４、ＡＣＴ３５および／またはＴＸＧＰ１Ｌとしても知られる)抗体(例えば、ＢＭＳ９８６１７８またはＭＤＸ−１８０３)、抗ＣＤ１３７抗体、抗ＬＡＧ−３抗体、抗ＧＩＴＲ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗ＴＧＦβ抗体、抗ＩＬ−１０抗体、長時間作用型ＩＬ−１０分子(例えばＩＬ−１０−Ｆｃ融合またはペグ化ＩＬ−１０、例えば、ARMO BioSciencesのＡＭ００１０)、長時間作用型ＩＬ−２(例えば、ペグ化ＩＬ−２分子、例えばNektarのＮＫＴＲ−２１４；ＵＳ８,２５２,２７５、ＷＯ１２／０６５０８６およびＷＯ１５／１２５１５９参照)、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＣＤ９６抗体、抗ＩＬ−８抗体、抗Ｂ７−Ｈ４、抗Ｆａｓリガンド抗体、抗ＣＸＣＲ４抗体、抗メソセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体またはこれらの何れかの組み合わせの１以上と組み合わせ得る。
【０３４３】
他の実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を、第二抗体と共に製剤化し得る。ある実施態様において、第二抗体は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＮＫＧ２ａ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ１３７、ＫＩＲ、ＴＧＦβ、ＩＬ−１０、ＩＬ−２、ＶＩＳＴＡ、ＣＤ９６、ＩＬ−８、Ｂ７−Ｈ４、Ｆａｓリガンド、ＣＸＣＲ４、メソセリン、ＣＤ２７、ＧＩＴＲおよびこれらの何れかの組み合わせからなる群から選択されるタンパク質に特異的に結合する。
【０３４４】
ある実施態様において、第二抗体は抗ＰＤ−１抗体であり得る。抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−１に結合し、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１の相互作用を阻害する、あらゆる抗体であり得る。ある実施態様において、抗ＰＤ−１抗体は、ここに開示する何れかの抗ＰＤ−１抗体である。ある実施態様において、第二抗体は、ニボルマブであり得る。ある実施態様において、第二抗体は、ペンブロリズマブであり得る。
【０３４５】
ある実施態様において、第二抗体は抗ＰＤ−Ｌ１抗体であり得る。抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＰＤ−Ｌ１に結合し、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１の相互作用を阻害する、あらゆる抗体であり得る。ある実施態様において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ここに開示する何れかの抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。ある実施態様において、第二抗体は、アテゾリズマブであり得る。ある実施態様において、第二抗体は、デュルバルマブであり得る。ある実施態様において、第二抗体は、アベルマブであり得る。
【０３４６】
ある実施態様において、第二抗体は抗ＣＴＬＡ−４抗体であり得る。抗ＣＴＬＡ−４抗体は、ＣＴＬＡ−４に結合し、その活性を阻害するあらゆる抗体であり得る。ある実施態様において、抗ＣＴＬＡ−４抗体は、ここに開示する何れかの抗ＣＴＬＡ−４抗体である。ある実施態様において、第二抗体は、トレメリムマブであり得る。ある実施態様において、第二抗体は、イピリムマブであり得る。
【０３４７】
ある実施態様において、第二抗体は抗ＬＡＧ３抗体であり得る。抗ＬＡＧ３抗体は、ＬＡＧ−３に結合し、その活性を阻害するあらゆる抗体であり得る。ある実施態様において、抗ＬＡＧ３抗体は、ここに開示する何れかの抗ＬＡＧ３抗体である。ある実施態様において、第二抗体は、２５Ｆ７であり得る。
【０３４８】
ある実施態様において、第二抗体は抗ＣＤ１３７抗体であり得る。抗ＣＤ１３７抗体は、ＣＤ１３７に結合し、その活性を阻害するあらゆる抗体であり得る。ある実施態様において、抗ＣＤ１３７抗体は、ここに開示する何れかの抗ＣＤ１３７抗体である。ある実施態様において、第二抗体は、ウレルマブであり得る。
【０３４９】
ある実施態様において、第二抗体は抗ＫＩＲ抗体であり得る。抗ＫＩＲ抗体は、ＫＩＲに結合し、その活性を阻害するあらゆる抗体であり得る。ある実施態様において、抗ＫＩＲ抗体は、ここに開示する何れかの抗ＫＩＲ抗体である。ある実施態様において、第二抗体は、リリルマブであり得る。
【０３５０】
ある実施態様において、第二抗体は抗ＧＩＴＲ抗体であり得る。抗ＧＩＴＲ抗体は、ＧＩＴＲに結合し、その活性を阻害するあらゆる抗体であり得る。ある実施態様において、抗ＧＩＴＲ抗体は、ここに開示する何れかの抗ＧＩＴＲ抗体である。ある実施態様において、第二抗体はＭＫ４１６６であり得る。ある実施態様において、第二抗体は、ＴＲＸ５１８であり得る。
【０３５１】
ある実施態様において、第二抗体は抗ＣＤ９６抗体であり得る。
【０３５２】
ある実施態様において、第二抗体は抗ＴＩＭ３抗体であり得る。
【０３５３】
ある実施態様において、第二抗体は抗ＶＩＳＴＡ抗体であり得る。
【０３５４】
ある実施態様において、第二抗体は抗ＮＫＧ２ａ抗体であり得る。
【０３５５】
ある実施態様において、第二抗体は抗ＩＣＯＳ抗体であり得る。
【０３５６】
ある実施態様において、第二抗体は抗ＯＸ４０抗体であり得る。
【０３５７】
ある実施態様において、第二抗体は抗ＩＬ８抗体、例えばＨｕＭａｘ(登録商標)−ＩＬ８(BMS-986253)であり得る。
【０３５８】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、長時間作用型ＩＬ−１０分子と製剤化され得る。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ＩＬ−１０−Ｆｃ融合分子と製剤化され得る。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ペグ化ＩＬ−１０、例えば、ARMO BioSciencesのＡＭ００１０と製剤化され得る。
【０３５９】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、長時間作用型ＩＬ−２と製剤化され得る。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ペグ化ＩＬ−２分子、例えば、NektarのＮＫＴＲ−２１４(ＵＳ８,２５２,２７５、ＷＯ１２／０６５０８６およびＷＯ１５／１２５１５９参照)と製剤化され得る。
【０３６０】
ある実施態様において、本発明の組成物は、さらに増量剤を含む。増量剤は、ＮａＣｌ、マンニトール、グリシン、アラニンおよびこれらの何れかの組み合わせからなる群から選択され得る。他の実施態様において、本発明の組成物は安定化剤を含む。安定化剤は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、アルギニン；またはこれらの何れかの組み合わせからなる群から選択され得る。他の実施態様において、本発明の組成物は界面活性剤を含む。界面活性剤は、ポリソルベート８０(ＰＳ８０)、ポリソルベート２０(ＰＳ２０)およびこれらの何れかの組み合わせからなる群から選択され得る。ある実施態様において、組成物はさらにキレート剤を含む。キレート剤は、ジエチレントリアミンペンタ酢酸(ＤＴＰＡ)、エチレンジアミン四酢酸、ニトリロ三酢酸およびこれらの何れかの組み合わせからなる群から選択され得る。
【０３６１】
他の実施態様において、組成物は第三の抗体を含む。ある実施態様において、第三の抗体は、ここに開示する何れかの抗体である。
【０３６２】
ある実施態様において、組成物はさらにＮａＣｌ、マンニトール、ペンテト酸(ＤＴＰＡ)、スクロース、ＰＳ８０およびこれらの何れかの組み合わせを含む。
【０３６３】
ここで使用する、「薬学的に許容される担体」は、生理学的に適合する、あらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤を含む。ある実施態様において、担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経腸、脊髄または上皮投与(例えば、注射または注入による)に適している。皮下注射のオプションは、細胞外マトリクスにより皮下送達され得る生物製剤および薬物の体積の伝統的な制限をなくす、Ａｂと、組み換えヒトヒアルロニダーゼ酵素(ｒＨｕＰＨ２０)の共製剤を含む、Halozyme TherapeuticsのENHANZE(登録商標)薬物送達技術に基づく(米国特許７,７６７,４２９)。投与経路によって、化合物を、酸および化合物を不活性化し得るその他の天然条件作用から保護するために、物質において、活性化合物、すなわち、抗体、免疫複合体または二特異的分子をコーティングし得る。
【０３６４】
ここに記載する医薬化合物は、１以上の薬学的に許容される塩を含み得る。「薬学的に許容される塩」とは、親化合物の所望の生物活性を保持し、何らかの望ましくない毒物学的影響を付与しない塩を指す(例えば、Berge, S.M., et al. (1977) J. Pharm. Sci. 66:1-19参照)。このような塩の例は、酸付加塩および塩基付加塩が挙げられる。酸付加塩として、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、亜リン酸などの非毒性無機酸に由来するものならびに脂肪族モノおよびジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、芳香族酸、脂肪族および芳香族スルホン酸などの非毒性有機酸に由来するものを含む。塩基付加塩は、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなどのアルカリ土類金属に由来するものならびにＮ,Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカインなどの非毒性有機アミンに由来するものを含む。
【０３６５】
ここに記載する医薬組成物はまた、薬学的に許容される抗酸化物質を含み得る。薬学的に許容される抗酸化物質の例は、(１)アスコルビン酸、システイン塩酸塩、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなどの水溶性抗酸化物質、(２)パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール(ＢＨＡ)、ブチル化ヒドロキシトルエン(ＢＨＴ)、レシチン、没食子酸プロピル、α−トコフェロールなどの油溶性抗酸化物質および(３)クエン酸、エチレンジアミン四酢酸(ＥＤＴＡ)、ソルビトール、酒石酸、リン酸などの金属キレート化剤を含む。
【０３６６】
ここに記載する医薬組成物において使用され得る、適当な水性および非水性担体の例は、水、エタノール、ポリオール(グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなどの)およびそれらの適した混合物、オリーブオイルなどの植物油およびオレイン酸エチルなどの注射用有機エステルを含む。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材の使用によって、分散体の場合には必要な粒径の維持によって、また界面活性剤の使用によって維持できる。
【０３６７】
これらの組成物はまた、保存料、湿潤剤、乳化剤および分散剤などのアジュバントを含有し得る。微生物の存在の防止は、前掲の滅菌法によって、また種々の抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などの包含の両方によって確実にできる。糖、塩化ナトリウムなどの等張剤を組成物中に含めることが望ましいこともある。さらに、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの吸収を遅延する薬剤を含めることによって、注射用医薬品形態の長期の吸収をもたらし得る。
【０３６８】
薬学的に許容される担体は、滅菌水溶液または分散物および滅菌注射用溶液または分散物の即時調製のための滅菌散剤を含む。医薬的に活性な物質のためのこのような媒体および薬剤の使用は、当技術分野で公知である。何れかの従来の媒体または薬剤が、活性化合物と不適合である場合を除いて、ここに記載する医薬組成物におけるその使用が考慮される。医薬組成物は、保存剤を含んでもよく、または保存剤を含まなくてもよい。補助的活性化合物は、組成物中に組み込まれ得る。
【０３６９】
治療用組成物は、通常、製造および貯蔵の条件下で、無菌で、安定でなくてはならない。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、リポソームまたは高薬物濃度に適したその他の秩序構造として製剤化できる。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール(例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコールなど)およびそれらの適した混合物を含有する、溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散物の場合には必要な粒径の維持によって、また界面活性剤の使用によって維持できる。多くの場合、組成物は、等張剤、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールまたは塩化ナトリウムなどのポリアルコールを含むことができる。組成物中に吸収を遅延する薬剤、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを含めることによって、注射用組成物の長期吸収をもたらし得る。
【０３７０】
滅菌注射用溶液は、必要に応じて、上記で列挙された成分のうち１種または組合せと共に、適当な溶媒中に必要な量の活性化合物を組み込むことと、それに続く、滅菌精密濾過によって調製できる。一般に、分散物は、基本分散媒および本明細書で列挙されたものから必要なその他の成分を含有する滅菌ビヒクル中に活性化合物を組み込むことによって調製される。滅菌注射用溶液を調製するための滅菌散剤の場合には、調製の方法として、その前もって滅菌濾過された溶液から有効成分および任意のさらなる所望の成分の粉末が得られる、真空乾燥およびフリーズドライ(凍結乾燥)がある。
【０３７１】
単一投与形を生産するための担体材料と組み合わされ得る有効成分の量は、治療されている対象および特定の投与様式に応じて変わる。単一投与形を生産するための担体材料と組み合わされ得る有効成分の量は、一般に、治療効果を生じる組成物の量となる。一般に、薬学的に許容される担体との組合せにおいて、この量は、１００パーセントのうち、有効成分の約０.０１パーセント〜約９９パーセント、約０.１パーセント〜約７０パーセント、または有効成分の約１パーセント〜約３０パーセントの範囲となる。
【０３７２】
投与レジメンは、最適の所望の応答(例えば、治療的応答)を提供するよう調節される。例えば、単回ボーラスを投与してもよく、数分割用量を経時的に投与してもよく、または治療状況の緊急事態によって示されるように、用量を比例的に低減または増大してもよい。投与の容易性および投与形の均一性のための投与単位形に非経腸組成物を製剤化することは特に有利である。本明細書において、投与単位形とは、処置対象の単位投与量として適している物理的に別個の単位をいい、各単位は、必要な医薬担体と関連して所望の治療効果を生産するよう算出された所定の量の活性化合物を含有する。ここに記載する投与単位形の仕様は、(ａ)活性化合物の独特の特徴および達成されるべき特定の治療効果ならびに(ｂ)個体における感受性の治療のためのこのような活性化合物の配合の技術分野に固有の制限によって決定され、それらに直接依存する。
【０３７３】
例えば、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の投与のために、投与量は、約０.０００１〜１００mg／kgの範囲である。抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を、一定用量(一定用量レジメン)で投与し得る。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を、他の抗体と固定用量で投与し得る。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を、体重に基づく用量で投与する。
【０３７４】
ある方法において、異なる結合特異性を有する２以上のモノクローナル抗体が同時に投与され、この場合には、投与される各抗体の投与量は、示される範囲内に入る。抗体は、通常、複数回で投与される。単一投与の間隔は、例えば、毎週、毎月、３カ月毎または毎年であり得る。間隔はまた、患者における標的抗原に対する抗体の血液レベルを測定することによって示されるように、不規則である場合もある。ある方法において、投与量は、約１〜１０００μg／ml、いくつかの方法では、約２５〜３００μg／mlの血漿抗体濃度を達成するよう調節される。
【０３７５】
抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、他の抗体の投与レジメンで、他の抗体と共に投与され得る。例えば、抗ＴＩＭ３抗体は、疾患の進行または許容されない毒性が生じるまで、抗ＰＤ−１抗体、例えば、ニボルマブ(オプジーボ(登録商標))と共に、６０分間にわたる静脈内点滴として、２週間に１回投与され得る。抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、疾患の進行または許容されない毒性が生じるまで、ペンブロリズマブ(キイトルーダ(登録商標))と共に、３０分間にわたる静脈内点滴として、３週間に１回投与され得る。抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、疾患の進行または許容されない毒性が生じるまで、アテゾリズマブ(TECENTRIQTM)と共に、６０分間または３０分間にわたる静脈内点滴として、３週間に１回投与され得る。
【０３７６】
抗体は、持続放出製剤として投与でき、この場合には、少ない頻度での投与が必要とされる。投与量および頻度は、患者における抗体の半減期に応じて変わる。一般に、ヒト抗体は、最長の半減期を示し、ヒト化抗体、キメラ抗体および非ヒト抗体が続く。投与の投与量および頻度は、治療が予防的であるか、治療的であるかに応じて変わり得る。予防的適用では、比較的少ない投与量が、比較的頻繁ではない間隔で長期間にわたって投与される。一部の患者は、生涯治療を受け続ける。治療的適用では、疾患の進行が低減または終結されるまで、患者が疾患の症状の部分的または完全寛解を示すまで、比較的短い間隔の比較的多い投与量が時には必要である。その後、患者は、予防的投与レジメンで投与され得る。
【０３７７】
ここに記載する医薬組成物中の有効成分の実際の投与量レベルは、患者とって毒性ではなく、特定の患者、組成物および投与様式について所望の治療応答を達成するのに有効である有効成分の量を得るように変えてよい。選択される投与量レベルは、使用されるここに記載する特定の組成物またはそのエステル、塩もしくはアミドの活性、投与経路、投与の時間、使用されている特定の化合物の排出速度、治療期間、使用される特定の組成物と組み合わせて使用されるその他の薬物、化合物および／または材料、治療されている患者の年齢、性別、体重、状態、全身の健康および先の病歴および医薬の技術分野において周知の同様の因子を含む、種々の薬物動態因子に応じて変わる。
【０３７８】
ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の「治療上有効な投与量」は、疾患症状の重症度の低減、疾患症状のない期間の頻度および期間の増大または疾患苦痛による機能不全もしくは能力障害の予防をもたらし得る。癌に関連して、治療上有効な用量は、生存、例えば、全生存期間の延長、および／または癌と関連する身体症状のさらなる増悪の予防をもたらし得る。癌の症状は、当技術分野で周知であり、例えば、異常な黒子の特性、非対称性、境界、色および／または直径を含む黒子の外観の変化、新規に着色した皮膚領域、異常な黒子、爪の下の黒化領域、乳房のしこり、乳頭の変化、乳房嚢胞、乳房疼痛、死亡、体重減少、脱力感、過度の疲労、摂食障害、食欲の喪失、慢性の咳、息切れの悪化、喀血、血尿、血便、悪心、嘔吐、肝転移、肺転移、骨転移、腹部膨満、鼓腸、腹膜腔中の流体、膣出血、便秘、腹部膨隆、結腸の穿孔、急性腹膜炎(感染、発熱、疼痛)、疼痛、吐血、多量の発汗、発熱、高血圧症、貧血、下痢、黄疸、めまい、悪寒、筋痙攣、結腸転移、肺転移、膀胱転移、肝転移、骨転移、腎転移および膵転移、嚥下困難などを含む。
【０３７９】
疾患の早期または先行する徴候が存在する場合に望まれ得るような治療上有効な用量は、癌の発生を防ぐかまたは遅延し得る。癌の診断において使用される臨床検査試験は、化学(ＭＩＣＡ／Ｂレベルの測定を含む)、血液学、血清学および放射線学を含む。したがって、前記のうち何れかをモニタリングする何らかの臨床または生化学アッセイを使用して、特定の治療が、癌を治療するための治療上有効な用量であるか否かを調べてもよい。当業者は、対象の体格、対象の症状の重症度および特定の組成物または選択された投与経路のような因子に基づいてこのような量を決定できる。
【０３８０】
ここに記載する組成物は、当分野で知られる１以上の種々の方法を使用して、１以上の投与経路によって投与できる。当業者には明らかであろうが、投与経路および／または投与様式は、所望の結果に応じて変わる。ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の投与経路は、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、皮下、脊髄または例えば、注射もしくは注入によるその他の非経腸投与経路を含む。本明細書において、語句「非経腸投与」は、経腸および局所投与以外の、通常、注射による投与様式を意味し、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、関節内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、硬膜外および胸骨内注射および注入を含むが、これらに限定されない。
【０３８１】
あるいは、ここに記載する抗体は、局所、上皮または粘膜投与経路、例えば、鼻腔内、経口、経膣、直腸、舌下または局所など、非経腸ではない経路によって投与できる可能性がある。
【０３８２】
インプラント、経皮パッチおよびマイクロカプセル化送達系を含む徐放性製剤などの、活性化合物を、化合物を迅速な放出から保護する担体を用いて調製できる。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーを使用できる。このような製剤を調製するための多数の方法が、特許されているか、または一般的に、当業者に知られる。例えば、Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978参照。
【０３８３】
治療用組成物は、当分野で知られる医療デバイスを用いて投与できる。例えば、ある実施態様において、ここに記載する治療用組成物は、米国特許５,３９９,１６３；５,３８３,８５１；５,３１２,３３５；５,０６４,４１３；４,９４１,８８０；４,７９０,８２４；または４,５９６,５５６に開示される装置などの注射針無し皮下注射装置を用いて投与できる。ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体と共に使用するための周知のインプラントおよびモジュールの例は、制御された速度で医薬を分配するための埋め込み可能な微量注入ポンプを開示する米国特許４,４８７,６０３；皮膚を通って医薬を投与するための治療用装置を開示する４,４８６,１９４；正確な注入速度で医薬を送達するための医薬注入ポンプを開示する４,４４７,２３３；連続薬物送達のための可変流動埋め込み可能注入器具を開示する４,４４７,２２４；マルチチャンバーコンパートメントを有する浸透圧薬物送達システムを開示する４,４３９,１９６；および浸透圧薬物送達システムを開示する４,４７５,１９６を含む。これらの特許は、参照により本明細書に組み込まれる。多数のその他のこのようなインプラント、送達系およびモジュールが、当業者に知られる。
【０３８４】
ある実施態様において、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、インビボでの適切な分布を確実にするよう製剤化できる。例えば、血液脳関門(ＢＢＢ)は、多数の高親水性化合物を排除する。ここに記載する治療用化合物が、ＢＢＢを通過することを確実にするために(所望される場合、例えば、脳の癌について)、それらを例えば、リポソーム中に製剤化できる。リポソームを作製する方法については、例えば、米国特許４,５２２,８１１；５,３７４,５４８；および５,３９９,３３１参照。リポソームは、特定の細胞または臓器中に選択的に輸送され、したがって、標的化された薬物送達を増強する１以上の部分を含み得る(例えば、V.V. Ranade (1989) J. Clin. Pharmacol. 29:685参照)。例示的標的化部分として、葉酸またはビオチン(例えば、Low et al.の米国特許５,４１６,０１６参照)；マンノシド(Umezawa et al., (1988) Biochem. Biophys. Res. Commun. 153:1038);抗体(P.G. Bloeman et al. (1995) FEBS Lett. 357:140; M. Owais et al. (1995) Antimicrob. Agents Chemother. 39:180)；界面活性剤プロテインＡ受容体(Briscoe et al. (1995) Am. J. Physiol. 1233:134)；ｐ１２０(Schreier et al. (1994) J. Biol. Chem. 269:9090)が挙げられ、K. Keinanen; M.L. Laukkanen (1994) FEBS Lett. 346:123; J.J. Killion; I.J. Fidler (1994) Immunomethods 4:273も参照のこと。
【０３８５】
XI. 使用および方法
本発明のある態様は、対象に、ここに開示する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体をコードするポリヌクレオチド、ポリヌクレオチドを含むベクター、ポリヌクレオチドを含む宿主細胞、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を含む免疫複合体またはこれらの何れかの組み合わせを投与することを含む対象を処置する方法に関する。
【０３８６】
本発明のある態様は、対象に有効用量のここに開示する組成物(例えば、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、免疫複合体または医薬組成物)を投与することを含む、処置を必要とする対象における癌を処置する方法に関する。他の態様において、本発明は、対象に有効用量のここに開示する組成物を投与することを含む、処置を必要とする対象における、腫瘍細胞におけるＭＩＣＡ／Ｂを阻害する方法に関する。他の態様において、本発明は、対象に有効用量のここに開示する組成物を投与することを含む、処置を必要とする対象における、血清における脱落ＭＩＣＡ／Ｂを現象させるおよび／または細胞表面にＭＩＣＡ／Ｂを保持する方法に関する。他の態様において、本発明は、対象に有効用量のここに開示する組成物を投与することを含む、処置を必要とする対象における、腫瘍細胞を殺滅する方法に関する。他の態様において、本発明は、対象に有効用量のここに開示する組成物を投与することを含む、処置を必要とする対象における、腫瘍サイズを減少させる方法に関する。他の実施態様において、本発明は、対象に有効用量のここに開示する組成物を投与することを含む、処置を必要とする対象における、腫瘍転移を阻害する方法に関する。ある実施態様において、対象はヒトである。
【０３８７】
本発明の組成物を、何れかの薬学的に許容される経路を使用して、投与できる。ある実施態様において、組成物(例えば、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、免疫複合体または医薬組成物)を静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、髄腔内、リンパ内、病巣内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、髄腔内、硬膜外および胸骨内、局所、上皮、粘膜またはこれらの何れかの組み合わせで投与される。ある実施態様において、組成物は静脈内投与される。ある実施態様において、組成物は皮下投与される。
【０３８８】
ある実施態様において、方法は、対象における癌のサイズ、例えば、腫瘍のサイズを減少させる。ある実施態様において、癌のサイズは、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％または少なくとも約９０％減少される。
【０３８９】
ある実施態様において、方法は、対象の全生存を延長させる。ある実施態様において、全生存は、同じ癌を有するが、異なる治療で処置されている平均全生存に比して延長される。ある実施態様において、全生存は、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約５倍延長される。ある実施態様において、全生存は、少なくとも約１か月、少なくとも約２か月、少なくとも約３か月、少なくとも約４か月、少なくとも約５か月、少なくとも約６か月、少なくとも約７か月、少なくとも約８か月、少なくとも約９か月、少なくとも約１０か月、少なくとも約１か月、少なくとも約１２か月、少なくとも約１５か月、少なくとも約１８か月、少なくとも約２１か月、少なくとも約２年、少なくとも約３年、少なくとも約４年、少なくとも約５年または少なくとも約１０年延長される。
【０３９０】
ある実施態様において、方法は、対象の無進行生存を延長させる。ある実施態様において、全生存は、同じ癌を有するが、異なる治療で処置されている平均無進行生存に比して延長される。ある実施態様において、無進行生存は、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約５倍延長される。ある実施態様において、全生存は、少なくとも約１か月、少なくとも約２か月、少なくとも約３か月、少なくとも約４か月、少なくとも約５か月、少なくとも約６か月、少なくとも約７か月、少なくとも約８か月、少なくとも約９か月、少なくとも約１０か月、少なくとも約１か月、少なくとも約１２か月、少なくとも約１５か月、少なくとも約１８か月、少なくとも約２１か月、少なくとも約２年、少なくとも約３年、少なくとも約４年、少なくとも約５年または少なくとも約１０年延長される。
【０３９１】
ある実施態様において、方法は、対象の客観的応答率を増加させる。ある実施態様において、方法は、対象における完全応答を誘導する。ある実施態様において、方法は、対象における部分応答を誘導する。
【０３９２】
ある実施態様において、方法は、ここに開示する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体(またはポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞または免疫複合体)および第二治療の投与を含む。ある実施態様において、第二治療を、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の前に投与する。ある実施態様において、第二治療を、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の後に投与する。ある実施態様において、第二治療を、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体と同時に投与する。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体および第二治療を別々に投与する。他の実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体および第二治療を単一製剤で投与する。
【０３９３】
第二治療は、当分野で知られるあらゆる他の治療であり得る。ある実施態様において、第二治療は、免疫療法を含む。ある実施態様において、第二治療は、化学療法を含む。ある実施態様において、第二治療は、放射線療法を含む。ある実施態様において、第二治療は、手術を含む。ある実施態様において、第二治療は、第二治療剤の投与を含む。
【０３９４】
ある実施態様において、第二治療剤は第二抗体を含む。ある実施態様において、第二治療剤は、誘導性Ｔ細胞共刺激分子(ＩＣＯＳ)、ＣＤ１３７(４−１ＢＢ)、ＣＤ１３４(ＯＸ４０)、ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ２７、グルココルチコイド誘発ＴＮＦＲ関連タンパク質(ＧＩＴＲ)およびヘルペスウイルス侵入メディエータ(ＨＶＥＭ)、プログラム死−１(ＰＤ−１)、プログラム死リガンド−１(ＰＤ−Ｌ１)、ＣＴＬＡ−４、ＢおよびＴリンパ球アテニュエータ(ＢＴＬＡ)、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン−３(ＴＩＭ−３)、リンパ球活性化遺伝子−３(ＬＡＧ−３)、アデノシンＡ２ａ受容体(Ａ２ａＲ)、キラー細胞レクチン様受容体Ｇ１(ＫＬＲＧ−１)、ナチュラルキラー細胞受容体２Ｂ４(ＣＤ２４４)、ＣＤ１６０、ＩｇおよびＩＴＩＭドメインを伴うＴ細胞免疫受容体(ＴＩＧＩＴ)およびＴ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサの受容体(ＶＩＳＴＡ)、ＮＫＧ２ａ、ＫＩＲ、ＴＧＦβ、ＩＬ−１０、ＩＬ−８、Ｂ７−Ｈ４、Ｆａｓリガンド、ＣＸＣＲ４、メソセリン、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＤ９６、ＣＤ５２、ＨＥＲ２およびこれらの何れかの組み合わせから選択されるタンパク質に特異的に結合する、有効量の抗体を含む。
【０３９５】
XI.Ａ. 抗ＰＤ−１抗体
ある実施態様において、第二抗体は抗ＰＤ−１抗体であり得る。当分野で知られる抗ＰＤ−１抗体を、本明細書に記載の組成物および方法において使用できる。ＰＤ−１と高親和性で特異的に結合する種々のヒトモノクローナル抗体は、米国特許８,００８,４４９に開示されている。米国特許８,００８,４４９に開示される抗ＰＤ−１ヒト抗体は、次の特徴の１以上を示すことが示されている。(ａ)Biacoreバイオセンサー系を使用する表面プラズモン共鳴により決定して、ヒトＰＤ−１に１×１０−７Ｍ以下のＫＤで結合する；(ｂ)ヒトＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４またはＩＣＯＳに実質的に結合しない；(ｃ)混合リンパ球反応(ＭＬＲ)アッセイでＴ細胞増殖を増加させる；(ｄ)ＭＬＲアッセイでインターフェロン−γ産生を増加させる；(ｅ)ＭＬＲアッセイでＩＬ−２分泌を増加させる；(ｆ)ヒトＰＤ−１およびカニクイザルＰＤ−１に結合する；(ｇ)ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２のＰＤ−１への結合を阻害する；(ｈ)抗原特異的記憶応答を刺激する；(ｉ)抗体応答を刺激する；および(ｊ)インビボで腫瘍細胞増殖を阻害する。本発明で有用な抗ＰＤ−１抗体は、ヒトＰＤ−１に特異的に結合し、先の特徴の少なくとも１個、ある実施態様において、少なくとも５個を示す、モノクローナル抗体を含む。
【０３９６】
他の抗ＰＤ−１モノクローナル抗体は、例えば、米国特許６,８０８,７１０、７,４８８,８０２、８,１６８,７５７および８,３５４,５０９、ＵＳ公開２０１６／０２７２７０８およびＰＣＴ公開ＷＯ２０１２／１４５４９３、ＷＯ２００８／１５６７１２、ＷＯ２０１５／１１２９００、ＷＯ２０１２／１４５４９３、ＷＯ２０１５／１１２８００、ＷＯ２０１４／２０６１０７、ＷＯ２０１５／３５６０６、ＷＯ２０１５／０８５８４７、ＷＯ２０１４／１７９６６４、ＷＯ２０１７／０２０２９１、ＷＯ２０１７／０２０８５８、ＷＯ２０１６／１９７３６７、ＷＯ２０１７／０２４５１５、ＷＯ２０１７／０２５０５１、ＷＯ２０１７／１２３５５７、ＷＯ２０１６／１０６１５９、ＷＯ２０１４／１９４３０２、ＷＯ２０１７／０４０７９０、ＷＯ２０１７／１３３５４０、ＷＯ２０１７／１３２８２７、ＷＯ２０１７／０２４４６５、ＷＯ２０１７／０２５０１６、ＷＯ２０１７／１０６０６１、ＷＯ２０１７／１９８４６、ＷＯ２０１７／０２４４６５、ＷＯ２０１７／０２５０１６、ＷＯ２０１７／１３２８２５およびＷＯ２０１７／１３３５４０に記載されており、この各々を、全体として引用により本明細書に包含させる。
【０３９７】
ある実施態様において、抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブ(オプジーボ(登録商標)、５Ｃ４、ＢＭＳ−９３６５５８、ＭＤＸ−１１０６およびＯＮＯ−４５３８としても知られる)、ペンブロリズマブ(Merck；キイトルーダ(登録商標)、ランブロリズマブおよびＭＫ−３４７５としても知られる；ＷＯ２００８／１５６７１２参照)、ＰＤＲ００１(Novartis；ＷＯ２０１５／１１２９００参照)、ＭＥＤＩ−０６８０(AstraZeneca；ＡＭＰ−５１４としても知られる；ＷＯ２０１２／１４５４９３参照)、セミプリマブ(Regeneron；ＲＥＧＮ−２８１０としても知られる；ＷＯ２０１５／１１２８００参照)、ＪＳ００１(TAIZHOU JUNSHI PHARMA；Si-Yang Liu et al., J. Hematol. Oncol. 10:136 (2017)参照)、ＢＧＢ−Ａ３１７(Beigene；ＷＯ２０１５／３５６０６およびＵＳ２０１５／００７９１０９参照)、ＩＮＣＳＨＲ１２１０(Jiangsu Hengrui Medicine；ＳＨＲ−１２１０としても知られる；ＷＯ２０１５／０８５８４７；Si-Yang Liu et al., J. Hematol. Oncol. 10:136 (2017)参照)、ＴＳＲ−０４２(Tesaro Biopharmaceutical；ＡＮＢ０１１としても知られる；ＷＯ２０１４／１７９６６４参照)、ＧＬＳ−０１０(Wuxi/Harbin Gloria Pharmaceuticals；ＷＢＰ３０５５としても知られる；Si-Yang Liu et al., J. Hematol. Oncol. 10:136 (2017)参照)、ＡＭ−０００１(Armo)、ＳＴＩ−１１１０(Sorrento Therapeutics；ＷＯ２０１４／１９４３０２参照)、ＡＧＥＮ２０３４(Agenus；ＷＯ２０１７／０４０７９０参照)、ＭＧＡ０１２(Macrogenics、ＷＯ２０１７／１９８４６参照)およびＩＢＩ３０８(Innovent；ＷＯ２０１７／０２４４６５、ＷＯ２０１７／０２５０１６、ＷＯ２０１７／１３２８２５およびＷＯ２０１７／１３３５４０参照)からなる群から選択される。
【０３９８】
ある実施態様において、抗ＰＤ−１抗体はニボルマブである。ニボルマブは、ＰＤ−１リガンド(ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２)との相互作用を選択的に阻害し、それにより抗腫瘍Ｔ細胞機能の下方制御を遮断する、完全ヒトＩｇＧ４(Ｓ２２８Ｐ)ＰＤ−１免疫チェックポイント阻害剤抗体である(米国特許８,００８,４４９; Wang et al., 2014 Cancer Immunol Res. 2(9):846-56)。
【０３９９】
他の実施態様において、抗ＰＤ−１抗体はペンブロリズマブである。ペンブロリズマブは、ヒト細胞表面受容体ＰＤ−１(プログラム死−１またはプログラム細胞死−１)に対するヒト化モノクローナルＩｇＧ４(Ｓ２２８Ｐ)抗体である。ペンブロリズマブは、例えば、米国特許８,３５４,５０９および８,９００,５８７に記載される。
【０４００】
本発明組成物および方法において有用な抗ＰＤ−１抗体は、ヒトＰＤ−１と特異的に結合し、ヒトＰＤ−１への結合についてここに開示するすべての抗ＰＤ−１抗体、例えば、ニボルマブと交差競合する単離抗体、例えば、ニボルマブも含む(例えば、米国特許８,００８,４４９および８,７７９,１０５；ＷＯ２０１３／１７３２２３参照)。ある実施態様において、抗ＰＤ−１抗体は、ここに記載する抗ＰＤ−１抗体の何れか、例えば、ニボルマブと同じエピトープに結合する。抗体が抗原への結合について交差競合する能力は、これらのモノクローナル抗体が該抗原の同じエピトープ領域に結合し、その特定のエピトープ領域に他の交差競合抗体が結合するのを立体的に妨害することを示す。これら交差競合抗体は、対照抗体、例えば、ニボルマブと、ＰＤ−１の同じエピトープ領域に結合することから、極めて類似する機能的性質を有することが期待される。交差競合抗体は、Biacore分析、ＥＬＩＳＡアッセイまたはフローサイトメトリーなどの標準的ＰＤ−１結合アッセイにおいてニボルマブと交差競合するその能力により、容易に同定され得る(例えば、ＷＯ２０１３／１７３２２３参照)。
【０４０１】
ある実施態様において、ヒトＰＤ−１抗体、ニボルマブとヒトＰＤ−１への結合について交差競合するまたは同じエピトープ領域に結合するコプ体は、モノクローナル抗体である。ヒト対象への投与のために、これら交差競合抗体はキメラ抗体、操作された抗体またはヒト化またはヒト抗体である。このようなキメラ、操作された、ヒト化またはヒトモノクローナル抗体は、当分野で周知の方法により製造および単離され得る。
【０４０２】
本発明の組成物および方法において有用な抗ＰＤ−１抗体は、上記抗体の抗原結合部分も含む。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体のフラグメントにより実施され得ることは十分に証明されている。
【０４０３】
本発明組成物および方法における使用に適する抗ＰＤ−１抗体は、高特異性および親和性でＰＤ−１に結合する、ＰＤ−Ｌ１およびまたはＰＤ−Ｌ２の結合を遮断するおよびＰＤ−１シグナル伝達経路の免疫抑制性効果を阻害する抗体である。ここに開示する何れの組成物または方法においても、抗ＰＤ−１「抗体」は、ＰＤ−１受容体に結合し、リガンド結合を阻害し、かつ免疫系を上方制御する完全抗体のものに類似する機能的性質を示す、抗原結合部分またはフラグメントを含む。ある実施態様において、抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合部分は、ヒトＰＤ−１への結合についてニボルマブと交差競合する。
【０４０４】
XI.Ｂ. 抗ＰＤ−Ｌ１抗体
ある実施態様において、第二抗体は抗ＰＤ−Ｌ１抗体であり得る。当分野で知られる抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、本発明の組成物および方法において使用され得る。本発明組成物および方法において有用な抗ＰＤ−Ｌ１抗体の例は、米国特許９,５８０,５０７に開示された抗体を含む。米国特許９,５８０,５０７に開示される抗ＰＤ−Ｌ１ヒトモノクローナル抗体は、次の特徴の１以上を示すことが示されている。(ａ)Biacoreバイオセンサー系を使用する表面プラズモン共鳴により決定して、ヒトＰＤ−Ｌ１に１×１０−７Ｍ以下のＫＤで結合する；(ｂ)混合リンパ球反応(ＭＬＲ)アッセイでＴ細胞増殖を増加させる；(ｃ)ＭＬＲアッセイでインターフェロン−γ産生を増加させる；(ｄ)ＭＬＲアッセイでＩＬ−２分泌を増加させる；(ｅ)抗体応答を刺激する；および(ｆ)Ｔ細胞エフェクター細胞および／または樹状細胞に対するＴ制御細胞の作用を逆転させる。抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、先の特徴の少なくとも１個、ある実施態様において、少なくとも５個を示す、モノクローナル抗体を含む。
【０４０５】
ある実施態様において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体はＢＭＳ−９３６５５９(１２Ａ４、ＭＤＸ−１１０５としても知られる；例えば、米国特許７,９４３,７４３およびＷＯ２０１３／１７３２２３参照)、アテゾリズマブ(Roche；TECENTRIQ(登録商標)；ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＲＧ７４４６としても知られる；ＵＳ８,２１７,１４９参照；またHerbst et al. (2013) J Clin Oncol 31(suppl):3000参照)、デュルバルマブ(AstraZeneca；イミフィンジTM、ＭＥＤＩ−４７３６としても知られる；ＷＯ２０１１／０６６３８９参照)、アベルマブ(Pfizer；バベンチオ(登録商標)、ＭＳＢ−００１０７１８Ｃとしても知られる；ＷＯ２０１３／０７９１７４参照)、ＳＴＩ−１０１４(Sorrento；ＷＯ２０１３／１８１６３４としても知られる)、ＣＸ−０７２(Cytomx；ＷＯ２０１６／１４９２０１としても知られる)、ＫＮ０３５(3D Med/Alphamab；Zhang et al., Cell Discov. 7:3 (March 2017)参照)、ＬＹ３３０００５４(Eli Lilly Co.；例えば、ＷＯ２０１７／０３４９１６参照)およびＣＫ−３０１(Checkpoint Therapeutics；Gorelik et al., AACR:Abstract 4606(Apr 2016)参照)からなる群から選択される。
【０４０６】
ある実施態様において、ＰＤ−Ｌ１抗体はアテゾリズマブ(TECENTRIQ(登録商標))である。アテゾリズマブは完全ヒト化ＩｇＧ１モノクローナル抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。
【０４０７】
ある実施態様において、ＰＤ−Ｌ１抗体はデュルバルマブ(イミフィンジTM)である。デュルバルマブはヒトＩｇＧ１カッパモノクローナル抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。
【０４０８】
ある実施態様において、ＰＤ−Ｌ１抗体はアベルマブ(バベンチオ(登録商標))である。アベルマブはヒトＩｇＧ１ラムダモノクローナル抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。
【０４０９】
他の実施態様において、抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体は、２８−８、２８−１、２８−１２、２９−８、５Ｈ１およびこれらの何れかの組み合わせからなる群から選択される。
【０４１０】
本発明組成物および方法において有用な抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ヒトＰＤ−Ｌ１と特異的に結合し、ここに開示する抗ＰＤ−Ｌ１抗体の何れか、例えば、アテゾリズマブ、デュルバルマブおよび／またはアベルマブとヒトＰＤ−Ｌ１への得ｋ都合について交差競合する単離抗体も含む。ある実施態様において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ここに記載する抗ＰＤ−Ｌ１抗体、例えば、アテゾリズマブ、デュルバルマブおよび／またはアベルマブの何れかと同じエピトープに結合する。抗体が抗原への結合について交差競合する能力は、これら抗体が抗原の同じエピトープ領域に結合し、その特定のエピトープ領域に他の交差競合抗体が結合するの立体的に妨害することを示す。これら交差競合抗体は、対照抗体、例えば、アテゾリズマブおよび／またはアベルマブと、ＰＤ−Ｌ１の同じエピトープ領域に結合することから、極めて類似する機能的性質を有することが期待される。交差競合抗体は、Biacore分析、ＥＬＩＳＡアッセイまたはフローサイトメトリーなどの標準的ＰＤ−Ｌ１結合アッセイにおいてアテゾリズマブおよび／またはアベルマブと交差競合するその能力により、容易に同定され得る(例えば、ＷＯ２０１３／１７３２２３参照)。
【０４１１】
ある実施態様において、ヒトＰＤ−Ｌ１抗体、アテゾリズマブ、デュルバルマブおよび／またはアベルマブとヒトＰＤ−Ｌ１への結合について交差競合するまたは同じエピトープ領域に結合するコプ体は、モノクローナル抗体である。ヒト対象への投与のために、これら交差競合抗体はキメラ抗体、操作された抗体またはヒト化またはヒト抗体である。このようなキメラ、操作された、ヒト化またはヒトモノクローナル抗体は、当分野で周知の方法により製造および単離され得る。
【０４１２】
本発明の組成物および方法において有用な抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、上記抗体の抗原結合部分も含む。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体のフラグメントにより実施され得ることは十分に証明されている。
【０４１３】
本発明組成物および方法における使用に適する抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、高特異性および親和性でＰＤ−Ｌ１に結合する、ＰＤ−１の結合を遮断するおよびＰＤ−１シグナル伝達経路の免疫抑制性効果を阻害する抗体である。ここに開示する何れの組成物または方法においても、抗ＰＤ−Ｌ１「抗体」は、ＰＤ−Ｌ１に結合し、受容体結合阻害および免疫系上方制御について完全抗体のものと類似する機能的性質を示す、抗原結合部分またはフラグメントを含む。ある実施態様において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合部分は、ヒトＰＤ−Ｌ１への結合についてアテゾリズマブ、デュルバルマブおよび／またはアベルマブと交差競合する。
【０４１４】
XI.Ｃ. 抗ＣＴＬＡ−４抗体
ある実施態様において、第二抗体は抗ＣＴＬＡ−４抗体であり得る。当分野で知られる抗ＣＴＬＡ−４抗体が、本発明の組成物および方法において使用され得る。本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体は、ＣＴＬＡ−４とヒトＢ７受容体の相互作用の妨害のために、ヒトＣＴＬＡ−４と結合する。Ｂ７とＣＴＬＡ−４の相互作用がＣＴＬＡ−４受容体を担持するＴ細胞不活性化に至るシグナルを伝達するため、相互作用の妨害は、効果的にこのようなＴ細胞の活性化を誘導、増強または延長し、それにより免疫応答を誘導、増強または延長する。
【０４１５】
高親和性でＣＴＬＡ−４に特異的に結合するヒトモノクローナル抗体は、米国特許６,９８４,７２０に開示されている。他の抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体は、例えば、米国特許５,９７７,３１８、６,０５１,２２７、６,６８２,７３６および７,０３４,１２１および国際公開ＷＯ２０１２／１２２４４４、ＷＯ２００７／１１３６４８、ＷＯ２０１６／１９６２３７およびＷＯ２０００／０３７５０４に記載されており、これら各々を引用により全体を本明細書に包含させる。米国特許６,９８４,７２０に開示される抗ＣＴＬＡ−４ヒトモノクローナル抗体は、次の特徴の１以上を示すことが示されている。(ａ)Biacore分析により決定して、少なくとも約１０７Ｍ−１または約１０９Ｍ−１または約１０１０Ｍ−１〜１０１１Ｍ−１以上の平衡結合定数(Ｋａ)により反映される結合親和性でヒトＣＴＬＡ−４に特異的に結合する；(ｂ)少なくとも約１０３、約１０４または約１０５ｍ−１ｓ−１の動的結合定数(ｋａ)；(ｃ)少なくとも約１０３、約１０４または約１０５ｍ−１ｓ−１の動的解離定数(ｋｄ)；および(ｄ)ＣＴＬＡ−４のＢ７−１(ＣＤ８０)およびＢ７−２(ＣＤ８６)への結合を阻害する。本発明で有用な抗ＣＴＬＡ−４抗体は、ヒトＣＴＬＡ−４に特異的に結合し、上記特徴の少なくとも１個、少なくとも２個または少なくとも３個を示すモノクローナル抗体を含む。
【０４１６】
ある実施態様において、ＣＴＬＡ−４抗体はイピリムマブ(ヤーボイ(登録商標)、ＭＤＸ−０１０、１０Ｄ１としても知られる；米国特許６,９８４,７２０参照)、ＭＫ−１３０８(Merck)、ＡＧＥＮ−１８８４(Agenus Inc.；ＷＯ２０１６／１９６２３７参照)およびトレメリムマブ(AstraZeneca；チシリムマブ、ＣＰ−６７５,２０６としても知られる；ＷＯ２０００／０３７５０４およびRibas, Update Cancer Ther. 2(3): 133-39 (2007)参照)からなる群から選択される。特に実施態様、抗ＣＴＬＡ−４抗体はイピリムマブである。
【０４１７】
具体的実施態様において、本発明組成物および方法で使用するためのＣＴＬＡ−４抗体はイピリムマブである。イピリムマブは、ＣＴＬＡ−４のそのＢ７リガンドへの結合を遮断し、それによりＴ細胞活性化を刺激し、進行型黒色腫を有する患者で全生存(ＯＳ)を改善する完全ヒト、ＩｇＧ１モノクローナル抗体である。
【０４１８】
具体的実施態様において、ＣＴＬＡ−４抗体はトレメリムマブである。
【０４１９】
具体的実施態様において、ＣＴＬＡ−４抗体はＭＫ−１３０８である。
【０４２０】
具体的実施態様において、ＣＴＬＡ−４抗体はＡＧＥＮ−１８８４である。
【０４２１】
ある実施態様において、ＣＴＬＡ−４抗体は非フコシル化または低フコシル化されている。ある実施態様において、ＣＴＬＡ−４抗体は、ＡＤＣＣおよび／またはＡＤＣＰ活性の増強を示す。ある実施態様において、ＣＴＬＡ−４抗体は、ＰＣＴ／ＵＳ１８／１９８６８に記載のＢＭＳ−９８６２１８である。
【０４２２】
本発明組成物および方法において有用な抗ＣＴＬＡ−４抗体は、ヒトＣＴＬＡ−４と特異的に結合し、ここに開示する抗ＣＴＬＡ−４抗体の何れか、例えば、イピリムマブおよび／またはトレメリムマブとヒトＣＴＬＡ−４への特異的結合について交差競合する単離抗体も含む。ある実施態様において、抗ＣＴＬＡ−４抗体は、ここに記載する抗ＣＴＬＡ−４抗体、例えば、イピリムマブおよび／またはトレメリムマブの何れかと同じエピトープに結合する。抗体が抗原への結合について交差競合する能力は、これら抗体が抗原の同じエピトープ領域に結合し、その特定のエピトープ領域に他の交差競合抗体が結合するの立体的に妨害することを示す。これら交差競合抗体は、対照抗体、例えば、イピリムマブおよび／またはトレメリムマブと、ＣＴＬＡ−４の同じエピトープ領域に結合することから、極めて類似する機能的性質を有することが期待される。交差競合抗体は、Biacore分析、ＥＬＩＳＡアッセイまたはフローサイトメトリーなどの標準的ＣＴＬＡ−４結合アッセイにおいてイピリムマブおよび／またはトレメリムマブと交差競合するその能力により、容易に同定され得る(例えば、ＷＯ２０１３／１７３２２３参照)。
【０４２３】
ある実施態様において、ヒトＣＴＬＡ−４抗体、イピリムマブおよび／またはトレメリムマブとヒトＣＴＬＡ−４への結合について交差競合するまたは同じエピトープ領域に結合するコプ体は、モノクローナル抗体である。ヒト対象への投与のために、これら交差競合抗体はキメラ抗体、操作された抗体またはヒト化またはヒト抗体である。このようなキメラ、操作された、ヒト化またはヒトモノクローナル抗体は、当分野で周知の方法により製造および単離され得る。
【０４２４】
本発明の組成物および方法において有用な抗ＣＴＬＡ−４抗体は、上記抗体の抗原結合部分も含む。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体のフラグメントにより実施され得ることは十分に証明されている。
【０４２５】
本発明方法または組成物での使用に適する抗ＣＴＬＡ−４抗体は、高特異性および親和性でＣＴＬＡ−４に結合する、ＣＴＬＡ−４の活性を遮断するおよびＣＴＬＡ−４とヒトＢ７受容体の相互作用を妨害する抗体である。ここに開示する何れの組成物または方法においても、抗ＣＴＬＡ−４「抗体」は、ＣＴＬＡ−４に結合し、ＣＴＬＡ−４とヒトＢ７受容体の相互作用を阻害し、免疫系を上方制御する完全抗体と類似する機能的性質を示す、抗原結合部分またはフラグメントを含む。ある実施態様において、抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合部分は、ヒトＣＴＬＡ−４への結合についてイピリムマブおよび／またはトレメリムマブと交差競合する。
【０４２６】
XI.Ｄ. 抗ＬＡＧ−３抗体
ある実施態様において、第二抗体は抗ＬＡＧ−３抗体であり得る。本発明の抗ＬＡＧ−３抗体はヒトＬＡＧ−３に結合する。ＬＡＧ−３に結合する抗体は、国際公開ＷＯ／２０１５／０４２２４６および米国公開２０１４／００９３５１１および２０１１／０１５０８９２に開示されている。
【０４２７】
本発明で有用なＬＡＧ−３抗体の例は２５Ｆ７(米国公開２０１１／０１５０８９２に記載)である。本発明で有用なＬＡＧ−３抗体のさらなる例はＢＭＳ−９８６０１６でる。ある実施態様において、組成物で有用な抗ＬＡＧ−３抗体は、２５Ｆ７またはＢＭＳ−９８６０１６と交差競合する。他の実施態様において、組成物で有用な抗ＬＡＧ−３抗体は、２５Ｆ７またはＢＭＳ−９８６０１６と同じエピトープに結合する。他の実施態様において、抗ＬＡＧ−３抗体は２５Ｆ７またはＢＭＳ−９８６０１６の６ＣＤＲを含む。
【０４２８】
ＸI.Ｅ. 抗ＣＤ１３７抗体
ある実施態様において、第二抗体は抗ＣＤ１３７抗体であり得る。抗ＣＤ１３７抗体は、ＣＤ１３７発現免疫細胞に特異的に結合し、活性化し、腫瘍細胞に対する免疫応答、特に細胞毒性Ｔ細胞応答を刺激する。ＣＤ１３７に結合する抗体は、米国公開２００５／００９５２４４および米国特許７,２８８,６３８、６,８８７,６７３、７,２１４,４９３、６,３０３,１２１、６,５６９,９９７、６,９０５,６８５、６,３５５,４７６、６,３６２,３２５、６,９７４,８６３および６,２１０,６６９に開示されている。
【０４２９】
ある実施態様において、抗ＣＤ１３７抗体は米国特許７,２８８,６３８(２０Ｈ４.９−ＩｇＧ４[１０Ｃ７またはＢＭＳ−６６３５１３])に記載のウレルマブ(ＢＭＳ−６６３５１３)である。ある実施態様において、抗ＣＤ１３７抗体は、ＢＭＳ−６６３０３１(２０Ｈ４.９−ＩｇＧ１)に記載の米国特許７,２８８,６３８である。ある実施態様において、抗ＣＤ１３７抗体は、４Ｅ９またはＢＭＳ−５５４２７１に記載の米国特許６,８８７,６７３である。ある実施態様において、抗ＣＤ１３７抗体は、米国特許７,２１４,４９３；６,３０３,１２１；６,５６９,９９７；６,９０５,６８５；または６,３５５,４７６に開示の抗体である。ある実施態様において、抗ＣＤ１３７抗体は米国特許６,３６２,３２５に記載の１Ｄ８またはＢＭＳ−４６９４９２；３Ｈ３またはＢＭＳ−４６９４９７；または３Ｅ１である。ある実施態様において、抗ＣＤ１３７抗体は、登録米国特許６,９７４,８６３(例えば５３Ａ２)に開示の抗体である。ある実施態様において、抗ＣＤ１３７抗体は、登録米国特許６,２１０,６６９(例えば１Ｄ８、３Ｂ８または３Ｅ１)に開示の抗体である。ある実施態様において、抗体はPfizerのＰＦ−０５０８２５６６(ＰＦ−２５６６)である。他の実施態様において、本発明で有用な抗ＣＤ１３７抗体は、ここに開示する抗ＣＤ１３７抗体と交差競合する。ある実施態様において、抗ＣＤ１３７抗体は、ここに開示する抗ＣＤ１３７抗体と同じエピトープに結合する。他の実施態様において、本明細書で有用な抗ＣＤ１３７抗体は、ここに開示する抗ＣＤ１３７抗体の６ＣＤＲを含む。
【０４３０】
XI.Ｆ. 抗ＫＩＲ抗体
ある実施態様において、第二抗体は抗ＫＩＲ３抗体であり得る。ＫＩＲに特異的に結合する抗体は、ＮＫ細胞のキラー細胞免疫グロブリン様受容体(ＫＩＲ)とそのリガンドの相互作用を遮断する。これらの受容体の遮断はＮＫ細胞の活性化を促進し、それにより腫瘍細胞を破壊する可能性がある。抗ＫＩＲ抗体の例は、国際公開ＷＯ／２０１４／０５５６４８、ＷＯ２００５／００３１６８、ＷＯ２００５／００９４６５、ＷＯ２００６／０７２６２５、ＷＯ２００６／０７２６２６、ＷＯ２００７／０４２５７３、ＷＯ２００８／０８４１０６、ＷＯ２０１０／０６５９３９、ＷＯ２０１２／０７１４１１およびＷＯ／２０１２／１６０４４８に開示されている。
【０４３１】
本発明で有用なある抗ＫＩＲ抗体はリリルマブ(ＢＭＳ−９８６０１５、ＩＰＨ２１０２または１−７Ｆ９のＳ２４１Ｐバリアントとも称する)であり、これは国際公開ＷＯ２００８／０８４１０６に最初に記載された。本発明で有用なさらなる抗ＫＩＲ抗体は、国際公開ＷＯ２００６／００３１７９に記載の１−７Ｆ９(ＩＰＨ２１０１とも称する)である。ある実施態様において、本組成物のための抗ＫＩＲ抗体は、リリルマブまたはＩ−７Ｆ９とＫＩＲへの結合について交差競合する。他の実施態様において、抗ＫＩＲ抗体は、リリルマブまたはＩ−７Ｆ９と同じエピトープに結合する。他の実施態様において、抗ＫＩＲ抗体は、リリルマブまたはＩ−７Ｆ９の６ＣＤＲを含む。
【０４３２】
XI.Ｇ. 抗ＧＩＴＲ抗体
ある実施態様において、第二抗体は抗ＧＩＴＲ抗体であり得る。抗ＧＩＴＲ抗体は、ヒトＧＩＴＲ標的に特異的に結合し、グルココルチコイド誘発腫瘍壊死因子受容体(ＧＩＴＲ)を活性化するあらゆる抗ＧＩＴＲ抗体であり得る。ＧＩＴＲは、制御Ｔ細胞、エフェクターＴ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー(ＮＫ)細胞および活性化樹状細胞(「抗ＧＩＴＲアゴニスト抗体」)を含む、複数タイプの免疫細胞の表面に発現される、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバーである。具体的に、ＧＩＴＲ活性化はエフェクターＴ細胞の増殖および機能を増加させ、同時に活性化Ｔ制御細胞により誘発される抑制を廃止する。さらに、ＧＩＴＲ刺激は、ＮＫ細胞、抗原提示細胞およびＢ細胞などの他の免疫細胞の活性増加により、抗腫瘍免疫を促進する。抗ＧＩＴＲ抗体の例は、国際公開ＷＯ／２０１５／０３１６６７、ＷＯ２０１５／１８４,０９９、ＷＯ２０１５／０２６,６８４、ＷＯ１１／０２８６８３およびＷＯ／２００６／１０５０２１、米国特許７,８１２,１３５および８,３８８,９６７および米国公開２００９／０１３６４９４、２０１４／０２２０００２、２０１３／０１８３３２１および２０１４／０３４８８４１に開示されている。
【０４３３】
ある実施態様において、本発明で有用な抗ＧＩＴＲ抗体は、ＴＲＸ５１８(例えば、Schaer et al. Curr Opin Immunol. (2012) Apr; 24(2): 217−224およびＷＯ／２００６／１０５０２１に記載)である。他の実施態様において、抗ＧＩＴＲ抗体は、ＭＫ４１６６、ＭＫ１２４８および、例えば、ＶＨ鎖が配列番号１０４を含み、ＶＬ鎖が配列番号１０５を含む(ここで、配列番号はＷＯ１１／０２８６８３または米国特許８,７０９,４２４に基づく)、ＷＯ１１／０２８６８３および米国８,７０９,４２４に記載の抗体から選択される。ある実施態様において、抗ＧＩＴＲ抗体は、ＷＯ２０１５／０３１６６７に開示の抗ＧＩＴＲ抗体、例えば、ＷＯ２０１５／０３１６６７のそれぞれ配列番号３１、７１および６３を含むＶＨ  ＣＤＲ１〜３およびＷＯ２０１５／０３１６６７の配列番号５、１４および３０を含むＶＬ  ＣＤＲ１〜３を含む、抗体である。ある実施態様において、抗ＧＩＴＲ抗体は、ＷＯ２０１５／１８４０９９に開示の抗ＧＩＴＲ抗体、例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃１またはＨｕｍ２３１＃２またはそのＣＤＲまたはその誘導体(例えば、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９７５またはｐａｂ１９７９)である。ある実施態様において、抗ＧＩＴＲ抗体は、ＪＰ２００８２７８８１４、ＷＯ０９／００９１１６、ＷＯ２０１３／０３９９５４、ＵＳ２０１４００７２５６６、ＵＳ２０１４００７２５６５、ＵＳ２０１４００６５１５２またはＷＯ２０１５／０２６６８４に開示の抗ＧＩＴＲ抗体またはＩＮＢＲＸ−１１０(ＩＮＨＩＢＲｘ)、ＬＫＺ−１４５(Novartis)またはＭＥＤＩ−１８７３(MedImmune)である。ある実施態様において、抗ＧＩＴＲ抗体は、ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０３３９９１(例えば、２８Ｆ３、１８Ｅ１０または１９Ｄ３の可変領域を含む抗体)に記載の抗ＧＩＴＲ抗体である。例えば、抗ＧＩＴＲ抗体は、次のＶＨおよびＶＬ鎖またはそのＣＤＲを含む抗体であり得る。
【０４３４】
ＶＨ：
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYEGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGSMVRGDYYYGMDVWGQGTTVTVS(配列番号７８)および
【０４３５】
ＶＬ：
AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSALAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPYTFGQGTKLEIK(配列番号７９)；または
【０４３６】
ＶＨ：
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGFHWVRQAPGKGLEWVAVIWYAGSNKFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGQLDYYYYYVMDVWGQGTTVTVSS(配列番号８０)および
【０４３７】
ＶＬ：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTKLEIK(配列番号８１)；または
【０４３８】
ＶＨ：
VQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYAGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGRIAVAFYYSMDVWGQGTTVTVSS(配列番号８２)および
【０４３９】
ＶＬ：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTKLEIK(配列番号８３)。
【０４４０】
ある実施態様において、上記ＶＨおよびＶＬ対またはそのＣＤＲを含む抗体は、野生型または例えば、エフェクターレスであるように変異されたＩｇＧ１アイソタイプの重鎖定常領域を含む。ある実施態様において、抗ＧＩＴＲ抗体は次の重鎖および軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０４４１】
重鎖：
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYEGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGSMVRGDYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(配列番号８４)および
【０４４２】
軽鎖：
AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSALAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(配列番号８５)または
【０４４３】
重鎖：
qvqlvesgggvvqpgrslrlscaasgftfssygmhwvrqapgkglewvaviwyegsnkyyadsvkgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycarggsmvrgdyyygmdvwgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkscdkthtcppcpapeaegapsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpssiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspg(配列番号８６)および
【０４４４】
軽鎖：
AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSALAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(配列番号８７)。
【０４４５】
ある実施態様において、抗ＧＩＴＲ抗体は、抗ＧＩＴＲここに記載する抗体、例えば、ＴＲＸ５１８、ＭＫ４１６６またはここに記載するＶＨドメインおよびＶＬドメインアミノ酸配列を含む抗体と交差競合する。ある実施態様において、抗ＧＩＴＲ抗体は、抗ＧＩＴＲここに記載する抗体、例えば、ＴＲＸ５１８、ＭＫ４１６６またはここに記載するＶＨドメインおよびＶＬドメインアミノ酸配列を含む抗体の同じエピトープに結合する。ある実施態様において、抗ＧＩＴＲ抗体は、ＴＲＸ５１８、ＭＫ４１６６またはここに記載するＶＨドメインおよびＶＬドメインアミノ酸配列を含む抗体の６ＣＤＲを含む。
【０４４６】
XI.Ｈ. 抗ＴＩＭ３抗体
ある実施態様において、第二抗体は抗ＴＩＭ３抗体であり得る。ある実施態様において、抗ＴＩＭ３抗体は、国際公開ＷＯ２０１８０１３８１８、ＷＯ／２０１５／１１７００２(例えば、ＭＧＢ４５３、Novartis)、ＷＯ／２０１６／１６１２７０(例えば、ＴＳＲ−０２２、Tesaro/AnaptysBio)、ＷＯ２０１１１５５６０７、ＷＯ２０１６／１４４８０３(例えば、ＳＴＩ−６００、Sorrento Therapeutics)、ＷＯ２０１６／０７１４４８、ＷＯ１７０５５３９９；ＷＯ１７０５５４０４、ＷＯ１７１７８４９３、ＷＯ１８０３６５６１、ＷＯ１８０３９０２０(例えば、Ｌｙ−３２２１３６７、Eli Lilly)、ＷＯ２０１７２０５７２１、ＷＯ１７０７９１１２；ＷＯ１７０７９１１５；ＷＯ１７０７９１１６、ＷＯ１１１５９８７７、ＷＯ１３００６４９０、ＷＯ２０１６０６８８０２、ＷＯ２０１６０６８８０３、ＷＯ２０１６／１１１９４７、ＷＯ／２０１７／０３１２４２に開示の抗ＴＩＭ３抗体から選択され得る。
【０４４７】
XI.Ｉ. 抗ＯＸ４０抗体
ある実施態様において、第二抗体は抗ＯＸ４０(ＣＤ１３４、ＴＮＦＲＳＦ４、ＡＣＴ３５および／またはＴＸＧＰ１Ｌとしても知られる)抗体であり得る。ある実施態様において、抗ＯＸ４０抗体は、国際公開ＷＯ２０１６０１９６２２８に記載のＢＭＳ−９８６１７８(Bristol-Myers Squibb Company)であり得る。ある実施態様において、抗ＯＸ４０抗体は、国際公開ＷＯ９５０１２６７３、ＷＯ１９９９４２５８５、ＷＯ１４１４８８９５、ＷＯ１５１５３５１３、ＷＯ１５１５３５１４、ＷＯ１３０３８１９１、ＷＯ１６０５７６６７、ＷＯ０３１０６４９８、ＷＯ１２０２７３２８、ＷＯ１３０２８２３１、ＷＯ１６２００８３６、ＷＯ１７０６３１６２、ＷＯ１７１３４２９２、ＷＯ１７０９６１７９、ＷＯ１７０９６２８１およびＷＯ１７０９６１８２に記載の抗ＯＸ４０抗体から選択され得る。
【０４４８】
XI.Ｊ. 抗ＮＫＧ２Ａ抗体
ある実施態様において、第二抗体は抗ＮＫＧ２Ａ抗体であり得る。ＮＫＧ２Ａは、ナチュラルキラー(ＮＫ)細胞およびＴリンパ球のサブセットで発現される、Ｃ型レクチン受容体ファミリーのメンバーである。具体的に、ＮＫＧ２Ａは、腫瘍浸潤自然免疫エフェクターＮＫ細胞および一部ＣＤ８＋  Ｔ細胞で主に発現される。その天然リガンドヒト白血球抗原Ｅ(ＨＬＡ−Ｅ)は、固形および血液系腫瘍で発現される。ＮＫＧ２Ａは、ＨＬＡ−Ｅに結合する阻害性受容体である。
【０４４９】
ある実施態様において、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、ＮＫＧ２ＡとそのリガンドＨＬＡ−Ｅの相互作用を遮断し、抗腫瘍免疫応答を活性化させるヒトモノクローナル抗体であるＢＭＳ−９８６３１５であり得る。ある実施態様において、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞および／または腫瘍浸潤免疫細胞を活性化するチェックポイント阻害剤であり得る。ある実施態様において、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、例えば、ＷＯ２００６／０７０２８６(Innate Pharma S.A.; University of Genova)；米国特許８,９９３,３１９(Innate Pharma S.A.; University of Genova)；ＷＯ２００７／０４２５７３(Innate Pharma S/A; Novo Nordisk A/S; University of Genova)；米国特許９,４４７,１８５(Innate Pharma S/A; Novo Nordisk A/S; University of Genova)；ＷＯ２００８／００９５４５(Novo Nordisk A/S)；米国特許８,２０６,７０９；８,９０１,２８３；９,６８３,０４１(Novo Nordisk A/S)；ＷＯ２００９／０９２８０５(Novo Nordisk A/S)；米国特許８,７９６,４２７および９,４２２,３６８(Novo Nordisk A/S)；ＷＯ２０１６／１３４３７１(Ohio State Innovation Foundation)；ＷＯ２０１６／０３２３３４(Janssen)；ＷＯ２０１６／０４１９４７(Innate)；ＷＯ２０１６／０４１９４５(Academisch Ziekenhuis Leiden H.O.D.N. LUMC)；ＷＯ２０１６／０４１９４７(Innate Pharma)；およびＷＯ２０１６／０４１９４５(Innate Pharma)に記載の抗ＮＫＧ２Ａ抗体から選択され得る。
【０４５０】
XI.Ｋ. 抗ＩＣＯＳ抗体
ある実施態様において、第二抗体は抗ＩＣＯＳ抗体であり得る。ＩＣＯＳは、ＣＤ２８−スーパーファミリーのメンバーである免疫チェックポイントタンパク質である。ＩＣＯＳは、Ｔ細胞活性化後Ｔ細胞で発現され、そのリガンド、ＩＣＯＳ−Ｌ(Ｂ７Ｈ２)と結合後、Ｔ細胞活性化を共刺激する、５５〜６０kDa  Ｉ型膜貫通タンパク質である。ＩＣＯＳはまた誘導性Ｔ細胞共刺激分子、ＣＶＩＤ１、ＡＩＬＩＭ、誘導性共刺激分子、ＣＤ２７８、活性化誘導性リンパ球免疫介在性分子およびＣＤ２７８抗原としても知られる。
【０４５１】
ある実施態様において、抗ＩＣＯＳ抗体は、ヒトＩＣＯＳに結合し、刺激するヒト化ＩｇＧモノクローナル抗体である、ＢＭＳ−９８６２２６であり得る。ある実施態様において、抗ＩＣＯＳ抗体は、例えば、ＷＯ２０１６／１５４１７７(Jounce Therapeutics, Inc.)、ＷＯ２００８／１３７９１５(MedImmune)、ＷＯ２０１２／１３１００４(ＩＮＳＥＲＭ、French National Institute of Health and Medical Research)、ＥＰ３１４７２９７(ＩＮＳＥＲＭ、French National Institute of Health and Medical Research)、ＷＯ２０１１／０４１６１３(Memorial Sloan Kettering Cancer Center)、ＥＰ２４８２８４９(Memorial Sloan Kettering Cancer Center)、ＷＯ１９９９／１５５５３(Robert Koch Institute)、米国特許７,２５９,２４７および７,７２２,８７２(Robert Kotch Institute)；ＷＯ１９９８／０３８２１６(Japan Tobacco Inc.)、米国特許７,０４５,６１５；７,１１２,６５５および８,３８９,６９０(Japan Tobacco Inc.)、米国特許９,７３８,７１８および９,７７１,４２４(GlaxoSmithKline)およびＷＯ２０１７／２２０９８８(Kymab Limited)に記載の抗ＩＣＯＳ抗体から選択され得る。
【０４５２】
XI.Ｌ. 抗ＴＩＧＩＴ抗体
ある実施態様において、第二抗体は抗ＴＩＧＩＴ抗体であり得る。ある実施態様において、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＢＭＳ−９８６２０７であり得る。ある実施態様において、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＷＯ２０１６／１０６３０２に記載のクローン２２Ｇ２であり得る。ある実施態様において、抗ＴＩＧＩＴ抗は、ＷＯ２０１７／０５３７４８に記載のＭＴＩＧ７１９２Ａ／ＲＧ６０５８／ＲＯ７０９２２８４またはクローン４.１Ｄ３であり得る。ある実施態様において、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、例えば、ＷＯ２０１６／１０６３０２(Bristol-Myers Squibb Company)およびＷＯ２０１７／０５３７４８(Genentech)に記載の抗ＴＩＧＩＴ抗体から選択され得る。
【０４５３】
XI.Ｍ. さらなる抗癌剤
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を、抗ＩＬ−１０抗体と組み合わせて使用し得る。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を、長時間作用型ＩＬ−１０分子と組み合わせて使用し得る。ある実施態様において、長時間作用型ＩＬ−１０分子は、ＩＬ−１０−Ｆｃ融合分子であり得る。ある実施態様において、長時間作用型ＩＬ−１０分子は、ペグ化ＩＬ−１０、例えばＡＭ００１０(ARMO BioSciences)であり得る。
【０４５４】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を、抗ＩＬ−２抗体と組み合わせて使用し得る。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を、長時間作用型ＩＬ−２分子と組み合わせて使用し得る。ある実施態様において、長時間作用型ＩＬ−２は、ペグ化ＩＬ−２、例えばＮＫＴＲ−２１４(Nektar；ＵＳ８,２５２,２７５、ＷＯ１２／０６５０８６およびＷＯ１５／１２５１５９参照)であり得る。
【０４５５】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を、抗ＶＩＳＴＡ抗体と組み合わせて使用し得る。
【０４５６】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を、抗ＣＤ９６抗体と組み合わせて使用し得る。
【０４５７】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を、抗ＩＬ−８抗体、例えば、ＨｕＭａｘ(登録商標)−ＩＬ８と組み合わせて使用し得る。
【０４５８】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を、抗ＴＧＦβ抗体と組み合わせて使用し得る。
【０４５９】
ある他の実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を、抗Ｂ７−Ｈ４抗体と組み合わせて使用し得る。ある実施態様において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、国際公開ＷＯ／２００９／０７３５３３に開示の抗Ｂ７−Ｈ４である。
【０４６０】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を、抗Ｆａｓリガンド抗体と組み合わせて使用し得る。ある実施態様において、抗Ｆａｓリガンド抗体は、国際公開ＷＯ／２００９／０７３５３３に開示の抗Ｆａｓリガンドである。
【０４６１】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を、抗ＣＸＣＲ４抗体と組み合わせて使用し得る。ある実施態様において、抗ＣＸＣＲ４抗体は、米国公開２０１４／０３２２２０８(例えば、ウロクプルマブ(ＢＭＳ−９３６５６４))に開示の抗ＣＸＣＲ４である。
【０４６２】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を、抗メソセリン抗体と組み合わせて使用し得る。ある実施態様において、抗メソセリン抗体は、米国特許８,３９９,６２３に開示の抗メソセリンである。
【０４６３】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を、抗ＨＥＲ２抗体と組み合わせて使用し得る。ある実施態様において、抗ＨＥＲ２抗体はハーセプチン(米国特許５,８２１,３３７)、トラスツズマブまたはAdo-トラスツズマブ・エムタンシン(Kadcyla、例えば、ＷＯ／２００１／０００２４４)である。
【０４６４】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を、抗ＣＤ２７抗体と組み合わせて使用し得る。ある実施態様において、抗ＣＤ−２７抗体は、例えば、米国特許９,１６９,３２５に開示の、ヒトＣＤ２７アゴニストであるヒトＩｇＧ１抗体である、バルリルマブ(「ＣＤＸ−１１２７」および「１Ｆ５」としても知られる)である。
【０４６５】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を、抗ＣＤ７３抗体と組み合わせて使用し得る。ある実施態様において、抗ＣＤ７３抗体はＣＤ７３.４.ＩｇＧ２Ｃ２１９Ｓ.ＩｇＧ１.１ｆである。
【０４６６】
ある実施態様において、第二治療は、化学療法剤の投与を含む。ある実施態様において、化学療法剤は、腫瘍細胞でＭＩＣＡ／Ｂ発現を誘発する。ある実施態様において、化学療法剤は、プロテアソーム阻害剤、免疫調節性薬物(ＩＭｉＤ)、Ｂｅｔ阻害剤およびこれらの何れかの組み合わせから選択される。ある実施態様において、プロテアソーム阻害剤は、ボルテゾミブ、イキサゾミブ、カルフィルゾミブ、オプロゾミブおよびマリゾミブから選択される。ある実施態様において、プロテアソーム阻害剤はボルテゾミブを含む。
【０４６７】
ある実施態様において、第二治療は、放射線療法を含む。同分野で知られるあらゆる放射線療法を第二治療として使用できる。
【０４６８】
ある実施態様において、第二治療は、自然免疫細胞を活性化する薬剤の投与を含む。ある実施態様において、自然免疫細胞を活性化する薬剤はＮＬＲＰ３アゴニストを含む。ある実施態様において、ＮＬＲＰ３アゴニストは、尿酸ナトリウム水和物(ＭＳＵ)および／またはワクチンアジュバントアルムを含む。ある実施態様において、自然免疫細胞を活性化する薬剤は、ｔｏｌｌ様受容体７(ＴＬＲ７)アゴニストである。ある実施態様において、ＴＬＲ７アゴニストは、イミキモド(Ｒ８３７)、ＧＳ−９６２０(Tsai et al., J. Virology doi:10.1128/JVI.02166-16 (Feb. 8, 2017)参照)またはＮＲ−２３３６(MIl10yl Biotec)またはこれらの何れかの組み合わせを含む。
【０４６９】
ある実施態様において、第二治療は、ナチュラルキラー(ＮＫ)細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞または両者の生存を増強する薬剤の投与を含む。ある実施態様において、薬剤は、ＩＬ−２を含む。ある実施態様において、薬剤は、ペグ化ＩＬ−２を含む。
【０４７０】
ある実施態様において、第二治療は、ドキソルビシン(アドリアマイシン(登録商標))、シスプラチン、カルボプラチン、硫酸ブレオマイシン、カルムスチン、クロラムブシル(LEUKERAN(登録商標))、シクロホスファミド(シトキサン(登録商標)；NEOSAR(登録商標))、レナリドマイド(レブラミド(登録商標))、ボルテゾミブ(ベルケイド(登録商標))、デキサメサゾン、ミトキサントロン、エトポシド、シタラビン、ベンダムスチン(TREANDA(登録商標))、リツキシマブ(リツキサン(登録商標))、イホスファミド、ビンクリスチン(オンコビン(登録商標))、フルダラビン(フルダラ(登録商標))、サリドマイド(サロミド(登録商標))、アレムツズマブ(キャンパス(登録商標))、オファツムマブ(アーゼラ(登録商標))、エベロリムス(アフィニトール(登録商標)、ZORTRESS(登録商標))、カルフィルゾミブ(カイプロリスTM)およびこれらの何れかの組み合わせから選択される薬剤の投与を含む。
【０４７１】
XI.Ｎ. 癌
抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、癌を有する患者における癌性細胞に対する免疫応答を増強し得る。癌を有する対象を処置するための方法であって、対象が処置される、例えば、その結果、癌性腫瘍の成長が阻害もしくは低減される、および／または腫瘍が退縮する、および／または生存期間が延長されるように、対象に、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を投与することを含む、方法が、本明細書において提供される。抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を単独で使用して、癌性腫瘍の成長を阻害することができる。あるいは、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、下記のとおり、別の薬剤、例えば、別の免疫原性剤、標準的癌処置または別の抗体と共に使用することができる。
【０４７２】
したがって、ここに提供されるのは、対象において、例えば、腫瘍細胞の成長を阻害することによって、癌を処置する方法であって、対象に、治療有効量の、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体、例えば、野生型ＩｇＧ定常領域または低減されたエフェクター機能を有する定常領域バリアント、例えば、ＩｇＧ１.１またはＩｇＧ１.３を有するＭＩＣＡ.３６、ＭＩＣＡ.５２、ＭＩＣＡ.５４、ＭＩＣＡ.２および７１Ｃ２またはその抗原結合部分を投与することを含む、方法である。抗体は、ヒト抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体(例えば、ここに記載するヒト抗ヒトＭＩＣＡ／Ｂの何れか)であり得る。本開示の抗体を使用して成長を阻害することができる癌には、典型的に免疫療法に応答性である癌および典型的に免疫療法に応答性でないものが含まれる。処置することができる癌にはまた、ＴＩＭ３陽性癌も含まれる。癌は、固形腫瘍または血液の悪性腫瘍(液性腫瘍)を伴う癌であってもよい。治療のための癌の非限定的例は、扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、扁平非小細胞肺癌(ＮＳＣＬＣ)および非扁平ＮＳＣＬＣ、神経膠腫、胃腸癌、腎癌(例えば、明細胞癌)、卵巣癌、肝臓癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌(例えば、腎細胞癌(ＲＣＣ))、前立腺癌(例えば、ホルモン難治性前立腺腺癌)、甲状腺癌、神経芽細胞腫、膵臓癌、神経膠芽腫(神経膠芽腫多形)、子宮頸癌、胃癌、膀胱癌、肝細胞腫、乳癌、結腸癌腫および頭頸部癌(または癌腫)、胃体癌、生殖細胞腫瘍、小児肉腫、副鼻腔ナチュラルキラー、黒色腫(例えば、皮膚または眼球内悪性黒色腫などの転移性悪性黒色腫)、骨癌、皮膚癌、子宮癌、肛門部癌、精巣癌、卵管癌腫、子宮内膜癌腫、子宮頸部癌腫、膣癌腫、外陰部癌腫、食道癌、小腸癌、内分泌系癌、上皮小体腺癌、副腎癌、柔組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、直腸癌、小児固形腫瘍、尿管癌、腎盂癌腫、中枢神経系(ＣＮＳ)新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳癌、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、アスベストによって誘導されるものを含む環境誘導性癌、ウイルス関連癌またはウイルス起源の癌(例えば、ヒトパピローマウイルス(ＨＰＶ)関連もしくは起源の腫瘍)およびこれらの癌の何らかの組み合わせを含む。
【０４７３】
処置のための、癌の非限定的例は、２種の主要な血液細胞系統の何れか、すなわち、骨髄系細胞株(顆粒球、赤血球、血小板、マクロファージおよび肥満細胞を産生する)またはリンパ球系細胞株(Ｂ、Ｔ、ＮＫおよび形質細胞を産生する)に由来する血液悪性腫瘍、例えば、すべての種類の白血病、リンパ腫および骨髄腫、例えば、急性白血病(ＡＬＬ)、急性骨髄性白血病(ＡＭＬ)、慢性リンパ性白血病(ＣＬＬ)および慢性骨髄性白血病(ＣＭＬ)、未分化ＡＭＬ(ＭＯ)、骨髄芽球性白血病(Ｍ１)、骨髄芽球性白血病(Ｍ２；細胞成熟を伴う)、前骨髄球性白血病(Ｍ３またはＭ３変異体[Ｍ３Ｖ])、骨髄単球性白血病(Ｍ４または好酸球増加症を伴うＭ４変異体[Ｍ４Ｅ])、単球性白血病(Ｍ５)、赤白血病(Ｍ６)、巨核芽球性白血病(Ｍ７)、孤立顆粒球性肉腫および緑色腫などの急性、慢性、リンパ性および／または骨髄性白血病；ホジキンリンパ腫(ＨＬ)、非ホジキンリンパ腫(ＮＨＬ)、Ｂ細胞血液悪性腫瘍、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、単球様Ｂ細胞リンパ腫、粘膜関連リンパ球系組織(ＭＡＬＴ)リンパ腫、未分化(例えば、Ｋｉ  １＋)大細胞型リンパ腫、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病、マントル細胞リンパ腫、血管免疫芽細胞性Ｔ細胞リンパ腫、血管中心性リンパ腫、腸管Ｔ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、前駆体Ｔリンパ芽球性リンパ腫、Ｔリンパ芽球性およびリンパ腫／白血病(Ｔ−Ｌｂｌｙ／Ｔ−ＡＬＬ)、末梢Ｔ細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、移植後リンパ増殖性障害、真性組織球性リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫(ＬＢＬ)、リンパ球系統の造血器腫瘍、急性リンパ性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性組織球性リンパ腫(ＤＨＬ)、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、前駆体Ｂリンパ芽球性リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫(ＣＴＬＣ)(菌状息肉症またはセザリー症候群とも呼ばれる)およびワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症を伴うリンパ形質細胞性リンパ腫(ＬＰＬ)などのリンパ腫；ＩｇＧ骨髄腫、軽鎖骨髄腫、非分泌性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫(低悪性度骨髄腫とも呼ばれる)、孤立性形質細胞腫および多発性骨髄腫、慢性リンパ性白血病(ＣＬＬ)、ヘアリー細胞リンパ腫などの骨髄腫；骨髄系統の造血器腫瘍、線維肉腫および横紋筋肉腫を含む間葉系起源の腫瘍；セミノーマ、奇形癌腫、星状細胞腫、シュワン腫を含めた中枢および末梢神経の腫瘍；線維肉腫、横紋筋肉腫および骨肉腫を含む間葉系起源の腫瘍；ならびに黒色腫、色素性乾皮症、ケラトアカントーマ、セミノーマ、甲状腺濾胞性癌および奇形癌腫を含めた他の腫瘍、リンパ球系統の造血器腫瘍、例えば、それだけには限らないが、小細胞および大脳様細胞型を含めたＴ前リンパ球性白血病(Ｔ−ＰＬＬ)などのＴ細胞障害を含むＴ細胞およびＢ細胞腫瘍；Ｔ細胞型の大顆粒リンパ球性白血病(ＬＧＬ)；ａ／ｄ  Ｔ−ＮＨＬ肝脾リンパ腫；末梢／成熟Ｔ細胞リンパ腫(多形性および免疫芽球性亜種)；血管中心性(鼻腔の)Ｔ細胞リンパ腫およびこれら癌の何らかの組合せを含む。
【０４７４】
ここに記載する方法はまた、転移性癌、切除不能な難治性癌(例えば、遮断性ＣＴＬＡ−４またはＰＤ−１抗体を用いる、例えば、これまでの免疫療法に対して難治性の癌)および／または再発性癌の治療のために使用し得る。
【０４７５】
ある実施態様において、対象は、非小細胞肺癌(ＮＳＣＬＣ)、頭頸部扁平上皮細胞癌(ＨＮＳＣＣ)、黒色腫、膀胱癌、膵臓癌、胃癌、結腸癌、腎臓細胞癌(ＲＣＣ)、小細胞肺癌(ＳＣＬＣ)、中皮腫、肝細胞癌、前立腺癌、多発性骨髄腫から選択される癌およびこれら癌の組み合わせを有する。
【０４７６】
ある実施態様において、対象は、非小細胞肺癌(ＮＳＣＬＣ)、頭頸部扁平上皮細胞癌(ＨＮＳＣＣ)、黒色腫、膀胱癌、膵臓癌、胃癌、結腸癌から選択される癌およびこれら癌の組み合わせを有する。
【０４７７】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を、以前の処置、例えば、腫瘍免疫療法剤もしくは免疫療法薬を用いた以前の処置に対して不適切な応答を示したかもしくはその後進行した癌を有する患者に、または不応性もしくは耐性、本質的に不応性もしくは耐性の何れかである(例えば、ＰＤ−１経路アンタゴニストに対して不応性である)癌を有する患者に、または耐性もしくは不応性状態が獲得された場合に、投与する。例えば、第１の治療に対して応答性でないかもしくは十分に応答性でない対象、または処置後、例えば、抗ＰＤ−１での処置後に、疾患の進行が見られる対象を、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体単独または他の治療(例えば、抗ＰＤ−１治療)と組み合わせた投与によって、処置することができる。
【０４７８】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を、腫瘍免疫療法剤、例えば、ＰＤ−１経路アンタゴニストを先に受けて(すなわち、処置されて)いない患者に投与する。
【０４７９】
ある実施態様において、対象における癌を処置する方法は、まず、対象が、ＭＩＣＡ／Ｂ陽性である、例えば、ＭＩＣＡ／Ｂを発現する腫瘍細胞を有するかどうかを判定すること、ならびに対象がＭＩＣＡ／Ｂ陽性癌細胞を有する場合、対象に、例えば、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を投与することを含む。癌を有する対象を、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体で処置する方法は、ＴＩＭ３を発現する癌細胞を有する対象に、治療有効量のＴＩＭ３抗体を投与することを含み得る。またここに提供されるのは、対象が、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体での処置に応答するかどうかを予測するための方法であって、患者の癌におけるＭＩＣＡ／Ｂのレベルを判定することを含み、対象の癌が、ＭＩＣＡ／Ｂ陽性であるならば、対象は、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体での処置に応答する可能性が高いものである、方法である。
【０４８０】
ある実施態様において、対象における癌を処置する方法は、まず、対象が、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−１陽性である、例えば、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−１を発現する腫瘍細胞またはＴＩＬを有するかどうかを判定すること、ならびに対象がＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−１陽性癌細胞またはＴＩＬ細胞を有する場合、対象に、例えば、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体(および適宜ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１アンタゴニスト)を投与することを含む。癌を有する対象を、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体(および適宜ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１アンタゴニスト)で処置する方法は、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１を発現する癌細胞またはＴＩＬ細胞を有する対象に、治療上有効な量のＭＩＣＡ／Ｂ抗体(および適宜ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−１アンタゴニスト)を投与することを含み得る。またここに提供されるのは、対象が、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体(および所望によりＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１アンタゴニスト)での処置に応答するかどうかを予測するための方法であって、患者の癌またはＴＩＬ細胞におけるＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−１のレベルを判定することを含み、対象の癌またはＴＩＬ細胞が、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−１陽性であるならば、対象は、ＭＩＣＡ／Ｂ抗体(および所望によりＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１アンタゴニスト)での処置に応答する可能性が高いものである、方法である。
【０４８１】
抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を、標準的治療処置と投与し得る。抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を、維持療法、例えば、腫瘍発生または再発の予防を意図する治療として投与し得る。
【０４８２】
抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を、他の処置、例えば、放射線、手術または化学療法と共に投与し得る。例えば、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体補助的治療を、微小転移が存在し得る危険性がある場合、および／または再発の危険性を低減するために、投与し得る。
【０４８３】
抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、単剤療法として投与されてもよく、唯一の免疫刺激療法として投与されてもよい。ＭＩＣＡ／Ｂに対する抗体、例えば、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体はまた、免疫原性剤、例えば、癌性細胞、精製された腫瘍抗原(組換えタンパク質、ペプチドおよび炭水化物分子を含む)、細胞ならびに免疫刺激性サイトカインをコードする遺伝子をトランスフェクトした細胞と組み合わせることができる(He et al (2004) J. Immunol. 173:4919-28)。使用できる腫瘍ワクチンの非限定的例は、ｇｐ１００、ＭＡＧＥ抗原、Ｔｒｐ−２、ＭＡＲＴ１および／またはチロシナーゼのペプチドなどの黒色腫抗原のペプチドまたはサイトカインＧＭ−ＣＳＦを発現するようにトランスフェクトされた腫瘍細胞を含む(さらに下に記載)。
【０４８４】
ヒトにおいて、黒色腫などの一部腫瘍は、免疫原性であることが示されている。血漿での可溶性ＭＩＣＡ／Ｂレベル低減によりＴ細胞活性化閾値を低下させることにより、宿主における腫瘍応答が活性化され得て、非免疫原性腫瘍または免疫原性が限定された腫瘍の処置が可能となる。
【０４８５】
抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体、例えば、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、ワクチン接種プロトコールと組み合わせることができる。腫瘍に対するワクチン接種のための多数の実験的戦略が考案されている(Rosenberg, S., 2000, Development of Cancer Vaccines, ASCO Educational Book Spring: 60-62; Logothetis, C, 2000, ASCO Educational Book Spring: 300-302; Khayat, D. 2000, ASCO Educational Book Spring: 414-428; Foon, K. 2000, ASCO Educational Book Spring: 730-738参照; DeVita et al. (eds.), 1997, Cancer: Principles and Practice of Oncology, Fifth Edition中のRestifo, N. and Sznol, M., Cancer Vaccines, Ch. 61, pp. 3023-3043も参照)。これらの戦略の１つでは、ワクチンは、自己または同種腫瘍細胞を使用して調製される。これらの細胞性ワクチンは、腫瘍細胞がＧＭ−ＣＳＦを発現するよう形質導入されるときに最も有効であることが判明している。ＧＭ−ＣＳＦは、腫瘍ワクチン接種のための抗原提示の強力なアクチベーターであることが判明している(Dranoff et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90: 3539-43)。
【０４８６】
種々の腫瘍における遺伝子発現および大規模遺伝子発現パターンの研究は、いわゆる腫瘍特異的抗原の定義につながった(Rosenberg, S A (1999) Immunity 10: 281-7)。多くの場合には、これらの腫瘍特異的抗原は、腫瘍において、また腫瘍が生じた細胞において発現される分化抗原、例えば、メラノサイト抗原ｇｐ１００、ＭＡＧＥ抗原およびＴｒｐ−２である。より重要なことに、これらの抗原の多くは、宿主における腫瘍特異的Ｔ細胞の標的であることが証明され得る。これらのタンパク質に対する免疫応答を生じさせるために、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体処置は、腫瘍において発現される組換えタンパク質および／またはペプチドの収集物と共に使用できる。これらのタンパク質は、正常には、自己抗原として免疫系によって見なされ、したがって、それらに対して寛容である。腫瘍抗原は、染色体のテロメアの合成に必要であり、ヒト癌の８５％超において、および限定された数の体細胞組織のみにおいて発現されるタンパク質テロメラーゼを含み得る(Kim et al. (1994) Science 266: 2011-2013)。腫瘍抗原はまた、タンパク質配列を変更するか、または２種の無関係の配列間の融合タンパク質(すなわち、フィラデルフィア染色体中のｂｃｒ−ａｂｌ)もしくはＢ細胞腫瘍からのイディオタイプを作製する体細胞突然変異のために癌細胞において発現される「ネオ抗原」であり得る。
【０４８７】
他の腫瘍ワクチンは、ヒトパピローマウイルス(ＨＰＶ)、肝炎ウイルス(ＨＢＶおよびＨＣＶ)およびカポジヘルペス肉腫ウイルス(ＫＨＳＶ)のようなヒト癌に関わるウイルスに由来するタンパク質を含み得る。抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体投与と共に使用できる腫瘍特異的抗原の別の形態として、腫瘍組織自体から単離された精製された熱ショックタンパク質(ＨＳＰ)がある。これらの熱ショックタンパク質は、腫瘍細胞に由来するタンパク質のフラグメントを含有し、これらのＨＳＰは、腫瘍免疫を誘発するための抗原提示細胞への送達で高度に効率的である(Suot & Srivastava (1995) Science 269:1585-1588; Tamura et al. (1997) Science 278:117-120)。
【０４８８】
樹状細胞(ＤＣ)は、抗原特異的応答を発動するために使用できる強力な抗原提示細胞である。ＤＣは、エキソビボで生産され、種々のタンパク質およびペプチド抗原ならびに腫瘍細胞抽出物を搭載させることができる(Nestle et al. (1998) Nature Medicine 4: 328-332)。ＤＣはまた、同様にこれらの腫瘍抗原を発現するよう遺伝的手段によって形質導入できる。ＤＣはまた、免疫化を目的として腫瘍細胞と直接融合されている(Kugler et al. (2000) Nature Medicine 6:332-336)。ワクチン化の方法として、より強力な抗腫瘍応答を発現するように、ＤＣ免疫化を、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体投与と効率的に組み合わせることができる。
【０４８９】
抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体投与また、標準的癌治療(例えば、外科手術、放射線および化学療法)と組み合わせることができる。抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体投与は、化学療法治療計画と効率的に組み合わせることができる。これらの場合には、投与される化学療法試薬の用量を低減することが可能であり得る(Mokyr et al. (1998) Cancer Research 58: 5301-5304)。このような組合せの一例として、黒色腫の治療のためのデカルバジン(decarbazine)と組み合わせた抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体がある。このような組合せの他の例として、黒色腫の治療のためのインターロイキン−２(ＩＬ−２)、例えばペグ化ＩＬ−２と組み合わせた抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体がある。抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体および化学療法の組合せ使用の背景にある科学的論拠は、ほとんどの化学療法薬化合物の細胞傷害性作用の結果である細胞死が、抗原提示経路における腫瘍抗原のレベルの増大をもたらすに違いないということである。細胞死による、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体との相乗作用をもたらし得る他の併用治療として、放射線照射、手術およびホルモン欠乏がある。これらのプロトコールの各々は、宿主において腫瘍抗原の供給源を作製する。血管新生阻害剤もまた、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体投与と組み合わせることができる。血管新生の阻害は、腫瘍細胞死につながり、これが、腫瘍抗原を宿主抗原提示経路に供給し得る。
【０４９０】
ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体はまた、腫瘍細胞に対するＦｃαまたはＦｃγ受容体を発現するエフェクター細胞を標的とする二重特異性抗体と組み合わせても使用できる(例えば、米国特許５,９２２,８４５および５,８３７,２４３参照)。２種の別個の抗原を標的とするよう二重特異性抗体を使用できる。例えば、抗Ｆｃ受容体／抗腫瘍抗原(例えば、Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ)二重特異性抗体が、腫瘍の部位に対するマクロファージを標的とするために使用されている。この標的化は、腫瘍特異的応答を効率的に活性化し得る。これらの応答のＴ細胞アームは、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の作用によって増大される。あるいは、抗原は、腫瘍抗原および樹状細胞特異的細胞表面マーカーと結合する二重特異性抗体の使用によってＤＣに直接送達され得る。
【０４９１】
腫瘍は、多様な機序によって宿主免疫監視を回避する。これらの機序のうち多くは、腫瘍によって発現され、免疫抑制であるタンパク質の不活性化によって克服され得る。これらは、中でも、ＴＧＦ−β(Kehrl et al. (1986) J. Exp. Med. 163: 1037-1050)、ＩＬ−１０(Howard & O'Garra (1992) Immunology Today 13: 198-200)およびＦａｓリガンド(Hahne et al. (1996) Science 274: 1363-1365)を含む。これらの実体の各々に対する抗体は、免疫抑制剤の効果に対抗し、宿主による腫瘍免疫応答に有利に働くように、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体と組み合わせて使用できる。
【０４９２】
宿主免疫応答性を活性化する他の抗体を、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体と組み合わせて使用できる。これらは、ＤＣ機能および抗原提示を活性化する樹状細胞の表面上の分子を含む。抗ＣＤ４０抗体は、効率的に、Ｔ細胞ヘルパー活性の代わりとなることができ(Ridge et al. (1998) Nature 393: 474-478)、抗ＴＩＭ３抗体と共に使用できる。ＣＴＬＡ−４(例えば、米国特許５,８１１,０９７)、ＯＸ−４０(Weinberg et al. (2000) Immunol 164: 2160-2169)、４−１ＢＢ(Melero et al. (1997) Nature Medicine 3: 682-685 (1997)およびＩＣＯＳ(Hutloff et al. (1999) Nature 397: 262-266)などのＴ細胞共刺激分子に対する抗体を活性化することはまた、Ｔ細胞活性化のレベルの増大を提供し得る。ＰＤ１またはＰＤ−Ｌ１の阻害剤もまた、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体と共に使用してもよい。他の組合せは、本明細書の別の箇所に提供される。
【０４９３】
骨髄移植は現在、造血起源の種々の腫瘍を処置するために使用されている。この処置の結果として、移植片対宿主病があるが、治療的利点が、移植片対腫瘍の応答から得ることができる。ＭＩＣＡ／Ｂ阻害を使用して、ドナーから移植された腫瘍特異的Ｔ細胞の有効性を増大することができる。
【０４９４】
抗原特異的Ｔ細胞のエキソビボ活性化および拡大、および腫瘍に対する抗原特異的Ｔ細胞を刺激するのための、これらの細胞のレシピエントへの養子移植を含むいくつかの実験治療プロトコールも存在する(Greenberg & RiddellScience 285: 546-51)。これらの方法はまた、ＣＭＶなどの感染性病原体に対するＴ細胞応答を活性化するよう使用できる。抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の存在下でのエキソビボ活性化は、養子導入されたＴ細胞の頻度および活性を増大することができる。
【０４９５】
XI.Ｏ. 感染症
ここに記載する方法は、特定の毒素または病原体に曝露された患者を治療するためにも使用され得る。したがって、ここに記載する別の態様は、対象が感染症について処置されるように、対象に抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を投与することを含む、対象において感染症を治療する方法を提供する。
【０４９６】
上記の腫瘍へのその適用と同様に、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を、単独で、またはアジュバントとして、ワクチンと組み合わせて投与して、病原体、毒素および自己抗原に対する免疫応答を刺激することができる。この治療的アプローチが特に有用であり得る病原体の例は、現在有効なワクチンが存在しない病原体、または従来的なワクチンが、完全な有効性に満たない病原体を含む。これらには、ＨＩＶ、肝炎(Ａ、ＢおよびＣ)、インフルエンザ、ヘルペス、ジアルジア症、マラリア、リーシュマニア症、黄色ブドウ球菌、シュードモナス・エルギノーザが挙げられるが、これらに限定されない。抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、感染の過程にわたって変更された抗原を提示する、ＨＩＶなどの作用因子による確立された感染症に対して有用であり得る。これらの新規なエピトープは、抗ヒトＭＩＣＡ／Ｂ抗体投与の時点では外来として認識され、したがって、強力なＴ細胞応答を誘起する。
【０４９７】
XI.Ｐ 組み合わせ治療
上記に提供される組み合わせ治療に加えて、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体、例えば、ここに記載するものはまた、例えば、以下に記載されとおり、癌を処置するための組み合わせ治療において使用できる。
【０４９８】
ここに提供されるのは、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を、１以上のさらなる薬剤、例えば、免疫応答を刺激するのに有効である小分子薬、抗体またはその抗原結合部分と同時投与し、それによって、対象において免疫応答をさらに増強、刺激または上方制御する組み合わせ治療の方法である。
【０４９９】
一般に、例えば、ここに記載する、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、(ｉ)刺激性(例えば、共刺激性)分子(例えば、受容体もしくはリガンド)のアゴニストならびに／または(ｉｉ)免疫細胞、例えば、Ｔ細胞上の阻害性シグナルもしくは分子(例えば、受容体もしくはリガンド)のアンタゴニストと組み合わせることができ、これらの何れも、免疫応答、例えば、抗原特異的Ｔ細胞応答の増幅をもたらす。ある態様では、腫瘍免疫療法剤は、(ｉ)刺激性(共刺激性を含む)分子(例えば、受容体もしくはリガンド)のアゴニスト、または(ｉｉ)細胞、例えば、Ｔ細胞活性化を阻害するものまたは自然免疫に関与するもの、例えば、ＮＫ細胞上の阻害性(共阻害性を含む)分子(例えば、受容体もしくはリガンド)のアンタゴニストであり、ここで、腫瘍免疫療法剤は、自然免疫を増強する。そのような腫瘍免疫療法剤は、しばしば、免疫チェックポイント制御因子、例えば、免疫チェックポイント阻害剤または免疫チェックポイント刺激剤と称される。
【０５００】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、免疫グロブリンスーパーファミリー(ＩｇＳＦ)のメンバーである、刺激性分子または阻害性分子を標的とする薬剤と共に投与される。例えば、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体、例えば、ここに記載するものは、免疫応答を増大させるために、ＩｇＳＦファミリーのメンバーを標的とする薬剤と共に、対象に投与され得る。例えば、抗ＴＩＭ３抗体は、Ｂ７−１、Ｂ７−２、Ｂ７−Ｈ１(ＰＤ−Ｌ１)、Ｂ７−ＤＣ(ＰＤ−Ｌ２)、Ｂ７−Ｈ２(ＩＣＯＳ−Ｌ)、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ５(ＶＩＳＴＡ)およびＢ７−Ｈ６を含む、膜結合型リガンドのＢ７ファミリーのメンバー、またはＢ７ファミリーメンバーと特異的に結合する共刺激性もしくは共阻害性受容体もしくはリガンドを標的とする(もしくはそれと特異的に結合する)、薬剤と共に、投与され得る。
【０５０１】
抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体はまた、分子のＴＮＦおよびＴＮＦＲファミリーのメンバー(リガンドまたは受容体)、例えば、ＣＤ４０およびＣＤ４０Ｌ、ＯＸ−４０、ＯＸ−４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、４−ｌＢＢＬ、ＣＤ１３７、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２−Ｌ、ＴＲＡＩＬＲ１／ＤＲ４、ＴＲＡＩＬＲ２／ＤＲ５、ＴＲＡＩＬＲ３、ＴＲＡＩＬＲ４、ＯＰＧ、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ、ＴＷＥＡＫＲ／Ｆｎ  １４、ＴＷＥＡＫ、ＢＡＦＦＲ、ＥＤＡＲ、ＸＥＤＡＲ、ＴＡＣＩ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＬＴｐＲ、ＬＩＧＨＴ、ＤｃＲ３、ＨＶＥＭ、ＶＥＧＩ／ＴＬ１Ａ、ＴＲＡＭＰ／ＤＲ３、ＥＤＡ１、ＥＤＡ２、ＴＮＦＲ１、リンホトキシンａ／ＴＮＦｐ、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦａ、ＬＴｐＲ、リンホトキシンａ１β２、ＦＡＳ、ＦＡＳＬ、ＲＥＬＴ、ＤＲ６、ＴＲＯＹならびにＮＧＦＲを標的とする薬剤と共に、投与され得る(例えば、Tansey (2009) Drug Discovery Today 00: 1参照)。
【０５０２】
Ｔ細胞応答は、例えば、ＭＩＣＡ.３６、ＭＩＣＡ.５２、ＭＩＣＡ.５４、ＭＩＣＡ.２および７１Ｃ２の可変領域を有する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体と、以下の薬剤の１つ以上との組合せによって、刺激され得る。
【０５０３】
(１)ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＧＩＴＲ、およびＬＡＧ−３、ガレクチン９、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＢＴＬＡ、ＣＤ６９、ガレクチン−１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１３、ＧＰＲ５６、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、２Ｂ４、ＣＤ４８、ＧＡＲＰ、ＰＤ１Ｈ、ＬＡＩＲ１、ＴＩＭ−１、ＴＩＭ−３およびＴＩＭ−４など、Ｔ細胞活性化を阻害するタンパク質(例えば、免疫チェックポイント阻害因子)のアンタゴニスト(阻害剤もしくは遮断剤)および／または
【０５０４】
(２)Ｂ７−１、Ｂ７−２、ＣＤ２８、４−１ＢＢ(ＣＤ１３７)、４−１ＢＢＬ、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＤＲ３およびＣＤ２８Ｈなど、Ｔ細胞活性化を刺激するタンパク質のアゴニスト。
【０５０５】
上記のタンパク質の１個を調節し、癌を治療するために抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体、例えば、ここに記載するものと組み合わせることができる例示的薬剤は、ヤーボイ(登録商標)(イピリムマブ)またはトレメリムマブ(ＣＴＬＡ−４に対する)、ガリキシマブ(Ｂ７.１に対する)、ＢＭＳ−９３６５５８(ＰＤ−１に対する)、ＭＫ−３４７５(ＰＤ−１に対する)、アテゾリズマブ(テセントリク(登録商標))、ＡＭＰ２２４(Ｂ７ＤＣに対する)、ＢＭＳ−９３６５５９(Ｂ７−Ｈ１に対する)、ＭＰＤＬ３２８０Ａ(Ｂ７−Ｈ１に対する)、ＭＥＤＩ−５７０(ＩＣＯＳに対する)、ＡＭＧ５５７(Ｂ７Ｈ２に対する)、ＭＧＡ２７１(Ｂ７Ｈ３に対する)、ＩＭＰ３２１(ＬＡＧ−３に対する)、ＢＭＳ−６６３５１３(ＣＤ１３７に対する)、ＰＦ−０５０８２５６６(ＣＤ１３７に対する)、ＣＤＸ−１１２７(ＣＤ２７に対する)、抗ＯＸ−４０(Providence Health Services)、ｈｕＭＡｂＯＸ４０Ｌ(ＯＸ４０Ｌに対する)、アタシセプト(ＴＡＣＩに対する)、ＣＰ−８７０８９３(ＣＤ４０に対する)、ルカツムマブ(ＣＤ４０に対する)、ダセツズマブ(ＣＤ４０に対する)、ムロモナブ−ＣＤ３(ＣＤ３に対する)、抗ＧＩＴＲ抗体ＭＫ４１６６、ＴＲＸ５１８、Ｍｅｄｉ１８７３、ＩＮＢＲＸ−１１０、ＬＫ２−１４５、ＧＷＮ−３２３、ＧＩＴＲＬ−Ｆｃ、またはこれらの何れかの組合せを含む。
【０５０６】
癌の治療のために抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体と組み合わせることができる他の分子は、ＮＫ細胞上の阻害性受容体のアンタゴニストまたはＮＫ細胞上の活性化受容体のアゴニストを含む。例えば、抗ＴＩＭ３抗体を、ＫＩＲのアンタゴニスト(例えば、リリルマブ)と組み合わせることができる。
【０５０７】
Ｔ細胞活性化は、可溶性サイトカインによっても制御され、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、Ｔ細胞活性化を阻害するサイトカインのアンタゴニストまたはＴ細胞活性化を刺激するサイトカインのアゴニストと共に、例えば癌を有する対象に投与され得る。
【０５０８】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を、(ｉ)Ｔ細胞活性化を阻害する、ＩｇＳＦファミリーもしくはＢ７ファミリーもしくはＴＮＦファミリーのタンパク質のアンタゴニスト(または阻害剤もしくは遮断剤)またはＴ細胞活性化を阻害するサイトカイン(例えば、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−β、ＶＥＧＦ「免疫抑制サイトカイン」)のアンタゴニストおよび／または(ii)免疫応答を刺激するための、例えば、癌などの増殖性疾患を治療するためのＩｇＳＦファミリー、Ｂ７ファミリーもしくはＴＮＦファミリーの、またはＴ細胞活性化を刺激するサイトカインの刺激性受容体のアゴニストと組み合わせて使用できる。
【０５０９】
組み合わせ治療のためのさらに他の薬剤は、マクロファージまたは単球を阻害または枯渇させる薬剤、それだけには限らないが、ＲＧ７１５５(ＷＯ１１／７００２４、ＷＯ１１／１０７５５３、ＷＯ１１／１３１４０７、ＷＯ１３／８７６９９、ＷＯ１３／１１９７１６、ＷＯ１３／１３２０４４)またはＦＰＡ−００８(ＷＯ１１／１４０２４９、ＷＯ１３１６９２６４、ＷＯ１４／０３６３５７)を含むＣＳＦ−１Ｒアンタゴニスト抗体などのＣＳＦ−１Ｒアンタゴニストを含む。
【０５１０】
抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体はまた、ＴＧＦ−βシグナル伝達を阻害する薬剤と共に投与してもよい。
【０５１１】
抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体と組み合わせることができるさらなる薬剤は、腫瘍抗原提示を増強する薬剤、例えば、樹状細胞ワクチン、ＧＭ−ＣＳＦ分泌細胞性ワクチン、ＣｐＧオリゴヌクレオチドおよびイミキモド、または腫瘍細胞の免疫原性を増強する治療(例えば、アントラサイクリン)を含む。
【０５１２】
抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体と組み合わせることができるさらなる他の治療は、Ｔｒｅｇ細胞を枯渇または遮断する治療、例えば、ＣＤ２５に特異的に結合する薬剤を含む。
【０５１３】
抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体と組み合わせることができる別の治療は、インドールアミンジオキシゲナーゼ(ＩＤＯ)、ジオキシゲナーゼ、アルギナーゼまたは一酸化窒素シンテターゼなどの代謝酵素を阻害する治療である。適当なＩＤＯアンタゴニストは、例えば、ＩＮＣＢ−０２４３６０(ＷＯ２００６／１２２１５０、ＷＯ０７／７５５９８、ＷＯ０８／３６６５３、ＷＯ０８／３６６４２)、インドキシモド、ＮＬＧ−９１９(ＷＯ０９／７３６２０、ＷＯ０９／１１５６６５２、ＷＯ１１／５６６５２、ＷＯ１２／１４２２３７)またはＦ００１２８７を含む。
【０５１４】
抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体と共に使用され得る別のクラスの薬剤は、アデノシンの形成を阻害する薬剤、例えばＣＤ７３阻害剤またはアデノシンＡ２Ａ受容体を阻害する薬剤を含む。
【０５１５】
癌の処置のために抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体と組み合わせ得る他の治療は、Ｔ細胞アネルギーまたは疲弊を逆転／予防する治療および腫瘍部位で自然免疫活性化および／または炎症を誘発する治療を含む。
【０５１６】
抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を、１個を超える腫瘍免疫療法剤と組み合わせてもよく、例えば、次の：腫瘍抗原の提示を増強する治療(例えば、樹状細胞ワクチン、ＧＭ−ＣＳＦ分泌細胞性ワクチン、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、イミキモド)；例えば、ＣＴＬＡ−４および／もしくはＰＤ１／ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−Ｌ２経路を阻害するならびに／またはＴｒｅｇもしくは他の免疫抑制細胞を枯渇もしくは遮断することによって、負の免疫制御を阻害する治療；例えば、ＣＤ−１３７、ＯＸ−４０および／もしくはＣＤ４０もしくはＧＩＴＲ経路を刺激するアゴニストならびに／またはＴ細胞エフェクター機能を刺激するアゴニストを用いて、正の免疫調節を刺激する治療；抗腫瘍Ｔ細胞の頻度を全身的に増大させる治療；例えば、ＣＤ２５のアンタゴニスト(例えば、ダクリズマブ)を使用してまたはエキソビボでの抗ＣＤ２５ビーズ枯渇によって腫瘍におけるＴｒｅｇなどのＴｒｅｇを枯渇または阻害する治療；腫瘍における抑制骨髄系細胞の機能に影響を及ぼす治療；腫瘍細胞の免疫原性を増強する治療(例えば、アントラサイクリン)；遺伝子修飾された細胞、例えば、キメラ抗原受容体によって修飾された細胞(ＣＡＲ−Ｔ療法)を含む、養子Ｔ細胞またはＮＫ細胞移入；インドールアミンジオキシゲナーゼ(ＩＤＯ)、ジオキシゲナーゼ、アルギナーゼまたは一酸化窒素シンテターゼなどの代謝酵素を阻害する治療；Ｔ細胞アネルギーまたはＴ細胞消耗を逆転／防止する治療；腫瘍部位における先天免疫活性化および／または炎症を引き起こす治療；免疫刺激サイトカインの投与；あるいは免疫抑制サイトカインの遮断の１個以上など、免疫経路の複数の要素を標的とするコンビナトリアルアプローチと組み合わせてもよい。
【０５１７】
ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、１個以上の、陽性共刺激性受容体をライゲーションするアゴニスト剤、阻害性受容体によるシグナル伝達を減弱する遮断薬、アンタゴニストならびに１個以上の、抗腫瘍Ｔ細胞の頻度を全身性に増大する薬剤、腫瘍微小環境内のそれぞれの免疫抑制経路に克服する(例えば阻害性受容体の関与(例えば、ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１相互作用)を遮断しＴｒｅｇを枯渇または阻害し(例えば、抗ＣＤ２５モノクローナル抗体(例えば、ダクリズマブ)を使用して、またはエキソビボ抗ＣＤ２５ビーズ枯渇によって)、ＩＤＯなどの代謝酵素を阻害するか、またはＴ細胞アネルギーもしくは消耗を逆転させる／防ぐ)薬剤および先天性免疫活性化および／または腫瘍部位での炎症の引き金を引く薬剤と共に使用できる。
【０５１８】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、対象が、ＢＲＡＦ  Ｖ６００突然変異に関して陽性である場合、ＢＲＡＦ阻害剤と共に対象に投与される。
【０５１９】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＮＫＧ２ａ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ１３７、ＫＩＲ、ＴＧＦβ、ＩＬ−１０、ＩＬ−８、ＩＬ−２、Ｂ７−Ｈ４、Ｆａｓリガンド、ＣＸＣＲ４、メソセリン、ＣＤ２７、ＶＩＳＴＡ、ＣＤ９６、ＧＩＴＲまたはこれらの何れかの組み合わせに特異的に結合する抗体と共に対象に投与する。
【０５２０】
ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体および組み合わせ治療を、治療されている適応症(例えば、癌)に対するその特定の有用性について選択される他の周知の療法と共に使用してもよい。ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の組合せを、既知の薬学的に許容される薬剤と逐次使用してもよい。
【０５２１】
例えば、ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体および組み合わせ治療は、放射線照射および／または化学療法、(例えば、カンプトテシン(ＣＰＴ−１１)、５−フルオロウラシル(５−ＦＵ)、シスプラチン、ドキソルビシン、イリノテカン、パクリタキセル、ゲムシタビン、シスプラチン、パクリタキセル、カルボプラチン−パクリタキセル(タキソール)、ドキソルビシン、５−ＦＵまたはカンプトテシン＋ａｐｏ２ｌ／ＴＲＡＩＬ(６Ｘ  ｃｏｍｂｏ)を使用する)、１以上のプロテアソーム阻害剤(例えば、ボルテゾミブまたはＭＧ１３２)、１以上のＢｃｌ−２阻害剤(例えば、ＢＨ３Ｉ−２’(ｂｃｌ−ｘｌ阻害剤)、インドールアミンジオキシゲナーゼ−１(ＩＤＯ１)阻害剤(例えば、ＩＮＣＢ２４３６０、インドキシモド、ＮＬＧ−９１９、またはＦ００１２８７)、ＡＴ−１０１(Ｒ−(−)−ゴシポール誘導体)、ＡＢＴ−２６３(小分子)、ＧＸ−１５−０７０(オバトクラックス(obatoclax))またはＭＣＬ−１(骨髄系白血病細胞分化タンパク質−１)アンタゴニスト)、ｉＡＰ(アポトーシスタンパク質の阻害剤)アンタゴニスト(例えば、ｓｍａｃ７、ｓｍａｃ４、小分子ｓｍａｃミメティック、合成ｓｍａｃペプチド(Fulda et al., Nat Med 2002;8:808-15)、ＩＳＩＳ２３７２２(ＬＹ２１８１３０８)またはＡＥＧ−３５１５６(ＧＥＭ−６４０))、ＨＤＡＣ(ヒストンデアセチラーゼ)阻害剤、抗ＣＤ２０抗体(例えば、リツキシマブ)、血管新生阻害剤(例えば、ベバシズマブ)、ＶＥＧＦおよびＶＥＧＦＲを標的化する抗血管新生剤(例えば、アバスチン)、合成トリテルペノイド(Hyer et al, Cancer Research 2005;65:4799-808参照)、ｃ−ＦＬＩＰ(細胞性ＦＬＩＣＥ阻害性タンパク質)モジュレーター(例えば、ＰＰＡＲｙ(ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ)の天然および合成リガンド、５８０９３５４または５５６９１００)、キナーゼ阻害剤(例えば、ソラフェニブ)、トラスツズマブ、セツキシマブ、テムシロリムス、ラパマイシンおよびテムシロリムスなどのｍＴＯＲ阻害剤、ボルテゾミブ、ＪＡＫ２阻害剤、ＨＳＰ９０阻害剤、ＰＩ３Ｋ−ＡＫＴ阻害剤、レナリドマイド(Lenalildomide)、ＧＳＫ３Ｐ阻害剤、ＩＡＰ阻害剤および／または遺伝毒性薬物などのさらなる治療と組み合わせて(例えば、同時または別個に)使用できる。
【０５２２】
ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体および組み合わせ治療は、１個以上の抗増殖性細胞傷害性薬剤と組み合わせてさらに使用できる。抗増殖性細胞傷害性薬剤として使用してもよい化合物のクラスは、次のものを含むが、これらに限定されない。
【０５２３】
アルキル化剤(限定するものではないが、ナイトロジェンマスタード、エチレンイミン誘導体、アルキルスルホネート、ニトロソ尿素およびトリアゼンを含む)：ウラシルマスタード、クロルメチン、シクロホスファミド(シトキサン(登録商標))ホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ピポブロマン、トリエチレンメラミン、トリエチレンチオホスホラミン、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン、ダカルバジンおよびテモゾロミド。
【０５２４】
代謝拮抗剤(限定するものではないが、葉酸アンタゴニスト、ピリミジン類似体、プリン類似体およびアデノシンデアミナーゼ阻害剤を含む)：メトトレキサート、５−フルオロウラシル、フロクスウリジン、シタラビン、６−メルカププリン、６−チオグアニン、フルダラビンホスフェート、ペントスタチンおよびゲムシタビン。
【０５２５】
当分野で知られる他のマイクロチューブリン分解防止剤に加えて、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体、限定するものではないが、タキサン、パクリタキセル(パクリタキセルは、タキソールTMとして市販されている)、ドセタキセル、ディスコデルモリド(ＤＤＭ)、ジクチオスタチン(ＤＣＴ)、ペロルシド(Peloruside)Ａ、エポチロン、エポチロンＡ、エポチロンＢ、エポチロンＣ、エポチロンＤ、エポチロンＥ、エポチロンＦ、フラノエポチロンＤ、デスオキシエポチロンＢｌ、[１７]−デヒドロデスオキシエポチロンＢ、[１８]デヒドロデスオキシエポチロンＢ、Ｃ１２,１３−シクロプロピル−エポチロンＡ、Ｃ６−Ｃ８架橋エポチロンＡ、トランス−９,１０−デヒドロエポチロンＤ、シス−９,１０−デヒドロエポチロンＤ、１６−デスメチルエポチロンＢ、エポチロンＢＩＯ、ディスコデルモリド(discoderomolide)、パツピロン(patupilone)(ＥＰＯ−９０６)、ＫＯＳ−８６２、ＫＯＳ−１５８４、ＺＫ−ＥＰＯ、ＡＢＪ−７８９、ＸＡＡ２９６Ａ(ディスコデルモリド(discoderomolide))、ＴＺＴ−１０２７(ソブリドチン)、ＩＬＸ−６５１(タシドチン塩酸塩(tasidotin hydrochloride))、ハリコンドリンＢ、エリブリンメシル酸塩(Eribulin mesylate)(Ｅ−７３８９)、ヘミアステリン(ＨＴＩ−２８６)、Ｅ−７９７４、クリプトフィシン、ＬＹ−３５５７０３、マイタンシノイド免疫複合体(ＤＭ−１)、ＭＫＣ−１、ＡＢＴ−７５１、Ｔ１−３８０６７、Ｔ−９００６０７、ＳＢ−７１５９９２(イスピネシブ(ispinesib))、ＳＢ−７４３９２１、ＭＫ−０７３１、ＳＴＡ−５３１２、エリュテロビン、１７β−アセトキシ−２−エトキシ−６−オキソ−Ｂ−ホモ−エストラ−１,３,５(１０)−トリエン−３−オール、シクロストレプチン、イソラウリマリド、ラウリマリド、４−エピ−７−デヒドロキシ−１４,１６−ジデメチル−(＋)−ディスコデルモリドおよびクリプトチロン(cryptothilone)１と組み合わせるための適した抗増殖性薬剤。
【０５２６】
ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を用いる治療と共に、またはそれに先立って異常に増殖性の細胞を静止状態にすることが望ましい場合には、１７ａ−エチニルエストラジオール、ジエチルスチルベストロール、テストステロン、プレドニゾン、フルオキシメステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、テストラクトン、メゲストロールアセテート、メチルプレドニゾロン、メチル−テストステロン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、クロロトリアニセン、ヒドロキシプロゲステロン、アミノグルテチミド、エストラムスチン、メドロキシプロゲステロンアセテート、リュープロリド、フルタミド、トレミフェン、ゾラデックスTM(登録商標)などのホルモンおよびステロイド(合成類似体を含む)も、患者に投与できる。ここに記載する方法または組成物を使用する場合には、鎮吐剤などの、臨床設定において腫瘍成長または転移の調節において使用される他の薬剤も、所望により投与できる。
【０５２７】
ある実施態様において、ここに開示する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体と第二薬剤の組み合わせを、薬学的に許容される担体中の単一組成物として同時にまたは薬学的に許容される担体中の抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体と第二薬剤の別々の組成物で同時に投与できる。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体と第二薬剤の組み合わせを連続的に投与し得る。２剤の投与は、例えば、３０分、６０分、９０分、１２０分、３時間、６時間、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、３日、５日、７日または１週間以上離れた開始時間で、開始してよくまたは第二薬剤の投与を、第一剤が投与された後、例えば、３０分、６０分、９０分、１２０分、３時間、６時間、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、３日、５日、７日または１週間以上後に開始し得る。
【０５２８】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体および／または第二薬剤と組み合わせることができる抗新生物抗体は、リツキサン(登録商標)(リツキシマブ)、ハーセプチン(登録商標)(トラスツズマブ)、ベキサール(登録商標)(トシツモマブ)、ゼヴァリン(登録商標)(イブリツモマブ)、キャンパス(登録商標)(アレムツズマブ)、リンホサイド(Lymphocide)(登録商標)(エプルツズマブ(eprtuzumab))、アバスチン(登録商標)(ベバシズマブ)およびタルセバ(登録商標)(エルロチニブ)またはこれらの何れかの組合せを含む。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体との組み合わせ治療に有用な第二抗体は、抗体薬物コンジュゲートであり得る。
【０５２９】
ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体は、単独または別の薬剤と組み合わせて、造血起源の様々な腫瘍を処置するために、骨髄移植と同時にまたは逐次的に使用される。
【０５３０】
ここに提供されるのは、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を、第二薬剤を伴って、または伴わずに対象に投与することを含む、免疫賦活性薬剤を用いる過剰増殖性疾患(例えば、癌)の治療と関連する有害事象を変更するための方法である。例えば、ここに記載する方法は、患者に非吸収性ステロイドを投与することによって、免疫賦活性治療用抗体誘導性大腸炎または下痢の罹患率を低減する方法を提供する。本明細書において、「非吸収性ステロイド」は、広範な初回通過代謝を示し、その結果、肝臓における代謝後に、ステロイドのバイオアベイラビリティが低い、すなわち、約２０％未満であるグルココルチコイドである。ここに記載するある実施態様において、非吸収性ステロイドは、ブデソニドである。ブデソニドは、経口投与後に広範に、主に肝臓によって代謝される局所活性糖質コルチコイドである。ENTOCORT EC(登録商標)(Astra-Zeneca)は、回腸および結腸全体への薬物送達を最適化するために開発されたブデソニドのｐＨおよび時間依存性経口製剤である。ENTOCORT EC(登録商標)は、回腸および／または上行結腸が関与する軽度から中程度のクローン病の治療のために米国において承認されている。ある実施態様において、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体と非吸収性ステロイドを、サリチル酸とさらに組み合わせることができる。サリチル酸は、例えば、スルファサラジン(AZULFIDINE(登録商標)、Pharmacia & UpJohn)；オルサラジン(DJPENTUM(登録商標)、Pharmacia & UpJohn)；バルサラジド(COLAZAL(登録商標)、Salix Pharmaceuticals, Inc.)；およびメサラミン(ASACOL(登録商標)、Procter & Gamble Pharmaceuticals；PENTASA(登録商標)、Shire US；CANASA(登録商標)、Axcan Scandipharm, Inc.；ROWASA(登録商標)、Solvay)などの５−ＡＳＡ薬剤を含む。
【０５３１】
【表１】
2021518140.tif 000008
【表２】
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【表３】
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【表４】
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【表５】
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【表６】
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【表７】
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【表８】
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【表９】
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【表１０】
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【表１１】
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【表１２】
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【表１３】
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【表１４】
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【表１５】
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【０５３２】
本開示の実施には、別途示されない限り、細胞生物学、細胞培養、分子生物学、トランスジェニック生物学、微生物学、組換えＤＮＡおよび免疫学の従来技術が用いられ、これらは、当業者の技量の範囲内である。そのような技術は、文献に十分に説明されている。例えば、Sambrook et al., ed. (1989) Molecular Cloning A Laboratory Manual (2nd ed.; Cold Spring Harbor Laboratory Press)、Sambrook et al., ed. (1992) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (Cold Springs Harbor Laboratory, NY)、D. N. Glover ed., (1985) DNA Cloning, Volumes I and II、Gait, ed. (1984) Oligonucleotide Synthesis、Mullis et al. U.S. Pat. No. 4,683,195、Hames and Higgins, eds. (1984) Nucleic Acid Hybridization、Hames and Higgins, eds. (1984) Transcription And Translation、Freshney (1987) Culture Of Animal Cells (Alan R. Liss, Inc.)、Immobilized Cells And Enzymes (IRL Press) (1986)、Perbal (1984) A Practical Guide To Molecular Cloning、the treatise, Methods In Enzymology (Academic Press, Inc., N.Y.)、Miller and Calos eds. (1987) Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells, (Cold Spring Harbor Laboratory)、Wu et al., eds., Methods In Enzymology, Vols. 154 and 155、Mayer and Walker, eds. (1987) Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology (Academic Press, London)、Weir and Blackwell, eds., (1986) Handbook Of Experimental Immunology, Volumes I-IV、Manipulating the Mouse Embryo, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., (1986); )、Crooks, Antisense drug Technology: Principles, strategies and applications, 2nd Ed. CRC Press (2007)およびAusubel et al. (1989) Current Protocols in Molecular Biology (John Wiley and Sons, Baltimore, Md.)参照。
【０５３３】
以下の実施例は、限定としてではなく、例示として提供されるものである。
【実施例】
【０５３４】
実施例１. 抗体産生およびスクリーニング
ヒトＩｇＧトランスジェニック(Ｈｃｏ７：０１[Ｊ／Ｋ](ＢＡＬＢ／ｃ))マウスを、完全長ヒトＭＩＣＡ／ＢでトランスフェクトしたＣＨＯ細胞で免疫化した。免疫化マウスからの脾臓細胞を、ＳＰ２／０融合パートナーと融合させた。ハイブリドーマ上清を、まず、ＨＴＲＦアッセイを使用してヒトＩｇＧ抗体の存在についてスクリーニングした。次いで、抗原特異性をＥＬＩＳＡでｈＭＩＣＡへの結合、続いて、ヒトＭＩＣＡ／Ｂを発現するＣＨＯ細胞の種々のアレルとのＦＡＣＳアッセイにより決定した。これらのＦＡＣＳ陽性ｍＡｂを、機能的アッセイにおける親和性および性能のさらなる特徴づけに付した。ハイブリドーマ３Ｆ５、１６Ａ５、７１Ｃ２、１９Ｇ６および２４Ｇ１１は代表的抗体クローンであった。
【０５３５】
実施例２. 組み換えＭＩＣＡ／Ｂの発現抗体
ここに記載する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を、当分野で一般に利用可能なクローニングおよび組み換え発現技術を使用して、発現させ得る。例えば、総ＲＮＡをハイブリドーマクローン３Ｆ５から調製し、ＶＨおよびＶＫ  ｃＤＮＡを調製した。抗体の重(ＶＨ)鎖および軽(ＶＬ)鎖可変領域をクローン化し、配列決定した(それぞれ図４Ａおよび４Ｃ)。３Ｆ５  ＶＨ配列(配列番号３１)を、オステオネクチンシグナル配列およびヒトＩｇＧ.１ｆ定常領域を含む、ベクターｐＩＣＯＦＳＣｐｕｒＧにクローン化し、プラスミドｐＩＣＯＦＳＣｐｕｒＧ(ＭＩＣＡ.２)を産生した。３Ｆ５  ＶＬ配列(配列番号３３)を、オステオネクチンシグナル配列およびヒトカッパ定常領域を含む、ベクターｐＩＣＯＦＳＣｎｅｏＫにクローン化し、プラスミドｐＩＣＯＦＳＣｎｅｏＫ(ＭＩＣＡ.２)を産生した。プラスミド  ｐＩＣＯＦＳＣｐｕｒＧ(ＭＩＣＡ.２)およびｐＩＣＯＦＳＣｎｅｏＫ(ＭＩＣＡ.２)をＣＨＯ−Ｓ細胞に共トランスフェクトし、安定なクローンを、組み換え発現のために選択し、スクリーニングした。３Ｆ５の組み換え抗体は、「ＭＩＣＡ.２」と称する。ＭＩＣＡ.２のＶＬ、例えばＣＤＲ３の変異を、抗体の溶解度を改善するために行った。ＭＩＣＡ.２のこのような変異体は、ＭＩＣＡ.２０(ＶＨ：配列番号１１５；ＶＬ：配列番号１１６)、ＭＩＣＡ.２１(ＶＨ：配列番号１１７；ＶＬ：配列番号１１８)、ＭＩＣＡ.２２(ＶＨ：配列番号１１９；ＶＬ：配列番号１２０)、ＭＩＣＡ.３８(ＶＨ：配列番号１２１；ＶＬ：配列番号１２２)、ＭＩＣＡ.３９(ＶＨ：配列番号１２３；ＶＬ：配列番号１２４)およびＭＩＣＡ４０(ＶＨ：配列番号１２５；ＶＬ：配列番号１２６)を含む。これらの変異体は、ＭＩＣＡ.２のＶＬにおける９６位またはその付近の変異または挿入を含む。
【０５３６】
ハイブリドーマ抗体１９Ｇ６(ＭＩＣＡ.３６；ＶＨおよびＶＬについてそれぞれ図１Ａおよび１Ｃ参照)、１６Ａ５(ＭＩＣＡ.５２(ＶＨおよびＶＬについてそれぞれ図２Ａおよび２Ｃ)およびＭＩＣＡ.５３)および２４Ｇ１１(ＭＩＣＡ.５４；ＶＨおよびＶＬについてそれぞれ図３Ａおよび３Ｃ参照)のＣＤＲおよび／または可変ドメインを含む抗体を、宿主細胞に組み換えにより発現させた。組み換え抗体は、ここでは、ＭＩＣＡ.３６(１９Ｇ６)、ＭＩＣＡ.５２およびＭＩＣＡ.５３(１６Ａ５)およびＭＩＣＡ.５４(２４Ｇ１１)などと名付ける。これらの組み換え抗体の何れかを名前により言うとき、特異的定常領域は参照されない、すなわち、抗体ＭＩＣＡ.２、ＭＩＣＡ.２０、ＭＩＣＡ.２１、ＭＩＣＡ.２２、ＭＩＣＡ.３６、ＭＩＣＡ.３８、ＭＩＣＡ.３９およびＭＩＣＡ.４０、ＭＩＣＡ.５２、ＭＩＣＡ.５３およびＭＩＣＡ.５４は、何れも所望の定常領域を有し得る。Ｇ２３６Ａ変異(ＥＵナンバリングによる)をＭＩＣＡ.３６の重鎖定常領域になし、抗体ＭＩＣＡ.３６−Ｇ２３６Ａを作製した。非フコシル化抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体ＭＩＣＡ.３６−ＩｇＧ１−ＮＦ−Ｇ２３６Ａは、BioWa, Inc. (Princeton, NJ)から入手可能なＦＵＴ８ノックアウトＣＨＯ細胞(ＰＯＴＥＬＬＩＧＥＮＴ(登録商標)細胞)にＭＩＣＡ.３６−Ｇ２３６Ａ配列をクローニングすることにより発現させた。
【０５３７】
実施例３. 表面プラズモン共鳴により決定される、ヒトＭＩＣＡアレルに対する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の結合親和性
ヒトＭＩＣＡアレルに対する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の動態および親和性を、ｐＨ７.４ランニング緩衝液(０.０１Ｍ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７.４、０.１５Ｍ  ＮａＣｌ、０.０５％ｖ／ｖ  界面活性剤Ｐ２０、１mg／mL  ＢＳＡ)を用いて、３７℃でBiacore T200装置で決定した。抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体をα−ヒトＦｃ表面に捕捉した。ＭＩＣＡアレル抗原を、高および低ナノモル濃度で注入した(特記しない限り、５００nMおよび５０nM)。抗体ＭＩＣＡ.３６およびＭＩＣＡ.３８(軽鎖の残基９５〜９６間にＳｅｒ挿入を伴うＭＩＣＡ.２)の結果を、下記表２に示す。ＭＩＣＡ.３６抗体およびＭＩＣＡ.３８抗体へのＭＩＣＡアレルの動態を、図６Ａ〜６Ｈに示す。
【表１６】
2021518140.tif 000023
＊これらの結果は、１００nMおよび１０nM抗原濃度を使用して得た。
【０５３８】
ヒトＭＩＣＡアレル(ｈｕＭＩＣＡ−ｈｉｓアレル＊００２、＊００４、＊００８および＊００９)に対する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体ＭＩＣＡ.２、１９Ｇ６、１６Ａ５および７１Ｃ２の動態および親和性も、次の条件を使用するBiacore 3000装置で決定した。
−  ランニング緩衝液：ＨＥＳ−ＥＰランニング緩衝液
−  チップ：ＣＭ５プロテインＧチップＦｃ１：ブランク。Ｆｃ２−４：約２００Rus
−  Ａｂ：５μg／mL、１０μL＠１０μL／分
−  Ａｇ結合：５分間結合、７分間解離＠２５μL／分、
−  再生：グリシン１.７、１０μL＠１００μL／分、続いて、ＨＥＳ−ＥＰによる６０秒間洗浄
【０５３９】
Biacore分析結果を下表３に示す。ＭＩＣＡ.２、１９Ｇ６、１６Ａ５および７１Ｃ２のＭＩＣＡアレルの動態を図６Ｉ〜６Ｌに示す。
【表１７】
2021518140.tif 000024
【０５４０】
実施例４. スキャッチャード分析により決定したヒトおよびカニクイザルＭＩＣＡ／Ｂに対する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の結合親和性
ＭＩＣＡ.３６抗体を、IODO-GEN(登録商標)固相ヨウ素化剤(１,３,４,６−テトラクロロ−３ａ−６ａ−ジフェニルグリコウリル；Pierce, Catalog 28601)を使用して、１２５Ｉ−Ｎａ(１mCi；PerkinElmer Catalog NEZ033H001MC)で放射ヨウ素標識した。過剰のアイオダイドを脱塩カラム(Pierce, Catalog 43243)を使用して除去した。標識抗体のフラクションを集め、Wizard 1470ガンマカウンターで放射活性を分析した。各フラクションの１２５Ｉ−ＭＩＣＡ.３６抗体濃度を、InvitrogenからのQubitフルオロメーターで計算した。放射性純度を、ピークタンパク質および放射性フラクションの薄層クロマトグラフィーから確立した(Pinestar Technology, Catalog 151-005)。
【０５４１】
７８６−０およびＳＷ４８０細胞で内因性に発現されるヒトＭＩＣＡ／Ｂ、ならびにヒトＭＩＣＡ−、ヒトＭＩＣＢ−またはカニクイザルＭＩＣＡ／Ｂ形質導入ＣＨＯ細胞への放射性ヨード標識ＭＩＣＡ.３６抗体結合を、細胞と力価測定濃度の１２５Ｉ−ＭＩＣＡ.３６のインキュベーションにより決定した。非特異的結合を、力価測定濃度の１００倍モル過剰の非標識抗体存在下の結合により決定し、特異的結合を計算するために総計数毎分(ＣＰＭ)から減じた。１２５Ｉ−ＭＩＣＡ.３６濃度対ＣＰＭの線形標準曲線を使用して、特異的活性、最大nM結合１２５Ｉ−ＭＩＣＡ.３６を外挿し、それにより細胞あたりの受容体数を計算した。
【０５４２】
ヨウ素化ＭＩＣＡ.３６の特異的活性を、標準曲線で関連ＣＰＭに対する抗体力価測定濃度のプロットにより決定した(図７Ａ)。特異的活性は、１nMの１２５Ｉ−ＭＩＣＡ.３６で１６４,２１４CPMと計算された。細胞あたりの受容体数を、次の式により計算した：(Ｂｍａｘ)×(アボガドロ数)×(アッセイ体積)／ウェルあたりの細胞数。
【０５４３】
結果は、ＭＩＣＡ.３６抗体がＣＨＯ細胞の過剰発現ヒトＭＩＣＡ＊００８(図７Ｂ)およびＭＩＣＢ＊００５に約１〜２nMの親和性(図７Ｃ)、過剰発現カニクイザルＭＩＣＡ／Ｂに約５〜１１nMの親和性(図７Ｄおよび７Ｅ)および７８６−０(図７Ｆ)およびＳＷ４８０(図７Ｇ)細胞に内因性に発現されるヒトＭＩＣＡ／Ｂに約０.４nMの親和性を示すことを示した。
【０５４４】
実施例５. フローサイトメトリーにおける細胞表面ヒトＭＩＣＡ／Ｂへの抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の結合およびカニクイザルＭＩＣＡ／Ｂ分子への交差反応性
連続希釈したＭＩＣＡ.３６−ＩｇＧ１−ＮＦ−Ｇ２３６Ａ  ｍＡｂを、ヒトＭＩＣＡ／Ｂ高頻度アレルを形質導入したＣＨＯ細胞またはＭＩＣＡ／Ｂを内因性に発現するヒト腫瘍細胞株とインキュベートした。次いで、細胞を２回洗浄し、細胞結合抗体を、フルオロフォアにコンジュゲートした二次抗ヒト抗体を使用して検出した。フローサイトメトリー分析を、FACSCantoIIまたはFACS Fortessa X-20フローサイトメーターを使用して実施した。細胞へのＭＩＣＡ.３６−ＩｇＧ１−ＮＦ−Ｇ２３６Ａ  ｍＡｂ結合の幾何平均蛍光強度を、FlowJo分析ソフトウェアを使用して決定した。用量−応答曲線を作成し、ＥＣ５０をPrismソフトウェアを使用して計算した。
【０５４５】
カニクイザル(「ｃｙｎｏ」)ＭＩＣＡ／Ｂ分子への交差反応性を測定するために、連続希釈したＭＩＣＡ.３６−ＩｇＧ１−ＮＦ−Ｇ２３６Ａ  ｍＡｂを、２種のカニクイザルＭＩＣＡ／ＢクローンでトランスフェクトしたＣＨＯ細胞とインキュベートした。細胞結合抗体を、フルオロフォアにコンジュゲートした二次抗ヒト抗体を使用して検出した。フローサイトメトリー分析を、Fortessa X-20を使用して実施した。残骸および死細胞除去のためにＦＳＣ−ＳＳＣ−７ＡＡＤパラメータでゲーティング後、ＭＩＣＡ.３６−ＩｇＧ１−ＮＦ−Ｇ２３６Ａ  ｍＡｂの平均蛍光強度を、FlowJo分析ソフトウェアを使用して決定した。
【０５４６】
フローサイトメトリー実験において、異所性にヒトＭＩＣＡ／Ｂ高頻度アレルを発現するＣＨＯ細胞の力価測定濃度の１９Ｇ６  ｍＡｂは、天然ヒトＭＩＣＡ／Ｂ分子に良好な１９Ｇ６結合を示した。データを図８Ａおよび８Ｂに示す。
【０５４７】
１９Ｇ６のカニクイザルＭＩＣＡ／Ｂへの交差反応性は、ＣＨＯ細胞にトランスフェクトした２種のカニクイザルＭＩＣＡ／Ｂクローンへの１９Ｇ６のｅ結合により示された。フローサイトメトリー実験において、１９Ｇ６は、ＣＨＯ−カニクイザルＭＩＣＡクローン＃４およびＣＨＯ−カニクイザルＭＩＣＡクローン＃６に良好に結合した。一つの代表的実験からのデータを図８Ｃに示す。ＥＣ５０はカニクイザルクローン＃４に１.０８nMおよびカニクイザルクローン＃６に２２.０２nMであり、１９Ｇ６がカニクイザルＭＩＣＡ／ＢにヒトＭＩＣＡ／Ｂと類似の有効性で結合することを示した。
【０５４８】
ＭＩＣＡ.３６−ＩｇＧ１−ＮＦ−Ｇ２３６Ａは、多様なヒト腫瘍細胞株で内因性に発現されるＭＩＣＡ／Ｂに結合した(図８Ｂ)。ＭＩＣＡアレルを発現するヒト腫瘍細胞株(括弧内)７８６−０(＊００８)、ＨｅＬａ(＊００８)、Ａ２０５８(＊００８／＊０１８)およびＲＰＭＩ−８２２６への結合のＥＣ５０値は、それぞれ１.３７nM、１.７６nM、５.４nMおよび３.９０nMであった。
【０５４９】
他の抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体、例えば、２４Ｇ１１、７１Ｃ２、１６Ａ５(＃１および＃２は、同じクローンからの２つのハイブリドーマ系統由来である)、を、類似方法を使用して試験した(下表４および５)(図８Ｄ〜８Ｈ)
【０５５０】
【表１８】
2021518140.tif 000025
【表１９】
2021518140.tif 000026
【０５５１】
実施例６. 抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体のビニング
ビニング実験を、ＨＥＰＥＳ緩衝化食塩水(１０mM  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７.４、１５０mM  ＮａＣｌ、０.０５％ｖ／ｖ  界面活性剤Ｐ２０および１mg／mL  ＢＳＡ)中、２５℃でOctet HTX装置で実施した。抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体およびＮＫＧ２Ｄ−ｍＦｃを抗Ｆｃチップに捕捉し、残存捕捉部位を、過剰の陰性対照ＩｇＧで遮断した。組み換え可溶性ＭＩＣＡ(アレル８)を結合させ、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体のその後の結合(「サンドイッチ」)を試験した。
【０５５２】
試験抗体は、２つの非重複エピトープビンに入った。各ビンのメンバーは、ＭＩＣＡに同時に結合できなかったが(重複エピトープを示す)、異なるビンのメンバーはできる。
【０５５３】
ビニング実験の結果を表６に示す。抗体ＭＩＣＡ.２、ＭＩＣＡ.３８、ＭＩＣＡ.３９およびＭＩＣＡ.４０は同じエピトープビンであった。抗体２４Ｇ１１(ＭＩＣＡ.５４)およびＭＩＣＡ.３６は、第二の、非重複ビンを形成した。これらの抗体は、ＭＩＣＡへのＮＫＤ２Ｄ結合を遮断しない。
【表２０】
2021518140.tif 000027
(「０」＝同時結合無；「１」＝同時結合)
【０５５４】
実施例７. ＨＤＸによるエピトープマッピング
水素／重水素交換マススペクトロメトリー(ＨＤＸ−ＭＳ)を、通常および高解像度モード下利用して、ＭＩＣＡとｍＡｂｓＭＩＣＡ.２、ＭＩＣＡ.３９、ＭＩＣＡ.４０、ＭＩＣＡ.３６  ＮＦ  Ｇ２３６ＡおよびＭＩＣＡ.３６の結合エピトープをプローブした。
【０５５５】
ＨＤＸ−ＭＳは、主鎖アミド水素原子の重水素交換の速度および程度のモニタリングにより、溶液中のタンパク質立体構造および構造動力学をプローブする。ＨＤＸのレベルは、主鎖アミド水素原子およびタンパク質水素結合の溶媒到達性に依存する。ＨＤＸによるタンパク質の質量増加を、ＭＳで正確に測定できる。この技術を酵素消化と合わせたとき、ペプチドレベルでの構造特性が解析でき、表面露出ペプチドと内側に折り畳まれたペプチドの区別を可能とする。ＭＳによる選択したペプチド領域の気相断片化は、アミノ酸レベルで高解像度ＨＤＸ情報を提供する。一般に、重水素標識およびその後の消光実験、続いて、酵素消化、ペプチド分離およびＭＳ分析を実施する。
【０５５６】
エピトープマッピング実験前に、非重水素化実験を実施して、社内作成したヒトＭＩＣＡ−Ｈｉｓタグ(アレル０８、１５μM)の組み換え完全長細胞外ドメイン(ＥＣＤ)およびＭＩＣＡおよびｍＡｂのタンパク質複合体(１：１モル比)のための一般的ペプチドの一覧を作成した。ＨＤＸ−ＭＳ実験で、５μLの各サンプル(ＭＩＣＡまたはＭＩＣＡとｍＡｂ)を５５μLのＤ２Ｏ緩衝液(１０mM  リン酸緩衝液、Ｄ２Ｏ、ｐＨ７.０)で希釈して、標識反応を開始させた。反応を種々の時間行わせた：２０秒、１分、１０分および２４０分。各標識反応時間終了時、消光緩衝液(１Ｍ  ＴＥＣＰの８Ｍ  尿素溶液、ｐＨ２.５、１：１、ｖ／ｖ)添加により、反応停止させ、５０μLの消光サンプルを、分析のためにWaters HDX-MS系に注入した。一般的消化性ペプチドの重水素取り込みレベルを、ＭＩＣＡ／Ｂ  ｍＡｂ非存在下／存在下でモニターした。高解像度ＨＤＸ実験のために、差次的ＨＤＸをＭＩＣＡと、ＭＩＣＡ.３６抗体のＦａｂを伴うＭＩＣＡの間でモニターし、ＭＩＣＡ.３６抗体Ｆａｂ結合により顕著にＨＤＸ減少を示すＭＩＣＡのペプチド領域を、ＭＳ／ＭＳによりさらに断片化した。アミノ酸残基の重水素取り込みレベルを、ＭＩＣＡ.３６のＦａｂの非存在下／存在下でモニターした。
【０５５７】
ＭＩＣＡにおけるＭＩＣＡ.２(図９Ａ)、ＭＩＣＡ.３９(図９Ｂ)およびＭＩＣＡ.４０(図９Ｃ)のＨＤＸ−ＭＳデータ分析は、全３種のｍＡｂが、ＭＩＣＡの２つの領域からなる同一結合エピトープを有することを示す。
領域１：201LRRTVPPMVNVTRSEASEGN220(配列番号５６)
領域２：238TWRQDGVSLSHDTQQ252(配列番号５７)
【０５５８】
相対的重水素取り込み差異に基づき、領域２は、重水素取り込みで最も顕著に変化した。
【０５５９】
ＭＩＣＡのＭＩＣＡ.３６  ＮＦ  Ｇ２３６ＡおよびＭＩＣＡ.３６におけるＨＤＸ−ＭＳデータ分析は、両分子が同一エピトープを有し、これは、ＭＩＣＡの３つの領域からなることを示した(図９Ｄおよび９Ｅ)。フコース除去およびＧ２３６Ａ変異は、結合エピトープに影響を与えない。
領域１：150WTVPQSSRAQTLAM163(配列番号５２)
領域２：231YPRNIILT238(配列番号５３)
領域３：253WGDVLPDGNGTYQTW267(配列番号５５)
【０５６０】
相対的重水素取り込み差異に基づき、３つのペプチド領域を領域３＞２＞１とランク付けでき、領域３は重水素取り込みで最も顕著に変化する。
【０５６１】
このＨＤＸ試験は、ＭＩＣＡ.２のバリアント(ＭＩＣＡ.３９およびＭＩＣＡ.４０)の安定化は、ＭＩＣＡ.２への同一エピトープマップを維持することを示す。ＭＩＣＡ上のＭＩＣＡ.３６の結合エピトープは、150WTVPQSSRAQTLAM163(配列番号５２)、231YPRNIILT238(配列番号５３)および253WGDVLPDGNGTYQTW267(配列番号５５)の不連続結合領域を含むとして特徴づけされ、フコースの除去およびＧ２３６Ａ変異は、結合エピトープに影響を与えない。
【０５６２】
ＭＩＣＡ.３６  Ｆａｂを使用する高解像度ＨＤＸ実験において、気相断片化のために、ＨＤＸのレベル減少に基づきＭＩＣＡ.３６エピトープ領域２および３を選択した。高解像度ＨＤＸ結果は、エピトープの次のものへの精密化を可能とする。
領域１：150WTVPQSSRAQTLAM163(配列番号５２)
領域２：234N, 237L
領域３：255DVLPDGNGTYQ265(配列番号５４), 267W
【０５６３】
図９Ｆは、これらの残基を、ＮＫＧ２Ｄに結合したＭＩＣＡの結晶構造に重ねた。
【０５６４】
実施例８. 酵母ディスプレイによるエピトープマッピング
ＭＩＣＡ−ＥＣＤクローンのライブラリーを、Genemorph II変異導入キットを使用して作製した。この変異体ＭＩＣＡ−ＥＣＤ分子のライブラリーを、Ｃ末端ｍｙｃ−Ａｇａ１融合を使用して、ガラクトース誘導性プロモーター下、サッカロミケス・セレビシエ表面にディスプレイさせた。ガラクトース誘発酵母細胞を、まず１００nMヒト抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体および１００nMマウス抗ｍｙｃ抗体９Ｅ１０で標識した。次いで、細胞をＰＥコンジュゲートヤギ抗ヒトおよびＡｌｅｘａ−６３３コンジュゲートヤギ抗マウス抗体で標識した。抗体−抗原相互作用を遮断する集団のライブラリーを単離するために、抗ｍｙｃ抗体に良好な結合を示すが、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体への結合が減少した標識細胞を、蛍光標示式細胞分取を使用して、分取した。次いで、分取細胞集団を、さらに１ラウンドの上記標識および分取により増殖および富化した。ＤＮＡを、第二ラウンド分取細胞および出発ライブラリーから単離した。ＤＮＡサンプルを、Nextera XTライブラリー調製キットを使用してＮＧＳシーケンシングのために調製し、Miseq NGSシーケンシングを使用して、多重化および配列決定した。得られたＤＮＡ配列読み取りデータを分析して、出発ライブラリーから特に富化された分取集団で見られる配列を同定した。これらの富化変異を、ＭＩＣＡ−ＮＫＧ２Ｄ複合体(PDB ID: 1HYR)の構造にマッピングし、タンパク質表面に良好に規定されたパッチが示された(図１０Ｄ〜１０Ｆ)。ＭＩＣＡ.３６、ＭＩＣＡ.２および２４Ｇ１１(ＭＩＣＡ.５４)抗体は、ＭＩＣＡα３ドメインに結合した。エピトープは次のとおりである。
ＭＩＣＡ.３６：Ｇ２５４、Ｄ２５５、Ｌ２５７、Ｙ２６４、Ｗ２６７(図１０Ａ)
ＭＩＣＡ.２：Ｒ２４０、Ｑ２４１、Ｄ２４２、Ｖ２４４、Ｒ２７９(図１０Ｂ)
２４Ｇ１１：Ｐ２５８、Ｇ２６０、Ｇ２６２、Ｙ２６４(図１０Ｃ)
【０５６５】
実施例９. インビトロでの抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体による表面ＭＩＣＡ保持および可溶性ＭＩＣＡ(ｓＭＩＣＡ)減少
ＭＩＣＡ／Ｂを異所性に発現する非ヒト細胞株を、ＭＩＣＡ.３６−ＩｇＧ１−ＮＦ−Ｇ２３６Ａまたはアイソタイプ対照と４８時間培養した。培養後、細胞を集め、表面ＭＩＣＡ／Ｂレベルを、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体クローン６Ｄ４での染色により測定した。上清を集め、可溶性ＭＩＣＡ(ｓＭＩＣＡ)レベルを、ＭＩＣＡ  ＥＬＩＳＡキット(Abcam ab100592)を使用して測定した。ＭＩＣＡ.３６−ＩｇＧ１−ＮＦ−Ｇ２３６Ａは、アイソタイプ対照(ＩｇＧ１  ＮＦ)と比較して、フローサイトメトリーで測定して細胞の表面ＭＩＣＡレベルを増加させ(図１１Ａ〜１１Ｄ)、ＥＬＩＳＡで定量して、培養上清のｓＭＩＣＡの量を減少させた(図１２Ａ〜１２Ｄ)。
【０５６６】
さらに、ＭＩＣＡを内因性に発現するヒト細胞株を、ＭＩＣＡ.３６−ＩｇＧ１−ＮＦ−Ｇ２３６Ａまたはアイソタイプ対照と４８時間培養した。培養後、細胞を集め、表面ＭＩＣＡ／Ｂレベルを、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体クローン６Ｄ４での染色により測定した。ＭＩＣＡ.３６−ＩｇＧ１−ＮＦ−Ｇ２３６Ａは、フローサイトメトリーで測定して細胞の表面ＭＩＣＡレベルを増加させ(図１３Ａ〜１３Ｅ)、ＥＬＩＳＡで定量して、培養上清のｓＭＩＣＡの量を減少させた(図１４Ａ〜１４Ｃ)。故に、ＭＩＣＡ.３６−ＩｇＧ１−ＮＦ−Ｇ２３６Ａは、腫瘍細胞表面にＭＩＣＡ／Ｂを保持し、ｓＭＩＣＡ／Ｂを減少させる。ＭＩＣＡ保持ＥＣ５０(nM)およびｓＭＩＣＡ減少のＩＣ５０(nM)を表７に示す
【表２１】
2021518140.tif 000028
【０５６７】
実施例１０：ＭＩＣＡ.３６−ＩｇＧ１−ＮＦ−Ｇ２３６Ａは、ＣＤ１６ａおよびＣＤ３２ａへの親和性増強を示した
重鎖に操作した変異、Ｇ２３６Ａを含む非フコシル化(ＮＦ)ヒトＩｇＧ１抗体であるＭＩＣＡ.３６−ＩｇＧ１−ＮＦ−Ｇ２３６Ａは、ＣＤ１６ａ(ＦｃγＲIIIａ)およびＣＤ３２ａ(ＦｃγＲIIａ)に天然ＩｇＧ１より高い親和性を示した。ＭＩＣＡ.３６−ＩｇＧ１−ＮＦ−Ｇ２３６ＡへのヒトＦｃγＲの結合を、表面プラズモン共鳴(ＳＰＲ)を使用して試験し、野生型ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ１ｆ−Ｇ２３６ＡおよびＩｇＧ１ｆ−ＮＦアイソタイプを有するＭＩＣＡ.３６抗体ならびに非ＭＩＣＡ結合対照ヒトＩｇＧ１およびＮＦ抗体と試験した。この試験について、プロテインＡを、ＣＭ５センサーチップのフローセル１〜４に、エタノールアミン遮断と共に、標準的エチル(ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド(ＥＤＣ)／Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド(ＮＨＳ)化学を使用して、１０mM  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７.４、１５０mM  ＮａＣｌ、３mM  ＥＤＴＡ、０.０５％界面活性剤ｐ２０のランニング緩衝液中、約３０００ＲＵの密度に固定化した。３μg／mLの抗体を、約２００〜４００ＲＵ密度でプロテインＡ表面に捕捉し、ＦｃγＲ検体結合を、１０mM  ＮａＰＯ４、１３０mM  ＮａＣｌ、０.０５％ｐ２０、緩衝液(ＰＢＳ−Ｔ)ｐＨ７.１からなるランニング緩衝液中、２５℃で、３０μL／分の流速で、１２０秒結合時間および１８０秒解離時間を使用して試験した。結合の速度論および親和性を決定ために、１μMから０.１５nM(ＣＤ６４タンパク質)または１０μMから１.５nM(他の全ＦｃγＲｓ)のＦｃγＲ濃度シリーズ(３：１希釈)を試験した。動態データをBiacore T200評価ソフトウェアを使用して、１：１ラングミュアモデルまたは定常状態モデルにフィットさせた。
【０５６８】
表８は、ＳＰＲで測定して、ヒトＣＤ１６ａおよびＣＤ３２ａアレルに対するＭＩＣＡ.３６−ＩｇＧ１−ＮＦ−Ｇ２３６Ａの増強した結合親和性を示す。
【表２２】
2021518140.tif 000029
【０５６９】
実施例１１：ＭＩＣＡ.３６−ＩｇＧ１−ＮＦ−Ｇ２３６Ａ介在増強抗体依存性細胞貪食(ＡＤＣＰ)および抗原交差提示
樹状細胞(ＤＣ)は、腫瘍細胞貪食、処理および腫瘍抗原提示ならびに腫瘍特異的Ｔ細胞応答誘発能を有する。ＭＩＣＡ／Ｂ発現腫瘍細胞株の抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体でのオプソニン化は、樹状細胞による腫瘍抗原の交差提示およびその後の抗原特異的ＣＤ８＋  Ｔ細胞誘発を増強することが示されている(Groh, V., PNAS 2005;102:6461-6)。抗体ＭＩＣＡ.３６−ＩｇＧ１−ＮＦ−Ｇ２３６Ａを、ＡＤＣＰおよび抗原交差提示について評価した。ヒトＦｃトランスジェニックマウス(全マウスＦｃγＲが欠失され、トランスジーンとしてコードされるヒトＦｃγＲが挿入され、ヒトＦｃγＲ発現再現をもたらすマウス種)(Smith, P., et al., 2013, Proc Natl Acad Sci U S A.;109:6181-6)からの骨髄由来樹状細胞(ＢＭＤＣ)をエフェクターとして使用した。ＢＭＤＣを作るために、骨髄をヒトＦｃトランスジェニックマウスから単離し、ｍＧＭ−ＣＳＦ(１０ng／ml)およびｍＩＬ−４(５ng／ml)とインビトロで培養し、培地の半分を２日目および４日目に交換した。ＢＭＤＣを５日目に採取した。一般に、総細胞の８０％超が、フローサイトメトリー染色でＣＤ１１ｃ陽性であり、良好なＢＭＤＣ誘導を示した。Ｂ１６.Ｆ１０−ＭＩＣＢ−ＧＦＰ−ｏｖａ細胞と称する、ＭＩＣＢ、ＧＦＰおよびＯｖａを形質導入したＢ１６.Ｆ１０黒色腫細胞を標的細胞として使用した。
【０５７０】
ＡＤＣＰアッセイのために、Ｂ１６.Ｆ１０−ＭＩＣＢ−ＧＦＰ−ｏｖａ細胞を、ＭＩＣＡ.３６  Ａｂで３０分間、４℃でオプソニン化した。次いで、細胞増殖を停止させるために照射し、ＢＭＤＣと２４時間インキュベートし、その後、培養を抗マウスＣＤ１１ｃ抗体で染色し、食作用をフローサイトメトリーにより評価した。食作用を、総ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞中ＣＤ１１ｃ＋  ＧＦＰ＋細胞のパーセンテージとして計算した。ＭＩＣＡ.３６のＩｇＧ１またはＩｇＧ１  ＮＦバリアントと比較したＡＤＣＰ増強が、抗体のＧ２３６Ａバリアント(ＭＩＣＡ.３６−ＩｇＧ１−ＮＦ−Ｇ２３６ＡおよびＭＩＣＡ.３６  ＩｇＧ１  Ｇ２３６Ａ)で見られた(図１５Ａ)。ヒトＦｃγＲトランスジェニックマウスからのＢＭＤＣをエフェクターとして使用し、Ｂ１６−ＭＩＣＢ−ＧＦＰ−Ｏｖａ細胞を標的細胞として使用したとき、ＭＩＣＡ.３６−ＩｇＧ１−ＮＦ−Ｇ２３６ＡのＥＣ５０は０.７nMと測定された。
【０５７１】
抗原交差提示アッセイのために、ｏｖａ抗原特異的ＯＴ−Ｉ  ＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖は、どのように効率的にＢＭＤＣが処理され、Ｂ１６.Ｆ１０−ＭＩＣＢ−ＧＦＰ−ｏｖａ細胞からのｏｖａ抗原をＣＤ８＋  Ｔ細胞に交差提示されるかの指標である。
【０５７２】
抗原交差提示を測定するために、Ｂ１６.Ｆ１０−ＭＩＣＢ−ＧＦＰ−ｏｖａ細胞を、ＭＩＣＡ.３６抗体で３０分間、４℃でオプソニン化した。次いで、細胞を増殖を停止させるために照射し、ＢＭＤＣと２４時間インキュベートした。次いで、ＯＴ−Ｉマウス(C57BL/6-Tg(TcraTcrb)1100Mjb/J, Jackson Laboratory)の脾臓から精製したＣＤ８＋  Ｔ細胞を、Cell Trace Violetで標識し、培養に４日間加えた。次いで、増殖をフローサイトメトリーにより評価した。増殖を、総ＣＤ８＋  Ｔ細胞中、Cell Trace Violet希釈されたＣＤ８＋  Ｔ細胞のパーセンテージとして計算した。ＯＴ−Ｉ  ＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖は、どのように効率的にＢＭＤＣが処理され、Ｏｖａペプチドが  ＣＤ８＋  Ｔ細胞に交差提示されるかの指標である。増強されたＯＴ−Ｉ  ＣＤ８＋  Ｔ細胞増殖は、１.６nMのＥＣ５０でＭＩＣＡ.３６−ＩｇＧ１−ＮＦ−Ｇ２３６Ａで観察された(図１５Ａ)。
【０５７３】
実施例１２：ＭＩＣＡ.３６−ＩｇＧ１−ＮＦ−Ｇ２３６Ａ介在増強抗体依存性細胞介在細胞毒性(ＡＤＣＣ)。
抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体がＡＤＣＣ活性に介在する能力を、エフェクターとしてヒトＮＫ細胞およびＭＩＣＡ＊００９を異所性に発現するＲａｊｉ細胞またはＭＩＣＡを内因性に発現するＡ３７５黒色腫細胞を標的細胞として使用して、試験した。
【０５７４】
標的細胞を、５,０００細胞／ウェル(Ａ３７５)または１０,０００細胞／ウェル(Ｒａｊｉ−ＭＩＣＡ)で、９６ウェル白色平底(Ａ３７５)またはＶ底(Ｒａｊｉ−ＭＩＣＡ)プレートに播種した。当量の力価した試験または対照抗体を標的細胞に加え、３７℃で２日間インキュベートした。
【０５７５】
次の日、ＰＢＭＣを、ヘパリン化全血サンプルから、密度勾配遠心分離により精製し、２％ＦＢＳ添加ＰＢＳ(HyClone)で洗浄した。ＮＫ細胞を、磁気ビーズベースの分離キット(Miltenyi Biotec)を使用する陰性選択によりＰＢＭＣから単離した。精製ＮＫ細胞を、５００IU／mL  ＩＬ−２添加MYELOCULTTM(Stemcell Technologies)培地中１×１０６細胞／mLで再懸濁し、一夜、３７℃でインキュベートした。
【０５７６】
一夜インキュベーション後、活性化ＮＫエフェクター細胞をＡＤＣＣアッセイ培地(１０％超低ＩｇＧ  ＦＢＳ添加、無フェノールレッドの、Ｌ−グルタミンを伴うＲＰＭＩ−１６４０)で２回洗浄し、濃度を５×１０５細胞／mLに調節した。試験抗体とインキュベートした標的細胞を洗浄し、１００μLの培地に再懸濁した。活性化ＮＫエフェクター、次いで、細胞を加え(１００μL／ウェル)、最終エフェクター細胞対標的細胞比(Ｅ：Ｔ)１０：１とした。次いで、プレートを加湿３７℃インキュベーターに４時間入れた。
【０５７７】
接着性Ａ３７５細胞について、ＮＫ細胞含有上清を除去し、標的細胞を培地で洗浄し、その後１００μLの培地を加えた。CellTiter-Glo試薬(Promega)を調製し、室温で平衡化し、１００μL／ウェルを標的細胞に加えた。発光を、Envisionプレートリーダーで検出し、比例は生存可能細胞数に比例した。特異的細胞溶解のパーセンテージを、式[１００−((サンプルの発光−最大殺滅の発光)／(自発的溶解の発光−最大殺滅の発光)＊１００)]を使用して計算した。
【０５７８】
懸濁Ｒａｊｉ−ＭＩＣＡ細胞について、標的およびエフェクター細胞を、eBioscience Fixable Viability Dye(Invitrogen)を用いてＣＤ３およびＣＤ５６(Biolegend)で染色し、蛍光をLSRFortessaフローサイトメーター(BD Biosciences)で読んだ。ＮＫ細胞(ＣＤ３−、ＣＤ５６＋)を除外し、残存細胞を細胞死(ＦＶＤ＋)について評価した。特異的細胞溶解のパーセンテージを、式[パーセントサンプル細胞死−パーセント自発的細胞死]を使用して計算した。
【０５７９】
標的細胞単独は、自発的溶解の対照となり、一方１００μL／ウェルの５％Ｔｗｅｅｎ−２０溶解緩衝液で溶解した標的細胞は、本アッセイにおける最大殺滅を表した。標的細胞溶解のパーセンテージを、GraphPad Inc.からのPrism v7ソフトウェアを使用して、各抗体についてプロットした。
【０５８０】
ＭＩＣＡ.３６のＩｇＧ１またはＩｇＧ１  Ｇ２３６Ａバリアントと比較して増強されたＡＤＣＣが、抗体のＮＦバリアント(ＭＩＣＡ.３６−ＩｇＧ１−ＮＦ−Ｇ２３６ＡおよびＭＩＣＡ.３６  ＩｇＧ１  ＮＦ)で観察された(図１６Ａおよび１６Ｂ)。
【０５８１】
実施例１３：Ｂ１６.Ｆ１０−ＭＩＣＡ肺転移モデルにおける有効性試験
ヒトＭＩＣＡ／ＢはマウスＮＫＧ２Ｄ受容体により認識され、それにより、十分に免疫適格性のマウスモデルにおける抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の試験が可能となる。完全長ＭＩＣＡタンパク質を、マウスＢ１６Ｆ１０黒色腫、ＭＣ３８結腸腺癌およびＥＧ７−ｏｖａ胸腺腫細胞株に異所性に発現させ、ヒトＦｃ(ＩｇＧ１  ＮＦ  Ｇ２３６Ａ、ＩｇＧ１  ＮＦまたはＩｇＧ１)またはマウスＦｃ(ＩｇＧ２ａまたはＩｇＧ１−Ｄ２６５Ａ)を有するＭＩＣＡ.３６抗体の活性を、それぞれヒトＦｃγＲ−Ｔｇマウスおよび野生型マウス系統(マウスＦｃγＲ発現)で評価した。
【０５８２】
０日目、マウス(Ｃ５７ＢＬ／６  ｈｕＦｃγＲトランスジェニックマウス)に、２×１０６細胞／mL濃度で、２００μL  Ｂ１６.Ｆ１０−ＭＩＣＡ細胞(ＭＩＣＡを形質導入したＢ１６.Ｆ１０黒色腫細胞)を側尾静脈に静脈内(IV)注射した。３日目および８日目、動物に、ＭＩＣＡ.３６−ＩｇＧ１−ＮＦ−Ｇ２３６Ａを５mg／kg腹腔内(ＩＰ)注射した。１４日目、肺を、Ｂ１６.Ｆ１０−ＭＩＣＡ細胞腫瘍転移測定のために摘出した。ヒトＩｇＧ１非フコシル化ｍＡｂ(社内)は、アイソタイプ対照として役立った。
【０５８３】
簡潔には、肺を、肺と同じ平面に位置する目盛り付定規の存在下、造影した。ImageJソフトウェアを使用して、画像を縮尺し、色バランスの調節を行い、閾値を設定し、目的領域を選択した。転移粒子径の決定および計数を実施した。分析を、ある表面積の転移の累積面積(mm２)またはある表面積の転移総数により行った。
【０５８４】
１４日目、血清を集め、−２０℃で保存し、その後ＥＬＩＳＡキット(Abcam ab100592)を使用してｓＭＩＣＡを測定した。
【０５８５】
ＩｇＧ１  ＮＦアイソタイプを有するＭＩＣＡ.３６抗体(ＭＩＣＡ.３６−ＩｇＧ１−ＮＦ−Ｇ２３６ＡおよびＭＩＣＡ.３６  ＩｇＧ１  ＮＦ)は、アイソタイプ対照と比較して、Ｂ１６Ｆ１０−ＭＩＣＡ腫瘍細胞により形成された総腫瘍面積およびマウス血清ｓＭＩＣＡレベル減少に有効であった(図１７Ａおよび１７Ｂ参照)。
【０５８６】
実施例１４：Ｂ１６.Ｆ１０−ＭＩＣＡ肺転移モデルにおける用量漸増試験
０日目、マウス(Ｃ５７ＢＬ／６  ｈｕＦｃγＲトランスジェニックマウス)に、１×１０７細胞／mL濃度で１００μL  Ｂ１６.Ｆ１０−ＭＩＣＡ細胞を側尾静脈に静脈内(IV)注射した。１日目、動物に、特定濃度で抗体を腹腔内(ＩＰ)注射した。１４日目、肺を転移測定のために摘出した。ヒトＩｇＧ１非フコシル化ｍＡｂ(ＢＭＳ)は、アイソタイプ対照として役立った。
【０５８７】
簡潔には、肺を、肺と同じ平面に位置する目盛り付定規の存在下、造影した。ImageJソフトウェアを使用して、画像を縮尺し、色バランスの調節を行い、閾値を設定し、目的領域を選択した。転移粒子径の決定および計数を実施した。分析を、ある表面積の転移の累積面積(mm２)またはある表面積の転移総数により行った。
【０５８８】
２つの別の試験からの結果は、アイソタイプ対照(３mg／kg)と比較して、ＭＩＣＡ.３６−ＩｇＧ１−ＮＦ−Ｇ２３６Ａ(ＭＩＣＡ.３６  ＮＦ  Ｇ２３６Ａ)投与マウスにおける総腫瘍面積減少を示した(図１８Ａおよび１８Ｂ)。
【０５８９】
実施例１５：ＭＩＣＡＥＧ７−ＭＩＣＡ腫瘍を有するトランスジェニックマウスにおけるＭＩＣＡ.３６−ＩｇＧ１−ＮＦ−Ｇ２３６Ａ(ＭＩＣＡ.３６  ＮＦ  Ｇ２３６Ａ)の有効性
ＭＩＣＡ耐容性マウスにおける抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の治療有効性を評価するために、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの前立腺でプロバシンプロモーター制御下にヒトＭＩＣＡ＊００９を発現する、トランスジェニックマウスを産生した(ＭＩＣＡトランスジェニック(Ｔｇ)マウス)(Liu, G. et al., 2013; J. Clin. Invest. 123, 4410-22)。ＭＩＣＡ−Ｔｇ雄マウスは、異所性にＭＩＣＡを発現するＭＣ３８細胞(ＭＣ３８−ＭＩＣＡ)の増殖に耐容性を示すことができ、一方Ｃ５７ＢＬ６またはヒトＦｃγＲ−ＴｇマウスまたはＭＩＣＡ−Ｔｇ雌マウスに移植された同じ腫瘍は大きく拒絶された。従って、ＭＣ３８−ＭＩＣＡ移植後、雄ＭＩＣＡ−ＴｇマウスのヒトＭＩＣＡに対する自己抗体産生は、野生型Ｃ５７ＢＬ６またはヒトＦｃγＲ−Ｔｇマウスと比較して低かった。合わせて、これらの結果は、ＭＩＣＡ−ＴｇマウスがＭＩＣＡタンパク質およびＭＩＣＡ発現腫瘍に耐容性であることを示唆する。
【０５９０】
抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の有効性を、高レベルのＭＩＣＡおよびペプチド卵白アルブミンを発現するＥＬ４胸腺腫細胞株であるＥＧ７に皮下(ＳｕｂＱ)移植した。機能的Ｆｃ(ＩｇＧ１  ＮＦに最も類似するマウスＦｃを有するＭＩＣＡ.３６−ｍｇ２ａ)または不活性Ｆｃ(マウスＣＤ１６への結合を無くすｍＩｇＧ１に変異を有するＭＩＣＡ.３６−ｍｇ１−Ｄ２６５Ａ)を有するＭＩＣＡ.３６抗体を、単独または抗ＰＤ−１抗体と組み合わせて試験した。
【０５９１】
腫瘍移植の日を試験０日目と指定した。Ｂ６.Ｆ１０−ＭＩＣＡトランスジェニックマウスに、５×１０７細胞／mL濃度(５×１０６細胞／マウス)で１００μｌ  ＥＧ７−ＭＩＣＡ腫瘍細胞をＳｕｂＱ注射した。移植５日後、マウスを無作為化し、投与を開始した。マウスに、特定抗体(抗体)を、１０mL／kgの投与量で腹腔内(ＩＰ)注射し、各抗体は３日に１回、計３回投与であった。次の抗体を種々の組み合わせで試験した：Ｄ２６５Ａ  Ｆｃ変異を有する抗マウスＰＤ−１  ｍＩｇＧ１、抗ヒトＭＩＣＡ.３６  ｍＩｇＧ２ａ、Ｄ２６５Ａ  Ｆｃ変異を有する抗ヒトＭＩＣＡ.３６  ｍＩｇＧ１ならびにアイソタイプ対照ｍＩｇＧ１(ＭＯＰＣ−２１、BioXCell)およびｍＩｇＧ２ａ  ｍＡｂ(Ｃ１.１８.４、BioXCell)。
【０５９２】
腫瘍応答を、腫瘍が１cm３の予定「標的」サイズに達するまで、腫瘍を週２回カリパスで測定することにより決定した(図１９Ａおよび１９Ｂ)。腫瘍体積[mm３]を次の式から推定した：腫瘍体積[mm３]＝(長さ[mm]×幅[mm]２)／２。
【０５９３】
各処置群のパーセント腫瘍増殖阻害(ＴＧＩ％)を、その群の個々の中央ＴＧＩの計算により決定した(図１９Ｃ)。全処置動物から計算した‘ｔ’日目の個々のＴＧＩを、次の式により決定した。
[１−((Ｔｔ／Ｔ０)／(Ｃｔ／Ｃ０))]／[(Ｃｔ−Ｃ０)／Ｃｔ]＊１００      [式１]
式中、Ｔｔ＝‘ｔ’時の処置動物の個々の腫瘍サイズ、Ｔ０＝処置動物の最初の測定時の個々の腫瘍サイズ、Ｃｔ＝‘ｔ’時の対照動物の中央腫瘍サイズ、Ｃ０＝対照動物の最初の測定時の中央腫瘍サイズ。
【０５９４】
‘ｔ’時に‘無進行’と判断された動物は、最初の測定の４倍未満である腫瘍サイズ(mm３)を有した(図１９Ｄ)。
【０５９５】
血清を１１日目に集めた。ｓＭＩＣＡの血清レベルを、Meso Scale Discovery(ＭＳＤ)プラットフォームを使用して測定した(図１９Ｅ)。ＭＩＣＡ.３８を捕捉抗体として使用し、ＭＩＣＡ.２を検出抗体として使用した。ＭＩＣＡ.３６抗体は、アイソタイプ対照と比較して、血清におけるｓＭＩＣＡを減少させた(図１９Ｅ)。
【０５９６】
本試験で、ＭＩＣＡ.３６−ｍｇ２ａは、大きな単剤活性を示さなかったが、他の試験で該抗体は、腫瘍増殖阻害に効果を示した(実施例１６)。しかしながら、組み合わせたＭＩＣＡ.３６−ｍｇ２ａ／抗ＰＤ−１処置は、単一抗体処置と比較して、腫瘍退縮を増強し、生存を延長した(図１９Ｃおよび１９Ｄ)。マウスの７０％は、組み合わせ処置後無腫瘍(ＴＦ)であり、一方、ＭＩＣＡ.３６−ｍｇ２ａおよび抗ＰＤ−１抗体の個々の投与後、それぞれ１０％および５０％がＴＦであった。肺転移モデルでの観察に一致して、ＭＩＣＡ.３６抗体は、単独または抗ＰＤ−１抗体との組み合わせで、血清ｓＭＩＣＡを有意に減少させた(図１９Ｅ)。ＭＩＣＡ.３６−ｍｇ２ａ／抗ＰＤ−１組み合わせ処置での抗腫瘍活性増強は、腫瘍へのＴ細胞およびＮＫ細胞浸潤増加ならびにリンパ節から出る腫瘍のＴ細胞およびＮＫ細胞ｉのＫｉ６７および活性化マーカー発現レベルの増加と相関した。ＭＩＣＡ.３６  Ｆｃ不活性(ＭＩＣＡ.３６−ｍｇ１−Ｄ２６５Ａ)は、単剤または抗ＰＤ−１抗体との組み合わせで活性ではなかった(血清ｓＭＩＣＡの減少はもたらしたが)。
【０５９７】
実施例１６：Ｂ６−ＭＩＣＡトランスジェニックマウスでのインビボ試験
この実験において、Ｂ６−ＭＩＣＡトランスジェニックマウスに、１００μｌ  ＥＧ７−ＭＩＣＡ腫瘍細胞を皮下(ＳｕｂＱ)注射した。移植６日後、マウスを無作為化し、投与を開始した。マウスに、抗体抗マウスＣＴＬＡ４  ｍＩｇＧ２ａ、抗ヒトＭＩＣＡ.３６  ｍＩｇＧ２ａおよびアイソタイプ対照ｍＩｇＧ２ａ  ｍＡｂ(Ｃ１.１８.４、BioXCell)の組み合わせを、１０mL／kgの投与量で与え、実施例１５に記載のとおり、各抗体は、３日毎に計３回であった。
【０５９８】
ＭＩＣＡ.３６抗体は、単独および抗ＣＴＬＡ４抗体との組み合わせで腫瘍体積を減少させ、ＴＧＩを増加させた(図２０Ａ〜２０Ｃ)。ＭＩＣＡ.３６および抗ＣＴＬＡ４抗体組み合わせは、単一抗体処置と比較して、無進行生存を延長させた(図２０Ｄ)。
【０５９９】
実施例１７：Ｂ６−ＭＩＣＡトランスジェニックマウスにおけるインビボ試験
Ｂ６−ＭＩＣＡトランスジェニックマウスに１００μｌ  ＥＧ７−ＭＩＣＡ腫瘍細胞を皮下(ＳｕｂＱ)注射し、実施例１６に記載のとおり、次の抗体で処置した(各抗体１０mL／kgの投与量を３日毎に計３回)：Ｄ２６５Ａ  Ｆｃ変異を有する抗マウスＰＤ−１  ｍＩｇＧ１、抗ヒトＭＩＣＡ.３６  ｍＩｇＧ２ａおよびアイソタイプ対照ｍＩｇＧ１(ＭＯＰＣ−２１、BioXCell)、ｍＩｇＧ２ａ  ｍＡｂ(Ｃ１.１８.４、BioXCell)。
【０６００】
ＭＩＣＡ.３６抗体は、単独および抗ＰＤ−１抗体との組み合わせで腫瘍体積を減少させ、ＴＧＩを増加させた(図２１Ａ〜２１Ｃ)。ＭＩＣＡ.３６および抗ＰＤ−１抗体組み合わせは無進行生存を延長させた(図２１Ｄ)。
【０６０１】
実施例１８. 抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の溶解度
ＭＩＣＡ.２およびＭＩＣＡ.３６抗体を、組み換え方法によりＣＨＯ細胞に発現させた。ＭＩＣＡ.３６  ＣＨＯクローンまたはＭＩＣＡ.２  ＣＨＯクローンの１mL凍結バイアルを、スケールアップ産生のために解凍した。細胞培養物を、８mM  グルタミン、１×ＨＴおよび５００μg／mL  Ｇ４１８添加ＣＤ  ＣＨＯ培地で、３７℃および８％ＣＯ２に設定したインキュベーターでインキュベートした。細胞を、最初に２５０mL振盪フラスコで、１００mL作業体積で培養させ、バッチ産生のために２つの３Ｌ  Corning Fernbachフラスコで２Ｌにスケールアップした。培養物を産生段階中、１０日間インキュベートし、生存能が４０％未満に低下したとき、採取した。培養物を浄化し、０.８／０.２μm滅菌フィルターで濾過し、下流処理に付した。
【０６０２】
細胞培養上清を、ｐＨ７.５のＰＢＳで予め平衡化したプロテインＡ親和性クロマトグラフィーカラムに載せた。カラムをＰＢＳ(５カラム体積)で洗浄した。抗体を、ｐＨ３の０.１Ｍクエン酸緩衝液を使用して溶出した。抗体含有フラクションをｐＨ８.５の２Ｍ  Ｔｒｉｓ緩衝液ですぐに中和し、最終ｐＨ７.２とした。次いで、抗体をＰＢＳまたはヒスチジンスクロース緩衝液に対して透析した。抗体を、４〜８℃で保存した。
【０６０３】
ＭＩＣＡ.２抗体は低溶解度を示した。溶出および中和工程中濁り、低濃度(＜２mg／ml)でさえ、透析およびおよび４〜８℃で保存中、相当に沈殿した。沈殿のため、材料の相当の損失があった。ＭＩＣＡ.２抗体の最大溶解度は、中性または弱酸性ｐＨで２mg／mlであった。製剤努力は、ＭＩＣＡ.２抗体溶解度を１５mg／mlを超えてあげることができず、製造目的で許容されない。
【０６０４】
ＭＩＣＡ.３６抗体は、精製および７.８８mg／mlの濃度で４℃で保存の全工程で濁らなかった。７mg／mlを超える濃度でさえ、中性または弱酸性ｐＨの水性緩衝液で保存中、沈殿しなかった。ＭＩＣＡ.３６抗体のバリアントであるＭＩＣＡ.３６−ＮＦ−Ｇ２３６Ａ抗体は、５０mg／ml濃度、４０℃で３か月安定であった。
【０６０５】
それ故に、ＭＩＣＡ.３６およびＭＩＣＡ.３６−ＮＦ−Ｇ２３６Ａ抗体は、ＭＩＣＡ.２抗体と比較して、優れた溶解度性質を有する。
【０６０６】
実施例１９. Ｘ線共結晶構造解析によるエピトープマッピング
タンパク質発現および精製：
ＭＩＣＡ＊０２のＥＣＤを、Ｎ末端ミツバチメリチンシグナルペプチドおよびＣ末端Ｈｉｓ６タグと共にｐＶＬ１３９３ベクターにクローン化し、Ｔ.ｎｉ細胞(発現系)で発現させた。ＭＩＣＡ.３６重鎖および軽鎖を、Ｎ末端オステオネクチンシグナルペプチドと共にｐＴＴ５ベクターに個々にクローン化した。重鎖をＣ末端Ｈｉｓ６タグとも融合させた。ＭＩＣＡ.３６  ＦａｂをＥｘｐｉ２９３浮遊細胞に発現させた。ＭＩＣＡ  ＥＣＤおよびＭＩＣＡ.３６  ＦａｂをＮｉセファロース樹脂を使用して精製した。
【０６０７】
結晶化および構造決定：
ＭＩＣＡ.３６：ＭＩＣＡ  ＥＣＤ複合体を、１.２：１モル比で形成させ、５０mM  ＮａＣｌ、１０mM  Ｔｒｉｓ  ｐＨ８でのゲル濾過により、複合体を非結合Ｆａｂから精製した。結晶を、シッティングドロップ蒸気拡散法で、２０℃で、混合０.２μL濃縮タンパク質サンプル(２２mg／mL)と０.２μL母液(０.２Ｍ  酒石酸ナトリウム二水和物、３０％ＰＥＧＭＭＥ  ５５０)の混合により成長させた。結晶を液体窒素で急速冷却し、回折データを、Advanced Photon SourceでＩＭＣＡ−ＣＡＴ  １７−ＩＤビームライン上で３.６Åに集めた。本データセットを、ＸＤＳを使用してＰ６５空間群に処理し、構造をＰＤＢ  ＩＤ  ４ＮＭ４からのＦａｂ定常ドメイン、ＰＤＢ  ＩＤ  １ＨＥＺからのＣＤＲ削減Ｆａｂ可変ドメインおよびＰＤＢ  ＩＤ  １ＨＹＲからのＭＩＣＡ  α３ドメインを使用するPhaserとの分子置換により決定した。ＭＩＣＡ  α１−α２ドメインは分子置換により見られなかった。ＭＩＣＡ  α３：ＭＩＣＡ.３６  Ｆａｂ複合体の１コピーが非対称単位で見られ、Phenixにより精密化し、ＣＯＯＴを使用して構築した。
【０６０８】
構造分析：
Ｆａｂ結合により埋没したＭＩＣＡの溶媒到達可能表面積を、AREAIMOLを使用して、プローブ半径１.４Åを使用して計算した。ＭＩＣＡ.３６結合により埋没したＭＩＣＡ残基は、Ｔ２２２、Ｔ２２４、Ｒ２２６、Ｗ２３３、Ｎ２３４、Ｈ２４８、Ｄ２４９、Ｑ２５１、Ｑ２５２、Ｗ２５３、Ｇ２５４、Ｄ２５５、Ｖ２５６、Ｌ２５７、Ｐ２５８、Ｄ２５９、Ｇ２６０、Ｎ２６１、Ｙ２６４、Ｑ２６５、Ｗ２６７およびＡ２６９であった(図２２Ａ〜２２Ｃ)。
【０６０９】
実施例２０. ＭＩＣＡへの結合の比較試験
ＭＩＣＡ.２を、国際特許出願公開ＷＯ２０１３／０４９５１７に開示の抗ＭＩＣＡ抗体Ａｂ２(ＣＭ２４００２  Ａｂ２)およびＡｂ２９(ＣＭ３３３２２  Ａｂ２９)ならびに国際特許出願公開ＷＯ２０１５０８５２１０に開示のＡｂ２８(ＣＭ３３３２２  Ａｂ２８)と、ＭＩＣＡ発現細胞への結合について比較した。
【０６１０】
抗体Ａｂ２、Ａｂ２８およびＡｂ２９は、組み換え方法によりＣＨＯ細胞にも発現させた(それぞれＭＩＣＡ.５、ＭＩＣＡ.７およびＭＩＣＡ.６)。ＭＩＣＡアレル００２、００４、００８、００９、０１０を形質導入したＣＨＯ細胞を１００,０００細胞／ウェルで播種した。細胞を、精製抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体と３０分間インキュベートした。抗体の細胞への結合を、フルオロフォアにコンジュゲートした二次抗ヒトＦ(ａｂ’)２抗体を使用して検出した。フローサイトメトリー分析を、FACSCantoIIサイトメーターを使用して実施した。細胞への抗体結合の幾何平均蛍光強度を、FlowJo分析ソフトウェアを使用して決定した。ＭＩＣＡ.２は、ＭＩＣＡ.５、ＭＩＣＡ.７およびＭＩＣＡ.６より、種々のＭＩＣＡアレルを発現する全ＣＨＯ細胞株に有意に強い結合を示した(図２３Ａおよび２３Ｂ)。
【０６１１】
これら抗体をまたヒトＲＰＭＩ−８２２６細胞への結合についても試験した。細胞を１００,０００細胞／ウェルで播種し、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体と３０分間インキュベートした。抗体の結合を、フルオロフォアにコンジュゲートした二次抗ヒトＦ(ａｂ’)２抗体を使用して検出した。フローサイトメトリー分析を、FACSCantoIIサイトメーターを使用して実施した。細胞への抗体結合の幾何平均蛍光強度を、FlowJo分析ソフトウェアを使用して決定した。ＭＩＣＡ.１およびＭＩＣＡ.２は、Ａｂ２、Ａｂ２８およびＡｂ２９ならびに組み換えカウンターパートＭＩＣＡ.５、ＭＩＣＡ.７およびＭＩＣＡ.６を発現するＣＨＯ細胞株からの上清(「ｓｕｐｅ」)より有意に強くＲＰＭＩ−８２２６細胞に結合した(図２４Ａおよび２４Ｂ)。
【０６１２】
実施例２１. 血清ｓＭＩＣＡ測定
Ｂ６−ＭＩＣＡトランスジェニックマウスに、５ｅ７細胞／mL濃度の１００μl  ＥＧ７−ＭＩＣＡ細胞(５ｅ６細胞／マウス)を皮下(ＳｕｂＱ)注射した。腫瘍移植の日を０日目と指定した。動物に、５日目に１０mL／kg投与量で特定抗体を腹腔内(ＩＰ)注射した。血清サンプルを、ｓＭＩＣＡ測定のために、８日目および１２日目(抗体投与７２時間および１６８時間後)に集めた。
【０６１３】
Meso Scale Discovery(ＭＳＤ)プラットフォームでの認定されたリガンド結合アッセイを使用して、ＥＧ７−ＭＩＣＡマウス血清の総可溶性ＭＩＣＡ(ｓＭＩＣＡ)を測定した。簡潔には、ＭＳＤ金９６ウェルストレプトアビジンプレートをまずビオチニル化捕捉ＭＩＣＡ抗体(ＭＩＣＡ.１−ビオチン)でコーティングした。次いで、プレートをサンプルとインキュベートし、プレートにｓＭＩＣＡを捕捉させた。ルテニル化検出ＭＩＣＡ抗体(ＭＩＣＡ.２−Ｒｕ)を加えて、サンドイッチ免疫アッセイを完成させた。総ｓＭＩＣＡアッセイは、組み換えおよび内因性量形態のＭＩＣＡをＭＩＣＡ.３６−ｍＩｇＧ２ａ存在下で検出した。アッセイ読出しは、電気化学発光(ＥＣＬ)であった。ＥＣＬを、読み取り緩衝液を加えた後に得て、プレートをMSD SECTOR装置で読んだ。得られたＥＣＬは、サンプルに存在するｓＭＩＣＡ量の定量的指標である。抗体投与７２時間後、１mg／kgおよび１０mg／kgのＭＩＣＡ.３６−ｍＩｇＧ２ａで処置したマウスの血清におけるｓＭＩＣＡ量は増加しており、このような増加は、抗体投与１６８時間後観察されなかった(図２５)。
【０６１４】
実施例２２. ｓＭＩＣＡ薬物動態(ＰＫ)試験
ＩＶ  ＰＫを測定するために、ｓＭＩＣＡ＊００９を、ＭＩＣＡ.３６−ｍＩｇＧ２ａ抗体存在下および非存在下、Ｂ６−ＭＩＣＡトランスジェニックマウス(非腫瘍担持)で、０.１μg／kgおよび１０μg／kg用量で評価した。まず、１０mpk(１０mg／kg)用量のＭＩＣＡ.３６−ｍＩｇＧ２ａ抗体またはＫＬＨアイソタイプ対照を、腹腔内経路(ＩＰ)を介して投与した。次に、ｓＭＩＣＡ＊００９を、ＭＩＣＡ.３６−ｍＩｇＧ２ａ抗体投与７２時間後、ＩＶボーラス注射として投与した。ＰＫ分析のための血清サンプルを、マウスにｓＭＩＣＡ投与２分後、１５分後、３０分後、１時間後、６時間後、２４時間後、７２時間後、１６８時間後および３３６時間後集めた。ノンコンパートメントＰＫ分析を使用して、ｓＭＩＣＡおよびＭＩＣＡ.３６−ｍＩｇＧ２ａ抗体のＰＫパラメータを推定した。０.１μg／kg投与動物のｓＭＩＣＡレベルは定量限界未満(ＢＬＱ)であった。１０μg／kg  ｓＭＩＣＡの単独で与えたときのＴ１／２は０.０７時間であったが、ｓＭＩＣＡ半減期はＭＩＣＡ.３６−ｍＩｇＧ２ａ存在下より有意に長く(３.５時間)(図２６)、ｓＭＩＣＡより長いｓＭＩＣＡ−ｍＡｂ複合体のＴ１／２による可能性がある。ＭＩＣＡ.３６−ｍＩｇＧ２ａのＰＫは、先の試験と一致し、ｓＭＩＣＡ投与による影響はなかった。
【０６１５】
特定の実施態様の先の記載は、当分野の知識を適用することにより、過度の実験なく、本発明の一般的概念から逸脱することなく、このような特定の実施態様を種々の応用に容易に修飾および／または適合できるように、本発明の一般的特性が十分に明示されるようなものである。それ故に、このような適合および修飾は、ここに示す教示および指針に基づき、本発明実施態様の均等の意味および範囲内に包含されることが意図される。ここでの表現法および用語は、限定ではなく、記載を意味し、従って、本明細書の用語または表現法は、本教示および指針に鑑みて当業者により解釈されると理解される。
【０６１６】
本発明の他の実施態様は、本明細書およびここに開示する発明の実施の考察により当業者には明らかである。明細書および実施例は、例示のみを意図し、本発明の真の範囲および精神は添付する特許請求の範囲により示されることが意図される。
【０６１７】
ここに開示する全ての刊行物、特許および特許出願は、各個々の刊行物、特許または特許出願が具体的におよび個々に引用により本明細書に包含されると示されるのと同じ程度に、引用により本明細書に包含される。
【０６１８】
本出願は、２０１８年３月２３日出願の米国仮出願６２／６４７,５５６および２０１８年５月４日出願の６２／６６７,１７０の利益を請求し、これらは引用により全体として本明細書に包含される。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
2021518140.tif 000031
【図１Ｃ】
2021518140.tif 000032
【図１Ｄ】
2021518140.tif 000033
【図２Ａ】
2021518140.tif 000034
【図２Ｂ】
2021518140.tif 000035
【図２Ｃ】
2021518140.tif 000036
【図２Ｄ】
2021518140.tif 000037
【図２Ｅ】
2021518140.tif 000038
【図２Ｆ】
2021518140.tif 000039
【図３Ａ】
2021518140.tif 000040
【図３Ｂ】
2021518140.tif 000041
【図３Ｃ】
2021518140.tif 000042
【図３Ｄ】
2021518140.tif 000043
【図４Ａ】
2021518140.tif 000044
【図４Ｂ】
2021518140.tif 000045
【図４Ｃ】
2021518140.tif 000046
【図４Ｄ】
2021518140.tif 000047
【図５Ａ】
2021518140.tif 000048
【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
2021518140.tif 000051
【図６−１】
2021518140.tif 000052
【図６−２】
2021518140.tif 000053
【図６−３】
2021518140.tif 000054
【図６−４】
2021518140.tif 000055
【図６−５】
2021518140.tif 000056
【図７Ａ】
2021518140.tif 000057
【図７Ｂ】
2021518140.tif 000058
【図７Ｃ】
2021518140.tif 000059
【図７Ｄ】
2021518140.tif 000060
【図７Ｅ】
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【図７Ｆ】
2021518140.tif 000062
【図７Ｇ】
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【図８−１】
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【図８−２】
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【図８−３】
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【図８−４】
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【図８−５】
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【図８−６】
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【図８−７】
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【図８−８】
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【図８−９】
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【図８−１０】
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【図８−１１】
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【図８−１２】
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【図８−１３】
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【図９−１】
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【図９−２】
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【図９−３】
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【図１０−１】
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【図１０−２】
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【図１０−３】
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【図１０−４】
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【図１１−１】
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【図１１−２】
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【図１２−１】
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【図１２−２】
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【図１３−１】
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【図１３−２】
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【図１３−３】
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【図１４−１】
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【図１４−２】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９−１】
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【図１９−２】
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【図１９−３】
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【図１９−４】
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【図２０Ａ】
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【図２０Ｂ】
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【図２０Ｃ】
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【図２０Ｄ】
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【図２１Ａ】
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【図２１Ｂ】
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【図２１Ｃ】
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【図２１Ｄ】
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【図２２】
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【図２３Ａ】
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【図２３Ｂ】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
2021518140.tif 000114
【配列表】
2021518140000001.app
【国際調査報告】
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