(57)【要約】  オリゴデオキシヌクレオチドベースの免疫賦活性トール様受容体９（ＴＬＲ９）アゴニストについて記載する。ＴＬＲ９アゴニストを含む組成物、ＴＬＲ９アゴニストの作製方法、及びウイルス感染又は癌などの免疫性の疾患、障害、又は病態を治療するためのＴＬＲ９アゴニストの使用方法についても記載される。
2021512044.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式を有するＣｐＧ  ＯＤＮコンストラクト：
式（ＩＩａ）：５’Ｍ−Ｌ−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’、又は
式（ＩＩｂ）：５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−Ｌ−Ｍ  ３’
（式中、
Ｍは、脂質部分を表し、好ましくは、前記脂質部分は、コレステロール、トコフェロール、パルミトイル基、及びステアリル基からなる群から選択される少なくとも１つの脂質部分を含み、
Ｌは、炭素、窒素、酸素、水素、硫黄及びリンからなる群から選択される１０〜１００個の原子を含むリンカーを表し、Ｌは、切断可能な結合を介して、好ましくはエステル又はアミド結合を介してＣｐＧ  ＯＤＮに共有結合しており、
ＣｐＧ  ＯＤＮは、ｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含み、好ましくは、それぞれがｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも２つ、３つ、又は４つのＣｐＧモチーフを含み、
所望により、式（ＩＩａ）又は（ＩＩｂ）のＣｐＧ  ＯＤＮコンストラクトは、更に、好ましくはガラクトース，Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、フコース、マンノース、シアル酸、Ｎ−アセチルノイラミン酸からなる群から選択される標的指向化部分に共有結合的にコンジュゲートする）。
【請求項２】
以下の構造を有するＣｐＧ  ＯＤＮコンストラクト：
式（ＩＩＩａ）：５’Ｍ１−Ｙ１−（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎ−Ｙ２−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−Ｙ３−Ｍ２  ３’、又は
式（ＩＩＩｂ）：５’Ｍ２−Ｙ３−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−Ｙ２−（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎ−Ｙ１−Ｍ１  ３’
（式中、
Ｍ１は、脂質部分を表し、好ましくは、前記脂質部分は、コレステロール、トコフェロール、パルミトイル基、及びステアリル基からなる群から選択される少なくとも１つを含み、
Ｍ２は、脂質部分、標的指向化部分を表すか、又は存在せず、
Ｙ１は、結合又はリンカー、好ましくは、ホスホジエステル（ｐｏ）結合、ホスホロチオエート（ｐｓ）結合、又は結合を介して（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎに共有結合している、式（（ＣＨ２）２Ｏ）ｏ（式中、ｏは１〜１５である）を有するエチレングリコールであり、
Ｘは、独立して、結合、ｐｏ結合、又はｐｓ結合であり、
Ｙ２及びＹ３のそれぞれは独立して切断可能な結合であり、好ましくはエステル又はアミド結合を含み、より好ましくはｐｏ結合又はホスホルアミデイト結合を含み、最も好ましくはｐｏ結合であり、ただし、Ｍ２が存在しないとき、Ｙ３も存在せず、
ＣｐＧ  ＯＤＮは、ｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含み、好ましくは、それぞれがｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも２つ、３つ、又は４つのＣｐＧモチーフを含み、
ｍは、１〜１５の整数であり、
ｎは、１〜５の整数である）。
【請求項３】
以下の式を有する、請求項２に記載のＯＤＮコンストラクト：
式（ＩＶａ）：５’Ｍ−Ｙ１−（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎ−Ｙ２−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’、又は
式（ＩＶｂ）：５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−Ｙ２−（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎ−Ｙ１−Ｍ  ３’
（式中、
Ｍは、脂質部分を表し、好ましくは前記脂質部分は、コレステロール、トコフェロール、パルミトイル基、及びステアリル基からなる群から選択される少なくとも１つの脂質部分を含み；
Ｙ１は、結合又はリンカー、好ましくは、ホスホジエステル（ｐｏ）結合、ホスホロチオエート（ｐｓ）結合、又は結合を介して（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎに共有結合している、式（（ＣＨ２）２Ｏ）ｏ（式中、ｏは１〜１５である）を有するエチレングリコールであり、
Ｘは、独立して、結合、ホスホジエステル（ｐｏ）結合、又はホスホロチオエート（ｐｓ）結合であり、
Ｙ２は、切断可能な結合であり、好ましくはエステル又はアミド結合を含み、より好ましくはｐｏ結合又はホスホルアミデイト結合を含み、最も好ましくはｐｏ結合であり、
ＣｐＧ  ＯＤＮは、ｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含み、好ましくは、それぞれがｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも２つ、３つ、又は４つのＣｐＧモチーフを含み、
ｍは、１〜１５の整数、好ましくは６であり、
ｎは、１〜５の整数、好ましくは２であり、
所望により、式（ＩＶａ）又は（ＩＶｂ）のＣｐＧ  ＯＤＮコンストラクトは、更に、好ましくはガラクトース，Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、フコース、マンノース、シアル酸、Ｎ−アセチルノイラミン酸からなる群から選択される標的指向化部分に共有結合的にコンジュゲートする）。
【請求項４】
以下からなる群から選択される式のコンストラクトを有する、請求項３に記載のＯＤＮコンストラクト：
５’Ｍ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’；
５’Ｍ−ｐｓ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’；
５’Ｍ−ｐｓ（ＨＥＧ）ｐｓ（ＨＥＧ）ｐｏ−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’；
５’Ｍ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｓ（ＨＥＧ）ｐｏ−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’；
５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｍ  ３’、
５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｓ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｍ  ３’、
５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｓ（ＨＥＧ）ｐｓ−Ｍ  ３’、及び
５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｓ−Ｍ  ３’、
（式中、
Ｍは、コレステロール、トコフェロール、パルミトイル基、及びステアリル基からなる群から選択される少なくとも１つを含む脂質部分を表し、
ｐｏは、ホスホジエステル結合を表し、
ＨＥＧは、（（ＣＨ２）２Ｏ）６を表し、
ｐｓは、ホスホロチオエート結合を表し、
ＣｐＧ  ＯＤＮは、ｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含み、好ましくは、それぞれがｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも２つ、３つ、又は４つのＣｐＧモチーフを含み、
Ｍは、ｐｏ若しくはｐｓ結合を介して直接、又はｐｏ若しくはｐｓ結合を介して直接（ＨＥＧ）に結合している第２のリンカーを介して間接的に（ＨＥＧ）に共有結合している）。
【請求項５】
以下からなる群から選択される式を有する、請求項３に記載のＯＤＮコンストラクト：
５’Ｔｏｃｏ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’（式中、Ｔｏｃｏは、トコフェロールを表す）、
５’Ｃｈｏｌ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’（式中、Ｃｈｏｌは、コレステロールを表す）、
５’Ｐａｌｍ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’（式中、Ｐａｌｍは、パルミトイルを表す）、
５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｓ−Ｃｈｏｌ  ３’（式中、Ｃｈｏｌは、コレステロールを表す）、
５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｓ−Ｔｏｃｏ  ３’（式中、Ｔｏｃｏは、トコフェロールを表す）、
５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｓ−Ｐａｌｍ  ３’（式中、Ｐａｌｍは、パルミトイルを表す）、
（式中、
ｐｏは、ホスホジエステル結合を表し、
ＨＥＧは、（（ＣＨ２）２Ｏ）６を表し、
ｐｓは、ホスホロチオエート結合を表し、
ＣｐＧ  ＯＤＮは、ｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含み、好ましくは、それぞれがｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも２つ、３つ、又は４つのＣｐＧモチーフを含み、
前記トコフェロール、前記コレステロール、又は前記パルミトイル基は、ｐｏ若しくはｐｓ結合を介して直接、又はｐｏ若しくはｐｓ結合を介して直接（ＨＥＧ）に結合している第２のリンカーを介して間接的に（ＨＥＧ）に共有結合している）。
【請求項６】
前記ＣｐＧ  ＯＤＮが、ホスホロチオエート（ｐｓ）ヌクレオチド間結合を有する、請求項１〜５のいずれか一項に記載のＯＤＮコンストラクト。
【請求項７】
前記ＣｐＧ  ＯＤＮにおける前記ＣｐＧジヌクレオチドのうちの２〜４個が、それぞれホスホジエステル（ｐｏ）ヌクレオチド間結合を有する、請求項１〜６のいずれか一項に記載のＯＤＮコンストラクト。
【請求項８】
前記ＣｐＧ  ＯＤＮが、以下からなる群から選択されるポリヌクレオチド配列を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載のＯＤＮコンストラクト：
（１）  ５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ  ３’（配列番号１）；
（２）  ５’ＧＧＧＧＧＡＣＧＡＴＣＧＴＣＧＧＧＧＧＧ  ３’（配列番号２）；
（３）  ５’ＧＧＧＧＴＣＡＡＣＧＴＴＧＡＧＧＧＧＧＧ  ３’（配列番号３）；
（４）  ５’ＴＣＣＡＴＧＡＣＧＴＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴ  ３’（配列番号４）；
（５）  ５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ  ３’（配列番号５）；
（６）  ５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＡＣＧＴＡＡＣＧＡＣＧＡＣＧＴＴ  ３’（配列番号６）；及び
（７）  ５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴ  ３’（配列番号７）。
【請求項９】
前記ＣｐＧ  ＯＤＮが、以下からなる群から選択されるポリヌクレオチド配列を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載のＯＤＮコンストラクト：
（１）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号８）；
（２）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号９）；
（３）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１０）；
（４）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１１）；
（５）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１２）；
（６）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１３）；
（７）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１４）；
（８）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＡｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１５）；
（９）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＡｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１６）；
（１０）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＡｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＡｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１７）；
（１１）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＡｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＡｐｓＡｐｓＣｐｏＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１８）；
（１２）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＡｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＡｐｓＡｐｓＣｐｏＧｐｓＡｐｓＣｐｏＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１９）；
（１３）  ５’ＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｏＧｐｓＡｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＧｐｓＧｐｓ  ＧｐｓＧｐｓＧ  ３’（配列番号２０）；
（１４）  ５’ＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＡｐｓＡｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＡｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧ  ３’（配列番号２１）；
（１５）  ５’ＴｐｓＣｐｓＣｐｓＡｐｓＴｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＣｐｓＣｐｓＴｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号２２）；
（１６）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＧｐｓＣｐｓＧｐｓＣｐｓＧｐｓＣｐｓＧｐｓＣｐｓＣｐｓＧ  ３’（配列番号２３）；
（１７）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴ  ３’（配列番号２４）；
（１８）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴ  ３’（配列番号２５）；及び
（１９）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴ  ３’（配列番号２６）；
（式中、
ｐｏは、ホスホジエステルヌクレオチド間結合を表し、
ｐｓは、ホスホロチオエートヌクレオチド間結合を表す）。
【請求項１０】
以下の構造を有する、請求項１に記載のＯＤＮコンストラクト：
（１）  ５’Ｔｏｃｏ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号２７）；
（２）  ５’Ｔｏｃｏ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号２８）；
（３）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｔｏｃｏ  ３’（配列番号２９）；
（４）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｔｏｃｏ  ３’（配列番号３０）；
（５）  ５’Ｃｈｏｌ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号３１）；
（６）  ５’Ｃｈｏｌ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号３２）；
（７）  ５’Ｃｈｏｌ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号３３）；
（８）  ５’Ｃｈｏｌ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号３４）；
（９）  ５’Ｃｈｏｌ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号３５）；
（１０）  ５’Ｃｈｏｌ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号３６）；
（１１）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｃｈｏｌ  ３’（配列番号３７）；
（１２）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｃｈｏｌ  ３’（配列番号３８）；
（１３）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｃｈｏｌ  ３’（配列番号３９）；
（１４）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｃｈｏｌ  ３’（配列番号４０）；
（１５）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｔｏｃｏ  ３’（配列番号４１）；
（１６）  ５’Ｔｏｃｏ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号４２）；
（１７）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｔｏｃｏ  ３’（配列番号４３）；
（１８）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｔｏｃｏ  ３’（配列番号４４）；
（１９）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｔｏｃｏ  ３’（配列番号４５）；
（２０）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｔｏｃｏ  ３’（配列番号４６）；
（２１）  ５’Ｔｏｃｏ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号４７）；
（２２）  ５’Ｔｏｃｏ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号４８）；
（２３）  ５’Ｔｏｃｏ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号４９）；
（２４）  ５’Ｔｏｃｏ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号５０）；
（２５）  ５’−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓ  ＴｐｓＴｐｓ−ＨＥＧｐｓ−Ｃｈｏｌ  ３’（配列番号５１）；
（２６）  ５’−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｃｈｏｌ  ３’（配列番号５２）；
（２７）  ５’−ＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＡｐｓＡｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＡｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓ−ＨＥＧｐｓ−Ｃｈｏｌ  ３’（配列番号５３）；
（２８）  ５’−ＴｐｓＣｐｓＣｐｓＡｐｓＴｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＣｐｓＣｐｓＴｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−ＨＥＧｐｓ−Ｃｈｏｌ  ３’（配列番号５４）；
（２９）  ５’−ＴｐｓＣｐｓＣｐｓＡｐｓＴｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＣｐｓＣｐｓＴｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−ＨＥＧｐｓ−Ｔｏｃｏ  ３’（配列番号５５）；
（３０）  ５’Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号５６）；
（式中、
Ｃｈｏｌは、コレステロールを表し、
Ｔｏｃｏは、トコフェロールを表し、
Ｐａｌｍｉｔｏｙｌは、パルミトイル基を表し、
ＨＥＧは、（（ＣＨ２）２Ｏ）６を表し、
ｐｏは、ホスホジエステル結合を表し、
ｐｓは、ホスホロチオエート結合を表し、
前記トコフェロール、前記コレステロール、又は前記パルミトイル基は、ｐｏ若しくはｐｓ結合を介して直接、又はｐｏ若しくはｐｓ結合を介して直接（ＨＥＧ）に結合している第２のリンカーを介して間接的に（ＨＥＧ）に共有結合している）。
【請求項１１】
以下の式を有するＣｐＧ  ＯＤＮコンストラクト：
式（ＩＩａ）（ｓ）：５’Ｍ−Ｌ−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’、又は
式（ＩＩｂ）（ｓ）：５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−Ｌ−Ｍ  ３’
（式中、
Ｍは、脂質部分を表し、好ましくは、前記脂質部分は、コレステロール、トコフェロール、パルミトイル基、及びステアリル基からなる群から選択される少なくとも１つの脂質部分を含み、
Ｌは、炭素、窒素、酸素、水素、硫黄及びリンからなる群から選択される少なくとも１個の原子を含むリンカーを表し、Ｌは、切断可能な結合を介して、好ましくはエステル又はアミド結合を介してＣｐＧ  ＯＤＮに共有結合しており、
ＣｐＧ  ＯＤＮは、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載のＣｐＧ  ＯＤＮを表し、
所望により、式（ＩＩａ）又は（ＩＩｂ）のＣｐＧ  ＯＤＮコンストラクトは、更に、好ましくはガラクトース，Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、フコース、マンノース、シアル酸、Ｎ−アセチルノイラミン酸からなる群から選択される標的指向化部分に共有結合的にコンジュゲートする）。
【請求項１２】
以下の構造を有するＯＤＮコンストラクト：又はその医薬的に許容される塩であって、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓが、ｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含み、好ましくは、それぞれが前記ｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも２つ、３つ、又は４つのＣｐＧモチーフを含むＣｐＧ  ＯＤＮを表す、ＯＤＮコンストラクト又はその薬剤として許容される塩。
【化１】
2021512044.tif 000021
【請求項１３】
前記ＣｐＧ  ＯＤＮが、配列番号１を含む、請求項１２に記載のＯＤＮコンストラクト。
【請求項１４】
前記ＣｐＧ  ＯＤＮが、５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ−３’からなる、請求項１３に記載のＯＤＮコンストラクト。
【請求項１５】
以下の構造を有する、請求項１２に記載のＯＤＮコンストラクト：
【化２】
2021512044.tif 000022
【請求項１６】
以下の構造を有するＯＤＮコンストラクト：
【化３】
2021512044.tif 000023
【請求項１７】
請求項１〜１６のいずれか一項に記載のＯＤＮコンストラクトと、医薬的に許容される担体と、を含む医薬組成物。
【請求項１８】
請求項１〜１６のいずれか一項に記載のＯＤＮコンストラクトを医薬的に許容される担体と組み合わせることを含む、医薬組成物を調製する方法。
【請求項１９】
請求項１７に記載の医薬組成物を被験体に投与することを含む、それを必要としている被験体における免疫応答を刺激する方法。
【請求項２０】
前記疾患がＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）及び癌からなる群から選択される、請求項１７に記載の医薬組成物を被験体に投与することを含む、それを必要としている被験体における疾患を治療する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）に従って２０１７年１１月２日出願の米国特許仮出願第６２／５８０，９２４号に対する優先権が与えられ、その開示の全容が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
（電子的に提出された配列表の参照）
本出願は、２０１８年１０月３１日付で作成された「６８８０９７＿１１９Ｕ１  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｌｉｓｔｉｎｇ」というファイル名のＡＳＣＩＩ形式の配列表としてＥＦＳ−Ｗｅｂを介して電子的に提出され、１１．３ＫＢのサイズを有する配列表を含む。ＥＦＳ−Ｗｅｂを介して提出された配列表は、本明細書の一部であり、その全容が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００３】
（発明の分野）
本開示は、オリゴヌクレオチドコンストラクト、当該オリゴヌクレオチドコンストラクトを含む組成物、及び当該オリゴヌクレオチドコンストラクトを作製する方法に関する。当該オリゴヌクレオチドコンストラクトは、免疫調節分子として、特にトール様受容体９（Toll-Like Receptor 9、ＴＬＲ９）アゴニストとして作用することができる。したがって、本開示はまた、免疫性の疾患、障害、又は病態、ウイルス感染、及び癌などのＴＬＲ９活性の調節が有益になる疾患を治療又は予防するために、単独で又は他の剤と組み合わせて、当該オリゴヌクレオチドコンストラクトをＴＬＲ９アゴニストとして使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
トール様受容体（Toll-Like Receptors、ＴＬＲ）は、自然免疫応答において重要な役割を果たすパターン認識受容体（pattern recognition receptor、ＰＲＲ）タンパク質のクラスである。ＴＬＲは、ホスト分子と区別することができる細菌、真菌、寄生生物、及びウイルスなどの病原性微生物由来の病原体関連分子パターン（pathogen-associated molecular patterns、ＰＡＭＰ）を認識する。ＴＬＲは、典型的には二量体として機能する、抗原提示樹状細胞及び貪食マクロファージを含む、自然免疫応答に関与する細胞で発現する膜貫通タンパク質である。
【０００５】
それぞれ認識する抗原の種類が異なる少なくとも１０種のヒトＴＬＲファミリーのメンバーＴＬＲ１〜ＴＬＲ１０、及び少なくとも１２種のマウスＴＬＲファミリーのメンバー、ＴＬＲ１〜ＴＬＲ９及びＴＬＲ１１〜ＴＬＲ１３が存在する。例えば、ＴＬＲ９は、ウイルスＤＮＡを含む一本鎖又は二本鎖のＤＮＡにおいて、ホスホジエステル又はホスホロチオエート結合によってシトシンがグアノシンに結合している非メチル化シトシン−リン酸−グアノシン（cytosine-phosphate-guanosine、ＣｐＧ）ジヌクレオチドによって活性化されるヌクレオチド感知性ＴＬＲである。
【０００６】
ＴＬＲの活性化によって一連のシグナル伝達事象が引き起こされ、その結果、Ｉ型インターフェロン（interferons、ＩＦＮ）、炎症性サイトカイン、及びケモカインが産生され、免疫応答が誘導される。最終的に、この炎症は適応免疫系も活性化させ、その結果、次いで、侵入した病原体及び感染した細胞がクリアランスされる。
【０００７】
ＴＬＲ９は、免疫系のＢ細胞及び形質細胞性樹状細胞で発現する。ＣｐＧ含有ＤＮＡがＴＬＲ９に結合すると、転写因子ＮＦ−κＢ、ＭＡＰＫ及びＩＲＦ７を活性化させる下流のシグナル伝達カスケードが開始され、これは最終的に、様々なインターロイキン及びサイトカインの発現増加を特徴とする急速な炎症の誘導を引き起こす（Ｙａｍａｍｏｔｏ  ａｎｄ  Ｔａｋｅｄａ，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｖｏｌ．２０１０）。特に、ＣｐＧ含有アゴニストによるＴＬＲ９の刺激は、ＣｐＧのクラスに応じて、ＩＦＮ−α、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６及び／又はＩＬ−１の産生を増加させる。
【０００８】
Ｂ型肝炎ウイルス（Hepatitis B virus、ＨＢＶ）は、Ｂ型肝炎、線維症、肝硬変、及び肝細胞癌を含む疾患を引き起こす二本鎖ＤＮＡ（double stranded DNA、ｄｓＤＮＡ）ウイルスである。約２０億人がＨＢＶに感染し、ほぼ４億人が慢性Ｂ型肝炎感染症（chronic hepatitis B infection、慢性ＨＢＶ）を有しており、これは、６ヶ月間超にわたって血中にウイルス及びサブウイルス粒子が残留することを特徴とする（Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ  Ｔｕｂｅ，１（３）：１３５−１４５）。慢性ＨＢＶは、現在、ＩＦＮ−α及びヌクレオシド又はヌクレオチドのアナログで治療されているが、感染した肝細胞に共有結合性閉環状ＤＮＡ（closed circular、ｃｃｃＤＮＡ）が残留することから、根本的には治癒しない。保持されたｃｃｃＤＮＡは、ウイルスＲＮＡ及び新しいビリオンのテンプレートとして継続的な役割を果たす。合成ＣｐＧオリゴデオキシリボヌクレオチド（CpG oligodeoxyribonucleotides、ＣｐＧ  ＯＤＮｓ）を使用してＢ細胞におけるＴＬＲ９シグナル伝達経路を刺激することを通してウイルス特異的Ｂ細胞応答を誘導することにより、ｃｃｃＤＮＡ保有肝細胞を効果的に排除することができると考えられる（Ｉｓｏｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ７９（１１）７２６９−７２７２）。
【０００９】
免疫療法が多くの種類の癌の治療のための実現可能かつ有効なアプローチであることを、実質的な証拠が示している。トール様受容体及び他の先天性認識経路を標的とするリガンドは、自然免疫を調節して抗腫瘍免疫を生じさせるための強力な戦略となる。ＴＬＲアゴニストは、免疫細胞を活性化し炎症を促進する能力について、抗癌療法におけるワクチンアジュバントとして現在研究中である（例えば、Ｋａｃｚａｎｏｗｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｌｅｕｋｏｃ  Ｂｉｏｌ．２０１３  Ｊｕｎ；９３（６）：８４７−８６３及びその参照文献を参照されたい）。例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞の生存時間を延長し、ＴＲｅｇ活性を抑制することに加えて、ＴＬＲ９リガンドは、ＩＬ−２産生及びＩＬ−２Ｒ発現を増強することによってＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞数を増加させることが報告された（同文献及びその参照文献を参照されたい）。神経芽腫細胞株におけるＴＬＲ９のＣｐＧ−ＯＤＮ刺激は、細胞増殖を減少させ、カスケード依存性アポトーシスを増加させ、その結果、腫瘍担持マウスの生存時間を増加させることが示されている（同文献）。しかしながら、腫瘍細胞におけるＴＬＲの会合は、慢性的炎症環境の維持の一因となり、癌細胞の増殖を誘導し、細胞の生存を促進することによって腫瘍の成長を促進し得ることも報告された。例えば、ＴＬＲ９を発現しているヒト乳癌及び胃癌の細胞は、組織培養においてＴＬＲ９刺激時にＭＭＰ１３及びＣＯＸ−２の分泌が増加した結果として侵入能が強化されることが報告されたが、膠腫の場合、その転移誘導特性にもかかわらず、ＴＬＲ９は細胞増殖に影響を与えず、このことから、異なる腫瘍細胞型に対してＴＬＲ９シグナル伝達が有し得る多様な効果が明らかになった（同文献）。
【００１０】
治療用オリゴヌクレオチドのインビボ送達を促進するために使用される戦略としては、オリゴヌクレオチドの化学修飾、脂質ナノキャリアの使用、オリゴヌクレオチドを受容体標的指向化剤に結合すること、及びオリゴヌクレオチドの有効性を高めるための小分子の使用が挙げられる。しかしながら、ナノ粒子送達系は、ほとんどの組織にアクセスすることができず、かつ潜在的な毒性の懸念があることから、治療用途の範囲が制限される場合がある。加えて、アンチセンス又はｓｉＲＮＡとは異なり、ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドアゴニストは、ＴＬＲ９に直接結合することによって機能する。コレステロールなどの送達分子とＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドアゴニストとのコンジュゲートを設計するときには、立体障害を回避する必要がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
したがって、慢性ＨＢＶ感染及び癌などのＴＬＲ９活性の調節が有益になる疾患を効果的に治療又は予防することができる有効な治療薬が依然として必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本開示は、ＴＬＲ９への結合及び活性化を通して免疫応答を刺激するオリゴデオキシリヌクレオチド（oligodeoxynucleotide、ＯＤＮ）ベースのコンストラクトを提供することによって、ＴＬＲ９活性の調節が有益になる疾患を効果的に治療又は予防することができる有効な治療法に対するニーズを満たす。本開示はまた、ウイルス感染又は癌を含む免疫性の疾患、障害、又は病態などの、ＴＬＲ９活性の調節が有益になる疾患を治療又は予防するための、単独で又は他の剤と組み合わせたこれらのＯＤＮコンストラクトの使用に関する。
【００１３】
本開示のＯＤＮコンストラクトは、リンカーを介して脂質部分にコンジュゲートしたＣｐＧオリゴデオキシリヌクレオチドを含む。
【００１４】
ＯＤＮコンストラクトの設計は、例えば、シトシン−グアニン（ＣｐＧ）モチーフ及びそのヌクレオチド間結合の数及び配置、並びに脂質部分の構造及び位置、並びにリンカーの有無を含む。脂質部分は、ＯＤＮコンストラクトにコンジュゲートしたコレステロール及びトコフェロールなどの脂質分子を含み得る。加えて、ＯＤＮコンストラクトは、オリゴヌクレオチドの１つ以上のＣｐＧモチーフ内にホスホジエステルヌクレオチド間結合を含む。
【００１５】
本開示の実施形態によるＯＤＮコンストラクトは、ＴＬＲ９アゴニストとして予想外に高いレベルの強化された生物学的利用能及び有効性を達成することが示されている。いかなる特定の理論にも束縛されることを望むものではないが、強化されたＴＬＲ９アゴニスト活性は、ウイルス生成物を認識するために免疫系を刺激すると同時に潜伏ウイルスの再発現を刺激することによって、ＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡ保有肝細胞を効果的に減少又は排除することができる。具体的には、免疫系は、潜伏状態のＨＢＶウイルスは認識せず、開示されるＯＤＮコンストラクトによって誘導された低レベルの炎症が、ウイルスをその潜伏期から脱させ得る。その結果ＨＢＶが再発現し、新たに形成されたウイルス発現産物が形成されると、次いで、活性化された免疫系によって認識されて、循環ウイルスが制御され、感染細胞が死滅し、ＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡ保有肝細胞が効果的に排除される。
【００１６】
また、本開示の実施形態による開示されるＯＤＮコンストラクトを使用して、腫瘍、好ましくは大腸癌などの癌を治療することができる。開示されるＣｐＧ  ＯＤＮコンストラクトは、インビボで腫瘍細胞に対する免疫を誘導し、腫瘍担持マウスの生存時間を増加させる。
【００１７】
一般的な一態様では、本開示は、リンカーを介してＣｐＧ  ＯＤＮに結合した脂質部分を有するＣｐＧ  ＯＤＮコンストラクトに関する。ある実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮコンストラクトは、以下の式を有する：
式Ｉ：５’Ｍ１−Ｌ１−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−Ｌ２−Ｍ２  ３’、
（式中、
Ｍ１及びＭ２のそれぞれは独立して脂質部分を表し、好ましくは、当該脂質部分は、コレステロール、トコフェロール、パルミトイル基、及びステアリル基からなる群から選択される少なくとも１つを含み、所望により、Ｍ１及びＭ２のうちの１つは存在せず、
Ｌ１及びＬ２のそれぞれは独立してリンカーを表し、好ましくは、当該リンカーは、炭素、窒素、酸素、水素、硫黄及びリンからなる群から選択される少なくとも１０個の原子を含み、Ｌは、切断可能な結合を介して、好ましくはエステル又はアミド結合を介してＣｐＧ  ＯＤＮに共有結合しており、所望により、それぞれＭ１及びＭ２が存在しないとき、Ｌ１及びＬ２のうちの１つは存在せず、
好ましくは、ＣｐＧ  ＯＤＮは、ホスホジエステル（ｐｏ）ヌクレオチド間結合を有する少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含み、
所望により、式（Ｉ）のＣｐＧ  ＯＤＮコンストラクトは、更に、好ましくはガラクトース，Ｎ−アセチルガラクトサミン（galactose, N-acetylgalactosamine、ＧａｌＮＡｃ）、フコース、マンノース、シアル酸、Ｎ−アセチルノイラミン酸からなる群から選択される標的指向化部分に共有結合的にコンジュゲートする）。
【００１８】
一実施形態では、本開示は、以下の式を有するＣｐＧ  ＯＤＮコンストラクトに関する：
式（ＩＩａ）：５’Ｍ−Ｌ−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’、又は
式（ＩＩｂ）：５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−Ｌ−Ｍ  ３’
（式中、
Ｍは、脂質部分を表し、好ましくは、当該脂質部分は、コレステロール、トコフェロール、パルミトイル基、及びステアリル基からなる群から選択される少なくとも１つを含み、
Ｌは、炭素、窒素、酸素、水素、硫黄及びリンからなる群から選択される少なくとも１０個の原子を含むリンカーを表し、Ｌは、切断可能な結合を介して、好ましくはエステル又はアミド結合を介してＣｐＧ  ＯＤＮに共有結合しており、
ＣｐＧ  ＯＤＮは、ｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含み、好ましくは、それぞれがｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも２つ、３つ、又は４つのＣｐＧモチーフを含み、
所望により、式（ＩＩａ）又は（ＩＩｂ）のＣｐＧ  ＯＤＮコンストラクトは、更に、好ましくはガラクトース，Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、フコース、マンノース、シアル酸、Ｎ−アセチルノイラミン酸からなる群から選択される標的指向化部分に共有結合的にコンジュゲートする）。
【００１９】
ある実施形態では、式（ＩＩａ）又は（ＩＩｂ）中のリンカーＬは、−（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎ−、（式中、ｍは、１〜１５の整数であり、Ｘは、独立して、ホスホジエステル（ｐｏ）又はホスホロチオエート（ｐｓ）結合であり、ｎは、１〜５の整数である）を含む。
【００２０】
別の実施形態では、式（ＩＩａ）又は（ＩＩｂ）中のリンカーＬは、ホスホジエステル（ｐｏ）結合又はホスホロチオエート（ｐｓ）結合を介して脂質部分Ｍに結合している。
【００２１】
更に別の実施形態では、式（ＩＩａ）又は（ＩＩｂ）中のリンカーＬは、ホスホジエステル（ｐｏ）結合又はホスホルアミデイト結合、好ましくはｐｏ結合を介してＣｐＧ  ＯＤＮに結合している。
【００２２】
別の態様では、本開示は、以下の構造を有するＯＤＮコンストラクトに関する：
式（ＩＩＩａ）：５’Ｍ１−Ｙ１−（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎ−Ｙ２−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−Ｙ３−Ｍ２  ３’、又は
式（ＩＩＩｂ）：５’Ｍ２−Ｙ３−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−Ｙ２−（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎ−Ｙ１−Ｍ１  ３’
（式中、
Ｍ１は、脂質部分を表し、好ましくは、当該脂質部分は、コレステロール、トコフェロール、パルミトイル基、及びステアリル基からなる群から選択される少なくとも１つを含み、
Ｍ２は、脂質部分、標的指向化部分を表すか、又は存在せず、
Ｙ１は、結合又はリンカー、好ましくは、ホスホジエステル（ｐｏ）結合、ホスホロチオエート（ｐｓ）結合、又は結合を介して（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎに共有結合している、式（（ＣＨ２）２Ｏ）ｏ（式中、ｏは１〜１５である）を有するエチレングリコールであり、
Ｘは、独立して、結合、ｐｏ結合、又はｐｓ結合であり、
Ｙ２及びＹ３のそれぞれは独立して切断可能な結合であり、好ましくはエステル又はアミド結合を含み、より好ましくはｐｏ結合又はホスホルアミデイト結合を含み、最も好ましくはｐｏ結合であり、ただし、Ｍ２が存在しないとき、Ｙ３も存在せず、
ＣｐＧ  ＯＤＮは、ｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含み、好ましくは、それぞれがｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも２つ、３つ、又は４つのＣｐＧモチーフを含み、
ｍは、１〜１５の整数であり、
ｎは、１〜５の整数である）。
【００２３】
一実施形態では、本開示は、以下の式を有するＣｐＧ  ＯＤＮコンストラクトに関する：
式（ＩＶａ）：５’Ｍ−Ｙ１−（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎ−Ｙ２−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’、又は
式（ＩＶｂ）：５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−Ｙ２−（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎ−Ｙ１−Ｍ  ３’
（式中、
Ｍは、脂質部分を表し、好ましくは、当該脂質部分は、コレステロール、トコフェロール、パルミトイル基、及びステアリル基からなる群から選択される少なくとも１つを含み、
Ｙ１は、結合又はリンカー、好ましくは、ホスホジエステル（ｐｏ）結合、ホスホロチオエート（ｐｓ）結合、又は結合を介して（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎに共有結合している、式（（ＣＨ２）２Ｏ）ｏ（式中、ｏは１〜１５である）を有するエチレングリコールであり、
Ｘは、独立して、結合、ホスホジエステル（ｐｏ）結合、又はホスホロチオエート（ｐｓ）結合であり、
Ｙ２は、切断可能な結合であり、好ましくはエステル又はアミド結合を含み、より好ましくはｐｏ結合又はホスホルアミデイト結合を含み、最も好ましくはｐｏ結合であり、
ＣｐＧ  ＯＤＮは、ｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含み、好ましくは、それぞれがｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも２つ、３つ、又は４つのＣｐＧモチーフを含み、
ｍは、１〜１５の整数、好ましくは６であり、
ｎは、１〜５の整数、好ましくは２であり、
所望により、式（ＩＶａ）又は（ＩＶｂ）のＣｐＧ  ＯＤＮコンストラクトは、更に、好ましくはガラクトース，Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、フコース、マンノース、シアル酸、Ｎ−アセチルノイラミン酸からなる群から選択される標的指向化部分に共有結合的にコンジュゲートする）。
【００２４】
具体的な実施形態によれば、脂質部分は、コレステロール、トコフェロール、又はパルミトイル基を表す。
【００２５】
具体的な実施形態によれば、式（Ｉ）〜（ＩＶｂ）のそれぞれにおけるＣｐＧ  ＯＤＮは、１つ以上のホスホロチオエート（ｐｓ）ヌクレオチド間結合を有する。より具体的な態様によれば、式（Ｉ）におけるＯＤＮコンストラクトのヌクレオチド間結合は全て、ホスホロチオエート（ｐｓ）結合である。具体的な態様によれば、ＯＤＮコンストラクトにおけるＣｐＧジヌクレオチドのＣとＧとの間のヌクレオチド間結合のうちの少なくとも１つは、立体構造の確定している（stereodefined）ホスホロチオエート（ｐｓ）ヌクレオチド間結合である。具体的な態様によれば、ＣｐＧ  ＯＤＮにおけるＣｐＧジヌクレオチドのＣとＧとの間のヌクレオチド間結合のうちの少なくとも１つは、ホスホジエステル（ｐｏ）ヌクレオチド間結合であり、当該ＣｐＧ  ＯＤＮの残りのヌクレオチド間結合のそれぞれは、ホスホロチオエート（ｐｓ）結合である。具体的な態様によれば、ＣｐＧ  ＯＤＮは、１９〜２４ヌクレオチド長を有する。
【００２６】
別の一般的な態様では、本開示は、本開示のＯＤＮコンストラクトと、医薬的に許容される担体とを含む医薬組成物に関する。
【００２７】
別の一般的態様では、本開示は、本開示のＯＤＮコンストラクトを医薬的に許容される担体と組み合わせることを含む、本開示の医薬組成物を調製する方法に関する。
【００２８】
別の一般的な態様では、本発明は、本開示の医薬組成物を被験体に投与することを含む、それを必要としている被験体における免疫応答を刺激する方法に関する。
【００２９】
別の一般的な態様では、本発明は、本開示の医薬組成物を被験体に投与することを含む、それを必要としている被験体における疾患を治療する方法に関する。好ましくは、当該疾患は、ウイルス感染又は癌などの免疫性の疾患、障害、又は病態からなる群から選択される。より好ましくは、当該疾患は、慢性ＨＢＶ感染又は固形腫瘍癌である。
【００３０】
本開示の他の態様、特徴、及び利点は、本開示の詳細な説明、並びにその好ましい実施形態及び添付の特許請求の範囲を含む以下の開示から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
上述の本開示の概要及び以下の本開示の詳細な説明は、添付の図面と併せて読むことでより深く理解されるであろう。本開示は、図示される実施形態そのものに限定されるものではないことを理解すべきである。
【００３２】
図面は、以下のとおりである。
【図１】様々な位置にホスホジエステル結合されたＣｐＧモチーフを有するＴＬＲ９アゴニストによる、ＯＤ６３０レベルによって測定されたレポーター細胞株のＴＬＲ９活性化を示す。
【図２】切断可能なリンカーによってコレステロールにコンジュゲートしているホスホジエステル結合されたＣｐＧモチーフを含む本開示の実施形態によるＯＤＮコンストラクトによる、ＯＤ６３０レベルによって測定されたレポーター細胞株のＴＬＲ９活性化を示す。
【図３】本開示の実施形態によるＯＤＮコンストラクトによる、ＯＤＮ２００６に対して正規化されたレポーター細胞株におけるヒト（左パネル）及びマウス（右パネル）のＴＬＲ９の活性化を示す。
【図４】ＯＤＮコンストラクト投与の４時間後における、本開示の実施形態によるＯＤＮコンストラクトによる、マウスにおけるインビボサイトカイン誘導（ＩＬ−６、左パネル；ＴＮＦ−α、中央パネル；ＭＩＰ−１β、右パネル）を示す。
【図５】マウスにおけるＨＢＶ感染に対する本開示の実施形態によるＯＤＮコンストラクトの効果を分析するために実施した実験の概略図を示す。
【図６】本開示の実施形態によるＯＤＮコンストラクトの単回投与（左パネル）又は複数回投与（右パネル）で処理した際の、マウスにおけるＨＢＶ  ＤＮＡのレベルを示す。
【図７】本開示の実施形態によるＯＤＮコンストラクトの単回投与（左パネル）又は複数回投与（右パネル）で処理した際の、マウスにおけるＨＢｓＡｇのレベルを示す。
【図８】本開示のＯＤＮコンストラクトの単回投与（左パネル）又は複数回投与（右パネル）で処理した際の、マウスにおけるＨＢｅＡｇのレベルを示す。
【図９】本開示のＯＤＮコンストラクトを皮下注射することによる、マウスにおけるインビボサイトカイン誘導（ＩＬ−１２ｐ４０、左パネル；Ｉｌ−６、中央パネル；ＭＩＰ−１β、右パネル）を示す。
【図１０】ＡＧ８と称される本開示のＯＤＮコンストラクトを静脈内注射することによる、マウスにおけるインビボサイトカイン誘導（ＩＬ−１２ｐ４０、左パネル；Ｉｌ−６、中央パネル；ＭＩＰ−１β、右パネル）を示す。
【図１１】ＨＢｓＡｇ及びＯＤＮコンストラクトを静脈内（ＩＶ）又は皮下（ＳＱ）に投与したマウスの１４日目のＨＢｓＡｇ特異的ＩｇＧのレベルを示す。
【図１２】本開示の実施形態による例示的なＯＤＮコンストラクトを示す。
【図１３−１】Ａは、本開示の実施形態によるＯＤＮコンストラクトであるＡＧ９を皮下投与した際の、ＡＡＶ−ＨＢＶマウスにおけるＨＢｓＡｇ、抗ＨＢｓ抗体、及びＨＢＶ  ＤＮＡのレベルを示す。Ｂは、ＡＧ９を静脈内投与した際の、ＡＡＶ−ＨＢＶマウスにおけるＨＢｓＡｇ、抗ＨＢｓ抗体、及びＨＢＶ  ＤＮＡのレベルを示す。
【図１３−２】Ｃは、本開示の実施形態によるＯＤＮコンストラクトであるＡＧ１９を静脈内投与した際の、ＡＡＶ−ＨＢＶマウスにおけるＨＢｓＡｇ、抗ＨＢｓ抗体、及びＨＢＶ  ＤＮＡのレベルを示す。
【図１３−３】Ｄは、本開示の実施形態によるＯＤＮコンストラクトを投与した際の、ＡＡＶ−ＨＢＶマウスにおけるＨＢｓＡｇ特異的Ｔ細胞のレベルを示す。
【図１４】ＭＣ−３８腫瘍担持マウス（大腸癌モデル）に腫瘍内（ＩＴ）及び静脈内（ＩＶ）に投与された本開示の実施形態によるＯＤＮコンストラクトを用いたパイロット有効性試験の概略図を示す。
【図１５Ａ】漸増量の本開示の実施形態によるＯＤＮコンストラクトを静脈内に投与した後の、ＭＣ−３８結腸癌細胞を移植したナイーブＣ５７ＢＬ／６マウスにおける腫瘍体積を示す。具体的には、ＡＧ１  ＯＤＮコンストラクトを静脈内に投与したマウスの腫瘍体積を示す。
【図１５Ｂ】漸増量の本開示の実施形態によるＯＤＮコンストラクトを静脈内に投与した後の、ＭＣ−３８結腸癌細胞を移植したナイーブＣ５７ＢＬ／６マウスにおける腫瘍体積を示す。具体的には、ＡＧ９  ＯＤＮコンストラクトを静脈内に投与したマウスの腫瘍体積を示す。
【図１５Ｃ】漸増量の本開示の実施形態によるＯＤＮコンストラクトを静脈内に投与した後の、ＭＣ−３８結腸癌細胞を移植したナイーブＣ５７ＢＬ／６マウスにおける腫瘍体積を示す。具体的には、ＡＧ１７  ＯＤＮコンストラクトを静脈内に投与したマウスの腫瘍体積を示す。
【図１６】ＭＣ−３８腫瘍担持マウスにおける、本開示の実施形態によるＯＤＮコンストラクトを用いた最大耐用量（Maximum Tolerated Dose、ＭＴＤ）／有効性試験の概略図を示す。
【図１７】本開示の実施形態によるＯＤＮコンストラクトの合成スキームを示す。
【図１８】Ｃ５７ＢＬ／６マウスから単離されたマウス脾細胞から精製し、本開示の実施形態によるＯＤＮコンストラクトで刺激したＢ細胞におけるＣＤ４０レベルを示す。
【図１９】本開示の実施形態によるＯＤＮコンストラクトによる、ＰｒｏＭｕｎｅに対して正規化されたレポーター細胞株におけるヒトＴＬＲ９の活性化を示す。
【図２０】本開示の実施形態によるＯＤＮコンストラクトによる、ＯＤＮ１８２６に対して正規化されたマウスＴＬＲ９の活性化を示す。
【図２１Ａ】ＡＧ２１（ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ−６４７にコンジュゲートしたＡＧ９）をマウスに皮下（ＳＱ）投与した結果、Ａｇ２０（ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ  ６４７にコンジュゲートしたＡＧ１）と比較して、マウスの排出リンパ節にオリゴが蓄積されたことを示す。
【図２１Ｂ】ＡＧ２１をマウスに静脈内（ＩＶ）投与した結果、ＡＧ２０と比較して、マウスの脾臓にオリゴが蓄積されたことを示す。
【図２２Ａ】トコフェロールが、ウシ血清アルブミン（bovine serum albumin、ＢＳＡ）などの血清タンパク質へのＣｐＧ  ＯＤＮの結合を促進し得ることを示す。
【図２２Ｂ】ＣｐＧ  ＯＤＮをパルミトイルにコンジュゲートすることにより、ＯＤＮとウシ胎児血清（fetal bovine serum、ＦＢＳ）内の血清タンパク質との相互作用が促進されたことを示す。及び
【図２３】ＣｐＧ  ＯＤＮのトコフェロールコンジュゲーションによって、ＯＤＮにミセル形成の特性が付与されたことを示す。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
発明の背景において、また、本明細書全体を通じて各種刊行物、論文及び特許を引用又は記載する。これら参照文献の各々はその全容が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に含まれる文書、操作、材料、デバイス、物品などの考察は、本開示のコンテキストを与えるためのものである。かかる考察は、これらの事物のいずれか又は全てが、開示又は特許請求されるいかなる発明に対しても先行技術の一部を構成することを容認するものではない。
【００３４】
定義
別段の規定がない限り、本明細書で使用される技術用語及び科学用語は全て、本開示が属する技術分野の当業者に一般的に理解される意味と同一の意味を有する。そうでない場合、本明細書で使用される特定の用語は、本明細書に記載される意味を有するものである。本明細書に引用する全ての特許、公開された特許出願及び刊行物は、参照によって恰もその全体が本明細書に記載されているものと同様にして組み込まれる。本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、特に文脈上明らかでない限り、複数の指示対象物を含むことに留意すべきである。
【００３５】
本明細書及び以下の特許請求の範囲をとおして、文脈上必要としない限り、用語「含む（comprise）」並びに「含む（comprises）」及び「含む（comprising）」などの変形は、指定の整数若しくはステップ又は整数若しくはステップの群を含むが、任意の他の整数若しくはステップ又は整数若しくはステップの群を除外するものではないことを意味すると理解されるであろう。本明細書で使用するとき、用語「含む」は、用語「含有する」又は「含む（including）」に置き換えることができ、又は時に本明細書で使用するとき、用語「有する」に置き換えることもできる。
【００３６】
本明細書で使用するとき、「からなる」は、特許請求の範囲の要素において指定されていない任意の要素、ステップ、又は成分を除外する。本明細書で使用するとき、「から本質的になる」は、特許請求の範囲の基本的かつ新規の特徴に実質的に影響を及ぼさない材料又はステップは除外しない。本発明の態様又は実施形態に関連して本明細書で使用するとき、本開示の範囲を変化させるために、「含む（comprising）」、「含有する」、「含む（including）」、及び「有する」という上記用語のいずれかを、用語「からなる」又は「から本質的になる」に置き換えることができる。
【００３７】
本明細書で使用するとき、ＣＤ２８９、ＵＮＱ５７９８、又はＰＲＯ１９６０５としても知られている用語「ＴＬＲ９」又は「トール様受容体９」は、非メチル化シトシン−リン酸−グアニン（ＣｐＧ）ジヌクレオチドによって活性化されるヌクレオチド感知性ＴＬＲを指す。ＴＬＲ９の例としては、３９２２ヌクレオチド長のｍＲＮＡ転写物によってコードされている１０３２アミノ酸長のタンパク質であるヒトＴＬＲ９（ＮＭ＿０１７４４２．３）が挙げられるが、これらに限定されない。例示的なヒトＴＬＲ９のアミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿０５９１３８．１で表される。本明細書で使用するとき、用語「ＴＬＲ９」は、カニクイザル（Macaca Fascicularis）又はチンパンジー（Pan troglodytes）などの、ヒト以外の種由来のＴＬＲ９のホモログを含む。本明細書で使用するとき、用語「ＴＬＲ９」は、完全長野生型ＴＬＲ９の変異、例えば、点変異、フラグメント、挿入、欠失、及びスプライスバリアントを含むタンパク質を含む。用語「ＴＬＲ９」はまた、ＴＬＲ９アミノ酸配列の翻訳後修飾を包含する。
【００３８】
本明細書で使用するとき、用語「アゴニスト」は、１つ以上のＴＬＲに結合し、受容体媒介応答を誘導する分子を指す。例えば、アゴニストは、受容体の活性を誘導、刺激、増大、活性化、促進、強化、又は上方調節することができる。このような活性を「アゴニスト活性」と称する。例えば、ＴＬＲ９アゴニストは、結合した受容体を介して細胞のシグナル伝達を活性化又は増加させることができる。アゴニストとしては、核酸、小分子、タンパク質、炭水化物、脂質、又は受容体と結合若しくは相互作用する任意の他の分子が挙げられるが、これらに限定されない。アゴニストは、天然受容体リガンドの活性を模倣することができる。アゴニストは、受容体によって認識され得るように、配列、高次構造、電荷、又は他の特徴に関してこれらの天然受容体リガンドに類似していてよい。この認識によって、細胞内で生理学的及び／又は生化学的な変化が生じ得、その結果、当該細胞は、まるで天然受容体リガンドが存在するかのように、アゴニストの存在に対して同様に反応する。本明細書で使用するとき、用語「ＴＬＲ９アゴニスト」は、ＴＬＲ９のアゴニストとして作用する任意の化合物を指す。
【００３９】
本明細書で使用するとき、用語「誘導する」及び「刺激する」並びにこれらの変形は、細胞活性の任意の測定可能な増加を指す。ＴＬＲ９によって媒介される細胞活性の誘導は、例えば、免疫細胞の集団の活性化、増殖、若しくは成熟、サイトカインの産生の増加、及び／又は免疫機能の増大の別の指標を含み得る。特定の実施形態では、免疫応答の誘導は、Ｂ細胞の増殖の増加、抗原特異的抗体の産生、抗原特異的Ｔ細胞の増殖の増加、樹状細胞の抗原提示の改善、並びに／又は特定のサイトカイン、ケモカイン、及び共刺激マーカーの発現増加を含み得る。
【００４０】
本明細書で使用するとき、「脂質部分」は、親油性構造を含有する部分を指す。脂質部分は、例えば、アルキル基、脂肪酸、トリグリセリド、ジグリセリド、ステロイド、スフィンゴ脂質、糖脂質、又はリン脂質である。例えば、脂質部分は、コレステロールなどのステロール、トコフェロールなどのメチル化された疎水性側鎖を有するメチル化クロマノール環、又はパルミチン酸若しくはそのエステルなどの飽和脂肪酸を含み得る。脂質部分は、核酸などの高度に親水性の分子に結合したとき、血漿タンパク質結合を実質的に強化し、結果として親水性分子の循環半減期を延長することができる。加えて、リポタンパク質などの特定の血漿タンパク質への結合は、対応するリポタンパク質受容体（例えば、ＬＤＬ受容体、ＨＤＬ受容体、又はスカベンジャー受容体ＳＲ−Ｂ１）を発現している特定の組織における取り込みを増加させることが示されている。例えば、Ｂｉｊｓｔｅｒｂｏｓｃｈ，Ｍ．Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２８，２７１７−２５；Ｗｏｌｆｒｕｍ，Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２５：１１４９−５７  ２５を参照。
【００４１】
標的指向性送達アプローチの細胞内輸送を改善するために、脂質部分を標的指向化部分と組み合わせて使用することもできる。標的指向化部分は、巨大分子（例えば、受容体）、細胞（例えば、マクロファージ、樹状細胞、肝細胞、腫瘍細胞）、又はこれらの構成要素などのインビボ標的にＯＤＮコンストラクトを導くことができる、本開示のＣｐＧ  ＯＤＮに直接又は間接的に結合している任意の好適な部分又はリガンドであってよい。したがって、標的指向化部分は、脂質、脂質酸誘導体、ガラクトース，Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、フコース、マンノース、シアル酸、Ｎ−アセチルノイラミン酸、抗体、リポソーム、ミセル、デンドリマー、ナノスフェア、ナノカプセル、ペプチド、タンパク質、アルブミン、及びホルモンなどの任意の好適な天然に存在する又は合成の分子を含み得る。
【００４２】
本明細書で使用するとき、用語「リンカー」は、ＣｐＧ  ＯＤＮの５’又は３’末端のヌクレオチドなどのヌクレオチドを、脂質部分又は標的指向化部分に結合させる化学部分を指す。用語「切断可能なリンカー」は、それが結合するヌクレオチド又は核酸分子を変化させることなく、特定の条件下で望まれるときにヌクレオチドから脂質部分又は標的指向化部分を除去するために切断されるリンカー又はその一部を指す。結合の性質に応じて、例えば、（例えば、ヒドラゾンの）酸又は塩基処理によって、（例えば、ヌクレアーゼ又はプロテアーゼによる）酵素的切断によって、（例えば、ジスルフィド架橋による）結合の酸化又は還元によって、（例えば、光漂白による）光処理によって、インビトロ又はインビボで切断を達成することができる。具体的な実施形態によれば、リンカーは、任意の柔軟性の切断可能なリンカーを含む。リンカーとしては、例えば、共有結合、置換又は無置換アルキル、置換又は無置換ヘテロアルキル、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、１つ、２つ、若しくは３つの非塩基性及び／若しくはリビトール基、エチレングリコール部分、又はペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。本開示の実施形態によれば、リンカーは、ホスホジエステル（ｐｏ）、ホスホルアミデイト結合（ｎｐ）又はホスホロチオエート（ｐｓ）結合などの切断可能な結合を介して、好ましくはｐｏ結合又はｎｐ結合などのエステル又はアミド結合を介して、最も好ましくはｐｏ結合を介して、ＣｐＧ  ＯＤＮに共有結合する。本開示の実施形態によれば、リンカーは、ｐｏ、ｎｐ、又はｐｓ結合を介してＣｐＧ  ＯＤＮに共有結合している、式（（ＣＨ２）２Ｏ）ｏ（式中、ｏは１〜１５である）を有するエチレングリコールを含む。
【００４３】
ある実施形態では、ｐｏ結合などの切断可能な結合は、ホスホジエステラーゼ酵素、例えば、環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼ、ホスホリパーゼＣ、ホスホリパーゼＤ、オートタキシン、スフィンゴミエリンホスホジエステラーゼ、ＤＮａｓｅ、ＲＮａｓｅ、又は制限エンドヌクレアーゼによって切断可能である。
【００４４】
本開示の実施形態によれば、リンカーは、（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ（式中、ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５などの１〜１５の整数である）を含む。具体的な実施形態によれば、リンカーは、以下の分子式：（（ＣＨ２）２Ｏ）６を有する１つ以上のヘキサエチレングリコール（hexaethylene glycol、ＨＥＧ）部分を含む。
【００４５】
ある実施形態では、リンカーは、１つ以上のホスホジエステル（ｐｏ）又はホスホロチオエート（ｐｓ）結合によって結合している１つ以上のＨＥＧ部分を含む。ある実施形態では、リンカーは、ｐｏ結合を介してＣｐＧ  ＯＤＮに結合している１つのＨＥＧ部分を含む。ある実施形態では、リンカーは、ｐｏ結合によって互いに結合し、ｐｏ結合を介してＣｐＧ  ＯＤＮと結合している２つのＨＥＧ部分を含む。
【００４６】
他の実施形態によれば、リンカーは、切断可能なジスルフィド基を含む。他の実施形態によれば、リンカーは、例えば、ｕＰＡ、レグマイン、マトリプターゼ、又はカテプシンなどの腫瘍微小環境に特異的なプロテアーゼのための切断部位を含むペプチドリンカーなどの、プロテアーゼで切断可能なペプチドを含む。
【００４７】
本発明の実施形態によれば、コレステロール、トコフェロール、パルミトイル基、又はステアリル基などの脂質部分（Ｍ）は、リンカーを介してＣｐＧ  ＯＤＮに共有結合し得る。リンカーは、式（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ（式中、ｍは１〜１５である）を有するエチレングリコールなどの１つ以上のリンカー部分を含み得る。ある実施形態では、ｍは６であり、リンカー部分はヘキサエチレングリコール（ＨＥＧ）である。
【００４８】
本発明の実施形態によれば、コレステロール、トコフェロール、パルミトイル基、又はステアリル基などの脂質部分（Ｍ）は、結合を介して直接、又は式（（ＣＨ２）２Ｏ）ｏ（式中、ｏは１〜１５である）を有するエチレングリコールを含むリンカーなどの第２のリンカーを介して間接的にＨＥＧ部分に共有結合し得る。第２のリンカーは、結合、ホスホジエステル（ｐｏ）結合、ホスホルアミデイト結合（ｎｐ）、又はホスホロチオエート（ｐｓ）結合を介してＨＥＧに共有結合することができる。
【００４９】
ホスホジエステル（ｐｏ）結合、ホスホルアミデイト結合（ｎｐ）、又はホスホロチオエート（ｐｓ）結合からなる群から選択される結合などの結合によって、各リンカー部分は、独立して、他のリンカー部分に結合することができる。リンカーは更に、ホスホジエステル（ｐｏ）結合、ホスホルアミデイト結合（ｎｐ）及びホスホロチオエート（ｐｓ）結合からなる群から選択される切断可能な結合などの切断可能な結合を通してＣｐＧ  ＯＤＮに結合することができる。ある実施形態では、リンカーは、脂質部分とＣｐＧ  ＯＤＮとの間に１つのリンカー部分を含む。ある実施形態では、リンカーは、脂質部分とＣｐＧ  ＯＤＮとの間に２つのリンカー部分を含む。ある実施形態では、各リンカー部分は、ｐｏ結合を通して少なくとも１つの他のリンカー部分に結合する。ある実施形態では、各リンカー部分は、ｐｓ結合を通して少なくとも１つの他のリンカー部分に結合する。ある実施形態では、各リンカー部分は、ｎｐ結合を通して少なくとも１つの他のリンカー部分に結合する。ある実施形態では、リンカー部分は、式（（ＣＨ２）２Ｏ）ｏ（式中、ｏは１〜１５である）を有するエチレングリコールを含むリンカーなどの第２のリンカーを介して脂質部分に共有結合し、当該第２のリンカーは、結合、ホスホジエステル（ｐｏ）結合、ホスホルアミデイト結合（ｎｐ）又はホスホロチオエート（ｐｓ）結合を介して脂質部分に共有結合する。ある実施形態では、リンカーは、脂質部分とＣｐＧ  ＯＤＮとの間のｐｏ結合によって結合された２つのリンカー部分を含む。ある実施形態では、リンカーは、脂質部分とＣｐＧ  ＯＤＮとの間のｐｓ結合によって結合された２つのリンカー部分を含む。ある実施形態では、リンカーは、脂質部分とＣｐＧ  ＯＤＮとの間のｎｐ結合によって結合された２つのリンカー部分を含む。
【００５０】
脂質部分（Ｍ）は、ホスホジエステル（ｐｏ）結合、ホスホルアミデイト結合（ｎｐ）、又はホスホロチオエート（ｐｓ）結合からなる群から選択される結合などの結合（bond）又は結合（linkage）を通してリンカーに結合することができる。本明細書で使用するとき、「Ｍ−ｐｏ（ＨＥＧ）」又は「（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｍ」は、脂質部分Ｍが、ホスホジエステル（ｐｏ）結合を介して直接、又は式（（ＣＨ２）２Ｏ）ｏ（式中、ｏは１〜１５である）を有するエチレングリコールを含むリンカーなどの第２のリンカーを介して間接的にＨＥＧ部分に共有結合しており、当該第２のリンカーがホスホジエステル（ｐｏ）結合を介してＨＥＧ部分に共有結合していることを意味する。例えば、本明細書で使用するとき、「Ｔｏｃｏ−ｐｓ（ＨＥＧ）」は、ホスホジエステル（ｐｏ）結合を介してＨＥＧ部分に共有結合している式（（ＣＨ２）２Ｏ）ｏ（式中、ｏは１〜１５である）を有するエチレングリコールなどの第２のリンカーを介してＣｐＧ  ＯＤＮに共有結合しているトコフェロール基を指し得る。
【００５１】
本明細書で使用するとき、「Ｍ−ｐｓ（ＨＥＧ）」又は「（ＨＥＧ）ｐｓ−Ｍ」は、脂質部分Ｍが、ホスホロチオエート（ｐｓ）結合を介して直接、又は式（（ＣＨ２）２Ｏ）ｏ（式中、ｏは１〜１５である）を有するエチレングリコールを含むリンカーなどの第２のリンカーを介して間接的にＨＥＧ部分に共有結合しており、当該第２のリンカーがホスホロチオエート（ｐｓ）結合を介してＨＥＧ部分に共有結合していることを意味する。例えば、本明細書で使用するとき、「Ｔｏｃｏ−ｐｓ（ＨＥＧ）」は、ホスホロチオエート（ｐｓ）結合を介してＨＥＧ部分に共有結合している式（（ＣＨ２）２Ｏ）ｏ（式中、ｏは１〜１５である）を有するエチレングリコールなどの第２のリンカーを介してＣｐＧ  ＯＤＮに共有結合しているトコフェロール基を指し得る。
【００５２】
本明細書で使用するとき、用語「ＣｐＧ」又は「ＣｐＧモチーフ」は、リン酸結合又はホスホジエステル（ｐｏ）結合などのリン含有骨格によって結合された、非メチル化シトシン−グアニン（すなわち、シトシン（Ｃ）に続いてグアニン（Ｇ）、すなわち、５’−ＣＧ−３’）を含有するジヌクレオチド配列を指す。
【００５３】
本明細書で使用するとき、「オリゴヌクレオチド」、「オリゴデオキシヌクレオチド」又は「ＯＤＮ」は、複数の結合しているヌクレオチド単位から形成されるポリヌクレオチドを指す。このようなオリゴヌクレオチドは、既存の核酸源から得ることもでき、又は合成方法によって生成することもできる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドはそれぞれ、約５〜約３０個のヌクレオチド残基、好ましくは約１０〜約２５個のヌクレオチド残基、より好ましくは約１９〜約２４個のヌクレオチド残基を有する。ある実施形態では、ＯＤＮは１９個のヌクレオチド残基を含有する。ある実施形態では、ＯＤＮは２０個のヌクレオチド残基を含有する。ある実施形態では、ＯＤＮは２１個のヌクレオチド残基を含有する。ある実施形態では、ＯＤＮは２２個のヌクレオチド残基を含有する。ある実施形態では、ＯＤＮは２３個のヌクレオチド残基を含有する。ある実施形態では、ＯＤＮは２４個のヌクレオチド残基を含有する。本開示のＯＤＮは、既存の核酸源（例えば、ゲノム又はｃＤＮＡ）から得ることができるが、好ましくは合成である（例えば、オリゴヌクレオチド合成によって生成される）。
【００５４】
本明細書で使用するとき、「ヌクレオチド」は、アデニン（Ａ）、チミジン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）及びウラシル（Ｕ）からなる群から選択される窒素性塩基と、デオキシリボース糖と、リン酸基とを含む、任意のネイティブな又は天然に存在するヌクレオチドを含む。例示的なヌクレオチドとしては、天然に存在するヌクレオチド塩基、例えば、アデニン、グアニン、シトシン、ウラシル、及びチミンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５５】
本明細書で使用するとき、用語「ＣｐＧオリゴヌクレオチド」、「ＣｐＧオリゴデオキチドヌクレオチド」及び「ＣｐＧ  ＯＤＮ」という用語は、互換的に使用され、少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチドを指す。本開示のＣｐＧ  ＯＤＮは、Ｂｏｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ，１０（４）：４９９−５１１に記載されているように、クラスＡ、クラスＢ、クラスＣ、又はクラスＰのＯＤＮなどの１つ以上のクラスのＣｐＧ  ＯＤＮを含み得る。Ｄ型とも呼ばれるクラスＡのＣｐＧ  ＯＤＮは、中央のＣｐＧ含有パリンドロームモチーフと、５’及び／又は３’末端におけるポリＧモチーフとを含有する。Ｋ型とも呼ばれるクラスＢのＣｐＧ  ＯＤＮは、典型的には、全てがホスホロチオエートである骨格によって十分に安定化され、特定の好ましい塩基コンテキスト内に１つ以上のＣｐＧジヌクレオチドを含む。クラスＣのＣｐＧ  ＯＤＮは、典型的には、全てがホスホロチオエートである骨格によって十分に安定化され、中央のパリンドロームＣｐＧモチーフに加えて他のＣｐＧジヌクレオチドを含む。クラスＰのＣｐＧ  ＯＤＮは、典型的には、全てがホスホロチオエートであるによって十分に安定化され、２つのパリンドローム及び複数のＣｐＧジヌクレオチドを含む。
【００５６】
本明細書で使用するとき、用語「ヌクレオチド間結合」は、隣接するヌクレオシド間のリン原子及び荷電又は中性の基からなる、ヌクレオチドの糖を介して２つの隣接するヌクレオチドを結合させる化学結合を指す。ヌクレオチド間結合の例としては、ホスホジエステル（ｐｏ）、ホスホロチオエート（ｐｓ）、ホスホルアミデイト（ｎｐ）、ホスホロジチオエート（ｐｓ２）、メチルホスホネート（ｍｐ）、及びメチルホスホロチオエート（ｒｐ）が挙げられる。ホスホロチオエート、ホスホルアミデイト、ホスホロジチオエート、メチルホスホネート及びメチルホスホロチオエートは、安定化ヌクレオチド間結合であり、一方、ホスホジエステルは天然に存在するヌクレオチド間結合である。
【００５７】
オリゴヌクレオチドホスホロチオエートは、典型的には、Ｒｐ及びＳｐホスホロチオエート結合のランダムラセミ混合物として合成される。しかしながら、具体的な実施形態によれば、開示されるＯＤＮコンストラクトのホスホロチオエート結合は、Ｒｐ及びＳｐホスホロチオエート結合の混合物を含有する。具体的な実施形態によれば、ＯＤＮコンストラクトのＣｐＧ  ＯＤＮは、立体構造の確定しているｐｓヌクレオチド間結合を有し、すなわち、ｐｓ結合は、ＣｐＧ  ＯＤＮ中に存在するオリゴヌクレオチド分子の少なくとも７５％、例えば、少なくとも８０％又は少なくとも８５％又は少なくとも９０％又は少なくとも９５％、例えば少なくとも９９％においてＲｐ又はＳｐのいずれかである。
【００５８】
具体的な実施形態によれば、ＣｐＧ  ＯＤＮにおけるＣｐＧジヌクレオチドのうちの１〜４個、好ましくは３個又は４個は、それぞれホスホジエステル（ｐｏ）ヌクレオチド間結合を有し、ＣｐＧ  ＯＤＮの残りのヌクレオチド間結合のそれぞれは、ホスホロチオエートヌクレオチド間結合である。ある実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮにおけるＣｐＧジヌクレオチドのそれぞれは、ホスホジエステル（ｐｏ）ヌクレオチド間結合を有し、ＣｐＧ  ＯＤＮにおける残りのヌクレオチドのそれぞれは、ホスホロチオエート（ｐｓ）ヌクレオチド間結合を有する。
【００５９】
本明細書で使用するとき、用語「担体」は、あらゆる賦形剤、希釈剤、充填剤、塩、バッファー、安定剤、可溶化剤、油、脂質、脂質含有小胞、ミクロスフェア、リポソーム封入体、又は医薬製剤で使用するための当該技術分野では公知の他の材料を指す。担体、賦形剤又は希釈剤の特性は、特定の用途の投与経路によって決まる点は理解されよう。本明細書で使用するとき、用語「医薬的に許容される担体」は、本開示による組成物の有効性にも本開示による組成物の生物活性にも干渉しない非毒性材料を指す。具体的な実施形態によれば、本開示を考慮して、ＣｐＧ  ＯＤＮベースのアゴニスト医薬組成物における使用に好適な任意の医薬的に許容される担体を本開示において使用してもよい。
【００６０】
本明細書で使用するとき、用語「被験体／対象」は、動物を指す。具体的な実施形態によれば、対象は、非霊長類（例えば、ラクダ、ロバ、シマウマ、ウシ、ブタ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、ネコ、イヌ、ラット、ウサギ、モルモット又はマウス）、又は霊長類（例えば、サル、チンパンジー、又はヒト）を含む哺乳動物である。具体的な実施形態では、対象はヒトである。
【００６１】
本明細書で使用するとき、用語「治療的有効量」は、対象に所望の生物学的又は薬理的応答を惹起する活性成分又は構成成分の量を指す。治療有効量は、記載される目的に対して経験的かつ一般的な方法で決定することができる。例えば、所望によりインビトロアッセイを用いて、最適な用量範囲の特定に役立てることができる。具体的な有効量の選択は、治療又は予防される疾病、伴う症状、患者の体重、患者の免疫状態、及び当業者が知っている他の因子を含むいくつかの因子の考慮に基づいて、当業者によって（例えば、臨床試験により）決定することができる。また、製剤に用いられる正確な用量は、投与経路及び疾患の重症度に応じて決まり、医師の判断及び各患者の状況に従って決定されるべきである。有効量は、インビトロ又は動物モデル試験系から導かれる用量応答曲線から推定することができる。
【００６２】
本明細書で使用するとき、用語「治療する（treat）」、「治療する（treating）」、及び「治療（treatment）」は全て、免疫性の疾患、障害、又は病態などのＴＬ９活性の調節が有益になる疾患に関連する少なくとも１つの測定可能な物理的パラメータの改善又は回復を指すことを意図するものであり、これは被験体において必ずしも認識可能であるわけではないが、被験体において認識可能である場合もある。「治療する（treat）」、「治療する（treating）」、及び「治療（treatment）」なる用語はまた、疾患、障害、又は病態の退縮を生じる、その進行を防止する、又は少なくともその進行を遅らせることを指す場合もある。具体的な実施形態では、「治療する」、「治療する」、及び「治療」は、ウイルス感染又は癌を含む、免疫性の疾患、障害、又は病態などのＴＬ９活性の調節が有益になる疾患に関連する１つ以上の症状の緩和、発症若しくは発生の阻止、又は期間の短縮を指す。具体的な実施形態では、「治療する」、「治療する」、及び「治療」は、疾患、障害、又は病態の再発の防止を指す。具体的な実施形態では、「治療する」、「治療する」、及び「治療」は、疾患、障害、又は病態を有する対象の生存率の向上を指す。具体的な実施形態では、「治療する」、「治療する」、及び「治療」は、対象における疾患、障害、又は病態の消失を指す。
【００６３】
本明細書で使用するとき、「ＴＬＲ９活性の調節が有益になる疾患」は、ＴＬＲ９シグナル伝達の刺激が被験体に利益をもたらす疾患を含む。例えば、ＴＬＲ９活性の調節が有益になる疾患は、免疫性の疾患、障害、又は病態を含み得る。具体的な実施形態によれば、治療される疾患、障害、又は病態は、癌、炎症性の疾患、障害、若しくは病態、自己免疫性の疾患、障害、若しくは病態、又はウイルス感染などの病原体によって引き起こされる疾患、障害、若しくは病態である。
【００６４】
具体的な実施形態によれば、ウイルス感染は、ＲＮＡ又はＤＮＡウイルス、例えば、アデノウイルス、サイトメガロウイルス、Ａ型肝炎ウイルス（hepatitis A virus、ＨＡＶ）；ＨＢＶ、慢性ＨＢＶを含むヘパドナウイルス；黄熱病ウイルスを含むフラビウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス（hepatitis C virus、ＨＣＶ）を含むヘパシウイルス、１及び２型単純ヘルペス、帯状疱疹、ヒトヘルペスウイルス６、ヒト免疫不全ウイルス（human immunodeficiency virus、ＨＩＶ）、ヒトパピローマウイルス（human papilloma virus、ＨＰＶ）、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、麻疹、パラインフルエンザウイルス、ペスチウイルス、ポリオウイルス、ポックスウイルス、ライノウイルス、コロノウイルス、呼吸器合胞体ウイルス（respiratory syncytial virus、ＲＳＶ）；アレナウイルス、ブンヤウイルス、及びフィロウイルスを含む出血熱を引き起こす複数の科のウイルス、並びにＲＮＡ及びＤＮＡウイルスによって引き起こされるウイルス性脳炎の範囲である。
【００６５】
具体的な実施形態によれば、癌又は腫瘍は、固形腫瘍又は血液癌である。具体的な実施形態によれば、癌又は腫瘍は、癌腫、肉腫、黒色腫、リンパ腫、又は白血病である。具体的な実施形態によれば、癌又は腫瘍は、癌腫、肉腫、白血病、又はウイルスによって引き起こされる癌である。具体的な実施形態によれば、癌は、乳房、結腸、膀胱、肺、前立腺、胃、若しくは膵臓の癌腫、又はリンパ芽球性若しくは骨髄性の白血病である。
【００６６】
本明細書で使用するとき、用語「併用される」は、対象への２種以上の治療薬の投与との関連において、複数の治療薬の使用を指す。用語「併用」の使用は、治療が被験体に投与される順序もこのような投与間の時間も限定しない。例えば、第１の治療薬（例えば、本明細書に記載される組成物）を、対象への第２の治療薬の投与の前（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、又は１２週間前）、同時に、又はその後（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、又は１２週間後）に投与することができる。
【００６７】
ＯＤＮコンストラクト
ある実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮコンストラクトは、以下の式を有する：
式Ｉ：５’Ｍ１−Ｌ１−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−Ｌ２−Ｍ２  ３’、
（式中、
Ｍ１及びＭ２のそれぞれは独立して脂質部分を表し、好ましくは、当該脂質部分は、コレステロール、トコフェロール、パルミトイル基、及びステアリル基からなる群から選択される少なくとも１つの脂質部分を含み、所望により、Ｍ１及びＭ２のうちの１つは存在せず、
Ｌ１及びＬ２のそれぞれは独立してリンカーを表し、好ましくは、当該リンカーは、炭素、窒素、酸素、水素、硫黄及びリンからなる群から選択される少なくとも１０個の原子を含み、Ｌは、切断可能な結合を介して、好ましくはエステル又はアミド結合を介してＣｐＧ  ＯＤＮに共有結合しており、所望により、それぞれＭ１及びＭ２が存在しないとき、Ｌ１及びＬ２のうちの１つは存在せず、
好ましくは、ＣｐＧ  ＯＤＮは、ホスホジエステル（ｐｏ）ヌクレオチド間結合を有する少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含む）。
【００６８】
一実施形態では、本開示は、以下の式を有するＣｐＧ  ＯＤＮコンストラクトに関する：
式（ＩＩａ）：５’Ｍ−Ｌ−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’、又は
式（ＩＩｂ）：５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−Ｌ−Ｍ  ３’
（式中、
Ｍは、脂質部分を表し、好ましくは、当該脂質部分は、コレステロール、トコフェロール、パルミトイル基、及びステアリル基からなる群から選択される少なくとも１つを含み、
Ｌは、炭素、窒素、酸素、水素、硫黄及びリンからなる群から選択される少なくとも１０個の原子を含むリンカーを表し、Ｌは、切断可能な結合を介して、好ましくはエステル又はアミド結合を介してＣｐＧ  ＯＤＮに共有結合しており、
ＣｐＧ  ＯＤＮは、ｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含み、好ましくは、それぞれがｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも２つ、３つ、又は４つのＣｐＧモチーフを含む）。
【００６９】
具体的な態様によれば、リンカーＬは、炭素、窒素、酸素、水素、硫黄及びリンからなる群から選択される、５〜１００個の原子、より好ましくは２０〜８０個の原子、２０〜４０個の原子、又は３０〜６０個の原子の長さを含む。具体的な態様によれば、リンカーは、ホスホジエステル（ｐｏ）又はホスホロチオエート（ｐｓ）結合を含み、（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ（式中、ｍは１〜１５の整数、好ましくは５〜１０の整数、より好ましくは６である）を含む。
【００７０】
ある実施形態では、式（ＩＩａ）又は（ＩＩｂ）中のリンカーＬは、−（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎ−、（式中、ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５などの１〜１５の整数であり、Ｘは、独立して、ホスホジエステル（ｐｏ）又はホスホロチオエート（ｐｓ）結合であり、ｎは、１、２、３、４、又は５などの１〜５の整数である）を含む。
【００７１】
別の実施形態では、式（ＩＩａ）又は（ＩＩｂ）中のリンカーＬは、ホスホジエステル（ｐｏ）結合又はホスホロチオエート（ｐｓ）結合を介して脂質部分Ｍに結合している。
【００７２】
更に別の実施形態では、式（ＩＩａ）又は（ＩＩｂ）中のリンカーＬは、ホスホジエステル（ｐｏ）結合又はホスホルアミデイト結合、好ましくはｐｏ結合を介してＣｐＧ  ＯＤＮに結合している。
【００７３】
ある実施形態では、Ｌは、−Ｙ１−（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎ−Ｙ２−であるか、又はＬは、−Ｙ２−（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎ−Ｙ１−である
（式中、
Ｙ１は、結合又はリンカー、好ましくは、ホスホジエステル（ｐｏ）結合、ホスホロチオエート（ｐｓ）結合、又は結合を介して（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎに共有結合している、式（（ＣＨ２）２Ｏ）ｏ（式中、ｏは１〜１５である）を有するエチレングリコールであり、
Ｙ２は、エステル又はアミド結合を含む切断可能な結合であり、
各Ｘは、独立して、結合、ｐｏ結合、又はｐｓ結合であり、
ｍは、１〜１５の整数であり、
ｎは、１〜５の整数である）。
【００７４】
ある実施形態では、Ｙ２は、ｐｏ結合又はｎｐ結合である。
【００７５】
別の態様では、本開示は、以下の構造を有するＯＤＮコンストラクトに関する：
式（ＩＩＩａ）：５’Ｍ１−Ｙ１−（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎ−Ｙ２−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−Ｙ３−Ｍ２  ３’、又は
式（ＩＩＩｂ）：５’Ｍ２−Ｙ３−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−Ｙ２−（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎ−Ｙ１−Ｍ１  ３’
（式中、
Ｍ１は、脂質部分を表し、好ましくは、当該脂質部分は、コレステロール、トコフェロール、パルミトイル基、及びステアリル基からなる群から選択される少なくとも１つを含み、
Ｍ２は、脂質部分、標的指向化部分を表すか、又は存在せず、
Ｙ１は、結合又はリンカー、好ましくは、ホスホジエステル（ｐｏ）結合、ホスホロチオエート（ｐｓ）結合、又は結合を介して（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎに共有結合している、式（（ＣＨ２）２Ｏ）ｏ（式中、ｏは１〜１５である）を有するエチレングリコールであり、
Ｘは、独立して、結合、ｐｏ結合、又はｐｓ結合であり、
Ｙ２及びＹ３のそれぞれは独立して切断可能な結合であり、好ましくはエステル又はアミド結合を含み、より好ましくはｐｏ結合又はホスホルアミデイト結合を含み、最も好ましくはｐｏ結合であり、ただし、Ｍ２が存在しないとき、Ｙ３も存在せず、
ＣｐＧ  ＯＤＮは、ｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含み、好ましくは、それぞれがｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも２つ、３つ、又は４つのＣｐＧモチーフを含み、
ｍは、１〜１５の整数であり、
ｎは、１〜５の整数である）。
【００７６】
一実施形態では、本開示は、以下の式を有するＣｐＧ  ＯＤＮコンストラクトに関する：
式（ＩＶａ）：５’Ｍ−Ｙ１−（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎ−Ｙ２−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’、又は
式（ＩＶｂ）：５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−Ｙ２−（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎ−Ｙ１−Ｍ  ３’
（式中、
Ｍは、脂質部分を表し、好ましくは、当該脂質部分は、コレステロール、トコフェロール、パルミトイル基、及びステアリル基からなる群から選択される少なくとも１つを含み、
Ｙ１は、ホスホジエステル（ｐｏ）結合、ホスホロチオエート（ｐｓ）結合、又は結合を介して（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎに共有結合している結合又はリンカー、好ましくは１〜５個のエルチレングリコール部分であり、
Ｘは、独立して、結合、ホスホジエステル（ｐｏ）結合、又はホスホロチオエート（ｐｓ）結合であり、
Ｙ２は、切断可能な結合であり、好ましくはエステル又はアミド結合を含み、より好ましくはｐｏ結合又はホスホルアミデイト結合を含み、最も好ましくはｐｏ結合であり、
ＣｐＧ  ＯＤＮは、ｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含み、好ましくは、それぞれがｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも２つ、３つ、又は４つのＣｐＧモチーフを含み、
ｍは、１〜１５の整数、好ましくは６であり、
ｎは、１〜５の整数、好ましくは２であり、
所望により、式（ＩＶａ）又は（ＩＶｂ）のＣｐＧ  ＯＤＮコンストラクトは、更に、好ましくはガラクトース，Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、フコース、マンノース、シアル酸、Ｎ−アセチルノイラミン酸からなる群から選択される標的指向化部分に共有結合的にコンジュゲートする）。
【００７７】
具体的な実施形態によれば、Ｘは、独立して、ホスホジエステル（ｐｏ）結合であるか又は存在せず、Ｙは、ｐｏ結合であり、ｍは６であり、ｎは２であり、Ｍは、トコフェロール又はパルミトイル基を含む脂質部分を表す。
【００７８】
具体的な実施形態によれば、ＯＤＮコンストラクトは、以下からなる群から選択される構造を有する：
５’Ｍ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’；
５’Ｍ−ｐｓ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’；
５’Ｍ−ｐｓ（ＨＥＧ）ｐｓ（ＨＥＧ）ｐｏ−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’；
５’Ｍ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｓ（ＨＥＧ）ｐｏ−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’；
５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｍ  ３’、
５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｓ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｍ  ３’、
５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｓ（ＨＥＧ）ｐｓ−Ｍ  ３’、及び
５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｓ−Ｍ  ３’、
（式中、
Ｍは、コレステロール、トコフェロール、パルミトイル基、及びステアリル基からなる群から選択される少なくとも１つを含む脂質部分を表し、
ｐｏは、ホスホジエステル結合を表し、
ＨＥＧは、（（ＣＨ２）２Ｏ）６を表し、
ｐｓは、ホスホロチオエート結合を表し、
ＣｐＧ  ＯＤＮは、ｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含み、好ましくは、それぞれがｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも２つ、３つ、又は４つのＣｐＧモチーフを含み、
Ｍは、ｐｏ若しくはｐｓ結合を介して直接、又はｐｏ若しくはｐｓ結合を介して直接（ＨＥＧ）に結合している第２のリンカーを介して間接的に（ＨＥＧ）に共有結合している）。
【００７９】
具体的な実施形態によれば、ＯＤＮコンストラクトは、以下からなる群から選択される構造を有する：
５’Ｔｏｃｏ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’（式中、Ｔｏｃｏは、トコフェロールを表す）、
５’Ｃｈｏｌ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’（式中、Ｃｈｏｌは、コレステロールを表す）、
５’Ｐａｌｍ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’（式中、Ｐａｌｍは、パルミトイルを表す）、
５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｓ−Ｃｈｏｌ  ３’（式中、Ｃｈｏｌは、コレステロールを表す）、
５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｓ−Ｔｏｃｏ  ３’（式中、Ｔｏｃｏは、トコフェロールを表す）、
５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｓ−Ｐａｌｍ  ３’（式中、Ｐａｌｍは、パルミトイルを表す）、
（式中、
ｐｏは、ホスホジエステル結合を表し、
ＨＥＧは、（（ＣＨ２）２Ｏ）６を表し、
ｐｓは、ホスホロチオエート結合を表し、
ＣｐＧ  ＯＤＮは、ｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含み、好ましくは、それぞれがｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも２つ、３つ、又は４つのＣｐＧモチーフを含み、
トコフェロール、コレステロール、又はパルミトイル基は、ｐｏ若しくはｐｓ結合を介して直接、又はｐｏ若しくはｐｓ結合を介して直接（ＨＥＧ）に結合している第２のリンカーを介して間接的に（ＨＥＧ）に共有結合している）。
【００８０】
ある実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮは、ＴＬＲ９を活性化するのに好適な多数のＣｐＧジヌクレオチドを含有する。ある実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮは、少なくとも１つのＣｐＧジヌクレオチドを含有する。ある実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮは、少なくとも２つのＣｐＧジヌクレオチドを含有する。ある実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮは、少なくとも３つのＣｐＧジヌクレオチドを含有する。ある実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮは、少なくとも４つのＣｐＧジヌクレオチドを含有する。ある実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮは、１つのＣｐＧジヌクレオチドを含有する。ある実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮは、２つのＣｐＧジヌクレオチドを含有する。ある実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮは、３つのＣｐＧジヌクレオチドを含有する。ある実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮは、４つのＣｐＧジヌクレオチドを含有する。
【００８１】
ある実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮのＣｐＧジヌクレオチドは、ＴＬＲ９を活性化するためにＣｐＧ  ＯＤＮ内に位置する。ある実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮの第１のＣｐＧジヌクレオチドは、第２のＣｐＧジヌクレオチドから少なくとも１ヌクレオチド離れている。ある実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮの第１のＣｐＧジヌクレオチドは、第２のＣｐＧジヌクレオチドから少なくとも２ヌクレオチド離れている。ある実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮの第１のＣｐＧジヌクレオチドは、第２のＣｐＧジヌクレオチドから少なくとも３ヌクレオチド離れている。ある実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮの第１のＣｐＧジヌクレオチドは、第２のＣｐＧジヌクレオチドから少なくとも４ヌクレオチド離れている。ある実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮの第１のＣｐＧジヌクレオチドは、第２のＣｐＧジヌクレオチドから少なくとも５ヌクレオチド離れている。ある実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮの第１のＣｐＧジヌクレオチドは、第２のＣｐＧジヌクレオチドから少なくとも６ヌクレオチド離れている。ある実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮの第１のＣｐＧジヌクレオチドは、第２のＣｐＧジヌクレオチドから１ヌクレオチド離れている。ある実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮの第１のＣｐＧジヌクレオチドは、第２のＣｐＧジヌクレオチドから２ヌクレオチド離れている。ある実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮの第１のＣｐＧジヌクレオチドは、第２のＣｐＧジヌクレオチドから３ヌクレオチド離れている。ある実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮの第１のＣｐＧジヌクレオチドは、第２のＣｐＧジヌクレオチドから４ヌクレオチド離れている。ある実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮの第１のＣｐＧジヌクレオチドは、第２のＣｐＧジヌクレオチドから５ヌクレオチド離れている。ある実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮの第１のＣｐＧジヌクレオチドは、第２のＣｐＧジヌクレオチドから６ヌクレオチド離れている。
【００８２】
ある実施形態では、ＣｐＧジヌクレオチドは、ＣｐＧ  ＯＤＮの３’末端から少なくとも１ヌクレオチド離れている。ある実施形態では、ＣｐＧジヌクレオチドは、ＣｐＧ  ＯＤＮの３’末端から少なくとも２ヌクレオチド離れている。ある実施形態では、ＣｐＧジヌクレオチドは、ＣｐＧ  ＯＤＮの３’末端から少なくとも３ヌクレオチド離れている。ある実施形態では、ＣｐＧジヌクレオチドは、ＣｐＧ  ＯＤＮの３’末端から少なくとも４ヌクレオチド離れている。ある実施形態では、ＣｐＧジヌクレオチドは、ＣｐＧ  ＯＤＮの３’末端から少なくとも５ヌクレオチド離れている。ある実施形態では、ＣｐＧジヌクレオチドは、ＣｐＧ  ＯＤＮの３’末端から１ヌクレオチド離れている。ある実施形態では、ＣｐＧジヌクレオチドは、ＣｐＧ  ＯＤＮの３’末端から２ヌクレオチド離れている。ある実施形態では、ＣｐＧジヌクレオチドは、ＣｐＧ  ＯＤＮの３’末端から３ヌクレオチド離れている。ある実施形態では、ＣｐＧジヌクレオチドは、ＣｐＧ  ＯＤＮの３’末端から４ヌクレオチド離れている。ある実施形態では、ＣｐＧジヌクレオチドは、ＣｐＧ  ＯＤＮの３’末端から５ヌクレオチド離れている。
【００８３】
ある実施形態では、ＣｐＧジヌクレオチドは、ＣｐＧ  ＯＤＮの５’末端から少なくとも１ヌクレオチド離れている。ある実施形態では、ＣｐＧジヌクレオチドは、ＣｐＧ  ＯＤＮの５’末端から少なくとも２ヌクレオチド離れている。ある実施形態では、ＣｐＧジヌクレオチドは、ＣｐＧ  ＯＤＮの５’末端から少なくとも３ヌクレオチド離れている。ある実施形態では、ＣｐＧジヌクレオチドは、ＣｐＧ  ＯＤＮの５’末端から少なくとも４ヌクレオチド離れている。ある実施形態では、ＣｐＧジヌクレオチドは、ＣｐＧ  ＯＤＮの５’末端から少なくとも５ヌクレオチド離れている。ある実施形態では、ＣｐＧジヌクレオチドは、ＣｐＧ  ＯＤＮの５’末端から１ヌクレオチド離れている。ある実施形態では、ＣｐＧジヌクレオチドは、ＣｐＧ  ＯＤＮの５’末端から２ヌクレオチド離れている。ある実施形態では、ＣｐＧジヌクレオチドは、ＣｐＧ  ＯＤＮの５’末端から３ヌクレオチド離れている。ある実施形態では、ＣｐＧジヌクレオチドは、ＣｐＧ  ＯＤＮの５’末端から４ヌクレオチド離れている。ある実施形態では、ＣｐＧジヌクレオチドは、ＣｐＧ  ＯＤＮの５’末端から５ヌクレオチド離れている。
【００８４】
具体的な態様によれば、ＯＤＮコンストラクトのＣｐＧ  ＯＤＮは、ホスホロチオエート（ｐｓ）ヌクレオチド間結合を有する。具体的な態様によれば、ＯＤＮコンストラクトのＣｐＧ  ＯＤＮは、立体構造が確定しているホスホロチオエート（ｐｓ）ヌクレオチド間結合を有する。具体的な態様によれば、ＯＤＮコンストラクトのＣｐＧ  ＯＤＮにおけるＣｐＧジヌクレオチドのうちの１〜４個、好ましくは３個又は４個は、それぞれホスホジエステル（ｐｏ）ヌクレオチド間結合を有し、ＣｐＧ  ＯＤＮの残りのヌクレオチド間結合のそれぞれは、ホスホロチオエート（ｐｓ）ヌクレオチド間結合である。他の具体的な態様によれば、ＣｐＧ  ＯＤＮにおけるヌクレオチド間結合のうちの２個は、それぞれ、ホスホジエステル（ｐｏ）ヌクレオチド間結合を有し、ＣｐＧ  ＯＤＮの残りのヌクレオチド間結合のそれぞれは、ホスホロチオエート（ｐｓ）結合である。他の具体的な態様によれば、ＣｐＧ  ＯＤＮにおけるヌクレオチド間結合のうちの３個は、それぞれホスホジエステル（ｐｏ）ヌクレオチド間結合を有し、ＣｐＧ  ＯＤＮの残りのヌクレオチド間結合のそれぞれは、ホスホロチオエート（ｐｓ）結合である。他の具体的な態様によれば、ＣｐＧ  ＯＤＮにおけるヌクレオチド間結合のうちの４個は、それぞれホスホジエステル（ｐｏ）ヌクレオチド間結合を有し、ＣｐＧ  ＯＤＮの残りのヌクレオチド間結合のそれぞれは、ホスホロチオエート（ｐｓ）結合である。更に他の具体的な態様によれば、ＣｐＧ  ＯＤＮにおけるヌクレオチド間結合のうちの５個以上は、それぞれホスホジエステル（ｐｏ）ヌクレオチド間結合を有し、ＣｐＧ  ＯＤＮの残りのヌクレオチド間結合のそれぞれは、ホスホロチオエート（ｐｓ）結合である。
【００８５】
いくつかの実施形態によれば、本開示のＯＤＮコンストラクトは、以下からなる群から選択されるポリヌクレオチド配列を含む、好ましくはからなるＣｐＧ  ＯＤＮを含むＴＬＲ９アゴニストを含む：
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ  ３’（配列番号１）；
５’ＧＧＧＧＧＡＣＧＡＴＣＧＴＣＧＧＧＧＧＧ  ３’（配列番号２）；
５’ＧＧＧＧＴＣＡＡＣＧＴＴＧＡＧＧＧＧＧＧ  ３’（配列番号３）；
５’ＴＣＣＡＴＧＡＣＧＴＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴ  ３’（配列番号４）；
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ  ３’（配列番号５）；
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＡＣＧＴＡＡＣＧＡＣＧＡＣＧＴＴ  ３’（配列番号６）；及び
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴ  ３’（配列番号７）。
【００８６】
いくつかの実施形態によれば、本開示のＯＤＮコンストラクトは、配列番号１〜７のうちの１つに対して、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％若しくは少なくとも１００％、又はこのような値の間の任意の割合同一であるポリヌクレオチド配列を含む、好ましくはからなるＣｐＧ  ＯＤＮを含むＴＬＲ９アゴニストを含む。
【００８７】
具体的な態様によれば、本開示のＯＤＮコンストラクトは、以下からなる群から選択されるポリヌクレオチド配列を含む、好ましくはからなるＣｐＧ  ＯＤＮを含む：
（１）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号８）；
（２）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号９）；
（３）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１０）；
（４）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１１）；
（５）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１２）；
（６）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１３）；
（７）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１４）；
（８）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＡｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１５）；
（９）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＡｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１６）；
（１０）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＡｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＡｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１７）；
（１１）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＡｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＡｐｓＡｐｓＣｐｏＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１８）；
（１２）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＡｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＡｐｓＡｐｓＣｐｏＧｐｓＡｐｓＣｐｏＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１９）；
（１３）  ５’ＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｏＧｐｓＡｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＧｐｓＧｐｓ  ＧｐｓＧｐｓＧ  ３’（配列番号２０）；
（１４）  ５’ＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＡｐｓＡｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＡｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧ  ３’（配列番号２１）；
（１５）  ５’ＴｐｓＣｐｓＣｐｓＡｐｓＴｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＣｐｓＣｐｓＴｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号２２）；
（１６）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＧｐｓＣｐｓＧｐｓＣｐｓＧｐｓＣｐｓＧｐｓＣｐｓＣｐｓＧ  ３’（配列番号２３）；
（１７）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴ  ３’（配列番号２４）；
（１８）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴ  ３’（配列番号２５）；及び
（１９）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴ  ３’（配列番号２６）；
（式中、
ｐｏは、ホスホジエステルヌクレオチド間結合を表し、
ｐｓは、ホスホロチオエートヌクレオチド間結合を表す）。
【００８８】
いくつかの実施形態によれば、本開示のＯＤＮコンストラクトは、配列番号８〜２６のうちの１つに対して、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％若しくは約１００％、又は少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％若しくは少なくとも約１００％、又はこのような値の間の任意の割合同一であるポリヌクレオチド配列を含む、好ましくはからなるＣｐＧ  ＯＤＮを含むＴＬＲ９アゴニストを含む。
【００８９】
具体的な態様によれば、本開示のＯＤＮコンストラクトは、以下からなる群から選択される構造を含む：
（１）  ５’Ｔｏｃｏ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号２７）；
（２）  ５’Ｔｏｃｏ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号２８）；
（３）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｔｏｃｏ  ３’（配列番号２９）；
（４）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｔｏｃｏ  ３’（配列番号３０）；
（５）  ５’Ｃｈｏｌ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号３１）；
（６）  ５’Ｃｈｏｌ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号３２）；
（７）  ５’Ｃｈｏｌ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号３３）；
（８）  ５’Ｃｈｏｌ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号３４）；
（９）  ５’Ｃｈｏｌ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号３５）；
（１０）  ５’Ｃｈｏｌ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号３６）；
（１１）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｃｈｏｌ  ３’（配列番号３７）；
（１２）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｃｈｏｌ  ３’（配列番号３８）；
（１３）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｃｈｏｌ  ３’（配列番号３９）；
（１４）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｃｈｏｌ  ３’（配列番号４０）；
（１５）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｔｏｃｏ  ３’（配列番号４１）；
（１６）  ５’Ｔｏｃｏ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号４２）；
（１７）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｔｏｃｏ  ３’（配列番号４３）；
（１８）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｔｏｃｏ  ３’（配列番号４４）；
（１９）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｔｏｃｏ  ３’（配列番号４５）；
（２０）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｔｏｃｏ  ３’（配列番号４６）；
（２１）  ５’Ｔｏｃｏ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号４７）；
（２２）  ５’Ｔｏｃｏ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号４８）；
（２３）  ５’Ｔｏｃｏ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号４９）；
（２４）  ５’Ｔｏｃｏ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号５０）；
（２５）  ５’−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓ  ＴｐｓＴｐｓ−ＨＥＧｐｓ−Ｃｈｏｌ  ３’（配列番号５１）；
（２６）  ５’−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｃｈｏｌ  ３’（配列番号５２）；
（２７）  ５’−ＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＡｐｓＡｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＡｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓ−ＨＥＧｐｓ−Ｃｈｏｌ  ３’（配列番号５３）；
（２８）  ５’−ＴｐｓＣｐｓＣｐｓＡｐｓＴｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＣｐｓＣｐｓＴｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−ＨＥＧｐｓ−Ｃｈｏｌ  ３’（配列番号５４）；
（２９）  ５’−ＴｐｓＣｐｓＣｐｓＡｐｓＴｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＣｐｓＣｐｓＴｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−ＨＥＧｐｓ−Ｔｏｃｏ  ３’（配列番号５５）；
（３０）  ５’Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号５６）；
（式中、
Ｃｈｏｌは、コレステロールを表し、
Ｔｏｃｏは、トコフェロールを表し、
Ｐａｌｍｉｔｏｙｌは、パルミトイル基を表し、
ＨＥＧは、（（ＣＨ２）２Ｏ）６を表し、
ｐｏは、ホスホジエステル結合を表し、
ｐｓは、ホスホロチオエート結合を表し、
トコフェロール、コレステロール、又はパルミトイル基は、ｐｏ若しくはｐｓ結合を介して直接、又はｐｏ若しくはｐｓ結合を介して直接（ＨＥＧ）に結合している第２のリンカーを介して間接的に（ＨＥＧ）に共有結合している）。
【００９０】
ある実施形態では、ＯＤＮコンストラクトは以下の構造：
【００９１】
【化１】
2021512044.tif 000003
又はそのラセミ又は別のキラリティを有し、式中、「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ」は、ＴＬＲ９に対するアゴニスト活性を有するＣｐＧ  ＯＤＮを表す。
【００９２】
ある実施形態では、ＯＤＮコンストラクトは以下の構造：
【００９３】
【化２】
2021512044.tif 000004
又はそのラセミ又は別のキラリティを有し、式中、「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ」は、ＴＬＲ９に対するアゴニスト活性を有するＣｐＧ  ＯＤＮを表す。
【００９４】
ある実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮは、配列番号１、好ましくは配列番号８を含有する：
５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ  ３’。
【００９５】
ある実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮは、以下の構造を含む。
【００９６】
【化３】
2021512044.tif 000005
【００９７】
具体的な態様によれば、本開示のＯＤＮコンストラクトは、更に、標的指向化部分にコンジュゲートしてもよい。本明細書で使用するとき、用語「標的指向化部分」は、それがコンジュゲートしたアゴニストを、標的とされる細胞に送達するのに好適な任意の部分を指す。標的指向化部分の例としては、例えば、細胞表面受容体によって特異的に認識される、炭水化物、ペプチド、タンパク質、小分子、脂質部分、又は毒素が挙げられる。有用な炭水化物部分としては、ガラクトース，Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、フコース、マンノース、及びシアル酸（Ｎ−アセチルノイラミン酸）が挙げられるが、これらに限定されない。具体的な実施形態によれば、標的指向化部分は、対象とする特定の標的細胞型に存在する受容体に結合する。標的指向化部分は、ＯＤＮコンストラクトが必要な標的部位を標的指向化するのに役立つ。標的指向化部分が送達を改善することができる１つの方法は、受容体によって媒介されるエンドサイトーシス活性によるものである。この取り込み機構は、膜構造の陥入を介して又は送達系と細胞膜との融合によって膜受容体に包まれている領域の内部への、膜受容体に結合しているＯＤＮコンストラクトの移動を伴う。このプロセスは、受容体に対する特異的リガンドの結合後に細胞表面又は膜受容体の活性化によって開始される。ガラクトース、マンノース、マンノース−６−リン酸などの糖、トランスフェリン、アシアロ糖タンパク糖、ビタミンＢ１２、インスリン、及び上皮成長因子（ＥＧＦ）などのペプチド及びタンパク質を認識するものを含む、多くの受容体によって媒介されるエンドサイトーシス系が公知であり、研究されている。アシアロ糖タンパク糖受容体（Asialoglycoprotein receptor、ＡＳＧＰ−Ｒ）は、高能力受容体であり、これは肝細胞上に非常に多く存在する。ＡＳＧＰ−Ｒは、Ｄ−ＧａｌよりもＮ−アセチル−ガラクトシルアミン（ＧａｌＮＡｃ）に対して５０倍高い親和性を示す。ｎＭの親和性を達成するためには多価性が必要とされるが、糖間の間隔もまた重要であることが、以前の研究で示されている。Ｄ−マンノースに対する親和性が高いマンノース受容体は、別の重要な炭水化物ベースのリガンド−受容体対を表す。マンノース受容体は、マクロファージ及び場合によっては樹状細胞などの特定の細胞型で高発現する。マンノースコンジュゲート及びマンノシル化された薬物担体が、薬物分子にこれら細胞を標的とさせるために成功裡に使用されてきた。例えば、Ｂｉｅｓｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１，２８０２４−２８０３０；Ｋｉｎｚｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｃｉ．９，３７５−３８５；Ｂａｒｒａｔｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９８６）Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  ８６２，１５３−６４；Ｄｉｅｂｏｌｄ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｓｏｍａｔ．Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ２７，６５−７４を参照。実施形態によれば、標的指向化部分は脂質部分である。例えば、トコフェロールは、ビタミンＥ受容体に対する標的指向化部分として機能することができ、パルミトイル基は、ＬＤＬ受容体に対する標的指向化部分として機能することができる。
【００９８】
具体的な実施形態によれば、標的指向化部分は、対象とする特定の標的細胞型に存在する受容体に結合する。
【００９９】
本開示のＯＤＮコンストラクトは、直接又はリンカーを介して間接的に標的指向化部分にコンジュゲートされ得る。
【０１００】
合成
本開示のＯＤＮコンストラクトは、本開示を考慮して当該技術分野において公知の方法を用いて作製することができる。例えば、本開示に従って使用されるオリゴリボヌクレオチド及びオリゴリボヌクレオシドは、固相合成を用いて作製することができ、例えば、「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ」、Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、１９８４年；「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ，Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ」、Ｆ．Ｅｃｋｓｔｅｉｎ編、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、１９９１年（例えば、第１章、Ｍｏｄｅｒｎ  ｍａｃｈｉｎｅ−ａｉｄｅｄ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  ＯＤＮ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第２章、Ｏｌｉｇｏｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第４章、Ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ、第５章、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｄｉｔｈｉｏａｔｅｓ）を参照。他の特に有用な合成手順、試薬、封鎖基、及び反応条件は、Ｍａｒｔｉｎ，Ｐ．，Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ，１９９５，７８，４８６−５０４；Ｂｅａｕｃａｇｅ，Ｓ．Ｌ．ａｎｄ  Ｉｙｅｒ，Ｒ．Ｐ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９２，４８，２２２３−２３１１  ａｎｄ  Ｂｅａｕｃａｇｅ，Ｓ．Ｌ．ａｎｄ  Ｉｙｅｒ，Ｒ．Ｐ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９３，４９，６１２３−６１９４、又はこれらの参照文献に記載されている。例えば、交互にＰＯ又はＰＳ結合を有する混合骨格化合物は、米国特許第５，３７８，８２５号、同第５，３８６，０２３号、同第５，４８９，６７７号、並びに国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ９２／０４２９４号及び同第ＰＣＴ／ＵＳ９２／０４３０５号（それぞれ国際公開第９２／２０８２２号及び同第９２／２０８２３号として公開）に記載のとおり調製することができる。
【０１０１】
本開示のＯＤＮコンストラクトを作製するために使用することができる合成スキームの例を図１７に示し、実施例１で説明する。
【０１０２】
医薬組成物及び治療方法
具体的な態様によれば、本開示は、ＴＬＲ９の活性を誘導するＯＤＮコンストラクトに関する。ＴＬＲ９に対してアゴニスト活性を有するＯＤＮコンストラクトのＴＬＲ依存性免疫応答に対する効果は、アゴニストと接触した免疫細胞（例えば、末梢血単核球（Peripheral Blood Mononuclear Cells、ＰＢＭＣ）、大部分はリンパ球及び単球からなる）又はレポーター細胞（例えば、ＴＬＲ９のレポーターコンストラクトを発現するＨＥＫ２９３細胞）の応答を測定することによって、インビトロで判定することができる。また、ＴＬＲ９に対してアゴニスト活性を有するＯＤＮコンストラクトのＴＬＲ依存性免疫応答に対する効果は、例えば、アゴニストを注射した後の動物におけるサイトカイン誘導を測定することによって、インビボで判定することもできる。例示的な方法は、本明細書に、例えば、以下の実施例に記載される。
【０１０３】
本開示のＯＤＮコンストラクトは、ウイルス感染又は癌などの免疫性の疾患、障害、又は病態を治療するために使用することができる。
【０１０４】
したがって、別の一般的な態様では、本開示は、本開示のＯＤＮコンストラクトと、医薬的に許容される担体とを含む医薬組成物に関する。
【０１０５】
別の一般的な態様では、本発明は、本開示のＯＤＮコンストラクトと医薬的に許容される担体とを含む医薬組成物を被験体に投与することを含む、それを必要としている被験体における免疫応答を刺激する方法に関する。
【０１０６】
別の一般的な態様では、本発明は、本開示の医薬組成物を被験体に投与することを含む、それを必要としている被験体における疾患、障害、又は病態、例えば、ウイルス感染又は癌などの免疫性の疾患、障害、又は病態の症状を治療又は低減する方法に関する。
【０１０７】
本開示の実施形態によれば、医薬組成物は、治療有効量のＯＤＮコンストラクトを含む。ＯＤＮコンストラクトに関して本明細書で使用するとき、治療有効量は、それを必要としている被験体における免疫応答を刺激するＯＤＮコンストラクトの量を意味する。また、ＯＤＮコンストラクトに関して本明細書で使用するとき、治療有効量は、ウイルス感染又は癌などの免疫性の疾患、障害、又は病態の治療をもたらす、ウイルス感染又は癌などの免疫性の疾患、疾患、又は病態の進行を阻止又は遅延させる、ウイルス感染又は癌などの免疫性の疾患、疾患、又は病態に関連する症状を低減又は完全に緩和する、ＯＤＮコンストラクトの量を意味する。
【０１０８】
具体的な実施形態によれば、治療有効量は、以下の効果のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、又はそれ以上を達成するのに十分な治療の量を指す：（ｉ）治療される疾患、障害若しくは病態又はそれに関連する症状の重症度を低下又は改善すること、（ｉｉ）治療される疾患、障害若しくは病態、又はそれに関連する症状の期間を短縮すること、（ｉｉｉ）治療される疾患、障害若しくは病態、又はそれに関連する症状の進行を防止すること、（ｉｖ）治療される疾患、障害若しくは状態、又はそれに関連する症状の退縮を生じさせること、（ｖ）治療される疾患、障害又は病態、又はそれに関連する症状の進展又は発症を予防すること、（ｖｉ）治療される疾患、障害又は病態、又はそれに関連する症状の再発を防止すること、（ｖｉｉ）治療される疾患、障害、若しくは状態、又はそれに関連する症状を有する対象の入院を減少させること、（ｖｉｉｉ）治療される疾患、障害若しくは状態、又はそれに関連する症状を有する対象の入院期間を短縮させること、（ｉｘ）治療される疾患、障害又は病態、又はそれに関連する症状を有する対象の生存率を高めること、（ｘ）被験体における治療される疾患、障害若しくは病態、又はそれに関連する症状を阻害又は低減すること、及び／又は（ｘｉ）別の治療法の予防又は治療の効果を強化又は改善すること。
【０１０９】
具体的な実施形態によれば、治療される疾患、障害、又は病態は、免疫性の疾患、疾患、又は病態である。具体的な実施形態によれば、治療される疾患、障害、又は病態は、癌、炎症性の疾患、障害、若しくは病態、自己免疫性の疾患、障害、若しくは病態、又はウイルス感染などの病原体によって引き起こされる疾患、障害、若しくは病態である。具体的な実施形態によれば、癌又は腫瘍は、ウイルスによって引き起こされる癌、癌腫、肉腫、又は白血病である。具体的な実施形態によれば、癌は、乳房、結腸、膀胱、肺、前立腺、胃、若しくは膵臓の癌腫、又はリンパ芽球性若しくは骨髄性の白血病である。具体的な実施形態によれば、ウイルス感染は、ＲＮＡ又はＤＮＡウイルス、例えば、アデノウイルス、サイトメガロウイルス、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）；ＨＢＶ、慢性ＨＢＶを含むヘパドナウイルス；黄熱病ウイルスを含むフラビウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）を含むヘパシウイルス、１及び２型単純ヘルペス、帯状疱疹、ヒトヘルペスウイルス６、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、麻疹、パラインフルエンザウイルス、ペスチウイルス、ポリオウイルス、ポックスウイルス、ライノウイルス、コロノウイルス、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）；アレナウイルス、ブンヤウイルス、及びフィロウイルスを含む出血熱を引き起こす複数の科のウイルス、並びにＲＮＡ及びＤＮＡウイルスによって引き起こされるウイルス性脳炎の範囲である。より具体的な実施形態によれば、治療される疾患は、ＨＢＶ感染又は慢性ＨＢＶ感染である。
【０１１０】
慢性ＨＢＶは、好ましくは、６ヶ月間超にわたって被験体において検出可能なＨＢＶが存在することを特徴とする。より好ましくは、本明細書に言及される慢性ＨＢＶ感染は、疾病対策予防センター（Centers for Disease Control and Prevention、ＣＤＣ）によって公開されている定義に従い、それによれば、慢性ＨＢＶ感染は、以下の検査所見基準によって特徴付けられる：（ｉ）Ｂ型肝炎コア抗原に対するＩｇＭ抗体（ＩｇＭ抗ＨＢｃ）について陰性であり、Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、Ｂ型肝炎ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）、若しくはＢ型肝炎ウイルスＤＮＡについての核酸試験について陽性であること、あるいは（ｉｉ）ＨＢｓＡｇ若しくはＨＢＶ  ＤＮＡについての核酸試験について陽性である、又は少なくとも６ヶ月間の間隔をあけて２回ＨＢｅＡｇについて陽性であること。
【０１１１】
具体的な実施形態によれば、治療有効量は、慢性ＨＢＶ感染を治療するのに十分な治療薬の量を指す。したがって、治療有効量は、以下の効果のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、又はそれ以上を達成するのに十分な治療薬の量を指す：（ｉ）ＨＢＶ感染又はそれに関連する症状の重症度を低下又は改善すること、（ｉｉ）ＨＢＶ感染又はそれに関連する症状の持続時間を短縮すること、（ｉｉｉ）ＨＢＶ感染又はそれに関連する症状の進行を防止すること、（ｉｖ）ＨＢＶ感染又はそれに関連する症状を後退させること、（ｖ）ＨＢＶ感染又はそれに関連する症状の発症又は発生を防止すること、（ｖｉ）ＨＢＶ感染又はそれに関連する症状の再発を防止すること、（ｖｉｉ）ＨＢＶ感染を有する被験体の入院を低減すること、（ｖｉｉｉ）ＨＢＶ感染を有する被験体の入院期間を短縮すること、（ｉｘ）ＨＢＶ感染を有する被験体の生存率を増加させること、（ｘ）被験体におけるＨＢＶ感染を排除すること、（ｘｉ）被験体におけるＨＢＶの複製を阻害又は軽減すること、及び／又は（ｘｉｉ）別の治療法の予防又は治療の効果を強化又は改善すること。
【０１１２】
具体的な実施形態によれば、治療有効量は、以下の効果のうちの１つ、２つ、３つ、又は４つを達成するのに十分な治療薬の量を指す：（ｉ）被験体におけるＢ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）の量を１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又はそれ以上減少させること、（ｉｉ）被験体におけるＢ型肝炎ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）の量を１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又はそれ以上減少させること、（ｉｉｉ）被験体におけるＢ型肝炎ウイルスＤＮＡの量を１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又はそれ以上減少させること、及び／又は（ｉｖ）被験体における抗ＨＢｓＡｇ抗体の量を１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又はそれ以上減少させること。
【０１１３】
具体的な実施形態によれば、治療有効量は、癌を治療するのに十分な治療薬の量を指す。したがって、治療有効量は、以下の効果のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、又はそれ以上を達成するのに十分な治療薬の量を指す：（ｉ）癌又はそれに関連する症状の重症度を低下又は改善すること、（ｉｉ）癌又はそれに関連する症状の持続時間を短縮すること、（ｉｉｉ）癌又はそれに関連する症状の進行を防止すること、（ｉｖ）癌又はそれに関連する症状を後退させること、（ｖ）癌又はそれに関連する症状の発症又は発生を防止すること、（ｖｉ）癌又はそれに関連する症状の再発を防止すること、（ｖｉｉ）癌を有する被験体の入院を低減すること、（ｖｉｉｉ）癌を有する被験体の入院期間を短縮すること、（ｉｘ）癌を有する被験体の生存率を増加させること、（ｘ）被験体における癌を排除すること、及び／又は（ｘｉ）別の治療法の予防又は治療の効果を強化又は改善すること。
【０１１４】
治療有効量又は投与量は、投与手段、標的部位、被験体の生理学的状態（例えば、年齢、体重、健康状態を含む）、被験体がヒトであるか動物であるか、投与される他の医薬、及び治療が予防的なものであるか治療的なものであるか、などの様々な要因によって変化し得る。治療用量は、安全性及び効能を最適化するために最適に漸増される。
【０１１５】
本開示のＯＤＮコンストラクトを治療的に使用するための投与様式は、剤を宿主に送達する任意の好適な経路であってもよい。例えば、本明細書に記載する組成物は、非経口的投与、例えば皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻孔内、若しくは頭蓋内投与に好適であるように製剤化することができ、又は、脳若しくは脊椎の脳脊髄液内に投与することができる。
【０１１６】
具体的な実施形態によれば、本明細書に記載される組成物は、対象への想定される投与経路に適するように製剤化される。例えば、本明細書に記載の組成物は、静脈内、皮下、腫瘍内、又は筋肉内への投与に適するように製剤化することができる。好ましい実施形態によれば、本明細書に記載の組成物は、静脈内、皮下、又は腫瘍内への投与に適するように製剤化される。
【０１１７】
治療は、単回投与スケジュールで行ってもよく、又は複数回投与スケジュールで行ってもよく、当該複数回投与スケジュールでは、一次治療過程が、１〜１０回の別個の投与と、応答を維持及び／又は補強するのに必要な後続の時間間隔、例えば２回目の投与については１〜４ヶ月間で投与される他の投与とであってよく、また必要に応じて、数ヶ月間後に次の投与を行う。好適な治療スケジュールの例としては、（ｉ）０、１ヶ月及び６ヶ月、（ｉｉ）０、７日及び１ヶ月、（ｉｉｉ）０及び１ヶ月、（ｉｖ）０及び６ヶ月、又は疾患の症状を軽減するか若しくは疾患の重症度を低下させることが期待される、所望の応答を惹起するのに十分な他のスケジュールが挙げられる。
【０１１８】
具体的な実施形態によれば、免疫性の疾患、障害、若しくは病態、慢性ＨＢＶなどのウイルス性疾患、又は癌の治療に使用される組成物を、関連する疾患、障害、又は病態の治療に有効な他の剤と組み合わせて使用することができる。このような剤の例としては、ＣＡＭ、ＤＡＡ、他のＴＬＲ、ＡＳＯ／ｓｉＲＮＡ、チェックポイント阻害剤、他の化学療法剤、ＣＡＲ−Ｔが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１９】
別の一般的な態様では、本開示は、ＯＤＮコンストラクトを医薬的に許容される担体と組み合わせて医薬組成物を得ることを含む、本開示のＯＤＮコンストラクトを含む医薬組成物を作製する方法に関する。
【０１２０】
別の一般的な態様では、本発明は、本開示のＯＤＮコンストラクトを含む医薬組成物を被験体に投与することを含む、それを必要としている被験体における慢性ＨＢＶ感染を治療する方法に関する。
【０１２１】
別の一般的な態様では、本発明は、本開示のＯＤＮコンストラクトを含む医薬組成物を被験体に投与することを含む、それを必要としている被験体における腫瘍、好ましくは癌を治療する方法に関する。
【０１２２】
本出願全体で引用した全ての引用参考文献（論文参考文献、交付済み特許、公開された特許出願、及び同時係属の特許出願を含む）の内容は、参照により本明細書に明白に組み込まれる。
【０１２３】
実施形態
また、本開示は、以下の非限定的な実施形態を提供する。
【０１２４】
実施形態１は、式Ｉの式を有するＯＤＮコンストラクトである：
５’Ｍ１−Ｌ１−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−Ｌ２−Ｍ２  ３’、
（式中、
Ｍ１及びＭ２のそれぞれは独立して脂質部分を表し、好ましくは、当該脂質部分は、コレステロール、トコフェロール、パルミトイル基、及びステアリル基からなる群から選択される少なくとも１つを含み、所望により、Ｍ１及びＭ２のうちの１つは存在せず、
Ｌ１及びＬ２のそれぞれは独立してリンカーを表し、好ましくは、当該リンカーは、炭素、窒素、酸素、水素、硫黄及びリンからなる群から選択される少なくとも１０個の原子を含み、Ｌは、切断可能な結合を介して、好ましくはエステル又はアミド結合を介してＣｐＧ  ＯＤＮに共有結合しており、所望により、それぞれＭ１及びＭ２が存在しないとき、Ｌ１及びＬ２のうちの１つは存在せず、
好ましくは、ＣｐＧ  ＯＤＮは、ホスホジエステル（ｐｏ）ヌクレオチド間結合を有する少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含み、
所望により、式（Ｉ）のＣｐＧ  ＯＤＮコンストラクトは、更に、好ましくはガラクトース，Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、フコース、マンノース、シアル酸、Ｎ−アセチルノイラミン酸からなる群から選択される標的指向化部分に共有結合的にコンジュゲートする）。
【０１２５】
実施形態２は、以下の式を有するＣｐＧ  ＯＤＮコンストラクトである：
式（ＩＩａ）：５’Ｍ−Ｌ−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’、又は
式（ＩＩｂ）：５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−Ｌ−Ｍ  ３’
（式中、
Ｍは、脂質部分を表し、好ましくは、当該脂質部分は、コレステロール、トコフェロール、パルミトイル基、及びステアリル基からなる群から選択される少なくとも１つを含み、
Ｌは、炭素、窒素、酸素、水素、硫黄及びリンからなる群から選択される少なくとも１個の原子を含むリンカーを表し、Ｌは、切断可能な結合を介して、好ましくはエステル又はアミド結合を介してＣｐＧ  ＯＤＮに共有結合しており、
ＣｐＧ  ＯＤＮは、ｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含み、好ましくは、それぞれがｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも２つ、３つ、又は４つのＣｐＧモチーフを含み、
所望により、式（ＩＩａ）又は（ＩＩｂ）のＣｐＧ  ＯＤＮコンストラクトは、更に、好ましくはガラクトース，Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、フコース、マンノース、シアル酸、Ｎ−アセチルノイラミン酸からなる群から選択される標的指向化部分に共有結合的にコンジュゲートする）。
【０１２６】
実施形態２ａは、当該リンカーが、炭素、窒素、酸素、水素、硫黄、及びリンからなる群から選択される１０〜１００個の原子を含む、実施形態１又は２に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１２７】
実施形態２ｂは、当該リンカーが、炭素、窒素、酸素、水素、硫黄、及びリンからなる群から選択される２０〜１００個の原子を含む、実施形態２ａに記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１２８】
実施形態２ｃは、当該リンカーが、炭素、窒素、酸素、水素、硫黄、及びリンからなる群から選択される３０〜１００個の原子を含む、実施形態２ａに記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１２９】
実施形態２ｄは、当該リンカーが、炭素、窒素、酸素、水素、硫黄、及びリンからなる群から選択される４０〜１００個の原子を含む、実施形態２ａに記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１３０】
実施形態２ｅは、当該リンカーが、炭素、窒素、酸素、水素、硫黄、及びリンからなる群から選択される５０〜１００個の原子を含む、実施形態２ａに記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１３１】
実施形態２ｆは、当該リンカーが、炭素、窒素、酸素、水素、硫黄、及びリンからなる群から選択される６０〜１００個の原子を含む、実施形態２ａに記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１３２】
実施形態２ｇは、当該リンカーが、炭素、窒素、酸素、水素、硫黄、及びリンからなる群から選択される７０〜１００個の原子を含む、実施形態２ａに記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１３３】
実施形態２ｈは、当該リンカーが、炭素、窒素、酸素、水素、硫黄、及びリンからなる群から選択される８０〜１００個の原子を含む、実施形態２ａに記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１３４】
実施形態３は、当該リンカーが、（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ（式中、ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５などの１〜１５の整数である）を含む、実施形態１又は２に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１３５】
実施形態４は、当該リンカーが、（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎ（式中、ｎは、１、１２、３、４、又は５などの１〜５の整数であり、Ｘは、独立して、ホスホジエステル（ｐｏ）又はホスホロチオエート（ｐｓ）結合である）を含む、実施形態３に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１３６】
実施形態４ａは、当該リンカーが、（（（ＣＨ２）２Ｏ）６−Ｘ）ｎを含む、実施形態４に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１３７】
実施形態４ｂは、当該リンカーが、（（ＣＨ２）２Ｏ）６−ｐｏを含む、実施形態４ａに記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１３８】
実施形態４ｃは、当該リンカーが、（（ＣＨ２）２Ｏ）６−ｐｏ−（（ＣＨ２）２Ｏ）６−ｐｏを含む、実施形態４ａに記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１３９】
実施形態４ｄは、当該リンカーが、（（ＣＨ２）２Ｏ）６−ｐｓ−（（ＣＨ２）２Ｏ）６−ｐｏを含む、実施形態４ａに記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１４０】
実施形態５は、以下の構造を有するＣｐＧ  ＯＤＮコンストラクトである：
式（ＩＩＩａ）：５’Ｍ１−Ｙ１−（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎ−Ｙ２−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−Ｙ３−Ｍ２  ３’、又は
式（ＩＩＩｂ）：５’Ｍ２−Ｙ３−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−Ｙ２−（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎ−Ｙ１−Ｍ１  ３’
（式中、
Ｍ１は、脂質部分を表し、好ましくは、当該脂質部分は、コレステロール、トコフェロール、パルミトイル基、及びステアリル基からなる群から選択される少なくとも１つを含み、
Ｍ２は、脂質部分、標的指向化部分を表すか、又は存在せず、
Ｙ１は、結合又はリンカー、好ましくは、ホスホジエステル（ｐｏ）結合、ホスホロチオエート（ｐｓ）結合、又は結合を介して（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎに共有結合している、式（（ＣＨ２）２Ｏ）ｏ（式中、ｏは１〜１５である）を有するエチレングリコールであり、
Ｘは、独立して、結合、ｐｏ結合、又はｐｓ結合であり、
Ｙ２及びＹ３のそれぞれは独立して切断可能な結合であり、好ましくはエステル又はアミド結合を含み、より好ましくはｐｏ結合又はホスホルアミデイト結合を含み、最も好ましくはｐｏ結合であり、ただし、Ｍ２が存在しないとき、Ｙ３も存在せず、
ＣｐＧ  ＯＤＮは、ｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含み、好ましくは、それぞれがｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも２つ、３つ、又は４つのＣｐＧモチーフを含み、
ｍは、１〜１５の整数であり、
ｎは、１〜５の整数である）。
【０１４１】
実施形態６は、Ｍ２が標的指向化である、実施形態５に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１４２】
実施形態６ａは、Ｍ２が、ガラクトース，Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、フコース、マンノース、シアル酸、Ｎ−アセチルノイラミン酸からなる群から選択される標的指向化である、実施形態６に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１４３】
実施形態６ｂは、Ｍ２及びＹ３が存在しない、実施形態５に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１４４】
実施形態７は、以下の式を有するＣｐＧ  ＯＤＮコンストラクトである：
式（ＩＶａ）：５’Ｍ−Ｙ１−（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎ−Ｙ２−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’、又は
式（ＩＶｂ）：５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−Ｙ２−（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎ−Ｙ１−Ｍ  ３’
（式中、
Ｍは、脂質部分を表し、好ましくは、当該脂質部分は、コレステロール、トコフェロール、パルミトイル基、及びステアリル基からなる群から選択される少なくとも１つを含み、
Ｙ１は、結合又はリンカー、好ましくは、ホスホジエステル（ｐｏ）結合、ホスホロチオエート（ｐｓ）結合、又は結合を介して（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎに共有結合している、式（（ＣＨ２）２Ｏ）ｏ（式中、ｏは１〜１５である）を有するエチレングリコールであり、
Ｘは、独立して、結合、ホスホジエステル（ｐｏ）結合、又はホスホロチオエート（ｐｓ）結合であり、
Ｙ２は、切断可能な結合であり、好ましくはエステル又はアミド結合を含み、より好ましくはｐｏ結合又はホスホルアミデイト結合を含み、最も好ましくはｐｏ結合であり、
ＣｐＧ  ＯＤＮは、ｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含み、好ましくは、それぞれがｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも２つ、３つ、又は４つのＣｐＧモチーフを含み、
ｍは、１〜１５の整数、好ましくは６であり、
ｎは、１〜５の整数、好ましくは２であり、
所望により、式（ＩＶａ）又は（ＩＶｂ）のＣｐＧ  ＯＤＮコンストラクトは、更に、好ましくはガラクトース，Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、フコース、マンノース、シアル酸、Ｎ−アセチルノイラミン酸からなる群から選択される標的指向化部分に共有結合的にコンジュゲートする）。
【０１４５】
実施形態８は、Ｙ２がエステル結合を含む、実施形態５〜７のいずれか１つに記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１４６】
実施形態８ａは、Ｙ２がホスホジエステル（ｐｏ）結合である、実施形態８に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１４７】
実施形態８ｂは、Ｙ２がアミド結合を含む、実施形態５〜７のいずれか１つに記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１４８】
実施形態８ｃは、Ｙ２がホスホルアミデイト結合である、実施形態８ｂに記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１４９】
実施形態９は、Ｙ１が、結合を介して（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎに共有結合している式（（ＣＨ２）２Ｏ）ｏ（式中、ｏは１〜１５である）を有するエチレングリコールを含む、実施形態５〜８ｃのいずれか１つに記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１５０】
実施形態９ａは、Ｙ１が、ｐｏ結合を介して（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎに共有結合している式（（ＣＨ２）２Ｏ）ｏ（式中、ｏは１〜１５である）を有するエチレングリコールを含む、実施形態９に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１５１】
実施形態９ｂは、Ｙ１が、ｐｓ結合を介して（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎに共有結合している式（（ＣＨ２）２Ｏ）ｏ（式中、ｏは１〜１５である）を有するエチレングリコールを含む、実施形態９に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１５２】
実施形態１０は、ｍが１〜１５の整数である、実施形態４〜９ｂのいずれか１つに記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１５３】
実施形態１０ａは、ｍが１である、実施形態１０に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１５４】
実施形態１０ｂは、ｍが２である、実施形態１０に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１５５】
実施形態１０ｃは、ｍが３である、実施形態１０に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１５６】
実施形態１０ｄは、ｍが４である、実施形態１０に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１５７】
実施形態１０ｅは、ｍが５である、実施形態１０に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１５８】
実施形態１０ｆは、ｍが６である、実施形態１０に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１５９】
実施形態１０ｇは、ｍが７である、実施形態１０に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１６０】
実施形態１０ｈは、ｍが８である、実施形態１０に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１６１】
実施形態１０ｉは、ｍが９である、実施形態１０に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１６２】
実施形態１０ｊは、ｍが１０である、実施形態１０に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１６３】
実施形態１０ｋは、ｍが１１である、実施形態１０に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１６４】
実施形態１０ｌは、ｍが１２である、実施形態１０に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１６５】
実施形態１０ｍは、ｍが１１である、実施形態１０に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１６６】
実施形態１０ｎは、ｍが１４である、実施形態１０に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１６７】
実施形態１０ｏは、ｍが１５である、実施形態１０に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１６８】
実施形態１１は、ｎが１〜５の整数である、実施形態４〜１０ｏのいずれか１つに記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１６９】
実施形態１１ａは、ｎが１である、実施形態１１に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１７０】
実施形態１１ｂは、ｎが２である、実施形態１１のＯＤＮコンストラクトである。
【０１７１】
実施形態１１ｃは、ｎが３である、実施形態１１のＯＤＮコンストラクトである。
【０１７２】
実施形態１１ｄは、ｎが４である、実施形態１１に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１７３】
実施形態１１ｅは、ｎが５である、実施形態１１に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１７４】
実施形態１２は、ｍが６であり、ｎが２である、実施形態４〜１０及び１１のいずれか１つに記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１７５】
実施形態１３は、以下からなる群から選択される構造を有するＯＤＮコンストラクトである：
５’Ｍ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’；
５’Ｍ−ｐｓ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’；
５’Ｍ−ｐｓ（ＨＥＧ）ｐｓ（ＨＥＧ）ｐｏ−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’；
５’Ｍ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｓ（ＨＥＧ）ｐｏ−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’；
５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｍ  ３’、
５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｓ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｍ  ３’、
５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｓ（ＨＥＧ）ｐｓ−Ｍ  ３’、及び
５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｓ−Ｍ  ３’、
（式中、
Ｍは、コレステロール、トコフェロール、パルミトイル基、及びステアリル基からなる群から選択される少なくとも１つを含む脂質部分を表し、
ｐｏは、ホスホジエステル結合を表し、
ＨＥＧは、（（ＣＨ２）２Ｏ）６を表し、
ｐｓは、ホスホロチオエート結合を表し、
ＣｐＧ  ＯＤＮは、ｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含み、好ましくは、それぞれがｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも２つ、３つ、又は４つのＣｐＧモチーフを含み、
Ｍは、ｐｏ若しくはｐｓ結合を介して直接、又はｐｏ若しくはｐｓ結合を介して直接（ＨＥＧ）に結合している第２のリンカーを介して間接的に（ＨＥＧ）に共有結合している）。
【０１７６】
実施形態１４は、当該脂質部分がコレステロールである、実施形態１〜１３のいずれか１つに記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１７７】
実施形態１４ａは、当該脂質部分がトコフェロールである、実施形態１〜１３のいずれか１つに記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１７８】
実施形態１４ｂは、当該脂質部分がパルミトイル基である、実施形態１〜１３のいずれか１つに記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１７９】
実施形態１４ｃは、当該脂質部分がステアリル基である、実施形態１〜１３のいずれか１つに記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１８０】
実施形態１５は、以下からなる群から選択される構造を有するＯＤＮコンストラクトである：
５’Ｔｏｃｏ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’（式中、Ｔｏｃｏは、トコフェロールを表す）、
５’Ｃｈｏｌ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’（式中、Ｃｈｏｌは、コレステロールを表す）、
５’Ｐａｌｍ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’（式中、Ｐａｌｍは、パルミトイルを表す）、
５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｓ−Ｃｈｏｌ  ３’（式中、Ｃｈｏｌは、コレステロールを表す）、
５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｓ−Ｔｏｃｏ  ３’（式中、Ｔｏｃｏは、トコフェロールを表す）、
５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｓ−Ｐａｌｍ  ３’（式中、Ｐａｌｍは、パルミトイルを表す）、
（式中、
ｐｏは、ホスホジエステル結合を表し、
ＨＥＧは、（（ＣＨ２）２Ｏ）６を表し、
ｐｓは、ホスホロチオエート結合を表し、
ＣｐＧ  ＯＤＮは、ｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含み、好ましくは、それぞれがｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも２つ、３つ、又は４つのＣｐＧモチーフを含み、
トコフェロール、コレステロール、又はパルミトイル基は、ｐｏ若しくはｐｓ結合を介して直接、又はｐｏ若しくはｐｓ結合を介して直接（ＨＥＧ）に結合している第２のリンカーを介して間接的に（ＨＥＧ）に共有結合している）。
【０１８１】
実施形態１５ａは、当該トコフェロール、当該コレステロール、又は当該パルミトイル基が、当該第２のリンカーと共有結合し、当該第２のリンカーが、当該ｐｏ又はｐｓ結合を介して直接当該（ＨＥＧ）に共有結合している、実施形態１５に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１８２】
実施形態１６は、以下の構造を有するＯＤＮコンストラクト：
【０１８３】
【化４】
2021512044.tif 000006
又はそのラセミ若しくは代替のキラリティであって、「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ」が、ｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含み、好ましくは、それぞれが当該ｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも２つ、３つ、又は４つのＣｐＧモチーフを含むＣｐＧ  ＯＤＮを表し、所望により、当該ＯＤＮコンストラクトが、更に、直接又はリンカーを介して標的指向化部分にコンジュゲートされたＯＤＮコンストラクトである。
【０１８４】
実施形態１６ａは、以下の構造を有するＯＤＮコンストラクト：
【０１８５】
【化５】
2021512044.tif 000007
又はそのラセミ若しくは代替のキラリティであって、「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ」が、ｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含み、好ましくは、それぞれが当該ｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも２つ、３つ、又は４つのＣｐＧモチーフを含むＣｐＧ  ＯＤＮを表し、所望により、当該ＯＤＮコンストラクトが、更に、直接又はリンカーを介して標的指向化部分にコンジュゲートされたＯＤＮコンストラクトである。
【０１８６】
実施形態１６ｂは、以下の構造を有するＯＤＮコンストラクト：
【０１８７】
【化６】
2021512044.tif 000008
又はそのラセミ若しくは代替のキラリティである。
【０１８８】
実施形態１６ｃは、以下の構造を有するＯＤＮコンストラクトである。
【０１８９】
【化７】
2021512044.tif 000009
【０１９０】
実施形態１６ｄは、以下の構造を有するＯＤＮコンストラクト：
【０１９１】
【化８】
2021512044.tif 000010
又はそのラセミ若しくは代替のキラリティである。
【０１９２】
実施形態１７は、当該ＣｐＧ  ＯＤＮが、ホスホロチオエート（ｐｓ）ヌクレオチド間結合を有する、実施形態１〜１６のいずれか１つに記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１９３】
実施形態１８は、当該ＣｐＧ  ＯＤＮが、立体構造が確定しているホスホロチオエート（ｐｓ）ヌクレオチド間結合を有する、実施形態１〜１７のいずれか１つに記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１９４】
実施形態１９は、当該ＣｐＧ  ＯＤＮにおける当該ＣｐＧジヌクレオチドのうちの１〜４個が、それぞれホスホジエステル（ｐｏ）ヌクレオチド間結合を有する、実施形態１〜１８のいずれか１つに記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１９５】
実施形態１９ａは、当該ＣｐＧ  ＯＤＮが、それぞれがｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも２つのＣｐＧモチーフを含む、実施形態１９に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１９６】
実施形態１９ｂは、当該ＣｐＧ  ＯＤＮが、それぞれがｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも３つのＣｐＧモチーフを含む、実施形態１９に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１９７】
実施形態１９ｃは、当該ＣｐＧ  ＯＤＮが、それぞれがｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも４つのＣｐＧモチーフを含む、実施形態１９に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１９８】
実施形態２０は、当該ＣｐＧ  ＯＤＮの残りのヌクレオチド間結合のそれぞれが、ホスホロチオエート（ｐｓ）ヌクレオチド間結合である、実施形態１９〜１９ｃのいずれか１つに記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０１９９】
実施形態２１は、当該ＣｐＧ  ＯＤＮが、以下からなる群から選択されるポリヌクレオチド配列を含む、好ましくはからなる、実施形態１〜２０のいずれか１つに記載のＯＤＮコンストラクトである：
（１）  ５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ  ３’（配列番号１）；
（２）  ５’ＧＧＧＧＧＡＣＧＡＴＣＧＴＣＧＧＧＧＧＧ  ３’（配列番号２）；
（３）  ５’ＧＧＧＧＴＣＡＡＣＧＴＴＧＡＧＧＧＧＧＧ  ３’（配列番号３）；
（４）  ５’ＴＣＣＡＴＧＡＣＧＴＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴ  ３’（配列番号４）；
（５）  ５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ  ３’（配列番号５）；
（６）  ５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＡＣＧＴＡＡＣＧＡＣＧＡＣＧＴＴ  ３’（配列番号６）；及び
（７）  ５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴ  ３’（配列番号７）。
【０２００】
実施形態２１ａは、当該ＣｐＧ  ＯＤＮが、配列番号１〜７のうちの１つに対して、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％若しくは少なくとも１００％同一であるポリヌクレオチド配列を含む、好ましくはからなる、実施形態２１に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０２０１】
実施形態２２は、当該ＣｐＧ  ＯＤＮが、以下からなる群から選択されるポリヌクレオチド配列を含む、好ましくはからなる、実施形態１〜２１のいずれか１つに記載のＯＤＮコンストラクトである：
（１）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号８）；
（２）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号９）；
（３）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１０）；
（４）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１１）；
（５）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１２）；
（６）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１３）；
（７）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１４）；
（８）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＡｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１５）；
（９）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＡｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１６）；
（１０）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＡｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＡｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１７）；
（１１）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＡｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＡｐｓＡｐｓＣｐｏＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１８）；
（１２）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＡｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＡｐｓＡｐｓＣｐｏＧｐｓＡｐｓＣｐｏＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１９）；
（１３）  ５’ＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｏＧｐｓＡｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＧｐｓＧｐｓ  ＧｐｓＧｐｓＧ  ３’（配列番号２０）；
（１４）  ５’ＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＡｐｓＡｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＡｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧ  ３’（配列番号２１）；
（１５）  ５’ＴｐｓＣｐｓＣｐｓＡｐｓＴｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＣｐｓＣｐｓＴｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号２２）；
（１６）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＧｐｓＣｐｓＧｐｓＣｐｓＧｐｓＣｐｓＧｐｓＣｐｓＣｐｓＧ  ３’（配列番号２３）；
（１７）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴ  ３’（配列番号２４）；
（１８）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴ  ３’（配列番号２５）；及び
（１９）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴ  ３’（配列番号２６）；
（式中、
ｐｏは、ホスホジエステルヌクレオチド間結合を表し、
ｐｓは、ホスホロチオエートヌクレオチド間結合を表す）。
【０２０２】
実施形態２２ａは、当該ＣｐＧ  ＯＤＮが、配列番号８〜２６のうちの１つに対して、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％若しくは少なくとも１００％同一であるポリヌクレオチド配列を含む、好ましくはからなる、実施形態２２に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０２０３】
実施形態２３は、以下の構造を有するＯＤＮコンストラクトである：
（１）  ５’Ｔｏｃｏ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号２７）；
（２）  ５’Ｔｏｃｏ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号２８）；
（３）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｔｏｃｏ  ３’（配列番号２９）；
（４）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｔｏｃｏ  ３’（配列番号３０）；
（５）  ５’Ｃｈｏｌ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号３１）；
（６）  ５’Ｃｈｏｌ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号３２）；
（７）  ５’Ｃｈｏｌ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号３３）；
（８）  ５’Ｃｈｏｌ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号３４）；
（９）  ５’Ｃｈｏｌ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号３５）；
（１０）  ５’Ｃｈｏｌ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号３６）；
（１１）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｃｈｏｌ  ３’（配列番号３７）；
（１２）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｃｈｏｌ  ３’（配列番号３８）；
（１３）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｃｈｏｌ  ３’（配列番号３９）；
（１４）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｃｈｏｌ  ３’（配列番号４０）；
（１５）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｔｏｃｏ  ３’（配列番号４１）；
（１６）  ５’Ｔｏｃｏ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号４２）；
（１７）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｔｏｃｏ  ３’（配列番号４３）；
（１８）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｔｏｃｏ  ３’（配列番号４４）；
（１９）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｔｏｃｏ  ３’（配列番号４５）；
（２０）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｔｏｃｏ  ３’（配列番号４６）；
（２１）  ５’Ｔｏｃｏ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号４７）；
（２２）  ５’Ｔｏｃｏ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号４８）；
（２３）  ５’Ｔｏｃｏ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号４９）；
（２４）  ５’Ｔｏｃｏ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号５０）；
（２５）  ５’−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓ  ＴｐｓＴｐｓ−ＨＥＧｐｓ−Ｃｈｏｌ  ３’（配列番号５１）；
（２６）  ５’−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｃｈｏｌ  ３’（配列番号５２）；
（２７）  ５’−ＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＡｐｓＡｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＡｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓ−ＨＥＧｐｓ−Ｃｈｏｌ  ３’（配列番号５３）；
（２８）  ５’−ＴｐｓＣｐｓＣｐｓＡｐｓＴｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＣｐｓＣｐｓＴｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−ＨＥＧｐｓ−Ｃｈｏｌ  ３’（配列番号５４）；
（２９）  ５’−ＴｐｓＣｐｓＣｐｓＡｐｓＴｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＣｐｓＣｐｓＴｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−ＨＥＧｐｓ−Ｔｏｃｏ  ３’（配列番号５５）；
（３０）  ５’Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号５６）；
（式中、
Ｃｈｏｌは、コレステロールを表し、
Ｔｏｃｏは、トコフェロールを表し、
Ｐａｌｍｉｔｏｙｌは、パルミトイル基を表し、
ＨＥＧは、（（ＣＨ２）２Ｏ）６を表し、
ｐｏは、ホスホジエステル結合を表し、
ｐｓは、ホスホロチオエート結合を表し、
トコフェロール、コレステロール、又はパルミトイル基は、ｐｏ若しくはｐｓ結合を介して直接、又はｐｏ若しくはｐｓ結合を介して直接（ＨＥＧ）に結合している第２のリンカーを介して間接的に（ＨＥＧ）に共有結合している）。
【０２０４】
実施形態２３ａは、当該トコフェロール、当該コレステロール、又は当該パルミトイル基が、当該第２のリンカーと共有結合し、当該第２のリンカーが、当該ｐｏ又はｐｓ結合を介して直接当該（ＨＥＧ）に共有結合している、実施形態２３に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０２０５】
実施形態２３ｂは、以下の構造を有する、実施形態２３に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０２０６】
【化９】
2021512044.tif 000011
【０２０７】
実施形態２３ｃは、以下の構造を有する、実施形態２３に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０２０８】
【化１０】
2021512044.tif 000012
【０２０９】
実施形態２３ｄは、以下の構造を有する、実施形態２３に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０２１０】
【化１１】
2021512044.tif 000013
【０２１１】
実施形態２４は、実施形態１〜２３ｃのいずれか１つに記載のＯＤＮコンストラクトと、医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物である。
【０２１２】
実施形態２５は、実施形態１〜２３ｃのいずれか１つに記載のＯＤＮコンストラクトを医薬的に許容される担体と組み合わせることを含む、医薬組成物を調製する方法である。
【０２１３】
実施形態２６は、実施形態２４に記載の医薬組成物を被験体に投与することを含む、それを必要としている被験体における免疫応答を刺激する方法である。
【０２１４】
実施形態２７は、当該疾患がＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）及び癌からなる群から選択される、実施形態２４に記載の医薬組成物を被験体に投与することを含む、それを必要としている被験体における疾患を治療する方法である。
【０２１５】
実施形態２８は、ＣｐＧ  ＯＤＮを含むＯＤＮコンストラクトであって、当該ＣｐＧ  ＯＤＮにおけるＣｐＧジヌクレオチドのうちの少なくとも１つが、立体構造が確定しているホスホロチオエートヌクレオチド間結合を有するＯＤＮコンストラクトである。
【０２１６】
実施形態２９は、当該ＣｐＧ  ＯＤＮにおける当該ＣｐＧジヌクレオチドのうちの２〜４個が、それぞれ立体構造が確定しているホスホロチオエートヌクレオチド間結合を有する、実施形態２８に記載のＯＤＮコンストラクトである。
【０２１７】
実施形態３０は、以下からなる群から選択されるポリヌクレオチド配列を含むＣｐＧ  ＯＤＮを含む、実施形態２８又は２９に記載のＯＤＮコンストラクトである：
（１）  ５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ  ３’（配列番号１）；
（２）  ５’ＧＧＧＧＧＡＣＧＡＴＣＧＴＣＧＧＧＧＧＧ  ３’（配列番号２）；
（３）  ５’ＧＧＧＧＴＣＡＡＣＧＴＴＧＡＧＧＧＧＧＧ  ３’（配列番号３）；
（４）  ５’ＴＣＣＡＴＧＡＣＧＴＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴ  ３’（配列番号４）；
（５）  ５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ  ３’（配列番号５）；
（６）  ５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＡＣＧＴＡＡＣＧＡＣＧＡＣＧＴＴ  ３’（配列番号６）；及び
（７）  ５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴ  ３’（配列番号７）。
【０２１８】
実施形態３１は、式Ｉ（ｓ）の式を有するＯＤＮコンストラクトである：
５’Ｍ１−Ｌ１−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−Ｌ２−Ｍ２  ３’、
（式中、
Ｍ１及びＭ２のそれぞれは独立して脂質部分を表し、好ましくは、当該脂質部分は、コレステロール、トコフェロール、パルミトイル基、及びステアリル基からなる群から選択される少なくとも１つを含み、所望により、Ｍ１及びＭ２のうちの１つは存在せず、
Ｌ１及びＬ２のそれぞれは独立してリンカーを表し、好ましくは、当該リンカーは、炭素、窒素、酸素、水素、硫黄及びリンからなる群から選択される少なくとも１０個の原子を含み、Ｌは、切断可能な結合を介して、好ましくはエステル又はアミド結合を介してＣｐＧ  ＯＤＮに共有結合しており、所望により、それぞれＭ１及びＭ２が存在しないとき、Ｌ１及びＬ２のうちの１つは存在せず、
ＣｐＧ  ＯＤＮは、請求項２８〜３０のいずれか１つに記載のＣｐＧ  ＯＤＮを表し、
所望により、式（Ｉ）のＣｐＧ  ＯＤＮコンストラクトは、更に、好ましくはガラクトース，Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、フコース、マンノース、シアル酸、Ｎ−アセチルノイラミン酸からなる群から選択される標的指向化部分に共有結合的にコンジュゲートする）。
【０２１９】
実施形態３２は、以下の式を有するＣｐＧ  ＯＤＮコンストラクトである：
式（ＩＩａ）（ｓ）：５’Ｍ−Ｌ−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’、又は
式（ＩＩｂ）（ｓ）：５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−Ｌ−Ｍ  ３’
（式中、
Ｍは、脂質部分を表し、好ましくは、当該脂質部分は、コレステロール、トコフェロール、パルミトイル基、及びステアリル基からなる群から選択される少なくとも１つを含み、
Ｌは、炭素、窒素、酸素、水素、硫黄及びリンからなる群から選択される少なくとも１個の原子を含むリンカーを表し、Ｌは、切断可能な結合を介して、好ましくはエステル又はアミド結合を介してＣｐＧ  ＯＤＮに共有結合しており、
ＣｐＧ  ＯＤＮは、実施形態２８〜３０のいずれか１つに記載のＣｐＧ  ＯＤＮを表し、
所望により、式（ＩＩａ）又は（ＩＩｂ）のＣｐＧ  ＯＤＮコンストラクトは、更に、好ましくはガラクトース，Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、フコース、マンノース、シアル酸、Ｎ−アセチルノイラミン酸からなる群から選択される標的指向化部分に共有結合的にコンジュゲートする）。
【０２２０】
実施形態３３は、以下の構造を有するＣｐＧ  ＯＤＮコンストラクトである：
式（ＩＩＩａ）（ｓ）：５’Ｍ１−Ｙ１−（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎ−Ｙ２−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−Ｙ３−Ｍ２  ３’、又は
式（ＩＩＩｂ）（ｓ）：５’Ｍ２−Ｙ３−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−Ｙ２−（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎ−Ｙ１−Ｍ１  ３’
（式中、
Ｍ１は、脂質部分を表し、好ましくは、当該脂質部分は、コレステロール、トコフェロール、パルミトイル基、及びステアリル基からなる群から選択される少なくとも１つを含み、
Ｍ２は、脂質部分、標的指向化部分を表すか、又は存在せず、
Ｙ１は、結合又はリンカー、好ましくは、ホスホジエステル（ｐｏ）結合、ホスホロチオエート（ｐｓ）結合、又は結合を介して（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎに共有結合している、式（（ＣＨ２）２Ｏ）ｏ（式中、ｏは１〜１５である）を有するエチレングリコールであり、
Ｘは、独立して、結合、ｐｏ結合、又はｐｓ結合であり、
Ｙ２及びＹ３のそれぞれは独立して切断可能な結合であり、好ましくはエステル又はアミド結合を含み、より好ましくはｐｏ結合又はホスホルアミデイト結合であり、最も好ましくはｐｏ結合であり、ただし、Ｍ２が存在しないとき、Ｙ３も存在せず、
ＣｐＧ  ＯＤＮは、実施形態２８〜３０のいずれか１つに記載のＣｐＧ  ＯＤＮを表し、
ｍは、１〜１５の整数であり、
ｎは、１〜５の整数である）。
【０２２１】
実施形態３４は、以下の式を有するＣｐＧ  ＯＤＮコンストラクトである：
式（ＩＶａ）（ｓ）：５’Ｍ−Ｙ１−（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎ−Ｙ２−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’、又は
式（ＩＶｂ）（ｓ）：５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−Ｙ２−（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎ−Ｙ１−Ｍ  ３’
（式中、
Ｍは、脂質部分を表し、好ましくは、当該脂質部分は、コレステロール、トコフェロール、パルミトイル基、及びステアリル基からなる群から選択される少なくとも１つを含み、
Ｙ１は、結合又はリンカー、好ましくは、ホスホジエステル（ｐｏ）結合、ホスホロチオエート（ｐｓ）結合、又は結合を介して（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎに共有結合している、式（（ＣＨ２）２Ｏ）ｏ（式中、ｏは１〜１５である）を有するエチレングリコールであり、
Ｘは、独立して、結合、ホスホジエステル（ｐｏ）結合、又はホスホロチオエート（ｐｓ）結合であり、
Ｙ２は、切断可能な結合であり、好ましくはエステル又はアミド結合を含み、より好ましくはｐｏ結合又はホスホルアミデイト結合を含み、最も好ましくはｐｏ結合であり、
ＣｐＧ  ＯＤＮは、実施形態２８〜３０のいずれか１つに記載のＣｐＧ  ＯＤＮを表し、
ｎは、１〜５の整数、好ましくは２であり、
所望により、式（ＩＶａ）又は（ＩＶｂ）のＣｐＧ  ＯＤＮコンストラクトは、更に、好ましくはガラクトース，Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、フコース、マンノース、シアル酸、Ｎ−アセチルノイラミン酸からなる群から選択される標的指向化部分に共有結合的にコンジュゲートする）。
【０２２２】
実施形態３５は、実施形態２８〜３４のいずれか１つに記載のＯＤＮコンストラクトを含む医薬組成物である。
【０２２３】
実施形態３６は、実施形態２８〜２４のいずれか１つに記載のＯＤＮコンストラクトを医薬的に許容される担体と組み合わせることを含む、医薬組成物を調製する方法である。
【０２２４】
実施形態３７は、実施形態３５に記載の医薬組成物を被験体に投与することを含む、それを必要としている被験体における免疫応答を刺激する方法である。
【０２２５】
実施形態３７ａは、当該被験体がＨＢＶ感染の治療を必要としている、実施形態３７に記載の方法である。
【０２２６】
実施形態３７ｂは、当該被験体が癌の治療を必要としている、実施形態３７に記載の方法である。
【０２２７】
実施形態３７ｃは、当該被験体が大腸癌の治療を必要としている、実施形態３７に記載の方法である。
【０２２８】
実施形態３８は、実施形態３５に記載の医薬組成物を被験体に投与することを含む、それを必要としている被験体における癌を治療する方法である。
【０２２９】
実施形態３８ａは、当該癌が、胃腸癌である、実施形態３８に記載の方法である。
【０２３０】
実施形態３８ｂは、当該癌が、大腸癌である、実施形態３８に記載の方法である。
【０２３１】
実施形態３９は、実施形態３５に記載の医薬組成物を被験体に投与することを含む、それを必要としている被験体におけるＨＢＶ感染を治療する方法である。
【０２３２】
実施形態３９ａは、当該治療が、当該被験体におけるＨＢＶ  ＤＮＡのコピー数を低減させる、実施形態３９に記載の方法である。
【０２３３】
実施形態３９ｂは、当該治療が、当該被験体におけるＢ型肝炎表面抗原（ＨＢＳＡｇ）特異的抗体の力価を増加させる、実施形態３９又は３９ａに記載の方法である。
【０２３４】
実施形態３９ｃは、当該治療が、Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢＳＡｇ）特異的Ｔ細胞を増加させる、実施形態３９〜３９ｂのいずれか１つに記載の方法である。
【実施例】
【０２３５】
以下の本開示の実施例は、本開示の性質について更に説明するためのものである。以下の実施例は本開示を限定するものではなく、本開示の範囲は添付の特許請求の範囲によって定められるべきであることを理解すべきである。
【０２３６】
以下の実施例で使用される実験方法は、別途記載のない限り、全て常法である。以下の実施形態で使用される試薬は、別途記載のない限り、全て通常の試薬供給元から購入される。
【０２３７】
（実施例１）
ＡＧ９の合成
ＡＧ９：化学式：Ｃ２９８Ｈ４２０Ｎ７０Ｏ１６４Ｐ２６Ｓ１９、分子量：９０２１．４２
（５’−Ｔｏｃｏ−（ｐｏ）−ＨＥＧ（ｐｏ）−ＨＥＧ（ｐｏ）−ＴｐｓＣＧｐｓＴｐｓＣＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣＧｐｓＴｐｓＴ−３’）
【０２３８】
【化１２】
2021512044.tif 000014
【０２３９】
図１７に示す合成スキームを用いてＡＧ９を合成した。より具体的には、固相合成技術及び自動合成装置を利用してＡＧ９の合成を実施した。合成は、２１８μｍｏｌスケールを２回、合計４３６μｍｏｌで実施した。固定された６．３ｍＬカラム（ＧＥヘルスケア）を使用して合成を実施した。化合物の合成にはＯｌｉｇｏＰｉｌｏｔ  １００を使用した。この合成に使用した固体基体は、ローディングが〜３０３μｍｏｌ／ｇのＵｎｙｌｉｎｋｅｒ  ＮｉｔｔｏＰｈａｓｅ基体であった。ＡＧ９の製造のために特別に設計された４ステップ反復法を実行することによって、合成を実行した。４つのステップは、脱トリチル化、カップリング、硫化、及びキャッピングを含み、特定のアミダイトを用いて１６サイクル繰り返して所望の生成物を得た。各ステップの後、不要な反応を防ぐためにアセトニトリルの適切な洗浄を実施した。固体基体の脱トリチル化は、トルエン中３％ジクロロ酢酸を用いて実施し、４３６ｎｍでモニターした。カラムに添加する前に、４０（体積）％の０．１Ｍアミダイト溶液を６０％の活性化剤とインライン混合することによって、カップリングを実施した。カップリング毎に合計２．５当量のアミダイトを添加した。活性化剤／アミダイト混合物をカラムにロードした後、ＤＮＡの場合は５分間、リサイクルループを介してカップリング混合物を循環させた。α−トコフェロールホスホルアミダイトをアセトニトリル中１０％ＤＭＦに溶解させた。ＨＥＧリンカー及びα−トコフェロールホスホルアミダイトの場合、１０分間の延長カップリングを使用した。高いカップリング効率を確保するために、アミダイト及び活性化剤の溶液は、調製後少なくとも４〜６時間にわたってモレキュラーシーブの上に留まっていた。第３のステップである硫化は、ルチジン：アセトニトリル（１：１）中０．２Ｍフェニルアセチルジスルフィド（Phenyl acetyl disulfide、ＰＡＤＳ）の溶液を１．２カラム体積添加することによって実施した。合成に使用する前に、溶液を少なくとも１２時間熟成させた。チオール化のために２．０ＣＶで２．０分間の接触時間を実施した。酸化については、ピリジン／水９０／１０中０．０５Ｍヨウ素を使用した。伸長サイクルにおける最後のステップであるキャッピングは、３つのキャッピング試薬の混合物（キャッピングＡ：キャッピングＢ１：キャッピングＢ２；５０／２５／２５；ｖ／ｖ／ｖ）をカラム体積の半分添加することによって実施した。
【０２４０】
完全長ＡＧ９配列を合成した後、アセトニトリル中２０％ジエチルアミン（ＤＥＡ）２．０ＣＶで基体を洗浄した。このステップにより、生成物がまだ基体に結合している間に、生成物からベータシアノエチル保護基を除去することができた。
【０２４１】
【表１】
2021512044.tif 000015
＊
【０２４２】
【表２】
2021512044.tif 000016
【０２４３】
０．７ｇのＵｎｙｌｉｎｋｅｒ（商標）樹脂をＡｋｔａ  ６．３ｍＬカラムに充填し、カラムをカラム位置１に置いた。カラムを通る流れ及びカラムの潜在的な漏れを、流れ試験によって確認した。
【０２４４】
濃水酸化アンモニウムを使用して、合成オリゴヌクレオチドの切断及び脱保護を実施した。固体基体に結合しているオリゴヌクレオチドに水酸化アンモニウム（〜６０ｍＬ）を添加し、基体が十分に分散するまで穏やかに撹拌した。混合物を５５℃で約１６時間撹拌した。持ち時間（allotted time）が経過した後、焼結ガラスフィルターを通して濾過することによって、固体基体を生成物含有溶液から分離した。次いで、フィルター内の固体基体を、５０：５０（ｖ／ｖ）エタノール：Ｈ２Ｏの溶液で洗浄した（３×２０ｍＬ）。質量スペクトル、ＨＰＬＣ、及びＵＶ分析のために、粗オリゴヌクレオチド溶液の少量のアリコートを除去した。
【０２４５】
Ａｋｔａ  Ｐｕｒ  ＨＰＬＣシステム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）の逆相クロマトグラフィー、及び内径２１．２ｃｍのＬｕｎａ  Ｃ８  ｐｈｅｎｏｍｅｎｏｘカラム２５０＊２１．２を使用して精製を実施した。
【０２４６】
精製試薬及び供給元のリスト
【０２４７】
【表３】
2021512044.tif 000017
【０２４８】
サンプルをロードした後、２カラム体積（ＣＶ）の溶離剤Ａに対してカラムを平衡化した。勾配は、カラムからあらゆる未結合サンプルを洗い流すために２．０ＣＶにわたって８％溶離剤Ｂを送達し、次いで、６．０ＣＶの長さにわたって８％から５０％までの溶離剤Ｂの勾配に供する初期セグメントからなっていた。画分を滅菌した５０ｍＬバイアル瓶に回収し、次いで、ＨＰＬＣにより分析した。
【０２４９】
精製条件
【０２５０】
【表４】
2021512044.tif 000018
【０２５１】
画分データが完成してから、モックプールを調製した。モックプールは、７５％  ＦＬＰを超える全ての画分を含有していた。分析後、限外濾過により脱塩するためにこれらの同じ画分をプールした。
【０２５２】
粗生成物、画分、モックプール、プール、脱塩生成物、及び最終生成物をＲＰ−ＨＰＬＣにより分析した。粗生成物及び最終生成物はＬＣＭＳによっても分析した。方法は以下のとおりであった。
ＡＧ９のＲＰ−ＨＰＬＣ分析
ＡＧ９のＥＳＩ／ＭＳ分析
【０２５３】
その時点まで分離したままであった各精製合成バッチ用に選択されたプールを限外濾過のために合わせた。合わせたプールを、合計３枚の０．１ｍ２  ＰＥＳ膜（Ｐａｌｌ  Ｃｏｒｐ）を用いる限外濾過を用いて濃縮及び脱塩に供した。プールを約２リットルまで濃縮し、この時点でダイアフィルトレーションを開始した。透過液の伝導率が５０μＳ／ｃｍ以下になるまでダイアフィルトレーションを継続した。
【０２５４】
ＶｉｒＴｉｓ  ＳＰ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｂｅｎｃｈ  Ｔｏｐ  Ｐｒｏ  Ｆｒｅｅｚｅ  Ｄｒｙｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍを使用して凍結乾燥を実施した。濃縮溶液を０．２マイクロメートルのフィルターを通して濾過し、次いで、５０ｍＬバイアル瓶に均一に分布させ、凍結乾燥した。最終生成物をＱＣによりサンプリングし、インビボ試験の準備を整えた。
【０２５５】
（実施例２）
ＴＬＲ９活性化アッセイ
ＨＥＫ２９３レポーターアッセイ
ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ  ｈＴＬＲ９及びＨＥＫ−ＢＬＵＥ  ｍＴＬＲ９細胞株は、レポーターコンストラクトＮＦ−ｋＢ−ＳＥＡＰ（分泌型胚性アルカリホスファターゼ）及びヒトＴＬＲ９又はマウスＴＬＲ９のいずれかを安定的にトランスフェクトした市販の細胞株（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）である。
【０２５６】
アッセイ開始の２４時間前に、細胞のサブコンフルエントな層を９６ウェル平底皿にプレーティングする。アッセイの日に、用量設定濃度の分析される化合物を細胞に添加し、培養物を一晩インキュベートする。これらの細胞では、受容体ＴＬＲ９を活性化する化合物の能力は、上清中のレポーター分子ＳＥＡＰの濃度に比例する。ＳＥＡＰの濃度は、３時間にわたって基質ＱＵＡＮＴＴＩ−Ｂｌｕｅ（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）を培養上清に添加する比色分析によって決定することができる。ＯＤ６３０ｎｍで分光光度計を使用して、切断された基質を検出し、相対濃度を比較する。
【０２５７】
ＰＢＭＣアッセイ
フィコール勾配遠心分離によって全血からＰＢＭＣを単離する。１×１０６個のＰＢＭＣを９６ウェル培養皿の底部に播種し、用量設定濃度の分析される化合物を細胞に添加する。培養物を４８時間インキュベートし、その間に細胞標的を誘導してサイトカインを発現させる。上清をサンプリングし、Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイを用いて個々のサイトカインを検出することによって、サイトカインレベルを測定する。更に、ＰＢＭＣを収集し、個々の受容体に対する蛍光色素コンジュゲート抗体を用いて染色する。フローサイトメーターを使用して発現レベルを測定する。
【０２５８】
ＰＨＨ細胞アッセイ
初代ヒト肝細胞を培養し、Ｂ型肝炎ウイルスに感染させる。感染後４日目に、培地を、化合物で処理したＰＢＭＣ由来の培地に交換する（上記参照）。４日間更にインキュベートした後（感染後８日目）、培地を交換し、上清をＨＢｓＡｇ産生について測定する。更に４日後（感染後１２日目）、上清を再びＨＢｓＡｇ産生について測定する。
【０２５９】
インビボサイトカイン誘導
分析される化合物をＣ５７ＢＬ／６マウスの皮下又は静脈内に注射する。４時間後、顎下静脈穿刺によってマウスから採血する。Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイを使用して血清サイトカインを測定する。
【０２６０】
ＡＡＶ−ＨＢＶモデル
Ｃ５７ＢＬ／６マウスにＡＡＶ−ＨＢＶ粒子を感染させる。感染の約１ヶ月後、分析される化合物をマウスの皮下又は静脈内に注射する。指定の期間、典型的には８週間にわたって、化合物の投与を隔週（２週間毎）繰り返す。毎週マウスから採血する。循環ＨＢｓＡｇ、ＨＢＶ  ＤＮＡ、及び抗ＨＢ  Ａｂなどの様々なエンドポイントについて血清を測定する。
【０２６１】
ＭＣ３８腫瘍モデル
Ｃ５７／ＢＬ６マウスに、０．５×１０６個のＭＣ３８結腸癌細胞を皮下移植し、腫瘍の成長をモニターする。平均腫瘍体積が１００〜２００ｍｍ３に達したとき（移植の約１２日後）、投与を開始する。腫瘍サイズを３〜４日毎にモニターする。
【０２６２】
ＥＬＩＳｐｏｔ手順
所定の時点、最後の投与の約１ヶ月後に屠殺した処理マウスから新鮮な脾臓細胞を単離した。脾細胞を、２×１０５細胞／ウェルの濃度でマイクロタイタープレートのウェルにトリプリケートで分注した。コア及び表面由来の個々の既知のＨＢＶエピトープ、並びにＨＢＶコンセンサスＢ、Ｃ、及びＤ（１１個のアミノ酸が重複）由来の１５ｍｅｒの重複ペプチドを、最終濃度２μｇ／ｍＬでウェルに添加した。細胞を様々な時間インキュベートし、次いで、製造元の説明書に従ってＭｏｕｓｅ  ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳｐｏｔキット（Ｍａｂｔｅｃｈ  ３３２１−２Ａ）によって活性化細胞を明らかにした。活性化細胞をＣＴＬ−ＦｌｕｏｒｏＳｐｏｔ  Ａｎａｌｙｚｅｒにより定量した。
【０２６３】
ＩＶＩＳ撮像
インビボ撮像のために、７〜８週齢のＣ５７Ｂｌ／６雄マウスを使用した。ＡＦ６４７標識ＣｐＧオリゴヌクレオチド（ＡＧ２０及びＡＧ２１）を、静脈内又は皮下の経路のいずれかを介して注射した（総体積１００μＬ中２０ｎｍｏｌ）。注射の２４時間後、動物を屠殺し、脾臓、排出リンパ節、肝臓、腎臓、及び肺を摘出した。ＩＶＩＳ（Ａｍｉ  ＨＸ）を使用して器官を撮像した。画像セット（Ｅｘ：６０５、Ｅｍ：６７０、ｆ５、１０  Ｓｅｃ）を収集した。Ｓｐｅｃｔｒａｌ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ａｕｒａを使用して、蛍光撮像データセットを取得及び定量化した。Ｒｅｇｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔツールを使用して、各器官からの放射効率を測定した。
【０２６４】
免疫蛍光法
７〜８週齢のＣ５７Ｂｌ／６雄マウスを使用した。ＡＦ６４７標識ＣｐＧオリゴヌクレオチド（ＡＧ２０及びＡＧ２１）を、静脈内又は皮下の経路のいずれかを介して注射した（総体積１００μＬ中２０ｎｍｏｌ）。注射の２４時間後、動物を屠殺し、脾臓、排出リンパ節、肝臓、腎臓、及び肺を摘出した。器官をホルマリン固定し、次いで、標準的な手順を用いてミクロトームで切片を作製した。ホルマリン固定パラフィン包埋（formalin-fixed paraffin-embedded、ＦＦＰＥ）マウスリンパ節及び脾臓においてＬｅｉｃａ  Ｂｏｎｄ自動免疫染色装置を使用して、免疫蛍光染色を行った。Ｌｅｉｃａ  Ｂｏｎ  Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｒｅｔｒｉｅｖａｌ  Ｂｕｆｆｅｒ  ２（ＥＤＴＡ溶液、ｐＨ９．０）を使用して２０分間加熱誘導抗原回復を実施した。一次抗体、ラット抗ＣＤ４５Ｒ（Ｂ２２０）（ＲＡ３−６Ｂ２）、ｅＦｌｕｏｒ  ５７０抗体、及びウサギ抗ＣＤ３抗体について一晩インキュベートして染色を行った。二次抗体、ヤギ抗ウサギＩｇＧ  Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  Ｐｌｕｓ  ４８８を適用し、核を可視化するためにＦｌｕｐｒｏｇｅｌ  ＩＩにおいてＤＡＰＩを用いてスライド標本を作製した。
【０２６５】
ＨＰＬＣ及び血清タンパク質結合
ＵＶ検出器及び蛍光検出器の両方を備えたＵｌｔｉｍ−３０００  ＨＰＬＣシステムを分析に使用した。オリゴヌクレオチド、タンパク質、及びオリゴヌクレオチド−タンパク質混合物のサンプルを、２０ｍＭ  ＫＣＬを含む１×ＰＢＳ中で調製し、サイズ排除クロマトグラフィーにより分析した。ミセル形成アッセイでは、２Ｍ若しくは４Ｍ尿素溶液又はＰＢＳ中でオリゴヌクレオチドを調製した。サンプルをＳｕｐｅｒｄｅｘ  ７５  Ｉｎｃｒｅａｓｅ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に注入した。０．０７５ｍＬ／分の２０ｍＭ  ＫＣＬを含む１×ＰＢＳの移動相をクロマトグラフィーに使用し、サイズ排除カラムを室温で維持した。ＵＶクロマトグラムを２６０、２８０、及び５００ｎｍで記録した。４９０ｎｍの励起波長及び５３０ｎｍの発光波長を使用して、蛍光検出装置によってクロマトグラムを得た。
【０２６６】
（実施例３）
ＣｐＧ  ＯＤＮ増強活性におけるホスホジエステル
文献に基づいて、プロトタイプ５’−ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ−３’（ＯＤＮ２００６）は、ＴＬＲ９を発現しているヒト及びマウスの細胞を刺激することができる。この配列は、インビボ安定性のためのホスホロチオエート（ｐｓ）骨格を有する。
【０２６７】
2021512044.tif 000019
のＣｐＧモチーフにおけるｐｓ結合をホスホジエステル（ｐｏ）結合に置き換え、ＴＬＲ９活性化を評価した。図１に示す結果は、ＣｐＧモチーフのｐｓ結合のうちの３又は４個をｐｏ結合に置き換えると、ＴＬＲ９に対してアゴニスト活性を有する高活性のＯＤＮコンストラクトが得られたことを示す。ＣｐＧモチーフのｐｓ結合の４個全てがｐｏ結合に置き換えられたＯＤＮ２００６のバージョン（ＡＧ１）は、ＯＤＮ２００６よりも２〜３倍低いＥＣ５０値、及びＯＤＮ２００６よりも２０〜３５％大きい最大活性を有する。ＣｐＧモチーフのｐｓ結合の３個がｐｏ結合に置き換えられたＡＧ２及びＡＧ３についても、ＡＧ１と同様の活性が観察された。この実験により、ＣｐＧモチーフの骨格におけるｐｏを置換することにより、オリゴヌクレオチドのアゴニスト特性が強化されることを実証される。
【０２６８】
（実施例４）
コレステロールをＣｐＧ  ＯＤＮに直接結合させると活性が抑制された実施例
オリゴヌクレオチドを、様々なオリゴ分布を可能にする様々な部分にコンジュゲートさせた。例えば、コレステロール及びトコフェロールは、肝臓に局在すると考えられる親油性分子である。コレステロール及びトコフェロールをＣｐＧ  ＯＤＮの５’又は３’末端のいずれかに直接コンジュゲートさせた場合、得られた分子はＴＬＲ９発現細胞を活性化しなかった（データは示さず）。これらの実験により、オリゴヌクレオチドの末端に化合物を直接コンジュゲートすると、ＴＬＲ９を刺激する（agonize）能力に影響を及ぼし得ることが実証された。
【０２６９】
（実施例５）
切断可能なリンカーを介してコレステロールをＣｐＧ  ＯＤＮに間接的にコンジュゲートさせると活性が増強された実施例
立体効果の可能性に起因して、オリゴヌクレオチドの近位に親油性部分をコンジュゲートさせると、ＴＬＲ９受容体に結合する分子の能力を抑制する可能性がある。この可能性について調べるために、切断可能なリンカーを使用して、標的指向化部分として、コレステロールを本明細書でＴＬＲ９アゴニストとも呼ばれるＴＬＲ９に対してアゴニスト活性を有するＯＤＮコンストラクトにコンジュゲートし、ＴＬＲ９活性化を評価した。図２に示す結果は、切断可能なリンカーを介してＴＬＲ９アゴニストに標的指向化部分をコンジュゲートさせると、そのアゴニスト活性が保持されることを示す。
【０２７０】
例えば、ＡＧ８と呼ばれるＴＬＲ９アゴニストは、ＡＧ１のＣｐＧ  ＯＤＮからコレステロールを分離するために切断可能なリンカーを使用して設計された。ＡＧ８のリンカーは、（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−であった。ＨＥＫ−ＢＬＵＥ  ｈＴＬＲ９細胞をＡＧ８で刺激した場合、コンジュゲートされていない親ＡＧ１に比べて活性が増強された。ＡＧ８は、ＡＧ１よりも２〜３倍低く、ＯＤＮ２００６よりも９倍超低いＥＣ５０値を有していた。ＡＧ８の最大活性はＡＧ１よりも約１０％高く、ＯＤＮ２００６よりも約５０％高かった。ＡＧ８と同様にコレステロールに結合させたＡＧ１のアナログを試験した。ＡＢ４、ＡＧ５、ＡＧ６、及びＡＧ７は、ＣｐＧモチーフのｐｓの（それぞれ）０、１、２、及び３個がｐｏで置換されている。図２に示すように、ｐｏ結合を有するＣｐＧモチーフの数が多いほど、活性が大きくなる。ＡＧ４は、全てがｐｓである骨格を有し、間接リンカーを介してコレステロールにコンジュゲートしている。ＡＧ５はＡＧ４と類似しているが、１個のＣｐＧモチーフがｐｏ結合で置換されている。これらの２つの化合物は、ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ  ｈＴＬＲ９細胞アッセイにおいて同様の活性を有し、そのＥＣ５０は６．４〜１０ｎＭである。ＡＧ６及びＡＧ７は、ｐｏ結合で置換されたＣｐＧモチーフを２及び３個有し、これらのＥＣ５０はそれぞれ約４．５ｎＭ及び２．６ｎＭであった。この実験により、切断可能なリンカーを介して間接的に標的指向化部分をコンジュゲートさせることによって、ファルマコフォアの活性が保持されることが実証された。
【０２７１】
（実施例６）
切断可能なリンカーを介してトコフェロールをＣｐＧ  ＯＤＮに間接的にコンジュゲートさせると活性が増強された実施例
コンジュゲーション戦略の汎用性を試験するために、切断可能なリンカーを使用してトコフェロールをＴＬＲ９アゴニストにコンジュゲートさせた。例えば、ＡＧ９と呼ばれるＴＬＲ９アゴニスト（その合成については上記実施例１に記載されている）は、ＡＧ１のオリゴヌクレオチドからトコフェロールを分離するために切断可能なリンカーを使用して設計された。ＡＧ９のリンカーは、（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−であった。ＨＥＫ−ＢＬＵＥ  ｈＴＬＲ９細胞をＡＧ９で刺激した場合、活性は、コレステロールコンジュゲートＡｇ８の活性と同等であった（データは示さず）。これらの実験により、異なる標的指向化部分をＣｐＧ  ＯＤＮにコンジュゲートさせることができ、ＣｐＧ  ＯＤＮが活性を保持することができたことが実証された。
【０２７２】
（実施例７）
ＣｐＧ  ＯＤＮの５’末端又は３’末端のいずれかにおいて切断可能なリンカーを使用して間接的にコンジュゲートさせた結果、同等の活性が得られた実施例
コンジュゲートした部分の極性を試験するために、切断可能なリンカーを使用してコレステロール又はトコフェロールをＴＬＲ９  ＯＤＮの３’末端にコンジュゲートさせた。例えば、ＡＧ１０と呼ばれるＴＬＲ９アゴニストは、ＡＧ１のオリゴヌクレオチドの３’末端からコレステロールを分離するために、切断可能なリンカーである−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）を使用して設計され、ＡＧ１１と呼ばれるＴＬＲ９アゴニストは、ＡＧ１のオリゴヌクレオチドの３’末端からトコフェロールを分離するために、切断可能なリンカーである−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）を使用して設計された。ＨＥＫ−ＢＬＵＥ  ｈＴＬＲ９を使用して、コンジュゲートの活性を分析した。図３に示すように、それぞれＣｐＧ  ＯＤＮの５’又は３’末端に間接的にコンジュゲートされたコレステロールを有するＡｇ８及びＡＧ１０は、同等の活性を有していた。
【０２７３】
興味深いことに、ＨＥＫ−ＢＬＵＥ  ｈＴＬＲ９細胞では、ＡＧ１０及びＡＧ１１は、これらの５’コンジュゲート対応物であるＡＧ８及びＡＧ９とそれぞれ同様の活性を有していた。しかしながら、これらはＨＥＫ−ＢＬＵＥ  ｍＴＬＲ９細胞では活性ではなく、このことは、マウスＴＬＲ９受容体による認識にとってはコンジュゲートの極性が重要であるが、ヒトＴＬＲ９受容体にとっては重要ではないことを示す（ＡＧ８及びＡＧ１０は図３に示し、ＡＧ９及びＡＧ１１についてはデータを示さない）。
【０２７４】
リンカー内の切断部位の効果を試験するために、ホスホジエステル切断部位が切断に対して耐性であるホスホロチオエート結合に置き換えられたＡＧ９のアナログを合成した。図１２に示すように、ＡＧ１２は、オリゴとリンカーとの間、トコフェロール部分とリンカーとの間、及びリンカーのＨＥＧ分子の間の切断可能なホスホジエステル結合が切断不可能なホスホロチオエート結合に置き換わっている。この分子は効率的には切断できないと考えられ、完全な分子はＴＬＲ９と相互作用する。ＡＧ１３は、リンカーとオリゴとの間の切断可能なホスホジエステル結合が切断不可能なホスホロチオエートリンカーに置き換わっている。切断後、リンカーの一部がオリゴに結合したままであると考えられる。ＡＧ１４は、リンカーとトコフェロールとの間の切断可能なホスホジエステル結合が切断不可能なホスホロチオエートリンカーに置き換わっている。切断後、トコフェロールが除去され、リンカー全体がオリゴに結合したままであると考えられる。ＡＧ１６は、ホスホロチオエート結合を介してトコフェロールに結合しているＡＧ１の変異型である。ＡＧ１５は、ホスホロチオエート結合を介してトコフェロールにコンジュゲートし、塩基２１と２２との間にホスホロチオエート結合を有するＡＧ１の変異型である。
【０２７５】
リンカー及び／又はトコフェロールの任意の部分を保持していた全てのアナログは、図１９及び２０に示すように、ＨＥＫ−Ｂｌｕｅレポーターアッセイにおいて活性が低下した。具体的には、コンストラクトＡ１５及びＡＧ１６によって表されるように標的指向化部分（トコフェロールなど）をオリゴに直接コンジュゲートすると、オリゴのＴＬＲ９アゴニスト活性が抑制されることが示された（データは示さず）。切断可能なリンカーを介してオリゴをトコフェロールにコンジュゲートさせると、オリゴのＴＬＲ９アゴニスト活性が保持され、トコフェロール及びリンカーの両方が切断されたときに最適な活性が得られた（図１９）。データは、細胞によってエンドサイトーシスされると、リンカー及び標的指向化部分から切断されることによってＯＤＮが放出されること、そして、この放出が完全な活性に必要であることを示唆している。この方法によってオリゴにコンジュゲートさせたコレステロール又はパルミチン酸でも同様の結果が得られた。結果は、この切断可能なリンカー戦略を使用して、ペプチド、タンパク質、毒素、有機又は無機の分子などの任意の分子をオリゴにコンジュゲートさせることができることを示唆している。
【０２７６】
ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ  ｍＴＬＲ９レポーター細胞を使用すると、ＡＧ９がマウスＴＬＲ９も活性化し、レポーター細胞において非コンジュゲート親ＡＧ１と同様の活性を達成し、ＯＤＮ２００６を含有する未修飾の全てがホスホロチオエートであるＰｒｏＭｕｎｅよりも優れた活性を達成したことが見出され、このことは、ＡＧ９をマウスインビボモデルでも使用できることを示す（図２０）。結果により、本開示の実施形態によるＴＬＲ９アゴニストでは、そのＴＬＲ９刺激能力を最適化するためには切断可能なリンカーが好ましいことが示される。
【０２７７】
（実施例８）
ＴＬＲ９アゴニストのインビボ分析
７．６〜１０．８ｍｇ／ｋｇのＴＬＲ９アゴニストＡＧ８及びＡＧ１０をマウスに皮下注射し、４時間後に採血した。ＡＧ８は、オリゴの５’末端においてコレステロール及び切断可能なリンカーにコンジュゲートしており、ＡＧ１０は、オリゴの３’末端においてコレステロール及び切断可能なリンカーにコンジュゲートしている。Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイを用いて、収集したサンプルをサイトカインレベルについて分析した。図４に示す結果は、ＴＬＲ９アゴニストがインビボでサイトカイン産生を誘導したことを示す。これらの実験は、ＨＥＫ−ＢＬＵＥ  ｍＴＬＲ９細胞レポーターアッセイを用いてインビトロで観察されたように、ＴＬＲ９を刺激するＡＧ１０の能力においてリンカー及びコレステロールの極性が重要であることを示した。ＡＧ１０はインビボにおいてほとんど活性を有していなかったが、ＡＧ８は、投与後にＩＬ−６、ＴＮＦａ、及びＭＩＰ−１ｂなどの炎症誘発性サイトカインを誘導することができた。注目すべきことに、産生されたサイトカインのレベルは、平均して対照ＯＤＮ２００６の濃度よりも高く、ＯＤＮ１８２６と同等であった。したがって、コレステロールがコンジュゲートしたＣｐＧ  ＯＤＮは、インビボで活性である。
【０２７８】
（実施例９）
ＡＡＶ−ＨＢＶ感染マウスに対するＴＬＲ９アゴニストの効果の分析
マウスにおけるＨＢＶ感染に対するＴＬＲ９アゴニストの効果を分析するために実施した実験の概略を図５に示す。
【０２７９】
−２８日目にＡＡＶ−ＨＢＶウイルスを注射したマウスにビヒクル又はＴＬＲ９アゴニストを投与し、ＨＢＶインジケーターのレベルについて評価した。マウスに、０日目に単回投与、又は７、２１、３５及び４９日目に複数回投与した。ベンチマークとして、１群のマウスに、ＴＬＲ７の小分子アゴニストであるＧＳ９６２０を経口投与した。全てのマウスをＨＢＶ  ＤＮＡ（図６を参照）、ＨＢｓＡｇ（ＨＢＶの表面抗原；図７を参照）、及びＨＢｅＡｇ（ＨＢＶのエンベロープ抗原；図８を参照）のレベルについて評価した。結果は、ＴＬＲ９アゴニストの投与によって、ＡＡＶ−ＨＢＶを投与したマウスにおけるＨＢＶ  ＤＮＡ、ＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの抑制に成功したことを示した。
【０２８０】
ＴＬＲ９アゴニストＡＧ８を皮下注射したマウスを、サイトカイン産生の誘導について評価した。図９に示す結果は、誘導部位反応を生じさせなかった３ｎｍｏｌのＴＬＲ９アゴニストＡＧ８が、ＴＬＲ９アゴニストＡＧ１０と同様のサイトカインレベルを誘導したことを示す。
【０２８１】
ＴＬＲ９アゴニストＡＧ８を静脈内（ＩＶ）注射したマウスを、サイトカイン産生の誘導について評価した。図１０に示す結果は、１５ｎｍｏｌのＴＬＲ９アゴニストＡＧ８がサイトカインレベルを誘導したことを示す。ＩＶ注射したマウスを、ＨＢＶウイルス量についても分析した。図１１に示すように、ＡＧ８をＩＶ投与すると、ＨＢＶウイルス量が減少した。
【０２８２】
これらの実験は、単回投与として又は８週間にわたってＱＯＷで与えたＡＧ８が、ウイルス量を抑制できることを実証した。
【０２８３】
（実施例１０）
ＴＬＲ９アゴニストが様々にサイトカインプロファイルを誘導した実施例
ナイーブＣ５７ＢＬ／６マウスに、ＴＬＲ９アゴニストであるＡＧ１、Ａｇ８及びＡＧ９をそれぞれ注射した。注射後４時間で血清をサンプリングし、Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイによりサイトカインについて測定した。
【０２８４】
図９の結果が示すように、ＡＧ８及びＡＧ９はいずれも、サイトカインＩＬ−１２ｐ４０、ＩＬ−６、及びＭ１Ｐ１ｂを誘導する活性が増大し、両方とも親分子ＡＧ１とは異なるサイトカインプロファイルを活性化した（データは示さず）。同様の誘導パターンが、他のサイトカイン、例えば、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１０、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−ｇ、ＩＦＮ−ａ、ＴＮＦ−ａについても観察された（データは示さず）。サイトカイン誘導は、用量依存性であった（図１０）。
【０２８５】
（実施例１１）
ＡＧ９がＡＧ１よりも高いレベルのα−ＨＢｓＡｇを誘導する実施例
３０ｎｍｏｌのＡＧ１又はＡＧ９のいずれかと組み合わせて、１０μｇの組み換えＨＢｓＡｇでマウスを皮下又は静脈内免疫した。７日後、マウスから採血し、ＨＢｓＡｇ特異的抗体の血清濃度をＥＬＩＳＡにより定量した。
【０２８６】
図１１に示すように、皮下投与したとき、ＡＧ１（０．３３２ＡＵ）及びＡＧ９（０．５５１ＡＵ）を投与したマウスの間で、α−ＨＢｓＡｇのレベルが平均して１．６５倍増加した。静脈内投与したとき、ＡＧ９（１．４１ＡＵ）により誘導されたＨＢｓＡｇ特異的抗体の量は、ＡＧ１（０．５９ＡＵ）により誘導された抗体の量よりも２．５倍多かった（ｐ＜０．００９）。これは、免疫化プロセスを増幅するために、トコフェロールのオリゴヌクレオチドへのコンジュゲーションが、免疫刺激活性を増強することを示唆している。加えて、トコフェロールをコンジュゲートさせたＣｐＧ  ＯＤＮの静脈内投与は、非コンジュゲート親ＡＧ１の皮下投与又は静脈内投与よりも液性応答の誘導においてはるかに効果的であった。この結果により、トコフェロールがＣｐＧ  ＯＤＮの体内分布に影響を及ぼし、その結果、液性応答に対する活性が強化されることが示唆されている。
【０２８７】
（実施例１２）
切断可能なリンカーを介してＴＬＲアゴニストを親油性部分にコンジュゲートさせると、ＡＶＶ−ＨＢＶマウスにおける機能的治癒が達成された実施例
ナイーブＣ５７ＢＬ／６マウスにＡＡＶ−ＨＢＶを感染させた。感染が確立すると、１５又は３０ｎｍｏｌのトコフェロールコンジュゲートＡＧ９又は親ＡＧ１を２週間毎にマウスの静脈内又は皮下に投与した。
【０２８８】
感染マウスは、いずれの化合物の皮下投与にも応答したが、循環ＨＢＶ  ＤＮＡ又はＨＢｓＡｇのいずれかの減少は一過性であり、２週間後にレベルが回復した（図１３Ａ及びＢ）。
【０２８９】
１５ｎｍｏｌのＡＧ９の反復静脈内投与は、循環ＨＢＶ  ＤＮＡ及びＨＢｓＡｇを定量下限よりも低くなるまで低減する能力によって測定したとき、親ＡＧ１よりも強力であった。加えて、処理期間後、ウイルスのリバウンドについてマウスをモニターした。ＡＧ９処理マウスは、持続的応答を達成し、ＨＢｓＡｇは安定して抑制され、投与の１ヶ月後にＨＢＶ  ＤＮＡレベルの最小限の回復しか観察されなかった（図１３Ａ及びＢ）。これは、マウスの大部分におけるα−ＨＢｓＡｇ  Ａｂの誘導、及びマウスの一部におけるＨＢｓＡｇ特異的ＣＴＬの誘導を伴うものであった。対照的に、親ＡＧ１で処理した５匹のマウスのうちの３匹は、持続的応答を達成し、これは、α−ＨＢｓＡｇ  Ａｂセロコンバージョン及びＨＢｓＡｇ特異的ＣＴＬｄの発生を伴うものであった。５匹のＡＧ１処理マウスのうちの２匹はセロコンバージョンしなかった。静脈内投与は、皮下投与よりも効果的であると思われた。
【０２９０】
α−ＨＢｓＡｇ  Ａｂの分析により、親ＡＧ１で処理したマウスと比較して、ＡＧ９で処理したマウスの方がより多くでセロコンバージョンし、平均してα−ＨＢｓＡｇ  Ａｂの循環濃度がより高いことが明らかになった。これらの結果は、トコフェロールをコンジュゲートさせたＣｐＧオリゴヌクレオチドＡＧ９は、ＡＡＶ−ＨＢＶ感染マウスにおいて機能的治癒を生じさせる能力が非コンジュゲート親ＡＧ１よりも高かったことを示す。
【０２９１】
強化された有効性が他の親油性部分にも適用され得るかどうかを試験するために、トコフェロールをパルミトイルに置き換えたＡＧ１９を合成した。ＨＥＫ−ｈＴＬＲ９系統におけるインビトロ実験では、ＡＧ１９がＡＧ９と同様の活性を有することが確認された（データは示さず）。ＡＧ１９を用いて、上述のとおりＡＡＶ−ＨＢＶ感染マウスにおける投与レジメンを繰り返した。１５ｎｍｏｌの化合物を１４週間にわたって２週間毎にマウスに皮下又は静脈内投与した。静脈内に投与したとき（図１３Ｃ）、ＡＧ１９は、循環ＨＢｓＡｇ及びＨＢＶ  ＤＮＡの低減についてＡＧ９と同程度有効であった。処理期間後、ＨＢｓＡｇのレベルは定量限界を下回ったままであり、ＨＢＶ−ＤＮＡレベルは安定して抑制された。ＡＧ９処理マウスと同様に、ウイルス量の抑制は、α−ＨＢｓＡｇ  Ａｂのロバストな誘導を伴うものであった。
【０２９２】
試験の最後に、ＥＬＩＳｐｏｔによりＨＢＶ特異的ＣＴＬ応答を測定した。ＨＢｓＡｇからペプチドに応答するＣＴＬの数を定量し、ＡＧ９及びＡＧ１９で処理したマウスが、ＰＢＳ又は親ＡＧ１で処理したマウスと比較して有意に多い数のα−ＨＢｓ  ＣＴＬを有していたことを見出した（図１３Ｄ）。したがって、ＣｐＧ  ＯＤＮをトコフェロール又はパルミトイルなどの親油性部分にコンジュゲートさせることにより、ＯＤＮのアゴニスト特性が増強された。投薬を中止した後であってもウイルス量を抑制するＨＢＶ特異的な液性及び細胞応答が生じた。定義上は、ＡＧ９及びＡＧ１９は、ＨＢＶに感染した被験体において機能的治癒を確立することができた。
【０２９３】
（実施例１３）
ＡＧ９がＭＣ−３８腫瘍モデルにおいて完全な腫瘍退縮及び腫瘍制御を達成する実施例
ナイーブＣ５７ＢＬ／６マウスにＭＣ−３８結腸癌細胞を移植し、腫瘍サイズをモニターした。腫瘍が確立された後、漸増量のトコフェロールコンジュゲートＡＧ９又は親ＡＧ１をマウスに腫瘍内又は静脈内投与した。ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＡｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴの配列を有する別のＣｐＧ  ＯＤＮであるＡＧ１４についても試験した。使用した用量は、それぞれ１．６ｍｐｋ、４．８ｍｐｋ及び１４．４ｍｐｋに相当する４０μｇ、１２０μｇ及び３６０μｇであった。マウスを腫瘍内処理した場合、１０日間にわたって４回投与した（移植後ｄ１２、ｄ１５、ｄ１９、及びｄ２２）。マウスに静脈内投与した場合、７日間間隔で２回投与した（移植後ｄ１２、ｄ１９）。腫瘍の成長を３日間毎にモニターした。試験に関する追加情報については図１４を参照されたい。
【０２９４】
ＡＧ１又はＡＧ９のいずれかの腫瘍内投与は、同等の有効性を有していた（データは示さず）。各群の４０μｇ用量では、１匹のマウスで腫瘍が完全に退縮し、残りのマウスで腫瘍の成長が遅延した。各群の１２０μｇ用量では、３匹のマウスで腫瘍が完全に退縮し、２匹のマウスで腫瘍の成長が遅延した。３６０μｇのＡＧ１の用量では、３匹のマウスで完全に退縮し、１匹のマウスで腫瘍の成長が遅延した。３６０μｇのＡＧ９の用量では、２匹のマウスで完全に退縮し、残りのマウスでは腫瘍が静止した。
【０２９５】
図１５の結果に示すように、静脈内投与した場合、ＡＧ９はＡＧ１及びＡＧ１４よりも効果的であった。各群の４０μｇ用量では、ＡＧ９で処理した３匹のマウスで腫瘍の成長が遅延し、一方、ＡＧ１で処理した２匹のマウスで腫瘍の成長が遅延した。１２０μｇ用量では、ＡＧ９で処理した３匹のマウスで腫瘍が完全に退縮し、他の２匹のマウスで腫瘍の成長が遅延した。ＡＧ１処理群では１匹のマウスで腫瘍が完全に退縮し、他の４匹のマウスで腫瘍の成長が遅延した。３６０μｇの最高用量では、ＡＧ９を投与した全てのマウスで腫瘍が完全に退縮した。ＡＧ９で処理したマウスでは、初発腫瘍の移植後４０日目にＭＣ−３８腫瘍細胞でマウスを再負荷（re-challenged）した後であっても、腫瘍の取り込みも成長も観察されなかった。ＡＧ１を投与したマウスの中では、５匹のうち４匹のマウスで腫瘍が完全に退縮し、１匹で腫瘍の成長が遅延した。これらのデータにより、インビボでＴＬＲ９を活性化するためにＣｐＧ  ＯＤＮを投与することが、癌の治療において治療的効果を有することが実証される。更に、切断可能なリンカーによってトコフェロールをＣｐＧ  ＯＤＮにコンジュゲートさせると、その治療効果を強化することができる。ＭＣ３８に関して、ＡＧ９は、腫瘍クリアランスをもたらす免疫応答及び腫瘍の再移植を防止するメモリ応答を刺激した。ＡＧ９を用いた免疫調節は、抗腫瘍応答を活性化することができ、腫瘍の任意の更なる再発に対する保護を与えるメモリ応答の形成を可能にした。
【０２９６】
（実施例１４）
ＡＧ９によるＭＴＤ／有効性試験
ナイーブＣ５７ＢＬ／６マウスにＭＣ−３８結腸癌細胞を移植し、腫瘍サイズをモニターする。腫瘍が確立された後、例えば、平均腫瘍体積１００〜２００ｍｍ３になった後、漸増量のトコフェロールコンジュゲートＡＧ９又は親ＡＧ１をマウスに腫瘍内又は静脈内投与する（図１６）。マウスに、２週間にわたって週１回、例えば、１２日目及び１９日目に静脈内に投与する（ｑｗｋ×２）か、又は１２日目に１回腫瘍内に投与する（ｑｄ×１）。
【０２９７】
この試験の主な目的は、ＭＣ−３８腫瘍担持マウスにおいてｑｗｋ×２で投与されたＡＧ９の最大耐用量（ＭＴＤ）を決定することである。この試験の二次的な目的は、腫瘍に対してｑｗｋ×２で投与されたＡＧ９の有効性を判定することである。
【０２９８】
群（ｑｗｋ×２及びｑｄ×１、ｎ＝５／群）及び用量は以下のとおりである。
【０２９９】
【表５】
2021512044.tif 000020
【０３００】
マウス及び腫瘍成長をモニターする。
【０３０１】
（実施例１５）
他の腫瘍モデル
ＡＧ９を、前立腺癌のＣＴ２６腫瘍マウスモデルで試験した。ＢＡＬＢ／Ｃマウスの側腹部に３×１０５個のＣＴ２６腫瘍細胞を皮下移植した。３〜４日間毎に腫瘍の成長をモニターする。平均腫瘍体積が７５〜１２５ｍｍ３に達したとき（移植の約１２日後）、投与を開始する。マウスに、４０ｎｍｏｌのＡＧ１又はＡＧ９のいずれかを２回移植（Ｑ１Ｗ）した。４０日間のモニタリング後、ＡＧ９を投与した８匹のマウス全てで腫瘍が存在しなかった。対照的に、ＡＧ１を投与した８匹のマウスのうちの７匹又はＰＢＳを投与した８匹のマウスのうちの８匹が腫瘍を有しており、腫瘍体積が１０００ｍｍ３を超えたときに安楽死させた。
【０３０２】
ＡＧ９を、リンパ腫のＡ２０腫瘍マウスモデルで試験した。ＢＡＬＢ／Ｃマウスの側腹部に１×１０６個のＡ２０リンパ腫腫瘍細胞を皮下移植した。３〜４日間毎に腫瘍の成長をモニターする。平均腫瘍体積が７５〜１２５ｍｍ３に達したとき（移植の約１９日後）、投与を開始する。マウスに、４０ｎｍｏｌのＡＧ９を２回投与（Ｑ１Ｗ）した。マウスを６０日間モニターした。モニタリング期間の終了時に、マウスの５０％で腫瘍が存在しなかった。他の５匹の被験体では、腫瘍の成長が遅延した。１０匹のマウスのうちの２匹が、約３００ｍｍ３の腫瘍量にとなり、約３０日目に安楽死させた。１匹のマウスは、約４０日目に約１０００ｍｍ３の腫瘍量になった。１匹のマウスは、約３００ｍｍ３の腫瘍量になり、約５０日目に安楽死させた。１匹のマウスは、約１０００ｍｍ３の腫瘍量になり、約５０日目に安楽死させた。対照的に、８匹のＰＢＳ処理マウスのうちの８匹が、２０日目の前に１５００ｍｍ３を超える腫瘍量になり、安楽死させた。
【０３０３】
要約すると、これらの実験により、大腸癌、前立腺癌、及びリンパ腫などの様々な癌を治療するための、ＡＧ９などの開示されたＯＤＮコンストラクトの有効性が実証される。
【０３０４】
（実施例１６）
Ｂ細胞アッセイ
Ｃ５７ＢＬ／６マウスからマウス脾細胞を単離した後、製造元のプロトコルに従って、ＭＡＣＳ磁気ビーズ細胞分離カラムを使用してＢ細胞を精製した。１×１０６個のＢ細胞を、３７℃で４８時間、指定の濃度のオリゴヌクレオチドで刺激した。次いで、細胞を、ＣＤ４０などの活性化マーカーに特異的な抗体で３０分間染色した後、ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋３％ＦＢＳ）で３回洗浄した。次いで、標準的な方法に従ってフローサイトメトリーによって細胞を分析した。マーカーの表面強度を平均蛍光強度によって定量した。この試験の結果を図１８に示す。本発明者らは、ＡＧ９及びその親ＡＧ１、並びに間接リンカーを介してトコフェロールをＡＧ１７にコンジュゲートさせたＡＧ１８及びその親ＡＧ１７を比較した。マウスＢ細胞は、試験した全てのアゴニストに応答し、アゴニストによる刺激時に用量依存的なＣＤ４０の上方調節が観察された。注目すべきことに、０．０１６μＭでは、トコフェロールがコンジュゲートしたＯＤＮであるＡＧ９及びＡＧ１８は、そのそれぞれの非コンジュゲート親ＡＧ１及びＡＧ１７よりも強力であった。この実験により、Ｂ細胞が、トコフェロールがコンジュゲートしたＯＤＮによって直接刺激され得、トコフェロールのコンジュゲーションがアゴニスト活性を増強することが実証された。
【０３０５】
（実施例１７）
切断可能なリンカーを介してＴＬＲアゴニストをトコフェロールにコンジュゲートさせると、二次リンパ器官内の特定の領域へのインビボ体内分布が促進される実施例
トコフェロールのコンジュゲーションがＣｐＧ  ＯＤＮのインビボ体内分布特性に影響を及ぼすかどうかを判定するために、ＡＧ２１（ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ−６４７にコンジュゲートしたＡＧ９のアナログである）又はＡＧ２０（ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ  ６４７にコンジュゲートしたＡＧ１のアナログである）をマウスの皮下又は静脈内に注射した。注射の２４時間後、脾臓、排出リンパ節、肝臓、腎臓、及び肺を摘出し、ＩＶＩＳ撮像装置を使用して撮像した。図２１Ａに示すように、ＡＧ２１を皮下注射したとき、ＡＧ２０と比較して、ＡＧ２１は排出リンパ節に局在する。定量したとき、ＡＧ２１の局在はＡｇ２０との間に２倍を超える差があった。図２１Ｂでは、いずれかの化合物をＩＶ注射した２４時間後に脾臓を定量した。ＩＶ投与後、トコフェロールは化合物の体内分布に影響を及ぼし、ＩＶＩＳを使用して、ＡＧ２１の大部分は脾臓、肝臓で可視化され、腎臓ではより少ない程度可視化されたが、ＡＧ２０はそうではなかった（データを示さず）。脾臓では、ＡＧ２１の局在の量は、ＡＧ２０と比較してほぼ１０倍増加した。皮下又は静脈内投与後、ＡＧ２１は排出リンパ節又は脾臓などの二次リンパ器官に局在し、そこで、免疫細胞を活性化するように配置される。これらの実験により、トコフェロールのコンジュゲーションがその体内分布に劇的に影響を与えることが実証される。
【０３０６】
二次リンパ器官内のＡＧ２１の分布を可視化するために、実験を繰り返し、リンパ節及び脾臓をパラフィン包埋し、切片を作製し、免疫蛍光によってＯＤＮの局在を可視化した。Ｔ細胞又はＢ細胞に対する抗体で組織を染色した。皮下注射の後、リンパ節のＢ細胞濾胞領域内で強いＡＧ２１染色が観察された（データは示さず）。興味深いことに、静脈内注射後に、濾胞外領域内で強力なＡＧ２１染色が観察された。ＡＧ１処理マウスでは、弱いが検出可能なＯＤＮ染色が観察された。これらの結果によって、トコフェロールをＣｐＧ  ＯＤＮにコンジュゲートさせることにより、ＯＤＮが二次リンパ器官内に、より具体的には、微小環境内の分離領域に効果的に局在することが再確認される。
【０３０７】
静脈内注射後に脾臓内のＡＧ２１に結合している細胞型を特性評価するために、脾臓を採取し、それを解離させた後、それを分化させるために特定の細胞マーカーに対する蛍光標識抗体で染色した。フローサイトメトリーを使用して、樹状細胞及びマクロファージ、そして、より低い程度であるがＢ細胞は、全てＡＧ２１に対して陽性であることを確認した（データは示さず）。Ｔ細胞はＡＧ２１に対して陰性であった。したがって、ＡＧ２１に対して陽性であった細胞は、ＴＬＲ９を発現する細胞と一致した。この実験により、トコフェロールがコンジュゲートしたＣｐＧ  ＯＤＮを投与すると、コンジュゲートは二次リンパ器官及びその器官内に優先的に局在し、コンジュゲートは、所望の細胞、すなわち、樹状細胞、マクロファージ、及びＢ細胞によって優先的に取り込まれたことが実証された。
【０３０８】
（実施例１８）
切断可能なリンカーを介してＴＬＲアゴニストを親油性部分にコンジュゲートすると、アルブミンなどの血清タンパク質への結合が促進される実施例
ＡＧ２１の肝臓及び脾臓などのいくつかの器官へは分布するが、腎臓及び肺（これらはいずれも血管新生される）などの他の器官には分布しないという傾斜分布パターンの観察は興味深かった。トコフェロールが血清タンパク質への結合を促進することができ、スカベンジャー受容体の分布に基づいて、それが、トコフェロールがコンジュゲートしたＣｐＧ  ＯＤＮの優先的な局在を決定すると仮定した。インビトロでこの可能性について試験した。ＡＧ１及びＡＧ９のＦＩＴＣがコンジュゲートしたアナログを生成した。ＡＧ２２は、３’末端にＦＩＴＣがコンジュゲートしたＡＧ１のアナログである。同様に、ＡＧ２３は、３’末端にＦＩＴＣがコンジュゲートした、トコフェロールコンジュゲートＡＧ９のアナログである。化合物をＨＰＬＣにロードし、次いで、ＦＩＴＣからの蛍光をモニターした（図２２Ａ）。化合物は、単独であった、又はＢＳＡと予め混合されていた。トコフェロールがコンジュゲートしたＡＧ２３は、存在する場合ＢＳＡと同一の保持時間を有していたが、ＡＧ２２はそうではなかったことが観察された。この実験により、トコフェロールが、ＢＳＡなどの血清タンパク質へのＣｐＧ  ＯＤＮの結合を促進し得ることが実証された。この複合体によって、トコフェロールがコンジュゲートしたＣｐＧ  ＯＤＮの二次リンパ器官及び肝臓への優先的な分布を部分的に説明することができる。
【０３０９】
次に、血清タンパク質に結合する能力がトコフェロールコンジュゲーションの固有の特徴であるかどうかについて考察した。パルミトイル化化合物ＡＧ１９のアナログを合成した。ＡＧ２４は、５’末端において切断可能なリンカーを介してパルミトイルにコンジュゲートし、３’末端においてＦＩＴＣにコンジュゲートしているＣｐＧ  ＯＤＮである。ＡＧ２４又はＡＧ２２をウシ胎児血清（fetal bovine serum、ＦＢＳ）に混合し、次いで、ＨＰＬＣにより混合物を分析し、その蛍光シグナルによりＯＤＮの保持時間をモニターすることによって、上記実験を繰り返した。図２２Ｂに示すように、ＡＧ２４の保持時間はＦＢＳと同一であったが、ＡＧ２２では同一でなかった。これにより、ＣｐＧ  ＯＤＮをパルミトイルにコンジュゲートさせることにより、ＯＤＮと血清タンパク質との相互作用が促進されることが実証された。
【０３１０】
（実施例１９）
切断可能なリンカーを介してＴＬＲアゴニストをトコフェロールにコンジュゲートさせると、ミセル構造への自己製剤化（self-formulation）が促進される実施例
トコフェロールの親油性の性質から、ＣｐＧ  ＯＤＮのミセル形成を促進するトコフェロールコンジュゲーションの能力についても試験した。ＦＩＴＣ蛍光シグナルを使用してＨＰＬＣにおいてＡＧ２３をモニターすることによって、ミセル形成を妨げる高濃度（２又は４Ｍ）の尿素の存在下で、ＡＧ２３の保持時間は変化したが、ＡＧ２２の保持時間は影響を受けなかったことが見出された（図２３）。これらの結果により、ＣｐＧ  ＯＤＮのトコフェロールコンジュゲートによって、ＯＤＮにミセル形成の特性が付与されたことが実証された。
【０３１１】
以上、本開示を詳細に、かつその具体的な実施形態を参照して説明したが、当業者には、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく、本開示に様々な変更及び改変を行い得る点は明らかであろう。
【図１】
2021512044.tif 000024
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３−１】
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【図１３−２】
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【図１３−３】
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【図１４】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１５Ｃ】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１Ａ】
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【図２１Ｂ】
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【図２２Ａ】
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【図２２Ｂ】
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【図２３】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年11月10日(2020.11.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式を有するＣｐＧ  ＯＤＮコンストラクト：
式（ＩＩａ）：５’Ｍ−Ｌ−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’、又は
式（ＩＩｂ）：５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−Ｌ−Ｍ  ３’
（式中、
Ｍは、脂質部分を表し、好ましくは、前記脂質部分は、コレステロール、トコフェロール、パルミトイル基、及びステアリル基からなる群から選択される少なくとも１つの脂質部分を含み、
Ｌは、炭素、窒素、酸素、水素、硫黄及びリンからなる群から選択される１０〜１００個の原子を含むリンカーを表し、Ｌは、切断可能な結合を介して、好ましくはエステル又はアミド結合を介してＣｐＧ  ＯＤＮに共有結合しており、
ＣｐＧ  ＯＤＮは、ｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含み、好ましくは、それぞれがｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも２つ、３つ、又は４つのＣｐＧモチーフを含み、
所望により、式（ＩＩａ）又は（ＩＩｂ）のＣｐＧ  ＯＤＮコンストラクトは、更に、好ましくはガラクトース，Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、フコース、マンノース、シアル酸、Ｎ−アセチルノイラミン酸からなる群から選択される標的指向化部分に共有結合的にコンジュゲートする）。
【請求項２】
以下の構造を有するＣｐＧ  ＯＤＮコンストラクト：
式（ＩＩＩａ）：５’Ｍ１−Ｙ１−（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎ−Ｙ２−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−Ｙ３−Ｍ２  ３’、又は
式（ＩＩＩｂ）：５’Ｍ２−Ｙ３−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−Ｙ２−（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎ−Ｙ１−Ｍ１  ３’
（式中、
Ｍ１は、脂質部分を表し、好ましくは、前記脂質部分は、コレステロール、トコフェロール、パルミトイル基、及びステアリル基からなる群から選択される少なくとも１つを含み、
Ｍ２は、脂質部分、標的指向化部分を表すか、又は存在せず、
Ｙ１は、結合又はリンカー、好ましくは、ホスホジエステル（ｐｏ）結合、ホスホロチオエート（ｐｓ）結合、又は結合を介して（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎに共有結合している、式（（ＣＨ２）２Ｏ）ｏ（式中、ｏは１〜１５である）を有するエチレングリコールであり、
Ｘは、独立して、結合、ｐｏ結合、又はｐｓ結合であり、
Ｙ２及びＹ３のそれぞれは独立して切断可能な結合であり、好ましくはエステル又はアミド結合を含み、より好ましくはｐｏ結合又はホスホルアミデイト結合を含み、最も好ましくはｐｏ結合であり、ただし、Ｍ２が存在しないとき、Ｙ３も存在せず、
ＣｐＧ  ＯＤＮは、ｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含み、好ましくは、それぞれがｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも２つ、３つ、又は４つのＣｐＧモチーフを含み、
ｍは、１〜１５の整数であり、
ｎは、１〜５の整数である）。
【請求項３】
以下の式を有する、請求項２に記載のＯＤＮコンストラクト：
式（ＩＶａ）：５’Ｍ−Ｙ１−（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎ−Ｙ２−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’、又は
式（ＩＶｂ）：５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−Ｙ２−（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎ−Ｙ１−Ｍ  ３’
（式中、
Ｍは、脂質部分を表し、好ましくは前記脂質部分は、コレステロール、トコフェロール、パルミトイル基、及びステアリル基からなる群から選択される少なくとも１つの脂質部分を含み；
Ｙ１は、結合又はリンカー、好ましくは、ホスホジエステル（ｐｏ）結合、ホスホロチオエート（ｐｓ）結合、又は結合を介して（（（ＣＨ２）２Ｏ）ｍ−Ｘ）ｎに共有結合している、式（（ＣＨ２）２Ｏ）ｏ（式中、ｏは１〜１５である）を有するエチレングリコールであり、
Ｘは、独立して、結合、ホスホジエステル（ｐｏ）結合、又はホスホロチオエート（ｐｓ）結合であり、
Ｙ２は、切断可能な結合であり、好ましくはエステル又はアミド結合を含み、より好ましくはｐｏ結合又はホスホルアミデイト結合を含み、最も好ましくはｐｏ結合であり、
ＣｐＧ  ＯＤＮは、ｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含み、好ましくは、それぞれがｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも２つ、３つ、又は４つのＣｐＧモチーフを含み、
ｍは、１〜１５の整数、好ましくは６であり、
ｎは、１〜５の整数、好ましくは２であり、
所望により、式（ＩＶａ）又は（ＩＶｂ）のＣｐＧ  ＯＤＮコンストラクトは、更に、好ましくはガラクトース，Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、フコース、マンノース、シアル酸、Ｎ−アセチルノイラミン酸からなる群から選択される標的指向化部分に共有結合的にコンジュゲートする）。
【請求項４】
以下からなる群から選択される式のコンストラクトを有する、請求項３に記載のＯＤＮコンストラクト：
５’Ｍ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’；
５’Ｍ−ｐｓ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’；
５’Ｍ−ｐｓ（ＨＥＧ）ｐｓ（ＨＥＧ）ｐｏ−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’；
５’Ｍ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｓ（ＨＥＧ）ｐｏ−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’；
５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｍ  ３’、
５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｓ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｍ  ３’、
５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｓ（ＨＥＧ）ｐｓ−Ｍ  ３’、及び
５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｓ−Ｍ  ３’、
（式中、
Ｍは、コレステロール、トコフェロール、パルミトイル基、及びステアリル基からなる群から選択される少なくとも１つを含む脂質部分を表し、
ｐｏは、ホスホジエステル結合を表し、
ＨＥＧは、（（ＣＨ２）２Ｏ）６を表し、
ｐｓは、ホスホロチオエート結合を表し、
ＣｐＧ  ＯＤＮは、ｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含み、好ましくは、それぞれがｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも２つ、３つ、又は４つのＣｐＧモチーフを含み、
Ｍは、ｐｏ若しくはｐｓ結合を介して直接、又はｐｏ若しくはｐｓ結合を介して直接（ＨＥＧ）に結合している第２のリンカーを介して間接的に（ＨＥＧ）に共有結合している）。
【請求項５】
以下からなる群から選択される式を有する、請求項３に記載のＯＤＮコンストラクト：
５’Ｔｏｃｏ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’（式中、Ｔｏｃｏは、トコフェロールを表す）、
５’Ｃｈｏｌ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’（式中、Ｃｈｏｌは、コレステロールを表す）、
５’Ｐａｌｍ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’（式中、Ｐａｌｍは、パルミトイルを表す）、
５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｓ−Ｃｈｏｌ  ３’（式中、Ｃｈｏｌは、コレステロールを表す）、
５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｓ−Ｔｏｃｏ  ３’（式中、Ｔｏｃｏは、トコフェロールを表す）、
５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｓ−Ｐａｌｍ  ３’（式中、Ｐａｌｍは、パルミトイルを表す）、
（式中、
ｐｏは、ホスホジエステル結合を表し、
ＨＥＧは、（（ＣＨ２）２Ｏ）６を表し、
ｐｓは、ホスホロチオエート結合を表し、
ＣｐＧ  ＯＤＮは、ｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含み、好ましくは、それぞれがｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも２つ、３つ、又は４つのＣｐＧモチーフを含み、
前記トコフェロール、前記コレステロール、又は前記パルミトイル基は、ｐｏ若しくはｐｓ結合を介して直接、又はｐｏ若しくはｐｓ結合を介して直接（ＨＥＧ）に結合している第２のリンカーを介して間接的に（ＨＥＧ）に共有結合している）。
【請求項６】
前記ＣｐＧ  ＯＤＮが、ホスホロチオエート（ｐｓ）ヌクレオチド間結合を有する、請求項１〜５のいずれか一項に記載のＯＤＮコンストラクト。
【請求項７】
前記ＣｐＧ  ＯＤＮにおける前記ＣｐＧジヌクレオチドのうちの２〜４個が、それぞれホスホジエステル（ｐｏ）ヌクレオチド間結合を有する、請求項１〜６のいずれか一項に記載のＯＤＮコンストラクト。
【請求項８】
前記ＣｐＧ  ＯＤＮが、以下からなる群から選択されるポリヌクレオチド配列を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載のＯＤＮコンストラクト：
（１）  ５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ  ３’（配列番号１）；
（２）  ５’ＧＧＧＧＧＡＣＧＡＴＣＧＴＣＧＧＧＧＧＧ  ３’（配列番号２）；
（３）  ５’ＧＧＧＧＴＣＡＡＣＧＴＴＧＡＧＧＧＧＧＧ  ３’（配列番号３）；
（４）  ５’ＴＣＣＡＴＧＡＣＧＴＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴ  ３’（配列番号４）；
（５）  ５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ  ３’（配列番号５）；
（６）  ５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＡＣＧＴＡＡＣＧＡＣＧＡＣＧＴＴ  ３’（配列番号６）；及び
（７）  ５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴ  ３’（配列番号７）。
【請求項９】
前記ＣｐＧ  ＯＤＮが、以下からなる群から選択されるポリヌクレオチド配列を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載のＯＤＮコンストラクト：
（１）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号８）；
（２）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号９）；
（３）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１０）；
（４）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１１）；
（５）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１２）；
（６）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１３）；
（７）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１４）；
（８）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＡｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１５）；
（９）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＡｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１６）；
（１０）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＡｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＡｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１７）；
（１１）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＡｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＡｐｓＡｐｓＣｐｏＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１８）；
（１２）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＡｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＡｐｓＡｐｓＣｐｏＧｐｓＡｐｓＣｐｏＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号１９）；
（１３）  ５’ＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｏＧｐｓＡｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＧｐｓＧｐｓ  ＧｐｓＧｐｓＧ  ３’（配列番号２０）；
（１４）  ５’ＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＡｐｓＡｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＡｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧ  ３’（配列番号２１）；
（１５）  ５’ＴｐｓＣｐｓＣｐｓＡｐｓＴｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＣｐｓＣｐｓＴｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号２２）；
（１６）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＧｐｓＣｐｓＧｐｓＣｐｓＧｐｓＣｐｓＧｐｓＣｐｓＣｐｓＧ  ３’（配列番号２３）；
（１７）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴ  ３’（配列番号２４）；
（１８）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴ  ３’（配列番号２５）；及び
（１９）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴ  ３’（配列番号２６）；
（式中、
ｐｏは、ホスホジエステルヌクレオチド間結合を表し、
ｐｓは、ホスホロチオエートヌクレオチド間結合を表す）。
【請求項１０】
以下の構造を有する、請求項１に記載のＯＤＮコンストラクト：
（１）  ５’Ｔｏｃｏ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号２７）；
（２）  ５’Ｔｏｃｏ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号２８）；
（３）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｔｏｃｏ  ３’（配列番号２９）；
（４）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｔｏｃｏ  ３’（配列番号３０）；
（５）  ５’Ｃｈｏｌ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号３１）；
（６）  ５’Ｃｈｏｌ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号３２）；
（７）  ５’Ｃｈｏｌ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号３３）；
（８）  ５’Ｃｈｏｌ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号３４）；
（９）  ５’Ｃｈｏｌ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号３５）；
（１０）  ５’Ｃｈｏｌ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号３６）；
（１１）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｃｈｏｌ  ３’（配列番号３７）；
（１２）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｃｈｏｌ  ３’（配列番号３８）；
（１３）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｃｈｏｌ  ３’（配列番号３９）；
（１４）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｃｈｏｌ  ３’（配列番号４０）；
（１５）  ５’ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｔｏｃｏ  ３’（配列番号４１）；
（１６）  ５’Ｔｏｃｏ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号４２）；
（１７）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｔｏｃｏ  ３’（配列番号４３）；
（１８）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｔｏｃｏ  ３’（配列番号４４）；
（１９）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｔｏｃｏ  ３’（配列番号４５）；
（２０）  ５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｔｏｃｏ  ３’（配列番号４６）；
（２１）  ５’Ｔｏｃｏ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号４７）；
（２２）  ５’Ｔｏｃｏ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号４８）；
（２３）  ５’Ｔｏｃｏ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号４９）；
（２４）  ５’Ｔｏｃｏ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号５０）；
（２５）  ５’−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓ  ＴｐｓＴｐｓ−ＨＥＧｐｓ−Ｃｈｏｌ  ３’（配列番号５１）；
（２６）  ５’−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−Ｃｈｏｌ  ３’（配列番号５２）；
（２７）  ５’−ＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｓＡｐｓＡｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＡｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓＧｐｓ−ＨＥＧｐｓ−Ｃｈｏｌ  ３’（配列番号５３）；
（２８）  ５’−ＴｐｓＣｐｓＣｐｓＡｐｓＴｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＣｐｓＣｐｓＴｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−ＨＥＧｐｓ−Ｃｈｏｌ  ３’（配列番号５４）；
（２９）  ５’−ＴｐｓＣｐｓＣｐｓＡｐｓＴｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓＣｐｓＣｐｓＴｐｓＧｐｓＡｐｓＣｐｓＧｐｓＴｐｓＴｐｓ−ＨＥＧｐｓ−Ｔｏｃｏ  ３’（配列番号５５）；
（３０）  ５’Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ−ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ（ＨＥＧ）ｐｏ−ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ  ３’（配列番号５６）；
（式中、
Ｃｈｏｌは、コレステロールを表し、
Ｔｏｃｏは、トコフェロールを表し、
Ｐａｌｍｉｔｏｙｌは、パルミトイル基を表し、
ＨＥＧは、（（ＣＨ２）２Ｏ）６を表し、
ｐｏは、ホスホジエステル結合を表し、
ｐｓは、ホスホロチオエート結合を表し、
前記トコフェロール、前記コレステロール、又は前記パルミトイル基は、ｐｏ若しくはｐｓ結合を介して直接、又はｐｏ若しくはｐｓ結合を介して直接（ＨＥＧ）に結合している第２のリンカーを介して間接的に（ＨＥＧ）に共有結合している）。
【請求項１１】
以下の式を有するＣｐＧ  ＯＤＮコンストラクト：
式（ＩＩａ）（ｓ）：５’Ｍ−Ｌ−［ＣｐＧ  ＯＤＮ］３’、又は
式（ＩＩｂ）（ｓ）：５’［ＣｐＧ  ＯＤＮ］−Ｌ−Ｍ  ３’
（式中、
Ｍは、脂質部分を表し、好ましくは、前記脂質部分は、コレステロール、トコフェロール、パルミトイル基、及びステアリル基からなる群から選択される少なくとも１つの脂質部分を含み、
Ｌは、炭素、窒素、酸素、水素、硫黄及びリンからなる群から選択される少なくとも１個の原子を含むリンカーを表し、Ｌは、切断可能な結合を介して、好ましくはエステル又はアミド結合を介してＣｐＧ  ＯＤＮに共有結合しており、
ＣｐＧ  ＯＤＮは、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載のＣｐＧ  ＯＤＮを表し、
所望により、式（ＩＩａ）又は（ＩＩｂ）のＣｐＧ  ＯＤＮコンストラクトは、更に、好ましくはガラクトース，Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、フコース、マンノース、シアル酸、Ｎ−アセチルノイラミン酸からなる群から選択される標的指向化部分に共有結合的にコンジュゲートする）。
【請求項１２】
以下の構造を有するＯＤＮコンストラクト：又はその医薬的に許容される塩であって、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓが、ｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含み、好ましくは、それぞれが前記ｐｏヌクレオチド間結合を有する少なくとも２つ、３つ、又は４つのＣｐＧモチーフを含むＣｐＧ  ＯＤＮを表す、ＯＤＮコンストラクト又はその薬剤として許容される塩。
【化１】
2021512044.tif 000053
【請求項１３】
前記ＣｐＧ  ＯＤＮが、配列番号１を含む、請求項１２に記載のＯＤＮコンストラクト。
【請求項１４】
前記ＣｐＧ  ＯＤＮが、５’ＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＴｐｓＧｐｓＴｐｓＣｐｏＧｐｓＴｐｓＴ−３’からなる、請求項１３に記載のＯＤＮコンストラクト。
【請求項１５】
以下の構造を有する、請求項１２に記載のＯＤＮコンストラクト：
【化２】
2021512044.tif 000054
【請求項１６】
以下の構造を有するＯＤＮコンストラクト：
【化３】
2021512044.tif 000055
【請求項１７】
請求項１〜１６のいずれか一項に記載のＯＤＮコンストラクトと、医薬的に許容される担体と、を含む医薬組成物。
【請求項１８】
免疫応答を刺激するための請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）または癌を治療するための請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
請求項１〜１６のいずれか一項に記載のＯＤＮコンストラクトを医薬的に許容される担体と組み合わせることを含む、医薬組成物を調製する方法。
【国際調査報告】
2021512044.tif 000056
2021512044.tif 000057
2021512044.tif 000058