(57)【要約】  有効量のイトラコナゾールと薬学的に許容される医薬品添加物とを含む医薬組成物が提供される。特発性肺線維症の治療のための医薬組成物の使用も提供される。
2021517558.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
特発性肺線維症の治療に使用するための医薬組成物であって、有効量のイトラコナゾールと薬学的に許容される医薬品添加物とを含む、医薬組成物。
【請求項２】
前記医薬組成物が２０ｍｇ〜１２００ｍｇの範囲の量のイトラコナゾールを含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記医薬組成物がさらに、薬学的に有効な量の別の抗線維化剤を含む、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記抗線維化剤がピルフェニドンまたはニンテダニブである、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記医薬組成物が、経口製剤、非経口製剤、直腸製剤、経皮製剤、経鼻製剤、経膣製剤または吸入製剤である、請求項１から４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記医薬組成物が吸入製剤である、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記医薬組成物が患者の肺に直接送達される、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記医薬組成物が経口投与の約１／１０未満の量で送達される、請求項７に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
特発性肺線維症（ＩＰＦ）は、呼吸不全や死亡に至る慢性進行性肺疾患である。ＩＰＦは進行性肺疾患による死亡原因の中で最も頻度が高く、世界中で約５００万人が罹患している。診断後の推定生存期間中央値はわずか２〜３年である（Ｃｈａｋｒａｂｏｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１４）Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  Ｄｒｕｇｓ，２３：８９３−９１０；Ｓｐａｇｎｏｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ＆  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  １５２：１８−２７；Ｔｚｏｕｖｅｌｅｋｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｒｉｓｋ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  １１：３５９−３７０）。米国では８９，０００人もの人々がＩＰＦにかかっており、毎年約３４，０００人が新たにＩＰＦと診断されている（Ｒａｇｈｕ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  １７４：（７）：８１０−８１６）。ＩＰＦの有病率は１０万人あたり１４．０〜４２．７症例、年間発生率は１０万人あたり６．８〜１６．３症例であり、採用された診断基準の厳格さに応じて異なる（Ｒａｇｈｕ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，上掲）。ＩＰＦの有病率は年齢とともに上昇し、ほとんどのＩＰＦ患者は診断時に６０歳以上である。この疾患は女性よりも男性に多く見られ（Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ  Ｐｅｒｅｚ  Ｅ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）Ｃｈｅｓｔ  １３７（１）：１２９−１３７）、ほとんどの患者は現在または以前に喫煙者である。家族性ＩＰＦはＩＰＦ症例の２０％もの割合を占め得る（Ｌｏｙｄ  Ｊ  Ｅ，（２００８）Ｅｕｒ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｒｅｖ  １７（１０９）：１６３−１６７）。
【０００２】
ＩＰＦの病因は不明のままである。しかしながら、タバコ喫煙、塵埃曝露および感染因子などの潜在的な要因がＩＰＦの発症と関連している。ＩＰＦは、上皮細胞および内皮細胞のアポトーシス、線維芽細胞過形成および細胞外マトリックスリモデリングの結果として、肺の構造の進行性不可逆的なゆがみを特徴とする（Ｃｈａｋｒａｂｏｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１４）Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  Ｄｒｕｇｓ，２３：８９３−９１０）。間質性線維症が進行し、それに伴って肺の構造のゆがみが生じると、肺のコンプライアンスがより低下し、呼吸に関連した動力が増加し、呼吸困難につながる。通常、肺機能は時間の経過とともにゆっくりと低下していくが、特に疾患の後期になると、肺機能が急激に低下して入院や死亡に至り得る患者も中にはいる。
【０００３】
ＩＰＦの治療薬の開発は遅れている。ＩＰＦを治療する最初の２つの薬剤であるピルフェニドンとニンテダニブが２０１４年末に承認されただけである（Ｋｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１４）Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３７０：２０８３−９２；Ｒｉｃｈｅｌｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１４）Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３７０：２０７１−８２）。しかしながら、これら２つの薬剤は、ほんの限られた有効性しかなく、重大な副作用があり、複雑な投与計画を必要とする。最近実施されたピルフェニドン、シルデナフィル、ボセンタン、エタネルセプトおよびインターフェロンγ−１ｂの第ＩＩＩ相臨床試験では、主要評価項目で有効性が実証されることはなかった。Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）、コルチコステロイドならびに免疫抑制剤のシクロホスファミドおよびアザチオプリンが一般に処方されているが、これらの薬剤の使用により患者の転帰が改善されたり、疾患の自然経過が変化したりするというエビデンスはほとんどない（Ｃｏｌｌａｒｄ  Ｈ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）Ｃｈｅｓｔ  １２５（６）：２１６９−２１７４；Ｗａｌｔｅｒ  Ｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｐｒｏｃ  Ａｍ  Ｔｈｏｒａｃ  Ｓｏｃ３（４）：３７７−３８１）。実際、最近のＩＰＦ研究では、プレドニゾンとアザチオプリンとＮＡＣの併用は、ＮＡＣまたはプラセボよりも悪い転帰をもたらした（ＮＩＨ  Ｎｅｗｓ，Ｏｃｔ．２４，２０１１）。肺移植は生存率を改善する唯一の治療法であるが（Ｗａｌｔｅｒ  Ｎ  ｅｔ  ａｌ，上掲）、ほとんどのＩＰＦ患者は年齢や併存疾患のために移植の対象とならない。通例、ＩＰＦ患者は、咳や呼吸困難の対症療法、低酸素血症のための酸素補充療法、禁煙、肺リハビリテーションならびに呼吸器感染症の予防および制御などの対症手段で管理される。
【０００４】
ＩＰＦの進行性致死的な経過は、承認された薬物がないことと相まって、この深刻な疾患を治療するための新しい方法および薬剤の必要性を強めている。本発明は、ＩＰＦの治療に使用するための新規な方法および薬剤を提供することにより、このアンメット・メディカル・ニーズを満たす。
【０００５】
イトラコナゾールは、イミダゾール／トリアゾール系抗真菌剤である。最近、Ｂｏｌｌｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ（２０１７）は、新規な抗線維化化合物のスクリーニングのための画像ベースのアッセイを記載し、イトラコナゾールが活性であることを同定した（Ｂｏｌｌｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１７）ＰＮＡＳ，１１４（１８）：４６７９−４６８４）。しかしながら、米国特許公開第２０１７０３６２２１１号明細書では、同じ研究者グループが指摘するに、イトラコナゾールは、ブレオマイシン誘発性肺モデルと四塩化炭素誘発性肝線維症マウスモデルの両方に有効性があり得るものの、Ｐ４５０阻害などの副作用が知られているため、抗線維化薬としての薬物の使用は制限されている。
【０００６】
イトラコナゾールは、シトクロムＰ４５０ステロールＣ１４α脱メチル化の高選択的な阻害剤であり（Ｐｅｒｆｅｃｔ  ＪＲ，（２０１７）Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  １６：６０３−６１６）、ヘッジホッグシグナル伝達経路（Ｋｉｍ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ．１７：３８８−３９９；Ｈｏｒｎ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．６４：２７２４−２７３３；Ｂｏｌａｎｏｓ  ＡＬ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．３０３：Ｌ９７８−Ｌ９９０）と血管新生（Ｃｈｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）ＡＣＳ  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ．２：２６３−７０）の両方に対して阻害活性を有することで知られている。イトラコナゾールはまた、内皮細胞における血管内皮増殖因子受容体２シグナル伝達に阻害活性を有していることが報告されている（Ｎａｃｅｖ  ＢＡ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１１）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２８６：４４０４５−４４０５６；Ｃｈａｕｄｈａｒｙ  ＮＩ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）ＥｕｒＲｅｓｐｉｒ  Ｊ．２９：９７６−９８５）。イトラコナゾールはＦＤＡ承認薬であり、安全性および耐性プロファイルがはっきりと特徴付けられているため、米国特許第２０１７０３６２２１１号明細書の発明者として名を連ねた研究者は、線維症治療のために必要なイトラコナゾールの用量および／または血中レベルが、ＦＤＡによって承認された安全性プロファイル／用量を超えていることを見出したようである。これらの研究者は代わりに、多発性線維症関連疾患の治療のための新しいクラスのイトラコナゾール誘導体の開発にさらに力を注いだ。
【発明の概要】
【０００７】
本発明者らは、驚くべきことに、適切な投与計画または新規な投与経路により、イトラコナゾールを有効かつ安全にＩＰＦの予防または治療に使用できることを見出した。
【０００８】
したがって、一実施形態では、本発明は、有効量のイトラコナゾールと薬学的に許容される医薬品添加物とを含む医薬組成物を、特発性肺線維症の治療を必要とする患者に投与することによって、特発性肺線維症を治療する方法を提供する。一実施形態では、イトラコナゾールの１日用量は、成人ヒト患者の場合、２０ｍｇ〜１２００ｍｇの範囲である。
【０００９】
一実施形態では、本発明の方法は、イトラコナゾールを有効量の１種または複数の既知の抗線維化剤、例えばピルフェニドンおよびニンテダニブと併用して投与することを含む。
【００１０】
一実施形態では、本発明の方法は、体重１ｋｇあたり０．５ｍｇ〜２００ｍｇのイトラコナゾールの１日用量を投与することを含む。イトラコナゾールは、経口投与、非経口投与、直腸投与、経皮投与、経鼻投与、経膣投与または吸入投与による使用の任意の適切な手段で投与することができる。
【００１１】
一実施形態では、医薬組成物は、吸入器を使用して、例えば、経口用量の約１／１０未満のレベルで、患者の肺に直接送達される。別の実施形態では、医薬組成物は、スプレーまたはネブライザーの剤形である。
【００１２】
ＩＰＦを治療するのに有効な量のイトラコナゾールと薬学的に許容される医薬品添加物とを含む、ＩＰＦを治療するための医薬組成物も提供される。一実施形態では、イトラコナゾールの１日用量は、２０ｍｇ〜１２００ｍｇの範囲である。
【００１３】
イトラコナゾールの吸入可能な製剤が知られているが（例えば、米国特許第９０６１０２７号明細書ならびにＬｅおよびＳｃｈｉｌｌｅｒによる記事（Ｌｅ  ａｎｄ  Ｓｃｈｉｌｌｅｒ，（２０１０）Ｃｕｒｒ  Ｆｕｎｇａｌ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｒｅｐ．４：９６−１０２）、それらの製剤は、抗真菌目的のために製剤化されたに過ぎず、ＩＰＦ治療や予防薬に必要な長期低用量使用のために製剤化されたものではなかった。難水溶性の薬物を噴霧凍結して液体にする新しいナノテクノロジー技術を用いて、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｕｓ（アスペルギルス・フラバス）およびＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ（アスペルギルス・フミガーツス）に起因する侵襲性肺アスペルギルス症に対する予防薬としてのエアロゾル化されたイトラコナゾールの有効性が、免疫不全マウスにおいて研究された（Ａｌｖａｒｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｊ  Ｉｎｆｅｃｔ．５５：６８−７４；Ｈｏｅｂｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．５０：１５５２−１５５４）。マウスを用いた単回および複数回のエアロゾル化投与試験により、血清レベルを２５〜５０倍低く維持しながら、ネブライゼーションの完了後６０分以内に有効な抗真菌肺濃度を達成できることが実証されている（ＭｃＣｏｎｖｉｌｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）  Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．２３：９０１−９１１；Ｖａｕｇｈｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｐｈａｒｍ．６３：９５−１０２）。
【００１４】
これらの抗真菌作用の結果はマウスでは有望と見られるが、それにもかかわらず、著者らは一貫して、当該結果を臨床の場に外挿する前には更なる研究が必要であると警告していた。抗線維化治療はせいぜい数週間であるのに対して、抗真菌治療は、一般的に数ヶ月または数年またはそれどころか一生続く。それゆえ、抗線維化薬のすべての副作用に対する懸念が非常に高まっており、これに直面しなければならない。
【００１５】
したがって、一実施形態では、本発明は、ＩＰＦの治療を必要とする患者のＩＰＦを治療するためにイトラコナゾールを送達するための剤形を提供し、当該剤形は、有効量のイトラコナゾールを患者の肺に直接送達する。剤形は、スプレーまたはネブライザーであり得、患者に経口用量の約１／１０未満を送達する。
【００１６】
一実施形態では、剤形はさらに、薬学的に有効な量の抗線維化剤を含み、この抗線維化剤は、ピルフェニドンまたはニンテダニブであり得る。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】ブレオマイシン＋ニンテダニブまたはフルコナゾール治療後のマウスの体重変化を示す図である。
【００１８】
【図２】ブレオマイシン＋ニンテダニブまたはフルコナゾール治療後のＢＡＬＦコラーゲンレベルを示す図である。
【００１９】
【図３】ブレオマイシン＋ニンテダニブまたはフルコナゾール治療後のＢＡＬＦ中の総細胞数および総マクロファージ数を示す。
【００２０】
【図４】ブレオマイシン＋ニンテダニブまたはフルコナゾール治療後のマウス肺の炎症領域（Ａ）、修正アシュクロフトスコア（Ｂ）、およびα−ＳＭＡ染色（Ｃ）を示す図である。
【００２１】
【図５】ブレオマイシン治療＋イトラコナゾール、ニンテダニブまたは併用投与後のマウスの体重変化を示す図である。
【００２２】
【図６】ブレオマイシン治療＋イトラコナゾール、ニンテダニブまたは併用投与後のＢＡＬＦコラーゲンレベルを示す図である。
【００２３】
【図７】ブレオマイシン治療＋イトラコナゾール、ニンテダニブまたは併用投与後のＢＡＬＦ中の細胞数を示す図である。
【００２４】
【図８】ブレオマイシン治療＋イトラコナゾール、ニンテダニブまたは併用投与後のマウス肺の炎症領域（Ａ）、修正アシュクロフトスコア（Ｂ）、およびα−ＳＭＡ染色（Ｃ）を示す図である。
【００２５】
【図９】ブレオマイシン治療＋イトラコナゾールもしくはニンテダニブの吸入投与または経口投与後のＢＡＬＦ中の総細胞数（Ａ）および総好中球数（Ｂ）を示す図である。
【００２６】
【図１０】ブレオマイシン治療＋イトラコナゾールもしくはニンテダニブの吸入投与または経口投与後のＢＡＬＦ中のＴＧＦ−β１レベル（Ａ）およびＩ型コラーゲンレベル（Ｂ）を示す図である。
【００２７】
【図１１】ブレオマイシン治療＋イトラコナゾールもしくはニンテダニブの吸入投与または経口投与後の肺中のヒドロキシプロリンレベルを示す図である。
【００２８】
【図１２】ブレオマイシン治療＋イトラコナゾールもしくはニンテダニブの吸入投与または経口投与後のマウス肺組織のアシュクロフトスコアを示す図である。
【００２９】
【図１３】ブレオマイシン治療＋イトラコナゾールもしくはニンテダニブの吸入投与または経口投与後の肺組織中のマッソンＩＯＤを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
以下の説明全体を通して、本発明のより完全な理解を提供するために、具体的な詳細が記載される。しかしながら、本発明は、これらの特定の事項に限定されずに実施することができる。他の例では、本発明を不必要に曖昧にすることを避けるために、周知の要素は詳細に示されていないか、または記載されていない。したがって、本明細書および図面は、限定的な意味ではなく、例示的な意味で捉えられるべきである。
【００３１】
本発明は、ヒトにおけるＩＰＦを治療するための方法および組成物に関する。「治療する」および「治療」という用語は、病理学的状態を有利に変化させる治療的介入および予防的介入を指すために幅広く使用される。治療には、疾患の進行を和らげたり、逆にしたり、疾患の重症度を下げたり、予防したり、治癒したりする手順が含まれる。本明細書で使用される場合、「ＩＰＦ」または「特発性肺線維症」という用語は、特発性肺線維症のすべての形態、例えば、職業性および環境性、自己免疫性、強皮症、サルコイドーシス、薬物および放射線誘発性線維症ならびに遺伝性／家族性線維症を含む。
【００３２】
イトラコナゾールの投与量は、患者、投与経路および求められる結果により異なり得る。特定の患者に対する最適な投与計画は、当業者によって容易に決定され得る。例えば、イトラコナゾールの１日用量は、約２０ｍｇ〜約１２００ｍｇであり得る。一実施形態では、イトラコナゾールの１日用量は、体重１キログラムあたり０．５ミリグラム〜体重１キログラムあたり２００ミリグラムの範囲であってもよい。
【００３３】
本発明の特定の実施形態によれば、特発性肺線維症の予防または治療のためのイトラコナゾールのエアロゾル投与用の製剤を含む、経口肺送達または鼻腔内吸入送達のためのイトラコナゾール製剤組成物が提供される。本発明の特定の実施形態によれば、本発明の吸入製剤を使用することを含む、イトラコナゾールの投与を必要とする患者にイトラコナゾールを投与する方法、またはＩＰＦの治療を必要とする患者のＩＰＦを治療する方法が提供される。
【００３４】
イトラコナゾールは、医薬組成物の形態で医薬担体と一緒に投与することができる。医薬組成物は、粉末、シロップ、懸濁液、エマルション、溶液、ヒドロゲルを含むゲル、スプレーまたはエアロゾルなどの投与単位の形態であってもよい。徐放性製剤を使用することもできる。
【００３５】
治療用量のイトラコナゾールを含有する場合、組成物を投与するための様々な種類の送達賦形剤が本発明の範囲内で考えられる。適切な送達賦形剤には、マイクロカプセルまたはマイクロスフェア、リポソームおよび他の脂質ベースの放出系、吸収性および／または生分解性の機械的障壁、高分子またはゲル状の材料が含まれるが、これらに限定されない。
【００３６】
いくつかの実施形態では、剤形は、２０〜１２００ｍｇのイトラコナゾールの投与量を提供することができる。剤形はまた、体重１キログラムあたり１〜２０ｍｇの範囲の１日用量を提供するように製剤化されてもよい。
【００３７】
医薬組成物は、従来の薬学的慣行に従って製剤化されてもよい。徐放性製剤を使用することもできる。イトラコナゾールは、当該技術分野で知られている様々な方法で、例えば液体として製剤化されてもよい。
【００３８】
本発明に従って、本発明の医薬組成物は、ＩＰＦに有効な治療薬であり、線維症に伴う疾患の進行を遅らせる有効な手段を提供する。吸入器中の組成物は、例えば、より少ない副作用で、経口投与よりも有効であり得る。より低い用量を使用することができ、全体的な副作用の負荷が軽減する。
【００３９】
吸入可能な製剤／エアロゾル送達
【００４０】
イトラコナゾールは、好ましくは、ＩＰＦ病理学的部位にエアロゾルとして直接投与される。
【００４１】
乾燥粉末または液体エアロゾル化された製品のいずれかを供給するために、いくつかのデバイス技術が存在する。乾燥粉末製剤は、一般的に、薬物投与に要する時間はより短いが、開発努力はより長く、より高価である。逆に、液体製剤はこれまで投与時間がより長くなるという問題を抱えてきたが、開発努力はより短く、より安価であるという利点を有する。
【００４２】
イトラコナゾールの０．１Ｎ塩酸への溶解度は約４〜６μｇ／ｍＬ、水への溶解度は１〜４ｎｇ／ｍＬである。イトラコナゾールは腸液に不溶性であるため、非常に低い経口バイオアベイラビリティを示す。
【００４３】
したがって、一実施形態では、本明細書に開示されるイトラコナゾールの特定の製剤は、所望の部位における最大薬物沈着に最適化された吸入用エアロゾルを提供するために、特定のエアロゾル化デバイスと組み合わされる。最適化され得る要因には、溶液または固体粒子の配合、送達速度、ならびにエアロゾル化デバイスによって生成される粒子径および粒子分布が含まれる。
【００４４】
粒子径および粒子分布
【００４５】
エアロゾル粒子／液滴サイズの分布は、空気力学的質量中位径（ＭＭＡＤ）−エアロゾルの質量の半分がより小さな液滴に含まれ、もう半分がより大きな液滴に含まれる液滴サイズ−、体積平均径（ＶＭＤ）、質量中位径（ＭＭＤ）、または微粒子画分（ＦＰＦ）−直径５μｍ未満の粒子の割合−のいずれかの観点で表すことができる。これらの測定は、衝突（ＭＭＤおよびＭＭＡＤ）またはレーザー（ＶＭＤ）によって行われてもよい。液体粒子の場合、環境条件、例えば標準湿度が維持されているならば、ＶＭＤ、ＭＭＤおよびＭＭＡＤは同じになる可能性がある。しかしながら、湿度が維持されていない場合、インパクター測定中の脱水により、ＭＭＤおよびＭＭＡＤの測定値はＶＭＤより小さくなる。この記述の目的のために、ＶＭＤ、ＭＭＤおよびＭＭＡＤの測定値は、ＶＭＤ、ＭＭＤおよびＭＭＡＤの記述が比較可能となるような標準的な条件下にあると見なされる。同様に、ＭＭＤおよびＭＭＡＤにおける乾燥粉末粒子径の測定値も比較可能と見なされる。
【００４６】
これらの基準は、異なる吸入器デバイスおよび薬物併用のｉｎ  ｖｉｔｒｏ性能の比較に使用されてきた。一般に、微粒子画分が高いほど、肺に沈着しやすい放出用量の割合は高くなるだろう。
【００４７】
一般的に、吸入された粒子は、２つのメカニズム、つまり、通常、大きな粒子の場合に支配的な衝突と、小さな粒子の場合に支配的な沈降という２つのメカニズムのうちの一つにより沈着される。衝突は、粒子が気流に追従せず、生理学的表面に遭遇するほど吸入された粒子の運動量が大きい場合に起きる。対照的に、沈降は、吸入された気流と共に移動した非常に小さな粒子が気流内でランダムに拡散した結果、生理学的表面に遭遇する場合に、主に肺の深部で起こる。
【００４８】
肺投与の場合、上気道は避けて中気道と下気道が優先される。肺薬物送達は、口および喉からのエアロゾルの吸入により達成され得る。約５ミクロンを超える空気力学的質量中位径（ＭＭＡＤ）を有する粒子は、一般的に肺には到達せず、代わりに喉の奥に衝突する傾向にあり、嚥下されて経口吸収される可能性がある。約１〜約５ミクロンの直径を有する粒子は、上肺野〜中肺野（誘導気道）に到達するほど小さいが、肺胞に到達するには大きすぎる。より小さい粒子、すなわち約０．５〜約２ミクロンの粒子は、肺胞領域に到達することができる。約０．５ミクロンより小さい直径を有する粒子は、非常に小さな粒子が放散されることもあるが、沈降によって肺胞領域に沈着することができる。
【００４９】
いくつかの実施形態では、エアロゾルの粒子径は、肺病理部位におけるイトラコナゾール沈着を最大化し、忍容性を最大化するように最適化される。
【００５０】
非忍容性（例えば、咳および気管支痙攣）は、大きな粒子の吸入衝突と、吸入と呼気の反復中の小さな粒子の沈殿との両方からの上気道沈着によって起こり得る。したがって、一実施形態では、中肺での沈着を最大化し、上気道沈着に伴う非忍容性を最小化するために、最適な粒子径（例えば、ＭＭＡＤ＝２〜５μｍ）が使用される。さらに、狭い幾何標準偏差（ＧＳＤ）を有する明確な粒子径を発生させることにより、沈着および忍容性が最適化され得る。狭いＧＳＤは、所望のＭＭＡＤサイズ範囲外にある粒子数を制限する。
【００５１】
一実施形態では、約２．５ミクロンより小さいかそれに等しいＧＳＤで約２ミクロン〜約５ミクロンのＭＭＡＤを有する、本明細書に開示されるイトラコナゾールを含有するエアロゾルが提供される。別の実施形態では、約２ミクロンより小さいかそれに等しいＧＳＤで２．８ミクロン〜約４．３ミクロンのＭＭＡＤを有するエアロゾルが提供される。別の実施形態では、約１．８ミクロンより小さいかそれに等しいＧＳＤで２．５ミクロン〜約４．５ミクロンのＭＭＡＤを有するエアロゾルが提供される。
【００５２】
いくつかの実施形態では、呼吸器送達を目的としたイトラコナゾールは、水性製剤として、ハロゲン系炭化水素推進剤中の懸濁液もしくは溶液として、または乾燥粉末として投与することができる。水性製剤は、液圧式霧化または超音波式霧化のいずれかを採用した液体ネブライザーによってエアロゾル化されてもよい。推進剤ベースのシステムには、適切な加圧式定量吸入器（ｐＭＤＩ）を使用してもよい。乾燥粉末には、薬物物質を効果的に分散させることができる乾燥粉末吸入器デバイス（ＤＰＩ）を使用してもよい。適切なデバイスを選択することにより、所望の粒子径および粒子分布を得ることができる。
【００５３】
本明細書で使用される肺沈着率とは、特定の送達経路を介して患者に薬剤を投与した際に、薬理活性の特定の部位でバイオアベイラブルな医薬品有効成分（ＡＰＩ）の公称用量の画分を指す。例えば、肺沈着率が３０％とは、投与直前の吸入デバイス中の有効成分の３０％が肺に沈着されることを意味する。同様に、肺沈着率が６０％とは、投与直前の吸入デバイス中の有効成分の６０％が肺に沈着されること等々を意味する。肺沈着率は、シンチグラフィーまたはデコンボリューションの方法を用いて決定することができる。いくつかの実施形態では、本発明は、液体ネブライザーを用いて患者に公称用量のイトラコナゾールを投与することを含む、患者における呼吸器疾患の治療または予防のための方法および吸入システムを提供する。いくつかの実施形態では、液体ネブライザーは、高効率液体ネブライザーである。いくつかの実施形態では、イトラコナゾールの公称用量に基づいて、少なくとも約７％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、または少なくとも約８５％のイトラコナゾールの肺沈着率が達成される。
【００５４】
肺へのエアロゾル沈着を測定するために使用される方法は、主に２つ存在する。第１に、９９ｍ−テクネチウムのような物質で薬物を放射性標識し、薬物の吸入後に対象を走査することで、γ−シンチグラフィーを行う。この技法は、患者が吸入したエアロゾルの割合だけでなく、上気道および肺における局所的な分布も定量化できるという利点を有する。第２に、下気道に沈着した薬物のほとんどは血流に吸収されるため、肺沈着率の測定には薬物動態学的技法が用いられる。この技法では、気道上皮と相互作用して全身に吸収されるＩＣＳの総量を評価することができるが、粘膜毛様体クリアランス後に喀出または嚥下される可能性のある小さな部分を見逃すことになり、局所的な分布については知ることができない。それゆえ、γ−シンチグラフィーと薬物動態学的研究とは、多くの場合、相補的なものと考えられる。
【００５５】
いくつかの実施形態では、液体ネブライザーを用いたイトラコナゾールの投与は、約１．０μｍ〜約２．５μｍ、約１．２μｍ〜約２．０μｍ、または約１．０μｍ〜約２．０μｍの放出された液滴サイズ分布のＧＳＤを提供する。いくつかの実施形態では、ＭＭＡＤは、約０．５μｍ〜約５μｍ、または約１〜約４μｍ、または約５μｍ未満である。いくつかの実施形態では、ＶＭＤは、約０．５μｍ〜約５μｍ、または約１〜約４μｍ、または約５μｍ未満である。
【００５６】
患者への薬物の送達用量（ＤＤ）は、ネブライザーに充填された液体の体積の一定部分、すなわち充填体積であり、デバイスのマウスピースから放出される。公称用量とＤＤとの間の差は、主に残留物によって失われた体積の量、すなわち投与後にネブライザー内に残っている充填体積の量、または患者からの空気の呼気中にエアロゾル形態で失われ、ひいては患者の体内に沈着しなかった量である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される霧状にされた製剤のＤＤは、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、または少なくとも約８０％である。
【００５７】
呼吸可能な送達用量（ＲＤＤ）は、ネブライザーから放出された液滴中に含まれる、患者の肺の表面上皮に到達して沈着するほど小さな薬物の送達量を表したものである。ＲＤＤは、ＤＤにＦＰＦを掛けて決定される。
【００５８】
いくつかの実施形態では、液体ネブライザーを用いた吸入イトラコナゾール水溶液の投与は、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、または少なくとも約８０％のＲＤＤを提供する。
【００５９】
一実施形態では、本明細書に記載されているのは、イトラコナキソールを含有する水滴であり、当該水滴は、約５．０μｍ未満の直径を有する。いくつかの実施形態では、水滴は、約５．０μｍ未満、約４．５μｍ未満、約４．０μｍ未満、約３．５μｍ未満、約３．０μｍ未満、約２．５μｍ未満、約２．０μｍ未満、約１．５μｍ未満、または約１．０μｍ未満の直径を有する。
【００６０】
いくつかの実施形態では、水滴は、１種または複数の共溶媒をさらに含む。いくつかの実施形態では、１種または複数の共溶媒は、エタノールおよびプロピレングリコールから選択される。いくつかの実施形態では、水滴は緩衝液をさらに含む。いくつかの実施形態では、緩衝液はクエン酸緩衝液またはリン酸緩衝液である。いくつかの実施形態では、液滴は、液体ネブライザーおよび本明細書に記載されるイトラコナゾールの水溶液から生成された。いくつかの実施形態では、水滴は、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約６０ｍｇ／ｍＬのイトラコナゾールの濃度を有する水溶液から生成される。
【００６１】
本明細書に記載されるイトラコナゾールの複数の水滴を含む水性エアロゾルも記載される。
【００６２】
いくつかの実施形態では、エアロゾル中の水滴の少なくとも約３０％は、約５μｍ未満の直径を有する。いくつかの実施形態では、エアロゾル中の少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、または少なくとも約９０％の水滴は、約５μｍ未満の直径を有する。いくつかの実施形態では、水性エアロゾルは、液体ネブライザーを用いて生成される。いくつかの実施形態では、水性エアロゾルは、高効率液体ネブライザーを用いて生成される。
【００６３】
液体ネブライザー
【００６４】
一実施形態では、ネブライザーは、主に約１〜約５ミクロンのＭＭＡＤを有する、本明細書に開示されるイトラコナゾールのエアロゾルの形成を可能にすることに基づいて選択される。一実施形態では、送達された量のイトラコナゾールは、ＩＰＦ病理学の治療効果を提供する。
【００６５】
ジェット式および超音波式の２種類のネブライザーは、２〜４ミクロンの大きさのエアロゾル粒子を発生させて送達することができる。これらの粒子径は、中間気道沈着に最適であることが示されている。しかしながら、特別に配合された溶液を使用しない限り、これらのネブライザーは、通常、十分な量の薬物を投与して治療効果を得るために、より大きな量を必要とする。ジェットネブライザーは、空気圧破壊を利用して水溶液をエアロゾルの液滴にする。超音波ネブライザーは、圧電結晶による水溶液の剪断を利用する。しかしながら、通常、ジェットネブライザーは臨床条件下では約１０％しか有効ではなく、超音波ネブライザーは約５％しか有効ではない。したがって、肺に沈着して吸収される医薬品の量は、ネブライザーに入れられた大量の薬物にもかかわらず、１０％のうちのごく一部である。哺乳類に投与する前にネブライザーに入れられる薬物の量は、一般的に「公称用量」または「負荷用量」と呼ばれる。公称用量を含む溶液の体積は、「充填体積」と呼ばれる。より小さな粒子径またはゆっくりとした吸入速度が、肺の深部への沈着を可能にする。適応症、例えば、肺線維症および全身送達のための中肺および／または肺胞沈着に応じて、本発明では中肺および肺胞沈着の両方が所望され得る。ネブライザーを使用した製剤送達のための組成物および方法の例示的な開示は、例えば、振動メッシュネブライザーを使用したエアロゾル化ミスト送達の技法、プロトコルおよび特性決定の記述を含む米国特許出願公開第２００６／０２７６４８３号明細書に見出すことができる。
【００６６】
したがって、一実施形態では、好ましい実施形態では、本明細書に開示されるようなイトラコナゾールのエアロゾルを送達するために、振動メッシュネブライザーが使用される。振動メッシュネブライザーは、ダイヤフラムと流体接触する液体保存容器ならびに吸入弁および呼気弁を含む。一実施形態では、約１〜約６ｍＬのイトラコナゾール製剤が保存容器に入れられ、エアロゾル発生器は、選択的に約１〜約５ミクロンの粒子径の霧化エアロゾルを発生させることを保証する。一実施形態では、約１〜約１０ｍＬのイトラコナゾール製剤が保存容器に入れられ、エアロゾル発生器は、選択的に約１〜約５ミクロンの粒子径の霧化エアロゾルを発生させることを保証する。一実施形態では、保存容器およびエアロゾル発生器に最初から入れられているイトラコナゾール製剤のおおよその量を入れ替えて、投与される用量サイズが増加させられる。
【００６７】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるイトラコナゾール製剤は、液体ネブライゼーション吸入器に入れられ、生成される約１〜約５ミクロンのＭＭＡＤ粒子サイズを有する約０．５〜約６ｍＬの投与溶液から約３４ｍｇ〜約４６３ｍｇを送達するための投与量で調製される。
【００６８】
非限定的な例では、霧状にされたイトラコナゾールは、約２０分未満、約１５分未満、約１０分未満、約７分未満、約５分未満、約３分未満、または約２分未満で、記載した呼吸可能な送達用量で投与され得る。
【００６９】
非限定的な例では、霧状にされたイトラコナゾールは、約２０分未満、約１０分未満、約７分未満、約５分未満、約３分未満、または約２分未満で、呼吸作動式ネブライザーを使用して、記載した呼吸可能な送達用量で投与され得る。
【００７０】
非限定的な例では、他の状況では、霧状にされたイトラコナゾールは、より長い期間にわたって投与された場合に、改善された忍容性を達成し、かつ／または、曲線下面積（ＡＵＣ）形状を増加させる特性を示し得る。これらの条件下で、記載した呼吸可能な送達用量は、約２分超、好ましくは約３分超、より好ましくは約５分超、より好ましくは約７分超、より好ましくは約１０分超、場合によっては最も好ましくは約１０分〜約２０分で投与される。
【００７１】
一実施形態では、イトラコナゾールは、例として肺線維症を有する患者の予防、管理または治療のために、所望の抗線維化または組織リモデリングの恩恵を付与する有効な濃度または量を供給するために、ミスト、気液懸濁液または霧状にされた液体、乾燥粉末および／または定量吸入エアロゾル投与を可能にするように配合されている。
【００７２】
本明細書に記載される薬剤の送達を提供するのに適した任意の既知の吸入ネブライザーは、本明細書に記載される種々の実施形態および方法において使用することができる。そのようなネブライザーとして、例えば、ジェットネブライザー、超音波ネブライザー、脈動膜ネブライザー、複数のアパ−チャーを有する振動メッシュまたはプレートを備えたネブライザー、および振動発生器と水室とを含むネブライザーが挙げられる。本発明における使用に適した市販のネブライザーの例は、特に、米国特許第１０１０５３５６号明細書に記載されており、その全体が参照により本明細書に援用される。
【００７３】
一態様では、本明細書に記載される方法は、特発性肺線維症の治療を必要とする哺乳類にイトラコナゾールの用量を吸入により長期投与スケジュールで投与することを含む、哺乳類における特発性肺線維症の治療のための方法である。いくつかの実施形態では、連続投与スケジュールは、イトラコナゾールの用量を、毎日、隔日、３日毎、４日毎、５日毎、６日毎、毎週、隔週、毎月または隔月に投与することを含む。いくつかの実施形態では、投与スケジュールは、毎日であっても毎日未満であっても、投与日にイトラコナゾールの１回用量、２回用量、３回用量、または４回以上の用量を投与することを含む。
【００７４】
いくつかの実施形態では、イトラコナゾールの各吸入用量は、ネブライザー、定量吸入器、または乾燥粉末吸入器を用いて投与される。いくつかの実施形態では、各吸入用量は、イトラコナゾールの溶液、例えば水溶液、および／またはエタノール溶液を含む。いくつかの実施形態では、各吸入用量は、約０．４ｍＬ〜約２４０ｍＬのイトラコナゾール水溶液を含み、当該水溶液中のイトラコナゾールの濃度は、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約６０ｍｇ／ｍＬ、例えば５ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬである。
【００７５】
いくつかの実施形態では、各吸入用量の溶液はさらに、共溶媒、等張化剤、甘味料、界面活性剤、湿潤剤、キレート剤、酸化防止剤、塩および緩衝剤から選択される１種または複数の追加の成分を含む。いくつかの実施形態では、各吸入用量の水溶液はさらに、エタノール、クエン酸緩衝液またはリン酸緩衝液と、塩化ナトリウム、塩化マグネシウム、臭化ナトリウム、臭化マグネシウム、塩化カルシウムおよび臭化カルシウムから成る群から選択される１種または複数の塩とを含んでいてもよい。
【００７６】
いくつかの実施形態では、各吸入用量の水溶液は、水、エタノール、カルボキシメチルセルロースナトリウムまたはＤＭＳＯ／ＰＥＧ４００；約５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬの濃度のイトラコナゾール；１種または複数の塩（当該１種または複数の塩の総量は、水溶液の重量の約０．０１重量％〜約２．０重量％である）；および任意に、溶液のｐＨを約ｐＨ５．０〜約ｐＨ８．０で維持するリン酸緩衝液、または溶液のｐＨを約４．０〜約７．０で維持するクエン酸緩衝液を含む。
【００７７】
いくつかの実施形態では、各吸入用量は、液体ネブライザーを用いて投与される。いくつかの実施形態では、吸入用量は、連続流エアロゾルまたは呼吸作動式エアロゾルの標準的な安静呼吸を使用してネブライゼーションにより送達される。
【００７８】
いくつかの実施形態では、液体ネブライザーは、（ｉ）吸入用量の投与後、哺乳類に投与されたイトラコナゾールの少なくとも７％の肺沈着率を達成する；（ｉｉ）約１．０μｍ〜約２．５μｍの水溶液の放出された液滴サイズ分布の幾何標準偏差（ＧＳＤ）を提供する；（ｉｉｉ）ａ）約１μｍ〜約５μｍの水溶液の高効率液体ネブライザーを用いて放出される水溶液の液滴サイズの空気力学的質量中位径（ＭＭＡＤ）を提供し；ｂ）約１μｍ〜約５μｍの体積平均径（ＶＭＤ）を提供し、かつ／もしくはｃ）約１μｍ〜約５μｍの質量中位径（ＭＭＤ）を提供する；または（ｉｖ）少なくとも約３０％の液体ネブライザーから放出される液滴の微粒子画分（ＦＰＦ＝％  ≦５μｍ）を提供する。いくつかの実施形態では、液体ネブライザーは、少なくとも０．１ｍＬ／分の出力速度を提供する；または少なくとも約２５％の水溶液を哺乳類に提供する。
【００７９】
いくつかの実施形態では、ａ）各吸入用量からのイトラコナゾールの肺組織Ｃｍａｘは、最大８０１ｍｇのイトラコナゾールの経口投与用量の肺組織Ｃｍａｘと少なくとも同等またはそれを上回り、かつ／またはｂ）哺乳類の肺に直接投与される各吸入用量からのイトラコナゾールの血中ＡＵＣ０−２４は、最大８０１ｍｇのイトラコナゾールの経口投与用量の血中ＡＵＣ０−２４を下回るかまたはそれと同等である。いくつかの実施形態では、各吸入用量からのイトラコナゾールの血中ＡＵＣ０−２４は、最大８０１ｍｇのイトラコナゾールの経口投与用量の血中ＡＵＣ０−２４を下回る。いくつかの実施形態では、各吸入用量からのイトラコナゾールの血中ＡＵＣ０−２４は、最大８０１ｍｇのイトラコナゾールの経口投与用量の血中ＡＵＣ０−２４の８０％未満、７０％未満、６０％未満、５０％未満、４０％未満、３０％未満、２０％未満、１０％未満、５％未満、２．５％未満、１．０％未満、０．５％未満、０．２５％未満、０．１％未満、０．０５％未満、０．０２５％未満、または０．０１％未満である。いくつかの実施形態では、各吸入用量からのイトラコナゾールの血中ＡＵＣ０−２４は、最大８０１ｍｇのイトラコナルゾールの経口投与用量の血中ＡＵＣ０−２４の０．０１〜９０％、０．０１〜８０％、０．０１〜７０％、０．０１〜６０％、０．０１〜５０％、０．０１〜４０％、０．０１〜３０％、０．０１〜２０％、０．０１〜１０％、０．０１〜５％、０．０１〜２．５％、０．０１〜１％、０．０１〜０．１％、５〜９０％、５〜８０％、５〜７０％、５〜６０％、５〜５０％、５〜４０％、５〜３０％、５〜２０％、５〜１０％、１〜５％、１〜１０％、１〜２０％、１〜３０％、１〜４０％、１〜５０％、１〜６０％、１〜７０％、１〜８０％、または１〜９０％である。いくつかの実施形態では、各吸入用量は、最大８０１ｍｇのイトラコナゾールの経口投与用量の１／２未満である。いくつかの実施形態では、各吸入用量は、最大８０１ｍｇのイトラコナゾールの経口投与用量の１／２、１／３、１／４、１／５、１／６、１／８、１／１０、１／２０、１／４０、１／５０、１／７５、１／１００、１／２００、１／３００または１／４００未満である。
【００８０】
ナノ粒子状組成物
【００８１】
別の実施形態は、肺送達または経鼻送達のためのナノ粒子状組成物を含有する乾燥粉末に関する。粉末は、ナノ粒子状薬物粒子の呼吸可能な凝集体、または少なくとも１つの埋め込まれた薬物ナノ粒子を含有する希釈剤の呼吸可能な粒子から成っていてもよい。ナノ粒子状薬物粒子を含有する粉末は、ナノ粒子の水性分散液から噴霧乾燥または凍結乾燥（フリーズドライ）により水分を除去して調製することができる。噴霧乾燥は、凍結乾燥よりも時間がかからず、より安価であるため、費用対効果に優れている。しかしながら、生物学的製剤などの特定の薬物は、乾燥粉末製剤の製造に際しては、噴霧乾燥よりも凍結乾燥の方が有益である。
【００８２】
約１〜約５ミクロンＭＭＡＤの粒子径を有する乾燥粉末エアロゾル送達に使用される従来の微粒子化された薬物粒子は、多くの場合、そのような粉末に内在する静電凝集力のために、少量で計量供給して分散させることが困難である。これらの問題点は、送達デバイスへの薬物物質の損失だけでなく、不完全な粉末分散および肺への準最適送達につながる可能性がある。多くの薬物化合物、特にタンパク質およびペプチドは、肺の深部送達および全身吸収を目的としている。従来どおりに調製された乾燥粉末の平均粒子径は、通常、約１〜約５ミクロンＭＭＡＤの範囲にあるため、実際に肺胞領域に到達する材料の割合は非常に少ない可能性がある。したがって、微粒子化された乾燥粉末の肺、特に肺胞領域への送達は、粉末自体の特性のために、一般的に非常に非効率的である。
【００８３】
ナノ粒子状薬物を含有する乾燥粉末エアロゾルは、同等の微粒子化された薬物物質よりも小さくすることができるため、肺の深部への効率的な送達に適している。さらに、ナノ粒子状薬物の凝集体は、幾何学的に球状であり、良好な流動特性を有し、それにより、投与された組成物の肺または鼻腔内での用量計量および沈着に役立つ。
【００８４】
乾燥ナノ粒子状組成物は、ＤＰＩおよびｐＭＤＩの両方で使用することができる。本明細書で使用される場合、「乾燥」とは、約５％未満の水を有する組成物を指す。
【００８５】
一実施形態では、光散乱法によって測定して、約１０００ｎｍ未満、より好ましくは約４００ｎｍ未満、約３００ｎｍ未満、約２５０ｎｍ未満、または約２００ｎｍ未満の有効平均粒子径を有するナノ粒子を含有する組成物が提供される。約１０００ｎｍ未満の有効平均粒子径とは、光散乱技術によって測定した場合に、薬物粒子の少なくとも５０％が約１０００ｎｍ未満の重量平均粒子径を有することを意味する。好ましくは、薬物粒子の少なくとも７０％が約１０００ｎｍ未満の重量平均粒子径を有し、より好ましくは、薬物粒子の少なくとも９０％が約１０００ｎｍ未満の重量平均粒子径を有し、さらにより好ましくは、薬物粒子の少なくとも約９５％が約１０００ｎｍ未満の重量平均粒子径を有する。
【００８６】
水性エアロゾル製剤の場合、ナノ粒子状イトラコナゾールは、約３４ｍｇ／ｍＬ〜最大約４６３ｍｇ／ｍＬの濃度で存在し得る。乾燥粉末エアロゾル製剤の場合、ナノ粒子化剤は、所望の薬物用量に応じて、約３４ｍｇ／ｇ〜最大約４６３ｍｇ／ｇの濃度で存在し得る。水性エアロゾル製剤の場合、約３４ｍｇ／ｍＬ〜最大約４６３ｍｇ／ｍＬの濃度でナノ粒子状薬物を含有し、乾燥粉末エアロゾル製剤の場合、約３４ｍｇ／ｇ〜最大約４６３ｍｇ／ｇの濃度でナノ粒子状薬物を含有するものと定義される濃縮ナノ粒子状エアロゾルが具体的に提供される。そのような製剤は、従来の肺ネブライザー療法で見られるような最大４〜２０分の投与時間と比較して、短い投与時間、すなわち、１回の投与あたり約３〜１５秒未満で、肺または鼻腔の適切な領域への有効な送達を提供する。
【００８７】
エアロゾル投与のためのナノ粒子状薬物組成物は、例えば、（１）粉砕もしくは沈殿のいずれかによって得られるナノ粒子状薬物の分散液を霧状にすること；（２）ナノ粒子状薬物と表面修飾剤の凝集体の乾燥粉末をエアロゾル化すること（エアロゾル化された組成物は、希釈剤をさらに含有していてもよい）；または（３）ナノ粒子状薬物もしくは薬物凝集体の懸濁液を非水性推進剤中にエアロゾル化することによって製造することができる。ナノ粒子状薬物と表面修飾剤の凝集体は、希釈剤をさらに含有していてもよく、非加圧システムまたは加圧非水性システムで製造することができる。そのような方法によって濃縮エアロゾル製剤を製造することもできる。
【００８８】
ナノ粒子状薬物を取得するための水性薬物の粉砕は、薬物粒子を液体分散媒体中に分散させ、粉砕媒体の存在下で機械的手段を適用して、薬物の粒子径を所望の有効平均粒子径まで小さくすることによって行うことができる。粒子は、１種または複数の表面修飾剤の存在下でサイズを小さくすることができる。あるいは、摩耗後に粒子を１種または複数の表面修飾剤と接触させてもよい。他の化合物、例えば希釈剤を、サイズダウンプロセス中に薬物／表面修飾剤組成物に添加してもよい。分散液は、連続的にまたはバッチ式に製造することができる。
【００８９】
ナノ粒子分散液を形成する別の方法は、ミクロ沈殿法によるものである。これは、１種または複数の表面修飾剤と、任意の微量の毒性溶媒または可溶化された重金属不純物を含まない１種または複数のコロイド安定性強化表面活性剤の存在下で薬物の安定な分散液を調製する方法である。そのような方法は、例えば、（１）薬物を適切な溶媒中に混合しながら溶解すること；（２）少なくとも１種の表面修飾剤を含む溶液に混合しながらステップ（１）からの製剤を添加して透明な溶液を形成すること；および（３）適切な非溶媒を用いて混合しながらステップ（２）からの製剤を沈殿させることを含む。この方法に続けて、任意の形成された塩が存在する場合には、透析または透析ろ過によるそれらの塩の除去と、従来の手段による分散液の濃縮を行うことができる。得られたナノ粒子状薬物分散液は、液体ネブライザーに利用することができるか、またはＤＰＩもしくはｐＭＤＩで使用するための乾燥粉末を形成するために処理することができる。
【００９０】
非水性の非加圧粉砕システムでは、室温で約１ａｔｍまたはそれより低い蒸気圧を有し、薬物物質が本質的に不溶性である非水性液体を湿式粉砕媒体として使用して、ナノ粒子状薬物組成物を製造することができる。そのようなプロセスでは、薬物と表面修飾剤のスラリーを非水性媒体中で粉砕して、ナノ粒子状薬物粒子を生成することができる。適切な非水性媒体の例として、エタノール、トリクロロモノフルオロメタン、（ＣＦＣ−１１）およびジクロロテトラフルオロエタン（ＣＦＣ−１１４）が挙げられる。ＣＦＣ−１１を使用する利点は、ＣＦＣ−１１４が蒸発を避けるためにより制御された条件を必要とするのに対して、ＣＦＣ−１１は室温よりもほんのわずかに低い温度で取り扱うことができることである。粉砕が完了したら、液体媒体は、真空または加熱下で除去し、回収することができ、乾燥したナノ粒子状組成物が得られる。次いで、乾燥した組成物を適切な容器に充填し、最終的な推進剤を装入してもよい。理想的には塩素系炭化水素を含有しない例示的な最終生成物の推進剤には、ＨＦＡ−１３４ａ（テトラフルオロエタン）およびＨＦＡ−２２７（ヘプタフルオロプロパン）が含まれる。環境上の理由から非塩素系推進剤が好ましいかもしれないが、本発明のこの実施形態では塩素系推進剤を使用してもよい。
【００９１】
非水性の加圧粉砕システムでは、室温で１ａｔｍよりも著しく高い蒸気圧を有する非水性液体媒体を、ナノ粒子状薬物組成物を製造するための粉砕プロセスで使用してもよい。粉砕媒体が適切なハロゲン系炭化水素推進剤である場合には、得られた分散液を適切なｐＭＤＩ容器に直接充填してもよい。あるいは、粉砕媒体を真空または加熱下で除去し、回収して、乾燥したナノ粒子状組成物を得ることもできる。次いで、この組成物を適切な容器に充填し、ｐＭＤＩで使用するための適切な推進剤を充填することができる。
【００９２】
噴霧乾燥は、液体媒体中で薬物の粒子径を小さくした後、ナノ粒子状薬物粒子を含有する粉末を得るために用いられるプロセスである。一般に、噴霧乾燥は、液体媒体が室温で約１ａｔｍ未満の蒸気圧を有する場合に使用することができる。噴霧乾燥器は、液体を蒸発させて薬物粉末の回収を可能にするデバイスである。溶液または懸濁液のいずれかの液体サンプルが噴霧ノズルに供給される。ノズルは、直径約２０〜約１００ミクロンの範囲内のサンプルの液滴を生成し、次いで担体ガスによって乾燥室内に運ばれる。担体ガスの温度は、通常、約８０℃〜約２００℃である。液滴は迅速な液体蒸発にさらされ、乾燥した粒子を残してサイクロン装置の下の特別なリザーバーに回収される。約１ミクロン〜約５ミクロンの範囲のより小さな粒子も可能である。
【００９３】
液体サンプルがナノ粒子と表面修飾剤の水性分散液から成る場合、回収された生成物は、ナノ粒子状薬物粒子の球状凝集体から成る。液体サンプルが、不活性希釈材料（例えばラクトースまたはマンニトール）が溶解されたナノ粒子の水性分散液から成る場合、回収された生成物は、埋め込まれたナノ粒子状薬物粒子を含有する希釈剤（例えばラクトースまたはマンニトール）粒子から成る。回収された生成物の最終的なサイズは、制御することができ、液体サンプル中のナノ粒子状薬物および／または希釈剤の濃度ならびに噴霧乾燥器ノズルによって生成される液滴サイズに依存する。回収された生成物は、肺送達または経鼻送達のための従来のＤＰＩに使用されてもよく、ｐＭＤＩで使用するための推進剤に分散されてもよく、または粒子は、ネブライザーで使用するために水中で再構成されてもよい。
【００９４】
いくつかの例では、最終生成物の計量特性を改善するために、噴霧乾燥材料に不活性担体を添加することが望ましい場合もある。これは、噴霧乾燥された粉末が非常に小さい（約５ミクロン未満）場合や、意図された用量が極めて少ない場合に特に該当する可能性があり、それによって用量の計量が困難になる。一般に、そのような担体粒子（増量剤としても知られている）は、肺に送達されるには大きすぎて、単に口および喉に衝突して嚥下される。そのような担体は、通常、ラクトース、マンニトールまたはトレハロースなどの糖類から成る。多糖類およびセルロース類を含む他の不活性材料も担体として有用であり得る。
【００９５】
ナノ粒子状薬物粒子を含有する噴霧乾燥粉末は、従来のＤＰＩで使用されてもよく、ｐＭＤＩで使用するための推進剤に分散されてもよく、またはネブライザーで使用するために液体媒体中で再構成されてもよい。
【００９６】
熱による変性または不安定化を避けるためには、蒸発よりも昇華が乾燥粉末ナノ粒子状薬物組成物を得るために好ましい。なぜなら、昇華は、噴霧乾燥に伴うプロセス温度の上昇を避けることができるからである。さらに、フリーズドライまたは凍結乾燥としても知られている昇華は、特に生物学的製剤の場合、薬物化合物の保存安定性を向上させることができる。凍結乾燥粒子は、再構成してネブライザーに使用されてもよい。凍結乾燥されたナノ粒子状薬物粒子の凝集体は、乾燥粉末中間体のいずれかとブレンドされてもよく、または単独でＤＰＩおよびｐＭＤＩに使用されてもよく、経鼻送達もしくは肺送達のいずれかに使用されてもよい。
【００９７】
昇華は、生成物を凍結させ、サンプルを強力な真空条件にさらすことを含む。これにより、形成された氷を固体状態から蒸気状態に直接変換することが可能である。そのようなプロセスは非常に効率的であるため、噴霧乾燥よりも高い収率を提供する。得られた凍結乾燥生成物は、薬物と修飾剤を含有する。通常、薬物は凝集状態で存在し、単独で（肺もしくは鼻のいずれかにより）吸入するために、希釈材料（ラクトース、マンニトールなど）と併せて、ＤＰＩもしくはｐＭＤＩで使用されてもよく、またはネブライザーで使用するために再構成されてもよい。
【００９８】
リポソーム組成物
【００９９】
いくつかの実施形態では、イトラコナゾールは、リポソーム粒子に製剤化されてもよく、次いで、この粒子は吸入送達のためにエアロゾル化することができる。本発明において有用な脂質は、中性脂質および荷電脂質の両方を含む任意の様々な脂質であり得る。望ましい特性を有する担体系は、脂質、標的基および循環促進剤の適切な組み合わせを用いて調製することができる。さらに、本明細書で提供される組成物は、リポソームまたは脂質粒子、好ましくは脂質粒子の形態であり得る。本明細書で使用される場合、「脂質粒子」という用語は、核酸を「コート」し、水性内部をほとんどまたは全く有しない脂質二重層担体を指す。より具体的には、この用語は、内層の一部が、核酸（例えば、プラスミドホスホジエステルバック骨格）上に負の電荷を有するイオン結合またはイオン対を形成するカチオン性脂質を含む自己組織化脂質二重層担体を記述するために使用される。内層はまた、中性脂質または融合性脂質と、いくつかの実施形態では、負に帯電した脂質とを含み得る。粒子の外層は、通常、内層の疎水性テールと（リポソームのように）ｔａｉｌ−ｔｏ−ｔａｉｌ型で配向した脂質の混合物を含む。外層の脂質上に存在する極性ヘッド基は、粒子の外表面を形成する。
【０１００】
リポソーム生物活性剤は、持続的な治療効果またはより低い毒性を有するように設計され得ることから、投与頻度をより少なくし、治療指数を向上させることが可能である。リポソームは、所望の医薬品を封入する二重層から構成されている。これらは、異なる層の脂質または層間の水性空間のいずれかの中に捕捉された医薬品を有する同心二重層のマルチラメラベシクルとしての形態をとっていてもよい。
【０１０１】
非限定的な例では、組成物中で使用される脂質は、リン脂質、トコフェロール、ステロイド、脂肪酸、アルブミンなどの糖タンパク質、負に帯電した脂質およびカチオン性脂質を含む、合成脂質、半合成脂質または天然に存在する脂質であってもよい。ホスホ脂質として、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、卵ホスファチジルグリセロール（ＥＰＧ）、卵ホスファチジルイノシトール（ＥＰＩ）、卵ホスファチジルセリン（ＥＰＳ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＥＰＥ）および卵ホスファチジン酸（ＥＰＡ）；大豆対応品である、大豆ホスファチジルコリン（ＳＰＣ）；ＳＰＧ、ＳＰＳ、ＳＰＩ、ＳＰＥおよびＳＰＡ；水添卵および大豆対応品（例えば、ＨＥＰＣ、ＨＳＰＣ）、１２〜２６個の炭素原子の鎖を含有するグリセロールの２位および３位の脂肪酸と、コリン、グリセロール、イノシトール、セリン、エタノールアミンならびに対応するホスファチジン酸を含むグリセロールの１位の異なるヘッド基とのエステル結合から構成される他のリン脂質が挙げられる。これらの脂肪酸上の鎖は、飽和または不飽和であってもよく、リン脂質は、異なる鎖長および異なる不飽和度の脂肪酸から構成されていてもよい。特に、製剤の組成物は、天然に存在する肺サーファクタントの主要な構成成分であるジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）ならびにジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）およびジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）を含み得る。他の例として、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）およびジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）およびジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）およびジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）およびジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）およびジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）、ジオレイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）およびパルミトイルステアロイルホスファチジルコリン（ＰＳＰＣ）およびパルミトイルステアロイルホスファチジルグリセロール（ＰＳＰＧ）のような混合リン脂質およびモノオレイルホスファチジルエタノールアミン（ＭＯＰＥ）のような単一のアシル化リン脂質が挙げられる。
【０１０２】
好ましい実施形態では、ＰＥＧ修飾脂質は、凝集防止剤として本発明の組成物中に組み込まれる。ＰＥＧ修飾脂質の使用は、バルキーなＰＥＧ基をリポソームまたは脂質担体の表面上に配置し、担体の外側にＤＮＡが結合することを防止する（それにより、脂質担体の架橋および凝集を阻害する）。多くの場合、ＰＥＧセラミドの使用が好ましく、膜二重層を安定化し、循環寿命を延ばすという追加の利点を有する。さらに、脂質二重層中のＰＥＧセラミドの寿命を制御するために、異なる脂質テール長を用いてＰＥＧセラミドを調製することができる。このようにして、脂質担体融合の制御をもたらす「プログラム可能な」放出を達成することができる。例えば、セラミド部分にＣ２０−アシル基が結合したＰＥＧセラミドは、半減期２２時間で脂質二重層担体から拡散する。Ｃ１４およびＣ８アシル基を有するＰＥＧセラミドは、それぞれ１０分および１分未満の半減期で同じ担体から拡散する。その結果、脂質テール長の選択により、二重層が既知の速度で不安定化（ひいては融合）する組成物が提供される。あまり好ましくはないが、他のＰＥＧ−脂質または脂質−ポリオキシエチレンコンジュゲートが、本組成物において有用である。適切なＰＥＧ修飾脂質の例として、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミンおよびホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロールおよびジアルキルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミンおよびＰＥＧ修飾１，２−ジアシルオキシプロパン−３−アミンが挙げられる。特に好ましいのは、ＰＥＧセラミドコンジュゲート（例えば、ＰＥＧ−Ｃｅｒ−Ｃ８、ＰＥＧ−Ｃｅｒ−Ｃ１４またはＰＥＧ−Ｃｅｒ−Ｃ２０）であり、これらは米国特許第５，８２０，８７３号明細書に記載されており、当該文献は参照により本明細書に援用される。
【０１０３】
本発明の組成物は、直径が約５０ｎｍ〜約４００ｎｍのリポソーム組成物を提供するために調製することができる。当業者は、カプセル化される体積に応じて、組成物のサイズがより大きくまたは小さくなり得ることを理解するであろう。したがって、より大きな体積の場合、サイズ分布は、通常、約８０ｎｍ〜約３００ｎｍになる。
【０１０４】
表面修飾剤
【０１０５】
イトラコナゾールは、既知の有機および無機の医薬品添加物から選択され得る適切な表面修飾剤を有する医薬組成物中で調製することができる。そのような医薬品添加物として、低分子量オリゴマー、ポリマー、界面活性剤および天然物が挙げられる。好ましい表面修飾剤として、非イオン性界面活性剤およびイオン性界面活性剤が挙げられる。２種またはそれより多くの表面修飾剤を組み合わせて使用してもよい。
【０１０６】
表面修飾剤の代表例として、塩化セチルピリジニウム、ゼラチン、カゼイン、レシチン（リン脂質）、デキストラン、グリセロール、アカシアガム、コレステロール、トラガカント、ステアリン酸、塩化ベンザルコニウム、ステアリン酸カルシウム、モノステアリン酸グリセロール、セトステアリルアルコール、セトマクロゴール乳化ワックス、ソルビタンエステル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル（例えば、セトマクロゴール１０００などのマクロゴールエーテル）、ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（例えば、市販のＴｗｅｅｎ（登録商標）、例えばＴｗｅｅｎ（登録商標）２０およびＴｗｅｅｎ（登録商標）８０（ＩＣＩ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）など）；ポリエチレングリコール（例えば、Ｃａｒｂｏｗａｘ  ３３５０（登録商標）および１４５０（登録商標）ならびにＣａｒｂｏｐｏｌ  ９３４（登録商標）（Ｕｎｉｏｎ  Ｃａｒｂｉｄｅ））、臭化ドデシルトリメチルアンモニウム、ポリオキシエチレンステアレート、コロイド状二酸化ケイ素、リン酸塩、ドデシル硫酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ、ＨＰＣ−ＳＬおよびＨＰＣ−Ｌ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、非結晶セルロース、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、トリエタノールアミン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、エチレンオキシドおよびホルムアルデヒドとの４−（１，１，３，３−テトラメチルブチル）フェノールポリマー（チロキサポール、スーペリオンおよびトリトンとしても知られている）、ポロキサマー（例えば、エチレンオキシドとプロピレンオキシドのブロックコポリマーであるＰｌｕｒｏｎｉｃｓ  Ｆ６８（登録商標）およびＦ１０８（登録商標））；ポロキサミン（例えば、ポロキサミン９０８（登録商標）としても知られているＴｅｔｒｏｎｉｃ  ９０８（登録商標）であって、これは、プロピレンオキシドとエチレンオキシドのエチレンジアミンへの逐次添加から誘導される四官能性ブロックコポリマーである（ＢＡＳＦ  Ｗｙａｎｄｏｔｔｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，Ｎ．Ｊ．））；ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジオクチルスルホコハク酸（ＤＯＳＳ）などの荷電リン脂質；Ｔｅｔｒｏｎｉｃ  １５０８（登録商標）；（Ｔ−１５０８）（ＢＡＳＦ  Ｗｙａｎｄｏｔｔｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、スルホコハク酸ナトリウムのジアルキルエステル（例えば、スルホコハク酸ナトリウムのジオクチルエステルであるＡｅｒｏｓｏｌ  ＯＴ（登録商標）（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｙａｎａｍｉｄ））；ラウリル硫酸ナトリウムであるＤｕｐｏｎｏｌ  Ｐ（登録商標）（ＤｕＰｏｎｔ）；アルキルアリールポリエーテルスルホン酸塩であるトリトンＸ−２００（登録商標）（Ｒｏｈｍ  ａｎｄ  Ｈａａｓ）；ステアリン酸スクロースとジステアリン酸スクロースの混合物であるＣｒｏｄｅｓｔａｓ  Ｆ−１１０（登録商標）（Ｃｒｏｄａ  Ｉｎｃ．）；ｐ−イソノニルフェノキシポリ−（グリシドール）、Ｏｌｉｎ−Ｌｏｇ（登録商標）またはＳｕｒｆａｃｔａｎｔ  １０−Ｇ（登録商標）（Ｏｌｉｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｓｔａｍｆｏｒｄ，Ｃｏｎｎ．）としても知られている；Ｃｒｏｄｅｓｔａｓ  ＳＬ−４０（登録商標）（Ｃｒｏｄａ，Ｉｎｃ．）；およびＣ．ｓｕｂ．１８Ｈ．ｓｕｂ．３７ＣＨ．ｓｕｂ．２（ＣＯＮ（ＣＨ．ｓｕｂ．３）−ＣＨ．ｓｕｂ．２（ＣＨＯＨ）．ｓｕｂ．４（ＣＨ．ｓｕｂ．２ＯＨ）．ｓｕｂ．２であるＳＡ９ＯＨＣＯ（Ｅａｓｔｍａｎ  Ｋｏｄａｋ  Ｃｏ．）；デカノイル−Ｎ−メチルグルカミド；ｎ−デシル−β−Ｄ−グルコピラノシド；ｎ−デシル−β−Ｄ−マルトピラノシド；ｎ−ドデシル−β−Ｄ−グルコピラノシド；ｎ−ドデシル−β−Ｄ−マルトシド；ヘプタノイル−Ｎ−メチルグルカミド；ｎ−ヘプチル−β−Ｄ−グルコピラノシド；ｎ−ヘプチル−β−Ｄ−チオグルコシド；ｎ−ヘキシル−β−Ｄ−グルコピラノシド；ノナノイル−Ｎ−メチルグルカミド；ｎ−ノニル−β−Ｄ−グルコピラノシド；オクタノイル−Ｎ−メチルグルカミド；ｎ−オクチル−β−Ｄ−グルコピラノシド；オクチル−β−Ｄ−チオグルコピラノシドなどが挙げられる。チロキサポールは、ステロイドの肺送達または鼻腔内送達のための特に好ましい表面修飾剤であり、ネブライザー療法の場合はさらに一層好ましい。
【０１０７】
本明細書に開示される溶液中で使用するための界面活性剤の例として、ラウレス硫酸アンモニウム、セタミンオキシド、塩化セトリモニウム、セチルアルコール、ミリスチン酸セチル、パルミチン酸セチル、コカミドＤＥＡ、コカミドプロピルベタイン、コカミドプロピルアミンオキシド、コカミドＭＥＡ、ラウリル硫酸ＤＥＡ、フタル酸ジステアリルアミド、塩化ジセチルジメチルアンモニウム、ジパルミトイルエチルヒドロキシエチルモニウム、ラウレススルホコハク酸二ナトリウム、フタル酸ジ（水添）牛脂、ジラウリン酸グリセリル、ジステアリン酸グリセリル、オレイン酸グリセリル、ステアリン酸グリセリル、ミリスチン酸イソプロピルＮＦ、パルミチン酸イソプロピルＮＦ、ラウラミドＤＥＡ、ラウラミドＭＥＡ、ラウラミドオキシド、ミリスタミンオキシド、イソノナン酸オクチル、パルミチン酸オクチル、ネオペンタン酸オクチルドデシル、塩化オレアルコニウム、ステアリン酸ＰＥＧ−２、カプリル酸／カプリン酸ＰＥＧ−３２グリセリル、ステアリン酸ＰＥＧ−３２グリセリル、ステアリン酸＆ジステアリン酸ＰＥＧ−４およびＰＥＧ−１５０、ラウリン酸＆ジラウリン酸ＰＥＧ−４およびＰＥＧ−１５０、オレイン酸＆ジオレイン酸ＰＥＧ−４およびＰＥＧ−１５０、ヤシ脂肪酸ＰＥＧ−７グリセリル、ＰＥＧ−８蜜蝋、ステアリン酸プロピレングリコール、Ｃ１４〜１６オレフィンスルホン酸ナトリウム、ラウリルスルホ酢酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、トリデセス硫酸ナトリウム、ステアラルコニウムクロリド、ステアルアミドオキシド、ドデシルベンゼンスルホン酸ＴＥＡ、ラウリル硫酸ＴＥＡが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０８】
これらの表面修飾剤のほとんどは、既知の医薬品添加物であり、米国薬剤師協会と王立薬剤師会が共同で出版した「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ」（Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６）に詳細に記載されており、これは特に参照により援用される。表面修飾剤は、市販されており、かつ／または当該技術分野で知られている技法によって調製することができる。薬物および表面修飾剤の相対量は大きく変動し得、表面修飾剤の最適な量は、例えば、選択された特定の薬物および表面修飾剤、ミセルを形成する場合の表面修飾剤の臨界ミセル濃度、表面修飾剤の親水性−親油性バランス（ＨＬＢ）、表面修飾剤の融点、表面修飾剤および／または薬物の水溶性、表面修飾剤の水溶液の表面張力などに依存し得る。
【０１０９】
本発明では、薬物と表面修飾剤の最適な比率は、約０．１％〜約９９．９％、より好ましくは約１０％〜約９０％のイトラコナゾールである。
【０１１０】
マイクロスフェア
【０１１１】
マイクロスフェアは、水に可溶化される薬物化合物の適切な量をまず添加することにより、イトラコナゾールの肺送達に使用することができる。例えば、イトラコナゾール水溶液は、氷浴上で１〜３分間プローブ超音波処理することにより、所定の量（０．１〜１％ｗ／ｖ）のポリ（ＤＬ−ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）を含有する塩化メチレンに分散させることができる。別途、イトラコナゾールを、ＰＬＧＡを含有する塩化メチレン（０．１〜１％ｗ／ｖ）に可溶化してもよい。得られた油中水型一次エマルションまたはポリマー／薬物溶液を、氷浴上で３〜５分間プローブ超音波処理することにより、（予め４℃に冷却された）１〜２％のポリビニルアルコールから成る水性連続相中に分散させる。得られたエマルションを室温で２〜４時間連続的に撹拌して塩化メチレンを蒸発させる。こうして形成された微粒子は、８０００〜１００００ｒｐｍで５〜１０分間遠心分離することにより、連続相から分離される。沈降した粒子を蒸留水で３回洗浄し、凍結乾燥する。凍結乾燥したイトラコナゾール微粒子を−２０℃で保存する。
【０１１２】
非限定的な例では、噴霧乾燥アプローチが、イトラコナゾールマイクロスフェアを調製するために採用される。適切な量のイトラコナゾールを、ＰＬＧＡを含有する塩化メチレン（０．１〜１％）に可溶化する。この溶液を噴霧乾燥してマイクロスフェアを得る。
【０１１３】
非限定的な例では、イトラコナゾール微粒子を、適切な技法および方法を用いて、サイズ分布（基準：９０％＜５μｍ、９５％＜１０μｍ）、形状、薬物負荷効率および薬物放出について特徴付ける。
【０１１４】
非限定的な例では、このアプローチはまた、ＡＵＣ形状を増加させる固体製剤の水溶性を封鎖し、改善するために使用されてもよい。
【０１１５】
まず、一定量のイトラコナゾールを、９６％〜７５％の水で希釈したときにフルオロキノロンを溶解状態に維持するのに必要な最小量のエタノール９６％に溶解することができる。この溶液を水で希釈して７５％エタノール溶液を得て、次いで一定量のパラセタモールを添加して、以下のｗ／ｗ薬物／ポリマー比を得ることができる：１：２、１：１、２：１、３：１、４：１、６：１、９：１および１９：１。これらの最終溶液は、以下の条件で噴霧乾燥される：供給速度１５ｍＬ／分；入口温度１１０℃；出口温度８５℃、圧力４ｂａｒおよび乾燥空気のスループット３５ｍ３／ｈｒ。次いで、粉末は回収され、デシケーターで真空下に保存される。
【０１１６】
固体脂質粒子
【０１１７】
イトラコナゾール固体脂質粒子の調製は、脂質の融解温度で少なくとも維持される脂質融液（ホスファチジルコリンおよびホスファチジルセリンなどのリン脂質）中に薬物を溶解し、その後、脂質の融解温度で少なくとも維持される高温の水性界面活性剤溶液（通常１〜５％ｗ／ｖ）中に薬物含有融液を分散させることを含み得る。Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ（登録商標）を用いて、この粗製分散液を１〜１０分間ホモジナイズしてナノエマルションを得る。ナノエマルションを４〜２５℃の温度に冷却すると、脂質が再固化し、固体脂質ナノ粒子が形成されることになる。薬物送達の延長を達成するべく、製剤パラメーター（脂質マトリックスの種類、界面活性剤濃度および製造パラメーター）の最適化が行われる。非限定的な例では、このアプローチはまた、ナノ粒子ベースの製剤のためのＡＵＣ形状を増加させる固体製剤の水溶性を封鎖し、改善するために使用されてもよい。
【０１１８】
ＡＵＣ形状を増加させる溶融押出製剤
【０１１９】
ＡＵＣ形状を増加させる溶融押出イトラコナゾール製剤は、界面活性剤の添加もしくはマイクロエマルションの調製によるミセルへの薬物の溶解、シクロデキストリンなどの他の分子との包接複合体の形成、薬物のナノ粒子の形成、またはポリマーマトリックスへの非晶質薬物の埋込みによって調製することができる。薬物をポリマーマトリックスに均一に埋め込むと、固体分散体が得られる。固体分散体は、溶媒法とホットメルト法の２通りの方法で調製することができる。溶媒法は、有機溶媒を使用し、薬物と適切なポリマーとを溶解させ、次いで（噴霧）乾燥させる。この方法の主要な欠点は、有機溶媒を使用することと、バッチ式での製造プロセスである。ホットメルト法は、薬物を適切なポリマーに分散または溶解させるために熱を使用する。溶融押出プロセスは、ホットメルト法を最適化したものである。溶融押出手法の利点は、有機溶媒を使用しないことと、連続的な製造プロセスであることである。溶融押出は新規な医薬品技術であるため、これを扱う文献は限られている。技術的な設定には、非限定的な例ではＡＵＣ形状を増加させるイトラコナゾールの製剤を作製するために、イトラコナゾール、ヒドロキシプロピル−ｂ−シクロデキストリン（ＨＰ−ｂ−ＣＤ）およびヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）の混合および押出を含む。シクロデキストリンは、外表面にヒドロキシル基と、中央に空孔を有するトロイダル形状の分子である。シクロデキストリンは、包接複合体を形成して薬物を隔離する。シクロデキストリンと薬物との複合体形成については広く調査されている。水溶性ポリマーが、複合体形成の過程でシクロデキストリンおよび薬物と相互作用して、このポリマーと共複合化して薬物とシクロデキストリンとの安定化された複合体を形成することが知られている。この複合体は、古典的なシクロデキストリン−薬物複合体よりも安定である。一例として、ＨＰＭＣは水溶性であるため、このポリマーをＨＰ−ｂ−ＣＤと一緒に溶融状態で使用することで、ＡＵＣ形状を増加させる水溶性製剤を作製することが期待される。非限定的な例では、このアプローチはまた、ナノ粒子ベースの製剤のためのＡＵＣ形状を増加させる固体製剤の水溶性を封鎖し、改善するために使用されてもよい。
【０１２０】
共沈物
【０１２１】
共沈物イトラコナゾール製剤は、薬理学的に不活性な高分子材料との共沈物の形成によって調製することができる。種々の水溶性ポリマーを用いてＡＵＣ形状を増加させる製剤を作製するための分子状の固体分散体または共沈物の形成が、インビトロ溶解速度および／またはインビボ吸収を大幅に遅らせ得ることが実証されている。粉末状生成物を調製する際には、溶解速度が粒子径の影響を大いに受けるため、一般的に粒子径を小さくするために粉砕が使用される。さらに、強い力（例えば粉砕）は、表面エネルギーを増大させ、結晶格子のゆがみとともに、粒子径の減少を引き起こし得る。イトラコナゾールをヒドロキシプロピルメチルセルロース、β−シクロデキストリン、キチンおよびキトサン、結晶セルロースならびにゼラチンと共粉砕することで、ＡＵＣ形状の増加が得られるように溶解特性を高めることができる。非限定的な例では、このアプローチはまた、ＡＵＣ形状を増加させる固体製剤の水溶性を封鎖し、改善するために使用されてもよい。
【０１２２】
分散を強化するペプチド
【０１２３】
組成物は、２個もしくはそれより多くのロイシン残基を含有する１種もしくは複数のジペプチドまたはトリペプチドを含み得る。更なる非限定的な例では、分散を強化するペプチドを開示する米国特許第６，８３５，３７２号明細書の全体が参照により援用される。この特許は、ジロイシルを含有するジペプチド（例えば、ジロイシン）およびトリペプチドが、粉末状組成物の分散性を高めるそれらの能力の点で優れているという発見を記載している。
【０１２４】
別の実施形態では、アミノ酸を含む高分散性粒子が投与される。疎水性アミノ酸が好ましい。適切なアミノ酸として、天然に存在する疎水性アミノ酸および天然には存在しない疎水性アミノ酸が挙げられる。天然に存在する疎水性アミノ酸の中には、天然には存在しないアミノ酸を含むがこれらに限定されないものがあり、例えば、β−アミノ酸が含まれる。疎水性アミノ酸のＤ／Ｌ構成およびラセミ体の両方を用いることができる。適切な疎水性アミノ酸はまた、アミノ酸アナログを含むことができる。本明細書で使用される場合、アミノ酸アナログは、次式−ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＯ−を有するアミノ酸のＤまたはＬ構成を含み、式中、Ｒは、脂肪族基、置換脂肪族基、ベンジル基、置換ベンジル基、芳香族基または置換芳香族基であり、かつＲは、天然に存在するアミノ酸の側鎖に対応しない。本明細書で使用される場合、脂肪族基は、完全に飽和しており、窒素、酸素または硫黄などの１個もしくは２個のヘテロ原子を含有し、かつ／または１個もしくは複数の不飽和単位を含有する直鎖状、分岐鎖状もしくは環状のＣ１〜Ｃ８炭化水素を含む。芳香族基として、炭素環式芳香族基、例えばフェニルおよびナフチル、ならびに複素環式芳香族基、例えばイミダゾリル、インドリル、チエニル、フラニル、ピリジル、ピラニル、オキサゾリル、ベンゾチエニル、ベンゾフラニル、キノリニル、イソキノリニルおよびアクリジニルが挙げられる。
【０１２５】
脂肪族基、芳香族基またはベンジル基上の適切な置換基として、−ＯＨ、ハロゲン（−Ｂｒ、−Ｃｌ、−Ｉおよび−Ｆ）、−Ｏ（脂肪族基、置換脂肪族基、ベンジル基、置換ベンジル基、アリール基または置換アリール基）、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨ（脂肪族基、置換脂肪族基、ベンジル基、置換ベンジル基、アリール基または置換アリール基）、−Ｎ（脂肪族基、置換脂肪族基、ベンジル基、置換ベンジル基、アリール基または置換アリール基）２、−ＣＯＯ（脂肪族基、置換脂肪族基、ベンジル基、置換ベンジル基、アリール基または置換アリール基）、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨ（脂肪族基、置換脂肪族基、ベンジル基、置換ベンジル基、アリール基または置換アリール基）、−ＳＨ、−Ｓ（脂肪族基、置換脂肪族基、ベンジル基、置換ベンジル基、芳香族基または置換芳香族基）および−ＮＨ−Ｃ（．ｄｂｄ．ＮＨ）−ＮＨ２が挙げられる。置換ベンジル基または置換芳香族基はまた、置換基として脂肪族基または置換脂肪族基を有していてもよい。置換脂肪族基はまた、置換基としてベンジル基、置換ベンジル基、アリール基または置換アリール基を有していてもよい。置換脂肪族基、置換芳香族基または置換ベンジル基は、１個または複数の置換基を有していてもよい。アミノ酸置換基を修飾することにより、例えば、親水性である天然アミノ酸の親油性または疎水性を高めることができる。
【０１２６】
多くの適切なアミノ酸、アミノ酸アナログおよびそれらの塩は、商業的に得ることができる。他のものは、当該技術分野で知られている方法で合成することができる。
【０１２７】
疎水性は、一般的に、非極性溶媒と水との間のアミノ酸の分配に関して定義される。疎水性アミノ酸は、非極性溶媒に優先傾向を示す酸である。アミノ酸の相対的な疎水性は、グリシンの値が０．５である疎水性スケールで表すことができる。そのようなスケールに関して、水に対する優先傾向を有するアミノ酸は０．５未満の値を有し、非極性溶媒に対する優先傾向を有するアミノ酸は０．５を上回る値を有する。本明細書で使用される場合、疎水性アミノ酸という用語は、疎水性スケールに関して、０．５より高いかそれに等しい値を有するアミノ酸、言い換えれば、少なくともグリシンの値と等しい非極性酸中で分配される傾向を有するアミノ酸を指す。
【０１２８】
用いることができるアミノ酸の例として、グリシン、プロリン、アラニン、システイン、メチオニン、バリン、ロイシン、チオシン、イソロイシン、フェニルアラニン、トリプトファンが挙げられるが、これらに限定されない。好ましい疎水性アミノ酸として、ロイシン、イソロイシン、アラニン、バリン、フェニルアラニンおよびグリシンが挙げられる。疎水性アミノ酸の組み合わせも用いることができる。さらに、全体の組み合わせが疎水性である疎水性アミノ酸と親水性（水中で優先的に分配される）アミノ酸との組み合わせも用いることができる。
【０１２９】
アミノ酸は、本発明の粒子中に少なくとも１０重量％の量で存在し得る。好ましくは、アミノ酸は、約２０重量％〜約８０重量％の範囲の量で粒子中に存在し得る。疎水性アミノ酸の塩は、本発明の粒子中に少なくとも１０重量％の量で存在し得る。好ましくは、アミノ酸塩は、約２０重量％〜約８０重量％の範囲の量で粒子中に存在する。好ましい実施形態では、粒子は、約０．４ｇ／ｃｍ３未満のタップ密度を有する。
【０１３０】
アミノ酸を含む粒子を形成し、送達する方法は、「Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｓｉｍｐｌｅ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄｓ  ｔｏ  Ｆｏｒｍ  Ｐｏｒｏｕｓ  Ｐａｒｔｉｃｌｅｓ  Ｄｕｒｉｎｇ  Ｓｐｒａｙ  Ｄｒｙｉｎｇ（噴霧乾燥中に多孔質粒子を形成するための単純アミノ酸の使用）」と題する米国特許第６，５８６，００８号明細書に記載されており、その教示はその全体が参照により本明細書に援用される。
【０１３１】
タンパク質／アミノ酸
【０１３２】
タンパク質の医薬品添加物として、アルブミン、例えばヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、組換えヒトアルブミン（ｒＨＡ）、ゼラチン、カゼイン、ヘモグロビンなどを挙げることができる。緩衝能でも機能し得る適切なアミノ酸（本発明のジロイシル−ペプチド以外）として、アラニン、グリシン、アルギニン、ベタイン、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、システイン、リシン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチオニン、フェニルアラニン、アスパルテーム、チロシン、トリプトファンなどが挙げられる。好ましいのは、分散剤として機能するアミノ酸およびポリペプチドである。このカテゴリーに属するアミノ酸として、疎水性アミノ酸、例えばロイシン、バリン、イソロイシン、トリプトファン、アラニン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、ヒスチジンおよびプロリンが挙げられる。分散性を強化するペプチドの医薬品添加物として、上記のような１種または複数の疎水性アミノ酸成分を含む二量体、三量体、四量体および五量体が挙げられる。
【０１３３】
炭水化物
【０１３４】
非限定的な例では、炭水化物の医薬品添加物として、単糖類、例えばフルクトース、マルトース、ガラクトース、グルコース、Ｄ−マンノース、ソルボースなど；二糖類、例えばラクトース、スクロース、トレハロース、セロビオースなど；多糖類、例えばラフィノース、メレジトース、マルトデキストリン、デキストラン、デンプンなど；アルジトール類、例えばマンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトール、ソルビトール（グルシトール）、ピラノシルソルビトール、ミオイノシトール、イソマルト、トレハロースなどが挙げられ得る。
【０１３５】
ポリマー
【０１３６】
非限定的な例では、組成物としてまた、高分子の医薬品添加物／添加剤、例えば、ポリビニルピロリドン、誘導体化セルロース、例えばヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロースおよびヒドロキシプロピルメチルセルロース、フィコールズ（高分子糖）、ヒドロキシエチルデンプン、デキストレート（非限定的な例では、シクロデキストリンとして、２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、２−ヒドロキシプロピル−γ−シクロデキストリン、ランダムにメチル化されたβ−シクロデキストリン、ジメチル−α−シクロデキストリン、ジメチル−β−シクロデキストリン、マルトシル−α−シクロデキストリン、グルコシル−１−α−シクロデキストリン、グルコシル−２−α−シクロデキストリン、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリンおよびスルホブチルエーテル−β−シクロデキストリンを挙げることができる）、ポリエチレングリコールを挙げることができ、ペクチンを使用することもできる。
【０１３７】
投与される高分散性粒子は、生物活性剤と、生体適合性、好ましくは生分解性のポリマー、コポリマーまたはブレンドとを含む。ポリマーは、以下を含む粒子の異なる特性を最適化するように調整されてもよい：ｉ）送達される薬剤とポリマーとの間の相互作用により、送達時の薬剤の安定化および活性の保持を提供する；ｉｉ）ポリマーの分解速度ひいては薬物放出プロファイルの速度；ｉｉｉ）表面特性および化学修飾による標的化能力；ならびにｉｖ）粒子の空隙率。
【０１３８】
ポリ無水物などの表面侵食性ポリマーを粒子の形成に使用してもよい。例えば、ポリ［（ｐ−カルボキシフェノキシ）ヘキサン無水物］（ＰＣＰＨ）などのポリ無水物を使用してもよい。生分解性ポリ無水物は、米国特許第４，８５７，３１１号明細書に記載されている。バルク侵食性ポリマー、例えばポリ（ヒドロキシ酸）を含むポリエステルをベースにしたものを使用することもできる。例えば、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ポリ乳酸（ＰＬＡ）またはそれらのコポリマーを粒子の形成に使用してもよい。ポリエステルはまた、アミノ酸などの荷電基または官能化可能基を有していてもよい。好ましい実施形態では、制御された放出特性を有する粒子は、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）などの界面活性剤を組み込んだポリ（Ｄ，Ｌ−乳酸）および／またはポリ（ＤＬ−乳酸−コ−グリコール酸）（「ＰＬＧＡ」）の形態をとり得る。
【０１３９】
他のポリマーとして、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリアルキレン類、例えばポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ（エチレングリコール）、ポリ（エチレンオキシド）、ポリ（エチレンテレフタレート）、ポリビニル化合物、例えばポリビニルアルコール、ポリビニルエーテルおよびポリビニルエステル、アクリル酸とメタクリル酸のポリマー、セルロースおよび他の多糖類、ならびにペプチドもしくはタンパク質、またはそれらのコポリマーもしくはブレンドが挙げられる。ポリマーは、異なる制御された薬物送達用途のために、生体内での適切な安定性および分解速度を有するように選択されるか、または修飾されていてもよい。
【０１４０】
高分散性粒子は、Ｈｒｋａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，２８：４７３６−４７３９；およびＨｒｋａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｐｏｌｙ（Ｌ−Ｌａｃｔｉｃ  ａｃｉｄ−ｃｏ−ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ）Ｇｒａｆｔ  Ｃｏｐｏｌｙｍｅｒｓ：Ａ  Ｃｌａｓｓ  ｏｆ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ」ｉｎ  Ｈｙｄｒｏｇｅｌｓ  ａｎｄ  Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  ｆｏｒ  Ｂｉｏａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（ＡＣＳ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ  Ｎｏ．６２７），Ｒａｐｈａｅｌ  Ｍ，Ｏｔｔｅｎｂｒｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｄｓ．，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｃｈａｐｔｅｒ  ８，ｐｐ．９３−１０１，１９９６に記載されているように、官能化ポリエステルグラフトコポリマーから形成することができる。
【０１４１】
本発明の好ましい実施形態では、生物活性剤およびリン脂質を含む高分散性粒子が投与される。適切なリン脂質の例として、とりわけ、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトールおよびそれらの組み合わせが挙げられる。リン脂質の具体例として、ホスファチジルコリンジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）またはそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。他のリン脂質は、当業者に知られている。好ましい実施形態では、リン脂質は肺に内因性である。
【０１４２】
リン脂質は、約０重量％〜約９０重量％の範囲の量で粒子中に存在し得る。より一般的には、リン脂質は、約１０重量％〜約６０重量％の範囲の量で粒子中に存在し得る。
【０１４３】
本発明の別の実施形態では、リン脂質またはそれらの組み合わせは、制御された放出特性を高分散性粒子に付与するように選択される。特定のリン脂質の相転移温度は、患者の生理的体温よりも低い温度、およそその温度、または患者の生理的体温よりも高い温度であってもよい。好ましい相転移温度は、３０℃〜５０℃の範囲（例えば、患者の通常の体温の＋／１０度以内）である。相転移温度に応じてリン脂質またはリン脂質の組み合わせを選択することにより、制御された放出特性を有するように粒子を調整することができる。例えば、患者の体温よりも高い相転移温度を有するリン脂質またはリン脂質の組み合わせを含む粒子を投与することにより、ドーパミン前駆体、アゴニスト、または前駆体および／もしくはアゴニストの任意の組み合わせの放出速度を遅らせることができる。一方、より低い転移温度を有するリン脂質を粒子中に含むことにより、迅速な放出を得ることができる。
【０１４４】
味覚マスキング、フレーバー他
【０１４５】
上記のとおり、本明細書に開示されるイトラコナゾール製剤および関連組成物は、１種または複数の味覚マスキング剤、例えば着香料、無機塩（例えば、塩化ナトリウム）、甘味料、酸化防止剤、帯電防止剤、界面活性剤（例えば、「ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０」および「ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０」などのポリソルベート類）、ソルビタンエステル、サッカリン（例えば、サッカリンナトリウムまたは他のサッカリン形態であり、本明細書の他の箇所で言及されているように、特定の実施形態において、イトラコナゾールに対して特定の濃度または特定のモル比で存在してもよい）、重炭酸塩、シクロデキストリン、脂質（例えば、リン脂質、例えばレシチンおよび他のホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン）、脂肪酸および脂肪酸エステル、ステロイド（例えば、コレステロール）、およびキレート剤（例えば、ＥＤＴＡ、亜鉛および他のそのような適切なカチオン）をさらに含み得る。本発明による組成物中で使用するのに適した他の医薬品添加物および／または添加剤は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ」，１９ｔｈ  ｅｄ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｌｉａｍｓ，（１９９５）および「Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ'ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ」，５２ｎｄ  ｅｄ．，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ，Ｍｏｎｔｖａｌｅ，Ｎ．Ｊ．（１９９８）に列挙されている。
【０１４６】
非限定的な例では、イトラコナゾール製剤における味覚マスキング剤は、香味料、甘味料、および他の種々のコーティング戦略、例として、糖類、例えばスクロース、デキストロースおよびラクトース、カルボン酸、メントール、アミノ酸もしくはアミノ酸誘導体、例えばアルギニン、リシンおよびグルタミン酸一ナトリウム、および／または合成香味油および香味芳香剤および／または天然油、植物、葉、花、果実などからの抽出物、ならびにそれらの組み合わせの使用を含み得る。これらには、シナモン油、ウィンターグリーン油、ペパーミント油、クローバー油、ベイ油、アニス油、ユーカリ、バニラ、柑橘系油、例えばレモン油、オレンジ油、グレープ油およびグレープフルーツ油、リンゴ、モモ、西洋ナシ、イチゴ、ラズベリー、チェリー、プラム、パイナップル、アプリコットなどを含むフルーツエッセンスが含まれ得る。追加の甘味料として、スクロース、デキストロース、アスパルテーム、アセスルファム−Ｋ、スクラロースおよびサッカリン（例えば、サッカリンナトリウムまたは他のサッカリンの形態であり、本明細書の他の箇所で言及されているように、特定の実施形態において、イトラコナゾールに対して特定の濃度または特定のモル比で存在してもよい）、有機酸（非限定的な例では、クエン酸およびアスパラギン酸）が挙げられる。そのようなフレーバーは、約０．０５重量％〜約４重量％の量で存在してもよく、フレーバーに及ぼす効果の効力、フレーバー剤の溶解度、他の製剤成分の溶解度または他の物理化学的特性もしくは薬物動態学的特性に及ぼすフレーバー剤の効果のうちの１つもしくは複数の要因、または他の要因として、より低い量またはより高い量で存在してもよい。
【０１４７】
吸入された薬物の不快な味を改善またはマスキングするための別のアプローチは、薬物の溶解度を低下させることであってもよく、例えば、薬物は、味覚受容体と相互作用するために溶解しなければならない。したがって、固形の薬物を送達することは、味覚反応を回避し、所望の改善された味覚影響をもたらし得る。
【０１４８】
さらに、脂溶性ベシクルの生成により、味覚マスキングが達成され得る。追加のコーティング剤またはキャッピング剤として、デキストレート（非限定的な例では、シクロデキストリンとして、２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、２−ヒドロキシプロピル−γ−シクロデキストリン、ランダムにメチル化されたβ−シクロデキストリン、ジメチル−α−シクロデキストリン、ジメチル−β−シクロデキストリン、マルトシル−α−シクロデキストリン、グルコシル−１−α−シクロデキストリン、グルコシル−２−α−シクロデキストリン、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、およびスルホブチルエーテル−β−シクロデキストリンを挙げることができる）、修飾されたセルロース、例えばエチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリアルキレングリコール、ポリアルキレンオキシド、糖類および糖アルコール類、ワックス、シェラック、アクリルおよびそれらの混合物が挙げられる。
【０１４９】
特定の他の好ましい実施形態による代替案は、イトラコナゾール製剤中に味覚修飾剤を含めることである。これらの実施形態では、イトラコナゾールと混合したり、イトラコナゾール上にコートしたり、それ以外の方法で組み合わせたりする味覚マスキング物質を製剤中に含めることが考えられる。これらの製剤中の１種または複数のそのような薬剤を含めることはまた、イトラコナゾールに加えて製剤中に含まれる追加の薬理学的に活性な化合物、例えば、ピルフェニドンまたはピリドンアナログ化合物などの別の抗線維化剤、または粘液溶解薬の味覚を改善するのに役立ち得る。そのような味覚修飾物質の非限定的な例として、酸性リン脂質、リゾリン脂質、コハク酸トコフェロールポリエチレングリコールおよびエンボン酸（パモエート）が挙げられる。これらの薬剤の多くは、単独でもしくはイトラコナゾールと組み合わせて、または別個の実施形態では、エアロゾル投与のためのイトラコナゾールと組み合わせて使用することができる。
【０１５０】
粘液溶解薬
【０１５１】
イトラコナゾールによるエアロゾル処理中に喀痰の粘度を低下させる薬剤を組み合わせる製剤を製造するための方法には、以下が含まれる。これらの薬剤は、固定併用で調製してもよいし、エアロゾル型イトラコナゾール療法に連続して投与してもよい。
【０１５２】
最も一般的に処方される薬剤は、Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）であり、これは高分子間のジスルフィド橋を壊すことによってｉｎ  ｖｉｔｒｏで粘液を解重合させる。そのような喀痰の粘り気の低下は、呼吸器からの除去を容易にすると考えられる。さらに、ＮＡＣは酸素ラジカル捕捉剤として作用し得る。ＮＡＣは、経口または吸入のいずれかで摂取することができる。これらの２つの投与方法の違いは、正式には研究されていない。経口投与後、ＮＡＣは肝臓および腸内で抗酸化物質グルタチオンの前駆体であるシステインに還元される。抗酸化特性は、嚢胞性線維症（ＣＦ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）または肺線維症（例えば、特発性肺線維症）における肺機能の低下を防止するのに有用であり得る。霧状にされたＮＡＣは、粘り気を減らして喀痰の喀出を改善するために、特にヨーロッパ大陸ではＣＦ患者に一般的に処方されている。これの最終的な目標は、ＣＦの肺機能の低下を遅らせることである。
【０１５３】
Ｌ−リシン−Ｎ−アセチルシステイン酸（ＡＣＣ）またはナシステリン（ＮＡＬ）は、粘液溶解特性、抗酸化特性および抗炎症特性を有する新規な去痰薬である。化学的にはＡＣＣの塩である。この薬物は、Ｌ−リシンとＡＣＣとの相乗的な粘液溶解活性のために、親分子ＡＣＣよりも優れた活性を呈示すると見られる。さらに、そのほぼ中性のｐＨ（６．２）は、気管支痙攣の発生率が非常に低い肺における投与を可能にし、これは酸性のＡＣＣ（ｐＨ２．２）の場合には該当しない。ＮＡＬは、必要とされる肺投与量が非常に高く（約２ｍｇ）、微粒子化された薬物は粘着性および凝集性があり、したがって再分散可能な製剤を製造することに問題が生じるため、吸入型の製剤化が困難である。ＮＡＬは最初、クロロフルオロカーボン（ＣＦＣ）を含有する定量吸入器（ＭＤＩ）として開発されたが、それはこの形態が前臨床試験と最初の臨床試験を開始するために開発するのが最も簡単で最も速かったからである。ＮＡＬ  ＭＤＩは、１パフあたり２ｍｇを送達し、そこから約１０％が健康なボランティアの肺に到達することができた。この製剤の主要な一つの問題点は、必要投与量を得るためには１２回ものパフが必要であったため、患者コンプライアンスであった。さらに、医薬品からのＣＦＣガスの段階的な除去は、患者集団の大部分に見られる調整の問題（１２）と結び付いているため、ＮＡＬの新しい生薬形態の開発につながっている。ＭＤＩのコンプライアンスの問題を解決し、幼児を含む可能な限り幅広い患者集団に薬物を投与するための最適で再現可能な快適な方法と組み合わせるために、乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）製剤が選択された。
【０１５４】
ＮＡＬのＤＰＩ製剤は、従来とは異なるラクトース（通常、錠剤の直接圧縮のために確保されている）、すなわち、ローラー乾燥（ＲＤ）無水β−ラクトースの使用を伴っていた。単回量ＤＰＩデバイスを用いてインビトロでテストした場合、この粉末製剤は公称用量の少なくとも３０％の微粒子画分（ＦＰＦ）、すなわちＭＤＩの３倍の微粒子画分をもたらす。このアプローチは、同時投与または固定併用療法のいずれかのためにイトラコナゾールと組み合わせて使用することができる。
【０１５５】
粘液溶解活性に加えて、嚢胞性線維症（ＣＦ）患者の気道内での過剰な好中球エラスターゼ活性は、進行性の肺障害をもたらす。還元剤によるエラスターゼのジスルフィド結合の破壊は、エラスターゼの酵素活性を修飾し得る。エラスターゼ活性に及ぼす影響を調べるため、天然に存在するジチオール還元系として、１）大腸菌チオレドキシン（Ｔｒｘ）系、２）組換えヒトチオレドキシン（ｒｈＴｒｘ）系、および３）ジヒドロリポ酸（ＤＨＬＡ）系の３つの系を使用した。Ｔｒｘ系は、Ｔｒｘ、Ｔｒｘ還元酵素、およびＮＡＤＰＨから成っていた。エラスターゼ活性の分光光度アッセイで示されるように、２つのＴｒｘシステムとＤＨＬＡは、精製ヒト好中球エラスターゼおよびＣＦ喀痰の可溶相（ゾル）中に存在するエラスチン分解活性を阻害した。３つのＴｒｘシステムの構成要素のいずれかを除去することで、阻害を防ぐことができた。モノチオールのＮ−アセチルシステインおよび還元グルタチオンと比較して、ジチオールのエラスターゼ阻害作用はより強かった。治験ツールとしてのＴｒｘを合理化するために、安定な還元型のｒｈＴｒｘを合成し、単一成分として使用した。還元されたｒｈＴｒｘは、ＮＡＤＰＨまたはＴｒｘ還元酵素なしで精製エラスターゼおよびＣＦ喀痰ゾルエラスターゼを阻害した。ＴｒｘおよびＤＨＬＡは粘液溶解効果を有しているため、粘液溶解処理後のエラスターゼ活性の変化を調べた。未処理のＣＦ喀痰を、還元されたｒｈＴｒｘ、Ｔｒｘ系、ＤＨＬＡまたはＤＮａｓｅで直接処理した。Ｔｒｘ系およびＤＨＬＡはエラスターゼ活性を増加させなかったが、還元されたｒｈＴｒｘ処理はゾルエラスターゼ活性を６０％増加させた。対照的に、ＤＮａｓｅ処理後のエラスターゼ活性は１９０％増加した。ＴｒｘおよびＤＨＬＡがエラスターゼ活性を制限する能力と、それらの粘液溶解効果とを組み合わせることで、これらの化合物はＣＦの潜在的な治療法となる。
【０１５６】
さらに、嚢胞性線維症（ＣＦ）患者の喀痰には存在するが、正常な気道液には存在しないＦ−アクチンとＤＮＡの束は、感染した気道液のクリアランスを阻害し、ＣＦの病理を悪化させる喀痰の粘弾性特性の変化に寄与する。これらの有害特性を変化させるための一つのアプローチは、ＤＮＡを構成モノマーに酵素的に解重合させるＤＮａｓｅと、Ｆ−アクチンを小さな断片に切断するのに役立つゲルゾリンを用いて、これらのフィラメント状の凝集体を除去することである。ＤＮＡおよびＦ−アクチンの表面の負の電荷密度が高いことは、単独で強い静電反発を示すこれらのフィラメントの束が、気道液中に分布する多価カチオン、例えばヒストン、抗菌ペプチド、および他の正に帯電した分子によって安定化され得ることを示唆している。さらに、実際のところ、ヒストンＨ１またはリゾチームの添加後に形成されたＤＮＡまたはＦ−アクチンの束は、可溶性の多価アニオン、例えば高分子アスパラギン酸塩またはグルタミン酸塩によって効率よく溶解されることが観察されている。ポリアスパラギン酸塩またはポリグルタミン酸塩の添加はまた、ＣＦ喀痰中のＤＮＡおよびアクチン含有の束を分散させ、これらのサンプルの弾性率をＤＮａｓｅ  Ｉまたはゲルゾリンで処理した後に得られるものに匹敵するレベルにまで低下させる。また、ヒストンＨ１で形成されたＤＮＡの束を含有するサンプルにポリアスパラギン酸を添加すると、ＤＮａｓｅ活性が増加した。ＣＦ喀痰に添加すると、ポリアスパラギン酸は細菌の増殖を著しく減少させ、これは内因性抗菌因子の活性化を示唆するものであった。これらの知見は、可溶性の多価アニオンが単独で、または他の粘液溶解薬と組み合わせて、ＣＦ喀痰中に形成される荷電バイオポリマーの大きな束を選択的に解離する可能性があることを示唆している。
【０１５７】
したがって、ＮＡＣ、未分画ヘパリン、還元グルタチオン、ジチオール、Ｔｒｘ、ＤＨＬＡ、他のモノチオール、ＤＮＡｓｅ、ドルナーゼアルファ、高血圧製剤（例えば、約３５０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇより大きいオスモラリティー）、多価アニオン、例えば高分子アスパラギン酸塩またはグルタミン酸塩、グリコシダーゼおよび上記に列挙した他の例は、エアロゾル投与のためのイトラコナゾールおよび他の粘液溶解薬と組み合わせて、喀痰粘度の減少からのより良好な分布により抗線維化活性および／または抗炎症活性を改善し、肺機能の改善（改善された喀痰移動性および粘膜毛様体クリアランスによるもの）ならびに免疫炎症反応からの肺組織損傷の減少により臨床転帰を改善することができる。
【０１５８】
いくつかの実施形態では、方法はさらに、哺乳類への１種または複数の追加の治療薬の投与を含む。
［実施例］
【０１５９】
ブレオマイシン誘発性肺線維症マウスモデルにおけるヒト有効性との関連性は確立されていないため（ただし、前臨床試験では十分に確立されている（Ｍｏｅｌｌｅｒ，２００８））、市販の抗線維化薬、すなわちピルフェニドンおよびニンテダニブを陽性対照として、新しいバージョンのブレオマイシン誘発性肺線維症マウス試験プロトコルを設計した。別の抗真菌薬であるフルコナゾールも、抗真菌活性だけでは肺線維症を軽減することができないことを示すためにテストを行った。
【０１６０】
我々の研究では、血漿中曝露レベルが３９４±６６および８９９±１９２ｎｇ／ｍＬとなる７．５および１５ｍｇ／ｋｇでのイトラコナゾール単独の治療により、１）修正アシュクロフトスコア、２）コラーゲン、炎症およびαＳＭＡの染色面積の減少を含む線維化活性の有意な減少が得られたことを示した。
【０１６１】
クリニックでのイトラコナゾールの一般的な用量レベルは、１００ｍｇ（ＰＯ／ＱＤ）、２００ｍｇ（ＰＯ／ＱＤ）または２００ｍｇ（ＰＯ／ＢＩＤ）である。ピーク血漿中レベルには、経口投与後２〜５時間で到達する。非線形な薬物動態の結果として、イトラコナゾールは多回投与時に血漿中に蓄積する。定常状態血漿中レベルには、一般的に経口投与後１５日目頃に到達する。定常状態時のＣｍａｘは、それぞれ１００ｍｇ（ＰＯ／ＱＤ）で５００ｎｇ／ｍＬ、２００ｍｇ（ＰＯ／ＱＤ）で１１００ｎｇ／ｍＬ、２００ｍｇ（ＰＯ／ＢＩＤ）で２０００ｎｇ／ｍＬと報告されており（スポラノックス−イトラコナゾールカプセル製品ラベル）、我々のモデル研究において７．５ｍｇ／ｋｇおよび１５ｍｇ／ｋｇで観察された有効用量レベルが臨床的に許容される用量の範囲内であることが示唆された。
【０１６２】
さらに、同じ研究では、イトラコナゾールの抗線維化活性が、２００ｍｇ／ｋｇのピルフェニドンよりも優れており、ＩＰＦ患者の治療薬として最近承認されたニンテダニブ６０ｍｇ／ｋｇの抗線維化活性よりも優れていないにしても同等であることが明らかになった。
【０１６３】
また、イトラコナゾールと構造的に類似した別の抗真菌薬であるフルコナゾールは、７０ｍｇ／ｋｇの１日用量で線維症関連評価項目測定において検出可能な変化を示さず、その結果、血漿中レベルは５６０９０±４９４７ｎｇ／ｍＬとなり、１５ｍｇ／ｋｇでのイトラコナゾールの血漿中レベルの６２倍以上であることが研究により実証された。
【０１６４】
現時点でイトラコナゾールの抗線維化作用の正確なメカニズムは明らかではないが、イトラコナゾールの治療はＩＰＦ患者に有益であると考えられており、ＩＰＦ患者に対してイトラコナゾール単独で治療するか、またはＩＰＦ患者に有益な効果を有する可能性のある他の薬剤と併用して治療することが提案される。イトラコナゾールは、静脈内投与、鼻腔内／気管内投与または経口投与が可能である。
【０１６５】
イトラコナゾールの経口投与量を、ブレオマイシン誘発性マウスモデルにおけるイトラコナゾールの種々の吸入製剤からのものと比較した結果、マウスモデルにおけるイトラコナゾールの治療効果の向上が達成され、これにより肺線維症治療における有効用量を大幅に低下させ、特に長期使用時に起こり得る副作用を軽減することができた。
【０１６６】
実施例１  陽性対照および陰性対照の確立
【０１６７】
４０匹の雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Ｎａｎｊｉｎｇ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  ＮａｎｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）を１日目に無作為に２つの群に分け、一方の群（対照群または第１群と呼ぶ）を１０匹の動物、他方の群を３０匹の動物とした。対照群の動物にはＰＢＳを２ｍＬ／ｋｇの用量で気管内投与し、他の動物にはブレオマイシン（Ｃａｔ＃ＨＹ−１７５６５、ＭＣＥ）を０．６６ｍｇ／ｋｇの用量で気管内投与した。
【０１６８】
５日目に、ブレオマイシン治療を行ったマウスを無作為に３つの群に分け（第２群〜第４群と呼ぶ、ｎ＝１０）、賦形剤（０．５％メチルセルロース）、ニンテダニブ（Ｋａｎｇｍａｎｌｉｎ  Ｃｏ．Ｌｔｄ．、６．０ｍｇ／ｍＬの最終濃度となるよう０．５％メチルセルロース中で調製）およびフルコナゾール（Ｋａｎｇｍａｎｌｉｎ  Ｃｏ．Ｌｔｄ．、７．０ｍｇ／ｍＬの最終濃度となるよう０．５％メチルセルロース中で調製）を、それぞれ１０ｍＬ／ｋｇ、６０ｍｇ／ｋｇおよび７０ｍｇ／ｋｇの１日用量で経口投与した。対照群のマウスには、賦形剤（０．５％メチルセルロース）を１０ｍＬ／ｋｇの１日用量で投与した。マウスの体重を測定し、１日目、５日目、１２日目、１９日目および２５日目に記録した。
【０１６９】
２５日目の薬物投与の２時間後に、全動物をペントバルビタール（腹腔内投与、６５ｍｇ／ｋｇ）で麻酔した。眼窩静脈から血液サンプルを採取し、ＥＤＴＡ−Ｋ２（ＫＡＮＧ  ＪＩＡＮ、Ｃａｔ＃ＫＪ２０２）でプレコートしたチューブに入れ、４０００×ｇで４℃にて１０分間遠心分離し、次いで−８０℃で保存し、血漿中薬物レベルを測定した。次いで、気管を露出させ、喉頭に近い気管内に生理食塩水０．３ｍＬを３回注射することにより、各マウスから気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）を採取した。ＢＡＬＦ採取後、マウスを生理食塩水で灌流し、各マウスから４つの肺葉をすべて採取し、１０％ＮＢＦ溶液で固定し、パラフィン包埋し、５μｍ厚の切片に切断した。切片をキシレンおよびエタノールで脱パラフィン化し、ヘマトキシリン−エオジン、マッソントリクロームおよびα−ＳＭＡ  ＩＨＣ染色に付した。
【０１７０】
２０μＬの気管支肺胞洗浄液をトリパンブルー２０Ｌと混合し、細胞数を測定した。次いで、ＢＡＬＦ中の細胞を、Ｃｙｔｏｓｐｉｎａｔを用いて１０００ｒｐｍで５分間濃縮し、スライド上に塗抹し、ディフ・クイック染色で染色した。細胞型（肺胞マクロファージ、好中球またはリンパ球）を、標準的なヘモサイトメーターを用いて少なくとも２００個の細胞を計数することによって決定した。残りのＢＡＬＦを遠心分離し、上清を回収し、可溶性コラーゲン分析のために−８０℃で保存した。
【０１７１】
ヘマトキシリン・エオジン染色を用いて組織内の炎症細胞を同定および定量化し、ＡｐｅｒｉｏＳｃａｎＳｃｏｐｅソフトウェアを用いて総炎症領域を算出した。
【０１７２】
マッソントリクローム染色を有する切片を、下記表１の修正アシュクロフト線維症評価基準に従って、肺線維症についてスコア化した。各肺葉は、主気管支からの距離に応じて４つの部分、すなわち上部、中位上部、中位下部、下部に分け、それぞれ別々にスコア化し、後で平均化した。
【表１】
2021517558.tif 000003
【０１７３】
α−ＳＭＡは、線維化における特徴のはっきりとしたマーカーである。α−ＳＭＡの免疫組織化学的染色は、多くの場合、組織の線維化を特徴付けて定量化するために使用される。α−ＳＭＡの染色の増加は、多くの場合、コラーゲン産生筋線維芽細胞の蓄積を反映している。α−ＳＭＡ  ＩＨＣ染色の前に、脱パラフィン化された切片を、クエン酸抗原賦活液（０．０１Ｎクエン酸緩衝液、ｐＨ６．０）を用いて１００℃で１０分間処理し、次いでウサギポリクローナル抗α−ＳＭＡ（１：４００、ａｂ５６９４、Ａｂｃａｍ）で１時間インキュベートし、その後、ヤギ抗ウサギＨＲＰ（Ｋ４００３、Ｄａｋｏ）でインキュベートした。ＤＡＢ基質キット（ＤＡＢ００３１、Ｍａｉｘｉｎ、上海）を発色染色のために用いた。すべての切片をヘマトキシリンでさらに対比染色した。赤色α−ＳＭＡ染色領域を、ＡｐｅｒｉｏＩｍａｇｅＳｃｏｐｅプログラムを用いて算出した。
【０１７４】
統計分析は、スチューデントのＴ−検定、一元配置分散分析または二元配置分散分析、その後、有意であれば、ポストホックダネットの検定を用いて行った。Ｎが小さすぎる場合や、データがガウス分布に従わない場合は、マン・ホイットニーのようなノンパラメトリック検定を使用した。ｐ＜０．０５のときに差が有意であると見なした。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．０１。
【０１７５】
マウスの体重変化を図１に示した。第１群のマウスは実験が進むにつれて体重が増加したが、他の群のマウスは体重がわずかに減少するか、または変化しないままであった。投与２時間後の血漿中レベルは、ニンテダニブが１０７９ｎｇ／ｍＬで、フルコナゾールが５６０９０ｎｇ／ｍＬであった。
【０１７６】
ブレオマイシンは、図２に示すように、ＢＡＬＦのコラーゲンレベルの増加を引き起こし、炎症性および線維化反応の上昇を示唆していたが、ニンテダニブによる治療は、コラーゲンレベルを著しく低下させた。フルコナゾールを投与した動物では、コラーゲンレベルの低下は観察されなかった。ブレオマイシンによる治療はまた、総細胞数およびマクロファージ／単球数を増加させ、ニンテダニブによる治療は細胞数をある程度減少させた（図３を参照）。
【０１７７】
図４は、ヘマトキシリン−エオジン、マッソントリクローム、α−ＳＭＡ  ＩＨＣ染色分析結果を示したものである。期待したとおり、ブレオマイシンを投与した結果、炎症領域がより多くなり、修正アシュクロフトスコアがより高くなり、肺のα−ＳＭＡ染色が増加した。ニンテダニブ投与では、肺炎症領域、修正アシュクロフトスコア、およびα−ＳＭＡ染色領域（それぞれ８４％、３９％、３９％）が有意に減少し、こうしたことはフルコナゾール治療後には観察されなかった。
【０１７８】
我々の抗ＩＰＦ有効性研究の結果が再現可能であり、同じ動物疾患モデルで異なる薬物を用いた異なる研究の結果と比較できることが非常に重要である。ブレオマイシン誘発性ＩＰＦマウスモデルにおいて、（市販のＩＰＦ薬である）ニンテダニブを陽性対照として使用し、（市販のアゾール系抗真菌薬である）フルコナゾールを陰性対照として使用することで、動物モデルの妥当性が確認され、動物モデルを用いた上記の研究により、ニンテダニブの既知の抗ＩＰＦ有効性が再現された。
【０１７９】
さらに、血漿中レベルの測定値は抗真菌薬の有効レベルを超えていたが、フルコナゾールは有意な抗ＩＰＦ活性を示さなかったのに対し、ニンテダニブは有効であった。この研究の結果から明らかに、このクラスの薬物で知られている抗真菌活性は、抗ＩＰＦ活性に直接変換できないことが実証された。
【０１８０】
実施例２  イトラコナゾール抑制線維症の経口および併用治療
【０１８１】
５０匹の雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Ｇｅｍｐｈａｒｍａｔｅｃｈ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）を１日目に無作為に２つの群に分け、一方の群（対照群または第１群と呼ぶ）を１０匹の動物、他方の群を４０匹の動物とした。対照群の動物にはＰＢＳを２ｍＬ／ｋｇの用量で気管内投与し、他の動物にはブレオマイシン（Ｃａｔ＃ＨＹ−１７５６５、ＭＣＥ）を０．６６ｍｇ／ｋｇの用量で気管内投与した。
【０１８２】
５日目に、ブレオマイシン治療を行ったマウスを無作為に４つの群に分け（第２群〜第５群と呼ぶ、ｎ＝１０）、賦形剤（ＤＭＳＯ：ＰＥＧ４００＝１：９、Ｖ／Ｖ）、イトラコナゾール（Ｋａｎｇｍａｎｌｉｎ  Ｃｏ．Ｌｔｄ．、１．５ｍｇ／ｍＬの最終濃度となるようＤＭＳＯ／ＰＥＧ４００中で調製）、ニンテダニブ（Ｋａｎｇｍａｎｌｉｎ  Ｃｏ．  Ｌｔｄ．、６．０ｍｇ／ｍＬの最終濃度となるようＤＭＳＯ／ＰＥＧ４００中で調製）およびイトラコナゾール＋ニンテダニブ（Ｋａｎｇｍａｎｌｉｎ  Ｃｏ．Ｌｔｄ．、１．５ｍｇ／ｍＬおよび６．０ｍｇ／ｍＬの最終濃度となるようＤＭＳＯ／ＰＥＧ４００中で調製）を、それぞれ１０ｍＬ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、６０ｍｇ／ｋｇおよび１５＋６０ｍｇ／ｋｇの１日用量で経口投与した。対照群のマウスには、賦形剤（ＤＭＳＯ／ＰＥＧ４００）を１０ｍＬ／ｋｇの１日用量で投与した。マウスの体重を測定し、１日目、５日目、１２日目、１９日目および２１日目に記録した。
【０１８３】
２１日目の薬物投与の２時間後に、全動物をペントバルビタール（腹腔内投与、６０ｍｇ／ｋｇ）で麻酔した。血液サンプル、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）および肺葉を各マウスから採取し、次いで実施例１のプロトコルに従って処理した。
【０１８４】
投与２時間後の血漿中レベルは、イトラコナゾールが７００ｎｇ／ｍＬで、ニンテダニブが３１０ｎｇ／ｍＬであった。イトラコナゾールとニンテダニブを併用投与した場合、血漿中薬物レベルは、それぞれ５１８ｎｇ／ｍＬおよび３９７ｎｇ／ｍＬであった。
【０１８５】
実験中のマウスの体重を記録し、図５に示した。イトラコナゾールおよび／またはニンテダニブの投与により、ブレオマイシン誘発性体重減少がある程度抑制されたことがわかる。
【０１８６】
ＢＡＬＦコラーゲンと細胞学的解析結果を図６〜７に示した。モデル群、すなわち第２群と比較して、イトラコナゾール投与後、ニンテダニブ投与後および併用投与後の動物では、コラーゲンレベルおよび好中球数が減少した。さらに、図８に示すように、イトラコナゾール投与、ニンテダニブ投与および併用投与により、ブレオマイシン治療に起因したモデル群と比較して、肺炎症領域、修正アッシュクロフトスコア及びα−ＳＭＡ染色領域が有意に減少した。
【０１８７】
ブレオマイシン誘発性ＩＰＦマウスモデルにおけるイトラコナゾールおよびニンテダニブとの併用の研究から明らかに、臨床的に許容される血漿中レベルでイトラコナゾールはＩＰＦに対して高い有効性を示し、市販の抗ＩＰＦ薬物であるニンテダニブと比較しても遜色ないことが実証された。ＢＡＬＦ中のコラーゲン含有量から炎症細胞数、病理組織像に至るすべての指標が試験終了時までに有意な改善を示した。実施例１の研究からのフルコナゾールの否定的な結果に基づき、イトラコナゾールについて観察された活性は、その既知の抗真菌活性からは考えにくいものであり、新たな作用様式が関与しているはずである。さらに、併用療法では、それぞれの単剤療法に比べて改善の兆しが見られ（図６〜図７参照）、更なる研究が必要であった。
【０１８８】
実施例３  イトラコナゾール抑制線維症の吸入治療
【０１８９】
６０匹の雄性ＩＣＲマウス（ＳＨＡＮＧＨＡＩ  ＳＬＡＣ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＡＮＩＭＡＬ  ＣＯ．，ＬＴＤ）を１日目に無作為に２つの群に分け、一方の群（対照群または第１群と呼ぶ）を１０匹の動物、他方の群を５０匹の動物とした。マウスに１．５％ペントバルビタールナトリウム溶液を０．１ｍＬ／２０ｇの用量で腹腔内注射して麻酔をかけ、次いで背臥位にして固定化した。ヨウ素を使用して首の毛と皮膚を消毒した。後で、首の皮膚を切って気管を露出させた。０．９％塩化ナトリウム溶液（０．３５ＵＳＰ／ｍｌ、すなわちブレオマイシン３５０単位／ｍＬ）中のＰＢＳまたは塩酸ブレオマイシン（Ｈｉｓｕｎ  Ｐｆｉｚｅｒ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏ．，  ＬＴＤ、１７００１７１１）５０μＬを、噴霧ノズルに接続された高圧シリンジを用いて、対照群または他の群のマウスの気管内にミストとして速やかに噴霧した。最後に、皮膚を縫合および消毒し、マウスをケージに戻して回復させた。
【０１９０】
５日目に、ブレオマイシンで治療したマウスを無作為に６つの群（第２群〜第７群と呼ぶ）に分けた。薬物投与を、下記表２の投与計画に従って、５日目から２７日目まで行った。
【０１９１】
イトラコナゾール吸入のために、各マウスを１６×１３×９（縦×横×高さｃｍ）のキャビネットに入れた。５、１５または５０ｍｇ／ｍＬのイトラコナゾール製剤を圧縮式ネブライザーでキャビネット内に噴霧した。
【０１９２】
５０ｍｇ／ｍＬのイトラコナゾール製剤をキャビネット内に完全に充填した後、（液体クロマトグラフィー用の移動相２ｍＬを含有する）５０ｍＬのシリンジを使用して、イトラコナゾールの濃度を測定するために４８ｍＬの霧化液体を吸引した。シリンジを密封し、１０分間静置し、強く振り混ぜ、次いで液体クロマトグラフィー（ＬＣ）に送った。ＬＣの移動相はアセトニトリル−リン酸緩衝液（６５：３５）（６．８ｇのＫＨ２ＰＯ４を１０００ｍＬの純水に溶解し、次いでＮａＯＨでｐＨ値を７．０に調節したもの）を用い、流速は１．０ｍＬ／分とした。クロマトグラフィーカラムとして、Ｋｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ１８（４．６×１５０ｍｍ、５μｍ）を用い、カラム温度は３０℃とした。検出波長は２５６ｎｍに設定し、注入用サンプル量は５０μＬとした。
【表２】
2021517558.tif 000004
【０１９３】
最後の薬物投与から２４時間後に、マウスを頸椎脱臼で犠牲にした。気管を切り離して挿管した。左肺の上葉を結紮した。肺胞洗浄を、肺胞洗浄液０．５ｍＬで３回行い、これを後で一緒に混合してＢＡＬＦと呼んだ。ＢＡＬＦ中の白血球の総数を計数した。ＢＡＬＦを２０００ｒｐｍ／分で４℃にて１０分間遠心分離した。上清を採取し、サイトカイン測定のために−８０℃で保存し、沈着物をスライドガラス上に塗抹した。室温で空気乾燥した後、スライドをライトギムザ染色に付した。好中球、リンパ球およびマクロファージの数を、各スライドの合計２００個の細胞から顕微鏡下で計数した。左上の肺組織はヒドロキシプロリンのレベルを測定するために使用し、下部はホルマリンで固定してＨ＆Ｅ染色およびマッソン染色を行った。
【０１９４】
肺組織中のヒドロキシプロリンのレベルは、ヒドロキシプロリンアッセイキット（Ｎａｎｊｉｎｇ  ＪｉａｎＣｈｅｎｇ  Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）を用いて測定した。ＢＡＬＦ１００μＬ中のＴＧＦ−β１のレベルは、マウスＴＧＦ−β１  ＥＬＩＳＡキット（Ｂｅｉｊｉｎｇ  ４Ａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｃｏ．，  ＬＴＤ）を用いて決定し、ＢＡＬＦ１００μＬ中のＩ型コラーゲン（Ｃｏｌ  Ｉ）のレベルは、マウスＩ型コラーゲンＥＬＩＳＡキット（ＣＵＳＡＢＩＯ  ＢＩＯＴＥＨ）を用いて決定した。
【０１９５】
下部肺組織を流水で一晩洗浄し、次いで、徐々に７０％〜１００％エタノールで脱水し、キシレンに浸漬し、パラフィン包埋した。次いで、肺組織をＨ＆Ｅ染色およびマッソン染色のために４μｍ厚に切片化した。肺胞充血、肺胞腔または血管壁への好中球の浸潤または凝集、および肺胞中隔の肥厚またはヒアリン膜の形成を観察するためにＨ＆Ｅ染色を使用した。Ｈ＆Ｅ染色した病変部の線維化の程度を顕微鏡下で観察し、下記の半定量的なアシュクロフトスコアリング基準を用いてスコア化した。グレード０：正常な気管支肺胞構造、グレード１：肺胞壁または気管支壁の最小限の線維性肥厚、グレード３：肺の構造に明らかな損傷は与えない壁の中等度の肥厚、グレード５：肺の構造への明確な損傷および線維性バンドまたは小さな線維性腫瘤の形成を伴う線維化の増加、グレード７：構造の深刻なゆがみおよび大きな線維性領域（蜂窩肺がこのカテゴリーに位置付けられる）、グレード８：全線維性閉塞。２つの奇数間の線維化の重症度を、対応する偶数と見なした。一方、陽性マッソン染色部位のＩＯＤ値を、解析のためにＩｍａｇｅ−Ｐｒｏソフトウェアにより測定した。
【０１９６】
データは分散の均一性について検定した。分散が均一な場合（ｐ＞０．０５）、単因子分散分析を行った。各投与群と対照群との差については、ダンネット検定を行った。分散が不均一である場合（ｐ≦０．０５）、ノンパラメトリック検定を実施し、その後、各投与群と対照群との間の差を調べるためにマン・ホイットニーＵ検定を行った。ｐ＜０．０５のときに、差が有意であると見なした。
【０１９７】
高速液体クロマトグラフィーによるイトラコナゾール濃度の測定により、標準曲線Ｙ＝９３０７９Ｘ−９５５３．５、ｒ２≧０．９９９が得られ、Ｘはイトラコナゾール濃度を表し、Ｙはピーク面積を表し、０．１〜１１４．５μｇ／ｍＬの範囲内で忠実な直線関係を示した。移動相中のイトラコナゾールの平均濃度は６９．０８μｇ／ｍＬと求められたので、キャビネット内のイトラコナゾール濃度は２．８８μｇ／ｍＬとなった。マウスの分時換気量が約２４ｍＬ／分であることを考えると、５０、１５および５ｍｇ／ｍＬでのイトラコナゾール吸入の１日用量は、それぞれ約８．３、２．５および０．８ｍｇ／ｋｇと算出した。
【０１９８】
ブレオマイシン治療により、ＢＡＬＦ中の白血球、好中球、リンパ球およびマクロファージの総数が２８日目に有意に増加した（ｐ＜０．００１）。５、１５および５０ｍｇ／ｍＬでのイトラコナゾール吸入治療を１日３分間にわたって２２日間行ったところ、ＢＡＬＦ中の白血球の総数が用量依存的に減少した。モデル群（第２群）と比較して、５０ｍｇ／ｍｌでのイトラコナゾール吸入により、白血球の総数の増加が有意に抑制された（ｐ＜０．０５）。５，１５，５０ｍｇ／ｍＬで３分間にわたるイトラコナゾール吸入により、ＢＡＬＦ中の好中球の増加は有意に抑制された（ｐ＜０．０５〜０．０１）が、リンパ球およびマクロファージの数に影響が及ぶことはなかった。陽性対照として６０ｍｇ／ｋｇでニンテダニブを経口投与したところ、ＢＡＬＦ中の白血球および好中球の総数は有意に減少したが（ｐ＜０．０１）、リンパ球およびマクロファージの数には影響が及ばなかった。結果を図９に示す。
【０１９９】
ブレオマイシン治療により、２８日目のＢＡＬＦ中でＴＧＦ−β１のレベルは有意に上昇した（ｐ＜０．００１）。５、１５および５０ｍｇ／ｍＬでのイトラコナゾール吸入を１日３分間にわたって２２日間行ったところ、ＢＡＬＦ中のＴＧＦ−β１のレベルは用量依存的に減少した。モデル群と比較して、５ｍｇ／ｍｌおよび５０ｍｇ／ｍｌでのイトラコナゾール吸入により、ＢＡＬＦ中のＴＧＦ−β１のレベルは有意に低下した（ｐ＜０．０５〜０．００１）。１５ｍｇ／ｍＬでのイトラコナゾール吸入後のＢＡＬＦ中のＴＧＦ−β１レベルは減少傾向にあったが、標準偏差は大きかった。ＢＡＬＦ中のＴＧＦ−β１のレベルもまた、６０ｍｇ／ｋｇでのニンテダニブの経口投与によって有意に低下した（ｐ＜０．００１、図１０のＡ）。
【０２００】
ブレオマイシン治療により、ＢＡＬＦ中のＣｏｌ  Ｉのレベルは２８日目に有意に上昇した（ｐ＜０．００１）。５、１５および５０ｍｇ／ｍＬでのイトラコナゾール吸入を３分間にわたって２２日間行ったところ、ＢＡＬＦ中のＣｏｌ  Ｉのレベルは用量依存的に減少した。モデル群と比較して、５０ｍｇ／ｍｌでのイトラコナゾール吸入により、ＢＡＬＦ中のＣｏｌ  Ｉのレベルは有意に低下した（ｐ＜０．０５）。ニンテダニブ６０ｍｇ／ｋｇの経口投与では、ＢＡＬＦ中のＣｏｌ  Ｉのレベルは低下しなかった（図１０のＢ）。
【０２０１】
肺組織中のヒドロキシプロリンのレベルは２８日目に有意に上昇した（ｐ＜０．００１）。５、１５および５０ｍｇ／ｍＬでのイトラコナゾール吸入を１日３分間にわたって２２日間行ったところ、肺組織中のヒドロキシプロリンのレベルは用量依存的に抑制された。モデル群と比較して、肺組織中のヒドロキシプロリンレベルは、１５および５０ｍｇ／ｍＬ投与群において有意に減少した（ｐ＜０．０５〜０．０１）。６０ｍｇ／ｋｇでニンテダニブを経口投与したところ、肺組織中のヒドロキシプロリンのレベルは有意に低下した（ｐ＜０．０１）。結果は図１１に示した。
【０２０２】
２８日目に、肺組織のＨ＆Ｅ染色を行い、その後の顕微鏡観察で、明らかな肺胞充血が観察された。小気道の周りに好中球およびマクロファージが大量に浸潤していた。肺胞中隔が肥厚し、ヒアリン膜が形成され、肺組織が圧迫されていた。１５、５０ｍｇ／ｍＬでのイトラコナゾール吸入により、肺線維症マウスモデルで観察された病理学的変化は大幅に緩和されたが、５ｍｇ／ｍＬ吸入投与では病理学的変化は緩和されなかった。６０ｍｇ／ｋｇでニンテダニブを経口投与したところ、肺組織における好中球およびマクロファージの浸潤ならびに肺胞中隔の肥厚が大幅に減少した。半定量的なアシュクロフトスコアは、５、１５、５０ｍｇ／ｍＬでのイトラコナゾール吸入により、マウスの肺線維症は用量依存的に減少し、６０ｍｇ／ｋｇでニンテダニブを経口投与したところ、肺線維症も有意に減少することを示した（ｐ＜０．０１、図１２）。
【０２０３】
２８日目に、マッソン染色を行い、その後、顕微鏡観察を行い、Ｉｍａｇｅ−Ｐｒｏソフトウェアを用いて半定量分析を行った。モデル群では肺のコラーゲン沈着が観察されたが、５、１５、５０ｍｇ／ｍＬでのイトラコナゾール吸入ではコラーゲン沈着は用量依存的に減少した。モデル群と比較して、１５または５０ｍｇ／ｍＬでのイトラコナゾール吸入により、肺組織のコラーゲン沈着は有意に減少し（ｐ＜０．０１〜０．００１）、６０ｍｇ／ｋｇでのニンテダニブの経口投与によっても、コラーゲン沈着は有意に減少した（ｐ＜０．００１、図１３）。
【０２０４】
別個の実験では、健康な雄性マウスの３つの群にイトラコナゾールで５日間連続して治療を行った。Ａ群の動物には、ＤＭＳＯ：ＰＥＧ４００（１：９、ｖ／ｖ）中のイトラコナゾールを１５ｍｇ／ｋｇの１日用量で経口投与し、Ｂ群のマウスには１５ｍｇ／ｍＬ、Ｃ群のマウスには５０ｍｇ／ｍＬのイトラコナゾールを３分間吸入治療に付した。最後の投与から２時間後に、血漿サンプルおよび肺組織を上記のように採取した。これらのサンプルは、イトラコナゾールのレベルを決定するために独立した生物分析サービスラボに送られ、結果は表３にまとめられている。
【表３】
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【０２０５】
１５ｍｇ／ｋｇで５日間経口投与した後、肺組織中のイトラコナゾールレベルは血漿中の約１．３倍であり、体循環に比べて肺には適度な蓄積が示された。
【０２０６】
１５ｍｇ／ｍＬで３分間にわたる５日間の吸入後、肺組織中のイトラコナゾールレベルは血漿中の約７．３倍となり、直接投与経路の結果、肺での有意な上昇が示された。同様に、５０ｍｇ／ｍＬで３分間吸入投与した場合、その差は肺組織に有利な８．３倍であった。
【０２０７】
本研究は、イトラコナゾールを吸入により肺組織に直接投与することで、抗ＩＰＦ治療の安全域（セーフティウィンドウ）をさらに広げられることを実証するように意図されていた。
【０２０８】
本研究の結果、イトラコナゾールの吸入投与は、マウスのブレオマイシン誘発性ＩＰＦに対して用量比例的に有効であることが確立された。ＢＡＬＦ中のコラーゲン含有量から炎症細胞数、病理組織像に至るすべての指標が試験終了時までに有意な改善を示した。同じ薬物の経口投与と比較して、更なる改善の兆しが見られた。肺組織および血漿サンプルの分析から、観察された有効性は、血漿中の薬物の曝露によるものではなく、肺組織中の薬物の曝露によって牽引される可能性が高いことが示された。経口投与後、肺組織中のイトラコナゾールレベルは血漿中よりもわずかに高く、イトラコナゾールは肺感染症に選択される抗真菌薬となった。しかしながら、吸入により肺組織への曝露は大幅に増加し、そのことが、観察された追加の抗ＩＰＦ活性の理由を説明している可能性が高い。吸入製剤およびデバイスは最適化がなされておらず、更なる研究開発が望まれている。
【０２０９】
イトラコナゾール吸入後の肺組織濃度と血漿中濃度との比が大幅に向上しており、抗ＩＰＦ活性は肺組織中での曝露に牽引されている可能性が最も高いことから、吸入によるイトラコナゾールの安全域は経口投与に比べて大きく拡大する可能性が高く、特にほとんどのＩＰＦ患者に必要とされる可能性が非常に高い慢性治療のためには吸入が非常に魅力的な選択肢となる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【国際調査報告】
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