(57)【要約】  スキンケアに使用される植物抽出物であって、植物抽出物は少なくともアナカーディム・オシデンタール・Ｌ．（Anacardium occidentale L.）の種子の外種皮からの抽出物である。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
アナカーディム・オシデンタール・Ｌ．（Anacardium occidentale L.）の種子の外種皮の植物抽出物を含む組成物であって、植物抽出物がチロシナーゼ阻害活性を示す、組成物。
【請求項２】
植物抽出物が約１．０μｇ／ｍＬ以上の量で存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
植物抽出物が約１．０μｇ／ｍＬ〜約２０００．０μｇ／ｍＬの量で存在する、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
組成物が化粧品組成物である、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
カシュー外種皮抽出物を治療に有効な量で含むチロシナーゼ阻害特性を有する栄養補助食品。
【請求項６】
カシュー外種皮抽出物が約１．０μｇ／ｍＬ以上の量で存在する、請求項５に記載の栄養補助食品。
【請求項７】
カテキンを含む植物抽出物であって、抽出物は抽出物の総重量を基準として約１５．０重量％以上のカテキン含有量に標準化され、植物抽出物はチロシナーゼ阻害活性を示し、植物抽出物は少なくともアナカーディム（Anacardium）属からの抽出物を含む、植物抽出物。
【請求項８】
アナカーディム（Anacardium）属からの抽出物は少なくともアナカーディム・オシデンタール・Ｌ．（Anacardium occidentale L.）からの抽出物である、請求項７に記載の植物抽出物。
【請求項９】
アナカーディム・オシデンタール・Ｌ．（Anacardium occidentale L.）からの抽出物は少なくともアナカーディム・オシデンタール・Ｌ．（Anacardium occidentale L.）の種子の外種皮からのものである、請求項８に記載の植物抽出物。
【請求項１０】
抽出物がＭＴ１Ａ遺伝子の増加した発現によって抗酸化活性を示す、請求項７に記載の植物抽出物。
【請求項１１】
抽出物がＮＱＯ１遺伝子の増加した発現によって抗酸化活性を示す、請求項７に記載の植物抽出物。
【請求項１２】
抽出物がＴＸＮＲＤ１遺伝子の増加した発現によって抗酸化活性を示す、請求項７に記載の植物抽出物。
【請求項１３】
抽出物がＣＴＧＦ遺伝子の発現の抑制によって創傷治癒活性を示す、請求項７に記載の植物抽出物。
【請求項１４】
抽出物がＩＬ１α遺伝子およびＩＬ１β遺伝子の増加した発現によって抗炎症活性を示す、請求項７に記載の植物抽出物。
【請求項１５】
アナカーディム・オシデンタール・Ｌ．（Anacardium occidentale L.）の外種皮の植物抽出物を約１．０μｇ／ｍＬ〜約２０００．０μｇ／ｍＬの濃度で含む組成物を投与することを含む、対象におけるメラニン産生を阻害する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、２０１８年８月３１日に出願された米国特許出願第６２／７２５，４４１号の利益を主張する。前記米国特許出願の開示は、参照によってその全体がここに組込まれる。
【０００２】
発明の技術分野
本発明は、一般に、チロシナーゼの阻害剤を含むスキンケア用途で使用するための植物抽出物に関し、より具体的には、カシュー外種皮からの植物抽出物に関し、およびそのような植物ベースの阻害剤の、皮膚保護剤としてのおよび／または皮膚引き締めのための使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
世界人口の約１５パーセントが皮膚美白剤に投資していると考えられている。アナリストは、皮膚引き締め剤の世界市場が２０２０年までに２３０億ドルに達するであろうと予測している。これらの皮膚美白剤の分子メカニズムは、皮膚の色の主な原因であるメラニンを減らすことである。
【０００４】
チロシナーゼは、菌類、植物および動物の組織に広く分布している銅含有酵素である。チロシナーゼはメラノサイトでメラニンを生成する上で重要な酵素である。チロシナーゼ阻害はとりわけメラニン生成を防ぐ１つの方法であり、市場に出回っている多くの皮膚美白製品は特にそれを対象としている。
【０００５】
ヒドロキノン、コウジ酸およびアルブチンのような合成チロシナーゼ阻害剤は、皮膚の炎症または急性皮膚炎を引き起こすことが報告されており、これらの化合物の安全性が懸念されている。結果として、多くの薬剤がチロシナーゼを阻害する可能性について研究されており、フィトメディシンが重要な役割を果たしている。研究は、様々な薬草、果物および野菜で見つかったポリフェノール化合物の摂取がメラニン含有量の抑制に関連していることを示した。結果的に、潜在的な治療薬としてチロシナーゼ阻害活性および健康促進植物成分を示す植物への研究の関心が高まっている。薬用植物は、上記のように悪影響を与える可能性がある化学阻害剤に代わる安全で費用効率の高い生態学的代替品を提供することができる。
【０００６】
カシューの木（アナカーディム・オシデンタール・リン（Anacardium occidentale Linn））はもともとアマゾン産で、その後、栽培のためにインド、東アフリカおよび他の国々に移植された。その木は腫れた花柄の形をした非常に独特のリンゴまたは果物を生産する。外面的に、この花柄の端に、カシューナッツ（すなわち種子）がそれ自体の灰色の腎臓形の硬い殻の中で成長する。この殻は、柔らかく革のような外皮と、種子を取り囲む包皮または外種皮と呼ばれる薄く硬い内皮とを有する。これらの２つの皮の間に、カシューナッツの殻の液体を含むハニカム構造がある。この液体は、他の成分の中でも、アナカルド酸、カルダノールおよびカルドールを含む。アナカルド酸はサリチル酸であるが、カルダノールとカルドールは置換フェノールである。
【０００７】
果実の様々な部分がそれらの用途について研究されてきた。食用の食品であることに加えて、カシューアップルからのジュースは飲料に使用されるが、果実抽出物は体重管理に利益を示している。カシューナッツの殻の液体は、摩擦ライニング、塗料、ラミネート樹脂、ゴムコンパウンド樹脂、カシューセメント、ポリウレタン系ポリマー、界面活性剤、エポキシ樹脂、鋳造化学薬品、化学薬品中間体、殺虫剤および殺菌剤を含む様々な工業および農業の用途のために抽出されてきた。カシューの外種皮はなめし材料に使用されてきた。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
上記のように、チロシナーゼ阻害活性を有する効果的で無毒の天然化合物に対するニーズがある。さらに、スキンケア組成物で使用するための効果的で無毒の天然化合物に対するニーズがある。本発明はそのような解決策の１つを提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
ここに開示されるのは、カテキンを含む植物抽出物であって、抽出物は抽出物の総重量を基準として約１５．０重量％以上のカテキン含有量に標準化され、植物抽出物はチロシナーゼ阻害活性を示し、そして植物抽出物は少なくともアナカーディム属からの抽出物を含む。特に、植物抽出物は、少なくともアナカーディム・オシデンタール・Ｌ（Anacardium occidentale L）からの抽出物であり、より具体的には、少なくともアナカーディム・オシデンタール・Ｌ．（Anacardium occidentale L.）の種子の外種皮から抽出物である。
【００１０】
１つの実施形態では、少なくともアナカーディム・オシデンタール・Ｌ．の種子の外種皮からの植物抽出物は、ＭＴ１Ａ遺伝子の増加した発現によって抗酸化活性を示す。
【００１１】
さらなる実施形態では、少なくともアナカーディム・オシデンタール・Ｌ．の種子の外種皮からの植物抽出物は、ＮＱＯ１遺伝子の増加した発現によって抗酸化活性を示す。
【００１２】
もう１つの実施形態では、少なくともアナカーディム・オシデンタール・Ｌ．の種子の外種皮からの植物抽出物は、ＴＸＮＲＤ１遺伝子の増加した発現によって抗酸化活性を示す。
【００１３】
さらにもう１つの実施形態では、少なくともアナカーディム・オシデンタール・Ｌ．の種子の外種皮からの植物抽出物は、ＣＴＧＦ遺伝子の発現の抑制によって創傷治癒活性を示す。
【００１４】
さらなる実施形態では、少なくともアナカーディム・オシデンタール・Ｌ．の種子の外種皮からの植物抽出物は、ＩＬ１αおよびＩＬ１β遺伝子の増加した発現によって抗炎症活性を示す。
【００１５】
本発明は、アナカーディム・オシデンタール・Ｌ．の種子の外種皮の植物抽出物を含む組成物であって、植物抽出物がチロシナーゼ阻害活性を示す、組成物をさらに提供する。好ましくは、植物抽出物は約１．０μｇ／ｍＬ以上の量で存在する。より好ましくは、植物抽出物は約１．０μｇ／ｍＬ〜約２０００．０μｇ／ｍＬの量で存在する。１つの実施形態では、組成物は化粧品組成物である。
【００１６】
チロシナーゼ阻害特性を有する栄養補助食品であって、治療上効果的な量のカシュー外種皮抽出物を含む栄養補助食品もまた、ここに提供される。好ましくは、カシュー外種皮抽出物は約１．０μｇ／ｍＬ以上の量で存在する。
【００１７】
さらに、アナカーディム・オシデンタール・Ｌ．の種子の外種皮の植物抽出物を約１．０μｇ／ｍＬ〜約２０００．０μｇ／ｍＬの濃度で含む組成物を投与することによって、対象におけるメラニン生成を阻害する方法をここに提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】図１は、０分（開始）から２０分までの保持時間にわたる２７５ｎｍの波長でのカシュー外種皮抽出物のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【００１９】
【図２】図２は、カシュー外種皮抽出物のＬＣ／ＭＳおよびＬＣ／ＰＤＡ（波長２８０および３５０ｎｍ）クロマトグラムである。
【００２０】
【図３】図３は、様々な（１０個の異なる）濃度でのカシュー外種皮抽出物を使用したマッシュルーム・チロシナーゼ阻害率を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本発明は、カシュー（アナカーディム・オシデンタール・Linn）の外種皮はある種のフラボノイドが実質的に高いという驚くべき発見に基づく。特に、カシューの外種皮の抽出物は、主成分としてカテキンおよびエピカテキンを含み、ならびにプロシアニジンを含むことが発見された。ここに記載のデータは、カシュー外種皮抽出物がチロシナーゼ阻害用途を有するかもしれないことを示している。
【００２２】
本出願のためには、「組成物」という用語は、自然状態の生物学的プロセスに関連する特定の状態または病気または障害を治療し、改善し、促進し、増加し、管理し、制御し、維持し、最適化し、修正し、低減し、阻害しまたは防止する製品をいう。例えば、組成物は、対象において、チロシナーゼの阻害を改善し、および／または皮膚の美白などを高める。組成物という用語には、限定するものではないが、有効量の抽出物、それの少なくとも１つの成分またはそれの混合物を含む医薬品（すなわちドラッグ）、店頭販売の薬（ＯＴＣ）、化粧品、食品、食品成分または栄養補助食品組成物が含まれる。例示的な組成物には、クリーム、化粧用ローション、パックまたはパウダーが含まれ、またはエマルション、ローション、リニメントフォーム、錠剤、硬膏剤、顆粒または軟膏として含まれる。そのような組成物には、液体、ローション、クリームまたはパウダーの形態の局所的組成物が含まれる。組成物には、飲料、例えば有効量の抽出物が注入された飲料、または有効量の抽出物を含むティーバッグも含まれ得る。有効量の抽出物を含む食品組成物の非限定的な具体例には、焼き菓子、プロテイン・パウダー、肉製品、乳製品および砂糖菓子が含まれる。
【００２３】
「美白（skin whitening）」、「美白（whitening skin）」または「美白（whitening skin）」という用語は、色素沈着の防止もしくは抑制、色黒の肌を明るくすること、色素沈着過度（特に局所的な色素沈着過度および不備な色素沈着）を明るくするもしくは除去すること、肌のくすみ、日焼けによる肌の黒ずみ、しみおよびそばかすの予防および／または改善を含む個体におけるメラニン生成またはメラニン含有量を抑える１つ以上の効果をいう。
【００２４】
ここで使用するときは、「抽出物」または「植物抽出物」という用語は、少なくともアナカーディム植物（例えばＡｎａｃａｒｄｉｕｍ  ｈｕｍｉｌｅ、Ａｎａｃａｒｄｉｕｍ  ｏｔｈｏｎｉａｎｕｍ、Ａｎａｃａｒｄｉｕｍ  ｇｉｇａｎｔｅｕｍ、Ａｎａｃａｒｄｉｕｍ  ｎａｎｕｍ、Ａｎａｃａｒｄｉｕｍ  ｎｅｇｒｅｎｓｅまたはアナカーディム・オシデンタール）、好ましくはアナカーディム・オシデンタール・Ｌ．の物質の１つ以上の活性成分を含む、固体の、粘性のまたは液体の物質または調製物をいう。好ましくは、活性成分はカシューの外種皮の抽出物から誘導される。抽出物は、水、１〜４個の炭素原子の低級アルコール（例えばメタノール、エタノール、ブタノールなど）、エチレン、アセトン、ヘキサン、エーテル、クロロホルム、酢酸エチル、酢酸ブチル、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（「ＤＭＦ」）、ジメチルスルホキシド（「ＤＭＳＯ」）、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコールおよびそれらの組み合わせのような溶媒を使用して調製されるが、そのような溶媒での粗抽出液の一部でもある。それが活性成分の抽出および保存を保証する限り、いかなる抽出方法を用いてもよい。
【００２５】
ここで使用するときは、純粋な化合物、組成物、抽出物、抽出物混合物、抽出物の成分、活性薬剤もしくは成分、またはそれらの組み合わせの「有効量」または「治療上有効な量」という用語は、望ましい結果を達成するのに十分な投与量で十分な期間、有効な量をいう。例えば、「有効量」または「治療上有効な量」とは、対象（例えば人のような哺乳動物）に投与したときに、対象において酸化の防止を改善しおよび／または炎症を低減するなどの治療を行うのに十分である本発明の純粋な化合物、組成物、抽出物、植物抽出物、抽出物混合物、植物抽出物混合物、抽出物の成分および／または活性薬剤もしくは成分、またはそれらの組み合わせの量をいう。「有効量」または「治療上有効な治療」を構成するこの開示の組成物、抽出物、植物抽出物、抽出物混合物、植物抽出物混合物、抽出物の成分および／または活性薬剤もしくは成分の量は、活性薬剤または化合物、治療される状態、およびその重症度、投与の方法、治療の期間または治療される対象の年齢に依存して変わるが、自分の知識およびこの開示を考慮して当業者が日常的に決定することができる。
【００２６】
「薬学的に許容される」という用語は、過度の毒性、不適合性、不安定性、刺激などなしに人および下等動物の組織に接する使用に適したそれらの薬物、医薬品、抽出物または不活性成分が、合理的な利益／リスク比に見合っていることをを意味する。
【００２７】
「投与する（administer）」、「投与された（administered）」、「投与する（administers）」および「投与（administering）」という用語は、限定するものではないが、静脈内、動脈内、経口、非経口、頬、局所、経皮、直腸、筋肉内、皮下、骨内、経粘膜または腹腔内の投与経路を含む当技術分野において知られている経路によって対象に組成物を与えることと定義される。好ましい実施形態では、経口の組成物投与経路が適切である。
【００２８】
ここで使用するときは、「対象」または「個体」という用語には、組成物が投与され得る哺乳動物が含まれる。哺乳動物の非限定的な具体例には、人、人以外の霊長類、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、げっ歯類（遺伝子組み換えおよび非遺伝子組み換えのマウスを含む。）などが含まれる。いくつかの実施形態では、対象は人以外の哺乳動物であり、いくつかの実施形態では、対象は人である。
【００２９】
ここで使用されるときは、用語「キャリヤー」とは、毒性がなく、有害の方法で他の成分と相互作用しない、投与に適した形態で１つ以上の植物抽出物を可溶かつ均質な状態に維持するのを助ける組成物をいう。
【００３０】
特に明記しない限り、この開示の全体にわたって記載された割合およびパーセンテージはすべて重量による。
【００３１】
本発明はチロシナーゼを阻害することができる植物ベース阻害剤を提供する。より具体的には、本発明は、アナカーディム属からのカシュー外種皮の植物抽出物を対象とする。そのような植物抽出物は、チロシナーゼを阻害することができることが見いだされた。
【００３２】
本発明のチロシナーゼを阻害することができる有用な植物抽出物は、アナカーディム属からの植物抽出物を含む。より具体的には、植物ベース阻害剤は、Ａｎａｃａｒｄｉｕｍ  ｈｕｍｉｌｅ、Ａｎａｃａｒｄｉｕｍ  ｏｔｈｏｎｉａｎｕｍ、Ａｎａｃａｒｄｉｕｍ  ｇｉｇａｎｔｅｕｍ、Ａｎａｃａｒｄｉｕｍ  ｎａｎｕｍ、Ａｎａｃａｒｄｉｕｍ  ｎｅｇｒｅｎｓｅおよび／またはアナカーディム・オシデンタールの１つ以上の種から選ばれる植物抽出物である。好ましくは、植物抽出物はアナカーディム・オシデンタール種からのものである。１つの実施形態では、植物抽出物はアナカーディム・オシデンタール種の外種皮からのものである。
【００３３】
本発明のチロシナーゼを阻害することができる組成物は、活性成分として機能し得る１つ以上の化合物を含み得る。その化合物は植物抽出物の成分であり得る。例えば、その化合物は、植物抽出物が得られる植物に存在する植物化学物質であり得る。その化合物は、チロシナーゼ阻害に少なくとも部分的に関与している可能性がある。その化合物はチロシナーゼを阻害することができるいかなる化合物であってもよい。１つの実施形態では、その化合物は、植物化学物質のカテキン、エピカテキンおよび／またはプロシアニジン（例えば、Ａ、Ｂ、三量体、四量体）から選ばれる。
【００３４】
一般に、植物抽出物を生産するために、限定するものではないが、根、茎、葉、花、果実、種子、および種子の外種皮を含む、植物の１つ以上の部分を使用することができる。本発明では、植物抽出物を生産するために、少なくとも種子の外種皮が、単独でまたは他の植物部分と共に使用される。アナカーディム植物からの外種皮は、様々な供給元から商業的に入手することができる。カシュー外種皮の抽出物は、任意の適切な抽出技術を使用して得ることができる。
【００３５】
この点に関して、植物の１つ以上の部分、特に植物の外種皮を収集し粉砕することができる。その後、粉砕された材料は適切な溶媒を使用して抽出することができる。溶媒は濃縮工程で除去することができる。例えば、抽出された材料は、上澄みおよび濾滓を生成するために、ふるい分けまたは濾過することができる。濾滓は液体の実質的な部分を除去するために圧搾することができ、それを上澄みに加えることができる。その後、濾滓は脱水して、繊維源として使用することができる。上澄みは、蒸留して溶媒またはその一部を除去し、植物抽出液濃縮物を形成することができる。除去した溶媒はリサイクルすることができる。濃縮物は、乾燥した植物抽出物を提供するために、（例えば噴霧乾燥によって）乾燥させることができる。この乾燥した植物抽出物は、ここに記載されるように、アッセイまたは標準化することができる。好ましくは、乾燥した植物抽出物は、アナカーディム・オシデンタール、特にアナカーディム・オシデンタール植物の外種皮から誘導される。
【００３６】
抽出方法に適した溶媒には、水、アルコールまたはそれらの混合物が含まれる。例示的なアルコール溶媒には、限定するものではないが、Ｃ１−Ｃ７アルコール（例えばメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノールおよびブタノール）、ヒドロアルコールすなわちアルコールと水の混合物（例えばヒドロエタノール）、多価アルコール（例えばプロピレングリコールおよびブチレングリコール）および脂肪族アルコールが含まれる。これらのアルコール溶媒はいずれも、混合物の形で使用することができる。１つの実施形態では、植物抽出物は、エタノール、水またはそれらの組み合わせ（例えば約７０％のエタノールと約３０％の水の混合物）を用いて抽出される。もう１つの実施形態では、植物抽出物は水のみを用いて抽出される。
【００３７】
１つの実施形態では、植物抽出物は有機溶媒抽出技術を使用して得ることができる。もう１つの実施形態では、植物抽出物を得るために、溶媒連続分別を使用することができる。全ヒドロエタノールの抽出技術も、エタノール植物抽出物を得るために使用することができる。一般に、これは一括抽出と呼ばれる。
【００３８】
全エタノール抽出も使用することができる。この技術は溶媒としてエタノールを使用する。この抽出技術は、水溶性化合物に加えて、脂溶性および／または親油性化合物を有する植物抽出物を生成することができる。
【００３９】
植物抽出物を得るために使用することができる抽出技術のもう１つの具体例は、超臨界流体二酸化炭素抽出（「ＳＦＥ」）である。この抽出手順では、抽出される材料はいかなる有機溶媒にも晒されない。むしろ、超臨界条件（３１．３℃超過および７３．８バール超過）において、モディファイアーと一緒にまたはモディファイアーなしに、抽出溶媒として、二酸化炭素を使用することができる。当業者は、最も良い抽出収率を得るために、温度および圧力の条件を変えることができることを理解するであろう。この技術は、全ヘキサンおよび酢酸エチル抽出技術と同様に、フリット可溶性および／または親油性化合物の抽出物を生成することができる。
【００４０】
この方法で生成された植物抽出物は、抽出された材料に存在する多種多様な植物化学物質を含むことができる。植物化学物質は脂溶性または水溶性であることができる。抽出液を回収した後、溶媒を蒸発させて抽出物を得ることができる。
【００４１】
植物抽出物は、特定の化合物の指定された量に標準化することができる。例えば、植物抽出物は、抽出物中に存在する活性成分または植物化学物質の指定された量に標準化することができる。１つの実施形態では、植物抽出物は、抽出物の総重量を基準として約１５．０重量％以上のカテキン含有量に標準化される。
【００４２】
チロシナーゼ阻害組成物中に存在する植物抽出物の量は、チロシナーゼ阻害の望まれるレベル、特定の植物抽出物またはその成分のチロシナーゼ阻害レベル、および他の要因を含むいくつかの要因に依存し得る。好ましくは、植物抽出物は、組成物の総重量を基準として、約０．００５重量％以上、例えば約０．００５重量％〜約５０．００重量％の量で存在する。
【００４３】
チロシナーゼ阻害組成物は１つ以上の許容し得るキャリヤーを含むことができる。キャリヤーは、対象への投与に適した形を有するチロシナーゼ阻害組成物の中に植物抽出物の組み込みを可能にするのを助けることができる。非常に多くの許容し得るキャリヤーが当技術分野において知られており、キャリヤーはいかなる適切なキャリヤーであってもよい。キャリヤーは、人を含む動物への投与に適したものであり、植物抽出物および／またはいかなる活性成分の所望の活性にも実質的に影響を与えずに、キャリヤーの役割をすることができるものであることが好ましい。キャリヤーは、組成物の所望の投与経路および剤形に基づいて選択することができる。
【００４４】
適切な剤形には液体および固体の形態が含まれる。１つの実施形態では、組成物は、ゲル、シロップ、スラリーまたは懸濁液の形態である。別の実施形態では、組成物は、ドリンクショットまたは液体濃縮物のような液体の剤形である。さらなる実施形態では、組成物は、錠剤、ピル、カプセル、糖衣錠または粉末のような固体の剤形で存在する。液体または固体の剤形である場合、組成物は、配達のために食品の中に組み込むのに適した食品配達形態であることができる。固体の形態（特に錠剤およびカプセルの形態）で使用される適切なキャリヤーの具体例には、限定するものではないが、ゼラチン、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ガム、二酸化ケイ素、ステアリン酸、セルロースなどのような有機および無機の不活性キャリヤー材料が含まれる。キャリヤーは実質的に不活性であり得る。
【００４５】
一例として、ケイ酸化微結晶性セルロースは、キャリヤーまたはバインダーとして使用することができる。ケイ酸化微結晶性セルロースは、微結晶性セルロースとコロイド状二酸化ケイ素の物理的混合物である。そのようなケイ酸化微結晶性セルロースの適切な１つの形態は、ペンウエスト・ファーマシューティカル社（Penwest Pharmaceutical Co.）（ニュージャージー州パターソン（Patterson））から入手可能なＰｒｏＳｏｌｖ  ＳＭＣＣ（登録商標）９０である。ケイ酸化微結晶性セルロースによって供給される二酸化ケイ素に加えて、加工助剤として組成物に二酸化ケイ素を加えてもよい。例えば、二酸化ケイ素は、錠剤のような固体の投薬量単位の製造における圧縮成型中の粉末の流れを改善するための流動促進剤として含めることができる。
【００４６】
別の実施形態では、キャリヤーは、少なくともソバまたはスペルト小麦のような機能性キャリヤーである。組成物の中に機能性キャリヤーを添加することによって、上記のような標準的なキャリヤーと比較して、より低い血糖値のような追加の利点が提供されてもよい。さらに、機能性キャリヤーはアレルゲンを含まないもの（例えばソバ）であることができ、それを生産プロセスの中に加えることによって、本発明の植物抽出物は、ルチンとケルセチンのようなこれらの機能性キャリヤーのフラボノイドから利益を得ることができる。さらに、これらの機能性キャリヤーの高い繊維含有量は、腸の通過を容易にし調節することもできる。最後に、スペルト小麦に見つかったセレンの追加のミネラルの利点は新陳代謝を助ける可能性がある。
【００４７】
チロシナーゼ阻害組成物は、潤滑剤および／または流動促進剤のような他の不活性成分を含むことができる。潤滑剤は、金型から排出するときのような製造中の錠剤の取り扱いを助ける。流動促進剤は打錠の圧縮成型中の粉末の流れを改善する。ステアリン酸は許容し得る潤滑剤／流動促進剤の具体例である。
【００４８】
チロシナーゼ阻害組成物は、錠剤およびカプセル剤のような固体の剤形で作製することができる。この形態は、個体がレストランのような食事の場所に容易に運ぶことができ、食品の飲食の前に、飲食中にまたは飲食の後に服用することができる製品を提供する。組成物は、個体が体重、食品の量または炭水化物（例えば砂糖）含有量のような適切なパラメーターに基づいて服用する適切な数の単位を決定することを可能にする、適切な量の植物抽出物および／または活性成分を含む投薬量単位に剤形化することができる。
【００４９】
１つの実施形態では、植物抽出物は、約４μｇ／ｍＬ以上、好ましくは約４．０μｇ／ｍＬ〜約２０００．０μｇ／ｍＬ、より好ましくは約１５．０μｇ／ｍＬ〜約１０００．０μｇ／ｍＬ、さらに好ましくは約３０．０μｇ／ｍＬ〜約５００．０μｇ／ｍＬの量のような、治療上有効な量で組成物中にあ存在する。組成物は、単回投与として、または複数回投与で投与することができる。一例では、化合物は、１日当たり最大３回の用量で投与される。例えば、化合物は、食事の前に投与してもよいし、食事中に投与してもよいし、食事の後に投与してもよい。１つの実施形態では、組成物は、治療上有効な量のカシュー外種皮抽出物を含むチロシナーゼ阻害特性を有する栄養補助食品である。
【００５０】
投薬量は、他の個体および／または他の食品に有効であり得る他のレベルの阻害効果を提供する比較的簡単な投薬量増加をも可能にしながら、いくつかの個体および／またはいくつかの食品に有効であり得る一単位で、あるレベルの阻害効果を提供するように選択することができる。
【００５１】
阻害組成物は、経口摂取に適合した形態であることができる。この形態は、植物抽出物の指定された服用量を提供することを意図した単一の剤形として構成することができる。例えば、単一の剤形は、粉末、ピル、錠剤、カプセルまたはドリンクショットであることができる。単一の剤形は、例えば、約４．０μｇ／ｍＬ〜約２０００．０μｇ／ｍＬの植物抽出物を含むことができる。
【実施例】
【００５２】
実施例−材料および化学プロファイリング
【００５３】
実施例１  ７０％エタノール溶媒を用いたカシュー外種皮抽出物の調製
乾燥したカシュー外種皮粉末（アナカーディム・オシデンタール）（６０ｇ）を、３本の１００ｍＬのステンレス鋼チューブに入れ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（商標）Ｄｉｏｎｅｘ（商標）ＡＳＥ３５０加速溶媒抽出器で８０℃の温度および１５００ｐｓｉの圧力で脱イオン水中に７０％のエタノールを含む溶媒を用いて２回抽出した。抽出液を濾過し回収した。混ぜ合わせたエタノール抽出液を、真空下でロータリーエバポレータで蒸発させて、粗カシュー外種皮抽出物を得た。
抽出結果を次の表１に示す。
【００５４】
【表１】
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【００５５】
実施例２  カシュー外種皮抽出物のカテキン定量化
カシュー外種皮抽出物中に存在する遊離カテキンを、フォトダイオードアレイ検出器を備えた日立（Hitachi）高機能液体クロマトグラフ（「ＨＰＬＣ／ＰＤＡ」）と共に、Ｃ１８逆相カラム（Ｌｕｎａ（登録商標）５μｍ  Ｃ１８（２）１００オングストロームＬＣカラム２５０×４．６ｍｍ、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（登録商標）（米国カリフォルニア州トランス（Torrance）から入手可能）を用いて測定した。移動相Ａのための溶媒は０．１０％リン酸（「Ｈ３ＰＯ４」）水溶液であり、移動相Ｂのための溶媒Ｂはアセトニトリル（「ＡＣＮ」）であり、それは１．０ｍＬ／分の流量、２７５ｎｍでのＵＶ吸光度および３５℃のカラム温度で溶出に使用された。使用されるカテキン標準品はシグマアルドリッチ社からのものであった。標準品を、メタノール（「ＭｅＯＨ」）：０．１％のＨ３ＰＯ４（比率１：１）に溶解し、カテキン（Ｃ１２５１）濃度は０．５ｍｇ／ｍＬおよびエピカテキン（Ｅ１７５３）濃度は０．１ｍｇ／ｍＬであった。試験サンプルは、メスフラスコ中で０．１％のＨ３ＰＯ４の中に５０％のＭｅＯＨで２ｍｇ／ｍＬに調製し、溶解するまで（約１０分）超音波処理し、その後、室温まで冷却し、十分に混合し、そして０．４５μｍナイロンシリンジフィルターで濾過した。ＨＰＬＣ分析は、ＨＰＬＣに２０μＬのサンプルを注入することによって実行した。以下の表２は、ＨＰＬＣ分析法のグラジエント表を示す。
【００５６】
【表２】
2021536450.tif 000004
【００５７】
カシュー外種皮抽出物のＨＰＬＣカテキン定量化結果は、抽出物の総重量を基準として、９．４０重量％のカテキン含有量および６．１２重量％のエピカテキン含有量、合計１５．５２重量％のカテキン含有量を提供した。したがって、カシュー外種皮抽出物は、抽出物の総重量を基準として約１５．００重量％以上の総カテキン含有量に標準化することができる。波長２７５ｎｍでのカシュー外種皮抽出物のＨＰＬＣクロマトグラムを図１に示す。
【００５８】
実施例３  カシュー外種皮抽出物の化学プロファイリング
カシュー外種皮抽出物中に存在するフラボノイド化合物は、超高圧液体クロマトグラフィー（「ＨＰＬＣ」）および質量分析法（ＡＣＱＵＩＴＹ（登録商標）ＵＰＬＣ  ＩクラスおよびＸＥＶＯ（登録商標）ＧＳ−ＸＴ−ＱＴｏｆシステム、両方ともウォーター社（Water Corporation）（米国マサチューセッツ州ミルフォード）から入手可能）を使用して測定した。使用したカラムは、ＡＣＱＵＩＴＹ（登録商標）ＵＰＬＣ  ＨＳＳ  Ｔ３  ２．１×１００ｍｍ、１．８μｍであり、カラム温度は４０℃、サンプル温度は１５℃であった。移動相については、溶媒Ａは水（０．１％ギ酸）中に１０％のアセトニトリル（「ＡＣＮ」）であり、溶媒ＢはＡＣＮであった。捕捉範囲は１００〜１５００ドルトン（「Ｄａ」）であり、捕捉モードはエレクトロスプレーイオン化（「ＥＳＩ」）（−）であった。以下の表３はＨＰＬＣ条件を示す。
【００５９】
【表３】
2021536450.tif 000005
【００６０】
ピークの同定は正確な質量のみに基づいた。ジガロイルカテキン、カテキンおよびエピカテキンがカシュー外種皮抽出物の主成分であると同定された。Ａ型およびＢ型プロシアニジン、プロシアニジン四量体およびプロシアニジン三量体を含むプロシアニジンもまた抽出物の中に検出され、Ｂ型プロシアニジンがプロシアニジンの主成分であった。上記の化合物に加えて、同定された化合物には、とりわけ、ジガロイルカテキン、バクシハインＡ、６″−ｐ−クマロイルプルニンおよびズナリアノシドＢが含まれていた。分析から得られたカシュー外種皮抽出物のＬＣ／ＭＳおよびＬＣ／ＰＤＡクロマトグラムを、図２に示す。
【００６１】
実施例−バイオアッセイ
カシュー外種皮の抽出物は、食品グレードのエタノールで調製し、その後、上記のように濾過し、乾燥させた。残りのアッセイ調製には、研究グレードの試薬を使用した。抽出物はジメチルスルホキシド（「ＤＭＳＯ」）に溶解して最終濃度を５０ｍｇ／ｍＬにした後、各々のバイオアッセイに適した緩衝液で作業濃度に希釈した。
【００６２】
実施例４  マッシュルームチロシナーゼ阻害
【００６３】
カシュー外種皮抽出物は、マッシュルームチロシナーゼ酵素に対するその阻害効果について分析した。カシュー外種皮抽出物は、濃度を試験するために、１０％のジメチルスルホキシド（「ＤＭＳＯ」）で、アッセイバッファー（１００ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ６．８）の中で希釈した。Ｌ−ＤＯＰＡアミノ酸基質溶液は新鮮なアッセイバッファーの中で調製した。サンプルおよびＬ−ＤＯＰＡ（最終濃度１ｍＭ）は、１０単位のマッシュルームチロシナーゼ酵素を添加する前に、マイクロプレートで混合した。４９２ｎｍでの吸光度を５分および１０分に読み取り、５分のデータで計算を行った。阻害率は未処理の対照に対して計算した。
【００６４】
マッシュルームチロシナーゼ活性は、潜在的な阻害剤の存在下でマッシュルームチロシナーゼを基質（Ｌ−ＤＯＰＡ）と混合し、４９２ｎｍで反応生成物の存在を測定することによって測定した。カシュー外種皮抽出物のマッシュルームチロシナーゼ阻害率を図３に示す。図３から、カシュー外種皮抽出物はマッシュルームチロシナーゼ酵素を阻害する効果があることが分かる。図示されるように、約１５．０μｇ／ｍＬ以上のカシュー外種皮抽出物濃度で少なくとも５０％のマッシュルームチロシナーゼ阻害が起こる。より具体的には、少なくとも５０％のマッシュルームチロシナーゼ阻害は、約１５．０μｇ／ｍＬ以上、好ましくは約１５．０μｇ／ｍＬ〜約２０００．０μｇ／ｍＬ、より好ましくは約１２５．０μｇ／ｍＬ〜約１０００．０μｇ／ｍＬの濃度で起こる。特に、カシュー外種皮抽出物は約３９１μｇ／ｍＬのＩＣ５０を示す。
【００６５】
実施例５  遺伝子発現
【００６６】
カシュー外種皮抽出物は、培地に添加したときにそれが皮膚における遺伝子発現にどのように影響を及ぼすかを決定するために調査した。その研究は、表皮および真皮細胞層（マットテック社（MatTek Corporation）（米国マサチューセッツ州アシュランド）製ＥｐｉＤｅｒｍＦＴ（商標）（全層）組織モデル）を含む全層インビトロ皮膚培養モデルを使用して行った。遺伝子発現は、２４時間の曝露後の全層組織で評価した。
【００６７】
対照（「ビヒクル対照」）は、ジメチルスルホキシド（「ＤＭＳＯ」）、エタノールおよび水の７０：２０：１０の比率のブレンドとして調製した。細胞生存率を測定するために、３つの異なる濃度（５００μｇ／ｍＬ、１０００μｇ／ｍＬおよび２０００μｇ／ｍＬ）のカシュー外種皮抽出物を細胞培養培地に適用した。同等の量のビヒクル対照も、それぞれ０．５％、１．０％および２．０％で各々に適用した。１つの培養物は、１％のトリトン（Triton）Ｘ−１００で２４時間処理し、陰性（−）ＭＴＴ対照として使用した。未処理の培養物は陽性（＋）対照としての役割を果たした。２４時間のインキュベーション後、ＭＴＴアッセイを行った。
【００６８】
細胞生存率は、カシュー外種皮抽出物の２０００μｇ／ｍＬの濃度で８０％未満（７４％）であったが、５００μｇ／ｍＬの濃度（１２６％）および１０００μｇ／ｍＬの濃度（１０５％）では１００％より高かった。遺伝子発現解析のために、５００μｇ／ｍＬの濃度を選択した。
【００６９】
培養物の処理および維持
ＥＦＴ−４００組織（マットテック社）を、３７℃、５％のＣＯ２および約９５％の相対湿度で一晩平衡化した。翌日、平衡化培地を取り除き、カシュー外種皮抽出物培地で置き換えた。体積２．５ｍＬの培地を、各々のＥＦＴ−４００培養ウェルに加えた。
【００７０】
ＭＴＴ部分
各々のグループに３つの同型培養が含まれていた。ＭＴＴ（＋）組織については、３つの組織を未処理のＥＦＴ−４００−ＡＳＹ培地で培養した。ＭＴＴ（−）組織については、体積１００μＬの１％トリトンＸ−１００を各々のＥＦＴ培養物の表面に適用し、未処理のＥＦＴ−４００−ＡＳＹ培地でインキュベートした。カシュー外種皮抽出物培地を添加した後、培養物を、５％ＣＯ２および相対湿度約９５％のインキュベーターに２４時間戻した。
【００７１】
遺伝子発現部分
各々のグループに４つの複製が含まれていた。カシュー外種皮抽出物培地を添加した後、培養物を３７℃、５％ＣＯ２および相対湿度約９５％のインキュベーターに２４時間戻した。２４時間後、各ウェルからの抽出物培地をＬＤＨアッセイ（以下に記載）のために集めた。その後、各ＥＦＴ−４００培養物を４分の１に切断し、ＲＮＡｌａｔｅｒ保存溶液を含むチューブに入れて室温で２時間インキュベートした後、４℃に移した。ＲＮＡｌａｔｅｒ保存溶液中で４℃で４日間インキュベートした後、以下に記載するように各組織からＲＮＡを単離した。
【００７２】
ＭＴＴ生存率測定
各培養物を１ｍｇ／ｍＬのＭＴＴチアゾリルブルーテトラゾリウムブロミド粉末（シグマアルドリッチ製Ｍ５６５５）と共に３時間±５分インキュベートした。３時間後、ＭＴＴ培地を除去した。その後、過剰のＭＴＴ培地をすべて除去するために、組織を無菌のキムワイプに吸い取り、その後、抽出ウェルに入れた。ホルマザン塩を可溶化するために、組織を１００％イソプロピルアルコールに浸し、プレートシェーカーの上で周囲温度で２時間インキュベートした。２時間のインキュベーションの後、組織を各抽出ウェルから取り出し、可溶化したホルマザン塩のみをイソプロパノール中に残した。
【００７３】
各ウェルからの抽出物の２００μＬのアリコートを、９６ウェルマイクロタイタープレートの複製ウェルに移した。５７０ｎｍでの吸光度を、Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ（商標）ＦＣマイクロプレート光度計（サーモ・サイエンティフィック（Thermo Scientific）（商標）製）を使用して測定した。新鮮なイソプロピルをブランクとして測定し、他のサンプル読み取り値からブランクの平均吸光度を差し引いた。各培養物の培養生存率は、次の式を使用して、各試験群の平均Ａ５７０読み取り値を、未処理対照群の平均Ａ５７０読み取り値と比較することによって計算した。
生存率％＝［処理されたＡ５７０／未処理のＡ５７０］×１００
【００７４】
ＬＤＨ細胞毒性分析
集めたＥＦＴ培地（カシュー外種皮抽出物試験培地）を、殺菌したリン酸塩緩衝食塩水（「ＰＢＳ」）で１：１０に希釈した。ＬＤＨ反応混合物（タカラバイオ株式会社（TaKaRa Bio Inc.）製）を調製し、光学的に透明な平底９６ウェルプレート（１：１）の希釈培地のアリコートに添加した。バックグラウンド対照（細胞培養に使用されなかった希釈ＥＦＴ培地）、「低対照」（未処理のＥＦＴ培養ウェルから集められた希釈ＥＦＴ培地）、および「高対照」（１％トリトンＸ−１００で処理した培養ウェルから集められた希釈ＥＦＴ培地）を、分析に含めた。各サンプルを２つの反応ウェルで分析した。
【００７５】
反応ウェルを室温で約２５分間インキュベートし、光から保護した。その後、停止溶液（０．１Ｎ−ＨＣ１）を各ウェルに添加し、６２０ｎｍの参照フィルターで４９２ｎｍで吸光度を測定した。各サンプルの吸光度値は、ブランクの吸光度値を差し引いた、２つの反応ウェルの平均ＯＤ４９２−ＯＤ６２０値として計算した。次に、細胞毒性％を、未処理品（陰性対照、細胞毒性０％に設定）およびトリトンＸ−１００処理品（陽性対照、細胞毒性１００％に設定）の吸光度値と比較して、以下のように計算した。
細胞毒性％＝［（試験培地値−低対照）／（高対照−低対照）］×１００
【００７６】
ＲＮＡ単離
ＲＮＡは、マクスウェル（Maxwell）（登録商標）１６  ＬＥＶ  ｓｉｍｐｌｙＲＮＡ精製キット（プロメガ社（Promega Corporation）から入手可能）を使用して、製造者の指示に従って、各組織から単離した。ＲＮＡサンプルは、すべて単離時に２００ｎｇ／μＬ（オープンアレイ（OpenArray）処理に必要とされる濃度）を超えており、減圧濃縮を必要としなかった。ＲＮＡ濃度および純度は、ナノドロップ（NanoDrop）２０００分光光度計を使用して測定した。
【００７７】
ｃＤＮＡ合成
ｃＤＮＡは、高容量ｃＤＮＡ逆転写キット（アプライド・バイオシステムズ（Applied Biosystems）（商標）から入手可能）を使用し、製造者の指示に従って生成させた。１１２個の標準的な皮膚パネル遺伝子のオープンアレイ処理のために、１つのサンプル当たり２０００ｎｇのＲＮＡからｃＤＮＡを生成させた。
【００７８】
ｑＰＣＲ処理
ｑＰＣＲ反応は、検証済みのタクマン遺伝子発現解析（TaqMan Gene Expression Assays）（アプライド・バイオシステムズ（Applied Biosystems）（商標）製）を使用して実行した。オープンアレイは、ライフ・テクノロジーズ・カントスタジオ１２Ｋフレックス（Life Technologies QuantStudio 12K Flex）機器で実行した。各遺伝子は２回ずつ分析した。
【００７９】
データ分析
ｑＰＣＲデータ品質は、エクスプレッション・スイート（Expression Suite）ソフトウェア（ライフ・テクノロジーズ）を使用して、生のデーターファイルから評価しエクスポートした。次に、ｑＰＣＲデータは、ティブコ・スポットファイヤー・アナリスト（TIBCO Spotfire Analyst）ソフトウェアの「ｑＰＣＲのためのオミックスオフィス（OmicsOffice for qPCR）」ツールにインポートした。統計分析は相対定量（ＲＱ）法を使用して行った。ＲＱ分析の最初の工程において、ターゲット遺伝子のＣＴ値は、デルタＣＴ（ｄＣＴ）を発生させるために、内因性制御遺伝子のＣＴ値に正規化される。ｄＣＴ値は、実験手順中に発生するかもしれないサンプル間の変動を正規化するために計算される。
【００８０】
ティブコ・スポットファイヤーソフトウェアを用いた統計的データ分析
ティブコ・スポットファイヤーソフトウェアを用いて、オプションのベンジャミニ・ホッホバーグ（Benjamini-Hochberg）偽発見率（ＦＤＲ）ｐ値調整を適用した場合と適用しない場合について、対応のないｔ検定を行った。遺伝子発現における統計的に有意な（対応のないｔ検定、ＦＤＲ  ｐ≦０．０５、Ｎ＝４）変化を、以下の表４に報告する。
【表４】
2021536450.tif 000006
「ｎ．ｓ」＝統計的に有意でない。１．５倍を超える線形変化は太字で示す。１．５倍未満の線形変化は括弧付きで示す。影付きの値は、ｐ値（未調整のｐ値およびＦＤＲのｐ値は両方ともｐ≦０．０５である。）を調整するために、ベンジャミニ・ホッホバーグ偽発見率（ＦＤＲ）を通過した。
【００８１】
上記の表４は、ビヒクル対照群と比較したカシュー外種皮抽出物の遺伝子発現の統計的に有意な（対応のないｔ検定、ＦＤＲ  ｐ≦０．０５、Ｎ＝４）変化を示す。上記のように、遺伝子発現は全層インビトロ皮膚培養組織モデルで分析した。別々の層（表皮および／または真皮）の追加の分析は、遺伝子発現の追加の変化を同定するか、または両方の細胞型を一緒に分析することによってマスクされたかもしれない既に調節されたものの倍率変化値を高めるかもしれない。
【００８２】
メタロチオネイン１Ａ（「ＭＴ１Ａ」）およびメタロチオネイン２Ａ（「ＭＴ２Ａ」）は抗酸化物質の解毒に関与している。メタロチオネインの増加は、フリーラジカル活性の低下、酸化による損傷の低下および炎症の低下につながる。上記の表４は、カシュー外種皮抽出物の存在下でのＭＴ１Ａ発現の有意な増加を示しており、皮膚の抗酸化活性と抗炎症活性の両方を示している。
【００８３】
ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ：キノンオキシドレダクターゼ−１（「ＮＱＯ１」）は、化学薬品および放射線によって誘発される酸化的損傷から細胞を保護する酵素をコードする抗酸化作用のあるストレス応答遺伝子である。ＡＨＲおよびＮＲＦ２転写因子はＮＱＯ１の発現を制御する。ＮＱＯ１のレベルは表皮角化細胞および真皮繊維芽細胞におけるｐ６３の発現と相関関係があり、細胞の増殖および分化を調節する役割を果たす。ＮＱＯ１は抗酸化物質の解毒に関連しており、チロシナーゼの分解を遅くすることで細胞をさらなる損傷から保護することができる。上記の表４は、カシュー外種皮抽出物が有意にＮＱＯ１の発現を増加させ、それ故に抗酸化物質として機能することを示している。
【００８４】
チオレドキシン（「ＴＸＮ」）およびチオレドキシンレダクターゼ１（「ＴＸＮＲＤ１」）は、Ｈ２Ｏ２への曝露で見られるように、繊維芽細胞の抗酸化応答に関係し、さらなる傷害を修復し防御するために、酸化還元感受性シグナル伝達経路を開ける。これは、酸化ストレスへの細胞の適応を可能にする。ＴＸＮＲＤ１の発現は、ＮＦＥ２Ｌ２（ｎｒｆ２）の活性化の下流にある。ＴＸＮＲＤ１はレスベラトロールへの曝露によっても誘発される。上記の表４は、カシュー外種皮抽出物がＴＸＮＲＤ１の発現を有意に増加させ、それ故に抗酸化物質として機能することを示している。
【００８５】
カスパーゼ１４（「ＣＡＳＰ１４」）は、主に表皮の基底上層で表現するプロテアーゼである。ＣＡＳＰ１４は表皮分化および角質化に必要であり、ＧＡＳＰ１４は、フィラグリン（ＦＬＧ）タンパク質モノマーを直接切断し、おそらく他のプロテアーゼによる分解のためにそれを準備させる。ＣＡＳＰ１４によるＦＬＧ生成物の分解は皮膚に自然な保湿効果をもたらす。
【００８６】
結合組織成長因子（「ＣＴＦＧ」）はタンパク質をコード化する遺伝子である。ＣＴＧＦと関連した疾病には全身性強皮症および腎繊維症が含まれる。関連する経路には、ＥＲＫシグナル伝達および遺伝子発現がある。この遺伝子に関連する遺伝子オントロジー（ＧＯ）アノテーションには、成長因子活性およびインテグリン結合が含まれる。繊維芽細胞におけるＣＴＧＦの過剰発現は、真皮、腎臓および肺の繊維症を促進し、繊維芽細胞および平滑筋細胞におけるＣＴＧＦの欠失はブレオマイシン誘発性の皮膚線維症を大幅に減少させる。表４は、カシュー外種皮抽出物の存在下でのＣＴＦＧの発現の有意な減少を示し、抽出物が、真皮繊維症におけるコラーゲン肥厚の場合により有意な増加をおそらく防ぐことを含む、繊維症を軽減する活性を有するかもしれないことを示す。
【００８７】
細胞間接着分子１（「ＩＣＡＭ１」）は、白血球および内皮細胞の膜に低濃度で連続的に存在する一種の細胞間接着分子をコードするタンパク質コード遺伝子である。サイトカイン刺激に際して、濃度は大幅に増加する。ＩＣＡＭ−１は、細胞−細胞相互作用の安定化および白血球内皮遊出の促進における重要性で長い間知られている、内皮および白血球に関連する膜貫通タンパク質である。
【００８８】
インターロイキン１，アルファ（「ＩＬ１α」）はケラチノサイトによって構成的に産生される表皮サイトカインである。ＩＬ１αは、皮膚の組織および機能の「主要制御因子」の役割をする。ＩＬ１αは、真皮のコラーゲン代謝回転を調整し、ヒアルロン酸の生成を刺激する。ＩＬ１αはチロシナーゼ活性の阻害を通じてメラニン形成を減少させることができる。ＩＬ１αの産生は年齢とともに低下し、バリヤー機能の低下に寄与する。ＩＬ１αシグナル伝達は組織の修復および創傷治癒に重要な炎症カスケードを引き起こす。
【００８９】
インターロイキン１，ベータ（「ＩＬ１β」）は、炎症反応中にアップレギュレートされるサイトカインであり、バリヤー破壊においてアップレギュレートされる。乾癬のような皮膚病では、ＩＬ１βは増殖が持続する間、分化をブロックすることによって表皮の恒常性を破壊するかもしれない。このサイトカインは、プロタンパク質として活性化マクロファージによって産生され、カスパーゼ１（ＣＡＳＰ１／ＩＣＥ）によってその活性型にタンパク質分解的にプロセシングされる。このサイトカインは炎症反応の重要なメディエーターであり、細胞の増殖、分化およびアポトーシスを含む様々な細胞活動に関与している。カシュー外種皮抽出物は、ＩＬ−１βの発現を有意に増加させ、皮膚の炎症活動の媒介に使用できる可能性を示している。
【００９０】
ＢＩＲＣ５（サバイビン）は、基底のケラチノサイト、おそらくケラチノサイト幹細胞の亜集団で発現する抗アポトーシスタンパク質である。Ｂ１ＲＣ５はＵＶに晒された細胞に抗アポトーシス効果を有し、ＢＩＲＣ５はカスパーゼの活性化を阻害することによってアポトーシスを阻害することができる。ＢＩＲＣ５の過剰発現は、ｐ５３に誘発されたアポトーシスから細胞を救うことができる。ＢＩＲＣ５は乾癬においてアップレギュレートされ、老化する真皮繊維芽細胞において過剰発現する。表４に示されるように、ＢＩＲＣ５の減少した発現は、カシュー外種皮抽出物の反老化効果を示唆する。
【００９１】
上記のデータは、アナカーディム・オシデンタール・Ｌ．の外種皮の植物抽出物がチロシナーゼの阻害を示す１つ以上の化合物を有することを実証している。さらに、外種皮抽出物のインビトロ研究は、抗酸化保護、細胞のリニューアルおよび再生、創傷治癒、老化防止、および免疫／炎症反応に関連する遺伝子の変化をもたらし、カシュー外種皮抽出物が、皮膚の過度の瘢痕に関与する遺伝子を抑制しながら、皮膚に存在する抗酸化物質および抗炎症関連遺伝子の発現を増加させることを示唆している。
【００９２】
上記の説明は、本発明のいくつかの方法および材料を開示する。本発明は、方法および材料の修正ならびに製作方法および機器の変更の影響を受けやすい。そのような修正は、この開示の考慮またはここに開示された発明の実施から当業者に明らかになるであろう。さらに、別段の定義がない限り、ここで使用されるすべての技術および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般に理解されているのと同じ意味を有する。したがって、本発明がここに開示された特定の実施形態に限定されることは意図していないが、それが、添付の特許請求の範囲に具体化されるような発明の真の範囲および精神に含まれる修正および代替をすべてカバーすることも意図していない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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