(57)【要約】本発明は、喘息を処置するための方法およびプログアニルを含む組成物に関する。本発明は、パーキンソン病を処置するための方法およびプログアニルを含む組成物にも関する。2021536467.tif 000025
2021536467.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
喘息の処置を必要としている対象における喘息の処置方法であって、式1で表される化合物またはその薬学的に許容される塩と薬学的に許容される賦形剤とを含む薬学的組成物を該対象に投与する段階を含む、前記方法：
［式1］
2021536467.tif 000019
。
【請求項２】
前記組成物が式2で表される化合物またはその薬学的に許容される塩をさらに含む、請求項1記載の方法：
［式2］
2021536467.tif 000020
。
【請求項３】
喘息が、アレルゲン誘発性喘息、ウイルス誘発性喘息、寒冷誘発性喘息、汚染誘発性喘息および/または運動誘発性喘息である、請求項1または2記載の方法。
【請求項４】
前記組成物が対象に経口投与される、請求項1〜3のいずれか一項記載の方法。
【請求項５】
前記組成物が対象の体重1kgあたり0.001mg〜100mgの各化合物を含む、請求項1〜4のいずれか一項記載の方法。
【請求項６】
式1で表される化合物またはその薬学的に許容される塩と、式2で表される化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される賦形剤とを含む、薬学的組成物：
［式1］
2021536467.tif 000021
および
［式2］
2021536467.tif 000022
。
【請求項７】
経口投与に適している、請求項6記載の組成物。
【請求項８】
1mg〜1000mgの各化合物を含む、請求項6または7記載の組成物。
【請求項９】
パーキンソン病の処置を必要としている対象におけるパーキンソン病の処置方法であって、式1で表される化合物またはその薬学的に許容される塩と薬学的に許容される賦形剤とを含む薬学的組成物を該対象に投与する段階を含む、前記方法：
［式1］
2021536467.tif 000023
。
【請求項１０】
前記組成物が式2で表される化合物またはその薬学的に許容される塩をさらに含む、請求項9記載の方法：
［式2］
2021536467.tif 000024
。
【請求項１１】
前記組成物が対象に経口投与される、請求項9または10記載の方法。
【請求項１２】
前記組成物が対象の体重1kgあたり0.001mg〜100mgの各化合物を含む、請求項9〜11のいずれか一項記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本開示は、喘息を処置するための方法およびプログアニルを含む組成物に関する。本開示は、パーキンソン病を処置するための方法およびプログアニルを含む組成物にも関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
喘息は、気道過敏症および粘液閉塞によって特徴づけられる下気道の慢性炎症性疾患である。気管支喘息は、小児および若年成人に波及する最も一般的な慢性疾患である。喘息の遺伝的成分に関する強力な証拠がある（Bleecker et al., Am. J. Respir. Crit. Care. Med., 156: S113-6 (1997)（非特許文献1）；Kauffmann et al., Chest, 121 (3 Supp.): 27S (2002)（非特許文献2））。複数の環境因子が喘息の臨床発現ならびに喘息関連の表現型である気管支過敏症、萎縮およびIgEの上昇を調節することも公知である（Koppelman et al., Eur. Resp. J., 13: 2-4 (1999)（非特許文献3）；Cookson, Nature, 25: B5-11 (1999)（非特許文献4）；Holloway, Clin. Exp. Allergy, 29: 1023-1032 (1999)（非特許文献5））。
【０００３】
コルチゾールの薬理学的類縁体（例えば、プレドニゾン）は1948年から臨床的に使用されており、喘息を含む様々な炎症性疾患処置のためのケアの標準のままである。これらのグルココルチコイド（GC）は、喘息の中心である病的炎症を軽減し、その抗炎症効果を通じて臨床喘息症状を制御すると考えられている（Expert Panel Report 3 (EPR-3): Guidelines for the Diagnosis and Management of Asthma-Summary Report 2007. J Allergy Clin. Immunol. 2007, 120:S94-138（非特許文献6））。喘息を処置するための改善された方法がいまだに必要とされている。
【０００４】
パーキンソン病は、筋肉が硬く不活発となり、動きが鈍く困難になって、筋肉群の制御不能な律動的攣縮が特徴的なふるえまたは振戦を生じる、随意運動の障害である。この状態は、脳内のシナプス前ドーパミン作動性ニューロンの変性によって引き起こされると考えられている。ニューロン活動中の化学伝達物質ドーパミンの十分な放出がないことにより、パーキンソン症候群の総体的症状が起こる。
【０００５】
パーキンソン症候群に対して最も広く使用されている処置は、L-ドーパ、すなわち失われたドーパミンに置き換わることによって間接的に作用するドーパミン前駆体の投与である。しかし、L-ドーパの使用には欠点が伴い、例えば、患者は運動障害およびオンオフ効果などの副作用に悩まされることが多く、L-ドーパをカルビドパまたはベンザセリド（benzaseride）などの末梢ドーパデカルボキシラーゼ阻害剤と共に投与する必要がある。これらの阻害剤は、末梢でのレボドーパのドーパミンへの分解を防ぎ、したがってより多くの薬物が脳に入ることを可能にし、末梢の副作用を制限する。このような処置は、患者の生活の質を改善するが、疾患の進行を停止させるものではない。さらに、このような処置は、悪心、嘔吐、腹部膨満および精神医学的副作用（例えば、中毒性の錯乱状態、妄想症、幻覚）を含む、いくつかの副作用を伴う。パーキンソン病の改善された処置がなお必要とされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Bleecker et al., Am. J. Respir. Crit. Care. Med., 156: S113-6 (1997)
【非特許文献２】Kauffmann et al., Chest, 121 (3 Supp.): 27S (2002)
【非特許文献３】Koppelman et al., Eur. Resp. J., 13: 2-4 (1999)
【非特許文献４】Cookson, Nature, 25: B5-11 (1999)
【非特許文献５】Holloway, Clin. Exp. Allergy, 29: 1023-1032 (1999)
【非特許文献６】Expert Panel Report 3 (EPR-3): Guidelines for the Diagnosis and Management of Asthma-Summary Report 2007. J Allergy Clin. Immunol. 2007, 120:S94-138
【発明の概要】
【０００７】
本明細書において開示するのは、喘息の処置を必要としている対象における喘息の処置方法であって、式1で表される化合物またはその薬学的に許容される塩と薬学的に許容される賦形剤とを含む薬学的組成物を対象に投与する段階を含む、前記方法である：
［式1］
2021536467.tif 000003
。
【０００８】
方法のいくつかの態様において、組成物は式2で表される化合物またはその薬学的に許容される塩をさらに含む：
［式2］
2021536467.tif 000004
。
【０００９】
喘息は、アレルゲン誘発性喘息、ウイルス誘発性喘息、寒冷誘発性喘息、汚染誘発性喘息および/または運動誘発性喘息であり得るが、これらに限定されない。
【００１０】
喘息の処置法のいくつかの態様において、組成物は対象に経口投与される。喘息の処置法のいくつかの態様において、組成物は対象の体重1kgあたり0.001mg〜100mgの各化合物を含む。
【００１１】
同様に本明細書において開示するのは、式1で表される化合物またはその薬学的に許容される塩と、式2で表される化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される賦形剤とを含む、薬学的組成物である：
［式1］
2021536467.tif 000005
および
［式2］
2021536467.tif 000006
。
【００１２】
いくつかの態様において、組成物は対象への経口投与に適している。いくつかの態様において、組成物は1mg〜1000mgの各化合物を含む。
【００１３】
同様に本明細書において開示するのは、パーキンソン病の処置を必要としている対象におけるパーキンソン病の処置方法であって、式1で表される化合物またはその薬学的に許容される塩と薬学的に許容される賦形剤とを含む薬学的組成物を対象に投与する段階を含む、前記方法である：
［式1］
2021536467.tif 000007
。
【００１４】
方法のいくつかの態様において、組成物は式2で表される化合物またはその薬学的に許容される塩をさらに含む：
［式2］
2021536467.tif 000008
。
【００１５】
パーキンソン病の処置法のいくつかの態様において、組成物は対象に経口投与される。パーキンソン病の処置法のいくつかの態様において、組成物は対象の体重1kgあたり0.001mg〜100mgの各化合物を含む。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図1は、A549肺癌細胞の生存に対するIPS-07004の効果を示す。
【図２】図2は、LPSによって誘導したA549肺癌細胞におけるIL-6およびIL-8の発現に対するIPS-07004の効果を示す。
【図３】図3は、IL-1βによって誘導したA549肺癌細胞におけるIL-6の発現に対するIPS-07004の効果を示す。
【図４】図4は、IL-1βによって誘導したA549肺癌細胞におけるIL-8の発現に対するIPS-07004の効果を示す。
【図５】図5は、LPSによって誘導したA549肺癌細胞におけるIL-6およびIL-8の発現に対するIPS-07004およびモンテルカストの併用処置の効果を示す。
【図６】図6は、IL-1βによって誘導したA549肺癌細胞におけるIL-6およびIL-8の発現に対するIPS-07004およびモンテルカストの併用処置の効果を示す。
【図７】図7は、マウスおよびHMC-1細胞におけるTSLP発現に対するIPS-07004の効果を示す。
【図８】図8は、肥満細胞数および血清IgEレベルに対するIPS-07004の阻害効果を示す。
【図９】図9は、HMC-1細胞におけるヒトカスパーゼ-1活性に対するIPS-07005の効果を示す。
【図１０】図10Aおよび10Bは、PMAによって誘導したHMC-1細胞におけるIL-6およびIL-8上の発現に対するIPS-07005の効果を示す。
【図１１】図11Aおよび11Bは、IL-1βによって誘導したA549肺癌細胞におけるIL-6およびIL-8の発現に対するIPS-07005の併用処置の効果を示す。
【図１２】図12は、OVA特異的IgE発現に対するIPS-07005の阻害効果を示す。
【図１３Ａ】図13Aおよび13Bは、気管支肺胞洗浄（BAL）液中の総細胞数および好酸球数に対するIPS-07005の阻害効果を示す。
【図１３Ｂ】図13Aおよび13Bは、気管支肺胞洗浄（BAL）液中の総細胞数および好酸球数に対するIPS-07005の阻害効果を示す。
【図１３Ｃ】図13Cは、好酸球の組織学的画像を示す。
【図１４】図14は、H＆E染色（100×）によって判定した、OVA誘導性の肺の組織学的変化に対するIPS-07005の効果を示す。
【図１５】図15Aおよび15Bは、杯細胞可視化のためにPASで染色した気道の組織学的画像を示す。
【図１６】図16Aおよび16Bは、BAL液中のIL17AおよびCXCL1の発現に対するIPS-07005の阻害効果を示す。
【図１７】図17Aおよび17Bは、BAL液中のCCL3およびCCL2の発現に対するIPS-07005の阻害効果を示す。
【図１８】図18は、パーキンソン病（PD）マウスの行動に対するIPS-07004の効果を示す。
【図１９】図19は、PD脳の線条体および黒質におけるチロシンヒドロキシラーゼの発現に対するIPS-07005の効果を示す。
【図２０】図20は、PD脳におけるIL-1βの発現に対するIPS-07005の効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
発明の詳細な説明
プログアニルは、クロログアニドとしても公知で、肝臓によって、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（DHFR）の阻害剤であるその活性代謝物、シクログアニルに変換されるプロドラッグである。本開示は、式1で表される化合物またはその薬学的に許容される塩を含む組成物を提供する：
［式1］
2021536467.tif 000009
。
【００１８】
組成物は、モンテルカスト（商品名シングレア）、すなわち式2で表される化合物またはその薬学的に許容される塩をさらに含み得る：
［式2］
2021536467.tif 000010
。
【００１９】
モンテルカストは、喘息の維持処置のため、および季節性アレルギーの症状を軽減するために使用される、ロイコトリエン受容体アンタゴニスト（LTRA）である。モンテルカストはCysLT1アンタゴニストであり；肺および気管支におけるシステイニルロイコトリエン受容体CysLT1に結合することにより、受容体上のロイコトリエンD4（および第二のリガンドLTC4およびLTE4）の作用を阻止する。これは、そうでなければロイコトリエンによって引き起こされる気管支収縮を低減させて、炎症を軽減することになる。
【００２０】
モンテルカストは、喘息、運動誘発気管支痙攣、アレルギー性鼻炎、原発性月経困難症（すなわち、公知の原因に関連しない月経困難症；月経困難症の原因を参照）、および蕁麻疹を含む、いくつかの状態に対して使用される。成人において、吸入コルチコステロイドが単独では所望の効果をもたらさない場合、これらに加えてモンテルカストを主に補完療法として使用される。また、静脈内免疫グロブリンの投与中にアレルギー反応および喘息の再発を防止するためにも使用される。
【００２１】
本明細書に開示する組成物は、プログアニル、プログアニルとモンテルカスト、またはプログアニルと他の抗喘息剤、例えばジロートン、ザフィルルカスト、硫酸テルブタリン、およびアルブテロールを含み得る。本明細書に開示する組成物は、プログアニル、モンテルカストおよびパーキンソン病を処置するための他の薬剤、例えばL-ドーパ、カルビドパ、および/またはベンゾセリドも含み得る。
【００２２】
本明細書に開示する化合物の薬学的に許容される塩には、リチウム（Li）、ナトリウム（Na）、カリウム（K）、カルシウム（Ca）、マグネシウム（Mg）、鉄（Fe）、銅（Cu）、亜鉛（Zn）、およびマンガン（Mn）などの無機塩基から誘導される塩；N,N'-ジアセチルエチレンジアミン、グルカミン、トリエチルアミン、塩素、水酸化物、ジシクロヘキシルアミン、メトホルミン、ベンジルアミン、トリアルキルアミン、チアミン、およびその等価物などの有機塩基の塩；アルキルフェニルアミン、グリシノール、フェニルグリシノールおよびその等価物などのキラル塩基；グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、ノルロイシン、チロシン、シスチン、システイン、メチオニン、プロリン、ヒドロキシルプロリン、ヒスチジン、オルニチン、リジン、アルギニン、セリン、およびその等価物などの天然アミノ酸塩；ハロゲン化アルキル、MeI、および(Me)2SO4ならびにその等価物などのアルキル硫酸を有する本開示の化合物の四級アンモニウム塩；D-異性体、置換アミノ酸などの人工アミノ酸；グアニジンや、ニトロ、アミノ、アルキル、アルケニル、およびアルキニルから選択されるもので置換されたグアニン、アンモニウムまたは置換アンモニウム塩、ならびにアルミニウム塩が含まれる。塩には酸付加塩が含まれ得、適切な塩の例には、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、過塩素酸塩、ホウ酸塩、ハロゲン化水素酸塩、酢酸塩、酒石酸塩、マリエート（maliate）、クエン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、パルモエート（palmoate）、メタンスルホン酸塩、安息香酸塩、サリチル酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、アスコルビン酸塩、グリセロリン酸塩、ケトグルタル酸塩、およびその等価物が含まれる。薬学的に許容される溶媒化合物には、水酸化物またはアルコールなどの結晶化溶媒が含まれる。
【００２３】
塩形態に加えて、本開示はプロドラッグ形態の化合物を提供する。本明細書に記載の化合物のプロドラッグは、生理的条件下で容易に化学変化を起こして本開示の化合物を提供する化合物である。加えて、プロドラッグは、エクスビボ環境において化学的または生化学的方法により本開示の化合物に変換することができる。例えば、プロドラッグは、適切な酵素または化学試薬と共に経皮パッチレザバーに入れると、本開示の化合物にゆっくり変換され得る。プロドラッグは、いくつかの状況では、親薬物よりも投与が容易であり得るため、有用であることが多い。プロドラッグは、例えば、経口投与によって生体利用可能であり得るが、親薬物はそうではない。プロドラッグはまた、薬学的組成物中で親薬物よりも改善された溶解性を有し得る。プロドラッグの加水分解切断または酸化的活性化に依存するものなどの、様々なプロドラッグ誘導体が当技術分野において公知である。プロドラッグの例は、限定されないが、エステル（「プロドラッグ」）として投与するが、次いで活性実体であるカルボン酸に代謝的に加水分解される、本開示の化合物である。追加の例には、本開示の化合物のペプチジル誘導体が含まれる。
【００２４】
本開示の一定の化合物は、非溶媒和形態ならびに水和形態を含む溶媒和形態で存在し得る。一般に、溶媒和形態は非溶媒和形態と等価であり、本開示の範囲内に含まれることが意図される。本開示の一定の化合物は、複数の結晶または非晶質形態で存在し得る。一般に、すべての物理的形態は、本開示によって企図される使用のために等価であり、本開示の範囲内であることが意図される。
【００２５】
本開示の一定の化合物は、不斉炭素原子（光学中心）または二重結合を有し；ラセミ体、鏡像異性体、ジアステレオマー、幾何異性体および個々の異性体はすべて、本開示の範囲内に含まれることが意図される。これらの異性体は、通常の方法を用いて分割または不斉合成して、異性体を「光学的に純粋」、すなわち、実質的に他の異性体を含まないようにすることができる。例えば、本開示の化合物の特定の鏡像異性体が望まれる場合、これは不斉合成によって、またはキラル補助剤による誘導によって調製することができ、ここで得られたジアステレオマー混合物を分離し、補助基を切断して、純粋な所望の鏡像異性体を提供する。または、分子がアミノなどの塩基性官能基、またはカルボキシルなどの酸性官能基を含む場合、適切な光学活性酸または塩基とジアステレオマー塩を形成し、続いてそのように形成したジアステレオマーを当技術分野において周知の分別結晶化またはクロマトグラフィー手段によって分割し、その後に純粋な鏡像異性体を回収する。
【００２６】
組成物
同様に本明細書において開示するのは、式1で表される化合物またはその薬学的に許容される塩と、式2で表される化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される賦形剤とを含む、薬学的組成物である：
［式1］
2021536467.tif 000011
および
［式2］
2021536467.tif 000012
。
【００２７】
いくつかの態様において、組成物は、対象への経口投与に適している。いくつかの態様において、組成物は、1mg〜1000mgの各化合物を含む。
【００２８】
いくつかの局面において、本開示は、本開示の1つまたは複数の化合物および薬学的に許容される賦形剤または担体を含む、薬学的使用に適した薬学的組成物を提供する。本明細書に開示する組成物は、プログアニル、プログアニルとモンテルカスト、またはプログアニルと他の抗喘息剤、例えばジロートン、ザフィルルカスト、硫酸テルブタリン、およびアルブテロールを含み得る。本明細書に開示する組成物は、プログアニル、モンテルカストおよびパーキンソン病を処置するための他の薬剤、例えばL-ドーパ、カルビドパ、および/またはベンゾセリドも含み得る。
【００２９】
本明細書において用いられる「薬学的に許容される」または「薬理学的に許容される」とは、適宜、動物、またはヒトに投与した場合に、有害、アレルギー性または他の不都合な反応を生じない、分子実体および組成物を意味する。
【００３０】
「薬学的に許容される賦形剤または担体」なる用語は、デンプン、ポリオール、造粒剤、微結晶セルロース、希釈剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤などを含む、1つまたは複数の不活性賦形剤、ならびに任意およびすべての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌および抗真菌剤、等張および吸収遅延剤などを含む。薬学的活性物質に対するこのような媒質および作用物質の使用は、当技術分野において周知である。任意の通常の媒質または作用物質が活性成分と不適合でない限り、治療組成物におけるその使用が企図される。補助的活性成分も、組成物に組み込むことができる。「薬学的に許容される賦形剤」は、制御放出手段も包含する。
【００３１】
製剤は、本開示の化合物または化合物の組み合わせ（本明細書において活性成分と呼ぶ）の1つまたは複数の薬物動態特性（例えば、経口バイオアベイラビリティ、膜透過性）を改善することができる。
【００３２】
剤形の組成、形状、および種類は、典型的にはその適用に応じて変動し得る。例えば、粘膜投与に適した剤形は、同じ疾患を処置する際に用いる経口投与に適した剤形の場合よりも少ない量の活性成分を含むことができる。本開示のこれらの局面は、当業者にはかなり明白であろう（参照：Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) 18th ed., Mack Publishing, Easton PA）。
【００３３】
典型的な薬学的組成物および剤形は、1つまたは複数の賦形剤を含む。適切な賦形剤は、薬学分野の当業者には明らかであり、本開示は本明細書に記載の適切な賦形剤の例に限定されない。
【００３４】
特定の賦形剤が薬学的組成物または剤形に適切であるかどうかは、患者に投与される製剤の配合法を含む、当技術分野において周知の様々な因子に依存するが、それらに限定されない。例えば、錠剤などの経口投与用の剤形は、非経口投与用の製剤における使用に適切でない賦形剤を含むことができる。
【００３５】
薬学的組成物には、エアロゾル、肺、吸入、経口、非経口（皮下、皮内、筋肉内、静脈内および関節内を含む）、直腸および局所（皮膚、口腔、舌下および眼内を含む）投与に適したものが含まれる。最も適切な経路は、受容者の状態および障害に依存し得る。組成物は、単位剤形で都合よく提示することができ、薬学の技術分野において周知の任意の方法によって調製することができる。一般に、組成物は、活性成分を液体担体もしくは微粉化固体担体または両方と均一かつ密接に混合し、次いで、必要に応じて、生成物を所望の組成物に成形することによって調製する。
【００３６】
本開示の組成物は、他の治療成分、抗固化剤、保存剤、甘味剤、着色剤、着香剤、乾燥剤、可塑剤、色素などを任意に含むこともできる。任意のそのような成分は、当然のことながら、組成物の安定性を確保するために開示の化合物と適合性でなければならない。
【００３７】
活性剤は、単独または他の適切な構成要素と組み合わせて、気管内注入（注射器による肺への液剤の送達）、リポソームの気管内送達、吹送法（注射器または任意の他の類似の器具による粉末組成物の肺への投与）およびエアロゾル吸入を含むが、それらに限定されない、いくつかの技術を利用して肺経路によって投与することができる。肺経路吸入に適した組成物には、水性食塩溶液に溶解した治療的有効量の化合物を含み、かつ塩化ベンザルコニウムまたはクロロブタノールなどの保存剤を任意に含む、噴霧療法用の滅菌液剤、および適切な噴射剤中に溶解または懸濁した治療的有効量を含むエアロゾル組成物が含まれる。エアロゾル（例えば、ジェットまたは超音波ネブライザー、定量吸入器（MDI）、および乾燥粉末吸入器（DPI））を鼻腔内適用において使用することもできる。エアロゾルは、単位剤形で都合よく提示し、薬学の技術分野において周知の任意の方法によって調製することができる。エアロゾル組成物は、気体媒質中の固体材料および液滴の安定な分散体または懸濁体であり、ヒドロフルオロアルカン（HFA、すなわち、HFA-134aおよびHFA-227、またはその混合物）、ジクロロジフルオロメタン（またはPropellant 11、12、および/もしくは114の混合物などの他のフロン噴射剤）、プロパン、窒素などの、加圧が許容される噴射剤中に入れることができる。肺組成物は、脂肪酸、および糖類などの浸透増強剤、キレート化剤、酵素阻害剤（例えば、プロテアーゼ阻害剤）、補助剤（例えば、グリココール酸塩、サーファクチン、スパン85、およびナファモスタット）、保存剤（例えば、塩化ベンザルコニウムまたはクロロブタノール）、ならびにエタノール（通常は最大5重量％であるが、場合によっては最大20重量％）を含むことができる。エタノールは、計量バルブの機能を改善し、場合によっては分散体の安定性も改善させ得るため、エアロゾル組成物に含まれることがよくある。肺組成物は界面活性剤を含むこともでき、これらには胆汁酸ならびに米国特許第6,524,557号およびその参照文献に記載のものが含まれるが、それらに限定されない。米国特許第6,524,557号に記載の界面活性剤、例えば、C8-C16脂肪酸塩、胆汁酸、リン脂質、またはアルキル糖は、それらのいくつかも組成物中の化合物の吸収を増強すると報告されているため、有利である。
【００３８】
同様に適切であるのは、適切な担体と混和し、乾燥粉末吸入器に関連しての使用に適合させた、治療的有効量の活性化合物を含む、乾燥粉末組成物である。本開示の乾燥粉末組成物に添加し得る吸収増強剤には、米国特許第6,632,456号に記載のものが含まれる。WO02/080884は、粉末の表面改変のための新しい方法を記載している。エアロゾル組成物には、米国特許第5,230,884号、米国特許第5,292,499号、WO017/8694、WO01/78696、US2003019437、US20030165436、およびWO96/40089（植物油を含む）が含まれ得る。吸入に適した持続放出組成物は、US20010036481A1、US20030232019A1、およびUS20040018243A1ならびにWO01/13891、WO02/067902、WO03/072080、およびWO03/079885に記載されている。微粒子を含む肺組成物は、WO03/015750、US20030008013、およびWO00/00176に記載されている。安定なガラス状粉末を含む肺組成物は、US20020141945および米国特許第6,309,671号に記載されている。他のエアロゾル組成物は、EP1338272A1、WO90/09781、米国特許第5,348,730号、米国特許第6,436,367号、WO91/04011、および米国特許第6,294,153号に記載されており、また米国特許第6,290,987号は、エアロゾルまたは他の手段を介して投与し得るリポソーム系組成物を記載している。吸入用の粉末組成物は、US20030053960およびWO01/60341に記載されている。薬剤は、US20010038824に記載されているとおり、鼻腔内に投与することができる。
【００３９】
肺経路はほとんどの場合に有利であるが、他の投与経路が有利であり得る場合もある。例えば、経口投与が望ましいこともある。それに関して、米国特許第5,811,127号に記載のとおり、化合物が修飾アミノ酸によって放出可能に封入されている組成物を用いての投与を企図することができる。また、US20040115236に記載されているものなどの、埋め込み型の持続放出剤形としての投与を企図することもできる。
【００４０】
活性成分を含む薬学的組成物は、経口使用に適した形態、例えば、錠剤、トローチ、ロゼンジ、水性もしくは油性懸濁剤、分散性散剤もしくは粒剤、乳剤、硬もしくは軟カプセル剤、またはシロップ剤もしくはエリキシル剤であり得る。経口使用を意図した組成物は、薬学的組成物の製造のために当技術分野において公知の任意の方法に従って調製することができる。このような組成物は、薬学的にエレガントで味のよい製剤を提供するために、甘味剤、着香剤、着色剤および保存剤から選択される1つまたは複数の作用物質を含むことができる。錠剤は、活性成分を錠剤の製造に適した他の非毒性の薬学的に許容される賦形剤と混合して含む。これらの賦形剤は、例えば、不活性希釈剤、例えば炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウム；造粒および崩壊剤、例えば、コーンスターチ、またはアルギン酸；結合剤、例えば、デンプン、ゼラチンまたはアカシア、および滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクであり得る。錠剤はコーティングしなくてもよく、または胃腸管における崩壊および吸収を遅延させ、それによって長期間にわたる持続作用を提供する、公知の技術によってコーティングすることもできる。例えば、モノステアリン酸グリセリンまたはジステアリン酸グリセリンなどの時間遅延材料を利用することができる。また、米国特許第4,256,108号；第4,160,452号；および第4,265,874号に記載の技術によってコーティングして、制御放出のための浸透性治療用錠剤を形成することもできる。
【００４１】
錠剤は、任意に1つまたは複数の補助成分と共に、圧縮または成形により作製することができる。圧縮錠は、任意に結合剤、滑沢剤、不活性希釈剤、潤滑剤、表面活性剤または分散剤と混合して、粉末または顆粒などの流動性形態の活性成分を、適切な機械で圧縮することにより調製することができる。成形錠は、不活性液体希釈剤で湿らせた粉末化合物の混合物を、適切な機械で成形することにより作製することができる。錠剤は、任意にコーティングする、または割線を入れることができ、その中の活性成分の持続、遅延または制御放出を提供するように製剤することができる。
【００４２】
経口用組成物は、その中で活性成分を不活性固体希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリンと混合するゼラチン硬カプセル剤として、あるいはその中で活性成分を水または油性媒質、例えば、ピーナッツ油、流動パラフィン、もしくはオリーブ油と混合するゼラチン軟カプセル剤として提示することもできる。
【００４３】
水性懸濁剤は、水性懸濁剤の製造に適した賦形剤との混合物で活性材料を含む。このような賦形剤は、懸濁化剤、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピル-メチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴムおよびアカシアゴムであり；分散剤または湿潤剤は、天然ホスファチド、例えばレシチン、またはアルキレンオキシドの脂肪酸との縮合生成物、例えば、ポリオキシエチレンステアレート、またはエチレンオキシドの長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物、例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール、またはエチレンオキシドの脂肪酸およびヘキシトールから誘導される部分エステルとの縮合生成物、例えばポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート、またはエチレンオキシドの脂肪酸およびヘキシトール無水物から誘導される部分エステルとの縮合生成物、例えばポリエチレンソルビタンモノオレエートであり得る。水性懸濁剤は、1つまたは複数の保存剤、例えば、p-ヒドロキシ安息香酸エチルまたはp-ヒドロキシ安息香酸n-プロピル、1つまたは複数の着色剤、1つまたは複数の着香剤、およびショ糖またはサッカリンなどの1つまたは複数の甘味剤を含むこともできる。
【００４４】
水の添加による水性懸濁剤の調製に適した分散性粉末および顆粒は、分散または湿潤剤、懸濁化剤および1つまたは複数の保存剤との混合物で活性成分を提供する。適切な分散または湿潤剤および懸濁化剤は、すでに前述したものによって例示される。追加の賦形剤、例えば甘味剤、着香剤および着色剤も存在し得る。
【００４５】
薬学的組成物は、滅菌注射用水性または油性懸濁剤の形態であり得る。この懸濁剤は、前述の適切な分散または湿潤剤および懸濁化剤を用い、公知の技術に従って製剤することができる。滅菌注射用製剤は、非毒性の非経口で許容される希釈剤または溶媒中の滅菌注射用液剤または懸濁剤、例えば1,3-ブタンジオール中の液剤であってもよい。使用することができる許容される媒体および溶媒の中には、水、リンゲル液および等張塩化ナトリウム溶液がある。加えて、滅菌不揮発性油は通常、溶媒または懸濁媒として用いられる。このために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む、任意の非刺激性不揮発性油を用いることができる。加えて、オレイン酸などの脂肪酸は、注射剤の調製において有用である。
【００４６】
本開示の薬学的組成物および方法は、喘息、アレルギー性疾患、および炎症状態の処置において有用な、本明細書に記載の他の治療活性化合物をさらに含むことができる。多くの場合、本明細書に開示の化合物および代替薬剤を含む組成物は、投与すると相加または相乗効果を有する。
【００４７】
本開示の化合物の投与のための薬学的組成物は、単位剤形で都合よく提示することができ、当技術分野において周知の任意の方法で調製することができる。すべての方法は、活性成分を1つまたは複数の補助成分を構成する担体と混合する段階を含む。一般に、薬学的組成物は、活性成分を液体担体もしくは微粉化固体担体または両方と均一かつ密接に混合し、次いで、必要に応じて、生成物を所望の組成物に成形することによって調製する。薬学的組成物中、活性目的化合物は、疾患のプロセスまたは状態に対して所望の効果を生じるのに十分な量で含まれる。
【００４８】
使用方法
「対象」または「患者」なる用語は、本明細書において、霊長類（例えば、ヒトまたは非ヒト）、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウスなどを含むが、それらに限定されない、哺乳動物などの動物を含むと定義される。いくつかの態様において、対象はヒトである。
【００４９】
本明細書において用いられる「予防する」、「予防すること」および「予防」なる用語は、疾患および/もしくはその付随する症状の発症を遅延させる、もしくは防止する、対象が疾患を獲得するのを妨げる、または対象が疾患を獲得するリスクを低減する方法を指す。
【００５０】
本明細書において用いられる「処置する」、「処置すること」および「処置」なる用語は、疾患もしくは状態および/またはその付随する症状を緩和、低減、または撤廃すること、ならびに疾患自体の原因を緩和、低減、または根絶することを含むことを意味する。
【００５１】
「治療的有効量」なる用語は、研究者、獣医師、医師または他の臨床家が求めている、組織、系、動物またはヒトの生物学的または医学的応答を誘発する対象化合物の量を指す。「治療的有効量」なる用語は、投与した場合に、処置中の状態または障害の1つまたは複数の症状の発生を予防する、またはある程度緩和するのに十分な、化合物の量を含む。治療的有効量は、化合物、疾患およびその重症度、ならびに処置する哺乳動物の年齢、体重などに応じて変動することになる。
【００５２】
本明細書において開示するのは、喘息の処置を必要としている対象における喘息の処置方法であって、式1で表される化合物またはその薬学的に許容される塩と薬学的に許容される賦形剤とを含む薬学的組成物を対象に投与する段階を含む、前記方法である：
［式1］
2021536467.tif 000013
。
【００５３】
同様に本明細書において開示するのは、喘息の処置を必要としている対象における喘息の処置方法であって、式1で表される化合物またはその薬学的に許容される塩と、式2で表される化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される賦形剤とを含む、薬学的組成物を、対象に投与する段階を含む、前記方法である：
［式1］
2021536467.tif 000014
および
［式2］
2021536467.tif 000015
。
【００５４】
同様に開示するのは、喘息の処置を必要としている対象における喘息の処置方法であって、プログアニルと他の抗喘息剤、例えばジロートン、ザフィルルカスト、硫酸テルブタリン、およびアルブテロールを含む薬学的組成物を対象に投与する段階を含む、前記方法である。喘息の予防および/または処置法には、アレルゲン誘発性喘息、ウイルス誘発性喘息、寒冷誘発性喘息、汚染誘発性喘息および/または運動誘発性喘息が含まれる。
【００５５】
喘息の処置法のいくつかの態様において、組成物は対象に経口投与される。喘息の処置法のいくつかの態様において、組成物は、対象の体重1kgあたり0.001mg〜100mgの各化合物を含む。
【００５６】
同様に本明細書において開示するのは、パーキンソン病の処置を必要としている対象におけるパーキンソン病の処置方法であって、式1で表される化合物またはその薬学的に許容される塩と薬学的に許容される賦形剤とを含む薬学的組成物を対象に投与する段階を含む、前記方法である：
［式1］
2021536467.tif 000016
。
【００５７】
同様に本明細書において開示するのは、パーキンソン病の処置を必要としている対象におけるパーキンソン病の処置方法であって、式1で表される化合物またはその薬学的に許容される塩と、式2で表される化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される賦形剤とを含む、薬学的組成物を、対象に投与する段階を含む、前記方法である：
［式1］
2021536467.tif 000017
および
［式2］
2021536467.tif 000018
。
【００５８】
パーキン病の処置法のいくつかの態様において、組成物は対象に経口投与される。パーキンソン病の処置法のいくつかの態様において、組成物は、対象の体重1kgあたり0.001mg〜100mgの各化合物を含む。
【００５９】
処置する疾患および対象の状態に応じて、本開示の化合物を、エアロゾル、肺、吸入、経口、非経口（例えば、筋肉内、腹腔内、静脈内、ICV、大槽内注射または注入、皮下注射または埋め込み）、吸入、鼻腔、膣、直腸、舌下、または局所（例えば、経皮、局部）投与経路によって投与することができ、各投与経路に適した通常の非毒性の薬剤的に許容される担体、補助剤および媒体を含む適切な用量単位組成物に、単独または一緒に製剤することができる。本開示は、活性成分が規定の期間にわたって放出される、デポー組成物中の本開示の化合物の投与も企図する。
【００６０】
成人ヒトに対する活性成分またはその薬学的に許容される塩の用量範囲は、一般には約0.005mg/日〜約10g/日、約1mg/日〜約1,000mg/日、約10mg/日〜約750m/日、約50mg/日〜約500mg/日、または約75mg/日〜約350mg/日である。個別の単位で提供される錠剤または他の提示形態は、そのような用量で、またはその複数として、例えば、5mg〜500mg、通常は約10mg〜200mgを含む単位で有効な、本開示の化合物の量を都合よく含み得る。患者に投与する化合物の正確な量は、主治医の責任となる。しかし、用いる用量は、患者の年齢および性別、処置中の正確な障害、およびその重症度を含む、いくつかの因子に依存する。
【００６１】
喘息の処置または予防において、適切な用量レベルは、一般には1日に患者の体重1kgあたり約0.001〜100mgであり、これは単一または複数用量で投与することができる。用量レベルは、約0.01mg/kg/日〜約75mg/kg/日または約0.05mg/kg/日〜約20mg/kg/日であり得る。適切な用量レベルは、約0.01mg/kg/日〜約50mg/kg/日、約0.05mg/kg/日〜約20mg/kg/日、または約0.1mg/kg/日〜約10mg/kg/日であり得る。この範囲内で、用量は0.01mg/kg/日〜0.1mg/kg/日、0.1mg/kg/日〜1mg/kg/日、1mg/kg/日〜10mg/kg/日であり得る。経口投与の場合、組成物を、処置する患者への用量を症状に合わせて調節するために、1mg、5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、50mg、75mg、100mg、150mg、200mg、250mg、300mg、400mg、500mg、600mg、750mg、800mg、900mg、および1000mgの活性成分などであるが、それらに限定されない、1mg〜1000mgの活性成分を含む、錠剤の形態で提供することができる。化合物は、1日に1〜4回、例えば、1日に1回、2回、3回、または4回の投与計画で投与することができる。
【００６２】
同様に、パーキンソン病の処置または予防において、適切な用量レベルは、一般には1日に患者の体重1kgあたり約0.001〜100mgであり、これは単一または複数用量で投与することができる。用量レベルは、約0.01mg/kg/日〜約75mg/kg/日または約0.05mg/kg/日〜約20mg/kg/日であり得る。適切な用量レベルは、約0.01mg/kg/日〜約50mg/kg/日、約0.05mg/kg/日〜約20mg/kg/日、または約0.1mg/kg/日〜約10mg/kg/日であり得る。この範囲内で、用量は0.01mg/kg/日〜0.1mg/kg/日、0.1mg/kg/日〜1mg/kg/日、1mg/kg/日〜10mg/kg/日であり得る。経口投与の場合、組成物を、処置する患者への用量を症状に合わせて調節するために、1mg、5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、50mg、75mg、100mg、150mg、200mg、250mg、300mg、400mg、500mg、600mg、750mg、800mg、900mg、および1000mgの活性成分などであるが、それらに限定されない、1mg〜1000mgの活性成分を含む、錠剤の形態で提供することができる。化合物は、1日に1〜4回、例えば、1日に1回、2回、3回、または4回の投与計画で投与することができる。
【００６３】
いくつかの態様において、プログアニルまたはモンテルカストの用量を、約0.1mg/日〜約1000mg/日、約1mg/日〜約1000mg/日、約2.5mg/日〜約100mg/日、約5mg/日〜約50mg/日、約10mg/日〜約750mg/日、約50mg/日〜約500mg/日、または約75mg/日〜約350mg/日などの、この範囲内の任意およびすべての変動を含む、約0.05mg/日〜約1000mg/日で提供する。
【００６４】
いくつかの態様において、モンテルカストは、口で摂取する錠剤、咀嚼錠、および粒剤として提供する。モンテルカストは、食物と共に、または食物なしで、1日1回摂取することができる。モンテルカストは、モンテルカストナトリウムの5.2mgがモンテルカストの5mgと等価である、モンテルカストナトリウムとして投与することができる。
【００６５】
しかし、任意の特定の患者に対する具体的な用量レベルおよび投与頻度は変動し得、使用する具体的化合物の活性、その化合物の代謝安定性および作用の長さ、年齢、体重、全身の健康、性別、食事、投与の様式および時間、排出速度、薬物の併用、特定の状態の重症度、ならびに治療を受けている宿主を含む、様々な因子に依存することが理解されるであろう。
【００６６】
本開示の化合物は、本開示の化合物が有用である疾患または状態の処置、予防、抑制または改善において有用な他の薬剤と組み合わせる、または併用することができる。
【００６７】
そのような他の作用物質、または薬物は、それに対して一般に使用される経路および量で、本開示の化合物と同時または逐次に投与することができる。本開示の化合物を1つまたは複数の他の薬物と同時に使用する場合、本開示の化合物に加えてそのような他の薬物を含む薬学的組成物が好ましい。したがって、本開示の薬学的組成物には、本開示の化合物に加えて、1つまたは複数の他の活性成分または治療剤も含むものが含まれる。
【００６８】
本開示の化合物の第2の活性成分に対する重量比は変動し得、各成分の有効用量に依存することになる。一般に、それぞれの有効用量を使用する。したがって、例えば、本開示の化合物をNSAIDと併用する場合、本開示の化合物のNSAIDに対する重量比は一般に約1000：1〜約1：1000、または約200：1〜約1：200の範囲となる。本開示の化合物と他の活性成分との併用も、一般には前述の範囲内にあるが、それぞれの場合に、各活性成分の有効用量を使用すべきである。
【００６９】
以下に、本開示を以下の非限定例を参照してさらに詳細に記載する。しかしながら、これらの例は例示のために提供するにすぎず、本開示の範囲を限定するものではない。
【実施例】
【００７０】
実施例1. インビトロ細胞生存度検定（MTT）
IPS-07004（プログアニル）をKey Organics（London, UK）から購入した。
【００７１】
A549肺癌細胞（1×103/ウェル）を96穴プレートに播種し、16時間放置した。24時間の飢餓培養の後、細胞をLPSまたはIL-1bで4時間前処理した。次いで、細胞をIPS-07004により用量依存的様式で24時間処理した。48時間のインキュベーション後、MTT［3-(4,5-ジメチルチアゾル-2-イル)-2,5-ジフェニル-テトラゾリウムブロミド］溶液（5mg/ml）を各ウェルに、全量の1/10の量で加え、細胞を37℃で2時間インキュベートした。
【００７２】
IPS-07004で処理したA549細胞の生存率を調べるために、MTTを用いてインビトロ細胞生存度検定を実施した。細胞をLPS（リポ多糖）およびIL-1β（インターロイキン-1β）で誘導した場合、生存度に対するIPS-07004の効果はほとんど、またはまったくなかった（図1）。
【００７３】
実施例2. IL-6およびIL-8の酵素結合免疫吸着検定法（ELISA）
A549細胞（1×105/ウェル）を96穴プレートに播種し、16時間放置した。24時間の飢餓培養の後、細胞をLPSまたはIL-1βで4時間前処理した。次いで、細胞をIPS-07004により用量依存的様式で24時間処理した。培地中のサイトカインレベル（IL-6およびIL-8）を、製造者の仕様書（BD Biosciences Pharmingen, San Diego, CA, USA）に従って分析した。
【００７４】
IPS-07004が、喘息の病理において重大な役割を果たすIL-6およびIL-8の発現を阻害するかどうかを評価するために、A549細胞におけるサイトカインのELISAを用いた。
【００７５】
IPS-07004は、LPS（図2）およびIL-1β（図3および4）によって誘導したA549細胞におけるIL-6およびIL-8の発現レベルを、用量依存的様式で低減させた。これらのデータは、IPS-07004が喘息を処置するために適用可能であることを示している。
【００７６】
実施例3. LPSまたはIL-1βによって誘導したA549肺癌細胞におけるIL-6およびIL-8の発現に対するIPS-07004およびモンテルカストの併用処理の効果
モンテルカスト（抗喘息剤）と併用したIPS-07004の抗喘息機能に対する相乗効果を調べるために、A549細胞におけるサイトカイン発現検定を実施した。
【００７７】
IPS-07004のモンテルカストとの併用は、モンテルカスト単独での処理に比べて、LPS（図5）およびIL-1β（図6）によって誘導したA549細胞におけるIL-6およびIL-8の発現を抑制する際により有効のようであった。これらのデータは、IPS-07004が喘息を処置するためのモンテルカストとの併用療法に使用可能であることを示している。
【００７８】
実施例4. IPS-07005の化合物プロファイル
適応症：喘息
作用標的の様式：NLRP3インフラマソーム誘導性カスパーゼ-1阻害剤
リード材料：IPS-07004
組成：IPS-07004 10mg/kg（mpk）＋モンテルカスト1.0mpk
開発段階：第I相
【００７９】
図7は、HMC-1細胞およびDNCB（2,4-ジニトロクロロベンゼン）マウスにおけるカスパーゼ-1活性およびTSLP（胸腺間質性リンパ球新生因子）発現に対するIPS-07004の阻害効果を示す。
【００８０】
図8は、肥満細胞数および血清IgEレベルに対するIPS-07004の阻害効果を示す。
【００８１】
実施例5. 喘息に対するIPS-07005の阻害効果−インビトロ細胞アッセイ
結果
HMC-1（ヒト肥満細胞株）細胞アッセイの使用では、IPS-07005（（IPS-07004＋モンテルカスト）は、図9に示すとおり、インフラマソームの重大な構成要素であるカスパーゼ-1の活性を阻害して、Pro-TSLP、IL-1β、および-IL-18の活性体への変換を抑制した。
【００８２】
IPS-07004単独では、HMC-1細胞におけるカスパーゼ-1活性を用量依存的様式で阻害し、IPS-07005は相乗効果を提供した。
【００８３】
図10は、PMA（ホルボール 12-ミリスタート 13-アセタート）およびカルシウムイオノフォア（C1）、A23187によって誘導したHMC-1細胞におけるIL-6およびIL-8の発現に対するIPS-07005の効果を示す。HCM-1細胞において、IPS-07005は、IPS-07004、モンテルカスト単独またはデキサメタゾンに比べて、IL-6およびIL-8の発現を阻害した。
【００８４】
IPS-07005が、喘息の病理において重大な役割を果たすIL-6およびIL-8の発現を阻害するかどうかを評価するために、A549肺癌細胞におけるサイトカインのELISAを用いた。IPS-07005は、IL-1β（図11）によって誘導したA549細胞におけるIL-6およびIL-8の発現レベルを、用量依存的様式で低減させた。A549細胞（ヒト肺癌細胞）において、IPS-07005は、IPS-07004、モンテルカスト単独、またはデキサメタゾンに比べて、IL-6およびIL-8の発現を阻害した。
【００８５】
これらのデータは、IPS-07005が喘息を処置するために適用可能であることを示している。
【００８６】
実施例6. 喘息に対するIPS-07005の阻害効果−インビボ動物データ
図12は、OVA特異的IgE発現に対するIPS-07005の阻害効果を示す。IPS-07005（IPS-07004 10mpk＋モンテルカスト1mpk）は、気管支肺胞洗浄液（BALF）中のOVA誘導性IgEレベルの有意な低減を示した。
【００８７】
図13Aおよび13Bは、気管支肺胞洗浄（BAL）液中の総細胞数および好酸球数に対するIPS-07005の阻害効果を示す。図13Cは、IPS-07004またはIPS-07005で処理した場合の、OVA曝露細胞中の好酸球数の低下を示す。BALF試料中の炎症細胞の分析により、OVA感作によって総細胞数は有意に増加することが明らかとなった。しかし、IPS-07005での処理により、総細胞数は低減した。具体的には、IPS-07005の投与は、OVA曝露群に比べて対応する群のBALF中の総細胞数および好酸球数も有意に低減させた（図13Aおよび13B）。
【００８８】
図14は、H＆E染色（100×）によって判定した、OVA誘導性の肺の組織学的変化に対するIPS-07005の効果を示す。図14は、杯細胞可視化のためにPASで染色した気道の組織学的画像を示す。肺切片をPAS（過ヨウ素酸シッフ反応）で染色して、杯細胞過形成のレベルを評価した。本発明者らは、3つの群間で、紫の領域、すなわち、PASで染色された肺組織の領域のサイズに顕著な差を観察した。本発明者らは、OVA曝露マウスの気道（bronchial passages）における杯細胞過形成および粘液生産過剰を認めた。しかし、本発明者らは、OVA曝露群よりもIPS-07005および高用量のモンテルカスト処置群で有意に低い杯細胞数を認めた（図15Aおよび15B）。
【００８９】
図16は、BAL液中のIL17AおよびCXCL1の発現に対するIPS-07005の阻害効果を示す。図17は、BAL液中のCCL3およびCCL2の発現に対するIPS-07005の阻害効果を示す。
【００９０】
喘息を有するマウスのサイトカインレベルに対するIPS-07005の抗喘息効果を判定するために、BAL液中のIL-17A、CXCL1、CCL2、およびCCL3産生を測定した。OVAへの曝露は、健常群マウスに比べて、BAL液中のIL-17A、CXCL1、CCL2、およびCCL3の著しい増加を引き起こした（図16および17）。しかし、OVA曝露マウスにおいて、OVA曝露後のBAL液中の、好中球浸潤において重要な役割を果たすIL-17A、CXCL1のレベルは、IPS-07005存在下では低減した（図16）。
【００９１】
この結果は、IPS-07005が、好中球性喘息を抑制し得ることを強く示唆するものであった。これは、喘息処置のためのまだ対処されていない医学的要求である。BAL液中のマクロファージ活性において重要な役割を果たすCCL2およびCCL3のレベルは、IPS-07005によって低減した（図17）。IPS-07005は、IPS-07004またはモンテルカストに比べて、これらのサイトカインの発現を低減させる上でより有効のようであった。これらのサイトカインの発現に対するIPS-07005の阻害効果は、IPS-07004およびモンテルカストの相乗的機能による。まとめると、これらの知見は、IPS-07005の抗炎症効果は複数の炎症因子の制御によって仲介されることを示している。
【００９２】
方法
25mgのオボアルブミン（OVA）および1mgの水酸化アルミニウム水和物（AlOH3）を300mLの滅菌食塩溶液に溶解し、第0日および第21日に腹腔内投与により感作した。観察期間終了時に、すべての生存動物をイソフルランを用いて麻酔し、大静脈/腹部大動脈から血液を採取した。肺を摘出し、滅菌食塩溶液で洗浄した。250mLの滅菌食塩水を1mLのシリンジに充填し、注入および回収を3回繰り返した。洗浄溶液を軽く遠心分離し（300rpm、10分）、上清を凍結してCXCL1（ab216951, Abcam PLC）IL-17A（ab199081, Abcam PLC）およびCCL3（ab100726, Abcam PLC）の分析に用いた。沈澱を同量の滅菌食塩溶液に再懸濁し、好酸球数および総細胞数のために用いた。採取した血液を室温で30分間放置し、3,000rpmで20分間遠心分離して血清を分離し、総IgEおよびOva特異的IgE分析に用いた。病理組織学的検査を、ホルマリン中で固定した肺組織を用いて実施した。剖検時に摘出した肺組織をカセットに入れ、組織体積の少なくとも20倍の10％中性緩衝ホルマリン（10％NBF）中に浸漬した。固定後、組織を厚さ約4mmに切断し、一般的な組織処理および包埋後にパラフィンブロックに製作した。その後、回転式ミクロトームを用いて切片を厚さ4μmに切断し、ヘマトキシリン＆エオシン（H&E）染色およびPAS染色を実施した。
【００９３】
実施例7. パーキンソン病の阻害
方法
1-メチル-4-フェニル-1,2,3,6-テトラヒドロピリジン（MPTP）中毒のために、マウスにPBSに溶解したMPTP-HCl（20mg/kg、食塩水中の遊離塩基；Sigma-Aldrich, St. Louis, MO）の腹腔内（i.p.）注射を2時間間隔で4回投与した。最後のMPTP注射の12時間後、MPTP注射マウスにIPS-07004、モンテルカスト、またはIPS-07005を1日1回、p.o.投与した。
【００９４】
PDマウスの異常な行動に対するIPS-07004の効果を調べるために、ポール試験（T-ターンおよびT-LA時間）を実施した。MPTP（20mg/kg、IP）で処置したマウスでPDを誘導し、マウスにIPS-07004を10mg/kgの用量で投与した。次いで、マウスで、パーキンソン病の特徴である動作緩慢を測定することができる、ポール試験を実施した。T-ターンは黒マウスがポールの最上部から下向きに向きを変える時間を測定する。図18に示すとおり、IPS-07004は、MPTP処置対照群およびL-ドーパ処置群に比べて、T-ターンおよびT-LA時間を低減させた。
【００９５】
PDマウスにおけるIPS-07004およびIPS-07005の抗PD機能を判定するために、本発明者らは、PD脳の線条体および黒質におけるチロシンヒドロキシラーゼ（TH）の発現を分析した。図19に示すとおり、脳の免疫組織化学的分析により、THレベルは、IPS-07004およびIPS-07005処置マウスでは、MPTP処置対照群およびL-ドーパ処置群に比べて低減することが判明した。
【００９６】
IPS-07004およびIPS-07005の抗PD機能がPD脳の炎症の阻害によるのかどうかを評価するために、サイトカイン発現の分析を実施した。図20に示すとおり、IPS-07004およびIPS-07005はPDマウスにおけるIL-1b発現を低減させた。
【００９７】
具体的な態様の前述の記載は、本発明の一般的性質を十分明らかにするため、他者は、当技術分野の範囲内の知識を応用することにより、本発明の一般的概念から逸脱することなく、様々な適用のために容易に改変する、および/または適合させることができる。したがって、そのような適合および改変は、本明細書において提示する教示および指標に基づき、開示する態様の等価物の意味および範囲に含まれることになる。本明細書における術語および用語は、本明細書の術語および用語が教示および指標に照らして当業者によって解釈されるように、説明するためのものであって、限定するものではないことが理解されるべきである。
【００９８】
本発明の幅および範囲は、前述の例示的態様のいずれによっても限定されるべきではなく、添付の特許請求の範囲およびそれらの等価物によってのみ定義されるべきである。
【００９９】
本明細書に記載の様々な局面、態様、および選択肢はすべて、任意およびすべての変更において組み合わせることができる。
【０１００】
本明細書において言及するすべての出版物、特許、および特許出願は、それぞれ個々の出版物、特許、および特許出願が具体的かつ個別に参照により本明細書に組み入れられるのと同程度に、参照により本明細書に組み入れられる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【国際調査報告】
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