(57)【要約】抗体ＮＥＯ−２０１は、Ｔｒｅｇ細胞に結合することが示されており、Ｔｒｅｇ細胞を標的化する際におけるその使用が説明されている。ＮＥＯ−２０１は、活性なＴｒｅｇ細胞の単離、検出、もしくは精製、またはＴｒｅｇ細胞を死滅させるためにも使用してもよい。ＮＥＯ−２０１を、任意に別の薬剤と組み合わせて使用する治療法及び併用療法が、説明されている。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
インビボでＴｒｅｇ細胞を死滅させる方法であって、有効量のＮＥＯ−２０１抗体を患者に投与することを含む、前記方法。
【請求項２】
患者における抗がん免疫応答を増強する方法であって、有効量のＮＥＯ−２０１抗体を前記患者に投与することを含む、前記方法。
【請求項３】
がんワクチンを前記患者に投与することをさらに含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
患者におけるがんのＴｒｅｇ細胞浸潤を減少させる方法であって、有効量のＮＥＯ−２０１抗体を前記患者に投与することを含む、前記方法。
【請求項５】
前記がんが、ＣＥＡＣＡＭ５またはＣＥＡＣＡＭ６を発現しない、請求項２〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記投与前または投与時に、前記がんが、ＣＥＡＣＡＭ５及びＣＥＡＣＡＭ６陰性であると決定することをさらに含む、請求項３〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
がんを治療または予防する、がんの負荷を軽減する、またはがんの成長もしくは増殖速度を低下させる方法であって、有効量のＮＥＯ−２０１抗体を、それを必要とする患者に投与することを含み、前記がんが、ＣＥＡＣＡＭ５及びＣＥＡＣＡＭ６陰性である、前記方法。
【請求項８】
別の治療剤を前記患者に投与することをさらに含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記他の薬剤が、（ａ）微小管阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、プラチン、アルキル化剤、及び代謝拮抗剤、（ｂ）ＭＫ−２２０６、ＯＮ  ０１３１０５、ＲＴＡ  ４０２、ＢＩ  ２５３６、ソラフェニブ、ＩＳＩＳ−ＳＴＡＴ３Ｒｘ、微小管阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、プラチン、アルキル化剤、代謝拮抗剤、パクリタキセル、ゲムシタビン、ドキソルビシン、ビンブラスチン、エトポシド、５−フルオロウラシル、カルボプラチン、アルトレタミン、アミノグルテチミド、アムサクリン、アナストロゾール、アザシチジン、ブレオマイシン、ブスルファン、カルムスチン、クロラムブシル、２−クロロデオキシアデノシン、シスプラチン、コルヒチン、シクロホスファミド、シタラビン、シトキサン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドセタキセル、リン酸エストラムスチン、フロクスウリジン、フルダラビン、ゲンツズマブ、ヘキサメチルメラミン、ヒドロキシ尿素、イフォスファミド、イマチニブ、インターフェロン、イリノテカン、ロムスチン、メクロレタミン、メルファレン、６−メルカプトプリン、メトトレキサート、マイトマイシン、ミトタン、ミトキサントロン、ペントスタチン、プロカルバジン、リツキシマブ、ストレプトゾシン、タモキシフェン、テモゾロミド、テニポシド、６−チオグアニン、トポテカン、トラスツズマブ、ビンクリスチン、ビンデシン、及び／またはビノレルビン、（ｃ）１−Ｄ−リボフラノシル−１，２，４−トリアゾール−３カルボキサミド、９−＞２−ヒドロキシ−エトキシメチルグアニン、アダマンタンアミン、５−ヨード−２’−デオキシウリジン、トリフルオロチミジン、インターフェロン、アデニンアラビノシド、プロテアーゼ阻害剤、チミジンキナーゼ阻害剤、糖または糖タンパク質合成阻害剤、構造タンパク質合成阻害剤、付着及び吸着阻害剤、ならびにアシクロビル、ペンシクロビル、バラシクロビル、及びガンシクロビルなどのヌクレオシド類似体、（ｄ）ＰＤ−１阻害剤、またはＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）（ペンブロリズマブ）もしくはＯＰＤＩＶＯ（登録商標）（ニボルマブ）などの抗ＰＤ−１抗体、あるいは（ｅ）ＣＴＬＡ−４阻害剤、またはＹＬＥＲＶＯＹ（登録商標）イピリムマブなどの抗ＣＴＬＡ−４抗体、から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＮＥＯ−２０１抗体が、前記患者における抗がん免疫応答を誘発または増大させる、請求項７〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
インビトロでＴｒｅｇ細胞を死滅させる方法であって、前記Ｔｒｅｇ細胞をＮＥＯ−２０１抗体と接触させることを含む、前記方法。
【請求項１２】
前記Ｔｒｅｇ細胞を補体と接触させることをさらに含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記Ｔｒｅｇ細胞が、ＣＤＣによって死滅する、請求項１１または１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記Ｔｒｅｇ細胞をエフェクター細胞と接触させることをさらに含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記エフェクター細胞が、ナチュラルキラー細胞を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記Ｔｒｅｇ細胞が、ＡＤＣＣによって死滅する、請求項１１、１４、または１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＮＥＯ−２０１抗体が、細胞毒性部分に結合されている、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
Ｔｒｅｇ細胞を検出する方法であって、前記Ｔｒｅｇ細胞による前記ＮＥＯ−２０１抗原の発現を検出することを含み、任意に、血液または生検サンプルなどの患者サンプル中のＴｒｅｇ細胞のレベルが、がんを診断するまたはがんの進行を決定するために使用される、前記方法。
【請求項１９】
前記Ｔｒｅｇ細胞をＮＥＯ−２０１抗体と接触させることを含み、任意に、前記ＮＥＯ−２０１抗体が、標識に直接的または間接的に結合される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記検出が、細胞選別、任意に、蛍光活性化細胞選別を含む、請求項１８または１９に記載の方法。
【請求項２１】
Ｔｒｅｇ細胞を染色する方法であって、細胞をＮＥＯ−２０１抗体と接触させることを含む、前記方法。
【請求項２２】
前記ＮＥＯ−２０１抗体が、標識に直接的または間接的に結合される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
Ｔｒｅｇ細胞を単離する方法であって、前記ＮＥＯ−２０１抗原を発現する細胞を単離することを含む、前記方法。
【請求項２４】
Ｔｒｅｇ細胞を含有するサンプルをＮＥＯ−２０１抗体と接触させることを含み、任意に、前記ＮＥＯ−２０１抗体が、直接的または間接的に標識される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記サンプルが、血液または骨髄であるか、またはそれを含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
ＮＥＯ−２０１陽性Ｔｒｅｇ細胞をＮＥＯ−２０１陰性細胞から分離することを含む、請求項２３〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記Ｔｒｅｇ細胞が、細胞選別、任意に、蛍光活性化細胞選別によって単離される、請求項２３〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記Ｔｒｅｇ細胞が、サンプルを、ＮＥＯ−２０１抗体を含む支持体と接触させることによって単離され、それにより前記Ｔｒｅｇ細胞が、前記支持体上に保持される、請求項２３〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記ＮＥＯ−２０１抗体が、配列番号２８及び配列番号２９に含まれるＣＤＲ配列の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つすべてを含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記ＮＥＯ−２０１抗体が、配列番号３８に対して少なくとも９０％の同一性を有する可変重鎖配列を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記ＮＥＯ−２０１抗体が、配列番号３９に対して少なくとも９０％の同一性を有する可変軽鎖配列を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
前記ＮＥＯ−２０１抗体が、配列番号３８に対して少なくとも９０％の同一性を有する可変重鎖配列及び配列番号３９に対して少なくとも９０％の同一性を有する可変軽鎖配列を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
前記ＮＥＯ−２０１抗体が、配列番号２８のアミノ酸２０〜４７０に対して少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列及び配列番号２９のアミノ酸２０〜２３３に対して少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
前記ＮＥＯ−２０１抗体が、配列番号２８及び配列番号２９に含まれるＣＤＲ配列の６つすべてを含む、請求項３２または３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記ＮＥＯ−２０１抗体が、ヒトＩｇＧ１定常ドメインを含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
前記ＮＥＯ−２０１抗体が、ヒト化されている、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
前記ＮＥＯ−２０１抗体が、別の部分にコンジュゲートされている、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
前記ＮＥＯ−２０１抗体が、別の細胞毒性部分、標識、放射性部分、または親和性タグにコンジュゲートされている、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
前記がんが、血液学的悪性腫瘍、非小細胞肺癌などの肺癌、黒色腫、胃腸癌、卵巣癌、頭頸部の扁平上皮癌、肝細胞癌、乳癌、膵臓癌、中皮腫、転移性腎細胞癌、及び前立腺癌から選択される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
前記Ｔｒｅｇ細胞を遺伝子改変することと、任意に、前記細胞を前記患者または別の個体に導入することと、をさらに含む、請求項２３〜２８のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年２月１３日に出願された米国仮特許出願第６２／６３０，０８４号への優先権を主張するものであり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
配列表情報
本出願は、その開示の一部として、２０１９年２月１３日に作成された３２，５４６バイトのサイズをもつ「４３２８２ｏ４６１３．ｔｘｔ」という名前のファイル内の生物学的配列表を含み、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００３】
ＣＤ４＋ＣＤ２５高制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）のレベルの増加は、血液学的悪性腫瘍（Ｂｅｙｅｒ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  ２００５，１０６，２０１８、Ｍｏｔｔａ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２００５，１９：１７８８、Ｙａｎｇ  ＺＺ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ，２００６，１０７：３６３９）、ならびに非小細胞肺癌（Ｗｏｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００１，６１：４７６６）、悪性黒色腫（Ｊａｖｉａ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００３，２６：８５）、胃腸悪性腫瘍（Ｓａｓａｄａ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ，２００３：９８：１０８９）、卵巣癌（Ｃｕｒｉｅｌ  ＪＴｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２００４，１０：９４２）、頭頸部の扁平上皮癌（Ｓｃｈａｅｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ２００５，９２：９１３）、肝細胞癌（Ｏｒｍａｎｄｙ  ＬＡ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，２００５：２４５７）、乳癌（Ｌｉｙａｎａｇｅ  ＵＹ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００２，１６９：２７５６）、膵臓癌（Ｌｉｙａｎａｇｅ  ＵＹ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００２，１６９：２７５６）、中皮腫（Ｄｅｌｏｎｇ  Ｐ，ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏ  Ｔｈｅｒ  ２００６，４：３４２）、転移性腎細胞癌（Ｄａｎｎｕｌｌ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ，２００５，１１５：３６２３）、及び前立腺癌（Ｖｅｒｇａｔｉ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２０１１，６０：１９７）に罹患している患者において報告されている。この増加は、腫瘍微小環境及び末梢血の両方で示されている。最近の研究（Ｍｉｌｌｅｒ  ＡＭ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０６６，１７７：７３９８）は、前立腺切除後の前立腺癌患者の末梢血における高レベルのＴｒｅｇを報告し、これらのＴｒｅｇの免疫抑制機能をインビトロで示した。
【０００４】
黒色腫患者の臨床研究は、Ｔｒｅｇが抗原特異的Ｔ細胞応答及び非特異的Ｔ細胞応答の両方を阻害することができることを示す（Ｍｕｋｈｅｔｊｉ  Ｂ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１９８９，１６９：１９６１、Ｃｈａｋｒａｂｏｒｔｙ  ＮＧ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９０，１４５：２３５９）。卵巣癌患者では、腫瘍浸潤性Ｔｒｅｇと全生存期間との間に直接的な相関関係が示されている（Ｃｕｒｉｅｌ  ＪＴ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２００４，１０：９４２）。これらの患者では、組換えインターロイキン２ジフテリア毒素とコンジュゲートしたＤＡＢ３８９ＩＬ２（デニロイキンディフティトックス、ＯＮＴＡＫ）での治療により、Ｔｒｅｇが減少し、抗腫瘍応答が改善された（Ｂａｒｎｅｔｔ  Ｂ  ｅｔ  ａｌ．Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｐｒｏｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００５，５４：３６９）。デニロイキンディフティトックス（ＤＡＢ３８９ＩＬ−２、ＯＮＴＡＫ）は、ヒトＩＬ−２とジフテリア毒素の酵素活性及び膜移行ドメインの融合タンパク質である。それは、ＣＤ２５（ＩＬ−２Ｒα）、ＣＤ１２２（ＩＬ−２Ｒβ）、及びＣＤ１３２（γｃ）からなる高親和性ＩＬ−２Ｒを発現する細胞に優先的に結合する。ＩＬ−２Ｒに結合した後、デニロイキンディフティトックスは、エンドサイトーシスによって内在化され、タンパク質合成を阻害し、最終的には細胞死をもたらす。デニロイキンディフティトックスは、転移性腎細胞癌患者の末梢血中のＴｒｅｇの数を大幅に減らし、インビボでＴｒｅｇを介した免疫抑制を無効にすることも示されている（Ｄａｎｎｕｌｌ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ，２００５，１１５：３６２３）。
【０００５】
要約すると、ＣＤ４＋ＣＤ２５高制御性Ｔ細胞が、免疫療法プロトコルの有効性を低下させ、これらの細胞の枯渇が、ワクチン薬用抗腫瘍免疫応答及び全生存を増強し得る（Ｄａｎｎｕｌｌ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ，２００５，１１５：３６２３、Ｖｅｒｇａｔｉ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２０１１，６０：１９７、Ａｎｔｏｎｙ  ＰＡ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ２００２，２５：２０２）。
【０００６】
がんは、世界中で最も頻度の高い死亡原因の１つであり、早ければ２０２５年までに毎年推定２０００万件の新しい症例があると予想されている（Ｆｅｒｌａｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。手術、放射線、及び化学療法などの従来のがん治療法では、しばしば、重篤な副作用が誘発され、進行した疾患の大部分の患者を治癒することができず、再発につながる（Ｂｏｄｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）。最近の治療法は、正常で健康な組織を大部分節約しながら、がん性細胞を選択的に標的とするために開発された。その中でも、免疫療法は、がん治療の分野に革命を起こすため、がん患者にとって重要な治療選択肢となっている。
【０００７】
がん免疫療法の根本的な原理は、免疫編集として知られており（Ｍｉｔｔａｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）、これは、細胞形質転換が起こり、がん抑制の内因性機構が失敗した後にのみ始まるがん抑制の外因性機構である。免疫編集プロセスは、排出、平衡、及び脱出の３つの相で行われる。排出相及び平衡相のそれぞれにおいて、がん細胞の免疫拒絶が優勢であるか、またはがん細胞の増殖と均衡して、悪性増殖を制御する。しかしながら、排出相では、一度抑制されたがん細胞は、免疫エフェクター機構への非感受性及び／または腫瘍微小環境における免疫抑制の誘導により、免疫認識を免れる可能性がある。免疫認識を免れたがん細胞は、より自由に増殖し、臨床的に明らかな疾患に成長することができる（Ｄｕｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）。がん免疫療法の目的は、抗腫瘍免疫応答を生成及び／または増幅して、腫瘍の成長を抑制し、腫瘍の再発を遅延させ、生存を延長することによって、がん細胞を排出相及び／または平衡相に保つことである（Ｃａｒｔｅｒ，２００１、Ｈｏｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００６、Ｖｅｒｇａｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０、Ｇａｂｉｔｚｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。治療アプローチには、チェックポイント阻害抗体、抗腫瘍ワクチン、及びキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−Ｔ細胞による患者を治療することが含まれ、これらはすべて、Ｔ細胞による適応免疫を利用する。しかしながら、先天性免疫は、抗腫瘍応答を生成及び増強することもでき、腫瘍標的モノクローナル抗体（ｍＡｂ）を使用して、先天性抗腫瘍免疫を刺激することができる（Ｔｏｐａｌｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。
【０００８】
ＮＥＯ−２０１は、Ｈｏｌｌｉｎｓｈｅａｄ同種結腸直腸癌ワクチンプラットフォームに対して生成された新規のヒト化ＩｇＧ１  ｍＡｂである（Ｈｏｌｌｉｎｓｈｅａｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９７０、Ｈｏｌｌｉｎｓｈｅａｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９７２）。このワクチンの免疫原性成分は、７９人の結腸癌患者からの外科的に切除された検体からプールされた腫瘍膜画分に由来する腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）であった（Ｈｏｌｌｉｎｓｈｅａｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５）。これらの膜画分は、半精製され、結腸癌患者対健常ボランティアの遅延型過敏症（ＤＴＨ）についてスクリーニングされ、難治性結腸直腸癌患者における臨床試験で評価された（Ｈｏｌｌｉｎｓｈｅａｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５、Ｈｏｌｌｉｎｓｈｅａｄ，ＵＳ４８１０７８１，１９８９、Ｂｒｉｓｔｏｌ  ＆  Ｋａｎｔｏｒ，米国特許第７８２９６７８号，２０１０）。これらの試験は、ワクチンに対する細胞性応答に加えて持続的なＩｇＧ応答を発現した患者における抗腫瘍応答と全生存の有意な延長の両方によって定義される臨床的利益を報告し、それによりワクチンは抗腫瘍抗体を生成することができる免疫原性成分を含んでいたことが示唆された（Ｈｏｌｌｉｎｓｈｅａｄ，１９９１）。この元の結腸直腸癌ワクチンは、マウスでモノクローナル抗体を生成するために使用され、前述のエンシツキシマブ（ＮＰＣ−１Ｃ／ＮＥＯ−１０２）（Ｌｕｋａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１、Ｐａｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３、Ｂｅｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６、Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ，２０１７）及びＮＥＯ−２０１が生成された。以前の研究では、ＮＥＯ−２０１は、ＣＥＡＣＡＭファミリーメンバーの腫瘍関連バリアント、特にＣＥＡＣＡＭ５及びＣＥＡＣＡＭ６のがん関連バリアントに結合することが示されている（Ｚｅｌｉｇｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１７）。
【０００９】
ヒトがん胎児性抗原（ＣＥＡ）ファミリーは、染色体１９ｑ１３．２にタンデムに配置された２９個の遺伝子で構成されている。ヌクレオチド相同性に基づいて、これらの遺伝子は、２つの主要なサブファミリー、ＣＥＡＣＡＭ及び妊娠特異的な糖タンパク質サブグループに分類される。ＣＥＡＣＡＭをコードするタンパク質には、ＣＥＡ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＥＡ関連の細胞接着分子（ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＥＡＣＡＭ３、ＣＥＡＣＡＭ４、ＣＥＡＣＡＭ６、ＣＥＡＣＡＭ７、ＣＥＡＣＡＭ８が含まれる。ＣＥＡＣＡＭファミリーは、Ｉｇスーパーファミリーに属する。構造的には、各ヒトＣＥＡＣＡＭには、１０８〜１１０個のアミノ酸を含み、Ｉｇ可変ドメインと相同な１つのＮ末端ドメインが含まれ、その後に異なる数（０〜６）のＩｇ  Ｃ２タイプの定数様ドメインが続く。ＣＥＡＣＡＭタンパク質は、互いに同種親和性及び異好性相互作用することができる。ＣＥＡＣＡＭ１は、その細胞質ドメインにＩＴＩＭ（免疫受容体チロシンベースの抑制モチーフ）様ＰＤ１が含まれているため、このファミリー内の独特なタンパク質である。この阻害効果は、ＩＴＩＭによるチロシン残基のリン酸化によって引き起こされ、その結果、Ｓｒｃホモロジー２ドメインを含むチロシンホスファターゼ−１及び−２が動員される。ＣＥＡＣＡＭ１タンパク質は、単球、顆粒球、活性化Ｔ細胞、Ｂ細胞、及びＮＫ細胞を含む様々な免疫細胞に発現する。ＣＥＡＣＡＭ１は、いくつかのアイソフォームとして発生し、２つの主要なものは、ＣＥＡＣＡＭ１−Ｌ及びＣＥＡＣＡＭ１−Ｓであり、それぞれ、長い（Ｌ）または短い（Ｓ）細胞質ドメインを有する。ＣＥＡＣＡＭ１−Ｓの発現は、ヒト白血球では完全に欠如している。ＣＥＡＣＡＭ１−Ｌは、ＣＤ１６は陰性であるがＣＤ５６は陽性である活性化ヒトＮＫ細胞の亜集団で発現する。
【００１０】
モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、既定のｍＡｂに特異的である固有の抗原結合領域（断片抗原結合、Ｆａｂ）と、同じアイソタイプのすべてのｍＡｂに共通の定常領域（断片結晶化可能、Ｆｃ）と、からなる。Ｆｃ領域は、特定の免疫細胞タイプの表面に発現するＦｃ受容体（ＦｃＲ）ファミリーのメンバーに関与することによって、免疫細胞の活性を調節することができる。特に、ヒトＩｇＧ１  ｍＡｂは、マクロファージ及びＮＫ細胞に発現するＦｃガンマ受容体ＩＩＩａ（ＦｃγＲＩＩＩａ、ＣＤ１６）と相互作用することができる。この相互作用は、マクロファージを刺激して、ｍＡｂオプソニン化されたがん細胞を貪食することができ、ＮＫ細胞を活性化して、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）として知られる機構を介してがん細胞を脱顆粒及び溶解することができる。ＡＤＣＣは、多くの前臨床試験においてインビボでの抗腫瘍効果の主要なメディエーターであることが示され、がん治療に使用されるいくつかのｍＡｂの作用機構において重要な役割を果たす（Ｓｅｉｄｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。ＡＤＣＣを媒介することができる臨床的に承認されたｍＡｂの例には、乳癌に対してはＨＥＲ２受容体を標的とするトラスツズマブ（Ｓｅｉｄｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３、Ｐｅｔｒｉｃｅｖｉｃ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）、リンパ腫に対して汎Ｂ細胞マーカーＣＤ２０を標的とするリツキシマブ（Ｓｅｉｄｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３、Ｄａｌｌ’Ｏｚｚｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）、大腸癌及び頭頸部癌に対して上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）を標的とするセツキシマブ（Ｓｅｉｄｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３、Ｌｅｖｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００９、Ｋａｗａｇｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００７、Ｌｏｐｅｚ−Ａｌｂａｉｔｅｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）、メルケル細胞癌及び膀胱癌に対して免疫抑制リガンドＰＤ−Ｌ１を標的とするアベルマブ（Ｂｏｙｅｒｉｎａｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）が含まれる。さらに、Ｆｃ領域は、Ｃ１複合体と潜在的に相互作用して、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を活性化することができ、タンパク質分解カスケードにより、抗体の標的となる細胞の溶解を引き起こす原形質膜の孔が形成される。抗腫瘍ＣＤＣが、インビトロで実証された場合でも、それががんにおけるｍＡｂ療法の臨床的有効性に重要であるかどうかについては論争がある（Ｍｅｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【００１１】
出願者の以前の米国特許第５，６８８，６５７号、同第７，３１４，６２２号、同第７，４９１，８０１号、同第７，７６３，７２０号、同第７，８２９，６７８号、同第８，４７０，３２６号、同第８，５２４，４５６号、同第８，５３５，６６７号、同第８，８０２，０９０号、同第９，０３４，５８８号、同第９，０６８，０１４号、同第９，３７１，３７５号、同第９，５９２，２９０号、同第９，７１８，８６６号、及びＲＥ３９，７６０（これらのそれぞれは、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）は、様々な抗がん抗体、がん抗原、及び関連技術を開示している。
【発明の概要】
【００１２】
ＮＥＯ−２０１が、ＣＥＡＣＡＭ５及びＣＥＡＣＡＭ６のがん関連バリアントに、特にこれらのタンパク質のがん関連グリコシル化バリアントを介して結合することをこれまでに示している。ＮＥＯ−２０１は、プールされた同種結腸腫瘍組織抽出物からの腫瘍関連抗原の免疫原性調製物に由来するヒト化ＩｇＧ１モノクローナル抗体である。ＮＥＯ−２０１は、多くの異なるがん腫からの大部分の腫瘍組織に対して反応するが、正常組織の大部分には反応しない。機能分析は、ＮＥＯ−２０１が腫瘍細胞に対する抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）の両方を媒介することができることが明らかになった。以前の研究は、ＮＥＯ−２０１がマウスのヒト腫瘍異種移植片の成長を減衰させることを示し、観察された唯一の悪影響である循環好中球の一時的な減少を伴う非ヒト霊長類における安全性及び忍容性を示す。
【００１３】
出願者は、ＮＥＯ−２０１がＴｒｅｇ細胞に結合し、それによりＴｒｅｇ細胞、例えば活性Ｔｒｅｇ細胞の精製、及びＴｒｅｇ細胞の死滅にも使用することができることを本明細書で示した。ＮＥＯ−２０１抗原（ＣＥＡＣＡＭ５及びＣＥＡＣＡＭ６のがん関連グリコシル化バリアント）はＴｒｅｇ細胞によって発現されないと考えられているため、これらの結果は特に予想外であった。これらの結果に基づいて、ＮＥＯ−２０１抗原の性質が、再評価されている。理論によって制限されることを意図するものではないが、Ｔｒｅｇ細胞が、ＮＥＯ−２０１抗原を構成するＣＥＡＣＡＭ５／６のがん関連グリコシル化と同じかまたは類似のグリコシル化を有する細胞表面で１つ以上のタンパク質を発現し得ると考えられている。
【００１４】
Ｔｒｅｇ細胞の浸潤は、多くのがんの種類に関連しており、いくつかの研究では、Ｔｒｅｇ細胞の選択的除去が抗がん免疫応答を促進することが示されている。新たに説明されたＮＥＯ−２０１のＴｒｅｇ細胞を死滅させる能力は、がん自体によるＮＥＯ−２０１抗原発現に関係なく、抗がん免疫応答を増強するためのＮＥＯ−２０１の使用を支援する。例えば、ＮＥＯ−２０１は、ワクチン薬用の抗腫瘍免疫応答を増強することが期待されている。ＮＥＯ−２０１を使用してＴｒｅｇ細胞を選択的に切除すると、神経変性状態（アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、及び多発性硬化症（ＭＳ））を含む、Ｔｒｅｇ細胞が役割を果たすと考えられるまたは思われている他の疾患に有益であり得る。
【００１５】
加えて、ＮＥＯ−２０１結合は、研究用または治療用のいずれであっても、Ｔｒｅｇ細胞の精製のために使用することができる。ヒトＴｒｅｇの抑制機能の低下は、自己免疫疾患及び状態の一般的な特徴であると思われる。Ｔｒｅｇ細胞の精製は、診断的及び／または治療的有用性を有し得る。例えば、健康なドナーからの精製されたＴｒｅｇ細胞は、その状態を治療するために、自己免疫状態を有する個体に移植されてもよい。加えて、精製された自己または異種のＴｒｅｇは、自己免疫疾患の治療のために操作され、患者に導入されてもよい。
【００１６】
作業例は、表現型及び機能の分析のために正常なドナーからのＰＢＭＣを使用して行われた実験について説明する。ＥａｓｙＳｅｐ（商標）ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｒｅｇ単離キット及び抗ビオチンキットは、製造業者が提供するＴｒｅｇ精製試薬とともに使用するか、ビオチン標識ＮＥＯ−２０１  ｍＡｂを使用してカスタマイズして、ＰＢＭＣからＴｒｅｇを単離した。表現型分析は、フローサイトメトリーによって、ＣＤ４、ＣＤ２５、ＣＤ１２７、ＦｏｘＰ３、ＣＤ１５ｓ、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ４、ＮＥＯ−２０１抗原、ＣＥＡＣＡＭ５、及びＣＥＡＣＡＭ６のマーカーに対して行われた。ＮＥＯ−２０１で単離されたＴｒｅｇが自己ＣＤ４＋Ｔ応答細胞の増殖を抑制する能力を、Ｔｒｅｇ共培養抑制アッセイを使用して評価した。ＣＤ４＋ＣＤ２５高ＣＤ１２７−ＦｏｘＰ３＋ＣＤ１５ｓ＋ＣＣＲ４＋Ｔｒｅｇの集団におけるＮＥＯ−２０１＋細胞の割合は、６１．８％〜８１．９％の範囲であった。ＮＥＯ−２０１＋Ｔｒｅｇは、ＣＤ４５ＲＡ−であった。単離されたＣＤ４＋ＮＥＯ−２０１＋Ｔｒｅｇは、ＣＤ４＋Ｔ応答細胞の増殖を抑制することができた。
【００１７】
加えて、ＮＥＯ−２０１がオプソニン化されたＴｒｅｇの死滅を媒介する能力を、ＣＤＣアッセイを使用して評価した。ＮＥＯ−２０１  ｍＡｂは、Ｔｒｅｇに対するＣＤＣ活性を媒介することができることが実証された。
【００１８】
これらの結果から、ＮＥＯ−２０１がヒトＴｒｅｇに対して反応し、Ｔｒｅｇの同定及び精製のための新規マーカーとして使用することができると結論付けられた。ＮＥＯ−２０１  ｍＡｂを使用して単離されたＴｒｅｇは、機能的に抑制され、ＣＤＣによって除去され得る。抗体がＴｒｅｇ細胞に結合する能力に基づいて、ＡＤＣＣを媒介したＴｒｅｇ細胞では、死滅も発生し得る。本出願は、この抗がん剤が抗腫瘍免疫のＴｒｅｇを媒介した免疫抑制を標的とすることにも有用性があり得ることを初めて実証する。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】ＮＥＯ−２０１による機能的Ｔｒｅｇ細胞の単離。市販のキット（ヒトＣＤ４＋ＣＤ１２７低ＣＤ２５＋）を使用して単離された機能的Ｔｒｅｇの割合またはＮＥＯ−２０１発現に基づく選択。ＥａｓｙＳｅｐ（商標）ヒトＣＤ４＋ＣＤ１２７低ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞単離キットは、６７．１４％の活性なＴｒｅｇ細胞を産生したが、ＮＥＯ−２０１陽性発現に基づく選択は、９９．１２％の活性なＴｒｅｇ細胞を産生した。
【図２】制御性Ｔ細胞は、フローサイトメトリーによって決定されるように、ＣＥＡＣＡＭ−５及びＣＥＡＣＡＭ−６陰性である。単離されたＴ−ｒｅｇ（ＥａｓｙＳｅｐ（商標）ヒトＣＤ４＋ＣＤ１２７低ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞単離キット（ＨＤ１９）の表現型分析。細胞を、ＣＤ６６ａ（ＣＥＡＣＡＭ１）、ＣＤ６６ｃ（ＣＥＡＣＡＭ６）、ＣＤ６６ｄ（ＣＥＡＣＡＭ３）、及びＣＤ６６ｅ（ＣＥＡＣＡＭ５）を認識するＰＥマウス抗ヒトＣＤ６６抗体（クローンＢ１．１／ＣＤ６６）で染色した。４４．８４％のＣＤ４＋／ＣＤ２５高／ＣＤ１２７−／ＦＯＸｐ３＋細胞は、ＮＥＯ−２０１＋／ＣＥＡＣＡＭ５−細胞及びＣＥＡＣＡＭ６−細胞である。
【図３】ＮＥＯ−２０１は、ＣＤ４＋ＣＤ１５ｓ＋Ｔｒｅｇに対してＣＤＣを媒介する。Ｔｒｅｇ細胞は、ＣＤ４及びＣＤ１５ｓ（シアリルルイスＸグリカン）を発現する。補体だけでは、Ｔｒｅｇは死滅しなかった。ＮＥＯ−２０１は、Ｔｒｅｇ細胞に対するＣＤＣを介した。ＣＤ４＋ＣＤ１５ｓ＋Ｔｒｅｇの集団が５３．４％減少した。手順：ＣＤ４＋Ｔ細胞をＰＢＭＣから単離した。細胞を、−／＋ＮＥＯ−２０１  ｍＡｂ（１０μｇ／ｍＬ）で処理した。次いで、細胞を、−／＋補体（１：８希釈、２時間）で処理した。細胞を洗浄し、ＣＤ４及びＣＤ１５ｓマーカーについて染色した。マーカー発現は、フローサイトメトリーによって測定された。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
一態様では、本開示は、インビボでＴｒｅｇ細胞を死滅させる方法であって、有効量のＮＥＯ−２０１抗体を患者に投与することを含む、方法を提供する。
【００２１】
別の態様では、本開示は、患者における抗がん免疫応答を増強する方法であって、有効量のＮＥＯ−２０１抗体を当該患者に投与することを含む、方法を提供する。
【００２２】
本方法は、がんワクチンを当該患者に投与することをさらに含み得る。投与され得る例示的ながんワクチンは、例えば、Ｆｉｓｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎ  Ｉｎｆｌａｍｍ  Ｄｉｓ．２０１７  Ｍａｒ；５（１）：１６−２８、Ｋｌａｇｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  Ｏｃｔｏｂｅｒ  １５  ２０１０（７０）（２０）７７８８−７７９９、Ｒｅｇｉｎａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．２０１３  Ｏｃｔ  １５；１０９（８）：２１６７−２１７４、Ｌｉｔｚｉｎｇｅｒ  ＭＴ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ２００７，１１０：３１９２に開示されており、これらのそれぞれは、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【００２３】
別の態様では、本開示は、患者におけるがんのＴｒｅｇ細胞浸潤を減少させる方法であって、有効量のＮＥＯ−２０１抗体を当該患者に投与することを含む、方法を提供する。
【００２４】
別の態様では、本開示は、患者におけるがんの退縮を刺激する方法であって、有効量のＮＥＯ−２０１抗体を当該患者に投与し、それにより当該患者における抗がん免疫を活性化、増強、または刺激することを含む、方法を提供する。
【００２５】
当該がんは、ＣＥＡＣＡＭ５またはＣＥＡＣＡＭ６を発現し得ない。
【００２６】
当該方法は、当該投与前または投与時に、当該がんが、ＣＥＡＣＡＭ５及びＣＥＡＣＡＭ６陰性であることを決定することをさらに含み得、これは、任意に、例えば、ＣＥＡＣＡＭ５及びＣＥＡＣＡＭ６の両方に特異的に結合する交差反応性抗体などのＣＥＡＣＡＭ５及び／またはＣＥＡＣＡＭ６に特異的な抗体で染色することによって、ＣＥＡＣＡＭ５及びＣＥＡＣＡＭ６タンパク質の発現について試験することによって決定され得る。
【００２７】
別の態様では、本開示は、がんを治療または予防する、がんの負荷を軽減する、またはがんの成長もしくは増殖速度を低下させる方法であって、有効量のＮＥＯ−２０１抗体を、それを必要とする患者に投与することを含む、方法を提供し、当該がんは、ＣＥＡＣＡＭ５及びＣＥＡＣＡＭ６陰性である。
【００２８】
当該方法は、別の治療剤を当該患者に投与することをさらに含み得る。当該他の薬剤は、（ａ）微小管阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、プラチン、アルキル化剤、及び代謝拮抗剤、（ｂ）ＭＫ−２２０６、ＯＮ  ０１３１０５、ＲＴＡ  ４０２、ＢＩ  ２５３６、ソラフェニブ、ＩＳＩＳ−ＳＴＡＴ３Ｒｘ、微小管阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、プラチン、アルキル化剤、代謝拮抗剤、パクリタキセル、ゲムシタビン、ドキソルビシン、ビンブラスチン、エトポシド、５−フルオロウラシル、カルボプラチン、アルトレタミン、アミノグルテチミド、アムサクリン、アナストロゾール、アザシチジン、ブレオマイシン、ブスルファン、カルムスチン、クロラムブシル、２−クロロデオキシアデノシン、シスプラチン、コルヒチン、シクロホスファミド、シタラビン、シトキサン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドセタキセル、リン酸エストラムスチン、フロクスウリジン、フルダラビン、ゲンツズマブ、ヘキサメチルメラミン、ヒドロキシ尿素、イフォスファミド、イマチニブ、インターフェロン、イリノテカン、ロムスチン、メクロレタミン、メルファレン、６−メルカプトプリン、メトトレキサート、マイトマイシン、ミトタン、ミトキサントロン、ペントスタチン、プロカルバジン、リツキシマブ、ストレプトゾシン、タモキシフェン、テモゾロミド、テニポシド、６−チオグアニン、トポテカン、トラスツズマブ、ビンクリスチン、ビンデシン、及び／またはビノレルビン、（ｃ）１−Ｄ−リボフラノシル−１，２，４−トリアゾール−３カルボキサミド、９−＞２−ヒドロキシ−エトキシメチルグアニン、アダマンタンアミン、５−ヨード−２’−デオキシウリジン、トリフルオロチミジン、インターフェロン、アデニンアラビノシド、プロテアーゼ阻害剤、チミジンキナーゼ阻害剤、糖または糖タンパク質合成阻害剤、構造タンパク質合成阻害剤、付着及び吸着阻害剤、ならびにアシクロビル、ペンシクロビル、バラシクロビル、及びガンシクロビルなどのヌクレオシド類似体、（ｄ）ＰＤ−１阻害剤、またはＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）（ペンブロリズマブ）もしくはＯＰＤＩＶＯ（登録商標）（ニボルマブ）などの抗ＰＤ−１抗体、あるいは（ｅ）ＣＴＬＡ−４阻害剤、またはＹＥＲＶＯＹ（登録商標）イピリムマブなどの抗ＣＴＬＡ−４抗体、から選択され得る。免疫チェックポイント阻害（ＰＤ−１阻害及び／またはＣＴＬＡ−４阻害）とＴｒｅｇアブレーションの組み合わせが、がん治療に特に有効であると予想される。Ｖａｒｇａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．２０１７  Ａｐｒ  １８；４６（４）：５７７−５８６及びＴａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．２０１７；１２７（９）：３４７２−３４８３を参照されたく、これらのそれぞれは、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【００２９】
当該ＮＥＯ−２０１抗体は、患者における抗がん免疫応答を誘発または増大させ得る。
【００３０】
別の態様では、本開示は、インビトロでＴｒｅｇ細胞を死滅させる方法であって、当該Ｔｒｅｇ細胞をＮＥＯ−２０１抗体と接触させることを含む、方法を提供する。当該方法は、当該Ｔｒｅｇ細胞を補体と接触させることをさらに含み得る。当該Ｔｒｅｇ細胞は、ＣＤＣによって死滅させ得る。当該方法は、当該Ｔｒｅｇ細胞をナチュラルキラー細胞などのエフェクター細胞と接触させることをさらに含み得る。当該Ｔｒｅｇ細胞は、ＡＤＣＣによって死滅させ得る。
【００３１】
別の態様では、本開示は、エクスビボでＴｒｅｇ細胞を死滅させる方法であって、Ｔｒｅｇ細胞を含むサンプルを有効量のＮＥＯ−２０１抗体と接触させることを含む、方法を提供する。当該サンプルは、患者から得られ得る。
【００３２】
当該ＮＥＯ−２０１抗体は、細胞毒性部分に結合され得る。
【００３３】
別の態様では、本開示は、Ｔｒｅｇ細胞を検出する方法であって、当該Ｔｒｅｇ細胞によるＮＥＯ−２０１抗原の発現を検出することを含み、任意に、血液または生検サンプルなどの患者サンプル中のＴｒｅｇ細胞のレベルが、がんを診断するまたはがんの進行を決定するために使用される、方法を提供する。任意に、当該方法は、Ｔｒｅｇ細胞の検出に基づいて、患者に治療を割り当てるまたは投与することをさらに含み得る。例えば、患者は、当該患者サンプル中にＴｒｅｇ細胞が検出される場合、投与されるように割り当てられ得るか、またはＴｒｅｇ細胞を死滅させるのに有効な量でＮＥＯ−２０１を投与され得る。
【００３４】
当該方法は、当該Ｔｒｅｇ細胞をＮＥＯ−２０１抗体と接触させることを含み得る。
【００３５】
当該検出は、細胞選別、任意に、蛍光活性化細胞選別を含み得る。
【００３６】
別の態様では、本開示は、Ｔｒｅｇ細胞を検出する方法であって、細胞をＮＥＯ−２０１抗体と接触させることと、ＮＥＯ−２０１を発現する細胞を検出することと、を含む、方法を提供する。当該ＮＥＯ−２０１抗体は、直接的または間接的に標識され得る。
【００３７】
別の態様では、本開示は、Ｔｒｅｇ細胞を染色する方法であって、細胞をＮＥＯ−２０１抗体と接触させることを含む、方法を提供する。当該ＮＥＯ−２０１抗体は、直接的または間接的に標識され得る。
【００３８】
別の態様では、本開示は、Ｔｒｅｇ細胞を単離する方法であって、ＮＥＯ−２０１抗原を発現する細胞を単離することを含む、方法を提供する。当該方法は、Ｔｒｅｇ細胞を含有するサンプルをＮＥＯ−２０１抗体と接触させることを含み得、任意に、当該ＮＥＯ−２０１抗体が、直接的または間接的に標識される。当該サンプルは、血液または骨髄であり得るか、またはそれを含み得る。当該方法は、ＮＥＯ−２０１陽性Ｔｒｅｇ細胞をＮＥＯ−２０１陰性細胞から分離することを含み得る。当該方法は、当該Ｔｒｅｇ細胞を遺伝子改変することと、任意に、当該細胞を当該患者または別の個体に導入することと、をさらに含み得る。
【００３９】
当該Ｔｒｅｇ細胞は、細胞選別、任意に、蛍光活性化細胞選別により単離され得る。
【００４０】
当該Ｔｒｅｇ細胞は、サンプルを、ＮＥＯ−２０１抗体を含む支持体と接触させることによって単離され得、それにより当該Ｔｒｅｇ細胞が、当該支持体上に保持される。
【００４１】
染色または検出の当該方法は、別のマーカー、または発現の存在、不在、及び／またはレベルが、ＮＥＯ−２０１と組み合わせて、Ｔｒｅｇ細胞、例えば、ＣＤ４＋、ＣＤ１５ｓ＋、ＦｏｘＰ３＋、ＣＤ２５＋、ＣＣＲ４＋及び／またはＣＤ１２７低またはＣＤ１２７−、例えば、ＣＤ４＋ＣＤ１５ｓ＋、ＣＤ４＋ＦｏｘＰ３＋ＣＤ２５＋、またはＣＤ４＋ＦｏｘＰ３＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７低を示すマーカーの組み合わせの発現を検出することをさらに含み得る。例えば、ＮＥＯ−２０１＋ＣＤ４＋ＣＤ１５ｓ＋、ＮＥＯ−２０１＋ＣＤ４＋ＣＤ１５ｓ＋ＦｏｘＰ３＋ＣＤ２５＋、ＮＥＯ−２０１＋ＣＤ４＋ＣＤ１５ｓ＋ＦｏｘＰ３＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７低、ＮＥＯ−２０１＋ＣＤ４＋ＦｏｘＰ３＋ＣＤ２５＋、またはＮＥＯ−２０１＋ＣＤ４＋ＦｏｘＰ３＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７低、好ましくはＮＥＯ−２０１＋ＣＤ４＋ＣＤ１５ｓ＋、または好ましくはＮＥＯ−２０１＋ＣＤ４＋ＣＤ１２７低ＣＤ２５＋、または好ましくは、ＣＤ４＋ＣＤ２５高ＣＤ１２７−ＦｏｘＰ３＋ＣＤ１５ｓ＋ＣＣＲ４＋である細胞は、本明細書に開示される方法に従ってＴｒｅｇ細胞として特定、検出、単離、及び／または精製され得る。
【００４２】
上記または下記の方法のいずれかにおいて、当該ＮＥＯ−２０１抗体は、配列番号２８及び配列番号２９に含まれるＣＤＲ配列の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または好ましくは６つすべてを含み得る。
【００４３】
上記または下記の方法のいずれかにおいて、当該ＮＥＯ−２０１抗体は、配列番号３８に対して少なくとも９０％の同一性を有する可変重鎖配列を含み得る。
【００４４】
上記または下記の方法のいずれかにおいて、当該ＮＥＯ−２０１抗体は、配列番号３９に対して少なくとも９０％の同一性を有する可変軽鎖配列を含み得る。
【００４５】
上記または下記の方法のいずれかにおいて、当該ＮＥＯ−２０１抗体は、配列番号３８に対して少なくとも９０％の同一性を有する可変重鎖配列及び配列番号３９に対して少なくとも９０％の同一性を有する可変軽鎖配列を含み得る。
【００４６】
上記または下記の方法のいずれかにおいて、当該ＮＥＯ−２０１抗体は、配列番号２８のアミノ酸２０〜４７０に対して少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列及び配列番号２９のアミノ酸２０〜２３３に対して少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含み得る。
【００４７】
上記または下記の方法のいずれかにおいて、当該ＮＥＯ−２０１抗体は、配列番号２８及び配列番号２９に含まれるＣＤＲ配列の６つすべてを含み得る。
【００４８】
上記または下記の方法のいずれかにおいて、当該ＮＥＯ−２０１抗体は、ヒトＩｇＧ１定常ドメインを含み得る。あるいは、当該ＮＥＯ−２０１抗体は、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３、もしくはヒトＩｇＧ４定常ドメイン、または２つ以上のヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４を含むハイブリッドもしくはキメラドメインを含み得る。
【００４９】
上記または下記の方法のいずれかにおいて、当該ＮＥＯ−２０１抗体は、ヒト化され得る。
【００５０】
上記または下記の方法のいずれかにおいて、当該ＮＥＯ−２０１抗体は、別の部分にコンジュゲートされ得る。
【００５１】
上記または下記の方法のいずれかにおいて、当該ＮＥＯ−２０１抗体は、別の細胞毒性部分、標識、放射性部分、または親和性タグにコンジュゲートされ得る。
【００５２】
上記または下記の方法のいずれかにおいて、当該ＮＥＯ−２０１抗体は、ＮＥＯ−２０１抗原への結合に関して、配列番号２８及び配列番号２９に含まれる抗体と競合し得る。
【００５３】
上記または下記の方法のいずれかにおいて、当該がんは、血液学的悪性腫瘍、非小細胞肺癌などの肺癌、黒色腫、胃腸癌、卵巣癌、頭頸部の扁平上皮癌、肝細胞癌、乳癌、膵臓癌、中皮腫、転移性腎細胞癌、及び前立腺癌から選択され得る。当該がんは、Ｔｒｅｇ細胞を含み得る。
【００５４】
定義
別途定義されない限り、本明細書で用いるすべての技術的及び科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を表す。本明細書に記載されるものと同様または同等の方法及び材料は、本発明または本発明の試験で使用され得るが、適切な方法及び材料が本明細書に記載される。材料、方法、及び実施例は単なる例示であり、限定することを意図するものではない。
【００５５】
本明細書の説明において、及び下記特許請求の範囲にわたって用いられる場合、文脈が別途明確に指示しない限り、「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」の意味は、複数の指示対象を含む。
【００５６】
本明細書で使用される「アミノ酸」という用語は、天然アミノ酸、合成アミノ酸、ならびに天然アミノ酸と同様の形で機能するアミノ酸類似体及びアミノ酸模倣体を指す。天然アミノ酸は、遺伝暗号によってコードされるものと、それらのアミノ酸が後で修飾されたもの、例えば、ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタメート及びＯ−ホスホセリンである。アミノ酸類似体とは、天然アミノ酸と同じ基本化学構造、すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基、及びＲ基に結合しているα炭素を有する化合物、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムを指す。このような類似体は、修飾されたＲ基を有するか（例えばノルロイシン）または修飾されたペプチド主鎖を有するが、天然アミノ酸と同じ基本化学構造を保持している。アミノ酸模倣体とは、アミノ酸の一般的な化学構造とは異なる構造を有するが、天然アミノ酸と同様の形で機能する化学化合物を指す。
【００５７】
本明細書で使用される「ＮＫ枯渇」または「ナチュラルキラー枯渇」という用語は、正常範囲と比較して低いナチュラルキラー（ＮＫ）細胞レベルを有する患者を指す。ＮＫ細胞は、細胞傷害性自然免疫リンパ球である。典型的には、ＮＫ細胞は、健常な個体における末梢血単核球（ＰＢＭＣ）の５〜２０％を占める。５％未満のＰＭＢＣを含むＮＫ細胞を有する患者は、ＮＫ枯渇と称される。加えて、ＮＫ細胞が３％未満のＰＭＢＣを含む場合、この患者は、重度のＮＫ細胞枯渇と称される。加えて、正常な個人では、最大９０％のＰＢＭＣ  ＮＫ細胞が、ＣＤ５６ｄｉｍＣＤ１６＋ＮＫ細胞であり、これらは最も細胞毒性のサブセットとみなされる。７０％未満のＰＢＭＣ  ＮＫ細胞がＣＤ５６ｄｉｍＣＤ１６＋ＮＫ細胞である場合、この患者は、ＮＫ枯渇と称される。加えて、５０％未満のＰＢＭＣ  ＮＫ細胞がＣＤ５６ｄｉｍＣＤ１６＋ＮＫ細胞である場合、この患者は、重度のＮＫ枯渇と称される。所定の患者は、これらの個々の基準のいずれかまたは両方を満たすことに基づいて、ＮＫ枯渇または重度のＮＫ枯渇と称され得る。一般的に言えば、ＮＫ枯渇または重度のＮＫ枯渇としての患者の状態は、患者から採取されたサンプル、例えば、血液サンプル、例えば、１週間または２週間前に得られ、試験されたサンプルを試験することによって決定される。ＮＫ枯渇または重度のＮＫ枯渇としての患者の状態は、疾患の診断及び／またはこのようなＮＫ細胞の枯渇に関連する一連の治療からも推定され得る。
【００５８】
「抗体」は、本明細書で用いられる場合、エピトープに適合し、それを認識する特定形状を有する任意のポリペプチド鎖含有分子構造を広く指し、１つ以上の非共有結合相互作用は、分子構造とエピトープとの間の複合体を安定化する。典型的な抗体分子は、免疫グロブリンであり、全ての源、例えば、ヒト、齧歯類、ウサギ、ウシ、ヒツジ、ブタ、イヌ、ニワトリからのあらゆる種類の免疫グロブリン、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤが「抗体」であると考えられる。抗体には、キメラ抗体、ヒト抗体、及び他の非ヒト哺乳動物抗体、ヒト化抗体、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、ラクダボディ、ナノボディ、ＩｇＮＡＲ（サメに由来する単鎖抗体）、小モジュラー免疫薬（ＳＭＩＰ）、及び抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２）が含まれるが、これらに限定されない。多数の抗体コード配列が記載され、他のものは、当該技術分野で周知の方法によって生じてもよい。Ｓｔｒｅｌｔｓｏｖ，ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．１４（１１）：２９０１−９、Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ，ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｎａｔｕｒｅ３７４（６５１８）：１６８−１７３、Ｎｕｔｔａｌｌ，ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．３８（４）：３１３−２６、Ｈａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ３６３（６４２８）：４４６−８、Ｇｉｌｌ，ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７（６）：６５３−８を参照のこと。
【００５９】
「ＮＥＯ−２０１抗体」とは、配列番号２８及び配列番号２９の重鎖及び軽鎖、または任意に、その中に含まれる定常領域と一緒に可変領域、ならびにそれらの断片及びバリアントを含む抗体を指す。そのようなバリアントには、配列番号２８及び配列番号２９に含まれるＣＤＲ配列の１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは好ましくは６つすべてを含む配列、すなわち、配列番号３２の重鎖ＣＤＲ１、配列番号３３の重鎖ＣＤＲ２、配列番号３４の重鎖ＣＤＲ３、配列番号３５の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号３６の軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３７の軽鎖ＣＤＲ３が含まれる。そのようなバリアントはまた、ＮＥＯ−２０１抗原への結合に関して、ＮＥＯ−２０１と競合する抗体も含む。当該抗体は、ヒト化され得る。当該抗体は、１つ以上のリーダー配列を含んで発現され得、発現中及び／または抗体の処理及び分泌に除去され得る。当該抗体は、当該ＮＥＯ−２０１抗体配列及び異なる抗体の結合断片を含む二特異的または多特異的抗体を含むが、これらに限定されない、一価、二価、またはより多価の形式で提示され得る。典型的には、当該抗体は、がん細胞に特異的に結合し、がん細胞への結合に関して、配列番号３８の可変重鎖及び配列番号３９の可変軽鎖を含むか、または配列番号２８の重鎖及び配列番号２９の軽鎖を含む抗体と競合する。配列番号２８及び／または配列番号２９に含まれるＣＤＲ配列のうちの１つ以上は、バリアント配列、例えば、配列番号１もしくは４の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号２もしくは５の軽鎖ＣＤＲ２、配列番号３もしくは６の軽鎖ＣＤＲ３、配列番号７の重鎖ＣＤＲ１、配列番号８、１０、３０、もしくは３１の重鎖ＣＤＲ２、配列番号９もしくは１１または配列番号３０〜３１の重鎖ＣＤＲ３と置換され得る。軽鎖は、配列番号１４、１６、１７、１８、１９、２０、２１、または２９の軽鎖配列に含まれるＣＤＲを含み得る。重鎖は、配列番号１５、２２、２３、２４、２５、２６、２７、または２９の重鎖配列に含まれるＣＤＲを含み得る。当該抗体は、配列番号３８に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する可変重鎖配列、及び／または配列番号３９に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する可変軽鎖配列を含み得、任意に、当該重鎖配列及び／または軽鎖配列は、配列番号２８及び配列番号２９に含まれるＣＤＲ配列の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または好ましくは６つすべて、すなわち、配列番号３２の重鎖ＣＤＲ１、配列番号３３の重鎖ＣＤＲ２、配列番号３４の重鎖ＣＤＲ３、配列番号３５の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号３６の軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３７の軽鎖ＣＤＲ３が含まれる。当該抗体は、細胞毒性部分、放射性部分、標識、または精製タグなどの別の部分にコンジュゲートされ得る。
【００６０】
本明細書で使用される「抗原」は、動物がその抗原のエピトープに結合することができる抗体を産生するようにさらに誘導することができる抗体が結合することができる分子または分子の一部を広く指す。抗原は、１つのエピトープを有していても、１つを超えるエピトープを有していてもよい。本明細書で言及される特定の反応は、抗原が、非常に選択的な方法で、その対応する抗体と反応し、他の抗原によって誘発され得る多数の他の抗体とは反応しないことを示す。抗原は、腫瘍特異的であり得る（例えば、膵臓及び結腸癌の腫瘍性細胞によって発現される）。
【００６１】
本明細書で使用される「がん」は、悪性の成長または腫瘍を引き起こす異常で制御されない細胞分裂を特徴とする任意の腫瘍性疾患（侵襲性または転移性のいずれであっても）を広く指す。
【００６２】
本明細書で使用される「がんワクチン」は、がん細胞に対する免疫応答を誘発するか、または誘発することを目的とする免疫原性組成物を指す。
【００６３】
本明細書で使用される「キメラ抗体」は、定常領域またはその一部分が、変更、代替、または交換されているため、抗原結合部位（可変領域）が異なるまたは変更されたクラス、エフェクター機能及び／または種の定常領域、またはキメラ抗体に新しい特性を付与する完全に異なる分子、例えば、酵素、毒素、ホルモン、成長因子、薬物などに結合され、または、可変領域またはその一部分は、異なるまたは変更された抗原特異性を有する可変領域で変更、代替、または交換されている、抗体分子を広く指す。
【００６４】
本明細書で使用される「保存的に改変されたバリアント」は、アミノ酸及び核酸配列の両方に適用され、特定の核酸配列に関して、保存的に改変されたバリアントを広く指し、同一または本質的に同一のアミノ酸配列をコードする核酸を指すか、または、核酸がアミノ酸配列をコードしない場合、本質的に同一の配列を指す。遺伝暗号の縮重のために、多数の機能的に同一の核酸が、任意の所与のタンパク質をコードする。このような核酸変異は「サイレント変異」であり、保存的に改変された変異の１つの種である。ポリペプチドをコードする本明細書中のすべての核酸配列はまた、核酸の可能なあらゆるサイレント変動を表す。当業者ならば、核酸における各コドンを、機能的に同一の分子を生じるために改変することができると理解できるであろう（ただし、通常メチオニンの唯一のコドンであるＡＵＧ、及び通常トリプトファンの唯一のコドンであるＴＧＧは除く）。
【００６５】
本明細書で使用される「相補性決定領域」、「超可変領域」、または「ＣＤＲ」は、抗体の軽または重鎖の可変領域に見出される１つ以上の超可変領域または相補的決定領域（ＣＤＲ）を広く指す。Ｋａｂａｔ，ｅｔ  ａｌ．（１９８７）“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤを参照されたい。これらの表現には、Ｋａｂａｔ，ｅｔ  ａｌ．（１９８３）“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ  ｏｒ  ｔｈｅ  ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ  ｌｏｏｐｓ  ｉｎ  ３−ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ（１９８７）Ｊ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７によって定義される、超可変領域が含まれる。各鎖内のＣＤＲは、フレームワーク領域によって極めて近接して保持され、他の鎖のＣＤＲとともに、抗原結合部位の形成に寄与する。ＣＤＲ内で、抗体抗原相互作用において、ＣＤＲによって使用される必須の接触残基を表す選択性決定領域（ＳＤＲ）として説明される選択アミノ酸が存在する。Ｋａｓｈｍｉｒｉ（２００５）Ｍｅｔｈｏｄｓ３６：２５−３４。
【００６６】
本明細書で使用される「対照量」は、マーカーの試験量に対して比較される任意の量または量の範囲であり得るマーカーを広く指す。例えば、マーカーの対照量は、特定の疾患または状態を有する患者またはそのような疾患または状態を有さない人におけるマーカーの量であり得る。対照量は、絶対量（例えば、マイクログラム／ｍｌ）または相対量（例えば、シグナルの相対強度）のいずれかであり得る。
【００６７】
本明細書で使用される「差次的に存在する」とは、疾患の１つを有さない患者から採取された同等のサンプルと比較して疾患または状態を有する患者から採取されたサンプル中に存在するマーカーの量または質における、差異を広く指す。例えばハイブリダイゼーション及び／またはＮＡＴベースのアッセイによって測定されるように、例えば、あるサンプル中の核酸断片の量が、もう一方のサンプル中の核酸断片の量と著しく異なる場合、核酸断片は、任意に２つのサンプル間に差次的に存在し得る。あるサンプル中のポリペプチドの量が、もう一方のサンプル中のポリペプチドの量と著しく異なる場合、ポリペプチドは、２つのサンプル間で差次的に存在する。マーカーが一方のサンプルで検出可能であるが、もう一方のサンプルで検出可能でない場合、そのようなマーカーは差次的に存在するとみなすことができることに注意すべきである。任意に、比較的少量の上方調節が、マーカーとして役立ち得る。
【００６８】
本明細書で使用される「診断的」は、病態の存在または性質を特定することを広く指す。診断的方法は、それらの感度及び特異性において異なる。診断的アッセイの「感度」は、検査で陽性を示す罹患した個体のパーセンテージである（「真の陽性」のパーセント）。アッセイによって検出されない罹患した個体は、「偽の陰性」である。罹患していない、かつアッセイにおいて検査で陰性を示す対象は、「真の陰性」と呼ばれる。診断的アッセイの「特異性」は、１−偽の陽性率であり、「偽の陽性」率は、検査で陽性を示す疾患のない者の割合として定義される。特定の診断的方法は、状態の確定診断を提供しないことがあるが、この方法が診断を補助する陽性表示を提供することをもって足りる。
【００６９】
本明細書で使用される「診断する」は、疾患または症状を分類することと、疾患の重症度を決定することと、疾患の進行を監視することと、疾患の転帰及び／または回復の見通しを予測することと、を広く指す。「検出する」という用語も、前述のいずれかを任意に包含し得る。本発明に従う疾患の診断は、いくつかの実施形態において、対象から得られた生物試料中の本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドのレベルを決定することによって影響されることがあり、決定されるレベルは、疾患に対する素因、または疾患の存在もしくは非存在と相関し得る。「対象から得られた生物試料」は、対象から物理的に除去されていない試料も任意に含み得ることに留意すべきである。
【００７０】
本明細書で使用される「有効量」は、所望の結果を達成する化合物、抗体、抗原、または細胞の量を広く指す。「有効量」は、疾患を治療するために患者に投与されたときに、その疾患についてそのような治療を行うのに十分である。有効量は、予防に有効な量、及び／または防止に有効な量であり得る。有効量は、兆候／症状の発生を低減するために有効な量、防止するために有効な量、兆候／症状の発生の重症度を低減するため、兆候／症状の発生を排除するため、兆候／症状の発生の発達を遅延させるため、兆候／症状の発生の発達を防止するため、及び／または兆候／症状の発生の予防をもたらすために有効な量であり得る。「有効量」は、疾患及びその重症度、ならびに治療される患者の年齢、体重、病歴、感受性、及び既存状態に応じて異なり得る。「有効量」という用語は、本開示の目的で「治療上有効な量」と同義である。
【００７１】
本明細書で使用される「発現ベクター」は、本開示の核酸配列を、インビトロまたはインビボで原核生物、酵母、真菌、植物、昆虫、または哺乳動物の細胞を含むいずれかの細胞において、構成的または誘導的に発現させる目的での、いずれの組換え発現系を広く指す。この用語には、線状または環状の発現系が含まれる。この用語には、エピソームのままであるかまたは宿主細胞のゲノムに組み込まれた発現系が含まれる。この発現系は、自己複製能力を有することも有しないこともでき、すなわち、細胞内で一過性の発現のみを駆動することもできる。この用語には、組換え核酸の転写に必要な最低限の要素のみを含む組換え発現カセットが含まれる。
【００７２】
本明細書で使用される「フレームワーク領域」または「ＦＲ」は、抗体の軽鎖及び重鎖の可変領域内の１つ以上のフレームワーク領域を広く指す。Ｋａｂａｔ，ｅｔ  ａｌ．（１９８７）“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤを参照のこと。これらの表現は、抗体の軽鎖及び重鎖の可変領域内で、ＣＤＲの間に挿入されるアミノ酸配列領域を含む。
【００７３】
本明細書で使用される「異種」は、核酸が、自然では互いに同一の関係では見出されない２つ以上の部分配列を含むことを示す核酸の一部を広く指す。例えば、核酸は、典型的には、組換えにより生成され、新しい機能的核酸を作製するように配置された無関係の遺伝子由来の２つ以上の配列を有し、例えばある供給源からのプロモーター及び他の供給源からのコード領域を有する。同様に、異種タンパク質は、タンパク質が自然では互いに同一の関係では見出されない２つ以上の部分配列を含むこと（例えば、融合タンパク質）を示す。
【００７４】
本明細書で使用される「高親和性」とは、標的抗原に対して少なくとも１０−８Ｍ、より好ましくは少なくとも１０−９Ｍ、さらにより好ましくは少なくとも１０−１０ＭのＫＤを有する抗体を広く指す。しかしながら、「高親和性」結合は、他の抗体アイソタイプに対して変動し得る。例えば、ＩｇＭアイソタイプに対する「高親和性」結合は、少なくとも１０−７Ｍ、より好ましくは少なくとも１０−８ＭのＫＤを有する抗体を指す。
【００７５】
本明細書で使用される「相同性」は、核酸配列と参照核酸配列との間、またはポリペプチド配列と参照ポリペプチド配列との間の類似性の程度を広く指す。相同性は、部分的または完全なものであり得る。完全な相同性は、核酸またはアミノ酸配列が同一であることを示す。部分的に相同な核酸またはアミノ酸配列は、参照核酸またはアミノ酸配列に同一でないものである。相同性の程度は、配列比較によって決定することができる。「配列同一性」という用語は、「相同性」と互換的に使用され得る。
【００７６】
本明細書で使用される「宿主細胞」は、発現ベクターを含み、かつ発現ベクターの複製または発現を支持する細胞を広く指す。宿主細胞は、原核細胞、例えばＥ．ｃｏｌｉ、または真核細胞、例えば酵母、昆虫（例えば、ＳＦ９）、両生類または哺乳動物の細胞、例えばＣＨＯ、ＨｅＬａ、ＨＥＫ−２９３、例えば、培養細胞、外植片及びインビボでの細胞であり得る。
【００７７】
本明細書で使用される「ハイブリダイゼーション」は、鎖が互いに逆平行に配置されたときの相補的ヌクレオチド間の水素結合の形成による相補的（部分的相補を含む）ポリヌクレオチド鎖の物理的相互作用を広く指す。
【００７８】
本明細書で使用される「Ｋ−ａｓｓｏｃ」または「Ｋａ」は、特定の抗体抗原相互作用の会合速度を広く指し、一方、本明細書で使用される「Ｋｄｉｓｓ」または「Ｋｄ」という用語は、特定の抗体抗原相互作用の解離速度を指す。本明細書で使用される「ＫＤ」という用語は、Ｋｄ対Ｋａの比（すなわち、Ｋｄ／Ｋａ）から得られ、モル濃度（Ｍ）として表される解離速度を指す。抗体に対するＫＤ値は、当該技術分野で十分に確立されている方法を使用して決定することができる。
【００７９】
本明細書で使用される「イムノアッセイ」は、抗体を使用して抗原に特異的に結合させるアッセイを広く指す。イムノアッセイは、抗原を単離、標的、及び／または定量する特定の抗体の特異的結合特性の使用を特徴とし得る。
【００８０】
本明細書で使用される「単離された」は、それが天然に存在するその元の環境から除去され、したがってその天然環境からヒトの手によって改変された材料を広く指す。単離された材料は、例えば、ベクター系に含まれる外因性核酸、宿主細胞内に含有される外因性核酸、またはその元の環境から除去され、したがってヒトの手によって改変された任意の材料（例えば、「単離された抗体」）であり得る。
【００８１】
本明細書で使用される「標識」または「検出可能な部分」は、顕微鏡的、光化学的、生化学的、免疫化学的、化学的、または他の物理的手段によって検出可能な組成物を広く指す。
【００８２】
本明細書で使用される「低ストリンジェンシー」、「中ストリンジェンシー」、「高ストリンジェンシー」、または「非常に高ストリンジェンシーの条件」は、核酸ハイブリダイゼーション及び洗浄についての条件を広く指す。ハイブリダイゼーション反応を行うための手引きは、Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（５ｔｈ  Ｅｄ．）Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹに見出すことができる。例示的な特定のハイブリダイゼーション条件には、（１）低ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件：約４５ｏＣで、６×ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中、次いで少なくとも５０ｏＣで０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中で２回洗浄（低ストリンジェンシー条件では、洗浄温度は５５ｏＣまで上昇させることができる）、（２）中ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件：約４５ｏＣで、６×ＳＳＣ、次いで６０ｏＣ、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中で１回以上洗浄、（３）高ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件：約４５ｏＣで、６×ＳＳＣ中、次いで、６５ｏＣ、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中で１回以上洗浄、及び（４）非常に高いストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件：６５ｏＣで、０．５Ｍリン酸ナトリウム、７％ＳＤＳ、次いで、６５ｏＣ、０．２×ＳＳＣ、１％ＳＤＳで１回以上洗浄、が含まれるが、これらに限定されない。
【００８３】
ＣＤ１２７などのマーカーに関して使用される「低レベル」または「低」という用語は、当該技術分野でよく知られており、対象となる細胞マーカー（例えば、ＣＤ１２７）の発現レベルを指し、細胞マーカーの発現レベルは全体として分析されている細胞集団における他の細胞におけるその細胞マーカーの発現レベルと比較して低い。より具体的には、「低」という用語は、１つ以上の他の別個の細胞集団よりも低いレベルで細胞マーカーを発現する別個の細胞集団を指す。したがって、ＣＤ１２７低は、例えば、ＣＤ１２７−亜集団よりも高いがＣＤ１２７＋亜集団よりも低いレベルで、標識されたＣＤ１２７抗体と接触したときにわずかにまたはぼんやりと染色する種類の細胞を指す。
【００８４】
「哺乳動物」は、本明細書で用いられる場合、皮膚の体毛被覆、及び雌において、子を育てるための乳汁産生乳腺を特徴とする、ヒトを含む哺乳類クラスの任意かつ全ての温血脊椎動物を広く指す。哺乳動物の例には、アルパカ、アルマジロ、カピバラ、ネコ、ラクダ、チンパンジー、チンチラ、ウシ、イヌ、ヤギ、ゴリラ、ハムスター、ウマ、ヒト、キツネザル、ラマ、マウス、非ヒト霊長類、ブタ、ラット、ヒツジ、トガリネズミ、リス、及びバクが含まれるが、これらに限定されない。哺乳動物には、ウシ科、イヌ科、ウマ科、ネコ科、ネズミ科、ヒツジ科、ブタ科、霊長類、及び齧歯類が含まれるが、これらに限定されない。哺乳動物には、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  ＤＣにあるＳｍｉｔｈｓｏｎｉａｎ自然史博物館によって維持される世界の哺乳類に列挙される任意かつすべてのものも含まれる。
【００８５】
本明細書で使用される「核酸」または「核酸配列」は、一本鎖または二本鎖のいずれかの形態のデオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドオリゴヌクレオチドを広く指す。この用語は、天然ヌクレオチドの既知の類似体を含む核酸、すなわちオリゴヌクレオチドを包含する。この用語はまた、合成骨格を有する核酸様構造も包含する。他に示されない限り、特定の核酸配列はまた、保存的に改変されたそのバリアント（例えば、縮重コドン置換）及び相補的配列、ならびに明確に示された配列を暗に包含する。核酸という用語は、遺伝子、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、オリゴヌクレオチド、及びポリヌクレオチドと互換的に使用される。
【００８６】
本明細書で使用される「作動可能に連結された」とは、２つのＤＮＡ断片によってコードされるアミノ酸配列がインフレームに維持されるように２つのＤＮＡ断片が結合されるときを広く指す。
【００８７】
本明細書で使用される「パラトープ」とは、抗原を認識する抗体の一部（例えば、抗体の抗原結合部位）を広く指す。パラトープは、抗体のＦｖ領域の小さな領域（例えば、１５〜２２アミノ酸）であり得、抗体の重鎖及び軽鎖の一部を含み得る。Ｇｏｌｄｓｂｙ，ｅｔ  ａｌ．Ａｎｔｉｇｅｎｓ（Ｃｈａｐｔｅｒ  ３）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（５ｔｈ  Ｅｄ．）Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，ｐａｇｅｓ  ５７−７５を参照のこと。
【００８８】
「患者」は、本明細書で用いられる場合、疾患状態を軽減するか、または疾患状態の発生もしくは再発を防止するかのいずれかのために治療を必要とする任意の動物を広く指す。また、本明細書で使用される「患者」は、危険因子、病歴、感受性、症状、兆候を有し、疾患が以前に診断されたか、疾患の危険性があるか、または疾患の患者集団の一員である、任意の動物を広く指す。患者は、ヒトなどの臨床患者、または随伴動物、家畜動物、畜産動物、珍しい動物、または動物園動物であり得る。「対象」という用語は、「患者」という用語と互換的に使用され得る。本明細書に開示される本発明の好ましい実施形態において、患者は、ヒトである。
【００８９】
「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、互換的に使用され、アミノ酸残基のポリマーを広く指す。これらの用語は、１つ以上のアミノ酸残基が、対応する天然アミノ酸の類似体または模倣体であるアミノ酸ポリマーと、天然アミノ酸ポリマーに適用される。これらの用語は、１つ以上のアミノ酸残基が、対応する天然アミノ酸の人工的な化学的模倣体であるアミノ酸ポリマーと、天然アミノ酸ポリマーと、非天然アミノ酸ポリマーに適用される。ポリペプチドは、例えば、糖タンパク質を形成するための炭水化物残基の添加によって改変され得る。「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」という用語には、糖タンパク質、ならびに非糖タンパク質が含まれる。
【００９０】
本明細書で使用される「プロモーター」は、核酸の転写を支配する一連の核酸配列を広く指す。本明細書で使用される場合、プロモーターは、ポリメラーゼＩＩ型プロモーターの場合においては、ＴＡＴＡ要素などの、転写の開始部位の近くで必要な核酸配列を含む。プロモーターはまた、任意に、転写の開始部位から数千塩基も離れて位置することができる遠位エンハンサーまたはリプレッサーエレメントを含むことができる。「構成性」プロモーターは、ほとんどの環境及び発達条件下で活性であるプロモーターである。「誘導性」プロモーターは、環境及び発達制御下で活性であるプロモーターである。
【００９１】
本明細書で使用される「予防的有効量」は、疾患の予防または疾患の再発の防止のために患者に投与されたときに、その疾患または再発についてそのような予防をもたらすのに十分である化合物の量を広く指す。予防的有効量は、兆候及び／または症状の発生を防止するのに有効な量であり得る。「予防的有効量」は、疾患及びその重症度、ならびに治療される患者の年齢、体重、病歴、状態になりやすい傾向、先行する状態に応じて異なり得る。
【００９２】
本明細書で使用される「予防」は、兆候及び／または症状が患者に存在しない、寛解期であり、または患者において以前に存在していた、一連の治療を広く指す。予防は、患者において疾患の治療の後で疾患が起こることを防止することを含む。さらに、防止は、疾患を潜在的に発症し得る患者、特に、疾患に影響されやすい患者（例えば、患者集団のメンバー、危険因子を有する、または疾患を発生する危険性のあるもの）を治療することを含む。
【００９３】
本明細書で使用される「組換え」は、産物、例えば、細胞、または核酸、タンパク質、またはベクターに関して広く指し、細胞、核酸、タンパク質、またはベクターが、異種核酸もしくはタンパク質、または天然の核酸もしくはタンパク質の導入、または細胞がそのように改変された細胞に由来することを示す。したがって、例えば、組換え細胞は、細胞の天然（非組換え）形態内に見出されない遺伝子を発現するか、さもなければ異常に発現され、発現が不十分または全く発現されない天然遺伝子を発現する。
【００９４】
本明細書で使用される、抗体に「特異的に（または選択的に）結合する」または「特異的に（または選択的に）免疫反応する」または「特異的に相互作用するまたは結合する」は、タンパク質またはペプチド（または他のエピトープ）を広く指し、いくつかの実施形態において、タンパク質及び他の生物製剤の不均一な集団におけるタンパク質の存在を決定する結合反応を指す。例えば、指定されたイムノアッセイ条件下で、特定された抗体は、バックグラウンド（非特異的シグナル）よりも少なくとも２倍多い特定のタンパク質に結合し、サンプルに存在する他のタンパク質に有意な量で実質的に結合しない。典型的に、特異的または選択的反応は、少なくとも２倍のバックグラウンド信号またはノイズであり、より典型的には約１０〜１００倍超のバックグラウンドである。
【００９５】
本明細書で使用される「特異的にハイブリダイズ可能」及び「相補的」とは、核酸が、従来のワトソンクリックまたは他の従来とは異なる種類のいずれかによって別の核酸配列と水素結合（複数可）を形成することができることを広く指す。核酸分子とその相補的配列の結合自由エネルギーは、核酸の関連する機能、例えばＲＮＡｉ活性が進むことを可能にするのに十分である。核酸分子の結合自由エネルギーの測定は、当該技術分野でよく知られている。例えば、Ｔｕｒｎｅｒ，ｅｔ  ａｌ．（１９８７）ＣＳＨ  Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．ＬＩＩ：１２３−３３、Ｆｒｉｅｒ，ｅｔ  ａｌ．（１９８６）ＰＮＡＳ８３：９３７３−７７、Ｔｕｒｎｅｒ，ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０９：３７８３−８５を参照のこと。相補性パーセントは、第２の核酸配列と水素結合（例えば、ワトソンクリック型塩基対合）を形成することができる核酸分子中の連続する残基の割合を示す（例えば、１０個のうち少なくとも約５、６、７、８、９、１０個が少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、及び１００％の相補性を有する）。「完全に相補的」または１００％の相補性とは、第２の核酸配列中の同じ数の連続する残基と水素結合する核酸配列の連続する残基のすべてを広く指す。「実質的な相補的」とは、非相補的であるように選択されたオーバーハングなどのポリヌクレオチド鎖の領域を除いて、少なくとも約９０％の相補性を示すポリヌクレオチド鎖を指す。特異的結合は、特異的結合が望まれる条件下で、すなわちインビボアッセイまたは治療的処置の場合には生理学的条件下で、またはインビトロアッセイの場合にはアッセイが行われる条件下で、非標的配列へのオリゴマー化合物の非特異的結合を回避するのに十分な程度の相補性を必要とする。非標的配列は、典型的には、少なくとも５ヌクレオチドが異なり得る。
【００９６】
本明細書で使用される疾患の「兆候」は、患者の検査で発見可能な、疾患を示す任意の異常、疾患を示す主観である兆候とは対照的に、疾患を示す目的を広く指す。
【００９７】
本明細書で使用される「固体支持体」、「支持体」、及び「基板」は、平滑な支持体（例えば、金属、ガラス、プラスチック、シリコン、及びセラミックの表面）、ならびに、凹凸がある、及び多孔質の材料を含むが、これらに限定されない、別の材料が連結され得る固体または半固体構造を提供する任意の材料を広く指す。例示的な固体支持体には、活性化ビーズ、磁気応答性ビーズ、または蛍光標識ビーズなどのビーズが含まれる。
【００９８】
本明細書で使用される「対象」は、本明細書に開示される本発明に従って治療されるのに適した者を広く指し、限定されないが鳥類及び哺乳類対象を含み、好ましくは哺乳類である。本開示される本発明の文脈における哺乳動物には、イヌ科、ネコ科、ウシ科、ヤギ科、ウマ科、ヒツジ科、ブタ科、齧歯類（例えば、ラット及びマウス）、ウサギ科、霊長類、ヒトが含まれるが、これらに限定されない。本明細書に開示される本発明に従って治療されることを必要とする任意の哺乳類対象が適している。両性別及び任意の発達段階（すなわち、新生児、幼児、若年、青年、成人）のヒト対象を、本発明に従って治療することができる。本発明は、獣医目的で、ならびに薬物スクリーニング及び薬物開発の目的で、動物対象、特にマウス、ラット、イヌ、ネコ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、及びウマなどの哺乳類対象で実行されてもよい。「対象」は、「患者」と互換的に使用される。開示される本発明の好ましい実施形態において、対象は、ヒトである。
【００９９】
本明細書で使用される疾患の「症状」は、患者によって経験され、疾患を示す任意の病的現象または構造、機能、もしくは感覚の正常からの離脱を広く指す。
【０１００】
本明細書で使用される「治療法」、「治療的」、「治療する」、または「治療」は、疾患を治療すること、疾患もしくはその臨床症状の発達を停止もしくは低減すること、及び／または疾患を緩和し、疾患もしくはその臨床症状の退行を引き起こすことを広く指す。治療法は、疾患、疾患の兆候、及び／または症状の予防、治療、修復、低減、軽減、及び／または緩和の提供を包含する。治療法は、進行中の疾患の兆候及び／または症状（例えば、腫瘍の成長、転移）を有する患者における兆候及び／または症状の軽減を包含する。治療法は、「予防」も包含する。「低減された」という用語は、治療の目的で、兆候及び／または症状の臨床的に有意な低減を広く指す。治療法は、再燃または再発性の兆候及び／または症状の兆候（例えば、腫瘍の成長、転移）を治療することを含む。治療法は、兆候及び／または症状をいつでも除外すること、ならびに既存の兆候及び／または症状を低減すること、及び既存の兆候及び／または症状を排除することを包含するが、これらに限定されない。治療法は、慢性疾患（「維持」）及び急性疾患を治療することを含む。例えば、治療は、兆候及び／または症状（例えば、腫瘍の成長、転移）の再燃または再発を治療または予防することを含む。
【０１０１】
本明細書で使用される「可変領域」または「ＶＲ」は、抗体の抗原への結合に直接関与する抗体の軽鎖及び重鎖の各ペア内のドメインを広く指す。各重鎖は、一方の端に可変ドメイン（ＶＨ）を有し、続いて、いくつかの定常ドメインを有する。各軽鎖は、一方の端に可変ドメイン（ＶＬ）を有し、その他方の端に定常ドメインを有し、軽鎖の定常ドメインは、重鎖の第１の定常ドメインと整列し、軽鎖の可変ドメインは、重鎖の可変ドメインと整列している。
【０１０２】
本明細書で使用される「ベクター」は、宿主細胞内で自発的に複製することができ、１つまたは少数の制限エンドヌクレアーゼ認識部位を特徴とするプラスミド、コスミド、ファージミド、ファージＤＮＡ、または他のＤＮＡ分子を広く指し、そのようなＤＮＡ配列がベクターの本質的な生物学的機能を失うことなく決定可能な方法で切断され得、その複製及びクローニングを生じさせるためにＤＮＡが挿入され得る。ベクターはさらに、ベクターで形質転換された細胞の同定に使用するのに適したマーカーを含んでもよい。
【０１０３】
技術及び手順は一般に、当該技術分野において周知である従来の方法に従って、かつ本明細書全体を通して引用され、考察される、一般的かつより具体的な様々な参考文献に記載されるように実行される。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｍｏｌｅｃ．Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ｌａｂ．Ｍａｎｕａｌ［３ｒｄ  Ｅｄ］  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓを参照のこと。組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、ならびに組織培養及び形質転換（例えば、電気穿孔、リポフェクション）には、標準技術が使用され得る。酵素反応及び精製技術は、製造業者の仕様書に従って、または当該技術分野において一般的に達成されるように、または本明細書に記載されるように実行され得る。本明細書に記載の分析化学、合成有機化学、ならびに医化学及び製薬化学に関連して用いられる命名法は、当該技術分野で周知であり、一般に使用されるものである。標準の技術は、化学合成、化学分析、薬学的調製、配合、及び送達、ならびに患者の治療において使用され得る。
【実施例】
【０１０４】
ここで一般に説明される本発明は、単に本発明のある特定の態様及び実施形態の説明の目的で含まれ、本発明を限定するものではない次の実施例を参照することによって、より容易に理解されるであろう。
【０１０５】
実施例１
ＮＥＯ−２０１は、機能的なＴｒｅｇ細胞を単離することができる。
【０１０６】
この実施例では、ＮＥＯ−２０１結合に基づく細胞選別が、機能的なＴｒｅｇの高い割合を生み出すことが示される。市販のキット（ヒトＣＤ４＋ＣＤ１２７低ＣＤ２５＋）を使用してまたはＮＥＯ−２０１発現に基づく選択により単離された機能的Ｔｒｅｇの割合を図１に示す。ＥａｓｙＳｅｐ（商標）ヒトＣＤ４＋ＣＤ１２７低ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞単離キットは、６７．１４％の活性なＴｒｅｇ細胞を産生したが、ＮＥＯ−２０１陽性発現に基づく選択は、９９．１２％の活性なＴｒｅｇ細胞を産生した。
【０１０７】
出願者らは、ＮＥＯ−２０１がＣＥＡＣＡＭ５及びＣＥＡＣＡＭ６のがん関連糖タンパク質バリアントに結合することをこれまでに示している。Ｔｒｅｇ細胞が、ＣＥＡＣＡＭ５及びＣＥＡＣＡＭ６を発現することは知られていない。Ｔｒｅｇ細胞へのＮＥＯ−２０１の結合の基準をさらに決定するために、細胞をフローサイトメトリーによってＣＥＡＣＡＭ５及びＣＥＡＣＡＭ６発現について試験した。制御性Ｔ細胞は、ＣＥＡＣＡＭ−５及びＣＥＡＣＡＭ−６陰性である（図２）。
【０１０８】
方法  単離されたヒトＴｒｅｇへのヒトＴｒｅｇマーカーの結合を、フローサイトメトリーによって分析した。Ｔｒｅｇ（１．０×１０６）は、１×リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中の試験ごとに１μＬのＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ  Ｆｉｘａｂｌｅ  Ａｑｕａ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ）で、４°Ｃで３０分間インキュベートして、生細胞と死細胞を区別した。次いで、細胞を遠心分離し、冷ＰＢＳで２回洗浄し、次いで、１×ＰＢＳ＋１％  ＢＳＡ（Ｔｅｋｎｏｖａ，Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ，ＣＡ，ＵＳＡ）中の、パシフィックブルーコンジュゲートＮＥＯ−２０１抗体、抗ＣＤ２５−ＡＰＣ−Ｈ７、抗ＣＤ１５ｓ−Ａｌｅｘａ  ４８８、抗ＣＤ１２７−ＡＰＣで染色し、抗Ｆｏｘｐ３−ＰｅｒＣＰ−ＣＹ５．５．（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を用いて４℃で３０分間細胞内染色した。染色後、細胞を、冷ＰＢＳで２回洗浄し、ＦＡＣＳＶｅｒｓｅフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して検査した。細胞の蛍光分析は、ＢＤ  ＦＡＣＳｕｉｔｅソフトウェア（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して行った。市販のキットによるＴ−ｒｅｇの単離は、製造業者の指示に従ってＥａｓｙＳｅｐ（商標）ヒトＣＤ４＋ＣＤ１２７低ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞単離キット（ＨＤ１９）を使用して行った。ＣＥＡＣＡＭ発現の分析のために、細胞を、ＣＤ６６ａ（ＣＥＡＣＡＭ１）、ＣＤ６６ｃ（ＣＥＡＣＡＭ６）、ＣＤ６６ｄ（ＣＥＡＣＡＭ３）、及びＣＤ６６ｅ（ＣＥＡＣＡＭ５）を認識するＰＥマウス抗ヒトＣＤ６６抗体（クローンＢ１．１／ＣＤ６６）で染色した。４４．８４％のＣＤ４＋／ＣＤ２５高／ＣＤ１２７−／ＦＯＸｐ３＋細胞は、ＮＥＯ−２０１＋／ＣＥＡＣＡＭ５−細胞及びＣＥＡＣＡＭ６−細胞である。
【０１０９】
実施例２
ＮＥＯ−２０１は、補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）によってＴｒｅｇを死滅させることができる。
【０１１０】
この実施例は、ＮＥＯ−２０１がＣＤ４＋ＣＤ１５ｓ＋Ｔｒｅｇに対してＣＤＣを媒介することができることを示す。Ｔｒｅｇ細胞は、ＣＤ４及びＣＤ１５ｓ（シアリルルイスＸグリカン）を発現する。ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＰＢＭＣから分離され、細胞は、−／＋ＮＥＯ−２０１  ｍＡｂ（１０μｇ／ｍＬ）で処理された。次いで、細胞を、−／＋補体（１：８希釈、２時間）で処理した。次いで、細胞を洗浄し、ＣＤ４及びＣＤ１５ｓマーカーについて染色した。マーカー発現は、フローサイトメトリーによって測定された。補体だけでは、Ｔｒｅｇは死滅しなかった。しかしながら、ＴｒｅｇがＮＥＯ−２０１及び補体の両方で処理された場合、ＣＤ４＋ＣＤ１５ｓ＋Ｔｒｅｇの集団は、５３．４％減少し、ＣＤＣが発生したことを示す。
【０１１１】
補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）アッセイ法。ＣＤＣアッセイは、以前に記載された手順の変更を使用して実行された（Ｋｏｎｉｓｈｉｅｔ  ａｌ．，２００８）。ＣＤ４＋Ｔ細胞を分離し、次いで、１０μｇ／ｍＬのＮＥＯ−２０１を用いてまたは用いずに３７°Ｃで１５分間処理して、細胞をオプソニン化した。次いで、精製したウサギ補体（ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ，Ｓａｎｔａ  Ａｎａ，ＣＡ）を、１：８の希釈で細胞に添加した。３７℃で１２０分間インキュベートした後、細胞を洗浄し、ＣＤ４及びＣＤ１５ｓに対して蛍光標識抗体で染色した。３０分間インキュベーションした後、細胞を洗浄し、ＢＤ  ＦＡＣＳＶｅｒｓｅを使用してフローサイトメトリーによって蛍光を測定した。細胞の蛍光分析は、ＢＤ  ＦＡＣＳｕｉｔｅソフトウェア（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して行った。
【０１１２】
実施例３
ヒト化ＮＥＯ−２０１モノクローナル抗体の作製
【０１１３】
Ｈｏｌｌｉｎｓｈｅａｄ結腸癌特異的ワクチンは、マウスにおけるモノクローナル抗体を生成するための免疫原性物質として使用された。腫瘍関連タンパク質及びペプチドの調製のための方法は、これまで記載されている（Ｈｏｌｌｉｎｓｈｅａｄ，ＵＳ４８１０７８１，１９８９）。簡潔に言えば、がん組織を細かく切り刻み、単一細胞懸濁液を生成するために使用し、次いで、低張性食塩水膜抽出、一連の遠心分離ステップ、その後の低周波超音波処理を行った。得られた膜抽出タンパク質を、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２００樹脂または電気泳動法によって分画し、濃縮及び定量した（Ｈｏｌｌｉｎｓｈｅａｄ  ｅｔ  ａｌ，１９７０、Ｈｏｌｌｉｎｓｈｅａｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９７２、Ｈｏｌｌｉｎｓｈｅａｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５）。ＴＡＡ製剤を、フロイントの完全アジュバントと混合し、ＢＡＬＢ／ｃマウスに皮下注射した。これに続いて、フロイントの不完全アジュバントに２〜３週間間隔で３回のブースター注射を行った。マウス血清を、免疫化抗原に対する抗体応答についてＥＬＩＳＡによって試験し、強力な応答を有するマウスを使用して、脾臓からのマウスＢ細胞をＳＰ２／０−Ａｇ１４骨髄腫細胞株と融合させて、マウス免疫グロブリン（ＩｇＧ）を成長させ、産生した細胞を選択することによって不死化ハイブリドーマ細胞を生成した。これらのマウスＩｇＧから、マウスの１６Ｃ３クローン（ｍ１６Ｃ３）は、ＥＬＩＳＡによって決定されたＬＳ１７４ＴまたはＨＴ−２９細胞由来の結腸腫瘍細胞膜抽出物との反応性に基づいて選択された。重鎖及び軽鎖ＩｇＧ１をコードするｃＤＮＡは、ハイブリドーマクローン１６Ｃ３  Ｅ１２から単離されたＲＮＡから決定され、固有であることが示された（Ｂｒｉｓｔｏｌ  ＆  Ｋａｎｔｏｒ，ＵＳ７８２９６７８，２０１０）。ｍ１６Ｃ３タンパク質配列は、ｈ１６Ｃ３としてヒト化され、ＮＥＯ−２０１と表された。ヒト化は、重鎖及び軽鎖タンパク質の両方のＦａｂ領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）の外側のマウス配列を、ヒトＦａｂ配列で置き換え、各鎖からの３つのマウスＣＤＲ配列を保持することによって、コンピュータ内で行われた。重鎖及び軽鎖のＦｃ領域は、他のヒト化承認済みｍＡｂ製品で使用されているヒトＩｇＧ１アイソタイプから選択された。アミノ酸配列は、ＣＨＯ細胞でのタンパク質発現のために最適化されたＤＮＡに逆翻訳された。次いで、重鎖及び軽鎖ｈ１６Ｃ３のＤＮＡを化学合成し、哺乳動物発現プラスミドにクローニングし、哺乳動物細胞株（ＨＥＫ２９３Ｔ及びＣＨＯ）にトランスフェクトした。組換えｈ１６Ｃ３を発現するいくつかの安定したＣＨＯ細胞株が誘導され、保存された。精製された組換えｈ１６Ｃ３は、ヒト化１６Ｃ３抗体が元のｍ１６Ｃ３抗体（Ｂｒｉｓｔｏｌ  ＆  Ｋａｎｔｏｒ，ＵＳ７８２９６７８，２０１０）として類似の特徴を有した。
【０１１４】
これらの実施例で使用されたＮＥＯ−２０１抗体配列は、以下の図に含まれている。
【化１】
2021512965.tif 000002
【０１１５】
発現リーダー配列、可変領域、及び定常領域の間の境界は、各配列中のフォワードスラッシュ（「／」）で区切られ、ＣＤＲ配列は、太字の下線付きテキストで示されている。使用された抗体配列は、示されている可変及び定常領域を含んだ。これらには、配列番号３２の重鎖ＣＤＲ１、配列番号３３の重鎖ＣＤＲ２、配列番号３４の重鎖ＣＤＲ３、配列番号３５の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号３６の軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３７の軽鎖ＣＤＲ３が含まれる。
【０１１６】
略語
筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）、時間０から無限大までの血漿濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣｉｎｆ）、時間０から無限までの血漿濃度−時間曲線下用量正規化面積（ＡＵＣｉｎｆ／Ｄ）、ベースライン（ＢＬ）、補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）、クリアランス（ＣＬ）、最大観測血漿濃度（Ｃｍａｘ）、用量で正規化した測定最大血漿濃度（Ｃｍａｘ／Ｄ）、エストロゲン受容体（ＥＲ）、半減期（ＨＬ）、免疫組織化学（ＩＨＣ）、多発性硬化症（ＭＳ）ナチュラルキラー（ＮＫ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、プロゲステロン受容体（ＰＲ）、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）、最大観察血漿中濃度の時間（Ｔｍａｘ）、分布体積（Ｖｚ）。
【０１１７】
参考文献
以下の表の各文書を含む、本明細書で引用される各文書は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
１．Ｆｅｒｌａｙ  Ｊ，Ｓｏｅｒｊｏｍａｔａｒａｍ  Ｉ，Ｄｉｋｓｈｉｔ  Ｒ，Ｅｓｅｒ  Ｓ，Ｍａｔｈｅｒｓ  Ｃ，Ｒｅｂｅｌｏ  Ｍ，Ｐａｒｋｉｎ  ＤＭ，Ｆｏｒｍａｎ  Ｄ，Ｂｒａｙ  Ｆ．Ｃａｎｃｅｒ  ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｍｏｒｔａｌｉｔｙ  ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ：ｓｏｕｒｃｅｓ，ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  ｍａｊｏｒ  ｐａｔｔｅｒｎｓ  ｉｎ  ＧＬＯＢＯＣＡＮ  ２０１２．Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．２０１５  Ｍａｒ  １；１３６（５）：Ｅ３５９−８６．
２．Ｂｏｄｅｙ  Ｂ，Ｓｉｅｇｅｌ  ＳＥ，Ｋａｉｓｅｒ  ＨＥ．Ｈｕｍａｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｗｉｔｈ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  ａｎｄ  ｎｏｎ−ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９９６  Ｍａｒ−Ａｐｒ；１６（２）：６６１−７４．
３．Ｍｉｔｔａｌ  Ｄ，Ｇｕｂｉｎ  ＭＭ，Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ  ＲＤ，Ｓｍｙｔｈ  ＭＪ．Ｎｅｗ  ｉｎｓｉｇｈｔｓ  ｉｎｔｏ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｅｄｉｔｉｎｇ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｔｈｒｅｅ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  ｐｈａｓｅｓ−−ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ，ｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ  ａｎｄ  ｅｓｃａｐｅ．Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１４  Ａｐｒ；２７：１６−２５．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｏｉ．２０１４．０１．００４．
４．Ｄｕｎｎ  ＧＰ，Ｏｌｄ  ＬＪ，Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ  ＲＤ．Ｔｈｅ  ｔｈｒｅｅ  Ｅｓ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｅｄｉｔｉｎｇ．Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００４；２２：３２９−６０．
５．Ｃａｒｔｅｒ  Ｐ．Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ  ｔｈｅ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｂａｓｅｄ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ．２００１  Ｎｏｖ；１（２）：１１８−２９．
６．Ｈｏｄｇｅ  ＪＷ，Ｇｒｅｉｎｅｒ  ＪＷ，Ｔｓａｎｇ  ＫＹ，Ｓａｂｚｅｖａｒｉ  Ｈ，Ｋｕｄｏ−Ｓａｉｔｏ  Ｃ，Ｇｒｏｓｅｎｂａｃｈ  ＤＷ，Ｇｕｌｌｅｙ  ＪＬ，Ａｒｌｅｎ  ＰＭ，Ｍａｒｓｈａｌｌ  ＪＬ，Ｐａｎｉｃａｌｉ  Ｄ，Ｓｃｈｌｏｍ  Ｊ．Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ａｓ  ａｄｊｕｖａｎｔｓ  ｆｏｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｆｒｏｎｔ  Ｂｉｏｓｃｉ．２００６  Ｊａｎ  １；１１：７８８−８０３．
７．Ｖｅｒｇａｔｉ  Ｍ  ＩＣ，Ｈｕｅｎ  ＮＹ，Ｓｃｈｌｏｍ  Ｊ，Ｔｓａｎｇ  ＫＹ．Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｊ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１０；２０１０（５９６４３２）．
８．Ｇａｂｉｔｚｓｃｈ  ＥＳ  ＴＫ，Ｐａｌｅｎａ  Ｃ，Ｄａｖｉｄ  ＪＭ，Ｆａｎｔｉｎｉ  Ｍ，Ｋｗｉｌａｓ  Ａ，Ｒｉｃｅ  ＡＥ，Ｌａｔｃｈｍａｎ  Ｙ，Ｈｏｄｇｅ  ＪＷ，Ｇｕｌｌｅｙ  ＪＬ，Ｍａｄａｎ  ＲＡ，Ｈｅｅｒｙ  ＣＲ，Ｂａｌｉｎｔ  ＪＰ  Ｊｒ，Ｊｏｎｅｓ  ＦＲ，Ｓｃｈｌｏｍ  Ｊ．Ｔｈｅ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｎａｌｙｓｅｓ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ  ｖａｃｃｉｎｅｓ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｈｒｅｅ  ｔｕｍｏｒ  ａｎｔｉｇｅｎｓ  ａｓ  ａｎ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ．Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ．２０１５；６（３１）：３１３４４−５９．
９．Ｔｏｐａｌｉａｎ  ＳＬ，Ｗｅｉｎｅｒ  ＧＪ，Ｐａｒｄｏｌｌ  ＤＭ．Ｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｃｏｍｅｓ  ｏｆ  ａｇｅ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．２０１１  Ｄｅｃ  ２０；２９（３６）：４８２８−３６．
１０．Ｈｏｌｌｉｎｓｈｅａｄ  Ａ，Ｇｌｅｗ  Ｄ，Ｂｕｎｎａｇ  Ｂ，Ｇｏｌｄ  Ｐ，Ｈｅｒｂｅｒｍａｎ  Ｒ．Ｓｋｉｎ−ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｆｒｏｍ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ−ｃｅｌｌ−ｍｅｍｂｒａｎｅｓ  ａｎｄ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｔｏ  ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎｓ．Ｌａｎｃｅｔ．１９７０；１（７６５８）：１１９１−１１９５．
１１．Ｈｏｌｌｉｎｓｈｅａｄ  ＡＣ，ＭｃＷｒｉｇｈｔ  ＣＧ，Ａｌｆｏｒｄ  ＴＧＤ，Ｇｏｌｄ  Ｐ，Ｈｅｒｂｅｍａｎ  ＲＢ．Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｋｉｎ  ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｏｆ  Ｇｏｌｄ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．１９７２；１７７（４０５２）：８８７−８８９．
１２．Ｈｏｌｌｉｎｓｈｅａｄ  Ａ，Ｅｌｉａｓ  ＥＧ，Ａｒｌｅｎ  Ｍ，Ｂｕｄａ  Ｂ，Ｍｏｓｌｅｙ  Ｍ，Ｓｃｈｅｒｒｅｒ  Ｊ．Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｃｔｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｏｌｏｎ  ｕｔｉｌｉｚｉｎｇ  ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ａｎｔｉｇｅｎｓ（ＴＡＡ）．Ａ  ｐｈａｓｅ  Ｉ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌ．Ｃａｎｃｅｒ．１９８５；５６（３）：４８０−４８９．
１３．Ｈｏｌｌｉｎｓｈｅａｄ  ＡＣ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  ｐｒｅｐａｒｉｎｇ  ｅｐｉｔｏｐｅｓ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ａｎｔｉｇｅｎｓ．ＵＳ４８１０７８１．１９８９．
１４．Ｂｒｉｓｔｏｌ  ＪＡ，Ｋａｎｔｏｒ  ＪＡ．Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ  ａｎｔｉｇｅｎｓ  ｆｏｒ  ｃｏｌｏｎ  ａｎｄ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒｓ．ＵＳ７８２９６７８．２０１０．
１５．Ｈｏｌｌｉｎｓｈｅａｄ  Ａ．Ａｃｔｉｖｅ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｌｕｎｇ  ａｎｄ  ｃｏｌｏｎ  ｃａｎｃｅｒ．Ｓｅｍｉｎ  Ｓｕｒｇ  Ｏｎｃｏｌ．１９９１  Ｊｕｌ−Ａｕｇ；７（４）：１９９−２１０．
１６．Ｌｕｋａ  Ｊ，Ａｒｌｅｎ  ＰＭ，Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ａ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａ  ｓｅｒｕｍ  ｂｉｏｍａｒｋｅｒ  ａｓｓａｙ  ｔｈａｔ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｓ  ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ＭＵＣ５ＡＣ（ＮＰＣ−１Ｃ  ＡＮＴＩＧＥＮ）ｆｒｏｍ  ｎｏｒｍａｌ  ＭＵＣ５ＡＣ．Ｊ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１１；２０１１：９３４７５７．ｄｏｉ：１０．１１５５／２０１１／９３４７５７．Ｅｐｕｂ  ２０１０  Ｄｅｃ  １６．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：２１１９７４１５
１７．Ｐａｔｅｌ  ＳＰ，Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ａ，Ｓａｒｉｃ  Ｏ，Ｗａｎｇ  ＸＰ，Ｄｕｂｅｙｋｏｖｓｋｉｙ  Ａ，Ａｒｌｅｎ  ＰＭ，Ｍｏｒｓｅ  ＭＡ．Ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ，ＮＰＣ−１Ｃ，ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ  ｆｏｒ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ  ａｎｔｉｇｅｎ  ＭＵＣ５ＡＣ  ｖａｒｉａｎｔ  ｉｎ  ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ｍｏｄｅｌｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２０１３  Ｊｕｎ；６２（６）：１０１１−９．
１８．Ｂｅｇ  ＭＳ，Ａｚａｄ  ＮＳ，Ｐａｔｅｌ  ＳＰ，Ｔｏｒｒｅａｌｂａ  Ｊ，Ｍａｖｒｏｕｋａｋｉｓ  Ｓ，Ｂｅａｔｓｏｎ  ＭＡ，Ｗａｎｇ  ＸＰ，Ａｒｌｅｎ  ＰＭ，Ｍｏｒｓｅ  ＭＡ．Ａ  ｐｈａｓｅ  １  ｄｏｓｅ−ｅｓｃａｌａｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ＮＥＯ−１０２  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｃｏｌｏｎ  ａｎｄ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０１６  Ｓｅｐ；７８（３）：５７７−８４．
１９．Ｋｉｍ  ＲＤ，Ａｒｌｅｎ  ＰＭ，Ｔｓａｎｇ  ＫＹ，Ｍａｖｒｏｕｋａｋｉｓ  ＳＡ，Ｚａｋｉ  Ａ，Ｃｕｉ  Ｋ，Ａｚａｄ  ＮＳ，Ｔａｎ  Ｊｒ．ＢＲ，Ｐｏｐｌｉｎ  Ｅ，Ｍｏｒｓｅ  ＭＡ，Ｂｅｇ  ＭＳ．Ｅｎｓｉｔｕｘｉｍａｂ（Ｅ）ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ（ｐｔｓ）ｗｉｔｈ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ（ｍＣＲＣ）：Ｒｅｓｕｌｔｓ  ｏｆ  ａ  ｐｈａｓｅ  １／２  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ３５，２０１７（ｓｕｐｐｌ；ａｂｓｔｒ  ３０８１）．
２０．Ｚｅｌｉｇｓ  Ｋ，Ａｒｌｅｎ  ＰＭ，Ｔｓａｎｇ  Ｋ，Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ  Ｌ，Ｆａｎｔｉｎｉ  Ｍ，Ａｎｎｕｎｚｉａｔａ  ＣＭ．Ａｂｓｔｒａｃｔ  ３０２５：Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ａ  ｎｅｏ−ａｎｔｉｇｅｎ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｉｎ  ｏｖａｒｉａｎ  ａｎｄ  ＧＩ  ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  Ｊｕｌｙ  １  ２０１７（７７）（１３  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）３０２５．
２１．Ｓｅｉｄｅｌ  ＵＪ，Ｓｃｈｌｅｇｅｌ  Ｐ，Ｌａｎｇ  Ｐ．Ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｉｎ  ｔｕｍｏｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｆｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１３  Ｍａｒ  ２７；４：７６．
２２．Ｐｅｔｒｉｃｅｖｉｃ  Ｂ，Ｌａｅｎｇｌｅ  Ｊ，Ｓｉｎｇｅｒ  Ｊ，Ｓａｃｈｅｔ  Ｍ，Ｆａｚｅｋａｓ  Ｊ，Ｓｔｅｇｅｒ  Ｇ，Ｂａｒｔｓｃｈ  Ｒ，Ｊｅｎｓｅｎ−Ｊａｒｏｌｉｍ  Ｅ，Ｂｅｒｇｍａｎｎ  Ｍ．Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃｅｌｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｓａｍｅ  ｅｘｔｅｎｔ  ｉｎ  ｂｏｔｈ  ａｄｊｕｖａｎｔ  ａｎｄ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ＨＥＲ２／ｎｅｕ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｊ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ．２０１３  Ｄｅｃ  １２；１１：３０７．
２３．Ｄａｌｌ’Ｏｚｚｏ  Ｓ，Ｔａｒｔａｓ  Ｓ，Ｐａｉｎｔａｕｄ  Ｇ，Ｃａｒｔｒｏｎ  Ｇ，Ｃｏｌｏｍｂａｔ  Ｐ，Ｂａｒｄｏｓ  Ｐ，Ｗａｔｉｅｒ  Ｈ，Ｔｈｉｂａｕｌｔ  Ｇ．Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｂｙ  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌｓ：ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ＦＣＧＲ３Ａ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ−ｅｆｆｅｃｔ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００４  Ｊｕｌ  １；６４（１３）：４６６４−９．
２４．Ｌｅｖｙ  ＥＭ，Ｓｙｃｚ  Ｇ，Ａｒｒｉａｇａ  ＪＭ，Ｂａｒｒｉｏ  ＭＭ，ｖｏｎ  Ｅｕｗ  ＥＭ，Ｍｏｒａｌｅｓ  ＳＢ，Ｇｏｎｚａｌｅｚ  Ｍ，Ｍｏｒｄｏｈ  Ｊ，Ｂｉａｎｃｈｉｎｉ  Ｍ．Ｃｅｔｕｘｉｍａｂ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｉｓ  ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ  ｂｙ  ＨＬＡ−Ｅ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｃｏｌｏｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ．Ｉｎｎａｔｅ  Ｉｍｍｕｎ．２００９  Ａｐｒ；１５（２）：９１−１００．
２５．Ｋａｗａｇｕｃｈｉ  Ｙ，Ｋｏｎｏ  Ｋ，Ｍｉｍｕｒａ  Ｋ，Ｓｕｇａｉ  Ｈ，Ａｋａｉｋｅ  Ｈ，Ｆｕｊｉｉ  Ｈ．Ｃｅｔｕｘｉｍａｂ  ｉｎｄｕｃｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｇａｉｎｓｔ  ＥＧＦＲ−ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ  ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．２００７  Ｆｅｂ  １５；１２０（４）：７８１−７．
２６．Ｌｏｐｅｚ−Ａｌｂａｉｔｅｒｏ  Ａ，Ｌｅｅ  ＳＣ，Ｍｏｒｇａｎ  Ｓ，Ｇｒａｎｄｉｓ  ＪＲ，Ｇｏｏｄｉｎｇ  ＷＥ，Ｆｅｒｒｏｎｅ  Ｓ，Ｆｅｒｒｉｓ  ＲＬ．Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ  Ｆｃ  ｇａｍｍａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＩＩＩａ  ａｎｄ  ＥＧＦＲ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｌｅｖｅｌ  ｉｎ  ｃｅｔｕｘｉｍａｂ  ｍｅｄｉａｔｅｄ，ＮＫ  ｃｅｌｌ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｈｅａｄ  ａｎｄ  ｎｅｃｋ  ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００９  Ｎｏｖ；５８（１１）：１８５３−６４．ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ００２６２−００９−０６９７−４．
２７．Ｂｏｙｅｒｉｎａｓ  Ｂ，Ｊｏｃｈｅｍｓ  Ｃ，Ｆａｎｔｉｎｉ  Ｍ，Ｈｅｅｒｙ  ＣＲ，Ｇｕｌｌｅｙ  ＪＬ，Ｔｓａｎｇ  ＫＹ，Ｓｃｈｌｏｍ  Ｊ．Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ａｎｔｉ−ＰＤ−Ｌ１  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ａｖｅｌｕｍａｂ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）ｏｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｔｕｍｏｒ  Ｃｅｌｌｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ．２０１５  Ｏｃｔ；３（１０）：１１４８−５７．
２８．Ｍｅｙｅｒ  Ｓ，Ｌｅｕｓｅｎ  ＪＨ，Ｂｏｒｏｓｓ  Ｐ．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｔｓ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ．ＭＡｂｓ．２０１４；６（５）：１１３３−４４．
２９．Ｓｔｒｏｍｅ  ＳＥ，Ｓａｕｓｖｉｌｌｅ  ＥＡ，Ｍａｎｎ  Ｄ．Ａ  ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ  ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｏｆ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｂｅｙｏｎｄ  ｔａｒｇｅｔ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｅｆｆｅｃｔｓ．Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ．２００７  Ｓｅｐ；１２（９）：１０８４−９５．
３０．Ｈａｙｅｓ  Ｊ，Ｆｒｏｓｔｅｌｌ  Ａ，Ｋａｒｌｓｓｏｎ  Ｒ，Ｍｕｌｌｅｒ  Ｓ，Ｍｉｌｌａｎ−Ｍａｒｔｉｎ  Ｓ，Ｐａｕｅｒｓ  Ｍ，Ｒｅｕｓｓ  Ｆ，Ｃｏｓｇｒａｖｅ  Ｅ，Ａｎｎｅｒｅｎ  Ｃ，Ｄａｖｅｙ  ＧＰ，Ｒｕｄｄ  ＰＭ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｆｃ  ｇａｍｍａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｇｌｙｃｏｆｏｒｍｓ  ｔｈａｔ  ｐｒｏｄｕｃｅ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｋｉｎｅｔｉｃｓ  ｆｏｒ  ｒｉｔｕｘｉｍａｂ．Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ．２０１７  Ｊｕｎ  ２．ｐｉｉ：ｍｃｐ．Ｍ１１７．０６６９４４．ｄｏｉ：１０．１０７４／ｍｃｐ．Ｍ１１７．０６６９４４．［Ｅｐｕｂ  ａｈｅａｄ  ｏｆ  ｐｒｉｎｔ］
３１．Ｋｏｅｎｅ  ＨＲ，Ｋｌｅｉｊｅｒ  Ｍ，Ａｌｇｒａ  Ｊ，Ｒｏｏｓ  Ｄ，ｖｏｎ  ｄｅｍ  Ｂｏｒｎｅ  ＡＥ，ｄｅ  Ｈａａｓ  Ｍ．Ｆｃ  ｇａｍｍａＲＩＩＩａ−１５８Ｖ／Ｆ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ  ｔｈｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｏｆ  ＩｇＧ  ｂｙ  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌ  Ｆｃ  ｇａｍｍａＲＩＩＩａ，ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｃ  ｇａｍｍａＲＩＩＩａ−４８Ｌ／Ｒ／Ｈ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ．Ｂｌｏｏｄ．１９９７  Ａｕｇ  １；９０（３）：１１０９−１４．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：９２４２５４２．
３２．Ｗｕ  Ｊ，Ｅｄｂｅｒｇ  ＪＣ，Ｒｅｄｅｃｈａ  ＰＢ，Ｂａｎｓａｌ  Ｖ，Ｇｕｙｒｅ  ＰＭ，Ｃｏｌｅｍａｎ  Ｋ，Ｓａｌｍｏｎ  ＪＥ，Ｋｉｍｂｅｒｌｙ  ＲＰ．Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ｏｆ  ＦｃｇａｍｍａＲＩＩＩａ（ＣＤ１６）ａｌｔｅｒｓ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｒｅｄｉｓｐｏｓｅｓ  ｔｏ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．１９９７  Ｓｅｐ  １；１００（５）：１０５９−７０．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：９２７６７２２
３３．Ｍｕｓｏｌｉｎｏ  Ａ，Ｎａｌｄｉ  Ｎ，Ｂｏｒｔｅｓｉ  Ｂ，Ｐｅｚｚｕｏｌｏ  Ｄ，Ｃａｐｅｌｌｅｔｔｉ  Ｍ，Ｍｉｓｓａｌｅ  Ｇ，Ｌａｃｃａｂｕｅ  Ｄ，Ｚｅｒｂｉｎｉ  Ａ，Ｃａｍｉｓａ  Ｒ，Ｂｉｓａｇｎｉ  Ｇ，Ｎｅｒｉ  ＴＭ，Ａｒｄｉｚｚｏｎｉ  Ａ．Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｇ  ｆｒａｇｍｅｎｔ  Ｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ−ｂａｓｅｄ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ＨＥＲ−２／ｎｅｕ−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．２００８  Ａｐｒ  １０；２６（１１）：１７８９−９６．
３４．Ｈａｎｋ  ＪＡ，Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ＲＲ，Ｓｕｒｆｕｓ  Ｊ，Ｍｕｅｌｌｅｒ  ＢＭ，Ｒｅｉｓｆｅｌｄ  ＲＡ，Ｃｈｅｕｎｇ  ＮＫ，Ｓｏｎｄｅｌ  ＰＭ．Ａｕｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃｅｌｌ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｗｉｔｈ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ２．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９９０  Ｓｅｐ  １；５０（１７）：５２３４−９．
３５．Ｗａｔａｎａｂｅ  Ｍ，Ｋｏｎｏ  Ｋ，Ｋａｗａｇｕｃｈｉ  Ｙ，Ｍｉｚｕｋａｍｉ  Ｙ，Ｍｉｍｕｒａ  Ｋ，Ｍａｒｕｙａｍａ  Ｔ，Ｆｕｊｉｉ  Ｈ．Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２１  ｃａｎ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ  ｒｅｓｔｏｒｅ  ｉｍｐａｉｒｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃｅｌｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｏｅｓｏｐｈａｇｅａｌ  ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．２０１０  Ｆｅｂ  ２；１０２（３）：５２０−９．
３６．Ｈａｎ  ＫＰ，Ｚｈｕ  Ｘ，Ｌｉｕ  Ｂ，Ｊｅｎｇ  Ｅ，Ｋｏｎｇ  Ｌ，Ｙｏｖａｎｄｉｃｈ  ＪＬ，Ｖｙａｓ  ＶＶ，Ｍａｒｃｕｓ  ＷＤ，Ｃｈａｖａｉｌｌａｚ  ＰＡ，Ｒｏｍｅｒｏ  ＣＡ，Ｒｈｏｄｅ  ＰＲ，Ｗｏｎｇ  ＨＣ．ＩＬ−１５：ＩＬ−１５  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｌｐｈａ  ｓｕｐｅｒａｇｏｎｉｓｔ  ｃｏｍｐｌｅｘ：ｈｉｇｈ−ｌｅｖｅｌ  ｃｏ−ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌｓ，ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ．２０１１  Ｄｅｃ；５６（３）：８０４−１０．
３７．Ｇｏｍｅｓ−Ｇｉａｃｏｉａ  Ｅ，Ｍｉｙａｋｅ  Ｍ，Ｇｏｏｄｉｓｏｎ  Ｓ，Ｓｒｉｈａｒａｎ  Ａ，Ｚｈａｎｇ  Ｇ，Ｙｏｕ  Ｌ，Ｅｇａｎ  ＪＯ，Ｒｈｏｄｅ  ＰＲ，Ｐａｒｋｅｒ  ＡＳ，Ｃｈａｉ  ＫＸ，Ｗｏｎｇ  ＨＣ，Ｒｏｓｓｅｒ  ＣＪ．Ｉｎｔｒａｖｅｓｉｃａｌ  ＡＬＴ−８０３  ａｎｄ  ＢＣＧ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ｔｕｍｏｒ  ｂｕｒｄｅｎ  ｉｎ  ａ  ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｌａｄｄｅｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｒａｔ  ｍｏｄｅｌ；ａ  ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ＮＫ  ｃｅｌｌ  ｅｘｐａｎｓｉｏｎ．ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．２０１４  Ｊｕｎ  ４；９（６）：ｅ９６７０５．
３８．Ｍａｔｈｉｏｓ  Ｄ，Ｐａｒｋ  ＣＫ，Ｍａｒｃｕｓ  ＷＤ，Ａｌｔｅｒ  Ｓ，Ｒｈｏｄｅ  ＰＲ，Ｊｅｎｇ  ＥＫ，Ｗｏｎｇ  ＨＣ，Ｐａｒｄｏｌｌ  ＤＭ，Ｌｉｍ  Ｍ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＩＬ−１５  ｓｕｐｅｒａｇｏｎｉｓｔ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ＡＬＴ−８０３  ｌｅａｄｓ  ｔｏ  ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ａｎｄ  ｄｕｒａｂｌｅ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｉｎ  ａ  ｍｕｒｉｎｅ  ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ  ｍｏｄｅｌ．Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．２０１６  Ｊａｎ  １；１３８（１）：１８７−９４．
３９．Ｒｈｏｄｅ  ＰＲ，Ｅｇａｎ  ＪＯ，Ｘｕ  Ｗ，Ｈｏｎｇ  Ｈ，Ｗｅｂｂ  ＧＭ，Ｃｈｅｎ  Ｘ，Ｌｉｕ  Ｂ，Ｚｈｕ  Ｘ，Ｗｅｎ  Ｊ，Ｙｏｕ  Ｌ，Ｋｏｎｇ  Ｌ，Ｅｄｗａｒｄｓ  ＡＣ，Ｈａｎ  Ｋ，Ｓｈｉ  Ｓ，Ａｌｔｅｒ  Ｓ，Ｓａｃｈａ  ＪＢ，Ｊｅｎｇ  ＥＫ，Ｃａｉ  Ｗ，Ｗｏｎｇ  ＨＣ．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｕｐｅｒａｇｏｎｉｓｔ  Ｃｏｍｐｌｅｘ，ＡＬＴ−８０３，ｔｏ  ＩＬ１５  ａｓ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｉｎ  Ａｎｉｍａｌ  Ｍｏｄｅｌｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ．２０１６  Ｊａｎ；４（１）：４９−６０．
４０．Ｋｉｍ  ＰＳ，Ｋｗｉｌａｓ  ＡＲ，Ｘｕ  Ｗ，Ａｌｔｅｒ  Ｓ，Ｊｅｎｇ  ＥＫ，Ｗｏｎｇ  ＨＣ，Ｓｃｈｌｏｍ  Ｊ，Ｈｏｄｇｅ  ＪＷ．ＩＬ−１５  ｓｕｐｅｒａｇｏｎｉｓｔ／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ  ｆｕｓｉｏｎ  ｃｏｍｐｌｅｘ  （ＩＬ−１５ＳＡ／ＩＬ−１５ＲαＳｕ−Ｆｃ；ＡＬＴ−８０３）ｍａｒｋｅｄｌｙ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｓｕｂｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ＮＫ  ａｎｄ  ｍｅｍｏｒｙ  ＣＤ８＋Ｔ  ｃｅｌｌｓ，ａｎｄ  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｇａｉｎｓｔ  ｍｕｒｉｎｅ  ｂｒｅａｓｔ  ａｎｄ  ｃｏｌｏｎ  ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ．Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ．２０１６  Ｍａｒ  ２９；７（１３）：１６１３０−４５．
４１．Ｆｅｌｉｃｅｓ  Ｍ，Ｃｈｕ  Ｓ，Ｋｏｄａｌ  Ｂ，Ｂｅｎｄｚｉｃｋ  Ｌ，Ｒｙａｎ  Ｃ，Ｌｅｎｖｉｋ  ＡＪ，Ｂｏｙｌａｎ  ＫＬＭ，Ｗｏｎｇ  ＨＣ，Ｓｋｕｂｉｔｚ  ＡＰＮ，Ｍｉｌｌｅｒ  ＪＳ，Ｇｅｌｌｅｒ  ＭＡ．ＩＬ−１５  ｓｕｐｅｒ−ａｇｏｎｉｓｔ（ＡＬＴ−８０３）ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ（ＮＫ）ｃｅｌｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｇａｉｎｓｔ  ｏｖａｒｉａｎ  ｃａｎｃｅｒ．Ｇｙｎｅｃｏｌ  Ｏｎｃｏｌ．２０１７  Ｊｕｎ；１４５（３）：４５３−４６１．
４２．Ｒｏｓａｒｉｏ  Ｍ，Ｌｉｕ  Ｂ，Ｋｏｎｇ  Ｌ，Ｃｏｌｌｉｎｓ  ＬＩ，Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ  ＳＥ，Ｃｈｅｎ  Ｘ，Ｈａｎ  Ｋ，Ｊｅｎｇ  ＥＫ，Ｒｈｏｄｅ  ＰＲ，Ｌｅｏｎｇ  ＪＷ，Ｓｃｈａｐｐｅ  Ｔ，Ｊｅｗｅｌｌ  ＢＡ，Ｋｅｐｐｅｌ  ＣＲ，Ｓｈａｈ  Ｋ，Ｈｅｓｓ  Ｂ，Ｒｏｍｅｅ  Ｒ，Ｐｉｗｎｉｃａ−Ｗｏｒｍｓ  ＤＲ，Ｃａｓｈｅｎ  ＡＦ，Ｂａｒｔｌｅｔｔ  ＮＬ，Ｗｏｎｇ  ＨＣ，Ｆｅｈｎｉｇｅｒ  ＴＡ．Ｔｈｅ  ＩＬ−１５−Ｂａｓｅｄ  ＡＬＴ−８０３  Ｃｏｍｐｌｅｘ  Ｅｎｈａｎｃｅｓ  ＦｃγＲＩＩＩａ−Ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ  ＮＫ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ａｎｄ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ  Ｃｌｅａｒａｎｃｅ  ｏｆ  Ｂ  Ｃｅｌｌ  Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ．Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１６  Ｆｅｂ  １；２２（３）：５９６−６０８．
４３．Ｓｅｙａ  Ｔ，Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ  Ｍ，Ｈａｒａ  Ｔ，Ｈａｔａｎａｋａ  Ｍ，Ｍａｓａｏｋａ  Ｔ，Ａｋｅｄｏ  Ｈ．Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃ３−ｓｔｅｐ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｓｙｓｔｅｍ，ＣＤ３５（ＣＲ１），ＣＤ４６（ＭＣＰ），ａｎｄ  ＣＤ５５（ＤＡＦ），ｉｎ  ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ  ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ．Ｌｅｕｋ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ．１９９４  Ｆｅｂ；１２（５−６）：３９５−４００．
４４．Ｎｉｅｈａｎｓ  ＧＡ，Ｃｈｅｒｗｉｔｚ  ＤＬ，Ｓｔａｌｅｙ  ＮＡ，Ｋｎａｐｐ  ＤＪ，Ｄａｌｍａｓｓｏ  ＡＰ．Ｈｕｍａｎ  ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ  ｖａｒｉａｂｌｙ  ｅｘｐｒｅｓｓ  ｔｈｅ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ＣＤ４６（ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｃｏｆａｃｔｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ），ＣＤ５５（ｄｅｃａｙ−ａｃｃｅｌｅｒａｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ），ａｎｄ  ＣＤ５９（ｐｒｏｔｅｃｔｉｎ）．Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ．１９９６  Ｊｕｌ；１４９（１）：１２９−４２．
４５．Ｄｏｎｉｎ  Ｎ，Ｊｕｒｉａｎｚ  Ｋ，Ｚｉｐｏｒｅｎ  Ｌ，Ｓｃｈｕｌｔｚ  Ｓ，Ｋｉｒｓｃｈｆｉｎｋ  Ｍ，Ｆｉｓｈｅｌｓｏｎ  Ｚ．Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ  ｄｅｐｅｎｄｓ  ｏｎ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅｓ  ａｎｄ  ｓｉａｌｉｃ  ａｃｉｄ．Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００３  Ｆｅｂ；１３１（２）：２５４−６３．
４６．Ｈｓｕ  ＹＦ，Ａｊｏｎａ  Ｄ，Ｃｏｒｒａｌｅｓ  Ｌ，Ｌｏｐｅｚ−Ｐｉｃａｚｏ  ＪＭ，Ｇｕｒｐｉｄｅ  Ａ，Ｍｏｎｔｕｅｎｇａ  ＬＭ，Ｐｉｏ  Ｒ．Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｃｅｔｕｘｉｍａｂ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ  ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｕｍｏｒ  ｇｒｏｗｔｈ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ．２０１０  Ｊｕｎ  ７；９：１３９．
４７．Ｋｏｎｉｓｈｉ  Ｅ，Ｋｉｔａｉ  Ｙ，Ｋｏｎｄｏ  Ｔ．Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｔｏ  ｍｅａｓｕｒｅ  ｌｏｗ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｎｏｎｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １  ｉｎ  ａ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  Ｊａｐａｎｅｓｅ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ  ｖｉｒｕｓ．Ｃｌｉｎ  Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００８  Ｊａｎ；１５（１）：８８−９４．
４８．Ｄａｖｉｄ  ＪＭ，Ｄｏｍｉｎｇｕｅｚ  Ｃ，ＭｃＣａｍｐｂｅｌｌ  ＫＫ，Ｇｕｌｌｅｙ  ＪＬ，Ｓｃｈｌｏｍ  Ｊ，Ｐａｌｅｎａ  Ｃ．Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ａｎｔｉ−ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦ−ββ  Ｔｒａｐ  ｆｕｓｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ（Ｍ７８２４）ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ  ｒｅｖｅｒｔｓ  ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ．ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２０１７  Ｊｕｌ  １３；６（１０）：ｅ１３４９５８９．
４９．Ｂｅｙｅｒ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  ２００５，１０６，２０１８．
５０．Ｍｏｔｔａ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２００５，１９：１７８８．
５１．Ｙａｎｇ  ＺＺ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ，２００６，１０７：３６３９．
５２．Ｗｏｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００１，６１：４７６６．
５３．Ｊａｖｉａ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００３，２６：８５．
５４．Ｓａｓａｄａ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ，２００３：９８：１０８９．
５５．Ｃｕｒｉｅｌ  ＪＴ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２００４，１０：９４２．
５６．Ｓｃｈａｅｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ２００５，９２：９１３．
５７．Ｏｒｍａｎｄｙ  ＬＡ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，２００５：２４５７．
５８．Ｌｉｙａｎａｇｅ  ＵＹ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００２，１６９：２７５６．
５９．Ｄｅｌｏｎｇ  Ｐ，ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏ  Ｔｈｅｒ  ２００６，４：３４２．
６０．Ｄａｎｎｕｌｌ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ，２００５，１１５：３６２３．
６１．Ｖｅｒｇａｔｉ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２０１１，６０：１９７．
６２．Ｍｉｌｌｅｒ  ＡＭ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０６６，１７７：７３９８．
６３．Ｍｕｋｈｅｔｊｉ  Ｂ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１９８９，１６９：１９６１．
６４．Ｃｈａｋｒａｂｏｒｔｙ  ＮＧ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９０，１４５：２３５９．
６５．Ｂａｒｎｅｔｔ  Ｂ  ｅｔ  ａｌ．Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｐｒｏｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００５，５４：３６９．
６６．Ａｎｔｏｎｙ  ＰＡ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ２００２，２５：２０２．
【図１】
2021512965.tif 000003
【図２】
2021512965.tif 000004
【図３】
2021512965.tif 000005
【配列表】
2021512965000001.app
【国際調査報告】
2021512965.tif 000006
2021512965.tif 000007
2021512965.tif 000008