(57)【要約】哺乳動物の内耳に、（ａ）シグナルペプチドに作動可能に連結された抗体重鎖可変ドメインを含むポリペプチド及びシグナルペプチドに作動可能に連結された抗体軽鎖可変ドメインを含むポリペプチド、（ｂ）シグナルペプチドに作動可能に連結された抗原結合抗体断片を含むポリペプチド、または（ｃ）シグナルペプチドに作動可能に連結された可溶性血管内皮増殖因子受容体をコードするヌクレオチド配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターの治療有効量を導入することを含む方法が本明細書に提供される。【選択図】図１Ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物の内耳に、
（ａ）シグナルペプチドに作動可能に連結された抗体重鎖可変ドメインを含むポリペプチド及びシグナルペプチドに作動可能に連結された抗体軽鎖可変ドメインを含むポリペプチド、または
（ｂ）シグナルペプチドに作動可能に連結された抗原結合抗体断片を含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターの治療有効量を導入することを含む、方法。
【請求項２】
内耳における抗体または抗原結合抗体断片のレベルの増加を必要とする哺乳動物の内耳における抗体または抗原結合抗体断片のレベルを増加させるための方法であって、
前記哺乳動物の前記内耳に、
（ａ）シグナルペプチドに作動可能に連結された抗体重鎖可変ドメインを含むポリペプチド及びシグナルペプチドに作動可能に連結された抗体軽鎖可変ドメインを含むポリペプチド、または
（ｂ）シグナルペプチドに連結された抗原結合抗体断片を含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むＡＡＶベクターの治療有効量を導入することを含み、
前記導入により、前記哺乳動物の前記内耳における前記抗体または前記抗原結合抗体断片のレベルの増加がもたらされる、前記方法。
【請求項３】
前記抗体または前記抗原結合抗体断片が血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）に特異的に結合する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記抗体または前記抗原結合抗体断片がＶＥＧＦ活性を低減する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記ＡＡＶベクターが、前記抗体または前記抗原結合抗体断片をコードする配列に作動可能に連結されるプロモーター及びＫｏｚａｋ配列の一方または両方をさらに含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記ＡＡＶベクターが、誘導性プロモーター、構成的プロモーター、及び組織特異的プロモーターからなる群から選択されるプロモーターを含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記ＡＡＶベクターがポリアデニル化シグナル配列をさらに含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記哺乳動物がヒトである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記哺乳動物が内耳障害を有すると特定されている、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記哺乳動物が内耳障害を有すると診断されている、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＡＡＶベクターが、シグナルペプチドに作動可能に連結された抗体重鎖可変ドメインを含むポリペプチド及びシグナルペプチドに作動可能に連結された抗体軽鎖可変ドメインを含むポリペプチドをコードする核酸配列を含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＡＡＶベクターが、シグナルに作動可能に連結された抗原結合抗体断片を含むポリペプチドをコードする核酸配列を含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
内耳障害の治療を必要とする哺乳動物における内耳障害を治療するための方法であって、
前記哺乳動物の内耳に、
（ａ）シグナルペプチドに作動可能に連結された抗体重鎖可変ドメインを含むポリペプチド及びシグナルペプチドに作動可能に連結された抗体軽鎖可変ドメインを含むポリペプチド、または
（ｂ）シグナルペプチドに連結された抗原結合抗体断片を含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むＡＡＶベクターの治療有効量を導入することを含み、
前記導入により、前記哺乳動物における前記内耳障害の治療がもたらされる、前記方法。
【請求項１４】
前記ＡＡＶベクターが、前記抗体または前記抗原結合抗体断片をコードする配列に作動可能に連結されるプロモーター及びＫｏｚａｋ配列の一方または両方をさらに含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＡＡＶベクターが、誘導性プロモーター、構成的プロモーター、及び組織特異的プロモーターからなる群から選択されるプロモーターを含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＡＡＶベクターがポリアデニル化シグナル配列をさらに含む、請求項１３〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記哺乳動物がヒトである、請求項１３〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記哺乳動物が内耳障害を有すると特定されている、請求項１３〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記哺乳動物が内耳障害を有すると診断されている、請求項１３〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＡＡＶベクターが、シグナルペプチドに作動可能に連結された抗体重鎖可変ドメインを含むポリペプチド及びシグナルペプチドに作動可能に連結された抗体軽鎖可変ドメインを含むポリペプチドをコードする核酸配列を含む、請求項１３〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＡＡＶベクターが、シグナルに作動可能に連結された抗原結合抗体断片を含むポリペプチドをコードする核酸配列を含む、請求項１３〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
内耳におけるＶＥＧＦ活性の低減を必要とする哺乳動物の内耳におけるＶＥＧＦ活性を低減する方法であって、
前記哺乳動物の前記内耳に、
（ａ）シグナルペプチドに作動可能に連結された抗体重鎖可変ドメインを含むポリペプチド及びシグナルペプチドに作動可能に連結された抗体軽鎖可変ドメインを含むポリペプチド、または
（ｂ）シグナルペプチドに連結された抗原結合抗体断片を含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むＡＡＶベクターの治療有効量を導入することを含み、
前記（ａ）のポリペプチドが、ＶＥＧＦに特異的に結合してＶＥＧＦ活性を低減する抗体をコードし、前記（ｂ）のポリペプチドが、ＶＥＧＦに特異的に結合してＶＥＧＦ活性を低減する抗原結合抗体断片をコードし、
前記導入により、前記哺乳動物の前記内耳におけるＶＥＧＦ活性の低減がもたらされる、前記方法。
【請求項２３】
前記ＡＡＶベクターが、前記抗体または前記抗原結合抗体断片をコードする配列に作動可能に連結されるプロモーター及びＫｏｚａｋ配列の一方または両方をさらに含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＡＡＶベクターが、誘導性プロモーター、構成的プロモーター、及び組織特異的プロモーターからなる群から選択されるプロモーターを含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記ＡＡＶベクターがポリアデニル化シグナル配列をさらに含む、請求項２２〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記哺乳動物がヒトである、請求項２２〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記哺乳動物が聴神経腫を有すると特定または診断されている、請求項２２〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記哺乳動物が前庭神経鞘腫を有すると特定または診断されている、請求項２２〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記哺乳動物が神経線維腫症２型を有すると特定または診断されている、請求項２２〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記ＡＡＶベクターが、シグナルペプチドに作動可能に連結された抗体重鎖可変ドメインを含むポリペプチド及びシグナルペプチドに作動可能に連結された抗体軽鎖可変ドメインを含むポリペプチドをコードする核酸配列を含む、請求項２２〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記ＡＡＶベクターが、シグナルペプチドに作動可能に連結された抗原結合抗体断片を含むポリペプチドをコードする核酸配列を含む、請求項２２〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
哺乳動物の内耳における聴神経腫、前庭神経鞘腫、または神経線維腫症２型を治療する方法であって、
前記哺乳動物の前記内耳に、
（ａ）シグナルペプチドに作動可能に連結された抗体重鎖可変ドメインを含むポリペプチド及びシグナルペプチドに作動可能に連結された抗体軽鎖可変ドメインを含むポリペプチド、または
（ｂ）シグナルペプチドに連結された抗原結合抗体断片を含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むＡＡＶベクターの治療有効量を導入することを含み、
前記（ａ）のポリペプチドが、ＶＥＧＦに特異的に結合してＶＥＧＦ活性を低減する抗体をコードし、前記（ｂ）のポリペプチドが、ＶＥＧＦに特異的に結合してＶＥＧＦ活性を低減する抗原結合抗体断片をコードし、
前記導入により、それぞれ、前記哺乳動物の前記内耳における聴神経腫、前庭神経鞘腫、または神経線維腫症ＩＩ型の治療がもたらされる、前記方法。
【請求項３３】
前記ＡＡＶベクターが、前記抗体または前記抗原結合抗体断片をコードする配列に作動可能に連結されるプロモーター及びＫｏｚａｋ配列の一方または両方をさらに含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記ＡＡＶベクターが、誘導性プロモーター、構成的プロモーター、及び組織特異的プロモーターからなる群から選択されるプロモーターを含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記ＡＡＶベクターがポリアデニル化シグナル配列をさらに含む、請求項３２〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
前記哺乳動物がヒトである、請求項３２〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
前記哺乳動物が聴神経腫を有すると特定または診断されている、請求項３２〜３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
前記哺乳動物が前庭神経鞘腫を有すると特定または診断されている、請求項３２〜３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
前記哺乳動物が神経線維腫症２型を有すると特定または診断されている、請求項３２〜３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
前記ＡＡＶベクターが、シグナルペプチドに作動可能に連結された抗体重鎖可変ドメインを含むポリペプチド及びシグナルペプチドに作動可能に連結された抗体軽鎖可変ドメインを含むポリペプチドをコードする核酸配列を含む、請求項３２〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
前記ＡＡＶベクターが、シグナルペプチドに作動可能に連結された抗原結合抗体断片を含むポリペプチドをコードする核酸配列を含む、請求項３２〜４０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
前記抗体が、対照抗体と比較して哺乳動物における前記抗体の半減期を減少させる１つ以上のアミノ酸置換を含むＦｃ領域を含むか、または
その前記抗原結合抗体断片が対照抗原結合抗体断片と比較して減少したインビボ半減期を有する、請求項１〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４３】
哺乳動物の内耳に、シグナルペプチドに作動可能に連結された可溶性血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）受容体をコードするヌクレオチド配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターの治療有効量を導入することを含む、方法。
【請求項４４】
内耳における可溶性血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）受容体のレベルの増加を必要とする哺乳動物の内耳における可溶性ＶＥＧＦ受容体のレベルを増加させるための方法であって、
前記哺乳動物の前記内耳に、シグナルペプチドに作動可能に連結された可溶性ＶＥＧＦ受容体をコードするヌクレオチド配列を含むＡＡＶベクターの治療有効量を導入することを含み、
前記導入により、前記哺乳動物の前記内耳における前記可溶性ＶＥＧＦ受容体のレベルの増加がもたらされる、前記方法。
【請求項４５】
前記可溶性ＶＥＧＦ受容体が、ＶＥＧＦ受容体−１（ＶＥＧＦＲ−１）の細胞外領域の一部分を含む、請求項４３または４４に記載の方法。
【請求項４６】
ＶＥＧＦＲ−１の前記細胞外領域の前記一部分が、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−１由来の隣接配列を含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
ＶＥＧＦＲ−１の前記細胞外領域の前記一部分が、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−１由来の前記細胞外領域における１つ以上の免疫グロブリン様ドメインを含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
ＶＥＧＦＲ−１の前記細胞外領域の前記一部分が、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−１由来の隣接配列と少なくとも９０％同一の配列を含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項４９】
前記可溶性ＶＥＧＦ受容体が、ＶＥＧＦ受容体−２（ＶＥＧＦＲ−２）の細胞外領域の一部分を含む、請求項４３または４４に記載の方法。
【請求項５０】
ＶＥＧＦＲ−２の前記細胞外領域の前記一部分が、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−２由来の隣接配列を含む、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
ＶＥＧＦＲ−２の前記細胞外領域の前記一部分が、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−２由来の細胞外領域における１つ以上の免疫グロブリン様ドメインを含む、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
ＶＥＧＦＲ−２の前記細胞外領域の前記一部分が、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−２由来の隣接配列と少なくとも９０％同一の配列を含む、請求項４９に記載の方法。
【請求項５３】
前記可溶性ＶＥＧＦ受容体が、ＶＥＧＦＲ−１の細胞外領域の一部分及びＶＥＧＦＲ−２の細胞外領域の一部分を含む、請求項４３または４４に記載の方法。
【請求項５４】
ＶＥＧＦＲ−１の前記細胞外領域の前記一部分が、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−１由来の前記細胞外領域における１つ以上の免疫グロブリン様ドメインを含み、
ＶＥＧＦＲ−２の前記細胞外領域の前記一部分が、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−２由来の前記細胞外領域における１つ以上の免疫グロブリン様ドメインを含む、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記可溶性ＶＥＧＦ受容体がアフリベルセプトである、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記可溶性ＶＥＧＦ受容体が、ＶＥＧＦ受容体−３（ＶＥＧＦＲ−３）の細胞外領域の一部分を含む、請求項４３または４４に記載の方法。
【請求項５７】
ＶＥＧＦＲ−３の前記細胞外領域の前記一部分が、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−３由来の隣接配列を含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
ＶＥＧＦＲ−３の前記細胞外領域の前記一部分が、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−３由来の前記細胞外領域における１つ以上の免疫グロブリン様ドメインを含む、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
ＶＥＧＦＲ−３の前記細胞外領域の前記一部分が、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−３由来の隣接配列と少なくとも９０％同一の配列を含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項６０】
前記可溶性ＶＥＧＦ受容体がＦｃドメインを含む、請求項４３〜５９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６１】
前記ＦｃドメインがＩｇＧ１  Ｆｃドメインである、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記ＩｇＧ１  Ｆｃドメインがヒト野生型ＩｇＧ１  Ｆｃドメインである、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記可溶性ＶＥＧＦ受容体が、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、及びＶＥＧＦＲ−３のうちの１つ以上に結合するＶＥＧＦの能力を低下させる、請求項４３〜６２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６４】
前記ＡＡＶベクターが、前記可溶性ＶＥＧＦ受容体をコードする配列に作動可能に連結されるプロモーター及びＫｏｚａｋ配列の一方または両方をさらに含む、請求項４３〜６３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６５】
前記ＡＡＶベクターが、誘導性プロモーター、構成的プロモーター、及び組織特異的プロモーターからなる群から選択されるプロモーターを含む、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記ＡＡＶベクターがポリアデニル化シグナル配列をさらに含む、請求項４３〜６５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６７】
前記哺乳動物がヒトである、請求項４３〜６６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６８】
前記哺乳動物が内耳障害を有すると特定されている、請求項４３〜６７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６９】
前記哺乳動物が内耳障害を有すると診断されている、請求項４３〜６７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７０】
内耳障害の治療を必要とする哺乳動物における内耳障害を治療するための方法であって、
前記哺乳動物の内耳に、シグナルペプチドに作動可能に連結された可溶性血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）受容体をコードするヌクレオチド配列を含むＡＡＶベクターの治療有効量を導入することを含み、
前記導入により、前記哺乳動物における前記内耳障害の治療がもたらされる、前記方法。
【請求項７１】
前記ＡＡＶベクターが、前記可溶性ＶＥＧＦ受容体をコードする前記配列に作動可能に連結されるプロモーター及びＫｏｚａｋ配列の一方または両方をさらに含む、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記ＡＡＶベクターが、誘導性プロモーター、構成的プロモーター、及び組織特異的プロモーターからなる群から選択されるプロモーターを含む、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記ＡＡＶベクターがポリアデニル化シグナル配列をさらに含む、請求項７０〜７２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７４】
前記哺乳動物がヒトである、請求項７０〜７３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７５】
前記哺乳動物が内耳障害を有すると特定されている、請求項７０〜７４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７６】
前記哺乳動物が内耳障害を有すると診断されている、請求項７０〜７４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７７】
内耳におけるＶＥＧＦ活性の低減を必要とする哺乳動物の内耳におけるＶＥＧＦ活性を低減する方法であって、
前記哺乳動物の前記内耳に、シグナルペプチドに作動可能に連結された可溶性血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）受容体をコードするヌクレオチド配列を含むＡＡＶベクターの治療有効量を導入することを含み、
前記導入により、前記哺乳動物の前記内耳における前記ＶＥＧＦ活性の低減がもたらされる、前記方法。
【請求項７８】
前記ＡＡＶベクターが、前記可溶性ＶＥＧＦ受容体をコードする配列に作動可能に連結されるプロモーター及びＫｏｚａｋ配列の一方または両方をさらに含む、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記ＡＡＶベクターが、誘導性プロモーター、構成的プロモーター、及び組織特異的プロモーターからなる群から選択されるプロモーターを含む、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
前記ＡＡＶベクターがポリアデニル化シグナル配列をさらに含む、請求項７７〜７９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８１】
前記哺乳動物がヒトである、請求項７７〜８０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８２】
前記哺乳動物が聴神経腫を有すると特定または診断されている、請求項７７〜８１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８３】
前記哺乳動物が前庭神経鞘腫を有すると特定または診断されている、請求項７７〜８１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８４】
前記哺乳動物が神経線維腫症２型を有すると特定または診断されている、請求項７７〜８１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８５】
哺乳動物の内耳における聴神経腫、前庭神経鞘腫、または神経線維腫症２型を治療する方法であって、
前記哺乳動物の前記内耳に、シグナルペプチドに作動可能に連結された可溶性血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）受容体をコードするヌクレオチド配列をコードするヌクレオチド配列を含むＡＡＶベクターの治療有効量を導入することを含み、
前記導入により、それぞれ、前記哺乳動物の前記内耳における聴神経腫、前庭神経鞘腫、または神経線維腫症ＩＩ型の治療がもたらされる、前記方法。
【請求項８６】
前記ＡＡＶベクターが、前記可溶性ＶＥＧＦ受容体をコードする前記配列に作動可能に連結されるプロモーター及びＫｏｚａｋ配列の一方または両方をさらに含む、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
前記ＡＡＶベクターが、誘導性プロモーター、構成的プロモーター、及び組織特異的プロモーターからなる群から選択されるプロモーターを含む、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
前記ＡＡＶベクターがポリアデニル化シグナル配列をさらに含む、請求項８５〜８７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８９】
前記哺乳動物がヒトである、請求項８５〜８８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９０】
前記哺乳動物が聴神経腫を有すると特定または診断されている、請求項８５〜８９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９１】
前記哺乳動物が前庭神経鞘腫を有すると特定または診断されている、請求項８５〜８９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９２】
前記哺乳動物が神経線維腫症２型を有すると特定または診断されている、請求項８５〜８９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９３】
前記可溶性ＶＥＧＦ受容体が、ＶＥＧＦ受容体−１（ＶＥＧＦＲ−１）の細胞外領域の一部分を含む、請求項７０〜９２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９４】
ＶＥＧＦＲ−１の前記細胞外領域の前記一部分が、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−１由来の隣接配列を含む、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
ＶＥＧＦＲ−１の前記細胞外領域の前記一部分が、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−１由来の前記細胞外領域における１つ以上の免疫グロブリン様ドメインを含む、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
ＶＥＧＦＲ−１の前記細胞外領域の前記一部分が、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−１由来の隣接配列と少なくとも９０％同一の配列を含む、請求項９３に記載の方法。
【請求項９７】
前記可溶性ＶＥＧＦ受容体が、ＶＥＧＦ受容体−２（ＶＥＧＦＲ−２）の細胞外領域の一部分を含む、請求項７０〜９２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９８】
ＶＥＧＦＲ−２の前記細胞外領域の前記一部分が、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−２由来の隣接配列を含む、請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
ＶＥＧＦＲ−２の前記細胞外領域の前記一部分が、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−２由来の前記細胞外領域における１つ以上の免疫グロブリン様ドメインを含む、請求項９８に記載の方法。
【請求項１００】
ＶＥＧＦＲ−２の前記細胞外領域の前記一部分が、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−２由来の隣接配列と少なくとも９０％同一の配列を含む、請求項９７に記載の方法。
【請求項１０１】
前記可溶性ＶＥＧＦ受容体が、ＶＥＧＦＲ−１の細胞外領域の一部分及びＶＥＧＦＲ−２の細胞外領域の一部分を含む、請求項７０〜９２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０２】
ＶＥＧＦＲ−１の前記細胞外領域の前記一部分が、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−１由来の前記細胞外領域における１つ以上の免疫グロブリン様ドメインを含み、
ＶＥＧＦＲ−２の前記細胞外領域の前記一部分が、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−２由来の前記細胞外領域における１つ以上の免疫グロブリン様ドメインを含む、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
前記可溶性ＶＥＧＦ受容体がアフリベルセプトである、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
前記可溶性ＶＥＧＦ受容体が、ＶＥＧＦ受容体−３（ＶＥＧＦＲ−３）の細胞外領域の一部分を含む、請求項７０〜９２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０５】
ＶＥＧＦＲ−３の前記細胞外領域の前記一部分が、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−３由来の隣接配列を含む、請求項１０４に記載の方法。
【請求項１０６】
ＶＥＧＦＲ−３の前記細胞外領域の前記一部分が、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−３由来の前記細胞外領域における１つ以上の免疫グロブリン様ドメインを含む、請求項１０５に記載の方法。
【請求項１０７】
ＶＥＧＦＲ−３の前記細胞外領域の前記一部分が、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−３由来の隣接配列と少なくとも９０％同一の配列を含む、請求項１０４に記載の方法。
【請求項１０８】
前記可溶性ＶＥＧＦ受容体がＦｃドメインを含む、請求項７０〜１０７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０９】
前記ＦｃドメインがＩｇＧ１  Ｆｃドメインである、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１０】
前記ＩｇＧ１  Ｆｃドメインがヒト野生型ＩｇＧ１  Ｆｃドメインである、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１１】
前記可溶性ＶＥＧＦ受容体が、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、及びＶＥＧＦＲ−３のうちの１つ以上に結合するＶＥＧＦの能力を低下させる、請求項７０〜１１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１２】
前記ＡＡＶベクターが分泌配列をさらに含む、請求項４３〜１１１のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、その全容が参照により本明細書に組み込まれる２０１７年１２月１９日出願の米国仮特許出願第６２／６０７，６６５号に対する優先権を主張する。
【０００２】
本開示は、概して、ヒト対象における難聴を治療するための核酸の使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
感音難聴は、哺乳動物の内耳における細胞（例えば、有毛細胞）の機能不全によって引き起こされる難聴である。感音難聴の非限定的な原因には、大きな音への曝露、頭部外傷、ウイルス感染、自己免疫性内耳疾患、遺伝性難聴、老化、内耳奇形、メニエール病、耳硬化症、及び腫瘍が挙げられる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明は、哺乳動物（例えば、ヒト）の内耳に、（ａ）シグナルペプチドに作動可能に連結された抗体重鎖可変ドメインを含むポリペプチド及びシグナルペプチドに作動可能に連結された抗体軽鎖可変ドメインを含むポリペプチド、または（ｂ）シグナルペプチドに作動可能に連結された抗原結合抗体断片を含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む任意のアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターの治療有効量を導入することを含む方法に関する。
【０００５】
内耳における抗体または抗原結合抗体断片のレベルの増加を必要とする哺乳動物の内耳における抗体または抗原結合抗体断片のレベルを増加させるための方法であって、哺乳動物の内耳に、（ａ）シグナルペプチドに作動可能に連結された抗体重鎖可変ドメインを含むポリペプチド及びシグナルペプチドに作動可能に連結された抗体軽鎖可変ドメインを含むポリペプチド、または（ｂ）シグナルペプチドに連結された抗原結合抗体断片を含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むＡＡＶベクターの治療有効量を導入することを含み、この導入により、哺乳動物の内耳における抗体または抗原結合抗体断片のレベルの増加がもたらされる、方法が本明細書に提供される。
【０００６】
いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合抗体断片は、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合抗体断片は、ＶＥＧＦ活性を低減する。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、抗体または抗原結合抗体断片をコードする配列に作動可能に連結されるプロモーター及びＫｏｚａｋ配列の一方または両方をさらに含む。
【０００７】
いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、誘導性プロモーター、構成的プロモーター、及び組織特異的プロモーターからなる群から選択されるプロモーターを含む。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、ポリアデニル化シグナル配列をさらに含む。
【０００８】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、哺乳動物は、内耳障害を有すると特定されている。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、哺乳動物は、内耳障害を有すると診断されている。
【０００９】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、シグナルペプチドに作動可能に連結された抗体重鎖可変ドメインを含むポリペプチド及びシグナルペプチドに作動可能に連結された抗体軽鎖可変ドメインを含むポリペプチドをコードする核酸配列を含む。
【００１０】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、シグナルに作動可能に連結された抗原結合抗体断片を含むポリペプチドをコードする核酸配列を含む。
【００１１】
内耳障害の治療を必要とする哺乳動物における内耳障害を治療するための方法であって、哺乳動物の内耳に、（ａ）シグナルペプチドに作動可能に連結された抗体重鎖可変ドメインを含むポリペプチド及びシグナルペプチドに作動可能に連結された抗体軽鎖可変ドメインを含むポリペプチド、または（ｂ）シグナルペプチドに連結された抗原結合抗体断片を含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むＡＡＶベクターの治療有効量を導入することを含み、この導入により、哺乳動物における内耳障害の治療がもたらされる、方法も本明細書に提供される。
【００１２】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、抗体または抗原結合抗体断片をコードする配列に作動可能に連結されるプロモーター及びＫｏｚａｋ配列の一方または両方をさらに含む。
【００１３】
いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、誘導性プロモーター、構成的プロモーター、及び組織特異的プロモーターからなる群から選択されるプロモーターを含む。
【００１４】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、ポリアデニル化シグナル配列をさらに含む。
【００１５】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、哺乳動物は、内耳障害を有すると特定されている。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、哺乳動物は、内耳障害を有すると診断されている。
【００１６】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、シグナルペプチドに作動可能に連結された抗体重鎖可変ドメインを含むポリペプチド及びシグナルペプチドに作動可能に連結された抗体軽鎖可変ドメインを含むポリペプチドをコードする核酸配列を含む。
【００１７】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、シグナルに作動可能に連結された抗原結合抗体断片を含むポリペプチドをコードする核酸配列を含む。
【００１８】
内耳におけるＶＥＧＦ活性の低減を必要とする哺乳動物の内耳におけるＶＥＧＦ活性を低減する方法であって、哺乳動物の内耳に、（ａ）シグナルペプチドに作動可能に連結された抗体重鎖可変ドメインを含むポリペプチド及びシグナルペプチドに作動可能に連結された抗体軽鎖可変ドメインを含むポリペプチド、または（ｂ）シグナルペプチドに連結された抗原結合抗体断片を含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むＡＡＶベクターの治療有効量を導入することを含み、（ａ）のポリペプチドが、ＶＥＧＦに特異的に結合してＶＥＧＦ活性を低減する抗体をコードし、（ｂ）のポリペプチドが、ＶＥＧＦに特異的に結合してＶＥＧＦ活性を低減する抗原結合抗体断片をコードし、この導入により、哺乳動物の内耳におけるＶＥＧＦ活性の低減がもたらされる、方法も本明細書に提供される。
【００１９】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、抗体または抗原結合抗体断片をコードする配列に作動可能に連結されるプロモーター及びＫｏｚａｋ配列の一方または両方をさらに含む。
【００２０】
いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、誘導性プロモーター、構成的プロモーター、及び組織特異的プロモーターからなる群から選択されるプロモーターを含む。
【００２１】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、ポリアデニル化シグナル配列をさらに含む。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。
【００２２】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、哺乳動物は、聴神経腫を有すると特定または診断されている。いくつかの実施形態では、哺乳動物は、前庭神経鞘腫を有すると特定または診断されている。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、哺乳動物は、神経線維腫症２型を有すると特定または診断されている。
【００２３】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、シグナルペプチドに作動可能に連結された抗体重鎖可変ドメインを含むポリペプチド及びシグナルペプチドに作動可能に連結された抗体軽鎖可変ドメインを含むポリペプチドをコードする核酸配列を含む。
【００２４】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、シグナルペプチドに作動可能に連結された抗原結合抗体断片を含むポリペプチドをコードする核酸配列を含む。
【００２５】
哺乳動物の内耳における聴神経腫、前庭神経鞘腫、または神経線維腫症２型を治療する方法であって、哺乳動物の内耳に、（ａ）シグナルペプチドに作動可能に連結された抗体重鎖可変ドメインを含むポリペプチド及びシグナルペプチドに作動可能に連結された抗体軽鎖可変ドメインを含むポリペプチド、または（ｂ）シグナルペプチドに連結された抗原結合抗体断片を含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むＡＡＶベクターの治療有効量を導入することを含み、（ａ）のポリペプチドが、ＶＥＧＦに特異的に結合してＶＥＧＦ活性を低減する抗体をコードし、（ｂ）のポリペプチドが、ＶＥＧＦに特異的に結合してＶＥＧＦ活性を低減する抗原結合抗体断片をコードし、この導入により、それぞれ、哺乳動物の内耳における聴神経腫、前庭神経鞘腫、または神経線維腫症ＩＩ型の治療がもたらされる、方法も本明細書に提供される。
【００２６】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、抗体または抗原結合抗体断片をコードする配列に作動可能に連結されるプロモーター及びＫｏｚａｋ配列の一方または両方をさらに含む。
【００２７】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、誘導性プロモーター、構成的プロモーター、及び組織特異的プロモーターからなる群から選択されるプロモーターを含む。
【００２８】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、ポリアデニル化シグナル配列をさらに含む。
【００２９】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、哺乳動物は、聴神経腫を有すると特定または診断されている。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、哺乳動物は、前庭神経鞘腫を有すると特定または診断されている。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、哺乳動物は、神経線維腫症２型を有すると特定または診断されている。
【００３０】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、シグナルペプチドに作動可能に連結された抗体重鎖可変ドメインを含むポリペプチド及びシグナルペプチドに作動可能に連結された抗体軽鎖可変ドメインを含むポリペプチドをコードする核酸配列を含む。
【００３１】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、シグナルペプチドに作動可能に連結された抗原結合抗体断片を含むポリペプチドをコードする核酸配列を含む。
【００３２】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、対照抗体と比較して哺乳動物における抗体の半減期を減少させる１つ以上のアミノ酸置換を含むＦｃ領域を含むか、またはその抗原結合抗体断片が対照抗原結合抗体断片と比較して減少したインビボ半減期を有する。
【００３３】
哺乳動物の内耳に、シグナルペプチドに作動可能に連結された可溶性血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）受容体をコードするヌクレオチド配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターの治療有効量を導入することを含む方法も本明細書に提供される。
【００３４】
内耳における可溶性血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）受容体のレベルの増加を必要とする哺乳動物の内耳における可溶性ＶＥＧＦ受容体のレベルを増加させるための方法であって、哺乳動物の内耳に、シグナルペプチドに作動可能に連結された可溶性ＶＥＧＦ受容体をコードするヌクレオチド配列を含むＡＡＶベクターの治療有効量を導入することを含み、この導入により、哺乳動物の内耳における可溶性ＶＥＧＦ受容体のレベルの増加がもたらされる、方法も本明細書に提供される。
【００３５】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、可溶性ＶＥＧＦ受容体は、ＶＥＧＦ受容体−１（ＶＥＧＦＲ−１）の細胞外領域の一部分を含む。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ−１の細胞外領域の一部分は、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−１由来の隣接配列を含む。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ−１の細胞外領域の一部分は、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−１由来の細胞外領域における１つ以上の免疫グロブリン様ドメインを含む。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ−１の細胞外領域の一部分は、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−１由来の隣接配列と少なくとも９０％同一の配列を含む。
【００３６】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、可溶性ＶＥＧＦ受容体は、ＶＥＧＦ受容体−２（ＶＥＧＦＲ−２）の細胞外領域の一部分を含む。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ−２の細胞外領域の一部分は、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−２由来の隣接配列を含む。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ−２の細胞外領域の一部分は、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−２由来の細胞外領域における１つ以上の免疫グロブリン様ドメインを含む。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ−２の細胞外領域の一部分は、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−２由来の隣接配列と少なくとも９０％同一の配列を含む。
【００３７】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、可溶性ＶＥＧＦ受容体は、ＶＥＧＦＲ−１の細胞外領域の一部分及びＶＥＧＦＲ−２の細胞外領域の一部分を含む。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ−１の細胞外領域の一部分は、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−１由来の細胞外領域における１つ以上の免疫グロブリン様ドメインを含み、ＶＥＧＦＲ−２の細胞外領域の一部分は、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−２由来の細胞外領域における１つ以上の免疫グロブリン様ドメインを含む。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、可溶性ＶＥＧＦ受容体は、アフリベルセプトである。
【００３８】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、可溶性ＶＥＧＦ受容体は、ＶＥＧＦ受容体−３（ＶＥＧＦＲ−３）の細胞外領域の一部分を含む。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ−３の細胞外領域の一部分は、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−３由来の隣接配列を含む。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ−３の細胞外領域の一部分は、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−３由来の細胞外領域における１つ以上の免疫グロブリン様ドメインを含む。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ−３の細胞外領域の一部分は、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−３由来の隣接配列と少なくとも９０％同一の配列を含む。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、可溶性ＶＥＧＦ受容体は、Ｆｃドメインを含む。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインである。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインは、ヒト野生型ＩｇＧ１  Ｆｃドメインである。
【００３９】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、可溶性ＶＥＧＦ受容体は、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、及びＶＥＧＦＲ−３のうちの１つ以上に結合するＶＥＧＦの能力を低下させる。
【００４０】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、可溶性ＶＥＧＦ受容体をコードする配列に作動可能に連結されるプロモーター及びＫｏｚａｋ配列の一方または両方をさらに含む。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、誘導性プロモーター、構成的プロモーター、及び組織特異的プロモーターの群から選択されるプロモーターを含む。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、ポリアデニル化シグナル配列をさらに含む。
【００４１】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、哺乳動物は、内耳障害を有すると特定されている。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、哺乳動物は、内耳障害を有すると診断されている。
【００４２】
内耳障害の治療を必要とする哺乳動物における内耳障害を治療するための方法であって、哺乳動物の内耳に、シグナルペプチドに作動可能に連結された可溶性血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）受容体をコードするヌクレオチド配列を含むＡＡＶベクターの治療有効量を導入することを含み、この導入により、哺乳動物における内耳障害の治療がもたらされる、方法も本明細書に提供される。
【００４３】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、可溶性ＶＥＧＦ受容体をコードする配列に作動可能に連結されるプロモーター及びＫｏｚａｋ配列の一方または両方をさらに含む。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、誘導性プロモーター、構成的プロモーター、及び組織特異的プロモーターの群から選択されるプロモーターを含む。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、ポリアデニル化シグナル配列をさらに含む。
【００４４】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、哺乳動物は、内耳障害を有すると特定されている。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、哺乳動物は、内耳障害を有すると診断されている。
【００４５】
内耳におけるＶＥＧＦ活性の低減を必要とする哺乳動物の内耳におけるＶＥＧＦ活性を低減する方法であって、哺乳動物の内耳に、シグナルペプチドに作動可能に連結された可溶性血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）受容体をコードするヌクレオチド配列を含むＡＡＶベクターの治療有効量を導入することを含み、この導入により、哺乳動物の内耳におけるＶＥＧＦ活性の低減がもたらされる、方法も本明細書に提供される。
【００４６】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、可溶性ＶＥＧＦ受容体をコードする配列に作動可能に連結されるプロモーター及びＫｏｚａｋ配列の一方または両方をさらに含む。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、誘導性プロモーター、構成的プロモーター、及び組織特異的プロモーターの群から選択されるプロモーターを含む。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、ポリアデニル化シグナル配列をさらに含む。
【００４７】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、哺乳動物は、聴神経腫を有すると特定または診断されている。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、哺乳動物は、前庭神経鞘腫を有すると特定または診断されている。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、哺乳動物は、神経線維腫症２型を有すると特定または診断されている。
【００４８】
哺乳動物の内耳における聴神経腫、前庭神経鞘腫、または神経線維腫症２型を治療する方法であって、哺乳動物の内耳に、シグナルペプチドに作動可能に連結された可溶性血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）受容体をコードするヌクレオチド配列をコードするヌクレオチド配列を含むＡＡＶベクターの治療有効量を導入することを含み、この導入により、それぞれ、哺乳動物の内耳における聴神経腫、前庭神経鞘腫、または神経線維腫症ＩＩ型の治療がもたらされる、方法も本明細書に提供される。
【００４９】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、可溶性ＶＥＧＦ受容体をコードする配列に作動可能に連結されるプロモーター及びＫｏｚａｋ配列の一方または両方をさらに含む。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、誘導性プロモーター、構成的プロモーター、及び組織特異的プロモーターの群から選択されるプロモーターを含む。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、ポリアデニル化シグナル配列をさらに含む。
【００５０】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、哺乳動物は、聴神経腫を有すると特定または診断されている。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、哺乳動物は、前庭神経鞘腫を有すると特定または診断されている。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、哺乳動物は、神経線維腫症２型を有すると特定または診断されている。
【００５１】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、可溶性ＶＥＧＦ受容体は、ＶＥＧＦ受容体−１（ＶＥＧＦＲ−１）の細胞外領域の一部分を含む。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ−１の細胞外領域の一部分は、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−１由来の隣接配列を含む。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ−１の細胞外領域の一部分は、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−１由来の細胞外領域における１つ以上の免疫グロブリン様ドメインを含む。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ−１の細胞外領域の一部分は、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−１由来の隣接配列と少なくとも９０％同一の配列を含む。
【００５２】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、可溶性ＶＥＧＦ受容体は、ＶＥＧＦ受容体−２（ＶＥＧＦＲ−２）の細胞外領域の一部分を含む。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ−２の細胞外領域の一部分は、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−２由来の隣接配列を含む。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ−２の細胞外領域の一部分は、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−２由来の細胞外領域における１つ以上の免疫グロブリン様ドメインを含む。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ−２の細胞外領域の一部分は、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−２由来の隣接配列と少なくとも９０％同一の配列を含む。
【００５３】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、可溶性ＶＥＧＦ受容体は、ＶＥＧＦＲ−１の細胞外領域の一部分及びＶＥＧＦＲ−２の細胞外領域の一部分を含む。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ−１の細胞外領域の一部分は、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−１由来の細胞外領域における１つ以上の免疫グロブリン様ドメインを含み、ＶＥＧＦＲ−２の細胞外領域の一部分は、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−２由来の細胞外領域における１つ以上の免疫グロブリン様ドメインを含む。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、可溶性ＶＥＧＦ受容体は、アフリベルセプトである。
【００５４】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、可溶性ＶＥＧＦ受容体は、ＶＥＧＦ受容体−３（ＶＥＧＦＲ−３）の細胞外領域の一部分を含む。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ−３の細胞外領域の一部分は、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−３由来の隣接配列を含む。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ−３の細胞外領域の一部分は、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−３由来の細胞外領域における１つ以上の免疫グロブリン様ドメインを含む。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ−３の細胞外領域の一部分は、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−３由来の隣接配列と少なくとも９０％同一の配列を含む。
【００５５】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、可溶性ＶＥＧＦ受容体は、Ｆｃドメインを含む。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインである。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインは、ヒト野生型ＩｇＧ１  Ｆｃドメインである。
【００５６】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、可溶性ＶＥＧＦ受容体は、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、及びＶＥＧＦＲ−３のうちの１つ以上に結合するＶＥＧＦの能力を低下させる。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、分泌配列をさらに含む。
【００５７】
別途明記されない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」は、互いの変性バージョンであり、それ故に、同じアミノ酸配列をコードする全てのヌクレオチド配列を含む。
【００５８】
「単離された」という用語は、天然状態から改変または除去されていることを意味する。例えば、生きている動物に天然に存在する核酸またはペプチドは「単離され」ないが、その天然状態の共存する材料から部分的にまたは完全に分離された同じ核酸またはペプチドは「単離され」る。単離された核酸またはタンパク質は、実質的に精製された形態で存在し得るか、または非天然環境、例えば、宿主細胞等に存在し得る。
【００５９】
「トランスフェクトされた」、「形質転換された」、または「形質導入された」という用語は、外因性核酸が細胞に移入または導入されるプロセスを指す。「トランスフェクトされた」、「形質転換された」、または「形質導入された」哺乳類細胞は、外因性核酸でトランスフェクト、形質転換、または形質導入された細胞である。
【００６０】
「発現」という用語は、タンパク質をコードする特定のヌクレオチド配列の転写及び／または翻訳を指す。
【００６１】
「一過性発現」という用語は、短期間（例えば、数時間または数日間）にわたる組み込まれていないコード配列の発現を指す。細胞（例えば、哺乳類細胞）に一過性に発現されるコード配列は、複数回の細胞分裂により失われる。
【００６２】
「対象」という用語は、任意の哺乳動物を含むよう意図されている。いくつかの実施形態では、対象は、齧歯類（例えば、ラットもしくはマウス）、ウサギ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、イヌ、ネコ、非ヒト霊長類、またはヒトである。いくつかの実施形態では、対象は、非症候性難聴を有するか、またはそれを発症する危険性を有する。いくつかの実施形態では、対象は、内耳障害を有すると以前に特定されている。いくつかの実施形態では、対象は、内耳障害を有すると以前に診断されている。いくつかの実施形態では、対象は、薬物誘発性難聴を有すると特定されている。いくつかの実施形態では、対象は、乳児（例えば、ヒト乳児）である。
【００６３】
治療は、対象（例えば、ヒト）における疾患（例えば、無症候性感音難聴）の１つ以上の症状の数、重症度、及び頻度のうちの１つ以上の低減をもたらす場合に、「治療的に有効である」。
【００６４】
「核酸」または「ポリヌクレオチド」という用語は、一本鎖形態または二本鎖形態のいずれかのデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）もしくはリボ核酸（ＲＮＡ）、またはそれらの組み合わせを指す。別途明確に限定されない限り、この用語は、参照ヌクレオチドと同様の結合特性を有する天然ヌクレオチドの既知の類似体を含む核酸を包含する。別途指示されない限り、特定の核酸配列は、相補的配列、ならびに明確に示される配列も黙示的に包含する。本明細書に記載の核酸のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、核酸は、ＤＮＡである。本明細書に記載の核酸のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、核酸は、ＲＮＡである。
【００６５】
「シグナルペプチド」という用語は、新生分泌タンパク質のＮ末端に存在するが、天然に存在する成熟タンパク質には存在しない配列を指す。「シグナルペプチド」は、シグナルペプチドが翻訳された後にプロテアーゼ（例えば、シグナルペプチダーゼ）によって切断される。シグナルペプチドは、当該技術分野で既知である。シグナルペプチドの非限定的な例としては、ＭＥＦＦＫＫＴＡＬＡＡＬＶＭＧＦＳＧＡＡＬＡ（配列番号９）及びＭＫＹＬＬＰＴＡＡＡＧＬＬＬＬＡＡＱＰＡＭＡ（配列番号１０）が挙げられる。
【００６６】
「内耳障害」という用語は、哺乳動物の内耳内またはその周辺の細胞（例えば、有毛細胞、支持細胞、らせん神経節ニューロン、マクロファージ、またはシュワン細胞）の機能不全によって引き起こされる障害を指す。内耳障害の非限定的な例としては、例えば、感音難聴（ＳＮＨＬ）、騒音性難聴、薬物誘発性難聴、加齢性難聴、聴神経腫、神経線維腫症２型、聴覚神経障害、有毛細胞消失を伴わない騒音性蝸牛シナプス変性症、加齢性蝸牛シナプス変性症、後天性感音難聴、及び前庭神経鞘腫が挙げられる。例えば、Ｋｕｊａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｅａｒ  Ｒｅｓ  ３３０（０  ０）：１９１−１９９，２０１５、及びＳｕｚｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  ６：２４９０７を参照されたい。内耳障害の非限定的な例が本明細書に記載されており、内耳障害のさらなる例は、当該技術分野で既知である。
【００６７】
「抗体」という用語は、相互作用して少なくとも１つの抗原結合ドメインを形成する２つ以上の単一ポリペプチド鎖の複合体を意味する。抗体の非限定的な例としては、モノクローナル抗体（例えば、完全長またはインタクトなモノクローナル抗体）、ポリクローナル抗体、多価抗体、多重特異性抗体（例えば、所望の生物学的活性を呈する限り、二重特異性抗体、三重特異性抗体等）が挙げられる。抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、及び／または親和性成熟抗体であり得る。
【００６８】
「抗原結合抗体断片」という用語は、少なくとも１つの抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を構成する全てのアミノ酸を含む単一のポリペプチドである。
【００６９】
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に同種の抗体の集団から得られた抗体を指し、すなわち、その集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る天然に存在する突然変異の可能性を除いて同一である。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原に対して指向されている。さらに、異なる決定基（エピトープ）に対して指向された異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して指向される。
【００７０】
本明細書におけるモノクローナル抗体には、重鎖及び／または軽鎖の一部分が、特定の種に由来するか、または特定の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または相同である一方で、それらの鎖（複数可）の残りが、別の種に由来するか、または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または相同である「キメラ」抗体、ならびに所望の生物学的活性を呈する限り、かかる抗体の断片が具体的に含まれる（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：６８５１−６８５５（１９８４）を参照のこと）。
【００７１】
「抗原結合ドメイン」とは、（例えば、単一のポリペプチド由来のアミノ酸から形成されるか、または２つ以上のポリペプチド（例えば、同じまたは異なるポリペプチド）由来のアミノ酸から形成された１つ以上の異なる抗原に特異的に結合することができる１つ以上のタンパク質ドメイン（複数可）である。いくつかの例では、抗原結合ドメインは、天然に存在する抗体のものと同様の特異性及び親和性で抗原またはエピトープに結合することができる。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、代替足場を含み得る。抗原結合ドメインの非限定的な例が本明細書に記載されている。抗原結合ドメインのさらなる例は当該技術分野で既知である。いくつかの例では、抗原結合ドメインは、単一の抗原に結合することができる。
【００７２】
「親和性」とは、抗原結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原またはエピトープ）との間の非共有的相互作用の総計の強度を指す。別途指示されない限り、本明細書で使用される場合、「親和性」とは、抗原結合ドメインのメンバーと抗原またはエピトープとの間の１：１の相互作用を反映する内因性結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、平衡解離定数（ＫＤ）によって表され得る。親和性は、本明細書に記載される方法を含む、当該技術分野で既知の一般的な方法によって測定することができる。親和性は、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標））または生物層干渉分光法（例えば、ＦＯＲＴＥＢＩＯ（登録商標））を使用して決定され得る。抗原結合ドメインとその対応する抗原またはエピトープとの間の親和性を決定するためのさらなる方法が当該技術分野で既知である。
【００７３】
「半減期」という語句は、哺乳動物（例えば、本明細書に記載の哺乳動物のうちのいずれか）の循環（例えば、血液）における抗体、その抗原結合抗体断片、または可溶性ＶＥＧＦ受容体の半減期を指し、抗体、その抗原結合抗体断片、または可溶性ＶＥＧＦ受容体の５０％が循環から除去されるのに必要な時間によって表される。いくつかの実施形態では、半減期の変化（例えば、抗体、その抗原結合抗体断片、または可溶性ＶＥＧＦ受容体の半減期の減少）は、対象における抗体、抗原結合抗体断片、または可溶性ＶＥＧＦ受容体の半減期を、同様の哺乳動物における対照抗体、対照抗原結合抗体断片、または対照可溶性ＶＥＧＦ受容体の半減期と比較することによって決定される。
【００７４】
いくつかの実施形態では、哺乳動物における抗体、その抗原結合抗体断片、または可溶性ＶＥＧＦ受容体の半減期は、対象から得られた試料（例えば、血液試料）中の抗体、その抗原結合抗体断片、または可溶性ＶＥＧＦ受容体のレベルを、本明細書に記載のＡＡＶベクターのうちのいずれかの全身投与（例えば、静脈内）投与後の異なる時点で測定することによって決定される。いくつかの実施形態では、哺乳動物から得られた試料中に存在する抗体、その抗原結合抗体断片、または可溶性ＶＥＧＦ受容体のレベルは、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）または当該技術分野で既知の別のアッセイを使用して決定され、試料中に存在する抗体、その抗原結合抗体断片、または可溶性ＶＥＧＦ受容体の決定されたレベルは、ソフトウェアプログラム（例えば、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ）を使用して時間の関数としてプロットされる。
【００７５】
「ＶＥＧＦ活性」という用語は、ＶＥＧＦタンパク質の１つ以上の既知の活性を指す。例えば、ＶＥＧＦタンパク質の活性の１つは、１つ以上のＶＥＧＦ受容体に結合する能力である。別の例では、ＶＥＧＦタンパク質の活性の１つは、ＶＥＧＦ受容体を発現する哺乳類細胞における下流シグナル伝達経路（複数可）を誘発するＶＥＧＦの能力である。ＶＥＧＦの１つ以上の活性を検出するための方法は、当該技術分野で既知である。
【００７６】
「可溶性ＶＥＧＦ受容体」という用語は、シグナルペプチドに作動可能に連結された１つ以上の哺乳類ＶＥＧＦ受容体（複数可）（例えば、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、及びＶＥＧＦＲ−３）の細胞外領域の一部分を含むポリペプチドを指し、可溶性ＶＥＧＦ受容体は、１つ以上の哺乳類ＶＥＧＦタンパク質（例えば、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、及びＶＥＧＦ−Ｄのうちの１つ以上）に特異的に結合することができる。いくつかの例では、可溶性ＶＥＧＦ受容体は、ＶＥＧＦＲ−１の細胞外領域の一部分（例えば、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−１由来の隣接配列（例えば、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−１由来の細胞外領域における１つ以上の免疫グロブリン様ドメイン）または野生型ヒトＶＥＧＦＲ−１由来の隣接配列と少なくとも９０％同一の配列）を含む。いくつかの例では、可溶性ＶＥＧＦ受容体は、ＶＥＧＦＲ−２の細胞外領域の一部分（例えば、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−２由来の隣接配列（例えば、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−２由来の細胞外領域における１つ以上の免疫グロブリン様ドメイン）または野生型ヒトＶＥＧＦＲ−２由来の隣接配列と少なくとも９０％同一の配列）を含む。いくつかの例では、可溶性ＶＥＧＦ受容体は、ＶＥＧＦＲ−１の細胞外領域の一部分及びＶＥＧＦＲ−２の細胞外領域の一部分（例えば、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−１由来の細胞外領域における１つ以上の免疫グロブリン様ドメイン及び野生型ヒトＶＥＧＦＲ−２由来の細胞外領域における１つ以上の免疫グロブリン様ドメイン）（例えば、アフリベルセプト）を含む。いくつかの例では、可溶性ＶＥＧＦ受容体は、ＶＥＧＦＲ−３の細胞外領域の一部分（例えば、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−３由来の隣接配列（例えば、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−３由来の細胞外領域における１つ以上の免疫グロブリン様ドメイン）または野生型ヒトＶＥＧＦＲ−３由来の隣接配列と少なくとも９０％同一の配列）を含む。
【００７７】
いくつかの例では、可溶性ＶＥＧＦ受容体は、安定化ドメイン（例えば、ＩｇＧ１  Ｆｃドメイン（例えば、ヒト野生型ＩｇＧ１  Ｆｃドメイン等のＦｃドメイン）をさらに含み得る。いくつかの例では、可溶性ＶＥＧＦ受容体は、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、及びＶＥＧＦＲ−３のうちの１つ以上（例えば、２つまたは３つ）に結合するＶＥＧＦの能力を低下させる。別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する当業者によって一般に理解される意味と同じ意味を有する。本発明で使用するための方法及び材料が本明細書に記載されており、当該技術分野で既知の他の好適な方法及び材料も使用され得る。材料、方法、及び例は例示にすぎず、限定するようには意図されていない。本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、配列、データベースエントリ、及び他の参考文献は、参照によりそれらの全体が組み込まれる。矛盾が生じる場合には、定義を含む本明細書が優先される。
【図面の簡単な説明】
【００７８】
【図１Ａ】ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））をコードする配列を含む４４７４ｂｐの例示的なＡＡＶベクターである。
【図１Ｂ】ラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））をコードする配列を含む３８１４ｂｐの例示的なＡＡＶベクターである。
【図１Ｃ】ラニビズマブ及び緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）をコードする配列を含む４５７３ｂｐの例示的なＡＡＶベクターである。
【図１Ｄ】アフリベルセプト（Ｅｙｌｅａ（登録商標））をコードする配列を含む３６３１ｂｐの例示的なＡＡＶベクターである。
【図２】本明細書に記載の例示的なＡＡＶベクターを使用して異なる抗ＶＥＧＦ抗体もしくは抗原結合抗体断片、または可溶性ＶＥＧＦ受容体のＨＥＫ細胞発現を示すウエスタンブロットである。レーン１：事前に染色されたＰａｇｅＲｕｌｅｒ（商標）タンパク質ラダー。レーン２：非トランスフェクト／陰性対照。レーン３：図１Ａに示されるＡＡＶベクターでのトランスフェクション。レーン４：図１Ｃに示されるＡＡＶベクターでのトランスフェクション。レーン５：図１Ｂに示されるＡＡＶベクターでのトランスフェクション。レーン６：７．５×１０４の感染多重度（ＭＯＩ）での、図１Ａに示されるＡＡＶベクターでのトランスフェクション。レーン７：２．２×１０５のＭＯＩでの、図１Ａに示されるＡＡＶベクターでのトランスフェクション。レーン８：５．５×１０５のＭＯＩでの、図１Ａに示されるＡＡＶベクターでのトランスフェクション。レーン９：事前に染色されたＰａｇｅＲｕｌｅｒ（商標）タンパク質ラダー。レーン１０：非トランスフェクト／陰性対照。レーン１１：図１Ａに示されるＡＡＶベクターでのトランスフェクション。レーン１２：図１Ｃに示されるＡＡＶベクターでのトランスフェクション。レーン１３：図１Ｂに示されるＡＡＶベクターでのトランスフェクション。レーン１４：７．５×１０４の感染多重度（ＭＯＩ）での、図１Ａに示されるＡＡＶベクターでのトランスフェクション。レーン１５：２．２×１０５のＭＯＩでの、図１Ａに示されるＡＡＶベクターでのトランスフェクション。レーン１６：５．５×１０５のＭＯＩでの、図１Ａに示されるＡＡＶベクターでのトランスフェクション。レーン２〜８は、還元タンパク質を含む。レーン１０〜１６は、非還元タンパク質を含む。
【図３Ａ】Ｏｃｔｅｔ（登録商標）分析ソフトウェアであるＤａｔａ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ＨＴ１０．０を使用してＯｃｔｅｔ（登録商標）ＨＴＸバイオセンサー機器によって測定される、組換えヒトＶＥＧＦを結合剤として使用する緩衝液中の対照マウス抗ヒトＶＥＧＦモノクローナル抗体（抗ｈＶＥＧＦ  ＭｍＡｂ）の親和性を示すグラフである。
【図３Ｂ】Ｏｃｔｅｔ（登録商標）分析ソフトウェアであるＤａｔａ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ＨＴ１０．０を使用してＯｃｔｅｔ（登録商標）ＨＴＸバイオセンサー機器によって測定される、組換えヒトＶＥＧＦを結合剤として使用する条件培地（ＣＭ）試料中の対照抗ｈＶＥＧＦ  ＭｍＡｂの親和性を示すグラフである。＊：抗ｈＶＥＧＦ  ＭｍＡｂをＣＭ中１００μｇ／ｍＬで調製し、その後、１×動態緩衝液中１０μｇ／ｍＬの最終濃度に希釈した。
【図４Ａ】Ｏｃｔｅｔ（登録商標）分析ソフトウェアであるＤａｔａ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ＨＴ１０．０を使用してＯｃｔｅｔ（登録商標）ＨＴＸバイオセンサー機器によって測定される、組換えヒトＶＥＧＦを結合剤として使用する条件培地の親和性を示すグラフである。
【図４Ｂ】Ｏｃｔｅｔ（登録商標）分析ソフトウェアであるＤａｔａ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ＨＴ１０．０を使用したＯｃｔｅｔ（登録商標）ＨＴＸバイオセンサー機器を使用して、組換えヒトＶＥＧＦを結合剤として使用する図１Ａに示されるＡＡＶベクターでトランスフェクトされたＨＥＫ細胞由来の培養培地の親和性を示すグラフである。
【図４Ｃ】図３Ａ、３Ｂ、４Ａ、及び４Ｂ（表の上から下に）に示されるデータから決定された平衡解離定数（ＫＤ）を示す表である。
【発明を実施するための形態】
【００７９】
哺乳動物の内耳に、（ａ）シグナルペプチドに作動可能に連結された抗体重鎖可変ドメインを含むポリペプチド及びシグナルペプチドに作動可能に連結された抗体軽鎖可変ドメインを含むポリペプチド、または（ｂ）シグナルペプチドに作動可能に連結された抗原結合抗体断片（例えば、ＦａｂまたはｓｃＦｖ）を含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターの治療有効量を導入することを含む方法が本明細書に提供される。
【００８０】
内耳における抗体または抗原結合抗体断片のレベルの増加を必要とする哺乳動物の内耳における抗体または抗原結合抗体断片のレベルを増加させるための方法であって、哺乳動物の内耳に、（ａ）シグナルペプチドに作動可能に連結された抗体重鎖可変ドメインを含むポリペプチド及びシグナルペプチドに作動可能に連結された抗体軽鎖可変ドメインを含むポリペプチド、または（ｂ）シグナルペプチドに作動可能に連結された抗原結合抗体断片（例えば、ＦａｂまたはｓｃＦｖ）を含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むＡＡＶベクターの治療有効量を導入することを含み、この導入により、哺乳動物の内耳における抗体または抗原結合抗体断片のレベルの増加がもたらされる、方法も本明細書に提供される。
【００８１】
内耳障害の治療を必要とする哺乳動物における内耳障害を治療するための方法であって、哺乳動物の内耳に、（ａ）シグナルペプチドに作動可能に連結された抗体重鎖可変ドメインを含むポリペプチド及びシグナルペプチドに作動可能に連結された抗体軽鎖可変ドメインを含むポリペプチド、または（ｂ）シグナルペプチドに連結された抗原結合抗体断片を含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むＡＡＶベクターの治療有効量を導入することを含み、この導入により、哺乳動物における内耳障害の治療がもたらされる、方法も提供される。
【００８２】
内耳におけるＶＥＧＦ活性の低減を必要とする哺乳動物の内耳におけるＶＥＧＦ活性を低減する方法であって、哺乳動物の内耳に、（ａ）シグナルペプチドに作動可能に連結された抗体重鎖可変ドメインを含むポリペプチド及びシグナルペプチドに作動可能に連結された抗体軽鎖可変ドメインを含むポリペプチド、または（ｂ）シグナルペプチドに作動可能に連結された抗原結合抗体断片（例えば、ＦａｂまたはｓｃＦｖ）を含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むＡＡＶベクターの治療有効量を導入することを含み、（ａ）のポリペプチドが、ＶＥＧＦに特異的に結合してＶＥＧＦ活性を低減する抗体をコードし、（ｂ）のポリペプチドが、ＶＥＧＦに特異的に結合してＶＥＧＦ活性を低減する抗原結合抗体断片をコードし、この導入により、哺乳動物の内耳におけるＶＥＧＦ活性の低減がもたらされる、方法も本明細書に提供される。
【００８３】
哺乳動物の内耳における聴神経腫、前庭神経鞘腫、または神経線維腫症ＩＩ型を治療する方法であって、哺乳動物の内耳に、（ａ）シグナルペプチドに作動可能に連結された抗体重鎖可変ドメインを含むポリペプチド及びシグナルペプチドに作動可能に連結された抗体軽鎖可変ドメインを含むポリペプチド、または（ｂ）シグナルペプチドに作動可能に連結された抗原結合抗体断片（例えば、ＦａｂまたはｓｃＦｖ）を含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むＡＡＶベクターの治療有効量を導入することを含み、（ａ）のポリペプチドが、ＶＥＧＦに特異的に結合してＶＥＧＦ活性を低減する抗体をコードし、（ｂ）のポリペプチドが、ＶＥＧＦに特異的に結合してＶＥＧＦ活性を低減する抗原結合抗体断片をコードし、この導入により、哺乳動物の内耳における聴神経腫または前庭神経鞘腫の治療がもたらされる、方法も本明細書に提供される。
【００８４】
哺乳動物の内耳に、シグナルペプチドに作動可能に連結された可溶性血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）受容体をコードするヌクレオチド配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターの治療有効量を導入することを含む方法も本明細書に提供される。
【００８５】
内耳における可溶性血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）受容体のレベルの増加を必要とする哺乳動物の内耳における可溶性ＶＥＧＦ受容体のレベルを増加させるための方法であって、哺乳動物の内耳に、シグナルペプチドに作動可能に連結された可溶性ＶＥＧＦ受容体をコードするヌクレオチド配列を含むＡＡＶベクターの治療有効量を導入することを含み、この導入により、哺乳動物の内耳における可溶性ＶＥＧＦ受容体のレベルの増加がもたらされる、方法も本明細書に提供される。
【００８６】
内耳障害の治療を必要とする哺乳動物における内耳障害を治療するための方法であって、哺乳動物の内耳に、シグナルペプチドに作動可能に連結された可溶性血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）受容体をコードするヌクレオチド配列を含むＡＡＶベクターの治療有効量を導入することを含み、この導入により、哺乳動物における内耳障害の治療がもたらされる、方法も本明細書に提供される。
【００８７】
内耳におけるＶＥＧＦ活性の低減を必要とする哺乳動物の内耳におけるＶＥＧＦ活性を低減する方法であって、哺乳動物の内耳に、シグナルペプチドに作動可能に連結された可溶性血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）受容体をコードするヌクレオチド配列を含むＡＡＶベクターの治療有効量を導入することを含み、この導入により、哺乳動物の内耳におけるＶＥＧＦ活性の低減がもたらされる、方法も本明細書に提供される。
【００８８】
哺乳動物の内耳における聴神経腫、前庭神経鞘腫、または神経線維腫症２型を治療する方法であって、哺乳動物の内耳に、シグナルペプチドに作動可能に連結された可溶性血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）受容体をコードするヌクレオチド配列をコードするヌクレオチド配列を含むＡＡＶベクターの治療有効量を導入することを含み、この導入により、それぞれ、哺乳動物の内耳における聴神経腫、前庭神経鞘腫、または神経線維腫症ＩＩ型の治療がもたらされる、方法も本明細書に提供される。
【００８９】
本明細書に記載のＡＡＶベクターのうちのいずれかを含むキットも提供される。
【００９０】
組成物、キット、及び方法の追加の非限定的な態様が本明細書に記載され、制限なく、任意の組み合わせで使用され得る。
【００９１】
抗体及び抗原結合抗体断片
いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化抗体、キメラ抗体、または多価抗体であり得る。いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合抗体断片は、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、ＶＨＨドメイン、ＶＮＡＲドメイン、ａ（ｓｃＦｖ）２、ミニボディ、またはＢｉＴＥであり得る。いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合抗体断片は、ＤＶＤ−Ｉｇ、及び二重親和性再標的抗体（ＤＡＲＴ）、トリオマブ、共通ＬＣを有するｋｉｈ  ＩｇＧ、クロスマブ、オルソ−Ｆａｂ  ＩｇＧ、ツー・イン・ワンＩｇＧ、ＩｇＧ−ＳｃＦｖ、ｓｃＦｖ２−Ｆｃ、ビ−ナノボディ、タンデン抗体、ＤＡＲＴ−Ｆｃ、ｓｃＦｖ−ＨＡＳ−ｓｃＦｖ、ＤＮＬ−Ｆａｂ３、ＤＡＦ（ツー・イン・ワンまたはフォー・イン・ワン）、ＤｕｔａＭａｂ、ＤＴ−ＩｇＧ、ノブインホール共通ＬＣ、ノブ・イン・ホールアセンブリ、電荷対抗体、Ｆａｂアーム交換抗体、ＳＥＥＤホディ、トリオマブ、ＬＵＺ−Ｙ、Ｆｃａｂ、ｋλ−ホディ、直交Ｆａｂ、ＤＶＤ−ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｈ）−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−（Ｈ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−（Ｌ）−ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ，Ｈ）−Ｆｃ、ＩｇＧ（Ｈ）−Ｖ、Ｖ（Ｈ）−ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）−Ｖ、Ｖ（Ｌ）−ＩｇＧ、ＫＩＨ  ＩｇＧ−ｓｃＦａｂ、２ｓｃＦｖ−ＩｇＧ、ＩｇＧ−２ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ４−Ｉｇ、Ｚｙｂｏｄｙ、ＤＶＩ−ＩｇＧ、ナノボディ、ナノボディ−ＨＳＡ、ダイアボディ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃダイアボディ、ｓｃダイアボディ−ＣＨ３、ダイアボディ−ＣＨ３、トリプルボディ、ミニ抗体、ミニボディ、ＴｒｉＢｉミニボディ、ｓｃＦｖ−ＣＨ３  ＫＩＨ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−ＣＨ−ＣＬ−ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２−ｓｃＦＶ２、ｓｃＦｖ−ＫＩＨ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、四価ＨＣＡｂ、ｓｃダイアボディ−Ｆｃ、ダイアボディ−Ｆｃ、タンデムｓｃＦｖ−Ｆｃ、イントラボディ、ドック・アンド・ロック二重特異性抗体、ＩｍｍＴＡＣ、ＨＳＡｂｏｄｙ、ｓｃダイアボディ−ＨＡＳ、タンデムｓｃＦｖ、ＩｇＧ−ＩｇＧ、Ｃｏｖ−Ｘ−Ｂｏｄｙ、及びｓｃＦｖ１−ＰＥＧ−ｓｃＦｖ２であり得る。
【００９２】
抗体または抗原結合抗体断片のさらなる例としては、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、及びＦａｂ’断片が挙げられる。抗体または抗原結合抗体断片のさらなる例としては、ＩｇＧの抗原結合断片（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４の抗原結合断片）（例えば、ヒトまたはヒト化ＩｇＧ、例えば、ヒトまたはヒト化ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４の抗原結合断片）、ＩｇＡの抗原結合断片（例えば、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２の抗原結合断片）（例えば、ヒトまたはヒト化ＩｇＡ、例えば、ヒトまたはヒト化ＩｇＡ１またはＩｇＡ２の抗原結合断片）、ＩｇＤの抗原結合断片（例えば、ヒトまたはヒト化ＩｇＤの抗原結合断片）、ＩｇＥの抗原結合断片（例えば、ヒトまたはヒト化ＩｇＥの抗原結合断片）、またはＩｇＭの抗原結合断片（例えば、ヒトまたはヒト化ＩｇＭの抗原結合断片）が挙げられる。
【００９３】
本明細書に記載の抗体または抗原結合抗体断片のうちのいずれかがＶＥＧＦに特異的に結合する。
【００９４】
ＶＨＨドメインは、ラクダ類に見られ得る単一の単量体可変抗体ドメインである。ＶＮＡＲドメインは、軟骨魚に見られ得る単一の単量体可変抗体ドメインである。ＶＨＨドメイン及びＶＮＡＲドメインの非限定的な態様は、例えば、Ｃｒｏｍｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１５：２５４３−２５５７，２０１６、Ｄｅ  Ｇｅｎｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０：１８７−１９８，２００６、Ｄｅ  Ｍｅｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３２：２６３−２７０，２０１４、Ｋｉｊａｎｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ  １０：１６１−１７４，２０１５、Ｋｏｖａｌｅｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．１４：１５２７−１５３９，２０１４、Ｋｒａｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｃｏｌ．３８：２１−２８，２０１６、Ｍｕｊｉｃ−Ｄｅｌｉｃ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．３５：２４７−２５５，２０１４、Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ，Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７４：２７７−３０２，２００１、Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．２６：２３０−２３５，２００１、Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．８２：７７５−７９７，２０１３、Ｒａｈｂａｒｉｚａｄｅｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｎｖｅｓｔ．４０：２９９−３３８，２０１１、Ｖａｎ  Ａｕｄｅｎｈｏｖｅ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ  ８：４０−４８，２０１６、Ｖａｎ  Ｂｏｃｋｓｔａｅｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ  １０：１２１２−１２２４，２００９、Ｖｉｎｃｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．９１１：１５−２６，２０１２、及びＷｅｓｏｌｏｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８：１５７−１７４，２００９に記載されている。
【００９５】
「Ｆｖ」断片は、１つの重鎖可変ドメインと１つの軽鎖可変ドメインとの非共有結合二量体を含む。
【００９６】
「Ｆａｂ」断片は、Ｆｖ断片の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインに加えて、軽鎖の定常ドメイン及び重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）を含む。
【００９７】
「Ｆ（ａｂ’）２」断片は、ジスルフィド結合によってヒンジ領域付近に結合された２つのＦａｂ断片を含む。
【００９８】
「二重可変ドメイン免疫グロブリン」または「ＤＶＤ−Ｉｇ」とは、例えば、各々参照により全体が組み込まれる、ＤｉＧｉａｍｍａｒｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．８９９：１４５−１５６，２０１２、Ｊａｋｏｂ  ｅｔ  ａｌ．，ＭＡＢｓ  ５：３５８−３６３，２０１３、ならびに米国特許第７，６１２，１８１号、同第８，２５８，２６８号、同第８，５８６，７１４号、同第８，７１６，４５０号、同第８，７２２，８５５号、同第８，７３５，５４６号、及び同第８，８２２，６４５号に記載の多価多重特異性結合タンパク質を指す。
【００９９】
ＤＡＲＴは、例えば、Ｇａｒｂｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  １３：７９９−８０１，２０１４に記載されている。
【０１００】
抗体及び抗原結合抗体断片のさらなる態様は、当該技術分野で既知である。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体または抗原結合抗体断片のうちのいずれかは、例えば、ＶＥＧＦタンパク質（例えば、本明細書に記載のＶＥＧＦタンパク質のうちのいずれか、例えば、成熟ヒトＶＥＧＦ−Ａ、成熟ヒトＶＥＧＦ−Ｂ、成熟ヒトＶＥＧＦ−Ｃ、及び成熟ヒトＶＥＧＦ−Ｄのうちの１つ以上）の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用してリン酸緩衝生理食塩水中で測定される、１×１０−５Ｍ未満（例えば、０．５×１０−５Ｍ未満、１×１０−６Ｍ未満、０．５×１０−６Ｍ未満、１×１０−７Ｍ未満、０．５×１０−７Ｍ未満、１×１０−８Ｍ未満、０．５×１０−８Ｍ未満、１×１０−９Ｍ未満、０．５×１０−９Ｍ未満、１×１０−１０Ｍ未満、０．５×１０−１０Ｍ未満、１×１０−１１Ｍ未満、０．５×１０−１１Ｍ未満、または１×１０−１２Ｍ未満）の解離定数（ＫＤ）を有する。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体または抗原結合抗体断片のうちのいずれかは、例えば、ＶＥＧＦタンパク質（例えば、本明細書に記載のＶＥＧＦタンパク質のうちのいずれか、例えば、成熟ヒトＶＥＧＦ−Ａ、成熟ヒトＶＥＧＦ−Ｂ、成熟ヒトＶＥＧＦ−Ｃ、及び成熟ヒトＶＥＧＦ−Ｄのうちの１つ以上）の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、を使用してリン酸緩衝生理食塩水中で測定される、約１×１０−１２Ｍ〜約１×１０−５Ｍ、約０．５×１０−５Ｍ、約１×１０−６Ｍ、約０．５×１０−６Ｍ、約１×１０−７Ｍ、約０．５×１０−７Ｍ、約１×１０−８Ｍ、約０．５×１０−８Ｍ、約１×１０−９Ｍ、約０．５×１０−９Ｍ、約１×１０−１０Ｍ、約０．５×１０−１０Ｍ、約１×１０−１１Ｍ、または約０．５×１０−１１Ｍ（含む）：約０．５×１０−１１Ｍ〜約１×１０−５Ｍ、約０．５×１０−５Ｍ、約１×１０−６Ｍ、約０．５×１０−６Ｍ、約１×１０−７Ｍ、約０．５×１０−７Ｍ、約１×１０−８Ｍ、約０．５×１０−８Ｍ、約１×１０−９Ｍ、約０．５×１０−９Ｍ、約１×１０−１０Ｍ、約０．５×１０−１０Ｍ、または約１×１０−１１Ｍ（含む）：約１×１０−１１Ｍ〜約１×１０−５Ｍ、約０．５×１０−５Ｍ、約１×１０−６Ｍ、約０．５×１０−６Ｍ、約１×１０−７Ｍ、約０．５×１０−７Ｍ、約１×１０−８Ｍ、約０．５×１０−８Ｍ、約１×１０−９Ｍ、約０．５×１０−９Ｍ、約１×１０−１０Ｍ、または約０．５×１０−１０Ｍ（含む）：約０．５×１０−１０Ｍ〜約１×１０−５Ｍ、約０．５×１０−５Ｍ、約１×１０−６Ｍ、約０．５×１０−６Ｍ、約１×１０−７Ｍ、約０．５×１０−７Ｍ、約１×１０−８Ｍ、約０．５×１０−８Ｍ、約１×１０−９Ｍ、約０．５×１０−９Ｍ、または約１×１０−１０Ｍ（含む）：約１×１０−１０Ｍ〜約１×１０−５Ｍ、約０．５×１０−５Ｍ、約１×１０−６Ｍ、約０．５×１０−６Ｍ、約１×１０−７Ｍ、約０．５×１０−７Ｍ、約１×１０−８Ｍ、約０．５×１０−８Ｍ、約１×１０−９Ｍ、または約０．５×１０−９Ｍ（含む）：約０．５×１０−９Ｍ〜約１×１０−５Ｍ、約０．５×１０−５Ｍ、約１×１０−６Ｍ、約０．５×１０−６Ｍ、約１×１０−７Ｍ、約０．５×１０−７Ｍ、約１×１０−８Ｍ、約０．５×１０−８Ｍ、または約１×１０−９Ｍ（含む）：約１×１０−９Ｍ〜約１×１０−５Ｍ、約０．５×１０−５Ｍ、約１×１０−６Ｍ、約０．５×１０−６Ｍ、約１×１０−７Ｍ、約０．５×１０−７Ｍ、約１×１０−８Ｍ、または約０．５×１０−８Ｍ（含む）：約０．５×１０−８Ｍ〜約１×１０−５Ｍ、約０．５×１０−５Ｍ、約１×１０−６Ｍ、約０．５×１０−６Ｍ、約１×１０−７Ｍ、約０．５×１０−７Ｍ、または約１×１０−８Ｍ（含む）：約１×１０−８Ｍ〜約１×１０−５Ｍ、約０．５×１０−５Ｍ、約１×１０−６Ｍ、約０．５×１０−６Ｍ、約１×１０−７Ｍ、または約０．５×１０−７Ｍ（含む）：約０．５×１０−７Ｍ〜約１×１０−５Ｍ、約０．５×１０−５Ｍ、約１×１０−６Ｍ、約０．５×１０−６Ｍ、または約１×１０−７Ｍ（含む）：約１×１０−７Ｍ〜約１×１０−５Ｍ、約０．５×１０−５Ｍ、約１×１０−６Ｍ、または約０．５×１０−６Ｍ（含む）：約０．５×１０−６Ｍ〜約１×１０−５Ｍ、約０．５×１０−５Ｍ、ま��は約１×１０−６Ｍ（含む）：約１×１０−６Ｍ〜約１×１０−５Ｍ、または約０．５×１０−５Ｍ（含む）：または、例えば約０．５×１０−５Ｍ〜約１×１０−５Ｍ（含む）のＫＤを有する。
【０１０３】
当該技術分野で既知の様々な異なる方法を使用して、本明細書に記載の抗体または抗原結合抗体断片のうちのいずれのＫＤ値も決定することができる（例えば、電気泳動移動度シフトアッセイ、フィルター結合アッセイ、表面プラズモン共鳴、及び生体分子結合速度論アッセイ等）。
【０１０４】
本明細書に記載の抗体及び／または抗原結合抗体断片のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、対象（例えば、ヒト）における抗体及び／または抗原結合抗体断片の半減期は、同様の対象における対照抗体及び／または対照抗原結合抗体断片（例えば、本明細書に記載の対照抗体及び対照抗原結合抗体断片のうちのいずれか）の半減期と比較して、約０．５倍〜約４倍（例えば、約０．５倍〜約３．５倍、約０．５倍〜約３倍、約０．５倍〜約２．５倍、約０．５倍〜約２倍、約０．５倍〜約１．５倍、約０．５倍〜約１倍、約１倍〜約４倍、約１倍〜約３．５倍、約１倍〜約３倍、約１倍〜約２．５倍、約１倍〜約２倍、約１．５倍〜約４倍、約１．５倍〜約３．５倍、約１．５倍〜約３倍、約１．５倍〜約２．５倍、約１．５倍〜約２倍、約２倍〜約４倍、約２倍〜約３．５倍、約２倍〜約３倍、約２倍〜約２．５倍、約２．５倍〜約４倍、約２．５倍〜約３．５倍、約２．５倍〜約３倍、約３倍〜約４倍、約３倍〜約３．５倍、または約３．５倍〜約４倍）減少する。例えば、Ｌｅａｂｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＭＡｂｓ．５（６）：８９６−９０３，２０１３を参照されたい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体または抗原結合抗体断片は、哺乳動物におけるその半減期を減少させる１つ以上のアミノ酸置換をＦｃ領域に有し、対照抗体は、Ｆｃ領域におけるこれらの１つ以上のアミノ酸置換のうちの少なくとも１つを欠く（例えば、全てを欠く）。
【０１０５】
ＶＥＧＦ
ＶＥＧＦ遺伝子は、以前はｆｍｓ様チロシンキナーゼ（Ｆｌｔ−１）として知られていた血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）をコードする。ＶＥＧＦタンパク質は、血管内皮細胞の移動及び増殖を誘導するヘパリン結合タンパク質である。
【０１０６】
タンパク質及び野生型ＶＥＧＦタンパク質をコードするヌクレオチド配列の非限定的な例が以下に示される。
ヒトＶＥＧＦ転写物変異形１タンパク質配列（配列番号１）
ＭＴＤＲＱＴＤＴＡＰＳＰＳＹＨＬＬＰＧＲＲＲＴＶＤＡＡＡＳＲＧＱＧＰＥＰＡＰＧＧＧＶＥＧＶＧＡＲＧＶＡＬＫＬＦＶＱＬＬＧＣＳＲＦＧＧＡＶＶＲＡＧＥＡＥＰＳＧＡＡＲＳＡＳＳＧＲＥＥＰＱＰＥＥＧＥＥＥＥＥＫＥＥＥＲＧＰＱＷＲＬＧＡＲＫＰＧＳＷＴＧＥＡＡＶＣＡＤＳＡＰＡＡＲＡＰＱＡＬＡＲＡＳＧＲＧＧＲＶＡＲＲＧＡＥＥＳＧＰＰＨＳＰＳＲＲＧＳＡＳＲＡＧＰＧＲＡＳＥＴＭＮＦＬＬＳＷＶＨＷＳＬＡＬＬＬＹＬＨＨＡＫＷＳＱＡＡＰＭＡＥＧＧＧＱＮＨＨＥＶＶＫＦＭＤＶＹＱＲＳＹＣＨＰＩＥＴＬＶＤＩＦＱＥＹＰＤＥＩＥＹＩＦＫＰＳＣＶＰＬＭＲＣＧＧＣＣＮＤＥＧＬＥＣＶＰＴＥＥＳＮＩＴＭＱＩＭＲＩＫＰＨＱＧＱＨＩＧＥＭＳＦＬＱＨＮＫＣＥＣＲＰＫＫＤＲＡＲＱＥＫＫＳＶＲＧＫＧＫＧＱＫＲＫＲＫＫＳＲＹＫＳＷＳＶＹＶＧＡＲＣＣＬＭＰＷＳＬＰＧＰＨＰＣＧＰＣＳＥＲＲＫＨＬＦＶＱＤＰＱＴＣＫＣＳＣＫＮＴＤＳＲＣＫＡＲＱＬＥＬＮＥＲＴＣＲＣＤＫＰＲＲ
ヒトＶＥＧＦ転写物変異形１ｃＤＮＡ（配列番号２）
ｃｔ  ｇａｃｇｇａｃａｇａ  ｃａｇａｃａｇａｃａ  ｃｃｇｃｃｃｃｃａｇ  ｃｃｃｃａｇｃｔａｃ  ｃａｃｃｔｃｃｔｃｃ  ｃｃｇｇｃｃｇｇｃｇ  ｇｃｇｇａｃａｇｔｇ  ｇａｃｇｃｇｇｃｇｇ  ｃｇａｇｃｃｇｃｇｇ  ｇｃａｇｇｇｇｃｃｇ  ｇａｇｃｃｃｇｃｇｃ  ｃｃｇｇａｇｇｃｇｇ  ｇｇｔｇｇａｇｇｇｇ  ｇｔｃｇｇｇｇｃｔｃ  ｇｃｇｇｃｇｔｃｇｃ  ａｃｔｇａａａｃｔｔ  ｔｔｃｇｔｃｃａａｃ  ｔｔｃｔｇｇｇｃｔｇ  ｔｔｃｔｃｇｃｔｔｃ  ｇｇａｇｇａｇｃｃｇ  ｔｇｇｔｃｃｇｃｇｃ  ｇｇｇｇｇａａｇｃｃｇａｇｃｃｇａｇｃｇ  ｇａｇｃｃｇｃｇａｇ  ａａｇｔｇｃｔａｇｃ  ｔｃｇｇｇｃｃｇｇｇ  ａｇｇａｇｃｃｇｃａ  ｇｃｃｇｇａｇｇａｇ  ｇｇｇｇａｇｇａｇｇ  ａａｇａａｇａｇａａ  ｇｇａａｇａｇｇａｇ  ａｇｇｇｇｇｃｃｇｃ  ａｇｔｇｇｃｇａｃｔ  ｃｇｇｃｇｃｔｃｇｇ  ａａｇｃｃｇｇｇｃｔ  ｃａｔｇｇａｃｇｇｇ  ｔｇａｇｇｃｇｇｃｇ  ｇｔｇｔｇｃｇｃａｇ  ａｃａｇｔｇｃｔｃｃ  ａｇｃｃｇｃｇｃｇｃ  ｇｃｔｃｃｃｃａｇｇ  ｃｃｃｔｇｇｃｃｃｇ  ｇｇｃｃｔｃｇｇｇｃ  ｃｇｇｇｇａｇｇａａ  ｇａｇｔａｇｃｔｃｇ  ｃｃｇａｇｇｃｇｃｃ  ｇａｇｇａｇａｇｃｇ  ｇｇｃｃｇｃｃｃｃａ  ｃａｇｃｃｃｇａｇｃ  ｃｇｇａｇａｇｇｇａ  ｇｃｇｃｇａｇｃｃｇ  ｃｇｃｃｇｇｃｃｃｃ  ｇｇｔｃｇｇｇｃｃｔ  ｃｃｇａａａｃｃａｔ  ｇａａｃｔｔｔｃｔｇ  ｃｔｇｔｃｔｔｇｇｇ  ｔｇｃａｔｔｇｇａｇ  ｃｃｔｔｇｃｃｔｔｇｃｔｇｃｔｃｔａｃｃ  ｔｃｃａｃｃａｔｇｃ  ｃａａｇｔｇｇｔｃｃ  ｃａｇｇｃｔｇｃａｃ  ｃｃａｔｇｇｃａｇａ  ａｇｇａｇｇａｇｇｇ  ｃａｇａａｔｃａｔｃ  ａｃｇａａｇｔｇｇｔ  ｇａａｇｔｔｃａｔｇ  ｇａｔｇｔｃｔａｔｃ  ａｇｃｇｃａｇｃｔａ  ｃｔｇｃｃａｔｃｃａ  ａｔｃｇａｇａｃｃｃ  ｔｇｇｔｇｇａｃａｔ  ｃｔｔｃｃａｇｇａｇ  ｔａｃｃｃｔｇａｔｇ  ａｇａｔｃｇａｇｔａ  ｃａｔｃｔｔｃａａｇ  ｃｃａｔｃｃｔｇｔｇ  ｔｇｃｃｃｃｔｇａｔ  ｇｃｇａｔｇｃｇｇｇ  ｇｇｃｔｇｃｔｇｃａ  ａｔｇａｃｇａｇｇｇ  ｃｃｔｇｇａｇｔｇｔ  ｇｔｇｃｃｃａｃｔｇ  ａｇｇａｇｔｃｃａａ  ｃａｔｃａｃｃａｔｇ  ｃａｇａｔｔａｔｇｃ  ｇｇａｔｃａａａｃｃ  ｔｃａｃｃａａｇｇｃ  ｃａｇｃａｃａｔａｇ  ｇａｇａｇａｔｇａｇ  ｃｔｔｃｃｔａｃａｇ  ｃａｃａａｃａａａｔ  ｇｔｇａａｔｇｃａｇ  ａｃｃａａａｇａａａ  ｇａｔａｇａｇｃａａ  ｇａｃａａｇａａａａ  ａａａａｔｃａｇｔｔ  ｃｇａｇｇａａａｇｇ  ｇａａａｇｇｇｇｃａ  ａａａａｃｇａａａｇ  ｃｇｃａａｇａａａｔ  ｃｃｃｇｇｔａｔａａ  ｇｔｃｃｔｇｇａｇｃ  ｇｔｇｔａｃｇｔｔｇ  ｇｔｇｃｃｃｇｃｔｇ  ｃｔｇｔｃｔａａｔｇ  ｃｃｃｔｇｇａｇｃｃ  ｔｃｃｃｔｇｇｃｃｃ  ｃｃａｔｃｃｃｔｇｔ  ｇｇｇｃｃｔｔｇｃｔ  ｃａｇａｇｃｇｇａｇ  ａａａｇｃａｔｔｔｇ  ｔｔｔｇｔａｃａａｇ  ａｔｃｃｇｃａｇａｃ  ｇｔｇｔａａａｔｇｔ  ｔｃｃｔｇｃａａａａ  ａｃａｃａｇａｃｔｃ  ｇｃｇｔｔｇｃａａｇ  ｇｃｇａｇｇｃａｇｃ  ｔｔｇａｇｔｔａａａ  ｃｇａａｃｇｔａｃｔ  ｔｇｃａｇａｔｇｔｇ  ａｃａａｇｃｃｇａｇ  ｇｃｇｇｔｇａ
ヒトＶＥＧＦ転写物変異形３タンパク質配列（配列番号３）
ＭＴＤＲＱＴＤＴＡＰＳＰＳＹＨＬＬＰＧＲＲＲＴＶＤＡＡＡＳＲＧＱＧＰＥＰＡＰＧＧＧＶＥＧＶＧＡＲＧＶＡＬＫＬＦＶＱＬＬＧＣＳＲＦＧＧＡＶＶＲＡＧＥＡＥＰＳＧＡＡＲＳＡＳＳＧＲＥＥＰＱＰＥＥＧＥＥＥＥＥＫＥＥＥＲＧＰＱＷＲＬＧＡＲＫＰＧＳＷＴＧＥＡＡＶＣＡＤＳＡＰＡＡＲＡＰＱＡＬＡＲＡＳＧＲＧＧＲＶＡＲＲＧＡＥＥＳＧＰＰＨＳＰＳＲＲＧＳＡＳＲＡＧＰＧＲＡＳＥＴＭＮＦＬＬＳＷＶＨＷＳＬＡＬＬＬＹＬＨＨＡＫＷＳＱＡＡＰＭＡＥＧＧＧＱＮＨＨＥＶＶＫＦＭＤＶＹＱＲＳＹＣＨＰＩＥＴＬＶＤＩＦＱＥＹＰＤＥＩＥＹＩＦＫＰＳＣＶＰＬＭＲＣＧＧＣＣＮＤＥＧＬＥＣＶＰＴＥＥＳＮＩＴＭＱＩＭＲＩＫＰＨＱＧＱＨＩＧＥＭＳＦＬＱＨＮＫＣＥＣＲＰＫＫＤＲＡＲＱＥＫＫＳＶＲＧＫＧＫＧＱＫＲＫＲＫＫＳＲＰＣＧＰＣＳＥＲＲＫＨＬＦＶＱＤＰＱＴＣＫＣＳＣＫＮＴＤＳＲＣＫＡＲＱＬＥＬＮＥＲＴＣＲＣＤＫＰＲＲ
ヒトＶＥＧＦ転写物変異形３ｃＤＮＡ（配列番号４）
ｃｔ  ｇａｃｇｇａｃａｇａ  ｃａｇａｃａｇａｃａ  ｃｃｇｃｃｃｃｃａｇ  ｃｃｃｃａｇｃｔａｃ  ｃａｃｃｔｃｃｔｃｃ  ｃｃｇｇｃｃｇｇｃｇ  ｇｃｇｇａｃａｇｔｇ  ｇａｃｇｃｇｇｃｇｇ  ｃｇａｇｃｃｇｃｇｇ  ｇｃａｇｇｇｇｃｃｇ  ｇａｇｃｃｃｇｃｇｃ  ｃｃｇｇａｇｇｃｇｇ  ｇｇｔｇｇａｇｇｇｇ  ｇｔｃｇｇｇｇｃｔｃ  ｇｃｇｇｃｇｔｃｇｃ  ａｃｔｇａａａｃｔｔ  ｔｔｃｇｔｃｃａａｃ  ｔｔｃｔｇｇｇｃｔｇ  ｔｔｃｔｃｇｃｔｔｃ  ｇｇａｇｇａｇｃｃｇ  ｔｇｇｔｃｃｇｃｇｃ  ｇｇｇｇｇａａｇｃｃｇａｇｃｃｇａｇｃｇ  ｇａｇｃｃｇｃｇａｇ  ａａｇｔｇｃｔａｇｃ  ｔｃｇｇｇｃｃｇｇｇ  ａｇｇａｇｃｃｇｃａ  ｇｃｃｇｇａｇｇａｇ  ｇｇｇｇａｇｇａｇｇ  ａａｇａａｇａｇａａ  ｇｇａａｇａｇｇａｇ  ａｇｇｇｇｇｃｃｇｃ  ａｇｔｇｇｃｇａｃｔ  ｃｇｇｃｇｃｔｃｇｇ  ａａｇｃｃｇｇｇｃｔ  ｃａｔｇｇａｃｇｇｇ  ｔｇａｇｇｃｇｇｃｇ  ｇｔｇｔｇｃｇｃａｇ  ａｃａｇｔｇｃｔｃｃ  ａｇｃｃｇｃｇｃｇｃ  ｇｃｔｃｃｃｃａｇｇ  ｃｃｃｔｇｇｃｃｃｇ  ｇｇｃｃｔｃｇｇｇｃ  ｃｇｇｇｇａｇｇａａ  ｇａｇｔａｇｃｔｃｇ  ｃｃｇａｇｇｃｇｃｃ  ｇａｇｇａｇａｇｃｇ  ｇｇｃｃｇｃｃｃｃａ  ｃａｇｃｃｃｇａｇｃ  ｃｇｇａｇａｇｇｇａ  ｇｃｇｃｇａｇｃｃｇ  ｃｇｃｃｇｇｃｃｃｃ  ｇｇｔｃｇｇｇｃｃｔ  ｃｃｇａａａｃｃａｔ  ｇａａｃｔｔｔｃｔｇ  ｃｔｇｔｃｔｔｇｇｇ  ｔｇｃａｔｔｇｇａｇ  ｃｃｔｔｇｃｃｔｔｇｃｔｇｃｔｃｔａｃｃ  ｔｃｃａｃｃａｔｇｃ  ｃａａｇｔｇｇｔｃｃ  ｃａｇｇｃｔｇｃａｃ  ｃｃａｔｇｇｃａｇａ  ａｇｇａｇｇａｇｇｇ  ｃａｇａａｔｃａｔｃ  ａｃｇａａｇｔｇｇｔ  ｇａａｇｔｔｃａｔｇ  ｇａｔｇｔｃｔａｔｃ  ａｇｃｇｃａｇｃｔａ  ｃｔｇｃｃａｔｃｃａ  ａｔｃｇａｇａｃｃｃ  ｔｇｇｔｇｇａｃａｔ  ｃｔｔｃｃａｇｇａｇ  ｔａｃｃｃｔｇａｔｇ  ａｇａｔｃｇａｇｔａ  ｃａｔｃｔｔｃａａｇ  ｃｃａｔｃｃｔｇｔｇ  ｔｇｃｃｃｃｔｇａｔ  ｇｃｇａｔｇｃｇｇｇ  ｇｇｃｔｇｃｔｇｃａ  ａｔｇａｃｇａｇｇｇ  ｃｃｔｇｇａｇｔｇｔ  ｇｔｇｃｃｃａｃｔｇ  ａｇｇａｇｔｃｃａａ  ｃａｔｃａｃｃａｔｇ  ｃａｇａｔｔａｔｇｃ  ｇｇａｔｃａａａｃｃ  ｔｃａｃｃａａｇｇｃ  ｃａｇｃａｃａｔａｇ  ｇａｇａｇａｔｇａｇ  ｃｔｔｃｃｔａｃａｇ  ｃａｃａａｃａａａｔ  ｇｔｇａａｔｇｃａｇ  ａｃｃａａａｇａａａ  ｇａｔａｇａｇｃａａ  ｇａｃａａｇａａａａ  ａａａａｔｃａｇｔｔ  ｃｇａｇｇａａａｇｇ  ｇａａａｇｇｇｇｃａ  ａａａａｃｇａａａｇ  ｃｇｃａａｇａａａｔ  ｃｃｃｇｔｃｃｃｔｇ  ｔｇｇｇｃｃｔｔｇｃ  ｔｃａｇａｇｃｇｇａ  ｇａａａｇｃａｔｔｔ  ｇｔｔｔｇｔａｃａａ  ｇａｔｃｃｇｃａｇａ  ｃｇｔｇｔａａａｔｇ  ｔｔｃｃｔｇｃａａａ  ａａｃａｃａｇａｃｔ  ｃｇｃｇｔｔｇｃａａ  ｇｇｃｇａｇｇｃａｇ  ｃｔｔｇａｇｔｔａａ  ａｃｇａａｃｇｔａｃ  ｔｔｇｃａｇａｔｇｔ  ｇａｃａａｇｃｃｇａ  ｇｇｃｇｇｔｇａ
成熟ヒトＶＥＧＦ−Ａ（配列番号１３）
ａｐｍａ  ｅｇｇｇｑｎｈｈｅｖ  ｖｋｆｍｄｖｙｑｒｓ  ｙｃｈｐｉｅｔｌｖｄ  ｉｆｑｅｙｐｄｅｉｅ  ｙｉｆｋｐｓｃｖｐｌ  ｍｒｃｇｇｃｃｎｄｅ  ｇｌｅｃｖｐｔｅｅｓ  ｎｉｔｍｑｉｍｒｉｋ  ｐｈｑｇｑｈｉｇｅｍ  ｓｆｌｑｈｎｋｃｅｃ  ｒｐｋｋｄｒａｒｑｅ  ｋｋｓｖｒｇｋｇｋｇ  ｑｋｒｋｒｋｋｓｒｙ  ｋｓｗｓｖｙｖｇａｒ  ｃｃｌｍｐｗｓｌｐｇ  ｐｈｐｃｇｐｃｓｅｒ  ｒｋｈｌｆｖｑｄｐｑ  ｔｃｋｃｓｃｋｎｔｄ  ｓｒｃｋａｒｑｌｅｌ  ｎｅｒｔｃｒｃｄｋｐ  ｒｒ
成熟ヒトＶＥＧＦ−Ｂ（配列番号１４）
ｐｖｓｑｐｄａｐｇ  ｈｑｒｋｖｖｓｗｉｄ  ｖｙｔｒａｔｃｑｐｒ  ｅｖｖｖｐｌｔｖｅｌ  ｍｇｔｖａｋｑｌｖｐ  ｓｃｖｔｖｑｒｃｇｇ  ｃｃｐｄｄｇｌｅｃｖ  ｐｔｇｑｈｑｖｒｍｑ  ｉｌｍｉｒｙｐｓｓｑ  ｌｇｅｍｓｌｅｅｈｓ  ｑｃｅｃｒｐｋｋｋｄ  ｓａｖｋｐｄｒａａｔ  ｐｈｈｒｐｑｐｒｓｖ  ｐｇｗｄｓａｐｇａｐ  ｓｐａｄｉｔｈｐｔｐ  ａｐｇｐｓａｈａａｐ  ｓｔｔｓａｌｔｐｇｐ  ａａａａａｄａａａｓ  ｓｖａｋｇｇａ
成熟ヒトＶＥＧＦ−Ｃ（配列番号１５）
Ａｈｙｎｔｅｉｌｋ  ｓｉｄｎｅｗｒｋｔｑ  ｃｍｐｒｅｖｃｉｄｖ  ｇｋｅｆｇｖａｔｎｔ  ｆｆｋｐｐｃｖｓｖｙ  ｒｃｇｇｃｃｎｓｅｇ  ｌｑｃｍｎｔｓｔｓｙ  ｌｓｋｔｌｆｅｉｔｖ  ｐｌｓｑｇｐｋｐｖｔ  ｉｓｆａｎｈｔｓｃｒ  ｃｍｓｋｌｄｖｙｒｑ  ｖｈｓｉｉｒｒ
成熟ヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号１６）
ｆａ  ａｔｆｙｄｉｅｔｌｋ  ｖｉｄｅｅｗｑｒｔｑ  ｃｓｐｒｅｔｃｖｅｖ  ａｓｅｌｇｋｓｔｎｔ  ｆｆｋｐｐｃｖｎｖｆ  ｒｃｇｇｃｃｎｅｅｓ  ｌｉｃｍｎｔｓｔｓｙ  ｉｓｋｑｌｆｅｉｓｖ  ｐｌｔｓｖｐｅｌｖｐ  ｖｋｖａｎｈｔｇｃｋ  ｃｌｐｔａｐｒｈｐｙ  ｓｉｉｒｒ
【０１０７】
本明細書に記載の抗体及びその抗原結合断片のうちのいずれかのいくつかの例では、抗体及び抗原結合断片は、ＶＥＧＦ抗原（例えば、本明細書に記載の例示的なＶＥＧＦタンパク質のうちのいずれか、例えば、成熟ヒトＶＥＧＦ−Ａ、成熟ヒトＶＥＧＦ−Ｂ、成熟ヒトＶＥＧＦ−Ｃ、及び成熟ヒトＶＥＧＦ−Ｄのうちの１つ以上）に結合することができる（例えば、本明細書に記載の結合親和性のうちのいずれか）。
【０１０８】
本明細書に記載のいくつかの実施形態では、抗体または抗原結合抗体断片は、ＶＥＧＦ（例えば、本明細書に記載の例示的なＶＥＧＦタンパク質のうちのいずれかのうちの１つ以上、例えば、成熟ヒトＶＥＧＦ−Ａ、成熟ヒトＶＥＧＦ−Ｂ、成熟ヒトＶＥＧＦ−Ｃ、及び成熟ヒトＶＥＧＦ−Ｄのうちの１つ以上）の活性を低減することができる。いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合抗体断片は、ＶＥＧＦ（例えば、本明細書に記載の例示的なＶＥＧＦタンパク質のうちのいずれかのうちの１つ以上、例えば、成熟ヒトＶＥＧＦ−Ａ、成熟ヒトＶＥＧＦ−Ｂ、成熟ヒトＶＥＧＦ−Ｃ、及び成熟ヒトＶＥＧＦ−Ｄのうちの１つ以上）がその受容体（例えば、１つ以上のＶＥＧＦ受容体）のうちの１つ以上に結合するのを阻止することができる。例えば、ＷＯ１９９８／０４５３３１、ＵＳ９，０７９，９５３、ＵＳ２０１５／０１４７３１７、ＵＳ２０１６／０２８９３１４、Ｐｌｏｔｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｔｏｌｏｇｙ  ＆  Ｎｅｕｒｏｔｏｌｏｇｙ  ３３：１０４６−１０５２（２０１２）、及びＦｅｒｒａｒａ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  ３３３（２）：３２８−３３５を参照されたい。いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合抗体は、下流シグナル伝達（例えば、ＶＥＧＦ受容体、例えば、本明細書に記載の例示的なＶＥＧＦ受容体のうちのいずれかのうちの１つ以上、例えば、ヒトＶＥＧＦＲ−１、ヒトＶＥＧＦＲ−２、及びヒトＶＥＧＦＲ−３のうちの１つ以上の下流シグナル伝達）を減少させることができる。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦの活性の低減は、例えば、本明細書に記載のＡＡＶベクターのうちのいずれかの投与前の、それぞれ、哺乳動物における聴神経腫、前庭神経鞘腫、または神経線維腫症ＩＩ型の聴覚レベルまたはサイズと比較した、哺乳動物における聴神経腫、前庭神経鞘腫、または神経線維腫症ＩＩ型のサイズまたはその１つ以上の症状の重症度における、聴覚の向上（例えば、１％〜約４００％（または本明細書に記載のこの範囲の部分範囲のうちのいずれか）の聴覚の向上）または低下（例えば、１％〜９９％、１％〜９５％、１％〜９０％、１％〜８５％、１％〜８０％、１％〜７５％、１％〜７０％、１％〜６５％、１％〜６０％、１％〜５５％、１％〜５０％、１％〜４５％、１％〜４０％、１％〜３５％、１％〜３０％、１％〜２５％、１％〜２０％、１％〜１５％、１％〜１０％、１％〜５％、５％〜９９％、５％〜９５％、５％〜９０％、５％〜８５％、５％〜８０％、５％〜７５％、５％〜７０％、５％〜６５％、５％〜６０％、５％〜５５％、５％〜５０％、５％〜４５％、５％〜４０％、５％〜３５％、５％〜３０％、５％〜２５％、５％〜２０％、５％〜１５％、５％〜１０％、１０％〜９９％、１０％〜９５％、１０％〜９０％、１０％〜８５％、１０％〜８０％、１０％〜７５％、１０％〜７０％、１０％〜６５％、１０％〜６０％、１０％〜５５％、１０％〜５０％、１０％〜４５％、１０％〜４０％、１０％〜３５％、１０％〜３０％、１０％〜２５％、１０％〜２０％、１０％〜１５％、１５％〜９９％、１５％〜９５％、１５％〜９０％、１５％〜８５％、１５％〜８０％、１５��〜７５％、１５％〜７０％、１５％〜６５％、１５％〜６０％、１５％〜５５％、１５％〜５０％、１５％〜４５％、１５％〜４０％、１５％〜３５％、１５％〜３０％、１５％〜２５％、１５％〜２０％、２０％〜９９％、２０％〜９５％、２０％〜９０％、２０％〜８５％、２０％〜８０％、２０％〜７５％、２０％〜７０％、２０％〜６５％、２０％〜６０％、２０％〜５５％、２０％〜５０％、２０％〜４５％、２０％〜４０％、２０％〜３５％、２０％〜３０％、２０％〜２５％、２５％〜９９％、２５％〜９５％、２５％〜９０％、２５％〜８５％、２５％〜８０％、２５％〜７５％、２５％〜７０％、２５％〜６５％、２５％〜６０％、２５％〜５５％、２５％〜５０％、２５％〜４５％、２５％〜４０％、２５％〜３５％、２５％〜３０％、３０％〜９９％、３０％〜９５％、３０％〜９０％、３０％〜８５％、３０％〜８０％、３０％〜７５％、３０％〜７０％、３０％〜６５％、３０％〜６０％、３０％〜５５％、３０％〜５０％、３０％〜４５％、３０％〜４０％、３０％〜３５％、３５％〜９９％、３５％〜９５％、３５％〜９０％、３５％〜８５％、３５％〜８０％、３５％〜７５％、３５％〜７０％、３５％〜６５％、３５％〜６０％、３５％〜５５％、３５％〜５０％、３５％〜４５％、３５％〜４０％、４０％〜９９％、４０％〜９５％、４０％〜９０％、４０％〜８５％、４０％〜８０％、４０％〜７５％、４０％〜７０％、４０％〜６５％、４０％〜６０％、４０％〜５５％、４０％〜５０％、４０％〜４５％、４５％〜９９％、４５％〜９５％、４５％〜９０％、４５％〜８５％、４５％〜８０％、４５％〜７５％、４５％〜７０％、４５％〜６５％、４５％〜６０％、４５％〜５５％、４５％〜５０％、５０％〜９９％、５０％〜９５％、５０％〜９０％、５０％〜８５％、５０％〜８０％、５０％〜７５％、５０％〜７０％、５０％〜６５％、５０％〜６０％、５０％〜５５％、５５％〜９９％、５５％〜９５％、５５％〜９０％、５５％〜８５％、５５％〜８０％、５５％〜７５％、５５％〜７０％、５５％〜６５％、５５％〜６０％、６０％〜９９％、６０％〜９５％、６０％〜９０％、６０％〜８５％、６０％〜８０％、６０％〜７５％、６０％〜７０％、６０％〜６５％、６５％〜９９％、６５％〜９５％、６５％〜９０％、６５％〜８５％、６５％〜８０％、６５％〜７５％、６５％〜７０％、７０％〜９９％、７０％〜９５％、７０％〜９０％、７０％〜８５％、７０％〜８０％、７０％〜７５％、７５％〜９９％、７５％〜９５％、７５％〜９０％、７５％〜８５％、７５％〜８０％、８０％〜９９％、８０％〜９５％、８０％〜９０％、８０％〜８５％、８５％〜９９％、８５％〜９５％、８５％〜９０％、９０％〜９９％、９０％〜９５％、または９５％〜９９％の低下）によって間接的に検出され得る。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ活性の低減は、インビトロアッセイで検出され得る。
【０１０９】
いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦに特異的に結合する抗体は、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔａｔｉｎ（登録商標））またはその抗原結合断片である。ベバシズマブ（フルサイズ抗体約１５０ｋＤａ）は、ＶＥＧＦ−Ａの全てのアイソフォームを阻害する。ベバシズマブは、２００４年に、結腸癌について、２〜３週間で４．０〜７．５ｍｇ／ｋｇの静脈内（ＩＶ）投与（血漿半減期２１日）、０．０５ｍＬ中１．２５ｍｇの硝子体内（ＩＶＴ）投与（半減期５．６日）の承認を食品医薬品局（ＦＤＡ）から得た。ベバシズマブは、５８ｐＭのＶＥＧＦ  １６５（ＶＥＧＦ−Ａ）に対するＫＤを有する。例えば、ＷＯ２０１７／０５０８２５を参照されたい。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦに特異的に結合する抗体は、ラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））、またはその抗原結合断片である。ラニビズマブ（約５０ｋＤａ）は、ＶＥＧＦ−Ａの全てのアイソフォームを阻害する。ラニビズマブは、２００６年に、眼内使用について、２〜３週間で４．０〜７．５ｍｇ／ｋｇの静脈内（ＩＶ）投与（血漿半減期０．５日）、０．０５ｍＬ中０．５ｍｇの硝子体内（ＩＶＴ）投与（半減期３．２日）の承認をＦＤＡから得た。ラニビズマブは、４６ｐＭのＶＥＧＦ  １６５（ＶＥＧＦ−Ａ）に対するＫＤを有する。例えば、ＷＯ２０１４／１７８０７８を参照されたい。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦに特異的に結合する抗体は、セバシズマブ（ＡＰＸ００３／ＳＩＭ−ＢＤ０８０１）、またはその抗原結合断片である。
ベバシズマブの軽鎖をコードするアミノ酸（配列番号５）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＶＬＩＹＦＴＳＳＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
ベバシズマブの重鎖をコードするアミノ酸（配列番号６）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲＲＦＴＦＳＬＤＴＳＫＳＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＹＰＨＹＹＧＳＳＨＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
【０１１０】
本明細書に記載のＶＥＧＦに特異的に結合する抗体及びその抗原結合断片のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ベバシズマブの可変軽鎖ドメインであるか、またはそれと少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％、少なくとも８４％、少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９６％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一の配列を含む可変軽鎖ドメインを含み、及び／またはベバシズマブの可変重鎖ドメインであるか、またはそれと少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％、少なくとも８４％、少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９６％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一の配列を含む可変重鎖ドメインを含む。
【０１１１】
本明細書に記載のＶＥＧＦに特異的に結合する抗体及びその抗原結合断片のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ベバシズマブの可変軽鎖ドメインであるか、またはそれを含む可変軽鎖ドメイン、及び／またはベバシズマブの可変重鎖ドメインであるか、またはそれを含む可変重鎖ドメインを含む。本明細書に記載のＶＥＧＦに特異的に結合する抗体及びその抗原結合断片のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５個のアミノ酸置換を含むことを除いて、ベバシズマブの可変軽鎖ドメインであるか、またはその配列を含む可変軽鎖ドメインを含み、及び／または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５個のアミノ酸置換を含むことを除いて、ベバシズマブの可変重鎖であるか、またはその配列を含む可変重鎖ドメインを含む。いくつかの実施形態では、第１の抗原結合ドメインは、ベバシズマブの軽鎖可変ドメインに３つのＣＤＲ、及び／またはベバシズマブの重鎖可変ドメインに３つのＣＤＲを含む。
ラニビズマブの軽鎖をコードするアミノ酸（配列番号７）
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＶＬＩＹＦＴＳＳＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
ラニビズマブの重鎖をコードするアミノ酸（配列番号８）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲＲＦＴＦＳＬＤＴＳＫＳＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＹＰＹＹＹＧＴＳＨＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＬ
【０１１２】
本明細書に記載のＶＥＧＦに特異的に結合する抗体及びその抗原結合断片のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ラニビズマブの可変軽鎖ドメインであるか、またはそれと少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％、少なくとも８４％、少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９６％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一の配列を含む可変軽鎖ドメインを含み、及び／またはラニビズマブの可変重鎖ドメインであるか、またはそれと少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％、少なくとも８４％、少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９６％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一の配列を含む可変重鎖ドメインを含む。
【０１１３】
本明細書に記載のＶＥＧＦに特異的に結合する抗体及びその抗原結合断片のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ラニビズマブの可変軽鎖ドメインであるか、またはそれを含む可変軽鎖ドメイン、及び／またはラニビズマブの可変重鎖ドメインであるか、またはそれを含む可変重鎖ドメインを含む。本明細書に記載のＶＥＧＦに特異的に結合する抗体及びその抗原結合断片のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５個のアミノ酸置換を含むことを除いて、ラニビズマブの可変軽鎖ドメインであるか、またはその配列を含む可変軽鎖ドメインを含み、及び／または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５個のアミノ酸置換を含むことを除いて、ラニビズマブの可変重鎖であるか、またはその配列を含む可変重鎖ドメインを含む。いくつかの実施形態では、第１の抗原結合ドメインは、ラニビズマブの軽鎖可変ドメインに３つのＣＤＲ、及び／またはラニビズマブの重鎖可変ドメインに３つのＣＤＲを含む。
【０１１４】
可溶性ＶＥＧＦ受容体
可溶性ＶＥＧＦ受容体は、シグナルペプチド（例えば、本明細書に記載の例示的なシグナルペプチドのうちのいずれか）に作動可能に連結された１つ以上（例えば、２つまたは３つ）の哺乳類ＶＥＧＦ受容体（複数可）（例えば、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、及びＶＥＧＦＲ−３のうちの１つ以上）の細胞外領域の一部分を含むポリペプチドであり、可溶性ＶＥＧＦ受容体は、１つ以上の哺乳類ＶＥＧＦタンパク質（複数可）（例えば、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、及びＶＥＧＦ−Ｄのうちの１つ以上（例えば、２つ、３つ、または４つ）、例えば、ヒト野生型ＶＥＧＦ−Ａ、ヒト野生型ＶＥＧＦ−Ｂ、ヒト野生型ＶＥＧＦ−Ｃ、及びヒト野生型ＶＥＧＦ−Ｄのうちの１つ以上（例えば、２つ、３つ、または４つ））に特異的に結合することができる。
【０１１５】
いくつかの例では、可溶性ＶＥＧＦ受容体は、ＶＥＧＦＲ−１の細胞外領域（例えば、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−１由来の隣接配列（例えば、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−１由来の細胞外領域（例えば、配列番号２３）における１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、または７つ）の免疫グロブリン様ドメインを含む隣接配列、または野生型ヒトＶＥＧＦＲ−１由来の隣接配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８２％、少なくとも８４％、少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９６％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一の配列、例えば、配列番号２３における隣接配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８２％、少なくとも８４％、少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９６％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一の配列）の一部分（例えば、約１０個のアミノ酸〜約７３２個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約７００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約６５０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約６００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約５５０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約５００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約４５０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約４００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約３５０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約３００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約２５０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約２００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約１５０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約５０個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸〜約７３２個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸〜約７００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸〜約６５０個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸〜約６００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸〜約５５０個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸〜約５００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸〜約４５０個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸〜約４００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸〜約３５０個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸〜約３００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸〜約２５０個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸〜約２００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸〜約１５０個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸〜約７３２個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸〜約７００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸〜約６５０個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸〜約６００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸〜約５５０個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸〜約５００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸〜約４５０個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸〜約４００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸〜約３５０個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸〜約３００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸〜約２５０個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸〜約２００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸〜約１５０個のアミノ酸、約１５０個のアミノ酸〜約７３２個のアミノ酸、約１５０個のアミノ酸〜約７００個のアミノ酸、約１５０個のアミノ酸〜約６５０個のアミノ酸、約１５０個のアミノ酸〜約６００個のアミノ酸、約１５０個のアミノ酸〜約５５０個のアミノ酸、約１５０個のアミノ酸〜約５００個のアミノ酸、約１５０個のアミノ酸〜約４５０個のアミノ酸、約１５０個のアミノ酸〜約４００個のアミノ酸、約１５０個のアミノ酸〜約３５０個のアミノ酸、約１５０個のアミノ酸〜約３００個のアミノ酸、約１５０個のアミノ酸〜約２５０個のアミノ酸、約１５０個のアミノ酸〜約２００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸〜約７３２個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸〜約７００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸〜約６５０個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸〜約６００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸〜約５５０個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸〜約５００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸〜約４５０個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸〜約４００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸〜約３５０個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸〜約３００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸〜約２５０個のアミノ酸、約２５０個のアミノ酸〜約７３２個のアミノ酸、約２５０個のアミノ酸〜約７００個のアミノ酸、約２５０個のアミノ酸〜約６５０個のアミノ酸、約２５０個のアミノ酸〜約６００個のアミノ酸、約２５０個のアミノ酸〜約５５０個のアミノ酸、約２５０個のアミノ酸〜約５００個のアミノ酸、約２５０個のアミノ酸〜約４５０個のアミノ酸、約２５０個のアミノ酸〜約４００個のアミノ酸、約２５０個のアミノ酸〜約３５０個のアミノ酸、約２５０個のアミノ酸〜約３００個のアミノ酸、約３００個のアミノ酸〜約７３２個のアミノ酸、約３００個のアミノ酸〜約７００個のアミノ酸、約３００個のアミノ酸〜約６５０個のアミノ酸、約３００個のアミノ酸〜約６００個のアミノ酸、約３００個のアミノ酸〜約５５０個のアミノ酸、約３００個のアミノ酸〜約５００個のアミノ酸、約３００個のアミノ酸〜約４５０個のアミノ酸、約３００個のアミノ酸〜約４００個のアミノ酸、約３００個のアミノ酸〜約３５０個のアミノ酸、約３５０個のアミノ酸〜約７３２個のアミノ酸、約３５０個のアミノ酸〜約７００個のアミノ酸、約３５０個のアミノ酸〜約６５０個のアミノ酸、約３５０個のアミノ酸〜約６００個のアミノ酸、約３５０個のアミノ酸〜約５５０個のアミノ酸、約３５０個のアミノ酸〜約５００個のアミノ酸、約３５０個のアミノ酸〜約４５０個のアミノ酸、約３５０個のアミノ酸〜約４００個のアミノ酸、約４００個のアミノ酸〜約７３２個のアミノ酸、約４００個のアミノ酸〜約７００個のアミノ酸、約４００個のアミノ酸〜約６５０個のアミノ酸、約４００個のアミノ酸〜約６００個のアミノ酸、約４００個のアミノ酸〜約５５０個のアミノ酸、約４００個のアミノ酸〜約５００個のアミノ酸、約４００個のアミノ酸〜約４５０個のアミノ酸、約４５０個のアミノ酸〜約７３２個のアミノ酸、約４５０個のアミノ酸〜約７００個のアミノ酸、約４５０個のアミノ酸〜約６５０個のアミノ酸、約４５０個のアミノ酸〜約６００個のアミノ酸、約４５０個のアミノ酸〜約５５０個のアミノ酸、約４５０個のアミノ酸〜約５００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸〜約７３２個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸〜約７００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸〜約６５０個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸〜約６００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸〜約５５０個のアミノ酸、約５５０個のアミノ酸〜約７３２個のアミノ酸、約５５０個のアミノ酸〜約７００個のアミノ酸、約５５０個のアミノ酸〜約６５０個のアミノ酸、約５５０個のアミノ酸〜約６００個のアミノ酸、約６００個のアミノ酸〜約７３２個のアミノ酸、約６００個のアミノ酸〜約７００個のアミノ酸、約６００個のアミノ酸〜約６５０個のアミノ酸、約６５０個のアミノ酸〜約７３２個のアミノ酸、約６５０個のアミノ酸〜約７００個のアミノ酸、または約７００個のアミノ酸〜約７３２個のアミノ酸）を含む。
【０１１６】
いくつかの例では、可溶性ＶＥＧＦ受容体は、ＶＥＧＦＲ−２の細胞外領域（例えば、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−２由来の隣接配列（例えば、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−２由来の細胞外領域（例えば、配列番号２６）における１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、または７つ）の免疫グロブリン様ドメインを含む隣接配列、または野生型ヒトＶＥＧＦＲ−２由来の隣接配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８２％、少なくとも８４％、少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９６％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一の配列、例えば、配列番号２６における隣接配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８２％、少なくとも８４％、少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９６％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一の配列）の一部分（例えば、約２０個のアミノ酸〜約７４５個のアミノ酸、または本明細書に記載のこの範囲の部分範囲のうちのいずれか）を含む。
【０１１７】
いくつかの例では、可溶性ＶＥＧＦ受容体は、ＶＥＧＦＲ−１の細胞外領域の一部分（例えば、本明細書に記載のＶＥＧＦＲ−１の細胞外領域の部分のうちのいずれか）及びＶＥＧＦＲ−２の細胞外領域の一部分（例えば、本明細書に記載のＶＥＧＦＲ−２の細胞外領域の部分のうちのいずれか）を含む。例えば、可溶性ＶＥＧＦ受容体は、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−１由来の細胞外領域における１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、または７つ）の免疫グロブリン様ドメイン、及び野生型ヒトＶＥＧＦＲ−２由来の細胞外領域における１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、または７つ）の免疫グロブリン様ドメイン（例えば、アフリベルセプト）を含み得る。
【０１１８】
いくつかの例では、可溶性ＶＥＧＦ受容体は、ＶＥＧＦＲ−３の細胞外領域（例えば、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−３由来の隣接配列（例えば、野生型ヒトＶＥＧＦＲ−３由来の細胞外領域（例えば、配列番号２９）における１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、または７つ）の免疫グロブリン様ドメインを含む隣接配列、または野生型ヒトＶＥＧＦＲ−３由来の隣接配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８２％、少なくとも８４％、少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９６％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一の配列、例えば、配列番号２９における隣接配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８２％、少なくとも８４％、少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９６％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一の配列）の一部分（例えば、約２０個のアミノ酸〜約７５１個のアミノ酸、または本明細書に記載のこの範囲の部分範囲のうちのいずれか）を含む。
【０１１９】
異なる哺乳類ＶＥＧＦＲ−１、異なる哺乳類ＶＥＧＦＲ−２、及び異なる哺乳類ＶＥＧＦＲ−３の細胞外領域の非限定的な例が本明細書に記載されている。タンパク質及び野生型ＶＥＧＦ受容体タンパク質をコードするヌクレオチド配列の非限定的な例が以下に示される。当業者であれば理解することができるように、種間で保存されるアミノ酸における置換がタンパク質の機能の変化をもたらす可能性が高い一方で、種間で保存されないアミノ酸位置における置換は、タンパク質の機能に影響を及ぼす可能性が低い。
ヒトＶＥＧＦ受容体１アイソフォーム２タンパク質配列（配列番号１７）
ＭＶＳＹＷＤＴＧＶＬＬＣＡＬＬＳＣＬＬＬＴＧＳＳＳＧＳＫＬＫＤＰＥＬＳＬＫＧＴＱＨＩＭＱＡＧＱＴＬＨＬＱＣＲＧＥＡＡＨＫＷＳＬＰＥＭＶＳＫＥＳＥＲＬＳＩＴＫＳＡＣＧＲＮＧＫＱＦＣＳＴＬＴＬＮＴＡＱＡＮＨＴＧＦＹＳＣＫＹＬＡＶＰＴＳＫＫＫＥＴＥＳＡＩＹＩＦＩＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＱＩＳＴＰＲＰＶＫＬＬＲＧＨＴＬＶＬＮＣＴＡＴＴＰＬＮＴＲＶＱＭＴＷＳＹＰＤＥＫＮＫＲＡＳＶＲＲＲＩＤＱＳＮＳＨＡＮＩＦＹＳＶＬＴＩＤＫＭＱＮＫＤＫＧＬＹＴＣＲＶＲＳＧＰＳＦＫＳＶＮＴＳＶＨＩＹＤＫＡＦＩＴＶＫＨＲＫＱＱＶＬＥＴＶＡＧＫＲＳＹＲＬＳＭＫＶＫＡＦＰＳＰＥＶＶＷＬＫＤＧＬＰＡＴＥＫＳＡＲＹＬＴＲＧＹＳＬＩＩＫＤＶＴＥＥＤＡＧＮＹＴＩＬＬＳＩＫＱＳＮＶＦＫＮＬＴＡＴＬＩＶＮＶＫＰＱＩＹＥＫＡＶＳＳＦＰＤＰＡＬＹＰＬＧＳＲＱＩＬＴＣＴＡＹＧＩＰＱＰＴＩＫＷＦＷＨＰＣＮＨＮＨＳＥＡＲＣＤＦＣＳＮＮＥＥＳＦＩＬＤＡＤＳＮＭＧＮＲＩＥＳＩＴＱＲＭＡＩＩＥＧＫＮＫＭＡＳＴＬＶＶＡＤＳＲＩＳＧＩＹＩＣＩＡＳＮＫＶＧＴＶＧＲＮＩＳＦＹＩＴＤＶＰＮＧＦＨＶＮＬＥＫＭＰＴＥＧＥＤＬＫＬＳＣＴＶＮＫＦＬＹＲＤＶＴＷＩＬＬＲＴＶＮＮＲＴＭＨＹＳＩＳＫＱＫＭＡＩＴＫＥＨＳＩＴＬＮＬＴＩＭＮＶＳＬＱＤＳＧＴＹＡＣＲＡＲＮＶＹＴＧＥＥＩＬＱＫＫＥＩＴＩＲＧＥＨＣＮＫＫＡＶＦＳＲＩＳＫＦＫＳＴＲＮＤＣＴＴＱＳＮＶＫＨ
ヒトＶＥＧＦ受容体１アイソフォーム２  ｃＤＮＡ（配列番号１８）
ＡＴＧＧＴＣＡＧＣＴＡＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＧＧＧＧＴＣＣＴＧＣＴＧＴＧＣＧＣＧＣＴＧＣＴＣＡＧＣＴＧＴＣＴＧＣＴＴＣＴＣＡＣＡＧＧＡＴＣＴＡＧＴＴＣＡＧＧＴＴＣＡＡＡＡＴＴＡＡＡＡＧＡＴＣＣＴＧＡＡＣＴＧＡＧＴＴＴＡＡＡＡＧＧＣＡＣＣＣＡＧＣＡＣＡＴＣＡＴＧＣＡＡＧＣＡＧＧＣＣＡＧＡＣＡＣＴＧＣＡＴＣＴＣＣＡＡＴＧＣＡＧＧＧＧＧＧＡＡＧＣＡＧＣＣＣＡＴＡＡＡＴＧＧＴＣＴＴＴＧＣＣＴＧＡＡＡＴＧＧＴＧＡＧＴＡＡＧＧＡＡＡＧＣＧＡＡＡＧＧＣＴＧＡＧＣＡＴＡＡＣＴＡＡＡＴＣＴＧＣＣＴＧＴＧＧＡＡＧＡＡＡＴＧＧＣＡＡＡＣＡＡＴＴＣＴＧＣＡＧＴＡＣＴＴＴＡＡＣＣＴＴＧＡＡＣＡＣＡＧＣＴＣＡＡＧＣＡＡＡＣＣＡＣＡＣＴＧＧＣＴＴＣＴＡＣＡＧＣＴＧＣＡＡＡＴＡＴＣＴＡＧＣＴＧＴＡＣＣＴＡＣＴＴＣＡＡＡＧＡＡＧＡＡＧＧＡＡＡＣＡＧＡＡＴＣＴＧＣＡＡＴＣＴＡＴＡＴＡＴＴＴＡＴＴＡＧＴＧＡＴＡＣＡＧＧＴＡＧＡＣＣＴＴＴＣＧＴＡＧＡＧＡＴＧＴＡＣＡＧＴＧＡＡＡＴＣＣＣＣＧＡＡＡＴＴＡＴＡＣＡＣＡＴＧＡＣＴＧＡＡＧＧＡＡＧＧＧＡＧＣＴＣＧＴＣＡＴＴＣＣＣＴＧＣＣＧＧＧＴＴＡＣＧＴＣＡＣＣＴＡＡＣＡＴＣＡＣＴＧＴＴＡＣＴＴＴＡＡＡＡＡＡＧＴＴＴＣＣＡＣＴＴＧＡＣＡＣＴＴＴＧＡＴＣＣＣＴＧＡＴＧＧＡＡＡＡＣＧＣＡＴＡＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＴＡＧＡＡＡＧＧＧＣＴＴＣＡＴＣＡＴＡＴＣＡＡＡＴＧＣＡＡＣＧＴＡＣＡＡＡＧＡＡＡＴＡＧＧＧＣＴＴＣＴＧＡＣＣＴＧＴＧＡＡＧＣＡＡＣＡＧＴＣＡＡＴＧＧＧＣＡＴＴＴＧＴＡＴＡＡＧＡＣＡＡＡＣＴＡＴＣＴＣＡＣＡＣＡＴＣＧＡＣＡＡＡＣＣＡＡＴＡＣＡＡＴＣＡＴＡＧＡＴＧＴＣＣＡＡＡＴＡＡＧＣＡＣＡＣＣＡＣＧＣＣＣＡＧＴＣＡＡＡＴＴＡＣＴＴＡＧＡＧＧＣＣＡＴＡＣＴＣＴＴＧＴＣＣＴＣＡＡＴＴＧＴＡＣＴＧＣＴＡＣＣＡＣＴＣＣＣＴＴＧＡＡＣＡＣＧＡＧＡＧＴＴＣＡＡＡＴＧＡＣＣＴＧＧＡＧＴＴＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＡＡＡＡＡＡＴＡＡＧＡＧＡＧＣＴＴＣＣＧＴＡＡＧＧＣＧＡＣＧＡＡＴＴＧＡＣＣＡＡＡＧＣＡＡＴＴＣＣＣＡＴＧＣＣＡＡＣＡＴＡＴＴＣＴＡＣＡＧＴＧＴＴＣＴＴＡＣＴＡＴＴＧＡＣＡＡＡＡＴＧＣＡＧＡＡＣＡＡＡＧＡＣＡＡＡＧＧＡＣＴＴＴＡＴＡＣＴＴＧＴＣＧＴＧＴＡＡＧＧＡＧＴＧＧＡＣＣＡＴＣＡＴＴＣＡＡＡＴＣＴＧＴＴＡＡＣＡＣＣＴＣＡＧＴＧＣＡＴＡＴＡＴＡＴＧＡＴＡＡＡＧＣＡＴＴＣＡＴＣＡＣＴＧＴＧＡＡＡＣＡＴＣＧＡＡＡＡＣＡＧＣＡＧＧＴＧＣＴＴＧＡＡＡＣＣＧＴＡＧＣＴＧＧＣＡＡＧＣＧＧＴＣＴＴＡＣＣＧＧＣＴＣＴＣＴＡＴＧＡＡＡＧＴＧＡＡＧＧＣＡＴＴＴＣＣＣＴＣＧＣＣＧＧＡＡＧＴＴＧＴＡＴＧＧＴＴＡＡＡＡＧＡＴＧＧＧＴＴＡＣＣＴＧＣＧＡＣＴＧＡＧＡＡＡＴＣＴＧＣＴＣＧＣＴＡＴＴＴＧＡＣＴＣＧＴＧＧＣＴＡＣＴＣＧＴＴＡＡＴＴＡＴＣＡＡＧＧＡＣＧＴＡＡＣＴＧＡＡＧＡＧＧＡＴＧＣＡＧＧＧＡＡＴＴＡＴＡＣＡＡＴＣＴＴＧＣＴＧＡＧＣＡＴＡＡＡＡＣＡＧＴＣＡＡＡＴＧＴＧＴＴＴＡＡＡＡＡＣＣＴＣＡＣＴＧＣＣＡＣＴＣＴＡＡＴＴＧＴＣＡＡＴＧＴＧＡＡＡＣＣＣＣＡＧＡＴＴＴＡＣＧＡＡＡＡＧＧＣＣＧＴＧＴＣＡＴＣＧＴＴＴＣＣＡＧＡＣＣＣＧＧＣＴＣＴＣＴＡＣＣＣＡＣＴＧＧＧＣＡＧＣＡＧＡＣＡＡＡＴＣＣＴＧＡＣＴＴＧＴＡＣＣＧＣＡＴＡＴＧＧＴＡＴＣＣＣＴＣＡＡＣＣＴＡＣＡＡＴＣＡＡＧＴＧＧＴＴＣＴＧＧＣＡＣＣＣＣＴＧＴＡＡＣＣＡＴＡＡＴＣＡＴＴＣＣＧＡＡＧＣＡＡＧＧＴＧＴＧＡＣＴＴＴＴＧＴＴＣＣＡＡＴＡＡＴＧＡＡＧＡＧＴＣＣＴＴＴＡＴＣＣＴＧＧＡＴＧＣＴＧＡＣＡＧＣＡＡＣＡＴＧＧＧＡＡＡＣＡＧＡＡＴＴＧＡＧＡＧＣＡＴＣＡＣＴＣＡＧＣＧＣＡＴＧＧＣＡＡＴＡＡＴＡＧＡＡＧＧＡＡＡＧＡＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＴＡＧＣＡＣＣＴＴＧＧＴＴＧＴＧＧＣＴＧＡＣＴＣＴＡＧＡＡＴＴＴＣＴＧＧＡＡＴＣＴＡＣＡＴＴＴＧＣＡＴＡＧＣＴＴＣＣＡＡＴＡＡＡＧＴＴＧＧＧＡＣＴＧＴＧＧＧＡＡＧＡＡＡＣＡＴＡＡＧＣＴＴＴＴＡＴＡＴＣＡＣＡＧＡＴＧＴＧＣＣＡＡＡＴＧＧＧＴＴＴＣＡＴＧＴＴＡＡＣＴＴＧＧＡＡＡＡＡＡＴＧＣＣＧＡＣＧＧＡＡＧＧＡＧＡＧＧＡＣＣＴＧＡＡＡＣＴＧＴＣＴＴＧＣＡＣＡＧＴＴＡＡＣＡＡＧＴＴＣＴＴＡＴＡＣＡＧＡＧＡＣＧＴＴＡＣＴＴＧＧＡＴＴＴＴＡＣＴＧＣＧＧＡＣＡＧＴＴＡＡＴＡＡＣＡＧＡＡＣＡＡＴＧＣＡＣＴＡＣＡＧＴＡＴＴＡＧＣＡＡＧＣＡＡＡＡＡＡＴＧＧＣＣＡＴＣＡＣＴＡＡＧＧＡＧＣＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴＣＴＴＡＡＴＣＴＴＡＣＣＡＴＣＡＴＧＡＡＴＧＴＴＴＣＣＣＴＧＣＡＡＧＡＴＴＣＡＧＧＣＡＣＣＴＡＴＧＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＴＧＴＡＴＡＣＡＣＡＧＧＧＧＡＡＧＡＡＡＴＣＣＴＣＣＡＧＡＡＧＡＡＡＧＡＡＡＴＴＡＣＡＡＴＣＡＧＡＧＧＴＧＡＧＣＡＣＴＧＣＡＡＣＡＡＡＡＡＧＧＣＴＧＴＴＴＴＣＴＣＴＣＧＧＡＴＣＴＣＣＡＡＡＴＴＴＡＡＡＡＧＣＡＣＡＡＧＧＡＡＴＧＡＴＴＧＴＡＣＣＡＣＡＣＡＡＡＧＴＡＡＴＧＴＡＡＡＡＣＡＴＴＡＡ
ヒトＶＥＧＦ受容体１アイソフォーム３タンパク質配列（配列番号１９）（ｓＦｌｔ１−１４）
ＭＶＳＹＷＤＴＧＶＬＬＣＡＬＬＳＣＬＬＬＴＧＳＳＳＧＳＫＬＫＤＰＥＬＳＬＫＧＴＱＨＩＭＱＡＧＱＴＬＨＬＱＣＲＧＥＡＡＨＫＷＳＬＰＥＭＶＳＫＥＳＥＲＬＳＩＴＫＳＡＣＧＲＮＧＫＱＦＣＳＴＬＴＬＮＴＡＱＡＮＨＴＧＦＹＳＣＫＹＬＡＶＰＴＳＫＫＫＥＴＥＳＡＩＹＩＦＩＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＱＩＳＴＰＲＰＶＫＬＬＲＧＨＴＬＶＬＮＣＴＡＴＴＰＬＮＴＲＶＱＭＴＷＳＹＰＤＥＫＮＫＲＡＳＶＲＲＲＩＤＱＳＮＳＨＡＮＩＦＹＳＶＬＴＩＤＫＭＱＮＫＤＫＧＬＹＴＣＲＶＲＳＧＰＳＦＫＳＶＮＴＳＶＨＩＹＤＫＡＦＩＴＶＫＨＲＫＱＱＶＬＥＴＶＡＧＫＲＳＹＲＬＳＭＫＶＫＡＦＰＳＰＥＶＶＷＬＫＤＧＬＰＡＴＥＫＳＡＲＹＬＴＲＧＹＳＬＩＩＫＤＶＴＥＥＤＡＧＮＹＴＩＬＬＳＩＫＱＳＮＶＦＫＮＬＴＡＴＬＩＶＮＶＫＰＱＩＹＥＫＡＶＳＳＦＰＤＰＡＬＹＰＬＧＳＲＱＩＬＴＣＴＡＹＧＩＰＱＰＴＩＫＷＦＷＨＰＣＮＨＮＨＳＥＡＲＣＤＦＣＳＮＮＥＥＳＦＩＬＤＡＤＳＮＭＧＮＲＩＥＳＩＴＱＲＭＡＩＩＥＧＫＮＫＭＡＳＴＬＶＶＡＤＳＲＩＳＧＩＹＩＣＩＡＳＮＫＶＧＴＶＧＲＮＩＳＦＹＩＴＤＶＰＮＧＦＨＶＮＬＥＫＭＰＴＥＧＥＤＬＫＬＳＣＴＶＮＫＦＬＹＲＤＶＴＷＩＬＬＲＴＶＮＮＲＴＭＨＹＳＩＳＫＱＫＭＡＩＴＫＥＨＳＩＴＬＮＬＴＩＭＮＶＳＬＱＤＳＧＴＹＡＣＲＡＲＮＶＹＴＧＥＥＩＬＱＫＫＥＩＴＩＲＤＱＥＡＰＹＬＬＲＮＬＳＤＨＴＶＡＩＳＳＳＴＴＬＤＣＨＡＮＧＶＰＥＰＱＩＴＷＦＫＮＮＨＫＩＱＱＥＰＥＬＹＴＳＴＳＰＳＳＳＳＳＳＰＬＳＳＳＳＳＳＳＳＳＳＳＳ
ヒトＶＥＧＦ受容体１アイソフォーム３  ｃＤＮＡ（配列番号２０）
ＡＴＧＧＴＣＡＧＣＴＡＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＧＧＧＧＴＣＣＴＧＣＴＧＴＧＣＧＣＧＣＴＧＣＴＣＡＧＣＴＧＴＣＴＧＣＴＴＣＴＣＡＣＡＧＧＡＴＣＴＡＧＴＴＣＡＧＧＴＴＣＡＡＡＡＴＴＡＡＡＡＧＡＴＣＣＴＧＡＡＣＴＧＡＧＴＴＴＡＡＡＡＧＧＣＡＣＣＣＡＧＣＡＣＡＴＣＡＴＧＣＡＡＧＣＡＧＧＣＣＡＧＡＣＡＣＴＧＣＡＴＣＴＣＣＡＡＴＧＣＡＧＧＧＧＧＧＡＡＧＣＡＧＣＣＣＡＴＡＡＡＴＧＧＴＣＴＴＴＧＣＣＴＧＡＡＡＴＧＧＴＧＡＧＴＡＡＧＧＡＡＡＧＣＧＡＡＡＧＧＣＴＧＡＧＣＡＴＡＡＣＴＡＡＡＴＣＴＧＣＣＴＧＴＧＧＡＡＧＡＡＡＴＧＧＣＡＡＡＣＡＡＴＴＣＴＧＣＡＧＴＡＣＴＴＴＡＡＣＣＴＴＧＡＡＣＡＣＡＧＣＴＣＡＡＧＣＡＡＡＣＣＡＣＡＣＴＧＧＣＴＴＣＴＡＣＡＧＣＴＧＣＡＡＡＴＡＴＣＴＡＧＣＴＧＴＡＣＣＴＡＣＴＴＣＡＡＡＧＡＡＧＡＡＧＧＡＡＡＣＡＧＡＡＴＣＴＧＣＡＡＴＣＴＡＴＡＴＡＴＴＴＡＴＴＡＧＴＧＡＴＡＣＡＧＧＴＡＧＡＣＣＴＴＴＣＧＴＡＧＡＧＡＴＧＴＡＣＡＧＴＧＡＡＡＴＣＣＣＣＧＡＡＡＴＴＡＴＡＣＡＣＡＴＧＡＣＴＧＡＡＧＧＡＡＧＧＧＡＧＣＴＣＧＴＣＡＴＴＣＣＣＴＧＣＣＧＧＧＴＴＡＣＧＴＣＡＣＣＴＡＡＣＡＴＣＡＣＴＧＴＴＡＣＴＴＴＡＡＡＡＡＡＧＴＴＴＣＣＡＣＴＴＧＡＣＡＣＴＴＴＧＡＴＣＣＣＴＧＡＴＧＧＡＡＡＡＣＧＣＡＴＡＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＴＡＧＡＡＡＧＧＧＣＴＴＣＡＴＣＡＴＡＴＣＡＡＡＴＧＣＡＡＣＧＴＡＣＡＡＡＧＡＡＡＴＡＧＧＧＣＴＴＣＴＧＡＣＣＴＧＴＧＡＡＧＣＡＡＣＡＧＴＣＡＡＴＧＧＧＣＡＴＴＴＧＴＡＴＡＡＧＡＣＡＡＡＣＴＡＴＣＴＣＡＣＡＣＡＴＣＧＡＣＡＡＡＣＣＡＡＴＡＣＡＡＴＣＡＴＡＧＡＴＧＴＣＣＡＡＡＴＡＡＧＣＡＣＡＣＣＡＣＧＣＣＣＡＧＴＣＡＡＡＴＴＡＣＴＴＡＧＡＧＧＣＣＡＴＡＣＴＣＴＴＧＴＣＣＴＣＡＡＴＴＧＴＡＣＴＧＣＴＡＣＣＡＣＴＣＣＣＴＴＧＡＡＣＡＣＧＡＧＡＧＴＴＣＡＡＡＴＧＡＣＣＴＧＧＡＧＴＴＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＡＡＡＡＡＡＴＡＡＧＡＧＡＧＣＴＴＣＣＧＴＡＡＧＧＣＧＡＣＧＡＡＴＴＧＡＣＣＡＡＡＧＣＡＡＴＴＣＣＣＡＴＧＣＣＡＡＣＡＴＡＴＴＣＴＡＣＡＧＴＧＴＴＣＴＴＡＣＴＡＴＴＧＡＣＡＡＡＡＴＧＣＡＧＡＡＣＡＡＡＧＡＣＡＡＡＧＧＡＣＴＴＴＡＴＡＣＴＴＧＴＣＧＴＧＴＡＡＧＧＡＧＴＧＧＡＣＣＡＴＣＡＴＴＣＡＡＡＴＣＴＧＴＴＡＡＣＡＣＣＴＣＡＧＴＧＣＡＴＡＴＡＴＡＴＧＡＴＡＡＡＧＣＡＴＴＣＡＴＣＡＣＴＧＴＧＡＡＡＣＡＴＣＧＡＡＡＡＣＡＧＣＡＧＧＴＧＣＴＴＧＡＡＡＣＣＧＴＡＧＣＴＧＧＣＡＡＧＣＧＧＴＣＴＴＡＣＣＧＧＣＴＣＴＣＴＡＴＧＡＡＡＧＴＧＡＡＧＧＣＡＴＴＴＣＣＣＴＣＧＣＣＧＧＡＡＧＴＴＧＴＡＴＧＧＴＴＡＡＡＡＧＡＴＧＧＧＴＴＡＣＣＴＧＣＧＡＣＴＧＡＧＡＡＡＴＣＴＧＣＴＣＧＣＴＡＴＴＴＧＡＣＴＣＧＴＧＧＣＴＡＣＴＣＧＴＴＡＡＴＴＡＴＣＡＡＧＧＡＣＧＴＡＡＣＴＧＡＡＧＡＧＧＡＴＧＣＡＧＧＧＡＡＴＴＡＴＡＣＡＡＴＣＴＴＧＣＴＧＡＧＣＡＴＡＡＡＡＣＡＧＴＣＡＡＡＴＧＴＧＴＴＴＡＡＡＡＡＣＣＴＣＡＣＴＧＣＣＡＣＴＣＴＡＡＴＴＧＴＣＡＡＴＧＴＧＡＡＡＣＣＣＣＡＧＡＴＴＴＡＣＧＡＡＡＡＧＧＣＣＧＴＧＴＣＡＴＣＧＴＴＴＣＣＡＧＡＣＣＣＧＧＣＴＣＴＣＴＡＣＣＣＡＣＴＧＧＧＣＡＧＣＡＧＡＣＡＡＡＴＣＣＴＧＡＣＴＴＧＴＡＣＣＧＣＡＴＡＴＧＧＴＡＴＣＣＣＴＣＡＡＣＣＴＡＣＡＡＴＣＡＡＧＴＧＧＴＴＣＴＧＧＣＡＣＣＣＣＴＧＴＡＡＣＣＡＴＡＡＴＣＡＴＴＣＣＧＡＡＧＣＡＡＧＧＴＧＴＧＡＣＴＴＴＴＧＴＴＣＣＡＡＴＡＡＴＧＡＡＧＡＧＴＣＣＴＴＴＡＴＣＣＴＧＧＡＴＧＣＴＧＡＣＡＧＣＡＡＣＡＴＧＧＧＡＡＡＣＡＧＡＡＴＴＧＡＧＡＧＣＡＴＣＡＣＴＣＡＧＣＧＣＡＴＧＧＣＡＡＴＡＡＴＡＧＡＡＧＧＡＡＡＧＡＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＴＡＧＣＡＣＣＴＴＧＧＴＴＧＴＧＧＣＴＧＡＣＴＣＴＡＧＡＡＴＴＴＣＴＧＧＡＡＴＣＴＡＣＡＴＴＴＧＣＡＴＡＧＣＴＴＣＣＡＡＴＡＡＡＧＴＴＧＧＧＡＣＴＧＴＧＧＧＡＡＧＡＡＡＣＡＴＡＡＧＣＴＴＴＴＡＴＡＴＣＡＣＡＧＡＴＧＴＧＣＣＡＡＡＴＧＧＧＴＴＴＣＡＴＧＴＴＡＡＣＴＴＧＧＡＡＡＡＡＡＴＧＣＣＧＡＣＧＧＡＡＧＧＡＧＡＧＧＡＣＣＴＧＡＡＡＣＴＧＴＣＴＴＧＣＡＣＡＧＴＴＡＡＣＡＡＧＴＴＣＴＴＡＴＡＣＡＧＡＧＡＣＧＴＴＡＣＴＴＧＧＡＴＴＴＴＡＣＴＧＣＧＧＡＣＡＧＴＴＡＡＴＡＡＣＡＧＡＡＣＡＡＴＧＣＡＣＴＡＣＡＧＴＡＴＴＡＧＣＡＡＧＣＡＡＡＡＡＡＴＧＧＣＣＡＴＣＡＣＴＡＡＧＧＡＧＣＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴＣＴＴＡＡＴＣＴＴＡＣＣＡＴＣＡＴＧＡＡＴＧＴＴＴＣＣＣＴＧＣＡＡＧＡＴＴＣＡＧＧＣＡＣＣＴＡＴＧＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＴＧＴＡＴＡＣＡＣＡＧＧＧＧＡＡＧＡＡＡＴＣＣＴＣＣＡＧＡＡＧＡＡＡＧＡＡＡＴＴＡＣＡＡＴＣＡＧＡＧＡＴＣＡＧＧＡＡＧＣＡＣＣＡＴＡＣＣＴＣＣＴＧＣＧＡＡＡＣＣＴＣＡＧＴＧＡＴＣＡＣＡＣＡＧＴＧＧＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＴＣＣＡＣＣＡＣＴＴＴＡＧＡＣＴＧＴＣＡＴＧＣＴＡＡＴＧＧＴＧＴＣＣＣＣＧＡＧＣＣＴＣＡＧＡＴＣＡＣＴＴＧＧＴＴＴＡＡＡＡＡＣＡＡＣＣＡＣＡＡＡＡＴＡＣＡＡＣＡＡＧＡＧＣＣＴＧＡＡＣＴＧＴＡＴＡＣＡＴＣＡＡＣＧＴＣＡＣＣＡＴＣＧＴＣＡＴＣＧＴＣＡＴＣＡＴＣＡＣＣＡＴＴＧＴＣＡＴＣＡＴＣＡＴＣＡＴＣＡＴＣＧＴＣＡＴＣＡＴＣＡＴＣＡＴＣＡＴＣＡＴＡＧ
ヒトＶＥＧＦ受容体１アイソフォーム４タンパク質配列（配列番号２１）
ＭＶＳＹＷＤＴＧＶＬＬＣＡＬＬＳＣＬＬＬＴＧＳＳＳＧＳＫＬＫＤＰＥＬＳＬＫＧＴＱＨＩＭＱＡＧＱＴＬＨＬＱＣＲＧＥＡＡＨＫＷＳＬＰＥＭＶＳＫＥＳＥＲＬＳＩＴＫＳＡＣＧＲＮＧＫＱＦＣＳＴＬＴＬＮＴＡＱＡＮＨＴＧＦＹＳＣＫＹＬＡＶＰＴＳＫＫＫＥＴＥＳＡＩＹＩＦＩＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＱＩＳＴＰＲＰＶＫＬＬＲＧＨＴＬＶＬＮＣＴＡＴＴＰＬＮＴＲＶＱＭＴＷＳＹＰＤＥＫＮＫＲＡＳＶＲＲＲＩＤＱＳＮＳＨＡＮＩＦＹＳＶＬＴＩＤＫＭＱＮＫＤＫＧＬＹＴＣＲＶＲＳＧＰＳＦＫＳＶＮＴＳＶＨＩＹＤＫＡＦＩＴＶＫＨＲＫＱＱＶＬＥＴＶＡＧＫＲＳＹＲＬＳＭＫＶＫＡＦＰＳＰＥＶＶＷＬＫＤＧＬＰＡＴＥＫＳＡＲＹＬＴＲＧＹＳＬＩＩＫＤＶＴＥＥＤＡＧＮＹＴＩＬＬＳＩＫＱＳＮＶＦＫＮＬＴＡＴＬＩＶＮＶＫＰＱＩＹＥＫＡＶＳＳＦＰＤＰＡＬＹＰＬＧＳＲＱＩＬＴＣＴＡＹＧＩＰＱＰＴＩＫＷＦＷＨＰＣＮＨＮＨＳＥＡＲＣＤＦＣＳＮＮＥＥＳＦＩＬＤＡＤＳＮＭＧＮＲＩＥＳＩＴＱＲＭＡＩＩＥＧＫＮＫＬＰＰＡＮＳＳＦＭＬＰＰＴＳＦＳＳＮＹＦＨＦＬＰ
ヒトＶＥＧＦ受容体１アイソフォーム４  ｃＤＮＡ（配列番号２２）
ＡＴＧＧＴＣＡＧＣＴＡＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＧＧＧＧＴＣＣＴＧＣＴＧＴＧＣＧＣＧＣＴＧＣＴＣＡＧＣＴＧＴＣＴＧＣＴＴＣＴＣＡＣＡＧＧＡＴＣＴＡＧＴＴＣＡＧＧＴＴＣＡＡＡＡＴＴＡＡＡＡＧＡＴＣＣＴＧＡＡＣＴＧＡＧＴＴＴＡＡＡＡＧＧＣＡＣＣＣＡＧＣＡＣＡＴＣＡＴＧＣＡＡＧＣＡＧＧＣＣＡＧＡＣＡＣＴＧＣＡＴＣＴＣＣＡＡＴＧＣＡＧＧＧＧＧＧＡＡＧＣＡＧＣＣＣＡＴＡＡＡＴＧＧＴＣＴＴＴＧＣＣＴＧＡＡＡＴＧＧＴＧＡＧＴＡＡＧＧＡＡＡＧＣＧＡＡＡＧＧＣＴＧＡＧＣＡＴＡＡＣＴＡＡＡＴＣＴＧＣＣＴＧＴＧＧＡＡＧＡＡＡＴＧＧＣＡＡＡＣＡＡＴＴＣＴＧＣＡＧＴＡＣＴＴＴＡＡＣＣＴＴＧＡＡＣＡＣＡＧＣＴＣＡＡＧＣＡＡＡＣＣＡＣＡＣＴＧＧＣＴＴＣＴＡＣＡＧＣＴＧＣＡＡＡＴＡＴＣＴＡＧＣＴＧＴＡＣＣＴＡＣＴＴＣＡＡＡＧＡＡＧＡＡＧＧＡＡＡＣＡＧＡＡＴＣＴＧＣＡＡＴＣＴＡＴＡＴＡＴＴＴＡＴＴＡＧＴＧＡＴＡＣＡＧＧＴＡＧＡＣＣＴＴＴＣＧＴＡＧＡＧＡＴＧＴＡＣＡＧＴＧＡＡＡＴＣＣＣＣＧＡＡＡＴＴＡＴＡＣＡＣＡＴＧＡＣＴＧＡＡＧＧＡＡＧＧＧＡＧＣＴＣＧＴＣＡＴＴＣＣＣＴＧＣＣＧＧＧＴＴＡＣＧＴＣＡＣＣＴＡＡＣＡＴＣＡＣＴＧＴＴＡＣＴＴＴＡＡＡＡＡＡＧＴＴＴＣＣＡＣＴＴＧＡＣＡＣＴＴＴＧＡＴＣＣＣＴＧＡＴＧＧＡＡＡＡＣＧＣＡＴＡＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＴＡＧＡＡＡＧＧＧＣＴＴＣＡＴＣＡＴＡＴＣＡＡＡＴＧＣＡＡＣＧＴＡＣＡＡＡＧＡＡＡＴＡＧＧＧＣＴＴＣＴＧＡＣＣＴＧＴＧＡＡＧＣＡＡＣＡＧＴＣＡＡＴＧＧＧＣＡＴＴＴＧＴＡＴＡＡＧＡＣＡＡＡＣＴＡＴＣＴＣＡＣＡＣＡＴＣＧＡＣＡＡＡＣＣＡＡＴＡＣＡＡＴＣＡＴＡＧＡＴＧＴＣＣＡＡＡＴＡＡＧＣＡＣＡＣＣＡＣＧＣＣＣＡＧＴＣＡＡＡＴＴＡＣＴＴＡＧＡＧＧＣＣＡＴＡＣＴＣＴＴＧＴＣＣＴＣＡＡＴＴＧＴＡＣＴＧＣＴＡＣＣＡＣＴＣＣＣＴＴＧＡＡＣＡＣＧＡＧＡＧＴＴＣＡＡＡＴＧＡＣＣＴＧＧＡＧＴＴＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＡＡＡＡＡＡＴＡＡＧＡＧＡＧＣＴＴＣＣＧＴＡＡＧＧＣＧＡＣＧＡＡＴＴＧＡＣＣＡＡＡＧＣＡＡＴＴＣＣＣＡＴＧＣＣＡＡＣＡＴＡＴＴＣＴＡＣＡＧＴＧＴＴＣＴＴＡＣＴＡＴＴＧＡＣＡＡＡＡＴＧＣＡＧＡＡＣＡＡＡＧＡＣＡＡＡＧＧＡＣＴＴＴＡＴＡＣＴＴＧＴＣＧＴＧＴＡＡＧＧＡＧＴＧＧＡＣＣＡＴＣＡＴＴＣＡＡＡＴＣＴＧＴＴＡＡＣＡＣＣＴＣＡＧＴＧＣＡＴＡＴＡＴＡＴＧＡＴＡＡＡＧＣＡＴＴＣＡＴＣＡＣＴＧＴＧＡＡＡＣＡＴＣＧＡＡＡＡＣＡＧＣＡＧＧＴＧＣＴＴＧＡＡＡＣＣＧＴＡＧＣＴＧＧＣＡＡＧＣＧＧＴＣＴＴＡＣＣＧＧＣＴＣＴＣＴＡＴＧＡＡＡＧＴＧＡＡＧＧＣＡＴＴＴＣＣＣＴＣＧＣＣＧＧＡＡＧＴＴＧＴＡＴＧＧＴＴＡＡＡＡＧＡＴＧＧＧＴＴＡＣＣＴＧＣＧＡＣＴＧＡＧＡＡＡＴＣＴＧＣＴＣＧＣＴＡＴＴＴＧＡＣＴＣＧＴＧＧＣＴＡＣＴＣＧＴＴＡＡＴＴＡＴＣＡＡＧＧＡＣＧＴＡＡＣＴＧＡＡＧＡＧＧＡＴＧＣＡＧＧＧＡＡＴＴＡＴＡＣＡＡＴＣＴＴＧＣＴＧＡＧＣＡＴＡＡＡＡＣＡＧＴＣＡＡＡＴＧＴＧＴＴＴＡＡＡＡＡＣＣＴＣＡＣＴＧＣＣＡＣＴＣＴＡＡＴＴＧＴＣＡＡＴＧＴＧＡＡＡＣＣＣＣＡＧＡＴＴＴＡＣＧＡＡＡＡＧＧＣＣＧＴＧＴＣＡＴＣＧＴＴＴＣＣＡＧＡＣＣＣＧＧＣＴＣＴＣＴＡＣＣＣＡＣＴＧＧＧＣＡＧＣＡＧＡＣＡＡＡＴＣＣＴＧＡＣＴＴＧＴＡＣＣＧＣＡＴＡＴＧＧＴＡＴＣＣＣＴＣＡＡＣＣＴＡＣＡＡＴＣＡＡＧＴＧＧＴＴＣＴＧＧＣＡＣＣＣＣＴＧＴＡＡＣＣＡＴＡＡＴＣＡＴＴＣＣＧＡＡＧＣＡＡＧＧＴＧＴＧＡＣＴＴＴＴＧＴＴＣＣＡＡＴＡＡＴＧＡＡＧＡＧＴＣＣＴＴＴＡＴＣＣＴＧＧＡＴＧＣＴＧＡＣＡＧＣＡＡＣＡＴＧＧＧＡＡＡＣＡＧＡＡＴＴＧＡＧＡＧＣＡＴＣＡＣＴＣＡＧＣＧＣＡＴＧＧＣＡＡＴＡＡＴＡＧＡＡＧＧＡＡＡＧＡＡＴＡＡＧＣＴＴＣＣＡＣＣＡＧＣＴＡＡＣＡＧＴＴＣＴＴＴＣＡＴＧＴＴＧＣＣＡＣＣＴＡＣＡＡＧＣＴＴＣＴＣＴＴＣＣＡＡＣＴＡＣＴＴＣＣＡＴＴＴＣＣＴＴＣＣＧＴＧＡ
野生型ヒトＶＥＧＦＲ−１の細胞外領域（配列番号２３）（７つのＩｇ様ドメインが太字で示され、下線が引かれている）
【化１】
2021506861.tif 000003
野生型マウスＶＥＧＦＲ−１の細胞外領域（配列番号２４）
ｙｇｓｇｓｋｌｋ  ｖｐｅｌｓｌｋｇｔｑ  ｈｖｍｑａｇｑｔｌｆ  ｌｋｃｒｇｅａａｈｓ  ｗｓｌｐｔｔｖｓｑｅ  ｄｋｒｌｓｉｔｐｐｓ  ａｃｇｒｄｎｒｑｆｃ  ｓｔｌｔｌｄｔａｑａ  ｎｈｔｇｌｙｔｃｒｙ  ｌｐｔｓｔｓｋｋｋｋ  ａｅｓｓｉｙｉｆｖｓ  ｄａｇｓｐｆｉｅｍｈ  ｔｄｉｐｋｌｖｈｍｔ  ｅｇｒｑｌｉｉｐｃｒ  ｖｔｓｐｎｖｔｖｔｌ  ｋｋｆｐｆｄｔｌｔｐ  ｄｇｑｒｉｔｗｄｓｒ  ｒｇｆｉｉａｎａｔｙ  ｋｅｉｇｌｌｎｃｅａ  ｔｖｎｇｈｌｙｑｔｎ  ｙｌｔｈｒｑｔｎｔｉ  ｌｄｖｑｉｒｐｐｓｐ  ｖｒｌｌｈｇｑｔｌｖ  ｌｎｃｔａｔｔｅｌｎ  ｔｒｖｑｍｓｗｎｙｐ  ｇｋａｔｋｒａｓｉｒ  ｑｒｉｄｒｓｈｓｈｎ  ｎｖｆｈｓｖｌｋｉｎ  ｎｖｅｓｒｄｋｇｌｙ  ｔｃｒｖｋｓｇｓｓｆ  ｑｓｆｎｔｓｖｈｖｙ  ｅｋｇｆｉｓｖｋｈｒ  ｋｑｐｖｑｅｔｔａｇ  ｒｒｓｙｒｌｓｍｋｖ  ｋａｆｐｓｐｅｉｖｗ  ｌｋｄｇｓｐａｔｌｋ  ｓａｒｙｌｖｈｇｙｓ  ｌｉｉｋｄｖｔｔｅｄ  ａｇｄｙｔｉｌｌｇｉ  ｋｑｓｒｌｆｋｎｌｔ  ａｔｌｉｖｎｖｋｐｑ  ｉｙｅｋｓｖｓｓｌｐ  ｓｐｐｌｙｐｌｇｓｒ  ｑｖｌｔｃｔｖｙｇｉ  ｐｒｐｔｉｔｗｌｗｈ  ｐｃｈｈｎｈｓｋｅｒ  ｙｄｆｃｔｅｎｅｅｓ  ｆｉｌｄｐｓｓｎｌｇ  ｎｒｉｅｓｉｓｑｒｍ  ｔｖｉｅｇｔｎｋｔｖ  ｓｔｌｖｖａｄｓｑｔ  ｐｇｉｙｓｃｒａｆｎ  ｋｉｇｔｖｅｒｎｉｋ  ｆｙｖｔｄｖｐｎｇｆ  ｈｖｓｌｅｋｍｐａｅ  ｇｅｄｌｋｌｓｃｖｖ  ｎｋｆｌｙｒｄｉｔｗ  ｉｌｌｒｔｖｎｎｒｔ  ｍｈｈｓｉｓｋｑｋｍ  ａｔｔｑｄｙｓｉｔｌ  ｎｌｖｉｋｎｖｓｌｅ  ｄｓｇｔｙａｃｒａｒ  ｎｉｙｔｇｅｄｉｌｒ  ｋｔｅｖｌｖｒｄｓｅ  ａｐｈｌｌｑｎｌｓｄ  ｙｅｖｓｉｓｇｓｔｔ  ｌｄｃｑａｒｇｖｐａ  ｐｑｉｔｗｆｋｎｎｈ  ｋｉｑｑｅｐｇｉｉｌ  ｇｐｇｎｓｔｌｆｉｅ  ｒｖｔｅｅｄｅｇｖｙ  ｒｃｒａｔｎｑｋｇａ  ｖｅｓａａｙｌｔｖｑ  ｇｔｓｄｋｓｎｌｅ
野生型ラットＶＥＧＦＲ−１の細胞外領域（配列番号２５）
ｙｃｓｇｓｋｌｋ  ｇｐｅｌｓｌｋｇｔｑ  ｈｖｍｑａｇｑｔｌｆ  ｌｋｃｒｇｅａａｈｓ  ｗｓｌｐｔｔｖｓｑｅ  ｄｋｋｌｓｖｔｒｓａ  ｃｇｒｎｎｒｑｆｃｓ  ｔｌｔｌｎｍａｑａｎ  ｈｔｇｌｙｓｃｒｙｌ  ｐｋｓｔｓｋｅｋｋｍ  ｅｓａｉｙｉｆｖｓｄ  ａｇｓｐｆｉｅｍｈｓ  ｄｉｐｋｌｖｈｍｔｅ  ｇｒｅｌｉｉｐｃｒｖ  ｔｓｐｎｉｔｖｔｌｋ  ｋｆｐｆｄａｌｔｐｄ  ｇｑｒｉａｗｄｓｒｒ  ｇｆｉｉａｎａｔｙｋ  ｅｉｇｌｌｔｃｅａｔ  ｖｎｇｈｌｙｑｔｓｙ  ｌｔｈｒｑｔｎｔｉｌ  ｄｖｑｉｓｐｐｓｐｖ  ｒｆｌｒｇｑｔｌｖｌ  ｎｃｔｖｔｔｄｌｎｔ  ｒｖｑｍｓｗｎｙｐｇ  ｋａｔｋｒａｓｉｒｑ  ｒｉｄｑｓｎｐｈｓｎ  ｖｆｈｓｖｌｋｉｎｎ  ｖｅｓｒｄｋｇｌｙｔ  ｃｒｖｋｓｇｓｓｆｒ  ｔｆｎｔｓｖｈｖｙｅ  ｋｇｆｉｓｖｋｈｒｋ  ｑｑｖｑｅｔｉａｇｋ  ｒｓｈｒｌｓｍｋｖｋ  ａｆｐｓｐｅｖｖｗｌ  ｋｄｇｖｐａｔｅｋｓ  ａｒｙｓｖｈｇｙｓｌ  ｉｉｋｄｖｔａｅｄａ  ｇｄｙｔｉｌｌｇｉｋ  ｑｓｋｌｆｒｎｌｔａ  ｔｌｉｖｎｖｋｐｑｉ  ｙｅｋｓｖｓｓｌｐｓ  ｐｐｌｙｐｌｇｓｒｑ  ｖｌｔｃｔｖｙｇｉｐ  ｑｐｔｉｋｗｌｗｈｐ  ｃｈｙｎｈｓｋｅｒｎ  ｄｆｃｆｇｓｅｅｓｆ  ｉｌｄｓｓｓｎｉｇｎ  ｒｉｅｇｉｔｑｒｍｍ  ｖｉｅｇｔｎｋｔｖｓ  ｔｌｖｖａｄｓｒｔｐ  ｇｓｙｓｃｋａｆｎｋ  ｉｇｔｖｅｒｄｉｒｆ  ｙｖｔｄｖｐｎｇｆｈ  ｖｓｌｅｋｉｐｔｅｇ  ｅｄｌｋｌｓｃｖｖｓ  ｋｆｌｙｒｄｉｔｗｉ  ｌｌｒｔｖｎｎｒｔｍ  ｈｈｓｉｓｋｑｋｍａ  ｔｔｑｄｙｓｉｔｌｎ  ｌｖｉｋｎｖｓｌｅｄ  ｓｇｔｙａｃｒａｒｎ  ｉｙｔｇｅｅｉｌｒｋ  ｔｅｖｌｖｒｄｌｅａ  ｐｌｌｌｑｎｌｓｄｈ  ｅｖｓｉｓｇｓｔｔｌ  ｄｃｑａｒｇｖｐａｐ  ｑｉｔｗｆｋｎｎｈｋ  ｉｑｑｅｐｇｉｉｌｇ  ｐｇｎｓｔｌｆｉｅｒ  ｖｔｅｅｄｅｇｖｙｒ  ｃｒａｔｎｑｋｇｖｖ  ｅｓｓａｙｌｔｖｑｇ  ｔｓｄｋｓｎｌｅ
野生型ヒトＶＥＧＦＲ−２の細胞外領域（配列番号２６）（７つのＩｇ様ドメインが太字で示され、下線が引かれている）
【化２】
2021506861.tif 000004
野生型マウスＶＥＧＦＲ−２の細胞外領域（配列番号２７）
ａｓｖｇｌｐｇｄｆｌｈ  ｐｐｋｌｓｔｑｋｄｉ  ｌｔｉｌａｎｔｔｌｑ  ｉｔｃｒｇｑｒｄｌｄ  ｗｌｗｐｎａｑｒｄｓ  ｅｅｒｖｌｖｔｅｃｇ  ｇｇｄｓｉｆｃｋｔｌ  ｔｉｐｒｖｖｇｎｄｔ  ｇａｙｋｃｓｙｒｄｖ  ｄｉａｓｔｖｙｖｙｖ  ｒｄｙｒｓｐｆｉａｓ  ｖｓｄｑｈｇｉｖｙｉ  ｔｅｎｋｎｋｔｖｖｉ  ｐｃｒｇｓｉｓｎｌｎ  ｖｓｌｃａｒｙｐｅｋ  ｒｆｖｐｄｇｎｒｉｓ  ｗｄｓｅｉｇｆｔｌｐ  ｓｙｍｉｓｙａｇｍｖ  ｆｃｅａｋｉｎｄｅｔ  ｙｑｓｉｍｙｉｖｖｖ  ｖｇｙｒｉｙｄｖｉｌ  ｓｐｐｈｅｉｅｌｓａ  ｇｅｋｌｖｌｎｃｔａ  ｒｔｅｌｎｖｇｌｄｆ  ｔｗｈｓｐｐｓｋｓｈ  ｈｋｋｉｖｎｒｄｖｋ  ｐｆｐｇｔｖａｋｍｆ  ｌｓｔｌｔｉｅｓｖｔ  ｋｓｄｑｇｅｙｔｃｖ  ａｓｓｇｒｍｉｋｒｎ  ｒｔｆｖｒｖｈｔｋｐ  ｆｉａｆｇｓｇｍｋｓ  ｌｖｅａｔｖｇｓｑｖ  ｒｉｐｖｋｙｌｓｙｐ  ａｐｄｉｋｗｙｒｎｇ  ｒｐｉｅｓｎｙｔｍｉ  ｖｇｄｅｌｔｉｍｅｖ  ｔｅｒｄａｇｎｙｔｖ  ｉｌｔｎｐｉｓｍｅｋ  ｑｓｈｍｖｓｌｖｖｎ  ｖｐｐｑｉｇｅｋａｌ  ｉｓｐｍｄｓｙｑｙｇ  ｔｍｑｔｌｔｃｔｖｙ  ａｎｐｐｌｈｈｉｑｗ  ｙｗｑｌｅｅａｃｓｙ  ｒｐｇｑｔｓｐｙａｃ  ｋｅｗｒｈｖｅｄｆｑ  ｇｇｎｋｉｅｖｔｋｎ  ｑｙａｌｉｅｇｋｎｋ  ｔｖｓｔｌｖｉｑａａ  ｎｖｓａｌｙｋｃｅａ  ｉｎｋａｇｒｇｅｒｖ  ｉｓｆｈｖｉｒｇｐｅ  ｉｔｖｑｐａａｑｐｔ  ｅｑｅｓｖｓｌｌｃｔ  ａｄｒｎｔｆｅｎｌｔ  ｗｙｋｌｇｓｑａｔｓ  ｖｈｍｇｅｓｌｔｐｖ  ｃｋｎｌｄａｌｗｋｌ  ｎｇｔｍｆｓｎｓｔｎ  ｄｉｌｉｖａｆｑｎａ  ｓｌｑｄｑｇｄｙｖｃ  ｓａｑｄｋｋｔｋｋｒ  ｈｃｌｖｋｑｌｉｉｌ  ｅｒｍａｐｍｉｔｇｎ  ｌｅｎｑｔｔｔｉｇｅ  ｔｉｅｖｔｃｐａｓｇ  ｎｐｔｐｈｉｔｗｆｋ  ｄｎｅｔｌｖｅｄｓｇ  ｉｖｌｒｄｇｎｒｎｌ  ｔｉｒｒｖｒｋｅｄｇ  ｇｌｙｔｃｑａｃｎｖ  ｌｇｃａｒａｅｔｌｆ  ｉｉｅｇａｑｅｋｔｎ  ｌｅ
野生型ラットＶＥＧＦＲ−２の細胞外領域（配列番号２８）
ａｓｖｇｌｐｇｄｓｌｈ  ｐｐｋｌｓｔｑｋｄｉ  ｌｔｉｌａｎｔｔｌｑ  ｉｔｃｒｇｑｒｄｌｄ  ｗｌｗｐｎｔｐｒｄｓ  ｅｅｒｖｌｖｔｅｃｇ  ｄｓｉｆｃｋｔｌｔｖ  ｐｒｖｖｇｎｄｔｇａ  ｙｋｃｆｙｒｄｔｄｖ  ｓｓｉｖｙｖｙｖｑｄ  ｈｒｓｐｆｉａｓｖｓ  ｄｅｈｇｉｖｙｉｔｅ  ｎｋｎｋｔｖｖｉｐｃ  ｒｇｓｉｓｎｌｎｖｓ  ｌｃａｒｙｐｅｋｒｆ  ｖｐｄｇｎｒｉｓｗｄ  ｓｅｋｇｆｔｉｐｓｙ  ｍｉｓｙａｇｍｖｆｃ  ｅａｋｉｎｄｅｔｙｑ  ｓｉｍｙｉｖｌｖｖｇ  ｙｒｉｙｄｖｖｌｓｐ  ｐｈｅｉｅｌｓａｇｅ  ｋｌｖｌｎｃｔａｒｔ  ｅｌｎｖｇｌｄｆｓｗ  ｑｆｐｓｓｋｈｑｈｋ  ｋｉｖｎｒｄｖｋｓｌ  ｐｇｔｖａｋｍｆｌｓ  ｔｌｔｉｄｓｖｔｋｓ  ｄｑｇｅｙｔｃｔａｙ  ｓｇｌｍｔｋｋｎｋｔ  ｆｖｒｖｈｔｋｐｆｉ  ａｆｇｓｇｍｋｓｌｖ  ｅａｔｖｇｓｑｖｒｉ  ｐｖｋｙｌｓｙｐａｐｄｉｋｗｙｒｎｇｒｐ  ｉｅｓｎｙｔｍｉｖｇ  ｄｅｌｔｉｍｅｖｓｅ  ｒｄａｇｎｙｔｖｉｌ  ｔｎｐｉｓｍｅｋｑｓ  ｈｍｖｓｌｖｖｎｖｐ  ｐｑｉｇｅｋａｌｉｓ  ｐｍｄｓｙｑｙｇｔｍ  ｑｔｌｔｃｔｖｙａｎ  ｐｐｌｈｈｉｑｗｙｗ  ｑｌｅｅａｃｓｙｒｐ  ｓｑｔｎｐｙｔｃｋｅ  ｗｒｈｖｋｄｆｑｇｇ  ｎｋｉｅｖｔｋｎｑｙ  ａｌｉｅｇｋｎｋｔｖ  ｓｔｌｖｉｑａａｙｖ  ｓａｌｙｋｃｅａｉｎ  ｋａｇｒｇｅｒｖｉｓ  ｆｈｖｉｒｇｐｅｉｔ  ｖｑｐａｔｑｐｔｅｒ  ｅｓｍｓｌｌｃｔａｄ  ｒｎｔｆｅｎｌｔｗｙ  ｋｌｇｓｑａｔｓｖｈ  ｍｇｅｓｌｔｐｖｃｋ  ｎｌｄａｌｗｋｌｎｇ  ｔｖｆｓｎｓｔｎｄｉ  ｌｉｖａｆｑｎａｓｌ  ｑｄｑｇｎｙｖｃｓａ  ｑｄｋｋｔｋｋｒｈｃ  ｌｖｋｑｌｖｉｌｅｒ  ｍａｐｍｉｔｇｎｌｅ  ｎｑｔｔｔｉｇｅｔｉ  ｅｖｖｃｐｔｓｇｎｐ  ｔｐｌｉｔｗｆｋｄｎ  ｅｔｌｖｅｄｓｇｉｖ  ｌｋｄｇｎｒｎｌｔｉ  ｒｒｖｒｋｅｄｇｇｌ  ｙｔｃｑａｃｎｖｌｇ  ｃａｒａｅｔｌｆｉｉ  ｅｇｖｑｅｋｔｎｌｅ
野生型ヒトＶＥＧＦＲ−３の細胞外領域（配列番号２９）（７つのＩｇ様ドメインが太字で示されている）
【化３】
2021506861.tif 000005
野生型マウスＶＥＧＦＲ−３の細胞外領域（配列番号３０）
ｙｓｍｔｐｐ  ｔｌｎｉｔｅｄｓｙｖ  ｉｄｔｇｄｓｌｓｉｓ  ｃｒｇｑｈｐｌｅｗｔ  ｗｐｇａｑｅｖｌｔｔ  ｇｇｋｄｓｅｄｔｒｖ  ｖｈｄｃｅｇｔｅａｒ  ｐｙｃｋｖｌｌｌａｑ  ｔｈａｎｎｔｇｓｙｈ  ｃｙｙｋｙｉｋａｒｉ  ｅｇｔｔａａｓｔｙｖ  ｆｖｒｄｆｋｈｐｆｉ  ｎｋｐｄｔｌｌｖｎｒ  ｋｄｓｍｗｖｐｃｌｖ  ｓｉｐｇｌｎｉｔｌｒ  ｓｑｓｓａｌｈｐｄｇ  ｑｅｖｌｗｄｄｒｒｇ  ｍｒｖｐｔｑｌｌｒｄ  ａｌｙｌｑｃｅｔｔｗ  ｇｄｑｎｆｌｓｎｌｆ  ｖｖｈｉｔｇｎｅｌｙ  ｄｉｑｌｙｐｋｋｓｍ  ｅｌｌｖｇｅｋｌｖｌ  ｎｃｔｖｗａｅｆｄｓ  ｇｖｔｆｄｗｄｙｐｇ  ｋｑａｅｒａｋｗｖｐ  ｅｒｒｓｑｑｔｈｔｅ  ｌｓｓｉｌｔｉｈｎｖ  ｓｑｎｄｌｇｐｙｖｃ  ｅａｎｎｇｉｑｒｆｒ  ｅｓｔｅｖｉｖｈｅｋ  ｐｆｉｓｖｅｗｌｋｇ  ｐｖｌｅａｔａｇｄｅ  ｌｖｋｌｐｖｋｌａａ  ｙｐｐｐｅｆｑｗｙｋ  ｄｒｋａｖｔｇｒｈｎ  ｐｈａｌｖｌｋｅｖｔ  ｅａｓａｇｖｙｔｌａ  ｌｗｎｓａａｇｌｒｑ  ｎｉｓｌｅｌｖｖｎｖ  ｐｐｈｉｈｅｋｅａｓ  ｓｐｓｉｙｓｒｈｓｒ  ｑｔｌｔｃｔａｙｇｖ  ｐｑｐｌｓｖｑｗｈｗ  ｒｐｗｔｐｃｋｔｆａ  ｑｒｓｌｒｒｒｑｑｒ  ｄｇｍｐｑｃｒｄｗｋ  ｅｖｔｔｑｄａｖｎｐ  ｉｅｓｌｄｓｗｔｅｆ  ｖｅｇｋｎｋｔｖｓｋ  ｌｖｉｑｄａｎｖｓａ  ｍｙｋｃｖｖｖｎｋｖ  ｇｑｄｅｒｌｉｙｆｙ  ｖｔｔｉｐｄｇｆｓｉ  ｅｓｅｐｓｅｄｐｌｅ  ｇｑｓｖｒｌｓｃｒａ  ｄｎｙｔｙｅｈｌｒｗ  ｙｒｌｎｌｓｔｌｈｄ  ａｑｇｎｐｌｌｌｄｃ  ｋｎｖｈｌｆａｔｐｌ  ｅａｎｌｅｅａｅｐｇ  ａｒｈａｔｌｓｌｎｉ  ｐｒｖａｐｅｄｅｇｄ  ｙｖｃｅｖｑｄｒｒｓ  ｑｄｋｈｃｈｋｋｙｌ  ｓｖｑａｌｅａｐｒｌ  ｔｑｎｌｔｄｌｌｖｎ  ｖｓｄｓｌｅｍｒｃｐ  ｖａｇａｈｖｐｓｉｖ  ｗｙｋｄｅｒｌｌｅｋ  ｅｓｇｉｄｌａｄｓｎ  ｑｒｌｓｉｑｒｖｒｅ  ｅｄａｇｒｙｌｃｓｖ  ｃｎａｋｇｃｖｎｓｓ  ａｓｖａｖｅｇｓｅｄ  ｋｇｓｍｅ
野生型ラットＶＥＧＦＲ−３の細胞外領域（配列番号３１）
ｙｓｍｔｐｐ  ｔｌｎｉｔｅｄｓｙｖ  ｉｄｔｇｄｓｌｓｉｓ  ｃｒｇｑｈｐｌｅｗｔ  ｗｒｇａｑｅｖｌｔｔ  ｇｇｋｄｓｅｄｔｑｖ  ｖｑｄｃｅｇｔｅａｒ  ｐｙｃｋｖｌｓｌａｑ  ｔｈａｎｎｔｇｓｙｙ  ｃｙｙｋｙｉｋａｒｉ  ｅｇｔｔａａｓｔｙｖ  ｆｖｒｄｆｅｑｐｆｉ  ｎｋｐｄｔｌｌｖｎｒ  ｋｄｓｍｗｖｐｃｌｖ  ｓｉｐｇｌｎｉｔｌｒ  ｓｑｓｓｖｌｈｐｄｇ  ｑｅｖｌｗｄｄｒｒｇ  ｍｒｖｐｔｌｌｌｒｄ  ａｌｙｌｑｃｅｔｔｗ  ｇｄｑｄｆｌｓｎｐｆ  ｌｖｈｉｔｇｎｅｌｙ  ｄｉｑｌｙｐｋｋｓｌ  ｅｌｌｖｇｅｋｌｖｌ  ｎｃｔｖｗａｅｆｄｓ  ｇｖｔｆｄｗｄｙｐｇ  ｋｑａｅｒａｋｗｖｐ  ｅｒｒｓｑｑｔｈｔｅ  ｌｓｓｉｌｔｉｈｎｖ  ｓｑｈｄｌｇｐｙｖｃ  ｅａｎｎｇｉｑｑｆｒ  ｅｓｔｅｖｉｖｈｅｋ  ｐｆｉｓｖｅｗｌｋｇ  ｐｖｌｅａｔａｇｄｅ  ｍｖｋｌｐｖｋｌａａ  ｙｐｐｐｅｆｑｗｙｋ  ｄｒｋａｖｔｇｒｈｎ  ｐｈａｌｖｌｋｅｖｔ  ｅａｓａｇｖｙｔｌａ  ｌｗｎｓａａｇｌｒｑ  ｎｉｓｌｅｌｖｖｎｖ  ｐｐｈｉｈｅｋｅａｓ  ｓｐｓｉｙｓｒｈｓｒ  ｑｔｌｔｃｔｔｙｇｖ  ｐｑｐｌｓｖｑｗｈｗ  ｒｐｗｔｐｃｋｔｆａ  ｑｒｓｌｒｒｒｑｐｒ  ｄｇｍｐｑｃｒｄｗｋ  ｅｖｔｔｑｄａｖｎｐ  ｉｅｓｌｄｔｗｔｅｓ  ｖｅｇｋｎｋｔｖｓｋ  ｌｖｉｑｄａｎｖｓａ  ｍｙｋｃｖｖｆｎｋｖ  ｇｑｄｅｒｌｉｙｆｙ  ｖｔｔｉｐｄｇｆｓｉ  ｅｓｅｐｓｅｄｐｌｅ  ｇｑｓｖｒｌｓｃｒａ  ｄｎｙｔｙｅｈｌｒｗ  ｙｒｌｎｌｓｔｌｈｄ  ａｑｇｎｐｌｌｌｄｃ  ｋｎｖｈｌｆａｔｐｌ  ｅａｎｌｅｅａｅｐｇ  ａｒｈａｔｌｓｌｎｉ  ｐｒｖａｐｅｄｅｇｄ  ｙｖｃｅｖｑｄｒｒｓ  ｑｄｋｈｃｈｋｋｙｌ  ｓｖｑａｌｅａｐｒｌ  ｔｑｎｌｔｄｌｌｖｎ  ｖｒｔｓｌｅｍｒｃｐ  ｖａｇａｈｖｐｓｉｖ  ｗｙｋｄｅｒｌｌｅｋ  ｅｓｇｉｄｌａｄｓｎ  ｑｒｌｓｉｑｒｖｒｅ  ｅｄａｇｒｙｌｃｓｖ  ｃｎａｋｇｃｖｎｓｓ  ａｓｖａｖｅｇｓｅｄ  ｋｇｓｍｅ
【０１２０】
いくつかの例では、可溶性ＶＥＧＦ受容体は、安定化ドメイン（例えば、ＦｃドメインまたはＦｃドメインの一部分）をさらに含み得る。例えば、安定化ドメインは、ＩｇＧ１  Ｆｃドメイン（例えば、ヒト野生型ＩｇＧ１  Ｆｃドメインまたはその一部分）であり得る。例えば、安定化ドメインは、ＩｇＧ２  Ｆｃドメイン（例えば、ヒト野生型ＩｇＧ２  Ｆｃドメインまたはその一部）であり得る。例えば、安定化ドメインは、ＩｇＧ３  Ｆｃドメイン（例えば、ヒト野生型ＩｇＧ３ドメインまたはその一部分）であり得る。
【０１２１】
ヒト野生型ＩｇＧ１  Ｆｃドメイン、ヒト野生型ＩｇＧ２  Ｆｃドメイン、及びヒト野生型ＩｇＧ３  Ｆｃドメインの非限定的な例が以下に示される。
ヒト野生型ＩｇＧ１  Ｆｃドメイン（配列番号３２）
ｐｃｐａｐｅｌｌｇｇ  ｐｓｖｆｌｆｐｐｋｐ  ｋｄｔｌｍｉｓｒｔｐ  ｅｖｔｃｖｖｖｄｖｓ  ｈｅｄｐｅｖｋｆｎｗ  ｙｖｄｇｖｅｖｈｎａ  ｋｔｋｐｒｅｅｑｙｎ  ｓｔｙｒｖｖｓｖｌｔ  ｖｌｈｑｄｗｌｎｇｋ  ｅｙｋｃｋｖｓｎｋａ  ｌｐａｐｉｅｋｔｉｓ  ｋａｋｇｑｐｒｅｐｑ  ｖｙｔｌｐｐｓｒｄｅ  ｌｔｋｎｑｖｓｌｔｃ  ｌｖｋｇｆｙｐｓｄｉ  ａｖｅｗｅｓｎｇｑｐ  ｅｎｎｙｋｔｔｐｐｖ  ｌｄｓｄｇｓｆｆｌｙ  ｓｋｌｔｖｄｋｓｒｗ  ｑｑｇｎｖｆｓｃｓｖ  ｍｈｅａｌｈｎｈｙｔ  ｑｋｓｌｓｌｓｐｇｋ
ヒト野生型ＩｇＧ２  Ｆｃ領域（配列番号３３）
ｖｅｃｐｐｃｐａｐｐ  ｖａｇｐｓｖｆｌｆｐ  ｐｋｐｋｄｔｌｍｉｓ  ｒｔｐｅｖｔｃｖｖｖ  ｄｖｓｈｅｄｐｅｖｑ  ｆｎｗｙｖｄｇｖｅｖ  ｈｎａｋｔｋｐｒｅｅ  ｑｆｎｓｔｆｒｖｖｓ  ｖｌｔｖｖｈｑｄｗｌ  ｎｇｋｅｙｋｃｋｖｓ  ｎｋｇｌｐａｐｉｅｋ  ｔｉｓｋｔｋｇｑｐｒ  ｅｐｑｖｙｔｌｐｐｓ  ｒｅｅｍｔｋｎｑｖｓ  ｌｔｃｌｖｋｇｆｙｐ  ｓｄｉａｖｅｗｅｓｎ  ｇｑｐｅｎｎｙｋｔｔ  ｐｐｍｌｄｓｄｇｓｆ  ｆｌｙｓｋｌｔｖｄｋ  ｓｒｗｑｑｇｎｖｆｓ  ｃｓｖｍｈｅａｌｈｎ  ｈｙｔｑｋｓｌｓｌｓ  ｐｇｋ
ヒト野生型ＩｇＧ３  Ｆｃ領域（配列番号３４）
ｔｃｐｒｃｐａｐｅｌ  ｌｇｇｐｓｖｆｌｆｐ  ｐｋｐｋｄｔｌｍｉｓ  ｒｔｐｅｖｔｃｖｖｖ  ｄｖｓｈｅｄｐｅｖｑ  ｆｋｗｙｖｄｇｖｅｖ  ｈｎａｋｔｋｐｒｅｅ  ｑｆｎｓｔｆｒｖｖｓ  ｖｌｔｖｌｈｑｄｗｌ  ｎｇｋｅｙｋｃｋｖｓ  ｎｋａｌｐａｐｉｅｋ  ｔｉｓｋｔｋｇｑｐｒ  ｅｐｑｖｙｔｌｐｐｓ  ｒｅｅｍｔｋｎｑｖｓ  ｌｔｃｌｖｋｇｆｙｐ  ｓｄｉａｖｅｗｅｓｓ  ｇｑｐｅｎｎｙｋｔｔ  ｐｐｍｌｄｓｄｇｓｆ  ｆｌｙｓｋｌｔｖｄｋ  ｓｒｗｑｑｇｎｉｆｓ  ｃｓｖｍｈｅａｌｈｎ  ｒｆｔｑｋｓｌｓｌｓ  ｐｇｋ
【０１２２】
いくつかの実施形態では、可溶性ＶＥＧＦ受容体は、アフリベルセプト（Ｅｙｌｅａ（登録商標））である。アフリベルセプトは、ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分（サイズ約１１５ｋＤａ）に融合したヒトＶＥＧＦ受容体１及び２細胞外ドメインの部分を含む。アフリベルセプトは、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂ、及びＰＩＧＦの活性を阻害する。アフリベルセプトは、０．４９ｐＭのＶＥＧＦ−Ａに対するＫＤを有する。例えば、ＷＯ２０１７／２１８９７４を参照されたい。
アフリベルセプトをコードするアミノ（配列番号１２）
ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
【０１２３】
可溶性ＶＥＧＦ受容体のいくつかの実施形態では、配列番号１２と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％、少なくとも８４％、少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９６％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一の配列を含む。
【０１２４】
可溶性ＶＥＧＦ受容体のいくつかの実施形態では、配列番号１２の配列に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５個のアミノ酸置換を含むことを除いて、配列番号１２であるか、またはその配列を含む細胞外ドメインを含む。
【０１２５】
可溶性ＶＥＧＦ受容体のさらなる例は、例えば、Ｋｅｎｄａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ９０：１０７０５−１０７０９，１９９３、Ｋｅｎｄａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  ２２６：３２４−３２８，１９９６、Ｆａｉｌｌａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｓｃｉ  １９（５）：ｐｉｉ．Ｅ１３０６，２０１８、及びＪｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ７（９）：ｅ４４５７２に記載されている。
【０１２６】
ベクター
組換えＡＡＶベクターまたは「ｒＡＡＶ」は、典型的には、最低でも、導入遺伝子またはその一部分及び調節配列、ならびに任意に５’及び３’ＡＡＶ逆方向末端反復（ＩＴＲ）で構成されている。かかる組換えＡＡＶベクターは、カプシドにパッケージングされ、選択された標的細胞（例えば、蝸牛有毛細胞）に送達される。
【０１２７】
このベクターのＡＡＶ配列は、典型的には、シス作用５’及び３’ＩＴＲ配列を含む（例えば、Ｂ．Ｊ．Ｃａｒｔｅｒ，“Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓｅｓ”，ｅｄ．，Ｐ．Ｔｉｊｓｓｅｒ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，ｐｐ．１５５  １６８，１９９０を参照のこと）。典型的なＡＡＶ  ＩＴＲ配列は、約１４５ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、典型的なＩＴＲ配列の少なくとも７５％（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％）がＡＡＶベクターに組み込まれる。これらのＩＴＲ配列を修飾する能力は、当該技術分野の技術の範囲内である（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ．Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ”，２ｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８９、及びＫ．Ｆｉｓｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｖｉｒｏｌ．７０：５２０  ５３２，１９９６等の文献を参照のこと）。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のコード配列のうちのいずれかは、ＡＡＶベクターにおける５’及び３’ＡＡＶ  ＩＴＲ配列に隣接している。ＡＡＶ  ＩＴＲ配列は、現在特定されているＡＡＶタイプを含む、任意の既知のＡＡＶから得られ得る。
【０１２８】
本明細書に記載のＡＡＶベクターは、本明細書に記載の調節要素のうちのいずれか（例えば、プロモーター、ポリアデニル化（ポリ（Ａ））シグナル配列、及びＩＲＥＳのうちの１つ以上）を含み得る。
【０１２９】
いくつかの実施形態では、ベクター（複数可）は、アデノウイルスである（例えば、Ｄｍｉｔｒｉｅｖ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２：９７０６−９７１３、及びＰｏｕｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ  ８：１００７４−１００８６，２０１０を参照のこと）。いくつかの実施形態では、ベクター（複数可）は、レトロウイルスである（例えば、Ｍａｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｆｕｔｕｒｅ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  ５：１５０７−２３を参照のこと）。
【０１３０】
本明細書に提供されるベクターは、異なるサイズのものであり得る。本明細書に記載の組成物、キット、及び方法のうちのいずれかで使用されるベクターの選択は、ベクターのサイズに依存し得る。
【０１３１】
いくつかの実施形態では、ベクター（複数可）は、最大１０ｋｂの総ヌクレオチド数を有し得る。いくつかの実施形態では、ウイルスベクター（複数可）は、約１ｋｂ〜約２ｋｂ、１ｋｂ〜約３ｋｂ、約１ｋｂ〜約４ｋｂ、約１ｋｂ〜約５ｋｂ、約１ｋｂ〜約６ｋｂ、約１ｋｂ〜約７ｋｂ、約１ｋｂ〜約８ｋｂ、約１ｋｂ〜約９ｋｂ、約１ｋｂ〜約１０ｋｂ、約２ｋｂ〜約３ｋｂ、約２ｋｂ〜約４ｋｂ、約２ｋｂ〜約５ｋｂ、約２ｋｂ〜約６ｋｂ、約２ｋｂ〜約７ｋｂ、約２ｋｂ〜約８ｋｂ、約２ｋｂ〜約９ｋｂ、約２ｋｂ〜約１０ｋｂ、約３ｋｂ〜約４ｋｂ、約３ｋｂ〜約５ｋｂ、約３ｋｂ〜約６ｋｂ、約３ｋｂ〜約７ｋｂ、約３ｋｂ〜約８ｋｂ、約３ｋｂ〜約９ｋｂ、約３ｋｂ〜約１０ｋｂ、約４ｋｂ〜約５ｋｂ、約４ｋｂ〜約６ｋｂ、約４ｋｂ〜約７ｋｂ、約４ｋｂ〜約８ｋｂ、約４ｋｂ〜約９ｋｂ、約４ｋｂ〜約１０ｋｂ、約５ｋｂ〜約６ｋｂ、約５ｋｂ〜約７ｋｂ、約５ｋｂ〜約８ｋｂ、約５ｋｂ〜約９ｋｂ、約５ｋｂ〜約１０ｋｂ、約６ｋｂ〜約７ｋｂ、約６ｋｂ〜約８ｋｂ、約６ｋｂ〜約９ｋｂ、約６ｋｂ〜約１０ｋｂ、約７ｋｂ〜約８ｋｂ、約７ｋｂ〜約９ｋｂ、約７ｋｂ〜約１０ｋｂ、約８ｋｂ〜約９ｋｂ、約８ｋｂ〜約１０ｋｂ、または約９ｋｂ〜約１０ｋｂの範囲の総ヌクレオチド数を有し得る。
【０１３２】
いくつかの実施形態では、ベクター（複数可）はレンチウイルスであり、最大８ｋｂの総ヌクレオチド数を有し得る。いくつかの例では、レンチウイルス（複数可）は、約１ｋｂ〜約２ｋｂ、約１ｋｂ〜約３ｋｂ、約１ｋｂ〜約４ｋｂ、約１ｋｂ〜約５ｋｂ、約１ｋｂ〜約６ｋｂ、約１ｋｂ〜約７ｋｂ、約１ｋｂ〜約８ｋｂ、約２ｋｂ〜約３ｋｂ、約２ｋｂ〜約４ｋｂ、約２ｋｂ〜約５ｋｂ、約２ｋｂ〜約６ｋｂ、約２ｋｂ〜約７ｋｂ、約２ｋｂ〜約８ｋｂ、約３ｋｂ〜約４ｋｂ、約３ｋｂ〜約５ｋｂ、約３ｋｂ〜約６ｋｂ、約３ｋｂ〜約７ｋｂ、約３ｋｂ〜約８ｋｂ、約４ｋｂ〜約５ｋｂ、約４ｋｂ〜約６ｋｂ、約４ｋｂ〜約７ｋｂ、約４ｋｂ〜約８ｋｂ、約５ｋｂ〜約６ｋｂ、約５ｋｂ〜約７ｋｂ、約５ｋｂ〜約８ｋｂ、約６ｋｂ〜約８ｋｂ、約６ｋｂ〜約７ｋｂ、または約７ｋｂ〜約８ｋｂの総ヌクレオチド数を有し得る。
【０１３３】
いくつかの実施形態では、ベクター（複数可）はアデノウイルスであり、最大８ｋｂの総ヌクレオチド数を有し得る。いくつかの実施形態では、アデノウイルス（複数可）は、約１ｋｂ〜約２ｋｂ、約１ｋｂ〜約３ｋｂ、約１ｋｂ〜約４ｋｂ、約１ｋｂ〜約５ｋｂ、約１ｋｂ〜約６ｋｂ、約１ｋｂ〜約７ｋｂ、約１ｋｂ〜約８ｋｂ、約２ｋｂ〜約３ｋｂ、約２ｋｂ〜約４ｋｂ、約２ｋｂ〜約５ｋｂ、約２ｋｂ〜約６ｋｂ、約２ｋｂ〜約７ｋｂ、約２ｋｂ〜約８ｋｂ、約３ｋｂ〜約４ｋｂ、約３ｋｂ〜約５ｋｂ、約３ｋｂ〜約６ｋｂ、約３ｋｂ〜約７ｋｂ、約３ｋｂ〜約８ｋｂ、約４ｋｂ〜約５ｋｂ、約４ｋｂ〜約６ｋｂ、約４ｋｂ〜約７ｋｂ、約４ｋｂ〜約８ｋｂ、約５ｋｂ〜約６ｋｂ、約５ｋｂ〜約７ｋｂ、約５ｋｂ〜約８ｋｂ、約６ｋｂ〜約７ｋｈ、約６ｋｂ〜約８ｋｂ、または約７ｋｂ〜約８ｋｂの範囲の総ヌクレオチド数を有し得る。
【０１３４】
いくつかの実施形態では、ベクター（複数可）はアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶベクター）であり、最大５ｋｂの総ヌクレオチド数を含み得る。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクター（複数可）は、約１ｋｂ〜約２ｋｂ、約１ｋｂ〜約３ｋｂ、約１ｋｂ〜約４ｋｂ、約１ｋｂ〜約５ｋｂ、約２ｋｂ〜約３ｋｂ、約２ｋｂ〜約４ｋｂ、約２ｋｂ〜約５ｋｂ、約３ｋｂ〜約４ｋｂ、約３ｋｂ〜約５ｋｂ、または約４ｋｂ〜約５ｋｂの範囲の総ヌクレオチド数を含み得る。
【０１３５】
当該技術分野で既知の様々な異なる方法を使用して、本明細書に開示されるベクターのうちのいずれかを哺乳類細胞（例えば、内耳細胞、蝸牛内有毛細胞）に導入することができる。核酸を哺乳類細胞に導入するための方法の非限定的な例としては、リポフェクション、トランスフェクション（例えば、リン酸カルシウムトランスフェクション、高度に分岐した有機化合物を使用したトランスフェクション、カチオン性ポリマーを使用するトランスフェクション、デンドリマーベースのトランスフェクション、光学的トランスフェクション、粒子ベースのトランスフェクション（例えば、ナノ粒子トランスフェクション）、またはリポソーム（例えば、カチオン性リポソーム）を使用したトランスフェクション）、マイクロインジェクション、エレクトロポレーション、細胞圧迫、ソノポレーション、原形質体融合、インパルフェクション、流体力学的送達、遺伝子銃、マグネトフェクション、ウイルストランスフェクション、及びヌクレオフェクションが挙げられる。
【０１３６】
本明細書に記載のベクターのうちのいずれかは、対照配列、例えば、転写開始配列、転写終結配列、プロモーター配列、エンハンサー配列、ＲＮＡスプライシング配列、ポリアデニル化（ポリＡ）シグナル、及びＫｏｚａｋコンセンサス配列の群から選択される対照配列をさらに含み得る。これらの対照配列の非限定的な例が本明細書に記載されている。いくつかの実施形態では、プロモーターは、天然プロモーター、構成的プロモーター、誘導性プロモーター、及び／または組織特異的プロモーターであり得る。
プロモーター
【０１３７】
「プロモーター」という用語は、特定の遺伝子の転写を開始するのに必要な哺乳類細胞における酵素／タンパク質によって認識されたＤＮＡ配列を意味する。プロモーターとは、典型的には、例えば、ＲＮＡポリメラーゼ及び／または任意の関連因子が結合し、転写が開始されるヌクレオチド配列を指す。プロモーターの非限定的な例が本明細書に記載されている。プロモーターのさらなる例は、当該技術分野で既知である。
【０１３８】
いくつかの実施形態では、抗体（例えば、ＶＥＧＦに特異的に結合する抗体またはその抗原結合抗体断片）をコードするベクター（例えば、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター）は、プロモーター及び／またはエンハンサーを含み得る。抗体または抗原結合抗体断片をコードするベクターは、本明細書に記載されるか、または当該技術分野で既知のプロモーター及び／またはエンハンサーのうちのいずれかを含み得る。
【０１３９】
いくつかの実施形態では、プロモーターは、誘導性プロモーター、構成的プロモーター、哺乳類細胞プロモーター、ウイルスプロモーター、キメラプロモーター、操作されたプロモーター、組織特異的プロモーター、または当該技術分野で既知の任意の他のタイプのプロモーターである。いくつかの実施形態では、プロモーターは、哺乳類ＲＮＡポリメラーゼＩＩプロモーター等のＲＮＡポリメラーゼＩＩプロモーターである。いくつかの実施形態では、プロモーターは、Ｈ１プロモーター、ヒトＵ６プロモーター、マウスＵ６プロモーター、またはブタＵ６プロモーターを含むが、これらに限定されない、ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩプロモーターである。プロモーターは、概して、内有毛細胞において転写を促進することができるプロモーターであろう。いくつかの例では、プロモーターは、蝸牛特異的プロモーターまたは蝸牛配向プロモーターである。
【０１４０】
本明細書で使用される得る様々なプロモーターが当該技術分野で既知である。本明細書で使用され得るプロモーターの非限定的な例としては、ヒトＥＦ１ａ、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）（米国特許第５，１６８，０６２号）、ヒトユビキチンＣ（ＵＢＣ）、マウスホスホグリセリン酸キナーゼ１、ポリオーマアデノウイルス、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）、β−グロビン、β−アクチン、α−フェトプロテイン、γ−グロビン、β−インターフェロン、γ−グルタミルトランスフェラーゼ、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）、ラウス肉腫ウイルス、ラットインスリン、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ、メタロチオネインＩＩ（ＭＴ  ＩＩ）、アミラーゼ、カテプシン、ＭＩムスカリン性受容体、レトロウイルスＬＴＲ（例えば、ヒトＴ細胞白血病ウイルスＨＴＬＶ）、ＡＡＶ  ＩＴＲ、インターロイキン−２、コラゲナーゼ、血小板由来増殖因子、アデノウイルス５  Ｅ２、ストロメライシン、マウスＭＸ遺伝子、グルコース調節タンパク質（ＧＲＰ７８及びＧＲＰ９４）、α−２−マクログロブリン、ビメンチン、ＭＨＣクラスＩ遺伝子Ｈ−２κ  ｂ、ＨＳＰ７０、プロリフェリン、腫瘍壊死因子、甲状腺刺激ホルモンα遺伝子、免疫グロブリン軽鎖、Ｔ細胞受容体、ＨＬＡ  ＤＱα及びＤＱβ、インターロイキン−２受容体、ＭＨＣクラスＩＩ、ＭＨＣクラスＩＩ  ＨＬＡ−ＤＲα、筋肉クレアチンキナーゼ、プレアルブミン（トランスサイレチン）、エラスターゼＩ、アルブミン遺伝子、ｃ−ｆｏｓ、ｃ−ＨＡ−ｒａｓ、神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）、Ｈ２Ｂ（ＴＨ２Ｂ）ヒストン、ラット成長ホルモン、ヒト血清アミロイド（ＳＡＡ）、トロポニンＩ（ＴＮ  Ｉ）、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ヒト免疫不全ウイルス、及びテナガザル白血病ウイルス（ＧＡＬＶ）プロモーターが挙げられる。プロモーターのさらなる例は、当該技術分野で既知である。例えば、Ｌｏｄｉｓｈ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  ２００７を参照されたい。いくつかの実施形態では、プロモーターは、ＣＭＶ前初期プロモーターである。いくつかの実施形態では、プロモーターは、ＣＡＧプロモーターまたはＣＡＧ／ＣＢＡプロモーターである。
【０１４１】
「構成的」プロモーターという用語は、タンパク質（例えば、抗体または抗原結合抗体断片）をコードする核酸と作動可能に連結されると、ＲＮＡを大半または全ての生理学的条件下で哺乳類細胞においてその核酸から転写させるヌクレオチド配列を指す。
【０１４２】
構成的プロモーターの例としては、レトロウイルスラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）ＬＴＲプロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター（例えば、Ｂｏｓｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｅｌｌ  ４１：５２１−５３０，１９８５を参照のこと）、ＳＶ４０プロモーター、ジヒドロ葉酸還元酵素プロモーター、ベータ−アクチンプロモーター、ホスホグリセロールキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、及びＥＦ１−アルファプロモーター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４３】
誘導性プロモーターは、遺伝子発現の調節を可能にし、外因的に供給される化合物、温度等の環境因子、または特定の生理学的状態（例えば、急性期、細胞の特定の分化状態、または複製細胞においてのみ）の存在によって調節され得る。誘導性プロモーター及び誘導性系は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、及びＡｒｉａｄを含むが、これらに限定されない様々な商業的供給源から入手可能である。誘導性プロモーターのさらなる例は、当該技術分野で既知である。
【０１４４】
外因的に供給される化合物によって調節される誘導性プロモーターの例としては、亜鉛誘導性ヒツジメタロチオニン（ＭＴ）プロモーター、デキサメタゾン（Ｄｅｘ）誘導性マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーター、Ｔ７ポリメラーゼプロモーター系（ＷＯ９８／１００８８）、エクジソン昆虫プロモーター（Ｎｏ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９３：３３４６−３３５１，１９９６）、テトラサイクリン抑制性系（Ｇｏｓｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８９：５５４７−５５５１，１９９２）、テトラサイクリン誘導性系（Ｇｏｓｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６８：１７６６−１７６９，１９９５、Ｈａｒｖｅｙ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２：５１２−５１８，１９９８も参照のこと）、ＲＵ４８６誘導性系（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１５：２３９−２４３，１９９７）及びＷａｎｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．４：４３２−４４１，１９９７）、及びラパマイシン誘導性系（Ｍａｇａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１００：２８６５−２８７２，１９９７）が挙げられる。
【０１４５】
「組織特異的」プロモーターという用語は、ある特定の細胞型及び／または組織でのみ活性なプロモーターを指す（例えば、特定の遺伝子の転写は、組織特異的プロモーターに結合する転写調節タンパク質を発現する細胞中でのみ生じる）。
【０１４６】
いくつかの実施形態では、調節配列は、組織特異的遺伝子発現能力を付与する。ある場合には、組織特異的調節配列は、組織特異的様式で転写を誘導する組織特異的転写因子に結合する。
【０１４７】
例示的な組織特異的プロモーターとしては、肝臓特異的チロキシン結合グロブリン（ＴＢＧ）プロモーター、インスリンプロモーター、グルカゴンプロモーター、ソマトスタチンプロモーター、膵臓ポリペプチド（ＰＰＹ）プロモーター、シナプシン−１（Ｓｙｎ）プロモーター、クレアチンキナーゼ（ＭＣＫ）プロモーター、哺乳類デスミン（ＤＥＳ）プロモーター、アルファ−ミオシン重鎖（ａ−ＭＨＣ）プロモーター、及び心臓トロポニンＴ（ｃＴｎＴ）プロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。さらなる例示的なプロモーターとしては、ベータ−アクチンプロモーター、Ｂ型肝炎ウイルスコアプロモーター（Ｓａｎｄｉｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．３：１００２−１００９，１９９６）、アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）プロモーター（Ａｒｂｕｔｈｎｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．７：１５０３−１５１４，１９９６）、骨オステオカルシンプロモーター（Ｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐ．２４：１８５−１９６，１９９７）、骨シアロタンパク質プロモーター（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ．Ｒｅｓ．１１：６５４−６６４，１９９６）、ＣＤ２プロモーター（Ｈａｎｓａｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１：１０６３−１０６８，１９９８）、免疫グロブリン重鎖プロモーター、Ｔ細胞受容体アルファ鎖プロモーター、ニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）プロモーター等のニューロンプロモーター（Ａｎｄｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．１３：５０３−５１５，１９９３）、ニューロフィラメント軽鎖遺伝子プロモーター（Ｐｉｃｃｉｏｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８８：５６１１−５６１５，１９９１）、及びニューロン特異的ｖｇｆ遺伝子プロモーター（Ｐｉｃｃｉｏｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ  １５：３７３−３８４，１９９５）が挙げられる。
【０１４８】
いくつかの実施形態では、組織特異的プロモーターは、蝸牛特異的プロモーターである。いくつかの実施形態では、組織特異的プロモーターは、蝸牛有毛細胞特異的プロモーターである。蝸牛有毛細胞特異的プロモーターの非限定的な例としては、ＡＴＯＨ１プロモーター、ＰＯＵ４Ｆ３プロモーター、ＬＨＸ３プロモーター、ＭＹＯ７Ａプロモーター、ＭＹＯ６プロモーター、α９ＡＣＨＲプロモーター、及びα１０ＡＣＨＲプロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、プロモーターは、ＰＲＥＳＴＩＮプロモーターまたはＯＮＣＯＭＯＤプロモーター等の蝸牛有毛細胞特異的プロモーターである。例えば、Ｚｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４０５：１４９−１５５，２０００、Ｔｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｄｅｖ．Ｄｙｎ．２３１：１９９−２０３，２００４、及びＲｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖ．Ｏｔｏｒｈｉｎｏｌａｒｙｎｇｏｌ．６６：９９−１１５，２００９を参照されたい。
【０１４９】
エンハンサー
いくつかの事例では、ベクター（例えば、ＡＡＶベクター）は、エンハンサー配列を含み得る。「エンハンサー」という用語は、目的とするタンパク質（例えば、ＶＥＧＦに特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合抗体断片、または可溶性ＶＥＧＦ受容体）をコードする核酸の転写レベルを増加させることができるヌクレオチド配列を指す。エンハンサー配列（５０〜１５００塩基対長）は、一般に、転写関連タンパク質（例えば、転写因子）に追加の結合部位を提供することによって転写レベルを増加させる。いくつかの実施形態では、エンハンサー配列は、イントロン配列内に見られる。プロモーター配列とは異なり、エンハンサー配列は、（例えば、プロモーターと比較して）転写開始部位からより離れた距離で作用することができる。エンハンサーの非限定的な例としては、ＲＳＶエンハンサー、ＣＭＶエンハンサー、及びＳＶ４０エンハンサーが挙げられる。
【０１５０】
ポリ（Ａ）シグナル配列
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるベクターのうちのいずれか（例えば、ＡＡＶベクター）は、ポリアデニル化（ポリ（Ａ））シグナル配列を含み得る。大半の新生真核生物ｍＲＮＡは、それらの３’末端に、一次転写物の切断及びポリ（Ａ）シグナル配列によって駆動される共役ポリアデニル化反応を含む複雑なプロセス中に付加されるポリ（Ａ）尾部を有する（例えば、Ｐｒｏｕｄｆｏｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  １０８：５０１−５１２，２００２を参照のこと）。ポリ（Ａ）尾部は、ｍＲＮＡ安定性及び移動性を付与する（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｅｌｌ，Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｂ．Ａｌｂｅｒｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，１９９４）。いくつかの実施形態では、ポリ（Ａ）シグナル配列は、抗体重鎖、抗体軽鎖、抗原結合抗体断片、または可溶性ＶＥＧＦ受容体をコードする核酸配列に対して３’に位置付けられる。
【０１５１】
本明細書で使用される場合、「ポリアデニル化」とは、ポリアデニリル部分またはその修飾された変異形の、メッセンジャーＲＮＡ分子への共有結合を指す。真核生物では、大半のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）分子は、３’末端でポリアデニル化されている。３’ポリ（Ａ）尾部は、酵素であるポリアデニル酸ポリメラーゼの作用によってプレｍＲＮＡに付加される長い（例えば、５０、６０、７０、１００、２００、５００、１０００、２０００、３０００、４０００、または５０００）アデニンヌクレオチド配列である。より高等の真核生物では、ポリ（Ａ）尾部は、特定の配列であるポリアデニル化（またはポリ（Ａ））シグナルを含む転写物に付加される。ポリ（Ａ）尾部及びそれに結合したタンパク質は、エクソヌクレアーゼによる分解からｍＲＮＡを保護する助けとなる。ポリアデニル化は、転写終結、核からのｍＲＮＡの輸送、及び翻訳にも重要である。ポリアデニル化は、ＤＮＡのＲＮＡへの転写の直後に核内で生じるが、後に細胞質内でも生じ得る。転写が終結した後、ｍＲＮＡ鎖は、ＲＮＡポリメラーゼと会合したエンドヌクレアーゼ複合体の作用によって切断される。切断部位は、通常、切断部位付近の塩基配列ＡＡＵＡＡＡの存在を特徴とする。ｍＲＮＡが切断された後、アデノシン残基が切断部位で遊離３’末端に付加される。
【０１５２】
本明細書で使用される場合、「ポリ（Ａ）シグナル配列」または「ポリアデニル化シグナル配列」とは、ｍＲＮＡのエンドヌクレアーゼ切断及び一連のアデノシンの切断されたｍＲＮＡの３’末端への付加を誘発する配列である。
【０１５３】
ウシ成長ホルモン（ｂｇｈ）（Ｗｏｙｃｈｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８１（１３）：３９４４−３９４８，１９８４、米国特許第５，１２２，４５８号）、マウス−β−グロビン、マウス−α−グロビン（Ｏｒｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．４（２）：４５３−４５６，１９８５、Ｔｈｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ７１（２）：３１３−３１９，１９８８）、ヒトコラーゲン、ポリオーマウイルス（Ｂａｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１５（９）：４７８３−４７９０，１９９５）、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ遺伝子（ＨＳＶ  ＴＫ）、ＩｇＧ重鎖遺伝子ポリアデニル化シグナル（ＵＳ２００６／００４０３５４）、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）（Ｓｚｙｍａｎｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒａｐｙ  １５（７）：１３４０−１３４７，２００７）、ＳＶ４０後期及び初期ポリ（Ａ）部位等のＳＶ４０ポリ（Ａ）部位からなる群（Ｓｃｈｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１２（１２）：５３８６−５３９３，１９９２）に由来するものを含む、使用され得るポリ（Ａ）シグナル配列がいくつか存在する。
【０１５４】
ポリ（Ａ）シグナル配列は、ＡＡＴＡＡＡであり得る。ＡＡＴＡＡＡ配列は、ＡＴＴＡＡＡ、ＡＧＴＡＡＡ、ＣＡＴＡＡＡ、ＴＡＴＡＡＡ、ＧＡＴＡＡＡ、ＡＣＴＡＡＡ、ＡＡＴＡＴＡ、ＡＡＧＡＡＡ、ＡＡＴＡＡＴ、ＡＡＡＡＡＡ、ＡＡＴＧＡＡ、ＡＡＴＣＡＡ、ＡＡＣＡＡＡ、ＡＡＴＣＡＡ、ＡＡＴＡＡＣ、ＡＡＴＡＧＡ、ＡＡＴＴＡＡ、またはＡＡＴＡＡＧを含む、ＡＡＴＡＡＡと相同性を有し、ポリアデニル化をシグナル伝達することができる他のヘキサヌクレオチド配列で置換され得る（例えば、ＷＯ０６／１２４１４を参照のこと）。
【０１５５】
いくつかの実施形態では、ポリ（Ａ）シグナル配列は、合成ポリアデニル化部位であり得る（例えば、Ｌｅｖｉｔｔ  ｅｌ  ａｌ，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．３（７）：１０１９−１０２５，１９８９に基づくＰｒｏｍｅｇａのｐＣｌ−ｎｅｏ発現ベクターを参照のこと）。いくつかの実施形態では、ポリ（Ａ）シグナル配列は、可溶性ニューロピリン−１（ｓＮＲＰ）のポリアデニル化シグナル（ＡＡＡＴＡＡＡＡＴＡＣＧＡＡＡＴＧ、配列番号１１）である（例えば、ＷＯ０５／０７３３８４を参照のこと）。ポリ（Ａ）シグナル配列のさらなる例は、当該技術分野で既知である。
【０１５６】
配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）
いくつかの実施形態では、抗体（例えば、抗体重鎖及び抗体軽鎖）、抗原結合抗体断片、または可溶性ＶＥＧＦ受容体をコードするベクター（例えば、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター）は、ポリヌクレオチド配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含み得る。ＩＲＥＳ配列は、単一の遺伝子転写物から１つより多くのポリペプチドを産生するために使用される。ＩＲＥＳは、ＩＲＥＳが位置する場所からすぐ下流にｍＲＮＡを有する任意の位置から翻訳を開始させる複雑な二次構造を形成する（例えば、Ｐｅｌｌｅｔｉｅｒ  ａｎｄ  Ｓｏｎｅｎｂｅｒｇ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．８（３）：１１０３−１１１２，１９８８を参照のこと）。
【０１５７】
例えば、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）、脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）、ヒトライノウイルス（ＨＲＶ）、コオロギ麻痺ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、及びポリオウイルス（ＰＶ）由来のものを含む、当業者に既知のＩＲＥＳ配列がいくつか存在する。例えば、Ａｌｂｅｒｔｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｅｌｌ，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００２、及びＨｅｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１５（１３）：１５９３−６１２，２００１を参照されたい。
【０１５８】
いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターに組み込まれるＩＲＥＳ配列は、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）２Ａ配列である。口蹄疫ウイルス２Ａ配列は、ポリタンパク質の切断を媒介することが示されている小ペプチド（およそ１８アミノ酸長）である（Ｒｙａｎ、Ｍ  Ｄ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  ４：９２８−９３３，１９９４、Ｍａｔｔｉｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ７０：８１２４−８１２７，１９９６、Ｆｕｒｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ８：８６４−８７３，２００１、及びＨａｌｐｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｌａｎｔ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ４：４５３−４５９，１９９９）。２Ａ配列の切断活性は、プラスミド及び遺伝子治療ベクター（ＡＡＶ及びレトロウイルス）を含む人工系において以前に実証されている（Ｒｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  ４：９２８−９３３，１９９４、Ｍａｔｔｉｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ７０：８１２４−８１２７，１９９６、Ｆｕｒｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ８：８６４−８７３，２００１、及びＨａｌｐｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｌａｎｔ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ４：４５３−４５９，１９９９、ｄｅ  Ｆｅｌｉｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ６：１９８−２０８，１９９９、ｄｅ  Ｆｅｌｉｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １１：１９２１−１９３１，２０００、及びＫｌｕｍｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ８：８１１−８１７，２００１）。
【０１５９】
レポーター配列
本明細書に提供されるＡＡＶのうちのいずれかは、任意に、レポータータンパク質をコードする配列（「レポーター配列」）を含み得る。レポーター配列の非限定的な例としては、ベータ−ラクタマーゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ（ＬａｃＺ）、アルカリ性ホスファターゼ、チミジンキナーゼ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、赤色蛍光タンパク質、ｍＣｈｅｒｒｙ蛍光タンパク質、黄色蛍光タンパク質、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）、及びルシフェラーゼをコードするＤＮＡ配列が挙げられる。レポーター配列のさらなる例は、当該技術分野で既知である。それらの発現を駆動する調節要素と会合すると、レポーター配列は、酵素アッセイ、Ｘ線アッセイ、比色アッセイ、蛍光アッセイ、または他の分光アッセイ、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）アッセイ、免疫学的アッセイ（例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）、及び免疫組織化学）を含む従来の手段によって検出可能なシグナルを提供することができる。
【０１６０】
いくつかの実施形態では、レポーター配列は、ＬａｃＺ遺伝子であり、哺乳類細胞（例えば、蝸牛有毛細胞）におけるＬａｃＺ遺伝子を保有するベクターの存在は、ベータ−ガラクトシダーゼ活性についてのアッセイによって検出される。レポーターが蛍光タンパク質（例えば、緑色蛍光タンパク質）またはルシフェラーゼである場合、哺乳類細胞（例えば、蝸牛有毛細胞）における蛍光タンパク質またはルシフェラーゼを保有するベクターの存在は、蛍光技法（例えば、蛍光顕微鏡法もしくはＦＡＣＳ）または照度計（例えば、分光光度計もしくはＩＶＩＳ撮像機器）における光生成によって測定され得る。いくつかの実施形態では、レポーター配列は、本明細書に記載のベクターのうちのいずれかの組織特異的標的能力及び組織特異的プロモーター調節活性を検証するために使用され得る。
【０１６１】
隣接領域：非翻訳領域（ＵＴＲ）
いくつかの実施形態では、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターのうちのいずれかは、５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲ等の非翻訳領域を含み得る。
【０１６２】
遺伝子の非翻訳領域（ＵＴＲ）は複写されるが、翻訳されない。５’ＵＴＲは、転写開始部位で始まり、開始コドンまで続くが、開始コドンは含まない。３’ＵＴＲは、終止コドンの直後に始まり、転写終結シグナルまで続く。核酸分子の安定性及び翻訳の観点でのＵＴＲが果たす調節役割に関する証拠が増加している。ＵＴＲの調節特徴は、抗体（例えば、ＶＥＧＦに特異的に結合する抗体）、抗原結合抗体断片（例えば、ＶＥＧＦに特異的に結合する抗原結合断片）、または可溶性ＶＥＧＦ受容体の発現を増強するために、本明細書に記載のベクター、組成物、キット、または方法のうちのいずれかに組み込まれ得る。
【０１６３】
天然５’ＵＴＲは、翻訳開始に関与する配列を含む。それらは、リボソームが多くの遺伝子の翻訳を開始するプロセスに関与することで一般に知られているＫｏｚａｋ配列のような特性を保有する。Ｋｏｚａｋ配列は、コンセンサス配列ＣＣＲ（Ａ／Ｇ）ＣＣＡＵＧＧを有し、ここで、Ｒは、開始コドン（ＡＵＧ）の３塩基上流のプリン（ＡまたはＧ）であり、開始コドンの後に別の「Ｇ」が続く。５’ＵＴＲは、伸長因子結合に関与する二次構造を形成することでも知られている。
【０１６４】
いくつかの実施形態では、５’ＵＴＲは、本明細書に記載のベクターのうちのいずれかに含まれる。以下の遺伝子：アルブミン、血清アミロイドＡ、アポリポタンパク質Ａ／Ｂ／Ｅ、トランスフェリン、アルファフェトプロテイン、エリスロポエチン、及び第ＶＩＩＩ因子由来のものを含む５’ＵＴＲの非限定的な例を使用して、ｍＲＮＡ等の核酸分子の発現を増強することができる。
【０１６５】
いくつかの実施形態では、蝸牛における細胞によって複写されたｍＲＮＡ由来の５’ＵＴＲは、本明細書に記載のベクター、組成物、キット、及び方法のうちのいずれかに含まれ得る。
【０１６６】
３’ＵＴＲは、アデノシン及びウリジン（ＲＮＡ形態）またはチミジン（ＤＮＡ形態）の伸長がそれらに埋め込まれていることで知られている。これらのＡＵリッチ特性は、特に高い回転率を有する遺伝子に見られる。それらの配列特徴及び機能特性に基づいて、ＡＵリッチ要素（ＡＲＥ）は３つのクラスに分類され得（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１５：５７７７−５７８８，１９９５、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１５：２０１０−２０１８，１９９５）、クラスＩのＡＲＥは、Ｕリッチ領域にＡＵＵＵＡモチーフのいくつかの分散コピーを含有する。例えば、ｃ−Ｍｙｃ及びＭｙｏＤ  ｍＲＮＡは、クラスＩのＡＲＥを含有する。クラスＩＩのＡＲＥは、２つ以上の重複ＵＵＡＵＵＵＡ（Ｕ／Ａ）（Ｕ／Ａ）九量体を有する。ＧＭ−ＣＳＦ及びＴＮＦ−アルファｍＲＮＡは、クラスＩＩのＡＲＥを含有する例である。クラスＩＩＩのＡＲＥはあまり定義されてない。これらのＵリッチ領域は、ＡＵＵＵＡモチーフを含有しない。このクラスの２つの十分に研究された例は、ｃ−Ｊｕｎ及びミオゲニンｍＲＮＡである。
【０１６７】
ＡＲＥに結合する大半のタンパク質がメッセンジャーを不安定にすることで知られている一方で、ＥＬＡＶファミリーのメンバー、最も顕著には、ＨｕＲがｍＲＮＡの安定性を増加させることが実証されている。ＨｕＲは、３つのクラスの全てのＡＲＥに結合する。ＨｕＲ特異的結合部位を操作して核酸分子の３’ＵＴＲに入れることにより、ＨｕＲ結合、ひいてはインビボでのメッセージの安定化がもたらされるであろう。
【０１６８】
いくつかの実施形態では、３’ＵＴＲ  ＡＲＥの導入、除去、または修飾を使用して、目的とするタンパク質（例えば、本明細書に記載のいずれかの抗体、本明細書に記載のいずれかの抗原結合抗体断片、または本明細書に記載のいずれかの可溶性ＶＥＧＦ受容体）をコードするｍＲＮＡの安定性を調節することができる。他の実施形態では、ＡＲＥが除去されるか、または突然変異して、細胞内安定性を増加させ、ひいては目的とするタンパク質（例えば、本明細書に記載のいずれかの抗体、本明細書に記載のいずれかの抗原結合抗体断片、または本明細書に記載のいずれかの可溶性ＶＥＧＦ受容体）の翻訳及び産生を増加させることができる。
【０１６９】
他の実施形態では、非ＡＲＥ配列が５’または３’ＵＴＲに組み込まれ得る。いくつかの実施形態では、イントロンまたはイントロン配列の部分が、本明細書に提供されるベクター、組成物、キット、及び方法のうちのいずれかにおいて、ポリヌクレオチドの隣接領域に組み込まれ得る。イントロン配列の組み込みにより、タンパク質産生、ならびにｍＲＮＡレベルが増加し得る。
【０１７０】
哺乳動物における抗体、抗原結合抗体断片、または可溶性ＶＥＧＦ受容体の半減期を減少させるＦｃ突然変異
本明細書に記載の抗体、抗原結合抗体断片、または可溶性ＶＥＧＦ受容体のうちのいずれかは、例えば、１つ以上のアミノ酸置換のうちの少なくとも１つをＦｃ領域に含まない、さもなければ同一の抗体、抗原結合抗体断片、または可溶性ＶＥＧＦ受容体の半減期と比較して、哺乳動物における抗体、抗原結合抗体断片、または可溶性ＶＥＧＦ受容体の半減期を減少させる１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０）のアミノ酸置換をＦｃ領域に含み得る。哺乳動物における抗体、抗原結合抗体断片、または可溶性ＶＥＧＦ受容体の半減期を決定するための方法は、当該技術分野で周知である。
【０１７１】
抗体、抗原結合抗体断片、または可溶性ＶＥＧＦ受容体の半減期を減少させることができるＦｃ突然変異における点突然変異の非限定的な例は、Ｌｅａｂｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＭＡｂｓ  ５（６）：８９６−９０３，２０１３に記載されている。
【０１７２】
方法
哺乳動物の内耳に、（ａ）シグナルペプチド（例えば、本明細書に記載のシグナルペプチドのうちのいずれか）に作動可能に連結された抗体重鎖可変ドメイン（例えば、本明細書に記載の例示的な抗体重鎖可変ドメインのうちのいずれか）を含むポリペプチド及びシグナルペプチド（例えば、本明細書に記載のシグナルペプチドのうちのいずれか）に作動可能に連結された抗体軽鎖可変ドメイン（例えば、本明細書に記載の例示的な抗体軽鎖可変ドメインのうちのいずれか）を含むポリペプチド、（ｂ）シグナルペプチド（例えば、本明細書に記載のシグナルペプチドのうちのいずれか）に作動可能に連結された抗原結合抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）（例えば、本明細書に記載の例示的な抗原結合抗体断片のうちのいずれか）を含むポリペプチド、または（ｃ）シグナルペプチド（例えば、本明細書に記載のうちのいずれかシグナルペプチド）に作動可能に連結された可溶性ＶＥＧＦ受容体（例えば、本明細書に記載の可溶性ＶＥＧＦ受容体のうちのいずれか）をコードするヌクレオチド配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターの治療有効量を導入することを含む方法も本明細書に提供される。内耳における抗体または抗原結合抗体断片のレベルの増加を必要とする哺乳動物の内耳における抗体または抗原結合抗体断片のレベルを増加させるための方法であって、哺乳動物の内耳に、（ａ）シグナルペプチドに作動可能に連結された抗体重鎖可変ドメイン（例えば、本明細書に記載の抗体重鎖可変ドメインのうちのいずれか）を含むポリペプチド及びシグナルペプチドに作動可能に連結された抗体軽鎖可変ドメイン（例えば、本明細書に記載の抗体軽鎖可変ドメインのうちのいずれか）を含むポリペプチド、または（ｂ）シグナルペプチド（例えば、本明細書に記載の例示的なシグナルペプチドのうちのいずれか）に作動可能に連結された抗原結合抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）（例えば、本明細書に記載の例示的な抗原結合抗体断片のうちのいずれか）を含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むＡＡＶベクターの治療有効量を導入することを含み、この導入により、例えば、投与前の哺乳動物の内耳における抗体または抗原結合抗体断片のレベルと比較して、哺乳動物の内耳における抗体または抗原結合抗体断片のレベルの増加（例えば、１％〜４００％の増加（または本明細書に記載のこの範囲の部分範囲のうちのいずれか）、または少なくとも１％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、少なくとも２００％、少なくとも２５０％、少なくとも３００％、少なくとも３５０％、少なくとも４００％、少なくとも４５０％、少なくとも５００％、少なくとも５５０％、少なくとも６００％、少なくとも６５０％、少なくとも７００％、少なくとも７５０％、少なくとも８００％、少なくとも８５０％、少なくとも９００％、少なくとも９５０％、少なくとも１０００％、少なくとも１１００％、少なくとも１２００％、少なくとも１３００％、少なくとも１４００％、少なくとも１５００％、少なくとも１６００％、少なくとも１７００％、少なくとも１８００％、少なくとも１９００％、または少なくとも２０００％の増加）がもたらされる、方法も本明細書に提供される。
【０１７３】
可溶性ＶＥＧＦ受容体のレベルを増加させるための方法であって、哺乳動物の内耳に、シグナルペプチド（例えば、本明細書に記載のシグナルペプチドのうちのいずれか）に作動可能に連結された可溶性ＶＥＧＦ受容体（例えば、本明細書に記載の可溶性ＶＥＧＦ受容体のうちのいずれか）をコードするヌクレオチド配列を含むＡＡＶベクターの治療有効量を導入することを含み、この導入により、例えば、投与前の哺乳動物の内耳における可溶性ＶＥＧＦ受容体のレベルと比較して、哺乳動物の内耳における可溶性ＶＥＧＦ受容体のレベルの増加（例えば、１％〜４００％の増加（または本明細書に記載のこの範囲の部分範囲のうちのいずれか）、または少なくとも１％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、少なくとも２００％、少なくとも２５０％、少なくとも３００％、少なくとも３５０％、少なくとも４００％、少なくとも４５０％、少なくとも５００％、少なくとも５５０％、少なくとも６００％、少なくとも６５０％、少なくとも７００％、少なくとも７５０％、少なくとも８００％、少なくとも８５０％、少なくとも９００％、少なくとも９５０％、少なくとも１０００％、少なくとも１１００％、少なくとも１２００％、少なくとも１３００％、少なくとも１４００％、少なくとも１５００％、少なくとも１６００％、少なくとも１７００％、少なくとも１８００％、少なくとも１９００％、または少なくとも２０００％の増加）がもたらされる、方法も本明細書に提供される。
【０１７４】
内耳障害の治療を必要とする哺乳動物における内耳障害を治療するための方法であって、哺乳動物の内耳に、（ａ）シグナルペプチド（例えば、本明細書に記載のシグナルペプチドのうちのいずれか）に作動可能に連結された抗体重鎖可変ドメイン（例えば、例えば、本明細書に記載の抗体重鎖可変ドメインのうちのいずれか）を含むポリペプチド及びシグナルペプチド（例えば、本明細書に記載のシグナルペプチドのうちのいずれか）に作動可能に連結された抗体軽鎖可変ドメイン（例えば、本明細書に記載の抗体軽鎖可変ドメインのうちのいずれか）を含むポリペプチド、（ｂ）シグナルペプチド（例えば、本明細書に記載のシグナルペプチドのうちのいずれか）に連結された抗原結合抗体断片（例えば、本明細書に記載の例示的な抗原結合抗体断片のうちのいずれか）を含むポリペプチド、または（ｃ）シグナルペプチド（例えば、本明細書に記載のシグナルペプチドのうちのいずれか）に作動可能に連結された可溶性ＶＥＧＦ受容体（例えば、本明細書に記載の可溶性ＶＥＧＲ受容体のうちのいずれか）をコードするヌクレオチド配列を含むＡＡＶベクターの治療有効量を導入することを含み、この導入により、哺乳動物における内耳障害の治療がもたらされる、方法も本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、内耳障害の治療により、導入前と比較して、導入後の哺乳動物における内耳障害の症状の重症度、頻度、または数の低減（例えば、１％〜１００％の低減、または本明細書に記載のこの範囲の部分範囲のうちのいずれか）がもたらされる。いくつかの実施形態では、任意の内耳障害の治療により、導入前と比較して、導入後の哺乳動物の聴覚（例えば、聴覚の１つ以上の測定基準）の向上（例えば、１％〜４００％の向上、または本明細書に記載のこの範囲の部分範囲のうちのいずれか）がもたらされる。
【０１７５】
これらの方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗体もしくは抗原結合抗体断片、または可溶性ＶＥＧＦ受容体は、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）（例えば、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、及びＶＥＧＦ−Ｄのうちの１つ以上、例えば、ヒトＶＥＧＦ−Ａ、ヒトＶＥＧＦ−Ｂ、ヒトＶＥＧＦ−Ｃ、及びヒトＶＥＧＦ−Ｄのうちの１つ以上）に特異的に結合する。これらの方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、抗体または抗原結合抗体断片をコードする配列に作動可能に連結されるプロモーター及びＫｏｚａｋ配列の一方または両方をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、誘導性プロモーター、構成的プロモーター、及び組織特異的プロモーターからなる群から選択されるプロモーターを含む。これらの方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、ポリアデニル化シグナル配列をさらに含む。これらの方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。これらの方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、哺乳動物（例えば、ヒト）は、内耳障害を有すると特定されている。これらの方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、哺乳動物（例えば、ヒト）は、内耳障害を有すると以前に診断されている。これらの方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ベクターは、抗体重鎖及び抗体軽鎖を含むポリペプチドをコードする核酸配列を含む。これらの方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ベクターは、抗原結合抗体断片をコードする核酸配列を含む。これらの方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ベクターは、シグナルペプチドに作動可能に連結された可溶性ＶＥＧＦ受容体をコードする核酸配列を含む。
【０１７６】
ＶＥＧＦ活性の低減を必要とする哺乳動物の内耳におけるＶＥＧＦ活性（例えば、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、及びＶＥＧＦ−Ｄのうちの１つ以上、例えば、ヒトＶＥＧＦ−Ａ、ヒトＶＥＧＦ−Ｂ、ヒトＶＥＧＦ−Ｃ、及びヒトＶＥＧＦ−Ｄのうちの１つ以上）を低減する方法であって、哺乳動物の内耳に、（ａ）シグナルペプチド（例えば、本明細書に記載のシグナルペプチドのうちのいずれか）に作動可能に連結された抗体重鎖可変ドメイン（例えば、本明細書に記載の抗体重鎖可変ドメインのうちのいずれか）を含むポリペプチド及びシグナルペプチド（例えば、本明細書に記載のシグナルペプチドのうちのいずれか）に作動可能に連結された抗体軽鎖可変ドメイン（例えば、本明細書に記載の抗体軽鎖可変ドメインのうちのいずれか）を含むポリペプチド、（ｂ）シグナルペプチド（例えば、本明細書に記載のシグナルペプチドのうちのいずれか）に作動可能に連結された抗原結合抗体断片（例えば、ＦａｂまたはｓｃＦｖ）（例えば、本明細書に記載の抗原結合抗体断片のうちのいずれか）を含むポリペプチド、または（ｃ）シグナルペプチド（例えば、本明細書に記載のシグナルペプチドのうちのいずれか）に作動可能に連結された可溶性ＶＥＧＦ受容体（例えば、本明細書に記載の可溶性ＶＥＧＦ受容体のうちのいずれか）をコードするヌクレオチド配列を含むＡＡＶベクターの治療有効量を導入することを含み、（ａ）のポリペプチドが、ＶＥＧＦに特異的に結合してＶＥＧＦ活性を低減する抗体を含むか、（ｂ）のポリペプチドが、ＶＥＧＦに特異的に結合してＶＥＧＦ活性を低減する抗原結合抗体断片を含むか、または（ｃ）の可溶性ＶＥＧＦ受容体が、１つ以上のＶＥＧＦタンパク質に特異的に結合して１つ以上のＶＥＧＦタンパク質の活性を低減し、この導入により、例えば、導入前の哺乳動物におけるＶＥＧＦ活性と比較して、哺乳動物の内耳におけるＶＥＧＦ活性（例えば、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、及びＶＥＧＦ−Ｄのうちの１つ以上、例えば、１つ以上のヒトＶＥＧＦ−Ａ、ヒトＶＥＧＦ−Ｂ、ヒトＶＥＧＦ−Ｃ、及びヒトＶＥＧＦ−Ｄの活性）の低減（例えば、１％〜１００％の低減、または本明細書に記載のこの範囲の部分範囲のうちのいずれか）がもたらされる、方法も本明細書に提供される。哺乳動物におけるＶＥＧＦ活性の低減は、本明細書に記載の例示的な方法のうちのいずれかを使用して検出され得る。
【０１７７】
哺乳動物の内耳における聴神経腫、前庭神経鞘腫、または神経線維腫症ＩＩ型（ＮＦ２）を治療する方法であって、哺乳動物の内耳に、（ａ）シグナルペプチド（例えば、本明細書に記載のシグナルペプチドのうちのいずれか）に作動可能に連結された抗体重鎖可変ドメイン（例えば、本明細書に記載の抗体重鎖可変ドメインのうちのいずれか）を含むポリペプチド及びシグナルペプチド（例えば、本明細書に記載のシグナルペプチドのうちのいずれか）に作動可能に連結された抗体軽鎖可変ドメイン（例えば、本明細書に記載の抗体軽鎖可変ドメインのうちのいずれか）を含むポリペプチド、（ｂ）シグナルペプチド（例えば、本明細書に記載のシグナルペプチドのうちのいずれか）に作動可能に連結された抗原結合抗体断片（例えば、ＦａｂまたはｓｃＦｖ）（例えば、本明細書に記載の抗原結合抗体断片のうちのいずれか）を含むポリペプチド、または（ｃ）シグナルペプチド（例えば、本明細書に記載のシグナルペプチドのうちのいずれか）に作動可能に連結された可溶性ＶＥＧＦ受容体（例えば、本明細書に記載の可溶性ＶＥＧＦ受容体のうちのいずれか）をコードするヌクレオチド配列を含むＡＡＶベクターの治療有効量を導入することを含み、（ａ）のポリペプチドが、ＶＥＧＦ（例えば、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、及びＶＥＧＦ−Ｄのうちの１つ以上、例えば、ヒトＶＥＧＦ−Ａ、ヒトＶＥＧＦ−Ｂ、ヒトＶＥＧＦ−Ｃ、及びヒトＶＥＧＦ−Ｄのうちの１つ以上）に特異的に結合してＶＥＧＦ活性を低減する抗体をコードするか、（ｂ）のポリペプチドが、ＶＥＧＦ（例えば、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、及びＶＥＧＦ−Ｄのうちの１つ以上、例えば、ヒトＶＥＧＦ−Ａ、ヒトＶＥＧＦ−Ｂ、ヒトＶＥＧＦ−Ｃ、及びヒトＶＥＧＦ−Ｄのうちの１つ以上）に特異的に結合してＶＥＧＦ活性を低減する抗原結合抗体断片をコードするか、または（ｃ）の可溶性ＶＥＧＦ受容体が、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、及びＶＥＧＦ−Ｄのうちの１つ以上（例えば、ヒトＶＥＧＦ−Ａ、ヒトＶＥＧＦ−Ｂ、ヒトＶＥＧＦ−Ｃ、及びヒトＶＥＧＦ−Ｄのうちの１つ以上）に特異的に結合し、この導入により、哺乳動物の内耳における聴神経腫、前庭神経鞘腫、または神経線維腫症ＩＩ型（ＮＦ２）の治療がもたらされる、方法も本明細書に提供される。本明細書に記載されるように、聴神経腫、前庭神経鞘腫、または神経線維腫症ＩＩ型のうちの１つ以上の成功した治療は、例えば、導入ステップ前と比較して、それぞれ、哺乳動物における聴神経腫、前庭神経鞘腫、または神経線維腫症ＩＩ型の１つ以上の症状の数、重症度、または頻度の低減（例えば、１％〜１００％の低減、または本明細書に記載のこの範囲の部分範囲のうちのいずれか）を観察することによって検出され得る。
【０１７８】
これらの方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ベクターは、抗体重鎖可変ドメイン（例えば、本明細書に記載の抗体重鎖のうちのいずれか）及び抗体軽鎖可変ドメイン（例えば、本明細書に記載の抗体軽鎖可変ドメインのうちのいずれか）をコードするポリペプチドをコードする核酸配列を含む。これらの方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ベクターは、抗原結合抗体断片（例えば、本明細書に記載の抗原結合抗体断片のうちのいずれか）を含むポリペプチドをコードする核酸配列を含む。これらの方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ベクターは、シグナルペプチド（例えば、本明細書に記載のシグナルペプチドのうちのいずれか）に作動可能に連結された可溶性ＶＥＧＦ受容体（例えば、本明細書に記載の可溶性ＶＥＧＦ受容体のうちのいずれか）をコードする核酸配列を含む。これらの方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、抗体または抗原結合抗体断片をコードする配列に作動可能に連結されるプロモーター及びＫｏｚａｋ配列の一方または両方をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、プロモーターを含み、プロモーターは、誘導性プロモーター、構成的プロモーター、または組織特異的プロモーターからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、ポリアデニル化シグナル配列をさらに含む。これらの方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。これらの方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、哺乳動物（例えば、ヒト）は、内耳障害を有すると特定されている。これらの方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、哺乳動物（例えば、ヒト）は、内耳障害を有すると以前に診断されている。これらの方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、哺乳動物（例えば、ヒト）は、薬物誘発性難聴を有すると特定または診断されている。これらの方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、哺乳動物（例えば、ヒト）は、加齢性難聴を有すると特定または診断されている。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、インビボでの抗体または抗原結合抗体断片の半減期を減少させる１つ以上の点突然変異を含むＦｃ領域を含む。
【０１８０】
これらの方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、本明細書に記載のアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターのうちのいずれかの２つ以上の用量が、哺乳動物または対象の内耳に導入または投与される。これらの方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態は、哺乳動物または対象の内耳にアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターの第１の用量を導入または投与することと、第１の用量の導入または投与後の哺乳動物または対象の聴覚機能を評価することと、（例えば、当該技術分野で既知のいずれかの聴覚検査を使用して決定される）正常範囲内の聴覚機能を有しないことが認められた哺乳動物または対象の内耳にアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターの追加の用量を投与することとを含み得る。
【０１８１】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターは、蝸牛内投与用に製剤化され得る。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、本明細書に記載のアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターは、蝸牛内投与または局所投与により投与され得る。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターは、医療デバイス（例えば、本明細書に記載の例示的な医療デバイスのうちのいずれか）を使用して投与される。
【０１８２】
いくつかの実施形態では、蝸牛内投与は、本明細書に記載されるか、または当該技術分野で既知の方法のうちのいずれかを使用して行われ得る。例えば、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターは、以下の外科的手技を使用して蝸牛に投与または導入され得る。第１に、０度／２．５ｍｍの硬性内視鏡による可視化を使用して、外耳道をきれいにし、丸刃を使用しておよそ５ｍｍの外耳道鼓膜弁の輪郭を鋭く線引きする。その後、外耳道鼓膜弁を持ち上げ、中耳に後方から進入する。鼓索神経を特定して分割し、キュレットを使用して上鼓室側壁骨（ｓｃｕｔａｌ  ｂｏｎｅ）を取り除き、正円窓膜を露出させる。投与または導入されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターの頂端分布を増強するために、外科用レーザーを使用して卵円窓内に２ｍｍの小さい開窓を作製して、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターの経正円窓膜注入中の外リンパ置換を可能にすることができる。その後、マイクロインフュージョンデバイスを準備し、手術野に至らせる。このデバイスを正円窓に向かって操縦し、先端を正円窓の骨突出部内に設置して、マイクロニードル（複数可）による膜の貫通を可能にする。足踏みペダルを係合連動させて、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターの測定された一定の注入を可能にする。その後、このデバイスを引き抜き、正円窓及びアブミ骨底をゲルフォームパッチで密封する。
【０１８３】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、対象または哺乳動物は、齧歯類、非ヒト霊長類、またはヒトである。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、対象または哺乳動物は、成人、青少年、少年、小児、幼児、乳児、または新生児である。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、対象または哺乳動物は、１〜５、１〜１０、１〜２０、１〜３０、１〜４０、１〜５０、１〜６０、１〜７０、１〜８０、１〜９０、１〜１００、１〜１１０、２〜５、２〜１０、１０〜２０、２０〜３０、３０〜４０、４０〜５０、５０〜６０、６０〜７０、７０〜８０、８０〜９０、９０〜１００、１００〜１１０、１０〜３０、１０〜４０、１０〜５０、１０〜６０、１０〜７０、１０〜８０、１０〜９０、１０〜１００、１０〜１１０、２０〜４０、２０〜５０、２０〜６０、２０〜７０、２０〜８０、２０〜９０、２０〜１００、２０〜１１０、３０〜５０、３０〜６０、３０〜７０、３０〜８０、３０〜９０、３０〜１００、４０〜６０、４０〜７０、４０〜８０、４０〜９０、４０〜１００、５０〜７０、５０〜８０、５０〜９０、５０〜１００、６０〜８０、６０〜９０、６０〜１００、７０〜９０、７０〜１００、７０〜１１０、８０〜１００、８０〜１１０、または９０〜１１０歳である。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、対象または哺乳動物は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１１ヶ月齢である。
【０１８４】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、対象または哺乳動物は、難聴（例えば、薬物誘発性難聴）を有するか、またはそれを発症する危険性を有する。
【０１８５】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、対象または哺乳動物は、ＶＥＧＦ遺伝子に突然変異を有すると以前に特定されている。
【０１８６】
いくつかの実施形態では、難聴（例えば、薬物誘発性難聴）の成功した治療は、当該技術分野で既知の従来の聴覚機能検査のうちのいずれかを使用して対象において決定され得る。聴覚機能検査の非限定的な例は、様々な種類の聴力測定アッセイ（例えば、純音検査、発語検査、中耳検査、聴性脳幹反応、及び耳音響放射）である。
【０１８７】
本明細書に記載のアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターのうちのいずれかを哺乳類細胞に導入するための方法は、当該技術分野で既知である（例えば、リポフェクションによる、またはウイルスベクター、例えば、本明細書に記載のウイルスベクターのうちのいずれかの使用による）。
【０１８８】
医薬組成物及びキット
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物のうちのいずれかは、核酸または本明細書に記載のベクターのうちのいずれかの哺乳類細胞（例えば、リポソームまたはカチオン性脂質）への進入を促進する１つ以上の薬剤をさらに含み得る。
【０１８９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のベクターのうちのいずれかは、天然及び／または合成ポリマーを使用して製剤化され得る。本明細書に記載の組成物のうちのいずれかに含まれ得るポリマーの非限定的な例としては、ＤＹＮＡＭＩＣ  ＰＯＬＹＣＯＮＪＵＧＡＴＥ（登録商標）（Ａｒｒｏｗｈｅａｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｒｐ．，Ｐａｓａｄｅｎａ，Ｃａｌｉｆ．）、Ｍｉｒｕｓ  Ｂｉｏ（Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）及びＲｏｃｈｅ  Ｍａｄｉｓｏｎ（Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）製の製剤、ＰｈａｓｅＲＸポリマー製剤（例えば、ＳＭＡＲＴＴ  ＰＯＬＹＭＥＲ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ（登録商標）（ＰｈａｓｅＲＸ，Ｓｅａｔｔｌｅ，Ｗａｓｈ．）であるが、これに限定されない）、ＤＭＲＩ／ＤＯＰＥ、ポロキサマー、Ｖｉｃａｌ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）製のＶＡＸＦＥＣＴＩＮ（登録商標）アジュバント、キトサン、Ｃａｌａｎｄｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（Ｐａｓａｄｅｎａ，Ｃａｌｉｆ．）製のシクロデキストリン、デンドリマー及びポリ（乳酸−コ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）ポリマー、ＲＯＮＤＥＬ（商標）（ＲＮＡｉ／オリゴヌクレオチドナノ粒子送達）ポリマー（Ａｒｒｏｗｈｅａｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｐａｓａｄｅｎａ，Ｃａｌｉｆ．）、及びｐＨ応答性コブロックポリマー（例えば、ＰｈａｓｅＲＸ（Ｓｅａｔｔｌｅ，Ｗａｓｈ．）によって製造されたものであるが、これに限定されない）が挙げられ得るが、これらに限定されない。これらのポリマーのうちの多くは、インビボでのオリゴヌクレオチドの哺乳類細胞への送達における有効性を実証している（例えば、ｄｅＦｏｕｇｅｒｏｌｌｅｓ，Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．１９：１２５−１３２，２００８、Ｒｏｚｅｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０４：１２９８２−１２８８７，２００７、Ｒｏｚｅｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０４：１２９８２−１２８８７，２００７、Ｈｕ−Ｌｉｅｓｋｏｖａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６５：８９８４−８９８２，２００５、Ｈｅｉｄｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０４：５７１５−５７２１，２００７を参照のこと）。
【０１９０】
本明細書に記載の組成物のうちのいずれかは、例えば、医薬組成物であり得る。医薬組成物は、本明細書に記載の組成物、及び１つ以上の薬学的または生理的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤のうちのいずれかを含み得る。かかる組成物は、１つ以上の緩衝液（例えば、中性緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水等）、１つ以上の炭水化物（例えば、グルコース、マンノース、スクロース、及びデキストラン）、マンニトール、１つ以上のタンパク質、ポリペプチド、もしくはアミノ酸（例えば、グリシン）、１つ以上の抗酸化剤、１つ以上のキレート剤（例えば、ＥＤＴＡもしくはグルタチオン）、ならびに／または１つ以上の保存料を含み得る。
【０１９１】
いくつかの実施形態では、組成物は、薬学的に許容される担体（例えば、リン酸緩衝生理食塩水、生理食塩水、または静菌水）を含む。製剤化されると、溶液は、投薬製剤と適合性のある様式で、治療的に有効な量で投与される。製剤は、例えば、注射可能な溶液、注射可能なゲル、薬物放出カプセル等の様々な剤形で容易に投与される。
【０１９２】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」という用語は、薬学的投与と適合性のある溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤、抗真菌剤等を含む。補足活性化合物も本明細書に記載の化合物のうちのいずれかに組み込まれ得る。
【０１９３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物のうちのいずれかの単回用量は、例えば、緩衝溶液中に、少なくとも１ｎｇ、少なくとも２ｎｇ、少なくとも４ｎｇ、約６ｎｇ、約８ｎｇ、少なくとも１０ｎｇ、少なくとも２０ｎｇ、少なくとも３０ｎｇ、少なくとも４０ｎｇ、少なくとも５０ｎｇ、少なくとも６０ｎｇ、少なくとも７０ｎｇ、少なくとも８０ｎｇ、少なくとも９０ｎｇ、少なくとも１００ｎｇ、少なくとも２００ｎｇ、少なくとも３００ｎｇ、少なくとも４００ｎｇ、少なくとも５００ｎｇ、少なくとも１μｇ、少なくとも２μｇ、少なくとも４μｇ、少なくとも６μｇ、少なくとも８μｇ、少なくとも１０μｇ、少なくとも１２μｇ、少なくとも１４μｇ、少なくとも１６μｇ、少なくとも１８μｇ、少なくとも２０μｇ、少なくとも２２μｇ、少なくとも２４μｇ、少なくとも２６μｇ、少なくとも２８μｇ、少なくとも３０μｇ、少なくとも３２μｇ、少なくとも３４μｇ、少なくとも３６μｇ、少なくとも３８μｇ、少なくとも４０μｇ、少なくとも４２μｇ、少なくとも４４μｇ、少なくとも４６μｇ、少なくとも４８μｇ、少なくとも５０μｇ、少なくとも５２μｇ、少なくとも５４μｇ、少なくとも５６μｇ、少なくとも５８μｇ、少なくとも６０μｇ、少なくとも６２μｇ、少なくとも６４μｇ、少なくとも６６μｇ、少なくとも６８μｇ、少なくとも７０μｇ、少なくとも７２μｇ、少なくとも７４μｇ、少なくとも７６μｇ、少なくとも７８μｇ、少なくとも８０μｇ、少なくとも８２μｇ、少なくとも８４μｇ、少なくとも８６μｇ、少なくとも８８μｇ、少なくとも９０μｇ、少なくとも９２μｇ、少なくとも９４μｇ、少なくとも９６μｇ、少なくとも９８μｇ、少なくとも１００μｇ、少なくとも１０２μｇ、少なくとも１０４μｇ、少なくとも１０６μｇ、少なくとも１０８μｇ、少なくとも１１０μｇ、少なくとも１１２μｇ、少なくとも１１４μｇ、少なくとも１１６μｇ、少なくとも１１８μｇ、少なくとも１２０μｇ、少なくとも１２２μｇ、少なくとも１２４μｇ、少なくとも１２６μｇ、少なくとも１２８μｇ、少なくとも１３０μｇ、少なくとも１３２μｇ、少なくとも１３４μｇ、少なくとも１３６μｇ、少なくとも１３８μｇ、少なくとも１４０μｇ、少なくとも１４２μｇ、少なくとも１４４μｇ、少なくとも１４６μｇ、少なくとも１４８μｇ、少なくとも１５０μｇ、少なくとも１５２μｇ、少なくとも１５４μｇ、少なくとも１５６μｇ、少なくとも１５８μｇ、少なくとも１６０μｇ、少なくとも１６２μｇ、少なくとも１６４μｇ、少なくとも１６６μｇ、少なくとも１６８μｇ、少なくとも１７０μｇ、少なくとも１７２μｇ、少なくとも１７４μｇ、少なくとも１７６μｇ、少なくとも１７８μｇ、少なくとも１８０μｇ、少なくとも１８２μｇ、少なくとも１８４μｇ、少なくとも１８６μｇ、少なくとも１８８μｇ、少なくとも１９０μｇ、少なくとも１９２μｇ、少なくとも１９４μｇ、少なくとも１９６μｇ、少なくとも１９８μｇ、または少なくとも２００μｇの総量の少なくとも２つの異なるベクターを含み得る。
【０１９４】
本明細書に提供される組成物は、例えば、それらの意図される投与経路と適合性があるように製剤化され得る。意図される投与経路の非限定的な例は、局所投与（例えば、蝸牛内投与）である。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、治療用組成物は、脂質ナノ粒子を含むように製剤化される。いくつかの実施形態では、治療用組成物は、ポリマーナノ粒子を含むように製剤化される。いくつかの実施形態では、治療用組成物は、ミニサークルＤＮＡを含むように製剤化される。いくつかの実施形態では、治療用組成物は、ＣＥＬｉＤ  ＤＮＡを含むように製剤化される。いくつかの実施形態では、治療用組成物は、合成外リンパ液を含むように製剤化される。例示的な合成外リンパ液は、２０〜２００ｍＭのＮａＣｌ、１〜５ｍＭのＫＣｌ、０．１〜１０ｍＭのＣａＣｌ２、１〜１０ｍＭのグルコース、２〜５０ｍＭのＨＥＰＥＳを含み、約６〜約９のｐＨを有する。
【０１９６】
本明細書に記載の組成物のうちのいずれかを含むキットも提供される。いくつかの実施形態では、キットは、固体組成物（例えば、本明細書に記載の少なくとも２つの異なるベクターを含む凍結乾燥組成物）及び凍結乾燥組成物を可溶化するための液体を含み得る。いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の組成物のうちのいずれかを含む事前に充填されたシリンジを含み得る。
【０１９７】
いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の組成物（例えば、水性組成物、例えば、水性医薬組成物として製剤化されたもの）のうちのいずれかを含むバイアルを含む。
【０１９８】
いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の方法のうちのいずれかを行うための取扱説明書を含み得る。
【０１９９】
デバイス及び外科的方法
難聴（例えば、聴神経腫／前庭神経鞘腫及び関連難聴）を治療するための治療用送達系が本明細書に提供される。一態様では、治療用送達系は、ｉ）内耳の正円窓膜への１つまたは複数の切開の作製を必要とするヒト対象の内耳の正円窓膜に１つまたは複数の切開を作製することができる医療デバイス、及びｉｉ）組成物（例えば、本明細書に記載の組成物のうちのいずれか）の有効用量を含む。いくつかの実施形態では、医療デバイスは、複数のマイクロニードルを含む。
【０２００】
難聴（例えば、聴神経腫／前庭神経鞘腫及び関連難聴）を治療するための外科的方法も本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、これらの方法は、第１の切開を第１の切開点でヒト対象の蝸牛に導入するステップと、本明細書に提供される組成物のうちのいずれかの治療有効量を蝸牛内投与するステップとを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、第１の切開点で対象に投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、第１の切開内にまたはそれを介して対象に投与される。
【０２０１】
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物のうちのいずれかは、蝸牛卵円窓膜内にまたはそれを介して対象に投与される。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物のうちのいずれかは、蝸牛正円窓膜内にまたはそれを介して対象に投与される。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、組成物は、正円窓膜内に複数の切開を作製することができる医療デバイスを使用して投与される。いくつかの実施形態では、医療デバイスは、複数のマイクロニードルを含む。いくつかの実施形態では、医療デバイスは、概ね円形の第１の側面を含む複数のマイクロニードルを含み、各マイクロニードルは、少なくとも約１０ミクロンの直径を有する。いくつかの実施形態では、医療デバイスは、組成物を保持することができる基部及び／または貯蔵部を含む。いくつかの実施形態では、医療デバイスは、組成物を移送することができる管腔を個別に含む複数の中空マイクロニードルを含む。いくつかの実施形態では、医療デバイスは、少なくとも部分的真空を発生させるための手段を含む。
【０２０２】
本発明は、以下の実験実施例を参照してさらに詳細に説明される。これらの実施例は、例証目的のためのみに提供されており、別途明記されない限り、限定するようには意図されていない。したがって、本発明は、決して以下の実施例に限定されると解釈されるべきではなく、むしろ、本明細書に提供される教示の結果として明らかになるありとあらゆる変形を包含すると解釈されるべきである。
【０２０３】
さらに説明することなく、当業者であれば、前述の説明及び以下の例示的な実施例を使用して、本発明の組成物を作製及び利用し、特許請求される方法を実施することができると考えられる。以下の実施例は、本発明の様々な態様を具体的に指摘し、決して本開示の残りの部分を限定すると解釈されるべきではない。
【実施例】
【０２０４】
実施例１．ウイルスベクターの構築
４つの異なる組換えＡＡＶベクターを生成し、図１Ａ〜Ｄに示す。
【０２０５】
図１Ａのベクターは、５’から３’の方向に進む以下のサブ配列を含む４４７４ｂｐの例示的なＡＡＶベクター（配列番号３５）である。
ＣＣＴＧＣＡＧＧＣＡＧＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣＣＧＧＧＣＧＴＣＧＧＧＣＧＡＣＣＴＴＴＧＧＴＣＧＣＣＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴＡＧＧＧＧＴＴＣＣＴＧＣＧＧＣＣＧＣＡＣＧＣＧＴ（５’ＩＴＲ、配列番号３６）、
ＧＡＣＡＴＴＧＡＴＴＡＴＴＧＡＣＴＡＧＴＴＡＴＴＡＡＴＡＧＴＡＡＴＣＡＡＴＴＡＣＧＧＧＧＴＣＡＴＴＡＧＴＴＣＡＴＡＧＣＣＣＡＴＡＴＡＴＧＧＡＧＴＴＣＣＧＣＧＴＴＡＣＡＴＡＡＣＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＴＧＡＣＣＧＣＣＣＡＡＣＧＡＣＣＣＣＣＧＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＡＡＴＧＡＣＧＴＡＴＧＴＴＣＣＣＡＴＡＧＴＡＡＣＧＣＣＡＡＴＡＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＧＴＧＧＡＣＴＡＴＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＣＴＧＣＣＣＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＴＡＴＣＡＴＡＴＧＣＣＡＡＧＴＡＣＧＣＣＣＣＣＴＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＡＴＴＡＴＧＣＣＣＡＧＴＡＣＡＴＧＡＣＣＴＴＡＴＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＴＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＴＡＣＧＴＡＴＴＡＧＴＣＡＴＣＧＣＴＡＴＴＡＣＣＡＴＧＧＧＴＣＧＡＧＧＴＧＡＧＣＣＣＣＡＣＧＴＴＣＴＧＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＣＣＣＡＴＣＴＣＣＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣＡＡＴＴＴＴＧＴＡＴＴＴＡＴＴＴＡＴＴＴＴＴＴＡＡＴＴＡＴＴＴＴＧＴＧＣＡＧＣＧＡＴＧＧＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＡＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＡＧＡＧＧＴＧＣＧＧＣＧＧＣＡＧＣＣＡＡＴＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＧＣＴＣＣＧＡＡＡＧＴＴＴＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＴＡＴＡＡＡＡＡＧＣＧＡＡＧＣＧＣＧＣＧＧＣＧＧＧＣＧＧＧＡＧＴＣＧＣＴＧＣＧＴＴＧＣＣＴＴＣＧＣＣＣＣＧＴＧＣＣＣＣＧＣＴＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣＴＣＧＣＧＣＣＧＣＣＣＧＣＣＣＣＧＧＣＴＣＴＧＡＣＴＧＡＣＣＧＣＧＴＴＡＣＴＣＣＣＡＣＡＧＧＴＧＡＧＣＧＧＧＣＧＧＧＡＣＧＧＣＣＣＴＴＣＴＣＣＴＣＣＧＧＧＣＴＧＴＡＡＴＴＡＧＣＧＣＴＴＧＧＴＴＴＡＡＴＧＡＣＧＧＣＴＣＧＴＴＴＣＴＴＴＴＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＧＴＧＡＡＡＧＣＣＴＴＡＡＡＧＧＧＣＴＣＣＧＧＧＡＧＧＧＣＣＣＴＴＴＧＴＧＣＧＧＧＧＧＧＧＡＧＣＧＧＣＴＣＧＧＧＧＧＧＴＧＣＧＴＧＣＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＧＧＡＧＣＧＣＣＧＣＧＴＧＣＧＧＣＣＣＧＣＧＣＴＧＣＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧＴＧＡＧＣＧＣＴＧＣＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＴＴＴＧＴＧＣＧＣＴＣＣＧＣＧＴＧＴＧＣＧＣＧＡＧＧＧＧＡＧＣＧＣＧＧＣＣＧＧＧＧＧＣＧＧＴＧＣＣＣＣＧＣＧＧＴＧＣＧＧＧＧＧＧＧＣＴＧＣＧＡＧＧＧＧＡＡＣＡＡＡＧＧＣＴＧＣＧＴＧＣＧＧＧＧＴＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＧＧＧＧＧＴＧＡＧＣＡＧＧＧＧＧＴＧＴＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＧＴＣＧＧＧＣＴＧＴＡＡＣＣＣＣＣＣＣＣＴＧＣＡＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＧＡＧＴＴＧＣＴＧＡＧＣＡＣＧＧＣＣＣＧＧＣＴＴＣＧＧＧＴＧＣＧＧＧＧＣＴＣＣＧＴＧＣＧＧＧＧＣＧＴＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＴＣＧＣＣＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＴＧＧＣＧＧＣＡＧＧＴＧＧＧＧＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＣＧＣＣＴＣＧＧＧＣＣＧＧＧＧＡＧＧＧＣＴＣＧＧＧＧＧＡＧＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＣＣＧＧＡＧＣＧＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧＴＣＧＡＧＧＣＧＣＧＧＣＧＡＧＣＣＧＣＡＧＣＣＡＴＴＧＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＴＡＡＴＣＧＴＧＣＧＡＧＡＧＧＧＣＧＣＡＧＧＧＡＣＴＴＣＣＴＴＴＧＴＣＣＣＡＡＡＴＣＴＧＴＧＣＧＧＡＧＣＣＧＡＡＡＴＣＴＧＧＧＡＧＧＣＧＣＣＧＣＣＧＣＡＣＣＣＣＣＴＣＴＡＧＣＧＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＧＡＡＧＣＧＧＴＧＣＧＧＣＧＣＣＧＧＣＡＧＧＡＡＧＧＡＡＡＴＧＧＧＣＧＧＧＧＡＧＧＧＣＣＴＴＣＧＴＧＣＧＴＣＧＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣＧＴＣＣＣＣＴＴＣＴＣＣＣＴＣＴＣＣＡＧＣＣＴＣＧＧＧＧＣＴＧＴＣＣＧＣＧＧＧＧＧＧＡＣＧＧＣＴＧＣＣＴＴＣＧＧＧＧＧＧＧＡＣＧＧＧＧＣＡＧＧＧＣＧＧＧＧＴＴＣＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＧＴＧＴＧＡＣＣＧＧＣＧＧＣＴＣＴＡＧＡＧＣＣＴＣＴＧＣＴＡＡＣＣＡＴＧＴＴＣＡＴＧＣＣＴＴＣＴＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＡＣＡＧ（ＣＢＡ配列、配列番号３７）、
ＣＴＣＣＴＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＣＴＧＧＴＴＡＴＴＧＴＧＡＣＣＧＧＴＧＣＣＡＣＣ（スペーサー、配列番号３８）、
ＡＴＧＴＡＣＣＧＧＡＴＧＣＡＧＣＴＧＣＴＧＡＧＣＴＧＴＡＴＣＧＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＡＡＴＴＣＴ（ＩＬ−２分泌シグナル配列、配列番号３９）、
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＣＴＴＧＴＴＣＡＡＣＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＧＡＧＣＴＧＴＧＣＣＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＡＡＣＴＡＣＧＧＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＣＡＡＡＧＧＣＣＴＴＧＡＡＴＧＧＧＴＣＧＧＡＴＧＧＡＴＣＡＡＣＡＣＣＴＡＣＡＣＣＧＧＣＧＡＧＣＣＡＡＣＡＴＡＣＧＣＣＧＣＣＧＡＣＴＴＣＡＡＧＣＧＧＡＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＣＣＴＧＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＡＧＴＡＴＣＣＣＣＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＣＡＧＣＡＧＣＣＡＣＴＧＧＴＡＣＴＴＴＧＡＣＧＴＧＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＣＡＣＡＣＴＧＧＴＣＡＣＡＧＴＧＴＣＴＡＧＣＧＣＣＴＣＴＡＣＡＡＡＧＧＧＣＣＣＣＡＧＣＧＴＴＴＴＣＣＣＡＣＴＧＧＣＴＣＣＴＡＧＣＡＧＣＡＡＧＴＣＴＡＣＣＡＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＡＧＣＣＧＣＴＣＴＧＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＴＣＣＣＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＣＧＴＧＴＣＣＴＧＧＡＡＴＴＣＴＧＧＣＧＣＴＣＴＧＡＣＡＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＴＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＡＡＧＣＡＧＣＧＧＣＣＴＧＴＡＣＴＣＴＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧＴＣＧＴＧＡＣＡＧＴＧＣＣＡＡＧＣＡＧＣＴＣＴＣＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＴＧＴＧＡＡＣＣＡＣＡＡＧＣＣＴＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＧＧＴＧＧＡＡＣＣＣＡＡＧＡＧＣＴＧＣＧＡＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＣＣＴＧＴＣＣＴＣＣＡＴＧＴＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＡＡＣＴＧＣＴＣＧＧＣＧＧＡＣＣＴＴＣＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＴＣＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＴＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＣＣＣＣＴＧＡＡＧＴＧＡＣＣＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＧＴＧＴＣＣＣＡＣＧＡＧＧＡＴＣＣＣＧＡＡＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＡＴＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＡＧＴＧＣＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＣＣＡＡＧＣＣＴＡＧＡＧＡＧＧＡＡＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＡＧＴＧＧＴＧＴＣＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣＡＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＴＧＣＴＣＣＴＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＴＡＧＧＧＡＡＣＣＣＣＡＧＧＴＴＴＡＣＡＣＡＣＴＧＣＣＴＣＣＡＡＧＣＣＧＧＧＡＡＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＴＴＣＣＧＡＴＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＡＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＣＣＡＧＣＣＡＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＡＡＣＣＣＣＴＣＣＴＧＴＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＧＡＣＧＧＣＴＣＡＴＴＣＴＴＣＣＴＧＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＣＡＡＧＴＣＣＡＧＡＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＴＴＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＣＣＡＧＡＡＧＴＣＴＣＴＧＡＧＣＣＴＧＴＣＴＣＣＴＧＧＣＡＡＧ（ベバシズマブの重鎖をコードする配列、配列番号４０）、
ＣＧＧＡＡＧＡＧＡＡＧＡ（リンカー配列、配列番号４１）、
ＧＧＣＴＣＴＧＧＣＧＡＡＧＧＣＡＧＡＧＧＣＡＧＣＣＴＧＣＴＴＡＣＡＴＧＴＧＧＣＧＡＣＧＴＧＧＡＡＧＡＧＡＡＣＣＣＣＧＧＡＣＣＴ（Ｔ２Ａ配列、配列番号４２）、
ＡＴＧＴＡＴＡＧＡＡＴＧＣＡＧＣＴＣＣＴＧＴＣＣＴＧＣＡＴＴＧＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＧＣＴＣＴＣＧＴＧＡＣＣＡＡＣＡＧＣ（ＩＬ−２分泌シグナル配列、配列番号４３）、
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＴＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＴＡＧＣＧＣＣＡＧＣＣＡＧＧＡＣＡＴＣＴＣＣＡＡＣＴＡＣＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＡＡＡＧＣＣＣＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＣＴＡＡＧＧＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＴＴＣＡＣＡＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＣＴＣＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＡＴＣＴＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＡＣＡＧＣＡＣＣＧＴＧＣＣＴＴＧＧＡＣＡＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＡＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＣＧＧＡＣＴＧＴＧＧＣＣＧＣＴＣＣＴＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＴＣＣＡＣＣＴＡＧＣＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＣＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＡＧＡＡＧＣＣＡＡＧＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＡＧＴＧＧＡＣＡＡＴＧＣＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣＡＡＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡＧＣＧＴＧＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＴＣＣＡＡＧＧＡＴＡＧＣＡＣＣＴＡＴＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＧＡＧＣＡＡＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＧＣＡＣＡＡＡＧＴＧＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＧＡＣＣＣＡＣＣＡＧＧＧＣＣＴＴＴＣＴＡＧＣＣＣＴＧＴＧＡＣＣＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＣＧＧＧＧＣＧＡＡＴＧＴＴＡＡ（ベバシズマブの軽鎖をコードする配列、配列番号４４）、
ＧＡＧＣＴＣＧＣＴＧＡＴＣＡＧＣＣＴＣＧＡ（リンカー配列、配列番号４５）、
ＣＴＧＴＧＣＣＴＴＣＴＡＧＴＴＧＣＣＡＧＣＣＡＴＣＴＧＴＴＧＴＴＴＧＣＣＣＣＴＣＣＣＣＣＧＴＧＣＣＴＴＣＣＴＴＧＡＣＣＣＴＧＧＡＡＧＧＴＧＣＣＡＣＴＣＣＣＡＣＴＧＴＣＣＴＴＴＣＣＴＡＡＴＡＡＡＡＴＧＡＧＧＡＡＡＴＴＧＣＡＴＣＧＣＡＴＴＧＴＣＴＧＡＧＴＡＧＧＴＧＴＣＡＴＴＣＴＡＴＴＣＴＧＧＧＧＧＧＴＧＧＧＧＴＧＧＧＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＧＧＧＡＧＧＡＴＴＧＧＧＡＡＧＡＣＡＡＴＡＧＣＡＧＧＣＡＴＧＣＴＧＧＧＧＡＴＧＣＧＧＴＧＧＧＣＴＣＴＡＴＧＧ（ウシ成長ホルモンポリＡ尾部配列、配列番号４６）、
ＡＡＧＣＴＴＧＡＡＴＴＣＡＧＣＴＧＡＣＧＴＧＣＣＴＣＧＧＡＣＣＧＣＴ（リンカー配列、配列番号４７）、及び
ＡＧＧＡＡＣＣＣＣＴＡＧＴＧＡＴＧＧＡＧＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＧＧＣＧＡＣＣＡＡＡＧＧＴＣＧＣＣＣＧＡＣＧＣＣＣＧＧＧＣＴＴＴＧＣＣＣＧＧＧＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＣＴＧＣＣＴＧＣＡＧＧ（３’ＩＴＲ、配列番号４８）。
【０２０６】
配列番号３９及び４３の各々によってコードされるＩＬ−２シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号４９）である。配列番号４２によってコードされるＴ２Ａ配列は、ＧＳＧＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号５０）である。配列番号４０は、ベバシズマブの重鎖（配列番号６）をコードする。配列番号４４は、ベバシズマブの軽鎖（配列番号５）をコードする。配列番号４４の最後の３つのヌクレオチドは、終止コドンである。
【０２０７】
図１Ｂのベクターは、５’から３’の方向に進む以下のサブ配列を含む３８１４ｂｐの例示的なＡＡＶベクター（配列番号５１）である。
ＣＣＴＧＣＡＧＧＣＡＧＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣＣＧＧＧＣＧＴＣＧＧＧＣＧＡＣＣＴＴＴＧＧＴＣＧＣＣＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴＡＧＧＧＧＴＴＣＣＴＧＣＧＧＣＣＧＣＡＣＧＣＧＴ（３’ＩＴＲ、配列番号３６）、
ＧＡＣＡＴＴＧＡＴＴＡＴＴＧＡＣＴＡＧＴＴＡＴＴＡＡＴＡＧＴＡＡＴＣＡＡＴＴＡＣＧＧＧＧＴＣＡＴＴＡＧＴＴＣＡＴＡＧＣＣＣＡＴＡＴＡＴＧＧＡＧＴＴＣＣＧＣＧＴＴＡＣＡＴＡＡＣＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＴＧＡＣＣＧＣＣＣＡＡＣＧＡＣＣＣＣＣＧＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＡＡＴＧＡＣＧＴＡＴＧＴＴＣＣＣＡＴＡＧＴＡＡＣＧＣＣＡＡＴＡＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＧＴＧＧＡＣＴＡＴＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＣＴＧＣＣＣＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＴＡＴＣＡＴＡＴＧＣＣＡＡＧＴＡＣＧＣＣＣＣＣＴＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＡＴＴＡＴＧＣＣＣＡＧＴＡＣＡＴＧＡＣＣＴＴＡＴＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＴＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＴＡＣＧＴＡＴＴＡＧＴＣＡＴＣＧＣＴＡＴＴＡＣＣＡＴＧＧＧＴＣＧＡＧＧＴＧＡＧＣＣＣＣＡＣＧＴＴＣＴＧＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＣＣＣＡＴＣＴＣＣＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣＡＡＴＴＴＴＧＴＡＴＴＴＡＴＴＴＡＴＴＴＴＴＴＡＡＴＴＡＴＴＴＴＧＴＧＣＡＧＣＧＡＴＧＧＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＡＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＡＧＡＧＧＴＧＣＧＧＣＧＧＣＡＧＣＣＡＡＴＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＧＣＴＣＣＧＡＡＡＧＴＴＴＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＴＡＴＡＡＡＡＡＧＣＧＡＡＧＣＧＣＧＣＧＧＣＧＧＧＣＧＧＧＡＧＴＣＧＣＴＧＣＧＴＴＧＣＣＴＴＣＧＣＣＣＣＧＴＧＣＣＣＣＧＣＴＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣＴＣＧＣＧＣＣＧＣＣＣＧＣＣＣＣＧＧＣＴＣＴＧＡＣＴＧＡＣＣＧＣＧＴＴＡＣＴＣＣＣＡＣＡＧＧＴＧＡＧＣＧＧＧＣＧＧＧＡＣＧＧＣＣＣＴＴＣＴＣＣＴＣＣＧＧＧＣＴＧＴＡＡＴＴＡＧＣＧＣＴＴＧＧＴＴＴＡＡＴＧＡＣＧＧＣＴＣＧＴＴＴＣＴＴＴＴＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＧＴＧＡＡＡＧＣＣＴＴＡＡＡＧＧＧＣＴＣＣＧＧＧＡＧＧＧＣＣＣＴＴＴＧＴＧＣＧＧＧＧＧＧＧＡＧＣＧＧＣＴＣＧＧＧＧＧＧＴＧＣＧＴＧＣＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＧＧＡＧＣＧＣＣＧＣＧＴＧＣＧＧＣＣＣＧＣＧＣＴＧＣＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧＴＧＡＧＣＧＣＴＧＣＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＴＴＴＧＴＧＣＧＣＴＣＣＧＣＧＴＧＴＧＣＧＣＧＡＧＧＧＧＡＧＣＧＣＧＧＣＣＧＧＧＧＧＣＧＧＴＧＣＣＣＣＧＣＧＧＴＧＣＧＧＧＧＧＧＧＣＴＧＣＧＡＧＧＧＧＡＡＣＡＡＡＧＧＣＴＧＣＧＴＧＣＧＧＧＧＴＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＧＧＧＧＧＴＧＡＧＣＡＧＧＧＧＧＴＧＴＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＧＴＣＧＧＧＣＴＧＴＡＡＣＣＣＣＣＣＣＣＴＧＣＡＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＧＡＧＴＴＧＣＴＧＡＧＣＡＣＧＧＣＣＣＧＧＣＴＴＣＧＧＧＴＧＣＧＧＧＧＣＴＣＣＧＴＧＣＧＧＧＧＣＧＴＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＴＣＧＣＣＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＴＧＧＣＧＧＣＡＧＧＴＧＧＧＧＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＣＧＣＣＴＣＧＧＧＣＣＧＧＧＧＡＧＧＧＣＴＣＧＧＧＧＧＡＧＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＣＣＧＧＡＧＣＧＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧＴＣＧＡＧＧＣＧＣＧＧＣＧＡＧＣＣＧＣＡＧＣＣＡＴＴＧＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＴＡＡＴＣＧＴＧＣＧＡＧＡＧＧＧＣＧＣＡＧＧＧＡＣＴＴＣＣＴＴＴＧＴＣＣＣＡＡＡＴＣＴＧＴＧＣＧＧＡＧＣＣＧＡＡＡＴＣＴＧＧＧＡＧＧＣＧＣＣＧＣＣＧＣＡＣＣＣＣＣＴＣＴＡＧＣＧＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＧＡＡＧＣＧＧＴＧＣＧＧＣＧＣＣＧＧＣＡＧＧＡＡＧＧＡＡＡＴＧＧＧＣＧＧＧＧＡＧＧＧＣＣＴＴＣＧＴＧＣＧＴＣＧＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣＧＴＣＣＣＣＴＴＣＴＣＣＣＴＣＴＣＣＡＧＣＣＴＣＧＧＧＧＣＴＧＴＣＣＧＣＧＧＧＧＧＧＡＣＧＧＣＴＧＣＣＴＴＣＧＧＧＧＧＧＧＡＣＧＧＧＧＣＡＧＧＧＣＧＧＧＧＴＴＣＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＧＴＧＴＧＡＣＣＧＧＣＧＧＣＴＣＴＡＧＡＧＣＣＴＣＴＧＣＴＡＡＣＣＡＴＧＴＴＣＡＴＧＣＣＴＴＣＴＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＡＣＡＧ（ＣＢＡ配列、配列番号３７）、
ＣＴＣＣＴＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＣＴＧＧＴＴＡＴＴＧＴＧＡＣＣＧＧＴＧＣＣＡＣＣ（リンカー配列、配列番号３８）、
ＡＴＧＴＡＣＣＧＧＡＴＧＣＡＧＣＴＧＣＴＧＡＧＣＴＧＴＡＴＣＧＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＡＡＴＴＣＴ（ＩＬ−２分泌シグナル配列、配列番号３９）、
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＣＴＴＧＴＴＣＡＡＣＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＧＡＧＣＴＧＴＧＣＣＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＡＣＴＡＣＧＧＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＣＡＡＡＧＧＣＣＴＴＧＡＡＴＧＧＧＴＣＧＧＡＴＧＧＡＴＣＡＡＣＡＣＣＴＡＣＡＣＣＧＧＣＧＡＧＣＣＡＡＣＡＴＡＣＧＣＣＧＣＣＧＡＣＴＴＣＡＡＧＣＧＧＡＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＣＣＴＧＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＡＧＴＡＴＣＣＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＣＡＣＣＡＧＣＣＡＣＴＧＧＴＡＣＴＴＴＧＡＣＧＴＧＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＣＡＣＡＣＴＧＧＴＣＡＣＡＧＴＧＴＣＴＡＧＣＧＣＣＴＣＴＡＣＡＡＡＧＧＧＣＣＣＣＡＧＣＧＴＴＴＴＣＣＣＡＣＴＧＧＣＴＣＣＴＡＧＣＡＧＣＡＡＧＴＣＴＡＣＣＡＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＡＧＣＣＧＣＴＣＴＧＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＴＣＣＣＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＣＧＴＧＴＣＣＴＧＧＡＡＴＴＣＴＧＧＣＧＣＴＣＴＧＡＣＡＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＴＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＡＡＧＣＡＧＣＧＧＣＣＴＧＴＡＣＴＣＴＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧＴＣＧＴＧＡＣＡＧＴＧＣＣＡＡＧＣＡＧＣＴＣＴＣＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＴＧＴＧＡＡＣＣＡＣＡＡＧＣＣＴＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＧＧＴＧＧＡＡＣＣＣＡＡＧＡＧＣＴＧＣＧＡＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＣＣＧＧＣＡＡＧ（ラニビズマブの重鎖をコードする配列、配列番号５２）、
ＣＧＧＡＡＧＡＧＡＡＧＡ（リンカー配列、配列番号４１）、
ＧＧＣＴＣＴＧＧＣＧＡＡＧＧＣＡＧＡＧＧＣＡＧＣＣＴＧＣＴＴＡＣＡＴＧＴＧＧＣＧＡＣＧＴＧＧＡＡＧＡＧＡＡＣＣＣＣＧＧＡＣＣＴ（Ｔ２Ａ配列、配列番号４２）、
ＡＴＧＴＡＴＡＧＡＡＴＧＣＡＧＣＴＣＣＴＧＴＣＣＴＧＣＡＴＴＧＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＧＣＴＣＴＣＧＴＧＡＣＣＡＡＣＡＧＣ（ＩＬ−２シグナル分泌配列、配列番号４３）、
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＣＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＴＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＴＡＧＣＧＣＣＡＧＣＣＡＧＧＡＣＡＴＣＴＣＣＡＡＣＴＡＣＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＡＡＡＧＣＣＣＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＣＴＡＡＧＧＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＴＴＣＡＣＡＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＣＴＣＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＡＴＣＴＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＡＣＡＧＣＡＣＣＧＴＧＣＣＴＴＧＧＡＣＡＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＡＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＣＧＧＡＣＴＧＴＧＧＣＣＧＣＴＣＣＴＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＴＣＣＡＣＣＴＡＧＣＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＣＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＡＧＡＡＧＣＣＡＡＧＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＡＧＴＧＧＡＣＡＡＴＧＣＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣＡＡＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡＧＣＧＴＧＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＴＣＣＡＡＧＧＡＴＡＧＣＡＣＣＴＡＴＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＧＡＧＣＡＡＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＧＣＡＣＡＡＡＧＴＧＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＧＡＣＣＣＡＣＣＡＧＧＧＣＣＴＴＴＣＴＡＧＣＣＣＴＧＴＧＡＣＣＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＣＧＧＧＧＣＧＡＡＴＧＴＴＡＡ（ラニビズマブの軽鎖をコードする配列、配列番号５３）。
ＧＡＧＣＴＣＧＣＴＧＡＴＣＡＧＣＣＴＣＧＡ（リンカー配列、配列番号４５）、
ＣＴＧＴＧＣＣＴＴＣＴＡＧＴＴＧＣＣＡＧＣＣＡＴＣＴＧＴＴＧＴＴＴＧＣＣＣＣＴＣＣＣＣＣＧＴＧＣＣＴＴＣＣＴＴＧＡＣＣＣＴＧＧＡＡＧＧＴＧＣＣＡＣＴＣＣＣＡＣＴＧＴＣＣＴＴＴＣＣＴＡＡＴＡＡＡＡＴＧＡＧＧＡＡＡＴＴＧＣＡＴＣＧＣＡＴＴＧＴＣＴＧＡＧＴＡＧＧＴＧＴＣＡＴＴＣＴＡＴＴＣＴＧＧＧＧＧＧＴＧＧＧＧＴＧＧＧＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＧＧＧＡＧＧＡＴＴＧＧＧＡＡＧＡＣＡＡＴＡＧＣＡＧＧＣＡＴＧＣＴＧＧＧＧＡＴＧＣＧＧＴＧＧＧＣＴＣＴＡＴＧＧ（ウシ成長ホルモンポリＡ尾部配列、配列番号４６）、及び
ＡＡＧＣＴＴＧＡＡＴＴＣＡＧＣＴＧＡＣＧＴＧＣＣＴＣＧＧＡＣＣＧＣＴ（リンカー、配列番号４７）、
ＡＧＧＡＡＣＣＣＣＴＡＧＴＧＡＴＧＧＡＧＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＧＧＣＧＡＣＣＡＡＡＧＧＴＣＧＣＣＣＧＡＣＧＣＣＣＧＧＧＣＴＴＴＧＣＣＣＧＧＧＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＣＴＧＣＣＴＧＣＡＧＧ（配列番号４８）。
【０２０８】
配列番号３９及び４３の各々によってコードされるＩＬ−２シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号４９）である。配列番号４２によってコードされるＴ２Ａ配列は、ＧＳＧＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号５０）である。配列番号５２は、ラニビズマブの重鎖（ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲＲＦＴＦＳＬＤＴＳＫＳＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＹＰＹＹＹＧＴＳＨＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＧＫ、配列番号５４）をコードする。配列番号５３は、ベバシズマブの軽鎖（配列番号７）をコードする。配列番号５３の最後の３つのヌクレオチドは、終止コドンである。
【０２０９】
図１Ｃは、５’から３’の方向に進む以下のサブ配列を含む４５７３ｂｐの例示的なＡＡＶベクター（配列番号５５）である。
ＣＣＴＧＣＡＧＧＣＡＧＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣＣＧＧＧＣＧＴＣＧＧＧＣＧＡＣＣＴＴＴＧＧＴＣＧＣＣＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴＡＧＧＧＧＴＴＣＣＴＧＣＧＧＣＣＧＣＡＣＧＣＧＴ（５’ＩＴＲ、配列番号３６）、
ＧＡＣＡＴＴＧＡＴＴＡＴＴＧＡＣＴＡＧＴＴＡＴＴＡＡＴＡＧＴＡＡＴＣＡＡＴＴＡＣＧＧＧＧＴＣＡＴＴＡＧＴＴＣＡＴＡＧＣＣＣＡＴＡＴＡＴＧＧＡＧＴＴＣＣＧＣＧＴＴＡＣＡＴＡＡＣＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＴＧＡＣＣＧＣＣＣＡＡＣＧＡＣＣＣＣＣＧＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＡＡＴＧＡＣＧＴＡＴＧＴＴＣＣＣＡＴＡＧＴＡＡＣＧＣＣＡＡＴＡＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＧＴＧＧＡＣＴＡＴＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＣＴＧＣＣＣＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＴＡＴＣＡＴＡＴＧＣＣＡＡＧＴＡＣＧＣＣＣＣＣＴＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＡＴＴＡＴＧＣＣＣＡＧＴＡＣＡＴＧＡＣＣＴＴＡＴＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＴＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＴＡＣＧＴＡＴＴＡＧＴＣＡＴＣＧＣＴＡＴＴＡＣＣＡＴＧＧＧＴＣＧＡＧＧＴＧＡＧＣＣＣＣＡＣＧＴＴＣＴＧＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＣＣＣＡＴＣＴＣＣＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣＡＡＴＴＴＴＧＴＡＴＴＴＡＴＴＴＡＴＴＴＴＴＴＡＡＴＴＡＴＴＴＴＧＴＧＣＡＧＣＧＡＴＧＧＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＡＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＡＧＡＧＧＴＧＣＧＧＣＧＧＣＡＧＣＣＡＡＴＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＧＣＴＣＣＧＡＡＡＧＴＴＴＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＴＡＴＡＡＡＡＡＧＣＧＡＡＧＣＧＣＧＣＧＧＣＧＧＧＣＧＧＧＡＧＴＣＧＣＴＧＣＧＴＴＧＣＣＴＴＣＧＣＣＣＣＧＴＧＣＣＣＣＧＣＴＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣＴＣＧＣＧＣＣＧＣＣＣＧＣＣＣＣＧＧＣＴＣＴＧＡＣＴＧＡＣＣＧＣＧＴＴＡＣＴＣＣＣＡＣＡＧＧＴＧＡＧＣＧＧＧＣＧＧＧＡＣＧＧＣＣＣＴＴＣＴＣＣＴＣＣＧＧＧＣＴＧＴＡＡＴＴＡＧＣＧＣＴＴＧＧＴＴＴＡＡＴＧＡＣＧＧＣＴＣＧＴＴＴＣＴＴＴＴＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＧＴＧＡＡＡＧＣＣＴＴＡＡＡＧＧＧＣＴＣＣＧＧＧＡＧＧＧＣＣＣＴＴＴＧＴＧＣＧＧＧＧＧＧＧＡＧＣＧＧＣＴＣＧＧＧＧＧＧＴＧＣＧＴＧＣＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＧＧＡＧＣＧＣＣＧＣＧＴＧＣＧＧＣＣＣＧＣＧＣＴＧＣＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧＴＧＡＧＣＧＣＴＧＣＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＴＴＴＧＴＧＣＧＣＴＣＣＧＣＧＴＧＴＧＣＧＣＧＡＧＧＧＧＡＧＣＧＣＧＧＣＣＧＧＧＧＧＣＧＧＴＧＣＣＣＣＧＣＧＧＴＧＣＧＧＧＧＧＧＧＣＴＧＣＧＡＧＧＧＧＡＡＣＡＡＡＧＧＣＴＧＣＧＴＧＣＧＧＧＧＴＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＧＧＧＧＧＴＧＡＧＣＡＧＧＧＧＧＴＧＴＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＧＴＣＧＧＧＣＴＧＴＡＡＣＣＣＣＣＣＣＣＴＧＣＡＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＧＡＧＴＴＧＣＴＧＡＧＣＡＣＧＧＣＣＣＧＧＣＴＴＣＧＧＧＴＧＣＧＧＧＧＣＴＣＣＧＴＧＣＧＧＧＧＣＧＴＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＴＣＧＣＣＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＴＧＧＣＧＧＣＡＧＧＴＧＧＧＧＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＣＧＣＣＴＣＧＧＧＣＣＧＧＧＧＡＧＧＧＣＴＣＧＧＧＧＧＡＧＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＣＣＧＧＡＧＣＧＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧＴＣＧＡＧＧＣＧＣＧＧＣＧＡＧＣＣＧＣＡＧＣＣＡＴＴＧＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＴＡＡＴＣＧＴＧＣＧＡＧＡＧＧＧＣＧＣＡＧＧＧＡＣＴＴＣＣＴＴＴＧＴＣＣＣＡＡＡＴＣＴＧＴＧＣＧＧＡＧＣＣＧＡＡＡＴＣＴＧＧＧＡＧＧＣＧＣＣＧＣＣＧＣＡＣＣＣＣＣＴＣＴＡＧＣＧＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＧＡＡＧＣＧＧＴＧＣＧＧＣＧＣＣＧＧＣＡＧＧＡＡＧＧＡＡＡＴＧＧＧＣＧＧＧＧＡＧＧＧＣＣＴＴＣＧＴＧＣＧＴＣＧＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣＧＴＣＣＣＣＴＴＣＴＣＣＣＴＣＴＣＣＡＧＣＣＴＣＧＧＧＧＣＴＧＴＣＣＧＣＧＧＧＧＧＧＡＣＧＧＣＴＧＣＣＴＴＣＧＧＧＧＧＧＧＡＣＧＧＧＧＣＡＧＧＧＣＧＧＧＧＴＴＣＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＧＴＧＴＧＡＣＣＧＧＣＧＧＣＴＣＴＡＧＡＧＣＣＴＣＴＧＣＴＡＡＣＣＡＴＧＴＴＣＡＴＧＣＣＴＴＣＴＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＡＣＡＧ（ＣＢＡ配列、配列番号３７）、
ＣＴＣＣＴＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＣＴＧＧＴＴＡＴＴＧＴＧＡＣＣＧＧＴＧＣＣＡＣＣ（リンカー配列、配列番号３８）、
ＡＴＧＴＡＣＣＧＧＡＴＧＣＡＧＣＴＧＣＴＧＡＧＣＴＧＴＡＴＣＧＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＡＡＴＴＣＴ（ＩＬ−２分泌シグナル配列、配列番号３９）、
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＣＴＴＧＴＴＣＡＡＣＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＧＡＧＣＴＧＴＧＣＣＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＡＣＴＡＣＧＧＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＣＡＡＡＧＧＣＣＴＴＧＡＡＴＧＧＧＴＣＧＧＡＴＧＧＡＴＣＡＡＣＡＣＣＴＡＣＡＣＣＧＧＣＧＡＧＣＣＡＡＣＡＴＡＣＧＣＣＧＣＣＧＡＣＴＴＣＡＡＧＣＧＧＡＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＣＣＴＧＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＡＧＴＡＴＣＣＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＣＡＣＣＡＧＣＣＡＣＴＧＧＴＡＣＴＴＴＧＡＣＧＴＧＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＣＡＣＡＣＴＧＧＴＣＡＣＡＧＴＧＴＣＴＡＧＣＧＣＣＴＣＴＡＣＡＡＡＧＧＧＣＣＣＣＡＧＣＧＴＴＴＴＣＣＣＡＣＴＧＧＣＴＣＣＴＡＧＣＡＧＣＡＡＧＴＣＴＡＣＣＡＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＡＧＣＣＧＣＴＣＴＧＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＴＣＣＣＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＣＧＴＧＴＣＣＴＧＧＡＡＴＴＣＴＧＧＣＧＣＴＣＴＧＡＣＡＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＴＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＡＡＧＣＡＧＣＧＧＣＣＴＧＴＡＣＴＣＴＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧＴＣＧＴＧＡＣＡＧＴＧＣＣＡＡＧＣＡＧＣＴＣＴＣＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＴＧＴＧＡＡＣＣＡＣＡＡＧＣＣＴＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＧＧＴＧＧＡＡＣＣＣＡＡＧＡＧＣＴＧＣＧＡＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＣＣＧＧＣＡＡＧ（ラニビズマブの重鎖をコードする配列、配列番号５２）、
ＣＧＧＡＡＧＡＧＡＡＧＡ（リンカー配列、配列番号４１）、
ＧＧＣＴＣＴＧＧＣＧＡＡＧＧＣＡＧＡＧＧＣＡＧＣＣＴＧＣＴＴＡＣＡＴＧＴＧＧＣＧＡＣＧＴＧＧＡＡＧＡＧＡＡＣＣＣＣＧＧＡＣＣＴ（Ｔ２Ａ配列、配列番号４２）、
ＡＴＧＴＡＴＡＧＡＡＴＧＣＡＧＣＴＣＣＴＧＴＣＣＴＧＣＡＴＴＧＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＧＣＴＣＴＣＧＴＧＡＣＣＡＡＣＡＧＣ（ＩＬ−２シグナル分泌配列、配列番号４３）、
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＣＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＴＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＴＡＧＣＧＣＣＡＧＣＣＡＧＧＡＣＡＴＣＴＣＣＡＡＣＴＡＣＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＡＡＡＧＣＣＣＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＣＴＡＡＧＧＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＴＴＣＡＣＡＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＣＴＣＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＡＴＣＴＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＡＣＡＧＣＡＣＣＧＴＧＣＣＴＴＧＧＡＣＡＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＡＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＣＧＧＡＣＴＧＴＧＧＣＣＧＣＴＣＣＴＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＴＣＣＡＣＣＴＡＧＣＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＣＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＡＧＡＡＧＣＣＡＡＧＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＡＧＴＧＧＡＣＡＡＴＧＣＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣＡＡＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡＧＣＧＴＧＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＴＣＣＡＡＧＧＡＴＡＧＣＡＣＣＴＡＴＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＧＡＧＣＡＡＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＧＣＡＣＡＡＡＧＴＧＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＧＡＣＣＣＡＣＣＡＧＧＧＣＣＴＴＴＣＴＡＧＣＣＣＴＧＴＧＡＣＣＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＣＧＧＧＧＣＧＡＡＴＧＴ（ラニビズマブの軽鎖をコードする配列、配列番号５６）、
ＧＧＣＴＣＣＧＧＡＧＡＧＧＧＣＡＧＡＧＧＡＡＧＴＣＴＧＣＴＡＡＣＡＴＧＣＧＧＴＧＡＣＧＴＣＧＡＧＧＡＧＡＡＴＣＣＴＧＧＣＣＣＡ（リンカー配列、配列番号５７）、
ＡＴＧＧＡＧＡＧＣＧＡＣＧＡＧＡＧＣＧＧＣＣＴＧＣＣＣＧＣＣＡＴＧＧＡＧＡＴＣＧＡＧＴＧＣＣＧＣＡＴＣＡＣＣＧＧＣＡＣＣＣＴＧＡＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＴＴＣＧＡＧＣＴＧＧＴＧＧＧＣＧＧＣＧＧＡＧＡＧＧＧＣＡＣＣＣＣＣＧＡＧＣＡＧＧＧＣＣＧＣＡＴＧＡＣＣＡＡＣＡＡＧＡＴＧＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＴＴＣＡＧＣＣＣＣＴＡＣＣＴＧＣＴＧＡＧＣＣＡＣＧＴＧＡＴＧＧＧＣＴＡＣＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＡＣＴＴＣＧＧＣＡＣＣＴＡＣＣＣＣＡＧＣＧＧＣＴＡＣＧＡＧＡＡＣＣＣＣＴＴＣＣＴＧＣＡＣＧＣＣＡＴＣＡＡＣＡＡＣＧＧＣＧＧＣＴＡＣＡＣＣＡＡＣＡＣＣＣＧＣＡＴＣＧＡＧＡＡＧＴＡＣＧＡＧＧＡＣＧＧＣＧＧＣＧＴＧＣＴＧＣＡＣＧＴＧＡＧＣＴＴＣＡＧＣＴＡＣＣＧＣＴＡＣＧＡＧＧＣＣＧＧＣＣＧＣＧＴＧＡＴＣＧＧＣＧＡＣＴＴＣＡＡＧＧＴＧＡＴＧＧＧＣＡＣＣＧＧＣＴＴＣＣＣＣＧＡＧＧＡＣＡＧＣＧＴＧＡＴＣＴＴＣＡＣＣＧＡＣＡＡＧＡＴＣＡＴＣＣＧＣＡＧＣＡＡＣＧＣＣＡＣＣＧＴＧＧＡＧＣＡＣＣＴＧＣＡＣＣＣＣＡＴＧＧＧＣＧＡＴＡＡＣＧＡＴＣＴＧＧＡＴＧＧＣＡＧＣＴＴＣＡＣＣＣＧＣＡＣＣＴＴＣＡＧＣＣＴＧＣＧＣＧＡＣＧＧＣＧＧＣＴＡＣＴＡＣＡＧＣＴＣＣＧＴＧＧＴＧＧＡＣＡＧＣＣＡＣＡＴＧＣＡＣＴＴＣＡＡＧＡＧＣＧＣＣＡＴＣＣＡＣＣＣＣＡＧＣＡＴＣＣＴＧＣＡＧＡＡＣＧＧＧＧＧＣＣＣＣＡＴＧＴＴＣＧＣＣＴＴＣＣＧＣＣＧＣＧＴＧＧＡＧＧＡＧＧＡＴＣＡＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＧＡＧＣＴＧＧＧＣＡＴＣＧＴＧＧＡＧＴＡＣＣＡＧＣＡＣＧＣＣＴＴＣＡＡＧＡＣＣＣＣＧＧＡＴＧＣＡＧＡＴＧＣＣＧＧＴＧＡＡＧＡＡＴＡＡ（ＴｕｒｂｏＧＦＰをコードする配列、配列番号５８）、
ＧＡＧＣＴＣＧＣＴＧＡＴＣＡＧＣＣＴＣＧＡ（リンカー配列、配列番号４５）、
ＣＴＧＴＧＣＣＴＴＣＴＡＧＴＴＧＣＣＡＧＣＣＡＴＣＴＧＴＴＧＴＴＴＧＣＣＣＣＴＣＣＣＣＣＧＴＧＣＣＴＴＣＣＴＴＧＡＣＣＣＴＧＧＡＡＧＧＴＧＣＣＡＣＴＣＣＣＡＣＴＧＴＣＣＴＴＴＣＣＴＡＡＴＡＡＡＡＴＧＡＧＧＡＡＡＴＴＧＣＡＴＣＧＣＡＴＴＧＴＣＴＧＡＧＴＡＧＧＴＧＴＣＡＴＴＣＴＡＴＴＣＴＧＧＧＧＧＧＴＧＧＧＧＴＧＧＧＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＧＧＧＡＧＧＡＴＴＧＧＧＡＡＧＡＣＡＡＴＡＧＣＡＧＧＣＡＴＧＣＴＧＧＧＧＡＴＧＣＧＧＴＧＧＧＣＴＣＴＡＴＧＧ（ウシ成長ホルモンポリＡ尾部配列、配列番号４６）、
ＡＡＧＣＴＴＧＡＡＴＴＣＡＧＣＴＧＡＣＧＴＧＣＣＴＣＧＧＡＣＣＧＣＴ（リンカー配列、配列番号４７）、及び
ＡＧＧＡＡＣＣＣＣＴＡＧＴＧＡＴＧＧＡＧＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＧＧＣＧＡＣＣＡＡＡＧＧＴＣＧＣＣＣＧＡＣＧＣＣＣＧＧＧＣＴＴＴＧＣＣＣＧＧＧＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＣＴＧＣＣＴＧＣＡＧＧ（３’ＩＴＲ、配列番号４８）。
【０２１０】
配列番号３９及び４３の各々によってコードされるＩＬ−２シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号４９）である。配列番号４２によってコードされるＴ２Ａ配列は、ＧＳＧＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号５０）である。配列番号５２は、ラニビズマブの重鎖（配列番号５４）をコードする。配列番号５６は、ベバシズマブの軽鎖（配列番号７）をコードする。配列番号５８は、ＴｕｒｂｏＧＦＰ（ＭＥＳＤＥＳＧＬＰＡＭＥＩＥＣＲＩＴＧＴＬＮＧＶＥＦＥＬＶＧＧＧＥＧＴＰＥＱＧＲＭＴＮＫＭＫＳＴＫＧＡＬＴＦＳＰＹＬＬＳＨＶＭＧＹＧＦＹＨＦＧＴＹＰＳＧＹＥＮＰＦＬＨＡＩＮＮＧＧＹＴＮＴＲＩＥＫＹＥＤＧＧＶＬＨＶＳＦＳＹＲＹＥＡＧＲＶＩＧＤＦＫＶＭＧＴＧＦＰＥＤＳＶＩＦＴＤＫＩＩＲＳＮＡＴＶＥＨＬＨＰＭＧＤＮＤＬＤＧＳＦＴＲＴＦＳＬＲＤＧＧＹＹＳＳＶＶＤＳＨＭＨＦＫＳＡＩＨＰＳＩＬＱＮＧＧＰＭＦＡＦＲＲＶＥＥＤＨＳＮＴＥＬＧＩＶＥＹＱＨＡＦＫＴＰＤＡＤＡＧＥＥ、配列番号５９）をコードする。配列番号５８の最後の３つのヌクレオチドは、終止コドンである。
【０２１１】
図１Ｄは、５’から３’の方向に進む以下のサブ配列を含む３６３１ｂｐの例示的なＡＡＶベクター（配列番号６０）である。
ＣＣＴＧＣＡＧＧＣＡＧＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣＣＧＧＧＣＧＴＣＧＧＧＣＧＡＣＣＴＴＴＧＧＴＣＧＣＣＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴＡＧＧＧＧＴＴＣＣＴＧＣＧＧＣＣＧＣＡＣＧＣＧＴ（５’ＩＴＲ、配列番号３６）、
ＧＡＣＡＴＴＧＡＴＴＡＴＴＧＡＣＴＡＧＴＴＡＴＴＡＡＴＡＧＴＡＡＴＣＡＡＴＴＡＣＧＧＧＧＴＣＡＴＴＡＧＴＴＣＡＴＡＧＣＣＣＡＴＡＴＡＴＧＧＡＧＴＴＣＣＧＣＧＴＴＡＣＡＴＡＡＣＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＴＧＡＣＣＧＣＣＣＡＡＣＧＡＣＣＣＣＣＧＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＡＡＴＧＡＣＧＴＡＴＧＴＴＣＣＣＡＴＡＧＴＡＡＣＧＣＣＡＡＴＡＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＧＴＧＧＡＣＴＡＴＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＣＴＧＣＣＣＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＴＡＴＣＡＴＡＴＧＣＣＡＡＧＴＡＣＧＣＣＣＣＣＴＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＡＴＴＡＴＧＣＣＣＡＧＴＡＣＡＴＧＡＣＣＴＴＡＴＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＴＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＴＡＣＧＴＡＴＴＡＧＴＣＡＴＣＧＣＴＡＴＴＡＣＣＡＴＧＧＧＴＣＧＡＧＧＴＧＡＧＣＣＣＣＡＣＧＴＴＣＴＧＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＣＣＣＡＴＣＴＣＣＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣＡＡＴＴＴＴＧＴＡＴＴＴＡＴＴＴＡＴＴＴＴＴＴＡＡＴＴＡＴＴＴＴＧＴＧＣＡＧＣＧＡＴＧＧＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＡＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＡＧＡＧＧＴＧＣＧＧＣＧＧＣＡＧＣＣＡＡＴＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＧＣＴＣＣＧＡＡＡＧＴＴＴＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＴＡＴＡＡＡＡＡＧＣＧＡＡＧＣＧＣＧＣＧＧＣＧＧＧＣＧＧＧＡＧＴＣＧＣＴＧＣＧＴＴＧＣＣＴＴＣＧＣＣＣＣＧＴＧＣＣＣＣＧＣＴＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣＴＣＧＣＧＣＣＧＣＣＣＧＣＣＣＣＧＧＣＴＣＴＧＡＣＴＧＡＣＣＧＣＧＴＴＡＣＴＣＣＣＡＣＡＧＧＴＧＡＧＣＧＧＧＣＧＧＧＡＣＧＧＣＣＣＴＴＣＴＣＣＴＣＣＧＧＧＣＴＧＴＡＡＴＴＡＧＣＧＣＴＴＧＧＴＴＴＡＡＴＧＡＣＧＧＣＴＣＧＴＴＴＣＴＴＴＴＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＧＴＧＡＡＡＧＣＣＴＴＡＡＡＧＧＧＣＴＣＣＧＧＧＡＧＧＧＣＣＣＴＴＴＧＴＧＣＧＧＧＧＧＧＧＡＧＣＧＧＣＴＣＧＧＧＧＧＧＴＧＣＧＴＧＣＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＧＧＡＧＣＧＣＣＧＣＧＴＧＣＧＧＣＣＣＧＣＧＣＴＧＣＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧＴＧＡＧＣＧＣＴＧＣＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＴＴＴＧＴＧＣＧＣＴＣＣＧＣＧＴＧＴＧＣＧＣＧＡＧＧＧＧＡＧＣＧＣＧＧＣＣＧＧＧＧＧＣＧＧＴＧＣＣＣＣＧＣＧＧＴＧＣＧＧＧＧＧＧＧＣＴＧＣＧＡＧＧＧＧＡＡＣＡＡＡＧＧＣＴＧＣＧＴＧＣＧＧＧＧＴＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＧＧＧＧＧＴＧＡＧＣＡＧＧＧＧＧＴＧＴＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＧＴＣＧＧＧＣＴＧＴＡＡＣＣＣＣＣＣＣＣＴＧＣＡＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＧＡＧＴＴＧＣＴＧＡＧＣＡＣＧＧＣＣＣＧＧＣＴＴＣＧＧＧＴＧＣＧＧＧＧＣＴＣＣＧＴＧＣＧＧＧＧＣＧＴＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＴＣＧＣＣＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＴＧＧＣＧＧＣＡＧＧＴＧＧＧＧＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＣＧＣＣＴＣＧＧＧＣＣＧＧＧＧＡＧＧＧＣＴＣＧＧＧＧＧＡＧＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＣＣＧＧＡＧＣＧＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧＴＣＧＡＧＧＣＧＣＧＧＣＧＡＧＣＣＧＣＡＧＣＣＡＴＴＧＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＴＡＡＴＣＧＴＧＣＧＡＧＡＧＧＧＣＧＣＡＧＧＧＡＣＴＴＣＣＴＴＴＧＴＣＣＣＡＡＡＴＣＴＧＴＧＣＧＧＡＧＣＣＧＡＡＡＴＣＴＧＧＧＡＧＧＣＧＣＣＧＣＣＧＣＡＣＣＣＣＣＴＣＴＡＧＣＧＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＧＡＡＧＣＧＧＴＧＣＧＧＣＧＣＣＧＧＣＡＧＧＡＡＧＧＡＡＡＴＧＧＧＣＧＧＧＧＡＧＧＧＣＣＴＴＣＧＴＧＣＧＴＣＧＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣＧＴＣＣＣＣＴＴＣＴＣＣＣＴＣＴＣＣＡＧＣＣＴＣＧＧＧＧＣＴＧＴＣＣＧＣＧＧＧＧＧＧＡＣＧＧＣＴＧＣＣＴＴＣＧＧＧＧＧＧＧＡＣＧＧＧＧＣＡＧＧＧＣＧＧＧＧＴＴＣＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＧＴＧＴＧＡＣＣＧＧＣＧＧＣＴＣＴＡＧＡＧＣＣＴＣＴＧＣＴＡＡＣＣＡＴＧＴＴＣＡＴＧＣＣＴＴＣＴＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＡＣＡＧ（ＣＢＡ配列、配列番号３７）、
ＣＴＣＣＴＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＣＴＧＧＴＴＡＴＴＧＴＧＡＣＣＧＧＴＧＣＣＡＣＣ（スペーサー、配列番号３８）、
ＡＴＧＴＡＣＣＧＧＡＴＧＣＡＧＣＴＧＣＴＧＡＧＣＴＧＴＡＴＣＧＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＡＡＴＴＣＴ（ＩＬ−２分泌シグナル配列、配列番号３９）、
ＡＧＣＧＡＴＡＣＣＧＧＣＡＧＡＣＣＣＴＴＣＧＴＧＧＡＡＡＴＧＴＡＣＡＧＣＧＡＧＡＴＣＣＣＣＧＡＧＡＴＣＡＴＣＣＡＣＡＴＧＡＣＣＧＡＧＧＧＣＡＧＡＧＡＧＣＴＧＧＴＣＡＴＣＣＣＣＴＧＣＡＧＡＧＴＧＡＣＡＡＧＣＣＣＣＡＡＣＡＴＣＡＣＣＧＴＧＡＣＴＣＴＧＡＡＧＡＡＧＴＴＣＣＣＴＣＴＧＧＡＣＡＣＡＣＴＧＡＴＣＣＣＣＧＡＣＧＧＣＡＡＧＡＧＡＡＴＣＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＣＣＧＧＡＡＧＧＧＣＴＴＣＡＴＣＡＴＣＡＧＣＡＡＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＡＡＡＧＡＧＡＴＣＧＧＣＣＴＧＣＴＧＡＣＣＴＧＴＧＡＡＧＣＣＡＣＣＧＴＧＡＡＴＧＧＣＣＡＣＣＴＧＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＡＣＴＡＣＣＴＧＡＣＡＣＡＣＡＧＡＣＡＧＡＣＣＡＡＣＡＣＣＡＴＣＡＴＣＧＡＣＧＴＧＧＴＧＣＴＧＡＧＣＣＣＴＡＧＣＣＡＣＧＧＣＡＴＴＧＡＡＣＴＧＴＣＴＧＴＧＧＧＣＧＡＧＡＡＧＣＴＧＧＴＧＣＴＧＡＡＣＴＧＴＡＣＣＧＣＣＡＧＡＡＣＣＧＡＧＣＴＧＡＡＣＧＴＧＧＧＣＡＴＣＧＡＣＴＴＣＡＡＣＴＧＧＧＡＧＴＡＣＣＣＣＡＧＣＡＧＣＡＡＧＣＡＣＣＡＧＣＡＣＡＡＧＡＡＡＣＴＧＧＴＣＡＡＣＣＧＧＧＡＣＣＴＧＡＡＡＡＣＣＣＡＧＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＡＧＡＴＧＡＡＧＡＡＡＴＴＣＣＴＧＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＧＡＣＧＧＣＧＴＧＡＣＣＡＧＡＴＣＴＧＡＣＣＡＧＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＣＡＴＧＴＧＣＣＧＣＣＡＧＣＴＣＴＧＧＣＣＴＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＡＡＡＣＡＧＣＡＣＣＴＴＣＧＴＧＣＧＧＧＴＧＣＡＣＧＡＧＡＡＧＧＡＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＣＣＴＧＴＣＣＴＣＣＡＴＧＴＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＡＡＣＴＧＣＴＣＧＧＣＧＧＡＣＣＴＴＣＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＴＣＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＴＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＣＣＣＣＴＧＡＡＧＴＧＡＣＣＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＧＴＧＴＣＣＣＡＣＧＡＧＧＡＴＣＣＣＧＡＡＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＡＴＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＡＧＴＧＣＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＣＣＡＡＧＣＣＴＡＧＡＧＡＧＧＡＡＣＡＧＴＡＣＡＡＴＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＡＧＴＧＧＴＧＴＣＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣＡＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＴＧＣＴＣＣＴＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＴＡＧＧＧＡＡＣＣＣＣＡＧＧＴＴＴＡＣＡＣＡＣＴＧＣＣＴＣＣＡＡＧＣＡＧＧＧＡＣＧＡＧＣＴＧＡＣＡＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＴＴＣＣＧＡＴＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＡＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＣＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＡＡＣＣＣＣＴＣＣＴＧＴＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＧＡＣＧＧＣＴＣＡＴＴＣＴＴＣＣＴＧＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＡＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＴＴＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＣＣＡＧＡＡＧＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＴＣＴＣＣＴＧＧＡＴＡＡ（アフリベルセプトをコードする配列、配列番号６１）、
ＧＡＧＣＴＣＧＣＴＧＡＴＣＡＧＣＣＴＣＧＡ（リンカー配列、配列番号４５）、
ＣＴＧＴＧＣＣＴＴＣＴＡＧＴＴＧＣＣＡＧＣＣＡＴＣＴＧＴＴＧＴＴＴＧＣＣＣＣＴＣＣＣＣＣＧＴＧＣＣＴＴＣＣＴＴＧＡＣＣＣＴＧＧＡＡＧＧＴＧＣＣＡＣＴＣＣＣＡＣＴＧＴＣＣＴＴＴＣＣＴＡＡＴＡＡＡＡＴＧＡＧＧＡＡＡＴＴＧＣＡＴＣＧＣＡＴＴＧＴＣＴＧＡＧＴＡＧＧＴＧＴＣＡＴＴＣＴＡＴＴＣＴＧＧＧＧＧＧＴＧＧＧＧＴＧＧＧＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＧＧＧＡＧＧＡＴＴＧＧＧＡＡＧＡＣＡＡＴＡＧＣＡＧＧＣＡＴＧＣＴＧＧＧＧＡＴＧＣＧＧＴＧＧＧＣＴＣＴＡＴＧＧ（ウシ成長ホルモンポリＡ尾部配列、配列番号４６）、
ＡＡＧＣＴＴＧＡＡＴＴＣＡＧＣＴＧＡＣＧＴＧＣＣＴＣＧＧＡＣＣＧＣＴ（リンカー配列、配列番号４７）、及び
ＡＧＧＡＡＣＣＣＣＴＡＧＴＧＡＴＧＧＡＧＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＧＧＣＧＡＣＣＡＡＡＧＧＴＣＧＣＣＣＧＡＣＧＣＣＣＧＧＧＣＴＴＴＧＣＣＣＧＧＧＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＣＴＧＣＣＴＧＣＡＧＧ（３’ＩＴＲ、配列番号４８）。
【０２１２】
配列番号３９によってコードされるＩＬ−２シグナル配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号４９）である。配列番号６１は、アフリベルセプト（配列番号１２）をコードする。配列番号６１の最後の３つのヌクレオチドは、終止コドンである。
【０２１３】
図１Ａ〜１Ｃに示されるＡＡＶベクターによって駆動されるタンパク質発現を決定するために、ＨＥＫ２９３ＦＴ細胞を、２４ウェルプレートのウェル内で、７×１０４細胞／ウェル（４００μＬ／ウェル）で一晩播種した。ＨＥＫ２９３ＦＴ細胞を、Ｊｅｔｐｒｉｍｅ  Ｐｏｌｙｐｕｓ試薬（図２のレーン２〜５及び１０〜１３のデータを生成するために使用）を使用して、図１Ａ〜１Ｄに示されるＡＡＶベクターで、約８００ｎｇでトランスフェクトした。ＨＥＫ２９３ＦＴ細胞を、２μＭエトポシド（図２のレーン６〜８及び１４〜１６のデータを生成するために使用）の存在下で、９６ウェルプレートのウェル内で、４×１０４細胞／ウェル（５０μＬ／ウェル）で６時間播種した。図１Ａに示されるＡＡＶベクターを、７．５×１０４、２．２×１０５、または５．５×１０５の感染多重度（ＭＯＩ）で培地に添加した。上清を処理後７２時間時点でウェルから収集し、還元条件（図２のレーン２〜８）及び非還元条件（図２のレーン１０〜１６）下で４〜１２％Ｂｏｌｔタンパク質ゲルに充填した。Ｆａｂ領域を検出する抗ラニビズマブ抗体を一次抗体として使用し、抗ヒトＩｇＧを二次抗体として使用した。
【０２１４】
図２に示されるように、重鎖及び軽鎖ラニビズマブをレーン３及び６〜８で検出し、インタクトなラニビズマブ（ヘテロ二量体）をレーン１１及び１４〜１６で検出した。
【０２１５】
実施例２．抗ヒトＶＥＧＦモノクローナル抗体の結合活性
図１Ａに示されるＡＡＶベクターでのトランスフェクション後のＨＥＫ２９３ＦＴ細胞で産生されたベバシズマブの結合活性を決定するための一組の実験を行った。組換えヒトＶＥＧＦを結合剤として使用して緩衝液または条件培地（それぞれ、図３Ａ及び図３Ｂ）中の表面プラズモン共鳴機器（マウス抗ヒトＶＥＧＦモノクローナル抗体（抗ｈＶＥＧＦ  ＭｍＡｂを使用、Ｒ＆Ｄ、ＭＡＢ２９３−１００）を較正するための第１の組の対照実験を行った。図１Ａに示されるＡＡＶベクターでのトランスフェクション後のＨＥＫ２９３ＴＦ細胞の対照条件培地及び条件培地（それぞれ、図４Ａ及び図４Ｂ）のヒトＶＥＧＦ結合活性を決定するための第２の組の対照実験を行った。
【０２１６】
試料である図１Ａに示されるＡＡＶベクターでトランスフェクトされたＨＥＫ２９３ＴＦ細胞由来の培地または条件培地中のベバシズマブ）を、３８４ウェル試料プレート中に１×動態緩衝液（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ、１８−１１０５）中１：１０で希釈することによって調製した。抗ｈＶＥＧＦ  ＭｍＡｂ（Ｒ＆Ｄ、ＭＡＢ２９３−１００）を陽性対照として１０μｇ／ｍＬの濃度で希釈した。捕捉剤である組換えヒトＶＥＧＦ（Ｒ＆Ｄ、２９３−ＶＥ−０１０）を１：２の希釈比で２００ｎＭから３．１２５ｎＭに連続希釈した。
【０２１７】
条件培地試料及びマウス抗ヒトＶＥＧＦ抗体（Ｒ＆Ｄ）試料の結合親和性をＯｃｔｅｔ（登録商標）ＨＴＸバイオセンサー機器内の１×動態緩衝液中で測定した。結合特徴及びＫＤ値をＯｃｔｅｔ（登録商標）分析ソフトウェアであるＤａｔａ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ＨＴ１０．０によって生成した。図３Ａ〜Ｂに示されるように、緩衝液中の抗ｈＶＥＧＦ  ＭｍＡｂのＫＤは、１．０×１０−１２Ｍ未満であり、条件培地中の抗ｈＶＥＧＦ  ＭｍＡｂは、１．０×１０−１２Ｍ未満であった。条件培地自体に結合親和性はなく、強度が非常に低かった（バックグラウンドシグナルのみ）（図４Ａ）。対照的に、図１Ａに示されるＡＡＶベクターでトランスフェクトされたＨＥＫ２９３ＴＦ細胞によって産生されたベバシズマブを含む条件培地は高い結合親和性を有したが、強度は低かった（図４Ｂ、１．０×１０−１２Ｍ未満のＫＤ）。図４Ｃは、充填試料、ならびにそれぞれのＫＤ、ＫＤ誤差、平衡会合定数（ｋａ）、及び解離定数（ｋｄｉｓ）、及びｋｄｉｓ誤差の表を示す。
【０２１８】
要約すれば、抗ｈＶＥＧＦマウス抗体（Ｒ＆Ｄ）は高い結合親和性を示した（ＫＤは１．０×１０−１２Ｍの測定可能な範囲よりも低かった）。ベバシズマブ条件培地試料は高い結合親和性を示した（ＫＤは測定可能な範囲よりも低かった）。対照条件培地試料の結合データからＫＤ値を推定することができなかった。
【０２１９】
要約すれば、これらのデータは、本明細書に提供されるＡＡＶベクターが抗ＶＥＧＦ抗体の発現及び分泌をもたらすことができ、これを使用して哺乳動物の内耳に抗ＶＥＧＦ抗体を発現することができることを示す。
【０２２０】
他の実施形態
本発明はその詳細な説明と併せて説明されているが、前述の説明は、添付の特許請求の範囲の範囲によって定義される本発明の範囲を限定するのではなく例証するよう意図されていることを理解されたい。他の態様、利点、及び修正は、以下の特許請求の範囲の範囲内である。
【０２２１】
本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、参照によりそれらの全体が組み込まれる。矛盾が生じる場合には、定義を含む本明細書が優先される節の見出し、ならびに材料、方法、及び例のいかなる説明も例示にすぎず、限定するようには意図されていない。
【図１Ａ】
2021506861.tif 000006
【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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