(57)【要約】本開示は、元の野生型配列を有する親抗体と比べて高収量で製造される改善された能力を有する抗ＣＤ３８  ＩｇＧクラス抗体を提供する。本開示は、抗体軽鎖の均一な集団の産生改善のために切断不均一性を低減する変異抗体軽鎖を提供する。本開示は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域が配列番号１の配列を含み、軽鎖が配列番号３の配列を含む、ＣＤ３８に結合する抗原結合性タンパク質を提供する。そのような抗原結合性タンパク質は、例えば、完全にヒトであり得る一本鎖抗体であってもよい。
2021528067.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む、ＣＤ３８に結合する抗原結合性タンパク質であって、前記重鎖可変領域が配列番号１の配列を含み、前記軽鎖が配列番号３の配列を含む、抗原結合性タンパク質。
【請求項２】
配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む軽鎖とを含む、ＩｇＧクラスの完全ヒト抗体または抗体Ｆａｂ断片。
【請求項３】
完全ヒト抗体である、請求項２に記載の完全ヒト抗体または抗体Ｆａｂ断片。
【請求項４】
Ｆａｂ断片である、請求項２に記載の完全ヒト抗体または抗体Ｆａｂ断片。
【請求項５】
配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む軽鎖とを含む完全ヒト一本鎖抗体である、請求項１に記載の抗原結合性タンパク質。
【請求項６】
薬学的に許容される賦形剤と、請求項１から５のいずれか一項に記載の完全ヒト抗体またはＦａｂ断片とを含む医薬組成物。
【請求項７】
配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む抗体軽鎖をコードする核酸。
【請求項８】
配列番号１のアミノ酸配列を含む抗体重鎖をコードする核酸をさらに含む、請求項７に記載の核酸。
【請求項９】
請求項１から５のいずれか一項に記載の抗体をコードする核酸。
【請求項１０】
請求項７または請求項９に記載の核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含む発現ベクター。
【請求項１１】
配列番号１のアミノ酸配列を含む抗体重鎖をコードする核酸をさらに含む、請求項１０に記載の発現ベクター。
【請求項１２】
請求項１０に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項１３】
請求項１１に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項１４】
完全ヒト抗体軽鎖を調製するための方法であって、前記抗体軽鎖を発現するのに適した条件下で、請求項１０または１１に記載の宿主細胞の集団を培養するステップを含む、方法。
【請求項１５】
発現された前記抗体軽鎖を前記宿主細胞から回収するステップをさらに含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
正しい長さ、正しいＮ末端アミノ酸を有し、配列番号３の軽鎖可変ドメインに対して１００％の配列同一性を有する回収され、発現された前記抗体軽鎖のパーセンテージが９０〜１００％であり、および／または回収され、発現された前記抗体軽鎖の均一性が９０〜１００％である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
完全ヒト抗体軽鎖を調製するための方法であって、前記抗体軽鎖を発現するのに適した条件下で、請求項１３に記載の宿主細胞の集団を培養するステップを含む、方法。
【請求項１８】
発現された前記抗体軽鎖および重鎖を前記宿主細胞から回収するステップをさらに含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
正しい長さ、正しいＮ末端アミノ酸を有し、配列番号３の軽鎖可変ドメインに対して１００％の配列同一性を有する、回収され、発現された前記抗体軽鎖のパーセンテージが９０〜１００％である、請求項１８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１８年６月２０日に出願され、「ＣＤ３８に結合する改善されたバリアント抗体」と題する米国仮特許出願第６２／６８７，６９５号の米国特許法第１１９条に基づく優先権の利益を主張するものであり、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本出願全体を通して様々な刊行物、特許、および／または特許出願が参照される。刊行物、特許および／または特許出願の開示は、本開示が属する技術分野の現状をより十分に説明するために、その内容全体がこれにより参照により本出願に組み込まれる。参照により組み込まれたいかなる事項も本出願の明示的な内容と矛盾する場合には、明示的な内容が優先する。
【０００３】
本開示は、野生型配列と比較してバリアントの軽鎖を有する抗ＣＤ３８  ＩｇＧクラス抗体を提供する。開示されている抗体は、野生型抗体と比べて高収量で製造される改善された能力、および／または抗体軽鎖の均一性を改善し得る低減された切断不均一性を有し得る。
【背景技術】
【０００４】
ＣＤ３８は、長いＣ末端細胞外ドメインおよび短いＮ末端細胞質ドメインを有する４５ｋＤ  ＩＩ型膜貫通糖タンパク質である。ＣＤ３８タンパク質は、サイクリックＡＤＰ−リボース（ｃＡＤＰＲ）へのＮＡＤ＋の変換を触媒し、またｃＡＤＰＲをＡＤＰ−リボースに加水分解することもできる二機能性エクトエンザイムである。個体発生中、ＣＤ３８は、ＣＤ３４＋拘束幹細胞ならびにリンパ球系、赤血球系および骨髄系細胞の系統拘束前駆細胞に現れる。ＣＤ３８発現は大部分がリンパ球系統で持続し、ＴおよびＢ細胞発生の種々の段階で発現レベルが異なる。
【０００５】
ＣＤ３８は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、慢性Ｂリンパ球性白血病（Ｂ−ＣＬＬ）、急性ＢおよびＴリンパ球性白血病（ＡＬＬ）、Ｔ細胞リンパ腫（ＴＣＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、ヘアリー細胞白血病（ＨＣＬ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、ならびに慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）を含む、多くの造血悪性疾患および様々な造血悪性疾患に由来する細胞系において上方調節される。その一方で、造血系のほとんどの原始的な多能性幹細胞はＣＤ３８−である。造血悪性疾患におけるＣＤ３８発現およびその疾患進行との相関により、ＣＤ３８は、抗ＣＤ３８抗体療法の魅力的な標的となっている。
【０００６】
ＣＤ３８は、Ｃａ２＋動員（Morra  et  al.,  1998，FASEB  J.,  12:581-592；Zilber  et  al.,  2000,  Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA,  97:2840-2845）、ならびにリンパ球系および骨髄系細胞または細胞系におけるホスホリパーゼＣ−γ、ＺＡＰ−７０、ｓｙｋ、およびｃ−ｃｂｌを含む多数のシグナル伝達分子のチロシンリン酸化を通じたシグナル伝達（Funaro  et  al.,  1993，Eur.  J.  Immunol.,  23:2407-2411；Morra  et  al.,  1998，FASEB  J.,  12:581-592；Funaro  et  al.,  1990,  J  Immunol,  145:2390-2396；Zubiaur  et  al.,  1997,  J  Immunol,  159:193-205；Deaglio  et  al.,  2003,  Blood  102:2146-2155；Todisco  et  al.,  2000,  Blood,  95:535-542；Konopleva  et  al.,  1998,  J.  Immunol.,  161:4702-4708；Zilber  et  al.,  2000,  Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA,  97:2840-2845；Kitanaka  et  al.,  1997,  J.  Immunol.,  159:184-192；Kitanaka  et  al.,  1999,  J.  Immunol.,  162:1952-1958；Mallone  et  al.,  2001,  Int.  Immunol.,  13:397-409）に関与することが報告されている。ＣＤ３８は、正常な発生中のリンパ球系および骨髄系細胞の成熟および活性化における重要なシグナル伝達分子であると提案された。
【０００７】
ＣＤ３８の機能に関する証拠は、自然免疫に欠陥があり、樹状細胞遊走の欠陥によりＴ細胞依存性体液性応答が低減されたＣＤ３８−／−ノックアウトマウスに由来する（Partida-Sanchez  et  al.,  2004,  Immunity,  20:279-291；Partida-Sanchez  et  al.,  2001,  Nat.  Med.,  7:1209-1216）。しかしながら、造血中のＣＤ３８発現パターンはヒトとマウスとでは大きく異なる：ａ）ヒトにおける未熟前駆・幹細胞とは異なり、マウスにおける類似の前駆・幹細胞は高レベルのＣＤ３８を発現する（Randall  et  al.,  1996,  Blood,  87:4057-4067；Dagher  et  al.,  1998,  Biol.  Blood  Marrow  Transplant,  4:69-74）、ｂ）ヒトＢ細胞発生中、高レベルのＣＤ３８発現が胚中心Ｂ細胞および形質細胞で見出されるが（Uckun,  1990,  Blood,  76:1908-1923；Kumagai  et  al.,  1995，J.  Exp.  Med.,  181:1101-1110）、マウスでは、対応する細胞におけるＣＤ３８発現レベルは低い（Oliver  et  al.,  1997,  J.  Immunol.,  158:108-1115；Ridderstad  and  Tarlinton  1998,  J.  Immunol.,  160:4688-4695）ため、マウスにおけるＣＤ３８機能がヒトと同一かどうかは明らかではない。
【０００８】
様々な腫瘍細胞および細胞系で増殖特性が異なるいくつかの抗ヒトＣＤ３８抗体が、文献に記載されている。例えば、マウスＦａｂおよびヒトＩｇＧ１  Ｆｃを有するキメラＯＫＴ１０抗体は、ＭＭ患者または正常な個体由来の末梢血単核エフェクター細胞の存在下で、リンパ腫細胞に対する抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を極めて効率的に媒介する（Stevenson  et  al.,  1991,  Blood,  77:1071-1079）。抗ＣＤ３８抗体ＡＴ１３／５のＣＤＲ移植ヒト化バージョンは、ＣＤ３８陽性細胞系に対して強力なＡＤＣＣ活性を有することが示されている。ヒトモノクローナル抗ＣＤ３８抗体は、ＡＤＣＣおよび／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）によるＣＤ３８陽性細胞系のｉｎ  ｖｉｔｒｏ死滅を媒介すること、ならびにＭＭ細胞系ＲＰＭＩ−８２２６を担持するＳＣＩＤマウスにおいて腫瘍成長を遅らせることが示されている（ＷＯ２００５／１０３０８３Ａ２）。その一方で、ＩＢ６、ＡＴ１、またはＡＴ２を除くいくつかの抗ＣＤ３８抗体、ＩＢ４、ＳＵＮ−４Ｂ７、およびＯＫＴ１０は、正常な個体由来の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の増殖を誘導した（Ausiello  et  al.  2000,  Tissue  Antigens,  56:539-547）。
従来技術の抗体の一部は、間質細胞依存的または間質由来サイトカイン依存的にＣＤ３８＋Ｂ細胞におけるアポトーシスの引き金を引くことができることが報告されている。アゴニスト抗ＣＤ３８抗体（ＩＢ４）は、ヒト胚中心（ＧＣ）Ｂ細胞のアポトーシスを防ぐこと（Zupo  et  al.  1994,  Eur.  J.  Immunol.,  24:1218-1222）、ならびにＫＧ−１およびＨＬ−６０  ＡＭＬ細胞の増殖を誘導すること（Konopleva  et  al.  1998,  J.  Immunol.,  161:4702-4708）が報告されているが、ジャーカットＴリンパ芽球細胞ではアポトーシスを誘導する（Morra  et  al.  1998,  FASEB  J.,  12:581-592）。別の抗ＣＤ３８抗体、Ｔ１６は、ＡＬＬ患者由来の未熟リンパ球系細胞および白血病性リンパ芽球細胞（Kumagai  et  al.  1995,  J.  Exp.  Med.,  181:1101-1110）、ならびにＡＭＬ患者由来の白血病性骨髄芽球細胞（Todisco  et  al.  2000,  Blood,  95:535-542）のアポトーシスを誘導したが、Ｔ１６は、間質細胞または間質由来サイトカイン（ＩＬ−７、ＩＬ−３、幹細胞因子）の存在下でのみアポトーシスを誘導した。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｚｕｐｏら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９４）２４：１２１８〜１２２２
【非特許文献２】Ｋｏｎｏｐｌｅｖａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９８）１６１：４７０２〜４７０８
【非特許文献３】Ｍｏｒｒａら、ＦＡＳＥＢ  Ｊ．（１９９８）１２：５８１〜５９２
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
したがって、抗ＣＤ３８抗体で標的化された抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、副作用の低減という利点と共に、強力な抗腫瘍活性を発揮する見込みおよび可能性を提供する。故に、ＣＤ３８、特に抗ＣＤ３８抗体に基づく有効な処置のニーズが当技術分野には残っている。本開示は、完全ヒト野生型配列とは異なるバリアント抗体配列を提供する。開示されているバリアント抗体は、はるかに高い収量で製造され、および／または改善された軽鎖均一性を提供することができる。
【００１１】
本開示は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域が配列番号１の配列を含み、軽鎖が配列番号３の配列を含む、ＣＤ３８に結合する抗原結合性タンパク質を提供する。そのような抗原結合性タンパク質は、例えば、完全にヒトであり得る一本鎖抗体であってもよい。本開示は、配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む軽鎖とを含む、ＩｇＧクラスの完全ヒト抗体または抗体Ｆａｂ断片を提供する。本開示は、配列番号１のアミノ酸配列を含む抗体重鎖をコードする核酸と組み合わせてもよく、または該核酸をさらに含んでもよい、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む抗体軽鎖をコードする核酸を提供する。
【００１２】
本開示はまた、ＩｇＧクラスのバリアント抗体の集団、およびバリアント抗体の集団を作製するための方法も提供する。バリアント抗体の集団は、２個またはそれより多いバリアント抗体（例えば、複数のバリアント抗体）を含む。集団における個々のバリアント抗体は、それぞれが２つの抗体重鎖および、変異体配列を有する２つの抗体軽鎖を有する免疫グロブリンを含む。軽鎖変異体配列は、抗体調製中の切断不均一性を低減する。例えば、バリアント抗体の集団は、組換え抗体重鎖および軽鎖の宿主細胞発現によって調製することができる。軽鎖バリアント配列は、ポリペプチド長不均一性のレベルおよびアミノ酸配列不均一性のレベルを抗体調製中に約４０〜５５％低減し、これによりバリアント抗体の調製における不均一性を低減することができる。
【００１３】
本開示は、より高レベルのポリペプチド長不均一性およびより高レベルのアミノ酸配列不均一性を示すＩｇＧクラスの親野生型抗体の集団と比べて、ポリペプチド長不均一性のレベルの低減およびアミノ酸配列不均一性のレベルの低減を示すＩｇＧクラスのバリアント抗体の集団を提供する。バリアント抗体の集団中の個々の抗体は、野生型アミノ酸配列を有する重鎖および変異体アミノ酸配列を有する軽鎖を含む。軽鎖のバリアントアミノ酸配列は、ポリペプチド長不均一性のレベルを低減することができ、バリアント抗体の集団におけるアミノ酸配列不均一性のレベルを約４０〜５５％低減する。
【００１４】
一実施形態では、バリアント抗体の集団は、配列番号１の野生型アミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む重鎖を有する個々のバリアント配列抗体と、配列番号３の変異体アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む軽鎖を有する個々のバリアント抗体とを含む。
【００１５】
一実施形態では、バリアント抗体の集団は、ＣＤ３８エピトープに結合する。
【００１６】
一実施形態では、バリアント抗体の集団は、完全ヒト抗体を含む。
【００１７】
一実施形態では、親野生型抗体の集団中の個々の親野生型抗体は、約４０〜５５％がポリペプチド長不均一性およびアミノ酸配列不均一性を示す野生型アミノ酸配列を有する軽鎖を含む。
【００１８】
一実施形態では、バリアント抗体の集団中の個々のバリアント抗体は、約８５〜９９％、８５〜１００％、９０〜９９％、または９０〜１００％がポリペプチド長均一性およびアミノ酸配列均一性を示す変異体アミノ酸配列を有する軽鎖を含む。均一性は、集団における、複数または大多数の種（例えば、配列番号３の配列を有する可変領域を含む軽鎖）の長さおよび／または配列を有する集団の（例えば、抗体軽鎖の）メンバーのパーセンテージとして定量化され得る。
【００１９】
一実施形態では、ＩｇＧクラスのバリアント抗体の集団は、ＣＤ３８エピトープに結合し、より高レベルのポリペプチド長不均一性およびより高レベルの配列不均一性を示すＩｇＧクラスの親野生型抗体の集団と比べて、ポリペプチド長不均一性のレベルの低減および配列不均一性のレベルの低減を示し、バリアント配列集団中の個々の抗体は、野生型アミノ酸配列を有する重鎖と変異体アミノ酸配列を有する軽鎖とを含み、個々のバリアント抗体の重鎖は、配列番号１の野生型アミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、個々のバリアント抗体の軽鎖は、配列番号３の変異体アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含み、軽鎖の変異体アミノ酸配列は、ポリペプチド長不均一性のレベルおよび配列不均一性のレベルを約４０〜５５％低減する。
【００２０】
本開示は、配列番号１の重鎖可変領域野生型アミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３の軽鎖可変領域変異体アミノ酸配列を有する軽鎖とを含む、完全ヒトＩｇＧクラス抗体の集団を提供する。
【００２１】
本開示は、配列番号１の重鎖可変領域野生型アミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３の軽鎖可変領域変異体アミノ酸配列を有する軽鎖とを含む、完全ヒトＦａｂ断片の集団を提供する。
【００２２】
本開示は、配列番号１の重鎖可変領域野生型アミノ酸配列と、配列番号３の軽鎖可変領域変異体アミノ酸配列とを含む、抗原結合性タンパク質（例えば、完全ヒトであってもよい一本鎖抗体）の集団を提供する。一実施形態では、一本鎖抗体は、ペプチドリンカーによって一緒に連結された重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。
【００２３】
本開示は、配列番号１の重鎖可変領域野生型アミノ酸配列を有する重鎖と、Ｎ末端近くに２個の点変異を有する（具体的には２位のアラニンがセリンと置き換えられ、３位のグリシンがアラニンと置き換えられる）配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、抗原結合性タンパク質（例えば、完全ヒトＩｇＧクラス抗体）の集団を提供する。一実施形態では、変異体軽鎖のＮ末端は、アミノ酸配列ＱＳＡＬＴ（配列番号６）を含有する。
【００２４】
本開示は、より高レベルのポリペプチド長およびより高レベルのアミノ酸配列不均一性を示す親野生型抗体軽鎖の集団と比べて、ポリペプチド長不均一性のレベルの低減およびアミノ酸配列不均一性のレベルの低減を示すバリアント抗体軽鎖の集団を提供する。バリアント抗体軽鎖の集団中の個々の抗体軽鎖は、配列番号３の変異体アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【００２５】
一実施形態では、集団中の個々のバリアント配列軽鎖は、完全ヒト抗体軽鎖を含む。
【００２６】
一実施形態では、親野生型抗体の集団中の個々の親野生型配列抗体軽鎖は、約４０〜５５％がポリペプチド長不均一性およびアミノ酸配列不均一性を示す親野生型アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【００２７】
一実施形態では、バリアント抗体の集団中の個々のバリアント抗体は、約８５〜９９％、８５〜１００％、９０〜９９％、または９０〜１００％がポリペプチド長均一性およびアミノ酸配列均一性を示す変異体アミノ酸配列を有する軽鎖を含む。
【００２８】
一実施形態では、ＩｇＧクラスのバリアント抗体軽鎖は、より高レベルのポリペプチド長不均一性およびより高レベルのアミノ酸配列不均一性を有する親野生型抗体の集団と比べて、ポリペプチド長不均一性のレベルの低減およびアミノ酸配列不均一性のレベルの低減を示す。バリアント抗体軽鎖の集団中の個々の抗体軽鎖は、配列番号３の変異体アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含み、軽鎖の変異体アミノ酸配列は、ポリペプチド長不均一性のレベルおよびアミノ酸配列不均一性のレベルを約４０〜５５％低減する。
【００２９】
一実施形態では、完全ヒトＦａｂ断片は、配列番号３の軽鎖可変領域変異体アミノ酸配列を有する軽鎖を含む。
【００３０】
一実施形態では、一本鎖完全ヒト抗体は、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【００３１】
本開示は、配列番号１の野生型アミノ酸配列を有する重鎖可変領域を有する重鎖と、配列番号３の変異体アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する軽鎖とを含む、ＣＤ３８エピトープに結合するＩｇＧクラスの完全ヒトバリアント抗体を提供する。
【００３２】
本開示は、配列番号１の野生型アミノ酸配列を有する重鎖可変領域を有する重鎖と、配列番号３の変異体アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する軽鎖とを含む、ＣＤ３８エピトープに結合する完全ヒト抗体Ｆａｂ断片を提供する。
【００３３】
本開示は、配列番号１の野生型アミノ酸配列を有する重鎖可変領域を有する重鎖と、配列番号３の変異体アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する軽鎖とを含む、ＣＤ３８エピトープに結合する抗原結合性タンパク質（例えば、完全ヒトであってもよい一本鎖抗体）を提供する。一実施形態では、一本鎖抗体は、ペプチドリンカーによって一緒に連結された重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。
【００３４】
本開示は、薬学的に許容される賦形剤と、配列番号１の重鎖可変領域野生型アミノ酸配列を有する重鎖および配列番号３の軽鎖可変領域変異体アミノ酸配列を有する軽鎖を含むＩｇＧクラスの完全ヒト抗体とを含む医薬組成物を提供する。
【００３５】
本開示は、薬学的に許容される賦形剤と、配列番号１の重鎖可変領域野生型アミノ酸配列を有する重鎖および配列番号３の軽鎖可変領域変異体アミノ酸配列を有する軽鎖を含む完全ヒトＦａｂ断片とを含む医薬組成物を提供する。
【００３６】
本開示は、薬学的に許容される賦形剤と、配列番号１の重鎖可変領域野生型アミノ酸配列を有する重鎖および配列番号３の軽鎖可変領域変異体アミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗原結合性タンパク質（例えば、完全ヒトであってもよい一本鎖抗体）とを含む医薬組成物を提供する。
【００３７】
本開示は、本明細書に開示されている軽鎖をコードする核酸を提供する。本開示は、配列番号３の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む抗体軽鎖をコードする核酸を提供する。一実施形態では、核酸は、配列番号１の重鎖可変領域野生型アミノ酸配列を含む抗体重鎖をコードする核酸をさらに含む。一実施形態では、核酸は、完全ヒトＩｇＧクラス抗体をコードする。一実施形態では、核酸は、抗原結合性タンパク質（例えば、完全ヒトであってもよい一本鎖抗体）をコードする。
【００３８】
本開示は、配列番号３の軽鎖可変領域変異体アミノ酸配列を有するＦａｂ断片をコードする核酸を提供する。一実施形態では、核酸は、抗体重鎖も含むＦａｂ断片をコードする。一実施形態では、核酸は、配列番号１の重鎖可変領域野生型アミノ酸配列を含む抗体重鎖をコードする核酸をさらに含む。
【００３９】
本開示は、配列番号３の軽鎖可変領域変異体アミノ酸配列を有する一本鎖抗体をコードする核酸を提供する。一実施形態では、核酸は、抗体重鎖も含む一本鎖抗体をコードする。一実施形態では、核酸は、配列番号１の重鎖可変領域野生型アミノ酸配列を含む抗体重鎖をコードする核酸をさらに含む。
【００４０】
本開示は、例えば、配列番号３の軽鎖可変領域変異体アミノ酸配列を有する抗体軽鎖をコードする、本明細書に開示されている核酸に作動可能に連結された発現ベクターを提供する。一実施形態では、ベクターは、配列番号１の重鎖可変領域野生型アミノ酸配列を含む抗体重鎖をコードする核酸に作動可能に連結されている。一実施形態では、発現ベクターは、完全ヒトＩｇＧクラス抗体をコードする１つまたは複数の核酸に、さらに作動可能に連結されている。
【００４１】
本開示は、配列番号３の軽鎖可変領域変異体アミノ酸配列を有するＦａｂ断片をコードする核酸に作動可能に連結された発現ベクターを提供する。一実施形態では、ベクターは、抗体重鎖も含むＦａｂ断片をコードする。一実施形態では、ベクターはさらに、配列番号１の重鎖可変領域野生型アミノ酸配列を含む抗体重鎖をコードする核酸に作動可能に連結されている。
【００４２】
本開示は、配列番号３の軽鎖可変領域変異体アミノ酸配列を有する抗原結合性タンパク質（例えば、完全ヒトであってもよい一本鎖抗体）をコードする核酸に作動可能に連結された発現ベクターを提供する。一実施形態では、ベクターは、抗体重鎖も含む一本鎖抗体をコードする。一実施形態では、ベクターは、配列番号１の重鎖可変領域野生型アミノ酸配列を含む抗体重鎖をコードする核酸に、さらに作動可能に連結されている。
【００４３】
本開示は、抗体軽鎖をコードする本明細書に開示されている核酸を含む宿主細胞を提供する。本開示は、配列番号３の軽鎖可変領域変異体アミノ酸配列を有する抗体軽鎖をコードする核酸に作動可能に連結された発現ベクターを含む宿主細胞を提供する。一実施形態では、宿主細胞に含まれるベクターは、配列番号１の重鎖可変領域野生型アミノ酸配列を含む抗体重鎖をコードする核酸に、さらに作動可能に連結されている。一実施形態では、宿主細胞は、配列番号１の重鎖可変領域野生型アミノ酸配列を含む抗体重鎖をコードする核酸に作動可能に連結された第２の発現ベクターを含む。一実施形態では、宿主細胞は、抗体軽鎖および重鎖を発現した。一実施形態では、宿主細胞は、軽鎖および重鎖を有する完全ヒトＩｇＧクラス抗体を発現する。
【００４４】
本開示は、配列番号３の軽鎖可変領域変異体アミノ酸配列を有するＦａｂ断片をコードする核酸に作動可能に連結された発現ベクターを含む宿主細胞を提供する。一実施形態では、宿主細胞に含まれるベクターは、配列番号１の重鎖可変領域野生型アミノ酸配列を含むＦａｂ断片をコードする核酸に、さらに作動可能に連結されている。一実施形態では、宿主細胞は、配列番号１の重鎖可変領域野生型アミノ酸配列を含む抗体重鎖を有するＦａｂ断片をコードする核酸に作動可能に連結された第２の発現ベクターを含む。一実施形態では、宿主細胞は、軽鎖および重鎖を有する完全ヒトＦａｂ断片を発現する。
【００４５】
本開示は、配列番号３の軽鎖可変領域変異体アミノ酸配列を有する抗原結合性タンパク質（例えば、完全ヒトであってもよい一本鎖抗体）をコードする核酸に作動可能に連結された発現ベクターを含む宿主細胞を提供する。一実施形態では、宿主細胞に含まれるベクターは、配列番号１の重鎖可変領域野生型アミノ酸配列を含む一本鎖抗体をコードする核酸に、さらに作動可能に連結されている。一実施形態では、宿主細胞は、軽鎖可変領域および重鎖可変領域を有する抗原結合性タンパク質（例えば、完全ヒトであってもよい一本鎖抗体）を発現する。
【００４６】
本開示は、完全ヒト抗体軽鎖を調製するための方法であって、抗体軽鎖を発現するのに適した条件下で宿主細胞の集団を培養するステップを含み、集団中の個々の宿主細胞が、配列番号３の軽鎖可変領域変異体アミノ酸配列を有する抗体軽鎖をコードする核酸に作動可能に連結された発現ベクターを含む、方法を提供する。一実施形態では、集団中の個々の宿主細胞は、配列番号１の重鎖可変領域野生型アミノ酸配列を含む抗体重鎖をコードする核酸にも作動可能に連結された発現ベクターを含む。一実施形態では、集団中の個々の宿主細胞は、配列番号１の重鎖可変領域野生型アミノ酸配列を含む抗体重鎖をコードする核酸に作動可能に連結された第２の発現ベクターを含む。一実施形態では、宿主細胞の集団は、抗体軽鎖および重鎖を発現する。一実施形態では、宿主細胞の集団は、軽鎖および重鎖を有する完全ヒトＩｇＧクラス抗体を発現する。一実施形態では、方法は、発現された抗体軽鎖を宿主細胞の集団から回収するステップをさらに含む。一実施形態では、方法は、発現された抗体軽鎖および重鎖を宿主細胞の集団から回収するステップをさらに含む。一実施形態では、発現および回収された抗体軽鎖の９０〜１００％は、正しい長さ、正しいＮ末端アミノ酸を有し、配列番号３の軽鎖可変ドメインに対して１００％の配列同一性を有する。
【００４７】
本開示は、完全ヒトＦａｂ断片を調製するための方法であって、Ｆａｂ断片を発現するのに適した条件下で宿主細胞の集団を培養するステップを含み、集団中の個々の宿主細胞が、配列番号３の軽鎖可変領域変異体アミノ酸配列を有する抗体軽鎖をコードする核酸に作動可能に連結された発現ベクターを含む、方法を提供する。一実施形態では、集団中の個々の宿主細胞は、配列番号１の重鎖可変領域野生型アミノ酸配列を含むＦａｂ断片をコードする核酸にも作動可能に連結された発現ベクターを含む。一実施形態では、集団中の個々の宿主細胞は、配列番号１の重鎖可変領域野生型アミノ酸配列を含むＦａｂ断片重鎖をコードする核酸に作動可能に連結された第２の発現ベクターを含む。一実施形態では、宿主細胞の集団は、抗体軽鎖および重鎖を発現する。一実施形態では、宿主細胞の集団は、軽鎖および重鎖を有する完全ヒトＦａｂ断片を発現する。一実施形態では、方法は、発現された軽鎖を宿主細胞の集団から回収するステップをさらに含む。一実施形態では、方法は、発現された軽鎖および重鎖を宿主細胞の集団から回収するステップをさらに含む。一実施形態では、発現および回収された軽鎖の９０〜１００％は、正しい長さ、正しいＮ末端アミノ酸を有し、配列番号３の軽鎖可変ドメインに対して１００％の配列同一性を有する。
【００４８】
本開示は、抗原結合性タンパク質（例えば、完全ヒトであってもよい一本鎖抗体）を調製するための方法であって、一本鎖抗体を発現するのに適した条件下で宿主細胞の集団を培養するステップを含み、集団中の個々の宿主細胞が、配列番号３の軽鎖可変領域変異体アミノ酸配列を有する抗体軽鎖をコードする核酸に作動可能に連結された発現ベクターを含む、方法を提供する。一実施形態では、集団中の個々の宿主細胞は、配列番号１の重鎖可変領域野生型アミノ酸配列を含む一本鎖抗体をコードする核酸にも作動可能に連結された発現ベクターを含む。一実施形態では、宿主細胞の集団は、軽鎖可変領域および重鎖可変領域を有する完全ヒト一本鎖抗体を発現する。一実施形態では、方法は、発現された一本鎖抗体を宿主細胞の集団から回収するステップをさらに含む。一実施形態では、発現および回収された一本鎖抗体の９０〜１００％は、正しい長さ、正しいＮ末端アミノ酸を有し、配列番号３の軽鎖可変ドメインに対して１００％の配列同一性を有する。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】図１Ａは、親野生型ＣＤ３８  Ａ２抗体、具体的には配列番号１の野生型配列を含む還元された脱糖化抗体重鎖の液体クロマトグラフ−質量分光光度法（ＬＣ−ＭＳ）の結果を示す図である。ピークが、ａｍｕでの分子量により標識されている。
【００５０】
図１Ｂは、ＣＤ３８  Ａ２  ＳＶバリアント抗体、具体的には配列番号１の野生型配列を含む還元された脱糖化抗体重鎖の液体クロマトグラフ−質量分光光度法（ＬＣ−ＭＳ）の結果を示す図である。ピークが、ａｍｕでの分子量により標識されている。
【００５１】
【図２】図２Ａは、親野生型ＣＤ３８  Ａ２抗体、具体的には配列番号２の野生型配列を含む抗体軽鎖の液体クロマトグラフ−質量分光光度法（ＬＣ−ＭＳ）の結果を示す図である。ピークが、ａｍｕでの分子量により標識されている。
【００５２】
図２Ｂは、バリアントＣＤ３８  Ａ２  ＳＶバリアント抗体、具体的には配列番号３のバリアント配列を含む抗体軽鎖の液体クロマトグラフ−質量分光光度法（ＬＣ−ＭＳ）の結果を示す図である。ピークが、ａｍｕでの分子量により標識されている。
【００５３】
【図３】図３Ａは、親抗体ＣＤ３８  Ａ２の結合動態のＳＰＲセンサーグラムを示す図である。
【００５４】
図３Ｂは、バリアント抗体ＣＤ３８  Ａ２  ＳＶの結合動態のＳＰＲセンサーグラムを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００５５】
別段の定義がない限り、本明細書で使用される技術用語および科学用語は、別段の定義がない限り当業者によって一般に理解される意味を有する。一般的に、本明細書に記載されている細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、トランスジェニック細胞産生、タンパク質化学および核酸化学ならびにハイブリダイゼーションの手法に関する用語は、当技術分野で周知であり、一般に使用されている。本明細書に提供されている方法および手法は一般的に、特に指示のない限り、当技術分野で周知の、ならびに本明細書に引用され、論じられている様々な一般的およびより具体的な参考文献に記載されている従来の手順に従って行われる。例えば、Sambrook  et  al.  Molecular  Cloning:  A  Laboratory  Manual,  2d  ed.,  Cold  Spring  Harbor  Laboratory  Press,  Cold  Spring  Harbor,  N.Y.  (1989)、およびAusubel  et  al.,  Current  Protocols  in  Molecular  Biology,  Greene  Publishing  Associates  (1992)を参照のこと。Borrebaeck  (ed)  Antibody  Engineering,  2nd  Edition  Freeman  and  Company,  NY,  1995；McCafferty  et  al.  Antibody  Engineering,  A  Practical  Approach,  IRL  at  Oxford  Press,  Oxford,  England,  1996；およびPaul  (1995)  Antibody  Engineering  Protocols  Humana  Press,  Towata,  N.J.,  1995；Paul  (ed.)，Fundamental  Immunology，Raven  Press,  N.Y,  1993；Coligan  (1991)  Current  Protocols  in  Immunology  Wiley/Greene,  NY；Harlow  and  Lane  (1989)  Antibodies:  A  Laboratory  Manual  Cold  Spring  Harbor  Press,  NY；Stites  et  al.  (eds.)  Basic  and  Clinical  Immunology  (4th  ed.)  Lange  Medical  Publications,  Los  Altos,  Calif.、およびその中に引用された参考文献；Coding  Monoclonal  Antibodies:  Principles  and  Practice  (2nd  ed.)  Academic  Press,  New  York,  N.Y.,  1986、およびKohler  and  Milstein  Nature  256:495-497,  1975を含むいくつかの基本テキストが標準的な抗体産生方法を記載している。本明細書に引用されている参考文献は全て、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。酵素反応および濃縮／精製法もまた周知であり、当技術分野で一般に達成され、または本明細書に記載されているように製造者の仕様書に従って行われる。本明細書に記載されている分析化学、合成有機化学、ならびに医薬品化学および製薬化学に関連して使用される用語、ならびにこの実験手順および手法は、当技術分野で周知であり、一般に使用されている。標準的な手法は、化学合成、化学分析、医薬品の調製、製剤化、および送達、ならびに患者の処置に使用することができる。
【００５６】
本明細書に提供される見出しは、本開示の様々な態様を限定するものではなく、該態様は全体として本明細書を参照することによって理解することができる。
【００５７】
本明細書では文脈によって特に必要とされない限り、単数用語は複数形を含むものとし、複数用語は単数形を含むものとする。単数形「１つ（ａ）」、「１つ（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」、ならびに任意の単語の単数使用は、明示的および明白に１つの指示対象に限定されない限り、複数の指示対象を含む。
【００５８】
本明細書では代替物（例えば、「または」）の使用は、代替物の一方もしくは両方またはその任意の組合せを意味すると解釈されることが理解される。
【００５９】
本明細書で使用される用語「および／または」は、他方の有無にかかわらず、指定された特徴または構成要素のそれぞれの具体的な開示を意味すると解釈されるべきである。例えば、用語「および／または」は、本明細書で「Ａおよび／またはＢ」などの句で使用される場合、「ＡおよびＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）、および「Ｂ」（単独）を含むことが意図される。同様に、用語「および／または」は、「Ａ、Ｂ、および／またはＣ」などの句で使用される場合、以下の態様：Ａ、Ｂ、およびＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；ＡおよびＣ；ＡおよびＢ；ＢおよびＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）のそれぞれを包含することが意図される。
【００６０】
本明細書で使用される場合、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」および「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、ならびにそれらの文法的変形は、本明細書で使用される場合、リスト中の１つの項目または複数の項目が、置換され得るまたはリストされた項目に追加され得る他の項目を排除しないように、非限定的であることが意図される。態様が、語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」と共に本明細書に記載される場合は常に、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」および／または「〜から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」に関して記載されたその他の類似の態様も提供されることが理解される。
【００６１】
本明細書で使用される場合、用語「約（ａｂｏｕｔ）」は、当業者によって決定される特定の値または組成の許容される誤差範囲内にある値または組成を指し、これは値または組成がどのように測定または決定されるか、すなわち、測定システムの限界に部分的に依存することになる。例えば、「約（ａｂｏｕｔ）」または「およそ（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」は、当技術分野の慣例により１標準偏差または１標準偏差を超える値以内を意味し得る。あるいは、「約（ａｂｏｕｔ）」または「約（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」は、測定システムの限界に応じて最大１０％（すなわち、±１０％）またはそれよりも大きい範囲を意味し得る。例えば、約５ｍｇは、４．５ｍｇ〜５．５ｍｇの間の任意の数を含み得る。さらに、特に生物システムまたはプロセスに関して、該用語は、値の１桁分までまたは５倍までを意味し得る。特定の値または組成が本開示で示される場合、特に明記されない限り、「約（ａｂｏｕｔ）」または「約（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」の意味は、その特定の値または組成の許容される誤差範囲内にあると想定されるべきである。
【００６２】
本明細書で使用される用語「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」ならびに他の関連する用語は、互換的に使用され、アミノ酸のポリマーを指し、任意の特定の長さに限定されない。ポリペプチドは、天然および非天然アミノ酸を含んでもよい。ポリペプチドには、組換え形態または化学的に合成された形態が含まれる。ポリペプチドはまた、切断、例えば分泌シグナルペプチドによる切断、またはある特定のアミノ酸残基での非酵素的切断にまだ供されていない前駆体分子も含む。ポリペプチドは、切断を受けた成熟分子を含む。これらの用語は、天然および人工のタンパク質、タンパク質断片およびタンパク質配列のポリペプチドアナログ（ムテイン、バリアント、キメラタンパク質および融合タンパク質など）、ならびに翻訳後修飾タンパク質、または他の方法で共有結合的もしくは非共有結合的に修飾されたタンパク質を包含する。組換え手順を使用して調製された、ＣＤ３８に結合する結合性タンパク質（例えば、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合性部分）のアミノ酸配列を含むポリペプチドが本明細書に記載される。
【００６３】
本明細書で使用される用語「核酸」、「ポリヌクレオチド」および「オリゴヌクレオチド」ならびに他の関連する用語は、互換的に使用され、ヌクレオチドのポリマーを指し、任意の特定の長さに限定されない。核酸には、組換え形態および化学的に合成された形態が含まれる。核酸には、ＤＮＡ分子（ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡ）、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ）、ヌクレオチドアナログ（例えば、ペプチド核酸および天然に存在しないヌクレオチドアナログ）を使用して生成されたＤＮＡまたはＲＮＡのアナログ、およびそれらのハイブリッドが含まれる。核酸分子は、一本鎖または二本鎖であってもよい。一実施形態では、本開示の核酸分子は、抗体、またはその断片もしくはｓｃＦｖ、誘導体、ムテイン、もしくはバリアントをコードする隣接するオープンリーディングフレームを含む。一実施形態では、核酸は、１つのタイプのポリヌクレオチド、または２つもしくはそれより多い異なるタイプのポリヌクレオチドの混合物を含む。抗体軽鎖、抗体重鎖、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合性部分をコードする核酸が本明細書に記載される。
【００６４】
用語「回収する」または「回収」または「回収すること」、および他の関連する用語は、宿主細胞培養培地からまたは宿主細胞溶解物からまたは宿主細胞膜から、タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合性部分）を得ることを指す。一実施形態では、タンパク質は、発現されたタンパク質の分泌を媒介する分泌シグナルペプチド配列に融合された組換えタンパク質として宿主細胞によって発現される。分泌されたタンパク質は、宿主細胞培地から回収され得る。一実施形態では、タンパク質は、分泌シグナルペプチド配列を欠く組換えタンパク質として宿主細胞によって発現され、宿主細胞溶解物から回収され得る。一実施形態では、タンパク質は、膜結合タンパク質として宿主細胞によって発現され、宿主細胞膜から発現されたタンパク質を放出するための界面活性剤を使用して回収され得る。一実施形態では、タンパク質を回収するのに使用される方法に関係なく、タンパク質は、回収されたタンパク質から細胞残屑を除去する手順に供され得る。例えば、回収されたタンパク質は、クロマトグラフィー、ゲル電気泳動および／または透析に供され得る。一実施形態では、クロマトグラフィーは、親和性クロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィーおよび／またはシリカクロマトグラフィーを含む、任意の１つのまたは任意の組合せのまたは２つもしくはそれより多い手順を含む。一実施形態では、親和性クロマトグラフィーは、プロテインＡまたはＧ（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ由来の細胞壁成分）を含む。
【００６５】
用語「単離された（ｉｓｏｌａｔｅｄ）」は、他の細胞物質を実質的に含まないタンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合性部分）またはポリヌクレオチドを指す。タンパク質は、当技術分野で周知のタンパク質精製法を使用する単離によって、天然において付随する成分（または抗体を産生するのに使用される細胞発現系もしくは化学合成方法に付随する成分）を実質的に含まなくなるようにされ得る。用語単離されたは、一部の実施形態では、同じ種の他の分子を実質的に含まないタンパク質またはポリヌクレオチド、例えば、それぞれ異なるアミノ酸配列またはヌクレオチド配列を有する他のタンパク質またはポリヌクレオチドも指す。所望の分子の均一性の純度は、ゲル電気泳動などの低分解能方法およびＨＰＬＣまたは質量分光光度法などの高分解能方法を含む、当技術分野で周知の手法を使用してアッセイすることができる。一実施形態では、抗体軽鎖、抗体重鎖、抗ＣＤ３８抗体のいずれかまたはその抗原結合性タンパク質が単離され得る。
【００６６】
本明細書で使用される「抗原結合性タンパク質」および関連する用語は、抗原に結合する部分、および必要に応じて、抗原結合性部分が、抗原への抗原結合性タンパク質の結合を促進するコンフォメーションをとることを可能にする足場部分またはフレームワーク部分を含むタンパク質を指す。抗原結合性タンパク質の例としては、抗体、抗体断片（例えば、抗体の抗原結合性部分）、抗体誘導体、および抗体アナログが挙げられる。抗原結合性タンパク質は、例えば、移植ＣＤＲまたはＣＤＲ誘導体を含む代替のタンパク質足場または人工足場を含んでもよい。そのような足場には、これらに限定されないが、例えば抗原結合性タンパク質の三次元構造を安定化するために導入された変異を含む抗体由来足場、および例えば生体適合性ポリマーを含む完全合成足場が含まれる。例えば、Korndorfer  et  al.,  2003,  Proteins:  Structure,  Function,  and  Bioinformatics,  Volume  53,  Issue  1:  121-129；Roque  et  al.,  2004,  Biotechnol.  Prog.  20:639-654を参照のこと。さらに、ペプチド抗体模倣体（「ＰＡＭ」）だけでなく、フィブロネクチン（fibronection）成分を足場として利用する抗体模倣体に基づく足場も使用され得る。ＣＤ３８に結合する抗原結合性タンパク質が本明細書に記載される。
【００６７】
抗原結合性タンパク質は、例えば、免疫グロブリンの構造を有してもよい。一実施形態では、「免疫グロブリン」は、２つの同一のポリペプチド鎖対から構成され、各対が一本の「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および一本の「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する、四量体分子を指す。各鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識に関与する約１００〜１１０個またはそれより多いアミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、主にエフェクター機能に関与する定常領域を規定する。ヒト軽鎖は、カッパまたはラムダ軽鎖として分類される。重鎖は、ミュー、デルタ、ガンマ、アルファ、またはイプシロンとして分類され、それぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＥとして抗体のアイソタイプを規定する。軽鎖および重鎖内では、可変および定常領域は、約１２個またはそれより多いアミノ酸の「Ｊ」領域によって連結され、重鎖は約１０個またはそれより多いアミノ酸の「Ｄ」領域も含む。一般的に、Fundamental  Immunology  Ch.  7（Paul,  W.,  ed.，2nd  ed.  Raven  Press,  N.Y.（1989））（あらゆる目的でその全体が参照により組み込まれる）を参照のこと。各軽鎖／重鎖対の可変領域は、インタクトな免疫グロブリンが２つの抗原結合性部位を有するように抗体結合性部位を形成する。一実施形態では、抗原結合性タンパク質は、四量体免疫グロブリン分子とは異なるが、依然として１個の標的抗原に結合する、または２個もしくはそれより多い標的抗原に結合する構造を有する合成分子であってもよい。例えば、合成抗原結合性タンパク質は、抗体断片、１〜６もしくはそれより多いポリペプチド鎖、ポリペプチドの非対称アセンブリー、または他の合成分子を含んでもよい。ＣＤ３８に特異的に結合する免疫グロブリン様特性を有する抗原結合性タンパク質が本明細書に記載される。
【００６８】
免疫グロブリン鎖の可変領域は、相補性決定領域またはＣＤＲとも呼ばれる３つの超可変領域によって連結された比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）の同じ一般構造を示す。Ｎ末端からＣ末端へ、軽鎖および重鎖は両方とも、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を含む。
【００６９】
１つまたは複数のＣＤＲは、分子を抗原結合性タンパク質にするために共有結合的または非共有結合的に分子に組み込まれてもよい。抗原結合性タンパク質は、ＣＤＲをより大きなポリペプチド鎖の一部として組み込んでもよく、ＣＤＲを別のポリペプチド鎖に共有結合させてもよく、またはＣＤＲを非共有結合的に組み込んでもよい。ＣＤＲにより、抗原結合性タンパク質は、目的の特定の抗原に特異的に結合できるようになる。
【００７０】
各ドメインへのアミノ酸の割り当ては、Sequences  of  Proteins  of  Immunological  Interest,  5th  Ed.,  US  Dept.  of  Health  and  Human  Services,  PHS,  NIH,  NIH  Publication  no.  91-3242，1991のKabatらの定義に従う。免疫グロブリン鎖のアミノ酸に対する他のナンバリングシステムには、ＩＭＧＴ．ＲＴＭ．（ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ  ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ；Lefranc  et  al,  Dev.  Comp.  Immunol.  29:185-203;  2005）およびＡＨｏ（Honegger  and  Pluckthun,  J.  Mol.  Biol.  309(3):657-670;  2001）；Ｃｈｏｔｈｉａ（Al-Lazikani  et  al.,  1997  Journal  of  Molecular  Biology  273:927-948；Ｃｏｎｔａｃｔ（Maccallum  et  al.,  1996  Journal  of  Molecular  Biology  262:732-745、およびＡｈｏ（Honegger  and  Pluckthun  2001  Journal  of  Molecular  Biology  309:657-670が含まれる。
【００７１】
本明細書で使用される「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）」および「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」ならびに関連する用語は、抗原に特異的に結合するインタクトな免疫グロブリンまたはその抗原結合性部分を指す。抗原結合性部分は、組換えＤＮＡ法またはインタクトな抗体の酵素的もしくは化学的切断によって産生されてもよい。抗原結合性部分には、特に、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、および相補性決定領域（ＣＤＲ）断片、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、キメラ抗体、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｙ）、テトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｙ）、およびポリペプチドに特異的抗原結合を付与するのに十分な免疫グロブリンの少なくとも一部を含有するポリペプチドが含まれる。
【００７２】
抗体には、組換え的に産生された抗体および抗原結合性部分が含まれる。抗体には、非ヒト、キメラ、ヒト化および完全ヒト抗体が含まれる。抗体には、単一特異性抗体、多特異性抗体（例えば、二重特異性、三重特異性および高次の特異性）が含まれる。抗体には、四量体抗体、軽鎖単量体、重鎖単量体、軽鎖二量体、重鎖二量体が含まれる。抗体には、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆａｂ’断片およびＦａｂ断片が含まれる。抗体には、単一ドメイン抗体、一価抗体、一本鎖抗体、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ラクダ化抗体（ｃａｍｅｌｉｚｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）、アフィボディ（ａｆｆｉｂｏｄｙ）、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、抗イディオタイプ抗体（抗Ｉｄ）、ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）が含まれる。抗体には、モノクローナルおよびポリクローナル集団が含まれる。抗体軽鎖および重鎖を含む抗ＣＤ３８抗体が本明細書に記載される。
【００７３】
本明細書で使用される「抗原結合性ドメイン」、「抗原結合性領域」、または「抗原結合性部位」および他の関連する用語は、抗原と相互作用し、抗原に対する抗原結合性タンパク質の特異性および親和性に寄与するアミノ酸残基（または他の部分）を含有する抗原結合性タンパク質の一部を指す。その抗原に特異的に結合する抗体に関して、これは、そのＣＤＲドメインのうちの少なくとも１つの少なくとも一部を含むことになる。抗ＣＤ３８抗体由来の抗原結合性ドメインが本明細書に記載される。
【００７４】
用語「特異的結合」、「特異的に結合する」または「特異的に結合すること」および他の関連する用語は、抗体または抗原結合性タンパク質または抗体断片の文脈において本明細書で使用される場合、他の分子または部分と比較して抗原への非共有結合的または共有結合的な優先的結合を指す（例えば、抗体は、他の利用可能な抗原と比較して特定の抗原に特異的に結合する）。一実施形態では、抗体が、１０−５Ｍもしくはそれより少ない、または１０−６Ｍもしくはそれより少ない、または１０−７Ｍもしくはそれより少ない、または１０−８Ｍもしくはそれより少ない、または１０−９Ｍもしくはそれより少ない、または１０−１０Ｍもしくはそれより少ない解離定数ＫＤで抗原に結合するならば、抗体は標的抗原に特異的に結合する。ＣＤ３８を特異的に結合する抗Ｃｄ３８抗体が本明細書に記載される。
【００７５】
一実施形態では、解離定数（ＫＤ）は、ＢＩＡＣＯＲＥ表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイを使用して測定することができる。表面プラズモン共鳴は、例えばＢＩＡＣＯＲＥシステム（ＧＥ  ＨｅａｌｔｈｃａｒｅのＢｉａｃｏｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ部、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を使用して、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化を検出することによりリアルタイム相互作用の分析を可能にする光学現象を指す。
【００７６】
本明細書で使用される場合、「エピトープ」および関連する用語は、抗原結合性タンパク質が（例えば、抗体またはその抗原結合性部分が）結合する抗原の一部を指す。エピトープは、抗原結合性タンパク質が結合する２個またはそれより多い抗原の一部を含んでもよい。エピトープは、１個の抗原または２個もしくはそれより多い抗原の非隣接部分を含んでもよい（例えば、抗原の一次配列では隣接しないが、抗原の三次および四次構造の文脈では、抗原結合性タンパク質が結合するのに互いに十分近いアミノ酸残基）。一般的に、抗体の可変領域、特にＣＤＲは、エピトープと相互作用する。ＣＤ３８ポリペプチド（抗原）のエピトープに結合する抗ＣＤ３８抗体、およびその抗原結合性タンパク質が本明細書に記載される。
【００７７】
本明細書で使用される「抗体断片」、「抗体部分」、「抗体の抗原結合性断片」、または「抗体の抗原結合性部分」および他の関連する用語は、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体の一部を含む、インタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、これらに限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；Ｆｄ；およびＦｖ断片、ならびにｄＡｂ；ダイアボディ；直鎖状抗体；一本鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ）；ポリペプチドに特異的抗原結合を付与するのに十分な抗体の少なくとも一部を含有するポリペプチドが挙げられる。抗体の抗原結合性部分は、組換えＤＮＡ法またはインタクトな抗体の酵素的もしくは化学的切断によって産生されてもよい。抗原結合性部分には、特に、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、および相補性決定領域（ＣＤＲ）断片、キメラ抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、および抗体断片に抗原結合性特性を付与するのに十分な免疫グロブリンの少なくとも一部を含有するポリペプチドが含まれる。抗ＣＤ３８抗体の抗原結合性断片が本明細書に記載される。
【００７８】
用語「Ｆａｂ」、「Ｆａｂ断片」および他の関連する用語は、可変軽鎖領域（ＶＬ）、定常軽鎖領域（ＣＬ）、可変重鎖領域（ＶＨ）、および第１の定常領域（ＣＨ１）を含む一価の断片を指す。Ｆａｂは、抗原に結合することができる。Ｆ（ａｂ’）２断片は、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２個のＦａｂ’断片を含む二価の断片である。Ｆ（ａｂ’）２は、抗原結合能を有する。Ｆｄ断片は、ＶＨおよびＣＨ１領域を含む。Ｆｖ断片は、ＶＬおよびＶＨ領域を含む。Ｆｖは、抗原に結合することができる。ｄＡｂ断片は、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、またはＶＨもしくはＶＬドメインの抗原結合性断片を有する（米国特許第６，８４６，６３４号および第６，６９６，２４５号；米国特許出願公開第２００２／０２５１２号、第２００４／０２０２９９５号、第２００４／００３８２９１号、第２００４／０００９５０７号、第２００３／００３９９５８号；ならびにWard  et  al.,  Nature  341:544-546，1989）。抗ＣＤ３８抗体由来の抗原結合性部分を含むＦａｂ断片が本明細書に記載される。
【００７９】
一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）は、ＶＬおよびＶＨ領域がリンカー（例えば、アミノ酸残基の合成配列）を介して連結されて、連続タンパク質鎖を形成する抗体である。好ましくはリンカーは、タンパク質鎖がそれ自体に折り重なり、一価抗原結合性部位を形成することを可能にするのに十分に長い（例えば、Bird  et  al.,  1988,  Science  242:423-26およびHuston  et  al.,  1988,  Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA  85:5879-83を参照のこと）。抗ＣＤ３８抗体由来の抗原結合性部分を含む一本鎖抗体が本明細書に記載される。
【００８０】
ダイアボディは、２本のポリペプチド鎖を含む二価の抗体であり、各ポリペプチド鎖は、同じ鎖の２つのドメイン間での対合を可能にするには短すぎ、故に各ドメインを別のポリペプチド鎖の相補性ドメインと対合させるリンカーによって連結されたＶＨおよびＶＬドメインを含む（例えば、Holliger  et  al.,  1993,  Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA  90:6444-48、およびPoljak  et  al.,  1994,  Structure  2:1121-23を参照のこと）。ダイアボディの２本のポリペプチド鎖が同一であるならば、それらの対合により生じるダイアボディは２つの同一の抗原結合性部位を有することになる。異なる配列を有するポリペプチド鎖は、２つの異なる抗原結合性部位を有するダイアボディを作製するのに使用することができる。同様に、トリボディ（tribodｙ）およびテトラボディは、それぞれ３本および４本のポリペプチド鎖を含み、それぞれ同じであっても異なっていてもよい３つおよび４つの抗原結合性部位を形成する抗体である。ダイアボディ、トリボディ（tribody）およびテトラボディ構築物は、本明細書に記載されている抗ＣＤ３８抗体のいずれか由来の抗原結合性部分を使用して調製することができる。
【００８１】
用語「ヒト抗体」は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する１つまたは複数の可変領域および定常領域を有する抗体を指す。一実施形態では、可変および定常ドメインの全てが、ヒト免疫グロブリン配列（例えば、完全ヒト抗体）に由来する。これらの抗体は様々な方法で調製することができ、組換え方法または、ヒト重鎖および／もしくは軽鎖コード遺伝子に由来する抗体を発現するように遺伝子改変されたマウスの目的の抗原を用いた免疫化を含め、その例が以下に記載されている。完全ヒト抗ＣＤ３８抗体およびその抗原結合性タンパク質が本明細書に記載される。
【００８２】
「ヒト化」抗体は、ヒト被験体に投与される場合、非ヒト種抗体と比べて免疫応答を誘導する可能性が低い、および／またはより重度でない免疫応答をヒト化抗体が誘導するように、１つまたは複数のアミノ酸置換、欠失、および／または付加によって非ヒト種に由来する抗体の配列とは異なる配列を有する抗体を指す。一実施形態では、非ヒト種抗体の重鎖および／または軽鎖のフレームワークおよび定常ドメイン中のある特定のアミノ酸が、ヒト化抗体を産生するように変異を導入される。別の実施形態では、ヒト抗体由来の定常ドメインが非ヒト種の可変ドメインに融合される。別の実施形態では、ヒト被験体に投与される場合、非ヒト抗体の可能性のある免疫原性を低減するために、非ヒト抗体の１つまたは複数のＣＤＲ配列の１つまたは複数のアミノ酸残基が変更される。変更されたアミノ酸残基はいずれも、抗体のその抗原への免疫特異的結合に重要でなく、または抗原へのヒト化抗体の結合が抗原への非ヒト抗体の結合より著しく悪くならないように、行われるアミノ酸配列の変更は保存的変更である。ヒト化抗体の作製方法の例は、米国特許第６，０５４，２９７号、第５，８８６，１５２号および第５，８７７，２９３号に見出すことができる。
【００８３】
本明細書で使用される用語「キメラ抗体」および関連する用語は、第１の抗体由来の１つまたは複数の領域、および１つまたは複数の他の抗体由来の１つまたは複数の領域を含有する抗体を指す。一実施形態では、ＣＤＲの１つまたは複数はヒト抗体に由来する。別の実施形態では、ＣＤＲの全てがヒト抗体に由来する。別の実施形態では、１つより多いヒト抗体由来のＣＤＲがキメラ抗体において混合され、マッチングされる。例えば、キメラ抗体は、第１のヒト抗体の軽鎖由来のＣＤＲ１と、第２のヒト抗体の軽鎖由来のＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、第３の抗体からの重鎖由来のＣＤＲとを含んでもよい。別の例では、ＣＤＲは、ヒトおよびマウス、またはヒトおよびウサギ、またはヒトおよびヤギなどの異なる種に由来する。当業者は、他の組合せが可能であることを理解するであろう。
【００８４】
さらに、フレームワーク領域は、同じ抗体のうちの１つ、ヒト抗体などの１つもしくは複数の異なる抗体、またはヒト化抗体に由来してもよい。キメラ抗体の１つの例では、重鎖および／または軽鎖の一部は、特定の種由来の抗体または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体と同一であり、相同であり、またはこれに由来するが、該鎖の残りの部分は、別の種由来の抗体または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体と同一であり、相同であり、またはこれに由来する。また、所望の生物活性（すなわち、標的抗原に特異的に結合する能力）を示すそのような抗体の断片も含まれる。キメラ抗体は、本明細書に記載されている抗ＣＤ３８抗体の一部から調製することができる。
【００８５】
本明細書で使用される場合、用語「バリアント」ポリペプチドおよびポリペプチドの「バリアント」は、参照ポリペプチド配列と比較して、１つまたは複数のアミノ酸残基がアミノ酸配列に挿入され、該配列から欠失されおよび／または該配列へと置換により導入されているアミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。ポリペプチドバリアントには、融合タンパク質が含まれる。同様に、バリアントポリヌクレオチドは、別のポリヌクレオチド配列と比較して、１つまたは複数のヌクレオチドがヌクレオチド配列に挿入され、該配列から欠失されおよび／または該配列へと置換により導入されているヌクレオチド配列を含む。ポリヌクレオチドバリアントには、融合ポリヌクレオチドが含まれる。
【００８６】
本明細書で使用される場合、用語ポリペプチドの「誘導体」は、例えば、ポリエチレングリコール、アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン）などの別の化学的部分へのコンジュゲーション、リン酸化、およびグリコシル化を例えば介して、化学的に改変されているポリペプチド（例えば、抗体）である。特に指示のない限り、用語「抗体」には、２本の完全長重鎖と２本の完全長軽鎖とを含む抗体に加えて、その誘導体、バリアント、断片、およびムテインが含まれ、その例が以下に記載される。
【００８７】
用語「Ｆｃ」または「Ｆｃ領域」は、本明細書で使用される場合、ヒンジ領域中またはその後で始まり、重鎖のＣ末端で終わる抗体重鎖定常領域の部分を指す。Ｆｃ領域は、ＣＨおよびＣＨ３領域の少なくとも一部を含み、ヒンジ領域の一部を含んでも含まなくてもよい。それぞれが半分のＦｃ領域を有する２本のポリペプチド鎖は、二量体化して完全Ｆｃドメインを形成することができる。Ｆｃドメインは、Ｆｃ細胞表面受容体および免疫補体系の一部のタンパク質に結合することができる。Ｆｃドメインは、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性ファゴサイトーシス（ＡＤＰ）、オプソニン化および／または細胞結合を含む、２つまたはそれより多い活性のいずれか１つまたは任意の組合せを含むエフェクター機能を示す。Ｆｃドメインは、ＦｃγＲＩ（例えば、ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（例えば、ＣＤ３２）および／またはＦｃγＲＩＩＩ（例えば、ＣＤ１６ａ）を含むＦｃ受容体に結合することができる。
【００８８】
用語「標識抗体」または関連する用語は、本明細書で使用される場合、非標識である、または検出のための検出可能な標識もしくは部分に連結された抗体およびその抗原結合性部分を指し、検出可能な標識または部分は、放射性、比色、抗原性、酵素性、検出可能なビーズ（磁気または高電子密度（例えば、金）ビーズなど）、ビオチン、ストレプトアビジンまたはプロテインＡである。放射性核種、蛍光体（fluorescer）、酵素、酵素基質、酵素補因子、酵素阻害剤およびリガンド（例えば、ビオチン、ハプテン）を含むがこれらに限定されない様々な標識が用いられ得る。本明細書に記載されている抗ＣＤ３８抗体はいずれも、非標識であってもよく、または検出可能な標識もしくは部分に連結されてもよい。
【００８９】
本明細書で使用される「同一性パーセント」または「相同性パーセント」および関連する用語は、２つのポリペプチド配列間または２つのポリヌクレオチド配列間の類似性の定量的測定値を指す。２つのポリペプチド配列間の同一性パーセントは、２つのポリペプチド配列のアライメントを最適化するために導入する必要があり得るギャップの数、および各ギャップの長さを考慮した、２つのポリペプチド配列間で共有される、アライメントされた位置における同一のアミノ酸の数の関数である。同様の方法で、２つのポリヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、２つのポリヌクレオチド配列のアライメントを最適化するために導入する必要があり得るギャップの数、および各ギャップの長さを考慮した、２つのポリヌクレオチド配列間で共有される、アライメントされた位置における同一のヌクレオチドの数の関数である。２つのポリペプチド配列間、または２つのポリヌクレオチド配列間の配列の比較および同一性パーセントの決定は、数学アルゴリズムを使用して達成することができる。例えば、２つのポリペプチド配列または２つのポリヌクレオチド配列の「同一性パーセント」または「相同性パーセント」は、デフォルトパラメータを使用するＧＡＰコンピュータプログラム（ＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｐａｃｋａｇｅ、ｖｅｒｓｉｏｎ  １０．３（Ａｃｃｅｌｒｙｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．）の一部）を使用して配列を比較することによって決定されてもよい。テスト配列に関して「Ｙと少なくともＸ％の同一性を有する配列を含む」などの表現は、上記のように配列Ｙに対してアライメントされる場合、テスト配列が、Ｙの残基の少なくともＸ％と同一の残基を含むことを意味する。
【００９０】
一実施形態では、テスト抗体のアミノ酸配列は、本明細書に記載されている抗ＣＤ３８抗体のいずれか、またはその抗原結合性タンパク質を構成する軽鎖および／または重鎖ポリペプチドのアミノ酸配列のいずれかと類似し得るが、同一でなくてもよい。テスト抗体とポリペプチドとの間の類似性は、本明細書に記載されている抗ＣＤ３８抗体のいずれか、またはその抗原結合性タンパク質を構成する軽鎖および／または重鎖ポリペプチドのいずれかに対して、少なくとも９５％、または少なくとも９６％同一、または少なくとも９７％同一、または少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であってもよい。一実施形態では、類似のポリペプチドは、重鎖および／または軽鎖内にアミノ酸置換を含有してもよい。一実施形態では、アミノ酸置換は、１つまたは複数の保存的アミノ酸置換を含む。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、化学的特性（例えば、電荷または疎水性）が類似している側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基によって置換されているものである。一般に、保存的アミノ酸置換は、実質的にタンパク質の機能特性を変更させることはない。２つまたはそれより多いアミノ酸配列が保存的置換によって互いに異なる場合、配列同一性パーセントまたは類似度は、置換の保存的性質を補正するために上方調整され得る。この調整を行う手段は当業者に周知である。例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Pearson（1994）Methods  Mol.  Biol.  24:307-331を参照のこと。化学的特性が類似している側鎖を有するアミノ酸の群の例としては、以下が挙げられる。（１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン；（２）脂肪族−ヒドロキシル側鎖：セリンおよびスレオニン；（３）アミド含有側鎖：アスパラギンおよびグルタミン；（４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファン；（５）塩基性側鎖：リシン、アルギニン、およびヒスチジン；（６）酸性側鎖：アスパラギン酸およびグルタミン酸、ならびに（７）硫黄含有側鎖はシステインおよびメチオニンである。
【００９１】
抗体は、様々な抗原特異性を有する免疫グロブリンを含有する血清または血漿などの供給源から得ることができる。そのような抗体が親和性精製に供される場合、抗体は特定の抗原特異性を濃縮することができる。抗体のそのような濃縮された調製物は、通常、特定の抗原に対して特異的結合活性を有する約１０％未満の抗体で作製されている。これらの調製物を数回の親和性精製に供すると、抗原に対して特異的結合活性を有する抗体の割合を増加させることができる。このようにして調製された抗体は、しばしば「単一特異性」であると言及される。単一特異性抗体調製物は、特定の抗原に対して特異的結合活性を有する約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、または９９．９％の抗体で構成され得る。抗体は、下記のように組換え核酸技術を使用して産生されてもよい。
【００９２】
本明細書で使用される「ベクター」および関連する用語は、外来遺伝物質（例えば、核酸導入遺伝子）に作動可能に連結することができる核酸分子（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）を指す。ベクターは、外来遺伝物質を細胞（例えば、宿主細胞）に導入するビヒクルとして使用することができる。ベクターは、ベクターに導入遺伝子を挿入するための少なくとも１つの制限エンドヌクレアーゼ認識配列を含んでもよい。ベクターは、抗生物質耐性またはベクター−導入遺伝子構築物を含む宿主細胞の選択に役立つ選択可能な特徴を付与する少なくとも１つの遺伝子配列を含んでもよい。ベクターは、一本鎖または二本鎖核酸分子であってもよい。ベクターは、直鎖状または環状核酸分子であってもよい。ベクターの１つのタイプは「プラスミド」である。プラスミドは、導入遺伝子に連結することができ、宿主細胞中で複製し、導入遺伝子を転写および／または翻訳することができる、直鎖状または環状二本鎖染色体外ＤＮＡ分子を指す。ウイルスベクターは、典型的には、導入遺伝子に連結することができるウイルスＲＮＡまたはＤＮＡ骨格配列を含有する。ウイルス骨格配列は、感染を無効にするが宿主細胞ゲノムへのウイルス骨格および共連結導入遺伝子の挿入を保持するように修飾され得る。ウイルスベクターの例としては、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴、バキュロウイルス、パポバウイルス、ワクシニアウイルス、単純ヘルペスウイルスおよびエプスタインバーウイルスベクターが挙げられる。ある特定のベクターは、これらが導入される宿主細胞中で自律複製することができる（例えば、細菌複製起点を含む細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入時に宿主細胞のゲノムに組み込まれ、これにより宿主ゲノムと一緒に複製される。
【００９３】
「発現ベクター」は、誘導性および／または構成的プロモーターならびにエンハンサーなどの、１つまたは複数の調節配列を含有することができるベクターの１つのタイプである。発現ベクターは、リボソーム結合部位および／またはポリアデニル化部位を含んでもよい。調節配列は、宿主細胞に形質導入される発現ベクターに連結された導入遺伝子の転写、または転写および翻訳を指示する。調節配列は、導入遺伝子の発現のレベル、タイミングおよび／または位置を制御することができる。調節配列は、例えば、導入遺伝子に対するその効果を直接発揮してもよく、または１つもしくは複数他の分子（例えば、調節配列および／または核酸に結合するポリペプチド）の作用を通じて発揮してもよい。調節配列は、ベクターの一部であってもよい。調節配列のさらなる例は、例えば、Goeddel,  1990,  Gene  Expression  Technology:  Methods  in  Enzymology  185,  Academic  Press,  San  Diego,  Calif.およびBaron  et  al.,  1995,  Nucleic  Acids  Res.  23:3605-3606に記載されている。発現ベクターは、本明細書に記載されている軽鎖、重鎖または抗ＣＤ３８抗体のいずれかの少なくとも一部をコードする核酸を含み得る。
【００９４】
ベクターに含有された導入遺伝子配列の機能または発現を可能にするための導入遺伝子とベクターとの間の連結がある場合、導入遺伝子はベクターに「作動可能に連結され」ている。一実施形態では、調節配列が導入遺伝子の発現（例えば、発現のレベル、タイミング、または位置）に影響を与える場合、導入遺伝子は、調節配列に「作動可能に連結され」ている。
【００９５】
本明細書で使用される用語「トランスフェクトされた」もしくは「形質転換された」もしくは「形質導入された」または他の関連する用語は、外因性核酸（例えば、導入遺伝子）が宿主細胞に移入または導入されるプロセスを指す。「トランスフェクトされた」または「形質転換された」または「形質導入された」宿主細胞は、外因性核酸（導入遺伝子）をトランスフェクト、形質転換または形質導入したものである。宿主細胞には、初代被験体細胞およびその子孫が含まれる。本明細書に記載されている軽鎖、重鎖または抗ＣＤ３８抗体のいずれかの少なくとも一部をコードする外因性核酸が、宿主細胞に導入されてもよい。本明細書に記載されている軽鎖、重鎖または抗ＣＤ３８抗体のいずれかの少なくとも一部を含む発現ベクターが、宿主細胞に導入されてもよく、宿主細胞は、軽鎖、重鎖または抗ＣＤ３８抗体の少なくとも一部を含むポリペプチドを発現し得る。
【００９６】
用語「宿主細胞」もしくは「宿主細胞の集団」または関連する用語は、本明細書で使用される場合、外来（外因性または導入遺伝子）核酸が導入されている細胞（またはその集団）を指す。外来核酸は、導入遺伝子に作動可能に連結された発現ベクターを含んでもよく、核酸、および／または外来核酸（導入遺伝子）によってコードされたポリペプチドを発現するのに宿主細胞が使用され得る。宿主細胞（またはその集団）は、培養細胞であってもよく、または被験体から抽出されてもよい。宿主細胞（またはその集団）には、継代数に関係なく初代被験体細胞およびその子孫が含まれる。子孫細胞は、親細胞と比べて同一の遺伝物質を含んでも含んでいなくてもよい。宿主細胞は、子孫細胞を包含する。一実施形態では、宿主細胞は、本明細書に開示されているように、抗体を発現させるための任意の方法で修飾、トランスフェクト、形質導入、形質転換、および／または操作されている任意の細胞（その子孫を含む）を説明する。１つの例では、宿主細胞（またはその集団）は、本明細書に記載されている所望の抗体、またはその抗原結合性部分をコードする核酸に作動可能に連結された発現ベクターを導入されてもよい。宿主細胞およびその集団は、宿主のゲノムに安定に組み込まれた発現ベクターを含んでもよく、または染色体外発現ベクターを含んでもよい。一実施形態では、宿主細胞およびその集団は、数回の細胞分裂後に存在する、または一時的に存在し、そして数回の細胞分裂後に消失する染色体外ベクターを含んでもよい。
【００９７】
宿主細胞は、原核生物、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉであってもよく、または真核生物、例えば、単細胞真核生物（例えば、酵母または他の真菌）、植物細胞（例えば、タバコまたはトマト植物細胞）、哺乳動物細胞（例えば、ヒト細胞、サル細胞、ハムスター細胞、ラット細胞、マウス細胞、また昆虫細胞）もしくはハイブリドーマであってもよい。一実施形態では、宿主細胞に、所望の抗体をコードする核酸に作動可能に連結された発現ベクターを導入してもよく、これにより、トランスフェクト／形質転換された宿主細胞による抗体の発現に適した条件下で培養されるトランスフェクト／形質転換された宿主細胞を生成し、必要に応じて、トランスフェクト／形質転換された宿主細胞から抗体を回収（例えば、宿主細胞溶解物からの回収）、または培養培地から回収してもよい。一実施形態では、宿主細胞は、ＣＨＯ、ＢＨＫ、ＮＳ０、ＳＰ２／０、およびＹＢ２／０を含む非ヒト細胞を含む。一実施形態では、宿主細胞は、ＨＥＫ２９３、ＨＴ−１０８０、Ｈｕｈ−７およびＰＥＲ．Ｃ６を含むヒト細胞を含む。宿主細胞の例としては、サル腎臓細胞のＣＯＳ−７系（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５１）（Gluzman  et  al.,  1981,  Cell  23:175を参照のこと）、Ｌ細胞、Ｃ１２７細胞、３Ｔ３細胞（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  １６３）、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞もしくはその派生物、例えばＶｅｇｇｉｅ  ＣＨＯおよび血清不含有培地で増殖する関連する細胞系（Rasmussen  et  al.,  1998,  Cytotechnology  28:31を参照のこと）もしくはＤＨＦＲが欠損しているＣＨＯ株ＤＸ−Ｂ１１（Urlaub  et  al.,  1980,  Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA  77:4216-20を参照のこと）など、ＨｅＬａ細胞、ＢＨＫ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １０）細胞系、アフリカミドリザル腎臓細胞系ＣＶ１に由来するＣＶ１／ＥＢＮＡ細胞系（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７０）（McMahan  et  al.,  1991,  EMBO  J.  10:2821を参照のこと）、ヒト胎児腎臓細胞、例えば２９３、２９３ＥＢＮＡまたはＭＳＲ２９３など、ヒト上皮Ａ４３１細胞、ヒトＣｏｌｏ２０５細胞、他の形質転換された霊長類細胞系、正常な二倍体細胞、一次組織のｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養物に由来する細胞系、一次外植片、ＨＬ−６０、Ｕ９３７、ＨａＫまたはＪｕｒｋａｔ細胞が挙げられる。一実施形態では、宿主細胞には、Ｙ０、ＮＳ０またはＳｐ２０などのリンパ球系細胞が含まれる。一実施形態では、宿主細胞は哺乳動物宿主細胞であるが、ヒト宿主細胞ではない。典型的には、宿主細胞は、ポリペプチドコード核酸を形質転換またはトランスフェクトされ得、次いで宿主細胞において発現され得る培養細胞である。句「トランスジェニック宿主細胞」または「組換え宿主細胞」は、発現されるべき核酸を形質転換またはトランスフェクトされている宿主細胞を表すのに使用され得る。宿主細胞はまた、核酸を含むものの、調節配列が核酸と作動可能に連結されるように宿主細胞に導入されない限り、所望のレベルの核酸を発現しない細胞であってもよい。用語宿主細胞は、特定の被験体細胞だけでなく、そのような細胞の子孫または潜在的子孫も指すことが理解される。ある特定の修飾が、例えば変異または環境的影響により後続世代で起こり得るので、そのような子孫は、親細胞と実際に同一でない場合があるが、本明細書で使用される��語の範囲内に依然として含まれる。
【００９８】
本開示のポリペプチド（例えば、抗体および抗原結合性タンパク質）は、当技術分野で公知の任意の方法を使用して産生され得る。１つの例では、ポリペプチドは、宿主細胞に導入され、発現を促進する条件下で宿主細胞によって発現される組換え発現ベクターに、ポリペプチドをコードする核酸配列（例えば、ＤＮＡ）を挿入することによる組換え核酸方法によって産生される。
【００９９】
組換え核酸操作の一般的な手法は、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Sambrook  et  al.,  Molecular  Cloning:  A  Laboratory  Manual,  Vols.  1-3,  Cold  Spring  Harbor  Laboratory  Press,  2  ed.,  1989、またはF.  Ausubel  et  al.,  Current  Protocols  in  Molecular  Biology（Green  PublishingおよびWiley-Interscience:  New  York,  1987）および定期的更新版に記載されている。ポリペプチドをコードする核酸（例えば、ＤＮＡ）は、哺乳動物、ウイルス、または昆虫遺伝子に由来する１つまたは複数の適切な転写または翻訳調節エレメントを有する発現ベクターに作動可能に連結される。そのような調節エレメントには、転写プロモーター、転写を制御するための必要に応じたオペレーター配列、適切なｍＲＮＡリボソーム結合部位をコードする配列、ならびに転写および翻訳の終結を制御する配列が含まれる。発現ベクターは、宿主細胞における複製能を付与する複製起点を含んでもよい。発現ベクターは、トランスジェニック宿主細胞（例えば、形質転換体）の認識を容易にするための選択を付与する遺伝子を含んでもよい。
【０１００】
組換えＤＮＡは、タンパク質の精製に有用であり得る任意のタイプのタンパク質タグ配列もコードすることができる。タンパク質タグの例には、これらに限定されないが、ヒスチジンタグ、ＦＬＡＧタグ、ｍｙｃタグ、ＨＡタグ、またはＧＳＴタグが含まれる。細菌、真菌、酵母、および哺乳動物細胞宿主と使用するための妥当なクローニングおよび発現ベクターは、Cloning  Vectors:  A  Laboratory  Manual,  （Elsevier,  N.Y.,  1985）に見出すことができる。
【０１０１】
発現ベクター構築物は、宿主細胞にとって妥当な方法を使用して宿主細胞に導入することができる。電気穿孔；塩化カルシウム、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥ−デキストラン、または他の物質を用いるトランスフェクション；ウイルストランスフェクション；非ウイルストランスフェクション；微粒子銃；リポフェクション；および感染（例えば、ベクターが感染病原体である場合）を含むがこれらに限定されない、核酸を宿主細胞に導入するための様々な方法が、当技術分野で公知である。適切な宿主細胞には、原核生物、酵母、哺乳動物細胞、または細菌細胞が含まれる。
【０１０２】
適切な細菌には、グラム陰性またはグラム陽性生物、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉまたはＢａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐｐ．が含まれる。Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅなどの好ましくはＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ種由来の酵母も、ポリペプチドの産生に使用され得る。様々な哺乳動物または昆虫細胞培養系も、組換えタンパク質を発現させるのに用いられ得る。昆虫細胞における異種タンパク質の産生のためのバキュロウイルス系は、Luckow  and  Summers,（Bio/Technology,  6:47,  1988）によって概説されている。適切な哺乳動物宿主細胞系の例としては、内皮細胞、ＣＯＳ−７サル腎臓細胞、ＣＶ−１、Ｌ細胞、Ｃ１２７、３Ｔ３、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、ヒト胎児腎臓細胞、ＨｅＬａ、２９３、２９３Ｔ、およびＢＨＫ細胞系が挙げられる。精製ポリペプチドは、組換えタンパク質を発現させるのに適切な宿主／ベクター系を培養して調製される。多くの適用に関して、本明細書に開示されているポリペプチドの小さいサイズの多くが、発現の好ましい方法としてＥ．ｃｏｌｉで発現することになる。タンパク質は、次いで培養培地または細胞抽出物から精製される。軽鎖、重鎖もしくは抗ＣＤ３８抗体、またはその抗原結合性タンパク質はいずれも、トランスジェニック宿主細胞によって発現され得る。
【０１０３】
本明細書に開示されている抗体および抗原結合性タンパク質はまた、細胞翻訳系を使用して産生することもできる。そのような目的のために、ポリペプチドをコードする核酸は、ｍＲＮＡを産生するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写を可能にする、および利用される特定の無細胞系（哺乳動物もしくは酵母無細胞翻訳系などの真核生物無細胞翻訳系、または細菌無細胞翻訳系などの原核生物無細胞翻訳系）でのｍＲＮＡの無細胞翻訳を可能にするように修飾されなければならない。
【０１０４】
本明細書に開示されている様々なポリペプチドのいずれかをコードする核酸は、化学的に合成されてもよい。コドン使用頻度は、細胞における発現を改善するように選択され得る。そのようなコドン使用頻度は、選択される細胞タイプに依存することになる。特殊化されたコドン使用頻度パターンが、Ｅ．ｃｏｌｉおよび他の細菌、ならびに哺乳動物細胞、植物細胞、酵母細胞および昆虫細胞に関して開発されている。例えば、Mayfield  et  al.,  Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA.  2003  100(2):438-42；Sinclair  et  al.  Protein  Expr.  Purif.  2002(1):96-105；Connell  N  D.  Curr.  Opin.  Biotechnol.  2001  12(5):446-9；Makrides  et  al.  Microbiol.  Rev.  1996  60(3):512-38；およびSharp  et  al.  Yeast.  1991  7(7):657-78を参照のこと。
【０１０５】
本明細書に記載されている抗体および抗原結合性タンパク質はまた、化学合成によって（例えば、Solid  Phase  Peptide  Synthesis,  2nd  ed.,  1984,  The  Pierce  Chemical  Co.,  Rockford,  Ill.に記載されている方法によって）産生することもできる。タンパク質に対する修飾も、化学合成によってもたらされ得る。
【０１０６】
本明細書に記載されている抗体および抗原結合性タンパク質は、タンパク質化学の分野で一般的に公知のタンパク質の単離／精製方法によって精製することができる。非限定的な例としては、抽出、再結晶、塩析（例えば、硫酸アンモニウムまたは硫酸ナトリウムを用いた）、遠心分離、透析、限外濾過、吸着クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、順相クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、ゲル濾過、ゲル浸透クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィー、電気泳動、向流分配またはこれらの任意の組合せが含まれる。精製後、ポリペプチドは、濾過および透析を含むがこれらに限定されない当技術分野に公知の様々な方法のいずれかによって、異なる緩衝液に交換および／または濃縮され得る。
【０１０７】
本明細書に記載されている精製された抗体および抗原結合性タンパク質は、好ましくは少なくとも６５％純粋、少なくとも７５％純粋、少なくとも８５％純粋、より好ましくは少なくとも９５％純粋、および最も好ましくは少なくとも９８％純粋である。純度の正確な数値とは関係なく、ポリペプチドは、医薬製品としての使用のために十分に純粋である。本明細書に記載されている軽鎖、重鎖もしくは抗ＣＤ３８抗体、またはその抗原結合性タンパク質はいずれも、トランスジェニック宿主細胞によって発現され、次いで当技術分野に公知の任意の方法を使用して、約６５〜９８％の純度または高レベルの純度まで精製され得る。
【０１０８】
ある特定の実施形態では、本明細書における抗体および抗原結合性タンパク質は、翻訳後修飾をさらに含んでもよい。例示的な翻訳後タンパク質修飾には、リン酸化、アセチル化、メチル化、ＡＤＰ−リボシル化、ユビキチン化、グリコシル化、カルボニル化、ＳＵＭＯ化、ビオチン化またはポリペプチド側鎖もしくは疎水性基の付加が含まれる。結果として、修飾されたポリペプチドは、脂質、多糖または単糖、およびリン酸塩などの非アミノ酸エレメントを含有することができる。グリコシル化の好ましい形態は、１つまたは複数のシアル酸部分をポリペプチドにコンジュゲートするシアリル化である。シアル酸部分は、溶解度および血清半減期を改善するが、タンパク質の免疫原性の可能性も低減する。Raju  et  al.  Biochemistry.  2001  31;  40(30):8868-76を参照のこと。
【０１０９】
一実施形態では、本明細書に記載されている抗体および抗原結合性タンパク質は、可溶性ポリペプチドになるように修飾されてもよく、これは、非タンパク質性ポリマーに抗体および抗原結合性タンパク質を連結することを含む。一実施形態では、非タンパク質性ポリマーは、米国特許第４，６４０，８３５号；第４，４９６，６８９号；第４，３０１，１４４号；第４，６７０，４１７号；第４，７９１，１９２号または第４，１７９，３３７号に記載されているようにポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）、ポリプロピレングリコール、またはポリオキシアルキレンを含む。
【０１１０】
ＰＥＧは、市販されている水溶性ポリマーであり、または当技術分野で周知の方法（Sandler  and  Karo,  Polymer  Synthesis,  Academic  Press,  New  York,  Vol.  3,  pages  138-161）に従って、エチレングリコールの開環重合によって調製することができる。用語「ＰＥＧ」は、サイズまたはＰＥＧの末端の修飾に関係なく任意のポリエチレングリコール分子を包含するのに広く使用され、式：Ｘ−Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ（１）（ここで、ｎは２０〜２３００であり、ＸはＨまたは末端修飾、例えば、Ｃ１〜４アルキルである）によって表すことができる。一実施形態では、ＰＥＧは、一方の末端がヒドロキシまたはメトキシで終結する（すなわち、ＸはＨまたはＣＨ３である（「メトキシＰＥＧ」））。ＰＥＧは、結合反応に必要な化学基をさらに含有してもよく；これは、分子の化学合成から生じ；または、分子の一部の最適な距離のためのスペーサーである。さらに、そのようなＰＥＧは、一緒に連結された１つまたは複数のＰＥＧ側鎖からなってもよい。１つより多いＰＥＧ鎖を有するＰＥＧは、多分岐型（ｍｕｌｔｉａｒｍｅｄ）または分枝型（ｂｒａｎｃｈｅｄ）ＰＥＧと呼ばれる。分枝型ＰＥＧは、例えば、グリセロール、ペンタエリスリトール（pentaerythriol）、およびソルビトールを含む様々なポリオールにポリエチレンオキシドを付加して調製することができる。例えば、４アーム分枝型ＰＥＧは、ペンタエリスリトールおよびエチレンオキシドから調製することができる。分枝型ＰＥＧは、例えば、ＥＰ−Ａ０４７３０８４および米国特許第５，９３２，４６２号に記載されている。ＰＥＧの１つの形態は、リシンの一級アミノ基を介して連結された２つのＰＥＧ側鎖（ＰＥＧ２）を含む（Monfardini  et  al.,  Bioconjugate  Chem.  6(1995)  62-69）。
【０１１１】
ＰＥＧ修飾ポリペプチドの血清クリアランス速度は、非修飾抗体および抗原結合性タンパク質結合ポリペプチドのクリアランス速度と比較して、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、またはさらには９０％モジュレート（例えば、増加または減少）され得る。ＰＥＧ修飾抗体および抗原結合性タンパク質は、非修飾ポリペプチドの半減期と比較して増大した半減期（ｔ１／２）を有し得る。ＰＥＧ修飾ポリペプチドの半減期は、非修飾抗体および抗原結合性タンパク質の半減期と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、２５０％、３００％、４００％または５００％、またはさらには１０００％増大され得る。一部の実施形態では、タンパク質半減期は、緩衝食塩溶液または血清などのｉｎ  ｖｉｔｒｏで決定される。他の実施形態では、タンパク質半減期は、動物の血清または他の体液中のタンパク質の半減期などのｉｎ  ｖｉｖｏ半減期である。
【０１１２】
本開示は、本明細書に記載されている軽鎖、重鎖もしくは抗ＣＤ３８抗体のいずれか、またはその抗原結合性タンパク質を、薬学的に許容される賦形剤との混合物中に含む治療組成物を提供する。賦形剤は、担体、安定剤および賦形剤を包含する。薬学的に許容される賦形剤の賦形剤には、例えば不活性希釈剤または充填剤（例えば、スクロースおよびソルビトール）、滑沢剤、流動促進剤、および抗接着剤（antiadhesive）（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸、シリカ、硬化植物油、またはタルク）が含まれる。追加の例としては、緩衝剤、安定化剤、保存料、非イオン性界面活性剤、抗酸化剤および等張化剤が挙げられる。
【０１１３】
治療組成物およびそれを調製するための方法は当技術分野で周知であり、例えば、「Remington:  The  Science  and  Practice  of  Pharmacy」（20th  ed.,  ed.  A.  R.  Gennaro  A  R.,  2000,  Lippincott  Williams  &  Wilkins,  Philadelphia,  Pa.）に見出される。治療組成物は、非経口投与用に製剤化されてもよく、例えば、賦形剤、滅菌水、生理食塩水、ポリエチレングリコールなどのポリアルキレングリコール、植物起源の油、または水素化ナフタレン（hydrogenated  napthalene）を含有することができる。生体適合性、生分解性ラクチドポリマー、ラクチド／グリコリドコポリマー、またはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマーは、本明細書に記載されている抗体（またはその抗原結合性タンパク質）の放出を制御するのに使用することができる。ナノ粒子製剤（例えば、生分解性ナノ粒子、固体脂質ナノ粒子、リポソーム）は、抗体（またはその抗原結合性タンパク質）の体内分布を制御するのに使用することができる。他の潜在的に有用な非経口送達系には、エチレン−酢酸ビニルコポリマー粒子、浸透圧ポンプ、埋め込み型注入系、およびリポソームが含まれる。製剤中の抗体（またはその抗原結合性タンパク質）の濃度は、投与される薬物の投与量、および投与経路を含むいくつかの要因に応じて異なる。
【０１１４】
抗ＣＤ３８抗体（またはその抗原結合性部分）はいずれも、医薬品業界で一般に使用されている非毒性の酸付加塩または金属錯体などの薬学的に許容される塩として投与されてもよい。酸付加塩の例としては、酢酸、乳酸、パモ酸、マレイン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、コハク酸、安息香酸、パルミチン酸、スベリン酸、サリチル酸、酒石酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、またはトリフルオロ酢酸などの有機酸；タンニン酸、カルボキシメチルセルロースなどのポリマー酸；および塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸などの無機酸が挙げられる。金属錯体には、亜鉛、鉄などが含まれる。１つの例では、抗体（またはその抗原結合性部分）は、熱安定性を高める酢酸ナトリウムの存在下で製剤化される。
【０１１５】
抗ＣＤ３８抗体（またはその抗原結合性部分）はいずれも、経口使用のために製剤化されてもよく、これには非毒性の薬学的に許容される賦形剤との混合物中に活性成分を含有する錠剤が含まれる。経口使用のための製剤はまた、チュアブル錠として、または活性成分が不活性固体希釈剤と混合される硬質ゼラチンカプセルとして、または活性成分が水または油媒体と混合される軟質ゼラチンカプセルとしても提供され得る。
【０１１６】
用語「被験体」は、本明細書で使用される場合、脊椎動物、哺乳動物および非哺乳動物を含むヒトおよび非ヒト動物を指す。一実施形態では、被験体は、ヒト、非ヒト霊長類、サル、類人猿、マウス（ｍｕｒｉｎｅ）（例えば、マウス（ｍｉｃｅ）およびラット）、ウシ、ブタ、ウマ、イヌ、ネコ、ヤギ、オオカミ、カエルまたは魚類であってもよい。
【０１１７】
用語「投与すること」、「投与された」および文法的変形は、当業者に公知の様々な方法および送達系のいずれかを使用して、被験体に薬剤を物理的に導入することを指す。本明細書に開示されている製剤の例示的な投与経路としては、例えば注射または注入による、静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、脊髄または他の非経口投与経路が挙げられる。句「非経口投与」は、本明細書で使用される場合、通常は注射による、経腸および局所投与以外の投与様式を意味し、限定するものではないが、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、リンパ内、病巣内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、表皮下、関節内、嚢下、クモ膜下、脊髄内、硬膜外および胸骨内注射および注入、ならびにｉｎ  ｖｉｖｏ電気穿孔が含まれる。一部の実施形態では、製剤は、非経口経路以外の経路を介して、例えば経口的に投与される。他の非経口経路以外の経路には、局所、上皮または粘膜投与経路、例えば、鼻腔内、膣内、直腸内、舌下または局所投与経路が含まれる。投与はまた、例えば、１回、複数回、および／または１回もしくは複数の長期間にわたって行うこともできる。本明細書に記載されている抗ＣＤ３８抗体（またはその抗原結合性タンパク質）はいずれも、当技術分野に公知の方法および送達経路を使用して被験体に投与することができる。
【０１１８】
用語「有効量」、「治療有効量」もしくは「有効用量」または関連する用語は、互換的に使用されてもよく、被験体に投与された場合、腫瘍またはがん抗原発現に関連する疾患または障害の測定可能な改善または予防をもたらすのに十分な抗体または抗原結合性タンパク質（例えば、本明細書に記載されている抗ＣＤ３８抗体のいずれかまたはその抗原結合性タンパク質）の量を指す。本明細書に示されている抗体の治療有効量は、単独でまたは組み合わせて使用される場合、抗体および組合せの相対的活性（例えば、細胞増殖の阻害における）に応じて、ならびに処置されている被験体および疾患状態、被験体の体重および年齢および性別、被験体における疾患状態の重症度、投与様式などに応じて異なり、当業者によって容易に決定され得る。
【０１１９】
一実施形態では、治療有効量は、処置される被験体および処置される障害のある特定の態様に依存し、公知の手法を使用して当業者によって確認され得る。一般に、ポリペプチドは、１日あたり約０．０１ｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは１日あたり０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、最も好ましくは１日あたり０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇで投与される。ポリペプチドは、毎日（例えば、毎日１、２、３回、または４回）、または好ましくはより少ない頻度（例えば、毎週、２週間ごと、３週間ごと、毎月、または四半期ごと）で投与され得る。さらに、当技術分野で公知の通り、年齢ならびに体重、全般的健康状態、性別、食事、投与時期、薬物相互作用、および疾患の重症度に対する調整が必要な場合がある。
【０１２０】
本開示は、ＣＤ３８の発現に関連する疾患を有する被験体を処置するための方法を提供する。疾患は、腫瘍関連抗原を発現するがんまたは腫瘍細胞を含む。一実施形態では、がんまたは腫瘍には、前立腺がん、乳がん、卵巣がん、頭頚部がん、膀胱がん、皮膚がん、結腸直腸がん、肛門がん、直腸がん、膵臓がん、肺がん（非小細胞肺がんおよび小細胞肺がんを含む）、平滑筋腫、脳がん、神経膠腫、神経膠芽腫、食道がん、肝臓がん、腎臓がん、胃がん、結腸がん、子宮頸がん、子宮がん、子宮内膜がん、外陰がん、喉頭がん、膣がん、骨がん、鼻腔がん、副鼻腔がん、鼻咽頭がん、口腔がん、中咽頭がん、喉頭がん、下咽頭（hypolarynx）がん、唾液腺がん、尿管がん、尿道がん、陰茎がんおよび精巣がんが含まれる。
【０１２１】
一実施形態では、がんは、白血病、リンパ腫、骨髄腫およびＢ細胞リンパ腫を含む血液がんを含む。血液がんには、多発性骨髄腫（ＭＭ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）を含む非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、慢性Ｂリンパ球性白血病（Ｂ−ＣＬＬ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、急性ＢおよびＴリンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、ヘアリー細胞白血病（ＨＣＬ）、濾胞性リンパ腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、マントル細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、形質細胞性骨髄腫、前駆Ｂ細胞リンパ芽球性白血病／リンパ腫、形質細胞腫、巨細胞骨髄腫、形質細胞性骨髄腫、重鎖骨髄腫、軽鎖またはベンスジョーンズ骨髄腫、リンパ腫様肉芽腫症、移植後リンパ増殖性障害、免疫調節性障害、関節リウマチ、重症筋無力症、特発性血小板減少性紫斑病、抗リン脂質症候群、シャーガス病、グレーブス病、ウェゲナー肉芽腫症、結節性多発動脈炎、シェーグレン症候群、尋常性天疱瘡、強皮症、多発性硬化症、抗リン脂質症候群、ＡＮＣＡ関連血管炎、グッドパスチャー病、川崎病、自己免疫性溶血性貧血、および急速進行性糸球体腎炎、重鎖病、原発性または免疫細胞関連アミロイドーシス、および意味未確定の単クローン性高ガンマグロブリン血症が含まれる。
【０１２２】
抗ＣＤ３８抗体は、２０１６年４月８日に出願された米国特許出願第１５／０９４，３８４号（その開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている。本明細書では「親」および／または「野生型」抗体と呼ばれるこの抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を有する親野生型重鎖と、配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する親野生型軽鎖とを含む。
【０１２３】
本開示は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を有する親野生型重鎖と、配列番号３の変異体アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する軽鎖とを含むバリアント抗体を提供する。一部の実施形態では、本開示は、軽鎖の変異体アミノ酸配列が、望ましい軽鎖と望ましくない軽鎖の混合物を含有する軽鎖の不均一な集団の生成を低減または排除する、バリアント配列軽鎖またはバリアント配列軽鎖を含む抗原結合性タンパク質を調製する方法を提供する。対照的に、親野生型軽鎖の調製物の作製は、高レベルの不均一性を有する抗体軽鎖の集団をもたらす。
【０１２４】
組換え抗体重鎖および軽鎖は、宿主細胞細胞質での前駆体抗体鎖の発現および宿主細胞膜を横切るトランスロケーションを可能にするために、Ｎ末端に分泌シグナルペプチドを含むようにしばしば設計される。トランスロケーションする前駆体抗体鎖は、宿主細胞によって発現されるシグナルペプチドペプチダーゼ酵素によって分泌シグナルペプチドにおいて部位特異的切断を受け、成熟抗体鎖をもたらす。分泌シグナルペプチド中の特異的な部位で切断されている前駆体抗体鎖から成熟抗体鎖の均一な集団を生成して、同じ長さおよび配列を有し、同じＮ末端およびＣ末端を含む成熟抗体鎖の集団を得ることが望ましい。しかし、組換え抗体鎖の産生は、異なる鎖長および配列、ならびに異なるＮ末端および／またはＣ末端を有する不均一な集団をしばしば生成する。不均一性の１つの供給源は、可変部位での分泌シグナルペプチドまたは抗体鎖のＮ末端領域の切断から生じ、鎖の短縮および伸長を引き起こす。切断不均一性はまた、分泌シグナルペプチド中および付近で、例えばアスパラギン酸、グリシン、セリン、スレオニン、システイン、メチオニンまたはアスパラギンなどのある特定のアミノ酸で、ペプチド結合の非酵素的分解から生じることも公知である。切断不均一性をもたらすメカニズムに関係なく、不正確な切断は、抗体鎖集団不均一性を引き起こす。切断不均一性は、抗体のその標的抗原への結合を低減する可能性がある。一部の場合では、切断不均一性は抗体鎖の電荷を変化させ、抗体ｐＩ（等電点）値の望ましくない変更をもたらし、これにより、発現された抗体鎖の集団における電荷不均一性をもたらす。概して、切断不均一性は、抗体の有効性を低減させ、保管寿命を低減させる可能性があり、均一な製品を一貫して生産することを困難にし、抗体鎖を生物生産にあまり望ましくないまたは適さないようにする可能性がある。
【０１２５】
本開示は、宿主細胞発現中に生じる切断不均一性を低減し、これにより軽鎖集団不均一性を低減するように設計される変異アミノ酸配列を有するバリアント抗体軽鎖を提供する。抗体軽鎖は、切断不均一性を低減するために、分泌シグナルペプチドに隣接するそのＮ末端近くに変異を導入されたアミノ酸配列を含む。理論に縛られることを望むものではないが、本明細書に記載されている抗体軽鎖のアミノ酸変異は、酵素および／または非酵素的切断事象による切断不均一性を低減すると想定される。
【０１２６】
抗体軽鎖の不均一な集団は、望ましい軽鎖と望ましくない軽鎖との混合物を含む。望ましい軽鎖は、正しい長さ、正しいＮ末端およびＣ末端アミノ酸残基を有し、配列番号３と１００％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、望ましい鎖は、鎖集団における複数または大多数の種である。望ましくない軽鎖は、正しくない長さ（例えば、より長いまたはより短い）、正しくないＮ末端および／もしくはＣ末端アミノ酸残基を有し、ならびに／または配列番号３と１００％同一でないアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【０１２７】
以下の考察では、増加、減少、および低減が、配列番号２と比較して表される。一部の実施形態では、軽鎖配列変異は、望ましい軽鎖のパーセンテージを増加させ、および望ましくない軽鎖のパーセンテージを減少させる、またはさらには排除することによって、軽鎖の不均一な集団の生成を低減する。
【０１２８】
一部の実施形態では、軽鎖配列変異は、軽鎖の調製物中（例えば、軽鎖の集団中）の望ましくない軽鎖のパーセンテージを、約１０〜３０％、または約３０〜５０％、または約５０〜７０％、または約７０〜９０％、または約９０〜９５％、または約９５〜９９％またはそれより高いレベルだけ低減させる。
【０１２９】
一部の実施形態では、軽鎖配列変異は、軽鎖の調製物中（例えば、軽鎖の集団中）の望ましい軽鎖のパーセンテージを、約１０〜３０％、または約３０〜５０％、または約５０〜７０％、または約７０〜９０％、または約９０〜９５％、または約９５〜９９％またはそれより高いレベルだけ増加させる。
【０１３０】
一実施形態では、軽鎖配列変異は、Ｎ末端近くに２個の点変異を含み、具体的には２位のアラニンがセリンと置き換えられ、３位のグリシンがバリンと置き換えられる（配列番号３の２位および３位を参照のこと）。軽鎖配列変異は、変異体軽鎖の調製物が正しい長さ、正しいＮ末端アミノ酸を有する約９８〜１００％の望ましい軽鎖を含有し、１００％の配列を有するように、望ましい軽鎖のパーセンテージを増加させる（図２ＡおよびＢ）。
【０１３１】
一実施形態では、軽鎖配列変異は、Ｎ末端近くに２個の点変異を有する配列番号２のアミノ酸配列を含み、具体的には２位のアラニンがセリンと置き換えられ、３位のグリシンがアラニンと置き換えられる。一実施形態では、変異体軽鎖のＮ末端は、アミノ酸配列ＱＳＡＬＴ（配列番号６）を含有する。軽鎖配列変異は、変異体軽鎖の調製物が正しい長さ、正しいＮ末端アミノ酸を有する約９８〜１００％の望ましい軽鎖を含有し、１００％の配列を有するように、望ましい軽鎖のパーセンテージを増加させる（表２）。
【０１３２】
本明細書に記載されている軽鎖変異体配列は、切断不均一性の低減を提供することができ、抗体軽鎖の産生および収量を改善する。抗体軽鎖に作動可能に連結される分泌シグナルペプチドのタイプおよび／または配列は重要ではない。
【０１３３】
対照的に、親野生型軽鎖（配列番号２）は、望ましくない軽鎖と望ましい軽鎖の不均一な混合物を生じさせる。親野生型軽鎖の調製物は、３５〜６５％もの軽鎖が望ましくない短縮軽鎖である、高いパーセンテージの短縮軽鎖を生成し得る（表２ならびに図２ＡおよびＢを参照のこと）。例えば、親野生型軽鎖の調製物は、約１０〜３０％、または約３０〜５０％、または約５０〜７０％、または約７０〜９０％、または約９０〜９５％、または約９５〜９９％またはそれより高いレベルの望ましくない短縮軽鎖型を含有し得る。
【０１３４】
本開示は、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する抗体軽鎖の変異体アミノ酸配列に作動可能に連結された分泌シグナルペプチドのアミノ酸配列を含む前駆体ポリペプチドを発現する宿主細胞を提供する。一実施形態では、分泌シグナルペプチドは、小胞体、分泌小胞および／または細胞外空間への前駆体ポリペプチドの移動を指示する。一実施形態では、分泌シグナルペプチドは、宿主細胞からの前駆体ポリペプチドの分泌を媒介する。一実施形態では、分泌シグナルペプチドは、分泌シグナルペプチドの特異的な部位（例えば、所望の切断部位）で酵素的切断の基質として機能して、前駆体ポリペプチドより短い成熟ポリペプチドをもたらす。一実施形態では、切断事象は、正しい長さを有し、および新たなＮ末端を有する抗体軽鎖をもたらし、配列番号３のアミノ酸配列と１００％同一であるアミノ酸配列を含む。変異抗体軽鎖は、重鎖と集合して、その標的抗原ＣＤ３８に結合する免疫グロブリンを生成し得る。
【０１３５】
本開示は、ＣＤ３８抗原に特異的に結合する抗原結合性タンパク質を形成するように重鎖と集合した変異軽鎖、および該抗原結合性タンパク質をコードする核酸、該核酸を含むベクター、該ベクターを含む宿主細胞、ならびにその使用方法を提供する。
【０１３６】
抗体重鎖および軽鎖の宿主細胞発現は、バリアント抗体および親野生型抗体を含む抗体の集団の調製物を作製するのに使用することができる。
【０１３７】
宿主細胞は、野生型配列を有する親野生型重鎖を発現することができる。親野生型重鎖の調製物は、約８５〜９９％またはそれより高いレベルの望ましい重鎖配列（例えば、低レベルの重鎖不均一性）を含有し得る。宿主細胞は、野生型配列を有する親野生型配列軽鎖を発現することができる。親野生型軽鎖の調製物は、約４０〜５５％またはそれより高いレベルの望ましくない軽鎖配列（例えば、高レベルの軽鎖不均一性）を含有し得る。
【０１３８】
宿主細胞は、野生型配列を有する親野生型重鎖を発現することができる。親野生型重鎖の調製物は、約８５〜９９％またはそれより高いレベルの望ましい重鎖配列（例えば、低レベルの重鎖不均一性）を含有し得る。宿主細胞は、変異体配列を有するバリアント配列軽鎖を発現することができる。バリアント配列軽鎖の調製物は、親野生型軽鎖の調製物と比べて軽鎖不均一性のレベルが低減した、約８５〜９９％またはそれより高いレベルの望ましい軽鎖配列を含有し得る。
【０１３９】
本開示は、ＣＤ３８ポリペプチドに結合するＩｇＧクラスの完全ヒト抗体を提供する。一実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含む；および抗ＣＤ３８抗体は、配列番号３のアミノ酸配列に対して９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。一実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４クラス抗体を含む。一実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４クラス抗体を含む。
【０１４０】
一実施形態では、抗ＣＤ３８抗体、またはその断片は、１０−６Ｍもしくはそれより少ない、１０−７Ｍもしくはそれより少ない、１０−８Ｍもしくはそれより少ない、１０−９Ｍもしくはそれより少ない、または１０−１０Ｍもしくはそれより少ない結合親和性（ＫＤ）でＣＤ３８標的抗原のエピトープに結合する抗原結合性部分を含む（表３を参照のこと）。一実施形態では、ＣＤ３８抗原は、細胞表面ＣＤ３８抗原または可溶性ＣＤ３８抗原を含む。一実施形態では、ＣＤ３８抗原は、細胞表面ＣＤ３８抗原の細胞外部分を含む。一実施形態では、ＣＤ３８抗原は、ヒトまたは非ヒトＣＤ３８抗原を含む。一実施形態では、ＣＤ３８抗原は、ヒトまたは非ヒト細胞によって発現される。一実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、ヒトＢ細胞によって発現される、またはヒト多発性骨髄腫細胞によって発現されるヒトＣＤ３８に結合する。一実施形態では、抗ＣＤ３８抗体間、またはその断片間の結合は、表面プラズモン共鳴、フローサイトメトリーおよび／またはＥＬＩＳＡを使用して検出および測定することができる。
【０１４１】
本開示は、ヒト由来のＣＤ３８のエピトープに結合する、またはマウス、ラット、ヤギ、ウサギ、ハムスターおよび／もしくはサル（例えば、カニクイザル）などの非ヒト動物のいずれか１つもしくは任意の組合せ由来のＣＤ３８のエピトープ（例えば、相同抗原）と結合することができる（例えば、交差反応性）抗ＣＤ３８抗体を提供する。一実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、１０−５Ｍもしくはそれより少ない、または１０−６Ｍもしくはそれより少ない、または１０−７Ｍもしくはそれより少ない、または１０−８Ｍもしくはそれより少ない、または１０−９Ｍもしくはそれより少ない、または１０−１０Ｍもしくはそれより少ない結合親和性ＫＤでマウスＣＤ３８に結合する。一実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、１０−５Ｍもしくはそれより少ない、または１０−６Ｍもしくはそれより少ない、または１０−７Ｍもしくはそれより少ない、または１０−８Ｍもしくはそれより少ない、または１０−９Ｍもしくはそれより少ない、または１０−１０Ｍもしくはそれより少ない結合親和性ＫＤでカニクイザルＣＤ３８に結合する。
【０１４２】
本開示は、抗体が重鎖と軽鎖の両方を含み、重鎖／軽鎖可変領域アミノ酸配列が、アミノ酸配列セット配列番号１および３に対して少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を有する、ＣＤ３８に結合する完全ヒト抗体を提供する。
【０１４３】
本開示は、重鎖由来の重鎖可変領域と軽鎖由来の可変領域とを含む、Ｆａｂ完全ヒト抗体断片を提供する。重鎖由来の可変領域の配列は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一、または少なくとも９６％同一、または少なくとも９７％同一、または少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一である。軽鎖由来の可変領域の配列は、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一、または少なくとも９６％同一、または少なくとも９７％同一、または少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一である。
【０１４４】
本開示は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖／軽鎖可変領域アミノ酸配列が、以下のアミノ酸配列セット：配列番号１および３のいずれかと少なくとも９５％同一、または少なくとも９６％同一、または少なくとも９７％同一、または少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一である、Ｆａｂ完全ヒト抗体断片を提供する。
【０１４５】
本開示は、完全ヒト重鎖由来の可変領域および完全ヒト軽鎖由来の可変領域を有するポリペプチド鎖と、必要に応じて、可変重鎖領域および可変軽鎖領域を連結するリンカーとを含み、可変重鎖領域が、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を含む、一本鎖完全ヒト抗体を提供する。可変軽鎖領域は、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を含む。
【０１４６】
本開示は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を有するポリペプチド鎖を含み、重鎖／軽鎖可変領域アミノ酸配列セットが、以下のアミノ酸配列セット：配列番号１および３のいずれかと少なくとも９５％同一、または少なくとも９６％同一、または少なくとも９７％同一、または少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一である、一本鎖完全ヒト抗体を提供する。
【０１４７】
本開示は、薬学的に許容される賦形剤との混合物中に、本明細書に記載されている抗ＣＤ３８抗体のいずれか、またはその抗原結合性タンパク質を含む治療組成物を提供する。賦形剤は、担体および安定剤を包含する。一実施形態では、治療組成物は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖／軽鎖可変領域アミノ酸配列が、以下のアミノ酸配列セット：配列番号１および３のいずれかと少なくとも９５％同一、または少なくとも９６％同一、または少なくとも９７％同一、または少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一である、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合性断片を含む。
【０１４８】
本開示は、ＣＤ３８発現に関連する疾患を有する被験体を処置するための方法であって、本明細書に記載されている完全ヒト抗ＣＤ３８抗体のいずれか、本明細書に記載されているＦａｂ完全ヒト抗ＣＤ３８抗体のいずれか、および本明細書に記載されている一本鎖ヒト抗ＣＤ３８抗体のいずれかからなる群より選択される、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合性断片を含む治療組成物の有効量を被験体に投与するステップを含む方法を提供する。一実施形態では、ＣＤ３８発現に関連する疾患は、白血病、リンパ腫、骨髄腫またはＢ細胞リンパ腫を含む血液がんである。一実施形態では、血液がんには、多発性骨髄腫（ＭＭ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）を含む非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、慢性Ｂリンパ球性白血病（Ｂ−ＣＬＬ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、急性ＢおよびＴリンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、ヘアリー細胞白血病（ＨＣＬ）、濾胞性リンパ腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、マントル細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、形質細胞性骨髄腫、前駆Ｂ細胞リンパ芽球性白血病／リンパ腫、形質細胞腫、巨細胞骨髄腫、形質細胞性骨髄腫、重鎖骨髄腫、軽鎖またはベンスジョーンズ骨髄腫、リンパ腫様肉芽腫症、移植後リンパ増殖性障害、免疫調節性障害、関節リウマチ、重症筋無力症、特発性血小板減少性紫斑病、抗リン脂質症候群、シャーガス病、グレーブス病、ウェゲナー肉芽腫症、結節性多発動脈炎、シェーグレン症候群、尋常性天疱瘡、強皮症、多発性硬化症、抗リン脂質症候群、ＡＮＣＡ関連血管炎、グッドパスチャー病、川崎病、自己免疫性溶血性貧血、および急速進行性糸球体腎炎、重鎖病、原発性または免疫細胞関連アミロイドーシス、および意味未確定の単クローン性高ガンマグロブリン血症が含まれる。
【０１４９】
配列表：
【０１５０】
表1:
【表１−１】
2021528067.tif 000003
【表１−２】
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【実施例】
【０１５１】
以下の実施例は、例示的であることを意図し、および本開示の実施形態をさらに理解するのに使用されてもよく、本教示の範囲を多少なりとも限定すると解釈されるべきではない。
【０１５２】
（実施例１：ＣＤ３８−Ａ２抗体の変異体軽鎖の合成）
【０１５３】
ＣＤ３８−Ａ２  ＳＶ変異体抗体の軽鎖をコードする合成コドン最適化ＤＮＡ断片を得た。断片は、コードされたＮ末端近くに２個の点変異を含有し、具体的には２位のアラニンがセリンと置き換えられ、３位のグリシンがバリンと置き換えられた。標準的な制限酵素消化およびライゲーションを使用して、軽鎖をコードする断片をＬｏｎｚａ  ｐＸＣ−１７．４ベクターにインフレームで挿入し、野生型ＣＤ３８−Ａ２重鎖をコードする異なる断片をＬｏｎｚａ  ｐＸＣ−１８．４ベクターにインフレームで挿入した（Ｌｏｎｚａ  ＧＳ  Ｓｙｓｔｅｍ  ｆｒｏｍ  Ｌｏｎｚａ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）。標準的な酵素消化およびライゲーションを使用して、ｐＸＣ−１７．４およびｐＸＣ１８．４ベクターを単一ベクターに融合させ、得られた融合ベクターをＥ．ｃｏｌｉ宿主細胞に導入した。
【０１５４】
（実施例２：抗ＣＤ３８抗体由来の変異体軽鎖の液体クロマトグラフィー質量分光光度分析）
【０１５５】
還元ＬＣ−ＭＳ分析を行って、ＣＤ３８−Ａ２野生型（ＷＴ）およびＣＤ３８−Ａ２  ＳＶバリアント抗体を比較した。簡単には、１６μＬの抗体試料（２０μｇ）を４μＬ  ５×Ｒａｐｉｄ  ＰＮＧアーゼ緩衝液（カタログ：Ｐ０７１０Ｓ；ＮＥＢ）と混合し、８０℃で５分間インキュベートしてジスルフィド結合を還元し、タンパク質を変性させた。０．５μＬのＲａｐｉｄ  ＰＮＧアーゼＦ（カタログ：Ｐ０７１０Ｓ；ＮＥＢ）を次いで添加して、Ｎ−グリカンを５０℃で１５分間遊離させた。５マイクログラムの試料をＷａｔｅｒｓ  ＬＣ−ＥＳＩ−ＭＳシステムに注入した。
【０１５６】
２．１×１５０ｍｍ  ＢＥＨ  ３００Å  １．７μｍ  Ｃ４カラムを備えるＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ（登録商標）Ｓｙｓｔｅｍを還元抗体鎖の分離に使用し、カラム温度は８０℃であった。１２分勾配（２５〜４０％アセトニトリル／０．１％ギ酸、流量０．４ｍＬ／分）で抗体をカラムから溶出した。
【０１５７】
Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｅｖｏ  Ｇ２  ＴＯＦ  ＭＳ  Ｓｙｓｔｅｍを、陽イオン、４００〜４０００ｍ／ｚの範囲の検出による感度モードで実施した。ソースパラメータは以下の通りであった：キャピラリー電圧、３．１０ｋＶ；サンプリングコーン電圧、４０．０Ｖ；抽出コーン電圧、３．０Ｖ；ソース温度、１２５℃；脱溶媒和温度、３５０℃；コーンガス流：１０Ｌ／時；脱溶媒和ガス流、５００Ｌ／時。タンパク質ピークを、ＭａｓｓＬｙｎｘ  ＭａｘＥｎｔ１機能によって以下のパラメータに従ってデコンボリューションした：出力分解能、１．０Ｄａ／チャネル；出力質量範囲、還元抗体について２０，０００〜７０，０００Ｄａ；ハーフハイト（ｈａｌｆ  ｈｅｉｇｈｔ）での均一ガウス幅、０．７５Ｄａ；最小強度比、左および右について３３％；最大反復数、１２。
【０１５８】
ＣＤ３８Ａ２  ＷＴおよびＳＶバリアントの分子量を、ＬＣ−ＥＳＩ−ＭＳによって測定し、タンパク質ＩＤを確認した。ＷＴおよびＳＶ重鎖分子量は両方とも、理論上の質量とよく一致した。その一方で、Ｎ末端軽鎖からの２個のアミノ酸の短縮が、全野生型軽鎖の最大約５０％で見出された。ＳＶ変異体のＬＣは、検出可能な短縮を全く示さなかった。
【０１５９】
還元ＣＥ−ＳＤＳを、テスト試料でＡｇｉｌｅｎｔ  Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ  ２１００を使用して製造指示に従って実施した。比率約１：１の２つの軽鎖集団を、ＣＤ３８−Ａ２野生型の還元ＣＥ−ＳＤＳで検出した。ＣＤ３８−Ａ２  ＳＶ変異体は、還元ＣＥ−ＳＤＳで１種類の軽鎖のみを示した。結果は、野生型は軽鎖短縮を受けるというＬＣ−ＭＳ分析からの知見と一致している。
【０１６０】
質量分析および還元ＣＥ−ＳＤＳ結果は、ＣＤ３８−Ａ２野生型軽鎖の集団のおよそ５０％が短縮された分子であることを示す。
【０１６１】
結論として、ＬＣ−ＭＳおよびＣＥ−ＳＤＳ分析によれば、Ｎ末端軽鎖短縮がＣＤ３８−Ａ２野生型で生じたが、ＣＤ３８−Ａ２  ＳＶバリアントについては検出できなかった。結果を表２ならびに図１ＡおよびＢならびに２ＡおよびＢにまとめる。軽鎖の２番目および３番目のアミノ酸が、それぞれセリンおよびアラニンであったＣＤ３８  Ａ２−ＳＡバリアントについての結果も示す。
【０１６２】
表2:
【表２−１】
2021528067.tif 000005
【表２−２】
2021528067.tif 000006
【０１６３】
（実施例３：親抗体ＣＤ３８  Ａ２およびバリアント抗体ＣＤ３８  Ａ２  ＳＶの比較結合試験）
【０１６４】
親抗体ＣＤ３８  Ａ２およびバリアント抗体ＣＤ３８  Ａ２  ＳＶの結合動態を、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して測定した。親またはバリアント抗体とｈｉｓタグ付きＣＤ３８タンパク質との間の動的相互作用を、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００表面プラズモン共鳴（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して２５℃で測定した。抗ヒト断片結晶性領域（Ｆｃ領域）抗体を、標準的なＮヒドロキシスクシンイミド／Ｎエチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＮＨＳ／ＥＤＣ）カップリング方法を使用して、およそ８０００レゾナンスユニット（ＲＵ）になるようにＣＭ５センサーチップに固定化した。ＣＤ３８  Ａ２親抗体またはＣＤ３８  Ａ２  ＳＶバリアント抗体（２μｇ／ｍＬ）を、流量１０μＬ／分で６０秒間捕捉した。組換えヒトｈｉｓタグＣＤ３８タンパク質を、０．０１Ｍ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０５％ｖ／ｖ  Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ  Ｐ２０（ＨＢＳ  ＥＰ＋）の泳動緩衝液で連続希釈した。全ての測定は、流量３０μＬ／分によりＨＢＳ−ＥＰ＋緩衝液で行った。定常状態親和性モデルを使用して親和性を得た。ＣＤ３８  Ａ２親抗体およびＣＤ３８  Ａ２  ＳＶバリアント抗体のセンサーグラムをそれぞれ図３ＡおよびＢに示し、それらの対応する結合動態を以下の表３に列挙する。
【０１６５】
表3:
【表３】
2021528067.tif 000007
【図１】
2021528067.tif 000008
【図２】
2021528067.tif 000009
【図３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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