(57)【要約】本開示は、定義される活性剤及び／又は免疫調節剤の、リンパ節への又はリンパ系組織における類脂質細胞への標的化送達に関する。より詳細には、本発明は、定義される活性剤又は免疫調節剤の、リンパ節への又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞への標的化送達のための方法であって、それを必要とする対象に活性剤又は免疫調節剤、１種又は複数の脂質ベースの構造体、及び疎水性担体を含む組成物を投与するステップを含む、方法を提供する。【選択図】  図５
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
活性剤のリンパ節への又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞への標的化送達のための方法であって、それを必要とする対象に
ａ）低分子薬；抗体、抗体模倣物、又はそれらのうちのいずれか１つの機能的等価物若しくは機能的断片；或いはそれらの混合物である、活性剤、
ｂ）１種又は複数の脂質ベースの構造体、及び
ｃ）疎水性担体
を含む組成物を投与するステップを含む、方法。
【請求項２】
組成物が無水である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
リンパ系組織がリンパ節である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
リンパ系組織が脾臓、胸腺、又は粘膜関連リンパ組織である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項５】
活性剤がリンパ節における免疫細胞に送達される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
免疫細胞がＴリンパ球、Ｂリンパ球、又は両方である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
活性剤が樹状細胞又はマクロファージによってリンパ節に又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞に送達される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
活性剤が組成物の投与部位又はその付近の樹状細胞又はマクロファージに送達される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
活性剤が主要組織適合複合体（ＭＨＣ）クラスＩタンパク質、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質、又は両方を直接結合しない、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
活性剤がＭＨＣクラスＩタンパク質を直接結合しない、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
活性剤がリンパ節又はリンパ球様細胞にインタクトで送達される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
活性剤がＴリンパ球の表面のチェックポイント受容体を結合する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
活性剤が免疫調節剤である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
活性剤がシャトルである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
活性剤が低分子薬である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
低分子薬が約２０００ダルトン又は２０００ダルトン未満の分子量を有する、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
低分子薬が、細胞傷害性剤、抗腫瘍剤、化学療法剤、抗新生物剤、抗ウイルス剤、抗菌剤、抗炎症剤、免疫調節剤、免疫応答チェックポイント剤、生物学的応答修飾物質、プロドラッグ、サイトカイン、ケモカイン、ビタミン、ステロイド、リガンド、鎮痛薬、放射性医薬、放射性同位元素、又は視覚的検出のための色素である、請求項１５又は１６に記載の方法。
【請求項１８】
活性剤が、エパカドスタット、ラパマイシン、ドキソルビシン、バルプロ酸、ミトキサントロン、ボリノスタット、シクロホスファミド、イリノテカン、シスプラチン、メトトレキセート、タクロリムス、又はそれらのうちのいずれか１つの薬学的に許容できる塩である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
活性剤がエパカドスタットである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
活性剤がシクロホスファミドである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
活性剤がラパマイシンである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
活性剤が、抗体、抗体模倣物、又はそれらのうちのいずれか１つの機能的等価物若しくは機能的断片である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
活性剤が抗ＣＴＬＡ−４抗体である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
抗ＣＴＬＡ−４抗体が、イピリムマブ、トレメリムマブ、ＢＮ−１３、ＵＣ１０−４Ｆ１０−１１、９Ｄ９、又は９Ｈ１０である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
活性剤が抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
抗ＰＤ−１抗体が、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、ピジリズマブ、ＡＭＰ−２２４、ＲＭＰ１−４、又はＪ４３であり、抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、又はデュルバルマブである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
活性剤が、ペプチドアプタマー、アフィマー、アフィリン、アフィボディ、アフィチン、アルファボディ、アンチカリン、アビマー、ダルピン、フィノマー、クニッツドメインペプチド、モノボディ、ナノクランプ、親和性試薬、足場タンパク質、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆａｂ２、Ｆａｂ３、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｄａｂ、エビボディ、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、又は単一ドメイン抗体（ナノボディ）である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２８】
活性剤が、成分（ｂ）及び（ｃ）のうちの１つ又は両方を含まない組成物において投与される場合、対象における全身送達を呈する、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
免疫調節剤のリンパ節への又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞への標的化送達のための方法であって、それを必要とする対象に
ａ）免疫調節剤、
ｂ）１種又は複数の脂質ベースの構造体、及び
ｃ）疎水性担体
を含む組成物を投与するステップを含む、方法。
【請求項３０】
組成物が無水である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
リンパ系組織がリンパ節である、請求項２９又は３０に記載の方法。
【請求項３２】
リンパ系組織が脾臓、胸腺、又は粘膜関連リンパ組織である、請求項２９又は３０に記載の方法。
【請求項３３】
免疫調節剤がリンパ節における免疫細胞に送達される、請求項２９〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
免疫細胞がＴリンパ球、Ｂリンパ球、又は両方である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
免疫調節剤が樹状細胞又はマクロファージによってリンパ節に又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞に送達される、請求項２９〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
活性剤が組成物の投与部位又はその付近の樹状細胞又はマクロファージに送達される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
免疫調節剤がリンパ節又はリンパ球様細胞にインタクトで送達される、請求項２９〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
免疫調節剤がＴリンパ球の表面のチェックポイント受容体を結合する、請求項２９〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
免疫調節剤が、抗原又は免疫原によって活性化する種類の免疫応答を上方制御、下方制御、又は再プログラミングする、請求項２９〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
免疫調節剤が、低分子薬；抗体、抗体模倣物、又はそれらのうちのいずれか１つの機能的等価物若しくは機能的断片；或いはそれらの混合物である、請求項２９〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
免疫調節剤が、エパカドスタット、ラパマイシン、ドキソルビシン、バルプロ酸、ミトキサントロン、ボリノスタット、シクロホスファミド、イリノテカン、シスプラチン、メトトレキセート、タクロリムス、抗ＣＴＬＡ−４抗体、又は抗ＰＤ−１抗体である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
免疫調節剤が、成分（ｂ）及び（ｃ）のうちの１つ又は両方を含まない組成物において投与される場合、対象における全身送達を呈する、請求項２９〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
１種又は複数の脂質ベースの構造体が単層脂質集合体を有する、請求項１〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
単層脂質集合体を有する１種又は複数の脂質ベースの構造体が、脂質の疎水部が疎水性担体に向かって外向きに配向し、脂質の親水部が中心部分として凝集している脂質の凝集体を含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
単層脂質集合体を有する１種又は複数の脂質ベースの構造体が逆ミセルを含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
脂質ベースの構造体のサイズが直径約２ｎｍ〜約１０ｎｍの間である、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
疎水性担体が鉱油であるか又は鉱油溶液中のオレイン酸マンニドである、請求項１〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
疎水性担体がモンタニド（登録商標）ＩＳＡ５１である、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
投与が注射によるものである、請求項１〜４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
投与が皮下、筋肉内、又は腹腔内注射によるものである、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
対象における免疫応答を調節するためのものである、請求項１〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
対象における疾患又は障害を処置又は防止するためのものである、請求項１〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
疾患又は障害が感染性疾患又は癌である、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
ａ）低分子薬；抗体、抗体模倣物、又はそれらのうちのいずれか１つの機能的等価物若しくは機能的断片；或いはそれらの混合物である、活性剤、
ｂ）１種又は複数の脂質ベースの構造体、及び
ｃ）疎水性担体
を含む組成物の使用であって、活性剤を対象のリンパ節に又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞にターゲティングするための、使用。
【請求項５５】
ａ）免疫調節剤、
ｂ）１種又は複数の脂質ベースの構造体、及び
ｃ）疎水性担体
を含む組成物の使用であって、免疫調節剤を対象のリンパ節に又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞にターゲティングするための、使用。
【請求項５６】
対象における免疫応答を調節するためのものである、請求項５４又は５５に記載の使用。
【請求項５７】
対象における疾患又は障害の処置又は防止のためのものである、請求項５４又は５５に記載の使用。
【請求項５８】
疾患又は障害が感染性疾患又は癌である、請求項５７に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
[001]本出願は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる、２０１８年３月２０日に出願された米国特許仮出願第６２／６４５，２４９号の利益及び優先権を主張する。
【０００２】
[002]本出願は、活性剤（例えば低分子薬及び抗体）並びに免疫調節剤の、リンパ節への又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞への標的化送達のための方法及び組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
[003]薬物、低分子、及び抗体は、癌及び感染性疾患を含む多くの異なる種類の疾患及び障害のための潜在的な療法として活発に調査されている。大半の医薬は低分子−強力で、構造的に定義されており、一般に費用効果が高い−である。
【０００４】
[004]一般に、低分子、薬物、及び抗体は経口錠剤又は静脈内（ＩＶ）注射として投与される。これらの投与経路は、低分子、薬物、又は抗体の全身送達をもたらす。多くの免疫調節剤は、樹状細胞又はＴ細胞等の一定の免疫細胞に対して主に活性であり、免疫調節剤を全身投与することは、より低い有効性及び潜在的なオフターゲット毒性をもたらすことがある。
【０００５】
[005]標的化療法の様々な手法は長年にわたり開発されている。１つの手法は、活性剤を抗体等のターゲティング剤にカップリングすることである。抗体は、より多くの活性剤がｉｎ  ｖｉｖｏにおいて必要である場所に局在化することができるように活性剤の体内分布を変化させるために使用される。抗体の代替として、ターゲティングリガンドにコンジュゲートしたリポソームナノ粒子は、軽減した副作用で治療剤の選択的送達を実現する可能性のために注目を集めている。課題は、標的とした細胞型に関する十分な選択性を提供するリガンドを同定することである。免疫リポソームは、抗体をターゲティング剤として使用するが、期待に見合う治療指数を今日までもたらしていない。
【０００６】
[006]リンパ節は、多種多様な疾患及び障害における免疫細胞（例えば細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞）の初回刺激及び活性化のための主な部位であるため、薬物のリンパ節への標的化送達のための効果的な方法を開発することは不可欠である。薬物のリンパ節への及びリンパ系組織におけるリンパ球様細胞への標的化送達は、免疫及び癌療法の有効性を高める可能性を有する。標的化送達はまた、全身送達と比較して減少した投薬と、それに応じたオフターゲット毒性の軽減とを可能にし得る。
【０００７】
[007]したがって、有効性及び効能を高め、オフターゲット副作用を軽減する目的を有する、活性剤及び免疫調節剤のリンパ節への又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞への標的化送達のための新規且つ効果的な手段に関する必要性が当技術分野において存在する。
【発明の概要】
【０００８】
[008]ある実施形態では、本開示は、活性剤のリンパ節への又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞への標的化送達のための方法であって、それを必要とする対象に（ａ）低分子薬；抗体、抗体模倣物、又はそれらのうちのいずれか１つの機能的等価物若しくは機能的断片；或いはそれらの混合物である、活性剤、（ｂ）１種又は複数の脂質ベースの構造体、及び（ｃ）疎水性担体を含む組成物を投与するステップを含む、方法に関する。
【０００９】
[009]ある実施形態では、本開示は、免疫調節剤のリンパ節への又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞への標的化送達のための方法であって、それを必要とする対象に（ａ）免疫調節剤、（ｂ）１種又は複数の脂質ベースの構造体、及び（ｃ）疎水性担体を含む組成物を投与するステップを含む、方法に関する。
【００１０】
[0010]ある実施形態では、本明細書に開示される方法は、対象における免疫応答を調節するためのものである。
【００１１】
[0011]ある実施形態では、本明細書に開示される方法は、対象における疾患又は障害を処置又は防止するためのものである。
【００１２】
[0012]ある実施形態では、本開示は、（ａ）低分子薬；抗体、抗体模倣物、又はそれらのうちのいずれか１つの機能的等価物若しくは機能的断片；或いはそれらの混合物である、活性剤、（ｂ）１種又は複数の脂質ベースの構造体、及び（ｃ）疎水性担体を含む組成物の使用であって、活性剤を対象のリンパ節に又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞にターゲティングするための、使用に関する。
【００１３】
[0013]ある実施形態では、本開示は、（ａ）免疫調節剤、（ｂ）１種又は複数の脂質ベースの構造体、及び（ｃ）疎水性担体を含む組成物の使用であって、免疫調節剤を対象のリンパ節に又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞にターゲティングするための、使用に関する。
【００１４】
[0014]ある実施形態では、本明細書に開示される使用は、対象における免疫応答を調節するためのものである。
【００１５】
[0015]ある実施形態では、本明細書に開示される使用は、対象における疾患又は障害を処置又は防止するためのものである。
【００１６】
[0016]本発明の他の態様及び特徴は、添付の図面と関連する以下の説明のレビューにより、当業者に明らかとなるだろう。
【００１７】
[0017]本明細書の一部をなす添付の図面は、本発明の実施形態を例として例証するに過ぎない。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１Ａ】本発明によるＣＰＡ組成物（図１Ａ）、ＦＰ／ＤＮＡベースのポリＩ：Ｃ組成物（図１Ｂ）、本発明によるＣＰＡ／ＦＰ／ＤＮＡベースのポリＩ：Ｃ組成物（図１Ｃ）、ＦＰ／ＥＰＡ／ＤＮＡベースのポリＩ：Ｃ組成物（図１Ｄ）、及びＦＰ／抗ＣＴＬ−４／ＤＮＡベースのポリＩ：Ｃ組成物（図１Ｅ）の写真である。
【図１Ｂ】本発明によるＣＰＡ組成物（図１Ａ）、ＦＰ／ＤＮＡベースのポリＩ：Ｃ組成物（図１Ｂ）、本発明によるＣＰＡ／ＦＰ／ＤＮＡベースのポリＩ：Ｃ組成物（図１Ｃ）、ＦＰ／ＥＰＡ／ＤＮＡベースのポリＩ：Ｃ組成物（図１Ｄ）、及びＦＰ／抗ＣＴＬ−４／ＤＮＡベースのポリＩ：Ｃ組成物（図１Ｅ）の写真である。
【図１Ｃ】本発明によるＣＰＡ組成物（図１Ａ）、ＦＰ／ＤＮＡベースのポリＩ：Ｃ組成物（図１Ｂ）、本発明によるＣＰＡ／ＦＰ／ＤＮＡベースのポリＩ：Ｃ組成物（図１Ｃ）、ＦＰ／ＥＰＡ／ＤＮＡベースのポリＩ：Ｃ組成物（図１Ｄ）、及びＦＰ／抗ＣＴＬ−４／ＤＮＡベースのポリＩ：Ｃ組成物（図１Ｅ）の写真である。
【図１Ｄ】本発明によるＣＰＡ組成物（図１Ａ）、ＦＰ／ＤＮＡベースのポリＩ：Ｃ組成物（図１Ｂ）、本発明によるＣＰＡ／ＦＰ／ＤＮＡベースのポリＩ：Ｃ組成物（図１Ｃ）、ＦＰ／ＥＰＡ／ＤＮＡベースのポリＩ：Ｃ組成物（図１Ｄ）、及びＦＰ／抗ＣＴＬ−４／ＤＮＡベースのポリＩ：Ｃ組成物（図１Ｅ）の写真である。
【図１Ｅ】本発明によるＣＰＡ組成物（図１Ａ）、ＦＰ／ＤＮＡベースのポリＩ：Ｃ組成物（図１Ｂ）、本発明によるＣＰＡ／ＦＰ／ＤＮＡベースのポリＩ：Ｃ組成物（図１Ｃ）、ＦＰ／ＥＰＡ／ＤＮＡベースのポリＩ：Ｃ組成物（図１Ｄ）、及びＦＰ／抗ＣＴＬ−４／ＤＮＡベースのポリＩ：Ｃ組成物（図１Ｅ）の写真である。
【図２】１５μｇ／ｍＬのＣＰＡを含有する標準品のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。
【図３】本発明によるＣＰＡ組成物の製造から取得した、フリーズドライ後のＣＰＡ調製物の試料のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。
【図４】本発明によるＣＰＡ／ＦＰ／ポリＩ：Ｃ組成物の製造から取得した、フリーズドライ後のＣＰＡ調製物の試料のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。
【図５】ＦＰ抗原を含む注射剤を流出する鼠径リンパ節における総細胞数を示すグラフである。Ａ、Ｂ、Ｅ、及びＦ群は、ＦＰ抗原を含有する組成物を左側に注射され、左リンパ節細胞数が示される。Ｃ及びＤ群は、ＦＰ抗原を含有する組成物を右側に注射され、右リンパ節細胞数が示される。各群をＦ群と比較するスチューデントのｔ検定（対応なし、片側）によって実施された統計量、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１。
【図６Ａ】（Ａ）実験の処置の予定、（Ｂ）腫瘍成長、（Ｃ）生存期間、及び（Ｄ）実験の処置の間のマウスの体重を示す図である。ＤＰＸを皮下注射によって投与する。ＰＯとして表される経口投与。ＤＰＸ−ＦＰ／ＥＰＡ  ｍＣＰＡ（ＰＯ）とＤＰＸ−ＦＰ  ｍＣＰＡ（ＰＯ）ＥＰＡ（ＰＯ）とを比較するマンテル・コックスによる生存期間の統計量、＊ｐ＜０．０３３２。テューキーの多重比較検定を用いた二元配置分散分析による体重の統計量、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．０００５、及び線形回帰による腫瘍体積の統計量、＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊ｐ＜０．０００５。
【図６Ｂ】（Ａ）実験の処置の予定、（Ｂ）腫瘍成長、（Ｃ）生存期間、及び（Ｄ）実験の処置の間のマウスの体重を示す図である。ＤＰＸを皮下注射によって投与する。ＰＯとして表される経口投与。ＤＰＸ−ＦＰ／ＥＰＡ  ｍＣＰＡ（ＰＯ）とＤＰＸ−ＦＰ  ｍＣＰＡ（ＰＯ）ＥＰＡ（ＰＯ）とを比較するマンテル・コックスによる生存期間の統計量、＊ｐ＜０．０３３２。テューキーの多重比較検定を用いた二元配置分散分析による体重の統計量、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．０００５、及び線形回帰による腫瘍体積の統計量、＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊ｐ＜０．０００５。
【図６Ｃ】（Ａ）実験の処置の予定、（Ｂ）腫瘍成長、（Ｃ）生存期間、及び（Ｄ）実験の処置の間のマウスの体重を示す図である。ＤＰＸを皮下注射によって投与する。ＰＯとして表される経口投与。ＤＰＸ−ＦＰ／ＥＰＡ  ｍＣＰＡ（ＰＯ）とＤＰＸ−ＦＰ  ｍＣＰＡ（ＰＯ）ＥＰＡ（ＰＯ）とを比較するマンテル・コックスによる生存期間の統計量、＊ｐ＜０．０３３２。テューキーの多重比較検定を用いた二元配置分散分析による体重の統計量、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．０００５、及び線形回帰による腫瘍体積の統計量、＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊ｐ＜０．０００５。
【図６Ｄ】（Ａ）実験の処置の予定、（Ｂ）腫瘍成長、（Ｃ）生存期間、及び（Ｄ）実験の処置の間のマウスの体重を示す図である。ＤＰＸを皮下注射によって投与する。ＰＯとして表される経口投与。ＤＰＸ−ＦＰ／ＥＰＡ  ｍＣＰＡ（ＰＯ）とＤＰＸ−ＦＰ  ｍＣＰＡ（ＰＯ）ＥＰＡ（ＰＯ）とを比較するマンテル・コックスによる生存期間の統計量、＊ｐ＜０．０３３２。テューキーの多重比較検定を用いた二元配置分散分析による体重の統計量、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．０００５、及び線形回帰による腫瘍体積の統計量、＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊ｐ＜０．０００５。
【図７Ａ】（Ａ）実験の処置の予定、（Ｂ）研究０〜７２日目までモニタリングされたマウスの生存期間、及び（Ｃ）研究０〜７２日目までモニタリングされたマウスにおける腫瘍体積（ｍｍ３）を示す図である。生存期間統計分析は、マンテル・コックス検定を使用して実施された、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊ｐ＜０．０５。腫瘍体積統計分析は、線形回帰比較によって実施された、＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【図７Ｂ】（Ａ）実験の処置の予定、（Ｂ）研究０〜７２日目までモニタリングされたマウスの生存期間、及び（Ｃ）研究０〜７２日目までモニタリングされたマウスにおける腫瘍体積（ｍｍ３）を示す図である。生存期間統計分析は、マンテル・コックス検定を使用して実施された、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊ｐ＜０．０５。腫瘍体積統計分析は、線形回帰比較によって実施された、＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【図７Ｃ】（Ａ）実験の処置の予定、（Ｂ）研究０〜７２日目までモニタリングされたマウスの生存期間、及び（Ｃ）研究０〜７２日目までモニタリングされたマウスにおける腫瘍体積（ｍｍ３）を示す図である。生存期間統計分析は、マンテル・コックス検定を使用して実施された、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊ｐ＜０．０５。腫瘍体積統計分析は、線形回帰比較によって実施された、＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【図８Ａ】（Ａ）研究１６及び３０日目にＩｇＧ２ｂ＋である、血液中のＣＤ３＋Ｔ細胞の％、並びに（Ｂ）研究１６及び３０日目にＩｇＧ２ｂ＋である、血液中のＣＤ８＋Ｔ細胞の％を示すグラフである。Ｔ細胞に結合したマウスＩｇＧ２ｂに関してフローサイトメトリーによって評価された、研究１６（ｎ＝４）及び３０（ｎ＝４、無処置ｎ＝２）日目に収集した血液試料。テューキーの多重比較検定を用いた二元配置分散分析によって実施された統計量、＊ｐ＜０．０５、＊＊＊ｐ＜０．００１。
【図８Ｂ】（Ａ）研究１６及び３０日目にＩｇＧ２ｂ＋である、血液中のＣＤ３＋Ｔ細胞の％、並びに（Ｂ）研究１６及び３０日目にＩｇＧ２ｂ＋である、血液中のＣＤ８＋Ｔ細胞の％を示すグラフである。Ｔ細胞に結合したマウスＩｇＧ２ｂに関してフローサイトメトリーによって評価された、研究１６（ｎ＝４）及び３０（ｎ＝４、無処置ｎ＝２）日目に収集した血液試料。テューキーの多重比較検定を用いた二元配置分散分析によって実施された統計量、＊ｐ＜０．０５、＊＊＊ｐ＜０．００１。
【図９Ａ】（Ａ）抗ＣＴＬＡ−４に対する抗薬物抗体（ＡＤＡ）（抗ＣＴＬＡ−４被覆及び検出抗体）の検出、（Ｂ）ＩｇＧ２ｂアイソタイプ対照被覆抗体及び抗ＣＴＬＡ−４検出抗体を使用した対照ＥＬＩＳＡ、並びに（Ｃ）ＩｇＧ１アイソタイプ対照被覆抗体及び抗ＣＴＬＡ−４検出抗体を使用した対照ＥＬＩＳＡを示す図である。ＡＤＡ形成に関して架橋ＥＬＩＳＡによって評価された、注射の２８及び４２日後にマウスから収集した血清試料（ＤＰＸ−ＦＰ、ｍＣＰＡ（水）試料のうちの１つは４１日目に収集した）。統計的な差が、テューキーの多重比較検定を使用した二元配置分散分析によって検出された、＊ｐ＜０．０５。破線によって示される検出限界。
【図９Ｂ】（Ａ）抗ＣＴＬＡ−４に対する抗薬物抗体（ＡＤＡ）（抗ＣＴＬＡ−４被覆及び検出抗体）の検出、（Ｂ）ＩｇＧ２ｂアイソタイプ対照被覆抗体及び抗ＣＴＬＡ−４検出抗体を使用した対照ＥＬＩＳＡ、並びに（Ｃ）ＩｇＧ１アイソタイプ対照被覆抗体及び抗ＣＴＬＡ−４検出抗体を使用した対照ＥＬＩＳＡを示す図である。ＡＤＡ形成に関して架橋ＥＬＩＳＡによって評価された、注射の２８及び４２日後にマウスから収集した血清試料（ＤＰＸ−ＦＰ、ｍＣＰＡ（水）試料のうちの１つは４１日目に収集した）。統計的な差が、テューキーの多重比較検定を使用した二元配置分散分析によって検出された、＊ｐ＜０．０５。破線によって示される検出限界。
【図９Ｃ】（Ａ）抗ＣＴＬＡ−４に対する抗薬物抗体（ＡＤＡ）（抗ＣＴＬＡ−４被覆及び検出抗体）の検出、（Ｂ）ＩｇＧ２ｂアイソタイプ対照被覆抗体及び抗ＣＴＬＡ−４検出抗体を使用した対照ＥＬＩＳＡ、並びに（Ｃ）ＩｇＧ１アイソタイプ対照被覆抗体及び抗ＣＴＬＡ−４検出抗体を使用した対照ＥＬＩＳＡを示す図である。ＡＤＡ形成に関して架橋ＥＬＩＳＡによって評価された、注射の２８及び４２日後にマウスから収集した血清試料（ＤＰＸ−ＦＰ、ｍＣＰＡ（水）試料のうちの１つは４１日目に収集した）。統計的な差が、テューキーの多重比較検定を使用した二元配置分散分析によって検出された、＊ｐ＜０．０５。破線によって示される検出限界。
【図１０Ａ】フローサイトメトリーによって測定した、ワクチン流入領域鼠径リンパ節（ＬＮ；Ａ、Ｂ、Ｃ）、血液（Ｄ、Ｅ、Ｆ）、肝臓（Ｇ、Ｈ、Ｉ）、及び脾臓（Ｊ、Ｋ、Ｌ）における、エバンスブルー（ＥＶＢ）色素に関して陽性であるＣＤ１１ｂ＋マクロファージ（Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｊ）、ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞（Ｂ、Ｅ、Ｈ、Ｋ）、及びＣＤ３＋Ｔ細胞（Ｃ、Ｆ、Ｉ、Ｌ）の平均パーセント±ＳＥＭを経時的に示すグラフである。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、二元配置分散分析、対照である第３群と比較したテューキーの多重比較検定。
【図１０Ｂ】フローサイトメトリーによって測定した、ワクチン流入領域鼠径リンパ節（ＬＮ；Ａ、Ｂ、Ｃ）、血液（Ｄ、Ｅ、Ｆ）、肝臓（Ｇ、Ｈ、Ｉ）、及び脾臓（Ｊ、Ｋ、Ｌ）における、エバンスブルー（ＥＶＢ）色素に関して陽性であるＣＤ１１ｂ＋マクロファージ（Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｊ）、ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞（Ｂ、Ｅ、Ｈ、Ｋ）、及びＣＤ３＋Ｔ細胞（Ｃ、Ｆ、Ｉ、Ｌ）の平均パーセント±ＳＥＭを経時的に示すグラフである。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、二元配置分散分析、対照である第３群と比較したテューキーの多重比較検定。
【図１０Ｃ】フローサイトメトリーによって測定した、ワクチン流入領域鼠径リンパ節（ＬＮ；Ａ、Ｂ、Ｃ）、血液（Ｄ、Ｅ、Ｆ）、肝臓（Ｇ、Ｈ、Ｉ）、及び脾臓（Ｊ、Ｋ、Ｌ）における、エバンスブルー（ＥＶＢ）色素に関して陽性であるＣＤ１１ｂ＋マクロファージ（Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｊ）、ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞（Ｂ、Ｅ、Ｈ、Ｋ）、及びＣＤ３＋Ｔ細胞（Ｃ、Ｆ、Ｉ、Ｌ）の平均パーセント±ＳＥＭを経時的に示すグラフである。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、二元配置分散分析、対照である第３群と比較したテューキーの多重比較検定。
【図１０Ｄ】フローサイトメトリーによって測定した、ワクチン流入領域鼠径リンパ節（ＬＮ；Ａ、Ｂ、Ｃ）、血液（Ｄ、Ｅ、Ｆ）、肝臓（Ｇ、Ｈ、Ｉ）、及び脾臓（Ｊ、Ｋ、Ｌ）における、エバンスブルー（ＥＶＢ）色素に関して陽性であるＣＤ１１ｂ＋マクロファージ（Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｊ）、ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞（Ｂ、Ｅ、Ｈ、Ｋ）、及びＣＤ３＋Ｔ細胞（Ｃ、Ｆ、Ｉ、Ｌ）の平均パーセント±ＳＥＭを経時的に示すグラフである。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、二元配置分散分析、対照である第３群と比較したテューキーの多重比較検定。
【図１０Ｅ】フローサイトメトリーによって測定した、ワクチン流入領域鼠径リンパ節（ＬＮ；Ａ、Ｂ、Ｃ）、血液（Ｄ、Ｅ、Ｆ）、肝臓（Ｇ、Ｈ、Ｉ）、及び脾臓（Ｊ、Ｋ、Ｌ）における、エバンスブルー（ＥＶＢ）色素に関して陽性であるＣＤ１１ｂ＋マクロファージ（Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｊ）、ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞（Ｂ、Ｅ、Ｈ、Ｋ）、及びＣＤ３＋Ｔ細胞（Ｃ、Ｆ、Ｉ、Ｌ）の平均パーセント±ＳＥＭを経時的に示すグラフである。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、二元配置分散分析、対照である第３群と比較したテューキーの多重比較検定。
【図１０Ｆ】フローサイトメトリーによって測定した、ワクチン流入領域鼠径リンパ節（ＬＮ；Ａ、Ｂ、Ｃ）、血液（Ｄ、Ｅ、Ｆ）、肝臓（Ｇ、Ｈ、Ｉ）、及び脾臓（Ｊ、Ｋ、Ｌ）における、エバンスブルー（ＥＶＢ）色素に関して陽性であるＣＤ１１ｂ＋マクロファージ（Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｊ）、ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞（Ｂ、Ｅ、Ｈ、Ｋ）、及びＣＤ３＋Ｔ細胞（Ｃ、Ｆ、Ｉ、Ｌ）の平均パーセント±ＳＥＭを経時的に示すグラフである。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、二元配置分散分析、対照である第３群と比較したテューキーの多重比較検定。
【図１０Ｇ】フローサイトメトリーによって測定した、ワクチン流入領域鼠径リンパ節（ＬＮ；Ａ、Ｂ、Ｃ）、血液（Ｄ、Ｅ、Ｆ）、肝臓（Ｇ、Ｈ、Ｉ）、及び脾臓（Ｊ、Ｋ、Ｌ）における、エバンスブルー（ＥＶＢ）色素に関して陽性であるＣＤ１１ｂ＋マクロファージ（Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｊ）、ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞（Ｂ、Ｅ、Ｈ、Ｋ）、及びＣＤ３＋Ｔ細胞（Ｃ、Ｆ、Ｉ、Ｌ）の平均パーセント±ＳＥＭを経時的に示すグラフである。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、二元配置分散分析、対照である第３群と比較したテューキーの多重比較検定。
【図１０Ｈ】フローサイトメトリーによって測定した、ワクチン流入領域鼠径リンパ節（ＬＮ；Ａ、Ｂ、Ｃ）、血液（Ｄ、Ｅ、Ｆ）、肝臓（Ｇ、Ｈ、Ｉ）、及び脾臓（Ｊ、Ｋ、Ｌ）における、エバンスブルー（ＥＶＢ）色素に関して陽性であるＣＤ１１ｂ＋マクロファージ（Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｊ）、ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞（Ｂ、Ｅ、Ｈ、Ｋ）、及びＣＤ３＋Ｔ細胞（Ｃ、Ｆ、Ｉ、Ｌ）の平均パーセント±ＳＥＭを経時的に示すグラフである。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、二元配置分散分析、対照である第３群と比較したテューキーの多重比較検定。
【図１０Ｉ】フローサイトメトリーによって測定した、ワクチン流入領域鼠径リンパ節（ＬＮ；Ａ、Ｂ、Ｃ）、血液（Ｄ、Ｅ、Ｆ）、肝臓（Ｇ、Ｈ、Ｉ）、及び脾臓（Ｊ、Ｋ、Ｌ）における、エバンスブルー（ＥＶＢ）色素に関して陽性であるＣＤ１１ｂ＋マクロファージ（Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｊ）、ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞（Ｂ、Ｅ、Ｈ、Ｋ）、及びＣＤ３＋Ｔ細胞（Ｃ、Ｆ、Ｉ、Ｌ）の平均パーセント±ＳＥＭを経時的に示すグラフである。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、二元配置分散分析、対照である第３群と比較したテューキーの多重比較検定。
【図１０Ｊ】フローサイトメトリーによって測定した、ワクチン流入領域鼠径リンパ節（ＬＮ；Ａ、Ｂ、Ｃ）、血液（Ｄ、Ｅ、Ｆ）、肝臓（Ｇ、Ｈ、Ｉ）、及び脾臓（Ｊ、Ｋ、Ｌ）における、エバンスブルー（ＥＶＢ）色素に関して陽性であるＣＤ１１ｂ＋マクロファージ（Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｊ）、ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞（Ｂ、Ｅ、Ｈ、Ｋ）、及びＣＤ３＋Ｔ細胞（Ｃ、Ｆ、Ｉ、Ｌ）の平均パーセント±ＳＥＭを経時的に示すグラフである。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、二元配置分散分析、対照である第３群と比較したテューキーの多重比較検定。
【図１０Ｋ】フローサイトメトリーによって測定した、ワクチン流入領域鼠径リンパ節（ＬＮ；Ａ、Ｂ、Ｃ）、血液（Ｄ、Ｅ、Ｆ）、肝臓（Ｇ、Ｈ、Ｉ）、及び脾臓（Ｊ、Ｋ、Ｌ）における、エバンスブルー（ＥＶＢ）色素に関して陽性であるＣＤ１１ｂ＋マクロファージ（Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｊ）、ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞（Ｂ、Ｅ、Ｈ、Ｋ）、及びＣＤ３＋Ｔ細胞（Ｃ、Ｆ、Ｉ、Ｌ）の平均パーセント±ＳＥＭを経時的に示すグラフである。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、二元配置分散分析、対照である第３群と比較したテューキーの多重比較検定。
【図１０Ｌ】フローサイトメトリーによって測定した、ワクチン流入領域鼠径リンパ節（ＬＮ；Ａ、Ｂ、Ｃ）、血液（Ｄ、Ｅ、Ｆ）、肝臓（Ｇ、Ｈ、Ｉ）、及び脾臓（Ｊ、Ｋ、Ｌ）における、エバンスブルー（ＥＶＢ）色素に関して陽性であるＣＤ１１ｂ＋マクロファージ（Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｊ）、ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞（Ｂ、Ｅ、Ｈ、Ｋ）、及びＣＤ３＋Ｔ細胞（Ｃ、Ｆ、Ｉ、Ｌ）の平均パーセント±ＳＥＭを経時的に示すグラフである。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、二元配置分散分析、対照である第３群と比較したテューキーの多重比較検定。
【図１１Ａ】フローサイトメトリーによって測定した、ワクチン流入領域鼠径リンパ節（ＬＮ；Ａ、Ｂ、Ｃ）、血液（Ｄ、Ｅ、Ｆ）、肝臓（Ｇ、Ｈ、Ｉ）、及び脾臓（Ｊ、Ｋ、Ｌ）における、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８（ＡＦ４８８）色素に関して陽性であるＣＤ１１ｂ＋マクロファージ（Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｊ）、ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞（Ｂ、Ｅ、Ｈ、Ｋ）、及びＣＤ３＋Ｔ細胞（Ｃ、Ｆ、Ｉ、Ｌ）の平均パーセント±ＳＥＭを経時的に示すグラフである。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、二元配置分散分析、対照である第３群と比較したテューキーの多重比較検定。
【図１１Ｂ】フローサイトメトリーによって測定した、ワクチン流入領域鼠径リンパ節（ＬＮ；Ａ、Ｂ、Ｃ）、血液（Ｄ、Ｅ、Ｆ）、肝臓（Ｇ、Ｈ、Ｉ）、及び脾臓（Ｊ、Ｋ、Ｌ）における、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８（ＡＦ４８８）色素に関して陽性であるＣＤ１１ｂ＋マクロファージ（Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｊ）、ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞（Ｂ、Ｅ、Ｈ、Ｋ）、及びＣＤ３＋Ｔ細胞（Ｃ、Ｆ、Ｉ、Ｌ）の平均パーセント±ＳＥＭを経時的に示すグラフである。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、二元配置分散分析、対照である第３群と比較したテューキーの多重比較検定。
【図１１Ｃ】フローサイトメトリーによって測定した、ワクチン流入領域鼠径リンパ節（ＬＮ；Ａ、Ｂ、Ｃ）、血液（Ｄ、Ｅ、Ｆ）、肝臓（Ｇ、Ｈ、Ｉ）、及び脾臓（Ｊ、Ｋ、Ｌ）における、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８（ＡＦ４８８）色素に関して陽性であるＣＤ１１ｂ＋マクロファージ（Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｊ）、ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞（Ｂ、Ｅ、Ｈ、Ｋ）、及びＣＤ３＋Ｔ細胞（Ｃ、Ｆ、Ｉ、Ｌ）の平均パーセント±ＳＥＭを経時的に示すグラフである。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、二元配置分散分析、対照である第３群と比較したテューキーの多重比較検定。
【図１１Ｄ】フローサイトメトリーによって測定した、ワクチン流入領域鼠径リンパ節（ＬＮ；Ａ、Ｂ、Ｃ）、血液（Ｄ、Ｅ、Ｆ）、肝臓（Ｇ、Ｈ、Ｉ）、及び脾臓（Ｊ、Ｋ、Ｌ）における、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８（ＡＦ４８８）色素に関して陽性であるＣＤ１１ｂ＋マクロファージ（Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｊ）、ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞（Ｂ、Ｅ、Ｈ、Ｋ）、及びＣＤ３＋Ｔ細胞（Ｃ、Ｆ、Ｉ、Ｌ）の平均パーセント±ＳＥＭを経時的に示すグラフである。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、二元配置分散分析、対照である第３群と比較したテューキーの多重比較検定。
【図１１Ｅ】フローサイトメトリーによって測定した、ワクチン流入領域鼠径リンパ節（ＬＮ；Ａ、Ｂ、Ｃ）、血液（Ｄ、Ｅ、Ｆ）、肝臓（Ｇ、Ｈ、Ｉ）、及び脾臓（Ｊ、Ｋ、Ｌ）における、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８（ＡＦ４８８）色素に関して陽性であるＣＤ１１ｂ＋マクロファージ（Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｊ）、ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞（Ｂ、Ｅ、Ｈ、Ｋ）、及びＣＤ３＋Ｔ細胞（Ｃ、Ｆ、Ｉ、Ｌ）の平均パーセント±ＳＥＭを経時的に示すグラフである。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、二元配置分散分析、対照である第３群と比較したテューキーの多重比較検定。
【図１１Ｆ】フローサイトメトリーによって測定した、ワクチン流入領域鼠径リンパ節（ＬＮ；Ａ、Ｂ、Ｃ）、血液（Ｄ、Ｅ、Ｆ）、肝臓（Ｇ、Ｈ、Ｉ）、及び脾臓（Ｊ、Ｋ、Ｌ）における、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８（ＡＦ４８８）色素に関して陽性であるＣＤ１１ｂ＋マクロファージ（Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｊ）、ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞（Ｂ、Ｅ、Ｈ、Ｋ）、及びＣＤ３＋Ｔ細胞（Ｃ、Ｆ、Ｉ、Ｌ）の平均パーセント±ＳＥＭを経時的に示すグラフである。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、二元配置分散分析、対照である第３群と比較したテューキーの多重比較検定。
【図１１Ｇ】フローサイトメトリーによって測定した、ワクチン流入領域鼠径リンパ節（ＬＮ；Ａ、Ｂ、Ｃ）、血液（Ｄ、Ｅ、Ｆ）、肝臓（Ｇ、Ｈ、Ｉ）、及び脾臓（Ｊ、Ｋ、Ｌ）における、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８（ＡＦ４８８）色素に関して陽性であるＣＤ１１ｂ＋マクロファージ（Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｊ）、ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞（Ｂ、Ｅ、Ｈ、Ｋ）、及びＣＤ３＋Ｔ細胞（Ｃ、Ｆ、Ｉ、Ｌ）の平均パーセント±ＳＥＭを経時的に示すグラフである。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、二元配置分散分析、対照である第３群と比較したテューキーの多重比較検定。
【図１１Ｈ】フローサイトメトリーによって測定した、ワクチン流入領域鼠径リンパ節（ＬＮ；Ａ、Ｂ、Ｃ）、血液（Ｄ、Ｅ、Ｆ）、肝臓（Ｇ、Ｈ、Ｉ）、及び脾臓（Ｊ、Ｋ、Ｌ）における、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８（ＡＦ４８８）色素に関して陽性であるＣＤ１１ｂ＋マクロファージ（Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｊ）、ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞（Ｂ、Ｅ、Ｈ、Ｋ）、及びＣＤ３＋Ｔ細胞（Ｃ、Ｆ、Ｉ、Ｌ）の平均パーセント±ＳＥＭを経時的に示すグラフである。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、二元配置分散分析、対照である第３群と比較したテューキーの多重比較検定。
【図１１Ｉ】フローサイトメトリーによって測定した、ワクチン流入領域鼠径リンパ節（ＬＮ；Ａ、Ｂ、Ｃ）、血液（Ｄ、Ｅ、Ｆ）、肝臓（Ｇ、Ｈ、Ｉ）、及び脾臓（Ｊ、Ｋ、Ｌ）における、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８（ＡＦ４８８）色素に関して陽性であるＣＤ１１ｂ＋マクロファージ（Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｊ）、ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞（Ｂ、Ｅ、Ｈ、Ｋ）、及びＣＤ３＋Ｔ細胞（Ｃ、Ｆ、Ｉ、Ｌ）の平均パーセント±ＳＥＭを経時的に示すグラフである。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、二元配置分散分析、対照である第３群と比較したテューキーの多重比較検定。
【図１１Ｊ】フローサイトメトリーによって測定した、ワクチン流入領域鼠径リンパ節（ＬＮ；Ａ、Ｂ、Ｃ）、血液（Ｄ、Ｅ、Ｆ）、肝臓（Ｇ、Ｈ、Ｉ）、及び脾臓（Ｊ、Ｋ、Ｌ）における、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８（ＡＦ４８８）色素に関して陽性であるＣＤ１１ｂ＋マクロファージ（Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｊ）、ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞（Ｂ、Ｅ、Ｈ、Ｋ）、及びＣＤ３＋Ｔ細胞（Ｃ、Ｆ、Ｉ、Ｌ）の平均パーセント±ＳＥＭを経時的に示すグラフである。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、二元配置分散分析、対照である第３群と比較したテューキーの多重比較検定。
【図１１Ｋ】フローサイトメトリーによって測定した、ワクチン流入領域鼠径リンパ節（ＬＮ；Ａ、Ｂ、Ｃ）、血液（Ｄ、Ｅ、Ｆ）、肝臓（Ｇ、Ｈ、Ｉ）、及び脾臓（Ｊ、Ｋ、Ｌ）における、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８（ＡＦ４８８）色素に関して陽性であるＣＤ１１ｂ＋マクロファージ（Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｊ）、ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞（Ｂ、Ｅ、Ｈ、Ｋ）、及びＣＤ３＋Ｔ細胞（Ｃ、Ｆ、Ｉ、Ｌ）の平均パーセント±ＳＥＭを経時的に示すグラフである。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、二元配置分散分析、対照である第３群と比較したテューキーの多重比較検定。
【図１１Ｌ】フローサイトメトリーによって測定した、ワクチン流入領域鼠径リンパ節（ＬＮ；Ａ、Ｂ、Ｃ）、血液（Ｄ、Ｅ、Ｆ）、肝臓（Ｇ、Ｈ、Ｉ）、及び脾臓（Ｊ、Ｋ、Ｌ）における、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８（ＡＦ４８８）色素に関して陽性であるＣＤ１１ｂ＋マクロファージ（Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｊ）、ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞（Ｂ、Ｅ、Ｈ、Ｋ）、及びＣＤ３＋Ｔ細胞（Ｃ、Ｆ、Ｉ、Ｌ）の平均パーセント±ＳＥＭを経時的に示すグラフである。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、二元配置分散分析、対照である第３群と比較したテューキーの多重比較検定。
【図１２Ａ】（Ａ）ＤＰＸにおいてＥＶＢを注射した第１群マウス、及び（Ｂ）水性溶液においてＥＶＢを注射した第２群マウスの、注射後１、２、５、及び７日目の血液から採取された血漿の写真である。
【図１２Ｂ】（Ａ）ＤＰＸにおいてＥＶＢを注射した第１群マウス、及び（Ｂ）水性溶液においてＥＶＢを注射した第２群マウスの、注射後１、２、５、及び７日目の血液から採取された血漿の写真である。
【図１３Ａ】（Ａ）水性溶液においてＥＶＢを注射した第２マウス群の皮膚、（Ｂ）ＤＰＸにおいてＥＶＢを注射した第１群マウスの青い流入領域リンパ節の写真である。
【図１３Ｂ】（Ａ）水性溶液においてＥＶＢを注射した第２マウス群の皮膚、（Ｂ）ＤＰＸにおいてＥＶＢを注射した第１群マウスの青い流入領域リンパ節の写真である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
[0031]本発明は、活性剤及び／又は免疫調節剤のリンパ節への又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞への標的化送達のための方法及び組成物に関する。
【００２０】
[0032]本明細書で使用する場合、「標的化」又は「ターゲティング」とは、活性剤及び／又は免疫調節剤がリンパ節に又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞に優先的に送達されることを意味する。
【００２１】
[0033]ある実施形態では、「優先的に送達される」とは、活性剤及び／又は免疫調節剤が、身体の他の領域に送達されること、全身に送達されること、又は効果的な送達を伴わずに身体から排除（例えば排出）されることとは異なり、リンパ節に又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞に送達されるという事実を指す。ある実施形態では、「優先的に送達される」とは、活性剤及び／又は免疫調節剤の濃度又は量が、リンパ節において又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞において、身体の他の部分における活性剤及び／又は免疫調節剤の濃度又は量と比べて増加することを意味する。ある実施形態では、「優先的に送達される」とは、活性剤及び／又は免疫調節剤が、本発明の組成物において送達されなかった場合よりも効率的に送達され、リンパ節又はリンパ系組織における細胞によって取り込まれることを意味する。
【００２２】
[0034]本明細書で使用する場合、理論に拘束されるものではないが、「標的化送達」という用語は、リンパ節への又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞へのターゲティングが、活性剤及び／又は免疫調節剤が活性剤及び／又は免疫調節剤をリンパ節又はリンパ系組織に輸送することができる細胞へより効果的に送達される上流事象によって成し遂げられる実施形態を包含する。ある実施形態では、細胞は例えば、限定されないが、単球、マクロファージ、樹状細胞、Ｔ細胞、及び／又はＢ細胞等の免疫細胞であり得る。したがって、ある実施形態では、「リンパ節への又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞への標的化送達」には、活性剤及び／又は免疫調節剤の、身体の非リンパ系の流体又は組織における免疫細胞への優先的な送達が含まれ、この送達によって細胞は次いでリンパ節に又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞に輸送され、標的化送達を実現する。
【００２３】
[0035]本明細書で使用する場合、理論に拘束されるものではないが、「標的化送達」という用語は、リンパ節への又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞へのターゲティングが、活性剤及び／又は免疫調節剤のリンパ節又はリンパ系組織における細胞へのより効果的な送達（例えば輸送）及び／又は取り込みによって成し遂げられる実施形態を包含する。
【００２４】
[0036]ある実施形態では、「標的化送達」とは、本明細書に開示される本発明の組成物を使用することによって、活性剤及び／又は免疫調節剤が、脂質ベースの構造体及び疎水性担体のうちの一方又は両方を含まない同種の組成物を使用することによるよりも効果的にリンパ節に又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞に送達されることを意味する。
【００２５】
[0037]ある実施形態では、「標的化送達」とは、本明細書に開示される本発明の組成物を使用することによって、活性剤及び／又は免疫調節剤が、活性剤及び／又は免疫調節剤の単独での又は異なる組成物（すなわち本発明の組成物ではない）での経口又は静脈内投与によるよりも効果的にリンパ節に又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞に送達されることを意味する。ある実施形態では、本明細書に開示される方法及び組成物は、標的化送達により、活性剤及び／又は免疫調節剤の単独での又は異なる組成物での経口又は静脈内投与と比較して少ない薬剤（複数可）を使用すると同時に、リンパ節における等価又はより良好な治療結果を達成することができる。
【００２６】
[0038]本明細書で使用する場合、「リンパ節」とは、例えばヒト等の動物の身体全体にわたって存在する任意の１つ又は複数のリンパ節を指す。ある実施形態では、リンパ節は、解剖学的位置に基づいた以下の種類：鼠径（鼠径部）、大腿（大腿内側上部）、腸間膜（胸郭より下側の下部胴体）、縦隔（胸骨の後ろ側の上部胴体）；鎖骨上（鎖骨）；腋窩（脇の下）；及び頸部（首）のうちの任意の１つ又は複数である。方法及び組成物が優先的に標的とするリンパ節は、投与経路（例えば注射）及び投与位置に依存し得る。ある実施形態では、リンパ節は鼠径リンパ節である。
【００２７】
[0039]本明細書で使用する場合、「リンパ系組織」という用語は、リンパ系を構成する細胞及び器官を指す。リンパ系組織としては、限定されないが、リンパ節、脾臓、胸腺、並びに粘膜関連リンパ組織（例えば、肺、腸壁の粘膜固有層、小腸のパイエル板、又は舌扁桃、口蓋扁桃及び咽頭扁桃、又はワルダイエル頸部輪（Ｗａｌｄｅｙｅｒ’ｓ  ｎｅｃｋ  ｒｉｎｇ）における）が挙げられる。リンパ系組織のリンパ球様細胞としては、例えば、白血球（白血細胞）、Ｔ細胞（Ｔリンパ球）、Ｂ細胞（Ｂリンパ球）、マクロファージ、樹状細胞、及び細網細胞が挙げられる。ある実施形態では、本明細書に開示される方法及び組成物の標的化送達は、リンパ節又はリンパ系組織におけるＴリンパ球及び／又はＢリンパ球へのものである。
【００２８】
[0040]本発明の方法及び組成物は、本明細書に定義される活性剤及び／又は免疫調節剤のリンパ節への又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞への標的化送達に好都合である。ターゲティング部分（例えばリガンド又は抗体）を活性剤及び／又は免疫調節剤にコンジュゲートする複雑なステップの必要性がない場合であっても、活性剤及び／又は免疫調節剤が、１種又は複数の脂質ベースの構造体と疎水性担体とを含む組成物を使用してリンパ節に優先的に送達され得ることが見出された。
【００２９】
[0041]実施例１及び図５に示すように、１種又は複数の脂質ベースの構造体と疎水性担体とを含む組成物において細胞傷害性活性剤を投与することによって、対照と比較して（Ｂ／Ｃ群をＦ群と比較して）有意なリンパ節細胞の数の減少が観察された。したがって、本発明の方法は、活性剤のリンパ節への送達をターゲティングすることにおいて効果的である。この結果は、活性剤が単独で投与された（Ｂ群）か又は抗原と一緒に投与された（Ｃ群）かに関係なく観察された。したがって、活性剤の標的化送達は、抗原提示細胞となるための、抗原による免疫細胞（例えば単球、マクロファージ、樹状細胞、Ｔ細胞、及び／又はＢ細胞）の古典的活性化とは無関係であった。このことは、Ｂ群において活性剤組成物がワクチン組成物（右側腹部）と異なる側腹部（左側腹部）に投与されたという事実によってさらに支持された。
【００３０】
[0042]さらに、本発明の方法は、単回投与のみの後に驚くほど効果的なリンパ節細胞の減少を実現した。０．４ｍｇの活性剤を含む本発明の組成物の単回投与のみで、リンパ節細胞数は、総計約２．８ｍｇの活性剤となる１週間の毎日の経口投与で達成されるのと等価なレベルまで減少した。したがって、等価な治療利益が、本発明の方法及び組成物を使用することによって約７分の１の活性剤で達成された。
【００３１】
[0043]方法
[0044]活性剤及び／又は免疫調節剤のリンパ節への又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞への標的化送達のための方法が提供される。
【００３２】
[0045]ある実施形態では、方法は、活性剤のリンパ節への又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞への標的化送達のためのものであって、それを必要とする対象に（ａ）低分子薬；抗体、抗体模倣物、又はそれらのうちのいずれか１つの機能的等価物若しくは機能的断片；或いはそれらの混合物である、活性剤、（ｂ）１種又は複数の脂質ベースの構造体、及び（ｃ）疎水性担体を含む組成物を投与するステップを含む、方法である。
【００３３】
[0046]ある実施形態では、方法は、免疫調節剤のリンパ節への又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞への標的化送達のためのものであって、それを必要とする対象に（ａ）免疫調節剤、（ｂ）１種又は複数の脂質ベースの構造体、及び（ｃ）疎水性担体を含む組成物を投与するステップを含む、方法である。
【００３４】
[0047]本明細書に開示される方法は、活性剤及び／又は免疫調節剤の、対象のリンパ節への又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞への送達を標的とすることが所望される任意の場合における適用を見出し得る。対象は、脊椎動物、例えば魚類、鳥類、又は哺乳動物であり得る。ある実施形態では、対象は哺乳動物である。ある実施形態では、対象はヒトである。
【００３５】
[0048]本発明の方法の実施において使用され得る組成物は、本明細書の他の箇所においてより詳細に記載される。ある実施形態では、本明細書に記載されるように、組成物は無水であり、１００％油性（すなわち疎水性）担体を含む。
【００３６】
[0049]理論に拘束されるものではないが、組成物は、活性剤及び免疫調節剤のリンパ節への又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞への標的化送達を、（ｉ）免疫細胞を引き付けて活性剤及び／又は免疫調節剤への長期の曝露をもたらす固有の「貯蔵所」の形成に起因する、投与部位又はその付近の免疫細胞（例えば単球、マクロファージ、樹状細胞、Ｔ細胞、及び／又はＢ細胞）による活性剤及び／又は免疫調節剤の効果的な取り込みを促進すること、（ｉｉ）提示され得る抗原による免疫細胞活性化の伝統的な過程（例えば活性化抗原提示細胞となるための）の非存在にもかかわらず、そのような免疫細胞のリンパ節への遊走を促進すること、並びに（ｉｉｉ）リンパ節における細胞又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞における細胞による活性剤及び／又は免疫調節剤の取り込みを促進することのうちの１つ又は複数によって実現すると考えられる。これらの要素のそれぞれは、本開示の方法の驚くべき利点だけでなく、予期せず克服された困難も表す。
【００３７】
[0050]外来抗原と遭遇する前、免疫細胞（例えば単球、マクロファージ、樹状細胞、Ｔ細胞、及び／又はＢ細胞）は未熟状態で存在する。提示され得る抗原の食作用により、これらの細胞は活性化し、その結果、ＭＨＣクラスＩ／ＩＩ分子の上方制御された発現、及びリンパ節に遊走する成熟抗原提示細胞への成熟をもたらし、リンパ節において受容体媒介性相互作用によってＴ細胞及びＢ細胞と相互作用する。免疫療法の場合、免疫細胞の適切な活性化は典型的には、経路選択及び適応免疫応答を向上させるためにアジュバントの投与も必要とする。これらの特徴（例えば提示され得る抗原及び／又は好適なアジュバント）の非存在下では、部分的には（１）活性化の欠如、（２）成熟及びリンパ節への活発な遊走の欠如、並びに／又は（３）リンパ節若しくはリンパ系組織におけるＴリンパ球及びＢリンパ球との受容体媒介性相互作用の欠如が存在し得るために、リンパ節への効果的な標的化送達が行われるとは考えられていなかった。しかしながら、本明細書に示すように、本開示の方法は、抗原及びアジュバントによる免疫細胞の古典的活性化とは無関係に活性剤／免疫調節剤の標的化送達を呈する。活性剤／免疫調節剤がリンパ節における細胞によって取り込まれたということは、リンパ節細胞の細胞傷害性軽減によってさらに明白となる。
【００３８】
[0051]したがって、ある実施形態では、本明細書に開示される方法は、本明細書に定義される活性剤及び／又は免疫調節剤の、リンパ節における免疫細胞又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞への標的化送達（及び取り込み）を実現する。リンパ節における免疫細胞又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞としては、限定されないが、骨髄前駆細胞、単球、樹状細胞、マクロファージ、Ｔリンパ球、及び／又はＢリンパ球を挙げることができる。ある実施形態では、免疫細胞は、リンパ節又はリンパ系組織におけるＴリンパ球又はＢリンパ球である。ある実施形態では、免疫細胞は、リンパ節におけるＴリンパ球又はＢリンパ球である。
【００３９】
[0052]ある実施形態では、組成物の投与は注射によるものである。注射は、例えば皮下、真皮下、粘膜下、筋肉内、又は腹腔内注射によるものであり得る。ある実施形態では、投与は皮下注射によるものである。投与はリンパ節以外の身体の領域に対するものである。ある実施形態では、注射は対象の腕、脚、腹部、又は臀部へのものであるが、いかなる簡便な部位が注射のために選択されてもよい。ある実施形態では、組成物の注射は、リンパ節に直接又は間接的に流出させる身体の領域に対するものである。ある実施形態では、組成物の注射は身体の組織へのものである。ある実施形態では、組織は上皮組織、結合組織、筋肉組織、又は神経組織である。ある実施形態では、組織は上皮組織又は筋肉組織である。
【００４０】
[0053]本発明の組成物は疎水性担体を含むため、組成物の注射は注射部位において「貯蔵所」を形成することができる（すなわち、疎水性担体は水性宿主環境と非混和である）。１種又は複数の脂質ベースの構造体は、この環境において疎水性担体中の活性剤及び／又は免疫調節剤を安定化させる。この併用効果は、組成物の成分が微小環境と長期間連続的に相互作用することを可能にし得ると推測される。この点において、ある実施形態では、本明細書に開示される方法は、リンパ節又はリンパ系組織への標的化送達のための、活性剤及び／又は免疫調節剤の受動的ではなく能動的な取り込みを伴う。ある実施形態では、活性剤及び／又は免疫調節剤は、組成物の投与部位又はその付近の免疫細胞（例えば単球、マクロファージ、樹状細胞、Ｔ細胞、及び／又はＢ細胞）に送達される。ある実施形態では、活性剤及び／又は免疫調節剤は、免疫細胞によってリンパ節に又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞に送達される。ある実施形態では、免疫細胞は樹状細胞又はマクロファージである。ある実施形態では、免疫細胞は樹状細胞である。
【００４１】
[0054]本明細書に開示される方法のある実施形態では、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の投与された活性剤及び／又は免疫調節剤は、リンパ節に又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞に送達される。ある実施形態では、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の投与された活性剤及び／又は免疫調節剤は、リンパ節に送達される。ある実施形態では、脂質ベースの構造体又は疎水性担体のいずれかを含む組成物の使用を伴わない場合、活性剤及び／又は免疫調節剤は対象における全身送達を呈する。ある実施形態では、脂質ベースの構造体又は疎水性担体のいずれかを含む組成物の使用を伴わない場合、活性剤及び／又は免疫調節剤は、リンパ節への又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞への優先的な送達を伴わずに対象の身体から取り除かれる。
【００４２】
[0055]相当な分量の活性剤及び免疫調節剤のリンパ節への標的化送達によって、ある特定の活性剤及び／又は免疫調節剤に対する望ましくない免疫応答及び／又は反応性の低下又は回避における利点が提供され得る。そのような望ましくない効果は、活性剤及び／又は免疫調節剤の全身送達により生じる場合があり、慣例的には、活性剤及び／若しくは免疫調節剤の投与を中止することか、又は他の薬物を投与して望ましくない効果を遮断若しくは低下させること（例えば免疫抑制薬）のいずれかによって媒介される。これらの手法は、対象が必要とされる治療処置を受けることができないために、又は処置が追加の費用及び場合により免疫系全体の望ましくない抑制を伴い得るために、望ましくない。このことは、本明細書に開示される標的化送達の方法によって回避することができる。
【００４３】
[0056]相当な分量の活性剤及び免疫調節剤のリンパ節への標的化送達によって、活性剤及び免疫調節剤の患者への投与の持続時間、容易さ、及び許容性におけるさらなる利点が提供され得る。一部の薬剤は従来、静脈内投与を必要とし、患者が静脈カテーテルを介して定量ポンプに長期間接続されることを必要とする。例として、抗ＣＴＬＡ−４抗体は従来、患者に３０〜９０分の期間にわたり１〜１０ｍｇ／ｋｇ静脈投与される。このことは、本明細書に開示される標的化送達の方法によって回避することができる。
【００４４】
[0057]ある実施形態では、本明細書に開示される方法によって、活性剤及び／又は免疫調節剤の標的化送達は、代替的方法、例えば異なる組成物（すなわち本発明の組成物ではない）を使用した経口投与による全身送達と比較して減少した投薬を可能にする。ある実施形態では、本発明の方法を使用して１コースの処置の間に対象に投与される活性剤及び／又は免疫調節剤の総量は、代替的方法を使用する場合に必要である薬剤（複数可）の総量の約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、又は７５％のみであり得る。ある実施形態では、本発明の方法を使用して１コースの処置の間に対象に投与される活性剤及び／又は免疫調節剤の総量は、代替的方法を使用する場合に必要である薬剤（複数可）の総量の１〜５０％、１〜２５％、１〜２０％、１〜１５％、１〜１０％、又は１〜５％の間であり得る。ある実施形態では、本発明の方法を使用して１コースの処置の間に対象に投与される活性剤及び／又は免疫調節剤の総量は、代替的方法を使用する場合に必要である薬剤（複数可）の総量の約２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、又は１０％のみであり得る。「処置のコース」とは、所望の治療効果、診断効果、又は生物学的効果を取得するための、投与の任意の長さの時間及び／又は任意の回数を意味する。
【００４５】
[0058]ある実施形態では、本明細書に開示される方法によって、活性剤及び／又は免疫調節剤のリンパ節への又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞への送達は、活性剤及び／又は免疫調節剤に対する免疫応答及び／又は他の望ましくない反応性を活性化しない。本明細書の方法の好ましい実施形態では、活性剤及び／又は免疫調節剤は、非免疫原性である化合物、物質、又は分子である。さらなる実施形態では、活性剤及び／又は免疫調節剤がリンパ節又はリンパ系組織に送達され免疫細胞内に入り、活性剤及び／又は免疫調節剤が表示し得る任意の免疫原性及び／又は反応性を場合により遮蔽することが企図される。
【００４６】
[0059]ある実施形態では、本明細書に開示される方法及び使用は、対象における免疫応答を調節するためのものである。「調節する」とは、方法が対象における免疫応答を増強（上方制御）するか、抑制（下方制御）するか、導くか、再び導くか、又は再プログラミングするために使用され得ることを意味する。本明細書で使用する場合、「免疫応答」とは、細胞媒介性免疫応答又は抗体（液性）免疫応答であり得る。
【００４７】
[0060]リンパ節及びリンパ系組織は、Ｂリンパ球及びＴリンパ球の主要な部位であり、免疫系の機能的活動及び免疫応答の発生に関して重要な身体の部位である。活性剤及び／又は免疫調節剤のリンパ節への又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞への送達を標的とする方法は、細胞媒介性免疫応答であれ、抗体免疫応答であれ、又は両方であれ、免疫応答を調節することにおいて有益であり得る。
【００４８】
[0061]ある実施形態では、本明細書に開示される方法及び使用は、対象における細胞媒介性免疫応答を調節するためのものである。
【００４９】
[0062]本明細書で使用する場合、「細胞媒介性免疫応答」、「細胞性免疫」、「細胞性免疫応答」、又は「細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）免疫応答」（本明細書では交換可能に使用される）という用語は、マクロファージ及びナチュラルキラー細胞の活性化、抗原特異的細胞傷害性Ｔリンパ球の産生、並びに／又は免疫原に応答する様々なサイトカインの放出を特徴とする免疫応答を指す。細胞傷害性Ｔリンパ球は、感染した体細胞又は腫瘍細胞の死を誘導することができるＴリンパ球（白血細胞の一種）の亜群であり、ウイルス（若しくは他の病原体）に感染しているか、又はそうでなければ損傷しているか若しくは機能障害性である細胞を死滅させる。
【００５０】
[0063]細胞性免疫は、例えば、外来抗原又は変異抗原のエピトープを表面に表示する身体の細胞、例えば腫瘍特異的抗原を表示する癌細胞を溶解することができる抗原特異的細胞傷害性Ｔリンパ球（例えば抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞）を活性化すること；マクロファージ及びナチュラルキラー細胞を活性化して、これらが細胞内病原体を破壊することを可能にすること；並びに細胞を刺激して、適応免疫応答及び自然免疫応答に関与する他の細胞の機能に影響を及ぼす種々のサイトカインを分泌させることによって身体を保護する。
【００５１】
[0064]細胞性免疫は、適応免疫応答の重要な成分であり、抗原提示細胞との、例えば樹状細胞、Ｂリンパ球、及びより小さい程度でマクロファージとの相互作用を介した細胞による抗原の認識後、様々な機構、例えば：
１．外来抗原又は変異抗原のエピトープを表面に表示する身体の細胞、例えば腫瘍特異的抗原を表示する癌細胞におけるアポトーシスを誘導することができる抗原特異的細胞傷害性Ｔリンパ球を活性化すること、
２．マクロファージ及びナチュラルキラー細胞を活性化して、これらが細胞内病原体を破壊することを可能にすること、並びに
３．細胞を刺激して、適応免疫応答及び自然免疫応答に関与する他の細胞の機能に影響を及ぼす種々のサイトカインを分泌させること
によって身体を保護する。
【００５２】
[0065]細胞媒介性免疫は、ウイルス感染細胞を除去することにおいて最も効果的であるが、真菌、原生動物、癌、及び細胞内細菌から防御することにも関与する。細胞媒介性免疫は移植拒絶においても主要な役割を果たす。
【００５３】
[0066]腫瘍誘導免疫抑制は、癌の特色の１つであり、免疫療法を使用して癌を処置することに対する大きな困難である。腫瘍は、発達するにつれて、いくつかの機構を介して免疫検出を回避及び逃避するように適応する。腫瘍微小環境は、例えば、ＣＤ４＋ＦｏｘＰ３＋制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）（Ｃｕｒｉｅｌ、２００４ａ）及び骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）（Ｎａｇａｒａｊ及びＧａｂｒｉｌｏｖｉｃｈ、２００８）等の抑制性免疫細胞の発生を促進する多くの因子を上方制御する。腫瘍微小環境はまた、ＴＮＦ−β等の免疫抑制性サイトカインを放出することによって活性化ＣＤ８＋Ｔ細胞の直接的な抑制にも寄与する（Ｙａｎｇ、２０１０）。免疫圧に応答する他の腫瘍逃避機構は、免疫編集、ＭＨＣクラスＩの下方制御、並びに抗原プロセシング及び提示の変更である。腫瘍誘導免疫抑制に対抗する免疫調節剤の使用は、処置の有効性を向上し得る（Ｙｏｎｇ、２０１２）。
【００５４】
[0067]細胞媒介性免疫は、様々な細胞型の関与を伴い、異なる機構によって媒介されるため、いくつかの方法が、細胞媒介性免疫応答の有効性又は活性を決定するために使用され得る。これらの方法は、ｉ）一定の抗原提示細胞の検出、ｉｉ）一定のエフェクター細胞及びその機能の検出、ｉｉｉ）サイトカイン等の可溶性メディエーターの放出の検出、並びにｉｖ）リンパ節、リンパ系組織、又は免疫反応の所望の部位（例えば腫瘍部位）における免疫細胞の検出及び計数に大きく分類され得る。
【００５５】
[0068]ある実施形態では、本明細書に開示される方法は、細胞媒介性免疫応答を、本発明の方法に供しない対照の細胞媒介性免疫応答と比較して少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、又は少なくとも１０倍増強又は低下させることができる。ある実施形態では、本明細書に開示される方法は、組成物の単回投与のみで細胞媒介性免疫応答を増強又は低下させることができる。ある実施形態では、本明細書に開示される方法は、例えば同じ活性剤及び／又は免疫調節剤の経口投与を伴う方法等の他の方法と比較して少ない総活性剤及び／又は免疫調節剤の投与で、細胞媒介性免疫応答を増強又は低下させることができる。
【００５６】
[0069]ある実施形態では、本明細書に開示される方法及び使用は、対象における抗体免疫応答を調節するためのものである。
【００５７】
[0070]「抗体免疫応答」又は「液性免疫応答」（本明細書では交換可能に使用される）とは、細胞媒介性免疫とは異なり、Ｂリンパ球系列の細胞（Ｂ細胞）において産生される分泌型抗体によって媒介される。そのような分泌型抗体はエピトープ、例えば外来物質、病原体（例えばウイルス、細菌等）及び／又は癌細胞の表面のエピトープ等に結合し、エピトープを破壊のために標識する。
【００５８】
[0071]本明細書で使用する場合、「液性免疫応答」とは、抗体産生を指し、付加的に又は代替的に、例えば２型ヘルパーＴ（Ｔｈ２）又は１７型ヘルパーＴ（Ｔｈ１７）細胞の生成及び／又は活性化、サイトカイン産生、アイソタイプスイッチ、親和性成熟、並びに記憶細胞活性化等の、抗体産生と同時に起こる付随的な過程も含むことができる。「液性免疫応答」はまた、例えば毒素中和、古典的補体活性化、並びに食作用及び病原体排除の促進等の抗体のエフェクター機能を含むことができる。液性免疫応答は多くの場合、ＣＤ４＋Ｔｈ２細胞によって補助され、したがってこの細胞型の活性化又は生成は、液性免疫応答の有効性を示すこともある。
【００５９】
[0072]液性免疫応答は、感染性疾患と闘う（例えばウイルス性又は細菌性侵入者から保護するために）ための一般的な機構の１つである。しかしながら、液性免疫応答はまた、癌と闘うのにも有用であり得る。Ｂ細胞媒介性応答は、場合によっては最大利益のために細胞傷害性Ｔ細胞と協同することがある機構を介して癌細胞を標的とし得る。Ｂ細胞媒介性（例えば液性免疫応答媒介性）抗腫瘍応答の例としては、限定されないが、１）腫瘍細胞又は腫瘍発生に影響を及ぼす他の細胞に見出される表面エピトープに結合する、Ｂ細胞によって産生される抗体。そのような抗体は、例えば抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）又は補体固定を介して標的細胞の死滅を誘導することができる；２）腫瘍細胞の受容体に結合して、受容体刺激を遮断し、事実上、受容体効果を中和する抗体；３）腫瘍若しくは腫瘍関連細胞によって放出されるか又はこれらと関連する因子に結合して、癌を支持するシグナル伝達経路又は細胞経路を調節する抗体；及び４）細胞内標的に結合し、現時点では不明の機構を介して抗腫瘍活性を媒介する抗体が挙げられる。
【００６０】
[0073]抗体応答を評価する１つの方法は、抗体の力価を測定することである。この測定は、動物から取得した抗体含有物質の酵素連結免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）等の当技術分野で公知の種々の方法を使用して実施することができる。限定されないが、使用することができる他のアッセイとしては、免疫学的アッセイ（例えば放射免疫アッセイ（ＲＩＡ））、免疫沈降アッセイ、及びタンパク質ブロット（例えばウェスタンブロット）アッセイ；並びに中和アッセイ（例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏアッセイにおけるウイルス感染性の中和）が挙げられる。
【００６１】
[0074]ある実施形態では、本明細書に開示される方法は、抗体免疫応答を、本発明の方法に供しない対照の抗体免疫応答と比較して少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、又は少なくとも１０倍増強又は低下させることができる。ある実施形態では、本明細書に開示される方法は、組成物の単回投与のみで抗体免疫応答を増強又は低下させることができる。ある実施形態では、本明細書に開示される方法は、例えば同じ活性剤及び／又は免疫調節剤の経口投与を伴う方法等の他の方法と比較して少ない総活性剤及び／又は免疫調節剤の投与で、抗体免疫応答を増強又は低下させることができる。
【００６２】
[0075]ある実施形態では、本明細書に開示される方法は、本明細書に記載される低分子薬のリンパ節への標的化送達によって対象における免疫応答を調節するためのものである。ある実施形態では、低分子薬は、エパカドスタット、ラパマイシン、ドキソルビシン、バルプロ酸、ミトキサントロン、ボリノスタット、シクロホスファミド、イリノテカン、シスプラチン、メトトレキセート、タクロリムス、又はそれらのうちのいずれか１つの薬学的に許容できる塩のうちのいずれか１つ又は複数である。
【００６３】
[0076]ある実施形態では、本明細書に開示される方法は、抗体のリンパ節への標的化送達によって対象における免疫応答を調節するためのものである。ある実施形態では、抗体は、抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えばイピリムマブ、トレメリムマブ、ＢＮ−１３、ＵＣ１０−４Ｆ１０−１１、９Ｄ９、又は９Ｈ１０）である。ある実施形態では、抗体は、抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例えばペムブロリズマブ、ニボルマブ、ピジリズマブ、ＡＭＰ−２２４、ＲＭＰ１−４、Ｊ４３、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、又はデュルバルマブ）である。
【００６４】
[0077]ある実施形態では、本明細書に開示される方法は、本明細書に記載される免疫調節剤のリンパ節への標的化送達によって対象における免疫応答を調節するためのものである。ある実施形態では、免疫調節剤は、例えばＣＴＬＡ−４又はＰＤ−１等のＴリンパ球の表面のチェックポイント受容体を結合するものである。
【００６５】
[0078]対象における免疫応答を調節するある実施形態では、活性剤及び／又は免疫調節剤は、癌細胞の１つ又は複数の免疫抑制機構に対抗する。
【００６６】
[0079]対象における免疫応答を調節するある実施形態では、活性剤及び／又は免疫調節剤は、癌に対する免疫応答、例えば抗癌ワクチン（例えば癌特異的抗原又は新抗原を送達するワクチン）によって活性化した免疫応答を増強する。
【００６７】
[0080]対象における免疫応答を調節するある実施形態では、活性剤及び／又は免疫調節剤は、感染性疾患に対する免疫応答、例えば抗ウイルス又は抗菌ワクチンによって活性化した免疫応答を増強する。
【００６８】
[0081]対象における免疫応答を調節するある実施形態では、活性剤及び／又は免疫調節剤は自己免疫応答を低下させる。
【００６９】
[0082]対象の免疫応答を調節するある実施形態では、活性剤及び／又は免疫調節剤は、ＴＨ１免疫応答、ＴＨ２免疫応答、又はＴＨ１免疫応答とＴＨ２免疫応答の両方を増大又は低減させることができる。
【００７０】
[0083]本明細書に開示される方法及び使用はまた、活性剤及び／又は免疫調節剤をリンパ節に又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞に優先的に送達することによって対象における疾患又は障害を処置又は防止するために使用することもできる。
【００７１】
[0084]「処置すること」若しくは「の処置」、又は「防止すること」若しくは「の防止」とは、本明細書で使用する場合、有益な又は所望の結果を取得するための手法を指す。有益な又は所望の結果としては、これらに限定されないが、１つ又は複数の症状又は状態の緩和又は改善、疾患の程度の軽減、疾患の状態の安定化、疾患の発生の防止、疾患の拡大の防止、疾患進行の遅延又は緩徐化（例えば抑制）、疾患発症の遅延又は遅れ、疾患を引き起こす薬剤に対する保護免疫を付与すること、及び疾患状態の改善又は寛解を挙げることができる。「処置すること」又は「防止すること」はまた、患者の生存期間を処置の非存在下において予期された生存期間を越えて延長することも意味することができ、さらに疾患の進行を一時的に阻害することも、例えば対象における感染症を防止することによって疾患の出現を防止することも意味することができる。「処置すること」又は「防止すること」はまた、腫瘍塊のサイズの減少、腫瘍攻撃性の低下等を指すこともある。
【００７２】
[0085]理解されるように、処置及び防止には重複部分が存在し得る。例えば、対象における疾患を「処置している」一方で、同時に疾患の症状又は進行を「防止している」ことは起こり得る。さらに、「処置すること」及び「防止すること」は、免疫応答を誘導するための対象の処置（例えばワクチン接種）が、病原体による感染症を防止するか、又は病原体への感染によって引き起こされる基礎疾患若しくは症状を防止するその後の効果を有し得る点で重複し得る。これらの防止的態様は、「感染性疾患の処置」又は「癌の処置」等の表現によって本明細書に包含される。
【００７３】
[0086]ある実施形態では、本明細書に開示される方法は、細胞媒介性免疫応答又は液性免疫応答によって改善する疾患及び／又は障害を処置又は防止するのに有用であり得る。そのような場合、本明細書に開示される方法は、それぞれの免疫応答を調節することによって疾患又は障害を処置及び／又は防止するのに有用であり得る。
【００７４】
[0087]ある実施形態では、本明細書に開示される方法は、リンパ節若しくはリンパ系組織の疾患及び／若しくは障害、又はリンパ節若しくはリンパ系組織に局在化する態様を有する疾患及び／若しくは障害（例えば転移性癌）を処置又は防止するのに有用であり得る。そのような場合、本明細書に開示される方法は、免疫調節を含むがこれらに限定されない、疾患又は障害に対する治療効果又は活性を有する一定の活性剤及び／又は免疫調節剤の送達において有用であり得る。例えば、方法は、細胞傷害性剤、抗腫瘍剤、化学療法剤、抗ウイルス剤、抗菌剤、抗炎症性剤、生物学的応答修飾物質、ステロイド等の標的化送達に有用であり得る。
【００７５】
[0088]ある実施形態では、限定されないが、リンパ節又はリンパ系組織の疾患は、腫脹リンパ節、リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、急性リンパ芽球性白血病、リンパ系疾患、キャッスルマン病、リンパ浮腫、サルコイドーシス、ネコ引っ掻き病、扁桃炎、急性扁桃炎、全身性リンパ節腫脹、リンパ管炎、リンパ節炎、リンパ球増加症、レンサ球菌咽頭炎、菊池病、川崎病、腺炎、フィラリア症、又は脾腫（ｓｐｌｅｏｍｅｇａｌｙ）であり得る。当業者であれば、本発明の方法及び使用が用途を見出し得るリンパ節又はリンパ系組織の他の疾患及び／又は障害を十分に認識しているだろう。
【００７６】
[0089]ある実施形態では、本明細書に開示される方法は、それを必要とする対象における、ウイルス感染症によって引き起こされるような感染性疾患を処置及び／又は防止するために使用され得る。対象は、ウイルスに感染していてもウイルス感染症を発生するリスクを有していてもよい。処置及び／又は防止され得るウイルス感染症としては、限定されないが、牛痘ウイルス、ワクシニアウイルス、偽牛痘ウイルス、ヒトヘルペスウイルス１、ヒトヘルペスウイルス２、サイトメガロウイルス、ヒトアデノウイルスＡ〜Ｆ、ポリオーマウイルス、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、パルボウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、オルトレオウイルス、ロタウイルス、エボラウイルス、パラインフルエンザウイルス、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、Ｃ型インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、風疹ウイルス、肺炎ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、狂犬病ウイルス、カリフォルニア脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス、ハンタンウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、コロナウイルス、エンテロウイルス、ライノウイルス、ポリオウイルス、ノロウイルス、フラビウイルス、デングウイルス、西ナイルウイルス、黄熱ウイルス、及び水痘が挙げられる。ある実施形態では、ウイルス感染症はヒトパピローマウイルス、エボラウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、又はインフルエンザウイルスである。
【００７７】
[0090]ある実施形態では、本明細書に開示される方法は、それを必要とする対象における、非ウイルス性病原体（例えば細菌又は原生動物）によって引き起こされる感染性疾患を処置及び／又は防止するために使用され得る。対象は、病原体に感染していても病原体による感染症を発生するリスクを有していてもよい。限定されないが、例示的な細菌性病原体としては、炭疽菌（バチルス・アントラシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ））、ブルセラ（Ｂｒｕｃｅｌｌａ）、ボルデテラ・パーツシス（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）、クラミジア・ニューモニエ（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、クラミジア・シッタシ（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｓｉｔｔａｃｉ）、コレラ（Ｃｈｏｌｅｒａ）、クロストリジウム・ボツリヌム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）、コクシジオイデス・イミティス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓ）、クリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ジフテリア（Ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）Ｏ１５７：Ｈ７、腸管出血性大腸菌、腸管毒素原性大腸菌、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）、レジオネラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）、レプトスピラ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ）、リステリア（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）、髄膜炎菌（Ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃｕｓ）、マイコプラズマ・ニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、マイコバクテリウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、百日咳、肺炎、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、ストレプトコッカス・ニューモニエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、及びエルシニア・エンテロコリチカ（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）を挙げることができる。特定の実施形態では、細菌感染症は炭疽症である。限定されないが、例示的な原生動物病原体としては、マラリアを引き起こすプラスモジウム（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）属（熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、四日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｍａｌａｒｉａｅ）、三日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘ）、卵形マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｏｖａｌｅ）、又はカニクイザルマラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｋｎｏｗｌｅｓｉ））のものを挙げることができる。
【００７８】
[0091]ある実施形態では、本明細書に開示される方法は、それを必要とする対象における癌を処置及び／又は防止することにおける使用のためのものであり得る。対象は、癌を有していても癌を発生するリスクを有していてもよい。
【００７９】
[0092]本明細書で使用する場合、「癌」、「癌細胞」、「腫瘍」、及び「腫瘍細胞」、（交換可能に使用される）という用語は、細胞増殖のコントロールの著しい喪失を特徴とする異常な成長を呈する細胞、又は不死化した細胞を指す。「癌」又は「腫瘍」という用語には、転移性及び非転移性癌又は腫瘍が含まれる。癌は悪性腫瘍の存在を含む、当技術分野において一般に認められている基準を使用して診断することができる。
【００８０】
[0093]方法はいかなる特定の種類の癌にも限定されない。ある実施形態では、癌は、リンパ節又はリンパ系組織の原発癌であっても、転移によってリンパ節又はリンパ系組織に広がった癌、例えば二次癌であってもよい。ある実施形態では、癌は免疫療法によって処置されている又は処置されることになる癌であってもよい。ある実施形態では、癌は、免疫抑制機構を介して免疫検出を回避及び逃避するように適応した癌であってもよい。
【００８１】
[0094]限定されないが、癌は、癌腫、腺癌腫、リンパ腫、白血病、肉腫、芽腫、骨髄腫、又は胚細胞癌であってもよい。より詳細には、癌は、膠芽腫、多発性骨髄腫、卵巣癌、乳癌、卵管癌、前立腺癌、卵管癌、腹膜癌、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、又はリンパ節若しくはリンパ系組織の任意の癌であってもよい。
【００８２】
[0095]ある実施形態では、癌は、ウイルス等の病原体によって引き起こされてもよい。癌の発生に関連付けられるウイルスは、当業者に公知であり、これらに限定されないが、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、ジョン・カニンガムウイルス（ＪＣＶ）、ヒトヘルペスウイルス８、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、メルケル細胞ポリオーマウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、及びヒトＴ細胞白血病ウイルス１が挙げられる。ある実施形態では、癌は、癌特異的抗原（例えばサバイビンタンパク質）を発現する癌である。ある実施形態では、癌は、１種又は複数の新抗原を発現する癌である。特定の実施形態では、腫瘍特異的新抗原。
【００８３】
[0096]本明細書に開示される方法では、任意の一定の活性剤及び／又は免疫調節剤の量は、薬剤の種類、処置される疾患若しくは障害、及び／又は対象の特定の特質（例えば年齢、体重、性別、免疫状況等）に依存し得る。当業者であれば、特定の用途において必要である活性剤及び／又は免疫調節剤の量を経験的な試験によって容易に決定することができる。
【００８４】
[0097]組成物
[0098]本発明の組成物は、本明細書に定義される活性剤又は免疫調節剤、１種又は複数の脂質ベースの構造体、及び疎水性担体を含む。これらの成分のそれぞれは、本明細書において個々に定義され、より詳細に記載される。
【００８５】
[0099]一部の実施形態では、組成物は、アジュバント剤と共に又はアジュバント剤を含まずに、抗原を任意選択で及び付加的に含むことがあり、そのような実施形態では、組成物は「ワクチン組成物」又は「ワクチン」と称してもよく、これらは交換可能に使用される。
【００８６】
[00100]本明細書に開示される方法に関して、活性剤及び／又は免疫調節剤のリンパ節への又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞への標的化送達を達成するために組成物が抗原又はアジュバント剤を含むことは必要とされない。標的化送達は、アジュバント剤による任意の必要な支援を含め、免疫細胞の古典的な抗原プロセシング及び活性化とは無関係である。この点において、ある実施形態では、本発明の組成物は抗原、アジュバント、又は両方を含まない。本明細書で使用する場合、「抗原」とは、抗体及び／又は細胞媒介性免疫応答を誘導する化合物又は物質（すなわち免疫原）を意味する。本明細書で使用する場合、「アジュバント剤」とは、抗原に対する経路選択及び適応免疫応答を向上させるために抗原と一緒に投与される化合物（すなわち分子）を意味する。
【００８７】
[00101]ある実施形態では、本発明の組成物における使用のための活性剤及び／又は免疫調節剤は、抗原プロセシングの古典的機構を介してプロセシングされ得ない及び／又は免疫細胞に提示され得ない化合物、物質、又は分子である。この点において、ある実施形態では、活性剤及び／又は免疫調節剤はリンパ節に又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞にインタクトで送達される。「インタクト」とは、活性剤及び／又は免疫調節剤が、エンドソーム又はプロテアソーム分解の対象となっておらず、活性剤及び／又は免疫調節剤の所望の機能性（例えば生物、薬剤、及び／又は治療活性）を維持することを意味する。ある実施形態では、「インタクト」とは、リンパ節に送達された活性剤及び／又は免疫調節剤が、投与された時の活性剤及び／又は免疫調節剤と一次、二次、三次、及び／又は四次構造の点で同一であることを意味する。
【００８８】
[00102]ある実施形態では、本明細書の組成物における使用のための活性剤及び／又は免疫調節剤は、主要組織適合複合体（ＭＨＣ）クラスＩタンパク質、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質、又は両方に直接結合しない化合物、物質、又は分子である。当業者であれば理解するように、ＭＨＣ分子とは、ポリペプチドを結合し、適切なＴ細胞による認識のためにポリペプチドを細胞表面に表示する細胞表面タンパク質である。例えば、未熟樹状細胞は病原体を貪食し、病原体のタンパク質を小片に分解し、成熟すると、ＭＨＣ分子を使用して病原体のタンパク質の断片を細胞表面に提示する。ＭＨＣ分子は免疫細胞間の相互作用を媒介する。
【００８９】
[00103]本明細書に開示される組成物は、対象に治療効果量で投与され得る。本明細書で使用する場合、「治療有効量」とは、治療的利益、予防的利益、若しくは診断上の利益を対象に提供するのに効果的な、組成物若しくは組成物に含有される活性剤／免疫調節剤の量、及び／又は対象における免疫応答を調節するのに十分な量を意味する。本明細書で使用する場合、免疫応答を「調節する」ことは、免疫応答を活性化することと別個であり異なる。「調節する」とは、本明細書の活性剤及び／又は免疫調節剤が他の機構又は化合物によって（例えば抗原又は免疫原によって）活性化した免疫応答を増強又は抑制することを意味する。ある実施形態では、免疫応答は、本明細書の組成物が投与される前に活性化した。別の実施形態では、免疫応答は、本明細書に記載される組成物の投与に比例して、又はその投与の後に活性化し得る。
【００９０】
[00104]一部の実施形態では、組成物の治療有効量は、特定の疾患又は障害の処置中の対象において臨床応答を誘導することができる量である。組成物の治療有効量の決定は、とりわけ本明細書に提供される本開示を考慮すると、十分に当業者の能力の範囲内である。治療有効量は、対象の状態、体重、性別、及び年齢等の種々の要因に従って変動し得る。
【００９１】
[00105]ある実施形態では、本明細書に開示される組成物は無水である。本明細書で使用する場合、「無水」とは、完全に又は実質的に水を含まない、すなわち組成物がエマルションではないことを意味する。
【００９２】
[00106]「完全に水を含まない」とは、組成物が水を一切含有しないことを意味する。対照的に、「実質的に水を含まない」という用語は、水が疎水性担体の非連続相に存在するという条件で、疎水性担体が少ない分量の水を依然として含有し得る実施形態を包含することが意図される。例えば、組成物の個々の成分（例えば本明細書に記載される活性剤及び／又は免疫調節剤）は、凍結乾燥又は蒸発等の処理によって完全には除去されないことがある少ない分量の結合水を有することがあり、ある特定の疎水性担体は、溶解した少量の水を含有することがある。一般に、本明細書に開示される「実質的に水を含まない」組成物は、例えば質量／質量基準で組成物の担体成分の総質量の約５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％、又は０．０１％未満の水を含有する。
【００９３】
[00107]薬学的使用のための組成物の文脈では、最終組成物は透明又はごくわずかに濁った溶液であることが望ましいことがある。ある実施形態では、本明細書の組成物は透明であるか又はわずかに濁っている。本明細書で使用する場合、「わずかに濁っている」という実施形態は、組成物が溶液におけるある程度の濁度を表示するが、いかなる目に見える微粒子も沈澱物も有しないか、又は微粒子も沈澱物も実質的に含まないことを意味する。「実質的に含まない」とは、組成物が、組成物の治療有効性にも安定性等の他の関係のある特質にも影響を与えない程の少しの含量の微粒子又は沈澱物を含むことを意味する。ある実施形態では、本明細書の組成物は透明である。ある実施形態では、本明細書の組成物は目に見える微粒子も沈澱物も実質的に含まない。ある実施形態では、本明細書の組成物は目に見える微粒子も沈澱物も有しない。組成物の透明度は、溶液を観察することにより肉眼で視覚的に決定されても、分光光度計を使用した測定によって視覚的に決定されてもよい。ある実施形態では、組成物は、欧州薬局方（Ｐｈ．Ｅｕｒ．）、第９版、２．９．２０節に従って視覚的に検査されてもよい。
【００９４】
[00108]活性剤
[00109]本明細書に開示される組成物は、活性剤のリンパ節への又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞への標的化送達のためのものである。
【００９５】
[00110]「薬剤」という用語には、任意の物質、分子、要素、化合物、実体、又はそれらの組合せが含まれる。薬剤は、天然物、合成化合物、又は２種以上の物質の組合せであり得る。別段に明記されていない限り、「薬剤」、「物質」、及び「化合物」という用語は、本明細書では交換可能に使用される。
【００９６】
[00111]本明細書で使用する場合、「活性剤」とは、医薬活性剤若しくは治療活性剤又は診断剤を指す。活性剤は、低分子薬；抗体、抗体模倣物、又はそれらのうちのいずれか１つの機能的等価物若しくは機能的断片である。
【００９７】
[00112]低分子薬
[00113]ある実施形態では、活性剤は低分子薬である。「低分子薬」という用語は、疾患、障害、又は状態を処置、治療、防止、又は診断するために使用され得る有機又は無機化合物を指す。
【００９８】
[00114]本明細書で使用する場合、「低分子」という用語は、合成的に生産され得るか又は天然源から取得され得る低分子量化合物を指し、２０００ダルトン（Ｄａ）未満、１５００Ｄａ未満、１０００Ｄａ未満、９００Ｄａ未満、８００Ｄａ未満、７００Ｄａ未満、６００Ｄａ未満、又は５００Ｄａ未満の分子量を有する。ある実施形態では、低分子薬は約９００Ｄａ又は９００Ｄａ未満の分子量を有する。より詳細には、ある実施形態では、低分子薬は６００Ｄａ未満、より一層詳細には５００Ｄａ未満の分子量を有する。
【００９９】
[00115]ある実施形態では、低分子薬は、約１００Ｄａ〜約２０００Ｄａ、約１００Ｄａ〜約１５００Ｄａ、約１００Ｄａ〜約１０００Ｄａ、約１００Ｄａ〜約９００Ｄａ、約１００Ｄａ〜約８００Ｄａ、約１００Ｄａ〜約７００Ｄａ、約１００Ｄａ〜約６００Ｄａ、又は約１００Ｄａ〜約５００Ｄａの間の分子量を有する。ある実施形態では、低分子薬は、約１００Ｄａ、約１５０Ｄａ、約２００Ｄａ、約２５０Ｄａ、約３００Ｄａ、約３５０Ｄａ、約４００Ｄａ、約４５０Ｄａ、約５００Ｄａ、約５５０Ｄａ、約６００Ｄａ、約６５０Ｄａ、約７００Ｄａ、約７５０Ｄａ、約８００Ｄａ、約８５０Ｄａ、約９００Ｄａ、約９５０Ｄａ、約１０００Ｄａ、又は約２０００Ｄａの分子量を有する。ある実施形態では、低分子薬は１ｎｍの程のサイズを有し得る。
【０１００】
[00116]ある実施形態では、低分子薬は、化学的に製造された活性物質又は化合物である（すなわち生物学的過程によって生成されない）。一般に、これらの化合物は、異なる有機及び／又は無機化合物間の化学反応によって古典的手段で合成される。本明細書で使用する場合、「低分子薬」という用語は、より大きな構造体、例えば生物学的過程によって産生されるポリヌクレオチド、タンパク質、及び多糖類を包含しない。
【０１０１】
[00117]ある実施形態では、本明細書で使用する場合、「低分子」という用語は、特異的な生体高分子を選択的に結合し、エフェクターとして作用して、標的の活性又は機能を変更する化合物又は分子を指す。したがって、ある実施形態では、低分子薬とは、対象の身体における、より詳細には細胞内における生物学的過程を制御する物質又は化合物である。低分子薬は、投与される形態で活性を発揮してもよく、プロドラッグであってもよい。この点において、「低分子薬」という用語は、本明細書で使用する場合、活性形態とプロドラッグの両方を包含する。
【０１０２】
[00118]「プロドラッグ」という用語は、生理的条件下で治療活性剤に変換される化合物又は物質を指す。ある実施形態では、プロドラッグは、投与後、対象の身体において薬学的に活性な形態に代謝される（例えば対象の身体における酵素活性によって）化合物又は物質である。プロドラッグを作製するための一般的な方法は、生理的条件下で加水分解して薬学的に活性な形態を表す選択された部分を含めることである。
【０１０３】
[00119]ある実施形態では、限定されないが、低分子薬は、細胞傷害性剤、抗癌剤、抗腫瘍剤、化学療法剤、抗新生物剤、抗ウイルス剤、抗菌剤、抗炎症剤、免疫調節剤（例えば免疫増強物質又は抑制物質）、免疫応答チェックポイント剤、生物学的応答修飾物質、プロドラッグ、サイトカイン、ケモカイン、ビタミン、ステロイド、リガンド、鎮痛薬、放射性医薬、放射性同位元素、又は視覚的検出のための色素である。
【０１０４】
[00120]低分子薬は、本明細書に記載される任意の低分子薬であっても、それらの薬学的に許容できる塩であってもよい。本明細書で使用する場合、「薬学的に許容できる塩（複数可）」という用語は、目的の対象への投与に安全且つ効果的であり、所望の生物、薬剤、及び／又は治療活性を保有する、本明細書に記載される活性剤及び／又は免疫調節剤の任意の塩形態を指す。薬学的に許容できる塩としては、酸性又は塩基性基の塩が挙げられる。薬学的に許容できる酸付加塩としては、これらに限定されないが、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、硫酸、重硫酸、リン酸、酸性リン酸、イソニコチン酸、酢酸、乳酸、サリチル酸、クエン酸、酒石酸、パントテン酸、重酒石酸、アスコルビン酸、コハク酸、マレイン酸、ゲンチシン酸（ｇｅｎｔｉｓｉｎａｔｅ）、フマル酸、グルコン酸、グルカロン酸（ｇｌｕｃａｒｏｎａｔｅ）、サッカリン酸、ギ酸、安息香酸、グルタミン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、及びパモ酸（すなわち、１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフトエート））の塩を挙げることができる。好適な塩基性塩としては、これらに限定されないが、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、亜鉛、及びジエタノールアミンの塩を挙げることができる。薬学的に許容できる塩のレビューは、例えばＢｅｒｇｅ、１９７７に見出すことができる。
【０１０５】
[00121]ある実施形態では、低分子薬は、ＤＮＡ複製に干渉する薬剤である。本明細書で使用する場合、「ＤＮＡ複製に干渉する」という表現は、細胞のＤＮＡをコピー（すなわち複製）する生物学的過程を妨げるか、阻害するか、又は遅延させる任意の作用を包含することが意図される。当業者であれば、例えばＤＮＡ架橋、ＤＮＡのメチル化、塩基置換等のＤＮＡ複製を妨げるか、阻害するか、又は遅延させることに関する様々な機構が存在することを理解するだろう。本開示は、ＤＮＡ複製に干渉する任意の薬剤の使用を包含する。使用され得るそのような薬剤の例示的な非限定的実施形態は、例えば国際出願第２０１４／１５３６３６号及び国際出願ＰＣＴ／ＣＡ２０１７／０５０５３９に記載されている。ある実施形態では、ＤＮＡ複製に干渉する薬剤は、例えばナイトロジェンマスタードアルキル化剤等のアルキル化剤である。ある実施形態では、ＤＮＡ複製に干渉する薬剤はシクロホスファミドである。
【０１０６】
[00122]ある実施形態では、低分子薬は、シクロホスファミド、イホスファミド、アホスファミド（ａｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、メルファラン、ベンダムスチン、ウラムスチン、パリホスファミド、クロラムブシル、ブスルファン、４−ヒドロキシシクロホスファミド、ビス−クロロエチルニトロソ尿素（ＢＣＮＵ）、マイトマイシンＣ、ヨンデリス、プロカルバジン、ダカルバジン、テモゾロミド、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、アシクロビル、ゲムシタビン、５−フルオロウラシル、シトシンアラビノシド、ガンシクロビル、カンプトテシン、トポテカン、イリノテカン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン、エトポシド、テニポシド、ミトキサントロン、若しくはピクサントロン、又はそれらのうちのいずれか１つの薬学的に許容できる塩である。
【０１０７】
[00123]ある実施形態では、低分子薬はイホスファミドである。イホスファミドはナイトロジェンマスタードアルキル化剤である。イホスファミドのＩＵＰＡＣ名はＮ−３−ビス（２−クロロエチル）−１，３，２−オキサザホスフィナン−２−アミド−２−オキシドである。イホスファミドはイフェックス（Ｉｆｅｘ）（登録商標）として一般的に公知である。イホスファミドの化学構造は：
【化１】
2021518373.tif 000003
である。
【０１０８】
[00124]ある実施形態では、低分子薬はパリホスファミドである。パリホスファミドは、安定性のためにアミノ酸であるリジンに共有結合的に連結したイホスファミドの活性代謝産物である。パリホスファミドは、ＧＣ塩基対を介してＤＮＡを不可逆的にアルキル化及び架橋して、７原子による修復不能な鎖間架橋を生じ；ＤＮＡ複製の阻害及び／又は細胞死をもたらす。パリホスファミドはジマホス（Ｚｙｍａｆｏｓ）（登録商標）としても公知である。
【０１０９】
[00125]ある実施形態では、低分子薬はベンダムスチンである。ベンダムスチンは別のナイトロジェンマスタードアルキル化剤である。ベンダムスチンのＩＵＰＡＣ名は、４−［５−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］−１−メチルベンズイミダゾール−２−イル］ブタン酸であり、トレアキシン（Ｔｒｅａｋｉｓｙｍ）（登録商標）、リボムスチン（Ｒｉｂｏｍｕｓｔｉｎ）（登録商標）、レバクト（Ｌｅｖａｃｔ）（登録商標）、及びトレアンダ（Ｔｒｅａｎｄａ）（登録商標）と一般的に称される。ベンダムスチンの化学構造は：
【化２】
2021518373.tif 000004
である。
【０１１０】
[00126]ある実施形態では、低分子薬は免疫応答チェックポイント剤である。本明細書で使用する場合、「免疫応答チェックポイント剤」とは、１種又は複数のチェックポイント分子（例えばタンパク質）の活性又は機能を全体的に又は部分的に調節（例えば活性化又は阻害）する任意の化合物又は分子を指す。チェックポイント分子は、Ｔ細胞応答の共刺激又は阻害相互作用に関わる。チェックポイント分子は、自己寛容、並びに生理的免疫応答の持続時間及び大きさを制御及び維持する。一般に、２種類のチェックポイント分子：刺激性チェックポイント分子及び阻害性チェックポイント分子が存在する。
【０１１１】
[00127]刺激性チェックポイント分子は、免疫応答を増強する役割を務める。例えば、限定されないが、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＩＣＯＳ、ＩＬ−１０、ＯＸ４０  ＴＧＦ−ベータ、ＴＯＲ受容体、及びグルココルチコイド誘導ＴＮＦＲ関連タンパク質ＧＩＴＲ等の多数の刺激性チェックポイント分子が公知である。ある実施形態では、低分子薬は、１種又は複数の刺激性チェックポイント分子のアゴニスト又はアンタゴニストである。ある実施形態では、低分子薬は、１種又は複数の刺激性チェックポイント分子のアゴニスト又はスーパーアゴニストである。当業者であれば、刺激性チェックポイント分子を調節するために使用され得る低分子薬を十分に認識しているだろう。
【０１１２】
[00128]阻害性チェックポイント分子は、免疫応答（例えば負のフィードバックループ）を低下又は遮断する役割を務める。例えばＣＴＬＡ−４とそのリガンドのＣＤ８０及びＣＤ８６；並びにＰＤ−１とそのリガンドのＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２等の多数の阻害性チェックポイントタンパク質が公知である。他の阻害性チェックポイント分子としては、限定されないが、アデノシンＡ２Ａ受容体（Ａ２ＡＲ）；Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）；Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）；ＢＴＬＡ（ＣＤ２７２）；キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）；リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）；Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇ抑制因子（ＶＩＳＴＡ）  Ｔ細胞免疫グロブリンドメイン及びムチンドメイン３（ＴＩＭ−３）；及びインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、並びにそれらのリガンド及び／又は受容体が挙げられる。ある実施形態では、低分子薬は、１種又は複数の阻害性チェックポイント分子のアゴニスト又はアンタゴニストである。ある実施形態では、低分子薬は、１種又は複数の阻害性チェックポイント分子のアンタゴニスト（すなわち阻害薬）である。当業者であれば、阻害性チェックポイント分子を調節するために使用され得る低分子薬を十分に認識しているだろう。
【０１１３】
[00129]ある実施形態では、低分子薬は、プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１、これはＢ７−Ｈ１、ＣＤ２７４としても公知である）、プログラム死１（ＰＤ−１、ＣＤ２７９）、ＣＴＬＡ−４（ＣＤ１５４）、ＰＤ−Ｌ２（Ｂ７−ＤＣ、ＣＤ２７３）、ＬＡＧ３（ＣＤ２２３）、ＴＩＭ３（ＨＡＶＣＲ２、ＣＤ３６６）、４１ＢＢ（ＣＤ１３７）、２Ｂ４、Ａ２ａＲ、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、Ｂ及びＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１６０、ＣＤ２２６、ＣＤ２７６、ＤＲ３、ＧＡＬ９、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＩＣＯＳ（誘導性Ｔ細胞共刺激因子）、キラー阻害性受容体（ＫＩＲ）、ＬＡＧ−３、ＬＡＩＲ１、ＬＩＧＨＴ、ＭＡＲＣＯ（コラーゲン構造を有するマクロファージ受容体）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ＯＸ−４０、Ｓｉｇｌｅｃ−５、Ｓｉｇｌｅｃ−７、Ｓｉｇｌｅｃ−９、Ｓｉｇｌｅｃ−１１、ＳＬＡＭ、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＴＮＦ−α、ＶＩＳＴＡ、ＶＴＣＮ１、又はそれらの任意の組合せの阻害薬である免疫応答チェックポイント剤である。
【０１１４】
[00130]ある実施形態では、低分子薬は、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、又はそれらの任意の組合せの阻害薬である免疫応答チェックポイント剤である。
【０１１５】
[00131]ある実施形態では、低分子薬は、エパカドスタット、ラパマイシン、ドキソルビシン、バルプロ酸、ミトキサントロン、ボリノスタット、シクロホスファミド、イリノテカン、シスプラチン、メトトレキセート、タクロリムス、又はそれらのうちのいずれか１つの薬学的に許容できる塩であってもよい。
【０１１６】
[00132]ある実施形態では、低分子薬は、シクロホスファミド又はその薬学的に許容できる塩である。シクロホスファミド（Ｎ，Ｎ−ビス（２−クロロエチル）−１，３，２−オキサザホスフィナン−２−アミン２−オキシド）。シクロホスファミドの化学構造は：
【化３】
2021518373.tif 000005
である。
【０１１７】
[00133]シクロホスファミドは、エンドキサン（Ｅｎｄｏｘａｎ）（登録商標）、シトキサン（Ｃｙｔｏｘａｎ）（登録商標）、ネオサール（Ｎｅｏｓａｒ）（登録商標）、プロシトックス（Ｐｒｏｃｙｔｏｘ）（登録商標）、及びレビミューン（Ｒｅｖｉｍｍｕｎｅ）（登録商標）の登録商標でも公知であり、これらの登録商標でも称される。シクロホスファミドは、Ｐ４５０酵素による酸化によってその活性代謝産物である、４−ヒドロキシ−シクロホスファミド及びアルドホスファミドに変換されるプロドラッグである。細胞内の４−ヒドロキシ−シクロホスファミドは、最終的な活性代謝産物であるホスホラミドマスタードに自発的に分解する。
【０１１８】
[00134]ある実施形態では、低分子薬は、エパカドスタット：
【化４】
2021518373.tif 000006
又はその薬学的に許容できる塩である。
【０１１９】
[00135]ある実施形態では、低分子薬は、ラパマイシン：
【化５】
2021518373.tif 000007
又はその薬学的に許容できる塩である。
【０１２０】
[00136]ある実施形態では、低分子薬は、ドキソルビシン：
【化６】
2021518373.tif 000008
又はその薬学的に許容できる塩である。
【０１２１】
[00137]ある実施形態では、低分子薬は、バルプロ酸：
【化７】
2021518373.tif 000009
又はその薬学的に許容できる塩である。
【０１２２】
[00138]ある実施形態では、低分子薬は、ミトキサントロン：
【化８】
2021518373.tif 000010
又はその薬学的に許容できる塩である。
【０１２３】
[00139]ある実施形態では、低分子薬は、ボリノスタット：
【化９】
2021518373.tif 000011
又はその薬学的に許容できる塩である。
【０１２４】
[00140]ある実施形態では、低分子薬は、イリノテカン：
【化１０】
2021518373.tif 000012
又はその薬学的に許容できる塩である。
【０１２５】
[00141]ある実施形態では、低分子薬は、シスプラチン：
【化１１】
2021518373.tif 000013
又はその薬学的に許容できる塩である。
【０１２６】
[00142]ある実施形態では、低分子薬は、メトトレキセート：
【化１２】
2021518373.tif 000014
又はその薬学的に許容できる塩である。
【０１２７】
[00143]ある実施形態では、低分子薬は、タクロリムス：
【化１３】
2021518373.tif 000015
又はその薬学的に許容できる塩である。
【０１２８】
[00144]ある実施形態では、低分子薬はシャトル、例えば分子シャトルである。本明細書で使用する場合、「シャトル」という用語は、他の分子又はイオンをある位置から別の位置に運搬することができる化合物又は分子を指す。限定されないが、シャトルは、例えば細胞透過ペプチド（ＣＰＰ）、ペプチド形質導入ドメイン（ＰＴＤ）、及び／又は樹状細胞ペプチド（ＤＣｐｅｐ）等の、積み荷を細胞に運搬することができるペプチドであり得る。これらの種類のシャトルは、例えばＤｅｌｃｒｏｉｘ、２０１０；Ｚｈａｎｇ、２０１６；Ｚａｈｉｄ、２０１２；及びＣｕｒｉｅｌ、２００４ｂに記載されている。当業者であれば、本発明の実施において使用され得る他のシャトルを十分に認識しているだろう。
【０１２９】
[00145]当業者であれば、本発明の実施において使用され得る他の低分子薬を十分に認識しているだろう。一例として、限定されないが、ドラッグバンク（ＤｒｕｇＢａｎｋ）（商標）（Ｗｉｓｈａｒｔ、２０１７）について言及する。２０１７年１２月２０日に公開されたドラッグバンク（商標）のバージョン５．０．１１は、２，５００超の承認された低分子薬を含む１０，９９０の薬物項目を含有する。
【０１３０】
[00146]抗体、抗体模倣物、又は機能的等価物若しくは断片
[00147]ある実施形態では、活性剤は、抗体、抗体の機能的等価物、又は抗体の機能的断片である。
【０１３１】
[00148]概して、「抗体」とは、免疫グロブリンの重及び／又は軽鎖の定常及び／又は可変ドメインとして理解される抗体ドメインからなるか又は含む、リンカー配列を有するか又は有しないポリペプチド又はタンパク質を指す。ある実施形態では、ポリペプチドは、ループ配列によって接続された抗体ドメイン構造の少なくとも２本のベータ鎖からなるベータバレル配列を含む場合、抗体ドメインとして理解される。抗体ドメインは、天然構造であっても、例えば結合特異性又は任意の他の特性を改変する変異誘発又は誘導体化によって修飾されていてもよい。
【０１３２】
[00149]「抗体」という用語は、インタクト抗体を指す。ある実施形態では、「抗体」は、例えば、全長重及び／又は軽鎖を有するポリクローナル、モノクローナル、キメラ、ヒト化、及び／又はヒトバージョンを含む、完全型（すなわち全長）免疫グロブリン分子を含み得る。「抗体」という用語は、限定されないが、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭの主要なクラス、並びにサブクラスであるＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２を含む、任意の及び全てのアイソタイプ及びサブクラスを包含する。ある実施形態では、抗体はＩｇＧである。抗体は、天然に存在する抗体であっても、当業者に利用可能な任意の手段によって、例えば動物若しくはハイブリドーマを使用することによって、及び／又は免疫グロブリン遺伝子断片組換え過程等によって調製される抗体であってもよい。抗体は、例えばＧｒｅｅｎｆｉｅｌｄ、２０１４）に全般的に記載されている。
【０１３３】
[00150]ある実施形態では、抗体は単離された形態であり、単離された形態とは、抗体が、異なる標的抗原に対する他の抗体、及び／又は抗体ドメインの異なる構造配置を含む他の抗体を実質的に含まないことを意味する。ある実施形態では、抗体は、哺乳動物の血清試料から単離された抗体であり得る。ある実施形態では、抗体は、精製された形態であり、例えば単離及び精製された抗体のみを活性剤として含む調製物において提供される。この調製物は、本発明の組成物の調製において使用することができる。ある実施形態では、抗体は親和性精製抗体である。
【０１３４】
[00151]抗体は、天然、組換え、及び／又は合成源を含む、いかなる起源のものであってもよい。ある実施形態では、抗体は動物起源のものであってもよい。ある実施形態では、抗体は、限定されないが、ヒト、マウス、ウサギ、及びヤギを含む哺乳動物起源のものであってもよい。ある実施形態では、抗体は組換え抗体であってもよい。
【０１３５】
[00152]ある実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、又は完全ヒト抗体であり得る。これらの用語及びこれらの用語に包含される抗体の種類に適用される意味は、当業者によって十分に理解されるだろう。
【０１３６】
[00153]簡潔に述べると、限定されないが、「キメラ抗体」という用語は、本明細書で使用する場合、例えばげっ歯類等の１つの種に由来する抗体の可変ドメイン（相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む）を含有する一方で、抗体の定常ドメインがヒト等の異なる種に由来する組換えタンパク質を指す。獣医学用途の場合、キメラ抗体の定常ドメインは、例えばネコ又はイヌ等の動物の定常ドメインに由来してもよい。
【０１３７】
[00154]限定されないが、「ヒト化抗体」とは、本明細書で使用する場合、１つの種、例えばげっ歯類からの抗体のＣＤＲが、げっ歯類抗体の可変重及び軽鎖から、ヒトフレームワーク領域（ＦＲ）配列を含むヒト重及び軽鎖可変ドメインに移された組換えタンパク質を指す。ヒト化抗体の定常ドメインも同様にヒト抗体に由来する。
【０１３８】
[00155]限定されないが、「ヒト抗体」とは、本明細書で使用する場合、抗原負荷に応答して特異的なヒト抗体を産生するように遺伝子操作されたトランスジェニック動物（例えばマウス）から取得される抗体を指す。この技法では、ヒト重及び軽鎖座位の要素は、内在性重鎖及び軽鎖座位の標的化破損を含有する胚性幹細胞株に由来するマウスの系統に導入される。トランスジェニック動物は、ヒト抗原に特異的なヒト抗体を合成することができ、ヒト抗体分泌ハイブリドーマを作製するために使用することができる。トランスジェニックマウスからヒト抗体を取得するための方法は、例えばＧｒｅｅｎ、１９９４；Ｌｏｎｂｅｒｇ、１９９４；及びＴａｙｌｏｒ、１９９４によって記載されている。完全ヒト抗体もまた、その全てが当技術分野で公知である、遺伝子又は染色体トランスフェクション法、及びファージディスプレイ技術によって構築することができる。（例えば、非免疫化ドナー由来の免疫グロブリン可変ドメイン遺伝子レパートリーからのヒト抗体及びその断片のｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける作製に関しては、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ、１９９０を参照のこと）。この技法では、抗体可変ドメイン遺伝子は、繊維状バクテリオファージの主要な又は副次的なコートタンパク質遺伝子にインフレームでクローニングされ、ファージ粒子の表面に機能的抗体断片として表示される。繊維状粒子はファージゲノムの一本鎖ＤＮＡコピーを含有するため、抗体の機能特性に基づく選択は、その機能特性を呈する抗体をコードする遺伝子の選択にもなる。この点で、ファージはＢ細胞の特性の一部を模倣する。ファージディスプレイは種々の形式で実施することができ、ファージディスプレイのレビューに関しては、例えばＪｏｈｎｓｏｎ及びＣｈｉｓｗｅｌｌ、１９９３を参照のこと。ヒト抗体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで活性化したＢ細胞によっても生成することができる（例えば米国特許第５，５６７，６１０号及び同第５，２２９，２７５号を参照のこと）。
【０１３９】
[00156]本明細書で使用する場合、抗体に関する「機能的断片」という用語は、抗体の抗原結合部分を指す。この文脈において、「機能的」とは、断片が標的抗原に結合する能力を維持することを意味する。ある実施形態では、結合親和性は、親抗体の結合親和性に等しくても、それより大きくてもよい。ある実施形態では、結合親和性は、親抗体より小さくてもよいが、その場合であっても機能的断片は標的抗原に関する特異性及び／又は選択性を維持する。
【０１４０】
[00157]ある実施形態では、機能的断片は、該当する場合、親抗体の標的抗原に結合する能力を維持することに加えて、抗体のエフェクター機能（例えば古典的補体経路の活性化、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、他の下流のシグナル伝達過程）も維持する。
【０１４１】
[00158]抗体の機能的断片としては、限定されないが、ＩｇＧ４の半分子（ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｎｅｕｔ  Ｋｏｌｆｓｃｈｏｔｅｎ、２００７）を含む抗体の一部分、例えばＦ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆａｂ２、Ｆａｂ３、単一ドメイン抗体（例えばＤａｂ又はＶＨＨ）等が挙げられる。構造にかかわらず、抗体の機能的断片は、インタクト抗体によって認識される同じ抗原と結合する。抗体に関連する「機能的断片」という用語には、可変領域からなる単離された断片、例えば重及び軽鎖の可変領域からなる「Ｆｖ」断片、並びに軽及び重鎖可変領域がペプチドリンカーによって接続される組換え一本鎖ポリペプチド分子（「ｓｃＦｖタンパク質」）も含まれる。本明細書で使用する場合、「機能的断片」という用語には、抗原結合部位を含有しないＦｃ断片等の断片は含まれない。
【０１４２】
[00159]抗体断片、例えば本明細書に記載される抗体断片は、単一ドメイン抗体（例えばナノボディ）、一本鎖抗体、マキシボディ、エビボディ、ミニボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖＮＡＲ、ｂｉｓ−ｓｃＦｖ、及び他の同様の構造体に組み込むことができる（例えばＨｏｌｌｉｎｇｅｒ及びＨｕｄｓｏｎ、２００５を参照のこと）。フィブロネクチンポリペプチドモノボディを含む抗体ポリペプチドは、米国特許第６，７０３，１９９号にも開示されている。他の抗体ポリペプチドは、米国特許出願公開第２００５０２３８６４６号に開示されている。
【０１４３】
[00160]機能的断片の別の形態は、抗体の１つ若しくは複数のＣＤＲ、又はＣＤＲの１つ若しくは複数の部分を含むペプチドであり、但し、結果として生じるペプチドは標的抗原を結合する能力を保持する。
【０１４４】
[00161]機能的断片は、合成タンパク質であっても遺伝子操作タンパク質であってもよい。例えば、機能的断片としては、軽鎖可変領域からなる単離された断片、重及び軽鎖の可変領域からなる「Ｆｖ」断片、並びに軽及び重鎖領域がペプチドリンカーによって接続される組換え一本鎖ポリペプチド分子（ｓｃＦｖタンパク質）が挙げられる。
【０１４５】
[00162]本明細書で使用する場合、「抗体」及び抗体の「機能的断片」という用語は、それらの任意の誘導体を包含する。「誘導体」とは、天然に存在する（例えばｉｎ  ｖｉｖｏ）修飾又は人工的に導入された（例えば実験的設計によって）修飾の両方を含む、抗体又は機能的断片の任意の修飾を意味する。そのような修飾の非限定的な例としては、例えば配列修飾（例えばアミノ酸置換、挿入、若しくは欠失）、翻訳後修飾（例えばリン酸化、Ｎ結合型グリコシル化、Ｏ結合型グリコシル化、アセチル化、ヒドロキシル化、メチル化、ユビキチン化、アミド化等）、又は異種分子（例えばポリペプチド、局在化シグナル、標識、ターゲティング分子等）の任意の他の共有結合若しくはそうでなければ組込みが挙げられる。ある実施形態では、抗体又はその機能的断片の修飾は、二重特異性抗体若しくは断片（すなわち２つ以上の抗原結合特異性を有する）又は二機能性抗体若しくは断片（すなわち２つ以上のエフェクター機能を有する）を生成するために行われ得る。
【０１４６】
[00163]本明細書で使用する場合、抗体の文脈における「機能的等価物」とは、特定の標的に対する抗体と類似した結合特質を有するが、抗体の認識可能な「断片」では必ずしもない、ポリペプチド又は他の化合物若しくは分子を指す。ある実施形態では、機能的等価物は、特定の標的に関して１０−７〜１０−１２の範囲の平衡解離定数（ＫＤ）を有するポリペプチドである。ある実施形態では、機能的等価物は、特定の標的に関して１０−８以下のＫＤを有する。ある実施形態では、機能的等価物は、特定の標的に関して１０−１０以下のＫＤを有する。ある実施形態では、機能的等価物は、特定の標的に関して１０−１１以下のＫＤを有する。ある実施形態では、機能的等価物は、特定の標的に関して１０−１２以下のＫＤを有する。本明細書に定義される平衡定数（ＫＤ）は、化合物のその標的に対する解離速度（Ｋ−ｏｆｆ）と会合速度（Ｋ−ｏｎ）との比である。
【０１４７】
[00164]ある実施形態では、抗体、抗体の機能的断片、又は抗体の機能的等価物は、リンパ節を又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞を優先的に標的として、その薬剤及び／又は治療活性を発揮するものである。例えば、限定されないが、抗体、抗体の機能的断片、又は抗体の機能的等価物は、リンパ節若しくはリンパ系組織における免疫細胞に結合する、リンパ節若しくはリンパ系組織において発現するか若しくは見出される所望の標的（例えば免疫刺激性若しくは阻害性分子）に結合する、及び／又はリンパ節若しくはリンパ系組織に隔離若しくは送達され得る細胞、タンパク質、ポリペプチド、若しくは他の標的に結合するものであり得る。
【０１４８】
[00165]ある実施形態では、抗体、抗体の機能的断片、又は抗体の機能的等価物は、免疫細胞上の標的を結合するか、免疫細胞によって産生されたタンパク質若しくはポリペプチドを結合するか、又は免疫細胞と相互作用するか若しくは免疫細胞に対して機能を発揮するタンパク質若しくはポリペプチド（例えばリガンド）を結合するものである。
【０１４９】
[00166]ある実施形態では、抗体、抗体の機能的断片、又は抗体の機能的等価物は、免疫調節活性又は機能を有するものである。「免疫調節活性又は機能」とは、抗体、抗体の機能的断片、又は抗体の機能的等価物が免疫応答を増強（上方制御）するか、抑制（下方制御）するか、導くか、再び導くか、又は再プログラミングすることができることを意味する。
【０１５０】
[00167]ある実施形態では、抗体、抗体の機能的断片、又は抗体の機能的等価物は、例えば、限定されないが、本明細書に記載される分子等の刺激性チェックポイント分子及び／又は阻害性チェックポイント分子に結合するものである。ある実施形態では、抗体、抗体の機能的断片、又は抗体の機能的等価物は、刺激性チェックポイント分子及び／又は阻害性チェックポイント分子のアゴニスト又はアンタゴニストである。ある実施形態では、抗体、抗体の機能的断片、又は抗体の機能的等価物は、阻害性チェックポイント分子のアンタゴニストである。ある実施形態では、抗体、抗体の機能的断片、又は抗体の機能的等価物は、刺激性チェックポイント分子のアゴニスト又はスーパーアゴニストである。
【０１５１】
[00168]ある実施形態では、抗体は、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体の機能的断片、若しくは抗ＣＴＬＡ−４抗体の機能的等価物、又はそれらの任意の組合せである。ＣＴＬＡ−４（ＣＤ１５２）は、免疫チェックポイントとして機能し、免疫応答を下方制御するタンパク質受容体である。ある実施形態では、抗ＣＴＬＡ−４抗体は、ＣＴＬＡ−４活性又は機能を阻害し、それにより免疫応答を増強する。ある実施形態では、抗ＣＴＬＡ−４抗体は、イピリムマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、トレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒ；ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、又はＢＮ−１３（ＢｉｏＸＣｅｌｌ）である。別の実施形態では、抗ＣＴＬＡ−４抗体は、ＵＣ１０−４Ｆ１０−１１、９Ｄ９、若しくは９Ｈ１０（ＢｉｏＸＣｅｌｌ）、又はそれらのヒト若しくはヒト化対応物である。
【０１５２】
[00169]ある実施形態では、抗体は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−１抗体の機能的断片、若しくは抗ＰＤ−１抗体の機能的等価物、又はそれらの任意の組合せである。ＰＤ−１（ＣＤ２７９）は、免疫チェックポイントとして機能し、免疫応答を下方制御し、自己寛容を促進する細胞表面受容体である。ある実施形態では、ＰＤ−１抗体はニボルマブ（オプジーボ（Ｏｐｄｉｖｏ）（商標）；Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）である。ある実施形態では、ＰＤ−１抗体はペムブロリズマブ（キイトルーダ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ）（商標）；Ｍｅｒｃｋ）である。ある実施形態では、ＰＤ−１抗体はピジリズマブ（Ｃｕｒｅ  Ｔｅｃｈ）である。ある実施形態では、抗ＰＤ−１抗体はＡＭＰ−２２４（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ＆ＧＳＫ）である。ある実施形態では、抗ＰＤ−１抗体はＲＭＰ１−４若しくはＪ４３（ＢｉｏＸＣｅｌｌ）、又はそれらのヒト若しくはヒト化対応物である。
【０１５３】
[00170]ある実施形態では、抗体は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体の機能的断片、若しくは抗ＰＤ−Ｌ１抗体の機能的等価物、又はそれらの任意の組合せである。ＰＤ−Ｌ１は、ＰＤ−１受容体のリガンドであり、ＰＤ−１受容体に結合することは、ＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を減少させ、アポトーシスを誘導することもできる阻害シグナルを伝達する。ある実施形態では、ＰＤ−Ｌ１抗体はＢＭＳ−９３６５５９（Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）である。ある実施形態では、ＰＤ−Ｌ１抗体はアテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ；Ｒｏｃｈｅ）である。ある実施形態では、ＰＤ−Ｌ１抗体はアベルマブ（Ｍｅｒｃｋ＆Ｐｆｉｚｅｒ）である。ある実施形態では、ＰＤ−Ｌ１抗体はデュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６；ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）である。
【０１５４】
[00171]他の実施形態では、限定されないが、抗体、その機能的断片又は機能的等価物は、例えば国際公開第２０１５／１０３６０２号に開示されているもの等の抗ＰＤ１又は抗ＰＤＬ１抗体であり得る。
【０１５５】
[00172]ある実施形態では、活性剤は、抗体模倣物、抗体模倣物の機能的等価物、又は抗体模倣物の機能的断片である。
【０１５６】
[00173]本明細書で使用する場合、「抗体模倣物」という用語は、抗体と同様に、抗原又は他の標的を特異的及び／又は選択的に結合することができるが、抗体に構造的に関連しない化合物を指す。抗体模倣物は、通例人工ペプチド又はタンパク質であるが、そのような実施形態に限定されない。典型的には、抗体模倣物は抗体よりも小さく、約３〜２０ｋＤａのモル質量である（他方、抗体は一般に約１５０ｋＤａである）。抗体模倣物の非限定的な例としては、ペプチドアプタマー、アフィマー、アフィリン、アフィボディ、アフィチン、アルファボディ、アンチカリン、アビマー、ダルピン（ＤＡＲＰｉｎ）（商標）、フィノマー、クニッツドメインペプチド、ナノクランプ（ｎａｎｏＣＬＡＭＰ）（商標）、親和性試薬、及び足場タンパク質が挙げられる。核酸及び低分子もまた抗体模倣物であり得る。
【０１５７】
[00174]「ペプチドアプタマー」という用語は、本明細書で使用する場合、細胞内部の他のタンパク質相互作用に干渉するように設計されたペプチド又はタンパク質を指す。ペプチドアプタマーは、タンパク質足場に両末端で付着した可変ペプチドループからなる。この二重の構造的制約は、ペプチドアプタマーの結合親和性を抗体の結合親和性に匹敵するレベル（ナノモル範囲）まで大きく高める。可変ペプチドループは典型的には１０〜２０個のアミノ酸を含み、足場は良好な可溶特性を有する任意のタンパク質であり得る。現時点では、細菌タンパク質であるチオレドキシンＡが一般的に使用される足場タンパク質であり、可変ペプチドループは、２つのシステイン側鎖がジスルフィド架橋を形成することができる、野生型タンパク質における−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−ループである酸化還元活性部位内に挿入される。ペプチドアプタマー選択は異なるシステムを使用して行うことができるが、最も広く使用されているシステムは、現時点では酵母ツーハイブリッドシステムである。
【０１５８】
[00175]「アフィマー」という用語は、本明細書で使用する場合、ペプチドアプタマーの発展したものを表す。アフィマーは、特異的な標的タンパク質又は抗原に関する高親和性結合表面を提供するペプチドループを表示するように操作された、小さく高度に安定なタンパク質である。アフィマーは、抗体と同じ特異性という利点を有することができるが、より小さく、化学的に合成することも化学的に修飾することもでき、細胞培養汚染物質を含まないという利点を有する。アフィマーは、シスタチンのシステインプロテアーゼ阻害剤ファミリーに由来する、低分子量の、典型的には１２〜１４ｋＤａのタンパク質である。アフィマー足場は、シスタチンタンパク質フォールドに基づく安定なタンパク質である。アフィマー足場は、無作為化して異なる標的タンパク質を高い親和性及び特異性で結合することができる、２つのペプチドループとＮ末端配列とを表示する。
【０１５９】
[00176]「アフィリン」という用語は、本明細書で使用する場合、ガンマＢクリスタリン又はユビキチンのいずれかを足場として使用し、これらのタンパク質の表面のアミノ酸を無作為な変異誘発によって修飾することによって開発された抗体模倣物を指す。所望の標的特異性を有するアフィリンの選択は、例えばファージディスプレイ又はリボソームディスプレイ技法によって行われる。足場に応じて、アフィリンはおよそ１０ｋＤａ（ユビキチン）又は２０ｋＤａ（ガンマＢクリスタリン）の分子量を有する。本明細書で使用する場合、アフィリンという用語は、アフィリンの二量体又は多量体形態も指す（Ｗｅｉｄｌｅ、２０１３）。
【０１６０】
[00177]「アフィボディ」という用語は、本明細書で使用する場合、ブドウ球菌プロテインＡのＺドメインに由来する抗体模倣物のファミリーを指す。構造的に、アフィボディ分子は、融合タンパク質に組み込むこともできる３ヘリックスバンドルドメインに基づく。本来、アフィボディは６ｋＤａ前後の分子の質量を有し、高温及び酸性又はアルカリ性条件下で安定である。標的特異性は、親タンパク質ドメインの結合活性に関与する２つのアルファヘリックスに位置する１３個のアミノ酸の無作為化によって取得される（Ｆｅｌｄｗｉｓｃｈ及びＴｏｌｍａｃｈｅｖ、２０１２）。ある実施形態では、アフィボディは、ＡｆｆｉｂｏｄｙＡＢ、Ｓｔｏｃｋｈｏｌｍ、Ｓｗｅｄｅｎから入手されるアフィボディ（Ａｆｆｉｂｏｄｙ）（商標）である。
【０１６１】
[00178]「アフィチン」（ナノフィチンとしても公知）は、スルホロブス・アシドカルダリウス（Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕｓ  ａｃｉｄｏｃａｌｄａｒｉｕｓ）のＤＮＡ結合タンパク質であるＳａｃ７ｄに由来する抗体模倣タンパク質である。アフィチンは通例、７ｋＤａ前後の分子量を有し、結合表面のアミノ酸を無作為化することによって標的分子を特異的に結合するように設計される（Ｍｏｕｒａｔｏｕ、２０１２）。ある実施形態では、アフィチンは国際公開第２０１２／０８５８６１号に記載の通りである。
【０１６２】
[00179]「アルファボディ」という用語は、本明細書で使用する場合、種々の抗原に結合するように操作された１０ｋＤａの小さなタンパク質を指す。アルファボディは、正確なフォールディング及び熱安定性を維持する一方でタンパク質標的を結合するように修飾することができる１組のアミノ酸残基を有する足場として開発される。アルファボディ足場は、コイルドコイル構造に基づいてコンピュータにより設計されるが、自然界において公知の対応物を有しない。初めは、足場は、非共有結合的に会合して平行コイルドコイル三量体を形成する３つのペプチドから作製されたが（米国特許出願公開第２０１００３０５３０４号）、後にリンカー領域によって接続された３つのαヘリックスを含有する単一ペプチド鎖として再設計された（Ｄｅｓｍｅｔ、２０１４）。
【０１６３】
[00180]「アンチカリン」という用語は、本明細書で使用する場合、リポカリンに由来する操作されたタンパク質を指す（Ｂｅｓｔｅ、１９９９）；Ｇｅｂａｕｅｒ及びＳｋｅｒｒａ、２００９）。アンチカリンは、リポカリン間で高度に保存されたコアユニットを形成し、開放端の４つの構造的に可変のループによってリガンドのための結合部位を天然に形成する、８つのストランドからなるβバレルを保有する。アンチカリンは、ＩｇＧスーパーファミリーと同族ではないが、抗体の結合部位に典型的であるとこれまでのところ考えられている特徴、すなわち、異なった形状を有する標的への適合の誘導を可能にする、（ｉ）配列多様性の結果としての高度な構造的可塑性、及び（ｉｉ）高められた立体構造的柔軟性を示す。
【０１６４】
[00181]「アビマー」（アビディティ多量体）という用語は、本明細書で使用する場合、様々な膜受容体のＡドメインに由来し、リンカーペプチドによって接続される、それぞれ３０〜３５個のアミノ酸の２つ以上のペプチド配列からなる抗体模倣物のクラスを指す。標的分子の結合はＡドメインを介して行われ、所望の結合特異性を有するドメインは、例えばファージディスプレイ技法によって選択することができる。アビマーに含有される異なるＡドメインの結合特異性は同一であってもよいが、同一である必要はない（Ｗｅｉｄｌｅ、２０１３）。
【０１６５】
[00182]「ダルピン（商標）」という用語は、本明細書で使用する場合、典型的には３つの反復されるβターンに起因する剛性のある界面を提供する、設計されたアンキリン反復ドメイン（１６６残基）を指す。ダルピンは通例、人工コンセンサス配列に対応する３つの反復配列を担持し、ここで反復配列１つ当たり６つの位置が無作為化される。結果的に、ダルピンは構造的柔軟性を欠如する（Ｇｅｂａｕｅｒ及びＳｋｅｒｒａ、２００９）。
【０１６６】
[00183]「フィノマー（Ｆｙｎｏｍｅｒ）（商標）」という用語は、本明細書で使用する場合、ヒトＦｙｎ  ＳＨ３ドメインに由来する非免疫グロブリン由来結合ポリペプチドを指す。Ｆｙｎ  ＳＨ３由来ポリペプチドは、当技術分野で周知であり、例えばＧｒａｂｕｌｏｖｓｋｉ、２００７；国際公開第２００８／０２２７５９号；Ｂｅｒｔｓｃｈｉｎｇｅｒ、２００７；Ｇｅｂａｕｅｒ及びＳｋｅｒｒａ、２００９；並びにＳｃｈｌａｔｔｅｒ、２０１２）に記載されている。
【０１６７】
[00184]「クニッツドメインペプチド」は、ウシ膵臓トリプシン阻害剤（ＢＰＴＩ）、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）、又は組織因子経路阻害剤（ＴＦＰＩ）等のクニッツ型プロテアーゼ阻害剤のクニッツドメインに由来する。クニッツドメインはおよそ６ｋＤＡの分子量を有し、必要とされる標的特異性を有するドメインは、ファージディスプレイ等のディスプレイ技法によって選択することができる（Ｗｅｉｄｌｅ、２０１３）。
【０１６８】
[00185]「モノボディ」（「アドネクチン」とも称される）という用語は、本明細書で使用する場合、２〜３つの曝露されたループを有する９４残基のＩｇ様のβサンドイッチフォールドを採用するが、中心のジスルフィド架橋を欠如する、ヒトフィブロネクチンＩＩＩの１０番目の細胞外ドメイン（１０Ｆｎ３）に基づく分子に関する（Ｇｅｂａｕｅｒ及びＳｋｅｒｒａ、２００９）。所望の標的特異性を有するモノボディは、タンパク質の特異的なループに修飾を導入することによって遺伝子操作することができる。ある実施形態では、モノボディはアドネクチン（ＡＤＮＥＣＴＩＮ）（商標）（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）である。
【０１６９】
[00186]「ナノクランプ」（クロストリジウム（ＣＬｏｓｔｒｉｄａｌ）抗体模倣タンパク質）という用語は、本明細書で使用する場合、標的分子への密接且つやや可逆的な選択的結合を有する１５ｋＤａのタンパク質である親和性試薬を指す。ナノクランプ足場は、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）ヒアルロニダーゼ（Ｍｕ毒素）からのＩｇＧ様の熱安定性炭水化物結合モジュールファミリー３２（ＣＢＭ３２）に基づく。ナノクランプの形状は、およそ長さ４ｎｍ及び直径２．５ｎｍの円筒に近似し、ナノボディとほぼ同じサイズである。特異的な標的に対するナノクランプは、アミノ酸配列を変え、ベータサンドイッチフォールドを構成するベータストランドを接続する、溶媒に曝露される３つの隣接するループの長さを時折変え、標的に関する結合親和性及び特異性を付与することによって生成される（Ｓｕｄｅｒｍａｎ、２０１７）。
【０１７０】
[00187]「親和性試薬」という用語は、本明細書で使用する場合、より大きな標的分子に結合してその活性を同定するか、追跡するか、捕捉するか、又はその活性に影響を及ぼす任意の化合物又は物質を指す。抗体及びペプチドアプタマーは一般的な例であるが、多くの異なる種類の親和性試薬が当業者に利用可能である。ある実施形態では、親和性試薬は、標的を特異的に結合するように操作することができる実現可能な足場を提供するものである（例えば、Ｔｏｐ７はＣＤ４を特異的に結合するように操作された足場である；Ｂｏｓｃｈｅｋ、２００９）。
【０１７１】
[00188]「足場タンパク質」という用語は、本明細書で使用する場合、シグナル伝達経路の複数のメンバーと相互作用及び／又は結合するポリペプチド又はタンパク質を指す。足場タンパク質は多くの重要なシグナル伝達経路の制御因子である。そのような経路では、足場タンパク質はシグナル伝達を制御し、経路成分を局在化することに役立つ。本明細書において、足場タンパク質は、抗体とほぼ同様に標的タンパク質を特異的及び／又は選択的に結合するという能力のために「抗体模倣物」という用語に包含される。足場タンパク質は、結合機能及び特異性に加えて、酵素活性を有することもできる。例示的な足場タンパク質としては、限定されないが、Ｒａｓ１のキナーゼ抑制因子（ＫＮＳ）、ＭＥＫキナーゼ１（ＭＥＫＫ１）、Ｂ細胞リンパ腫／白血病１０（ＢＣＬ−１０）、Ａキナーゼアンカータンパク質（ＡＫＡＰ）、神経芽細胞分化関連タンパク質ＡＨＮＡＫ、ＨＯＭＥＲ１、ペリノタンパク質、ＮＬＲＰファミリー、ディスクラージ相同体１（ｄｉｓｃｓ  ｌａｒｇｅ  ｈｏｍｏｌｏｇ  １；ＤＬＧ１）、及びスピノフィリン（ＰＰＰ１Ｒ９Ｂ）が挙げられる。
【０１７２】
[00189]抗体模倣物の他の実施形態としては、限定されないが、プロテインＡのＺドメイン、ガンマＢクリスタリン、ユビキチン、シスタチン、スルホロブス・アシドカルダリウスからのＳａｃ７Ｄ、リポカリン、膜受容体のＡドメイン、アンキリン反復モチーフ（ｍｏｔｉｖｅ）、ＦｙｎのＳＨ３ドメイン、プロテアーゼ阻害剤のクニッツドメイン、１０番目のフィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン、３若しくは４ヘリックスバンドルタンパク質、アルマジロ反復ドメイン、ロイシン豊富反復ドメイン、ＰＤＺドメイン、ＳＵＭＯ若しくはＳＵＭＯ様ドメイン、免疫グロブリン様ドメイン、ホスホチロシン結合ドメイン、プレクストリン相同ドメイン、又はｓｒｃ相同２ドメインが挙げられる。
【０１７３】
[00190]本明細書で使用する場合、抗体模倣物に関する「機能的断片」という用語は、抗体模倣物の標的分子に結合する能力を維持する、抗体模倣物の任意の部分又は断片を指す。抗体模倣物の機能的断片は、例えば本明細書に記載される抗体模倣物の任意の一部分であり得る。ある実施形態では、結合親和性は、親抗体模倣物の結合親和性に等しくても、それより大きくてもよい。ある実施形態では、結合親和性は、親抗体模倣物より小さくてもよいが、その場合であっても機能的断片は標的抗原に関する特異性及び／又は選択性を維持する。
【０１７４】
[00191]ある実施形態では、抗体模倣物の機能的断片は、該当する場合、親抗体模倣物の標的分子に結合する能力を維持することに加えて、抗体模倣物のエフェクター機能（例えば下流のシグナル伝達）も維持する。
【０１７５】
[00192]本明細書で使用する場合、抗体模倣物の文脈における「機能的等価物」とは、抗体模倣物と類似した結合特質を有するが、抗体模倣物の認識可能な「断片」では必ずしもない、ポリペプチド又は他の化合物若しくは分子を指す。ある実施形態では、機能的等価物は、特定の標的に関して１０−７〜１０−１２の範囲の平衡解離定数（ＫＤ）を有するポリペプチドである。ある実施形態では、機能的等価物は、特定の標的に関して１０−８以下のＫＤを有する。ある実施形態では、機能的等価物は、特定の標的に関して１０−１０以下のＫＤを有する。ある実施形態では、機能的等価物は、特定の標的に関して１０−１１以下のＫＤを有する。ある実施形態では、機能的等価物は、特定の標的に関して１０−１２以下のＫＤを有する。本明細書に定義される平衡定数（ＫＤ）は、化合物のその標的に対する解離速度（Ｋ−ｏｆｆ）と会合速度（Ｋ−ｏｎ）との比である。
【０１７６】
[00193]ある実施形態では、抗体模倣物、抗体模倣物の機能的断片、又は抗体模倣物の機能的等価物は、リンパ節を又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞を優先的に標的として、その薬剤及び／又は治療活性を発揮するものである。例えば、限定されないが、抗体模倣物、抗体模倣物の機能的断片、又は抗体模倣物の機能的等価物は、リンパ節若しくはリンパ系組織における免疫細胞に結合する、リンパ節若しくはリンパ系組織において発現するか若しくは見出される所望の標的（例えば免疫刺激性若しくは阻害性分子）に結合する、及び／又はリンパ節若しくはリンパ系組織に隔離若しくは送達され得る細胞、タンパク質、ポリペプチド、若しくは他の標的に結合するものであり得る。
【０１７７】
[00194]ある実施形態では、抗体模倣物、抗体模倣物の機能的断片、又は抗体模倣物の機能的等価物は、免疫細胞上の標的を結合するか、免疫細胞によって産生されたタンパク質若しくはポリペプチドを結合するか、又は免疫細胞と相互作用するか若しくは免疫細胞に対して機能を発揮するタンパク質若しくはポリペプチド（例えばリガンド）を結合するものである。
【０１７８】
[00195]ある実施形態では、抗体模倣物、抗体模倣物の機能的断片、又は抗体模倣物の機能的等価物は、免疫調節活性又は機能を有するものである。ある実施形態では、抗体模倣物、抗体模倣物の機能的断片、又は抗体模倣物の機能的等価物は、例えば、限定されないが、本明細書に記載される分子等の刺激性チェックポイント分子及び／又は阻害性チェックポイント分子に結合するものである。ある実施形態では、抗体模倣物、抗体模倣物の機能的断片、又は抗体模倣物の機能的等価物は、刺激性チェックポイント分子及び／又は阻害性チェックポイント分子のアゴニスト又はアンタゴニストである。ある実施形態では、抗体模倣物、抗体模倣物の機能的断片、又は抗体模倣物の機能的等価物は、阻害性チェックポイント分子（例えばＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、又はＰＤ−Ｌ１）のアンタゴニストである。ある実施形態では、抗体模倣物、抗体模倣物の機能的断片、又は抗体模倣物の機能的等価物は、刺激性チェックポイント分子のアゴニスト又はスーパーアゴニストである。
【０１７９】
[00196]本明細書に記載される任意の特異的な活性剤の量は、薬剤の種類（例えば低分子薬、抗体、機能的断片等）に依存し得る。当業者であれば、特定の用途において必要である活性剤の量を経験的な試験によって容易に決定することができる。
【０１８０】
[00197]免疫調節剤
[00198]本明細書で使用する場合、「免疫調節剤」とは、免疫応答の活性及び／又は効力を調節する化合物又は分子である。「調節する」とは、本明細書で使用する場合、免疫応答を増強（上方制御）するか、抑制（下方制御）するか、導くか、再び導くか、又は再プログラミングすることを意味する。「調節する」という用語は、活性化するを意味することも、誘導するを意味することも意図しない。この用語は、免疫調節剤は、特定の物質（例えば抗原）によって活性化したか、開始したか、又は誘導された免疫応答を調節する（増強するか、低下させるか、又は導く）が、免疫調節剤それ自体は免疫応答の対象となる物質でもなければ、その物質に由来してもいないことを意味する。
【０１８１】
[00199]ある実施形態では、免疫調節剤は、骨髄細胞（単球、マクロファージ、樹状細胞、巨核球、及び顆粒球）、又はリンパ球様細胞（Ｔ細胞、Ｂ細胞、及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞）を調節するものである。特定の実施形態では、免疫調節剤はリンパ球様細胞のみを調節するものである。ある実施形態では、免疫調節剤は、投与された場合、免疫細胞を刺激して、増殖させるか活性化状態とする治療剤である。
【０１８２】
[00200]ある実施形態では、免疫調節剤は、免疫応答を増強するものである。免疫応答は、予め活性化又は開始されていたが、適切な又は所望の治療利益を提供するのに十分なほど有効ではないものであり得る。或いは、免疫調節剤は、免疫系を事前に予備刺激し、それによりその後活性化する免疫応答を増強するために提供されてもよい。
【０１８３】
[00201]ある実施形態では、免疫応答を増強する免疫調節剤は、サイトカイン（例えばある特定のインターロイキン及びインターフェロン）、幹細胞成長因子、リンホトキシン、共刺激分子、造血因子、コロニー刺激因子、エリスロポエチン、トロンボポエチン等、並びにこれらの分子の合成類似体から選択され得る。
【０１８４】
[00202]ある実施形態では、免疫応答を増強する免疫調節剤は、リンホトキシン、例えば腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）；造血因子、例えばインターロイキン（ＩＬ）；コロニー刺激因子、例えば顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）又は顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）；インターフェロン、例えばインターフェロン−アルファ、−ベータ、又は−ラムダ；及び幹細胞成長因子、例えば「ＳＩ因子」と称されるものから選択され得る。
【０１８５】
[00203]サイトカインには、成長ホルモン、例えばヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモン、及びウシ成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；リラキシン；プロリラキシン；糖タンパク質ホルモン、例えば卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、及び黄体形成ホルモン（ＬＨ）；肝細胞成長因子；プロスタグランジン、線維芽細胞成長因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン、ＯＢタンパク質；腫瘍壊死因子−アルファ及び−ベータ；ミュラー管阻害物質；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮成長因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；神経成長因子、例えばＮＧＦベータ；血小板成長因子；形質転換成長因子（ＴＧＦ）、例えばＴＧＦアルファ及びＴＧＦＰ；インスリン様成長因子Ｉ及びＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロン、例えばインターフェロン−アルファ、−ベータ、及び−ガンマ；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、例えばマクロファージＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）；インターロイキン（ＩＬ）、例えばＩＬ−１、ＩＬ−１アルファ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２；ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＩＬ−２５、ＬＩＦ、ｋｉｔリガンド、又はＦＬＴ−３、アンジオスタチン、トロンボスポンジン、エンドスタチン、並びに腫瘍壊死因子が含まれる。
【０１８６】
[00204]ある実施形態では、免疫調節剤は、チェックポイント阻害薬を調節する薬剤であり得る。免疫チェックポイントタンパク質は、免疫応答を制御する役割を果たすシグナル伝達タンパク質である。一部のチェックポイント阻害薬は、細胞外シグナル伝達に応答する細胞の表面に位置する受容体である。例えば、多くのチェックポイントはリガンド−受容体相互作用によって開始する。活性化すると、阻害性チェックポイントタンパク質は、制御性Ｔ細胞の活性化及び細胞傷害性又はキラーＴ細胞の阻害を含むことができる抗炎症性応答を引き起こす。癌細胞は、免疫細胞による認識を回避する手段として阻害性チェックポイントタンパク質を発現することが示されている。したがって、阻害性チェックポイントタンパク質の阻害薬（すなわち「免疫チェックポイント阻害薬」）は、個体における免疫系を活性化させて癌細胞を死滅させるために使用することができる（例えばＰａｒｄｏｌｌ、２０１２を参照のこと）。
【０１８７】
[00205]ある実施形態では、免疫調節剤は、プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１、これはＢ７−Ｈ１、ＣＤ２７４としても公知である）、プログラム死１（ＰＤ−１、ＣＤ２７９）、ＣＴＬＡ−４（ＣＤ１５４）、ＰＤ−Ｌ２（Ｂ７−ＤＣ、ＣＤ２７３）、ＬＡＧ３（ＣＤ２２３）、ＴＩＭ３（ＨＡＶＣＲ２、ＣＤ３６６）、４１ＢＢ（ＣＤ１３７）、２Ｂ４、Ａ２ａＲ、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、Ｂ及びＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１６０、ＣＤ２２６、ＣＤ２７６、ＤＲ３、ＧＡＬ９、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＩＣＯＳ（誘導性Ｔ細胞共刺激因子）、キラー阻害性受容体（ＫＩＲ）、ＬＡＧ−３、ＬＡＩＲ１、ＬＩＧＨＴ、ＭＡＲＣＯ（コラーゲン構造を有するマクロファージ受容体）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ＯＸ−４０、Ｓｉｇｌｅｃ−５、Ｓｉｇｌｅｃ−７、Ｓｉｇｌｅｃ−９、Ｓｉｇｌｅｃ−１１、ＳＬＡＭ、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＴＮＦ−α、ＶＩＳＴＡ、ＶＴＣＮ１、又はそれらの任意の組合せから選択される免疫チェックポイントタンパク質の阻害薬を含むがこれらに限定されない免疫チェックポイント阻害薬である任意の化合物、分子、又は物質である。
【０１８８】
[00206]ある実施形態では、免疫調節剤は、ＣＴＬＡ−４を阻害又は遮断する任意の化合物、分子、又は物質である。ＣＴＬＡ−４シグナル伝達は、特に、強いＴ細胞応答の間、Ｔ細胞活性化を阻害する。抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体等のＣＴＬＡ−４阻害薬を使用するＣＴＬＡ−４遮断は、阻害シグナルの抑制が抗腫瘍Ｔ細胞応答の発生をもたらすため、大きな魅力を有する。臨床データと前臨床データの両方は、ＣＴＬＡ−４遮断がＣＤ４＋及びＣＤ８＋エフェクター細胞の直接的な活性化をもたらし、抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体療法がいくつかの癌における期待を示したということを示す。
【０１８９】
[00207]ある実施形態では、免疫調節剤は、ＰＤ−１を阻害又は遮断する任意の化合物、分子、又は物質である。ＣＴＬＡ−４シグナル伝達と同様に、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１はＴ細胞応答を調節する。ＰＤ−１を発現するＴｒｅｇは、免疫阻害応答を有することが示されており、したがってＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１発現は自己寛容における役割を果たすと考えられる。癌の文脈では、腫瘍細胞は、ＰＤ−１及びＰＤ−Ｌ１を過剰発現して、免疫系による認識を逃れる。ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１を遮断する抗癌療法は、エフェクターＴ細胞活性を高め、抑制性Ｔｒｅｇ活性を減少させ、個体の免疫系による腫瘍の認識及び破壊を可能にする。
【０１９０】
[00208]様々なチェックポイント阻害薬が使用され得る。例えば、チェックポイント阻害薬は、阻害性チェックポイントタンパク質に結合して拮抗する抗体であってもよい。例示的な抗体としては、抗ＰＤ１抗体（ペムブロリズマブ、ニボルマブ、ピジリズマブ、ＡＭＰ−２２４、ＲＭＰ１−４、又はＪ４３）、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（アテゾリズマブ、アベルマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、又はデュルバルマブ）、抗ＣＴＬＡ−４抗体（イピリムマブ、トレメリムマブ、ＢＮ−１３、ＵＣ１０−４Ｆ１０−１１、９Ｄ９、又は９Ｈ１０）等が挙げられる。一部の実施形態では、チェックポイント阻害薬は、阻害性チェックポイントタンパク質を標的とする低分子又はＲＮＡｉであってもよい。一部の実施形態では、チェックポイント阻害薬はペプチド模倣物又はポリペプチドであってもよい。
【０１９１】
[00209]ある実施形態では、免疫調節剤は免疫共刺激分子アゴニストであり得る。免疫共刺激分子とは、免疫応答を制御する役割を果たすシグナル伝達タンパク質である。一部の免疫共刺激分子は、細胞外シグナル伝達に応答する細胞の表面に位置する受容体である。活性化すると、免疫共刺激分子は、制御性Ｔ細胞の抑制及び細胞傷害性又はキラーＴ細胞の活性化を含むことができる炎症誘発性応答を引き起こす。したがって、免疫共刺激分子アゴニストは、個体における免疫系を活性化させて癌細胞を死滅させるために使用することができる。
【０１９２】
[00210]例示的な免疫共刺激分子としては、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＩＣＯＳ、ＩＬ−１０、ＯＸ４０  ＴＧＦ−ベータ、ＴＯＲ受容体、及びグルココルチコイド誘導ＴＮＦＲ関連タンパク質ＧＩＴＲのいずれも挙げられる。例えば、ＯＸ４０刺激は、エフェクターＴ細胞の生存期間及び活性を増強する一方でＴｒｅｇ細胞機能を抑制し、それにより抗腫瘍免疫を高める。
【０１９３】
[00211]ある実施形態では、免疫調節剤は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＩＣＯＳ、ＩＬ−１０、ＯＸ４０  ＴＧＦ−ベータ、ＴＯＲ受容体、及びグルココルチコイド誘導ＴＮＦＲ関連タンパク質ＧＩＴＲから選択される共刺激免疫分子を含むがこれらに限定されない共刺激免疫分子のアゴニストである任意の化合物、分子、又は物質である。
【０１９４】
[00212]様々な免疫共刺激分子アゴニストが使用され得る。例えば、免疫共刺激分子アゴニストは、免疫共刺激分子に結合して活性化させる抗体であってもよい。さらなる実施形態では、免疫共刺激分子アゴニストは、免疫共刺激分子を標的とし、活性化させる低分子であってもよい。
【０１９５】
[00213]ある実施形態では、免疫調節剤は、免疫抑制剤である任意の化合物、分子、又は物質である。「免疫抑制剤」とは、化合物、分子、又は物質が免疫応答の活性及び／若しくは有効性を低下（下方制御）するか、又は望ましくない結果（例えば自己免疫応答若しくはアレルギー）を緩和するように免疫応答を導くか、再び導くか、若しくは再プログラミングすることを意味する。限定されないが、カルシニューリン阻害薬、インターロイキン阻害薬、選択的免疫抑制薬、及びＴＨＦアルファ阻害薬を含む多くの異なる種類の免疫抑制剤が存在する。
【０１９６】
[00214]ある実施形態では、限定されないが、免疫調節剤は、５−フルオロウラシル、６−チオグアニン、アダリムマブ、アナキンラ、アトガム、アバタセプト、アレファセプト、アザチオプリン、バシリキシマブ、ベラタセプト、ベリムマブ、ベンラリズマブ、ブロダルマブ、カナキヌマブ、セルトリズマブ、クロラムブシル、シクロスポリン、ダクリズマブ、フマル酸ジメチル（ｄｉｍｅｔｈｙｌ  ｆｕｍｅｒａｔｅ）、デュピルマブ、エクリズマブ、エファリズマブ、エタネルセプト、エベロリムス、フィンゴリモド、ゴリムマブ、グセルクマブ、イミキモド、インフリキシマブ、イキセキズマブ、レフルノミド、レナリドミド（ｌｅｎｌｉｄｏｍｉｄｅ）、メクロレタミン、メポリズマブ、メトトレキセート、ムロモナブ−ｃｄ３、ミコフェノール酸モフェチル、ミコフェノール酸、ナタリズマブ、オマリズマブ、ポマリドミド、ピメクロリムス、レスリズマブ、リロナセプト、サリルマブ、セクキヌマブ、シルツキシマブ、シロリムス、タクロリムス、テリフルノミド、サリドマイド、サイモグロブリン、トシリズマブ、ウステキヌマブ、及びベドリズマブから選択される免疫抑制薬であり得る。
【０１９７】
[00215]ある実施形態では、免疫調節剤は、免疫抑制細胞傷害性薬である任意の化合物、分子、又は物質である。ある実施形態では、免疫抑制細胞傷害性薬は、グルココルチコイド、細胞増殖抑制薬（例えばアルキル化剤、代謝拮抗剤）、抗体、イムノフィリンに作用する薬物、インターフェロン、オピオイド、又はＴＮＦ結合タンパク質である。免疫抑制細胞傷害性薬としては、限定されないが、ナイトロジェンマスタード類（例えばシクロホスファミド）、ニトロソ尿素類、プラチナ化合物、葉酸類似体（例えばメトトレキセート）、プリン類似体（例えばアザチオプリン及びメルカプトプリン）、ピリミジン類似体（例えばフルオロウラシル）、タンパク質合成阻害薬、細胞傷害性抗生物質（例えばダクチノマイシン、アントラサイクリン、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、及びミトラマイシン）、シクロスポリン、タクロリムス、シロリムス／ラパマイシン、エベロリムス、プレドニゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メクロレタミン、クロラムブシル（ｃｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、ミコフォリック酸（ｍｙｃｏｐｈｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、フィンゴリモド、ミリオシン、インフリキシマブ、エタネルセプト、又はアダリムマブが挙げられる。
【０１９８】
[00216]ある実施形態では、免疫調節剤は抗炎症剤である。一実施形態では、抗炎症剤は非ステロイド性抗炎症剤である。ある実施形態では、非ステロイド性抗炎症剤はＣｏｘ−１及び／又はＣｏｘ−２阻害薬である。ある実施形態では、抗炎症剤としては、限定されないが、アスピリン、サルサレート、ジフルニサル、イブプロフェン、フェノプロフェン、フルビプロフェン、フェナム酸、ケトプロフェン、ナブメトン、ピロキシカム、ナプロキセン、ジクロフェナク、インドメタシン、スリンダク、トルメチン、エトドラク、ケトロラク、オキサプロジン、又はセレコキシブが挙げられる。ある実施形態では、抗炎症剤はステロイド性抗炎症剤である。ある実施形態では、ステロイド性抗炎症剤はコルチコステロイドである。
【０１９９】
[00217]ある実施形態では、免疫調節剤は抗リウマチ剤である。ある実施形態では、抗リウマチ剤は非ステロイド性抗炎症剤である。ある実施形態では、抗リウマチ剤はコルチコステロイドである。ある実施形態では、コルチコステロイドはプレドニゾン又はデキサメタゾンである。ある実施形態では、抗リウマチ剤は疾患修飾性抗リウマチ薬である。ある実施形態では、疾患修飾性抗リウマチ薬としては、これらに限定されないが、クロロキン、ヒドロキシクロロキン、メトトレキセート、スルファサラジン、シクロスポリン、アザチオプリン、シクロホスファミド、アザチオプリン、スルファサラジン、ペニシラミン、オーロチオグルコース、金チオリンゴ酸ナトリウム、又はオーラノフィンが挙げられる。ある実施形態では、抗リウマチ剤は免疫抑制細胞傷害性薬である。一実施形態では、免疫抑制細胞傷害性薬としては、これらに限定されないが、メトトレキセート、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、又はアザチオプリンが挙げられる。
【０２００】
[00218]ある実施形態では、免疫調節剤は、本明細書に記載される活性剤（例えば低分子薬、抗体、抗体模倣物、又は抗体若しくは抗体模倣物の機能的等価物若しくは断片）のうちの任意の１つ又は複数であり、それによって活性剤は免疫調節機能を有する。ある実施形態では、免疫調節剤は、エパカドスタット、ラパマイシン、ドキソルビシン、バルプロ酸、ミトキサントロン、ボリノスタット、シクロホスファミド、イリノテカン、シスプラチン、メトトレキセート、タクロリムス、抗ＣＴＬＡ−４抗体、又は抗ＰＤ−１抗体のうちの任意の１つ又は複数である。
【０２０１】
[00219]当業者であれば、上記に包含される他の免疫調節剤を十分に認識しているだろう。注目すべきことに、「免疫調節剤」という用語は、本明細書で使用する場合、抗原の免疫細胞への曝露を延長することによって（すなわち、フロイント（Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ）（商標）完全若しくは不完全アジュバント、モンタニド（Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ）（商標）ＩＳＡ、又は他の油性担体等の送達プラットフォームによって）抗原の免疫原性を増強するように機能する化合物も組成物も包含しない。むしろ、「免疫調節剤」という用語は、本明細書で使用する場合、リンパ節に又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞に特異的に送達することができる化合物又は組成物を指す。
【０２０２】
[00220]本明細書に記載される任意の特異的な免疫調節剤の量は、薬剤の種類（例えば低分子薬、抗体等）に依存し得る。当業者であれば、特定の用途において必要である免疫調節剤の量を経験的な試験によって容易に決定することができる。
【０２０３】
[00221]脂質ベースの構造体
[00222]本発明の組成物は、１種又は複数の脂質ベースの構造体を含む。本明細書で使用する場合、「脂質ベースの構造体」という用語は、１種又は複数の脂質によって形成される任意の構造体を指す。
【０２０４】
[00223]「脂質」という用語は、非極性溶媒に可溶であるが、極性溶媒（例えば水）に一般に不溶である任意の有機物質又は化合物であるという点で、当技術分野において一般的な意味を有する。脂質は、限定されないが、脂肪、蝋、ステロール、脂溶性ビタミン、モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリド、及びリン脂質を含む、多様な群の化合物である。ある実施形態では、本明細書に記載される脂質ベースの構造体の脂質は膜形成脂質である。「膜形成脂質」とは、脂質が、単独で又は他の脂質及び／若しくは安定化分子と一緒になって、脂質膜を形成することができることを意味する。脂質膜は、閉鎖脂質小胞を形成しても、例えば脂質シート等の任意の他の構造を形成してもよい。本明細書の脂質ベースの構造体は、単一の種類の脂質を含んでも、２つ以上の異なる種類の脂質を含んでもよい。
【０２０５】
[00224]ある実施形態では、脂質ベースの構造体の１種又は複数の脂質は両親媒性脂質であり、両親媒性脂質とは、脂質が親水性特性と疎水性（親油性）特性の両方を保有することを意味する。
【０２０６】
[00225]上で定義されたいかなる脂質も使用することができるが、特に好適な脂質としては、少なくとも４個の炭素、典型的には約４〜２８個の炭素を含有する少なくとも１つの脂肪酸鎖を有する脂質を挙げることができる。脂肪酸鎖は、いかなる数の飽和及び／又は不飽和結合を含有してもよい。脂質は天然脂質であっても合成脂質であってもよい。脂質の非限定的な例としては、リン脂質、スフィンゴ脂質、スフィンゴミエリン、セレブロシド（ｃｅｒｏｂｒｏｃｉｄｅ）、ガングリオシド、エーテル脂質、ステロール、カルジオリピン、カチオン性脂質、並びにポリ（エチレングリコール）及び他のポリマーで修飾された脂質を挙げることができる。合成脂質としては、限定されないが、以下の脂肪酸構成要素：ラウロイル、ミリストイル、パルミトイル、ステアロイル、アラキドイル、オレオイル、リノレオイル、エルコイル、又はこれらの脂肪酸の組合せを挙げることができる。
【０２０７】
[00226]ある実施形態では、脂質はリン脂質又はリン脂質の混合物である。広義には、「リン脂質」とは、加水分解すると、リン酸、アルコール、脂肪酸、及び窒素塩基を生じる脂質化合物の群のメンバーである。
【０２０８】
[00227]使用することができるリン脂質としては、例えば、限定されないが、ホスホグリセロール、ホスホエタノールアミン、ホスホセリン、ホスホコリン（例えばＤＯＰＣ；１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）、及びホスホイノシトールからなる群から選択される少なくとも１つの頭部基を有するものが挙げられる。ある実施形態では、リン脂質は、ホスファチジルコリンであっても、ホスファチジルコリンを含む脂質の混合物であってもよい。ある実施形態では、脂質は、ＤＯＰＣ（Ｌｉｐｏｉｄ  ＧｍｂＨ、Ｇｅｒｍａｎｙ）であっても、リポイドＳ１００レシチンであってもよい。一部の実施形態では、ＤＯＰＣと非エステル化コレステロールとの混合物が使用されてもよい。他の実施形態では、リポイドＳ１００レシチンと非エステル化コレステロールとの混合物が使用されてもよい。
【０２０９】
[00228]ある実施形態では、脂質ベースの構造体は合成脂質を含む。ある実施形態では、脂質ベースの構造体は合成ＤＯＰＣを含む。別の実施形態では、脂質ベースの構造体は合成ＤＯＰＣ及びコレステロールを含む。
【０２１０】
[00229]コレステロールが使用される場合、コレステロールは、脂質膜における脂質を安定化させるのに十分な任意の量で使用することができる。ある実施形態では、コレステロールは、リン脂質の質量の約１０％に等しい量（例えば１０：１ｗ／ｗのＤＯＰＣ：コレステロール比）で使用することができる。コレステロールは、リン脂質小胞粒子の形成を安定化させることができる。コレステロール以外の化合物が使用される場合、当業者であれば必要である量を容易に決定することができる。
【０２１１】
[00230]ある実施形態では、本明細書に開示される組成物は、約１２０ｍｇ／ｍｌのＤＯＰＣ及び約１２ｍｇ／ｍｌのコレステロールを含む。
【０２１２】
[00231]別の一般的なリン脂質はスフィンゴミエリンである。スフィンゴミエリンは、長鎖不飽和炭化水素鎖を有するアミノアルコールであるスフィンゴシンを含有する。脂肪アシル側鎖は、スフィンゴシンのアミノ基にアミド結合によって連結し、セラミドを形成する。スフィンゴシンのヒドロキシル基はホスホコリンとエステル結合する。ホスホグリセリドと同様に、スフィンゴミエリンは両親媒性である。
【０２１３】
[00232]さらに使用することができるレシチンは、鶏卵、羊毛、ダイズ、及び他の野菜源に典型的には由来するリン脂質の天然混合物である。
【０２１４】
[00233]これらの及び他のリン脂質の全ては本発明の実施において使用することができる。リン脂質は、様々な数ある供給業者の中でも、例えばＡｖａｎｔｉ  ｌｉｐｉｄｓ（Ａｌａｂａｓｔａｒ、ＡＬ、ＵＳＡ）、Ｌｉｐｏｉｄ  ＬＬＣ（Ｎｅｗａｒｋ、ＮＪ、ＵＳＡ）、及びＬｉｐｏｉｄ  ＧｍｂＨ（Ｇｅｒｍａｎｙ）から購入することができる。
【０２１５】
[00234]形成することができる様々な脂質ベースの構造体が存在し、本明細書に開示される組成物は、単一の種類の脂質ベースの構造体を含んでも、異なる種類の脂質ベースの構造体の混合物を含んでもよい。
【０２１６】
[00235]ある実施形態では、脂質ベースの構造体は閉鎖小胞構造体であり得る。閉鎖小胞構造体は、典型的には球状又は実質的に球状の形状であるが、他の形状及び立体構造は、形成されてもよく、除外されない。「実質的に球状」とは、脂質ベースの構造体が球状に近いが、完全な球であることがないことを意味する。閉鎖小胞構造体の他の形状としては、限定されないが、卵形、楕円形、正方形、長方形、三角形、立方形、三日月形、菱形、円筒形、又は半球形状が挙げられる。いかなる規則又は不規則形状が形成されてもよい。閉鎖小胞構造体の例示的な実施形態としては、限定されないが、単層小胞構造体（例えばミセル若しくは逆ミセル）、及び二重層小胞構造体（例えば単ラメラ若しくは多重ラメラ小胞）、又はそれらの様々な組合せが挙げられる。
【０２１７】
[00236]「単層」とは、脂質が二重層を形成するのではなく、疎水部が一方の側に配向し、親水部がその反対側に配向している層のままであることを意味する。「二重層」とは、脂質が、例えば各層の疎水部が二重層の中心に向かって内側に配向し、親水部が外側に配向している二層シートを形成することを意味する。或いは、逆の配置も可能である、すなわち各層の親水部が二重層の中心に向かって内側に配向し、疎水部が外側に配向している配置も可能である。「多層」という用語は、単層構造と二重層構造との任意の組合せを包含することを意味する。採用される形態は、使用される一定の脂質、及び組成物が無水であるか否かに依存し得る。
【０２１８】
[00237]閉鎖小胞構造体は、単層脂質膜、二重層脂質膜、及び／又は多層脂質膜から形成することができる。脂質膜は、大部分は脂質で構成及び形成されるが、追加の成分も含むことができる。例えば、限定されないが、脂質膜は、構造体の完全性を維持することを補助する安定化分子を含むことができる。任意の利用可能な安定化分子が使用され得る。
【０２１９】
[00238]ある実施形態では、脂質ベースの構造体は、例えばリポソーム等の二重層小胞構造体である。リポソームは完全閉鎖脂質二重層膜である。リポソームは、単ラメラ小胞（単一の二重層膜を保有する）であっても、多重ラメラ小胞（各二重層が水性層によって隣の二重層から分離されていてもされていなくてもよい多重膜二重層を特徴とする）であっても、多胞体小胞（小胞内に１つ又は複数の小胞を保有する）であってもよい。リポソームの全般的考察は、Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ、１９９０；及びＦｒｅｚａｒｄ、１９９９に見出すことができる。ある実施形態では、脂質ベースの構造体は、本明細書の組成物が無水でない場合、リポソームである。
【０２２０】
[00239]ある実施形態では、１種又は複数の脂質ベースの構造体は単層脂質集合体で構成される。形成することができる様々な種類のこれらの脂質ベースの構造体が存在し、本明細書に開示される組成物は、単層脂質集合体を有する単一の種類の脂質ベースの構造体を含んでも、異なるそのような脂質ベースの構造体の混合物を含んでもよい。
【０２２１】
[00240]ある実施形態では、本明細書の脂質ベースの構造体は、本明細書の組成物が無水である場合、単層脂質集合体を有する。
【０２２２】
[00241]ある実施形態では、単層脂質集合体を有する脂質ベースの構造体は、活性剤及び／又は免疫調節剤を部分的に又は完全に囲む。一例として、脂質ベースの構造体は、活性剤及び／又は免疫調節剤を囲む閉鎖小胞構造体であり得る。ある実施形態では、小胞構造体における脂質の疎水部は、疎水性担体に向かって外向きに配向する。
【０２２３】
[00242]別の例として、単層脂質集合体を有する１種又は複数の脂質ベースの構造体は、脂質の疎水部が疎水性担体に向かって外向きに配向し、脂質の親水部が中心部分として凝集している脂質の凝集体を含み得る。単層脂質集合体を有する１種又は複数の脂質ベースの構造体は連続脂質層膜を必ずしも形成しない。ある実施形態では、単層脂質集合体を有する１種又は複数の脂質ベースの構造体は単量体脂質の凝集体である。
【０２２４】
[00243]ある実施形態では、単層脂質集合体を有する１種又は複数の脂質ベースの構造体は逆ミセルを含む。水性溶液における典型的なミセルは、親水部が周囲の水性溶液と接触している凝集体を形成し、ミセル中心部における疎水部を隔離する。対照的に、疎水性担体では、疎水部が周囲の疎水性溶液と接触している反転／逆ミセルが形成され、ミセル中心部における親水部を隔離する。球状逆ミセルは、その中心部分（すなわち内部環境）に、親水親和性を有する活性剤及び／又は免疫調節剤をパッケージングすることができる。
【０２２５】
[00244]限定されないが、単層脂質集合体を有する脂質ベースの構造体のサイズは、直径２ｎｍ（２０Ａ）〜２０ｎｍ（２００Ａ）の範囲である。ある実施形態では、単層脂質集合体を有する脂質ベースの構造体のサイズは直径約２ｎｍ〜約１０ｎｍの間である。ある実施形態では、単層脂質集合体を有する脂質ベースの構造体のサイズは直径約２ｎｍ、３ｎｍ、４ｎｍ、５ｎｍ、６ｎｍ、約７ｎｍ、約８ｎｍ、約９ｎｍ、又は約１０ｎｍである。ある実施形態では、脂質ベースの構造体の最大直径は約４ｎｍ又は約６ｎｍである。ある実施形態では、これらのサイズの脂質ベースの構造体は逆ミセルである。
【０２２６】
[00245]ある実施形態では、１つ又は複数の活性剤及び／又は免疫調節剤は、疎水性担体への可溶化後、脂質ベースの構造体の内側にある。「脂質ベースの構造体の内側」とは、活性剤及び／又は免疫調節剤が脂質によって、活性剤及び／又は免疫調節剤の親水性成分が疎水性担体に曝露されないように実質的に囲まれていることを意味する。ある実施形態では、脂質ベースの構造体の内側の活性剤及び／又は免疫調節剤は大部分親水性である。
【０２２７】
[00246]ある実施形態では、１つ又は複数の活性剤及び／又は免疫調節剤は、疎水性担体への可溶化後、脂質ベースの構造体の外側にある。「脂質ベースの構造体の外側」とは、活性剤及び／又は免疫調節剤が脂質膜又は集合体の内部の環境内に隔離されていないことを意味する。ある実施形態では、脂質ベースの構造体の外側の活性剤及び／又は免疫調節剤は大部分疎水性である。
【０２２８】
[00247]疎水性担体
[00248]組成物は疎水性担体を含む。
【０２２９】
[00249]疎水性担体のある実施形態では、担体は、連続疎水性相及び不連続水性相（例えばエマルション、例えば油中水型エマルション等）を含み得る。疎水性担体のある実施形態では、担体は、不連続相を有しない連続疎水性相を含む（例えば無水）。
【０２３０】
[00250]疎水性担体は、本質的に純粋な疎水性物質であっても、疎水性物質の混合物であってもよい。本明細書に記載される方法及び組成物に有用な疎水性物質は、薬学的に許容できる疎水性物質である。担体は、典型的には室温（例えば約１８〜２５℃）で液体であるが、室温で液体ではないある特定の疎水性物質は、例えば加温によって液化することができ、これらも有用であり得る。
【０２３１】
[00251]油又は油の混合物は、本明細書に開示される方法及び組成物における使用に特に好適な担体である。油は薬学的に許容できると考えられる。好適な油としては、例えば鉱油（とりわけドラケオール（Ｄｒａｋｅｏｌ）（登録商標）６ＶＲ等の軽油若しくは低粘度鉱油）、野菜油（例えばダイズ油）、ナッツ油（例えばピーナッツ油）、又はそれらの混合物が挙げられる。したがって、ある実施形態では、疎水性担体は野菜油、ナッツ油、又は鉱油等の疎水性物質である。動物性脂肪及び人工疎水性ポリマー材料、特に大気温で液体であるか又は比較的容易に液化することができるものもまた使用することができる。
【０２３２】
[00252]一部の実施形態では、疎水性担体は、鉱油ベースのモデル疎水性担体である不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）であり得るか、又はこれを含み得る。別の実施形態では、疎水性担体は、モンタニド（登録商標）ＩＳＡ５１（ＳＥＰＰＩＣ、Ｆｒａｎｃｅ）として市販されているもの等の鉱油溶液中のオレイン酸マンニドであり得るか、又はこれを含み得る。
【０２３３】
[00253]ある実施形態では、疎水性担体は鉱油であるか又は鉱油溶液中のオレイン酸マンニドである。
【０２３４】
[00254]ある実施形態では、疎水性担体はモンタニド（登録商標）ＩＳＡ５１である。
【０２３５】
[00255]ある実施形態では、疎水性担体は、鉱油（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）とＳｐａｎ８０（Ｆｌｕｋａ）との混合物であるＭＳ８０油である。成分は別々に購入し、使用前に混合することができる。
【０２３６】
[00256]ある実施形態では、疎水性担体は無水であり、本明細書の他の箇所に記載される無水である組成物を調製するために使用される。さらに、本明細書で使用する場合、「無水」とは、完全に又は実質的に水を含まないことを意味する。ある実施形態では、疎水性担体は完全に水を含まない。
【０２３７】
[00257]組成物を調製するための方法
[00258]組成物は、本開示を考慮して当技術分野で公知の方法によって調製することができる。本明細書に開示される組成物を調製するための例示的な実施形態は、限定されないが実施例を含む以下に記載される。
【０２３８】
[00259]この節で使用する場合、「活性剤及び／又は免疫調節剤」という用語は一般に、本明細書に記載及び定義される任意の活性剤及び／又は免疫調節剤を説明するために使用される。「活性剤及び／又は免疫調節剤」という用語は、単数形の「活性剤及び／又は免疫調節剤」と複数形の「活性剤及び／又は免疫調節剤」の両方を包含する。複数の活性剤及び／又は免疫調節剤が組成物に含まれる場合、それら全てが同じ手段で組成物に導入されることは必要ではない。
【０２３９】
[00260]組成物を調製するための実施形態では、脂質調製物は、脂質又は脂質混合物を好適な溶媒に、穏やかに振盪しながら溶解又は水和することによって調製する。次いで、活性剤及び／又は免疫調節剤を、脂質調製物に直接（例えば乾燥活性剤及び／若しくは免疫調節剤を添加することによって）、又は好適な溶媒に溶解した活性剤及び／若しくは免疫調節剤のストックを最初に調製することによって添加することができる。典型的には、活性剤及び／又は免疫調節剤は、穏やかに振盪しながら、脂質調製物に添加するか又は脂質調製物と組み合わせる。次いで、活性剤及び／又は免疫調節剤／脂質調製物を乾燥して乾燥ケーキを形成し、乾燥ケーキを疎水性担体に再懸濁する。乾燥させるステップは、当技術分野で公知の様々な手段、例えばフリーズドライ、凍結乾燥、ロータリーエバポレーション、減圧下蒸発等によって実施され得る。成分の完全性を損なわない低温乾燥も使用することができる。
【０２４０】
[00261]「好適な溶媒」は、それぞれの成分（例えば脂質、活性剤／免疫調節剤、又は両方）を溶解することができ、当業者によって決定することができる溶媒である。
【０２４１】
[00262]活性剤及び／又は免疫調節剤について、ある実施形態では、好適な溶媒はリン酸ナトリウム緩衝液又は酢酸ナトリウム緩衝液である。別の実施形態では、ＤＭＳＯ又は水が使用されてもよい。当業者であれば、使用される活性剤及び／又は免疫調節剤に応じて、他の好適な溶媒を決定することができる。
【０２４２】
[00263]脂質について、ある実施形態では、好適な溶媒は、アルコール（例えばｔｅｒｔ−ブタノール、ｎ−ブタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、エタノール、若しくはメタノール）、水、酢酸緩衝液、リン酸緩衝液、ギ酸、又はクロロホルム等の極性プロトン性溶媒である。ある実施形態では、好適な溶媒は４０％ターシャリーブタノールである。当業者であれば、使用される脂質に応じて、他の好適な溶媒を決定することができる。
【０２４３】
[00264]組成物を調製する特定の実施形態では、ＤＯＰＣとコレステロールとを１０：１の比（ｗ：ｗ）で含有する脂質混合物（Ｌｉｐｏｉｄ  ＧｍＢＨ、Ｇｅｒｍａｎｙ）は、室温にて３００ＲＰＭで溶解するまで振盪することによって４０％ターシャリーブタノールに溶解させることができる。活性剤／免疫調節剤ストックは、ＤＭＳＯ中で調製し、４０％ターシャリーブタノールで希釈した後で、溶解した脂質混合物と混合することができる。次いで、活性剤／免疫調節剤ストックを、３００ＲＰＭで約５分間振盪しながら、溶解した脂質混合物に添加することができる。次いで、調製物を、保管及び後の再構成のためにフリーズドライしてもよい。任意選択で、調製物は凍結保護剤／増量剤を用いてフリーズドライしてもよい。使用することができる凍結保護剤／増量剤としては、これらに限定されないが、糖類／多糖類、例えばトレハロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、マルトース、ラフィノース、マルトデキストリン、プルラン、イヌリン、フィコール、カルボキシメチルセルロース、及びヒドロキシエチルデンプン；アミノ酸、例えばアルギニン、ヒスチジン、フェニルアラニン、ロイシン、及びイソロイシン；ウシ血清アルブミン；緩衝塩、例えば酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、トリスＨＣｌ、ＨＥＰＥＳ、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、トリス酢酸塩；並びにポリマー、例えばポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、ポリアクリルアミド、及びカーボポール（Ｃａｒｂｏｐｏｌ）（登録商標）が挙げられる。次いで、フリーズドライケーキを、モンタニド（登録商標）ＩＳＡ５１ＶＧ（ＳＥＰＰＩＣ、Ｆｒａｎｃｅ）において再構成して、透明溶液を取得することができる。典型的には、フリーズドライケーキは、疎水性担体において再構成する場合、投与時まで保管される（例えば−２０℃で）。
【０２４４】
[00265]別の実施形態では、組成物を調製するために、活性剤及び／又は免疫調節剤を、Ｓ１００脂質とコレステロールとを含むリン酸ナトリウム緩衝液（Ｌｉｐｏｉｄ、Ｇｅｒｍａｎｙ）に溶解する。次いで、これらの成分を凍結乾燥して乾燥ケーキを形成する。注射直前に、乾燥ケーキをＩＳＡ５１ＶＧ油（ＳＥＰＰＩＣ、Ｆｒａｎｃｅ）に再懸濁して、油性無水組成物を調製する。
【０２４５】
[00266]別の実施形態では、組成物を調製するために、活性剤及び／又は免疫調節剤を、ＤＯＰＣとコレステロールとを含むリン酸ナトリウム緩衝液（Ｌｉｐｏｉｄ、Ｇｅｒｍａｎｙ）に溶解する。次いで、これらの成分を凍結乾燥して乾燥ケーキを形成する。注射直前に、乾燥ケーキをＩＳＡ５１ＶＧ油（ＳＥＰＰＩＣ、Ｆｒａｎｃｅ）に再懸濁して、油性無水組成物を調製する。
【０２４６】
[00267]別の実施形態では、組成物を調製するために、活性剤及び／又は免疫調節剤を、リン酸ナトリウム緩衝液（１００ｍＭ、ｐＨ６．０）中で脂質／コレステロールナノ粒子（サイズ≦１１０ｎｍ）と混合する。脂質はＤＯＰＣであり得る。次いで、成分を凍結乾燥して乾燥ケーキを形成する。注射直前に、乾燥ケーキをＩＳＡ５１ＶＧ油（ＳＥＰＰＩＣ、Ｆｒａｎｃｅ）に再懸濁して、油性無水組成物を調製する。
【０２４７】
[00268]一部の実施形態では、乾燥ケーキの成分を疎水性担体に再懸濁する場合、乾燥ケーキの成分を安定化させることを支援するために疎水性担体に乳化剤を含めることが適切なことがある。乳化剤は、活性剤及び／又は免疫調節剤と脂質との乾燥混合物を疎水性担体に再懸濁し、疎水性担体に溶解した状態の活性剤及び／又は免疫調節剤と脂質とを維持するのに十分な量で提供される。例えば、乳化剤は、疎水性担体の約５％〜約１５質量／質量％又は質量／容量％で存在し得る。
【０２４８】
[00269]生物活性を維持するか又は化学的安定性を向上して、成分のいずれかの有効期間を延長する安定剤、例えば糖類、抗酸化剤、又は保存剤が組成物に添加されてもよい。
【０２４９】
[00270]ある実施形態では、本明細書の組成物を調製するための方法は、本開示の文脈において適切である場合、国際公開第２００９／０４３１６５号に開示されている方法を含んでもよい。そのような場合、本明細書に記載される活性剤及び／又は免疫調節剤は、国際公開第２００９／０４３１６５号に抗原に関して記載されているのと同様の方法で組成物に組み込まれ得る。
【０２５０】
[00271]ある実施形態では、本明細書の組成物を調製するための方法は、サイジングされた脂質小胞粒子の使用を伴う国際出願ＰＣＴ／ＣＡ２０１７／０５１３３５及び同ＰＣＴ／ＣＡ２０１７／０５１３３５に開示されている方法を含んでもよい。そのような場合、本明細書に記載される活性剤及び／又は免疫調節剤は、国際出願ＰＣＴ／ＣＡ２０１７／０５１３３５及び同ＰＣＴ／ＣＡ２０１７／０５１３３５に治療剤に関して記載されているのと同様の方法で組成物に組み込まれ得る。
【０２５１】
[00272]実施形態
[00273]本発明の特定の実施形態としては、限定されないが、以下のものが挙げられる：
[00274]（１）活性剤のリンパ節への又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞への標的化送達のための方法であって、それを必要とする対象にａ）低分子薬；抗体、抗体模倣物、又はそれらのうちのいずれか１つの機能的等価物若しくは機能的断片；或いはそれらの混合物である、活性剤、ｂ）１種又は複数の脂質ベースの構造体、及びｃ）疎水性担体を含む組成物を投与するステップを含む、方法。
【０２５２】
[00275]（２）組成物が無水である、項目（１）に記載の方法。
【０２５３】
[00276]（３）リンパ系組織がリンパ節である、項目（１）又は（２）に記載の方法。
【０２５４】
[00277]（４）リンパ系組織が脾臓、胸腺、又は粘膜関連リンパ組織である、項目（１）又は（２）に記載の方法。
【０２５５】
[00278]（５）活性剤がリンパ節における免疫細胞に送達される、項目（１）〜（３）のいずれか一項に記載の方法。
【０２５６】
[00279]（６）免疫細胞がＴリンパ球、Ｂリンパ球、又は両方である、項目（５）に記載の方法。
【０２５７】
[00280]（７）活性剤が樹状細胞又はマクロファージによってリンパ節に又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞に送達される、項目（１）〜（６）のいずれか一項に記載の方法。
【０２５８】
[00281]（８）活性剤が組成物の投与部位又はその付近の樹状細胞又はマクロファージに送達される、項目（７）に記載の方法。
【０２５９】
[00282]（９）活性剤が主要組織適合複合体（ＭＨＣ）クラスＩタンパク質、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質、又は両方を直接結合しない、項目（１）〜（８）のいずれか一項に記載の方法。
【０２６０】
[00283]（１０）活性剤がＭＨＣクラスＩタンパク質を直接結合しない、項目（９）に記載の方法。
【０２６１】
[00284]（１１）活性剤がリンパ節又はリンパ球様細胞にインタクトで送達される、項目（１）〜（１０）のいずれか一項に記載の方法。
【０２６２】
[00285]（１２）活性剤がＴリンパ球の表面のチェックポイント受容体を結合する、項目（１）〜（１１）のいずれか一項に記載の方法。
【０２６３】
[00286]（１３）活性剤が免疫調節剤である、項目（１）〜（１２）のいずれか一項に記載の方法。
【０２６４】
[00287]（１４）活性剤がシャトルである、項目（１）〜（１１）のいずれか一項に記載の方法。
【０２６５】
[00288]（１５）活性剤が低分子薬である、項目（１）〜（１４）のいずれか一項に記載の方法。
【０２６６】
[00289]（１６）低分子薬が約２０００ダルトン又は２０００ダルトン未満の分子量を有する、項目（１）〜（１５）のいずれか一項に記載の方法。
【０２６７】
[00290]（１７）低分子薬が約９００ダルトン又は９００ダルトン未満の分子量を有する、項目（１）〜（１５）のいずれか一項に記載の方法。
【０２６８】
[00291]（１８）低分子薬が、細胞傷害性剤、抗腫瘍剤、化学療法剤、抗新生物剤、抗ウイルス剤、抗菌剤、抗炎症剤、免疫調節剤、免疫応答チェックポイント剤、生物学的応答修飾物質、プロドラッグ、サイトカイン、ケモカイン、ビタミン、ステロイド、リガンド、鎮痛薬、放射性医薬、放射性同位元素、又は視覚的検出のための色素である、項目（１５）〜（１７）のいずれか一項に記載の方法。
【０２６９】
[00292]（１９）活性剤が、エパカドスタット、ラパマイシン、ドキソルビシン、バルプロ酸、ミトキサントロン、ボリノスタット、シクロホスファミド、イリノテカン、シスプラチン、メトトレキセート、タクロリムス、又はそれらのうちのいずれか１つの薬学的に許容できる塩である、項目（１５）に記載の方法。
【０２７０】
[00293]（２０）活性剤がエパカドスタットである、項目（１９）に記載の方法。
【０２７１】
[00294]（２１）活性剤がシクロホスファミドである、項目（１９）に記載の方法。
【０２７２】
[00295]（２２）活性剤がラパマイシンである、項目（１９）に記載の方法。
【０２７３】
[00296]（２３）活性剤が、抗体、抗体模倣物、又はそれらのうちのいずれか１つの機能的等価物若しくは機能的断片である、項目（１）〜（１４）のいずれか一項に記載の方法。
【０２７４】
[00297]（２４）活性剤が抗ＣＴＬＡ−４抗体である、項目（２３）に記載の方法。
【０２７５】
[00298]（２５）抗ＣＴＬＡ−４抗体が、イピリムマブ、トレメリムマブ、ＢＮ−１３、ＵＣ１０−４Ｆ１０−１１、９Ｄ９、又は９Ｈ１０である、項目（２４）に記載の方法。
【０２７６】
[00299]（２６）活性剤が抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、項目（２３）に記載の方法。
【０２７７】
[00300]（２７）抗ＰＤ−１抗体が、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、ピジリズマブ、ＡＭＰ−２２４、ＲＭＰ１−４、又はＪ４３であり、抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、又はデュルバルマブである、項目（２６）に記載の方法。
【０２７８】
[00301]（２８）活性剤が、ペプチドアプタマー、アフィマー、アフィリン、アフィボディ、アフィチン、アルファボディ、アンチカリン、アビマー、ダルピン、フィノマー、クニッツドメインペプチド、モノボディ、ナノクランプ、親和性試薬、足場タンパク質、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆａｂ２、Ｆａｂ３、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｄａｂ、エビボディ、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、又は単一ドメイン抗体（ナノボディ）である、項目（２３）に記載の方法。
【０２７９】
[00302]（２９）活性剤が、成分（ｂ）及び（ｃ）のうちの１つ又は両方を含まない組成物において投与される場合、対象における全身送達を呈する、項目（１）〜（２８）のいずれか一項に記載の方法。
【０２８０】
[00303]（３０）免疫調節剤のリンパ節への又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞への標的化送達のための方法であって、それを必要とする対象にａ）免疫調節剤、ｂ）１種又は複数の脂質ベースの構造体、及びｃ）疎水性担体を含む組成物を投与するステップを含む、方法。
【０２８１】
[00304]（３１）組成物が無水である、項目（３０）に記載の方法。
【０２８２】
[00305]（３２）リンパ系組織がリンパ節である、項目（３０）又は３１）に記載の方法。
【０２８３】
[00306]（３３）リンパ系組織が脾臓、胸腺、又は粘膜関連リンパ組織である、項目（３０）又は（３１）に記載の方法。
【０２８４】
[00307]（３４）免疫調節剤がリンパ節における免疫細胞に送達される、項目（３０）〜（３２）のいずれか一項に記載の方法。
【０２８５】
[00308]（３５）免疫細胞がＴリンパ球、Ｂリンパ球、又は両方である、項目（３４）に記載の方法。
【０２８６】
[00309]（３６）免疫調節剤が樹状細胞又はマクロファージによってリンパ節に又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞に送達される、項目（３０）〜（３５）のいずれか一項に記載の方法。
【０２８７】
[00310]（３７）活性剤が組成物の投与部位又はその付近の樹状細胞又はマクロファージに送達される、項目（３６）に記載の方法。
【０２８８】
[00311]（３８）免疫調節剤がリンパ節又はリンパ球様細胞にインタクトで送達される、項目（３０）〜（３７）のいずれか一項に記載の方法。
【０２８９】
[00312]（３９）免疫調節剤がＴリンパ球の表面のチェックポイント受容体を結合する、項目（３０）〜（３８）のいずれか一項に記載の方法。
【０２９０】
[00313]（４０）免疫調節剤が、抗原又は免疫原によって活性化する種類の免疫応答を上方制御、下方制御、又は再プログラミングする、項目（３０）〜（３９）のいずれか一項に記載の方法。
【０２９１】
[00314]（４１）免疫調節剤が、低分子薬；抗体、抗体模倣物、又はそれらのうちのいずれか１つの機能的等価物若しくは機能的断片；或いはそれらの混合物である、項目（３０）〜（４０）のいずれか一項に記載の方法。
【０２９２】
[00315]（４２）免疫調節剤が、エパカドスタット、ラパマイシン、ドキソルビシン、バルプロ酸、ミトキサントロン、ボリノスタット、シクロホスファミド、イリノテカン、シスプラチン、メトトレキセート、タクロリムス、抗ＣＴＬＡ−４抗体、又は抗ＰＤ−１抗体である、項目（４１）に記載の方法。
【０２９３】
[00316]（４３）免疫調節剤が、成分（ｂ）及び（ｃ）のうちの１つ又は両方を含まない組成物において投与される場合、対象における全身送達を呈する、項目（３０）〜（４２）のいずれか一項に記載の方法。
【０２９４】
[00317]（４４）１種又は複数の脂質ベースの構造体が単層脂質集合体を有する、項目（１）〜（４３）のいずれか一項に記載の方法。
【０２９５】
[00318]（４５）単層脂質集合体を有する１種又は複数の脂質ベースの構造体が、脂質の疎水部が疎水性担体に向かって外向きに配向し、脂質の親水部が中心部分として凝集している脂質の凝集体を含む、項目（４４）に記載の方法。
【０２９６】
[00319]（４６）単層脂質集合体を有する１種又は複数の脂質ベースの構造体が逆ミセルを含む、項目（４５）に記載の方法。
【０２９７】
[00320]（４７）脂質ベースの構造体のサイズが直径約２ｎｍ〜約１０ｎｍの間である、項目（１）〜（４６）のいずれか一項に記載の方法。
【０２９８】
[00321]（４８）疎水性担体が鉱油であるか又は鉱油溶液中のオレイン酸マンニドである、項目（１）〜（４７）のいずれか一項に記載の方法。
【０２９９】
[00322]（４９）疎水性担体がモンタニド（登録商標）ＩＳＡ５１である、項目（１）〜（４８）のいずれか一項に記載の方法。
【０３００】
[00323]（５０）投与が注射によるものである、項目（１）〜（４９）のいずれか一項に記載の方法。
【０３０１】
[00324]（５１）投与が皮下、筋肉内、又は腹腔内注射によるものである、項目（５０）に記載の方法。
【０３０２】
[00325]（５２）対象における免疫応答を調節するためのものである、項目（１）〜（５１）のいずれか一項に記載の方法。
【０３０３】
[00326]（５３）対象における疾患又は障害を処置又は防止するためのものである、項目（１）〜（５１）のいずれか一項に記載の方法。
【０３０４】
[00327]（５４）疾患又は障害が感染性疾患又は癌である、項目（５３）に記載の方法。
【０３０５】
[00328]（５５）ａ）低分子薬；抗体、抗体模倣物、又はそれらのうちのいずれか１つの機能的等価物若しくは機能的断片；或いはそれらの混合物である、活性剤、ｂ）１種又は複数の脂質ベースの構造体、及びｃ）疎水性担体を含む組成物の使用であって、活性剤を対象のリンパ節に又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞にターゲティングするための、使用。
【０３０６】
[00329]（５６）組成物が無水である、項目（５５）に記載の使用。
【０３０７】
[00330]（５７）リンパ系組織がリンパ節である、項目（５５）又は（５６）に記載の使用。
【０３０８】
[00331]（５８）リンパ系組織が脾臓、胸腺、又は粘膜関連リンパ組織である、項目（５５）又は（５６）に記載の使用。
【０３０９】
[00332]（５９）活性剤がリンパ節における免疫細胞に送達される、項目（５５）〜（５８）のいずれか一項に記載の使用。
【０３１０】
[00333]（６０）免疫細胞がＴリンパ球、Ｂリンパ球、又は両方である、項目（５９）に記載の使用。
【０３１１】
[00334]（６１）活性剤が樹状細胞又はマクロファージによってリンパ節に又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞に送達される、項目（５５）〜（６０）のいずれか一項に記載の使用。
【０３１２】
[00335]（６２）活性剤が組成物の投与部位又はその付近の樹状細胞又はマクロファージに送達される、項目（６１）に記載の使用。
【０３１３】
[00336]（６３）活性剤が主要組織適合複合体（ＭＨＣ）クラスＩタンパク質、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質、又は両方を直接結合しない、項目（５５）〜（６２）のいずれか一項に記載の使用。
【０３１４】
[00337]（６４）活性剤がＭＨＣクラスＩタンパク質を直接結合しない、項目（６３）に記載の使用。
【０３１５】
[00338]（６５）活性剤がリンパ節又はリンパ球様細胞にインタクトで送達される、項目（５５）〜（６４）のいずれか一項に記載の使用。
【０３１６】
[00339]（６６）活性剤がＴリンパ球の表面のチェックポイント受容体を結合する、項目（５５）〜（６５）のいずれか一項に記載の使用。
【０３１７】
[00340]（６７）活性剤が免疫調節剤である、項目（５５）〜（６６）のいずれか一項に記載の使用。
【０３１８】
[00341]（６８）活性剤がシャトルである、項目（５５）〜（６５）のいずれか一項に記載の使用。
【０３１９】
[00342]（６９）活性剤が低分子薬である、項目（５５）〜（６８）のいずれか一項に記載の使用。
【０３２０】
[00343]（７０）低分子薬が約２０００ダルトン又は２０００ダルトン未満の分子量を有する、項目（５５）〜（６９）のいずれか一項に記載の使用。
【０３２１】
[00344]（７１）低分子薬が約９００ダルトン又は９００ダルトン未満の分子量を有する、項目（５５）〜（６９）のいずれか一項に記載の使用。
【０３２２】
[00345]（７２）低分子薬が、細胞傷害性剤、抗腫瘍剤、化学療法剤、抗新生物剤、抗ウイルス剤、抗菌剤、抗炎症剤、免疫調節剤、免疫応答チェックポイント剤、生物学的応答修飾物質、プロドラッグ、サイトカイン、ケモカイン、ビタミン、ステロイド、リガンド、鎮痛薬、放射性医薬、放射性同位元素、又は視覚的検出のための色素である、項目（６９）又は（７０）に記載の使用。
【０３２３】
[00346]（７３）活性剤が、エパカドスタット、ラパマイシン、ドキソルビシン、バルプロ酸、ミトキサントロン、ボリノスタット、シクロホスファミド、イリノテカン、シスプラチン、メトトレキセート、タクロリムス、又はそれらのうちのいずれか１つの薬学的に許容できる塩である、項目（６９）に記載の使用。
【０３２４】
[00347]（７４）活性剤がエパカドスタットである、項目（７３）に記載の使用。
【０３２５】
[00348]（７５）活性剤がシクロホスファミドである、項目（７３）に記載の使用。
【０３２６】
[00349]（７６）活性剤がラパマイシンである、項目（７３）に記載の使用。
【０３２７】
[00350]（７７）活性剤が、抗体、抗体模倣物、又はそれらのうちのいずれか１つの機能的等価物若しくは機能的断片である、項目（５５）〜（６９）のいずれか一項に記載の使用。
【０３２８】
[00351]（７８）活性剤が抗ＣＴＬＡ−４抗体である、項目（７７）に記載の使用。
【０３２９】
[00352]（７９）抗ＣＴＬＡ−４抗体が、イピリムマブ、トレメリムマブ、ＢＮ−１３、ＵＣ１０−４Ｆ１０−１１、９Ｄ９、又は９Ｈ１０である、項目（７８）に記載の使用。
【０３３０】
[00353]（８０）活性剤が抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、項目（７７）に記載の使用。
【０３３１】
[00354]（８１）抗ＰＤ−１抗体が、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、ピジリズマブ、ＡＭＰ−２２４、ＲＭＰ１−４、又はＪ４３であり、抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、又はデュルバルマブである、項目（８０）に記載の使用。
【０３３２】
[00355]（８２）活性剤が、ペプチドアプタマー、アフィマー、アフィリン、アフィボディ、アフィチン、アルファボディ、アンチカリン、アビマー、ダルピン、フィノマー、クニッツドメインペプチド、モノボディ、ナノクランプ、親和性試薬、足場タンパク質、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆａｂ２、Ｆａｂ３、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｄａｂ、エビボディ、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、又は単一ドメイン抗体（ナノボディ）である、項目（７７）に記載の使用。
【０３３３】
[00356]（８３）活性剤が、成分（ｂ）及び（ｃ）のうちの１つ又は両方を含まない組成物において投与される場合、対象における全身送達を呈する、項目（５５）〜（８２）のいずれか一項に記載の使用。
【０３３４】
[00357]（８４）ａ）免疫調節剤、ｂ）１種又は複数の脂質ベースの構造体、及びｃ）疎水性担体を含む組成物の使用であって、免疫調節剤を対象のリンパ節に又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞にターゲティングするための、使用。
【０３３５】
[00358]（８５）組成物が無水である、項目（８４）に記載の使用。
【０３３６】
[00359]（８６）リンパ系組織がリンパ節である、項目（８４）又は（８５）に記載の使用。
【０３３７】
[00360]（８７）リンパ系組織が脾臓、胸腺、又は粘膜関連リンパ組織である、項目（８４）又は（８５）に記載の使用。
【０３３８】
[00361]（８８）免疫調節剤がリンパ節における免疫細胞に送達される、項目（８４）〜（８７）のいずれか一項に記載の使用。
【０３３９】
[00362]（８９）免疫細胞がＴリンパ球、Ｂリンパ球、又は両方である、項目（８８）に記載の使用。
【０３４０】
[00363]（９０）免疫調節剤が樹状細胞又はマクロファージによってリンパ節に又はリンパ系組織におけるリンパ球様細胞に送達される、項目（８４）〜（８９）のいずれか一項に記載の使用。
【０３４１】
[00364]（９１）活性剤が組成物の投与部位又はその付近の樹状細胞又はマクロファージに送達される、項目（９０）に記載の使用。
【０３４２】
[00365]（９２）免疫調節剤がリンパ節又はリンパ球様細胞にインタクトで送達される、項目（８４）〜（９１）のいずれか一項に記載の使用。
【０３４３】
[00366]（９３）免疫調節剤がＴリンパ球の表面のチェックポイント受容体を結合する、項目（８４）〜（９２）のいずれか一項に記載の使用。
【０３４４】
[00367]（９４）免疫調節剤が、抗原又は免疫原によって活性化する種類の免疫応答を上方制御、下方制御、又は再プログラミングする、項目（８４）〜（９３）のいずれか一項に記載の使用。
【０３４５】
[00368]（９５）免疫調節剤が、低分子薬；抗体、抗体模倣物、又はそれらのうちのいずれか１つの機能的等価物若しくは機能的断片；或いはそれらの混合物である、項目（８４）〜（９４）のいずれか一項に記載の使用。
【０３４６】
[00369]（９６）免疫調節剤が、エパカドスタット、ラパマイシン、ドキソルビシン、バルプロ酸、ミトキサントロン、ボリノスタット、シクロホスファミド、イリノテカン、シスプラチン、メトトレキセート、タクロリムス、抗ＣＴＬＡ−４抗体、又は抗ＰＤ−１抗体である、項目（９５）に記載の使用。
【０３４７】
[00370]（９７）免疫調節剤が、成分（ｂ）及び（ｃ）のうちの１つ又は両方を含まない組成物において投与される場合、対象における全身送達を呈する、項目（８４）〜（９６）のいずれか一項に記載の使用。
【０３４８】
[00371]（９８）１種又は複数の脂質ベースの構造体が単層脂質集合体を有する、項目（５５）〜（６６）のいずれか一項に記載の使用。
【０３４９】
[00372]（９９）単層脂質集合体を有する１種又は複数の脂質ベースの構造体が、脂質の疎水部が疎水性担体に向かって外向きに配向し、脂質の親水部が中心部分として凝集している脂質の凝集体を含む、項目（９８）に記載の使用。
【０３５０】
[00373]（１００）単層脂質集合体を有する１種又は複数の脂質ベースの構造体が逆ミセルを含む、項目（９９）に記載の使用。
【０３５１】
[00374]（１０１）脂質ベースの構造体のサイズが直径約２ｎｍ〜約１０ｎｍの間である、項目（５５）〜（１００）のいずれか一項に記載の使用。
【０３５２】
[00375]（１０２）疎水性担体が鉱油であるか又は鉱油溶液中のオレイン酸マンニドである、項目（５５）〜（１０１）のいずれか一項に記載の使用。
【０３５３】
[00376]（１０３）疎水性担体がモンタニド（登録商標）ＩＳＡ５１である、項目（５５）〜（１０２）のいずれか一項に記載の使用。
【０３５４】
[00377]（１０４）投与が注射によるものである、項目（５５）〜（１０３）のいずれか一項に記載の使用。
【０３５５】
[00378]（１０５）投与が皮下、筋肉内、又は腹腔内注射によるものである、項目（１０４）に記載の使用。
【０３５６】
[00379]（１０６）対象における免疫応答を調節するためのものである、項目（５５）〜（１０５）のいずれか一項に記載の使用。
【０３５７】
[00380]（１０７）対象における疾患又は障害を処置又は防止するためのものである、項目（５５）〜（１０５）のいずれか一項に記載の使用。
【０３５８】
[00381]（１０８）疾患又は障害が感染性疾患又は癌である、項目（１０７）に記載の使用。
【０３５９】
[00382]本発明は以下の非限定的な例によってさらに例示される。
【実施例】
【０３６０】
[00383]本発明は次に、非限定的な例として、添付の図面を考慮して説明される。
【０３６１】
[00384]
実施例１
[00385]６〜８週齢の病原体不在Ｃ５７ＢＬ／６マウスをＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｓｔ．Ｃｏｎｓｔａｎｔ、ＰＱ）から購入し、施設のガイドラインに従って、フィルターコントロール空気循環下で水及び食餌を自由に摂取できるようにして収容した。
【０３６２】
[00386]第１の組成物を、シクロホスファミド（ＣＰＡ；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）を用いて調製し、第２の組成物を、汎用ヘルパーＴペプチドであるＰＡＤＲＥ（ＡＫＸＶＡＡＷＴＬＫＡＡ；ここでＸはシクロヘキシルアラニルである）にコンジュゲートしたＨＰＶ１６Ｅ７４９−５７ペプチド抗原（Ｒ９Ｆ；ＲＡＨＹＮＩＶＴＦ）を含有するＲ９Ｆ−ＰＡＤＲＥ融合ペプチド（ＦＰ）、及びＤＮＡベースのポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント（（ＩＣ）１３の２６マーの配列、すなわちＩＣＩＣＩＣＩＣＩＣＩＣＩＣＩＣＩＣＩＣＩＣＩＣＩＣ）を用いて調製し、第３の組成物を、シクロホスファミド、ＦＰ、及びＤＮＡベースのポリＩ：Ｃポリヌクレオチドを用いて調製した。
【０３６３】
[00387]マウスに組成物を投与し、リンパ節細胞数を以下に記載するように分析した。
【０３６４】
[00388]組成物の調製
[00389]ＣＰＡ組成物：ＣＰＡ組成物は、ＣＰＡ薬を脂質混合物溶液に添加し、十分に混合し、フリーズドライすることによって調製した。簡潔に述べると、ＤＯＰＣとコレステロールとを１０：１の比（ｗ：ｗ）で含有する脂質混合物（１３２ｍｇ／ｍＬ）（Ｌｉｐｏｉｄ  ＧｍＢＨ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を、室温にて３００ＲＰＭで１時間又は溶解するまで十分に振盪することによって４０％ターシャリーブタノールに溶解した。次に、ＣＰＡ薬ストックをＤＭＳＯ中２５０ｍｇ／ｍＬで調製し、４０％ターシャリーブタノールで希釈して、１２５ｍｇ／ｍＬストックを取得した。調製した脂質混合物溶液の０．５ｍＬのアリコートを２つのバイアルに入れ、次いでＣＰＡ薬ストックを添加（第１のバイアルには３．２μＬ、第２のバイアルには３２μＬ）して、より低い及びより高いＣＰＡ濃度（０．４ｍｇ／ｍＬ及び４．０ｍｇ／ｍＬ）を有する調製物を取得し、３００ＲＰＭで５分間振盪することによって十分に混合した。次いで、各調製物を、４０％ターシャリーブタノールを用いて１．０ｍＬにＱ．Ｓし、フリーズドライした。次いで、フリーズドライケーキを、０．４５ｍＬのモンタニド（登録商標）ＩＳＡ５１ＶＧ（ＳＥＰＰＩＣ、Ｆｒａｎｃｅ）において再構成して、透明溶液を取得した（図１Ａ）。
【０３６５】
[00390]ＦＰ／ＤＮＡベースのポリＩ：Ｃ組成物：ＦＰ／ＤＮＡベースのポリＩ：Ｃ組成物は、ＦＰストック及びＤＮＡベースのポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバントストックを脂質混合物溶液に添加し、十分に混合し、フリーズドライすることによって調製した。簡潔に述べると、ＤＯＰＣとコレステロールとを１０：１の比（ｗ：ｗ）で含有する脂質混合物（１３２ｍｇ／ｍＬ）（Ｌｉｐｏｉｄ  ＧｍＢＨ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を、室温にて３００ＲＰＭで１時間又は溶解するまで十分に振盪することによって４０％ターシャリーブタノールに溶解した。次に、ＦＰストック（１０ｍｇ／ｍＬ）をＤＭＳＯ中で調製し、ＤＮＡベースのポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバントストック（１０ｍｇ／ｍＬ）を滅菌水中で調製した。脂質混合物溶液の０．５ｍＬアリコートに、１０μＬのＦＰストックを添加して、０．１ｍｇ／ｍＬの最終充填濃度を取得し、３００ＲＰＭで５分間十分に振盪した。形成したＦＰ−脂質混合物溶液に、２０μＬのＤＮＡベースのポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバントストックを添加して、０．２ｍｇ／ｍＬの最終充填濃度を取得し、３００ＲＰＭで５分間十分に振盪した。４０％ターシャリーブタノールを用いて１．０ｍＬにＱ．Ｓし、フリーズドライした。次いで、フリーズドライケーキを、０．４５ｍＬのモンタニド（登録商標）ＩＳＡ５１ＶＧ（ＳＥＰＰＩＣ、Ｆｒａｎｃｅ）において再構成して、透明からわずかに濁った溶液を取得した（図１Ｂ）。
【０３６６】
[00391]ＣＰＡ／ＦＰ／ＤＮＡベースのポリＩ：Ｃ組成物：ＣＰＡ／ＦＰ／ＤＮＡベースのポリＩ：Ｃポリヌクレオチド組成物は、ＦＰストック、ＣＰＡストック、及びＤＮＡベースのポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバントストックを脂質混合物溶液に添加し、十分に混合し、フリーズドライすることによって調製した。簡潔に述べると、ＤＯＰＣとコレステロールとを１０：１の比（ｗ：ｗ）で含有する脂質混合物（１３２ｍｇ／ｍＬ）（Ｌｉｐｏｉｄ  ＧｍＢＨ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を、室温にて３００ＲＰＭで１時間又は溶解するまで十分に振盪することによって４０％ターシャリーブタノールに溶解した。次に、ＦＰストック（１０ｍｇ／ｍＬ）をＤＭＳＯ中で調製し、ＤＮＡベースのポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバントストック（１０ｍｇ／ｍＬ）を滅菌水中で調製した。ＣＰＡ薬ストックをＤＭＳＯ中２５０ｍｇ／ｍＬで調製し、４０％ターシャリーブタノールで希釈して、１２５ｍｇ／ｍＬストックを取得した。２つの脂質混合物溶液の０．５ｍＬアリコートに、１０μＬのＦＰストックを添加して、０．１ｍｇ／ｍＬの充填濃度を取得し、３００ＲＰＭで５分間十分に振盪した。次いで、形成したＦＰ−脂質混合物溶液に、ＣＰＡ薬ストックを添加（第１のバイアルには３．２μＬ、第２のバイアルには３２μＬ）して、より低い及びより高いＣＰＡ濃度（０．４ｍｇ／ｍＬ及び４．０ｍｇ／ｍＬ）を有する調製物を取得し、３００ＲＰＭで５分間振盪することによって十分に混合した。次いで、２０μＬのＤＮＡベースのポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバントストックを各バイアルに添加して、０．２ｍｇ／ｍＬの充填濃度を取得し、３００ＲＰＭで５分間十分に振盪した。次いで、各調製物を、４０％ターシャリーブタノールを用いて１．０ｍＬにＱ．Ｓし、フリーズドライした。次いで、フリーズドライケーキを、０．４５ｍＬのモンタニド（登録商標）ＩＳＡ５１ＶＧ（ＳＥＰＰＩＣ、Ｆｒａｎｃｅ）において再構成して、透明からわずかに濁った溶液を取得した（図１Ｃ）。
【０３６７】
[00392]組成物のＨＰＬＣ分析
[00393]ＨＰＬＣ機器条件及び試験した勾配プロファイルを以下の表に示す。試料は、５μｇ／ｍＬ〜１２５μｇ／ｍＬのＣＰＡの範囲において５点較正曲線を使用して定量した。
【表１】
2021518373.tif 000016
【表２】
2021518373.tif 000017
【０３６８】
[00394]実験条件：
[00395]ＣＰＡ凍結乾燥物又はＣＰＡ／ＦＰ／ＤＮＡベースのポリＩ：Ｃ凍結乾燥物を、実験用超純水を用いて可溶化し、１ｍｇ／ｍＬのＣＰＡを得た。３〜４種のガラスビーズを添加し、１分間激しくボルテックスして、完全な均質化を保証した。７５ｍｇの溶液を５ｍＬメスフラスコに移し、移動相Ａで標線まで希釈した（ＣＰＡの理論濃度は１５μｇ／ｍＬである）。
【０３６９】
[00396]１５μｇ／ｍＬのＣＰＡを含有する標準品のＨＰＬＣクロマトグラムを図２に示す。
【０３７０】
[00397]上記のように調製したＣＰＡ組成物の試料を、ＨＰＬＣ法を使用して定量的に特性解析した。フリーズドライ後のＣＰＡを示すＨＰＬＣクロマトグラムを図３に示す。乾燥調製物からのＣＰＡの算出した回収率は１０２％であった。
【０３７１】
[00398]上記のように調製したＣＰＡ／ＦＰ／ＤＮＡベースのポリＩ：Ｃ組成物の試料を、ＨＰＬＣ法を使用して定量的に特性解析した。フリーズドライ後のＣＰＡを示すＨＰＬＣクロマトグラムを図４に示す。乾燥調製物からのシクロホスファミドの算出した回収率は１００％であった。
【０３７２】
[00399]Ｉｎ  ｖｉｖｏ研究
[00400]Ａ群（ｎ＝５）のマウスの右側腹部に、０．０４ミリグラムのＣＰＡを含有する５０マイクロリットルのＣＰＡ組成物を注射し、左側腹部に、１０マイクログラムのＦＰと２０マイクログラムのＤＮＡベースのポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバントとを含有する５０マイクロリットルのＦＰ／ＤＮＡベースのポリＩ：Ｃポリヌクレオチド組成物を注射した。
【０３７３】
[00401]Ｂ群（ｎ＝５）のマウスの右側腹部に、０．４ミリグラムのＣＰＡを含有する５０マイクロリットルのＣＰＡ組成物を注射し、左側腹部に、１０マイクログラムのＦＰと２０マイクログラムのＤＮＡベースのポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバントとを含有する５０マイクロリットルのＦＰ／ＤＮＡベースのポリＩ：Ｃポリヌクレオチド組成物を注射した。
【０３７４】
[00402]Ｃ群（ｎ＝５）のマウスの右側腹部に、０．０４ミリグラムのＣＰＡと、１０マイクログラムのＦＰと、２０マイクログラムのＤＮＡベースのポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバントとを含有する５０マイクロリットルのＣＰＡ／ＦＰ／ポリＩ：Ｃ組成物を注射した。
【０３７５】
[00403]Ｄ群（ｎ＝５）のマウスの右側腹部に、０．４ミリグラムのＣＰＡと、１０マイクログラムのＦＰと、２０マイクログラムのＤＮＡベースのポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバントとを含有する５０マイクロリットルのＣＰＡ／ＦＰ／ポリＩ：Ｃ組成物を注射した。
【０３７６】
[00404]Ｅ群（ｎ＝５）のマウスの左側腹部に、５０マイクロリットルのＦＰ／ポリＩ：Ｃ組成物を注射した。ＦＰ／ＤＮＡベースのポリＩ：Ｃ組成物の注射前の７日間、これらのマウスは、飲料水において提供された２０ｍｇ／ｋｇ／日のＣＰＡを用いた処置も受け、これは７日間の１日当たりおよそ０．４ミリグラムに相当する。
【０３７７】
[00405]Ｆ群（ｎ＝５）のマウスの左側腹部に、５０マイクロリットルのＦＰ／ポリＩ：Ｃ組成物を注射した。
【０３７８】
[00406]全てのマウスを注射の８日後に屠殺した。マウスのＦＰ抗原を受け取った側の鼠径リンパ節を収集し、処理して単一細胞懸濁液にした。リンパ節総数を図５に示す。
【０３７９】
[00407]ＦＰ／ＤＮＡベースのポリＩ：Ｃ組成物のみを注射したＦ群のマウスのリンパ節は、未処置マウスよりも多くの細胞を有し、活発な免疫応答を示した。Ｅ群のマウスは、ＣＰＡを用いてマウスを処置する場合に予期されるように、Ｆ群と比較して有意に低い細胞数を有した。Ｂ、Ｃ、及びＤ群のマウスもまた、Ｆ群と比較して有意に低い細胞数を有した。Ａ群のマウスはＦ群よりも低い細胞数を有したが、有意ではなかった。
【０３８０】
[00408]このデータは、脂質ベースの構造体と疎水性担体とを含む本発明の組成物において送達されたＣＰＡが、ＣＰＡが飲料水を介して送達される場合に観察されるのと同等の、ＦＰ抗原をワクチン接種されたマウスにおけるリンパ節細胞の減少を誘導することを示す。しかしながら、本発明のＣＰＡ組成物に関する等価な結果は単回投与のみで達成したが、経口ＣＰＡは、有意に大きい総分量のＣＰＡを用いる、１週間の期間を超える投与を必要とした。結果は、ＣＰＡのリンパ節への標的化送達を提供することにおける本発明の組成物の効率を証明する。
【０３８１】
[00409]
実施例２
[00410]マウス（１群当たりｎ＝８）にＣ３癌細胞を研究０日目に移植した。全ての処置群のマウスを、研究７及び２１日目から毎日７日間、飲料水を介して０．４ｍｇのメトロノミックシクロホスファミド（ｍＣＰＡ）を用いて処置した（経口投与：ＰＯ）。１つの群は対照として処置しなかった。１つの処置群は、強制経口投与を介した６ｍｇ／日のエパカドスタット（ＥＰＡ）を、研究１４日目から５日間、５日間にわたって３０ｍｇの総ＥＰＡ用量となるように用いて処置した。マウスを、ＦＰのみを含有する（ＤＰＸ−ＦＰ）か又はＥＰＡと組み合わせたＦＰを含有する（ＤＰＸ−ＦＰ／ＥＰＡ、１ｍｇのＥＰＡ）本発明の組成物（ＤＰＸ）を用いて処置した。ＤＰＸは、研究１４及び２８日目に、ＤＰＸ−ＦＰ／ＥＰＡを受け取る群では１４日間にわたって２ｍｇの総ＥＰＡ用量となるように、皮下注射によって処置群に投与した。ＤＰＸ組成物は、実施例１に詳述した方法に従って調製した。全てのＤＰＸ−ＦＰ及びＤＰＸ−ＦＰ／ＥＰＡ製剤は、２０マイクログラムのＤＮＡベースのポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバントを含有した。フリーズドライバイアルを０．７ｍＬのモンタニド（登録商標）ＩＳＡ５１ＶＧ（ＳＥＰＰＩＣ、Ｆｒａｎｃｅ）において再構成して、透明溶液を取得した（図１Ｄ）。実験の処置の予定を図６Ａに示す。
【０３８２】
[00411]図６Ｂは、ＤＰＸ−ＦＰ／ＥＰＡを用いて処置したマウスが、ＥＰＡを含まないＤＰＸ−ＦＰを用いて処置したマウスよりも有意に低い腫瘍成長を呈したことを示す。その上、ＤＰＸ−ＦＰ／ＥＰＡを用いて処置したマウスは、ＤＰＸ−ＦＰ及び経口ＥＰＡ（ＰＯ）を用いて処置したマウスと比較して同等の腫瘍成長の低下を呈した。このことは、本発明の組成物におけるＥＰＡの送達が、ＥＰＡの従来の経口送達よりも低い用量を使用して腫瘍成長を効果的に制限したことを実証する。
【０３８３】
[00412]図６Ｃは、ＤＰＸ−ＦＰ／ＥＰＡを用いて処置したマウスが、ＤＰＸ−ＦＰ及び経口ＥＰＡ（ＰＯ）を用いて処置したマウスよりも有意に高い生存率を呈したことを示す。図６Ｄは、ＤＰＸ−ＦＰ及び経口ＥＰＡ（ＰＯ）を用いて処置したマウスが処置の間に有意な体重喪失を呈したことを示し、ＥＰＡ処置の毒性を実証する。図６Ｄはまた、ＤＰＸ−ＦＰ／ＥＰＡを用いて処置したマウスが、ＥＰＡを含まないＤＰＸ−ＦＰを用いて処置したマウスと同様に、処置の間に体重喪失を呈しなかったことも示す。まとめると、このことは、本発明の組成物におけるＥＰＡの送達がＥＰＡ処置の毒性を軽減し、生存期間を向上したことを実証する。
【０３８４】
[00413]
実施例３
[00414]マウス（１群当たりｎ＝８）にＣ３癌細胞を研究０日目に移植し、研究７及び２１日目から７日間、２０ｍｇ／ｋｇ／日のメトロノミックシクロホスファミド（ｍＣＰＡ）を用いて処置した（経口投与：ＰＯ）。１つの群は対照として処置しなかった。処置群は、ＦＰのみを含有する（ＤＰＸ−ＦＰ）か、ＦＰ及び抗ＣＴＬＡ−４を含有する（ＤＰＸ−ＦＰ／抗ＣＴＬＡ−４、０．１ｍｇの抗ＣＴＬＡ−４）か、又はＦＰのみを含有し０．１ｍｇの抗ＣＴＬＡ−４の腹腔内（ＩＰ）注射と一緒に提供される、本発明の組成物（ＤＰＸ）の皮下注射を受けた。ＤＰＸ−ＦＰ製剤とＤＰＸ−ＦＰ／抗ＣＴＬＡ−４製剤の両方は、２０マイクログラムのＤＮＡベースのポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバントを含有した。ＤＰＸ−ＦＰ組成物は、実施例１に詳述した方法に従って調製した。ＤＰＸ−ＦＰ／抗ＣＴＬＡ−４調製物に関しては、ＤＯＰＣとコレステロールとの１０：１（ｗ：ｗ）の均質な混合物（Ｌｉｐｏｉｄ  ＧｍＢＨ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を酢酸ナトリウム、５０ｍＭ、ｐＨ７．４２に、１３２ｍｇ／ｍｌの濃度で、３００ＲＰＭで約１時間振盪しながら添加し、脂質ナノ粒子を形成した。次いで、混合物を、材料を２００ｎｍポリカーボネート膜に２５回通し、１００ｎｍポリカーボネート膜に１０回通すことによって押し出して、１２０ｎｍ以下の平均粒径を０．１以下のｐｄｉで得た。２つの３ｍＬバイアルにおいて、ｐＨ６．０の４００μＬの０．１Ｍ酢酸ナトリウム、２１２．２μＬの抗ＣＴＬＡ−４溶液（７．５４ｍｇ／ｍＬ）、調製した、サイジングされた８００μＬのＤＯＰＣ／コレステロール脂質ナノ粒子を添加した。穏やかにボルテックスして混合した。この混合物に、１６μＬのＦＰ（１０ｍｇ／ｍＬ）、３２μＬのＤＮＡベースのポリＩ：Ｃ（１０ｍｇ／ｍＬ）、及び１３９．８μＬの滅菌水を添加し、ボルテックスすることによって穏やかに混合した。バイアルをフリーズドライし、次いで０．７ｍＬのモンタニド（登録商標）ＩＳＡ５１ＶＧ（ＳＥＰＰＩＣ、Ｆｒａｎｃｅ）を用いて再構成して、透明溶液を取得した（図１Ｅ）。全ての処置群において、注射を研究１４及び２８日目に投与した。実験の処置の予定を図７Ａに示す。
【０３８５】
[00415]図７Ｂ及び７Ｃは、ＤＰＸ−ＦＰ／抗ＣＴＬＡ−４を用いて処置したマウスが、処置しなかったマウスと比較して有意に向上した生存率及び腫瘍成長の有意な低下を呈し、ＩＰ注射による全身にわたる抗ＣＴＬＡ−４を用いて処置したマウスの生存率及び腫瘍成長の低下と等価であったという予期せぬ結果を示す。このことは、本発明の組成物において送達された抗ＣＴＬＡ−４が、ＩＰ注射による全身送達を介した抗ＣＴＬＡ−４の投与と等しく効果的に腫瘍成長を制限し、生存期間を向上したことを実証する。
【０３８６】
[00416]血液試料を、全ての群のマウスから研究１６及び３０日目に収集して、循環Ｔ細胞に結合した抗ＣＴＬＡ−４（ＩｇＧ２ｂ）に関して評価した。図８Ａ及び８Ｂは、ＤＰＸ−ＦＰ／抗ＣＴＬＡ−４を用いて処置したマウスが、ＩＰ注射による全身にわたる抗ＣＴＬＡ−４を用いて処置したマウスと比較して同等の数の、抗ＣＴＬＡ−４（ＩｇＧ２ｂ）によって結合された循環ＣＤ３＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞を有したという予期せぬ結果を示す。このことは、本発明の組成物において送達された抗ＣＴＬＡ−４が、ＩＰ注射等の全身送達経路を介した抗ＣＴＬＡ−４の投与と等しく効果的に循環Ｔ細胞に結合したことを実証する。
【０３８７】
[00417]血清試料を、注射の２８及び４２日後に全ての群のマウスから収集し、抗薬物抗体（ＡＤＡ）形成に関して架橋ＥＬＩＳＡによって評価した。架橋ＥＬＩＳＡに関して、簡潔に述べると、被覆抗原は、マウスＩｇＧ２ｂである抗ＣＴＬＡ−４、又はＩｇＧ２ｂアイソタイプ対照若しくはＩｇＧ１アイソタイプ対照であり、検出抗体は、抗ＣＴＬＡ−４であった。図９Ａは、ＤＰＸ−ＦＰ／抗ＣＴＬＡ−４を用いて処置したマウスが抗ＣＴＬＡ−４に対するＡＤＡを発生させたことを示す。このことは、予期せぬことに、ＡＤＡの形成が本発明の組成物において送達された抗ＣＴＬＡ−４の、生存期間を向上すること（図７Ｂ）、腫瘍成長を制限すること（図７Ｃ）、並びに循環Ｔ細胞に結合すること（図８Ａ及び８Ｂ）における効果を妨害しないことを実証する。
【０３８８】
[00418]
実施例４
[00419]Ｃ５７Ｂｌ／６マウス（時点１つ当たりｎ＝３）に、本発明の組成物（ＤＰＸ、第１群）又は水性溶液（第２群）のいずれかに配合した１ｍｇのエバンスブルー（ＥＶＢ）色素を研究０日目に皮下注射した。対照群に、ＥＶＢを含有しないＤＰＸを皮下注射した（第３群）か、又は注射を投与しなかった（第４群）。ＤＰＸ組成物は、実施例１に詳述した方法に従って調製した。フリーズドライバイアルをモンタニド（登録商標）ＩＳＡ５１ＶＧ（ＳＥＰＰＩＣ、Ｆｒａｎｃｅ）において再構成した。細胞を、各群の２〜３匹のマウスのワクチン流入領域リンパ節（ＬＮ）、血液、肝臓、及び脾臓から研究１、２、５、及び７日目に収集し、染色して、異なる細胞集団をフローサイトメトリーによって検出した。
【０３８９】
[00420]ＥＶＢ（ＭＷ  ９６０．８１ｇ／ｍｏｌ）は、非生存細胞に浸透することも、マクロファージ及び樹状細胞等の食細胞によって活発に内部に取り込まれることもできる、血清アルブミンに関して高い親和性を有する膜不透過性色素である。図１１Ａ〜Ｌは、異なる組織（ＬＮ、血液、肝臓、脾臓）からのＥＶＢを含有する異なる細胞型（ＣＤ１１ｂ＋マクロファージ、ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞）の、異なる時点（１、２、５、及び７日目）における百分率を示す。
【０３９０】
[00421]図１０Ａは、ＬＮにおいて、第１群は１、２、及び５日目に、第３群と比較して有意な数のＥＶＢ＋ＣＤ１１ｂ＋細胞を有し、第２群は試験された全ての日に、第３群と比較して有意な数のＥＶＢ＋ＣＤ１１ｂ＋細胞を有したことを示す。図１０Ｂは、ＬＮにおいて、第１群は２及び５日目に、第３群と比較して有意な数のＥＶＢ＋樹状細胞を有し、第２群は試験された全ての日に、第３群と比較して有意な数のＥＶＢ＋樹状細胞を有したことを示す。図１０Ｃは、ＬＮにおいて、第１群は５日目に、第３群と比較して有意な数のＥＶＢ＋Ｔ細胞を有し、第２群は試験された全ての日に、第３群と比較して有意な数のＥＶＢ＋Ｔ細胞を有したことを示す。図１０Ｄは、血液において、第１群は１、２、及び５日目に、第３群と比較して有意な数のＥＶＢ＋ＣＤ１１ｂ＋細胞を有し、第２群は試験された全ての日に、第３群と比較して有意な数のＥＶＢ＋ＣＤ１１ｂ＋細胞を有したことを示す。図１０Ｅは、血液において、第１群は２、５、及び７日目に、第３群と比較して有意な数のＥＶＢ＋樹状細胞を有し、第２群は試験された全ての日に、第３群と比較して有意な数のＥＶＢ＋樹状細胞を有したことを示す。図１０Ｆは、血液において、第１群は５及び７日目に、第３群と比較して有意な数のＥＶＢ＋Ｔ細胞を有し、第２群は試験された全ての日に、第３群と比較して有意な数のＥＶＢ＋Ｔ細胞を有したことを示す。図１０Ｇは、肝臓において、第１群及び第２群の両方が試験された全ての日に、第３群と比較して有意な数のＥＶＢ＋ＣＤ１１ｂ＋細胞を有したことを示す。図１０Ｈは、肝臓において、第１群と第３群との間には全ての日に有意性が存在せず、第２群は試験された２及び７日目に、第３群と比較して有意な数のＥＶＢ＋樹状細胞を有したことを示す。図１０Ｉは、肝臓において、第１群と第２群の両方が試験された全ての日に、第３群と比較して有意な数のＥＶＢ＋Ｔ細胞を有したことを示す。図１０Ｊは、脾臓において、第１群は２、５、及び７日目に、第３群と比較して有意な数のＥＶＢ＋ＣＤ１１ｂ＋細胞を有し、第２群は試験された全ての日に、第３群と比較して有意な数のＥＶＢ＋ＣＤ１１ｂ＋細胞を有したことを示す。図１０Ｋは、脾臓において、第１群は５日目に、第３群と比較して有意な数のＥＶＢ＋樹状細胞を有し、第２群は試験された全ての日に、第３群と比較して有意な数のＥＶＢ＋樹状細胞を有したことを示す。図１０Ｌは、脾臓において、第１群は５及び７日目に、第３群と比較して有意な数のＥＶＢ＋Ｔ細胞を有し、第２群は試験された全ての日に、第３群と比較して有意な数のＥＶＢ＋Ｔ細胞を有したことを示す。
【０３９１】
[00422]図１０Ａ〜Ｃは、水性溶液においてＥＶＢを注射したマウス（第２群）では、ＬＮにおける細胞が、食作用性ではないＣＤ３＋Ｔ細胞を含め、急速に飽和した（２日目までに約１００％の細胞がＥＶＢ＋）ことを示す。ＥＶＢは、第２群では７日目までに依然としてＬＮから取り除かれなかった。ＤＰＸにおいてＥＶＢを注射したマウス（第１群）では、ＥＶＢは、５日目にピークに達したＬＮへの持続放出を呈し、ほとんどが７日目までに取り除かれ、ＬＮにおける細胞を飽和させず、ＣＤ３＋Ｔ細胞よりもむしろＣＤ１１ｂ＋マクロファージ及びＣＤ１１ｃ＋樹状細胞によって優先的に摂取された。このことは、本発明の組成物において送達されたＥＶＢが流入領域ＬＮに対する持続放出を、水性溶液において送達されたＥＶＢと比較して食細胞において優先的に呈したことを実証する。
【０３９２】
[00423]図１０Ｄ〜Ｆは、水性溶液においてＥＶＢを注射したマウス（第２群）では、血液における細胞が、食作用性ではないＣＤ３＋Ｔ細胞を含め、急速に飽和した（２日目までに約１００％の細胞がＥＶＢ＋）ことを示す。ＥＶＢは第２群では、例えば７日目に依然としてほぼ飽和していたＣＤ１１ｂ＋マクロファージ及びＣＤ３＋Ｔ細胞において、７日目までに依然として血液から取り除かれなかった。ＤＰＸにおいてＥＶＢを注射したマウス（第１群）では、ＥＶＢは、第２群と比較して低い血液への放出を呈した。第１群マウスは血液におけるＣＤ１１ｃ＋樹状細胞の飽和もＣＤ３＋Ｔ細胞の飽和も呈せず、５日目までのＣＤ１１ｂ＋マクロファージの飽和は７日目までに完全に取り除かれた。このことは、本発明の組成物において送達されたＥＶＢが、血液における循環細胞を急速に飽和させた水性溶液において送達されたＥＶＢと比較して、限定された血液への全身放出を呈したことを実証する。図１２Ａは、第１群マウスからの血漿が薄赤色であったことを示し、図１２Ｂは、第２群マウスからの血漿が濃青色であったことを示し、これらは、本発明の組成物において送達されたＥＶＢが、水性溶液において送達されたＥＶＢと比較して、循環に入ることの点で限定されたことを実証する。図１３Ａは、第２群マウスの皮膚が青色になったことを示し、図１３Ｂ及び１３Ｃは、青の呈色が第１群マウスでは注射部位及び流入領域ＬＮに隔離されたことを示し、これらは、本発明の組成物において送達されたＥＶＢが流入領域ＬＮを優先的に標的とし、全身放出から隔離されたことを実証する。
【０３９３】
[00424]図１０Ｇ〜Ｉは、水性溶液においてＥＶＢを注射したマウス（第２群）では、肝臓におけるマクロファージ及びＴ細胞が急速に飽和し（１〜２日目までに約１００％の細胞がＥＶＢ＋）、数多くの樹状細胞が２日目までにＥＶＢ＋であったことを示す。ＤＰＸにおいてＥＶＢを注射したマウス（第１群）では、第２群と比較して、ＥＶＢは肝臓へのより遅い放出を呈し（１日目で飽和なし）、肝臓において有意に少ないＥＶＢ＋ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞が存在した。このことは、本発明の組成物において送達されたＥＶＢが、水性溶液において送達されたＥＶＢと比較して限定された肝臓への放出を呈したことを実証する。
【０３９４】
[00425]図１０Ｊ〜Ｌは、水性溶液においてＥＶＢを注射したマウス（第２群）では、脾臓における細胞が、食作用性ではないＣＤ３＋Ｔ細胞を含め、急速に飽和し（１〜２日目までに約１００％の細胞がＥＶＢ＋）、ＣＤ１１ｂ＋マクロファージ及びＴ細胞では７日目まで依然として飽和していたことを示す。ＤＰＸにおいてＥＶＢを注射したマウス（第１群）では、ＥＶＢは、５日目にピークに達した脾臓への持続放出を呈し、７日目までには取り除かれ始め、脾臓における細胞を飽和させず、ＣＤ３＋Ｔ細胞よりもむしろＣＤ１１ｂ＋マクロファージによって優先的に摂取された。このことは、本発明の組成物において送達されたＥＶＢが脾臓に対する脾臓への持続放出を、水性溶液において送達されたＥＶＢと比較して食細胞において優先的に呈したことを実証する。
【０３９５】
[00426]
実施例５
[00427]Ｃ５７Ｂｌ／６マウス（時点１つ当たりｎ＝２〜３）に、本発明の組成物（ＤＰＸ、第１群）又は水性溶液（第２群）のいずれかに配合した０．１ｍｇのＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８ヒドラジド（ＡＦ４８８）色素を研究０日目に皮下注射した。対照群に、ＡＦ４８８を含有しないＤＰＸを皮下注射した（第３群）か、又は注射を投与しなかった（第４群）。ＤＰＸ組成物は、実施例１に詳述した方法に従って調製した。フリーズドライバイアルをモンタニド（登録商標）ＩＳＡ５１ＶＧ（ＳＥＰＰＩＣ、Ｆｒａｎｃｅ）において再構成した。細胞を、各群の２〜３匹のマウスのワクチン流入領域リンパ節（ＬＮ）、血液、肝臓、及び脾臓から研究１、２、５、及び７日目に収集し、染色して、異なる細胞集団をフローサイトメトリーによって検出した。
【０３９６】
[00428]ＡＦ４８８（ＭＷ  ７７３．９１ｇ／ｍｏｌ）は、マクロファージ及び樹状細胞等の食細胞によって活発に内部に取り込まれることができる膜不透過性蛍光色素である。図１１Ａ〜Ｌは、異なる組織（ＬＮ、血液、肝臓、脾臓）からのＡＦ４８８を含有する異なる細胞型（ＣＤ１１ｂ＋マクロファージ、ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞）の、異なる時点（１、２、５、及び７日目）における百分率を示す。
【０３９７】
[00429]図１１Ａは、ＬＮにおいて、第１群と第３群との間には全ての日に有意性が存在せず、第２群は１及び２日目に、第３群と比較して有意な数のＡＦ４８８＋ＣＤ１１ｂ＋細胞を有したことを示す。図１１Ｂは、ＬＮにおいて、第１群と第３群との間には全ての日に有意性が存在せず、第２群は１日目に、第３群と比較して有意な数のＡＦ４８８＋樹状細胞を有したことを示す。図１１Ｃは、ＬＮにおいて、第１群は全ての日で、第３群と比較して有意には異ならず、第２群は１日目に、第３群と比較して有意な数のＡＦ４８８＋Ｔ細胞を有したことを示す。図１１Ｄは、血液において、第１群と第３群との間には全ての日に有意性が存在せず、第２群は１及び２日目に、第３群と比較して有意な数のＡＦ４８８＋ＣＤ１１ｂ＋細胞を有したことを示す。図１１Ｅは、血液において、第１群と第３群との間には全ての日に有意性が存在せず、第２群は１及び２日目に、第３群と比較して有意な数のＡＦ４８８＋樹状細胞を有したことを示す。図１１Ｆは、血液において、第１群は全ての日で、第３群と比較して有意には異ならず、第２群は１及び２日目に、第３群と比較して有意な数のＡＦ４８８＋Ｔ細胞を有したことを示す。図１１Ｇは、肝臓において、第１群と第３群との間には全ての日に有意性が存在せず、第２群は１、２、及び５日目に、第３群と比較して有意な数のＡＦ４８８＋単球を有したことを示す。図１１Ｈは、肝臓において、第１群と第３群との間には全ての日に有意性が存在せず、第２群は１、２、及び５日目に、第３群と比較して有意な数のＡＦ４８８＋樹状細胞を有したことを示す。図１１Ｉは、肝臓において、第１群は全ての日で、第３群と比較して有意には異ならず、第２群は収集した全ての日において、第３群と比較して有意な数のＡＦ４８８＋Ｔ細胞を有したことを示す。
【０３９８】
[00430]図１１Ａ〜Ｃは、水性溶液においてＡＦ４８８を注射したマウス（第２群）では、ＬＮにおけるＡＦ４８８＋細胞が１日目に急速にピークに達し、ＡＦ４８８が５〜７日目までに取り除かれたことを示す。ＤＰＸにおいてＡＦ４８８を注射したマウス（第１群）では、ＡＦ４８８は、５日目にピークに達したＬＮへの持続放出を、ＣＤ３＋Ｔ細胞よりもむしろＣＤ１１ｂ＋及びＣＤ１１ｃ＋細胞において優先的に呈した。このことは、本発明の組成物において送達されたＡＦ４８８が流入領域ＬＮに対する持続放出を、水性溶液において送達されたＡＦ４８８と比較して食細胞において優先的に呈したことを実証する。
【０３９９】
[00431]図１１Ｄ〜Ｆは、水性溶液においてＡＦ４８８を注射したマウス（第２群）では、血液におけるＡＦ４８８＋細胞が１日目に急速にピークに達し、７０％超の循環ＣＤ１１ｂ＋細胞が１〜２日目にＡＦ４８８＋であったことを示す。ＤＰＸにおいてＡＦ４８８を注射したマウス（第１群）では、ＡＦ４８８は、血液への放出を呈せず、血液におけるＡＦ４８８＋細胞は対照群の血液におけるＡＦ４８８＋細胞に匹敵した。このことは、本発明の組成物において送達されたＡＦ４８８が、ＡＦ４８８＋細胞の血液への急速且つ有意な放出を呈した水性溶液において送達されたＡＦ４８８と比較して、血液における細胞へ放出されなかったことを実証する。
【０４００】
[00432]図１１Ｇ〜Ｉは、水性溶液においてＡＦ４８８を注射したマウス（第２群）では、全ての細胞型においてＡＦ４８８の脾臓への迅速且つ有意な放出が存在したことを示す。ＤＰＸにおいてＡＦ４８８を注射したマウス（第１群）では、対照群に匹敵する、ＡＦ４８８の脾臓への非常に少ない放出が存在した。
【０４０１】
[00433]本明細書において引用された全ての刊行物及び特許出願は、個々の各刊行物又は特許出願が参照によって組み込まれることが具体的かつ個別的に示されるように、参照によって本明細書に組み込まれる。任意の刊行物の引用は、出願日以前の刊行物の開示に関するものであり、本発明が先行発明のためにそのような刊行物に先立つ権利を有しないという承認として解釈されるべきではない。
【０４０２】
[00434]前述の発明は、理解を明確にするために例証及び例としてある程度詳細に記載されたが、ある種の変更及び修正が添付の特許請求の範囲の趣旨又は範囲から逸脱せずに本発明に対して行われてもよいということは、当業者には、本発明の教示を考慮して容易に明らかとなる。
【０４０３】
[00435]本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用する場合、単数形の「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈上別段の指示が明確にない限り、複数の指示対象を含むことが留意されなければならない。別段に定義されていない限り、本明細書で使用される全ての技術及び科学用語は、本発明が属する技術分野における当業者に一般的に理解されるのと同じ意味を有する。
【０４０４】
[00436]「及び／又は（ａｎｄ／ｏｒ）」という語句は、ここで本明細書及び特許請求の範囲で使用する場合、そのように等位接続された要素、すなわち一部の場合では共に存在し、他の場合では別々に存在する要素の「いずれか又は両方」を意味すると理解されるべきである。「及び／又は」を用いて列挙された複数の要素は、同じように、すなわちそのように等位接続された要素の「１つ又は複数」と解釈されるべきである。任意選択で、「及び／又は」節によって具体的に同定された要素以外の他の要素が、具体的に同定された要素に関連していようと関連していなかろうと、存在してもよい。したがって、非限定的な例として、「Ａ及び／又はＢ」への言及は、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」等の非限定的な言葉と共に使用される場合、一実施形態ではＡのみ（任意選択でＢ以外の要素を含む）、別の実施形態ではＢのみ（任意選択でＡ以外の要素を含む）、さらに別の実施形態ではＡとＢの両方（任意選択で他の要素を含む）、等を指すことができる。
【０４０５】
[00437]ここで本明細書及び特許請求の範囲で使用する場合、「又は（ｏｒ）」は、上で定義した「及び／又は」と同じ意味を包含すると理解されるべきである。例えば、リスト中の項目を抽出する場合、「又は」又は「及び／又は」は、包括的である、すなわち、いくつかの要素又はリストの要素のうちの少なくとも１つを含むが、２つ以上も含み、任意選択で、リストに載っていない追加の項目を含むと解釈されるものとする。
【０４０６】
[00438]本明細書全体にわたって使用する場合、「約」という用語は、合理的に近いを意味する。例えば、「約」は、特定の値が測定される方法に依存し得る、当業者によって決定される特定の値の許容できる標準偏差及び／又は許容できる誤差範囲内を意味する。さらに、整数が表される場合、約はその整数の両側の小数の値を指すことができる。範囲の文脈で使用される場合、「約」という用語は、その範囲の一方の端点の一方の特定の値と、その範囲の他方の端点の他方の特定の値との間の例示的な値の全て、及び各端点を超える合理的に近い値を包含する。
【０４０７】
[00439]本明細書で使用する場合、本明細書であれ添付の特許請求の範囲であれ、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「所有する（ｃａｒｒｙｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、「伴う（ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ）」等の移行用語は、包括的又は非限定的（すなわち、を含むがこれらに限定されないを意味する）と理解されるべきであり、記載されていない要素、材料、又は方法ステップを除外しない。「からなる」及び「から本質的になる」という移行句のみが、特許請求の範囲及び本明細書における例示的な実施形態の段落に関して、それぞれ制限的又は半制限的な移行句である。「からなる」という移行句は、具体的に記載されていないあらゆる要素、ステップ、又は構成成分を除外する。「から本質的になる」という移行句は、範囲を、明記された要素、材料、又はステップ、並びに本明細書に開示された及び／又は特許請求された本発明の基本的特質（複数可）に実質的に影響を与えない要素、材料、又はステップに限定する。
【０４０８】
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【図１Ａ】
2021518373.tif 000018
【図１Ｂ】
2021518373.tif 000019
【図１Ｃ】
2021518373.tif 000020
【図１Ｄ】
2021518373.tif 000021
【図１Ｅ】
2021518373.tif 000022
【図２】
2021518373.tif 000023
【図３】
2021518373.tif 000024
【図４】
2021518373.tif 000025
【図５】
2021518373.tif 000026
【図６Ａ】
2021518373.tif 000027
【図６Ｂ】
2021518373.tif 000028
【図６Ｃ】
2021518373.tif 000029
【図６Ｄ】
2021518373.tif 000030
【図７Ａ】
2021518373.tif 000031
【図７Ｂ】
2021518373.tif 000032
【図７Ｃ】
2021518373.tif 000033
【図８Ａ】
2021518373.tif 000034
【図８Ｂ】
2021518373.tif 000035
【図９Ａ】
2021518373.tif 000036
【図９Ｂ】
2021518373.tif 000037
【図９Ｃ】
2021518373.tif 000038
【図１０Ａ】
2021518373.tif 000039
【図１０Ｂ】
2021518373.tif 000040
【図１０Ｃ】
2021518373.tif 000041
【図１０Ｄ】
2021518373.tif 000042
【図１０Ｅ】
2021518373.tif 000043
【図１０Ｆ】
2021518373.tif 000044
【図１０Ｇ】
2021518373.tif 000045
【図１０Ｈ】
2021518373.tif 000046
【図１０Ｉ】
2021518373.tif 000047
【図１０Ｊ】
2021518373.tif 000048
【図１０Ｋ】
2021518373.tif 000049
【図１０Ｌ】
2021518373.tif 000050
【図１１Ａ】
2021518373.tif 000051
【図１１Ｂ】
2021518373.tif 000052
【図１１Ｃ】
2021518373.tif 000053
【図１１Ｄ】
2021518373.tif 000054
【図１１Ｅ】
2021518373.tif 000055
【図１１Ｆ】
2021518373.tif 000056
【図１１Ｇ】
2021518373.tif 000057
【図１１Ｈ】
2021518373.tif 000058
【図１１Ｉ】
2021518373.tif 000059
【図１１Ｊ】
2021518373.tif 000060
【図１１Ｋ】
2021518373.tif 000061
【図１１Ｌ】
2021518373.tif 000062
【図１２Ａ】
2021518373.tif 000063
【図１２Ｂ】
2021518373.tif 000064
【図１３Ａ】
2021518373.tif 000065
【図１３Ｂ】
2021518373.tif 000066
【国際調査報告】
2021518373.tif 000067
2021518373.tif 000068
2021518373.tif 000069
2021518373.tif 000070
2021518373.tif 000071
2021518373.tif 000072