(57)【要約】  式（Ｉ）の基2021504430.tif 000153（式中、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は本明細書で定義された通りである。）を含む抗ＣＤ４０抗体薬物コンジュゲートが本明細書に提供される。式（ＩＩ）の抗ＣＤ４０抗体薬物コンジュゲート（式中、Ｚ、Ｒ、ＡＡ１、ＡＡ２、ＡＡ３、ｍ、ｐ、ｑ、ｎ、ｗ、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は本明細書で定義された通りである。）がさらに提供される。医薬組成物及びそのキット、並びにこれを使用する方法がさらに提供される。
2021504430.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、及び配列番号１２として示された相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗ＣＤ４０抗体；並びに
（ｂ）式（Ｉ）のグルココルチコイド受容体アゴニスト基：
【化１】
2021504430.tif 000147
（式中、
Ｒ１は水素又はフルオロであり、
Ｒ２は水素又はフルオロであり、
Ｒ３は水素又は−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２である。）を含み、  さらに、前記抗体が、以下の式で表されるリンカー：
【化２】
2021504430.tif 000148
（式中、Ｒは、結合、
【化３】
2021504430.tif 000149
又は
【化４】
2021504430.tif 000150
であり、ｒは０又は１であり、
ＡＡ１、ＡＡ２、及びＡＡ３は、独立して、アラニン（Ａｌａ）、グリシン（Ｇｌｙ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、プロリン（Ｐｒｏ）、バリン（Ｖａｌ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、チロシン（Ｔｙｒ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、アルギニン（Ａｒｇ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、リシン（Ｌｙｓ）、セリン（Ｓｅｒ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、システイン（Ｃｙｓ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、及びグルタミン（Ｇｌｎ）からなる群から選択され、
ｍは０又は１であり、
ｗは０又は１であり、
ｐは０又は１であり、
ｑは０又は１である。）を介して、前記グルココルチコイド受容体アゴニストにコンジュゲートされている、抗体薬物コンジュゲート。
【請求項２】
式：
【化５】
2021504430.tif 000151
（式中、Ａは前記抗ＣＤ４０抗体であり、ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０である。）による、請求項１に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項３】
Ｒ１が水素であり、Ｒ２が水素である、請求項１又は２に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項４】
Ｒ１がフルオロであり、Ｒ２が水素である、請求項１又は２に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項５】
Ｒ１がフルオロであり、Ｒ２がフルオロである、請求項１又は２に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項６】
Ｒ３が−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項７】
Ｒ３が水素である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項８】
−ＡＡ１−（ＡＡ２）ｐ−（ＡＡ３）ｑ−が、−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−、−Ａｌａ−Ａｌａ−、−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−、−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−、−Ｇｌｕ−、−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−及び−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−からなる群から選択される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項９】
−ＡＡ１−（ＡＡ２）ｐ−（ＡＡ３）ｑ−が、−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−、−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−、−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−及び−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−からなる群から選択される、請求項８に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項１０】
−ＡＡ１−（ＡＡ２）ｐ−（ＡＡ３）ｑ−が、−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−又は−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−である、請求項９に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項１１】
−ＡＡ１−（ＡＡ２）ｐ−（ＡＡ３）ｑ−が、−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−又は−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−である、請求項９に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項１２】
ｍが０であり、
ｑが０であり、
Ｒが、
【化６】
2021504430.tif 000152
である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項１３】
ｍが０又は１であり、
ｐが１であり、
Ｒが結合である、
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項１４】
Ｒが結合であり、ｐが１であり、ｍが０であり、ｗが０であり、ｑが０である、請求項１〜８又は１０に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項１５】
Ｒが結合であり、ｐが１であり、ｍが０であり、ｗが０であり、ｑが１である、請求項１〜８又は１１に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項１６】
ｍが１であり、ｗが１であり、ｑが０である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項１７】
ｍが０である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項１８】
ｎが１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０である、表５に列挙された化合物からなる群から選択される、請求項１に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項１９】
実施例４−コンジュゲート型、実施例２８−コンジュゲート型、及び実施例４７−コンジュゲート型からなる群から選択される、請求項１８に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項２０】
ｎが１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０である、表６Ａに列挙された化合物からなる群から選択される、請求項１に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項２１】
実施例６−コンジュゲート型、実施例７−コンジュゲート型、実施例１２−コンジュゲート型、及び実施例１３−コンジュゲート型からなる群から選択される、請求項２０に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項２２】
ｎが１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０である、表６Ｂに列挙された化合物からなる群から選択される、請求項１に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項２３】
実施例６−加水分解型、実施例７−加水分解型、実施例１２−加水分解型、及び実施例１３−加水分解型からなる群から選択される、請求項２２に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項２４】
実施例１２−加水分解型及び実施例１３−加水分解型からなる群から選択される、請求項２３に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項２５】
ｎが２、４、６、又は８である、請求項１〜２４のいずれかに記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項２６】
ｎが２である、請求項２５に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項２７】
ｎが４である、請求項２５に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項２８】
ｎが２である、実施例４７−コンジュゲート型である、請求項１に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項２９】
ｎが４である、実施例４７−コンジュゲート型である、請求項１に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項３０】
ｎが２である、実施例２８−コンジュゲート型である、請求項１に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項３１】
ｎが４である、実施例２８−コンジュゲート型である、請求項１に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項３２】
前記抗体が、配列番号５として示された重鎖可変領域及び配列番号６として示された軽鎖可変領域を含む、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項３３】
前記抗体が、配列番号３として示された重鎖を含む、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項３４】
前記抗体が、配列番号４として示された軽鎖を含む、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項３５】
前記抗体が、配列番号３として示された重鎖及び配列番号４として示された軽鎖を含む、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項３６】
請求項１〜３５のいずれか一項に記載の抗体薬物コンジュゲート及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項３７】
治療を必要とする対象において、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、多発性硬化症、関節リウマチ、シェーグレン症候群、及び化膿性汗腺炎（ＨＳ）からなる群から選択される状態を治療する方法であって、有効量の、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の抗体薬物コンジュゲート又は請求項３６に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、全内容が参照により本明細書に組み込まれている、２０１７年１２月１日に出願した米国仮出願第６２／５９３，８０７号及び２０１７年１２月５日に出願した米国仮出願第６２／５９５，０４５号の優先権を主張するものである。
【０００２】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、その全体が参照により本明細書に組み込まれている配列表を含有する。２０１８年１１月２９日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは、Ａ１０３０１７＿１４８０ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘと命名され、サイズは１３，５２０バイトである。
【背景技術】
【０００３】
ＣＤ４０は、広範囲な造血（リンパ球、単球、樹状）細胞型及び非造血（上皮、内皮、線維芽細胞）細胞型に発現する４８ｋＤａＩ型膜貫通タンパクである（ｖａｎ  Ｋｏｏｔｅｎ、Ｊ  Ｌｅｕｋｏｃ  Ｂｉｏｌ．２０００年１月；６７巻（１号）：２〜１７頁）。ＣＤ４０は、Ｂ細胞の発生、リンパ球の活性化、及び抗原提供細胞（ＡＰＣ）機能に重要な役割を果たす腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体ファミリーメンバーである。
【０００４】
ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌシグナル伝達経路は、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、多発性硬化症、関節リウマチ、及びシェーグレン症候群を含む多くの自己免疫疾患の病因に関わってきた（Ｌａｗ  ａｎｄ  Ｇｒｅｗａｌ、Ａｄｖ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  Ｂｉｏｌ．、２００９年；６４７巻：８〜３６頁）。ＣＤ４０の発現は、慢性自己免疫によりダメージを受けた、腎臓、腸、及び関節を含む組織において、マクロファージ、内皮、上皮、及びＢ細胞上で上昇する（Ｂｏｒｃｈｅｒｄｉｎｇ、Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ．、２０１０年４月；１７６巻（４号）：１８１６〜２７頁；Ｓａｗａｄａ−Ｈａｓｅ、Ａｍ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．、２０００年６月；９５巻（６号）：１５１６〜２３頁）。溶解性ＣＤ４０Ｌは、ＳＬＥ、ＩＢＤ、及びシェーグレン症候群に罹患した対象において、これら対象における炎症負荷と一致して上昇する。
【０００５】
慢性腸炎症におけるＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ経路の最も早期の証拠の一部は、抗ＣＤ４０Ｌ  ｍＡｂｓが実験的大腸炎からげっ歯類を保護した、臨床前モデルから得たものであった（ｄｅ  Ｊｏｎｇ、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．、２０００年９月；１１９巻（３号）：７１５〜２３頁；Ｌｉｕ、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２０００年６月１日；１６４巻（１１号）：６００５〜１４頁；Ｓｔｕｂｅｒ、Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ、１９９６年２月１日、１８３巻（２号）：６９３〜８頁）。疾患活性スコアの減少は、腸における炎症誘発性サイトカイン産生の減少及び慢性の体重損失からの保護に関連した。ＣＤ４０又はＣＤ４０Ｌが遺伝的に欠如した動物において類似の結果が観察された（ｄｅ  Ｊｏｎｇ、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．、２０００年９月；１１９巻（３号）：７１５〜２３頁）。疾患発症後の抗ＣＤ４０Ｌ  ｍＡｂｓでのマウスの処置は疾患活性を減少させるのに依然として有効であり、慢性炎症性疾患を維持するためにこの経路が重大であることを示唆している。加えて、ＣＤ４０アゴニスト抗体はリンパ球が欠乏しているマウスにおいて腸の炎症を促進させるのに十分である（Ｕｈｌｉｇ、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．、２００６年８月；２５巻（２号）：３０９〜１８頁）。ＣＤ４０  ｓｉＲＮＡを使用したより最近のデータはまた、大腸炎におけるＣＤ４０シグナル伝達に対する重要な役割を指摘している（Ａｒｒａｎｚ、ＪＣｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌｅａｓｅ．２０１３年２月１０日；１６５巻（３号）：１６３〜７２頁）。クローン病では、粘膜固有層単球及び上皮は高レベルのＣＤ４０を発現し、ＣＤ４０＋単球は末梢血中で富化する。さらに、ＣＤ４０位置における多形性はＩＢＤに対する感受性の増加に連結している。抗ＴＮＦ抗体で治療したクローン病の対象において、転写プロファイリングは、薬物治療の応答が十分な対象ではＣＤ４０  ｍＲＮＡレベルが低減していることを示している。しかし、ＴＮＦ阻害剤に対する応答が弱い対象では、ＣＤ４０  ｍＲＮＡレベルは変化しておらず、ＣＤ４０依存性の、ＴＮＦから独立した経路がこれらの対象において炎症を促進し得ることを示唆している。実験は、ＣＤ４０媒介性シグナル伝達の阻害がＩＢＤ並びに他の自己免疫疾患の発生において重要であることを示唆している。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】ｖａｎ  Ｋｏｏｔｅｎ、Ｊ  Ｌｅｕｋｏｃ  Ｂｉｏｌ．２０００年１月；６７巻（１号）：２〜１７頁
【非特許文献２】（Ｌａｗ  ａｎｄ  Ｇｒｅｗａｌ、Ａｄｖ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  Ｂｉｏｌ．、２００９年；６４７巻：８〜３６頁
【非特許文献３】Ｂｏｒｃｈｅｒｄｉｎｇ、Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ．、２０１０年４月；１７６巻（４号）：１８１６〜２７頁
【非特許文献４】Ｓａｗａｄａ−Ｈａｓｅ、Ａｍ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．、２０００年６月；９５巻（６号）：１５１６〜２３頁
【非特許文献５】ｄｅ  Ｊｏｎｇ、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．、２０００年９月；１１９巻（３号）：７１５〜２３頁
【非特許文献６】Ｌｉｕ、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２０００年６月１日；１６４巻（１１号）：６００５〜１４頁
【非特許文献７】Ｓｔｕｂｅｒ、Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ、１９９６年２月１日、１８３巻（２号）：６９３〜８頁
【非特許文献８】Ｕｈｌｉｇ、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．、２００６年８月；２５巻（２号）：３０９〜１８頁
【非特許文献９】Ａｒｒａｎｚ、Ｊ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌｅａｓｅ．２０１３年２月１０日；１６５巻（３号）：１６３〜７２頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、様々な炎症性及び自己免疫性状態の治療に有用な新規ＣＤ４０アンタゴニストに対する必要性が依然として継続して存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
（発明の要旨）
一態様において、本開示は、（ａ）配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、及び配列番号１２として示される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗ＣＤ４０抗体、並びに（ｂ）式（Ｉ）のグルココルチコイド受容体アゴニストの基：
【０００９】
【化１】
2021504430.tif 000003
（式中、
Ｒ１は水素又はフルオロであり、
Ｒ２は水素又はフルオロであり、
Ｒ３は水素又は−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２である。）を含み、
さらに、抗体が、以下の式で表されるリンカー：
【００１０】
【化２】
2021504430.tif 000004
（式中、Ｒは、結合、
【００１１】
【化３】
2021504430.tif 000005
又は
【００１２】
【化４】
2021504430.tif 000006
（式中、ｒは０又は１である。）であり、
ＡＡ１、ＡＡ２、及びＡＡ３は、独立して、アラニン（Ａｌａ）、グリシン（Ｇｌｙ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、プロリン（Ｐｒｏ）、バリン（Ｖａｌ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、チロシン（Ｔｙｒ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、アルギニン（Ａｒｇ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、リシン（Ｌｙｓ）、セリン（Ｓｅｒ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、システイン（Ｃｙｓ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、及びグルタミン（Ｇｌｎ）からなる群から選択され、
ｍは０又は１であり、
ｗは０又は１であり、
ｐは０又は１であり、
ｑは０又は１である。）で表されるリンカーを介して、グルココルチコイド受容体アゴニストにコンジュゲートしている抗体薬物コンジュゲートを提供する。
【００１３】
別の実施形態において、本開示は、式（ＩＩ）による抗体薬物コンジュゲート：
【００１４】
【化５】
2021504430.tif 000007
（式中、Ａは抗ＣＤ４０抗体であり、ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０である。）を提供する。
【００１５】
ある特定の実施形態において、ｎは２、４、６、又は８である。ある特定の実施形態において、ｎは２である。ある特定の実施形態において、ｎは４である。
【００１６】
一実施形態において、本開示は、Ｒ１が水素であり、Ｒ２が水素である、任意の先行する実施形態による抗体薬物コンジュゲートを提供する。一実施形態において、本開示は、Ｒ１がフルオロであり、Ｒ２が水素である、任意の先行する実施形態による抗体薬物コンジュゲートを提供する。一実施形態において、本開示は、Ｒ１がフルオロであり、Ｒ２がフルオロである、任意の先行する実施形態による抗体薬物コンジュゲートを提供する。一実施形態において、本開示は、Ｒ３が−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２である、抗体薬物コンジュゲートを提供する。別の実施形態において、本開示は、Ｒ３が水素である、抗体薬物コンジュゲートを提供する。
【００１７】
一実施形態において、本開示は、−ＡＡ１−（ＡＡ２）ｐ−（ＡＡ３）ｑ−が、−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−；−Ａｌａ−Ａｌａ−；−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−；−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−；−Ｇｌｕ−；−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−；及び−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−からなる群から選択される、任意の先行する実施形態による抗体薬物コンジュゲートを提供する。ある特定の実施形態において、ＡＡ１−（ＡＡ２）ｐ−（ＡＡ３）ｑは、−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−；−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−；−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−；及び−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−からなる群から選択される。ある特定の実施形態において、ＡＡ１−（ＡＡ２）ｐ−（ＡＡ３）ｑは−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−又は−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−である。ある特定の実施形態において、ＡＡ１−（ＡＡ２）ｐ−（ＡＡ３）ｑは−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−又は−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−である。
【００１８】
一実施形態において本開示は、ｍが０であり、ｑが０であり、
Ｒが
【００１９】
【化６】
2021504430.tif 000008
である、任意の先行する実施形態による抗体薬物コンジュゲートを提供する。
【００２０】
一実施形態において本開示は、ｍが０又は１であり、ｐが１であり、Ｒが結合である、任意の先行する実施形態による抗体薬物コンジュゲートを提供する。
【００２１】
一実施形態において本開示は、ｍが１であり、ｗが１であり、ｑが０である、任意の先行する実施形態による抗体薬物コンジュゲートを提供する。
【００２２】
一実施形態において本開示は、ｍが０である、任意の先行する実施形態による抗体薬物コンジュゲートを提供する。
【００２３】
ある特定の実施形態において、本開示は、Ｒが結合であり、ｐが１であり、ｍが０であり、ｗが０であり、ｑが０である、任意の先行する実施形態による抗体薬物コンジュゲートを提供する。ある特定の実施形態において、本開示は、Ｒが結合であり、ｐが１であり、ｍが０であり、ｗが０であり、ｑが１である、任意の先行する実施形態による抗体薬物コンジュゲートを提供する。
【００２４】
一実施形態において本開示は、ｎが１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０である、表５に列挙された化合物からなる群から選択される、任意の先行する実施形態による抗体薬物コンジュゲートを提供する。ある特定の実施形態において、ｎは２、４、６又は８である。ある特定の実施形態において、ｎは２である。ある特定の実施形態において、ｎは４である。
【００２５】
一実施形態において、本開示は、実施例４−コンジュゲート型、実施例２８−コンジュゲート型、及び実施例４７−コンジュゲート型からなる群から選択される、任意の先行する実施形態による抗体薬物コンジュゲートを提供する。ある特定の実施形態において、本開示は、抗体薬物コンジュゲートが実施例４７−コンジュゲート型であり、ｎが２である、任意の先行する実施形態による抗体薬物コンジュゲートを提供する。ある特定の実施形態において、本開示は、抗体薬物コンジュゲートが実施例４７−コンジュゲート型であり、ｎが４である、任意の先行する実施形態による抗体薬物コンジュゲートを提供する。ある特定の実施形態において、本開示は、抗体薬物コンジュゲートが実施例２８−コンジュゲート型であり、ｎが２である、任意の先行する実施形態による抗体薬物コンジュゲートを提供する。ある特定の実施形態において、本開示は、抗体薬物コンジュゲートが実施例２８−コンジュゲート型であり、ｎが４である、任意の先行する実施形態による抗体薬物コンジュゲートを提供する。
【００２６】
一実施形態において本開示は、ｎが１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０である、表６Ａ又は６Ｂに列挙された化合物からなる群から選択される、任意の先行する実施形態による抗体薬物コンジュゲートを提供する。ある特定の実施形態において、ｎは２、４、６又は８である。ある特定の実施形態において、ｎは２である。ある特定の実施形態において、ｎは４である。
【００２７】
一実施形態において本開示は、実施例６−コンジュゲート型、実施例６−加水分解型、実施例７−コンジュゲート型、実施例７−加水分解型、実施例１２−コンジュゲート型、実施例１２−加水分解型、実施例１３−コンジュゲート型、及び実施例１３−加水分解型からなる群から選択される、任意の先行する実施形態による抗体薬物コンジュゲートを提供する。
【００２８】
一実施形態において本開示は、実施例１２−加水分解型、実施例１３−加水分解型からなる群から選択される、任意の先行する実施形態による抗体薬物コンジュゲートを提供する。
【００２９】
ある特定の実施形態において、抗体薬物コンジュゲートの抗体は、配列番号５として示される重鎖可変領域及び配列番号６として示される軽鎖可変領域を含む。
【００３０】
ある特定の実施形態において、抗体薬物コンジュゲートの抗体は、配列番号３とし示される重鎖を含む。ある特定の実施形態において、抗体薬物コンジュゲートの抗体は配列番号４として示される軽鎖を含む。ある特定の実施形態において、抗体薬物コンジュゲートの抗体は配列番号３として示される重鎖及び配列番号４として示される軽鎖を含む。
【００３１】
一実施形態において、本開示は、任意の先行する実施形態による抗体薬物コンジュゲート、及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
【００３２】
一実施形態において、本開示は、これを必要とする対象において、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、多発性硬化症、関節リウマチ、シェーグレン症候群、及び化膿性汗腺炎（ＨＳ）からなる群から選択される状態を治療する方法であって、任意の先行する実施形態による抗体薬物コンジュゲート又は任意の先行する実施形態による医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む方法を提供する。
【００３３】
一実施形態において、本開示は、（ａ）任意の先行する実施形態による抗体薬物コンジュゲート又は任意の先行する実施形態による医薬組成物を含む容器；及び（ｂ）１個以上の容器上の又はこれに付随するラベル又はパッケージ添付文書を含むキットであって、該抗体薬物コンジュゲート又は医薬組成物が、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、多発性硬化症、関節リウマチ、シェーグレン症候群、及び化膿性汗腺炎（ＨＳ）からなる群から選択される状態を治療するために使用されることをラベル又はパッケージ添付文書が示すキットを提供する。
【００３４】
先行する実施形態のいずれかにおいて、ＩＢＤは潰瘍性大腸炎（ＵＣ）又はクローン病である。
【００３５】
一実施形態において、本開示は、グルココルチコイド受容体アゴニストをＣＤ４０発現細胞に送達する方法であって、細胞を任意の先行する実施形態による抗体薬物コンジュゲートに接触させるステップを含む方法を提供する。
【００３６】
一実施形態において、本開示は、抗体薬物コンジュゲートの抗炎症性活性を決定する方法であって、（ａ）ＣＤ４０発現細胞を、任意の先行する実施形態による抗体薬物コンジュゲートに接触させるステップ、及び（ｂ）対照細胞と比較して、細胞からの炎症誘発性サイトカインの放出の減少を決定するステップを含む方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１Ａ】ＡＤＣ実施例２において提供された、実施例４−コンジュゲート型（ヒト）（ｎ＝４）のデコンボリューション処理した質量分析データを表している。２５１４０．７３ピークは１つの薬物リンカー分子をコンジュゲートした軽鎖（配列番号４）に対応する。５０９１７．５９ピークは、１つの薬物リンカー分子をコンジュゲートした重鎖（配列番号３）に対応する。
【図１Ｂ】保持時間が約７．５分間である、ＡＤＣ実施例２において提供された、実施例２８−コンジュゲート型（ヒト）（ｎ＝２）に対するアニオン性交換クロマトグラフィー（ＡＥＣ）データを表している。
【図１Ｃ】ＡＤＣ実施例２において提供された、実施例４−コンジュゲート型（ヒト）（ｎ＝２）のデコンボリューション処理した質量分析データを表している。２５１７６．７２ピークは、１つの薬物リンカー分子とコンジュゲートした軽鎖（配列番号２）に対応している。５０９５４．６３ピークは、１つの薬物リンカー分子とコンジュゲートした重鎖（配列番号１）に対応している。
【図１Ｄ】保持時間が約１３分間である、ＡＤＣ実施例２において提供された、実施例２８−コンジュゲート型（ヒト）（ｎ＝４）に対するアニオン性交換クロマトグラフィー（ＡＥＣ）データを表している。
【図１Ｅ】ＡＤＣ実施例２において提供された、実施例４−コンジュゲート型（ヒト）（ｎ＝４）のデコンボリューション処理した質量分析データを表している。２５１７６．８８ピークは、１つの薬物リンカー分子とコンジュゲートした軽鎖（配列番号２）に対応している。５０９５４．８０ピークは、１つの薬物リンカー分子とコンジュゲートした重鎖（配列番号１）に対応している。
【図２】実施例Ｃに記載されているように、ＬＰＳ及びＣＤ４０Ｌで刺激したヒトＭｏＤＣアッセイにおける抗ヒトＣＤ４０  ＡＤＣのインビトロ活性を表している。図２のデータは、試験した２種のＡＤＣ化合物のうちのいずれかによる免疫細胞活性化を阻害する最大能力が、親アンタゴニスト抗体により提供される阻害を超えることを実証している。
【図３】実施例Ｄに記載されているように、ＬＰＳ及びＣＤ４０Ｌで刺激したマウスＢＭＤＣアッセイにおける抗マウスＣＤ４０  ＡＤＣのインビトロ活性を表している。図３に示されている結果は、実施例６−加水分解型（マウス）による免疫細胞活性化を阻害する最大能力が、親アンタゴニスト抗体により提供される阻害を超えることを実証している。
【図４】実施例Ｅに記載されているように、ＬＰＳ誘発性急性炎症における、実施例６−加水分解型（マウス）（ｎ＝４）のインビボ活性を表している。図４に示されている結果は、ＣＤ４０  ＡＤＣが、インビボでのＤＣ活性化を抑制する効力が、親アンタゴニスト抗体又はイソタイプＡＤＣよりも大きいことを示すことを実証している。
【図５Ａ】実施例Ｆに記載されているように、ＤＴＨ応答における抗マウスＣＤ４０  ＡＤＣ（実施例１２−加水分解型（マウス））のインビボ活性を表している。図５Ａにおけるデータは、親のアンタゴニスト抗体又は非標的ＡＤＣ単独よりも、Ｔ細胞媒介性炎症をインビボでより強力に阻害するＣＤ４０  ＡＤＣの増強された効力を実証している。
【図５Ｂ】実施例Ｆに記載されているように、ＤＴＨ応答における抗マウスＣＤ４０  ＡＤＣ（実施例２８−コンジュゲート（マウス））のインビボ活性を表している。図５Ｂにおけるデータは、親のアンタゴニスト抗体又は非標的ＡＤＣ単独よりも、Ｔ細胞媒介性炎症をインビボでより強力に阻害するＣＤ４０  ＡＤＣの増強された効力を実証している。
【図６】実施例Ｈに記載されているように、マウスコラーゲン誘発性関節炎（ＣＩＡ）における抗マウスＣＤ４０  ＡＤＣのインビボ活性を表している。図６のデータは、単回用量の抗マウスＣＤ４０ステロイドＡＤＣが、対照１及び２と比較して、約６週間の間、足の腫れの回復を介してより長い作用期間を示すことができることを実証している。
【発明を実施するための形態】
【００３８】
定義
「ヒトＣＤ４０」及び「ヒトＣＤ４０野生型」（本明細書ではｈＣＤ４０、ｈＣＤ４０ｗｔと略記する）という用語は、本明細書で使用される場合、Ｉ型膜貫通タンパクを指す。一実施形態において、ヒトＣＤ４０という用語は、標準的組換え型発現方法により調製することができる、組換え型ヒトＣＤ４０（ｒｈＣＤ４０）を含むことを意図する。表１は、ヒトＣＤ４０（すなわち、配列番号１）及びその細胞外ドメインのアミノ酸配列（すなわち、配列番号２）を提供するものである。
【００３９】
【表１】
2021504430.tif 000009
【００４０】
「抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、ジスルフィド結合で相互接続された、４つのポリペプチド鎖、２つの重鎖（Ｈ）及び２つの軽鎖（Ｌ）で構成されるイムノグロブリン分子を指すことを意図する。各重鎖は重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲ又はＶＨと略記する）及び重鎖定常領域で構成される。重鎖定常領域は３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３で構成される。各軽鎖は軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲ又はＶＬと略記する）及び軽鎖定常領域で構成される。軽鎖定常領域は１つのドメイン、ＣＬで構成される。ＶＨ及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域が分散している、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性領域へとさらに分割することができる。各ＶＨ及びＶＬは、以下の順序でアミノ末端からカルボキシ末端に配置される、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲで構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。
【００４１】
抗体の「抗原結合部分」（又は単に「抗体部分」）という用語は、本明細書で使用される場合、抗原（例えば、ＴＮＦα）に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上の断片を指す。抗体の抗原結合機能は、全長抗体の断片により実施され得ることが示されている。抗体の「抗原結合部分」という用語の範囲内に包含される結合断片の例として（ｉ）Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる一価断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結している２つのＦａｂ断片を含む二価断片；（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら、（１９８９年）Ｎａｔｕｒｅ、３４１巻：５４４〜５４６頁）；並びに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン、ＶＬ及びＶＨは別個の遺伝子によりコード化されているが、これらは組換え法を使用して合成リンカーで連結することができ、これらはこの合成リンカーにより、ＶＬ及びＶＨ領域が対となって一価分子を形成する単一タンパク質鎖を作製することが可能となる（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）としても公知である）；例えば、Ｂｉｒｄら（１９８８年）Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４２巻：４２３〜４２６頁；及びＨｕｓｔｏｎら（１９８８年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５巻：５８７９〜５８８３頁を参照されたい）。このような一本鎖抗体もまた、抗体の「抗原結合部分」という用語の中に包含されることが意図される。他の形態の一本鎖抗体、例えば、ダイアボディもまた包含される。ダイアボディとは、ＶＨ及びＶＬドメインが単一のポリペプチド鎖上に発現されるが、同じ鎖上の２つのドメイン間の対形成を可能にするには短すぎるリンカーを使用し、よって、ドメインが別の鎖の相補的ドメインと対形成するようにして、２つの抗原結合部位を作り出す、二価の、二重特異性抗体である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ、Ｐ．ら（１９９３年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：６４４４〜６４４８頁；Ｐｏｌｊａｋ、Ｒ．Ｊ．ら（１９９４年）、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１１２１〜１１２３を参照されたい）。
【００４２】
抗体の「可変領域」とは、抗体軽鎖の可変領域又は抗体重鎖の可変領域を、単独で又は組み合わせて指す。重鎖及び軽鎖の可変領域は４つのフレームワーク領域（ＦＲ）及び超可変領域としても公知の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）をそれぞれ有する。ＣＤＲは抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。ＣＤＲを決定するために少なくとも２つの技術が存在する：（１）異種間の配列ばらつきに基づく手法（例えば、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、（第５版、１９９１年、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ  Ｍｄ．））及び（２）抗原−抗体複合体の結晶実験に基づく手法（Ａｌ−ｌａｚｉｋａｎｉら（１９９７年）Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．２７３巻：９２７〜９４８頁））。加えて、これらの２つの手法の組合せが、時にはＣＤＲを決定するために当技術分野で使用されている。
【００４３】
「同一の」又は「同一性」パーセントという用語は、２種又はこれより多くの核酸又はポリペプチドとの関連で、配列同一性の一部として任意の保存アミノ酸置換を考慮せずに、最も一致するように比較及び並べた場合（必要に応じてギャップを導入して）、同じである、又は同じであるヌクレオチド若しくはアミノ酸残基の特定されたパーセンテージを有する２種又はこれより多くの配列又はサブ配列を指す。同一性パーセントは、配列比較ソフトウエア又はアルゴリズムを使用して、又は目視検査により測定することができる。アミノ酸又はヌクレオチド配列のアライメントを得るために使用することができる様々なアルゴリズム及びソフトウエアが当技術分野で公知である。配列アライメントアルゴリズムのこのような非限定的例の１つがＫａｒｌｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、８７巻：２２６４〜２２６８頁（１９９０年）において記載されているアルゴリズム、これが修飾されたものがＫａｒｌｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、９０巻：５８７３〜５８７７頁（１９９３年）に記載され、ＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれている（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、２５巻：３３８９〜３４０２頁（１９９１年））。ある特定の実施形態において、第１のアミノ酸配列の、第２の配列アミノ酸に対する同一性パーセンテージ「Ｘ」は、１００×（Ｙ／Ｚ）として計算される（式中、Ｙは、第１及び第２の配列のアライメント（目視検査、又は特定の配列アライメントプログラムにより並べた場合）において同一適合として採点されたアミノ酸残基の数であり、Ｚは第２の配列における残渣の総数である）。第１の配列の長さが第２の配列よりも長い場合、第１の配列の、第２の配列に対するパーセント同一性は、第２の配列の、第１の配列に対するパーセント同一性よりも長くなる。
【００４４】
非限定的例として、ある特定の実施形態において、任意の特定のポリヌクレオチドが基準配列に対してある特定のパーセンテージ配列同一性（例えば、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、及び一部の実施形態において、少なくとも９５％同一、９６％同一、９７％同一、９８％同一、又は９９％同一）を有するかどうか、Ｂｅｓｔｆｉｔプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐａｃｋａｇｅ、Ｖｅｒｓｉｏｎ  ８  ｆｏｒ  Ｕｎｉｘ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐａｒｋ、５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒｉｖｅ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ５３７１１）を使用して決定することができる。Ｂｅｓｔｆｉｔは、Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎのローカル相同性アルゴリズム（Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ  ２：４８２  ４８９（１９８１年））を使用して、２つの配列間の相同性の最も良いセグメントを発見する。Ｂｅｓｔｆｉｔ又は任意の他の配列アライメントプログラムを使用して、特定の配列が、例えば、本開示による基準配列と９５％同一であるかどうか決定する場合、同一性パーセンテージが基準ヌクレオチド配列の全長にわたり計算され、相同性におけるギャップが基準配列内のヌクレオチドの総数の５％まで許容されるようにパラメーターが設定される。
【００４５】
一部の実施形態において、２つの核酸又はポリペプチドは実質的に同一であるとは、配列比較アルゴリズムを使用して、又は目視検査により測定する場合、最大一致が得られるよう比較し、並べた際に、これらが少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、及び一部の実施形態において少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のヌクレオチド又はアミノ酸残基同一性を有することを意味する。同一性は、少なくとも約１０、約２０、約４０〜６０個の残基の長さ又はその間の任意の積分値である配列領域にわたり存在することができ、６０〜８０個の残基よりも長い領域、例えば、少なくとも約９０〜１００個の残基の領域にわたることができ、一部の実施形態において、配列は、比較された配列、例えば、ヌクレオチド配列のコーディング領域の全長にわたり実質的に同一である。
【００４６】
「保存アミノ酸置換」とは、１つのアミノ酸残基が類似の側鎖を有する別のアミノ酸残基で置き換えられているものである。塩基性の側鎖（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性の側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、帯電していない極性の側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β−分枝の側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を含めた、類似の側鎖を有するアミノ酸残基ファミリーが当技術分野で定義されている。例えば、チロシンに対するフェニルアラニンの置換は保存的置換である。一部の実施形態において、ポリペプチドの配列及び本開示の抗体における保存的置換は、アミノ酸配列を含有する抗体の、抗原（複数可）への結合、例えば、ＣＤ４０の、結合する抗体への結合を取り消すことはない。抗原結合を排除しないヌクレオチド及びアミノ酸保存的置換を同定する方法は当技術分野で周知である（例えば、Ｂｒｕｍｍｅｌｌら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．３２巻：１１８０〜１１８７頁（１９９３年）；Ｋｏｂａｙａｓｈｉら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．１２巻（１０号）：８７９〜８８４頁（１９９９年）；及びＢｕｒｋｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４巻：４１２〜４１７頁（１９９７年）を参照されたい）。
【００４７】
「結合親和性」とは、一般的に、分子の単一結合部位（例えば、抗体又はその抗原結合部分）と、結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合の相互作用の合計の強度を指す。別途示されていない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」とは、結合対（例えば、抗体と抗原）のメンバー間の１：１相互作用を反映する内因性の結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は一般的に解離定数（Ｋｄ）で表すことができる。親和性は当技術分野で公知の一般的方法で測定することができる。親和性の低い抗体は一般的に抗原にゆっくりと結合し、容易に分離する傾向にあるのに対して、親和性の高い抗体は一般的に抗原により速く結合し、より長く結合したまま留まる傾向にある。結合親和性を測定する様々な方法は当技術分野で公知である。
【００４８】
「アンタゴニスト」という用語は、本明細書で使用される場合、ヒトＣＤ４０（ｈＣＤ４０）の生物学的又は免疫学的活性を遮断又は減少させる抗体又はその抗原結合部分を指す。ｈＣＤ４０のアンタゴニスト抗体、又はその抗原結合部分は、例えば、ＣＤ４０Ｌと共に培養された（又はこれに曝露された）初代ヒトＢ細胞（例えば、Ｂ細胞をＣＤ４０Ｌ−発現ヒトＴ細胞と共に培養する）のＣＤ８６の上方調節を阻害することができる。一実施形態において、アゴニスト活性を実質的に含まないアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はその抗原結合部分は、アゴニストアッセイ、例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ２０１６／１９６３１４の実施例７に記載されているアゴニスト単球アッセイにおいて、陰性対照と同等の又は陰性対照から１標準偏差の範囲内である活性レベルを有すると定義される。アゴニスト及びアンタゴニスト活性はまた、当技術分野で公知の方法、例えば、ＮＦｋＢ媒介性アルカリホスファターゼ（ＡＰ）に連結したヒトＣＤ４０を発現するＣＤ４０発現リポーター細胞株を使用する方法、又はＢ細胞アッセイなどを使用して評価することもできる。
【００４９】
「糖質コルチコステロイドの基」は、親糖質コルチコステロイドのアミノ基からの水素原子の除去から誘導される。水素原子の除去は、親糖質コルチコステロイドのリンカーへの結合を促進する。
【００５０】
「薬剤含有量」及び「薬物抗体比率」（ＤＡＲ）という用語は、本明細書で交換可能なように使用され、リンカーを介して、抗体に接続された糖質コルチコステロイド基の数を指す。式（Ｉ）の基を含む抗体薬物コンジュゲート、又は、例えば、及び個々のＡＤＣを意味する、式（ＩＩ）の抗体薬物コンジュゲートの「薬剤含有量」又は「薬物抗体比率」（ＤＡＲ）とは、個々の抗体に連結している糖質コルチコステロイド分子の数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０の薬剤含有量、又は変数ｎはそれぞれ１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０である）（「化合物ＤＡＲ」）を指す。さらに、抗体薬物コンジュゲートの集団の薬物抗体比率（ＤＡＲ）（例えば、収集された組成物又は画分中に提供されたもの）とは、付与された集団において抗体に連結している糖質コルチコステロイド分子の平均数、例えば、薬剤含有量又は１〜１０±０．５、±０．４、±０．３、±０．２、又は±０．１の整数又は分数としてのｎ（「集団ＤＡＲ」）を指す。
【００５１】
「対象」という用語は、これらに限定されないが、特定の治療のレシピエントとなるヒト、ヒト以外の霊長類、げっ歯類などを含む任意の動物（例えば、哺乳動物）を指す。
【００５２】
本明細書中に開示される抗体薬物コンジュゲートの「有効量」とは、具体的に述べられている目的を行うのに十分な量である。「有効量」は、述べられている目的との関連で決定することができる。
【００５３】
「治療有効量」という用語は、対象又は哺乳動物において疾患又は障害を「治療する」のに有効な抗体薬物コンジュゲートの量を指す。「防止的有効量」とは、所望の防止的結果を達成するのに有効な量を指す。
【００５４】
「治療する」又は「治療」又は「治療すること」又は「緩和する」又は「緩和すること」などの用語は、診断された病的状態又は障害の１つ以上の症状を治癒する、減速させる、軽減する、及び／又はその進行を減速させる若しくは停止する療法による対策を指す（「療法による治療」）。よって、療法による治療を必要とするものとして、すでに障害と診断されている、又は障害を有する疑いがあるものが挙げられる。防止的又は予防的対策は、標的とする病理学的状態又は障害の発症を予防する対策を指す（「防止的治療」）。よって、防止的治療を必要とする者として、障害を起こす傾向があるもの及び障害が予防されるべき者が挙げられる。
【００５５】
詳細な説明
本開示は、抗ＣＤ４０抗体に連結されているグルココルチコイド受容体アゴニストを含む抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を提供する。
【００５６】
炎症性腸疾患、例えば、クローン病及び潰瘍性大腸炎において、腸バリア完全性の損失は、共生細菌の腸管粘膜への侵入を可能にする。対応する宿主免疫応答は炎症の増悪を結果として生じる。免疫細胞の微生物の活性化は、ＣＤ４０シグナル伝達に関わりなく生じ得るので、その効力を限定するＡｂ−１０２などの抗ＣＤ４０アンタゴニストを用いた治療により影響を受けないままでいる。しかし、抗ＣＤ４０抗体に連結したグルココルチコイド受容体アゴニストは、ＣＤ４０媒介性活性化を遮断するだけでなく、そのグルココルチコイド受容体アゴニストペイロードの内面化及び放出の際に、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）を介して微生物由来分子の炎症性シグナル伝達も阻害する。この二重機序は、活性化した炎症細胞に対して最大の阻害性応答を示し、抗ＣＤ４０アンタゴニスト単独の場合と比較して効力の増強をもたらす。
【００５７】
実施例Ｃのデータは、図２及び表１８に提供されているように、この仮説を確定する。半接着性単球由来の樹状細胞（初代ヒト末梢血単核細胞由来）を、リポ多糖（ＬＰＳ）で予め刺激して、細胞−表面ＣＤ４０発現の上方調節を誘発した。抗ＣＤ４０抗体単独（対照１）での洗浄及び前処理と対比させた、選択された抗ヒトＣＤ４０  ＡＤＣでの洗浄及び前処理の後、細胞をＬＰＳ及び／又はＣＤ４０Ｌで活性化し、炎症誘発性サイトカインＩＬ−６の分泌を定量化した。データは、抗ＣＤ４０抗体単独（対照１）では炎症性シグナル伝達を部分的に抑制するが、試験した抗ヒトＣＤ４０  ＡＤＣは、追加の炎症性の、ＣＤ４０から独立したシグナル伝達を完全に抑制する（すなわち、ＬＰＳ事前刺激（点線）以前のレベルまで）ことを実証している。
【００５８】
Ｉ．抗ＣＤ４０抗体
「抗ＣＤ４０抗体」及び「抗ＣＤ４０抗原結合部分」という用語は、ヒトＣＤ４０のアンタゴニストである全長抗体及び抗原結合部分をそれぞれ指す。ヒトＣＤ４０に対する全長アミノ酸配列は、表１、配列番号１において提供されている。アミノ酸を含有するヒトＣＤ４０の細胞外ドメインは表１、配列番号２において提供されている。
【００５９】
一実施形態において、抗体、又はその抗原結合部分は、抗体、又はその抗原結合部分の不在下でのＣＤ４０活性又は機能と比較して、ＣＤ４０活性又は機能の低減を引き起こすアンタゴニスト抗体、又はその抗原結合部分である。特定の実施形態において、抗体、又はその抗原結合部分は、アゴニスト活性を実質的に含まない、すなわち、抗体、又はその抗原結合部分は、抗体、又はその抗原結合部分の不在下でのＣＤ４０活性又は機能と比較して、ＣＤ４０活性又は機能の大きさを増加させない。ある特定の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体はポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、又はその抗原結合部分である。
【００６０】
ある特定の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体はルカツムマブ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ；米国特許第８２７７８１０号に記載されている通り）；抗体５Ｄ１２、３Ａ８及び３Ｃ６、又はそのヒト化バージョン（Ｎｏｖａｒｔｉｓ；米国特許第５８７４０８２号に記載されている通り）；抗体１５Ｂ８（Ｎｏｖａｒｔｉｓ；米国特許第７４４５７８０号に記載されている通り）；抗体４Ｄ１１（Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ  Ｋｉｒｉｎ；米国特許第７１９３０６４号に記載されている通り）；テレミキシマブ（ｔｅｍｅｌｉｘｉｍａｂ）（Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ；米国特許第６０５１２２８号に記載されている通り）；抗体ＰＧ１０２（ＰａｎＧｅｎｅｔｉｃｓ；米国特許第８６６９３５２号に記載されている通り）；抗体２Ｃ１０（Ｐｒｉｍａｔｏｐｅ；米国特許第２０１４００９３４９７号に記載されている通り）；抗ＣＤ４０抗体、米国特許第８５９１９００号及び８７７８３４５号に記載されている通り（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）；抗ＣＤ４０抗体、米国特許第５８０１２２７号に記載されている通り（Ａｍｇｅｎ）；又はＡＰＸ００５（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ；米国特許出願公開第２０１２０３０１４８８号に記載されている通り）である。
【００６１】
ある特定の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、及び配列番号１２として示された相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
【００６２】
ある特定の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号５として示された重鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号６として示された軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号５として示された重鎖可変領域及び配列番号６として示された軽鎖可変領域を含む。
【００６３】
ある特定の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号３として示された重鎖を含む。ある特定の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号４として示された軽鎖を含む。ある特定の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、米国公開第２０１６／０３４７８５０号に記載され、配列番号３として示された重鎖及び配列番号４として示された軽鎖を含む、全長抗体、Ａｂ１０２である（ＣＤＲ領域ボールド体で示されている；定常領域は下線が付けられている）。
【００６４】
【表２】
2021504430.tif 000010
【００６５】
抗ＣＤ４０抗体は、部分的な欠失又はいくつかのアミノ酸の置換若しくは単一アミノ酸の置換でも提供され得ることを認識されたい。例えば、ＣＨ２ドメインの選択された領域における単一アミノ酸の突然変異は、Ｆｃ結合を実質的に減少させるのに十分であり得る。同様に、エフェクター機能（例えば、補体Ｃ１Ｑ結合）がモジュレートされるよう制御する１つ以上の定常領域ドメインのその部分を単に削除することが望ましいこともある。定常領域のこのような部分的な欠失は、対象の定常領域ドメインに伴う他の望ましい機能を無傷のまま、抗体の選択された特徴（血清半減期）を改善することができる。さらに、開示された抗体の定常領域は、生成する構造体のプロファイルを増強する１つ以上のアミノ酸の突然変異又は置換を介して修飾することができる。この観点において、抗体の立体配置及び免疫原性プロファイルを実質的に維持しながら、保存された結合部位（例えば、Ｆｃ結合）により提供される活性を破壊することは可能であり得る。ある特定の実施形態は、望ましい特徴を増強する、例えば、エフェクター機能を低減若しくは増加する、又はより多くのグルココルチコイド受容体アゴニスト結合を提供するために、１つ以上のアミノ酸を定常領域に付加することを含むことができる。このような実施形態において、選択された定常領域ドメイン由来の特定の配列を挿入する又は繰り返すことが望ましいこともある。
【００６６】
本開示は、本明細書で示された抗ＣＤ４０抗体と実質的に同種である変化形及び同等物をさらに包含する。これらは、例えば、保存的置換突然変異、すなわち、１つ以上のアミノ酸の類似のアミノ酸による置換を含有することができる。例えば、保存的置換は、アミノ酸を同じ一般的クラス内の別のアミノで置換する、例えば、１種の酸性アミノ酸を別の酸性アミノ酸で置換する、１種の塩基性アミノ酸を別の塩基性アミノ酸で置換する、又は１種の中性アミノ酸を別の中性のアミノ酸で置換することを指す。保存的アミノ酸置換により意図されることは当技術分野で周知である。
【００６７】
抗ＣＤ４０抗体は、抗体の組換え型ポリペプチド、天然ポリペプチド、又は合成ポリペプチドであることができる。本開示一部のアミノ酸配列は、タンパク質の構造又は機能の著しい作用なしに変化し得ることは当技術分野で認識されている。よって、本開示は、実質的な活性を示す、又は抗体の領域を含むポリペプチドの変化形をさらに含む。このような変異体は、欠失、挿入、反転、繰返し、及び型置換を含む。
【００６８】
本明細書に記載されている抗ＣＤ４０抗体は、当技術分野で公知の任意の適切な方法で生成することができる。このような方法は、直接的タンパク質合成法から、単離したポリペプチド配列をコードし、適切な変換した宿主においてこれらの配列を発現するＤＮＡ配列を構築するまでの範囲に及ぶ。一部の実施形態において、ＤＮＡ配列は、組換え型の技術を使用して、目的の野生型タンパク質をコードしているＤＮＡ配列を単離又は合成することにより構築される。任意選択的に、部位特異的突然変異により突然変異が起きて、配列がその機能的類似体を提供することができる。例えば、Ｚｏｅｌｌｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１巻：５６６２〜５０６６頁（１９８４年）及び米国特許第４，５８８，５８５号を参照されたい。
【００６９】
一部の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体をコードしているＤＮＡ配列は、オリゴヌクレオチドシンセサイザーを使用して化学合成により構築される。このようなオリゴヌクレオチドは、所望のポリペプチドのアミノ酸配列に基づき、目的の組換え型ポリペプチドが生成される宿主細胞において好まれるようなコドンを選択して設計することができる。標準的方法は、目的の単離したポリペプチドをコードしている単離したポリヌクレオチド配列を合成するために適用され得る。
【００７０】
ある特定の実施形態において、組換え型の発現ベクターは、抗体抗ＣＤ４０抗体をコードしているＤＮＡを増幅及び発現するために使用される。多種多様な発現宿主／ベクターの組合せが利用され得る。真核生物宿主に対する有用な発現ベクターは、例えば、ＳＶ４０、ウシパピローマウイルス、アデノウイルス及びサイトメガロウイルス由来の発現制御配列を含むベクターを含む。細菌宿主に有用な発現ベクターとして、公知の細菌プラスミド、例えば、ｐＣＲ１、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９及びこれらの誘導体を含む、エシェリキア・コーライ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）由来のプラスミド、幅広い宿主範囲のプラスミド、例えば、Ｍ１３及び線維状一本鎖ＤＮＡファージが挙げられる。
【００７１】
抗ＣＤ４０抗体の発現に対して適切な宿主細胞として、適当なプロモーターの制御下にある原核生物、酵母、昆虫又は高等真核細胞が挙げられる。原核生物として、グラム陰性又はグラム陽性生物、例えばＥ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）又はＥ．バシラス（Ｅ．ｂａｃｉｌｌｉ）が挙げられる。高等真核細胞として、哺乳動物の起源の樹立細胞系統が挙げられる。無細胞の翻訳システムもまた利用することができる。細菌、菌類、酵母、及び哺乳動物細胞宿主と共に使用するのに適当なクローニング及び発現ベクターはＰｏｕｗｅｌｓら（ＣｌｏｎｉｎｇＶｅｃｔｏｒｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｎ．Ｙ．、１９８５年）により記載されている。抗体産生を含むタンパク質産生の方法に関する追加の情報は、例えば、米国特許公開第２００８／０１８７９５４、米国特許第６，４１３，７４６及び６，６６０，５０１、及び国際特許公開ＷＯ０４００９８２３に見出すことができる。
【００７２】
様々な哺乳動物又は昆虫細胞培養物システムもまた組換え型タンパク質を発現させるために有利に利用される。哺乳動物細胞における組換え型タンパク質の発現は、このようなタンパク質は一般的に正しく折り畳まれ、適切に修飾され、完全に機能的であるので、実施することができる。適切な哺乳動物の宿主細胞系統の例として、ＨＥＫ−２９３及びＨＥＫ−２９３Ｔ、サル腎臓細胞のＣＯＳ−７系統（Ｇｌｕｚｍａｎ（Ｃｅｌｌ２３：１７５、１９８１）により記載されている）、及び、例えば、Ｌ細胞、Ｃ１２７、３Ｔ３、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、ＨｅＬａ及びＢＨＫ細胞株を含む他の細胞株が挙げられる。哺乳動物の発現ベクターは、非転写要素、例えば、複製の起源、発現する遺伝子に連結された適切なプロモーター及び促進剤、並びに他の５’又は３’フランキング非転写配列、及び５’又は３’非変換配列、例えば、必要なリボソーム結合部位、ポリアデニル化部位、スプライスドナー及び受容体部位、並びに転写停止配列を含むことができる。昆虫細胞における異種性タンパク質の産生のためのバキュロウイルスシステムはＬｕｃｋｏｗ  ａｎｄ  Ｓｕｍｍｅｒｓ、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６：４７巻（１９８８年）により概説されている。
【００７３】
変換された宿主により生産されるタンパク質は、任意の適切な方法により精製することができる。このような標準的方法として、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、親和性及びサイジングカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、示差溶解度、又はタンパク質精製のための任意の他の標準的技術が挙げられる。親和性タグ、例えば、ヘキサヒスチジン、マルトース結合ドメイン、インフルエンザ被膜配列及びグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼなどをタンパク質に結合させて、適当な親和性カラムに通すことにより、容易な精製を可能にすることができる。単離タンパク質はまた、タンパク質分解、核磁気共鳴及びＸ線結晶構造解析などの技術を使用して物理的に特徴付けることもできる。
【００７４】
細菌培養物中に産生された組換え型タンパク質は、例えば、細胞ペレットからの初期抽出、これに続く１回以上の濃縮、塩析、水性イオン交換又はサイズ排除クロマトグラフィーステップにより単離され得る。高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）は、最終精製ステップに利用することができる。組換え型タンパク質の発現に利用した微生物細胞は、凍結融解サイクリング、超音波処理、機械的破壊、又は細胞溶解剤の使用を含めた、任意の好都合な方法により破砕することができる。
【００７５】
抗体を精製するための方法として、例えば、米国特許公開第２００８／０３１２４２５号、第２００８／０１７７０４８号、及び第２００９／０１８７００５号に記載されているものなどが挙げられる。
【００７６】
ＩＩ．グルココルチコイド受容体アゴニストに連結した抗ＣＤ４０抗体
抗ＣＤ４０抗体に連結したグルココルチコイド受容体アゴニストを含む抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が本明細書で提供される。一部の実施形態において、ＡＤＣはＦｃガンマ受容体に結合する。一部の実施形態において、ＡＤＣはＪｕｒｋａｔ細胞リポーターアッセイにおいて活性がある。一部の実施形態において、ＡＤＣはＣＤ４０Ｌリポーターアッセイにおいて活性がある。一部の実施形態において、ＡＤＣは、抗ＣＤ４０抗体単独の場合と比較して、免疫原性の減少を示す（抗薬物免疫応答（ＡＤＡ）の減少）。
【００７７】
一実施形態において、（ａ）抗ＣＤ４０抗体；及び（ｂ）式（Ｉ）のグルココルチコイド受容体アゴニストの基：
【００７８】
【化７】
2021504430.tif 000011
（式中、
Ｒ１は、水素又はフルオロであり、
Ｒ２は、水素又はフルオロであり、
Ｒ３は、水素又は−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２である。）を含む抗体薬物コンジュゲートであって、
さらに、抗体が、式のリンカー：
【００７９】
【化８】
2021504430.tif 000012
（式中、Ｒは、結合、
【００８０】
【化９】
2021504430.tif 000013
又は
【００８１】
【化１０】
2021504430.tif 000014
（式中、ｒは０又は１である。）であり、
ＡＡ１、ＡＡ２、及びＡＡ３は、独立して、アラニン（Ａｌａ）、グリシン（Ｇｌｙ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、プロリン（Ｐｒｏ）、バリン（Ｖａｌ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、チロシン（Ｔｙｒ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、アルギニン（Ａｒｇ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、リシン（Ｌｙｓ）、セリン（Ｓｅｒ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、システイン（Ｃｙｓ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、及びグルタミン（Ｇｌｎ）からなる群から選択され、
ｍは０又は１であり、
ｗは０又は１であり、
ｐは０又は１であり、
ｑは０又は１である。）により、グルココルチコイド受容体アゴニストにコンジュゲートしている抗体薬物コンジュゲートが提供される。
【００８２】
別の実施形態において、式（ＩＩ）の抗体薬物コンジュゲートが提供される：
【００８３】
【化１１】
2021504430.tif 000015
（式中、
Ａは抗ＣＤ４０抗体であり、
ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０である。）。
【００８４】
ある特定の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、及び配列番号１２として示された相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。ある特定の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号５として示された重鎖可変領域及び配列番号６として示された軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号３として示された重鎖及び配列番号４として示された軽鎖を含む。
【００８５】
抗体は、求核性基、例えば、ＯＨ基（連結した場合、−Ｏ−基を提供する）、−ＳＨ基（連結した場合、−Ｓ−基を提供する）、又は−ＮＨ２基（連結した場合、−ＮＨ−基を提供する）を保持する抗体上の任意の部分により変数Ｒに連結していてもよい。ある特定の実施形態において、抗体の変数Ｒへの結合点は、抗体のシステイン残基のＳＨ基（連結した場合、−Ｓ−基を提供する）を介する。
【００８６】
ある特定の実施形態において、Ｒ１は水素であり、Ｒ２は水素である。
【００８７】
ある特定の実施形態において、Ｒ１はフルオロであり、Ｒ２は水素である。
【００８８】
ある特定の実施形態において、Ｒ１はフルオロであり、Ｒ２はフルオロである。
【００８９】
ある特定の実施形態において、Ｒ３は水素である。
【００９０】
ある特定の実施形態において、Ｒ３は−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２である。
【００９１】
ある特定の好ましい実施形態において、Ｒ１及びＲ２の少なくとも１つはフルオロであり、Ｒ３は−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２である。
【００９２】
ある特定の実施形態において、−ＡＡ１−（ＡＡ２）ｐ−（ＡＡ３）ｑ−は、−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−；−Ａｌａ−Ａｌａ−；−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−；−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−；−Ｇｌｕ−；−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−；及び−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−からなる群から選択される。このアミノ酸リストは、左から右に読み取るべきであり、左端のアミノ酸はＡＡ１に対応し、右端のアミノ酸はＡＡ２（ｑが０の場合）、又はＡＡ３（ｑが１の場合）に対応すると理解されたい。
【００９３】
ある特定の好ましい実施形態において、リンカー部分は、１、２、又は３種の親水性アミノ酸−ＡＡ１−（ＡＡ２）ｐ−（ＡＡ３）ｑ−を含む、例えば、ＡＡ１、ＡＡ２、及び／又はＡＡ３の側鎖は、水素結合基、例えば＝Ｏ、及び／又は水素供与基、例えば、−ＯＨ、−ＮＨ２、又は−ＳＨを含む。リンカーの親水性を増加させることは、長期安定性及びＡＤＣの貯蔵をもたらし得る。例えば、ある特定の好ましい実施形態において、−ＡＡ１−（ＡＡ２）ｐ−（ＡＡ３）ｑ−は、−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−；−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−；−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−；及び−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−からなる群から選択される。
【００９４】
ある特定の実施形態において、ｍが０である場合、ｗは０である。ある特定の実施形態において、ｍが１である場合、ｗは１である。
【００９５】
ある特定の実施形態において、ｍは０であり、ｑは０であり、Ｒは
【００９６】
【化１２】
2021504430.tif 000016
（式中、ｒは０又は１である。）である。ある特定の実施形態において、ｗは０である。ある特定の実施形態において、ｒは０である。ある特定の実施形態において、ｒは１である。
【００９７】
ある特定の好ましい実施形態において、Ｒは結合である。式
【００９８】
【化１３】
2021504430.tif 000017
のＲ基を含むＡＤＣはインビボで不安定であり得る。式
【００９９】
【化１４】
2021504430.tif 000018
の環開したＲ基を含むＡＤＣは式
【０１００】
【化１５】
2021504430.tif 000019
の基に対して、液体賦形剤中での長期貯蔵の間に閉環し得る。さらに、閉環したＡＤＣから環開したＡＤＣを調製することは、長期間の間塩基性ｐＨ条件を必要とし得るので、より長い製造時間及びより高い製造コスト、並びに高いｐＨによる所望しないＡＤＣの分解をもたらし得る。
【０１０１】
ある特定の実施形態において、ｍは０又は１であり、ｐは１であり、Ｒは結合である。ある特定の実施形態において、ｗは０である。ある特定の実施形態においてｑは０である。ある特定の実施形態において、ｑは１である。
【０１０２】
ある特定の実施形態において、ｍは１であり、ｑは０である。ある特定の実施形態において、ｗは１である。ある特定の実施形態において、ｍは１であり、ｗは１である。ある特定の実施形態において、ｍは１であり、ｗは１であり、ｑは０である。
【０１０３】
ある特定の実施形態において、ｍは０である。
【０１０４】
ある特定の好ましい実施形態において、ｐは１である。ある特定の好ましい実施形態において、ｐは１であり、ｍは０である。ある特定の好ましい実施形態において、ｐは１であり、ｍは０であり、ｗは０である。ある特定の好ましい実施形態において、ｐは１であり、ｍは０であり、ｗは０であり、ｑは０であり、Ｒは結合である。ある特定の代替の好ましい実施形態において、ｐは１であり、ｍは０であり、ｗは０であり、ｑは１であり、Ｒは結合である。
【０１０５】
ある特定の実施形態、式（Ｉ）の基を含む抗体薬物コンジュゲートにおいて、薬剤含有量は１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０である。ある特定の実施形態において、薬剤含有量は２、３、４、５、６、７、又は８である。別の実施形態において、薬剤含有量は１、２、３、４、又は５である。別の実施形態において、薬剤含有量は２、３、４、又は５である。別の実施形態において、薬剤含有量は２、４、６、又は８である。別の実施形態において、薬剤含有量は１である。別の実施形態において、薬剤含有量は２である。別の実施形態において、薬剤含有量は３である。別の実施形態において、薬剤含有量は４である。別の実施形態において、薬剤含有量は５である。別の実施形態において、薬剤含有量は６である。別の実施形態において、薬剤含有量は７である。別の実施形態において、薬剤含有量は８である。好ましい実施形態において、薬剤含有量は２又は４である。
【０１０６】
式（ＩＩ）のある特定の実施形態において、ｎは２、３、４、５、６、７、又は８である。式（ＩＩ）のある特定の実施形態において、ｎは１、２、３、４、又は５である。式（ＩＩ）のある特定の実施形態において、ｎは２、３、４、又は５である。式（ＩＩ）のある特定の実施形態において、ｎは２、４、６、又は８である。式（ＩＩ）のある特定の実施形態において、ｎは１である。式（ＩＩ）のある特定の実施形態において、ｎは２である。式（ＩＩ）のある特定の実施形態において、ｎは３である。式（ＩＩ）のある特定の実施形態において、ｎは４である。式（ＩＩ）のある特定の実施形態において、ｎは５である。式（ＩＩ）のある特定の実施形態において、ｎは６である。式（ＩＩ）のある特定の実施形態において、ｎは７である。式（ＩＩ）のある特定の実施形態において、ｎは８である。式（ＩＩ）の好ましい実施形態において、ｎは２又は４である。
【０１０７】
上記記載されている実施形態の様々な組合せが本明細書でさらに想定される。
【０１０８】
例えば、Ｒ１が水素であり、Ｒ２が水素であり、Ｒ３が水素である、ある特定の実施形態において、式（Ｉ−ａ）の基を含む抗体薬物コンジュゲート、又は式（ＩＩ−ａ）の抗体薬物コンジュゲート：
【０１０９】
【化１６】
2021504430.tif 000020
が提供される。
【０１１０】
ある特定の実施形態において、Ｒは結合である。ある特定の実施形態において、Ｒは結合であり、ｍは１であり、ｐは１であり、ｑは０である。ある特定の実施形態において、Ｒは結合であり、ｍは１であり、ｐは１であり、ｑは０であり、−ＡＡ１−（ＡＡ２）ｐ−（ＡＡ３）ｑ−は、−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−；−Ａｌａ−Ａｌａ−；及び−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−からなる群から選択される。ある特定の実施形態において、Ｒは結合であり、ｍは０であり、ｐは１であり、ｑは０又は１である。ある特定の実施形態において、Ｒは結合であり、ｍは０であり、ｐは１であり、ｑは０又は１であり、−ＡＡ１−（ＡＡ２）ｐ−（ＡＡ３）ｑ−は、−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−；−Ａｌａ−Ａｌａ−；−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−；−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−；−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−；及び−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−からなる群から選択される。しかし、ある特定の実施形態において、−Ａｌａ−Ａｌａ−及び−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−は除外される。ある特定の実施形態において、Ｒは結合であり、ｍは０であり、ｐは１であり、ｑは０であり、−ＡＡ１−（ＡＡ２）ｐ−（ＡＡ３）ｑ−は−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−又は−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−である。ある特定の実施形態において、Ｒは結合であり、ｍは０であり、ｐは１であり、ｑは１であり、−ＡＡ１−（ＡＡ２）ｐ−（ＡＡ３）ｑ−は−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−；及び−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−である。ある特定の実施形態において、ｍが０である場合、ｗは０である。ある特定の実施形態において、ｍが１である場合、ｗは１である。ある特定の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、及び配列番号１２として示された相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。ある特定の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号５として示された重鎖可変領域及び配列番号６として示された軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号３として示された重鎖及び配列番号４として示された軽鎖を含む。ある特定の実施形態において、ｎは２である。ある特定の実施形態において、ｎは４である。
【０１１１】
Ｒ１が水素であり、Ｒ２が水素であり、Ｒ３が−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２である、ある特定の実施形態において、式（Ｉ−ｂ）の基を含む抗体薬物コンジュゲート、又は式（ＩＩ−ｂ）の抗体薬物コンジュゲートが提供される。
【０１１２】
【化１７】
2021504430.tif 000021
【０１１３】
ある特定の実施形態において、Ｒは結合である。ある特定の実施形態において、Ｒは結合であり、ｍは１であり、ｐは１であり、ｑは０である。ある特定の実施形態において、Ｒは結合であり、ｍは１であり、ｐは１であり、ｑは０であり、−ＡＡ１−（ＡＡ２）ｐ−（ＡＡ３）ｑ−は、−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−；−Ａｌａ−Ａｌａ−；及び−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−からなる群から選択される。ある特定の実施形態において、Ｒは結合であり、ｍは０であり、ｐは１であり、ｑは０又は１である。ある特定の実施形態において、Ｒは結合であり、ｍは０であり、ｐは１であり、ｑは０又は１であり、−ＡＡ１−（ＡＡ２）ｐ−（ＡＡ３）ｑ−は、−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−；−Ａｌａ−Ａｌａ−；−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−；−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−；−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−；及び−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−からなる群から選択される。しかし、ある特定の実施形態において、−Ａｌａ−Ａｌａ−及び−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−は除外される。ある特定の実施形態において、Ｒは結合であり、ｍは０であり、ｐは１であり、ｑは０であり、−ＡＡ１−（ＡＡ２）ｐ−（ＡＡ３）ｑ−は−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−又は−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−である。ある特定の実施形態において、Ｒは結合であり、ｍは０であり、ｐは１であり、ｑは１であり、−ＡＡ１−（ＡＡ２）ｐ−（ＡＡ３）ｑ−は−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−；及び−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−である。ある特定の実施形態において、ｍが０である場合、ｗは０である。ある特定の実施形態において、ｍが１である場合、ｗは１である。ある特定の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、及び配列番号１２として示された相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。ある特定の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号５として示された重鎖可変領域及び配列番号６として示された軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号３として示された重鎖及び配列番号４として示された軽鎖を含む。ある特定の実施形態において、ｎは２である。ある特定の実施形態において、ｎは４である。
【０１１４】
Ｒ１がフルオロであり、Ｒ２がフルオロであり、Ｒ３が水素である、ある特定の実施形態において、式（Ｉ−ｃ）の基を含む抗体薬物コンジュゲート、又は式（ＩＩ−ｃ）の抗体薬物コンジュゲートが提供される。
【０１１５】
【化１８】
2021504430.tif 000022
【０１１６】
ある特定の実施形態において、Ｒは結合である。ある特定の実施形態において、Ｒは結合であり、ｍは１であり、ｐは１であり、ｑは０である。ある特定の実施形態において、Ｒは結合であり、ｍは１であり、ｐは１であり、ｑは０であり、−ＡＡ１−（ＡＡ２）ｐ−（ＡＡ３）ｑ−は、−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−；−Ａｌａ−Ａｌａ−；及び−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−からなる群から選択される。ある特定の実施形態において、Ｒは結合であり、ｍは０であり、ｐは１であり、ｑは０又は１である。ある特定の実施形態において、Ｒは結合であり、ｍは０であり、ｐは１であり、ｑは０又は１であり、−ＡＡ１−（ＡＡ２）ｐ−（ＡＡ３）ｑ−は、−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−；−Ａｌａ−Ａｌａ−；−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−；−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−；−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−；及び−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−からなる群から選択される。しかし、ある特定の実施形態において、−Ａｌａ−Ａｌａ−及び−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−は除外される。ある特定の実施形態において、Ｒは結合であり、ｍは０であり、ｐは１であり、ｑは０であり、−ＡＡ１−（ＡＡ２）ｐ−（ＡＡ３）ｑ−は−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−又は−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−である。ある特定の実施形態において、Ｒは結合であり、ｍは０であり、ｐは１であり、ｑは１であり、−ＡＡ１−（ＡＡ２）ｐ−（ＡＡ３）ｑ−は−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−；及び−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−である。ある特定の実施形態において、ｍが０である場合、ｗは０である。ある特定の実施形態において、ｍが１である場合、ｗは１である。ある特定の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、及び配列番号１２として示された相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。ある特定の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号５として示された重鎖可変領域及び配列番号６として示された軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号３として示された重鎖及び配列番号４として示された軽鎖を含む。ある特定の実施形態において、ｎは２である。ある特定の実施形態において、ｎは４である。
【０１１７】
Ｒ１がフルオロであり、Ｒ２がフルオロであり、Ｒ３が−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２である、ある特定の実施形態において、式（Ｉ−ｄ）の基を含む抗体薬物コンジュゲート、又は式（ＩＩ−ｄ）の抗体薬物コンジュゲートが提供される。
【０１１８】
【化１９】
2021504430.tif 000023
【０１１９】
ある特定の実施形態において、Ｒは結合である。ある特定の実施形態において、Ｒは結合であり、ｍは１であり、ｐは１であり、ｑは０である。ある特定の実施形態において、Ｒは結合であり、ｍは１であり、ｐは１であり、ｑは０であり、−ＡＡ１−（ＡＡ２）ｐ−（ＡＡ３）ｑ−は、−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−；−Ａｌａ−Ａｌａ−；及び−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−からなる群から選択される。ある特定の実施形態において、Ｒは結合であり、ｍは０であり、ｐは１であり、ｑは０又は１である。ある特定の実施形態において、Ｒは結合であり、ｍは０であり、ｐは１であり、ｑは０又は１であり、−ＡＡ１−（ＡＡ２）ｐ−（ＡＡ３）ｑ−は、−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−；−Ａｌａ−Ａｌａ−；−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−；−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−；−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−；及び−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−からなる群から選択される。しかし、ある特定の実施形態において、−Ａｌａ−Ａｌａ−及び−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−は除外される。ある特定の実施形態において、Ｒは結合であり、ｍは０であり、ｐは１であり、ｑは０であり、−ＡＡ１−（ＡＡ２）ｐ−（ＡＡ３）ｑ−は−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−又は−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−である。ある特定の実施形態において、Ｒは結合であり、ｍは０であり、ｐは１であり、ｑは１であり、−ＡＡ１−（ＡＡ２）ｐ−（ＡＡ３）ｑ−は−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−；及び−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−である。ある特定の実施形態において、ｍが０である場合、ｗは０である。ある特定の実施形態において、ｍが１である場合、ｗは１である。ある特定の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、及び配列番号１２として示された相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。ある特定の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号５として示された重鎖可変領域及び配列番号６として示された軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号３として示された重鎖及び配列番号４として示された軽鎖を含む。ある特定の実施形態において、ｎは２である。ある特定の実施形態において、ｎは４である。
【０１２０】
Ｒ１がフルオロであり、Ｒ２が水素であり、Ｒ３が水素である、ある特定の実施形態において、式（Ｉ−ｅ）の基を含む抗体薬物コンジュゲート又は式（ＩＩ−ｅ）の抗体薬物コンジュゲートが提供される。
【０１２１】
【化２０】
2021504430.tif 000024
【０１２２】
ある特定の実施形態において、Ｒは結合である。ある特定の実施形態において、Ｒは結合であり、ｍは１であり、ｐは１であり、ｑは０である。ある特定の実施形態において、Ｒは結合であり、ｍは１であり、ｐは１であり、ｑは０であり、−ＡＡ１−（ＡＡ２）ｐ−（ＡＡ３）ｑ−は、−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−；−Ａｌａ−Ａｌａ−；及び−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−からなる群から選択される。ある特定の実施形態において、Ｒは結合であり、ｍは０であり、ｐは１であり、ｑは０又は１である。ある特定の実施形態において、Ｒは結合であり、ｍは０であり、ｐは１であり、ｑは０又は１であり、−ＡＡ１−（ＡＡ２）ｐ−（ＡＡ３）ｑ−は、−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−；−Ａｌａ−Ａｌａ−；−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−；−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−；−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−；及び−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−からなる群から選択される。しかし、ある特定の実施形態において、−Ａｌａ−Ａｌａ−及び−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−は除外される。ある特定の実施形態において、Ｒは結合であり、ｍは０であり、ｐは１であり、ｑは０であり、−ＡＡ１−（ＡＡ２）ｐ−（ＡＡ３）ｑ−は−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−又は−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−である。ある特定の実施形態において、Ｒは結合であり、ｍは０であり、ｐは１であり、ｑは１であり、−ＡＡ１−（ＡＡ２）ｐ−（ＡＡ３）ｑ−は−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−；及び−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−である。ある特定の実施形態において、ｍが０である場合、ｗは０である。ある特定の実施形態において、ｍが１である場合、ｗは１である。ある特定の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、及び配列番号１２として示された相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。ある特定の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号５として示された重鎖可変領域及び配列番号６として示された軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号３として示された重鎖及び配列番号４として示された軽鎖を含む。ある特定の実施形態において、ｎは２である。ある特定の実施形態において、ｎは４である。
【０１２３】
Ｒ１がフルオロであり、Ｒ２が水素であり、Ｒ３が−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２である、ある特定の実施形態において、式（Ｉ−ｆ）の基を含む抗体薬物コンジュゲート、又は式（ＩＩ−ｆ）抗体薬物コンジュゲートが提供される。
【０１２４】
【化２１】
2021504430.tif 000025
【０１２５】
ある特定の実施形態において、Ｒは結合である。ある特定の実施形態において、Ｒは結合であり、ｍは１であり、ｐは１であり、ｑは０である。ある特定の実施形態において、Ｒは結合であり、ｍは１であり、ｐは１であり、ｑは０であり、−ＡＡ１−（ＡＡ２）ｐ−（ＡＡ３）ｑ−は、−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−；−Ａｌａ−Ａｌａ−；及び−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−からなる群から選択される。ある特定の実施形態において、Ｒは結合であり、ｍは０であり、ｐは１であり、ｑは０又は１である。ある特定の実施形態において、Ｒは結合であり、ｍは０であり、ｐは１であり、ｑは０又は１であり、−ＡＡ１−（ＡＡ２）ｐ−（ＡＡ３）ｑ−は、−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−；−Ａｌａ−Ａｌａ−；−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−；−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−；−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−；及び−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−からなる群から選択される。しかし、ある特定の実施形態において、−Ａｌａ−Ａｌａ−及び−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−は除外される。ある特定の実施形態において、Ｒは結合であり、ｍは０であり、ｐは１であり、ｑは０であり、−ＡＡ１−（ＡＡ２）ｐ−（ＡＡ３）ｑ−は−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−又は−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−である。ある特定の実施形態において、Ｒは結合であり、ｍは０であり、ｐは１であり、ｑは１であり、−ＡＡ１−（ＡＡ２）ｐ−（ＡＡ３）ｑ−は−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−；及び−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−である。ある特定の実施形態において、ｍが０である場合、ｗは０である。ある特定の実施形態において、ｍが１である場合、ｗは１である。ある特定の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、及び配列番号１２として示された相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。ある特定の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号５として示された重鎖可変領域及び配列番号６として示された軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号３として示された重鎖及び配列番号４として示された軽鎖を含む。ある特定の実施形態において、ｎは２である。ある特定の実施形態において、ｎは４である。
【０１２６】
式（Ｉ）の基を含む例示的な抗体薬物コンジュゲート、及び式（ＩＩ）の抗体薬物コンジュゲートは、表５、６Ａ、及び６Ｂに列挙された抗体薬物コンジュゲート（式中、ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０であり、Ａは抗ＣＤ４０抗体である。）を含む。
【０１２７】
【表３】
2021504430.tif 000026
2021504430.tif 000027
2021504430.tif 000028
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2021504430.tif 000041
2021504430.tif 000042
【０１２８】
【表４】
2021504430.tif 000043
2021504430.tif 000044
2021504430.tif 000045
2021504430.tif 000046
【０１２９】
【表５】
2021504430.tif 000047
2021504430.tif 000048
2021504430.tif 000049
2021504430.tif 000050
【０１３０】
表５のある特定の実施形態において、抗体薬物コンジュゲートは実施例４−コンジュゲート型又は実施例２８−コンジュゲート型である。ある特定の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、及び配列番号１２として示された相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。ある特定の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号５として示された重鎖可変領域及び配列番号６として示された軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号３として示された重鎖及び配列番号４として示された軽鎖を含む。ある特定の実施形態において、ｎは２である。ある特定の実施形態において、ｎは４である。表５のある特定の実施形態において、抗体薬物コンジュゲートは、ｎが２又は４である、実施例４−コンジュゲート型、実施例２８−コンジュゲート型、又は実施例４７−コンジュゲート型である。表５のある特定の実施形態において、抗体薬物コンジュゲートは、ｎが２である、実施例４７−コンジュゲート型である。表５のある特定の実施形態において、抗体薬物コンジュゲートは、ｎが４である、実施例４７−コンジュゲート型である。表５のある特定の実施形態において、抗体薬物コンジュゲートは、ｎが２である、実施例２８−コンジュゲート型である。表５のある特定の実施形態において、抗体薬物コンジュゲートは、ｎが４である、実施例２８−コンジュゲート型である。
【０１３１】
表６Ａ及び６Ｂのある特定の実施形態において、抗体薬物コンジュゲートは、実施例６−コンジュゲート型、実施例６−加水分解型、実施例７−コンジュゲート型、実施例７−加水分解型、実施例１２−コンジュゲート型、実施例１２−加水分解型、実施例１３−コンジュゲート型、又は実施例１３−加水分解型である。ある特定の実施形態において、抗体薬物コンジュゲートは、実施例６−加水分解型、実施例７−加水分解型、実施例１２−加水分解型、又は実施例１３−加水分解型である。ある特定の実施形態において、化合物は実施例６−加水分解型、実施例７−加水分解型、又は実施例１２−加水分解型である。ある特定の実施形態において、抗体薬物コンジュゲートは実施例１２−加水分解型又は実施例１３−加水分解型である。ある特定の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、及び配列番号１２として示された相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。ある特定の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号５として示された重鎖可変領域及び配列番号６として示された軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号３として示された重鎖及び配列番号４として示された軽鎖を含む。ある特定の実施形態において、ｎは２である。ある特定の実施形態において、ｎは４である。
【０１３２】
ＩＩＩ．使用の方法及び医薬組成物
インビトロ又はインビボで使用することができる式（Ｉ）又は（ＩＩ）の抗体薬物コンジュゲートが本明細書に提供されている。したがって、組成物、例えば、ある特定のインビボでの使用のための医薬組成物であって、生理学的に許容される担体、賦形剤又は安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０年）Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ）中に、所望の程度の純度を有する式（Ｉ）又は（ＩＩ）の抗体薬物コンジュゲートを含む、医薬組成物もまた提供される。許容される担体、賦形剤、又は安定剤は、利用する用量及び濃度においてレシピエントに非毒性である。
【０１３３】
インビボでの投与のために使用される組成物（例えば、医薬組成物）は、滅菌であることができ、滅菌は、例えば、無菌化濾過膜を介した濾過により達成することができる。インビボ投与に使用される組成物（例えば、医薬組成物）は保存剤を含むことができる。
【０１３４】
抗体薬物コンジュゲートは、当技術分野の知識に従い、剤形に製剤化し、投与することができる（例えば、静脈内投与又は点滴を介して）。
【０１３５】
抗体薬物コンジュゲート及び／又は本明細書に記載されている抗体薬物コンジュゲートを含む医薬組成物は、ＣＤ４０を発現する細胞を溶解すること（インビトロ又はインビボで）及び／又はＣＤ４０の増加により特徴付けられる疾患又は障害の治療に有用となり得る。一部の実施形態において、抗体薬物コンジュゲート及び／又は組成物は、サイトカイン放出の阻害において（インビトロ又はインビボで）及び／又は自己免疫性又は炎症性疾患の治療に対して有用である。
【０１３６】
ある特定の実施形態において、これを必要とする対象において、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、多発性硬化症、関節リウマチ、シェーグレン症候群、及び化膿性汗腺炎（ＨＳ）からなる群から選択される状態を治療する方法であって、本明細書に記載されている抗体薬物コンジュゲート又は医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む方法が提供される。ある特定の実施形態において、状態は炎症性腸疾患（ＩＢＤ）である。ある特定の実施形態において、ＩＢＤは潰瘍性大腸炎（ＵＣ）又はクローン病である。ある特定の実施形態において、状態は全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）である。ある特定の実施形態において、状態は多発性硬化症である。ある特定の実施形態において、状態は関節リウマチである。ある特定の実施形態において、状態はシェーグレン症候群である。ある特定の実施形態において、状態は化膿性汗腺炎（ＨＳ）である。
【０１３７】
別の実施形態において、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、多発性硬化症、関節リウマチ、シェーグレン症候群、及び化膿性汗腺炎（ＨＳ）からなる群から選択される状態の治療における使用のための、本明細書に記載されている抗体薬物コンジュゲート又は医薬組成物が提供される。
【０１３８】
別の実施形態において、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、多発性硬化症、関節リウマチ、シェーグレン症候群、及び化膿性汗腺炎（ＨＳ）からなる群から選択される状態を治療するための医薬の調製のための、本明細書に記載されている抗体薬物コンジュゲート又は医薬組成物が提供される。
【０１３９】
一部の実施形態は、ＣＤ４０発現細胞にグルココルチコイド受容体アゴニストを送達する方法を含む。このような方法は、ＣＤ４０発現細胞を、本明細書に記載されている抗体薬物コンジュゲートに接触させるステップを含むことができる。一部の実施形態は、グルココルチコイド受容体アゴニストをＣＤ４０発現細胞にインビトロで送達する方法を含む。
【０１４０】
抗体薬物コンジュゲートの抗炎症性活性を決定する方法もまた提供される。このような方法は、ＣＤ４０発現細胞を、本明細書に記載されている抗体薬物コンジュゲートに接触させるステップを含むことができる。一部の実施形態は、ＣＤ４０発現細胞を、本明細書に記載されている抗体薬物コンジュゲートに接触させ、細胞からの炎症誘発性サイトカインの放出の減少を、対照細胞と比較して決定することを含む。一部の実施形態は、抗体薬物コンジュゲートの抗炎症性活性を決定するインビトロの方法を含む。
【０１４１】
一部の実施形態は、直接的に又は間接的に、細胞（例えば、ＣＤ４０発現細胞）を、抗体薬物コンジュゲートに接触させること、及び抗体薬物コンジュゲートが、例えば、細胞形態又は生存率の変化、マーカーの発現、分化又は脱分化、細胞呼吸、ミトコンドリア活性、膜統合性、熟成、増殖、生存率、アポトーシス又は細胞死により反映される、細胞の活性又は機能をモジュレートするかどうか決定することを含むスクリーニング法（例えばインビトロの方法）を含む。直接的相互作用の１つの例は物理的相互作用であり、その一方で間接的相互作用は、例えば、中間分子に対して組成物が作用し、ひいては、参照された実体（例えば、細胞又は細胞培養物）に作用することを含む。
【０１４２】
よって、ある特定の実施形態において、グルココルチコイド受容体アゴニストをＣＤ４０発現細胞に送達する方法であって、細胞を、本明細書に記載されている抗体薬物コンジュゲート又は医薬組成物に接触させるステップを含む方法が提供される。
【０１４３】
さらにある特定の実施形態において、抗体薬物コンジュゲートの抗炎症性活性を決定する方法であって、ＣＤ４０発現細胞を、本明細書に記載されている抗体薬物コンジュゲートに接触させること、及び対照細胞と比較して、細胞からの炎症誘発性サイトカインの放出の減少を決定することを含む方法が提供される。
【０１４４】
ＩＶ．製造物品
本開示はまた、１個以上の容器を含む医薬品パック及びキットであって、容器が、１つ以上の用量の、本明細書に記載されている抗体薬物コンジュゲート又は組成物を含むことができる医薬品パック及びキットを含む。ある特定の実施形態において、パック又はキットは、単位用量を含有し、この単位用量とは、１種以上の追加の薬剤を有する、又は１個以上の追加の薬剤を有さない、組成物又は抗体薬物コンジュゲートの既定量を意味する。
【０１４５】
一部の実施形態において、キットは、非水性溶液又は水溶液であってよい１種以上の液体溶液で提供される。一部の実施形態において、溶液は無菌溶液である。キット中の組成物はまた、適当な液体の添加により再構成することができる乾燥粉末（複数可）又は凍結乾燥形態として提供され得る。再構成に使用される液体は、別個の容器に含有されていてもよい。このような液体は、滅菌の、薬学的に許容される緩衝液（複数可）又は他の希釈剤（複数可）、例えば、注射のための静菌剤、リン酸緩衝食塩水、リンガー液又はブドウ糖溶液を含むことができる。
【０１４６】
キットは、１個又は複数の容器、及びこの容器（複数可）内、容器上、又は容器に付随したラベル又はパッケージ添付文書を含むことができ、これらのラベル又はパッケージ添付文書は封入された組成物が、選択の病態を治療するために使用されることを示している。適切な容器として、例えば、ビン、バイアル、シリンジなどが挙げられる。容器は、様々な物質、例えば、ガラス又はプラスチックから形成することができる。容器（複数可）は、滅菌のアクセスポートを含むことができ、例えば、容器は、皮下注射用注射針で刺すことができるストッパーを有する静脈用溶液バッグ又はバイアルであってよい。
【０１４７】
一部の実施形態において、キットは、抗体薬物コンジュゲート及びいずれかの任意選択的構成成分を、これを必要とする対象に投与するために使う手段、例えば、１種以上の針若しくはシリンジ（予備充填した又は空のもの）、目薬の容器、ピペット、又は他のこのような装置を含有することができ、組成物は、これらから対象に注入若しくは導入する、又は身体の罹患した領域に適用することができる。本開示のキットはまた、バイアル、又はそのようなもの、及び他の構成成分を、商業用販売のために、例えば、この中に所望のバイアル及び他の装置を配置し、保持するブロー成形したプラスチック容器などの中に密閉して含有するための手段を通常含む。
【０１４８】
よって、ある特定の実施形態において、
（ａ）本明細書に記載されている抗体薬物コンジュゲート又は医薬組成物を含む容器；及び
（ｂ）１個以上の容器上の、又はこれに付随するラベル又はパッケージ添付文書であって、抗体薬物コンジュゲート又は医薬組成物が炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、多発性硬化症、関節リウマチ、シェーグレン症候群、及び化膿性汗腺炎（ＨＳ）からなる群から選択される状態を治療するために使用されることを示すラベル又はパッケージ添付文書
を含むキットが提供される。
【実施例】
【０１４９】
本明細書に記載されている実施例及び実施形態は、例証的目的のためのみのものであり、その観点から様々な修正又は変化が、当業者に示唆され、本開示の趣旨及び認識の範囲内に含まれるものとすることを理解されたい。
【０１５０】
分析法
１．小分子分析手順
他に述べられていない限り、すべての１Ｈ及び１３Ｃ  ＮＭＲ（核磁気共鳴）データはＶａｒｉａｎ  Ｍｅｒｃｕｒｙ  Ｐｌｕｓ  ４００ＭＨｚ又はＢｒｕｋｅｒ  ＡＶＩＩＩ  ３００ＭＨｚ装置で収集した。化学シフトは百万分率（ｐｐｍ）で提示されている。高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）及びＬＣＭＳ分析用データは、実験部分で詳述されている、又は表７に列挙された条件を基準とする。
【０１５１】
【表６】
2021504430.tif 000051
2021504430.tif 000052
2021504430.tif 000053
【０１５２】
２．ＡＤＣ分析手順
ＡＤＣは、コンジュゲーションの度合及びＡＤＣの純度を決定するために、アニオン性交換クロマトグラフィー（ＡＥＣ）又は疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）でプロファイリングした。
【０１５３】
アニオン性交換クロマトグラフィー（ＡＥＣ）。
【０１５４】
およそ２０μｇのＡＤＣを４×２５０ｍｍ  Ｐｒｏｐａｃ（商標）ＷＡＸ−１０カラム（Ｔｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、ｃａｔ．０５４９９９）を備えたＵｌｔｉｍａｔｅ  ３０００  Ｄｕａｌ  ＬＣシステム（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に充填した。カラムを１００％緩衝液Ａで平衡化し、１００％緩衝液Ａから１００％緩衝液Ｂへの線型勾配を、１．０ｍＬ／分で１８分間にわたり使用して溶出した。緩衝液Ａは２０ｍＭ  ＭＥＳ、ｐＨ６．７であり、緩衝液Ｂは２０ｍＭ  ＭＥＳ、５００塩化ナトリウム、ｐＨ６．７である。
【０１５５】
疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）。
【０１５６】
およそ２０μｇのＡＤＣを、４．６×３５ｍｍブチル−ＮＰＲカラム（Ｔｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、ｃａｔ．１４９４７）を備えたＵｌｔｉｍａｔｅ  ３０００  Ｄｕａｌ  ＬＣシステム（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に充填した。カラムを１００％緩衝液Ａ中で平衡化し、１００％緩衝液Ａから１００％緩衝液Ｂへの線型勾配を、０．８ｍＬ／分で１２分間にわたり使用して溶出した。緩衝液Ａは２５ｍＭリン酸ナトリウム、１．５Ｍ硫酸アンモニウム、ｐＨ７．０であり、緩衝液Ｂは２５ｍＭリン酸ナトリウム、２５％イソプロパノール、ｐＨ７．０である。
【０１５７】
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）。
【０１５８】
ＡＤＣのサイズ分布を、７．８×３００ｍｍ  ＴＳＫ−ゲル  ３０００ＳＷＸＬカラム（Ｔｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、ｃａｔ．０８５４１）を備えたＵｌｔｉｍａｔｅ  ３０００  Ｄｕａｌ  ＬＣシステム（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、サイズ排除ＳＥＣによりプロファイリングした。およそ２０μｇのＡＤＣをカラムに充填し、１００ｍＭ硫酸ナトリウム、１００ｍＭリン酸ナトリウムの均一濃度勾配を、ｐＨ６．８、流量１．０ｍＬ／分で使用して、１７分間にわたり溶出した。
【０１５９】
凝集実験もまたＳＥＣを使用して行うことができ、凝集パーセンテージは、ゲル濾過標準物質（Ｂｉｏ−ｒａｄ、１５１−１９０１）により決定された凝集ピークの領域を積分することにより測定することができる。
質量分析（ＭＳ）。
【０１６０】
温度制御された（５℃）ＣＴＣオートサンプラーを介して、還元した試料（１０μＬ）をＡｇｉｌｅｎｔ  ６５５０  ＱＴｏｆ  ＬＣ／ＭＳシステムに注入した。試料溶出は、Ｗａｔｅｒｓ  Ｃ−４、３．５μｍ、３００Å、２．１×５０ｍｍ、すなわち、ＨＰＬＣカラムで達成した。移動相は、Ａ：水中０．１％ギ酸、及びＢ：アセトニトリル中０．１％ギ酸であり、流量は０．４５ｍＬ／分であり、カラム区画は４０℃で維持した。ＨＰＬＣ勾配は以下の通りである：
【０１６１】
【表７】
2021504430.tif 000054
【０１６２】
前駆体分子の合成
［前駆体実施例１］  （２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−アミノベンジル）フェニル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−１，２，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−４Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−オンの合成
【０１６３】
【化２２】
2021504430.tif 000055
2021504430.tif 000056
【０１６４】
ステップ１：４−（ブロモメチル）ベンズアルデヒドの合成。水素化ジイソブチルアルミニウム（１５３ｍＬ、１５３ｍｍｏｌ、トルエン中１Ｍ）を、４−（ブロモメチル）ベンゾニトリル（２０ｇ、１０２ｍｍｏｌ）のトルエン（４００ｍＬ）中０℃溶液に１時間にわたり滴下添加した。２つの追加反応を上に記載されているように設定した。すべての３つの反応混合物を合わせた。混合物に、１０％水性ＨＣｌ（１．５Ｌ）を加えた。混合物をジクロロメタン（３×５００ｍＬ）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝１０／１で溶出）で精製して、表題化合物を得た（５０ｇ、収率８２％）。1H  NMR  (400MHz,  CDCl3)  δ  10.02  (s,  1H),  7.91  -  7.82  (m,  2H),  7.56  (d,  J=7.9  Hz,  2H),  4.55  -  4.45  (m,  2H).
【０１６５】
ステップ２：３−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）アニリンの合成。３−ブロモアニリン（４０ｇ、２３３ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（４８０ｍＬ）中溶液に、４，４，４’，４’，５，５，５’，５’−テトラメチル−２，２’−ビ（１，３，２−ジオキサボロラン）（９４ｇ、３７２ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（４５．６ｇ、４６５ｍｍｏｌ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリ−ｉ−プロピル−１，１’−ビフェニル（８．０７ｇ、１３．９５ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（８．５２ｇ、９．３０ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、生成した混合物を８０℃で、４時間窒素下で加熱した。追加反応を上に記載されているように設定した。２つの反応混合物を合わせ、濃縮し、残渣をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１０：１で溶出）で精製して、表題化合物を得た（６０ｇ、収率５５．４％）。1H  NMR  (400MHz,  CDCl3)  δ  7.23  -  7.13  (m,  3H),  6.80  (d,  J=7.5  Hz,  1H),  3.82  -  3.38  (m,  2H),  1.34  (s,  12H).
【０１６６】
ステップ３：ｔｅｒｔ−ブチル（３−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）カルバメートの合成。前駆体実施例１、ステップ２からの生成物（３０ｇ、１３７ｍｍｏｌ）及び二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（３８．９ｇ、１７８ｍｍｏｌ）をトルエン（６００ｍＬ）中、１００℃で２４時間混合した。別の反応を上に記載されているように設定した。２つの反応混合物を合わせ、褐色混合物を蒸発させ、酢酸エチル（１．５Ｌ）に溶解し、０．１Ｎ  ＨＣｌ（３×２Ｌ）及びブライン（３Ｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、表題化合物を得た（５０ｇ、収率５７％）。1H  NMR  (400MHz,  CDCl3)  δ  7.63  (br  m,  2H),  7.48  (d,  J=7.1  Hz,  1H),  7.37  -  7.28  (m,  1H),  1.52  (s,  9H),  1.34  (s,  12H).Ｂｏｃ＝ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル。
【０１６７】
ステップ４：ｔｅｒｔ−ブチル（３−（４−ホルミルベンジル）フェニル）カルバメートの合成。前駆体実施例１、ステップ１からの生成物（２４．９４ｇ、１２５ｍｍｏｌ）、１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンジクロロパラジウム（ＩＩ）ジクロロメタン複合体（１３．７５ｇ、１８．８０ｍｍｏｌ）、前駆体実施例１、ステップ３からの生成物（２０ｇ、６２．７ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（４３．３ｇ、３１３ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（４００ｍＬ）中混合物を８０℃に１２時間加熱した。別の追加反応を上に記載されているように設定した。２つの反応混合物を合わせ、水（５００ｍＬ）で希釈した。水性混合物を酢酸エチル（３×５００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１０：１で溶出）で精製して、表題化合物を得た（１５ｇ、収率３８．４％）。1H  NMR  (400MHz,  CDCl3)  δ  9.95  (s,  1H),  7.78  (d,  J=7.9  Hz,  2H),  7.33  (d,  J=7.9  Hz,  2H),  7.27  -  7.13  (m,  3H),  6.82  (d,  J=7.1  Hz,  1H),  6.47  (br.  s.,  1H),  4.00  (s,  2H),  1.48  (s,  9H).
【０１６８】
ステップ５：（６Ｓ，８Ｓ，９Ｒ，１０Ｓ，１１Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１６Ｒ，１７Ｓ）−６，９−ジフルオロ−１１，１６，１７−トリヒドロキシ−１７−（２−ヒドロキシアセチル）−１０，１３−ジメチル−６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−オンの合成。（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ，１０，１０−テトラメチル−１，２，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−４Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−オン（２０ｇ、４４．２ｍｍｏｌ）を４０％水性ＨＢＦ４（４４０ｍＬ）中に懸濁させ、混合物を２５℃で４８時間撹拌した。この反応が完了した後、２ＬのＨ２Ｏを加え、固体を濾過によって収集した。この固体をＨ２Ｏ（１Ｌ）、次いでメタノール（２００ｍＬ）で洗浄して、表題化合物を得た（１１ｇ、収率６０．３％）。1H  NMR  (400MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  7.25  (d,  J=10.1  Hz,  1H),  6.28  (d,  J=10.1  Hz,  1H),  6.10  (s,  1H),  5.73  -  5.50  (m,  1H),  5.39  (br.  s.,  1H),  4.85  -  4.60  (m,  2H),  4.50  (d,  J=19.4  Hz,  1H),  4.20  -  4.04  (m,  2H),  2.46  -  2.06  (m,  6H),  1.87  -  1.75  (m,  1H),  1.56  -  1.30  (m,  6H),  0.83  (s,  3H).ジメチルスルホキシド＝ジメチルスルホキシド。
【０１６９】
ステップ６：（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｓ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−アミノベンジル）フェニル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−１，２，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−４Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−オンの合成。前駆体実施例１、ステップ５からの生成物（４．４ｇ、１０．６７ｍｍｏｌ）及びＭｇＳＯ４（６．４２ｇ、５３．３ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１００ｍＬ）中懸濁液を２０℃で１時間撹拌した。前駆体実施例１、ステップ４からの生成物（３．６５ｇ、１１．７４ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１００ｍＬ）中溶液を一度に加えた。氷浴を使用して内部温度を室温未満に維持しながら、トリフルオロメタンスルホン酸（９．０１ｍＬ、５３．３ｍｍｏｌ）を滴下添加した。添加後、混合物を２０℃で２時間撹拌した。３つの追加反応を上に記載されているように設定した。すべての４つの反応混合物を合わせ、濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣで精製して、表題化合物を得た（４．５ｇ、収率１４．２％）。ＬＣＭＳ（方法ａ、表７）Ｒｔ＝２．６５分；ＭＳｍ／ｚ＝６０６．２（Ｍ＋Ｈ）＋。1H  NMR  (400MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  7.44  -  7.17  (m,  5H),  6.89  (t,  J=7.7  Hz,  1H),  6.44  -  6.25  (m,  4H),  6.13  (br.  s.,  1H),  5.79  -  5.52  (m,  2H),  5.44  (s,  1H),  5.17  -  4.89  (m,  3H),  4.51  (d,  J=19.4  Hz,  1H),  4.25  -  4.05  (m,  2H),  3.73  (s,  2H),  3.17  (br.  s.,  1H),  2.75  -  2.55  (m,  1H),  2.36  -  1.97  (m,  3H),  1.76  -  1.64  (m,  3H),  1.59  -  1.39  (m,  4H),  0.94  -  0.78  (m,  3H).分取ＨＰＬＣ方法：装置：Ｇｉｌｓｏｎ  ２８１半分取ＨＰＬＣシステム；移動相：Ａ：ギ酸／Ｈ２Ｏ＝０．０１％ｖ／ｖ；Ｂ：アセトニトリル；カラム：Ｌｕｎａ  Ｃ１８  １５０×２５５ミクロン；流量：２５ｍＬ／分；モニター波長：２２０及び２５４ｎｍ。
【０１７０】
【表８】
2021504430.tif 000057
【０１７１】
［前駆体実施例２］  （６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−アミノベンジル）フェニル）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−１，２，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−４Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−オンの合成。
【０１７２】
【化２３】
2021504430.tif 000058
【０１７３】
（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ，１０，１０−テトラメチル−１，２，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−４Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−オンを使用して、前駆体実施例２生成物を、前駆体実施例１と類似の手順で合成した。
1H  NMR  (400MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  7.36  (d,  J=7.9  Hz,  2H),  7.31  (d,  J=10.1  Hz,  1H),  7.20  (d,  J=7.9  Hz,  2H),  6.89  (t,  J=7.9  Hz,  1H),  6.39  -  6.28  (m,  3H),  6.16  (dd,  J=1.5,  9.9  Hz,  1H),  5.93  (s,  1H),  5.39  (s,  1H),  5.08  (t,  J=5.7  Hz,  1H),  4.98  -  4.87  (m,  3H),  4.78  (d,  J=3.1  Hz,  1H),  4.49  (dd,  J=6.2,  19.4  Hz,  1H),  4.29  (br.  s.,  1H),  4.17  (dd,  J=5.5,  19.6  Hz,  1H),  3.74  (s,  2H),  2.61  -  2.53  (m,  1H),  2.36  -  2.26  (m,  1H),  2.11  (d,  J=11.0  Hz,  1H),  2.07  (s,  1H),  2.02  (d,  J=12.8  Hz,  1H),  1.83  -  1.54  (m,  5H),  1.39  (s,  3H),  1.16  -  0.96  (m,  2H),  0.85  (s,  3H).ＬＣＭＳ（方法ａ、表７）Ｒｔ＝２．３６５分；ｍ／ｚ＝５７０．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１７４】
［前駆体実施例３］  （６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−アミノベンジル）フェニル）−６ｂ−フルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−１，２，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−４Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−オンの合成。
【０１７５】
【化２４】
2021504430.tif 000059
【０１７６】
（６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−６ｂ−フルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ，１０，１０−テトラメチル−１，２，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−４Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−オンを使用して、前駆体実施例３生成物を、前駆体実施例１と類似の手順で合成した。
1H  NMR  (400MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  7.37  -  7.26  (m,  3H),  7.21  (d,  J=7.9  Hz,  2H),  6.89  (t,  J=7.7  Hz,  1H),  6.43  -  6.30  (m,  3H),  6.23  (d,  J=10.1  Hz,  1H),  6.04  (s,  1H),  5.75  (s,  1H),  5.44  (s,  2H),  5.09  (t,  J=5.7  Hz,  1H),  4.93  (br.  s.,  3H),  4.50  (dd,  J=6.2,  19.4  Hz,  1H),  4.28  -  4.09  (m,  2H),  3.74  (s,  2H),  2.73  -  2.54  (m,  2H),  2.35  (d,  J=13.2  Hz,  1H),  2.25  -  2.12  (m,  1H),  2.05  (d,  J=15.0  Hz,  1H),  1.92  -  1.77  (m,  1H),  1.74  -  1.58  (m,  3H),  1.50  (s,  3H),  1.45  -  1.30  (m,  1H),  0.87  (s,  3H).ＬＣＭＳ（方法ａ、表７）Ｒｔ＝２．６８分；ｍ／ｚ＝５８８．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１７７】
［前駆体実施例４］  （Ｓ）−４−（２−（２−ブロモアセトアミド）アセトアミド）−５−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−８ｂ−（２−（ホスホノオキシ）アセチル）−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−５−オキソペンタン酸の合成
【０１７８】
【化２５】
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2021504430.tif 000061
【０１７９】
ステップ１：（Ｓ）−２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）アセトアミド）−５−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−５−オキソペンタン酸の合成。２−クロロトリチル塩化物樹脂（３０ｇ、９２ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（４６．４ｇ、４５８ｍｍｏｌ）及び（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−５−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−５−オキソペンタン酸（２５．５ｇ、６０ｍｍｏｌ）の乾燥ジクロロメタン（２００ｍＬ）中混合物をＮ２で、２０℃で８時間バブリングした。混合物を濾過し、樹脂をジクロロメタン（２×２００ｍＬ）、メタノール（ＭｅＯＨ）（２×２００ｍＬ）、及びジメチルホルムアミド（２×２００ｍＬ）で洗浄した。樹脂をピペリジン：ジメチルホルムアミドの溶液（１：４、４００ｍＬ）に加え、混合物をＮ２で８分間バブリングし、次いで濾過した。この作業を５回繰り返して、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）保護基の完全な除去を得た。樹脂をジメチルホルムアミド（５×５００ｍＬ）で洗浄して、樹脂結合した（Ｓ）−２−アミノ−５−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−５−オキソペンタン酸を生成した。２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）酢酸（１３．３８ｇ、４５．０ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（７．８６ｍＬ、４５ｍｍｏｌ）、ヒドロキシベンゾトリアゾール（６．８９ｇ、４５ｍｍｏｌ）、２−（６−クロロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルイソウロニウムヘキサフルオロホスフェート（Ｖ）（１８．６２ｇ、４５．０ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（２００ｍＬ）中混合物を２０℃で３０分間撹拌した。混合物に、樹脂結合した（Ｓ）−２−アミノ−５−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−５−オキソペンタン酸を加え、生成した混合物をＮ２で、２５℃で１．５時間バブリングした。混合物を濾過し、樹脂をジメチルホルムアミド（４×５００ｍＬ）、及びジクロロメタン（２×５００ｍＬ）で洗浄した。混合物に、１％トリフルオロ酢酸／ジクロロメタン（５×５００ｍＬ）を加え、Ｎ２で５分間バブリングした。混合物を濾過し、濾液をＮａＨＣＯ３（２００ｍＬ）の飽和溶液に直接加えた。合わせた混合物を分離し、有機相をクエン酸飽和水溶液（４×４００ｍＬ）及びブライン（２×３００ｍＬ）で洗浄した。最終有機溶液をＮａ２ＳＯ４（２０ｇ）で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、表題化合物を生成した（１０ｇ、収率２０％）。1H  NMR:  (CDCl3,  400  MHz)  δ  7.75  (d,  J  =  7.5  Hz,  2H),  7.59  (br  d,  J  =  7.5  Hz,  2H),  7.41  -  7.36  (m,  2H),  7.30  (t,  J  =  7.0  Hz,  2H),  5.82  (br  s,  1H),  4.57  (br  d,  J  =  4.8  Hz,  1H),  4.38  (br  d,  J  =  7.5  Hz,  2H),  4.27  -  4.15  (m,  1H),  4.06  -  3.83  (m,  2H),  2.50  -  2.29  (m,  2H),  2.26  -  2.13  (m,  1H),  2.06  -  2.02  (m,  1H),  1.43  (s,  9H).
【０１８０】
ステップ２：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−４−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）アセトアミド）−５−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−５−オキソペンタノエートの合成。実施例４、ステップ１からの生成物（４２４ｍｇ、０．８７８ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（３．５ｍＬ）中溶液に、実施例２（５００ｍｇ、０．８７８ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．３ｍＬ、２．６３ｍｍｏｌ）を２５℃で加えた。溶液を０℃に冷却し、次いで２，４，６−トリプロピル−１，３，５，２，４，６−トリオキサトリホスフィナン２，４，６−トリオキシド（１．１２ｇ、１．７５５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を２５℃で１２時間撹拌した。ＬＣＭＳは反応が完了したことを示した。１４種の追加反応を上に記載されているように設定した。すべての１５種の反応混合物を合わせた。混合物を逆相カラムで精製して、表題化合物を黄色の固体として生成した（５ｇ、収率３８．４％）。逆相カラム法：装置：Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＬＣ−８Ａ  分取ＨＰＬＣ；カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８  ２００×４０ｍｍ×１０μｍ；移動相：Ｈ２Ｏ（０．０５％トリフルオロ酢酸）に対してＡ及びアセトニトリルに対してＢ；勾配：Ｂ３０％〜１００％で３０分間；流量：６０ｍＬ／ｍｉｎ；波長：２２０＆２５４ｎｍ。ＬＣＭＳ（方法ａ、表７）Ｒｔ＝１．３４分；ｍ／ｚ１０１６．６（Ｍ＋Ｈ−１８）＋。
【０１８１】
ステップ３：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−４−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）アセトアミド）−５−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−８ｂ−（２−（（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシホスホリル）オキシ）アセチル）−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−５−オキソペンタノエートの合成。実施例４、ステップ２からの生成物（４００ｍｇ、０．３８７ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（２．５ｍＬ）中溶液に、１Ｈ−テトラゾール（２７１ｍｇ、３．８７ｍｍｏｌ）及びジ−ｔｅｒｔ−ブチルジエチルホスホラミダイト（１．１６ｇ、４．６４ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で２．５時間撹拌し、次いで０℃に冷却した。過酸化水素（２４１ｍｇ、２．１２７ｍｍｏｌ）を生成した混合物に加え、室温まで温め、１時間撹拌し、この後、ＬＣＭＳは反応が完了したことを示した。１１種の追加の反応を上に記載されているように設定した。すべての１２種の反応混合物を合わせた。混合物を逆相カラムで精製して、表題化合物を生成した（４．４ｇ、収率６４．２％）。逆相カラム法：装置：Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＬＣ−８Ａ  分取ＨＰＬＣ；カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８  ２００×４０ｍｍ×１０μｍ；移動相：Ｈ２Ｏに対してＡ及びアセトニトリルに対してＢ；勾配：Ｂ５０％〜１００％で３０分；流量：６０ｍＬ分；波長：２２０＆２５４ｎｍ。ＬＣＭＳ（方法ａ、表７）Ｒｔ＝１．４１分；ｍ／ｚ１２２６．７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１８２】
ステップ４：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−４−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）アセトアミド）−５−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−８ｂ−（２−（（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシホスホリル）オキシ）アセチル）−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−５−オキソペンタノエートの合成。実施例４、ステップ３からの生成物（１．１ｇ、０．８９７ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（６ｍＬ）中溶液に、ピペリジン（０．７５ｍＬ、７．５８ｍｍｏｌ）を２５℃で加えた。反応物を室温で２０分間撹拌し、その後、ＬＣＭＳは反応が完了したことを示した。３種の追加反応を上に記載されているように設定した。すべての４種の反応混合物を合わせた。混合物を濃縮して残渣を生成し，これを撹拌下で２時間、石油エーテル（１０ｍＬ）で処理した。生成した固体を濾過によって収集し、減圧下で乾燥させて、表題化合物を生成した（３．８ｇ、収率９０％）。ＬＣＭＳ（方法ａ、表７）Ｒｔ＝１．１６分；ｍ／ｚ１００４．６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１８３】
ステップ５：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−４−（２−（２−ブロモアセトアミド）アセトアミド）−５−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−８ｂ−（２−（（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシホスホリル）オキシ）アセチル）−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−５−オキソペンタノエートの合成。２−ブロモ酢酸（９７ｍｇ、０．６９７ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（２．５ｍＬ）中溶液に、２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１，２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ）（１７２ｍｇ、０．６９７ｍｍｏｌ）を室温で加えた。混合物を室温で１時間撹拌した。実施例４、ステップ４からの生成物（３５０ｍｇ、０．３４９ｍｍｏｌ）を加え、生成物を２．５時間撹拌した後、ＬＣＭＳは反応が完了したことを示した。７種の追加反応を上に記載されているように設定した。すべての８種の反応混合物を合わせた。反応物をジクロロメタン（１００ｍＬ）で希釈し、水性ＨＢｒ（１Ｍ、２×８０ｍＬ）、水性ＮａＨＣＯ３（６０ｍＬ）、ブライン（６０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、表題化合物を生成した（２ｇ、収率６３．７％）。ＬＣＭＳ（方法ａ、表７）Ｒｔ＝１．３０分；ｍ／ｚ１１２６．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１８４】
ステップ６：（Ｓ）−４−（２−（２−ブロモアセトアミド）アセトアミド）−５−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−８ｂ−（２−（ホスホノオキシ）アセチル）−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−５−オキソペンタン酸の合成。実施例４、ステップ５からの生成物（２ｇ、１．７７８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１６ｍＬ）中溶液に、トリフルオロ酢酸（８ｍＬ、１０４ｍｍｏｌ）を加え、生成した混合物を室温で４０分間撹拌し、この後、ＬＣＭＳは反応が完了したことを示した。溶媒を減圧下で除去した。生成した残渣を分取ＨＰＬＣで精製した。移動相をそのまま凍結乾燥して、表題化合物を生成した（６４０ｍｇ、収率３５．３％）。分取ＨＰＬＣ法：装置：Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＬＣ−８Ａ  分取ＨＰＬＣ；カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８  ２００×４０ｍｍ×１０μｍ；移動相：Ｈ２Ｏ（０．０９％トリフルオロ酢酸）に対してＡ及びアセトニトリルに対してＢ；勾配：Ｂ３０％〜４０％で２０分；流量：６０ｍＬ／分；波長：２２０＆２５４ｎｍ。1H  NMR:  (ジメチルスルホキシド-d6,  400  MHz)  δ  9.88  (s,  1H),  8.52  (s,  1H),  8.24  (br  d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  7.46  (br  d,  J  =  7.9  Hz,  1H),  7.42  (s,  1H),  7.36  (br  d,  J  =7.9  Hz,  2H),  7.30  (br  d,  J  =  9.7  Hz,  1H),  7.23  -  7.17  (m,  3H),  6.90  (br  d,  J  =  6.8  Hz,  1H),  6.16  (br  d,  J  =  10.4  Hz,  1H),  5.93  (s,  1H),  5.47  (s,  1H),  4.96  -  4.85  (m,  3H),  4.58  (br  dd,  J  =  7.9,  18.7  Hz,  1H),  4.38  (br  d,  J  =  5.3  Hz,  1H),  4.29  (br  s,  1H),  3.93  (s,  2H),  3.89  (s,  2H),  3.80  (br  s,  2H),  2.30  -  2.22  (m,  2H),  2.16  -  1.91  (m,  4H),  1.85  -  1.62  (m,  6H),  1.39  (s,  3H),  1.00  (br  s,  2H),  0.87  (s,  3H).ＬＣＭＳ（方法ａ、表７）Ｒｔ＝２．８６分；ｍ／ｚ９５６．０、９５８．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１８５】
［前駆体実施例５］  ２−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−（（Ｓ）−６−アミノ−２−（２−（２−ブロモアセトアミド）アセトアミド）ヘキサンアミド）ベンジル）フェニル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−１，２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−８ｂＨ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−８ｂ−イル）−２−オキソエチルリン酸二水素塩の合成。
【０１８６】
【化２６】
2021504430.tif 000062
2021504430.tif 000063
【０１８７】
ステップ１：ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−５−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）アセトアミド）−６−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−６−オキソヘキシル）カルバメートの合成。Ｎ２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）グリシル）−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リシン（５．５８ｇ、８．２６ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（６０ｍＬ）中溶液に、０℃で、２，４，６−トリプロピル−１，３，５，２，４，６−トリオキサトリホスフィナン２，４，６−トリオキシド（１０．５１ｇ、１６．５１ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（３．４５ｍＬ、２４．７７ｍｍｏｌ）を加えた。生成した混合物を室温で１時間撹拌し、次いで前駆体実施例１、ステップ６からの生成物（５ｇ、８．２６ｍｍｏｌ）を加えた。生成した混合物を室温で５時間撹拌し、この後、ＬＣＭＳは反応が完了したことを示した。６種の追加反応を上に記載されているように設定した。すべての７種の反応混合物を合わせた。反応物を逆相カラムで精製して、表題化合物を生成した（２４ｇ、収率２４．６２％）。逆相カラム法：装置：Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＬＣ−８Ａ分取ＨＰＬＣ；カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８  ２００×４０ｍｍ×１０μｍ；移動相：Ｈ２Ｏ（０．０５％トリフルオロ酢酸）に対してＡ及びアセトニトリルに対してＢ；勾配：Ｂ３０％〜１００％で３０分；流量：６０ｍＬ／分；波長：２２０＆２５４ｎｍ。ＬＣＭＳ（方法ａ、表７）Ｒｔ＝１．２９分；ｍ／ｚ１０９５．６（Ｍ＋Ｈ−１８）＋。Ｆｍｏｃ＝フルオレニルメチルオキシカルボニル；Ｂｏｃ＝ｔｅｒｔブトキシカルボニル。
【０１８８】
ステップ２：ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−５−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）アセトアミド）−６−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−８ｂ−（２−（（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシホスホリル）オキシ）アセチル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−６−オキソヘキシル）カルバメートの合成。実施例５、ステップ１からの生成物（３ｇ、２．６９ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）中溶液に、１Ｈ−テトラゾール（１．８８８ｇ、２６．９ｍｍｏｌ）及びジ−ｔｅｒｔ−ブチルジエチルホスホラミダイト（８．０６ｇ、３２．３ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で３．５時間撹拌した。過酸化水素（２２４ｍｇ、１．９７ｍｍｏｌ）を反応物に加え、０．５時間撹拌し、この後、ＬＣＭＳは反応が完了したことを示した。６種の追加反応を上に記載されているように設定した。すべての７種の反応混合物を合わせた。反応物を逆相カラムで精製して、表題化合物を生成した（１０ｇ、純度：７８％、収率３７．１％）。逆相カラム法：装置：Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＬＣ−８Ａ  分取ＨＰＬＣ；カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８  ２００×４０ｍｍ×１０μｍ；移動相：Ｈ２Ｏに対してＡ及びアセトニトリルに対してＢ；勾配：Ｂ５０％〜１００％で３０分；流量：６０ｍＬ／分；波長：２２０＆２５４ｎｍ。ＬＣＭＳ（方法ａ、表７）Ｒｔ＝１．４２分；ｍ／ｚ１３０５．７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１８９】
ステップ３：ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−５−（２−アミノアセトアミド）−６−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−８ｂ−（２−（（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシホスホリル）オキシ）アセチル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−６−オキソヘキシル）カルバメートの合成。実施例５、ステップ２からの生成物（２．５ｇ、１．９６９ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１０ｍＬ）中溶液に、ピペリジン（２ｍＬ、１．９６９ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で１時間撹拌し、この後ＬＣＭＳは反応が完了したことを示した。３つの追加反応を上に記載されているように設定した。すべての４種の反応混合物を合わせた。反応物を濃縮して、粗生成物を生成し、これを石油エーテル（３０ｍＬ）中で２時間撹拌した。生成した固体を濾過によって収集し、減圧下で乾燥させて、表題化合物を黄色の固体として生成した（７ｇ、純度：８３％、収率７０．４％）。ＬＣＭＳ（方法ａ、表７）Ｒｔ＝１．１７ｍｉｎ；ｍ／ｚ１０８３．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１９０】
ステップ４：ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−５−（２−（２−ブロモアセトアミド）アセトアミド）−６−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−８ｂ−（２−（（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシホスホリル）オキシ）アセチル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−６−オキソヘキシル）カルバメートの合成。２−ブロモ酢酸（０．９２９ｇ、６．６８ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（３５ｍＬ）中溶液に、２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１，２−ジヒドロキノリン（１．６５３ｇ、６．６８ｍｍｏｌ）を加え、生成した混合物を室温で１時間撹拌した。実施例５、ステップ３からの生成物（３．５ｇ、３．３４ｍｍｏｌ）を加え、生成した混合物を室温で２時間撹拌した。ＬＣＭＳは反応が完了したことを示した。反応物をジクロロメタン（１００ｍＬ）で希釈し、水性ＨＢｒ（１Ｍ、２×８０ｍＬ）、水性ＮａＨＣＯ３（６０ｍＬ）及びブライン（６０ｍＬ）を洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、表題化合物を生成した（２ｇ、収率５１．２％）。ＬＣＭＳ（方法ａ、表７）Ｒｔ＝１．３２分；ｍ／ｚ１２０５．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１９１】
ステップ５：２−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−（（Ｓ）−６−アミノ−２−（２−（２−ブロモアセトアミド）アセトアミド）ヘキサンアミド）ベンジル）フェニル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−１，２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−８ｂＨ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−８ｂ−イル）−２−オキソエチルリン酸二水素塩の合成。実施例５、ステップ４からの生成物（２ｇ、１．６６１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１０ｍＬ）中溶液に、トリフルオロ酢酸（５ｍＬ、６４．９ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で４０分間撹拌し、この後、ＬＣＭＳは反応が完了したことを示した。溶媒を減圧下で除去し、粗生成物を分取ＨＰＬＣで精製した。移動相をそのまま凍結乾燥して、表題化合物を生成した（５５０ｍｇ、純度：９６．９％、収率３２．３％）。分取ＨＰＬＣ方法：装置：Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＬＣ−８Ａ  分取ＨＰＬＣ；カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８  ２００×４０ｍｍ×１０μｍ；移動相：Ｈ２Ｏ（０．０９％トリフルオロ酢酸）に対してＡ及びアセトニトリルに対してＢ；勾配：Ｂ３０％〜４０％で２０分；流量：６０ｍＬ／分；波長：２２０＆２５４ｎｍ。ＬＣＭＳ（方法ａ、表７）Ｒｔ＝２．３１分。1H  NMR:  (ジメチルスルホキシド-d6,  400  MHz)  δ  ppm  0.90  (s,  3  H)  1.19  -  1.41  (m,  2  H)  1.43  -  1.62  (m,  7  H)  1.64  -  1.77  (m,  3  H)  1.84  (br  d,  J=14.55  Hz,  1  H)  1.95  -  2.07  (m,  1  H)  2.18  -  2.36  (m,  3  H)  2.65  -  2.78  (m,  3  H)  3.71  -  3.86  (m,  3  H)  3.89  (s,  2  H)  3.93  (s,  2  H)  4.20  (br  d,  J=9.48  Hz,  1  H)  4.33  -  4.41  (m,  1  H)  4.59  (br  dd,  J=18.41,  8.05  Hz,  1  H)  4.81  (br  dd,  J=18.52,  8.60  Hz,  1  H)  4.94  (d,  J=4.63  Hz,  1  H)  5.50  (s,  1  H)  5.54  -  5.76  (m,  1  H)  6.13  (s,  1  H)  6.29  (dd,  J=10.14,  1.32  Hz,  1  H)  6.95  (d,  J=7.72  Hz,  1  H)  7.15  -  7.28  (m,  4  H)  7.30  -  7.41  (m,  3  H)  7.51  (br  d,  J=7.94  Hz,  1  H)  7.72  (br  s,  3  H)  8.21  (br  d,  J=7.72  Hz,  1  H)  8.54  (t,  J=5.62  Hz,  1  H)  9.93  (br  d,  J=2.65  Hz,  1  H).
【０１９２】
［前駆体実施例６］  （Ｓ）−Ｎ−（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）−２−（（Ｓ）−２−（３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド）プロパンアミド）プロパンアミドの合成。
【０１９３】
【化２７】
2021504430.tif 000064
2021504430.tif 000065
【０１９４】
ステップ１：ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ、８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）カルバメートの合成。１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム３−オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）（６１０ｍｇ、１．６０５ｍｍｏｌ）及び２，６−ルチジン（０．３ｍＬ、２．５８ｍｍｏｌ）を、室温で、前駆体実施例１、ステップ６からの生成物（６４８．１ｍｇ、１．０７０ｍｍｏｌ）、及び（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロパンアミド）プロパン酸（３３４ｍｇ、１．２８４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１１．５ｍＬ）中混合物に加えた。９時間後、反応物を酢酸エチル（１６ｍＬ）で希釈し、次いでＨＣｌの１Ｎ水溶液（３×４ｍＬ）、これに続いてブラインの飽和水性溶液（４ｍＬ）で洗浄した。０〜１０％メタノール／ジクロロメタンの勾配で溶出するクロマトグラフィー（シリカ、４０ｇ）での精製により表題化合物を得た（７７３．７ｍｇ、０．９１２ｍｍｏｌ、８５％収率）。ＬＣＭＳ（方法ｂ、表７）Ｒｔ＝０．９２分、ｍ／ｚ＝８４８．５３［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０１９５】
ステップ２：（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）プロパンアミドの合成。トリフルオロ酢酸（１．９７ｍＬ、２５．６ｍｍｏｌ）を、実施例６、ステップ１からの生成物（０．７６８３ｇ、０．９０６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（６．０ｍＬ）中室温溶液に滴下添加した。５０分後、溶媒を減圧下で除去して、褐色のシロップを得た。残渣を１：１ジメチルスルホキシド：メタノール（１２ｍＬ）に溶解し、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｃ１８（２）  １０ミクロンカラム（２５０×５０ｍｍカラム）による逆相ＨＰＬＣで精製した。アセトニトリル（Ａ）及び水中０．１％トリフルオロ酢酸（Ｂ）の勾配を、流量９０ｍＬ／分（０〜５．０分、１５％Ａ、５．０〜２０分、線型勾配１５〜７５％Ａ、２分保持、２２．０〜２２．５分、線型勾配７５〜９５％Ａ、４分保持）で使用した。合わせた画分を減圧下で濃縮乾燥させて、残渣を真空オーブン内、５０℃で終夜乾燥させて、表題化合物を得た（２３０ｍｇ、０．３０８ｍｍｏｌ、３４％収率）。ＬＣ−ＭＳ（方法ｂ、表７）主要のアセタール異性体Ｒｔ＝０．７３分、ｍ／ｚ＝７４８．７８［Ｍ＋Ｈ＋］。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  10.01  (s,  1H),  8.62  (d,  J  =  7.2  Hz,  1H),  8.04  (d,  J  =  5.4  Hz,  3H),  7.46  -  7.31  (m,  4H),  7.31  -  7.13  (m,  4H),  6.91  (d,  J  =  7.6  Hz,  1H),  6.27  (dd,  J  =  10.2,  1.9  Hz,  1H),  6.11  (s,  1H),  5.76  -  5.47  (m,  2H),  5.43  (s,  1H),  4.93  (d,  J  =  4.6  Hz,  1H),  4.49  (d,  J  =  19.5  Hz,  1H),  4.42  (q,  J  =  7.1  Hz,  1H),  4.23  -  4.13  (m,  2H),  2.72  -  2.54  (m,  1H),  2.33  -  2.16  (m,  2H),  2.02  (dt,  J  =  13.6,  3.6  Hz,  1H),  1.69  (h,  J  =  5.9,  5.1  Hz,  3H),  1.48  (s,  4H),  1.33  (d,  J  =  7.0  Hz,  3H),  1.30  (d,  J  =  7.1  Hz,  3H),  0.85  (s,  3H).
【０１９６】
ステップ３：（Ｓ）−Ｎ−（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）−２−（（Ｓ）−２−（３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド）プロパンアミド）プロパンアミドの合成。ジイソプロピルエチルアミン（０．１ｍＬ、０．５７３ｍｍｏｌ）を、室温で、実施例６、ステップ２からの生成物（０．２２０ｇ、０．２９４ｍｍｏｌ）及びＮ−スクシンイミジル３−マレイミドプロピオネート（０．０８６ｇ、０．３２４ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（２．８ｍＬ）中溶液に加えた。３０分後、反応混合物のｐＨを、トリフルオロ酢酸の水（１．０ｍＬ）中７％溶液の滴下添加により４〜５に調節した。粗製混合物をＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｃ１８（２）１０ミクロンカラム（２５０×５０ｍｍカラム）による逆相ＨＰＬＣで精製した。アセトニトリル（Ａ）及び水中０．１％トリフルオロ酢酸（Ｂ）の勾配を流量９０ｍＬ／分（０〜５．０分、１５％Ａ、５．０〜２０分、線型勾配１５〜８５％Ａ、２分保持）で使用した。合わせた画分を減圧下で濃縮して、揮発性溶媒を除去し、生成した溶液を凍結し、凍結乾燥して、表題化合物を得た（１７５．２ｍｇ、０．１９５ｍｍｏｌ、６６％収率）。ＬＣＭＳ（方法ｂ、表７）Ｒｔ＝０．８２分、ｍ／ｚ＝８９９．８７［Ｍ＋Ｈ＋］。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  9.70  (s,  1H),  8.14  (d,  J  =  7.0  Hz,  1H),  8.01  (d,  J  =  7.2  Hz,  1H),  7.47  -  7.35  (m,  2H),  7.32  (d,  J  =  8.1  Hz,  2H),  7.26  -  7.10  (m,  4H),  6.95  (s,  1H),  6.87  (dt,  J  =  7.6,  1.3  Hz,  1H),  6.26  (dd,  J  =  10.2,  1.9  Hz,  1H),  6.09  (d,  J  =  2.0  Hz,  1H),  5.72  -  5.51  (m,  1H),  5.48  (s,  1H),  5.41  (s,  1H),  4.91  (d,  J  =  4.9  Hz,  1H),  4.47  (d,  J  =  19.4  Hz,  1H),  4.30  (p,  J  =  7.1  Hz,  1H),  4.25  -  4.11  (m,  3H),  3.85  (s,  2H),  3.57  (t,  J  =  7.3  Hz,  2H),  2.71  -  2.48  (m,  1H),  2.36  (dd,  J  =  8.0,  6.7  Hz,  2H),  2.23  (ddt,  J  =  25.1,  12.2,  6.6  Hz,  2H),  2.01  (dt,  J  =  13.7,  3.7  Hz,  1H),  1.75  -  1.57  (m,  3H),  1.48  (p,  J  =  11.9  Hz,  1H),  1.46  (s,  3H),  1.24  (d,  J  =  7.2  Hz,  3H),  1.13  (d,  J  =  7.2  Hz,  3H),  0.83  (s,  3H).
【０１９７】
［前駆体実施例７］  ３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）プロパンアミドの合成
【０１９８】
【化２８】
2021504430.tif 000066
【０１９９】
（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−アミノベンジル）フェニル）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−１，２，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−４Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−オンを使用して、前駆体実施例７生成物を、実施例６と類似の手順で合成した。ＬＣＭＳ（方法ｂ、表７）Ｒｔ＝０．８５分、ｍ／ｚ＝８６３．４［Ｍ＋Ｈ］。
1H  NMR  (501  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  9.71  (s,  1H),  8.17  (d,  J  =  7.0  Hz,  1H),  8.03  (d,  J  =  7.3  Hz,  1H),  7.43  (dd,  J  =  7.8,  1.1  Hz,  2H),  7.38  -  7.32  (m,  2H),  7.29  (d,  J  =  10.1  Hz,  1H),  7.22  -  7.15  (m,  3H),  6.96  (s,  2H),  6.88  (dt,  J  =  7.8,  1.3  Hz,  1H),  6.13  (dd,  J  =  10.1,  1.9  Hz,  1H),  5.90  (t,  J  =  1.6  Hz,  1H),  5.37  (s,  1H),  4.90  (d,  J  =  5.4  Hz,  1H),  4.48  (d,  J  =  19.4  Hz,  1H),  4.32  (p,  J  =  7.1  Hz,  1H),  4.27  (q,  J  =  3.3  Hz,  1H),  4.21  (p,  J  =  7.1  Hz,  1H),  4.16  (d,  J  =  19.4  Hz,  1H),  3.87  (s,  2H),  3.59  (t,  J  =  7.3  Hz,  2H),  2.57  -  2.49  (m,  1H),  2.38  (dd,  J  =  8.0,  6.6  Hz,  2H),  2.32  -  2.24  (m,  1H),  2.15  -  2.04  (m,  1H),  2.04  -  1.95  (m,  1H),  1.80  -  1.54  (m,  5H),  1.37  (s,  3H),  1.26  (d,  J  =  7.1  Hz,  3H),  1.15  (d,  J  =  7.1  Hz,  3H),  1.02  (ddd,  J  =  21.2,  12.1,  4.2  Hz,  2H),  0.84  (s,  3H).
【０２００】
［前駆体実施例８］  ３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−６ｂ−フルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）プロパンアミドの合成。
【０２０１】
【化２９】
2021504430.tif 000067
【０２０２】
（６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−アミノベンジル）フェニル）−６ｂ−フルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−１，２，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−４Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−オンを使用して、前駆体実施例８生成物を、実施例６と類似の手順で合成した。ＬＣＭＳ（方法ｂ、表７）Ｒｔ＝０．８５分；ｍ／ｚ＝８８１．４６［Ｍ＋Ｈ］＋。
1H  NMR  (ジメチルスルホキシド-d6)  δ  0.83  (s,  3H),  1.13  (d,  J  =  7.1  Hz,  3H),  1.24  (d,  J  =  7.1  Hz,  3H),  1.35  (qd,  J  =  13.3,  12.8,  5.1  Hz,  1H),  1.46  (s,  3H),  1.63  (q,  J  =  9.7,  8.5  Hz,  3H),  1.73  -  1.88  (m,  1H),  2.01  (dt,  J  =  13.7,  3.5  Hz,  1H),  2.14  (td,  J  =  11.8,  7.2  Hz,  1H),  2.26  -  2.40  (m,  3H),  2.48  -  2.69  (m,  2H),  3.57  (t,  J  =  7.3  Hz,  2H),  3.85  (s,  2H),  4.17  (ddd,  J  =  17.5,  11.7,  6.2  Hz,  3H),  4.30  (p,  J  =  7.2  Hz,  1H),  4.47  (d,  J  =  19.4  Hz,  1H),  4.83  -  4.95  (m,  1H),  5.40  (s,  2H),  5.99  (d,  J  =  1.6  Hz,  1H),  6.20  (dd,  J  =  10.1,  1.9  Hz,  1H),  6.87  (d,  J  =  7.5  Hz,  1H),  6.95  (s,  2H),  7.16  (t,  J  =  7.9  Hz,  1H),  7.20  (d,  J  =  8.1  Hz,  2H),  7.25  (d,  J  =  10.1  Hz,  1H),  7.31  (d,  J  =  8.0  Hz,  2H),  7.38  (d,  J  =  1.9  Hz,  1H),  7.43  (dd,  J  =  8.0,  2.0  Hz,  1H),  8.01  (d,  J  =  7.3  Hz,  1H),  8.14  (d,  J  =  7.1  Hz,  1H),  9.70  (s,  1H).
【０２０３】
［前駆体実施例９］  （Ｓ）−４−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド）−５−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−８ｂ−（２−（ホスホノオキシ）アセチル）−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−５−オキソペンタン酸の合成
【０２０４】
【化３０】
2021504430.tif 000068
2021504430.tif 000069
【０２０５】
ステップ１：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−５−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−５−オキソペンタノエートの合成。１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム３−オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）（２６０ｍｇ、０．６８５ｍｍｏｌ）及び２，６−ジメチルピリジン（０．１８４ｍｌ、１．５８０ｍｍｏｌ）を、前駆体実施例２からの生成物（３００ｍｇ、０．５２７ｍｍｏｌ）及び（Ｓ）−５−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−５−オキソペンタン酸（１６８ｍｇ、０．５５３ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（６ｍＬ）中室温懸濁液に加えた。室温で２時間後、反応物を酢酸エチル（３０ｍＬ）で希釈し、次いでＨＣｌの１Ｎ水溶液（２×１５ｍＬ）、ＮａＨＣＯ３の飽和水溶液（１５ｍＬ）、及びブライン（１５ｍＬ）で逐次的に洗浄した。有機層を脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、溶媒を減圧下で除去した。０〜１０％メタノール／ジクロロメタンの勾配で溶出するクロマトグラフィー（シリカ）による精製により、表題化合物をオフホワイト色の固体として得た（４００ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ、８９％収率）。ＬＣＭＳ（方法ｂ、表７）Ｒｔ＝１．０９分；ＭＳｍ／ｚ＝８５４．９［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２０６】
ステップ２：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−５−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−８ｂ−（２−（（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシホスホリル）オキシ）アセチル）−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−５−オキソペンタノエートの合成。ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジエチルホスホラミダイト（０．４２ｍｌ、１．５ｍｍｏｌ）を、前駆体実施例９、ステップ１からの生成物（４００ｍｇ、０．４６８ｍｍｏｌ）及び１Ｈ−テトラゾール（０．３５ｍｌ、２．２５ｍｍｏｌ）のジメチルアセトアミド（５ｍＬ）中室温溶液に加えた。反応物を室温で２時間撹拌し、この時点で、過酸化水素の水（１．５ｍＬ）中５０％溶液を滴下添加した。ＬＣＭＳが、酸化が完了したことを示したら、反応物を０℃に冷却し、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３の１Ｍ水溶液（８ｍＬ）の添加によりクエンチした。混合物を酢酸エチル（２×３０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。分取逆相ＨＰＬＣでの精製により、表題化合物を得た（４２０ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ、８６％収率）。ＬＣＭＳ（方法ｂ、表７）Ｒｔ＝１．２７分；ＭＳｍ／ｚ＝１０４７．６［Ｍ＋Ｈ＋］．1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  9.80  (s,  1H),  7.41  (d,  J  =  8.3  Hz,  1H),  7.37  -  7.31  (m,  3H),  7.29  (d,  J  =  10.1  Hz,  1H),  7.20  (d,  J  =  8.0  Hz,  2H),  7.17  (t,  J  =  7.9  Hz,  1H),  6.94  (d,  J  =  8.0  Hz,  1H),  6.88  (d,  J  =  7.5  Hz,  1H),  6.11  (dd,  J  =  10.1,  1.9  Hz,  1H),  5.89  (s,  1H),  5.46  (s,  1H),  5.00  -  4.81  (m,  3H),  4.58  (dd,  J  =  18.0,  9.1  Hz,  1H),  4.26  (s,  1H),  4.00  (d,  J  =  6.7  Hz,  1H),  3.86  (s,  2H),  2.49  (d,  J  =  2.2  Hz,  1H),  2.29  (p,  J  =  2.0  Hz,  1H),  2.27  -  2.16  (m,  2H),  2.06  (d,  J  =  10.3  Hz,  1H),  1.98  (d,  J  =  11.0  Hz,  1H),  1.91  -  1.56  (m,  6H),  1.39  (d,  J  =  1.5  Hz,  18H),  1.35  (s,  3H),  1.33  (s,  18H),  1.01  (t,  J  =  13.7  Hz,  2H),  0.85  (s,  3H).
【０２０７】
ステップ３：（Ｓ）−４−アミノ−５−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−８ｂ−（２−（ホスホノオキシ）アセチル）−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−５−オキソペンタン酸の合成。トリフルオロ酢酸（２．０ｍＬ、０．４０ｍｍｏｌ）を、室温で前駆体実施例９、ステップ２からの生成物（４２０ｍｇ、０．４０１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（６ｍＬ）中溶液に加えた。混合物を室温で４５分間撹拌し、この時点で溶媒を減圧下で除去した。表題化合物はさらに精製せずに次のステップで使用した。ＬＣＭＳ（方法ａ、表７）主要なアセタール異性体Ｒｔ＝０．６９分、ＭＳｍ／ｚ＝７７９．８［Ｍ＋Ｈ］＋；微量のアセタール異性体Ｒｔ＝０．７２分、ＭＳｍ／ｚ＝７７９．９［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２０８】
ステップ４：（Ｓ）−４−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド）−５−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−８ｂ−（２−（ホスホノオキシ）アセチル）−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−５−オキソペンタン酸の合成。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．９０ｍＬ、５．１ｍｍｏｌ）及びマレイミド酢酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（１４１ｍｇ、０．５６１ｍｍｏｌ）を、前駆体実施例９、ステップ３からの生成物（３６４ｍｇ、０．４６７ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（５ｍＬ）中室温溶液に逐次的に加えた。ＬＣＭＳは、反応が１５分間以内に完了したことを示し、この時点で反応物を０℃に冷却し、２，２，２−トリフルオロ酢酸（０．４３２ｍＬ、６．６ｍｍｏｌ）の添加によりｐＨを１に調節した。分取逆相ＨＰＬＣでの精製及び凍結乾燥により、表題化合物を得た（１４６ｍｇ、０．１５９ｍｍｏｌ、３４％収率）。ＬＣＭＳ（方法ｂ、表７）Ｒｔ＝０．７９分；ＭＳｍ／ｚ＝９１５．９［Ｍ＋Ｈ］＋。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  9.92  (s,  1H),  8.45  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H),  7.43  -  7.38  (m,  1H),  7.35  (d,  J  =  8.1  Hz,  3H),  7.28  (d,  J  =  10.1  Hz,  1H),  7.21  (d,  J  =  8.3  Hz,  3H),  7.16  (d,  J  =  7.9  Hz,  1H),  7.05  (s,  2H),  6.89  (d,  J  =  7.6  Hz,  1H),  6.13  (dd,  J  =  10.1,  1.9  Hz,  1H),  5.89  (d,  J  =  1.6  Hz,  1H),  5.44  (s,  1H),  4.93  -  4.83  (m,  2H),  4.80  (s,  1H),  4.53  (dd,  J  =  18.2,  8.2  Hz,  1H),  4.34  (td,  J  =  8.1,  5.3  Hz,  1H),  4.27  (s,  1H),  4.08  (s,  2H),  3.87  (s,  2H),  2.58  -  2.48  (m,  1H),  2.34  -  2.16  (m,  3H),  2.16  -  2.03  (m,  1H),  2.03  -  1.84  (m,  2H),  1.84  -  1.53  (m,  4H),  1.36  (s,  3H),  1.01  (td,  J  =  13.1,  11.3,  4.0  Hz,  2H),  0.84  (s,  3H).
【０２０９】
［前駆体実施例１０］  （Ｓ）−４−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド）−５−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−８ｂ−（２−（ホスホノオキシ）アセチル）−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−５−オキソペンタン酸の合成。
【０２１０】
【化３１】
2021504430.tif 000070
【０２１１】
前駆体実施例１、ステップ６からの生成物を使用して、前駆体実施例１０生成物を前駆体実施例９と類似の手順で合成した。ＬＣＭＳ（方法ｂ、表７）Ｒｔ＝０．７９分；ＭＷ  ｍ／ｚ９７４．３［Ｍ＋Ｎａ］＋。
1H    NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  9.91  (s,  1H),  8.45  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H),  7.42  (dd,  J  =  8.0,  1.9  Hz,  1H),  7.37  -  7.29  (m,  3H),  7.28  -  7.20  (m,  3H),  7.17  (t,  J  =  7.9  Hz,  1H),  7.04  (s,  1H),  6.89  (d,  J  =  7.6  Hz,  1H),  6.26  (dd,  J  =  10.2,  1.8  Hz,  1H),  6.09  (s,  1H),  5.67  (dd,  J  =  11.2,  6.7  Hz,  1H),  5.60  -  5.48  (m,  2H),  4.94  -  4.85  (m,  2H),  4.56  (dd,  J  =  18.2,  8.4  Hz,  1H),  4.34  (td,  J  =  8.2,  5.4  Hz,  1H),  4.23  -  4.13  (m,  1H),  4.08  (s,  2H),  3.86  (s,  2H),  2.69  -  2.52  (m,  1H),  2.32  -  2.12  (m,  4H),  2.03  (dt,  J  =  13.7,  3.7  Hz,  1H),  1.96  -  1.85  (m,  1H),  1.83  -  1.60  (m,  4H),  1.55  -  1.41  (m,  4H),  0.85  (s,  3H).
【０２１２】
［前駆体実施例１１］  （Ｓ）−４−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド）−５−（（３−（４−（（６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−６ｂ−フルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−８ｂ−（２−（ホスホノオキシ）アセチル）−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−５−オキソペンタン酸の合成。
【０２１３】
【化３２】
2021504430.tif 000071
【０２１４】
前駆体実施例３からの生成物を使用して、前駆体実施例１１生成物を前駆体実施例９と類似の手順で合成した。ＬＣＭＳ（方法ｂ、表７）Ｒｔ＝０．８０分；ＭＷｍ／ｚ９３４［Ｍ＋Ｈ］＋。
1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  0.89  (s,  3H),  1.39  (dd,  J  =  12.7,  5.1  Hz,  1H),  1.50  (s,  3H),  1.67  (q,  J  =  6.2  Hz,  3H),  1.76  -  2.02  (m,  3H),  2.07  (d,  J  =  13.1  Hz,  1H),  2.22  (dtd,  J  =  16.7,  11.1,  10.4,  4.6  Hz,  3H),  2.31  -  2.43  (m,  1H),  2.57  -  2.75  (m,  1H),  3.90  (s,  2H),  4.11  (s,  2H),  4.20  (d,  J  =  8.9  Hz,  1H),  4.38  (td,  J  =  8.2,  5.5  Hz,  1H),  4.58  (dd,  J  =  18.2,  8.3  Hz,  1H),  4.84  -  5.00  (m,  2H),  5.51  (d,  J  =  8.5  Hz,  2H),  6.04  (d,  J  =  1.7  Hz,  1H),  6.24  (dd,  J  =  10.2,  1.9  Hz,  1H),  6.88  -  6.99  (m,  1H),  7.09  (s,  2H),  7.15  -  7.32  (m,  4H),  7.32  -  7.42  (m,  3H),  7.42  -  7.53  (m,  1H),  8.48  (d,  J  =  7.9  Hz,  1H),  9.95  (s,  1H).
【０２１５】
［前駆体実施例１２］  ２−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド）プロパンアミド）プロパンアミド）ベンジル）フェニル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−１，２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−８ｂＨ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−８ｂ−イル）−２−オキソエチルリン酸二水素塩
【０２１６】
【化３３】
2021504430.tif 000072
【０２１７】
前駆体実施例１のアミノ生成物、前駆体実施例６（ステップ１）からのジペプチド、及び前駆体実施例９（ステップ４）からのマレイミド試薬を使用して、前駆体実施例１２生成物を前駆体実施例９と類似の手順で合成した。ＬＣＭＳ（方法ｂ、表７）Ｒｔ＝０．８２分；ｍ／ｚ＝９６５．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  9.74  (s,  1H),  8.36  (d,  J  =  7.3  Hz,  1H),  8.09  (d,  J  =  7.2  Hz,  1H),  7.40  (dd,  J  =  8.0,  2.0  Hz,  1H),  7.35  (d,  J  =  1.8  Hz,  1H),  7.32  (d,  J  =  7.9  Hz,  2H),  7.26  7.19  (m,  3H),  7.15  (t,  J  =  7.8  Hz,  1H),  7.04  (s,  2H),  6.87  (d,  J  =  7.5  Hz,  1H),  6.26  (dd,  J  =  10.1,  1.9  Hz,  1H),  6.09  (s,  1H),  5.74  5.51  (m,  2H),  5.50  (s,  1H),  4.96  4.83  (m,  2H),  4.56  (dd,  J  =  18.2,  8.4  Hz,  1H),  4.29  (dp,  J  =  14.3,  7.1  Hz,  2H),  4.18  (d,  J  =  9.3  Hz,  1H),  4.11  3.98  (m,  2H),  3.85  (s,  2H),  2.62  (dtd,  J  =  33.1,  12.3,  4.2  Hz,  1H),  2.34  2.14  (m,  2H),  2.03  (dt,  J  =  13.3,  3.7  Hz,  1H),  1.67  (dd,  J  =  13.2,  5.1  Hz,  3H),  1.46  (s,  4H),  1.24  (d,  J  =  7.1  Hz,  3H),  1.17  (d,  J  =  7.0  Hz,  3H),  0.85  (s,  3H).
【０２１８】
［前駆体実施例１３］  ２−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド）プロパンアミド）プロパンアミド）ベンジル）フェニル）−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−１，２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−８ｂＨ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−８ｂ−イル）−２−オキソエチルリン酸二水素塩
【０２１９】
【化３４】
2021504430.tif 000073
【０２２０】
前駆体実施例２のアミノ生成物、前駆体実施例６（ステップ１）からのジペプチド、及び前駆体実施例９（ステップ４）からのマレイミド試薬を使用して、前駆体実施例１３生成物を前駆体実施例９と類似の手順で合成した。ＬＣＭＳ（方法ｃ、表７）Ｒｔ＝０．８２分；ｍ／ｚ＝９２９．４［Ｍ＋Ｈ］＋。
1H  NMR  (400MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  =  9.79  (s,  1H),  8.42  (br  d,  J=7.5  Hz,  1H),  8.15  (br  d,  J=7.0  Hz,  1H),  7.49  -  7.28  (m,  5H),  7.25  -  7.12  (m,  3H),  7.07  (s,  2H),  6.90  (br  d,  J=7.5  Hz,  1H),  6.16  (br  d,  J=10.1  Hz,  1H),  5.92  (s,  1H),  5.48  (s,  1H),  4.96  -  4.85  (m,  2H),  4.56  (dd,  J=8.3,  18.4  Hz,  1H),  4.37  -  4.23  (m,  3H),  4.08  (br  d,  J=2.6  Hz,  2H),  3.89  (s,  2H),  2.19  -  1.95  (m,  3H),  1.84  -  1.60  (m,  6H),  1.38  (s,  3H),  1.27  (br  d,  J=7.0  Hz,  3H),  1.20  (br  d,  J=6.6  Hz,  3H),  1.02  (br  d,  J=11.4  Hz,  2H),  0.87  (s,  3H),  0.00  -  0.00  (m,  1H).
【０２２１】
［前駆体実施例１４Ａ］  （Ｓ）−２−（（２−（２−ブロモアセトアミド）エチル）アミノ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）プロパンアミド
【０２２２】
【化３５】
2021504430.tif 000074
2021504430.tif 000075
【０２２３】
前駆体実施例１４Ａ生成物は、Ｎ−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エチル）−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニン（ステップＳ１及びＳ２の生成物）の、実施例２のアミノ生成物へのカップリング、これに続くステップＳ４〜Ｓ６：（１）Ｆｍｏｃ脱保護、（２）２−ブロモ酢酸とのカップリング、及び（３）Ｂｏｃ脱保護から合成することができる。Ｆｍｏｃ＝フルオレニルメチルオキシカルボニル；Ｂｏｃ＝ｔｅｒｔブトキシカルボニル。
【０２２４】
追加の前駆体実施例
表１０に列挙された実施例１４Ｂ〜４８のブロモアセトアミド生成物は、本明細書に記載されている手順に従い合成することができる。
【０２２５】
【表９】
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【０２２６】
［前駆体実施例１４Ｂ］  ３−（２−ブロモアセトアミド）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）プロパンアミド
【０２２７】
【化３６】
2021504430.tif 000086
2021504430.tif 000087
【０２２８】
ステップ１：ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）カルバメートの合成。（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニン（１１．９ｇ、４５．６ｍｍｏｌ、１．３０当量）のテトラヒドロフラン（１４０ｍＬ）中溶液に、Ｎ−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン（１１．３ｇ、４５．６ｍｍｏｌ、１．３０当量）を加え、反応混合物を１５℃で０．５時間撹拌した。次いで、前駆体実施例２（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−アミノベンジル）フェニル）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−１，２，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−４Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−オン（２０．０ｇ、３５．１ｍｍｏｌ））の生成物を加え、混合物を１５℃で２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、残渣を得、シリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル／酢酸エチル＝３／１〜０／１）で精製して、表題化合物を生成した（２５．０ｇ、８８％収率）。1H  NMR  (400MHz  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  9.85  (s,  1H),  7.96  (d,  J  =  7.2  Hz,  1H),  7.37-7.41  (m,  4H),  7.31  (d,  J  =  10.0  Hz,  1H),  7.21-7.23  (m,  3H),  6.94  (dd,  J  =  23.6,  7.2  Hz,  2H),  6.16  (d,  J  =  10.0  Hz,  1H),  5.93  (s,  1H),  5.41  (s,  1H),  5.08  (t,  J  =  5.6  Hz,  1H),  4.92  (d,  J  =  5.2  Hz,  1H),  4.78  (d,  J  =  3.2  Hz,  1H),  4.50  (dd,  J  =  19.6,  6.4  Hz,  1H),  4.35-4.38  (m,  1H),  4.29  (s,  1H),  4.18  (dd,  J  =  19.6,  5.6  Hz,  1H),  3.98-4.16  (m,  1H),  3.89  (s,  2H),  2.54-2.58  (m,  1H),  2.31  (d,  J  =  10.8  Hz,  1H),  2.03  -  2.10  (m,  2H),  1.67  -  1.77  (m,  6H),  1.39  (s,  3H),  1.37  (s,  9H),  1.16-1.19  (m,  3H),  1.01-1.03  (m,  2H),  0.86  (s,  3H).
【０２２９】
ステップ２：（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）プロパンアミド塩酸塩の合成。ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）カルバメート（１５．０ｇ、１８．５ｍｍｏｌ、１．０当量）のＨＣｌ／メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（９０ｍＬ、４Ｍ）中溶液を２０℃で０．５時間撹拌した。反応混合物を濾過し、フィルターケーキを乾燥させた。残渣を分取ＨＰＬＣにより精製して、表題化合物を生成した（１０．２ｇ、７４％収率）。1H  NMR  (400  MHz  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  10.0  (s,  1  H),  8.68  (d,  J  =  7.2  Hz,  1H),  8.13  (br  d,  J  =  3.6  Hz,  3H),  7.43  -  7.45  (m,  2H),  7.39  (d,  J  =  7.6  Hz,  2H),  7.32  (d,  J  =  10.4  Hz,  1H),  7.21  -  7.24  (m,  3H),  6.93  (br  d,  J  =  7.6  Hz,  1H),  6.16  (dd,  J  =  10.0,  1.6  Hz,  1H),  5.93  (s,  1H),  5.41  (s,  1H),  4.92  (d,  J  =  4.8  Hz,  1H),  4.82  (br  s,  1H),  4.41  -  4.52  (m,  2H),  4.29  (br  s,  1H),  4.18  (d,  J  =  19.6  Hz,  1H),  3.87  -  3.89  (m,  3H),  2.54  -  2.58  (m,  1H),  2.29  -  2.33  (m,  1H),  2.01  -  2.03  (m,  2H),  1.67  -  1.77  (m,  5H),  1.40  (s,  3H),  1.34  (dd,  J  =  14.4,  6.8  Hz,  6H),  1.02  -  1.03  (m,  2H),  0.86  (s,  3H).
【０２３０】
ステップ３：ｔｅｒｔ−ブチル（３−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−オキソプロピル）カルバメートの合成。２，５−ジオキソピロリジン−１−イル３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロパノエート（２０５ｍｇ、０．７１６ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（３ｍＬ）中溶液に、（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）プロパンアミド（３３３ｍｇ、０．４７７ｍｍｏｌ）及びＮ、Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１６７ｍＬ、０．９５４ｍｍｏｌ）を２５℃で加えた。反応物を２５℃で２時間撹拌した。２つの追加のバイアルを上に記載されているように設定した。すべての３種の反応混合物を合わせ、分取ＨＰＬＣ（方法ＡＡ１）で精製して、表題化合物を生成した（３００ｍｇ、２４％収率）。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ１３）Ｒｔ＝１．１５２分、ｍ／ｚ８８３．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２３１】
ステップ４：３−アミノ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）プロパンアミドの合成。ｔｅｒｔ−ブチル（３−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−オキソプロピル）カルバメート（１００ｍｇ、０．１１３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１ｍＬ）中溶液に、トリフルオロ酢酸（０．３３ｍＬ、４．２８ｍｍｏｌ）を２５℃で加えた。反応物を２５℃で１時間撹拌した。１つの追加のバイアルを上に記載されているように設定した。両方の反応混合物を合わせ、分取ＨＰＬＣ（方法ＡＡ２）で精製して、表題化合物を生成した（５０ｍｇ、２８％収率）。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ１３）Ｒｔ＝０．９８７分、ｍ／ｚ７８３．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２３２】
ステップ５：３−（２−ブロモアセトアミド）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）プロパンアミドの合成。２−ブロモ酢酸（３５．５ｍｇ、０．２５５ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（１ｍＬ）中溶液に、２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１、２−ジヒドロキノリン（６３．２ｍｇ、０．２５５ｍｍｏｌ）を２５℃で加えた。反応物を２５℃で３０分間撹拌し、次いで３−アミノ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）プロパンアミド（１００ｍｇ、０．１２８ｍｍｏｌ）を２５℃で加えた。反応物を２５℃で２時間撹拌した。１つの追加のバイアルを上に記載されているように設定した。両方の反応混合物を合わせ、分取ＨＰＬＣ（方法ＡＡ３）で精製して、表題化合物を生成した（８０ｍｇ、３５％収率）。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ４）Ｒｔ：２．９９３分。ｍ／ｚ９０５．３（Ｍ＋Ｈ）＋。1H  NMR  (メタノール-d4,  400MHz)  δ  7.53  -  7.48  (m,  1H),  7.46  -  7.40  (m,  2H),  7.34  (dd,  J=1.5,  8.2  Hz,  2H),  7.23  -  7.14  (m,  3H),  6.92  (t,  J=7.5  Hz,  1H),  6.24  (d,  J=9.5  Hz,  1H),  6.01  (s,  1H),  5.42  (d,  J=1.3  Hz,  1H),  5.04  (d,  J=4.9  Hz,  1H),  4.62  (d,  J=19.4  Hz,  1H),  4.48  -  4.21  (m,  4H),  3.93  (d,  J=2.2  Hz,  2H),  3.76  (s,  1H),  3.65  (s,  1H),  3.45  (五重線の二重線,  J=6.4,  12.8  Hz,  2H),  2.65  (dt,  J=5.6,  13.1  Hz,  1H),  2.52  -  2.34  (m,  3H),  2.25  (dq,  J=3.9,  10.8  Hz,  1H),  2.13  (br  dd,  J=5.7,  12.6  Hz,  1H),  1.95  (br  d,  J=13.7  Hz,  1H),  1.89  -  1.64  (m,  5H),  1.48  (s,  3H),  1.43  (dd,  J=2.2,  7.3  Hz,  3H),  1.36  (dd,  J=7.2,  10.7  Hz,  3H),  1.20  -  1.07  (m,  1H),  1.03  (ddd,  J=3.6,  7.5,  11.1  Hz,  1H),  0.98  (s,  3H).
【０２３３】
［前駆体実施例１５］  （Ｓ）−２−（２−ブロモアセトアミド）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）プロパンアミド
【０２３４】
【化３７】
2021504430.tif 000088
【０２３５】
ステップ１：（Ｓ）−２−（２−ブロモアセトアミド）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）プロパンアミドの合成。２−ブロモ酢酸（１０９ｍｇ、０．７８７ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（２ｍＬ）中溶液に、２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１、２−ジヒドロキノリン（１９５ｍｇ、０．７８７ｍｍｏｌ）を２５℃で加えた。反応物を２５℃で３０分間撹拌し、この時点で、前駆体実施例１４Ｂ、ステップ２の生成物（（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）プロパンアミド）（２８０ｍｇ、０．３９３ｍｍｏｌ）を混合物に加えた。反応物を２５℃で２時間撹拌し、次いで分取ＨＰＬＣ（方法ＡＡ５）で精製して、表題化合物を生成した（８５ｍｇ、２６％収率）。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ４）Ｒｔ＝３．１０分、ｍ／ｚ８３４．３（Ｍ＋Ｈ）＋。1H  NMR  (メタノール-d4,  400  MHz)  δ  0.98  (s,  3H),  1.02  (br  s,  1H),  1.12  (br  d,  J=10.5  Hz,  1H),  1.40  (br  dd,  J=7.0,  10.5  Hz,  6H),  1.48  (s,  3H),  1.89  -  1.66  (m,  4H),  1.98  -  1.89  (m,  1H),  2.12  (br  d,  J=12.7  Hz,  1H),  2.24  (br  d,  J=10.5  Hz,  1H),  2.37  (br  d,  J=11.0  Hz,  1H),  2.70  -  2.58  (m,  1H),  3.93  -  3.80  (m,  4H),  4.46  -  4.24  (m,  4H),  4.61  (d,  J=19.3  Hz,  1H),  5.04  (d,  J=4.8  Hz,  1H),  5.43  (s,  1H),  6.01  (s,  1H),  6.24  (br  d,  J=8.8  Hz,  1H),  6.90  (br  d,  J=7.0  Hz,  1H),  7.23  -  7.12  (m,  3H),  7.47  -  7.30  (m,  5H).
【０２３６】
［前駆体実施例２１Ｂ］  （Ｓ）−２−（（２−（２−ブロモアセトアミド）エチル）アミノ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）プロパンアミド
【０２３７】
【化３８】
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【０２３８】
（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−アミノベンジル）フェニル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−１，２，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−４Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−オンを使用して、前駆体実施例１４Ｂと類似の経路を使用して調製した。
ＬＣＭＳ（方法ＡＡ４）Ｒｔ＝２．９４２分、ｍ／ｚ９４０．３（Ｍ＋Ｈ）＋。1H  NMR  (ジメチルスルホキシド-d6)  δ  =  9.81  -  9.68  (m,  1H),  8.31  -  8.17  (m,  2H),  8.15  -  8.04  (m,  1H),  7.56  -  7.39  (m,  2H),  7.35  (d,  J=7.9  Hz,  2H),  7.30  -  7.16  (m,  4H),  6.91  (d,  J=7.5  Hz,  1H),  6.30  (dd,  J=2.0,  10.3  Hz,  1H),  6.13  (s,  1H),  5.74  -  5.49  (m,  2H),  5.45  (s,  1H),  5.46  -  5.43  (m,  1H),  4.94  (d,  J=4.8  Hz,  1H),  4.51  (d,  J=19.7  Hz,  1H),  4.40  -  4.15  (m,  4H),  3.88  (s,  2H),  3.82  (d,  J=3.9  Hz,  2H),  3.32  -  3.22  (m,  2H),  2.72  -  2.57  (m,  1H),  2.36  -  2.19  (m,  4H),  2.09  -  2.00  (m,  1H),  1.78  -  1.62  (m,  3H),  1.57  -  1.45  (m,  4H),  1.27  (dd,  J=2.4,  7.2  Hz,  3H),  1.20  (d,  J=7.0  Hz,  3H),  0.86  (s,  3H).
【０２３９】
［前駆体実施例２２］  （Ｓ）−２−（２−ブロモアセトアミド）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）プロパンアミド
【０２４０】
【化３９】
2021504430.tif 000090
【０２４１】
（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−アミノベンジル）フェニル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−１，２，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−４Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−オンを使用して、前駆体実施例１５と類似の経路を使用して調製した。
ＬＣＭＳ（方法ＡＡ４）Ｒｔ＝３．０８９分、ｍ／ｚ８６９．３（Ｍ＋Ｈ）＋。1H  NMR  (メタノール-d4)  δ  7.29-7.57  (m,  5H),  7.15-7.26  (m,  3H),  6.93  (br  d,  J=7.02  Hz,  1H),  6.30-6.38  (m,  2H),  5.47-5.68  (m,  1H),  5.43-5.45  (m,  1H),  5.04  (br  d,  J=3.95  Hz,  1H),  4.62  (br  d,  J=19.29  Hz,  1H),  4.25-4.46  (m,  4H),  3.93  (br  s,  2H),  3.77-3.90  (m,  2H),  2.60-2.78  (m,  1H),  2.21-2.49  (m,  3H),  1.63-1.85  (m,  4H),  1.58  (s,  3H),  1.35-1.46  (m,  6H),0.98  (s,  3H).
【０２４２】
［前駆体実施例４２］  （Ｓ）−４−（２−ブロモアセトアミド）−５−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−５−オキソペンタン酸
【０２４３】
【化４０】
2021504430.tif 000091
2021504430.tif 000092
【０２４４】
ステップ１：５−（ｔｅｒｔ−ブチル）１−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−Ｌ−グルタメートの合成。（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−５−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−５−オキソペンタン酸（５０ｇ、１１８ｍｍｏｌ）及び１−ヒドロキシピロリジン−２，５−ジオン（１３．５２ｇ、１１８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（６００ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ’−メタンジイリデンジシクロヘキサンアミン（ＤＣＣ）（２４．２５ｍｇ、１１８ｍｍｏｌ）を０℃で加え、混合物を２５℃で４時間撹拌した。混合物を、焼結ガラス漏斗を介して濾過し、ジクロロメタン（１００ｍＬ）で洗浄した。溶媒を真空下で除去して、表題化合物を生成した（６０ｇ、９６％収率）。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ１３）Ｒｔ＝１．６６３分、ｍ／ｚ５４５．０（Ｍ＋Ｎａ）＋。1H  NMR  (CDCl3,  400  MHz)  δ  1.40  -  1.54  (m,  9  H)  2.15  (dq,  J=14.53,  7.36  Hz,  1  H)  2.25  -  2.38  (m,  1  H)  2.39  -  2.53  (m,  2  H)  2.82  (s,  4  H)  4.17  -  4.27  (m,  1  H)  4.30  -  4.49  (m,  2  H)  4.72  -  4.83  (m,  1  H)  5.71  (br  d,  J=8.16  Hz,  1  H)  7.24  -  7.34  (m,  2  H)  7.36  -  7.44  (m,  2  H)  7.55  -  7.63  (m,  2  H)  7.76  (d,  J=7.50  Hz,  2  H).Ｆｍｏｃ＝フルオレニルメチルオキシカルボニル
【０２４５】
ステップ２：（（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−５−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−５−オキソペンタノイル）−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニンの合成。（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノプロパンアミド）プロパン酸（６．１３ｇ、３８．３ｍｍｏｌ）の１，２−ジメトキシエタン（２００ｍＬ）及び水（１３３ｍＬ）中溶液に、ＮａＨＣＯ３（１２．８６ｇ、１５３ｍｍｏｌ）及び５−（ｔｅｒｔ−ブチル）１−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−Ｌ−グルタメート（２０ｇ、３８．３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２５℃で４時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮して、溶媒を除去した。ＮａＨＣＯ３飽和溶液（２５０ｍＬ）及び酢酸エチル（２５０ｍＬ）を加え、層を分離した。水性ＨＣｌ（１Ｍ、２５０ｍＬ）を水層に加え、酢酸エチル（３００ｍＬ）で抽出した。有機層を脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、溶媒を真空下で除去して、表題化合物を生成した（１５ｇ、６９％収率）。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ１３）Ｒｔ＝１．１７０分、ｍ／ｚ５６８．４（Ｍ＋Ｈ）＋。1H  NMR  (ジメチルスルホキシド-d6,  400  MHz)  δ  1.15  (t,  J=7.06  Hz,  1  H)  1.21  (br  d,  J=7.06  Hz,  3  H)  1.26  (br  d,  J=7.28  Hz,  3  H)  1.37  (s,  9  H)  1.65  -  1.78  (m,  1  H)  1.81  -  1.93  (m,  1  H)  1.96  (s,  1  H)  2.23  (br  t,  J=7.83  Hz,  2  H)  4.01  (五重線,  J=7.11  Hz,  2  H)  4.15  -  4.23  (m,  2  H)  4.23  -  4.32  (m,  2  H)  7.26  -  7.34  (m,  2  H)  7.36  -  7.43  (m,  2  H)  7.53  (br  d,  J=8.16  Hz,  1  H)  7.71  (br  t,  J=6.73  Hz,  2  H)  7.86  (d,  J=7.50  Hz,  2  H)  7.99  (br  d,  J=7.28  Hz,  1  H)  8.14  (br  d,  J=7.28  Hz,  1  H)  12.53  (br  s,  1  H).
【０２４６】
ステップ３：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−４−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−５−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−５−オキソペンタノエートの合成。（（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−５−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−５−オキソペンタノイル）−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニン（１．４９５ｇ、２．６３ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（５ｍＬ）中溶液に、２，４，６−トリプロピル−１，３，５，２，４，６−トリオキサトリホスフィナン２，４，６−トリオキシド（２．２３４ｇ、３．５１ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．５３３ｇ、５．２７ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。混合物を２５℃で３０分間撹拌した。前駆体実施例２（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−アミノベンジル）フェニル）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−１，２，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−４Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−オン）（１ｇ、１．７５５ｍｍｏｌ）を混合物に２５℃で加え、反応物を１２時間撹拌した。混合物を氷冷水（５０ｍＬ）に加え、沈殿物を濾過によって収集して、表題化合物を生成した（１．６８ｇ、８６％収率）。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ１３）Ｒｔ＝１．３４４分、ｍ／ｚ１１１９．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２４７】
ステップ４：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−４−アミノ−５−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−５−オキソペンタノエートの合成。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−４−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−５−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−５−オキソペンタノエート（１．６８ｇ、１．５０１ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（３ｍＬ）中溶液に、ピペリジン（０．６ｍＬ、１．５０１ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。混合物を０℃で１０分間撹拌した。トリフルオロ酢酸（０．５ｍＬ）を加え、混合物を分取ＨＰＬＣ（方法ＡＡ６）で精製して、表題化合物を生成した（１．０３ｇ、７６％収率）。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ１３）Ｒｔ＝１．０８０分、ｍ／ｚ８９７．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２４８】
ステップ５：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−４−（２−ブロモアセトアミド）−５−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−５−オキソペンタノエートの合成。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−４−アミノ−５−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−５−オキソペンタノエート（１６０ｍｇ、０．１７８ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（３ｍＬ）中溶液に、２−ブロモ酢酸（３７．２ｍｇ、０．２６８ｍｍｏｌ）及びエチル２−エトキシキノリン−１（２Ｈ）−カルボキシレート（５２．９ｍｇ、０．２１４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２５℃で２時間撹拌した。反応物を酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈し、水性ＨＢｒ（１Ｍ、２×４０ｍＬ）、飽和水性ＮａＨＣＯ３（３０ｍＬ）及びブライン（３０ｍＬ）で洗浄した。有機層を脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮して表題化合物を生成した（１４０ｍｇ、７７％収率）。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ１３）Ｒｔ＝１．２３２分、ｍ／ｚ１０１９．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２４９】
ステップ６：（Ｓ）−４−（２−ブロモアセトアミド）−５−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−５−オキソペンタン酸の合成。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−４−（２−ブロモアセトアミド）−５−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−５−オキソペンタノエート（１４０ｍｇ、０．１３８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３ｍＬ）中溶液に、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を加えた。混合物を２０℃で１時間撹拌した。溶媒を真空下で除去し、粗生成物を分取ＨＰＬＣ（方法ＡＡ５）で精製して、表題化合物を生成した（３６ｍｇ、２６％収率）。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ４）Ｒｔ＝２．９７５分、ｍ／ｚ９６１．９（Ｍ＋Ｈ）＋。1H  NMR  (ジメチルスルホキシド-d6,  400  MHz).  δ  0.84  (s,  3  H)  0.95  -  1.13  (m,  2  H)  1.18  -  1.28  (m,  6  H)  1.38  (s,  3  H)  1.56  -  1.82  (m,  6  H)  1.83  -  1.95  (m,  1  H)  2.00  (br  d,  J=12.13  Hz,  1  H)  2.06  -  2.16  (m,  1  H)  2.18  -  2.34  (m,  4  H)  2.52  -  2.72  (m,  1  H)  3.82  -  3.94  (m,  4  H)  4.09  -  4.39  (m,  5  H)  4.48  (d,  J=19.40  Hz,  1  H)  4.78  (br  s,  1  H)  4.90  (d,  J=5.07  Hz,  1  H)  5.38  (s,  1  H)  5.92  (s,  1  H)  6.15  (dd,  J=10.03,  1.65  Hz,  1  H)  6.89  (d,  J=7.72  Hz,  1  H)  7.15  -  7.24  (m,  3  H)  7.30  (d,  J=9.92  Hz,  1  H)  7.37  (d,  J=7.94  Hz,  2  H)  7.39  -  7.49  (m,  2  H)  8.00  -  8.31  (m,  2  H)  8.47  (dd,  J=7.50,  4.19  Hz,  1  H)  9.62  -  9.90  (m,  1  H).
【０２５０】
［前駆体実施例２３］  （Ｓ）−４−（２−ブロモアセトアミド）−５−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−５−オキソペンタン酸
【０２５１】
【化４１】
2021504430.tif 000093
（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−アミノベンジル）フェニル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−１，２，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−４Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−オンを使用して、前駆体実施例４２と類似の経路を使用して調製した。
【０２５２】
ＬＣＭＳ（方法ＡＡ４）Ｒｔ＝２．６６８分、ｍ／ｚ９９９．３（Ｍ＋Ｈ）＋。1H  NMR  (ジメチルスルホキシド-d6)  δ  =  12.12  (br  s,  1H),  9.89  -  9.72  (m,  1H),  8.50  -  8.45  (m,  1H),  8.40  -  8.24  (m,  1H),  8.18  (br  d,  J=7.1  Hz,  1H),  8.07  (d,  J=7.2  Hz,  1H),  7.49  -  7.40  (m,  2H),  7.36  (d,  J=7.8  Hz,  2H),  7.29  -  7.17  (m,  4H),  6.91  (br  d,  J=7.3  Hz,  1H),  6.30  (d,  J=10.3  Hz,  1H),  6.13  (s,  1H),  5.75  -  5.56  (m,  1H),  5.53  (br  d,  J=3.1  Hz,  1H),  5.45  (s,  1H),  4.95  (d,  J=4.8  Hz,  1H),  4.51  (d,  J=19.6  Hz,  1H),  4.40  -  4.09  (m,  6H),  3.96  -  3.85  (m,  4H),  2.27  -  2.20  (m,  3H),  2.09  -  2.01  (m,  2H),  1.90  (br  d,  J=7.5  Hz,  2H),  1.78  -  1.65  (m,  4H),  1.63  -  1.63  (m,  1H),  1.50  (s,  4H),  1.30  -  1.19  (m,  6H),  0.86  (s,  3H).
【０２５３】
［前駆体実施例４３］  （Ｓ）−４−（２−（２−ブロモアセトアミド）アセトアミド）−５−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−５−オキソペンタン酸
【０２５４】
【化４２】
2021504430.tif 000094
【０２５５】
ステップ１：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−４−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）アセトアミド）−５−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−５−オキソペンタノエートの合成。（Ｓ）−２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）アセトアミド）−５−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−５−オキソペンタン酸（５０８ｍｇ、１．０５３ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（５ｍＬ）中溶液に、２，４，６−トリプロピル−１，３，５，２，４，６−トリオキサトリホスフィナン２，４，６−トリオキシド（１１１７ｍｇ、１．７７５ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．３６７ｍＬ、２．６３ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応物を２５℃で３０分間撹拌した。前駆体実施例２（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−アミノベンジル）フェニル）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−１，２，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−４Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−オン）（５００ｍｇ、０．８７８ｍｍｏｌ）を２５℃で加え、反応物を２５℃で２時間撹拌した。６つの追加バイアルを上に記載されているように設定した。すべての７つの反応混合物を合わせ、分取ＨＰＬＣ（方法ＡＡ７）で精製して、表題化合物を生成した（２ｇ、３１％収率）。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ１３）Ｒｔ＝１．３７０分、ｍ／ｚ１０１６．５（Ｍ＋Ｈ−１８）＋。Ｆｍｏｃ＝フルオレニルメチルオキシカルボニル。
【０２５６】
ステップ２：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−４−（２−アミノアセトアミド）−５−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−５−オキソペンタノエートの合成。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−４−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）アセトアミド）−５−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−５−オキソペンタノエート（３５０ｍｇ、０．３３８ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（４ｍＬ）中溶液に、ピペリジン（１ｍＬ、５．０５ｍｍｏｌ）を２５℃で加えた。反応物を２５℃で１５分間撹拌し、次いでトリフルオロ酢酸をｐＨ＝５まで加えた。１つの追加バイアルを上に記載されているように設定した。両方の反応混合物を合わせ、分取ＨＰＬＣ（方法ＡＡ８）で精製し、移動相をそのまま凍結乾燥させて、表題化合物を生成した（２００ｍｇ、１３％収率）。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ１３）Ｒｔ＝１．０６３分、ｍ／ｚ８１２．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２５７】
ステップ３：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−４−（２−（２−ブロモアセトアミド）アセトアミド）−５−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−５−オキソペンタノエートの合成。２−ブロモ酢酸（６８．５ｍｇ、０．４９３ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（２ｍＬ）中溶液に、２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１，２−ジヒドロキノリン（１２２ｍｇ、０．４９３ｍｍｏｌ）を２５℃で加えた。混合物を２５℃で３０分間撹拌し、次いでｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−４−（２−アミノアセトアミド）−５−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−５−オキソペンタノエート（２００ｍｇ、０．２４６ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を２５℃で１．５時間撹拌した。反応物を酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈し、水性ＨＢｒ（１Ｍ、２×１５０ｍＬ）、水性ＮａＨＣＯ３（２００ｍＬ）、及びブライン（２００ｍＬ）で洗浄した。有機層を（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮して表題化合物を生成した（２００ｍｇ、８７％収率）。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ１３）Ｒｔ＝１．２０１分、ｍ／ｚ９３４．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２５８】
ステップ４：（Ｓ）−４−（２−（２−ブロモアセトアミド）アセトアミド）−５−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−５−オキソペンタン酸の合成。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−４−（２−（２−ブロモアセトアミド）アセトアミド）−５−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−５−オキソペンタノエート（２００ｍｇ、０．２１４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２ｍＬ）中溶液に、トリフルオロ酢酸（０．７ｍＬ、９．０９ｍｍｏｌ）を２５℃で加えた。反応物を２５℃で１時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、生成した残渣を分取ＨＰＬＰ（方法ＡＡ２）で精製した。移動相を凍結乾燥して、表題化合物を生成した（４４ｍｇ、２３％収率）。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ４）Ｒｔ＝２．９７６分、ｍ／ｚ８７６．１（Ｍ＋Ｈ）＋。1H  NMR  (ジメチルスルホキシド-d6,  400  MHz).    δ  9.88  (br  s,  1H),  8.52  (br  s,  1H),  8.24  (br  d,  J=7.3  Hz,  1H),  7.51  -  7.14  (m,  9H),  6.92  (br  d,  J=7.1  Hz,  1H),  6.16  (br  d,  J=9.9  Hz,  1H),  5.93  (br  s,  1H),  5.39  (s,  1H),  4.91  (br  d,  J=4.2  Hz,  1H),  4.77  (br  s,  1H),  4.49  (br  d,  J=19.6  Hz,  1H),  4.38  (br  d,  J=5.7  Hz,  1H),  4.29  (br  s,  1H),  4.17  (br  d,  J=19.4  Hz,  1H),  3.91  (br  d,  J=16.8  Hz,  3H),  3.79  (br  s,  2H),  2.37  -  2.18  (m,  4H),  2.15  -  1.92  (m,  4H),  1.87  -  1.65  (m,  6H),  1.39  (br  s,  3H),  1.13  -  0.96  (m,  2H),  0.86  (br  s,  3H).
【０２５９】
［前駆体実施例２４］  （Ｓ）−４−（２−（２−ブロモアセトアミド）アセトアミド）−５−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−５−オキソペンタン酸
【０２６０】
【化４３】
2021504430.tif 000095
【０２６１】
（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−アミノベンジル）フェニル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−１，２，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−４Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−オンを使用して、前駆体実施例４３と類似の経路を使用して調製した。
ＬＣＭＳ（方法ＡＡ４）Ｒｔ＝２．９４８分、ｍ／ｚ９１４．２（Ｍ＋Ｈ）＋。1H  NMR    (ジメチルスルホキシド-d6,  400  MHz)  δ  =  9.89  (s,  1H),  8.53  (t,  J=5.6  Hz,  1H),  8.25  (d,  J=7.9  Hz,  1H),  7.47  (br  d,  J=8.4  Hz,  1H),  7.41  (s,  1H),  7.36  (d,  J=8.2  Hz,  2H),  7.29  -  7.23  (m,  3H),  7.20  (t,  J=7.8  Hz,  1H),  7.02  -  6.86  (m,  1H),  6.30  (dd,  J=1.9,  10.3  Hz,  1H),  6.13  (s,  1H),  5.76  -  5.60  (m,  1H),  5.63  -  5.56  (m,  1H),  5.54  -  5.47  (m,  1H),  5.45  (s,  1H),  4.94  (d,  J=5.1  Hz,  1H),  4.51  (d,  J=19.6  Hz,  1H),  4.42  -  4.35  (m,  1H),  4.25  -  4.11  (m,  2H),  3.93  (s,  2H),  3.89  (s,  2H),  3.85  -  3.74  (m,  3H),  2.63  -  2.52  (m,  2H),  2.42  (br  d,  J=1.8  Hz,  1H),  2.30  -  2.16  (m,  4H),  2.07  -  1.90  (m,  2H),  1.87  -  1.61  (m,  4H),  1.55  (br  s,  1H),  1.49  (s,  3H),  0.86  (s,  3H).
【０２６２】
［前駆体実施例４４］  ２−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（３−（２−ブロモアセトアミド）プロパンアミド）プロパンアミド）プロパンアミド）ベンジル）フェニル）−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−１，２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−８ｂＨ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−８ｂ−イル）−２−オキソエチルリン酸二水素塩
【０２６３】
【化４４】
2021504430.tif 000096
【０２６４】
ステップ１：ｔｅｒｔ−ブチル（３−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−８ｂ−（２−（（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシホスホリル）オキシ）アセチル）−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−オキソプロピル）カルバメートの合成。前駆体実施例１４Ｂ、ステップ１の生成物（ｔｅｒｔ−ブチル（３−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−オキソプロピル）カルバメート）（５００ｍｇ、０．５６６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５ｍＬ）中溶液に、１Ｈ−テトラゾール（３９７ｍｇ、５．６６ｍｍｏｌ）及びジ−ｔｅｒｔ−ブチルジエチルホスホラミダイト（１．６９４ｇ、６．７９ｍｍｏｌ）を２５℃で加えた。反応物を２５℃で１時間撹拌し、次いで過酸化水素（３５３ｍｇ、３．１１ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を２時間撹拌した。１つの追加のバイアルを上に記載されているように設定した。両方の反応混合物を合わせ、分取ＨＰＬＣ（方法ＡＡ７）で精製して、表題化合物を生成した（１ｇ、８２％収率）。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ１３）Ｒｔ＝１．３００分、ｍ／ｚ１０７５．８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２６５】
ステップ２：２−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（３−アミノｐｒｏｐａｎａｍｉｄｏ）プロパンアミド）プロパンアミド）ベンジル）フェニル）−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−１，２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−８ｂＨ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−８ｂ−イル）−２−オキソエチルリン酸二水素塩の合成。ｔｅｒｔ−ブチル（３−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−８ｂ−（２−（（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシホスホリル）オキシ）アセチル）−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−オキソプロピル）カルバメート（６００ｍｇ、０．５５８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（６ｍＬ）中溶液に、トリフルオロ酢酸（２ｍＬ、２６．０ｍｍｏｌ）を２５℃で加え、反応物を２５℃で１時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、生成した残渣を分取ＨＰＬＣ（方法ＡＡ６）で精製した。移動相を凍結乾燥して、表題化合物を生成した（３５０ｍｇ、７３％収率）。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ１３）Ｒｔ＝０．９８６分、ｍ／ｚ８６３．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２６６】
ステップ３：２−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（３−（２−ブロモアセトアミド）プロパンアミド）プロパンアミド）プロパンアミド）ベンジル）フェニル）−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−１，２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−８ｂＨ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−８ｂ−イル）−２−オキソエチルリン酸二水素塩の合成。２−ブロモ酢酸（１６．１ｍｇ、０．１１６ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（１ｍＬ）中溶液に、２−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（３−アミノプロパンアミド）プロパンアミド）プロパンアミド）ベンジル）フェニル）−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−１，２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−８ｂＨ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−８ｂ−イル）−２−オキソエチルリン酸二水素塩（１００ｍｇ、０．１１６ｍｍｏｌ）、２−ブロモ−１−エチルピリジン−１−イウムテトラフルオロボレート（３４．９ｍｇ、０．１２７ｍｍｏｌ）及びＮ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（３０．０ｍｇ、０．２３２ｍｍｏｌ）を２５℃で加え、混合物を２５℃で２時間撹拌した。生成した残渣を分取ＨＰＬＣ（方法ＡＡ２）で精製した。移動相を凍結乾燥させ、表題化合物を生成した（６５ｍｇ、３０％収率）。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ４）Ｒｔ＝２．９３２分、ｍ／ｚ９８５．２（Ｍ＋Ｈ）＋。1H  NMR  (ジメチルスルホキシド-d6,  400  MHz).    δ  9.79  -  9.63  (m,  1H),  8.31  -  8.24  (m,  1H),  8.21  -  8.04  (m,  2H),  7.51  -  7.41  (m,  2H),  7.36  (d,  J=7.9  Hz,  2H),  7.29  (d,  J=10.1  Hz,  1H),  7.24  -  7.12  (m,  3H),  6.89  (br  d,  J=7.7  Hz,  1H),  6.14  (dd,  J=1.5,  10.1  Hz,  1H),  5.91  (s,  1H),  5.46  (s,  1H),  4.95  -  4.78  (m,  3H),  4.54  (br  dd,  J=8.0,  18.2  Hz,  1H),  4.38  -  4.12  (m,  4H),  3.87  (s,  2H),  3.80  (d,  J=3.3  Hz,  2H),  3.25  (br  d,  J=6.8  Hz,  2H),  2.60  -  2.50  (m,  2H),  2.13  -  1.96  (m,  2H),  1.84  -  1.58  (m,  6H),  1.37  (s,  3H),  1.25  (dd,  J=2.1,  7.2  Hz,  3H),  1.19  (s,  3H),  1.06  -  0.98  (m,  2H),  0.85  (s,  3H).
【０２６７】
［実施例２５Ｂ］  ２−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（３−（２−ブロモアセトアミド）プロパンアミド）プロパンアミド）プロパンアミド）ベンジル）フェニル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−１，２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−８ｂＨ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−８ｂ−イル）−２−オキソエチルリン酸二水素塩
【０２６８】
【化４５】
2021504430.tif 000097
【０２６９】
２−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−アミノベンジル）フェニル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−１，２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−８ｂＨ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−８ｂ−イル）−２−オキソエチルリン酸二水素塩を使用して、前駆体実施例４４と類似の経路を使用して調製した。
ＬＣＭＳ（方法ＡＡ４）Ｒｔ＝２．９５８分、ｍ／ｚ１０２１．３（Ｍ＋Ｈ）＋。1H  (ジメチルスルホキシド-d6,  400  MHz)  δ  =  9.83  -  9.70  (m,  1H),  8.34  -  8.16  (m,  2H),  8.15  -  8.06  (m,  1H),  7.56  -  7.40  (m,  2H),  7.36  (d,  J=7.9  Hz,  2H),  7.30  -  7.16  (m,  4H),  6.91  (br  d,  J=7.3  Hz,  1H),  6.30  (dd,  J=1.5,  10.1  Hz,  1H),  6.12  (s,  1H),  5.75  -  5.56  (m,  2H),  5.53  (s,  1H),  4.99  -  4.87  (m,  2H),  4.59  (dd,  J=8.4,  18.1  Hz,  1H),  4.43  -  4.15  (m,  4H),  3.89  (s,  2H),  3.82  (d,  J=3.5  Hz,  2H),  3.33  -  3.21  (m,  2H),  2.73  -  2.60  (m,  1H),  2.39  -  2.14  (m,  5H),  2.11  -  2.00  (m,  1H),  1.78  -  1.63  (m,  3H),  1.57  -  1.45  (m,  4H),  1.27  (dd,  J=2.3,  6.9  Hz,  3H),  1.19  (d,  J=7.1  Hz,  3H),  0.88  (s,  3H).
［前駆体実施例４５］  ２−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（２−ブロモアセトアミド）プロパンアミド）プロパンアミド）ベンジル）フェニル）−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−１，２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−８ｂＨ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−８ｂ−イル）−２−オキソエチルリン酸二水素塩
【０２７０】
【化４６】
2021504430.tif 000098
【０２７１】
ステップ１：ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−８ｂ−（２−（（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシホスホリル）オキシ）アセチル）−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）カルバメートの合成。実施例１４Ｂ、ステップ１の生成物（ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）カルバメート）（４００ｍｇ、０．４９３ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（４ｍＬ）中溶液に、１Ｈ−テトラゾール（３４５ｍｇ、４．９３ｍｍｏｌ）及びジ−ｔｅｒｔ−ブチルジエチルホスホラミダイト（１４７４ｍｇ、５．９１ｍｍｏｌ）を２５℃で加えた。混合物を２５℃で２時間撹拌し、次いで過酸化水素（３０７ｍｇ、２．７１ｍｍｏｌ）を０℃で混合物に加えた。反応物を２５℃で２時間撹拌した。４つの追加バイアルを上に記載されているように設定した。すべての５つの反応混合物を合わせ、氷水（１Ｌ）に注入し、濾過して、表題化合物を生成した（１．６ｇ、６５％収率）。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ１３）Ｒｔ＝１．３４４分、ｍ／ｚ１００４．５（Ｍ＋Ｈ）＋。Ｂｏｃ＝ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル。
【０２７２】
ステップ２：２−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノプロパンアミド）プロパンアミド）ベンジル）フェニル）−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−１，２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−８ｂＨ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−８ｂ−イル）−２−オキソエチルリン酸二水素塩の合成。ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−８ｂ−（２−（（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシホスホリル）オキシ）アセチル）−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）カルバメート（１．５ｇ、１．４９４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１０ｍＬ）中溶液に、トリフルオロ酢酸（３ｍＬ、３８．９ｍｍｏｌ）を２５℃で加えた。反応物を２５℃で２時間撹拌した。混合物を分取ＨＰＬＣ（方法ＡＡ１０）で精製して、表題化合物を生成した（４００ｍｇ、３４％収率）。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ１３）Ｒｔ１．６０２分、ｍ／ｚ７９２．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２７３】
ステップ３：２−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（２−ブロモアセトアミド）プロパンアミド）プロパンアミド）ベンジル）フェニル）−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−１，２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−８ｂＨ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−８ｂ−イル）−２−オキソエチルリン酸二水素塩の合成。２−ブロモ酢酸（６３．２ｍｇ、０．４５５ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（１．５ｍＬ）中溶液に、２−ブロモ−１−エチルピリジン−１−イウムテトラフルオロボレート（１２５ｍｇ、０．４５５ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１５９ｍＬ、０．９０９ｍｍｏｌ）及び２−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノプロパンアミド）プロパンアミド）ベンジル）フェニル）−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−１，２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−８ｂＨ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−８ｂ−イル）−２−オキソエチルリン酸二水素塩（２４０ｍｇ、０．３０３ｍｍｏｌ）を２５℃で加え、混合物を２５℃で２時間撹拌した。生成した混合物を分取ＨＰＬＣ（方法ＡＡ９）で精製し、表題化合物を生成した（１００ｍｇ、収率３６．０％収率）。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ４）Ｒｔ＝２．８９０分、ｍ／ｚ９１４．２（Ｍ＋Ｈ）＋。1H  NMR  (ジメチルスルホキシド-d6,  400  MHz)  δ  0.84-0.90  (m,  3H),  0.98-1.11  (m,  2H),  1.18-1.23  (m,  3H),  1.28  (d,  J=7.09  Hz,  3H),  1.39  (s,  3H),  1.60-1.86  (m,  5H),  1.96-2.17  (m,  2H),  2.32  (br  d,  J=1.71  Hz,  1H),  2.52-2.59  (m,  2H),  3.86-3.94  (m,  4H),  4.26-4.40  (m,  3H),  4.56  (dd,  J=18.22,  8.07  Hz,  1H),  4.82-4.96  (m,  3H),  5.48  (s,  1H),  5.93  (s,  1H),  6.16  (dd,  J=10.15,  1.71  Hz,  1H),  6.91  (br  d,  J=7.58  Hz,  1H),  7.17-7.26  (m,  3H),  7.31  (d,  J=10.03  Hz,  1H),  7.35-7.52  (m,  4H),  8.19-8.42  (m,  1H),  8.45-8.57  (m,  1H),  9.71-9.88  (m,  1H).
【０２７４】
［前駆体実施例２６］  ２−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（２−ブロモアセトアミド）プロパンアミド）プロパンアミド）ベンジル）フェニル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−１，２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−８ｂＨ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−８ｂ−イル）−２−オキソエチルリン酸二水素塩の合成
【０２７５】
【化４７】
2021504430.tif 000099
【０２７６】
２−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−アミノベンジル）フェニル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−１，２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−８ｂＨ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−８ｂ−イル）−２−オキソエチルリン酸二水素塩を使用して、前駆体実施例４５と類似の経路を使用して調製した。
ＬＣＭＳ（方法ＡＡ４）Ｒｔ＝２．９２４分、ｍ／ｚ９５０．３（Ｍ＋Ｈ）＋。1H  NMR  (メタノール-d4,  400  MHz)  δ  =  7.44  -  7.38  (m,  1H),  7.36  -  7.31  (m,  4H),  7.23  -  7.17  (m,  3H),  6.93  (br  d,  J=7.6  Hz,  1H),  6.35  -  6.33  (m,  2H),  5.61  -  5.47  (m,  2H),  5.03  (s,  1H),  5.01-4.97  (m  ,  1H),  4.80  -  4.76  (m,  1H),  4.43  -  4.30  (m,  3H),  3.94  (s,  2H),  3.88  -  3.81  (m,  2H),  2.76  -  2.66  (m,  1H),  2.42  -  2.38  (m,  3H),  1.81  -  1.79  (m,  3H),  1.78  -  1.75  (m,  1H),  1.58  (s,  3H),  1.42  -  1.37  (m,  6H),  1.01  (s,  3H).
【０２７７】
［前駆体実施例４６］  （Ｓ）−４−（２−ブロモアセトアミド）−５−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−８ｂ−（２−（ホスホノオキシ）アセチル）−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−５−オキソペンタン酸
【０２７８】
【化４８】
2021504430.tif 000100
【０２７９】
ステップ１：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−４−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−５−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−８ｂ−（２−（（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシホスホリル）オキシ）アセチル）−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−５−オキソペンタノエートの合成。前駆体実施例４２、ステップ３の生成物（ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−４−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−５−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−５−オキソペンタノエート）（５００ｍｇ、０．４４７ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（２ｍＬ）中溶液に、１Ｈ−テトラゾール（３１３ｍｇ、４．４７ｍｍｏｌ）及びジ−ｔｅｒｔ−ブチルジエチルホスホラミダイト（１．３３７ｇ、５．３６ｍｍｏｌ）を２０℃で加えた。反応物を２０℃で１時間撹拌し、次いで過酸化水素（２７９ｍｇ、２．４５７ｍｍｏｌ）を加え、反応物を追加の１時間を撹拌した。反応物を分取ＨＰＬＣ（方法ＡＡ６）で精製して、表題化合物を生成した（４５０ｍｇ、７７％収率）。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ１３）Ｒｔ＝１．５２４分、ｍ／ｚ１３１１．６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２８０】
ステップ２．ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−４−アミノ−５−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−８ｂ−（２−（（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシホスホリル）オキシ）アセチル）−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−５−オキソペンタノエートの合成。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−４−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−５−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−８ｂ−（２−（（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシホスホリル）オキシ）アセチル）−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−５−オキソペンタノエート（４５０ｍｇ、０．３４３ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２ｍＬ）中溶液にピペリジン（０．４ｍＬ）を０℃で加えた。反応物を０℃で２０分間撹拌し、次いで濃縮して粗生成物を生成し、これを石油エーテル（２０ｍＬ）中で１時間撹拌した。固体を濾過によって収集して、減圧下で乾燥させて、表題化合物を生成した（２５０ｍｇ、６７％収率）。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ１３）Ｒｔ＝１．２４４分、ｍ／ｚ１０８９．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２８１】
ステップ３：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−４−（２−ブロモアセトアミド）−５−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−８ｂ−（２−（（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシホスホリル）オキシ）アセチル）−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−５−オキソペンタノエートの合成。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−４−アミノ−５−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−８ｂ−（２−（（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシホスホリル）オキシ）アセチル）−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−５−オキソペンタノエート（２５０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（３ｍＬ）中溶液に、２−ブロモ酢酸（４７．８ｍｇ、０．３４４ｍｍｏｌ）及びエチル２−エトキシキノリン−１（２Ｈ）−カルボキシレート（６８．１ｍｇ、０．２７５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２５℃で２時間撹拌し、次いで分取ＨＰＬＣ（方法ＡＡ１１）で精製して、表題化合物を生成した（１２０ｍｇ、４３％収率）。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ１３）Ｒｔ＝１．３５１分、ｍ／ｚ１２１１．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２８２】
ステップ４：（Ｓ）−４−（２−ブロモアセトアミド）−５−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−８ｂ−（２−（ホスホノオキシ）アセチル）−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−５−オキソペンタン酸の合成。ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−４−（２−ブロモアセトアミド）−５−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−８ｂ−（２−（（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシホスホリル）オキシ）アセチル）−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−５−オキソペンタノエート（１２０ｍｇ、０．０９９ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３ｍＬ）中溶液に、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を加え、混合物を２０℃で２時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、粗生成物を分取ＨＰＬＣ（方法ＡＡ１２）で精製して、表題化合物を生成した（３２ｍｇ、３０％収率）。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ４）Ｒｔ＝２．９０９分、ｍ／ｚ＝１０４１．９（Ｍ＋Ｈ）＋。1H  NMR  (ジメチルスルホキシド-d6,  400  MHz)  δ  9.88  -  9.67  (m,  2H),  8.47  (dd,  J=4.3,  7.6  Hz,  2H),  8.26  (d,  J=7.1  Hz,  1H),  8.21  -  8.12  (m,  1H),  8.28  -  8.03  (m,  1H),  8.06  (d,  J=7.1  Hz,  1H),  7.49  -  7.39  (m,  5H),  7.36  (d,  J=8.2  Hz,  5H),  7.30  (d,  J=10.1  Hz,  2H),  7.22  (br  d,  J=8.2  Hz,  1H),  7.24  -  7.15  (m,  1H),  7.19  -  7.14  (m,  1H),  6.88  (d,  J=7.7  Hz,  2H),  6.15  (d,  J=11.7  Hz,  2H),  5.91  (s,  2H),  5.46  (s,  2H),  4.95  -  4.80  (m,  7H),  4.55  (dd,  J=8.0,  18.0  Hz,  2H),  4.38  -  4.31  (m,  1H),  4.31  -  4.19  (m,  3H),  3.93  -  3.85  (m,  4H),  2.66  (s,  2H),  2.31  (br  s,  1H),  2.24  (br  t,  J=8.2  Hz,  2H),  2.33  -  2.18  (m,  1H),  2.17  -  1.94  (m,  5H),  1.87  (br  s,  2H),  1.83  -  1.59  (m,  14H),  1.37  (s,  7H),  1.28  -  1.17  (m,  15H),  1.00  (br  d,  J=11.2  Hz,  5H),  0.86  (s,  7H).
【０２８３】
［前駆体実施例２７］  （Ｓ）−４−（２−ブロモアセトアミド）−５−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−８ｂ−（２−（ホスホノオキシ）アセチル）−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−５−オキソペンタン酸
【０２８４】
【化４９】
2021504430.tif 000101
【０２８５】
（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−アミノベンジル）フェニル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−１，２，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−４Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−オンを使用して、前駆体実施例４６と類似の経路を使用して調製した。
【０２８６】
ＬＣＭＳ（方法ＡＡ４）Ｒｔ＝２．９０５分、ｍ／ｚ１０７９．１（Ｍ＋Ｈ）＋。1H  NMR  (メタノール-d4,  400  MHz)  δ  =  7.48  -  7.44  (m,  1H),  7.40  -  7.30  (m,  4H),  7.25  -  7.16  (m,  3H),  6.93  (br  d,  J=7.6  Hz,  1H),  6.37  -  6.30  (m,  2H),  5.64  -  5.52  (m,  2H),  5.04  (br  d,  J=4.4  Hz,  1H),  5.01  -  4.95  (m,  1H),  4.81  -  4.72  (m,  1H),  4.43  -  4.25  (m,  4H),  4.13  -  3.99  (m,  1H),  3.97  -  3.91  (m,  2H),  3.91  -  3.77  (m,  2H),  2.79  -  2.61  (m,  1H),  2.45  -  2.33  (m,  4H),  2.27  (br  d,  J=13.7  Hz,  1H),  2.16  -  2.03  (m,  1H),  2.00  -  1.88  (m,  1H),  1.83  -  1.74  (m,  3H),  1.68  -  1.54  (m,  4H),  1.46  -  1.36  (m,  6H),  1.01  (s,  3H).
【０２８７】
［前駆体実施例３９］  ２−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−（（Ｓ）−６−アミノ−２−（２−（２−ブロモアセトアミド）アセトアミド）ヘキサンアミド）ベンジル）フェニル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−１，２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−８ｂＨ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−８ｂ−イル）−２−オキソエチルリン酸二水素塩
【０２８８】
【化５０】
2021504430.tif 000102
2021504430.tif 000103
【０２８９】
ステップ１：ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−５−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）アセトアミド）−６−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−６−オキソヘキシル）カルバメートの合成。Ｎ２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）グリシル）−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リシン（５．５８ｇ、８．２６ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（６０ｍＬ）中溶液に、２，４，６−トリプロピル−１，３，５，２，４，６−トリオキサトリホスフィナン２，４，６−トリオキシド（１０．５１ｇ、１６．５１ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（３．４５ｍＬ、２４．７７ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応物を２５℃で１時間撹拌し、次いで前駆体実施例１、ステップ６の生成物（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−アミノベンジル）フェニル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−１，２，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−４Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−オン）（５ｇ、８．２６ｍｍｏｌ）を反応物に２５℃で加えた。反応物を２５℃で５時間撹拌した。６つの追加バイアルを上に記載されているように設定した。すべての７つの反応物を合わせ、分取ＨＰＬＣ（方法ＡＡ１４）で精製して、表題化合物を生成した（２４ｇ、２５％収率）。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ１３）Ｒｔ＝１．２９５分、ｍ／ｚ１０９５．６（Ｍ＋Ｈ−１８）＋。
【０２９０】
ステップ２：ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−５−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）アセトアミド）−６−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−８ｂ−（２−（（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシホスホリル）オキシ）アセチル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−６−オキソヘキシル）カルバメートの合成。ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−５−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）アセトアミド）−６−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−６−オキソヘキシル）カルバメート（３ｇ、２．６９ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）中溶液に、１Ｈ−テトラゾール（１．８８８ｇ、２６．９ｍｍｏｌ）及びジ−ｔｅｒｔ−ブチルジエチルホスホラミダイト（８．０６ｇ、３２．３ｍｍｏｌ）を２５℃で加えた。反応物を２５℃で３．５時間撹拌し、次いで過酸化水素（２２４ｍｇ、１．９７６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を３０分間撹拌した。６つの追加バイアルを上に記載されているように設定した。すべての７つの反応物を合わせ、分取ＨＰＬＣ（方法ＡＡ７）で精製して、表題化合物を生成した（１０ｇ、３７％収率）。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ１３）Ｒｔ＝１．４２１分、ｍ／ｚ１３０５．７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２９１】
ステップ３：ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−５−（２−アミノアセトアミド）−６−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−８ｂ−（２−（（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシホスホリル）オキシ）アセチル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−６−オキソヘキシル）カルバメートの合成。ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−５−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）アセトアミド）−６−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−８ｂ−（２−（（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシホスホリル）オキシ）アセチル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−６−オキソヘキシル）カルバメート（２．５ｇ、１．９６９ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１０ｍＬ）中溶液に、ピペリジン（２ｍＬ、１．９６９ｍｍｏｌ）を２５℃で加えた。反応物を２５℃で１時間撹拌した。３つの追加のバイアルを上に記載されているように設定した。すべての４つの反応物を合わせ、濃縮して残渣を生成し、これを石油エーテル（３０ｍＬ）中で２時間撹拌した。固体を濾過によって収集し、減圧下で乾燥させて、表題化合物（７ｇ、７０％収率）を得た。反応物に対するＬＣＭＳ（ＥＳＩ＋）：ｍ／ｚ１０８３．５（Ｍ＋Ｈ）＋、Ｒｔ：１．１７５分。
【０２９２】
ステップ４：ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−５−（２−（２−ブロモアセトアミド）アセトアミド）−６−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−８ｂ−（２−（（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシホスホリル）オキシ）アセチル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−６−オキソヘキシル）カルバメートの合成。２−ブロモ酢酸（０．９２９ｇ、６．６８ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（３５ｍＬ）中溶液に、２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１，２−ジヒドロキノリン（１．６５３ｇ、６．６８ｍｍｏｌ）を２５℃で加えた。混合物を２５℃で１時間撹拌した。次いで、ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−５−（２−アミノアセトアミド）−６−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−８ｂ−（２−（（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシホスホリル）オキシ）アセチル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−６−オキソヘキシル）カルバメート（３．５ｇ、３．３４ｍｍｏｌ）を反応物に加えた。反応物を２５℃で２時間撹拌した。ＬＣＭＳは反応が完了したことを示した。反応物をジクロロメタン（１００ｍＬ）で希釈し、水性ＨＢｒ（１Ｍ、２×８０ｍＬ）、水性ＮａＨＣＯ３（６０ｍＬ）、及びブライン（６０ｍＬ）で洗浄した。有機層を脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮して表題化合物を生成し（２ｇ、５１％収率）、これを次のステップでそのまま使用した。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ１３）Ｒｔ＝１．３１８分、ｍ／ｚ１２０５．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２９３】
ステップ５：２−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−（（Ｓ）−６−アミノ−２−（２−（２−ブロモアセトアミド）アセトアミド）ヘキサンアミド）ベンジル）フェニル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−１，２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−８ｂＨ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−８ｂ−イル）−２−オキソエチルリン酸二水素塩の合成。ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−５−（２−（２−ブロモアセトアミド）アセトアミド）−６−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−８ｂ−（２−（（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシホスホリル）オキシ）アセチル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−６−オキソヘキシル）カルバメート（２ｇ、１．６６１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１０ｍＬ）中溶液に、トリフルオロ酢酸（５ｍＬ、６４．９ｍｍｏｌ）を２５℃で加えた。反応物を２５℃で４０分間撹拌し、次いで蒸発乾固して、残渣を生成し、これを分取ＨＰＬＣ（方法ＡＡ１７）で精製して、表題化合物を生成した（５５０ｍｇ、３２％収率）。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ１３）Ｒｔ＝２．３１３分、ｍ／ｚ９９３．１（Ｍ＋Ｈ）＋。1H  NMR  (ジメチルスルホキシド-d6,  400  MHz)  δ  ppm  0.90  (s,  3  H)  1.19  -  1.41  (m,  2  H)  1.43  -  1.62  (m,  7  H)  1.64  -  1.77  (m,  3  H)  1.84  (br  d,  J=14.55  Hz,  1  H)  1.95  -  2.07  (m,  1  H)  2.18  -  2.36  (m,  3  H)  2.65  -  2.78  (m,  3  H)  3.71  -  3.86  (m,  3  H)  3.89  (s,  2  H)  3.93  (s,  2  H)  4.20  (br  d,  J=9.48  Hz,  1  H)  4.33  -  4.41  (m,  1  H)  4.59  (br  dd,  J=18.41,  8.05  Hz,  1  H)  4.81  (br  dd,  J=18.52,  8.60  Hz,  1  H)  4.94  (d,  J=4.63  Hz,  1  H)  5.50  (s,  1  H)  5.54  -  5.76  (m,  1  H)  6.13  (s,  1  H)  6.29  (dd,  J=10.14,  1.32  Hz,  1  H)  6.95  (d,  J=7.72  Hz,  1  H)  7.15  -  7.28  (m,  4  H)  7.30  -  7.41  (m,  3  H)  7.51  (br  d,  J=7.94  Hz,  1  H)  7.72  (br  s,  3  H)  8.21  (br  d,  J=7.72  Hz,  1  H)  8.54  (t,  J=5.62  Hz,  1  H)  9.93  (br  d,  J=2.65  Hz,  1  H).
【０２９４】
［前駆体実施例２８］  （Ｓ）−４−（２−（２−ブロモアセトアミド）アセトアミド）−５−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−８ｂ−（２−（ホスホノオキシ）アセチル）−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−５−オキソペンタン酸
【０２９５】
【化５１】
2021504430.tif 000104
2021504430.tif 000105
【０２９６】
ステップ１：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−４−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）アセトアミド）−５−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−５−オキソペンタノエートの合成。前駆体実施例１の生成物（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−アミノベンジル）フェニル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−デカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−４（２Ｈ）−オン）（５００ｍｇ、０．８２６ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）中溶液に、（Ｓ）−２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）アセトアミド）−５−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−５−オキソペンタン酸（５００ｍｇ、１．０３６ｍｍｏｌ）、２，４，６−トリプロピル−１，３，５，２，４，６−トリオキサトリホスフィナン２，４，６−トリオキシド（１８００ｍｇ、２．８３ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．６８９ｍｌ、４．９４ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応混合物を２０℃で３０分間撹拌し、次いで前駆体実施例１の追加の生成物（５００ｍｇ、０．８２６ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を２５℃で１２時間撹拌した。１６回の同一の反応を実施し、反応物を合わせた。混合物を水（３Ｌ）に加え、酢酸エチル（３×５００ｍＬ）で抽出した。層を分離し、有機層（Ｎａ２ＳＯ４）で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、黄色の固体として表題化合物を生成した（１２ｇ、１１．２１ｍｍｏｌ、４８．０％収率）。ＴＬＣ（酢酸エチル）Ｒｆ０．４８。
【０２９７】
ステップ２：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−４−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）アセトアミド）−５−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−８ｂ−（２−（（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシホスホリル）オキシ）アセチル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−５−オキソペンタノエートの合成。（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）アセトアミド）−５−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−５−オキソペンタノエート（１ｇ、０．９３４ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（５ｍＬ）中溶液に、１Ｈ−テトラゾール（０．６５５ｇ、９．３４ｍｍｏｌ）及びジ−ｔｅｒｔ−ブチルジエチルホスホラミダイト（１．８６４ｇ、７．４８ｍｍｏｌ）を２５℃で加えた。反応物を２５℃で２．５時間撹拌し、次いで過酸化水素（０．５８３ｇ、５．１４ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。混合物を２５℃で１時間撹拌した。１９回の同一の反応を実施し、合わせた。混合物を水に加え、固体を濾過によって収集し、分取ＨＰＬＣで精製して、表題化合物を生成した（１０ｇ、８５％収率）。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ１８）Ｒｔ＝１．４３４分、ｍ／ｚ１２６２．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２９８】
ステップ３：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−４−（２−アミノアセトアミド）−５−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−８ｂ−（２−（（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシホスホリル）オキシ）アセチル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−５−オキソペンタノエートの合成。アセトニトリル（２０ｍＬ）中（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）アセトアミド）−５−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−８ｂ−（２−（（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシホスホリル）オキシ）アセチル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−５−オキソペンタノエート（１０ｇ、７．９２ｍｍｏｌ）に、ピペリジン（４ｍＬ、７．９２ｍｍｏｌ）を２５℃で加えた。混合物を２０分間撹拌し、濃縮し、石油エーテル（２Ｘ３００ｍＬ）で洗浄し、減圧下で乾燥させて、表題化合物を生成した（５ｇ、６１％収率）。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ１９）Ｒｔ＝１．６０４分、ｍ／ｚ１０４０．７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２９９】
ステップ４：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−４−（２−（２−ブロモアセトアミド）アセトアミド）−５−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−８ｂ−（２−（（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシホスホリル）オキシ）アセチル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−５−オキソペンタノエートの合成。２−ブロモ酢酸（０．１３４ｇ、０．９６１ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（４ｍＬ）中溶液に、Ｎ−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン（０．２３８ｇ、０．９６１ｍｍｏｌ）を２５℃で加えた。混合物を２５℃で１時間撹拌し、次いで（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（２−アミノアセトアミド）−５−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−８ｂ−（２−（（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシホスホリル）オキシ）アセチル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−５−オキソペンタノエート（０．５ｇ、０．４８１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を２５℃で２．５時間撹拌した。９回の同一の反応を実施し、合わせた。混合物を濃縮し、水中１Ｍ  ＨＢｒ（２００ｍＬ）、水性ＮａＨＣＯ３（２００ｍＬ）、ブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮して、表題化合物を生成した（５ｇ、９０％収率）．ＬＣＭＳ（方法ＡＡ１８）Ｒｔ＝１．３２分、ｍ／ｚ１１６２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３００】
ステップ５：（Ｓ）−４−（２−（２−ブロモアセトアミド）アセトアミド）−５−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−８ｂ−（２−（ホスホノオキシ）アセチル）−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−５−オキソペンタン酸の合成。ジクロロメタン（２０ｍＬ）中（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（２−（２−ブロモアセトアミド）アセトアミド）−５−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−８ｂ−（２−（（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシホスホリル）オキシ）アセチル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−５−オキソペンタノエート（３ｇ、２．５８ｍｍｏｌ）に、トリフルオロ酢酸（１０ｍＬ）を２５℃で加え、混合物を２時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、分取ＨＰＬＣ（方法ＡＡ２０）で精製して、表題化合物を生成した（１．０９ｇ、４２％収率）。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ４）Ｒｔ＝２．９１９分、ｍ／ｚ９９４．２（Ｍ＋Ｈ）＋。1H  NMR  (メタノール-d4,  400  MHz)  δ  =  7.45  (br  d,  J=7.9  Hz,  1H),  7.40  -  7.29  (m,  4H),  7.25  -  7.16  (m,  3H),  6.95  (br  d,  J=7.5  Hz,  1H),  6.38  -  6.30  (m,  2H),  5.66  -  5.57  (m,  1H),  5.55  -  5.44  (m,  1H),  5.08  -  4.94  (m,  2H),  4.81  -  4.72  (m,  1H),  4.49  (br  dd,  J=5.0,  9.0  Hz,  1H),  4.32  (br  d,  J=8.6  Hz,  1H),  3.96  -  3.90  (m,  5H),  2.79  -  2.60  (m,  1H),  2.48  -  2.32  (m,  4H),  2.28  (br  d,  J=13.3  Hz,  1H),  2.17  (dt,  J=7.6,  13.4  Hz,  1H),  2.04  -  1.92  (m,  1H),  1.85  -  1.72  (m,  3H),  1.70  -  1.53  (m,  4H),  1.01  (s,  3H).
【０３０１】
［前駆体実施例３６］  （Ｓ）−４−（２−（２−ブロモアセトアミド）アセトアミド）−５−（（３−（４−（（６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−６ｂ−フルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−８ｂ−（２−（ホスホノオキシ）アセチル）−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−５−オキソペンタン酸
【０３０２】
【化５２】
2021504430.tif 000106
【０３０３】
２−（（６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−アミノベンジル）フェニル）−６ｂ−フルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−１，２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−８ｂＨ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−８ｂ−イル）−２−オキソエチルリン酸二水素塩を使用して、前駆体実施例４と類似の経路を使用して調製した。
ＬＣＭＳ（方法ＡＡ１５）Ｒｔ＝１．６９０分、ｍ／ｚ９７６．１（Ｍ＋Ｈ）＋。1H  NMR  (メタノール-d4,  400  MHz)  δ  =  7.47  (br  d,  J=8.6  Hz,  1H),  7.44  -  7.36  (m,  4H),  7.28  -  7.19  (m,  3H),  6.97  (d,  J=7.6  Hz,  1H),  6.33  (dd,  J=1.7,  10.1  Hz,  1H),  6.14  (s,  1H),  5.53  (s,  1H),  5.07  -  4.96  (m,  2H),  4.83  -  4.73  (m,  1H),  4.50  (dd,  J=4.8,  9.0  Hz,  1H),  4.34  (br  d,  J=8.7  Hz,  1H),  4.00  -  3.91  (m,  6H),  2.83  -  2.71  (m,  1H),  2.68  -  2.54  (m,  1H),  2.45  (br  t,  J=7.6  Hz,  3H),  2.40  -  2.26  (m,  2H),  2.25  -  2.13  (m,  1H),  2.06  -  1.91  (m,  2H),  1.84  -  1.72  (m,  3H),  1.65  -  1.50  (m,  4H),  1.04  (s,  3H).
【０３０４】
［前駆体実施例３７］  ２−（（６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−（（Ｓ）−６−アミノ−２−（２−（２−ブロモアセトアミド）アセトアミド）ヘキサンアミド）ベンジル）フェニル）−６ｂ−フルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−１，２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−８ｂＨ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−８ｂ−イル）−２−オキソエチルリン酸二水素塩
【０３０５】
【化５３】
2021504430.tif 000107
【０３０６】
２−（（６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−アミノベンジル）フェニル）−６ｂ−フルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−１，２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−８ｂＨ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−８ｂ−イル）−２−オキソエチルリン酸二水素塩を使用して、前駆体実施例５と類似の経路を使用して調製した。
ＬＣＭＳ（方法ＡＡ１６）Ｒｔ＝２．４３７分、ｍ／ｚ９７５．２（Ｍ＋Ｈ）＋。1H  NMR  (ジメチルスルホキシド-d6,  400  MHz)  δ  =  9.94  (br  s,  1H),  8.54  (br  t,  J=5.4  Hz,  1H),  8.21  (br  d,  J=7.9  Hz,  1H),  7.75  (br  s,  3H),  7.51  (br  d,  J=7.3  Hz,  1H),  7.39  -  7.30  (m,  3H),  7.30  -  7.17  (m,  4H),  6.95  (br  d,  J=7.5  Hz,  1H),  6.22  (br  d,  J=10.1  Hz,  1H),  6.03  (s,  1H),  5.49  (s,  1H),  4.92  (br  s,  1H),  4.79  (br  dd,  J=8.3,  18.2  Hz,  1H),  4.58  (br  dd,  J=8.0,  18.4  Hz,  1H),  4.42  -  4.32  (m,  1H),  4.19  (br  d,  J=9.0  Hz,  1H),  3.94  (s,  2H),  3.89  (br  s,  2H),  3.86  -  3.71  (m,  3H),  2.74  (br  s,  2H),  2.33  (br  s,  1H),  2.23  -  1.96  (m,  2H),  1.83  (br  d,  J=10.6  Hz,  2H),  1.76  -  1.46  (m,  10H),  1.45  -  1.22  (m,  3H),  0.90  (s,  3H).
【０３０７】
［前駆体実施例４７］  （Ｓ）−５−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−６−アミノ−１−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−８ｂ−（２−（ホスホノオキシ）アセチル）−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソヘキサン−２−イル）アミノ）−３−ヒドロキシ−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−４−（２−ブロモアセトアミド）−５−オキソペンタン酸
【０３０８】
【化５４】
2021504430.tif 000108
2021504430.tif 000109
2021504430.tif 000110
2021504430.tif 000111
【０３０９】
ステップ１：（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−６−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−６−オキソヘキサンｅ−１，５−ジイル）ジカルバメートの合成。（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−６−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキサン酸（０．３９０ｇ、０．８３２ｍｍｏｌ）、前駆体実施例１の生成物（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−アミノベンジル）フェニル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−デカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−４（２Ｈ）−オン）（０．５０４ｇ、０．８３２ｍｍｏｌ）、１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム３−オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）（０．３８０ｇ、０．９９９ｍｍｏｌ）及び２，６−ジメチルピリジン（０．２９１ｍＬ、２．４９６ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（４ｍＬ）中の混合物を、周辺温度で３０時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈し、ＨＣｌの１Ｎ水溶液（５０ｍＬ）、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液（５０ｍＬ）及びブライン飽和溶液（５０ｍＬ）で洗浄した。有機相を脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。生成した残渣を、０〜７０％酢酸エチル／ヘプタンの勾配で溶出するクロマトグラフィー（シリカ）で精製して、表題化合物を生成した（０．７８０ｇ、８９％収率）。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ１７）：Ｒｔ＝１．１０分、ｍ／ｚ１０５６．９（Ｍ＋Ｈ）＋。1H  NMR  (ジメチルスルホキシド-d6,  400  MHz)  δ  9.87  (s,  1H),  7.85  (d,  J  =  7.5  Hz,  2H),  7.69  (dd,  J  =  7.6,  4.8  Hz,  2H),  7.52  (d,  J  =  7.9  Hz,  1H),  7.44  (d,  J  =  8.2  Hz,  1H),  7.41  -  7.24  (m,  7H),  7.24  -  7.12  (m,  4H),  6.88  (d,  J  =  7.6  Hz,  1H),  6.71  (s,  1H),  6.24  (dd,  J  =  10.1,  1.9  Hz,  1H),  6.09  (s,  1H),  5.61  (ddd,  J  =  48.9,  11.0,  6.6  Hz,  1H),  5.48  (d,  J  =  3.6  Hz,  1H),  5.41  (s,  1H),  5.06  (t,  J  =  5.9  Hz,  1H),  4.91  (d,  J  =  4.8  Hz,  1H),  4.47  (dd,  J  =  19.4,  6.3  Hz,  1H),  4.27  -  4.11  (m,  4H),  4.07  -  3.95  (m,  1H),  3.85  (s,  2H),  2.89  -  2.83  (m,  2H),  2.66  -  2.51  (m,  1H),  2.28  -  2.23  (m,  2H),  2.20  (dt,  J  =  12.2,  6.3  Hz,  1H),  2.01  (d,  J  =  13.9  Hz,  1H),  1.74  -  1.62  (m,  2H),  1.66  -  1.49  (m,  4H),  1.46  (s,  3H),  1.31  (s,  9H),  1.22  (d,  J  =  9.3  Hz,  1H),  0.83  (s,  3H).
【０３１０】
ステップ２：ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−５−アミノ−６−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−６−オキソヘキシル）カルバメートの合成。ジエチルアミン（０．５４０ｇ、７．３９ｍｍｏｌ）を、（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−６−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−６−オキソヘキサンｅ−１，５−ジイル）ジカルバメート（０．７８０ｇ、０．７３９ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）中の脱気した溶液に加えた。反応混合物を周辺温度で２時間撹拌し、この時点で溶媒を減圧下で除去した。生成した残渣をトルエン（３ｘ５０ｍＬ）で処理し、これを減圧下で除去して、できるだけ多くのジエチルアミンを追い出した。粗製の表題化合物を、さらに精製せずに直ちに使用した。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ１７）：Ｒｔ＝０．８６分、ｍ／ｚ８３４．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３１１】
ステップ３：ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−５−（（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）プロパンアミド）−６−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−６−オキソヘキシル）カルバメートの合成。（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）プロパン酸（０．２８３ｇ、０．７３９ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−５−アミノ−６−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−６−オキソヘキシル）カルバメート（０．６１６ｇ、０．７３９ｍｍｏｌ）、１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム３−オキシドヘキサフルオロホスフェート）（ＨＡＴＵ）（０．３３７ｇ、０．８８７ｍｍｏｌ）及び２，６−ジメチルピリジン（０．２５８ｍＬ、２．２１７ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（４ｍＬ）中混合物を０℃で０．５時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈し、ＨＣｌの１Ｎ水溶液（５０ｍＬ）、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液（５０ｍＬ）及びブライン飽和溶液（５０ｍＬ）で洗浄した。有機相を脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。生成した残渣を、０〜７０％酢酸エチル／ヘプタンの勾配で溶出するクロマトグラフィー（シリカ）で精製して、表題化合物を生成した（０．５００ｇ、５６％収率）。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ１７）：Ｒｔ＝１．１８分、ｍ／ｚ１１９９．２（Ｍ＋Ｈ）＋。1H  NMR  (ジメチルスルホキシド-d6,  500  MHz)  δ  9.84  (s,  1H),  7.95  (d,  J  =  8.0  Hz,  1H),  7.86  (d,  J  =  7.5  Hz,  2H),  7.70  (t,  J  =  7.1  Hz,  2H),  7.46  -  7.26  (m,  7H),  7.26  -  7.13  (m,  5H),  6.89  (d,  J  =  7.6  Hz,  1H),  6.67  (s,  1H),  6.27  (dd,  J  =  10.2,  1.9  Hz,  1H),  6.11  (s,  1H),  5.62  (dt,  J  =  48.6,  9.1  Hz,  1H),  5.50  (s,  1H),  5.41  (s,  1H),  5.08  (t,  J  =  5.9  Hz,  1H),  4.92  (d,  J  =  4.9  Hz,  1H),  4.48  (dd,  J  =  19.4,  5.8  Hz,  1H),  4.36  (d,  J  =  6.9  Hz,  1H),  4.33  -  4.07  (m,  5H),  3.84  (s,  2H),  3.44  (d,  J  =  6.1  Hz,  2H),  2.85  (q,  J  =  6.5  Hz,  2H),  2.68  -  2.53  (m,  1H),  2.32  -  2.16  (m,  2H),  2.02  (d,  J  =  13.7  Hz,  1H),  1.67  (d,  J  =  13.5  Hz,  3H),  1.60  -  1.48  (m,  1H),  1.47  (s,  3H),  1.31  (s,  10H),  1.25  -  1.16  (m,  1H),  1.05  (s,  9H),  0.84  (s,  3H).
【０３１２】
ステップ４：ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−５−（（Ｓ）−２−アミノ−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）プロパンアミド）−６−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−６−オキソヘキシル）カルバメートの合成。ジエチルアミン（０．３０５ｇ、４．１７ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−５−（（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）プロパンアミド）−６−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−６−オキソヘキシル）カルバメート（０．５００ｇ、０．４１７ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）中の脱気した溶液に加えた。反応混合物を周辺温度で２時間撹拌し、この時点で溶媒を減圧下で除去した。生成した残渣をトルエン（３ｘ５０ｍＬ）で処理し、これを減圧下で除去して、できるだけ多くのジエチルアミンを排除した。粗製の表題化合物をさらに精製せずに直ちに使用した。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ１７）：Ｒｔ＝０．９２分、ｍ／ｚ９７６．９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３１３】
ステップ５：（１０Ｓ，１３Ｓ，１６Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル１６−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−１３−（ｔｅｒｔ−ブトキシメチル）−１０−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）カルバモイル）−２，２−ジメチル−４，１２，１５−トリオキソ−３−オキサ−５，１１，１４−トリアザノナデカン−１９−オエートの合成。（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−５−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−５−オキソペンタン酸（０．１７７ｇ、０．４１７ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−５−（（Ｓ）−２−アミノ−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）プロパンアミド）−６−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−６−オキソヘキシル）カルバメート（０．４０７ｇ、０．４１７ｍｍｏｌ）、（１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム３−オキシドヘキサフルオロホスフェート）（ＨＡＴＵ）（０．１９０ｇ、０．５００ｍｍｏｌ）及び２，６−ジメチルピリジン（０．１４６ｍｌ、１．２５１ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（４ｍＬ）中混合物を０℃で０．５時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈し、ＨＣｌの１Ｍ水溶液（５０ｍＬ）、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液（５０ｍＬ）及びブライン飽和溶液（５０ｍＬ）で洗浄した。有機相を脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。生成した残渣を、０〜７０％酢酸エチル／ヘプタンの勾配で溶出するクロマトグラフィー（シリカ）で精製して、表題化合物を生成した（０．４５５ｇ、７９％収率）。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ１７）：Ｒｔ＝１．０３分、ｍ／ｚは観察されなかった。1H  NMR  (ジメチルスルホキシド-d6,  500  MHz)  δ  9.77  (s,  1H),  7.91  (s,  1H),  7.85  (d,  J  =  7.6  Hz,  3H),  7.77  (d,  J  =  7.7  Hz,  1H),  7.68  (t,  J  =  6.7  Hz,  2H),  7.58  (d,  J  =  8.0  Hz,  1H),  7.44  -  7.34  (m,  4H),  7.34  -  7.22  (m,  4H),  7.16  (dd,  J  =  22.5,  8.0  Hz,  3H),  6.87  (d,  J  =  7.6  Hz,  1H),  6.65  (s,  1H),  6.25  (dd,  J  =  10.1,  1.9  Hz,  1H),  6.09  (s,  1H),  5.70  -  5.50  (m,  1H),  5.48  (d,  J  =  3.8  Hz,  1H),  5.40  (s,  1H),  5.06  (t,  J  =  6.0  Hz,  1H),  4.90  (d,  J  =  4.7  Hz,  1H),  4.47  (dd,  J  =  19.4,  6.2  Hz,  1H),  4.29  (dt,  J  =  19.5,  6.5  Hz,  3H),  4.23  -  4.10  (m,  3H),  4.03  (d,  J  =  6.3  Hz,  1H),  3.84  (s,  2H),  3.53  (s,  0H),  3.52  -  3.36  (m,  1H),  2.84  -  2.78  (m,  2H),  2.67  -  2.50  (m,  1H),  2.22  (t,  J  =  8.4  Hz,  3H),  2.01  (d,  J  =  13.6  Hz,  1H),  1.88  (s,  1H),  1.80  -  1.58  (m,  6H),  1.56  -  1.48  (m,  1H),  1.46  (s,  3H),  1.34  (s,  9H),  1.29  (s,  9H),  1.20  (s,  1H),  1.00  (s,  9H),  0.93  (s,  1H),  0.82  (s,  3H).
【０３１４】
ステップ６：（１０Ｓ，１３Ｓ，１６Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル１６−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−１３−（ｔｅｒｔ−ブトキシメチル）−１０−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−８ｂ−（２−（（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシホスホリル）オキシ）アセチル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）カルバモイル）−２，２−ジメチル−４，１２，１５−トリオキソ−３−オキサ−５，１１，１４−トリアザノナデカン−１９−オエートの合成。（１０Ｓ，１３Ｓ，１６Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル１６−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−１３−（ｔｅｒｔ−ブトキシメチル）−１０−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）カルバモイル）−２，２−ジメチル−４，１２，１５−トリオキソ−３−オキサ−５，１１，１４−トリアザノナデカン−１９−オエート（０．４５２ｇ、０．３２６ｍｍｏｌ）及び１Ｈ−テトラゾール（０．１０５ｇ、１．５０２ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（１．５ｍＬ）中混合物をジ−ｔｅｒｔ−ブチルジエチルホスホラミダイト（０．２９１ｍＬ、１．０４５ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を周辺温度に対して４時間撹拌し、この時点でＨ２Ｏ２（５０重量％、０．３ｍＬ）の水溶液を加え、撹拌を１時間継続した。アセトニトリル及び１０ｍＭ水性酢酸アンモニウムの勾配で溶出する分取ＨＰＬＣの精製により、表題化合物が生成した（０．４５５ｇ、７９％収率）。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ１７）：Ｒｔ＝１．３５分、ｍ／ｚ１５７５．８（Ｍ＋Ｈ）＋。1H  NMR  (ジメチルスルホキシド-d6,  400  MHz)  δ  9.76  (s,  1H),  7.85  (d,  J  =  7.7  Hz,  3H),  7.77  (d,  J  =  7.7  Hz,  1H),  7.67  (t,  J  =  6.7  Hz,  2H),  7.58  (d,  J  =  8.0  Hz,  1H),  7.44  -  7.18  (m,  10H),  7.14  (t,  J  =  7.8  Hz,  1H),  6.88  (d,  J  =  7.5  Hz,  1H),  6.65  (s,  1H),  6.25  (dd,  J  =  10.1,  1.9  Hz,  1H),  6.09  (s,  1H),  5.70  -  5.48  (m,  3H),  4.98  -  4.87  (m,  2H),  4.61  (dd,  J  =  17.9,  9.3  Hz,  1H),  4.29  (dt,  J  =  19.4,  6.8  Hz,  2H),  4.19  (d,  J  =  7.0  Hz,  2H),  4.03  (d,  J  =  7.0  Hz,  1H),  3.84  (s,  2H),  3.54  -  3.32  (m,  1H),  2.82  (d,  J  =  6.5  Hz,  2H),  2.74  -  2.50  (m,  1H),  2.22  (t,  J  =  7.9  Hz,  3H),  2.03  (d,  J  =  13.1  Hz,  1H),  1.94  -  1.80  (m,  1H),  1.76  -  1.60  (m,  5H),  1.55  -  1.41  (m,  2H),  1.45  (s,  3H),  1.39  (s,  9H),  1.38  (s,  9H),  1.34  (s,  9H),  1.29  (s,  9H),  1.25  -  1.12  (m,  1H),  0.99  (s,  9H),  0.91  (s,  1H),  0.85  (s,  3H).
【０３１５】
ステップ７：（１０Ｓ，１３Ｓ，１６Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル１６−アミノ−１３−（ｔｅｒｔ−ブトキシメチル）−１０−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−８ｂ−（２−（（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシホスホリル）オキシ）アセチル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）カルバモイル）−２，２−ジメチル−４，１２，１５−トリオキソ−３−オキサ−５，１１，１４−トリアザノナデカン−１９−オエートの合成。ジエチルアミン（０．１００ｇ、１．３６４ｍｍｏｌ）を、（１０Ｓ，１３Ｓ，１６Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル１６−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−１３−（ｔｅｒｔ−ブトキシメチル）−１０−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−８ｂ−（２−（（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシホスホリル）オキシ）アセチル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）カルバモイル）−２，２−ジメチル−４，１２，１５−トリオキソ−３−オキサ−５，１１，１４−トリアザノナデカン−１９−オエート（０．２１５ｇ、０．１３６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（８ｍＬ）中脱気した溶液に加えた。反応混合物を周辺温度で２時間撹拌し、この時点で溶媒を減圧下で除去した。生成した残渣をトルエン（３×５０ｍＬ）で処理し、これを減圧下で除去して、できるだけ多くのジエチルアミンを追い出した。粗製の表題化合物をさらに精製せずに直ちに使用した。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ１７）：Ｒｔ＝１．１１分、ｍ／ｚ１３５４．８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３１６】
ステップ８：（１０Ｓ，１３Ｓ，１６Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル１６−（２−ブロモアセトアミド）−１３−（ｔｅｒｔ−ブトキシメチル）−１０−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−８ｂ−（２−（（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシホスホリル）オキシ）アセチル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）カルバモイル）−２，２−ジメチル−４，１２，１５−トリオキソ−３−オキサ−５，１１，１４−トリアザノナデカン−１９−オエートの合成。ブロモ酢酸（０．０３４７ｇ、０．２５０ｍｍｏｌ）及びエチル２−エトキシキノリン−１（２Ｈ）−カルボキシレート（０．０７７３６ｇ、０．２９８ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（０．２ｍＬ）中混合物を周辺温度で３０分間撹拌し、この時点で（１０Ｓ，１３Ｓ，１６Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル１６−アミノ−１３−（ｔｅｒｔ−ブトキシメチル）−１０−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−８ｂ−（２−（（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシホスホリル）オキシ）アセチル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）カルバモイル）−２，２−ジメチル−４，１２，１５−トリオキソ−３−オキサ−５，１１，１４−トリアザノナデカン−１９−オエート（０．１３０ｇ、０．０９６ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（０．３ｍＬ）中溶液をブロモ酢酸溶液に加えた。反応物を周辺温度で２０分間撹拌した。アセトニトリル及び水中０．１％（ｖ／ｖ）トリフルオロ酢酸の勾配で溶出する分取ＨＰＬＣでの精製により、表題化合物を生成した（０．１０３ｇ、７３％収率）。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ１７）：Ｒｔ＝１．２０分、ｍ／ｚ１４７４．４、１４７６．５（Ｍ＋Ｈ）＋。1H  NMR  (ジメチルスルホキシド-d6,  400  MHz)  δ  9.77  (s,  1H),  8.46  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H),  7.94  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H),  7.85  (d,  J  =  8.0  Hz,  1H),  7.41  (d,  J  =  8.3  Hz,  1H),  7.35  (s,  1H),  7.31  (d,  J  =  8.0  Hz,  2H),  7.22  (dd,  J  =  14.0,  9.0  Hz,  3H),  7.15  (t,  J  =  7.9  Hz,  1H),  6.88  (d,  J  =  7.5  Hz,  1H),  6.66  (s,  1H),  6.26  (dd,  J  =  10.2,  1.9  Hz,  1H),  6.09  (s,  1H),  5.58  (d,  J  =  51.4  Hz,  3H),  4.98  -  4.87  (m,  2H),  4.61  (dd,  J  =  18.0,  9.2  Hz,  1H),  4.33  (s,  1H),  4.17  (s,  1H),  3.93  -  3.86  (m,  2H),  3.85  (s,  2H),  3.63  (s,  10H),  2.87  -  2.79  (m,  2H),  2.28  -  2.16  (m,  4H),  2.04  (d,  J  =  13.2  Hz,  1H),  1.87  (s,  1H),  1.69  (s,  3H),  1.63  (d,  J  =  13.6  Hz,  2H),  1.46  (s,  3H),  1.39  (s,  9H),  1.38  (s,  9H),  1.33  (s,  9H),  1.30  (s,  9H),  1.19  (d,  J  =  9.7  Hz,  1H),  1.02  (s,  9H),  0.85  (s,  3H).
【０３１７】
ステップ９：（Ｓ）−５−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−６−アミノ−１−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−８ｂ−（２−（ホスホノオキシ）アセチル）−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）アミノ）−１−オキソヘキサン−２−イル）アミノ）−３−ヒドロキシ−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−４−（２−ブロモアセトアミド）−５−オキソペンタン酸の合成。トリフルオロ酢酸（２ｍＬ、０．０６８ｍｍｏｌ）を、（１０Ｓ，１３Ｓ，１６Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル１６−（２−ブロモアセトアミド）−１３−（ｔｅｒｔ−ブトキシメチル）−１０−（（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−８ｂ−（２−（（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシホスホリル）オキシ）アセチル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）カルバモイル）−２，２−ジメチル−４，１２，１５−トリオキソ−３−オキサ−５，１１，１４−トリアザノナデカン−１９−オエート（０．１００ｇ、０．０６８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２ｍＬ）中０℃溶液に加えた。反応物を０℃で１０分間撹拌し、この時点で氷浴を除去し、撹拌を周辺温度で追加の９０分間継続した。アセトニトリル及び水中０．１％（ｖ／ｖ）トリフルオロ酢酸の勾配で溶出する分取ＨＰＬＣでの精製により、表題化合物を生成した（０．０５６ｇ、７２％収率）。ＬＣＭＳ（方法ＡＡ１７）主要アセタール異性体：Ｒｔ＝０．７５分、ｍ／ｚ１１４９．７、１１５１．８（Ｍ＋Ｈ）＋；微量のアセタール異性体Ｒｔ＝０．７８分、ｍ／ｚ１１４９．７、１１５１．７（Ｍ＋Ｈ＋）。1H  NMR  (ジメチルスルホキシド-d6,  500  MHz)  δ  9.70  (s,  1H),  8.61  (d,  J  =  7.7  Hz,  1H),  8.13  (d,  J  =  7.2  Hz,  1H),  8.06  (d,  J  =  7.7  Hz,  1H),  7.81  (s,  3H),  7.51  (d,  J  =  8.3  Hz,  1H),  7.35  (d,  J  =  7.9  Hz,  2H),  7.23  (t,  J  =  8.7  Hz,  3H),  7.18  (t,  J  =  7.8  Hz,  1H),  7.13  (s,  1H),  6.97  (d,  J  =  7.6  Hz,  1H),  6.27  (dd,  J  =  10.1,  1.9  Hz,  1H),  6.11  (s,  1H),  5.77  -  5.53  (m,  1H),  5.43  (s,  1H),  4.92  (d,  J  =  4.7  Hz,  1H),  4.70  (dd,  J  =  19.0,  8.1  Hz,  1H),  4.53  (dd,  J  =  19.0,  7.9  Hz,  1H),  4.27  (q,  J  =  6.6  Hz,  3H),  4.19  (d,  J  =  9.6  Hz,  1H),  3.96  -  3.86  (m,  4H),  3.58  (qd,  J  =  10.9,  5.9  Hz,  2H),  2.77  -  2.52  (m,  3H),  2.68  -  2.54  (m,  0H),  2.49  (s,  2H),  2.23  (q,  J  =  8.3  Hz,  3H),  2.00  (d,  J  =  13.2  Hz,  1H),  1.93  -  1.85  (m,  2H),  1.77  -  1.69  (m,  1H),  1.72  -  1.65  (m,  3H),  1.57  (s,  1H),  1.49  (s,  4H),  1.54  -  1.44  (m,  2H),  1.30  (s,  2H),  0.88  (s,  3H).
【０３１８】
［前駆体実施例４８］  （Ｓ）−６−アミノ−２−（（Ｓ）−２−（２−（２−ブロモアセトアミド）アセトアミド）−３−ヒドロキシプロパンアミド）−Ｎ−（３−（４−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−８ｂ−（２−ヒドロキシアセチル）−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イル）ベンジル）フェニル）ヘキサンアミド
【０３１９】
【化５５】
2021504430.tif 000112
【０３２０】
２−（（２Ｓ，６ａＳ，６ｂＲ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）−１０−（４−（３−アミノベンジル）フェニル）−２，６ｂ−ジフルオロ−７−ヒドロキシ−６ａ，８ａ−ジメチル−４−オキソ−１，２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−８ｂＨ−ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−８ｂ−イル）−２−オキソエチルリン酸二水素塩を使用して、前駆体実施例４７と類似の経路を使用して調製した。
ＬＣＭＳ（方法ＡＡ１７）Ｒｔ＝０．７９分、ｍ／ｚ９９８．７、１０００．９（Ｍ＋Ｈ）＋。1H  NMR  (ジメチルスルホキシド-d6,  500  MHz)  δ  9.66  (s,  1H),  8.55  (t,  J  =  5.7  Hz,  1H),  8.16  (dd,  J  =  12.8,  7.7  Hz,  2H),  7.62  (s,  3H),  7.48  -  7.40  (m,  2H),  7.40  -  7.32  (m,  2H),  7.31  -  7.23  (m,  3H),  7.23  -  7.17  (m,  2H),  6.92  (d,  J  =  7.6  Hz,  1H),  6.54  (s,  1H),  6.30  (dd,  J  =  10.2,  1.9  Hz,  1H),  6.13  (s,  1H),  5.66  (dt,  J  =  48.7,  10.2  Hz,  1H),  5.54  (dd,  J  =  4.5,  1.7  Hz,  1H),  5.45  (s,  1H),  5.21  (s,  1H),  5.13  (s,  1H),  4.95  (d,  J  =  4.8  Hz,  1H),  4.51  (d,  J  =  19.4  Hz,  1H),  4.36  (td,  J  =  12.8,  7.2  Hz,  2H),  4.20  (d,  J  =  19.2  Hz,  1H),  3.92  (d,  J  =  1.7  Hz,  2H),  3.89  (d,  J  =  2.4  Hz,  2H),  3.82  (qd,  J  =  16.7,  5.7  Hz,  2H),  3.65  (t,  J  =  8.2  Hz,  1H),  3.58  (dd,  J  =  10.5,  5.9  Hz,  1H),  2.78  (q,  J  =  6.7  Hz,  2H),  2.73  -  2.58  (m,  1H),  2.35  -  2.28  (m,  1H),  2.24  (td,  J  =  12.3,  6.8  Hz,  1H),  2.04  (d,  J  =  13.3  Hz,  1H),  1.85  -  1.50  (m,  4H),  1.50  (s,  3H),  1.36  (dq,  J  =  16.0,  8.3  Hz,  2H),  0.87  (s,  3H).
【０３２１】
［ＡＤＣ実施例１］  マレイミド由来生成物とのコンジュゲーション（一般的方法）
１．マレイミドとのシステインコンジュゲーションプロトコル
抗体の約１０ｍｇ／ｍＬ溶液を、リン酸緩衝液生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４並びにＰＢＳ（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｏｎｄ−Ｂｒｅａｋｅｒ、ｃａｔ．７７７２０）中の１０ｍＭ  ＴＣＥＰ（トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン）溶液中に調製した。次いで、抗ＣＤ４０抗体（表３）をおよそ２モル当量（ｅｑ）の１０ｍＭ  ＴＣＥＰを添加することにより部分的に還元し、素早く混合し、３７℃で６０分間インキュベートした。次いで、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を、全ＤＭＳＯ１５％になるまでの十分な量で部分的に還元された抗体に加えた。次いで、コンジュゲーションのため、８モル当量（ｅｑ）の実施例６〜１３のマレイミド生成物（ＰＢＳ中１０ｍＭ）を加え、部分的に還元された抗体と共に室温で３０分間インキュベートした。次いで、事前にリン酸緩衝液生理食塩水緩衝液、ｐＨ７．４で平衡化しておいたＮＡＰ−５脱塩カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ｃａｔ．１７−０８５３−０２）を使用して過剰のマレイミド生成物及びＤＭＳＯを除去した。次いで、脱塩した試料をサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）、及び換算質量分析法で分析した。
【０３２２】
２．チオスクシンイミド加水分解
ＡＤＣのチオスクシンイミド環の加水分解を、高いｐＨでＡＤＣをインキュベートすることにより達成した。簡単に説明すると、０．７Ｍアルギニン、ｐＨ９．０溶液を調製し、リン酸緩衝液生理食塩水（ＰＢＳ）緩衝液中の各ＡＤＣに加えて、全アルギニン濃度を５０ｍＭ（ｐＨ約８．９）にした。次いで、材料を２５℃で７２時間インキュベートした。次いで、換算質量分析法によりスクシンイミド環の加水分解を確認し、この後、０．１Ｍ酢酸溶液を全酢酸１２．５ｍＭ（ｐＨ約７．１）まで添加することにより、加水分解をクエンチした。
【０３２３】
表１１は、この一般的方法に従い合成したＡＤＣコンジュゲートを提供している（例示的な数のＡＤＣコンジュゲートに対して凝集データが提供された）。表１２は、この一般的方法に従い合成することができるＡＤＣコンジュゲートを提供している。変数（Ａ）は抗ＣＤ４０抗体に対応している；ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０である。ヒト抗ＣＤ４０抗体はＡｂ１０２（表３）に対応している。マウス抗ＣＤ４０抗体は、参照により本明細書に組み込まれるＵＳ２０１６０３４７８５０に記載の抗体１３８に対応している。Ｐ＝前駆体実施例である。抗体１３８は、Ａｂ１０２と類似の特徴を有し、例えば、抗体１３８はＡｂ１０２のような実質的なアゴニスト活性の無いアンタゴニスト抗体である。よって、抗体１３８はマウスモデルにおけるＡｂ１０２活性の代表的なものである。
【０３２４】
【化５６】
2021504430.tif 000113
【０３２５】
【表１０】
2021504430.tif 000114
2021504430.tif 000115
2021504430.tif 000116
2021504430.tif 000117
【０３２６】
【表１１】
2021504430.tif 000118
2021504430.tif 000119
2021504430.tif 000120
【０３２７】
［ＡＤＶ実施例２］  前駆体ブロモアセトアミド生成物とのコンジュゲーション（一般的方法）
１．一般的手順
所望の抗体の約５〜２０ｍｇ／ｍＬ溶液をリン酸緩衝液生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ６〜７．４中に調製した。選択した還元剤、例えば、ＴＣＥＰ（トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン）などを希釈するか、又はＨ２Ｏ、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）若しくはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）などの溶媒に溶解して、１〜２５ｍＭの間の濃度範囲の溶液を得た。次いで、抗ＣＤ４０抗体を、約２〜３．５当量の還元剤の添加により部分的に還元し、素早く混合し、０〜４℃で終夜インキュベートした。次いで、トリス緩衝液、ｐＨ８〜８．５（２０〜５０ｍＭ）を加え、これに続いてジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）又はジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）（全部で１５％未満）中の実施例４〜５のブロモアセトアミド生成物を加え、混合物を室温で２〜３時間インキュベートした。次いで、過剰のブロモアセトアミド生成物及び有機溶媒を精製で除去した。次いで、精製したＡＤＣ試料をサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）及び換算質量分析法で分析した。
【０３２８】
２．前駆体実施例４のヒトＡＤＣの調製
【０３２９】
【化５７】
2021504430.tif 000121
【０３３０】
濃度２０ｍｇ／ｍＬの１００ｍｇのヒト抗ＣＤ４０抗体（Ａｂ１０２、表３）を、ジフェニルホスフィノ酢酸（２．９〜３．０当量（ｅｑ））で、０℃で終夜還元した。次いで、部分的に還元されたＣＤ４０  Ａｂを、室温で３時間、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中で実施例４ブロモアセトアミド生成物（１０当量（ｅｑ））にコンジュゲートした。複数のＮＡＰ２５脱塩カラムを使用して、コンジュゲーション混合物を、最初に２０ｍＭトリス緩衝液、５０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．８へと緩衝液交換をした。脱塩したＡＤＣ溶液を、ＡＥＣで精製して、ＡＤＣのＤＡＲ２（ｎ＝２）及びＤＡＲ４（ｎ＝４）構成成分を生成した（薬物連結した分子の数は還元された鎖間ジスルフィド結合の数に依存する）。
【０３３１】
ＡＥＣ条件
以下のＡＥＣ条件を使用した：カラムはＰｒｏｐａｃ（商標）ＷＡＸ−１０、４×２５０ｍｍ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ｃａｔ．０５４９９９）であり、カラム温度は３７℃であった。波長は２８０ｎｍであり、作動時間は１８分であり、注入量は２０μｇであり、流量は１．０ｍＬ／分間であった。移動相Ａ：２０ｍＭ  ＭＥＳ、ｐＨ６．７、移動相Ｂ：２０ｍＭ  ＭＥＳ、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ６．７。ＤＡＲ２ＡＤＣは、凝集０％で保持時間７．７０分を有し、ＤＡＲ４は、凝集０％で保持時間１０．８８分を有した。
【０３３２】
【表１２】
2021504430.tif 000122
【０３３３】
質量分析
ＭＳ分析前にＡＤＣ試料を完全に還元した。使用した質量分析法条件は以下の通りである：ＨＰＬＣカラム＝Ｗａｔｅｒ  ＢＥＨ３００  Ｃ４、２．１×５０ｍｍ、３．５ミクロン粒径；移動相Ａ：水中０．１％ギ酸；移動相Ｂ：アセトニトリル中０．１％ギ酸；流量：４５０μＬ／分；勾配：０〜０．６分、５％Ｂ、０．６〜１．１分５〜９０％Ｂ、１．１〜２．２分９０％Ｂ、２．２〜２．４分、９０〜５％Ｂ、２．４〜３．５分５％Ｂ；カラム温度：４０℃；ＭＳイオン化供給源：ＥＳＩ
【０３３４】
実施例４−コンジュゲート型（ヒト）のデコンボリューション処理した質量分析データが図１Ａに示されている（ｎ＝４）。２５１４０．７３ピークは、１つの薬物リンカー分子をコンジュゲートした軽鎖（配列番号２）に対応している。５０９１７．５９ピークは、１つの薬物リンカー分子をコンジュゲートした重鎖（配列番号１）に対応している。
【０３３５】
３．前駆体実施例２８のマウス及びヒトＡＤＣの調製
【０３３６】
【化５８】
2021504430.tif 000123
【０３３７】
マウスＡＤＣ
実施例２８−コンジュゲート型（マウス）ＡＤＣを、マウス抗ＣＤ４０抗体（抗体１３８）を使用して、実施例４ＡＤＣに従い合成した。ＤＡＲ２  ＡＤＣは、０％凝集で、保持時間７．１７分を有し、ＤＡＲ４は、０％凝集で保持時間１０．５０分を有した。
【０３３８】
ヒトＡＤＣ
約２０ｍｇ／ｍＬの濃度での４１０ｍｇのヒト抗ＣＤ４０抗体（Ａｂ１０２、表３）を、ジフェニルホスフィノ酢酸（２．７当量）で、約４℃で終夜還元した。２％（ｖ／ｖ）の２Ｍトリス緩衝液（ｐＨ８．５）を部分的に還元された抗体に加え、これに続いて１０当量のジメチルスルホキシド中前駆体実施例２８生成物を加えた。室温で３時間のコンジュゲーション後、ＮＡＰ２５脱塩カラムを使用して、混合物を２０ｍＭトリス、５０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ８．０へと緩衝液交換をし、ＡＥＣでさらに精製して、ＡＤＣのＤＡＲ２（ｎ＝２）及びＤＡＲ４（ｎ＝４）構成成分を生成した（薬物連結した分子の数は還元された鎖間ジスルフィド結合の数に依存する）。装置：ＡＫＴＡ  ｐｕｒｅ；カラム：４Ｘ  Ｈｉｔｒａｐ  Ｑ  ＨＰ  ５ｍＬ；移動相：２０ｍＭトリス緩衝液に対してＡ、ｐＨ８．０；２０ｍＭトリス緩衝液に対してＢ、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ８．０；勾配：Ｂ、４５ＣＶにわたり１０％〜４０％；流量：５ｍＬ／分；波長：２８０＆２６０ｎｍ。
【０３３９】
ＡＥＣ条件
ＰｒｏＰａｃＴＭＳＡＸ−１０、４×２５０ｍｍ、１０μｍ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｃａｔ  ＃０５４９９７）室温；波長＝２８０ｎｍ；作動時間＝２０分間；注入量＝約２０μｇ；流量＝１．０ｍＬ／分間；移動相Ａ：２０ｍＭ  トリス、ｐＨ８．０；移動相Ｂ：２０ｍＭ  トリス、１Ｍ  ＮａＣｌ、ｐＨ８．０。
【０３４０】
【表１３】
2021504430.tif 000124
【０３４１】
実施例２８−コンジュゲート型（ヒト）のＡＥＣデータが図１Ｂ（ｎ＝２）及び図１Ｄ（ｎ＝４）に示されており、保持時間はそれぞれ０％凝集で約７．５分間であり、０％凝集で約１３分間である。
【０３４２】
質量分析
ＡＤＣ試料はＭＳ分析前に完全に還元した。使用した質量分析法条件は以下の通り：ＨＰＬＣカラム＝Ｗａｔｅｒ  ＢＥＨ３００  Ｃ４、２．１×５０ｍｍ、３．５ミクロン粒径；移動相Ａ：水中０．１％ギ酸；移動相Ｂ：アセトニトリル中０．１％ギ酸；流量：４５０μＬ／分；勾配：０〜０．６分、５％Ｂ、０．６〜１．１分５〜９０％Ｂ、１．１〜２．２分９０％Ｂ、２．２〜２．４分、９０〜５％Ｂ、２．４〜３．５分５％Ｂ；カラム温度：４０℃；ＭＳイオン化源：ＥＳＩ。
【０３４３】
実施例２８−コンジュゲート型（ヒト）のデコンボリューション処理した質量分析データが図１Ｃ（ｎ＝２）及び図１Ｅ（ｎ＝４）に示されている。
【０３４４】
図１Ｃ（ｎ＝２）に関して、２５１７６．７２ピークは、１つの薬物リンカー分子をコンジュゲートした軽鎖（配列番号２）に対応する。５０９５４．６３ピークは１つの薬物リンカー分子をコンジュゲートした重鎖（配列番号１）に対応する。
【０３４５】
図１Ｅ（ｎ＝４）に関して、２５１７６．８８ピークは、１つの薬物リンカー分子をコンジュゲートした軽鎖（配列番号２）に対応する。５０９５４．８０ピークは、１つの薬物リンカー分子をコンジュゲートした重鎖（配列番号１）に対応する。
４．一般的手順によるＡＤＣ並びに実施例４及び２８のＡＤＣの調製
表１４Ａは、この一般的方法に従い合成したＡＤＣコンジュゲートを提供し、これらはＡＤＣコンジュゲート集団の画分から試験された（ＤＡＲ値が提供されている；ＡＤＣの混合物を含む集団、例えば、ｎ＝２、４、及び／又は６の混合物；凝集データも提供されている）。表１４Ｂは、前駆体実施例１４Ａ及び表１０に列挙された様々な前駆体のブロモアセトアミド生成物から、上記一般的な方法に従い合成され得るＡＤＣコンジュゲートを提供している。変数（Ａ）は抗ＣＤ４０抗体（ヒト又はマウス）に対応する；ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０である。ヒト抗ＣＤ４０抗体はＡｂ１０２（表３）に対応する。マウス抗ＣＤ４０抗体は、参照により本明細書に組み込まれるＵＳ２０１６０３４７８５０に記載の抗体１３８に対応する。Ｐ＝前駆体実施例である。抗体１３８はＡｂ１０２と類似の特徴を有し、例えば、抗体１３８はＡｂ１０２のように実質的なアゴニスト活性の無いアンタゴニスト抗体である。よって、抗体１３８はマウスモデルにおいてＡｂ１０２活性の代表的なものである。
【０３４６】
【化５９】
2021504430.tif 000125
【０３４７】
【表１４】
2021504430.tif 000126
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【０３４８】
【表１５】
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【０３４９】
生物学的アッセイ
【０３５０】
【表１６】
2021504430.tif 000141
【０３５１】
［実施例Ａ］  ヒト及びマウスのＣＤ４０  ＧＲＥリポーター細胞株の生成
親細胞株を作り出すため、２ｍＬの完全成長培地（ＲＰＭＩ、１０％ＦＢＳ、１％Ｌ−グルタミン、１％Ｎａピルベート及び１％ＭＥＭ  ＮＥＡＡ）を有する６ウェルシャーレ（Ｃｏｓｔａｒ：３５１６）に、ＨＥＫ２９３細胞を、１ウェル当たり２５０，０００個の細胞で３７℃、５％ＣＯ２で２４時間播種した。翌日、３μｇのｐＧＬ４．３６［Ｌｕｃ２Ｐ／ＭＭＴＶ／Ｈｙｇｒｏ］（Ｐｒｏｍｅｇａ：Ｅ３１６）及び３μｌのＰＬＵＳ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ：１０９６４−０２１）を２４４μＬのＯｐｔｉ−ＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ：３１９８５−０７０）に入れて希釈し、室温で１５分間インキュベートした。ｐＧＬ４．３６［ｌｕｃ２Ｐ／ＭＭＴＶ／Ｈｙｇｒｏ］ベクターは、いくつかの核内受容体、例えば、グルココルチコイド受容体及びアンドロゲン受容体などの活性化に応答してルシフェラーゼレポーター遺伝子ｌｕｃ２Ｐの転写を促進するＭＭＴＶ  ＬＴＲ（Ｍｕｒｉｎｅ  Ｍａｍｍａｒｙ  Ｔｕｍｏｒ  Ｖｉｒｕｓ  Ｌｏｎｇ  Ｔｅｒｍｉｎａｌ  Ｒｅｐｅａｔ）を含有する。インキュベーション後、希釈されたＤＮＡ溶液を、１：１リポフェクタミンＬＴＸ溶液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ：９４７５６）（１３．２μｌ＋２５６．８μｌのＯｐｔｉ−ＭＥＭ）と共に予備インキュベートし、室温で２５分間インキュベートして、ＤＮＡ−リポフェクタミンＬＴＸ複合体を形成した。インキュベーション後、５００μｌのＤＮＡ−リポフェクタミン複合体を、細胞を含有するウェルに直接加えた。ＨＥＫ２９３細胞を３７℃、５％Ｃ０２で２４時間形質移入した。インキュベーション後、細胞を３ｍＬのリン酸緩衝液生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、２週間の間、１００μｇ／ｍＬのハイグロマイシンＢ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ：１０６８７−０１０）を含有する完全成長培地で選択した。「ＨＥＫ２９３ＧＲＥｐＧＬ４．３６［Ｌｕｃ２Ｐ／ＭＭＴＶ／Ｈｙｇｒｏ］」細胞を生成した。
【０３５２】
マウスＣＤ４０形質移入した細胞株を作り出すために、２ｍＬの完全成長培地（ＲＰＭＩ、１０％ＦＢＳ、１％Ｌ−グルタミン、１％Ｎａ  ピルベート及び１％ＭＥＭ  ＮＥＡＡ）を有する６ウェルシャーレ（Ｃｏｓｔａｒ：３５１６）に、ＨＥＫ２９３細胞を、１ウェル当たり２５０，０００個の細胞で、３７°、５％Ｃ０２で２４時間播種した。翌日、３μＬのＦｕＧＥＮＥ６  Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ：Ｅ２３１１）を９６μＬの非補充ＲＰＭＩ培地に入れて希釈し、室温で５分間インキュベートした。インキュベーション後、１μｇのＮＥＦ３９  ｍｕＣＤ４０  ＨＡ  ＩＣＤ４（ＰＤＬ／ＦＡＣＥＴ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）を形質移入混合物に加え、室温で３０分間インキュベートした。インキュベーション後、希釈したＤＮＡ溶液は、細胞を１ウェル当たり１００μＬ含有するウェルに滴下添加した。ＨＥＫ２９３細胞を３７°、５％Ｃ０２で２４時間形質移入した。インキュベーション後、細胞を３ｍＬのＰＢＳで洗浄し、２週間の間、５００μｇ／ｍＬのＧ４１８（Ｇｉｂｃｏ：１０１３１−０２７）を含有する完全成長培地で選択した。生成した細胞株は「ｍＣＤ４０＿ＨＥＫ２９３」と指定した。
【０３５３】
マウスＣＤ４０  ＧＲＥリポーター細胞株を作り出すために、２ｍＬの完全成長培地（ＲＰＭＩ，１０％ＦＢＳ、１％Ｌ−グルタミン、１％Ｎａ  ピルベート及び１％ＭＥＭ  ＮＥＡＡ）を有する６ウェルシャーレ（Ｃｏｓｔａｒ：３５１６）に、ｍＣＤ４０で安定的に形質移入したＨＥＫ２９３細胞を、１ウェル当たり２５０，０００個の細胞で、３７°、５％Ｃ０２で２４時間播種した。翌日、３μｇのｐＧＬ４．３６［Ｌｕｃ２Ｐ／ＭＭＴＶ／Ｈｙｇｒｏ］（Ｐｒｏｍｅｇａ：Ｅ３１６）及び３μＬのＰＬＵＳ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ：１０９６４−０２１）を、２４４μＬのＯｐｔｉ−ＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ：３１９８５−０７０）に入れて希釈し、室温で１５分間インキュベートした。インキュベーション後、希釈したＤＮＡ溶液を、１：１リポフェクタミンＬＴＸ溶液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ：９４７５６）（１３．２μＬ＋２５６．８μＬのＯｐｔｉ−ＭＥＭ）と共に予備インキュベートし、室温で２５分間インキュベートして、ＤＮＡ−リポフェクタミンＬＴＸ複合体を形成した。インキュベーション後、５００μＬのＤＮＡ−リポフェクタミン複合体を、細胞を含有するウェルに直接加えた。ＨＥＫ２９３細胞を３７°、５％Ｃ０２で２４時間形質移入した。インキュベーション後、細胞を３ｍＬのＰＢＳで洗浄し、２週間の間、１００μｇ／ｍＬのハイグロマイシンＢ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ：１０６８７−０１０）及び５００μｇ／ｍＬのＧ４１８（Ｇｉｂｃｏ：１０１３１−０２７）を含有する完全成長培地で選択した。生成した細胞株は「ｍＣＤ４０＿ＨＥＫ２９３ＧＲＥｐＧＬ４．３６［Ｌｕｃ２Ｐ／ＭＭＴＶ／Ｈｙｇｒｏ］」と指定した。
【０３５４】
ヒトＣＤ４０  ＧＲＥリポーター細胞株を作り出すために、１ｍＬの完全成長培地（ＲＰＭＩ，１０％ＦＢＳ、１％Ｌ−グルタミン、１％Ｎａ  ピルベート及び１％ＭＥＭ  ＮＥＡＡ）を有する６ウェルシャーレ（Ｃｏｓｔａｒ：３５１６）に、ＨＥＫ２９３  ｐＧＬ４．３６［Ｌｕｃ２Ｐ／ＭＭＴＶ／Ｈｙｇｒｏ］細胞を、１ウェル当たり２５０，０００個の細胞で播種した。次いで、３μｇのヒトＣＤ４０  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ  １（Ｍｙｃ−ＤＤＫ−タグ付き）ＤＮＡ（Ｏｒｉｇｅｎｅ  Ｃａｔ＃ＲＣ２０１９７７）及び３μＬのＰＬＵＳ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ：１０９６４−０２１）を、５００μＬのＯｐｔｉ−ＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ：３１９８５−０７０）に入れて希釈した。ＤＮＡ溶液を、１：１リポフェクタミンＬＴＸ溶液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ：９４７５６）（１１μＬ＋５００μＬＯｐｔｉ−ＭＥＭ）共に予備インキュベートし、室温で１５分間インキュベートして、ＤＮＡ−リポフェクタミンＬＴＸ複合体を形成した。インキュベーション後、１，０００μＬのＤＮＡ−リポフェクタミン複合体を、細胞を含有するウェルに直接加えた。ＨＥＫ２９３ｐＧＬ４．３６［Ｌｕｃ２Ｐ／ＭＭＴＶ／Ｈｙｇｒｏ］細胞を、３７°、５％Ｃ０２で２４時間形質移入した。インキュベーション後、細胞を３ｍＬのＰＢＳで洗浄し、２週間の間、１００μｇ／ｍＬのハイグロマイシンＢ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ：１０６８７−０１０）及び５００μｇ／ｍＬのＧ４１８（Ｇｉｂｃｏ：１０１３１−０２７）を含有する完全成長培地で選択した。生成した細胞株は「ｈＣＤ４０  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ１＿ＨＥＫ２９３  ＧＲＥ  ｐＧＬ４．３６［Ｌｕｃ２Ｐ／ＭＭＴＶ／Ｈｙｇｒｏ］」と指定した。
【０３５５】
［実施例Ｂ］  ＧＲＥリポーターアッセイにおける抗ＣＤ４０  ＡＤＣの活性
ＨＥＫ２９３親ＧＲＥ（ｐＧＬ４．３６［ｌｕｃ２Ｐ／ＭＭＴＶ／Ｈｙｇｒｏ］）細胞及びＨＥＫ２９３ｍＣＤ４０又はｈＣＤ４０  ＧＲＥ（ｐＧＬ４．３６［ｌｕｃ２Ｐ／ＭＭＴＶ／Ｈｙｇｒｏ］）細胞、１ウェル当たり２０，０００個の細胞を、９６ウェル組織培養物処理した白色プレート（Ｃｏｓｔａｒ：３９１７）上で、７５μＬのアッセイ培地（ＲＰＭＩ、１％ＣＳＦＢＳ、１％Ｌ−グルタミン、１％Ｎａピルベート及び１％ＭＥＡＡ）内にプレーティングし、３７℃、５％ＣＯ２で２４時間インキュベートした。翌日、細胞を、アッセイ培地内の２５μＬの４×段階希釈したマウス又はヒト抗ＣＤ４０抗体薬物コンジュゲート、ステロイド化合物、又は培地単独で処理し、３７℃、５％ＣＯ２で７２時間インキュベートした。７２時間のインキュベーション後、細胞を１００μＬのＤｕａｌ−Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ−Ｅ２９２０）で１０分間処理し、Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して発光について分析した。４種のパラメーター曲線フィットを使用してデータを分析して、ＥＣ５０値を生成した。最大活性化パーセント（％）を１００ｎＭデキサメタゾン（最大活性化と考えられた）に対して正規化した。それぞれ抗マウスＣＤ４０  ＡＤＣと抗ヒトＣＤ４０  ＡＤＣの両方に対するＥＣ５０値が表１６及び１７にそれぞれ提供されている。
【０３５６】
【表１７】
2021504430.tif 000142
【０３５７】
【表１８】
2021504430.tif 000143
【０３５８】
［実施例Ｃ］  リポ多糖及び溶解性ＣＤ４０リガンド刺激されたヒト単球由来のＤＣサイトカイン放出アッセイにおける抗ＣＤ４０  ＡＤＣの活性
初代ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をＳａｎｇｕｉｎｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入し、５０ｍＬのリン酸緩衝液生理食塩水（ＰＢＳ）（ｐＨ７．２）中で洗浄し、５％ＤＭＳＯを有する１００％ＦＢＳ中に再懸濁させ、アリコートし、使用するまで液体窒素内で凍結保存した。ＰＢＭＣを解凍し、０．５％ＦＢＳ及び２ｍＭ  ＥＤＴＡを有するＰＢＳ（ｐＨ７．２）中で洗浄した。製造業者プロトコルに従い、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｗｈｏｌｅ  Ｂｌｏｏｄ  ＣＤ１４  ＭｉｃｒｏＢｅａｄｓキット（Ｃａｔ＃１３０−０９０−８７９）及びＭｉｌｔｅｎｙｉ  ａｕｔｏＭＡＣＳ  Ｐｒｏ  Ｓｅｐａｒａｔｏｒを使用して、ＣＤ１４＋細胞のポジティブ選択により、ＰＢＭＣからの単球を富化した。精製した単球を洗浄し、１０％ＦＢＳ、Ｌ−グルタミン（Ｇｉｂｃｏ  Ｃａｔ＃２５０３００８１）、ピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ  Ｃａｔ＃１１３６００７０）、ＭＥＭ非必須アミノ酸溶液（Ｇｉｂｃｏ  Ｃａｔ＃１１１４００５０）、ペニシリン−ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ  Ｃａｔ＃１５１４０１２２）、ＨＥＰＥＳ緩衝液（Ｇｉｂｃｏ  Ｃａｔ＃１５６３００８０）、２−メルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ  Ｃａｔ＃２１９８５０２３）を補充したＲＰＭＩ中に再懸濁した。細胞は、１ｍＬ当たり１．００Ｅ＋０６個の細胞及び１ウェル当たり３ｍＬで６−ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃａｔ＃３５０６）に移し、１００ｎｇ／ｍＬのｒｈＧＭ−ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｃａｔ＃２１５−ＧＭ−０１０／ＣＦ）及び１００ｎｇ／ｍＬのｒｈＩＬ−４（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｃａｔ＃２０４−ＩＬ−０１０／ＣＦ）と共に３７℃及び５％ＣＯ２で、５日間インキュベートして、単球の樹状細胞（ＤＣ）への分化を誘発した。第５日目、半接着単球由来のＤＣ（ＭｏＤＣ）をプールし、ＣＤ１ａ−ポジティブＣＤ１４−ネガティブ細胞（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ  Ｃａｔ＃３００１０６、Ｃａｔ＃３２５６２８）に対して、フローサイトメトリーを使用して表現型検査によりこれらの分化効率を確認した。ＭｏＤＣを洗浄し、補充したＲＰＭＩ培地に再懸濁し、細胞アッセイプレート（Ｃｏｓｔａｒ  Ｃａｔ＃３７９９）に１ウェル当たり１．０Ｅ＋０５個の細胞をプレーティングした。細胞を、リポ多糖（ＬＰＳ）（Ｓｉｇｍａ  Ｃａｔ＃Ｌ４３９１−１ＭＧ）で、０．１ｎｇ／ｍＬで２時間刺激して、ＭｏＤＣ上の細胞表面ＣＤ４０発現の上方調節を誘発させた。刺激後、培養物上清を洗浄し、異なる濃度の抗ヒトＣＤ４０抗体又は抗ヒトＣＤ４０  ＡＤＣと共に、細胞を３７℃及び５％ＣＯ２で２時間インキュベートした。次いで、細胞を０．２ｎｇ／ｍＬのＬＰＳ及び０．５μｇ／ｍＬの溶解性ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）（Ａｄｉｐｏｇｅｎ  Ｃａｔ＃ＡＧ−４０Ｂ−００１０）で２０時間刺激した。インキュベーション後、１２００ｒｐｍで５分間プレートを回転させ、１５０μＬの上清培地を追加の９６−ウェルプレートに直接移し、ＩＬ−６（ＭＳＤ、＃Ｋ１５１ＡＫＢ）濃度について分析した。非線形回帰を使用して、用量反応データをシグモイド曲線にフィットし、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｉｎｃ．）の助けを借りてＩＣ５０値を���算した。表１８に示されている結果は、活性化した初代免疫細胞からの炎症誘発性サイトカインＩＬ−６の放出を阻害することにおいて抗ヒトＣＤ４０  ＡＤＣが強力な活性を有し、実施例１３−加水分解型（ヒト）と実施例１２−加水分解型（ヒト）ＡＤＣ（式中、ｎは４である。）との間の作用強度の差異が２種のペイロード化合物の間の作用強度の差異に対応することを実証している。表１８はまた、実施例２８−コンジュゲート型（ヒト）ＡＤＣ（式中、ｎは２である。）、及び実施例２８−コンジュゲート型（ヒト）ＡＤＣ（式中、ｎは４である。）に対して類似の結果を提供している。図２に示されている代表的な実施例の結果は、実施例１３−加水分解型（ヒト）及び実施例１２−加水分解型（ヒト）（式中、ｎは４である。）のいずれかによる免疫細胞活性化を阻害する最大能力が、親のアンタゴニスト抗体により提供される阻害を超えることを実証している。
【０３５９】
【表１９】
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【０３６０】
［実施例Ｄ］  骨髄由来のＤＣ活性化アッセイにおける抗マウスＣＤ４０  ＡＤＣの活性
マウス骨髄（ＢＭ）細胞を、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの大腿及び脛骨から押し出し、補充したＲＰＭＩ培地に再懸濁した。細胞は、１ｍＬ当たり１．００Ｅ＋０６個の細胞及び１ウェル当たり５ｍＬで、６−ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃａｔ＃３５０６）に移し、１０ｎｇ／ｍＬのマウスＧＭ−ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｃａｔ＃４１５−ＭＬ−０１０）と共に３７℃及び５％ＣＯ２で８日間インキュベートした。培養の３日目及び５日目において、培地の２／３を２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ−４を補充した培地を含有する新鮮なＧＭ−ＣＳＦと置き換えて、ＢＭ細胞の樹状細胞（ＤＣ）への分化を誘発した。インキュベーション後、これらＢＭ由来のＤＣ（ＢＭＤＣ）を洗浄し、補充したＲＰＭＩ培地に再懸濁し、細胞アッセイプレート（Ｃｏｓｔａｒ  Ｃａｔ＃３７９９）にプレーティングした。細胞をリポ多糖（ＬＰＳ）（Ｓｉｇｍａ  Ｃａｔ＃Ｌ４３９１−１ＭＧ）、０．１ｎｇ／ｍＬで２時間刺激して、ＢＭＤＣ上での細胞−表面ＣＤ４０発現の上方調節を誘発した。刺激後、培養物上清を洗浄し、細胞を異なる濃度の抗マウスＣＤ４０抗体又は実施例６−加水分解型（マウス）と共に、３７Ｃ℃及び５％ＣＯ２で２時間インキュベートした。次いで、細胞を０．１ｎｇ／ｍＬのＬＰＳ及び０．５μｇ／ｍＬの溶解性ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）（Ｅｎｚｏ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｉｎｃ．Ｃａｔ＃ＡＬＸ−５２２−１２０−Ｃ０１０）で２０時間刺激した。一部の実験では、ＬＰＳ処理を異なる濃度（０．１、１．０、１０ｎｇ／ｍＬ）で試験したが、溶解性ＣＤ４０Ｌは０．５μｇ／ｍＬのままであった。インキュベーション後、プレートを１２００ｒｐｍで５分間回転させ、１５０μＬの上清培地を追加の９６−ウェルプレートに直接移し、ＩＬ−６（ＭＳＤ、Ｃａｔ＃Ｋ１５２ＴＸＫ）濃度について分析した。ＤＣ活性化マーカーの上方調節を定量化するため、アッセイプレートに残留する培養細胞を洗浄し、抗マウスＣＤ８６抗体（ＧＬ−１、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ  Ｃａｔ＃１０５０１８）で着色し、フローサイトメトリーで評価した。非線形回帰を使用して、用量反応データをシグモイド曲線フィットし、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｉｎｃ．）の助けを借りてＩＣ５０値を計算した。実施例１２−加水分解型（マウス）及び実施例２８（マウス）を用いて追加の実験を行った。表１９に示されている結果は、抗マウスＣＤ４０  ＡＤＣが、活性化した初代免疫細胞上での共刺激分子発現の上方調節の抑制において強力な活性を示し、ＡＤＣ間での作用強度の差異が薬物−リンカーペイロード間の作用強度の差異に対応することを実証している。図３に示されている結果は、実施例６−加水分解型（マウス）による免疫細胞活性化を阻害する最大能力は、親のアンタゴニスト抗体で提供される阻害を超えることを実証している。
【０３６１】
【表２０】
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【０３６２】
［実施例Ｅ］  ＬＰＳ誘発性急性炎症のインビボモデルにおける抗マウスＣＤ４０  ＡＤＣの活性
Ｃ５７ＢＬ／６雌のマウス（ｎ＝３）に、１μｇのＬＰＳ及び（１）対照１としての親アンタゴニスト抗体（ｍＣＤ４０ｍＡｂ）、（２）実施例６−加水分解型イソタイプ（Ａｂ＝抗破傷風トキソイド、マウスイソタイプ）（ｎ＝４）、又は（３）ＡＤＣとしての実施例６−加水分解型（マウス）（１０ｍｇ／ｋｇ）（ｎ＝４）のいずれかを含有する１００μＬのリン酸緩衝液生理食塩水（ＰＢＳ）（ｐＨ７．２）を腹腔内投薬した。注入後２４時間の時点で、処置したマウスから脾臓を収集し、処理して、それぞれ個々のマウスからシングルセル懸濁液を得た。細胞は、フローサイトメトリーを使用して、表現型特異的抗原を提示する細胞集団に対して以下の蛍光色素標識抗体で着色した：抗マウスＣＤ４  ＰＥ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ  Ｃａｔ＃１００４０８）、抗マウスＣＤ８  ＢＵＶ３９５（ＢＤ  Ｃａｔ＃５６３７８６）、抗マウスＣＤ１９  ＰＥ−Ｃｙ７、抗マウスＣＤ１１ｃ  ＰｅｒＣｐ−Ｃｙ５．５、抗マウスＣＤ１１ｂ  ＢＶ５１０、抗マウスＩＡＩＥ  Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｂｌｕｅ、抗マウスＣＤ４０  ＡＰＣ、抗マウスＣＤ８６  Ａｌｅｘａ−４８８。細胞は、１％ＦＢＳ及びＦｃＲ−遮断試薬（ＢＤ、Ｃａｔ＃５５３１４２）を含有するＰＢＳ（ｐＨ７．２）中１ｍＬ当たり１．０Ｅ＋０７個の細胞において着色した。脾臓１個当たりの活性化樹状細胞（ＤＣ）の全周波数を計算し、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ６（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｉｎｃ．）の助けを借りてプロットした。図４に示されている結果は、ＣＤ４０  ＡＤＣが、ＤＣ活性化のインビボでの抑制において、親のアンタゴニスト抗体又はイソタイプＡＤＣよりもより大きな効力を示すことを実証している。
【０３６３】
［実施例Ｆ］  遅延型ＩＶ過敏症モデルにおける抗マウスＣＤ４０  ＡＤＣの活性
抗マウスＣＤ４０  ＡＤＣを急性遅延型−ＩＶ過敏症（ＤＴＨ）モデルにおいて評価した。皮膚のＴ細胞駆動性急性炎症性応答を増感したタンパク質抗原（ＢＳＡ）への再曝露により誘発させた。抗マウスＣＤ４０  ＡＤＣの効力を足の腫れを阻害する能力により測定した。
【０３６４】
Ｃ５７ＢＬ／６雌のマウスに、−１日目に、（１）対照１としてのｍＣＤ４０  ｍＡｂ；（２）対照２としての実施例１２−加水分解型イソタイプ（Ａｂ＝抗破傷風トキソイド、マウスイソタイプ）（ｎ＝４）；又は（３）ＡＤＣとしての実施例１２−加水分解型（マウス）（ｎ＝４）を腹腔内投薬した。０日目、ＣＦＡ  Ｈ３７Ｒａ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ、Ｃａｔ＃２３１１３１）中で乳化させた２００μｇのメチル化ＢＳＡ（ＳＩＧＭＡ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｃａｔ＃１００９）を使用して、免疫化を介してマウスを増感させた。７日目、両後足のベースライン厚さを測定した。右のフットパッドにはリン酸緩衝液生理食塩水（ＰＢＳ）中１００μｇのｍＢＳＡを細菌投与し、左のフットパッドはＰＢＳ単独で処理した。細菌投与後２４時間の時点で、後足を、Ｄｙｅｒスプリングキャリパ（Ｄｙｅｒ３１０−１１５）を使用して足の腫れについて評価した。厚さの変化をベースラインと比べて図５Ａにプロットする。足の腫れの測定後、マウスにＡＣＴＨを１ｍｐｋ  ＩＰで注入し、ＡＣＴＨ後３０分の時点で最終的に出血させた。血漿を収集し、Ｐ１ＮＰ、コルチコステロン、遊離ステロイド、及び大分子レベルについて分析した。図５Ａのデータは、Ｔ細胞媒介性炎症をインビボでより強力に阻害するＣＤ４０  ＡＤＣの効力が、親のアンタゴニスト抗体又は非標的ＡＤＣ単独の場合よりも増強したことを実証している。
【０３６５】
抗マウスＣＤ４０又はイソタイプ（Ａｂ＝抗オボアルブミン、マウスイソタイプ）への実施例２８−コンジュゲート型（マウス）からなる抗マウスＣＤ４０  ＡＤＣの活性もまた、上に示された手順に従いＤＴＨアッセイにおいて評価した。図５Ｂは、Ｔ細胞媒介性炎症をインビボで阻害するＣＤ４０  ＡＤＣの効力が、親のアンタゴニスト抗体又は非標的ＡＤＣ単独の場合よりも増強したことを実証している。
【０３６６】
［実施例Ｇ］  炎症のＤＴＨモデルにおけるステロイドバイオマーカー
１．血漿Ｐ１ＮＰ
血漿Ｐ１ＮＰの定量化は、タンパク質トリプシン消化に基づくＬＣ／ＭＳプラットフォーム上で行った。血漿試料を部分的に沈殿させ、ＭｅＣＮ／０．１Ｍ炭酸水素アンモニウム／ＤＴＴ混合物を添加することにより完全に還元させた。上清を収集し、ヨード酢酸を添加することによりアルキル化した。アルキル化したタンパク質をトリプシンで分解し、生成したトリプシンペプチドをＬＣ／ＭＳで分析した。
【０３６７】
ウマ血清（非干渉性代用マトリックス）に加えた合成トリプシンのペプチドを使用することにより標準曲線物質を生成した。安定した同位体標識フランキングペプチド（トリプシンペプチドの両末端上の３〜６アミノ酸伸長）を、消化効率及びＬＣ／ＭＳ注入の両方を正規化するためのＭｅＣＮ／ＤＴＴタンパク質沈殿混合物に加える内部標準として使用した。Ｃｏｌｕｍｎｅｘ  Ｃｈｒｏｍｅｎｔａ  ＢＢ−Ｃ１８、２．１×１５０ｍｍ、５μｍカラムをクロマトグラフィー分離に使用した。移動相Ａは、Ｍｉｌｌｉ  Ｑ  ＨＰＬＣ水中０．１％ギ酸であり、移動相ＢはＭｅＣＮ中０．１％ギ酸であった。２％の移動相Ｂから６５％移動相Ｂまでの線型勾配を０．６〜３分間適用した。全作動時間は０．４５ｍＬ／分の流量で８分間であった。ＡＢ  Ｓｃｉｅｘ  ４０００Ｑｔｒａｐ質量分析器をポジティブＭＲＭモードで使用して、７００℃のソース温度でＰ１ＮＰペプチドを定量化した。
【０３６８】
２．放出された遊離ステロイド及び内因性コルチコステロン
ステロイドの標準曲線物質を、０．０３ｎＭ〜０．１μＭの最終濃度、８つの異なる濃度レベルで、マウス血漿中で調製した。最終コルチコステロン濃度０．３ｎＭ〜１μＭの範囲のコルチコステロン標準曲線物質を、リン酸緩衝液生理食塩水（ＰＢＳ）中の７０ｍｇ／ｍＬウシ血清アルブミン溶液に調製した。０．１％ギ酸を有する１６０μＬのＭｅＣＮの溶液を、４０μＬの血漿研究試料又は校正標準液に加えた。上清を蒸留水で希釈し、３０μＬの最終試料溶液をＬＣ／ＭＳ分析用に注入した。
【０３６９】
放出された遊離ステロイド及びコルチコステロンの定量化を、ポジティブモードで作動するエレクトロスプレーイオン化ソースとインターフェイス接続されたＳｈｉｍａｄｚｕ  ＡＣ２０  ＨＰＬＣシステムに接続しているＡＢ  Ｓｃｉｅｘ  ５５００トリプル四重極質量分析計で行った。Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  ＢＥＨ  Ｃ１８、２．１×３０ｍｍ、３．５μｍカラムをクロマトグラフィー分離に使用した。移動相ＡはＭｉｌｌｉ  Ｑ  ＨＰＬＣ水中０．１％ギ酸であり、移動相ＢはＭｅＣＮ中０．１％ギ酸であった。２％の移動相Ｂから９８％の移動相Ｂへの線型勾配を０．６〜１．２分間適用した。全作動時間は流量０．８ｍＬ／分で２．６分であった。質量分析器を、ポジティブＭＲＭモードで、ソース温度７００℃で作動した。表２０のデータは、ＤＴＨモデルにおけるＡＤＣの処置がステロイドバイオマーカー、Ｐ１ＮＰ及びコルチコステロンの血清レベルに有意に影響しないことを実証している。
【０３７０】
【表２１】
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【０３７１】
［実施例Ｈ］  コラーゲン誘発関節炎（ＣＩＡ）における抗マウスＣＤ４０免疫コンジュゲートの活性
実施例６−加水分解型（マウス）ＡＤＣの疾患に影響を与える能力を、関節炎のコラーゲン誘発関節炎（ＣＩＡ）モデルにおいて評価した。
【０３７２】
これらの実験において、雄のＤＢＡ／１ＪマウスをＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｓ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、ＭＥ）から入手した。マウスは、週齢６〜１２週で使用した。すべての動物は、定温及び定湿気で、１２時間の明暗サイクル下で維持し、げっ歯類固形飼料（Ｌａｂ  Ｄｉｅｔ  ５０１０  ＰｈａｒｍａＳｅｒｖ、Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ、ＭＡ）及び水を自由に摂取できるようにした。ＡｂｂＶｉｅはＡＡＡＬＡＣ（実験動物ケア評価認証協会（Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ））正式認可を受け、すべての手順は動物実験委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ））により承認され、担当獣医によりモニターされた。体重及び状態はモニターされ、動物は＞２０％体量の減少を示した場合安楽死させた。
【０３７３】
雄のＤＢＡ／Ｊマウスは、０．１Ｎ酢酸に溶解した１００μｇのＩＩ型ウシコラーゲン（ＭＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）及び２００μｇの加熱不活性結核菌Ｈ３７Ｒａ（フロイント完全アジュバント、Ｄｉｆｃｏ、Ｌａｕｒｅｎｃｅ、ＫＳ）を含有する１００μＬの乳濁液を、尾の底部に皮内（ｉ．ｄ．）投与することで免疫を付けた。コラーゲンでの免疫化から２１日目に、マウスにＩＰリン酸緩衝液生理食塩水（ＰＢＳ）中の１ｍｇのＺｙｍｏｓａｎ  Ａ（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）で追加免疫を付けた。この強化後、１週間当たり３〜５回関節炎についてマウスをモニターした。Ｄｙｅｒスプリングキャリパ（Ｄｙｅｒ３１０−１１５）を使用して足の腫れについて後足を評価した。
【０３７４】
２４日目〜２８日目の間に、疾患の第１の臨床徴候があった時点でマウスを登録し、同等の関節炎重症度を有する群になるよう分配した。早期療法的治療を登録の時点で開始した。
【０３７５】
抗マウスＣＤ４０アンタゴニスト抗体を１０ｍｇ／ｋｇで、又は０．９％生理食塩水中実施例６−加水分解型（マウス）ＡＤＣ（ｎ＝４）を動物に腹腔内投薬した。投薬後２４及び７２時間の時点で、尾の切り傷を入れて、抗体曝露量のために血液を収集した。最終時間点において組織病理学用に足を収集した。最終時間点において、完全な血算のために、心臓穿刺により血液を収集した（Ｓｙｓｍｅｘ  ＸＴ−２０００ｉＶ）。統計的有意性をＡＮＯＶＡで決定した。実施例６−加水分解型イソタイプ（Ａｂ＝抗破傷風トキソイド、マウスイソタイプ）（ｎ＝４）及び親の抗ｍＣＤ４０  ｍＡｂを対照１及び２として使用した。図６に示されている結果は、単回用量の抗マウスＣＤ４０ステロイドＡＤＣが、対照１及び２と比較して、約６週間の間、足の腫れの回復を介して延長した作用期間を示すことができることを実証している。
【０３７６】
参照による組み込み
詳細な説明及び実施例において参照された、特許及び公開出願を含むすべての公開は、これら全体が本明細書で参照により組み込まれている。
【０３７７】
他の実施形態
前述の記載は、本開示のある特定の非限定的実施形態が記載されている。当業者であれば、この記載に対する様々な変化及び修正が、本開示の趣旨又は範囲から逸脱することなく、以下の特許請求の範囲で定義されているように作製され得ることを認識している。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図１Ｅ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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