(57)【要約】本出願は、ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含む免疫細胞、そのような改変免疫細胞を製造する方法、ならびにＨＰＶ関連疾患を処置するため、ＨＰＶ関連疾患を予防するため、および／またはＨＰＶ関連疾患を有する個体における免疫応答をモジュレートするために、そのような改変免疫細胞を使用する方法を提供する。一部の態様では、本発明は、個体におけるヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）関連疾患を処置するための方法であって、方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含み、アジュバントは細胞内に供給されている、方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
個体におけるヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）関連疾患を処置するための方法であって、前記方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を前記個体に投与するステップを含み、前記改変免疫細胞は、ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含み、前記アジュバントは細胞内に供給されている、方法。
【請求項２】
個体におけるＨＰＶ関連疾患を予防するための方法であって、前記方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を前記個体に投与するステップを含み、前記改変免疫細胞は、ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含み、前記アジュバントは細胞内に供給されている、方法。
【請求項３】
ＨＰＶ関連疾患を有する個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、前記方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を前記個体に投与するステップを含み、前記改変免疫細胞は、ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含み、前記アジュバントは細胞内に供給されている、方法。
【請求項４】
個体におけるＨＰＶ関連疾患を処置するための方法であって、前記方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を前記個体に投与するステップを含み、前記改変免疫細胞は、ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含み、前記アジュバントは細胞内に供給されており、
前記改変免疫細胞は、
ａ）インプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプット細胞の直径の関数であり、それによって、前記抗原および前記アジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；ならびに
ｂ）前記ＨＰＶ抗原および前記アジュバントが前記摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプット細胞と前記ＨＰＶ抗原および前記アジュバントとをインキュベートし、それによって、前記改変免疫細胞を作出するステップ
によって調製される、方法。
【請求項５】
個体におけるＨＰＶ関連疾患を予防するための方法であって、前記方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を前記個体に投与するステップを含み、前記改変免疫細胞は、ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含み、前記アジュバントは細胞内に供給されており、
前記改変免疫細胞は、
ａ）インプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプット細胞の直径の関数であり、それによって、前記ＨＰＶ抗原および前記アジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；ならびに
ｂ）前記ＨＰＶ抗原および前記アジュバントが前記摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプット細胞と前記ＨＰＶ抗原および前記アジュバントとをインキュベートし、それによって、前記改変免疫細胞を作出するステップ
によって調製される、方法。
【請求項６】
ＨＰＶ関連疾患を有する個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、前記方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を前記個体に投与するステップを含み、前記改変免疫細胞は、ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含み、前記アジュバントは細胞内に供給されており、
前記改変免疫細胞は、
ａ）ＨＰＶ抗原を含むインプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプット細胞の直径の関数であり、それによって、前記ＨＰＶ抗原および前記アジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；ならびに
ｂ）前記ＨＰＶ抗原および前記アジュバントが前記摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプット細胞と前記抗原および前記アジュバントとをインキュベートし、それによって、前記改変免疫細胞を作出するステップ
によって調製される、方法。
【請求項７】
前記狭窄の前記直径は、前記細胞の前記直径未満である、請求項４〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記狭窄の前記直径は、前記細胞の前記直径の約２０％〜９９％である、請求項４〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記狭窄の前記直径は、前記細胞の前記直径の約２０％〜約６０％未満である、請求項４〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記狭窄は、チャネル中にある、請求項４〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記インプット細胞に、それが前記狭窄を通過するときに変形力が印加される、請求項４〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＨＰＶ抗原および／または前記アジュバントは、細胞質基質および／またはエンドソームに存在する、請求項１〜１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
前記抗原および／またはアジュバントは、前記細胞の多数の区画に存在する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記改変免疫細胞は、前記細胞の外側に、ＨＰＶ抗原および／またはアジュバントをさらに含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記摂動インプット細胞とインキュベートされるアジュバントの濃度は、約０．１μＭ〜約１ｍＭである、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記摂動インプット細胞とインキュベートされるＨＰＶ抗原の濃度は、約０．１μＭ〜約１ｍＭである、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記摂動インプット細胞とインキュベートされるＨＰＶ抗原のアジュバントに対する比は、約１００００：１〜約１：１００００である、請求項４〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記免疫応答は増強される、請求項３または６に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＨＰＶ抗原に対する前記免疫応答は増強される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記アジュバントは、ＣｐＧ  ＯＤＮ、ＩＦＮ−α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ−Ｉアゴニスト、またはポリＩ：Ｃである、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＣｐＧ  ＯＤＮは、ＣｐＧ  ＯＤＮ１０１８、ＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６、またはＣｐＧ  ＯＤＮ２００６である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記改変免疫細胞は１つよりも多いアジュバントを含む、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＨＰＶ抗原は、同じおよび／または異なるＨＰＶ抗原に対する応答を誘発する多数のポリペプチドのプールである、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
多数の抗原の前記プール中の抗原は、多数の抗原の前記プール中の他の抗原に向けられた前記免疫応答を減少させない、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記ＨＰＶ抗原は、抗原性ＨＰＶエピトープおよび１つまたは複数の異種ペプチド配列を含むポリペプチドである、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記ＨＰＶ抗原は、それ自体と、他の抗原と、または前記アジュバントと複合体を形成する、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記ＨＰＶは細胞溶解物に由来する抗原である、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記ＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ−１６またはＨＰＶ−１８抗原である、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記ＨＰＶ抗原は、ＨＬＡ−Ａ２特異的エピトープで構成される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記ＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ  Ｅ６抗原またはＨＰＶ  Ｅ７抗原である、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記改変免疫細胞は、ＨＰＶ  Ｅ６抗原およびＨＰＶ  Ｅ７抗原を含む、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記ＨＰＶ抗原は、１つまたは複数の異種ペプチド配列がそのＮ末端および／またはそのＣ末端で隣接している抗原性エピトープを含むポリペプチドである、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記ＨＰＶ抗原は、配列番号１８〜２６のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記ＨＰＶ抗原は、配列番号２３と少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記ＨＰＶ抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記ＨＰＶ抗原は、ＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る、請求項１〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記改変免疫細胞は、約０．１μＭ〜約１ｍＭの濃度で前記アジュバントを含む、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記改変免疫細胞は、約０．１μＭ〜約１ｍＭの濃度で前記ＨＰＶ抗原を含む、請求項１〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記ＨＰＶ抗原の前記アジュバントに対する比は、約１００００：１〜約１：１００００である、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
前記改変免疫細胞は、作用物質をさらに含み、前記作用物質は、前記作用物質を含まない対応する改変免疫細胞と比較して前記改変免疫細胞の生存能力および／または機能を増強する、請求項１〜４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記作用物質は、エンドサイトーシスを増強する化合物、安定剤、または補因子である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記作用物質はアルブミンである、請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
前記アルブミンは、マウス、ウシ、またはヒトアルブミンである、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記作用物質は、二価金属カチオン、グルコース、ＡＴＰ、カリウム、グリセロール、トレハロース、Ｄ−スクロース、ＰＥＧ１５００、Ｌ−アルギニン、Ｌ−グルタミン、またはＥＤＴＡである、請求項４１に記載の方法。
【請求項４６】
前記作用物質はマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）を含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項４７】
前記改変免疫細胞は、共刺激分子のうちの１つまたは複数の発現を増加させるようにさらに改変されている、請求項１〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
前記共刺激分子は、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−１、Ｂ７−２、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＣＤ４０、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ３０Ｌ、ＴＩＭ４、ＳＬＡＭ、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ１５５、またはＣＤ１１２である、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記細胞は、前記１つまたは複数の共刺激分子の増加した発現をもたらす核酸を含む、請求項４７または４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記免疫細胞は、Ｔ細胞、樹状細胞、単球、マクロファージ、骨髄性細胞、顆粒球、好中球、マスト細胞、ナチュラルキラー細胞、自然リンパ球、好塩基球、または造血系前駆細胞である、請求項１〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
前記免疫細胞はＢ細胞ではない、請求項１〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
前記免疫細胞はＢ細胞である、請求項１〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
前記免疫細胞はＴ細胞である、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
前記免疫細胞は混合細胞集団である、請求項１〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
前記免疫細胞は複数のＰＢＭＣである、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む、請求項５３に記載の方法。
【請求項５７】
前記Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む、請求項５３に記載の方法。
【請求項５８】
前記Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を低下させるさらなる改変を含む、請求項５６または５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記さらなる改変は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９、ＺＦＮ、ＴＡＬＥＮ、Ｃｒｅリコンビナーゼ、またはメガヌクレアーゼを使用して、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を低下させることを含む、請求項５６または５７に記載の方法。
【請求項６０】
前記Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を増加させるさらなる改変を含む、請求項５６または５７に記載の方法。
【請求項６１】
前記さらなる改変は、ＲＮＡまたはプラスミドＤＮＡを使用して、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を増加させることを含む、請求項５６または５７に記載の方法。
【請求項６２】
前記さらなる改変Ｔ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答は、前記さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答と比較して低下している、請求項５３および５６〜５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
前記さらなる改変Ｔ細胞の、それらが投与された個体における循環半減期は、前記さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞の、それらが投与された個体における循環半減期と比較してモジュレートされる、請求項５３および５６〜５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
前記Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、ＣＩＫ細胞、およびナチュラルキラーＴ細胞のうちの１つまたは複数を含む、請求項５３および５６〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
前記Ｔ細胞は、ＣＤ３＋  Ｔ細胞、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＡ＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＯ＋  Ｔ細胞、およびγδ−Ｔ細胞のうちの１つまたは複数を含む、請求項５３および５６〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６６】
前記改変細胞は前記個体に対して同種異系である、請求項１〜６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
前記改変細胞は前記個体に対して自家である、請求項１〜６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６８】
前記個体は、モジュレートされた炎症および／またはモジュレートされた免疫応答を有するよう事前調整されている、請求項１〜６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
アジュバントを前記個体に投与するステップをさらに含む、請求項１〜６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７０】
前記アジュバントは、ＩＦＮαまたはＣｐＧ  ＯＤＮである、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記改変免疫細胞を含む前記組成物および前記アジュバントは同時に投与される、請求項６９または７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記改変免疫細胞を含む前記組成物および前記アジュバントは逐次的に投与される、請求項６９または７０に記載の方法。
【請求項７３】
前記改変免疫細胞を含む前記組成物は、前記アジュバントを投与する前に投与される、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
前記改変免疫細胞を含む前記組成物は、前記アジュバントの投与後に投与される、請求項７２に記載の方法。
【請求項７５】
前記改変免疫細胞を含む前記組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与と組み合わせて投与される、請求項１〜７４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７６】
前記改変免疫細胞を含む前記組成物および前記免疫チェックポイント阻害剤は同時に投与される、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記改変免疫細胞を含む前記組成物および前記免疫チェックポイント阻害剤は逐次的に投与される、請求項７５に記載の方法。
【請求項７８】
前記改変免疫細胞を含む前記組成物は、前記免疫チェックポイント阻害剤を投与する前に投与される、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記改変免疫細胞を含む前記組成物は、前記免疫チェックポイント阻害剤の投与後に投与される、請求項７７に記載の方法。
【請求項８０】
前記免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ−３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数を標的にする、請求項７５〜７９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８１】
前記改変免疫細胞を含む前記組成物は、化学療法の投与と組み合わせて投与される、請求項１〜８０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８２】
前記改変免疫細胞を含む前記組成物および前記化学療法は同時に投与される、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
前記改変免疫細胞を含む前記組成物および前記化学療法は逐次的に投与される、請求項８１に記載の方法。
【請求項８４】
前記改変免疫細胞を含む前記組成物は、前記化学療法を投与する前に投与される、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
前記改変免疫細胞を含む前記組成物は、前記化学療法の投与後に投与される、請求項８３に記載の方法。
【請求項８６】
前記化学療法は白金系作用物質を含む、請求項８１〜８５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８７】
前記化学療法はシスプラチンを含む、請求項８１〜８６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８８】
前記個体への前記改変免疫細胞を含む前記組成物の投与は、前記ＨＰＶ抗原に特異的な細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の活性化および／または増殖をもたらす、請求項１〜８７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８９】
前記個体への前記改変免疫細胞を含む前記組成物の投与は、前記抗原に特異的なヘルパーＴ（Ｔｈ）細胞の活性化および／または増殖をもたらす、請求項１〜８７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９０】
前記有効量の前記組成物は、約１×１０６〜約１×１０１２個の改変免疫細胞を含む、請求項１〜８９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９１】
前記改変免疫細胞を含む前記組成物の複数回投与を含む、請求項１〜９０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９２】
前記改変免疫細胞を含む前記組成物の第１の投与、続いて、前記改変免疫細胞を含む前記組成物の第２の投与を含む、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
前記第２の投与は、前記第１の投与の約１か月後である、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
前記ＨＰＶ関連疾患はＨＰＶ関連がんである、請求項１〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９５】
前記ＨＰＶ関連がんは、子宮頸がん、肛門がん、中咽頭がん、膣がん、外陰がん、陰茎がん、皮膚がん、または頭頸部がんである、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
前記ＨＰＶ関連疾患は、ＨＰＶ関連感染性疾患である、請求項１〜９５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９７】
個体におけるヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）関係疾患を処置するための方法であって、前記方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を前記個体に投与するステップを含み、前記改変免疫細胞は、配列番号１８〜２５のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸を含むＨＰＶ抗原を含む、方法。
【請求項９８】
個体におけるＨＰＶ関連疾患を予防するための方法であって、前記方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を前記個体に投与するステップを含み、前記改変免疫細胞は、配列番号１８〜２５のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含むＨＰＶ抗原を含む、方法。
【請求項９９】
ＨＰＶ関連疾患を有する個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、前記方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を前記個体に投与するステップを含み、前記改変免疫細胞は、配列番号１８〜２５のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含むＨＰＶ抗原を含む、方法。
【請求項１００】
個体におけるＨＰＶ関連疾患を処置するための方法であって、前記方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を前記個体に投与するステップを含み、前記改変免疫細胞は、配列番号１８〜２５のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含むＨＰＶ抗原を含み、
前記改変免疫細胞は、
ａ）インプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプット細胞の直径の関数であり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；および
ｂ）前記ＨＰＶ抗原が前記摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプット細胞と前記ＨＰＶ抗原とをインキュベートし、それによって、前記改変免疫細胞を作出するステップ
によって調製される、方法。
【請求項１０１】
個体におけるＨＰＶ関連疾患を予防するための方法であって、前記方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を前記個体に投与するステップを含み、前記改変免疫細胞は、ＨＰＶ抗原を含み、前記改変免疫細胞は、配列番号１８〜２５のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含むＨＰＶ抗原を含み、
前記改変免疫細胞は、
ａ）インプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプット細胞の直径の関数であり、それによって、前記ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きな前記インプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；および
ｂ）前記ＨＰＶ抗原が前記摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプット細胞と前記ＨＰＶ抗原とをインキュベートし、それによって、前記改変免疫細胞を作出するステップ
によって調製される、方法。
【請求項１０２】
ＨＰＶ関連疾患を有する個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、前記方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を前記個体に投与するステップを含み、前記改変免疫細胞は、配列番号１８〜２５のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含むＨＰＶ抗原を含み、
前記改変免疫細胞は、
ａ）インプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプット細胞の直径の関数であり、それによって、前記ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きな前記インプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；および
ｂ）前記ＨＰＶ抗原が前記摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプット細胞と前記ＨＰＶ抗原とをインキュベートし、それによって、前記改変免疫細胞を作出するステップ
によって調製される、方法。
【請求項１０３】
前記狭窄の前記直径は、前記細胞の前記直径未満である、請求項１００〜１０２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０４】
前記狭窄の前記直径は、前記細胞の前記直径の約２０％〜９９％である、請求項１００〜１０３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０５】
前記狭窄の前記直径は、前記細胞の前記直径の約２０％〜約６０％未満である、請求項１００〜１０４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０６】
前記狭窄は、チャネル中にある、請求項１００〜１０５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０７】
前記インプット細胞に、それが前記狭窄を通過するときに変形力が印加される、請求項１００〜１０６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０８】
アジュバントを前記個体に投与するステップをさらに含む、請求項８６〜１０７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０９】
前記アジュバントは、ＩＦＮαまたはＣｐＧ  ＯＤＮである、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１０】
前記改変免疫細胞を含む前記組成物および前記アジュバントは同時に投与される、請求項１０８または１０９に記載の方法。
【請求項１１１】
前記改変免疫細胞を含む前記組成物および前記アジュバントは逐次的に投与される、請求項１０８または１０９に記載の方法。
【請求項１１２】
前記改変免疫細胞を含む前記組成物は、前記アジュバントを投与する前に投与される、請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１３】
前記改変免疫細胞を含む前記組成物は、前記アジュバントの投与後に投与される、請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１４】
前記改変免疫細胞はアジュバントをさらに含む、請求項９７〜１１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１５】
ステップｂの前記摂動免疫細胞は、前記ＨＰＶ抗原およびアジュバントとインキュベートされる、請求項１００〜１１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１６】
前記ＨＰＶ抗原および／または前記アジュバントは、細胞質基質および／またはエンドソームに存在する、請求項１１４または１１５に記載の方法。
【請求項１１７】
前記抗原および／またはアジュバントは、前記細胞の多数の区画に存在する、請求項１１４〜１１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１８】
前記改変免疫細胞は、前記細胞の外側に、ＨＰＶ抗原および／またはアジュバントをさらに含む、請求項１１４〜１１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１９】
前記摂動インプット細胞とインキュベートされるアジュバントの濃度は、約０．１μＭ〜約１ｍＭである、請求項１１５〜１１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２０】
前記摂動インプット細胞とインキュベートされるＨＰＶ抗原の濃度は、約０．１μＭ〜約１ｍＭである、請求項１１５〜１１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２１】
前記摂動インプット細胞とインキュベートされるＨＰＶ抗原のアジュバントに対する比は、約１００００：１〜約１：１００００である、請求項１１５〜１２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２２】
前記免疫応答は増強される、請求項９９または１０２に記載の方法。
【請求項１２３】
前記ＨＰＶ抗原に対する前記免疫応答は増強される、請求項１２２に記載の方法。
【請求項１２４】
前記アジュバントは、ＣｐＧ  ＯＤＮ、ＩＦＮ−α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ−Ｉアゴニスト、またはポリＩ：Ｃである、請求項１１４〜１２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２５】
前記アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮである、請求項１２４に記載の方法。
【請求項１２６】
前記ＣｐＧ  ＯＤＮは、ＣｐＧ  ＯＤＮ１０１８、ＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６、またはＣｐＧ  ＯＤＮ２００６である、請求項１２５に記載の方法。
【請求項１２７】
前記改変免疫細胞は１つよりも多いアジュバントを含む、請求項１１４〜１２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２８】
前記ＨＰＶ抗原は、同じおよび／または異なるＨＰＶ抗原に対する応答を誘発する多数のポリペプチドのプールである、請求項９７〜１２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２９】
多数の抗原の前記プール中の抗原は、多数の抗原の前記プール中の他の抗原に向けられた前記免疫応答を減少させない、請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３０】
前記ＨＰＶ抗原は、抗原性ＨＰＶエピトープおよび１つまたは複数の異種ペプチド配列を含むポリペプチドである、請求項９７〜１２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３１】
前記ＨＰＶ抗原は、それ自体と、他の抗原と、または前記アジュバントと複合体を形成する、請求項９７〜１３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３２】
前記ＨＰＶ抗原は、ＨＬＡ−Ａ２特異的エピトープで構成される、請求項９７〜１３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３３】
前記ＨＰＶ抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る、請求項９７〜１３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３４】
前記ＨＰＶ抗原は、ＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る、請求項９７〜１３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３５】
前記改変免疫細胞は、約０．１μＭ〜約１ｍＭの濃度で前記アジュバントを含む、請求項１１４〜１３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３６】
前記改変免疫細胞は、約０．１μＭ〜約１ｍＭの濃度で前記ＨＰＶ抗原を含む、請求項９７〜１３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３７】
前記ＨＰＶ抗原の前記アジュバントに対する比は、約１００００：１〜約１：１００００である、請求項１１４〜１３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３８】
前記改変免疫細胞は、作用物質をさらに含み、前記作用物質は、前記作用物質を含まない対応する改変免疫細胞と比較して前記改変免疫細胞の生存能力および／または機能を増強する、請求項９７〜１３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３９】
前記作用物質は、エンドサイトーシスを増強する化合物、安定剤、または補因子である、請求項１３８に記載の方法。
【請求項１４０】
前記作用物質はアルブミンである、請求項１３８に記載の方法。
【請求項１４１】
前記アルブミンは、マウス、ウシ、またはヒトアルブミンである、請求項１４０に記載の方法。
【請求項１４２】
前記作用物質は、二価金属カチオン、グルコース、ＡＴＰ、カリウム、グリセロール、トレハロース、Ｄ−スクロース、ＰＥＧ１５００、Ｌ−アルギニン、Ｌ−グルタミン、またはＥＤＴＡである、請求項１３８に記載の方法。
【請求項１４３】
前記作用物質はＭＳＡを含む、請求項１３８に記載の方法。
【請求項１４４】
共刺激分子のうちの１つまたは複数の発現を増加させるようにさらに改変されている、請求項９７〜１４３のいずれか一項に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項１４５】
前記共刺激分子は、Ｂ７−Ｈ２（ＩＣＯＳＬ）、Ｂ７−１（ＣＤ８０）、Ｂ７−２（ＣＤ８６）、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＣＤ４０、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ３０Ｌ、ＴＩＭ４、ＳＬＡＭ、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ１５５、またはＣＤ１１２である、請求項１４４に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項１４６】
前記１つまたは複数の共刺激分子の増加した発現をもたらす核酸を含む、請求項１４４または１４５に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項１４７】
前記免疫細胞は、Ｔ細胞、樹状細胞、単球、マクロファージ、骨髄性細胞、顆粒球、好中球、マスト細胞、ナチュラルキラー細胞、自然リンパ球、好塩基球、または造血系前駆細胞である、請求項９７〜１４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４８】
前記免疫細胞はＢ細胞ではない、請求項９７〜１４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４９】
前記免疫細胞はＢ細胞である、請求項９７〜１４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５０】
前記免疫細胞はＴ細胞である、請求項９７〜１４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５１】
前記免疫細胞は混合細胞集団である、請求項９７〜１４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５２】
前記免疫細胞は複数のＰＢＭＣである、請求項１５１に記載の方法。
【請求項１５３】
前記Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む、請求項１５０に記載の方法。
【請求項１５４】
前記Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む、請求項１５０に記載の方法。
【請求項１５５】
前記Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を低下させるさらなる改変を含む、請求項１５３または１５４に記載の方法。
【請求項１５６】
前記さらなる改変は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９、ＺＦＮ、ＴＡＬＥＮ、Ｃｒｅリコンビナーゼ、またはメガヌクレアーゼを使用して、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を低下させることを含む、請求項１５３または１５４に記載の方法。
【請求項１５７】
前記Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を増加させるさらなる改変を含む、請求項１５３または１５４に記載の方法。
【請求項１５８】
前記さらなる改変は、ＲＮＡまたはプラスミドＤＮＡを使用して、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を増加させることを含む、請求項１５３または１５４に記載の方法。
【請求項１５９】
前記さらなる改変Ｔ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答は、前記さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答と比較して低下している、請求項１５０および１５３〜１５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６０】
前記さらなる改変Ｔ細胞の、それらが投与された個体における循環半減期は、前記さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞の、それらが投与された個体における循環半減期と比較してモジュレートされる、請求項１５０および１５３〜１５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６１】
前記Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、ＣＩＫ細胞、およびナチュラルキラーＴ細胞のうちの１つまたは複数を含む、請求項１５０および１５３〜１６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６２】
前記Ｔ細胞は、ＣＤ３＋  Ｔ細胞、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＡ＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＯ＋  Ｔ細胞、およびγδ−Ｔ細胞のうちの１つまたは複数を含む、請求項１５０および１５３〜１６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６３】
前記改変細胞は前記個体に対して同種異系である、請求項９７〜１６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６４】
前記改変細胞は前記個体に対して自家である、請求項９７〜１６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６５】
前記個体は、モジュレートされた炎症および／またはモジュレートされた免疫応答を有するよう事前調整されている、請求項９７〜１６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６６】
前記改変免疫細胞を含む前記組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与と組み合わせて投与される、請求項９７〜１６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６７】
前記改変免疫細胞を含む前記組成物および前記免疫チェックポイント阻害剤は同時に投与される、請求項１６６に記載の方法。
【請求項１６８】
前記改変免疫細胞を含む前記組成物および前記免疫チェックポイント阻害剤は逐次的に投与される、請求項１６６に記載の方法。
【請求項１６９】
前記改変免疫細胞を含む前記組成物は、前記免疫チェックポイント阻害剤を投与する前に投与される、請求項１６８に記載の方法。
【請求項１７０】
前記改変免疫細胞を含む前記組成物は、前記免疫チェックポイント阻害剤の投与後に投与される、請求項１６８に記載の方法。
【請求項１７１】
前記免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ−３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数を標的にする、請求項１５２〜１５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７２】
前記改変免疫細胞を含む前記組成物は、化学療法の投与と組み合わせて投与される、請求項９７〜１７１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７３】
前記改変免疫細胞を含む前記組成物および前記化学療法は同時に投与される、請求項１７２に記載の方法。
【請求項１７４】
前記改変免疫細胞を含む前記組成物および前記化学療法は逐次的に投与される、請求項１７２に記載の方法。
【請求項１７５】
前記改変免疫細胞を含む前記組成物は、前記化学療法を投与する前に投与される、請求項１７４に記載の方法。
【請求項１７６】
前記改変免疫細胞を含む前記組成物は、前記化学療法の投与後に投与される、請求項１７４に記載の方法。
【請求項１７７】
前記化学療法はシスプラチンを含む、請求項１７２〜１７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７８】
前記個体への前記改変免疫細胞を含む前記組成物の投与は、前記ＨＰＶ抗原に特異的な細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の活性化および／または増殖をもたらす、請求項９７〜１７７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７９】
前記個体への前記改変免疫細胞を含む前記組成物の投与は、前記ＨＰＶ抗原に特異的なヘルパーＴ（Ｔｈ）細胞の活性化および／または増殖をもたらす、請求項９７〜１７７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８０】
前記有効量の前記組成物は、約１×１０６〜約１×１０１２個の改変免疫細胞を含む、請求項９７〜１７９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８１】
前記改変免疫細胞を含む前記組成物の複数回投与を含む、請求項９７〜１８０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８２】
前記改変免疫細胞を含む前記組成物の第１の投与、続いて、前記改変免疫細胞を含む前記組成物の第２の投与を含む、請求項１８１に記載の方法。
【請求項１８３】
前記第２の投与は、前記第１の投与の約１か月後である、請求項１８２に記載の方法。
【請求項１８４】
前記ＨＰＶ関連疾患はＨＰＶ関連がんである、請求項９７〜１８３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８５】
前記ＨＰＶ関連がんは、子宮頸がん、肛門がん、中咽頭がん、膣がん、外陰がん、陰茎がん、皮膚がん、または頭頸部がんである、請求項１８４に記載の方法。
【請求項１８６】
改変免疫細胞を含む組成物であって、前記改変免疫細胞は、ＣｐＧ  ＯＤＮ、および配列番号１８〜２５のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するＨＰＶ抗原を細胞内に含む、組成物。
【請求項１８７】
前記ＨＰＶ抗原は、配列番号２３と少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１６６に記載の組成物。
【請求項１８８】
前記改変免疫細胞は、
ａ）インプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプット細胞の直径の関数であり、それによって、前記ＨＰＶ抗原および前記ＣｐＧ  ＯＤＮが通過するのに十分に大きな前記インプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；ならびに
ｂ）前記ＨＰＶ抗原および前記ＣｐＧ  ＯＤＮが前記摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプット細胞と前記ＨＰＶ抗原および前記ＣｐＧ  ＯＤＮとをインキュベートし、それによって、前記改変免疫細胞を作出するステップ
によって調製される、請求項１８６または１８７に記載の組成物。
【請求項１８９】
前記狭窄の前記直径は、前記細胞の前記直径未満である、請求項１８８に記載の組成物。
【請求項１９０】
前記狭窄の前記直径は、前記細胞の前記直径の約２０％〜約９９％である、請求項１８８または１８９に記載の組成物。
【請求項１９１】
前記狭窄の前記直径は、前記細胞の前記直径の約２０％〜約６０％未満である、請求項１８８〜１９０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９２】
前記狭窄は、チャネル中にある、請求項１８８〜１９１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９３】
前記インプット細胞に、それが前記狭窄を通過するときに変形力が印加される、請求項１８８〜１９２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９４】
アジュバントをさらに含む、請求項１８６〜１９３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９５】
前記ＨＰＶ抗原および／または前記ＣｐＧ  ＯＤＮは、細胞質基質および／またはエンドソームに存在する、請求項１８６〜１９４のいずれかに記載の組成物。
【請求項１９６】
前記抗原および／または前記ＣｐＧ  ＯＤＮは、前記細胞の多数の区画に存在する、請求項１８６〜１９５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９７】
前記改変免疫細胞は、前記細胞の表面に、ＨＰＶ抗原および／またはＣｐＧ  ＯＤＮをさらに含む、請求項１８６〜１９６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９８】
前記摂動インプット細胞とインキュベートされるＣｐＧ  ＯＤＮの濃度は、約０．１μＭ〜約１ｍＭである、請求項１８８〜１９７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９９】
前記摂動インプット細胞とインキュベートされるＨＰＶ抗原の濃度は、約０．１μＭ〜約１ｍＭである、請求項１８８〜１９８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２００】
前記摂動インプット細胞とインキュベートされるＨＰＶ抗原のＣｐＧ  ＯＤＮに対する比は、約１００００：１〜約１：１００００である、請求項１８８〜１９９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２０１】
前記ＣｐＧ  ＯＤＮは、ＣｐＧ  ＯＤＮ１０１８、ＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６、またはＣｐＧ  ＯＤＮ２００６である、請求項１８６〜２００のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２０２】
前記改変免疫細胞は１つよりも多いアジュバントを含む、請求項１８６〜２０１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２０３】
前記アジュバントは、ＣｐＧ  ＯＤＮ、ＩＦＮ−α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ−Ｉアゴニスト、またはポリＩ：Ｃを含む、請求項２０２に記載の組成物。
【請求項２０４】
前記ＨＰＶ抗原は、同じおよび／または異なるＨＰＶ抗原に対する応答を誘発する多数のポリペプチドのプールである、請求項１８６〜２０３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２０５】
多数の抗原の前記プール中の抗原は、多数の抗原の前記プール中の他の抗原に向けられた前記免疫応答を減少させない、請求項２０４に記載の組成物。
【請求項２０６】
前記ＨＰＶ抗原は、抗原性ＨＰＶエピトープおよび１つまたは複数の異種ペプチド配列を含むポリペプチドである、請求項１８６〜２０５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２０７】
前記ＨＰＶ抗原は、それ自体と、他の抗原と、アジュバントと、または前記ＣｐＧ  ＯＤＮと複合体を形成する、請求項１８６〜２０６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２０８】
前記ＨＰＶ抗原は、ＨＬＡ−Ａ２特異的エピトープで構成される、請求項１８６〜２０７に記載の組成物。
【請求項２０９】
前記ＨＰＶ抗原は、１つまたは複数の異種ペプチド配列がそのＮ末端および／またはそのＣ末端で隣接している抗原性エピトープを含むポリペプチドである、請求項１８６〜２０８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２１０】
前記改変免疫細胞は、約０．１μＭ〜約１ｍＭの濃度で前記ＣｐＧ  ＯＤＮを含む、請求項１８６〜２０９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２１１】
前記改変免疫細胞は、約０．１μＭ〜約１ｍＭの濃度で前記ＨＰＶ抗原を含む、請求項１８６〜２１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２１２】
前記ＨＰＶ抗原の前記ＣｐＧ  ＯＤＮに対する比は、約１００００：１〜約１：１００００である、請求項１８６〜２１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２１３】
改変免疫細胞を含む組成物であって、前記改変免疫細胞は、ＨＰＶ抗原を含み、前記ＨＰＶ抗原は、配列番号１８〜２５のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む、組成物。
【請求項２１４】
前記ＨＰＶ抗原は、配列番号２３と少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２１３に記載の組成物。
【請求項２１５】
前記改変免疫細胞は、
ａ）インプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプット細胞の直径の関数であり、それによって、前記ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きな前記インプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；および
ｂ）前記ＨＰＶ抗原が前記摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプット細胞と前記ＨＰＶ抗原とをインキュベートし、それによって、前記改変免疫細胞を作出するステップ
によって調製される、請求項２１３または２１４に記載の組成物。
【請求項２１６】
前記狭窄の前記直径は、前記細胞の前記直径未満である、請求項２１５に記載の組成物。
【請求項２１７】
前記狭窄の前記直径は、前記細胞の前記直径の約２０％〜約９９％である、請求項２１５〜２１６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２１８】
前記狭窄の前記直径は、前記細胞の前記直径の約２０％〜約６０％未満である、請求項２１５〜２１７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２１９】
前記狭窄は、チャネル中にある、請求項２１５〜２１８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２０】
前記インプット細胞に、それが前記狭窄を通過するときに変形力が印加される、請求項２１５〜２１９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２１】
アジュバントをさらに含む、請求項２１３〜２２０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２２】
前記ＨＰＶ抗原および／または前記アジュバントは、細胞質基質および／またはエンドソームに存在する、請求項２１３〜２２１のいずれかに記載の組成物。
【請求項２２３】
前記抗原および／またはアジュバントは、前記細胞の多数の区画に存在する、請求項２１３〜２２２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２４】
前記改変免疫細胞は、前記細胞の表面に、ＨＰＶ抗原および／またはアジュバントをさらに含む、請求項２１３〜２２３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２５】
前記摂動インプット細胞とインキュベートされるアジュバントの濃度は、約０．１μＭ〜約１ｍＭである、請求項２１５〜２２４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２６】
前記摂動インプット細胞とインキュベートされるＨＰＶ抗原の濃度は、約０．１μＭ〜約１ｍＭである、請求項２１５〜２２５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２７】
前記摂動インプット細胞とインキュベートされるＨＰＶ抗原のアジュバントに対する比は、約１００００：１〜約１：１００００である、請求項２１５〜２２６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２８】
前記アジュバントは、ＣｐＧ  ＯＤＮ、ＩＦＮ−α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ−Ｉアゴニスト、またはポリＩ：Ｃである、請求項２１３〜２２７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２９】
前記アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮである、請求項２２８に記載の組成物。
【請求項２３０】
前記ＣｐＧ  ＯＤＮは、ＣｐＧ  ＯＤＮ１０１８、ＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６、またはＣｐＧ  ＯＤＮ２００６である、請求項２２９に記載の組成物。
【請求項２３１】
前記改変免疫細胞は１つよりも多いアジュバントを含む、請求項２１３〜２３０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３２】
前記ＨＰＶ抗原は、同じおよび／または異なるＨＰＶ抗原に対する応答を誘発する多数のポリペプチドのプールである、請求項２１３〜２３１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３３】
多数の抗原の前記プール中の抗原は、多数の抗原の前記プール中の他の抗原に向けられた前記免疫応答を減少させない、請求項２３２に記載の組成物。
【請求項２３４】
前記ＨＰＶ抗原は、抗原性ＨＰＶエピトープおよび１つまたは複数の異種ペプチド配列を含むポリペプチドである、請求項２１３〜２３３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３５】
前記ＨＰＶ抗原は、それ自体と、他の抗原と、または前記アジュバントと複合体を形成する、請求項２１３〜２３４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３６】
前記ＨＰＶ抗原は、ＨＬＡ−Ａ２特異的エピトープで構成される、請求項２１３〜２３５に記載の組成物。
【請求項２３７】
前記改変免疫細胞は、約０．１μＭ〜約１ｍＭの濃度で前記アジュバントを含む、請求項２１３〜２３６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３８】
前記改変免疫細胞は、約０．１μＭ〜約１ｍＭの濃度で前記ＨＰＶ抗原を含む、請求項２１３〜２３７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３９】
前記ＨＰＶ抗原の前記アジュバントに対する比は、約１００００：１〜約１：１００００である、請求項２１３〜２３８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２４０】
前記ＨＰＶ抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る、請求項１８６〜２３９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２４１】
前記ＨＰＶ抗原は、ＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る、請求項１８６〜２４０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２４２】
前記改変免疫細胞は、作用物質をさらに含み、前記作用物質は、前記作用物質を含まない対応する改変免疫細胞と比較して前記改変免疫細胞の生存能力および／または機能を増強する、請求項１８６〜２４１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２４３】
前記作用物質は、エンドサイトーシスを増強する化合物、安定剤、または補因子である、請求項２４２に記載の組成物。
【請求項２４４】
前記作用物質はアルブミンである、請求項２４２に記載の組成物。
【請求項２４５】
前記アルブミンは、マウス、ウシ、またはヒトアルブミンである、請求項２４４に記載の組成物。
【請求項２４６】
前記作用物質は、二価金属カチオン、グルコース、ＡＴＰ、カリウム、グリセロール、トレハロース、Ｄ−スクロース、ＰＥＧ１５００、Ｌ−アルギニン、Ｌ−グルタミン、またはＥＤＴＡである、請求項２４２に記載の組成物。
【請求項２４７】
前記作用物質はＭＳＡを含む、請求項２４２に記載の組成物。
【請求項２４８】
前記細胞は、共刺激分子のうちの１つまたは複数の発現を増加させるようにさらに改変されている、請求項１８６〜２４７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２４９】
前記共刺激分子は、Ｂ７−Ｈ２（ＩＣＯＳＬ）、Ｂ７−１（ＣＤ８０）、Ｂ７−２（ＣＤ８６）、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＣＤ４０、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ３０Ｌ、ＴＩＭ４、ＳＬＡＭ、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ１５５、またはＣＤ１１２である、請求項２４８に記載の組成物。
【請求項２５０】
前記細胞は、前記１つまたは複数の共刺激分子の増加した発現をもたらす核酸を含む、請求項２４８または２４９に記載の組成物。
【請求項２５１】
前記免疫細胞は、Ｔ細胞、樹状細胞、単球、マクロファージ、骨髄性細胞、顆粒球、好中球、マスト細胞、ナチュラルキラー細胞、自然リンパ球、好塩基球、または造血系前駆細胞である、請求項１８６〜２５０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２５２】
前記免疫細胞はＢ細胞ではない、請求項１８６〜２５１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２５３】
前記免疫細胞はＴ細胞である、請求項１８６〜２５２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２５４】
前記Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む、請求項２５３に記載の組成物。
【請求項２５５】
前記Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む、請求項２５３に記載の組成物。
【請求項２５６】
前記Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を低下させるさらなる改変を含む、請求項２５４または２５５に記載の組成物。
【請求項２５７】
前記さらなる改変は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９、ＺＦＮ、ＴＡＬＥＮ、Ｃｒｅリコンビナーゼ、またはメガヌクレアーゼを使用して、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を低下させることを含む、請求項２５４または２５５に記載の組成物。
【請求項２５８】
前記Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を増加させるさらなる改変を含む、請求項２５４または２５５に記載の組成物。
【請求項２５９】
前記さらなる改変は、ＲＮＡまたはプラスミドＤＮＡを使用して、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を増加させることを含む、請求項２５４または２５５に記載の組成物。
【請求項２６０】
前記さらなる改変Ｔ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答は、前記さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答と比較して低下している、請求項２５３〜２５７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２６１】
前記さらなる改変Ｔ細胞の、それらが投与された個体における循環半減期は、前記さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞の、それらが投与された個体における循環半減期と比較してモジュレートされる、請求項２５３〜２５７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２６２】
前記Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、ＣＩＫ細胞、およびナチュラルキラーＴ細胞のうちの１つまたは複数を含む、請求項２５３〜２６１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２６３】
前記Ｔ細胞は、ＣＤ３＋  Ｔ細胞、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＡ＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＯ＋  Ｔ細胞、およびγδ−Ｔ細胞のうちの１つまたは複数を含む、請求項２５３〜２６１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２６４】
前記改変細胞は個体に対して同種異系である、請求項１８６〜２６３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２６５】
前記改変細胞は個体に対して自家である、請求項１８６〜２６３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２６６】
個体は、モジュレートされた炎症および／またはモジュレートされた免疫応答を有するよう事前調整されている、請求項１８６〜２６５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２６７】
免疫チェックポイント阻害剤をさらに含む、請求項１８６〜２６６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２６８】
前記免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ−３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数を標的にする、請求項２６７に記載の組成物。
【請求項２６９】
個体への前記改変免疫細胞を含む前記組成物の投与は、前記ＨＰＶ抗原に特異的な細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の活性化および／または増殖をもたらす、請求項１８６〜２６８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２７０】
個体への前記改変免疫細胞を含む前記組成物の投与は、前記抗原に特異的なヘルパーＴ（Ｔｈ）細胞の活性化および／または増殖をもたらす、請求項１８６〜２６８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２７１】
前記有効量の前記組成物は、約１×１０６〜約１×１０１２個の改変免疫細胞を含む、請求項１８６〜２７０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２７２】
抗原を含む組成物であって、前記抗原は、配列番号２３と少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む、組成物。
【請求項２７３】
前記抗原は配列番号２３のアミノ酸配列を含む、請求項２７２に記載の組成物。
【請求項２７４】
個体におけるＨＰＶ関連疾患を処置または予防するための方法であって、前記方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を前記個体に投与するステップを含み、前記改変免疫細胞は、ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含み、前記アジュバントは細胞内に供給されており、
前記改変免疫細胞は、
ａ）ＨＰＶ抗原を含むインプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプット細胞の直径の関数であり、それによって、前記抗原および前記アジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；ならびに
ｂ）前記アジュバントが前記摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプット細胞と前記アジュバントとをインキュベートし、それによって、前記改変免疫細胞を作出するステップ
によって調製される、方法。
【請求項２７５】
個体におけるＨＰＶ関連疾患を処置または予防するための方法であって、前記方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を前記個体に投与するステップを含み、前記改変免疫細胞は、ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含み、前記アジュバントは細胞内に供給されており、
前記改変免疫細胞は、
ａ）前記アジュバントを含むインプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプット細胞の直径の関数であり、それによって、前記ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きな前記インプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；および
ｂ）前記ＨＰＶ抗原が前記摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプット細胞と前記ＨＰＶ抗原とをインキュベートし、それによって、前記改変免疫細胞を作出するステップ
によって調製される、方法。
【請求項２７６】
前記狭窄の前記直径は、前記細胞の前記直径未満である、請求項２７４または２７５に記載の方法。
【請求項２７７】
前記狭窄の前記直径は、前記細胞の前記直径の約２０％〜９９％である、請求項２７４〜２７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７８】
前記狭窄の前記直径は、前記細胞の前記直径の約２０％〜約６０％未満である、請求項２７４〜２７７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７９】
前記狭窄は、チャネル中にある、請求項２７４〜２７８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８０】
前記インプット細胞に、それが前記狭窄を通過するときに変形力が印加される、請求項２７４〜２７９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８１】
前記ＨＰＶ抗原および／または前記アジュバントは、細胞質基質および／またはエンドソームに存在する、請求項２７４〜２８０のいずれかに記載の方法。
【請求項２８２】
前記抗原および／またはアジュバントは、前記細胞の多数の区画に存在する、請求項２７４〜２８１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８３】
前記摂動インプット細胞とインキュベートされるアジュバントの濃度は、約０．１μＭ〜約１ｍＭである、請求項２７４に記載の方法。
【請求項２８４】
前記摂動インプット細胞とインキュベートされるＨＰＶ抗原の濃度は、約０．１μＭ〜約１ｍＭである、請求項２７５に記載の方法。
【請求項２８５】
前記アジュバントは、ＣｐＧ  ＯＤＮ、ＩＦＮ−α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ−Ｉアゴニスト、またはポリＩ：Ｃである、請求項２７４〜２８５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８６】
前記アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮである、請求項２８５に記載の方法。
【請求項２８７】
前記ＣｐＧ  ＯＤＮは、ＣｐＧ  ＯＤＮ１０１８、ＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６、またはＣｐＧ  ＯＤＮ２００６である、請求項２８６に記載の方法。
【請求項２８８】
前記ＨＰＶ抗原は細胞溶解物に由来する、請求項２７４〜２８７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８９】
前記ＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ−１６またはＨＰＶ−１８抗原である、請求項２７４〜２８８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９０】
前記ＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ  Ｅ６抗原またはＨＰＶ  Ｅ７抗原である、請求項２７４〜２８９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９１】
前記ＨＰＶ抗原は、配列番号１８〜２５のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２９０に記載の方法。
【請求項２９２】
前記ＨＰＶ抗原は、配列番号１８〜２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項２８９に記載の方法。
【請求項２９３】
前記ＨＰＶ抗原は、配列番号２３と少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２９０に記載の方法。
【請求項２９４】
前記ＨＰＶ抗原は配列番号２３のアミノ酸配列を含む、請求項２９０に記載の方法。
【請求項２９５】
個体におけるＨＰＶ関連疾患を処置または予防するための方法であって、ＨＰＶ抗原と会合した改変免疫細胞を前記個体に投与するステップを含み、前記改変免疫細胞は、
ａ）前記ＨＰＶ抗原がインプット細胞と会合するのを可能にするのに十分な時間、前記インプット細胞と前記ＨＰＶ抗原および／またはアジュバントとをインキュベートし、それによって、前記抗原と会合した前記改変免疫細胞を作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、方法。
【請求項２９６】
前記ＨＰＶ抗原は、配列番号１８〜２５のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２９５に記載の方法。
【請求項２９７】
前記ＨＰＶ抗原は配列番号２３のアミノ酸配列を含む、請求項２９６に記載の方法。
【請求項２９８】
前記アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮである、請求項２９５〜２９７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９９】
前記ＣｐＧ  ＯＤＮは、ＣｐＧ  ＯＤＮ１０１８、ＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６、またはＣｐＧ  ＯＤＮ２００６である、請求項２９８に記載の方法。
【請求項３００】
医薬としての使用のための、請求項１８６〜２７３のいずれか一項に記載の改変免疫細胞を含む組成物。
【請求項３０１】
手術、治療、または診断による、ヒトまたは動物身体の処置の方法における使用のための、請求項１８６〜２７３のいずれか一項に記載の改変免疫細胞を含む組成物。
【請求項３０２】
がん、感染性疾患、またはウイルス関連疾患の処置における使用のための、請求項１８６〜２７３のいずれか一項に記載の改変免疫細胞を含む組成物。
【請求項３０３】
前記がんは、頭頸部がん、子宮頸がん、外陰がん、膣がん、陰茎がん、肛門がん、肛門周囲がん、肛門性器がん、口腔がん、または唾液腺がんである、請求項１８６〜２７３のいずれか一項に記載の改変免疫細胞を含む組成物。
【請求項３０４】
前記改変ＰＢＭＣは、免疫チェックポイント阻害剤の投与の前、それと並行して、または後に投与される、請求項３００〜３０３のいずれか一項に記載の改変免疫細胞を含む組成物。
【請求項３０５】
前記免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、およびＴＩＭ−３のいずれか１つを標的にする、請求項３０４に記載の組成物。
【請求項３０６】
前記免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ−１を標的にする、請求項３０５に記載の組成物。
【請求項３０７】
前記免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ−Ｌ１を標的にする、請求項３０５に記載の組成物。
【請求項３０８】
前記改変ＰＢＭＣは、治療剤の投与の前、それと並行して、または後に投与される、請求項３００〜３０７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３０９】
前記治療剤は化学療法剤である、請求項３０８に記載の組成物。
【請求項３１０】
前記感染性疾患は、ＨＩＶ、ＨＰＶ、ＥＢＶ、ＭＣＶ、ＨＢＶ、またはＨＣＶと関連する、請求項３０９に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年３月１２日に出願された米国仮特許出願第６２／６４１，９８８号、２０１９年１月１８日に出願された米国仮特許出願第６２／７９４，５１７号、および２０１９年２月２８日に出願された米国仮特許出願第６２／８１２，２２５号に対する優先権を主張する。本出願は、２０１９年３月１１日に出願された欧州特許出願第ＥＰ１９１６１９６４．２号に対する利益も主張し、それらの全体が、これにより参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
ＡＳＣＩＩテキストファイルにおける配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルにおける以下の提出の内容は、その全体が、参照により本明細書に組み込まれる：コンピューター可読形式（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：７５０３２２００１６４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴ、記録日：２０１９年３月１１日、サイズ：１４ＫＢ）。
【０００３】
発明の分野
本開示は、一般に、抗原およびアジュバントを含む免疫細胞、そのような改変免疫細胞を製造する方法、ならびにＨＰＶ関連疾患を処置するため、ＨＰＶ関連疾患を予防するため、およびＨＰＶ関連疾患を有する個体における免疫応答をモジュレートするために、そのような改変免疫細胞を使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
発明の背景
パピローマウイルスは、直径が約５５ｎｍのビリオンサイズを有する小さな非エンベロープＤＮＡウイルスである。１００を超えるＨＰＶ遺伝子型が完全に特徴付けられ、より多くの数が存在すると推定される。ＨＰＶは、子宮頸がん、ならびに一部の外陰、膣、陰茎、中咽頭、肛門および直腸がんの公知の原因である。ほとんどのＨＰＶ感染症は、無症状で自然に消失するが、腫瘍形成性のＨＰＶ型の１つによる持続感染は、前がん状態またはがんに進行し得る。他のＨＰＶ関連疾患としては、尋常性疣贅、足底疣贅、扁平疣贅、肛門性器疣贅、肛門病変、表皮異形成、局所性上皮肥厚、口腔乳頭腫、疣贅嚢胞（verrucous  cyst）、喉頭乳頭腫症、扁平上皮内病変（ＳＩＬ）、子宮頸部上皮内腫瘍（ＣＩＮ）、外陰部上皮内腫瘍（ＶＩＮ）および膣上皮内腫瘍（ＶＡＩＮ）を挙げることができる。
【０００５】
公知のヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）型の多くは、腫瘍形成性であるサブセットによる良性病変を引き起こす。疫学的および系統発生学的な関係に基づいて、ＨＰＶ型は、１５種の「高リスク型」（ＨＰＶ１６、１８、３１、３３、３５、３９、４５、５１、５２、５６、５８、５９、６８、７３、および８２）および３種の「おそらく高リスク型」（ＨＰＶ２６、５３、および６６）に分類され、これらは、一緒に、低および高悪性度の子宮頸部の変化およびがん、ならびに外陰、膣、陰茎、肛門がんおよび肛門周囲がんなどの他の肛門性器（anogential）がん、ならびに頭頸部がんとして現れることが公知である。最近、高リスク型のＨＰＶ１６および１８と乳がんとの関連も記載されている。「低リスク型」として分類される１１種のＨＰＶ型（ＨＰＶ６、１１、４０、４２、４３、４４、５４、６１、７０、７２および８１）は、良性の低悪性度の子宮頸部の変化、性器疣贅および再発性呼吸器乳頭腫症として現れることが公知である。皮膚のＨＰＶ型５、８および９２は、皮膚がんと関連する。一部のＨＰＶ関連がんでは、免疫系は抑制され、それに応じて、抗腫瘍応答は有意に損なわれる。Suresh  and  Burtness  Am  J  Hematol  Oncol  13(6):20-27  (2017)を参照されたい。
【０００６】
免疫療法は、受動的または能動的のいずれかの、２つの主な種類の介入に分けることができる。受動的プロトコールは、事前に活性化されたおよび／もしくは操作された細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞）、疾患特異的治療用抗体、ならびに／またはサイトカインの投与を含む。能動免疫療法の戦略は、ｉｎ  ｖｉｖｏで免疫系エフェクター機能を刺激することを対象とする。いくつかの現在の能動的プロトコールは、疾患関連ペプチド、溶解物、または同種異系細胞全体によるワクチン接種戦略、腫瘍抗原送達のためのビヒクルとしての自家ＤＣの注入、および免疫チェックポイントモジュレーターの注入を含む。Papaioannou,  Nikos  E.,  et  al.  Annals  of  translational  medicine  4.14  (2016)を参照されたい。養子免疫療法は、免疫応答をモジュレートする、抗腫瘍活性を増強する、およびＨＰＶ関連がんを処置または予防する目標を達成するために用いることができる。
疾患関連抗原によって刺激されたＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）およびＣＤ４＋ヘルパーＴ（Ｔｈ）細胞は、罹患細胞を標的にし、破壊する潜在力を有する。本明細書に記載の方法は、ハイスループットで、かつ効率的にｄｅ  ｎｏｖｏで改変免疫細胞を作出するために使用され、このようにして、ＨＰＶ抗原に対するロバストなＴ細胞応答を誘導する。
特許出願および刊行物を含む、本明細書において引用されるすべての参照文献は、それらの全体が参照により組み込まれる。特許公開ＷＯ２０１７０４１０５０、ＷＯ２０１６０７０１３６は、それらの全体が、これにより参照により明示的に本明細書に組み込まれる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】国際公開第２０１７／０４１０５０号
【特許文献２】国際公開第２０１６／０７０１３６号
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Suresh  and  Burtness  Am  J  Hematol  Oncol  13(6):20-27  (2017)
【非特許文献２】Papaioannou,  Nikos  E.,  et  al.  Annals  of  translational  medicine  4.14  (2016)
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
発明の簡単な概要
一部の態様では、本発明は、個体におけるヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）関連疾患を処置するための方法であって、方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含み、アジュバントは細胞内に供給されている、方法を提供する。一部の態様では、本発明は、個体におけるＨＰＶ関連疾患を予防するための方法であって、方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含み、アジュバントは細胞内に供給されている、方法を提供する。一部の態様では、本発明は、ＨＰＶ関連疾患を有する個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含み、アジュバントは細胞内に供給されている、方法を提供する。
【００１０】
一部の実施形態では、本発明は、個体におけるＨＰＶ関連疾患を処置するための方法であって、方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含み、アジュバントは細胞内に供給されており、改変免疫細胞は、ａ）インプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄（cell-deforming  constriction）に通すステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプット細胞の直径の関数であり、それによって、抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きなインプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；ならびにｂ）ＨＰＶ抗原およびアジュバントが摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット細胞とＨＰＶ抗原およびアジュバントとをインキュベートし、それによって、改変免疫細胞を作出するステップによって調製される、方法を提供する。一部の実施形態では、本発明は、個体におけるＨＰＶ関連疾患を予防するための方法であって、方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含み、アジュバントは細胞内に供給されており、改変免疫細胞は、ａ）インプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプット細胞の直径の関数であり、それによって、ＨＰＶ抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きなインプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；ならびにｂ）ＨＰＶ抗原およびアジュバントが摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット細胞とＨＰＶ抗原およびアジュバントとをインキュベートし、それによって、改変免疫細胞を作出するステップによって調製される、方法を提供する。一部の実施形態では、本発明は、ＨＰＶ関連疾患を有する個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含み、アジュバントは細胞内に供給されており、改変免疫細胞は、ａ）ＨＰＶ抗原を含むインプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプット細胞の直径の関数であり、それによって、ＨＰＶ抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きなインプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；ならびにｂ）ＨＰＶ抗原およびアジュバントが摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット細胞と抗原およびアジュバントとをインキュベートし、それによって、改変免疫細胞を作出するステップによって調製される、方法を提供する。一部の実施形態では、狭窄の直径は、細胞の直径未満である。一部の実施形態では、狭窄の直径は、細胞の直径の約２０％〜９９％である。一部の実施形態では、狭窄の直径は、細胞の直径の約２０％〜約６０％未満である。一部の実施形態では、狭窄は、チャネル中にある。一部の実施形態では、インプット細胞に、それが狭窄を通過するときに変形力が印加される。
【００１１】
一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原および／またはアジュバントは、細胞質基質および／またはエンドソームに存在する。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、細胞の多数の区画に存在する。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、細胞の外側に、ＨＰＶ抗原および／またはアジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、摂動インプット細胞とインキュベートされるアジュバントの濃度は、約０．１μＭ〜約１ｍＭである。一部の実施形態では、摂動インプット細胞とインキュベートされるＨＰＶ抗原の濃度は、約０．１μＭ〜約１ｍＭである。一部の実施形態では、摂動インプット細胞とインキュベートされるＨＰＶ抗原のアジュバントに対する比は、約１００００：１〜約１：１００００である。
【００１２】
一部の実施形態では、免疫応答は増強される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原に対する免疫応答は増強される。
【００１３】
一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧ  ＯＤＮ、ＩＦＮ−α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ−Ｉアゴニスト、またはポリＩ：Ｃである。一部の実施形態では、アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮである。一部の実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮは、ＣｐＧ  ＯＤＮ１０１８、ＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６、またはＣｐＧ  ＯＤＮ２００６である。一部の実施形態では、改変免疫細胞は１つよりも多いアジュバントを含む。
【００１４】
一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、同じおよび／または異なるＨＰＶ抗原に対する応答を誘発する多数のポリペプチドのプールである。
【００１５】
一部の実施形態では、多数の抗原のプール中の抗原は、多数の抗原のプール中の他の抗原に向けられた免疫応答を減少させない。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、抗原性ＨＰＶエピトープおよび１つまたは複数の異種ペプチド配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、それ自体と、他の抗原と、またはアジュバントと複合体を形成する。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ−１６またはＨＰＶ−１８抗原である。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＬＡ−Ａ２特異的エピトープで構成される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ  Ｅ６抗原またはＨＰＶ  Ｅ７抗原である。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、ＨＰＶ  Ｅ６抗原およびＨＰＶ  Ｅ７抗原を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、１つまたは複数の異種ペプチド配列がそのＮ末端および／またはそのＣ末端で隣接している抗原性エピトープを含むポリペプチドである。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａ２拘束性ペプチドは、配列番号１〜４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｎ末端隣接ポリペプチドは、配列番号５〜１０のいずれか１つのアミノ酸配列を含み、および／またはＣ末端隣接ポリペプチドは、配列番号１１〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号１８〜２６のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号２３と少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る。
【００１６】
一部の実施形態では、改変免疫細胞は、約０．１μＭ〜約１ｍＭの濃度でアジュバントを含む。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、約（about  about）０．１μＭ〜約１ｍＭの濃度でＨＰＶ抗原を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原のアジュバントに対する比は、約１００００：１〜約１：１００００である。
【００１７】
一部の実施形態では、改変免疫細胞は、作用物質をさらに含み、この作用物質は、この作用物質を含まない対応する改変免疫細胞と比較して改変免疫細胞の生存能力および／または機能を増強する。一部の実施形態では、作用物質は、エンドサイトーシスを増強する化合物、安定剤、または補因子である。一部の実施形態では、作用物質はアルブミンである。一部の実施形態では、アルブミンは、マウス、ウシ、またはヒトアルブミンである。一部の実施形態では、作用物質は、二価金属カチオン、グルコース、ＡＴＰ、カリウム、グリセロール、トレハロース、Ｄ−スクロース、ＰＥＧ１５００、Ｌ−アルギニン、Ｌ−グルタミン、またはＥＤＴＡである。一部の実施形態では、作用物質はマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）を含む。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、共刺激分子のうちの１つまたは複数の発現を増加させるようにさらに改変されている。一部の実施形態では、共刺激分子は、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−１、Ｂ７−２、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＣＤ４０、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ３０Ｌ、ＴＩＭ４、ＳＬＡＭ、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ１５５、またはＣＤ１１２である。一部の実施形態では、細胞は、１つまたは複数の共刺激分子の増加した発現をもたらす核酸を含む。
【００１８】
一部の実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、樹状細胞、単球、マクロファージ、骨髄性細胞、顆粒球、好中球、マスト細胞、ナチュラルキラー細胞、自然リンパ球、好塩基球、または造血系（hematopoetic）前駆細胞である。一部の実施形態では免疫細胞はＢ細胞ではない。
【００１９】
一部の実施形態では、免疫細胞はＴ細胞である。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を低下させるさらなる改変を含む。一部の実施形態では、さらなる改変は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９、ＺＦＮ、ＴＡＬＥＮ、Ｃｒｅリコンビナーゼ、またはメガヌクレアーゼを使用して、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を低下させることを含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を増加させるさらなる改変を含む。一部の実施形態では、さらなる改変は、ＲＮＡまたはプラスミドＤＮＡを使用して、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を増加させることを含む。一部の実施形態では、さらに改変されたＴ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答は、さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答と比較して低下している。一部の実施形態では、さらに改変されたＴ細胞の、それらが投与された個体における循環半減期は、さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞の、それらが投与された個体における循環半減期と比較してモジュレートされる。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、ＣＩＫ細胞、およびナチュラルキラーＴ細胞のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ３＋  Ｔ細胞、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＡ＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＯ＋  Ｔ細胞、およびγδ−Ｔ細胞のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、改変細胞は個体に対して同種異系である。一部の実施形態では、改変細胞は個体に対して自家である。一部の実施形態では、個体は、モジュレートされた炎症および／またはモジュレートされた免疫応答を有するよう事前調整されている。
【００２０】
一部の実施形態では、方法は、アジュバントを個体に投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、アジュバントは、ＩＦＮαまたはＣｐＧ  ＯＤＮである。一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物およびアジュバントは同時に投与される。一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物およびアジュバントは逐次的に投与される。一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物は、アジュバントを投与する前に投与される。一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物は、アジュバントの投与後に投与される。
【００２１】
一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物および免疫チェックポイント阻害剤は同時に投与される。一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物および免疫チェックポイント阻害剤は逐次的に投与される。一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤を投与する前に投与される。一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与後に投与される。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、またはＴＩＭ−３のうちの１つまたは複数を標的にする。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ−３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数を標的にする。
【００２２】
一部の実施形態では、個体への改変免疫細胞を含む組成物の投与は、ＨＰＶ抗原に特異的な細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の活性化および／または増殖をもたらす。一部の実施形態では、個体への改変免疫細胞を含む組成物の投与は、抗原に特異的なヘルパーＴ（Ｔｈ）細胞の活性化および／または増殖をもたらす。
【００２３】
一部の実施形態では、有効量の組成物は、約１×１０６〜約１×１０１２個の改変免疫細胞を含む。一部の実施形態では、方法は、改変免疫細胞を含む組成物の複数回投与を含む。一部の実施形態では、方法は、改変免疫細胞を含む組成物の第１の投与、続いて、改変免疫細胞を含む組成物の第２の投与を含む。一部の実施形態では、第２の投与は、第１の投与の約１か月後である。
【００２４】
一部の実施形態では、ＨＰＶ関連疾患はＨＰＶ関連がんである。一部の実施形態では、ＨＰＶ関連がんは、子宮頸がん、肛門がん、中咽頭がん、膣がん、外陰がん、陰茎がん、皮膚がん、または頭頸部がんである。一部の実施形態では、ＨＰＶ関連疾患は、ＨＰＶ関連感染性疾患である。
【００２５】
一部の態様では、本発明は、個体におけるヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）関係疾患を処置するための方法であって、方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、配列番号１８〜２５のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸を含むＨＰＶ抗原を含む、方法を提供する。一部の態様では、本発明は、個体におけるＨＰＶ関連疾患を予防するための方法であって、方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、配列番号１８〜２５のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含むＨＰＶ抗原を含む、方法を提供する。一部の態様では、本発明は、ＨＰＶ関連疾患を有する個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、配列番号１８〜２５のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含むＨＰＶ抗原を含む、方法を提供する。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、配列番号１８〜２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＰＶ抗原を含む。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＰＶ抗原を含む。
【００２６】
一部の態様では、本発明は、個体におけるＨＰＶ関連疾患を処置するための方法であって、方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、配列番号１８〜２５のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含むＨＰＶ抗原を含み、改変免疫細胞は、ａ）インプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプット細胞の直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；およびｂ）ＨＰＶ抗原が摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット細胞とＨＰＶ抗原とをインキュベートし、それによって、改変免疫細胞を作出するステップによって調製される、方法を提供する。一部の態様では、本発明は、個体におけるＨＰＶ関連疾患を予防するための方法であって、方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、ＨＰＶ抗原を含み、改変免疫細胞は、配列番号１８〜２５のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含むＨＰＶ抗原を含み、改変免疫細胞は、ａ）インプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプット細胞の直径の関数であり、それによって、ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きなインプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；およびｂ）ＨＰＶ抗原が摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット細胞とＨＰＶ抗原とをインキュベートし、それによって、改変免疫細胞を作出するステップによって調製される、方法を提供する。一部の態様では、本発明は、ＨＰＶ関連疾患を有する個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、配列番号１８〜２５のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含むＨＰＶ抗原を含み、改変免疫細胞は、ａ）インプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプット細胞の直径の関数であり、それによって、ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きなインプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；およびｂ）ＨＰＶ抗原が摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット細胞とＨＰＶ抗原とをインキュベートし、それによって、改変免疫細胞を作出するステップによって調製される、方法を提供する。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、配列番号１８〜２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＰＶ抗原を含む。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＰＶ抗原を含む。一部の実施形態では、狭窄の直径は、細胞の直径未満である。一部の実施形態では、狭窄の直径は、細胞の直径の約２０％〜９９％である。一部の実施形態では、狭窄の直径は、細胞の直径の約２０％〜約６０％未満である。一部の実施形態では、狭窄は、チャネル中にある。一部の実施形態では、インプット細胞に、それが狭窄を通過するときに変形力が印加される。
【００２７】
一部の実施形態では、方法は、アジュバントを個体に投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、アジュバントは、ＩＦＮαまたはＣｐＧ  ＯＤＮである。一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物およびアジュバントは同時に投与される。一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物およびアジュバントは逐次的に投与される。一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物は、アジュバントを投与する前に投与される。一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物は、アジュバントの投与後に投与される。一部の実施形態では、改変免疫細胞はアジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、ステップｂの摂動免疫細胞は、ＨＰＶ抗原およびアジュバントとインキュベートされる。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原および／またはアジュバントは、細胞質基質および／またはエンドソームに存在する。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、細胞の多数の区画に存在する。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、細胞の外側に、ＨＰＶ抗原および／またはアジュバントをさらに含む。
【００２８】
一部の実施形態では、摂動インプット細胞とインキュベートされるアジュバントの濃度は、約０．１μＭ〜約１ｍＭである。一部の実施形態では、摂動インプット細胞とインキュベートされるＨＰＶ抗原の濃度は、約０．１μＭ〜約１ｍＭである。一部の実施形態では、摂動インプット細胞とインキュベートされるＨＰＶ抗原のアジュバントに対する比は、約１００００：１〜約１：１００００である。
【００２９】
一部の実施形態では、免疫応答は増強される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原に対する免疫応答は増強される。
【００３０】
一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧ  ＯＤＮ、ＩＦＮ−α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ−Ｉアゴニスト、またはポリＩ：Ｃである。一部の実施形態では、アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮである。一部の実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮは、ＣｐＧ  ＯＤＮ１０１８、ＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６、またはＣｐＧ  ＯＤＮ２００６である。一部の実施形態では、改変免疫細胞は１つよりも多いアジュバントを含む。
【００３１】
一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、同じおよび／または異なるＨＰＶ抗原に対する応答を誘発する多数のポリペプチドのプールである。一部の実施形態では、多数の抗原のプール中の抗原は、多数の抗原のプール中の他の抗原に向けられた免疫応答を減少させない。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、抗原性ＨＰＶエピトープおよび１つまたは複数の異種ペプチド配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、それ自体と、他の抗原と、またはアジュバントと複合体を形成する。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ−１６またはＨＰＶ−１８抗原である。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＬＡ−Ａ２特異的エピトープで構成される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ  Ｅ６抗原またはＨＰＶ  Ｅ７抗原である。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、ＨＰＶ  Ｅ６抗原およびＨＰＶ  Ｅ７抗原を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、１つまたは複数の異種ペプチド配列がそのＮ末端および／またはそのＣ末端で隣接している抗原性エピトープを含むポリペプチドである。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る。
【００３２】
一部の実施形態では、改変免疫細胞は、約０．１μＭ〜約１ｍＭの濃度でアジュバントを含む。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、約０．１μＭ〜約１ｍＭの濃度でＨＰＶ抗原を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原のアジュバントに対する比は、約１００００：１〜約１：１００００である。
【００３３】
一部の実施形態では、改変免疫細胞は、作用物質をさらに含み、この作用物質は、この作用物質を含まない対応する改変免疫細胞と比較して改変免疫細胞の生存能力および／または機能を増強する。一部の実施形態では、作用物質は、エンドサイトーシスを増強する化合物、安定剤、または補因子である。一部の実施形態では、作用物質はアルブミンである。一部の実施形態では、アルブミンは、マウス、ウシ、またはヒトアルブミンである。一部の実施形態では、作用物質は、二価金属カチオン、グルコース、ＡＴＰ、カリウム、グリセロール、トレハロース、Ｄ−スクロース、ＰＥＧ１５００、Ｌ−アルギニン、Ｌ−グルタミン、またはＥＤＴＡである。一部の実施形態では、作用物質はマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）を含む。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、共刺激分子のうちの１つまたは複数の発現を増加させるようにさらに改変されている。一部の実施形態では、共刺激分子は、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−１、Ｂ７−２、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＣＤ４０、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ３０Ｌ、ＴＩＭ４、ＳＬＡＭ、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ１５５、またはＣＤ１１２である。一部の実施形態では、細胞は、１つまたは複数の共刺激分子の増加した発現をもたらす核酸を含む。
【００３４】
一部の実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、樹状細胞、単球、マクロファージ、骨髄性細胞、顆粒球、好中球、マスト細胞、ナチュラルキラー細胞、自然リンパ球、好塩基球、または造血系前駆細胞である。一部の実施形態では免疫細胞はＢ細胞ではない。
【００３５】
一部の実施形態では、免疫細胞はＴ細胞である。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を低下させるさらなる改変を含む。一部の実施形態では、さらなる改変は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９、ＺＦＮ、ＴＡＬＥＮ、Ｃｒｅリコンビナーゼ、またはメガヌクレアーゼを使用して、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を低下させることを含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を増加させるさらなる改変を含む。一部の実施形態では、さらなる改変は、ＲＮＡまたはプラスミドＤＮＡを使用して、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を増加させることを含む。一部の実施形態では、さらに改変されたＴ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答は、さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答と比較して低下している。一部の実施形態では、さらに改変されたＴ細胞の、それらが投与された個体における循環半減期は、さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞の、それらが投与された個体における循環半減期と比較してモジュレートされる。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、ＣＩＫ細胞、およびナチュラルキラーＴ細胞のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ３＋  Ｔ細胞、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＡ＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＯ＋  Ｔ細胞、およびγδ−Ｔ細胞のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、改変細胞は個体に対して同種異系である。一部の実施形態では、改変細胞は個体に対して自家である。一部の実施形態では、個体は、モジュレートされた炎症および／またはモジュレートされた免疫応答を有するよう事前調整されている。
【００３６】
一部の実施形態では、方法は、アジュバントを個体に投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、アジュバントは、ＩＦＮαまたはＣｐＧ  ＯＤＮである。一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物およびアジュバントは同時に投与される。一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物およびアジュバントは逐次的に投与される。一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物は、アジュバントを投与する前に投与される。一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物は、アジュバントの投与後に投与される。
【００３７】
一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物および免疫チェックポイント阻害剤は同時に投与される。一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物および免疫チェックポイント阻害剤は逐次的に投与される。一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤を投与する前に投与される。一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与後に投与される。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、またはＴＩＭ−３のうちの１つまたは複数を標的にする。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ−３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数を標的にする。
【００３８】
一部の実施形態では、個体への改変免疫細胞を含む組成物の投与は、ＨＰＶ抗原に特異的な細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の活性化および／または増殖をもたらす。一部の実施形態では、個体への改変免疫細胞を含む組成物の投与は、抗原に特異的なヘルパーＴ（Ｔｈ）細胞の活性化および／または増殖をもたらす。
【００３９】
一部の実施形態では、有効量の組成物は、約１×１０６〜約１×１０１２個の改変免疫細胞を含む。一部の実施形態では、方法は、改変免疫細胞を含む組成物の複数回投与を含む。一部の実施形態では、方法は、改変免疫細胞を含む組成物の第１の投与、続いて、改変免疫細胞を含む組成物の第２の投与を含む。一部の実施形態では、第２の投与は、第１の投与の約１か月後である。
【００４０】
一部の実施形態では、ＨＰＶ関連疾患はＨＰＶ関連がんである。一部の実施形態では、ＨＰＶ関連がんは、子宮頸がん、肛門がん、中咽頭がん、膣がん、外陰がん、陰茎がん、皮膚がん、または頭頸部がんである。一部の実施形態では、ＨＰＶ関連疾患は、ＨＰＶ関連感染性疾患である。
【００４１】
一部の態様では、本発明は、改変免疫細胞を含む組成物であって、改変免疫細胞は、ＣｐＧ  ＯＤＮ、および配列番号１８〜２５のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するＨＰＶ抗原を細胞内に含む、組成物を提供する。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号２３と少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、ＣｐＧ  ＯＤＮおよびＨＰＶ抗原を細胞内に含み、ＨＰＶ抗原は、配列番号１８〜２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は配列番号２３のアミノ酸配列を含む。
【００４２】
一部の実施形態では、改変免疫細胞は、ａ）インプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプット細胞の直径の関数であり、それによって、ＨＰＶ抗原およびＣｐＧ  ＯＤＮが通過するのに十分に大きなインプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；ならびにｂ）ＨＰＶ抗原およびＣｐＧ  ＯＤＮが摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット細胞とＨＰＶ抗原およびＣｐＧ  ＯＤＮとをインキュベートし、それによって、改変免疫細胞を作出するステップによって調製される。一部の実施形態では、狭窄の直径は、細胞の直径未満である。一部の実施形態では、狭窄の直径は、細胞の直径の約２０％〜約９９％である。一部の実施形態では、狭窄の直径は、細胞の直径の約２０％〜約６０％未満である。一部の実施形態では、狭窄は、チャネル中にある。一部の実施形態では、インプット細胞に、それが狭窄を通過するときに変形力が印加される。
【００４３】
一部の実施形態では、組成物はアジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原および／またはＣｐＧ  ＯＤＮは、細胞質基質および／またはエンドソームに存在する。一部の実施形態では、抗原および／またはＣｐＧ  ＯＤＮは、細胞の多数の区画に存在する。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、細胞の表面に、ＨＰＶ抗原および／またはＣｐＧ  ＯＤＮをさらに含む。一部の実施形態では、摂動インプット細胞とインキュベートされるＣｐＧ  ＯＤＮの濃度は、約０．１μＭ〜約１ｍＭである。一部の実施形態では、摂動インプット細胞とインキュベートされるＨＰＶ抗原の濃度は、約０．１μＭ〜約１ｍＭである。一部の実施形態では、摂動インプット細胞とインキュベートされるＨＰＶ抗原のＣｐＧ  ＯＤＮに対する比は、約１００００：１〜約１：１００００である。一部の実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮは、ＣｐＧ  ＯＤＮ１０１８、ＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６、またはＣｐＧ  ＯＤＮ２００６である。一部の実施形態では、改変免疫細胞は１つよりも多いアジュバントを含む。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧ  ＯＤＮ、ＩＦＮ−α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ−Ｉアゴニスト、またはポリＩ：Ｃを含む。
【００４４】
一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、同じおよび／または異なるＨＰＶ抗原に対する応答を誘発する多数のポリペプチドのプールである。一部の実施形態では、多数の抗原のプール中の抗原は、多数の抗原のプール中の他の抗原に向けられた免疫応答を減少させない。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、抗原性ＨＰＶエピトープおよび１つまたは複数の異種ペプチド配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、それ自体と、他の抗原と、アジュバントと、またはＣｐＧ  ＯＤＮと複合体を形成する。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＬＡ−Ａ２特異的エピトープで構成される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、１つまたは複数の異種ペプチド配列がそのＮ末端および／またはそのＣ末端で隣接している抗原性エピトープを含むポリペプチドである。
【００４５】
一部の実施形態では、改変免疫細胞は、約０．１μＭ〜約１ｍＭの濃度でＣｐＧ  ＯＤＮを含む。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、約０．１μＭ〜約１ｍＭの濃度でＨＰＶ抗原を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原のＣｐＧ  ＯＤＮに対する比は、約１００００：１〜約１：１００００である。
【００４６】
一部の態様では、本発明は、改変免疫細胞を含む組成物であって、改変免疫細胞は、ＨＰＶ抗原を含み、ＨＰＶ抗原は、配列番号１８〜２５のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む、組成物を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号２３と少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号１８〜２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は配列番号２３のアミノ酸配列を含む。
【００４７】
一部の実施形態では、改変免疫細胞は、ａ）インプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプット細胞の直径の関数であり、それによって、ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きなインプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；およびｂ）ＨＰＶ抗原が摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット細胞とＨＰＶ抗原とをインキュベートし、それによって、改変免疫細胞を作出するステップによって調製される。一部の実施形態では、狭窄の直径は、細胞の直径未満である。一部の実施形態では、狭窄の直径は、細胞の直径の約２０％〜約９９％である。一部の実施形態では、狭窄の直径は、細胞の直径の約２０％〜約６０％未満である。一部の実施形態では、狭窄は、チャネル中にある。一部の実施形態では、インプット細胞に、それが狭窄を通過するときに変形力が印加される。
【００４８】
一部の実施形態では、組成物はアジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原および／またはアジュバントは、細胞質基質および／またはエンドソームに存在する。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、細胞の多数の区画に存在する。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、細胞の表面に、ＨＰＶ抗原および／またはアジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、摂動インプット細胞とインキュベートされるアジュバントの濃度は、約０．１μＭ〜約１ｍＭである。一部の実施形態では、摂動インプット細胞とインキュベートされるＨＰＶ抗原の濃度は、約０．１μＭ〜約１ｍＭである。一部の実施形態では、摂動インプット細胞とインキュベートされるＨＰＶ抗原のアジュバントに対する比は、約１００００：１〜約１：１００００である。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧ  ＯＤＮ、ＩＦＮ−α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ−Ｉアゴニスト、またはポリＩ：Ｃである。一部の実施形態では、アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮである。一部の実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮは、ＣｐＧ  ＯＤＮ１０１８、ＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６、またはＣｐＧ  ＯＤＮ２００６である。一部の実施形態では、改変免疫細胞は１つよりも多いアジュバントを含む。
【００４９】
一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、同じおよび／または異なるＨＰＶ抗原に対する応答を誘発する多数のポリペプチドのプールである。一部の実施形態では、多数の抗原のプール中の抗原は、多数の抗原のプール中の他の抗原に向けられた免疫応答を減少させない。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、抗原性ＨＰＶエピトープおよび１つまたは複数の異種ペプチド配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、それ自体と、他の抗原と、またはアジュバントと複合体を形成する。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＬＡ−Ａ２特異的エピトープで構成される。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、約０．１μＭ〜約１ｍＭの濃度でアジュバントを含む。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、約０．１μＭ〜約１ｍＭの濃度でＨＰＶ抗原を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原のアジュバントに対する比は、約１００００：１〜約１：１００００である。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る。
【００５０】
一部の実施形態では、改変免疫細胞は、作用物質をさらに含み、この作用物質は、この作用物質を含まない対応する改変免疫細胞と比較して改変免疫細胞の生存能力および／または機能を増強する。一部の実施形態では、作用物質は、エンドサイトーシスを増強する化合物、安定剤、または補因子である。一部の実施形態では、作用物質はアルブミンである。一部の実施形態では、アルブミンは、マウス、ウシ、またはヒトアルブミンである。一部の実施形態では、作用物質は、二価金属カチオン、グルコース、ＡＴＰ、カリウム、グリセロール、トレハロース、Ｄ−スクロース、ＰＥＧ１５００、Ｌ−アルギニン、Ｌ−グルタミン、またはＥＤＴＡである。一部の実施形態では、作用物質はＭＳＡを含む。一部の実施形態では、細胞は、共刺激分子のうちの１つまたは複数の発現を増加させるようにさらに改変されている。一部の実施形態では、共刺激分子は、Ｂ７−Ｈ２（ＩＣＯＳＬ）、Ｂ７−１（ＣＤ８０）、Ｂ７−２（ＣＤ８６）、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＣＤ４０、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ３０Ｌ、ＴＩＭ４、ＳＬＡＭ、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ１５５、またはＣＤ１１２である。一部の実施形態では、細胞は、１つまたは複数の共刺激分子の増加した発現をもたらす核酸を含む。
【００５１】
一部の実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、樹状細胞、単球、マクロファージ、骨髄性細胞、顆粒球、好中球、マスト細胞、ナチュラルキラー細胞、自然リンパ球、好塩基球、または造血系前駆細胞である。一部の実施形態では、免疫細胞はＢ細胞ではない。一部の実施形態では、免疫細胞はＴ細胞である。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を低下させるさらなる改変を含む。一部の実施形態では、さらなる改変は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９、ＺＦＮ、ＴＡＬＥＮ、Ｃｒｅリコンビナーゼ、またはメガヌクレアーゼを使用して、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を低下させることを含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を増加させるさらなる改変を含む。一部の実施形態では、さらなる改変は、ＲＮＡまたはプラスミドＤＮＡを使用して、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を増加させることを含む。一部の実施形態では、さらに改変されたＴ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答は、さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答と比較して低下している。一部の実施形態では、さらに改変されたＴ細胞の、それらが投与された個体における循環半減期は、さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞の、それらが投与された個体における循環半減期と比較してモジュレートされる。
【００５２】
一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、ＣＩＫ細胞、およびナチュラルキラーＴ細胞のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ３＋  Ｔ細胞、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＡ＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＯ＋  Ｔ細胞、およびγδ−Ｔ細胞のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、改変細胞は個体に対して同種異系である。一部の実施形態では、改変細胞は個体に対して自家である。一部の実施形態では、個体は、モジュレートされた炎症および／またはモジュレートされた免疫応答を有するよう事前調整されている。
【００５３】
一部の実施形態では、組成物は、免疫チェックポイント阻害剤をさらに含む。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数を標的にする。一部の実施形態では、個体への改変免疫細胞を含む組成物の投与は、ＨＰＶ抗原に特異的な細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の活性化および／または増殖をもたらす。一部の実施形態では、個体への改変免疫細胞を含む組成物の投与は、抗原に特異的なヘルパーＴ（Ｔｈ）細胞の活性化および／または増殖をもたらす。
【００５４】
一部の実施形態では、有効量の組成物は、約１×１０６〜約１×１０１２個の改変免疫細胞を含む。一部の実施形態では、抗原は、配列番号２３と少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗原は配列番号２３のアミノ酸配列を含む。
【００５５】
一部の実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、樹状細胞、単球、マクロファージ、骨髄性細胞、顆粒球、好中球、マスト細胞、ナチュラルキラー細胞、自然リンパ球、好塩基球、または造血系前駆細胞である。一部の実施形態では、免疫細胞はＢ細胞ではない。一部の実施形態では、免疫細胞はＴ細胞である。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を低下させるさらなる改変を含む。一部の実施形態では、さらなる改変は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９、ＺＦＮ、ＴＡＬＥＮ、Ｃｒｅリコンビナーゼ、またはメガヌクレアーゼを使用して、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を低下させることを含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を増加させるさらなる改変を含む。一部の実施形態では、さらなる改変は、ＲＮＡまたはプラスミドＤＮＡを使用して、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を増加させることを含む。一部の実施形態では、さらに改変されたＴ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答は、さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答と比較して低下している。一部の実施形態では、さらに改変されたＴ細胞の、それらが投与された個体における循環半減期は、さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞の、それらが投与された個体における循環半減期と比較してモジュレートされる。
【００５６】
一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、ＣＩＫ細胞、およびナチュラルキラーＴ細胞のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ３＋  Ｔ細胞、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＡ＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＯ＋  Ｔ細胞、およびγδ−Ｔ細胞のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、改変細胞は個体に対して同種異系である。一部の実施形態では、改変細胞は個体に対して自家である。一部の実施形態では、個体は、モジュレートされた炎症および／またはモジュレートされた免疫応答を有するよう事前調整されている。
【００５７】
一部の実施形態では、組成物は、免疫チェックポイント阻害剤をさらに含む。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、またはＴＩＭ−３のうちの１つまたは複数を標的にする。一部の実施形態では、個体への改変免疫細胞を含む組成物の投与は、ＨＰＶ抗原に特異的な細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の活性化および／または増殖をもたらす。一部の実施形態では、個体への改変免疫細胞を含む組成物の投与は、抗原に特異的なヘルパーＴ（Ｔｈ）細胞の活性化および／または増殖をもたらす。
【００５８】
一部の実施形態では、有効量の組成物は、約１×１０６〜約１×１０１２個の改変免疫細胞を含む。一部の実施形態では、抗原は、配列番号２３と少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗原は配列番号２３のアミノ酸配列を含む。
【００５９】
一部の態様では、本発明は、個体におけるＨＰＶ関連疾患を処置または予防するための方法であって、方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含み、アジュバントは細胞内に供給されており、改変免疫細胞は、ａ）ＨＰＶ抗原を含むインプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプット細胞の直径の関数であり、それによって、抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きなインプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；ならびにｂ）アジュバントが摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット細胞とアジュバントとをインキュベートし、それによって、改変免疫細胞を作出するステップによって調製される、方法を提供する。一部の態様では、本発明は、個体におけるＨＰＶ関連疾患を処置または予防するための方法であって、方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含み、アジュバントは細胞内に供給されており、改変免疫細胞は、ａ）アジュバントを含むインプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプット細胞の直径の関数であり、それによって、ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きなインプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；およびｂ）ＨＰＶ抗原が摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット細胞とＨＰＶ抗原とをインキュベートし、それによって、改変免疫細胞を作出するステップによって調製される、方法を提供する。
【００６０】
一部の実施形態では、狭窄の直径は、細胞の直径未満である。一部の実施形態では、狭窄の直径は、細胞の直径の約２０％〜約９９％である。一部の実施形態では、狭窄の直径は、細胞の直径の約２０％〜約６０％未満である。一部の実施形態では、狭窄は、チャネル中にある。一部の実施形態では、インプット細胞に、それが狭窄を通過するときに変形力が印加される。
【００６１】
一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原および／またはアジュバントは、細胞質基質および／またはエンドソームに存在する。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、細胞の多数の区画に存在する。一部の実施形態では、摂動インプット細胞とインキュベートされるアジュバントの濃度は、約０．１μＭ〜約１ｍＭである。一部の実施形態では、摂動インプット細胞とインキュベートされるＨＰＶ抗原の濃度は、約０．１μＭ〜約１ｍＭである。
【００６２】
一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧ  ＯＤＮ、ＩＦＮ−α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ−Ｉアゴニスト、またはポリＩ：Ｃである。一部の実施形態では、アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮである。一部の実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮは、ＣｐＧ  ＯＤＮ１０１８、ＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６、またはＣｐＧ  ＯＤＮ２００６である。
【００６３】
一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ−１６またはＨＰＶ−１８抗原である。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ  Ｅ６抗原またはＨＰＶ  Ｅ７抗原である。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号１８〜２５のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号１８〜２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号２３と少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は配列番号２３のアミノ酸配列を含む。
【００６４】
一部の態様では、本発明は、個体におけるＨＰＶ関連疾患を処置または予防するための方法であって、ＨＰＶ抗原と会合した改変免疫細胞を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、ａ）ＨＰＶ抗原がインプット細胞と会合するのを可能にするのに十分な時間、インプット細胞とＨＰＶ抗原および／またはアジュバントとをインキュベートし、それによって、抗原と会合した改変免疫細胞を作出するステップを含むプロセスによって調製される、方法を提供する。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号１８〜２５のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は配列番号２３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮである。一部の実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮは、ＣｐＧ  ＯＤＮ１０１８、ＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６、またはＣｐＧ  ＯＤＮ２００６である。
【図面の簡単な説明】
【００６５】
【図１Ａ】図１Ａは、処置群およびスケジュールの代表的な概略図を示す。
【図１Ｂ】図１Ｂは、未処置群（Ｔ細胞の養子移植なし）および図１Ａで概説された処置群Ｂ〜Ｅからのマウスの間で比較した、式（（長さ×幅２）／２）によって測定される腫瘍成長を示す。
【００６６】
【図２Ａ】図２Ａは、Ｅ７抗原を評価するための代表的な概略図を示す。
【図２Ｂ】図２Ｂは、ＩＦＮ−γ産生ＣＤ８＋  Ｔ細胞に対するＳＬＰ配列の影響が、ＴＡＰＣワクチン接種に応答して生じたことを示す。
【００６７】
【図３】図３は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏヒトモデルにおけるＥ６レスポンダーＴ細胞において抗原特異的免疫応答を誘導するＥ６  ＳＬＰの能力を示すグラフである。
【００６８】
【図４】図４は、Ｅ７１１−２０レスポンダーＴ細胞において抗原特異的免疫応答を誘導するＥ７  ＳＬＰの能力、およびｉｎ  ｖｉｔｒｏヒトモデルにおけるＳＱＺ  Ｔ細胞ＡＰＣ（Ｔａｐｃ）活性化に対するＳＬＰ配列の影響を示す。
【００６９】
【図５】図５は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏヒトモデルにおいてＳＱＺ  Ｔ細胞ＡＰＣについての抗原の用量を評価するための研究の結果を示す。
【００７０】
【図６−１】図６は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏヒトモデルにおいてＳＱＺ  Ｔ細胞ＡＰＣについてのドナーの変動性を決定するための研究の結果を示す。
【図６−２】図６は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏヒトモデルにおいてＳＱＺ  Ｔ細胞ＡＰＣについてのドナーの変動性を決定するための研究の結果を示す。
【００７１】
【図７Ａ】図７Ａは、異なるアジュバントを使用して免疫応答の頑健性を比較するための実験の概略図である。
【図７Ｂ】図７Ｂは、ポリＩ：ＣおよびＣｐＧ  ＯＤＮを使用して免疫応答の頑健性を比較するための実験の結果を示す。
【００７２】
【図８Ａ】図８Ａは、免疫応答におけるＣｐＧ  ＯＤＮの濃度の効果を評価する実験の概略図である。
【図８Ｂ】図８Ｂは、免疫応答におけるＣｐＧ  ＯＤＮの濃度の効果を評価する実験の結果を示す。
【００７３】
【図９Ａ】図９Ａは、免疫応答におけるＣｐＧ  ＯＤＮの投与スケジュールを評価する実験の概略図である。
【図９Ｂ】図９Ｂは、免疫応答におけるＣｐＧ  ＯＤＮの投与スケジュールを評価する実験の結果を示す。
【００７４】
【図１０Ａ】図１０Ａは、ＴＡＰＣ抗腫瘍機能についての細胞内および全身性のアジュバント投与の組合せを評価するための実験の概略図である。
【図１０Ｂ】図１０Ｂは、各実験群についてのＴ細胞応答を示す。
【図１０Ｃ】図１０Ｃは、各実験群についての腫瘍の成長を示す。
【図１０Ｄ】図１０Ｄは、未処置動物に対して、ＳＱＺ（Ｅ７＋ＣｐＧ）で処置された動物における再チャレンジ後の腫瘍成長を示す。
【００７５】
【図１１Ａ】図１１Ａは、ＴＡＰＣ抗腫瘍機能についての多数のＨＰＶ抗原を組み合わせる効果を評価するための実験の概略図である。
【図１１Ｂ】図１１Ｂは、各実験群についてのＴ細胞応答を示す。
【図１１Ｃ】図１１Ｃは、各実験群についての腫瘍の成長を示す。
【００７６】
【図１２Ａ】図１２Ａは、Ｅ７特異的ＴＡＰＣ抗腫瘍効果についてのＣｐＧアジュバントの投与経路の重要性を評価する実験の結果を示す。投与スケジュールを提供する。
【図１２Ｂ】図１２Ｂは、各処置群内の個々のマウスについての経時的な腫瘍体積を示す。
【００７７】
【図１３】図１３は、Ｅ７特異的Ｔ細胞腫瘍浸潤をもたらす共投与アジュバントの能力を査定するための実験の概略図を示す。Ｔ細胞応答を下側パネルに示す。
【００７８】
【図１４Ａ】図１４Ａは、Ｅ７合成長鎖ペプチド（ＳＬＰ）＋ＣｐＧをロードされたＴＡＰＣのプライムおよびブーストの両方のためのワクチン接種スケジュールを決定するための実験の概略図である。
【図１４Ｂ】図１４Ｂは、各実験群についての腫瘍の成長を示す。
【００７９】
【図１５】図１５は、ＳＱＺ化ＴＡＰＣを直接抗原に提示することができることを示すための実験の結果を示す。
【００８０】
【図１６】図１６は、アジュバントのＳＱＺ送達が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＴ細胞サイトカインレベルを有意に変えないことを示す。
【００８１】
【図１７】図１７は、抗原＋／−アジュバントのＳＱＺ送達が、ｉｎ  ｖｉｖｏで血清サイトカインレベルを有意に変えないことを示す。
【００８２】
【図１８】図１８は、樹状細胞（ＡＰＣとして）におけるＨＰＶ−Ｅ７を含有する細胞溶解物のＳＱＺ送達、続いて、ＳＱＺ化樹状細胞とＣＤ８  Ｔ細胞レスポンダーとの共培養が、エンドサイトーシスによる樹状細胞への同じ溶解物の送達と比較してよりロバストなＴ細胞応答をもたらすことを示す。
【００８３】
【図１９】図１９Ａは、内因性応答を誘導するＡＰＣとしてのＢ細胞の能力を評価するための実験の代表的な概略図を示す。図１９Ｂは、ＯＶＡロードＢＡＰＣワクチン接種に応答して生じた、Ｂ９−２３チャレンジによって誘導されたＩＦＮ−γ陽性ＣＤ８＋  Ｔ細胞のレベルを示す。図１９Ｃは、Ｅ７ロードＢＡＰＣワクチン接種に応答して生じた、Ｅ７チャレンジによって誘導されたＩＦＮ−γ陽性ＣＤ８＋  Ｔ細胞のレベルを示す。
【００８４】
【図２０】図２０Ａは、ＨＰＶ関連腫瘍に対する予防的処置のためにＡＰＣとしての機能を果たすＳＱＺロードＢ細胞の能力を決定するための実験における経時的な腫瘍体積を示す。図２０Ｂは、ＨＰＶ関連腫瘍に対するＢ細胞ＡＰＣの予防的処置からの経時的な対応する生存データを示す。
【００８５】
【図２１】図２１Ａは、ＨＰＶ関連腫瘍に対する治療的処置のためにＡＰＣとしての機能を果たすＳＱＺロードＢ細胞の能力を決定するための実験における経時的な腫瘍体積を示す。図２１Ｂは、ＨＰＶ関連腫瘍に対するＢ細胞ＡＰＣの治療的処置からの経時的な対応する生存データを示す。
【００８６】
【図２２】図２２Ａは、ＨＰＶ関連腫瘍に対する治療的処置のためにＡＰＣとしての機能を果たすＳＱＺロードＢ細胞の能力を決定するための実験における経時的な腫瘍体積を示す。図２２Ｂは、腫瘍に動員された腫瘍浸潤細胞のさまざまな表現型のプロファイルおよびパーセンテージを示す。
【００８７】
【図２３】図２３は、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＳＬＰによるＳＱＺロードＢＡＰＣへのｉｎ  ｖｉｔｒｏの抗原特異的応答としての、Ｅ７レスポンダーによるＩＦＮ−γ分泌を示す。
【００８８】
【図２４】図２４は、アジュバントの共投与あり、またはなしで、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＳＬＰによるＳＱＺロードＴＡＰＣにより投与された腫瘍への腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）動員の相対量を示す。
【００８９】
【図２５】図２５は、より短期間（右側腹部腫瘍、０日目に注射）およびより長期間の保護（左側腹部腫瘍、６０日目に注射）の両方について、ＨＰＶ関連腫瘍に対する予防的処置のためにＡＰＣとしての機能を果たすＳＱＺロードＴ細胞の能力を決定するための実験における経時的な腫瘍体積を示す。
【００９０】
【図２６】図２６は、ＨＰＶ関連腫瘍に対する治療的処置のためにＡＰＣとしての機能を果たすＳＱＺロードＴ細胞の能力における、Ｔ細胞の用量、アジュバントの共投与、および投与の数（プライム、対プライム／ブースト）の効果を決定するための実験における経時的な腫瘍体積を示す。図２６において、「Ｐ」はプライムを示し、「Ｂ」はブーストを示す。
【００９１】
【図２７】図２７Ａは、エレクトロポレーションされたＢ細胞および高用量での高投薬量ペプチドワクチン（ＳＣ  ＳＬＰ）と比較して、ＨＰＶ関連腫瘍に対する治療的処置のためにＡＰＣとしての機能を果たすＳＱＺロードＢ細胞の能力を決定するための実験における経時的な腫瘍体積を示す。図２７Ｂは、エレクトロポレーションされた（lectroporated）Ｂ細胞および高投薬量ペプチドワクチンと比較して、ＨＰＶ関連腫瘍に対するＢ細胞ＡＰＣの治療的処置からの経時的な対応する生存データを示す。
【００９２】
【図２８】図２８Ａは、内因性応答を誘導するＡＰＣとしての脾細胞の能力を評価するための実験の代表的な概略図を示す。図２８Ｂは、ＯＶＡロード脾細胞ＡＰＣワクチン接種に応答して生じた、Ｂ９−２３チャレンジによって誘導されたＩＦＮ−γ陽性ＣＤ８＋  Ｔ細胞のレベルを示す。図２８Ｃは、Ｅ７ロード脾細胞ＡＰＣワクチン接種に応答して生じた、Ｅ７チャレンジによって誘導されたＩＦＮ−γ陽性ＣＤ８＋  Ｔ細胞のレベルを示す。
【００９３】
【図２９】図２９Ａは、ＨＰＶ関連腫瘍に対する治療的処置のためにＡＰＣとしての機能を果たすＳＱＺロード脾細胞の能力を決定するための実験における経時的な腫瘍体積を示す。図２９Ｂは、ＨＰＶ関連腫瘍に対する脾細胞ＡＰＣの治療的処置からの経時的な対応する生存データを示す。
【００９４】
【図３０】図３０は、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＳＬＰによるＳＱＺロードＰＢＭＣＡＰＣへのｉｎ  ｖｉｔｒｏの抗原特異的応答としての、Ｅ７レスポンダーによるＩＦＮ−γ分泌を示す。
【発明を実施するための形態】
【００９５】
発明の詳細な説明
一部の態様では、本発明は、ＨＰＶ関連疾患を処置および予防する、ならびに／またはＨＰＶ関連疾患を有する個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、改変免疫細胞を含む組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、細胞内にＨＰＶ抗原、および細胞内にアジュバントを含む、方法を提供する。一部の態様では、本発明は、ＨＰＶ関連疾患を処置および予防する、ならびに／またはＨＰＶ関連疾患を有する個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、細胞内にＨＰＶ抗原、および細胞内にアジュバントを含み、改変免疫細胞は、最初に、インプット細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄に通すステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプット細胞の直径の関数であり、それによって、抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きなインプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；ならびに、次いで、ＨＰＶ抗原およびアジュバントが摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット細胞とＨＰＶ抗原およびアジュバントとをインキュベートし、それによって、改変免疫細胞を作出するステップによって調製される、方法を提供する。本開示のある特定の態様は、改変免疫細胞を含む組成物を作出するための方法であって、免疫細胞を、狭窄を通過させ、狭窄が細胞を変形させ、それによって、ＨＰＶ抗原および／またはアジュバントが改変される免疫細胞に入るように、細胞の摂動を引き起こす、方法に関する。
【００９６】
一部の態様では、本発明は、ＨＰＶ関連疾患を処置および予防する、ならびに／またはＨＰＶ関連疾患を有する個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、改変免疫細胞を含む組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、細胞内にＨＰＶ抗原を含む、方法を提供する。一部の態様では、本発明は、ＨＰＶ関連疾患を処置および予防する、ならびに／またはＨＰＶ関連疾患を有する個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、細胞内にＨＰＶ抗原を含み、改変免疫細胞は、最初に、インプット細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄に通すステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプット細胞の直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；および、次いで、ＨＰＶ抗原が摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット細胞とＨＰＶ抗原とをインキュベートし、それによって、改変免疫細胞を作出するステップによって調製される、方法を提供する。本開示のある特定の態様は、改変免疫細胞を含む組成物を作出するための方法であって、免疫細胞を、狭窄に通過させ、狭窄が細胞を変形させ、それによって、ＨＰＶ抗原が改変される免疫細胞に入るように、細胞の摂動を引き起こす、方法に関する。一部のさらなる実施形態では、ＨＰＶ関連疾患を処置および予防する、ならびに／またはＨＰＶ関連疾患を有する個体における免疫応答をモジュレートするための方法は、アジュバントを個体に投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、改変免疫細胞の組成物は、アジュバント（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド（ＣｐＧ  ＯＤＮ）またはＩＦＮαをさらに含む。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、ＣｐＧ  ＯＤＮなどのアジュバントを細胞内にさらに含む。
【００９７】
一般技法
本明細書に記載または参照される技法および手順は、一般に、十分に理解されており、例えば、Molecular  Cloning:  A  Laboratory  Manual  (Sambrook  et  al.,  4th  ed.,  Cold  Spring  Harbor  Laboratory  Press,  Cold  Spring  Harbor,  N.Y.,  2012)；Current  Protocols  in  Molecular  Biology  (F.M.  Ausubel,  et  al.  eds.,  2003)；the  series  Methods  in  Enzymology  (Academic  Press,  Inc.)；PCR  2:  A  Practical  Approach  (M.J.  MacPherson,  B.D.  Hames  and  G.R.  Taylor  eds.,  1995)；Antibodies,  A  Laboratory  Manual  (Harlow  and  Lane,  eds.,  1988)；Culture  of  Animal  Cells:  A  Manual  of  Basic  Technique  and  Specialized  Applications  (R.I.  Freshney,  6th  ed.,  J.  Wiley  and  Sons,  2010)；Oligonucleotide  Synthesis  (M.J.  Gait,  ed.,  1984)；Methods  in  Molecular  Biology,  Humana  Press;  Cell  Biology:  A  Laboratory  Notebook  (J.E.  Cellis,  ed.,  Academic  Press,  1998)；Introduction  to  Cell  and  Tissue  Culture  (J.P.  Mather  and  P.E.  Roberts,  Plenum  Press,  1998)；Cell  and  Tissue  Culture:  Laboratory  Procedures  (A.  Doyle,  J.B.  Griffiths,  and  D.G.  Newell,  eds.,  J.  Wiley  and  Sons,  1993-8)；Handbook  of  Experimental  Immunology  (D.M.  Weir  and  C.C.  Blackwell,  eds.,  1996)；Gene  Transfer  Vectors  for  Mammalian  Cells  (J.M.  Miller  and  M.P.  Calos,  eds.,  1987)；PCR:  The  Polymerase  Chain  Reaction,  (Mullis  et  al.,  eds.,  1994)；Current  Protocols  in  Immunology  (J.E.  Coligan  et  al.,  eds.,  1991)；Short  Protocols  in  Molecular  Biology  (Ausubel  et  al.,  eds.,  J.  Wiley  and  Sons,  2002)；Immunobiology  (C.A.  Janeway  et  al.,  2004)；Antibodies  (P.  Finch,  1997)；Antibodies:  A  Practical  Approach  (D.  Catty.,  ed.,  IRL  Press,  1988-1989)；Monoclonal  Antibodies:  A  Practical  Approach  (P.  Shepherd  and  C.  Dean,  eds.,  Oxford  University  Press,  2000)；Using  Antibodies:  A  Laboratory  Manual  (E.  Harlow  and  D.  Lane,  Cold  Spring  Harbor  Laboratory  Press,  1999)；The  Antibodies  (M.  Zanetti  and  J.  D.  Capra,  eds.,  Harwood  Academic  Publishers,  1995)；およびCancer:  Principles  and  Practice  of  Oncology  (V.T.  DeVita  et  al.,  eds.,  J.B.  Lippincott  Company,  2011)に記載されている広く利用されている方法論などの、従来の方法論を使用して、当業者によって一般的に用いられている。
【００９８】
定義
本明細書を解釈する目的のために、以下の定義が適用され、適切である場合は常に、単数で使用されている用語は、複数も含み、逆もまた同様である。下記に説明する任意の定義が、参照により本明細書に組み込まれる任意の文書と矛盾する場合、説明する定義が優先されるものとする。
【００９９】
本明細書で使用される場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、他に指示されない限り、複数の参照を含む。
【０１００】
本明細書に記載の本発明の態様および実施形態は、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」および「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」の態様および実施形態を含むことが理解される。
【０１０１】
本明細書で使用される「約」という用語は、本技術分野における当業者に容易に公知である、それぞれの値についての通常の誤差範囲を指す。本明細書における「約」の値またはパラメーターへの言及は、その値またはパラメーターそれ自体を対象にする実施形態を含む（および記載する）。
【０１０２】
本明細書で使用される場合、「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、有益なまたは所望の臨床結果を得るためのアプローチである。本明細書で使用される「処置」は、ヒトを含む哺乳動物における疾患のための治療的な任意の投与または適用を網羅する。本発明の目的のために、有益なまたは所望の臨床結果としては、限定されるものではないが、１つまたは複数の症状の緩和、疾患の程度の減退、疾患の拡大（例えば、転移、例えば、肺またはリンパ節への転移）を予防または遅延させること、疾患の再発を予防または遅延させること、疾患進行を遅延または緩慢化すること、疾患状態の好転、疾患または疾患の進行を阻害すること、疾患もしくはその進行を阻害または緩慢化すること、その発生を抑止すること、ならびに寛解（部分的または完全に関係なく）のうちのいずれか１つまたは複数が挙げられる。増殖性疾患の病理学的帰結の低下も「処置」に包含される。本発明の方法は、これらの処置の態様のうちのいずれか１つまたは複数を企図する。
【０１０３】
がんの文脈において、「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語は、がん細胞の成長を阻害すること、がん細胞の複製を阻害すること、全体的な腫瘍負荷を軽減すること、および疾患と関連する１つもしくは複数の症状を好転させることのうちのいずれか、またはすべてを含む。
【０１０４】
本明細書で使用される「ポア」という用語は、限定なく、材料内の孔、裂け目、空洞、開口部、割れ目、間隙または穿孔部を含む、開口を指す。一部の例では、（示される場合）用語は、本開示の表面内のポアを指す。他の例では、（示される場合）ポアは、細胞膜におけるポアを指すことができる。
【０１０５】
本明細書で使用される「膜」という用語は、ポアを含有する選択的な障壁またはシートを指す。用語は、境界または裏打ちとしての機能を果たす柔軟なシート様構造を含む。一部の例では、用語は、ポアを含有する表面またはフィルターを指す。この用語は、「細胞膜」という用語とは区別される。
【０１０６】
本明細書で使用される「フィルター」という用語は、ポアの選択的通過を可能にする多孔性物品を指す。一部の例では、用語は、ポアを含有する表面または膜を指す。
【０１０７】
本明細書で使用される「不均質」という用語は、構造または組成において、混ぜ合わされるか、または均一ではないものを指す。一部の例では、用語は、所与の表面内で多様なサイズ、形状または分布を有するポアを指す。
【０１０８】
本明細書で使用される「均質」という用語は、全体にわたって、構造または組成が一貫しているか、または均一であるものを指す。一部の例では、用語は、所与の表面内で一貫したサイズ、形状または分布を有するポアを指す。
【０１０９】
本明細書で使用される「同種」という用語は、同じ生物体に由来する分子を指す。一部の例では、用語は、所与の生物体内で通常見出されるか、または発現する、核酸またはタンパク質を指す。
【０１１０】
コード配列および制御配列などの核酸配列に関連する場合の「異種」という用語は、通常、互いに接合されない、および／または通常、特定の細胞と関連しない配列を表す。そのため、核酸構築物またはベクターの「異種」領域は、本来は、他の分子との関連で見出されない別の核酸分子内の、またはそれらに結合した核酸のセグメントである。例えば、核酸構築物の異種領域は、本来は、コード配列との関連で見出されない配列に隣接するコード配列を含み得る。異種コード配列の別の例は、コード配列それ自体が、本来は見出されない構築物（例えば、生来の遺伝子（native  gene）と異なるコドンを有する合成配列）である。同様に、細胞に通常存在しない構築物で形質転換された細胞は、本発明の目的のために、異種とみなされるはずである。対立遺伝子変形形態または天然に存在する変異事象は、本明細書で使用される場合、異種ＤＮＡを生じさせない。
【０１１１】
ペプチド配列およびポリペプチド配列などのアミノ酸配列に関連する場合の「異種」という用語は、通常、互いに接合されない、および／または通常、特定の細胞と関連しない配列を表す。そのため、ペプチド配列の「異種」領域は、本来は、他の分子との関連で見出されない別のアミノ酸分子内の、またはそれらに結合したアミノ酸のセグメントである。例えば、ペプチド構築物の異種領域は、本来は、ペプチドのアミノ酸配列との関連で見出されない配列に隣接するペプチドのアミノ酸配列を含み得る。異種ペプチド配列の別の例は、ペプチド配列それ自体が、本来は見出されない構築物（例えば、生来の遺伝子からコードされる異なるアミノ酸を有する合成配列）である。同様に、細胞に通常存在しないアミノ酸構築物を発現するベクターで形質転換された細胞は、本発明の目的のために、異種とみなされるはずである。対立遺伝子変形形態または天然に存在する変異事象は、本明細書で使用される場合、異種ペプチドを生じさせない。
【０１１２】
本明細書で使用される場合、「阻害する」という用語は、特定の標的の存在または活性を、遮断する、低下させる、除去する、または他の方法で拮抗させる作用を指し得る。阻害は、部分的な阻害または完全な阻害を指し得る。例えば、免疫応答を阻害するとは、免疫応答の遮断、低下、除去、または任意の他の拮抗をもたらす任意の作用を指し得る。他の例では、核酸の発現の阻害としては、限定されるものではないが、核酸の転写の低下、ｍＲＮＡの存在量の低下（例えば、ｍＲＮＡ転写をサイレンシングする）、ｍＲＮＡの分解、ｍＲＮＡの翻訳の阻害などが挙げられ得る。
【０１１３】
本明細書で使用される場合、「抑制する」という用語は、特定の標的の存在または活性を、減少させる、低下させる、妨げる、制限する、軽減する、または他の方法で減退させる作用を指し得る。抑制は、部分的な抑制または完全な抑制を指し得る。例えば、免疫応答を抑制するとは、免疫応答を減少させること、低下させること、妨げること、制限すること、軽減すること、または他の方法で減退させることをもたらす任意の作用を指し得る。他の例では、核酸の発現の抑制としては、限定されるものではないが、核酸の転写の低下、ｍＲＮＡの存在量の低下（例えば、ｍＲＮＡ転写をサイレンシングする）、ｍＲＮＡの分解、ｍＲＮＡの翻訳の阻害などが挙げられ得る。
【０１１４】
本明細書で使用される場合、「増強する」という用語は、特定の標的の存在または活性を、改善する、ブーストする、高める、または他の方法で増加させる作用を指し得る。例えば、免疫応答を増強するとは、免疫応答を改善すること、ブーストすること、高めること、または他の方法で増加させることをもたらす任意の作用を指し得る。例示的な一例では、免疫応答を増強するとは、免疫応答を改善する、ブーストする、高める、もしくは他の方法で増加させるために、抗原および／またはアジュバントを用いることを指し得る。他の例では、核酸の発現を増強することとしては、限定されるものではないが、核酸の転写の増加、ｍＲＮＡの存在量の増加（例えば、ｍＲＮＡ転写を増加させる）、ｍＲＮＡの分解の減少、ｍＲＮＡの翻訳の増加などが挙げられ得る。
【０１１５】
本明細書で使用される場合、「モジュレートする」という用語は、特定の標的の存在または活性を、変化させる、変える、変動させる、または他の方法で改変する作用を指し得る。例えば、免疫応答をモジュレートするとは、免疫応答を変化させること、変えること、変動させること、または他の方法で改変することをもたらす任意の作用を指し得る。一部の例では、「モジュレートする」は、特定の標的の存在または活性を増強することを指す。一部の例では、「モジュレートする」は、特定の標的の存在または活性を抑制することを指す。他の例では、核酸の発現をモジュレートすることとしては、限定されるものではないが、核酸の転写における変化、ｍＲＮＡの存在量における変化（例えば、ｍＲＮＡ転写を増加させる）、ｍＲＮＡの分解における対応する変化、ｍＲＮＡの翻訳における変化などが挙げられ得る。
【０１１６】
本明細書で使用される場合、「誘導する」という用語は、開始する、促す、刺激する、確立する、または他の方法で結果を生成する作用を指し得る。例えば、免疫応答を誘導するとは、所望の免疫応答を開始すること、促すこと、刺激すること、確立すること、または他の方法で生成することをもたらす任意の作用を指し得る。他の例では、核酸の発現を誘導することとしては、限定されるものではないが、核酸の転写の開始、ｍＲＮＡの翻訳の開始などが挙げられ得る。
【０１１７】
本明細書で使用される場合、「末梢血単核細胞」または「ＰＢＭＣ」は、丸形の核を有する血液細胞の異種集団を指す。ＰＢＭＣの集団において見出され得る細胞の例としては、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞（ＮＫＴ細胞およびＣＩＫ細胞を含む）などのリンパ球、ならびにマクロファージおよび樹状細胞などの単球が挙げられる。本明細書で使用される「複数のＰＢＭＣ」は、血液細胞の少なくとも２種類の細胞を含むＰＢＭＣの調製物を指す。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、または樹状細胞のうちの２つまたはそれよりも多くを含む。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、または樹状細胞のうちの３つまたはそれよりも多くを含む。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、または樹状細胞のうちの４つまたはそれよりも多くを含む。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、および樹状細胞を含む。
【０１１８】
ＰＢＭＣは、当技術分野において公知の手段によって単離することができる。例えば、ＰＢＭＣは、他の血液細胞と比較して、ＰＢＭＣの密度に基づいて、個体の末梢血から得ることができる。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、Ｆｉｃｏｌｌ（例えば、ｆｉｃｏｌｌ勾配）を使用して、個体の末梢血から得られる。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、ＥＬＵＴＲＡ（登録商標）細胞分離システムを使用して、個体の末梢血から得られる。
【０１１９】
一部の実施形態では、ＰＢＭＣの集団は、個体から単離される。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、集団が、特定の個体に由来し、本明細書に記載の方法のいずれかによって操作され、特定の個体に戻される、ＰＢＭＣの自家集団である。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、集団が、１つの個体に由来し、本明細書に記載の方法のいずれかによって操作され、第２の個体に投与される、ＰＢＭＣの同種異系集団である。
【０１２０】
一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、ＰＢＭＣの再構成調製物である。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、ＰＢＭＣの集団において典型的に見出される細胞を混合することによって、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、または単球のうちの２つまたはそれよりも多くの集団を混合することによって、作出され得る。
【０１２１】
本明細書で使用される「ポリヌクレオチド」または「核酸」という用語は、リボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドのいずれかの、任意の長さのポリマー形態のヌクレオチドを指す。そのため、この用語は、限定されるものではないが、一本鎖、二本鎖または多重鎖のＤＮＡまたはＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッド、あるいはプリンおよびピリミジン塩基、または他の天然の、化学的もしくは生化学的に修飾された、非天然もしくは誘導体化されたヌクレオチド塩基を含むポリマーを含む。ポリヌクレオチドの主鎖は、糖およびリン酸基（ＲＮＡまたはＤＮＡにおいて典型的に見出され得る通り）、または修飾もしくは置換された糖もしくはリン酸基を含むことができる。あるいは、ポリヌクレオチドの主鎖は、ホスホルアミデートおよびホスホロチオエートなどの合成サブユニットのポリマーを含むことができ、そのため、オリゴデオキシヌクレオシドホスホルアミデート（Ｐ−ＮＨ２）、混合ホスホロチオエート−ホスホジエステルオリゴマー、または混合ホスホルアミデート−ホスホジエステルオリゴマーであり得る。加えて、二本鎖ポリヌクレオチドは、相補鎖を合成すること、および適切な条件下で鎖をアニーリングすることによる、またはＤＮＡポリメラーゼを適切なプライマーと共に使用して相補鎖をｄｅ  ｎｏｖｏで合成することによるいずれかで、化学合成の一本鎖ポリヌクレオチド生成物から得ることができる。
【０１２２】
「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指すために互換可能に使用され、最小の長さに限定されない。アミノ酸残基のそのようなポリマーは、天然または非天然のアミノ酸残基を含有し得、限定されるものではないが、ペプチド、オリゴペプチド、アミノ酸残基の二量体、三量体および多量体が挙げられる。全長タンパク質およびその断片は両方とも定義により包含される。用語は、ポリペプチドの発現後修飾、例えば、グリコシル化、シアリル化、アセチル化、リン酸化なども含む。さらにまた、本発明の目的のために、「ポリペプチド」は、タンパク質が所望の活性を維持する限り、天然配列に対する欠失、付加および置換（一般に、本来は、保存的）などの修飾を含むタンパク質を指す。これらの修飾は、部位特異的変異誘発によるような計画的なものであってもよく、またはタンパク質を産生する宿主の変異もしくはＰＣＲ増幅に起因するエラーによるなど偶発的なものであってもよい。
【０１２３】
本明細書で使用される場合、「アジュバント」という用語は、免疫応答をモジュレートおよび／または発生させる物質を指す。一般に、アジュバントは、抗原と併せて投与されて、抗原単独と比較して抗原に対する免疫応答の増強をもたらす。さまざまなアジュバントが本明細書に記載される。
【０１２４】
「ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド」および「ＣｐＧ  ＯＤＮ」という用語は、本明細書において、ホスフェートによって分離されるシトシンおよびグアニンのジヌクレオチド（本明細書において「ＣｐＧ」ジヌクレオチドまたは「ＣｐＧ」とも称する）を含有する１０〜３０ヌクレオチド長のＤＮＡ分子を指す。本開示のＣｐＧ  ＯＤＮは、少なくとも１つの非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含有する。すなわち、ＣｐＧジヌクレオチド中のシトシンは、メチル化されない（すなわち、５−メチルシトシンではない）。ＣｐＧ  ＯＤＮは、部分的または完全なホスホロチオエート（ＰＳ）主鎖を有していてもよい。
【０１２５】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」または「薬学的に適合する」は、生物学的、または別段望ましくないものではない材料を意味し、例えば、材料は、任意の有意な望ましくない生物学的効果を引き起こすまたはそれが含有される組成物の他の構成要素のいずれかと有害な形式で相互作用することなく、患者に投与される医薬組成物に組み込まれ得る。薬学的に許容される担体または賦形剤は、好ましくは、毒性学的および製造試験の必要な基準を満たしており、ならびに／または米国食品医薬品局によって作られた不活性成分ガイド（Inactive  Ingredient  Guide）に含まれる。
【０１２６】
本明細書に記載の任意の構造的および機能的特徴について、これらの特徴を決定する方法は、当技術分野において公知である。
マイクロ流体システムおよびその構成要素
細胞変形狭窄を提供するためのマイクロ流体チャネル
一部の態様では、本発明は、ＨＰＶ関連疾患を処置および予防する、ならびに／またはＨＰＶ関連疾患を有する個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、細胞内にＨＰＶ抗原、および細胞内にアジュバントを含み、改変免疫細胞は、最初に、インプット細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄に通すステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプット細胞の直径の関数であり、それによって、抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きなインプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；ならびに、次いで、ＨＰＶ抗原およびアジュバントが摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット細胞とＨＰＶ抗原およびアジュバントとをインキュベートし、それによって、改変免疫細胞を作出するステップによって調製される、方法を提供する。一部の実施形態では、狭窄は、マイクロ流体チャネル内に含有される。一部の実施形態では、多数の狭窄は、マイクロ流体チャネル内に、並列および／または直列で配置することができる。一部の実施形態では、インプット細胞に、それが狭窄を通過するときに変形力が印加される。本明細書に開示の方法における使用のための細胞変形狭窄を含有する例示的なマイクロ流体チャネルは、ＷＯ２０１３０５９３４３に記載されている。本明細書に開示の方法における使用のための例示的なポアを有する表面は、ＷＯ２０１７０４１０５０に記載されている。
【０１２７】
一部の実施形態では、マイクロ流体チャネルは、管腔を含み、緩衝液に懸濁された免疫細胞が通過することができるように構成され、マイクロ流体チャネルは、狭窄を含む。マイクロ流体チャネルは、ケイ素、金属（例えば、ステンレス鋼）、プラスチック（例えば、ポリスチレン）、セラミック、ガラス、結晶性基材、アモルファス基材、またはポリマー（例えば、ポリ−メチルメタクリレート（ＰＭＭＡ）、ＰＤＭＳ、環状オレフィンコポリマー（ＣＯＣ）など）を含む、いくつかの材料のうちのいずれか１つで作られ得る。マイクロ流体チャネルの製作は、ドライエッチング、ウェットエッチング、フォトリソグラフィー、射出成型、レーザーアブレーションまたはＳＵ−８マスクを含む、当技術分野において公知の任意の方法によって行うことができる。
【０１２８】
一部の実施形態では、マイクロ流体チャネル内の狭窄は、入口部分、中心点および出口部分を含む。一部の実施形態では、マイクロ流体チャネル内の狭窄の長さ、深さおよび幅は、変動させることができる。一部の実施形態では、マイクロ流体チャネル内の狭窄の直径は、免疫細胞の直径の関数である。一部の実施形態では、マイクロ流体チャネル内の狭窄の直径は、免疫細胞の直径の約２０％〜約９９％である。一部の実施形態では、狭窄のサイズは、免疫細胞の直径の約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９９％である。一部の実施形態では、狭窄のサイズは、免疫細胞の最小断面距離の約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９９％である。一部の実施形態では、チャネルは、約２μｍ〜約１０μｍの狭窄の幅、またはそれらの間の任意の幅もしくは幅の範囲を含む。例えば、狭窄の幅は、約２μｍ、約３μｍ、約４μｍ、約５μｍ、約６μｍ、または約７μｍのうちのいずれか１つであり得る。一部の実施形態では、チャネルは、約１０μｍの狭窄の長さ、および約４μｍの狭窄の幅を含む。チャネルの断面、入口部分、中心点および出口部分も変動させることができる。例えば、断面は、円形、楕円形、細長いスリット、正方形、六角形、または三角形の形状であり得る。入口部分は、狭窄の角度を規定し、狭窄の角度は、チャネルの目詰まりを低下させるために最適化され、免疫細胞への化合物の増強された送達のために最適化される。出口部分の角度も同様に変動させることができる。例えば、出口部分の角度は、非層流をもたらし得る乱流の可能性を低下させるために構成される。一部の実施形態では、入口部分および／または出口部分の壁は、直線状である。他の実施形態では、入口部分および／または出口部分の壁は、湾曲している。チャネルを通る流速も調整することができる。一部の実施形態では、チャネルを通る流速は、約０．００１ｍＬ／ｃｍ２／秒〜約１００Ｌ／ｃｍ２／秒、またはそれらの間の任意の速度もしくは速度の範囲である。
【０１２９】
免疫細胞が複数のＰＢＭＣである、本明細書に記載の方法または組成物のいずれか１つによる一部の実施形態では、狭窄の直径は、ＰＢＭＣの直径の関数、例えば、複数のＰＢＭＣの平均直径、または複数のＰＢＭＣ内の亜集団の平均直径である。一部の実施形態では、細胞の直径は、細胞（例えば、複数のＰＢＭＣ内の細胞）の最小断面距離によって測定される。
【０１３０】
免疫細胞が複数のＰＢＭＣである、本明細書に記載の方法または組成物のいずれか１つによる一部の実施形態では、狭窄の直径は、複数のインプットＰＢＭＣの平均直径の約１０％〜約９９％である。一部の実施形態では、狭窄の直径は、複数のインプットＰＢＭＣの平均直径の約１０％〜約９０％、約１０％〜約８０％、約１０％〜約７０％、約２０％〜約６０％、約４０％〜約６０％、または約３０％〜約４５％のうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、複数のインプットＰＢＭＣの平均直径の約１０％〜約２０％、約２０％〜約３０％、約３０％〜約４０％、約４０％〜約５０％、約５０％〜約６０％、約６０％〜約７０％、約７０％〜約８０％、約８０％〜約９０％、または約９０％〜約９９％のうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、複数のインプットＰＢＭＣの平均直径の約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％のうちのいずれか１つである。
【０１３１】
免疫細胞が複数のＰＢＭＣである、本明細書に記載の方法または組成物のいずれか１つによる一部の実施形態では、狭窄の直径は、複数のインプットＰＢＭＣ内の最小直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約１０％〜約９９％である。一部の実施形態では、狭窄の直径は、複数のインプットＰＢＭＣ内の最小直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約１０％〜約９０％、約１０％〜約８０％、約１０％〜約７０％、約２０％〜約６０％、約４０％〜約６０％、約３０％〜約４５％、約５０％〜約９９％、約５０％〜約９０％、約５０％〜約８０％、約５０％〜約７０％、約６０％〜約９０％、約６０％〜約８０％、または約６０％〜約７０％のうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、複数のインプットＰＢＭＣ内の最小直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約１０％〜約２０％、約２０％〜約３０％、約３０％〜約４０％、約４０％〜約５０％、約５０％〜約６０％、約６０％〜約７０％、約７０％〜約８０％、約８０％〜約９０％、または約９０％〜約９９％のうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、複数のインプットＰＢＭＣ内の最小直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％のうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣ内の最小平均直径を有する細胞の亜集団は、リンパ球の集団であり、リンパ球の集団の直径は、約６μｍ〜約１０μｍである。一部の実施形態では、リンパ球の集団の平均直径は、約７μｍである。一部の実施形態では、リンパ球の集団は、Ｔ細胞の集団である。一部の実施形態では、リンパ球は、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣ内の最小平均直径を有する細胞の亜集団は、Ｔ細胞である。
【０１３２】
免疫細胞が複数のＰＢＭＣである、本明細書に記載の方法または組成物のいずれか１つによる一部の実施形態では、狭窄の直径は、複数のインプットＰＢＭＣ内の最大直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約１０％〜約９９％である。一部の実施形態では、狭窄の直径は、複数のインプットＰＢＭＣ内の最大直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約１０％〜約９０％、約１０％〜約８０％、約１０％〜約７０％、約２０％〜約６０％、約４０％〜約６０％、約３０％〜約４５％、約１５％〜約３０％、約１５％〜約２０％、約２０％〜約２５％、約２５％〜約３０％、約２０％〜約３０％、約３０％〜約７０％、または約３０％〜約６０％のうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、複数のインプットＰＢＭＣ内の最大直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約５％〜約１０％、約１０％〜約２０％、約２０％〜約３０％、約３０％〜約４０％、約４０％〜約５０％、約５０％〜約６０％、約６０％〜約７０％、約７０％〜約８０％、約８０％〜約９０％、または約９０％〜約９９％のうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、複数のインプットＰＢＭＣ内の最大直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％のうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣ内の最大平均直径を有する細胞の亜集団は、単球の集団であり、単球の集団の直径は、約１５μｍ〜約２５μｍである。一部の実施形態では、単球の集団の平均直径は、約２０μｍである。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣ内の最大平均直径を有する細胞の亜集団は、単球である。
【０１３３】
本明細書に記載の方法または組成物のいずれか１つによる一部の実施形態では、狭窄の直径は、約３μｍ〜約１５μｍである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、約３μｍ〜約１０μｍである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、約４μｍ〜約１０μｍである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、約４．２μｍ〜約６μｍである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、約４．２μｍ〜約４．８μｍである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、約２μｍ〜約１４μｍ、約４μｍ〜約１２μｍ、約６μｍ〜約９μｍ、約４μｍ〜約６μｍ、約４μｍ〜約５μｍ、約３．５μｍ〜約７μｍ、約３．５μｍ〜約６．３μｍ、約３．５μｍ〜約５．６μｍ、約３．５μｍ〜約４．９μｍ、約４．２μｍ〜約６．３μｍ、約４．２μｍ〜約５．６μｍ、または約４．２μｍ〜約４．９μｍのうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、約２μｍ、２．５μｍ、３μｍ、３．５μｍ、４μｍ、４．５μｍ、５μｍ、５．５μｍ、６μｍ、６．５μｍ、７μｍ、７．５μｍ、８μｍ、８．５μｍ、９μｍ、９．５μｍ、１０μｍ、１０．５μｍ、１１μｍ、１１．５μｍ、１２μｍ、１２．５μｍ、１３μｍ、１３．５μｍ、１４μｍ、１４．５μｍ、または１５μｍのうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、約４．０μｍ、４．１μｍ、４．２μｍ、４．３μｍ、４．４μｍ、４．５μｍ、４．６μｍ、４．７μｍ、４．８μｍ、４．９μｍ、または５．０μｍのうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、約４．５μｍである。
【０１３４】
本明細書に記載の方法または組成物のいずれか１つによる一部の実施形態では、インプット免疫細胞は、約０．００１ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分の流速、またはそれらの間の任意の速度もしくは速度の範囲で、狭窄を通過する。一部の実施形態では、流速は、約０．００１ｍＬ／分〜約１７５ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分〜約１５０ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分〜約１２５ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分〜約１００ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分〜約５０ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分〜約２５ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分〜約１０ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分〜約７．５ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分〜約５．０ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分〜約２．５ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分〜約１ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分〜約０．１ｍＬ／分、または約０．００１ｍＬ／分〜約０．０１ｍＬ／分である。一部の実施形態では、流速は、約０．００１ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分、約０．０１ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分、約０．１ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分、約１ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分、約１０ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分、約５０ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分、約７５ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分、約１００ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分、約１５０ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分、約０．５ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分、約１ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分、約２．５ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分、約５ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分、約７．５ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分、約１０ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分、約２５ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分、または約１７５ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分である。一部の実施形態では、インプット免疫細胞は、約１０ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分の流速で、狭窄を通過する。一部の実施形態では、インプット免疫細胞は、約１００ｍＬ／分の流速で、狭窄を通過する。
【０１３５】
本明細書に記載の方法または組成物のいずれか１つによる一部の実施形態では、狭窄は、当技術分野において公知の任意の形状、例えば、３次元形状または２次元形状を有することができる。狭窄の断面形状などの２次元形状は、限定なく、円形、楕円形、丸形、正方形、星形、三角形、多角形、五角形、六角形、七角形、または八角形であり得る。狭窄の３次元形状は、限定なく、円柱状、円錐状または立方体状であり得る。一部の実施形態では、狭窄の断面形状は、長方形である。一部の実施形態では、狭窄の断面形状は、スリットである。一部の実施形態では、狭窄の断面形状は、約４μｍ〜約１０μｍの幅、および／または約１μｍ〜約２００μｍの深さを含むスリットである。一部の実施形態では、狭窄の断面形状は、約３μｍ〜約６μｍの幅、および／または約２０μｍ〜約１２０μｍの深さを含むスリットである。一部の実施形態では、狭窄の断面形状は、約４．２μｍ〜約６μｍの幅、および／または約２０μｍ〜約１２０μｍの深さを含むスリットである。一部の実施形態では、狭窄の断面形状は、約４．２μｍ〜約６μｍの幅、および／または約４０μｍ〜約１２０μｍの深さを含むスリットである。一部の実施形態では、狭窄の断面形状は、約４．２μｍ〜約６μｍの幅、および／または約２０μｍ〜約８０μｍの深さを含むスリットである。一部の実施形態では、狭窄の断面形状は、約４．５μｍの幅、および／または約８０μｍの深さを含むスリットである。一部の実施形態では、スリットは、約５μｍ〜約５０μｍの長さを含む。一部の実施形態では、スリットは、約１０μｍ〜約３０μｍの長さを含む。一部の実施形態では、スリットは、約２μｍ〜約５０μｍの長さを含む。一部の実施形態では、スリットは、約２μｍ〜約５μｍ、約５μｍ〜約１０μｍ、約１０μｍ〜約１５μｍ、約１５μｍ〜約２０μｍ、約２０μｍ〜約２５μｍ、約２５μｍ〜約３０μｍ、約３０μｍ〜約３５μｍ、約３５μｍ〜約４０μｍ、約４０μｍ〜約４５μｍ、または約４５μｍ〜約５０μｍのうちのいずれか１つの長さを含む。一部の実施形態では、スリットは、約１０μｍの長さを含む。
【０１３６】
細胞変形狭窄を提供するためのポアを有する表面
一部の態様では、本発明は、ＨＰＶ関連疾患を処置および予防する、ならびに／またはＨＰＶ関連疾患を有する個体における免疫応答を増強するための方法であって、方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、細胞内にＨＰＶ抗原およびアジュバントを含み、改変免疫細胞は、最初に、インプット細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄に通すステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプット細胞の直径の関数であり、それによって、抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きなインプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；ならびに、次いで、ＨＰＶ抗原およびアジュバントが摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット細胞とＨＰＶ抗原およびアジュバントとをインキュベートし、それによって、改変免疫細胞を作出するステップによって調製される、方法を提供する。一部の実施形態では、インプット細胞に、それが狭窄を通過するときに変形力が印加される。一部の実施形態では、狭窄は、ポアであるか、またはポア内に含有される。一部の実施形態では、ポアは、表面に含有される。本明細書に開示の方法における使用のためのポアを有する例示的な表面は、ＷＯ２０１７０４１０５０に記載されている。
【０１３７】
本明細書に開示の表面は、いくつかの材料のいずれか１つで作られ、いくつかの形態のいずれか１つをとることができる。一部の実施形態では、表面はフィルターである。一部の実施形態では、表面は膜である。一部の実施形態では、フィルターは、タンジェンシャルフローフィルターである。一部の実施形態では、表面は、スポンジまたはスポンジ様のマトリックスである。一部の実施形態では、表面はマトリックスである。
【０１３８】
一部の実施形態では、表面は、蛇行状のパス表面である。一部の実施形態では、蛇行状のパス表面は、酢酸セルロースを含む。一部の実施形態では、表面は、限定なく、合成または天然ポリマー、ポリカーボネート、ケイ素、ガラス、金属、合金、硝酸セルロース、銀、酢酸セルロース、ナイロン、ポリエステル、ポリエーテルスルホン、ポリアクリロニトリル（ＰＡＮ）、ポリプロピレン、ＰＶＤＦ、ポリテトラフルオロエチレン、混合セルロースエステル、ポーセレン、およびセラミックから選択される材料を含む。
【０１３９】
本明細書に開示の表面は、当技術分野で公知の任意の形状、例えば、３次元形状を有することができる。表面の２次元形状は、限定なく、円形、楕円形、丸形、正方形、星形、三角形、多角形、五角形、六角形、七角形、または八角形であり得る。一部の実施形態では、表面は、丸形の形状である。一部の実施形態では、表面３次元形状は、円柱状、円錐状、または立方体状である。
【０１４０】
表面は、さまざまな断面の幅および厚さを有することができる。一部の実施形態では、表面の断面の幅は、約１ｍｍ〜約１ｍ、またはそれらの間の任意の断面の幅もしくは断面の幅の範囲である。一部の実施形態では、表面は、規定された厚さを有する。一部の実施形態では、表面の厚さは均一である。一部の実施形態では、表面の厚さは可変である。例えば、一部の実施形態では、表面の部分は、表面の他の部分よりも厚いか、または薄い。一部の実施形態では、表面の厚さは、約１％〜約９０％、またはそれらの間の任意のパーセンテージもしくはパーセンテージの範囲で変動する。一部の実施形態では、表面は、約０．０１μｍ〜約５ｍｍの厚さ、またはそれらの間の任意の厚さもしくは厚さの範囲である。
【０１４１】
一部の実施形態では、狭窄は、ポアであるか、またはポア内に含有される。ポアの断面の幅は、処置される免疫細胞の種類に関係する。一部の実施形態では、ポアのサイズは、免疫細胞、または処置される免疫細胞のクラスターの直径の関数である。一部の実施形態では、ポアのサイズは、ポアを通過する際に免疫細胞が摂動されるようなものである。一部の実施形態では、ポアのサイズは、免疫細胞の直径未満である。一部の実施形態では、ポアのサイズは、免疫細胞の直径の約１０％〜約９９％である。一部の実施形態では、ポアのサイズは、免疫細胞の直径の約１０％、約１５％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９９％である。最適なポアのサイズ、またはポアの断面の幅は、印加および／または免疫細胞の種類に基づいて、変動させることができる。一部の実施形態では、ポアのサイズは、約２μｍ〜約１４μｍである。一部の実施形態では、ポアのサイズは、約２μｍ、約３μｍ、約４μｍ、約５μｍ、約８μｍ、約１０μｍ、約１２μｍ、または約１４μｍである。一部の実施形態では、断面の幅は、約２μｍ〜約１４μｍである。一部の実施形態では、ポアの断面は、約２μｍ、約３μｍ、約４μｍ、約５μｍ、約８μｍ、約１０μｍ、約１２μｍ、または約１４μｍである。
【０１４２】
ポアの通路の入口および出口は、さまざまな角度を有し得る。ポアの角度は、免疫細胞が通過する間に、ポアの目詰まりを最小化するために選択することができる。例えば、入口または出口部分の角度は、約０〜約９０度であり得る。一部の実施形態では、入口または出口部分は、９０度よりも大きくあり得る。一部の実施形態では、ポアは、同一の入口および出口の角度を有する。一部の実施形態では、ポアは、異なる入口および出口の角度を有する。一部の実施形態では、ポアの縁は、滑らかであり、例えば、丸みを帯びているか、または湾曲している。滑らかなポアの縁は、突起、隆線および起伏のある部分がない、連続的な、平坦かつ平らな表面を有する。一部の実施形態では、ポアの縁は、鋭い。鋭いポアの縁は、先端が尖っているか、または鋭角である、細い縁を有する。一部の実施形態では、ポアの通路は、まっすぐである。まっすぐなポアの通路は、曲線、屈曲、角度および他の凸凹を含まない。一部の実施形態では、ポアの通路は、湾曲している。湾曲したポアの通路は、屈曲しているか、または直線から外れる。一部の実施形態では、ポアの通路は、複数の曲線、例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれよりも多くの湾曲を有する。ポアを通る流速も調整することができる。一部の実施形態では、ポアを通る流速は、約０．００１ｍＬ／ｃｍ２／秒〜約１００Ｌ／ｃｍ２／秒、またはそれらの間の任意の速度もしくは速度の範囲である。
【０１４３】
ポアは、２次元または３次元形状を含む、当技術分野において公知の任意の形状を有することができる。ポアの形状（例えば、断面形状）は、限定なく、円形、楕円形、丸形、正方形、星形、三角形、多角形、五角形、六角形、七角形、および八角形であり得る。一部の実施形態では、ポアの断面は、丸形の形状である。一部の実施形態では、ポアの３次元形状は、円柱状または円錐状である。一部の実施形態では、ポアは、溝がある入口および出口の形状を有する。一部の実施形態では、ポアの形状は、所与の表面内のポアの間で均質（すなわち、一貫したまたは規則的）である。一部の実施形態では、ポアの形状は、所与の表面内のポアの間で不均質（すなわち、混合または変動する）である。
【０１４４】
本明細書に記載の表面は、総ポア数の範囲を有することができる。一部の実施形態では、ポアは、総表面積の約１０％〜約８０％を包含する。一部の実施形態では、表面は、約１．０×１０５〜約１．０×１０３０個の総ポア、またはそれらの間の任意の数もしくは数の範囲を含有する。一部の実施形態では、表面は、約１０〜約１．０×１０１５ポア／ｍｍ２の表面積を含む。
【０１４５】
ポアは、所与の表面内に非常に多くの様式で分布し得る。一部の実施形態では、ポアは、所与の表面内に並行して分布する。そのような一例では、ポアは、同じ方向に並んで分布し、所与の表面内で同じ距離離れている。一部の実施形態では、ポアの分布は、規則正しいか、または均質である。そのような一例では、ポアは、規則的な系統的パターンで分布するか、または所与の表面内で同じ距離離れている。一部の実施形態では、ポアの分布は、ランダムまたは不均質である。そのような一例では、ポアは、不規則的な無秩序のパターンで分布するか、または所与の表面内で異なる距離離れている。一部の実施形態では、多数の表面は、直列で分布する。多数の表面は、均質または不均質な表面のサイズ、形状および／または粗さであり得る。多数の表面は、均質または不均質なポアのサイズ、形状および／または数を有するポアをさらに含有することができ、それによって、異なる免疫細胞型へのある範囲の化合物の同時送達を可能にする。
【０１４６】
一部の実施形態では、個々のポアは、均一な幅寸法（すなわち、ポアの通路の長さに沿って一定の幅）を有する。一部の実施形態では、個々のポアは、可変の幅（すなわち、ポアの通路の長さに沿って増加または減少する幅）を有する。一部の実施形態では、所与の表面内のポアは、同じ個々のポアの深さを有する。一部の実施形態では、所与の表面内のポアは、異なる個々のポアの深さを有する。一部の実施形態では、ポアは、互いに直接隣接している。一部の実施形態では、ポアは、ある距離により、互いに離れている。一部の実施形態では、ポアは、約０．００１μｍ〜約３０ｍｍの距離、またはそれらの間の任意の距離もしくは距離の範囲により、互いに離れている。
【０１４７】
一部の実施形態では、表面は、材料でコーティングされる。材料は、限定なく、テフロン（登録商標）、接着コーティング、界面活性剤、タンパク質、接着分子、抗体、抗凝固剤、細胞機能をモジュレートする因子、核酸、脂質、炭水化物または膜貫通タンパク質を含む、当技術分野において公知の任意の材料から選択することができる。一部の実施形態では、表面は、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）でコーティングされる。一部の実施形態では、材料は、表面に共有結合的に付加される。一部の実施形態では、材料は、表面に非共有結合的に付加されるか、または吸着される。一部の実施形態では、表面分子は、免疫細胞がポアを通過するときに放出される。
【０１４８】
一部の実施形態では、表面は、修飾された化学的性質を有する。一部の実施形態では、表面は極性である。一部の実施形態では、表面は親水性である。一部の実施形態では、表面は非極性である。一部の実施形態では、表面は疎水性である。一部の実施形態では、表面は帯電している。一部の実施形態では、表面は、正および／または負に帯電している。一部の実施形態では、表面は、一部の領域において正に帯電し、他の領域において負に帯電することができる。一部の実施形態では、表面は、全体として正電荷、または全体として負電荷を有する。一部の実施形態では、表面は、滑らか、電解研磨される、粗い、またはプラズマ処理される、のうちのいずれか１つであり得る。一部の実施形態では、表面は、双性イオンまたは双極性化合物を含む。一部の実施形態では、表面はプラズマ処理される。
【０１４９】
一部の実施形態では、表面は、より大きなモジュール内に含有される。一部の実施形態では、表面は、プラスチックまたはガラスシリンジなどのシリンジ内に含有される。一部の実施形態では、表面は、プラスチックフィルターホルダー内に含有される。一部の実施形態では、表面は、ピペットチップ内に含有される。
細胞摂動
一部の実施形態では、本発明は、免疫細胞を含む細胞懸濁液を、狭窄に通し、それにより、抗原および／またはアジュバントが免疫細胞に入るように、免疫細胞の摂動を引き起こすことによって、免疫応答をモジュレートするための方法であって、免疫細胞における摂動は、免疫細胞の外側から材料を免疫細胞に移動させることを可能にする、免疫細胞における開裂（例えば、孔、裂け目、空洞、開口部、ポア、割れ目、間隙、穿孔部）である、方法を提供する。一部の実施形態では、インプット細胞に、それが狭窄を通過するときに変形力が印加される。変形は、例えば、機械的ひずみおよび／またはせん断力によって引き起こすことができる。一部の実施形態では、摂動は、免疫細胞膜内の摂動である。一部の実施形態では、摂動は一過性である。一部の実施形態では、免疫細胞摂動は、約１．０×１０−９秒〜約２時間、またはそれらの間の任意の時間もしくは時間の範囲で持続する。一部の実施形態では、免疫細胞摂動は、約１．０×１０−９秒〜約１秒、約１秒〜約１分、または約１分〜約１時間、持続する。一部の実施形態では、免疫細胞摂動は、約１．０×１０−９〜約１．０×１０−１、約１．０×１０−９〜約１．０×１０−２、約１．０×１０−９〜約１．０×１０−３、約１．０×１０−９〜約１．０×１０−４、約１．０×１０−９〜約１．０×１０−５、約１．０×１０−９〜約１．０×１０−６、約１．０×１０−９〜約１．０×１０−７、または約１．０×１０−９〜約１．０×１０−８秒のうちのいずれか１つの間、持続する。一部の実施形態では、免疫細胞摂動は、約１．０×１０−８〜約１．０×１０−１、約１．０×１０−７〜約１．０×１０−１、約１．０×１０−６〜約１．０×１０−１、約１．０×１０−５〜約１．０×１０−１、約１．０×１０−４〜約１．０×１０−１、約１．０×１０−３〜約１．０×１０−１、または約１．０×１０−２〜約１．０×１０−１秒のうちのいずれか１つの間、持続する。本明細書に記載の方法によって作り出される免疫細胞摂動（例えば、ポアまたは孔）は、補体または細菌溶血素によって作り出されるものなどの、多量体ポア構造を形成するためのタンパク質サブユニットのアセンブリーの結果として形成されない。
【０１５０】
免疫細胞が狭窄を通過するときに、狭窄は、免疫細胞膜に傷害を一時的に与え、これが、摂動による材料の受動的拡散を可能にする。一部の実施形態では、免疫細胞は、およそ１００μ秒の短い期間のみ変形されて、細胞シグナル伝達機構によりアポトーシス経路を活性化する機会を最小化するが、他の持続時間も可能である（例えば、数ナノ秒〜数時間の範囲）。一部の実施形態では、免疫細胞は、約１．０×１０−９秒〜約２時間、またはそれらの間の任意の時間もしくは時間の範囲で、変形される。一部の実施形態では、免疫細胞は、約１．０×１０−９秒〜約１秒、約１秒〜約１分、または約１分〜約１時間、変形される。一部の実施形態では、免疫細胞は、約１．０×１０−９〜約１．０×１０−１、約１．０×１０−９〜約１．０×１０−２、約１．０×１０−９〜約１．０×１０−３、約１．０×１０−９〜約１．０×１０−４、約１．０×１０−９〜約１．０×１０−５、約１．０×１０−９〜約１．０×１０−６、約１．０×１０−９〜約１．０×１０−７、または約１．０×１０−９〜約１．０×１０−８秒のうちのいずれか１つの間、変形される。一部の実施形態では、免疫細胞は、約１．０×１０−８〜約１．０×１０−１、約１．０×１０−７〜約１．０×１０−１、約１．０×１０−６〜約１．０×１０−１、約１．０×１０−５〜約１．０×１０−１、約１．０×１０−４〜約１．０×１０−１、約１．０×１０−３〜約１．０×１０−１、または約１．０×１０−２〜約１．０×１０−１秒のうちいずれか１つの間、変形される。一部の実施形態では、免疫細胞を変形させることは、限定なく、約１μｓ〜少なくとも約７５０μｓ、例えば、少なくとも約１μｓ、１０μｓ、５０μｓ、１００μｓ、５００μｓ、または７５０μｓの範囲の時間、免疫細胞を変形させることを含む。
【０１５１】
一部の実施形態では、免疫細胞への抗原および／またはアジュバントの通過は、免疫細胞が狭窄を通過するのと同時に、および／または免疫細胞の摂動と同時に起こる。一部の実施形態では、免疫細胞への化合物の通過は、免疫細胞が狭窄を通過した後に起こる。一部の実施形態では、免疫細胞への化合物の通過は、免疫細胞が狭窄を通過したおよそ数分後に起こる。一部の実施形態では、免疫細胞への化合物の通過は、免疫細胞が狭窄を通過した約１．０×１０−２秒〜少なくとも約３０分後に起こる。例えば、免疫細胞への化合物の通過は、免疫細胞が狭窄を通過した、約１．０×１０−２秒〜約１秒、約１秒〜約１分、または約１分〜約３０分後に起こる。一部の実施形態では、免疫細胞への化合物の通過は、免疫細胞が狭窄を通過した、約１．０×１０−２秒〜約１０分、約１．０×１０−２秒〜約５分、約１．０×１０−２秒〜約１分、約１．０×１０−２秒〜約５０秒、約１．０×１０−２秒〜約３０秒、約１．０×１０−２秒〜約１０秒、約１．０×１０−２秒〜約１秒、または約１．０×１０−２秒〜約０．１秒後に起こる。一部の実施形態では、免疫細胞への化合物の通過は、免疫細胞が狭窄を通過した、約１．０×１０−１秒〜約１０分、約１秒〜約１０分、約１０秒〜約１０分、約５０秒〜約１０分、約１分〜約１０分、または約５分〜約１０分後に起こる。一部の実施形態では、狭窄を通過した後の免疫細胞における摂動は、免疫細胞が狭窄を通過した後、およそ約５分以内に修正される。
【０１５２】
一部の実施形態では、狭窄を通過した後の細胞生存率は、約５％〜約１００％である。一部の実施形態では、狭窄を通過した後の細胞生存率は、少なくとも約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％である。一部の実施形態では、細胞生存率は、免疫細胞が狭窄を通過した約１．０×１０−２秒〜少なくとも約１０日後に測定される。例えば、細胞生存率は、免疫細胞が狭窄を通過した、約１．０×１０−２秒〜約１秒、約１秒〜約１分、約１分〜約３０分、または約３０分〜約２時間後に測定される。一部の実施形態では、細胞生存率は、免疫細胞が狭窄を通過した、約１．０×１０−２秒〜約２時間、約１．０×１０−２秒〜約１時間、約１．０×１０−２秒〜約３０分、約１．０×１０−２秒〜約１分、約１．０×１０−２秒〜約３０秒、約１．０×１０−２秒〜約１秒、または約１．０×１０−２秒〜約０．１秒後に測定される。一部の実施形態では、細胞生存率は、免疫細胞が狭窄を通過した、約１．５時間〜約２時間、約１時間〜約２時間、約３０分〜約２時間、約１５分〜約２時間、約１分〜約２時間、約３０秒〜約２時間、または約１秒〜約２時間後に測定される。一部の実施形態では、細胞生存率は、免疫細胞が狭窄を通過した、約２時間〜約５時間、約５時間〜約１２時間、約１２時間〜約２４時間、または約２４時間〜約１０日後に測定される。
【０１５３】
送達パラメーター
いくつかのパラメーターが、本明細書に記載の方法による免疫応答をモジュレートするための免疫細胞への化合物の送達に影響を与え得る。一部の実施形態では、細胞懸濁液は、狭窄を通過する前、それと並行して、またはその後に、化合物と接触する。免疫細胞は、送達するための化合物を含む溶液に懸濁されて狭窄を通過し得るが、化合物は、免疫細胞が狭窄を通過した後に、細胞懸濁液に添加することができる。一部の実施形態では、送達される化合物は、狭窄にコーティングされる。
【０１５４】
免疫細胞への化合物の送達に影響を与え得るパラメーターの例としては、限定されるものではないが、狭窄の寸法、狭窄の入口の角度、狭窄の表面の性質（例えば、粗さ、化学修飾、親水性、疎水性など）、運転流束（例えば、狭窄を通る細胞通過時間）、免疫細胞の濃度、細胞懸濁液中の化合物の濃度、および狭窄を通過した後に免疫細胞を回復させるまたはインキュベートする時間の量が挙げられ、免疫細胞に送達される化合物の通過に影響を及ぼし得る。免疫細胞への化合物の送達に影響を与える追加のパラメーターとしては、狭窄における免疫細胞の速度、狭窄におけるせん断速度、細胞懸濁液の粘度、流速に垂直な速度成分、および狭窄における時間を挙げることができる。そのようなパラメーターは、化合物の送達を制御するために設計することができる。一部の実施形態では、免疫細胞の濃度は、約１０〜少なくとも約１０１２個細胞／ｍＬ、またはそれらの間の任意の濃度もしくは濃度の範囲に及ぶ。一部の実施形態では、送達化合物の濃度は、約１０ｎｇ／ｍＬ〜約１ｇ／ｍＬ、またはそれらの間の任意の濃度もしくは濃度の範囲に及び得る。一部の実施形態では、送達化合物の濃度は、約１ｐＭ〜少なくとも約２Ｍ、またはそれらの間の任意の濃度もしくは濃度の範囲に及び得る。
【０１５５】
本開示の方法において使用される温度は、化合物の送達および細胞生存率に影響を及ぼすように調整することができる。一部の実施形態では、方法は、約−５℃〜約４５℃で行われる。例えば、方法は、室温（例えば、約２０℃）、生理学的温度（例えば、約３７℃）、生理学的温度よりも高い（例えば、約３７℃よりも高い〜４５℃、またはそれよりも高い）もしくは低下した温度（例えば、約−５℃〜約４℃）、またはこれらの例示的な温度の間の温度で行うことができる。
【０１５６】
さまざまな方法を利用して、狭窄を通して免疫細胞を駆動することができる。例えば、圧力を、入口側のポンプ（例えば、コンプレッサー）によって印加することができ、真空を、出口側の真空ポンプによって印加することができ、毛細管作用を、チューブによって適用することができ、および／またはシステムに、重力を供給することができる。変位に基づく流動システムを使用することもできる（例えば、シリンジポンプ、蠕動ポンプ、手動シリンジまたはピペット、ピストンなど）。一部の実施形態では、免疫細胞は、陽圧または陰圧によって狭窄を通過する。一部の実施形態では、免疫細胞は、一定圧力または可変圧力によって狭窄を通過する。一部の実施形態では、圧力は、シリンジを使用して印加される。一部の実施形態では、圧力は、ガスボンベを使用して印加される。一部の実施形態では、圧力は、ガスボンベ陽圧法を使用して印加される。一部の実施形態では、圧力は、ポンプを使用して印加される。一部の実施形態では、ポンプは、蠕動ポンプまたはダイヤフラムポンプである。一部の実施形態では、圧力は、真空を使用して印加される。一部の実施形態では、免疫細胞は、ｇ力によって狭窄を通過する。一部の実施形態では、免疫細胞は、遠心力によって狭窄を通過する。一部の実施形態では、免疫細胞は、毛細管圧によって狭窄を通過する。
【０１５７】
一部の実施形態では、流体の流動は、狭窄を通して免疫細胞を方向づける。一部の実施形態では、流体の流動は、免疫細胞が狭窄を通過する前の乱流である。乱流は、所与のポイントでの速度が、大きさおよび方向が不規則に変動する流体の流動である。一部の実施形態では、狭窄を通る流体の流動は、層流である。層流は、すべてのポイントでの流動の方向が一定のままである、固体境界付近の流体における途切れない流動を含む。一部の実施形態では、流体の流動は、免疫細胞が狭窄を通過した後の乱流である。免疫細胞が狭窄を通過する速度は、変動させることができる。一部の実施形態では、免疫細胞は、均一な細胞スピードで狭窄を通過する。一部の実施形態では、免疫細胞は、変動する細胞スピードで狭窄を通過する。
【０１５８】
他の実施形態では、組合せ処置は、免疫細胞を含む細胞懸濁液を、狭窄に通過させることによって、免疫応答をモジュレートするために使用され、狭窄は、免疫細胞を変形させ、それによって、抗原および／またはアジュバントが、例えば、本明細書に記載の方法で免疫細胞に入るように、免疫細胞の摂動を引き起こした後、狭窄の下流で電場に曝露される。一部の実施形態では、免疫細胞は、狭窄を通過した後、少なくとも１つの電極によって生じた電場を通過する。一部の実施形態では、電場は、免疫細胞の核などの免疫細胞の内側の第２の場所への化合物の送達を支援する。例えば、細胞変形狭窄および電場の組合せは、免疫細胞（例えば、細胞核）に、抗体をコードするプラスミドを送達し、抗体のｄｅ  ｎｏｖｏ産生をもたらす。一部の実施形態では、１つまたは複数の電極は、電場を生じるために細胞変形狭窄に近接している。一部の実施形態では、電場は、約０．１ｋＶ／ｍ〜約１００ＭＶ／ｍ、またはそれらの間の任意の数もしくは数の範囲である。一部の実施形態では、集積回路を使用して、電極を駆動するための電気シグナルを提供する。一部の実施形態では、免疫細胞は、約１ｎｓ〜約１ｓのパルス幅、および約１００ｎｓ〜約１０ｓ、またはそれらの間の任意の時間もしくは時間の範囲の期間、電場に曝露される。
免疫細胞への送達のための細胞懸濁液
【０１５９】
細胞懸濁液は、混合されるか、または精製された、免疫細胞の集団であり得る。一部の実施形態では、細胞懸濁液は、全血またはＰＢＭＣなどの混合細胞集団である。さらなる実施形態では、混合細胞集団は、規定または精製された集団の混合物である。一部の実施形態では、細胞懸濁液は、免疫細胞の精製された集団などの精製細胞集団である。
【０１６０】
細胞懸濁液の組成（例えば、容量オスモル濃度、塩濃度、血清含有量、細胞濃度、ｐＨなど）は、免疫応答をモジュレートするための化合物の送達に影響し得る。一部の実施形態では、懸濁液は全血を含む。あるいは、細胞懸濁液は、血液以外の生理食塩溶液または生理学的媒体中の細胞の混合物である。一部の実施形態では、細胞懸濁液は水溶液を含む。一部の実施形態では、水溶液は、細胞培養培地、（リン酸緩衝食塩水）ＰＢＳ、塩、金属イオン、糖、成長因子、動物由来生成物、増量材料、界面活性剤、潤滑剤、脂質、ビタミン、アミノ酸、タンパク質、細胞周期阻害剤、および／またはアクチン重合に影響する作用物質を含む。一部の実施形態では、細胞培養培地は、Ｘ−ＶＩＶＯ（商標）１０、Ｘ−ＶＩＶＯ（商標）１５、ＤＭＥＭ、Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ（登録商標）、ＩＭＤＭ、またはＲＰＭＩである。加えて、溶液緩衝液（solution  buffer）は、例えば、狭窄の目詰まりを低下または排除し、細胞生存率を改善するように設計することができる、１つまたは複数の潤滑剤（プルロニック（登録商標）または他の界面活性剤）を含むことができる。例示的な界面活性剤としては、限定なく、ポロキサマー；ポリソルベート；マンニトール、ソルビトールなどの糖または糖アルコール；動物由来血清；およびアルブミンタンパク質が挙げられる。
【０１６１】
ある特定の種類の免疫細胞による一部の構成では、免疫細胞は、免疫細胞の内部への化合物の送達を助ける１つまたは複数の溶液中でインキュベートすることができる。一部の実施形態では、水溶液は、アクチン重合に影響する作用物質を含む。一部の実施形態では、アクチン重合に影響する作用物質は、ラトランクリンＡ、サイトカラシンおよび／またはコルヒチンである。例えば、免疫細胞は、ラトランクリン（Lantrunculin）Ａ（０．１μｇ／ｍＬ）などの解重合溶液中で、送達前に１時間インキュベートして、アクチン細胞骨格を解重合することができる。追加の例として、免疫細胞は、１０μＭのコルヒチン（Ｓｉｇｍａ）中で、送達前に２時間インキュベートして、微小管ネットワークを解重合することができる。
【０１６２】
一部の実施形態では、細胞集団は、開示される方法における使用の前に、富化される。例えば、細胞は、体液、例えば、末梢血から得られ、必要に応じて、富化されるか、または免疫細胞を濃縮するために精製される。細胞は、限定なく、磁気細胞分離、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）または密度勾配遠心分離を含む、当技術分野において公知の任意の方法によって富化されてもよい。
【０１６３】
細胞懸濁液の粘度も、本明細書に開示される方法に影響し得る。一部の実施形態では、細胞懸濁液の粘度は、約８．９×１０−４Ｐａ・ｓ〜約４．０×１０−３Ｐａ・ｓ、またはそれらの間の任意の値もしくは値の範囲に及ぶ。一部の実施形態では、粘度は、約８．９×１０−４Ｐａ・ｓ〜約４．０×１０−３Ｐａ・ｓ、またはそれらの間の任意の値もしくは値の範囲のいずれか１つの間に及ぶ。一部の実施形態では、粘度は、約８．９×１０−４Ｐａ・ｓ〜約４．０×１０−３Ｐａ・ｓ、約８．９×１０−４Ｐａ・ｓ〜約３．０×１０−３Ｐａ・ｓ、約８．９×１０−４Ｐａ・ｓ〜約２．０×１０−３Ｐａ・ｓ、または約８．９×１０−３Ｐａ・ｓ〜約１．０×１０−３Ｐａ・ｓのうちのいずれか１つの間に及ぶ。一部の実施形態では、粘度は、約０．８９ｃＰ〜約４．０ｃＰ、約０．８９ｃＰ〜約３．０ｃＰ、約０．８９ｃＰ〜約２．０ｃＰ、または約０．８９ｃＰ〜約１．０ｃＰのうちのいずれか１つの間に及ぶ。一部の実施形態では、細胞懸濁液の粘度がせん断ひずみの条件下で減少する、せん断減粘効果が観察される。粘度は、限定なく、ガラス毛細管粘度計などの粘度計、またはレオメーターを含む、当技術分野において公知の任意の方法によって測定することができる。粘度計は、１つの流動条件下で粘度を測定するが、レオメーターは、流動条件と共に変動する粘度を測定するために使用される。一部の実施形態では、粘度は、血液などのせん断減粘性溶液について測定される。一部の実施形態では、粘度は、約−５℃〜約４５℃で測定される。例えば、粘度は、室温（例えば、約２０℃）、生理学的温度（例えば、約３７℃）、生理学的温度よりも高い（例えば、約３７℃よりも高い〜４５℃、またはそれよりも高い）、低下した温度（例えば、約−５℃〜約４℃）、またはこれらの例示的な温度の間の温度で測定される。
【０１６４】
免疫応答を増強するための抗原およびアジュバント
本開示のある特定の態様は、本明細書に記載の方法により改変された免疫細胞を患者に導入することによって、患者を処置する方法に関する。一部の実施形態では、免疫細胞は、免疫療法における使用のためのものである。一部の態様では、本開示は、個体におけるヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）関係疾患を処置するための方法であって、方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、細胞内にＨＰＶ抗原、および細胞内にアジュバントを含む、方法に関する。一部の態様では、本開示は、個体におけるＨＰＶ関連疾患を処置するための方法であって、方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、細胞内にＨＰＶ抗原、および細胞内にアジュバントを含み、改変免疫細胞は、ａ）インプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプット細胞の直径の関数であり、それによって、抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きなインプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；ならびにｂ）ＨＰＶ抗原およびアジュバントが摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット細胞とＨＰＶ抗原およびアジュバントとをインキュベートし、それによって、改変免疫細胞を作出するステップによって調製される、方法に関する。一部の実施形態では、インプット細胞に、それが狭窄を通過するときに変形力が印加される。
【０１６５】
一部の態様では、本開示は、個体におけるＨＰＶ関連疾患を予防するための方法であって、方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、細胞内にＨＰＶ抗原、および細胞内にアジュバントを含む、方法に関する。一部の態様では、本開示は、個体におけるＨＰＶ関連疾患を予防するための方法であって、方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、細胞内にＨＰＶ抗原、および細胞内にアジュバントを含み、改変免疫細胞は、ａ）インプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプット細胞の直径の関数であり、それによって、ＨＰＶ抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きなインプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；ならびにｂ）ＨＰＶ抗原およびアジュバントが摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット細胞とＨＰＶ抗原およびアジュバントとをインキュベートし、それによって、改変免疫細胞を作出するステップによって調製される、方法に関する。一部の実施形態では、インプット細胞に、それが狭窄を通過するときに変形力が印加される。
【０１６６】
一部の態様では、本開示は、ＨＰＶ関連疾患を有する個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、細胞内にＨＰＶ抗原、および細胞内にアジュバントを含む、方法に関する。一部の態様では、本開示は、ＨＰＶ関連疾患を有する個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、細胞内にＨＰＶ抗原、および細胞内にアジュバントを含み、改変免疫細胞は、ａ）ＨＰＶ抗原を含むインプット細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を含むマイクロ流体チャネルに通すステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプット細胞の直径の関数であり、それによって、ＨＰＶ抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きなインプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；ならびにｂ）ＨＰＶ抗原およびアジュバントが摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット細胞と抗原およびアジュバントとをインキュベートし、それによって、改変免疫細胞を作出するステップによって調製される、方法に関する。一部の実施形態では、インプット細胞に、それが狭窄を通過するときに変形力が印加される。一部の実施形態では、免疫応答は増強される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原に対する免疫応答は増強される。
【０１６７】
本発明の一部の態様は、細胞内抗原を含む免疫細胞を投与することによって、抗原に対する免疫応答を増強するための、ＨＰＶ関連疾患を有する個体への抗原の送達であって、抗原は、本明細書に記載の方法のいずれかによって細胞に送達される、送達を提供する。一部の実施形態では、抗原は単一抗原である。一部の実施形態では、抗原は抗原の混合物である。抗原は、細胞または抗体媒介性免疫応答などの特異的な免疫応答を刺激する物質である。抗原は、特定の抗原に対して特異的である、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）などの免疫細胞によって発現される受容体に結合する。抗原−受容体結合は、その後、細胞活性化、サイトカイン産生、細胞遊走、細胞傷害性因子の分泌および抗体産生などの下流の免疫エフェクター経路をもたらす、細胞内シグナル伝達経路を誘因する。
【０１６８】
一部の実施形態では、改変免疫細胞は、ａ）ＨＰＶ抗原を含むインプット細胞を含む細胞懸濁液を狭窄に通すステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプット細胞の直径の関数であり、それによって、ＨＰＶ抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きなインプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；ならびにｂ）ＨＰＶ抗原およびアジュバントが摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット細胞と抗原およびアジュバントとをインキュベートし、それによって、改変免疫細胞を作出するステップによって調製される。さらなる実施形態では、狭窄の直径は、細胞の直径未満である。一部の実施形態では、狭窄の直径は、免疫細胞の直径よりも小さい。一部の実施形態では、狭窄の直径は、細胞の直径の約２０％〜約９９％である。一部の実施形態では、狭窄の直径は、細胞の直径の約２０％〜約６０％未満である。一部の実施形態では、狭窄の直径は、細胞の直径の約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、または約９９％のうちのいずれかである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、細胞の直径の約２０％〜約３０％、約３０％〜約４０％、約４０％〜約５０％、約５０％〜約６０％、約６０％〜約７０％、約７０％〜約８０％、約８０％〜約９０％、約９０％〜約９５％、または約９５％〜約９９％のうちのいずれかである。一部の実施形態では、インプット細胞に、それが狭窄を通過するときに変形力が印加される。一部の実施形態では、狭窄は、チャネル中にある。一部の実施形態では、狭窄は、マイクロ流体チャネルに含有される。一部の実施形態では、狭窄は、フィルター内に含有される。他の実施形態では、狭窄は、フィルター上のポアである。
【０１６９】
一部の実施形態では、改変免疫細胞は、ＨＰＶ抗原およびアジュバントを細胞内に含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原および／またはアジュバントは、細胞質基質および／またはエンドソームに存在する。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、細胞の多数の区画に存在する。さらなる実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、小胞体（endoplasmic  recticulum）（ＥＲ）、ゴルジ装置、リソソーム、またはエキソソームのうちの１つまたは複数を含む、細胞の区画に存在する。一部の実施形態では、抗原およびアジュバントは、同じ区画にある。一部の実施形態では、抗原およびアジュバントは、互いに異なる区画にある。例えば、一部の実施形態では、抗原は細胞質基質に存在するが、アジュバントはエンドソームに存在する。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、細胞の外側に、ＨＰＶ抗原および／またはアジュバントをさらに含む。
【０１７０】
一部の実施形態では、摂動インプット細胞とインキュベートされるアジュバントの濃度は、約０．０１μＭ〜約１０ｍＭである。例えば、一部の実施形態では、摂動インプット細胞とインキュベートされるアジュバントの濃度は、約０．０１μＭ、約０．１μＭ、約１μＭ、約１０μＭ、約１００μＭ、約１ｍＭ、または約１０ｍＭ未満のうちのいずれかである。一部の実施形態では、摂動インプット細胞とインキュベートされるアジュバントの濃度は、約１０ｍＭよりも高い。一部の実施形態では、摂動インプット細胞とインキュベートされるアジュバントの濃度は、約０．０１μＭ〜約０．１μＭ、約０．１μＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１００μＭ、約１００μＭ〜約１ｍＭ、または１ｍＭ〜約１０ｍＭのうちのいずれかである。一部の実施形態では、摂動インプット細胞とインキュベートされるアジュバントの濃度は、約０．１μＭ〜約１ｍＭである。
【０１７１】
一部の実施形態では、摂動インプット細胞とインキュベートされるＨＰＶ抗原の濃度は、約０．０１μＭ〜約１０ｍＭである。例えば、一部の実施形態では、摂動インプット細胞とインキュベートされるＨＰＶ抗原の濃度は、約０．０１μＭ、約０．１μＭ、約１μＭ、約１０μＭ、約１００μＭ、約１ｍＭ、または約１０ｍＭ未満のうちのいずれかである。一部の実施形態では、摂動インプット細胞とインキュベートされるＨＰＶ抗原の濃度は、約１０ｍＭよりも高い。一部の実施形態では、摂動インプット細胞とインキュベートされるＨＰＶ抗原の濃度は、約０．０１μＭ〜約０．１μＭ、約０．１μＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１００μＭ、約１００μＭ〜約１ｍＭ、または１ｍＭ〜約１０ｍＭのうちのいずれかである。一部の実施形態では、摂動インプット細胞とインキュベートされるＨＰＶ抗原の濃度は、約０．１μＭ〜約１ｍＭである。
【０１７２】
一部の実施形態では、摂動インプット細胞とインキュベートされるＨＰＶ抗原のアジュバントに対するモル比は、約１００００：１〜約１：１００００のうちのいずれかである。例えば、一部の実施形態では、摂動インプット細胞とインキュベートされるＨＰＶ抗原のアジュバントに対するモル比は、約１００００：１、約１０００：１、約１００：１、約１０：１、約１：１、約１：１０、約１：１００、約１：１０００、または約１：１００００のうちのいずれかである。一部の実施形態では、摂動インプット細胞とインキュベートされるＨＰＶ抗原のアジュバントに対するモル比は、約１００００：１〜約１０００：１、約１０００：１〜約１００：１、約１００：１〜約１０：１、約１０：１〜約１：１、約１：１〜約１：１０、約１：１０〜約１：１００、約１：１００〜約１：１０００、約１：１０００〜約１：１００００のうちのいずれかである。
【０１７３】
一部の実施形態では、改変免疫細胞は、約０．０１μＭ〜約１０ｍＭの濃度でアジュバントを含む。例えば、一部の実施形態では、免疫細胞は、約０．０１μＭ、約０．１μＭ、約１μＭ、約１０μＭ、約１００μＭ、約１ｍＭ、または約１０ｍＭ未満のうちのいずれかの濃度でアジュバントを含む。一部の実施形態では、免疫細胞は、約１０ｍＭのいずれかよりも高い濃度でアジュバントを含む。一部の実施形態では、免疫細胞は、約０．１μＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１００μＭ、約１００μＭ〜約１ｍＭ、または１ｍＭ〜約１０ｍＭのうちのいずれかの濃度でアジュバントを含む。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、約０．１μＭ〜約１ｍＭの濃度でアジュバントを含む。
【０１７４】
一部の実施形態では、改変免疫細胞中のＨＰＶ抗原の濃度は、約０．０１μＭ〜約１０ｍＭである。例えば、一部の実施形態では、改変免疫細胞中のＨＰＶ抗原の濃度は、約０．０１μＭ、約０．１μＭ、約１μＭ、約１０μＭ、約１００μＭ、約１ｍＭ、または約１０ｍＭ未満のうちのいずれかである。一部の実施形態では、改変免疫細胞中のＨＰＶ抗原の濃度は、約１０ｍＭよりも高い。一部の実施形態では、改変免疫細胞中のＨＰＶ抗原の濃度は、約０．１μＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１００μＭ、約１００μＭ〜約１ｍＭ、または１ｍＭ〜約１０ｍＭのうちのいずれかである。一部の実施形態では、改変免疫細胞中のＨＰＶ抗原の濃度は、約０．１μＭ〜約１ｍＭである。
【０１７５】
一部の実施形態では、改変免疫細胞中のＨＰＶ抗原のアジュバントに対するモル比は、約１００００：１〜約１：１００００のうちのいずれかである。例えば、一部の実施形態では、改変免疫細胞中のＨＰＶ抗原のアジュバントに対するモル比は、約１００００：１、約１０００：１、約１００：１、約１０：１、約１：１、約１：１０、約１：１００、約１：１０００、または約１：１００００のうちのいずれかである。一部の実施形態では、改変免疫細胞中のＨＰＶ抗原のアジュバントに対するモル比は、約１００００：１〜約１０００：１、約１０００：１〜約１００：１、約１００：１〜約１０：１、約１０：１〜約１：１、約１：１〜約１：１０、約１：１０〜約１：１００、約１：１００〜約１：１０００、約１：１０００〜約１：１００００のうちのいずれかである。
【０１７６】
一部の実施形態では、抗原はポリペプチド抗原である。一部の実施形態では、抗原は、脂質で改変されている。一部の実施形態では、改変抗原は、多糖または炭水化物部分で改変されている。一部の実施形態では、抗原は、ウイルスと会合している。一部の実施形態では、抗原はウイルス抗原である。例示的なウイルス抗原としては、ＨＰＶ抗原が挙げられる。さらなる実施形態では、抗原はＨＰＶ抗原である。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ−１６、１８、２６、３１、３３、３５、３９、４５、５１、５２、５３、５６、５８、５９、６６、６８、７３、および８２の群からの選択からなる。ＨＰＶ−１６、１８、３１、３３、３５、３９、４５、５１、５２、５６、５８、５９、６８、７３、および８２は、がんを引き起こす高リスク型であるが、ＨＰＶ−２６、５３、および６６は、がんを引き起こす「おそらく高リスク型」である。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、抗原性ＨＰＶエピトープおよび１つまたは複数の異種ペプチド配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、抗原は、ＨＰＶ−１６抗原またはＨＰＶ−１８抗原である。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＬＡ−Ａ２特異的エピトープで構成される。ＨＰＶ  Ｅ６およびＥ７遺伝子は、ウイルスの癌遺伝子であり、これらの遺伝子の発現は、悪性形質転換のために必要である。Ｅ６およびＥ７タンパク質は、細胞周期のいくつかの負の制御因子である、主にｐ１０５Ｒｂおよびｐ５３を、それぞれ標的にし、そのため、細胞周期の制御を妨げる。さらなる実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ  Ｅ６抗原またはＨＰＶ  Ｅ７抗原である。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、ＨＰＶ  Ｅ６抗原およびＨＰＶ  Ｅ７抗原を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、１つまたは複数の異種ペプチド配列がそのＮ末端および／またはそのＣ末端で隣接している免疫原性エピトープを含むポリペプチドである。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ  Ｅ６ポリペプチド由来の配列が隣接しているＨＰＶ  Ｅ７エピトープ（Ｅ７．６）である。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号１８〜２６のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は配列番号２３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は配列番号１８〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は配列番号２３のアミノ酸配列を含む。
【０１７７】
一部の実施形態では、抗原は、罹患細胞の溶解物などの細胞溶解物に由来する。一部の実施形態では、抗原は、細胞溶解物中にある。一部の実施形態では、抗原は、腫瘍溶解物に由来する。一部の実施形態（mebodiment）では、抗原は、ＨＰＶ関連がん細胞の溶解物に由来する。一部の実施形態では、ＨＰＶ関連がんは、頭頸部がん、子宮頸がん、外陰がん、膣がん、陰茎がん、肛門がん、肛門周囲がん、肛門性器がん、口腔がん、または唾液腺がんのうちのいずれか１つである。
【０１７８】
一部の態様では、本開示は、個体におけるヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）関係がんを処置するための方法であって、方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、配列番号１８〜２６のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含むＨＰＶ抗原を含む、方法に関する。一部の態様では、本開示は、個体におけるＨＰＶ関連疾患を処置するための方法であって、方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、配列番号１８〜２６のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含むＨＰＶ抗原を含み、改変免疫細胞は、ａ）インプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプット細胞の直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；およびｂ）ＨＰＶ抗原が摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット細胞とＨＰＶ抗原とをインキュベートし、それによって、改変免疫細胞を作出するステップによって調製される、方法に関する。一部の実施形態では、インプット細胞に、それが狭窄を通過するときに変形力が印加される。
【０１７９】
一部の態様では、本開示は、個体におけるＨＰＶ関連疾患を予防するための方法であって、方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、配列番号１８〜２６のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含むＨＰＶ抗原を含む、方法に関する。一部の態様では、本開示は、個体におけるＨＰＶ関連疾患を予防するための方法であって、方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、ＨＰＶ抗原を含み、改変免疫細胞は、配列番号１８〜２６のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含むＨＰＶ抗原を含み、改変免疫細胞は、ａ）インプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプット細胞の直径の関数であり、それによって、ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きなインプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；およびｂ）ＨＰＶ抗原が摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット細胞とＨＰＶ抗原とをインキュベートし、それによって、改変免疫細胞を作出するステップによって調製される、方法に関する。一部の実施形態では、インプット細胞に、それが狭窄を通過するときに変形力が印加される。
【０１８０】
一部の態様では、本開示は、ＨＰＶ関連疾患を有する個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、配列番号１８〜２６のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含むＨＰＶ抗原を含む、方法に関する。一部の態様では、本開示は、ＨＰＶ関連疾患を有する個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、配列番号１８〜２６のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含むＨＰＶ抗原を含み、改変免疫細胞は、ａ）インプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプット細胞の直径の関数であり、それによって、ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きなインプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；およびｂ）ＨＰＶ抗原が摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット細胞とＨＰＶ抗原とをインキュベートし、それによって、改変免疫細胞を作出するステップによって調製される、方法に関する。一部の実施形態では、インプット細胞に、それが狭窄を通過するときに変形力が印加される。一部の実施形態では、免疫応答は増強される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原に対する免疫応答は増強される。
【０１８１】
一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、同じおよび／または異なるＨＰＶ抗原に対する応答を誘発する多数のポリペプチドのプールである。一部の実施形態では、多数の抗原のプールに含まれる抗原は、他の抗原に向けられた免疫応答を減少させない。例えば、ＨＰＶ  Ｅ６およびＥ７抗原のプールを使用する場合、ＨＰＶ  Ｅ６およびＥ７抗原に向けられるそれぞれの免疫応答は、抗原として、それぞれ、ＨＰＶ  Ｅ６単独を使用する、またはＨＰＶ  Ｅ７単独を使用するのに匹敵するはずである。
【０１８２】
一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、免疫原性ＨＰＶエピトープおよび１つまたは複数の異種ペプチド配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、１つまたは複数のＨＰＶ抗原は、それ自体と、他の抗原と、またはアジュバントと複合体を形成する。
【０１８３】
本明細書で使用される場合、「アジュバント」という用語は、免疫応答を、直接的または間接的に、モジュレートおよび／または発生させる物質を指す。一般に、アジュバントは、抗原と併せて投与されて、抗原単独と比較して抗原に対する免疫応答の増強をもたらす。したがって、アジュバントは、抗原に対する免疫細胞応答（例えば、Ｔ細胞応答）の誘発をブーストするために使用することができる。一部の実施形態では、本発明は、細胞内にＨＰＶ抗原、および細胞内にアジュバントを含むように改変された免疫細胞を提供する。一部の実施形態では、本明細書に記載のようにして摂動された免疫細胞は、ＨＰＶ抗原およびアジュバントの両方とインキュベートされる。例示的な細胞内のアジュバントとしては、限定なく、ＣｐＧ  ＯＤＮ、インターフェロン−α（ＩＦＮ−α）、インターフェロン遺伝子刺激因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニスト、およびレチノイン酸誘導性（induicible）遺伝子Ｉ（ＲＩＧ−Ｉ）アゴニスト、ならびにポリイノシン酸：ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）が挙げられる。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧ  ＯＤＮ、ＩＦＮ−α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ−Ｉアゴニスト、またはポリＩ：Ｃである。特定の実施形態では、アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮポリヌクレオチドである。一部の実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮアジュバントは、ＣｐＧ  ＯＤＮ１０１８、ＣｐＧ  ＯＤＮ１５８５、ＣｐＧ  ＯＤＮ２２１６、ＣｐＧ  ＯＤＮ２３３６、ＣｐＧ  ＯＤＮ１６６８、ＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６、ＣＰＧ  ＯＤＮ２００６、ＣｐＧ  ＯＤＮ２００７、ＣｐＧ  ＯＤＮ  ＢＷ００６、ＣｐＧ  ＯＤＮ  Ｄ−ＳＬ０１、ＣｐＧ  ＯＤＮ２３９５、ＣｐＧ  ＯＤＮ  Ｍ３６２、ＣｐＧ  ＯＤＮ  Ｄ−ＳＬ０３の群から選択されたものを含む。一部の実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮアジュバントは、ＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６（ＴＣＣＡＴＧＡＣＧＴＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴ；配列番号３０）またはＣｐＧ  ＯＤＮ２００６（ＣｐＧ  ＯＤＮ７９０９としても公知）（ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ；配列番号３１）オリゴヌクレオチドである。一部の実施形態では、ＲＩＧ−Ｉアゴニストは、ポリイノシン酸：ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）を含む。複数のアジュバントを、免疫応答の誘発を増強するための抗原と併せて使用することもできる。一部の実施形態では、改変免疫細胞は１つよりも多いアジュバントを含む。複数のアジュバントを、免疫応答の誘発を増強するための抗原と併せて使用することもできる。一部の実施形態では、改変免疫細胞は１つよりも多いアジュバントを含む。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、アジュバントのＣｐＧ  ＯＤＮ、ＩＦＮ−α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ−Ｉアゴニスト、またはポリＩ：Ｃの任意の組合せを含む。
【０１８４】
例示的なアジュバントとしては、限定なく、ＣｐＧ  ＯＤＮ、インターフェロン−α（ＩＦＮ−α）、ポリイノシン酸：ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）、イミキモド（Ｒ８３７）、レシキモド（Ｒ８４８）、またはリポ多糖（ＬＰＳ）が挙げられる。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧ  ＯＤＮ、ＬＰＳ、ＩＦＮ−α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ−Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、またはＴＬＲ  ９アゴニストである。特定の実施形態では、アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮである。一部の実施形態では、アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮである。一部の実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮは、クラスＡ  ＣｐＧ  ＯＤＮ、クラスＢ  ＣｐＧ  ＯＤＮ、またはクラスＣ  ＣｐＧ  ＯＤＮである。一部の実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮアジュバントは、ＣｐＧ  ＯＤＮ１０１８、ＣｐＧ  ＯＤＮ１５８５、ＣｐＧ  ＯＤＮ２２１６、ＣｐＧ  ＯＤＮ２３３６、ＣｐＧ  ＯＤＮ１６６８、ＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６、ＣＰＧ  ＯＤＮ２００６、ＣｐＧ  ＯＤＮ２００７、ＣｐＧ  ＯＤＮ  ＢＷ００６、ＣｐＧ  ＯＤＮ  Ｄ−ＳＬ０１、ＣｐＧ  ＯＤＮ２３９５、ＣｐＧ  ＯＤＮ  Ｍ３６２、ＣｐＧ  ＯＤＮ  Ｄ−ＳＬ０３の群から選択されたものを含む。一部の実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮアジュバントは、ＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６（ＴＣＣＡＴＧＡＣＧＴＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴ；配列番号３０）またはＣｐＧ  ＯＤＮ２００６（ＣｐＧ  ＯＤＮ７９０９としても公知）（ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ；配列番号３１）オリゴヌクレオチドである。一部の実施形態では、アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮ７９０９である。一部の実施形態では、ＲＩＧ−Ｉアゴニストは、ポリイノシン酸：ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）を含む。複数のアジュバントを、免疫応答の誘発を増強するための抗原と併せて使用することもできる。一部の実施形態では、改変免疫細胞は１つよりも多いアジュバントを含む。複数のアジュバントを、免疫応答の誘発を増強するための抗原と併せて使用することもできる。一部の実施形態では、改変免疫細胞は１つよりも多いアジュバントを含む。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、アジュバントのＣｐＧ  ＯＤＮ、ＬＰＳ、ＩＦＮ−α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ−Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、またはＴＬＲ  ９アゴニストの任意の組合せを含む。
【０１８５】
本明細書に記載の実施形態のいずれかでは、他に指示されない限り、アジュバントは、（ａ）摂動インプット細胞とインキュベートされ、それを通過するアジュバント、（ｂ）ＰＢＭＣを調整するために、ＰＭＢＣとインキュベートされるアジュバント、（ｃ）個体に改変免疫細胞と共投与されるアジュバントを指す場合がある。
【０１８６】
一部の実施形態では、改変免疫細胞は、作用物質をさらに含み、この作用物質は、この作用物質を含まない対応する改変免疫細胞と比較して改変免疫細胞の生存能力および／または機能を増強する。一部の実施形態では、作用物質は、エンドサイトーシスを増強する化合物、安定剤、または補因子である。一部の実施形態では、安定剤は、ＨＰＶ抗原および／またはアジュバントと複合体を形成する。一部の実施形態では、安定剤は、ＨＰＶ抗原および／またはアジュバントの溶解度および／または溶液半減期を増加させる。一部の実施形態では、複数の改変免疫細胞は、安定剤を含まない対応する改変免疫細胞よりも高い生存能力を有する。一部の実施形態では、作用物質はアルブミンである。さらなる実施形態では、アルブミンは、マウス、ウシ、またはヒトアルブミンである。さらなる実施形態では、作用物質は、二価金属カチオン、グルコース、ＡＴＰ、カリウム、グリセロール、トレハロース、Ｄ−スクロース、ＰＥＧ１５００、Ｌ−アルギニン、Ｌ−グルタミン、またはＥＤＴＡである。一部の実施形態では、二価金属カチオンは、Ｍｇ２＋、Ｚｎ２＋、またはＣａ２＋のうちの１つまたは複数（one  more  of）である。一部の実施形態では、作用物質はＭＳＡを含む。
【０１８７】
本明細書に記載の方法または組成物のいずれか１つによる一部の実施形態では、改変免疫細胞は、作用物質をさらに含み、この作用物質は、この作用物質を含まない対応する複数の改変免疫細胞と比較して改変免疫細胞の生存能力および／または機能を増強する。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、作用物質をさらに含み、この作用物質は、この作用物質を含まない対応する改変免疫細胞と比較して凍結−解凍サイクルの際の改変免疫細胞の生存能力および／または機能を増強する。一部の実施形態では、作用物質は、凍結保存剤および／または低温保存剤である。一部の実施形態では、凍結保存剤も低温保存剤も、任意の凍結−解凍サイクルの前の作用物質を含まない対応する改変免疫細胞と比較して作用物質を含む改変免疫細胞において１０％または２０％を超える細胞死を引き起こさない。一部の実施形態では、改変免疫細胞の少なくとも約７０％、約８０％、または約９０％は、最大で１、２、３、４、５回の凍結−解凍サイクルの後、生存している。一部の実施形態では、作用物質は、エンドサイトーシスを増強する化合物、安定剤、または補因子である。一部の実施形態では、作用物質はアルブミンである。一部の実施形態では、アルブミンは、マウス、ウシ、またはヒトアルブミンである。一部の実施形態では、作用物質はヒトアルブミンである。一部の実施形態では、作用物質は、二価金属カチオン、グルコース、ＡＴＰ、カリウム、グリセロール、トレハロース、Ｄ−スクロース、ＰＥＧ１５００、Ｌ−アルギニン、Ｌ−グルタミン、またはＥＤＴＡのうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、二価金属カチオンは、Ｍｇ２＋、Ｚｎ２＋またはＣａ２＋のうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、作用物質は、ピルビン酸ナトリウム、アデニン、トレハロース、デキストロース、マンノース、スクロース、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ＤＭＳＯ、ＨＥＰＥＳ、グリセロール、グルタチオン、イノシン、二塩基性リン酸ナトリウム、一塩基性リン酸ナトリウム、ナトリウム金属イオン、カリウム金属イオン、マグネシウム金属イオン、塩化物、アセテート、グルコネート、スクロース、水酸化カリウム、または水酸化ナトリウムのうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、作用物質は、ピルビン酸ナトリウム、アデニン、Ｒｅｊｕｖｅｓｏｌ（登録商標）、トレハロース、デキストロース、マンノース、スクロース、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ（登録商標）、ＤＭＳＯ、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ２、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ５、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１５、ＨＥＰＥＳ、グリセロール、グルタチオン、ＨｙｐｏＴｈｅｒｍｏｓｏｌ（登録商標）のうちの１つまたは複数である。
【０１８８】
一部の実施形態では、改変免疫細胞は、共刺激分子のうちの１つまたは複数の発現を増加させるためにさらに改変されている。さらなる実施形態では、共刺激分子は、Ｂ７−Ｈ２（ＩＣＯＳＬ）、Ｂ７−１（ＣＤ８０）、Ｂ７−２（ＣＤ８６）、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＣＤ４０、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ３０Ｌ、ＴＩＭ４、ＳＬＡＭ、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ１５５、またはＣＤ１１２である。一部の実施形態では、細胞は、１つまたは複数の共刺激分子の増加した発現をもたらす核酸を含む。
【０１８９】
一部の実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、樹状細胞、単球、マクロファージ、骨髄性細胞、顆粒球、好中球、マスト細胞、ナチュラルキラー細胞、自然リンパ球、好塩基球、または造血系前駆細胞である。一部の実施形態では、免疫細胞はＢ細胞ではない。一部の実施形態では、免疫細胞はＴ細胞である。一部の実施形態では、免疫細胞は、Ｂ細胞以外である。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、ＣＩＫ細胞、またはナチュラルキラーＴ細胞のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ３＋  Ｔ細胞、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＡ＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＯ＋  Ｔ細胞、およびγδ−Ｔ細胞のうちの１つまたは複数を含む。同種異系Ｔ細胞におけるＭＨＣ発現は、それらの投与に応答して個体において開始される自然免疫応答をもたらすことができ、そのようなＴ細胞の半減期の短縮をもたらす。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を低下させるさらなる改変を含む。特定の実施形態では、さらなる改変は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９、ＺＦＮ、ＴＡＬＥＮ、Ｃｒｅリコンビナーゼ、またはメガヌクレアーゼを使用して、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を低下させることを含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を増加させるさらなる改変を含む。特定の実施形態では、さらなる改変は、ｍＲＮＡ、プラスミドＤＮＡまたはｃＤＮＡを使用して、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を増加させることを含む。一部の実施形態では、さらに改変されたＴ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答は、さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答と比較して低下している。一部の実施形態では、さらに改変されたＴ細胞の、それらが投与された個体における循環半減期は、さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞の、それらが投与された個体における循環半減期と比較して増加している。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、ＣＩＫ細胞、またはナチュラルキラーＴ細胞のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ３＋  Ｔ細胞、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＡ＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＯ＋  Ｔ細胞、またはγδ−Ｔ細胞のうちの１つまたは複数を含む。
【０１９０】
免疫細胞および他の細胞は、自家または同種異系間細胞の供給源として使用することができる。一部の実施形態では、改変免疫細胞は個体に対して同種異系である。他の実施形態では、改変免疫細胞は個体に対して自家である。一部の実施形態では、処置される個体は、炎症をモジュレートするよう事前調整される。
【０１９１】
アジュバントは、ＨＰＶ抗原に対する免疫応答をさらに増強するために用いることができる。一部の実施形態では、処置するための方法は、アジュバントを個体に投与するステップをさらに含む。例示的なアジュバントとしては、限定なく、ＩＦＮ−α、ＣｐＧ  ＯＤＮ、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ−Ｉアゴニスト、およびポリＩ：Ｃが挙げられる。一部の実施形態では、アジュバントは、ＩＦＮ−αまたはＣｐＧ  ＯＤＮである。一部の実施形態では、アジュバントは、ＩＦＮ−α、ＣｐＧ  ＯＤＮ、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ−Ｉアゴニスト、またはポリＩ：Ｃである。一部の実施形態では、アジュバントは、ＩＦＮ−α、ＣｐＧ  ＯＤＮ、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ−Ｉアゴニスト、またはポリＩ：Ｃの任意の組合せを含む。
【０１９２】
一部の実施形態では、方法は、改変免疫細胞の複数回投与を含む。一部の実施形態では、方法は、改変免疫細胞の約３〜約９回の投与を含む。一部の実施形態では、方法は、改変免疫細胞の約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５回の投与のうちのいずれか１つを含む。一部の実施形態では、方法は、必要により、改変免疫細胞の連続投与を含む。一部の実施形態では、改変免疫細胞の２回の連続投与の間の時間間隔は約１日〜約３０日である。一部の実施形態では、改変免疫細胞の２回の連続投与の間の時間間隔は、約２１日である。一部の実施形態では、改変免疫細胞の２回の連続投与の間の時間間隔（the  time  the  time  interval）は、約１、２、３、４、５、６、７、８、１０、１２、１４、１６、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、または１５０日のうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、複数の改変ＰＢＭＣである。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、調整された複数の改変ＰＢＭＣである。ＰＢＭＣを調整するための方法は、米国仮特許出願第６２／８１２，２２５号および欧州特許出願第ＥＰ１９１６１９６４．２号によって提供され、これらは、それらの全体が、これにより参照により本明細書に組み込まれる。
【０１９３】
一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物およびアジュバントは同時に投与される。一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物およびアジュバントは逐次的に投与される。
【０１９４】
一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物は、アジュバントを投与する前に投与される。例えば、改変免疫細胞を含む組成物は、アジュバントの投与の約１時間〜約１週間前に投与される。例えば、一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物は、アジュバントの投与の約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約６時間、約８時間、約１０時間、約１２時間、約１４時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４２時間、約４８時間、約６０時間、約３日、約４日、約５日、約６日、または約７日前に投与される。一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物は、アジュバントの投与の約１時間〜約２時間、約２時間〜約３時間、約３時間〜約４時間、約４時間〜約６時間、約６時間〜約８時間、約８時間〜約１０時間、約１０時間〜約１２時間、約１２時間〜約１４時間、約１４時間〜約１６時間、約１６時間〜約１８時間、約１８時間〜約２０時間、約２０時間〜約２４時間、約２４時間〜約３０時間、約３０時間〜約３６時間、約３６時間〜約４２時間、約４２時間〜約４８時間、約４８時間〜約６０時間、約６０時間〜約３日、約３日〜約４日、約４日〜約５日、約５日〜約６日、約６日〜約７日前に投与される。
【０１９５】
一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物は、アジュバントの投与後に投与される。例えば、改変免疫細胞を含む組成物は、アジュバントの投与の約１時間〜約１週間後に投与される。例えば、一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物は、アジュバントの投与の約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約６時間、約８時間、約１０時間、約１２時間、約１４時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４２時間、約４８時間、約６０時間、約３日、約４日、約５日、約６日、または約７日後に投与される。一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物は、アジュバントの投与の約１時間〜約２時間、約２時間〜約３時間、約３時間〜約４時間、約４時間〜約６時間、約６時間〜約８時間、約８時間〜約１０時間、約１０時間〜約１２時間、約１２時間〜約１４時間、約１４時間〜約１６時間、約１６時間〜約１８時間、約１８時間〜約２０時間、約２０時間〜約２４時間、約２４時間〜約３０時間、約３０時間〜約３６時間、約３６時間〜約４２時間、約４２時間〜約４８時間、約４８時間〜約６０時間、約６０時間〜約３日、約３日〜約４日、約４日〜約５日、約５日〜約６日、約６日〜約７日後に投与される。
【０１９６】
免疫チェックポイントは、免疫系の制御因子であり、チェック中に免疫応答を保つ。免疫チェックポイント阻害剤は、免疫応答の増強を促進するために用いることができる。一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物および免疫チェックポイント阻害剤は同時に投与される。一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物および免疫チェックポイント阻害剤は逐次的に投与される。
【０１９７】
一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与の前に投与される。一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与後に投与される。例えば、改変免疫細胞を含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与の約１時間〜約１週間前に投与される。例えば、一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与の約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約６時間、約８時間、約１０時間、約１２時間、約１４時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４２時間、約４８時間、約６０時間、約３日、約４日、約５日、約６日、または約７日前に投与される。一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与の約１時間〜約２時間、約２時間〜約３時間、約３時間〜約４時間、約４時間〜約６時間、約６時間〜約８時間、約８時間〜約１０時間、約１０時間〜約１２時間、約１２時間〜約１４時間、約１４時間〜約１６時間、約１６時間〜約１８時間、約１８時間〜約２０時間、約２０時間〜約２４時間、約２４時間〜約３０時間、約３０時間〜約３６時間、約３６時間〜約４２時間、約４２時間〜約４８時間、約４８時間〜約６０時間、約６０時間〜約３日、約３日〜約４日、約４日〜約５日、約５日〜約６日、約６日〜約７日前に投与される。
【０１９８】
一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与後に投与される。例えば、改変免疫細胞を含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与の約１時間〜約１週間後に投与される。例えば、一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与の約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約６時間、約８時間、約１０時間、約１２時間、約１４時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４２時間、約４８時間、約６０時間、約３日、約４日、約５日、約６日、または約７日後に投与される。一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与の約１時間〜約２時間、約２時間〜約３時間、約３時間〜約４時間、約４時間〜約６時間、約６時間〜約８時間、約８時間〜約１０時間、約１０時間〜約１２時間、約１２時間〜約１４時間、約１４時間〜約１６時間、約１６時間〜約１８時間、約１８時間〜約２０時間、約２０時間〜約２４時間、約２４時間〜約３０時間、約３０時間〜約３６時間、約３６時間〜約４２時間、約４２時間〜約４８時間、約４８時間〜約６０時間、約６０時間〜約３日、約３日〜約４日、約４日〜約５日、約５日〜約６日、約６日〜約７日後に投与される。
【０１９９】
一部の実施形態では、方法は、改変免疫細胞を含む組成物の複数回投与、および／またはチェックポイント阻害剤の複数回投与を含む。例えば、一部の実施形態では、方法は、改変免疫細胞を含む組成物および／またはチェックポイント阻害剤の２回投与、３回投与、４回投与、５回投与、６回投与、７回投与、８回投与、９回投与、１０回投与、１１回投与、１２回投与、１３回投与、１４回投与、または１５回投与を含む。例えば、一部の実施形態では、方法は、改変免疫細胞を含む組成物および／またはチェックポイント阻害剤の５回未満の投与、１０回未満の投与、１５回未満の投与、２０回未満の投与、２５回未満の投与、３０回未満の投与、５０回未満の投与、７５回未満の投与、１００回未満、または２００回未満の投与を含む。
【０２００】
例示的な免疫チェックポイント阻害剤は、限定なく、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３またはＴＩＭ−３を標的にする。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、またはＴＩＭ−３のうちの１つまたは複数を標的にする。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１に結合する抗体、ＰＤ−Ｌ１を結合する抗体、ＣＴＬＡ−４を結合する抗体、ＬＡＧ３を結合する抗体、またはＴＩＭ−３を結合する抗体のうちの１つまたは複数である。さらなる実施形態では、抗体は、全長抗体または任意のバリアント、例えば、限定されるものではないが、抗体断片、一本鎖可変断片（ＳｃＦｖ）、または抗原結合断片（Ｆａｂ）であり得る。さらなる実施形態では、抗体は、二重特異性、三重特異性、または多重特異性であり得る。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、またはＴＩＭ−３のうちの１つまたは複数に結合するか、および／またはこれらを阻害する、１つまたは複数の化学化合物である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、またはＴＩＭ−３のうちの１つまたは複数に結合するか、および／またはこれらを阻害する、１つまたは複数のペプチドである。
【０２０１】
他の例示的な免疫チェックポイント阻害剤は、限定なく、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、またはＢＴＬＡを標的にする。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数を標的にする。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＩＧＩＴに結合する抗体、ＶＩＳＴＡを結合する抗体、ＴＩＭ１を結合する抗体、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）を結合する抗体、またはＢＴＬＡを結合する抗体のうちの１つまたは複数である。さらなる実施形態では、抗体は、全長抗体または任意のバリアント、例えば、限定されるものではないが、抗体断片、一本鎖可変断片（ＳｃＦｖ）、または抗原結合断片（Ｆａｂ）であり得る。さらなる実施形態では、抗体は、二重特異性、三重特異性、または多重特異性であり得る。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ−３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数に結合するか、および／またはこれらを阻害する、１つまたは複数の化学化合物である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ−３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数に結合するか、および／またはこれらを阻害する、１つまたは複数のペプチドである。
【０２０２】
化学療法または放射線療法を、がん、例えば、ＨＰＶ関連がんに対する相加または相乗効果を達成するために、本明細書に記載の改変免疫細胞のいずれか１つと組み合わせて使用することができる。一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物は、化学療法の投与と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物および化学療法は同時に投与される。一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物および化学療法は逐次的に投与される。
【０２０３】
一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物は、化学療法の投与の前に投与される。一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物は、化学療法の投与後に投与される。例えば、改変免疫細胞を含む組成物は、化学療法の投与の約１時間〜約１週間前に投与される。例えば、一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物は、化学療法の投与の約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約６時間、約８時間、約１０時間、約１２時間、約１４時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４２時間、約４８時間、約６０時間、約３日、約４日、約５日、約６日、または約７日前に投与される。一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物は、化学療法の投与の約１時間〜約２時間、約２時間〜約３時間、約３時間〜約４時間、約４時間〜約６時間、約６時間〜約８時間、約８時間〜約１０時間、約１０時間〜約１２時間、約１２時間〜約１４時間、約１４時間〜約１６時間、約１６時間〜約１８時間、約１８時間〜約２０時間、約２０時間〜約２４時間、約２４時間〜約３０時間、約３０時間〜約３６時間、約３６時間〜約４２時間、約４２時間〜約４８時間、約４８時間〜約６０時間、約６０時間〜約３日、約３日〜約４日、約４日〜約５日、約５日〜約６日、約６日〜約７日前に投与される。
【０２０４】
一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物は、化学療法の投与後に投与される。例えば、改変免疫細胞を含む組成物は、化学療法の投与の約１時間〜約１週間後に投与される。例えば、一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物は、化学療法の投与の約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約６時間、約８時間、約１０時間、約１２時間、約１４時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４２時間、約４８時間、約６０時間、約３日、約４日、約５日、約６日、または約７日後に投与される。一部の実施形態では、改変免疫細胞を含む組成物は、化学療法の投与の約１時間〜約２時間、約２時間〜約３時間、約３時間〜約４時間、約４時間〜約６時間、約６時間〜約８時間、約８時間〜約１０時間、約１０時間〜約１２時間、約１２時間〜約１４時間、約１４時間〜約１６時間、約１６時間〜約１８時間、約１８時間〜約２０時間、約２０時間〜約２４時間、約２４時間〜約３０時間、約３０時間〜約３６時間、約３６時間〜約４２時間、約４２時間〜約４８時間、約４８時間〜約６０時間、約６０時間〜約３日、約３日〜約４日、約４日〜約５日、約５日〜約６日、約６日〜約７日後に投与される。
【０２０５】
一部の実施形態では、方法は、改変免疫細胞を含む組成物の複数回投与、および／または化学療法の複数回投与を含む。例えば、一部の実施形態では、方法は、改変免疫細胞を含む組成物および／または化学療法の２回投与、３回投与、４回投与、５回投与、６回投与、７回投与、８回投与、９回投与、１０回投与、１１回投与、１２回投与、１３回投与、１４回投与、または１５回投与を含む。例えば、一部の実施形態では、方法は、改変免疫細胞を含む組成物および／または化学療法の５回未満の投与、１０回未満の投与、１５回未満の投与、２０回未満の投与、２５回未満の投与、３０回未満の投与、５０回未満の投与、７５回未満の投与、１００回未満、または２００回未満の投与を含む。
【０２０６】
例示的な化学療法は、細胞周期依存性または細胞周期非依存性であり得る。一部の実施形態では、化学療法は、１つまたは複数の化学療法剤を含む。一部の実施形態では、化学療法剤は、がんにおける、細胞分裂、ＤＮＡ、または代謝のうちの１つまたは複数を標的にし得る。一部の実施形態では、化学療法剤は、限定されるものではないが、シスプラチン、オキサリプラチン、またはカルボプラチンなどの白金系作用物質である。一部の実施形態では、化学療法剤はタキサン（ドセタキセルまたはパクリタキセルなど）である。一部の実施形態では、化学療法剤は、５−フルオロウラシル、ドキソルビシン、またはイリノテカンである。一部の実施形態では、化学療法剤は、アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗腫瘍抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤、または有糸分裂阻害剤のうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、化学療法はシスプラチンを含む。一部の実施形態では、化学療法または免疫チェックポイント阻害剤の１つまたは複数は、ＨＰＶ関連疾患を処置するまたは予防するために、本明細書に記載の改変免疫細胞のいずれか１つと組み合わせることができる。
【０２０７】
放射線療法を、がん、例えば、ＨＰＶ関連がんに対する相加または相乗効果を達成するために、本明細書に記載の改変Ｔ細胞のいずれか１つと組み合わせて使用することができる。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞を含む組成物は、放射線療法の投与と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞を含む組成物および放射線療法は同時に投与される。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞を含む組成物および放射線療法は逐次的に投与される。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞を含む組成物は、放射線療法の投与と組み合わせて、化学療法と組み合わせて、および／または免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて、投与される。
【０２０８】
一部の実施形態では、改変Ｔ細胞を含む組成物は、放射線療法の投与の前に投与される。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞を含む組成物は、放射線療法の投与後に投与される。例えば、改変Ｔ細胞を含む組成物は、放射線療法の投与の約１時間〜約１週間前に投与される。例えば、一部の実施形態では、改変Ｔ細胞を含む組成物は、放射線療法の投与の約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約６時間、約８時間、約１０時間、約１２時間、約１４時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４２時間、約４８時間、約６０時間、約３日、約４日、約５日、約６日、または約７日前に投与される。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞を含む組成物は、放射線療法の投与の約１時間〜約２時間、約２時間〜約３時間、約３時間〜約４時間、約４時間〜約６時間、約６時間〜約８時間、約８時間〜約１０時間、約１０時間〜約１２時間、約１２時間〜約１４時間、約１４時間〜約１６時間、約１６時間〜約１８時間、約１８時間〜約２０時間、約２０時間〜約２４時間、約２４時間〜約３０時間、約３０時間〜約３６時間、約３６時間〜約４２時間、約４２時間〜約４８時間、約４８時間〜約６０時間、約６０時間〜約３日、約３日〜約４日、約４日〜約５日、約５日〜約６日、約６日〜約７日前に投与される。
【０２０９】
一部の実施形態では、改変Ｔ細胞を含む組成物は、放射線療法の投与後に投与される。例えば、改変Ｔ細胞を含む組成物は、放射線療法の投与の約１時間〜約１週間後に投与される。例えば、一部の実施形態では、改変Ｔ細胞を含む組成物は、放射線療法の投与の約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約６時間、約８時間、約１０時間、約１２時間、約１４時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４２時間、約４８時間、約６０時間、約３日、約４日、約５日、約６日、または約７日後に投与される。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞を含む組成物は、放射線療法の投与の約１時間〜約２時間、約２時間〜約３時間、約３時間〜約４時間、約４時間〜約６時間、約６時間〜約８時間、約８時間〜約１０時間、約１０時間〜約１２時間、約１２時間〜約１４時間、約１４時間〜約１６時間、約１６時間〜約１８時間、約１８時間〜約２０時間、約２０時間〜約２４時間、約２４時間〜約３０時間、約３０時間〜約３６時間、約３６時間〜約４２時間、約４２時間〜約４８時間、約４８時間〜約６０時間、約６０時間〜約３日、約３日〜約４日、約４日〜約５日、約５日〜約６日、約６日〜約７日後に投与される。
【０２１０】
一部の実施形態では、方法は、改変Ｔ細胞を含む組成物の複数回投与、および／または放射線療法の複数回投与を含む。例えば、一部の実施形態では、方法は、改変Ｔ細胞を含む組成物および／または放射線療法の２回投与、３回投与、４回投与、５回投与、６回投与、７回投与、８回投与、９回投与、１０回投与、１１回投与、１２回投与、１３回投与、１４回投与、または１５回投与を含む。例えば、一部の実施形態では、方法は、改変Ｔ細胞を含む組成物および／または放射線療法の５回未満の投与、１０回未満の投与、１５回未満の投与、２０回未満の投与、２５回未満の投与、３０回未満の投与、５０回未満の投与、７５回未満の投与、１００回未満、または２００回未満の投与を含む。
【０２１１】
ＨＰＶ抗原は、プロセシングされ、免疫細胞に対してＭＨＣにおいて提示されると、提示されたＨＰＶエピトープに対する免疫応答を誘因または増強することができる。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る。一部の実施形態では、免疫応答は増強される。さらなる実施形態では、ＨＰＶ抗原に対する免疫応答は増強される。一部の実施形態では、個体への改変免疫細胞を含む組成物の投与は、ＨＰＶ抗原に特異的な細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の活性化および／または増殖をもたらす。一部の実施形態では、個体への改変免疫細胞を含む組成物の投与は、抗原に特異的なヘルパーＴ（Ｔｈ）細胞の活性化および／または増殖をもたらす。
【０２１２】
一部の実施形態では、有効量の組成物は、約１×１０６〜約１×１０１２個の改変免疫細胞を含む。一部の実施形態では、有効量の組成物は、約１×１０６個、約１×１０７個、約１×１０８個、約１×１０９個、約１×１０１０個、約１×１０１１個、または約１×１０１２個の改変免疫細胞のうちのいずれかを含む。一部の実施形態では、有効量の組成物は、約１×１０６〜約１×１０７個、約１×１０７〜約１×１０８個、約１×１０８〜約１×１０９個、約１×１０９〜約１×１０１０個、約１×１０１０〜約１×１０１１個、または約１×１０１１〜約１×１０１２個の改変免疫細胞のうちのいずれかを含む。
【０２１３】
一部の実施形態では、方法は、改変免疫細胞を含む組成物の複数回投与を含む。例えば、一部の実施形態では、方法は、改変免疫細胞を含む組成物の２回投与、３回投与、４回投与、５回投与、６回投与、７回投与、８回投与、９回投与、１０回投与、１１回投与、１２回投与、１３回投与、１４回投与、または１５回投与を含む。例えば、一部の実施形態では、方法は、改変免疫細胞を含む組成物の５回未満の投与、１０回未満の投与、１５回未満の投与、２０回未満の投与、２５回未満の投与、３０回未満の投与、５０回未満の投与、７５回未満の投与、１００回未満、または２００回未満の投与を含む。例えば、一部の実施形態では、方法は、改変免疫細胞を含む組成物の第１の投与、続いて、改変免疫細胞を含む組成物の第２の投与を含む。投与のタイミングはまた、所望の結果を達成するために改変することができる。一部の実施形態では、個体への組成物の第１の投与は、組成物の第２の投与の前に起こる。一部の実施形態では、第１の投与は、第２の投与の導入の約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１か月、約２か月、約３か月、約４か月、約５か月、約６か月、約７か月、約８か月、約９か月、約１０か月、約１１か月、約１２か月、約１８か月または約２４か月前のうちのいずれかを超えて、個体に導入される。
【０２１４】
一部の実施形態では、方法は、改変Ｔ細胞の複数回投与を含む。一部の実施形態では、方法は、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または約１０回より多くの投与のうちのいずれかを含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞の２回の連続投与の間の時間間隔は、約１日〜約１か月である。一部の実施形態では、投与は、毎日、２日ごと、３日ごと、４日ごと、５日ごと、６日ごと、毎週、隔週、または毎月である。一部の実施形態では、連続投与は、最大で１年、またはそれよりも長く与えられる。
【０２１５】
ある特定の態様では、改変細胞を含む組成物は、ＨＰＶ関連疾患を処置、予防する、および／またはＨＰＶ関連疾患を有する個体における免疫応答をモジュレートするために使用することができる。一部の実施形態では、ＨＰＶ関連疾患はＨＰＶ関連がんである。一部の実施形態では、ＨＰＶ関連がんは、子宮頸部疾患、肛門疾患、中咽頭疾患、膣疾患、外陰部疾患、陰茎疾患、皮膚疾患、または頭頸部疾患である。一部の実施形態では、ＨＰＶ関連疾患は、ＨＰＶ関連感染性疾患である。他のＨＰＶ関連疾患としては、尋常性疣贅、足底疣贅、扁平疣贅、肛門性器疣贅、肛門病変、表皮異形成、局所性上皮肥厚、口腔乳頭腫、疣贅嚢胞、および喉頭乳頭腫症を挙げることができる。
【０２１６】
一部の態様では、本開示は、ＨＰＶ関連疾患を処置するための改変免疫細胞の使用であって、改変免疫細胞は、細胞内にＨＰＶ抗原、および細胞内にアジュバントを含む、使用に関する。一部の態様では、本開示は、ＨＰＶ関連疾患を処置するための改変免疫細胞の使用であって、方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、細胞内にＨＰＶ抗原、および細胞内にアジュバントを含み、改変免疫細胞は、ａ）インプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、インプット細胞に、それが狭窄を通過するときに変形力が印加されるように、狭窄の直径は、懸濁液中のインプット細胞の直径の関数であり、それによって、ＨＰＶ抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きなインプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；ならびにｂ）ＨＰＶ抗原およびアジュバントが摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット細胞とＨＰＶ抗原およびアジュバントとをインキュベートし、それによって、改変免疫細胞を作出するステップによって調製される、使用に関する。
【０２１７】
一部の態様では、本開示は、ＨＰＶ関連疾患を処置するために使用される医薬の製造のための改変免疫細胞を含む組成物であって、改変免疫細胞は、細胞内にＨＰＶ抗原、および細胞内にアジュバントを含む、組成物に関する。一部の態様では、本開示は、ＨＰＶ関連疾患を処置するために使用される医薬の製造のための改変免疫細胞を含む組成物であって、方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、細胞内にＨＰＶ抗原、および細胞内にアジュバントを含み、改変免疫細胞は、ａ）インプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、インプット細胞に、それが狭窄を通過するときに変形力が印加されるように、狭窄の直径は、懸濁液中のインプット細胞の直径の関数であり、それによって、ＨＰＶ抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きなインプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；ならびにｂ）ＨＰＶ抗原およびアジュバントが摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット細胞とＨＰＶ抗原およびアジュバントとをインキュベートし、それによって、改変免疫細胞を作出するステップによって調製される、組成物に関する。
【０２１８】
一部の態様では、本開示は、医学的処置の方法における使用のための改変免疫細胞を含む組成物であって、改変免疫細胞は、細胞内にＨＰＶ抗原、および細胞内にアジュバントを含む、組成物に関する。一部の態様では、本開示は、医学的処置の方法における使用のための改変免疫細胞を含む組成物であって、方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、細胞内にＨＰＶ抗原、および細胞内にアジュバントを含み、改変免疫細胞は、ａ）インプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、インプット細胞に、それが狭窄を通過するときに変形力が印加されるように、狭窄の直径は、懸濁液中のインプット細胞の直径の関数であり、それによって、ＨＰＶ抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きなインプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；ならびにｂ）ＨＰＶ抗原およびアジュバントが摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット細胞とＨＰＶ抗原およびアジュバントとをインキュベートし、それによって、改変免疫細胞を作出するステップによって調製される、組成物に関する。
【０２１９】
一部の態様では、本開示は、がん、感染性疾患、またはウイルス関連疾患を処置する方法における使用のための改変免疫細胞を含む組成物であって、改変免疫細胞は、細胞内にＨＰＶ抗原、および細胞内にアジュバントを含む、組成物に関する。一部の態様では、本開示は、ＨＰＶ関連疾患の処置における使用のための改変免疫細胞を含む組成物であって、方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、細胞内にＨＰＶ抗原、および細胞内にアジュバントを含み、改変免疫細胞は、ａ）インプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、インプット細胞に、それが狭窄を通過するときに変形力が印加されるように、狭窄の直径は、懸濁液中のインプット細胞の直径の関数であり、それによって、ＨＰＶ抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きなインプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；ならびにｂ）ＨＰＶ抗原およびアジュバントが摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット細胞とＨＰＶ抗原およびアジュバントとをインキュベートし、それによって、改変免疫細胞を作出するステップによって調製される、組成物に関する。
【０２２０】
一部の態様では、本開示は、個体におけるＨＰＶ関連疾患を処置または予防するための方法であって、ＨＰＶ抗原と会合した改変免疫細胞を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、ａ）ＨＰＶ抗原がインプット細胞の細胞表面と会合するのを可能にするのに十分な時間、インプット細胞とＨＰＶ抗原および／またはアジュバントとをインキュベートし、それによって抗原と会合した改変免疫細胞を作出するステップを含むプロセスによって調製される、方法に関する。
【０２２１】
一部の実施形態では、本発明の改変免疫細胞は、個体における耐性を誘導しない。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、個体における免疫応答を抑制しない。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、免疫寛容原性因子を含まない。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、免疫寛容原性因子と組み合わせて投与されない。一部の実施形態では、改変免疫（immunce）細胞は、免疫寛容原性因子の投与の前、それと同時に、またはその後に、投与されない。
【０２２２】
組成物
ある特定の態様では、本発明は、改変免疫細胞を含む組成物であって、改変免疫細胞は、細胞内にＨＰＶ抗原、および細胞内にＣｐＧ  ＯＤＮを含む、組成物を提供する。他の態様では、本開示は、改変免疫細胞を含む組成物であって、改変免疫細胞は、細胞内にＨＰＶ抗原を含み、ＨＰＶ抗原は、配列番号１８〜２６のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む、組成物に関する。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号２３と少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は配列番号２３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、ａ）インプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプット細胞の直径の関数であり、それによって、ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きなインプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；およびｂ）ＨＰＶ抗原が摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプット細胞とＨＰＶ抗原とをインキュベートし、それによって、改変免疫細胞を作出するステップによって調製される。さらなる実施形態では、インプット細胞に、それが狭窄を通過するときに変形力が印加される。一部の実施形態では、組成物は、細胞内にアジュバントをさらに含む。
【０２２３】
一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原および／またはアジュバントは、細胞質基質またはエンドソームに存在する。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、細胞の多数の区画に存在する。さらなる実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、小胞体（ＥＲ）、ゴルジ装置、リソソーム、エキソソーム、細胞表面または細胞膜を含む細胞の区画に存在する。一部の実施形態では、抗原およびアジュバントは、同じ区画にある。一部の実施形態では、抗原およびアジュバントは、互いに異なる区画にある。例えば、一部の実施形態では、抗原は細胞質基質に存在するが、アジュバントはエンドソームに存在する。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、細胞の外側に、ＨＰＶ抗原および／またはアジュバントをさらに含む。
【０２２４】
一部の実施形態では、抗原はポリペプチド抗原である。一部の実施形態では、抗原は改変抗原である。例えば、抗原は、治療剤または標的化ペプチドと融合されていてもよい。一部の実施形態では、改変抗原は、ポリペプチドと融合されている。一部の実施形態では、抗原は、脂質で改変されている。一部の実施形態では、抗原は、多糖または炭水化物部分で改変されている。一部の実施形態では、抗原は、ウイルスと会合している。一部の実施形態では、抗原はウイルス抗原である。例示的なウイルス抗原としては、ＨＰＶ抗原が挙げられる。さらなる実施形態では、抗原はＨＰＶ抗原である。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ−１６、１８、２６、３１、３３、３５、３９、４５、５１、５２、５３、５６、５８、５９、６６、６８、７３、および８２の群からの選択からなる。ＨＰＶ−１６、１８、３１、３３、３５、３９、４５、５１、５２、５６、５８、５９、６８、７３、および８２は、がんを引き起こす高リスク型であるが、ＨＰＶ−２６、５３および６６は、がんを引き起こす「おそらく高リスク型」である。一部の実施形態では、抗原は、ＨＰＶ−１６抗原またはＨＰＶ−１８抗原である。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＬＡ−Ａ２特異的エピトープで構成される。ＨＰＶ  Ｅ６およびＥ７遺伝子は、ウイルスの癌遺伝子であり、これらの遺伝子の発現は、悪性形質転換のために必要である。Ｅ６およびＥ７タンパク質は、細胞周期のいくつかの負の制御因子である、主にｐ１０５Ｒｂおよびｐ５３を、それぞれ標的にし、そのため、細胞周期の制御を妨げる。さらなる実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ  Ｅ６抗原またはＨＰＶ  Ｅ７抗原である。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、ＨＰＶ  Ｅ６抗原およびＨＰＶ  Ｅ７抗原を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、１つまたは複数の異種ペプチド配列がそのＮ末端および／またはそのＣ末端で隣接している免疫原性エピトープを含むポリペプチドである。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ  Ｅ６ポリペプチド由来の配列が隣接しているＨＰＶ  Ｅ７エピトープである。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号１８〜２６のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は配列番号２３のアミノ酸配列を含む。
【０２２５】
アジュバントは、免疫原性の作用物質に添加される場合、混合物への曝露の際にレシピエントの宿主中で、作用物質に対する免疫応答を、非特異的に、増強または高める。したがって、アジュバントは、抗原に対する免疫細胞応答（例えば、Ｔ細胞応答）の誘発をブーストするために使用することができる。一部の実施形態では、摂動細胞は、ＨＰＶ抗原およびアジュバントの両方とインキュベートされる。例示的な細胞内のアジュバントとしては、限定なく、ＣｐＧ  ＯＤＮ、インターフェロン−α（ＩＦＮ−α）、インターフェロン遺伝子刺激因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニスト、レチノイン酸誘導性遺伝子Ｉ（ＲＩＧ−Ｉ）アゴニスト、およびポリイノシン酸：ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）が挙げられる。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧ  ＯＤＮ、ＩＦＮ−α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ−Ｉアゴニスト、またはポリＩ：Ｃである。特定の実施形態では、アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮポリヌクレオチドである。一部の実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮアジュバントは、ＣｐＧ  ＯＤＮ１５８５、ＣｐＧ  ＯＤＮ２２１６、ＣｐＧ  ＯＤＮ２３３６、ＣｐＧ  ＯＤＮ１６６８、ＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６、ＣＰＧ  ＯＤＮ２００６、ＣｐＧ  ＯＤＮ２００７、ＣｐＧ  ＯＤＮ  ＢＷ００６、ＣｐＧ  ＯＤＮ  Ｄ−ＳＬ０１、ＣｐＧ  ＯＤＮ２３９５、ＣｐＧ  ＯＤＮ  Ｍ３６２、ＣｐＧ  ＯＤＮ  Ｄ−ＳＬ０３（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）の群から選択されたものを含む。一部の実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮアジュバントは、ＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６（ＴＣＣＡＴＧＡＣＧＴＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴ；配列番号３０）またはＣｐＧ  ＯＤＮ２００６（ＣｐＧ  ＯＤＮ７９０９としても公知）（ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ；配列番号３１）オリゴヌクレオチドである。複数のアジュバントを、免疫応答の誘発を増強するための抗原と併せて使用することもできる。一部の実施形態では、改変免疫細胞は１つよりも多いアジュバントを含む。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、アジュバントのＣｐＧ  ＯＤＮ、ＩＦＮ−α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ−Ｉアゴニスト、およびポリＩ：Ｃの任意の組合せを含む。
【０２２６】
一部の実施形態では、改変免疫細胞は、約０．０１μＭ〜約１０ｍＭの濃度でアジュバントを含む。例えば、一部の実施形態では、改変免疫細胞は、約０．０１μＭ、約０．１μＭ、約１μＭ、約１０μＭ、約１００μＭ、約１ｍＭ、または約１０ｍＭ未満のうちのいずれかの濃度でアジュバントを含む。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、約１０ｍＭよりも高い濃度でアジュバントを含む。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、約０．０１μＭ、約０．１μＭ、約１μＭ、約１０μＭ、約１００μＭ、約１ｍＭ、または約１０ｍＭ未満のうちのいずれかの濃度でアジュバントを含む。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、約１０ｍＭのいずれかよりも高い濃度でアジュバントを含む。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、約０．１μＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１００μＭ、約１００μＭ〜約１ｍＭ、または１ｍＭ〜約１０ｍＭのうちのいずれかの濃度でアジュバントを含む。
【０２２７】
一部の実施形態では、改変免疫細胞は、約０．０１μＭ〜約１０ｍＭの濃度でＨＰＶ抗原を含む。例えば、一部の実施形態では、改変免疫細胞は、約０．０１μＭ、約０．１μＭ、約１μＭ、約１０μＭ、約１００μＭ、約１ｍＭ、または約１０ｍＭ未満のうちのいずれかの濃度でアジュバントを含む。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、約１０ｍＭよりも高い濃度でアジュバントを含む。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、約０．０１μＭ、約０．１μＭ、約１μＭ、約１０μＭ、約１００μＭ、約１ｍＭ、または約１０ｍＭ未満のうちのいずれかの濃度でＨＰＶ抗原を含む。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、約１０ｍＭのいずれかよりも高い濃度でアジュバントを含む。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、約０．１μＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１００μＭ、約１００μＭ〜約１ｍＭ、または１ｍＭ〜約１０ｍＭのうちのいずれかの濃度でＨＰＶ抗原を含む。
【０２２８】
一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原のアジュバントに対する比は、約１００００：１〜約１：１００００である。例えば、一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原のアジュバントに対する比は、約１００００：１、約１０００：１、約２００：１、約１００：１、約１０：１、約１：１、約１：１０、約１：１００、約１：１０００、または約１：１００００のうちのいずれかである。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原のアジュバントに対する比は、約１００００：１〜約１０００：１、約１０００：１〜約１００：１、約１００：１〜約１０：１、約１０：１〜約１：１、約１：１〜約１：１０、約１：１０〜約１：１００、約１：１００〜約１：１０００、約１：１０００〜約１：１００００である。
【０２２９】
一部の実施形態では、改変免疫細胞は、作用物質をさらに含み、この作用物質は、この作用物質を含まない対応する改変免疫細胞と比較して改変免疫細胞の生存能力および／または機能を増強する。一部の実施形態では、作用物質は、エンドサイトーシスを増強する化合物、安定剤、または補因子である。一部の実施形態では、安定剤は、ＨＰＶ抗原および／またはアジュバントと複合体を形成する。一部の実施形態では、安定剤は、ＨＰＶ抗原および／またはアジュバントの溶解度および／または溶液半減期を増加させる。一部の実施形態では、複数の改変免疫細胞は、安定剤を含まない対応する改変免疫細胞よりも高い生存能力を有する。一部の実施形態では、作用物質はアルブミンである。さらなる実施形態では、アルブミンは、マウス、ウシ、またはヒトアルブミンである。さらなる実施形態では、作用物質は、二価金属カチオン、グルコース、ＡＴＰ、カリウム、グリセロール、トレハロース、Ｄ−スクロース、ＰＥＧ１５００、Ｌ−アルギニン、Ｌ−グルタミン、またはＥＤＴＡである。一部の実施形態では、二価金属カチオンは、Ｍｇ２＋、Ｚｎ２＋、またはＣａ２＋のうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、作用物質はＭＳＡを含む。
【０２３０】
本明細書に記載の方法または組成物のいずれか１つによる一部の実施形態では、改変免疫細胞は、作用物質をさらに含み、この作用物質は、この作用物質を含まない対応する複数の改変免疫細胞と比較して改変免疫細胞の生存能力および／または機能を増強する。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、作用物質をさらに含み、この作用物質は、この作用物質を含まない対応する改変免疫細胞と比較して凍結−解凍サイクルの際の改変免疫細胞の生存能力および／または機能を増強する。一部の実施形態では、作用物質は、凍結保存剤および／または低温保存剤である。一部の実施形態では、凍結保存剤も低温保存剤も、任意の凍結−解凍サイクルの前の作用物質を含まない対応する改変免疫細胞と比較して作用物質を含む改変免疫細胞において１０％または２０％を超える細胞死を引き起こさない。一部の実施形態では、改変免疫細胞の少なくとも約７０％、約８０％、または約９０％は、最大で１、２、３、４、５回の凍結−解凍サイクルの後、生存している。一部の実施形態では、作用物質は、エンドサイトーシスを増強する化合物、安定剤、または補因子である。一部の実施形態では、作用物質はアルブミンである。一部の実施形態では、アルブミンは、マウス、ウシ、またはヒトアルブミンである。一部の実施形態では、作用物質はヒトアルブミンである。一部の実施形態では、作用物質は、二価金属カチオン、グルコース、ＡＴＰ、カリウム、グリセロール、トレハロース、Ｄ−スクロース、ＰＥＧ１５００、Ｌ−アルギニン、Ｌ−グルタミン、またはＥＤＴＡのうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、二価金属カチオンは、Ｍｇ２＋、Ｚｎ２＋またはＣａ２＋のうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、作用物質は、ピルビン酸ナトリウム、アデニン、トレハロース、デキストロース、マンノース、スクロース、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ＤＭＳＯ、ＨＥＰＥＳ、グリセロール、グルタチオン、イノシン、二塩基性リン酸ナトリウム、一塩基性リン酸ナトリウム、ナトリウム金属イオン、カリウム金属イオン、マグネシウム金属イオン、塩化物、アセテート、グルコネート、スクロース、水酸化カリウム、または水酸化ナトリウムのうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、作用物質は、ピルビン酸ナトリウム、アデニン、Ｒｅｊｕｖｅｓｏｌ（登録商標）、トレハロース、デキストロース、マンノース、スクロース、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ（登録商標）、ＤＭＳＯ、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ２、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ５、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１５、ＨＥＰＥＳ、グリセロール、グルタチオン、ＨｙｐｏＴｈｅｒｍｏｓｏｌ（登録商標）のうちの１つまたは複数である。
【０２３１】
一部の実施形態では、改変免疫細胞は、共刺激分子のうちの１つまたは複数の発現を増加させるためにさらに改変されている。さらなる実施形態では、共刺激分子は、Ｂ７−Ｈ２（ＩＣＯＳＬ）、Ｂ７−１（ＣＤ８０）、Ｂ７−２（ＣＤ８６）、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＣＤ４０、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ３０Ｌ、ＴＩＭ４、ＳＬＡＭ、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ１５５、またはＣＤ１１２である。一部の実施形態では、細胞は、１つまたは複数の共刺激分子の増加した発現をもたらす核酸を含む。
【０２３２】
一部の実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、樹状細胞、単球、マクロファージ、骨髄性細胞、顆粒球、好中球、マスト細胞、ナチュラルキラー細胞、自然リンパ球、好塩基球、または造血系前駆細胞である。一部の実施形態では、免疫細胞はＢ細胞ではない。一部の実施形態では、免疫細胞はＴ細胞である。一部の実施形態では、免疫細胞は、Ｂ細胞以外である。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、ＣＩＫ細胞、またはナチュラルキラーＴ細胞のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ３＋  Ｔ細胞、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＡ＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＯ＋  Ｔ細胞、およびγδ−Ｔ細胞のうちの１つまたは複数を含む。同種異系Ｔ細胞におけるＭＨＣ発現は、それらの投与に応答して個体において開始される自然免疫応答をもたらすことができ、そのようなＴ細胞の半減期の短縮をもたらす。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を低下させるさらなる改変を含む。特定の実施形態では、さらなる改変は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９、ＺＦＮ、ＴＡＬＥＮ、Ｃｒｅリコンビナーゼ、またはメガヌクレアーゼを使用して、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を低下させることを含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を増加させるさらなる改変を含む。特定の実施形態では、さらなる改変は、ｍＲＮＡ、プラスミドＤＮＡまたはｃＤＮＡを使用して、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を増加させることを含む。一部の実施形態では、さらに改変されたＴ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答は、さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答と比較して低下している。一部の実施形態では、さらに改変されたＴ細胞の、それらが投与された個体における循環半減期は、さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞の、それらが投与された個体における循環半減期と比較して増加している。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、ＣＩＫ細胞、またはナチュラルキラーＴ細胞のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ３＋  Ｔ細胞、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＡ＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＯ＋  Ｔ細胞、またはγδ−Ｔ細胞のうちの１つまたは複数を含む。
【０２３３】
免疫細胞および他の細胞は、自家または同種異系間細胞の供給源として使用することができる。一部の実施形態では、改変免疫細胞は個体に対して同種異系である。他の実施形態では、改変免疫細胞は個体に対して自家である。一部の実施形態では、処置される個体は、減少した炎症、またはモジュレートされた炎症応答を有するよう事前調整されている。
【０２３４】
ＰＢＭＣ組成物
本明細書で使用される場合、ＰＢＭＣは、個体から得られる全血からの白血球除去によって単離され得る。同じ個体または異なる個体からのＰＢＭＣの異なるプールを混合することによって再構成されるＰＢＭＣ組成物も提供される。他の例では、ＰＢＭＣはまた、生成プロファイルを有する混合細胞組成物に異なる細胞の集団を混合することによって、再構成されてもよい。一部の実施形態では、ＰＢＭＣを再構成するために使用される細胞の集団は、混合細胞集団（Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、または単球のうちの１つまたは複数の混合物など）である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣを再構成するために使用される細胞の集団は、精製細胞集団（精製されたＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞または単球など）である。追加の例では、ＰＢＭＣ組成物の再構成において使用される異なる細胞の集団は、同じ個体（例えば、自家）から単離する、または異なる個体（例えば、同種異系および／または異種）から単離することができる。
【０２３５】
したがって、免疫細胞が複数のＰＢＭＣである、本明細書に記載の方法または組成物のいずれか１つによる一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、単球、樹状細胞、またはＮＫ−Ｔ細胞のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、単球、樹状細胞、またはＮＫ−Ｔ細胞を含む。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣは、ＣＤ３＋  Ｔ細胞、ＣＤ２０＋  Ｂ細胞、ＣＤ１４＋単球、ＣＤ５６＋  ＮＫ細胞のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含み、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の、複数のインプットＰＢＭＣ中のＰＢＭＣの総数に対する比は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の、全血中のＰＢＭＣの総数に対する比と本質的に同じである。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含み、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の、複数のインプットＰＢＭＣ中のＰＢＭＣの総数に対する比は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞および単球の、全血からの白血球除去生成物中のＰＢＭＣの総数に対する比と本質的に同じである。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含み、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の、複数のインプットＰＢＭＣ中のＰＢＭＣの総数に対する比は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の、全血中のＰＢＭＣの総数に対する比から、１％、２％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、または５０％以下のうちのいずれか１つで異なる。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含み、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の、複数のインプットＰＢＭＣ中のＰＢＭＣの総数に対する比は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞および単球の、全血中のＰＢＭＣの総数に対する比から、１０％以下のいずれか１つで異なる。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含み、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の、複数のインプットＰＢＭＣ中のＰＢＭＣの総数に対する比は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の、全血からの白血球除去生成物中のＰＢＭＣの総数に対する比から、１％、２％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、または５０％以下のうちのいずれか１つで異なる。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含み、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の、複数のインプットＰＢＭＣ中のＰＢＭＣの総数に対する比は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞および単球の、全血からの白血球除去生成物中のＰＢＭＣの総数に対する比から、１０％以下のいずれか１つで異なる。
【０２３６】
免疫細胞が複数のＰＢＭＣである、本明細書に記載の方法または組成物のいずれか１つによる一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約２５％〜約７０％は、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約２．５％〜約１４％は、Ｂ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約３．５％〜約３５％は、ＮＫ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約４％〜約２５％は、ＮＫ細胞である。免疫細胞が複数のＰＢＭＣである、本明細書に記載の方法または組成物のいずれか１つによる一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの少なくとも約９０％〜約９９％は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞および単球からなる。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの少なくとも約８０％〜約８５％、約８５％〜約９０％、約９０％〜約９５％、または約９５％〜約９９％のうちのいずれか１つは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球からなる。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のうちのいずれか１つは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球からなる。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの少なくとも約９０％は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球からなる。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球からなる。
【０２３７】
免疫細胞が複数のＰＢＭＣである、本明細書に記載の方法または組成物のいずれか１つによる一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの少なくとも約９０％〜約９９％は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球からなる。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの少なくとも約８０％〜約８５％、約８５％〜約９０％、約９０％〜約９５％、または約９５％〜約９９％のうちのいずれか１つは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞および単球からなる。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のうちのいずれか１つは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球からなる。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの少なくとも約９０％は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球からなる。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球からなる。
【０２３８】
免疫細胞が複数のＰＢＭＣである、本明細書に記載の方法または組成物のいずれか１つによる一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの少なくとも約１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、または７５％のうちのいずれか１つは、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの少なくとも約２５％は、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの少なくとも約０．５％、１％、１．５％、２％、２．５％、３％、４％、５％、６％、７％、７．５％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、または３０％のうちのいずれか１つは、Ｂ細胞である。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの少なくとも約２．５％は、Ｂ細胞である。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの少なくとも約０．５％、１％、１．５％、２％、２．５％、３％、４％、５％、６％、７％、７．５％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、または３０％のうちのいずれか１つは、ＮＫ細胞である。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの少なくとも約３．５％は、ＮＫ細胞である。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの少なくとも約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１２％、１４％、１６％、１８％、２０％、２５％、３０％、３５％、または４０％のうちのいずれか１つは、単球である。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの少なくとも約４％は、単球である。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの少なくとも約２５％は、Ｔ細胞であり；インプットＰＢＭＣの少なくとも約２．５％は、Ｂ細胞であり；インプットＰＢＭＣの少なくとも約３．５％は、ＮＫ細胞であり；インプットＰＢＭＣの少なくとも約４％は、単球である。
【０２３９】
免疫細胞が複数のＰＢＭＣである、本明細書に記載の方法または組成物のいずれか１つによる一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、または７０％のうちのいずれか１つは、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの少なくとも約２０％は、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの少なくとも約０．２５％、０．５％、１％、１．５％、２％、２．５％、３％、４％、５％、６％、７％、７．５％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、または３０％のうちのいずれか１つは、Ｂ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの少なくとも約２％は、Ｂ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの少なくとも約０．５％、１％、１．５％、２％、２．５％、３％、４％、５％、６％、７％、７．５％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、または３０％のうちのいずれか１つは、ＮＫ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの少なくとも約３％は、ＮＫ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの少なくとも約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１２％、１４％、１６％、１８％、２０％、２５％、３０％、３５％、または４０％のうちのいずれか１つは、単球である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの少なくとも約３％は、単球である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの少なくとも約２０％は、Ｔ細胞であり；改変ＰＢＭＣの少なくとも約２％は、Ｂ細胞であり；改変ＰＢＭＣの少なくとも約３％は、ＮＫ細胞であり；改変ＰＢＭＣの少なくとも約３％は、単球である。
【０２４０】
免疫細胞が複数のＰＢＭＣである、本明細書に記載の方法または組成物のいずれか１つによる一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの約４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、または９０％以下のうちのいずれか１つは、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの約７０％以下は、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの約５％、１０％、１２％、１４％、１６％、１８％、２０％、２２％、２５％、３０％、３５％、４０％、または５０％以下のうちのいずれか１つは、Ｂ細胞である。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの約１４％以下は、Ｂ細胞である。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、または６０％以下のうちのいずれか１つは、ＮＫ細胞である。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの約３５％以下は、ＮＫ細胞である。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの約５％、１０％、１２％、１４％、１６％、１８％、２０％、２２％、２５％、３０％、３５％、４０％、または５０％以下のうちのいずれか１つは、単球である。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの約４％以下は、単球である。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの約２５％以下は、Ｔ細胞であり；インプットＰＢＭＣの約２．５％以下は、Ｂ細胞であり；インプットＰＢＭＣの約３．５％以下は、ＮＫ細胞であり；インプットＰＢＭＣの約４％以下は、単球である。
【０２４１】
免疫細胞が複数のＰＢＭＣである、本明細書に記載の方法または組成物のいずれか１つによる一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、または７０％以下のうちのいずれか１つは、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約２０％以下は、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約０．２５％、０．５％、１％、１．５％、２％、２．５％、３％、４％、５％、６％、７％、７．５％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、または３０％以下のうちのいずれか１つは、Ｂ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約２％以下は、Ｂ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約０．５％、１％、１．５％、２％、２．５％、３％、４％、５％、６％、７％、７．５％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、または３０％以下のうちのいずれか１つは、ＮＫ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約３％以下は、ＮＫ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１２％、１４％、１６％、１８％、２０％、２５％、３０％、３５％、または４０％以下のうちのいずれか１つは、単球である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約３％以下は、単球である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約２０％以下は、Ｔ細胞であり；改変ＰＢＭＣの約２％以下は、Ｂ細胞であり；改変ＰＢＭＣの約３％以下は、ＮＫ細胞であり；改変ＰＢＭＣの約３％以下は、単球である。
【０２４２】
免疫細胞が複数のＰＢＭＣである、本明細書に記載の方法または組成物のいずれか１つによる一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約２０％〜２５％、２５％〜３０％、３０％〜３５％、３５％〜４０％、４０％〜４５％、４５％〜５０％、５０％〜５５％、５５％〜６０％、６０％〜６５％、６５％〜７０％、または７０％〜７５％のうちのいずれか１つは、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約２５％〜約７０％は、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約１％〜２．５％、２．５％〜４％、４％〜６％、６％〜８％、８％〜１０％、１０％〜１２％、１２％〜１４％、１４％〜１６％、１６％〜２０％、または２０％〜２５％のうちのいずれか１つは、Ｂ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約２．５％〜約１４％は、Ｂ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約１％〜２％、２％〜３．５％、３．５％〜５％、５％〜８％、８％〜１０％、１０％〜１２％、１２％〜１４％、１４％〜１６％、１６％〜２０％、または２０％〜２５％のうちのいずれか１つは、Ｂ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約３．５％〜約３５％は、ＮＫ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約２％〜４％、４％〜６％、６％〜８％、８％〜１０％、１０％〜１２％、１２％〜１４％、１４％〜１６％、１６％〜２０％、２０％〜２５％、２５％〜３０％、３０％〜３５％、または３５％〜４０％のうちのいずれか１つは、単球である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約４％〜約２５％は、単球である。
【０２４３】
本明細書で使用される場合、ＰＢＭＣはまた、単核血液細胞（リンパ球および単球など）の混合細胞集団の組成物を操作した後、作出され得る。一部の例では、インプットＰＢＭＣは、単核血液細胞の混合細胞集団内のある特定の亜集団（Ｂ細胞など）を低下させた（枯渇させたなど）後、作出される。個体における単核血液細胞の混合細胞集団における組成は、同じ個体における全血からの白血球除去生成物とより酷似した細胞集団を作製するために操作することができる。他の例では、単核血液細胞（例えば、マウス脾細胞）の混合細胞集団における組成は、ヒト全血からの白血球除去生成物から単離されたヒトＰＢＭＣとより酷似した細胞集団を作製するために操作することもできる。
【０２４４】
一部の実施形態では、狭窄（construction）が媒介する送達は、ＰＢＭＣ内の異なる亜集団（Ｂ細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、または単球など）の生存能力を、有意な方法で、差次的にモジュレートしない。一部の実施形態では、コンディショニングプロセスは、ＰＢＭＣ内の異なる亜集団の生存能力を、有意な方法で、差次的にモジュレートしない。一部の実施形態では、作用物質（限定されるものではないが、生物保存剤、またはＰＢＭＣの機能および／もしくは生存能力を増強する作用物質のいずれか１つを含む）のさらなる添加は、ＰＢＭＣ内のさまざまな亜集団の生存能力を、有意な方法で、差次的にモジュレートしない。したがって、免疫細胞が複数のＰＢＭＣである、本明細書に記載の方法または組成物のいずれか１つによる一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣ内のＴ細胞のパーセンテージおよび複数のインプットＰＢＭＣ内のＴ細胞のパーセンテージは、数で約１０％以下異なる。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣ内のＴ細胞のパーセンテージおよび複数のインプットＰＢＭＣ内のＴ細胞のパーセンテージは、数で、約５％、８％、１０％、１２％、１４％、１６％、１８％、または２０％以下のうちのいずれか１つ異なる。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣ内のＢ細胞のパーセンテージおよび複数のインプットＰＢＭＣ内のＢ細胞のパーセンテージは、数で約１０％以下異なる。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣ内のＢ細胞のパーセンテージおよび複数のインプットＰＢＭＣ内のＢ細胞のパーセンテージは、数で、約５％、８％、１０％、１２％、１４％、１６％、１８％、または２０％以下のうちのいずれか１つ異なる。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣ内のＮＫ細胞のパーセンテージおよび複数のインプットＰＢＭＣ内のＮＫ細胞のパーセンテージは、数で約１０％以下異なる。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣ内のＮＫ細胞のパーセンテージおよび複数のインプットＰＢＭＣ内のＮＫ細胞のパーセンテージは、数で、約５％、８％、１０％、１２％、１４％、１６％、１８％、または２０％以下のうちのいずれか１つ異なる。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣ内の単球のパーセンテージおよび複数のインプットＰＢＭＣ内の単球のパーセンテージは、数で約１０％以下異なる。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣ内の単球のパーセンテージおよび複数のインプットＰＢＭＣ内の単球のパーセンテージは、数で、約５％、８％、１０％、１２％、１４％、１６％、１８％、または２０％以下のうちのいずれか１つ異なる。
【０２４５】
ＰＢＭＣのコンディショニング
免疫細胞が複数のＰＢＭＣである、本明細書に記載の方法または組成物のいずれか１つによる一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣは、調整される。さらなる実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣは、成熟している。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、狭窄が媒介する送達の後、調整される。したがって、一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを調製するプロセスは、抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原および／またはアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣと第２のアジュバントとをインキュベートし、それによって、抗原および／またはアジュバントを含む調整された（conditioned）複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップをさらに含む。一部の実施形態では、プロセスは、改変ＰＢＭＣを調整するためのアジュバントとのインキュベーションの前に、細胞懸濁液から、抗原および／またはアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを単離するステップをさらに含む。
【０２４６】
一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣとインキュベートされる抗原の濃度は、約０．０１μＭ〜約１０ｍＭである。例えば、一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣとインキュベートされる抗原の濃度は、約０．０１μＭ、約０．１μＭ、約１μＭ、約１０μＭ、約１００μＭ、約１ｍＭ、または約１０ｍＭ未満のうちのいずれかである。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣとインキュベートされる抗原の濃度は、約１０ｍＭよりも高い。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣとインキュベートされる抗原の濃度は、約０．０１μＭ〜約０．１μＭ、約０．１μＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１００μＭ、約１００μＭ〜約１ｍＭ、または１ｍＭ〜約１０ｍＭのうちのいずれかである。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣとインキュベートされる抗原の濃度は、約０．１μＭ〜約１ｍＭである。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣとインキュベートされる抗原の濃度は、約０．１μＭ〜約１０μＭである。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣとインキュベートされる抗原の濃度は、１μＭである。
【０２４７】
免疫細胞が複数のＰＢＭＣである、本明細書に記載の方法または組成物のいずれか１つによる一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣは、改変ＰＢＭＣを調整するために、約１〜約２４時間、アジュバントとインキュベートされる。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣは、改変ＰＢＭＣを調整するために、約２〜約１０時間、アジュバントとインキュベートされる。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣは、改変ＰＢＭＣを調整するために、約３〜約６時間、アジュバントとインキュベートされる。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣは、改変ＰＢＭＣを調整するために、約１時間、２時間、３時間、３．５時間、４時間、４．５時間、５時間、５．５時間、６時間、８時間、１２時間、１６時間、２０時間、または２４時間のうちのいずれか１つの間、アジュバントとインキュベートされる。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣは、改変ＰＢＭＣを調整するために、約４時間、アジュバントとインキュベートされる。
【０２４８】
免疫細胞が複数のＰＢＭＣである、本明細書に記載の方法または組成物のいずれか１つによる一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣは、狭窄が媒介する送達の前に、調整される。したがって、一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを調製するプロセスは、インプットＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、複数のインプットＰＢＭＣとアジュバントとをインキュベートし、それによって、調整された複数のインプットＰＢＭＣを作出するステップをさらに含む。一部の実施形態では、ａ）インプットＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、複数のインプットＰＢＭＣとアジュバントとをインキュベートし、それによって、調整された複数のインプットＰＢＭＣを作出するステップ；ｂ）調整された複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして、調整された複数の摂動インプットＰＭＢＣを形成するステップ；およびｃ）抗原が摂動インプットＰＭＢＣに入るのを可能にするのに十分な時間、調整された複数の摂動インプットＰＭＢＣと抗原とをインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製される、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣが提供される。一部の実施形態では、プロセスは、調整された複数のインプットＰＢＭＣを細胞変形狭窄に通す前に、調整された複数のインプットＰＢＭＣを、調整するアジュバントから単離するステップをさらに含む。
【０２４９】
一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣとインキュベートされる抗原の濃度は、約０．０１μＭ〜約１０ｍＭである。例えば、一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣとインキュベートされる抗原の濃度は、約０．０１μＭ、約０．１μＭ、約１μＭ、約１０μＭ、約１００μＭ、約１ｍＭ、または約１０ｍＭ未満のうちのいずれかである。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣとインキュベートされる抗原の濃度は、約１０ｍＭよりも高い。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣとインキュベートされる抗原の濃度は、約０．０１μＭ〜約０．１μＭ、約０．１μＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１００μＭ、約１００μＭ〜約１ｍＭ、または１ｍＭ〜約１０ｍＭのうちのいずれかである。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣとインキュベートされる抗原の濃度は、約０．１μＭ〜約１ｍＭである。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣとインキュベートされる抗原の濃度は、約０．１μＭ〜約１０μＭである。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣとインキュベートされる抗原の濃度は、１μＭである。
【０２５０】
免疫細胞が複数のＰＢＭＣである、本明細書に記載の方法または組成物のいずれか１つによる一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣは、インプットＰＢＭＣを調整するために、約１〜約２４時間、アジュバントとインキュベートされる。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣは、インプットＰＢＭＣを調整するために、約２〜約１０時間、アジュバントとインキュベートされる。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣは、インプットＰＢＭＣを調整するために、約３〜約６時間、アジュバントとインキュベートされる。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣは、インプットＰＢＭＣを調整するために、約１時間、２時間、３時間、３．５時間、４時間、４．５時間、５時間、５．５時間、６時間、８時間、１２時間、１６時間、２０時間、または２４時間のうちのいずれか１つの間、アジュバントとインキュベートされる。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣは、インプットＰＢＭＣを調整するために、約４時間、アジュバントとインキュベートされる。
【０２５１】
一部の実施形態では、ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数のＰＢＭＣとアジュバントとをインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣを作出するステップによって調製される、抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣが提供される。一部の実施形態では、抗原をＰＢＭＣに導入する前に、ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、複数のＰＢＭＣとアジュバントとをインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣを作出するステップによって調製される、抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣが提供される。
【０２５２】
免疫細胞が複数のＰＢＭＣである、本明細書に記載の方法または組成物のいずれか１つによる一部の実施形態では、ＰＢＭＣとインキュベートされる抗原の濃度は、約０．０１μＭ〜約１０ｍＭである。例えば、一部の実施形態では、ＰＢＭＣとインキュベートされる抗原の濃度は、約０．０１μＭ、約０．１μＭ、約１μＭ、約１０μＭ、約１００μＭ、約１ｍＭ、または約１０ｍＭ未満のうちのいずれかである。一部の実施形態では、ＰＢＭＣとインキュベートされる抗原の濃度は、約１０ｍＭよりも高い。一部の実施形態では、ＰＢＭＣとインキュベートされる抗原の濃度は、約０．０１μＭ〜約０．１μＭ、約０．１μＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１００μＭ、約１００μＭ〜約１ｍＭ、または１ｍＭ〜約１０ｍＭのうちのいずれかである。一部の実施形態では、ＰＢＭＣとインキュベートされる抗原の濃度は、約０．１μＭ〜約１ｍＭである。一部の実施形態では、ＰＢＭＣとインキュベートされる抗原の濃度は、約０．１μＭ〜約１０μＭである。一部の実施形態では、ＰＢＭＣとインキュベートされる抗原の濃度は、１μＭである。
【０２５３】
免疫細胞が複数のＰＢＭＣである、本明細書に記載の方法または組成物のいずれか１つによる一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを調整するために、約１〜約２４時間、アジュバントとインキュベートされる。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを調整するために、約２〜約１０時間、アジュバントとインキュベートされる。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを調整するために、約３〜約６時間、アジュバントとインキュベートされる。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを調整するために、約１時間、２時間、３時間、３．５時間、４時間、４．５時間、５時間、５．５時間、６時間、８時間、１２時間、１６時間、２０時間、または２４時間のうちのいずれか１つの間、アジュバントとインキュベートされる。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを調整するために、約４時間、アジュバントとインキュベートされる。
【０２５４】
一部の実施形態では、１つまたは複数の共刺激分子は、調整されていない複数の改変ＰＢＭＣと比較して、調整された複数の改変ＰＢＭＣにおいて上方制御される。一部の実施形態では、１つまたは複数の共刺激分子は、調整されていない複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞の亜集団と比較して、調整された複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞の亜集団において上方制御される。一部の実施形態では、１つまたは複数の共刺激分子は、調整されていない複数の改変ＰＢＭＣ中のＢ細胞と比較して、調整された複数の改変ＰＢＭＣのＢ細胞において上方制御される。一部の実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ８０および／またはＣＤ８６である。一部の実施形態では、共刺激分子はＣＤ８６である。一部の実施形態では、ＣＤ８０および／またはＣＤ８６は、調整されていない複数の改変ＰＢＭＣ中のＢ細胞と比較して、約１．２倍、１．５倍、１．８倍、２倍、３倍、４倍、５倍、８倍、または１０倍よりも高く、調整された複数の改変ＰＢＭＣのＢ細胞において上方制御される。一部の実施形態では、ＣＤ８０および／またはＣＤ８６は、調整されていない複数の改変ＰＢＭＣ中のＢ細胞と比較して、約１．２倍〜約１．５倍、約１．５倍〜約１．８倍、約１．８倍〜約２倍、約２倍〜約３倍、約３倍〜約４倍、約４倍〜約５倍、約５倍〜約８倍、約８倍〜約１０倍、約１０倍〜約２０倍、約２０倍〜約５０倍、約５０倍〜約１００倍、約１００倍〜約２００倍、約２００倍〜約５００倍、または約５００倍よりも高くのうちのいずれか、調整された複数の改変ＰＢＭＣのＢ細胞において上方制御される。一部の実施形態では、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−６、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１β、ＩＰ−１０、またはＴＮＦ−αのうちの１つまたは複数の発現は、調整されていない複数の改変ＰＢＭＣと比較して調整された複数の改変ＰＢＭＣにおいて増加している。一部の実施形態では、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−６、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１β、ＩＰ−１０、またはＴＮＦ−αのうちの１つまたは複数の発現は、調整されていない複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞の亜集団と比較して調整された複数中の細胞の亜集団において増加している。一部の実施形態では、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−６、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１β、ＩＰ−１０、またはＴＮＦ−αのうちの１つまたは複数の発現は、調整されていない複数の改変ＰＢＭＣと比較して、約１．２倍、１．５倍、１．８倍、２倍、３倍、４倍、５倍、８倍、または１０倍よりも高く、調整された複数の改変ＰＢＭＣにおいて増加している。一部の実施形態では、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−６、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１β、ＩＰ−１０、またはＴＮＦ−αのうちの１つまたは複数の発現は、調整されていない複数の改変ＰＢＭＣと比較して、約１．２倍〜約１．５倍、約１．５倍〜約１．８倍、約１．８倍〜約２倍、約２倍〜約３倍、約３倍〜約４倍、約４倍〜約５倍、約５倍〜約８倍、約８倍〜約１０倍、約１０倍〜約２０倍、約２０倍〜約５０倍、約５０倍〜約１００倍、約１００倍〜約２００倍、約２００倍〜約５００倍、または約５００倍よりも高くのうちのいずれか、調整された複数の改変ＰＢＭＣにおいて増加している。
【０２５５】
適用
一部の態様では、本発明は、ＨＰＶ関連疾患を処置および予防する、ならびに／またはＨＰＶ関連疾患を有する個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、改変免疫細胞を含む組成物を個体に投与するステップを含み、改変免疫細胞は、細胞内にＨＰＶ抗原、および細胞内にアジュバントを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、細胞は、患者から単離され、開示される方法により改変され、患者に再び導入される。例えば、免疫細胞の集団は、患者から単離され、狭窄を通過させて、ＨＰＶ抗原およびアジュバントの送達を達成し、次いで、患者に再注入して、ＨＰＶ抗原に対する治療的免疫応答を増加させる。一部の実施形態では、細胞は、ＨＰＶ関連疾患を有する個体から単離され、開示される方法により改変され、個体に再び導入される。例えば、免疫細胞の集団は、ＨＰＶ関連疾患を有する個体から単離され、狭窄を通過させて、ＨＰＶ抗原およびアジュバントの送達を達成し、次いで、患者に再注入して、個体におけるＨＰＶ抗原に対する免疫応答を誘導または増強する。
【０２５６】
一部の実施形態では、送達されるＨＰＶ抗原および／またはアジュバントは、精製されている。一部の実施形態では、化合物は、目的の化合物の少なくとも約６０重量％（乾燥重量）である。一部の実施形態では、精製化合物は、目的の化合物の少なくとも約７５％、９０％、または９９％である。一部の実施形態では、精製化合物は、目的の化合物の少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９８％、９９％、または１００％（ｗ／ｗ）である。純度は、限定なく、カラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、ＨＰＬＣ分析、ＮＭＲ、質量分析またはＳＤＳ−ＰＡＧＥを含む、任意の公知の方法によって決定される。精製されたＤＮＡまたはＲＮＡは、外因性の核酸、炭水化物および脂質を含まないＤＮＡまたはＲＮＡとして定義される。
【０２５７】
一部の実施形態では、本発明は、ＨＰＶ抗原およびアジュバントが細胞に入るように、狭窄を通過することによって改変された細胞を、個体に導入することによって、ＨＰＶ関連疾患を有する個体を処置する方法を提供する。一部の実施形態では、細胞は、自家細胞である。例えば、免疫細胞は、個体（例えば、患者）から単離され、開示される方法により改変され、個体に再び導入される。一部の実施形態では、免疫細胞は、個体から単離され、開示される方法により改変され、同じ個体に再び導入される。一部の実施形態では、細胞は、同種異系細胞である。例えば、細胞は、異なる個体から単離され、開示される方法により改変され、第１の個体（例えば、患者）に導入される。一部の実施形態では、細胞は、個体から単離され、開示される方法により改変され、異なる個体に導入される。
【０２５８】
上に記載の方法のいずれかは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ、またはｉｎ  ｖｉｖｏで行われる。ｉｎ  ｖｉｖｏ適用のために、デバイスを、血管腔に、例えば、インラインステントを動脈または静脈に埋め込み得る。一部の実施形態では、方法は、患者細胞のｅｘ  ｖｉｖｏ処置のためのベッドサイドシステム、および患者への細胞の即時再導入の一部として使用される。一部の実施形態では、方法は、最小限の訓練を受けた技術者により、典型的な病院の検査室で実行することができる。一部の実施形態では、患者が操作する処置システムを使用することができる。
【０２５９】
システムおよびキット
一部の態様では、本発明は、本明細書に開示の方法における使用のための、１つもしくは複数の狭窄、免疫細胞懸濁液、ＨＰＶ抗原またはアジュバントを含むシステムを提供する。システムは、細胞変形狭窄を提供するポアを有するマイクロ流体チャネルもしくは表面、細胞懸濁液、細胞摂動、送達パラメーター、化合物および／または印加などを含む、上に開示の方法について記載される任意の実施形態を含むことができる。一部の実施形態では、細胞変形狭窄は、免疫細胞への送達のための大きさである。一部の実施形態では、送達パラメーター、例えば、運転流束、細胞および化合物の濃度、狭窄における細胞の速度、ならびに細胞懸濁液の組成（例えば、容量オスモル濃度、塩濃度、血清含有量、細胞濃度、ｐＨなど）は、免疫応答を抑制するまたは耐性を誘導するために、化合物の最大の応答について最適化される。
【０２６０】
ＨＰＶ関連疾患を有する個体の処置における使用のためのキットまたは製造品も提供される。一部の実施形態では、キットは、細胞内にＨＰＶ抗原、および細胞内にアジュバントを含む改変免疫細胞を含む。一部の実施形態では、キットは、ＨＰＶ関連疾患を有する個体の処置における使用のために、改変免疫細胞の作出における使用のための、１つもしくは複数の狭窄、免疫細胞懸濁液、ＨＰＶ抗原またはアジュバントを含む。一部の実施形態では、キットは、好適なパッケージ内に、本明細書に記載の組成物（例えば、ポアを含有するマイクロ流体チャネルもしくは表面、細胞懸濁液および／または化合物）を含む。好適なパッケージ材料は、当技術分野において公知であり、例えば、バイアル（密封バイアルなど）、容器、アンプル、瓶、広口瓶、フレキシブル包装材料（例えば、密封マイラーまたはプラスチック袋）などが挙げられる。これらの製品は、さらに滅菌され得かつ／または密封され得る。
【０２６１】
本発明は、本明細書に記載の方法の構成要素を含むキットも提供し、ＨＰＶ関連疾患を有する個体を処置する前記方法を行うための指示、ならびに／またはＨＰＶ抗原およびアジュバントを免疫細胞に導入するための指示をさらに含んでいてもよい。本明細書に記載のキットは、他のバッファ、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、ならびに本明細書に記載のいずれかの方法を行うための指示を伴う添付文書；例えば、ＨＰＶ関連疾患を有する個体を処置するための指示、または細胞内にＨＰＶ抗原、および細胞内にアジュバントを含有するように免疫細胞を改変するための指示を含む、他の材料をさらに含み得る。
【０２６２】
例示的な実施形態
実施形態１。個体におけるヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）関連疾患を処置するための方法であって、前記方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を前記個体に投与するステップを含み、前記改変免疫細胞は、ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含み、前記アジュバントは細胞内に供給されている、方法。
【０２６３】
実施形態２。個体におけるＨＰＶ関連疾患を予防するための方法であって、前記方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を前記個体に投与するステップを含み、前記改変免疫細胞は、ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含み、前記アジュバントは細胞内に供給されている、方法。
【０２６４】
実施形態３。ＨＰＶ関連疾患を有する個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、前記方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を前記個体に投与するステップを含み、前記改変免疫細胞は、ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含み、前記アジュバントは細胞内に供給されている、方法。
【０２６５】
実施形態４。個体におけるＨＰＶ関連疾患を処置するための方法であって、前記方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を前記個体に投与するステップを含み、前記改変免疫細胞は、ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含み、前記アジュバントは細胞内に供給されており、
前記改変免疫細胞は、
ａ）インプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプット細胞の直径の関数であり、それによって、前記抗原および前記アジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；ならびに
ｂ）前記ＨＰＶ抗原および前記アジュバントが前記摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプット細胞と前記ＨＰＶ抗原および前記アジュバントとをインキュベートし、それによって、前記改変免疫細胞を作出するステップ
によって調製される、方法。
【０２６６】
実施形態５。個体におけるＨＰＶ関連疾患を予防するための方法であって、前記方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を前記個体に投与するステップを含み、前記改変免疫細胞は、ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含み、前記アジュバントは細胞内に供給されており、
前記改変免疫細胞は、
ａ）インプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプット細胞の直径の関数であり、それによって、前記ＨＰＶ抗原および前記アジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；ならびに
ｂ）前記ＨＰＶ抗原および前記アジュバントが前記摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプット細胞と前記ＨＰＶ抗原および前記アジュバントとをインキュベートし、それによって、前記改変免疫細胞を作出するステップ
によって調製される、方法。
【０２６７】
実施形態６。ＨＰＶ関連疾患を有する個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、前記方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を前記個体に投与するステップを含み、前記改変免疫細胞は、ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含み、前記アジュバントは細胞内に供給されており、
前記改変免疫細胞は、
ａ）ＨＰＶ抗原を含むインプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプット細胞の直径の関数であり、それによって、前記ＨＰＶ抗原および前記アジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；ならびに
ｂ）前記ＨＰＶ抗原および前記アジュバントが前記摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプット細胞と前記抗原および前記アジュバントとをインキュベートし、それによって、前記改変免疫細胞を作出するステップ
によって調製される、方法。
【０２６８】
実施形態７。前記狭窄の前記直径は、前記細胞の前記直径未満である、実施形態４〜６のいずれか一つに記載の方法。
【０２６９】
実施形態８。前記狭窄の前記直径は、前記細胞の前記直径の約２０％〜９９％である、実施形態４〜７のいずれか一つに記載の方法。
【０２７０】
実施形態９。前記狭窄の前記直径は、前記細胞の前記直径の約２０％〜約６０％未満である、実施形態４〜８のいずれか一つに記載の方法。
【０２７１】
実施形態１０。前記狭窄は、チャネル中にある、実施形態４〜９のいずれか一つに記載の方法。
【０２７２】
実施形態１１。前記インプット細胞に、それが前記狭窄を通過するときに変形力が印加される、実施形態４〜１０のいずれか一つに記載の方法。
【０２７３】
実施形態１２。前記ＨＰＶ抗原および／または前記アジュバントは、細胞質基質および／またはエンドソームに存在する、実施形態１〜１１のいずれか一つに記載の方法。
【０２７４】
実施形態１３。前記抗原および／またはアジュバントは、前記細胞の多数の区画に存在する、実施形態１〜１２のいずれか一つに記載の方法。
【０２７５】
実施形態１４。前記改変免疫細胞は、前記細胞の外側に、ＨＰＶ抗原および／またはアジュバントをさらに含む、実施形態１〜１３のいずれか一つに記載の方法。
【０２７６】
実施形態１５。前記摂動インプット細胞とインキュベートされるアジュバントの濃度は、約０．１μＭ〜約１ｍＭである、実施形態１〜１４のいずれか一つに記載の方法。
【０２７７】
実施形態１６。前記摂動インプット細胞とインキュベートされるＨＰＶ抗原の濃度は、約０．１μＭ〜約１ｍＭである、実施形態１〜１５のいずれか一つに記載の方法。
【０２７８】
実施形態１７。前記摂動インプット細胞とインキュベートされるＨＰＶ抗原のアジュバントに対する比は、約１００００：１〜約１：１００００である、実施形態４〜１６のいずれか一つに記載の方法。
【０２７９】
実施形態１８。前記免疫応答は増強される、実施形態３または６に記載の方法。
【０２８０】
実施形態１９。前記ＨＰＶ抗原に対する前記免疫応答は増強される、実施形態１８に記載の方法。
【０２８１】
実施形態２０。前記アジュバントは、ＣｐＧ  ＯＤＮ、ＩＦＮ−α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ−Ｉアゴニスト、またはポリＩ：Ｃである、実施形態１〜１９のいずれか一つに記載の方法。
【０２８２】
実施形態２１。前記アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮである、実施形態２０に記載の方法。
【０２８３】
実施形態２２。前記ＣｐＧ  ＯＤＮは、ＣｐＧ  ＯＤＮ１０１８、ＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６、またはＣｐＧ  ＯＤＮ２００６である、実施形態２１に記載の方法。
【０２８４】
実施形態２３。前記改変免疫細胞は１つよりも多いアジュバントを含む、実施形態１〜２２のいずれか一つに記載の方法。
【０２８５】
実施形態２４。前記ＨＰＶ抗原は、同じおよび／または異なるＨＰＶ抗原に対する応答を誘発する多数のポリペプチドのプールである、実施形態１〜２３のいずれか一つに記載の方法。
【０２８６】
実施形態２５。多数の抗原の前記プール中の抗原は、多数の抗原の前記プール中の他の抗原に向けられた前記免疫応答を減少させない、実施形態２４に記載の方法。
【０２８７】
実施形態２６。前記ＨＰＶ抗原は、抗原性ＨＰＶエピトープおよび１つまたは複数の異種ペプチド配列を含むポリペプチドである、実施形態１〜２５のいずれか一つに記載の方法。
【０２８８】
実施形態２７。前記ＨＰＶ抗原は、それ自体と、他の抗原と、または前記アジュバントと複合体を形成する、実施形態１〜２６のいずれか一つに記載の方法。
【０２８９】
実施形態２８。前記ＨＰＶは細胞溶解物に由来する抗原である、実施形態１〜２７のいずれか一つに記載の方法。
【０２９０】
実施形態２９。前記ＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ−１６またはＨＰＶ−１８抗原である、実施形態１〜２８のいずれか一つに記載の方法。
【０２９１】
実施形態３０。前記ＨＰＶ抗原は、ＨＬＡ−Ａ２特異的エピトープで構成される、実施形態２９に記載の方法。
【０２９２】
実施形態３１。前記ＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ  Ｅ６抗原またはＨＰＶ  Ｅ７抗原である、実施形態１〜３０のいずれか一つに記載の方法。
【０２９３】
実施形態３２。前記改変免疫細胞は、ＨＰＶ  Ｅ６抗原およびＨＰＶ  Ｅ７抗原を含む、実施形態１〜３１のいずれか一つに記載の方法。
【０２９４】
実施形態３３。前記ＨＰＶ抗原は、１つまたは複数の異種ペプチド配列がそのＮ末端および／またはそのＣ末端で隣接している抗原性エピトープを含むポリペプチドである、実施形態１〜３２のいずれか一つに記載の方法。
【０２９５】
実施形態３４。前記ＨＰＶ抗原は、配列番号１８〜２６のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態３３に記載の方法。
【０２９６】
実施形態３５。前記ＨＰＶ抗原は、配列番号２３と少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態３４に記載の方法。
【０２９７】
実施形態３６。前記ＨＰＶ抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る、実施形態１〜３５のいずれか一つに記載の方法。
【０２９８】
実施形態３７。前記ＨＰＶ抗原は、ＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る、実施形態１〜３６のいずれか一つに記載の方法。
【０２９９】
実施形態３８。前記改変免疫細胞は、約０．１μＭ〜約１ｍＭの濃度で前記アジュバントを含む、実施形態１〜３７のいずれか一つに記載の方法。
【０３００】
実施形態３９。前記改変免疫細胞は、約０．１μＭ〜約１ｍＭの濃度で前記ＨＰＶ抗原を含む、実施形態１〜３８のいずれか一つに記載の方法。
【０３０１】
実施形態４０。前記ＨＰＶ抗原の前記アジュバントに対する比は、約１００００：１〜約１：１００００である、実施形態１〜３９のいずれか一つに記載の方法。
【０３０２】
実施形態４１。前記改変免疫細胞は、作用物質をさらに含み、前記作用物質は、前記作用物質を含まない対応する改変免疫細胞と比較して前記改変免疫細胞の生存能力および／または機能を増強する、実施形態１〜４０のいずれか一つに記載の方法。
【０３０３】
実施形態４２。前記作用物質は、エンドサイトーシスを増強する化合物、安定剤、または補因子である、実施形態４１に記載の方法。
【０３０４】
実施形態４３。前記作用物質はアルブミンである、実施形態４１に記載の方法。
【０３０５】
実施形態４４。前記アルブミンは、マウス、ウシ、またはヒトアルブミンである、実施形態４３に記載の方法。
【０３０６】
実施形態４５。前記作用物質は、二価金属カチオン、グルコース、ＡＴＰ、カリウム、グリセロール、トレハロース、Ｄ−スクロース、ＰＥＧ１５００、Ｌ−アルギニン、Ｌ−グルタミン、またはＥＤＴＡである、実施形態４１に記載の方法。
【０３０７】
実施形態４６。前記作用物質はマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）を含む、実施形態４１に記載の方法。
【０３０８】
実施形態４７。前記改変免疫細胞は、共刺激分子のうちの１つまたは複数の発現を増加させるようにさらに改変されている、実施形態１〜４６のいずれか一つに記載の方法。
【０３０９】
実施形態４８。前記共刺激分子は、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−１、Ｂ７−２、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＣＤ４０、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ３０Ｌ、ＴＩＭ４、ＳＬＡＭ、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ１５５、またはＣＤ１１２である、実施形態４７に記載の方法。
【０３１０】
実施形態４９。前記細胞は、前記１つまたは複数の共刺激分子の増加した発現をもたらす核酸を含む、実施形態４７または４８に記載の方法。
【０３１１】
実施形態５０。前記免疫細胞は、Ｔ細胞、樹状細胞、単球、マクロファージ、骨髄性細胞、顆粒球、好中球、マスト細胞、ナチュラルキラー細胞、自然リンパ球、好塩基球、または造血系前駆細胞である、実施形態１〜４９のいずれか一つに記載の方法。
【０３１２】
実施形態５１。前記免疫細胞はＢ細胞ではない、実施形態１〜５０のいずれか一つに記載の方法。
【０３１３】
実施形態５２。前記免疫細胞はＢ細胞である、実施形態１〜５０のいずれか一つに記載の方法。
【０３１４】
実施形態５３。前記免疫細胞はＴ細胞である、実施形態１〜５１のいずれか一つに記載の方法。
【０３１５】
実施形態５４。前記免疫細胞は混合細胞集団である、実施形態１〜４９のいずれか一つに記載の方法。
【０３１６】
実施形態５５。前記免疫細胞は複数のＰＢＭＣである、実施形態５４に記載の方法。
【０３１７】
実施形態５６。前記Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む、実施形態５３に記載の方法。
【０３１８】
実施形態５７。前記Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む、実施形態５３に記載の方法。
【０３１９】
実施形態５８。前記Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を低下させるさらなる改変を含む、実施形態５６または５７に記載の方法。
【０３２０】
実施形態５９。前記さらなる改変は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９、ＺＦＮ、ＴＡＬＥＮ、Ｃｒｅリコンビナーゼ、またはメガヌクレアーゼを使用して、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を低下させることを含む、実施形態５６または５７に記載の方法。
【０３２１】
実施形態６０。前記Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を増加させるさらなる改変を含む、実施形態５６または５７に記載の方法。
【０３２２】
実施形態６１。前記さらなる改変は、ＲＮＡまたはプラスミドＤＮＡを使用して、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を増加させることを含む、実施形態５６または５７に記載の方法。
【０３２３】
実施形態６２。前記さらなる改変Ｔ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答は、前記さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答と比較して低下している、実施形態５３および５６〜５９のいずれか一つに記載の方法。
【０３２４】
実施形態６３。前記さらなる改変Ｔ細胞の、それらが投与された個体における循環半減期は、前記さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞の、それらが投与された個体における循環半減期と比較してモジュレートされる、実施形態５３および５６〜５９のいずれか一つに記載の方法。
【０３２５】
実施形態６４。前記Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、ＣＩＫ細胞、およびナチュラルキラーＴ細胞のうちの１つまたは複数を含む、実施形態５３および５６〜６３のいずれか一つに記載の方法。
【０３２６】
実施形態６５。前記Ｔ細胞は、ＣＤ３＋  Ｔ細胞、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＡ＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＯ＋  Ｔ細胞、およびγδ−Ｔ細胞のうちの１つまたは複数を含む、実施形態５３および５６〜６３のいずれか一つに記載の方法。
【０３２７】
実施形態６６。前記改変細胞は前記個体に対して同種異系である、実施形態１〜６５のいずれか一つに記載の方法。
【０３２８】
実施形態６７。前記改変細胞は前記個体に対して自家である、実施形態１〜６５のいずれか一つに記載の方法。
【０３２９】
実施形態６８。前記個体は、モジュレートされた炎症および／またはモジュレートされた免疫応答を有するよう事前調整されている、実施形態１〜６７のいずれか一つに記載の方法。
【０３３０】
実施形態６９。アジュバントを前記個体に投与するステップをさらに含む、実施形態１〜６８のいずれか一つに記載の方法。
【０３３１】
実施形態７０。前記アジュバントは、ＩＦＮαまたはＣｐＧ  ＯＤＮである、実施形態６９に記載の方法。
【０３３２】
実施形態７１。前記改変免疫細胞を含む前記組成物および前記アジュバントは同時に投与される、実施形態６９または７０に記載の方法。
【０３３３】
実施形態７２。前記改変免疫細胞を含む前記組成物および前記アジュバントは逐次的に投与される、実施形態６９または７０に記載の方法。
【０３３４】
実施形態７３。前記改変免疫細胞を含む前記組成物は、前記アジュバントを投与する前に投与される、実施形態７２に記載の方法。
【０３３５】
実施形態７４。前記改変免疫細胞を含む前記組成物は、前記アジュバントの投与後に投与される、実施形態７２に記載の方法。
【０３３６】
実施形態７５。前記改変免疫細胞を含む前記組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与と組み合わせて投与される、実施形態１〜７４のいずれか一つに記載の方法。
【０３３７】
実施形態７６。前記改変免疫細胞を含む前記組成物および前記免疫チェックポイント阻害剤は同時に投与される、実施形態７５に記載の方法。
【０３３８】
実施形態７７。前記改変免疫細胞を含む前記組成物および前記免疫チェックポイント阻害剤は逐次的に投与される、実施形態７５に記載の方法。
【０３３９】
実施形態７８。前記改変免疫細胞を含む前記組成物は、前記免疫チェックポイント阻害剤を投与する前に投与される、実施形態７７に記載の方法。
【０３４０】
実施形態７９。前記改変免疫細胞を含む前記組成物は、前記免疫チェックポイント阻害剤の投与後に投与される、実施形態７７に記載の方法。
【０３４１】
実施形態８０。前記免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ−３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数を標的にする、実施形態７５〜７９のいずれか一つに記載の方法。
【０３４２】
実施形態８１。前記改変免疫細胞を含む前記組成物は、化学療法の投与と組み合わせて投与される、実施形態１〜８０のいずれか一つに記載の方法。
【０３４３】
実施形態８２。前記改変免疫細胞を含む前記組成物および前記化学療法は同時に投与される、実施形態８１に記載の方法。
【０３４４】
実施形態８３。前記改変免疫細胞を含む前記組成物および前記化学療法は逐次的に投与される、実施形態８１に記載の方法。
【０３４５】
実施形態８４。前記改変免疫細胞を含む前記組成物は、前記化学療法を投与する前に投与される、実施形態８３に記載の方法。
【０３４６】
実施形態８５。前記改変免疫細胞を含む前記組成物は、前記化学療法の投与後に投与される、実施形態８３に記載の方法。
【０３４７】
実施形態８６。前記化学療法は白金系作用物質を含む、実施形態８１〜８５のいずれか一つに記載の方法。
【０３４８】
実施形態８７。前記化学療法はシスプラチンを含む、実施形態８１〜８６のいずれか一つに記載の方法。
【０３４９】
実施形態８８。前記個体への前記改変免疫細胞を含む前記組成物の投与は、前記ＨＰＶ抗原に特異的な細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の活性化および／または増殖をもたらす、実施形態１〜８７のいずれか一つに記載の方法。
【０３５０】
実施形態８９。前記個体への前記改変免疫細胞を含む前記組成物の投与は、前記抗原に特異的なヘルパーＴ（Ｔｈ）細胞の活性化および／または増殖をもたらす、実施形態１〜８７のいずれか一つに記載の方法。
【０３５１】
実施形態９０。前記有効量の前記組成物は、約１×１０６〜約１×１０１２個の改変免疫細胞を含む、実施形態１〜８９のいずれか一つに記載の方法。
【０３５２】
実施形態９１。前記改変免疫細胞を含む前記組成物の複数回投与を含む、実施形態１〜９０のいずれか一つに記載の方法。
【０３５３】
実施形態９２。前記改変免疫細胞を含む前記組成物の第１の投与、続いて、前記改変免疫細胞を含む前記組成物の第２の投与を含む、実施形態９１に記載の方法。
【０３５４】
実施形態９３。前記第２の投与は、前記第１の投与の約１か月後である、実施形態９２に記載の方法。
【０３５５】
実施形態９４。前記ＨＰＶ関連疾患はＨＰＶ関連がんである、実施形態１〜９３のいずれか一つに記載の方法。
【０３５６】
実施形態９５。前記ＨＰＶ関連がんは、子宮頸がん、肛門がん、中咽頭がん、膣がん、外陰がん、陰茎がん、皮膚がん、または頭頸部がんである、実施形態９４に記載の方法。
【０３５７】
実施形態９６。前記ＨＰＶ関連疾患は、ＨＰＶ関連感染性疾患である、実施形態１〜９５のいずれか一つに記載の方法。
【０３５８】
実施形態９７。個体におけるヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）関係疾患を処置するための方法であって、前記方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を前記個体に投与するステップを含み、前記改変免疫細胞は、配列番号１８〜２５のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸を含むＨＰＶ抗原を含む、方法。
【０３５９】
実施形態９８。個体におけるＨＰＶ関連疾患を予防するための方法であって、前記方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を前記個体に投与するステップを含み、前記改変免疫細胞は、配列番号１８〜２５のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含むＨＰＶ抗原を含む、方法。
【０３６０】
実施形態９９。ＨＰＶ関連疾患を有する個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、前記方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を前記個体に投与するステップを含み、前記改変免疫細胞は、配列番号１８〜２５のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含むＨＰＶ抗原を含む、方法。
【０３６１】
実施形態１００。個体におけるＨＰＶ関連疾患を処置するための方法であって、前記方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を前記個体に投与するステップを含み、前記改変免疫細胞は、配列番号１８〜２５のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含むＨＰＶ抗原を含み、
前記改変免疫細胞は、
ａ）インプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプット細胞の直径の関数であり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；および
ｂ）前記ＨＰＶ抗原が前記摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプット細胞と前記ＨＰＶ抗原とをインキュベートし、それによって、前記改変免疫細胞を作出するステップ
によって調製される、方法。
【０３６２】
実施形態１０１。個体におけるＨＰＶ関連疾患を予防するための方法であって、前記方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を前記個体に投与するステップを含み、前記改変免疫細胞は、ＨＰＶ抗原を含み、前記改変免疫細胞は、配列番号１８〜２５のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含むＨＰＶ抗原を含み、
前記改変免疫細胞は、
ａ）インプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプット細胞の直径の関数であり、それによって、前記ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きな前記インプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；および
ｂ）前記ＨＰＶ抗原が前記摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプット細胞と前記ＨＰＶ抗原とをインキュベートし、それによって、前記改変免疫細胞を作出するステップ
によって調製される、方法。
【０３６３】
実施形態１０２。ＨＰＶ関連疾患を有する個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、前記方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を前記個体に投与するステップを含み、前記改変免疫細胞は、配列番号１８〜２５のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含むＨＰＶ抗原を含み、
前記改変免疫細胞は、
ａ）インプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプット細胞の直径の関数であり、それによって、前記ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きな前記インプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；および
ｂ）前記ＨＰＶ抗原が前記摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプット細胞と前記ＨＰＶ抗原とをインキュベートし、それによって、前記改変免疫細胞を作出するステップ
によって調製される、方法。
【０３６４】
実施形態１０３。前記狭窄の前記直径は、前記細胞の前記直径未満である、実施形態１００〜１０２のいずれか一つに記載の方法。
【０３６５】
実施形態１０４。前記狭窄の前記直径は、前記細胞の前記直径の約２０％〜９９％である、実施形態１００〜１０３のいずれか一つに記載の方法。
【０３６６】
実施形態１０５。前記狭窄の前記直径は、前記細胞の前記直径の約２０％〜約６０％未満である、実施形態１００〜１０４のいずれか一つに記載の方法。
【０３６７】
実施形態１０６。前記狭窄は、チャネル中にある、実施形態１００〜１０５のいずれか一つに記載の方法。
【０３６８】
実施形態１０７。前記インプット細胞に、それが前記狭窄を通過するときに変形力が印加される、実施形態１００〜１０６のいずれか一つに記載の方法。
【０３６９】
実施形態１０８。アジュバントを前記個体に投与するステップをさらに含む、実施形態８６〜１０７のいずれか一つに記載の方法。
【０３７０】
実施形態１０９。前記アジュバントは、ＩＦＮαまたはＣｐＧ  ＯＤＮである、実施形態１０８に記載の方法。
【０３７１】
実施形態１１０。前記改変免疫細胞を含む前記組成物および前記アジュバントは同時に投与される、実施形態１０８または１０９に記載の方法。
【０３７２】
実施形態１１１。前記改変免疫細胞を含む前記組成物および前記アジュバントは逐次的に投与される、実施形態１０８または１０９に記載の方法。
【０３７３】
実施形態１１２。前記改変免疫細胞を含む前記組成物は、前記アジュバントを投与する前に投与される、実施形態１１１に記載の方法。
【０３７４】
実施形態１１３。前記改変免疫細胞を含む前記組成物は、前記アジュバントの投与後に投与される、実施形態１１１に記載の方法。
【０３７５】
実施形態１１４。前記改変免疫細胞はアジュバントをさらに含む、実施形態９７〜１１３のいずれか一つに記載の方法。
【０３７６】
実施形態１１５。ステップｂの前記摂動免疫細胞は、前記ＨＰＶ抗原およびアジュバントとインキュベートされる、実施形態１００〜１１３のいずれか一つに記載の方法。
【０３７７】
実施形態１１６。前記ＨＰＶ抗原および／または前記アジュバントは、細胞質基質および／またはエンドソームに存在する、実施形態１１４または１１５のいずれか一つに記載の方法。
【０３７８】
実施形態１１７。前記抗原および／またはアジュバントは、前記細胞の多数の区画に存在する、実施形態１１４〜１１６のいずれか一つに記載の方法。
【０３７９】
実施形態１１８。前記改変免疫細胞は、前記細胞の外側に、ＨＰＶ抗原および／またはアジュバントをさらに含む、実施形態１１４〜１１７のいずれか一つに記載の方法。
【０３８０】
実施形態１１９。前記摂動インプット細胞とインキュベートされるアジュバントの濃度は、約０．１μＭ〜約１ｍＭである、実施形態１１５〜１１８のいずれか一つに記載の方法。
【０３８１】
実施形態１２０。前記摂動インプット細胞とインキュベートされるＨＰＶ抗原の濃度は、約０．１μＭ〜約１ｍＭである、実施形態１１５〜１１９のいずれか一つに記載の方法。
【０３８２】
実施形態１２１。前記摂動インプット細胞とインキュベートされるＨＰＶ抗原のアジュバントに対する比は、約１００００：１〜約１：１００００である、実施形態１１５〜１２０のいずれか一つに記載の方法。
【０３８３】
実施形態１２２。前記免疫応答は増強される、実施形態９９または１０２に記載の方法。
【０３８４】
実施形態１２３。前記ＨＰＶ抗原に対する前記免疫応答は増強される、実施形態１２２に記載の方法。
【０３８５】
実施形態１２４。前記アジュバントは、ＣｐＧ  ＯＤＮ、ＩＦＮ−α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ−Ｉアゴニスト、またはポリＩ：Ｃである、実施形態１１４〜１２３のいずれか一つに記載の方法。
【０３８６】
実施形態１２５。前記アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮである、実施形態１２４に記載の方法。
【０３８７】
実施形態１２６。前記ＣｐＧ  ＯＤＮは、ＣｐＧ  ＯＤＮ１０１８、ＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６、またはＣｐＧ  ＯＤＮ２００６である、実施形態１２５に記載の方法。
【０３８８】
実施形態１２７。前記改変免疫細胞は１つよりも多いアジュバントを含む、実施形態１１４〜１２６のいずれか一つに記載の方法。
【０３８９】
実施形態１２８。前記ＨＰＶ抗原は、同じおよび／または異なるＨＰＶ抗原に対する応答を誘発する多数のポリペプチドのプールである、実施形態９７〜１２７のいずれか一つに記載の方法。
【０３９０】
実施形態１２９。多数の抗原の前記プール中の抗原は、多数の抗原の前記プール中の他の抗原に向けられた前記免疫応答を減少させない、実施形態１２８に記載の方法。
【０３９１】
実施形態１３０。前記ＨＰＶ抗原は、抗原性ＨＰＶエピトープおよび１つまたは複数の異種ペプチド配列を含むポリペプチドである、実施形態９７〜１２９のいずれか一つに記載の方法。
【０３９２】
実施形態１３１。前記ＨＰＶ抗原は、それ自体と、他の抗原と、または前記アジュバントと複合体を形成する、実施形態９７〜１３０のいずれか一つに記載の方法。
【０３９３】
実施形態１３２。前記ＨＰＶ抗原は、ＨＬＡ−Ａ２特異的エピトープで構成される、実施形態９７〜１３１のいずれか一つに記載の方法。
【０３９４】
実施形態１３３。前記ＨＰＶ抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る、実施形態９７〜１３２のいずれか一つに記載の方法。
【０３９５】
実施形態１３４。前記ＨＰＶ抗原は、ＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る、実施形態９７〜１３３のいずれか一つに記載の方法。
【０３９６】
実施形態１３５。前記改変免疫細胞は、約０．１μＭ〜約１ｍＭの濃度で前記アジュバントを含む、実施形態１１４〜１３４のいずれか一つに記載の方法。
【０３９７】
実施形態１３６。前記改変免疫細胞は、約０．１μＭ〜約１ｍＭの濃度で前記ＨＰＶ抗原を含む、実施形態９７〜１３５のいずれか一つに記載の方法。
【０３９８】
実施形態１３７。前記ＨＰＶ抗原の前記アジュバントに対する比は、約１００００：１〜約１：１００００である、実施形態１１４〜１３６のいずれか一つに記載の方法。
【０３９９】
実施形態１３８。前記改変免疫細胞は、作用物質をさらに含み、前記作用物質は、前記作用物質を含まない対応する改変免疫細胞と比較して前記改変免疫細胞の生存能力および／または機能を増強する、実施形態９７〜１３７のいずれか一つに記載の方法。
【０４００】
実施形態１３９。前記作用物質は、エンドサイトーシスを増強する化合物、安定剤、または補因子である、実施形態１３８に記載の方法。
【０４０１】
実施形態１４０。前記作用物質はアルブミンである、実施形態１３８に記載の方法。
【０４０２】
実施形態１４１。前記アルブミンは、マウス、ウシ、またはヒトアルブミンである、実施形態１４０に記載の方法。
【０４０３】
実施形態１４２。前記作用物質は、二価金属カチオン、グルコース、ＡＴＰ、カリウム、グリセロール、トレハロース、Ｄ−スクロース、ＰＥＧ１５００、Ｌ−アルギニン、Ｌ−グルタミン、またはＥＤＴＡである、実施形態１３８に記載の方法。
【０４０４】
実施形態１４３。前記作用物質はＭＳＡを含む、実施形態１３８に記載の方法。
【０４０５】
実施形態１４４。共刺激分子のうちの１つまたは複数の発現を増加させるようにさらに改変されている、実施形態９７〜１４３のいずれか一つに記載の改変Ｔ細胞。
【０４０６】
実施形態１４５。前記共刺激分子は、Ｂ７−Ｈ２（ＩＣＯＳＬ）、Ｂ７−１（ＣＤ８０）、Ｂ７−２（ＣＤ８６）、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＣＤ４０、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ３０Ｌ、ＴＩＭ４、ＳＬＡＭ、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ１５５、またはＣＤ１１２である、実施形態１４４に記載の改変Ｔ細胞。
【０４０７】
実施形態１４６。前記１つまたは複数の共刺激分子の増加した発現をもたらす核酸を含む、実施形態１４４または１４５に記載の改変Ｔ細胞。
【０４０８】
実施形態。前記免疫細胞は、Ｔ細胞、樹状細胞、単球、マクロファージ、骨髄性細胞、顆粒球、好中球、マスト細胞、ナチュラルキラー細胞、自然リンパ球、好塩基球、または造血系前駆細胞である、実施形態９７〜１４６のいずれか一つに記載の方法。
【０４０９】
実施形態１４８。前記免疫細胞はＢ細胞ではない、実施形態９７〜１４７のいずれか一つに記載の方法。
【０４１０】
実施形態１４９。前記免疫細胞はＢ細胞である、実施形態９７〜１４８のいずれか一つに記載の方法。
【０４１１】
実施形態１５０。前記免疫細胞はＴ細胞である、実施形態９７〜１４８のいずれか一つに記載の方法。
【０４１２】
実施形態１５１。前記免疫細胞は混合細胞集団である、実施形態９７〜１４８のいずれか一つに記載の方法。
【０４１３】
実施形態１５２。前記免疫細胞は複数のＰＢＭＣである、実施形態１５１に記載の方法。
【０４１４】
実施形態１５３。前記Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む、実施形態１５０に記載の方法。
【０４１５】
実施形態１５４。前記Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む、実施形態１５０に記載の方法。
【０４１６】
実施形態１５５。前記Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を低下させるさらなる改変を含む、実施形態１５３または１５４に記載の方法。
【０４１７】
実施形態１５６。前記さらなる改変は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９、ＺＦＮ、ＴＡＬＥＮ、Ｃｒｅリコンビナーゼ、またはメガヌクレアーゼを使用して、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を低下させることを含む、実施形態１５３または１５４に記載の方法。
【０４１８】
実施形態１５７。前記Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を増加させるさらなる改変を含む、実施形態１５３または１５４に記載の方法。
【０４１９】
実施形態１５８。前記さらなる改変は、ＲＮＡまたはプラスミドＤＮＡを使用して、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を増加させることを含む、実施形態１５３または１５４に記載の方法。
【０４２０】
実施形態１５９。前記さらなる改変Ｔ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答は、前記さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答と比較して低下している、実施形態１５０および１５３〜１５６のいずれか一つに記載の方法。
【０４２１】
実施形態１６０。前記さらなる改変Ｔ細胞の、それらが投与された個体における循環半減期は、前記さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞の、それらが投与された個体における循環半減期と比較してモジュレートされる、実施形態１５０および１５３〜１５６のいずれか一つに記載の方法。
【０４２２】
実施形態１６１。前記Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、ＣＩＫ細胞、およびナチュラルキラーＴ細胞のうちの１つまたは複数を含む、実施形態１５０および１５３〜１６０のいずれか一つに記載の方法。
【０４２３】
実施形態１６２。前記Ｔ細胞は、ＣＤ３＋  Ｔ細胞、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＡ＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＯ＋  Ｔ細胞、およびγδ−Ｔ細胞のうちの１つまたは複数を含む、実施形態１５０および１５３〜１６０のいずれか一つに記載の方法。
【０４２４】
実施形態１６３。前記改変細胞は前記個体に対して同種異系である、実施形態９７〜１６２のいずれか一つに記載の方法。
【０４２５】
実施形態１６４。前記改変細胞は前記個体に対して自家である、実施形態９７〜１６２のいずれか一つに記載の方法。
【０４２６】
実施形態１６５。前記個体は、モジュレートされた炎症および／またはモジュレートされた免疫応答を有するよう事前調整されている、実施形態９７〜１６４のいずれか一つに記載の方法。
【０４２７】
実施形態１６６。前記改変免疫細胞を含む前記組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与と組み合わせて投与される、実施形態９７〜１６５のいずれか一つに記載の方法。
【０４２８】
実施形態１６７。前記改変免疫細胞を含む前記組成物および前記免疫チェックポイント阻害剤は同時に投与される、実施形態１６６に記載の方法。
【０４２９】
実施形態１６８。前記改変免疫細胞を含む前記組成物および前記免疫チェックポイント阻害剤は逐次的に投与される、実施形態１６６に記載の方法。
【０４３０】
実施形態１６９。前記改変免疫細胞を含む前記組成物は、前記免疫チェックポイント阻害剤を投与する前に投与される、実施形態１６８に記載の方法。
【０４３１】
実施形態１７０。前記改変免疫細胞を含む前記組成物は、前記免疫チェックポイント阻害剤の投与後に投与される、実施形態１６８に記載の方法。
【０４３２】
実施形態１７１。前記免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ−３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数を標的にする、実施形態１５２〜１５６のいずれか一つに記載の方法。
【０４３３】
実施形態１７２。前記改変免疫細胞を含む前記組成物は、化学療法の投与と組み合わせて投与される、実施形態９７〜１７１のいずれか一つに記載の方法。
【０４３４】
実施形態１７３。前記改変免疫細胞を含む前記組成物および前記化学療法は同時に投与される、実施形態１７２に記載の方法。
【０４３５】
実施形態１７４。前記改変免疫細胞を含む前記組成物および前記化学療法は逐次的に投与される、実施形態１７２に記載の方法。
【０４３６】
実施形態１７５。前記改変免疫細胞を含む前記組成物は、前記化学療法を投与する前に投与される、実施形態１７４に記載の方法。
【０４３７】
実施形態１７６。前記改変免疫細胞を含む前記組成物は、前記化学療法の投与後に投与される、実施形態１７４に記載の方法。
【０４３８】
実施形態１７７。前記化学療法はシスプラチンを含む、実施形態１７２〜１７６のいずれか一つに記載の方法。
【０４３９】
実施形態１７８。前記個体への前記改変免疫細胞を含む前記組成物の投与は、前記ＨＰＶ抗原に特異的な細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の活性化および／または増殖をもたらす、実施形態９７〜１７７のいずれか一つに記載の方法。
【０４４０】
実施形態１７９。前記個体への前記改変免疫細胞を含む前記組成物の投与は、前記ＨＰＶ抗原に特異的なヘルパーＴ（Ｔｈ）細胞の活性化および／または増殖をもたらす、実施形態９７〜１７７のいずれか一つに記載の方法。
【０４４１】
実施形態１８０。前記有効量の前記組成物は、約１×１０６〜約１×１０１２個の改変免疫細胞を含む、実施形態９７〜１７９のいずれか一つに記載の方法。
【０４４２】
実施形態１８１。前記改変免疫細胞を含む前記組成物の複数回投与を含む、実施形態９７〜１８０のいずれか一つに記載の方法。
【０４４３】
実施形態１８２。前記改変免疫細胞を含む前記組成物の第１の投与、続いて、前記改変免疫細胞を含む前記組成物の第２の投与を含む、実施形態１８１に記載の方法。
【０４４４】
実施形態１８３。前記第２の投与は、前記第１の投与の約１か月後である、実施形態１８２に記載の方法。
【０４４５】
実施形態１８４。前記ＨＰＶ関連疾患はＨＰＶ関連がんである、実施形態９７〜１８３のいずれか一つに記載の方法。
【０４４６】
実施形態１８５。前記ＨＰＶ関連がんは、子宮頸がん、肛門がん、中咽頭がん、膣がん、外陰がん、陰茎がん、皮膚がん、または頭頸部がんである、実施形態１８４に記載の方法。
【０４４７】
実施形態１８６。改変免疫細胞を含む組成物であって、前記改変免疫細胞は、ＣｐＧ  ＯＤＮ、および配列番号１８〜２５のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するＨＰＶ抗原を細胞内に含む、組成物。
【０４４８】
実施形態１８７。前記ＨＰＶ抗原は、配列番号２３と少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１６６に記載の組成物。
【０４４９】
実施形態１８８。前記改変免疫細胞は、
ａ）インプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプット細胞の直径の関数であり、それによって、前記ＨＰＶ抗原および前記ＣｐＧ  ＯＤＮが通過するのに十分に大きな前記インプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；ならびに
ｂ）前記ＨＰＶ抗原および前記ＣｐＧ  ＯＤＮが前記摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプット細胞と前記ＨＰＶ抗原および前記ＣｐＧ  ＯＤＮとをインキュベートし、それによって、前記改変免疫細胞を作出するステップ
によって調製される、実施形態１８６または１８７に記載の組成物。
【０４５０】
実施形態１８９。前記狭窄の前記直径は、前記細胞の前記直径未満である、実施形態１８８に記載の組成物。
【０４５１】
実施形態１９０。前記狭窄の前記直径は、前記細胞の前記直径の約２０％〜約９９％である、実施形態１８８または１８９に記載の組成物。
【０４５２】
実施形態１９１。前記狭窄の前記直径は、前記細胞の前記直径の約２０％〜約６０％未満である、実施形態１８８〜１９０のいずれか一つに記載の組成物。
【０４５３】
実施形態１９２。前記狭窄は、チャネル中にある、実施形態１８８〜１９１のいずれか一つに記載の組成物。
【０４５４】
実施形態１９３。前記インプット細胞に、それが前記狭窄を通過するときに変形力が印加される、実施形態１８８〜１９２のいずれか一つに記載の組成物。
【０４５５】
実施形態１９４。アジュバントをさらに含む、実施形態１８６〜１９３のいずれか一つに記載の組成物。
【０４５６】
実施形態１９５。前記ＨＰＶ抗原および／または前記ＣｐＧ  ＯＤＮは、細胞質基質および／またはエンドソームに存在する、実施形態１８６〜１９４のいずれか一つに記載の組成物。
【０４５７】
実施形態１９６。前記抗原および／または前記ＣｐＧ  ＯＤＮは、前記細胞の多数の区画に存在する、実施形態１８６〜１９５のいずれか一つに記載の組成物。
【０４５８】
実施形態１９７。前記改変免疫細胞は、前記細胞の表面に、ＨＰＶ抗原および／またはＣｐＧ  ＯＤＮをさらに含む、実施形態１８６〜１９６のいずれか一つに記載の組成物。
【０４５９】
実施形態１９８。前記摂動インプット細胞とインキュベートされるＣｐＧ  ＯＤＮの濃度は、約０．１μＭ〜約１ｍＭである、実施形態１８８〜１９７のいずれか一つに記載の組成物。
【０４６０】
実施形態１９９。前記摂動インプット細胞とインキュベートされるＨＰＶ抗原の濃度は、約０．１μＭ〜約１ｍＭである、実施形態１８８〜１９８のいずれか一つに記載の組成物。
【０４６１】
実施形態２００。前記摂動インプット細胞とインキュベートされるＨＰＶ抗原のＣｐＧ  ＯＤＮに対する比は、約１００００：１〜約１：１００００である、実施形態１８８〜１９９のいずれか一つに記載の組成物。
【０４６２】
実施形態２０１。前記ＣｐＧ  ＯＤＮは、ＣｐＧ  ＯＤＮ１０１８、ＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６、またはＣｐＧ  ＯＤＮ２００６である、実施形態１８６〜２００のいずれか一つに記載の組成物。
【０４６３】
実施形態２０２。前記改変免疫細胞は１つよりも多いアジュバントを含む、実施形態１８６〜２０１のいずれか一つに記載の組成物。
【０４６４】
実施形態。前記アジュバントは、ＣｐＧ  ＯＤＮ、ＩＦＮ−α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ−Ｉアゴニスト、またはポリＩ：Ｃを含む、実施形態２０２に記載の組成物。
【０４６５】
実施形態２０４。前記ＨＰＶ抗原は、同じおよび／または異なるＨＰＶ抗原に対する応答を誘発する多数のポリペプチドのプールである、実施形態１８６〜２０３のいずれか一つに記載の組成物。
【０４６６】
実施形態２０５。多数の抗原の前記プール中の抗原は、多数の抗原の前記プール中の他の抗原に向けられた前記免疫応答を減少させない、実施形態２０４に記載の組成物。
【０４６７】
実施形態２０６。前記ＨＰＶ抗原は、抗原性ＨＰＶエピトープおよび１つまたは複数の異種ペプチド配列を含むポリペプチドである、実施形態１８６〜２０５のいずれか一つに記載の組成物。
【０４６８】
実施形態２０７。前記ＨＰＶ抗原は、それ自体と、他の抗原と、アジュバントと、または前記ＣｐＧ  ＯＤＮと複合体を形成する、実施形態１８６〜２０６のいずれか一つに記載の組成物。
【０４６９】
実施形態２０８。前記ＨＰＶ抗原は、ＨＬＡ−Ａ２特異的エピトープで構成される、実施形態１８６〜２０７に記載の組成物。
【０４７０】
実施形態２０９。前記ＨＰＶ抗原は、１つまたは複数の異種ペプチド配列がそのＮ末端および／またはそのＣ末端で隣接している抗原性エピトープを含むポリペプチドである、実施形態１８６〜２０８のいずれか一つに記載の組成物。
【０４７１】
実施形態２１０。前記改変免疫細胞は、約０．１μＭ〜約１ｍＭの濃度で前記ＣｐＧ  ＯＤＮを含む、実施形態１８６〜２０９のいずれか一つに記載の組成物。
【０４７２】
実施形態２１２。前記ＨＰＶ抗原の前記ＣｐＧ  ＯＤＮに対する比は、約１００００：１〜約１：１００００である、実施形態１８６〜２１１のいずれか一つに記載の組成物。
【０４７３】
実施形態２１３。改変免疫細胞を含む組成物であって、前記改変免疫細胞は、ＨＰＶ抗原を含み、前記ＨＰＶ抗原は、配列番号１８〜２５のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む、組成物。
【０４７４】
実施形態２１４。前記ＨＰＶ抗原は、配列番号２３と少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態２１３に記載の組成物。
【０４７５】
実施形態２１５。前記改変免疫細胞は、
ａ）インプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプット細胞の直径の関数であり、それによって、前記ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きな前記インプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；および
ｂ）前記ＨＰＶ抗原が前記摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプット細胞と前記ＨＰＶ抗原とをインキュベートし、それによって、前記改変免疫細胞を作出するステップ
によって調製される、実施形態２１３または２１４に記載の組成物。
【０４７６】
実施形態２１６。前記狭窄の前記直径は、前記細胞の前記直径未満である、実施形態２１５に記載の組成物。
【０４７７】
実施形態２１７。前記狭窄の前記直径は、前記細胞の前記直径の約２０％〜約９９％である、実施形態２１５〜２１６のいずれか一つに記載の組成物。
【０４７８】
実施形態２１８。前記狭窄の前記直径は、前記細胞の前記直径の約２０％〜約６０％未満である、実施形態２１５〜２１７のいずれか一つに記載の組成物。
【０４７９】
実施形態２１９。前記狭窄は、チャネル中にある、実施形態２１５〜２１８のいずれか一つに記載の組成物。
【０４８０】
実施形態２２０。前記インプット細胞に、それが前記狭窄を通過するときに変形力が印加される、実施形態２１５〜２１９のいずれか一つに記載の組成物。
【０４８１】
実施形態２２１。アジュバントをさらに含む、実施形態２１３〜２２０のいずれか一つに記載の組成物。
【０４８２】
実施形態２２２。前記ＨＰＶ抗原および／または前記アジュバントは、細胞質基質および／またはエンドソームに存在する、実施形態２１３〜２２１のいずれか一つに記載の組成物。
【０４８３】
実施形態２２３。前記抗原および／またはアジュバントは、前記細胞の多数の区画に存在する、実施形態２１３〜２２２のいずれか一つに記載の組成物。
【０４８４】
実施形態２２４。前記改変免疫細胞は、前記細胞の表面に、ＨＰＶ抗原および／またはアジュバントをさらに含む、実施形態２１３〜２２３のいずれか一つに記載の組成物。
【０４８５】
実施形態２２５。前記摂動インプット細胞とインキュベートされるアジュバントの濃度は、約０．１μＭ〜約１ｍＭである、実施形態２１５〜２２４のいずれか一つに記載の組成物。
【０４８６】
実施形態２２６。前記摂動インプット細胞とインキュベートされるＨＰＶ抗原の濃度は、約０．１μＭ〜約１ｍＭである、実施形態２１５〜２２５のいずれか一つに記載の組成物。
【０４８７】
実施形態２２７。前記摂動インプット細胞とインキュベートされるＨＰＶ抗原のアジュバントに対する比は、約１００００：１〜約１：１００００である、実施形態２１５〜２２６のいずれか一つに記載の組成物。
【０４８８】
実施形態２２８。前記アジュバントは、ＣｐＧ  ＯＤＮ、ＩＦＮ−α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ−Ｉアゴニスト、またはポリＩ：Ｃである、実施形態２１３〜２２７のいずれか一つに記載の組成物。
【０４８９】
実施形態２２９。前記アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮである、実施形態２２８に記載の組成物。
【０４９０】
実施形態２３０。前記ＣｐＧ  ＯＤＮは、ＣｐＧ  ＯＤＮ１０１８、ＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６、またはＣｐＧ  ＯＤＮ２００６である、実施形態２２９に記載の組成物。
【０４９１】
実施形態２３１。前記改変免疫細胞は１つよりも多いアジュバントを含む、実施形態２１３〜２３０のいずれか一つに記載の組成物。
【０４９２】
実施形態２３２。前記ＨＰＶ抗原は、同じおよび／または異なるＨＰＶ抗原に対する応答を誘発する多数のポリペプチドのプールである、実施形態２１３〜２３１のいずれか一つに記載の組成物。
【０４９３】
実施形態２３３。多数の抗原の前記プール中の抗原は、多数の抗原の前記プール中の他の抗原に向けられた前記免疫応答を減少させない、実施形態２３２に記載の組成物。
【０４９４】
実施形態２３４。前記ＨＰＶ抗原は、抗原性ＨＰＶエピトープおよび１つまたは複数の異種ペプチド配列を含むポリペプチドである、実施形態２１３〜２３３のいずれか一つに記載の組成物。
【０４９５】
実施形態２３５。前記ＨＰＶ抗原は、それ自体と、他の抗原と、または前記アジュバントと複合体を形成する、実施形態２１３〜２３４のいずれか一つに記載の組成物。
【０４９６】
実施形態２３６。前記ＨＰＶ抗原は、ＨＬＡ−Ａ２特異的エピトープで構成される、実施形態２１３〜２３５に記載の組成物。
【０４９７】
実施形態２３７。前記改変免疫細胞は、約０．１μＭ〜約１ｍＭの濃度で前記アジュバントを含む、実施形態２１３〜２３６のいずれか一つに記載の組成物。
【０４９８】
実施形態２３８。前記改変免疫細胞は、約０．１μＭ〜約１ｍＭの濃度で前記ＨＰＶ抗原を含む、実施形態２１３〜２３７のいずれか一つに記載の組成物。
【０４９９】
実施形態２３９。前記ＨＰＶ抗原の前記アジュバントに対する比は、約１００００：１〜約１：１００００である、実施形態２１３〜２３８のいずれか一つに記載の組成物。
【０５００】
実施形態２４０。前記ＨＰＶ抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る、実施形態１８６〜２３９のいずれか一つに記載の組成物。
【０５０１】
実施形態２４１。前記ＨＰＶ抗原は、ＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る、実施形態１８６〜２４０のいずれか一つに記載の組成物。
【０５０２】
実施形態２４２。前記改変免疫細胞は、作用物質をさらに含み、前記作用物質は、前記作用物質を含まない対応する改変免疫細胞と比較して前記改変免疫細胞の生存能力および／または機能を増強する、実施形態１８６〜２４１のいずれか一つに記載の組成物。
【０５０３】
実施形態２４３。前記作用物質は、エンドサイトーシスを増強する化合物、安定剤、または補因子である、実施形態２４２に記載の組成物。
【０５０４】
実施形態２４４。前記作用物質はアルブミンである、実施形態２４２に記載の組成物。
【０５０５】
実施形態２４５。前記アルブミンは、マウス、ウシ、またはヒトアルブミンである、実施形態２４４に記載の組成物。
【０５０６】
実施形態２４６。前記作用物質は、二価金属カチオン、グルコース、ＡＴＰ、カリウム、グリセロール、トレハロース、Ｄ−スクロース、ＰＥＧ１５００、Ｌ−アルギニン、Ｌ−グルタミン、またはＥＤＴＡである、実施形態２４２に記載の組成物。
【０５０７】
実施形態２４７。前記作用物質はＭＳＡを含む、実施形態２４２に記載の組成物。
【０５０８】
実施形態２４８。前記細胞は、共刺激分子のうちの１つまたは複数の発現を増加させるようにさらに改変されている、実施形態１８６〜２４７のいずれか一つに記載の組成物。
【０５０９】
実施形態２４９。前記共刺激分子は、Ｂ７−Ｈ２（ＩＣＯＳＬ）、Ｂ７−１（ＣＤ８０）、Ｂ７−２（ＣＤ８６）、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＣＤ４０、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ３０Ｌ、ＴＩＭ４、ＳＬＡＭ、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ１５５、またはＣＤ１１２である、実施形態２４８に記載の組成物。
【０５１０】
実施形態２５０。前記細胞は、前記１つまたは複数の共刺激分子の増加した発現をもたらす核酸を含む、実施形態２４８または２４９に記載の組成物。
【０５１１】
実施形態２５１。前記免疫細胞は、Ｔ細胞、樹状細胞、単球、マクロファージ、骨髄性細胞、顆粒球、好中球、マスト細胞、ナチュラルキラー細胞、自然リンパ球、好塩基球、または造血系前駆細胞である、実施形態１８６〜２５０のいずれか一つに記載の組成物。
【０５１２】
実施形態２５２。前記免疫細胞はＢ細胞ではない、実施形態１８６〜２５１のいずれか一つに記載の組成物。
【０５１３】
実施形態２５３。前記免疫細胞はＴ細胞である、実施形態１８６〜２５２のいずれか一つに記載の組成物。
【０５１４】
実施形態２５４。前記Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む、実施形態２５３に記載の組成物。
【０５１５】
実施形態２５５。前記Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む、実施形態２５３に記載の組成物。
【０５１６】
実施形態２５６。前記Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を低下させるさらなる改変を含む、実施形態２５４または２５５に記載の組成物。
【０５１７】
実施形態２５７。前記さらなる改変は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９、ＺＦＮ、ＴＡＬＥＮ、Ｃｒｅリコンビナーゼ、またはメガヌクレアーゼを使用して、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を低下させることを含む、実施形態２５４または２５５に記載の組成物。
【０５１８】
実施形態２５８。前記Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を増加させるさらなる改変を含む、実施形態２５４または２５５に記載の組成物。
【０５１９】
実施形態２５９。前記さらなる改変は、ＲＮＡまたはプラスミドＤＮＡを使用して、ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ発現を増加させることを含む、実施形態２５４または２５５に記載の組成物。
【０５２０】
実施形態２６０。前記さらなる改変Ｔ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答は、前記さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答と比較して低下している、実施形態２５３〜２５７のいずれか一つに記載の組成物。
【０５２１】
実施形態２６１。前記さらなる改変Ｔ細胞の、それらが投与された個体における循環半減期は、前記さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞の、それらが投与された個体における循環半減期と比較してモジュレートされる、実施形態２５３〜２５７のいずれか一つに記載の組成物。
【０５２２】
実施形態２６２。前記Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、ＣＩＫ細胞、およびナチュラルキラーＴ細胞のうちの１つまたは複数を含む、実施形態２５３〜２６１のいずれか一つに記載の組成物。
【０５２３】
実施形態２６３。前記Ｔ細胞は、ＣＤ３＋  Ｔ細胞、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＡ＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＯ＋  Ｔ細胞、およびγδ−Ｔ細胞のうちの１つまたは複数を含む、実施形態２５３〜２６１のいずれか一つに記載の組成物。
【０５２４】
実施形態２６４。前記改変細胞は個体に対して同種異系である、実施形態１８６〜２６３のいずれか一つに記載の組成物。
【０５２５】
実施形態２６５。前記改変細胞は個体に対して自家である、実施形態１８６〜２６３のいずれか一つに記載の組成物。
【０５２６】
実施形態２６６。個体は、モジュレートされた炎症および／またはモジュレートされた免疫応答を有するよう事前調整されている、実施形態１８６〜２６５のいずれか一つに記載の組成物。
【０５２７】
実施形態２６７。免疫チェックポイント阻害剤をさらに含む、実施形態１８６〜２６６のいずれか一つに記載の組成物。
【０５２８】
実施形態２６８。前記免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ−３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数を標的にする、実施形態２６７に記載の組成物。
【０５２９】
実施形態２６９。個体への前記改変免疫細胞を含む前記組成物の投与は、前記ＨＰＶ抗原に特異的な細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の活性化および／または増殖をもたらす、実施形態１８６〜２６８のいずれか一つに記載の組成物。
【０５３０】
実施形態２７０。個体への前記改変免疫細胞を含む前記組成物の投与は、前記抗原に特異的なヘルパーＴ（Ｔｈ）細胞の活性化および／または増殖をもたらす、実施形態１８６〜２６８のいずれか一つに記載の組成物。
【０５３１】
実施形態２７１。前記有効量の前記組成物は、約１×１０６〜約１×１０１２個の改変免疫細胞を含む、実施形態１８６〜２７０のいずれか一つに記載の組成物。
【０５３２】
実施形態２７２。抗原を含む組成物であって、前記抗原は、配列番号２３と少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む、組成物。
【０５３３】
実施形態２７３。前記抗原は配列番号２３のアミノ酸配列を含む、実施形態２７２に記載の組成物。
【０５３４】
実施形態２７４。個体におけるＨＰＶ関連疾患を処置または予防するための方法であって、前記方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を前記個体に投与するステップを含み、前記改変免疫細胞は、ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含み、前記アジュバントは細胞内に供給されており、
前記改変免疫細胞は、
ａ）ＨＰＶ抗原を含むインプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプット細胞の直径の関数であり、それによって、前記抗原および前記アジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；ならびに
ｂ）前記アジュバントが前記摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプット細胞と前記アジュバントとをインキュベートし、それによって、前記改変免疫細胞を作出するステップ
によって調製される、方法。
【０５３５】
実施形態２７５。個体におけるＨＰＶ関連疾患を処置または予防するための方法であって、前記方法は、改変免疫細胞を含む有効量の組成物を前記個体に投与するステップを含み、前記改変免疫細胞は、ＨＰＶ抗原およびアジュバントを含み、前記アジュバントは細胞内に供給されており、
前記改変免疫細胞は、
ａ）前記アジュバントを含むインプット細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプット細胞の直径の関数であり、それによって、前記ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きな前記インプット細胞の摂動を引き起こして摂動インプット細胞を形成するステップ；および
ｂ）前記ＨＰＶ抗原が前記摂動インプット細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプット細胞と前記ＨＰＶ抗原とをインキュベートし、それによって、前記改変免疫細胞を作出するステップ
によって調製される、方法。
【０５３６】
実施形態２７６。前記狭窄の前記直径は、前記細胞の前記直径未満である、実施形態２７４または２７５に記載の方法。
【０５３７】
実施形態２７７。前記狭窄の前記直径は、前記細胞の前記直径の約２０％〜９９％である、実施形態２７４〜２７６のいずれか一つに記載の方法。
【０５３８】
実施形態２７８。前記狭窄の前記直径は、前記細胞の前記直径の約２０％〜約６０％未満である、実施形態２７４〜２７７のいずれか一つに記載の方法。
【０５３９】
実施形態２７９。前記狭窄は、チャネル中にある、実施形態２７４〜２７８のいずれか一つに記載の方法。
【０５４０】
実施形態２８０。前記インプット細胞に、それが前記狭窄を通過するときに変形力が印加される、実施形態２７４〜２７９のいずれか一つに記載の方法。
【０５４１】
実施形態２８１。前記ＨＰＶ抗原および／または前記アジュバントは、細胞質基質および／またはエンドソームに存在する、実施形態２７４〜２８０のいずれか一つに記載の方法。
【０５４２】
実施形態２８２。前記抗原および／またはアジュバントは、前記細胞の多数の区画に存在する、実施形態２７４〜２８１のいずれか一つに記載の方法。
【０５４３】
実施形態２８３。前記摂動インプット細胞とインキュベートされるアジュバントの濃度は、約０．１μＭ〜約１ｍＭである、実施形態２７４に記載の方法。
【０５４４】
実施形態２８４。前記摂動インプット細胞とインキュベートされるＨＰＶ抗原の濃度は、約０．１μＭ〜約１ｍＭである、実施形態２７５に記載の方法。
【０５４５】
実施形態２８５。前記アジュバントは、ＣｐＧ  ＯＤＮ、ＩＦＮ−α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ−Ｉアゴニスト、またはポリＩ：Ｃである、実施形態２７４〜２８５のいずれか一つに記載の方法。
【０５４６】
実施形態２８６。前記アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮである、実施形態２８５に記載の方法。
【０５４７】
実施形態２８７。前記ＣｐＧ  ＯＤＮは、ＣｐＧ  ＯＤＮ１０１８、ＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６、またはＣｐＧ  ＯＤＮ２００６である、実施形態２８６に記載の方法。
【０５４８】
実施形態２８８。前記ＨＰＶ抗原は細胞溶解物に由来する、実施形態２７４〜２８７のいずれか一つに記載の方法。
【０５４９】
実施形態２８９。前記ＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ−１６またはＨＰＶ−１８抗原である、実施形態２７４〜２８８のいずれか一つに記載の方法。
【０５５０】
実施形態２９０。前記ＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ  Ｅ６抗原またはＨＰＶ  Ｅ７抗原である、実施形態２７４〜２８９のいずれか一つに記載の方法。
【０５５１】
実施形態２９１。前記ＨＰＶ抗原は、配列番号１８〜２５のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態２９０に記載の方法。
【０５５２】
実施形態２９２。前記ＨＰＶ抗原は、配列番号１８〜２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態２８９に記載の方法。
【０５５３】
実施形態２９３。前記ＨＰＶ抗原は、配列番号２３と少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態２９０に記載の方法。
【０５５４】
実施形態２９４。前記ＨＰＶ抗原は配列番号２３のアミノ酸配列を含む、実施形態２９０に記載の方法。
【０５５５】
実施形態２９５。個体におけるＨＰＶ関連疾患を処置または予防するための方法であって、ＨＰＶ抗原と会合した改変免疫細胞を前記個体に投与するステップを含み、前記改変免疫細胞は、
ａ）前記ＨＰＶ抗原がインプット細胞と会合するのを可能にするのに十分な時間、前記インプット細胞と前記ＨＰＶ抗原および／またはアジュバントとをインキュベートし、それによって、前記抗原と会合した前記改変免疫細胞を作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、方法。
【０５５６】
実施形態２９６。前記ＨＰＶ抗原は、配列番号１８〜２５のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態２９５に記載の方法。
【０５５７】
実施形態２９７。前記ＨＰＶ抗原は配列番号２３のアミノ酸配列を含む、実施形態２９６に記載の方法。
【０５５８】
実施形態２９８。前記アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮである、実施形態２９５〜２９７のいずれか一つに記載の方法。
【０５５９】
実施形態２９９。前記ＣｐＧ  ＯＤＮは、ＣｐＧ  ＯＤＮ１０１８、ＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６、またはＣｐＧ  ＯＤＮ２００６である、実施形態２９８に記載の方法。
【０５６０】
実施形態３００。医薬としての使用のための、実施形態１８６〜２７３のいずれか一つに記載の改変免疫細胞を含む組成物。
【０５６１】
実施形態３０１。手術、治療、または診断による、ヒトまたは動物身体の処置の方法における使用のための、実施形態１８６〜２７３のいずれか一つに記載の改変免疫細胞を含む組成物。
【０５６２】
実施形態３０２。がん、感染性疾患、またはウイルス関連疾患の処置における使用のための、実施形態１８６〜２７３のいずれか一つに記載の改変免疫細胞を含む組成物。
【０５６３】
実施形態３０３。前記がんは、頭頸部がん、子宮頸がん、外陰がん、膣がん、陰茎がん、肛門がん、肛門周囲がん、肛門性器がん、口腔がん、または唾液腺がんである、実施形態１８６〜２７３のいずれか一つに記載の改変免疫細胞を含む組成物。
【０５６４】
実施形態３０４。前記改変ＰＢＭＣは、免疫チェックポイント阻害剤の投与の前、それと並行して、または後に投与される、実施形態３００〜３０３のいずれか一つに記載の改変免疫細胞を含む組成物。
【０５６５】
実施形態３０５。前記免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、およびＴＩＭ−３のいずれか１つを標的にする、実施形態３０４に記載の組成物。
【０５６６】
実施形態３０６。前記免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ−１を標的にする、実施形態３０５に記載の組成物。
【０５６７】
実施形態３０７。前記免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ−Ｌ１を標的にする、実施形態３０５に記載の組成物。
【０５６８】
実施形態３０８。前記改変ＰＢＭＣは、治療剤の投与の前、それと並行して、または後に投与される、実施形態３００〜３０７のいずれか一つに記載の組成物。
【０５６９】
実施形態３０９。前記治療剤は化学療法剤である、実施形態３０８に記載の組成物。
【０５７０】
実施形態３１０。前記感染性疾患は、ＨＩＶ、ＨＰＶ、ＥＢＶ、ＭＣＶ、ＨＢＶ、またはＨＣＶと関連する、実施形態３０９に記載の組成物。
【実施例】
【０５７１】
当業者は、いくつかの実施形態が本発明の範囲および精神内で可能であることを認識する。本発明は、ここに、以下の非限定的な実施例を参照することによって、より詳細に記載する。以下の実施例は、本発明をさらに説明するが、当然ながら、その範囲を決して限定するものとして解釈されるべきではない。
【０５７２】
（実施例１）
治療的環境において腫瘍の成長阻害をもたらすために必要なＴＡＰＣの最小有効細胞用量を決定するために、プライム／ブーストのＴＡＰＣの４つの異なる用量を、時間に対してプロットされた腫瘍の面積を用いる、ＴＣ１腫瘍モデルにおいて試験した。
【０５７３】
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌マウスに、０日目に、ＴＣ１腫瘍細胞（５０ｋ個細胞／マウス）を右後側腹部に注射した。４日目（プライム）および７日目（ブースト）に、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌ドナーマウス由来のＴ細胞を単離し、ＳＱＺを使用して、２００μｇ／ｍＬのＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６、および事前に複合体を形成させた４０μＭのＥ７  ＳＬＰ（
【化１】
2021517895.tif 000002
；配列番号２５）＋４０μＭのマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）をロードした。動物（１０匹のマウス／群）に、Ｅ７＋ＭＳＡ＋ＣｐＧがロードされたＴ細胞（５０Ｍ個細胞／ｍＬ）の適切な用量を静脈内注射し、ＴＣ−１腫瘍成長を、腫瘍移植の１週間後に開始して、週あたり２回測定し、未処置マウスにおける腫瘍成長と比較した。処置群およびスケジュールの代表的な概略図を図１Ａに概説する。
【０５７４】
式（（長さ×幅２）／２）によって測定される腫瘍成長を、未処置群（Ｔ細胞の養子移植なし）および図１Ａで概説された処置群Ｂ〜Ｅからのマウスの間で比較し、図１Ｂに示す。すべての処置条件は、完全な腫瘍低下をもたらし、試験された最低細胞用量（２．５Ｍ個細胞のプライム、１Ｍ個細胞のブースト）は、依然として、より高い細胞用量と同じ腫瘍低下を達成することが可能であり、１８日目に未処置と比べてそれぞれ統計学的有意性に達したことを示す（＃Ｐ＜０．０００１）。
【０５７５】
（実施例２）
Ｅ７  ＳＬＰの設計を決定するために、ネイティブＥ７  ＳＬＰ、および天然配列がすべてのシステインをセリンで置き換えられたものの２つの異なるＥ７  ＳＬＰを、ＣｐＧ共投与と一緒にＴ  ＡＰＣにＳＱＺ化し、各条件を、ＩＣＳによるＩＦＮ−γ産生について評価した。
【０５７６】
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌ドナーマウス由来のＴ細胞を単離し、ＳＱＺを使用して、各種の用量のＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６（左−２００μｇ／ｍＬ、右−２５μｇ／ｍＬ）、および事前に複合体を形成させた４０μＭのＥ７ネイティブもしくは古典的ＳＬＰ＋４０μＭのマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）をロードするか、または、Ｔ細胞を、陰性対照（Ｅｎｄｏ−群ＢおよびＤ）としてＳＱＺの非存在下、同じ条件でインキュベートした。動物（５匹のマウス／群）に、１００μＬの体積で（５０Ｍ個細胞／ｍＬ）、５Ｍ個のロードされたまたはインキュベートされたＴ細胞を静脈内注射した。８日目に、脾臓を収集し、ＩＦＮ−γ産生ＣＤ８＋  Ｔ細胞の％を、ＩＣＳによって定量した。処置群およびスケジュールの代表的な概略図を図２Ａに概説する。
【０５７７】
ＩＦＮ−γ産生ＣＤ８＋  Ｔ細胞の％は、ｃＥ７を使用するＥｎｄｏ対照群において最も高く、これは、ｃＥ７によるＳＱＺまたはｎＥ７によるＥｎｄｏと有意には異ならなかった。予想外にも、ＳＱＺ対Ｅｎｄｏに対する利益はなかったが、他のすべてと比べて、ＳＱＺ  ｎＥ７条件におけるＩＦＮ−γ産生ＣＤ８＋  Ｔ細胞の％の注目すべき減少があった。このデータは、ＳＬＰ配列が、特に抗原がＳＱＺを使用してＴ細胞にロードされる場合、Ｔ  ＡＰＣワクチン接種に応答して生じるＩＦＮ−γ産生ＣＤ８＋  Ｔ細胞の％に対して影響があることを示す。
【０５７８】
（実施例３）
ｉｎ  ｖｉｔｒｏヒトモデルにおいて、Ｅ６レスポンダーＴ細胞において抗原特異的免疫応答を誘導するＥ６  ＳＬＰの能力を決定するために、初代ヒトＴ細胞にＥ６  ＳＬＰをロードし、レスポンダー細胞のＩＦＮ−γの分泌をＥＬＩＳＡによって測定した。
【０５７９】
ヒトＴ細胞を、ＨＬＡ−Ａ０２＋ドナーのＰＢＭＣ（１０Ｍ個細胞／ｍＬ）から単離し、ＨＬＡ−Ａ０２拘束性最小Ｅ６２９−３８エピトープ（
【化２】
2021517895.tif 000003
；配列番号１８）を含有する５０μＭのＥ６  ＳＬＰを、ＳＱＺによって細胞内に送達し、ＥＬＩＳＡによって測定されるＩＦＮ−γのレベルを、ＳＱＺ条件、およびＥ６  ＳＬＰがＳＱＺ化（Ｅｎｄｏ）の非存在下でＴＡＰＣとインキュベートされた対照の間で比較した。次いで、ＴＡＰＣを、１：１の刺激因子：エフェクターの比で、Ｅ６特異的ＣＤ８＋レスポンダー細胞と共培養し、ＩＬ−２（１００Ｕ／ｍＬ）の存在下で培養した。１８時間後、上清を各条件から収集し、ＩＦＮ−γ産生のレベルを、ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＡ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）によって評価した。
【０５８０】
試験されたＥ６  ＳＬＰは、ＳＱＺを使用して細胞内に送達されると、図３に示すように、Ｅ６レスポンダーＣＤ８＋  Ｔ細胞と共培養された場合、＞１０倍のＩＦＮ−γ産生の増加をもたらした（＃Ｐ＜０．０００１）。これらの知見は、多数のＨＰＶ抗原（Ｅ６およびＥ７）に対する抗原特異的免疫応答を誘発するＴ  ＡＰＣの能力を示す。
【０５８１】
（実施例４）
ｉｎ  ｖｉｔｒｏヒトモデルにおいて、Ｅ７１１−２０レスポンダーＴ細胞において抗原特異的免疫応答を誘導するＥ７  ＳＬＰの能力、およびＳＱＺ  Ｔ細胞ＡＰＣ（Ｔａｐｃ）の活性化に対するＳＬＰ配列の影響を決定するために、複数のドナー由来の初代ヒトＴ細胞に異なるＥ７  ＳＬＰをロードし、レスポンダー細胞のＩＦＮ−γの分泌をＥＬＩＳＡによって測定した。
【０５８２】
ヒトＴ細胞を、ＨＬＡ−Ａ０２＋ドナーのＰＢＭＣ（１０Ｍ個細胞／ｍＬ）から単離し、５０μＭのＯＬ−Ｅ７１−３５（
【化３】
2021517895.tif 000004
；配列番号２２）またはＥ７．６（
【化４】
2021517895.tif 000005
；配列番号２３）のＳＬＰを、ＳＱＺによって細胞内に送達し、ＥＬＩＳＡによって測定されるＩＦＮ−γのレベルを、ＳＱＺ条件、およびＥ７  ＳＬＰがＳＱＺ化（Ｅｎｄｏ）の非存在下でＴａｐｃとインキュベートされた対照の間で比較した。次いで、ＴＡＰＣを、４：１の刺激因子：エフェクターの比で、Ｅ７１１−２０特異的ＣＤ８＋レスポンダー細胞と共培養し、ＩＬ−２（１００Ｕ／ｍＬ）の存在下で培養した。２４時間後、上清を各条件から収集し、ＩＦＮ−γ産生のレベルを、ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＡ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）によって評価した。
【０５８３】
ネイティブＯＬ−Ｅ７１−３５  ＳＬＰは、Ｅｎｄｏと比較してＳＱＺを使用して送達された場合、最小のＩＦＮ−γ応答を誘発した（図４）。しかしながら、別の反応性ＳＬＰ（Ｅ６２１−４５  ＱＬＣＴＥＬＱＴＸＸＸＸＸＸＸＸＸＹＣＫＱＱＬＬ）の隣接領域の間に挿入されたＥ７最小エピトープ（ＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ；配列番号３）を含むＥ７．６は、マッチしたＥｎｄｏ対照と比べて、試験された３人のドナーすべてにおいて、Ｅｎｄｏ対照と比較して、より高いＩＦＮ−γ応答を誘導した（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１；＃Ｐ＜０．０００１）。この知見は、ＳＬＰの免疫原性における隣接領域の配列の重要性を強調し、反応性であることが公知の他のＳＬＰの隣接領域を、直交する最小エピトープと併せて使用して、増加した免疫応答を達成することができるという裏付けを提供する。
【０５８４】
（実施例５）
ｉｎ  ｖｉｔｒｏヒトモデルにおいて、ＳＱＺ  Ｔ細胞ＡＰＣに対する抗原の用量を評価するために、初代ヒトＴ細胞に各種の用量のＥ７  ＳＬＰをロードし、ＥＬＩＳＡによってＩＦＮ−γについて評価した。
【０５８５】
ヒトＴ細胞を、ＨＬＡ−Ａ０２＋ドナーのＰＢＭＣ（１０Ｍ個細胞／ｍＬ）から単離し、各種の用量（５０および１００μＭ）のＥ７  ＳＬＰ（
【化５】
2021517895.tif 000006
；配列番号２３）をＳＱＺによって細胞内に送達し、ＥＬＩＳＡによって測定されるＩＦＮ−γのレベルを、ＳＱＺ条件、およびＥ７  ＳＬＰがＳＱＺ化（Ｅｎｄｏ）の非存在下でＴ  ＡＰＣとインキュベートされる対照の間で比較した。次いで、Ｔ  ＡＰＣを、４：１の刺激因子：エフェクターの比で、Ｅ７１１−２０特異的ＣＤ８＋レスポンダー細胞と共培養し、ＩＬ−２（１００Ｕ／ｍＬ）の存在下で培養した。２４時間後、上清を各条件から収集し、ＩＦＮ−γ産生のレベルを、ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＡ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）によって評価した。加えて、Ｂ−ＬＣＬ細胞をＥＬＩＳＡの１時間前に最小Ｅ７エピトープ（ＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ；配列番号３）の存在下でインキュベートした、ペプチドパルス陽性対照を用いた。
【０５８６】
試験した３人のドナー全員で、ＩＦＮ−γの一貫性のある増加は、ＳＬＰがＳＱＺの非存在下でＴ細胞とインキュベートされる同等の対照（Ｅｎｄｏ）と比べて、すべてのＳＱＺ条件で起こる（図５）。ドナー１および３は、５０μＭのＥ７  ＳＬＰで統計学的に有意な増加を示し（８６６８−＊Ｐ＜０．０５；８２９９−＃Ｐ＜０．０００１）、より高い１００μＭのＥ７  ＳＬＰで有意性の傾向があった。あらゆるドナーについて、５０μＭおよび１００μＭの間で統計学的有意差はなかったが、５０μＭのＥ７  ＳＬＰにより、一貫した同等またはより高いＩＦＮ−γの応答があった。
【０５８７】
（実施例６）
ｉｎ  ｖｉｔｒｏヒトモデルにおいて、ＳＱＺ  Ｔ細胞ＡＰＣに対するドナーの変動性を決定するとともに、複数のＨＬＡ−Ａ０２＋ドナー由来の初代ヒトＴ細胞におけるＥ７に対する有意な免疫応答を誘導するＥ６およびＥ７  ＳＬＰの最適な組合せおよび用量を特定するために、Ｅ６およびＥ７  ＳＬＰをロードし、ＥＬＩＳＡによってＩＦＮ−γについて評価した。
【０５８８】
ヒトＴ細胞を、ＨＬＡ−Ａ０２＋ドナーのＰＢＭＣ（１０Ｍ個細胞／ｍＬ）から単離し、２５または５０μＭのＥ６  ＳＬＰ（
【化６】
2021517895.tif 000007
）およびＥ７．６  ＳＬＰ（
【化７】
2021517895.tif 000008
；配列番号２３）をＳＱＺによって細胞内に送達し、ＥＬＩＳＡによって測定されるＩＦＮ−γのレベルを、ＳＱＺ条件、およびＳＬＰがＳＱＺ化（Ｅｎｄｏ）の非存在下でＴＡＰＣとインキュベートされる対照の間で比較した。Ｂ−ＬＣＬ細胞を、ＴＡＰＣ生成と同じ時間、最小Ｅ７エピトープ（ＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ；配列番号３）の存在下でインキュベートした、ペプチドパルス陽性対照を用いた。次いで、ＴＡＰＣおよび陽性対照を、４：１の刺激因子：エフェクターの比で、Ｅ７１１−２０特異的ＣＤ８＋レスポンダー細胞と共培養し、ＩＬ−２（１００Ｕ／ｍＬ）の存在下で培養した。２４時間後、上清を各条件から収集し、ＩＦＮ−γ産生のレベルを、ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＡ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）によって評価した。
【０５８９】
示される７人のドナーのうち５人は、図６に示すように、ＳＱＺ  Ｅ６＋Ｅ７  ＳＬＰで処置された場合に、ＳＬＰがＳＱＺの非存在下でＴ細胞とインキュベートされる同等の対照（Ｅｎｄｏ）と比べて、ＩＦＮ−γの一貫性のある増加を示した（ドナー１〜３、５〜６：＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００５）。ＳＱＺ化Ｔ  ＡＰＣで処置された場合に、Ｅｎｄｏ対照と比べて統計学的に有意な増加がなかった２人のドナーのうち、両方のドナー（ドナー４および７）は、試験されたＳＱＺ化Ｔ  ＡＰＣの１用量で検出可能な増加がある状態を有しており（ドナー４−５０μＭ、ドナー７−２５μＭ）、有意性の傾向があった。まとめると、これらのデータは、異なるドナーのＴ  ＡＰＣが差次的免疫賦活活性を有することを示し、本発明者らは、複数のドナー全体にわたってＩＦＮ−γ産生の一貫性のある増加があること、およびＥ７特異的免疫応答は、多数の抗原／ＳＬＰ、この場合はＨＰＶ特異的Ｅ６抗原と組み合わせた場合に、依然として有意であることを知ることができる。
【０５９０】
（実施例７）
最もロバストな免疫応答をもたらすアジュバントを決定するのを助けるために、本発明者らは、ｉｎ  ｖｉｖｏの抗原特異的応答を誘導するＴ  ＡＰＣの能力において、異なる経路で作用する２つのアジュバントの効果を試験した。この効果を、フローサイトメトリーによる四量体およびＩＣＳ染色によって、定量した。
【０５９１】
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌ドナーマウス由来のＴ細胞を単離し、ＳＱＺを使用して、４００μｇ／ｍＬのＯｖａ＋各種の濃度の高および低分子量のポリＩ：Ｃ（１０、３０、１００、３００、１０００μｇ／ｍＬ）をロードし、陰性対照（Ｅｎｄｏ−群ＣおよびＥ）としてＳＱＺの非存在下で同じ条件でインキュベートされたＴ細胞と比較した。Ｏｖａ＋２００μｇ／ｍＬのＣｐＧでＳＱＺ化されたＴ細胞を陽性対照として使用した（群Ｆ）。０日目に、マウス（５匹／群、３匹の未処置）に、１００μＬの体積で（５０Ｍ個細胞／ｍＬ）、５Ｍ個のロードされたまたはインキュベートされたＴ細胞を注射した。７日目に、脾臓を収集し、Ｏｖａ特異的Ｔ細胞を、フローサイトメトリーを使用して、四量体染色によって定量しながら、一部の脾細胞を透過処理し、終夜固定した。翌日（８日目）、ＩＦＮ−γのレベルを、陽性対照として作用するＰＭＡ／イオノマイシンを用いて、ＩＣＳによって決定した。処置群およびスケジュールの代表的な概略図を図７Ａに概説する。
【０５９２】
四量体またはＩＦＮ−γ産生ＣＤ８＋  Ｔ細胞の％は、ＣｐＧでアジュバントされた群で最も高かったが、ＬＭＷまたはＨＭＷのポリＩ：Ｃでアジュバントされたすべての条件は、未処置に対して、Ｏｖａ特異的またはＩＦＮ−γ産生ＣＤ８＋  Ｔ細胞のパーセンテージを増加させなかった（図７Ｂ）。ポリＩ：ＣがＴＬＲ３アゴニストであり、ＣｐＧがＴＬＲ９アゴニストであるので、このデータは、Ｔ  ＡＰＣワクチン接種によるアジュバントとして、ポリＩ：Ｃに対するＣｐＧの優位性を裏付けるが、ＴＬＲ３の活性化は、この環境において有利ではない場合があることを示唆する。
【０５９３】
（実施例８）
最もロバストな免疫応答をもたらすＣｐＧアジュバントの濃度を決定するのを助けるために、本発明者らは、ｉｎ  ｖｉｖｏの抗原特異的応答を誘導するＴ  ＡＰＣの能力における、ＣｐＧの複数の用量の効果を試験した。この効果を、フローサイトメトリーによる四量体およびＩＣＳ染色によって、定量した。
【０５９４】
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌ドナーマウス由来のＴ細胞を単離し、ＳＱＺを使用して、４００μｇ／ｍＬのＯｖａ＋各種の濃度のＣｐＧ１８２６（５０、１００、２００μｇ／ｍＬ）をロードし、陰性対照（Ｅｎｄｏ−群Ｂ、ＤおよびＦ）としてＳＱＺの非存在下で同じ条件でインキュベートされたＴ細胞と比較した。０日目に、マウス（５匹／群、３匹の未処置）に、１００μＬの体積で（５０Ｍ個細胞／ｍＬ）、５Ｍ個のロードされたまたはインキュベートされたＴ細胞を注射した。７日目に、脾臓を収集し、Ｏｖａ特異的Ｔ細胞を、フローサイトメトリーを使用して、四量体染色によって定量しながら、一部の脾細胞を透過処理し、終夜固定した。翌日（８日目）、ＩＦＮ−γのレベルを、陽性対照として作用するＰＭＡ／イオノマイシンを用いて、ＩＣＳによって決定した。処置群およびスケジュールの代表的な概略図を図８Ａに概説する。
【０５９５】
四量体またはＩＦＮ−γ産生ＣＤ８＋  Ｔ細胞の％は、２００μｇ／ｍＬのＣｐＧによる群で最も高く、クラスＩペプチド／ＭＨＣ−Ｉについて関連するＥｎｄｏ対照と有意に異なったが（四量体について＊Ｐ＜０．０５、ＩＦＮ−γについて＃Ｐ＜０．０００１）、すべての他の条件は、未処置またはそれらの代表的なＥｎｄｏ対照に対して、有意な応答を誘発しなかった（図８Ｂ）。Ｏｖａ特異的Ｔ細胞の活性化は、クラスＩペプチドでのみ観察され、ＣＤ８＋  Ｔ細胞応答をもたらすＯｖａ抗原の直接の提示を裏付ける。
【０５９６】
（実施例９）
ロバストな免疫応答をもたらすＣｐＧアジュバント投与のためのスケジュールを評価するのを助けるために、本発明者らは、ｉｎ  ｖｉｖｏの抗原特異的応答を誘導するＴ  ＡＰＣの能力における、ＣｐＧの複数の投与スケジュールの効果を試験した。この効果を、フローサイトメトリーによる四量体およびＩＣＳ染色によって、定量した。
【０５９７】
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌ドナーマウス由来のＴ細胞を単離し、ＳＱＺを使用して、４００μｇ／ｍＬのＯｖａをロードし、マウス（５匹／群、３匹の未処置）に、１００μＬの体積で（５０Ｍ個細胞／ｍＬ）、５Ｍ個のロードされたまたはインキュベートされたＴ細胞を注射した。ドナーマウスのＣｐＧ１８２６（２５μｇ／ｍＬ）の全身共投与を、Ｔ  ＡＰＣのプライム（０日目）と同時に、または１もしくは２日後のプライム（それぞれ、１または２日目）のいずれかで行い、陰性対照（群Ｂ、ＤおよびＦ）としてＳＱＺの非存在下で同じ条件でインキュベートされたＴ細胞と比較した。（Ｏｖａ＋２００μｇ／ｍＬのＣｐＧ）でＳＱＺ化されたＴ細胞を陽性対照として使用した（群Ｈ）。７日目に、脾臓を収集し、Ｏｖａ特異的Ｔ細胞を、フローサイトメトリーを使用して、四量体染色によって定量しながら、一部の脾細胞を透過処理し、終夜固定した。翌日（８日目）、ＩＦＮ−γのレベルを、陽性対照として作用するＰＭＡ／イオノマイシンを用いて、ＩＣＳによって決定した。処置群およびスケジュールの代表的な概略図を図９Ａに概説する。
【０５９８】
四量体またはＩＦＮ−γ産生ＣＤ８＋  Ｔ細胞の％は、ＯｖａおよびＣｐＧがＴ  ＡＰＣに共送達された群で最も高かったが、プライムと同じ日の共投与（群Ｂ）はあるレベルのＯｖａ特異的活性化を示す唯一の共投与ＣｐＧ群であり、有意性の傾向があった（図９Ｂ）。しかしながら、このデータは、抗原＋ＣｐＧの共送達が最も高いＯｖａ特異的ＣＤ８＋  Ｔ細胞の活性化をもたらし得るという観察を裏付けるが、ＣｐＧの全身投与を遅らせると、同時のプライムおよびアジュバントの共投与と比較してより低い応答をもたらす。
【０５９９】
（実施例１０）
Ｔ  ＡＰＣ抗腫瘍機能に対する細胞内および全身のアジュバント投与の組合せを決定するために、ＣｐＧ対ＩＦＮ−αの投与の複数の経路を、予防的ＴＣ−１マウス腫瘍モデルにおいて、本発明者らのＥ７特異的Ｔ  ＡＰＣと併せて比較した。抗原特異的Ｔ細胞応答を、四量体染色およびフローサイトメトリーによって測定しながら、抗腫瘍効果を、腫瘍成長予防によって測定した。
【０６００】
−１４日目（プライム）および−７日目（ブースト）に、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌ドナーマウス由来のＴ細胞を単離し、ＳＱＺを使用して、事前に複合体を形成させた４０μＭのＥ７  ＳＬＰ（
【化８】
2021517895.tif 000009
；配列番号２５）＋４０μＭのマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）（群ＢおよびＣ）またはＥ７  ＳＬＰ＋ＭＳＡ＋２００μｇ／ｍＬのＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６（群Ｄ、ＥおよびＦ）をロードした。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌レシピエントマウス（１０匹のマウス／群）に、１００μＬのロードされたＴ細胞（５Ｍ個細胞／動物）を静脈内注射しながら、群ＢおよびＥの動物は、静脈内にＣｐＧ（２５μｇ）も受け、群ＣおよびＦは、ＩＶでＩＦＮ−α（１０ｋ  ＩＵ）を受けた。−８日目および−３日目に、１００μＬのマウス血液を採取し、Ｅ７特異的ＣＤ８＋  Ｔ細胞の％を、四量体染色およびフローサイトメトリーによって定量した。０日目に、レシピエントマウスに、ＴＣ１腫瘍細胞（１００ｋ個細胞／マウス）を右後側腹部に注射し、ＴＣ−１腫瘍成長を、１１日目に開始して、週あたり２回測定し、未処置マウスにおける腫瘍成長と比較した。処置群およびスケジュールの代表的な概略図を図１０Ａに概説する。
【０６０１】
Ｅ７特異的Ｔ細胞のパーセンテージを、Ｅ７＋ＭＳＡまたはＥ７＋ＭＳＡ＋ＣｐＧ  ＳＱＺ化Ｔ細胞＋／−ＣｐＧもしくはＩＦＮ−αの共投与によるプライム（−８日目）およびブースト（−３日目）の後、Ｅ７四量体染色によって、マウスにおいて測定した（図１０Ｂ）。Ｅ７特異的Ｔ細胞の最も高い相対割合は、ＳＱＺ  Ｅ７＋ＣｐＧ共投与群およびＳＱＺ（Ｅ７＋ＣｐＧ）＋ＩＦＮ−α共投与群において観察された。Ｅ７特異的なプライム後のＣＤ８＋  Ｔ細胞の相対数は、驚くべきことに、ＳＱＺ  Ｅ７＋ＣｐＧの共投与と比べて、ＳＱＺ（Ｅ７＋ＣｐＧ）＋ＣｐＧの共投与において低かったが（＊Ｐ＜０．０５）、ＩＦＮ−αとＳＱＺ（Ｅ７＋ＣｐＧ）Ｔ細胞の共投与は、ＣｐＧとＳＱＺ（Ｅ７＋ＣｐＧ）Ｔ細胞の共投与よりも、Ｅ７特異的Ｔ細胞の有意に高い数をもたらした（＊Ｐ＜０．０５）。ブースト（−３日目）後、ＳＱＺ  Ｅ７＋ＣｐＧ共投与群およびＳＱＺ（Ｅ７＋ＣｐＧ）＋ＩＦＮ−α共投与群が最も高いＥ７特異的Ｔ細胞の％をもたらした、同様の傾向が観察された。しかしながら、ＳＱＺ（Ｅ７＋ＣｐＧ）＋ＩＦＮ−α共投与群からの最も高い応答は、ＳＱＺ  Ｅ７＋ＩＦＮ−α共投与およびＳＱＺ（Ｅ７＋ＣｐＧ）＋ＣｐＧの共投与よりも有意に高く、ＩＦＮ−α共投与は、ＳＱＺ（Ｅ７＋ＣｐＧ）Ｔ細胞と組み合わせて使用した場合に、抗原特異的Ｔ細胞のより高いパーセンテージをもたらすことを示す。式（（長さ×幅２）／２）によって測定される腫瘍成長を、未処置群（Ｔ細胞の養子移植なし）および図１０Ｃで概説された処置群Ｂ〜Ｆからのマウスの間で比較した。ＳＱＺ（Ｅ７＋ＣｐＧ）＋ＩＦＮ−α共投与群の高い腫瘍成長の低下および生存優位性は、四量体染色と良く一致し、Ｅ７特異的Ｔ細胞の最も高い誘導が最良の抗腫瘍活性をもたらしたことを示す。興味深いことに、ＳＱＺ（Ｅ７＋ＣｐＧ）群におけるＥ７特異的Ｔ細胞の低％にもかかわらず、この処置は、非常に高いレベルの抗腫瘍活性も与え、これは、すべてのマウスの生存期間を、６０日を過ぎて延長した唯一の他の群（ＳＱＺ（Ｅ７＋ＣｐＧ）＋ＩＦＮ−α共投与に加えて）である。以前に述べた群ＤおよびＦよりもわずかに低いが、群ＣおよびＥにおいて、認識可能な生存期間の延長および腫瘍成長阻害があった。７８日目に、群Ｄからの７匹の腫瘍がないマウスに、逆（左）の側腹部に５０ｋ個の細胞を再チャレンジし、年齢がマッチした未処置動物（１０匹のマウス）と比較した（図１０Ｄ）。群Ｄからのマウスは、それらの最初のチャレンジを受けた未処置マウスと比較して再チャレンジ後に腫瘍成長の有意な低下を有しており（＊＊＊Ｐ＜０．００５）、この抗腫瘍効果が２か月を過ぎて持続するという裏付けを提供する。
【０６０２】
（実施例１１）
Ｔ  ＡＰＣ抗腫瘍機能に対する複数のＨＰＶ抗原を組み合わせる効果を決定するために、予防的ＴＣ−１マウス腫瘍モデルにおいて、Ｅ６およびＥ７合成長鎖ペプチド（ＳＬＰ）単独、および本発明者らのＥ７特異的Ｔ  ＡＰＣとの組合せ。Ｅ７特異的Ｔ細胞応答を、四量体染色およびフローサイトメトリーによって測定しながら、抗腫瘍効果を、腫瘍成長予防によって測定した。
【０６０３】
−１４日目（プライム）および−８日目（ブースト）に、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌ドナーマウス由来のＴ細胞を単離し、ＳＱＺを使用して、表ＸＸに従って、事前に複合体を形成させた２０μＭのマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）＋２０μＭのＥ６（ＶＹＳＫＱＱＬＬＲＲＥＶＹＤＦＡＦＲＤＬＳＩＶＹＲＤＧＮＰＹＡＶＳＤＫ；配列番号２１）および／もしくはＥ７  ＳＬＰ（ＧＱＡＥＰＤＲＡＨＹＮＩＶＴＦＳＳＫＳＤＳＴＬＲＬＳＶＱＳＴＨＶＤＩＲ；配列番号２５）、または両方＋／−２００μｇ／ｍＬのＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６の組合せをロードした。ＳＱＺの非存在下で群Ｂと同じ条件でインキュベートされたＴ細胞を陰性対照として使用した（群Ｃ）。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌レシピエントマウス（５〜１０匹のマウス／群）に、１００μＬのロードされたＴ細胞（５Ｍ個細胞／動物）を静脈内注射した。−３日目に、１００μＬのマウス血液を採取し、Ｅ７特異的ＣＤ８＋  Ｔ細胞の％を、四量体染色およびフローサイトメトリーによって定量した。０日目に、レシピエントマウスに、ＴＣ１腫瘍細胞（１００ｋ個細胞／マウス）を右後側腹部に注射し、ＴＣ−１腫瘍成長を、１１日目に開始して、週あたり２回測定し、未処置マウスにおける腫瘍成長と比較した。処置群およびスケジュールの代表的な概略図を図１１Ａに概説する。
【０６０４】
Ｅ７特異的Ｔ細胞のパーセンテージを、ブースト（−３日目）の後、Ｅ７四量体染色によってマウスで測定し、図１１Ｂに示すように、最も高い効果は、ＣｐＧ＋Ｅ７  ＳＱＺ  Ｔ  ＡＰＣ（群Ｂ）で観察された。興味深いことに、群Ｂの応答は、未処置、ならびにＥ７およびＥ６の組合せよりも有意に高く（群Ｆ−＃Ｐ＜０．０００１）、Ｅ６  ＳＬＰの添加がＥ７特異的応答を鈍らせる証拠を提供する。群Ｂは、Ｅｎｄｏ対照（群Ｃ）の明らかな例外で、他の処置群と有意に異なり、群Ｂは明らかに高く、統計学的有意性の傾向があった。図１１Ｃに示すように、式（（長さ×幅２）／２）によって測定される腫瘍成長を、未処置群（Ｔ細胞の養子移植なし）および図１１Ａで概説された処置群Ｂ〜Ｇからのマウスの間で比較した。高い腫瘍成長の予防は、Ｅ７＋ＣｐＧでＳＱＺ化されたＴ細胞、およびＥ７＋ＣｐＧの存在下、ＳＱＺの非存在下でインキュベートされたＴ細胞による群で起こった。群Ｄ〜Ｆは、未処置（群Ａ）およびＥ６＋ＣｐＧがＳＱＺ化Ｔ細胞（群Ｇ）と比べて、あるレベルの腫瘍成長阻害を示したが、群ＢおよびＣよりもすべて有効性が低かった。
【０６０５】
（実施例１２）
Ｅ７特異的Ｔ  ＡＰＣの抗腫瘍効果に対するＣｐＧアジュバントの投与の経路の重要性を決定するために、Ｅ７  ＳＬＰをＣｐＧと組み合わせてＴ細胞に送達し、Ｔ細胞に送達するか、またはレシピエント動物に全身共投与し、抗腫瘍効果を腫瘍成長阻害によって測定した。
【０６０６】
０日目に、レシピエントマウスに、ＴＣ１腫瘍細胞（５０ｋ個細胞／マウス）を右後側腹部に注射した。１０日目（プライム）および２０日目（ブースト）に、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌ドナーマウス由来のＴ細胞を単離し、ＳＱＺを使用して、事前に複合体を形成させた２０μＭのマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）＋２０μＭのＥ７（
【化９】
2021517895.tif 000010
；配列番号２５）をロードし、ＯＤＮ１８２６を、２００μｇ／ｍＬでＳＱＺによって共送達するか（群Ｄ）、または２５μｇ／マウスで全身的に動物に共投与し（群Ｃ）、未処置（群Ａ）およびＣｐＧ単独の全身投与（群Ｂ）と比較した。レシピエントマウス（８〜１０匹のマウス／群）を、１００μＬのロードされたＴ細胞（５Ｍ個細胞／動物）で処置した。ＴＣ−１腫瘍成長を、１０日目に開始して、週あたり２回測定した。処置群およびスケジュールの代表的な概略図を図１２Ａに概説する。
【０６０７】
ＨＰＶ関連がん（ＴＣ−１）の治療モデルにおいて、Ｅ７  ＳＬＰでＳＱＺ化されたＴ  ＡＰＣは、未処置およびＣｐＧ注射単独と比べて、腫瘍負荷の有意な低下をもたらした（１７日目：群Ｃ−Ｐ＜０．０５；２０日目：群ＣおよびＤ−Ｐ＜０．０００１）（図１２Ｂ）。これらのデータは、治療環境において、ＣｐＧアジュバントの全身共投与および細胞内送達の両方とも、未処置またはアジュバント単独と比べて、腫瘍負荷の有意な低下をもたらすことを示す。
【０６０８】
（実施例１３）
Ｅ７特異的Ｔ細胞腫瘍浸潤をもたらす共投与されたアジュバントの能力を評価するために、ＣｐＧ対ＩＦＮ−αを、治療的ＴＣ−１マウス腫瘍モデルにおいて、本発明者らのＥ７特異的Ｔ  ＡＰＣと組み合わせて比較した。抗原特異的Ｔ細胞応答を、四量体染色およびフローサイトメトリーによって、腫瘍浸潤リンパ球において測定した。
【０６０９】
０日目に、レシピエントマウスに、ＴＣ１腫瘍細胞（５０ｋ個細胞／マウス）を右後側腹部に注射した。１０日目に、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌ドナーマウス由来のＴ細胞を単離し、ＳＱＺを使用して、事前に複合体を形成させた２０μＭのＥ７  ＳＬＰ（
【化１０】
2021517895.tif 000011
；配列番号２５）＋２０μＭのマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）をロードした。ＳＱＺロードＴ細胞（５Ｍ個細胞／動物）を、単独（群Ｃ）で投与し、一緒に、ＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６（２５μｇ／マウス−群Ｄ）またはＩＦＮ−α（１０ｋ  ＩＵ／マウス−群Ｅ）を、１００μＬの総体積で静脈内注射した。マウスに、ＣｐＧ（２５μｇ−群Ａ）またはＩＦＮ−α単独（１０ｋ  ＩＵ−群Ｂ）も全身に注射した。１７日目に、腫瘍を収集し、ＣＤ８＋腫瘍浸潤Ｔ細胞を単離し、Ｅ７特異的反応性を四量体染色によって評価した。処置群およびスケジュールの代表的な概略図を図１３に概説する。
【０６１０】
Ｅ７特異的ＣＤ８＋  Ｔ細胞のパーセンテージを、プライムの７日後（１７日目）、Ｅ７四量体染色によってマウスで測定し、ＣＤ８＋細胞のうちのＥ７特異的Ｔ細胞のパーセンテージの代表的な例を、図１３の下部パネルに示す。アジュバント単独の注射は、認識できる量のＥ７特異的Ｔ細胞を生じなかったが、Ｅ７  ＳＬＰのＳＱＺ送達は、Ｅ７特異的Ｔ細胞の４０％の増加を与え、ＣｐＧおよびＩＦＮ−αと組み合わせたＥ７送達Ｔ細胞は、さらに高いパーセンテージの抗原特異的Ｔ細胞をもたらした（それぞれ、７０および８０％）。このデータは、Ｅ７  ＳＬＰがロードされたＴ細胞がＣｐＧまたはＩＦＮ−αなどの全身アジュバントと組み合わせて投与された場合に、よりロバストなＥ７特異的Ｔ細胞応答が生じることを示す。
【０６１１】
（実施例１４）
Ｅ７合成長鎖ペプチド（ＳＬＰ）＋ＣｐＧをロードされたＴ  ＡＰＣのプライムおよびブーストの両方についてのワクチン接種スケジュールを決定するために、本発明者らは、異なる時点で本発明者らのＴ  ＡＰＣワクチンで、差次的な数のブーストで処置された、治療的ＴＣ−１マウス腫瘍モデルを使用した。抗腫瘍効果を、腫瘍成長阻害によって測定した。
【０６１２】
０日目に、レシピエントマウスに、ＴＣ１腫瘍細胞（５０ｋ個細胞／マウス）を右後側腹部に注射し、ＴＣ−１腫瘍成長を、１１日目に開始して、週あたり２回測定し、未処置マウスにおける腫瘍成長と比較した。３または６日目に、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌ドナーマウス由来のＴ細胞を単離し、ＳＱＺを使用して、表ＸＸに従って、事前に複合体を形成させた２０μＭのマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）＋２０μＭのＥ７  ＳＬＰ（
【化１１】
2021517895.tif 000012
；配列番号２５）＋２００μｇ／ｍＬのＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６をロードし、続いて、１００μＬのロードされたＴ細胞（５Ｍ個細胞／動物）をレシピエントマウスに静脈内注射した。処置群およびスケジュールの代表的な概略図を図１４Ａに概説する。
【０６１３】
腫瘍成長阻害は、Ｅ７＋ＣｐＧでＳＱＺ化されたＴ細胞を用いるすべての群で起こり、未処置に対する統計学的有意性が、２０日目が得られる（２０日目−すべての群でＰ＜０．０５；２４日目−すべての群でＰ＜０．０００１）。このデータは、Ｔ  ＡＰＣワクチンによる投与スケジュールは、６日目対３日目でプライムした場合に、同様に良好に働くことができ、２１日目の２回目のブーストの追加には認識可能な利益はなかったことを示す。
【０６１４】
（実施例１５）
ＳＱＺによる細胞内に抗原が送達されたＴ細胞による抗原提示のメカニズムをより良好に理解するために、Ｏｖａを、野生型マウスまたはＭＨＣ−Ｉノックアウトマウスに注射された野生型Ｔ細胞に送達するか、またはそれらとＳＱＺの非存在下でインキュベートした。脾臓を収集し、Ｏｖａ特異的Ｔ細胞（ＯＴ−Ｉ）の増殖の量を、ＣＦＳＥ染色によって定量した。
【０６１５】
０日目に、ＯＴ−Ｉ雌ドナーマウス由来のＴ細胞を単離し、２μＭのＣＦＳＥで標識し、２．５Ｍ個の細胞を、野生型またはＭＨＣ−Ｉノックアウトマウスのいずれかに、１００μＬのＰＢＳ中で、後眼窩（ＲＯ）に注射した。また、０日目に、４００μｇ／ｍＬのＯｖａを、ＣＤ４５．１ドナーマウス（４匹のマウス／群）から単離されたＴ細胞にロードするか、またはそれらとインキュベートし、５Ｍ個のＴ細胞をＲＯに注射した。３日目に、脾臓を収集し、Ｏｖａ特異的Ｔ細胞の増殖のレベルを、ＣＦＳＥ染色によって評価した。
【０６１６】
Ｏｖａ特異的Ｔ細胞の増殖の量を、Ｏｖａ応答性ＯＴ−Ｉ  ＣＤ８＋  Ｔ細胞のＣＦＳＥ標識化によって評価した。抗原がロードされたＴＡＰＣの提示のメカニズムを決定するために、ＭＨＣ−Ｉが欠損したマウスをレシピエントマウスとして使用した。これは、ＳＱＺ化Ｔ細胞の死による抗原の間接的な取り込み、および養子移植されたＯＴ−Ｉ細胞へのＭＨＣ−Ｉにおける交差提示に起因する、内因性マウスＡＰＣによるＯｖａ抗原の提示を不可能にするはずである。レシピエントマウスがＭＨＣ−Ｉを欠く場合、Ｏｖａ特異的ＯＴ−Ｉ細胞の増殖は依然として起こることが見出され、ＳＱＺ化Ｔ  ＡＰＣが抗原を直接提示している証拠を提供する（図１５）。これらのデータは、ＳＱＺ媒介性細胞内送達抗原の直接提示を裏付ける。
【０６１７】
（実施例１６）
サイトカイン産生を変えるためのＳＱＺの性向を評価するために、Ｔ細胞を、ＣｐＧでＳＱＺ送達し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏマウスモデルにおいて、Ｔ細胞のサイトカインレベルを変える能力について評価した。上清中のサイトカインレベルを、マルチプレックスサイトカインキットを使用して、プロファイルした。
【０６１８】
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌レシピエントマウスをプライムし、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌ドナーマウス由来のＴ細胞を単離し、２００μｇ／ｍＬのＣｐＧでＳＱＺ化し、上清を２４時間後に採取した（Ｎ＝２）。上清を、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｍｉｌｌｉｐｌｅｘマルチプレックスサイトカインキットによってサイトカインレベルについて評価し、未処置のＴ細胞と比べて、倍率変化の差として表した。
【０６１９】
未処置細胞と比べて、ＳＱＺを介してＣｐＧをロードされたＴ細胞の上清中のサイトカインレベルの間の有意な変化はなかった（図１６）。このデータは、アジュバントのＳＱＺ送達は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＴ細胞サイトカインレベルを有意に変えないことを示す。
【０６２０】
（実施例１７）
サイトカイン産生を変えるためのＳＱＺの性向を評価するために、ＯｖａまたはＯｖａ＋ＣｐＧのいずれかでＳＱＺ送達されたＴ細胞を、ｉｎ  ｖｉｖｏマウスモデルにおいて、血清サイトカインレベルを変える能力について評価した。血清サイトカインを、マルチプレックスサイトカインキットを使用して、プロファイルした。
【０６２１】
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌レシピエントマウスをプライムし、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌ドナーマウス由来のＴ細胞を単離し、４００μｇ／ｍＬのＯｖａまたはＯｖａ＋２００μｇ／ｍＬのＣｐＧのいずれかでＳＱＺ化し、血液を、６時間後に尾静脈から、およびプライムの２４時間後に心穿刺を介して採取した。血清を、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｍｉｌｌｉｐｌｅｘマルチプレックスサイトカインキットによってサイトカインレベルについて評価し、倍率変化対未処置のＴ細胞として表した。
【０６２２】
ＳＱＺを介してＯｖａまたはＯｖａ＋ＣｐＧをロードされたＴ細胞でプライムされたマウスの血清中のサイトカインレベルの間の有意な変化はなかった（図１７）。加えて、有意差は、プライムの６時間後および２４時間後の間で観察されなかった。これらのデータは、抗原＋／−アジュバントのＳＱＺ送達は、ｉｎ  ｖｉｖｏで血清サイトカインレベルを有意に変えないことを示す。
【０６２３】
（実施例１８）
ｉｎ  ｖｉｔｒｏヒトモデルにおいて、抗原供給源として腫瘍細胞溶解物（ＴＣＬ）を使用する、Ｅ７レスポンダーＴ細胞におけるＨＰＶ  Ｅ７特異的免疫応答を誘発する初代ヒト単球由来樹状細胞（ＭｏＤＣ）の能力を決定するために、初代ヒトＭｏＤＣに、ＣａＳｋｉ腫瘍細胞由来の溶解物をロードし、４−１ＢＢの発現パーセントを、フローサイトメトリーによって測定した。
【０６２４】
ヒト単球をＨＬＡ−Ａ０２＋ドナーのＰＢＭＣから単離し、未成熟ＭｏＤＣを、４〜６日にわたってｒｈＩＬ−４（１０００Ｕ／ｍＬ）およびｒｈＧＭ−ＣＳＦ（８００Ｕ／ｍＬ）の添加によって生じさせ、３日後にサイトカイン含有培地を補給した。ＣａＳｋｉ子宮頸がん細胞系を抗原供給源として使用し、ＣａＳｋｉ細胞由来のＴＣＬ（２３ｍｇ／ｍＬ）を、ＳＱＺによって、ＭｏＤＣ（１×１０６個細胞／ｍＬ）に細胞内に送達するか、またはＣａＳｋｉ  ＴＣＬを、ＳＱＺ化（Ｅｎｄｏ）の非存在下でＭｏＤＣとインキュベートした。加えて、ＭｏＤＣを公知の反応性Ｅ７エピトープ（ＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ；配列番号３−０．１μＭ−陽性対照）の存在下でインキュベートした、ペプチドパルス化対照を用いた。すべての条件を、１時間、ＬＰＳ（６０ＥＵ／ｍＬ）およびｒｈＩＦＮ−γ（２００００ＩＵ／ｍＬ）と培養して、ＭｏＤＣを活性化し、続いて、培地を含有する６０ＥＵ／ｍＬのＬＰＳ中で１６〜２４時間インキュベーションした（ＩＦＮ−γなし）。次いで、ＭｏＤＣを、３：１の刺激因子：レスポンダーの比で、Ｅ７反応性Ｔ細胞（Ａｓｔａｒｔｅ）と１６〜２４時間共培養した。共培養後、Ｅ７反応性ＣＤ８＋  Ｔ細胞における４−１ＢＢ発現の％を、フローサイトメトリーによって測定した。
【０６２５】
ＨＰＶ抗原Ｅ７を高度に発現することが公知のＨＰＶ陽性子宮頸がん細胞系に由来するＣａＳｋｉ溶解物は、ＳＱＺを使用して細胞内に送達された場合、未処置および対応するＥｎｄｏ対照の両方と比較した場合に、抗原特異的活性化のマーカーである４−１ＢＢを発現するＥ７反応性ＣＤ８＋  Ｔ細胞のパーセントの２０％の増加をもたらした（＃Ｐ＜０．０００１）。これらの知見は、初代ヒトＭｏＤＣにおけるＨＰＶ抗原Ｅ７に対する抗原特異的免疫応答を誘導するためのＳＱＺによる細胞内ＴＣＬの能力を示し、腫瘍形成性抗原が未知であり得る追加の適応における複合体抗原供給源としてのＴＣＬの使用についての裏付けを提供する。
【０６２６】
（実施例１９）
ＳＱＺによって抗原をロードされた抗原提示細胞（ＡＰＣ）に対する内因性応答を決定するために、Ｂ細胞をＳＱＺロードし、炎症性サイトカインのレベルを、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）によって測定した。
【０６２７】
Ｃ５６ＢＬ／６Ｊマウス由来のマウスＢ細胞（ＢＡＰＣ）を単離し、４００μｇ／ｍＬのＯｖａタンパク質または２０μＭのＨＰＶ１６  Ｅ７ペプチドをＳＱＺロードし、次いで、１μＭのＣｐＧ１８２６と一緒にドナーマウスに注射した（５匹のマウス／群）。７日目に、脾細胞を、未処置マウス、およびＳＱＺロードＢＡＰＣで処置されたマウスから収集し、Ｉｎｓ  Ｂ９−２３ペプチドを再チャレンジし、その後、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）をＩＦＮ−γについて実施し、フローサイトメトリーによって測定した（図１９Ａ）。
【０６２８】
両方のモデル抗原のＯｖａ（図１９Ｂ）および疾患関連ＨＰＶ  Ｅ７（図１９Ｃ）について、結果は、ＳＱＺロードＢＡＰＣで処置されたマウス由来の脾細胞は、ＯｖａまたはＨＰＶ  Ｅ７でそれぞれ再刺激された場合に、未処置マウスから収集された脾細胞と比較してＩＦＮ−γ産生における統計学的に有意な増加を示したことを示した（両方ともＰ＜０．００５）。まとめると、これらのデータは、Ｂ細胞を操作して、ｉｎ  ｖｉｖｏで多数の抗原に対する抗原特異的応答を誘発することができることを示す。
【０６２９】
（実施例２０）
腫瘍の予防的処置のために抗原提示細胞（ＢＡＰＣ）としての機能を果たすＳＱＺロードＢ細胞の能力を決定するために、マウスを、抗原をＳＱＺロードされたＢＡＰＣで処置し、続いて、ＴＣ−１腫瘍細胞を注射した。腫瘍成長阻害を測定して、ｉｎ  ｖｉｖｏでの予防的ワクチンの有効性を評価した。
【０６３０】
ＴＣ−１腫瘍成長を制御するための、予防的ＨＰＶ抗原系Ｂ細胞ワクチン、すなわち、ＨＰＶ抗原をＳＱＺロードされたＢＡＰＣの能力を試験するために、Ｅ７  ＳＬＰを、Ｂ細胞にＳＱＺ送達し、腫瘍の移植前にマウスに注射した。具体的には、−７日目に、Ｃ５６ＢＬ／６Ｊマウス由来のマウスＢ細胞（ＢＡＰＣ）を単離し、ＨＰＶ１６  Ｅ７ペプチドをＳＱＺロードし、次いで、１μＭのＣｐＧ１８２６と一緒にドナーマウスに注射した（１０匹のマウス／群）。０日目に、ＴＣ−１腫瘍細胞を、各マウスの後側腹部に、皮下に移植した（１００μＬ中、１Ｅ６個細胞／ｍＬ）。ＴＣ−１は、ＨＰＶ抗原Ｅ６およびＥ７を発現することが公知の腫瘍細胞系である。腫瘍体積を経時的に測定し、マウスを、４８日目、またはそれらの腫瘍が＞１５００ｍｍ３に達したときのいずれか早い方の時点において、屠殺した。
【０６３１】
腫瘍成長は、Ｅ７ロードＢＡＰＣを受けたマウスにおいて大幅に阻害され、処置群の１０匹のマウスのうち８匹は、対照群における１０匹のマウスのうち０匹と比較して、研究の全期間にわたって腫瘍なし（ＴＦ）のままであった（図２０Ａ）。ＢＡＰＣワクチンはまた、対照と比べて、ＢＡＰＣで免疫されたマウスの生存において統計学的に有意な改善をもたらし（Ｐ＜０．０００１）、対照群についての３２日と比較して、処置群についての生存期間中央値は＞６０日であった（図２０Ｂ）。まとめると、このデータは、ＳＱＺを介して抗原をロードされたＢ細胞は、腫瘍の抗原特異的な予防的処置のための強力なＡＰＣ系ワクチンとしての機能を果たすことができることを示す。
【０６３２】
（実施例２１）
腫瘍の治療的処置のために抗原提示細胞（ＢＡＰＣ）としての機能を果たすＳＱＺロードＢ細胞の能力を決定するために、マウスに、ＴＣ−１腫瘍細胞を移植し、続いて、抗原をロードされたＢＡＰＣによる治療的免疫付与を行った。腫瘍成長阻害を測定して、ｉｎ  ｖｉｖｏでの治療的ワクチンの有効性を評価した。
【０６３３】
ＴＣ−１腫瘍成長を制御するための、治療的ＨＰＶ抗原系Ｂ細胞ワクチン、すなわち、ＨＰＶ抗原をＳＱＺロードされたＢＡＰＣの能力を試験するために、Ｅ７  ＳＬＰを、Ｂ細胞にＳＱＺ送達し、腫瘍の移植後にマウスに注射した。具体的には、０日目に、ＴＣ−１腫瘍細胞（５０ｋ個細胞／マウス）を、Ｃ５６ＢＬ／６Ｊマウスの右側腹部に皮下注射した（１０匹のマウス／群）。ＴＣ−１は、ＨＰＶ抗原Ｅ６およびＥ７を発現することが公知の腫瘍細胞系である。９日目に、マウスは、未処置のままにするか、または１Ｍ個細胞／マウスの、Ｅ７  ＳＬＰをＳＱＺロードされたマウスＢ細胞（ＢＡＰＣ）でプライムした。腫瘍体積を経時的に測定し、マウスを、４８日目、またはそれらの腫瘍が＞１５００ｍｍ３に達したときのいずれか早い方の時点において、屠殺した。
【０６３４】
腫瘍成長は、Ｅ７ロードＢＡＰＣを受けたマウスにおいて大幅に阻害され、研究の期間の間、平均腫瘍体積は＜５００ｍｍ３のままであった（図２１Ａ）。Ｅ７ロードＢＡＰＣで処置されたマウスの生存も有意に増加し（Ｐ＜０．０００１）、対照群についての３８日と比較して、処置群についての生存期間中央値は＞６０日であった。まとめると、このデータは、ＳＱＺを介して抗原をロードされたＢ細胞は、腫瘍の抗原特異的な治療的処置のための強力なＡＰＣ系ワクチンとしての機能を果たすことができることを示す。
【０６３５】
（実施例２２）
腫瘍への腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）動員を促進するＳＱＺロードＢ細胞の能力を決定するために、腫瘍を有するマウスを、ロードされたＢ細胞ＡＰＣ（プライムおよびブースト）で処置し、腫瘍成長阻害を、フローサイトメトリーによる抗原特異的Ｔ細胞の数および相対パーセンテージについて、腫瘍の分析に加えて、測定した。
【０６３６】
０日目に、ＴＣ−１腫瘍細胞（５０ｋ個細胞／マウス）を、Ｃ５６ＢＬ／６Ｊマウスの右側腹部に皮下注射した（２０匹のマウス／群）。１４日目に、マウスを、（ｉ）１５０μｇ／マウスのＥ７  ＳＬＰ＋５０μｇのＣｐＧ１８２６を皮下に注射（Ｓ．Ｃ．ＳＬＰ）、（ｉｉ）１μｇ／ｍＬのＥ７最小エピトープ＋１μＭのＣｐＧ（Ｍｉｎ．Ｅｐｉ．）でパルスしたマウスＢ細胞を後眼窩に注射、または（ｉｉｉ）Ｅ７  ＳＬＰ（２０μＭ）＋１μＭのＣｐＧ（５Ｍ個細胞／マウス）をロード（ＳＱＺ）されたＢ細胞を後眼窩に注射のいずれかでプライムした。腫瘍体積を、＞１５００ｍｍ３に達する、または３４日目までのいずれか早い方の時点まで、経時的に測定した。２７日目に、動物のサブセット（５匹のマウス／群）を屠殺し、腫瘍を切除し、Ｔ細胞を単離し、フローサイトメトリーによって分析した。
【０６３７】
記載される治療的処置の環境において、Ｓ．Ｃ．ＳＬＰおよびＳＱＺ処置のみは、適切な腫瘍成長阻害をもたらし、ＳＱＺ処置のみは、１９日目に観察された最大体積と比べて、腫瘍退縮をもたらした（図２２Ａ）。腫瘍へのＴＩＬ動員、およびこれらのＴ細胞の相対的な表現型の分析は、ＳＱＺロードＢ細胞ワクチン（ＳＱＺ）は、腫瘍中の浸潤Ｔ細胞のパーセンテージの有意な増加、および１００ｍｇの腫瘍重量に対して正規化されたより多くの細胞の数をもたらしたことを示した。浸潤Ｔ細胞の総数に加えて、ＳＱＺ処置におけるＣＤ８＋  Ｔ細胞およびＥ７特異的ＣＤ８＋  Ｔ細胞は両方とも、Ｓ．Ｃ．ＳＬＰおよびＭｉｎ．ＥＰ．と比較してＣＤ４５＋細胞のパーセンテージをより有意に増加させたことが観察され、この傾向は、腫瘍重量に対して同様に正規化した場合にも観察された（図２２Ｂ）。ＳＱＺおよびすべての他の処置群の間のすべての比較は、統計学的に有意であった（Ｐ＜０．００１）。まとめると、これらのデータは、ＳＱＺロードＢＡＰＣワクチンは、腫瘍へのＴ細胞浸潤の促進、具体的には、抗原特異的ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞に起因して、腫瘍退縮をもたらすという知見を裏付ける。
【０６３８】
（実施例２３）
ＳＱＺによって抗原をロードされたヒト抗原提示細胞（ＡＰＣ）に対するｉｎ  ｖｉｔｒｏ抗原特異的応答を決定するために、Ｂ細胞をＳＱＺロードし、誘導された炎症性サイトカイン分泌のレベルを、ＥＬＩＳＡによって測定した。
【０６３９】
具体的には、ヒトＢ細胞をＨＬＡ−Ａ２＋ドナーから単離し、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＳＬＰ（５０μＭ）を、Ｂ細胞とインキュベートするか（Ｅｎｄｏ）、またはＳＱＺによってＢ細胞に送達した（ＳＱＺ）。次いで、ＥｎｄｏまたはＳＱＺ  Ｂ細胞（６０ｋ個細胞／ウェル）を、２：１の比でＥ７レスポンダーＴ細胞（３０ｋ個細胞／ウェル）とインキュベートし、ＩＬ−２（１００Ｕ／ｍＬ）およびＣｐＧ２００６（１μＭ）の存在下で２４時間共培養した。次いで、上清を収集し、ＥＬＩＳＡによってＩＦＮ−γの分泌について分析した。
【０６４０】
結果は、ＳＱＺロードＢ細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＨＰＶ  Ｅ７抗原特異的応答を刺激する抗原提示細胞（ＢＡＰＣ）としての機能を果たすことができることを示す。抗原をロードされたＢ細胞ＡＰＣは、Ｅ７特異的レスポンダー細胞を刺激して、抗原とインキュベートされた細胞のレベルよりも有意に高いレベルでＩＦＮ−γを分泌した（Ｐ＜０．００５）。
【０６４１】
（実施例２４）
抗原特異的腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を誘導するＳＱＺロードワクチンの能力におけるアジュバントの重要性を評価するために、細胞にモデル抗原をロードし、アジュバントと成熟させ、腫瘍を有するマウスに注射した。腫瘍に動員された抗原特異的Ｔ細胞の相対パーセンテージをフローサイトメトリーによって測定した。
【０６４２】
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌マウスに、０日目に、ＴＣ１腫瘍細胞（５０ｋ個細胞／マウス）を右後側腹部に注射した。１５日目（プライム）に、マウスＴ細胞を、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊドナーマウスの脾臓から得、ＳＱＺ（４０ｐｓｉ、３．５μｍの狭窄、室温）を介して、事前に複合体を形成させた５μＭのＥ７  ＳＬＰ（
【化１２】
2021517895.tif 000013
；配列番号２５）＋５μＭのマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）をロードし、３７℃で１時間インキュベートした。雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊレシピエントマウス（１０匹／群）に、１００μＬのビヒクル（ＰＢＳ−未処置）またはＥ７ロードＴ細胞（１Ｍ個細胞／マウス）＋／−ＣｐＧ１８２６（２５μｇ／マウス）のいずれかを１５日目に後眼窩に注射した。２５日目に、腫瘍を収集し、Ｅ７特異的ＴＩＬの量をフローサイトメトリーによって測定した。
【０６４３】
ＳＱＺロードＴ  ＡＰＣ単独は、少ないが（約１５％）、統計学的に有意ではないＥ７特異的ＴＩＬの数の増加をもたらしたが、ＣｐＧと共注射した場合、より高く、かつ有意なＴＩＬの数の増加があった（約５５％、Ｔ  ＡＰＣ単独と比較して＊＊Ｐ＜０．０１；未処置と比較して＊＊＊Ｐ＜０．０００５）。このデータは、Ｅ７ロードＴ  ＡＰＣと一緒にＣｐＧを共注射することは、Ｔ  ＡＰＣ単独と比較して非常に高いＴＩＬの動員をもたらすことを示す。
【０６４４】
（実施例２５）
予防的環境においてＴ  ＡＰＣ＋アジュバントワクチンの持続性を評価するために、Ｔ  ＡＰＣ処置マウスを、初回応答および６０日後の再チャレンジの両方で、ＨＰＶ  Ｅ７発現ＴＣ１腫瘍モデルの腫瘍成長について、未処置マウスと比較し、腫瘍の面積を時間に対してプロットした。
【０６４５】
−１４日目に、脾細胞をＣ５７ＢＬ／６Ｊ雌ドナーマウスから収集し、Ｔ細胞を免疫磁気分離によって単離した。次に、マウスＴ細胞に、ＳＱＺ（４５ｐｓｉ、３．５μｍの狭窄）を介して、事前に複合体を形成させた２０μＭのＥ７  ＳＬＰ（
【化１３】
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；配列番号２５）＋２０μＭのマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）をロードし、３７℃で１時間インキュベートした。雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊレシピエントマウス（１０匹のマウス／群、２０匹のマウス／群である未処置コホートＩを除く）に、１００μＬのビヒクル（ＰＢＳ−未処置）またはＥ７ロードＴ細胞（１Ｍ個細胞／マウス）＋ＣｐＧ１８２６（２５μｇ／マウス）のいずれかを、後眼窩に注射した［プライム］。−７日目に、脾臓をＣ５７ＢＬ／６Ｊ雌ドナーマウスから収集し、Ｔ細胞を単離し、ＳＱＺ化し、厳密に−１４日目にレシピエントマウスに注射した［ブースト］。０日目に、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌マウスに、右後側腹部に注射した（ＴＣ１腫瘍細胞（５０ｋ個細胞／マウス）により６４日目まで腫瘍細胞を移植されていない１０匹の未処置コホート２を除く）。ＴＣ−１腫瘍成長を、腫瘍移植の１週間後に開始して、週あたり２回測定し、最長１２０日間、未処置マウスにおける腫瘍成長と比較した。
【０６４６】
式（（長さ×幅２）／２）によって測定される腫瘍成長を、未処置群および０日目に腫瘍細胞をチャレンジされたＴ  ＡＰＣ処置群からのマウスの間で比較し、すべてのマウスは、未処置群において４７日目までに人道的なエンドポイントに達し、Ｔ  ＡＰＣマウスのうち２匹を除くすべてにおいて、Ｔ  ＡＰＣ群について有意な腫瘍成長の遅延があったが、残りのマウス（８匹）は、腫瘍の再チャレンジまで腫瘍なしのままであった。興味深いことに、６４日目に腫瘍が移植された未処置マウスをそれらの反対側の側腹部に腫瘍を再移植されたＴ  ＡＰＣ処置マウスと比較すると、依然として腫瘍成長の遅延があり、マウスのうち３匹では、２次腫瘍チャレンジ後でさえ、測定可能な腫瘍が成長しなかった。これらのデータは、Ｅ７ロードＴ  ＡＰＣ＋アジュバントによる処置は、抗原特異的腫瘍成長阻害だけでなく、２次腫瘍チャレンジにもかかわらず、＞１００日を超えてさらに持続し得る腫瘍予防をもたらすことができることを示唆する。
【０６４７】
（実施例２６）
治療的ワクチン環境において、異なるＴ  ＡＰＣの濃度およびプライム−ブーストスケジュールの影響を評価するために、Ｔ  ＡＰＣ処置マウス（多数の濃度およびプライム−ブーストスケジュール）を、ＨＰＶ  Ｅ７発現ＴＣ１腫瘍モデルの腫瘍成長について未処置マウスと比較し、腫瘍の面積を時間に対してプロットした。
【０６４８】
０日目に、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌マウスに、ＴＣ１腫瘍細胞（５０ｋ個細胞／マウス）を右後側腹部に注射した。１０日目（プライム）に、マウスＴ細胞を、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊドナーマウスの脾臓から、免疫磁気分離によって得、ＳＱＺ（４５ｐｓｉ、３．５μｍの狭窄）を介して、事前に複合体を形成させた２０μＭのＥ７  ＳＬＰ（
【化１４】
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；配列番号２５）＋２０μＭのマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）をロードし、３７℃で１時間インキュベートした。次いで、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊレシピエントマウス（１０匹／群）に、１００μＬのビヒクル（ＰＢＳ）またはＴ  ＡＰＣ（０．２５または１Ｍ個細胞／マウス）＋ＣｐＧ１８２６（２５μｇ／マウス）のいずれかを後眼窩に注射した。１７日目に、プライム／ブースト群は、１０日目に、同一の形式で、Ｔ  ＡＰＣによる２回目の注射を受けた。ＴＣ−１腫瘍成長を、腫瘍移植の１週間後に開始して、週あたり２回測定し、最長６６日間、未処置マウスにおける腫瘍成長と比較した。
【０６４９】
式（（長さ×幅２）／２）によって測定される腫瘍成長、および腫瘍成長の速度においてわずかな遅延のみをもたらす低用量のＴ  ＡＰＣ群（０．２５Ｍ個細胞／マウス）＋ＣｐＧ（プライムのみ）を、未処置と比較した。低用量のＴ  ＡＰＣ＋ＣｐＧ（０．２５Ｍ個プライム／ブースト）による１７日目のブーストを含めると、同じ濃度のプライムのみの条件と比べて腫瘍成長阻害の増強が、未処置と比べてはるかに大きな阻害が見られた。抗原ロードＴ  ＡＰＣの１Ｍ個／マウス（プライムのみ）への用量の増加は、より低用量のＴ  ＡＰＣ＋ＣｐＧ（プライムのみ）と比べて、わずかな腫瘍成長阻害をもたらした。興味深いことに、高用量のＴ  ＡＰＣ＋ＣｐＧ（プライムのみ）の使用は、腫瘍成長からの最良の保護をもたらし、腫瘍退縮は、２０〜４０日目の間に起こり、観察された群のいずれかのうちで最も高いレベルの成長阻害を有した。まとめると、これらのデータは、細胞用量の増加、アジュバントの包含、またはプライム＋ブーストの投与スケジュールがＴ  ＡＰＣワクチンの有効性を増強することができることを強調する。
【０６５０】
（実施例２７）
高用量のペプチドワクチン、対、ペプチドとインキュベートされたか、またはペプチドをＳＱＺロードされたＢ細胞の有効性を比較するために、治療的環境において、ＨＰＶ  Ｅ７発現ＴＣ１腫瘍モデルでのチャレンジ後、マウスを、Ｅ７ペプチド、Ｅ７インキュベートＢ細胞（パルスしたＢ細胞）、またはＥ７ロードＢ  ＡＰＣのいずれかで処置し、腫瘍の面積および生存を経時的にプロットした。
【０６５１】
０日目に、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌マウスに、ＴＣ１腫瘍細胞（５０ｋ個細胞／マウス）を右後側腹部に注射した。１３日目（プライム）に、Ｂ細胞を、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊドナーマウスの脾臓から、免疫磁気分離によって得、ＳＱＺ（６０ｐｓｉ、４μｍの狭窄、室温）を介して、事前に複合体を形成させた２０μＭのＥ７  ＳＬＰ（
【化１５】
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；配列番号２５）＋２０μＭのマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）とインキュベートするか（１０μｇ／ｍＬ）、またはこれをロードし、ＣｐＧ１８２６（１μＭ）と１６時間インキュベートした。１４日目に、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊレシピエントマウス（１０匹／マウス）に、１００μＬのビヒクル（ＰＢＳ）、Ｅ７インキュベートＢ  ＡＰＣ（５Ｍ個細胞／マウス）、Ｅ７ロードＢ  ＡＰＣ（５Ｍ個細胞／マウス）のいずれかを後眼窩に注射するか、またはＥ７  ＳＬＰ（４５０μｇ／マウス）＋ＣｐＧ（５０μｇ／マウス）を左後側腹部に皮下注射した。２８日目に、ペプチドのみのマウスを、１４日目と同一の形式で（ブースト）、皮下にペプチドでブーストした。ＴＣ−１腫瘍成長および生存を、腫瘍移植の１週間後に開始して、週あたり２回測定し、最長８０日間、未処置マウスにおける腫瘍成長と比較した。
【０６５２】
式（（長さ×幅２）／２）によって測定される腫瘍成長は、未処置マウスと比較して、ペプチドでパルスしたＢ  ＡＰＣによる処置によって影響を受けなかった（図２７Ａ）。興味深いことに、ＳＱＺロードＢ  ＡＰＣ処置マウスは、未処置およびペプチドでパルスしたＢ細胞と比較して明確な腫瘍成長阻害を示した。この効果は、マウスに送達されたペプチドの量がロードＢ  ＡＰＣよりもはるかに高かったこと、およびペプチドワクチン群がペプチドワクチンのプライムおよびブーストを受けたが、ＳＱＺ  Ｂ  ＡＰＣ群が単回のプライム用量のみを受けたという事実にもかかわらず、ペプチドワクチン（ＳＣ  ＳＬＰ）の効果と同様であった。腫瘍成長で観察された傾向は、全生存期間と相関し、未処置群およびペプチドでパルスしたＢ細胞群は両方とも、同等の生存期間中央値（約３６日−右）を有していた。高用量のペプチドワクチンおよびＥ７ロードＢ  ＡＰＣは両方とも、２つの他の群と比べて、ほぼ２倍の生存期間中央値を有していた（６０日［ペプチド］対６５．５日［ＳＱＺ  Ｂ  ＡＰＣ］）（図２７Ｂ）。これらのデータは、ＳＱＺによりロードされたＢ  ＡＰＣが、ＨＰＶ関連がんの治療モデルにおいて腫瘍退縮を誘導することができること、およびはるかに高い用量の古典的なペプチドワクチンの同様に、またはそれよりも有効であることを示す。
【０６５３】
（実施例２８）
ＳＱＺによって抗原をロードされた抗原提示細胞（ＡＰＣ）に対する内因性応答を決定するために、精巧に扱った脾細胞にＳＱＺロードし、炎症性サイトカインのレベルを、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）によって測定した。
【０６５４】
Ｃ５６ＢＬ／６Ｊマウス由来のマウス脾細胞（Ｓｐｌｅｎｏ  ＡＰＣ）を単離し、４００μｇ／ｍＬのＯｖａタンパク質（図２８Ｂ）またはＨＰＶ１６  Ｅ７ペプチド（２０μＭ−図２８Ｃ）でＳＱＺ化し、次いで、１μＭのＣｐＧ１８２６と一緒にドナーマウスに注射した（５匹のマウス／群）。７日目に、脾細胞を収集し、Ｉｎｓ  Ｂ９−２３を再チャレンジし、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）をＩＦＮ−γおよびＩＬ−２のためにフローサイトメトリーによって実施し、未処置マウスと比較した。
【０６５５】
モデル抗原Ｏｖａ（図２８Ｂ）および疾患関連ＨＰＶ  Ｅ７（図２８Ｃ）の両方について、Ｓｐｌｅｎｏ  ＡＰＣ処置マウスは、ＯｖａまたはＥ７のいずれかで再刺激した場合に、ＩＦＮ−γおよびＩＬ−２の両方において、統計学的に有意な増加を示したことを見出した（それらのそれぞれの未処置条件と比較してすべてのＡＰＣ条件について、Ｐ＜０．００５）。まとめると、これらのデータは、混合脾細胞を操作して、ｉｎ  ｖｉｖｏで多数の抗原に対する抗原特異的応答を誘発することができることを示す。
【０６５６】
（実施例２９）
腫瘍の治療的処置のために抗原提示細胞（ＡＰＣ）としての機能を果たすＳＱＺロードＢ細胞または混合脾細胞の能力を決定するために、マウスを、ロードされた脾細胞ＡＰＣで処置し、続いて、ＴＣ−１腫瘍細胞を注射した。腫瘍成長阻害を測定して、ｉｎ  ｖｉｖｏでのワクチンの有効性を評価した。
【０６５７】
０日目に、ＴＣ−１腫瘍細胞（５０ｋ個細胞／マウス）を、Ｃ５６ＢＬ／６Ｊマウス（１０匹のマウス／群）の右側腹部に皮下注射した。９日目に、マウスを、いずれかの１Ｍ個細胞／マウスの脾細胞（図２８、ＳｐｌｅｎｏＡＰＣ）でプライムし、腫瘍体積を経時的に測定し、マウスを、４８日目、またはそれらの腫瘍が＞１５００ｍｍ３に達したときのいずれか早い方の時点において、屠殺した。
【０６５８】
ＨＰＶ抗原Ｅ６およびＥ７を発現することが公知の系統である治療的ＨＰＶ抗原系脾細胞ワクチンのＴＣ−１腫瘍成長を制御するための能力を、腫瘍移植の９日後に、Ｂ細胞または脾細胞にＥ７  ＳＬＰをロードすることによって試験した。腫瘍成長は、両方のＳｐｌｅｎｏＡＰＣ処置マウスにおいて大幅に阻害され、研究の期間の間、平均腫瘍体積は＜５００ｍｍ３のままであった（図２９Ａ）。いずれかのＡＰＣで処置されたマウスの生存期間も、有意に増加し（Ｐ＜０．０００１）、研究の終了の前にどのＳｐｌｅｎｏＡＰＣ処置マウスも人道的なエンドポイントに達しなかった（図２９Ｂ）。まとめると、このデータは、ＳＱＺを介して抗原をロードされた脾細胞は、腫瘍の抗原特異的な処置のための強力なＡＰＣ系ワクチンとしての機能を果たすことができることを示す。
【０６５９】
（実施例３０）
ＳＱＺによって抗原をロードされたヒト抗原提示細胞（ＡＰＣ）に対するｉｎ  ｖｉｔｒｏの抗原特異的応答を決定するために、Ｂ細胞またはＰＢＭＣをＳＱＺロードし、炎症性サイトカインのレベルを、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）によって測定した。
【０６６０】
ヒトＰＢＭＣをＨＬＡ−Ａ２＋ドナーから単離し、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＳＬＰ（５０μＭ）を、ＰＢＭＣとインキュベートするか（Ｅｎｄｏ）、またはＳＱＺによって送達した（ＳＱＺ）。次いで、ロードされたＰＢＭＣ（６０ｋ個細胞／ウェル）を、２：１の比でＡｓｔａｒｔｅ  Ｅ７レスポンダーＴ細胞（３０ｋ個細胞／ウェル）と共培養し、ＩＬ−２（１００Ｕ／ｍＬ）およびＣｐＧ２００６（１μＭ）の存在下で２４時間培養した。次いで、上清を収集し、ＥＬＩＳＡによってＩＦＮ−γについて分析した。
【０６６１】
ＰＢＭＣを、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＨＰＶ  Ｅ７抗原特異的応答を刺激するＡＰＣとして試験した。抗原をロードされたＰＢＭＣ  ＡＰＣは、Ｅ７特異的レスポンダー細胞を刺激して、抗原とインキュベートされた細胞のものよりもはるかに高いレベルでＩＦＮ−γを分泌した（Ｐ＜０．００５）。
【０６６２】
まとめると、これらのデータは、ヒトＰＢＭＣは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで疾患関連抗原特異的応答を刺激する効率の良いＡＰＣとして機能し得ることを示す。
【表１−１】
2021517895.tif 000017
【表１−２】
2021517895.tif 000018
【表１−３】
2021517895.tif 000019
【図１Ａ】
2021517895.tif 000020
【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
2021517895.tif 000022
【図２Ｂ】
2021517895.tif 000023
【図３】
2021517895.tif 000024
【図４】
2021517895.tif 000025
【図５】
2021517895.tif 000026
【図６−１】
2021517895.tif 000027
【図６−２】
2021517895.tif 000028
【図７Ａ】
2021517895.tif 000029
【図７Ｂ】
2021517895.tif 000030
【図８Ａ】
2021517895.tif 000031
【図８Ｂ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
2021517895.tif 000038
【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
2021517895.tif 000040
【図１１Ｃ】
2021517895.tif 000041
【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
2021517895.tif 000043
【図１３】
2021517895.tif 000044
【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
2021517895.tif 000062
【配列表】
2021517895000001.app
【国際調査報告】
2021517895.tif 000063
2021517895.tif 000064
2021517895.tif 000065
2021517895.tif 000066
2021517895.tif 000067