(57)【要約】  本開示は、１−［４−ブロモ−５−［１−エチル−７−（メチルアミノ）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−３−イル］−２−フルオロフェニル］−３−フェニル尿素または１−（５−（７−アミノ−１−エチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−３−イル）−４−ブロモ−２−フルオロフェニル）−３−フェニル尿素またはその薬学的に許容可能な塩を、肥満細胞症の治療のために例えばＲＡＳ、ＲＡＦ、ＭＥＫまたはＥＲＫの阻害剤等であるＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤と組み合わせて使用することに関する。【選択図】図１Ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
それを必要とする患者における肥満細胞症を治療する方法であって、前記患者に対して、
有効量のｃ−ＫＩＴ阻害剤と、
有効量の１または複数のＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤とを投与することを含む、方法。
【請求項２】
前記ＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤は、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＥＫ阻害剤）、細胞外シグナル調節キナーゼ阻害剤（ＥＲＫ阻害剤）、および急速に進行する線維肉腫（ＲＡＦ）キナーゼ阻害剤からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記肥満細胞症は、ｃ−ＫＩＴ突然変異を伴う、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記ｃ−ＫＩＴ突然変異は、活性化突然変異である、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記肥満細胞症は、ｃ−ＫＩＴ遺伝子のエクソン１７の一次突然変異を伴う肥満細胞を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記一次突然変異は、ｃ−ＫＩＴ  Ｄ８１６突然変異である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記一次突然変異は、Ｄ８１６Ｖ、Ｄ８１６Ｙ、Ｄ８１６Ｆ、Ｄ８１６Ｈ、Ｆ５２２Ｃ、Ｋ５０９１、Ｖ５６０Ｇ、Ｖ５５９Ｇ、およびｄｅｌ４１９のうちの１つである、請求項５または６に記載の方法。
【請求項８】
前記一次突然変異はＤ８１６Ｖである、請求項５から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記肥満細胞症は、ｃ−ＫＩＴ二次突然変異を伴う肥満細胞を含む、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ｃ−ＫＩＴ二次突然変異は、エクソン９、１１、１３、または１７のうちの１つにある、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記ｃ−ＫＩＴ二次突然変異は、Ｙ２６９Ｃ、Ｙ５０３＿Ｆ５０４ｉｎｓＡＹ、Ｖ５６０ＤまたはＫ６４２Ｅの突然変異のうちの１つである、請求項９または１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記肥満細胞症はｃ−ＫＩＴ一次突然変異を伴うかどうかを判断することをさらに含む、請求項６から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記肥満細胞症はｃ−ＫＩＴ二次突然変異を伴うかどうかを判断することをさらに含む、請求項６から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記肥満細胞症は、ｃ−ＫＩＴ一次突然変異を伴うかどうかを判断することまたはｃ−ＫＩＴ二次突然変異を伴うかどうかを判断することは、腫瘍試料から抽出されたＤＮＡにおける突然変異を特定することを含む、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記肥満細胞症がｃ−ＫＩＴ一次突然変異を伴うかどうかを判断することまたはｃ−ＫＩＴ二次突然変異を伴うかどうかを判断することは、血中腫瘍ＤＮＡにおける、または血中末梢血白血球における、突然変異を特定することを含む、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記肥満細胞症は、全身性肥満細胞症である、請求項１から１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記全身性肥満細胞症は、無痛性全身性肥満細胞症、くすぶり型の全身性肥満細胞症、関連するクローン性血液非肥満細胞系統疾患を伴う全身性肥満細胞症、侵襲的全身性肥満細胞症、肥満細胞白血病、および肥満細胞肉腫からなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記肥満細胞症は、無痛性全身性肥満細胞症であり、任意に、皮膚病変を含まないアナフィラキシー再発または血管崩壊を伴う全身性肥満細胞症である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
前記肥満細胞症は、くすぶり型の全身性肥満細胞症である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
前記肥満細胞症は、関連するクローン性血液非肥満細胞系統疾患を伴う全身性肥満細胞症である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２１】
前記肥満細胞症は、侵襲的全身性肥満細胞症である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２２】
前記肥満細胞症は、肥満細胞白血病または肥満細胞肉腫である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２３】
前記肥満細胞症は、皮膚肥満細胞症である、請求項１から１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記肥満細胞症は、斑点状丘疹皮膚肥満細胞症、肥満細胞腫、またはびまん性皮膚肥満細胞症からなる群から選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記ｃ−ＫＩＴ阻害剤は、１−［４−ブロモ−５−［１−エチル−７−（メチルアミノ）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−３−イル］−２−フルオロフェニル］−３−フェニル尿素またはその薬学的に許容可能な塩、ミドスタリンまたはその薬学的に許容可能な塩、イマチニブメシル酸塩、スニチナブリンゴ酸塩（ｓｕｎｉｔｉｎａｂ  ｍａｌａｔｅ）、ミドスタウリン、レゴラフェニブ、クレノラニブ（ｃｒｅｎｏｌａｎｉｂ）、ＰＴＸ９４８６、もしくはＢＬＵ−２８５またはその薬学的に許容可能な塩からなる群から選択される、請求項１から２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、セルメチニブ、コビメチニブ、およびビニメチニブからなる群から選択される、請求項２から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記ＭＥＫ阻害剤は、ビニメチニブである、請求項２から２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブである、請求項２から２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記ＥＲＫ阻害剤は、ウリキセルチニブ（ｕｌｉｘｅｒｔｉｎｉｂ）、ＳＣＨ７７２９８４、およびＬＹ３２１４９９６からなる群から選択される、請求項２から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記ｃ−ＫＩＴ阻害剤および前記ＭＥＫ阻害剤および／または前記ＥＲＫ阻害剤は、実質的に同時にまたは連続的に投与される、請求項２から２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
別の癌標的治療薬、癌標的生物剤、免疫チェックポイント阻害剤、または化学療法剤を投与することをさらに含む、請求項１から３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
投与の２週間以上後に、前記患者は少なくとも部分寛解である、請求項１から３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
それを必要とする患者における全身性肥満細胞症を治療する方法であって、前記患者に対して、
有効量の１−［４−ブロモ−５−［１−エチル−７−（メチルアミノ）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−３−イル］−２−フルオロフェニル］−３−フェニル尿素、またはその薬学的に許容可能な塩と、有効量の１または複数のＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤とを投与することを含む、方法。
【請求項３４】
前記ＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤は、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＥＫ阻害剤）、および細胞外シグナル調節キナーゼ阻害剤（ＥＲＫ阻害剤）からなる群から選択される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記全身性肥満細胞症は、ｃ−ＫＩＴ突然変異を伴う、請求項３３または３４に記載の方法。
【請求項３６】
突然変異は、ｃ−ＫＩＴ  Ｄ８１６突然変異である、請求項３３または３４に記載の方法。
【請求項３７】
前記突然変異は、Ｄ８１６Ｖ、Ｄ８１６Ｙ、Ｄ８１６Ｆ、Ｄ８１６Ｈ、Ｆ５２２Ｃ、Ｋ５０９１、Ｖ５６０Ｇ、Ｖ５５９Ｇ、およびｄｅｌ４１９のうちの１つである、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記突然変異は、Ａ５５３Ｄ、Ｃ４３３Ｙ、Ｄ４１９Ｙ、Ｄ５７２Ａ、Ｄ８１６Ｆ、Ｄ８１６Ｈ、Ｄ８１６Ｉ、Ｄ８１６Ｖ、Ｄ８１６Ｙ、Ｄ８２０Ｇ、ｄｅｌ４１９、ｄｕｐ（５０１−５０２）、Ｅ８３９Ｋ、Ｆ５２２Ｃ、Ｉ８１７Ｖ、ＩｎｓＦＦ４１９、ＩｎｓＶ８１５−Ｉ８１６、Ｋ５０９Ｉ、Ｎ８２２Ｉ、Ｒ８１５Ｋ、Ｔ４１７Ｖ、Ｖ５６０Ｇ、Ｖ５５９ＩまたはＹ４１８Ｙのうちの１つである、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
突然変異はＤ８１６Ｖである、請求項３４から３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記肥満細胞症は、Ｙ２６９Ｃ、Ｙ５０３＿Ｆ５０４ｉｎｓＡＹ、Ｖ５６０Ｄ、またはＫ６４２Ｅの突然変異のうちの１つであるさらなるｃ−ＫＩＴ突然変異を伴う、請求項３４から３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
前記ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、セルメチニブ、コビメチニブ、およびビニメチニブからなる群から選択される、請求項３４から４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記ＭＥＫ阻害剤は、ビニメチニブである、請求項３４から４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブである、請求項３４から４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記ＥＲＫ阻害剤は、ウリキセルチニブ（ｕｌｉｘｅｒｔｉｎｉｂ）、ＳＣＨ７７２９８４、およびＬＹ３２１４９９６からなる群から選択される、請求項３４から４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
それを必要とする患者における肥満細胞症を治療する方法であって、前記患者に対して、
有効量のｃ−ＫＩＴ阻害剤と、
有効量のＲＡＦ阻害剤とを投与することを含む、方法。
【請求項４６】
ＲＡＦ阻害剤は、汎ＲＡＦ阻害剤またはＢ−ＲＡＦ阻害剤である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４７】
前記ｃ−ＫＩＴ阻害剤は、１−［４−ブロモ−５−［１−エチル−７−（メチルアミノ）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−３−イル］−２−フルオロフェニル］−３−フェニル尿素、またはその薬学的に許容可能な塩である、請求項４４または４５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、２０１８年１月３１日に出願された米国特許出願第６２／６２４，４５３号に対する優先権を主張するものであり、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
ｃ−ＫＩＴ（ＫＩＴ、ＣＤ１１７、および幹細胞因子受容体としても知られる）は、ＩＩＩ型受容体として作用する１４５ｋＤａの膜貫通型チロシンキナーゼタンパク質である。染色体４ｑ１１−２１に位置するｃ−ＫＩＴ癌原遺伝子は、ｃ−ＫＩＴ受容体をコードし、そのリガンドは幹細胞因子（ＳＣＦ、造血幹細胞因子、ｋｉｔリガンド、肥満細胞増殖因子）である。受容体はチロシンプロテインキナーゼ活性を有し、リガンドＳＣＦの結合は、ｃ−ＫＩＴの自己リン酸化、およびホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）などの基質とのその会合を導く。タンパク質チロシンキナーゼによるチロシンリン酸化は、細胞シグナル伝達において特に重要であり、増殖、生存、分化、アポトーシス、付着、侵襲および遊走などの主要な細胞内プロセスのためのシグナルを媒介することができる。
【０００３】
受容体チロシンキナーゼｃ−ＫＩＴ遺伝子は、肥満細胞の増殖、生存、分化およびホメオスタシスにとって重要である。ｃ−ＫＩＴ遺伝子の活性化突然変異または過剰発現は、ｃ−ＫＩＴ受容体の能力を高め、細胞内経路を開始させて、結果として異常肥満細胞増殖をもたらす。
【０００４】
肥満細胞症は、皮膚、骨髄、および内臓（例えば、肝臓、脾臓、胃腸管およびリンパ節）における肥満細胞（ＭＣ）の異常蓄積によって特徴付けられる希少な障害である。成人期に始まる症例は慢性である傾向があり、皮膚に加えて骨髄が関与しているが、一方、小児期では、症状は内臓の関与なしで皮膚症状を特徴とすることが多く、また思春期の間に解決できることが多い。ほとんどの成人患者では、肥満細胞症は持続性である傾向があり、また患者の少数でより高度なカテゴリーに進行する場合がある。肥満細胞症は、患者の病徴および全体的な症状に応じて特定の種類に分類できる。肥満細胞症の種類には、皮膚肥満細胞症（例えば、斑点状丘疹性皮膚肥満細胞症、肥満細胞腫、およびびまん性皮膚肥満細胞症）および全身性肥満細胞症（例えば、無痛性全身性肥満細胞症（ＩＳＭ）、くすぶり型の全身性肥満細胞症（ＳＳＭ）、関連するクローン性血液非肥満細胞系列疾患を伴う全身性肥満細胞症（ＳＭ−ＡＨＮ）、侵襲的全身性肥満細胞症（ＡＳＭ）、肥満細胞性白血病（ＭＣＬ）及び肥満細胞肉腫）が含まれる。稀な症例では、侵襲的な新生物肥満細胞の増殖が結果として末端器官障害をもたらし、患者は寿命が著しく短縮し、細胞減少療法を必要とする。ｃ−ＫＩＴの発癌性突然変異によって生じた新生物肥満細胞の病的な蓄積は、全身性肥満細胞症の原因であることが発見された。主要な活性化ＫＩＴ突然変異は、残基８１６（ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ）でのアスパラギン酸からバリンへの置換である。その肥満細胞が活性化Ｄ８１６Ｖ  ｃ−ＫＩＴ突然変異を含有する頻度が高いものである全身性肥満細胞症を患う患者は、侵襲的疾患に対して不活性である場合があり、また当該患者は、肥満細胞メディエーター放出関連の症状を経験する場合がある。再発性アナフィラキシー、または皮膚病変の存在がない血管虚脱を伴う不活性の全身性肥満細胞症は、特定のサブタイプの不活性全身性肥満細胞症であり、このクローンＭＣ活性化障害は、すべての肥満細胞活性化症候群のうち有意な割合を表す。Ｖ５６０Ｇ  ＫＩＴ突然変異は、全身性肥満細胞症を患う患者では極めて稀であり、その生物学的および予後の影響は不明である。現在、大部分のチロシンキナーゼ阻害剤は、進行した疾患状態において控えめな効能を示すのみであり、そして有意な副作用を伴う。さらに、ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ突然変異を含む一部の侵襲的ＫＩＴ突然変異は、イマチニブ、スニチニブ、ソラフェニブ、およびレゴラフェニブなどの古典的ＡＴＰ競合ＫＩＴ阻害剤に対し耐性がある。ｃ−ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖの阻害剤、ミドスタウリンは、２０１７年にＳＭの治療のために最近承認された。
【０００５】
ｃ−ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ突然変異は、全身性肥満細胞症（ＳＭ）のドライバーとして報告されたｃ−ＫＩＴ一次突然変異であるが、特定のｃ−ＫＩＴ阻害剤に対する耐性を与えるｃ−ＫＩＴ二次突然変異（「耐性ｃ−ＫＩＴ二次突然変異」）もまた肥満細胞症患者において報告されており、例えばｃ−ＫＩＴ遺伝子における、Ｙ２６９Ｃ、Ｙ５０３＿Ｆ５０４ｉｎｓＡＹ、Ｖ５６０Ｄ、もしくはＫ６４２Ｅの点突然変異、インフレーム欠損もしくは挿入、またはミスセンス突然変異を含む。
【０００６】
ｃ−ＫＩＴ遺伝子の活性化突然変異または過剰発現は、新生物肥満細胞増殖につながる。ｃ−ＫＩＴの複雑な機能、および薬剤耐性の全身性肥満細胞症の治療におけるｃ−ＫＩＴ阻害剤の潜在的な有用性を考慮すると、有益な治療特性を有する阻害剤および治療的処置が要望されている。
【発明の概要】
【０００７】
本開示は、肥満細胞症細胞のアポトーシスを誘発するために、例えば１−［４−ブロモ−５−［１−エチル−７−（メチルアミノ）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−３−イル］−２−フルオロフェニル］−３−フェニル尿素（化合物Ａ）であるｃ−ＫＩＴ阻害剤、ならびに、例えばトラメチニブであるＭＥＫ阻害剤、またはウリキセルチニブ等であるＥＲＫ阻害剤、またはＬＹ３００９１２０等であるＲＡＦ阻害剤である、ＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤の使用に一部関する。
【０００８】
本開示において提供される方法は、それを必要とする患者における肥満細胞症を治療する方法であって、患者に対して、例えば、１−［４−ブロモ−５−［１−エチル−７−（メチルアミノ）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−３−イル］−２−フルオロフェニル］−３−フェニル尿素（本明細書に記載の化合物Ａ）である有効量のｃ−ＫＩＴ阻害剤、および有効量のマイトジェン活性化プロテインキナーゼの阻害剤（ＭＥＫ阻害剤）、および／または有効量の細胞外シグナル調節キナーゼ阻害剤（ＥＲＫ阻害剤）、を投与することを含む。
【０００９】
例えば、それを必要とする患者における全身性肥満細胞症を治療する方法であって、患者に対して、有効量の１−［４−ブロモ−５−［１−エチル−７−（メチルアミノ）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−３−イル］−２−フルオロフェニル］−３−フェニル尿素またはその薬学的に許容可能な塩、および有効量のマイトジェン活性化プロテインキナーゼの阻害剤（ＭＥＫ阻害剤）またはＥＲＫ阻害剤を投与することを含む。
【００１０】
また、この開示において、それを必要とする患者における肥満細胞症を治療する方法であって、患者に対して、有効量のｃ−ＫＩＴ阻害剤、および有効量のＲＡＦ阻害剤を投与することを含む方法を意図する。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１−１】図１Ａは、ＨＭＣ１．１  Ｖ５６０Ｇ（左パネル）およびＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ（右パネル）の細胞株におけるビヒクル対照と比較した、化合物Ａと共に図示した薬剤での処置後の細胞増殖のグラフ表示を示す。
【００１２】
【図１−２】図１Ｂは、ＨＭＣ１．１  Ｖ５６０Ｇ（左パネル）およびＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ（右パネル）の細胞株におけるビヒクル対照と比較した、化合物Ｂと共に図示した薬剤での処置後の細胞増殖のグラフ表示を示す。
【００１３】
【図２−１】図２Ａは、ＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞株における、化合物Ａおよびトラメチニブによる図示した様々な処置後のカスパーゼ活性のグラフ表示を示す。
【００１４】
【図２−２】図２Ｂは、ＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞株における化合物Ａおよびトラメチニブによる様々な処置に関する併用指数法（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｉｎｄｅｘ  ｍｅｔｈｏｄ）に基づく相乗作用のマトリクス図を提供する。
【００１５】
【図２−３】図２Ｃは、ＭＥＫ阻害剤トラメチニブと化合物Ａとの併用に関する併用指数プロットを提供する。
【００１６】
【図３−１】図３Ａは、ＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞株における、化合物Ｂおよびトラメチニブによる図示した様々な処置後のカスパーゼ活性のグラフ表示を示す。
【００１７】
【図３−２】図３Ｂは、ＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞株における化合物Ｂおよびトラメチニブによる様々な処置のための併用指数法に基づく相乗作用のマトリクス図を提供する。
【００１８】
【図３−３】図３Ｃは、ＭＥＫ阻害剤トラメチニブと化合物Ｂとの併用に関する併用指数プロットを提供する。
【００１９】
【図４−１】図４Ａは、ＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞株における、化合物Ａおよびビニメチニブによる図示した様々な処置後のカスパーゼ活性のグラフ表示を示す。
【００２０】
【図４−２】図４Ｂは、ＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞株における化合物Ａおよびビニメチニブによる様々な処置に関する併用指数法に基づく相乗作用のマトリクス図を提供する。
【００２１】
【図４−３】図４Ｃは、ＭＥＫ阻害剤ビニメチニブと化合物Ａとの併用に関する併用指数プロットを提供する。
【００２２】
【図５−１】図５Ａは、ＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞株における、化合物Ｂおよびビニメチニブによる図示した様々な処置後のカスパーゼ活性のグラフ表示を示す。
【００２３】
【図５−２】図５Ｂは、ＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞株における化合物Ｂおよびビニメチニブによる様々な処置に関する併用指数法に基づく相乗作用のマトリクス図を提供する。
【００２４】
【図５−３】図５Ｃは、ＭＥＫ阻害剤ビニメチニブと化合物Ｂとの併用に関する併用指数プロットを提供する。
【００２５】
【図６−１】図６Ａは、ＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞株における、化合物Ａおよびコビメチニブによる図示した様々な処置後のカスパーゼ活性のグラフ表示を示す。
【００２６】
【図６−２】図６Ｂは、ＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞株における化合物Ａおよびコビメチニブによる様々な処置のための併用指数法に基づく相乗作用のマトリクス図を提供する。
【００２７】
【図６−３】図６Ｃは、ＭＥＫ阻害剤コビメチニブと化合物Ａとの併用に関する併用指数プロットを提供する。
【００２８】
【図７−１】図７Ａは、ＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞株における、化合物Ｂおよびコビメチニブによる図示した様々な処置後のカスパーゼ活性のグラフ表示を示す。
【００２９】
【図７−２】図７Ｂは、ＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞株における化合物Ｂおよびコビメチニブによる様々な処置に関する併用指数法に基づく相乗作用のマトリクス図を提供する。
【００３０】
【図７−３】図７Ｃは、ＭＥＫ阻害剤コビメチニブと化合物Ｂとの併用に関する併用指数プロットを提供する。
【００３１】
【図８−１】図８Ａは、ＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞株における、化合物ＡおよびＥＲＫ阻害剤ウリキセルチニブ（ｕｌｉｘｅｒｔｉｎｉｂ）による図示した様々な処置後のカスパーゼ活性のグラフ表示を示す。
【００３２】
【図８−２】図８Ｂは、ＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞株における化合物ＡおよびＥＲＫ阻害剤ウリキセルチニブによる様々な処置に関する併用指数法に基づく相乗作用のマトリクス図を提供する。
【００３３】
【図８−３】図８Ｃは、ＥＲＫ阻害剤ウリキセルチニブと化合物Ａとの併用に関する併用指数プロットを提供する。
【００３４】
【図９】図９Ａは、ＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞における、単剤化合物Ａ、単剤トラメチニブ、およびＭＥＫ阻害剤トラメチニブと化合物Ａとの併用、による処置からのコロニー増殖の阻害を示す。
【００３５】
図９Ｂは、ＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞における、単剤化合物Ａ、単剤トラメチニブ、およびＭＥＫ阻害剤トラメチニブと化合物Ａとの併用、による処置からのコロニー増殖の阻害のグラフ表示を示す。矢印は、コロニー増殖がないことを示す。
【００３６】
【図１０】図１０Ａは、ＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞における、単剤化合物Ｂ、単剤トラメチニブ、およびＭＥＫ阻害剤トラメチニブと化合物Ｂとの併用、による処置からのコロニー増殖の阻害を示す。
【００３７】
図１０Ｂは、ＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞における、単剤化合物Ｂ、単剤トラメチニブ、およびＭＥＫ阻害剤トラメチニブと化合物Ｂとの併用、による処置からのコロニー増殖の阻害のグラフ表示を示す。矢印は、コロニー増殖がないことを示す。
【００３８】
【図１１】図１１Ａは、ＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞における、単剤化合物Ａ、単剤ビニメチニブ、およびＭＥＫ阻害剤ビニメチニブと化合物Ａとの併用、による処置からのコロニー増殖の阻害を示す。
【００３９】
図１１Ｂは、ＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞における、単剤化合物Ａ、単剤ビニメチニブ、およびＭＥＫ阻害剤ビニメチニブと化合物Ａとの併用、による治療からのコロニー増殖の阻害のグラフ表示を示す。矢印は、コロニー増殖がないことを示す。
【００４０】
【図１２】図１２Ａは、ＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞における、単剤化合物Ｂ、単剤ビニメチニブ、およびＭＥＫ阻害剤ビニメチニブと化合物Ｂとの併用、による処置からのコロニー増殖の阻害を示す。
【００４１】
図１２Ｂは、ＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞における、単剤化合物Ｂ、単剤ビニメチニブ、およびＭＥＫ阻害剤ビニメチニブと化合物Ｂとの併用、による処置からのコロニー増殖の阻害のグラフ表示を示す。矢印は、コロニー増殖がないことを示す。
【００４２】
【図１３】図１３Ａは、ＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞における、単剤化合物Ａ、単剤コビメチニブ、およびＭＥＫ阻害剤コビニメチニブと化合物Ａとの併用、による処置からのコロニー増殖の阻害を示す。
【００４３】
図１３Ｂは、ＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞における、単剤化合物Ａ、単剤コビメチニブ、およびＭＥＫ阻害剤コビメチニブと化合物Ａとの併用、による処置からのコロニー増殖の阻害のグラフ表示を示す。
【００４４】
【図１４】図１４Ａは、ＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞における、単剤化合物Ｂ、単剤コビメチニブ、およびＭＥＫ阻害剤コビメチニブと化合物Ｂとの併用、による処置からのコロニー増殖の阻害を示す。
【００４５】
図１４Ｂは、ＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞における、単剤化合物Ｂ、単剤コビメチニブ、およびＭＥＫ阻害剤コビメチニブと化合物Ｂとの併用、による処置からのコロニー増殖の阻害のグラフ表示を示す。
【００４６】
【図１５】図１５Ａは、空のベクター（ＥＶ、左パネル）、またはＮ−ｒａｓ  Ｇ１２Ｄ（右パネル）を形質移入したＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞中における２４時間での化合物Ａおよびトラメチニブによる様々な処置後のカスパーゼ活性のグラフ表示を示す。
【００４７】
図１５Ｂは、空のベクター（左パネル）、またはＮ−ｒａｓ  Ｇ１２Ｄ（右パネル）を形質移入したＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞中における４８時間での化合物Ａおよびトラメチニブによる様々な処置後のカスパーゼ活性のグラフ表示を示す。
【００４８】
【図１６】図１６Ａは、空のベクター（ＥＶ、左パネル）、またはＮ−ｒａｓ  Ｇ１２Ｄ（右パネル）を形質移入したＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞中における２４時間での化合物Ａおよびコビメチニブによる様々な治療後のカスパーゼ活性のグラフ表示を示す。
【００４９】
図１６Ｂは、空のベクター（左パネル）、またはＮ−ｒａｓ  Ｇ１２Ｄ（右パネル）を形質移入したＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞中における４８時間での化合物Ａおよびコビメチニブによる様々な処置後のカスパーゼ活性のグラフ表示を示す。
【００５０】
【図１７−１】図１７Ａは、空のベクター（ＥＶ）を形質移入したＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞における、単剤化合物Ａ、単剤トラメチニブ、およびＭＥＫ阻害剤トラメチニブと化合物Ａとの併用、による処置からのコロニー増殖の阻害を示す。
【００５１】
図１７Ｂは、空のベクター（ＥＶ）を形質移入したＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞における、単剤化合物Ａ、単剤トラメチニブ、およびＭＥＫ阻害剤トラメチニブと化合物Ａとの併用、による処置からのコロニー増殖の阻害のグラフ表示を示す。矢印は、コロニー増殖がないことを示す。
【００５２】
【図１７−２】図１７Ｃは、Ｎ−ｒａｓ  Ｇ１２Ｄを形質移入したＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞における、単剤化合物Ａ、単剤トラメチニブ、およびＭＥＫ阻害剤トラメチニブと化合物Ａとの併用、による処置からのコロニー増殖の阻害を示す。
【００５３】
図１７Ｄは、Ｎ−ｒａｓ  Ｇ１２Ｄを形質移入したＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞における、単剤化合物Ａ、単剤トラメチニブ、およびＭＥＫ阻害剤トラメチニブと化合物１との併用、による処置からのコロニー増殖の阻害のグラフ表示を示す。矢印は、コロニー増殖がないことを示す。
【００５４】
【図１８−１】図１８Ａは、空のベクター（ＥＶ）を形質移入したＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞における、単剤化合物Ａ、単剤コビメチニブ、およびＭＥＫ阻害剤コビメチニブと化合物Ａとの併用、による処置からのコロニー増殖の阻害を示す。
【００５５】
図１８Ｂは、空のベクター（ＥＶ）を形質移入したＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞における、単剤化合物Ａ、単剤コビメチニブ、およびＭＥＫ阻害剤コビメチニブと化合物Ａとの併用、による処置からのコロニー増殖の阻害を示す。矢印は、コロニー増殖がないことを示す。
【００５６】
【図１８−２】図１８Ｃは、Ｎ−ｒａｓ  Ｇ１２Ｄを形質移入したＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞における、単剤化合物Ａ、単剤コビメチニブ、およびＭＥＫ阻害剤コビメチニブと化合物Ａとの併用、による処置からのコロニー増殖の阻害を示す。
【００５７】
図１８Ｄは、Ｎ−ｒａｓ  Ｇ１２Ｄを形質移入したＨＭＣ１．２Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞における、単剤化合物Ａ、単剤コビメチニブ、およびＭＥＫ阻害剤コビメチニブと化合物Ａとの併用、による処置からのコロニー増殖の阻害のグラフ表示を示す。矢印は、コロニー増殖がないことを示す。
【発明を実施するための形態】
【００５８】
添付の実施例に示されるように、例えば１−［４−ブロモ−５−［１−エチル−７−（メチルアミノ）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−３−イル］−２−フルオロフェニル］−３−フェニル尿素（化合物Ａ）であるｃ−ＫＩＴ阻害剤と、例えばＭＥＫ阻害剤トラメチニブ、またはＥＲＫ阻害剤ウリキセルチニブ、またはＲＡＦ阻害剤ＬＹ３００９１２０である、ＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤との併用が、予期せずに、相乗作用を発揮して肥満細胞症細胞のアポトーシスを誘発することが見られる。加えて、本明細書に開示される併用療法は、単に細胞増殖抑制性であることと対立するものとして、細胞致死性である。
【００５９】
いかなる特定の理論に拘束されることを望むものではないが、多くのｃ−ＫＩＴ阻害剤は、ｃ−ＫＩＴの特定の突然変異体の形態のみを阻害し、ＳＭの原因であるｃ−ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ突然変異を効果的に阻害しないと考えられる。本開示は、ｃ−ＫＩＴ阻害剤をＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤と組み合わせて使用して、ｃ−ＫＩＴおよびＭＥＫの両方を阻害することにより、ｃ−ＫＩＴ媒介性肥満細胞症を治療する方法を提供する。特定の実施形態では、ｃ−ＫＩＴ阻害剤は、本明細書では、化合物Ａもしくはその薬学的に許容可能な塩、化合物Ｂもしくはその薬学的に許容可能な塩、ミドスタウリンもしくはその薬学的に許容可能な塩、ＢＬＵ−２８５もしくはその薬学的に許容可能な塩、ＰＬＸ９４８６もしくはその薬学的に許容可能な塩、またはクレノラニブ（ｃｒｅｎｏｌａｎｉｂ）もしくはその薬学的に許容可能な塩として開示する。驚くべきことに、例えば化合物Ａ及び化合物Ｂ（およびその薬学的に許容可能な塩）であるｃ−ＫＩＴ阻害剤は、ＭＥＫ、ＥＲＫ、またはＲＡＦの阻害剤と相乗作用を発揮し、肥満細胞症細胞の増殖を阻害し、且つ、肥満細胞症細胞のアポトーシスを誘発する。
【００６０】
〔0060〕したがって、特定の実施形態では、本開示は、例えばｃ−ＫＩＴ突然変異を含む肥満細胞である肥満細胞をｃ−ＫＩＴ阻害剤およびＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤と接触することによって、細胞致死性の肥満細胞死滅を誘発すること、肥満細胞のアポトーシスを誘発すること、肥満細胞の成長もしくは増殖を阻害すること、肥満細胞メディエーター放出を阻害すること、組織もしくは器官における蓄積する肥満細胞の量を減少すること、例えば肥満細胞性白血病もしくは肥満細胞肉腫等の肥満細胞症関連腫瘍の体積を減少すること、および／または、肥満細胞の再増殖を阻害すること、を誘発する方法を提供する。様々な実施形態では、肥満細胞は、インビトロ、インビボまたはエクソビボで接触させる。特定の実施形態では、ｃ−ＫＩＴ阻害剤は、化合物Ａもしくはその薬学的に許容可能な塩、化合物Ｂもしくはその薬学的に許容可能な塩、ミドスタウリンもしくはその薬学的に許容可能な塩、ＢＬＵ−２８５もしくはその薬学的に許容可能な塩、ＰＬＸ９４８６もしくはその薬学的に許容可能な塩、またはクレノラニブ（ｃｒｅｎｏｌａｎｉｂ）またはその薬学的に許容可能な塩として本明細書に開示され、本明細書においてＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、コビメチニブ、セルメチニブ、またはビニメチニブとして開示され、ＥＲＫ阻害剤はウリキセルチニブ、ＳＣＨ７７２９８４、ＬＹ３２１４９９６、ラボキセルチニブ（ｒａｖｏｘｅｒｔｉｎｉｂ）およびＶＸ−１１ｅを含むがこれに限定されるものではなく、またＲＡＦ阻害剤は、ＬＹ３００９１２０、ベムラフェニブ、またはダブラフェニブを含むがこれに限定されるものではない。
【００６１】
特定の実施形態では、本開示は、肥満細胞症、肥満細胞性白血病、または急性骨髄性白血病を有する対象を治療する方法であって、対象に対して、（ｉ）例えば１−［４−ブロモ−５−［１−エチル−７−（メチルアミノ）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−３−イル］−２−フルオロフェニル］−３−フェニル尿素もしくはその薬学的に許容可能な塩、または１−（５−（７−アミノ−１−エチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−３−イル）−４−ブロモ−２−フルオロフェニル）−３−フェニル尿素もしくはその薬学的に許容可能な塩であるＫＩＴ阻害剤と、（ｉｉ）例えばトラメチニブ、ビニメチニブ、ウリキセルチニブであるＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤とを、有効量で投与することを含む上記方法を含む。本明細書に開示される方法のいずれかの特定の実施形態では、肥満細胞症は、肥満細胞中のｃ−ＫＩＴ遺伝子のＤ８１６Ｖ突然変異から生じた全身性肥満細胞症である。
定義
【００６２】
本明細書において使用される場合、「化合物Ａおよび化合物Ｂ」とは、１−［４−ブロモ−５−［１−エチル−７−（メチルアミノ）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−３−イル］−２−フルオロフェニル］−３−フェニル尿素、および１−（５−（７−アミノ−１−エチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−３−イル）−４−ブロモ−２−フルオロフェニル）−３−フェニル尿素をそれぞれ指す。化合物Ａおよび化合物Ｂの薬学的に許容可能な塩、互変異性体、水和物、および溶媒和物もまた、本開示において意図される。化合物Ａおよび化合物Ｂの構造を以下に示す：
【化１】
2021512101.tif 000003
１−［４−ブロモ−５−［１−エチル−７−（メチルアミノ）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−３−イル］−２−フルオロフェニル］−３−フェニル尿素（化合物Ａ）
【化２】
2021512101.tif 000004
１−（５−（７−アミノ−１−エチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−３−イル）−４−ブロモ−２−フルオロフェニル）−３−フェニル尿素（化合物Ｂ）
【００６３】
化合物Ａおよび化合物Ｂの製造方法は、参照によりその内容が本明細書に組み込まれる米国特許第８４６１１７９Ｂ１号公報に開示されている。
【００６４】
例示的な方法および材料を、本明細書に記載している。明細書および添付の特許請求の範囲において、文脈から別段に明示されない限り、単数形は複数形も含む。別段に規定しない限り、本明細書において使用される全ての技術用語および科学用語は、当業者によって普遍的に理解される意味と同じ意味を有する。
【００６５】
〔0065〕本開示全体を通して、様々な特許、特許出願、および公開公報が参照される。これら特許、特許出願および公開公報の開示はその全体が、本開示の日付において当業者に公知である当技術の状況をさらに詳細に記述するために、参照により本開示に組み込まれる。それら特許、特許出願および公開公報と本開示との間に何らかの不一致がある場合には、本開示が優先されることとなる。
簡便のため、本明細書、実施例および特許請求の範囲に採用される特定の語を、ここにまとめる。別段に規定しない限り、本開示で使用される全ての技術用語および科学用語は、本開示が属する技術の当業者によって普遍的に理解される意味と同じ意味を有する。本開示において提示される群または語に対して提示される最初の定義は、別段に示さない限り、本開示全体を通じて当該群または語に対して個々に、または別の群の一部として適用される。
【００６６】
「薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤」としては、ヒトまたは家畜における使用に許容可能であるとして、米国食品医薬品局（Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）に承認された任意のアジュバント、担体、賦形剤、流動促進剤、甘味剤、希釈剤、保存剤、色素／着色剤、調味料（ｆｌａｖｏｒ  ｅｎｈａｎｃｅｒ）、界面活性剤、湿潤剤、分散剤、懸濁化剤、安定剤、等張剤、溶媒または乳化剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６７】
「薬学的に許容可能な塩」としては、酸付加塩が挙げられる。
【００６８】
「薬学的に許容可能な酸付加塩」とは、遊離塩基の生物学的な有効性および特性を保持するそうした塩を指し、それらは生物的に望ましくないものでもなく、またはそれ以外の望ましくないものでもなく、そして例えば、限定されないが、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸、および例えば限定されないが、酢酸、２，２−ジクロロ酢酸、アジピン酸、アルギン酸、アスコルビン酸、アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、４−アセトアミド安息香酸、ショウノウ酸、カンファー−１０−スルホン酸、カプリン酸、カプロン酸、カプリル酸、炭酸、ケイ皮酸、クエン酸、シクラミン酸、ドデシル硫酸、エタン−１，２−ジスルホン酸、エタンスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、ガラクタル酸、ゲンチシン酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルクロン酸、グルタミン酸、グルタル酸、２−オキソ−グルタル酸、グリセロリン酸、グリコール酸、馬尿酸、イソ酪酸、乳酸、ラクトビオン酸、ラウリン酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、粘液酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸、ニコチン酸、オレイン酸、オロチン酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、プロピオン酸、ピログルタミン酸、ピルビン酸、サリチル酸、４−アミノサリチル酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、酒石酸、チオシアン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、ウンデシレン酸などの有機酸で形成される。
【００６９】
「医薬組成物」とは、本明細書に記載の化合物（例えば化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩）と、生物学的に活性な化合物の、例えばヒトである哺乳動物への送達に関して、当技術において概して許容可能である媒体との製剤を指す。そのような媒体としては、それらのためのすべての薬学的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤が挙げられる。
【００７０】
〔0001〕「ＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤」は、ＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路の阻害剤である。この経路の阻害剤には、ＲＡＳ阻害剤、ＲＡＦ阻害剤（例えば、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、ＬＹ３００９１２０）、ＭＥＫ阻害剤（例えば、トラメチニブ、ビニメチニブ、コビメチニブ）、およびＥＲＫ阻害剤（例えば、ウリキセルチニブ）が含まれる。
【００７１】
〔00070〕例えばＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤と組み合わせたｃ−ＫＩＴ阻害剤である、本開示の併用療法での「治療を必要とする」対象または患者には、例えば肥満細胞症、肥満細胞白血病、または急性骨髄性白血病である、有益な治療結果を達成するために本明細書に開示される併用で治療することが可能である疾患および／または症状を有する対象が含まれる。肥満細胞症の治療における有益な転帰は、ＩＷＧ−ＭＲＴ−ＥＣＮＭ基準（Ｇｏｔｌｉｂ  ｅｔ  ａｌ、Ｂｌｏｏｄ  ２０１３；１２１：２３９３−４０１）により定義されるような完全寛解、部分奏効、臨床的改善、または安定病態を含み得る。特定の実施形態においては、治療を必要とする対象は、皮膚肥満細胞症（例えば、斑点状丘疹性皮膚肥満細胞症、肥満細胞腫、およびびまん性皮膚肥満細胞症）または全身性肥満細胞症（例えば、無痛性全身性肥満細胞症、くすぶり型の全身性肥満細胞症、関連するクローン性血液非肥満細胞系列疾患を伴う全身性肥満細胞、侵襲的全身性肥満細胞症、肥満細胞性白血病および肥満細胞肉腫）に悩まされている。特定の実施形態では、対象は哺乳動物であり、例えば、ヒトまたは他の哺乳動物である。
【００７２】
本明細書に開示される化合物または他の治療薬と関連して使用する場合、「有効量」の語は、疾患または障害を治療または予防するために有用である、例えば化合物ＡまたはＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤である、単独または併用での、ある量の治療薬を指す。併用療法で使用する治療薬の有効量は、もう一方の薬剤が存在しない状態での治療薬の一方または両方の量が、疾患または障害を治療または予防するのに有効でなくても、併用療法で使用するときに疾患または障害の治療または予防に有用であるような各治療薬の量である。特定の実施形態では、有効量は、細胞致死性の肥満細胞死滅を誘発すること、肥満細胞のアポトーシスを誘発すること、組織または器官内の蓄積した肥満細胞の量を減少させること、肥満細胞症症状を減少させること、肥満細胞メディエーター放出を阻害すること、肥満細胞の増殖を阻害すること、および／または、肥満細胞の後退を誘発することを結果的に生じる量であり、肥満細胞は、活性化ｃ−ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ突然変異を含むｃ−ＫＩＴキナーゼにおいて活性化突然変異を包含するものである。「有効量」は、投与の形態、疾患または障害の特定の位置、ならびに対象の年齢、体重および全体的な健康に応じて変更可能である。投与する化合物の量は、疾患または症状の程度、重篤度および種類、所望される治療の量、ならびに医薬製剤の放出特性に依存するであろう。また、対象の健康状態、大きさ、重量、年齢、性別および薬剤に対する耐性にも依存するであろう。典型的には、化合物は、望ましい治療効果を実現するのに充分な期間、投与する。
【００７３】
「治療」、「治療する」および「治療すること」の語は、例えば肥満細胞症または急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を患う患者である、治療しようとする患者における介入の全範囲を含むことを意味する。治療することは、障害を治癒、改善、または少なくとも部分的に緩和させることであってもよい。特定の実施形態では、治療は、治療しようとする対象において、細胞致死性の肥満細胞死滅を誘発すること、肥満細胞のアポトーシスを誘発すること、組織または器官内の蓄積した肥満細胞の量を減少させること、肥満細胞症症状を減少させること、肥満細胞メディエーター放出を阻害すること、肥満細胞の増殖を阻害すること、および／または、肥満細胞の後退を誘発することを意図して実行する。特定の実施形態では、本明細書に開示される併用療法による治療は、たとえ肥満細胞症が実際に除去されなくとも、肥満細胞症症状のうちの１または複数を緩和する、遅延させる、または逆行させる、および／または肥満細胞症の後退を誘発する。いくつかの実施形態では、治療には、例えば肥満細胞症またはＡＭＬである疾患または障害を、完全に除去することが含まれる。他の実施形態においては、治療は、ＩＷＧ−ＭＲＴ−ＥＣＮＭ基準（Ｇｏｔｌｉｂ  ｅｔ  ａｌ、Ｂｌｏｏｄ  ２０１３；１２１：２３９３−４０１）により定義されるような、完全寛解、部分奏効、臨床的改善、または安定病態を結果として生じる。
【００７４】
本明細書において使用される場合、「肥満細胞」には、肥満細胞（マスト細胞とも呼ばれる）およびＣＤ３４＋肥満細胞前駆細胞を含む。
【００７５】
本明細書で使用される場合、「新生物」は、通常よりもより急速な細胞増殖によって増殖する異常組織を指す。新生物は、構造機構の部分的または完全な欠如、および正常組織との機能的協調を見せ、通常は良性（良性腫瘍）または悪性（癌）のいずれかでありうる組織の別個の腫瘤を形成する。
【００７６】
〔00075〕本明細書で使用される場合、「腫瘍」とは腫瘤を指す。これは、良性（概して無害）または悪性（癌性）の増殖を指す場合もある語である。悪性の増殖は、実質臓器または骨髄が起源であり得る。後者は多くの場合、液性腫瘍と呼ばれる。「腫瘍」は、肥満細胞白血病および肥満細胞肉腫を包含し、本明細書ではまとめて「肥満細胞症腫瘍」と称する。
【００７７】
特定の実施形態では、本明細書に開示される方法に従う肥満細胞症を治療することの治療効果は、当技術で公知の標準的な応答判定基準を使用して測定され得る。例えば、侵襲的全身性肥満細胞症、肥満細胞性白血病、および骨髄性新生物と関連する全身性肥満細胞症に対する治療の効果を定量化するために用いる「完全寛解（ＣＲ）、部分寛解（ＰＲ）、臨床的改善（ＣＩ）、または安定病態（ＳＤ）に関する応答判定基準」は、ＩＷＧ−ＭＲＴ−ＥＣＮＭ（Ｇｏｔｌｉｂ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｌｏｏｄ  ２０１３；１２１：２３９３−４０１）により定義されるそれら基準のいずれかであり得る。例えば、完全寛解（ＣＲ）は、４つの基準全てが必要であり、かつ、奏効期間が１２週以上である必要があり、ＢＭまたは他の生検された皮膚以外の臓器において凝集するコンパクトな新生物肥満細胞の存在がない。トリプターゼの血清濃度が＜２０ｎｇ／ｍＬ†であり、正常白血球数（ｎｏｒｍａｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ）を伴うＡＮＣとして規定される末梢血球数の寛解が≧１×１０９／Ｌであり、Ｈｂレベル≧１１ｇ／ｄＬであり、かつ、血小板数≧１００×１０９／Ｌであり、また触知できる肝脾腫大症と生検により確定診断されたまたは疑わしい全てのＳＭ関連臓器損傷（ＣＩ所見）とについての完全寛解である；部分寛解（ＰＲ）＊は、３つの基準全てが必要であり、また奏効期間が１２週以上である必要があり、ＣＲおよび進行性疾患（ＰＤ）両方の存在がなく、骨髄におけるおよび／または生検確定適格のＳＭ関連臓器障害での皮膚以外の臓器における新生物ＭＣが≧５０％まで減少すること、トリプターゼの血清濃度が≧５０％減少すること；ならびに、１または複数の生検により確定診断されたまたは疑わしいＳＭ関連臓器損傷（ＣＩ所見）の回復、を伴うものである；臨床的改善（ＣＩ）は、奏効期間が１２週以上である必要があり、満たそうとする非造血系および／または造血系の応答基準（表３参照）のうちの１以上が必要であり、ＣＲ／ＰＲおよび割り当てまたは進行性疾患（ＰＤ）の両方の存在がないものである。安定病態（ＳＤ）は、ＣＲ、ＰＲ、ＣＩ、またはＰＤの基準を満たしていないものである。
【００７８】
応答を判定するためのガイドラインには、（１）疾患に関連したグレード２以上の器官損傷のみが、臨床試験における主要評価項目として評価可能である、（２）ＣＲ、ＰＲ、ＳＤ、ＰＤ、および損失または応答（ＬＯＲ）の応答判定は、試験の文脈におけるこれらのグレード２以上の器官損傷の所見にのみ適用されるべきである、（３）患者を治験から除外する時点における疾患状態は、最初のグレード２以上の臓器損傷の知見の更新された状態と、特に関連する、（４）薬剤関連毒性および／またはその他の臨床問題の排除（例えば、貧血や輸血依存が悪化している場合の胃腸管出血など）は、基準のグレード２以上の器官損傷が悪化している患者において指定のＰＤまたはＬＯＲを割り当てる前に行わなければならない、ことを含む。
【００７９】
特定の実施形態では、本明細書に開示される方法に従ったＡＭＬを治療することの治療効果は、当技術で公知の標準的な応答判定基準を使用して測定され得る。例えば、ＡＭＬに対する治療の効果を定量化するために使用される「ＡＭＬの治療のための応答判定基準」は、Ｂｌｏｏｄ．２０１７  Ｊａｎ  ２６；１２９（４）：４２４−４４７で定義されるような、最小限の残存疾患（ＣＲＭＲＤ−）を含まない完全寛解（ＣＲ）、完全寛解（ＣＲ）、不完全な血液回復を伴うＣＲ（ＣＲｉ）、形態学的無白血病状態（ＭＬＦＳ）、部分寛解（ＰＲ）、安定病態（ＳＤ）、または進行性疾患（ＰＤ）を含めた、以下に規定される基準のいずれかであり得、また以下のとおり要約される：最小限の残存疾患を含まない完全寛解（ＣＲＭＲＤ−）：治療前試験を行う場合であれば、ＲＴ−ｑＰＣＲによる遺伝子マーカの陰性を伴うＣＲ、またはＭＦＣによる陰性を伴うＣＲである、完全寛解（ＣＲ）：骨髄芽球＜５％であり；血流中の芽球およびアウエル小体を伴う芽球が存在せず；髄外疾患が存在せず；髄外疾患が存在せず；絶対好中球数（ＡＮＣ）≧１．０×１０９／Ｌ（１０００／μＬ）であり；血小板数≧１００×１０９／Ｌ（１０００００／μＬ）である；不完全な血液回復を伴うＣＲ（ＣＲｉ）：残存好中球減少（＜１．０×１０９／Ｌ［１０００／μＬ］）または血小板減少（＜１００×１０９／Ｌ［１０００００／μＬ］）を除く全てのＣＲ基準の；形態学的無白血病状態（ＭＬＦＳ）：骨髄芽球＜５％であり；アウエル小体を伴う芽球が存在せず；髄外疾患が存在せず；血液回復は必要としない；部分寛解（ＰＲ）：ＣＲの全ての血液基準；骨髄芽球の割合の５％〜２５％への減少；および、少なくとも５０％の治療前骨髄芽球の割合の減少。
【００８０】
「併用療法」とは、２以上の治療薬、例えばｃ−ＫＩＴ阻害剤（化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩、ミドスタウリン、ＢＬＵ−２８５、ＰＬＸ９４８６またはクレノラニブ等）と、ＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤（トラメチニブ、コビメチニブ、セルメチニブ、ビニメチニブ、ウリキセルチニブ、ＬＹ３００９１２０を含むがこれに限定されない）とを、患者に投与することを含む治療である。２以上の治療薬は、同時に、例えば、別個の医薬組成物中でまたは同じ医薬組成物中で、送達されてもよく、または２以上の治療薬は、異なる時点で送達されてもよい。例えば、２以上の治療薬は同時にまたは重複する時間の間に送達されてもよく、および／または、１つの治療薬を、その他の治療薬の前または後に送達してもよい。化合物ＡなどのＫＩＴ阻害剤およびＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤の併用を伴う治療は、両方の薬剤での同時治療の期間が先行する、または当該期間がその後に続く、いずれかの単剤での治療を含んでいてもよい。しかしながら、一部の期間中に、有効量の２以上の治療薬が患者の体内に存在することが意図される。
治療方法
【００８１】
〔00080〕一実施形態では、本開示は、例えば全身性肥満細胞症（ＳＭ）である、肥満細胞症、任意にｃ−ＫＩＴ媒介性肥満細胞症を治療または予防する方法であって、それを必要とする対象に対して、有効量のｃ−ＫＩＴ阻害剤を、例えばトラメチニブ、コビメチニブ、セルメチニブ、ビニメチニブ、ウリキセルチニブ、またはＬＹ３００９１２０である有効量のＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤と組み合わせて提供することまたは投与することを含む上記方法を提供する。一実施形態では、本開示は、例えば全身性肥満細胞症（ＳＭ）である、肥満細胞症、任意にｃ−ＫＩＴ媒介性肥満細胞症を治療または予防する方法であって、それを必要とする対象に対して、有効量の化合物Ａ（またはその薬学的に許容可能な塩）または化合物Ｂ（またはその薬学的に許容可能な塩）を、例えばトラメチニブ、コビメチニブ、セルメチニブ、ビニメチニブ、ウリキセルチニブ、またはＬＹ３００９１２０である有効量のＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤と組み合わせて提供することまたは投与することを含む上記方法を提供する。関連する実施形態では、本開示は、例えば肥満細胞性白血病または肥満細胞肉腫である、肥満細胞腫瘍、任意にｃ−ＫＩＴ媒介性肥満細胞症を治療または予防する方法であって、それを必要とする対象に対して、有効量のｃ−ＫＩＴ阻害剤を、例えばトラメチニブ、コビメチニブ、セルメチニブ、ビニメチニブ、ウリキセルチニブ、またはＬＹ３００９１２０である有効量のＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤と組み合わせて提供することまたは投与することを含む上記方法を提供する。関連する実施形態では、本開示は、例えば肥満細胞性白血病または肥満細胞肉腫である、肥満細胞腫瘍、任意にｃ−ＫＩＴ媒介性肥満細胞腫瘍を治療または予防する方法であって、それを必要とする対象に対して、有効量の化合物Ａ（またはその薬学的に許容可能な塩）または化合物Ｂ（またはその薬学的に許容可能な塩）を、例えばトラメチニブ、コビメチニブ、セルメチニブ、ビニメチニブ、ウリキセルチニブ、またはＬＹ３００９１２０である有効量のＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤と併用して提供することまたは投与することを含む上記方法を提供する。
【００８２】
別の実施例においては、本開示は、それを必要とする患者における肥満細胞症を治療する方法であって、患者に対して、有効量のｃ−ＫＩＴ阻害剤、および有効量の１または複数のＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤を投与することを含む方法を提供する。こうしたＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤は、急速に進行する線維肉腫（ＲＡＦ）キナーゼ阻害剤、マイトジェン活性化プロテインキナーゼの阻害剤（ＭＥＫ阻害剤）、および細胞外シグナル調節キナーゼ阻害剤（ＥＲＫ阻害剤）からなる群から選択することが可能である。
【００８３】
かかる開示された方法の一実施形態では、肥満細胞症はｃ−ＫＩＴ突然変異を伴う。いくつかの実施形態においては、ｃ−ＫＩＴ突然変異は活性化突然変異である。
【００８４】
別の実施形態においては、肥満細胞症は、ｃ−ＫＩＴ遺伝子のエクソン１７における一次突然変異を伴う肥満細胞を含みうる。いくつかの実施形態においては、一次突然変異は、ｃ−ＫＩＴ  Ｄ８１６突然変異である。いくつかの実施形態においては、一次突然変異は、Ｄ８１６Ｖ、Ｄ８１６Ｙ、Ｄ８１６Ｆ、Ｄ８１６Ｈ、Ｆ５２２Ｃ、Ｋ５０９１、Ｖ５６０Ｇ、Ｖ５５９Ｇ、およびｄｅｌ４１９のうちの１つである。いくつかの実施形態においては、一次突然変異は、Ｄ８１６Ｖである。
【００８５】
肥満細胞症はまた、ｃ−ＫＩＴ二次突然変異を伴う肥満細胞を含んでもよい。いくつかの実施形態においては、ｃ−ＫＩＴ二次突然変異は、エクソン９、１１、１３または１７のうちの１つにある。いくつかの実施形態においては、ｃ−ＫＩＴ二次突然変異は、Ｙ２６９Ｃ、Ｙ５０３＿Ｆ５０４ｉｎｓＡＹ、Ｖ５６０ＤまたはＫ６４２Ｅの突然変異のうちの１つである。
【００８６】
〔00085〕本開示の方法は、肥満細胞症はｃ−ＫＩＴ一次突然変異を伴うかどうかを判断することをさらに含み得る。例えば、この方法は、肥満細胞症はｃ−ＫＩＴ二次突然変異を伴うかどうかを判断することをさらに含む。いくつかの実施形態においては、肥満細胞症はｃ−ＫＩＴ一次突然変異を伴うかどうかを判断することまたはｃ−ＫＩＴ二次突然変異を伴うかどうかを判断することは、腫瘍試料から抽出されたＤＮＡにおける突然変異を特定することを含む。さらに別の実施形態においては、肥満細胞症はｃ−ＫＩＴ一次突然変異を伴うかどうかを判断することまたはｃ−ＫＩＴ二次突然変異を伴うかどうかを判断することは、血液中の腫瘍ＤＮＡにおける突然変異を特定することまたは血液中の末梢血白血球における突然変異を特定することを含む。
【００８７】
肥満細胞症は、全身性肥満細胞症であり得る。いくつかの実施形態においては、全身性肥満細胞症は、不活性全身性肥満細胞症、くすぶり型の全身性肥満細胞症、関連するクローン性血液非肥満細胞系統疾患を伴う全身性肥満細胞症、侵襲的全身性肥満細胞症、肥満細胞白血病、及び肥満細胞肉腫からなる群から選択される。いくつかの実施形態においては、肥満細胞症は、不活性全身性肥満細胞症であり、任意に、アナフィラキシー再発、または皮膚病変が存在しない血管崩壊を伴う全身性肥満細胞症である。いくつかの実施形態においては、肥満細胞症は、くすぶり型の全身性肥満細胞症である。
【００８８】
いくつかの実施形態においては、肥満細胞症は、関連するクローン性血液非肥満細胞系統疾患を伴う全身性肥満細胞症である。いくつかの実施形態においては、肥満細胞症は、侵襲的全身性肥満細胞症である。いくつかの実施形態においては、肥満細胞症は、肥満細胞白血病または肥満細胞肉腫である。いくつかの実施形態においては、肥満細胞症は、皮膚肥満細胞症である。いくつかの実施形態においては、肥満細胞症は、斑点状丘疹皮膚肥満細胞症、肥満細胞腫、またはびまん性皮膚肥満細胞症からなる群から選択される。
【００８９】
こうした開示の方法においては、ｃ−ＫＩＴ阻害剤は、１−［４−ブロモ−５−［１−エチル−７−（メチルアミノ）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−３−イル］−２−フルオロフェニル］−３−フェニル尿素またはその薬学的に許容可能な塩、ミドスタウリンまたはその薬学的に許容可能な塩、イマチニブメシル酸塩、スニチナブリンゴ酸塩（ｓｕｎｉｔｉｎａｂ  ｍａｌａｔｅ）、ミドスタウリン、レゴラフェニブ、クレノラニブ（ｃｒｅｎｏｌａｎｉｂ）、ＰＴＸ９４８６、もしくはＢＬＵ−２８５（アバプリチニブ）またはその薬学的に許容可能な塩からなる群から選択することが可能である。
【００９０】
さらに、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、セルメチニブ、コビメチニブ、およびビニメチニブからなる群から選択することが可能である。いくつかの実施形態においては、ＭＥＫ阻害剤はビニメチニブである。いくつかの実施形態においては、ＭＥＫ阻害剤はトラメチニブである。いくつかの実施形態においては、ＥＲＫ阻害剤は、ウリキセルチニブ、ＳＣＨ７７２９８４、およびＬＹ３２１４９９６からなる群から選択される。いくつかの実施形態においては、ｃ−ＫＩＴ阻害剤およびＭＥＫおよび／またはＥＲＫ阻害剤は、実質的に同時に、または連続的に投与される。
【００９１】
〔00090〕この方法はまた、別の癌標的治療薬、癌標的生物剤、免疫チェックポイント阻害剤、または化学療法剤を投与することを含んでもよい。
【００９２】
さらに、意図した方法に従って、有効量のｃ−ＫＩＴ阻害剤の投与、および有効量のマイトジェン活性化プロテインキナーゼの阻害剤（ＭＥＫ阻害剤）、および／または有効量の細胞外シグナル調節キナーゼ阻害剤（ＥＲＫ阻害剤）の２週間以上の投与により、結果として少なくとも部分寛解の患者をもたらすことが可能である。
【００９３】
また、それを必要とする患者における全身性肥満細胞症を治療する方法であって、患者に対して、有効量の１−［４−ブロモ−５−［１−エチル−７−（メチルアミノ）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−３−イル］−２−フルオロフェニル］−３−フェニル尿素、またはその薬学的に許容可能な塩と、有効量のＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤とを投与することを含む上記方法を提供する。こうした開示の方法においては、ＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤は、急速に進行する線維肉腫（ＲＡＦ）キナーゼ阻害剤、マイトジェン活性化プロテインキナーゼの阻害剤（ＭＥＫ阻害剤）、および細胞外シグナル調節キナーゼ阻害剤（ＥＲＫ阻害剤）からなる群から選択される。
【００９４】
全身性肥満細胞症は、一実施形態においては、ｃ−ＫＩＴ突然変異を伴うことができる。例えば、突然変異はｃ−ＫＩＴ  Ｄ８１６突然変異であることが可能である。いくつかの実施形態においては、突然変異は、Ｄ８１６Ｖ、Ｄ８１６Ｙ、Ｄ８１６Ｆ、Ｄ８１６Ｈ、Ｆ５２２Ｃ、Ｋ５０９１、Ｖ５６０Ｇ、Ｖ５５９Ｇ、およびｄｅｌ４１９のうちの１つである。いくつかの実施形態においては、突然変異は、Ａ５５３Ｄ、Ｃ４３３Ｙ、Ｄ４１９Ｙ、Ｄ５７２Ａ、Ｄ８１６Ｆ、Ｄ８１６Ｈ、Ｄ８１６Ｉ、Ｄ８１６Ｖ、Ｄ８１６Ｙ、Ｄ８２０Ｇ、ｄｅｌ４１９、ｄｕｐ（５０１−５０２）、Ｅ８３９Ｋ、Ｆ５２２Ｃ、Ｉ８１７Ｖ、ＩｎｓＦＦ４１９、ＩｎｓＶ８１５−Ｉ８１６、Ｋ５０９Ｉ、Ｎ８２２Ｉ、Ｒ８１５Ｋ、Ｔ４１７Ｖ、Ｖ５６０Ｇ、Ｖ５５９ＩまたはＹ４１８Ｙのうちの１つである。いくつかの実施形態においては、突然変異は、Ｄ８１６Ｖである。
【００９５】
さらに、肥満細胞症は、Ｙ２６９Ｃ、Ｙ５０３＿Ｆ５０４ｉｎｓＡＹ、Ｖ５６０Ｄ、またはＫ６４２Ｅの突然変異のうちの１つであるさらなるｃ−ＫＩＴ突然変異を伴ってもよい。
【００９６】
〔00095〕こうした開示の方法においては、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、セルメチニブ、コビメチニブ、およびビニメチニブからなる群から選択することが可能である。いくつかの実施形態においては、ＭＥＫ阻害剤はビニメチニブである。いくつかの実施形態においては、ＭＥＫ阻害剤はトラメチニブである。ＥＲＫ阻害剤は、ウリキセルチニブ、ＳＣＨ７７２９８４、およびＬＹ３２１４９９６からなる群から選択することが可能である。
【００９７】
本開示は、それを必要とする患者における肥満細胞症を治療する方法であって、患者に対して、有効量のｃ−ＫＩＴ阻害剤、および有効量のＲＡＦ阻害剤を投与することを含む上記方法をさらに提供する。
【００９８】
こうした開示の方法においては、ＲＡＦ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、およびＬＹ３００９１２０を含む汎ＲＡＦ阻害剤またはＢ−ＲＡＦ阻害剤とすることが可能である。さらに、ｃ−ＫＩＴ阻害剤は、１−［４−ブロモ−５−［１−エチル−７−（メチルアミノ）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−３−イル］−２−フルオロフェニル］−３−フェニル尿素、またはその薬学的に許容可能な塩とすることが可能である。
【００９９】
本明細書に開示される方法の特定の実施形態においては、肥満細胞症または肥満細胞腫瘍を治療する方法を含み、当該方法は、細胞致死性の肥満細胞死滅を誘発すること、肥満細胞のアポトーシスを誘発すること、組織または器官内の蓄積した肥満細胞の量を減少させること、肥満細胞症症状を減少させること、肥満細胞メディエーター放出を阻害すること、肥満細胞の増殖を阻害すること、および／または、肥満細胞の後退を誘発することを含み、肥満細胞は、例えば活性化ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ突然変異等のｃ−ＫＩＴキナーゼにおける１または複数の活性化突然変異を包含する。特定の実施形態においては、この方法は、対象における、例えば肥満細胞腫瘍である肥満細胞症を根絶する方法を包含する。いくつかの実施形態においては、治療は、ＩＷＧ−ＭＲＴ−ＥＣＮＭ基準（Ｇｏｔｌｉｂ  ｅｔ  ａｌ、Ｂｌｏｏｄ  ２０１３；１２１：２３９３−４０１）により定義される完全寛解、部分奏効、臨床的改善、または安定病態を結果として生じる。
【０１００】
別の関連する実施形態においては、本開示は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、任意にｃ−ＫＩＴ媒介性の（ＡＭＬ）、を治療または予防する方法であって、それを必要とする対象に対して、有効量のｃ−ＫＩＴ阻害剤を、例えばトラメチニブ、コビメチニブ、セルメチニブ、ビニメチニブ、ウリキセルチニブ、またはＬＹ３００９１２０である有効量のＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤と組み合わせて投与することを含む上記方法を提供する。関連する実施形態においては、本開示は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、任意にｃ−ＫＩＴ媒介性の（ＡＭＬ）、を治療または予防する方法であって、それを必要とする対象に対して、有効量の化合物Ａ（またはその薬学的に許容可能な塩）または化合物Ｂ（またはその薬学的に許容可能な塩）を、例えばトラメチニブ、コビメチニブ、セルメチニブ、ビニメチニブ、ウリキセルチニブ、またはＬＹ３００９１２０である有効量のＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤と組み合わせて投与することを含む上記方法を提供する。
【０１０１】
〔000100〕本明細書に記載される方法が、化合物Ａもしくはその薬学的に許容可能な塩による、または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容可能な塩による治療を指す場合、化合物Ａもしくはその薬学的に許容可能な塩、または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容可能な塩のうちの１つのみを必要とすることを意味する。しかしながら、これらの方法はまた、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩、および化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩の両方を、ＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤と組み合わせて、患者に対して投与することも包含することが理解されよう。本明細書に記載される方法はまた、化合物ＡおよびＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤を対象に投与することを含み、それによって化合物Ａがインビボで化合物Ｂへと代謝され、インビボでの化合物Ａおよび化合物Ｂの混合物が、ＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤との併用で対象を有効に治療する。
【０１０２】
開示の方法および組成物の特定の実施形態は、化合物Ａもしくはその薬学的に許容可能な塩およびトラメチニブの併用；化合物Ａもしくはその薬学的に許容可能な塩およびセルメチニブの併用；化合物Ａもしくはその薬学的に許容可能な塩およびコビメチニブの併用；または、化合物Ａもしくはその薬学的に許容可能な塩およびビニメチニブの併用を使用して実施される。
【０１０３】
一実施形態においては、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩と、例えばトラメチニブまたはビニメチニブであるＭＥＫ阻害剤とを、ｃ−ＫＩＴ媒介性肥満細胞症を患う対象に対して投与する。別の実施形態においては、化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩と、例えばトラメチニブまたはビニメチニブであるＭＥＫ阻害剤とを、ｃ−ＫＩＴ媒介性肥満細胞症を患う対象に対して投与する。
【０１０４】
関連する実施形態においては、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩と、例えばトラメチニブまたはビニメチニブであるＭＥＫ阻害剤とを、肥満細胞白血病または肥満細胞肉腫を含むがこれに限定されない肥満細胞腫瘍であって、肥満細胞腫瘍の増殖または腫瘍進行が、例えばＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ突然変異である活性化ｃ−ＫＩＴ一次突然変異によって生じる上記肥満細胞腫瘍を患う患者に対して、投与する。別の実施形態においては、化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩と、例えばトラメチニブまたはビニメチニブであるＭＥＫ阻害剤とを、肥満細胞白血病または肥満細胞肉腫を含むがこれに限定されない肥満細胞腫瘍であって、肥満細胞腫瘍の増殖または腫瘍進行が、例えばＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ突然変異である活性化ｃ−ＫＩＴ一次突然変異によって生じる上記肥満細胞腫瘍を患う患者に対して、投与する。特定の実施形態においては、化合物Ａもしくはその薬学的に許容可能な塩または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容可能な塩と、例えばトラメチニブまたはビニメチニブであるＭＥＫ阻害剤とを、ＡＭＬを患う患者に投与し、任意に、上記ＡＭＬは、Ｄ８１６における突然変異またはＮ８２２における突然変異を含むがこれに限定されない突然変異を含む、例えばｃ−ＫＩＴエクソン８活性化突然変異またはｃ−ＫＩＴエクソン１７突然変異である活性化ｃ−ＫＩＴ一次突然変異によって生じる（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２００６  ２４：２４，３９０４−３９１１）。
【０１０５】
開示の方法および組成物の特定の実施形態は、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩とウリキセルチニブとの併用；化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩とＳＣＨ７７２９８４，ｅとの併用；化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩とＬＹ３２１４９９６との併用；化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩とラボキセルチニブとの併用；または、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩とＶＸ−１１との併用を使用して実施される。
【０１０６】
〔000105〕一実施形態においては、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩と、例えばウリキセルチニブであるＥＲＫ阻害剤とを、ｃ−ＫＩＴ媒介性肥満細胞症を患う対象に対して投与する。別の実施形態においては、化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩と、例えばウリキセルチニブであるＥＲＫ阻害剤とを、ｃ−ＫＩＴ媒介性肥満細胞症を患う対象に対して投与する。
【０１０７】
関連する実施形態においては、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩と、例えばウリキセルチニブであるＥＲＫ阻害剤とを、肥満細胞白血病または肥満細胞肉腫を含むがこれに限定されない肥満細胞腫瘍であって、肥満細胞腫瘍の増殖または腫瘍進行が、例えばＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ突然変異である一次活性化ｃ−ＫＩＴ突然変異によって生じる上記肥満細胞腫瘍を患う患者に対して、投与する。別の実施形態においては、化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩と、例えばウリキセルチニブであるＥＲＫ阻害剤とを、肥満細胞白血病または肥満細胞肉腫を含むがこれに限定されない肥満細胞腫瘍であって、肥満細胞腫瘍の増殖または腫瘍進行が、例えばＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ突然変異である一次活性化ｃ−ＫＩＴ突然変異によって生じる上記肥満細胞腫瘍を患う患者に対して、投与する。特定の実施形態においては、化合物Ａもしくはその薬学的に許容可能な塩、または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容可能な塩と、例えばウリキセルチニブであるＥＲＫ阻害剤とを、ＡＭＬを患う患者に対して投与し、任意に、上記ＡＭＬは、Ｄ８１６での突然変異またはＮ８２２での突然変異を含むがこれに限定されない突然変異を含む、例えばｃ−ＫＩＴエクソン８活性化突然変異またはｃ−ＫＩＴエクソン１７突然変異である一次活性化ｃ−ＫＩＴ突然変異によって生じる（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２００６  ２４：２４，３９０４−３９１１）。
【０１０８】
開示の方法および組成物の特定の実施形態は、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩とＬＹ３００９１２０との併用；化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩とダブラフェニブとの併用；または、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩とベムラフェニブとの併用、を使用して実施される。
【０１０９】
一実施形態においては、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩と、例えばＬＹ３００９１２０、ダブラフェニブまたはベムラフェニブであるＲＡＦ阻害剤とを、ｃ−ＫＩＴ媒介性肥満細胞症を患う対象に対して投与する。別の実施形態においては、化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩と、例えばＬＹ３００９１２０、ダブラフェニブまたはベムラフェニブであるＲＡＦ阻害剤とを、ｃ−ＫＩＴ媒介性肥満細胞症を患う対象に対して投与する。
関連する実施形態においては、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩と、例えばＬＹ３００９１２０、ダブラフェニブまたはベムラフェニブであるＲＡＦ阻害剤とを、肥満細胞白血病または肥満細胞肉腫を含むがこれに限定されない肥満細胞腫瘍であって、肥満細胞腫瘍の増殖または腫瘍進行が、例えばＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ突然変異である一次活性化ｃ−ＫＩＴ突然変異によって生じる上記肥満細胞腫瘍を患う患者に対して、投与する。別の実施形態においては、化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩と、例えばＬＹ３００９１２０、ダブラフェニブまたはベムラフェニブであるＲＡＦ阻害剤とを、肥満細胞白血病または肥満細胞肉腫を含むがこれに限定されない肥満細胞腫瘍であって、肥満細胞腫瘍の増殖または腫瘍進行が、例えばＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ突然変異である一次活性化ｃ−ＫＩＴ突然変異によって生じる上記肥満細胞腫瘍を患う患者に対して、投与する。特定の実施形態においては、化合物Ａもしくはその薬学的に許容可能な塩、または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容可能な塩と、例えばＬＹ３００９１２０、ダブラフェニブまたはベムラフェニブであるＲＡＦ阻害剤とを、ＡＭＬを患う患者に対して投与し、任意に、上記ＡＭＬは、Ｄ８１６での突然変異またはＮ８２２での突然変異を含むがこれに限定されない突然変異を含む、例えばｃ−ＫＩＴエクソン８活性化突然変異またはｃ−ＫＩＴエクソン１７突然変異である一次活性化ｃ−ＫＩＴ突然変異によって生じる（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２００６  ２４：２４，３９０４−３９１１）。
【０１１０】
開示された方法および組成物に従って使用され得る例示的なｃ−ＫＩＴ阻害剤としては、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩、化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩、ミドスタウリン、ＢＬＵ−２８５、ＰＬＸ９４８６、およびクレノラニブが挙げられるがこれらに限定されない。本開示の方法および組成物に従って使用され得る例示的なＭＥＫ阻害剤としては、トラメチニブ、セルメチニブ、コビメチニブ、およびビニメチニブが挙げられるがこれらに限定されない。本開示の方法および組成物に従って使用され得る例示的なＥＲＫ阻害剤としては、ウリキセルチニブ、ＳＣＨ７７２９８４、ＬＹ３２１４９９６、ラボキセルチニブ、およびＶＸ−１１ｅが挙げられるがこれらに限定されない。本開示の方法および組成物に従って使用され得る例示的なＲＡＦ阻害剤としては、ＬＹ３００９１２０、ダブラフェニブ、およびベムラフェニブが挙げられるがこれらに限定されない。
【０１１１】
〔000110〕化合物Ａもしくはその薬学的に許容可能な塩、または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容可能な塩の、例えばトラメチニブ、ビニメチニブ、ウリキセルチニブ、またはＬＹ３００９１２０であるＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤との併用による治療は、ＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤を投与することと重複する期間の前、当該期間の後、当該期間と同時にまたは当該期間中に、化合物Ａもしくはその薬学的に許容可能な塩または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容可能な塩を投与することを包含する。化合物Ａもしくはその薬学的に許容可能な塩、化合物Ｂもしくはその薬学的に許容可能な塩、別のｃ−ＫＩＴ阻害剤、または例えばトラメチニブ、ビニメチニブ、ウリキセルチニブ、もしくはＬＹ３００９１２０であるＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤のうちのいずれかについての有効量は、例えば肥満細胞白血病またはＡＭＬである肥満細胞症または肥満細胞腫瘍を治療または予防するためである同じ目的のために、これら薬剤のいずれかをそれそのもので用いる場合と比較して、本明細書で開示する併用で用いる場合に様々であり得ることが理解される。特定の実施形態においては、化合物Ａもしくはその薬学的に許容可能な塩、または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容可能な塩の有効量は、例えばトラメチニブ、ビニメチニブ、ウリキセルチニブ、またはＬＹ３００９１２０であるＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤との併用療法として投与された場合、単剤療法として、例えば肥満細胞症または肥満細胞腫瘍を治療または防止するために投与する場合と比べて、より少ない量である。特定の実施形態においては、例えば肥満細胞症または肥満細胞腫瘍を治療または防止するために、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩との併用療法で投与した場合、または化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩との併用療法で投与した場合、例えばトラメチニブ、ビニメチニブ、ウリキセルチニブ、またはＬＹ３００９１２０であるＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤の有効量は、より少ない量である。
【０１１２】
本明細書に開示される方法のいずれかは、治療しようとする肥満細胞症細胞、肥満細胞腫瘍、またはＡＭＬが１または複数のｃ−ＫＩＴ遺伝子突然変異を伴うかを判断することを、さらに含み得る。こうした判断は、対象から得られた、例えば骨髄試料、組織試料、末梢血試料、または血漿試料である生体試料中の遺伝子突然変異の存在を判断するための通例の方法によってなされ得る。さらに、こうした判断は、実施されたテストの結果をレビューして患者から得られた生体試料中の１または複数のｃ−ＫＩＴ遺伝子突然変異の存在を判断することによってなされ得る。本明細書に開示される方法のいずれかの特定の実施形態においては、これら方法は、肥満細胞症、肥満細胞腫瘍またはＡＭＬが１つまたは複数のｃ−ＫＩＴ遺伝子突然変異を伴うものとして特定されている対象に対して実行される。ｃ−ＫＩＴ遺伝子突然変異は、本明細書に特に記載されたもののうちのいずれかを含むが、これに限定されない。本明細書に開示される方法のいずれかの特定の実施形態においては、これら方法は、肥満細胞症、肥満細胞腫瘍またはＡＭＬが１つまたは複数のｃ−ＫＩＴ遺伝子突然変異を伴っていないものとして特定されている対象に対しては実行されない。
【０１１３】
本明細書に開示される方法のいずれかの様々な態様においては、化合物Ａもしくはその薬学的に許容可能な塩または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容可能な塩のいずれかの、例えばトラメチニブ、ビニメチニブ、ウリキセルチニブまたはＬＹ３００９１２０であるＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤との併用よる治療は、細胞致死性の肥満細胞死滅を誘発し、肥満細胞のアポトーシスを誘発し、組織または器官内の蓄積した肥満細胞の量を減少させ、肥満細胞症症状を減少させ、肥満細胞メディエーター放出を阻害し、肥満細胞の増殖を阻害し、および／または、肥満細胞の後退を誘発するものであり、肥満細胞は、活性化ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ突然変異を含むｃ−ＫＩＴキナーゼにおける活性化突然変異を包含する。肥満細胞のアポトーシス、肥満細胞死滅、肥満細胞増殖および成長の阻害、肥満細胞メディエーター放出の阻害、末梢血中変異型ＫＩＴ対立遺伝子負荷、肥満細胞症および肥満細胞腫瘍の根絶、完全寛解、部分奏効、臨床的改善、もしくは安定病態、についての量を測定または決定する方法は、当技術において公知であり、また本明細書に記載される任意の方法を含む。
【０１１４】
特定の実施形態においては、例えば化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩または化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩であるｃ−ＫＩＴ阻害剤と、例えばトラメチニブ、ビニメチニブ、ウリキセルチニブ、またはＬＹ３００９１２０であるＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤との併用による治療は、ＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤単独によるかまたは例えば化合物Ａもしくは化合物Ｂであるｃ−ＫＩＴ阻害剤単独により未治療または治療した同じタイプの肥満細胞症細胞または肥満細胞のアポトーシスの量と比較して、肥満細胞症細胞または肥満細胞のアポトーシスの量が結果的に増加する。例えば、アポトーシスは、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、または少なくとも２０倍、増加し得る。特定の実施形態においては、アポトーシスの量は、ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ突然変異を包含するＨＭＣ１．２肥満細胞株を含む、ＫＩＴ突然変異肥満細胞または肥満細胞株のカスパーゼ活性を測定することにより決定される。
【０１１５】
特定の実施形態においては、例えば化合物Ａもしくはその薬学的に許容可能な塩、または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容可能な塩であるｃ−ＫＩＴアンヒビターと、例えばトラメチニブ、ビニメチニブ、ウリキセルチニブ、またはＬＹ３００９１２０であるＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤との併用による治療は、例えばトラメチニブ、ビニメチニブ、ウリキセルチニブ、またはＬＹ３００９１２０であるＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤のみでまたは例えばミドスタウリン、ＢＬＵ−２８５、化合物Ａもしくは化合物Ｂであるｃ−ＫＩＴ阻害剤のみで未治療または治療した同じ器官における肥満細胞の蓄積の量と比較して、皮膚や例えば肝臓、脾臓、骨髄、および／または小腸である内臓における肥満細胞の蓄積の減少を結果的に生じる。例えば、器官内に蓄積された肥満細胞の量または数が、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％、減少し得る。
【０１１６】
〔000115〕特定の実施形態においては、例えば化合物Ａもしくはその薬学的に許容可能な塩または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容可能な塩であるｃ−ＫＩＴ阻害剤と、例えばトラメチニブ、ビニメチニブ、ウリキセルチニブ、またはＬＹ３００９１２０であるＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤との併用による治療は、結果として、ＩＷＧ−ＭＲＴ−ＥＣＮＭ基準（Ｇｏｔｌｉｂ  ｅｔ  ａｌ、Ｂｌｏｏｄ  ２０１３；１２１：２３９３−４０１）により定義されるような完全寛解をもたらす。
【０１１７】
特定の実施形態においては、例えば化合物Ａもしくはその薬学的に許容可能な塩または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容可能な塩であるｃ−ＫＩＴ阻害剤と、例えばトラメチニブ、ビニメチニブ、ウリキセルチニブ、またはＬＹ３００９１２０であるＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤との併用による治療は、結果として、ＩＷＧ−ＭＲＴ−ＥＣＮＭ基準（Ｇｏｔｌｉｂ  ｅｔ  ａｌ、Ｂｌｏｏｄ  ２０１３；１２１：２３９３−４０１）により定義されるような部分奏効をもたらす。
【０１１８】
特定の実施形態においては、例えば化合物Ａもしくはその薬学的に許容可能な塩または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容可能な塩であるｃ−ＫＩＴ阻害剤と、例えばトラメチニブ、ビニメチニブ、ウリキセルチニブ、またはＬＹ３００９１２０であるＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤との併用による治療は、結果として、ＩＷＧ−ＭＲＴ−ＥＣＮＭ基準（Ｇｏｔｌｉｂ  ｅｔ  ａｌ、Ｂｌｏｏｄ  ２０１３；１２１：２３９３−４０１）により定義されるような臨床的改善をもたらす。
【０１１９】
特定の実施形態においては、例えば化合物Ａもしくはその薬学的に許容可能な塩または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容可能な塩であるｃ−ＫＩＴ阻害剤と、例えばトラメチニブ、ビニメチニブ、ウリキセルチニブ、またはＬＹ３００９１２０であるＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤との併用による治療は、結果として、ＩＷＧ−ＭＲＴ−ＥＣＮＭ基準（Ｇｏｔｌｉｂ  ｅｔ  ａｌ、Ｂｌｏｏｄ  ２０１３；１２１：２３９３−４０１）により定義されるような安定病態をもたらす。
【０１２０】
特定の実施形態においては、例えば化合物Ａもしくはその薬学的に許容可能な塩または化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩であるｃ−ＫＩＴ阻害剤と、例えばトラメチニブ、ビニメチニブ、ウリキセルチニブ、またはＬＹ３００９１２０などであるＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤との併用による治療は、ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ一次突然変異に加えてＫＩＴ二次突然変異を含有する耐性肥満細胞症細胞のアポトーシスを誘発または増殖を阻害するものであり、ＫＩＴ二次突然変異には、ｃ−ＫＩＴ遺伝子におけるＹ２６９Ｃ、Ｙ５０３＿Ｆ５０４ｉｎｓＡＹ、Ｖ５６０ＤまたはＫ６４２Ｅの点突然変異、インフレーム欠失もしくは挿入、またはミスセンス変異（Ｌａｓｈｏ  ｅｔ  ａｌ、Ｂｒ  Ｊ  Ｈａｅｍａｔｏｌ  １７３、１５３−１５６）が含まれるがこれに限定されない。
【０１２１】
〔000120〕特定の実施形態においては、例えば化合物Ａもしくはその薬学的に許容可能な塩、または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容可能な塩であるｃ−ＫＩＴ阻害剤と、例えばトラメチニブ、ビニメチニブ、ウリキセルチニブ、またはＬＹ３００９１２０であるＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤との併用による治療は、本明細書に開示する遺伝子のうちのいずれかを含む、他の遺伝子における、例えば耐性突然変異である突然変異を含有する、耐性肥満細胞症細胞のアポトーシスを誘発または増殖を阻害する。特定の実施形態においては、こうした他の遺伝子の突然変異は、ＮＲａｓ機能突然変異の獲得（Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ  ２０１１；９６（０３）：４５９−４６３．ｄｏｉ：１０．３３２４／ｈａｅｍａｔｏｌ．２０１０．０３１６９０）またはＴＥＴ２機能突然変異の喪失（Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２００９；２３：９００−０４；Ｂｌｏｏｄ，６  Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  ２０１２；１２０（２４）：４８４６−４９）を含み得る。その他の後成的または転写性の調節因子突然変異の存在が、ＤＮＭＴ３Ａ、ＡＳＸＬ１およびＣＢＬの突然変異を含むＳＭ中で、それぞれ患者の１２％、１２％、および４％で検出された（ＰｌｏＳ  １．２０１２；７：ｅ４３０９０）。さらに、一部の肥満細胞症患者はまた、スプライセオソーム機能（ｍａｃｈｉｎｅｒｙ）において突然変異を呈する。スプライセオソームは、ｍＲＮＡにおいてスプライスされた正しい線形順のエクソンを確実にする。Ｈａｎｓｓｅｎｓらは、７２例の肥満細胞症患者の群において２３．６％のＳＲＳＦ２、５．６％のＳＦ３Ｂ１および２．７％のＵ２ＡＦ１の突然変異の発生率を報告した（Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ  ２０１４；９９：８３０−３５）。複雑なゲノムドライバーがあるこうした肥満細胞症は、例えばトラメチニブであるＭＥＫ阻害剤のみでまたは例えば化合物Ａもしくは化合物Ｂであるｃ−ＫＩＴ阻害剤のみでの治療するまたは治療しない場合と比較してｃ−ＫＩＴ阻害剤およびＭＥＫ阻害剤の併用による本明細書で開示される治療からの恩恵を享受することができる。例えば、アポトーシスは、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、または少なくとも２０倍、増加し得る。例えば、耐性肥満細胞症細胞の増殖の量または数は、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％、阻害することができる。
【０１２２】
特定の実施形態においては、耐性肥満細胞症細胞は、例えば化合物Ａ、化合物Ｂ、ミドスタウリン、ＢＬＵ−２８５、ＰＬＸ９４８６、またはクレノラニブであるｃ−ＫＩＴ阻害剤での治療によってアポトーシス媒介性細胞死または細胞破壊活性に対して耐性があり、および／または、単剤療法として使用される場合に、例えばトラメチニブ、ビニメチニブ、ウリキセルチニブ、またはＬＹ３００９１２０であるＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤での治療により、アポトーシス媒介性細胞死または細胞破壊活性に対して耐性がある。
【０１２３】
特定の実施形態においては、例えば化合物Ａもしくはその薬学的に許容可能な塩または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容可能な塩のいずれかであるｃ−ＫＩＴ阻害剤と、例えばトラメチニブ、ビニメチニブ、ウリキセルチニブ、またはＬＹ３００９１２０であるＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤と組み合わせた併用による治療は、結果として、例えば肥満細胞腫瘍である肥満細胞症の根絶をもたらす。特定の実施形態においては、肥満細胞症の根絶は、患者における検出可能なあらゆる肥満細胞症がもはや存在しないことを意味する。特定の実施形態においては、本明細書に開示する併用療法による肥満細胞症の治療の開始後、少なくとも１２週間、少なくとも２４週間、少なくとも１年間、少なくとも２年間、または少なくとも５年間、患者において検出可能な肥満細胞症が存在しない。肥満細胞症の根絶は、ＩＷＧ−ＭＲＴ−ＥＣＮＭ基準（Ｇｏｔｌｉｂ  ｅｔ  ａｌ、Ｂｌｏｏｄ  ２０１３；１２１：２３９３−４０１）により定義されるような完全寛解の基準により判断され得る。
【０１２４】
本開示は、例えば化合物Ａもしくはその薬学的に許容可能な塩、または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容可能な塩のいずれかであるｃ−ＫＩＴ阻害剤と、例えばトラメチニブ、ビニメチニブ、ウリキセルチニブ、またはＬＹ３００９１２０であるＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤との投与を伴う併用療法を記述する。本明細書に記載される併用療法は、それそのものによって、または１または複数の追加的治療薬と組み合わせて、使用することができる。例えば、化合物Ａもしくはその薬学的に許容可能な塩、または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容可能な塩のいずれかと、ＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤とは、癌標的治療薬、癌標的生物剤、免疫チェックポイント阻害剤、または化学療法剤と共に投与することができる。別の実施形態では、化合物Ａまたは化合物Ｂと、例えばトラメチニブ、ビニメチニブ、ウリキセルチニブ、またはＬＹ３００９１２０であるＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤とは、その他の治療薬なしで投与される。治療薬は、併用療法において本明細書に記載される別の治療薬と一緒に、または当該治療薬と連続して投与することができる。
【０１２５】
併用療法は、２以上の治療薬を投与することであって、それら治療薬の各々は別個に処方されて投与されることによってか、または単一の製剤中の２以上の治療薬を投与することによって、実現することができる。他の組み合わせもまた、併用療法に包含される。併用療法において２以上の治療薬は同時に投与することができるが、必須ではない。例えば、第一の薬剤（または薬剤の併用）の投与は、数分、数時間、数日、または数週間だけ、第二の薬剤（または薬剤の併用）の投与に先行することができる。ゆえに２以上の薬剤は、互いに数分以内に投与されるか、または互いに１、２、３、６、９、１２、１５、１８、または２４時間以内に投与されるか、または互いに１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４日以内に投与されるか、または互いに２、３、４、５、６、７、８、９週間以内もしくはそれ以上の週以内に投与することができる。一部の場合においては、さらに長い間隔も可能である。多くの場合において、併用療法で使用される２以上の薬剤は、同時に患者の身体内に存在することが望ましいが、必須ではない。
【０１２６】
〔000125〕併用療法は、異なる順序での構成薬剤を使用した併用で使用される１または複数の薬剤の２回以上の投与を含むこともできる。例えば薬剤Ｘと薬剤Ｙとを併用で使用する場合には、それらを任意の組合せで１回または複数回、連続的に投与することができ、例えばＸ−Ｙ−Ｘ、Ｘ−Ｘ−Ｙ、Ｙ−Ｘ−Ｙ、Ｙ-−Ｙ−Ｘ、Ｘ−Ｘ−Ｙ−Ｙなどの順序である。さらに、併用の２以上の薬剤の投与は、併用薬剤のうちの少なくとも１つが治療から省略される投与間隔を先行してまたはその後に続いて行ってもよい。
【０１２７】
例えば、肥満細胞症または肥満細胞腫瘍を治療するための、本開示に従って投与され得るさらなる治療薬は、ルキソリチニブ、トファシチニブ、またはフェドラチニブを含むがこれに限定されないＳＴＡＴ５の阻害剤、イブルチニブ、ＰＣＩ２９７３２、アカラブルチニブ、またはＡＶＬ−２９２を含むがこれに限定されないＢＴＫの阻害剤、イデラリシブ、ダクトリシブ、ピクチリシブ、ＬＹ２９４００２、ブパルリシブ、ピララリシブ、デュベリシブ、ＰＦ−０４６９１５０２、ボクスタリシブ（ｖｏｘｔａｌｉｓｉｂ）、オミパリシブ、ゲダトリシブ（ｇｅｄａｔｏｌｉｓｉｂ）、アピトリシブ、またはウォルトマンニンを含むがこれに限定されないＰＩ３キナーゼの阻害剤、ＭＫ−２２０６、ペリフォシン、ＧＳＫ６９０６９３、ＧＳＫ２１４１７９５、イパタセルチブ、ＡＺＤ５３６３、アフレセルチブ、またはＡＴ７８６７を含むがこれに限定されないＡＫＴキナーゼの阻害剤、５−アザシチジンまたは５−アザ−２’−デオキシシチジンを含むがこれに限定されないＤＮＡメチル化阻害剤、ボルテゾミブ、カルフィルゾミブ、ＭＬＮ９７０８、ＯＮＸ０９１２、インターフェロンアルファ（ＩＦＮ−α）、クラドリビンを含むがこれに限定されないプロテオソーム阻害剤、および、クロロキン、ヒドロキシクロロキンまたはキナクリンを含むがこれに限定されないリソソーム作用剤、からなる群から選択される薬剤を含むがこれに限定されない。
【０１２８】
特定の実施形態においては、さらなる治療薬は、５−アザシチジン、５−アザ−２’−デオキシシチジン、およびクラドリビンから選択される。
【０１２９】
特定の実施形態においては、それを必要とする対象は、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩、例えばトラメチニブ、ビニメチニブ、ウリキセルチニブ、またはＬＹ３００９１２０、および５−アザシチジンであるＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤のうちの１または２の併用により治療される。特定の実施形態においては、ＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤はトラメチニブである。特定の実施形態においては、ＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤はビニメチニブである。特定の実施形態においては、ＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤はウリキセルチニブである。特定の実施形態においては、ＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤はＬＹ３００９１２０、ダブラフェニブ、またはベムラフェニブである。
【０１３０】
特定の実施形態においては、それを必要とする対象は、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩、例えばトラメチニブ、ビニメチニブ、ウリキセルチニブ、またはＬＹ３００９１２０、および５−アザ−２’−デオキシシチジンであるＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤の併用により治療される。特定の実施形態においては、ＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤はトラメチニブである。特定の実施形態においては、ＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤はビニメチニブである。特定の実施形態においては、ＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤はウリキセルチニブである。特定の実施形態においては、ＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤はＬＹ３００９１２０、ダブラフェニブ、またはベムラフェニブである。
【０１３１】
〔000130〕特定の実施形態においては、それを必要とする対象は、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩、例えばトラメチニブ、ビニメチニブ、ウリキセルチニブ、またはＬＹ３００９１２０、およびクラドリビンであるＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤の併用により治療される。特定の実施形態においては、ＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤はトラメチニブである。特定の実施形態においては、ＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤はビニメチニブである。特定の実施形態においては、ＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤はウリキセルチニブである。特定の実施形態においては、ＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤はＬＹ３００９１２０、ダブラフェニブ、またはベムラフェニブである。本開示に従って投与され得る追加的な治療薬としては、三酸化ヒ素、シクロホスファミド、シタラビン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エナシデニブ、イダルビシン、キザルチニブ、ミトキサントロン、チオグアニン、またはビンクリスチンが挙げられるがこれに限定されない。特定の実施形態においては、ＡＭＬがある対象は、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩と、三酸化ヒ素、シクロホスファミド、シタラビン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エナシデニブ、イダルビシン、キザルチニブ、ミトキサントロン、チオグアニン、またはビンクリスチンとの併用により治療される。
【０１３２】
医薬組成物
本開示の態様は、本明細書に開示される化合物の併用、またはこうした化合物および薬学的に許容可能な希釈剤、賦形剤もしくは担体を含む１もしくは複数の医薬組成物、の投与を含む治療方法を対象とする。特定の実施形態においては、本明細書に開示される方法は、例えば化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩であるｃ−ＫＩＴ阻害剤および薬学的に許容可能な希釈剤、賦形剤または担体を含む第一の医薬組成物と、例えばトラメチニブ、ビニメチニブ、ウリキセルチニブ、またはＬＹ３００９１２０であるＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤および薬学的に許容可能な希釈剤、賦形剤または担体を含む第二の医薬組成物とを投与することに関与する。特定の実施形態においては、本明細書に開示される方法は、化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩および薬学的に許容可能な希釈剤、賦形剤または担体を含む第一の医薬組成物と、例えばトラメチニブ、ビニメチニブ、ウリキセルチニブ、またはＬＹ３００９１２０であるＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤および薬学的に許容可能な希釈剤、賦形剤または担体を含む第二の医薬組成物とを投与することに関与する。特定の実施形態においては、本明細書に開示される方法は、例えば化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩であるｃｉＫＩＴ阻害剤と、例えばトラメチニブ、ビニメチニブ、ウリキセルチニブ、またはＬＹ３００９１２０であるＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤と、薬学的に許容可能な希釈剤、賦形剤または担体とを含む医薬組成物を投与することに関与する。特定の実施形態においては、本明細書に開示される方法は、化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩と、例えばトラメチニブ、ビニメチニブ、ウリキセルチニブ、またはＬＹ３００９１２０であるＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤と、薬学的に許容可能な希釈剤、賦形剤または担体とを含む医薬組成物を投与することに関与する。
【０１３３】
本明細書に記載される化合物の医薬組成物の使用において、薬学的に許容可能な担体は固体または液体のいずれかであり得る。固体形態としては、粉剤、錠剤、分散性顆粒、カプセル、カシェ剤、および座薬が挙げられる。粉剤および錠剤は、約５〜約９５パーセントの活性成分から構成されてもよい。適切な固体担体は当技術で公知であり、例えば炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖またはラクトースがある。錠剤、粉剤、カシェ剤およびカプセル剤は、経口投与に適した固形剤型として使用可能である。薬学的に許容可能な担体の例、および様々な組成物の製造方法の例は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＡ．Ｇｅｎｎａｒｏ（ｅｄ．），Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，（１９９０），Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａに見ることができる。
【０１３４】
液体形態製剤としては、溶液、懸濁液およびエマルジョンが挙げられる。例えば、非経口注射用には水または水−プロピレングリコール溶液、または経口の溶液、懸濁液およびエマルジョン用には甘味剤および乳白剤の添加がある。液体形態製剤としては、鼻腔内投与用の溶液も挙げられる。
【０１３５】
特に注射可能な、液体の組成物は、例えば溶解、分散などにより調製可能である。例えば、開示される化合物は、例えば、水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、グリセリン、エタノールなどの薬学的に許容可能な溶媒に溶解されるか、または混合され、それによって注射可能な等張溶液または懸濁液が形成される。アルブミン、カイロミクロン粒子、または血清タンパク質などのタンパク質を使用して、開示される化合物を可溶化することができる。
【０１３６】
〔000135〕非経口注射投与は概して、皮下、筋肉内、または静脈内の注射および点滴に使用される。注射剤は、溶液もしくは懸濁液、または注射前に液体に溶解させることに適した固体の形態のいずれかとして従来的な形態で調製可能である。
【０１３７】
吸入に適したエアロゾル製剤もまた使用され得る。これら製剤は、溶液、および粉末形態の固体を含んでもよく、それらは例えば窒素である不活性圧縮ガスなどの薬学的に許容可能な担体と組み合わせる場合がある。
【０１３８】
また、使用に関して、経口投与または非経口投与のいずれかのための液体形態製剤に、使用直前に変えることを意図した固体形態製剤も意図される。そのような液体形態としては、溶液、懸濁液およびエマルジョンが挙げられる。
【０１３９】
用量
いくつかの実施形態においては、治療プロトコルのために、化合物Ａまたは化合物Ｂ（またはその薬学的に許容可能な塩）が、例えばトラメチニブ、ビニメチニブ、ウリキセルチニブ、またはＬＹ３００９１２０であるＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤と組み合わせて使用される場合、２つの治療薬は一緒に投与してもよく、または「二重レジメン」であって、２つの治療薬を別個に投薬および投与する二重レジメンで投与してもよい。化合物ＡまたはＢ（またはその薬学的に許容可能な塩）とＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤とが別個に投薬される場合、治療を必要とする対象に投与される化合物Ａまたは化合物Ｂ（またはその薬学的に許容可能な塩）の典型的な用量は、典型的には約５ｍｇ／日〜約５０００ｍｇ／日であり、他の実施形態では約５０ｍｇ／日〜約１０００ｍｇ／日である。他の用量は、約１０ｍｍｏｌから最大で約２５０ｍｍｏｌ／日、約２０ｍｍｏｌ〜約７０ｍｍｏｌ／日、または約３０ｍｍｏｌ〜約６０ｍｍｏｌ／日であってもよい。開示の化合物の有効投与量は、示される効果に関して使用される場合、症状の治療に必要とされる本開示化合物を約０．５ｍｇ〜約５０００ｍｇの範囲とする。インビボまたはインビトロでの使用のための組成物は、約０．５、５、２０、５０、７５、１００、１５０、２５０、５００、７５０、１０００、１２５０、２５００、３５００、または５０００ｍｇの開示の化合物を含有することができ、または、用量の列記中のある量から別の量の範囲で開示の化合物を含有することができる。経口投与に関し、典型的な推奨される１日の投与レジメンは、単一用量で、または２〜４に分割した用量で、約１ｍｇ／日〜約５００ｍｇ／日または１ｍｇ／日〜２００ｍｇ／日の範囲とすることが可能である。一実施形態においては、典型的な１日の経口用量レジメンは１５０ｍｇである。
【０１４０】
特定の実施形態においては、ＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤の用量は、先に開示した用量および／または食品医薬品局による使用のために承認された用量と一致する。他の実施形態においては、ＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤の用量は、先に承認された用量未満であり、例えば承認された用量の約２０％、約５０％、または約８０％である。特定の実施形態においては、トラメチニブの用量は、１日に、約．５ｍｇ〜２０ｍｇを経口で、例えば１日に約１ｍｇ、または１日に２ｍｇである。特定の実施形態においては、コビメチニブの用量は、１日に、約１０ｍｇ〜２００ｍｇで、例えば１日に約３０ｍｇ、または約６０ｍｇである。特定の実施形態においては、ビニメチニブの用量は、１日に約１０ｍｇ〜２００ｍｇを２回、例えば１日に約２５ｍｇまたは約４５ｍｇを２回である。特定の実施形態においては、セルメチニブの用量は、１日に約１０ｍｇ〜２００ｍｇで、例えば１日に約３０ｍｇまたは約７５ｍｇを２回である。
【０１４１】
〔000140〕本明細書に記載の化合物および／またはその薬学的に許容可能な塩ならびに他の治療薬の投与の量および回数は、患者の年齢、症状および大きさ、ならびに治療される症状の重篤度などの因子を考慮し、担当医の判断に従い調整されることとなる。
【０１４２】
本開示の化合物（例えば、化合物Ａまたは化合物Ｂ（およびその薬学的に許容可能な塩）、ＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤、および他の治療薬）は、任意の適切な経路によって投与され得る。化合物は、カプセル剤、懸濁剤、錠剤、丸薬、糖衣錠、液剤、ゲル、シロップ、スラリーなどで、経口で（例えば食事で）投与可能である。組成物を封入する（硬質ゼラチンまたはシクロデキストラン（ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒａｎ）のコーティング内になど）ための方法は、当技術で公知である（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｂａｋｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，“Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｃｔｉｖｅ  Ａｇｅｎｔｓ”，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，１９８６）。化合物は、医薬組成物の一部として許容可能な医薬担体と併せて対象に対して投与可能である。医薬組成物の剤型は、選択される投与経路に従って変化することとなる。適切な医薬担体は、化合物と相互作用しない不活性成分を含み得る。担体は生体適合性であり、すなわち非毒性、非炎症性、非免疫原性であり、投与部位で他の望ましくない反応を発生させない。
【０１４３】
例示的な医薬組成物は、例えば化合物Ａである本明細書に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩と、薬学的に許容可能な担体であって、例えばａ）例えば精製水、例えば水素化された、もしくは部分的に水素化された植物油またはそれらの混合物であるトリグリセリド油、トウモロコシ油、オリーブ油、ヒマワリ油、ベニバナ油、例えばＥＰＡもしくはＤＨＡである魚油もしくはそれらのエステル、もしくはトリグリセリドもしくはその混合物、オメガ−３脂肪酸もしくはその誘導体、ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロース、ナトリウム、サッカリン、グルコースおよび／またはグリシンである希釈剤；ｂ）例えばシリカ、タルク、ステアリン酸、そのマグネシウム塩もしくはカルシウム塩、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムおよび／またはポリエチレングリコールである潤滑剤、錠剤用でもある；ｃ）例えばケイ酸マグネシウムアルミニウム、デンプン糊、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、炭酸マグネシウム、例えばグルコースまたはベータ−ラクトースなどの天然糖類、トウモロコシ甘味料、例えばアカシア、トラガカントまたはアルギン酸ナトリウムなどの天然ゴムおよび合成ゴム、ワックスおよび／またはポリビニルピロリドンである結合剤、もし所望であれば；ｄ）例えばデンプン、アガー、メチルセルロース、ベントナイト、キサンタンガム、アルギン酸もしくはそのナトリウム塩、または発泡性混合物である崩壊剤；ｅ）吸収剤、着色剤、香味剤および甘味剤；ｆ）例えばＴｗｅｅｎ８０、Ｌａｂｒａｓｏｌ、ＨＰＭＣ、ＤＯＳＳ、Ｃａｐｒｏｙｌ  ９０９、Ｌａｂｒａｆａｃ、Ｌａｂｒａｆｉｌ、Ｐｅｃｅｏｌ、Ｔｒａｎｓｃｕｔｏｌ、ＣＡＰＭＵＬ  ＭＣＭ、ＣＡＰＭＵＬ  ＰＧ−１２、Ｃａｐｔｅｘ  ３５５、Ｇｅｌｕｃｉｒｅ、ビタミンＥ  ＴＧＰＳまたは他の許容可能な乳化剤である、乳化剤または分散剤；および／またはｇ）例えばシクロデキストリン、ヒドロキシプロピルシクロデキストリン、ＰＥＧ４００、ＰＥＧ２００である、化合物の吸収を強化する薬剤、等である上記担体とを含む錠剤およびゼラチンカプセルである。
【０１４４】
固定された用量として調製される場合、かかる配合剤は、本明細書に記載されるまたは当業者に公知の、用量範囲内で本明細書に記載の化合物を採用する。
【０１４５】
本明細書に記載の化合物（例えば、化合物Ａおよび化合物ＢおよびＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤）は、医薬組成物で使用することが意図されているため、当業者であれば、実質的に純粋な形態で、例えば少なくとも６０％純粋、少なくとも７５％純粋、少なくとも８５％純粋、および少なくとも９８％純粋（ｗ／ｗ）でそれらが提供可能であることを理解するであろう。医薬製剤は、単位剤型であってもよい。そのような製剤では、例えば本明細書に記載される望ましい目的を実現する有効量などである適切な量の化合物Ａまたは化合物Ｂを含有する適切な大きさとした単位用量に分割して調製される。
【実施例】
【０１４６】
〔000145〕化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩のいずれかを、ＭＡＰＫＡＰ経路阻害剤と組み合わせた併用による治療が、予期せずに、相乗的に、全身性肥満細胞症の原因である突然変異体ｃ−ＫＩＴにより駆動される肥満細胞のアポトーシスを誘発することが見出された。さらに、この併用療法は、肥満細胞症細胞の増殖を阻害する。さらに、本明細書に開示される併用療法は、カスパーゼ活性化において誘発される併用治療により決定されるような単に細胞静止作用であることに対立するものとして、肥満細胞症に対する細胞毒性効果を有するように見えた。この予期せぬ発見の特定には、本明細書に記載されるアッセイを含めて、生化学アッセイおよび細胞アッセイにおいて行った。
【０１４７】
本開示は、以下の実施例によってさらに説明するが、それらは、本明細書に記載される具体的な手順に対する範囲または趣旨において本開示を限定するものとはみなされないものとする。実施例は、特定の実施形態を説明するために提示されるものであり、またそれにより本開示の範囲を限定する意図はないことを理解されたい。さらに本開示の趣旨、および／または添付の特許請求の範囲の範囲から逸脱することなく、当業者に示唆され得る様々な他の実施形態、変形物および均等物に対して策がもたれ得ることを理解されたい。
【０１４８】
実施例１．化合物Ａまたは化合物Ｂによる、突然変異体ＫＩＴの肥満細胞株の処置により、肥満細胞症細胞株の細胞増殖およびＫＩＴリン酸化が阻害される
化合物Ａまたは化合物Ｂによる処置が、突然変異体ＫＩＴ  ＨＭＣ１．１  ＫＩＴ  Ｖ５６０ＧおよびＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖの肥満細胞株の細胞増殖を阻害することを実証する試験を実施した。ウェル当たり１０，０００個の細胞を播種した９６ウェルプレートでアッセイを行った。細胞を様々な濃度で、ビヒクル対照、化合物Ａ、またはその化合物Ｂで処置し、７２時間成長させ、次いで細胞増殖を評価した。
【０１４９】
図１Ａは、様々な濃度の化合物Ａに対して決定された細胞増殖の相対的割合を示すグラフ表示である。化合物Ａでの処置により、それぞれ、２．６ｎＭおよび９７ｎＭであるＩＣ５０値を伴うＨＭＣ１．１  Ｖ５６０ＧおよびＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖの肥満細胞株における細胞増殖を阻害した。
【０１５０】
図１Ｂは、様々な濃度の化合物Ｂに対して決定された細胞増殖の相対的割合を示すグラフ表示である。化合物Ｂでの処置により、それぞれ、２．３ｎＭおよび６１ｎＭであるＩＣ５０値を伴うＨＭＣ１．１  Ｖ５６０ＧおよびＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖの肥満細胞株における細胞増殖を阻害した。
【０１５１】
実施例２．化合物Ａおよびトラメチニブによる併用処置により、肥満細胞症細胞株におけるアポトーシスが誘発される
〔000150〕化合物ＡおよびＭＥＫ阻害剤トラメチニブによる併用処置が、ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖの肥満細胞症細胞株におけるアポトーシスを誘発することを実証するために、試験を実施した。ウェル当たり１０，０００個の細胞を播種した９６ウェルプレートでアッセイを行った。細胞を様々な濃度で、ビヒクル対照、化合物Ａ、トラメチニブ、またはその組合せで処置し、細胞を２４時間成長させた。アポトーシスは、カスパーゼ３／７活性を測定することにより評価した。
【０１５２】
図２Ａは、様々な処置に対して決定された細胞アポトーシスの相対的割合を示すグラフ表示である。図２Ｂは、ＣｈｏｕおよびＴａｌａｌａｙ（１９８４）ならびにＣｈｏｕおよびＭａｒｔｉｎのコンピュータソフトウェア（２００５）により記述される、併用指数（ＣＩ）法に基づく相乗作用のマトリクス図である。ＣＩ＜１は、相乗作用を示し、ＣＩ＝１は、相加作用を示し、またＣＩ＞１は、拮抗作用を示す。化合物ＡおよびＭＥＫ阻害剤トラメチニブによる併用処置により、予期せずに、ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞のアポトーシスを誘発する強い相乗作用が示された。図２Ｃは、ＣＩの併用指数プロットであり、ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ肥満細胞のアポトーシスを誘発する、化合物Ａとトラメチニブとの併用に関する強い相乗作用を実証する。
【０１５３】
実施例３．化合物Ｂおよびトラメチニブによる併用処置により、肥満細胞症細胞株におけるアポトーシスが誘発される
化合物Ｂおよびトラメチニブによる併用処置が、ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖの肥満細胞症細胞株におけるアポトーシスを誘発することを実証するために、また試験を実施した。実施例２に説明されるようにアッセイを行った。アポトーシスは、カスパーゼ３／７活性を測定することにより評価した。
【０１５４】
図３Ａは、様々な処置に対して決定された細胞アポトーシスの相対的割合を示すグラフ表示である。図３Ｂは、ＣｈｏｕおよびＴａｌａｌａｙ（１９８４）ならびにＣｈｏｕおよびＭａｒｔｉｎのコンピュータソフトウェア（２００５）により記述される、併用指数（ＣＩ）法に基づく相乗作用のマトリクス図である。ＣＩ＜１は、相乗作用を示し、ＣＩ＝１は、相加作用を示し、またＣＩ＞１は、拮抗作用を示す。化合物ＢおよびＭＥＫ阻害剤トラメチニブによる併用処置により、予期せずに、ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞のアポトーシスを誘発するための強い相乗作用が示された。図３Ｃは、ＣＩの併用指数プロットであり、ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ肥満細胞のアポトーシスを誘発する、化合物Ｂとトラメチニブとの併用に関する強い相乗作用を実証する。
【０１５５】
実施例４．化合物Ａおよびビニメチニブによる併用処置により、肥満細胞症細胞株におけるアポトーシスが誘発される
化合物Ａおよびビニメチニブによる併用処置もまた、ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ肥満細胞症細胞株におけるアポトーシスを誘発する。実施例２に説明されるようにアッセイを行った。アポトーシスは、カスパーゼ３／７活性を測定することにより評価した。
【０１５６】
〔000155〕図４Ａは、様々な処置に対して決定された細胞アポトーシスの相対的割合を示すグラフ表示である。図４Ｂは、ＣｈｏｕおよびＴａｌａｌａｙ（１９８４）ならびにＣｈｏｕおよびＭａｒｔｉｎのコンピュータソフトウェア（２００５）により記述される、併用指数（ＣＩ）法に基づく相乗作用のマトリクス図である。化合物ＡおよびＭＥＫ阻害剤ビニメチニブによる併用処置により、予期せずに、ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞のアポトーシスを誘発する強い相乗作用が示された。図４Ｃは、ＣＩの併用指数プロットであり、ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ肥満細胞のアポトーシスを誘発する、化合物Ａとビニメチニブとの併用に関する強い相乗作用を実証する。
【０１５７】
実施例５．化合物Ｂおよびビニメチニブによる併用処置により、肥満細胞症細胞株におけるアポトーシスが誘発される
図５Ａは、化合物Ｂおよびビニメチニブの様々な処置に対して決定された細胞アポトーシスの相対的割合を示すグラフ表示である。図５Ｂは、ＣｈｏｕおよびＴａｌａｌａｙ（１９８４）ならびにＣｈｏｕおよびＭａｒｔｉｎのコンピュータソフトウェア（２００５）により記述される、併用指数（ＣＩ）法に基づく相乗作用のマトリクス図である。ＣＩ＜１は、相乗作用を示し、ＣＩ＝１は、相加作用を示し、またＣＩ＞１は、拮抗作用を示す。化合物ＢおよびＭＥＫ阻害剤ビニメチニブによる併用処置により、予期せずに、ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞のアポトーシスを誘発する強い相乗作用が示された。図５Ｃは、ＣＩの併用指数プロットであり、ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ肥満細胞のアポトーシスを誘発する、化合物Ｂとビニメチニブとの併用に関する強い相乗作用を実証する。
【０１５８】
実施例６．化合物Ａおよびコビメチニブによる併用処置により、肥満細胞症細胞株におけるアポトーシスが誘発される
図６Ａは、化合物Ａおよびコビメチニブの様々な処置に対して決定された細胞アポトーシスの相対的割合を示すグラフ表示である。図６Ｂは、ＣｈｏｕおよびＴａｌａｌａｙ（１９８４）およびＣｈｏｕおよびＭａｒｔｉｎのコンピュータソフトウェア（２００５）により記述される、併用指数（ＣＩ）法に基づく相乗作用のマトリクス図である。化合物ＡおよびＭＥＫ阻害剤コビメチニブによる併用療法により、予期せずに、ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞のアポトーシスを誘発する強い相乗作用が示された。図６Ｃは、ＣＩの併用指数プロットであり、ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ肥満細胞のアポトーシスを誘発する、化合物Ａとコビメチニブとの併用に関する強力な相乗作用を実証する。
【０１５９】
実施例７．化合物Ｂおよびコビメチニブによる併用処置により、肥満細胞症細胞株におけるアポトーシスが誘発される
図７Ａは、化合物Ｂおよびコビメチニブの様々な処置に対して決定された細胞アポトーシスの相対的割合を示すグラフ表示である。図７Ｂは、ＣｈｏｕおよびＴａｌａｌａｙ（１９８４）ならびにＣｈｏｕおよびＭａｒｔｉｎのコンピュータソフトウェア（２００５）により記述される、併用指数（ＣＩ）法に基づく相乗作用のマトリクス図である。ＣＩ＜１は、相乗作用を示し、ＣＩ＝１は、相加作用を示し、またＣＩ＞１は、拮抗作用を示す。化合物ＢおよびＭＥＫ阻害剤コビメチニブによる併用処置により、予期せずに、ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞のアポトーシスを誘発するための強い相乗作用が示された。図７Ｃは、ＣＩの併用指数プロットであり、ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ肥満細胞のアポトーシスを誘発する、化合物Ｂとコビメチニブとの併用に関する強い相乗作用を実証する。
【０１６０】
実施例８．化合物Ａおよびウリキセルチニブによる併用処置により、肥満細胞症細胞株におけるアポトーシスが誘発される
図８Ａは、化合物ＡおよびＥＲＫ阻害剤ウリキセルチニブの様々な処置に対して決定された細胞アポトーシスの相対的割合を示すグラフ表示である。図８Ｂは、ＣｈｏｕおよびＴａｌａｌａｙ（１９８４）ならびにＣｈｏｕおよびＭａｒｔｉｎのコンピュータソフトウェア（２００５）により記述される、併用指数（ＣＩ）法に基づく相乗作用のマトリクス図である。化合物Ａおよびウリキセルチニブによる併用療法により、予期せずに、ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞のアポトーシスを誘発する強い相乗作用が示された。図８Ｃは、ＣＩの併用指数プロットであり、ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ肥満細胞のアポトーシスを誘発する、化合物Ａとウリキセルチニブとの併用に関する強い相乗作用を実証する。
【０１６１】
実施例９．化合物Ｂおよびウリキセルチニブによる併用処置により、肥満細胞症細胞株におけるアポトーシスが誘発される
〔000160〕ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ肥満細胞におけるアポトーシスの誘発に関して、化合物ＢおよびＥＲＫ阻害剤ウリキセルチニブの併用処置を評価することができる。併用指数（ＣＩ）法に基づく相乗作用のマトリクス図は、ＣｈｏｕおよびＴａｌａｌａｙ（１９８４）ならびにＣｈｏｕおよびＭａｒｔｉｎのコンピュータソフトウェア（２００５）により記述されるとおりに生成することが可能である。化合物Ｂおよびウリキセルチニブによる併用処置を用いて、ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞のアポトーシスを誘発する相乗作用を示すことができる。ＣＩの併用指数プロットを用いて、ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ肥満細胞のアポトーシスを誘発する、化合物Ｂとウリキセルチニブとの併用に関する強い相乗作用を実証することができる。
【０１６２】
実施例１０．化合物ＡおよびＳＣＨ７７２９８４による併用処置により、肥満細胞症細胞株におけるアポトーシスが誘発される
ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ肥満細胞におけるアポトーシスの誘発に関して、化合物ＡおよびＥＲＫ阻害剤ＳＣＨ７７２９８４の併用処置を評価することができる。併用指数（ＣＩ）法に基づく相乗作用のマトリクス図は、ＣｈｏｕおよびＴａｌａｌａｙ（１９８４）ならびにＣｈｏｕおよびＭａｒｔｉｎのコンピュータソフトウェア（２００５）により記述されるとおりに生成することが可能である。化合物ＡおよびＳＣＨ７７２９８４による併用処置を用いて、ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞のアポトーシスを誘発する相乗作用を示すことができる。ＣＩの併用指数プロットを用いて、ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ肥満細胞のアポトーシスを誘発する、化合物ＡとＳＣＨ７７２９８４との併用に関する相乗作用を実証することができる。
【０１６３】
実施例１１．化合物ＢおよびＳＣＨ７７２９８４による併用処置により、肥満細胞症細胞株におけるアポトーシスが誘発される
ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ肥満細胞におけるアポトーシスの誘発に関して、化合物ＢおよびＥＲＫ阻害剤ＳＣＨ７７２９８４の併用処置を評価することができる。併用指数（ＣＩ）法に基づく相乗作用のマトリクス図は、ＣｈｏｕおよびＴａｌａｌａｙ（１９８４）ならびにＣｈｏｕおよびＭａｒｔｉｎのコンピュータソフトウェア（２００５）により記述されるとおりに生成することが可能である。化合物ＡおよびＳＣＨ７７２９８４による併用処置を用いて、ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞のアポトーシスを誘発する相乗作用を示すことができる。ＣＩの併用指数プロットを用いて、ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ肥満細胞のアポトーシスを誘発する、化合物ＢとＳＣＨ７７２９８４との併用に関する相乗作用を実証することができる。
【０１６４】
実施例１２．化合物ＡおよびＬＹ３００９１２０による併用処置により、肥満細胞症細胞株におけるアポトーシスが誘発される
ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ肥満細胞におけるアポトーシスの誘発に関して、化合物ＡおよびＲＡＦ阻害剤ＬＹ３００９１２０の併用処置を評価することができる。併用指数（ＣＩ）法に基づく相乗作用のマトリクス図は、ＣｈｏｕおよびＴａｌａｌａｙ（１９８４）ならびにＣｈｏｕおよびＭａｒｔｉｎのコンピュータソフトウェア（２００５）により記述されるとおりに生成することが可能である。化合物ＡおよびＬＹ３００９１２０による併用処置を用いて、ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞のアポトーシスを誘発する相乗作用を示すことができる。ＣＩの併用指数プロットを用いて、ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ肥満細胞のアポトーシスを誘発する、化合物ＡとＬＹ３００９１２０との併用に関する強い相乗作用を実証することができる。
【０１６５】
実施例１３．化合物ＢおよびＬＹ３００９１２０による併用処置により、肥満細胞症細胞株におけるアポトーシスが誘発される
ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ肥満細胞におけるアポトーシスの誘発に関して、化合物ＢおよびＲＡＦ阻害剤ＬＹ３００９１２０の併用処置を評価することができる。併用指数（ＣＩ）法に基づく相乗作用のマトリクス図は、ＣｈｏｕおよびＴａｌａｌａｙ（１９８４）ならびにＣｈｏｕおよびＭａｒｔｉｎのコンピュータソフトウェア（２００５）により記述されるとおりに生成することが可能である。化合物ＢおよびＬＹ３００９１２０による併用療法を用いて、ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞のアポトーシスを誘発する相乗作用を示すことができる。ＣＩの併用指数プロットを用いて、ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ肥満細胞のアポトーシスを誘発する、化合物ＢとＬＹ３００９１２０との併用に関する相乗作用を示すことができる。
【０１６６】
実施例１４．化合物Ａおよびトラメチニブによる併用処置が、ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ肥満細胞株のコロニー増殖の相乗的な減少を導く
〔000165〕化合物ＡおよびＭＥＫ阻害剤トラメチニブによる併用処置が、いずれかの単剤による処置と比較して、ＨＭＣ１．２のコロニー増殖の減少を導くことを実証するために、試験を実施した。１０，０００個のＨＭＣ１．２細胞を軟寒天で増殖させ、様々な濃度の化合物Ａ、トラメチニブ、または化合物Ａおよびトラメチニブの併用で、１０日間インキュベートした。薬剤処置を除去し、生細胞のコロニー増殖をさらに５日後に観察した。
図９Ａは、単剤として、または様々な濃度の化合物Ａを様々な濃度のトラメチニブとを組み合わせたマトリクスとして、トラメチニブ（０、１０、または２５ｎＭ）、化合物Ａ（０、２５、または５０ｎＭ）による処置後のＨＭＣ１．２肥満細胞のコロニー増殖の代表的な写真である。化合物Ａまたはトラメチニブによる単剤処置で、薬剤除去５日後にすべての濃度でコロニー増殖が生じた一方、化合物Ａとトラメチニブとの併用では、薬物除去５日後にコロニー増殖はほとんど生じなかった。化合物Ａ（２５ｎＭ）のトラメチニブ（２５ｎＭ）との併用で、薬剤除去５日後にコロニー増殖が完全に根絶された。化合物Ａ（５０ｎＭ）のトラメチニブ（１０または２５ｎＭ）との併用が、予期せずに、薬剤除去５日後に、５倍での実体的顕微鏡検査による視覚化で決定されるような検出限界まで、生細胞ＨＭＣ１．２の増殖の完全な根絶をもたらした一方、単剤化合物Ａまたは単剤のトラメチニブでの処置では、根絶は観察されなかった。薬剤除去のさらに８日後（総計１３日）までさらに延長したコロニー増殖では、化合物Ａ（５０ｎＭ）およびトラメチニブ（１０及び２５ｎＭ）の併用で、コロニー増殖の検出限界まで根絶が維持されたままであった。しかしながら、化合物Ａ（２５ｎＭ）およびトラメチニブ（２５ｎＭ）の併用でのインキュベーションでは、追加で８日間行った後、約１５〜２０のコロニーが増殖した。（図９Ａ右パネル）。
【０１６７】
図９Ｂは、図９Ａからの様々な処置後のＨＭＣ１．２肥満細胞のコロニー増殖を定量化するグラフ表示である。５０ｎＭの化合物Ａと、１０ｎＭまたは２５ｎＭのいずれかのトラメチニブとの併用処置が、予期せずに、５倍での実体的顕微鏡検査による視覚化で決定されるような検出限界まで、コロニー増殖の根絶をもたらした（図９Ｂ、矢印を参照）。２５ｎＭの化合物Ａと、２５ｎＭのトラメチニブとの併用処置が、予期せずに、５倍での実体的顕微鏡検査による視覚化で決定されるような検出限界まで、コロニー増殖の根絶をもたらし（図９Ｂ、矢印を参照）、根絶は、単剤の化合物Ａまたはトラメチニブのいずれかによる処置では観察されなかった。
【０１６８】
実施例１５．化合物Ｂおよびトラメチニブによる併用処置が、ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ肥満細胞株のコロニー増殖の相乗的な減少を導く
実施例１４に記載されるＨＭＣ１．２細胞におけるコロニー増殖の減少を評価するために、化合物ＢおよびＭＥＫ阻害剤トラメチニブを用いてまた試験を実施した。
【０１６９】
図１０Ａは、単剤として、または様々な濃度の化合物Ｂを様々な濃度のトラメチニブとを組み合わせたマトリクスとして、トラメチニブ（０、１０、または２５ｎＭ）、化合物Ｂ（０、２５、または５０ｎＭ）での処置後のＨＭＣ１．２肥満細胞のコロニー増殖の代表的な写真である。化合物Ｂまたはトラメチニブでの単剤処置によって、薬剤除去５日後にすべての濃度でコロニー増殖が生じた一方、化合物Ｂとトラメチニブとの併用では、薬剤除去５日後にコロニー増殖はほとんど生じなかった。化合物Ｂ（２５ｎＭ）のトラメチニブ（２５ｎＭ）との併用により、薬剤除去５日後に、生細胞ＨＭＣ１．２の増殖が著しく減少した。化合物Ｂ（５０ｎＭ）のトラメチニブ（１０または２５ｎＭ）との併用が、予期せずに、薬物除去５日後に、５倍での実体的顕微鏡検査による視覚化で決定されるような検出限界まで、生細胞ＨＭＣ１．２の増殖の完全な根絶をもたらした一方、単剤化合物Ｂまたは単剤のトラメチニブでの治療では、根絶は観察されなかった。薬剤除去のさらに８日後（総計１３日）までさらに延長したコロニー増殖では、化合物Ｂ（５０ｎＭ）およびトラメチニブ（２５ｎＭ）の併用で、コロニー増殖の検出限界まで根絶が維持されたままであった。
図１０Ｂは、図１０Ａからの様々な処置後のＨＭＣ１．２肥満細胞のコロニー増殖を定量化するグラフ表示である。５０ｎＭの化合物Ｂと、１０ｎＭまたは２５ｎＭのいずれかのトラメチニブとの併用処置が、予期せずに、５倍での実体的顕微鏡検査による視覚化で決定されるような検出限界まで、コロニー増殖の根絶をもたらした一方で、根絶は、単剤の化合物Ｂまたはトラメチニブのいずれかによる処置では観察されなかった（図１０Ｂ、矢印を参照）。
【０１７０】
実施例１６．化合物Ａおよびビニメチニブによる併用処置が、ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ肥満細胞株のコロニー増殖の相乗的な減少を導く
図１１Ａは、単剤として、または様々な濃度の化合物Ａを様々な濃度のビニメチニブとを組み合わせたマトリクスとして、ビニメチニブ（０、２５０、または５００ｎＭ）、化合物Ａ（０、２５、または５０ｎＭ）での治療後のＨＭＣ１．２肥満細胞のコロニー増殖の代表的な写真である。化合物Ａまたはビニメチニブによる単剤処置によって、薬剤除去５日後にすべての濃度でコロニー増殖が生じた一方、化合物Ａとビニメチニブとの併用では、薬剤除去５日後にコロニー増殖はほとんど生じなかった。化合物Ａ（２５ｎＭ）のビニメチニブ（２５０ｎＭ）との併用により、薬剤除去５日後に、生細胞ＨＭＣ１．２の増殖が著しく減少した。化合物Ａ（５０ｎＭ）のビニメチニブ（２５０ｎＭまたは５００ｎＭ）との併用が、予期せずに、薬剤除去５日後に、５倍での実体的顕微鏡検査による視覚化で決定されるような検出限界まで、生細胞ＨＭＣ１．２の増殖の完全な根絶をもたらした一方、単剤化合物Ａまたは単剤のビニメチニブによる処置では、根絶は観察されなかった。薬剤除去のさらに８日後（総計１３日）までさらに延長したコロニー増殖では、化合物Ａ（５０ｎＭ）およびビニメチニブ（５００ｎＭ）の併用で、コロニー増殖の検出限界まで根絶が維持されたままであった。しかしながら、化合物Ａ（５０ｎＭ）およびビニメチニブ（２５０ｎＭ）の併用で、約１０〜１５のコロニーが増殖した。
【０１７１】
〔000170〕図１１Ｂは、図１１Ａからの様々な処置後のＨＭＣ１．２肥満細胞のコロニー増殖を定量化するグラフ表示である。５０ｎＭの化合物Ａと、２５０ｎＭまたは５００ｎＭのビニメチニブとの併用処置が、予期せずに、５倍での実体的顕微鏡検査による視覚化で決定されるような検出限界まで、コロニー増殖の根絶をもたらし、根絶は、単剤の化合物Ａまたはビニメチニブのいずれかによる処置では観察されなかった（図１１Ｂ、矢印を参照）。
【０１７２】
実施例１７．化合物Ｂおよびビニメチニブによる併用処置が、ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ肥満細胞株のコロニー増殖の相乗的な減少を導く
図１２Ａは、単剤として、または様々な濃度の化合物Ｂを様々な濃度のビニメチニブと組み合わせたマトリクスとして、ビニメチニブ（０、２５０、または５００ｎＭ）、化合物Ｂ（０、２５、または５０ｎＭ）による処置後のＨＭＣ１．２肥満細胞のコロニー増殖の代表的な写真である。化合物Ｂまたはビニメチニブによる単剤処置によって、薬剤除去５日後にすべての濃度でコロニー増殖が生じた一方、化合物Ｂとビニメチニブとの併用では、薬剤除去５日後にコロニー増殖はほとんど生じなかった。化合物Ｂ（２５ｎＭ）のビニメチニブ（２５０ｎＭ）との併用により、薬剤除去５日後に、生細胞ＨＭＣ１．２の増殖が著しく減少した。化合物Ｂ（２５ｎＭ）のビニメチニブ（５００ｎＭ）との併用により、薬剤除去５日後に、５倍での実体的顕微鏡検査による視覚化で決定されるような検出限界まで、生細胞ＨＭＣ１．２の増殖の完全な根絶をもたらした。化合物Ｂ（５０ｎＭ）のビニメチニブ（２５０ｎＭまたは５００ｎＭ）との併用が、予期せずに、薬剤除去５日後に、５倍での実体的顕微鏡検査による視覚化で決定されるような検出限界まで、生細胞ＨＭＣ１．２の増殖の完全な根絶をもたらした一方、単剤化合物Ｂまたは単剤のビニメチニブでの処置では、根絶は観察されなかった。薬剤除去のさらに８日後（総計１３日）までさらに延長したコロニー増殖では、化合物Ｂ（５０ｎＭ）とビニメチニブ（２５０または５００ｎＭ）および化合物Ｂ（２５ｎＭ）とビニメチニブ（５００ｎＭ）との併用で、コロニー増殖の検出限界まで根絶が維持されたままであった。
【０１７３】
図１２Ｂは、図１２Ａからの様々な処置後のＨＭＣ１．２肥満細胞のコロニー増殖を定量化するグラフ表示である。２５ｎＭの化合物Ｂと５００ｎＭのビニメチニブとの併用処置および５０ｎＭの化合物Ｂと２５０ｎＭまたは５００ｎＭのいずれかのビニメチニブとの併用処置が、予期せずに、５倍での実体的顕微鏡検査による視覚化で決定されるような検出限界まで、コロニー増殖の根絶をもたらした一方、根絶は、単剤の化合物Ｂまたはビニメチニブのいずれかによる処置では観察されなかった（図１２Ｂ、矢印を参照）。
【０１７４】
実施例１８．化合物Ａおよびコビメチニブによる併用処置が、ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ肥満細胞株のコロニー増殖の相乗的な減少を導く
図１３Ａは、単剤として、または様々な濃度の化合物Ａを様々な濃度のコビメチニブとを組み合わせたマトリクスとして、コビメチニブ（０、２５、または５０ｎＭ）、化合物Ａ（０、２５、または５０ｎＭ）での治療後のＨＭＣ１．２肥満細胞のコロニー増殖の代表的な写真である。化合物Ａまたはコビメチニブを用いた単剤処置によって、薬剤除去５日後にすべての濃度でコロニー増殖が生じた一方、化合物Ａとコビメチニブとの併用では、いずれか一方での単剤処置と比べて、薬剤除去５日後にコロニー増殖はほとんど生じなかった。化合物Ａ（５０ｎＭ）のコビメチニブ（２５または５０ｎＭ）との併用により、薬剤除去５日後に、生細胞ＨＭＣ１．２の増殖が著しく減少した。
【０１７５】
図１３Ｂは、図１３Ａからの様々な処置後のＨＭＣ１．２肥満細胞のコロニー増殖を定量化するグラフ表示である。５０ｎＭの化合物Ａと２５ｎＭまたは５０ｎＭのいずれかのコビメチニブとを用いた併用処置により、単剤の化合物Ａまたはコビメチニブのいずれかと比較して、コロニー増殖の著しい減少をもたらした。
【０１７６】
実施例１９．化合物Ｂおよびコビメチニブを用いた併用処置が、ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ肥満細胞株のコロニー増殖における相乗的な減少を導く
〔000175〕図１４Ａは、単剤として、または様々な濃度の化合物Ｂを様々な濃度のコビメチニブとを組み合わせたマトリクスとして、コビメチニブ（０、２５、または５０ｎＭ）、化合物Ｂ（０、２５、または５０ｎＭ）での治療後のＨＭＣ１．２肥満細胞のコロニー増殖の代表的な写真である。化合物Ｂまたはコビメチニブによる単剤処置によって、薬剤除去５日後にすべての濃度でコロニー増殖が生じた一方、化合物Ｂとコビメチニブとの併用では、いずれか一方での単剤処置と比べて、薬剤除去５日後にコロニー増殖がほとんど生じなかった。化合物Ｂ（５０ｎＭ）のコビメチニブ（２５または５０ｎＭ）との併用により、薬剤除去５日後に、生細胞ＨＭＣ１．２の増殖が著しく減少した。
【０１７７】
図１４Ｂは、図１４Ａからの様々な処置後のＨＭＣ１．２肥満細胞のコロニー増殖を定量化するグラフ表示である。５０ｎＭの化合物Ｂと２５ｎＭまたは５０ｎＭのいずれかのコビメチニブとによる併用処置により、単剤の化合物Ｂまたはコビメチニブのいずれかと比較して、コロニー増殖の著しい減少をもたらした。
【０１７８】
実施例２０．化合物ＡおよびＥＲＫ阻害剤ウリキセルチニブによる併用処置が、ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ肥満細胞株のコロニー増殖における相乗的な減少を導く
実施例１４の方法に従ったＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ肥満細胞株のコロニー増殖の阻害について、化合物Ａおよびウリキセルチニブの併用処置を評価することができる。
【０１７９】
実施例２１．化合物ＢおよびＥＲＫ阻害剤ウリキセルチニブによる併用処置が、ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ肥満細胞株のコロニー増殖における相乗的な減少を導く
実施例１４の方法に従ったＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ肥満細胞株のコロニー増殖の阻害に関して、化合物Ｂおよびウリキセルチニブの併用処置を評価することができる。
【０１８０】
実施例２２．化合物ＡおよびＲＡＦ阻害剤ＬＹ３００９１２０による併用処置が、ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ肥満細胞株のコロニー増殖における相乗的な減少を導く
実施例１４の方法に従ったＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ肥満細胞株のコロニー増殖の阻害に関して、化合物ＡおよびＲＡＦ阻害剤ＬＹ３００９１２０の併用処置を評価することができる。
【０１８１】
実施例２３．化合物ＢおよびＬＹ３００９１２０による併用処置が、ＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ肥満細胞株のコロニー増殖における相乗的な減少を導く
〔000180〕実施例１４の方法に従ったＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ肥満細胞株のコロニー増殖の阻害に関して、化合物ＢおよびＲＡＦ阻害剤ＬＹ３００９１２０の併用処置を評価することができる。
【０１８２】
実施例２４．化合物ＡおよびＭＥＫ阻害剤トラメチニブによる併用処置が、突然変異体Ｎ−ｒａｓ  Ｇ１２Ｄを形質移入したＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ肥満細胞症細胞株においてアポトーシスを誘発する
化合物Ａおよびトラメチニブによる併用処置が、突然変異体Ｎ−ｒａｓ  Ｇ１２Ｄを形質移入したＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞においてアポトーシスを誘発することを実証するために、試験を実施した。ウェル当たり１０，０００個の細胞を播種した９６ウェルプレートでアッセイを行った。細胞を、様々な濃度でのビヒクル対照、化合物Ａ、トラメチニブ、またはその組合せにより処置し、細胞を２４時間および４８時間成長させた。アポトーシスは、カスパーゼ３／７活性を測定することにより評価した。
【０１８３】
図１５Ａは、２４時間での、様々な処置に対して決定されたカスパーゼ活性の相対的割合を示すグラフ表示である。２４時間の化合物Ａおよびトラメチニブによる併用処置が、空のベクター（ＥＶ）を形質移入した（左パネル）ＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞、または突然変異体Ｎ−ｒａｓ  Ｇ１２Ｄを形質移入した（右パネル）ＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞のアポトーシスを誘発した。化合物Ａのトラメチニブとの併用が、ＥＶを形質移入したＨＭＣ１．２細胞およびＮ−ｒａｓ  Ｇ１２Ｄを形質移入したＨＭＣ１．２細胞におけるアポトーシスの相乗的増加を導いた。
【０１８４】
図１５Ｂは、４８時間での、様々な治療に対して決定されたカスパーゼ活性の相対的割合を示すグラフ表示である。４８時間の化合物Ａおよびトラメチニブによる併用処置が、空のベクター（ＥＶ）を形質移入した（左パネル）ＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞、または突然変異体Ｎ−ｒａｓ  Ｇ１２Ｄを形質移入した（右パネル）ＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞のアポトーシスを誘発した。化合物Ａのトラメチニブとの併用が、ＥＶを形質移入したＨＭＣ１．２細胞およびＮ−ｒａｓ  Ｇ１２Ｄを形質移入したＨＭＣ１．２細胞におけるアポトーシスの相乗的増加を導いた。ＥＶ形質移入細胞よりも、Ｎ−ｒａｓ形質移入細胞でのアポトーシスがより多かった。
【０１８５】
実施例２５．化合物ＡおよびＭＥＫ阻害剤コビメチニブによる併用処置が、突然変異体Ｎ−ｒａｓ  Ｇ１２Ｄを形質移入したＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ肥満細胞症細胞株においてアポトーシスを誘発する
図１６Ａは、２４時間での、様々な処置に対して決定されたカスパーゼ活性の相対的割合を示すグラフ表示である。２４時間の化合物Ａおよびコビメチニブによる併用処置が、空のベクター（ＥＶ）を形質移入した（左パネル）ＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞、または突然変異体Ｎ−ｒａｓ  Ｇ１２Ｄを形質移入した（右パネル）ＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞のアポトーシスを誘発した。化合物Ａのコビメチニブとの併用が、ＥＶを形質移入したＨＭＣ１．２細胞およびＮ−ｒａｓ  Ｇ１２Ｄを形質移入したＨＭＣ１．２細胞におけるアポトーシスの相乗的増加を導いた。ＥＶ形質移入細胞よりも、Ｎ−ｒａｓ形質移入細胞でのアポトーシスがより多かった。
【０１８６】
〔000185〕図１６Ｂは、４８時間での、様々な治療に対して決定されたカスパーゼ活性の相対的割合を示すグラフ表示である。４８時間の化合物Ａおよびコビメチニブを用いた併用処置が、空のベクター（ＥＶ）を形質移入した（左パネル）ＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞、または突然変異体Ｎ−ｒａｓ  Ｇ１２Ｄを形質移入した（右パネル）ＨＭＣ１．２  Ｖ５６０Ｇ／Ｄ８１６Ｖ細胞のアポトーシスを誘発した。化合物Ａのコビメチニブとの併用が、ＥＶを形質移入したＨＭＣ１．２細胞およびＮ−ｒａｓ  Ｇ１２Ｄを形質移入したＨＭＣ１．２細胞におけるアポトーシスの相乗的増加を導いた。ＥＶ形質移入細胞よりも、Ｎ−ｒａｓ形質移入細胞でのアポトーシスがより多かった。
【０１８７】
実施例２６．化合物ＡおよびＭＥＫ阻害剤トラメチニブを用いた併用処置が、Ｎ−ｒａｓ  Ｇ１２Ｄまたは空ベクターで形質移入したＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ肥満細胞株のコロニー増殖の相乗的な減少を導く
化合物Ａおよびトラメチニブを用いた併用処置が、いずれかの単剤による治療と比較して、空のベクター（ＥＶ）で形質移入したまたはＮ−ｒａｓ  Ｇ１２Ｄで形質移入した、ＨＭＣ１．２のコロニー増殖の減少を導くことを実証するために、試験を実施した。ＨＭＣ１．２細胞を、様々な濃度の化合物Ａ、トラメチニブ、または化合物Ａとトラメチニブとの併用で、１０日間インキュベートした。薬剤処置を除去し、生細胞のコロニー増殖をさらに５または１３日後に観察した。
【０１８８】
図１７Ａは、単剤として、または様々な濃度の化合物Ａを様々な濃度のトラメチニブとを組み合わせたマトリクスとして、トラメチニブ（０、１、１０、または２５ｎＭ）、化合物Ａ（０、２５、または５０ｎＭ）での治療後のＥＶを形質移入したＨＭＣ１．２肥満細胞のコロニー増殖の代表的な写真である。化合物Ａまたはトラメチニブによる単剤処置で、薬剤除去５日後にすべての濃度でコロニー増殖が生じた一方、化合物Ａとトラメチニブとの併用では、薬剤除去５日後にコロニー増殖はほとんど生じなかった。化合物Ａ（５０ｎＭ）のトラメチニブ（１ｎＭ）との併用により、単剤の化合物Ａまたは単剤のトラメチニブと比較して、１ｎＭのトラメチニブとの併用で、コロニー増殖の著しい減少が生じた。化合物Ａ（５０ｎＭ）のトラメチニブ（１０または２５ｎＭ）との併用が、予期せずに、薬剤除去５日後に、５倍での実体的顕微鏡検査による視覚化で決定されるような検出限界まで、生細胞ＨＭＣ１．２の増殖の完全な根絶をもたらした一方、単剤化合物Ａまたは単剤のトラメチニブでの処置では、根絶は観察されなかった。薬剤除去後のさらに８日間（薬剤除去後総計１３日）のさらに延長したコロニー増殖では、化合物Ａ（５０ｎＭ）およびトラメチニブ（２５ｎＭ）の併用で、コロニー増殖の検出限界まで根絶が維持されたままであった。
【０１８９】
図１７Ｂは、図１７Ａからの様々な処置後のＥＶを形質移入したＨＭＣ１．２肥満細胞のコロニー増殖を定量化するグラフ表示である。５０ｎＭの化合物Ａと、１０ｎＭまたは２５ｎＭのいずれかのトラメチニブとの併用処置が、予期せずに、５倍での実体的顕微鏡検査による視覚化で決定されるような検出限界まで、コロニー増殖の根絶をもたらした一方、根絶は、単剤の化合物Ａまたはトラメチニブのいずれかによる処置では観察されなかった（図１７Ｂ、矢印を参照）。
【０１９０】
図１７Ｃは、単剤として、または様々な濃度の化合物Ａを様々な濃度のトラメチニブとを組み合わせたマトリクスとして、トラメチニブ（０、１、１０、または２５ｎＭ）、化合物Ａ（０、２５、または５０ｎＭ）での治療後のＮ−ｒａｓ  Ｇ１２Ｄを形質移入したＨＭＣ１．２細胞のコロニー増殖の代表的な写真である。化合物Ａまたはトラメチニブを用いた単剤処置によって、薬剤除去５日後にすべての濃度でコロニー増殖が生じた一方、化合物Ａとトラメチニブとの併用では、薬剤除去５日後にコロニー増殖はほとんど生じなかった。化合物Ａ（２５ｎＭ）のトラメチニブ（２５ｎＭ）との併用では、薬剤除去５日後の生細胞ＨＭＣ１．２の増殖の著しい減少がもたらされ、また化合物Ａ（５０ｎＭ）のトラメチニブ（１０または２５ｎＭ）との併用が、予期せずに、薬剤除去５日後に、５倍での実体的顕微鏡検査による視覚化で決定されるような検出限界まで、Ｎ−ｒａｓ  Ｇ１２Ｄを形質移入したＨＭＣ１．２細胞の増殖の完全な根絶をもたらし、一方で、根絶は、単剤の化合物Ａまたはトラメチニブのいずれかによる処置では観察されなかった。薬剤除去のさらに８日後（薬剤除去後総計１３日）までさらに延長したコロニー増殖では、化合物Ａ（５０ｎＭ）およびトラメチニブ（２５ｎＭ）の併用で、コロニー増殖の根絶が維持されたままであった（図１７Ｃ）。
【０１９１】
〔000190〕図１７Ｄは、図１７Ｃからの様々な処置のコロニー増殖を定量化するグラフ表示である。化合物Ａおよびトラメチニブによる併用処置により、単剤のいずれかでの処置と比較して、コロニー増殖の優れた阻害が生じた。５０ｎＭの化合物Ａと、１０ｎＭまたは２５ｎＭのいずれかのトラメチニブとの併用処置が、予期せずに、薬剤除去５日後に、５倍での実体的顕微鏡検査による視覚化で決定されるような検出限界まで、コロニー増殖の根絶をもたらし、根絶は、単剤の化合物Ａまたはトラメチニブのいずれかによる処置では観察されなかった（図１７Ｄ、矢印を参照）。
【０１９２】
実施例２７．化合物Ａおよびコビメチニブを用いた併用処置が、Ｎ−ｒａｓ  Ｇ１２Ｄまたは空ベクターで形質移入したＨＭＣ１．２  ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ肥満細胞株のコロニー増殖における相乗的な減少を導く
化合物Ａおよびコビメチニブを用いた併用処置が、いずれかの単剤による処置と比較して、空のベクター（ＥＶ）で形質移入したまたはＮ−ｒａｓ  Ｇ１２Ｄで形質移入した、ＨＭＣ１．２のコロニー増殖の減少を導くことを実証するために、試験を実施した。ＨＭＣ１．２細胞を、様々な濃度の化合物Ａ、コビメチニブ、または化合物Ａとコビメチニブとの併用で、１０日間インキュベートした。薬剤処置を除去し、生細胞のコロニー増殖をさらに５または１０日後に観察した。
【０１９３】
図１８Ａは、単剤として、または様々な濃度の化合物Ａを様々な濃度のコビメチニブとを組み合わせたマトリクスとして、コビメチニブ（２５、または５０ｎＭ）、化合物Ａ（０、２５、または５０ｎＭ）での処置後のＥＶを形質移入したＨＭＣ１．２肥満細胞のコロニー増殖の代表的な写真である。化合物Ａまたはコビメチニブによる単剤処置によって、薬剤除去５日後にすべての濃度でコロニー増殖が生じた一方、化合物Ａとコビメチニブとの併用では、薬剤処置除去５日後にコロニー増殖がほとんど生じなかった。化合物Ａ（２５ｎＭ）のコビメチニブ（２５および５０ｎＭ）との併用により、薬剤処置除去５日後に、生細胞ＨＭＣ１．２の増殖が著しく減少した。化合物Ａ（５０ｎＭ）のコビメチニブ（５０ｎＭ）との併用が、予期せずに、薬剤処置除去５日後に、５倍での実体的顕微鏡検査による視覚化で決定されるような検出限界まで、生細胞ＨＭＣ１．２の増殖の完全な根絶をもたらした一方、単剤化合物Ａまたは単剤のコビメチニブでの処置では、根絶は観察されなかった。薬剤処置除去のさらに５日後（薬剤除去後総計１０日）までさらに延長したコロニー増殖では、化合物Ａ（５０ｎＭ）およびコビメチニブ（５０ｎＭ）の併用で、コロニー増殖の検出限界まで根絶が維持されたままであった。
【０１９４】
図１８Ｂは、図１８Ａからの様々な処置後のＥＶを形質移入したＨＭＣ１．２肥満細胞のコロニー増殖を定量化するグラフ表示である。５０ｎＭの化合物Ａと、５０ｎＭのコビメチニブとの併用処置が、予期せずに、５倍での実体的顕微鏡検査による視覚化で決定されるような検出限界まで、コロニー増殖の根絶をもたらした一方、根絶は、単剤の化合物Ａまたはコビメチニブのいずれかによる処置では観察されなかった（図１８Ｂ、矢印を参照）。
【０１９５】
図１８Ｃは、単剤として、または様々な濃度の化合物Ａを様々な濃度のコビメチニブとを組み合わせたマトリクスとして、コビメチニブ（０、２５、または５０ｎＭ）、化合物Ａ（０、２５、または５０ｎＭ）による処置後のＮ−ｒａｓ  Ｇ１２Ｄを形質移入したＨＭＣ１．２肥満細胞のコロニー増殖の代表的な写真である。化合物Ａまたはコビメチニブを用いた単剤処置によって、薬剤処置除去５日後にすべての濃度でコロニー増殖が生じた一方、化合物Ａとコビメチニブとの併用では、薬剤処置除去５日後にコロニー増殖がほとんど生じなかった。化合物Ａ（２５ｎＭ）のコビメチニブ（２５および５０ｎＭ）との併用により、薬剤除去５日後に、生細胞ＨＭＣ１．２の増殖が著しく減少した。化合物Ａ（５０ｎＭ）のコビメチニブ（２５または５０ｎＭ）との併用が、予期せずに、薬剤処置除去５日後に、５倍での実体的顕微鏡検査による視覚化で決定されるような検出限界まで、生細胞ＨＭＣ１．２の増殖の完全な根絶をもたらした一方、単剤化合物Ａまたは単剤のコビメチニブでの処置では、根絶は観察されなかった。薬剤処置除去後のさらに１０日までさらに延長したコロニー増殖では、化合物Ａ（５０ｎＭ）およびコビメチニブ（２５または５０ｎＭ）の併用で、コロニー増殖の検出限界まで根絶が維持されたままであった。
【０１９６】
〔000195〕図１８Ｄは、図１８Ｃからの様々な処置後のコロニー増殖を定量化するグラフ表示である。化合物Ａおよびコビメチニブによる併用処置により、単剤のいずれかでの処置と比較して、コロニー増殖の優れた阻害が生じた。５０ｎＭの化合物Ａと、２５ｎＭまたは５０ｎＭのコビメチニブとの併用処置が、予期せずに、薬剤除去５日後に、５倍での実体的顕微鏡検査による視覚化で決定されるような検出限界まで、コロニー増殖の根絶をもたらした一方、根絶は、単剤の化合物Ａまたはコビメチニブのいずれかによる処置では観察されなかった（図１８Ｄ、矢印を参照）。
【０１９７】
均等物
当業者であれば、本開示に具体的に記載される特定の実施形態に対する多数の均等を、通例の実験程度のものにより、認識することができ、または確認することができるであろう。かかる均等物は、以下の特許請求の範囲に包含されることが意図される。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図２−３】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図３−３】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【図４−３】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【図５−３】
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【図６−１】
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【図６−２】
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【図６−３】
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【図７−１】
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【図７−２】
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【図７−３】
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【図８−１】
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【図８−２】
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【図８−３】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７−１】
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【図１７−２】
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【図１８−１】
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【図１８−２】
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【国際調査報告】
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