(57)【要約】  アテローム性動脈硬化を予防および調節するための方法および材料。特に、ＣＤ４０と相互作用することができ、それによって炎症およびアテローム性動脈硬化症に影響を与えるＣＤ１５４と相互作用するＣＤ４０の能力を妨害することができる小型のペプチド。アテローム性動脈硬化、特にその駆動因子であり得る自己免疫性炎症反応を減少させることにおけるそのようなペプチドの使用。ＬＤＬコレステロールを低下させるためのそのような短いペプチドの使用。ＣＤ４０を発現するＴ細胞（Ｔｈ４０細胞）を検出するための方法および材料。２型糖尿病および自己炎症性疾患を予防、調節、低減および／または逆転させるための方法および材料。特に、ＣＤ４０と相互作用することができ、それによって炎症および２型糖尿病に影響を与えるＣＤ１５４と相互作用するＣＤ４０の能力を妨害することができる小型のペプチド。２型糖尿病、特にその駆動因子であり得る自己免疫性炎症反応を減少させることにおけるそのようなペプチドの使用。ＩＬ２，  ＩＮＦγとＩＬ１７ａを低下させるためのそのような短いペプチドの使用。グルコース輸送タンパク質（ＧＬＵＴ４）を増加させるためのそのような短いペプチドの使用。ＣＤ４０を発現するＴ細胞（Ｔｈ４０細胞）を検出するための方法および材料。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象におけるアテローム性動脈硬化症を予防する方法であって、ＣＤ１５４／ＣＤ４０リガンドとＣＤ４０との相互作用に影響を与える治療有効量のペプチドを、それを必要とする対象に投与することを含む、方法。
【請求項２】
ペプチドがＣＤ４０に結合する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ペプチドが、１０−６より大きいＫｄでＣＤ４０タンパク質に結合する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記ペプチドが、ＣＤ４０とＣＤ１５４との相互作用に影響を与える、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記ペプチドが、ＣＤ４０のＣＤ１５４への結合を抑制する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記ペプチドは、ＣＤ４０がＣＤ１５４と相互作用する部位でＣＤ４０を結合する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記ペプチドが、Ｔｈ４０細胞の増殖を予防するような方法で、ＣＤ４０とＣＤ１５４との相互作用に影響を与える、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記ペプチドが、Ｔｈ４０細胞の数を減少するような方法で、ＣＤ４０とＣＤ１５４との相互作用に影響を与える、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記ペプチドが、前記ペプチドで処理された細胞集団のサイトカイン発現プロファイルを変化させるような方法で、ＣＤ４０とＣＤ１５４との相互作用に影響を与える、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ペプチドが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６，ＳＥＱ  ＩＤ：７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０の群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記ペプチドが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０の群から選択されるアミノ酸配列である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記ペプチドが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３−９，２４−３０，および３２の群から選択されるアミノ酸配列である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
対象が、ペプチドおよび／またはＣＤ１５４に応答する自己抗体を産生しない、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
対象のＴ細胞がＴ細胞抗原リコールを誘発しない、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記ペプチドが、脾臓ＣＤ４ｈｉ細胞、ＣＤ８細胞、および他の抗原提示細胞を含む、約４５ｋＤａのＣＤ４０を発現する複数の骨髄由来の細胞型に結合する、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記ペプチドが、天然の供給源から得られるか、または合成される、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
対象が脂質異常症、高脂血症、高コレステロール血症、アテローム性動脈硬化症、心血管疾患、および／または冠動脈性心疾患に罹患している、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
スタチンを投与することをさらに含む、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
アテローム性動脈硬化症を調節する方法であって、アテローム性動脈硬化症を調節するような方法でＣＤ１５４結合部位で前記ＣＤ４０タンパク質と結合するペプチドをＣＤ４０タンパク質に接触させることを含む、方法。
【請求項２０】
患者におけるアテローム性動脈硬化を調節する方法であって、ＣＤ１５４結合部位でＣＤ４０タンパク質に結合し、それによってアテローム性動脈硬化を調節するペプチドを患者に投与することを含む、方法。
【請求項２１】
その治療を必要とする患者における心血管疾患を治療する方法であって、ＣＤ１５４結合部位でＣＤ４０タンパク質に結合し、それによって心血管疾患を調節するペプチドを患者に投与することを含む、方法。
【請求項２２】
前記方法が、ＣＤ４０とＣＤ１５４の相互作用を抑制する化合物を投与することによって患者におけるＴｈ４０細胞の数を減少させることをさらに含み、ここで、前記化合物が、ＣＤ１５４結合部位でＣＤ４０タンパク質を結合する、請求項１９〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
動物におけるアテローム性動脈硬化を逆転させる方法であって、ＣＤ１５４結合部位でＣＤ４０タンパク質に結合し、それによって炎症を調節するペプチドを患者に投与することを含む、方法。
【請求項２４】
アテローム性動脈硬化症を発症するリスクのある患者を識別する方法であって、（ａ）患者からＴ細胞集団を取得すること、および（ｂ）Ｔ細胞集団中のＣＤ４０＋である細胞の数を測定することを含み、ここで、前記Ｔ細胞集団中のＣＤ４０＋Ｔ細胞のパーセントが２５％より大きい場合、前記患者はアテローム性動脈硬化症を発症するリスクがある、方法。
【請求項２５】
アテローム性動脈硬化症の進行を予防する方法であって、患者におけるＴｈ４０細胞の数を減少させることを含む、方法。
【請求項２６】
ＣＤ４０とＣＤ１５４の相互作用を抑制する化合物を投与することをさらに含み、ここで、前記化合物がＣＤ１５４結合部位でＣＤタンパク質を結合する、請求項２３〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
動物におけるアテローム性動脈硬化症を調節および／または減少させる方法であって、該方法は、ＩＦＮγを調節するような方法でＣＤ４０タンパク質と相互作用するペプチドを動物に投与することを含む、方法。
【請求項２８】
心血管疾患および／またはアテローム性動脈硬化症を発症するリスクがある患者を識別する方法であって、該方法は、検査されるべき患者からＴ細胞を含むサンプルを得ることと、該サンプルをＣＤ４０タンパク質を結合するペプチドと接触させることと、該ＣＤ４０結合ペプチドを検出することと、該ＣＤ４０結合量からＴｈ４０細胞のレベルを測定することとを含み、ここで、Ｔ細胞総数の２５％を超えるＴｈ４０細胞のレベルは、患者が心血管疾患および／またはアテローム性動脈硬化症を発症するリスクがあることを示す、方法。
【請求項２９】
血管壁の石灰化を予防、調節、または減少させる方法であって、ＣＤ１５４結合部位でＣＤ４０提示細胞に特異的に結合する治療有効量のペプチドを、それを必要とする対象に投与することを含む、方法。
【請求項３０】
前記ペプチドがＣＤ４０に結合する、請求項２７〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記ペプチドが、１０−６より大きいＫｄでＣＤ４０タンパク質に結合する、請求項２７〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記ペプチドが、ＣＤ４０とＣＤ１５４との相互作用に影響を与える、請求項２７〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記ペプチドが、ＣＤ４０のＣＤ１５４への結合を抑制する、請求項２７〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記ペプチドは、ＣＤ４０がＣＤ１５４と相互作用する部位でＣＤ４０を結合する、請求項２７〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記ペプチドが、Ｔｈ４０細胞の増殖を予防するような方法で、ＣＤ４０とＣＤ１５４との相互作用に影響を与える、請求項２７〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
前記ペプチドが、Ｔｈ４０細胞の数を減少するような方法で、ＣＤ４０とＣＤ１５４との相互作用に影響を与える、請求項２７〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記ペプチドが、前記ペプチドで処理された細胞集団のサイトカイン発現プロファイルを変化させるような方法で、ＣＤ４０とＣＤ１５４との相互作用に影響を与える、請求項２７〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記ペプチドが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９の群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２７〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記ペプチドが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３−９および２４−３０の群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２７〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記ペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２の群から選択されるアミノ酸配列である、請求項２７〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
アテローム性動脈硬化を予防、調節、および／または減少するためにＣＤ４０結合ペプチドを投与する方法であって、ＣＤ１５４結合部位でＣＤ４０タンパク質と相互作用するペプチドを選択することと、筋肉内（ＩＭ）送達、静脈内（ＩＶ）送達、皮下（ＳＣ）送達、経口送達、胃管送達、エモリエント／皮膚送達、または経皮パッチを含む群から選択される送達方法を選択することとを含む、方法。
【請求項４２】
動物にアテローム性動脈硬化を予防、調節、および／または減少するためにＣＤ４０−ＣＤ１５４に影響を与えるペプチドを投与する方法であって、ＣＤ１５４結合部位でＣＤ４０タンパク質と相互作用するペプチドを選択することと、移植可能なデバイス、親水性ポリマー製剤、透過性ポリマー膜、注入可能なゲルインプラント、溶媒抽出システム、相反転システム、感温性ゲル、ｐＨ依存性ｉｎ  ｓｉｔｕゲル、微粒子、マイクロスフェア、ナノ粒子、ナノスフェア、生体分解性インプラント、または光活性化デポを含む群から選択される多種送達方法を使用することとを含む、方法。
【請求項４３】
対象におけるＬＤＬコレステロールを低下させる方法であって、ＣＤ１５４結合部位でＣＤ４０提示細胞に特異的に結合する治療有効量のペプチドを、それを必要とする対象に投与することを含む、方法。
【請求項４４】
前記ペプチドがＣＤ４０に結合する、請求項４１〜４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
前記ペプチドが、１０−６より大きいＫｄでＣＤ４０タンパク質に結合する、請求項４１〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
前記ペプチドが、ＣＤ４０とＣＤ１５４との相互作用に影響を与える、請求項４１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
前記ペプチドが、ＣＤ４０のＣＤ１５４への結合を抑制する、請求項４１〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
前記ペプチドは、ＣＤ４０がＣＤ１５４と相互作用する部位でＣＤ４０を結合する、請求項４１〜４７のいずれ一項かに記載の方法。
【請求項４９】
前記ペプチドが、前記ペプチドで処理された細胞集団のサイトカイン発現プロファイルを変化させるような方法で、ＣＤ４０とＣＤ１５４との相互作用に影響を与える、請求項４１〜４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
前記ペプチドが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９の群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項４１〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
前記ペプチドが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０の群から選択されるアミノ酸配列である、請求項４１〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
対象における２型糖尿病を予防、調節、減少、治療および／または逆転させるための方法であって、ＣＤ１５４／ＣＤ４０リガンドとＣＤ４０との相互作用に影響を与える治療有効量のペプチドを、２型糖尿病を有する対象に投与することを含む、方法。
【請求項５３】
前記ペプチドがＣＤ４０に結合する、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記ペプチドが、１０−６より大きいＫｄでＣＤ４０タンパク質に結合する、請求項５２または５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記ペプチドが、ＣＤ４０とＣＤ１５４との相互作用に影響を与える、請求項５２〜５４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
前記ペプチドが、ＣＤ４０のＣＤ１５４への結合を抑制する、請求項５２〜５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
前記ペプチドは、ＣＤ４０がＣＤ１５４と相互作用する部位でＣＤ４０を結合する、請求項５２〜５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
前記ペプチドが、Ｔｈ４０細胞の増殖を予防するような方法で、ＣＤ４０とＣＤ１５４との相互作用に影響を与える、請求項５２〜５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
前記ペプチドが、Ｔｈ４０細胞の数を減少するような方法で、ＣＤ４０とＣＤ１５４との相互作用に影響を与える、請求項５２〜５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
前記ペプチドが、前記ペプチドで処理された細胞集団のサイトカイン発現プロファイルを変化させるような方法で、ＣＤ４０とＣＤ１５４との相互作用に影響を与える、請求項５２〜５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６１】
前記ペプチドがＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７の群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項５２〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６２】
前記ペプチドがＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７の群から選択されるアミノ酸配列である、請求項５２〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
前記ペプチドが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４−９および２４−３０の群から選択されるアミノ酸配列である、請求項５２〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
グルコース輸送タンパク質４（ＧＬＵＴ４）を調節および／または増加させるための方法であって、治療上十分な量のＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７から選択されるペプチドを患者に投与することを含む、方法。
【請求項６５】
グルコース輸送タンパク質４（ＧＬＵＴ４）を調節および／または増加させるための方法であって、治療上十分な量のＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．４−９およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．２４−３０の群から選択されるペプチドを患者に投与することを含む、方法。
【請求項６６】
動物における２型糖尿病を予防、調節、減少、治療および／または逆転させるための方法であって、ＧＬＵＴ  ４を調節するような方法でＣＤ４０タンパク質と相互作用するペプチドを動物に投与することを含む、方法。
【請求項６７】
対象が、ペプチドおよび／またはＣＤ１５４および／またはＧＬＵＴ  ４に応答する自己抗体を産生しない、請求項６４〜６６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６８】
対象のＴ細胞がＴ細胞抗原リコールを誘発しない、請求項６４〜６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
前記ペプチドが、脾臓ＣＤ４ｈｉ細胞、ＣＤ８細胞、および他の抗原提示細胞を含む、約４５ｋＤａのＣＤ４０を発現する複数の骨髄由来の細胞型に結合する、請求項６４〜６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７０】
前記ペプチドが、天然の供給源から得られるか、または合成される、請求項６４〜６９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７１】
患者における２型糖尿病を調節する方法であって、ＣＤ１５４結合部位でＣＤ４０タンパク質に結合し、それによって２型糖尿病を調節するペプチドを患者に投与することを含む、方法。
【請求項７２】
患者における２型糖尿病を予防、調節、減少、治療および／または逆転するためにＣＤ４０結合ペプチドを投与する方法であって、ＣＤ１５４結合部位でＣＤ４０タンパク質と相互作用するペプチドを選択することと、筋肉内（ＩＭ）送達、静脈内（ＩＶ）送達、皮下（ＳＣ）送達、経口送達、胃管送達、エモリエント／皮膚送達、または経皮パッチを含む群から選択される送達方法を選択することとを含む、方法。
【請求項７３】
患者における２型糖尿病を予防、調節、減少、治療および／または逆転するためにＣＤ４０結合ペプチドを投与する方法であって、ＣＤ１５４結合部位でＣＤ４０タンパク質と相互作用するペプチドを選択することと、移植可能なデバイス、親水性ポリマー製剤、透過性ポリマー膜、注入可能なゲルインプラント、溶媒抽出システム、相反転システム、感温性ゲル、ｐＨ依存性ｉｎ  ｓｉｔｕゲル、微粒子、マイクロスフェア、ナノ粒子、ナノスフェア、生体分解性インプラント、または光活性化デポを含む群から選択される多種送達方法を使用することとを含む、方法。
【請求項７４】
対象における２型糖尿病を調節および／または減少させる方法であって、ＩＦＮγを調節するような方法でＣＤ４０タンパク質と相互作用するペプチドを対象に投与することを含む、方法。
【請求項７５】
細胞または対象におけるＩＦＮ−γを調節および／または減少させる方法であって、ＩＦＮ−γシグナル伝達を減少または抑制するのに十分な量のＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．３−９および２７−３０から選択されるペプチドを投与することを含み、ここで、ＩＦＮ−γシグナル伝達が２型糖尿病と関連する、方法。
【請求項７６】
細胞または対象におけるインターロイキン−２シグナル伝達を調節および／または減少させる方法であって、インターロイキン−２シグナル伝達を減少または抑制するのに十分な量のＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．３−９および２７−３０から選択されるペプチドを投与することを含み、ここで、インターロイキン−２シグナル伝達が２型糖尿病と関連する、方法。
【請求項７７】
細胞または対象におけるインターロイキン１７（ＩＬ−１７）を調節および／または減少させる方法であって、インターロイキン１７（ＩＬ−１７）シグナル伝達を減少または抑制するのに十分な量のＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．３−９および２７−３０から選択されるペプチドを投与することを含み、ここで、ＩＬ−１７が２型糖尿病と関連する、方法。
【請求項７８】
細胞または対象におけるインターロイキン１７（ＩＬ−１７）を調節および／または減少させるための方法であって、インターロイキン１７（ＩＬ−１７）シグナル伝達を減少または抑制するのに十分な量でＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．３−９および２７−３０から選択されるペプチドを投与することを含み、ここで、より一般的には、インターロイキン１７（ＩＬ−１７）シグナル伝達が、Ｉ型糖尿病、２型糖尿病、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、クローン病、炎症性腸疾患、慢性閉塞性肺疾患、喘息、動脈硬化症、血管炎、高血圧症、甲状腺炎、原発性胆道性肝硬変、パジェット病、アジソン病、急性呼吸窮迫症候群、急性肺損傷、および／または無菌性慢性炎症を含む群から選択される状態と関連する、方法。
【請求項７９】
２型糖尿病を発症するリスクのある患者を識別する方法であって、該方法が、検査されるべき患者からＴ細胞を含むサンプルを得ることと、該サンプルをＣＤ４０タンパク質を結合するペプチドと接触させることと、該ＣＤ４０結合ペプチドを検出することと、該ＣＤ４０結合量からＴｈ４０細胞のレベルを測定することとを含み、ここで、Ｔ細胞総数の２５％を超えるＴｈ４０細胞のレベルは、患者が２型糖尿病を発症するリスクがあることを示す、方法。
【請求項８０】
自己免疫疾患および／または２型糖尿病を発症するリスクがある患者を識別する方法であって、該方法は、検査されるべき患者からＴ細胞を含むサンプルを得ることと、該サンプルをＣＤ４０タンパク質を結合するペプチドと接触させることと、該ＣＤ４０結合ペプチドを検出することと、該ＣＤ４０結合量からＴｈ４０細胞のレベルを測定することとを含み、ここで、Ｔ細胞総数の２５％を超えるＴｈ４０細胞のレベルは、患者が自己免疫疾患および／または２型糖尿病を発症するリスクがあることを示す、方法。
【請求項８１】
自己免疫疾患および／または２型糖尿病を予防、調節、または減少させる方法であって、ＣＤ１５４結合部位でＣＤ４０提示細胞に特異的に結合する治療有効量のペプチドを、それを必要とする対象に投与することを含む、方法。
【請求項８２】
前記ペプチドがＣＤ４０に結合する、請求項７１〜８１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８３】
前記ペプチドが、１０−６より大きいＫｄでＣＤ４０タンパク質に結合する、請求項７１〜８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８４】
前記ペプチドが、ＣＤ４０とＣＤ１５４との相互作用に影響を与える、請求項７１〜８３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８５】
前記ペプチドが、ＣＤ４０のＣＤ１５４への結合を抑制する、請求項７１〜８４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８６】
前記ペプチドは、ＣＤ４０がＣＤ１５４と相互作用する部位でＣＤ４０を結合する、請求項７１〜８５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８７】
前記ペプチドが、Ｔｈ４０細胞の増殖を予防するような方法で、ＣＤ４０とＣＤ１５４との相互作用に影響を与える、請求項７１〜８６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８８】
前記ペプチドが、Ｔｈ４０細胞の数を減少するような方法で、ＣＤ４０とＣＤ１５４との相互作用に影響を与える、請求項７１〜８７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８９】
前記ペプチドが、前記ペプチドで処理された細胞集団のサイトカイン発現プロファイルを変化させるような方法で、ＣＤ４０とＣＤ１５４との相互作用に影響を与える、請求項７１〜８８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９０】
前記ペプチドが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項７１〜８９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９１】
前記ペプチドがＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０の群から選択されるアミノ酸配列である、請求項７１〜８９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９２】
前記ペプチドが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３−９，２４−３０，および３２の群から選択されるアミノ酸配列である、請求項７１〜８９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９３】
対象における自己免疫疾患および／または自己炎症性疾患を予防、調節、減少、治療および／または逆転させるための方法であって、ＣＤ１５４／ＣＤ４０リガンドとＣＤ４０との相互作用に影響を与える治療有効量のペプチドを、２型糖尿病を有する対象に投与することを含む、方法。
【請求項９４】
対象における自己炎症性疾患および／または自己炎症性疾患を予防、調節、減少、治療および／または逆転させるための方法であって、ＣＤ１５４／ＣＤ４０リガンドとＣＤ４０との相互作用に影響を与える治療有効量のペプチドを投与することを含み、ここで、より一般的には、対象が、Ｉ型糖尿病、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、クローン病、炎症性腸疾患、慢性閉塞性肺疾患、喘息、動脈硬化症、血管炎、高血圧症、甲状腺炎、原発性胆道性肝硬変、パジェット病、アジソン病、急性呼吸窮迫症候群、急性肺損傷、２型糖尿病、および／または無菌性慢性炎症を含む群から選択された状態に罹患している、方法。
【請求項９５】
対象における自己免疫疾患および／または自己炎症性疾患を予防、調節、減少、治療および／または逆転させるための方法であって、ＧＬＵＴ  ４を調節するような方法でＣＤ４０タンパク質と相互作用するペプチドを、自己免疫疾患および／または自己炎症性疾患を有する対象に投与することを含む、方法。
【請求項９６】
対象における自己免疫疾患および／または自己炎症性疾患を予防、調節、減少、治療および／または逆転させるための方法であって、ＩＮＦγを調節するような方法でＣＤ４０タンパク質と相互作用するペプチドを、自己免疫疾患および／または自己炎症性疾患を有する対象に投与することを含む、方法。
【請求項９７】
対象における自己免疫疾患および／または自己炎症性疾患を予防、調節、減少、治療および／または逆転させるための方法であって、インターロイキン−２（ＩＬ−２）を調節するような方法でＣＤ４０タンパク質と相互作用するペプチドを、自己免疫疾患および／または自己炎症性疾患を有する対象に投与することを含む、方法。
【請求項９８】
対象における自己免疫疾患および／または自己炎症性疾患を予防、調節、減少、治療および／または逆転させるための方法であって、インターロイキン−１７（ＩＬ−１７）を調節するような方法でＣＤ４０タンパク質と相互作用するペプチドを、自己免疫疾患および／または自己炎症性疾患を有する対象に投与することを含む、方法。
【請求項９９】
前記ペプチドがＣＤ４０に結合する、請求項９３〜９８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１００】
前記ペプチドが、１０−６より大きいＫｄでＣＤ４０タンパク質に結合する、請求項９３〜９９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０１】
前記ペプチドが、ＣＤ４０とＣＤ１５４との相互作用に影響を与える、請求項９３〜１００のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０２】
前記ペプチドが、ＣＤ４０のＣＤ１５４への結合を抑制する、請求項９３〜１０１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０３】
前記ペプチドは、ＣＤ４０がＣＤ１５４と相互作用する部位でＣＤ４０を結合する、請求項９３〜１０２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０４】
前記ペプチドが、Ｔｈ４０細胞の増殖を予防するような方法で、ＣＤ４０とＣＤ１５４との相互作用に影響を与える、請求項９３〜１０３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０５】
前記ペプチドが、Ｔｈ４０細胞の数を減少するような方法で、ＣＤ４０とＣＤ１５４との相互作用に影響を与える、請求項９３〜１０４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０６】
前記ペプチドが、前記ペプチドで処理された細胞集団のサイトカイン発現プロファイルを変化させるような方法で、ＣＤ４０とＣＤ１５４との相互作用に影響を与える、請求項９３〜１０５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０７】
前記ペプチドが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０の群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項９３〜１０６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０８】
前記ペプチドが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０の群から選択されるアミノ酸配列である、請求項９３〜１０７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０９】
前記ペプチドが、脾臓ＣＤ４ｈｉ細胞、ＣＤ８細胞、および他の抗原提示細胞を含む、約４５ｋＤａのＣＤ４０を発現する複数の骨髄由来の細胞型に結合する、請求項９３〜１０８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１０】
前記ペプチドが、天然の供給源から得られるか、または合成される、請求項９３〜１０９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１１】
筋肉内（ＩＭ）送達、静脈内（ＩＶ）送達、皮下（ＳＣ）送達、経口送達、胃管送達、エモリエント／皮膚送達、経皮パッチまたは鼻噴投与を含む群から選択される送達方法でＣＤ４０結合タンパク質を対象に投与する、請求項９３〜１１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１２】
移植可能なデバイス、親水性ポリマー製剤、透過性ポリマー膜、注入可能なゲルインプラント、溶媒抽出システム、相反転システム、感温性ゲル、ｐＨ依存性ｉｎ  ｓｉｔｕゲル、微粒子、マイクロスフェア、ナノ粒子、ナノスフェア、生体分解性インプラント、または光活性化デポを含む群から選択される送達方法でＣＤ４０結合タンパク質を対象に投与する、請求項９３〜１１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１３】
本明細書に記載の組成物、方法またはシステム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、ＣＤ４０とＣＤ１５４との相互作用を抑制し、治療有効量のペプチドを必要とする対象における心血管疾患および／またはアテローム性動脈硬化症の予防、調節および軽減のための方法または使用、ならびにそのような化合物のＴ細胞活性の調節および疾患の治療における使用に関するものである。さらに、本開示は、ＣＤ４０とＣＤ１５と４の相互作用を抑制、影響、破壊、ブロック、および／または変化させるＣＤ４０結合する治療有効量のペプチドの投与を介して、２型糖尿病および／または自己炎症性疾患を予防、調節、減少、治療および／または逆転する方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
自己免疫疾患は、正常な体の部分に対する異常な免疫応答から生じる状態である。身体自体の臓器、組織、細胞を攻撃する免疫系が原因で、８０以上の疾患が発生する。１型糖尿病、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、および炎症性腸疾患は、人類全体の広い範囲の人々に影響を与える一般的な自己免疫疾患である。重要なことに、上記の自己免疫疾患は、日常生活と日常の仕事に影響を与えるかなりの数の人々を苦しめ、たくさんの金銭、医療的資源、時間、医療従事者のケアを必要とする。
【０００３】
世界保健機関（ＷＨＯ）によると、２０１５年に推定する１７７０万人が心血管疾患（ＣＶＤ）で死亡し、これは全世界の死亡の３１％を占めた。ＣＶＤは心臓血管疾患としても知られ、多くの問題を含み、その多くはアテローム性動脈硬化症と呼ばれるプロセスに関連している。さらに、２０１１年にＨｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｑｕａｌｉｔｙ（ＡＨＲＱ）が後援するＨｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｃｏｓｔ  ａｎｄ  Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｊｅｃｔ（ＨＣＵＰ）によると、アテローム性冠動脈硬化だけで１０４億ドル以上の病院費用を占めている。したがって、２０１１年には、アテローム性冠動脈硬化だけでも、米国の入院患者の中で最も高額な１０疾患の一つに数えられている。
【０００４】
心血管疾患とアテローム性動脈硬化
アテローム性動脈硬化は、心臓発作や脳卒中を引き起こす可能性のある動脈プラーク形成によって定義される。動脈プラーク形成は、コレステロール、死細胞、樹状細胞、発泡細胞、マクロファージ、肥満細胞、単球、平滑筋細胞、Ｔ細胞、コラーゲン、カルシウム、およびフィブリンを含むがこれらに限定されない細胞、物質、老廃物、および細胞屑の沈着によって引き起こされる。動脈壁とプラーク内の炎症性変化は、アテローム性動脈硬化性疾患の発症に重要な役割を果たし得る。そのため、自己免疫および炎症性疾患としてのアテローム性動脈硬化症の概念が検討されてきたが、その治療法は確立されていない。炎症を制御することの重要性は、自己免疫、炎症、および心血管疾患および死の他の側面を標的とした現在の臨床試験によって強調されている。
【０００５】
例えば、ＣＩＲＴ（Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｒｉａｌ）は、メトトレキサートを使用してインターロイキン−６（ＩＬ−６）を標的とし、メトトレキサートが２型糖尿病を有するアテローム性動脈疾患患者の心筋梗塞、脳卒中、および心血管死の割合を減少させるかどうかを試験しようとしている。別の例には、カナキヌマブが炎症誘発性サイトカインであるインターロイキン−１β（ＩＬ−１β）を抑制することで、高リスクのままの心臓発作患者における心筋梗塞の再発、脳卒中、心血管疾患による死亡率を低下させるかどうかを検討しているＣＡＮＴＯＳ試験（Ｃａｎａｋｉｎｕｍａｂ  Ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  Ｏｕｔｃｏｍｅｓ  Ｓｔｕｄｙ）が含まれる。このリスクは、炎症性バイオマーカーである高感度Ｃ反応性蛋白（ｈｓＣＲＰ）のレベルが上昇することで明らかになる。これらの研究が、炎症がアテローム血栓症およびアテローム性動脈硬化症において重要な役割を果たしていることを認めているが、炎症自体を抑制することで血管イベント発生率が低下するかどうかは不明であることも認識している。
【０００６】
哺乳類およびヒトのアテローム性動脈硬化性病変は、単球、マクロファージ、内皮細胞、平滑筋細胞、血小板、およびＴ細胞を含む血管壁の慢性炎症性−線維増殖性疾患を特徴とする。これらの細胞型のそれぞれは、ＣＤ４０／ＣＤ１５４の共刺激ペアのいずれかまたは両方を発現することができる。このダイアドは免疫応答の増強に関与しており、関節リウマチ、多発性硬化症、１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）を含む多くの慢性炎症性疾患に寄与している可能性がある。しかしながら、この高度にアテローム形成ダイアドに対して実行可能な治療法は存在しない。
【０００７】
炎症は、好中球、好酸球、好塩基球、肥満細胞、マクロファージ、血小板、内皮細胞などの炎症性細胞が、炎症性のイベントや、微生物の侵入、細胞の損傷、または他の刺激物などの有害な刺激に反応して起こる。体内の炎症反応は、例えば、侵入微生物の場合、炎症反応が、免疫系による除去のために感染物質を局在化に重要なステップであるため、有益である。しかし、自己免疫では、感染がないにもかかわらず、重度の炎症が存在し、または持続している。この場合の炎症は、無菌性慢性炎症（ＡＣＩ）と呼ばれ、正常組織を破壊するため、有害である。この無菌性炎症の結果は、生命を改変するものであり、場合によっては生命を脅かすものでもある。さらに、急性炎症と同様に、このプロセスはＴ細胞を含む免疫細胞によって介される。
【０００８】
現代医学の大きな関心事は、自己免疫疾患中に発生することのようなＡＣＩをどのようにコントロールするか、また、外傷に起因する急性炎症をどのようにコントロールするかである。慢性および急性の炎症は、組織の変性を引き起こし、最終的には主要な臓器の機能を失うことになる。ＡＣＩは単一の疾患に限定されなく、以下を含むが、これらに限定されない多数の自己免疫疾患に助けがある：１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）、多発性硬化症（ＭＳ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、関節リウマチ（ＲＡ）、クローン病、炎症性腸疾患（ＩＢＳ）、自己免疫性喘息を含む慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、アテローム性動脈硬化症、血管炎、高血圧症、橋本病およびグレーブス病を含む甲状腺炎、原発性胆汁性肝硬変、パジェット病、アジソン病、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、急性肺損傷、および臓器移植に伴う無菌性慢性炎症（ＡＣＩ）。
【０００９】
自己免疫疾患は、臓器特異的（主に１つの臓器に向けられている）と非臓器特異的（全身に広く広がっている）の２種類に分類される。臓器特異的自己免疫疾患の例としては、膵臓に影響を与えるインスリン依存性１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）、甲状腺に影響を与える橋本甲状腺炎およびグレーブス病、血液に影響を与える悪性貧血、副腎に影響を与えるアジソン病、肝臓に影響を与える慢性活動性肝炎、筋肉に影響を与える重症筋無力症、神経系の組織に影響を与える多発性硬化症（ＭＳ）である。非臓器特異的自己免疫疾患の例としては、関節リウマチ（ＲＡ）である。自己免疫疾患は、常に慢性的で衰弱させ、生命を脅かす。国立衛生研究所（ＮＩＨ）は、最大２３５０万人のアメリカ人が自己免疫疾患に罹患し、その有病率が上昇していると推定している。自己免疫疾患は、６５歳までのすべての年齢層の女性の死因の主要１０位以内に入っていると推定されている。
【００１０】
外傷や敗血症の際に見られるような急性炎症もまた、免疫細胞を介したものである。このプロセスにおける分子メディエーターの包括的、完全、網羅的なリストはまだ同定されていないが、Ｔ細胞、リンパ球、好中球、マクロファージ、単球、好中球、好酸球、好塩基球、マスト細胞、および他の炎症性細胞の顕著な役割が強く関与している。したがって、これらの細胞型を調節するプロセスが炎症反応を制御し得る。
【００１１】
２型糖尿病
ＣＤ４０−ＣＤ１５４ダイアドは１型糖尿病に重要な役割を果たす主要な炎症経路を構成している。２型糖尿病（Ｔ２Ｄ）は、歴史的にも科学的にも、主に代謝性疾患として分類されてきたが、２型糖尿病は、単なる代謝性疾患ではなく、自己免疫疾患として再定義される過程にある。
【００１２】
米国疾病対策センターの２０１７年全国糖尿病統計報告書によると、２０１５年には、すべての年齢層の推定３，０３０万人−または米国人口の９．４％が糖尿病に罹患していた。推定２，３００万人−または米国人口の７．２％が糖尿病と診断されており、糖尿病と診断された人の約９５％が２型糖尿病である。空腹時血漿グルコース値に基づいて、２型糖尿病の症例の３分の１から２分の１は未診断と未治療である。
【００１３】
２型糖尿病が４５歳以上の人に発症することが最も多いが、２型糖尿病は２００１年から２００９年にかけてアメリカの若者に２１％増加し、ＳＥＡＲＣＨ  ｆｏｒ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｉｎ  Ｙｏｕｔｈと呼ばれる大規模な研究では、２００２年から２０１２年の間に、子供および十代の若者に新たに診断された２型糖尿病の症例は、研究期間の各年で約４．８％増加したことが分かった。
【００１４】
主要な併存疾患が糖尿病を複雑にしており、最も一般的なのは虚血性心疾患や脳卒中を含む心血管疾患（１，０００人あたり７０．４人）である。全体では、２０１２年の米国糖尿病協会の推計によると、米国での直接的・間接的な推定全体コストは２４５０億ドルで、その中には１，７６０億ドルの直接医療費と６９０億ドルの生産性低下が含まれる。
【００１５】
１型糖尿病も２型糖尿病も、アテローム性動脈疾患（ＣＡＤ）、脳卒中、末梢動脈疾患の強力的な独立した危険因子である。アテローム血栓症は、一般的な北米の人口における全死亡の約３３％と比較して、北米の糖尿病患者の全死亡の６５％から８０％を占める。したがって、効果的であり、かつ長期間忍容可能な治療レジメンは、個人にとっても公衆衛生の観点からも有益であろう。理想的な抗糖尿病薬は、高血糖を矯正し、大血管合併症を予防し、２型糖尿病（「Ｔ２Ｄ」）の原因となる病態生理学的障害を矯正する薬であり得る。インスリン抵抗性はＴ２Ｄに基本的であるが、β細胞障害は、さらに合併症になるインスリン抵抗性とインスリン分泌との間の不均衡がことと共に最終的に起こる。したがって、治療的に有益な治療アプローチは、インスリン抵抗性を逆転させ、β細胞機能を改善することを目的とし得る。
【００１６】
Ｔ２Ｄは常に肥満と一致しているが、最近では遺伝的と環境的な要因が疾患の原因として記載されている。さらに、Ｔ１Ｄと同様にＴ２Ｄには、Ｔ２Ｄ疾患の開始、発生、進行の原因および／または推進因子である顕著な炎症成分があることを示す追加の研究が明らかになった。ＣＤ４０−ＣＤ１５４炎症性ダイアドは、自己免疫性炎症を促進する分子ドライバーとして作用し、ダイアドの過剰なレベルに影響を与えることが、Ｔ２Ｄの評価されていないが寄与している要因であり得る。
【００１７】
一般に、炎症は、好中球、好酸球、好塩基球、肥満細胞、マクロファージ、血小板、内皮細胞、Ｔ細胞およびＢ細胞を含むがこれらに限定されないリンパ球などの炎症性細胞が、炎症性のイベントや、微生物の侵入、細胞の損傷、または他の刺激物などの有害な刺激に反応して起こる。体内の炎症反応は、例えば、侵入微生物の場合、炎症反応が、免疫系による除去のために感染物質を局在化に重要なステップであるため、有益である。しかし、自己免疫では、感染がないにもかかわらず、重度の炎症が存在し、または持続している。この場合の炎症は、無菌性慢性炎症（ＡＣＩ）と呼ばれ、正常組織を破壊するため、有害である。この無菌性炎症の結果は、生命を改変するものであり、場合によっては生命を脅かすものでもある。さらに、急性炎症と同様に、このプロセスはＴ細胞を含む免疫細胞によって介される。
【００１８】
現代医学の大きな関心事は、自己免疫疾患中に発生することのようなＡＣＩをどのようにコントロールするか、また、外傷に起因する急性炎症をどのようにコントロールするかである。慢性および急性の炎症は、組織の変性を引き起こし、最終的には主要な臓器の機能を失うことになる。ＡＣＩは単一の疾患に限定されなく、以下を含むが、これらに限定されない多数の自己免疫疾患に助けがある．：１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、クローン病、炎症性腸疾患、自己免疫性喘息を含む慢性閉塞性肺疾患、アテローム性動脈硬化症、血管炎、高血圧症、橋本病およびグレーブス病を含む甲状腺炎、原発性胆汁性肝硬変、パジェット病、アジソン病、急性呼吸窮迫症候群、急性肺損傷、および臓器移植に伴う無菌性慢性炎症。
【００１９】
自己免疫疾患は、臓器特異的（主に１つの臓器に向けられている）と非臓器特異的（全身に広く広がっている）の２種類に分類される。臓器特異的自己免疫疾患の例としては、膵臓に影響を与えるインスリン依存性１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）、甲状腺に影響を与える橋本甲状腺炎およびグレーブス病、血液に影響を与える悪性貧血、副腎に影響を与えるアジソン病、肝臓に影響を与える慢性活動性肝炎、筋肉と神経の間の関節にいるレセプターに影響を与える重症筋無力症、神経系の組織に影響を与える多発性硬化症である。非臓器特異的自己免疫疾患の例としては、関節リウマチである。自己免疫疾患は、常に慢性的で衰弱させ、生命を脅かす。国立衛生研究所（ＮＩＨ）は、最大２３５０万人のアメリカ人が自己免疫疾患に罹患し、その有病率が上昇していると推定している。自己免疫疾患は、６５歳までのすべての年齢層の女性の死因の主要１０位以内に入っていると推定されている。
【００２０】
外傷や敗血症の際に見られるような急性炎症もまた、免疫細胞を介したものである。このプロセスにおける分子メディエーターの包括的、完全、網羅的なリストはまだ同定されていないが、Ｔ細胞、リンパ球、好中球、マクロファージ、単球、好中球、好酸球、好塩基球、マスト細胞、および他の炎症性細胞の顕著な役割が強く関与している。したがって、これらの細胞型を調節するプロセスが炎症反応を制御する可能性がある。
【００２１】
ユニークなＴ細胞サブセットは、自己免疫疾患の発症に役立つことが示されている。これらの細胞は、表現型的にＣＤ４ｌｏＣＤ４０＋を特徴とし、Ｔｈ４０細胞と呼ばれている。ＣＤ４０の発現は、一般的に抗原提示細胞と関連しており、先行技術の大部分は、ＣＤ４０がＢ細胞、マクロファージ、単球、およびその他の細胞に発現していると記載し；しかしながら、ＣＤ４０タンパク質はＴ細胞にも発現している。Ｔｈ４０細胞は、ナイーブな非自己免疫マウスおよびヒトでは末梢ＣＤ４＋コンパートメントの一部を含っているが、自己免疫を起こしやすいマウスおよびヒトでは、この割合はＣＤ４＋コンパートメントの５０％にまで劇的に拡大している。これらのＴ細胞は、初期活性化マーカーを発現せず、非チャレンジマウスのナイーブ表現型で発現する。
【００２２】
ＮＯＤ（非肥満糖尿病）マウスでは、Ｔｈ４０細胞は、糖尿病発症前であっても、脾臓、リンパ節および膵臓で誇張されたレベルで発生する。非自己免疫性対照や２型糖尿病患者と比較して、１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）患者の末梢血中には、これらのＴ細胞の数とパーセンテージが増加していることが明らかになる。
【００２３】
Ｔｈ４０細胞の観察された増加は、それらのＴ細胞が抗原応答性であること、またはＣＤ４０発現が活性化誘導されていることを意味する可能性がある。さらに、いくつかの糖尿病原性Ｔ細胞クローンはＣＤ４０＋である。ＮＯＤマウスおよび糖尿病前のＮＯＤ（１２〜週齢）マウスからの精製一次Ｔｈ４０細胞は、１型糖尿病をＮＯＤ／Ｓｃｉｄ（非肥満糖尿病／重度複合免疫不全症）レシピエントマウスに移すことに成功し、Ｔｈ４０Ｔ細胞サブセットの病原性を直接実証する。Ｔｈ４０細胞が膵島β細胞に浸潤してインスリン産生を破壊し、それによって膵島抗原特異性を示唆することが示されている。また、Ｔｈ４０細胞が糖尿病移行に必要であることも示されている。ＣＤ４０が枯渇し、次いでＣＤ２５、Ｔｒｅｇが枯渇した末梢（脾臓および所属リンパ節）Ｔ細胞は、糖尿病をＳｃｉｄ（重症複合免疫不全症）レシピエントに移行させることができなかった。Ｔｒｅｇ細胞を除去しても、自己攻撃性ＣＤ４０＋Ｔ細胞サブセットが欠乏していれば、疾患移行は起こらない。
【００２４】
自己免疫の発症にはＴｈ４０細胞が重要であるが、もう一つの重要な因子はＣＤ４０−リガンドであるＣＤ１５４の発現である。ＣＤ１５４は、ＣＤ３／ＴＣＲ刺激に応答して活性化Ｔ細胞上に一時的に誘導される。ＣＤ１５４の発現は、血小板、単球、好塩基球、好酸球、樹状細胞、線維芽細胞、平滑筋、内皮細胞でも確認されている。ＣＤ１５４は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリーのメンバーであり、ＣＤ１５４の可溶性形態（ｓＣＤ１５４）が記載されている。したがって、ｓＣＤ１５４はサイトカインのように作用する可能性がある。Ｔ１Ｄの研究ではＣＤ１５４が遺伝的に関連していないにもかかわらず、Ｔ１ＤではｓＣＤ１５４は有意に上昇しており、疾患過程での役割を果たし得る。自己免疫にＣＤ４０−ＣＤ１５４相互作用の重要性が確立されている。ＣＤ４０−ＣＤ１５４  相互作用を抑制することで、ＮＯＤマウスモデルを用いたコラーゲン誘発関節炎、実験的自己免疫性脳炎、前立腺炎、１型糖尿病を予防できる。糖尿病モデルでは、９週齢ではブロックする抗体が糖尿病予防効果を示さなかったため、３週齢のＮＯＤマウスにＣＤ１５４ブロックする抗体を投与することが必要であった。
【００２５】
また、以前の研究では、Ｔｈ４０細胞サブセットが、ＣＤ４０が関与しているときに、ＲＡＧ１およびＲＡＧ２（組換え活性化遺伝子）の転写、翻訳、および核移行を誘導することが示されている。ＣＤ３の関与がＴ細胞ではＲＡＧ１とＲＡＧ２を誘導しない。ＲＡＧ１／ＲＡＧ２誘導に続いて、ＣＤ４０が介するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）リビジョン（ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｒｅｖｉｓｉｏｎ）が末梢Ｔ細胞で起こる。ＴＣＲリビジョンのＣＤ４０誘導は、ＲＡＧ依存性である。ＴＣＲ−Ｔｇマウスから単離されたＴ細胞は、ＣＤ４０が関与するとＴＣＲリビジョンを受けるが、ＴＣＲ−Ｔｇ．ＲＡＧ−／−マウスからのＴ細胞が、ＣＤ４０が関与するとＴＣＲリビジョンを受けない。
【００２６】
ＣＤ４０は、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ−Ｒ）ファミリーの５０ｋＤａの膜タンパク質である。それは、ホモ三量体として構成的に発現される。一般に、すべてのＣＤ４０発現細胞型の刺激は、炎症に寄与する操作を誘導し、例えば、共刺激および接着分子の増強、およびタンパク質分解酵素のアップレギュレーションを誘導する。
【００２７】
ＣＤ４０のリガンド−ＣＤ１５４−は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）ファミリーに属する３９ｋＤａのタンパク質である。ＣＤ４０は、３つのモノマーの界面でＣＤ１５４と結合する三量体を形成する。ＣＤ１５４は、ＣＤ１５４が活性化後に細胞表面から流される可溶性生物学的に活性な形態（ｓＣＤ１５４）でも存在するので、表面発現ＣＤ１５４を超えて細胞上で一般的に発現される。ｓＣＤ１５４の主な供給源は血小板である。
【００２８】
野生型マウスが一般的にアテローム性動脈硬化症の発症や進行に対する抵抗性が高いため、遺伝子操作されたマウスモデルはアテローム性動脈硬化症や心血管疾患に関する研究と開発に利用される。先行研究では、モノクローナル抗体を用いてＣＤ４０／ＣＤ１５４相互作用をブロックする試みが行われており、このアプローチは、Ａｐｏｅ−／−またはＬＤＬｒ欠損のアテローム性動脈硬化モデルを用いたいくつかのマウスモデル研究で有効であることが証明されている。さらに、ＣＤ１５４の欠失で構築されたこれらの同じマウスモデルでは、全体でプラークの形成が大幅に減少し、より安定したプラーク表現型の産生にも寄与していることができる。臨床的に安定したプラークとは、コラーゲンと平滑筋の含有量の増加、厚い線維性のキャップ、Ｔ細胞、マクロファージ、脂質の蓄積の観察可能な減少によって識別可能であり、表示される。
【００２９】
Ｔ２Ｄに関する研究と開発には、マウスモデルがインスリン抵抗性と、β細胞が人間のＴ２Ｄに特徴的な十分に補償できないことを表現できるため、遺伝子操作されたマウスモデルが利用される。Ｔ２Ｄのマウスモデルを含む動物モデルの多くは肥満であり、肥満がＴ２Ｄの発症に密接に関係しているヒトの状況を反映している。
【００３０】
慢性炎症と急性炎症の両方に対処し、制御するために、複数の治療法が提案されている。多くのアプローチでは、局所的な炎症を引き起こす細胞内物質であるロイコトリエンやプロスタグランジンの産生を攻撃する非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤＳ）が使用されている。その他の治療法としては、シクロホスファミド、メトトレキサート、アザチオプリンなどのより強力な免疫抑制剤を使用し、免疫反応を抑制して病気の進行を止める。さらに他の治療は、自己免疫疾患の間に起こるように、自己組織に対する免疫応答を変化させるように設計されたモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を使用に関する。ただし、これらの治療法はすべて、常に、重度の長期的な副作用がある。
【００３１】
現在の免疫調節療法は、合併症をもたらせるモノクローナル抗体治療に依存し得る。例えば、被験者に投与された抗体は、意図しない標的と交差反応し、重篤な腎合併症を引き起こす可能性があり、ＣＤ１５４に対して特異的に作用する抗体は、塞栓性合併症を引き起こす可能性がある。さらに、ＣＤ４０−ＣＤ１５４相互作用は、抗体生成において重要な役割を果たし得り、これは、モノクローナル抗体の投与が自己抗体生成およびさらなる合併症を誘導し、正常な免疫機能の回復を抑制し得ることを示唆している（一般的に参照）。
【００３２】
他の研究では、モノクローナル抗体を用いてＣＤ１５４相互作用をブロックすること、またはモノクローナル抗体を用いてＣＤ４０受容体を制限することは、アテローム性動脈硬化症を消失させ、そしてより低い炎症およびより高い線維化を特徴とするより好ましいプラーク表現型を与えることができることが実証されている。これらの研究はさらに、ＣＤ１５４の相互作用を抑制することにより、新内膜形成と再狭窄が制限される可能性があることを実証している。ルーパス腎炎に関する研究では、ＣＤ４０を介したシグナルをブロックすることで、抗二本鎖ＤＮＡ（抗ｄｓＤＮＡ）抗体を減少させるのができることが実証されている。さらに、これらの研究は、抗ｄｓＤＮＡの減少が血清補体レベルの上昇および糸球体炎症の減少と関連していることを実証しており、これは臨床的観点から積極的に見ることができる。しかしながら、ＣＤ４０／ＣＤ１５４ダイアドを標的とするモノクローナル抗体の使用は、血栓安定化におけるＣＤ１５４の機能に関連し得る血栓塞栓性イベントのために放棄された。ＣＤ１５４がインテグリンαＩＩｂβ３との相互作用により血栓を安定化させ、ＣＤ１５４を抑制することで血栓の安定性が低下し、結果として血栓症の原因となる塞栓を排出すると推測される。
【００３３】
また、Ｔ細胞の活性化と効果的な免疫応答の発達に重要なＣＤ４０−ＣＤ１５４の共刺激相互作用を抑制しようとするために、低分子の研究も行われている。例えば、対称性ポリスルホン化ナプチルアミン−ベンズアミド尿素誘導体であるスラミンについて、ＣＤ１５４のその受容体への結合を抑制し、ヒトＢ細胞のＣＤ１５４誘発増殖を阻止する能力が研究され；しかしながら、その多くの可逆性毒性（嗜眠、発疹、疲労、貧血、高血糖症、低カルシウム血症、凝固病、好中球減少症、腎合併症、肝合併症）、タンパク質が豊富な培地での活性の喪失、および正の共刺激相互作用との妨害により、この薬および他の関連する低分子候補薬は、ＣＤ４０−ＣＤ１５４ダイアドの有効な治療源とはなりにくいものとなっている。
【００３４】
原発病変と各組織の相対的な重要性については不確実性があり、肝臓の代謝異常と脂肪、筋肉、膵β細胞などの末梢組織の代謝異常が全部で２型糖尿病の因子となっている可能性が高い。さらに、２型糖尿病の原因が、遺伝的影響と環境的影響の両方によって理解されておらず、複雑であり、混乱しているが、高血糖自体が膵β細胞の機能を抑制すると考えられている。
【００３５】
したがって、ヒトにおける２型糖尿病は、典型的には、ますます破壊的な段階（ｐｈａｓｅ  または  ｓｔａｇｅ）の進行性シリーズを経て発症する。最初に、前糖尿病は耐糖能障害を特徴とし、体が食後にグルコースをクリアすることが困難であり（食後高血糖症）、および／または体がインスリンへの感受性を低下する可能性がある。第２の段階では、食後高血糖症および基礎高血糖症が発生する一方で、膵臓のインスリン産生β細胞が増加する速度で機能不全になる。疾患進行の次の段階では、空腹後も高血糖が起こり、細胞レベルではβ細胞の萎縮が起こる。最終的には、疾患進行の最終段階または終末期になると、β細胞はもはやインスリンを産生および／または放出することができなくなり、患者さんはインスリン補充療法を必要とする。
【００３６】
Ｔ２Ｄは臨床的に高血糖症を特徴とし、病理学的に相対的なインスリン分泌障害を伴うインスリン抵抗性を特徴としている。遺伝的にＴ２Ｄを発症しやすい個人は、明らかに糖尿病が臨床的に発症する前に１５〜２５年以上の間、インスリン抵抗性（最も早い検出可能な代謝障害）を経験する可能性がある。Ｔ２Ｄは従来、年齢と肥満と関連していったが、若年者のＴ２Ｄの診断が増加していることから、これら２つの因子だけでは疾患の信頼できる唯一の予測因子ではないことが明らかになっている。体格指数（ＢＭＩ）もまた、明らかにＴ２Ｄと関連しているが、現在では遺伝的要因と環境的要因の両方が寄与因子としても識別される。肥満は炎症性の状態を作り出し、肥満または他の状態に起因する持続的な炎症は、Ｔ２Ｄ発症において重要であるかもしれない。
【００３７】
したがって、自己免疫および炎症性経路およびＣＤ４０−ＣＤ１５４に関連するダイアドによって暗示されるＴ２Ｄの治療および予防のための、より安全でより効果的な方法が現有技術で必要とされる。本発明は、治療有効量のＣＤ４０結合ペプチドの投与によるＴ２Ｄの治療のための方法を記載することによって、この必要性に対処することができる。
【００３８】
したがって、無菌性慢性炎症（ＡＣＩ）によって暗示される心血管疾患（ＣＶＤ）およびＴ２Ｄの治療および予防のための、より安全でより効果的な方法が現有技術で必要とされている。本発明は、ＣＤ４０−ＣＤ１５４ダイアドに影響、調節、ブロック、抑制、または調節させるペプチドの治療有効量の投与によるアテローム性動脈硬化症の治療のための方法を記載することによって、この必要性に対処することができる。さらに、本発明は、自己抗体の生成を防止という付加的な利点を提供することでき、したがって正常な免疫機能の再開ことができる。
【００３９】
この背景の記述は、情報提供のみを目的としたものであり、潜在的に関連するすべての背景を完全にまたは網羅的に説明することを意図したものではない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００４０】
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【非特許文献５７】Ｙａｎｇ，２０１３，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ，３６（４）：１０３３−４６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００４１】
本発明は、身体（ｃｏｒｐｏｒｅａｌ  ｂｏｄｙ）内で生じるアテローム性動脈硬化症を予防、調節、および／または低減するための新規な方法を提供し得る。アテローム性動脈硬化症は、動脈の壁における白血球の慢性的な炎症反応の結果として生じ得る。このような慢性的な炎症反応とそれに伴う動脈内のプラークの蓄積は、血中コレステロールやトリグリセリドの上昇、高血圧、喫煙などによって引き起こされると考えられる。
【課題を解決するための手段】
【００４２】
本発明は、Ｔ細胞（Ｔｈ４０細胞）上に発現するＣＤ４０タンパク質とＣＤ４０リガンド（ＣＤ１５４タンパク質）との相互作用が、アテローム性動脈硬化症および自己免疫疾患の発症に重要である可能性があるという知見に基づいている。本発明は、この相互作用に重要であるかもしれないＣＤ４０とＣＤ１５４の重要な残基の解明に基づいている。本発明は、ＣＤ１５４タンパク質が通常結合するであろう部位でＣＤ４０タンパク質と相互作用する小ペプチドの使用により、ＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との間の相互作用を遮断することに関連している。本発明はまた、そのようなペプチドを使用してＴｈ４０細胞のレベルを低下させ、それによって疾患の重症度を低下させることにも関連する。
【００４３】
本発明の一実施形態は、ＣＤ４０タンパク質と相互作用するペプチドをＣＤ４０タンパク質に接触させることからなるアテローム性動脈硬化症を予防する方法である。好ましいペプチドは、２５アミノ酸未満の長さであり、ＣＤ４０タンパク質と結合し、それによってＣＤ１５４タンパク質との相互作用を抑制するものであってもよい；しかしながら、ペプチドの長さは、その意図された所望の結果を実行するペプチドの能力に影響を与える他の多数の因子が存在するため、本明細書の開発において制限とみなされるべきではない。
【００４４】
本発明の一実施形態は、アテローム性動脈硬化症を予防、調節、および／または減少させるための方法であって、この方法が、ＣＤ４０タンパク質と相互作用するペプチドを用いて、ＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との間の相互作用を抑制することを含む。好ましいペプチドは、ＣＤ１５４−結合部位でＣＤ４０タンパク質と相互作用する。好ましくは、そのようなペプチドは、２５アミノ酸未満の長さである。さらに好ましいペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３〜９およびＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２５〜３０から選択されるアミノ酸配列である。
【００４５】
本発明の一実施形態は、アテローム性動脈硬化症を予防、調節、および／または低減するための方法であって、この方法が、ＣＤ１５４／ＣＤ４０リガンドとＣＤ４０との相互作用に影響を与える治療有効量のペプチドを、それを必要とする対象に投与することを含む。本発明の一局面は、ペプチドがＣＤ４０に結合することである。本実施形態では、ペプチドは、１０−６より大きいＫｄでＣＤ４０タンパク質に結合し得る。さらに、この実施形態では、ペプチドは、ＣＤ４０とＣＤ１５４との間の相互作用に影響を与えてもよい。さらに、好ましい実施形態では、ペプチドは、ＣＤ４０のＣＤ１５４への結合を抑制してもよい。さらに、この実施形態では、ペプチドは、ＣＤ４０がＣＤ１５４と相互作用する部位でＣＤ４０に結合する。本実施形態では、ペプチドは、Ｔｈ４０細胞の増殖を防止するような方法で、ＣＤ４０とＣＤ１５４との相互作用に影響を与える。本実施形態では、ペプチドは、Ｔｈ４０細胞の数を減少するような方法で、ＣＤ４０とＣＤ１５４との相互作用に影響を与える。本実施形態では、ペプチドは、前記ペプチドで処理された細胞集団のサイトカイン発現プロファイルを変化させるような方法で、ＣＤ４０とＣＤ１５４との相互作用に影響を与える。
【００４６】
本発明の一実施形態は、動物におけるアテローム性動脈硬化症を調節および／または減少させる方法であって、該方法が、ＩＦＮγ（インターフェロンγ）を調節するような方法でＣＤ４０タンパク質と相互作用するペプチドを動物に投与することを含む。好ましいペプチドは、ＣＤ１５４結合部位でＣＤ４０タンパク質と相互作用し、それによってＩＦＮγを調節するペプチドである。好ましいペプチドは、Ｔｈ４０細胞のレベルを総Ｔ細胞集団の２５％以下に減少させることによって炎症を調節する。そのような方法は、より一般的に、心血管疾患を伴う可能性のあるアテローム性動脈硬化および症状を予防および／または軽減するために使用することができる。
【００４７】
本開発の一実施形態は、心血管疾患および／またはアテローム性動脈硬化症を発症するリスクがある患者を識別する方法であって、該方法は、検査されるべき患者からＴ細胞を含むサンプルを取得することと、該サンプルをＣＤ４０タンパク質を結合するペプチドと接触させることと、該ＣＤ４０結合ペプチドを検出することと、該ＣＤ４０結合量からＴｈ４０細胞のレベルを測定することとを含み、ここで、Ｔ細胞総数の２５％を超えるＴｈ４０細胞のレベルは、患者が心血管疾患および／またはアテローム性動脈硬化症を発症するリスクがあることを示す。
【００４８】
さらに、本発明の別の実施形態は、カルシウムの蓄積、または血管壁の石灰化を予防、調節、または減少させる方法であって、その方法は、ＣＤ１５４結合部位でＣＤ４０提示細胞に特異的に結合する治療有効量のペプチドを、それを必要とする対象に投与することを含む。
【００４９】
本発明の別の実施形態は、アテローム性動脈硬化を予防、調節、および／または低減するためにＣＤ４０結合ペプチドを投与する方法であって、ＣＤ１５４結合部位でＣＤ４０タンパク質と相互作用するペプチドを選択することと、筋肉内（ＩＭ）送達、静脈内（ＩＶ）送達、皮下（ＳＣ）送達、経口送達、胃管送達、エモリエント／皮膚送達、または経皮パッチを含む群から選択される送達方法を選択することとを含む。
【００５０】
本発明の別の実施形態では、動物にアテローム性動脈硬化を予防、調節、および／または減少させるためにＣＤ４０結合ペプチドを投与する方法であって、ＣＤ１５４結合部位でＣＤ４０タンパク質との相互作用するペプチドを選択することと、移植可能なデバイス、親水性ポリマー製剤、透過性ポリマー膜、注入可能なゲルインプラント、溶媒抽出システム、相反転システム、感温性ゲル、ｐＨ依存性ｉｎ  ｓｉｔｕゲル、微粒子、マイクロスフェア、ナノ粒子、ナノスフェア、生体分解性インプラント、または光活性化デポ（ｄｅｐｏｔ）を含む群から選択される多種送達方法を使用することとを含む。
【００５１】
さらに、本発明の別の実施形態は、対象においてＬＤＬコレステロールを低下させる方法であって、その方法は、ＣＤ１５４結合部位でＣＤ４０提示細胞に特異的に結合する治療有効量のペプチドを、それを必要とする対象に投与することを含む。
【００５２】
本発明、身体内で生じるＴ２Ｄを予防、調節、低減、治療および／または逆転させるための新規な方法を提供し得る。さらに、本明細書に開示された発明は、疾患、障害、および状態、特に免疫疾患および炎症性疾患の予防、制御、および治療のために追加的に使用され得る治療方法である。
【００５３】
本発明は、Ｔ細胞（Ｔｈ４０細胞）上に発現するＣＤ４０タンパク質とＣＤ４０リガンド（ＣＤ１５４タンパク質）との相互作用が、２型糖尿病および自己免疫疾患の発症に重要である可能性があるという知見に基づいている。本発明は、この相互作用に重要であるかもしれないＣＤ４０とＣＤ１５４の重要な残基の解明に基づいている。本発明は、ＣＤ１５４タンパク質が通常結合するであろう部位でＣＤ４０タンパク質と相互作用するおよび／または結合する合成した小ペプチドの使用により、ＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との間の相互作用を遮断および／または破壊することに関連している。本発明はまた、そのようなペプチドを使用してＴｈ４０細胞のレベルを低下させ、それによって疾患の重症度を低下させることにも関連する。本発明のペプチドは、ＣＤ４０の機能を変化させるような方法でＣＤ４０分子に直接および／または交互に結合し得る。
【００５４】
自己免疫疾患および状態において、ＣＤ４０の結合は、炎症を促進し得る。したがって、本発明の一実施形態では、ペプチドは、もはや炎症性ではないようにＣＤ４０シグナル伝達を変化させ得る。したがって、一実施形態では、本発明のペプチドは、Ｔｈ４０細胞、膵β細胞、内皮細胞、Ｂ細胞、単球、および／またはマクロファージを含むがこれらに限定されない部位でのＣＤ４０機能を遮断、破壊、妨害、および／または抑制し得る。本発明は、ＣＤ４０を提示し得る任意の細胞のＣＤ４０シグナル伝達経路をするために、本明細書に開示された小妨害ペプチド（ＳＩＰ）の使用を企図する。これらのペプチドは、投与経路に応じて特定の部位で妨害することができる。
【００５５】
本発明の一実施形態は、ＣＤ４０タンパク質と相互作用するペプチドをＣＤ４０タンパク質に接触することを含む２型糖尿病を予防、調節、減少および／または逆転させるための方法である。好ましいペプチドは、２５アミノ酸未満の長さであり、ＣＤ４０タンパク質に結合し、それによってＣＤ１５４タンパク質との相互作用を抑制するペプチドである。
【００５６】
本発明の一実施形態は、２型糖尿病を予防、調節、減少および／または逆転させるための方法であって、この方法が、ＣＤ４０タンパク質と相互作用するペプチドを用いて、ＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との間の相互作用を抑制することを含む。好ましいペプチドは、ＣＤ１５４−結合部位でＣＤ４０タンパク質と相互作用する。好ましくは、そのようなペプチドは、２５アミノ酸未満の長さである。さらに好ましいペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３〜９およびＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２５〜３０から選択されるアミノ酸配列である。
【００５７】
一局面において、本発明は、グルコース輸送タンパク質４（ＧＬＵＴ４）を調節および／または増加させるための方法を提供し、この方法が、治療上十分な量のＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．３−９およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．２５−３０から選択されるペプチドを患者に投与することを含む。
【００５８】
本発明の一実施形態は、動物における２型糖尿病を予防、調節、減少および／または逆転させる方法であって、この方法が、グルコース輸送タンパク質４（「ＧＬＵＴ４」）を調節するような方法でＣＤ４０タンパク質と相互作用するペプチドを動物に投与することを含む。好ましいペプチドは、ＣＤ１５４結合部位でＣＤ４０タンパク質と相互作用し、それによってＧＬＵＴ４を調節するペプチドである。好ましいペプチドは、未処理の群体と比較して、脂肪組織および筋肉組織の両方においてＧＬＵＴ４を調節、アップレギュレート、または増加させ得る。そのような方法は、より一般的に、Ｔ２Ｄおよび自己免疫関連炎症を伴う可能性のあるＴ２Ｄおよび症状を予防および／または軽減するために使用することができる。        
【００５９】
本発明の別の実施形態は、２型糖尿病を予防、調節、減少および／または逆転させるためにＣＤ４０結合ペプチドを投与する方法であって、ＣＤ１５４結合部位でＣＤ４０タンパク質と相互作用するアペプチドを選択することと、筋肉内（ＩＭ）送達、静脈内（ＩＶ）送達、皮下（ＳＣ）送達、経口送達、胃管送達、エモリエント／皮膚送達、経皮パッチまたは鼻噴投与を含む群から選択される送達方法を選択することとを含む。
【００６０】
本発明の別の実施形態は、動物に２型糖尿病を予防、調節、減少および／または逆転させるためにＣＤ４０結合ペプチドを投与する方法であって、ＣＤ１５４結合部位でＣＤ４０タンパク質との相互作用するペプチドを選択することと、移植可能なデバイス、親水性ポリマー製剤、透過性ポリマー膜、注入可能なゲルインプラント、溶媒抽出システム、相反転システム、感温性ゲル、ｐＨ依存性ｉｎ  ｓｉｔｕゲル、微粒子、マイクロスフェア、ナノ粒子、ナノスフェア、生体分解性インプラント、または光活性化デポを含む群から選択される多種送達方法を使用することとを含む。
【００６１】
本発明の別の実施形態は、対象にＧＬＵＴ４を調節、コントロールおよび／または増加させる方法であって、この方法が、治療有効量のＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．３−９およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．２５−３０から選択されるペプチドをそれを必要とする対象に投与することを含む。
【００６２】
本発明の別の実施形態は、細胞または対象におけるインターロイキン−２シグナル伝達を調節し、影響し、および／または低減する方法であって、インターロイキン−２シグナル伝達を低減または抑制するのに十分な量のＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ３−９およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ２５−３０から選択されるペプチドを投与することを含み、ここで、インターロイキン−２シグナル伝達が、より一般的には、Ｉ型糖尿病、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、クローン病、炎症性腸疾患、慢性閉塞性肺疾患、喘息、アテローム性硬化症、血管炎、高血圧、甲状腺炎、原発性胆道性肝硬変、パジェット病、アジソン病、急性呼吸窮迫症候群、急性肺損傷、および／または無菌性慢性炎症を含む群から選択される状態に関連している。
【００６３】
本発明の別の実施形態は、細胞または対象におけるインターロイキン−２シグナル伝達を調節および／または低減する方法であって、インターロイキン−２シグナル伝達を低減または抑制するのに十分な量のＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．３−９およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．２５−３０から選択されるペプチドを投与することを含み、ここで、インターロイキン−２シグナル伝達は、２型糖尿病と関連する。
【００６４】
本発明の別の実施形態は、細胞または対象におけるＩＦＮ−γを調節および／または低減する方法であって、ＩＦＮ−γシグナル伝達を低減または抑制するのに十分な量のＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．３−９およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．２５−３０から選択されるペプチドを投与することを含み、ここで、ＩＦＮ−γシグナル伝達が、２型糖尿病と関連する。
【００６５】
本発明の別の実施形態は、細胞または対象におけるインターロイキン−２１（ＩＬ−２１）、インターロイキン−２２（ＩＬ−２２）、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、顆粒球−マクロファージ結腸刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、インターロイキン−１０（ＩＬ−１０）およびトランスフォーミング成長因子β（ＴＧＦβ）の変化を調節し、影響し、および／または誘導する方法であって、インターロイキン−２１（ＩＬ−２１）、インターロイキン−２２（ＩＬ−２２）、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、顆粒球−マクロファージ結腸刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、インターロイキン−１０（ＩＬ−１０）およびトランスフォーミング成長因子β（ＴＧＦβ）を変化させるのに十分な量でＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．３−９および２５−３０から選択されるペプチドを投与することを含み、ここで、より一般的には、前記インターロイキン−２１（ＩＬ−２１）、インターロイキン−２２（ＩＬ−２２）、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、顆粒球−マクロファージ結腸刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、インターロイキン−１０（ＩＬ−１０）およびトランスフォーミング成長因子β（ＴＧＦβ）シグナル伝達が、Ｉ型糖尿病、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、クローン病、炎症性腸疾患、慢性閉塞性肺疾患、喘息、動脈硬化症、血管炎、高血圧症、甲状腺炎、原発性胆道性肝硬変、パジェット病、アジソン病、急性呼吸窮迫症候群、急性肺損傷、２型糖尿病、および／または無菌性慢性炎症を含む群から選択される状態と関連している。
【００６６】
本発明の別の実施形態は、細胞または対象におけるインターロイキン１７（ＩＬ−１７）を調節および／または低減するための方法を含み、インターロイキン１７（ＩＬ−１７）シグナル伝達を低減または抑制するのに十分な量でＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．３−９および２５−３０から選択されるペプチドを投与することを含み、ここで、より一般的には、インターロイキン１７（ＩＬ−１７）シグナル伝達が、Ｉ型糖尿病、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、クローン病、炎症性腸疾患、慢性閉塞性肺疾患、喘息、動脈硬化症、血管炎、高血圧症、甲状腺炎、原発性胆道性肝硬変、パジェット病、アジソン病、急性呼吸窮迫症候群、急性肺損傷、２型糖尿病、および／または無菌性慢性炎症を含む群から選択される状態と関連する。
【００６７】
本発明の別の実施形態は、細胞または対象におけるインターロイキン１７（ＩＬ−１７）シグナル伝達を調節および／または低減する方法を含み、インターロイキン１７シグナル伝達を低減または抑制するのに十分な量のＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．３−９および２５−３０から選択されるペプチドを投与することを含み、ここで、ＩＬ−１７は、２型糖尿病と関連する。
【００６８】
本発明の一実施形態は、２型糖尿病を発症するリスクのある患者を識別する方法であって、該方法が、検査されるべき患者からＴ細胞を含むサンプルを取得することと、該サンプルをＣＤ４０タンパク質を結合するペプチドと接触させることと、該ＣＤ４０結合ペプチドを検出することと、該ＣＤ４０結合量からＴｈ４０細胞のレベルを測定することとを含み、ここで、Ｔ細胞総数の２５％を超えるＴｈ４０細胞のレベルは、患者が２型糖尿病を発症するリスクがあることを示す。
【００６９】
本発明の一実施形態は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４、２７、２８、２９、および３０に記載のものの小妨害ペプチドの物質組成物である。本発明のこれらの実施形態は、より一般的には、１型糖尿病、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、クローン病、炎症性腸疾患、慢性閉塞性肺疾患、喘息、アテローム性硬化症、血管炎、高血圧、甲状腺炎、原発性胆道性肝硬変、パジェット病、アジソン病、急性呼吸窮迫症候群、急性肺損傷、２型糖尿病、および／または無菌性慢性炎症を含む群から選択される疾患の治療のために使用し得る。
【図面の簡単な説明】
【００７０】
【図１】ＮＯＤマウスにおける糖尿病発症に対するＣＤ１５４の種々のペプチドの効果を示すチャートである。８−ｍｅｒ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５）、１０−ｍｅｒ（ＳＥＱ  ＮＯ：２４）、１３−ｍｅｒ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５）、１５−ｍｅｒ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７）、および２４−ｍｅｒ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６）を試験した。
【図２Ａ】ＣＤ１５４からの１５−ｍｅｒペプチドの、ＮＯＤマウスにおけるＣＤ４／ＣＤ８比に対する効果のチャートである。
【図２Ｂ】処理された対切除、検査、および採点された対照膵臓のβ島浸潤に対する１５−ｍｅｒペプチドの効果のチャートである。
【図３】ＣＤ１５４からの１５−ｍｅｒペプチドを用いてＮＯＤマウスにおける糖尿病の逆転のグラフである。
【図４】ＣＤ１５４由来のＳＩＰ−１５−ｍｅｒペプチド用いてＴｈ４０細胞の検出のドットプロットである。
【図５】ＣＤ１５４由来のＳＩＰ−１５−ｍｅｒペプチド用いてＢ細胞のスクリーニングのドットプロットである。
【図６】糖尿病マウスと非糖尿病マウスのＴｈ４０細胞レベルの比較を示すチャートである。
【図７】１５−ｍｅｒペプチドによる処理が膵臓のインスリン顆粒化に影響を示すグラフである。
【図８】１５−ｍｅｒペプチドの変異が、１５−ｍｅｒペプチドがＮＯＤマウスにおける糖尿病の発症を抑制する能力に影響を示すグラフである。
【図９】異なるマウスモデルにおけるＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ４０＋の細胞数（ｘ１０６）を示すチャートである。
【図１０】対照群と糖尿病群におけるヒト対象の末梢血中のＴｈ４０細胞のパーセントを示すチャートである。
【図１１】フローサイトメトリーで得られたＣＤ４＋細胞とＣＤ４０細胞のデータを比較したドットプロットである。Ｔｈ４０細胞（ＣＤ４＋ＣＤ４０＋）は右上の象限にある。
【図１２】マウスモデルのＣＤ３＋ＣＤ４＋群体のＴｈ４０細胞のパーセントを示すチャートである。
【図１３】Ｃ５７Ｂ−６マウス、若年非糖尿病ＮＯＤマウス、糖尿病ＮＯＤマウスのマウス大動脈内のＣＤ３＋ＣＤ４＋集団のＴｈ４０細胞パーセントを示すチャートである。
【図１４】ＡｐｏＥ−／−マウスモデルにおけるプラークの肩部部位におけるＴｈ４０細胞を示す倍率２００倍の画像である。
【図１５】Ｔｈ４０増殖のインターフェロンγ制御を示すグラフである。
【図１６】インターフェロンγがＣＤ４０誘導増殖を媒介していることを示す抗インターフェロンγ抗体（αＩＦＮγ）の存在／非存在下でのＴｈ４０細胞のＣＤ４０刺激増殖のプロットである。
【図１７】大動脈弓の曲率の小さい方の大動脈弓の染色のサンプルである。
【図１８】対照および処理された対象の大動脈弓の曲率の小さい方の染色である。
【図１９】大動脈弓の曲率の小さい方とプラークの面積測量のチャートである。
【図２０】処理したＡｐｏＥマウス対象と対照ＡｐｏＥマウス対象のチャートである。
【図２１】処理したＡｐｏＥマウス対象と対照ＡｐｏＥマウス対象のチャートである。
【図２２】処理したＡｐｏＥマウス対象と対照ＡｐｏＥマウス対象のチャートである。
【図２３】処理したＡｐｏＥマウス対象と対照ＡｐｏＥマウス対象のチャートである。
【図２４】正常な血栓と比較した１５−メルペプチドの存在下でのヒト血液の血栓データの表である。
【図２５Ａ】ＥｘＰＡＳｙ分析によって評価された相対的なペプチド安定性を提供する表である。
【図２５Ｂ】ＥｘＰＡＳｙ分析によって評価された相対的なペプチド安定性を提供する表である。
【図２６】対象マウスからの対照サンプルおよび処理したサンプルを比較するウエスタンブロットである。
【図２７】処理された対象と処理されていない対象で測量されたＬＤＬコレステロールのグラフである。
【図２８Ａ】ＫＧＹＹ６で処理した大動脈ｅｎ−ｆａｃｅ  ＳｕｄａｎＩＶ染色の画像である。
【図２８Ｂ】対照大動脈ｅｎ−ｆａｃｅ  ＳｕｄａｎＩＶ染色の画像である。
【図２９】ＳｕｄａｎＩＶ染色の病変部の減少を示すグラフである。
【図３０】曲線下面積に対するプラーク体積の減少を示すグラフである。
【図３１】ＫＧＹＹ６（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９）で処理した対象マウスおよび対照対象マウスのプラーク組成のグラフである。
【図３２Ａ】ＫＧＹＹ６（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９）で処理した対象のトリクローム染色切片の画像である。
【図３２Ｂ】対照対象のトリクローム染色切片の画像である。
【図３３（ａ）】ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９に応答して、グルコース耐性（ＧＴＴ）およびインスリン感受性の統計的に有意な改善を示すグラフである。
【図３３（ｂ）】ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９に応答して、グルコース耐性（ＧＴＴ）およびインスリン感受性の統計的に有意な改善を示すグラフである。
【図３４】処理した（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９を投与した）マウスと未処理マウスの脂肪組織および筋肉組織を比較したＧＬＵＴ４（インスリン調節されたグルコース輸送タンパク質）のウエスタンブロット分析である。
【図３５】ＡｐｏＥ−／−マウスおよびＣ５７ＢＬ／６マウスの脾臓細胞においてフローサイトメトリーにより測量した体外リンパ球サイトカインの変化率のグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００７１】
本主題は、ＣＤ４０タンパク質を発現し、したがってＴｈ４０細胞と呼ばれるＴ細胞のユニークなサブセットが、自己免疫性炎症に役立つ可能性があるという発見に基づく。さらに、自己免疫過程におけるＴｈ４０細胞の関与は、Ｔ細胞表面に発現するＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質の相互作用に依存している可能性がある。ＣＤ４０とＣＤ１５４の相互作用は、細胞間に活性化シグナルが伝達され、その後Ｔｈ４０細胞の活性化をもたらす。このような活性化は、Ｔｈ４０細胞の増殖と炎症の増加（例えば、系内に存在する免疫細胞および免疫調節分子の数の増加）をもたらす。したがって、ＣＤ４０／ＣＤ１５４相互作用の抑制は、Ｔｈ４０細胞の活性を調節し、それによって炎症に影響を与えることができる。したがって、本主題は、ＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との間の相互作用に影響を与え、それによって炎症を調節し得るペプチド、およびその投与に関する。さらに、本主題は、Ｔ細胞の表面に発現するＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との間の相互作用に影響を与え、それによってＴ細胞の活性に影響を与え、炎症を制御し、その結果、アテローム性動脈硬化症を予防、調節、および減少させるペプチドに関する。本主題はまた、Ｔｈ４０細胞を検出するためのそのようなペプチドの使用を包含する。
【００７２】
本開発をさらに説明する前に、本発明は、もちろんそのようなものが変化し得るので、記載された特定の実施形態に厳密に限定されないことが理解されるべきである。本発明の範囲は請求項によってのみ限定されるので、本明細書において使用する術語には特定の態様を説明するという目的しかなく、限定を意図していないことも理解すべきである。
【００７３】
本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用される単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、特に内容上明示されない限り、複数の指示対象を含むことに留意すべきである。本明細書で使用されるように、用語「ａ」または「ａｎ」とは、そのものの１つまたは複数を表すことをさらに理解すべきである。例えば、核酸分子は、１つ以上の核酸分子を指す。このように、用語「１つの」（または「ａｎ」）、「１つ以上の」及び「少なくとも１つの」は、交換可能に使用することができる。同様に、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、及び「有する」という用語が交換可能に使用され得る。
【００７４】
本明細書において別様に定義されない限り、本明細書で用いるすべての技術用語および科学用語は、当該技術分野の当業者が通常理解しているものと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと同様または同等であるすべての方法および材料を、本発明の実施または試験に使用することができるが、好ましい方法および材料を本明細書に記載している。本明細書において言及する刊行物はいずれも、その刊行物への言及と関係する方法および材料を開示し説明するために、参照により本明細書に組み入れられる。本明細書において議論する刊行物は、本願の出願日前にそれらが開示されていたから記載するにすぎない。本発明が先行発明を理由としてそれらの公開に先行する資格がないことの自認であると解釈すべき記述は、本明細書にはない。さらに、提供される刊行物の日付は、実際の公開日とは異なる場合があり、個別に確認する必要がある。
【００７５】
本発明のいくつかの特徴は、分かりやすくするため別個の実施態様で記載してあるが、組み合わせて単一の実施態様で提供できることも分かるであろう。逆に言えば、簡略にするために１つの実施形態に照らして説明されている本発明の様々な特徴を、別々に、または任意の適切な組合せで、提供することもできる。すべての実施形態の組み合わせは、本発明によって具体的に包含され、それぞれの組み合わせが個別に明示的に開示されているように、本明細書に開示される。さらに、すべてのサブコンビネーションもまた、本発明によって具体的に包含され、それぞれのサブコンビネーションが個別に明示的に開示されているように、本明細書に開示される。
【００７６】
さらに、請求項がいかなる選択的な要素も排除して記載されていることを留意すべきである。そのようなものとして、この記述は、請求項要素の引用と関連して「唯一」、「のみ」等の限定的用語を使用するため、または「否定的な」限定を使用するための先の記載として機能することが意図される。
【００７７】
さらに、本明細書で使用されるように、動物という用語は、脊椎動物、好ましくは哺乳類、より好ましくはヒトを指す。本発明の方法を使用するのに適した哺乳動物は、家畜、スポーツ動物、ペット、霊長類、マウス、ラット、馬、犬、猫、およびヒトを含むが、これらに限定されない。動物という用語は、対象または患者という用語と互換的に使用することができる。
【００７８】
本主題の一実施形態は、アテローム性動脈硬化症を予防するような方法でＣＤ４０タンパク質と相互作用するペプチドである。本明細書で使用されるように、用語「相互作用」（ｉｎｔｅｒａｃｔまたはｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ）、およびそのようなものは、２つの分子が炎症の調節を引き起こすように十分に物理的に近接することを意味する。そのようなタイプの相互作用の１つは、結合相互作用である。そのような相互作用では、ペプチドはＣＤ４０と結合して複合体を形成する。複合体形成の例は、抗原と抗体との結合である。本主題によれば、本発明のペプチドのＣＤ４０タンパク質への結合は、可逆的（例えば、非共有結合相互作用）または非可逆的（例えば、共有結合相互作用）であり得る。さらに、可逆的な相互作用は強い場合も弱い場合もあり、相互作用の強さは、各タンパク質が複合体中の他のタンパク質に及ぼす力（例えば、イオン電荷、水素結合、ファンデルウォール相互作用など）によって測定される。２つの分子間の相互作用の強さに影響を与える因子は、当業者には知られている。ペプチドとタンパク質のような２つの分子間の結合の強さの１つの有用な測量は、解離定数（Ｋｄ）である。本発明の好ましいペプチドは、約１×１０−６Ｍ、約１×１０−７Ｍ、または約１×１０−８Ｍを超えないＫｄでＣＤ４０タンパク質に結合するペプチドである。特に好ましいペプチドは、約１×１０−９Ｍ未満のＫｄを有するものである。一実施形態では、本発明のペプチドは、１００ｎＭ未満、５０ｎＭ未満、２５ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、５ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２ｎＭ未満、または１ｎＭ未満のＫｄでＣＤ４０タンパク質に結合する。ペプチドとＣＤ４０タンパク質との間の結合相互作用を測量および分析する方法は、当技術分野の当業者に知られている。
【００７９】
本明細書で使用されるように、動物中に存在するＴｈ４０細胞のレベルの変化、またはＴ細胞の培養物中に存在するＴｈ４０細胞のレベルの変化は、炎症の調節を示し得る。本明細書で使用されるように、レベル、数、計数、および濃度という用語は、交換可能に使用することができる。炎症の調節は、炎症環境に存在するＴｈ４０細胞の数の増加または減少を意味し得；しかしながら、炎症の調節は、細胞数または細胞計数に限定されるべきではない。その結果、調節は陽性または陰性と呼ばれることがある。炎症の陽性調節（アップレギュレーションとも呼ばれる）は、炎症環境中のＴｈ４０細胞の数を増加させる結果となり得る。炎症の陰性調節（ダウンレギュレーションとも呼ばれる）は、炎症環境に存在するＴｈ４０細胞の数を減少させる結果となり得る。Ｔｈ４０細胞のレベル、計数、または濃度は、炎症性環境における炎症を示すものではない可能性がある。好ましいペプチドは、炎症をダウンレギュレーションし、それによって炎症環境に存在するＴｈ４０細胞の数を減少させるものであリ得る。炎症の陽性および陰性の調節は、炎症性環境に存在する免疫調節分子のタイプおよび量の変化をもたらしてもよいし、またはもたらさなくてもよい。いくつかの実施例では、Ｔｈ４０レベルは変化しないが、それらの細胞の活性は、それらの細胞が炎症性サイトカインおよび炎症の他のバイオマーカーをもはや発揮または増加させないように変化する可能性がある。したがって、本明細書で使用されるように、炎症を調節することは、身体またはサンプル中のＴｈ４０レベル、数、または濃度の変化を指してもよく、また、疾患、炎症性サイトカイン、および／または細胞由来の炎症性メディエーター分子に関連している可能性のある、より一般的な炎症の変化を指してもよい。
【００８０】
細胞培養系および動物の免疫系の両方が、免疫細胞および免疫調節分子の基底レベルを含むことは、当業者によって理解されたい。基底レベルおよび正常レベルという表現は、交換可能に使用することができる。動物の免疫系に関しては、本明細書で使用されるように、免疫細胞（例えば、Ｔｈ４０細胞）の種類または免疫調節分子の基底レベルとは、健康と考えられる個体群（すなわち、代謝性疾患、自己免疫疾患または感染症のない個体群）に存在する、その細胞の種類または免疫調節分子の平均数を指す。細胞培養系に関しては、本明細書で使用されるように、免疫細胞の種類または免疫調節分子の基底レベルは、非活性化された細胞の集団中に存在する、その細胞の種類または免疫調節分子の平均レベルを指す。当業者は、Ｔ細胞またはそのような細胞の集団が活性化されるかどうかを測定することができる。例えば、細胞によるＣＤ６９、ＣＤ２５および／またはＣＤ１５４タンパク質の発現は、その細胞が活性化されていることを示す。
【００８１】
細胞または分子の基底レベルは、特定の量（例えば、特定の濃度）であり得るか、または量の範囲を包含し得る。免疫細胞および免疫調節分子の基底レベルまたは範囲は、当業者に知られている。例えば、健康な個体では、ヒトの血液中に存在するＣＤ４＋Ｔ細胞の正常レベルは、５００〜１５００細胞／ｍｌである。この測量値の変動は、細胞計数を測定するために使用される方法の違いに起因し得る。さらに、細胞の正常レベルは、総細胞集団に対するパーセンテージとして報告され得る。例えば、健康な個体では、Ｔｈ４０細胞は総Ｔ細胞集団の２５％未満を占める。したがって、本明細書で使用されるように、炎症という用語は、Ｔｈ４０細胞が、総Ｔ細胞集団の約２５％以上、約３０％以上、約３５％以上、約４０％以上、約４５％以上、約５０％以上、約５５％以上、約６０％以上、約６５％以上、約７０％以上、約７５％以上、または約８０％以上を占める炎症性環境を指す。さらに、本明細書において好ましいペプチドは、Ｔｈ４０細胞のレベルを、総Ｔ細胞集団の約５０％未満、約４５％未満、約４０％未満、約３５％未満、約３０％未満、約２７％未満、または約２５％に等しいレベルまで低下させるものである。Ｔ細胞集団中の異なるタイプのＴ細胞を測量する方法は、当業者に知られている。さらに、本明細書では、本発明のペプチドを用いてＴｈ４０細胞を検出するための新規な方法が開示される。
【００８２】
本明細書で使用されるように、「炎症性環境」という表現は、細胞の培養物、または動物の体内に存在する免疫細胞および関連する免疫調節分子の全体的な集団を指す。このように、「炎症性環境」という表現は、細胞の培養物中、または動物の体内に存在する免疫細胞および免疫調節分子（例えば、サイトカイン）の種類、および／または相対的な量を包含し、これらは炎症反応に影響を与えることに関与する。炎症性環境という用語によって包含される細胞の例としては、Ｔ細胞、好中球、マクロファージ、顆粒球などが挙げられるが、これらに限定されない。炎症性環境は、急性および慢性炎症の両方を媒介する細胞および分子に関連する。炎症性環境が本発明のペプチドが投与されるシステムを指すことは、当業者によって理解されたい。一実施形態では、システムは、細胞培養システムである。一実施形態では、システムは、完全な動物である。
【００８３】
本発明の好ましいペプチドは、免疫吸着アッセイのようなアッセイを用いて測定されるように、溶液中で、またはＴ細胞の表面上で、ＣＤ４０タンパク質と選択的に相互作用するものである。本明細書で使用されるように、選択的（ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙまたは  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ）、特異的などの用語は、ペプチドが、ＣＤ４０タンパク質に関連しないタンパク質よりもＣＤ４０タンパク質に対してより高い親和性を有することを示す。より具体的には、選択的（ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙまたは  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ）、特異的などの用語は、ＣＤ４０に対するペプチドの親和性が、標準的なアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ）を用いて測量された陰性対照（例えば、アルブミンなどの無関係なタンパク質）に対する親和性よりも統計的に有意に高いことを示す。ＣＤ４０タンパク質と選択的に相互作用するペプチドの能力をアッセイするための適切な技術は、当業者に知られている。そのようなアッセイは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏアッセイであり得る。有用なアッセイの例としては、酵素結合免疫アッセイ、競合酵素結合免疫アッセイ、ラジオイムノアッセイ、蛍光免疫アッセイ、化学発光アッセイ、ラテラルフローアッセイ、フロースルーアッセイ、凝集アッセイ、微粒子ベースのアッセイ（例えば、磁性粒子やプラスチックポリマー（ラテックスやポリスチレンビーズなど）などに限定されない微粒子を使用）、免疫沈降アッセイ、免疫ブロットアッセイ（例えば、ウエスタンブロット）、燐光アッセイ、フロースルーアッセイ、クロマトグラフィーアッセイ、ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）ベースのアッセイ、表面プラズモン共鳴アッセイ、分光光度法アッセイ、微粒子ベースのアッセイ、電子センサアッセイおよびフローサイトメトリーアッセイが含まれるが、これに限定されない。このようなアッセイを実施する方法は、当業者によく知られている。一実施形態では、アッセイは、培養中の細胞を用いて実施することができ、または完全な動物を用いて実施することができる。アッセイは、どのように使用されるかおよび所望の結果のタイプに応じて、定性的、定量的または半定量的な結果が得られるように設計できる。
【００８４】
心血管疾患（ＣＶＤ）、動脈硬化、およびコレステロール関連の開発
本発明の一実施形態は、ＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との相互作用に影響を与えるような方法でＣＤ４０タンパク質と相互作用し、それによって炎症を調節するペプチドである。ＣＤ４０／ＣＤ１５４相互作用に対するペプチドの効果は、正であってもよいし、負であってもよい。例えば、ペプチドは、ＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との間の相互作用の強さが増加するような方法でＣＤ４０タンパク質と相互作用することができる。あるいは、ペプチドは、ＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との間の相互作用の強さが減少するようにＣＤ４０タンパク質と相互作用することができる。ペプチドとＣＤ４０タンパク質との間の結合の強さを測量する方法は、当業者に知られている。本発明の好ましいペプチドは、ＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との間の相互作用の強さを減少させるものである。本発明の好ましいペプチドは、ＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との間の結合の強さを、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％減少させる。
【００８５】
特に好ましいペプチドは、ＣＤ４０とＣＤ１５４との結合を完全に抑制するものである。ＣＤ４０とＣＤ１５４との結合を完全に抑制することは、通常ＣＤ４０とＣＤ１５４との相互作用を可能にする条件下で、本発明のペプチドをＣＤ４０タンパク質およびＣＤ１５４タンパク質と近接させると、そのような相互作用は起こらず、ＣＤ４０発現細胞において活性化シグナルが刺激されないことを意味する。その結果、炎症のＣＤ４０／ＣＤ１５４媒介による調節は起こらない。一実施形態では、ペプチドは、系内の炎症のレベルを低下させるような方法でＣＤ４０タンパク質と相互作用する。一実施形態では、ペプチドは、系内の炎症の発症を抑制するような方法でＣＤ４０タンパク質と相互作用する。
【００８６】
本発明のペプチドが、ＣＤ４０タンパク質上の任意の部位と相互作用することができるが、好ましいペプチドは、ＣＤ１５４結合部位と重なる位置でＣＤ４０タンパク質と相互作用する。一実施形態では、本発明のペプチドは、ＣＤ１５４結合部位でＣＤ４０タンパク質と相互作用する。そのようなペプチドの例は、ＣＤ４０リガンド競合的拮抗剤である。本明細書で使用されるように、ＣＤ１５４タンパク質のＣＤ４０タンパク質への結合を妨害または抑制するペプチドは、小妨害ペプチド（ＳＩＰ）と呼ばれる。本明細書で使用されるように、小妨害ペプチドは、生理化学的特性を介して、ＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との相互作用を妨害し、それによって活性化シグナルがＣＤ４０保有細胞に送達されるのを防ぎ、それによってＣＤ４０保有細胞の活性化、それに炎症を制限するペプチドである。本明細書で実証されるように、このような妨害の結果は、Ｔ細胞の活性化および伝播の防止、および炎症の防止または減少である。本明細書で実証されるように、いくつかの実施例では、ＣＤ４０とＣＤ１５４との間の相互作用のそのような抑制または予防の結果は、アテローム性動脈硬化症、およびそれに関連する疾患の特徴を予防、調節、および／または減少することを実証する観察可能なデータを含み得る。
【００８７】
さらに、小妨害ペプチドは、生理化学的特性を介して、ＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との相互作用を妨害し、それによって活性化シグナルがＣＤ４０保有細胞に送達されるのを防止し、それによってＣＤ４０保有細胞の活性化、それにアテローム性動脈硬化症を調節、抑制、および予防を制限する。本明細書で実証されるように、このような妨害の結果は、Ｔ細胞の活性化および伝播の防止、およびアテローム性動脈硬化症の防止、減少または調節である。
【００８８】
本発明の方法を実践するのに有用なペプチドは、アテローム性動脈硬化症を調節するような方法でＣＤ４０タンパク質と相互作用するのに十分な大きさであるべきである。好ましいペプチドが、製造が容易であり、かつ安価であるので、比較的短いものであることは、当業者によって理解される。好ましいペプチドは、長さが２５アミノ酸未満であるものであってもよいが、いくつかの実施例では、ペプチドの長さは２５アミノ酸より長くてもよい。好ましいペプチドは、長さが４、６、８、１０、１３、１５、または２４アミノ酸であるものであってもよい。一実施形態では、ペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３（コア配列は表１，２を参照）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４（６−ｍｅｒは表１，２を参照）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．  ５（８−ｍｅｒマウスは表１，２を参照）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６（８−ｍｅｒヒトは表１，２を参照）、ＳＥＱ  ＩＮ  ＮＯ：７（１５−ｍｅｒは表１，２を参照）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８（１５−ｍｅｒヒトは表１，２を参照）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９（２４−ｍｅｒは表１，２を参照）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．  ２４（１０−ｍｅｒは表１，２を参照）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５（１３−ｍｅｒは表１，２を参照）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６（２４−ｍｅｒは表１，２を参照）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７（６−ｍｅｒ（様式２）は表１，２を参照）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．２８（６−ｍｅｒ（様式３）は表１，２を参照）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９（６−ｍｅｒ（様式４）は表１，２を参照）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０（６−ｍｅｒ（様式４）は表１，２を参照）、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２（２４−ｍｅｒ−マウス（様式２））の群から選択されるアミノ酸である。このようなペプチドの配列を以下に示す。
【００８９】
【表１】
2021510174.tif 000003
【００９０】
【表２】
2021510174.tif 000004
【００９１】
ＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との相互作用は、各タンパク質内の特定の領域で起こることが示される。本発明者らは現在、驚くべきことに、ＣＤ４０と相互作用するＣＤ１５４領域の短い部分を含むペプチドが、ＣＤ４０タンパク質と結合し、それによってアテローム性動脈硬化症を調節することができることを示している。したがって、本明細書の一実施形態は、アテローム性動脈硬化症を調節するような方法でＣＤ４０タンパク質と相互作用するようにＣＤ１５４タンパク質のアミノ酸配列の少なくとも一部を含むペプチドである。一実施形態では、ペプチドとＣＤ４０タンパク質との相互作用は、アテローム性動脈硬化症の陰性調節をもたらす。一局面において、ペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２の少なくとも一部を含む。
【００９２】
一局面において、ペプチドは、可能な限り短いが、アテローム性動脈硬化症を調節するような方法でＣＤ４０タンパク質との相互作用を可能にするのに十分なＣＤ１５４タンパク質を含む。一実施形態において、本発明のペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２からの６、１３または１５の連続するアミノ酸を含み、アテローム性動脈硬化症を調節するような方法でＣＤ４０と相互作用する。好ましいペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸１４２〜１４５およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のアミノ酸１４３〜１４６に対応するリジン−グリシン−チロシン−チロシン（ＫＧＹＹ；  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３）のコア配列を含む。有用なペプチドは、そのペプチドがアテローム性動脈硬化症を調節することができる限り、コア配列に隣接するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１またはＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２からの配列の付加的な領域を含み得る。一実施形態において、ペプチドは、そのペプチドがアテローム性動脈硬化症を調節するような方法でＣＤ４０タンパク質と相互作用する限り、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３，  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７，  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８，  ＳＥＱＩＤ  ＮＯ：９，  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４，  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５，  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６，  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８，  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９，  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２から選択される少なくとも１つの配列を含む。本主題の一実施形態において、本発明のペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３，  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５，  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６，  ＳＥＱＩＤ  ＮＯ：７，  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８，  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４，  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５，  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６，  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９から選択される配列である。本主題の一実施形態において、本発明のペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３〜９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５〜３０、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２から選択される配列である。
【００９３】
本主題のペプチドは、ＣＤ４０タンパク質との相互作用を担う配列の全体またはそこから選択されるかもしれないが、ＣＤ４０タンパク質と相互作用しないが他の有用な機能を有するアミノ酸配列をさらに含んでもよい。任意の有用な付加的なアミノ酸配列は、付加的な配列がＣＤ４０タンパク質と相互作用するＣＤ４０相互作用配列の能力に望ましくない影響を及ぼさない限り、ＣＤ４０相互作用配列に追加することができる。例えば、ＣＤ４０タンパク質と相互作用を担うアミノ酸配列に加えて、本発明のペプチドは、ペプチドの可視化または精製に有用なアミノ酸配列を含むことができる。そのような配列は、ラベル（例えば、酵素）またはタグ（抗体結合部位）として機能する。そのようなラベルおよびタグの例としては、Ｂ−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、グルタチオン−トランスフェラーゼ、チオレドキシン、ＨＩＳタグ、ビオチンタグ、および蛍光タグを含むが、これらに限定されない。タンパク質のラベルおよびタグ付けのための他の有用な配列は、当業者に知られている。
【００９４】
同様に、本発明のペプチドは、そのような改変がアテローム性動脈硬化を調節するペプチドの能力に著しく影響しない限り、修飾することができる。そのような修飾は、例えば、タンパク質の安定性、溶解性または吸収性を高めるために行うことができる。そのような修飾の例としては、ペプチドのＰＥＧ化、グリコシル化、および化学修飾を含むが、これらに限定されない。
【００９５】
本発明のペプチドは、自然界から得られてもよく（例えば、植物、動物または微生物から得られる）、または実験室で生産されてもよい（例えば、組換え的または合成的により）。好ましいペプチドは、合成されたペプチドである。また、天然分子と合成分子の組み合わせであるペプチドも包含される。組換えペプチドまたは合成ペプチドを製造および単離するための一般的な方法は、当業者に知られている。本明細書で使用されるように、単離された、または生物学的に純粋な分子は、その天然の環境から取り除かれたものであることに留意されたい。このように、単離された、生物学的に純粋ななどの用語は、必ずしもタンパク質が精製された程度を反映しているわけではない。
【００９６】
本明細書に記載されているように、ＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との相互作用は、アテローム性動脈硬化症におけるＴｈ４０細胞の関与に必要である。したがって、本発明のペプチドを用いたＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との間の相互作用の抑制は、アテローム性動脈硬化症に影響を与える有用な方法である。したがって、一実施形態は、ＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との間の相互作用を減少させる方法であり、ＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との間の相互作用を減少させるような方法でＣＤ４０タンパク質と相互作用するペプチドをＣＤ４０タンパク質およびＣＤ１５４タンパク質を含む環境に導入することを含む。本明細書の一局面において、ペプチドは、ＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との間の相互作用を、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％減少させる。一実施形態では、ペプチドは、ＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との間の相互作用を、少なくとも１０、少なくとも１００、少なくとも１０００、少なくとも１００００のファクターで減少させる。ＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との間の相互作用の強さを測量する方法は、以前に議論されており、当業者に知られている。
【００９７】
本明細書の一実施形態は、炎症を調節するような方法でＣＤ４０タンパク質と相互作用するペプチドをＣＤ４０タンパク質に接触させることを含む、アテローム性動脈硬化症を調節する方法である。一局面において、ＣＤ４０タンパク質とペプチドとの相互作用は、Ｔｈ４０細胞の数を少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％減少させる。一実施形態では、ＣＤ４０タンパク質とペプチドとの相互作用は、Ｔｈ４０細胞の数を少なくとも１０、少なくとも１００、少なくとも１０００、少なくとも１００００のファクターで減少させる。
【００９８】
本発明の一局面は、炎症を改善するような方法でＣＤ４０タンパク質と相互作用するペプチドをＣＤ４０タンパク質に接触させることを含む、アテローム性動脈硬化、心血管疾患、および／またはコレステロールレベルを調節する方法である。この代替実施形態の一局面は、ＣＤ４０タンパク質と相互作用するペプチドをＣＤ４０タンパク質に接触させることに応答して、Ｔｈ４０レベルが変化しないことである。一局面において、ペプチドで処理されたＴｈ４０細胞は、炎症性サイトカインの産生を停止させ、遅くし、減少させ、または遅延させ得る。この局面において、Ｔｈ４０レベルの数は、比較的変化しないままであり得る。
【００９９】
一局面は、患者におけるアテローム性動脈硬化症を減少させる方法であって、該方法が、本発明のペプチドを患者に投与することを含む。一実施形態において、ペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  ７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２から選択されるアミノ酸配列を含む。一実施形態において、ペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２から選択されるアミノ酸配列である。好ましい実施形態において、ＣＤ４０タンパク質とペプチドとの相互作用は、Ｔｈ４０細胞の数を少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％減少させる。別の実施形態では、ＣＤ４０タンパク質とペプチドとの相互作用は、Ｔｈ４０細胞の数を少なくとも１０、少なくとも１００、少なくとも１０００、少なくとも１００００のファクターで減少させる。好ましい実施形態では、Ｔｈ４０細胞のレベルは、Ｔｈ４０細胞が総Ｔ細胞集団の約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、または約４０％を超えないように低減される。
【０１００】
本発明のペプチドおよび方法は、患者を治療するためだけでなく、細胞培養における使用にも適している。本明細書で使用されるように、用語「患者」は、そのような治療を必要とする任意の動物を指す。動物は、ヒトまたは非ヒト動物であり得る。治療するための好ましい動物は哺乳動物である。ペプチドは、それ自体、または医薬組成物として投与または適用することができる。本発明のペプチドまたはその医薬組成物は、注射投与（例えば、静脈内、筋肉内、皮下、髄腔内、腹腔内）、吸入投与、経口投与（例えば、錠剤、タブレット、カプセル、粉末、シロップ、溶液、懸濁液、薄膜、分散液または乳剤中）、経皮投与、経粘膜投与、経肺投与、頬側投与、鼻腔内投与、舌下投与、脳内投与、膣内直腸投与または局所投与、または当業者に知られている任意の他の便利な方法を含むがこれらに限定されない様々な経路で患者に投与することができる。
【０１０１】
本発明のペプチドおよび／またはその医薬組成物の有効量は、当技術分野で知られている標準的な臨床技術によって測定することができる。そのような量は、他の要因の中で、患者の体重、年齢、および状態、化合物の意図される効果、投与方法および処方する医師の判断を含むがこれらに限定されない、治療される患者に依存する。また、この文脈において、関心のある障害を示す患者を治療する際には、治療有効量の薬剤またはそれらの薬剤が投与されることに留意されたい。治療有効量とは、患者における１つまたは複数の症状の改善または生存期間の延長をもたらす化合物のその量を指す。
【０１０２】
本発明のペプチドまたはその医薬組成物は、単独で、または本開示の他の化合物を含む１種または複種の他の医薬組成物と組み合わせて投与することができる。特定の医薬組成物は、当業者にはよく知られているように、所望の投与モードに依存する。
【０１０３】
Ｔｈ４０細胞が自己免疫疾患、アテローム性動脈硬化、および心血管疾患の発生に密接に関与していることが本発明により実証されているので、本明細書に開示されたペプチドおよび方法は、そのような疾患に起因するアテローム性動脈硬化に影響を与えるために使用することができる。したがって、本明細書の一実施形態は、そのような治療を必要とする患者においてアテローム性動脈硬化性疾患を治療する方法であって、その方法は、ＣＤ４０タンパク質と相互作用するペプチドを患者に投与し、それによってアテローム性動脈硬化を減少させることを含む。一実施形態では、ペプチドは、ＣＤ４０およびＣＤ１５４の相互作用に影響を与えるような方法でＣＤ４０タンパク質と相互作用し、それによりアテローム性動脈硬化症を減少させる。好ましい実施形態では、ペプチドとＣＤ４０タンパク質との相互作用は、患者におけるＴｈ４０細胞の数を、心血管疾患を有しない対象において観察されるのと等しいレベルまで減少させる。本発明の開発は、自己免疫疾患および／または心血管疾患を有する任意の患者を治療するのに適しており、その発症はＴｈ４０細胞に依存する。より具体的には、本発明のペプチドは、そのような患者におけるＴｈ４０細胞のレベルを減少させるのに適する。好ましい実施形態では、本発明のペプチドは、心血管疾患に罹患している患者におけるＴｈ４０細胞のレベルを、総Ｔ細胞集団の約２５％以下に低減する。別の実施形態では、本発明のペプチドは、患者のＴｈ４０レベルに影響を与えない一方で、炎症性サイトカインレベルを減少させる。
【０１０４】
本発明のペプチドを用いた治療に特に従順である疾患の一例は、アテローム性動脈硬化症であり得る。アテローム性動脈硬化症では、動脈壁の炎症性変化が動脈プラークの形成および蓄積をもたらす。したがって、ＣＤ４０−ＣＤ１５４相互作用を介した炎症性細胞および細胞シグナル伝達の制御は、血管壁の慢性炎症性線維増殖性疾患を特徴とするアテローム性動脈硬化性病変を制御、調節、および／または減少させるために使用し得る。Ｔ２Ｄおよび／またはアテローム性動脈硬化症のいくつかのマウスモデルが開発される。病変形成の進行は、アポリポタンパク質Ｅ（ＡｐｏＥ）欠損トランスジェニックマウスにおいて観察可能であり、大動脈弓、プラークの数およびタイプの測量によって観察でき、ＡＨＡタイプＩからＡＨＡタイプＶまでの米国心臓協会のアテローム性動脈硬化症の病期分類に従って特徴付けられる。ＡＨＡタイプ１は、早期病変または初期病変を特徴とし、組織学的に「正常な」細胞、マクロファージ浸潤、および単離された発泡細胞から構成され得る。ＡＨＡタイプＶは、表面欠陥、血腫、出血、および／または血栓症を特徴とする内皮機能障害の増加を含むがこれらに限定されない、進行したまたは複雑な病変を特徴とし得る。したがって、本発明の一実施形態は、アテローム性動脈硬化症を発症する危険性のある個人におけるアテローム性動脈硬化症を予防する方法であって、該方法が、ＣＤ４０発現細胞に選択的に結合するためにペプチドを該個人に投与することを含む。
【０１０５】
さらに、アテローム性動脈硬化症は、現在開発されているペプチドを用いて治療することに特に従順であり得る。アテローム性動脈硬化症のリスクは、家族性の要因（遺伝など）や、個人の体調などの他の要因から生じる。アテローム性動脈硬化性活動および疾患のレベルは、活動レベル、食事、喫煙状態、および炎症のレベルなどの動態のな他の可変因子などの多数の因子に依存して、個人ごとに異なり得る。アテローム性動脈硬化症のリスク評価のいくつかの方法は、当業者に知られている。したがって、本発明の一実施形態では、治療方法は、炎症をダウンレギュレートすることができる限り、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９から選択されるアミノ酸配列を含むペプチドを、それを必要とする患者に投与することを含む。一実施形態において、ペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  ７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２から選択されるアミノ酸配列である。
【０１０６】
本明細書の発明はまた、驚くべきことに、すでにアテローム性動脈硬化症の徴候を示す個体において、ペプチドが疾患プロセスを逆転させるために使用されることができることを示す。したがって、本主題の一局面は、アテローム性動脈硬化症を有すると診断された患者に、本発明のペプチドを投与することを含むアテローム性動脈硬化症を逆転させる方法である。一実施形態において、ペプチドは、炎症をダウンレギュレートすることができる限り、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３，  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  ７，  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９から選択されるアミノ酸配列を含む。一実施形態において、ペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３，  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  ７，  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９から選択されるアミノ酸配列である。本明細書で使用されるように、アテローム性動脈硬化症を逆転させるという表現は、アテローム性動脈硬化症を有する個体の大動脈弓部浸潤、プラーク、および病変を、観察的に低いレベルに匹敵するレベルまで、またはいくつかの実施例では、非アテローム性動脈硬化症を有する個体においてより一般的であり得るレベルまで減少させることを意味する。
【０１０７】
記載されているように、本発明のペプチドは、ＣＤ４０発現細胞に選択的に結合する。したがって、本発明の主題のペプチドは、Ｔｈ４０細胞を鑑定するために使用することができる。したがって、本発明の一実施形態は、Ｔｈ４０依存性アテローム性動脈硬化症を検出する方法であって、前記方法が、Ｔ細胞集団を本発明のペプチドと接触させることを含む。好ましい実施形態では、ペプチドは、検出可能なマーカー、例えばルシフェラーゼまたはアルカリホスファターゼで標識される。そのような検出は、当業者に知られているアッセイ技術を用いて行うことができる。一般に、本発明のペプチドを使用してＴｈ４０細胞を検出するためのアッセイは、（ａ）細胞のサンプルを取得することと；（ｂ）存在する場合には、Ｔｈ４０細胞へのペプチドの結合を可能にするのに適した条件で本発明のペプチドを前記細胞に接触させることと；（ｃ）非特異的相互作用を破壊し、かつ未結合のペプチドを除去する条件で前記細胞を洗浄することと；（ｄ）細胞に結合したペプチドを検出することとを含む。結合したペプチドの検出は、直接または間接的に達成することができる。例えば、直接検出は、本明細書に開示されるように、検出可能なマーカーを用いて標識されたペプチドを用いて達成することができる。上記の洗浄ステップに続いて、細胞は、検出可能なマーカーの存在について単純にスクリーニングされる。細胞サンプル中の検出可能なマーカーの存在は、Ｔｈ４０細胞の存在を示し、したがってＴｈ４０依存性のアテローム性動脈硬化症を示す。あるいは、間接的検出は、ペプチドに結合する抗体のような第二の分子の使用を関与する。間接検出アッセイでは、上記の洗浄ステップに続いて、ペプチドに結合する検出分子を細胞サンプルに添加する。この検出分子は検出可能なマーカーで標識される。結合していない検出分子を洗い流した後、細胞は検出可能なマーカーの存在についてスクリーニングされる。細胞サンプル中の検出可能なマーカーの存在は、Ｔｈ４０細胞の存在を示す。本明細書に記載されたアッセイは、有用なアッセイの例として意図されており、他のアッセイ技術を採用することができることを理解されたい。適切なアッセイ技術は、当業者に知られており、また、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｓａｍｂｒｏｏｋ，  Ｊ．，Ｆｒｉｔｓｃｈ，Ｅ．Ｆ．，ａｎｄ  Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｔ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ；２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（１９８９年１２月）にも開示されている。本明細書に引用されたすべての参考文献は、その全体が本明細書に組み込まれる。
【０１０８】
上記のアッセイ技術は、ＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との相互作用に影響を与える他の分子を同定するためにも使用することができる。そのような分子の例としては、タンパク質、ペプチド、および低分子が含まれるが、これらに限定されない。例えば、Ｔｈ４０細胞への結合のために、本発明のペプチドと競合する分子の能力を試験するアッセイを設計することができる。例えば、検出可能なマーカーで標識されたペプチドを、試験分子と、Ｔｈ４０細胞を含むことが知られている細胞の集団とを、Ｔｈ４０細胞へのペプチドの結合を可能にする条件下で混合することができる。適切な潜伏期の後、細胞を洗浄して未結合のペプチドを除去し、検出可能なマーカーの存在について細胞はスクリーニングされる。あるいは、標識されたペプチドを最初にＴｈ４０細胞に結合させ得、未結合ペプチドを除去するための洗浄ステップの後、結合されたペプチドを含む細胞に試験分子を添加することができる。インキュベーション期間および未結合分子または放出されたペプチドを除去するための洗浄ステップに続いて、細胞は、検出可能なマーカーの存在についてスクリーニングされる。いずれの場合も、細胞サンプル中の検出可能なマーカーの不在は、被験分子がＴｈ４０細胞への結合のためにペプチドと競合することができることを示し、検出可能なマーカーの存在は、被験分子がペプチドのＴｈ４０細胞への結合を抑制しないことを示すであろう。そのようなアッセイがまた、ペプチドのＴｈ４０細胞への結合を部分的に抑制する分子を同定するために有用であろうから、結合の抑制は１００％である必要はない。そのようなアッセイが、陽性対照（例えば、標識されていないペプチド）および陰性対照（例えば、Ｔｈ４０細胞に結合しないことが知られているタンパク質／分子）の使用に関することは、当業者によって理解される。
【０１０９】
Ｔｈ４０細胞のレベルの増加が、自己免疫疾患の発症と関連しているので、本発明は、自己免疫疾患および自己免疫関連のアテローム性動脈硬化症および／または心血管疾患をより一般的に発症するリスクのある患者を同定するために使用することができる。したがって、本発明の一実施形態は、自己免疫関連のアテローム性動脈硬化症を発症するリスクのある患者を同定する方法である。一実施形態では、アテローム性動脈硬化症を発症するリスクのある患者は、検査されるべき患者からサンプルを取得することと、前記サンプルのＴ細胞部分を本発明のペプチドと接触させることと、サンプル中に存在するＴｈ４０細胞のレベルを測定することとによって同定され、ここで、Ｔ細胞の総集団の約２５％よりも大きいＴｈ４０細胞のレベルが、患者がアテローム性動脈硬化症を発症するリスクがあることを示す。一実施形態において、ペプチドは、ＣＤ４０タンパク質に結合する限り、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２から選択されるアミノ酸配列を含む。一実施形態において、ペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  ７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２から選択されるアミノ酸配列である。好ましい実施形態では、ペプチドは、例えばルシフェラーゼまたはアルカリホスファターゼのような適切な検出可能なマーカーで標識される。
【０１１０】
本発明はまた、本明細書に開示された方法を実践するのに有用なキットを含み、キットが、アテローム性動脈硬化症を調節するような方法でＣＤ４０タンパク質と相互作用するペプチドを含む。一実施形態において、ペプチドは、アテローム性動脈硬化症をダウンレギュレートすることができる限り、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９から選択されるアミノ酸配列を含む。一実施形態において、ペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９から選択されるアミノ酸配列である。別の実施形態では、Ｔｈ４０細胞のレベルを測定するためのキットであって、キットが、ＣＤ４０タンパク質と相互作用するペプチド、およびＣＤ４０結合したペプチドを検出するための方法を含む。キットはまた、緩衝剤、ラベル、容器、挿入物、チューブ、バイアル、シリンジなどのような、これらに限定されない関連する試薬および構成要素を含み得る。
【０１１１】
２型糖尿病関連の発明
本主題は、ＣＤ４０タンパク質を発現し、したがってＴｈ４０細胞と呼ばれるＴ細胞のユニークなサブセットが、２型糖尿病のような状態を含む自己免疫性炎症に役立つ可能性があるという発見に基づく。さらに、自己免疫過程におけるＴｈ４０細胞の関与は、Ｔ細胞表面に発現するＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質の相互作用に依存している可能性がある。ＣＤ４０とＣＤ１５４の相互作用は、細胞間に活性化シグナルが伝達され、その後Ｔｈ４０細胞の活性化をもたらす。このような活性化は、Ｔｈ４０細胞の増殖と炎症の増加（例えば、系内に存在する免疫細胞および免疫調節分子の数の増加）をもたらす。したがって、ＣＤ４０／ＣＤ１５４相互作用の抑制は、Ｔｈ４０細胞の活性を調節し、それによって炎症に影響を与えることができる。したがって、本主題は、ＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との間の相互作用に影響を与え、それによって炎症を調節し得るペプチド、およびその投与に関する。さらに、本主題は、Ｔ細胞の表面に発現するＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との間の相互作用に影響を与え、それによってＴ細胞の活性に影響を与え、炎症を制御し、その結果、２型糖尿病を予防、調節、および減少させるペプチドに関する。本主題はまた、Ｔｈ４０細胞を検出するためのそのようなペプチドの使用を包含する。
【０１１２】
本主題の一実施形態は、２型糖尿病を予防するような方法でＣＤ４０タンパク質と相互作用するペプチドである。本明細書で使用されるように、用語「相互作用」（ｉｎｔｅｒａｃｔまたはｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ）、およびそのようなものは、２つの分子が炎症の調節を引き起こすように十分に物理的に近接することを意味する。そのようなタイプの相互作用の１つは、結合相互作用である。そのような相互作用では、ペプチドはＣＤ４０と結合して複合体を形成する。複合体形成の例は、抗原と抗体との結合である。本主題によれば、本発明のペプチドのＣＤ４０タンパク質への結合は、可逆的（例えば、非共有結合相互作用）または非可逆的（例えば、共有結合相互作用）であり得る。さらに、可逆的な相互作用は強い場合も弱い場合もあり、相互作用の強さは、各タンパク質が複合体中の他のタンパク質に及ぼす力（例えば、イオン電荷、水素結合、ファンデルウォール相互作用など）によって測定される。２つの分子間の相互作用の強さに影響を与える因子は、当業者には知られている。ペプチドとタンパク質のような２つの分子間の結合の強さの１つの有用な尺度は、解離定数（Ｋｄ）である。本発明の好ましいペプチドは、約１×１０−６Ｍ、約１×１０−７Ｍ、または約１×１０−８Ｍを超えないＫｄでＣＤ４０タンパク質に結合するペプチドである。特に好ましいペプチドは、約１×１０−９Ｍ未満のＫｄを有するものである。一実施形態では、本発明のペプチドは、１００ｎＭ未満、５０ｎＭ未満、２５ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、５ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２ｎＭ未満、または１ｎＭ未満のＫｄでＣＤ４０タンパク質に結合する。ペプチドとＣＤ４０タンパク質との間の結合相互作用を測量および分析する方法は、当技術分野の当業者に知られている。
【０１１３】
本明細書で使用されるように、動物中に存在するＴｈ４０細胞のレベルの変化、またはＴ細胞の培養物中に存在するＴｈ４０細胞のレベルの変化は、炎症の調節を示し得る。本明細書で使用されるように、レベル、数、計数、および濃度という用語は、交換可能に使用することができる。炎症の調節は、炎症環境に存在するＴｈ４０細胞の数の増加または減少を意味し得；しかしながら、炎症の調節は、細胞数または細胞計数に限定されるべきではない。その結果、調節は陽性または陰性と呼ばれることがある。炎症の陽性調節（アップレギュレーションとも呼ばれる）は、炎症環境中のＴｈ４０細胞の数を増加させる結果となり得る。炎症の陰性調節（ダウンレギュレーションとも呼ばれる）は、炎症環境に存在するＴｈ４０細胞の数を減少させる結果となり得る。Ｔｈ４０細胞のレベル、計数、または濃度は、炎症性環境における炎症を示すものではない可能性がある。好ましいペプチドは、炎症をダウンレギュレーションし、それによって炎症環境に存在するＴｈ４０細胞の数を減少させるものであリ得る。炎症の陽性および陰性の調節は、炎症性環境に存在する免疫調節分子のタイプおよび量の変化をもたらしてもよいし、またはもたらさなくてもよい。いくつかの実施例では、Ｔｈ４０レベルは変化しないが、それらの細胞の活性は、それらの細胞が炎症性サイトカインおよび炎症の他のバイオマーカーをもはや発揮または増加させないように変化する可能性がある。したがって、本明細書で使用されるように、炎症を調節することは、身体またはサンプル中のＴｈ４０レベル、数、または濃度の変化を指してもよく、また、疾患、炎症性サイトカイン、および／または細胞由来の炎症性メディエーター分子に関連している可能性のある、より一般的な炎症の変化を指してもよい。
【０１１４】
細胞培養系および動物の免疫系の両方が、免疫細胞および免疫調節分子の基底レベルを含むことは、当業者によって理解されたい。基底レベルおよび正常レベルという表現は、交換可能に使用することができる。動物の免疫系に関しては、本明細書で使用されるように、免疫細胞（例えば、Ｔｈ４０細胞）の種類または免疫調節分子の基底レベルとは、健康と考えられる個体群（すなわち、代謝性疾患、自己免疫疾患または感染症のない個体群）に存在する、その細胞の種類または免疫調節分子の平均数を指す。細胞培養系に関しては、本明細書で使用されるように、免疫細胞の種類または免疫調節分子の基底レベルは、非活性化された細胞の集団中に存在する、その細胞の種類または免疫調節分子の平均レベルを指す。当業者は、Ｔ細胞またはそのような細胞の集団が活性化されるかどうかを測定することができる。例えば、細胞によるＣＤ６９、ＣＤ２５および／またはＣＤ１５４タンパク質の発現は、その細胞が活性化されていることを示す。
【０１１５】
細胞または分子の基底レベルは、特定の量（例えば、特定の濃度）であり得るか、または量の範囲を包含し得る。免疫細胞および免疫調節分子の基底レベルまたは範囲は、当業者に知られている。例えば、健康な個体では、ヒトの血液中に存在するＣＤ４＋Ｔ細胞の正常レベルは、５００〜１５００細胞／ｍｌである。この測量値の変動は、細胞計数を測定するために使用される方法の違いに起因し得る。さらに、細胞の正常レベルは、総細胞集団に対するパーセンテージとして報告され得る。例えば、健康な個体では、Ｔｈ４０細胞は総Ｔ細胞集団の２５％未満を占める。したがって、本明細書で使用されるように、炎症という用語は、Ｔｈ４０細胞が、総Ｔ細胞集団の約２５％以上、約３０％以上、約３５％以上、約４０％以上、約４５％以上、約５０％以上、約５５％以上、約６０％以上、約６５％以上、約７０％以上、約７５％以上、または約８０％以上を占める炎症性環境を指す。さらに、本明細書において好ましいペプチドは、Ｔｈ４０細胞のレベルを、総Ｔ細胞集団の約５０％未満、約４５％未満、約４０％未満、約３５％未満、約３０％未満、約２７％未満、または約２５％に等しいレベルまで低下させるものである。Ｔ細胞集団中の異なるタイプのＴ細胞を測量する方法は、当業者に知られている。さらに、本明細書では、本発明のペプチドを用いてＴｈ４０細胞を検出するための新規な方法が開示される。
【０１１６】
本明細書で使用されるように、「炎症性環境」という表現は、細胞の培養物、または動物の体内に存在する免疫細胞および関連する免疫調節分子の全体的な集団を指す。このように、「炎症性環境」という表現は、細胞の培養物中、または動物の体内に存在する免疫細胞および免疫調節分子（例えば、サイトカイン）の種類、および／または相対的な量を包含し、これらは炎症反応に影響を与えることに関与する。炎症性環境という用語によって包含される細胞の例としては、Ｔ細胞、好中球、マクロファージ、顆粒球などが挙げられるが、これらに限定されない。炎症性環境は、急性および慢性炎症の両方を媒介する細胞および分子に関連する。炎症性環境が本発明のペプチドが投与されるシステムを指すことは、当業者によって理解されたい。一実施形態では、システムは、細胞培養システムである。一実施形態では、システムは、完全な動物である。
【０１１７】
本発明の好ましいペプチドは、免疫吸着アッセイのようなアッセイを用いて測定されるように、溶液中で、またはＴ細胞の表面上で、ＣＤ４０タンパク質と選択的に相互作用するものである。本明細書で使用されるように、選択的（ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙまたは  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ）、特異的などの用語は、ペプチドが、ＣＤ４０タンパク質に関連しないタンパク質よりもＣＤ４０タンパク質に対してより高い親和性を有することを示す。より具体的には、選択的（ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙまたはｓｅｌｅｃｔｉｖｅ）、特異的などの用語は、ＣＤ４０に対するペプチドの親和性が、標準的なアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ）を用いて測量された陰性対照（例えば、アルブミンなどの無関係なタンパク質）に対する親和性よりも統計的に有意に高いことを示す。ＣＤ４０タンパク質と選択的に相互作用するペプチドの能力をアッセイするための適切な技術は、当業者に知られている。そのようなアッセイは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏアッセイであり得る。有用なアッセイの例としては、酵素結合免疫アッセイ、競合酵素結合免疫アッセイ、ラジオイムノアッセイ、蛍光免疫アッセイ、化学発光アッセイ、ラテラルフローアッセイ、フロースルーアッセイ、凝集アッセイ、微粒子ベースのアッセイ（例えば、磁性粒子やプラスチックポリマー（ラテックスやポリスチレンビーズなど）などに限定されない微粒子を使用）、免疫沈降アッセイ、免疫ブロットアッセイ（例えば、ウエスタンブロット）、燐光アッセイ、フロースルーアッセイ、クロマトグラフィーアッセイ、ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）ベースのアッセイ、表面プラズモン共鳴アッセイ、分光光度法アッセイ、微粒子ベースのアッセイ、電子センサアッセイおよびフローサイトメトリーアッセイが含まれるが、これに限定されない。このようなアッセイを実施する方法は、当業者によく知られている。一実施形態では、アッセイは、培養中の細胞を用いて実施することができ、または完全な動物を用いて実施することができる。アッセイは、どのように使用されるかおよび所望の結果のタイプに応じて、定性的、定量的または半定量的な結果が得られるように設計できる。
【０１１８】
本発明の一実施形態は、ＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との相互作用に影響を与えるような方法でＣＤ４０タンパク質と相互作用し、それによって炎症を調節するペプチドである。ＣＤ４０／ＣＤ１５４相互作用に対するペプチドの効果は、正であってもよいし、負であってもよい。例えば、ペプチドは、ＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との間の相互作用の強さが増加するような方法でＣＤ４０タンパク質と相互作用することができる。あるいは、ペプチドは、ＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との間の相互作用の強さが減少するようにＣＤ４０タンパク質と相互作用することができる。ペプチドとＣＤ４０タンパク質との間の結合の強さを測量する方法は、当業者に知られている。本発明の好ましいペプチドは、ＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との間の相互作用の強さを減少させるものである。本発明の好ましいペプチドは、ＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との間の結合の強さを、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％減少させる。特に好ましいペプチドは、ＣＤ４０とＣＤ１５４との結合を完全に抑制するものである。ＣＤ４０とＣＤ１５４との結合を完全に抑制することは、通常ＣＤ４０とＣＤ１５４との相互作用を可能にする条件下で、本発明のペプチドをＣＤ４０タンパク質およびＣＤ１５４タンパク質と近接させると、そのような相互作用は起こらず、ＣＤ４０発現細胞において活性化シグナルが刺激されないことを意味する。その結果、炎症のＣＤ４０／ＣＤ１５４媒介による調節は起こらない。一実施形態では、ペプチドは、系内の炎症のレベルを低下させるような方法でＣＤ４０タンパク質と相互作用する。一実施形態では、ペプチドは、系内の炎症の発症を抑制するような方法でＣＤ４０タンパク質と相互作用する。一局面において、ペプチドは、細胞が細胞間相互作用の間に通常起こる他の分子と相互作用する方法を変化させ得る。そのような細胞間相互作用は、炎症をもたらすものであり得る。本発明のペプチドは、炎症促進性サイトカインであるインターロイキン−１β（ＩＬ−１β）およびインターロイキン−１８（ＩＬ−１８）の成熟を促進するような、インフラマソーム複合体を破壊し得る。さらに、本明細書に記載のペプチドの一局面は、これらのペプチドが、カスパーゼ１、ＰＹＣＡＲＤ、ＮＡＬＰ、カスパーゼ５、ヌクレオチド結合オリゴマー化ドメイン、およびロイシンリッチリピート含有受容体（ＮＬＲ）およびＡＬＲ（ＡＩＭ２様受容体）のインフラマソーム複合体を破壊する可能性があることである。
【０１１９】
本明細書に記載されたペプチドの一局面は、ペプチドの投与が、炎症を示すまたは結果として生じる可能性のある細胞間相互作用の間に通常生じる他の分子と細胞が相互作用する方法を変化させ得ることである。本明細書に記載のペプチドの一局面は、これらのペプチド（複数可）が、インフルマソームを破壊し、したがって炎症の結果を変化させ得ることである。
【０１２０】
本発明のペプチドが、ＣＤ４０タンパク質上の任意の部位と相互作用することができるが、好ましいペプチドは、ＣＤ１５４結合部位と重なる位置でＣＤ４０タンパク質と相互作用する。一実施形態では、本発明のペプチドは、ＣＤ１５４結合部位でＣＤ４０タンパク質と相互作用する。そのようなペプチドの例は、ＣＤ４０リガンド競合的拮抗剤である。本明細書で使用されるように、ＣＤ１５４タンパク質のＣＤ４０タンパク質への結合を妨害または抑制するペプチドは、小妨害ペプチド（ＳＩＰ）と呼ばれる。本明細書で使用されるように、小妨害ペプチドは、生理化学的特性を介して、ＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との相互作用を妨害し、それによって活性化シグナルがＣＤ４０保有細胞に送達されるのを防ぎ、それによってＣＤ４０保有細胞の活性化、それに炎症を制限するペプチドである。本明細書で実証されるように、このような妨害の結果は、Ｔ細胞の活性化および伝播の防止、および炎症の防止または減少である。
【０１２１】
さらに、小妨害ペプチドは、生理化学的特性を介して、ＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との相互作用を妨害し、それによって活性化シグナルがＣＤ４０保有細胞に送達されるのを防止し、それによってＣＤ４０保有細胞の活性化を制限し、その結果、２型糖尿病を調節、抑制、予防、および／または逆転させ得る。本明細書で実証されるように、このような妨害の結果は、Ｔ細胞の活性化および伝播の防止、および２型糖尿病の発症の防止、減少、調節または逆転である。
【０１２２】
本発明の方法を実践するのに有用なペプチドは、２型糖尿病を調節するような方法でＣＤ４０タンパク質と相互作用するのに十分な大きさであるべきである。好ましいペプチドが、製造が容易であり、かつ安価であるので、比較的短いものであることは、当業者によって理解される。好ましいペプチドは、２０アミノ酸未満の長さである。好ましいペプチドは、長さが４、６、８、１０、１３、１５、または２４アミノ酸であるものである。一実施形態では、ペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３（コア配列は表３，４を参照）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４（６−ｍｅｒは表３，４を参照）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．  ５（８−ｍｅｒマウスは表３，４を参照）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６（８−ｍｅｒヒトは表３，４を参照）、ＳＥＱ  ＩＮ  ＮＯ：７（１５−ｍｅｒマウスは表３，４を参照）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８（１５−ｍｅｒヒトは表３，４を参照）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９（２４−ｍｅｒは表３，４を参照）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．  ２４（１０−ｍｅｒは表３，４を参照）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５（１３−ｍｅｒは表３，４を参照）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６（２４−ｍｅｒは表３，４を参照）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７（６−ｍｅｒ（様式２）は表３，４を参照）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．  ２８（６−ｍｅｒ（様式３）は表３，４を参照）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９（６−ｍｅｒ（様式４）は表３，４を参照）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０（６−ｍｅｒ（様式４）は表３，４を参照）、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２（２４−ｍｅｒ−マウス（様式２））の群から選択されるアミノ酸である。そのようなペプチドの配列を以下の表３，４に示す（これは、先に記載した表１，２と完全に重複しているが、読者の便宜のためにここに繰り返す）。
【０１２３】
【表３】
2021510174.tif 000005
【０１２４】
【表４】
2021510174.tif 000006
【０１２５】
ＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との相互作用は、各タンパク質内の特定の領域で起こることが示される。本発明者らは現在、驚くべきことに、ＣＤ４０と相互作用するＣＤ１５４領域の短い部分を含むペプチドが、ＣＤ４０タンパク質と結合し、それによって２型糖尿病を調節することができることを示す。したがって、本明細書の一実施形態は、２型糖尿病を調節するような方法でＣＤ４０タンパク質と相互作用するようにＣＤ１５４タンパク質のアミノ酸配列の少なくとも一部を含むペプチドである。一実施形態では、ペプチドとＣＤ４０タンパク質との相互作用は、２型糖尿病の陰性調節、減少または抑制をもたらす。一局面において、ペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２の少なくとも一部を含む。
【０１２６】
一局面において、ペプチドは、可能な限り短いが、２型糖尿病を調節するような方法でＣＤ４０タンパク質との相互作用を可能にするのに十分なＣＤ１５４タンパク質を含む。一実施形態において、本発明のペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２からの６、１３または１５の連続するアミノ酸を含み、２型糖尿病を調節するような方法でＣＤ４０と相互作用する。好ましいペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸１４２〜１４５およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のアミノ酸１４３〜１４６に対応するリジン−グリシン−チロシン−チロシン（ＫＧＹＹ；  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３）のコア配列を含む。さらに、別の好ましいペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸１４２〜１４５およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のアミノ酸１４３〜１４６に対応するリジン−グリシン−チロシン−チロシン−スレオニン−メチオニン（ＫＧＹＹＴＭ；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７）のコア配列を含む。有用なペプチドは、そのペプチドが２型糖尿病を調節することができる限り、コア配列に隣接するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１またはＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２からの配列の付加的な領域を含み得る。本明細書の一実施形態において、ペプチドは、そのペプチドが２型糖尿病を調節するような方法でＣＤ４０タンパク質と相互作用する限り、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２から選択される少なくとも１つの配列を含む。本主題の一実施形態において、本発明のペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８，ＳＥＱＩＤ  ＮＯ：９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２から選択される配列である。
【０１２７】
本主題のペプチドは、ＣＤ４０タンパク質との相互作用を担う配列の全体またはそこから選択されるが、ＣＤ４０タンパク質と相互作用しないが他の有用な機能を有するアミノ酸配列をさらに含んでもよい。任意の有用な付加的なアミノ酸配列は、付加的な配列がＣＤ４０タンパク質と相互作用するＣＤ４０相互作用配列の能力に望ましくない影響を及ぼさない限り、ＣＤ４０相互作用配列に追加することができる。例えば、ＣＤ４０タンパク質と相互作用を担うアミノ酸配列に加えて、本発明のペプチドは、ペプチドの可視化または精製に有用なアミノ酸配列を含むことができる。そのような配列は、ラベル（例えば、酵素）またはタグ（抗体結合部位）として機能する。さらに、本明細書に提示された発明は、１５−ｍｅｒの位置−７（Ｋ）および１５−ｍｅｒの位置−９（Ｙ）以外の任意の位置でのアミノ酸の置換が行われてもよく、ペプチドの完全性および機能が維持されてもよいことを実証する（図８を参照のこと）。
【０１２８】
したがって、これらの発明は、ペプチドの有益な側面を維持しつつ、多数の置換が可能であることを暗示し得る。
【０１２９】
任意の有用な付加的なアミノ酸配列は、付加的な配列がＣＤ４０タンパク質と相互作用するＣＤ４０相互作用配列の能力に望ましくない影響を及ぼさない限り、ＣＤ４０相互作用配列に追加することができる。例えば、ＣＤ４０タンパク質と相互作用を担うアミノ酸配列に加えて、本発明のペプチドは、ペプチドの可視化または精製に有用なアミノ酸配列を含むことができる。そのようなラベルおよびタグの例としては、Ｂ−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、グルタチオン−トランスフェラーゼ、チオレドキシン、ＨＩＳタグ、ビオチンタグ、および蛍光タグを含むが、これらに限定されない。さらに、アセチル基およびアミドは、Ｎ末端またはＣ末端に付加されていてもよく、本明細書の発明は、そのようなペプチドの安定性または所望の他の特性を増強し得る、これらおよび他のバリエーションを考慮する。タンパク質のラベルおよびタグ付けのための他の有用な配列は、当業者に知られている。
【０１３０】
同様に、本発明のペプチドは、そのような改変が２型糖尿病を調節するペプチドの能力に著しく影響しない限り、修飾することができる。そのような修飾は、例えば、タンパク質の安定性、溶解性または吸収性を高めるために行うことができる。そのような修飾の例としては、ペプチドのＰＥＧ化、グリコシル化、および化学修飾を含むが、これらに限定されない。
【０１３１】
本発明のペプチドは、自然界から得られる可能性があってもよく（例えば、植物、動物または微生物から得られる）、または実験室で生産されてもよい（例えば、組換え的または合成的により）。好ましいペプチドは、合成されたペプチドである。また、天然分子と合成分子の組み合わせであるペプチドも包含される。組換えペプチドまたは合成ペプチドを製造および単離するための一般的な方法は、当業者に知られている。本明細書で使用されるように、単離された、または生物学的に純粋な分子は、その天然の環境から取り除かれたものであることに留意されたい。このように、単離された、生物学的に純粋ななどの用語は、必ずしもタンパク質が精製された程度を反映しているわけではない。
【０１３２】
本発明のペプチドは、身体内で自然に発生するものではなく、むしろ、小妨害ペプチドを得るために構築および合成されなければならない。設計および合成の特定の局面は、ペプチドの安定性およびその意図された使用を実行する能力に影響を与える可能性がある。本明細書のペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３のような４アミノ酸の長さ、５アミノ酸の長さ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，２７，２８，２９および３０のような６アミノ酸の長さ、７アミノ酸の長さ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５および６のような８アミノ酸の長さ、９アミノ酸の長さ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４のような１０アミノ酸の長さ、１１アミノ酸の長さ、１２アミノ酸の長さ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５のような１３アミノ酸の長さ、１４アミノ酸の長さ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７，８，１１，１２，１３，１４，１５，  １６，１７，１８および２０のような１５アミノ酸の長さ、１６アミノ酸の長さ、１７アミノ酸の長さ、１８アミノ酸の長さ、１９アミノ酸の長さ、２０アミノ酸の長さ、２１アミノ酸の長さ、２２アミノ酸の長さ、２３アミノ酸の長さ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６および３２のような２４アミノ酸の長さ、および２５アミノ酸の長さから長さが異なり得る。いくつかの実施例では、本発明の実施形態は、長さが５０個以上のアミノ酸までであってもよく、そのような実施例では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３のコア配列の繰り返しは、そのようなペプチドにおいて、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１１回またはそれ以上の回数で発生してもよい。他の実施例では、本発明の実施形態は、最大で５０個以上のアミノ酸の長さであってもよく、そのような実施例では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３のコア配列の繰り返しは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４〜９、２５〜３０、および３２の配列のような所望の効果を提供することが知られている他の配列で変化させてもよい。前記変化の繰り返しおよび配列は無数であり；しかしながら、本明細書の開発は、対象における炎症を変化、制御、または影響するような方法でＣＤ４０と相互作用するという意図された使用を実行する能力を維持するペプチドを考慮する。
【０１３３】
本明細書に記載されているように、ＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との相互作用は、２型糖尿病におけるＴｈ４０細胞の関与に必要である。したがって、本発明のペプチドを用いたＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との間の相互作用の抑制は、２型糖尿病に影響を与える有用な方法である。したがって、一実施形態は、ＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との間の相互作用を減少させる方法であり、ＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との間の相互作用を減少させるような方法でＣＤ４０タンパク質と相互作用するペプチドをＣＤ４０タンパク質およびＣＤ１５４タンパク質を含む環境に導入することを含む。本明細書の一局面において、ペプチドは、ＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との間の相互作用を、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％減少させる。一実施形態では、ペプチドは、ＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との間の相互作用を、少なくとも１０、少なくとも１００、少なくとも１０００、少なくとも１００００のファクターで減少させる。ＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との間の相互作用の強さを測量する方法は、以前に議論されており、当業者に知られている。
【０１３４】
本明細書の一実施形態は、炎症を調節するような方法でＣＤ４０タンパク質と相互作用するペプチドをＣＤ４０タンパク質に接触させることを含む、２型糖尿病を調節する方法である。一局面において、ＣＤ４０タンパク質とペプチドとの相互作用は、Ｔｈ４０細胞の数を少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％増加させる。一実施形態では、ＣＤ４０タンパク質とペプチドとの相互作用は、Ｔｈ４０細胞の数を少なくとも１０、少なくとも１００、少なくとも１０００、少なくとも１００００のファクターで増加させる。
【０１３５】
一局面は、患者における２型糖尿病を減少させる方法であって、該方法が、本発明のペプチドを患者に投与することを含む。一実施形態において、ペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  ６，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  ２８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  ２９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２から選択されるアミノ酸配列を含む。一実施形態において、ペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  ２８、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９から選択されるアミノ酸配列である。好ましい実施形態において、ＣＤ４０タンパク質とペプチドとの相互作用は、Ｔｈ４０細胞の数を少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％減少させる。別の実施形態では、ＣＤ４０タンパク質とペプチドとの相互作用は、Ｔｈ４０細胞の数を少なくとも１０、少なくとも１００、少なくとも１０００、少なくとも１００００のファクターで減少させる。好ましい実施形態では、Ｔｈ４０細胞のレベルは、Ｔｈ４０細胞が総Ｔ細胞集団の約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、または約４０％を超えないように低減される。
【０１３６】
本発明のペプチドおよび方法は、患者を治療するためだけでなく、細胞培養における使用にも適している。本明細書で使用されるように、用語「患者」は、そのような治療を必要とする任意の動物を指す。動物は、ヒトまたは非ヒト動物であり得る。治療するための好ましい動物は哺乳動物である。ペプチドは、それ自体、または医薬組成物として投与または適用することができる。本発明のペプチドまたはその医薬組成物は、注射投与（例えば、静脈内、筋肉内、皮下、髄腔内、腹腔内）、吸入投与、経口投与（例えば、錠剤、タブレット、カプセル、粉末、シロップ、溶液、懸濁液、薄膜、分散液または乳剤中）、経皮投与、経粘膜投与、経肺投与、頬側投与、鼻腔内投与、舌下投与、脳内投与、膣内直腸投与または局所投与、または当業者に知られている任意の他の便利な方法を含むがこれらに限定されない様々な経路で患者に投与することができる。
【０１３７】
本発明のペプチドおよび／またはその医薬組成物の有効量は、当技術分野で知られている標準的な臨床技術によって測定することができる。そのような量は、他の要因の中で、患者の体重、年齢、および状態、化合物の意図される効果、投与方法および処方する医師の判断を含むがこれらに限定されない、治療される患者に依存する。また、この文脈において、関心のある障害を示す患者を治療する際には、治療有効量の薬剤またはそれらの薬剤が投与されることに留意されたい。治療有効量とは、患者における１つまたは複数の症状の改善または生存期間の延長をもたらす化合物のその量を指す。
【０１３８】
本発明のペプチドまたはその医薬組成物は、単独で、または本開示の他の化合物を含む１種または複種の他の医薬組成物と組み合わせて投与することができる。特定の医薬組成物は、当業者にはよく知られているように、所望の投与モードに依存する。
【０１３９】
本発明者らが、Ｔｈ４０細胞が自己免疫疾患および２型糖尿病の発症に密接に関与することを発見したので、本明細書に開示されたペプチドおよび方法は、そのような疾患に起因するコンディショニングに影響を与えるために使用することができる。したがって、本明細書の一実施形態は、そのような治療を必要とする患者において２型糖尿病を治療する方法であって、その方法が、ＣＤ４０タンパク質と相互作用するペプチドを患者に投与し、それによって２型糖尿病を減少させることを含む。一実施形態では、ペプチドは、ＣＤ４０およびＣＤ１５４の相互作用に影響を与えるような方法でＣＤ４０タンパク質と相互作用し、それにより２型糖尿病を減少させる。好ましい実施形態では、ペプチドとＣＤ４０タンパク質との相互作用は、患者におけるＴｈ４０細胞の数を、２型糖尿病を有しない対象において観察されるのと等しいレベルまで減少させる。別の実施形態では、ペプチドとＣＤ４０タンパク質との相互作用は、患者における炎症性サイトカインレベルを減少させる。別の実施形態では、ペプチドとＣＤ４０タンパク質との相互作用は、患者における炎症性サイトカインレベルを、２型糖尿病を有しない対象において観察されるレベルと同等または類似のレベルまで減少させる。本発明は、自己免疫疾患および／または心血管疾患を有する任意の患者を治療するのに適しており、その発症が、Ｔｈ４０細胞に関連するか、Ｔｈ４０細胞と相関するか、またはＴｈ４０細胞に依存し得る。本発明はまた、自己免疫疾患および／または心血管疾患を有する任意の患者を治療するのに適し得、その発症は、Ｔｈ４０細胞計数、レベル、および／または濃度に関連しないか、相関しないか、または依存しない。
【０１４０】
一実施形態では、より具体的には、本発明のペプチドは、そのような患者におけるＴｈ４０細胞のレベルを減少させるのに適する。この実施形態では、本発明のペプチドは、自己免疫疾患に罹患している患者におけるＴｈ４０細胞のレベルを、総Ｔ細胞集団の約２５％以下に低減し得る。
【０１４１】
本発明のペプチドを用いた治療に特に従順である疾患の一例は、２型糖尿病であり得る。２型糖尿病では、耐糖能が低下し、インスリン感受性が低下し、血漿中インスリン濃度が上昇する。したがって、ＣＤ４０−ＣＤ１５４相互作用を介した炎症性細胞および細胞シグナル伝達の制御は、耐糖能低下、インスリン抵抗性、および血漿インスリンレベルの上昇を特徴とする２型糖尿病の症状を制御、調節、低減および／または逆転させるために使用することができる。Ｔ２Ｄおよび／またはアテローム性動脈硬化症のいくつかのマウスモデルが開発される。最初の研究では、高脂肪食から２型糖尿病を発症する能力のために、ＡｐｏＥ−／−マウスが選択された。すべてのマウスについて、耐糖能試験およびインスリン試験を実施した。マウスは、６−ｍｅｒペプチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９）を１ｍｇ／ｋｇの割合で週１回静脈注射で投与され、モニターされた。ペプチドで処理したＡｐｏＥ欠損マウスは、対照と比較して、インスリン感受性を有意に改善し、インスリン抵抗性を改善し、血漿インスリンレベルを低下させたのと同様に、有意に増加したグルコース耐性を実証した。したがって、本発明の一実施形態は、２型糖尿病を発症する危険性のある個人における２型糖尿病を予防する方法であって、該方法が、ＣＤ４０発現細胞に選択的に結合するためにペプチドを該個人に投与することを含む。そのような実施形態において、ペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３〜９、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４−３０から選択され得る。
【０１４２】
本発明はまた、驚くべきことに、すでに２型糖尿病の徴候を示す個体において、本発明のペプチドが疾患プロセスを逆転させるために使用され得ることを示す。したがって、本主題の一局面は、２型糖尿病を有すると診断された患者に、本発明のペプチドを投与することを含む２型糖尿病を逆転させる方法である。一実施形態において、ペプチドは、炎症をダウンレギュレートまたは低減することができる限り、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３，  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０から選択されるアミノ酸配列を含む。一実施形態において、ペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０から選択されるアミノ酸配列である。本明細書で使用されるように、２型糖尿病を逆転させるという表現は、耐糖能を増加させ、インスリン抵抗性を減少させ、血漿インスリンレベルを、２型糖尿病を有しない個体で観察されるレベルに近いか、またはそれに匹敵するレベルに減少させることを意味する。
【０１４３】
まだ別の発明では、驚くべきことに、すでに２型糖尿病の徴候を示す個体において、本発明のペプチドが疾患プロセスを逆転させるために使用され得ることを示す。したがって、本主題の一局面は、２型糖尿病を有すると診断された患者に、本発明のペプチドを投与することを含む２型糖尿病を逆転させる方法である。一実施形態において、ペプチドは、炎症を制御、調節、減少および／または逆転させることができる限り、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３−９およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４−３０から選択されるアミノ酸配列を含む。一実施形態において、ペプチドは、２型糖尿病を制御、調節、減少および／または逆転させることができる限り、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３−９およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４−３０から選択されるアミノ酸配列である。さらに、この実施形態の一局面では、本発明のペプチドは、自己免疫疾患に罹患している患者におけるＴｈ４０細胞のレベルを、総Ｔ細胞集団の約２５％以下に低減し得る。代替的な実施形態では、ペプチドとＣＤ４０タンパク質との相互作用は、患者におけるＴｈ４０細胞の数を、２型糖尿病を有しない対象において観察されるのと等しいレベルまで減少させる。別の実施形態では、ペプチドとＣＤ４０タンパク質との相互作用は、患者における炎症性サイトカインレベルを減少させる。別の実施形態では、ペプチドとＣＤ４０タンパク質との相互作用は、患者における炎症性サイトカインレベルを、２型糖尿病を有しない対象において観察されるレベルと同等または類似のレベルまで減少させる。本開発は、自己免疫疾患および／または心血管疾患を有する任意の患者を治療するのに適し得、その発症が、Ｔｈ４０細胞に関連するか、Ｔｈ４０細胞と相関するか、またはＴｈ４０細胞に依存し得る。本発明はまた、自己免疫疾患および／または心血管疾患を有する任意の患者を治療するのに適し得、その発症は、Ｔｈ４０細胞計数、レベル、および／または濃度に関連しないか、相関しないか、または依存しない。
【０１４４】
記載されているように、本発明のペプチドは、ＣＤ４０発現細胞に選択的に結合する。したがって、本発明の主題のペプチドは、Ｔｈ４０細胞を鑑定するために使用することができる。したがって、本発明の一実施形態は、Ｔｈ４０依存性２型糖尿病を検出する方法であって、前記方法が、本発明のペプチドをＴ細胞集団に接触させることを含む。好ましい実施形態では、ペプチドは、検出可能なマーカー、例えばフルオレセイン、ルシフェラーゼまたはアルカリホスファターゼで標識される。そのような検出は、当業者に知られているアッセイ技術を用いて行うことができる。一般に、本発明のペプチドを使用してＴｈ４０細胞を検出するためのアッセイは、（ａ）細胞のサンプルを取得することと；（ｂ）存在する場合には、Ｔｈ４０細胞へのペプチドの結合を可能にするのに適した条件で本発明のペプチドを前記細胞に接触させることと；（ｃ）非特異的相互作用を破壊し、かつ未結合のペプチドを除去する条件で前記細胞を洗浄することと；（ｄ）細胞に結合したペプチドを検出することとを含む。結合したペプチドの検出は、直接または間接的に達成することができる。例えば、直接検出は、本明細書に開示されるように、検出可能なマーカーを用いて標識されたペプチドを用いて達成することができる。上記の洗浄ステップに続いて、細胞は、検出可能なマーカーの存在について単純にスクリーニングされる。細胞サンプル中の検出可能なマーカーの存在は、Ｔｈ４０細胞の存在を示し、したがってＴｈ４０依存性２型糖尿病を示す。あるいは、間接的検出は、ペプチドに結合する抗体のような第二の分子の使用を関与する。間接検出アッセイでは、上記の洗浄ステップに続いて、ペプチドに結合する検出分子を細胞サンプルに添加する。この検出分子は検出可能なマーカーで標識される。結合していない検出分子を洗い流した後、細胞は検出可能なマーカーの存在についてスクリーニングされる。細胞サンプル中の検出可能なマーカーの存在は、Ｔｈ４０細胞の存在を示す。本明細書に記載されたアッセイは、有用なアッセイの例として意図されており、他のアッセイ技術を採用することができることを理解されたい。適切なアッセイ技術は、当業者に知られており、また、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．，Ｆｒｉｔｓｃｈ，Ｅ．Ｆ．，ａｎｄ  Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｔ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ；２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（１９８９年１２月）にも開示されている。本明細書に引用されたすべての参考文献は、その全体が本明細書に組み込まれる。
【０１４５】
上記のアッセイ技術は、ＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との相互作用に影響を与える他の分子を同定するためにも使用することができる。そのような分子の例としては、タンパク質、ペプチド、および低分子が含まれるが、これらに限定されない。例えば、Ｔｈ４０細胞への結合のために、本発明のペプチドと競合する分子の能力を試験するアッセイを設計することができる。例えば、検出可能なマーカーで標識されたペプチドを、試験分子と、Ｔｈ４０細胞を含むことが知られている細胞の集団とを、Ｔｈ４０細胞へのペプチドの結合を可能にする条件下で混合することができる。適切な潜伏期の後、細胞を洗浄して未結合のペプチドを除去し、検出可能なマーカーの存在について細胞はスクリーニングされる。あるいは、標識されたペプチドを最初にＴｈ４０細胞に結合させ得、未結合ペプチドを除去するための洗浄ステップの後、結合されたペプチドを含む細胞に試験分子を添加することができる。インキュベーション期間および未結合分子または放出されたペプチドを除去するための洗浄ステップに続いて、細胞は、検出可能なマーカーの存在についてスクリーニングされる。いずれの場合も、細胞サンプル中の検出可能なマーカーの不在は、被験分子がＴｈ４０細胞への結合のためにペプチドと競合することができることを示し、検出可能なマーカーの存在は、被験分子がペプチドのＴｈ４０細胞への結合を抑制しないことを示すであろう。そのようなアッセイがまた、ペプチドのＴｈ４０細胞への結合を部分的に抑制する分子を同定するために有用であろうから、結合の抑制は１００％である必要はない。そのようなアッセイが、陽性対照（例えば、標識されていないペプチド）および陰性対照（例えば、Ｔｈ４０細胞に結合しないことが知られているタンパク質／分子）の使用に関することは、当業者によって理解される。
【０１４６】
上記のアッセイ技術は、ＣＤ４０タンパク質とＣＤ１５４タンパク質との相互作用に影響を与える他の分子を同定するためにも使用することができる。そのような分子の例としては、タンパク質、ペプチド、および低分子が含まれるが、これらに限定されない。例えば、好中球、好酸球、好塩基球、肥満細胞、マクロファージ、血小板、内皮細胞、およびナチュラルキラー細胞およびＢ細胞を含むリンパ球などのＴ細胞以外の細胞のＣＤ４０タンパク質に結合について、本発明のペプチドと競合する分子の能力を試験するアッセイを設計することができる。例えば、検出可能なマーカーで標識されたペプチドを、試験分子と、ＣＤ４０を含有する細胞を含むことが知られている細胞の集団とを、ペプチドのＣＤ４０保有細胞への結合を可能にする条件で混合することができる。適切な潜伏期の後、細胞を洗浄して未結合のペプチドを除去し、検出可能なマーカーの存在について細胞はスクリーニングされる。あるいは、標識されたペプチドを最初にＣＤ４０保有細胞に結合させ得、未結合ペプチドを除去するための洗浄ステップの後、結合されたペプチドを含む細胞に試験分子を添加することができる。インキュベーション期間および未結合分子または放出されたペプチドを除去するための洗浄ステップに続いて、細胞は、検出可能なマーカーの存在についてスクリーニングされる。いずれの場合も、細胞サンプル中の検出可能なマーカーの不在は、被験分子がＣＤ４０保有細胞への結合のためにペプチドと競合することができることを示し、検出可能なマーカーの存在は、被験分子がＣＤ４０保有細胞へのペプチドの結合を抑制しないことを示すであろう。そのようなアッセイはまた、ＣＤ４０保有細胞へのペプチドの結合を部分的に抑制する分子を同定するために有用であろうから、結合の抑制は１００％である必要はない。そのようなアッセイが、陽性対照（例えば、標識されていないペプチド）および陰性対照（例えば、ＣＤ４０保有細胞に結合しないことが知られているタンパク質／分子）の使用に関するであろうことは、当業者によって理解される。
【０１４７】
Ｔｈ４０細胞のレベルの増加が、自己免疫疾患の発症と関連しているので、本発明は、自己免疫疾患および自己免疫関連の２型糖尿病を発症するリスクのある患者を同定するために使用することができる。したがって、本発明の一実施形態は、自己免疫関連の２型糖尿病を発症するリスクのある患者を同定する方法である。一実施形態では、２型糖尿病を発症するリスクのある患者は、検査されるべき患者からサンプルを得ることと、前記サンプルのＴ細胞部分を本発明のペプチドと接触させることと、サンプル中に存在するＴｈ４０細胞のレベルを測定することとによって同定され、ここで、Ｔ細胞の総集団の約２５％よりも大きいＴｈ４０細胞のレベルは、患者が２型糖尿病を発症するリスクがあることを示す。一実施形態において、ペプチドは、ＣＤ４０タンパク質に結合する限り、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０から選択されるアミノ酸配列を含む。一実施形態において、ペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０から選択されるアミノ酸配列である。好ましい実施形態では、ペプチドは、適切な検出可能なマーカー、例えばフルオレセイン、ルシフェラーゼまたはアルカリホスファターゼで標識される。さらに別の実施形態では、ペプチドは、ＣＤ４０タンパク質に結合する限り、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４−９，２４−３０，および  ３２から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０１４８】
本開発はまた、本明細書に開示された方法を実践するのに有用なキットを含み、キットが、２型糖尿病の症状を調節、減少、予防、治療、または他の方法で改善するような方法でＣＤ４０タンパク質と相互作用するペプチドを含む。一実施形態において、ペプチドは、２型糖尿病を調節することができる限り、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０から選択されるアミノ酸配列を含む。一実施形態において、ペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０から選択されるアミノ酸配列である。別の実施形態では、Ｔｈ４０細胞のレベルを測定するためのキットであって、キットが、ＣＤ４０タンパク質と相互作用するペプチド、およびＣＤ４０結合したペプチドを検出するための方法を含む。キットはまた、緩衝剤、ラベル、容器、挿入物、チューブ、バイアル、シリンジなどのような、これらに限定されない関連する試薬および構成要素を含み得る。
【０１４９】
本開発はまた、本明細書に開示された方法を実践するのに有用なキットを含み、キットが、２型糖尿病の症状を調節、減少、予防、治療、または他の方法で改善するような方法でＣＤ４０タンパク質と相互作用するペプチドを含む。一実施形態において、ペプチドは、２型糖尿病を調節することができる限り、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３−９および２４−３０から選択されるアミノ酸配列を含む。一実施形態において、ペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３〜９、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４−３０から選択されるアミノ酸配列である。別の実施形態では、Ｔｈ４０細胞のレベルを測定するためのキットであって、キットが、ＣＤ４０タンパク質と相互作用するペプチド、およびＣＤ４０結合したペプチドを検出するための方法を含む。キットはまた、緩衝剤、ラベル、容器、挿入物、チューブ、バイアル、シリンジなどのような、これらに限定されない関連する試薬および構成要素を含み得る。
【０１５０】
以下の実施例は、例示のために提供されるものであり、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【実施例１】
【０１５１】
本実施例は、ＣＤ１５４の様々なペプチドフラグメントのＣＤ４／ＣＤ８比およびＮＯＤマウスにおける糖尿病の発症に対する効果を実証する。
【０１５２】
ペプチドは、ＳｗｉｓｓＰｒｏデータベースのマウスＣＤ１５４タンパク質（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）のアミノ酸配列に基づいて設計された。ペプチド（８−ｍｅｒ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６）、１０−ｍｅｒ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４）、１３−ｍｅｒ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５）、１５−ｍｅｒ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７）、２４−ｍｅｒ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６）、スクランブル（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３）、およびＲＧＤ（アルギニルグリシラスパラギン酸）は、次にＮｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅに注文した。ＲＧＤペプチドは、ＣＤ１５４配列からの１５アミノ酸配列であり、ＣＤ４０結合モチーフを含まない。
【０１５３】
凍結乾燥したペプチドを１ｍｇ／ｍｌで滅菌生理食塩水に懸濁した。次に、１００ｕｌ（１ｍｇ／ｋｇ）中に２５ｕｇの特定のペプチドを６週齢のＮＯＤマウスの尾静脈に注射した。対照マウスには１００ｕｌの滅菌生理食塩水を投与した。これは、糖尿病（およびアテローム性動脈硬化症）の発症前であるが、膵島の損傷が始まった後である。最初の注射の後、週に１回、ペプチドの別の２５ｕｇ（対照マウスの場合は１００ｕｌの生理食塩水）を尾静脈に注射した。１０週齢で、マウスを、３日間連続して２５０ｍｇ／ｄＬを超える血糖値によって示される糖尿病についてモニターした。その研究の結果を図１に示す。この間、尾静脈から、または顎下静脈穿刺により血液を採取し、ＣＤ４タンパク質およびＣＤ８タンパク質に対する抗体を用いたフローサイトメトリーによりＣＤ４＋およびＣＤ８＋細胞のレベルを測定した。その分析の結果を図２Ａに示す。
膵臓を切除し、組織学的に細胞浸潤について調べ、観察可能、測量可能、および定量可能なデータに基づいてスコアを割り当てた：０＝浸潤なし；１＝一極浸潤；２＝膵島周囲炎、両極浸潤；３＝７５％浸潤および４＝完全浸潤。
【０１５４】
この分析の結果を図２Ｂに示す。
【０１５５】
この結果は、ＣＤ１５４タンパク質とは無関係のペプチドでの処理が、ＮＯＤマウスにおける糖尿病の発症を減少させなかったことを実証する。対照的に、ＣＤ１５４タンパク質に由来する１５−ｍｅｒペプチドでマウスを処理すると、糖尿病の発症が予防された。さらに、ＣＤ１５４タンパク質に由来する１３−ｍｅｒペプチドは、糖尿病の発症に対して有意な効果を有した。さらに、このデータは、ＣＤ４／ＣＤ８比によって測定されるように、１５−ｍｅｒペプチドが免疫系を損なう結果をもたらさなかったことを実証する。
【実施例２】
【０１５６】
本実施例は、新たに糖尿病を発症したＮＯＤマウスにおける高血糖に対する１５−ｍｅｒペプチドの効果を実証する。
【０１５７】
実施例１の処理されなかった６匹のマウスを、その後糖尿病を発症させた。これらのマウスを、１００ｕｇの１５−ｍｅｒペプチドを静脈内に注射した。次いで、これらのマウスに１５−ｍｅｒペプチドを毎週尾静脈に注射し、血糖値を週２回モニターした。１５−ｍｅｒペプチドを合計１０週間投与した後、治療を中止した。その研究の結果を図３に示す。
【０１５８】
この研究は、すでに糖尿病を発症しているマウスに１５−ｍｅｒペプチドを注射することで、高血糖を逆転させることができることを実証する。また、治療を中止すると５週間以内に高血糖が戻ることを実証する。
【実施例３】
【０１５９】
この研究は、１５−ｍｅｒペプチドがＴｈ４０細胞およびＢ細胞に結合する能力を実証する。
【０１６０】
９週齢のＮＯＤマウスから全リンパ球を単離した。リンパ球を抗ＣＤ４、抗ＣＤ８、抗ＣＤ４０およびＦＩＴＣ標識１５−ｍｅｒペプチドでインキュベートし、フローサイトメトリーで分析した。細胞は、ＣＤ４（ＣＤ４ｈｉおよびＣＤ４ｌｏの両方の集団を含む）およびＣＤ４０対１５−ｍｅｒペプチドについてゲートされた。この分析の結果を図４に示す。
【０１６１】
Ｂ細胞を、ＮＯＤマウスの脾臓から単離した。ソートされたＭＨＣ−ＩＩＩ＋細胞を、全リンパ球から精製した。細胞は、ＦＩＴＣ標識１５ｍｅｒペプチド、抗ＣＤ４０、およびＢ細胞マーカーＣＤ１９およびＣＤ２１で染色された。ＭＨＣ−ＩＩ＋細胞をＣＤ１９＋およびＣＤ２１＋についてゲートし、次いで１５−ｍｅｒペプチド対ＣＤ４０抗体を測量した。その研究の結果を図５に示す。
【０１６２】
この研究は、ＣＤ４０＋Ｔ細胞の実質的な大部分、９０％も１５−ｍｅｒペプチドを結合し、それによって１５−ｍｅｒペプチドがＣＤ４０＋細胞に対して高度に特異的であることを実証することを示す。また、Ｂ細胞の９０％がＣＤ４０陽性であったのに対し、Ｂ細胞の８％のみが１５−ｍｅｒペプチドを結合したことを示す。
【実施例４】
【０１６３】
この実施例は、Ｉ型糖尿病被験者および非糖尿病（対照）対象の血液中のＣＤ４０陽性細胞のレベルを実証する。
【０１６４】
各個人から全血１ｍｌを取得して、ビオチン共役１５−ｍｅｒペプチドでインキュベートした。次いで、細胞をワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）アビジンに曝露し、洗浄し、分光光度計を用いて４０５ｎｍでの吸光度を測定した。その研究の結果を図６に示す。
【０１６５】
この研究は、Ｉ型糖尿病患者の血球が、非糖尿病対照者の血球よりも高い１５−ｍｅｒペプチド結合活性を有したことを実証する。
【実施例５】
【０１６６】
この例は、１５−ｍｅｒペプチドまたはオバルブミンからのペプチドのいずれかで処理されたＮＯＤマウスの膵臓で観察されるインスリン顆粒化のレベルを実証する。
【０１６７】
糖尿病の発症時に、６匹のＮＯＤマウスに１００ｕｇ／ｍｌの１５−ｍｅｒペプチドを注射し、その結果、レシピエントの８０％で高血糖の逆転をもたらした。高血糖症の逆転の６週間後、マウスを犠牲にし、分析のために膵臓を摘出した。膵臓を固定し、薄片に切り分けた後、インスリン顆粒の検出を可能にするアルデヒド／フクシン染色を用いて染色した。組織の顆粒化は、以下のようにスコアリングされた。４＝完全に顆粒化した；３＝７５％膵島顆粒化；２＝５０％膵島顆粒化、膵島周囲炎；１＝２５％膵島顆粒化；０＝インスリン顆粒は検出されなかった。この分析の結果を図７に示す。
【０１６８】
この分析は、１５−ｍｅｒペプチドは、大多数のマウスにおいてインスリン顆粒を保存し、無関係なペプチドを受けた糖尿病マウスと比較して、ペプチド反転させた糖尿病マウスにおいて有意に改善されたことを実証する。
【実施例６】
【０１６９】
本実施例は、糖尿病の発症を予防する能力に対する１５−ｍｅｒペプチドの変異の効果を実証する。図８は、この実施例６に関連する結果を提供する。
【０１７０】
ペプチドを、実施例１に記載したように設計し、製造した。各バリアントにおいて、以下のように、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７の位置１〜７または９〜１２のアミノ酸に対応するアミノ酸をグリシンに置換されるように、バリアントペプチドを製造した。
Ｇｌｙ−１          Ｇ−Ｌ−Ｑ−Ｗ−Ａ−Ｋ−Ｋ−Ｇ−Ｙ−Ｙ−Ｔ−Ｍ−Ｋ−Ｓ−Ｎ    （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１）
Ｇｌｙ−２          Ｖ−Ｇ−Ｑ−Ｗ−Ａ−Ｋ−Ｋ−Ｇ−Ｙ−Ｙ−Ｔ−Ｍ−Ｋ−Ｓ−Ｎ    （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２）
Ｇｌｙ−３          Ｖ−Ｌ−Ｇ−Ｗ−Ａ−Ｋ−Ｋ−Ｇ−Ｙ−Ｙ−Ｔ−Ｍ−Ｋ−Ｓ−Ｎ    （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３）
Ｇｌｙ−４          Ｖ−Ｌ−Ｑ−Ｇ−Ａ−Ｋ−Ｋ−Ｇ−Ｙ−Ｙ−Ｔ−Ｍ−Ｋ−Ｓ−Ｎ    （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４）
Ｇｌｙ−５          Ｖ−Ｌ−Ｑ−Ｗ−Ｇ−Ｋ−Ｋ−Ｇ−Ｙ−Ｙ−Ｔ−Ｍ−Ｋ−Ｓ−Ｎ    （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５）
Ｇｌｙ−６          Ｖ−Ｌ−Ｑ−Ｗ−Ａ−Ｇ−Ｋ−Ｇ−Ｙ−Ｙ−Ｔ−Ｍ−Ｋ−Ｓ−Ｎ    （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６）
Ｇｌｙ−７          Ｖ−Ｌ−Ｑ−Ｗ−Ａ−Ｋ−Ｇ−Ｇ−Ｙ−Ｙ−Ｔ−Ｍ−Ｋ−Ｓ−Ｎ    （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７）
Ｇｌｙ−９          Ｖ−Ｌ−Ｑ−Ｗ−Ａ−Ｋ−Ｋ−Ｇ−Ｇ−Ｙ−Ｔ−Ｍ−Ｋ−Ｓ−Ｎ    （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８）
Ｇｌｙ−１０      Ｖ−Ｌ−Ｑ−Ｗ−Ａ−Ｋ−Ｋ−Ｇ−Ｙ−Ｇ−Ｔ−Ｍ−Ｋ−Ｓ−Ｎ    （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９）
Ｇｌｙ−１１          Ｖ−Ｌ−Ｑ−Ｗ−Ａ−Ｋ−Ｋ−Ｇ−Ｙ−Ｙ−Ｇ−Ｍ−Ｋ−Ｓ−Ｎ    （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０）
Ｇｌｙ−１２      Ｖ−Ｌ−Ｑ−Ｗ−Ａ−Ｋ−Ｋ−Ｇ−Ｙ−Ｙ−Ｔ−Ｇ−Ｋ−Ｓ−Ｎ    （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１）
【０１７１】
ＮＯＤマウスを１０匹のグループに配置し、各グループのマウスに、２５ｕｇの野生型（ＷＴ；Ｌｅｇｅｎｄ）ペプチドまたは上記のバリアントペプチド（ＰＢＳ中、ｐｈ７．２）を週１回静脈注射した。糖尿病の発症は、週単位で血糖値を測量することによりモニターした。マウスは、３回連続に測量した血糖値が２５０ｍｇ／ｄｌ以上であったときに「糖尿病」とみなされた。６週齢で注射を開始した＝糖尿病前である。
【０１７２】
この例は、１〜７位、または９〜１２位のいずれかの位置でグリシンに置換すると、糖尿病の発症を抑制する１５−ｍｅｒペプチドの能力が低下することを実証する。また、そのような変異は、糖尿病の発症を抑制する変異した１５−ｍｅｒペプチドの能力を完全には廃止しないことを示す。図８に示すように、Ｔｙｒ位置９、Ｔｈｒ位置１１、Ｍｅｔ位置１２の置換は、高血糖予防活性に差があることが証明された。したがって、第２の６−ｍｅｒ誘導体−ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７〜６−ｍｅｒ（様式２）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８〜６−ｍｅｒ（様式３）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９〜６−ｍｅｒ（様式４）、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０〜６−ｍｅｒ（様式５）もまた、増加した治療効果を提供し得ると推測される。
【実施例７】
【０１７３】
本実施例は、アテローム性動脈硬化のＡｐｏＥ欠損マウスモデルにおけるＴｈ４０細胞レベルの同じ上昇が、ヒト１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）においても顕著に上昇することを実証する。
【０１７４】
末梢血を、図９のように、ＮＯＤ、ＮＯＲ（非肥満糖尿病抵抗性）、ＢＡＬＢ／ｃ（対照）マウスにおけるＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ４０＋細胞数の総計数について測量した。これを、図１０のように、対照、糖尿病／新規発症、および長期糖尿病患者集団のヒト対象の末梢血中のＴｈ４０細胞のパーセントと比較した。９週齢のＮＯＤマウスからリンパ球を単離した。リンパ球を抗ＣＤ、抗ＣＤ８およびＦＩＴＣ標識１５−ｍｅｒペプチドでインキュベートし、フローサイトメトリーで分析した。細胞は、ＣＤ４（ＣＤ４ｈｉおよびＣＤ４ｌｏの両方の集団を含む）およびＣＤ４０対１５−ｍｅｒペプチドについてゲートされた。これらの結果は、図１１に表示されている。
【０１７５】
正常なチャウ食上のＡｐｏＥ欠損マウスを、９週齢から始まる２６週の期間にわたって、週３回ＩＶ尾部注射により１ｍｇ／ｋｇの１５−ｍｅｒペプチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７）の投与量を受けるように選択し、また対照を利用した。２５週齢で、動物を安楽死させ、体重を測量し、分析のために血液、脾臓および膵臓を摘出した。
【０１７６】
対象は、その後、４％パラホルムアルデヒドで心臓穿刺を介して灌流された。大動脈弓を解剖し、ショ糖勾配で脱水した後、急速冷凍した。様々な染色手順のために、マウス１匹あたり約３５枚の８μｍ縦断切片を取得した。ＭＡＣＳＱｕａｎｔ（Ｒ）  Ａｎａｌｙｚｅｒ  １０（ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃ  Ｉｎｃ．）を用いて、フローサイトメトリーを行った。追加の解析は、ＦｌｏｗＪｏ（Ｒ）（ＦｌｏｗＪｏ，ＬＬＣ、ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｉｎｃ．が完全所有）単細胞フローサイトメトリーソフトウェアを用いて行った。
【０１７７】
Ｃ５７ＢＬ／６およびＡｐｏＥ−／−マウスは、図１２に実証するように、高血糖になる前のすべてのＣＤ３＋ＣＤ４＋細胞と比較して、Ｔｈ４０細胞のレベルが増加していることを実証した。
【０１７８】
さらに、図１３に示すように、本研究で試験したＮＯＤマウスは、対照マウスおよび若年の非糖尿病性ＮＯＤマウス集団と比較して、大動脈内に有意なＴｈ４０浸潤を実証した。
【０１７９】
図１４に示すように、縦断面の１つの例示的な大動脈プラークを、オイルレッドＯ、トリクローム染色
および免疫蛍光を用いて２００倍の倍率で観察した。この大動脈の顕微鏡検査と染色は、図１０〜１４に実証するように、大動脈では末梢血と同様にＴｈ４０細胞が増加しているだけでなく、ＡｐｏＥ／モデル（プラーク／アテローム性動脈硬化の成長領域）ではプラークの肩領域内にもＴｈ４０細胞が存在することを示す。図１４において、１０および２０は、有意な細胞内ＣＤ４０を有するＣＤ３＋、ＣＤ４＋、およびＣＤ４０＋を表す細胞（Ｔｈ４０細胞）を示す。３０は、細胞外発現を有し、細胞内ＣＤ４０を示さないＴｈ４０細胞を示す。４０は、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ４０ｎｅｇ細胞を示す。
【実施例８】
【０１８０】
この例は、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ４０＋細胞がインターフェロンγ（ＩＮＦγ）を豊富に産生するように見えることを実証する。さらに、インターフェロンγは、Ｔｈ４０増殖を制御する。
【０１８１】
正常なチャウ食上のＡｐｏＥ欠損マウスを、９週齢から始まる２６週の期間にわたって、週３回ＩＶ尾部注射により１ｍｇ／ｋｇの１５−ｍｅｒペプチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７）の投与量を受けるように選択し、また対照を利用した。２５週齢で、動物を安楽死させ、体重を測量し、分析のために血液、脾臓および膵臓を摘出した。対象は、その後、４％パラホルムアルデヒドで心臓穿刺を介して灌流された。大動脈弓を解剖し、ショ糖勾配で脱水した後、急速冷凍した。様々な染色手順のために、マウス１匹あたり約３５枚の８μｍ縦断切片を取得した。ＭＡＣＳＱｕａｎｔ（Ｒ）  Ａｎａｌｙｚｅｒ  １０（ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃ  Ｉｎｃ．）を用いて、フローサイトメトリーを行った。追加の解析は、ＦｌｏｗＪｏ（Ｒ）（ＦｌｏｗＪｏ，ＬＬＣ、ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｉｎｃ．が完全所有）単細胞フローサイトメトリーソフトウェアを用いて行った。
【０１８２】
共焦点顕微鏡を介して図１４に実証されるように、ＣＤ４０は、ＣＤ３＋ＣＤ４＋細胞の内部または外部に存在し得る。フローサイトメトリーをさらに実行し、ほとんどのＣＤ３＋細胞がＣＤ４０を産生する能力を有するように見える一方で、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ４０＋細胞が、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）を豊富に産生するように見えることを実証した。このフローサイトメトリー研究は、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ４０およびＩＦＮγの外部染色および内部染色の両方を取り入れた。
【０１８３】
図１６は、インターフェロンγがＴｈ４０増殖を制御することを実証する。単離されたＴｈ４０細胞は、ＣＤ４０に対する抗体によって架橋された。図１６のグラフは、ＩＮＦγに対する抗体（αＩＦＮγ）および非刺激対照（ＵＮ）の存在／非存在下でのＣＤ４０刺激（ＣＤ４０ＸＬ：活性化）Ｔｈ４０細胞の増殖を示す。さらに、ＩＦＮγをブロックすることにより、活性化されたＴｈ４０細胞は増殖しない。
【実施例９】
【０１８４】
この実施例は、ＫＧＹＹ１５（１５−ｍｅｒ−ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７）およびＫＧＹＹ６（６−ｍｅｒ−ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９）がアテローム性動脈硬化症を消失することを実証する。
【０１８５】
正常なチャウ食上のＡｐｏＥ欠損マウスを、９週齢から始まる２６週の期間にわたって、週３回ＩＶ尾部注射により１ｍｇ／ｋｇの１５−ｍｅｒペプチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７）の投与量を受けるように選択し、また対照を利用した。２５週齢で、動物を安楽死させ、体重を測量し、分析のために血液、脾臓および膵臓を摘出した。対象は、その後、４％パラホルムアルデヒドで心臓穿刺を介して灌流された。大動脈弓を解剖し、ショ糖勾配で脱水した後、急速冷凍した。
【０１８６】
図１７は、大動脈流出（ＡＯ）から近位に定義された大動脈弓のより小さい曲率の例を提供する。トリクローム染色で見られるセグメントのうち、遠位に２．４ｍｍの内接距離を測量した。内膜のこの２．５ｍｍのストレッチに対した大動脈弓壁面積は、グループごとの平均を計算するために各マウスの内側の大動脈弓の壁の最大面積を使用して、すべてのマウスの各セクションについて計算された。内腔表面（Ｌ）、大動脈弓（ＡＯ）、および無名動脈（Ｉ）は、この図１７でラベル付けされる。
【０１８７】
図１８は、本実施例で概説されたステップに従って、１５−ｍｅｒペプチドで処理されたマウスの大動脈弓のより小さい曲率と比較して、対照のＡｐｏＥマウスの大動脈弓のより小さい曲率を実証する。
【０１８８】
図１９は、ペプチド処理によって達成された総面積の減少を実証する。２．５ｍｍのセグメント（図１７に記載されるように）の総面積が実質的に減少した。
【０１８９】
図２０は、初期の病変および進行したプラークを含むプラークの数の減少を実証する。プラークの総数は、治療群で有意に減少した。プラークは、より進行した線維性粥腫（様々な程度の脂質または壊死性コアおよび線維性キャップを含む）と比較して、初期病変（様々な程度の脂質蓄積を有するマクロファージ由来の発泡細胞を含む脂肪線条として観察可能）の形態に基づいて細分化された。指定された２．５ｍｍセグメント内のすべてのプラークが含まれた。プラークの総数と種類の両方とも、ペプチドを投与された被験者で有意に減少した。
【０１９０】
この研究は、ペプチドの投与がアテローム性動脈硬化症を消失させることを実証する。
【実施例１０】
【０１９１】
この実施例は、ＫＧＹＹ１５（１５−ｍｅｒ−ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７）の投与が、既存の疾患の進行を減少させながらキャップ形成を増大させることを実証する。
【０１９２】
この研究では、６匹のＡｐｏＥ−／−マウスを、０週齢から２０週齢までの間、通常の飼料を与えた。２０週齢の時点で、３匹のマウスを無作為に割り当て、１ｍｇ／ｋｇのＫＧＹＹ１５（１５−ｍｅｒ−ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７）の用量で、週１回、４週間の期間、尾部静脈注射で投与した。対照マウスは溶媒のみを投与した。処理の４週後、動物を安楽死させ、その後４％パラホルムアルデヒドで心臓穿刺を介して灌流した。大動脈弓をショ糖勾配で解剖し、急速冷凍した。マウス１匹につき約５０枚の８μｍ縦断切片を取得した。スライドは、トリクローム染色で処理し、測量のためのｃｅｌｌＳｅｎｓソフトウェアを使用して分析した。総プラークは、２．５ｍｍ以下の曲率および無名動脈を含めて測量した。
【０１９３】
図２０は、個々の初期プラークおよび進行プラークの数が、対照群に比べて治療群で減少したことを示す。
【０１９４】
図２１は、進行プラークのキャップ対コア比が、対照群に比べて治療群で減少したことを示す。
【０１９５】
図２２は、平均キャップ幅（キャップサイズ）が対照群に比べて治療群で大きくなったことを示す。
【０１９６】
図２３は、平均コア幅（コアサイズ／プラークサイズ）が対照群に比べて治療群で少なくなったことを示す。
【０１９７】
この実施例は、ＫＧＹＹ１５（１５−ｍｅｒ-ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７）の投与が、既存の疾患の進行を減少させながらキャップ形成を増大させることを実証する。さらに、本研究では、ＫＧＹＹ１５ペプチドの投与がプラーク安定性の結果に移行することを実証する。
【０１９８】
以上のことから、Ｔ１Ｄが自己免疫性炎症を促進するＣＤ４０−ＣＤ１５４ダイアドを動脈硬化と共有していることが明らかになった。ＮＯＤマウス、ヒトＴ１Ｄ患者、ＡｐｏＥ−／−マウスの末梢血中にはＴｈ４０細胞が増加する。Ｔｈ４０細胞は大動脈壁に浸潤し、ＡｐｏＥ−／−マウスのプラーク内に見られる。Ｔｈ４０細胞は炎症性サイトカインＩＦＮγを他の細胞よりも高いレベルで産生し、これが炎症を促進する。ＫＧＹＹ１５ペプチドはＴｈ４０細胞を標的とする。特定ペプチドは、さらに、Ｔｈ４０遮断またはＣＤ４０の一般的な遮断に起因する可能性のあるアテローム性動脈硬化を抑制し、調節する。また、指定されたペプチドの投与により、より安定なプラーク型に移行する。
【実施例１１】
【０１９９】
ヒト全血を、マウス試験に用いたものと同様の投与量で投与した。
【０２００】
図２４は、ヒトで観察された血栓試験の結果を示す。
【０２０１】
この研究は、ヒトに投与されたときのＫＧＹＹ１５ペプチドが、通常認識されるレベルの外で全ヒト血液の血栓を有意に変更しないか、または変化しないことを実証する。
【実施例１２】
【０２０２】
この実施例は、アテローム性動脈硬化を得るために遺伝的に改変され、高脂肪食を与えられ、６−メルペプチドで処理されたＡｐｏＥマウスが、未処理の対象と比較してＬＤＬコレステロール値のレベルが低下する可能性があることを実証する。
【０２０３】
この研究では、６匹のＡｐｏＥ−／−マウスを、０週齢から２０週齢までの間、通常の飼料を与えた。２０週齢の時点で、３匹のマウスを無作為に割り当て、１ｍｇ／ｋｇのＫＧＹＹ６（６−ｍｅｒ−ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９）の用量で、週１回、４週間の期間、尾部静脈注射で投与した。対照マウスは溶媒のみを投与した。
【０２０４】
未処理マウスから得られ、および処理したマウスのデータと比較したデータは、ＬＤＬコレステロール値の統計的に有意な減少（＞５０％）を示した。このデータを図２７に示す。
【実施例１３】
【０２０５】
この実施例は、ＡｐｏＥ−／−マウスがＫＧＹＹ６（６−ｍｅｒ−ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９）で処理したときに経験したアテローム性動脈硬化の変化を実証する。ＡｐｏＥ  −／−マウスに高脂肪食を１６週間与えた。マウスを無作為に割り当て、１ｍｇ／ｋｇのＫＧＹＹ６（６−ｍｅｒ−ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９）の用量で、週１回、４週間の期間、尾部静脈注射で投与した。対照マウスは溶媒のみを投与した。アテローム性動脈硬化をいくつかの方法で調査した。ＳｕｄａｎＩＶ染色（脂質染色）を利用したエンフェース分析は、病変部の有意な減少を実証した。図２８Ａは、ＫＧＹＹ６で処理した大動脈のｅｎ−ｆａｃｅ  ＳｕｄａｎＩＶ染色の画像であり、図２８Ｂは、対照（未処理）の大動脈のｅｎ−ｆａｃｅ  Ｓｕｄａｎ染色の画像である。図２９は、ＳｕｄａｎＩＶ染色の病変部の減少を示すグラフである。
【０２０６】
さらに、プラーク面積および形態の測量を、Ｐａｉｇｅｎ法を用いて行った。この方法は、弁尖から始まる大動脈根から上行大動脈に至るまでの順次５μｍの大動脈断面を取得する。５０μｍ間隔でスライドを染色した後、テローム性動脈硬化性病変の面積を測量する。個々のプラーク面積の測量値がマイクロメートル間隔に対してプロットされ、曲線が確立され、曲線下面積（ＡＵＣ）がプラークの総体積を与える。これらの結果は、図３０にグラフ形式で示され、これは、ＫＧＹＹ６（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９）で処理したマウスが曲線下のプラーク体積の減少を示したことを実証する。
【０２０７】
さらに、プラーク組成物または大動脈サンプルの特徴付けをトリクローム染色技術を用いて実施し、これらの結果を図３１のグラフ形式で示す。実際、Ｉｍａｇｅ  Ｐｒｏ  Ｐｌｕｓソフトウェア解析を使用して生成されたこの図３１のデータは、コラーゲンの増加および平滑筋含量の減少を含むプラーク組成の変化が生じたことを定量化して示す。
【０２０８】
図３２Ａは、ＫＧＹＹ６処理された対象の大動脈の断面のトリクローム染色された細胞の画像である。図３２Ｂは、対照対象の断面のトリクローム染色された細胞の画像である。図３２Ａにおいて、５０はプラーク形成に特徴的な領域を特定する。６０は大動脈弁尖を特定する。図３２Ｂにおいて、プラークに特徴的な対照（未処理）５０領域（曲線下の領域）は、ＫＧＹＹ６ペプチドで処理された対象のものよりも大きい。
【実施例１４】
【０２０９】
この実施例は、ＫＧＹＹ６（６−ｍｅｒ−ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９）がグルコース耐性およびインスリン感受性の有意な改善をもたらすことを実証する。
【０２１０】
ＡｐｏＥ−／−マウスに６０％高脂肪食（研究食）を１週間与えた。マウスの選択された集団に、次いで、１ｍｇ／ｋｇの用量で６−メルペプチドを注射し、他は無処理で、対照として追跡した。グルコース耐性試験（ＧＴＴ）は、６時間絶食し、次いで、１ｇ／ｋｇ体重のグルコースを水で腹腔内注射して実施した。血糖値と血清インスリンの両方を０、１５分、３０分、６０分、２時間に測量した。この研究の結果を図３３（ａ）と３３（ｂ）に示す。ペプチドで処理したＡｐｏＥ欠損マウスは、対照と比較して、インスリン感受性を有意に改善し、血漿インスリンレベルを低下しただけでなく、有意に増加したグルコース耐性を実証した。
【０２１１】
処理したマウスおよび未処理マウスの脂肪組織および筋肉組織についてウエスタン分析を行い、図３４に示すように、白色脂肪組織におけるグルコース輸送タンパク質（ＧＬＵＴ４）の発現量の増加を実証した。さらに、ウエスタン分析により、筋肉組織ではＧＬＵＴ４タンパク質の発現量の増加が示されたことも実証した。ＧＬＵＴ４は、インスリンに応答してグルコースを取り込む役割を担っており、２型糖尿病では発現が低下することが知られる。
【０２１２】
本研究は、ペプチドの投与がグルコース耐性、インスリン感受性、およびＧＬＵＴ４レベルに影響を与え、これらのそれぞれが２型糖尿病患者の治療に重要である可能性があることを実証する。
【実施例１５】
【０２１３】
この実施例は、ＫＧＹＹ６（６−ｍｅｒ−ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９）の投与が、ＩＬ２、ＩＮＦγ、およびＩＬ１７ａの炎症性サイトカイン産生に影響を与えることを実証する。
【０２１４】
ＡｐｏＥマウスおよびＣ５７ＢＬ／６マウスからの脾臓をリンパ球について処理した。ＡｐｏＥ−／−マウスおよびＣ５７ＢＬ／６マウスに６０％高脂肪食（研究食）を１週間与えた。脾臓リンパ球を、２４時間インビトロで６−ｍｅｒで処理した。細胞を、様々な濃度の６−ｍｅｒペプチドの存在下で培地に一晩入れた。翌朝、ブレフェルジンＡを４時間投与した。すべての細胞を、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ４０（Ｔｈ４０細胞）について染色し、ＩＬ２、ＩＮＦγ、およびＩＬ１７ａの産生についてフローサイトメトリーを使用して測量した。その結果を図３５に示す。
【０２１５】
前述のように、本明細書では、驚くほど予想外の様式で多くの要求を満たす方法の新規かつ有用な実施形態が説明され、図示されていることが容易に明らかになっている。もちろん、本開示に直面する当業者に容易に起こり得るそのような修正、変更、および適応は、本開示の趣旨の範囲内であり、添付の特許請求の範囲によってのみ制限されることが理解される。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５Ａ】
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【図２５Ｂ】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８Ａ】
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【図２８Ｂ】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２Ａ】
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【図３２Ｂ】
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【図３３（ａ）】
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【図３３（ｂ）】
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【図３４】
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【図３５】
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【国際調査報告】
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