(57)【要約】  自己免疫性疾患及び炎症性障害を治療するのに有用な組成物及び方法が本明細書に記載される。組成物及び方法は、主要組織適合複合体（ＭＨＣ）と会合されており、且つナノ粒子コアにカップリングされているユビキタス非組織特異的抗原を利用して、制御性Ｔ細胞及び制御性Ｂ細胞を誘導する。
2021504488.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
自己免疫性又は炎症性疾患を治療することにおける使用のための組成物であって、
ａ）複数の抗原−主要組織適合複合体（抗原−ＭＨＣ）であって、前記複数のそれぞれの抗原−ＭＨＣは、ＭＨＣ分子の結合溝と会合されているユビキタス自己抗原を含み、前記ユビキタス自己抗原は、前記自己免疫性又は炎症性疾患の組織特異的抗原でない、複数の抗原−主要組織適合複合体（抗原−ＭＨＣ）；及び
ｂ）１〜約１００ナノメートルの直径を有するナノ粒子コア
を含み；
前記抗原−ＭＨＣは、前記ナノ粒子コア又は前記ナノ粒子コアを包囲する生体適合性層にカップリングされている、組成物。
【請求項２】
前記ＭＨＣ分子は、ＭＨＣクラスＩＩ分子である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ナノ粒子コアは、金属又は金属酸化物である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記金属は、鉄である、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記金属酸化物は、酸化鉄である、請求項３に記載の組成物。
【請求項６】
前記直径は、約５ナノメートル〜約５０ナノメートルである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記直径は、約５ナノメートル〜約２５ナノメートルである、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記複数の抗原−ＭＨＣは、前記ナノ粒子コアに、少なくとも１０：１の抗原−ＭＨＣとナノ粒子コアとの比においてカップリングされている、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記複数の抗原−ＭＨＣは、前記ナノ粒子コアに、約１５０：１以下の抗原−ＭＨＣとナノ粒子コアとの比においてカップリングされている、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記複数の抗原−ＭＨＣは、前記ナノ粒子コアに、１００ｎｍ２のナノ粒子コア表面積当たり約０．４〜約１３個の抗原−ＭＨＣの密度においてカップリングされている、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記抗原−ＭＨＣは、前記ナノ粒子コアに共有結合によりカップリングされている、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記抗原−ＭＨＣは、前記ナノ粒子コアに、約５キロダルトン未満の質量を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）リンカーによってカップリングされている、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記ナノ粒子コアは、生体適合性コーティングをさらに含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記ユビキタス自己抗原は、定常状態において細胞内区画中又は上に存在するタンパク質に由来するポリペプチドを含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記細胞内区画は、サイトゾル、ミトコンドリア、ゴルジ装置、小胞体、核又は細胞膜である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記細胞内区画は、ミトコンドリアである、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１７】
前記ユビキタス自己抗原は、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ複合体−Ｅ２構成成分（ＰＤＣ−Ｅ２）である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記ユビキタス自己抗原は、シトクロムＰ４５０  ２Ｄ６（ＣＹＰ２Ｄ６）である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９】
前記ユビキタス自己抗原は、アクチン（ＡＣＴＢ）である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２０】
前記ユビキタス自己抗原は、可溶性肝抗原（ＳＬＡ）である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２１】
前記ユビキタス自己抗原は、ホルムイミドイルトランスフェラーゼ−シクロデアミナーゼ（ＦＴＣＤ）である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２】
前記ユビキタス自己抗原は、ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３】
前記ユビキタス自己抗原は、ＰＤＣ−Ｅ２３５３−３６７；ＰＤＣ−Ｅ２７２−８６；ＰＤＣ−Ｅ２４２２−４３６；ＰＤＣ−Ｅ２３５３−３６７；ＰＤＣ−Ｅ２８０−９４；ＰＤＣ−Ｅ２５３５−５４９；ＰＤＣ−Ｅ２６２９−６４８；ＰＤＣ−Ｅ２１２２−１３５、ＰＤＣ−Ｅ２２４９−２６３；及びＰＤＣ−Ｅ２２４９−２６３からなる群から選択される、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２４】
前記ユビキタス自己抗原は、ＰＤＣ−Ｅ２４２２−４３６及びＰＤＣ−Ｅ２８０−９４からなる群から選択される、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２５】
前記ユビキタス自己抗原は、ＣＹＰ２Ｄ６２８４−２９８；ＣＹＰ２Ｄ６２８９−３０３；ＣＹＰ２Ｄ６３１８−３３２；ＣＹＰ２Ｄ６３１３−３３２；ＣＹＰ２Ｄ６３９３−４１２；ＣＹＰ２Ｄ６１９２−２０６；ＣＹＰ２Ｄ６５−１９；ＣＹＰ２Ｄ６２９３−３０７；ＣＹＰ２Ｄ６２１９−２３３；ＣＹＰ２Ｄ６２３７−２５１；ＣＹＰ２Ｄ６１５−２９；ＣＹＰ２Ｄ６２３５−２４９；ＣＹＰ２Ｄ６３１７−３３１；ＣＹＰ２Ｄ６２９３−３０７；ＣＹＰ２Ｄ６４２８−４４２；ＣＹＰ２Ｄ６２３７−２５１；ＣＹＰ２Ｄ６１４−２８；ＣＹＰ２Ｄ６１９９−２１３；ＣＹＰ２Ｄ６４５０−４６４；ＣＹＰ２Ｄ６３０１−３１５；ＣＹＰ２Ｄ６４５２−４６６；ＣＹＰ２Ｄ６５９−７３；ＣＹＰ２Ｄ６１３０−１４４；ＣＹＰ２Ｄ６１９３−２１２；ＣＹＰ２Ｄ６３０５−３２４；及びＣＹＰ２Ｄ６１５−２９からなる群から選択される、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２６】
前記ユビキタス自己抗原は、ＡＣＴＢ２０２−２１６；ＡＣＴＢ１７０−１８４；ＡＣＴＢ２４５−２５９；ＡＣＴＢ１８７−２０１；ＡＣＴＢ１７２−１８６；ＡＣＴＢ１３１−１４５；ＡＣＴＢ１３１−１４５；ＡＣＴＢ１７１−１８５；ＡＣＴＢ１２９−１４３；ＡＣＴＢ１６４−１７８；ＡＣＴＢ２５−３９；及びＡＣＴＢ３２３−３３７からなる群から選択される、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２７】
前記ユビキタス自己抗原は、ＡＣＴＢ１４６−１６０；ＡＣＴＢ１８−３２；及びＡＣＴＢ１７１−１８５からなる群から選択される、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２８】
前記ユビキタス自己抗原は、ＳＬＡ３３４−３４８；ＳＬＡ１９６−２１０；ＳＬＡ１１５−１２９；ＳＬＡ３７３−３８６；ＳＬＡ１８６−１９７；ＳＬＡ３４２−２５６；ＳＬＡ１１０−１２４；ＳＬＡ２９９−３１３；ＳＬＡ４９−６３；ＳＬＡ２６０−２７４；ＳＬＡ１１９−１３３；ＳＬＡ８６−１００；ＳＬＡ２６−４０；ＳＬＡ３３１−３４５；ＳＬＡ３１７−３３１；ＳＬＡ１７１−１８５；ＳＬＡ４１７−４３１；ＳＬＡ３５９−３７３；ＳＬＡ２１５−２２９；及びＳＬＡ１１１−１２５からなる群から選択される、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２９】
前記ユビキタス自己抗原は、ＦＴＣＤ４３９−４５３；ＦＴＣＤ３８１−３９５；ＦＴＣＤ２９７−３１１；ＦＴＣＤ５２５−５３９；ＦＴＣＤ２１８−２３２；ＦＴＣＤ４９５−５０９；ＦＴＣＤ２６２−２７６；ＦＴＣＤ３００−３１４；ＦＴＣＤ２５９−２７３；ＦＴＣＤ４９０−５０４；ＦＴＣＤ３８９−４０３；及びＦＴＣＤ２９５−３０９からなる群から選択される、請求項２１に記載の組成物。
【請求項３０】
前記ユビキタス自己抗原は、ＦＴＣＤ２７１−２８５；ＦＴＣＤ４９８−５１２；及びＦＴＣＤ３０１−３１５からなる群から選択される、請求項２１に記載の組成物。
【請求項３１】
前記ユビキタス自己抗原は、ＭＰＯ３２２−３３６；ＭＰＯ７１４−７２８；ＭＰＯ６１７−６３１；ＭＰＯ５０４−５１８；ＭＰＯ４６２−４７６；ＭＰＯ６１７−６３１；ＭＰＯ４４４−４５８；ＭＰＯ６８９−７０３；ＭＰＯ２４８−２６２；ＭＰＯ５１１−５２５；ＭＰＯ９７−１１１；及びＭＰＯ６１６−６３０からなる群から選択される、請求項２２に記載の組成物。
【請求項３２】
前記ナノ粒子コアにカップリングされている第２の複数の抗原−主要組織適合複合体（ＭＨＣ）をさらに含み、前記第２の複数のそれぞれの抗原−ＭＨＣは、抗原を含む、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３３】
前記第２の複数の抗原−主要組織適合複合体（ＭＨＣ）の前記抗原は、第２のユビキタス自己抗原である、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３４】
前記第２のユビキタス自己抗原は、定常状態において細胞内区画中又は上に存在するタンパク質に由来するポリペプチドを含む、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３５】
前記細胞内区画は、サイトゾル、ミトコンドリア、ゴルジ装置、小胞体、核又は細胞膜である、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３６】
前記細胞内区画は、ミトコンドリアである、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３７】
前記第２のユビキタス自己抗原は、ＰＤＣ−Ｅ２３５３−３６７；ＰＤＣ−Ｅ２７２−８６；ＰＤＣ−Ｅ２４２２−４３６；ＰＤＣ−Ｅ２３５３−３６７；ＰＤＣ−Ｅ２８０−９４；ＰＤＣ−Ｅ２５３５−５４９；ＰＤＣ−Ｅ２６２９−６４８；ＰＤＣ−Ｅ２１２２−１３５、ＰＤＣ−Ｅ２２４９−２６３；及びＰＤＣ−Ｅ２２４９−２６３からなる群から選択される、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３８】
前記第２のユビキタス自己抗原は、ＰＤＣ−Ｅ２４２２−４３６及びＰＤＣ−Ｅ２８０−９４からなる群から選択される、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３９】
前記第２のユビキタス自己抗原は、ＣＹＰ２Ｄ６２８４−２９８；ＣＹＰ２Ｄ６２８９−３０３；ＣＹＰ２Ｄ６３１８−３３２；ＣＹＰ２Ｄ６３１３−３３２；ＣＹＰ２Ｄ６３９３−４１２；ＣＹＰ２Ｄ６１９２−２０６；ＣＹＰ２Ｄ６５−１９；ＣＹＰ２Ｄ６２９３−３０７；ＣＹＰ２Ｄ６２１９−２３３；ＣＹＰ２Ｄ６２３７−２５１；ＣＹＰ２Ｄ６１５−２９；ＣＹＰ２Ｄ６２３５−２４９；ＣＹＰ２Ｄ６３１７−３３１；ＣＹＰ２Ｄ６２９３−３０７；ＣＹＰ２Ｄ６４２８−４４２；ＣＹＰ２Ｄ６２３７−２５１；ＣＹＰ２Ｄ６１４−２８；ＣＹＰ２Ｄ６１９９−２１３；ＣＹＰ２Ｄ６４５０−４６４；ＣＹＰ２Ｄ６３０１−３１５；ＣＹＰ２Ｄ６４５２−４６６；ＣＹＰ２Ｄ６５９−７３；ＣＹＰ２Ｄ６１３０−１４４；ＣＹＰ２Ｄ６１９３−２１２；ＣＹＰ２Ｄ６３０５−３２４；及びＣＹＰ２Ｄ６１５−２９からなる群から選択される、請求項３３に記載の組成物。
【請求項４０】
前記第２のユビキタス自己抗原は、ＡＣＴＢ２０２−２１６；ＡＣＴＢ１７０−１８４；ＡＣＴＢ２４５−２５９；ＡＣＴＢ１８７−２０１；ＡＣＴＢ１７２−１８６；ＡＣＴＢ１３１−１４５；ＡＣＴＢ１３１−１４５；ＡＣＴＢ１７１−１８５；ＡＣＴＢ１２９−１４３；ＡＣＴＢ１６４−１７８；ＡＣＴＢ２５−３９；及びＡＣＴＢ３２３−３３７からなる群から選択される、請求項３３に記載の組成物。
【請求項４１】
前記第２のユビキタス自己抗原は、ＡＣＴＢ１４６−１６０；ＡＣＴＢ１８−３２；及びＡＣＴＢ１７１−１８５からなる群から選択される、請求項３３に記載の組成物。
【請求項４２】
前記第２のユビキタス自己抗原は、ＳＬＡ３３４−３４８；ＳＬＡ１９６−２１０；ＳＬＡ１１５−１２９；ＳＬＡ３７３−３８６；ＳＬＡ１８６−１９７；ＳＬＡ３４２−２５６；ＳＬＡ１１０−１２４；ＳＬＡ２９９−３１３；ＳＬＡ４９−６３；ＳＬＡ２６０−２７４；ＳＬＡ１１９−１３３；ＳＬＡ８６−１００；ＳＬＡ２６−４０；ＳＬＡ３３１−３４５；ＳＬＡ３１７−３３１；ＳＬＡ１７１−１８５；ＳＬＡ４１７−４３１；ＳＬＡ３５９−３７３；ＳＬＡ２１５−２２９；及びＳＬＡ１１１−１２５からなる群から選択される、請求項３３に記載の組成物。
【請求項４３】
前記第２のユビキタス自己抗原は、ＦＴＣＤ４３９−４５３；ＦＴＣＤ３８１−３９５；ＦＴＣＤ２９７−３１１；ＦＴＣＤ５２５−５３９；ＦＴＣＤ２１８−２３２；ＦＴＣＤ４９５−５０９；ＦＴＣＤ２６２−２７６；ＦＴＣＤ３００−３１４；ＦＴＣＤ２５９−２７３；ＦＴＣＤ４９０−５０４；ＦＴＣＤ３８９−４０３；及びＦＴＣＤ２９５−３０９からなる群から選択される、請求項３３に記載の組成物。
【請求項４４】
前記第２のユビキタス自己抗原は、ＦＴＣＤ２７１−２８５；ＦＴＣＤ４９８−５１２；及びＦＴＣＤ３０１−３１５からなる群から選択される、請求項３３に記載の組成物。
【請求項４５】
前記第２のユビキタス自己抗原は、ＭＰＯ３２２−３３６；ＭＰＯ７１４−７２８；ＭＰＯ６１７−６３１；ＭＰＯ５０４−５１８；ＭＰＯ４６２−４７６；ＭＰＯ６１７−６３１；ＭＰＯ４４４−４５８；ＭＰＯ６８９−７０３；ＭＰＯ２４８−２６２；ＭＰＯ５１１−５２５；ＭＰＯ９７−１１１；及びＭＰＯ６１６−６３０からなる群から選択される、請求項３３に記載の組成物。
【請求項４６】
薬学的に許容可能な安定剤、賦形剤、希釈剤又はそれらの組合せをさらに含む、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４７】
静脈内投与のために配合される、請求項１〜４６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４８】
前記自己免疫性又は炎症性疾患は、Ｉ型糖尿病、多発性硬化症、再発寛解型多発性硬化症、天疱瘡、落葉状天疱瘡、尋常性天疱瘡、視神経脊髄炎スペクトラム障害、関節リウマ
チ、骨関節炎、乾癬性関節炎、炎症性腸疾患、クローン病、セリアック病、アレルギー性喘息、全身性エリテマトーデス、アテローム性動脈硬化症、慢性閉塞性肺疾患、肺気腫、乾癬、ブドウ膜炎、シェーグレン症候群、強皮症、抗リン脂質症候群、ＡＮＣＡ関連血管炎、原発性胆汁性肝硬変、自己免疫性肝炎、原発性硬化性胆管炎及びスティッフマン症候群からなる群から選択される、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４９】
前記自己免疫性又は炎症性疾患は、多発性硬化症である、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５０】
前記ユビキタス自己抗原又は前記第２のユビキタス自己抗原は、ミエリン塩基性タンパク質、ミエリン関連糖タンパク質、ミエリンオリゴデンドロサイトタンパク質（ＭＯＧ）、プロテオリピドタンパク質、オリゴデンドロサイトミエリンオリゴタンパク質、ミエリン関連オリゴデンドロサイト塩基性タンパク質、オリゴデンドロサイト特異的タンパク質、熱ショックタンパク質、オリゴデンドロサイト特異的タンパク質、ＮＯＧＯ  Ａ、糖タンパク質Ｐｏ、末梢ミエリンタンパク質２２又は２’３’−環状ヌクレオチド３’−ホスホジエステラーゼに由来するポリペプチドでない、請求項４９に記載の組成物。
【請求項５１】
前記自己免疫性又は炎症性疾患は、Ｉ型糖尿病である、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５２】
前記ユビキタス自己抗原又は前記第２のユビキタス自己抗原は、プレプロインスリン、プロインスリン、膵島特異的グルコース−６−ホスファターゼ（ＩＧＲＰ）、グルタミン酸デカルボキシラーゼ（ＧＡＤ）、膵島細胞自己抗原−２（ＩＣＡ２）又はインスリンに由来するポリペプチドでない、請求項５１に記載の組成物又は使用。
【請求項５３】
個体における自己免疫性又は炎症性疾患を治療する方法であって、個体に、組成物であって、
ａ）複数の抗原−主要組織適合複合体（抗原−ＭＨＣ）であって、前記複数のそれぞれの抗原−ＭＨＣは、ＭＨＣ分子の結合溝と会合されているユビキタス自己抗原を含み、前記ユビキタス自己抗原は、前記自己免疫性又は炎症性疾患の組織特異的抗原でない、複数の抗原−主要組織適合複合体（抗原−ＭＨＣ）；及び
ｂ）１〜約１００ナノメートルの直径を有するナノ粒子コア
を含み；
前記抗原−ＭＨＣは、前記ナノ粒子コア又は前記ナノ粒子コアを包囲する生体適合性層にカップリングされている、組成物を投与することを含む方法。
【請求項５４】
前記ＭＨＣ分子は、ＭＨＣクラスＩＩ分子である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記ナノ粒子コアは、金属又は金属酸化物である、請求項５３又は５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記金属は、鉄である、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記金属酸化物は、酸化鉄である、請求項５５に記載の方法。
【請求項５８】
前記直径は、約５ナノメートル〜約５０ナノメートルである、請求項５３〜５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
前記直径は、約５ナノメートル〜約２５ナノメートルである、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記抗原−ＭＨＣは、前記ナノ粒子コアに、少なくとも１０：１の抗原−ＭＨＣとナノ粒子コアとの比においてカップリングされている、請求項５３〜５９のいずれか一項に記
載の方法。
【請求項６１】
前記抗原−ＭＨＣは、前記ナノ粒子コアに、約１５０：１以下の抗原−ＭＨＣとナノ粒子コアとの比においてカップリングされている、請求項５３〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６２】
前記抗原−ＭＨＣは、前記ナノ粒子コアに、１００ｎｍ２のナノ粒子コア表面積当たり約０．４〜約１３個の抗原−ＭＨＣの密度においてカップリングされている、請求項５３〜６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
前記抗原−ＭＨＣは、前記ナノ粒子コアに共有結合によりカップリングされている、請求項５３〜６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
前記抗原−ＭＨＣは、前記ナノ粒子コアに、約５キロダルトン未満の質量を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）リンカーによってカップリングされている、請求項５３〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
前記ナノ粒子コアは、生体適合性コーティングをさらに含む、請求項５３〜６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６６】
前記ユビキタス自己抗原は、定常状態において細胞内区画中又は上に存在するタンパク質に由来するポリペプチドを含む、請求項５３〜６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
前記細胞内区画は、サイトゾル、ミトコンドリア、ゴルジ装置、小胞体、核又は細胞膜である、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記細胞内区画は、ミトコンドリアである、請求項６６に記載の方法。
【請求項６９】
前記ユビキタス自己抗原は、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ複合体−Ｅ２構成成分（ＰＤＣ−Ｅ２）である、請求項５３〜６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７０】
前記ユビキタス自己抗原は、シトクロムＰ４５０  ２Ｄ６（ＣＹＰ２Ｄ６）である、請求項５３〜６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７１】
前記ユビキタス自己抗原は、アクチン（ＡＣＴＢ）である、請求項５３〜６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
前記ユビキタス自己抗原は、可溶性肝抗原（ＳＬＡ）である、請求項５３〜６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７３】
前記ユビキタス自己抗原は、ホルムイミドイルトランスフェラーゼ−シクロデアミナーゼ（ＦＴＣＤ）である、請求項５３〜６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７４】
前記ユビキタス自己抗原は、ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）である、請求項５３〜６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７５】
前記ユビキタス自己抗原は、ＰＤＣ−Ｅ２３５３−３６７；ＰＤＣ−Ｅ２７２−８６；ＰＤＣ−Ｅ２４２２−４３６；ＰＤＣ−Ｅ２３５３−３６７；ＰＤＣ−Ｅ２８０−９４；ＰＤＣ−Ｅ２５３５−５４９；ＰＤＣ−Ｅ２６２９−６４８；ＰＤＣ−Ｅ２１２２−１３５、ＰＤＣ−Ｅ２２４９−２６３；及びＰＤＣ−Ｅ２２４９−２６３からなる群から選択
される、請求項６９に記載の方法。
【請求項７６】
前記ユビキタス自己抗原は、ＰＤＣ−Ｅ２４２２−４３６及びＰＤＣ−Ｅ２８０−９４からなる群から選択される、請求項６９に記載の方法。
【請求項７７】
前記ユビキタス自己抗原は、ＣＹＰ２Ｄ６２８４−２９８；ＣＹＰ２Ｄ６２８９−３０３；ＣＹＰ２Ｄ６３１８−３３２；ＣＹＰ２Ｄ６３１３−３３２；ＣＹＰ２Ｄ６３９３−４１２；ＣＹＰ２Ｄ６１９２−２０６；ＣＹＰ２Ｄ６５−１９；ＣＹＰ２Ｄ６２９３−３０７；ＣＹＰ２Ｄ６２１９−２３３；ＣＹＰ２Ｄ６２３７−２５１；ＣＹＰ２Ｄ６１５−２９；ＣＹＰ２Ｄ６２３５−２４９；ＣＹＰ２Ｄ６３１７−３３１；ＣＹＰ２Ｄ６２９３−３０７；ＣＹＰ２Ｄ６４２８−４４２；ＣＹＰ２Ｄ６２３７−２５１；ＣＹＰ２Ｄ６１４−２８；ＣＹＰ２Ｄ６１９９−２１３；ＣＹＰ２Ｄ６４５０−４６４；ＣＹＰ２Ｄ６３０１−３１５；ＣＹＰ２Ｄ６４５２−４６６；ＣＹＰ２Ｄ６５９−７３；ＣＹＰ２Ｄ６１３０−１４４；ＣＹＰ２Ｄ６１９３−２１２；ＣＹＰ２Ｄ６３０５−３２４；及びＣＹＰ２Ｄ６１５−２９からなる群から選択される、請求項７０に記載の方法。
【請求項７８】
前記ユビキタス自己抗原は、ＡＣＴＢ２０２−２１６；ＡＣＴＢ１７０−１８４；ＡＣＴＢ２４５−２５９；ＡＣＴＢ１８７−２０１；ＡＣＴＢ１７２−１８６；ＡＣＴＢ１３１−１４５；ＡＣＴＢ１３１−１４５；ＡＣＴＢ１７１−１８５；ＡＣＴＢ１２９−１４３；ＡＣＴＢ１６４−１７８；ＡＣＴＢ２５−３９；及びＡＣＴＢ３２３−３３７からなる群から選択される、請求項７１に記載の方法。
【請求項７９】
前記ユビキタス自己抗原は、ＡＣＴＢ１４６−１６０；ＡＣＴＢ１８−３２；及びＡＣＴＢ１７１−１８５からなる群から選択される、請求項７１に記載の方法。
【請求項８０】
前記ユビキタス自己抗原は、ＳＬＡ３３４−３４８；ＳＬＡ１９６−２１０；ＳＬＡ１１５−１２９；ＳＬＡ３７３−３８６；ＳＬＡ１８６−１９７；ＳＬＡ３４２−２５６；ＳＬＡ１１０−１２４；ＳＬＡ２９９−３１３；ＳＬＡ４９−６３；ＳＬＡ２６０−２７４；ＳＬＡ１１９−１３３；ＳＬＡ８６−１００；ＳＬＡ２６−４０；ＳＬＡ３３１−３４５；ＳＬＡ３１７−３３１；ＳＬＡ１７１−１８５；ＳＬＡ４１７−４３１；ＳＬＡ３５９−３７３；ＳＬＡ２１５−２２９；及びＳＬＡ１１１−１２５からなる群から選択される、請求項７２に記載の方法。
【請求項８１】
前記ユビキタス自己抗原は、ＦＴＣＤ４３９−４５３；ＦＴＣＤ３８１−３９５；ＦＴＣＤ２９７−３１１；ＦＴＣＤ５２５−５３９；ＦＴＣＤ２１８−２３２；ＦＴＣＤ４９５−５０９；ＦＴＣＤ２６２−２７６；ＦＴＣＤ３００−３１４；ＦＴＣＤ２５９−２７３；ＦＴＣＤ４９０−５０４；ＦＴＣＤ３８９−４０３；及びＦＴＣＤ２９５−３０９からなる群から選択される、請求項７３に記載の方法。
【請求項８２】
前記ユビキタス自己抗原は、ＦＴＣＤ２７１−２８５；ＦＴＣＤ４９８−５１２；及びＦＴＣＤ３０１−３１５からなる群から選択される、請求項７３に記載の方法。
【請求項８３】
前記ユビキタス自己抗原は、ＭＰＯ３２２−３３６；ＭＰＯ７１４−７２８；ＭＰＯ６１７−６３１；ＭＰＯ５０４−５１８；ＭＰＯ４６２−４７６；ＭＰＯ６１７−６３１；ＭＰＯ４４４−４５８；ＭＰＯ６８９−７０３；ＭＰＯ２４８−２６２；ＭＰＯ５１１−５２５；ＭＰＯ９７−１１１；及びＭＰＯ６１６−６３０からなる群から選択される、請求項７４に記載の方法。
【請求項８４】
前記組成物は、前記ナノ粒子コアにカップリングされている第２の複数の抗原−主要組織適合複合体（ＭＨＣ）をさらに含み、前記第２の複数のそれぞれの抗原−ＭＨＣは、抗
原を含む、請求項５３〜８３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８５】
前記第２の複数の抗原−主要組織適合（ＭＨＣ）複合体の前記抗原は、第２のユビキタス自己抗原である、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
前記ユビキタス自己抗原は、定常状態において細胞内区画中又は上に存在するタンパク質に由来するポリペプチドを含む、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
前記細胞内区画は、サイトゾル、ミトコンドリア、ゴルジ装置、小胞体、核又は細胞膜である、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
前記細胞内区画は、ミトコンドリアである、請求項８６に記載の方法。
【請求項８９】
前記第２のユビキタス自己抗原は、ＰＤＣ−Ｅ２３５３−３６７；ＰＤＣ−Ｅ２７２−８６；ＰＤＣ−Ｅ２４２２−４３６；ＰＤＣ−Ｅ２３５３−３６７；ＰＤＣ−Ｅ２８０−９４；ＰＤＣ−Ｅ２５３５−５４９；ＰＤＣ−Ｅ２６２９−６４８；ＰＤＣ−Ｅ２１２２−１３５、ＰＤＣ−Ｅ２２４９−２６３；及びＰＤＣ−Ｅ２２４９−２６３からなる群から選択される、請求項８５に記載の方法。
【請求項９０】
前記第２のユビキタス自己抗原は、ＰＤＣ−Ｅ２４２２−４３６及びＰＤＣ−Ｅ２８０−９４からなる群から選択される、請求項８５に記載の方法。
【請求項９１】
前記第２のユビキタス自己抗原は、ＣＹＰ２Ｄ６２８４−２９８；ＣＹＰ２Ｄ６２８９−３０３；ＣＹＰ２Ｄ６３１８−３３２；ＣＹＰ２Ｄ６３１３−３３２；ＣＹＰ２Ｄ６３９３−４１２；ＣＹＰ２Ｄ６１９２−２０６；ＣＹＰ２Ｄ６５−１９；ＣＹＰ２Ｄ６２９３−３０７；ＣＹＰ２Ｄ６２１９−２３３；ＣＹＰ２Ｄ６２３７−２５１；ＣＹＰ２Ｄ６１５−２９；ＣＹＰ２Ｄ６２３５−２４９；ＣＹＰ２Ｄ６３１７−３３１；ＣＹＰ２Ｄ６２９３−３０７；ＣＹＰ２Ｄ６４２８−４４２；ＣＹＰ２Ｄ６２３７−２５１；ＣＹＰ２Ｄ６１４−２８；ＣＹＰ２Ｄ６１９９−２１３；ＣＹＰ２Ｄ６４５０−４６４；ＣＹＰ２Ｄ６３０１−３１５；ＣＹＰ２Ｄ６４５２−４６６；ＣＹＰ２Ｄ６５９−７３；ＣＹＰ２Ｄ６１３０−１４４；ＣＹＰ２Ｄ６１９３−２１２；ＣＹＰ２Ｄ６３０５−３２４；及びＣＹＰ２Ｄ６１５−２９からなる群から選択される、請求項８５に記載の方法。
【請求項９２】
前記第２のユビキタス自己抗原は、ＡＣＴＢ２０２−２１６；ＡＣＴＢ１７０−１８４；ＡＣＴＢ２４５−２５９；ＡＣＴＢ１８７−２０１；ＡＣＴＢ１７２−１８６；ＡＣＴＢ１３１−１４５；ＡＣＴＢ１３１−１４５；ＡＣＴＢ１７１−１８５；ＡＣＴＢ１２９−１４３；ＡＣＴＢ１６４−１７８；ＡＣＴＢ２５−３９；及びＡＣＴＢ３２３−３３７からなる群から選択される、請求項８５に記載の方法。
【請求項９３】
前記第２のユビキタス自己抗原は、ＡＣＴＢ１４６−１６０；ＡＣＴＢ１８−３２；及びＡＣＴＢ１７１−１８５からなる群から選択される、請求項８５に記載の方法。
【請求項９４】
前記第２のユビキタス自己抗原は、ＳＬＡ３３４−３４８；ＳＬＡ１９６−２１０；ＳＬＡ１１５−１２９；ＳＬＡ３７３−３８６；ＳＬＡ１８６−１９７；ＳＬＡ３４２−２５６；ＳＬＡ１１０−１２４；ＳＬＡ２９９−３１３；ＳＬＡ４９−６３；ＳＬＡ２６０−２７４；ＳＬＡ１１９−１３３；ＳＬＡ８６−１００；ＳＬＡ２６−４０；ＳＬＡ３３１−３４５；ＳＬＡ３１７−３３１；ＳＬＡ１７１−１８５；ＳＬＡ４１７−４３１；ＳＬＡ３５９−３７３；ＳＬＡ２１５−２２９；及びＳＬＡ１１１−１２５からなる群から選択される、請求項８５に記載の方法。
【請求項９５】
前記第２のユビキタス自己抗原は、ＦＴＣＤ４３９−４５３；ＦＴＣＤ３８１−３９５；ＦＴＣＤ２９７−３１１；ＦＴＣＤ５２５−５３９；ＦＴＣＤ２１８−２３２；ＦＴＣＤ４９５−５０９；ＦＴＣＤ２６２−２７６；ＦＴＣＤ３００−３１４；ＦＴＣＤ２５９−２７３；ＦＴＣＤ４９０−５０４；ＦＴＣＤ３８９−４０３；及びＦＴＣＤ２９５−３０９からなる群から選択される、請求項８５に記載の方法。
【請求項９６】
前記第２のユビキタス自己抗原は、ＦＴＣＤ２７１−２８５；ＦＴＣＤ４９８−５１２；及びＦＴＣＤ３０１−３１５からなる群から選択される、請求項８５に記載の方法。
【請求項９７】
前記第２のユビキタス自己抗原は、ＭＰＯ３２２−３３６；ＭＰＯ７１４−７２８；ＭＰＯ６１７−６３１；ＭＰＯ５０４−５１８；ＭＰＯ４６２−４７６；ＭＰＯ６１７−６３１；ＭＰＯ４４４−４５８；ＭＰＯ６８９−７０３；ＭＰＯ２４８−２６２；ＭＰＯ５１１−５２５；ＭＰＯ９７−１１１；及びＭＰＯ６１６−６３０からなる群から選択される、請求項８５に記載の方法。
【請求項９８】
前記組成物は、薬学的に許容可能な安定剤、賦形剤、希釈剤又はそれらの組合せをさらに含む、請求項５３〜９７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９９】
前記組成物は、静脈内投与のために配合される、請求項５３〜９８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１００】
前記ユビキタス自己抗原又は前記第２のユビキタス自己抗原は、ミエリン塩基性タンパク質、ミエリン関連糖タンパク質、ミエリンオリゴデンドロサイトタンパク質（ＭＯＧ）、プロテオリピドタンパク質、オリゴデンドロサイトミエリンオリゴタンパク質、ミエリン関連オリゴデンドロサイト塩基性タンパク質、オリゴデンドロサイト特異的タンパク質、熱ショックタンパク質、オリゴデンドロサイト特異的タンパク質、ＮＯＧＯ  Ａ、糖タンパク質Ｐｏ、末梢ミエリンタンパク質２２又は２’３’−環状ヌクレオチド３’−ホスホジエステラーゼに由来するポリペプチドでない、請求項５３〜９９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０１】
前記ユビキタス自己抗原又は前記第２のユビキタス自己抗原は、プレプロインスリン、プロインスリン、膵島特異的グルコース−６−ホスファターゼ（ＩＧＲＰ）、グルタミン酸デカルボキシラーゼ（ＧＡＤ）、膵島細胞自己抗原−２（ＩＣＡ２）又はインスリンに由来するポリペプチドでない、請求項５３〜９９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０２】
前記自己免疫性又は炎症性疾患は、Ｉ型糖尿病、多発性硬化症、再発寛解型多発性硬化症、天疱瘡、落葉状天疱瘡、尋常性天疱瘡、視神経脊髄炎スペクトラム障害、関節リウマチ、骨関節炎、乾癬性関節炎、炎症性腸疾患、クローン病、セリアック病、アレルギー性喘息、全身性エリテマトーデス、アテローム性動脈硬化症、慢性閉塞性肺疾患、肺気腫、乾癬、ブドウ膜炎、シェーグレン症候群、強皮症、抗リン脂質症候群、ＡＮＣＡ関連血管炎、原発性胆汁性肝硬変、自己免疫性肝炎、原発性硬化性胆管炎及びスティッフマン症候群からなる群から選択される、請求項５３〜１０１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０３】
前記自己免疫性又は炎症性疾患は、多発性硬化症である、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
前記自己免疫性又は炎症性疾患は、Ｉ型糖尿病である、請求項１０２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互作用
本出願は、全て参照により全体として本明細書に組み込まれる２０１７年１１月２９日に出願された米国仮特許出願第６２／５９１，９２１号明細書；２０１８年２月２８日に出願された米国仮特許出願第６２／６３６，５２０号明細書；及び２０１８年３月１２日に出願された米国仮特許出願第６２／６４１，６０７号明細書の利益を主張する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００２】
ナノ粒子コアにカップリングされている複数の抗原−主要組織適合複合体を含む組成物が本明細書に提供される。組成物は、自己免疫性及び炎症性障害を治療するのに有用である。多くの自己免疫性又は炎症性疾患は、特定の組織特異的抗原又は抗原のサブセットに指向される免疫応答と関連する。これは、それぞれの疾患がその抗原又は抗原のサブセットを標的化する特異的医薬品を要求するため、自己免疫性又は炎症性疾患を治療する介入の設計についての問題を呈する。代わりに、非特異的免疫阻害剤を使用することができるが、それらは、顕著な全身副作用を伴う。自己免疫性疾患の治療又は自己反応性（すなわち自己免疫性又は炎症性）Ｔ細胞を抑制するＴ制御性細胞の集団の拡大に有用である、ナノ粒子にカップリングされているユビキタス自己抗原−ＭＨＣ複合体（ｕａＭＨＣ−ＮＰ）を含む組成物が本明細書に記載される。
【０００３】
主に、本明細書に記載の治療は、単一組成物が機序的にも病理学的にも結びつかない複数の自己免疫性又は炎症性障害を治療し得るという点で多目的である。このように多目的である多くの治療、例えばコルチコステロイド又は一般的な炎症性メディエーターに対する抗体は、全身免疫抑制をもたらし、したがって二次感染及び全身免疫学的合併症の発症についての治療患者のリスクを増加させる。本明細書に記載の組成物は、多目的である一方、ウイルス、細菌、真菌感染又は腫瘍を撲滅する患者の能力を完全に残して全身免疫も節約する。驚くべきことに、本明細書に記載の方法により利用される抗原は、病理学的に区別され（例えば、同一器官の異なる自己免疫性疾患を単一の抗原により治療することができる）、起源組織に関して区別される（例えば、異なる器官系を冒す自己免疫性疾患）複数の疾患を治療し得る。これらの抗原は、多くの異なる組織タイプにわたり広く発現される抗原であるが、一般に特定の組織に限定される発現を示す、疾患と関連する最重要抗原でない。
【０００４】
本明細書に記載のある態様において、組成物であって、（ａ）複数の抗原−主要組織適合複合体（ＭＨＣ）であって、複数のそれぞれの抗原−ＭＨＣは、組織特異的抗原でなく、ＭＨＣ分子の結合溝と会合されているユビキタス自己抗原を含む、複数の抗原−主要組織適合複合体（ＭＨＣ）；及び（ｂ）１〜１００ナノメートルの直径を有するナノ粒子コアを含み；抗原−ＭＨＣは、ナノ粒子コアにカップリングされている、組成物が存在する。ある実施形態において、ＭＨＣ分子は、ＭＨＣクラスＩＩ分子である。ある実施形態において、ナノ粒子コアは、金属又は金属酸化物である。ある実施形態において、金属は、鉄である。ある実施形態において、金属酸化物は、酸化鉄である。ある実施形態において、直径は、約５ナノメートル〜約５０ナノメートルである。ある実施形態において、直径は、約５ナノメートル〜約２５ナノメートルである。ある実施形態において、複数の抗原−ＭＨＣは、ナノ粒子コアに、少なくとも１０：１の抗原−ＭＨＣとナノ粒子コアとの比においてカップリングされている。ある実施形態において、複数の抗原−ＭＨＣは、ナノ粒子コアに、１５０：１以下の抗原−ＭＨＣとナノ粒子コアとの比においてカップリングされている。ある実施形態において、複数の抗原−ＭＨＣは、ナノ粒子コアに、１００ｎ
ｍ２のナノ粒子表面積当たり約０．４〜約１３個の抗原−ＭＨＣの密度においてカップリングされている。ある実施形態において、抗原−ＭＨＣは、ナノ粒子に共有結合によりカップリングされている。ある実施形態において、抗原−ＭＨＣは、ナノ粒子コアに、約５キロダルトン未満の質量を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）リンカーによって共有結合によりカップリングされている。ある実施形態において、ナノ粒子コアは、生体適合性コーティングをさらに含む。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、定常状態において細胞内区画中又は上に存在するタンパク質に由来するポリペプチドを含む。ある実施形態において、細胞内区画は、サイトゾル、ミトコンドリア、ゴルジ装置、小胞体、核又は細胞膜である。ある実施形態において、細胞内区画は、ミトコンドリアである。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ複合体−Ｅ２構成成分（ＰＤＣ−Ｅ２）である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、シトクロムＰ４５０  ２Ｄ６（ＣＹＰ２Ｄ６）である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、可溶性肝抗原（ＳＬＡ）である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、アクチン（ＡＣＴＢ）である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ホルムイミドイルトランスフェラーゼ−シクロデアミナーゼ（ＦＴＣＤ）である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）である。ある実施形態において、細胞内区画は、ミトコンドリアである。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＤＲＢ３＊０２０２についてＰＤＣ−Ｅ２３５３−３６７、ＰＤＣ−Ｅ２７２−８６及びＰＤＣ−Ｅ２４２２−４３６；ＤＲＢ５＊０１０１についてＰＤＣ−Ｅ２３５３−３６７、ＰＤＣ−Ｅ２８０−９４及びＰＤＣ−Ｅ２５３５−５４９；ＤＲＢ４＊０１０１についてＰＤＣ−Ｅ２６２９−６４８、ＰＤＣ−Ｅ２１２２−１３５及びＰＤＣ−Ｅ２２４９−２６３；並びにＤＲＢ１＊０８０１についてＰＤＣ−Ｅ２２４９−２６３からなる群から選択される。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＰＤＣ−Ｅ２４２２−４３６及びＰＤＣ−Ｅ２８０−９４からなる群から選択される。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＣＹＰ２Ｄ６２８４−２９８、ＣＹＰ２Ｄ６２８９−３０３、ＣＹＰ２Ｄ６３１８−３３２、ＣＹＰ２Ｄ６３１３−３３２、ＣＹＰ２Ｄ６３９３−４１２、ＣＹＰ２Ｄ６１９２−２０６、ＣＹＰ２Ｄ６５−１９、ＣＹＰ２Ｄ６２９３−３０７（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＣＹＰ２Ｄ６２１９−２３３、ＣＹＰ２Ｄ６２３７−２５１、ＣＹＰ２Ｄ６１５−２９（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＣＹＰ２Ｄ６２３５−２４９、ＣＹＰ２Ｄ６３１７−３３１、ＣＹＰ２Ｄ６２９３−３０７（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＣＹＰ２Ｄ６４２８−４４２、ＣＹＰ２Ｄ６２３７−２５１、ＣＹＰ２Ｄ６１４−２８（ＤＲＢ５＊０１０１について）；ＣＹＰ２Ｄ６１９９−２１３、ＣＹＰ２Ｄ６４５０−４６４、ＣＹＰ２Ｄ６３０１−３１５（ＤＲＢ１＊０４０１について）；ＣＹＰ２Ｄ６４５２−４６６、ＣＹＰ２Ｄ６５９−７３、ＣＹＰ２Ｄ６１３０−１４４���ＣＹＰ２Ｄ６１９３−２１２、ＣＹＰ２Ｄ６３０５−３２４、ＣＹＰ２Ｄ６１５−２９（ＤＲＢ１＊０７０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＡＣＴＢ２０２−２１６、ＡＣＴＢ１７０−１８４、ＡＣＴＢ２４５−２５９（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＡＣＴＢ１８７−２０１、ＡＣＴＢ１７２−１８６、ＡＣＴＢ１３１−１４５（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＡＣＴＢ１３１−１４５、ＡＣＴＢ１７１−１８５、ＡＣＴＢ１２９−１４３（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＡＣＴＢ１６４−１７８、ＡＣＴＢ２５−３９、ＡＣＴＢ３２３−３３７（ＤＲＢ５＊０１０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＡＣＴＢ１４６−１６０、ＡＣＴＢ１８−３２及びＡＣＴＢ１７１−１８５からなる群から選択される。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＳＬＡ３３４−３４８、ＳＬＡ１９６−２１０、ＳＬＡ１１５−１２９、ＳＬＡ３７３−３８６、ＳＬＡ１８６−１９７（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＳＬＡ３４２−２５６、ＳＬＡ１１０−１２４、ＳＬＡ２９９−３１３（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＳＬＡ４９−６３、ＳＬＡ２６０−２７４、ＳＬＡ１１９−１３３（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＳＬＡ８６−１００、ＳＬＡ２６−４０、ＳＬＡ３３１−３４５（ＤＲＢ５＊０１０１について）；ＳＬＡ３１７−３３１、ＳＬＡ１７１−１８５、ＳＬＡ４１７−４３
１（ＤＲＢ１＊０４０１について）；ＳＬＡ３５９−３７３、ＳＬＡ２１５−２２９、ＳＬＡ１１１−１２５（ＤＲＢ１＊０７０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＦＴＣＤ４３９−４５３、ＦＴＣＤ３８１−３９５、ＦＴＣＤ２９７−３１１（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＦＴＣＤ５２５−５３９、ＦＴＣＤ２１８−２３２、ＦＴＣＤ４９５−５０９（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＦＴＣＤ２６２−２７６、ＦＴＣＤ３００−３１４、ＦＴＣＤ２５９−２７３（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＦＴＣＤ４９０−５０４、ＦＴＣＤ３８９−４０３、ＦＴＣＤ２９５−３０９（ＤＲＢ５＊０１０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＦＴＣＤ２７１−２８５、ＦＴＣＤ４９８−５１２及びＦＴＣＤ３０１−３１５からなる群から選択される。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＭＰＯ３２２−３３６、ＭＰＯ７１４−７２８、ＭＰＯ６１７−６３１（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＭＰＯ５０４−５１８、ＭＰＯ４６２−４７６、ＭＰＯ６１７−６３１（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＭＰＯ４４４−４５８、ＭＰＯ６８９−７０３、ＭＰＯ２４８−２６２（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＭＰＯ５１１−５２５、ＭＰＯ９７−１１１、ＭＰＯ６１６−６３０（ＤＲＢ５＊０１０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、複合体は、ナノ粒子コアにカップリングされている第２の複数の抗原−主要組織適合複合体（ＭＨＣ）をさらに含み、第２の複数のそれぞれの抗原−ＭＨＣは、抗原を含む。ある実施形態において、第２の複数の抗原−主要組織適合複合体（ＭＨＣ）の抗原は、第２のユビキタス自己抗原である。ある実施形態において、第２のユビキタス自己抗原は、定常状態において細胞内区画中又は上に存在するタンパク質に由来するポリペプチドを含む。ある実施形態において、細胞内区画は、サイトゾル、ミトコンドリア、ゴルジ装置、小胞体、核又は細胞膜である。ある実施形態において、細胞内区画は、ミトコンドリアである。ある実施形態において、細胞内区画は、ミトコンドリアである。ある実施形態において、第２のユビキタス自己抗原は、ＤＲＢ３＊０２０２についてＰＤＣ−Ｅ２３５３−３６７、ＰＤＣ−Ｅ２７２−８６及びＰＤＣ−Ｅ２４２２−４３６；ＤＲＢ５＊０１０１についてＰＤＣ−Ｅ２３５３−３６７、ＰＤＣ−Ｅ２８０−９４及びＰＤＣ−Ｅ２５３５−５４９；ＤＲＢ４＊０１０１についてＰＤＣ−Ｅ２６２９−６４８、ＰＤＣ−Ｅ２１２２−１３５及びＰＤＣ−Ｅ２２４９−２６３；並びにＤＲＢ１＊０８０１についてＰＤＣ−Ｅ２２４９−２６３からなる群から選択される。ある実施形態において、第２のユビキタス自己抗原は、ＰＤＣ−Ｅ２４２２−４３６及びＰＤＣ−Ｅ２８０−９４からなる群から選択される。ある実施形態において、第２のユビキタス自己抗原は、ＣＹＰ２Ｄ６２８４−２９８、ＣＹＰ２Ｄ６２８９−３０３、ＣＹＰ２Ｄ６３１８−３３２、ＣＹＰ２Ｄ６３１３−３３２、ＣＹＰ２Ｄ６３９３−４１２、ＣＹＰ２Ｄ６１９２−２０６、ＣＹＰ２Ｄ６５−１９、ＣＹＰ２Ｄ６２９３−３０７（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＣＹＰ２Ｄ６２１９−２３３、ＣＹＰ２Ｄ６２３７−２５１、ＣＹＰ２Ｄ６１５−２９（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＣＹＰ２Ｄ６２３５−２４９、ＣＹＰ２Ｄ６３１７−３３１、ＣＹＰ２Ｄ６２９３−３０７（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＣＹＰ２Ｄ６４２８−４４２、ＣＹＰ２Ｄ６２３７−２５１、ＣＹＰ２Ｄ６１４−２８（ＤＲＢ５＊０１０１について）；ＣＹＰ２Ｄ６１９９−２１３、ＣＹＰ２Ｄ６４５０−４６４、ＣＹＰ２Ｄ６３０１−３１５（ＤＲＢ１＊０４０１について）；ＣＹＰ２Ｄ６４５２−４６６、ＣＹＰ２Ｄ６５９−７３、ＣＹＰ２Ｄ６１３０−１４４、ＣＹＰ２Ｄ６１９３−２１２、ＣＹＰ２Ｄ６３０５−３２４、ＣＹＰ２Ｄ６１５−２９（ＤＲＢ１＊０７０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、第２のユビキタス自己抗原は、ＡＣＴＢ２０２−２１６、ＡＣＴＢ１７０−１８４、ＡＣＴＢ２４５−２５９、（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＡＣＴＢ１８７−２０１、ＡＣＴＢ１７２−１８６、ＡＣＴＢ１３１−１４５（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＡＣＴＢ１３１−１４５、ＡＣＴＢ１７１−１８５、ＡＣＴＢ１２９−１４３（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＡＣＴＢ１６４−１７８、ＡＣＴＢ２５−３９、ＡＣＴＢ３２３−３３７（ＤＲＢ５＊０１０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、第２のユビキタス自己抗原は、ＡＣＴＢ１４６−１６０、ＡＣＴＢ１８−３２及びＡＣＴＢ１
７１−１８５からなる群から選択される。ある実施形態において、第２のユビキタス自己抗原は、ＳＬＡ３３４−３４８、ＳＬＡ１９６−２１０、ＳＬＡ１１５−１２９、ＳＬＡ３７３−３８６、ＳＬＡ１８６−１９７（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＳＬＡ３４２−２５６、ＳＬＡ１１０−１２４、ＳＬＡ２９９−３１３（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＳＬＡ４９−６３、ＳＬＡ２６０−２７４、ＳＬＡ１１９−１３３（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＳＬＡ８６−１００、ＳＬＡ２６−４０、ＳＬＡ３３１−３４５（ＤＲＢ５＊０１０１について）；ＳＬＡ３１７−３３１、ＳＬＡ１７１−１８５、ＳＬＡ４１７−４３１（ＤＲＢ１＊０４０１について）；ＳＬＡ３５９−３７３、ＳＬＡ２１５−２２９、ＳＬＡ１１１−１２５（ＤＲＢ１＊０７０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、第２のユビキタス自己抗原は、ＦＴＣＤ４３９−４５３、ＦＴＣＤ３８１−３９５、ＦＴＣＤ２９７−３１１（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＦＴＣＤ５２５−５３９、ＦＴＣＤ２１８−２３２、ＦＴＣＤ４９５−５０９（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＦＴＣＤ２６２−２７６、ＦＴＣＤ３００−３１４、ＦＴＣＤ２５９−２７３（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＦＴＣＤ４９０−５０４、ＦＴＣＤ３８９−４０３、ＦＴＣＤ２９５−３０９（ＤＲＢ５＊０１０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、第２のユビキタス自己抗原は、ＦＴＣＤ２７１−２８５、ＦＴＣＤ４９８−５１２及びＦＴＣＤ３０１−３１５からなる群から選択される。ある実施形態において、第２のユビキタス自己抗原は、ＭＰＯ３２２−３３６、ＭＰＯ７１４−７２８、ＭＰＯ６１７−６３１（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＭＰＯ５０４−５１８、ＭＰＯ４６２−４７６、ＭＰＯ６１７−６３１（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＭＰＯ４４４−４５８、ＭＰＯ６８９−７０３、ＭＰＯ２４８−２６２（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＭＰＯ５１１−５２５、ＭＰＯ９７−１１１、ＭＰＯ６１６−６３０（ＤＲＢ５＊０１０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、組成物は、薬学的に許容可能な安定剤、賦形剤、希釈剤又はそれらの組合せをさらに含む。ある実施形態において、組成物は、静脈内投与のために配合される。ある実施形態において、組成物は、自己免疫性又は炎症性疾患を治療する方法における使用のためのものである。ある実施形態において、組成物は、自己免疫性又は炎症性疾患を治療するための医薬品の製造における使用のためのものである。ある実施形態において、自己免疫性又は炎症性疾患は、Ｉ型糖尿病、多発性硬化症、再発寛解型多発性硬化症、天疱瘡、落葉状天疱瘡、尋常性天疱瘡、視神経脊髄炎スペクトラム障害、関節リウマチ、骨関節炎、乾癬性関節炎、炎症性腸疾患、クローン病、セリアック病、アレルギー性喘息、全身性エリテマトーデス、アテローム性動脈硬化症、慢性閉塞性肺疾患、肺気腫、乾癬、ブドウ膜炎、シェーグレン症候群、強皮症、抗リン脂質症候群、ＡＮＣＡ関連血管炎、原発性胆汁性肝硬変、自己免疫性肝炎、原発性硬化性胆管炎及びスティッフマン症候群からなる群から選択される。ある実施形態において、自己免疫性又は炎症性疾患は、多発性硬化症である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ミエリン塩基性タンパク質、ミエリン関連糖タンパク質、ミエリンオリゴデンドロサイトタンパク質（ＭＯＧ）、プロテオリピドタンパク質、オリゴデンドロサイトミエリンオリゴタンパク質、ミエリン関連オリゴデンドロサイト塩基性タンパク質、オリゴデンドロサイト特異的タンパク質、熱ショックタンパク質、オリゴデンドロサイト特異的タンパク質、ＮＯＧＯ  Ａ、糖タンパク質Ｐｏ、末梢ミエリンタンパク質２２又は２’３’−環状ヌクレオチド３’−ホスホジエステラーゼに由来するポリペプチドでない。ある実施形態において、自己免疫性又は炎症性疾患は、Ｉ型糖尿病である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、プレプロインスリン、プロインスリン、膵島特異的グルコース−６−ホスファターゼ（ＩＧＲＰ）、グルタミン酸デカルボキシラーゼ（ＧＡＤ）、膵島細胞自己抗原−２（ＩＣＡ２）又はインスリンに由来するポリペプチドである。
【０００５】
本明細書に記載のある態様において、自己免疫性又は炎症性疾患を治療する方法であって、個体に、治療有効量の、組成物であって、（ａ）複数の抗原−主要組織適合複合体（ＭＨＣ）であって、複数のそれぞれの抗原−ＭＨＣは、組織特異的抗原でなく、ＭＨＣ分
子の結合溝と会合されているユビキタス自己抗原を含む、複数の抗原−主要組織適合複合体（ＭＨＣ）；及び（ｂ）１〜１００ナノメートルの直径を有するナノ粒子コアを含み；抗原−ＭＨＣは、ナノ粒子コアにカップリングされている、組成物を投与することを含む方法が存在する。ある実施形態において、ＭＨＣ分子は、ＭＨＣクラスＩＩ分子である。ある実施形態において、ナノ粒子コアは、金属又は金属酸化物である。ある実施形態において、金属は、鉄である。ある実施形態において、金属酸化物は、酸化鉄である。ある実施形態において、直径は、約５ナノメートル〜約５０ナノメートルである。ある実施形態において、直径は、約５ナノメートル〜約２５ナノメートルである。ある実施形態において、複数の抗原−ＭＨＣは、ナノ粒子コアに、少なくとも１０：１の抗原−ＭＨＣとナノ粒子コアとの比においてカップリングされている。ある実施形態において、複数の抗原−ＭＨＣは、ナノ粒子コアに、１５０：１以下の抗原−ＭＨＣとナノ粒子コアとの比においてカップリングされている。ある実施形態において、複数の抗原−ＭＨＣは、ナノ粒子コアに、１００ｎｍ２のナノ粒子コア表面積当たり約０．４〜約１３個の抗原−ＭＨＣの密度においてカップリングされている。ある実施形態において、抗原−ＭＨＣは、ナノ粒子コアに共有結合によりカップリングされている。ある実施形態において、抗原−ＭＨＣは、ナノ粒子コアに、約５キロダルトン未満の質量を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）リンカーによって共有結合によりカップリングされている。ある実施形態において、ナノ粒子コアは、生体適合性コーティングをさらに含む。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、定常状態において細胞内区画中又は上に存在するタンパク質に由来するポリペプチドを含む。ある実施形態において、細胞内区画は、サイトゾル、ミトコンドリア、ゴルジ装置、小胞体、核又は細胞膜である。ある実施形態において、細胞内区画は、ミトコンドリアである。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ複合体−Ｅ２構成成分（ＰＤＣ−Ｅ２）である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、シトクロムＰ４５０  ２Ｄ６（ＣＹＰ２Ｄ６）である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、可溶性肝抗原（ＳＬＡ）である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、アクチン（ＡＣＴＢ）である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ホルムイミドイルトランスフェラーゼ−シクロデアミナーゼ（ＦＴＣＤ）である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）である。ある実施形態において、細胞内区画は、ミトコンドリアである。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＤＲＢ３＊０２０２についてＰＤＣ−Ｅ２３５３−３６７、ＰＤＣ−Ｅ２７２−８６及びＰＤＣ−Ｅ２４２２−４３６；ＤＲＢ５＊０１０１についてＰＤＣ−Ｅ２３５３−３６７、ＰＤＣ−Ｅ２８０−９４及びＰＤＣ−Ｅ２５３５−５４９；ＤＲＢ４＊０１０１についてＰＤＣ−Ｅ２６２９−６４８、ＰＤＣ−Ｅ２１２２−１３５及びＰＤＣ−Ｅ２２４９−２６３；並びにＤＲＢ１＊０８０１についてＰＤＣ−Ｅ���２４９−２６３からなる群から選択される。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＰＤＣ−Ｅ２４２２−４３６及びＰＤＣ−Ｅ２８０−９４からなる群から選択される。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＣＹＰ２Ｄ６２８４−２９８、ＣＹＰ２Ｄ６２８９−３０３、ＣＹＰ２Ｄ６３１８−３３２、ＣＹＰ２Ｄ６３１３−３３２、ＣＹＰ２Ｄ６３９３−４１２、ＣＹＰ２Ｄ６１９２−２０６、ＣＹＰ２Ｄ６５−１９、ＣＹＰ２Ｄ６２９３−３０７（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＣＹＰ２Ｄ６２１９−２３３、ＣＹＰ２Ｄ６２３７−２５１、ＣＹＰ２Ｄ６１５−２９（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＣＹＰ２Ｄ６２３５−２４９、ＣＹＰ２Ｄ６３１７−３３１、ＣＹＰ２Ｄ６２９３−３０７（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＣＹＰ２Ｄ６４２８−４４２、ＣＹＰ２Ｄ６２３７−２５１、ＣＹＰ２Ｄ６１４−２８（ＤＲＢ５＊０１０１について）；ＣＹＰ２Ｄ６１９９−２１３、ＣＹＰ２Ｄ６４５０−４６４、ＣＹＰ２Ｄ６３０１−３１５（ＤＲＢ１＊０４０１について）；ＣＹＰ２Ｄ６４５２−４６６、ＣＹＰ２Ｄ６５９−７３、ＣＹＰ２Ｄ６１３０−１４４、ＣＹＰ２Ｄ６１９３−２１２、ＣＹＰ２Ｄ６３０５−３２４、ＣＹＰ２Ｄ６１５−２９（ＤＲＢ１＊０７０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＡＣＴＢ２０２−２１６、ＡＣＴＢ１７０−１８４、ＡＣＴＢ２４５−２５９、（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＡＣ
ＴＢ１８７−２０１、ＡＣＴＢ１７２−１８６、ＡＣＴＢ１３１−１４５（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＡＣＴＢ１３１−１４５、ＡＣＴＢ１７１−１８５、ＡＣＴＢ１２９−１４３（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＡＣＴＢ１６４−１７８、ＡＣＴＢ２５−３９、ＡＣＴＢ３２３−３３７（ＤＲＢ５＊０１０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＡＣＴＢ１４６−１６０、ＡＣＴＢ１８−３２及びＡＣＴＢ１７１−１８５からなる群から選択される。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＳＬＡ３３４−３４８、ＳＬＡ１９６−２１０、ＳＬＡ１１５−１２９、ＳＬＡ３７３−３８６、ＳＬＡ１８６−１９７（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＳＬＡ３４２−２５６、ＳＬＡ１１０−１２４、ＳＬＡ２９９−３１３（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＳＬＡ４９−６３、ＳＬＡ２６０−２７４、ＳＬＡ１１９−１３３（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＳＬＡ８６−１００、ＳＬＡ２６−４０、ＳＬＡ３３１−３４５（ＤＲＢ５＊０１０１）；ＳＬＡ３１７−３３１、ＳＬＡ１７１−１８５、ＳＬＡ４１７−４３１（ＤＲＢ１＊０４０１について）；ＳＬＡ３５９−３７３、ＳＬＡ２１５−２２９、ＳＬＡ１１１−１２５（ＤＲＢ１＊０７０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＦＴＣＤ４３９−４５３、ＦＴＣＤ３８１−３９５、ＦＴＣＤ２９７−３１１（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＦＴＣＤ５２５−５３９、ＦＴＣＤ２１８−２３２、ＦＴＣＤ４９５−５０９（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＦＴＣＤ２６２−２７６、ＦＴＣＤ３００−３１４、ＦＴＣＤ２５９−２７３（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＦＴＣＤ４９０−５０４、ＦＴＣＤ３８９−４０３、ＦＴＣＤ２９５−３０９（ＤＲＢ５＊０１０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＦＴＣＤ２７１−２８５、ＦＴＣＤ４９８−５１２及びＦＴＣＤ３０１−３１５からなる群から選択される。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＭＰＯ３２２−３３６、ＭＰＯ７１４−７２８、ＭＰＯ６１７−６３１（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＭＰＯ５０４−５１８、ＭＰＯ４６２−４７６、ＭＰＯ６１７−６３１（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＭＰＯ４４４−４５８、ＭＰＯ６８９−７０３、ＭＰＯ２４８−２６２（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＭＰＯ５１１−５２５、ＭＰＯ９７−１１１、ＭＰＯ６１６−６３０（ＤＲＢ５＊０１０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、複合体は、ナノ粒子コアにカップリングされている第２の複数の抗原−主要組織適合複合体（ＭＨＣ）をさらに含み、第２の複数のそれぞれの抗原−ＭＨＣは、抗原を含む。ある実施形態において、第２の複数の抗原−主要組織適合複合体（ＭＨＣ）の抗原は、第２のユビキタス自己抗原である。ある実施形態において、第２のユビキタス自己抗原は、定常状態において細胞内区画中又は上に存在するタンパク質に由来するポリペプチドを含む。ある実施形態において、細胞内区画は、サイトゾル、ミトコンドリア、ゴルジ装置、小胞体、核又は細胞膜である。ある実施形態において、細胞内区画は、ミトコンドリアである。ある実施形態において、細胞内区画は、ミトコンドリアである。ある実施形態において、第２のユビキタス自己抗原は、ＤＲＢ３＊０２０２についてＰＤＣ−Ｅ２３５３−３６７、ＰＤＣ−Ｅ２７２−８６及びＰＤＣ−Ｅ２４２２−４３６；ＤＲＢ５＊０１０１についてＰＤＣ−Ｅ２３５３−３６７、ＰＤＣ−Ｅ２８０−９４及びＰＤＣ−Ｅ２５３５−５４９；ＤＲＢ４＊０１０１についてＰＤＣ−Ｅ２６２９−６４８、ＰＤＣ−Ｅ２１２２−１３５及びＰＤＣ−Ｅ２２４９−２６３；並びにＤＲＢ１＊０８０１についてＰＤＣ−Ｅ２２４９−２６３からなる群から選択される。ある実施形態において、第２のユビキタス自己抗原は、ＰＤＣ−Ｅ２４２２−４３６及びＰＤＣ−Ｅ２８０−９４からなる群から選択される。ある実施形態において、第２のユビキタス自己抗原は、ＣＹＰ２Ｄ６２８４−２９８、ＣＹＰ２Ｄ６２８９−３０３、ＣＹＰ２Ｄ６３１８−３３２、ＣＹＰ２Ｄ６３１３−３３２、ＣＹＰ２Ｄ６３９３−４１２、ＣＹＰ２Ｄ６１９２−２０６、ＣＹＰ２Ｄ６５−１９、ＣＹＰ２Ｄ６２９３−３０７（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＣＹＰ２Ｄ６２１９−２３３、ＣＹＰ２Ｄ６２３７−２５１、ＣＹＰ２Ｄ６１５−２９（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＣＹＰ２Ｄ６２３５−２４９、ＣＹＰ２Ｄ６３１７−３３１、ＣＹＰ２Ｄ６２９３−３０７（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＣＹＰ２Ｄ６４２８−４４２、ＣＹＰ２Ｄ６２３７−
２５１、ＣＹＰ２Ｄ６１４−２８（ＤＲＢ５＊０１０１について）；ＣＹＰ２Ｄ６１９９−２１３、ＣＹＰ２Ｄ６４５０−４６４、ＣＹＰ２Ｄ６３０１−３１５（ＤＲＢ１＊０４０１について）；ＣＹＰ２Ｄ６４５２−４６６、ＣＹＰ２Ｄ６５９−７３、ＣＹＰ２Ｄ６１３０−１４４、ＣＹＰ２Ｄ６１９３−２１２、ＣＹＰ２Ｄ６３０５−３２４、ＣＹＰ２Ｄ６１５−２９（ＤＲＢ１＊０７０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、第２のユビキタス自己抗原は、ＡＣＴＢ２０２−２１６、ＡＣＴＢ１７０−１８４、ＡＣＴＢ２４５−２５９、（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＡＣＴＢ１８７−２０１、ＡＣＴＢ１７２−１８６、ＡＣＴＢ１３１−１４５（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＡＣＴＢ１３１−１４５、ＡＣＴＢ１７１−１８５、ＡＣＴＢ１２９−１４３（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＡＣＴＢ１６４−１７８、ＡＣＴＢ２５−３９、ＡＣＴＢ３２３−３３７（ＤＲＢ５＊０１０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、第２のユビキタス自己抗原は、ＡＣＴＢ１４６−１６０、ＡＣＴＢ１８−３２及びＡＣＴＢ１７１−１８５からなる群から選択される。ある実施形態において、第２のユビキタス自己抗原は、ＳＬＡ３３４−３４８、ＳＬＡ１９６−２１０、ＳＬＡ１１５−１２９、ＳＬＡ３７３−３８６、ＳＬＡ１８６−１９７（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＳＬＡ３４２−２５６、ＳＬＡ１１０−１２４、ＳＬＡ２９９−３１３（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＳＬＡ４９−６３、ＳＬＡ２６０−２７４、ＳＬＡ１１９−１３３（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＳＬＡ８６−１００、ＳＬＡ２６−４０、ＳＬＡ３３１−３４５（ＤＲＢ５＊０１０１について）；ＳＬＡ３１７−３３１、ＳＬＡ１７１−１８５、ＳＬＡ４１７−４３１（ＤＲＢ１＊０４０１について）；ＳＬＡ３５９−３７３、ＳＬＡ２１５−２２９、ＳＬＡ１１１−１２５（ＤＲＢ１＊０７０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、第２のユビキタス自己抗原は、ＦＴＣＤ４３９−４５３、ＦＴＣＤ３８１−３９５、ＦＴＣＤ２９７−３１１（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＦＴＣＤ５２５−５３９、ＦＴＣＤ２１８−２３２、ＦＴＣＤ４９５−５０９（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＦＴＣＤ２６２−２７６、ＦＴＣＤ３００−３１４、ＦＴＣＤ２５９−２７３（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＦＴＣＤ４９０−５０４、ＦＴＣＤ３８９−４０３、ＦＴＣＤ２９５−３０９（ＤＲＢ５＊０１０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、第２のユビキタス自己抗原は、ＦＴＣＤ２７１−２８５、ＦＴＣＤ４９８−５１２及びＦＴＣＤ３０１−３１５からなる群から選択される。ある実施形態において、第２のユビキタス自己抗原は、ＭＰＯ３２２−３３６、ＭＰＯ７１４−７２８、ＭＰＯ６１７−６３１（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＭＰＯ５０４−５１８、ＭＰＯ４６２−４７６、ＭＰＯ６１７−６３１（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＭＰＯ４４４−４５８、ＭＰＯ６８９−７０３、ＭＰＯ２４８−２６２（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＭＰＯ５１１−５２５、ＭＰＯ９７−１１１、ＭＰＯ６１６−６３０（ＤＲＢ５＊０１０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、組成物は、薬学的に許容可能な安定剤、賦形剤、希釈剤又はそれらの組合せをさらに含む。ある実施形態において、組成物は、静脈内投与のために配合される。ある実施形態において、自己免疫性又は炎症性疾患は、Ｉ型糖尿病、多発性硬化症、再発寛解型多発性硬化症、天疱瘡、落葉状天疱瘡、尋常性天疱瘡、視神経脊髄炎スペクトラム障害、関節リウマチ、骨関節炎、乾癬性関節炎、炎症性腸疾患、クローン病、セリアック病、アレルギー性喘息、全身性エリテマトーデス、アテローム性動脈硬化症、慢性閉塞性肺疾患、肺気腫、乾癬、ブドウ膜炎、シェーグレン症候群、強皮症、抗リン脂質症候群、ＡＮＣＡ関連血管炎、原発性胆汁性肝硬変、自己免疫性肝炎、原発性硬化性胆管炎及びスティッフマン症候群からなる群から選択される。ある実施形態において、自己免疫性又は炎症性疾患は、多発性硬化症である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ミエリン塩基性タンパク質、ミエリン関連糖タンパク質、ミエリンオリゴデンドロサイトタンパク質（ＭＯＧ）、プロテオリピドタンパク質、オリゴデンドロサイトミエリンオリゴタンパク質、ミエリン関連オリゴデンドロサイト塩基性タンパク質、オリゴデンドロサイト特異的タンパク質、熱ショックタンパク質、オリゴデンドロサイト特異的タンパク質、ＮＯＧＯ  Ａ、糖タンパク質Ｐｏ、末梢ミエリンタンパク質２２又は２’３’−環状ヌクレオチド３
’−ホスホジエステラーゼに由来するポリペプチドでない。ある実施形態において、自己免疫性又は炎症性疾患は、Ｉ型糖尿病である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、プレプロインスリン、プロインスリン、膵島特異的グルコース−６−ホスファターゼ（ＩＧＲＰ）、グルタミン酸デカルボキシラーゼ（ＧＡＤ）、膵島細胞自己抗原−２（ＩＣＡ２）又はインスリンに由来するポリペプチドである。
【０００６】
本明細書に記載の別の態様において、多発性硬化症を治療する方法であって、個体に、治療有効量の、組成物であって、（ａ）複数の抗原−主要組織適合複合体（ＭＨＣ）であって、複数のそれぞれの抗原−ＭＨＣは、多発性硬化症特異的抗原でなく、ＭＨＣ分子の結合溝と会合されているユビキタス自己抗原を含む、複数の抗原−主要組織適合複合体（ＭＨＣ）；及び（ａ）１〜１００ナノメートルの直径を有するナノ粒子コアを含み；抗原−ＭＨＣは、ナノ粒子コアにカップリングされている、組成物を投与することを含む方法が存在する。ある実施形態において、ＭＨＣ分子は、ＭＨＣクラスＩＩ分子である。ある実施形態において、ナノ粒子コアは、金属又は金属酸化物である。ある実施形態において、金属は、鉄である。ある実施形態において、金属酸化物は、酸化鉄である。ある実施形態において、直径は、約５ナノメートル〜約５０ナノメートルである。ある実施形態において、直径は、約５ナノメートル〜約２５ナノメートルである。ある実施形態において、複数の抗原−ＭＨＣは、ナノ粒子コアに、少なくとも１０：１の抗原−ＭＨＣとナノ粒子コアとの比においてカップリングされている。ある実施形態において、複数の抗原−ＭＨＣは、ナノ粒子コアに、１５０：１以下の抗原−ＭＨＣとナノ粒子コアとの比においてカップリングされている。ある実施形態において、複数の抗原−ＭＨＣは、ナノ粒子コアに、１００ｎｍ２のナノ粒子コア表面積当たり約０．４〜約１３個の抗原−ＭＨＣの密度においてカップリングされている。ある実施形態において、抗原−ＭＨＣは、ナノ粒子コアに共有結合によりカップリングされている。ある実施形態において、抗原−ＭＨＣは、ナノ粒子コアに、約５キロダルトン未満の質量を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）リンカーによって共有結合によりカップリングされている。ある実施形態において、ナノ粒子コアは、生体適合性コーティングをさらに含む。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、定常状態において細胞内区画中又は上に存在するタンパク質に由来するポリペプチドを含む。ある実施形態において、細胞内区画は、サイトゾルである。ある実施形態において、細胞内区画は、ミトコンドリアである。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ複合体−Ｅ２構成成分（ＰＤＣ−Ｅ２）である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、シトクロムＰ４５０  ２Ｄ６（ＣＹＰ２Ｄ６）である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、可溶性肝抗原（ＳＬＡ）である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、アクチン（ＡＣＴＢ）である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ホルムイミドイルトランスフェラーゼ−シクロデアミナーゼ（ＦＴＣＤ）である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）である。ある実施形態において、細胞内区画は、ミトコンドリアである。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＤＲＢ３＊０２０２についてＰＤＣ−Ｅ２３５３−３６７、ＰＤＣ−Ｅ２７２−８６及びＰＤＣ−Ｅ２４２２−４３６；ＤＲＢ５＊０１０１についてＰＤＣ−Ｅ２３５３−３６７、ＰＤＣ−Ｅ２８０−９４及���ＰＤＣ−Ｅ２５３５−５４９；ＤＲＢ４＊０１０１についてＰＤＣ−Ｅ２６２９−６４８、ＰＤＣ−Ｅ２１２２−１３５及びＰＤＣ−Ｅ２２４９−２６３；並びにＤＲＢ１＊０８０１についてＰＤＣ−Ｅ２２４９−２６３からなる群から選択される。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＰＤＣ−Ｅ２４２２−４３６及びＰＤＣ−Ｅ２８０−９４からなる群から選択される。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＣＹＰ２Ｄ６２８４−２９８、ＣＹＰ２Ｄ６２８９−３０３、ＣＹＰ２Ｄ６３１８−３３２、ＣＹＰ２Ｄ６３１３−３３２、ＣＹＰ２Ｄ６３９３−４１２、ＣＹＰ２Ｄ６１９２−２０６、ＣＹＰ２Ｄ６５−１９、ＣＹＰ２Ｄ６２９３−３０７（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＣＹＰ２Ｄ６２１９−２３３、ＣＹＰ２Ｄ６２３７−２５１、ＣＹＰ２Ｄ６１５−２９（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＣＹＰ２Ｄ６２３５−２４９、ＣＹＰ２Ｄ
６３１７−３３１、ＣＹＰ２Ｄ６２９３−３０７（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＣＹＰ２Ｄ６４２８−４４２、ＣＹＰ２Ｄ６２３７−２５１、ＣＹＰ２Ｄ６１４−２８（ＤＲＢ５＊０１０１について）；ＣＹＰ２Ｄ６１９９−２１３、ＣＹＰ２Ｄ６４５０−４６４、ＣＹＰ２Ｄ６３０１−３１５（ＤＲＢ１＊０４０１について）；ＣＹＰ２Ｄ６４５２−４６６、ＣＹＰ２Ｄ６５９−７３、ＣＹＰ２Ｄ６１３０−１４４、ＣＹＰ２Ｄ６１９３−２１２、ＣＹＰ２Ｄ６３０５−３２４、ＣＹＰ２Ｄ６１５−２９（ＤＲＢ１＊０７０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＡＣＴＢ２０２−２１６、ＡＣＴＢ１７０−１８４、ＡＣＴＢ２４５−２５９、（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＡＣＴＢ１８７−２０１、ＡＣＴＢ１７２−１８６、ＡＣＴＢ１３１−１４５（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＡＣＴＢ１３１−１４５、ＡＣＴＢ１７１−１８５、ＡＣＴＢ１２９−１４３（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＡＣＴＢ１６４−１７８、ＡＣＴＢ２５−３９、ＡＣＴＢ３２３−３３７（ＤＲＢ５＊０１０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＡＣＴＢ１４６−１６０、ＡＣＴＢ１８−３２及びＡＣＴＢ１７１−１８５からなる群から選択される。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＳＬＡ３３４−３４８、ＳＬＡ１９６−２１０、ＳＬＡ１１５−１２９、ＳＬＡ３７３−３８６、ＳＬＡ１８６−１９７（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＳＬＡ３４２−２５６、ＳＬＡ１１０−１２４、ＳＬＡ２９９−３１３（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＳＬＡ４９−６３、ＳＬＡ２６０−２７４、ＳＬＡ１１９−１３３（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＳＬＡ８６−１００、ＳＬＡ２６−４０、ＳＬＡ３３１−３４５（ＤＲＢ５＊０１０１について）；ＳＬＡ３１７−３３１、ＳＬＡ１７１−１８５、ＳＬＡ４１７−４３１（ＤＲＢ１＊０４０１について）；ＳＬＡ３５９−３７３、ＳＬＡ２１５−２２９、ＳＬＡ１１１−１２５（ＤＲＢ１＊０７０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＦＴＣＤ４３９−４５３、ＦＴＣＤ３８１−３９５、ＦＴＣＤ２９７−３１１（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＦＴＣＤ５２５−５３９、ＦＴＣＤ２１８−２３２、ＦＴＣＤ４９５−５０９（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＦＴＣＤ２６２−２７６、ＦＴＣＤ３００−３１４、ＦＴＣＤ２５９−２７３（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＦＴＣＤ４９０−５０４、ＦＴＣＤ３８９−４０３、ＦＴＣＤ２９５−３０９（ＤＲＢ５＊０１０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＦＴＣＤ２７１−２８５、ＦＴＣＤ４９８−５１２及びＦＴＣＤ３０１−３１５からなる群から選択される。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＭＰＯ３２２−３３６、ＭＰＯ７１４−７２８、ＭＰＯ６１７−６３１（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＭＰＯ５０４−５１８、ＭＰＯ４６２−４７６、ＭＰＯ６１７−６３１（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＭＰＯ４４４−４５８、ＭＰＯ６８９−７０３、ＭＰＯ２４８−２６２（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＭＰＯ５１１−５２５、ＭＰＯ９７−１１１、ＭＰＯ６１６−６３０（ＤＲＢ５＊０１０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、複合体は、ナノ粒子コアにカップリングされている第２の複数の抗原−主要組織適合複合体（ＭＨＣ）をさらに含み、第２の複数のそれぞれの抗原−ＭＨＣは、抗原を含む。ある実施形態において、第２の複数の抗原−主要組織適合複合体（ＭＨＣ）の抗原は、第２のユビキタス自己抗原である。ある実施形態において、第２のユビキタス自己抗原は、定常状態において細胞内区画中又は上に存在するタンパク質に由来するポリペプチドを含む。ある実施形態において、細胞内区画は、サイトゾルである。ある実施形態において、細胞内区画は、ミトコンドリアである。ある実施形態において、第２のユビキタス自己抗原は、ＤＲＢ３＊０２０２についてＰＤＣ−Ｅ２３５３−３６７、ＰＤＣ−Ｅ２７２−８６及びＰＤＣ−Ｅ２４２２−４３６；ＤＲＢ５＊０１０１についてＰＤＣ−Ｅ２３５３−３６７、ＰＤＣ−Ｅ２８０−９４及びＰＤＣ−Ｅ２５３５−５４９；ＤＲＢ４＊０１０１についてＰＤＣ−Ｅ２６２９−６４８、ＰＤＣ−Ｅ２１２２−１３５及びＰＤＣ−Ｅ２２４９−２６３；並びにＤＲＢ１＊０８０１についてＰＤＣ−Ｅ２２４９−２６３からなる群から選択される。ある実施形態において、第２のユビキタス自己抗原は、ＰＤＣ−Ｅ２４２２−４３６及びＰＤＣ−Ｅ２８０−９４からなる群から選択される。ある
実施形態において、第２のユビキタス自己抗原は、ＣＹＰ２Ｄ６２８４−２９８、ＣＹＰ２Ｄ６２８９−３０３、ＣＹＰ２Ｄ６３１８−３３２、ＣＹＰ２Ｄ６３１３−３３２、ＣＹＰ２Ｄ６３９３−４１２、ＣＹＰ２Ｄ６１９２−２０６、ＣＹＰ２Ｄ６５−１９、ＣＹＰ２Ｄ６２９３−３０７（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＣＹＰ２Ｄ６２１９−２３３、ＣＹＰ２Ｄ６２３７−２５１、ＣＹＰ２Ｄ６１５−２９（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＣＹＰ２Ｄ６２３５−２４９、ＣＹＰ２Ｄ６３１７−３３１、ＣＹＰ２Ｄ６２９３−３０７（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＣＹＰ２Ｄ６４２８−４４２、ＣＹＰ２Ｄ６２３７−２５１、ＣＹＰ２Ｄ６１４−２８（ＤＲＢ５＊０１０１について）；ＣＹＰ２Ｄ６１９９−２１３、ＣＹＰ２Ｄ６４５０−４６４、ＣＹＰ２Ｄ６３０１−３１５（ＤＲＢ１＊０４０１について）；ＣＹＰ２Ｄ６４５２−４６６、ＣＹＰ２Ｄ６５９−７３、ＣＹＰ２Ｄ６１３０−１４４、ＣＹＰ２Ｄ６１９３−２１２、ＣＹＰ２Ｄ６３０５−３２４、ＣＹＰ２Ｄ６１５−２９（ＤＲＢ１＊０７０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、第２のユビキタス自己抗原は、ＡＣＴＢ２０２−２１６、ＡＣＴＢ１７０−１８４、ＡＣＴＢ２４５−２５９、（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＡＣＴＢ１８７−２０１、ＡＣＴＢ１７２−１８６、ＡＣＴＢ１３１−１４５（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＡＣＴＢ１３１−１４５、ＡＣＴＢ１７１−１８５、ＡＣＴＢ１２９−１４３（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＡＣＴＢ１６４−１７８、ＡＣＴＢ２５−３９、ＡＣＴＢ３２３−３３７（ＤＲＢ５＊０１０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、第２のユビキタス自己抗原は、ＡＣＴＢ１４６−１６０、ＡＣＴＢ１８−３２及びＡＣＴＢ１７１−１８５からなる群から選択される。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＳＬＡ３３４−３４８、ＳＬＡ１９６−２１０、ＳＬＡ１１５−１２９、ＳＬＡ３７３−３８６、ＳＬＡ１８６−１９７（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＳＬＡ３４２−２５６、ＳＬＡ１１０−１２４、ＳＬＡ２９９−３１３（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＳＬＡ４９−６３、ＳＬＡ２６０−２７４、ＳＬＡ１１９−１３３（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＳＬＡ８６−１００、ＳＬＡ２６−４０、ＳＬＡ３３１−３４５（ＤＲＢ５＊０１０１について）；ＳＬＡ３１７−３３１、ＳＬＡ１７１−１８５、ＳＬＡ４１７−４３１（ＤＲＢ１＊０４０１について）；ＳＬＡ３５９−３７３、ＳＬＡ２１５−２２９、ＳＬＡ１１１−１２５（ＤＲＢ１＊０７０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、第２のユビキタス自己抗原は、ＦＴＣＤ４３９−４５３、ＦＴＣＤ３８１−３９５、ＦＴＣＤ２９７−３１１（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＦＴＣＤ５２５−５３９、ＦＴＣＤ２１８−２３２、ＦＴＣＤ４９５−５０９（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＦＴＣＤ２６２−２７６、ＦＴＣＤ３００−３１４、ＦＴＣＤ２５９−２７３（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＦＴＣＤ４９０−５０４、ＦＴＣＤ３８９−４０３、ＦＴＣＤ２９５−３０９（ＤＲＢ５＊０１０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、第２のユビキタス自己抗原は、ＦＴＣＤ２７１−２８５、ＦＴＣＤ４９８−５１２及びＦＴＣＤ３０１−３１５からなる群から選択される。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＭＰＯ３２２−３３６、ＭＰＯ７１４−７２８、ＭＰＯ６１７−６３１（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＭＰＯ５０４−５１８、ＭＰＯ４６２−４７６、ＭＰＯ６１７−６３１（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＭＰＯ４４４−４５８、ＭＰＯ６８９−７０３、ＭＰＯ２４８−２６２（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＭＰＯ５１１−５２５、ＭＰＯ９７−１１１、ＭＰＯ６１６−６３０（ＤＲＢ５＊０１０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、組成物は、薬学的に許容可能な安定剤、賦形剤、希釈剤又はそれらの組合せをさらに含む。ある実施形態において、組成物は、静脈内投与のために配合される。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ミエリン塩基性タンパク質、ミエリン関連糖タンパク質、ミエリンオリゴデンドロサイトタンパク質（ＭＯＧ）、プロテオリピドタンパク質、オリゴデンドロサイトミエリンオリゴタンパク質、ミエリン関連オリゴデンドロサイト塩基性タンパク質、オリゴデンドロサイト特異的タンパク質、熱ショックタンパク質、オリゴデンドロサイト特異的タンパク質、ＮＯＧＯ  Ａ、糖タンパク質Ｐｏ、末梢ミエリンタンパク質２２又は２’３’−環状ヌクレオチド３’−ホスホジエステラーゼに由来するポリペ
プチドでない。
【０００７】
本明細書に記載の別の態様において、Ｉ型糖尿病を治療する方法であって、個体に、治療有効量の、組成物であって、（ａ）複数の抗原−主要組織適合複合体（ＭＨＣ）であって、複数のそれぞれの抗原−ＭＨＣは、Ｉ型糖尿病特異的抗原でなく、ＭＨＣ分子の結合溝と会合されているユビキタス自己抗原を含む、複数の抗原−主要組織適合複合体（ＭＨＣ）；及び（ｂ）１〜１００ナノメートルの直径を有するナノ粒子コアを含み；複数の抗原−ＭＨＣは、ナノ粒子コアにカップリングされている、組成物を投与することを含む方法が存在する。ある実施形態において、ＭＨＣ分子は、ＭＨＣクラスＩＩ分子である。ある実施形態において、ナノ粒子コアは、金属又は金属酸化物である。ある実施形態において、金属は、鉄である。ある実施形態において、金属酸化物は、酸化鉄である。ある実施形態において、直径は、約５ナノメートル〜約５０ナノメートルである。ある実施形態において、直径は、約５ナノメートル〜約２５ナノメートルである。ある実施形態において、複数の抗原−ＭＨＣは、ナノ粒子コアに、少なくとも１０：１の抗原−ＭＨＣとナノ粒子コアとの比においてカップリングされている。ある実施形態において、複数の抗原−ＭＨＣは、ナノ粒子コアに、１５０：１以下の抗原−ＭＨＣとナノ粒子コアとの比においてカップリングされている。ある実施形態において、複数の抗原−ＭＨＣは、ナノ粒子に、１００ｎｍ２のナノ粒子表面積当たり約０．４〜約１３個の抗原−ＭＨＣの密度においてカップリングされている。ある実施形態において、抗原−ＭＨＣは、ナノ粒子コアに共有結合によりカップリングされている。ある実施形態において、抗原−ＭＨＣは、ナノ粒子コアに、約５キロダルトン未満の質量を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）リンカーによって共有結合によりカップリングされている。ある実施形態において、ナノ粒子コアは、生体適合性コーティングをさらに含む。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、定常状態において細胞内区画中又は上に存在するタンパク質に由来するポリペプチドを含む。ある実施形態において、細胞内区画は、サイトゾルである。ある実施形態において、細胞内区画は、ミトコンドリアである。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ複合体−Ｅ２構成成分（ＰＤＣ−Ｅ２）である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、シトクロムＰ４５０  ２Ｄ６（ＣＹＰ２Ｄ６）である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、可溶性肝抗原（ＳＬＡ）である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、アクチン（ＡＣＴＢ）である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ホルムイミドイルトランスフェラーゼ−シクロデアミナーゼ（ＦＴＣＤ）である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）である。ある実施形態において、細胞内区画は、ミトコンドリアである。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＤＲＢ３＊０２０２についてＰＤＣ−Ｅ２３５３−３６７、ＰＤＣ−Ｅ２７２−８６及びＰＤＣ−Ｅ２４２２−４３６；ＤＲＢ５＊０１０１についてＰＤＣ−Ｅ２３５３−３６７、ＰＤＣ−Ｅ２８０−９４及びＰＤ���−Ｅ２５３５−５４９；ＤＲＢ４＊０１０１についてＰＤＣ−Ｅ２６２９−６４８、ＰＤＣ−Ｅ２１２２−１３５及びＰＤＣ−Ｅ２２４９−２６３；並びにＤＲＢ１＊０８０１についてＰＤＣ−Ｅ２２４９−２６３からなる群から選択される。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＰＤＣ−Ｅ２４２２−４３６及びＰＤＣ−Ｅ２８０−９４からなる群から選択される。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＣＹＰ２Ｄ６２８４−２９８、ＣＹＰ２Ｄ６２８９−３０３、ＣＹＰ２Ｄ６３１８−３３２、ＣＹＰ２Ｄ６３１３−３３２、ＣＹＰ２Ｄ６３９３−４１２、ＣＹＰ２Ｄ６１９２−２０６、ＣＹＰ２Ｄ６５−１９、ＣＹＰ２Ｄ６２９３−３０７（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＣＹＰ２Ｄ６２１９−２３３、ＣＹＰ２Ｄ６２３７−２５１、ＣＹＰ２Ｄ６１５−２９（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＣＹＰ２Ｄ６２３５−２４９、ＣＹＰ２Ｄ６３１７−３３１、ＣＹＰ２Ｄ６２９３−３０７（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＣＹＰ２Ｄ６４２８−４４２、ＣＹＰ２Ｄ６２３７−２５１、ＣＹＰ２Ｄ６１４−２８（ＤＲＢ５＊０１０１について）；ＣＹＰ２Ｄ６１９９−２１３、ＣＹＰ２Ｄ６４５０−４６４、ＣＹＰ２Ｄ６３０１−３１５（ＤＲＢ１＊０４０１について）；ＣＹＰ２Ｄ６４５２−４６６
、ＣＹＰ２Ｄ６５９−７３、ＣＹＰ２Ｄ６１３０−１４４、ＣＹＰ２Ｄ６１９３−２１２、ＣＹＰ２Ｄ６３０５−３２４、ＣＹＰ２Ｄ６１５−２９（ＤＲＢ１＊０７０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＡＣＴＢ２０２−２１６、ＡＣＴＢ１７０−１８４、ＡＣＴＢ２４５−２５９、（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＡＣＴＢ１８７−２０１、ＡＣＴＢ１７２−１８６、ＡＣＴＢ１３１−１４５（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＡＣＴＢ１３１−１４５、ＡＣＴＢ１７１−１８５、ＡＣＴＢ１２９−１４３（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＡＣＴＢ１６４−１７８、ＡＣＴＢ２５−３９、ＡＣＴＢ３２３−３３７（ＤＲＢ５＊０１０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＡＣＴＢ１４６−１６０、ＡＣＴＢ１８−３２及びＡＣＴＢ１７１−１８５からなる群から選択される。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＳＬＡ３３４−３４８、ＳＬＡ１９６−２１０、ＳＬＡ１１５−１２９、ＳＬＡ３７３−３８６、ＳＬＡ１８６−１９７（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＳＬＡ３４２−２５６、ＳＬＡ１１０−１２４、ＳＬＡ２９９−３１３（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＳＬＡ４９−６３、ＳＬＡ２６０−２７４、ＳＬＡ１１９−１３３（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＳＬＡ８６−１００、ＳＬＡ２６−４０、ＳＬＡ３３１−３４５（ＤＲＢ５＊０１０１について）；ＳＬＡ３１７−３３１、ＳＬＡ１７１−１８５、ＳＬＡ４１７−４３１（ＤＲＢ１＊０４０１について）；ＳＬＡ３５９−３７３、ＳＬＡ２１５−２２９、ＳＬＡ１１１−１２５（ＤＲＢ１＊０７０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＦＴＣＤ４３９−４５３、ＦＴＣＤ３８１−３９５、ＦＴＣＤ２９７−３１１（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＦＴＣＤ５２５−５３９、ＦＴＣＤ２１８−２３２、ＦＴＣＤ４９５−５０９（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＦＴＣＤ２６２−２７６、ＦＴＣＤ３００−３１４、ＦＴＣＤ２５９−２７３（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＦＴＣＤ４９０−５０４、ＦＴＣＤ３８９−４０３、ＦＴＣＤ２９５−３０９（ＤＲＢ５＊０１０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＦＴＣＤ２７１−２８５、ＦＴＣＤ４９８−５１２及びＦＴＣＤ３０１−３１５からなる群から選択される。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＭＰＯ３２２−３３６、ＭＰＯ７１４−７２８、ＭＰＯ６１７−６３１（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＭＰＯ５０４−５１８、ＭＰＯ４６２−４７６、ＭＰＯ６１７−６３１（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＭＰＯ４４４−４５８、ＭＰＯ６８９−７０３、ＭＰＯ２４８−２６２（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＭＰＯ５１１−５２５、ＭＰＯ９７−１１１、ＭＰＯ６１６−６３０（ＤＲＢ５＊０１０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、複合体は、ナノ粒子コアにカップリングされている第２の複数の抗原−主要組織適合複合体（ＭＨＣ）をさらに含み、第２の複数のそれぞれの抗原−ＭＨＣは、抗原を含む。ある実施形態において、第２の複数の抗原−主要組織適合複合体（ＭＨＣ）の抗原は、第２のユビキタス自己抗原である。ある実施形態において、第２のユビキタス自己抗原は、定常状態において細胞内区画中又は上に存在するタンパク質に由来するポリペプチドを含む。ある実施形態において、細胞内区画は、サイトゾルである。ある実施形態において、細胞内区画は、ミトコンドリアである。ある実施形態において、細胞内区画は、ミトコンドリアである。ある実施形態において、第２のユビキタス自己抗原は、ＤＲＢ３＊０２０２についてＰＤＣ−Ｅ２３５３−３６７、ＰＤＣ−Ｅ２７２−８６及びＰＤＣ−Ｅ２４２２−４３６；ＤＲＢ５＊０１０１についてＰＤＣ−Ｅ２３５３−３６７、ＰＤＣ−Ｅ２８０−９４及びＰＤＣ−Ｅ２５３５−５４９；ＤＲＢ４＊０１０１についてＰＤＣ−Ｅ２６２９−６４８、ＰＤＣ−Ｅ２１２２−１３５及びＰＤＣ−Ｅ２２４９−２６３；並びにＤＲＢ１＊０８０１についてＰＤＣ−Ｅ２２４９−２６３からなる群から選択される。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ＰＤＣ−Ｅ２４２２−４３６及びＰＤＣ−Ｅ２８０−９４からなる群から選択される。ある実施形態において、第２のユビキタス自己抗原は、ＣＹＰ２Ｄ６２８４−２９８、ＣＹＰ２Ｄ６２８９−３０３、ＣＹＰ２Ｄ６３１８−３３２、ＣＹＰ２Ｄ６３１３−３３２、ＣＹＰ２Ｄ６３９３−４１２、ＣＹＰ２Ｄ６１９２−２０６、ＣＹＰ２Ｄ６５−１９、ＣＹＰ２Ｄ６２９３−３０７（ＤＲＢ１＊
０３０１について）；ＣＹＰ２Ｄ６２１９−２３３、ＣＹＰ２Ｄ６２３７−２５１、ＣＹＰ２Ｄ６１５−２９（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＣＹＰ２Ｄ６２３５−２４９、ＣＹＰ２Ｄ６３１７−３３１、ＣＹＰ２Ｄ６２９３−３０７（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＣＹＰ２Ｄ６４２８−４４２、ＣＹＰ２Ｄ６２３７−２５１、ＣＹＰ２Ｄ６１４−２８（ＤＲＢ５＊０１０１について）；ＣＹＰ２Ｄ６１９９−２１３、ＣＹＰ２Ｄ６４５０−４６４、ＣＹＰ２Ｄ６３０１−３１５（ＤＲＢ１＊０４０１について）；ＣＹＰ２Ｄ６４５２−４６６、ＣＹＰ２Ｄ６５９−７３、ＣＹＰ２Ｄ６１３０−１４４、ＣＹＰ２Ｄ６１９３−２１２、ＣＹＰ２Ｄ６３０５−３２４、ＣＹＰ２Ｄ６１５−２９（ＤＲＢ１＊０７０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、第２のユビキタス自己抗原は、ＡＣＴＢ２０２−２１６、ＡＣＴＢ１７０−１８４、ＡＣＴＢ２４５−２５９、（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＡＣＴＢ１８７−２０１、ＡＣＴＢ１７２−１８６、ＡＣＴＢ１３１−１４５（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＡＣＴＢ１３１−１４５、ＡＣＴＢ１７１−１８５、ＡＣＴＢ１２９−１４３（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＡＣＴＢ１６４−１７８、ＡＣＴＢ２５−３９、ＡＣＴＢ３２３−３３７（ＤＲＢ５＊０１０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、第２のユビキタス自己抗原は、ＡＣＴＢ１４６−１６０、ＡＣＴＢ１８−３２及びＡＣＴＢ１７１−１８５からなる群から選択される。ある実施形態において、第２のユビキタス自己抗原は、ＳＬＡ３３４−３４８、ＳＬＡ１９６−２１０、ＳＬＡ１１５−１２９、ＳＬＡ３７３−３８６、ＳＬＡ１８６−１９７（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＳＬＡ３４２−２５６、ＳＬＡ１１０−１２４、ＳＬＡ２９９−３１３（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＳＬＡ４９−６３、ＳＬＡ２６０−２７４、ＳＬＡ１１９−１３３（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＳＬＡ８６−１００、ＳＬＡ２６−４０、ＳＬＡ３３１−３４５（ＤＲＢ５＊０１０１について）；ＳＬＡ３１７−３３１、ＳＬＡ１７１−１８５、ＳＬＡ４１７−４３１（ＤＲＢ１＊０４０１について）；ＳＬＡ３５９−３７３、ＳＬＡ２１５−２２９、ＳＬＡ１１１−１２５（ＤＲＢ１＊０７０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、第２のユビキタス自己抗原は、ＦＴＣＤ４３９−４５３、ＦＴＣＤ３８１−３９５、ＦＴＣＤ２９７−３１１（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＦＴＣＤ５２５−５３９、ＦＴＣＤ２１８−２３２、ＦＴＣＤ４９５−５０９（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＦＴＣＤ２６２−２７６、ＦＴＣＤ３００−３１４、ＦＴＣＤ２５９−２７３（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＦＴＣＤ４９０−５０４、ＦＴＣＤ３８９−４０３、ＦＴＣＤ２９５−３０９（ＤＲＢ５＊０１０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、第２のユビキタス自己抗原は、ＦＴＣＤ２７１−２８５、ＦＴＣＤ４９８−５１２及びＦＴＣＤ３０１−３１５からなる群から選択される。ある実施形態において、第２のユビキタス自己抗原は、ＭＰＯ３２２−３３６、ＭＰＯ７１４−７２８、ＭＰＯ６１７−６３１（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＭＰＯ５０４−５１８、ＭＰＯ４６２−４７６、ＭＰＯ６１７−６３１（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＭＰＯ４４４−４５８、ＭＰＯ６８９−７０３、ＭＰＯ２４８−２６２（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＭＰＯ５１１−５２５、ＭＰＯ９７−１１１、ＭＰＯ６１６−６３０（ＤＲＢ５＊０１０１について）からなる群から選択される。ある実施形態において、組成物は、薬学的に許容可能な安定剤、賦形剤、希釈剤又はそれらの組合せをさらに含む。ある実施形態において、自己免疫性又は炎症性疾患は、Ｉ型糖尿病である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、プレプロインスリン、プロインスリン、膵島特異的グルコース−６−ホスファターゼ（ＩＧＲＰ）、グルタミン酸デカルボキシラーゼ（ＧＡＤ）、膵島細胞自己抗原−２（ＩＣＡ２）又はインスリンに由来するポリペプチドでない。
【０００８】
特許又は出願ファイルは、少なくとも１つの着色図面を含有する。有色図面を有する本特許又は特許出願公開のコピーは、要求及び必要な費用の支払い時に特許庁により提供される。
【０００９】
本明細書に記載の新規の特徴は、添付の特許請求の範囲に詳述される。本明細書に記載
の特徴の特徴及び利点のより良好な理解は、本明細書に記載の特徴の原理を利用する説明的な実施例を記載する以下の詳細な説明及び以下の添付図面の参照により得られる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】ピルビン酸デヒドロゲナーゼ複合体−Ｅ２構成成分（ＰＤＣ−Ｅ２）に由来するペプチドと会合しているＭＨＣクラスＩＩにカップリングされているナノ粒子（ＰＢＣ関連ペプチド−主要組織適合複合体−ナノ粒子（ｐＭＨＣ−ＮＰ））による原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）関連制御性Ｔ細胞の拡大を説明する。図１Ａは、週齢に応じたＮＯＤ対ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスの血液中の四量体＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合を示す。図１Ｂは、非処理ＮＯＤ又はＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウス又は対照Ｃｙｓ−ＮＰにより処理されたＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスと比較したｐＭＨＣ−ＮＰ処理ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスの末梢血中の四量体＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合を示す。図１Ｃは、ｐＭＨＣ−ＮＰ療法の終了時の種々の器官中のパネルＢからのマウスにおける四量体＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合を示す。図１Ｄは、１型糖尿病関連ｐＭＨＣ−ＮＰにより処理されたＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスにおける四量体＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合を示す。図１Ｅは、２つの異なるＰＢＣ関連ｐＭＨＣの１つによりコーティングされたＮＰにより処理されたＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスの種々のリンパ器官及び肝中の四量体＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合を示す。図１Ｆは、ｐＭＨＣ−ＮＰ療法によりＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスにおいて拡大された四量体＋ＣＤ４＋Ｔ細胞によるＴＲ１様細胞表面マーカーの発現を示す。（図１Ｇは、ペプチドパルスＤＣによる刺激時のエクスビボでのソートされた四量体＋ＣＤ４＋ＴＲ１様細胞対四量体陰性ＣＤ４＋Ｔ細胞のサイトカイン分泌プロファイルを示す。
【図２】ＰＢＣ関連ｐＭＨＣ−ＮＰによるＰＢＣ関連制御性Ｔ細胞の拡大を説明する。（図２Ａ〜Ｂ）ＰＤＣ１６６／ＩＡｇ７−又はＰＤＣ８２／ＩＡｇ７−ＮＰ療法に応答してインビボで拡大された四量体＋ＣＤ４＋Ｔ細胞上のＴＲ１様マーカーの上方調節。図２Ａは、代表的なＦＡＣＳプロファイルであり；図２Ｂは、平均の中間蛍光強度値を示す。図２Ｃは、ＰＤＣ１６６／ＩＡｇ７−ＮＰ療法に応答して３８〜４４週齢ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスにおいて生じた四量体＋ＣＤ４＋Ｔ細胞上のＴＲ１細胞表面マーカーについての平均の平均蛍光強度値を示す。
【図３】ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスにおける肝疾患の臨床、表現型、免疫学的及び病理学的特徴を説明する。図３Ａは、経時的な血清ＴＢ及びＡＬＴレベルの変化を示す。図３Ｂは、顕微鏡的スコアリングシステム（左側）及び経時的な疾患の顕微鏡的スコアの進行（右側）を示す。図３Ｃは、代表的なＣＢＤ画像並びに経時的なＣＢＤ直径及びスコアの進行を示す。図３Ｄは、代表的な肝臓画像（上段）並びに経時的な肝スコア及び重量の進行を示す（下段）。図３Ｅは、ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスは、抗−ＰＤＣ−Ｅ２特異的自己抗体（左側）及びＡＮＡ（右側）を自然発症することを示す。図３Ｆは、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞による肝炎症の代表的な画像を示す。
【図４】ＰＢＣ関連ｐＭＨＣ−ＮＰを使用したＰＢＣのマウスモデルにおける疾患の回復を説明する。図４Ａは、ＰＤＣ１６６／ＩＡｇ７−ＮＰ、ＰＤＣ８２／ＩＡｇ７−ＮＰ又は対照（Ｃｙｓ−ＮＰ）により処理されたＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスの血清中の総胆汁酸（ＴＢＡ）及びアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベルの変化を示す。図４Ｂは、ＰＤＣ１６６／ＩＡｇ７−ＮＰ、ＰＤＣ８２／ＩＡｇ７−ＮＰ又はＣｙｓ−ＮＰ処理ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスからの肝臓の代表的な組織学的画像（上段）及び平均組織学的スコア（下段）を示す。図４Ｃは、総胆管の代表的な肉眼画像（上段）並びに平均総胆管スコア及び直径（下段）を示す。図４Ｄは、肝臓の代表的な肉眼画像（上段）並びに平均肝スコア及び重量（下段）を示す。図４Ｅは、ＰＤＣ１６６／ＩＡｇ７−ＮＰ又は対照Ｃｙｓ−ＮＰにより処理されたＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスの代表的な全身画像を示す。図４Ｆは、処理後の抗ミトコンドリア（ＰＤＣ−Ｅ２）抗体及び抗核自己抗体（ＡＮＡ）の力価の変化（それぞれ上段左側の２つのパネル及び右側パネル）並びにｐＭＨＣ−ＮＰ対Ｃｙｓ−ＮＰ処理ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスからの血清により染色されたＨｅｐ２細胞の代表的な画像（下段）を示す。図４Ｇは、２４週齢において出発して（３８〜４４週目まで）処理されたマウスにおける四量体＋細胞の割合を示す。図４Ｈ及び４Ｉは、図４Ｇにおいて試験されたマウスについての顕微鏡的（図４Ｈ）及び肉眼的スコア（図４Ｉ）を示す。
【図５】ＰＢＣ関連ナノ粒子による定期的な再処理に応答した四量体＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の循環存在比率の変化を説明する。図５Ａは、２つの異なるマウスを示し、図５Ｂは、ＰＤＣ１６６／ＩＡｇ７−ＮＰにより処理された又は未処理のままのマウスのコホートに対応する平均値を示す。図５Ｃは、四量体＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合を示し、図５Ｄは、図５Ａにおいて試験されたマウスからの四量体＋ＣＤ４＋Ｔ細胞中のＴＲ１マーカーについて染色した平均蛍光強度を示す。図５Ｅは、図５Ａ〜Ｄにおいて試験されたマウスについての平均肉眼的ＣＢＤ及び肝スコアを示す。
【図６】処理を疾患プロセスの早期に開始した場合の肉眼的及び血清ＡＬＴレベル（図６Ａ）並びに顕微鏡的（図６Ｂ）疾患スコアに対するＰＢＣ関連ｐＭＨＣ−ＮＰ又はＰＢＣの治療標準（ＵＤＣＡ）による処理の効果を説明する。図６Ｃは、図６Ａ〜Ｂにおいて試験されたマウスにおける四量体＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合を示す。図６Ｄ及びＥは、処理を疾患の進行期において開始した場合の肉眼的（図６Ｄ）及び顕微鏡的（図６Ｅ）疾患スコアに対するＰＢＣ関連ｐＭＨＣ−ＮＰ又はＰＢＣの治療標準（ＵＤＣＡ）による処理の効果を示す。図６Ｆは、図６Ｄ〜Ｅにおいて試験されたマウスにおける四量体＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合を示す。
【図７】ＰＢＣ関連ｐＭＨＣ−ＮＰが制御性Ｂ細胞を拡大させることを説明する。図７Ａは、ｐＭＨＣ−ＮＰ及びラット−ＩｇＧ（対照）又はマウスＩＬ−１０若しくはＴＧＦ−ベータに対する遮断ラットｍＡｂにより処理されたマウスにおける四量体＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合を示す。図７Ｂ及びＣは、図７Ａにおいて試験されたマウスの肉眼（図７Ｂ）及び顕微鏡（図７Ｃ）スコアを示す。図７Ｄは、非処理ＮＯＤ．ｃ３ｃ４ドナーからの全脾細胞により再構成され、次いでＰＤＣ１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ処理ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスからの脾臓ＣＤ４＋Ｔ細胞が注入されたＮＯＤ．ｃ３ｃ４．ｓｃｉｄ宿主の血液及びリンパ器官中の四量体＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合を示す。後者は、ＣＤ４＋Ｔ細胞移植後に非処理のままであるか、又はＰＤＣ１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰにより処理した。図７Ｅは、ＰＤＣ１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰにより処理された宿主の代表的なＦＡＣＳ染色ヒストグラム（上段）及び四量体＋ＣＤ４＋対四量体−ＣＤ４＋Ｔ細胞上のＴＲ１マーカーについての平均の平均蛍光強度値（下段）を示す。図７Ｆは、Ａにおいて試験されたマウスの肉眼的スコア及び計測値を示す。図７Ｇは、ｐＭＨＣ−ＮＰ対Ｃｙｓ−ＮＰ処理ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスの肝臓流入領域（ＰＬＮ）又は非流入領域（ＭＬＮ）リンパ節から単離されたＬＰＳチャレンジＣＤ１１ｂ＋細胞のサイトカインプロファイルを示す。図７Ｈは、ｐＭＨＣ−ＮＰ対Ｃｙｓ−ＮＰ処理ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスからの肝クッパー細胞のサイトカインプロファイルを示す。図７Ｉは、ｐＭＨＣ−ＮＰ対Ｃｙｓ−ＮＰ処理ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスの肝臓流入領域（ＰＣＬＮ）及び非流入領域（ＩＬＮ）リンパ節又は肝臓中のＢ細胞の絶対数を示す。図７Ｊは、ｐＭＨＣ−ＮＰ処理マウスにおけるＢ細胞の絶対数と、四量体＋ＣＤ４＋Ｔ細胞との間の相関を示す。（図７Ｋは、ｐＭＨＣ−ＮＰ対Ｃｙｓ−ＮＰ処理ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスの肝臓流入領域及び非流入領域リンパ節又は肝臓から単離されたＬＰＳチャレンジＢ細胞のＩＬ−１０分泌レベルを示す。図７Ｌは、ｐＭＨＣ−ＮＰにより処理された宿主中で生じるこの実験のみにおけるＩＬ−１０産生Ｂｒｅｇ細胞へのＢ細胞の変換を示す代表的なＦＡＣＳプロットを示す。図７Ｍは、ｐＭＨＣ−ＮＰ誘導ＴＲ１様ＣＤ４＋Ｔ細胞を保有する（脾臓及びＰＣＬＮ）又は欠く（ＭＬＮ）、肝臓及び末梢リンパ器官中のｐＭＨＣ−ＮＰ又はＣｙｓ−ＮＰにより処理された宿主におけるコンベンショナルＢ細胞由来Ｂｒｅｇ細胞の割合を示す。
【図８】ＰＢＣ関連ｐＭＨＣ−ＮＰは、全身免疫を節約することを説明する。図８Ａは、全身ｒＶＶ感染の４及び１４日後のｐＭＨＣ−ＮＰ処理対非処理ＮＯＤ．ｃ３ｃ４雌マウスの卵巣中のｒＶＶの平均力価を示す。図８Ｂは、ＨＫｘ３１株による事前のプライミングあり又はなしのＰＲ８株による感染の３及び７日後のｐＭＨＣ−ＮＰ処理対非処理ＮＯＤ．ｃ３ｃ４雌マウスの肺中のインフルエンザウイルスの力価を示す。図８Ｃは、感染及び処理に応じた臨床スコア及び体重変化を示す。図８Ｄは、全身リステリア属（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）感染後３、７及び１４日目のｐＭＨＣ処理対非処理ＮＯＤ又はＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスの脾臓又は肝臓中のリステリア属（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）のコロニー形成単位を示す。図８Ｅは、ＫＬＨ−ＤＮＰ免疫時の血清抗ＤＮＰ抗体力価を示す（ｎ＝３／群）。図８Ｆ〜８Ｋは、ＣＴ２６細胞が注射された非処理対ＰＤＣ１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ処理ＮＯＤ．ｃ３ｃ４（ｎ＝５／群）又は非処理Ｂａｌｂ／ｃ（ｎ＝７）の四量体＋細胞の割合（図８Ｆ）、肉眼的ＰＢＣスコア及び肝重量（図８Ｇ）、顕微鏡的ＰＢＣスコア（図８Ｈ）、肝臓画像（図８Ｉ）、顕微鏡的腫瘍スコア（図８Ｊ）及び生存率（図８Ｋ）を示す。図８Ｌ〜８Ｐは、Ｂ１６／Ｆ１０細胞が注射された非処理対ＰＤＣ１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ処理ＮＯＤ．ｃ３ｃ４（ｎ＝５及び４）又は非処理Ｂ６（ｎ＝６）の四量体＋細胞の割合（図８Ｌ）、肉眼（図８Ｍ）及び顕微鏡ＰＢＣスコア（図８Ｎ）、並びに肝重量及び転移数（図８Ｏ）、並びに肝臓画像（図８Ｐ）を示す。図８Ｑは、図８Ｌ〜８Ｐのマウスの生存率を示す。データは、平均±ＳＥＭに対応する。Ｐ値を、Ｋ、Ｑ（ログランク）又はＣ（二元ＡＮＯＶＡ）を除きマン・ホイットニーＵを介して比較した。
【図９】ヒト化マウスにおけるＰＢＣ関連ｐＭＨＣ−ＮＰによるＴ制御性細胞の拡大を説明する。図９Ａは、ＤＲＢ４＊０１０１＋ＰＢＣ患者からのＰＢＭＣが移植され、３つの異なるＰＢＣ関連ｐＭＨＣ−ＮＰにより処理されたＮＳＧ宿主における代表的な四量体染色を示す。図９Ｂは、応答性対非応答性ｐＭＨＣ−ＮＰ処理マウス又は非処理リッターメイトにおける四量体＋ＣＤ４＋細胞の平均割合及び絶対数を示す。図９Ｃは、図９Ａ〜Ｂにおいて試験されたマウスにおけるＴＲ１マーカーＣＤ４９ｂ及びＬＡＧ３についての平均蛍光強度値（上段）及び二次元ＦＡＣＳプロット（下段）を示す。
【図１０】ＰＢＣ関連ｐＭＨＣ−ＮＰが、ＰＢＣと区別される肝臓自己免疫のモデルにおける疾患、特に原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）及び自己免疫性肝炎（ＡＩＨ）を治療し得ることを説明する。図１０Ａは、ｐＭＨＣ−ＮＰ療法に応答したＮＯＤ．Ａｂｃｂ４−／−マウスにおける四量体＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合を示す。図１０Ｂは、図１０Ａにおいて試験されたマウスに対応する平均原発性硬化性胆管炎スコア（上段）及び代表的なＨＥ染色又はピクロシリウス染色肝切片（下段）並びにＴＢＡ及びＡＬＴ（右列）を示す。図１０Ｃは、ｈＦＴＣＤコードアデノウイルス（ＡＩＨ発症）を感染させ、３つの異なるｐＭＨＣ−ＮＰタイプにより処理されたＮＯＤマウスにおける四量体＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合を示す。図１０Ｄは、図１０Ｃにおいて試験されたマウスについての自己免疫性肝炎組織病理学的スコア（上段）並びに代表的なＨＤ及びピクロシリウス肝染色切片（下段）を示す。図１０Ｅは、図１０Ｃのマウスにおける血清ＡＬＴレベルを示す［ｎ＝１１、５、９及び１０匹のマウス（左側から右側）；２〜３回の実験］。
【図１１】ＰＢＣ及びＡＩＨ関連ｐＭＨＣ−ＮＰがＰＳＣのマウスモデルにおいてＴ制御性細胞を拡大させることを説明する。図１１Ａは、ＰＢＣ又はＡＩＨ関連ｐＭＨＣ−ＮＰにより処理されたＮＯＤ．Ａｂｃｂ４−／−マウス（ＰＳＣを自然発症する）の四量体＋ＣＤ４＋対四量体−ＣＤ４＋Ｔ細胞上のＴＲ１マーカーについて代表的なＦＡＣＳ染色ヒストグラムを示し、図１１Ｂは、その平均の平均蛍光強度値を示す。
【図１２】ＰＢＣ関連ｐＭＨＣ−ＮＰがＡＩＨのマウスモデルにおいてＴ制御性細胞を拡大させることを説明する。図１２Ａは、ｈＦＴＣＤをコードするアデノウイルス（ＡＩＨを自然発症する）を感染させ、ＰＢＣ又はＡＩＨ関連ｐＭＨＣ−ＮＰにより処理されたＮＯＤマウスの四量体＋ＣＤ４＋対四量体−ＣＤ４＋Ｔ細胞上のＴＲ１マーカーについての代表的なＦＡＣＳ染色ヒストグラムを示し、図１２Ｂは、その平均の平均蛍光強度値を示す。
【図１３】器官中の肝臓自己免疫性疾患を疾患特異的にでなく鈍化させるユビキタス自己抗原ベースｐＭＨＣ−ＮＰの能力を説明する。図１３Ａは、ＡＩＨ関連ｐＭＨＣ−ＮＰタイプにより処理されたＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスにおける四量体＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合を示す。図１３Ｂは、ＰＢＣ、ＡＩＨ又はＴ１Ｄ関連ｐＭＨＣ−ＮＰタイプにより処理されたＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスにおける平均肉眼的肝スコアを示す。図１３Ｃは、ＰＢＣ又はＡＩＨ関連ｐＭＨＣ−ＮＰタイプにより処理されたＮＯＤマウスにおける四量体＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合を示す。
【図１４】（ＮＯＤ×Ｂ６．Ｉｆｎｇ−ＡＲＥ−Ｄｅｌ−／−）Ｆ１マウスにおけるＰＢＣ関連ｐＭＨＣＩＩ−ＮＰの治療効果を説明する。図１４Ａは、Ｃｙｓ−ＮＰ又はＰＤＣ１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰにより処理されたマウス（プールされた雄及び雌）における四量体＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合を示す。図１４Ｂは、Ａにおいて試験されたマウスにおける血清ＴＢＡ及びＡＬＴレベルを示す。図１４Ｃは、Ａにおいて試験された雌マウスの顕微鏡的スコア（左側）並びに代表的なＨＥ（上段右側）及びピクロシリウスレッド染色肝切片（下段右側）を示す。図１４Ａ〜Ｃのデータは、それぞれ２〜３回の実験からのｎ＝７及び１２匹のマウス／処理タイプに対応する。
【図１５】疾患関連ｐＭＨＣＩＩ−ＮＰが、ＰＤＣ−Ｅ２自己反応性ＴＲ１様ＣＤ４＋Ｔ細胞を保有するにもかかわらず全身免疫を節約することを説明する。図１５Ａは、ＨＫｘ３１株によるプライミングの７日後のＮＰ中のＰＤＣ１６６−１８１／ＩＡｇ７処理ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスの血液及びリンパ器官中のＰＤＣ１６６−１８１／ＩＡｇ７四量体＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の平均割合を示す。データは、それぞれｎ＝４及び５に対応する。図１５Ｂは、リステリア属（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）の感染の１４日後のＮＰ中のＰＤＣ１６６−１８１／Ａｇ７処理ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスの血液及びリンパ器官中のＰＤＣ１６６−１８１／ＩＡｇ７四量体＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の平均割合を示す。データは、それぞれｎ＝３及び５匹のマウスに対応する。データは、平均＋ＳＥＭに対応する。Ｐ値を、マン・ホイットニーＵを介して比較した。
【図１６】ユビキタス自己抗原からのエピトープをディスプレイするｐＭＨＣＩＩベースナノ医薬がＮＯＤマウスにおける再発寛解型ＥＡＥを鈍化させることを説明する。図１６Ａは、ＥＡＥを有するｐＭＨＣＩＩ−ＮＰ処理ＮＯＤマウスの血液、脾臓及び頸部ＬＮ中の四量体＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合を示す。データは、（上段から）（ｉ）５匹のＣｙｓ−ＮＰ及び７匹のＭＯＧ３６−５０／ＩＡｇ７−ＮＰ処理マウスについてのＭＯＧ３６−５０／ＩＡｇ７四量体染色；（ｉｉ）１１匹のＣｙｓ−ＮＰと１４匹のＢＤＣ２．５ｍｉ／ＩＡｇ７−ＮＰ及び２２匹のＰＤＣ１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ処理マウス（２回の実験からプール）についてのＰＤＣ１６６−１８１／ＩＡｇ７四量体染色；（ｉｉｉ）１１匹のＣｙｓ−ＮＰ及び８匹のＣＹＰＤ３９８−４１２／ＩＡｇ７−ＮＰ処理マウス（２回の実験からプール）についてのＣＹＰＤ３９８−４１２／ＩＡｇ７四量体染色；並びに（ｉｖ）１４匹のＰＤＣ１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ及び１４匹のＢＤＣ２．５ｍｉ／ＩＡｇ７−ＮＰ処理マウスについてのＢＤＣ２．５ｍｉ／ＩＡｇ７四量体染色に対応する。図１６Ｂは、脾臓四量体＋ＣＤ４＋細胞中のＴＲ１マーカーについてのＭＦＩを示す。図１６Ｂのデータは、３匹のＰＤＣ１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ及び４匹のＢＤＣ２．５ｍｉ／ＩＡｇ７−ＮＰ処理マウスに対応する。図１６Ｃは、（ｉ）Ｃｙｓ−ＮＰ（ｎ＝９）、ＢＤＣ２．５ｍｉ／ＩＡｇ７−ＮＰ（ｎ＝１４）又はＭＯＧ３６−５０／ＩＡｇ７−ＮＰ（ｎ＝８）（上段）；及び（ｉｉ）Ｃｙｓ−ＮＰ（ｎ＝１１、２回の実験から）ＰＤＣ１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ（ｎ＝２２、２回の実験から）又はＣＹＰＤ３９８−４１２／ＩＡｇ７−ＮＰ（ｎ＝８）（下段）により処理されたＮＯＤマウスにおけるＥＡＥスコアを示す。図１６Ｄは、炎症性細胞の浸潤及び脱髄の区域（白色矢印）を示す図１６Ｃのマウスからの小脳の代表的なルクソールファストブルー（ＬＦＢ）／ＨＥ染色写真を示す。図１６Ｅは、図１６Ｄのマウスについての平均盲検組織病理学的ランクオーダーＬＦＢスコアを示す。データは、バーの図の左側から右側にかけて、ｎ＝５、７、６、８及び７／ＮＰタイプに対応する。データは、平均±ＳＥＭに対応する。Ｐ値は、二元ＡＮＯＶＡ（図１６Ｃ）又はマン・ホイットニーＵ検定（図１６Ａ、Ｂ及びＥ）を使用して計算した。
【図１７】ユビキタス自己抗原からのエピトープをディスプレイするｐＭＨＣＩＩベースナノ医薬がＣ５７ＢＬ／６マウスにおいて慢性進行性ＥＡＥを鈍化させることを説明する。図１７Ａは、ＥＡＥを有するｐＭＨＣＩＩ−ＮＰ処理Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスの血液、脾臓及び頸部ＬＮ中の四量体＋ＣＤ４＋細胞の割合を示す。データは、コグネイトｐＭＨＣ四量体（上段：ＭＯＧ３８−４９／ＩＡｂ；中段：ＰＤＣ９４−１０８／ＩＡｂ；及び下段：ＣＹＰＤ３５３−３６７／ＩＡｂ）により染色された、１パネル当たり６匹のＣｙｓ−ＮＰ及び７匹のｐＭＨＣＩＩ−ＮＰ処理マウスからの試料に対応する。図１７Ｂは、脾臓四量体＋ＣＤ４＋細胞中のＴＲ１マーカーのＭＦＩを示す。図１７Ｂのデータは、それぞれのパネルの７匹のｐＭＨＣＩＩ−ＮＰ処理マウスに対応する。図１７Ｃは、ＥＡＥを有するｐＭＨＣＩＩ−ＮＰ処理Ｃ５７ＢＬ／６ＪマウスにおけるＥＡＥスコア及び％初期体重変化を示す。データは、６匹のＣｙｓ−ＮＰ、７匹のＭＯＧ３８−４９／ＩＡｂ−ＮＰ、７匹のＰＤＣ９４−１０８／ＩＡｂ−ＮＰ及び７匹のＣＹＰＤ３５３−３６７／ＩＡｂ−ＮＰ処理マウスに対応する。図１７Ｄは、図１７Ｄのマウスについての平均盲検組織病理学的ランクオーダーＬＦＢスコアを示す。データは、バーの図の左側から右側にかけて、ｎ＝６、６、６及び７／ｐＭＨＣ−ＮＰタイプに対応する。データは、平均±ＳＥＭに対応する。Ｐ値は、二元ＡＮＯＶＡ（図１７Ｃ）又はマン・ホイットニーＵ検定（図１７Ａ、Ｂ及びＤ）を使用して計算した。
【図１８】自己抗原脱落が末梢自己反応性Ｔ細胞をｐＭＨＣＩＩ−ＮＰ療法に応答性にすることを説明する。図１８Ａは、処理開始前（０時間）並びに２．５及び５週間後のｐＭＨＣＩＩ−ＮＰ処理対非処理ＮＯＤマウスの血液中の四量体＋ＣＤ４＋細胞の割合を示す。データは、（左側から右側のパネルにかけて）（ｉ）５匹のＰＤＣ１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ処理（２回の実験）；（ｉｉ）５匹のＣＹＰＤ３９８−４１２／ＩＡｇ７−ＮＰ処理；及び（ｉｉｉ）５匹の非処理マウス（２回の実験）に対応する。血液試料をＢＤＣ２．５ｍｉ／ＩＡｇ７、ＰＤＣ１６６−１８１／ＩＡｇ７及びＣＹＰＤ３９８−４１２／ＩＡｇ７四量体により染色した。図１８Ｂは、ＰＤＣ１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ又はＣＹＰＤ３９８−４１２／ＩＡｇ７−ＮＰにより処理されたＮＯＤマウスの異なるリンパ器官及び肝臓中の四量体＋ＣＤ４＋細胞の割合を示す。ＰＣＬＮ、門脈及び腹腔ＬＮ；ＰＬＮ：膵臓ＬＮ；ＭＬＮ、腸間膜ＬＮ；ＢＭ、骨髄。データは、９匹の非処理（２回の実験）、５匹のＰＤＣ１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ処理（２回の実験）及び５匹のＣＹＰＤ３９８−４１２／ＩＡｇ７−ＮＰ処理マウスに対応する。図１８Ｃは、ｐＭＨＣＩＩ−ＮＰ療法後のＤＴ処理ＲＩＰ−ＤＴＲ−トランスジェニックＮＯＤマウスのＰＣＬＮ、ＰＬＮ及び脾臓中の四量体＋ＣＤ４＋細胞の割合を示す。データは、２回の独立実験からの６匹のＣｙｓ−ＮＰ、５匹のＢＤＣ２．５ｍｉ／ＩＡｇ７−ＮＰ、５匹のＰＤＣ１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ及び５匹のＣＹＰＤ３９８−４１２／ＩＡｇ７−ＮＰ処理マウスに対応する。ＢＤＣ２．５ｍｉ／ＩＡｇ７−ＮＰ及びＣＹＰＤ３９８−４１２／ＩＡｇ７−ＮＰにより処理されたマウスからの試料を両方のｐＭＨＣＩＩ四量体（コグネイト及び非コグネイト）により染色した。Ｃｙｓ−ＮＰ、ＰＤＣ１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ及びＭＯＧ３６−５０／ＩＡｇ７−ＮＰにより処理されたマウスからの試料をそれぞれＰＤＣ１６６−１８１／ＩＡｇ７又はＭＯＧ３６−５０／ＩＡｇ７四量体により染色した。図１８Ｄは、脾臓四量体＋ＣＤ４＋細胞中のＴＲ１マーカーについての平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示す。データを平均±ＳＥＭとして提示する。Ｐ値は、ＡＮＯＶＡ（図１８Ａ）又はマン・ホイットニーＵ検定（図１８Ｂ、Ｃ及びＤ）を使用して計算した。
【図１９】乾癬のマウスモデルがユビキタス自己抗原をプライミングし得ること及びユビキタス自己抗原ｐＭＨＣＩＩ−ＮＰ療法の施与が乾癬の兆候を低減させ得ることを説明する。図１９Ａは、ＰＤＣ１６６−１８１／ＩＡｇ７Ｔ細胞のパーセント四量体染色を示す。図１９Ｂは、ＰＤＣ１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰが投与されたマウスにおける耳厚の改善を示す。
【図２０】本開示のｐＭＨＣ−ＮＰの非限定的な実施形態を説明する。図２０Ａは、遺伝子操作ノブを含む免疫グロブリン分子のＣＨ２及びＣＨ３ドメインに融合しているＭＨＣクラスＩＩ二量体のアルファ鎖を示す。図２０Ｂは、ＭＨＣクラスＩＩのベータ鎖に融合しており、遺伝子操作ホールを含む免疫グロブリン分子のＣＨ２及びＣＨ３ドメインに融合しているＮ末端ユビキタスポリペプチド（Ｅ２１２２−１３５）を有するＭＨＣクラスＩＩのベータ鎖を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
表１は、ナノ粒子へのユビキタス自己抗原−ＭＨＣのカップリングに有用なリンカーを説明する。
【００１２】
表２、３及び４は、３つの異なるヒトＰＢＣ関連ｐＭＨＣ−ＮＰタイプによる処理時の、ＤＲＢ４＊０１０１＋ＰＢＣ患者からのＰＢＭＣが移植されたＮＳＧマウスにおける四量体＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合及び絶対数を説明する。
【００１３】
種々の実施形態が以下に記載される。具体的な実施形態は、排他的な記載としても、本明細書に考察されるより広い態様への限定としても意図されるものではないことを留意すべきである。特定の実施形態との組合せで記載される１つの態様は、その実施形態に必ずしも限定されず、任意の他の実施形態を用いて実施することができる。
【００１４】
要素の記載に関する（特に、以下の特許請求の範囲に関する）用語「１つの（ａ）」、及び「１つの（ａｎ）」、及び「その」並びに類似の参照物の使用は、特に本明細書に示されない限り又は文脈により明らかに矛盾しない限り、単数形及び複数形の両方を包含すると解釈すべきである。本明細書の値の範囲の引用は、特に本明細書に示されない限り、その範囲内に収まるそれぞれの別個の値を個々に指す短縮法として機能するものにすぎず、それぞれの別個の値は、それが本明細書に個々に引用されるように本明細書に組み込まれる。本明細書に記載の全ての方法は、特に本明細書に示されない限り又は特に文脈により明らかに矛盾しない限り、任意の好適な順序で実施することができる。本明細書に提供される任意の及び全ての例又は例示的な言語（例えば、「例えば」）の使用は、実施形態をより良好に説明するものにすぎず、特に記述のない限り、特許請求の範囲に対して限定を課すものでない。本明細書中の言語は、特許請求されていないいかなる要素も不可欠でないことを示すと解釈すべきである。
【００１５】
本明細書において使用される「抗原」は、対象における免疫応答又は免疫細胞、好ましくはＴ又はＢ細胞の拡大を誘導し得る分子の全部、一部、断片又はセグメントを指す。抗原は、ポリペプチド、脂質、炭水化物又は核酸であり得る。
【００１６】
本明細書において使用される「個体」は、「対象」又は「患者」と同義である。個体は、疾患を有すると診断され得る。個体は、特定の疾患を前記疾患の少なくとも１つの症状の顕在化に基づいて有すること、前記疾患の家族歴を有すること、前記疾患についての定義リスクに関連するゲノタイプを有すること又はその疾患についてのリスクに個体を曝すレベル若しくはその付近の１つ以上の表現型計測値若しくは「臨床試験」を有することが疑われ得る。個体は、哺乳動物、例えばウマ、ネコ、イヌ、ブタ、ウシ、ヤギ又はヒツジであり得る。個体は、ある例においてヒトであり得る。
【００１７】
本明細書において使用される「約」は、当業者により理解され、それが使用される文脈に応じてある程度変動する。当業者に明確でない用語が使用される場合、それが使用される文脈を考慮して、「約」は、その特定の用語の最大プラス又はマイナス１０％を意味する。
【００１８】
本明細書において使用される「ポリペプチド」は、約８つ超のアミノ酸残基を有するペプチド結合により結合している複数のアミノ酸を指す。ポリペプチドのアミノ酸は、天然発生又は非天然アミノ酸残基であり得る。
【００１９】
参照ポリペプチド配列に関するパーセント（％）配列同一性は、配列をアラインし、必要によりギャップを導入して最大パーセント配列同一性を達成した後の、配列同一性の一部としていかなる保存的置換も考慮しない、参照ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同
一である候補配列中のアミノ酸残基の割合である。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、公知の種々の手法において、例えば公的に利用可能なコンピュータソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアを使用して達成することができる。配列のアラインメントに適切なパラメータ、例として比較される配列の全長にわたる最大アラインメントを達成するために必要とされるアルゴリズムを決定することができる。しかしながら、本明細書における目的のため、％アミノ酸配列同一性値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ−２を使用して生成される。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．により著作され、ソースコードは、Ｕ．Ｓ．Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ  Ｏｆｆｉｃｅ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．，２０５５９のユーザ文書により出願されており、それは、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７のもとで登録されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆ．から公的に利用可能であるか、又はソースコードから編集することができる。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、ＵＮＩＸ(登録商標)オペレーティングシステム、例としてデジタルＵＮＩＸ(登録商標)  Ｖ４．０Ｄ上での使用のために編集すべきである。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ−２プログラムにより設定され、変動しない。
【００２０】
アミノ酸配列比較のためにＡＬＩＧＮ−２が用いられる状況において、所与のアミノ酸配列Ｂへの、それとの又はそれに対する所与のアミノ酸配列Ａの％アミノ酸配列同一性（アミノ酸配列Ｂへの、それとの又はそれに対するある％アミノ酸配列同一性を有するか又は含む所与のアミノ酸配列Ａと代替的に表現することができる）は、以下のとおり計算される：分数Ｘ／Ｙを１００倍し、Ｘは、配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ−２により、そのプログラムのＡ及びＢのアラインメントにおいて同一マッチとしてスコアリングされるアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂ中のアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、ＢへのＡの％アミノ酸配列同一性は、ＡへのＢの％アミノ酸配列同一性と等しくないことが認識される。特に具体的に記述のない限り、本明細書において使用される全ての％アミノ酸配列同一性値は、ＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを使用して直前の段落に記載されるとおり得られる。
【００２１】
本明細書に記載の本開示のｕａＭＨＣ−ＮＰのｕａＭＨＣは、核酸によりコードさせることができる。核酸は、２つ以上のヌクレオチド塩基を含むポリヌクレオチドのタイプである。ある実施形態において、核酸は、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを細胞中に移行させるために使用することができるベクターの構成成分である。本明細書において使用される用語「ベクター」は、それが結合している別の核酸を輸送し得る核酸分子を指す。ベクターの１つのタイプは、宿主細胞の染色体ＤＮＡ中に組み込まれるゲノム組み込み型ベクター又は「組み込み型ベクター」である。ベクターの別のタイプは、「エピソーマル」ベクター、例えば染色体外で複製し得る核酸である。作動可能に結合している遺伝子の発現を指向し得るベクターは、本明細書において「発現ベクター」と称される。好適なベクターは、プラスミド、細菌人工染色体、酵母人工染色体、ウイルスベクターなどを含む。発現ベクターにおいて、転写制御における使用のための調節エレメント、例えばプロモーター、エンハンサー、ポリアデニル化シグナルは、哺乳動物、細菌、ウイルス又は昆虫遺伝子に由来し得る。通常、複製起点により付与される宿主中での複製能及び形質転換体の認識を容易にするための選択遺伝子をさらに取り込むことができる。ウイルス、例えばレンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルスなどに由来するベクターを用いることができる。プラスミドベクターは、染色体位置中への組み込みのために線形化することができる。ベクターは、ゲノム中の定義位置又は制限部位セット中への部位特異的組み込みを指向する配列を含み得る（例えば、ＡｔｔＰ−ＡｔｔＢ組換え）。さらに、ベクターは、転移因子に由来する配列を含み得る。
【００２２】
ｕａＭＨＣをコードする核酸又は前記核酸を含むベクターのいずれも、ｕａＭＨＣの産生のための好適な細胞系に移行させることができる。ある実施形態において、核酸又はベクターは、細胞系のゲノム中に安定的に組み込まれる。好適な細胞系は、Ｖｅｒｏ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ８１）又はＣＨＯ−Ｋ１（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ６１）細胞、ＨｅＬａ細胞及びＬ細胞であり得る。ポリペプチドを発現させるために使用することができる例示的な真核細胞としては、限定されるものではないが、ＣＯＳ細胞、例としてＣＯＳ７細胞；２９３細胞、例として２９３−６Ｅ細胞；ＣＨＯ細胞、例としてＣＨＯ−Ｓ及びＤＧ４４細胞；ＰＥＲ．Ｃ６（商標）細胞（Ｃｒｕｃｅｌｌ）；並びにＮＳＯ細胞が挙げられる。
【００２３】
ある実施形態において、組成物であって、複数の抗原−主要組織適合複合体（ＭＨＣ）であって、複数のそれぞれの抗原−ＭＨＣは、組織特異的抗原でなく、ＭＨＣ分子の結合溝と会合されているユビキタス自己抗原を含む、複数の抗原−主要組織適合複合体（ＭＨＣ）；及び１〜１００ナノメートルの直径を有するナノ粒子コアを含み、抗原−ＭＨＣは、ナノ粒子コアにカップリングされている、組成物が本明細書に記載される。
【００２４】
ある実施形態において、自己免疫性又は炎症性疾患を治療する方法であって、個体に、治療有効量の、組成物であって、（ａ）複数の抗原−主要組織適合複合体（ＭＨＣ）であって、複数のそれぞれの抗原−ＭＨＣは、組織特異的抗原でなく、ＭＨＣ分子の結合溝と会合されているユビキタス自己抗原を含む、複数の抗原−主要組織適合複合体（ＭＨＣ）；及び（ｂ）１〜１００ナノメートルの直径を有するナノ粒子コアを含み；抗原−ＭＨＣは、ナノ粒子コアにカップリングされている、組成物を投与することを含む方法が本明細書に記載される。
【００２５】
ある実施形態において、多発性硬化症を治療する方法であって、個体に、治療有効量の、組成物であって、（ａ）複数の抗原−主要組織適合複合体（ＭＨＣ）であって、複数のそれぞれの抗原−ＭＨＣは、多発性硬化症特異的抗原でなく、ＭＨＣ分子の結合溝と会合されているユビキタス自己抗原を含む、複数の抗原−主要組織適合複合体（ＭＨＣ）；及び（ｂ）１〜１００ナノメートルの直径を有するナノ粒子コアを含み；抗原−ＭＨＣは、ナノ粒子コアにカップリングされている、組成物を投与することを含む方法が本明細書に記載される。
【００２６】
ある実施形態において、Ｉ型糖尿病を治療する方法であって、個体に、治療有効量の、組成物であって、（ａ）複数の抗原−主要組織適合複合体（ＭＨＣ）であって、複数のそれぞれの抗原−ＭＨＣは、Ｉ型糖尿病特異的抗原でなく、ＭＨＣ分子の結合溝と会合されているユビキタス自己抗原を含む、複数の抗原−主要組織適合複合体（ＭＨＣ）；及び（ｂ）１〜１００ナノメートルの直径を有するナノ粒子コアを含み；複数の抗原−ＭＨＣは、ナノ粒子コアにカップリングされている、組成物を投与することを含む方法が本明細書に記載される。
【００２７】
ユビキタス自己抗原
自己免疫性疾患及び炎症性障害の治療に有用なナノ粒子組成物及び方法が本明細書に記載される。ナノ粒子組成物は、ナノ粒子にカップリングされているＭＨＣと会合している複数の抗原を含む。ナノ粒子組成物及び方法は、広く発現されるユビキタス自己抗原を利用して制御性Ｔ及びＢリンパ球の生成を誘発する。
【００２８】
ある態様において、ＭＨＣ分子と会合している抗原は、ユビキタス自己抗原である。ユビキタス自己抗原は、少なくともそれらが無関連の複数の異なる細胞タイプにより共通して発現される抗原であるという点で組織特異的抗原から区別される。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、個体発生的に区別される組織により共通して発現されるものである。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、外胚葉、中胚葉及び内胚葉から
なるリストから生じる組織に由来する少なくとも２つの細胞タイプ中で発現されるものである。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、機能的に区別される組織により共通して発現されるものである。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、神経組織、内分泌組織、結合組織、造血細胞、肝臓の問題、心臓組織、皮膚組織、肺組織、血管組織、腸組織及び胃組織からなるリストから選択される少なくとも２つの組織中で発現されるものである。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、神経組織及び肝組織の両方で発現されるものである。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、神経組織及び膵臓組織の両方において発現されるものである。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個以上の細胞タイプに共通する細胞プロセスに関与するタンパク質に由来するポリペプチドである。ユビキタス自己抗原は、同一ファミリーのパラログ又はホモログであるとして認識される２つ以上の密接に関連するタンパク質に共通するが、種々の組織にわたり示差的発現を示す配列であり得る。ある実施形態において、２つ以上の密接に関連するタンパク質は、例えば、２つの異なる無関連組織中で同一又は類似の機能を遂行し得る。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、細胞プロセスに関与するタンパク質に由来するポリペプチドであり、細胞プロセスは、解糖、酸化的リン酸化、グリコーゲン生成、ヌクレオチド生合成、ベータ酸化及びオメガ酸化から選択される代謝プロセスである。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原は、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ複合体−Ｅ２構成成分（ＰＤＣ−Ｅ２）、シトクロムＰ４５０  ２Ｄ６（ＣＹＰ２Ｄ６）、ホルムイミドイルトランスフェラーゼ−シクロデアミナーゼ（ＦＴＣＤ）、可溶性肝抗原（ＳＬＡ）、アクチン（ＡＣＴＢ）及びミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）からなるリストから選択される。
【００２９】
ユビキタス自己抗原は、種々の細胞タイプ中で利用されるハウスキーピング遺伝子によりコードされることが多い。例えば、アクチンは、細胞構造、運動性、細胞分裂及び小胞運動性に寄与し、さらにユビキタスに発現される細胞骨格タンパク質である。したがって、多くのユビキタス自己抗原は、定常状態において細胞内に存在し、特定の細胞内区画中で滞留する。抗原は、定常状態において、例えば顕微鏡観察又は細胞分画により決定して抗原をその最大量において見出すことができる細胞位置に存在する。例えば、アクチンはエキソソームと会合状態において細胞外で見出すことができるという事実にかかわらず、莫大なアクチンが細胞のサイトゾル中で見出される。同様に、多くの抗原は、異なる細胞小器官を介して移動し得るが、主に単一の細胞小器官中に滞留する。例えば、多くの小胞体（ＥＲ）滞留タンパク質はシス−ゴルジを介して一過的に移動するが、ＥＲに直ちに戻され、そこで、それらは、定常状態において滞留する。
【００３０】
ある実施形態において、本明細書に記載のナノ粒子組成物についての使用のためのユビキタス自己抗原は、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ複合体−Ｅ２構成成分（ＰＤＣ−Ｅ２）に由来するポリペプチドである。ある実施形態において、ＰＤＣ−Ｅ２に由来するポリペプチドは、ＤＲＢ３＊０２０２についてＰＤＣ−Ｅ２３５３−３６７、ＰＤＣ−Ｅ２７２−８６及びＰＤＣ−Ｅ２４２２−４３６；ＤＲＢ５＊０１０１についてＰＤＣ−Ｅ２３５３−３６７、ＰＤＣ−Ｅ２８０−９４及びＰＤＣ−Ｅ２５３５−５４９；ＤＲＢ４＊０１０１についてＰＤＣ−Ｅ２６２９−６４８、ＰＤＣ−Ｅ２１２２−１３５及びＰＤＣ−Ｅ２２４９−２６３；並びにＤＲＢ１＊０８０１についてＰＤＣ−Ｅ２２４９−２６３のいずれか１つ以上である。ある実施形態において、ＰＤＣ−Ｅ２に由来するポリペプチドは、ＰＤＣ−Ｅ２４２２−４３６及びＰＤＣ−Ｅ２８０−９４のいずれか１つ以上である。ある実施形態において、ＰＤＣ−Ｅ２に由来するポリペプチドは、配列番号１〜１２のいずれか１つ以上である。
【００３１】
ある実施形態において、本明細書に記載のナノ粒子組成物についての使用のためのユビキタス自己抗原は、シトクロムＰ４５０  ２Ｄ６（ＣＹＰ２Ｄ６）に由来するポリペプチドである。ある実施形態において、ＣＹＰ２Ｄ６に由来するポリペプチドは、ＣＹＰ２Ｄ
６２８４−２９８、ＣＹＰ２Ｄ６２８９−３０３、ＣＹＰ２Ｄ６３１８−３３２、ＣＹＰ２Ｄ６３１３−３３２、ＣＹＰ２Ｄ６３９３−４１２、ＣＹＰ２Ｄ６１９２−２０６、ＣＹＰ２Ｄ６５−１９、ＣＹＰ２Ｄ６２９３−３０７（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＣＹＰ２Ｄ６２１９−２３３、ＣＹＰ２Ｄ６２３７−２５１、ＣＹＰ２Ｄ６１５−２９（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＣＹＰ２Ｄ６２３５−２４９、ＣＹＰ２Ｄ６３１７−３３１、ＣＹＰ２Ｄ６２９３−３０７（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＣＹＰ２Ｄ６４２８−４４２、ＣＹＰ２Ｄ６２３７−２５１、ＣＹＰ２Ｄ６１４−２８（ＤＲＢ５＊０１０１について）；ＣＹＰ２Ｄ６１９９−２１３、ＣＹＰ２Ｄ６４５０−４６４、ＣＹＰ２Ｄ６３０１−３１５（ＤＲＢ１＊０４０１について）；ＣＹＰ２Ｄ６４５２−４６６、ＣＹＰ２Ｄ６５９−７３、ＣＹＰ２Ｄ６１３０−１４４、ＣＹＰ２Ｄ６１９３−２１２、ＣＹＰ２Ｄ６３０５−３２４、ＣＹＰ２Ｄ６１５−２９（ＤＲＢ１＊０７０１について）のいずれか１つ以上である。ある実施形態において、ＣＹＰ２Ｄ６に由来するポリペプチドは、配列番号１３〜３７のいずれか１つ以上である。
【００３２】
ある実施形態において、本明細書に記載のナノ粒子組成物についての使用のためのユビキタス自己抗原は、可溶性肝抗原（ＳＬＡ）に由来するポリペプチドである。ある実施形態において、ＳＬＡに由来するポリペプチドは、ＳＬＡ３３４−３４８、ＳＬＡ１９６−２１０、ＳＬＡ１１５−１２９、ＳＬＡ３７３−３８６、ＳＬＡ１８６−１９７（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＳＬＡ３４２−２５６、ＳＬＡ１１０−１２４、ＳＬＡ２９９−３１３（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＳＬＡ４９−６３、ＳＬＡ２６０−２７４、ＳＬＡ１１９−１３３（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＳＬＡ８６−１００、ＳＬＡ２６−４０、ＳＬＡ３３１−３４５（ＤＲＢ５＊０１０１について）；ＳＬＡ３１７−３３１、ＳＬＡ１７１−１８５、ＳＬＡ４１７−４３１（ＤＲＢ１＊０４０１について）；ＳＬＡ３５９−３７３、ＳＬＡ２１５−２２９、ＳＬＡ１１１−１２５（ＤＲＢ１＊０７０１について）のいずれか１つ以上である。ある実施形態において、ＳＬＡに由来するポリペプチドは、配列番号５３〜７２のいずれか１つ以上である。
【００３３】
ある実施形態において、本明細書に記載のナノ粒子組成物についての使用のためのユビキタス自己抗原は、アクチン（ＡＣＴＢ）に由来するポリペプチドである。ある実施形態において、ＡＣＴＢに由来するポリペプチドは、ＡＣＴＢ２０２−２１６、ＡＣＴＢ１７０−１８４、ＡＣＴＢ２４５−２５９、（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＡＣＴＢ１８７−２０１、ＡＣＴＢ１７２−１８６、ＡＣＴＢ１３１−１４５（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＡＣＴＢ１３１−１４５、ＡＣＴＢ１７１−１８５、ＡＣＴＢ１２９−１４３（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＡＣＴＢ１６４−１７８、ＡＣＴＢ２５−３９、ＡＣＴＢ３２３−３３７（ＤＲＢ５＊０１０１について）のいずれか１つ以上である。ある実施形態において、ＡＣＴＢに由来するポリペプチドは、ＡＣＴＢ１４６−１６０、ＡＣＴＢ１８−３２及びＡＣＴＢ１７１−１８５のいずれか１つ以上である。ある実施形態において、ＡＣＴＢに由来するポリペプチドは、配列番号３８〜５２のいずれか１つ以上である。
【００３４】
ある実施形態において、本明細書に記載のナノ粒子組成物についての使用のためのユビキタス自己抗原は、ホルムイミドイルトランスフェラーゼ−シクロデアミナーゼ（ＦＴＣＤ）に由来するポリペプチドである。ある実施形態において、ＦＴＣＤに由来するポリペプチドは、ＦＴＣＤ４３９−４５３、ＦＴＣＤ３８１−３９５、ＦＴＣＤ２９７−３１１（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＦＴＣＤ５２５−５３９、ＦＴＣＤ２１８−２３２、ＦＴＣＤ４９５−５０９（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＦＴＣＤ２６２−２７６、ＦＴＣＤ３００−３１４、ＦＴＣＤ２５９−２７３（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＦＴＣＤ４９０−５０４、ＦＴＣＤ３８９−４０３、ＦＴＣＤ２９５−３０９（ＤＲＢ５＊０１０１について）のいずれか１つ以上である。ある実施形態において、ＦＴＣＤに由来するポリペプチドは、ＦＴＣＤ２７１−２８５、ＦＴＣＤ４９８−５１２及びＦＴＣＤ３０
１−３１５のいずれか１つ以上である。ある実施形態において、ＦＴＣＤに由来するポリペプチドは、配列番号７３〜８７のいずれか１つ以上である。
【００３５】
ある実施形態において、本明細書に記載のナノ粒子組成物についての使用のためのユビキタス自己抗原は、ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）に由来するポリペプチドである。ある実施形態において、ＭＰＯに由来するポリペプチドは、ＭＰＯ３２２−３３６、ＭＰＯ７１４−７２８、ＭＰＯ６１７−６３１（ＤＲＢ３＊０２０２について）；ＭＰＯ５０４−５１８、ＭＰＯ４６２−４７６、ＭＰＯ６１７−６３１（ＤＲＢ１＊０３０１について）；ＭＰＯ４４４−４５８、ＭＰＯ６８９−７０３、ＭＰＯ２４８−２６２（ＤＲＢ４＊０１０１について）；ＭＰＯ５１１−５２５、ＭＰＯ９７−１１１、ＭＰＯ６１６−６３０（ＤＲＢ５＊０１０１について）のいずれか１つ以上である。ある実施形態において、ＭＰＯに由来するポリペプチドは、配列番号８８〜９９のいずれか１つ以上である。
【００３６】
追加のユビキタス自己抗原は、本開示の最後に表５に列記される。ある実施形態において、本明細書に記載のナノ粒子組成物についての使用のためのユビキタス自己抗原は、表５に列記されるタンパク質又はポリペプチドに由来する。ある実施形態において、本明細書に記載のナノ粒子組成物についての使用のためのユビキタス自己抗原は、表５に列記されるタンパク質又はポリペプチドのヒトホモログに由来する。ある実施形態において、ホモログ又はヒトホモログは、表５に列記されるタンパク質と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は９８％の同一性を示すタンパク質又はポリペプチドである。
【００３７】
組織特異的抗原
本明細書に記載のナノ粒子組成物及び方法は、組織特異的抗原でないユビキタス自己抗原を利用する。多くの自己免疫性又は炎症性障害は、組織特異的抗原に指向される免疫応答と関連する。これは、自己免疫性又は炎症性疾患を治療するための医薬品の産生についての問題を表す。なぜなら、それぞれの疾患は、その抗原を標的化する特異的医薬品を要求するためである。代わりに、非特異的免疫阻害剤を使用することができるが、それらは、顕著な全身副作用を伴う。
【００３８】
組織特異的抗原は、自己免疫性疾患により罹患された組織又は細胞タイプにより発現されることが多く、例えば、多発性硬化症の主な病理学的結果は、神経系組織の脱髄であり、結果として、多発性硬化症についての組織特異的抗原は、大部分が神経系に制限される（例えば、ミエリン塩基性タンパク質）。組織特異的抗原は、特異的細胞又は細胞タイプと会合する抗原である。組織特異的抗原は、特殊化された機能を遂行し得るか、又は特殊化された組織構造に寄与し得る。ある実施形態において、組織特異的抗原は、以下の組織のいずれか１つ：神経、腎臓、心臓、肺、肝臓、小腸、結腸、胃、筋肉、結合及び血管に制限された発現を有する。ある実施形態において、組織特異的抗原は、以下の細胞タイプのいずれか１つ：ベータ細胞、アルファ細胞、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球、シュワン細胞、副腎皮質細胞の発現に制限される。
【００３９】
多くの組織特異的抗原は、他の細胞又は組織タイプ中で極めて低いレベルにおいて発現され得るが、主な発現の資源は、１つの特異的細胞又は組織タイプである。例えば、ある遺伝子の細胞特異的又は組織タイプ特異的発現を示す単一の細胞又は組織タイプは、任意の他の無関連細胞タイプよりもｍＲＮＡ又はタンパク質レベルにおいて少なくとも１０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１０００倍以上の遺伝子を発現する。さらに、一部の組織特異的抗原は、病原性条件下において又は外部刺激により細胞特異的抗原の異所性発現を獲得する。異なる細胞タイプが病原性又は外部条件下で異所性発現を獲得し得るというのみで、抗原の組織特異的性質が損失されないことが意図される。例えば、インスリンは、ベータ細胞により産生される組織特異的抗原であるが、遺伝的不安定性に起因して、一
部の腫瘍（インスリノーマ）は、インスリンを発現し、これらのタイプの状況下において、インスリンは、依然として組織特異的とみなされる。
【００４０】
ユビキタス自己抗原でない組織特異的抗原は、主に、特定の組織特異的自己免疫性又は炎症性疾患と関連する抗原である。
【００４１】
ある実施形態において、自己免疫性又は炎症性疾患は、多発性硬化症である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原でない組織特異的抗原は、ミエリン塩基性タンパク質、ミエリン関連糖タンパク質、ミエリンオリゴデンドロサイトタンパク質（ＭＯＧ）、プロテオリピドタンパク質、オリゴデンドロサイトミエリンオリゴタンパク質、ミエリン関連オリゴデンドロサイト塩基性タンパク質、オリゴデンドロサイト特異的タンパク質、熱ショックタンパク質、オリゴデンドロサイト特異的タンパク質、ＮＯＧＯ  Ａ、糖タンパク質Ｐｏ、末梢ミエリンタンパク質２２及び／又は２’３’−環状ヌクレオチド３’−ホスホジエステラーゼに由来するポリペプチドである。
【００４２】
ある実施形態において、自己免疫性又は炎症性疾患は、Ｉ型糖尿病である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原でない組織特異的抗原は、プレプロインスリン、プロインスリン、膵島特異的グルコース−６−ホスファターゼ（ＩＧＲＰ）、グルタミン酸デカルボキシラーゼ（ＧＡＤ）、膵島細胞自己抗原−２（ＩＣＡ２）及び／又はインスリンに由来するポリペプチドである。
【００４３】
ある実施形態において、自己免疫性又は炎症性疾患は、落葉状天疱瘡（ＰＦ）又は尋常性天疱瘡（ＰＶ）である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原でない組織特異的抗原は、デスモグレイン３（ＤＧ３）及び／又はデスモグレイン１（ＤＧ１）に由来するポリペプチドである。
【００４４】
ある実施形態において、自己免疫性又は炎症性疾患は、視神経脊髄炎スペクトラム障害（ＮＭＯ）である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原でない組織特異的抗原は、アクアポリン４（ＡＱＰ４）に由来するポリペプチドである。
【００４５】
ある実施形態において、自己免疫性又は炎症性疾患は、関節炎である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原でない組織特異的抗原は、熱ショックタンパク質、免疫グロブリン結合タンパク質、異種核ＲＮＰ、アネキシンＶ、カルパスタチン、ＩＩ型コラーゲン、グルコース−６−リン酸イソメラーゼ、伸長因子ヒト軟骨ｇｐ３９、マンノース結合レクチン、シトルリン化ビメンチン、ＩＩ型コラーゲン、フィブリノゲン、アルファエノラーゼ、抗カルバミル化タンパク質（抗ＣａｒＰ）、ペプチジルアルギニンデイミナーゼ４型（ＰＡＤ４）、ＢＲＡＦ、フィブリノゲンガンマ鎖、インター−アルファ−トリプシンインヒビター重鎖Ｈ１、アルファ−１−抗トリプシン、血漿プロテアーゼＣ１阻害剤、ゲルゾリン、アルファ−１−Ｂ糖タンパク質、セルロプラスミン、インター−アルファ−トリプシンインヒビター重鎖Ｈ４、補体因子Ｈ、アルファ２マクログロブリン、血清アミロイド、Ｃ反応性タンパク質、血清アルブミン、フィブリノゲンベータ鎖、セロトランスフェリン、アルファ２ＨＳ糖タンパク質、ビメンチン及び／又は補体Ｃ３に由来するポリペプチドである。
【００４６】
ある実施形態において、自己免疫性又は炎症性疾患は、アレルギー性喘息である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原でない組織特異的抗原は、ＤＥＲＰ１及び／又はＤＥＲＰ２に由来するポリペプチドである。
【００４７】
ある実施形態において、自己免疫性又は炎症性疾患は、炎症性腸疾患である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原でない組織特異的抗原は、バクテロイデスインテグラ
ーゼ、フラジェリン、フラジェリン２（Ｆｌａ−２／Ｆｌａ−Ｘ）又は機能不明大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）タンパク質（ＹＩＤＸ）に由来するポリペプチドである。
【００４８】
ある実施形態において、自己免疫性又は炎症性疾患は、全身性エリテマトーデス病である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原でない組織特異的抗原は、ポリペプチドＨ４、Ｈ２Ｂ、Ｈ１’、ｄｓＤＮＡ、ＲＮＰ、Ｓｍｉｔｈ（Ｓｍ）、シェーグレン症候群関連抗原Ａ（ＳＳ−Ａ）／Ｒｏ、シェーグレン症候群関連抗原Ｂ（ＳＳ−Ｂ）／Ｌａ及び／又はヒストンである。一部の実施形態において、ＳＳ−Ａとしては、限定されるものではないが、ＲＯ６０及びＲＯ５２が挙げられる。一部の実施形態において、ヒストンとしては、限定されるものではないが、Ｈ４、Ｈ２Ｂ、Ｈ１が挙げられる。
【００４９】
ある実施形態において、自己免疫性又は炎症性疾患は、アテローム性動脈硬化症である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原でない組織特異的抗原は、アポリポタンパク質Ｂ（ＡｐｏＢ）及び／又はアポリポタンパク質Ｅ（ＡｐｏＥ）に由来するポリペプチドである。
【００５０】
ある実施形態において、自己免疫性又は炎症性疾患は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原でない組織特異的抗原は、エラスチンに由来するポリペプチドである。
【００５１】
ある実施形態において、自己免疫性又は炎症性疾患は、乾癬である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原でない組織特異的抗原は、ヒトａｄａｍｉｓ様タンパク質５（ＡＴＬ５）、カテリシジン抗菌ペプチド（ＣＡＰ１８）及び／又はＡＤＡＭＴＳ様タンパク質５（ＡＤＭＴＳＬ５）に由来するポリペプチドである。
【００５２】
ある実施形態において、自己免疫性又は炎症性疾患は、ブドウ膜炎である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原でない組織特異的抗原は、アレスチン、ヒト網膜Ｓ抗原及び／又は光受容体間レチノイド結合タンパク質（ＩＲＢＰ）に由来するポリペプチドである。
【００５３】
ある実施形態において、自己免疫性又は炎症性疾患は、シェーグレン症候群である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原でない組織特異的抗原は、（ＳＳ−Ａ）／Ｒｏ、（ＳＳ−Ｂ）／Ｌａ、ＲＯ６０、ＲＯ５２及び／又はムスカリン受容体３（ＭＲ３）に由来するポリペプチドである。
【００５４】
ある実施形態において、自己免疫性又は炎症性疾患は、強皮症である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原でない組織特異的抗原は、セントロメア自己抗原セントロメアタンパク質Ｃ（ＣＥＮＰ−Ｃ）、ＤＮＡトポイソメラーゼＩ（ＴＯＰ１）及び／又はＲＮＡポリメラーゼＩＩＩに由来するポリペプチドである。
【００５５】
ある実施形態において自己免疫性又は炎症性疾患は、抗リン脂質症候群である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原でない組織特異的抗原は、ベータ−２−糖タンパク質１（ＢＧ２Ｐ１又はＡＰＯＨ）に由来するポリペプチドである。
【００５６】
ある実施形態において、自己免疫性又は炎症性疾患は、スティッフマン症候群である。ある実施形態において、ユビキタス自己抗原でない組織特異的抗原は、ＧＡＤ６５に由来するポリペプチドである。
【００５７】
抗原−主要組織適合複合体（ＭＨＣ）
本開示のナノ粒子複合体は、ユビキタス自己抗原−ＭＨＣにカップリングされている、
層及び／又はコーティングを有する又は有さないナノ粒子コアを含む。個々のＭＨＣポリペプチド及び抗原性（例えば、ポリペプチド）構成成分は、共有又は非共有結合を介して（例えば、水素結合、イオン結合又は疎水性結合を介して）複合体を形成する。このような複合体の調製は、様々な程度の操作を要求し得、そのような方法は、文献において周知である。一部の態様において、抗原性構成成分は、例えば、ＭＨＣ及び抗原性構成成分を混合することによりＭＨＣ構成成分のポケット部分と非共有結合により会合させることができ；これは、ＭＨＣと抗原との間の天然結合親和性に依存する。代わりに、一部の態様において、ＭＨＣ構成成分は、標準的な手順、例えば、限定されるものではないが、公知のカップリング剤の導入又は光親和性標識を使用して抗原性構成成分と共有結合により会合させることができる（例えば、Ｈａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２４：５７０２−５７１１（１９８５）を参照されたい）。ある態様において、抗原性構成成分は、ペプチド結合又は文献に考察される他の方法、例として、限定されるものではないが、糖タンパク質上の炭水化物基、例として、例えばアルファ及び／又はベータ鎖の炭水化物部分を介する付着を介してＭＨＣ構成成分に作動可能にカップリングさせることができる。特定の実施形態において、抗原性構成成分は、適切なＭＨＣ分子のＮ末端又はＣ末端に付着させることができる。代わりに、ある実施形態において、ＭＨＣ複合体は、抗原性構成成分の配列を、ＭＨＣをコードする配列中に、その両方が機能的特性を保持するように取り込むことにより組換えにより形成することができる。
【００５８】
複数のユビキタス自己抗原−ＭＨＣを同一のナノ粒子コアにカップリングさせることができ；これらの複合体、ＭＨＣ及び／又は抗原は、互いに同一であるか又は異なり得る。
【００５９】
主要組織適合分子
本明細書に記載のユビキタス自己抗原は、ＭＨＣ分子と会合して（ユビキタス自己抗原−ＭＨＣを形成して）おり、ナノ粒子にカップリングされている。抗原は、ＭＨＣ分子の結合溝に結合している。ＭＨＣ分子は、ポリペプチドである抗原に主に結合するが、ポリペプチドは、修飾、例えば脂質化、グリコシル化、リン酸化などを含み得る。ＭＨＣ分子は、ＭＨＣクラスＩ分子（ＭＨＣＩ）又はＭＨＣクラスＩＩ分子（ＭＨＣＩＩ）であり得る。ＭＨＣクラスＩ分子は、それらの結合溝中で８〜１０個のアミノ酸残基のポリペプチドに結合する。なぜなら、結合溝が両側で近接しているためである。ＭＨＣクラスＩＩ分子、例として本明細書に記載のものは、少なくとも８つのアミノ酸残基長さのポリペプチドに結合するが、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９個のアミノ酸残基以上の長さを有するより長いペプチドに結合し得る。なぜなら、結合溝が両側で開口されているためである。
【００６０】
ヒト個体についての使用のため、本明細書において利用されるＭＨＣ分子は、ヒトである（ヒト白血球抗原、略して「ＨＬＡ」とも称される）。ある実施形態において、ＭＨＣクラスＩ分子は、古典的又は非古典的ＭＨＣクラスＩ分子ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−Ｅ、ＣＤ１ｄ又はそれらの断片若しくは生物学的同等物である。ある実施形態において、ＭＨＣクラスＩＩ分子は、ＨＬＡ−ＤＲＢ１、ＨＬＡ−ＤＲＢ３、ＨＬＡ−ＤＲＢ４、ＨＬＡ−ＤＲＢ５、ＨＬＡ−ＤＱＢ１若しくはＨＬＡ−ＤＰＢ１又はそれらの断片若しくは生物学的均等物である。一部の実施形態において、抗原−ＭＨＣ（ｐＭＨＣ）は、単鎖構築物であり得る。一部の実施形態において、ｐＭＨＣは、二本鎖構築物であり得る。クラスＩＩＭＨＣの場合、ＨＬＡのベータ鎖は、一般に、適切なアルファ鎖と非共有結合してベータ鎖と対合しているアルファ鎖との二本鎖ヘテロ二量体を形成している。一般に、ＭＨＣクラスＩＩのアルファ鎖は、かなり低い多型度、例えばＤＲアルファ鎖を示す。
【００６１】
ＭＨＣクラスＩＩ複合体は、アルファ及びベータ鎖を含むヘテロ二量体であるため、ヘテロ二量体は、一部の条件下で形成する問題を有し得るか、又は一部の状況において本質
的に不安定である。ＭＨＣクラスＩＩ分子が本明細書における方法又は組成物中に配備される場合、ＭＨＣ分子は、ノブインホールアーキテクチャをさらに含み得る。一般に、アルファ又はベータ鎖は、突起を含むように改変された抗体ＣＨ２及びＣＨ３ドメインに融合している一方、ヘテロ二量体の対応する他のアルファ又はベータ鎖は、空洞を含むように改変された抗体ＣＨ２及びＣＨ３ドメインに融合している。
【００６２】
本明細書において使用される「ノブインホール」又は「ノブイントゥホール」は、第１のポリペプチドの界面における突起（又は「ノブ」）及び第２のポリペプチドの界面における対応する空洞（又は「ホール」）を要求し、その結果、突起を空洞中に位置させてヘテロ二量体形成を促進することができるポリペプチジルアーキテクチャを指す。突起は、第１のポリペプチドの界面からの小さいアミノ酸側鎖をより大きい側鎖（例えば、フェニルアラニン又はチロシン）により置き換えることにより構築することができる。突起と同一又は類似サイズの空洞は、第２のポリペプチドの界面中に、大きいアミノ酸側鎖をより小さいもの（例えば、アラニン又はトレオニン）により置き換えることにより作出することができる。突起及び空洞は、合成手段により、例えばポリペプチドをコードする核酸を変更することにより又はペプチド合成により、当業者により定型的な方法を使用して作製することができる。一部の実施形態において、第１のポリペプチドの界面は、第１のポリペプチド中のＦｃドメイン上に局在しており；第２のポリペプチドの界面は、第２のポリペプチド上のＦｃドメイン上に局在している。ノブインホールヘテロ二量体並びにその調製方法及び使用は、全てが全体として参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，７３１，１６８号明細書；同第５，８０７，７０６号明細書；同第５，８２１，３３３号明細書；同第７，６４２，２２８号明細書；同第７，６９５，９３６号明細書；同第８，２１６，８０５号明細書；及び同第８，６７９，７８５号明細書；並びにＭｅｒｃｈａｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９８，１６：６７７−６８１に開示されている。
【００６３】
代わりに又はさらに、本明細書に記載の抗原のいずれも、ＭＨＣクラスＩＩアルファ又はベータ鎖のシステイン残基（遺伝子操作又は天然）と相互作用するシステイン残基を含み得る。これは、一般にシステイントラップとして公知である。
【００６４】
システイントラップを利用して、本明細書に記載のヘテロ二量体を安定化させることができる。システイントラッピングは、未結合ポリペプチドパートナーから共有結合ポリペプチド複合体を形成することを含む。一部の実施形態において、システイントラッピングは、方針上選択された位置におけるシステインをポリペプチドパートナーの相互作用界面内に導入して安定化ポリペプチド複合体を形成することを含む。ある実施形態において、システイントラッピングは、ポリペプチド複合体を安定化して特異的立体構造を優先し、解離を防止し得る。システイントラッピングは、ジスルフィドトラッピング及びジスルフィド架橋とも称される。システイントラッピングの方法及び用途の例は、Ｋｕｆａｒｅｖａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．５７０：３８９−４２０（２０１６）に概説されている。ＭＨＣに関して、システインは、ＭＨＣクラスＩＩ二量体の結合溝中で会合することが公知であるか、又はそれが考えられるポリペプチド中に遺伝子操作される。次いで、システインを結合溝中又はその付近において遺伝子操作し、その結果、ポリペプチドが結合溝と会合した場合、結合溝システインが接近してポリペプチドシステインとのジスルフィド結合を形成し得る。
【００６５】
一態様において、少なくとも１つの第１のポリペプチド及び少なくとも１つの第２のポリペプチドを含む単離ヘテロ二量体であって、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、界面において接触し、第１のポリペプチドの界面は、第２のポリペプチドの界面中の遺伝子操作空洞中で位置決め可能な遺伝子操作突起を含み；（ｉ）第１のポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩＩα１ドメイン、ＭＨＣクラスＩＩα２ドメイン若しくはそれらの組
合せを含み；第２のポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩＩβ１ドメイン、ＭＨＣクラスＩＩβ２ドメイン若しくはそれらの組合せを含み；又は（ｉｉ）第１のポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩＩβ１ドメイン、ＭＨＣクラスＩＩβ２ドメイン若しくはそれらの組合せを含み、第２のポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩＩα１ドメイン、ＭＨＣクラスＩＩα２ドメイン若しくはそれらの組合せを含む、単離ヘテロ二量体が本明細書に提供される。第１のポリペプチド、第２のポリペプチド又はその両方は、ポリペプチドに融合している抗体ＣＨ３ドメインを含み得る。任意に、第１のポリペプチド、第２のポリペプチド又はその両方は、ＭＨＣ（α又はβ鎖）とＣＨ３ドメインとの間に局在している抗体ＣＨ２ドメインを含む。ある実施形態において、第１のポリペプチドは、抗体ＣＨ３ドメインを含み、抗体ＣＨ３ドメインは、Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ並びにＳ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗの両方（ＥＵナンバリング）からなるリストから選択される少なくとも１つの突然変異を含む。ある実施形態において、第２のポリペプチドは、抗体ＣＨ３ドメインを含み、抗体ＣＨ３ドメインは、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ（ＥＵナンバリング）及びそれらの組合せからなるリストから選択される少なくとも１つの突然変異を含む。さらなる実施形態において、単離ヘテロ二量体は、任意に第１又は第２のポリペプチドのいずれかに共有結合しているユビキタス自己抗原を含む。任意に、ユビキタス自己抗原は、第１又は第２のポリペプチドのいずれかのシステイン残基と相互作用してシステイントラップを作出するシステイン残基を含む。
【００６６】
一態様において、ヘテロ二量体の一方のポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩＩα１ドメイン、ＭＨＣクラスＩＩα２ドメイン又はそれらの組合せ；及び少なくとも１つの遺伝子操作突起を含む。一部の実施形態において、少なくとも１つの遺伝子操作突起は、ＭＨＣクラスＩＩα１ドメインにおいてもＭＨＣクラスＩＩα２ドメインにおいても局在していない。一部の実施形態において、遺伝子操作突起は、ポリペプチドに融合している抗体ＣＨ３ドメインにおいて局在している。一部の実施形態において、ポリペプチドは、任意に、ＭＨＣクラスＩＩα２ドメインと遺伝子操作突起を有するＣＨ３ドメインとの間に局在している抗体ＣＨ２ドメインを含む。ある実施形態において、ポリペプチドは、抗体ＣＨ３ドメインを含み、抗体ＣＨ３ドメインは、Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ並びにＳ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗの両方（ＥＵナンバリング）からなるリストから選択される少なくとも１つの突然変異を含む。さらなる実施形態において、ポリペプチドは、ユビキタス自己抗原を含む。任意に、ユビキタス自己抗原は、ＭＨＣα１又はβ１ドメインのいずれかのシステイン残基と相互作用してシステイントラップを作出するシステイン残基を含む。
【００６７】
一態様において、ヘテロ二量体の一方のポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩＩβ１ドメイン、ＭＨＣクラスＩＩβ２ドメイン又はそれらの組合せ；及び少なくとも１つの遺伝子操作突起を含む。一部の実施形態において、少なくとも１つの遺伝子操作突起は、ＭＨＣクラスＩＩβ１ドメインにおいてもＭＨＣクラスＩＩβ２ドメインにおいても局在していない。一部の実施形態において、遺伝子操作突起は、ポリペプチドに融合している抗体ＣＨ３ドメインにおいて局在している。一部の実施形態において、ポリペプチドは、任意に、ＭＨＣクラスＩＩβ２ドメインと遺伝子操作突起を有するＣＨ３ドメインとの間に局在している抗体ＣＨ２ドメインを含む。ある実施形態において、ポリペプチドは、抗体ＣＨ３ドメインを含み、抗体ＣＨ３ドメインは、Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ並びにＳ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗの両方（ＥＵナンバリング）からなるリストから選択される少なくとも１つの突然変異を含む。さらなる実施形態において、ポリペプチドは、ユビキタス自己抗原を含む。任意に、ユビキタス自己抗原は、ＭＨＣα１又はβ１ドメインのいずれかのシステイン残基と相互作用してシステイントラップを作出するシステイン残基を含む。
【００６８】
一態様において、ヘテロ二量体の一方のポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩＩα１ドメイン、ＭＨＣクラスＩＩα２ドメイン又はそれらの組合せ；及び少なくとも１つの遺伝子操作空洞を含む。一部の実施形態において、少なくとも１つの遺伝子操作空洞は、ＭＨＣク
ラスＩＩα１ドメインにおいてもＭＨＣクラスＩＩα２ドメインにおいても局在していない。一部の実施形態において、遺伝子操作空洞は、ポリペプチドに融合している抗体ＣＨ３ドメインにおいて局在している。一部の実施形態において、ポリペプチドは、任意に、ＭＨＣクラスＩＩα２ドメインと遺伝子操作空洞を有するＣＨ３ドメインとの間に局在している抗体ＣＨ２ドメインを含む。ある実施形態において、ポリペプチドは、抗体ＣＨ３ドメインを含み、抗体ＣＨ３ドメインは、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ（ＥＵナンバリング）及びそれらの組合せからなるリストから選択される少なくとも１つの突然変異を含む。さらなる実施形態において、ポリペプチドは、ユビキタス自己抗原を含む。任意に、ユビキタス自己抗原は、ＭＨＣα１又はβ１ドメインのいずれかのシステイン残基と相互作用してシステイントラップを作出するシステイン残基を含む。
【００６９】
一態様において、ヘテロ二量体の一方のポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩＩβ１ドメイン、ＭＨＣクラスＩＩβ２ドメイン又はそれらの組合せ；及び少なくとも１つの遺伝子操作空洞を含む。一部の実施形態において、少なくとも１つの遺伝子操作空洞は、ＭＨＣクラスＩＩβ１ドメインにおいてもＭＨＣクラスＩＩβ２ドメインにおいても局在していない。一部の実施形態において、遺伝子操作空洞は、ポリペプチドに融合している抗体ＣＨ３ドメインにおいて局在している。一部の実施形態において、ポリペプチドは、任意に、ＭＨＣクラスＩＩβ２ドメインと遺伝子操作空洞を有するＣＨ３ドメインとの間に局在している抗体ＣＨ２ドメインを含む。ある実施形態において、ポリペプチドは、抗体ＣＨ３ドメインを含み、抗体ＣＨ３ドメインは、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ（ＥＵナンバリング）及びそれらの組合せからなるリストから選択される少なくとも１つの突然変異を含む。さらなる実施形態において、ポリペプチドは、ユビキタス自己抗原を含む。任意に、ユビキタス自己抗原は、ＭＨＣα１又はβ１ドメインのいずれかのシステイン残基と相互作用してシステイントラップを作出するシステイン残基を含む。
【００７０】
図２０Ａ及びＢは、遺伝子操作空洞及び遺伝子操作突起を含む遺伝子操作ｕａＭＨＣの非限定的な実施形態を示す。図２０Ａは、免疫グロブリンＣＨ２及びＣＨ３ドメインに融合しているヒトＭＨＣクラスＩＩアルファ鎖、配列番号１０３を示す。ＣＨ３ドメインは、２つのアミノ酸Ｓ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗを置換することにより作出された遺伝子操作ノブを含む。アルファ鎖は、官能化リンカーへのコンジュゲーションを可能とするための任意のｃ末端システインを含むが、このｃ末端システインは、代替的にベータ鎖上に含めることができる。図２０Ｂは、免疫グロブリンＣＨ２及びＣＨ３ドメインに融合しているヒトＭＨＣクラスＩＩベータ鎖、配列番号１０４を示す。ＣＨ３ドメインは、４つのアミノ酸Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖを置換することにより作出された遺伝子操作ホールを含む。ベータ鎖は、ペプチドリンカーによりベータ鎖に共有結合によりカップリングされているユビキタス自己抗原（ＰＤＣ−Ｅ２１２２−１３５）も含む。突起−空洞相互作用は、インタクトｕａＭＨＣヘテロ二量体の集合を優先し、免疫グロブリンを精製するための標準的技術を使用してその精製を可能とする。ｕａＭＨＣは、精製されると、官能化リンカー分子（例えば、官能化ＰＥＧ分子）を介して好適なナノ粒子にカップリングさせることができる。ある実施形態において、ＭＨＣヘテロ二量体のアルファ鎖は、配列番号１０３と少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施形態において、ＭＨＣヘテロ二量体のベータ鎖は、配列番号１０４と少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施形態において、ＭＨＣヘテロ二量体は、配列番号１０３と少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアルファ鎖；及び配列番号１０４と少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるベータ鎖を含む。ある実施形態において、アルファ鎖及びベータ鎖は、配列番号１０３又は１０４並びに配列番号１０３のＣＨ２及びＣＨ３ドメイン、配列番号１０３のＣＨ２及びＣＨ３ドメインのいずれか１つ以上と少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％同一であり、且つ／又は
ユビキタス自己抗原は、配列番号１０４に開示されるものと同一である。ある実施形態において、アルファ鎖及びベータ鎖は、配列番号１０３又は１０４と少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であり、ユビキタス自己抗原は、配列番号１０４に開示されるものと同一である。当業者は、ヒトＭＨＣのアルファ及びベータ鎖が高度に多型であり、したがって比較的高い程度の変動に忍容し得ることを認識する。当業者は、配列番号１０２及び１０４に示されるＭＨＣのアルファ及びベータ鎖を、異なるＨＬＡアレル及び特異的置換アレルに結合し得る適切なユビキタス自己抗原に代用することもできる。このようなＨＬＡアレル及びユビキタス自己抗原の対合は、本出願の他の箇所、例えば本出願の最後の配列表において開示される。
【００７１】
ナノ粒子
ユビキタス自己抗原−ＭＨＣは、ナノ粒子コアにカップリングされている（ｕａＭＨＣ−ＮＰ）。ナノ粒子は、種々の材料から作製することができる。ある実施形態において、ナノ粒子は、非リポソーム性であり、且つ／又はソリッドコアを有する。ある実施形態において、ソリッドコアは、金属又は金属酸化物であり得る。ある実施形態において、ソリッドコアは、鉄、酸化鉄又は金であり得る。ソリッドコアは、密度が約２．０ｇ／ｃｍ３、約３．０ｇ／ｃｍ３、約４．０ｇ／ｃｍ３、約５．０ｇ／ｃｍ３、約６．０ｇ／ｃｍ３又は約７．０ｇ／ｃｍ３よりも大きいような高密度コアであり得る。ある実施形態において、ソリッドコアの密度は、約４．０ｇ／ｃｍ３〜約８．０ｇ／ｃｍ３である。ある実施形態において、ソリッドコアの密度は、約５．０ｇ／ｃｍ３〜約８．０ｇ／ｃｍ３である。ある実施形態において、ソリッドコアの密度は、約５．０ｇ／ｃｍ３〜約７．０ｇ／ｃｍ３である。ある実施形態において、ソリッドコアの密度は、約５．０ｇ／ｃｍ３〜約６．０ｇ／ｃｍ３である。
【００７２】
ｕａＭＨＣ−ＮＰのナノ粒子コアは、コア、例えばソリッドコア、金属コア、デンドリマーコア、ポリマーミセルナノ粒子コア、ナノロッド、フラーレン、ナノシェル、コアシェル、タンパク質ベースナノ構造又は脂質ベースナノ構造を含むか、又は本質的にそれからなるか、又はさらにはそれからなる。一部の態様において、ナノ粒子コアは、生体吸収性及び／又は生分解性である。一部の態様において、ナノ粒子コアは、コアから成長した樹様構造を有する高分岐巨大分子を含むか、又は代わりに本質的にそれからなるか、又はさらにはそれからなるデンドリマーナノ粒子コアである。さらなる態様において、デンドリマーナノ粒子コアは、ポリ（アミドアミン）ベースデンドリマー又はポリＬ−リジンベースデンドリマーを含むか、又は代わりに本質的にそれからなるか、又はさらにはそれからなり得る。ある態様において、ナノ粒子コアは、ナノスケール化コアシェル構造に集合した両親媒性ブロックコポリマーを含むか、又は代わりに本質的にそれからなるか、又はさらにはそれからなるポリマーミセルコアである。さらなる態様において、ポリマーミセルコアは、ポリエチレングリコール−ジアステアロイルホスファチジルエタノールアミンブロックコポリマーを使用して産生されたポリマーミセルを含むか、又は本質的にそれからなるか、又はさらにはそれからなる。さらなる態様において、ナノ粒子コアは、金属を含むか、又は代わりに本質的にそれからなるか、又はさらにはそれからなる。別の態様において、ナノ粒子コアは、リポソームでない。コア材料の追加の例としては、限定されるものではないが、標準及び特殊ガラス、シリカ、ポリスチレン、ポリエステル、ポリカーボネート、アクリルポリマー、ポリアクリルアミド、ポリアクリロニトリル、ポリアミド、フルオロポリマー、シリコーン、セルロース、シリコン、金属（例えば、鉄、金、銀）、鉱物（例えば、ルビー）、ナノ粒子（例えば、金ナノ粒子、コロイド粒子、金属酸化物、金属硫化物、金属セレン化物及び磁気材料、例えば酸化鉄）並びにそれらの複合材料が挙げられる。一部の実施形態において、酸化鉄ナノ粒子コアは、酸化鉄（ＩＩ、ＩＩＩ）を含む。コアは、所望される特性に応じて均一組成のもの又は２つ以上のクラスの材料の複合材料であり得る。ある態様において、金属ナノ粒子が使用される。これらの金属粒子又はナノ粒子は、Ａｕ、Ｐｔ、Ｐｄ、Ｃｕ、Ａｇ、Ｃｏ、Ｆｅ、Ｎｉ、Ｍｎ、Ｓｍ、Ｎｄ
、Ｐｒ、Ｇｄ、Ｔｉ、Ｚｒ、Ｓｉ及びＩｎ、前駆体、それらの二元合金、それらの三元合金及びそれらの金属間化合物から形成することができる。そのような開示について参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６，７１２，９９７号明細書を参照されたい。ある実施形態において、コア及び層の組成（下記）は、ナノ粒子が生体適合性及び生体吸収性であることを条件として、変動し得る。コアは、所望される特性に応じて均一組成のもの又は２つ以上のクラスの材料の複合材料であり得る。ある態様において、金属ナノ球体が使用される。これらの金属ナノ粒子は、Ｆｅ、Ｃａ、Ｇａなどから形成することができる。ある実施形態において、ナノ粒子は、金属又は金属酸化物、例えば金又は酸化鉄を含むコアを含むか、又は代わりに本質的にそれからなるか、又はさらにはそれからなる。
【００７３】
別の態様において、少なくとも１つの本明細書に記載のユビキタス自己抗原−ＭＨＣ及びナノ粒子を含むｕａＭＨＣ−ＮＰであって、ナノ粒子は、非リポソーム性であり、酸化鉄コアを有する、ｕａＭＨＣ−ＮＰが本明細書に提供される。
【００７４】
別の態様において、少なくとも１つの本明細書に記載のユビキタス自己抗原−ＭＨＣ及びナノ粒子を含むｕａＭＨＣ−ＮＰであって、ナノ粒子は、非リポソーム性であり、金コアを有する、ｕａＭＨＣ−ＮＰが本明細書に提供される。
【００７５】
別の態様において、少なくとも１つの本明細書のユビキタス自己抗原−ＭＨＣ及びナノ粒子を含むｕａＭＨＣ−ＮＰであって、ナノ粒子は、非リポソーム性であり、酸化鉄コアを有し；少なくとも１つのユビキタス自己抗原−ＭＨＣは、リンカーを介してナノ粒子に共有結合している、ｕａＭＨＣ−ＮＰが本明細書に提供される。
【００７６】
一部の態様において、ナノ粒子コアは、約１ｎｍ〜約１００ｎｍ；約１ｎｍ〜約７５ｎｍ；約１ｎｍ〜約５０ｎｍ；約１ｎｍ〜約２５ｎｍ；約５ｎｍ〜約１００ｎｍ；約５ｎｍ〜約５０ｎｍ；約５ｎｍ〜約４０ｎｍ；約５ｎｍ〜約３０ｎｍ；約５ｎｍ〜約２５ｎｍ；又は約５ｎｍ〜約２０ｎｍからなる群から選択される直径を有する。一部の実施形態において、ナノ粒子コアは、約１０ｎｍ〜約１００ｎｍ；約１０ｎｍ〜約５０ｎｍ；約１０ｎｍ〜約４０ｎｍ；約１０ｎｍ〜約３０ｎｍ；約１０ｎｍ〜約２５ｎｍ；又は約１０ｎｍ〜約２０ｎｍの直径を有する。ある実施形態において、ナノ粒子コアは、約１ｎｍ、２ｎｍ、５ｎｍ、１０ｎｍ、１５ｎｍ、２０ｎｍ、２５ｎｍ、３０ｎｍ、４０ｎｍ又は５０ｎｍ超の直径を有する。ある実施形態において、ナノ粒子コアは、約１００ｎｍ、７５ｎｍ、５０ｎｍ、４０ｎｍ、３０ｎｍ、２０ｎｍ又は１５ｎｍ未満の直径を有する。
【００７７】
一部の態様において、ナノ粒子コアは、コアから成長した樹様構造を有する高分岐巨大分子を含むか、又は代わりに本質的にそれからなるか、又はさらにはそれからなるデンドリマーナノ粒子コアである。さらなる態様において、デンドリマーナノ粒子コアは、ポリ（アミドアミン）ベースデンドリマー又はポリＬ−リジンベースデンドリマーを含むか、又は代わりに本質的にそれからなるか、又はさらにはそれからなり得る。ある態様において、ナノ粒子コアは、ナノスケール化コアシェル構造に集合した両親媒性ブロックコポリマーを含むか、又は代わりに本質的にそれからなるか、又はさらにはそれからなるポリマーミセルコアである。さらなる態様において、ポリマーミセルコアは、ポリエチレングリコール−ジアステアロイルホスファチジルエタノールアミンブロックコポリマーを使用して産生されたポリマーミセルを含むか、又は代わりに本質的にそれからなるか、又はさらにはそれからなり得る。デンドリマーコア又はポリマーミセルコアは、本明細書に記載の外部コーティング又は層をさらに含み得る。
【００７８】
ある実施形態において、デンドリマーナノ粒子又はデンドリマーナノ粒子コアを有するナノ粒子の合成の具体的な手段は、金属イオンをデンドリマーの内部に抽出し、次いで続いて化学的に還元して３ｎｍ未満の寸法を有するほぼサイズ単分散の粒子を生じさせるこ
とを要求し得、例えばＣｒｏｏｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｄｅｎｄｒｉｍｅｒ−Ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ  Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ”．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｂ（１０９）：６９２−７０４（２００５）に開示の方法であり、得られるデンドリマーコア構成成分は、ナノ粒子を調製するためのテンプレートとしてだけでなく、ナノ粒子を安定化させるようにも機能し、溶解度の調整を可能とし、固体担体上のナノ粒子の固定化手段を提供する。
【００７９】
ナノ粒子コアは、典型的には、実質的に球状のコア及び任意に１つ以上の層又はコーティングからなる。コアは、本明細書に記載のとおり、サイズ及び組成が変動し得る。コアに加えて、粒子は、目的の用途に適切な機能性を提供するための１つ以上の層を有し得る。層の厚さは、存在する場合、具体的な用途の必要性に応じて変動し得る。例えば、層は、有用な光学的特性を付与し得る。
【００８０】
層は、化学的又は生物学的機能性も付与し得、本明細書において化学的活性又は生物学的活性層と称される。これらの層は、典型的には、粒子の外表面上に施与され、機能性をｐＭＨＣ−ＮＰに付与し得る。１つ又は複数の層は、典型的には、約０．００１マイクロメートル（１ナノメートル）〜約１０マイクロメートル以上（所望の粒径に依存する）又は約１ｎｍ〜５ｎｍ、約１ｎｍ〜約１０ｎｍ、約１ｎｍ〜約４０ｎｍ、約１５ｎｍ〜約２５ｎｍ又は約２０ｎｍ及びその間の範囲の厚さに及び得る。
【００８１】
層又はコーティングは、生分解性糖又は他のポリマーを含むか、又は本質的にそれからなるか、又はさらにはそれからなり得る。生分解性層の例としては、限定されるものではないが、デキストラン；ポリ（エチレングリコール）；ポリ（エチレンオキシド）マンニトール；ポリラクチド（ＰＬＡ）、ポリグリコリド（ＰＧＡ）、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）をベースとするポリ（エステル）；ＰＨＢ−ＰＨＶクラスのポリ（ヒドロクスアルカノエート（ｈｙｄｒｏｘａｌａｌｋａｎｏａｔｅ））；及び他の加工多糖、例えばデンプン、セルロース及びキトサンが挙げられる。さらに、ナノ粒子は、化学結合又はカップリング部位のための化学官能基の付着に好適な表面を有する層を含み得る。
【００８２】
抗原−ＭＨＣの表面価数及び密度
本明細書に記載のユビキタス自己抗原−ＭＨＣは、ある価数においてナノ粒子にカップリングされている。価数は、１ナノ粒子コア当たりのｐＭＨＣの数である。ある実施形態において、ナノ粒子の価数は、１ナノ粒子コア当たり約１個のｐＭＨＣ〜１ナノ粒子コア当たり約６，０００個のｐＭＨＣに及び得る。ある実施形態において、ナノ粒子の価数は、１ナノ粒子コア当たり約１０個のｐＭＨＣ〜１ナノ粒子コア当たり約６，０００個のｐＭＨＣに及び得る。ある実施形態において、ナノ粒子の価数は、１ナノ粒子コア当たり約５０個のｐＭＨＣ〜１ナノ粒子コア当たり約６，０００個のｐＭＨＣに及び得る。ある実施形態において、ナノ粒子の価数は、１ナノ粒子コア当たり約１個のｐＭＨＣ〜１ナノ粒子コア当たり約５０００、約４０００、約３０００、約２０００又は約１０００個のｐＭＨＣに及び得る。ある実施形態において、ナノ粒子の価数は、１ナノ粒子コア当たり約１０個のｐＭＨＣ〜１ナノ粒子コア当たり約５０００、約４０００、約３０００、約２０００又は約１０００個のｐＭＨＣに及び得る。ある実施形態において、ナノ粒子の価数は、１ナノ粒子コア当たり約５０個のｐＭＨＣ〜１ナノ粒子コア当たり約５０００、約４０００、約３０００、約２０００又は約１０００個のｐＭＨＣに及び得る。ある実施形態において、ナノ粒子の価数は、１ナノ粒子コア当たり約１個のｐＭＨＣ〜１ナノ粒子コア当たり約１０００個のｐＭＨＣ、又は約１０：１〜約１０００：１、又は約１１：１〜約１０００：１、又は約１２：１〜約１０００：１に及び得る。ある実施形態において、価数（ナノ粒子コアに対する抗原−ＭＨＣ）は、約１０：１〜約５００：１、又は約１１：１〜約５００：１、又は約１２：１〜約５００：１に及び得る。ある実施形態において、価数
（ナノ粒子コアに対する抗原−ＭＨＣ）は、約１０：１〜約２００：１、又は約１１：１〜約２００：１、又は約１２：１〜約２００：１に及び得る。ある実施形態において、価数（ナノ粒子コアに対する抗原−ＭＨＣ）は、約１０：１〜約１５０：１、又は約１１：１〜約１５０：１、又は約１２：１〜約１５０：１に及び得る。ある実施形態において、価数（ナノ粒子コアに対する抗原−ＭＨＣ）は、約１０：１〜約１００：１、又は約１１：１〜約１００：１、又は約１２：１〜約１００：１に及び得る。ある実施形態において、価数（ナノ粒子コアに対する抗原−ＭＨＣ）は、約１０：１〜約２００：１、約２０：１〜約２００：１、約３０：１〜約２００：１、約４０：１〜約２００：１又は約５０：１〜約２００：１に及び得る。ある実施形態において、価数（ナノ粒子コアに対する抗原−ＭＨＣ）は、約１０：１〜約１５０：１、約２０：１〜約１５０：１、約３０：１〜約２００：１、約４０：１〜約１５０：１又は約５０：１〜約１５０：１に及び得る。ある実施形態において、価数（ナノ粒子コアに対する抗原−ＭＨＣ）は、約１０：１〜約１００：１又は約２０：１〜約１００：１、約３０：１〜約１００：１、約４０：１〜約１００：１又は約５０：１〜約１００：１に及び得る。
【００８３】
一部の態様において、ナノ粒子コアは、本明細書において「密度」とも称される、コアの表面積当たりの定義価数を有する。これらの態様において、１ナノ粒子当たりのｐＭＨＣ密度は、約０．０２５のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約１００個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２のナノ粒子コアの表面積又は代わりに約０．４０６個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約５０個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２；又は代わりに約０．０５個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約２５個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２である。ある態様において、１ナノ粒子当たりのｐＭＨＣ密度は、約０．４個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約２５個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２、又は約０．４個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約２０個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２、又は約０．４個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約１５個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２、又は約０．４個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約１４個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２、又は約０．４個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約１３個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２、又は約０．４個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約１２個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２、又は約０．４個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約１１．６個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２、又は約０．４個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約１１．５個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２、又は約０．４個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約１１個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２、又は約０．４個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約１０個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２、又は約０．４個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約９個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２、又は約０．４個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約８個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２、又は約０．４個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約７個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２、又は約０．４個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約６個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２、又は約０．４個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約５個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２、又は約０．４個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約４個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２、又は約０．４個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約３個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２、又は約０．４個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約２．５個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２、又は約０．４個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約２個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２、又は約０．４個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約１．５個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２である。
【００８４】
別の態様において、ナノ粒子は、約０．２２個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約１０個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２、又は約０．２２個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約９個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２、又は約０．２２個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約８個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２、又は約０．２２個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約７個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２、又は約０．２２個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約６個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２、又は約０．２２個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約５個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２、又は約０．２２個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約４個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２、又は約０．２２個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約３個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２、又は約０．２２個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約２個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２、又は約０．２２個のｐＭＨ
Ｃ／１００ｎｍ２〜約１．５個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２のｐＭＨＣ密度を有し得る。一部の態様において、ナノ粒子は、約０．２２個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約１０個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２、又は０．２４個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約９個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２、又は約０．２６個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約８個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２、又は約０．２８個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約７個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２、又は約０．２４個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約４個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２、又は約０．５個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約３個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２、又は約０．６個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約１．５個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２のｐＭＨＣ密度を有する。さらなる態様において、ナノ粒子は、約０．４個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約１．３個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２、又は代わりに約０．５個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約０．９個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２、又は代わりに約０．６個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２〜約０．８個のｐＭＨＣ／１００ｎｍ２のｐＭＨＣ密度を有する。
【００８５】
リンカー
ある態様において、ユビキタス自己抗原−ＭＨＣは、共有結合、非共有結合又は架橋の１つ以上によりナノ粒子コアにカップリングさせ、任意にリンカーを介してカップリングさせることができる。１つ又は複数のリンカーを含む態様において、リンカーは、単一ナノ粒子コア上で互いに同一であるか又は異なり得る。一部の実施形態において、ユビキタス自己抗原−ＭＨＣは、少なくとも１つの本明細書に記載のユビキタス自己抗原−ＭＨＣ及びナノ粒子を含み、ナノ粒子は、非リポソーム性であり、金属又は金属酸化物コアを有し；少なくとも１つのユビキタス自己抗原−ＭＨＣは、５キロダルトン（ｋＤ）未満の分子量を有するポリエチレングリコールを含むリンカーを介してナノ粒子に共有結合によりカップリングされている。一部の実施形態において、ポリエチレングリコールは、１ｋＤ、２ｋＤ、３ｋＤ、４ｋＤ、５ｋＤ、６ｋＤ、７ｋＤ、８ｋＤ、９ｋＤ又は１０ｋＤ未満の分子量を有する。一部の実施形態において、ポリエチレングリコールは、マレイミドにより官能化される。一部の実施形態において、ポリエチレングリコールは、約１ｋＤ〜約５ｋＤ、約２ｋＤ〜約５ｋＤ、約３ｋＤ〜約５ｋＤの分子量を有する。一部の実施形態において、ポリエチレングリコールは、マレイミドにより官能化される。ある実施形態において、ソリッドコアと接触するリンカーの端部は、ソリッドコア中に埋め込まれる。さらなる態様において、リンカーは、５ｋＤ未満のサイズであり得、任意にポリエチレングリコールである。リンカーは、表１に記載のリンカーのいずれかであり得る。
【００８６】
【表１】
2021504488.tif 000003
【００８７】
ユビキタス自己抗原−ＭＨＣのサブストレート又は粒子をナノ粒子にカップリングさせるため、以下の技術を適用することができる。
【００８８】
結合は、典型的には、表面上の「官能基」の生成を含むサブストレート又は粒子を化学
修飾することにより生成することができ、前記官能基は、ＭＨＣ複合体に結合し、且つ／又は表面若しくは粒子の任意に化学修飾された表面を、共有若しくは非共有結合されるいわゆる「結合分子」と結合させ、次いでＭＨＣ又はＭＨＣ複合体を得られた粒子と反応させ得る。
【００８９】
官能基又はそれを担持する結合分子は、アミノ基、カルボン酸基、チオール、チオエーテル、ジスルフィド、グアニジノ、ヒドロキシル基、アミン基、ビシナルジオール、アルデヒド、アルファ−ハロアセチル基、水銀オルガニル、エステル基、酸ハロゲン化物、酸チオエステル、酸無水物、イソシアネート、イソチオシアネート、スルホン酸ハロゲン化物、イミドエステル、ジアゾアセテート、ジアゾニウム塩、１，２−ジケトン、リン酸、リン酸エステル、スルホン酸、アゾリド、イミダゾール、インドール、Ｎ−マレイミド、アルファ−ベータ不飽和カルボニル化合物、アリールハロゲニド又はそれらの誘導体から選択することができる。
【００９０】
より高い分子量を有する他の結合分子についての非限定的な例は、サブストレート又は粒子に対して逆の極性を有する表面を有する核酸分子、ポリマー、コポリマー、重合性カップリング剤、シリカ、タンパク質及び鎖様分子である。核酸は、それ自体、核酸分子を含有するが、結合分子に対して相補的配列を有する親和性分子への結合を提供し得る。
【００９１】
一部の実施形態において、結合分子は、ポリエチレングリコールを含む。一部の実施形態において、結合分子は、ポリエチレングリコール及びマレイミドを含む。一部の実施形態において、ポリエチレングリコールは、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ基、−Ｒ１０ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ−、−Ｒ１０Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ−、−Ｒ１０ＯＣ（Ｏ）Ｒ−、−Ｒ１０Ｃ（Ｏ）ＯＲ−の１つ以上を含み、それぞれのＲは、独立してＨ又はＣ１〜Ｃ６アルキルであり、それぞれのＲ１０は、独立して結合又はＣ１〜Ｃ６アルキルである。
【００９２】
ｐＭＨＣは、種々の方法によりナノ粒子にカップリングさせることができ、１つの非限定的な例としては、１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）の存在下でアミド結合の形成を介して達成することができる末端−ＮＨ２又は−ＣＯＯＨ基を担持するＰＥＧリンカーにより産生されるＮＰへのコンジュゲーションが挙げられる。−ＣＯＯＨ基を有するＮＰを最初に２０ｍＭのＭＥＳ緩衝液、ｐＨ５．５中で溶解させる。Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミドナトリウム塩（サルファ−ＮＨＳ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ、最終濃度１０ｍＭ）及びＥＤＣ（Ｔｈｅｒｍｏ  ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ、最終濃度１ｍＭ）をＮＰ溶液に添加する。室温において２０分間撹拌した後、ＮＰ溶液を、２０ｍＭのホウ酸緩衝液（ｐＨ８．２）中で溶解させたｐＭＨＣ単量体を含有する溶液に滴加する。混合物をさらに４時間撹拌する。ＭＨＣをＮＨ２官能化ＮＰにコンジュゲートさせるため、ｐＭＨＣを、最初に、１００ｍＭのＮａＣｌ．サルファ−ＮＨＳ（１０ｍＭ）及びＥＤＣ（５ｍＭ）を含有する２０ｍＭのＭＥＳ緩衝液、ｐＨ５．５中で溶解させ、次いでＭＨＣ溶液に添加する。次いで、活性化されたＭＨＣ分子を２０ｍＭのホウ酸緩衝液（ｐＨ８．２）中でＮＰ溶液に添加し、室温において４時間撹拌する。
【００９３】
ＭＨＣをマレイミド官能化ＮＰにコンジュゲートさせるため、ｐＭＨＣを最初にトリブチルホスピン（Ｔｒｉｂｕｔｙｌｐｈｏｓｐｉｎｅ）（ＴＢＰ、１ｍＭ）と室温において４時間インキュベートし、次いでフリーカルボキシ末端Ｃｙｓ残基をコードするように遺伝子操作されたｐＭＨＣを、２ｍＭのＥＤＴＡ、１５０ｍＭのＮａＣｌを含有する４０ｍＭのリン酸緩衝液、ｐＨ６．０中でＮＰと混合し、室温において一晩インキュベートする。ｐＭＨＣのＭＨＣを、マレイミド基とＣｙｓ残基との間の炭素−スルフィド結合の形成を介してＮＰと共有結合させる。
【００９４】
クリックケミストリーを使用してｐＭＨＣ又はアビジンを、アジド基により官能化されたＮＰにコンジュゲートさせることができる。この反応のため、ＭＨＣ又はアビジン分子を最初にジベンゾシクロオクチル（ＤＢＣＯ、Ｃｌｉｃｋ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｔｏｏｌｓ，Ｓｃｏｔｔｓｄａｌｅ，ＡＺ）試薬と室温において２時間インキュベートする。フリーＤＢＣＯ分子を透析により一晩除去することができる。次いで、ＭＨＣ−又はアビジン−ＤＢＣＯコンジュゲートをＳＦＰ−Ｚと２時間インキュベートし、ｐＭＨＣ又はアビジン分子とＮＰとの間のトリアゾール結合の形成をもたらす。
【００９５】
異なるＭＨＣ−ＮＰコンジュゲート反応における非コンジュゲートｐＭＨＣは、当分野において公知の方法を使用して大規模な透析により除去することができる。非限定的な例は、３００ｋＤ分子量カットオフ膜（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  ｌａｂｓ）に通す４℃におけるＰＢＳ、ｐＨ７．４に対する透析である。代わりに、ｐＭＨＣコンジュゲートＩＯＮＰは、磁気分離により精製することができる。コンジュゲートＮＰは、Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５ユニット（１００ｋＤのＭＷＣＯ）に通す限外濾過により濃縮し、ＰＢＳ中で貯蔵することができる。
【００９６】
粒子の表面は、例えば、機能性反応基を有するホスホン酸誘導体の結合により化学的に修飾することができる。これらのホスホン酸又はホスホン酸エステル誘導体の一例は、「Ｍａｎｎｉｃｈ−Ｍｏｅｄｒｉｔｚｅｒ」反応により合成することができるイミノ−ビス（メチレンホスホノ）カルボン酸である。この結合反応は、サブストレート又は粒子を用いて調製プロセスから直接得られたままで又は（例えば、トリメチルシリルブロミドによる）前処理後に実施することができる。最初の例において、リン酸（エステル）誘導体は、例えば、依然として表面に結合している反応媒体の構成成分と置き換わり得る。この置き換えは、より高温において向上させることができる。トリメチルシリルブロミドは、他方では、アルキル基含有リンベース錯化剤を脱アルキル化し、それによりホスホン酸（エステル）誘導体についての新たな結合部位を作出すると考えられる。ホスホン酸（エステル）誘導体又はそれに結合している結合分子は、上記で挙げられるものと同一の官能基をディスプレイし得る。サブストレート又は粒子の表面処理のさらなる例は、ジオール、例えばエチレングリコール中での加熱を含む。この処理は、合成がジオール中で既に進行した場合、冗長であり得ることに留意すべきである。これらの状況下において、直接得られた合成産物は、必要な官能基を示す可能性が高い。しかしながら、この処理は、Ｎ又はＰ含有錯化剤中で産生されたサブストレート又は粒子に適用可能である。このようなサブストレート又は粒子をエチレングリコールによる後処理に供する場合、依然として表面に結合している反応媒体の成分（例えば、錯化剤）は、ジオールにより置き換えることができ、且つ／又は脱アルキル化することができる。
【００９７】
依然として表面粒子に結合しているＮ含有錯化剤を、第２の官能基を有する第１級アミン誘導体により置き換えることも可能である。サブストレート又は粒子の表面は、シリカによりコーティングすることもできる。シリカが有機リンカー、例えばトリエトキシシラン又はクロロシランと容易に反応するため、シリカは、有機分子の比較的簡易な化学的コンジュゲーションを可能とする。粒子表面は、ホモ又はコポリマーによりコーティングすることもできる。重合性カップリング剤の例は、Ｎ−（３−アミノプロピル）−３−メルカプトベンズアミジン、３−（トリメトキシシリル）プロピルヒドラジド及び３−トリメトキシシリル）プロピルマレイミドである。重合性カップリング剤の他の非限定的な例は、本明細書に挙げられる。これらのカップリング剤は、コーティングとして生成すべきコポリマーのタイプに応じて単独で又は組合せで使用することができる。
【００９８】
酸化遷移金属化合物を含有するサブストレート又は粒子について使用することができる別の表面修飾技術は、塩素ガス又は有機塩素化剤による、酸化遷移金属化合物の対応するオキシ塩化物への変換である。これらのオキシ塩化物は、生体分子中で見出されることが
多い求核試薬、例えばヒドロキシル又はアミノ基と反応し得る。この技術は、例えば、リジン側鎖のアミノ基を介するタンパク質との直接的なコンジュゲーションの生成を可能とする。オキシ塩化物による表面修飾後のタンパク質とのコンジュゲーションは、二官能性リンカー、例えばマレイミドプロピオン酸ヒドラジドを使用することにより行うこともできる。
【００９９】
非共有結合技術のため、サブストレート又は粒子表面と逆の極性又は電荷を有する鎖型分子が特に好適である。コア／シェルナノ粒子に非共有結合させることができる結合分子の例は、アニオン性、カチオン性又は双性イオン性界面活性剤、酸性又は塩基性タンパク質、ポリアミン、ポリアミド、ポリスルホン又はポリカルボン酸を含む。サブストレート又は粒子と、官能性反応基を有する両親媒性試薬との間の疎水性相互作用は、必要な結合を生成し得る。特に、互いに架橋し得る両親媒性特徴を有する鎖型分子、例えばリン脂質又は誘導体化多糖が有用である。表面上のこれらの分子の吸収は、同時インキュベーションにより達成することができる。親和性分子とサブストレート又は粒子との間の結合は、非共有的な自己組織化結合にも基づき得る。その一例は、結合分子としてのビオチンを有する簡易検出プローブ及びアビジン又はストレプトアビジンカップリング分子を含む。
【０１００】
官能基と生物分子とのカップリング反応のためのプロトコルは、文献、例えば“Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ”（Ｇｒｅｇ  Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  １９９６）に見出すことができる。生物分子（例えば、ＭＨＣ分子又はその誘導体）は、有機化学の標準的な手順、例えば酸化、ハロゲン化、アルキル化、アシル化、付加、置換又はアミド化に従って結合分子に共有又は非共有結合によりカップリングさせることができる。共有又は非共有結合している結合分子をカップリングさせるこれらの方法は、結合分子をサブストレート又は粒子にカップリングする前又はその後に適用することができる。さらに、インキュベーションにより、（例えば、トリメチルシリルブロミドにより）対応して前処理されたサブストレート又は粒子（この前処理に起因する改質表面（例えば、より高い電荷又は極性の表面）をディスプレイする）への分子の直接結合を行うことが可能である。
【０１０１】
ナノ粒子の合成
ナノ粒子は、米国特許第４，５８９，３３０号明細書又は同第４，８１８，５４２号明細書に教示されるとおり、ｐＭＨＣ複合体及びポリマーを含有する水相と非水相とを接触させ、次いで非水相を蒸発させて水相からの粒子のコアレッセンスを引き起こすことにより形成することができる。このような調製のためのあるポリマーは、天然又は合成コポリマー又はポリマーであり、それとしては、ゼラチン寒天、デンプン、アラビノガラクタン、アルブミン、コラーゲン、ポリグリコール酸、ポリ乳酸、グリコリド−Ｌ（−）ラクチドポリ（イプシロン−カプロラクトン）、ポリ（イプシロン−カプロラクトン−ＣＯ−乳酸）、ポリ（イプシロン−カプロラクトン−ＣＯ−グリコール酸）、ポリ（β−ヒドロキシ酪酸）、ポリ（エチレンオキシド）、ポリエチレン、ポリ（アルキル−２−シアノアクリレート）、ポリ（ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリアミド、ポリ（アミノ酸）、ポリ（２−ヒドロキシエチルＤＬ−アスパルタミド）、ポリ（エステル尿素）、ポリ（Ｌ−フェニルアラニン／エチレングリコール／１，６−ジイソシアナトヘキサン）及びポリ（メチルメタクリレート）が挙げられる。特に、あるポリマーは、ポリエステル、例えばポリグリコール酸、ポリ乳酸、グリコリド−Ｌ（−）ラクチドポリ（イプシロン−カプロラクトン）、ポリ（イプシロン−カプロラクトン−ＣＯ−乳酸）及びポリ（イプシロン−カプロラクトン−ＣＯ−グリコール酸）である。ポリマーの溶解に有用な溶媒としては、水、ヘキサフルオロイソプロパノール、塩化メチレン、テトラヒドロフラン、ヘキサン、ベンゼン又はヘキサフルオロアセトンセスキ水和物が挙げられる。
【０１０２】
金ナノ粒子（ＧＮＰ）は、Ｐｅｒｒａｕｌｔ，Ｓ．Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｎａ
ｎｏ  Ｌｅｔｔ  ９：１９０９−１９１５に記載のクエン酸ナトリウムによる塩化金の化学的還元を使用して合成される。簡潔に述べると、２ｍＬの１％のＨＡｕＣｌ４（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を激しく撹拌しながら１００ｍＬのＨ２Ｏに添加し、溶液を油浴中で加熱する。６（１４ｎｍのＧＮＰについて）又は２ｍＬ（４０ｎｍのＧＮＰについて）の１％のクエン酸Ｎａを沸騰ＨＡｕＣｌ４溶液に添加し、それをさらに１０分間撹拌し、次いで室温に冷却する。ＭＨＣのアクセプターとしての−ＣＯＯＨ又は−ＮＨ２基により官能化された１μＭｏｌのチオール−ＰＥＧリンカー（Ｎａｎｏｃｓ，ＭＡ）の添加によりＧＮＰを安定化させる。ＰＥＧ化ＧＮＰを水により洗浄してフリーチオール−ＰＥＧを除去し、濃縮し、さらなる分析のために水中で貯蔵する。ＮＰ密度は、分光光度法により決定し、ベールの法則に従って計算する。
【０１０３】
酸化鉄ＮＰのＳＦＰ系列（ＳＦＰ  ＩＯＮＰ）は、界面活性剤の存在下での有機溶媒中での酢酸鉄の熱分解により産生し、次いでペグ化により水性緩衝液中で溶解性とすることができる（Ｘｉｅ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ａｄｖ  Ｍａｔｅｒ  １９：３１６３；Ｘｉｅ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｐｕｒｅ  Ａｐｐｌ．Ｃｈｅｍ．７８：１００３−１０１４；Ｘｕ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ５６：８２１−８２６）。簡潔に述べると、２ｍＭｏｌのＦｅ（ａｃａｃ）３（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｏａｋｖｉｌｌｅ，ＯＮ）を１０ｍＬのベンジルエーテル及びオレイルアミンの混合物中で溶解させ、窒素ブランケットの保護下で還流させながら１００℃に１時間加熱し、次いで３００℃まで２時間加熱する。合成ＮＰをエタノールの添加により沈殿させ、ヘキサン中で再懸濁させる。ＩＯＮＰのペグ化のため、１００ｍｇの異なる３．５ｋＤのＤＰＡ−ＰＥＧリンカー（Ｊｅｎｋｅｍ  Ｔｅｃｈ  ＵＳＡ）をＣＨＣｌ３及びＨＣＯＮ（ＣＨ３）２（ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ））の混合物中で溶解させる。次いで、ＮＰ溶液（２０ｍｇのＦｅ）をＤＰＡ−ＰＥＧ溶液に添加し、室温において４時間撹拌する。ペグ化ＳＦＰ  ＮＰをヘキサンの添加により一晩沈殿させ、次いで水中で再懸濁させる。微量の凝集体を高速遠心分離（２０，０００×ｇ、３０分間）により除去し、さらなる特徴付け及びｐＭＨＣコンジュゲーションのために単分散ＳＦＰ  ＮＰを水中で貯蔵する。ＩＯＮＰ産物中の鉄の濃度は、分光光度法によりＡ４１０において２ＮのＨＣＬ中で決定する。ＳＦＰ  ＮＰの分子構造及び直径（Ｆｅ３Ｏ４；８＋１ｎｍ直径）（Ｘｉｅ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ａｄｖ  Ｍａｔｅｒ  １９：３１６３；Ｘｉｅ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｐｕｒｅ  Ａｐｐｌ．Ｃｈｅｍ．７８：１００３−１０１４）に基づき、１ｍｇの鉄を含有するＳＦＰ溶液は、５×１０１４個のＮＰを含有すると推定される。
【０１０４】
ナノ粒子は、ナノ粒子前駆体を熱分解又は加熱することにより作製することもできる。一実施形態において、ナノ粒子は、金属又は金属酸化物ナノ粒子である。一実施形態において、ナノ粒子は、酸化鉄ナノ粒子である。一実施形態において、ナノ粒子は、金ナノ粒子である。一実施形態において、本技術により調製されるナノ粒子が本明細書に提供される。一実施形態において、鉄アセチルアセトネートの熱分解反応を含む、酸化鉄ナノ粒子を作製する方法が本明細書に提供される。一実施形態において、得られる酸化鉄ナノ粒子は、水溶性である。一態様において、酸化鉄ナノ粒子は、タンパク質コンジュゲーションに好適である。一実施形態において、方法は、単一ステップ熱分解反応を含む。
【０１０５】
一態様において、熱分解は、官能化ＰＥＧ分子の存在下で行う。官能化ＰＥＧリンカーのある非限定的な例は、表１に示される。
【０１０６】
一態様において、熱分解は、鉄アセチルアセトネートを加熱することを含む。一実施形態において、熱分解は、官能化ＰＥＧ分子の存在下で鉄アセチルアセトネートを加熱することを含む。一実施形態において、熱分解は、ベンジルエーテル及び官能化ＰＥＧ分子の存在下で鉄アセチルアセトネートを加熱することを含む。理論により拘束されるものでは
ないが、一実施形態において、官能化ＰＥＧ分子は、還元試薬として及び界面活性剤として使用される。本明細書に提供されるナノ粒子を作製する方法は、ＰＥＧ分子により粒子を水溶性とするため、置き換えが困難であるか又は完全に置き換わらない界面活性剤を使用する慣用の方法を簡易化し、改善する。慣用的に、界面活性剤は、高価（例えば、リン脂質）又は毒性（例えば、オレイン酸又はオレイルアミン）であり得る。別の態様において、理論により拘束されるものではないが、ナノ粒子を作製する方法は、慣用の界面活性剤を使用する必要性を省き、それにより高程度の分子純度及び水溶性を達成する。
【０１０７】
一実施形態において、熱分解は、鉄アセチルアセトネート及びベンジルエーテルを必要とし、本明細書において用いられるもの以外の慣用の界面活性剤の不存在下であることを必要とする。
【０１０８】
一実施形態において、熱分解のための温度は、約８０℃〜約３００℃、又は約８０℃〜約２００℃、又は約８０℃〜約１５０℃、又は約１００℃〜約２５０℃、又は約１００℃〜約２００℃、又は約１５０℃〜約２５０℃、又は約１５０℃〜約２５０℃である。一実施形態において、熱分解は、約１〜約２時間の時間において行う。
【０１０９】
一実施形態において、酸化鉄ナノ粒子を作製する方法は、例えば、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ  ＬＳ磁気カラムを使用することによる精製ステップを含む。
【０１１０】
一実施形態において、ナノ粒子は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中で約４℃において安定性であり、いかなる検出可能な分解も凝集も伴わない。一実施形態において、ナノ粒子は、少なくとも６ヵ月間安定性である。
【０１１１】
一態様において、ｐＭＨＣを本明細書に提供される酸化鉄ナノ粒子と接触させることを含む、ナノ粒子複合体を作製する方法が本明細書に提供される。理論により拘束されるものではないが、ｐＭＨＣは、約ｐＨ６．２〜約ｐＨ６．５において官能化ＰＥＧ中のマレイミド基と約１２〜約１４時間反応し得るそのカルボキシ末端におけるシステインをコードする。
【０１１２】
一態様において、ナノ粒子複合体を作製する方法は、例えば、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ  ＬＳ磁気カラムを使用することによる精製ステップを含む。
【０１１３】
制御性免疫細胞タイプ
本開示のｕａＭＨＣ−ＮＰ複合体は、自己反応性Ｔ細胞をＴ制御性又はＴＲ１細胞に再プログラム化するか又は分化させる。ある実施形態において、ＴＲ１細胞は、ＩＬ−１０を発現する。ある実施形態において、ＴＲ１細胞は、ＩＬ−１０を分泌する。ある実施形態において、ＴＲ１細胞は、ＣＤ４９ｂを発現する。ある実施形態において、ＴＲ１細胞は、ＬＡＧ−３を発現する。これらの表現型特徴を有するＴ細胞は、個体の炎症性又は自己免疫性病態を治療するために有用である。ある実施形態において、ｕａＭＨＣ−ＮＰ複合体は、投与後の個体において自己反応性Ｔ細胞をＴＲ１細胞に再プログラム化するか又は分化させる方法において有用である。この方法は、ＴＲ１細胞を抗原特異的に生成する。
【０１１４】
本開示のユビキタス自己抗原−ＭＨＣは、Ｂ制御性細胞の生成に有用である。ある実施形態において、本開示のユビキタス自己抗原−ＭＨＣは、高レベルのＣＤ１ｄ、ＣＤ５を発現し、且つ／又はＩＬ−１０を分泌するＢ細胞を生成する方法において配備される。Ｂ−ｒｅｇは、Ｔｉｍ−１の発現によっても同定される。ある実施形態において、ｕａＭＨＣ−ＮＰ複合体は、投与後の個体においてＢ制御性細胞を誘導する方法において有用である。この方法は、Ｂ制御性細胞を抗原特異的に生成する。
【０１１５】
医薬組成物及び投与
疾患の治療及び予防に有用なユビキタス自己抗原−ＭＨＣ−ＮＰの医薬組成物が本明細書に提供される。組成物は、本明細書に記載のナノ粒子複合体及び担体を含むか、又は本質的にそれからなるか、又はさらにはそれからなる。
【０１１６】
本開示の組成物は、慣用的に、注射により非経口投与、例えば静脈内投与、皮下投与又は筋肉内投与することができる。他の投与形式に好適な追加の配合物としては、経口配合物が挙げられる。経口配合物は、例えば、医薬グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどのような通常用いられる賦形剤を含む。これらの組成物は、液剤、懸濁液、錠剤、ピル剤、カプセル剤、徐放配合物又は散剤の形態を取り、約１０％〜約９５％、好ましくは約２５％〜約７０％の活性成分を含有する。対象の免疫状態を改変する抗原−ＭＨＣ−ナノ粒子複合体を含有する水性組成物の調製は、本開示に照らして当業者に公知である。一実施形態において、ユビキタス自己抗原−ＭＨＣ−ナノ粒子複合体は、全身投与される。具体的な実施形態において、ユビキタス自己抗原−ＭＨＣ−ＮＰ複合体又は複数のユビキタス自己抗原−ＭＨＣ−Ｎ複合体を含む組成物は、静脈内投与することができる。
【０１１７】
典型的には、本明細書に記載のユビキタス自己抗原−ＭＨＣ−ＮＰは、投与配合物と適合性の様式且つ治療有効及び免疫改変性であるような量で投与される。投与すべき量は、治療すべき対象に依存する。投与が要求される活性成分の正確な量は、主治医の判断に依存する。しかしながら、好適な投与量範囲は、１投与当たり１０〜数百ナノグラム又はマイクログラムのオーダーの抗原／ＭＨＣ／ナノ粒子複合体である。初回投与及びブースターに好適な投与計画も変動的であるが、初回投与とそれに続く後続の投与により典型化される。
【０１１８】
適用の様式は、広く変動し得る。ワクチンの投与の慣用の方法のいずれも適用可能である。これらは、固体の生理学的に許容可能な基剤上又は生理学的に許容可能な分散液中の経口適用、注射などによる非経口適用を含むと考えられる。抗原／ＭＨＣ／ナノ粒子複合体の投与量は、投与経路に依存し、対象のサイズ及び健康に応じて変動する。ユビキタス自己抗原−ＭＨＣ−ＮＰは、任意の好適な経路、例として静脈内、皮下、経皮、筋肉内、直腸又は腹腔内経路により投与することができる。ある実施形態において、自己抗原−ＭＨＣ−ＮＰは、非経口投与される。ある実施形態において、自己抗原−ＭＨＣ−ＮＰは、静脈内投与される。ある実施形態において、自己抗原−ＭＨＣ−ＮＰは、皮下投与される。
【０１１９】
多くの例において、ユビキタス自己抗原−ＭＨＣ−ＮＰの複数回投与、約、少なくとも約又は多くとも約３、４、５、６、７、８、９、１０回以上の投与を受けることが望ましい。投与は、通常、１、２、３、４、５、６又は７日〜１２週間の間隔、より通常には１〜２週間の間隔に及ぶ。１日おき、週２回、週１回、２週間に１回、月１回又は０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、１、２、３、４若しくは５年間、通常、２年間の間隔における定期的なブースターが、免疫系の状態を維持するために望ましい。投与プロセスに続き、自己反応性免疫応答、コグネイトＴＲ１細胞及びＴ細胞活性についてのアッセイを行うことができる。
【０１２０】
ある態様において、ナノ粒子コア及びいかなる生体吸収性／生体適合性外層を含まないユビキタス自己抗原−ＭＨＣ−ＮＰの単一用量は、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約２．０ｍｇ／ｋｇ、又は約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１．５ｍｇ／ｋｇ、又は約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１．４ｍｇ／ｋｇ、又は約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１．３ｍｇ／ｋｇ、又は約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１．２ｍｇ／ｋｇ、又は約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１．１ｍ
ｇ／ｋｇ、又は約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１．０ｍｇ／ｋｇである。一部の実施形態において、単一用量は、約０．００４ｍｇ／ｋｇ〜約１．０１４ｍｇ／ｋｇ、又は約０．０２ｍｇ／ｋｇ〜約０．８１１ｍｇ／ｋｇ、又は約０．０４１ｍｇ／ｋｇ〜約０．６０８ｍｇ／ｋｇ、又は約０．０６１ｍｇ／ｋｇ〜約０．５０７ｍｇ／ｋｇ、又は約０．０８１ｍｇ／ｋｇ〜約０．４０５ｍｇ／ｋｇ、又は約０．１２１ｍｇ／ｋｇ〜約０．３２４ｍｇ／ｋｇ、又は約０．１６２ｍｇ／ｋｇ〜約０．２４３ｍｇ／ｋｇである。一部の実施形態において、単一用量は、約０．００４ｍｇ／ｋｇ〜約１．０１５ｍｇ／ｋｇ、又は約０．００４ｍｇ／ｋｇ〜約１．０ｍｇ／ｋｇ、又は約０．００４ｍｇ／ｋｇ〜約０．９ｍｇ／ｋｇ、又は約０．００４ｍｇ／ｋｇ〜約０．８ｍｇ／ｋｇ、又は約０．００４ｍｇ／ｋｇ〜約０．７ｍｇ／ｋｇ、又は約０．００４ｍｇ／ｋｇ〜約０．６ｍｇ／ｋｇ、又は約０．００４ｍｇ／ｋｇ〜約０．５ｍｇ／ｋｇ、又は約０．００４ｍｇ／ｋｇ〜約０．４ｍｇ／ｋｇ、又は約０．００４ｍｇ／ｋｇ〜約０．３ｍｇ／ｋｇ、又は約０．００４ｍｇ／ｋｇ〜約０．２ｍｇ／ｋｇ、又は約０．００４ｍｇ／ｋｇ〜約０．１ｍｇ／ｋｇである。ここで、ｍｇ／ｋｇは、１ｋｇの対象体重当たりで投与されるユビキタス自己抗原−ＭＨＣ又はＭＨＣ構成成分を考慮しないユビキタス自己抗原のミリグラムを指す。
【０１２１】
自己免疫性及び炎症性疾患
本開示のユビキタス自己抗原−ＭＨＣは、自己免疫性又は炎症性障害の治療に有用である。自己免疫性又は炎症性障害としては、個体自身の組織又は器官から生じ、それに指向される疾患若しくは障害又はその顕在化若しくはそれから生じる病態が挙げられる。一実施形態において、これは、正常な身体組織及び抗原との反応性を示すＴ細胞の産生から生じるか又はそれにより悪化する病態を指す。一実施形態において、これは、正常な身体組織及び抗原との反応性を示す抗体の産生から生じるか又はそれにより悪化する病態を指す。自己免疫性又は炎症性障害の例としては、限定されるものではないが、関節炎（関節リウマチ、例えば急性関節炎、慢性関節リウマチ、痛風又は痛風性関節炎、急性痛風性関節炎、急性免疫学的関節炎、慢性炎症性関節炎、変形性関節炎、ＩＩ型コラーゲン誘発性関節炎、感染性関節炎、ライム関節炎、増殖性関節炎、乾癬性関節炎、スティル病、脊椎関節炎及び若年発症関節リウマチ、骨関節炎、慢性進行性関節炎、変形性関節炎、慢性原発性多発性関節炎、反応性関節炎及び強直性脊椎炎）、炎症性過剰増殖性皮膚疾患、乾癬（例えば、尋常性乾癬、滴状乾癬、膿胞性乾癬及び爪乾癬）、アトピー（例として、花粉症及びヨブ症候群のようなアトピー疾患）、皮膚炎（例として、接触性皮膚炎、慢性接触性皮膚炎、剥脱性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、アレルギー性接触性皮膚炎、ヘルペス状の皮膚炎、貨幣状皮膚炎、脂漏性皮膚炎、非特異的皮膚炎、原発性刺激性接触皮膚炎及びアトピー性皮膚炎）、ｘ連鎖高ＩｇＭ症候群、アレルギー性眼内炎症性疾患、蕁麻疹（例えば、慢性アレルギー性蕁麻疹及び慢性特発性蕁麻疹、例として慢性自己免疫性蕁麻疹）、筋炎、多発性筋炎／皮膚筋炎、若年性皮膚筋炎、中毒性表皮壊死症、強皮症（例として、全身強皮症）、硬化症（例えば、全身性硬化症；多発性硬化症（ＭＳ）、例えば視神経脊髄ＭＳ、原発性進行性ＭＳ（ＰＰＭＳ）及び再発寛解型ＭＳ（ＲＲＭＳ）；進行性全身性硬化症、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、播種性硬化症及び失調性硬化症）、視神経脊髄炎スペクトラム障害（ＮＭＯ、デビック病又はデビック症候群としても公知）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）（例えば、クローン病；自己免疫媒介性消化管疾患、大腸炎、例えば潰瘍性大腸炎、大腸性潰瘍、顕微鏡的大腸炎、コラーゲン大腸炎、大腸ポリープ、壊死性全腸炎及び貫壁性大腸炎；並びに自己免疫性炎症性腸疾患）、腸炎症、壊疸性膿皮症、結節性紅斑、原発性硬化性胆管炎、呼吸窮迫症候群（例として、成人性又は急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ））、髄膜炎、ブドウ膜の全部又は一部の炎症、虹彩炎、脈絡膜炎、自己免疫性血液障害、リウマチ様脊椎炎、リウマチ性滑膜炎、遺伝性血管浮腫、髄膜炎におけるような脳神経損傷、妊娠性疱疹、妊娠性類天疱瘡、陰嚢掻痒、自己免疫性未成熟卵巣不全、自己免疫性病態に起因する突発性難聴、ＩｇＥ媒介性疾患、例えばアナフィラキシー並びにアレルギー性及びアトピー性鼻炎、脳炎、例えばラスムッセン脳炎並びに辺縁及び／又は脳幹の脳炎、ブドウ膜炎（例えば、前部ブドウ膜炎、急性前ブドウ膜炎、肉芽腫
性ブドウ膜炎、非顆粒性ブドウ膜炎、水晶体抗原性ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎又は自己免疫性ブドウ膜炎）、ネフローゼ症候群を有する又は有さない糸球体腎炎（ＧＮ）（例えば、慢性又は急性糸球体腎炎、例えば原発性ＧＮ、免疫介在性ＧＮ、膜性ＧＮ（膜性腎症）、特発性膜性ＧＮ又は特発性膜性腎症、膜又は膜性増殖性ＧＮ（ＭＰＧＮ）、例としてＩ型及びＩＩ型及び急速進行性ＧＮ又は増殖性腎炎）、自己免疫性多腺性内分泌不全、亀頭炎、例として形質細胞限局性亀頭炎、亀頭包皮炎、遠心性環状紅斑、色素異常性固定性紅斑、多形性紅斑、環状肉芽腫、光沢苔癬、硬化性萎縮性苔癬、慢性単純性苔癬、棘状苔癬、扁平苔癬、葉状魚鱗癬、表皮融解性過角化、前癌性角化、壊疽性膿皮症、アレルギー性病態及び応答、アレルギー反応、湿疹（例として、アレルギー性及びアトピー性湿疹、皮脂欠乏性湿疹、汗疱状湿疹及び水疱性掌蹠湿疹）、喘息（例えば、喘息気管支炎、気管支喘息及び自己免疫性喘息）、Ｔ細胞の浸潤及び慢性炎症性応答を伴う病態、外来性抗原、例えば胎児Ａ−Ｂ−Ｏ血液型に対する妊娠中の免疫反応、慢性肺炎症性疾患、自己免疫性心筋炎、白血球接着不全症、ループス（例として、ループス腎炎、ループス脳炎、小児ループス、非腎性ループス、腎外ループス、円板状ループス及び円板状エリテマトーデス、脱毛症ループス、全身性エリテマトーサス（ＳＬＥ）、例えば皮膚ＳＬＥ又は亜急性皮膚ＳＬＥ、新生児期ループス症候群（ＮＬＥ）及び播種性紅斑性狼瘡）、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病及び成人における潜在性自己免疫性糖尿病（又は１．５型糖尿病）が挙げられる。サイトカイン及びＴリンパ球により媒介される急性及び遅発性過敏症と関連する免疫応答、サルコイドーシス、肉芽腫症（例として、リンパ腫様肉芽腫症、ウェゲナー肉芽腫症又は無顆粒球症）、脈管炎（例として、血管炎、大血管血管炎（例として、リウマチ性多発筋痛症及び巨細胞性（高安）動脈炎）、中血管血管炎（例として、川崎病及び結節性多発動脈炎／結節性動脈周囲炎）、顕微鏡的多発動脈炎、免疫血管炎、ＣＮＳ血管炎、皮膚性血管炎、過敏性血管炎、壊死性血管炎、例えば全身性壊死性血管炎及びＡＮＣＡ関連血管炎（例えば、チャーグ・ストラウス血管炎又は症候群（ＣＳＳ）及びＡＮＣＡ関連小血管血管炎））、側頭動脈炎、再生不良性貧血、自己免疫性再生不良性貧血、クームス陽性貧血、ダイヤモンド・ブラックファン貧血、溶血性貧血、免疫性溶血性貧血、例として自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）、アジソン病、自己免疫性好中球減少症、汎血球減少症、白血球減少症、白血球血管外漏出を伴う疾患、ＣＮＳ炎症性障害、アルツハイマー病、パーキンソン病、多臓器損傷症候群（例えば、敗血症、外傷又は出血に続発性のもの）、抗原−抗体複合体により媒介される疾患、抗糸球体基底膜疾患、抗リン脂質抗体症候群、抗リン脂質症候群、アレルギー性神経炎、ベーチェット病／症候群、キャッスルマン症候群、グッドパスチャー症候群、レイノー症候群、シェーグレン症候群、スティーブンス・ジョンソン症候群、類天疱瘡、例えば水泡性類天疱瘡及び類天疱瘡皮膚、天疱瘡（例として、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、天疱瘡粘膜類天疱瘡及び紅斑性天疱瘡）、自己免疫性多腺性内分泌障害、ライター病又は症候群、熱傷、妊娠高血圧腎症、免疫複合体障害、例えば免疫複合体腎炎、抗体媒介性腎炎、視神経脊髄炎、慢性神経障害、例えばＩｇＭ多発性神経障害又はＩｇＭ媒介性神経障害、自己免疫性又は免疫媒介性血小板減少症、例えば特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、例として慢性又は急性ＩＴＰ、後天性血小板減少性紫斑症、強膜炎、例えば特発性角強膜炎、上強膜炎、精巣及び卵巣の自己免疫性疾患、例として自己免疫性精巣炎及び卵巣炎、原発性甲状腺機能低下症、副甲状腺機能低下症、自己免疫性内分泌疾患（例として、甲状腺炎（例えば、自己免疫性甲状腺炎、橋本病、慢性甲状腺炎（橋本甲状腺炎）又は亜急性甲状腺炎）、自己免疫甲状腺疾患、特発性甲状腺機能低下症、グレーブス病）、多腺性症候群、例えば自己免疫多腺性症候群（又は多腺性内分泌障害症候群）、腫瘍随伴症候群、例として神経性腫瘍随伴症候群、例えばランバート・イートン筋無力症症候群又はイートン・ランバート症候群、スティッフマン又はスティッフパーソン症候群、脳脊髄炎、例えばアレルギー性脳脊髄炎又は脳脊髄炎性アレルギー及び実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）、重症筋無力症、例えば胸腺腫関連の重傷筋無力症、小脳変性症、神経性筋強直症、眼球クローヌス又は眼球クローヌス・ミオクローヌス症候群（ＯＭＳ）、感覚性神経障害、多巣性運動神経障害、シーハン症候群、自己免疫性肝炎、慢性肝炎、ルポイド肝炎、巨細胞性肝炎、慢性活動性肝炎又は自己免疫性
慢性活動性肝炎、リンパ球様間質性肺炎（ＬＩＰ）、閉塞性細気管支炎（非移植）対ＮＳＩＰ、ギランバレー症候群、ベルジェ病（ＩｇＡ腎症）、特発性ＩｇＡ腎症、線状ＩｇＡ皮膚症、急性熱性好中球皮膚症、角層下膿疱症、一過性棘融解性皮膚症、肝硬変、例えば原発性胆汁性肝硬変及び肺硬変、自己免疫性腸疾患症候群、セリアック（Ｃｅｌｉａｃ）又はセリアック（Ｃｏｅｌｉａｃ）病、セリアックスプルー（グルテン性腸症）、難治性スプルー、特発性スプルー、クリオグロブリン血症、筋委縮性側索硬化症（ＡＬＳ；ルー・ゲーリック病）、冠動脈疾患、自己免疫性耳疾患、例えば自己免疫性内耳疾患（ＡＩＥＤ）、自己免疫性難聴、多発性軟骨炎、例えば難治性又は再発又は再発性多発性軟骨炎、肺胞タンパク症、コーガン症候群／非梅毒性角膜実質炎、ベル麻痺、スイート病／症候群、自己免疫性酒さ、帯状疱疹関連痛、アミロイドーシス、非癌性リンパ球増加症、原発性リンパ球増加症、例としてモノクローナルＢ細胞リンパ球増加症（例えば、良性単クローン性免疫グロブリン血症及び意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症、ＭＧＵＳ）、末梢神経障害、腫瘍随伴症候群、チャネル病、例えば癲癇、偏頭痛、不整脈、筋障害、難聴、盲目、周期性麻痺及びＣＮＳのチャネル病、自閉症、炎症性筋障害、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、内分泌性眼障害、ブドウ膜網膜炎、脈絡網膜炎、自己免疫性肝障害、線維筋痛症、多発性内分泌不全、シュミット症候群、副腎炎、胃萎縮症、初老期認知症、脱髄性疾患、例えば自己免疫性脱髄性疾患及び慢性炎症性脱髄性多発神経障害、ドレスラー症候群、円形脱毛症、完全脱毛症、ＣＲＥＳＴ症候群（石灰沈着症、レイノー現象、食堂蠕動低下、強指症及び毛細血管拡張症）、男性及び女性の自己免疫性不妊（例えば、抗精子抗体に起因）、混合性結合組織疾患、シャーガス病、リウマチ熱、反復流産、農夫肺、多形成紅斑、開心術後症候群、クッシング症候群、愛鳥家肺、アレルギー性肉芽腫性血管炎、良性リンパ球性血管炎、アルポート症候群、肺胞炎、例えばアレルギー性肺胞炎及び線維性肺胞炎、間質性肺疾患、輸血反応、ハンセン病、マラリア、寄生虫病、例えばリーシュマニア症、キパノソミアシス（ｋｙｐａｎｏｓｏｍｉａｓｉｓ）、住血吸虫症、回虫症、アスペルギルス症、サンプター症候群、カプラン症候群、デング熱、心内膜炎、心内膜心筋線維症、びまん性間質性肺線維症、間質性肺線維症、肺線維症、特発性肺線維症、嚢胞性線維症、眼内炎、持久性隆起性紅斑、胎児赤芽球症、好酸球性筋膜炎、シャルマン症候群、フェルティ症候群、フィラリア症、毛様体炎、例えば慢性毛様体炎、異時性毛様体炎、虹彩毛様体炎（急性又は慢性）又はフックス毛様体炎、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染、ＳＣＩＤ、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、エコーウイルス感染、敗血症、内毒素血症、膵炎、甲状腺中毒症、パルボウイルス感染、風疹ウイルス感染、ワクチン接種後症候群、先天性風疹感染症、エプスタインバーウイルス感染、ムンプス、エバンス症候群、自己免疫性性腺機能不全、シデナム舞踏病、連鎖球菌感染後腎炎、閉塞性血栓血管炎、甲状腺中毒症、脊髄ろう、脈絡膜炎、巨細胞多発性筋痛、慢性過敏性肺炎、乾性角結膜炎、流行性角結膜炎、特発性腎炎症候群、微小変化型腎症、良性家族性及び虚血再灌流傷害、移植臓器再灌流、網膜自己免疫、関節炎症、気管支炎、慢性閉塞性気道／肺疾患、珪肺症、アフタ、アフタ性口内炎、動脈硬化性障害、アスペルニオゲネーゼ（ａｓｐｅｒｎｉｏｇｅｎｅｓｅ）、自己免疫性溶血、ベック病、クリオグロブリン血症、デュプイトラン拘縮、水晶体過敏性眼内炎、アレルギー性腸炎、らい性結節性紅斑、特発性顔面麻痺、慢性疲労症候群、リウマチ熱、ハンマン・リッチ病、感音難聴、発作性ヘモグロビン尿症、性腺機能低下症、限局性回腸炎、白血球減少症、伝染性単核球症、横断性脊髄炎、原発性特発性粘液水腫、ネフローゼ、交感性眼炎、肉芽腫性精巣炎、膵炎、急性多発神経根炎、壊疸性膿皮症、ケルバン甲状腺炎、後天性脾臓委縮症、非悪性胸腺腫、白斑、毒素性ショック症候群、食中毒、Ｔ細胞の浸潤を伴う病態、白血球粘着不全症、サイトカイン及びＴリンパ球により媒介される急性及び遅発性過敏症と関連する免疫応答、白血球血管外漏出を伴う疾患、多臓器損傷症候群、抗原−抗体複合体により媒介される疾患、抗糸球体基底膜疾患、アレルギー性神経炎、自己免疫性多腺性内分泌障害、卵巣炎、原発性粘液水腫、自己免疫性萎縮性胃炎、交感性眼炎、リウマチ病、混合性結合組織病、ネフローゼ症候群、膵島炎、多腺性内分泌不全、多腺性自己免疫症候群Ｉ型、成人発症型特発性副甲状腺機能低下症（ＡＯＩＨ）、心筋症、例え
ば拡張型心筋症、後天性表皮水泡症（ＥＢＡ）、ヘモクロマトーシス、心筋炎、ネフローゼ症候群、原発性硬化性胆管炎、化膿性又は非化膿性副鼻腔炎、急性又は慢性副鼻腔炎、篩骨洞炎、前頭洞炎、上顎洞炎又は蝶形骨洞炎、好酸球関連疾患、例えば好酸球増多症、肺浸潤性好酸球増多症、好酸球増多筋痛症候群、レフレル症候群、慢性好酸球性肺炎、局所性肺好酸球増多症、気管支肺アスペルギルス症、アスペルギルス腫又は好酸球を含有する肉芽腫、アナフィラキシー、血清反応陰性脊椎関節炎、多腺性内分泌性自己免疫疾患、硬化性胆管炎、強膜、上強膜、慢性粘膜皮膚カンジダ症、ブルトン症候群、乳児期一過性低ガンマグロブリン血症、ウィスコット・アルドリッチ症候群、毛細血管拡張性運動失調症候群、血管拡張症、膠原病と関連する自己免疫性障害、リウマチ、神経病、リンパ節炎、血圧応答の低減、血管機能不全、組織損傷、心血管虚血、痛感過敏、腎虚血、脳虚血及び血管新生を伴う疾患、アレルギー性過敏性障害、糸球体腎炎、再灌流傷害、虚血再灌流傷害、心筋又は他の組織の再灌流傷害、リンパ腫性気管気管支炎、炎症性皮膚病、急性炎症性構成成分による皮膚症、多臓器不全、水疱性疾患、腎皮質壊死、急性化膿性髄膜炎又は他の中枢神経系炎症障害、眼及び眼窩炎症性障害、顆粒球輸血関連症候群、サイトカイン誘発毒性、ナルコレプシー、急性の重篤な炎症、慢性難治性炎症、腎盂炎、動脈内過形成、消化性潰瘍、弁膜炎、気腫、円形脱毛症、脂肪組織炎症／ＩＩ型糖尿病、肥満関連脂肪組織炎症／インスリン耐性並びに子宮内膜症も企図される。
【０１２２】
ある実施形態において、自己免疫性疾患又は炎症性障害としては、限定されるものではないが、Ｉ型及びＩＩ型糖尿病、前糖尿病、移植拒絶、多発性硬化症、多発性硬化症関連障害、未成熟卵巣不全、強皮症、シェーグレン病／症候群、ループス、白斑、脱毛症（禿頭）、多腺性内分泌不全、グレーブス病、甲状腺機能低下症、多発性筋炎、天疱瘡、クローン病、大腸炎、自己免疫性肝炎、下垂体機能低下症、心筋炎、アジソン病、自己免疫性皮膚疾患、ブドウ膜炎、悪性貧血、副甲状腺機能低下症及び／又は関節リウマチを挙げることができる。他の目的適応症としては、限定されるものではないが、喘息、アレルギー性喘息、原発性胆汁性肝硬変、肝硬変、視神経脊髄炎スペクトラム障害（デビック病、視神経脊髄型多発性硬化症（ＯＳＭＳ））、尋常性天疱瘡、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、関節炎、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、セリアック病、乾癬、自己免疫性心筋症、特発性拡張型心筋症（ＩＤＣＭ）、重症筋無力症、ブドウ膜炎、強直性脊椎炎、免疫介在性ミオパチー、前立腺癌、抗リン脂質症候群（ＡＮＣＡ＋）、アテローム性動脈硬化症、皮膚筋炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肺気腫、脊髄損傷、外傷性損傷、タバコ誘発性肺破壊、ＡＮＣＡ関連血管炎、乾癬、硬化性胆管炎、原発性硬化性胆管炎並びに中枢及び末梢神経系の疾患が挙げられる。
【０１２３】
ある実施形態において、自己免疫性疾患又は炎症性障害としては、限定されるものではないが、Ｉ型糖尿病、多発性硬化症、セリアック病、原発性胆汁性肝硬変、天疱瘡、落葉状天疱瘡、尋常性天疱瘡、視神経脊髄炎スペクトラム障害、関節炎（例として、関節リウマチ）、アレルギー性喘息、炎症性腸疾患（例として、クローン病及び潰瘍性大腸炎）、全身性エリテマトーデス、アテローム性動脈硬化症、慢性閉塞性肺疾患、肺気腫、乾癬、自己免疫性肝炎、ブドウ膜炎、シェーグレン症候群、強皮症、抗リン脂質症候群、ＡＮＣＡ関連血管炎及びスティッフマン症候群を挙げることができる。さらなる態様において、疾患関連抗原は、腫瘍又は癌関連抗原である。
【０１２４】
ある実施形態において、自己免疫性疾患又は炎症性障害としては、原発性胆汁性肝硬変、自己免疫性肝炎及び原発性硬化性胆管炎から選択される肝臓自己免疫性障害を挙げることができる。ある実施形態において、ｕａＭＨＣ−ＮＰ複合体は、原発性胆汁性肝硬変、自己免疫性肝炎及び／又は原発性硬化性胆管炎を治療する方法において使用される。ある実施形態において、原発性胆汁性肝硬変、自己免疫性肝炎及び／又は原発性硬化性胆管炎を治療する方法は、ｕａＭＨＣ−ＮＰ複合体であって、ユビキタス自己抗原は、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ複合体−Ｅ２構成成分（ＰＤＣ−Ｅ２）、シトクロムＰ４５０  ２Ｄ
６（ＣＹＰ２Ｄ６）、可溶性肝抗原（ＳＬＡ）、アクチン（ＡＣＴＢ）、ホルムイミドイルトランスフェラーゼ−シクロデアミナーゼ（ＦＴＣＤ）及びミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）のいずれか１つ以上に由来するポリペプチドである、ｕａＭＨＣ−ＮＰ複合体を投与することを含む。ある実施形態において、原発性胆汁性肝硬変を治療する方法は、ｕａＭＨＣ−ＮＰ複合体であって、ユビキタス自己抗原は、シトクロムＰ４５０  ２Ｄ６（ＣＹＰ２Ｄ６）、可溶性肝抗原（ＳＬＡ）、アクチン（ＡＣＴＢ）、ホルムイミドイルトランスフェラーゼ−シクロデアミナーゼ（ＦＴＣＤ）及びミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）のいずれか１つ以上に由来するポリペプチドである、ｕａＭＨＣ−ＮＰ複合体を投与することを含む。ある実施形態において、自己免疫性肝炎を治療する方法は、ｕａＭＨＣ−ＮＰ複合体であって、ユビキタス自己抗原は、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ複合体−Ｅ２構成成分（ＰＤＣ−Ｅ２）、可溶性肝抗原（ＳＬＡ）、アクチン（ＡＣＴＢ）、ホルムイミドイルトランスフェラーゼ−シクロデアミナーゼ（ＦＴＣＤ）及びミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）のいずれか１つ以上に由来するポリペプチドである、ｕａＭＨＣ−ＮＰ複合体を投与することを含む。ある実施形態において、原発性硬化性胆管炎を治療する方法は、ｕａＭＨＣ−ＮＰ複合体であって、ユビキタス自己抗原は、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ複合体−Ｅ２構成成分（ＰＤＣ−Ｅ２）、シトクロムＰ４５０  ２Ｄ６（ＣＹＰ２Ｄ６）、可溶性肝抗原（ＳＬＡ）、アクチン（ＡＣＴＢ）及びミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）のいずれか１つ以上に由来するポリペプチドである、ｕａＭＨＣ−ＮＰ複合体を投与することを含む。
【０１２５】
ある実施形態において、自己免疫性疾患又は炎症性障害としては、多発性硬化症を挙げることができる。ある実施形態において、自己免疫性疾患又は炎症性障害としては、再発寛解型多発性硬化症を挙げることができる。ある実施形態において、ｕａＭＨＣ−ＮＰ複合体は、多発性硬化症を治療する方法において使用される。ある実施形態において、多発性硬化症を治療する方法は、ｕａＭＨＣ−ＮＰ複合体であって、ユビキタス自己抗原は、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ複合体−Ｅ２構成成分（ＰＤＣ−Ｅ２）、シトクロムＰ４５０  ２Ｄ６（ＣＹＰ２Ｄ６）、可溶性肝抗原（ＳＬＡ）、アクチン（ＡＣＴＢ）、ホルムイミドイルトランスフェラーゼ−シクロデアミナーゼ（ＦＴＣＤ）及びミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）のいずれか１つ以上に由来するポリペプチドである、ｕａＭＨＣ−ＮＰ複合体を投与することを含む。
【０１２６】
薬学的に許容可能な安定剤、賦形剤及び希釈剤
ある実施形態において、本開示のｕａＭＨＣ−ＮＰ複合体は、１つ以上の薬学的に許容可能な安定剤、賦形剤、担体及び希釈剤を含む医薬組成物中に含められる。ある実施形態において、本開示のｕａＭＨＣ−ＮＰ複合体は、無菌溶液中で懸濁させて投与される。ある実施形態において、溶液は、０．９％のＮａＣｌを含む。ある実施形態において、溶液は、緩衝液、例えば酢酸塩、クエン酸塩、ヒスチジン、コハク酸塩、リン酸塩、重炭酸塩及びヒドロキシメチルアミノメタン（Ｔｒｉｓ）；界面活性剤、例えばポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）、ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ２０）及びポロキサマー１８８；ポリオール／二糖／多糖、例えばグルコース、デキストロース、マンノース、マンニトール、ソルビトール、スクロース、トレハロース及びデキストラン４０；アミノ酸、例えばグリシン又はアルギニン；酸化防止剤、例えばアスコルビン酸、メチオニン；又はキレート剤、例えばＥＧＴＡ若しくはＥＧＴＡの１つ以上をさらに含む。ある実施形態において、本開示のｕａＭＨＣ−ＮＰ複合体は、凍結乾燥させて輸送／貯蔵され、投与前に再構成される。ある実施形態において、凍結乾燥ｕａＭＨＣ−ＮＰ複合体配合物は、増量剤、例えばマンニトール、ソルビトール、スクロース、トレハロース又はデキストラン４０を含む。凍結乾燥配合物は、ガラスから構成されるバイアル中で含有させることができる。ｕａＭＨＣ−ＮＰ複合体は、配合される場合、再構成されるか否かに関係なく、あるｐＨ、一般に７．０未満において緩衝化することができる。ある実施形態において、ｐＨは、４．５〜６．５、４．５〜６．０、４．５〜５．５、４．５〜５．０又は５．０〜６．０
であり得る。ある実施形態において、ｕａＭＨＣ−ＮＰ複合体は、静脈内注射のために配合することができる。ある実施形態において、ｕａＭＨＣ−ＮＰ複合体は、経口摂取のために配合することができる。ある実施形態において、ｕａＭＨＣ−ＮＰ複合体は、非経口、筋肉内又は組織内注射のために配合することができる。ある実施形態において、ｕａＭＨＣ−ＮＰ複合体は、いかなる免疫学的アジュバントも免疫応答を増加若しくは減少させることが意図される他の化合物又はポリペプチドも用いずに配合し、且つ／又は投与することができる。
【実施例】
【０１２７】
以下の説明的な実施例は、本明細書に記載の組成物及び方法の実施形態の代表例であり、決して限定を意味するものではない。
【０１２８】
実施例１  −  ＰＢＣ関連ｐＭＨＣクラスＩＩ−ＮＰによるＴＲ１様ＣＤ４＋Ｔ細胞形成及び拡大
抗糖尿病誘発性Ｂ６由来第３及び４染色体領域を担持するＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスは、ヒトＰＢＣと類似するある形態の自己免疫性胆管疾患を自然発症する。Ｉｒｉｅ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０３，１２０９−１２１９を参照されたい。患者の＞９０％と同様に、これらのマウスは、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ（ＰＤＣ）複合体のＥ２及びＥ３ＢＰ構成成分に対する病原性Ｔ及びＢ細胞応答を発症する。Ｋｉｔａ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０９，１２３１−１２４０を参照されたい。ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウス及びヒトにおいて、これらの自己免疫性応答は、胆管上皮細胞の破壊を促進し、胆汁鬱滞、小胆管増殖及び最終的に肝不全をもたらす。
【０１２９】
ＰＢＣ関連ｐＭＨＣクラスＩＩベースナノ医薬を設計するため、本発明者らは、ＮＯＤ／ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスＭＨＣクラスＩＩ分子（Ｉ−Ａｇ７）に結合し得るネズミＰＤＣ−Ｅ２中の１５ｍｅｒのペプチドをインシリコで探索した。２つのこのようなエピトープ（ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１及びＰＤＣ−Ｅ２８２−９６）をコードするＩ−Ａｇ７ベースｐＭＨＣを実験のために選択した。Ｔ１Ｄ関連Ｉ−Ａｇ７結合ＢＤＣ２．５ミモトープを陰性対照として使用した。これらの複合体は、レンチウイルス形質導入チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞中で産生させ、連続ニッケル及びｓｔｒｅｐｔａｇ親和性クロマトグラフィーにより精製し、フリーカルボキシ末端システインを介してＳｉｎｇｈａ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １２，７０１−７１０に記載のとおりマレイミド官能化ポリエチレングリコールの存在下で鉄（ＩＩＩ）アセチルアセトネート（Ｆｅ（ａｃａｃ）３）の熱分解により産生された酸化鉄ナノ粒子上に共有結合によりコーティングした。
【０１３０】
図１Ａ（逆三角形、中段及び右側パネル）に示されるとおり、ｐＭＨＣ四量体染色試験は、ＮＯＤ．ｃ３ｃ４（ＮＯＤでない）マウスが経時的に増加するレベルのＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７及びＰＤＣ−Ｅ２８２−９６／ＩＡｇ７反応性Ｔ細胞サブセットの両方を保有することを実証した。対照的に、ＮＯＤマウスと異なり、ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスは、図１Ａ（三角形、中央及び右側パネル）に示されるとおり、無視可能なレベルのＴ１Ｄ関連ＢＤＣ２．５ｍｉ／ＩＡｇ７反応性サブセットを含有し、それら２つの系統のＰＢＣ対Ｔ１Ｄ傾向と一致するアウトカムである。したがって、ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスにおける肝臓自己免疫の進行は、ＰＤＣ−Ｅ２特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞のサイズ及び／又は循環活性の増加を伴う。
【０１３１】
ＰＢＣ関連ｐＭＨＣクラスＩＩ−ＮＰがＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスにおいてＰＤＣ−Ｅ２特異的ＴＲ１様ＣＤ４＋Ｔ細胞の形成及び拡大をトリガーし得るか否かを確認するため、本発明者らは、最初に、１５週齢ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウス（疾患が十分確定されたとき）を、ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７ｐＭＨＣをディスプレイするＮＰ又は対照Ｎ
Ｐ（Ｃｙｓ−ＮＰ）により処理した（週２回、１３．５週まで静脈内）。図１Ｂ（四角、左側及び中央パネル）に示されるとおり、処理は、裸ＮＰにより処理されたマウス又は非処理ＮＯＤマウスと比較して循環ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７四量体＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の末梢存在比率の急速な増加（２．５週以内）をトリガーした。フォローアップの終了時のマウスの試験は、図１Ｃに示されるとおりコグネイトＣＤ４＋Ｔ細胞のＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ誘導拡大が全身性であり、脾臓、骨髄、肝臓及び肝臓流入領域（門脈及び腹腔リンパ節）中の存在比率を増加させるが、非流入領域リンパ節（対腸間膜リンパ節（ＭＬＮ））中の存在比率を増加させないことを裏付けた。
【０１３２】
対照的に、Ｔ１Ｄ関連ＢＤＣ２．５／Ｉ−Ａｇ７ｐＭＨＣによりコーティングされたＮＰによるＮＯＤ．ｃ３ｃ４の処理は、ＴＲ１細胞形成も拡大もトリガーしなかった（図１Ｂ右側パネル及び図１Ｄ）。この結果は、もっぱら自己抗原経験Ｔ細胞に影響するそれらのナノ医薬と一致し；ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスは、膵島炎症を発症せず、したがって抗原活性化ＢＤＣ２．５ｍｉ／ＩＡｇ７自己反応性ＣＤ４＋Ｔ細胞を保有することが予測されない。
【０１３３】
マウスの追加のコホートにおける実験は、コグネイトＣＤ４＋Ｔ細胞のＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ誘導拡大がペプチド特異的であり、ＰＤＣ−Ｅ２８２−９６／Ｉ−Ａｇ７反応性ＣＤ４＋Ｔ細胞のいかなる検出可能な拡大も示さないことを実証した（図１Ｅ、上段行）。実際、これらのマウスにおけるＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞の拡大は、週齢適合非処理マウスにおいて検出されたレベルと比較して全ての試験器官中のＰＤＣ−Ｅ２８２−９６／Ｉ−Ａｇ７反応性ＣＤ４＋Ｔ細胞の存在比率の有意な低減を伴った（図１Ｅ、上段行）。これは、ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞サブセットが、内因性自己抗原曝露に応答するそのＰＤＣ−Ｅ２８２−９６／Ｉ−Ａｇ７反応性カウンターパートの増殖をいくらか阻害したことを示唆する。
【０１３４】
予測のとおり、図１Ｆ並びに図２Ａ及び２Ｂに示されるとおり、これらのマウスにおいて拡大したＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７四量体＋ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＴＲ１細胞マーカーＬＡＧ−３、ＣＤ４９ｂ及びＬＡＰを発現した。さらに、これらの四量体陰性カウンターパートと異なり、それらのマウスの脾臓四量体＋ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１（ＢＤＣ２．５でない）ペプチドパルス骨髄由来ＤＣに応答してＴＲ１サイトカインＩＬ−１０を産生したが、ＩＦＮγも、ＩＬ−２も、ＩＬ−４も、ＩＬ−９も、ＩＬ−１７も産生しなかった（図１Ｇ）。類似の結果は、図１Ｂ（中央）及び１Ｅ（下段）並びに図２Ａ及び２Ｂに示されるとおり、第２のＰＤＣ−Ｅ２ベースｐＭＨＣ（ＰＤＣ−Ｅ２８２−９６／Ｉ−Ａｇ７）をディスプレイするＮＰにより処理されたマウスにおいて得られ、コグネイトＰＤＣ−Ｅ２８２−９６／Ｉ−Ａｇ７反応性ＴＲ１様ＣＤ４＋Ｔ細胞の有意な拡大及びＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７反応性ＣＤ４＋Ｔ細胞の存在比率の有意な低減が存在し、上記アウトカムは、ＰＤＣ−Ｅ２上のいかなる特定のエピトープの特性でもないことを示した。
【０１３５】
まとめると、上記データは、Ｔ１Ｄ、ＥＡＥ及びＣＩＡ関連ｐＭＨＣクラスＩＩ−ＮＰについて対応する疾患モデルにおいて既に記載のとおり、ＰＤＣ−Ｅ２ペプチド／ＩＡｇ７−ＮＰがＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスにおいてコグネイトＴＲ１様ＣＤ４＋Ｔ細胞の形成及び拡大を効率的にトリガーすることを実証する。
【０１３６】
実施例２  −  疾患関連ｐＭＨＣクラスＩＩ−ＮＰによる確定ＰＢＣの好転
週齢適合ＮＯＤマウスと比較した場合、６〜８週齢ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスは、上昇レベルの血清アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、顕微鏡的な胆汁性上皮増殖、胆管系白血球浸潤、広範胆管侵襲（ほぼ最大数の罹患門脈三管）及び総胆管（ＣＢＤ）の
肉眼的肥大を呈し始める（図３Ａ及び３Ｃ）。図３Ｂは、顕微鏡分析を定量するための例示的なスコアリング行列を示す。約１５〜１６週までに、これらの兆候は、悪化し、マウスは、増加した総血清ビリルビン（ＴＢ）レベル（図３Ａ）、高い力価の抗ミトコンドリア／ＰＤＣ−Ｅ２特異的自己抗体（ＮＯＤマウスにおいて不存在；図３Ｅ）及び肝疾患の肉眼的兆候（胆管嚢胞）（図３Ｄ）を呈し始める。これら全ての疾患の兆候の重症度は、約２４週齢においてピークを示し（図３Ａ〜３Ｄ）、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞による胆管上皮の広範浸潤（図３Ｆ）、高い力価の抗核自己抗体（ＡＮＡ）（図３Ｅ）並びに肝重量のほぼ３倍の増加（図３Ｄ）と一致する。
【０１３７】
本発明者らは、マウスにおいて肝臓自己免疫が十分に確定される週齢の１５週齢ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスにおいてＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−、ＰＤＣ−Ｅ２８２−９６／Ｉ−Ａｇ７−及びＢＤＣ２．５／Ｉ−Ａｇ７−ＮＰの治療特性を試験した。マウスは、２０ｕｇのｐＭＨＣ−ＮＰの用量又は等用量の対照（ＣｙｓコンジュゲートＮＰ；Ｃｙｓ−ＮＰ）を９〜１３．５週間、２週間に１回受容した。ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰによる処理は、血清ＡＬＴ及びＴＢレベル（図４Ａ）、胆管侵襲、胆管上皮増殖及び白血球浸潤（図４Ｂ）、総胆管直径及び肉眼的スコア（図４Ｃ）、肝重量及び肉眼的肝スコア（図４Ｄ）並びに腹囲（図４Ｅ）の有意な低減をもたらした。処理は、治療開始時に見出される自己抗体力価を減少させなかったが、それは、ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ、ＰＤＣ−Ｅ２８２−９６／Ｉ−Ａｇ７−ＮＰ対対照ＮＰにより処理されたマウスにおける抗ＰＤＣ−Ｅ２及び抗核自己抗体力価の有意な低減により報告されるとおり明らかに自己抗体形成の進行を鈍化させた（図４Ｆ）。第２のＰＢＣ関連ｐＭＨＣ−ＮＰ化合物（ＰＤＣ−Ｅ２８２−９６／Ｉ−Ａｇ７−ＮＰ）及びＴ１Ｄ関連（しかし、ＰＢＣ無関連）カウンターパート（ＢＤＣ２．５／Ｉ−Ａｇ７−ＮＰ）を用いる追加の試験は、それらの化合物の疾患特異性を裏付けた（図４Ｃ及び４Ｄ）。
【０１３８】
疾患重症度のピーク（２４週齢）において処理を開始した場合、類似の結果が得られた。ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰによる治療１４〜２０週後のマウス（３８〜４４週齢）の分析は、ＴＲ１様ＣＤ４＋Ｔ細胞の全身拡大を明らかにし（図４Ｇ及び図２Ｃ）、疾患兆候の尺度（図４Ｈ及び４Ｉ）が治療を開始した週齢において見られるものよりも有意に低いことを示し、ＰＢＣ特異的ナノ医薬による肝炎症の消散が既存の肝損傷の修復を促進することを示唆した。
【０１３９】
実施例３  −  連続処理対断続処理
ｐＭＨＣ−ＮＰ療法は、コグネイトＴＲ１細胞の形成及び拡大を全身的にトリガーし、ほとんどのリンパ器官中及び自己免疫炎症の部位においてそれらの細胞の蓄積をもたらす（図１〜３を参照されたい）。さらに、これらのＴＲ１細胞は、血流を介して循環し、血液中のそれらの存在は、再治療の必要性を判断するためのバイオマーカーとして使用することができる。これを調査し、治療決定をガイドするためにコグネイトＴＲ１様ＣＤ４＋Ｔ細胞の循環レベルを実際に使用することができるか否かを確認するため、本発明者らは、ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰにより処理されたＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスにおける処理を１５週から２４週齢まで中断した。次いで、本発明者らは、２週間ごとに末梢血中のＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７四量体＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合を計測し、四量体＋細胞の割合が処理中断時の値の約５０％に降下した動物を再処理し；処理は、次回の予定計測において四量体＋値が回復した時に再び中断し、このサイクルをマウスが５０週齢に達するまで繰り返した。マウスごとにかなり変動したが（図５Ａ）、ほとんどの動物において、末梢血四量体＋ＴＲ１様細胞含有量は、処理中断後の４〜６週以内に元の値の約５０％に次第に降下したが、それらの動物の再処理は、それらの値を急速に回復させた（図５Ｂ）。断続処理は、非処理マウス又は２４から３８〜４４週齢まで連続処理されたマウスの値と比較して薬力学（ＴＲ１様ＣＤ４＋Ｔ細胞の全身拡大）（図５Ｃ及び５Ｄ）も、処理の治療効果、例として総胆管直径／肉眼的スコア及び肝重量／肉眼的
スコア（図５Ｅ）の低減も減弱させなかった。
【０１４０】
実施例４  −  ｐＭＨＣ−ＮＰ対標準治療
ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ、親水性胆汁酸）は、ＰＢＣのための標準治療である。Ｃｈａｒａｔｃｈａｒｏｅｎｗｉｔｔｈａｙａ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．Ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ａｎｄ  ｉｍｐａｃｔ  ｏｆ  ｕｒｓｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ
ａｃｉｄ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｂｉｌｉａｒｙ  ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ  ａｆｔｅｒ  ｌｉｖｅｒ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．Ｌｉｖｅｒ  Ｔｒａｎｓｐｌ．１３，１２３６−１２４５を参照されたい。ＵＤＣＡは、抗コレステロール効果を有し、肝胆汁分泌を刺激し、したがって胆管細胞を疎水性胆汁酸の毒性効果から保護する。疾患プロセスの早期に与えた場合、患者の約５０％において有効であるが、進行期のＰＢＣでは有効でない。
【０１４１】
ＵＤＣＡ補給食を介する９週間連続の６週齢ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスへのＵＤＣＡの経口投与は、非処理マウスと比較してＡＬＴ、ＣＢＤスコア又はＣＢＤ直径の低減はないものの、肝スコア及び肝重量の低減（図６Ａ）並びに白血球浸潤の低減はないものの、胆管侵襲及び胆管増殖の低減（図６Ｂ）により顕在化されるとおり、ＰＢＣの進行に対する治療効果を有した。しかしながら、疾患進行の進行期（２４週齢）においてＵＤＣＡを与えた場合、それは、非処理動物と比較してＣＢＤ直径の極めて有意な低減を除きそれらの治療効果を有さず、それは、おそらくその抗コレステロール効果のためである（図６Ｄ及び６Ｅ）。
【０１４２】
対照的に、ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ処理は、試験した全てのリードアウトの重症度の有意な低減により報告されるとおり、６週齢及び２４週齢動物の両方において高度に有意な治療効果を有した（図６Ａ〜６Ｅ）。予測のとおり、これは、コグネイトＴＲ１様ＣＤ４＋Ｔ細胞の全身拡大と関連した（図６Ｆ）。
【０１４３】
実施例５  −  疾患抑制は、ＩＬ−１０、ＴＧＦｂ及びＣＤ４＋Ｔ細胞を要求する
ＴＲ１様ｐＭＨＣ−ＮＰ拡大ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７ＣＤ４＋Ｔ細胞による疾患好転がＴＲ１サイトカインＩＬ−１０及び／又はＴＧＦｂにより媒介されたか否かを確認するため、本発明者らは、遮断抗ＩＬ１０又は抗ＴＧＦｂ  ｍＡｂ又はラットＩｇＧにより５週間処理された１５週齢ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスに対するＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰの免疫学的及び治療効果を比較した。サイトカイン遮断は、ラットＩｇＧにより処理された週齢適合ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスと比較してＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７特異的ＴＲ１様ＣＤ４＋Ｔ細胞の拡大を有意に阻害しなかった一方（図７Ａ）、それは、それらの治療効果を抑制した（図７Ｂ及び７Ｃ）。ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ処理ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスからの精製脾臓ＣＤ４＋Ｔ細胞は、疾患ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスからの脾細胞を用いて再構成されたＮＯＤ．ｓｃｉｄ．ｃ３ｃ４宿主に疾患抑制を移行させ得、ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰによる宿主の処理は、図７Ｄ〜７Ｆに示されるとおり、この効果を向上させた。
【０１４４】
実施例６  −  局所及び近位ＡＰＣの炎症促進特性の治療誘導抑制
ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰによるＰＢＣの好転が疾患促進ＡＰＣの特異的抑制と関連したか否かを確認するため、本発明者らは、ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ及び対照ＮＰ処理動物から単離された門脈（流入領域）対腸間膜（非流入領域）リンパ節ＣＤ１１ｂ＋細胞及び肝クッパー細胞のサイトカイン及びケモカインプロファイルを比較した。対照ＮＰ処理動物の門脈リンパ節からのＬＰＳチャレンジＣＤ１１ｂ＋細胞は、それらの腸間膜リンパ節カウンターパートよりも有意に高いレベルの広範な炎症促進性サイトカイン及びケモカインを分泌した（図７Ｇ）。逆に、ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ処理マウスの門脈リンパ節ＣＤ１１ｂ＋細胞は、対照Ｎ
Ｐ処理動物から単離されたそれらの腸間膜リンパ節カウンターパート及びＣＤ１１ｂ＋細胞の両方よりも有意に低いレベルのそのような炎症促進性メディエーターを分泌した（図７Ｇ）。同様に、ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ処理マウスの肝臓から単離されたクッパー細胞は、有意に低いレベルのそれらのメディエーターの一部を分泌した（図７Ｈ）。したがって、ＰＢＣ関連ｐＭＨＣクラスＩＩ−ＮＰによる処理によるＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスにおけるＰＤＣ−Ｅ２特異的ＴＲ１  ＣＤ４＋細胞の全身拡大は、局所及び近位ＡＰＣタイプの炎症促進特性の大幅な阻害と関連し、肝臓由来ＰＤＣ−Ｅ２自己抗原性材料の取り込みの増加に起因する可能性が高い。
【０１４５】
実施例７  −  ＰＢＣ関連ナノ医薬は、制御性Ｂ細胞の局所形成を促進する
膵臓ベータ細胞特異的ＴＲ１  ＣＤ４＋Ｔ細胞は、膵臓及びその流入領域リンパ節へのＢ細胞のリクルートメント並びに抗糖尿病誘発性ＩＬ−１０産生Ｂｒｅｇ細胞の局所形成を促進する。これがＰＢＣに関してＰＤＣ−Ｅ２特異的ＴＲ１  ＣＤ４＋Ｔ細胞についても当てはまるか否かを確認するため、本発明者らは、ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ処理マウスの肝臓、門脈及び腸間膜リンパ節中のＢ細胞の絶対数と、ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７特異的ＴＲ１細胞の絶対数との間に統計的に有意な相関が存在したか否かを調査した。ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ処理マウスの肝臓及び門脈リンパ節は、対照ＮＰ処理動物からのものよりも有意に多い数のＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−四量体＋細胞及びＢ細胞を保有したが、腸間膜リンパ節を保有しなかった（図７Ｉ）。さらに、肝臓及び門脈リンパ節の両方における四量体＋及びＢ細胞数は統計的に相関し；そのような相関は、ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ処理マウスの腸間膜リンパ節において見られなかった（図７Ｊ）。したがって、ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ処理マウスの肝臓及び肝臓流入領域リンパ節へのコグネイトＴＲ１細胞のリクルートメントの向上は、Ｂ細胞の局所蓄積を促進する。
【０１４６】
ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ処理マウスの肝臓及び門脈リンパ節Ｂ細胞をＢｒｅｇ細胞について濃縮させることができたか否かを確認するため、本発明者らは、ＬＰＳ刺激に応答してＩＬ−１０を産生する対応するＢ細胞の能力を比較した。ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ処理マウスの肝臓及び門脈リンパ節Ｂ細胞は有意なレベルのＩＬ−１０を産生したが、腸間膜リンパ節Ｂ細胞を産生せず；対照ＮＰ処理動物の肝臓も門脈リンパ節Ｂ細胞もＩＬ−１０を産生しなかった（図７Ｋ）。したがって、肝臓及び流入領域リンパ節へのＢ細胞のＴＲ１ＣＤ４＋Ｔ細胞向上リクルートメントは、ＩＬ−１０産生Ｂ細胞の局所形成と関連する。
【０１４７】
ＴＲ１細胞リクルートメントとＢｒｅｇ細胞形成との間の直接的な関係をさらに具体化するため、本発明者らは、ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７処理マウスの脾臓、肝臓及び門脈（腸間膜でない）リンパ節中で蓄積してＮＯＤ．Ｉｌ１０−ｅＧＦＰレポーターマウスからＣＤ１ｄｈｉｇｈ／ＣＤ５＋／ｅＧＦＰ＋子孫へのＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１ペプチドパルスコンベンショナル（ＩＬ−１０／ｅＧＦＰ−）Ｂ細胞の分化を促進するＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７特異的ＴＲ１細胞の能力を確認した。図７Ｋ〜７Ｍにおいて示されるとおり、脾臓、肝臓及び門脈リンパ節（コグネイトＴＲ１細胞を含有する）中のＢｒｅｇ細胞の明らかな形成が存在したが、腸間膜リンパ節（コグネイトＴＲ１細胞を欠く）中では存在しなかった。まとめると、これらの結果は、ＰＤＣ−Ｅ２特異的ＴＲ１細胞が、コンベンショナルＢ細胞のリクルートメント及びＢｒｅｇ様細胞へのその分化を促進することを示す。
【０１４８】
実施例８  −  全身免疫は、節約される
ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７特異的ＴＲ１細胞の持続的拡大が全身免疫の抑制をもたらすか否かを確認するため、本発明者らは、全身ワクシニアウイルス感染をクリアランスし、致死インフルエンザ感染に対するエフェクターＴ細胞応答をマウントし、細
胞内細菌感染（リステリア属（Ｌｉｓｔｅｒｉａ））に対する保護免疫をマウントし、且つ同種異系腫瘍肝転移に対する局所免疫応答をマウントするＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ処理ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスの能力を比較した。ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスのコホートは、ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ又は対照ＮＰの２週間に１回の投与を９週間受容した。治療終了時、マウスに組換えワクシニアウイルスの静脈内注射を与えた。注射１４日後の雌の両方のコホートの卵巣中のウイルス力価は、マウスの両方のコホートにおいて類似であり、感染のピークにおいて見出されたものよりもかなり低く、ｐＭＨＣ−ＮＰ療法がウイルス感染細胞に対する細胞免疫を損傷しなかったことを示した（図８Ａ）。
【０１４９】
これをさらに証明するため、本発明者らは、ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ処理又は非処理ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスにインフルエンザＨＫｘ３１の実験室株（Ｈ３Ｎ２）をｉ．ｐ．感染させて鼻腔内経路を介して与えられ、ＭＨＣクラスＩ拘束性エピトープを共有するインフルエンザのＨ１Ｎ１株（ＰＲ８）による後続の潜在性致死感染に対する異種免疫を誘導した。図８Ｂ及び８Ｃに示されるとおり、処理及び非処理マウスは、肺組織中のウイルス負荷及び活動性感染の臨床兆候により報告されるとおり、ＰＲ８感染に対する保護免疫をマウントした。
【０１５０】
通常、慢性感染を引き起こさない細胞内病原体リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）（ＬＭ）を感染させたマウスにおいて、類似の結果が得られた。ＬＭ感染ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ処理及び非処理ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスは、この細胞内病原体に対する未損傷免疫と一致して脾臓及び肝臓の両方からの細菌のクリアランスにおいて等しく効率的であった（図８Ｄ）。
【０１５１】
ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ処理及び非処理ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスは、ハプテン担体コンジュゲートＤＮＰ−キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）による免疫時に類似の力価の抗ジニトロフェニル（ＤＮＰ）抗体も産生した（図８Ｅ）。
【０１５２】
最後に、ＰＢＣ抑制ＰＤＣ−Ｅ２特異的ＴＲ１様ＣＤ４＋Ｔ細胞の全身拡大及び肝蓄積（図８Ｆ及び８Ｌ）は、未処理ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウス又は同系宿主（それぞれＢａｌｂ／ｃ及びＣ５７ＢＬ／６Ｊ）と比較して、脾臓内注射時に生じる同種異系結腸癌（ＣＴ２６）及び黒色腫（Ｂ１６）肝転移に対する免疫応答をマウントする処理ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスの能力を損傷させなかった（図８Ｆ〜８Ｋ及び８Ｌ〜８Ｑ）。したがって、ユビキタスに発現される抗原を標的化するにもかかわらず、ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７特異的ＴＲ１細胞は、外来又は腫瘍抗原に対する免疫を損傷させない。
【０１５３】
実施例９  −  ＰＢＣを有するヒト化マウス
ＤＲＢ４＊０１０１及びＤＲＢ１＊０８０１は、一部の研究においてＰＢＣと関連付けられてきた。ＰＢＣにおけるＨＬＡハプロタイプ多様性を確認するため、本発明者らは、スペインからのＰＢＣを有する１５４人の患者の高分解能ＨＬＡ−ＤＲＢ１タイピングを行った。患者の４０．３％は、ＤＲＢ１＊０７０１を発現し、２５％は、ＤＲＢ１＊０３０１＋であり、１４％は、ＤＲＢ１＊０８０１＋であった。ＤＲＢ１＊０７０１＋及び他のＤＲＢ１アレルを担持するハプロタイプは、オリゴモルフィック（ｏｌｉｇｏｍｏｒｐｈｉｃ）ＨＬＡ−ＤＲＢ４遺伝子座を担持するため、本発明者らは、それらの患者をＤＲＢ４＊０１０１についてもタイピングした。全てのＰＢＣ患者の６１．７％がＤＲＢ４＊０１０１アレルを担持した。
【０１５４】
これらのＨＬＡ−ＤＲＢ型の２つ（ＤＲＢ４＊０１０１及びＤＲＢ１＊０８０１）に結合するＰＤＣ−Ｅ２からのいくつかのＴ細胞エピトープ、例としてＰＤＣ−Ｅ２２４９−２６２（ＧＤＬＬＡＥＩＥＴＤＫＡＴＩ；ＤＲＢ４＊０１０１−バインダー）、ＰＤＣ−
Ｅ２１２２−１３５（ＧＤＬＩＡＥＶＥＴＤＫＡＴＶ；さらにはＤＲＢ４＊０１０１−バインダー）、ＰＤＣ−Ｅ２２４９−２６３（ＧＤＬＬＡＥＩＥＴＤＫＡＴＩＧ；ＤＲＢ１＊０８０１）及びＰＤＣ−Ｅ２６２９−６４３（ＡＱＷＬＡＥＦＲＫＹＬＥＫＰＩ；ＤＲＢ１＊０８０１）が記載されている。したがって、本発明者らは、ＰＤＣ−Ｅ２１２２−１３５／ＤＲＢ４＊０１０１、ＰＤＣ−Ｅ２２４９−２６２／ＤＲＢ４＊０１０１及びＰＤＣ−Ｅ２６２９−６４３／ＤＲＢ１＊０８０１複合体を発現させ、精製し、記載のとおりそれらの複合体のそれぞれをディスプレイする酸化鉄ナノ粒子を産生した。
【０１５５】
上記観察の並進的な有意性を調査するため、本発明者らは、１１人のＤＲＢ４＊０１０１＋及び５人のＤＲＢ１＊０８０１＋ＰＢＣ患者からのＰＢＭＣを用いて再構成されたＮＯＤ．ｓｃｉｄ／Ｉｌ２ｒｇ−／−（ＮＳＧ）宿主においてコグネイトＴＲ１様ＣＤ４＋Ｔ細胞を拡大させるそれら３つのヒトＰＢＣ関連ｐＭＨＣクラスＩＩ−ＮＰの能力を試験した（ＰＢＬ−ＮＳＧマウス、表２、３及び４）。次いで、ＰＢＭＣ注入ＮＳＧ宿主を８〜１０回用量の２０μｇのｐＭＨＣ−ＮＰにより静脈内処理した（５週間、週／２回）。１匹のマウスは、生着せず、３つの他のマウスは、処理終了前にＧｖＨＤにより死亡した。対照として、本発明者らは、ドナーごとに第２のマウスを注入し、それを対照（非ｐＭＨＣコーティングＮＰ）により処理した。コグネイトＣＤ４＋Ｔ細胞の拡大を脾臓、肝臓、門脈／腹腔及び腋窩リンパ節中で分析した。本発明者らは、非処理対照に対してＰＤＣ−Ｅ２１２２−１３５／ＤＲＢ４＊０１０１−ＮＰにより処理された６匹中６匹全てのＰＢＬ−ＮＳＧマウス、ＰＤＣ−Ｅ２２４９−２６２／ＤＲＢ４＊０１０１−ＮＰにより処理された６匹中５匹のＰＢＬ−ＮＳＧマウス及びＰＤＣ−Ｅ２６２９−６４３／ＤＲＢ１＊０８０１−ＮＰにより処理された５匹中４匹のＰＢＬ−ＮＳＧマウスからの脾臓及び／又は肝臓及びＬＮ中の四量体＋ＣＤ４９ｂ＋ＬＡＧ−３＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の拡大を確認した（表２、３及び４）。処理された応答性マウスは、対照ＮＰ処理又は非応答性マウスよりも脾臓、肝臓及びリンパ節中で有意に高い割合及び絶対数の四量体＋細胞を有し（図９Ａ及び９Ｂ）、それらの細胞は、ＴＲ１マーカーＣＤ４９ｂ及びＬＡＧ−３を発現した（図９Ｃ）。
【０１５６】
【表２】
2021504488.tif 000004
【０１５７】
【表３】
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【０１５８】
【表４】
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【０１５９】
実施例１０  −  疾患対器官特異性
より小型の器官、例えば内分泌膵臓と比較して器官、例えば肝臓の大きい自己抗原負荷及びＰＤＣ−Ｅ２が実質的に全ての細胞タイプ中で発現される自己抗原であるという事実を考慮すると、本発明者らの結果は、ＰＢＣ関連ナノ医薬（すなわちＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ）が疾患（ＰＢＣ）特異的であるか器官（肝臓）特異的であるか、又は肝臓遠位の自己免疫性炎症も鈍化させ得るか否かという問題を提起した。
【０１６０】
原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）は、中及び大胆管周囲の管周囲線維症を有する線維閉塞性胆管炎及び胆管上皮の退行性変化をもたらす肝臓胆管内及び外部の炎症を特徴とする慢性胆汁鬱滞性疾患であり、それは、門脈及び胆汁性肝硬変、最終的に肝硬変に進行する。ヒトＰＳＣは、炎症性腸疾患と関連し、高い有病率の非定型核周辺型抗好中球細胞質抗体（ｐＡＮＣＡ）を伴うことが多いが、抗ミトコンドリア自己抗体を伴わない。Ｆｉｃｋｅｒｔ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｉｍａｌ  ｍｏｄｅｌｓ  ｆｏｒ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｎｇ  ｃｈｏｌａｎｇｉｔｉｓ（ＰＳＣ）．Ｊ．Ｈｅｐａｔｏｌ．６０，１２９０−１３０３を参照されたい。Ａｂｃｂ４遺伝子ノックアウトマウスは、ヒトＰＳＣに顕著に類似し、胆汁性リン脂質分泌の損傷による胆管細胞の損傷により引き起こされるある形態の硬化性胆管炎を自然発症する。Ｐｏｌｌｈｅｉｍｅｒ，Ｍ．Ｊ．＆Ｆｉｃｋｅｒｔ，Ｐ．Ａｎｉｍａｌ  ｍｏｄｅｌｓ  ｉｎ
ｐｒｉｍａｒｙ  ｂｉｌｉａｒｙ  ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｎｇ  ｃｈｏｌａｎｇｉｔｉｓ．Ｃｌｉｎ．Ｒｅｖ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．４８，２０７−２１７，ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ１２０１６−０１４−８４４２−ｙ（２０１５）を参照されたい。
【０１６１】
自己免疫性肝炎（ＡＩＨ）は、抗核及び／若しくは平滑筋自己抗体（１型ＡＩＨ）又はそれぞれミクロソームシトクロムＰ４５０ＩＩＤ６（ＣＹＰ２Ｄ６）若しくはホルムイミノトランスフェラーゼシクロデアミナーゼ（ＦＴＣＤ）を特異的に標的化する抗肝腎ミクロソーム若しくは抗肝臓サイトゾル１型自己抗体（２型ＡＩＨ）の存在と関連する肝実質の門脈単核細胞浸潤を特徴とする。Ｌｏｎｇｈｉ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．Ａｅｔｉｏｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ．Ｊ．Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ．３４，７−１４を参照されたい。近年、ヒト肝臓自己抗原ホルムイミノトランスフェラーゼシクロデアミナーゼをコードする複製欠陥アデノウイルス（Ａｄ−ＦＴＣＤ）によるＮＯＤマウスの感染が、２型ＡＩＨと類似するある形態の慢性自己免疫性肝炎をトリガーすることが示されている。Ｈａｒｄｔｋｅ−Ｗｏｌｅｎｓｋｉ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｅｔｉｃ  ｐｒｅｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ  ｄａｎｇｅｒ  ｓｉｇｎａｌｓ  ｉｎｉｔｉａｔｅ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  ｄｒｉｖｅｎ  ｂｙ  ＣＤ４＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ５８，７１８−７２８を参照されたい。
【０１６２】
ＰＳＣ及びＡＩＨの根底をなす大胆管及び肝実質損傷は、ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ療法に応答し得るＰＤＣ−Ｅ２の放出及びコグネイト自己反応性ＣＤ４＋Ｔ細胞のプライミングをトリガーし得る。そうであれば、治療法は、局所及び近位ＰＤＣ−Ｅ２負荷ＡＰＣの認識時にＴＲ１様ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞の拡大及び局所炎症の抑制をトリガーするはずである。代わりに、ＰＳＣ及び／又はＡＩＨにおける炎症環境中に脱落するＰＤＣ−Ｅ２の量は、ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７経験ＣＤ４＋Ｔ細胞、したがってＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰに対する免疫学的及び治療応答を生成するのに不十分であり得る。
【０１６３】
これらの代替可能性を試験するため、本発明者らは、最初に、ＮＯＤ．Ａｂｃｂ４−／−マウスにおいてコグネイトＴＲ１様ＣＤ４＋Ｔ細胞の拡大をトリガーし、ＰＳＣを好転させるＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰの能力を調査した。顕著には、ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰは、図１０Ａ〜１０Ｂ並びに図１１Ａ及び１１Ｂに示されるとおり、対照ＮＰ処理対照と比較してこれらの動物においてコグネイトＴＲ１様ＣＤ４＋Ｔ細胞の全身拡大をトリガーし、確定疾患を好転させた。
【０１６４】
次に、本発明者らは、これがＡｄ−ＦＴＣＤ誘導ＡＩＨにおいても当てはまるか否かを調査した。本発明者らは、Ａｄ−ＦＴＣＤを感染させたＮＯＤマウスにおいてｍＦＴＣＤ５８−７２／ＩＡｇ７−ＮＰ及びＣＹＰＤ３９８−４１２／ＩＡｇ７−ＮＰ（ＡＩＨ関連）の両方の薬力学及び治療活性をＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ（ＰＢＣ関連）のものと比較した。３つ全ての化合物は、それらの動物においてコグネイトＴＲ１様ＣＤ４＋Ｔ細胞の形成及び拡大を非処理Ａｄ−ＦＴＣＤ感染動物と比較して類似程度でトリガーし（図１０Ｃ並びに図１２Ａ及び１２Ｂ）、これは、図１０Ｃ及び１０Ｄに示されるとおり肝炎症並びに図１０Ｅに示されるとおり血清ＡＬＴレベルの有意な低減を伴った。
【０１６５】
疾患特異的でなく器官において肝臓自己免疫を鈍化させるユビキタス自己抗原ベースｐＭＨＣ−ナノ医薬のこの能力は、ＣＹＰＤ３９８−４１２／ＩＡｇ７−ＮＰにより処理されたＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスにおいても生じた（図１３Ａ〜１３Ｃ）。実際、後者は、１５週齢マウスにおいてコグネイトＴＲ１細胞の拡大（図１３Ａ）及びＰＢＣの鈍化（図１３Ｂ）においてＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰと同程度で効率的であった。対照的に、ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰも、ＣＹＰＤ３９８−４１２／ＩＡｇ７−ＮＰも、１０週齢前糖尿病性ＮＯＤマウスにおいてコグネイトＴＲ１ＣＤ４＋Ｔ細胞の拡大をトリガーせず（図１３Ｃ）、ベータ細胞特異的ＢＤＣ２．５／ＩＡｇ７−、ＩＧＲＰ４−２２／ＩＡｇ７−又はＩＧＲＰ１２８−１４５／ＩＡｇ７−ＮＰについ
ての場合と異なり、おそらくベータ細胞中のＰＤＣ−Ｅ２及びＣＹＰＤ含有量がコグネイトＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化をプライミングするために不十分であるためである。
【０１６６】
まとめると、これらの観察は、肝細胞（ＡＩＨ）又は胆管上皮細胞損傷（ＰＢＣ及びＰＳＣ）時に豊富なレベルのＰＤＣ−Ｅ２（ミトコンドリア）、ＣＹＰＤ２Ｄ６及びＦＴＣＤ抗原（それぞれゴルジ滞留又は細胞質）が局所及び近位ＡＰＣに送達され、自己反応性ＣＤ４＋Ｔ細胞プライミング、ｐＭＨＣ−ＮＰによるコグネイトＴＲ１細胞生成並びに局所及び近位自己抗原負荷ＡＰＣの抑制を可能とすることを示唆する。
【０１６７】
実施例１１  −  別のＰＢＣモデルにおける治療効果
ＮＯＤ．ｃ３ｃ４モデルは、女性優勢、肝線維症への進行及び肝嚢胞形成の不存在を特徴とするヒトＰＢＣの免疫病理を完全には再現しない。ＩＦＮγ３’非翻訳領域アデニレートウリジレートリッチエレメント（ＡＲＥ）の欠失を担持するＢ６マウス（ＡＲＥ−Ｄｅｌ＋／−）は、調節不全Ｉｆｎｇ遺伝子座を有し、ヒト疾患と同様に、主に雌を冒し、ＴＢＡの上方調節、抗ＰＤＣ−Ｅ２自己抗体の産生、門脈及び肝小葉炎症、胆管損傷、肉芽腫形成及び線維症と関連するある形態のＰＢＣを発症する。図１４Ａ〜Ｃは、ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰによる（ＮＯＤ×Ｂ６．ＡＲＥ−Ｄｅｌ−／−）Ｆ１マウスの処理が、対照ＮＰにより処理されたマウスと比較してＴＢＡ及びＡＬＴレベルの上方調節、肝炎症及び線維症を抑制したことを示す。
【０１６８】
実施例１２  −  ユビキタス自己抗原ｐＭＨＣＩＩ−ＮＰは、ＰＤＣ−Ｅ２自己反応性ＴＲ１様ＣＤ４＋Ｔ細胞を保有するにもかかわらず全身免疫を節約する。
ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ処理又は非処理ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスに、インフルエンザの実験室株（ＨＫｘ３１−Ｈ３Ｎ２−）をｉ．ｐ．感染させて、鼻腔内経路を介して与えられるインフルエンザのＨ１Ｎ１株（ＰＲ８）による致死感染に対する異種免疫を誘導した。図８Ｂ〜８Ｃに示されるとおり、ｐＭＨＣＩＩ−ＮＰ処理ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスは、図１５Ａに示されるとおりコグネイトＴＲ１様ＣＤ４＋Ｔ細胞の全身存在にかかわらず、肺組織中のウイルス負荷及び活動性感染の臨床兆候により報告されるとおりＰＲ８感染に対する保護免疫をマウントした。
【０１６９】
細胞内病原体リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  Ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）（ＬＭ）を感染させたマウスにおいて類似の結果が得られた。ＬＭ感染ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ処理及び非処理ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスは、図１５Ｂに示されるとおりこの細胞内病原体に対する非損傷免疫と一致して図８Ｄに示されるとおり脾臓及び肝臓の両方からの細菌のクリアランスにおいて等しく効率的であった。
【０１７０】
実施例１３  −  ユビキタス自己抗原ｐＭＨＣ−ＮＰは、マウスにおいてＥＡＥを治療する
未解決の１つの疑問は、ユビキタス自己抗原からのエピトープをディスプレイするそれらの肝疾患関連ナノ医薬が肝臓特異的であるか否か、又は肝臓外自己免疫も鈍化させ得るか否かであった。これを調査するため、ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ及びＣＹＰＤ３９８−４１２／ＩＡｇ７−ＮＰ（ユビキタスエピトープをディスプレイする）対ＢＤＣ２．５／ＩＡｇ７−ＮＰ（ベータ細胞特異的エピトープをディスプレイする）及びＭＯＧ３６−５０／ＩＡｇ７−ＮＰ（中枢神経系特異的エピトープをディスプレイする）の能力を比較してＮＯＤマウスにおいてＭＯＧ３６−５５誘導再発寛解型のＥＡＥを鈍化させ得るか否かを確認した。ＢＤＣ２．５／ＩＡｇ７−ＮＰは、それらの動物（血液及び脾臓中）において、それらが非ＥＡＥ罹患ＮＯＤマウスにおいて拡大させるのと類似程度にコグネイトＴＲ１様ＣＤ４＋Ｔ細胞を拡大させたが、それらの細胞は、ＣＮＳ流入領域頸部リンパ節（ＣＬＮ）に不存在であり（図１６Ｂ）、図１６Ｃに示されるとおり抗脳炎誘発活性を有さなかった（オリゴデンドロサイトはクロモグラニンＡを発現しない）
。
【０１７１】
特に、ＣＹＰＤ３９８−４１２／ＩＡｇ７−ＮＰ及びＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰの両方もそれらのマウスにおいてコグネイトＴＲ１様細胞拡大をトリガーしたが（図１６Ｂ）、ＢＤＣ２．５／ＩＡｇ７−ＮＰと異なり、ＣＮＳ炎症及び脱髄並びにＥＡＥ再発の進行及び重症度を抑制した（図１６Ｃ、Ｄ及び１６Ｅ）。これは、図１６Ａに示されるとおりＣＬＮ中のコグネイトＴＲ１様細胞の蓄積と関連した。重要なことに、これらの効果は、それらがＣＹＰＤ及びＰＤＣエピトープ／ＩＡｂベースナノ医薬により処理されたＣ５７ＢＬ／６マウスにおいても見られたため、ＮＯＤ遺伝子バックグラウンド特異的でなく：ＰＤＣ９４−１０８／ＩＡｂ−ＮＰ及びＣＹＰＤ３５３−３６７／ＩＡｂ−ＮＰは、血液、脾臓及びＣＬＮ中でコグネイトＴＲ１様ＣＤ４＋Ｔ細胞を拡大させ（図１７Ａ及びＢ）、図１７Ｃ及びＤに示されるとおりＣｙｓ−ＮＰ及びＭＯＧ３６−４９／ＩＡｂ−ＮＰ（それぞれ陰性及び陽性対照）と比較してそれらのマウスにおいて慢性形態のＭＯＧ３５−５５誘導ＥＡＥの進行を鈍化させた。
【０１７２】
まとめると、これらの観察は、有意レベルの２つの異なるユビキタスに発現される自己抗原ＰＤＣ−Ｅ２及びＣＹＰＤ２Ｄ６がオリゴデンドロサイト細胞損傷時（ＥＡＥにおける）に局所及び近位ＡＰＣに送達され、自己反応性ＣＤ４＋Ｔ細胞プライミング、ｐＭＨＣ−ＮＰによるコグネイトＴＲ１細胞生成、ＣＮＳ流入領域リンパ節中のそれらのＴＲ１細胞のリクルートメント及び蓄積並びに局所炎症の抑制を可能とすることを示唆した。
【０１７３】
実施例１４  −  ベータ細胞アポトーシスの誘導は、ＮＯＤマウスをユビキタス自己抗原ｐＭＨＣ−ＮＰに対して応答性にする
ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ（ＰＢＣ関連）及びＣＹＰＤ３９８−４１２／ＩＡｇ７−ＮＰ（ＡＩＨ関連）による前糖尿病性１０週齢ＮＯＤマウスの処理は、血液中（図１８Ａ）又は試験器官のいずれにおいても、例として肝臓（図１８Ｂ）中でｐＭＨＣ四量体を用いて計測されたとおり内因性ＢＤＣ２．５／ＩＡｇ７特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞に対してコグネイトＴＲ１様ＣＤ４＋Ｔ細胞の拡大をトリガーしなかった。
【０１７４】
これらの結果は、前糖尿病性ＮＯＤマウスにおける自発的ベータ細胞殺傷が、対応するナノ医薬に応答し得るＰＤＣ−Ｅ２又はＣＹＰＤ自己抗原経験Ｔ細胞の形成をトリガーしないことを示唆した。３つの代替的な可能性は、それらの結果を説明し得た：１）これらの抗原は、胆管細胞及び肝細胞（肝臓自己免疫疾患において）から放出されるが、死滅ベータ細胞（Ｔ１Ｄにおいて）から放出されず；２）抗原は、ＮＯＤベータ細胞から放出されるが、ＮＯＤマウスは、それらのユビキタス自己抗原に応答し得るコグネイト自己反応性Ｔ細胞を輸送せず；又は３）抗原は、ベータ細胞から放出され、マウスはコグネイト自己反応性Ｔ細胞を保有するが、抗原は、それらのＴ細胞をプライミングするために不十分な量で放出される。
【０１７５】
上記３つの可能性を区別するため、Ｘ染色体連鎖ラットインスリンプロモータードライブヒトジフテリア毒素受容体（ｈＤＴＲ）導入遺伝子を非糖尿病性雌ＮＯＤマウスの膵臓ベータ細胞中で発現させた。次いで、これらのマウスをＤＴにより処理してベータ細胞の５０％を同時に殺傷した（Ｘ染色体不活性化に起因、ベータ細胞の５０％がｈＤＴＲを発現するにすぎない）。次いで、本発明者らは、ｐＭＨＣ四量体を使用してＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰ、ＣＹＰＤ３９８−４１２／ＩＡｇ７−ＮＰ（肝臓自己免疫関連）、ＢＤＣ２．５／ＩＡｇ７−ＮＰ（Ｔ１Ｄ関連、陽性対照）、ＭＯＧ３６−５０／ＩＡｇ７−ＮＰ（中枢神経系自己免疫性疾患特異的、陰性対照）又はＣｙｓコーティングＮＰ（陰性対照）によりＤＴ処理及びＤＴ非処理マウスを処理し、脾臓、肝臓流入領域リンパ節（門脈及び腹腔ＬＮ、ＰＣＬＮ）及び膵臓ＬＮ（ＰＬＮ）中のコグネイト自己反応性Ｔ細胞の存在を計数した。予測のとおり、ＭＯＧ３６−５０／ＩＡｇ７−ＮＰは、そ
れらのマウスにおいてコグネイト四量体＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の拡大をトリガーしなかった（ＭＯＧは、膵臓ベータ細胞中で発現されないオリゴデンドロサイト特異的タンパク質である）（図１８Ｃ、下段右側パネル）。対照的に、ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−及びＣＹＰＤ３９８−４１２／ＩＡｇ７−ＮＰの両方は、ＤＴ処理マウスの脾臓及びＰＬＮ中のＴＲ１マーカーＬＡＧ３、ＬＡＰ及びＣＤ４９ｂを発現する有意数のコグネイト四量体＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の拡大及び蓄積を、ＢＤＣ２．５／ＩＡｇ７−ＮＰ処理動物におけるＢＤＣ２．５／ＩＡｇ７四量体＋Ｔ細胞について見られたものと類似の程度にトリガーした（図１８Ｃ、下段左側及び上段パネル並びに図１８Ｄ）。
【０１７６】
これらの知見は、ｐＭＨＣ−ＮＰ誘導ＴＲ１細胞形成及び拡大が自己抗原経験Ｔ細胞の存在を要求し、そのような細胞のプライミングが発現細胞タイプからの抗原脱落を要求し、ＮＯＤマウスの末梢レパートリーが通常、ユビキタスに発現される抗原を標的化するナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞特異性を保有するという本発明者らの事前の観察を裏付ける。
【０１７７】
実施例１５  −  ユビキタス自己抗原ｐＭＨＣ−ＮＰは、誘導乾癬のマウスモデルにおいて乾癬の兆候を抑制する
ユビキタス自己免疫性疾患関連ｐＭＨＣ−ＮＰの能力を乾癬の関連マウスモデル、イミキモド（ＩＭＱ）誘導モデルにおいて試験した。このマウスモデルは、前臨床乾癬試験において最も広く使用されるマウスモデルの１つである。ＮＯＤ／Ｌｔｊマウスを５％の局所ＩＭＱにより８日間のレスト間隔で６日間処理した。最初の施与は、マウスの背部に行い、後続の施与を耳上に行った。耳への第２の施与開始後にマウスにＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−又はＣＹＰＤ３９８−４１２／ＩＡｇ７−ＮＰのいずれかを投与した。マウスを、紅斑、鱗屑及び皮膚厚を計測するＰＡＳＩ（乾癬面積及び重症度指標）基準に従って乾癬の症状についてアッセイし；脾臓、頸部リンパ節（ＣＶ  ＬＮ）及び肝臓腹腔リンパ節（ＨＣ  ＬＮ）中のＰＤＣ及びＣＹＰＤ四量体＋ＣＤ４Ｔ細胞の拡大についてマウスを評価した。図１９Ａに示されるとおり、ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７がこのモデルにおいて拡大され、ＩＭＱ処理によりもたらされた炎症の誘導によりそれらの細胞がプライミングされたことが示された。図１９Ｂは、ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−又はＣＹＰＤ３９８−４１２／ＩＡｇ７−ＮＰによる処理により耳厚が改善された一方、鱗屑及び紅斑は、改善されなかった（示さず）ことを示す。これらの実験は、予備的であるが、異なる方式の自己免疫性／炎症性疾患が、ユビキタス自己抗原関連ｐＭＨＣ−ＮＰにより改変され得るユビキタス自己抗原に対してＴ細胞をプライミングすることを示す。
【０１７８】
実施例１６  −  本明細書において利用される選択方法
マウス
ＮＯＤ／ＬｔＪ、ＢＡＬＢ／ｃ、Ｃ５７ＢＬ／６、ＮＯＤ．ｓｃｉｄ．Ｉｌ２ｒｇ−／−（ＮＳＧ）、ＮＯＤ．ｃ３ｃ４及びＦＶＢ／Ｎ．Ａｂｃｂ４−／−（Ａｂｃｂ４又はＡＴＰ結合カセットトランスポーター、サブファミリーＢ、メンバー４）マウスをＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）から購入した。ＩＦＮγＡＲＥ−Ｄｅｌ−／−Ｂ６マウスをＨ．Ｙｏｕｎｇ（ＮＩＨ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）から入手した。（ＮＯＤ．ｃ３ｃ４×ＮＯＤ．ｓｃｉｄ）Ｆ１マウスとＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスとを５世代戻し交配し、次いでＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスから間隔を空けてｓｃｉｄ突然変異についてヘテロ接合性であり、Ｂ６第３及び４染色体についてホモ接合性であるマウスを交配することにより、ＮＯＤ．ｃ３ｃ４．ｓｃｉｄマウスを生成した。ＦＶＢ／Ｎ−Ａｂｃｂ４−／−マウスからの突然変異Ａｂｃｂ４アレルをＮＯＤ／Ｌｔｊバックグラウンド上に６世代戻し交配し、次いで交配することにより、ＮＯＤ．Ａｂｃｂ４−／−マウスを得た。ＩＦＮγＡＲＥ−Ｄｅｌ−／−及びＮＯＤ／ＬｔＪマウスを交配することにより、（ＮＯＤ×Ｂ６．ＩＦＮｇ  ＡＲＥ−Ｄｅｌ−／−）Ｆ１マウスを生成した。Ｃ５７ＢＬ／６．Ｉｌ１０ｔｍ１Ｆｌｖマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂ）からのＩｌ１０
ｔｍ１ＦｌｖアレルをＮＯＤ／Ｌｔｊバックグラウンド上に１０世代戻し交配することにより、ＮＯＤ．Ｉｌ１０ｔｍ１Ｆｌｖ（Ｔｉｇｅｒ）マウスを得た。トランスジェニックＢ６マウスからのＸ染色体連鎖ラットインスリンプロモータードライブヒトジフテリア毒素受容体（ＲＩＰ−ＤＴＲ）導入遺伝子をＮＯＤバックグラウンド中に１０世代超、戻し交配することにより、ＲＩＰ−ＤＴＲ．ＮＯＤトランスジェニックマウスを生成した。
【０１７９】
細胞系、病原体及び腫瘍
ＣＨＯ−Ｓ、ＢＳＣ−１、ＭＤＣＫ、２９３Ｔ、Ｂ１６／Ｆ１０及びＣＴ２６細胞系をＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から購入した。リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）をＤＭＸ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ）から入手した。
【０１８０】
抗体及びフローサイトメトリー
マウスＣＤ４（ＲＭ４−５）、ＣＤ５（５３−７．３）、ＣＤ１９（１Ｄ３）、Ｂ２２０（ＲＡ３６Ｂ２）及びＣＤ４９ｂ（ＨＭａ２）に対するＦＩＴＣ、ＰＥ、ＡＰＣ、ＰｅｒＣＰ又はビオチンコンジュゲートｍＡｂ並びにストレプトアビジン−ＰｅｒＣＰをＢＤ
Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から購入した。抗ネズミＬＡＧ−３  ｍＡｂ（Ｃ９Ｂ７Ｗ）をｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から購入した。抗潜在関連ＴＧＦ−β（ＬＡＰ）抗体（ＴＷ７−１６Ｂ４）は、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）製であった。ビオチン化ｐＭＨＣ単量体を使用してＰＥコンジュゲートｐＭＨＣクラスＩＩ四量体を産生した。ｐＭＨＣクラスＩＩ四量体染色及び表現型マーカー分析をわずかに修正して本質的に記載のとおり行った。簡潔に述べると、アビジンインキュベーション（ＲＴにおいて１５分間）後、血液白血球及び脾臓、リンパ節、肝臓単核細胞及び骨髄細胞からの単一細胞懸濁液を最初にＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ中０．０５％のアジ化ナトリウム及び１％のＦＢＳ）中のｐＭＨＣ四量体（５μｇ
ｍｌ−１）より３７℃において６０分間、次いでＦＩＴＣコンジュゲート抗マウスＣＤ４（５μｇ  ｍｌ−１）及びＰｅｒＣＰコンジュゲート抗マウスＢ２２０（２μｇ  ｍｌ−１；「ダンプ」チャネルとして）により４℃において３０分間染色した。洗浄後、細胞を固定し（ＰＢＳ中１％のパラホルムアルデヒド）、ＦＡＣＳｃａｎ、ＦＡＣＳａｒｉａ又はＢＤ  ＬＳＲＩＩフローサイトメーターにより分析した。表現型分析のため、細胞を抗ＦｃＲ  Ａｂとインキュベートし、次いでＦＡＣＳ緩衝液中で１：１００希釈された細胞表面マーカー抗体により（抗ＣＤ４９ｂ及び抗ＬＡＰ  Ａｂについて４℃において、且つ抗ＬＡＧ−３  Ａｂについて３７℃において）、次いでｐＭＨＣ四量体、ＦＩＴＣコンジュゲート抗マウスＣＤ４（５μｇ  ｍｌ−１）及びＰｅｒＣＰコンジュゲート抗マウスＢ２２０により染色した。染色時、細胞を洗浄し、固定し、フローサイトメトリーにより分析した。ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを全ての分析に使用した。
【０１８１】
以下のｍＡｂを使用してＮＳＧ生着ヒトＴ細胞を分析した：ＦＩＴＣコンジュゲート抗ＣＤ４（ＯＫＴ４、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、ＡＰＣコンジュゲート抗ＣＤ１９（ＨＩＢ１９、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）、ＰｅｒＣＰコンジュゲートポリクローナルヤギ抗ＬＡＧ−３  ＩｇＧ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）、ビオチンコンジュゲート抗ＣＤ４９ｂ（ＡＫ７、Ｐｉｅｒｃｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）及びｅＦｌｕｏｒ  ４５０コンジュゲートストレプトアビジン（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）。簡潔に述べると、脾細胞及び膵臓リンパ節細胞をアビジン（ＦＡＣＳ緩衝液中０．２５ｍｇ  ｍｌ−１）と室温において３０分間インキュベートし、洗浄し、四量体（５μｇ  ｍｌ−１）により３７℃において１時間染色し、洗浄し、ＦＩＴＣコンジュゲート抗ＣＤ４（２／１００）、ＡＰＣコンジュゲート抗ＣＤ１９（５／１００；「ダンプ」チャネルとして）、ＰｅｒＣＰコンジュゲート抗ＬＡＧ−３（８／１００）及びビオチンコンジュゲート抗ＣＤ４９ｂ（４／１００）と４℃において４５分間インキュベー
トした。洗浄後、細胞をｅＦｌｕｏｒ  ４５０コンジュゲートストレプトアビジンと４℃において３０分間インキュベートし、洗浄し、ＰＢＳ中１％のＰＦＡ中で固定し、ｈＣＤ４＋／ｈＣＤ１９−ゲート内の細胞をＦＡＣＳＣａｎｔｏ  ＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）により分析した。
【０１８２】
ｐＭＨＣ単量体及びペプチド
複合体のペプチド−ＭＨＣｂ及びＭＨＣａ鎖がリボソームスキッピングＰ２Ａ配列により分離されるモノシストロン性メッセージをコードするレンチウイルスにより形質導入されたＣＨＯ−Ｓ細胞の上清から、組換えｐＭＨＣクラスＩＩ単量体を精製した。フレキシブルＧＳリンカーを介してペプチドをＭＨＣｂ鎖のアミノ末端に係留させ、カルボキシ末端におけるＢｉｒＡ部位、６×Ｈｉｓタグ、ｔｗｉｎ  ｓｔｒｅｐ−ｔａｇ及びフリーＣｙｓをコードするＭＨＣａ鎖を遺伝子操作した。分泌された自己集合ｐＭＨＣクラスＩＩ複合体を連続ニッケル及びＳｔｒｅｐ−Ｔａｃｔｉｎ（登録商標）クロマトグラフィーにより精製し、ＮＰ上へのコーティングに使用するか、又は上記のとおりビオチン化及び四量体形成のために処理した。ネズミ単量体構築物中にコードされるエピトープを、予測ＭＨＣＩＩ結合能に基づいてＲＡＮＫＰＥＰ（ｈｔｔｐ：／／ｉｍｅｄ．ｍｅｄ．ｕｃｍ．ｅｓ／ｃｇｉ−ｂｉｎ／ｒａｎｋｐｅｐ＿ｍｉｆ．ｃｇｉ）を使用して、閾値スコアとして７．５４を使用して選択した。ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１は、閾値を下回るスコアを有したが、実験のために選択した。なぜなら、それは、ＡＭＡについての抗原標的のＰＤＣ−Ｅ２のリポイル結合ドメインの１つに含有されるためである。ＣＹＰＤ及びＦＴＣＤエピトープ予測のため、本発明者らは、第２のオンラインアルゴリズム（ＧＰＳ−ＭＢＡ）（ｈｔｔｐ：／／ｍｂａ．ｂｉｏｃｕｃｋｏｏ．ｏｒｇ／）を使用し、ＲＡＮＫＰＥＰ及びＧＰＳ−ＭＢＡの両方により予測されたペプチドを実験のために選択した。ｈＰＤＣ−Ｅ２１２２−１３５、ｈＰＤＣ−Ｅ２２４９−２６２（両方ともＰＤＣ−Ｅ２のリポイル結合ドメイン中に含有される）及びｈＰＤＣ−Ｅ２６２９−６４３は、既に記載されている。様々なエピトープの配列は、ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７（ＬＡＥＩＥＴＤＫＡＴＩＧＦＥＶＱ）、ＰＤＣ−Ｅ２８２−９６／ＩＡｇ７（ＥＫＰＱＤＩＥＡＦＫＮＹＴＬＤ）、ＦＴＣＤ５８−７２／ＩＡｇ７（ＶＶＥＧＡＬＨＡＡＲＴＡＳＱＬ）、ＣＹＰＤ３９８−４１２／ＩＡｇ７（ＬＩＴＮＬＳＳＡＬＫＤＥＴＶＷ）、２．５ｍｉ／ＩＡｇ７（ＡＨＨＰＩＷＡＲＭＤＡ）、ｈＰＤＣ−Ｅ２１２２−１３５／ＤＲＢ４＊０１０１（ＧＤＬＩＡＥＶＥＴＤＫＡＴＶ）、ｈＰＤＣ−Ｅ２２４９−２６２／ＤＲＢ４＊０１０１（ＧＤＬＬＡＥＩＥＴＤＫＡＴＩ）及びｈＰＤＣ−Ｅ２６２９−６４３／ＤＲＢ１＊０８０１（ＡＱＷＬＡＥＦＲＫＹＬＥＫＰＩ）である。合成ＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１、２．５ｍｉ及びｍＭＯＧ３６−５５（ＥＶＧＷＹＲＳＰＦＳＲＶＶＨＬＹＲＮＧＫ）ペプチドをＧｅｎｓｃｒｉｐｔ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）から購入した。それぞれのペプチドについてのアミノ酸残基数は、対応する抗原の成熟形態に見出されるものに対応する。
【０１８３】
ナノ粒子、ｐＭＨＣＩＩ−ＮＰ合成及び精製
ｐＭＨＣを、（２）に記載のとおり産生されたペグ化酸化鉄ＮＰ（ＰＦＭ−ＮＰ）上にコーティングした。簡潔に述べると、２ｋＤのメトキシ−ＰＥＧ−マレイミドの存在下でＦｅ（ａｃａｃ）３の熱分解によりＰＦＭ−ＮＰを産生した。磁気（ＭＡＣＳ）カラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ，Ａｕｂｕｒｎ，ＣＡ）を使用してＮＰを精製した。フリーシステイン（対照）又はフリーカルボキシ末端Ｃｙｓを担持するｐＭＨＣを、２ｍＭのＥＤＴＡ、１５０ｍＭのＮａＣｌを含有する４０ｍＭのリン酸緩衝液、ｐＨ６．０中のマレイミド官能化ＰＦＭに室温において一晩コンジュゲートさせた。磁気カラムを使用してフリーｐＭＨＣからｐＭＨＣコンジュゲートＮＰを分離し、０．２μｍフィルターに通す濾過により滅菌し、水又はＰＢＳ中で４℃において貯蔵した。透過型電子顕微鏡観察、動的光散乱並びにネイティブ及び変性ゲル電気泳動を使用して品質管理を行った。ブラッドフォードアッセイ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）及びＳＤＳ
−ＰＡＧＥを使用してｐＭＨＣ含有量を計測した。
【０１８４】
ＦＴＣＤ発現アデノウイルスの生成
Ｉｎ−Ｆｕｓｉｏｎ（登録商標）ＨＤクローニング技術及びＳｔｅｌｌａｒ  Ｃｏｍｐｅｔｅｎｔ細胞（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ）を使用してｈＦＴＣＤ  ＤＮＡ配列をＡｄｅｎｏ−Ｘ  Ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ  Ｓｙｓｔｅｍ３（ＣＭＶ）中に直接クローニングすることにより、ヒトホルムイミノトランスフェラーゼシクロデアミナーゼを発現する複製欠損アデノウイルス（Ａｄ−ｈＦＴＣＤ）（２型ＡＩＨにおける標的自己抗原）を生成した。クローニングされたＡｄ−ＦＴＣＤをＡｄ−２９３Ｔ細胞中で増幅させ、Ａｄｅｎｏ−Ｘ  Ｍａｘｉ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を使用して精製した。Ｅｎｄ−ｐｏｉｎｔ  Ｄｉｌｕｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ又はＡｄｅｎｏ−Ｘ  Ｒａｐｉｄ  Ｔｉｔｅｒ  Ｋｉｔ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を使用してウイルス力価を計測した。
【０１８５】
ウルソデオキシコール酸処理
５〜６又は２４週齢雄及び／又は雌ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスのコホートを非処理のままとし、０．５％のＵＤＣＡが補給された食餌（ＢＯＣ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｕｐｔｏｎ，ＮＹ；ＴｅｓｔＤｉｅｔ，Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，ＩＮ）を供給するか、又はそれぞれｐＭＨＣＩＩ−ＮＰにより１４若しくは９週間処理し、ｐＭＨＣＩＩ四量体染色、ＰＢＣスコアリング及び生化学的試験のために屠殺した。
【０１８６】
ＮＯＤ．ｃ３ｃ４、（ＮＯＤ×Ｂ６．ＩＦＮｇ  ＡＲＥ−Ｄｅｌ−／−）Ｆ１及びＮＯＤ／ＬｔｊマウスにおけるｐＭＨＣＩＩ−ＮＰ療法
確定ＰＢＣを有する１５週齢雄及び／又は雌ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスのコホートを非処理のままとするか、又は特に示されない限り、２０ｍｇのｐＭＨＣＩＩ−ＮＰ若しくはＣｙｓ−ＮＰ（ｉ．ｖ．）により９週間、週２回処理した。肝疾患スコアリングは、本質的に記載のとおり嚢胞含有量の肉眼的評価（０〜５）、肝重量及びＣＢＤ直径（０〜４）並びに胆管侵襲の顕微鏡的評価（０〜４）、胆管増殖（０〜４）及び単核細胞浸潤（０〜４）を含んだ（２３）。他の実験において、処理を疾患のピーク（２４週齢）において開始し、１４〜２０週間、週２回与えた。断続処理は、１５から２４週齢まで週２回マウスを処理し、次いで四量体＋細胞の割合が処理中断時に見られたレベルの約５０％に降下するまで処理を中断し（末梢血中の計測を２週間に１回行った）、四量体＋細胞の割合が元の値に達するまで週２回マウスを再処理し、このサイクルを５０週齢まで繰り返すことを含んだ。
【０１８７】
インビボサイトカイン遮断実験において、ＨＲＰＮ（ｒＩｇＧ１）、ＩＬ−１０（ＪＥＳ５−２Ａ５）又はＴＧＦ−β（１Ｄ１１）に対するｍＡｂ（ＢｉｏＸｃｅｌｌ，Ｗｅｓｔ  Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ）をｉ．ｐ．で週２回、２週間にわたり１用量当たり５００ｍｇにおいて、次いで追加の７週間にわたり１用量当たり２００ｍｇにおいて与えた。マウスをサイトカイン中和ｍＡｂ処理（抗ＩＬ−１０又はＴＧＦβ）又はＨＲＰＮラット−ＩｇＧ１群に無作為化した。
【０１８８】
（ＮＯＤ×Ｂ６．ＩＦＮｇ  ＡＲＥ−Ｄｅｌ−／−）Ｆ１マウスを含む実験において、１０週齢雄及び雌マウスを５〜６週間処理した。肝臓における組織病理学的スコアリングを記載のとおり実施した。簡潔に述べると、門脈炎症、小葉炎症及び肉芽腫形成を０〜４で、且つ胆管損傷を０〜２でスコアリングすることにより、重症度スコアを得た。門脈炎症及び胆管損傷の程度は、患部領域と非患部領域との比に基づいて０〜４でスコアリングした。小葉炎症及び肉芽腫形成の程度は、１検体当たりの病変の数に基づいて０〜４でスコアリングした。線維症の重症度は、０〜６のスケールでスコアリングした。
【０１８９】
ＮＯＤマウスを使用する試験は、１０週齢の前糖尿病性雌ＮＯＤ／Ｌｔｊマウスのコホートを２０ｍｇのｐＭＨＣＩＩ−ＮＰ又はＣｙｓ−ＮＰにより５週間、週２回ｉ．ｖ．処理することを含んだ。
【０１９０】
ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスにおけるＥＡＥのためのｐＭＨＣＩＩ−ＮＰ療法
雄及び雌１２〜１４週齢ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウスを、イソフルラン麻酔下でＣＦＡ中の２５０ｍｇのｐＭＯＧ３６−５５により、尾部の付け根上方の脇腹領域の片側上にｓ．ｃ．で免疫した。マウスは、ペプチド免疫に対して０及び２日目に３５０ｎｇの百日咳毒素をｉ．ｖ．で受容した。マウスを０日目、次いで免疫後１４日目から開始して毎日秤量及びスコアリングし、次いでスコアを５点スケールでプロットした。免疫の３２日目、＜３のスコアを有する全てのマウスをＣｙｓ−ＮＰ又はｐＭＨＣＩＩ−ＮＰによる処理に無作為化した。全てのマウスを９週間、週２回処理した。ＰＢＣの兆候についてのマウスのスコアリングは、上記のとおり行った。
【０１９１】
ＮＯＤ．Ａｂｃｂ４−／−マウスにおけるＰＳＣのためのｐＭＨＣＩＩ−ＮＰ療法
確定ＰＳＣを有する５〜６週齢雄及び／又は雌ＮＯＤ．Ａｂｃｂ４−／−マウスのコホートを２０ｍｇのｐＭＨＣＩＩ−ＮＰ又はＣｙｓ−ＮＰにより５〜６週間、週２回ｉ．ｖ．処理した。Ｉｓｈａｋスコアリングシステムを使用して組織病理学的病変をグレード化し、それは、線維症（０〜６）並びに胆汁性胆管炎の壊死炎症性続発症、例としてインターフェイス肝炎（０〜４）、癒合性壊死（０〜６）、小葉炎症（０〜４）及び門脈炎症（０〜４）の両方を評価する。
【０１９２】
ＮＯＤマウスにおけるＡＩＨのためのｐＭＨＣＩＩ−ＮＰ療法
５〜６週齢雌ＮＯＤ／Ｌｔｊマウスに、ヒトＦＴＣＤをコードするアデノウイルス（Ａｄ−ｈＦＴＣＤ、１０１０のプラーク形成単位（ＰＦＵ）ｉ．ｖ．）を感染させることにより、ＡＩＨを誘導した。４週間後、確定ＡＩＨを有するマウスのコホートを２０ｍｇのｐＭＨＣＩＩ−ＮＰ又はＣｙｓ−ＮＰ（ｉ．ｖ．）により５〜６週間、週２回処理した。上記のＩｓｈａｋスケールを使用して組織病理学的スコアリングを行った。
【０１９３】
ヒトＰＢＭＣ再構成ＮＳＧ宿主におけるｐＭＨＣＩＩ−ＮＰ療法
ＨＬＡ−ＤＲＢ４＊０１０１＋ＰＢＣ患者（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｂｏａｒｄ  ａｔ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ  Ｃｌｉｎｉｃにより承認されたインフォームドコンセントのもとでリクルート）からのＰＢＭＣを、抗ＣＤ８ｍＡｂコーティング磁気ビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ａｕｂｕｒｎ，ＣＡ）を使用してＣＤ８＋Ｔ細胞について枯渇させ、８〜１０週齢ＮＳＧ宿主中にｉ．ｖ．（２×１０７個）注射した。マウスを、ＰＢＭＣ注入後５日目から開始して３０〜４０ｍｇのｐＭＨＣ−ＮＰにより、５週間連続で週２回処理するか又は非処理のままとした。コグネイトＣＤ４＋Ｔ細胞の治療法誘導拡大を肝臓、末梢ＬＮ、脾臓及び骨髄中で計測した（示さず）。少なくとも２つの異なる器官中の四量体＋Ｔ細胞の割合が非処理宿主において見られた平均±１０標準偏差値よりも高い場合、マウスをレスポンダーとみなした。
【０１９４】
全身適応免疫の評価
ｐＭＨＣＩＩ−ＮＰ処理及び非処理雌マウスに２×１０６ＰＦＵの組換えワクシニアウイルス（ｒＶＶ）をｉ．ｖ．注射し、感染後４及び１４日目に屠殺した。試料をｐＭＨＣＩＩ四量体染色及びｒＶＶ力価計測のために処理した。簡潔に述べると、両方の卵巣を、２％のＦＢＳを含有するＤＭＥＭ中で回収し、ホモジナイズし、３回冷凍解凍し、次いで超音波処理した（３ラウンド、それぞれ２０秒間）。溶解物の段階希釈物をコンフルエントＢＳＣ−１細胞培養物に３７℃において１時間添加し、血清不含ＤＭＥＭにより２回洗浄し、次いで２％のＦＣＳ及び０．４％のカルボキシメチルセルロースを含有するＤＭＥＭ（ＣＭＣ；Ｓｉｇｍａ，Ｓａｉｎｔ  Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を重層した。３日目、重層部
を廃棄し、細胞層をクリスタルバイオレットにより染色してプラークの数を計数した。
【０１９５】
インフルエンザ感染に対する細胞応答を評価するため、ｐＭＨＣＩＩ−ＮＰ処理及び非処理マウスを最初にＨＫｘ３１（Ｈ３Ｎ２）株により１マウス当たり１０６ＥＩＤ５０においてｉ．ｐ．でプライミングした。マウスの１つのコホートをプライミングの７日後に屠殺し、四量体染色のために処理してプライミングの間のｐＭＨＣ−ＮＰ特異的ＴＲ１様細胞の存在を確認した。プライミングされたマウスの他のコホートに麻酔下で鼻腔内用量のＰＲ８ウイルス、インフルエンザの致死Ｈ１Ｎ１株（１マウス当たり８×１０４ＥＩＤ５０）を３０日後に再感染させた。ＰＲ８チャレンジマウスを毎日秤量し、毛皮の皺の程度、死亡率の低減、群れの出現並びに呼吸促迫及び／又は呼吸困難に基づいて０〜４で臨床的にスコアリングした。マウスを７日後に屠殺し、四量体染色及びインフルエンザ力価計測のために処理した。簡潔に述べると、肺を血清不含ＤＭＥＭ中で回収し、ホモジナイズし、３回冷凍解凍した。溶解物の段階希釈物をコンフルエントＭＤＣＫ細胞培養物にＲＴにおいて１時間添加し、洗浄した。次いで、培養物に０．４％のＣＭＣを含有するＤＭＥＭを２〜３日間重層し、洗浄し、固定し、クリスタルバイオレットにより染色してプラークの数を計数した。
【０１９６】
ｐＭＨＣＩＩ−ＮＰ処理及び非処理マウスに１０３コロニー形成単位（ｃｆｕ）のリステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）をｉ．ｖ．感染させることにより、細胞内細菌に対する細胞免疫を決定した。マウスを感染７日後又は１４日後に屠殺し、試料を四量体染色及び細菌負荷計測のために処理した。簡潔に述べると、脾臓及び肝臓をいくつかの小片に切断し、秤量し、０．３５％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を含有するＰＢＳ中で均一化した。次いで、溶解物の段階希釈物を、５ｍｇ／ｍｌのエリスロマイシンを含有するＢｏｖｉｎｅ  Ｈｅａｒｔ  Ｉｎｆｕｓｉｏｎ寒天上にプレーティングし、３７℃において２４〜４８時間インキュベートし、コロニーの数を計数した。
【０１９７】
肝転移腫瘍に対する細胞免疫をＢ１６／Ｆ１０黒色腫及びＣＴ２６結腸癌腫瘍の同系（それぞれＣ５７ＢＬ／６Ｊ又はＢａｌｂ／ｃ）又は同種異系宿主（ｐＭＨＣ−ＮＰ処理又は非処理ＮＯＤ．ｃ３ｃ４マウス）中への脾臓内注射時に確認した。イソフルラン吸入麻酔下で小さい切開部を腹部中に作製して脾臓を部分的に露出させた。腫瘍細胞（Ｂ１６／Ｆ１０及びＣＴ２６についてそれぞれ０．２×１０６個及び０．１×１０６個、１００ｍＬのＰＢＳ中）を露出された脾臓中にゆっくりと１分間注射した。１０分後、脾臓を摘出し、腹膜及び皮膚層を縫合した。ｐＭＨＣＩＩ−ＮＰ療法を術後５〜７日以内に再開し、フォローアップの終了まで継続した。マウスを１９〜２１日目までモニタリングし、四量体染色、ＰＢＳスコアリング及び腫瘍負荷計測のために安楽死させた。Ｂ１６／Ｆ１０注射マウスにおいて、肝重量を計測し、肝実質と容易に区別可能な転移の数を計数することにより、腫瘍負荷を評価した。ＣＴ２６注射動物において、転移腫瘍により占有される肝面積（ＨＰＡ）を計測することにより、腫瘍負荷を組織学的にスコアリングした。
【０１９８】
体液性免疫を評価するため、ｐＭＨＣＩＩ−ＮＰ処理及び非処理マウスをＣＦＡ中の１００ｍｇのＤＮＰ−ＫＬＨ（Ａｌｐｈａ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｓａｎ  Ａｎｔｏｎｉｏ，ＴＸ）によりｉ．ｐ．で免疫し、３週間後に再度ブーストした。マウスを１０日後に屠殺して抗ＤＮＰ  Ｉｇ  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ（Ａｌｐｈａ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）を使用して血清抗ＤＮＰ抗体力価を計測した。
【０１９９】
サイトカイン分泌アッセイ
ｐＭＨＣＩＩ−ＮＰ処理マウスからの脾臓及び門脈／腹腔リンパ節（ＰＣＬＮ）細胞懸濁液を、ＣＤ１９＋Ｂ細胞（ＥａｓｙＳｅｐ（商標）Ｍｏｕｓｅ  ＣＤ１９  Ｐｏｓｉｔ
ｉｖｅ  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔ、Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，ＢＣ）及びＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＤ８  Ｍａｇｎｅｔｉｃ  Ｐａｒｔｉｃｌｅｓ，ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を枯渇するＣＤ４＋Ｔ細胞について濃縮した。細胞をｐＭＨＣＩＩ四量体により染色し、フローサイトメトリーによりソートした。ソートされた細胞（２〜３×１０４個）に、２μｇ  ｍｌ−１のペプチドがパルスされた骨髄由来ＤＣ（２×１０４個）をチャレンジした。４８時間後、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）を介するサイトカイン含有量の計測のために上清を回収した。
【０２００】
ｐＭＨＣＩＩ−ＮＰ療法がＩＬ−１０分泌Ｂ細胞のリクルートメント／形成を促進したか否かを確認するため、ＣＤ１９濃縮キット（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して腸間膜ＬＮ、ＰＣＬＮ及び肝細胞懸濁液をＢ細胞について濃縮した。細胞（２００ｍＬ中２〜３×１０５個／ウェル）を２つ組において１０％のＦＣＳを含有するＲＰＭＩ−１６４０培地中のＬＰＳ（１μｇ  ｍｌ−１、Ｓｉｇｍａ）により２４時間刺激した。Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）を介して上清中のＩＬ−１０のレベルを計測した。
【０２０１】
リンパ節ＣＤ１１ｂ＋細胞及び肝クッパー細胞の単離及びインビトロ刺激
ＬＮからのＣＤ１１ｂ＋細胞を３７℃における１５分間のコラゲナーゼＤ（１．２５μｇ  ｍＬ−１）及びＤＮアーゼＩ（０．１μｇ  ｍＬ−１）の消化により得、洗浄し、抗ＦｃＲ  Ａｂとインキュベートし、抗ＣＤ１１ｂ  ｍＡｂコーティング磁気ビーズ（ＢＤ
Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して精製した。精製された細胞（２００ｍＬ中２〜３×１０５個／ウェル）をＬＰＳ（２μｇ  ｍｌ−１）により３日間刺激し、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）マルチプレックスサイトカインアッセイを使用して上清をサイトカイン含有量について分析した。
【０２０２】
クッパー細胞（ＫＣ）を単離するため、処理及び非処理マウスからの肝臓をミンスし、１５ｍｌのＨＢＳＳ中０．０５％のコラゲナーゼ溶液中で３７℃において２０〜３０分間消化した。得られた細胞懸濁液をナイロンメッシュ（０．７μｍ）に通して濾過し、５０×ｇにおいて４℃において３分間遠心分離して組織残屑及び肝細胞を除去した。上清中の細胞を４℃における５分間の３００×ｇにおける遠心分離によりペレット化した。細胞ペレットは、主に非肝実質免疫細胞、ＫＣ、類洞壁内皮細胞及び星細胞から構成され、それを３３％のＰｅｒｃｏｌｌ（登録商標）溶液中で再懸濁させ、３５０×ｇにおいて３０分間遠心分離して単核細胞を単離した。１０％のＦＣＳを含有するＤＭＥＭ中でペレットを再懸濁させ（５×１０６個の細胞ｍｌ−１）、６ウェルプレート中で１〜３×１０７個の細胞／ウェルにおいてプレーティングし、３７℃において５％のＣＯ２雰囲気中で２〜３時間インキュベートした。非接着細胞をＰＢＳによる穏やかな洗浄により除去した。接着分画（ＫＣについて濃縮）をトリプシン消化（５分間、０．２５％のトリプシン）により回収した。得られた細胞懸濁液を９６ウェルプレート中で１〜２×１０５個／２００ｍＬ／ウェルにおいてプレーティングし、ＬＰＳ（２ｍｇ  ｍｌ−１）により３日間刺激した。Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）マルチプレックスサイトカインアッセイを使用して上清をサイトカイン含有量について分析した。
【０２０３】
抑制の養子移入
非処理マウス又はＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰの１２回の投与により処理されたマウスからの脾臓ＣＤ４＋Ｔ細胞（１０７個）を１０〜１４週齢の性別適合ＮＯＤ．ｃ３ｃ４．ｓｃｉｄ宿主中に養子移入（ｉ．ｖ．）した。１日後、レシピエントに、確定ＰＢＣを有する性別適合ＮＯＤ．ｃ３ｃ４ドナーマウス（＞３５週齢）からの４×１０７個の全脾細胞を養子移入した。ｐＭＨＣＩＩ−ＮＰ処理ドナーからのＣＤ４＋Ｔ細胞を注入したマウスのコホートの１つをＰＤＣ−Ｅ２１６６−１８１／ＩＡｇ７−ＮＰの１２回の投与によりさらに処理した。レシピエントを６週間後に四量体染色及びＰＢＣス
コアリングのために屠殺した。
【０２０４】
インビボＢｒｅｇ誘導アッセイ
ＥａｓｙＳｅｐ  Ｍｏｕｓｅ  Ｂ−ｃｅｌｌ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｓｔｅｍ
Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してＮＯＤ．Ｉｌ１０ｔｍ１Ｆｌｖ（Ｔｉｇｅｒ）マウスからの脾臓Ｂ細胞を濃縮し、ＢＤＣ２．５ｍｉ又はＰＤＣ１６６−１８１ペプチド（１０μｇ  ｍｌ−１）により３７℃において２時間パルスした。ペプチドパルスされたＢ細胞をＰＢＳにより２回洗浄し、ＰＫＨ２６（Ｓｉｇｍａ）により標識し、ｐＭＨＣ−ＮＰ処理又は非処理マウス中に注入した（３×１０６個）。宿主を７日後に屠殺し、それらの脾臓、ＭＬＮ、ＰＣＬＮ及び肝単核細胞を抗Ｂ２２０−ＡＰＣ及びビオチン化抗ＣＤ１ｄ又は抗ＣＤ５  ｍＡｂ、次いでストレプトアビジン−ＰｅｒＣＰにより標識した。ＰＫＨ２６＋Ｂ細胞をｅＧＦＰ＋／ＣＤ１ｄｈｉｇｈ及びｅＧＦＰ＋／ＣＤ５＋細胞の存在についてフローサイトメトリーにより分析した。
【０２０５】
組織学的及び免疫組織化学的検査
肝臓を１０％のホルマリン中で２日間固定し、パラフィン中で包埋し、５μｍの切片に切断し、ＨＥ又はピクロシリウスレッドにより染色した。免疫組織化学的検査のため、肝組織をＴｉｓｓｕｅ−Ｔｅｋ  ＯＣＴ中で包埋し、３０μｍの冷凍切片に切片化し、−８０℃においてスライド上で貯蔵した。スライドを冷蔵アセトン中で固定し、ＰＢＳにより洗浄し、ＰＢＳ中３０％のＨ２Ｏ２の１：１０の希釈物により処理し、ＰＢＳにより洗浄し、ＰＢＳ中１０％の正常ヤギ血清によりブロッキングし、再度洗浄し、抗マウスＣＤ４（ＧＫ１．５）又はＣＤ８（Ｌｙｔ−２）抗体（１．５時間、４℃）により染色した。洗浄後、スライドをビオチン化ヤギ抗ラット二次抗体（１：２００の希釈率）により染色し、セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）コンジュゲートストレプトアビジン、次いで３，３−ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）基質とインキュベートした。スライドをマウント前にヘマトキシリンにより対比染色した。
【０２０６】
ＡＬＴ及びＴＢＡアッセイ
Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製のキットを製造業者のプロトコルに従って使用して血清中のアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベルを決定した。簡潔に述べると、血清試料を予備加温（３７℃）したＩｎｆｉｎｉｔｙ（商標）ＡＬＴ（ＧＰＴ）Ｌｉｑｕｉｄ  Ｓｔａｂｌｅ  Ｒｅａｇｅｎｔと１：１０の比において混合し、ＯＤ読み取りをｎａｎｏｄｒｏｐ中で３４０ｎｍの波長、３７℃において１分の間隔において３分間行った。線形回帰を使用して時間に対して吸光度をプロットすることにより、傾きを計算し、キットに記載のとおり係数を乗じて血清中のＡＬＴレベル（Ｕ／Ｌ）を得た。ＴＢＡ  Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ  Ｃｙｃｌｉｎｇ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（Ｄｉａｚｙｍｅ，Ｐｏｗａｙ，ＣＡ）を記載のとおり修正された製造業者のプロトコルに従って使用して血清総胆汁酸（ＴＢＡ）レベルを分析した。
【０２０７】
抗核及び抗ミトコンドリア自己抗体計測
ＮＯＶＡ  Ｌｉｔｅ（登録商標）ＨＥｐ−２  Ｓｌｉｄｅｓキット（Ｉｎｏｖａ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を使用して血清中の抗核自己抗体（ＡＮＡ）の存在を確認した。半定量的アプローチに従ってＡＮＡ力価を計測した。簡潔に述べると、血清試料をＰＢＳ中で段階希釈し（１：１６０、１：３２０、１：６４０、１：１２８０及び１：２５６０において）、次いで事前固定Ｈｅｐ−２サブストレートスライドに添加し、洗浄し、５％の正常ロバ血清を含有するＰＢＳ中のＦＩＴＣコンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧ（１：２００の希釈率）により染色し、洗浄し、マウントし、蛍光顕微鏡下で読み取った。
【０２０８】
抗ミトコンドリアＰＤＣ−Ｅ２抗体の血清レベルを、ＥＬＩＳＡを介して決定した。簡
潔に述べると、ＥＬＩＳＡプレートを、ＰＤＣ−Ｅ２タンパク質（５μｇ  ｍｌ−１、１００ｍＬ）（ＳｕｒＭｏｄｉｃｓ  Ｉｎｃ．，Ｅｄｅｎ  Ｐｒａｉｒｉｅ，ＭＮ）によりＲＴにおいて一晩コーティングした。プレートを洗浄し、ＰＢＳ（ｐＨ７．４、１５０ｍｌ）中３％の乾燥スキムミルクを使用してブロッキングし、段階希釈血清試料（１００ｍｌ、１：２５０の希釈率において試薬希釈剤を使用して調製した）とＲＴにおいて２時間インキュベートした。ウェルを洗浄し、１００ｍＬのＨＲＰコンジュゲート抗マウスＩｇＧ（試薬希釈剤中１：２０００）とＲＴにおいて２時間インキュベートし、洗浄した。最後に、ウェルを暗所で１００ｍＬのＤＡＢ基質とＲＴにおいて２０分間インキュベートした。５０ｍＬの２ＮのＨ２ＳＯ４による酵素反応の停止時、ＥＬＩＳＡプレートリーダーを使用して４５０ｎｍの波長において吸収を計測した。対照ＮＯＤ血清試料の平均ＯＤ±２ＳＤ（陽性指数）を計算し、ＮＯＤ．ｃ３ｃ４血清試料に対応するＯＤ値を陽性指数により割ることにより陽性抗体活性（ＰＡＡ）レベルを計算し、＞１．０の値がＰＡＡに対応する。
【０２０９】
統計的分析
規定のない限り、図面の凡例に挙げられる試料サイズ値は、異なる実験からプールされた試験マウスの総数に対応する。マン・ホイットニーＵ検定、カイ二乗、ログランク（マンテル・コックス）、ピアソン相関、二元ＡＮＯＶＡ又はホルム・シダック補正を使用する多重ｔ検定分析を使用してＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６においてデータを比較した。＜０．０５のＰ値を統計的に有意とみなした。統計的に有意なＰ値のみ図面に示す。
【０２１０】
本発明の好ましい実施形態を本明細書に示し、記載した一方、そのような実施形態は、例として提供されるにすぎないことが当業者に明らかである。ここで、多数の変形形態、変更形態及び置換形態が本発明から逸脱せずに当業者に想起される。本明細書に記載の本発明の実施形態の種々の代替形態を本発明の実施において用い得ることを理解すべきである。
【０２１１】
本明細書において参照される全ての刊行物、特許出願、発行特許及び他の文献は、それぞれの個々の刊行物、特許出願、発行特許又は他の文献が全体として参照により組み込まれることが具体的及び個別的に示されるように、参照により本明細書に組み込まれる。参照により組み込まれる本文に含有される定義は、それらが本開示の定義と矛盾する限り除外される。
【０２１２】
本説明の実施形態
以下の実施形態は、本発明の具体的な組成物及び使用の非排他的リストを提供する。
１．本明細書に記載のある態様において、組成物であって、
ａ）複数の抗原−主要組織適合複合体（ＭＨＣ）であって、複数のそれぞれの抗原−ＭＨＣは、組織特異的抗原でなく、ＭＨＣ分子の結合溝と会合されているユビキタス自己抗原を含む、複数の抗原−主要組織適合複合体（ＭＨＣ）；及び
ｂ）１〜１００ナノメートルの直径を有するナノ粒子コア
を含み；
抗原−ＭＨＣは、ナノ粒子コアにカップリングされている、組成物が存在する。
２．ＭＨＣ分子は、ＭＨＣクラスＩＩ分子である、実施形態１の組成物の一実施形態。
３．ナノ粒子コアは、金属又は金属酸化物である、実施形態１の組成物の一実施形態。
４．金属は、鉄である、実施形態３の組成物の一実施形態。
５．金属酸化物は、酸化鉄である、実施形態３の組成物の一実施形態。
６．直径は、約５ナノメートル〜約５０ナノメートルである、実施形態１〜５のいずれか１つの組成物の一実施形態。
７．直径は、約５ナノメートル〜約２５ナノメートルである、実施形態６の組成物の一実施形態。
８．複数の抗原−ＭＨＣは、ナノ粒子コアに、少なくとも１０：１の抗原−ＭＨＣとナノ粒子コアとの比においてカップリングされている、実施形態１〜７のいずれか１つの組成物の一実施形態。
９．複数の抗原−ＭＨＣは、ナノ粒子コアに、１５０：１以下の抗原−ＭＨＣとナノ粒子コアとの比においてカップリングされている、実施形態１〜８のいずれか１つの組成物の一実施形態。
１０．複数の抗原−ＭＨＣは、ナノ粒子コアに、１００ｎｍ２のナノ粒子コア表面積当たり約０．４〜約１３個の抗原−ＭＨＣの密度においてカップリングされている、実施形態１〜９のいずれか１つの組成物の一実施形態。
１１．抗原−ＭＨＣは、ナノ粒子コアに共有結合によりカップリングされている、実施形態１〜１０のいずれか１つの組成物の一実施形態。
１２．抗原−ＭＨＣは、ナノ粒子コアに、約５キロダルトン未満の質量を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）リンカーによって共有結合によりカップリングされている、実施形態１〜１１のいずれか１つの組成物の一実施形態。
１３．ナノ粒子コアは、生体適合性コーティングをさらに含む、実施形態１〜１２のいずれか１つの組成物の一実施形態。
１４．ユビキタス自己抗原は、定常状態において細胞内区画中又は上に存在するタンパク質に由来するポリペプチドを含む、実施形態１〜１３のいずれか１つの組成物の一実施形態。
１５．細胞内区画は、サイトゾル、ミトコンドリア、ゴルジ装置、小胞体、核又は細胞膜である、実施形態１４の組成物の一実施形態。
１６．細胞内区画は、ミトコンドリアである、実施形態１４の組成物の一実施形態。
１７．ユビキタス自己抗原は、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ複合体−Ｅ２構成成分（ＰＤＣ−Ｅ２）である、実施形態１〜１３のいずれか１つの組成物の一実施形態。
１８．ユビキタス自己抗原は、シトクロムＰ４５０  ２Ｄ６（ＣＹＰ２Ｄ６）である、実施形態１〜１３のいずれか１つの組成物。
１９．ユビキタス自己抗原は、アクチン（ＡＣＴＢ）である、実施形態１〜１３のいずれか１つの組成物の一実施形態。
２０．ユビキタス自己抗原は、可溶性肝抗原（ＳＬＡ）である、実施形態１〜１３のいずれか１つの組成物の一実施形態。
２１．ユビキタス自己抗原は、ホルムイミドイルトランスフェラーゼ−シクロデアミナーゼ（ＦＴＣＤ）である、実施形態１〜１３のいずれか１つの組成物の一実施形態。
２２．ユビキタス自己抗原は、ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）である、実施形態１〜１３のいずれか１つの組成物の一実施形態。
２３．ユビキタス自己抗原は、ＰＤＣ−Ｅ２３５３−３６７；ＰＤＣ−Ｅ２７２−８６；ＰＤＣ−Ｅ２４２２−４３６；ＰＤＣ−Ｅ２３５３−３６７；ＰＤＣ−Ｅ２８０−９４；ＰＤＣ−Ｅ２５３５−５４９；ＰＤＣ−Ｅ２６２９−６４８；ＰＤＣ−Ｅ２１２２−１３５、ＰＤＣ−Ｅ２２４９−２６３；及びＰＤＣ−Ｅ２２４９−２６３からなる群から選択される、実施形態１７の組成物の一実施形態。
２４．ユビキタス自己抗原は、ＰＤＣ−Ｅ２４２２−４３６及びＰＤＣ−Ｅ２８０−９４からなる群から選択される、実施形態１７の組成物の一実施形態。
２５．ユビキタス自己抗原は、ＣＹＰ２Ｄ６２８４−２９８；ＣＹＰ２Ｄ６２８９−３０３；ＣＹＰ２Ｄ６３１８−３３２；ＣＹＰ２Ｄ６３１３−３３２；ＣＹＰ２Ｄ６３９３−４１２；ＣＹＰ２Ｄ６１９２−２０６；ＣＹＰ２Ｄ６５−１９；ＣＹＰ２Ｄ６２９３−３０７；ＣＹＰ２Ｄ６２１９−２３３；ＣＹＰ２Ｄ６２３７−２５１；ＣＹＰ２Ｄ６１５−２９；ＣＹＰ２Ｄ６２３５−２４９；ＣＹＰ２Ｄ６３１７−３３１；ＣＹＰ２Ｄ６２９３−３０７；ＣＹＰ２Ｄ６４２８−４４２；ＣＹＰ２Ｄ６２３７−２５１；ＣＹＰ２Ｄ６１４−２８；ＣＹＰ２Ｄ６１９９−２１３；ＣＹＰ２Ｄ６４５０−４６４；ＣＹＰ２Ｄ６３０１−３１５；ＣＹＰ２Ｄ６４５２−４６６；ＣＹＰ２Ｄ６５９−７３；ＣＹＰ２Ｄ６１３０−１４４；ＣＹＰ２Ｄ６１９３−２１２；ＣＹＰ２Ｄ６３０５−３２４；及びＣＹＰ
２Ｄ６１５−２９からなる群から選択される、実施形態１８の組成物の一実施形態。
２６．ユビキタス自己抗原は、ＡＣＴＢ２０２−２１６；ＡＣＴＢ１７０−１８４；ＡＣＴＢ２４５−２５９；ＡＣＴＢ１８７−２０１；ＡＣＴＢ１７２−１８６；ＡＣＴＢ１３１−１４５；ＡＣＴＢ１３１−１４５；ＡＣＴＢ１７１−１８５；ＡＣＴＢ１２９−１４３；ＡＣＴＢ１６４−１７８；ＡＣＴＢ２５−３９；及びＡＣＴＢ３２３−３３７からなる群から選択される、実施形態１９の組成物の一実施形態。
２７．ユビキタス自己抗原は、ＡＣＴＢ１４６−１６０；ＡＣＴＢ１８−３２；及びＡＣＴＢ１７１−１８５からなる群から選択される、実施形態１９の組成物の一実施形態。
２８．ユビキタス自己抗原は、ＳＬＡ３３４−３４８；ＳＬＡ１９６−２１０；ＳＬＡ１１５−１２９；ＳＬＡ３７３−３８６；ＳＬＡ１８６−１９７；ＳＬＡ３４２−２５６；ＳＬＡ１１０−１２４；ＳＬＡ２９９−３１３；ＳＬＡ４９−６３；ＳＬＡ２６０−２７４；ＳＬＡ１１９−１３３；ＳＬＡ８６−１００；ＳＬＡ２６−４０；ＳＬＡ３３１−３４５；ＳＬＡ３１７−３３１；ＳＬＡ１７１−１８５；ＳＬＡ４１７−４３１；ＳＬＡ３５９−３７３；ＳＬＡ２１５−２２９；及びＳＬＡ１１１−１２５からなる群から選択される、実施形態２０の組成物の一実施形態。
２９．ユビキタス自己抗原は、ＦＴＣＤ４３９−４５３；ＦＴＣＤ３８１−３９５；ＦＴＣＤ２９７−３１１；ＦＴＣＤ５２５−５３９；ＦＴＣＤ２１８−２３２；ＦＴＣＤ４９５−５０９；ＦＴＣＤ２６２−２７６；ＦＴＣＤ３００−３１４；ＦＴＣＤ２５９−２７３；ＦＴＣＤ４９０−５０４；ＦＴＣＤ３８９−４０３；及びＦＴＣＤ２９５−３０９からなる群から選択される、実施形態２１の組成物の一実施形態。
３０．ユビキタス自己抗原は、ＦＴＣＤ２７１−２８５；ＦＴＣＤ４９８−５１２；及びＦＴＣＤ３０１−３１５からなる群から選択される、実施形態２１の組成物の一実施形態。
３１．ユビキタス自己抗原は、ＭＰＯ３２２−３３６；ＭＰＯ７１４−７２８；ＭＰＯ６１７−６３１；ＭＰＯ５０４−５１８；ＭＰＯ４６２−４７６；ＭＰＯ６１７−６３１；ＭＰＯ４４４−４５８；ＭＰＯ６８９−７０３；ＭＰＯ２４８−２６２；ＭＰＯ５１１−５２５；ＭＰＯ９７−１１１；及びＭＰＯ６１６−６３０からなる群から選択される、実施形態２２の組成物の一実施形態。
３２．ナノ粒子コアにカップリングされている第２の複数の抗原−主要組織適合複合体（ＭＨＣ）をさらに含み、第２の複数のそれぞれの抗原−ＭＨＣは、抗原を含む、実施形態１〜３１のいずれか１つの組成物の一実施形態。
３３．第２の複数の抗原−主要組織適合複合体（ＭＨＣ）の抗原は、第２のユビキタス自己抗原である、実施形態３２の組成物の一実施形態。
３４．第２のユビキタス自己抗原は、定常状態において細胞内区画中又は上に存在するタンパク質に由来するポリペプチドを含む、実施形態３２の組成物の一実施形態。
３５．細胞内区画は、サイトゾル、ミトコンドリア、ゴルジ装置、小胞体、核又は細胞膜である、実施形態３４の組成物の一実施形態。
３６．細胞内区画は、ミトコンドリアである、実施形態３４の組成物の一実施形態。
３７．第２のユビキタス自己抗原は、ＰＤＣ−Ｅ２３５３−３６７；ＰＤＣ−Ｅ２７２−８６；ＰＤＣ−Ｅ２４２２−４３６；ＰＤＣ−Ｅ２３５３−３６７；ＰＤＣ−Ｅ２８０−９４；ＰＤＣ−Ｅ２５３５−５４９；ＰＤＣ−Ｅ２６２９−６４８；ＰＤＣ−Ｅ２１２２−１３５、ＰＤＣ−Ｅ２２４９−２６３；及びＰＤＣ−Ｅ２２４９−２６３からなる群から選択される、実施形態３４の組成物の一実施形態。
３８．第２のユビキタス自己抗原は、ＰＤＣ−Ｅ２４２２−４３６及びＰＤＣ−Ｅ２８０−９４からなる群から選択される、実施形態３４の組成物の一実施形態。
３９．第２のユビキタス自己抗原は、ＣＹＰ２Ｄ６２８４−２９８；ＣＹＰ２Ｄ６２８９−３０３；ＣＹＰ２Ｄ６３１８−３３２；ＣＹＰ２Ｄ６３１３−３３２；ＣＹＰ２Ｄ６３９３−４１２；ＣＹＰ２Ｄ６１９２−２０６；ＣＹＰ２Ｄ６５−１９；ＣＹＰ２Ｄ６２９３−３０７；ＣＹＰ２Ｄ６２１９−２３３；ＣＹＰ２Ｄ６２３７−２５１；ＣＹＰ２Ｄ６１５−２９；ＣＹＰ２Ｄ６２３５−２４９；ＣＹＰ２Ｄ６３１７−３３１；ＣＹＰ２Ｄ６
２９３−３０７；ＣＹＰ２Ｄ６４２８−４４２；ＣＹＰ２Ｄ６２３７−２５１；ＣＹＰ２Ｄ６１４−２８；ＣＹＰ２Ｄ６１９９−２１３；ＣＹＰ２Ｄ６４５０−４６４；ＣＹＰ２Ｄ６３０１−３１５；ＣＹＰ２Ｄ６４５２−４６６；ＣＹＰ２Ｄ６５９−７３；ＣＹＰ２Ｄ６１３０−１４４；ＣＹＰ２Ｄ６１９３−２１２；ＣＹＰ２Ｄ６３０５−３２４；及びＣＹＰ２Ｄ６１５−２９からなる群から選択される、実施形態３４の組成物の一実施形態。
４０．第２のユビキタス自己抗原は、ＡＣＴＢ２０２−２１６；ＡＣＴＢ１７０−１８４；ＡＣＴＢ２４５−２５９；ＡＣＴＢ１８７−２０１；ＡＣＴＢ１７２−１８６；ＡＣＴＢ１３１−１４５；ＡＣＴＢ１３１−１４５；ＡＣＴＢ１７１−１８５；ＡＣＴＢ１２９−１４３；ＡＣＴＢ１６４−１７８；ＡＣＴＢ２５−３９；及びＡＣＴＢ３２３−３３７からなる群から選択される、実施形態３４の組成物の一実施形態。
４１．第２のユビキタス自己抗原は、ＡＣＴＢ１４６−１６０；ＡＣＴＢ１８−３２；及びＡＣＴＢ１７１−１８５からなる群から選択される、実施形態３４の組成物の一実施形態。
４２．第２のユビキタス自己抗原は、ＳＬＡ３３４−３４８；ＳＬＡ１９６−２１０；ＳＬＡ１１５−１２９；ＳＬＡ３７３−３８６；ＳＬＡ１８６−１９７；ＳＬＡ３４２−２５６；ＳＬＡ１１０−１２４；ＳＬＡ２９９−３１３；ＳＬＡ４９−６３；ＳＬＡ２６０−２７４；ＳＬＡ１１９−１３３；ＳＬＡ８６−１００；ＳＬＡ２６−４０；ＳＬＡ３３１−３４５；ＳＬＡ３１７−３３１；ＳＬＡ１７１−１８５；ＳＬＡ４１７−４３１；ＳＬＡ３５９−３７３；ＳＬＡ２１５−２２９；及びＳＬＡ１１１−１２５からなる群から選択される、実施形態３４の組成物の一実施形態。
４３．第２のユビキタス自己抗原は、ＦＴＣＤ４３９−４５３；ＦＴＣＤ３８１−３９５；ＦＴＣＤ２９７−３１１；ＦＴＣＤ５２５−５３９；ＦＴＣＤ２１８−２３２；ＦＴＣＤ４９５−５０９；ＦＴＣＤ２６２−２７６；ＦＴＣＤ３００−３１４；ＦＴＣＤ２５９−２７３；ＦＴＣＤ４９０−５０４；ＦＴＣＤ３８９−４０３；及びＦＴＣＤ２９５−３０９からなる群から選択される、実施形態３４の組成物の一実施形態。
４４．第２のユビキタス自己抗原は、ＦＴＣＤ２７１−２８５；ＦＴＣＤ４９８−５１２；及びＦＴＣＤ３０１−３１５からなる群から選択される、実施形態３４の組成物の一実施形態。
４５．第２のユビキタス自己抗原は、ＭＰＯ３２２−３３６；ＭＰＯ７１４−７２８；ＭＰＯ６１７−６３１；ＭＰＯ５０４−５１８；ＭＰＯ４６２−４７６；ＭＰＯ６１７−６３１；ＭＰＯ４４４−４５８；ＭＰＯ６８９−７０３；ＭＰＯ２４８−２６２；ＭＰＯ５１１−５２５；ＭＰＯ９７−１１１；及びＭＰＯ６１６−６３０からなる群から選択される、実施形態３４の組成物の一実施形態。
４６．薬学的に許容可能な安定剤、賦形剤、希釈剤又はそれらの組合せをさらに含む、実施形態１〜４５のいずれか１つの組成物の一実施形態。
４７．静脈内投与のために配合される、実施形態１〜４６のいずれか１つの組成物の一実施形態。
４８．自己免疫性又は炎症性疾患を治療する方法における使用のための、実施形態１〜４７のいずれか１つの組成物の一実施形態。
４９．自己免疫性又は炎症性疾患を治療するための医薬品の製造における、実施形態１〜４７のいずれか１つの組成物の使用。
５０．ユビキタス自己抗原又は第２のユビキタス自己抗原は、ミエリン塩基性タンパク質、ミエリン関連糖タンパク質、ミエリンオリゴデンドロサイトタンパク質（ＭＯＧ）、プロテオリピドタンパク質、オリゴデンドロサイトミエリンオリゴタンパク質、ミエリン関連オリゴデンドロサイト塩基性タンパク質、オリゴデンドロサイト特異的タンパク質、熱ショックタンパク質、オリゴデンドロサイト特異的タンパク質、ＮＯＧＯ  Ａ、糖タンパク質Ｐｏ、末梢ミエリンタンパク質２２又は２’３’−環状ヌクレオチド３’−ホスホジエステラーゼに由来するポリペプチドでない、実施形態４９の組成物又は使用の一実施形態。
５１．ユビキタス自己抗原又は第２のユビキタス自己抗原は、プレプロインスリン、プロインスリン、膵島特異的グルコース−６−ホスファターゼ（ＩＧＲＰ）、グルタミン酸デカルボキシラーゼ（ＧＡＤ）、膵島細胞自己抗原−２（ＩＣＡ２）又はインスリンに由来するポリペプチドでない、実施形態４９の組成物又は使用の一実施形態。
【０２１３】
【表５】
2021504488.tif 000007
【０２１４】
【表６】
2021504488.tif 000008
【０２１５】
【表７】
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【０２１６】
【表８】
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【０２１７】
【表９】
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【０２１８】
【表１０】
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【０２１９】
【表１１】
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【０２２０】
【表１２】
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【０２２１】
【表１３】
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【０２２２】
【表１４】
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【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図１Ｅ】
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【図１Ｆ】
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【図１Ｇ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図３Ｅ】
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【図３Ｆ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図４Ｅ】
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【図４Ｆ】
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【図４Ｇ】
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【図４Ｈ】
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【図４Ｉ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図５Ｅ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図６Ｅ】
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【図６Ｆ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図７Ｅ】
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【図７Ｆ】
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【図７Ｇ】
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【図７Ｈ】
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【図７Ｉ】
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【図７Ｊ】
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【図７Ｋ】
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【図７Ｌ】
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【図７Ｍ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図８Ｅ】
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【図８Ｆ】
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【図８Ｇ】
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【図８Ｈ】
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【図８Ｉ】
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【図８Ｊ】
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【図８Ｋ】
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【図８Ｌ】
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【図８Ｍ】
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【図８Ｎ】
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【図８Ｏ】
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【図８Ｐ】
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【図８Ｑ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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【図１０Ｅ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１４Ｃ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１６Ｃ】
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【図１６Ｄ】
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【図１６Ｅ】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１７Ｃ】
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【図１７Ｄ】
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【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
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【図１８Ｃ】
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【図１８Ｄ】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【図２０Ａ】
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【図２０Ｂ】
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【国際調査報告】
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