(57)【要約】  本発明は、オゾン化の程度が制御された、オゾン化オリーブ油の製造方法に関し、該方法は、水存在下で、オリーブ油をオゾンに接触させる少なくとも１つのステップを含む。【選択図】図３
2021504531.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）オリーブ油と、オプションとして、しかし好ましくは水とを含む分散液を調製することと；
（ｉｉ）量Ｑ１のオゾンを前記分散液にバブリングして、オプションとして、水を加えることのうち少なくとも１つのステップとを含む、オゾン化オリーブ油の調製方法であって、
ステップ（ｉｉ）において、オプションとして、前記水を液相又は気相に加えて；
ステップ（ｉ）及び／又は（ｉｉ）において、前記オリーブ油に加える水の総量は、０．５〜１５．０体積％である、オゾン化オリーブ油の調製方法。
【請求項２】
ステップ（ｉ）及び／又は（ｉｉ）において、前記オリーブ油に加える水の総量は、１．１〜１２．０体積％、好ましくは１．１〜１０．０体積％、より好ましくは１．５〜８．０体積％である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記オリーブ油は、２．０ｍｇＫＯＨ／ｇ以下の酸価を有する、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
（ｉ．ａ）オリーブ油と、０．５〜１５．０体積％、好ましくは１．１〜１２．０体積％、より好ましくは１．１〜１０．０体積％、さらに好ましくは１．５〜８．０体積％の水とを含むＷ／Ｏ分散液を調製することと；
（ｉｉ．ａ）量Ｑ１のオゾン、好ましくは無水オゾンを、前記Ｗ／Ｏ分散液にバブリングすることと、を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載のオゾン化オリーブ油の調製方法。
【請求項５】
ステップ（ｉ．ａ）は、
（ｉ．ａ１）量Ｑ２の水と少なくとも１つの植物油、好ましくは、オレイン酸（Ｃ１８：１）とリノール酸（Ｃ１８：２）とを総量３５重量％以上で含む少なくとも１つの植物油を含む予備分散液を調製し、それにより第１分散液を取得することと；
（ｉ．ａ２）前記第１分散液と前記オリーブ油とを混合して、それにより０．５〜１５．０体積％、好ましくは１．１〜１２．０体積％、より好ましくは１．１〜１０．０体積％、さらに好ましくは１．５〜８．０体積％の水を含む第２Ｗ／Ｏ分散液を取得することと、を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
（ｉ．ｂ）オリーブ油と水とを含むＷ／Ｏ分散液を調製することと；
（ｉｉ．ｂ）量Ｑ１のオゾンを前記Ｗ／Ｏ分散液にバブリングして、水を加えることと、を含み、
ステップ（ｉｉ．ｂ）において、前記水を液相又は気相に加えて、
ステップ（ｉ．ｂ）と（ｉｉ．ｂ）において、加える水の総量は、０．５〜１５．０体積％、好ましくは１．１〜１２．０体積％、より好ましくは１．１〜１０．０体積％、さらに好ましくは１．５〜８．０体積％である、請求項１〜３のいずれか１項に記載のオゾン化オリーブ油の調製方法。
【請求項７】
ステップ（ｉ．ｂ）は、
（ｉ．ｂ１）量Ｑ２の水と少なくとも１つの植物油、好ましくは、オレイン酸（Ｃ１８：１）とリノール酸（Ｃ１８：２）とを総量３５重量％以上で含む少なくとも１つの植物油を含む予備分散液を調製し、それにより第１分散液を取得することと；
（ｉ．ｂ２）前記第１分散液とオリーブ油とを混合して、それにより第２Ｗ／Ｏ分散液を取得することと、を含み、
ステップ（ｉ．ｂ１）、（ｉ．ｂ２）及び（ｉｉ．ｂ）において加える水の総量は、０．５〜１５．０体積％、好ましくは１．１〜１２．０体積％、より好ましくは１．１〜１０．０体積％、さらに好ましくは１．５〜８．０体積％である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
ステップ（ｉｉ．ｂ）は、量Ｑ１の無水オゾンを前記Ｗ／Ｏ分散液にバブリングして、水を液相に加えることを含む、請求項６又は７に記載の方法。
【請求項９】
ステップ（ｉ．ｂ）において水を総量の２０〜３０体積％、ステップ（ｉｉ．ｂ）において水を総量の７０〜８０体積％、好ましくは２〜６のアリコートに分割して、より好ましくは等量のアリコートで加えることを含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
水の量Ｑ２は、６０体積％以下、好ましくは５０体積％以下、より好ましくは３０〜５０体積％、さらに好ましくは４０体積％であって、量Ｑ２は、前記予備分散液の総容量に対する水の容量として表される、請求項５又は７に記載の方法。
【請求項１１】
前記少なくとも１つの植物油は、３５〜８５重量％、好ましくは５０〜８０重量％、より好ましくは５５〜７５重量％のオレイン酸（Ｃ１８：１）とリノール酸（Ｃ１８：２）とを含む、請求項５又は７に記載の方法。
【請求項１２】
前記少なくとも１つの植物油は、オリーブ油、オリーブかす油、落花生油、トウモロコシ油、ヒマワリ油、菜種油、ごま油、米油、小麦胚種油、大麻種子油、大豆油、亜麻仁油、扁桃油、ニーム油、ヘーゼルナッツ油、グレープシード油、パンプキンシード油及びその混合物からなる群から選ばれ；前記植物油は、好ましくはオリーブ油である、請求項５、７又は１１に記載の方法。
【請求項１３】
量Ｑ１のオゾンと水蒸気を前記オリーブ油にバブリングすることを含み、前記オリーブ油に加える水の総量は、０．５〜１５．０体積％、好ましくは１．１〜１２．０体積％、より好ましくは１．１〜１０．０体積％、さらに好ましくは１．５〜８．０体積％である、請求項１〜３のいずれか１項に記載のオゾン化オリーブ油の調製方法。
【請求項１４】
オゾンの量Ｑ１は、油１リットルあたり１０．０ｌ／ｈ以下、好ましくは７．５ｌ／ｈ以下、より好ましくは１．０〜７．５ｌ／ｈ、より好ましくは１．１〜７．０ｌ／ｈ、さらに好ましくは１．５〜６．５ｌ／ｈ、さらに好ましくは２．０〜４．０ｌ／ｈのオゾンである、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のオゾン化オリーブ油の調製方法。
【請求項１５】
オゾンをバブリングする前記少なくとも１つのステップは、冷却条件下で、好ましくは３５℃以下、好ましくは３０℃以下、より好ましくは２０〜３０℃の温度で実行される、請求項１〜１４のいずれか１項に記載のオゾン化オリーブ油の調製方法。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法で取得可能で、以下特性の少なくとも１つを有するオゾン化オリーブ油であって、
前記オゾン化オリーブ油は、安定したゲル形状であって、過酸化物価の変化ΔＰＶは≦約１００．０、好ましくは≦７０〜９０で、
【数１】
2021504531.tif 000012
式中の項は、以下の通りである：
ＰＶｔ０＝ステップ（ｂ）の終了時に測定される過酸化物価
ＰＶｔ２４＝ステップ（ｂ）の終了２４か月後に測定される過酸化物価；及び／又は
ＰＶ≦２０００ｍＥｑＯ２／Ｋｇ、好ましくは３５０〜２０００ｍＥｑＯ２／Ｋｇ、より好ましくは３５０〜１０００ｍＥｑＯ２／Ｋｇ、さらに好ましくは４００〜８００ｍＥｑＯ２／Ｋｇとなる過酸化物価を有する、オゾン化オリーブ油。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、オゾン化の程度が制御された、オゾン化オリーブ油の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
オゾン化植物油の臨床用途は、当技術分野において周知である。植物油に含まれる脂肪酸にオゾンを反応させて形成される酸化物は、オゾン化油を局所塗布する場合、殺菌性、抗真菌性及び免疫賦活性効果を有する。
【０００３】
オゾン化植物油は、組織再生を刺激する特性があるため、傷、特に感染創の局所治療に利用可能である。
【０００４】
オゾン化植物油の局所塗布を促進し、該植物油を治療部位に極力長持ちさせるため、オゾン化植物油は、好ましくは、ゲル又は粘度が非常に高い液体の状態で市販されている。完全にオゾン化した植物油は、安定したゲル形状を有し、欧州特許出願第２０２５７４０Ａ１等に記載の方法により、液体植物油を溶媒が存在しない状態で配した反応器内部で、オゾンをバブリングすることで容易に製造可能である。
【０００５】
完全にオゾン化したオゾン化油の過酸化物価（ＰＶ）は、オゾン存在下で異なる過酸化反応を生じる、存在する不飽和脂肪酸の量と質で決まる。過酸化物、ヒドロペルオキシド及びオゾン化物等の形成される過酸化物は、オゾン化油が広範囲な治療作用を有することに貢献する。
【０００６】
液体の粘度は、安定したゲルの形成と同様、植物油のオゾン化の程度が上昇するに伴い増加し、オゾン化の程度は、オゾンと基質が接触する時間に正比例する。欧州特許出願第２０２５７４０Ａ１記載のオゾン化工程により、植物油に含まれる不飽和脂肪酸の数や種類に大きく依存する所定の過酸化物価を、安定したゲルとして示す、オゾン化のみのオリーブ油を得ることが可能である。
【０００７】
このように、本分野において、安定したゲル形状で及び／又は適切な粘度を有するだけでなく、その過酸化物価をオゾン化油の物理的状態に影響せずに変更できる、オゾン化油を調製可能なオリーブ油のオゾン化方法を取得するニーズが求められている。
【０００８】
植物油オゾン化工程は、当技術分野で周知であり、水中油エマルジョンの調製から始まる。これらの系において、油に対する水の含有量は一般的に高く、米国特許出願第２，８６５，９３７では、油と溶媒の総量の１〜６倍、米国特許出願第３，５０４，０３８では油の量の約２．７倍である。
【０００９】
しかしながら、このような工程では、適切な過酸化物価を持つ安定したゲル形状のオゾン化油を得ることはできない。
【００１０】
米国特許出願第２００６／００７４１２９は、１〜５０体積％の水を加えた油又は液体油脂にオゾンをバブリングすることで、過酸化物価が２００〜１２００の範囲であるオゾン化油を得る方法を開示する。例示的実施形態において、使用する油の容量に対し高比率な気体流量（１０リットルの油あたり酸素／オゾンの混合ガスのみからなる２００リットル／時の気体）に加えて、約２３体積％に相当する油１０リットルあたり３リットルの大量の水を使用する。実施例で製造するオゾン化油の過酸化物価は、ヒマワリ油の６００〜８００ユニットとカカオ脂の１０００〜１２００ユニットとの間で変化する。さらに、製造されるオゾン化油は、可変の過酸化物価を持つものの、低粘度（オゾン化ヒマワリ油で３５０ｍＰａ．ｓ未満）を有する。
【００１１】
これに関連して、本発明の主な目的は、好ましくは、安定したゲル形状の、過酸化物価が制御された、オゾン化油の製造方法を提案することである。本発明のさらなる目的は、油の単位容量あたり量が限定された試薬を使用して、短時間でオゾン化油の目標の過酸化物価及び／又は粘度値を得ることを可能にする、オゾン化油の調製方法を提案することである。
【発明の概要】
【００１２】
これらの及びさらなる目的は、後続の詳細な説明の中でより明らかになるが、本発明により達成され、該発明は、その第１側面において、
（ｉ）オリーブ油と、オプションとして、しかし好ましくは水とを含む分散液を調製し；
（ｉｉ）量Ｑ１のオゾンを分散液にバブリングして、オプションとして、水を加えることのうち少なくとも１つのステップを含む、オゾン化オリーブ油の調製方法に関し、
ステップ（ｉｉ）において、水を液相又は気相に加えて；
ステップ（ｉ）及び／又は（ｉｉ）において、少なくとも１つのオリーブ油に加える水の総量は、約０．５〜１５．０体積％である。
【００１３】
さらなる側面において、本発明は、上記記載の方法で得られ／取得可能で、以下特性の少なくとも１つを特徴とするオゾン化オリーブ油に関し、
オゾン化オリーブ油は、安定したゲル形状であって、過酸化物価の変化ΔＰＶは≦約１００．０で、
【数１】
2021504531.tif 000003
式中の項は、以下の通りである：
ＰＶｔo＝ステップ（ｂ）の終了時に測定される過酸化物価
ＰＶｔ２４＝ステップ（ｂ）の終了２４か月後に測定される過酸化物価；及び／又は
ＰＶ≦約２０００ｍＥｑＯ２／Ｋｇとなる過酸化物価を有する。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】実施例８及び９の植物油の過酸化物価の変化のグラフを、反応時間の関数として示す。
【図２】実施例１０及び１１のオゾン化油の過酸化物価の変化のグラフを、反応時間の関数として示す。
【図３】実施例９及び１０のＰＶの変化間の比較を、反応時間の関数として示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明に関して、用語「分散液」は、分散相と混和しない液相が分散した状態（分散相）の、優勢な液相（分散相又は連続相）のみからなる不均一系を表す。分散相を構成する液滴は、約１０−３μｍ以上の大きさを有し得る。本発明に関して、用語「エマルジョン」は、分散相を構成する液滴が約１０−３〜１μｍの大きさを有する分散液を表す。
【００１６】
本発明に関して、用語「Ｗ／Ｏ分散液」又は用語「Ｗ／Ｏエマルジョン」はそれぞれ、油が連続相を構成し、水が分散相を構成する、油中水分散液又はエマルジョンを表す。
【００１７】
本発明に関して、用語、安定した「分散液（又はエマルジョン）」は、分散液（又はエマルジョン）を約２５℃で約５分間静止状態に維持する場合、分散相を構成する液滴が結果形成される連続相と合体しない分散液（又はエマルジョン）を表す。
【００１８】
本明細書及び添付請求項において、用語「植物油」は、含油植物の果実や種子から一般的に得られるエステル化脂質を主成分とする、２５℃、１０１．３ｋＰａでの液体混合物を表す。
【００１９】
本発明に関して、用語「オレイン酸」、「リノール酸」、またより一般的には「脂肪酸」はそれぞれ、エステル化形状、好ましくはトリグリセリド形状の植物油に存在するオレイン酸、リノール酸及び脂肪酸を表す。用語「遊離脂肪酸」は、本発明に関して、非エステル化脂肪酸を示すよう使用される。
【００２０】
第１の側面において、本発明は、オゾン化オリーブ油の調製方法に関し、
（ｉ）オリーブ油と、オプションとして、しかし好ましくは水とを含む分散液を調製し；
（ｉｉ）量Ｑ１のオゾンを分散液にバブリングして、オプションとして、水を加えることのうち少なくとも１つのステップを含む方法であって、
ステップ（ｉｉ）において、オプションとして、水を液相又は気相に加えて；
ステップ（ｉ）及び／又は（ｉｉ）において、オリーブ油に加える水の総量は、約０．５〜１５．０体積％である。
【００２１】
ステップ（ｉ）及び／又は（ｉｉ）のオリーブ油に加える水の総量は、分散液の総容量の体積％として表される。
【００２２】
オリーブ油は、オレイン酸（Ｃ１８：１）とリノール酸（Ｃ１８：２）とを総量３５重量％以上で含み得、オレイン酸とリノール酸の総量は、植物油の総量に対する２種類の脂肪酸の％量の合計として表される。
【００２３】
オリーブ油は、好ましくは、生物由来で及び／又は約２．０ｍｇＫＯＨ／ｇ以下の酸価を有してもよい。
【００２４】
第１実施形態において、該方法は、該方法で使用するオリーブ油と総量の水とを含むＷ／Ｏ分散液を調製するステップを含み得る。本実施形態によれば、少なくとも１つのステップ（ｉｉ）は、水蒸気が存在しない状態で、無水オゾンを使用して実行され得る。
【００２５】
より詳しくは、オゾン化オリーブ油の調製方法は、
（ｉ．ａ）オリーブ油と、約０．５〜１５．０体積％、好ましくは約１．１〜１２．０体積％、より好ましくは約１．１〜１０．０体積％、さらに好ましくは約１．５〜８．０体積％の水とを含む（又はのみからなる）Ｗ／Ｏ分散液を調製し；
（ｉｉ．ａ）量Ｑ１のオゾン、好ましくは無水オゾンを、Ｗ／Ｏ分散液にバブリングする少なくとも１つのステップを含む。
【００２６】
ステップ（ｉ．ａ）は、液相の上記記載の量の水をオリーブ油に加えて、当該分野で通常使用される機械的（例：攪拌装置）及び／又は物理的（例：超音波）分散手段で構成要素を混合することを含み得、好ましくは安定したＷ／Ｏ分散液を得る。１つの変形例によれば、ステップ（ｉ．ａ）は、水を植物油に機械的に分散して、その後、Ｗ／Ｏ分散液を超音波で処理することで実行可能である。
【００２７】
１つの変形例によれば、ステップ（ｉ．ａ）は、
（ｉ．ａ１）量Ｑ２の水と少なくとも１つの植物油、好ましくは、オレイン酸（Ｃ１８：１）とリノール酸（Ｃ１８：２）とを総量約３５重量％以上で含む少なくとも１つの植物油を含む予備分散液、好ましくはプレエマルジョンを調製して、第１分散液、好ましくは第１エマルジョンを取得し；
（ｉ．ａ２）第１分散液とオリーブ油とを混合して、約０．５〜１５．０体積％、好ましくは１．１〜１２．０体積％、より好ましくは１．１〜１０．０体積％、さらに好ましくは１．５〜８．０体積％の水とを含む第２Ｗ／Ｏ分散液、好ましくは第２Ｗ／Ｏエマルジョンを取得することを含む。
【００２８】
量Ｑ１のオゾン、好ましくは無水オゾンを、引き続き、Ｗ／Ｏ分散液にバブリングして、オゾン化オリーブ油を得る。
【００２９】
１つの実施形態において、水の量Ｑ２は、約６０体積％以下、好ましくは約５０体積％以下、より好ましくは約３０〜５０体積％以下、さらに好ましくは約４０体積％以下であり得、量Ｑ２は、予備分散液（又はプレエマルジョン）の総容量に対する水の容量として表される。出願人は、少なくとも１つの植物油に予備分散された水の量Ｑ２が６０体積％を超えると、予備分散液を植物油に加える場合、オゾン化反応（ステップ（ｉｉ．ａ））の最適終了に悪影響を及ぼす、連続形成される水相に分散相が合体することが偶然見出された。
【００３０】
予備分散液ステップ（ｉ．ａ１）は、当該分野で通常使用される機械的（例：攪拌装置）及び／又は物理的（例：超音波）分散液手段を使用して植物油に水を加えることを含み得、好ましくは安定した分散液を得る。
【００３１】
ステップ（ｉ．ａ１）は、約５００〜１５００ｒｐｍ、好ましくは約１０００ｒｐｍの速度で、機械的攪拌装置で構成要素を、安定した予備分散液を得るまで予備分散すること含み得る。オプションとして、予備分散液は、機械的分散の後、超音波でさらに処理可能である。
【００３２】
さらなる実施形態において、オゾン化オリーブ油の調製方法は、オリーブ油と該方法で使用する水の総量よりも少ない水とを含むＷ／Ｏ分散液を調製するステップ（ｉ）を含み得る。
【００３３】
本実施形態において、少なくとも１つのステップ（ｉｉ）は、オゾンと水蒸気をＷ／Ｏ分散液にバブリングする又は液相の水をオリーブ油に加える、及びオゾン、好ましくは無水オゾンを分散液にバブリングすることで実行可能であり、ステップ（ｉ）とステップ（ｉｉ）において加えた水の総量を約０．５〜１５．０体積％とする。
【００３４】
したがって、１つの実施形態において、該方法は、
（ｉ．ｂ）オリーブ油と水とを含むＷ／Ｏ分散液を調製し；
（ｉｉ．ｂ）量Ｑ１のオゾンをＷ／Ｏ分散液にバブリングして、水を加えることを含み、
ステップ（ｉｉ．ｂ）において、水を液相又は気相に加えて、
ステップ（ｉ．ｂ）と（ｉｉ．ｂ）において、加える水の総量は、０．５〜１５．０体積％、好ましくは１．１〜１２．０体積％、より好ましくは１．１〜１０．０体積％、さらに好ましくは１．５〜８．０体積％である。
【００３５】
ステップ（ｉ．ｂ）は、上記記載の通り、ステップ（ｉ．ａ）のために実行可能である。
本実施形態のさらなる１つの変形例において、本発明に係る方法のステップ（ｉ．ｂ）は、
（ｉ．ｂ１）量Ｑ２の水と少なくとも１つの植物油、好ましくはオレイン酸（Ｃ１８：１）とリノール酸（Ｃ１８：２）とを総量約３５重量％以上で含む少なくとも１つの植物油を含む予備分散液、好ましくはプレエマルジョンを調製し、それにより第１分散液を取得し；
（ｉ．ｂ２）第１分散液とオリーブ油とを混合して、それにより第２Ｗ／Ｏ分散液を取得することを含み、
ステップ（ｉ．ｂ１）、（ｉ．ｂ２）及び（ｉｉ．b）において加える水の総量は、約０．５〜１５．０体積％、好ましくは約１．１〜１２．０体積％、より好ましくは約１．１〜１０．０体積％、さらに好ましくは約１．５〜８．０体積％である。
【００３６】
ステップ（ｉ．ｂ１）と（ｉ．ｂ２）は、上記記載の通り、ステップ（ｉ．ａ１）と（ｉ．ａ２）のために実行可能である。
【００３７】
該方法は、液相の水をオリーブ油に加えて、オゾン、好ましくは無水オゾンをＷ／Ｏ分散液にバブリングすることを含み得る。本実施形態によれば、該方法は、ステップ（ｉ．ｂ）において水を総量の約２０〜３０体積％、ステップ（ｉｉ．ｂ）において水を総量の残り約７０〜８０体積％、好ましくは２〜６のアリコートに分割して、より好ましくは等量のアリコートで加えることを含み得る。
【００３８】
同じ総量の水を加えオゾンを使用することを考慮すれば、本実施形態により、過酸化物価がより高いオゾン化オリーブ油を取得できる。さらに利点として、反応時間が、水の部分をステップ（ｉｉ．ｂ）に加えた場合に増加するに伴い、過酸化物価はより規則的に増加し、生成物の特性、特に過酸化物価と粘度を良好に制御可能である。
【００３９】
さらなる実施形態において、該方法は、水蒸気の形状で、ステップ（ｉｉ）のみにおいて、該方法を実行するために総量の水を加えることを含み得る。
本実施形態によれば、オゾン化オリーブ油の調製方法は、オリーブ油に量Ｑ１のオゾンと水蒸気とを含み得、オリーブ油に加える水の総量は、約０．５〜１５．０体積％、好ましくは約１．１〜１２．０体積％、より好ましくは約１．１〜１０．０体積％、さらに好ましくは約１．５〜８．０体積％である。
【００４０】
上記記載の該方法の異なる実施形態において：
ステップ（ｉ）、該当があれば、ステップ（ｉ）のサブステップ及び／又はステップとサブステップ（ｉｉ）で加える水の総量は、約０．５〜１５．０体積％、好ましくは約１．１〜１２．０体積％、より好ましくは約１．１〜１０．０体積％、さらに好ましくは約１．５〜８．０体積％であり；及び／又は
水は、精製水で、好ましくは注入用の水、より好ましくは、イタリア共和国の公式薬局方第１２版で規定された注入用の滅菌水であり得；及び／又は
ステップ（ｉ．ａ１）及び／又は（ｉ．ｂ１）の少なくとも１つの植物油は、オレイン酸（Ｃ１８：１）とリノール酸（Ｃ１８：２）の約３５〜８５重量％、好ましくは約５０〜８０重量％、より好ましくは約５５〜７５重量％の総量を含み得る；及び／又は
少なくとも１つの植物油は、オリーブ油、オリーブかす油、落花生油、トウモロコシ油、ヒマワリ油、菜種油、ごま油、米油、小麦胚種油、大麻種子油、大豆油、亜麻仁油、扁桃油、ニーム油、ヘーゼルナッツ油、グレープシード油、パンプキンシード油及びその混合物から選択可能で、少なくとも１つの植物油は、好ましくはオリーブ油、すなわち、オリーブの木の果実のみ由来の油であり得；及び／又は
オゾンの量Ｑ１は、油１リットルあたり約１０．０ｌ／ｈ以下、好ましくは約７．５ｌ／ｈ以下、より好ましくは約１．０〜７．５ｌ／ｈ、さらに好ましくは約１．１〜７．０ｌ／ｈ、さらに好ましくは約１．５〜６．５ｌ／ｈのオゾンであり得る。さらに好ましい変形例において、量Ｑ１は、油１リットルあたり約２．０〜４．０ｌ／ｈのオゾンであり得；及び／又は
ステップ（ｉ．ａ）、（ｉ．ａ１）、（ｉ．ａ２）、（ｉ．ｂ１）及び（ｉ．ｂ２）の少なくとも１つ、好ましくは該ステップのすべては、約２０〜２５℃の温度及び／又は約１０１．３ｋＰａの圧力で実行可能で；及び／又は
ステップ（ｉ．ａ）、（ｉ．ａ１）、（ｉ．ａ２）、（ｉ．ｂ１）及び（ｉ．ｂ２）の少なくとも１つ、好ましくは該ステップのすべての分散液は、安定した分散液であり得、好ましくはエマルジョン、さらに好ましくは安定したエマルジョンであり得る。
【００４１】
オゾンは不安定性が大きいため、空気又は純酸素のみからなる供給ガスから、当該分野で公知のオゾン発生器により、一般的に現地で製造される。オゾン製造の主な方法は、紫外線による気体流の照射とコロナ放電である。本発明の方法において、好ましくは、コロナ放電を利用するオゾン発生器を使用可能である。
【００４２】
利点として、供給ガスがオゾン発生器に到達する前に、該気体は、気体そのものに存在する水の量を減らすため少なくとも１つの乾燥装置に送気可能であり、それにより乾燥供給ガスを製造する。供給ガスに水が存在するため、オゾン発生器の容量が大幅に低減される。
【００４３】
好ましい実施形態において、オゾン発生器に流れる乾燥供給ガスは、露点が約−５０℃以下、好ましくは約−１００℃以上で約−５０℃以下の乾燥空気であり得る。
【００４４】
１つの実施形態において、上記記載の乾燥空気が供給されるオゾン発生器は、乾燥空気の総容量に対するオゾン濃度が約１〜１５体積％、好ましくは約３体積％である、乾燥空気流を製造可能である。
【００４５】
該方法は、実行する場合、水蒸気とオゾンをバブリングすることを含み、オゾン流は、それ自体が当該分野で公知である加湿装置により、オゾン発生器の下流で加湿可能である。その他の方法として、オゾンは、ステップ（ｉｉ）に乾燥オゾンとして送気可能で、水蒸気はそれ自体を追加流として送気可能である。該方法は、気体−液体反応で通常使用する型の少なくとも１つの気泡塔反応器を具備するシステムで実行可能である。そのような反応器は、それ自体が当該分野で公知であるため、さらなる詳細は記載しない。
【００４６】
植物油のオゾン化反応は発熱反応なため、オゾンをバブリングする少なくとも１つのステップは、好ましくは冷却条件下で実行可能で、反応環境において制御されない温度上昇による油の悪化、又は燃焼反応の誘発を防止する。
【００４７】
本開示に関連して、文言「冷却条件下で」は、植物油のオゾン化により生成される反応熱を反応環境から除去する条件を表す。
【００４８】
したがって、オゾンをバブリング少なくとも１つのステップが実行可能である気泡塔反応器は、一般的に水又はミネラル又はシリコーン油である冷却液が循環する、当該分野で公知の型の外部冷却室（又はジャケット）を具備し得る。
【００４９】
反応器ジャケットに供給される冷却液の温度は、約１５〜２５℃、好ましくは約１８〜２２度であり得、該温度は、約１０１．３ｋＰａの圧力で測定される。
【００５０】
１つの実施形態において、オゾンをバブリングする少なくとも１つのステップは、３５℃以下、好ましくは約３０℃以下、より好ましくは約２０〜３０℃の温度で実行可能である。
【００５１】
オゾンをバブリングする少なくとも１つのステップは、大気圧で、又は好ましくは、真空下で、好ましくは約５１ｋＰａ以下の圧力で実行可能である。
【００５２】
オゾンをバブリングする少なくとも１つのステップは、可変の継続時間を有し得る。
【００５３】
１つの実施形態において、該ステップは、ゲル形状のオゾン化油を取得するまで、実行可能である。１つの実施形態において、オゾンをバブリングする少なくとも１つのステップは、過酸化物価の変化ΔＰＶが約１００．０以下、好ましくは７０〜９０である、安定したゲル形状のオゾン化オリーブ油を取得するまで、実行可能である：
【数２】
2021504531.tif 000004
式中の項は、以下の通りである：
ＰＶｔo＝少なくとも１つのオゾン化ステップの終了時に測定される過酸化物価
ＰＶｔ２４＝少なくとも１つのオゾン化ステップの終了２４か月後に測定される過酸化物価。
【００５４】
１つの実施形態において、オゾンをバブリングする少なくとも１つのステップは、過酸化物価ＰＶｔ０が約２０００ｍＥｑＯ２／Ｋｇ以下、好ましくは約３５０〜２０００ｍＥｑＯ２／Ｋｇ、より好ましくは約３５０〜１０００ｍＥｑＯ２／Ｋｇ、さらに好ましくは約４００〜８００ｍＥｑＯ２／Ｋｇであるオゾン化油を得るまで実行可能である。
【００５５】
オゾンをバブリングする少なくとも１つのステップは、上記で規定されたＰＶｔ０を持つ安定したゲル形状のオゾン化油を得るまで、実行可能である。本発明に係る方法は、約１４〜２４時間、好ましくは約１８〜２４時間持続する少なくとも１つのステップ（ｉｉ）を含み得、そのプロセスの終了時に、得られたオゾン化油は、上記記載の特性の少なくとも１つ、好ましくは全部を有し得る。
【００５６】
オゾンをバブリングする少なくとも１つのステップの終了時に、オゾン流は、遮断され得、オゾン化植物油は、反応環境から除去される。
【００５７】
その他の方法として、所望の特性を持つオゾン化植物油を得るため、本発明に係る方法は、以下から選択されるさらなるステップを含み得る：
（１）酸素をオゾン化油にバブリングして；
（２）０．５〜１５．０体積％の水をオゾン化植物油に分散する。
【００５８】
本発明に係る方法により、粘度と過酸化物価が制御されたオゾン化植物油を取得でき、該油は、好ましくは安定したゲル形状である。少なくとも１つのステップ（ｉｉ）が上記運転パラメータ内で実行される条件を適切に修正することで、安定したゲル形状で高ＰＶｔ０値を持つオゾン化植物油を短時間で得る、すなわち、通常当該分野で使用されるオゾン化工程と比較して、オゾンをバブリングする少なくとも１つのステップの継続時間を大幅に低減可能なことが偶然見出された。
【００５９】
本発明に係るオゾン化方法のさらなる利点は、同一のＰＶｔ０を持つオゾン化油に対して使用する試薬の量が、当該分野で公知のオゾン化工程よりも少ない事実にある。
【００６０】
さらなる側面において、本発明は、上記記載の方法で得られ／取得可能で、以下特性の少なくとも１つを特徴とするオゾン化オリーブ油に関し、
オゾン化オリーブ油は、安定したゲル形状で、過酸化物価の変化ΔＰＶは約１００．０以下、好ましくは７０〜９０で、
【数３】
2021504531.tif 000005
式中の項は、以下の通りである：
ＰＶｔ０＝ステップ（ｂ）終了時に測定される過酸化物価
ＰＶｔ２４＝ステップ（ｂ）終了２４か月後に測定される過酸化物価；及び／又は
オゾン化オリーブ油は、ＰＶｔ０が約２０００ｍＥｑＯ２／Ｋｇ以下、好ましくは約３５０〜２０００ｍＥｑＯ２／Ｋｇ、より好ましくは約３５０〜１０００ｍＥｑＯ２／Ｋｇ、さらに好ましくは約４００〜８００ｍＥｑＯ２／Ｋｇとなる過酸化物価を有する。
【００６１】
上記記載の方法で得られる／取得可能なオゾン化オリーブ油は、殺菌性及び／又は抗真菌性活性を示し、したがって、治療、好ましくは、バクテリア及び／又は真菌で生じるヒト及び動物の感染の局所治療の用途を有し得る。
測定方法
【００６２】
オレイン酸及びリノール酸の量：脂肪酸の比率は、気体−液体クロマトグラフィー（ＧＬＣ）により決定される。
【００６３】
酸価：酸価は、ＩＳＯ６６０−２００９の方法を使用して、定量的に決定される。
【００６４】
過酸化物価：過酸化物とヨウ化カリウムとの反応により遊離されたヨウ素のチオ硫酸ナトリウムによるヨウ素還元滴定（ＡＯＡＣ方法第２８．０２２に準拠）。装置：内部ビュレットとＤＭＭ４７−ＳＣを組み合わせた電極（白金−ｐＨ）とLabX（登録商標）滴定ソフトウェアを設けたメトラー・トレド社製Ｇ２０滴定装置。滴定溶液：チオ硫酸ナトリウム０．１Ｎ（EXAXOL社製、イタリア）。氷酢酸（＃Cat．３３２０９、シグマアルドリッチ社製）とクロロホルム（＃Cat．１３２９５０−１Ｌ、シグマアルドリッチ社製）を、体積比３：２で緩やかに攪拌して混合することで、溶液（「Sol．A」）を調製する。測定前に、電極をそれが保持されている液体から取り出し、電極を脱イオン水で数秒間洗浄する。ヨウ化カリウム（#Cat．３０３１５、シグマアルドリッチ社製）を、滴定装置のビーカー内で約４ｇ秤量し；３０ｍｌの「Sol．A」を攪拌しながら加える。装置のタイマーを４分にセットして、測定を開始し、溶液を攪拌しながら保持する。３分３５秒経過後、２５ｍｌの脱イオン水を溶液に加えて、チオ硫酸ナトリウムで（サンプルなしの）空試験値の自動決定に進む。空試験により、試薬中に不純物がどんなものでも存在すれば生じる電位変化により、過酸化物価の相対誤差を算出可能である。空試験用に使用する滴定剤のミリモル値を、装置はＢ［１］と記録する。サンプルの過酸化物価を決定するには、サンプルを、滴定装置のビーカー内で約２ｇ正確に秤量し、装置で秤量したサンプルの重量（ｐ）を記録し、３０ｍｌの「Sol．A」を加えて、サンプルが完全に溶解するまで攪拌する。約４ｇのＫｌを溶液に加えて滴定し、装置のタイマーを４分にセットして、測定を開始し、溶液を攪拌しながら保持する。３分３５秒経過後、２５ｍｌの脱イオン水を溶液に加えて、チオ硫酸ナトリウムでサンプルから遊離されたヨウ素の自動滴定に進む。電位変化を地図化する曲線を作成し、曲線の変曲点を特定する１１点の最低値を装置が記録できれば、滴定結果は好ましいものとなる。装置は、過酸化物価をｍｅｑ／ＫｇＯ２単位で直接与える。過酸化物価は、同一サンプルで行われる３回の測定の算術平均値として算出される。測定間は、電極をクロロホルムで洗浄する。
【００６５】
実施例１−３及び比較例４
実施例１及び２において、５００ｍｌの第１Ｗ／Ｏ分散液を、表１記載の特徴を有する有機オリーブ油を適当な量で、量Ｑ１の精製水（イタリアの公式薬局方）に分散することで、１０００ｍｌビーカーに調製した。分散液を、速度１０００ｒｐｍで約１．５分間、機械的に攪拌し、淡黄色の乳状Ｗ／Ｏエマルジョンを得た。
【００６６】
実施例３において、量Ｑ２の水を、予混合せずに、機械的攪拌によりオリーブ油に直接分散させた。
【００６７】
表２は、異なる実施例で使用する水の量Ｑ１及びＱ２を示す。
【００６８】
エマルジョンを、水冷ジャケットを設けた気泡塔反応器に前回配した、４．５ｌの同一の有機オリーブ油に加えた。冷却液の温度を、約１８℃に設定した。
【００６９】
約３体積％のオゾンを含む乾燥空気流を、油１リットルあたり約７８ｌ／ｈの流量で（油１リットルあたり約２．３ｌ／ｈのオゾン）、油にバブリングさせた。
【００７０】
反応環境の温度を、冷却液により、３０〜３１℃以下に維持した。
【００７１】
油の３つのサンプルを反応終了時に反応器から取出し、バブリング開始２４時間後に、サンプルごとにＰＶを測定した。表２記載のＰＶは、３つのサンプルで測定した値の平均値として取得した。オゾン化終了時、オゾン化油は、琥珀色ゲル形状であった。
【００７２】
表１−オリーブ油の平均物理化学的特性
【表１】
2021504531.tif 000006
表２
【表２】
2021504531.tif 000007
【００７３】
実施例２のオゾン化油製品のサンプルにおいて、約２５℃で合計０．２６６の残留遊離水について測定した。この値は、約２５℃で含水率０．２３５を持つことを示した、比較例４のサンプルで得られた値と完全に比較可能であった。
【００７４】
比較例５
５００ｍｌの第１Ｗ／Ｏ分散液を、表１記載の特徴を有する有機オリーブ油１００ｍｌに４００ｍｌの精製水（イタリアの公式薬局方）を分散することで、１０００ｍｌビーカーに調製した。分散液を、速度１０００ｒｐｍで約１．５分間、機械的に攪拌し、淡黄色の乳状Ｗ／Ｏエマルジョンを得た。
【００７５】
エマルジョンを、水冷ジャケットを設けた気泡塔反応器に前回配した、９．５ｌの同一の有機オリーブ油に加えた。冷却液の温度を、約１８℃に設定した。約３体積％のオゾンを含む乾燥空気流を、油１リットルあたり約７８ｌ／ｈの流量で（油１リットルあたり約２．３ｌ／ｈのオゾン）、油にバブリングさせた。
【００７６】
バブリング中、反応器の底部に降下した気泡が形成したことで、分散水の合体が発生した。反応終了時、得られた過酸化物価の測定値は、約２００の標準値を示し、脂肪酸の過酸化の低減と不十分さを明らかに示すパラメータとなった。
【００７７】
実施例６
５００ｍｌの第１Ｗ／Ｏ分散液を、表１記載の特徴を有する有機オリーブ油３２５ｍｌに１７５ｍｌの精製水（イタリアの公式薬局方）を分散することで、１０００ｍｌビーカーに調整した。分散液を、速度１０００ｒｐｍで約１．５分間、機械的に攪拌し、淡黄色の乳状Ｗ／Ｏエマルジョンを得た。
【００７８】
エマルジョンを、水冷ジャケットを設けた気泡塔反応器に前回配した、２．５ｌの同一の有機オリーブ油に加えた。冷却液の温度を、約１８℃に設定した。
【００７９】
約３体積％のオゾンを含む乾燥空気流を、油１リットルあたり約３１２ｌ／ｈの流量で（油１リットルあたり約９．４ｌ／ｈのオゾン）、油にバブリングさせた。
【００８０】
反応環境の温度を、冷却液により、３０〜３１℃以下に維持した。
【００８１】
油の３つのサンプルを反応器から取出し、オゾン化反応開始３，８、２４時間後に、サンプルごとにＰＶを測定した。表３記載のＰＶは、３つのサンプルで測定した値の平均値として取得した。
【００８２】
オゾン化終了（２４時間）時、オゾン化油は、琥珀色ゲル形状であった。
表３
【表３】
2021504531.tif 000008
【００８３】
適用７の実施例
５００ｍｌの第１Ｗ／Ｏ分散液を、表１記載の特徴を有する有機オリーブ油３９０ｍｌに１１０ｍｌの精製水（イタリアの公式薬局方）を分散することで、１０００ｍｌビーカーに調整した。分散液を、速度１０００ｒｐｍで約１．５分間、機械的に攪拌し、淡黄色の乳状Ｗ／Ｏエマルジョンを得た。
【００８４】
エマルジョンを、水冷ジャケットを設けた気泡塔反応器に前回配した、９．５ｌの同一の有機オリーブ油に加えた。冷却液の温度を、約１８℃に設定した。
【００８５】
約３体積％のオゾンを含む乾燥空気流を、油１リットルあたり約７８ｌ／ｈの流量で（油１リットルあたり約２．３ｌ／ｈのオゾン）、油にバブリングさせた。
【００８６】
反応環境の温度を、冷却液により、３０〜３１℃以下に維持した。
【００８７】
油の３つのサンプルを反応終了時に反応器から取出し、バブリング開始２４時間後に、ＰＶは、３つのサンプルで測定した値の平均値として約４６０ｍＥｑＯ２／Ｋｇと測定された。表３記載のＰＶは、３つのサンプルで測定した値の平均値として取得した。
【００８８】
オゾン化終了時に、オゾン化油は、琥珀色ゲル形状であった。
【００８９】
得られた生成物は、標準ＵＮＩ  ＥＮ２０６４５の手続きに準拠した、バクテリア及び／又は真菌の増殖阻害の有効性を実証するための検査を行った。
表４−バクテリア増殖の阻害
【表４】
2021504531.tif 000009
【００９０】
表５−真菌増殖の阻害
【表５】
2021504531.tif 000010
【００９１】
表８〜１１
表６記載の量の精製水（イタリアの公式薬局方）を、冷却ジャケットを設けた気泡塔反応器内のオリーブ油に加えて、水を適当な量の油に予備乳化させた。実施例８と９において、すべての水を、反応開始時でオゾンのバブリング開始前に加えた。実施例１０と１１において、表６記載の通り、水の一部をオゾン化開始前に、また別の一部を反応開始直後に加えた。
【００９２】
約３体積％のオゾンを含む乾燥空気流を、油にバブリングさせた。反応器の冷却液の温度を、約１８℃に設定した。反応環境の温度を、冷却液により、３０〜３１℃以下に維持した。油のサンプルをオゾン化反応中と反応終了時の異なる時間に反応器から取出し、バブリング開始約２２／２４時間後に、サンプルごとにＰＶを測定した。実施例８−１１の植物油の過酸化物価の変化を、反応時間の関数として図１と２に示す。
【００９３】
図３は、実施例９及び１０用のＰＶの変化間の比較を、反応時間の関数として示す。
表６
【表６】
2021504531.tif 000011
【図１】
2021504531.tif 000013
【図２】
2021504531.tif 000014
【図３】
2021504531.tif 000015
【国際調査報告】
2021504531.tif 000016
2021504531.tif 000017
2021504531.tif 000018