(57)【要約】  本発明は、急性呼吸不全の治療および／または予防のために上皮バリア機能を回復および／または正常化するための、抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、同等の機能的活性を有するそのホモログ、および／もしくは断片、ならびに／またはその薬学的に活性な塩の使用に関する。特に、抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、同等の機能的活性を有するそのホモログ、および／もしくは断片、ならびに／またはその薬学的に活性な塩は、限定はされないが、ＢＰＤ、ＡＲＤＳ、ＩＲＤＳ、敗血症、ＳＩＲＳ、急性肺水腫、肺炎、間質性肺水腫および心血管系肺障害に罹患している患者のリストから選択される肺胞および／または細気管支における体液の異常蓄積に罹患している患者のような、外傷性肺傷害を有する患者の大部分に顕著な影響を与える上皮細胞バリアを越えた体液移動を中和および／または正常化するのに有用であることが、本明細書において開示される。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
急性呼吸不全（ＡＲＦ）の治療および／または予防における使用のための、配列番号１に示される抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、ならびに／または同等の活性を有し、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むそのホモログおよび／もしくは断片、ならびに／またはその薬学的に活性な塩、ならびに／または前記抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質ならびに／またはそのホモログおよび／もしくは断片が富化されたならびに／または天然に豊富な食品および／もしくは食品サプリメント。
【請求項２】
ＢＰＤ、ＡＲＤＳ、ＩＲＤＳ、敗血症、ＳＩＲＳ、急性肺水腫、肺炎、間質性肺水腫および心血管系肺障害に罹患している患者のリストから選択される肺胞および／または細気管支における体液の異常蓄積を有する患者の急性呼吸不全の治療および／または予防のための、請求項１に記載の使用のための、配列番号１に示される抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、ならびに／または同等の活性を有し、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むそのホモログおよび／もしくは断片、ならびに／またはその薬学的に活性な塩、ならびに／または前記抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質ならびに／またはそのホモログおよび／もしくは断片が富化されたならびに／または天然に豊富な食品および／もしくは食品サプリメント。
【請求項３】
ＡＲＦ、ＩＲＤＳ、または急性ＡＲＤＳおよび重度ＡＲＤＳからなる群から選択されるＡＲＤＳの治療および／または予防における使用のための、配列番号１に示される抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、ならびに／または同等の活性を有し、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むそのホモログおよび／もしくは断片、ならびに／またはその薬学的に活性な塩、ならびに／または前記抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質ならびに／またはそのホモログおよび／もしくは断片が富化されたならびに／または天然に豊富な食品および／もしくは食品サプリメント。
【請求項４】
前記抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質ならびに／またはそのホモログおよび／もしくは断片ならびに／またはその薬学的に活性な塩は、医薬組成物として製剤化されている、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のための、配列番号１に示される抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、ならびに／または同等の活性を有し、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むそのホモログおよび／もしくは断片、ならびに／またはその薬学的に活性な塩、ならびに／または前記抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質ならびに／またはそのホモログおよび／もしくは断片が富化されたならびに／または天然に豊富な食品および／もしくは食品サプリメント。
【請求項５】
前記抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質および／またはそのホモログおよび／または断片および／またはその薬学的に活性な塩は、少なくとも２つ以上の抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質ならびに／またはそのホモログおよび／もしく断片ならびに／またはその薬学的に活性な塩ならびに薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物として製剤化されている、請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用のための、配列番号１に示される抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、ならびに／または同等の活性を有し、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むそのホモログおよび／もしくは断片、ならびに／またはその薬学的に活性な塩、ならびに／または前記抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質ならびに／またはそのホモログおよび／もしくは断片が富化されたならびに／または天然に豊富な食品および／もしくは食品サプリメント。
【請求項６】
前記医薬組成物は、眼内投与、鼻腔内投与、経口投与、局所投与、皮下投与および／または全身投与用に製剤化されている、請求項４または５に記載の使用のための、配列番号１に示される抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、ならびに／または同等の活性を有し、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むそのホモログおよび／もしくは断片、ならびに／またはその薬学的に活性な塩、ならびに／または前記抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質ならびに／またはそのホモログおよび／もしくは断片が富化されたならびに／または天然に豊富な食品および／もしくは食品サプリメント。
【請求項７】
前記医薬組成物は、スプレー、エアゾール、吸入器および／またはネブライザーによる投与のために製剤化されている、請求項４〜６のいずれか１項に記載の使用のための、配列番号１に示される抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、ならびに／または同等の活性を有し、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むそのホモログおよび／もしくは断片、ならびに／またはその薬学的に活性な塩、ならびに／または前記抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質ならびに／またはそのホモログおよび／もしくは断片が富化されたならびに／または天然に豊富な食品および／もしくは食品サプリメント。
【請求項８】
前記医薬組成物は、適用および体重１ｋｇあたり０．１μｇ〜１００ｍｇ、好ましくは適用および体重１ｋｇあたり１〜１００００μｇの用量で血液に全身投与するために製剤化されており、前記投与は、単回投与または毎日の多回適用として行われる、請求項４または５に記載の使用のための、配列番号１に示される抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、ならびに／または同等の活性を有し、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むそのホモログおよび／もしくは断片、ならびに／またはその薬学的に活性な塩、ならびに／または前記抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質ならびに／またはそのホモログおよび／もしくは断片が富化されたならびに／または天然に豊富な食品および／もしくは食品サプリメント。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質ならびに／またはそのホモログおよび／もしくは断片が富化された食品および／または食品サプリメントは、天然に存在する抗分泌因子（ＮＡＳＰ）が富化された卵黄のような、抗分泌因子が富化されたおよび／または天然に豊富な卵黄として提供される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の使用のための、配列番号１に示される抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、ならびに／または同等の活性を有し、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むそのホモログおよび／もしくは断片、ならびに／またはその薬学的に活性な塩、ならびに／または前記抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質ならびに／またはそのホモログおよび／もしくは断片が富化されたならびに／または天然に豊富な食品および／もしくは食品サプリメント。
【請求項１０】
前記卵黄は、配列番号３および／または配列番号４に開示されているアミノ酸配列を有する少なくとも０．０５ｎｇ／ｍｌの抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質断片を含む、請求項９に記載の使用のための、配列番号１に示される抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、ならびに／または同等の活性を有し、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むそのホモログおよび／もしくは断片、ならびに／またはその薬学的に活性な塩、ならびに／または前記抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質ならびに／またはそのホモログおよび／もしくは断片が富化されたならびに／または天然に豊富な食品および／もしくは食品サプリメント。
【請求項１１】
急性呼吸不全（ＡＲＦ）を治療および／または予防するための医薬組成物の製造のための、配列番号１に示される抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、ならびに／または同等の活性を有し、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むそのホモログおよび／もしくは断片、ならびに／またはその薬学的に活性な塩、ならびに／または前記抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質ならびに／またはそのホモログおよび／もしくは断片が富化されたならびに／または天然に豊富な食品および／もしくは食品サプリメントの使用。
【請求項１２】
ＢＰＤ、ＡＲＤＳ、ＩＲＤＳ、敗血症、ＳＩＲＳ、急性肺水腫、肺炎、間質性肺水腫および心血管性肺障害に罹患している患者のリストから選択される肺胞および／または気管支における体液の異常蓄積を有する患者の急性呼吸不全の治療および／または予防のための、請求項１１に記載の、配列番号１に示される抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、ならびに／または同等の活性を有し、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むそのホモログおよび／もしくは断片、ならびに／またはその薬学的に活性な塩、ならびに／または前記抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質ならびに／またはそのホモログおよび／もしくは断片が富化されたならびに／または天然に豊富な食品および／もしくは食品サプリメントの使用。
【請求項１３】
急性呼吸不全の治療および／または予防における使用のための、配列番号１に示される少なくとも１つの抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、ならびに／または同等の活性を有し、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むそのホモログおよび／もしくは断片、ならびに／またはその薬学的に活性な塩、ならびに／または前記抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質ならびに／またはそのホモログおよび／もしくは断片が富化されたならびに／または天然に豊富な食品および／もしくは食品サプリメントを含む、医薬組成物。
【請求項１４】
ＢＰＤ、ＡＲＤＳ、ＩＲＤＳ、敗血症、ＳＩＲＳ、急性肺水腫、肺炎、間質性肺水腫および心血管系肺障害に罹患している患者のリストから選択される肺胞および／または気管支における体液の異常蓄積を有する患者の急性呼吸不全の治療および／または予防のための、請求項１３に記載の使用のための、配列番号１に示される少なくとも１つの抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、ならびに／または同等の活性を有し、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むそのホモログおよび／もしくは断片、ならびに／またはその薬学的に活性な塩、ならびに／または前記抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質ならびに／またはそのホモログおよび／もしくは断片が富化されたならびに／または天然に豊富な食品および／もしくは食品サプリメントを含む、医薬組成物。
【請求項１５】
急性呼吸不全の治療、予防および／または予防的処置のための方法であって、配列番号１に示される抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、ならびに／または配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むそのホモログおよび／もしくは断片、ならびに／またはその薬学的に活性な塩、ならびに／または前記抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質ならびに／またはそのホモログおよび／もしくは断片が富化されたならびに／または天然に豊富な食品および／もしくは食品サプリメントは、それを必要とする哺乳動物に、上皮バリア機能の回復および／または正常化に十分な量で投与される、方法。
【請求項１６】
ＢＰＤ、ＡＲＤＳ、ＩＲＤＳ、敗血症、ＳＩＲＳ、急性肺水腫、肺炎、間質性肺水腫および心血管系肺障害に罹患している患者のリストから選択される肺胞および／または細気管支における体液の異常蓄積を有する患者の急性呼吸不全の治療および／または予防のための、請求項１５に記載の治療、予防および／または予防的処置のための方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、急性呼吸不全（ＡＲＦ）の病態における上皮バリア機能を回復および／または正常化するための、同等の機能的活性を有する、抗分泌因子タンパク質（ＡＦ）、そのホモログ、および／もしくは断片、ならびに／またはその薬学的に活性な塩の使用に関する。
【０００２】
特に、同等の機能的活性を有する抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、そのホモログ、および／もしくは断片、ならびに／またはその薬学的に活性な塩は、本明細書において、ＡＲＤＳ（急性呼吸窮迫症候群）、およびＩＲＤＳ（乳児呼吸窮迫症候群）を含むがこれらに限定されない急性呼吸不全（ＡＲＦ）による肺胞および細気管支への体液の異常な蓄積を伴う患者のような急性呼吸不全の患者の大部分に重大な影響を与える上皮バリアを通過する体液移動の中和および／または正常化に有用であることが開示される。
【背景技術】
【０００３】
上皮バリア
皮膚、ならびに気道、肺、胃腸管や尿路の粘膜など、体内および体表の表面裏打ちは重要な防御線であり、例えば、微生物とその生成物の侵入、ならびに体液と溶質の異常な流れおよび／または分布を防ぐ。
【０００４】
上皮細胞は、通常は敵対的な外部環境と内部環境との間にバリアを確立する。しかしながら、細胞の裏打ちは、体液、溶質、栄養素の吸収ならびに廃棄物を含む幅広い産物の分泌および選択的な透過性バリアを必要とする活動にも関与している。これらの機能は、上皮を、例えば、粘膜免疫系と食事性抗原や微生物産物を含む管腔内容物との間、ならびに封入細胞とその間質液との間の相互作用の中心に配置する。
【０００５】
免疫能力のある細胞、特にリンパ球は、これらの上皮バリアの完全性の維持に関与している。それらは、これらの同じ部位を占める共生生物に対する耐性、および有害な生物とその産物に対する免疫反応に貢献する。
【０００６】
「上皮バリア」という概念は、全ての体表、腔内、および管を覆うか、または裏打ちする上皮細胞の多様なグループの総称である。これは、内皮細胞と呼ばれる血管およびリンパ管を概略する上皮細胞として説明される。上皮細胞は、基底膜によって下層の組織や臓器にしっかりと付着している。上皮細胞は、選択的拡散、取り込み、吸収、分泌、物理的保護、封じ込めのような広範囲の活動を仲介する。上皮バリアの非常に重要な機能は、ルーメンの選択的で正確な分離、ならびに例えば、空気から分離された体液および溶質の組成の制御である。
【０００７】
上皮バリア機能には、細胞の連続層、ならびに上皮細胞間の傍細胞空間を密封する結合部が必要である。原形質膜とともに、細胞間の密着結合は上皮バリア機能の主要な細胞決定因子である。特定のタンパク質変異または異常な調節シグナルの結果としての密着結合構造の破壊は、疾患の原因と結果の両方である可能性がある。
【０００８】
肺では、気道上皮細胞が外界の空気／ガスへのバリアを形成し、粘膜免疫の最前線にいる。上皮頂端結合複合体は、細胞間接着とバリアの完全性を促進する一連のタンパク質サブユニットによって形成される。例えば、喘息または気管支炎の患者における気道上皮の完全性はしばしば障害され、上皮細胞−細胞の接触がさまざまに失われている。修復イベントは、未分化の、乱された、機能不全の細胞の形成をもたらす可能性がある。さらに、気道上皮のバリア機能の損傷は、気道上皮を介した異物の粘膜透過性を高める。このように、気道上皮バリア機能不全は、構造的上皮バリア機能が、免疫系を調節し、それにより調節される上皮の能力と織り交ぜられているため、例えば喘息にとって重要な意味を持ち得ることが示唆されている。
【０００９】
したがって、上皮細胞のバリア機能の低下は、腸管、肺、心血管系、全身性など、多くの疾患状態と関連している。残念ながら、現在の臨床データのほとんどは相関関係にあり、バリア喪失の重要性を解釈する際に原因と結果を区別することは難しい。現在、上皮バリアを修復、回復、調整することを目的としたＦＤＡ承認の薬剤は入手できない。このような療法を開発するためには、疾患の病因とバリア調節のメカニズムの両方のより深い理解を達成しなければならない。
【００１０】
急性呼吸不全（ＡＲＦ）
「急性呼吸不全（ＡＲＦ）」という用語は、本文脈において、「急性肺傷害」、「外傷性肺傷害」および「外傷関連肺傷害」と交換可能に使用され、状態の重症度に依存して軽度、中等度、重度に分けられる、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）を包含する。ＡＲＤＳは、全身性疾患および／または外傷などの肺細胞の傷害に起因するが、これに限定されない。後者は、肺炎、有毒物質の吸入、転倒、交通事故または穿通外傷などの事故、人工呼吸、免疫反応、心血管系機能障害または敗血症が原因であり得る。出血、脳卒中、外傷による脳損傷は、追加の原因である。ＡＲＤＳは、肺胞液クリアランス（ＡＬＣ）容量の減少、肺胞上皮バリアの破壊、および毛細血管内皮透過性の増加に関連しており、肺胞液および細気管支液の蓄積の増加をもたらす。
【００１１】
以前の研究によると、急性肺傷害に関連する外傷の結果としての病態生理は、非外傷誘導性肺傷害に起因するものとは異なる可能性があるとされている。外傷患者は、肺上皮および内皮傷害のバイオマーカーの血漿レベルが有意に低く、以前は急性肺傷害の予後であると確認されていた。結論として、外傷患者は、肺傷害の他の臨床的リスクのある患者よりも、平均して重症度の低い肺上皮および内皮傷害を有する傾向がある（非特許文献１を参照）。故に、肺を負傷した外傷性肺傷害患者の上皮バリア機能を回復および／または正常化する可能性を高めることは、損傷メカニズムに関係なく、有益であろう。
【００１２】
さらに、ＡＲＦは、敗血症、その他の重度の全身性炎症状態、および／または心血管系の肺および／または脳の障害が原因である可能性もある。したがって、本発明はまた、敗血症、全身性炎症性疾患および／または心肺および／または脳障害に罹患した患者における急性呼吸不全（ＡＲＦ）の病因における上皮バリア機能の回復および／または正常化のための、同等の機能活性を有する抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、そのホモログ、および／もしくは断片、ならびに／またはその薬学的に活性な塩の使用にも関する。
【００１３】
さらに、高地への滞在は、溺死と同様の急性肺損傷を誘導する可能性がある。
【００１４】
急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）
ＡＲＤＳは、非心原性呼吸困難、頻呼吸、肺胞内の体液の蓄積、両側胸部Ｘ線写真の不鮮明、および酸素療法に抵抗性の低酸素血症を特徴としている。初期の疾患段階にあるＡＲＤＳ患者の約３分の１は、肺胞細胞裏打ちが損傷しているにもかかわらず、肺胞に明らかな余剰体液がないことを強調しておく必要がある（非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４）。Ｉ
【００１５】
ＡＲＤＳは、しばしば機械的人工呼吸を必要とする重篤な状態である低酸素性呼吸不全のために、病院のＩＣＵ（集中治療室）に入院する一般的な原因である。コルチコステロイドは、いくつかの例外を除いてＡＲＤＳ患者に推奨されない。救助療法は、適切な酸素化を維持できない患者の低酸素血症を緩和する：動員操作、腹臥位、吸入一酸化窒素、高周波振動換気、および体外式膜型人工肺は酸素化を改善するが、腹臥位を除いて、死亡率への影響はまだ証明されていない。肺内の体液の有害な過負荷を回避するための制限的な体液管理は好ましい戦略であるように思われるが、６０日死亡率の有意な減少はない。
【００１６】
血液や体液による肺の心原性過負荷は、ＡＲＤＳをシミュレートする有害で生命を脅かす状態をもたらす可能性がある。
【００１７】
乳児呼吸窮迫症候群
ＩＲＤＳ（乳児呼吸窮迫症候群）は、肺サーファクタント（pulmonary surfactant）の不十分な生成および未熟な肺の構造が完全に発達していないことによって引き起こされる未熟児の症候群である。
【００１８】
気管支肺異形成症（ＢＰＤ）
気管支肺異形成症（ＢＰＤ）は、新生児、特に未熟児や乳児に発症する慢性肺疾患の一形態である。これは、人工呼吸器などの機械的人工呼吸、および酸素の長期使用によって引き起こされる肺の損傷に起因するが、これに限定されない。ほとんどの乳児はＢＰＤから回復するが、長期的な呼吸困難を有するものもいる。
【００１９】
ＡＲＦには、ＢＰＤ、ＩＲＤＳ、およびＡＲＤＳが含まれ、肺胞腔からの体液除去の障害および肺胞内のタンパク質に富む体液の蓄積に関連する毛細血管上皮および肺胞上皮の損傷を特徴とする。付随して、肺胞細胞は炎症促進物質を形成および放出し、急性肺障害を増加させる。したがって、負傷患者は、毛細血管透過性の増加を引き起こし、肺機能、酸素化を妨げ、身体の臓器および心臓血管系の全身機能を損なう上皮バリアの障害に罹患している。
【００２０】
急性肺傷害、特にＡＲＤＳおよび同様の障害は、かなりの疾病負荷を及ぼし、高度な現代医療技術治療にもかかわらず、患者の約４０％が病院で死亡している（非特許文献３；非特許文献４）。年齢および病気の重症度、国レベル、社会経済的地位、人工呼吸器管理、およびＩＣＵ組織的要因などの患者関連の要因を含むさまざまな要因が、それぞれこれらの肺傷害の結果に寄与している。生存転帰を改善することが示された治療戦略はごくわずかである。
【００２１】
抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質
抗分泌因子（ＡＦ）は４１ｋＤａのタンパク質であり、元々は下痢性疾患および腸の炎症に対する保護を提供するものと記載された（レビューについては、非特許文献５を参照）。抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質は、長い間配列決定され、そのｃＤＮＡがクローン化されてきた。抗分泌活性は、主に、４、５、６、７、８または１６などの少なくとも４〜１６アミノ酸のコンセンサス配列を含む、抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質配列のアミノ酸位置３５と５０の間に位置するペプチドによって発揮されるようである。免疫化学的および免疫組織化学的な調査により、抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質が存在し、体内のほとんどの組織および臓器によって合成されている可能性があることが明らかになった。止瀉薬配列、すなわち少なくともコンセンサス配列に位置する配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む合成ペプチドは、以前に特徴付けられている（特許文献１；特許文献２；特許文献３；特許文献４）。
【００２２】
抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質およびペプチドは、コレラ毒素にチャレンジされた後の腸内および中枢神経系内などの病理学的体液輸送および／または炎症反応を正常化することが以前に開示されている（特許文献１）。したがって、ＡＦの内因性合成を誘導するかまたは追加ＡＦの取り込むかのいずれかの能力を有する食品および飼料は、特許文献１において浮腫、下痢、脱水および炎症の治療に有用であることが示唆されている。特許文献５は、抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質の内因性形成を誘導する食品の製造のための酵素活性を有する産物の使用を開示している。特許文献６はさらに、それ自体として、野生型抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質（ＮＡＳＰ）が富化されたおよび／または天然に豊富な食品を開示している。
【００２３】
抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質およびその断片はまた、細胞の喪失および／または獲得に関連する状態の治療における神経組織の修復、ならびに幹細胞および前駆細胞ならびにそれらに由来する細胞の増殖、アポトーシス、分化、および／または遊走を改善することが示されており（特許文献２）、コンパートメント症候群の治療および／または予防（特許文献７）と同様に、眼内高血圧症の治療および／または予防（特許文献３）において同等に効果的であることが示されている。
【００２４】
本発明者らはまた、ＡＦが、膜中の脂質ラフト、受容体、および／またはカベオラの構造、分布、および複数の機能を監視および／または有益な影響を与えることができ、したがって、ＡＦが、細胞膜中の脂質ラフトおよび／またはカベオラの構造的崩壊および機能不全の治療および／または予防のために採用され得ることも示した（特許文献８）。
【００２５】
本発明者らはさらに、同じ抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、ペプチド、およびそれらの断片が、ＦＡＫおよびＣＡＰを介して膜貫通タンパク質イオンチャネル、例えばＮＫＣＣ１の生物学的活性化に介入することができ、したがって、病理学的および／または摂動された細胞におけるイオンチャネルの病理学的活性を直接調節することができ、前記細胞内の細胞内圧力および膜貫通タンパク質機能を効果的に正常化し、それにより、例えば癌療法に使用される薬物の取り込みを改善することができることを証明することができた（特許文献９）。
【００２６】
さらに、特許文献１０において、抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、ペプチド、そのホモログおよび／または断片は、膠芽腫の対症療法、治癒療法および緩和療法において有用であることが示されている。
【００２７】
本発明は、抗分泌因子（ＡＦ）がまた、急性呼吸不全（ＡＲＦ）の病因における上皮バリア機能を回復および／または正常化し、それにより例えば、呼吸器系における体液の蓄積を顕著に中和し、同時に心血管系に有益な効果を発揮するという驚くべき洞察に関する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２８】
【特許文献１】ＷＯ９７／０８２０２
【特許文献２】ＷＯ０５／０３０２４６
【特許文献３】ＷＯ２００７／１２６３６４
【特許文献４】ＷＯ２０１８／０１５３７９
【特許文献５】ＷＯ９８／２１９７８
【特許文献６】ＷＯ００／０３８５３５
【特許文献７】ＷＯ０７／１２６３６３
【特許文献８】ＷＯ０７／１２６３６５
【特許文献９】ＷＯ２０１０／０９３３２４
【特許文献１０】ＷＯ２０１４／０９６３８４
【非特許文献】
【００２９】
【非特許文献１】Ｃａｌｆｅｅら  ２００７
【非特許文献２】Ｓａｋｋａ  ２０１３
【非特許文献３】Ｃｌａｅｓｓｏｎら、２０１６
【非特許文献４】ＨｕｐｐｅｒｔおよびＭａｔｔｈａｙ、２０１７
【非特許文献５】ＬａｎｇｅおよびＬｏｎｎｒｏｔｈ、２００１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００３０】
本出願は、急性呼吸不全（ＡＲＦ）の治療、寛解および／または予防のための上皮および／もしくは内皮バリア機能の回復ならびに／または正常化の使用のための、配列番号１に示される抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、ならびに／または同等の活性を有し、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むそのホモログおよび／もしくは断片（ＡＦ−６）、ならびに／またはその薬学的に活性な塩、ならびに／または前記抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質および／またはそのホモログおよび／もしくは断片が富化されたならびに／または天然に豊富な食品および／もしくは食品サプリメントを初めて開示する。
【課題を解決するための手段】
【００３１】
治療、寛解および／または予防されるＡＲＦは、本文脈において、ＩＲＤＳ、ＢＰＤ、ＡＲＤＳ、急性肺水腫および間質性肺水腫からなる群から選択される。
【００３２】
したがって、本発明は、急性呼吸不全を治療および／または予防するための上皮バリア機能の回復および／または正常化における使用のための医薬組成物を製造するための、配列番号１に示される抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、および／もしくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むそのホモログおよび／もしくは断片（ＡＦ−６）、ならびに／またはその薬学的に活性な塩、ならびに／または前記抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質および／もしくはそのホモログおよび／もしくは断片が富化されたおよび／もしくは天然に豊富な食品および／もしくは食品サプリメントの使用に関する。
【００３３】
本発明は、上皮バリア機能の回復および／または正常化における使用のための、抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質および／もしくはそのホモログおよび／もしくは断片ならびに／または前記抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質ならびに／またはそのホモログおよび／もしくは断片が富化されたならびに／または天然に豊富である食品および／もしくは食品サプリメントに関連し、ここで急性呼吸不全に罹患している患者において上皮細胞バリア機能が回復および／または正常化される。
【００３４】
本発明による使用のための抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質および／またはそのホモログおよび／もしくは断片ならびに／またはその薬学的に活性な塩は、抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質および／またはそのホモログおよび／もしくは断片ならびに／またはその薬学的に活性な塩の１つまたは少なくとも２つ以上を含む医薬組成物として製剤化することができる。典型的には、前記医薬組成物は、薬学的に許容される賦形剤をさらに含む。
【００３５】
本発明はさらに、急性呼吸不全の病因における上皮バリア機能の回復および／または正常化における使用のための、配列番号１（ＡＦ）に示される少なくとも１つの抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、ならびに／または配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むそのホモログおよび／もしくは断片（ＡＦ−６）、ならびに／またはその薬学的に活性な塩を含む前記医薬組成物にも関する。
【００３６】
さらに、本発明による使用のための抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質および／またはそのホモログおよび／もしくは断片ならびに／またはその薬学的に活性な塩は、前記抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質ならびに／またはそのホモログおよび／もしくは断片が富化されたおよび／または天然に豊富である食品および／もしくは食品サプリメントとして製剤化することができる。
【００３７】
本発明による使用のための抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質ならびに／またはそのホモログおよび／もしくは断片ならびに／またはその薬学的に活性な塩、ならびに／または前記抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質および／またはそのホモログおよび／もしくは断片が富化された食品および／もしくは食品サプリメントは、血管内注入または注射、眼内、鼻腔内、経口、局所、皮膚、皮下および／または全身投与のためのスプレー、エアロゾル、吸入器および／またはネブライザーによる投与のために製剤化することができる。それは、適用および体重１ｋｇあたり０．１μｇから１００ｍｇの用量で、好ましくは適用および体重１ｋｇあたり１〜１００００μｇの用量で血液に全身投与するために製剤化することができる。前記投与は、単回投与、多回投与、および／または毎日の多回適用のいずれかとして実行することができる。
【００３８】
本発明による使用のための抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質ならびに／またはそのホモログおよび／もしくは断片ならびに／またはその薬学的に活性な塩、ならびに／または前記抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質ならびに／またはそのホモログおよび／もしくは断片が富化された食品および／もしくは食品サプリメントは、天然に存在する抗分泌因子（ＮＡＳＰ）が富化されたおよび／または高い天然含有量を有する卵黄など、または配列番号３（ＡＦ−１６）および／または配列番号４（ＡＦ−８）に開示されているアミノ酸配列を有する少なくとも０．０５ｎｇ／ｍｌの抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質断片を有する卵黄として、抗分泌因子が富化されたおよび／または天然に豊富な卵黄として提供することができる。前記卵黄は噴霧乾燥することができる。
【００３９】
一実施形態では、ＡＲＦの治療および／または予防のための上皮バリア機能を回復および／または正常化するための方法が開示され、ここで、配列番号１（ＡＦ）に示される抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質ならびに／またはそのホモログおよび／もしくは配列番号２（ＡＦ−６）に示されるアミノ酸配列を含む断片、ならびに／またはその薬学的に活性な塩、配列番号１（ＡＦ）に示される前記抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質および／またはそのホモログおよび／もしくは配列番号２（ＡＦ−６）に示されるアミノ酸配列を含む断片、ならびに／またはその薬学的に活性な塩を含む医薬組成物、ならびに／または前記抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質ならびに／またはそのホモログおよび／もしくは断片が富化されたおよび／または天然に豊富な食品および／または食品サプリメントが、それを必要とする哺乳動物に投与される。前記哺乳動物はヒトであり得る。
【００４０】
結果として、本発明は、ＩＲＤＳ、ＢＰＤ、ＡＲＤＳ、急性ＡＲＤＳ、重度ＡＲＤＳ、急性肺水腫および間質性肺水腫からなる群から選択される、ＡＲＦを治療および／または予防するためなどの急性呼吸不全の治療、寛解予防および／または予防的治療のための方法に関し、ここで、配列番号１（ＡＦ）に示される十分な量の抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質ならびに／またはそのホモログおよび／もしくは配列番号２（ＡＦ−６）に示されるアミノ酸配列を含む断片、ならびに／またはその薬学的に活性な塩、配列番号１（ＡＦ）に示される前記抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質ならびに／またはそのホモログおよび／もしくは配列番号２（ＡＦ−６）に示されるアミノ酸配列を含む断片、ならびに／またはその薬学的に活性な塩を含む医薬組成物、ならびに／または前記抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質ならびに／またはそのホモログおよび／もしくは断片が富化されたおよび／または天然に豊富な食品および／または食品サプリメントが、それを必要とする哺乳動物に投与される。前記哺乳動物はヒトであり得る。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１】実験中の実験室におけるセットアップを示す図である。深く麻酔された２匹のブタは、それぞれ気管切開を行い、呼吸器に連結される。集中治療監視装置の２つの同一のセットがさらに見られる。担当研究者にはいずれの動物の治療も盲検化されており、コードは全ての実験が行われるまで利用可能にされなかった。コアの体温はチェックされ、３８〜３９℃に保たれた。
【図２】傷害後５時間およびいずれかの治療後４時間の肺の写真を示す図である。左の写真（図２Ｂ）は、ビヒクルで治療された負傷した肺を示し、対照的に、右の肺（図２Ａ）は、２ｍｇ／ｋｇ  ｂｗ（体重）のＡＦ−１６を施したブタのものである。左の写真（図２Ｂ）は、１時間後にビヒクルを注入した後のＡＬＩは、広範囲の無気肺と出血が形成され、肺組織が変色し、暗く見えたことを開示している。ビヒクル治療された肺の上部の限られた領域のみが正常な外観であり、ビヒクル肺の機能的能力が制限されていることが明らかである。対照的に、右の写真（図２Ａ）は、左肺葉と右肺葉の両方とも、わずかな出血が散在しているものの、正常に近い外観であり、ＡＦ−１６注入の保護効果を示している。ＡＦ−１６治療の効率は、豚の肺を胸部肋骨ケージに対して押し付けたＥＶＬＷの含有量の増加に関連した、ビヒクル治療した（左）豚からの肺の変色した跡によって顕著に示されている。
【図３】重要な結果の実証である、異なるタイミングで肺傷害に曝されたブタにおける血管外肺水（Ｅｘｔｒａ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｌｕｎｇ  Ｗａｔｅｒ；ＥＶＬＷ）の蓄積の増加のダイナミクスを示す図である（Ａ−Ｆ）。記録値は、グラフに示されるように、治療について１時間（時間）間隔でプロットされる。タイムラインは治療に関連する：Ａ：実験用に準備された動物の肺傷害前のベースライン；Ｂ：肺傷害の１時間後、ＡＦ−１６／ビヒクル注入の直前；Ｃ：ＡＦ−１６／ビヒクル注入の１時間後；Ｄ：ＡＦ−１６／ビヒクル注入の２時間後；Ｅ：ＡＦ−１６／ビヒクル注入の３時間後；Ｆ：ＡＦ−１６／ビヒクル注入の４時間後；ＥＶＬＷ画分は、肺傷害後１時間以内のベースライン時の約３２０ｍＬから、いずれのグループについて約５００ｍＬに増加した。ブタをビヒクル、生理食塩水で治療した場合、ＥＶＬＷはさらに４時間そのレベルのままだった。対照的に、肺洗浄と傷害性換気を繰り返し曝露した後、ＡＦ−１６で治療することにより、ＥＶＬＷは、４時間で約５００ｍＬから４００ｍＬに有意に減少し、極めて有意（ｐ  ＜０．００１）で有益な効果である、約２０％の減少を示した。このような１００ｍＬの差は、機能的に非常に有益であり、肺領域に満たされた体液の量を減少し、血液の酸素化を改善する、決定的に重要である可能性がある。ＥＶＬＷは、２ｍｇ／ｋｇ  ｂｗ（体重）のＡＦ−１６が注入されたＡＲＤＳを有する６匹のブタにおいて、ＰｉＣＣＯ法を用いて測定されたが、６匹のＡＲＤＳブタはビヒクルのみが注入された。治療は実行研究者のためにコード化された。
【図４】心臓は構造的および機能的に肺と密接に関連している。肺機能障害は、心血管系機能の低下に関連しており、心拍出量（ＣＯ）の低下、心臓の機能レベルの高感度で正確な測定によって開示される。図４のグラフは、誘導されたＡＬＩが、ビヒクル治療した６匹のブタにおけるＣＯをベースラインの４．２Ｌ／ｍｉｎ／ｍ２から約１Ｌ／ｍｉｎ／ｍ２妨げ、これは、次の４時間持続した約２５％の減少に相当することを示す図である。対照的に、ＡＬＩの１時間後に２ｍｇ／ｋｇのＡＦ−１６を６匹のブタに注入したところ、ＣＯは正常レベルに近い値を維持したが、これはＡＲＤＳなどの重篤な疾患では非常に重要であり、臨床的に関連性が高いと考えられている。ＡＦ−１６注入は、ビヒクル治療動物について記録されたものと比較して、ＣＯを有意に（ｐ＜０．０５）増加させ、有益な効果は少なくとも４時間持続した。治療は実行研究者のためにコード化された。
【発明を実施するための形態】
【００４２】
定義と略語
略語
ＩＦＰ：間質液圧；
ＰＢＳ：リン酸緩衝生理食塩水；
ＡＦ：抗分泌因子、
全長ＡＦタンパク質（配列番号１に示す）
ＡＦ−６：アミノ酸ＣＨＳＫＴＲから構成されるヘキサペプチド（配列番号２に示される）；
ＡＦ−１６：アミノ酸ＶＣＨＳＫＴＲＳＮＰＥＮＮＶＧＬで構成されるペプチド（配列番号３に示される）；
ＡＦ−８：アミノ酸ＶＣＨＳＫＴＲで構成されるセプタペプチド（配列番号４に示される）；
オクタペプチドＩＶＣＨＳＫＴＲ（配列番号５に示される）；
ペンタペプチドＨＳＫＴＲ（配列番号６に示される）；
ＳＰＣ：特別に加工されたシリアル
ＲＴＴ：ＡＦ（ＡＳＰ）の含有量を測定するための、ＳＥ９００００２８−２（公開番号４６６３３１）で公開されている、ラット小腸の標準化された分泌反応の測定方法。
ＡＲＦ：急性呼吸不全
ＡＲＤＳ：急性呼吸窮迫症候群
ＩＲＤＳ：乳児呼吸窮迫症候群
ＢＰＤ：気管支肺異形成症
ＳＩＲＳ：全身性炎症反応症候群
敗血症：感染の全身症状を伴う感染
【００４３】
定義
タンパク質は、ペプチド結合によって連結されたアミノ酸残基によって構成される生体高分子である。アミノ酸の線状ポリマーとしてのタンパク質は、ポリペプチドとも呼ばれる。通常、タンパク質は５０〜８００のアミノ酸残基を有するため、分子量は約６，０００〜約数十万ダルトン以上の範囲にある。小さなタンパク質は、ペプチド、ポリペプチド、またはオリゴペプチドと呼ばれる。「タンパク質」、「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」および「ペプチド」という用語は、本文脈において交換可能に使用される。ペプチドは、２〜５０アミノ酸残基（ａａ）など、わずかなアミノ酸残基を有し得る。
【００４４】
本文脈における「医薬組成物」は、治療的に活性な量の抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質を、場合により担体またはビヒクルなどの医薬的に活性な賦形剤と組み合わせて含む組成物を指す。前記医薬組成物は、適切な投与経路のために製剤化されており、これは、患者の状態、ならびに年齢または好ましい選択などの他の要因に応じて変化し得る。投与時の医薬組成物は、ヒトまたは動物の体に活性物質を提示する。前記医薬組成物は、例えば、錠剤、丸薬、ロゼンジ、カプセル、便丸剤、ゲル、溶液などの形態であり得るが、それらに限定されない。
【００４５】
「薬学的に活性な塩」という用語は、いわゆるホフマイスターシリーズ（Ｈｏｆｍｅｉｓｔｅｒ  ｓｅｒｉｅｓ）に基づいて、それらに由来する任意の塩であり得る抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、ペプチド、もしくはポリペプチド、またはそのホモログおよび／もしくは断片の塩を指す。薬学的に活性な塩の他の例は、トリフルオロアセテート、アセテートおよび塩化リシンを含み、本発明はそれらに限定されない。
【００４６】
「抗分泌性」という用語は、本文脈において、分泌および／または体液移動を阻害または減少させることを指す。したがって、「抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質」という用語は、体液移動ならびに体内の分泌を阻害するかまたは減少させるか、さもなければモジュレートすることができるタンパク質のファミリーを指す。
【００４７】
本文脈において、「同等の活性」は、「同等の機能的活性」という用語と交換可能に使用され、抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、ペプチド、もしくはポリペプチド、またはそれらのホモログ、誘導体および／もしくは断片の生物学的効果、すなわち、肺および／または全身性疾患における上皮細胞バリア機能の回復および／または正常化における使用のための、ＡＲＦの療法および／または治療を改善するためのその能力に関する。そのような能力を試験および／または測定するための標準化された例は、当該技術分野で周知である。例は、実施例１などの本出願の実験セクションに示される。さらに、本発明による抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、ペプチド、もしくはポリペプチド、またはそのホモログおよび／もしくは断片の生物学的活性は、例えば、限定はされないが、Ｃａｃｏ−２細胞ＡＴＣＣなどの標準化されたインビトロ肺傷害モデルで試験され［例えば、Ｖ  Ｎｉｃｏｌａｓ＆Ｖ  Ｌｉｅｖｉｎ−  Ｌｅ  ｍｏａｌ：Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ＆Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２０１５；８３：９０７〜９２２頁］）、ここでは経細胞体液交換および／または運動が測定される。
【００４８】
本文脈において、「同等の活性」という用語は、「類似の生物学的活性」と交換可能に使用される。
【００４９】
本文脈において、「抗分泌因子タンパク質」、「抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質」、「ＡＦ−タンパク質」、ＡＦ、またはそのホモログ、もしくは断片という用語は、「抗分泌因子」または特許文献１で定義される「抗分泌因子タンパク質」という用語と交換可能に使用してもよく、抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質もしくはペプチドまたは抗分泌および／もしくは同等の機能的および／または類似体活性を有するそのホモログ、および／もしくは断片、またはポリペプチドの機能を変えないその改変を指す。したがって、本文脈における「抗分泌因子」、「抗分泌因子タンパク質」、「抗分泌ペプチド」、「抗分泌断片」、または「抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質」もまた、そのホモログまたは断片を指すことができることもまた理解されよう。これらの用語は全て、本発明の文脈において交換可能に使用される。さらに、本文脈において、「抗分泌因子」という用語は、「ＡＦ」と省略されることもある。本文脈における抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質は、特許文献１およびＷＯ００／３８５３５において以前に定義された抗分泌特性を有するタンパク質を指す。抗分泌因子もまた、例えば特許文献２において開示されている。また、抗分泌因子という用語によって意図されるのは、以下でさらに説明するように、例えば、ＳＥ９０００２８−２およびＷＯ００／３８５３５およびＷＯ２０１７／００９００４において開示されているような、抗分泌因子が富化されたおよび／または天然に豊富な卵黄中の野生型抗分泌因子（ＮＡＳＰ）である。さらに、ＡＦタンパク質の代替名が文献で使用されている。
【００５０】
本文脈における「医療食品」は、抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質を用いて調製された、あるいは、内因性ＡＦの合成および／または活性化を誘導する能力を有する食品、食品サプリメント、または特別食用の食品を指す。前記食品は、液体または粉末、バー、シリアル、または他の任意の適切な食料品などの、流体または固体の形態の任意の適切な食品であってもよい。そのような物質の例は、ＷＯ２０１７／００９００４、ＷＯ００３８５３５および／またはＷＯ９１／０９５３６に見出すことができる。
【００５１】
本文脈における「ネブライザー」は、液体医薬品をミストの形態で気道に送達する医療機器を指す。
【００５２】
本文脈における「エアロゾル」という用語は、微細な固体または液体粒子の気体状懸濁液を指す。
【００５３】
本文脈において、「アジュバント」という用語は、他の薬剤の効果を改変する薬理学的および／または免疫学的薬剤を説明するために使用される。本出願におけるアジュバントは、投与される活性物質のレシピエントの使用を増強または最適化し、したがって、前記物質の必要量を最小限にする。
【００５４】
本発明の詳細な説明
本発明は、急性呼吸不全を治療、寛解および／または予防するための、妨害および／または阻害された上皮バリア機能を中和および／または予防するための新しいアプローチに関する。
【００５５】
特に、本発明は、急性呼吸不全の治療、寛解および／または予防のための上皮バリア機能の回復ならびに／または正常化のための、配列番号１に示される抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、ならびに／または同等の活性を有し、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むそのホモログおよび／もしくは断片（ＡＦ−６）、ならびに／またはその薬学的に活性な塩、ならびに／または前記抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質および／またはそのホモログおよび／もしくは断片が富化された食品および／もしくは食品サプリメントの使用に関する。
【００５６】
上皮バリア機能
血液と肺胞空気との間の拡散バリアは、減衰した肺細胞の細胞質、基底膜、および毛細血管内皮細胞の薄い細胞質によって構成される。
【００５７】
肺胞上皮は、Ｉ型肺細胞とＩＩ型肺細胞で構成されており、どちらも基底膜上にあり、後者は間質組織に寄与し、間質液の一部を含む。ＩＩ型肺細胞の主な機能は、サーファクタントを形成および分泌することである。
【００５８】
上皮細胞の密着結合は破壊される可能性があり、これにより間質液、タンパク質、さらには細胞が肺胞に漏れ、呼吸が損なわれる。
【００５９】
急性呼吸不全では、肺の上皮バリア機能が損なわれるため、毛細血管透過性が増加し、肺胞内で体液の蓄積をもたらす。ＢＰＤ、ＡＲＤＳ、およびＩＲＤＳは、肺胞腔からの体液除去の障害および肺胞内のタンパク質に富む体液の蓄積に関連する毛細血管内皮および肺胞上皮の損傷を特徴とする。
【００６０】
本発明は、上皮細胞バリアを回復および／または正常化するためのＡＦの使用を初めて記載し、したがって、限定はされないが、ＢＰＤ、ＩＲＤＳおよび／またはＡＲＤＳ、急性ＡＲＤＳ、重度ＡＲＤＳ、急性肺水腫および間質性肺水腫などの急性呼吸不全に罹患した患者における上皮バリア機能を効果的に回復および／または正常化する。
【００６１】
実施例１に示されるように、ペプチドＡＦ−１６の静脈内注入（ｉｖ）で治療された実験的に誘導されたＡＲＤＳを有する成体豚では、肺胞および間質組織における体液の有害な蓄積の有意な減少を示した（図３）。さらに、有益な効果は１時間以内に示され、少なくとも４時間は有意に持続した。
【００６２】
実施例１はさらに、ＡＦ−１６治療が、ビヒクル治療された参照動物について文書化されたものと比較して、誘導された外傷性肺傷害によって引き起こされる構造的異常が減少し、血圧および心拍数を含む心血管系パラメーターに関して有害な副作用を示され得なかったことを実証する。
【００６３】
入手可能な結果は、ＡＦ−１６治療が急性呼吸不全の心拍出量に統計的に有意な有益な効果があることを強固に示す（図４）。
【００６４】
したがって、本発明は主に呼吸器系および心血管系の両方の治療に関する。
【００６５】
呼吸器系では、酸素と二酸化炭素の適切な取り込みと交換を可能にするために、呼吸された空気が１０分の１マイクロメートルの範囲の厚さの組織によって血液および間質液から分離されることが最も重要である。肺胞を含む呼吸器の適切に正常な、すなわち健康な機能のためには、体液は最小限の量でないとならない。したがって、多くの有害な医学的状態は、呼吸を損ない、最終的には心原性（例えば、心臓梗塞および他の心筋症、重度の筋緊張亢進、急性非代償性心不全による）、または非心原性（例えば、ＡＲＦ、肺外傷、ＡＲＤＳ、ＩＲＤＳ、ＢＰＤ、気道傷害、敗血症、肺炎、体液過剰、溺死、腎臓病、肝障害、脳出血、脳卒中、脳外傷などの神経性状態）のいずれかで窒息および／または溺死を引き起こす肺胞内の体液量の有害な増加に関連している。
【００６６】
体液の肺胞への漏れおよび蓄積は、呼吸および酸素化を妨げ、重度の罹患率および高い死亡率に関連する肺における血液の循環障害と蓄積により心臓への負荷をさらに増加させる。長期の低酸素症および高二酸化炭素血症は、生存している患者において持続的な神経精神医学的有害症状および神経学的機能障害をもたらすことが多い。したがって、長期的な後遺症は、生活の質を著しく損ない、寿命を縮める可能性がある。現在、利用可能な治療法−推奨事項は主に対症療法であり、治療では、肺胞および呼吸器における体液、破片、および炎症細胞の危険な蓄積を限られた範囲でしか軽減させない。
【００６７】
上で指定された条件での肺および呼吸器系の肺外部分における体液の病理学的蓄積に対する有益な効果について、抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、ペプチド、誘導体、同等の機能的活性を有するそのホモログ、および／もしくは断片、ならびに／またはその薬学的に活性な塩が調査されてきた。
【００６８】
一般に、本発明は、抗分泌因子（ＡＦ）が呼吸器系における体液の蓄積を有意に中和し（図３）、心血管系に有益な効果を発揮する（図４）という驚くべき洞察に関する。現在、重篤な肺胞を含む呼吸器系における体液蓄積を減少させる公知の他の医薬品はない。
【００６９】
したがって、本発明は、ＡＦが、錯乱したおよび／または病的な細胞における前記経細胞間体液移動の異常な活性を効果的に調節および／または正常化させることができ、それにより、影響を受けた組織および／または臓器の極めて重要な上皮バリア機能の生命機能を効果的に正常化するという驚くべき発見に関する。
【００７０】
したがって、本発明は、急性呼吸不全を治療および／または予防するための、上皮および／または内皮細胞バリア機能を回復および／または正常化することにより、上皮および／または内皮細胞バリア機能を回復および／または正常化する、配列番号１（ＡＦ）に示される抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、ならびに／または同等の活性を有し、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むそのホモログおよび／もしくは断片（ＡＦ−６）、ならびに／またはその薬学的に活性な塩、ならびに／または前記抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質および／またはそのホモログおよび／もしくは断片が富化されたおよび／または天然に豊富である食品および／もしくは食品サプリメントの使用に関する。
【００７１】
抗分泌因子
抗分泌因子は、体内で天然に生じるタンパク質のクラスである。ヒト抗分泌因子ＡＦタンパク質は、下垂体から単離された場合、３８２〜２８８個のアミノ酸を含む４１ｋＤａのタンパク質である。本発明による上皮細胞バリア機能の回復および／または正常化における有益な効果に関する活性部位は、タンパク質のＮ末端部分に近い領域に局在する可能性があり、特に、配列番号１のアミノ酸１〜１６３、より具体的には抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質配列のアミノ酸位置３５〜５０に局在し得る。ＡＦの生物学的効果は、前記コンセンサス配列の配列番号２（ＡＦ−６）に対応する少なくとも６個のアミノ酸を含む任意のペプチドまたはポリペプチド、またはポリペプチドおよび／またはペプチドの機能を変化させないその改変によって発揮されることが示されている。
【００７２】
本発明者らは、抗分泌因子が、タンパク質Ｓ５ａ、および全ての細胞に蔓延する構成要素のサブユニットを構成するＲｐｎ１０、２６Ｓプロテアソーム、より具体的には１９Ｓ／ＰＡ７００キャップとある程度相同であることを示した。本発明において、抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質は、同じ機能的特性を有するホモログタンパク質のファミリーとして定義される。抗分泌因子はまた、トロンボスポンジン−１に結合することが知られており、癌の進行に関連する別のタンパク質アイソフォームであるアンギオシジンに類似している。
【００７３】
本発明による抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質および／またはペプチドのホモログおよび断片は全て、類似の生物学的活性を有する。本文脈におけるホモログおよび断片は、天然に存在する抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質のものに対応する少なくとも６つのアミノ酸（配列番号２に示される）を含み、これは、ポリペプチドおよび／またはペプチドの本質的な機能を変えることなく、抗分泌因子の生物学的活性を最適化するために、１つまたは複数のアミノ酸を変化させることによってさらに改変してもよい。
【００７４】
本発明による抗分泌因子断片および／または誘導体は、Ｎ末端および／またはＣ末端保護基を含み得る。Ｎ末端保護基の一例には、アセチルが含まれる。Ｃ末端保護基の一例には、アミドが含まれる。
【００７５】
さらに、本発明による抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、ペプチド、ホモログ、誘導体および／または断片のアミノ酸配列と少なくとも７２％、７５％、７７％、８０％、８２％、８５％、８７％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のように少なくとも７０％同一である任意のアミノ酸配列もまた本発明の範囲内と見なされる。
【００７６】
少なくとも、例えば、参照アミノ酸配列と９５％同一であるアミノ酸配列を有するタンパク質、そのホモログ、ペプチド、および／または断片によって、例えばそのペプチドのアミノ酸配列が参照アミノ酸配列と、そのアミノ酸配列が参照アミノ酸配列の１００個のアミノ酸ごとに５個までの点突然変異を含んでいてもよいことを除いて、同一であることが意図される。言い換えると、参照アミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを得るために、参照配列中のアミノ酸の５％までを削除するか、もしくは別のアミノ酸で置換してもよく、または参照配列中の全アミノ酸の５％までの数のアミノ酸を参照配列に挿入してもよい。参照配列のこれらの変異は、参照アミノ酸配列のアミノもしくはカルボキシ末端位置、またはそれらの末端位置の間のどこかで、参照配列中のアミノ酸間で個別に、または参照配列内の１つまたは複数の隣接グループの中に散在して起こり得る。
【００７７】
本発明において、同一性を決定するためには、ローカルアルゴリズムプログラムが最も適している。ローカルアルゴリズムプログラム（Ｓｍｉｔｈ  Ｗａｔｅｒｍａｎなど）は、１つの配列のサブ配列を２番目の配列のサブ配列と比較し、全体的な類似性スコアが最も高くなるようなサブ配列の組み合わせとそれらのサブ配列のアラインメントを見つける。内部ギャップは、許可されている場合、ペナルティが課せられる。ローカルアルゴリズムは、単一のドメインを持つ２つのマルチドメインタンパク質、または共通の結合部位を比較する場合によく機能する。
【００７８】
同一性と類似性を決定する方法は、公に利用可能なプログラムで体系化されている。２つの配列間の同一性および類似性を決定するための好ましいコンピュータプログラム方法には、ＧＣＧプログラムパッケージ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ、Ｊら（１９９４））、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、およびＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ、Ｓ．Ｆ．ら（１９９０））が含まれるが、これらに限定されない。ＢＬＡＳＴＸプログラムは、ＮＣＢＩおよび他の情報源から公に利用可能である（ＢＬＡＳＴマニュアル、Ａｌｔｓｃｈｕｌ、Ｓ．Ｆら、Ａｌｔｓｃｈｕｌ、Ｓ．Ｆら（１９９０））。各配列分析プログラムには、デフォルトのスコアリングマトリックスとデフォルトのギャップペナルティがある。一般に、分子生物学者は、使用するソフトウェアプログラムによって確立されたデフォルト設定を使用することが期待される。
【００７９】
本明細書で定義される抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質またはペプチドまたは同等の活性を有するそのホモログおよび／もしくは断片は、６アミノ酸またはそれ以上、例えば６〜１６アミノ酸など、例えば６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０アミノ酸またはそれ以上などを含むことができる。他の好ましい実施形態では、抗分泌因子は、４２、４３、４５、４６、５１、８０、１２８、１２９または１６３個のアミノ酸からなる。好ましい実施形態では、本発明による抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、そのホモログ、ペプチド、および／または断片は、６、７、８または１６個のアミノ酸からなる。
【００８０】
本発明による抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、そのホモログ、ペプチドおよび／または断片は、インビボまたはインビトロで産生することができ、例えば、組換え、合成および／または化学的に合成することができ、および／またはブタの下垂体または鳥の卵などの天然に存在する抗分泌因子の供給源から単離することができる。製造後、本発明による抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、そのホモログ、ペプチドおよび／または断片は、例えば、より小さな抗分泌活性断片への化学的または酵素的切断によって、またはアミノ酸の改変によって、さらに処理される。現在、精製によって純粋な形態で抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質を取得することは不可能である。しかしながら、特許文献１および特許文献２に以前に開示されたように、生物学的に活性な抗分泌因子タンパク質を組換えまたは合成的に産生することが可能である。特許文献１はまた、７〜８０アミノ酸のこのタンパク質の生物学的に活性な断片の生成を開示している。
【００８１】
本発明による抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、そのホモログ、ペプチドおよび／または断片は、Ｎ末端および／またはＣ末端保護基をさらに含み得る。Ｎ末端保護基の一例には、アセチルが含まれる。Ｃ末端保護基の一例には、アミドが含まれる。
【００８２】
本発明の好ましい実施形態において、本発明による抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、そのホモログ、ペプチドおよび／または断片は、配列番号１〜６、すなわち、アミノ酸の一般的な一文字の略語を使用して、ＶＣＨＳＫＴＲＳＮＰＥＮＮＶＧＬ（配列番号３、本文脈においてＡＦ−１６とも呼ばれる）、ＩＶＣＨＳＫＴＲ（配列番号５）、ＶＣＨＳＫＴＲ（配列番号４）、ＣＨＳＫＴＲ（配列番号２）、ＨＳＫＴＲ（配列番号６）、または配列番号１による抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質のアミノ酸配列の中から選択される。それらは以前に、例えば特許文献２において開示されている。付随の配列表に指定されるように、上記で指定された配列のいくつかのアミノ酸は、他のアミノ酸によって置き換えられてもよい。この段落の以降では、特定のアミノ酸配列内の特定のアミノ酸の位置が左から計算され、最もＮ末端のアミノ酸がその特定の配列の位置１であると示される。以下に指定される任意のアミノ酸置換は、その配列内の任意の他のアミノ酸置換と独立的に行われてもよい。配列番号３においては、位置２のＣはＳに置き換えることができ、位置３のＨはＲまたはＫに置き換えることができ、位置４のＳはＬに置き換えることができ、および／または位置６のＴはＡに置き換えることができる。配列番号５においては、位置３のＣをＳに、位置４のＨをＲまたはＫに、位置５のＳをＬに、および／または位置７のＴをＡに置き換えることができる。配列番号４においては、位置２のＣはＳに置き換えることができ、位置３のＨはＲまたはＫに置き換えることができ、位置４のＳはＬに置き換えることができ、および／または位置６のＴはＡに置き換えることができる。配列番号２においては、位置１のＣをＳに、位置２のＨをＲまたはＫに、位置３のＳをＬに、および／または位置５のＴをＡに置き換えることができる。配列番号６においては、位置１のＨをＲまたはＫに置き換えることができ、位置２のＳをＬに置き換えることができ、および／または位置４のＴをＡに置き換えることができる。
【００８３】
また、配列番号１〜６による断片／ペプチドのいずれかの２つまたはそれ以上の組み合わせが本発明によって意図される。
【００８４】
本発明によって使用されるおよび／または本発明により含まれる特定の抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質またはペプチドは、
配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質
配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、
配列番号３に示されるアミノ酸配列を含む抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、
配列番号４に示されるアミノ酸配列を含む抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、および
配列番号５に示されるアミノ酸配列を含む抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質からなる群から選択される。
【００８５】
さらに、さらなる別の実施形態では、本発明は、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有するタンパク質である抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、または配列番号１のアミノ酸３７〜４２を含むそのホモログ、誘導体および／もしくは断片の使用に関する。
【００８６】
さらに別の実施形態では、本発明は、配列番号１〜６、ならびに配列番号１、または配列番号１のアミノ酸３７〜４２を含むそのホモログ、誘導体および／もしくは断片、または本明細書に記載の一般式によって開示される配列に開示されるタンパク質から選択される２つまたはそれ以上の抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質を含む、本明細書に開示される医薬組成物の使用に関する。前記配列は、本発明で使用されるために、全て同等に好ましい。
【００８７】
特許文献６は、抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質それ自体が富化されたおよび／または天然に豊富な食品を開示しており、これらは、本文脈での使用に適した食品、食料品および／または食品サプリメントの例である。本文脈での使用のための別の例は、ＷＯ２０１７／００９００４に開示されているように、配列番号３および／または配列番号４に開示されるアミノ酸配列を有する少なくとも０．０５ｎｇ／ｍｌの抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質断片を含む卵黄である。
【００８８】
医薬組成物
本発明の一実施形態では、本発明による医薬組成物は、薬学的に許容される賦形剤をさらに含む。本発明による使用のための薬学的に許容される賦形剤およびそれらの最適濃度の選択は、当業者が実験によって容易に決定することができる。本発明による使用のための薬学的に許容される賦形剤には、溶媒、緩衝剤、防腐剤、キレート剤、抗酸化剤、および安定剤、乳化剤、懸濁剤および／または希釈剤が含まれる。本発明の医薬組成物は、従来の医薬慣行、例えば「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  ｐｈａｒｍａｃｙ」、第２１版、ＩＳＢＮ  ０−７８１７−４６７３−６または「Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ」、第２版、Ｓｗａｒｂｒｉｃｋ  Ｊ．編、ＩＳＢＮ：０−８２４７−２１５２−７に従って製剤化することができる。
【００８９】
薬学的に許容される賦形剤は、組成物が投与される個体に実質的に無害な物質である。このような賦形剤は通常、国の保健当局によって与えられた要件を満たしている。例えば、英国薬局方、アメリカ合衆国薬局方、およびヨーロッパ薬局方のような公の薬局方は、薬学的に許容される賦形剤の基準を設定している。
【００９０】
以下は、本発明による医薬組成物における任意選択の使用のための関連する組成物のレビューである。レビューは、特定の投与経路に基づいている。しかしながら、薬学的に許容される賦形剤が異なる剤形または組成物で採用される場合には、特定の薬学的に許容される賦形剤の適用は、特定の剤形または賦形剤の特定の機能に限定されないことが理解される。本発明が以下に述べられる組成物の使用に限定されないことは、強調されるべきである。
【００９１】
非経口組成物：
全身適用について、本発明による組成物は、ミクロスフェアおよびリポソームを含む、従来の非毒性の薬学的に許容される担体および賦形剤を含み得る。
【００９２】
本発明による使用のための組成物は、全ての種類の固体、半固体、および流体組成物を含み得る。
【００９３】
薬学的に許容される賦形剤には、溶媒、緩衝剤、防腐剤、キレート剤、抗酸化剤、および安定剤、乳化剤、懸濁剤および／または希釈剤が含まれ得る。異なる薬剤の例を以下に示す。
【００９４】
さまざまな薬剤の例
溶媒の例には、水、アルコール、血液、血漿、脳脊髄液、腹水およびリンパ液が含まれるが、これらに限定されない。
【００９５】
緩衝剤の例には、クエン酸、酢酸、酒石酸、乳酸、リン酸水素、重炭酸塩、リン酸塩、ジエチルアミドなどが含まれるが、これらに限定されない。
【００９６】
キレート剤の例には、ＥＤＴＡおよびクエン酸が含まれるが、これらに限定されない。
【００９７】
抗酸化剤の例には、ブチル化ヒドロキシルアニソール（ＢＨＡ）、アスコルビン酸およびその誘導体、トコフェロールおよびその誘導体、システイン、およびそれらの混合物が含まれるが、これらに限定されない。
【００９８】
希釈剤および崩壊剤の例には、ラクトース、サッカロース、エムデックス、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、硫酸カルシウム、マンニトール、デンプンおよび微結晶性セルロースが含まれるが、これらに限定されない。
【００９９】
結合剤の例には、サッカロース、ソルビトール、アカシアガム、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、キトサン、デンプン、セルロース、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、およびポリエチレングリコールが含まれるが、これらに限定されない。
【０１００】
本発明による医薬組成物は、１つの文脈において、局所的に、または静脈内注入または中心血管または臓器関連血管または管内注入を介して、または患者への筋肉内または皮下注射を介して、または頬、肺、鼻、皮膚または経口経路を介して投与される。さらに、脳実質、または脳室または患者の神経系中または周囲の空間に外科的に挿入されたシャントを介して医薬組成物を投与することも可能である。
【０１０１】
一実施形態では、本発明による使用のための医薬組成物は、眼内、局所、鼻腔内、経口、皮膚、皮下および／または全身投与用に製剤化されている。選択投与経路は、治療を受ける患者の状態ならびに患者の年齢および性別などによって異なる。
【０１０２】
好ましい実施形態では、本発明の組成物は、懸濁液として、またはさらにより好ましくは、鼻腔内および／または気道に、粉末として吸入するためのスプレー、エアロゾル、吸入器またはネブライザーを用い適用することによって投与される。
【０１０３】
抗分泌因子を含む粉末の投与は、安定性および投与量の点で追加の利点を有する。本発明による医薬組成物はまた、局所的に、眼、鼻、経口、皮膚、皮下に適用することができるおよび／または血管を介して全身投与することができる。好ましい実施形態では、医薬組成物は、静脈内、筋肉内、局所、経口または経鼻投与用に製剤化されている。典型的には、眼への局所適用に使用される場合、本発明の組成物中の適用濃度は、適用あたり１μｇから１００ｍｇ、好ましくは５０〜５０００μｇであり、１日あたりの単回投与として、または１日あたり数回繰り返される（多回投与）が、これらに限定されない。
【０１０４】
血液中に全身投与される場合、用量は、適用および体重１ｋｇあたり０．１μｇから１０ｍｇ、例えば、適用および体重１ｋｇあたり０．１μｇから１００ｍｇなど、好ましくは１〜５０００、例えば、１〜１００００μｇ／体重ｋｇなどの範囲内である。抗分泌因子が富化されたおよび／または天然に豊富な卵黄が本発明に従って使用される場合、この製剤は、好ましくは、チューブおよび／または栄養チューブによって経口投与される。
【０１０５】
本発明の一実施形態では、前記医薬組成物は、薬学的に許容される賦形剤をさらに含む。そのような賦形剤は、特定の目的について適切であるように選択された任意の好ましい賦形剤であってもよい。賦形剤の例は、本明細書に開示されている。
【０１０６】
サロバム（Ｓａｌｏｖｕｍ）（登録商標）
本発明はさらに、限定はされないが、肺胞および細気管支における体液の異常蓄積、急性呼吸不全、ＡＲＤＳ（急性呼吸窮迫症候群）、ＩＲＤＳ（乳児呼吸窮迫症候群）、ＳＩＲＳ（全身性炎症反応症候群）、他の重度の全身性炎症状態および／または心血管系肺障害を有する患者の治療のような、急性呼吸不全の病態における上皮バリア機能の回復および／または正常化のための、現在サロバム（登録商標）の商標で販売されている、抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質が富化されたおよび／または天然に豊富な卵黄、および前記抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質および／またはそのホモログおよび／もしくは断片が富化されたおよび／または天然に豊富である食品および／または食品サプリメントの調製のためのその使用に関する。
【０１０７】
本発明はさらに、前記抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質および／またはそのホモログおよび／もしくは断片が富化されたおよび／または天然に豊富な食品および／または食品サプリメントに関し、ここで、抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質および／またはそのホモログおよび／もしくは断片が富化されたおよび／または天然に豊富な食品および／または食品サプリメントは、限定はされないが、肺胞および細気管支における体液の異常蓄積、ＢＰＤ、ＡＲＤＳ、ＩＲＤＳ、敗血症、ＳＩＲＳ（全身性炎症反応症候群）、その他の重度の全身性炎症状態および／または心血管系肺障害を有する患者の治療のような急性呼吸不全（ＡＲＦ）の病態における上皮バリア機能の回復および／または正常化のために、例えば特許文献６において開示されたような天然に存在する抗分泌因子（ＮＡＳＰ）が豊富な卵黄のような抗分泌因子が富化されたおよび／または天然に豊富な卵黄として提供される。
【０１０８】
本発明はさらに、限定はされないが、肺胞および細気管支における体液の異常蓄積、ＢＰＤ、ＡＲＤＳ、ＩＲＤＳ、敗血症、ＳＩＲＳ（全身性炎症反応症候群）、その他の重度の全身性炎症状態および／または心血管系肺障害を有する患者の治療のような急性呼吸不全（ＡＲＦ）の病態における上皮バリア機能の回復および／または正常化のための、例えば、ＷＯ２０１７／００９００４に開示される配列番号３および／または配列番号４に開示されるアミノ酸配列を有する抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質断片を少なくとも０．０５ｎｇ／ｍｌを含む卵黄として提供される、抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質および／またはそのホモログおよび／もしくは断片が富化されたおよび／または天然に豊富な食品および／または食品サプリメントに関する。
【０１０９】
本明細書に記載の、および参照により本明細書に組み込まれる、例えば特許文献６またはＷＯ２０１７／００９００４に開示されているような使用のための、抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質および／またはそのホモログおよび／もしくは断片が富化されたおよび／または天然に豊富な卵黄組成物は、食品、食品サプリメント、医薬組成物、および／または医療食品として提供することができる。
【０１１０】
治療方法
本発明はさらに、適用および体重１ｋｇあたり０．１μｇ〜１００ｍｇ、好ましくは適用および体重１ｋｇあたり１〜１００００μｇの用量で血液中に全身投与するために製剤化されている医薬組成物および／または医療食品中の抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質および／またはそのホモログおよび／もしくは断片ならびに／またはその薬学的に活性な塩、ならびに／または前記抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質および／またはそのホモログおよび／または断片が富化されたおよび／または天然に豊富な食品および／または食品サプリメントを、それを必要とする患者に投与することによる、限定はされないが、肺胞および細気管支における体液の異常蓄積、ＢＰＤ、ＡＲＤＳ、ＩＲＤＳ、敗血症、ＳＩＲＳ、および／または心血管系肺障害を有する患者の治療のような、急性呼吸不全（ＡＲＦ）の治療に関し、ここで、前記投与は、単回投与または毎日の多回適用のいずれかとして行われる。
【０１１１】
本発明はさらに、限定はされないが、肺胞および細気管支の体液の異常蓄積、ＢＰＤ、ＡＲＤＳ、ＩＲＤＳ、敗血症、ＳＩＲＳ、および／または心血管系肺障害を有する患者の治療のような、急性呼吸不全（ＡＲＦ）の治療、予防および／または予防的処置のための方法であって、配列番号１（ＡＦ）に示される抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、および／または配列番号２（ＡＦ−６）に示されるアミノ酸配列を含むそのホモログおよび／もしくは断片、ならびに／またはその薬学的に活性な塩、ならびに／または前記抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質および／またはそのホモログおよび／もしくは断片が富化されたおよび／または天然に豊富な食品および／もしくは食品サプリメントは、それを必要とする哺乳動物に、上皮細胞バリア機能の回復および／または正常化に十分な量で投与される、方法に関する。
【０１１２】
本発明はさらに、限定はされないが、肺胞および細気管支の体液の異常蓄積、ＢＰＤ、ＡＲＤＳ、ＩＲＤＳ、敗血症、ＳＩＲＳ、および／または心血管系肺障害などを有する患者の治療のような、急性呼吸不全（ＡＲＦ）の治療、予防および／または予防的処置のための方法に関する。
【０１１３】
実験セクション
【実施例１】
【０１１４】
気道洗浄と傷害性換気に基づいたＡＲＤＳモデル
背景
実験の目的は、実験的に誘導されたＡＲＤＳを有する成体豚に投与されたペプチドＡＦ−１６の効果を解明することであった。
【０１１５】
実験セットアップ
倫理承認の後、生後３ヶ月の豚（体重３０〜３５ｋｇ）全１２頭を地元の農場から購入し、２頭を６回に分けて実験日の朝に研究室に配送した。２頭のブタを並行して使用し、ランダムに割り当てた１頭をＡＦ−１６で治療し、他の１頭は代わりにビヒクル、滅菌生理食塩水を使用した。到着すると、ブタは鎮静化され、その後、終了の同日の遅くまでの実験全体の間、完全に麻酔されたままであった。気管切開を行い、人工呼吸器で人工呼吸を行った。この設定は、図１に視覚化されている。チューブは動脈、静脈、および右心にも静脈を介して配置された。肺の総血液量、血管外肺水（ＥＶＬＷ）、および心機能パラメーターを正確に決定できるようにするために、ＰｉＣＣＯ機器（脈拍指数、連続心拍出量＝ＰｉＣＣＯ）を使用できるように機器が埋め込まれた。血圧トランスデューサーは、肺動脈と中心動脈に挿入された。動脈血ガスと追加の血液パラメーターを定期的にチェックした。酸素濃度計を使用して、動脈血中のヘモグロビン酸素飽和度を測定した。コア体温は自動的に望ましい正常レベルに保たれた。ＥＫＧを記録した。全ての機器は集中治療コントロールパネルおよびコンピューターに接続され、保存されたデータの継続的な文書化と取得ができるようにした。液体注入は、水分過剰を避けるために厳密な管理下で静脈内（ｉｖ）投与された。記載の予防措置および処置により、動物を良好状態に保った。
【０１１６】
安定化の後、気管支樹内の温度を制御した生理食塩水を洗い流すことによって肺傷害を誘導し、そのことでサーファクタントの枯渇および崩壊しやすい肺を誘導した。続いて、１時間の傷害性換気（すなわち、高い吸気圧および低い呼気終末気道圧による換気）により肺胞レベルでの外傷性肺損傷を生じさせた。人工呼吸器に関するパラメーターは、人工呼吸器を使用して調節された。１時間以内に、肺胞に蓄積された体液の量が増加し、早期であっても、酸素の取り込みが大幅に減少し、二酸化炭素の排出が妨げられた。
【０１１７】
ペプチドＡＦ−１６またはビヒクルを用いた治療は、肺傷害の誘導後（すなわち、傷害性換気の後）に開始された。１０分間、生理食塩水に溶解したＡＦ−１６を、各実験および日に参加した２頭のブタのうちの１頭に静脈内注入した。同時に２番目のブタにビヒクルを注入した。実験に参加した研究室の人々には、どの動物が試験される薬物が与えられ、どの動物がビヒクルを与えられたかについては知らされず、コードは全ての実験後まで利用可能にされなかった。ＰｉＣＣＯ値は、１時間に１回、試験物質の注入後４時間まで測定された。最終的に実験が終了すると、動物を安楽死させ、剖検を行った。
【０１１８】
ＰｉＣＣＯシステムを使用して、肺胞および間質組織に存在する水分である血管外肺水（ＥＶＬＷ）を、肺の血液量を除いて高精度で測定した。肺胞腔内に体液が存在すると、各肺胞内の空気量が減少し、さらに距離が長くなり、それにより呼吸空気と肺毛細血管内の血液との間の酸素／二酸化炭素の交換が妨げられ、さらには排除され、特に低酸素血症が発生する。浮腫自体は、人工呼吸器によって誘導された肺傷害および炎症を増強し（人工呼吸器は、肺に供給される陽圧によって肺傷害を誘導する）、炎症および敗血症を発症する可能性を高める悪循環が開始する。この炎症反応はその後、全身に広がり、複数の臓器や組織における細胞死を引き起こす。事実、ＡＲＤＳの最も一般的な死因は、この理由による多臓器不全である。
【０１１９】
結果
（図３を参照）
【０１２０】
ＥＶＬＷ容量は、実験の開始時に約３３０ｍｌ（ＡＦ−１６で治療された６匹のブタおよびビヒクルを投与した６匹のブタの平均）であり、ＰｉＣＣＯシステムによって決定された。豚の平均体重は約３５ｋｇであった。
【０１２１】
気道を、調節された生理食塩水で洗い流すことによる肺損傷の誘導により、１時間後、ＥＶＬＷが５００〜５２０ｍｌに増加し、この値はＡＦ−１６で治療することを目的とした６匹のブタおよびビヒクルのみを投与した６匹のブタについて決定された。
【０１２２】
２ｍｇ／ｋｇ体重のＡＦ−１６を注入すると、減少したＥＶＬＷが１時間減少し、４６０ｍｌに減少したが、これは、ビヒクルで治療した６匹のブタについて実証可能な５１０ｍＬのＥＶＬＷと統計的に有意に異なる。
【０１２３】
ＡＦ−１６注入の２時間後、ＡＦ−１６で治療された６匹のブタの平均ＥＶＬＷは４３０ｍｌに減少し、ビヒクル群で測定された５０５ｍＬとは有意に異なる。
【０１２４】
ＡＦ−１６による治療の３時間後、６匹のブタのＥＶＬＷ容量はさらに低くなり４２０ｍｌであったが、これは、ビヒクル群で測定された５００ｍＬとは有意に異なる。
【０１２５】
４時間後、ＡＦ−１６で治療されたブタのＥＶＬＷ含有量４００ｍｌは、ビヒクルで治療されたブタの４８０ｍｌとは依然として有意に異なっていた。
【０１２６】
ブタの肺の写真は、肺損傷の誘導から５時間後の剖検時、および４時間の間ＡＦ−１６またはビヒクル、生理食塩水の単回注入のいずれかで治療した後に撮影された。写真を図２に示す。ＡＦ−１６で治療された肺は、左右の肺葉の両方で最小限の出血であり、ほぼ正常な外観を示している。対照的に、ビヒクル治療された６匹のブタからの肺は、広範囲の無気肺および出血を示し、組織が変色し、両側で暗く見える。ビヒクル治療された肺の上部の限られた領域のみが正常な外観であり、ビヒクル肺の機能的能力が制限されていることを示している。ビヒクル治療された肺は重く腫れ、胸郭ケージからの圧迫出血パターンが見えるようになった（図３）。
【０１２７】
さらに、心拍出量（ＣＯ）は、ＡＬＩでＡＦ−１６治療されたブタの初期ベースライン値とほぼ同じレベルのままであった（図４）。対照的に、ビヒクル注入は、ＣＯが有意に低いレベルに留まるようになった。ＣＯの増加は、肺水腫の減少により肺血管抵抗が正常化されたことによるものと解釈できる。このモデルでは、肺水腫は肺胞血管の圧縮と肺血管収縮の増加をもたらし、肺血管抵抗が増加し、肺を通る流れ、すなわちＣＯが損なわれる。
【０１２８】
結論
ペプチドＡＦ−１６の静脈内注入により、実験的に負傷した肺の肺胞および間質組織における体液の有害な蓄積が有意に減少したことと、有益な効果が１時間以内に示され、少なくとも３〜４時間続いたということが、主な結論である。
【０１２９】
血圧や心拍数を含む心血管系パラメーターに関しては、有害な副作用は認められなかった。
【０１３０】
入手できる結果は、心拍出量に対するＡＦ−１６の有益な効果、すなわち心臓機能の改善を示した。急性肺疾患では右心不全は珍しいことではないため、この観察は重要である。
【０１３１】
参考文献
1.  Lange, S., and Lonnroth, I. 2001. The antisecretory factor: synthesis, anatomical and cellular distribution, and biological action in experimental and clinical studies. Int. Rev. Cytol. 210, 39-75.
2.  H.-A. Hansson, M. Al-Olama, E. Jennische, K. Gatzinsky and S. Lange (2012). The peptide AF-16 and the AF protein counteract intracranial hypertension. Acta Neurochir. Suppl. 114, 377-382.  
3.  Remington: The science and practice of pharmacy”, 21st edition, ISBN 0-7817-4673-6 or “Encyclopedia of pharmaceutical technology”, 2nd edition, ed. Swarbrick J., ISBN: 0-8247-2152-7.
4.  WO 97/08202; 
5.  WO 05/030246
6.  WO 97/08202
7.  WO 97/08202
8.  WO 98/21978
9.  WO 00/038535. 
10.  WO 05/030246
11.  WO 07/126364
12.  WO 07/126363
13.  WO 07/126365
14.  WO 2010/093324
15.  Sakka S.G. Extravascular lung water in ARDS patients. Minerva Anestesiol. 2013; 79: 274-284.
16.  Singer M, Deutschman C S, Seymore C W et al. The third international consensus definitions for sepsis and septic shock [Sepsis-3].  JAMA  2016;315:801-810
17.  Calfee et al., Trauma-associated lung injury differs clinically and biologically from acute lung injury due to other clinical disorders, Crit Care Med. 2009.  
18.  Claesson J, Freundlich M, Gunnarsson I, Laake JH, Moller M H, et al. Scandinavian clinical practice guideline on fluid and drug therapy in adults with acute respiratory distress syndrome. Acta Anaesth Scand 2016; 60: 697-709.   
19.  Huppert LA and Matthay MA. Alveolar Fluid Clearance in Pathologically Relevant Conditions: In Vitro and In Vivo Models of Acute Respiratory Distress Syndrome. Front. Immunol.  2017;8:371. doi: 10.3389/fimmu.2017.00371
20.  Altschul, S.F., Gish, W., Miller, W., Myers, E.w., Lipman, D.J. Basic local alignment search tool.  Journal of Molecular Biology 1990; 215/3: 403-410
【図１】
2021528388.tif 000003
【図２】
2021528388.tif 000004
【図３】
2021528388.tif 000005
【図４】
2021528388.tif 000006
【配列表】
2021528388000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和3年2月12日(2021.2.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
急性呼吸不全（ＡＲＦ）の治療および／または予防における使用のための医薬組成物を製造するための、配列番号１に示される抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、ならびに／または同等の活性を有し、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むそのホモログおよび／もしくは断片、ならびに／またはその薬学的に活性な塩、ならびに／または前記抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質ならびに／またはそのホモログおよび／もしくは断片が富化されたならびに／または天然に豊富な食品および／もしくは食品サプリメントの使用。
【請求項２】
ＢＰＤ、ＡＲＤＳ、ＩＲＤＳ、敗血症、ＳＩＲＳ、急性肺水腫、肺炎、間質性肺水腫および心血管系肺障害に罹患している患者のリストから選択される肺胞および／または細気管支における体液の異常蓄積を有する患者の急性呼吸不全の治療および／または予防のための医薬組成物を製造するための、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
ＡＲＦ、ＩＲＤＳ、または急性ＡＲＤＳおよび重度ＡＲＤＳからなる群から選択されるＡＲＤＳの治療および／または予防における使用のための医薬組成物を製造するための、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
前記抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質および／またはそのホモログおよび／または断片および／またはその薬学的に活性な塩は、少なくとも２つ以上の抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質ならびに／またはそのホモログおよび／もしく断片ならびに／またはその薬学的に活性な塩ならびに薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物として製剤化されている、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５】
前記医薬組成物は、眼内投与、鼻腔内投与、経口投与、局所投与、皮下投与および／または全身投与用に製剤化されている、請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６】
前記医薬組成物は、スプレー、エアゾール、吸入器および／またはネブライザーによる投与のために製剤化されている、請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項７】
前記医薬組成物は、適用および体重１ｋｇあたり０．１μｇ〜１００ｍｇ、好ましくは
適用および体重１ｋｇあたり１〜１００００μｇの用量で血液に全身投与するために製剤化されており、前記投与は、単回投与または毎日の多回適用として行われる、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質ならびに／またはそのホモログおよび／もしくは断片が富化された食品および／または食品サプリメントは、天然に存在する抗分泌因子（ＮＡＳＰ）が富化された卵黄のような、抗分泌因子が富化されたおよび／または天然に豊富な卵黄として提供される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項９】
前記卵黄は、配列番号３および／または配列番号４に開示されているアミノ酸配列を有する少なくとも０．０５ｎｇ／ｍｌの抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質断片を含む、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
急性呼吸不全の治療および／または予防における使用のための、配列番号１に示される少なくとも１つの抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質、ならびに／または同等の活性を有し、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むそのホモログおよび／もしくは断片、ならびに／またはその薬学的に活性な塩、ならびに／または前記抗分泌因子（ＡＦ）タンパク質ならびに／またはそのホモログおよび／もしくは断片が富化されたならびに／または天然に豊富な食品および／もしくは食品サプリメントを含む、医薬組成物。
【請求項１１】
ＢＰＤ、ＡＲＤＳ、ＩＲＤＳ、敗血症、ＳＩＲＳ、急性肺水腫、肺炎、間質性肺水腫および心血管系肺障害に罹患している患者のリストから選択される肺胞および／または気管支における体液の異常蓄積を有する患者の急性呼吸不全の治療および／または予防のための、請求項１０に記載の医薬組成物。
【国際調査報告】
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