(57)【要約】４−（２−（（４−ブロモフェニル）チオ）アセトアミド）−１−フェネチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸の塩化合物が開示される。また、塩化合物を製造する方法および塩化合物の製剤を臨床使用のための剤形にする方法も開示される。塩化合物および塩化合物の製剤を臨床使用のための剤形にする方法もまた開示される。
2021512168.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（２）：
【化１】
2021512168.tif 000028
［式中、
ｎは１、２または３であり、
ｍは０、０．５、１、２、または３であり、
Ｘ＋は陽イオンであり、および
Ｓｏｌは溶媒分子である。］
を有する塩化合物。
【請求項２】
Ｘ＋がカリウムイオン、ナトリウムイオン、カルシウムイオン、または置換されたアンモニア分子である、請求項１に記載の塩化合物。
【請求項３】
Ｘ＋が、コリン、ジエチルアミン、ジメチルアミン、Ｌ−リシン、Ｎ、Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ−エチルグルカミン、１−（２−ヒドロキシエチル）ピロリジン、Ｎ−（フェニルメチル）ベンゼンエタンアミン、アンモニア、酢酸マグネシウム、Ｎ−メチルグルカミン、トロメタミン、４−（２−ヒドロキシエチル）モルホリン、２−（ジエチルアミノ）エタノール、２−ジメチルアミノエタノールから成る群から選択される第四級アミンである、請求項１に記載の塩化合物。
【請求項４】
Ｘ＋がカリウムイオン、ナトリウムイオン、または第四級ジメチルアミンまたは第四級ジエチルアミンである、請求項１に記載の塩化合物。
【請求項５】
ｍが０．５または１である、請求項１に記載の塩化合物。
【請求項６】
ｍが０．５または１である、請求項４に記載の塩化合物。
【請求項７】
４−メチル−ペンタン−２−オン、エタノールまたはジイソプロピルエーテルをさらに含有する溶媒和物である、請求項１に記載の塩化合物。
【請求項８】
エタノールまたはジイソプロピルエーテルをさらに含有する溶媒和物である、請求項４に記載の塩化合物。
【請求項９】
式（２）：
【化２】
2021512168.tif 000029
［式中、
ｎは１、２または３であり、
ｍは０、０．５、１、２、または３であり、
Ｘ＋は陽イオンであり、および
Ｓｏｌは溶媒分子であるである。］を有する塩化合物を調製する方法であって、
ｉ）有機溶媒または水と混合した有機溶媒に式２の化合物の遊離酸の形態を溶解すること；
ｉｉ）式２の遊離酸化合物を滴定するのに必要な化学量論量を超えた塩基を、過剰に添加して、式２の塩化合物の沈殿物を形成すること；および
ｉｉｉ）沈殿物を集めて塩化合物２を得ること
を含む、方法。
【請求項１０】
前記有機溶媒が、１，１−ジメトキシエタン、アセトニトリル、エタノール、１，２−ジクロロエタン、ベンゾニトリル、酢酸エチル、１，４−ジオキサン、アニソール、ヘプタン、２−ブタノール、クメン、ヘキサン、２−プロパノール、シクロヘキサン、酢酸イソプロピル、４−メチルペンタン−２−オン、ジクロロメタン、メタノール、アセトン、ジイソプロピルエーテル（ＤＩＰＥ）、酢酸イソブチル、テトラリン、トルエン、メチルエチルケトン（ＭＥＫ）、Ｎ−メチルピロリドン、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（ＴＭＢＥ）、ニトロメタン、ピリジンまたはテトラヒドロフラン、またはそれらの２種または３種のいずれかの混合物である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記有機溶媒がエタノールまたはジイソプロピルエーテル（ＤＩＰＥ）である、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記塩基が水酸化ナトリウム、水酸化カリウムまたは第四級ジメチルアミンの塩または第四級ジエチルアミンの塩である、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
前記塩基が、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムまたは第四級ジメチルアミンの塩または第四級ジメチルアミンの塩である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記溶媒が、極性有機溶媒と混合された水である、請求項９に記載の方法。
【請求項１５】
極性有機溶媒に対する水の比率が５：１から１０：０．１の範囲である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
溶媒が極性有機溶媒と混合された水である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１７】
極性有機溶媒に対する水の比率が５：１から１０：０．１の範囲である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記溶媒が、極性有機溶媒と混合された水である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１９】
極性有機溶媒に対する水の比率が５：１から１０：０．１の範囲である、請求項１８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、ＦＡＦ−１の阻害剤として有用な塩化合物を含む、様々な製剤および組成物に関する。また、塩化合物を調製するための方法も開示される。
【背景技術】
【０００２】
虚血は、１つまたは複数の血管の収縮または閉塞によって引き起こされる、臓器、組織またはその領域への血流の減少を意味する。一度虚血が発生すると、たとえ再灌流が迅速であっても、神経細胞の損傷のために発達する様々な後遺症が続く。このような虚血は、冠状動脈疾患、心血管疾患、狭心症、頭痛、または血管の閉塞または収縮に関連する他の症状で頻繁に起こり、最終的には不可逆的な損傷、すなわち細胞または組織の壊死をもたらす。
【０００３】
虚血再灌流の間の細胞損傷および機能障害に起因する心筋梗塞、不整脈または心不全などの虚血性疾患は、罹患率が高く、死亡率が高く、完全治癒率が低いことから、この分野では、５０年間にわたって基礎研究および臨床検討が進行中である［Wang, Q. D. et al., Cardiovasc. Res. 55:25-37, 2002］。特に、虚血再灌流障害は、代謝、免疫応答およびイオン恒常性の変化、酸素フリーラジカルの生成などを含有する様々な生理学的メカニズムを伴うことから、免疫調節、細胞死抑制、イオンチャンネル調節、その他に関連した様々な分野で検討が進められている［Hearse, D. J. et al., Mol. Cell. Biochem. 186:177-184, 1998］。このようなメカニズム研究に基づいて、これまで、新規作用部位に焦点を当てた多くの治療学および外科手術が発展してきたが、虚血再灌流障害から心筋細胞を保護する技術は、まだ商業化されていない。したがって、心筋細胞の虚血性損傷の進行を遅延させることができ、再灌流誘発性損傷を減少させることができる、虚血性心疾患を予防および治療するための薬剤または心臓病を防ぐ薬剤が必要とされている。
【０００４】
さらに、血流の回復により虚血が軽減されると、活性酸素種（ＲＯＳ）の生成が促進され、グルタチオンの顕著な減少を引き起こし、より重篤な疾患を引き起こすことが明らかになっている。同様の疾患は、心臓、肝臓、肺、膵臓または血管などの様々な種類の臓器の移植手術の様々な技術の間に血流が停止または回復するときに観測され、臓器の切開および除去においても問題となる。疾患を引き起こすと推測される活性酸素および活性フリーラジカルは、組織の細胞の細胞質およびオルガネラ、特に細胞の主要なエネルギー源としてＡＴＰを製造するミトコンドリアで検出される。ミトコンドリアでは、上記の活性分子は主に呼吸鎖を介して放出され、その濃度は虚血潅流の間に著しく増加することが観測される。
【０００５】
この点に関し、虚血は細胞死または細胞の壊死を導き、特に再灌流後に生じる細胞死は組織損傷の主な原因であるので、虚血性細胞死は様々な虚血性疾患、例えば、脳虚血、心臓虚血、糖尿病性の心血管疾患、心不全、心筋肥大、網膜虚血、虚血性大腸炎および虚血性急性腎不全の原因である。
【０００６】
脳虚血では、血液供給の減少によるエネルギー源の枯渇が虚血性細胞死を誘発する。そして、虚血性細胞死は細胞膜受容体を過剰に活性化し、それに続いて細胞の外側と内側で、それぞれグルタミン酸およびカルシウムの蓄積、および脂質、蛋白質および核酸の損傷を含有する様々な生化学的変化が起こり、最終的に脳組織損傷に至る(Liu, P. K., J. Biomed. Sci. 10:4-13, 2003; Upton, R, Physiol. Rev. 79:1431-1568, 1999; and Renolleau, S. et al., Stroke 29:1454-1460, 1998)。
【０００７】
虚血性心疾患としての心筋梗塞、心不全および不整脈において、虚血性細胞死は、細胞膜への損傷を引き起こす脂質酵素の活性化、およびその後のｐＨおよびカルシウム輸送の変化によって起こることが報告されている［Ferrari, R. Rev. Port. Cardiol. 5:7-20, 2000; Webster, K.A. et al., J. Clin. Invest. 104:239-252, 1999; Katz, A. M. et al., J. Mol Cell. Cardiol.2:11-20, 1985; and Vandeplassche, G. et al., Basic Res. Cardiol. 85:384-391 , 1990］。網膜虚血において、グルタミン酸が媒介する網膜細胞の細胞死は、虚血性細胞死によって媒介されることが知られている［Napper, G. A. et al., Vis. Neurosci. 16:149-158, 1999］。結腸への血液供給不足は虚血性細胞死を引き起こし、次いで細胞壊死および血行動態障害による動脈の閉鎖性損傷は虚血性疾患として虚血性大腸炎を引き起こす［Saegesser, F. et al., Pathobiol. Annu. 9:303-337, 1979］。
【０００８】
一方、虚血性細胞死を阻害するテトラサイクリン系抗生物質の１つであるミノサイクリンは、脳梗塞［Yrjanheikki, J. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 96: 13496-1 3500, 1999］、心筋梗塞［Scarabelli, T. M. et al., J.Am. Coll. Cardiol. 43:865-874, 2004］および虚血性急性腎不全［Wang, J. et al., J. Biol. Chem. 279:19948-19954, 2004］などの虚血性疾患に有効であることが知られており、虚血性細胞死が上記疾患の原因であることが示唆されている。
【０００９】
さらに、虚血によって誘発される神経細胞の損傷または細胞死は、アルツハイマー病、パーキンソン病、緑内障および糖尿病性の神経障害などの様々な神経系疾患、および脳卒中、頭部外傷、新生児低酸素症に起因する病理の主要な原因であることが知られている［G. J. Zoppo et al., Drugs 54, 9 (1997); I . Sziraki et al., Neurosci. 85, 1101 (1998)］。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
式（２）（下記）を有する塩化合物が開示される。
【００１１】
【化１】
2021512168.tif 000003
【００１２】
式（２）：
［ｎは１、２、または３であり、
ｍは０から３までの、非整数であってもよく、ｍは通常０、０．５、１、２、または３であり、
「Ｓｏｌ」は溶媒分子であり、例えば、水またはＣ２〜Ｃ４のアルコールであってもよく、
Ｘ＋は陽イオンであり、例えば、カリウムイオン、ナトリウムイオン、カルシウムイオン、マグネシウムイオン、アンモニウムイオンまたは置換アンモニウムイオンであってもよい。］を有する塩化合物。
【００１３】
式２の塩化合物は、化合物１の遊離塩基または双性イオン（後述する）を、例えば、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、Ｌ−アルギニン、水酸化カルシウム、Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルグリシン、水酸化アンモニウム、水酸化マグネシウム、コリン、ジエチルアミン、Ｌ−リシン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ−エチルグルカミン、酢酸カルシウム、１−（２−ヒドロキシエチル）ピロリジン、Ｎ−（フェニルメチル）ベンゼンエタンアミン、アンモニア、酢酸マグネシウム、Ｎ−メチルグルカミン、トロメタミン、４−（２−ヒドロキシエチル）モルホリン、２−（ジエチルアミノ）エタノールまたは２−ジメチルアミノエタノールで処理することによって調製することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、種々の溶媒中の、水酸化カリウムで調製された試料のＸＲＰＤ回折を示している。１は４−メチル−ペンタン−２−オン由来、２はジイソプロピルエーテル由来、３はエタノール由来、４は遊離酸由来。
【００１５】
【図２】図２は、種々の溶媒中の、水酸化ナトリウムで調製された試料のＸＲＰＤ回折を示している。１はエタノール由来、２はジイソプロピルエーテル由来、３は４−メチル−ペンタン−２−オン由来、４は遊離酸由来。
【００１６】
【図３】図３は、種々の溶媒中の、Ｌ−アルギニンで調製された試料のＸＲＰＤ回折を示している。２はジイソプロピルエーテル由来、３は４−メチル−ペンタン−２−オン由来、４は遊離酸由来。
【００１７】
【図４】図４は、種々の溶媒中の、水酸化カルシウムで調製された試料のＸＲＰＤ回折を示している。１は４−メチル−ペンタン−２−オン由来、２はジイソプロピルエーテル由来、３はエタノール由来、４は遊離酸由来。
【００１８】
【図５】図５は、種々の溶媒中の、Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルグリシンで調製された試料のＸＲＰＤ回折を示している。１は４−メチル−ペンタン−２−オン由来、２はジイソプロピルエーテル由来、３はエタノール由来、４は遊離酸由来。
【００１９】
【図６】図６は、種々の溶媒中の、水酸化アンモニウムで調製された試料のＸＲＰＤ回折を示している。１は４−メチル−ペンタン−２−オン由来、２はジイソプロピルエーテル由来、３はエタノール由来、４は遊離酸由来。
【００２０】
【図７】図７は、種々の溶媒中の、水酸化マグネシウムで調製された試料のＸＲＰＤ回折を示している。１は４−メチル−ペンタン−２−オン由来、２はジイソプロピルエーテル由来、３はエタノール由来、４は遊離酸由来。
【００２１】
【図８】図８は、種々の溶媒中の、コリンで調製された試料のＸＲＰＤ回折を示している。１は４−メチル−ペンタン−２−オン由来、２はジイソプロピルエーテル由来、３はエタノール由来、４は遊離酸由来。
【００２２】
【図９】図９は、種々の溶媒中の、ジエチルアミンで調製された試料のＸＲＰＤ回折を示している。１は４−メチル−ペンタン−２−オン由来、２はジイソプロピルエーテル由来、３はエタノール由来、４は遊離酸由来。
【００２３】
【図１０】図１０は、種々の溶媒中の、Ｌ−リシンで調製された試料のＸＲＰＤ回折を示している。１は４−メチル−ペンタン−２−オン由来、２はジイソプロピルエーテル由来、３はエタノール由来、４は遊離酸由来。
【００２４】
【図１１】図１１は、種々の溶媒中の、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミンで調製された試料のＸＲＰＤ回折を示している。１は４−メチル−ペンタン−２−オン由来、２はジイソプロピルエーテル由来、３はエタノール由来、４は遊離酸由来。
【００２５】
【図１２】図１２は、種々の溶媒中の、Ｎ−エチルグルカミンで調製されたＸＲＰＤ回折を示している。１は４−メチル−ペンタン−２−オン由来、２はジイソプロピルエーテル由来、３はエタノール由来、４は遊離酸由来。
【００２６】
【図１３】図１３は、種々の溶媒中の、酢酸カルシウムで調製された試料のＸＲＰＤ回折を示している。１は４−メチル−ペンタン−２−オン由来、２はジイソプロピルエーテル由来、３はエタノール由来、４は遊離酸由来。
【００２７】
【図１４】図１４は、種々の溶媒中の、Ｎ−（フェニルメチル）ベンゼンエタンアミンで調製された試料のＸＲＰＤ回折を示している。１は４−メチルペンタン−２−オン由来、２はジイソプロピルエーテル由来、３はエタノール由来、４は遊離酸由来。
【００２８】
【図１５】図１５は、種々の溶媒中の、アンモニアで調製された試料のＸＲＰＤ回折を示している。１は４−メチル−ペンタン−２−オン由来、２はジイソプロピルエーテル由来、３はエタノール由来、４は遊離酸由来。
【００２９】
【図１６】図１６は、種々の溶媒中の、酢酸マグネシウムで調製された試料のＸＲＰＤ回折を示している。１は４−メチル−ペンタン−２−オン由来、２はジイソプロピルエーテル由来、３はエタノール由来、４は遊離酸由来。
【００３０】
【図１７】図１７は、種々の溶媒中の、Ｎ−メチルグルカミンで調製された試料のＸＲＰＤ回折を示している。１は４−メチル−ペンタン−２−オン由来、２はジイソプロピルエーテル由来、３はエタノール由来、４は遊離酸由来。
【００３１】
【図１８】図１８は、種々の溶媒中の、トロメタミンで調製された試料のＸＲＰＤ回折を示している。１は４−メチル−ペンタン−２−オン由来、２はジイソプロピルエーテル由来、３はエタノール由来、４は遊離酸由来。
【００３２】
【図１９】図１９は、種々の溶媒中の、４−（２−ヒドロキシエチル）モルホリンで調製された試料のＸＲＰＤ回折を示している。１は４−メチルペンタン−２−オン由来、２はジイソプロピルエーテル由来、３はエタノール由来、４は遊離酸由来。
【００３３】
【図２０】図２０は、ＫＭ−８１９の第２の調製からのカリウム塩式２のＰＬＭ分析を示す。
【００３４】
【図２１】図２１は、ＫＭ−８１９の第２の調製からのカリウム塩式２のＴＧＡ分析を示す。
【００３５】
【図２２】図２２は、ＫＭ−８１９の第２の調製からのカリウム塩式２の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）分析を示す。
【００３６】
【図２３Ａ−Ｅ】図２３Ａ−２３Ｅは、ＫＭ−８１９の第２の調製からのカリウム塩式２のＨＳＭ分析を示す。２３Ａ：カリウム塩の初期条件、２３Ｂ：１２７℃での複屈折の損失、２３Ｃ：１５４℃での初期溶融、２３Ｄ：２１２℃での二次溶融、２３Ｅ：再結晶。
【００３７】
【図２４】図２４は、ＫＭ−８１９の第２の調製からのカリウム塩式２のフーリエ変換赤外分光（ＦＴ−ＩＲ）分析を示す。
【００３８】
【図２５】図２５は、ＫＭ−８１９の第２の調製からのカリウム塩式２の粒度分布（ＰＳＤ）を示す。
【００３９】
【図２６】図２６は、ＫＭ−８１９の第２の調製からのカリウム塩式２の質量プロットにおけるＤＶＳ変化を示す。
【００４０】
【図２７】図２７は、ＫＭ−８１９の第２の調製からのカリウム塩式２のＤＶＳ等温プロットを示す。
【００４１】
【図２８】図２８は、ＫＭ−８１９の第２の調製からのナトリウム塩のＰＬＭ分析を示す。
【００４２】
【図２９Ａ−Ｃ】図２９Ａ−２９Ｃは、ＫＭ−８１９の第２の調製からのナトリウム塩のＨＳＭ分析を示す。２９Ａ：調製した塩、２９Ｂ：１３６℃での溶融、２９Ｃ：再結晶。
【００４３】
【図３０】図３０は、ＫＭ−８１９の第２の調製からのナトリウム塩のＴＧＡ分析を示す。
【００４４】
【図３１】図３１は、ＫＭ−８１９の第２の調製からのナトリウム塩のＤＳＣ分析を示す。
【００４５】
【図３２】図３２は、ＫＭ−８１９の第２の調製からのナトリウム塩のＦＴ−ＩＲ分析を示す。
【００４６】
【図３３】図３３は、ＫＭ−８１９の第２の調製からのナトリウム塩のシンパテック（Ｓｙｍｐａｔｅｃ）粒度分布分析を示す。
【００４７】
【図３４】図３４は、ＫＭ−８１９の第２の調製からのナトリウム塩の質量プロットにおけるＤＶＳ変化を示す。
【００４８】
【図３５】図３５は、ＫＭ−８１９の第２の調製からのナトリウム塩のＤＶＳ等温プロットを示す。
【００４９】
【図３６】図３６は、ＫＭ−８１９の第２の調製からのジエチルアミン塩式２のＰＬＭ分析を示す。
【００５０】
【図３７】図３７は、ＫＭ−８１９の第２の調製からのジエチルアミン塩式２のＴＧＡ分析を示す。
【００５１】
【図３８】図３８は、ＫＭ−８１９の第２の調製からのジエチルアミン塩式２のＤＳＣ分析を示す。
【００５２】
【図３９Ａ−Ｅ】図３９Ａ−Ｅは、ＫＭ−８１９の第２の調製からのジエチルアミン塩式２のＨＳＭ分析を示す。３９Ａ：調製したジエチルアミン塩、３９Ｂ：１５４℃での初期溶融、３９Ｃ：２００℃での粒子運動、３９Ｄ：２０９℃での二次溶融、３９Ｅ：再結晶。
【００５３】
【図４０】図４０は、ＫＭ−８１９の第２の調製からのジエチルアミン塩式２のＦＴ−ＩＲ分析を示す。
【００５４】
【図４１】図４１は、ＫＭ−８１９の第２の調製からのジエチルアミン塩式２のシンパテック粒度分布を示す。
【００５５】
【図４２】図４２は、ＫＭ−８１９の第２の調製からのジエチルアミン塩式２の質量プロットにおけるＤＶＳ変化を示す。
【００５６】
【図４３】図４３は、ＫＭ−８１９の第２の調製からのジエチルアミン塩式２のＤＶＳ等温プロットを示す。
【００５７】
【図４４】図４４は、スクリーニング中に得られた塩の５つのＸＲＰＤ回折パターンのアライメントを示す。スペクトルは２シータスケールで揃えられている。
【００５８】
【図４５】図４５は、塩のスクリーニングからの試料で観測された５つの異なる１Ｈ  ＮＭＲ分析のアライメントを示す。当該スペクトルは、ＤＭＳＯの標準ピークを介して揃えられている。パターンの番号付けはＸＲＰＤパターンの番号付けに対応しており、ＸＲＰＤパターン１を示す塩は多くの場合、ＮＭＲパターン１を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５９】
アミノピラゾール誘導体は、虚血性細胞死を阻害するということが開示されており、したがって、虚血性細胞死によって媒介される、脳虚血、心臓虚血、糖尿病性の心血管疾患、心不全、心筋肥大、網膜虚血、虚血性大腸炎、虚血性急性腎不全、脳卒中、頭部外傷、アルツハイマー病、パーキンソン病、新生児低酸素症、緑内障、および糖尿病性の神経障害などの虚血性疾患を予防および治療するための薬剤、および移植手術中の臓器を保護するための薬剤として使用することができる。
【００６０】
化合物１（ＫＭ−８１９）はパーキンソン病の治療に有用な新規アミノピラゾール誘導体である。開示された化合物１（ＫＭ−８１９）は、Ｗ０２００８／０５１０４７（すべての目的のために、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されたように合成することができ、白色の結晶性粉末を提供する。化合物１（ＫＭ−８１９）の最初の分析は、遊離酸または双性イオンとして、材料についてより理解し、化合物１（ＫＭ−８１９）と調製した任意の塩の間の比較を行うことができるよう基準データを提供するために実施された。
【００６１】
当業者は、化合物１がアニオンを形成することができるカルボキシレート基と、陽イオン性第四級アミンを形成することができる窒素中心と、の両方を含有することを理解する。したがって、“化合物１”は、化合物１の溶液のｐＨに依存して、化合物の遊離酸または双性イオンの形態のいずれかを参照することができる。
【００６２】
【化２】
2021512168.tif 000004
【００６３】
化合物１（ＫＭ−００８１９）の溶解度評価を、水および多様な範囲の有機溶媒を使用して行った。塩のスクリーニング中の使用に適した溶媒のリストを当該評価から決定した。溶媒スクリーニングの完了時に、塩形態を生成する試料の能力を試験するために、１．１当量の水酸化ナトリウム（水溶液）を各試料に添加した。水酸化物を添加すると、いくつかの試料から濁った沈殿が形成し、塩の形成がおそらく起こったであろうことを示し、塩の形成から単離した固体のＸＲＰＤ分析で、５つの異なる回折パターンが観測された。（例えば、実施例８および図１０〜図１９および図４４を参照されたい。）回折パターンを示す試料の１Ｈ  ＮＭＲ分析を使用し、以下に説明するように、ＫＭ−８１９の塩形態を調製する際に使用するのに最も適した溶媒を決定した。図４５は、塩のスクリーニングからの試料の代表的な１Ｈ  ＮＭＲ分析のアライメントを示す。
【００６４】
＜塩のスクリーニング＞
塩のスクリーニングは、実験ごとに３種の溶媒および２２種の塩基と約２５ｍｇの化合物１（ＫＭ−８１９）を使用して行われ、１：１．１（遊離酸：塩基）の比率で添加された。調製後、濾過およびＸＲＰＤによる分析の前に、試料を５日間静置させた。塩が完全に溶媒に可溶性のままである場合には、溶媒を試料からゆっくりと蒸発させた。
【００６５】
新しいＸＲＰＤパターンを示す塩の水溶性評価を行い、５０℃（１．２５ｍｇ／ｍｌの濃度）で一晩振盪した後に完全または部分溶解を示したものを１Ｈ  ＮＭＲでさらに分析した。いくつかの塩はＸＲＰＤパターンおよび１Ｈ  ＮＭＲ化学シフトの違いによって示されるような多形性を示した。
【００６６】
本明細書に開示されているのは、ＫＭ−８１９の新規な薬学的に受容可能な固体形態およびその塩およびそれらの調製の方法である。これらの形態は、塩または塩基を調製し、臨床使用のためにそれらの製剤を調製することで使用することができる。
【００６７】
本明細書に開示されているのは、４−（２−（（４−ブロモフェニル）チオ）アセトアミド）−１−フェネチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（ＫＭ−８１９）の結晶または非晶質形態の新規な薬学的に許容される塩およびそれらの製造の方法である。これらの塩は、ＫＭ−８１９の他の塩または遊離塩基形態を調製するため、および臨床使用のためにその製剤を調製するために使用することができる。
【００６８】
本発明は、下記式２に従った塩および／または溶媒和物（水和物）化合物に関する。
【００６９】
【化３】
2021512168.tif 000005
【００７０】
式２において、ｎは１、２または３の整数であり、
ｍは０から３までの、例えば０．５や１．５などの非整数であってもよく、
「Ｓｏｌ」は溶媒分子であり、例えば、水またはＣ２〜Ｃ４アルコールであってもよく、
Ｘ＋は陽イオンであり、例えば、カリウムイオン、ナトリウムイオン、カルシウムイオン、マグネシウムイオン、アンモニウムイオンまたは置換されたアンモニウムイオンであってもよい。
【００７１】
式２の塩化合物は、化合物１の遊離塩基または双性イオンを、例えば、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、Ｌ−アルギニン、水酸化カルシウム、Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルグリシン、水酸化アンモニウム、水酸化マグネシウム、コリン、ジエチルアミン、Ｌ−リシン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ−エチルグルカミン、酢酸カルシウム、１−（２−ヒドロキシエチル）ピロリジン、Ｎ−（フェニルメチル）ベンゼンエタンアミン、アンモニア、酢酸マグネシウム、Ｎ−メチルグルカミン、トロメタミン、４−（２−ヒドロキシエチル）モルホリン、２−（ジエチルアミノ）エタノールまたは２−ジメチルアミノエタノールで処理することによって調製することができる。
【００７２】
式２の塩化合物のいくつかの例では、ｍは０．５または１であってもよい。そのような例では、Ｘ＋は、カリウムイオン、ナトリウムイオンまたは第四級メチルアミンまたは第四級エチルアミンであってもよい。
【００７３】
塩化合物２は、代替的または追加的に水、エタノールまたはジイソプロピルエーテル、またはそれらの２種または３種のいずれかの混合物を含有する、これらのような溶媒和物の形態であってもよい。溶媒分子は、水分子および化合物１イオンのいずれかまたは両方に対して非整数比で存在することができ、例えば、化合物１イオンの分子あたり０．１、０．２、または０．５溶媒分子である。溶媒分子は、水分子および化合物１イオンのいずれかまたは両方に対して整数比で存在することができ、例えば、化合物１イオンの分子あたり１または２の溶媒分子である。
【００７４】
また、式（２）：
【００７５】
【化４】
2021512168.tif 000006
【００７６】
［式中、
ｎは１、２、または３であり、
ｍは０から３であり、
Ｘ＋は陽イオンであり、
「Ｓｏｌ」は溶媒分子である。］を有する塩化合物を調製する方法であって、
ｉ）有機溶媒または水と混合した有機溶媒に式２の化合物の遊離酸の形態を溶解すること；
ｉｉ）式２の遊離酸化合物を滴定するのに必要な化学量論量を超えた塩基を、過剰に添加して、式２の塩化合物の沈殿物を形成すること；および
ｉｉｉ）沈殿物を集めて塩化合物２を得ること
を含む、方法も開示される。
【００７７】
このような方法では、有機溶媒は、１，１−ジメトキシエタン、アセトニトリル、エタノール、１，２−ジクロロエタン、ベンゾニトリル、酢酸エチル、１，４−ジオキサン、アニソール、ヘプタン、２−ブタノール、クメン、ヘキサン、２−プロパノール、シクロヘキサン、酢酸イソプロピル、４−メチル−ペンタン−２−オン、ジクロロメタン、メタノール、アセトン、ジイソプロピルエーテル（ＤＩＰＥ）、酢酸イソブチル、テトラリン、トルエン、メチルエチルケトン（ＭＥＫ）、Ｎ−メチルピロリドン、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（ＴＭＢＥ）、ニトロメタン、ピリジン、またはテトラヒドロフラン、またはこれらの２種または３種のいずれかの混合物であってもよい。
【００７８】
方法のいくつかの実施態様では、有機溶媒は、エタノールまたはジイソプロピルエーテル（ＤＩＰＥ）であってもよい。
【００７９】
方法のいくつかの実施態様では、塩基は、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化マグネシウム、酢酸マグネシウム、アンモニア、第４級ジメチルアミンの塩または第４級ジエチルアミンの塩であってもよい。
【００８０】
有機溶媒としてエタノールまたはＤＩＰＥ、および塩基として水酸化ナトリウム、水酸化カリウムまたは第四級ジメチルアミンの塩または第四級ジエチルアミンの塩を使用する組み合わせを使用してもよい。
【００８１】
場合によっては、エタノールまたはＤＩＰＥが有機溶媒として使用される。
【００８２】
水は有機溶媒と混合してもよく、そして場合によっては、水はエタノールまたはＤＩＰＥと混合してもよい。
【００８３】
水が有機溶媒と混合される任意の実施形態において、例えば、水は極性有機溶媒と混合され、極性有機溶媒に対する水の比率は５：１から１０：０．１の範囲にわたってもよい。
【００８４】
遊離塩基（双性イオン）化合物１は、緩衝化されていない水、一連の有機溶媒、有機溶媒の混合物および溶媒と緩衝化されていない水との混合物に溶解してもよい。評価した溶媒は、１，１−ジメトキシエタン、アセトニトリル、エタノール、１，２−ジクロロエタン、ベンゾニトリル、酢酸エチル、１，４−ジオキサン、アニソール、ヘプタン、２−ブタノール、クメン、ヘキサン、２−プロパノール、シクロヘキサン、酢酸イソプロピル、４−メチル−ペンタン−２−オン、ジクロロメタン、メタノール、アセトン、ジイソプロピルエーテル（ＤＩＰＥ）、酢酸イソブチル、テトラリン、トルエン、メチルエチルケトン、Ｎ−メチルピロリドン、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、ニトロメタン、ピリジン、テトラヒドロフランであった。溶解度試験例の結果を以下のテーブル２に示す。
【００８５】
有機溶媒は、純粋な、または２種または３種またはそれ以上の有機溶媒の混合物として使用してもよい。遊離塩基（双性イオン）化合物１の溶媒として、水のみを使用してもよいし、水を１種またはそれ以上の有機溶媒と混合してもよい。好ましくは、純粋な極性有機溶媒または溶媒混合物、または極性有機溶媒の水の混合物を使用して、遊離塩基または双性イオン性化合物１を溶解する。
【００８６】
二成分混合物の場合、溶媒混合物中の有機溶媒（好ましくは極性有機溶媒）に対する水の比率は、１：１０から１：０．１、または１：５から１：０．１、または１：２−１：０．１、または１：２−１：０．５、または約１：１であってもよい。
【００８７】
＜塩の形成＞
本開示の塩化合物を調製するための一般的な方法は、以下のスキームに例示される。
【００８８】
スキーム１は、十分に確立された化学を利用する一般的なルートに従った塩形態の合成を示す。
【００８９】
【化５】
2021512168.tif 000007
【００９０】
遊離酸化合物１を秤量して容器に添加し、次いで溶媒を容器に添加する。それから、溶媒中で１Ｍストック溶液として調製した約１．１当量の塩基を添加する。塩基添加時の試料の濁りは、塩の形成が起こっていることを示す。静置後（室温で数時間放置）、試料をろ過し、真空で乾燥し、次いで様々な方法で特徴づけた。
【００９１】
塩の形成に使用される塩基は、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、Ｌ−アルギニン、水酸化カルシウム、Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルグリシン、水酸化アンモニウム、水酸化マグネシウム、コリン、ジエチルアミン、Ｌ−リシン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ−エチルグルカミン、酢酸カルシウム、１−（２−ヒドロキシエチル）ピロリジン、Ｎ−（フェニルメチル）ベンゼンエタンアミン、アンモニア、酢酸マグネシウム、Ｎ−メチルグルカミン、トロメタミン、４−（２−ヒドロキシエチル）モルホリン、２−（ジエチルアミノ）エタノールまたは２−ジメチルアミノエタノールであってもよい。
【００９２】
多くの有機化合物は、非晶質または結晶状態であってもよい、異なった固体形態で存在する。
【００９３】
化合物が異なる結晶相で結晶化する能力は多形と呼ばれる。多形体という用語は、非晶質相（無秩序）、水和物（結晶格子中に存在する水）および溶媒和物（結晶格子中に存在する水以外の溶媒）を含有してもよい。
【００９４】
異なる結晶変態は異なる結晶構造および異なる自由エネルギーを有するため、多形は融点、密度、溶解度、化学的安定性および最終的に生物学的利用能などの異なる物理−化学的性質を示す。
【００９５】
塩化合物２の４−（２−（（４−ブロモフェニル）チオ）アセトアミド）−１−フェネチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸の好ましい塩の例は、以下である。
【００９６】
４−（２−（（４−ブロモフェニル）チオ）アセトアミド）−１−フェネチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸および水酸化カリウムの塩、
【００９７】
４−（２−（（４−ブロモフェニル）チオ）アセトアミド）−１−フェネチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸および水酸化ナトリウムの塩、
【００９８】
４−（２−（（４−ブロモフェニル）チオ）アセトアミド）−１−フェネチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸および水酸化アンモニウムの塩、
【００９９】
４−（２−（（４−ブロモフェニル）チオ）アセトアミド）−１−フェネチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸およびコリンの塩、
【０１００】
４−（２−（（４−ブロモフェニル）チオ）アセトアミド）−１−フェネチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸およびジエチルアミンの塩、
【０１０１】
４−（２−（（４−ブロモフェニル）チオ）アセトアミド）−１−フェネチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸およびＬ−リシンの塩、
【０１０２】
４−（２−（（４−ブロモフェニル）チオ）アセトアミド）−１−フェネチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸およびＮ、Ｎ’ジベンジルエチレンジアミンの塩、
【０１０３】
４−（２−（（４−ブロモフェニル）チオ）アセトアミド）−１−フェネチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸およびＮ−エチルグルカミンの塩、
【０１０４】
４−（２−（（４−ブロモフェニル）チオ）アセトアミド）−１−フェネチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸および酢酸カルシウムの塩、
【０１０５】
４−（２−（（４−ブロモフェニル）チオ）アセトアミド）−１−フェネチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸およびＮ−（フェニルメチル）ベンゼンエタンアミンの塩、
【０１０６】
４−（２−（（４−ブロモフェニル）チオ）アセトアミド）−１−フェネチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸および酢酸マグネシウムの塩、
【０１０７】
４−（２−（（４−ブロモフェニル）チオ）アセトアミド）−１−フェネチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸およびＮ−メチルグルカミンの塩、
【０１０８】
４−（２−（（４−ブロモフェニル）チオ）アセトアミド）−１−フェネチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸およびトロメタミンの塩、および
【０１０９】
４−（２−（（４−ブロモフェニル）チオ）アセトアミド）−１−フェネチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸および４−（２−ヒドロキシエチル）モルホリンの塩。
【０１１０】
塩の形成段階から単離した多くの固体はＸＲＰＤ分析（固体が結晶性であることを示す）で回折パターンを示し、いくつかは遊離酸化合物１のものとは異なる回折パターンを示した。多くの場合、結晶性固体の１Ｈ  ＮＭＲ分析は、化合物１中の−ＣＯＯＨ基がイオン化していることを示した。
【０１１１】
塩の形成に使用するのに適した溶媒は、遊離酸化合物１を完全に溶解する溶媒であり、化合物１から塩化合物２の調製に使用するために適した塩基は、化合物１のカルボン酸水素を完全に置換する塩基である。
【０１１２】
【表１】
2021512168.tif 000008
【実施例】
【０１１３】
以下の実施例では、代表的な実施形態の調製および詳細な特徴付けを記載する。
【０１１４】
４−（２−（（４−ブロモフェニル）チオ）アセトアミド）−１−フェネチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（化合物１）をＷＯ２００８／０５１０４７に記載されているように合成し、白色の結晶性粉末を得た。
【０１１５】
実施例の試料は、開示された方法（実施例１、２、４、５）によって合成し、ＸＲＰＤ、１Ｈ  ＮＭＲ、ＨＰＬＣ化学純度および溶解度により分析した。
【０１１６】
＜使用機器＞
４０μＬアルミ製皿（ベント付き）を使用したＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＰＹＲＩＳ  １  ＤＳＣ。データ収集および分析はＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒの制御および分析ソフトウェア、バージョン１１．０．２．０４６８を使用して行った。
【０１１７】
５ｍｍＱＮＰプローブを備えたＢｒｕｋｅｒ  ４００  Ａｖａｎｃｅ分光計。分析は、ＡＣＤ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  １Ｄ  ＮＭＲプロセッサー、バージョン、１２．０１を用い、機器の制御およびデータ収集は、Ｔｏｐ  Ｓｐｉｎ  バージョン１．３を使用して行った。
【０１１８】
減衰全反射（ＡＴＲ）モジュールを用いたＪａｓｃｏ  ４２０  ＦＴＩＲ。分析およびデータ収集は、Ｊａｓｃｏ  Ｓｐｅｃｔｒａ  Ｍａｎａｇｅｒ  ソフトウェア、バージョン１．５１．００（ビルド１）を使用して行った。
【０１１９】
偏光光学顕微鏡のために、６つの対物レンズ（２．５ｘ、４ｘ、１０ｘ、２０ｘ、４０ｘおよび１００ｘ）および１／１０λの波長板を備えたＯｌｙｍｐｕｓ  ＢＸ  ５３顕微鏡。Ｓｏｎｙ  ＩＣＸ２５２  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｓｃａｎ  ｉｎｔｅｒｌｉｎｅ  ３．３ＭＰ  ＣＣＤカメラ。顕微鏡はＬｉｎｋａｍ  ＬＴＳ４２０  加熱／凍結ステージも備えた。
【０１２０】
ＰＬＭ：Ｑｃａｐｔｕｒｅ−Ｐｒｏ  バージョン７  イメージングソフトウェアによるデータ分析と画像取り込み。
【０１２１】
ＨＳＭ：Ｌｉｎｋｓｙｓ  ３２ＤＶ温度制御およびデジタル映像取り込みソフトウェアによるデータ分析と画像取り込み。
【０１２２】
９ｍｍ空洞および平板試料ホルダーを使用したＢｒｕｋｅｒ−ＡＸＳ  Ｄ８  Ａｄｖａｎｃｅ  ＸＲＰＤ。装置制御およびデータ収集は、Ｄｉｆｆｒａｃ  Ｐｌｕｓ  ＸＲＤ  コマンダー制御ソフトウェア  バージョン２．６．１を備えたＰＣを使用して行い、記録されたデータの分析はＥｖａ  バージョン  １８．０．０．０で行った。
【０１２３】
ＤＶＳ固有の制御ソフトウェア  バージョン１．０．６．０を使用するＳＭＳ  ＤＶＳ固有の動的水蒸気吸着装置。データの分析は、マイクロソフトエクセルに組み込まれたＤＶＳ分析スイートバージョン  ７．０．１３．１マクロプログラムを使用して行った。分析は０〜９０％ＲＨのｗｔ％変化として行い、また等温プロットも調べた。
【０１２４】
セラミックるつぼにアルミ製皿（ベント付き）を使用したＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＴＧＡ  ＰＹＲＩＳ  １。データ分析および収集は、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒの制御および分析ソフトウェア、バージョン１１．０．２．０４６８を使用して行った。
【０１２５】
ｉＴＥＶＡソフトウェアを使用したＴｈｅｒｍｏ−Ｆｉｓｈｅｒ  ｉＣＡＰ  ６５００  ＩＣＰ−ＯＥＳ。
【０１２６】
Ｍｅｔｒｏｈｍ  ８５２  Ｔｉｔｒａｎｔｏは、容積測定および電量測定のＫＦユニットを組み合わせたものである。全ての試料を、容積測定カールフィッシャーモジュールを用いて分析した。
【０１２７】
ＰＤＡ２９９６プローブを備えたＷａｔｅｒｓ−Ａｌｌｉａｎｃｅ  ２６９５  ＨＰＬＣスペクトロメーター。システム制御および処理はＥｍｐｏｗｅｒ  ３  ソフトウェアビルド３４７１で行った。
【０１２８】
加熱モジュール付ＨｅｉｄｏｌｐｈＴｉｔｒａｍａｘ  １０００。
【０１２９】
実施例１：１５００ｐＬの添加の前に、約２５ｍｇの化合物１、４−（２−（（４−ブロモフェニル）チオ）アセトアミド）−１−フェネチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸カリウム塩（ＫＭ−００８１９）を、２ｍＬのＨＰＬＣバイアルに秤量した。結果として生じたスラリーに６０ｕｌの水中の（１Ｍ濃度の）１．１当量の水酸化カリウムを添加した。試料を、８時間サイクル（室温で４時間、続いて５０℃で４時間）を使用して５日間、静置サイクルに置いた。静置後、試料を再検査し、次いで濾過し、真空で乾燥した。
【０１３０】
実施例２：４−（２−（（４−ブロモフェニル）チオ）アセトアミド）−１−フェネチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸カルシウム塩。
【０１３１】
テーブル１に記載のとおり１５００μＬの溶媒を添加する前に、約２５ｍｇの化合物１（ＫＭ−００８１９）を、２ｍＬのＨＰＬＣバイアルに秤量した。結果として生じたスラリーに１．１当量の水酸化カルシウム（５．６ｐｇ）を固体として添加した。試料を、８時間サイクル（室温で４時間、続いて５０℃で４時間）を使用して５日間、静置サイクルに置いた。静置後、試料を再検査し、次いで濾過し、真空で乾燥した。
【０１３２】
実施例３：４−（２−（（４−ブロモフェニル）チオ）アセトアミド）−１−フェネチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸の追加の塩。
【０１３３】
実施例１または実施例２と同様の方法により、以下の化合物の塩を調製した。
【０１３４】
【表２】
2021512168.tif 000009
2021512168.tif 000010
2021512168.tif 000011
2021512168.tif 000012
【０１３５】
実施例４：４−（２−（（４−ブロモフェニル）チオ）アセトアミド）−１−フェネチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸ナトリウム塩。
【０１３６】
６０ｍＬのＤＩＰＥを各容器に添加する前に、約１ｇの化合物１を３×１００ｍＬのバイアルに秤量した。結果として生じた懸濁液に、水中の１Ｍストック溶液として調製した水酸化ナトリウム１．１当量を添加した。塩基を添加すると、反応混合物が白濁するのが観測され、これは塩の形成が起こっていたことを示す。静置後（実施例１と同様に）、試料を濾過し、真空で乾燥した。
【０１３７】
実施例５：４−（２−（（４−ブロモフェニル）チオ）アセトアミド）−１−フェネチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸カリウム塩。
【０１３８】
４−（２−（（４−ブロモフェニル）チオ）アセトアミド）−１−フェネチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸および水酸化カリウムの塩を、実施例４に記載したものと類似の手順を使用して調製した。
【０１３９】
実施例６：４−（２−（（４−ブロモフェニル）チオ）アセトアミド）−１−フェネチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸およびジエチルアミン。
【０１４０】
４−（２−（（４−ブロモフェニル）チオ）アセトアミド）−１−フェネチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸およびジエチルアミンの塩を、実施例４に記載したものと類似の手順を使用して調製した。
【０１４１】
実施例７：４−（２−（（４−ブロモフェニル）チオ）アセトアミド）−１−フェネチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸およびジエチルアミン。
【０１４２】
４８０ｍＬのＤＩＰＥを添加する前に、約８ｇの化合物１の遊離酸を５００ｍＬのガラス容器に秤量した。結果として生じた懸濁液に、ＤＩＰＥ中の１Ｍストック溶液として調製したジエチルアミン１．１当量を添加した。塩基を添加すると、試料が反応混合物から沈降するのが観測され、塩の形成が起こったことが示された。次いで、試料の静置を４日間行った（５０℃で４時間および室温で４時間の８時間サイクル）。静置後、試料を濾過し、４０℃で、２日間真空で乾燥した。
【０１４３】
実施例８：様々な溶媒への溶解性
【０１４４】
溶媒を１００〜２５０ｐＬ刻みで最大１７５０ｐＬまで増加させて添加する前に、約１０ｍｇの化合物１の遊離酸を２ｍＬのＨＰＬＣバイアルに秤量した。溶媒を添加するたびに、溶解を促進するために試料を短時間振盪し、残留固体の徴候がないか視覚的に検査した。いったん溶媒の最大量を添加し、１．１当量の１Ｍの水酸化ナトリウム（水溶液）溶液も添加し、どの溶媒が適切な塩形態をもたらすかについての兆候が与えられた。試料を２日間の静置の前に、目視検査し、その後全てを再び検査した。次いで、全ての試料を室温で蒸発させ、固体材料を生成させた。
【０１４５】
静置後のＸＲＰＤによる回収固体の分析は、頻繁に観測される、試験したほとんどの溶媒から調製したナトリウム塩で観測される回折パターン（パターン１）があることを示した。しかしながら、４つの追加のパターンも、あまり一般的ではないが同定された。これらの５つのパターンを示す塩をさらに１Ｈ  ＮＭＲで分析し、そこから、以下の結論を導いた。
パターン１：結晶性ナトリウム塩（試験した溶媒の大部分から）
パターン２：ナトリウム塩の溶媒和物（２−ブタノールおよび２−プロパノールから）
パターン３：起こり得る新しい多形（４−メチルペンタン−２−オンから）
パターン４：不明な汚染物を含んだナトリウム塩（アセトンから）
パターン５：ナトリウム塩のヘミエタノエート（エタノールから）。
【０１４６】
次のピークのリストを使用して、これらのパターンの１つを別のパターンと区別することができる。２シータの値は小数点以下２桁に丸められる。
【０１４７】
パターン１は、４．６８、６．５４、９．２４、１０．３０、１３．８０、１４．５４、１６．６０、１８．４８、１８．９６、２０．６０、２２．１８、２３．０４、２３．４９、２４．８３、２５．７６、２６．１５、２６．９７、２７．７２、２８．０９、２８．９１、２９．６３、３０．７１、３１．０３、３１．４１、３２．１０、３２．４５、３２．７５、３３．４８、３３．７６および３４．７４の２シータのピークによって特徴付けられる。
【０１４８】
パターン２は、７．００、１１．６１、１５．７５、１９．１９、２０．３０、２０．８６、２３．１９、２６．０８、２６．７２および２９．２９の２シータのピークによって特徴付けられる。
【０１４９】
パターン３は、６．７１、９．４７、１０．５９、１３．１３、１４．０６、１４．８６、１６．３０、１６．９０、１７．６４、１８．８１、１９．２８、２０．９２、２２．４９、２３．３９、２３．８０、２４．７３、２５．１２、２６．０５、２６．４５、２７．２７、２７．６６、２８．３５、２８．７９、２９．２０、２９．９２、３１．００、３２．４６、３４．０１および３５．０９の２シータのピークによって特徴付けられる。
【０１５０】
パターン４は、３．７６、６．４７、７．４６、８．２８、８．６３、１１．３４、１４．４９、１５．７８、１８．９６、１９．２７、１９．９７、２１．６４、２２．１６、２３．２４、２５．６７、２７．６１、２９．７７および３３．２７の２シータのピークによって特徴付けられる。
【０１５１】
パターン５は、５．３０、５．８３、７．０９、１０．５７、１０．９７、１１．７５、１３．０２、１３．８０、１７．３８、１７．９７、１８．２３、１８．７５、２１．２６、２２．１０、２３．１３、２３．５０、２５．１７、２６．８４、２７．３９、２８．７６、２９．１４、２９．５７、３０．０５、３１．１８、３２．１５、３３．４４、３５．０６、３６．２９および３９．２６の２シータのピークによって特徴付けられる。
【０１５２】
テーブル２に溶解度スクリーニングの結果を示す。
【０１５３】
【表３】
2021512168.tif 000013
2021512168.tif 000014
2021512168.tif 000015
【０１５４】
実施例９：粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）分析
【０１５５】
試料は、０バックグラウンドシリコーンウェハー（５  １  ０）を取り付けた試料ホルダー上にこれらを被覆することによって調製した。分析は、４０ｋ、Ｖ４０ｍＡで作動するＣｕ  Ｋａ  Ｘ線源およびＬｙｎｘＥｙｅＴＭ検出器を使用して行った。全試料を２〜４０°２θの範囲にわたって分析した。
【０１５６】
ＸＲＰＤ分析は、塩が遊離酸化合物１と比較して、新規な結晶パターンをもった結晶性固体を生成し、さらに試料は部分的な結晶パターンを与えることを示した（テーブル３および図１〜１９および４４を参照）。
【０１５７】
【表４】
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【０１５８】
実施例１０：水溶性
【０１５９】
水溶性評価は、ＸＲＰＤにより独特なパターンを示した各固体の約５ｍｇを使用して行った。目視検査の前に、これらの試料を、最大４０００ｐＬまでの脱イオン水の一定分量に添加し、試料を添加の間に振盪して溶解を促進した。室温ではいずれの試料も溶解しないことが観測されたが、５０℃で一晩振とうした後、５試料が完全溶解したことが観測され、さらに７試料が部分溶解した。
【０１６０】
約５０ｍｇの各塩を、１ｍＬの脱イオン水を添加する前に、２ｍＬのＨＰＬＣバイアルに秤量した。次いで、試料を予め秤量したフィルターカートリッジに濾過する前に、２５℃で２４時間振盪し、真空下で一晩乾燥させ、再度秤量し、これから溶解度を算出した。実験は５０℃でも繰り返した（テーブル４参照）。
【０１６１】
【表５】
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【０１６２】
実施例１１：プロトン核磁気共鳴分光法（ＮＭＲ）
【０１６３】
ＮＭＲ分析のための試料は、ｄ−ＤＭＳＯに溶解する前に、１．５ｍＬのＨＰＬＣバイアルに５〜７ｍｇの試料を秤量することにより調製し、次いで、試料を、分析のために場とあった５ｍｍＮＭＲ管に移した。標準的な装置設定を使用して試料の分析を行った。
【０１６４】
スクリーニング中に調製した完全に可溶または部分的に可溶な塩の１Ｈ  ＮＭＲデータは、遊離酸のそれと比較して、カルボキシレート基の周りのプロトンに関連したピークに対して全て異なる化学シフトを有することを示した。これは塩の形成を示す（遊離酸化合物１の９．９１、８．２２、４．３８および４．０３におけるピークはシフトにおいて最も顕著な変化を示す、テーブル５参照。いくつかの試料は、不十分な乾燥または溶媒和物の形成のいずれかの結果であり得るＮＭＲに存在する溶媒も示し、水もすべてのＮＭＲデータに見られたが、これは調製に関係しているかもしれない。１Ｈ  ＮＭＲによって対イオンが可視化される場合には、それも定量された（テーブル５参照）。
【０１６５】
【表６】
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【０１６６】
実施例１２：示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
【０１６７】
約１〜３ｍｇの試料を、分析天秤を使用して、予め秤量したアルミニウムＤＳＣ皿上に置いた。試料を１０℃／分で、室温から分解点より約５℃高い温度まで、窒素雰囲気下で加熱した。各データセットを熱の事象について調べた。
【０１６８】
実施例１３：フーリエ変換赤外分光法（ＦＴ−ＩＲ）
【０１６９】
約１〜２ｍｇの試料をＡＴＲモジュールの結晶上に置き、所定の位置に固定した。生成したすべてのデータを、分析ソフトウェアの中でバックグラウンドを除去することによって修正した。
【０１７０】
実施例１４：偏光顕微鏡法（ＰＬＭ）
【０１７１】
１〜２滴の浸漬油およびガラスカバースリップを使用してガラス顕微鏡スライド上に試料を調製した。試料の光学的評価を、交差、部分的交差および非交差位置に偏光子を持つ適切な対物レンズを使用して行った。
【０１７２】
実施例１５：ホットステージ顕微鏡（ＨＳＭ）
【０１７３】
試料をガラス顕微鏡スライド上に調製し、ＴＧＡおよびＤＳＣで使用した温度プロファイルを模倣し、１０℃／分で試料の融点まで加熱させた後、強制冷却せずに室温まで冷却した。
【０１７４】
実施例１６：動的水蒸気吸着（ＤＶＳ）
【０１７５】
約１０〜１５ｍｇの試料を、分析のために差し出す前に、ステンレス鋼ＤＶＳバスケットに秤量した。試料は０〜９０％ＲＨの範囲で、湿度段階ごとに最大６時間分析した。各試料を二度サイクルにさらした。全試料のＸＲＰＤ分析をＤＶＳ後に行った。
【０１７６】
実施例１７：熱重量分析（ＴＧＡ）
【０１７７】
試料を窒素ガス気流下で１０℃／分（特に指示の無い限り）で室温から４００℃に加熱した。各データセットを調べて、試料の質量損失および分解温度を決定した。
【０１７８】
実施例１８：誘導結合プラズマ（ＩＣＰ）
【０１７９】
試験試料約０．１０ｇを硝酸５ｍＬで蒸解し、脱イオン水で定容した。次いで、試験試料をさらに希釈し、一連の校正標準に対して分析して、ナトリウムおよびカリウム含量を決定した。
【０１８０】
実施例１９：カールフィッシャー
【０１８１】
約０．０５ｇの試験試料をＫＦ容器に戻し秤量し、Ｈｙｄｒａｎａｌ（Ｒ）−コンポジット５で滴定し、塩の％含水量を決定した。
【０１８２】
実施例２０：粒子径
【０１８３】
分散剤：空気、レンズ：Ｒ３（カリウムおよびジエチルアミン）およびＲ５（ナトリウム）、圧力：４ｂａｒ、供給速度：４０ｍｍ／ｓ、光学モデル：フラウンホーファー、測定時間：５秒、試料を乾燥粉末として二部ずつ分析し、記録された値の平均を報告した。
【０１８４】
実施例２１：ＨＰＬＣ
【０１８５】
流量：３．０３ｍＬ／ｍｉｎ、方法：アイソクラティック、カラム温度：２５℃、波長範囲：１９０〜４００ｎｍ、溶媒Ａ：２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液−ｐＨ５．５（３０％）、溶剤Ｂ：ＭｅＯＨ（７０％）、注入量：１５μＬ，実行時間：２０分。
【０１８６】
実施例２２：空腹時における人工腸液／摂食時における人工腸液／溶解性
【０１８７】
１ｍＬの空腹時における人工腸液（ＦａＳＳＩＳ）溶液を添加する前に、約２５ｍｇの各塩を２ｍＬのＨＰＬＣバイアルに秤量した。次いで、予め秤量したフィルターカートリッジに濾過する前に、試料を３７℃で２４時間振盪し、真空下で一晩乾燥させ、再度秤量し、これから溶解度を算出した。実験はまた、摂食時における人工腸液（ＦｅＳＳＩＦ）溶液を使用して繰り返された。
【０１８８】
実施例２３：ｐＨ１安定
【０１８９】
１ｍＬのｐＨ１の緩衝液を添加する前に、約２５ｍｇの各塩を２ｍＬのＨＰＬＣバイアルに秤量した。次いで、ＳＰＥカートリッジに濾過する前に、試料を３７℃で４時間振盪し、一晩乾燥させた。
【０１９０】
実施例２４：ｐＨ
【０１９１】
分析の前に、５ｍＬの脱イオン水に各塩の飽和溶液を室温で調製した。
【０１９２】
【表７】
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【０１９３】
【表８】
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【０１９４】
【表９】
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【０１９５】
＜製剤＞
【０１９６】
開示された式２の塩は酸性条件下では安定ではないので、臨床使用のための製剤は、胃の中の条件下（例えば「腸溶性の」製剤）で生存するように、または経口経路（例えば注射またはパッチによって）以外で投与されるように、適切な緩衝および／または被覆を用いて調製されるべきである。
【０１９７】
経口投与、注射、経皮パッチによる投与および、香味剤、緩衝剤、担体などの賦形剤を含有するようなものための剤形での式２の塩の調製および剤形の包装は、当業者の技術の範囲内であると考えられる。例えば、すべての目的のため、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Remington: the Science and Practice of Pharmacy, 22nd Ed., c . 2013 by Pharmaceutical Pressを参照されたい。製剤は、１〜１０００ｍｇ／日の範囲の用量を被験体に提供するように、または１〜１００ｍｇ／日の範囲の用量を被験体に提供するように、または１０〜１００ｍｇ／日の範囲の用量を被験体に提供するように調製および投与されるべきである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３Ａ−Ｅ】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９Ａ−Ｃ】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９Ａ−Ｅ】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【国際調査報告】
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