(57)【要約】  本発明は、上記請求項のいずれかに記載のＩＬＤＲ２アンタゴニストと１つまたは複数の他の治療活性化合物を含む新規な医薬組み合わせ、および新規な特異的ＩＬＤＲ２アンタゴニストに関する。【選択図】図1
2021504404.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩＬＤＲ２アンタゴニストと場合により１つまたは複数の他の治療活性化合物を含む医薬組み合わせ。
【請求項２】
前記他の治療活性化合物が、
●ＰＤ−Ｌ１アンタゴニスト
●タキサンまたはタキサン誘導体
●ワクチン
●ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド、および／または
●ｃ４．４Ａを標的とする化合物
からなる群から選択される少なくとも１つである、請求項１に記載の組み合わせ。
【請求項３】
前記ＩＬＤＲ２アンタゴニストと前記他の治療活性化合物が、
●同じ投与単位で提供される、または
●個別の投与単位で提供される、
請求項１または２に記載の組み合わせ。
【請求項４】
前記ＩＬＤＲ２アンタゴニストと前記他の治療活性化合物が、
●同時に投与される、または
●逐次的に、すなわち、次々に投与される、
請求項１または２に記載の組み合わせ。
【請求項５】
前記ＩＬＤＲ２アンタゴニストが、抗体、その断片もしくは誘導体、改変された抗体フォーマット、または抗体模倣物であり、その全てがＩＬＤＲ２結合特性を有する、請求項１から４のいずれか一項に記載の組み合わせ。
【請求項６】
抗ＩＬＤＲ２抗体、またはその断片もしくは誘導体、または改変された抗体フォーマットであって、その全てがＩＬＤＲ２結合特性を有し、それらが少なくとも３つのＣＤＲ重鎖配列：
【表１】
2021504404.tif 000043
を含む、前記抗ＩＬＤＲ２抗体、またはその断片もしくは誘導体、または改変された抗体フォーマット。
【請求項７】
抗ＩＬＤＲ２抗体、またはその断片もしくは誘導体、または改変された抗体フォーマットであって、その全てがＩＬＤＲ２結合特性を有し、それらが少なくとも３つのＣＤＲ軽鎖配列：
【表２】
2021504404.tif 000044
を含む、前記抗ＩＬＤＲ２抗体、またはその断片もしくは誘導体、または改変された抗体フォーマット。
【請求項８】
以下からなる群：
【表３】
2021504404.tif 000045
から選択される配列と９５％同一、好ましくは９６％または９７％同一、より好ましくは９８％または９９％同一、最も好ましくは１００％である少なくとも１つの重鎖または軽鎖可変領域配列を含む、請求項６または７に記載の抗ＩＬＤＲ２抗体、断片もしくは誘導体または改変された抗体フォーマット。
【請求項９】
以下からなる群：
【表４】
2021504404.tif 000046
から選択される配列と９５％同一、好ましくは９６または９７％同一、より好ましくは９８％または９９％同一、最も好ましくは１００％である少なくとも１つの重鎖または軽鎖配列を含む、請求項６から８のいずれか一項に記載の抗ＩＬＤＲ２抗体、断片もしくは誘導体または改変された抗体フォーマット。
【請求項１０】
抗ＩＬＤＲ２抗体、またはその断片もしくは誘導体、または改変された抗体フォーマットであって、その全てがＩＬＤＲ２結合特性を有し、以下からなる群：
【表５】
2021504404.tif 000047
から選択される、３つのＣＤＲ重鎖配列の少なくとも１つの組み合わせを含む、前記抗ＩＬＤＲ２抗体、またはその断片もしくは誘導体、または改変された抗体フォーマット。
【請求項１１】
抗ＩＬＤＲ２抗体、またはその断片もしくは誘導体、または改変された抗体フォーマットであって、その全てがＩＬＤＲ２結合特性を有し、以下からなる群：
【表６】
2021504404.tif 000048
から選択される、３つのＣＤＲ軽鎖配列の少なくとも１つの組み合わせを含む、前記抗ＩＬＤＲ２抗体、またはその断片もしくは誘導体、または改変された抗体フォーマット。
【請求項１２】
抗ＩＬＤＲ２抗体、またはその断片もしくは誘導体、または改変された抗体フォーマットであって、その全てがＩＬＤＲ２結合特性を有し、以下からなる群：
【表７】
2021504404.tif 000049
から選択される配列と９５％同一、好ましくは９６または９７％同一、より好ましくは９８％または９９％同一、最も好ましくは１００％である少なくとも１つの重鎖または軽鎖可変領域配列を含む、前記抗ＩＬＤＲ２抗体、またはその断片もしくは誘導体、または改変された抗体フォーマット。
【請求項１３】
抗ＩＬＤＲ２抗体、またはその断片もしくは誘導体、または改変された抗体フォーマットであって、その全てがＩＬＤＲ２結合特性を有し、以下からなる群：
【表８】
2021504404.tif 000050
から選択される配列と９５％同一、好ましくは９６または９７％同一、より好ましくは９８％または９９％同一、最も好ましくは１００％である少なくとも１つの重鎖または軽鎖配列を含む、前記抗ＩＬＤＲ２抗体、またはその断片もしくは誘導体、または改変された抗体フォーマット。
【請求項１４】
６１−０２．Ｃ０５、５６−０２．Ｅ０８、７４−１５．Ｇ０９および５９−０８．Ｂ０２からなる群から選択される、請求項１から１３のいずれか一項に記載の抗ＩＬＤＲ２抗体または断片もしくは誘導体または改変された抗体フォーマット。
【請求項１５】
蛍光活性化細胞スキャン（ＦＡＣＳ）によって決定される２５ｎＭ（２，５×１０−８Ｍ）以下のＫｄでヒトＩＬＤＲ２から解離する、請求項１から１４のいずれか一項に記載のＩＬＤＲ２アンタゴニストまたは抗体、または断片もしくは誘導体または改変された抗体フォーマット。
【請求項１６】
請求項６から１５のいずれか一項に記載のＩＬＤＲ２抗体とＩＬＤＲ２への結合について競合する、ＩＬＤＲ２アンタゴニストまたは抗体、または断片もしくは誘導体または改変された抗体フォーマット。
【請求項１７】
請求項６から１６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片を含む、抗体薬物複合体。
【請求項１８】
請求項６から１６のいずれか一項に記載のＩＬＤＲ２抗体、または断片もしくは誘導体または改変された抗体フォーマットをコードする、単離された核酸配列またはそのセット。
【請求項１９】
請求項１８に記載の少なくとも１つの核酸配列を含む、ベクター。
【請求項２０】
請求項６から１６のいずれか一項に記載のＩＬＤＲ２抗体、または断片もしくは誘導体または改変された抗体フォーマットを発現する、ならびに／あるいは請求項１８に記載の核酸配列もしくはそのセット、または請求項１９に記載のベクターを含む、単離された細胞。
【請求項２１】
請求項６から１６のいずれか一項に記載のＩＬＤＲ２アンタゴニストまたは抗体、または断片もしくは誘導体または改変された抗体フォーマットを含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の医薬組み合わせ。
【請求項２２】
医薬品として使用するための、請求項１から２１のいずれか一項に記載のＩＬＤＲ２アンタゴニストまたは抗体、または断片もしくは誘導体または改変された抗体フォーマット、またはＩＬＤＲ２アンタゴニストを含む組み合わせ。
【請求項２３】
がんなどの新生物疾患、または免疫疾患もしくは障害
●を患っている、
●を発症するリスクがある、および／または
●について診断されている
患者の処置に使用するための、ここで、ＩＬＤＲ２アンタゴニストまたはＩＬＤＲ２アンタゴニストまたは抗体を含む組合せは１つまたは複数の治療上有効投与量で投与される、請求項１から２２のいずれか一項に記載のＩＬＤＲ２アンタゴニストまたは抗体、または断片もしくは誘導体または改変された抗体フォーマット、またはＩＬＤＲ２アンタゴニストを含む組み合わせ。
【請求項２４】
がんなどの新生物疾患、または免疫疾患もしくは障害
●を患っている、
●を発症するリスクがある、および／または
●について診断されている
患者を処置する方法であって、１つまたは複数の治療上有効投与量で、請求項１から２３のいずれか一項に記載のＩＬＤＲ２アンタゴニストまたは抗体、または断片もしくは誘導体または改変された抗体フォーマット、またはＩＬＤＲ２アンタゴニストを含む組み合わせを前記患者に投与するステップを含む、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＩＬＤＲ２アンタゴニストと１つまたは複数の他の治療活性化合物を含む新規な医薬組み合わせ、ならびに新規な特異的ＩＬＤＲ２アンタゴニストに関する。
【背景技術】
【０００２】
免疫調節リガンドのＢ７ファミリーは、免疫応答を調節するリンパ球上の受容体に結合する、構造的に関連する細胞表面タンパク質リガンドからなる。
【０００３】
ＴおよびＢリンパ球の活性化は、細胞表面の抗原特異的Ｔ細胞受容体またはＢ細胞受容体の結合によって開始されるが、Ｂ７リガンドによって同時に送達される追加のシグナルが最終的な免疫応答を決定する。これらの「共刺激」または「共抑制」シグナルは、リンパ球上の受容体のＣＤ２８ファミリーを通してＢ７リガンドによって送達される。
【０００４】
Ｂ７タンパク質のファミリーには、Ｂ７．１（ＣＤ８０）、Ｂ７．２（ＣＤ８６）、誘導性共刺激因子リガンド（ＩＣＯＳ−Ｌ）、プログラム細胞死１リガンド（ＰＤ−Ｌ１、Ｂ７−１とも呼ばれる）、プログラム細胞死−２リガンド（ＰＤ−Ｌ２）、Ｂ７−Ｈ３およびＢ７−Ｈ４が含まれる。ファミリーのメンバーは主にヒトおよびマウスで特徴付けられているが、一部のメンバーは鳥にも見られる。これらは２０〜４０％のアミノ酸同一性を共有し、構造的に関連しており、細胞外ドメインが可変および定常免疫グロブリンドメインに関連するタンデムドメインを含む。Ｂ７リガンドは、リンパ組織および非リンパ組織で発現される。免疫応答の調節におけるファミリーの重要性は、Ｂ７ファミリー遺伝子に突然変異を有するマウスにおける免疫不全および自己免疫疾患の発症によって示される。Ｂ７リガンドによって送達されるシグナルの操作は、自己免疫、炎症性疾患およびがんの処置における可能性を示している。
【０００５】
Ｂ７ファミリーのメンバーとそれぞれの共刺激受容体（通常はＣＤ２８関連ファミリーのメンバー）との相互作用は免疫応答を増強するが、ＣＴＬＡ４などの共抑制受容体との相互作用は免疫応答を弱める。
【０００６】
明らかに、各Ｂ７分子は免疫系で独自のニッチを発達させた。Ｂ７ファミリーメンバーの特定のニッチが分析され続けるにつれ、その診断および治療可能性がさらに明らかになる。Ｂ７スーパーファミリーメンバーの多くは、当初はＴ細胞共刺激分子として特徴付けられていた。しかしながら、より最近では、これらがＴ細胞応答を共抑制することもできることが明らかになった。したがって、Ｂ７ファミリーのメンバーは、免疫応答に対する反対の効果を有し得る。
【０００７】
Ｂ７ファミリーのメンバーは、免疫チェックポイント阻害剤療法の標的になっている。
【０００８】
ＰＤ−Ｌ１阻害剤アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０）は、完全ヒト化、操作ＩｇＧ１抗体であり、黒色腫、肺がん、膀胱がんおよび腎臓がんを含むいくつかの様々ながんの処置に有効性を有する。アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）は、完全ヒトＩｇＧ１抗体で、転移性または局所進行性固形腫瘍で有効性を有している。デュルバルマブは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体であり、代替免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて、転移性尿路上皮性膀胱がんで有効性を示している。
【０００９】
ＰＤ１阻害剤のニボルマブおよびペンブロリズマブはＰＤ−Ｌ１受容体ＰＤ−１に結合し、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１への結合を阻害する。
【００１０】
トレメリムマブ（旧称チシリムマブ、ＣＰ−６７５２０６）は、ＣＴＬＡ−４に対する完全ヒトモノクローナル抗体（ＩｇＧ２）である。これは、抗原提示細胞リガンドＢ７．１およびＢ７．２のＣＴＬＡ−４への結合を遮断し、Ｔ細胞活性化のＢ７−ＣＴＬＡ−４媒介下方制御を阻害する。イピリムマブは同様の作用様式を有する同様の抗体であるが、ＩｇＧ１アイソタイプである。
【００１１】
エノブリツズマブ（ＭＧＡ２７１とも呼ばれる）は、腫瘍細胞およびがん幹様細胞、ならびに支持している腫瘍血管系およびその下の組織、または間質でも過剰発現されるＢ７−Ｈ３を標的とする抗体である。
【００１２】
しかしながら、上で特定されるアプローチの大成功にもかかわらず、これらの一部は有効性が持続可能でない、すなわち、疾患の再発が起こる、および／または所与の疾患型に関して有効でないことが判明した。
【００１３】
したがって、免疫チェックポイント阻害剤療法の分野では、新たな改善された療法を提供する、ならびに既存の療法を改善する大きな必要性がある。
【００１４】
近年特定されたＩＬＤＲ２（免疫グロブリン様ドメイン含有受容体２）は、Ｃ１ＯＲＦ３２としても知られており、Ｂ７／ＣＤ２８ファミリーの新規なメンバーである。ＩＬＤＲ２はＩｇＶドメインを含む；これは、Ｉ型膜タンパク質であることに加えて、他の既知のＢ７メンバーと同様に、最終的にＢ７ファミリーへのアノテーションをもたらした。また、ＩＬＤＲ２の２つの選択的スプライシングバリアント（Ｈ１９０１１−１−Ｐ８およびＨ１９０１１−１−Ｐ９）は、野生型Ｃ１ＯＲＦ３２と最初の５つのエクソンのみを共有し、これらのエクソン内のＩｇＶおよび膜貫通ドメインのエクソンのサイズおよび位置が既知のＢ７ファミリーメンバーと似ている。ＩＬＤＲ２の完全な特性評価については、国際公開第２００９０３２８４５号を参照されたい、その内容が参照により本明細書に組み込まれる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１５】
【特許文献１】国際公開第２００９０３２８４５号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
これまでのところ、この近年特定された受容体を標的とする療法は開発されていない。したがって、ＩＬＤＲ２を標的とする新たな改善された免疫チェックポイント阻害剤療法を提供することが、本発明の１つの目的である。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本発明は、ＩＬＤＲ２アンタゴニストと１つまたは複数の他の治療活性化合物を含む新規な医薬組み合わせ、ならびに新規な特異的ＩＬＤＲ２アンタゴニストを提供する。本発明およびその特徴の一般的な利点については、以下で詳細に論じる。
【００１８】
「ｍＩｇＧ」という用語は、マウス免疫グロブリンＧを指す。「ｈＩｇＧ」という用語は、ヒト免疫グロブリンＧを指す。
【００１９】
「ａＰＤ−Ｌ１」、「ａＰＤＬ１」、「ａＩＬＤＲ２」および「ＢＡＹ１９０５２５４」という用語は、本明細書の他で定義される。
【００２０】
「アイソタイプ対照」という用語は、同じアイソタイプ、同じ種のものであるが無関係の抗原に対するモノクローナル抗体の使用を指す。アイソタイプ対照は、非特異的バックグラウンドとポジティブ蛍光染色との間の差別的レベルを設定するために広く使用される。
【００２１】
「アイソタイプＡＤＣ」という用語は、同じ毒素と同じアイソタイプ、同じ種のものであるが無関係の抗原に対するモノクローナル抗体とを含む抗体薬物複合体（ＡＤＣ）の使用を指す。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】二元配置ＡＮＯＶＡ分析によって決定されるアイソタイプ対照と比較したＢＡＹ１９０５２５４処置の有意性を示す図である。Ｂ１６Ｆ１０腫瘍の成長は、アイソタイプ対照と比較して、ＢＡＹ１９０５２５４による処置によって有意に遅延した。処置開始（ｄ０）。実験条件を以下の表に示す：
【表１】
2021504404.tif 000003
【図２】Ｅ１０抗体による処置は、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍モデルの成長に影響を及ぼさなかったことを示す図である。処置開始（ｄ０）。実験条件を以下の表に示す：
【表２】
2021504404.tif 000004
【図３】二元配置ＡＮＯＶＡ分析によって決定される、アイソタイプ対照に対する単独療法および併用療法の有意性を示す図である。ａＰＤ−Ｌ１でもＢＡＹ１９０５２５４処置でも、アイソタイプ対照に対する単独療法の有効性は観察されなかった。ａＰＤ−Ｌ１とＢＡＹ１９０５２５４の組み合わせは、対照に対して腫瘍成長を相乗的に遅延させた。処置開始：ｑ３ｄ  ｉ．ｐ．実験条件を以下の表に示す：
【表３】
2021504404.tif 000005
【図４】二元配置ＡＮＯＶＡ分析によって決定されるアイソタイプ対照と比較したａＰＤ−Ｌ１とＢＡＹ１９０５２５４の併用処置の有意性を示す図である。ＢＡＹ１９０５２５４単独では、ＣＴ２６腫瘍モデルで３ｍｇ／ｋｇの用量で腫瘍成長の遅延は示さない。１０ｍｇ／ｋｇのａＰＤ−Ｌ１は、１０ｍｇ／ｋｇのａＰＤ−Ｌ１を３ｍｇ／ｋｇのＢＡＹ１９０５２５４と組み合わせると相乗的に改善される、アイソタイプ対照に対する有効性を示す。処置開始（ｄ７）：ｑ３ｄ  ｉ．ｐ．実験条件を以下の表に示す：
【表４】
2021504404.tif 000006
【図５】二元配置ＡＮＯＶＡ分析によって決定される、アイソタイプ対照に対する単独療法および併用療法の有意性を示す図である。単独療法ａＰＤ−Ｌ１で３Ｃ９−Ｄ１１−Ｈ１１モデルを処置すると、ＢＡＹ１９０５２５４の場合とは異なり、アイソタイプ対照と比較して腫瘍成長の有意な遅延が達成される。ａＰＤ−Ｌ１とＢＡＹ１９０５２５４の組み合わせは相乗効果を示し、腫瘍成長を妨げる。処置開始（ｄ８）：ｑ３ｄ  ｉ．ｐ．実験条件を以下の表に示す：
【表５】
2021504404.tif 000007
【図６】二元配置ＡＮＯＶＡ分析によって決定される、アイソタイプ対照に対する単独療法および併用療法の有意性を示す図である。単独療法ＢＡＹ１９０５２５４でＢ１６Ｆ１０  ＯＶＡモデルを処置すると、腫瘍成長が中等度に遅延する。これは、ＢＡＹ１９０５２５４をＯＶＡおよびＣＰＧと組み合わせると相乗的に改善される。処置開始（ｄ９）：ｑ３ｄ  ｉ．ｐ．実験条件を以下の表に示す：
【表６】
2021504404.tif 000008
【図７】二元配置ＡＮＯＶＡ分析によって決定される、アイソタイプ対照に対する単独療法および併用療法の有意性を示す図である。単独療法ＢＡＹ１９０５２５４でＢ１６Ｆ１０  ＯＶＡモデルを処置すると、腫瘍成長が中等度に遅延する。これは、ＢＡＹ１９０５２５４をドセタキセルと組み合わせると相乗的に改善される。処置開始（ｄ８）：ｑ３ｄ  ｉ．ｐ．実験条件を以下の表に示す：
【表７】
2021504404.tif 000009
【図８】二元配置ＡＮＯＶＡ分析によって決定される、アイソタイプ対照に対する単独療法および併用療法の有意性を示す図である。単独療法ＢＡＹ１９０５２５４でＢ１６Ｆ１０  ＯＶＡモデルを処置しても、腫瘍成長の遅延にはつながらない。ＢＡＹ１９０５２５４をＣ４．４ａ  ＡＤＣと組み合わせると、相乗効果がまだ目に見える。処置開始（ｄ６）：ｑ３ｄ  ｉ．ｐ．実験条件を以下の表に示す：
【表８】
2021504404.tif 000010
【図９Ａ】Ｂ１６Ｆ１０同系マウスモデルにおける様々な抗体の腫瘍退縮活性を示す図である。腫瘍退縮活性は、アイソタイプ対照と比較した腫瘍体積の減少として測定される。
【図９Ｂ】抗ＰＤ−Ｌ１抗体と比較した、ＩＬ２誘導アッセイにおける本発明による選択された抗ＩＬＤＲ２抗体の異常な挙動を示す図である。
【図９Ｃ】ＣＴ２６同系マウスモデルにおける本発明による選択された抗ＩＬＤＲ２抗体の腫瘍退縮活性を示す図である。腫瘍退縮活性は、アイソタイプ対照と比較した腫瘍体積の減少として測定される。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
定義
特に定義しない限り、本明細書で使用される全ての技術的および科学的用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般的に理解される意味を有する。しかしながら、以下の参考文献は、本発明が関連する当業者に、本発明で使用される多くの用語の一般的な定義を提供することができ、このような定義が当分野で一般的に理解される意味と一致する限り参照および使用され得る。このような参考文献には、それだけに限らないが、Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（２ｎｄ  ｅｄ．１９９４）；Ｔｈｅ  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｗａｌｋｅｒ  ｅｄ．，１９８８）；Ｈａｌｅ＆Ｍａｒｈａｍ，Ｔｈｅ  Ｈａｒｐｅｒ  Ｃｏｌｌｉｎｓ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９１）；およびＬａｃｋｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ＆Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（３ｄ  ｅｄ．１９９９）；およびＣｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｅｄｓ．Ａｂｂａｓ，Ｌｉｃｈｔｍａｎ  ａｎｄ  Ｐｏｂｅｒ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ  Ｃｏｍｐａｎｙが含まれる。当技術分野において一般的に理解される意味を有する本明細書で使用される用語の定義を提供する、当業者に入手可能な任意の追加の技術的資源を調べることができる。本発明の目的のために、以下の用語をさらに定義する。さらなる用語は、明細書のどこかで定義される。本明細書および添付の特許請求の範囲で使用する場合、単数形「ａ」および「ｔｈｅ」は、文脈上別段の意味を有することが明らかな場合を除き、複数指示対象を含む。
【００２４】
「アミノ酸」は、本明細書では、一般的に知られている３文字記号またはＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ生化学命名委員会によって推奨される１文字記号によって呼ばれ得る。同様に、ヌクレオチドは、一般に認められている一文字コードによって呼ばれ得る。
【００２５】
本発明における「組み合わせ」という用語は、当業者に知られているように使用され、前記組み合わせが、固定された組み合わせ、固定されていない組み合わせ、またはキットオブパーツ（ｋｉｔ−ｏｆ−ｐａｒｔｓ）であることが可能である。
【００２６】
本発明における「固定された組み合わせ」は、当業者に知られているように使用され、例えば、本発明のＩＬＤＲ２アンタゴニストなどの第１の有効成分とさらなる有効成分が合わせて１つの単位投与量または１つの単一実体で存在する組み合わせとして定義される。「固定された組み合わせ」の一例は、第１の有効成分とさらなる有効成分が、製剤などの同時投与用の混和物として存在する医薬組成物である。「固定された組み合わせ」の別の例は、第１の有効成分とさらなる有効成分が、混和されずに１つの単位に存在する医薬組み合わせである。
【００２７】
本発明の固定されていない組み合わせまたは「キットオブパーツ」は、当業者に知られているように使用され、第１の有効成分とさらなる有効成分が２つ以上の単位に存在する組み合わせとして定義される。固定されていない組み合わせまたはキットオブパーツの一例は、第１の有効成分とさらなる有効成分が別々に存在する組み合わせである。固定されていない組み合わせまたはキットオブパーツの成分を、別々に、逐次的に、同時に、同時発生的に、または時間をずらして投与することが可能である。
【００２８】
「抗体」は、同義的に「免疫グロブリン」（Ｉｇ）とも呼ばれ、一般に４つのポリペプチド鎖、２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含むので、完全長機能的突然変異体、変異体またはこれらの誘導体（それだけに限らないが、Ｉｇ分子の必須エピトープ結合特徴を保持する（または必要に応じて、親和性成熟もしくは脱免疫化（ｄｅｉｉｍｕｉｚａｔｉｏｎ）を受ける）マウス、キメラ、ヒト化および完全ヒト抗体を含み、二重特異性（ｄｕａｌ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ）、二重特異性（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）、多重特異性および二重可変ドメイン免疫グロブリンを含む、多量体タンパク質、またはその同等のＩｇホモログ（例えば、重鎖のみを含むラクダナノボディ、重鎖または軽鎖に由来し得る単一ドメイン抗体（ｄＡｂｓ））である。免疫グロブリン分子は、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、またはサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）およびアロタイプであり得る。本発明の一実施形態では、抗ＩＬＤＲ２抗体が完全ヒトであり、ＩｇＧ２サブクラスのものである。
【００２９】
本明細書で使用される「抗体ベースの結合タンパク質」は、他の非免疫グロブリンまたは非抗体由来成分の文脈で少なくとも１つの抗体由来ＶＨ、ＶＬまたはＣＨ免疫グロブリンドメインを含む任意のタンパク質を表し得る。このような抗体ベースのタンパク質には、それだけに限らないが、（ｉ）免疫グロブリンＣＨドメインの全部または一部を有する受容体または受容体成分を含む、結合タンパク質のＦｃ融合タンパク質、（ｉｉ）ＶＨおよびＶＬドメインが代替分子足場にカップリングしている、結合タンパク質、または（ｉｉｉ）免疫グロブリンＶＨ、および／またはＶＬ、および／またはＣＨドメインが、天然の抗体または抗体断片では通常見られない様式で結合しているおよび／または組み立てられている、分子が含まれる。
【００３０】
本明細書で使用される「抗体誘導体または断片」は、完全長ではない抗体に由来する少なくとも１つのポリペプチド鎖を含む分子に関するものであり、それだけに限らないが、単独または任意の組み合わせの、（ｉ）可変軽鎖（ＶＬ）、可変重鎖（ＶＨ）、定常軽鎖（ＣＬ）および定常重鎖１（ＣＨ１）ドメインからなる一価断片であるＦａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片である、Ｆ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなる、Ｆａｂ（Ｆｄ）断片の重鎖部分；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなる、可変断片（Ｆｖ）断片、（ｖ）単一可変ドメインを含む、ドメイン抗体（ｄＡｂ）断片；（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）；（ｖｉｉ）単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）；（ｖｉｉｉ）二価のダイアボディ、ＶＨおよびＶＬドメインが単一ポリペプチド鎖上で発現されているが、同じ鎖上の２つのドメイン間でペアリングするには短すぎるリンカーを使用しているため、ドメインに別の鎖の相補性ドメインと対にならせて、２つの抗原結合部位を作成する二重特異性抗体；および（ｉｘ）相補性軽鎖ポリペプチドと共に、一対の抗原結合領域を形成する、一対のタンデムＦｖセグメント（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）を含む、線状抗体；および（ｘ）免疫グロブリン重鎖および／または軽鎖、あるいはその突然変異体、変異体、または誘導体の他の非完全長部分を含む。
【００３１】
本明細書で使用される「改変された抗体フォーマット」という用語は、抗体薬物複合体、ポリアルキレンオキシド改変ｓｃＦｖ、モノボディ、ダイアボディ、ラクダ抗体、ドメイン抗体、二重または三重特異性抗体、ＩｇＡ、またはＪ鎖によって結合された２つのＩｇＧ構造および分泌成分、サメ抗体、新世界霊長類フレームワーク＋非新世界霊長類ＣＤＲ、ヒンジ領域が削除されたＩｇＧ４抗体、ＣＨ３ドメインに設計された２つの追加の結合部位を有するＩｇＧ、Ｆｃγ受容体に対する親和性を増強するよう改変されたＦｃ領域を有する抗体、ＣＨ３＋ＶＬ＋ＶＨを含む二量体化構築物などを包含する。
【００３２】
本明細書で使用される「抗体模倣物」という用語は、免疫グロブリンファミリーに属さないタンパク質、さらにはアプタマーなどの非タンパク質、または合成ポリマーを指す。いくつかのタイプは、抗体様βシート構造を有する。抗体に対する「抗体模倣物」または「代替足場」の潜在的な利点は、溶解度が高く、組織浸透が高く、熱および酵素に対する安定性が高く、製造コストが比較的低いことである。
【００３３】
いくつかの抗体模倣物は、考えられる全ての標的に対する特異的結合候補を提供する大きなライブラリーで提供され得る。抗体の場合と同様に、標的特異的抗体模倣物は、ハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）技術、ならびに確立されたディスプレイ技術、例えばファージディスプレイ、細菌ディスプレイ、酵母または哺乳動物ディスプレイを使用して開発することができる。現在開発されている抗体模倣物には、例えば、アンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎｓと呼ばれる）、Ｃ型レクチン、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）のＡドメインタンパク質、トランスフェリン、リポカリン、フィブロネクチンの１０番目のＩＩＩ型ドメイン、Ｋｕｎｉｔｚドメインプロテアーゼ阻害剤、ユビキチン由来バインダー（アフィリンと呼ばれる）、ガンマクリスタリン由来バインダー、システインノットまたはノッチン、チオレドキシンＡ足場ベースバインダー、核酸アプタマー、ポリマーの分子インプリンティングによって生成される人工抗体、細菌ゲノムからのペプチドライブラリー、ＳＨ−３ドメイン、ストラドボディ（ｓｔｒａｄｏｂｏｄｙ）、スルフィド結合およびＣａ２＋で安定化された膜受容体の「Ａドメイン」、ＣＴＬＡ４ベース化合物、Ｆｙｎ  ＳＨ３、およびアプタマー（特異的標的分子に結合するオリゴ核酸またはペプチド分子）が包含される。
【００３４】
本明細書における「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。この用語は、天然配列Ｆｃ領域および変異Ｆｃ領域を含む。本明細書において特に指定されない限り、Ｆｃ領域または定常領域におけるアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載されているＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ番号付けシステムによる。
【００３５】
本明細書で使用される場合、「ＩＬＤＲ２」は、Ｃ１ＯＲＦ３２としても知られている免疫グロブリン様ドメイン含有受容体２に関し、Ｂ７／ＣＤ２８ファミリーの新規なメンバーである。ＩＬＤＲ２の完全な特性評価については、その内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２００９０３２８４５号を参照されたい。
【００３６】
「抗ＩＬＤＲ２抗体」および「ＩＬＤＲ２に結合する抗体」という用語は、抗体がＩＬＤＲ２を標的とする際の診断薬および／または治療薬として有用であるように十分な親和性でＩＬＤＲ２に結合することができる抗体を指す。一実施形態では、抗ＩＬＤＲ２抗体の非関連非ＩＬＤＲ２タンパク質への結合の程度は、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定される、抗体とＩＬＤＲ２の結合の約５％未満、好ましくは約２％未満である。一定の実施形態では、ＩＬＤＲ２に結合する抗体が、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭまたは≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（ＫＤ）を有する。一定の実施形態では、抗ＩＬＤＲ２抗体が、様々な種のＩＬＤＲ２間で保存されているＩＬＤＲ２のエピトープに結合する。
【００３７】
本明細書で使用される場合、「相補性決定領域」（ＣＤＲ、例えばＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）という用語は、その存在が抗原結合に必要な抗体可変ドメインのアミノ酸残基を指す。各可変ドメインは、典型的には、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３として同定される３つのＣＤＲ領域を有する。各相補性決定領域は、Ｋａｂａｔによって定義される「相補性決定領域」（例えば、軽鎖可変ドメイン中の残基約２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）および８９〜９７（Ｌ３）ならびに重鎖可変ドメイン中の３１〜３５（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）および９５〜１０２（Ｈ３））（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｌｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１））のアミノ酸残基および／または「超可変ループ」（例えば、軽鎖可変ドメイン中の残基約２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）および９１〜９６（Ｌ３）ならびに重鎖可変ドメイン中の２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）および９６〜１０１（Ｈ３）（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ；Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  １９６：９０１−９１７（１９８７））の残基を含み得る。いくつかの例では、相補性決定領域が、Ｋａｂａｔによって定義されるＣＤＲ領域と超可変ループの両方のアミノ酸を含み得る。
【００３８】
重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、完全抗体を異なる「クラス」に割り当てることができる。完全抗体の５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭが存在し、これらのいくつかを「サブクラス」（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２にさらに分けることができる。本発明に使用にするために好ましいクラスの免疫グロブリンはＩｇＧである。
【００３９】
種々のクラスの抗体に対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γおよびμと呼ばれる。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造および三次元立体配置は周知である。本明細書で使用される場合、抗体は、従来公知の抗体およびその機能的断片である。
【００４０】
本発明において企図される抗体または抗原結合抗体断片の変異体は、抗体または抗原結合抗体断片の結合活性が維持されている分子である。
【００４１】
「ヒト」抗体またはその抗原結合断片は、これにより、キメラではなく（例えば、「ヒト化」されていない）、（全部または一部）ヒト以外の種からのものでないものとして定義される。ヒト抗体またはその抗原結合断片は、ヒト由来であり得る、または合成ヒト抗体であり得る。「合成ヒト抗体」は、公知のヒト抗体配列の分析に基づく合成配列から全体的にまたは部分的にインシリコで誘導された配列を有する抗体として本明細書で定義される。ヒト抗体配列またはその断片のインシリコ設計は、例えば、ヒト抗体または抗体断片配列のデータベースを分析し、そこから得られたデータを利用してポリペプチド配列を考案することによって達成することができる。ヒト抗体またはその抗原結合断片の別の例は、ヒト起源の抗体配列のライブラリーから単離された核酸によってコードされるものである（例えば、このようなライブラリーはヒト天然源から採取された抗体に基づく）。ヒト抗体の例としては、Ｓｏｄｅｒｌｉｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２０００，１８：８５３−８５６に記載される抗体が挙げられる。
【００４２】
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に同種の抗体の集団（すなわち、集団を構成する個々の抗体が、可能な突然変異、例えば少量存在し得る天然に存在する突然変異を除いて同一である）から得られた抗体を指す。したがって、「モノクローナル」という用語は、抗体の特徴が個別の抗体の混合物ではないことを示す。典型的には異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。その特異性に加えて、モノクローナル抗体調製物は、典型的には他の免疫グロブリンによって汚染されないという点で有利である。「モノクローナル」という用語は、任意の特定の方法による抗体の作成を必要とすると解釈されるべきではない。モノクローナル抗体という用語は、具体的には、キメラ抗体、ヒト化抗体およびヒト抗体を含む。
【００４３】
「単離された」抗体は、同定され、それを発現した細胞の成分から分離されたものである。細胞の汚染成分は、抗体の診断または治療的使用を妨害する物質であり、これには酵素、ホルモンおよび他のタンパク質性または非タンパク質性溶質が含まれ得る。
【００４４】
「単離された」核酸は、同定され、その自然環境の成分から分離されたものである。単離された核酸は、通常核酸分子を含む細胞に含まれる核酸分子を含むが、核酸分子は染色体外またはその天然の染色体位置とは異なる染色体位置に存在する。
【００４５】
本明細書で使用される場合、抗体は、対象となる抗原、例えば腫瘍関連ポリペプチド抗原標的「に特異的に結合する」、「に特異的である」、または「を特異的に認識する」ものであり、抗体が抗原を発現している細胞または組織を標的とする際に治療薬として有用であり、他のタンパク質と有意には交差反応せず、上記抗原標的のオルソログおよび変異体（例えば、突然変異型、スプライス変異型もしくはタンパク質分解性切断型）と有意には交差反応しないように十分な親和性で抗原に結合するものである。本明細書で使用される特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド標的上のエピトープ「を特異的に認識する」または「に特異的に結合する」または「に特異的である」という用語は、例えば、抗体またはその抗原結合断片が約１０−４Ｍ未満、あるいは約１０−５Ｍ未満、あるいは約１０−６Ｍ未満、あるいは約１０−７Ｍ未満、あるいは約１０−８Ｍ未満、あるいは約１０−９Ｍ未満、あるいは約１０−１０Ｍ未満、あるいは約１０−１１Ｍ未満、あるいは約１０−１２Ｍ未満、またはそれ未満の抗原に対する一価ＫＤを有することによって示され得る。このような抗体がこのような抗原と１つまたは複数の基準抗原を区別することができる場合、抗体は、抗原「に特異的に結合する」、「に特異的である」または「を特異的に認識する」。その最も一般的な形態では、「特異的結合」、「に特異的に結合する」、「に特異的である」または「を特異的に認識する」とは、例えば、以下の方法の１つにより決定される、抗体が対象となる抗原と関連しない抗原を区別する能力を指している。このような方法は、それだけに限らないが、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ−、ＲＩＡ−、ＥＣＬ−、ＩＲＭＡ−試験およびペプチドスキャンを含む。例えば、標準的ＥＬＩＳＡアッセイを行うことができる。点数化は、標準的な発色（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼによる二次抗体および過酸化水素によるテトラメチルベンジジン）によって行うことができる。あるウェルにおける反応は、例えば４５０ｎｍでの光学濃度によって点数化する。典型的な背景（＝陰性反応）は０．１ＯＤであり得る；典型的な陽性反応は１ＯＤであり得る；これは、陽性／陰性の差が５倍、１０倍、５０倍、好ましくは１００倍超であることを意味する。典型的には、結合特異性の決定は、単一基準抗原ではなく、粉乳、ＢＳＡ、トランスフェリンなどの約３〜５個の関連しない抗原のセットを用いて行われる。
【００４６】
「結合親和性」または「親和性」は、分子の単一の結合部位とその結合パートナーとの間の非共有結合相互作用の総和の強さを指す。特に指示されない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、抗体と抗原）間の１：１相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。解離定数「ＫＤ」は、分子（抗体など）とその結合パートナー（抗原など）との間の親和性、すなわちリガンドが特定のタンパク質にどれくらい強く結合するかを記載するために一般的に使用される。リガンド−タンパク質親和性は、２つの分子間の非共有結合分子間相互作用によって影響される。親和性は、本明細書に記載されるものを含む当技術分野で公知の一般的な方法によって測定することができる。
【００４７】
本明細書で使用される場合、「エピトープ」という用語は、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体に特異的に結合することができる任意のタンパク質決定基を含む。エピトープ決定基は通常、アミノ酸もしくは糖側鎖またはこれらの組み合わせなどの分子の化学的に活性な表面群からなり、通常、特異的な三次元構造特性ならびに特異的な電荷特性を有する。
【００４８】
基準抗体と「同じエピトープに結合する抗体」または基準抗体と「結合について競合する抗体」は、５０％またはそれ以上、競合アッセイで基準抗体とその抗原の結合を遮断する抗体を指し、逆に、基準抗体は５０％またはそれ以上、競合アッセイで抗体とその抗原の結合を遮断する。代表的な競合アッセイを本明細書で提供する。
【００４９】
「免疫複合体」（互換的に「抗体−薬物複合体」または「ＡＤＣ」とも呼ばれる）という用語は、化学療法剤、薬物、成長阻害剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物もしくは動物起源の酵素的に活性な毒素、またはこれらの断片）、または放射性同位体（すなわち、放射性複合体（ｒａｄｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ））などの１種または複数の細胞傷害剤または細胞増殖抑制剤と結合した抗体を指す。免疫複合体は、細胞傷害剤、すなわち、がんの治療において、細胞を死滅させるまたはその成長もしくは増殖を阻害する薬物の局所送達に使用されてきた（例えば、Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（１９９６），９３，８６１８−８６２３））。免疫複合体は、非複合体薬物の全身投与が正常細胞および／または組織に対して許容できないレベルの毒性をもたらし得る場合に、腫瘍への薬物部分の標的送達およびその中の細胞内蓄積を可能にする。抗体−毒素複合体に使用される毒素には、ジフテリア毒素などの細菌毒素、リシンなどの植物毒素、ゲルダナマイシンなどの小分子毒素が含まれる。毒素は、チューブリン結合、ＤＮＡ結合またはトポイソメラーゼ阻害を含む機構によって細胞傷害性効果を発揮し得る。
【００５０】
基準ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列それぞれに関する「配列同一性パーセント（％）」は、配列を整列させ、必要に応じてギャップを導入して最大配列同一性％を達成した後の、基準ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列それぞれの中の核酸またはアミノ酸残基それぞれと同一である候補配列中の核酸またはアミノ酸残基それぞれの割合として定義される。保存的置換は配列同一性の一部とは見なされない。ギャップのないアラインメントが好ましい。アミノ酸配列同一性％を決定するためのアライメントは、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを用いて、当技術分野の技能の範囲内の種々の方法で達成することができる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列を整列させるための適当なパラメータを決定することができる。「配列相同性」は、同一であるまたは保存的アミノ酸置換を表すアミノ酸の割合を示す。
【００５１】
「新生物疾患」とは、腫瘍成長を引き起こす状態であり、良性と悪性の両方がある。新生物は、腫瘍とも呼ばれる細胞の異常な成長である。
【００５２】
本発明を詳細に記載する前に、本発明は、記載される装置および記載される方法は変化し得るため、このような装置の特定の構成部品にもこのような方法のプロセスステップにも限定されないことを理解すべきである。また、本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を説明することのみを目的としており、限定することを意図していないことも理解すべきである。本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈上別段の意味を有することが明らかな場合を除き、単数および／または複数指示対象を含むことに留意しなければならない。さらに、数値によって区切られるパラメータ範囲が与えられる場合、範囲がこれらの限界値を含むと見なされることを理解すべきである。
【００５３】
さらに、本明細書に開示される実施形態は、互いに関連しない個別の実施形態として理解されることを意味しないことを理解すべきである。ある実施形態で論じられる特徴は、本明細書に示される他の実施形態に関連して開示されることも意図されている。ある場合において、特定の特徴がある実施形態では開示されず、別の実施形態で開示される場合、当業者であれば、前記特徴が前記他の実施形態で開示されることを意味しないことを必ずしも意味しないことを理解するだろう。当業者であれば、他の実施形態についても前記特徴を開示することが本出願の要旨であることを理解するだろうが、明確にする目的で、また明細書を扱いやすいボリュームに保つために、これを行わなかった。
【００５４】
さらに、本明細書で参照される先行技術文献の内容は、参照により組み込まれる。これは、特に、標準的または日常的な方法を開示する先行技術文献について言及している。その場合、参照による組み込みは、十分可能にする開示を提供し、長い繰り返しを避ける目的を主に有する。
【００５５】
本発明の一態様によると、ＩＬＤＲ２アンタゴニストと場合により１つまたは複数の他の治療活性化合物を含む医薬組み合わせが提供される。
【００５６】
好ましくは、本発明のＩＬＤＲ２アンタゴニストが抗ＩＬＤＲ２抗体である。より好ましくは、抗ＩＬＤＲ２抗体が、本明細書で以下にさらに記載される抗体である。
【００５７】
本発明の一実施形態によると、他の治療活性化合物が、
●ＰＤ−Ｌ１アンタゴニスト
●タキサンまたはタキサン誘導体
●ワクチン
●ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド、および／または
●ｃ４．４Ａを標的とする化合物
からなる群から選択される少なくとも１つである。
【００５８】
好ましくは、ＰＤ−Ｌ１アンタゴニストが抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。より好ましくは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、アテゾリズマブの可変ドメインを含む。さらにより好ましくは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体がアテゾリズマブである。
【００５９】
本明細書で使用される「タキサン誘導体」という用語は、タキサジエンコアを含む細胞傷害性または細胞増殖抑制性化合物に関する。より好ましくは、タキサン誘導体が、パクリタキセル、ドセタキセルまたはカバジタキセルである。
【００６０】
「ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド」という用語は、シトシン三リン酸デオキシヌクレオチド（「Ｃ」）に続いてグアニン三リン酸デオキシヌクレオチド（「Ｇ」）を含む一本鎖合成ＤＮＡ分子を指す。「ｐ」は、連続ヌクレオチド間のホスホジエステル結合を指すが、一部のＯＤＮは代わりに改変されたホスホロチオエート（ＰＳ）骨格を有する。ＣｐＧモチーフがメチル化されていない場合、これらは免疫刺激剤として作用する。一実施形態では、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチドが、例えば、配列番号１７のヌクレオチド配列（ｔｃｃａｔｇａｃｇｔｔｃｃｔｇａｃｇｔｔ）を有する、Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎによって配給されるＯＤＮ１８２６である。
【００６１】
Ｃ４．４Ａ（ＬＹＰＤ３、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｏ９５２７４（ＬＹＰＤ３＿ＨＵＭＡＮ））は、がんおよび転移関連表面マーカーとして特定されている内在化細胞表面タンパク質である。したがって、Ｃ４．４Ａ（ＬＹＰＤ３）は、抗がん剤を腫瘍に標的化するためのマーカーとして使用することができる。当業者であれば、日常的な方法により、例えば、ファージディスプレイもしくは免疫化によって、または適切なスクリーニング方法を用いたライブラリースクリーニングによって、Ｃ４．４Ａを標的とする化合物を生成することができる。したがって、Ｃ４．４Ａを標的とするこのような化合物は、標的結合能力を保持する抗体、抗体断片もしくは誘導体、または抗体模倣物であり得る。さらに、ｃ４．４Ａを標的とするこのような化合物は、小分子であり得る。
【００６２】
一実施形態では、Ｃ４．４Ａを標的とする化合物が、細胞傷害剤または細胞増殖抑制剤に結合した、Ｃ４．４Ａを標的とする抗体、またはその断片もしくは誘導体、または抗体模倣物を含む抗体薬物複合体である。好ましくは、Ｃ４．４Ａを標的とする化合物が、オーリスタチンに結合した抗Ｃ４．４Ａ（ＬＹＰＤ３）抗体からなるＢＡＹ１１２９９８０である。
【００６３】
本発明はまた、化学療法剤または薬物、増殖抑制剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物、ヒトもしくは動物起源の酵素的に活性な毒素、またはこれらの断片）、または放射活性同位体などの１つまたは複数の細胞傷害剤に結合した抗ＩＬＤＲ２抗体を含む抗体−薬物複合体（ＡＤＣ、免疫複合体）を提供する。好ましくは、抗ＩＬＤＲ２抗体が本明細書で以下に記載されるものであり、最も好ましくは、抗ＩＬＤＲ２抗体がＢＡＹ１９０５２５４である。
【００６４】
一実施形態では、免疫複合体が、抗体が、それだけに限らないが、マイタンシノイド（米国特許第５２０８０２０号明細書、第５４１６０６４号明細書および欧州特許第０４２５２３５号明細書参照）；オーリスタチン、例えばモノメチルオーリスタン薬物部分ＤＥおよびＤＦ（ＭＭＡＥおよびＭＭＡＦ）（米国特許第５６３５４８３号明細書および第５７８０５８８号明細書および第７４９８２９８号明細書参照）；ドラスタチン；カリケアマイシンまたはその誘導体；アントラサイクリン、例えばダウノマイシンまたはドキソルビシン；メトトレキサート；ビンデシン；タキサン、例えばドセタキセル、パクリタキセル、ラロタキセル、テセタキセルおよびオルタタキセル；トリコテセン；ならびにＣＣ１０６５を含む１種または複数の薬物と結合している抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）である。
【００６５】
別の実施形態では、免疫複合体が、それだけに限らないが、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファサルシン、シナアブラギリ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ジアンチンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩおよびＰＡＰ−Ｓ）、ニガウリ（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン、クロチン、サポンソウ（ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシンおよびトリコテセンを含む酵素的に活性な毒素またはその断片に結合した本明細書に記載される抗体を含む。
【００６６】
別の実施形態では、免疫複合体が、放射性複合体を形成する放射性原子に結合した本明細書に記載される抗体を含む。放射性複合体の製造には、種々の放射性同位体が利用可能である。例としては、２２７Ｔｈ、２２５Ａｃ、２１１Ａｔ、１３１Ｉ、１２５Ｉ、９０Ｙ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１５３Ｓｍ、２１２Ｂｉ、３２Ｐ、２１２ＰｂおよびＬｕの放射性同位体が挙げられる。放射性複合体を検出に使用する場合、放射性複合体はシンチグラフィー研究のための放射性原子、例えばＴｃ９９ｍ、または核磁気共鳴（ＮＭＲ）イメージング用のスピン標識、例えば再びヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガンまたは鉄を含むことができる。
【００６７】
抗体および細胞傷害剤の複合体は、種々の二官能性タンパク質カップリング剤、例えばＮ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（アジプイミド酸ジメチルＨＣｌなど）、活性エステル（スベリン酸ジスクシンイミジルなど）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビスアジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミンなど）、ジイソシアネート（トルエン２，６−ジイソシアネートなど）およびビス活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンなど）を用いて作成することができる。
【００６８】
リンカーは、細胞傷害性薬物の細胞中への放出を促進する「切断可能なリンカー」であってもよい。例えば、酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、光解離性リンカー、ジメチルリンカーまたはジスルフィド含有リンカーがある（Ｃｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５２：１２  ７−１３１（１９９２））。
【００６９】
本明細書の免疫複合体またはＡＤＣは明確に、それだけに限らないが、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ−ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホＥＭＣＳ、スルホＧＭＢＳ、スルホＫＭＵＳ、スルホＭＢＳ、スルホＳＩＡＢ、スルホＳＭＣＣおよびスルホＳＭＰＢ、および（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ．、米国から）商業的に入手可能なＳＶＳＢ（スクシンイミジル−（４−ビニルスルホン）ベンゾエート）を含む架橋リンカー試薬を用いて調製されたこのような複合体を企図する。
【００７０】
本発明の一実施形態によると、ＩＬＤＲ２アンタゴニストと他の治療活性化合物が：
●同じ投与単位で提供される、または
●個別の投与単位で提供される。
【００７１】
本発明の他の一実施形態によると、ＩＬＤＲ２アンタゴニストと他の治療活性化合物が：
●同時に投与される、または
●逐次的に、すなわち、次々に投与される。
【００７２】
本発明の一実施形態によると、ＩＬＤＲ２アンタゴニストが、その全てがＩＬＤＲ２結合特性を有する、抗体、その断片もしくは誘導体、改変された抗体フォーマット、または抗体模倣物である。
【００７３】
本発明のさらなる一態様によると、少なくとも３つのＣＤＲ重鎖配列を含む、その全てがＩＬＤＲ２結合特性を有する、抗ＩＬＤＲ２抗体、またはその断片もしくは誘導体、または改変された抗体フォーマットが提供される：
【表９】
2021504404.tif 000011
【００７４】
本発明のさらなる一態様によると、少なくとも３つのＣＤＲ軽鎖配列を含む、その全てがＩＬＤＲ２結合特性を有する、抗ＩＬＤＲ２抗体、またはその断片もしくは誘導体、または改変された抗体フォーマットが提供される：
【表１０】
2021504404.tif 000012
【００７５】
ここでは、「ＨＣ」は重鎖を表し、「ＬＣ」は軽鎖を表す。上記の配列は、ＢＡＹ１９０５２５４（本明細書では５９−０８．Ｂ０２とも呼ばれる）のＣＤＲである。
【００７６】
一実施形態によると、抗ＩＬＤＲ２抗体、断片もしくは誘導体または改変された抗体フォーマットが、以下からなる群から選択される配列と９５％同一、好ましくは９６または９７％同一、より好ましくは９８％または９９％同一、最も好ましくは１００％である少なくとも１つの重鎖または軽鎖可変領域配列を含む：
【表１１】
2021504404.tif 000013
【００７７】
ここでは、「ＶＤ」は可変ドメインを表す。上記の配列は、ＢＡＹ１９０５２５４（本明細書では同義的に５９−０８．Ｂ０２またはＢ０２と呼ばれる）の可変ドメインである。
【００７８】
さらなる実施形態によると、抗ＩＬＤＲ２抗体、断片もしくは誘導体または改変された抗体フォーマットが、以下からなる群から選択される配列と９５％同一、好ましくは９６％または９７％同一、より好ましくは９８％または９９％同一、最も好ましくは１００％である少なくとも１つの重鎖または軽鎖配列を含む：
【表１２】
2021504404.tif 000014
【００７９】
ここでは、「ＨＣ」は重鎖を表し、「ＬＣ」は軽鎖を表す。上記の配列は、ＢＡＹ１９０５２５４（本明細書では５９−０８．Ｂ０２とも呼ばれる）の重鎖および軽鎖配列である。
【００８０】
本発明のさらなる一態様によると、以下からなる群から選択される、３つのＣＤＲ重鎖配列の少なくとも１つの組み合わせを含む、その全てがＩＬＤＲ２結合特性を有する、抗ＩＬＤＲ２抗体、またはその断片もしくは誘導体、または改変された抗体フォーマットが提供される：
【表１３】
2021504404.tif 000015
【００８１】
本発明のさらなる一態様によると、以下からなる群から選択される、３つのＣＤＲ軽鎖配列の少なくとも１つの組み合わせを含む、その全てがＩＬＤＲ２結合特性を有する、抗ＩＬＤＲ２抗体、またはその断片もしくは誘導体、または改変された抗体フォーマットが提供される：
【表１４】
2021504404.tif 000016
【００８２】
上記の配列は、抗体６１−０２．Ｃ０５、５６−０２．Ｅ０８、７４．１５．Ｇ０９および５６．０２．Ｅ１０のＣＤＲである。
【００８３】
本発明のさらなる一態様によると、以下からなる群から選択される配列と９５％同一、好ましくは９６または９７％同一、より好ましくは９８％または９９％同一、最も好ましくは１００％である少なくとも１つの重鎖または軽鎖可変領域配列を含む、その全てがＩＬＤＲ２結合特性を有する、抗ＩＬＤＲ２抗体、またはその断片もしくは誘導体、または改変された抗体フォーマットが提供される：
【表１５】
2021504404.tif 000017
【００８４】
上記の配列は、６１−０２．Ｃ０５、５６−０２．Ｅ０８、７４．１５．Ｇ０９および５６．０２．Ｅ１０の可変ドメインである。
【００８５】
本発明のさらなる実施形態によると、以下からなる群から選択される配列と９５％同一、好ましくは９６または９７％同一、より好ましくは９８％または９９％同一、最も好ましくは１００％である少なくとも１つの重鎖または軽鎖配列を含む、その全てがＩＬＤＲ２結合特性を有する、抗ＩＬＤＲ２抗体、またはその断片もしくは誘導体、または改変された抗体フォーマットが提供される：
【表１６】
2021504404.tif 000018
【００８６】
以下の表は、これらの配列、およびこれらが属する抗体の概要を示している。
【表１７】
2021504404.tif 000019
【００８７】
本発明の一実施形態によると、ＩＬＤＲ２抗体または断片もしくは誘導体または改変された抗体フォーマットが、６１−０２．Ｃ０５、５６−０２．Ｅ０８、７４−１５．Ｇ０９および５９−０８．Ｂ０２からなる群から選択される。
【００８８】
本発明の一実施形態によると、ＩＬＤＲ２アンタゴニストまたは抗体、または断片もしくは誘導体または改変された抗体フォーマットが、蛍光活性化細胞スキャン（ＦＡＣＳ）によって決定される２５ｎＭ（２，５×１０−８Ｍ）以下のＫｄでヒトＩＬＤＲ２から解離する。
【００８９】
好ましくは、前記Ｋｄが１５ｎＭ以下である。より好ましくは、前記Ｋｄが１３ｎＭ以下である。より好ましくは、前記Ｋｄが１１ｎＭ以下である。より好ましくは、前記Ｋｄが８ｎＭ以下である。より好ましくは、前記Ｋｄが５ｎＭ以下である。より好ましくは、前記Ｋｄが３ｎＭ以下である。最も好ましくは、前記Ｋｄが２ｎＭ以下である。
【００９０】
本発明の１つのさらなる態様によると、ＩＬＤＲ２への結合について上記明細書によるＩＬＤＲ２抗体と競合する、ＩＬＤＲ２アンタゴニストまたは抗体、または断片もしくは誘導体または改変された抗体フォーマットが提供される。
【００９１】
本発明の他の１つの態様によると、上記明細書によるＩＬＤＲ２抗体、または断片もしくは誘導体または改変された抗体フォーマットをコードする単離された核酸配列またはそのセットが提供される。
【００９２】
本発明の他の１つの態様によると、上記明細書による少なくとも１つの核酸配列を含むベクターが提供される。
【００９３】
本発明の他の一態様によると、上記明細書によるＩＬＤＲ２抗体、または断片もしくは誘導体または改変された抗体フォーマットを発現する、ならびに／あるいは上記明細書による核酸配列もしくはそのセット、または上記明細書によるベクターを含む、単離された細胞が提供される。
【００９４】
本発明の一実施形態によると、医薬組み合わせが、上記明細書によるＩＬＤＲ２アンタゴニストまたは抗体、または断片もしくは誘導体または改変された抗体フォーマットを含む。
【００９５】
治療的方法
治療的方法は、治療上有効量の本発明によって企図される抗体、またはその抗原結合断片、またはその変異体を、治療を必要とする対象に投与するステップを含む。これにより、「治療上有効」量は、有害状態の緩和につながるが、毒物学的に許容される、単回用量として、または複数回用量レジメンにより、単独で、または他の薬剤と組み合わせて、十分な量である抗体または抗原結合断片の量として定義される。対象は、ヒトまたはヒト以外の動物（例えば、ウサギ、ラット、マウス、イヌ、サルまたは他の下等霊長類）であり得る。
【００９６】
本発明の他の一態様によると、上記明細書によるＩＬＤＲ２アンタゴニストまたは抗体、または断片もしくは誘導体または改変された抗体フォーマット、またはＩＬＤＲ２アンタゴニストを含む組み合わせが、医薬品として使用するために提供される。
【００９７】
がんを治療するための医薬品としての使用するための抗体またはその抗原結合断片を提供することが本発明の実施形態である。
【００９８】
一実施形態によると、ＩＬＤＲ２アンタゴニストまたは抗体、または断片もしくは誘導体または改変された抗体フォーマット、またはＩＬＤＲ２アンタゴニストを含む組み合わせが、
がんなどの新生物疾患、または免疫疾患もしくは障害
●を患っている、
●を発症するリスクがある、および／または
●について診断されている
患者の処置に使用するためのものであり、ＩＬＤＲ２アンタゴニストが１つまたは複数の治療上有効投与量で投与される。
【００９９】
他の一実施形態によると、
がんなどの新生物疾患、または免疫疾患もしくは障害
●を患っている、
●を発症するリスクがある、および／または
●について診断されている
患者を処置する方法であって、１つまたは複数の治療上有効投与量で上記明細書によるＩＬＤＲ２アンタゴニストまたは抗体、または断片もしくは誘導体または改変された抗体フォーマット、またはＩＬＤＲ２アンタゴニストを含む組み合わせを前記患者に投与するステップを含む方法が提供される。
【０１００】
がんを処置するための医薬品の製造において抗体またはその抗原結合断片を使用することが本発明のさらなる実施形態である。
【０１０１】
本発明の抗体またはその抗原結合断片を、異常なＩＬＤＲ２シグナル伝達を有する種々の状況、例えばがんなどの細胞増殖性障害において、治療ツールまたは診断ツールとして使用することができる。本発明の抗体による処置に適している障害および状態は、それだけに限らないが、例えば乳房、気道、脳、生殖器官、消化管、尿路、眼、肝臓、皮膚、頭頸部、甲状腺、副甲状腺のがんおよびそれらの遠隔転移などの固形腫瘍であり得る。これらの障害には、リンパ腫、肉腫および白血病も含まれる。
【０１０２】
消化管の腫瘍には、それだけに限らないが、肛門、結腸、結腸直腸、食道、胆嚢、胃、膵臓、直腸、小腸および唾液腺のがんが含まれる。
【０１０３】
食道がんの例としては、それだけに限らないが、食道細胞癌および腺癌、ならびに扁平上皮細胞癌、平滑筋肉腫、悪性黒色腫、横紋筋肉腫およびリンパ腫が挙げられる。
【０１０４】
胃がんの例としては、それだけに限らないが、腸型および散在型胃腺癌が挙げられる。
【０１０５】
膵臓がんの例としては、それだけに限らないが、腺管癌、腺扁平上皮癌および膵臓内分泌腫瘍が挙げられる。
【０１０６】
乳がんの例としては、それだけに限らないが、トリプルネガティブ乳がん、浸潤性乳管癌、浸潤性小葉癌、腺管上皮内癌および非浸潤性小葉癌が挙げられる。
【０１０７】
気道のがんの例としては、それだけに限らないが、小細胞および非小細胞肺癌ならびに気管支腺腫および胸膜肺芽腫が挙げられる。
【０１０８】
脳がんの例としては、それだけに限らないが、脳幹および視床下部膠腫、小脳および大脳星状細胞腫、神経膠芽腫、髄芽腫、上衣腫ならびに神経外胚葉および松果体腫瘍が挙げられる。
【０１０９】
男性生殖器の腫瘍には、それだけに限らないが、前立腺がんおよび精巣がんが含まれる。女性生殖器の腫瘍には、それだけに限らないが、子宮内膜がん、子宮頸がん、卵巣がん、膣がんおよび外陰がんならびに子宮肉腫が含まれる。
【０１１０】
卵巣がんの例としては、それだけに限らないが、漿液性腫瘍、子宮内膜腫瘍、粘液性嚢胞腺癌、顆粒膜細胞腫瘍、セルトリ・ライディッヒ細胞腫および男化腫瘍が挙げられる。
【０１１１】
子宮頸がんの例としては、それだけに限らないが、扁平上皮癌、腺癌、腺扁平上皮癌、小細胞癌、神経内分泌腫瘍、ガラス状細胞癌および絨毛腺腺癌が挙げられる。
【０１１２】
尿路の腫瘍には、それだけに限らないが、膀胱、陰茎、腎臓、腎盂、尿管、尿道、ならびに遺伝性および散発性の乳頭状腎がんが含まれる。
【０１１３】
腎臓がんの例としては、それだけに限らないが、腎細胞癌、尿路上皮細胞癌、傍糸球体細胞腫瘍（腎腫）、血管膠腫、腎膨大細胞腫、ベリーニ管癌、腎臓の明細胞肉腫、中胚葉腎腫およびウィルムス腫瘍が挙げられる。
【０１１４】
膀胱がんの例としては、それだけに限らないが、移行上皮癌、扁平上皮癌、腺癌、肉腫および小細胞癌が挙げられる。
【０１１５】
眼のがんには、それだけに限らないが、眼内黒色腫および網膜芽腫が含まれる。
【０１１６】
肝臓がんの例としては、それだけに限らないが、肝細胞癌（線維層状型変異体を伴うまたは伴わない肝細胞癌腫）、胆管細胞癌（肝内胆管癌）および混合型肝細胞胆管細胞癌が挙げられる。
【０１１７】
皮膚がんには、それだけに限らないが、扁平上皮細胞癌、カポジ肉腫、悪性黒色腫、メルケル細胞皮膚がんおよび非黒色腫皮膚がんが含まれる。
【０１１８】
頭頸部がんには、それだけに限らないが、頭頸部の扁平上皮癌、喉頭癌、下咽頭がん、鼻咽頭がん、口腔咽頭がん、唾液腺がん、口唇および口腔がん、ならびに扁平上皮癌が含まれる。
【０１１９】
リンパ腫には、それだけに限らないが、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、ホジキン病および中枢神経系のリンパ腫が含まれる。
【０１２０】
肉腫には、それだけに限らないが、軟部組織の肉腫、骨肉腫、悪性線維性組織球腫、リンパ肉腫および横紋筋肉腫が含まれる。
【０１２１】
白血病には、それだけに限らないが、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病およびヘアリーセル白血病が含まれる。
【０１２２】
さらに、本発明の抗体またはその抗原結合断片はまた、ＩＬＤＲ２が関与する種々の他の障害における治療ツールまたは診断ツールとして使用することもできる。
【０１２３】
［実施例］
本発明を、図面および前記説明において詳細に例示および説明してきたが、このような例証および説明は、例示的または代表的であり、制限的ではないと見なされるべきである；本発明は、開示される実施形態に限定されない。開示される実施形態に対する他の変形が、図面、開示、および添付の特許請求の範囲の研究から、請求される発明を実施する際に当業者によって理解および達成され得る。請求項において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という語は他の要素もステップも除外せず、不定冠詞「ａ」または「ａｎ」は複数を除外しない。一定の手段が相互に異なる従属請求項に列挙されているという単なる事実は、これらの手段の組み合わせを有利に使用できないことを示すものではない。請求項の参照符号は、範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
【０１２４】
本明細書に開示される全てのアミノ酸配列は、Ｎ末端からＣ末端に示されている；本明細書に開示される全ての核酸配列は、５’→３’で示されている。
【０１２５】
１．腫瘍マウスモデル
以下の同系腫瘍モデルを、インビボ実験で皮下的に使用した。Ｂ１６−Ｆ１０細胞は、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスの皮膚に由来するマウス黒色腫細胞株を表す。ＣＴ２６は、Ｎ−ニトロソ−Ｎ−メチルウレタン−（ＮＮＭＵ）によって誘発される、未分化結腸癌細胞株である。これは線維芽細胞型で、ＢＡＬＢ／ｃマウスに由来する。３Ｃ９−Ｄ１１−Ｈ１１細胞は、脾臓細胞とＳｐ２／０−Ａｇ１４骨髄腫細胞の融合によって作製されたハイブリドーマＢリンパ球である。脾臓細胞は、精製ブタパルボウイルス（ＰＰＶ）で免疫されたＢＡＬＢ／ｃマウスに由来する。
【０１２６】
２．抗体作製
ＩＬＤＲ２に対する抗体を、ファージディスプレイによって作製した。手短に言えば、ビオチン化抗原を捕捉するためにストレプトアビジンコーティング磁気ビーズを使用して、溶液中でパニング反応を行った。磁気ラック（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用してビーズを回収した。全てのファージパニング実験で、５％脱脂乳でブロッキングしたＸＯＭＡ０３１ヒトｆａｂ抗体ファージディスプレイライブラリー（ＸＯＭＡ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｂｅｒｋｅｌｅｙ、ＣＡ）を使用した。
【０１２７】
ファージディスプレイに必要なタンパク質は、Ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ−ＬＣ−Ｂｉｏｔｉｎキット（Ｐｉｅｒｃｅ）を使用してビオチン化した。適切な緩衝液に対する透析により、遊離ビオチンを反応物から除去した。ビオチン標識タンパク質は、ＩＬＤＲ２−ＨＭおよび同じマウスＩｇＧ２ａ配列に融合した対照抗原のＥＣＤを含んでいた。対照抗原を、パニング実験の枯渇ステップに使用した。パニングプロセス中に、ストレプトアビジンビーズおよびマウスＩｇＧ２ａ  Ｆｃドメインへの不要なバインダーを除去することが必要であった。これを達成するために、ストレプトアビジンビーズを対照抗原と組み合わせた。次いで、ファージのアリコートをこれらの「枯渇」ビーズと混合し、室温（ＲＴ）で３０分間インキュベートした。次いで、枯渇ビーズを廃棄した。ＩＬＤＲ２−ＨＭへの特異的バインダーを選択するために、ブロッキングおよび枯渇したファージライブラリーをビオチン化ＩＬＤＲ２−ＨＭに結合した磁気ビーズと混合した。反応物をＲＴで１〜２時間インキュベートし、非特異的ファージをＰＢＳ−ＴおよびＰＢＳで洗浄して除去した。洗浄後、結合したファージを１００ｍＭトリエチルアミン（ＥＭＤ）とのインキュベーションによって溶出し、溶出液をトリス−ＨＣｌ  ｐＨ８．０（Ｔｅｋｎｏｖａ）を添加して中和した。得られた大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）菌叢をかき取り、液体増殖培地に再懸濁した。再懸濁した細胞の少アリコートを１００ｍＬ培養物（２ＹＴとアンピシリン）に接種し、６００ｎＭのＯＤが０．５に達するまで３７℃で増殖させた。この培養物をＭ１３Ｋ０７ヘルパーファージ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ）で感染させ、カナマイシン（Ｍ１３Ｋ０７の選択抗生物質）を添加した。次いで、培養物を２５℃で維持して、ファージをパッケージングさせた。培養物上清のアリコートを、パニングの後のラウンドまたはｆａｂ結合スクリーニングのいずれかに持ち越した。ファージライブラリーの代わりに前のラウンドから救済されたファージ上清を使用したことを除いて、２回目以降のラウンドを同様に行った。ファージ溶出液をＴＧ１大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に感染させ、ＸＯＭＡ０３１ファージミドで細胞を形質転換した。次いで、形質転換細胞を選択寒天プレート（アンピシリン）に広げ、３７°Ｃで一晩インキュベートした。ＸＯＭＡ０３１ライブラリーは、ＩＰＴＧ誘導可能なｆａｂ発現ベクターとしても機能するファージミド構築物に基づく。パニングラウンド３から溶出したファージプールを希釈し、ＴＧ１大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞（Ｌｕｃｉｇｅｎ）に感染させ、寒天プレート上に広げたときに単一のコロニーが生成されるようにした。個々のクローンを１ｍＬの培養物（２ＹＴとグルコースおよびアンピシリン）で増殖させ、ＩＰＴＧ（Ｔｅｋｎｏｖａ）を添加してタンパク質発現を誘導した。発現培養物を２５℃で一晩インキュベートした。次いで、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ペリプラズムに分泌されたＦａｂタンパク質を分析のために抽出した。試料の各プレートはまた、陰性対照として役立つ「ブランクＰＰＥ」ウェルを重複して含んでいた。これらは、ｆａｂ  ＰＰＥと同様に処理された非接種培養物から作製した。ＦＡＣＳ分析を使用して、ＩＬＤＲ２に対する親和性を有するｆａｂを特定した。個々のｆａｂ  ＰＰＥを、ヒトＩＬＤＲ２を過剰発現しているＨＥＫ−２９３Ｔ細胞（２９３Ｔ−ｈｕＩＬＤＲ２細胞）への結合について試験した。全ての分析が、「空のベクター」対照プラスミド（２９３Ｔ−ＥＶ細胞）でトランスフェクトされた陰性対照ＨＥＫ−２９３Ｔモック細胞を含んでいた。試薬調製および洗浄ステップは、ＦＡＣＳ緩衝液（１％ＢＳＡを含むＰＢＳ）で行った。ＦａｂおよびブランクＰＰＥを細胞のアリコートと混合し、４℃で１時間インキュベートし、次いで、ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄した。次いで、細胞を抗Ｃ−ｍｙｃ一次抗体（Ｒｏｃｈｅ）と混合した。同じインキュベーションおよび洗浄ステップの後、細胞を抗マウスＩｇＧ  Ｆｃ  ＡｌｅｘａＦｌｏｕｒ−６４７抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）で染色した。最終的なインキュベーションおよび洗浄の後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液中に構成された４％パラホルムアルデヒドで固定した。試料を、ＨＴＦＣスクリーニングシステム（Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ）で読み取った。ＦＣＳ  Ｅｘｐｒｅｓｓ（Ｄｅ  Ｎｏｖｏ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、ＣＡ、米国）またはＦｌｏＪｏ（Ｄｅ  Ｎｏｖｏ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、ＣＡ、米国）を使用してデータを分析した。これらの結果に基づいて、５つのバインダーをさらに分析するために選択し、完全長ＩｇＧに再フォーマットした。
【表１８】
2021504404.tif 000020
【０１２８】
比較として、抗ＰＤ−Ｌ１抗体をいくつかの実験に使用した。抗ＰＤ−Ｌ１抗体（本明細書ではａＰＤＬ１とも呼ばれる）は、アテゾリズマブの可変ドメインとヒトＩｇＧ２ドメインのキメラである。
【０１２９】
３．抗体産生
これらのＩｇＧを、標準的手順を使用して発現および精製した。手短に言えば、ＩｇＧを、一過的トランスフェクトしたＨＥＫ２９３−６Ｅ細胞を使用した哺乳動物細胞培養によって産生させた。重鎖および軽鎖をｐＴＴ５デュアルベクターシステムにクローニングした。細胞培養スケールは、Ｆ１７培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；０．１％ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）および４  ｍＭ  Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充）を利用して、振盪フラスコで４×１．５ｌとした。トランスフェクションの２４時間後、１％ＦＣＳ「超低」ＩｇＧ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）および０．５ｍＭバルプロ酸（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を添加した。６．０ｌの細胞上清を濾過滅菌し、精製前に４℃で保存した。ＩｇＧを、標準的精製プロトコルを使用して精製した。捕捉ステップは、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ  ＳｕＲｅでのアフィニティクロマトグラフィー、引き続いてＳｕｐｅｒｄｅｘ  ２００での分取ＳＥＣとする。ＡＥＫＴＡ  Ｅｘｐｌｏｒｅｒ  １００  Ｓｙｓｔｅｍ（ＧＥ−Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、ＨＥＫ−２９３細胞からの濾過（０．２μｍ）上清をＭａｂＳｅｌｅｃｔ  ＳｕＲｅカラム（２００ｍｌ）に直接ロードした。第１のカラムからの溶出後、ピーク画分をプールし、３．０ＭトリスｐＨ９を使用して中和した。滅菌濾過後、濾液をＳＥＣまで４℃で保存した。同じクロマトグラフィーシステムを使用して、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００分取グレードＸＫ  ５０／１００（カラム体積約１．８Ｌ）で１回の注入を実施した。
【０１３０】
ピークをプールした。最終的なＩｇＧ含有画分を、Ａｍｉｃｏｎ  ｕｌｔｒａ−１５濃縮装置（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、３０  ｋＤａ  ＭＷＣＯ）を使用して約１０ｍｇ／ｍｌまで濃縮した。タンパク質の量および濃度を、Ｎａｎｏｄｒｏｐ  ＵＶ分光光度計によって決定した；試料を滅菌濾過し、アリコートし、液体窒素で凍結し、−８０℃で保存した。
【０１３１】
４．選択した抗体の抗原結合の特性評価
ヒトＩＬＤＲ２で安定的にトランスフェクトされたＨＥＫ細胞への結合のフローサイトメトリー定量および結合曲線に基づいて親和性を外挿するように設計されたアルゴリズムの使用によって、ＫＤ値を決定した。手短に言えば、ｈＩｇＧ１を、９６ウェルプレートの１６ウェルにわたる一定数の細胞（１０００００個細胞／ウェル）に、３ｐＭ〜２０９ｎＭの結合部位濃度範囲で添加した。１つのウェルは、ブランクウェルとして役立つようＩｇＧが添加されていない細胞を含んでいた。細胞を４℃で４時間平衡化した。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で１回洗浄した後、９０ｎＭの過剰のＣｙ５標識ヤギ抗ヒトポリクローナル抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  １０９−６０６−０９７）を各ウェルに添加した。標識ｐＡｂとの３０分間のインキュベーション（４℃）後、細胞を２回洗浄し、次いで、Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔｅフローサイトメーターを使用して平均蛍光強度（ＭＦＩ）をおよそ１００００「イベント」にわたって記録した。ＩＬＤＲ２を発現するＨＥＫ  ２９３細胞に結合するＩｇＧのＫＤを、ＤｒａｋｅおよびＫｌａｋａｍｐ（２００７）に詳述される１：１平衡モデルを使用してＭＦＩ対ＩｇＧ結合部位濃度曲線を当てはめることによって推定した。マウスＩＬＤＲ２を発現するＨＥＫ細胞を用いて行った実験は、匹敵する結合をもたらした。非トランスフェクト細胞を使用した対照実験は、結合が厳密にＩＬＤＲ２依存性であることを実証した。結果を以下の表２に示す。
【表１９】
2021504404.tif 000021
【０１３２】
５．同系インビボマウスモデルにおける選択されたバインダーの例えば、退縮活性などの抗腫瘍有効性
例えば、それぞれのバインダーの腫瘍退縮効果などの抗腫瘍有効性を決定するために、２つの同系マウスモデル（Ｂ１６Ｆ１０、ＣＴ２６）を上に論じられるように使用した。アイソタイプ対照に対して測定した場合、抗ＩＬＤＲ２抗体Ｅ１０は腫瘍退縮をまったく示さないが、抗ＰＤ−Ｌ１抗体および抗ＩＬＤＲ２抗体Ｂ０２は示すことが判明した（図９Ａ参照）。
【０１３３】
６．ＭＬＲにおける選択されたバインダーによるＩＬＤＲ２活性の調節
ＩＬＤＲ２機能に対するこれらの抗体の効果を決定するために、免疫調節アッセイ、すなわち混合リンパ球反応アッセイを行った。混合リンパ球反応（ＭＬＲ）は、リンパ球の集団を混合し、得られた反応物を測定する試験である。技術的には、これは、２つの同種リンパ球集団間で行われるエキソビボ細胞性免疫アッセイである。一方向ＭＬＲでは、１つのリンパ球集団のみ応答または増殖することができる。二方向ＭＬＲでは、両集団が増殖することができる。Ｔ細胞が外部刺激、例えば抗ＰＤ−１抗体（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ  ２０１４）および抗ＰＤ−Ｌ１抗体などの免疫チェックポイント阻害剤への曝露にどのように反応するかを評価するためにＭＬＲを実施する。本文脈では、抗体誘起ＩＬ−２分泌を、このアッセイで測定した。
【０１３４】
この場合、あるドナーのＣＤ４  Ｔ細胞を、種々のＩＬＤＲ２抗体、機能遮断ＰＤ−Ｌ１抗体、またはアイソタイプ対照の存在下で、別のドナーのＭ−ＣＳＦ成熟単球と５日間共培養した。上清を採取し、古典的なＴ細胞活性化マーカーであるＩＬＤＲ２の濃度をＥｌｉｓａによって決定した。予想通り、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、アイソタイプ対照よりもＩＬ−２分泌の有意な増加を誘導した。ＩＬＤＲ２抗体の１つであるＥ１０は、同等の効果を有していた。結果を図９Ｂおよび以下の表３に示す。
【表２０】
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【０１３５】
これにより、本発明者らは、さらなるインビボモデルにおいて、Ｂ０２と同様に、ＭＬＲにおけるＩＬ−２誘導を媒介しないさらなる抗ＩＬＤＲ２抗体を試験するよう促された。ＣＴ２６モデルでは、抗体Ｇ０９、Ｅ０８、Ｂ０２およびＣ０５が、アイソタイプ対照に対して測定した場合、同様の抗腫瘍有効性を示すことが分かった（図９Ｃ参照）。したがって、非常に驚くべきことに、抗ＩＬＤＲ２抗体Ｇ０９、Ｅ０８、Ｂ０２およびＣ０５は、免疫調節アッセイで抗ＰＤ−Ｌ１抗体よりも低いサイトカイン誘導活性を有するが、インビボ腫瘍モデルでは抗ＰＤ−Ｌ１抗体と同等の抗腫瘍活性を示す。
【０１３６】
ＩＬ−２分泌アッセイでは、ただ１つの抗ＩＬＤＲ２抗体、すなわちＥ１０が、比較の抗ＰＤ−Ｌ１抗体と同様の挙動を示したが、インビボアッセイでは不活性であった。試験した残りの抗ＩＬＤＲ２抗体はＩＬ−２分泌を誘発しなかったが、それにもかかわらず、インビボアッセイで活性を示した。したがって、本発明者らは、ＩＬ−２分泌アッセイは抗ＩＬＤＲ２抗体のインビボ活性を予測できないと結論付けている。むしろ、インビボ活性を有することが実証された抗ＩＬＤＲ２抗体によって描写されたエピトープ空間は、インビボ抗腫瘍活性を有する、したがって治療可能性を有するＩＬＤＲ２抗体の作製に適したエピトープ空間を描写するように思われる。
【０１３７】
サイトカイン誘導活性を、アイソタイプ対照と比較して、ＩＬ−２、ＴＮＦα、ＩＬ−６および／またはＩＦＮγの分泌として測定するアッセイでは、
●好ましいＩＬＤＲ２アンタゴニストのＩＬ−２誘導が、抗ＰＤ−Ｌ１抗体と比較して４０％以下である、
●好ましいＩＬＤＲ２アンタゴニストのＴＮＦα誘導は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体と比較して２８％以下である、
●好ましいＩＬＤＲ２アンタゴニストのＩＬ−６誘導は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体と比較して５０％以下である、
●好ましいＩＬＤＲ２アンタゴニストのＩＦＮγ誘導は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体と比較して６８％以下である。
【０１３８】
７．Ｂ０２（ＢＡＹ１９０５２５４）を用いたインビボ実験
抗ＰＤ−Ｌ１（本明細書ではａＰＤＬ１とも呼ばれる）抗体は、アテゾリズマブの可変ドメインとヒトＩｇＧ２ドメインのキメラである。ＢＡＹ１９０５２５４（本明細書ではａＩＬＤＲ２とも呼ばれる）は、ＩＬＤＲ２の細胞外ドメインに結合する可変ドメインおよび定常ドメインフレームワークからなる。ａＰＤ−Ｌ１とａＩＬＤＲ２の両方が、ヒトＩｇＧ２アイソタイプ対照によってインビボ実験で制御される。Ｅ１０は、ＩＬＤＲ２の細胞外ドメインに結合する可変ドメインおよび定常ドメインフレームワークからなり、マウスＩｇＧ１アイソタイプ対照によってインビボ実験で制御される。
【０１３９】
全ての動物実験はドイツの動物福祉法に基づいて実施し、地元当局によって承認された。
【０１４０】
７．１．Ｂ１６−Ｆ１０予防的処置
Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ、Ｓｕｌｚｆｅｌｄ製の８週齢の雌Ｃ５７Ｂｌ／６Ｎ  Ｃｒｌ  ＢＲマウス（体重１８〜２０ｇ）をＢ１６Ｆ１０腫瘍モデルに使用した。８日間の順応期間後に実験を開始した。動物を１２時間の明／暗サイクルで飼育した。飼料および水は自由に入手可能とした。収容温度を２１℃で維持した。マウス（１群当たりｎ＝１２）に、１×１０４個のＢ１６−Ｆ１０腫瘍細胞を左側腹部に皮下接種し、実験群に割り当てた。処置開始時に、動物に印を付け、各ケージにケージ番号、試験番号および１ケージ当たりの動物の数を表示した。
【０１４１】
５ｍｌ／ｋｇの施用体積でのインビボ投与の調整を、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋、ｐＨ７．４（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ）を含まないＤＰＢＳにストック溶液を希釈することによって達成した。そして、腫瘍接種による処置を開始して、１０ｍｇ／ｋｇ  ｑ３ｄ×６で薬剤を腹腔内投与した。結果を図１および図２ならびに表３〜６に示す。
【表２１】
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【表２２】
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【表２３】
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【表２４】
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【０１４２】
７．２．Ｂ１６−Ｆ１０治療的処置、ａＰＤ−Ｌ１との組み合わせでの相乗的有効性
Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ、Ｓｕｌｚｆｅｌｄ製の８週齢の雌Ｃ５７Ｂｌ／６Ｎ  Ｃｒｌ  ＢＲマウス（体重１８〜２０ｇ）をＢ１６−Ｆ１０腫瘍モデルに使用した。５日間の順応期間後に実験を開始した。動物を１２時間の明／暗サイクルで飼育した。飼料および水は自由に入手可能とした。収容温度を２１℃で維持した。マウス（１群当たりｎ＝１１）に、１×１０４個のＢ１６Ｆ１０腫瘍細胞を左側腹部に皮下接種し、腫瘍接種後３日目に層別無作為化（腫瘍サイズが同じ分布の群にマウスを分割する方法）によって実験群に割り当てた。処置開始時に、動物に印を付け、各ケージにケージ番号、試験番号および１ケージ当たりの動物の数を表示した。
【０１４３】
５ｍｌ／ｋｇの施用体積でのインビボ投与の調整を、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋、ｐＨ７．４（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ）を含まないＤＰＢＳにストック溶液を希釈することによって達成し、薬剤をｄ３で開始する１０ｍｇ／ｋｇ  ｑ３ｄ×５で腹腔内投与した。結果を図３および表７〜８に示す。
【表２５】
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【表２６】
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【０１４４】
７．３．ａＰＤ−Ｌ１によるＣＴ２６治療的、相乗的有効性
Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ、Ｓｕｌｚｆｅｌｄ製の８週齢の雌Ｂａｌｂ／ｃＡｎＮマウス（体重１８〜２０ｇ）をＣＴ２６腫瘍モデルに使用した。６日間の順応期間後に実験を開始した。動物を１２時間の明／暗サイクルで飼育した。飼料および水は自由に入手可能とした。収容温度を２１℃で維持した。マウス（１群当たりｎ＝１２）に、５×１０５個のＣＴ２６腫瘍細胞を左側腹部に皮下接種し、腫瘍接種後７日目に層別無作為化（腫瘍サイズが同じ分布の群にマウスを分割する方法）によって実験群に割り当てた。処置開始時に、動物に印を付け、各ケージにケージ番号、試験番号および１ケージ当たりの動物の数を表示した。
【０１４５】
５ｍｌ／ｋｇの施用体積でのインビボ投与の調整を、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋、ｐＨ７．４（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ）を含まないＤＰＢＳにストック溶液を希釈することによって達成した。ａＰＤ−Ｌ１を１０ｍｇ／ｋｇ  ｑ３ｄ×３で腹腔内投与し、ＢＡＹ１９０５２５４を３ｍｇ／ｋｇ  ｑ３ｄ×３で腹腔内投与し、全ての処置をｄ７に開始した。結果を図４および表９〜１０に示す。
【表２７】
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【表２８】
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【０１４６】
７．４．ａＰＤ−Ｌ１による３Ｃ９−Ｄ１１−Ｈ１１治療的、相乗的有効性
Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ、Ｓｕｌｚｆｅｌｄ製の８週齢の雌Ｂａｌｂ／ｃＡｎＮマウス（体重１８〜２０ｇ）を３Ｃ９−Ｄ１１−Ｈ１１腫瘍モデルに使用した。
【０１４７】
１２日間の順応期間後に実験を開始した。動物を１２時間の明／暗サイクルで飼育した。飼料および水は自由に入手可能とした。収容温度を２１℃で維持した。
【０１４８】
マウス（１群当たりｎ＝１２）に、１×１０４個の３Ｃ９−Ｄ１１−Ｈ１１腫瘍細胞を左側腹部に皮下接種し、腫瘍接種後８日目に層別無作為化（腫瘍サイズが同じ分布の群にマウスを分割する方法）によって実験群に割り当てた。処置開始時に、動物に印を付け、各ケージにケージ番号、試験番号および１ケージ当たりの動物の数を表示した。
【０１４９】
５ｍｌ／ｋｇの施用体積でのインビボ投与の調整を、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋、ｐＨ７．４（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ）を含まないＤＰＢＳにストック溶液を希釈することによって達成した。そして、ｄ８で開始して、１０ｍｇ／ｋｇ  ｑ３ｄ×５で薬剤を腹腔内投与した。結果を図５および表１１〜１２に示す。
【表２９】
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【表３０】
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【０１５０】
８．追加の組み合わせ
８．１免疫刺激性ＣｐＧオリゴ（ＯＶＡワクチン）との組み合わせ
Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ、Ｓｕｌｚｆｅｌｄ製の９週齢の雌Ｃ５７Ｂｌ／６Ｎ  Ｃｒｌ  ＢＲマウス（体重１８〜２０ｇ）をＢ１６Ｆ１０  ＯＶＡ腫瘍モデルに使用した。このモデルは、抗原特異的Ｔ細胞によって認識することができるニワトリ同種抗原オボアルブミンを発現するＢ１６−Ｆ１０細胞株の派生物である。
【０１５１】
１３日間の順応期間後に実験を開始した。動物を１２時間の明／暗サイクルで飼育した。飼料および水は自由に入手可能とした。収容温度を２１℃で維持した。マウス（１群当たりｎ＝１２）に、１×１０４個のＢ１６−Ｆ１０  ＯＶＡ腫瘍細胞を左側腹部に皮下接種し、実験群に割り当てた。処置開始時に、動物に印を付け、各ケージにケージ番号、試験番号および１ケージ当たりの動物の数を表示した。
【０１５２】
５ｍｌ／ｋｇの施用体積でのアイソタイプ対照およびＢＡＹ１９０５２５４のインビボ投与の調整を、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋、ｐＨ７．４（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ）を含まないＤＰＢＳにストック溶液を希釈することによって達成した。８日目で開始して、１０ｍｇ／ｋｇ  ｑ３ｄ×３で薬剤を腹腔内投与した。９日目に、５０μｇ  ＯＶＡ（５０μｌ）＋１０μｇ  ＣＰＧ（１０μｌ）＋１４０μｌ  ＰＢＳ＝２００μｌ／マウスを、腫瘍に隣接する左側腹部に皮下施用した。ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、マウスＴＬＲ９に特異的なＯＤＮ  １８２６（５’−ｔｃｃａｔｇａｃｇｔｔｃｃｔｇａｃｇｔｔ−３’；塩基はホスホロチオエート／ヌクレアーゼ耐性）であった、使用した（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ番号ｔｌｒｌ−１８２６−５）。結果を図６および表１３〜１４に示す。
【表３１】
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【表３２】
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【０１５３】
８．２．ドセタキセルとの組み合わせ
Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ、Ｓｕｌｚｆｅｌｄ製の８週齢の雌Ｃ５７Ｂｌ／６Ｎ  Ｃｒｌ  ＢＲマウス（体重１８〜２０ｇ）をＢ１６−Ｆ１０  ＯＶＡ腫瘍モデルに使用した。このモデルは、抗原特異的Ｔ細胞によって認識することができる同種抗原オボアルブミンを発現するＢ１６Ｆ１０細胞株の派生物である。５日間の順応期間後に実験を開始した。動物を１２時間の明／暗サイクルで飼育した。飼料および水は自由に入手可能とした。収容温度を２１℃で維持した。マウス（１群当たりｎ＝１２）に、１×１０４個のＢ１６Ｆ１０  ＯＶＡ腫瘍細胞を左側腹部に皮下接種し、実験群に割り当てた。処置開始時に、動物に印を付け、各ケージにケージ番号、試験番号および１ケージ当たりの動物の数を表示した。
【０１５４】
５ｍｌ／ｋｇの施用体積でのアイソタイプ対照およびＢＡＹ１９０５２５４のインビボ投与の調整を、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋、ｐＨ７．４（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ）を含まないＤＰＢＳにストック溶液を希釈することによって達成した。８日目で開始して、１０ｍｇ／ｋｇ  ｑ３ｄ×３で薬剤を腹腔内投与した。ドセタキセルを、８０ｍｇ／４ｍｌのストック溶液を注入目的で０．９％ＮａＣｌで希釈して、８日目に、２０ｍｇ／ｋｇで１回静脈内投与した。結果を図７および表１５〜１６に示す。
【表３３】
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【表３４】
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【０１５５】
８．３．Ｃ４．４Ａ  ＡＤＣとの組み合わせ
Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ、Ｓｕｌｚｆｅｌｄ製の９週齢の雌Ｂａｌｂ／ｃＡｎＮマウス（体重１８〜２０ｇ）をＣＴ２６  Ｃ４．４ａ腫瘍モデルに使用した。このモデルは、腫瘍細胞の表面でマウスＣ４．４ａを発現する親ＣＴ２６モデルの派生物である。
【０１５６】
１５日間の順応期間後に実験を開始した。動物を１２時間の明／暗サイクルで飼育した。飼料および水は自由に入手可能とした。収容温度を２１℃で維持した。
【０１５７】
マウス（１群当たりｎ＝１２）に、１×１０５個のＣＴ２６腫瘍細胞を左側腹部に皮下接種し、腫瘍接種後６日目に層別無作為化（腫瘍サイズが同じ分布の群にマウスを分割する方法）によって実験群に割り当てた。
【０１５８】
処置開始時に、動物に印を付け、各ケージにケージ番号、試験番号および１ケージ当たりの動物の数を表示した。１０ｍｌ／ｋｇの施用体積でのインビボ投与の調整を、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋、ｐＨ７．４（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ）を含まないＤＰＢＳにストック溶液を希釈することによって調製した。６日目で開始して、１０ｍｇ／ｋｇ  ｑ３ｄ×５で薬剤（対照＋ＢＡＹ  １９０５２５４）を腹腔内投与した。
【０１５９】
ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子受容体（ｕＰＡＲ）の構造的ホモログに対する抗体および腫瘍関連抗原であるＣ４．４ａで構成され、細胞傷害剤と結合されたＣ４．４Ａ  ＡＤＣ（抗体薬物複合体ＢＡＹ１１２９９８０）を、６日目で開始して１０ｍｇ／ｋｇ  ｑ４ｄｘ３で静脈内投与した。結果を図８および表１７〜１８に示す。
【表３５】
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【表３６】
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【０１６０】
配列
以下の表に示される配列は、本明細書で参照される。この表と、本明細書およびその開示の一部を形成するＷＩＰＯ標準配列表との間にあいまいさが存在する場合、この表の配列および修飾子を正しいものと見なすものとする。
【表３７】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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