(57)【要約】本発明は、ある種の障害および症状、例えば、嗜癖または強迫障害の処置のための化合物およびその使用方法に関する。一態様において、本発明は、嗜癖、嗜癖性行動、行動的嗜癖、脳内報酬系障害、強迫障害もしくは関連する状態を予防し、好転させ、処置し、またはそれからの回復を促進する方法であって、嗜癖、嗜癖性行動、行動的嗜癖、脳内報酬系障害、強迫障害もしくは関連する状態を予防し、好転させ、処置し、またはそれからの回復を促進することを必要とする被験体に、有効量の、開示された化合物または薬学的に許容され得るその塩を投与することを含む、方法を提供する。
2021512897.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
嗜癖、嗜癖性行動、行動的嗜癖、脳内報酬系障害、強迫障害もしくは関連する状態を処置し、またはそれからの回復を促進する方法であって、嗜癖、嗜癖性行動、行動的嗜癖、脳内報酬系障害、強迫障害もしくは関連する状態を処置し、またはそれからの回復を促進することを必要とする被験体に、有効量の、
【化７０】
2021512897.tif 000072
から選択される化合物または薬学的に許容され得るこれらの塩を投与することを含む、方法。
【請求項２】
乱用可能性を有する物質もしくは薬物への嗜癖によって引き起こされる離脱を処置し、またはそれからの回復を促進する方法であって、乱用可能性を有する物質もしくは薬物への嗜癖によって引き起こされる離脱を処置し、またはそれからの回復を促進することを必要とする被験体に、有効量の、
【化７１】
2021512897.tif 000073
から選択される化合物または薬学的に許容され得るこれらの塩を投与することを含む、方法。
【請求項３】
前記化合物が、
【化７２】
2021512897.tif 000074
または薬学的に許容され得るその塩である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記化合物が、
【化７３】
2021512897.tif 000075
または薬学的に許容され得るその塩である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
前記嗜癖が、アルコール、ニコチン、麻薬、処方薬またはレクリエーショナルドラッグから選択される乱用可能性を有する物質または薬物に対するものである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記乱用可能性を有する物質または薬物が、刺激薬、抑制剤、カンナビノイドアゴニストまたはオピオイドアゴニストから選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記乱用可能性を有する物質または薬物が、ヘロイン、コカイン、アルコール、ニコチン、吸入剤、バルビツレート、ベンゾジアゼピン、処方オピオイドアゴニスト鎮痛剤、ニコチン、アンフェタミンまたはこれらの類縁体、塩、組成物もしくは組み合わせから選択される、請求項５または６に記載の方法。
【請求項８】
前記乱用可能性を有する物質または薬物が、アルコール、ニコチン、ヘロイン、コカイン、テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）、アモバルビタール、アロバルビタール、アプロバルビタール、アルフェナール、バルビタール、ブラロバルビタール、ペントバルビタール、フェノバルビタール、セコバルビタール、メホバルビタール、ブタバルビタール、ツイナール、ジアゼパム（バリウム）、アルプラゾラム、ロラゼパム、クロナゼパム、ゾルピデム、ブプロピオン、カチノン、ＭＤＭＡ、アンフェタミン、メタンフェタミン、デキストロアンフェタミン、メチルフェニデート、アヘン、モルヒネ、オキシコドン、コデイン、メサドン、メペリジン、オキシモルフォン、ヒドロコドン、トラマドール、カルフェンタニル、ヒドロモルフォンもしくはフェンタニルまたはこれらの薬学的に許容され得る塩もしくは類縁体、またはこれらの組み合わせから選択される、請求項６または７に記載の方法。
【請求項９】
前記被験体がアルコールまたはニコチン嗜癖を有する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記被験体が多種薬剤乱用者である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記嗜癖によって引き起こされた星状膠細胞中へのグルタメート取り込みの減少を少なくとも部分的に反転させる、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
星状膠細胞、膠細胞、小膠細胞、ニューロン、内皮細胞または脳および／もしくは中枢神経系（ＣＮＳ）のその他の細胞によって媒介されるエネルギー代謝を増加させる、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記被験体中の嗜癖または嗜癖性行動を処置し、またはその再発を予防する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記化合物が、離脱中である嗜癖に陥った個体における離脱症状を減少させる、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
嗜癖性行動、行動的嗜癖、脳内報酬系障害、強迫障害もしくは関連する状態を予防し、好転させ、処置し、またはそれからの回復を促進する方法であって、嗜癖性行動、行動的嗜癖、脳内報酬系障害、強迫障害もしくは関連する状態を予防し、好転させ、処置し、またはそれからの回復を促進することを必要とする被験体に、有効量の、
【化７４】
2021512897.tif 000076
から選択される化合物または薬学的に許容され得るこれらの塩を投与することを含む、方法。
【請求項１６】
離脱を処置するための第二の薬物を同時投与することをさらに含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記嗜癖性行動、行動的嗜癖、脳内報酬系障害、強迫障害または関連する状態が、強迫性障害（ＯＣＤ）、トゥレット症候群、抜毛癖、食欲不振、過食症、不安障害、精神病または心的外傷後ストレス障害である、請求項１５または１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記嗜癖性行動、行動的嗜癖、脳内報酬系障害、強迫障害または関連する状態が、ギャンブル嗜癖、セックス嗜癖、ポルノ嗜癖、摂食障害、消費嗜癖、激怒／怒り、仕事中毒、運動嗜癖、リスクを追及する嗜癖、完全主義、インターネットもしくはテレビゲーム嗜癖または電子機器の強迫性使用である、請求項１５または１６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、嗜癖および強迫障害などのある種の疾患および障害を処置し、好転させ（ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ）、またはかかる疾患および障害からの回復を促進するための化合物およびその使用方法に関する。
（関連出願の相互参照）
【０００２】
本願は、２０１８年２月９日に出願された米国仮特許出願第６２／６２８，６５８号の恩典を主張し、その内容の全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００３】
嗜癖および強迫障害は、単に行動としてではなく、それ自体疾患としてますます認識されている。これらの障害の神経学的基礎がよりよく理解されるようになるにつれ、薬学的介入によりこれらの障害を処置する可能性が存在する。しかしながら、これらの障害に対する効果的な処置は、未だとらえにくく、十分に調査されていない。
【０００４】
側坐核および腹側被蓋野（ＶＴＡ）は、嗜癖性薬物が作用する主要な部位であると考えられている。嗜癖性薬物には、ヘロイン、コカイン、アルコール、オピエート、ニコチン、アンフェタミンおよびこれらの合成類縁体が含まれる。このような薬物は、強化信号の処理に対するドーパミンの神経調節性影響の変化を引き起こし、これにより、側坐核中でのドーパミンの作用を延長させる。このような薬物は、側坐核および／またはＶＴＡ中のニューロンも刺激し得る。一般的な乱用薬物は、ドーパミンの放出を刺激し、これらの薬物の報酬効果および精神運動効果の両方を作り出す。反復性のドーパミン刺激から生じる中脳辺縁系のドーパミン系の永続的な機能的変化は、強迫性の薬物服用行動をもたらす。分子的および細胞性の適応が、薬物乱用に応答した、ＶＴＡ中でのおよび中脳辺縁系ドーパミン投射に沿った感作されたドーパミン活性に関与している。ドーパミン合成酵素であるチロシン水酸化酵素の活性は、興奮性入力に対して応答するこれらのニューロンの能力が増加するにつれて、嗜癖に陥った個体中で増加する。後者の効果は、転写因子ＣＲＥＢの活性の増加およびグルタメートに対するＡＭＰＡ受容体の重要なサブユニットであるＧｌｕＲ１の上方制御に続いて起こる。薬物探索行動および服薬行動は習慣性かつ強迫性となるので、これらの神経処理の変化は、意思決定能力の働きにおける適応性情動シグナルの漸減する影響の原因であり得る。
【０００５】
薬物が存在しない場合には常に、報酬機能の欠損が苦痛サイクルを開始するので、一般に離脱が起きる。このため、正常な恒常性状態を回復するために、薬物が必要である。離脱の最終段階を通過した後でさえ、以前に嗜癖に陥った個体が薬物または薬物関連刺激に曝されると、薬物探索行動が再開され得ることが研究によって示されている。そのため、嗜癖性薬物の不存在下で正常な脳機能を回復する何らかの手段なしに、嗜癖から抜け出すことは極めて困難である。
【０００６】
したがって、嗜癖、脳内報酬系障害、強迫障害および関連する状態に対するより効果的な処置への差し迫った、未だ充足されていない要望が存在する。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】ＡＳＴ−００４は、培養された星状膠細胞中の細胞内Ｃａ２＋を増加させる。Ａ）色素が負荷された（Ｃａｌ５２０）星状膠細胞中の静止状態のＣａ２＋レベルの画像。Ｂ）パネルＡ中の縦軸に対するＣａ２＋蛍光の時空間プロット。ＡＳＴ−００４は、２分の時点で添加された。６分以上にわたる振動性のＣａ２＋応答に注目されたい。Ｃ）表記されているＡ３Ｒアゴニスト濃度での、積分されたＣａ２＋蛍光強度（ＤＦ／Ｆ０）のプロット。値は、平均＋／−ＳＥＭ（各濃度で３つの実験からプールされたデータ）。画像は、Ｎｉｋｏｎ  Ｓｗｅｐｔｆｉｅｌｄ共焦点顕微鏡上で取得した。
【０００８】
【図２】プリン作動性アゴニストＡＳＴ−００４によって、酸素消費速度（ＯＣＲ）が増加される。培養された星状膠細胞を標準的なＳｅａｈｏｒｓｅ皿（２４ウェル）上に播種した。基礎ＯＣＲを確立した後、第一の矢印で、プリン作動性アゴニストＡＳＴ−００４または対照（アンタゴニスト）を添加した。ＡＳＴ−００４処置されたウェル中で、基礎呼吸が著しく増加した。第二の矢印で、オリゴマイシンを添加し、ＡＴＰ産生に起因し得るＯＣＲの量を明らかにした。脱共役剤ＦＣＣＰの添加（第三の矢印）によって明らかとされるように、ＡＳＴ−００４処置された星状膠細胞中で、最大の呼吸は有意により高かった。ミトコンドリアの阻害剤の最終添加により、非ミトコンドリア性ＯＣＲ源が明らかになった。
【０００９】
【図３】ＡＳＴ−００４によって低減され、Ａ３Ｒアンタゴニスト（ＭＲＳ１５２３）によって遮断される光血栓症（ｐｈｏｔｏｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ）によって誘導された脳卒中梗塞。Ａ）ビヒクル中（食塩水注射）および処置されたマウス、ＡＳＴ−００４（０．２ｍｇ／ｋｇ）中での、光血栓症により脳卒中となった脳の連続的冠状切片。脳卒中の２４時間後にマウスを屠殺し、脳を取り出し、切片とし、ＴＴＣで染色した。Ｂ）ＴＴＣ染色された脳卒中の平均体積。Ｃ）Ａ３ＲアンタゴニストＭＲＳ１５２３で前処置されたマウス中の脳卒中体積。データは、２つの実験からプールした（平均＋／−ＳＥＭ）。
【００１０】
【図４】ＴＢＩによって誘導されたＧＦＡＰ発現の増加は、ＡＳＴ−００４（ＡＳＴ−００４）およびＭＲＳ２３６５処置によって低減される。マウスは、（脳の同側に）偽またはＴＢＩを受け、ＴＢＩの３０分後に、表記されているとおりの処置を受けた。傷害から７日後に、マウスから血漿を取得し、次いで、同側および反対側半球から脳ホモジネートを得るために屠殺した（中央三番目）。ウェスタンブロット分析は、アクチンに対して正規化した。（ＡおよびＣ）７日における、同側の脳ホモジネートおよび血漿に対する代表的なブロットが示されている。（ＢおよびＤ）３つの異なる実験（Ｎ＝処置当たりのマウスの数）からデータをプールし、棒ヒストグラムとしてプロットし、対照の平均＋／−ＳＥＭとして示されている。ＴＢＩ非処置（濃い灰色の棒）から＊ｐ＜０．０５および＊＊ｐ＜０．０１。
【００１１】
【図５】インビボ生物発光画像化は、ＡＳＴ−００４がＡＴＰを増加させることを示す。Ａ）星状膠細胞中でルシフェラーゼレポーター遺伝子（ＧＦＡＰプロモーター）を発現しているトランスジェニックマウスを鈍的ＴＢＩ（閉鎖性皮質衝撃（Ｃｌｏｓｅｄ  Ｃｏｒｔｉｃａｌ  Ｉｍｐａｃｔ））に供した。最初の外傷から２〜４日後に、合成Ｄ−ルシフェリン類縁体（Ｃｙｔｌｕｃ１、１００μＬ）をマウスに腹腔内注射した。Ｃｙｃｌｕｃ１注射の５分後に、ＩＶＩＳ  Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｉｍａｇｅｒを用いて、生物発光信号を記録した（緑の矢印）。次いで、４分の時点で、ビヒクルまたはＡＳＴ−００４をマウスに腹腔内注射し（青の矢印）、直ちにフォトン束を測定し、次いで、２０分におけるフォトン束と比較した（赤い矢印）。Ｂ）ＡＳＴ−００４を注射されたマウスが、ビヒクルと比較して、より高いフォトン束レベルを呈し、星状膠細胞中でのより高いＡＴＰ産生と合致することを示すヒストグラムプロット。
【００１２】
【図６】ＧＬＵＤ１発現は、ｓｈＲＮＡで処理された培養星状膠細胞中において８０％低下する。Ａ）対照（Ｓｃｒａｍ）またはＧＬＵＤ１ｓｈＲＮＡに供された星状膠細胞細胞株（Ｃ８Ｄ１Ａ）から得られた細胞抽出物のウェスタンブロット分析。ＧＬＵＤ１レベルは、著しく低下する。比較のために、ＧＬＡＳＴ、グルタチオン合成酵素（ＧＳ）およびアクチンのウェスタンブロットも示されている。Ｂ）アクチンに対して正規化された発現レベルのヒストグラムプロット。ＧＬＵＤ１は、およそ８０％低下する。
【００１３】
【図７】星状膠細胞中でのＧＬＵＤ１のノックダウン（ＫＤ）は、Ｐ２Ｙ１ＲおよびＡ３Ｒによって刺激されるＡＴＰの増加を遮断する。Ａ、Ｂ）通常のグルコース培地（Ａ）または無グルコース、ガラクトース（Ｂ）補充培地のいずれかの中で、Ｐ２Ｙ１ＲアゴニストＭＲＳ２３６５で２０分間、細胞を処理した。ガラクトースは、エネルギー代謝のために、細胞に酸化的リン酸化を使用することを強制する。表記濃度のＭＲＳ２３６５において、Ｐ２Ｙ１Ｒ刺激後に、ＡＴＰレベルが有意に増加されるが、対照細胞（スクランブルされたｓｈＲＮＡ）中のみであった。ＧＬＵＤ１に対するｓｈＲＮＡで処理された細胞は応答しなかった。Ｃ）Ａ３ＲアゴニストＡＳＴ−００４によって、ＡＴＰレベルも増加したが、ＧＬＵＤ１ｓｈＲＮＡで処理された細胞中では増加しなかった。ルシフェリン−ルシフェラーゼキットで細胞内ＡＴＰレベルを測定した。
【００１４】
【図８】ＡＳＴ−００４処置は、マウスにおけるコカイン自己投与を有意に低下させる。ベースラインでの各マウスの個別のコカイン摂取に対して正規化されたデータ。２時間の毎日のセッションにおいて、固定比率３のスケジュールで、コカインを自己投与する（０．５ｍｇ／ｋｇ／注入）ようにマウスを訓練した。マウスの摂取を安定化させた後（ベースライン）、食塩水（黒丸）または薬物ＡＳＴ−００４（白丸）のいずれかを含有する浸透圧ミニポンプを第０日にマウスに移植した、各群中、ｎ＝５匹のマウス。マウスを１日休息させ（７日目）、次いで、毎日のセッションでの自己投与に戻した。ＡＳＴ−００４処置されたマウスでは注入の数が低下したのに対して、食塩水処置されたマウスは注入を増加したことに注目されたい。
【００１５】
【図９】本発明において有用なある種の化合物の構造。このような化合物は、本明細書に記載されている方法のいずれにおいても使用され得る。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
１．嗜癖、嗜癖性行動、行動的嗜癖、強迫障害および行動ならびに関連する状態
コカイン自己投与マウスは、脳のＶＴＡ（腹側被蓋野）中に有意により高いグルタメートレベルを示す。ＶＴＡ、特に、ＶＴＡドーパミンニューロンは、報酬系、動機づけ、認知および薬物嗜癖においていくつかの機能を果たし、いくつかの精神障害の中心であり得る。上昇したグルタメートレベルは、少なくとも１つには、星状膠細胞中へのグルタメート取り込みの減少によるものと思われる。理論に拘束されることを望まないが、グルタメートの低下した利用可能性は星状膠細胞機能に対して負の効果を有し、この機能の低下はニューロンの活動および薬物探索行動に影響を及ぼすことが考えられる。本明細書に開示されている化合物は、例えば、星状膠細胞機能のこのような低下を反転させることによって、嗜癖に陥った個体を処置し、またはその再発を予防することがここに見出された。星状膠細胞機能のこのような低下は、一つには、星状膠細胞中のグルタメート輸送体（ＧＬＴ−１）の低下した発現によるものであり得る。星状膠細胞はＡＴＰを産生するためにグルタメートを代謝するので、これは、グルタメートの取り込みを損ない、星状膠細胞の酸化的代謝および下流のＡＴＰ依存性過程を弱め、これにより、星状膠細胞がＶＴＡニューロンの活動にとって最適な環境を維持する能力を弱める可能性がある。
【００１７】
したがって、一態様において、本発明は、嗜癖、嗜癖性行動、行動的嗜癖、脳内報酬系障害、強迫障害もしくは関連する状態を予防し、好転させ、処置し、またはそれからの回復を促進する方法であって、嗜癖、嗜癖性行動、行動的嗜癖、脳内報酬系障害、強迫障害もしくは関連する状態を予防し、好転させ、処置し、またはそれからの回復を促進することを必要とする被験体に、有効量の、開示された化合物または薬学的に許容され得るその塩を投与することを含む、方法を提供する。
【００１８】
いくつかの実施形態において、嗜癖は、乱用可能性を有する物質または薬物に対するものである。いくつかの実施形態において、乱用可能性を有する物質または薬物は、処方薬またはレクリエーショナルドラッグである。
【００１９】
いくつかの実施形態において、乱用可能性を有する物質または薬物は、アルコール、ニコチン、刺激薬、カンナビノイドアゴニストまたはオピオイドアゴニストから選択される。いくつかの実施形態において、乱用可能性を有する物質または薬物は、ヘロイン、コカイン、アルコール、吸入剤、オピオイド、ニコチン、アンフェタミンまたはこれらの合成類縁体、塩、組成物もしくは組み合わせから選択される。
【００２０】
いくつかの実施形態において、アンフェタミンは、ブプロピオン、カチノン、ＭＤＭＡまたはメタンフェタミンから選択される。
【００２１】
いくつかの実施形態において、処方薬またはレクリエーショナルドラッグは、カンナビノイドアゴニストまたはオピオイドアゴニストから選択される。
【００２２】
いくつかの実施形態において、嗜癖は、アルコールまたはニコチン嗜癖である。
【００２３】
いくつかの実施形態において、被験体は多種薬剤乱用者である。
【００２４】
いくつかの実施形態において、処方薬またはレクリエーショナルドラッグは、コカイン、ヘロイン、ブプロピオン、カチノン、ＭＤＭＡもしくはメタンフェタミンモルヒネ、オキシコドン、ヒドロモルフォン、フェンタニルまたはこれらの組み合わせから選択される。
【００２５】
いくつかの実施形態において、開示された化合物は、星状膠細胞ミトコンドリアなどの、星状膠細胞によって媒介されるエネルギー代謝を増加させる。いくつかの実施形態において、化合物は、乱用可能性を有する物質によって引き起こされた星状膠細胞中へのグルタメートの取り込みの低下を反転させる。いくつかの実施形態において、化合物は、嗜癖によって引き起こされた脳内報酬系の再構成を少なくとも部分的に反転させる。いくつかの実施形態において、このような効果は、ＶＴＡ中の星状膠細胞Ａ３Ｒまたは小膠細胞のＡ３Ｒなどの脳または中枢神経系アデノシンＡ３受容体によって媒介される。
【００２６】
別の態様において、本発明は、星状膠細胞、膠細胞、小膠細胞、ニューロン、内皮細胞または脳および／もしくは中枢神経系のその他の細胞によって媒介されるエネルギー代謝を増加させることによって、嗜癖、嗜癖性行動、行動的嗜癖、脳内報酬系障害、強迫障害もしくは関連する状態を予防し、好転させ、処置し、またはそれからの回復を促進する方法であって、嗜癖、嗜癖性行動、行動的嗜癖、脳内報酬系障害、強迫障害もしくは関連する状態を予防し、好転させ、処置し、またはそれからの回復を促進することを必要とする被験体に、有効量の、開示された化合物または薬学的に許容され得るその塩を投与することを含む、方法を提供する。
【００２７】
いくつかの実施形態において、該方法は、被験体中の嗜癖または嗜癖性行動を処置し、またはその再発を予防する。いくつかの実施形態において、被験体は、嗜癖性薬物（乱用可能性を有する薬物）などの１またはそれを超える嗜癖性物質への嗜癖に陥っている。以下に記載されているように、このような薬物には、ヘロイン、コカイン、ニコチンまたはオピオイドアゴニストなどの処方薬およびレクリエーショナルドラッグが含まれる。
【００２８】
別の態様において、本発明は、１もしくはそれを超える嗜癖性物質もしくは嗜癖性薬物への嗜癖によって引き起こされる離脱を処置しまたは予防する方法であって、１もしくはそれを超える嗜癖性物質もしくは嗜癖性薬物への嗜癖によって引き起こされる離脱を処置しまたは予防することを必要とする被験体に、有効量の、開示された化合物または薬学的に許容され得るその塩を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態において、化合物は、離脱中である嗜癖に陥った個体における離脱症状を減少させる。いくつかの実施形態において、化合物は、離脱中である嗜癖に陥った個体における離脱を処置する。いくつかの実施形態において、該方法は、離脱を処置するための別の薬物を同時投与すること、および必要に応じて、精神療法などのカウンセリングを実施することをさらに含む。
【００２９】
いくつかの実施形態において、本発明は、強迫障害もしくは強迫行動を処置し、またはその再発を予防する方法であって、強迫障害もしくは強迫行動を処置し、またはその再発を予防することを必要とする被験体に、有効量の開示された化合物を投与することを含む、方法を提供する。
【００３０】
いくつかの実施形態において、強迫障害は、強迫性障害（ＯＣＤ）、トゥレット症候群、抜毛癖、食欲不振、過食症、不安障害、精神病または心的外傷後ストレス障害である。
【００３１】
別の態様によれば、本発明は、１またはそれを超える行動的嗜癖および嗜癖性行動または障害を処置する方法であって、１またはそれを超える行動的嗜癖および嗜癖性行動または障害を処置することを必要とする被験体に、開示された化合物または薬学的に許容され得るその塩を投与することを含む、方法を提供する。行動的嗜癖および嗜癖性障害は、ある種の活動中における脳内化学物質（例えば、セロトニン、アドレナリン、エピネフリンなど）の放出から感知する中毒から生じる。このような障害は本分野において公知であり、数例を挙げると、ギャンブル、セックス嗜癖、ポルノ嗜癖（ｐｏｒｎｏｇｒａｐｈｙ  ａｄｄｉｃｔｉｏｎ）、摂食障害、消費嗜癖、激怒／怒り、仕事中毒、運動嗜癖、リスクを追及する嗜癖（例えば、窃盗癖および放火癖）、完全主義、インターネットもしくはテレビゲーム嗜癖、ならびにソーシャルメディアの書き込みおよびチェックなどの電子機器の強迫性使用が含まれる。
【００３２】
いくつかの実施形態において、星状膠細胞の活性化は、アデノシン受容体（ＡＲ）、例えば、星状膠細胞もしくは小膠細胞と関連するまたは星状膠細胞もしくは小膠細胞によって発現されるアデノシン受容体（ＡＲ）などの１またはそれを超えるプリン作動性受容体を開示された化合物と接触させ、これにより、１またはそれを超えるこれらの受容体の活性を調節することを通じて達成される。いくつかの実施形態において、星状膠細胞上のＡ１、Ａ２Ａ、Ａ２ＢおよびＡ３などのアデノシン受容体に対する効果を通じて、化合物は、１またはそれを超える開示された疾患または状態を処置するために星状膠細胞を活性化する。いくつかの実施形態において、それを必要としている被験体への投与後に、開示された化合物は、星状膠細胞のエネルギー代謝またはニューロンの機能に対する影響を有するグルタメートの取り込みなどの１またはそれを超える機能に影響を与え、これにより、１またはそれを超える疾患または状態を処置する。いくつかの実施形態において、化合物はＡＲアゴニストである。いくつかの実施形態において、プリン作動性受容体は、アデノシンＡ３受容体（Ａ３Ｒ）である。いくつかの実施形態において、化合物はＡ３Ｒアゴニストである。いくつかの実施形態において、化合物は、ヒトＡ３受容体（ｈＡ３Ｒ）などのＡ３受容体（Ａ３Ｒ）における部分アゴニストまたはバイアスアゴニストまたはバイアス部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、化合物はＡ３受容体におけるバイアスアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、化合物は、ＡＳＴ−００４もしくはＭＲＳ１８７３（ＡＳＴ−００８）または薬学的に許容され得るその塩である。
【００３３】
Ｐ２Ｙ受容体は、Ｇタンパク質共役型受容体であり、これらの受容体の異なるサブタイプは、シナプスの情報交換、細胞の分化、イオンフラックス、血管拡張、血液脳関門透過性、血小板凝集および神経調節などの過程において重要な役割を有する。プリン作動性Ｐ２Ｙ受容体ファミリーの特徴付けられたメンバーには、アデニンヌクレオチドに結合する哺乳動物Ｐ２Ｙ１、Ｐ２Ｙ１１、Ｐ２Ｙ１２およびＰ２Ｙ１３受容体、ウラシルヌクレオチドに結合するＰ２Ｙ４、Ｐ２Ｙ６およびＰ２Ｙ１４受容体、ならびに混合された選択性を有するＰ２Ｙ２およびげっ歯類Ｐ２Ｙ４受容体が含まれる。いくつかの実施形態において、星状膠細胞の活性化は、Ｐ２Ｙ受容体、例えば、星状膠細胞と関連するまたは星状膠細胞によって発現されるＰ２Ｙ受容体などの１またはそれを超えるプリン作動性受容体を開示された化合物と接触させ、これにより、１またはそれを超える受容体の活性を調節することを通じて達成される。いくつかの実施形態において、星状膠細胞と関連するまたは星状膠細胞によって発現されるＰ２Ｙ１、Ｐ２Ｙ１１、Ｐ２Ｙ１２およびＰ２Ｙ１３受容体などのＰ２Ｙ受容体に対する効果を通じて、化合物は、１またはそれを超える開示された疾患または状態を処置するために星状膠細胞を活性化する。いくつかの実施形態において、Ｐ２Ｙ受容体は、Ｐ２Ｙ１受容体である。いくつかの実施形態において、Ｐ２Ｙ１受容体は、細胞内のミトコンドリアの膜上に位置する。いくつかの実施形態において、化合物はＰ２Ｙアゴニストである。いくつかの実施形態において、化合物は、例えば、ヒトＰ２Ｙ１受容体におけるＰ２Ｙ１アゴニストである。いくつかの実施形態において、化合物は、ヒトＰ２Ｙ１受容体などのＰ２Ｙ１受容体におけるバイアスアゴニスト、部分アゴニストまたはバイアス部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、化合物はＰ２Ｙ１受容体におけるバイアスアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、化合物は、２ＭｅＳＡＤＰ、ＭＲＳ２３６５、ＭＲＳ１８７３の５’−ジホスフェート（ＭＲＳ１８７３は、ＡＳＴ−００８としても知られる）もしくはＡＳＴ−００４または薬学的に許容され得るこれらの塩である。
【００３４】
一態様において、本発明は、嗜癖、嗜癖性行動、行動的嗜癖、脳内報酬系障害、強迫障害もしくは関連する状態を処置し、またはそれからの回復を促進する方法であって、嗜癖、嗜癖性行動、行動的嗜癖、脳内報酬系障害、強迫障害もしくは関連する状態を処置し、またはそれからの回復を促進することを必要とする被験体に、有効量の、
【化１】
2021512897.tif 000003
から選択される化合物または薬学的に許容され得るこれらの塩を投与することを含む、方法を提供する。
【００３５】
別の態様において、本発明は、乱用可能性を有する物質もしくは薬物への嗜癖によって引き起こされる離脱を処置し、またはそれからの回復を促進する方法であって、乱用可能性を有する物質もしくは薬物への嗜癖によって引き起こされる離脱を処置し、またはそれからの回復を促進することを必要とする被験体に、有効量の、
【化２】
2021512897.tif 000004
から選択される化合物または薬学的に許容され得るこれらの塩を投与することを含む、方法を提供する。
【００３６】
いくつかの実施形態において、化合物は
【化３】
2021512897.tif 000005
または薬学的に許容され得るこれらの塩である。
【００３７】
いくつかの実施形態において、化合物は
【化４】
2021512897.tif 000006
または薬学的に許容され得るこれらの塩である。
【００３８】
いくつかの実施形態において、嗜癖が、アルコール、ニコチン、麻薬、処方薬またはレクリエーショナルドラッグから選択される乱用可能性を有する物質または薬物に対するものである。
【００３９】
いくつかの実施形態において、乱用可能性を有する物質または薬物が、刺激薬、抑制剤、カンナビノイドアゴニストまたはオピオイドアゴニストから選択される。
【００４０】
いくつかの実施形態において、乱用可能性を有する物質または薬物は、ヘロイン、コカイン、アルコール、ニコチン、吸入剤（例えば、βアゴニストまたはコルチコステロイドまたはステロイドなどの気管支拡張薬）、バルビツレート、ベンゾジアゼピン、処方オピオイドアゴニスト鎮痛剤、ニコチン、アンフェタミンまたはこれらの類縁体、塩、組成物もしくは組み合わせから選択される。
【００４１】
いくつかの実施形態において、乱用可能性を有する物質または薬物が、アルコール、ニコチン、ヘロイン、コカイン、テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）、アモバルビタール、アロバルビタール、アプロバルビタール、アルフェナール、バルビタール、ブラロバルビタール、ペントバルビタール、フェノバルビタール、セコバルビタール、メホバルビタール、ブタバルビタール、ツイナール、ジアゼパム（バリウム）、アルプラゾラム、ロラゼパム、クロナゼパム、ゾルピデム、ブプロピオン、カチノン、ＭＤＭＡ、アンフェタミン、メタンフェタミン、デキストロアンフェタミン、メチルフェニデート、アヘン、モルヒネ、オキシコドン、コデイン、メサドン、メペリジン、オキシモルフォン、ヒドロコドン、トラマドール、カルフェンタニル、ヒドロモルフォンもしくはフェンタニルまたはこれらの薬学的に許容され得る塩もしくは類縁体、またはこれらの組み合わせから選択される。
【００４２】
いくつかの実施形態において、被験体がアルコールまたはニコチン嗜癖を有する。
【００４３】
いくつかの実施形態において、被験体は、多種薬剤乱用者、例えば、ニコチンとアルコールの常用者またはオピオイドとカンナビノイドの常用者である。
【００４４】
いくつかの実施形態において、方法は、嗜癖によって引き起こされた星状膠細胞中へのグルタメート取り込みの減少を少なくとも部分的に反転させる。
【００４５】
いくつかの実施形態において、方法は、星状膠細胞、膠細胞、小膠細胞、ニューロン、内皮細胞または脳および／もしくは中枢神経系（ＣＮＳ）のその他の細胞によって媒介されるエネルギー代謝を増加させる。
【００４６】
いくつかの実施形態において、方法は、被験体中の嗜癖または嗜癖性行動を処置し、またはその再発を予防する。
【００４７】
いくつかの実施形態において、化合物は、離脱中である嗜癖に陥った個体における離脱症状を減少させる。
【００４８】
一態様において、本発明は、嗜癖性行動、行動的嗜癖、脳内報酬系障害、強迫障害もしくは関連する状態を予防し、好転させ、処置し、またはそれからの回復を促進する方法であって、嗜癖性行動、行動的嗜癖、脳内報酬系障害、強迫障害もしくは関連する状態を予防し、好転させ、処置し、またはそれからの回復を促進することを必要とする被験体に、有効量の、
【化５】
2021512897.tif 000007
から選択される化合物または薬学的に許容され得るこれらの塩を投与することを含む、方法を提供する。
【００４９】
いくつかの実施形態において、化合物は
【化６】
2021512897.tif 000008
または薬学的に許容され得るこれらの塩である。
【００５０】
いくつかの実施形態において、化合物は
【化７】
2021512897.tif 000009
または薬学的に許容され得るこれらの塩である。
【００５１】
いくつかの実施形態において、方法は、離脱を処置するための第二の薬物を同時投与することをさらに含む。
【００５２】
いくつかの実施形態において、嗜癖性行動、行動的嗜癖、脳内報酬系障害、強迫障害または関連する状態が、強迫性障害（ＯＣＤ）、トゥレット症候群、抜毛癖、食欲不振、過食症、不安障害、精神病または心的外傷後ストレス障害である。
【００５３】
いくつかの実施形態において、嗜癖性行動、行動的嗜癖、脳内報酬系障害、強迫障害または関連する状態が、ギャンブル嗜癖、セックス嗜癖、ポルノ嗜癖、摂食障害、消費嗜癖、激怒／怒り、仕事中毒、運動嗜癖、リスクを追及する嗜癖（例えば、窃盗癖および放火癖）、完全主義、インターネットもしくはテレビゲーム嗜癖または電子機器の強迫性使用である。
【００５４】
いくつかの実施形態において、該方法は、嗜癖によって引き起こされた星状膠細胞中へのグルタメート取り込みの減少を少なくとも部分的に反転させる。
【００５５】
いくつかの実施形態において、該方法は、星状膠細胞、膠細胞、小膠細胞、ニューロン、内皮細胞または脳および／もしくは中枢神経系（ＣＮＳ）のその他の細胞によって媒介されるエネルギー代謝を増加させる。
【００５６】
いくつかの実施形態において、該方法は、被験体中の嗜癖性行動、行動的嗜癖、脳内報酬系障害、強迫障害または関連する状態を処置し、またはその再発を予防する。
【００５７】
いくつかの実施形態において、化合物は、経口、静脈内または非経口投与される。いくつかの実施形態において、被験体は、ヒトなどの哺乳動物である。いくつかの実施形態において、ヒトは、成人のヒトである。
【００５８】
２．定義
本明細書において使用される「嗜癖」という用語には、別段の指定がなければ、物質への身体的または心理的依存を含む。嗜癖は、物質が中断されると、離脱症状または精神的もしくは身体的苦痛を伴い得る。いくつかの実施形態において、嗜癖には、薬物嗜好、薬物依存、習慣形成、神経および／もしくはシナプスの変化、脳内報酬系障害の発症、行動の変化または被験体中での嗜癖のその他の徴候もしくは症状の１またはそれより多くが含まれる。
【００５９】
本明細書において使用される「嗜癖性薬物」または「乱用可能性を有する薬物」という用語には、疾患の処置に対する規制機関によって承認されたか否かを問わず、嗜癖または強迫行動の臨床的、行動的または神経学的症状発現をもたらすことが知られているニコチンなどの薬物およびその他の物質が含まれる。いくつかの実施形態において、嗜癖性薬物には、ニコチン、カンナビノイドアゴニスト、刺激薬、抑制剤またはオピオイドアゴニストが含まれる。「嗜癖性物質」は、嗜癖性薬物の他に、アルコールなどのその他の乱用物質を表す。したがって、嗜癖性物質の例には、ヘロイン、コカイン、アルコール、オピエート、ニコチン、吸入剤、バルビツレート、アンフェタミンおよびこれらの合成類縁体が含まれる。
【００６０】
３．本発明のある種の化合物の記述
一態様において、本発明は、嗜癖などの開示された疾患、障害または状態を予防し、処置し、好転させ、またはかかる疾患、障害または状態からの回復を促進するのに有用な化合物を提供する。いくつかの実施形態において、該化合物は、星状膠細胞によって媒介される神経保護および神経再生を増加させる。いくつかの実施形態において、該化合物は、Ａ３受容体に対して選択的である、例えば、他のアデノシン受容体と比べて少なくとも１０倍、または例えば、他のアデノシン受容体と比べて２５倍、５０倍、１００倍、５００倍もしくは１０００倍超、Ａ３受容体に対して選択的である。いくつかの実施形態において、該化合物は、Ａ３受容体を選択的に調節する。いくつかの実施形態において、該化合物は、Ａ３受容体における選択的アゴニストである。いくつかの実施形態において、該化合物は、Ａ３受容体における選択的部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、該化合物は、Ａ１およびＡ３受容体の両方における二重部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、化合物はバイアス完全または部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、化合物はバイアス完全または部分アンタゴニストである。
【００６１】
さらなる実施形態において、該化合物は、Ｐ２Ｙ１受容体に対して選択的である、例えば、他のＰ２Ｙ受容体と比べて少なくとも１０倍、または例えば、他のＰ２Ｙ受容体と比べて２５倍、５０倍、１００倍、５００倍もしくは１０００倍超、Ｐ２Ｙ１受容体に対して選択的である。いくつかの実施形態において、該化合物は、Ｐ２Ｙ１受容体を選択的に調節する。いくつかの実施形態において、該化合物は、Ｐ２Ｙ１受容体における選択的アゴニストである。いくつかの実施形態において、該化合物は、Ｐ２Ｙ１受容体における選択的部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、化合物はバイアス完全または部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、化合物はバイアス完全または部分アンタゴニストである。
【００６２】
「バイアス」という用語は、受容体と関連する経路の１またはそれより多くを優先的に調節し、活性化し、刺激し、または拮抗するが、全てを調節し、活性化し、刺激し、または拮抗するわけではない化合物を表す。
【００６３】
理論に拘束されることを望まないが、バイアス完全または部分受容体活性化作用または拮抗作用は、Ａ３またはＰ２Ｙ１受容体に関連した１またはそれを超える経路の選択的調節を可能にし、これは、疾患または状態の改善された処置および（副作用を引き起こし得る）所望でない経路の調節の回避をもたらし得ると考えられる。いくつかの実施形態において、選択的調節は、本明細書に開示されているように星状膠細胞を優先的に活性化する。したがって、いくつかの実施形態において、開示された化合物は、アデノシンＡ３受容体またはＰ２Ｙ１受容体に関連する１またはそれを超えるＧ共役型またはＧ非依存性経路のバイアス完全または部分アゴニストまたはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、該化合物は、β−アレスチン活性化、細胞内カルシウム動員、ｃＡＭＰ調節、ＡＴＰ依存性カリウムチャンネル活性化またはＥＲＫ１／２リン酸化またはこのような経路と関連するその他の下流の細胞活動など、Ａ３またはＰ２Ｙ１受容体によって媒介される経路を選択的に調節する。いくつかの実施形態において、経路は、神経保護もしくは神経回復を増加させ、または神経保護もしくは神経回復に関連する。いくつかの実施形態において、化合物は、ＡＳＴ−００４などの（Ｎ）−メタノカルバヌクレオシドまたは薬学的に許容され得るその塩から選択される。
【００６４】
本明細書において使用される「メタノカルバヌクレオシド」という用語は、リボース糖のテトラヒドロフラン環中に存在する酸素がメチレン単位で置換されており、生じた炭素環式環がシクロプロピル環に縮合して、構造
【化８】
2021512897.tif 000010
などのビシクロ［３．１．０］ヘキサンを形成するヌクレオシド類縁体を表す。理論に拘束されることを望まないが、メタノカルバヌクレオシドは、ある種の受容体サブタイプによって好まれると考えられる糖のコンフォメーションまたは擬似コンフォメーションを模倣すると考えられる。いくつかの実施形態において、ノース型メタノカルバヌクレオシドは、Ｃ３’−エンド／Ｃ２’−エキソ糖コンフォメーションを模倣するまたは好むメタノカルバヌクレオシドであり、サウス型ヌクレオシドヌクレオシドは、Ｃ３’−エキソ／Ｃ２’−エンドコンフォメーションを模倣するまたは好むメタノカルバヌクレオシドである。いくつかの実施形態において、（Ｎ）−メタノカルバ（「ノース型」メタノカルバ）糖は、以下の構造：
【化９】
2021512897.tif 000011
を有する。いくつかの実施形態において、（Ｎ）−メタノカルバ糖は、以下の構造：
【化１０】
2021512897.tif 000012
を有し、本明細書において、「Ｄ−（Ｎ）−メタノカルバ糖」と称される。他の実施形態において、メタノカルバ糖は、サウス型または（Ｓ）−メタノカルバ、立体配置である。いくつかの実施形態において、このようなメタノカルバ糖は、構造：
【化１１】
2021512897.tif 000013
によって表される。いくつかの実施形態において、（Ｓ）−メタノカルバ糖は、以下の構造：
【化１２】
2021512897.tif 000014
を有し、本明細書において、「Ｄ−（Ｓ）−メタノカルバ糖」と称される。
【００６５】
いくつかの実施形態において、該化合物は、Ａ３またはＰ２Ｙ１受容体において機能的に選択的である、すなわち、例えば、１もしくはそれを超える経路を調節するが、他の経路は調節しないことによって、または１もしくはそれを超える経路を活性化し、１もしくはそれを超えるその他の経路を非活性化することによって、Ａ３またはＰ２Ｙ１受容体によって媒介される経路の間で選択的に識別する。いくつかの実施形態において、該化合物は、ｃＡＭＰシグナル伝達によって測定されるアンタゴニストであるが、β−アレスチン動員に対する部分アゴニストである。他の実施形態において、該化合物は、Ｇｑ／１１によって媒介されるＣａ２＋動員のアゴニストであり、アレスチン動員の部分アゴニストまたはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、本発明は、バイアスのあるまたは機能的に選択的なＡ３受容体調節を介して（例えば、上記されている経路、例えばグルタメート取り込みなどの経路の間での選択的な受容体活性化作用または拮抗作用によって）、嗜癖、嗜癖性行動、行動的嗜癖、脳内報酬系障害、強迫障害もしくは関連する状態を処置し、またはそれからの回復を促進する方法であって、嗜癖、嗜癖性行動、行動的嗜癖、脳内報酬系障害、強迫障害もしくは関連する状態を処置し、またはそれからの回復を促進することを必要とする患者に、有効量の開示された化合物を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態において、該化合物は、ＤＭＰＡ、ＣＣＰＡ、ＭＲＳ１７６０またはＭＲＳ５４２から選択される（Ｖｅｒｚｉｊｌ  Ｄ，ら、“Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｌｉｇａｎｄｓ，”Ｐｕｒｉｎｅｒｇｉｃ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ７：１７１−１９２（２０１１）参照）。いくつかの実施形態において、該化合物はＤＢＸＲＭである。いくつかの実施形態において、化合物は、ＡＳＴ−００４もしくはＭＲＳ１８７３（ＡＳＴ−００８）などの（Ｎ）−メタノカルバヌクレオシドまたは薬学的に許容され得るその塩から選択される。
【００６６】
本明細書に詳しく記載されているものなどのある種のプリンヌクレオシド一、二および三リン酸は、おそらくは、細胞膜の表面上に存在し、および血液と血漿中で循環している、ヌクレオチドの脱リン酸化に関与する酵素であるエクトヌクレオチダーゼによって、インビボで迅速に脱リン酸化されることが驚くべきことに見出されている（Ｚｉｇａｎｓｈｉｎら、Ｐｆｌｕｇｅｒｓ  Ａｒｃｈ．（１９９５）４２９：４１２−４１８）参照。どのヌクレオチド類縁体がエクトヌクレオチダーゼに対する基質であり、したがって、インビボで脱リン酸化されると予測されるかを予想することは、多くの場合、極めて困難である。いくつかの実施形態において、脱リン酸化された化合物は、治療上の有効性に関与する。したがって、いくつかの実施形態において、対応するリン酸化されたモノホスフェート、ジホスフェートもしくはトリホスフェートまたはこれらのアルキルもしくはフェニルエステルなどのホスフェートエステルは、治療効果に関与する薬剤のプロドラッグまたは前駆体である。
【００６７】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、血液脳関門（ＢＢＢ）を通過することができる。本明細書において使用される「血液脳関門」または「ＢＢＢ」という用語は、厳密な意味でのＢＢＢおよび血液脊髄関門を表す。脳血管の内皮、基底膜および神経膠細胞からなる血液脳関門は、脳内への物質の透過を制限するように作用する。いくつかの実施形態において、全薬物の脳／血漿比は、患者への投与（例えば、経口または静脈内投与）後に、少なくともおよそ０．０１である。いくつかの実施形態において、全薬物の脳／血漿比は、少なくともおよそ０．０３である。いくつかの実施形態において、全薬物の脳／血漿比は、少なくともおよそ０．０６である。いくつかの実施形態において、全薬物の脳／血漿比は、少なくともおよそ０．１である。いくつかの実施形態において、全薬物の脳／血漿比は、少なくともおよそ０．２である。
【００６８】
ＣＩ−ＩＢ−ＭＥＣＡおよびＭＲＳ５６９８などの典型的なアデノシンＡ３受容体アゴニストは、通例２より大きいｃＬｏｇＰ値を有する低溶解度の親油性化合物である。この親油性は、これらの化合物の高い血漿タンパク質結合、高い脳結合およびその結果生じる脳内Ａ３受容体との相互作用に利用可能な薬物の低い遊離画分に寄与する主要な要因である。いくつかの実施形態において、実質的に異なる物理化学特性を有するＡＳＴ−００４またはＭＲＳ１８７３（ＡＳＴ−００８）などの開示された化合物が選択され、これらのおよび関連する化合物は、ｃＬｏｇＰ＜０を有する親水性化合物であり、高い溶解度、低い血漿および脳結合ならびにＡ３受容体との相互作用に利用可能な高い非結合薬物濃度をもたらす。
【００６９】
したがって、いくつかの実施形態において、該化合物は、約０．８、約０．７、約０．６、約０．５、約０．４、約０．３、約０．２、約０．１、約０．０５、約０．０１または約０．００５未満のｃＬｏｇＰを有する。いくつかの実施形態において、該化合物は、約−０．１、−０．２、−０．３、−０．４、−０．５、−０．６、−０．７、−０．８もしくはー０．９またはそれ未満など、約０未満のｃＬｏｇＰを有する。いくつかの実施形態において、該化合物は、約０．５〜０．９の血漿中非結合画分を有する。いくつかの実施形態において、該化合物は、約０．６〜０．８５、０．７〜０．８または約０．７５の血漿中非結合画分を有する。いくつかの実施形態において、該化合物は、少なくとも約０．０２または少なくとも約０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．１２、０．１５もしくは０．１７またはそれを超える脳内非結合画分を有する。いくつかの実施形態において、該化合物は、約０．６〜０．８５、０．７〜０．８もしくは約０．７５および／または少なくとも０．０８の脳内非結合画分の血漿中非結合画分を有する。
【００７０】
本発明の化合物は、慣用的な実験操作のみを用いて、本分野において公知の方法を使用して調製され得る。例えば、本発明のある種の化合物は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第７，０８７，５８９号（およびその中に引用されている参考文献）中に示されている手法にしたがって調製され得る。
【００７１】
いくつかの実施形態において、化合物は、アデノシン、ＡＤＰ、２−メチルチオ−ＡＤＰ三ナトリウム塩、ＡＴＰ、ＡＴＰ二ナトリウム塩、α，β−メチレンＡＴＰ、α，β−メチレンアデノシン５’−三リン酸三ナトリウム塩、２−メチルチオアデノシン三リン酸四ナトリウム塩、２−ＭｅＳＡＴＰ、ＢｚＡＴＰトリエチルアンモニウム塩、イノシン、シチジン、アシル化されたシチジン、シチジン一リン酸（ＣＭＰ）、シチジン二リン酸（ＣＤＰ）、シチジン三リン酸（ＣＴＰ）、ＣＤＰ−コリン、ＣＭＰ−コリン、デヌホソル、デヌホソル四ナトリウム、ＧＴＰ、ＩＴＰ、ＭＲＳ５４１、ＭＲＳ５４２、ＭＲＳ１７６０、ＭＲＳ２１７９、ＭＲＳ２２７９、ＭＲＳ２３４１、ＭＲＳ２３６５、ＭＲＳ２５００、ＭＲＳ２６９０、ＭＲＳ２６９８、ＭＲＳ３５５８、ＭＲＳ４３２２、ＭＲＳ５１５１、ＭＲＳ５６７６、ＭＲＳ５６７８、ＭＲＳ５６９７、ＭＲＳ５６９８、ＭＲＳ５９２３、ＭＲＳ５９３０、ベンジル−ＮＥＣＡ、ＩＢ−ＭＥＣＡ、Ｃｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡ、ＬＪ５２９、ＤＰＭＡ、ＣＣＰＡ、ＤＢＸＲＭ、ＨＥＭＡＤＯ、ＰＥＭＡＤＯ、ＨＥＮＥＣＡ、ＰＥＮＥＣＡ、ＣＰ６０８，０３９、ＣＰ５３２，９０３、ＣＧＳ２１６８０、ＡＲ１３２、ＶＴ７２、ＶＴ１５８、ＶＴ１６０、ＶＴ１６３、ＰＳＢ０４７４、ウリジン５’−二リン酸（ＵＤＰ）、ＵＤＰ−グルコース、ウリジンβ−チオ二リン酸（ＵＤＰβＳ）、ウリジン５’−三リン酸（ＵＴＰ）、ウリジンγ−チオリン酸（ＵＴＰγＳ）、２−チオＵＴＰ四ナトリウム塩、ＵＴＰγＳ三ナトリウム塩、ウリジン−５’−ジホスホグルコース、ジウリジン三リン酸、２−（ヘキシルチオ）（ＨＴ）−ＡＭＰ、ジアデノシン五リン酸、２’−デオキシ−２’−アミノ−ＵＴＰ、２−チオ−ＵＴＰ、トリアセチルウリジン、ジアセチル／アシルウリジン、ウリジン、スラミン、ジピリダモール類縁体、ジアデノシン四リン酸Ａｐ４Ｕ、Ａｐ４Ａ、ＩＮＳ３６５、ＩＮＳ３７２１７またはＩＮＳ４８８２３；（ここで各糖は、ノース型もしくはサウス型コンフォメーションのメタノカルバ糖で置換され得、または各糖は、Ｄ−リボ糖で置換され得る）；または薬学的に許容され得るこれらの塩から選択される。
【００７２】
いくつかの実施形態において、２−メチルチオ−ＡＤＰまたは薬学的に許容され得るその塩は、本発明の方法において有用である。理論に拘束されることを望まないが、インビボでは、２−ＭｅＳ  ＡＤＰは、Ａ３Ｒのバイアスアゴニスト、部分アゴニストまたはバイアス部分アゴニストである２−メチルチオアデノシンへ迅速に加水分解されると考えられる。２−メチルチオアデノシンは、ＡＳＴ−００４と極めて類似した受容体結合を有すると考えられる。
【００７３】
いくつかの実施形態において、該化合物は、ＩＢ−ＭＥＣＡもしくはＣａｎ−Ｆｉｔｅ  ＣＦ−１０１としても知られるＮ６−（３−ヨードベンジル）−アデノシン−５’−Ｎ−メチルウロンアミドもしくは２−クロロ−Ｎ６−（３−ヨードベンジル）−アデノシン−５’−Ｎ−メチルウロンアミド（２−ＣＩ−ＩＢ−ＭＥＣＡまたはＣａｎ−Ｆｉｔｅ  ＣＦ−１０２としても知られる）などのＮ６−ベンジルアデノシン−５’−Ｎ−メチルウロンアミド；（Ｎ）−メタノカルバヌクレオシド、例えば、（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−４−（２−クロロ−６−（（３−クロロベンジル）アミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）−２，３−ジ−ヒドロキシ−Ｎ−メチルビシクロ［３．１．０］ヘキサン−１−カルボキサミド（ＣＦ５０２としても知られる、Ｃａｎ−Ｆｉｔｅ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａ、ＭＡ）；（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−３−アミノ−５−［６−（２，５−ジクロロベンジルアミノ）プリン−９−イル］−４−ヒドロキシ−テトラヒドロフラン−２−カルボン酸メチルアミド（ＣＰ５３２，９０３としても知られる）；（１’Ｓ，２’Ｒ，３’Ｓ，４’Ｒ，５’Ｓ）−４−（２−クロロ−６−（３−クロロベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）−２，３−ジヒドロキシ−Ｎ−メチルビシクロ［３．１．０］ヘキサン−１−カルボキサミド（ＭＲＳ３５５８としても知られる）、２−（１−へキシニル）−Ｎ−メチルアデノシン；（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（６−（（３−ヨードベンジル）アミノ）−４Ｈ−プリン−９（５Ｈ）−イル）−Ｎ−メチルシクロペンタンカルボキサミド（ＣＦ１０１としても知られる、Ｃａｎ−Ｆｉｔｅ）；（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−４−（２−クロロ−６−（（３−ヨードベンジル）アミノ）−４Ｈ−プリン−９（５Ｈ）−イル）−２，３−ジヒドロキシ−Ｎ−メチルシクロペンタンカルボキサミド（ＣＦ１０２としても知られる、Ｃａｎ−Ｆｉｔｅ）；（１’Ｒ，２’Ｒ，３’Ｓ，４’Ｒ，５’Ｓ）−４−｛２−クロロ−６−［（３−ヨードフェニルメチル）アミノ］プリン−９−イル−｝−１−（メチルアミノカルボニル）−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，３−ジオール（ＭＲＳ１８９８としても知られる）；もしくは（Ｎ）−メタノカルバヌクレオシドの２−ジアルキニル誘導体；または薬学的に許容され得るこれらの塩などのＡ３Ｒアゴニストである。いくつかの実施形態において、該化合物は、ＩＢ−ＭＥＣＡ（ＣＦ１０１としても知られる）もしくはＣｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡ（ＣＦ１０２としても知られる）または薬学的に許容され得るこれらの塩から選択される。いくつかの実施形態において、該化合物は、上に開示されているものなどの（Ｎ）−メタノカルバヌクレオシドまたは薬学的に許容され得るその塩から選択される。
【００７４】
２−シクロヘキシル−Ｎ−（３，４−ジクロロフェニル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン（ＣＦ６０２としても知られる、Ｃａｎ−Ｆｉｔｅ）などの天然のリガンドの存在下で受容体活性を増強するＡ３Ｒアロステリック調節因子も含まれる。しかしながら、上に列記されているＡ３Ｒアゴニストは決して排他的なものではなく、その他のこのようなアゴニストも使用され得る。ポリマーに共有結合されたＡ３Ｒアゴニストの投与も想定される。例えば、Ａ３Ｒアゴニストは、アゴニストがポリアミドアミン（ＰＡＭＡＭ）デンドリマーに結合されている結合体の形態で投与され得る。
【００７５】
理論に拘束されることを望まないが、ある種のウリジン類縁体によるバイアス受容体活性化作用を含む完全または部分受容体活性化作用は、１またはそれを超える経路の選択的調節を可能にし、これは、開示されている疾患または状態の改善された処置および（副作用を引き起こし得る）所望でない経路の調節の回避をもたらし得ると考えられる。いくつかの実施形態において、選択的調節は、星状膠細胞または小膠細胞および乏突起膠細胞などのその他の膠細胞を優先的に活性化する。本発明において使用するのに適したある種のウリジン類縁体化合物は、国際公開第２０１４／１６０５０２号に開示されており、その全体が、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態において、化合物はＡ３Ｒアゴニストである。いくつかの実施形態において、化合物はＰ２Ｙ１受容体アゴニストである。いくつかの実施形態において、化合物はＡ１、Ａ２Ａ、Ａ２ＢまたはＡ３受容体などのアデノシン受容体におけるバイアスアゴニストである。いくつかの実施形態において、化合物は、Ａ３受容体におけるバイアスアゴニスト、部分アゴニストまたはバイアス部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、化合物は、Ｐ２Ｙ１受容体におけるバイアスアゴニスト、部分アゴニストまたはバイアス部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、化合物は、以下からなる群：
【化１３】
2021512897.tif 000015
【化１４】
2021512897.tif 000016
【化１５】
2021512897.tif 000017
もしくはこれらのリン酸化された類縁体または薬学的に許容され得るこれらの塩より選択される。
【００７６】
いくつかの実施形態において、化合物は、
【化１６】
2021512897.tif 000018
（Ｂｅｕｋｅｒｓ  ＭＷら、（２００４）“Ｎｅｗ，ｎｏｎ−ａｄｅｎｏｓｉｎｅ，ｈｉｇｈ−ｐｏｔｅｎｃｙ  ａｇｏｎｉｓｔｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  Ａ２Ｂ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｗｉｔｈ  ａｎ  ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ  ｐｒｏｆｉｌｅ  ｃｏｍｐａｒｅｄ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ａｇｏｎｉｓｔ  Ｎ−ｅｔｈｙｌｃａｒｂｏｘａｍｉｄｏａｄｅｎｏｓｉｎｅ，”Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４７（１５）：３７０７‐３７０９参照）；
【化１７】
2021512897.tif 000019
【化１８】
2021512897.tif 000020
（Ｄｅｖｉｎｅ  ＳＭら、“Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｅｗ  Ａ３Ｒ  ａｇｏｎｉｓｔｓ，”Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  １８，３０７８−３０８７．２０１０；およびＭｕｌｌｅｒ  ＣＥ，Ｊａｃｏｂｓｏｎ  ＫＡ．“Ｒｅｃｅｎｔ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ  ｉｎ  ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｌｉｇａｎｄｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  ｎｏｖｅｌ  ｄｒｕｇｓ，”Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ  １８０８，１２９０−１３０８．２０１１参照）；
【化１９】
2021512897.tif 000021
（Ｂｅｎ  ＤＤら、“Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ａｎｄ  ＮＥＣＡ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ａｔ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  Ａ３  ｒｅｃｅｐｔｏｒ：Ｉｎｓｉｇｈｔ  ｉｎｔｏ  ｔｈｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｓｗｉｔｃｈ，”Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍ  ８７，３２１−３３１．２０１４；およびＣａｍａｉｏｎｉ  Ｅ，Ｄｉ  Ｆｒａｎｃｅｓｃｏ  Ｅ，Ｖｉｔｔｏｒｉ  Ｓ，Ｖｏｌｐｉｎｉ  Ｒ，Ｃｒｉｓｔａｌｌｉ  Ｇ．“Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｇｏｎｉｓｔｓ：ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｄｉａｓｔｅｒｅｏｉｓｏｍｅｒｓ  ｏｆ  ２−（３−ｈｙｄｒｏｘｙ−３−ｐｈｅｎｙｌ−１−ｐｒｏｐｙｎ−１−ｙｌ）ＮＥＣＡ，”Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  １９９７；５：２２６７‐７５参照）；
【化２０】
2021512897.tif 000022
（Ｋｌｏｔｚ，Ｋ．Ｎ．“２−Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ  Ｎ−ｅｔｈｙｌｃａｒｂｏｘａｍｉｄｏａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ａｓ  ｈｉｇｈ−ａｆｆｉｎｉｔｙ  ａｇｏｎｉｓｔｓ  ａｔ  ｈｕｍａｎ  Ａ３  ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，”Ｎａｕｎｙｎ  Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇｓ  Ａｒｃｈ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９９  Ａｕｇ；３６０（２）：１０３−８；およびＣｒｉｓｔａｌｌｉ  Ｇら、（１９９５）“２−Ａｒａｌｋｙｎｙｌ  ａｎｄ  ２−ｈｅｔｅｒｏａｌｋｙｎｙｌ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ｏｆ  ａｄｅｎｏｓｉｎｅ−５’−Ｎ−ｅｔｈｙｌｕｒｏｎａｍｉｄｅ  ａｓ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ａ２ａ  ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｇｏｎｉｓｔｓ，”Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ３８：１４６２‐１４７２参照）；
【化２１】
2021512897.tif 000023
（Ｋｉｍ  Ｓら、“３Ｄ  ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ＳＡＲ  ａｔ  Ａ３Ｒ，”Ｊ  Ｃｈｅｍ  Ｉｎｆ．Ｍｏｄｅｌ  ４７，１２２５−１２３３  ２００７参照）；
【化２２】
2021512897.tif 000024
（Ｌｅｅ，Ｋ．ら、“Ｒｉｎｇ−Ｃｏｎｓｔｒａｉｎｅｄ（Ｎ）−Ｍｅｔｈａｎｏｃａｒｂａ  Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  ａｓ  Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ａｇｏｎｉｓｔｓ，”Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ  ２００１，１１，１３３３−１３３７参照）；
【化２３】
2021512897.tif 000025
（Ｋｅｎｎｅｔｈ  Ａ．Ｊａｃｏｂｓｏｎら、Ｃｈａｐｔｅｒ  ６．Ａ３  Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ａｇｏｎｉｓｔｓ：Ｈｉｓｔｏｒｙ  ａｎｄ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ  ｐｐ  ９６−９７．Ｂｏｏｋ‐Ｓｐｒｉｎｇｅｒ：Ａ３  Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｆｒｏｍ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｔｏ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，２００９参照）；
【化２４】
2021512897.tif 000026
（Ｌｅｅ  Ｋら、“Ｒｉｎｇ−Ｃｏｎｓｔｒａｉｎｅｄ（Ｎ）−Ｍｅｔｈａｎｏｃａｒｂａ  Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  ａｓ  Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ａｇｏｎｉｓｔｓ，”Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ  ２００１，１１，１３３３−１３３７；およびＧａｏら、“Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ  ｏｆ  Ａ３Ｒ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ：Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ  Ｌｉｇａｎｄｓ  ａｔ  ｔｈｅ  Ａｇｏｎｉｓｔ／Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  Ｂｏｕｎｄａｒｙ，”Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００２，４５，４４７１−４４８４参照）；
【化２５】
2021512897.tif 000027
（Ｍｕｌｌｅｒ  ＣＥ，Ｊａｃｏｂｓｏｎ  ＫＡ，“Ｒｅｃｅｎｔ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ  ｉｎ  ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｌｉｇａｎｄｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  ｎｏｖｅｌ  ｄｒｕｇｓ，”Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ  ２０１１，１８０８，１２９０−１３０８参照）；
【化２６】
2021512897.tif 000028
（ＭＲＳ５９３０；Ｊａｃｏｂｓｏｎ  ＫＡら、“Ｊｏｈｎ  Ｄａｌｙ  Ｌｅｃｔｕｒｅ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ｇｕｉｄｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ｆｏｒ  Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ａｎｄ  Ｐ２Ｙ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，”Ｃｏｍｐ．ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｊｏｕｒ  １３．２８６−２９８．２０１５参照）；
【化２７】
2021512897.tif 000029
（ＭＲＳ５９２３；Ｊａｃｏｂｓｏｎ  ＫＡら、“Ｊｏｈｎ  Ｄａｌｙ  Ｌｅｃｔｕｒｅ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ｇｕｉｄｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ｆｏｒ  Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ａｎｄ  Ｐ２Ｙ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，”Ｃｏｍｐ．ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｊｏｕｒ  １３．２８６−２９８．２０１５参照）；
【化２８】
2021512897.tif 000030
ＣＰ５３２，９０３（Ｔｒａｃｅｙ  ＷＲら、“Ｎｏｖｅｌ  ｎ６−ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｄ  ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ５’−Ｎ−ｍｅｔｈｙｌｕｒｏｎａｍｉｄｅｓ  ｗｉｔｈ  ｈｉｇｈ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ  ｆｏｒ  ｈｕｍａｎ  Ａ３Ｒ  ｒｅｄｕｃｅ  ｉｓｃｈｅｍｉｃ  ｍｙｏｃｈａｒｄｉａｌ  ｉｎｊｕｒｙ，”Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｈｅａｒｔ  Ｃｉｒｃ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２８５．２００３；Ｍｕｌｌｅｒ  ＣＥ，Ｊａｃｏｂｓｏｎ  ＫＡ，“Ｒｅｃｅｎｔ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ  ｉｎ  ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｌｉｇａｎｄｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  ｎｏｖｅｌ  ｄｒｕｇｓ，”Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ  １８０８，１２９０−１３０８．２０１１；およびＷａｎ  ＴＣら、“Ｔｈｅ  Ａ３Ｒ  Ａｇｏｎｉｓｔ  ＣＰ−５３２，９０３  Ｐｒｏｔｅｃｔｓ  ａｇａｉｎｓｔ  Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  Ｉｓｃｈｅｍｉａ／Ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ  Ｉｎｊｕｒｙ，”Ｊ．ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｘｐｔｌ  Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ３２４，１．２００８参照）；
【化２９】
2021512897.tif 000031
（Ｖｏｌｐｉｎｉ  Ｒら、“ＨＥＭＡＤＯ  ａｓ  Ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ａｇｏｎｉｓｔｓ  ｏｆ  ｈＡ３Ｒ，”Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ４５，３２７１−３２７９．２００２；Ｍｕｌｌｅｒ  ＣＥら、“Ｒｅｃｅｎｔ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ  ｉｎ  ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｌｉｇａｎｄｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  ｎｏｖｅｌ  ｄｒｕｇｓ，”Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ  １８０８，１２９０−１３０８．２０１１；およびＶｏｌｐｉｎｉ  Ｒら、“Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  Ｈｉｇｈｌｙ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ａｇｏｎｉｓｔｓ  ｆｏｒ  ｈＡ３Ｒ，”Ｊ  ｏｆ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ５２，７８９７−７９００．２００９参照）；
【化３０】
2021512897.tif 000032
（Ｍｕｌｌｅｒ  ＣＥ，Ｊａｃｏｂｓｏｎ  ＫＡ．“Ｒｅｃｅｎｔ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ  ｉｎ  ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｌｉｇａｎｄｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  ｎｏｖｅｌ  ｄｒｕｇｓ，”Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ，１８０８，１２９０−１３０８．２０１１参照）；
【化３１】
2021512897.tif 000033
式中、Ｒは、Ｈまたはシクロペンチルメチルである；
【化３２】
2021512897.tif 000034
式中、Ｒは、Ｈ、ブチルまたはピリジン−２−イルである（Ｃｏｓｙｎ  Ｌ．ら、”２−ｔｒｉａｚｏｌｅ−ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ  ａｄｅｎｏｓｉｎｅｓ，”Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ２００６．４９．７３７３−７３８３参照）；
【化３３】
2021512897.tif 000035
（Ｍｕｌｌｅｒ  ＣＥ，Ｊａｃｏｂｓｏｎ  ＫＡ．“Ｒｅｃｅｎｔ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ  ｉｎ  ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｌｉｇａｎｄｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  ｎｏｖｅｌ  ｄｒｕｇｓ，”Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ，１８０８，１２９０−１３０８．２０１１参照）；
【化３４】
2021512897.tif 000036
（Ｊａｃｏｂｓｏｎ  ＫＡら、“Ｊｏｈｎ  Ｄａｌｙ  Ｌｅｃｔｕｒｅ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ｇｕｉｄｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ｆｏｒ  Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ａｎｄ  Ｐ２Ｙ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，”Ｃｏｍｐ．ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｊｏｕｒ  １３．２８６−２９８．２０１５参照）；
【化３５】
2021512897.tif 000037
式中、Ａｒは、フェニル、ｐ−ＣＨ３ＣＯ−フェニル、ｐ−フルオロフェニルまたは２−ピリジルから選択される（Ｖｏｌｐｉｎｉ  Ｒら、“Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  Ｈｉｇｈｌｙ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ａｇｏｎｉｓｔｓ  ｆｏｒ  ｈＡ３Ｒ，”Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ５２，７８９７−７９００．２００９参照）；
【化３６】
2021512897.tif 000038
（Ｐｕｇｌｉｅｓｅ  ＡＭら、“Ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ａ３Ｒ  ｏｎ  ＣＡ１  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ  ｄｕｒｉｎｇ  ＯＧＤ，”Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ７４．２００７参照）；
【化３７】
2021512897.tif 000039
；もしくは
【化３８】
2021512897.tif 000040
（Ｋｌｏｔｚ  ＫＮ“Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｌｉｇａｎｄｓ  ＮＳ’ｓ，”Ａｒｃｈ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３６２．３８２−３９１．２０００参照）；または薬学的に許容され得るこれらの塩から選択される。いくつかの実施形態において、該化合物は、上に開示されているものなどの（Ｎ）−メタノカルバヌクレオシドまたは薬学的に許容され得るその塩から選択される。
【００７７】
いくつかの実施形態において、化合物は、
【化３９】
2021512897.tif 000041
【化４０】
2021512897.tif 000042
【化４１】
2021512897.tif 000043
または薬学的に許容され得るこれらの塩から選択される。いくつかの実施形態において、該化合物は、上に開示されているものなどの（Ｎ）−メタノカルバヌクレオシドまたは薬学的に許容され得るその塩から選択される。
【００７８】
いくつかの実施形態において、化合物は、
【化４２】
2021512897.tif 000044
または薬学的に許容され得るこれらの塩から選択される。いくつかの実施形態において、化合物は、以下からなる群：
【化４３】
2021512897.tif 000045
【化４４】
2021512897.tif 000046
（式中、各化合物は、ノース型もしくはサウス型コンフォメーションであり得、またはメタノカルバ糖は、Ｄ−リボ糖で置換され得る）；または薬学的に許容され得るこれらの塩；またはこれらのモノホスフェート、ジホスフェートもしくはトリホスフェートもしくはモノホスフェート、ジホスフェートもしくはトリホスフェートの薬学的に許容され得る塩から選択される。いくつかの実施形態において、メタノカルバ糖は、Ｄ−（Ｎ）−メタノカルバ糖である。いくつかの実施形態において、メタノカルバ糖は、Ｄ−（Ｓ）−メタノカルバ糖である。
【００７９】
いくつかの実施形態において、化合物は、
【化４５】
2021512897.tif 000047
【化４６】
2021512897.tif 000048
【化４７】
2021512897.tif 000049
または薬学的に許容され得るこれらの塩から選択される。いくつかの実施形態において、該化合物は、上に開示されているものなどの（Ｎ）−メタノカルバヌクレオシドまたは薬学的に許容され得るその塩から選択される。
【００８０】
いくつかの実施形態において、化合物は、
【化４８】
2021512897.tif 000050
または薬学的に許容され得るこれらの塩から選択される。
【００８１】
いくつかの実施形態において、化合物は、
【化４９】
2021512897.tif 000051
または薬学的に許容され得るこれらの塩から選択される。
【００８２】
いくつかの実施形態において、化合物は、
【化５０】
2021512897.tif 000052
または薬学的に許容され得るその塩である。いくつかの実施形態において、化合物は、
【化５１】
2021512897.tif 000053
または薬学的に許容され得るその塩である。いくつかの実施形態において、化合物は、
【化５２】
2021512897.tif 000054
または薬学的に許容され得るその塩である。
【００８３】
いくつかの実施形態において、化合物は、
【化５３】
2021512897.tif 000055
または薬学的に許容され得るその塩である。いくつかの実施形態において、化合物は、
【化５４】
2021512897.tif 000056
または薬学的に許容され得るその塩である。いくつかの実施形態において、化合物は、
【化５５】
2021512897.tif 000057
または薬学的に許容され得るその塩である。いくつかの実施形態において、化合物は、
【化５６】
2021512897.tif 000058
または薬学的に許容され得るその塩である。いくつかの実施形態において、化合物は、
【化５７】
2021512897.tif 000059
である。
【００８４】
一態様において、本発明は、開示された化合物または薬学的に許容され得るその塩と、薬学的に許容され得る賦形剤とを含む薬学的組成物を提供する。いくつかの実施形態において、化合物は、
【化５８】
2021512897.tif 000060
または薬学的に許容され得るこれらの塩である。いくつかの実施形態において、化合物は、
【化５９】
2021512897.tif 000061
または薬学的に許容され得るその塩である。いくつかの実施形態において、化合物は、
【化６０】
2021512897.tif 000062
または薬学的に許容され得るその塩である。いくつかの実施形態において、化合物は、
【化６１】
2021512897.tif 000063
である。
【００８５】
いくつかの実施形態において、化合物は、図９中の化合物または薬学的に許容され得るそれらの塩から選択される。いくつかの実施形態において、化合物は、
【化６２】
2021512897.tif 000064
【化６３】
2021512897.tif 000065
（ＭＲＳ１８９８）もしくはＭＲＳ１８７３（ＡＳＴ−００８）または薬学的に許容され得るこれらの塩から選択される。
【００８６】
一態様において、本発明は、嗜癖、嗜癖性行動、行動的嗜癖、脳内報酬系障害、強迫障害もしくは関連する状態を処置し、またはそれからの回復を促進する方法であって、嗜癖、嗜癖性行動、行動的嗜癖、脳内報酬系障害、強迫障害もしくは関連する状態を処置し、またはそれからの回復を促進することを必要とする患者に、有効量の
【化６４】
2021512897.tif 000066
から選択される化合物もしくは薬学的に許容され得るこれらの塩またはこれらの化合物もしくは薬学的に許容され得るこれらの塩を含む薬学的に許容され得る組成物を投与することを含む、方法を提供する。
【００８７】
いくつかの実施形態において、化合物は、
【化６５】
2021512897.tif 000067
または薬学的に許容され得るその塩である。
【００８８】
いくつかの実施形態において、化合物は、
【化６６】
2021512897.tif 000068
または薬学的に許容され得るその塩である。
【００８９】
いくつかの実施形態において、化合物は、ヒトＡ３アデノシン受容体（Ａ３Ｒ）におけるバイアス部分アゴニストである。
【００９０】
いくつかの実施形態において、Ａ３Ｒは、Ａ３Ｒ受容体の神経保護機能の方向に偏った様式で部分的に刺激される。
【００９１】
いくつかの実施形態において、化合物は、経口、静脈内または非経口投与される。
【００９２】
いくつかの実施形態において、化合物または薬学的に許容され得るその塩は、少なくとも０．７の血漿中非結合画分もしくは少なくとも０．０８の脳内非結合画分またはそれらの両方を有する。
【００９３】
いくつかの実施形態において、化合物または薬学的に許容され得るその塩は、少なくとも０．７の血漿中非結合画分もしくは少なくとも０．０８の脳内非結合画分またはそれらの両方を有する。
【００９４】
いくつかの実施形態において、Ａ３Ｒは、他のＡ３Ｒ媒介性経路の活性化がより少ないもしくは全くない細胞内カルシウム動員の優先的な活性化を介して、またはＧｑ１１媒介性細胞内カルシウム動員、ｃＡＭＰ産生のＧｉ媒介性調節もしくはＥＲＫ１／２およびＡｋｔのＧｉ媒介性リン酸化の優先的な活性化を介して、Ａ３Ｒ受容体の神経保護機能の方向に偏った様式で刺激される。
【００９５】
いくつかの実施形態において、化合物は経口投与される。
【００９６】
開示された方法を使用するための組成物または開示された薬学的組成物中に存在するべき開示された化合物（すなわち、活性薬剤）の量は、一般的には、治療的有効量である。「治療的有効量」または用量（または「有効量」）は、所望される治療的結果をもたらすのに十分な活性薬剤の量を表す。活性薬剤の組成物の毒性および治療効果は、例えば、ＬＤ５０（試験群の５０％に対して致死的な用量）およびＥＤ５０（試験群の５０％において治療的に効果的な用量）を決定するための、細胞培養または実験動物の分野において公知の手法によって決定することができる。毒性効果と治療効果間の用量比が治療指数であり、比率ＬＤ５０／ＥＤ５０として表すことができる。大きな治療指数を呈する組成物が有利である。ヒトにおいて使用するためのさまざまな投与量を調合する上で、細胞培養アッセイおよび動物研究から得られたデータを使用することができる。いくつかの実施形態において、このような組成物の投与量は、毒性がほとんどまたは全くないＥＤ５０を含む様々な循環濃度内に収まる。投与量は、使用される剤形および使用される投与の経路に応じて、この範囲内で変動し得る。
【００９７】
開示された処置の方法は、所望の治療効果を得るために必要とされる開示された化合物を投与することを包含し得る。組成物は、例えば、嗜癖またはリスクのある行動への再発を予防するために、予防効果などの所望される治療効果を維持することが必要である限り、投与することができる。いくつかの実施形態において、化合物は、約１〜１２ヶ月投与される。いくつかの実施形態において、化合物は、１〜６ヶ月投与される。いくつかの実施形態において、化合物は、１〜３ヶ月投与される。
【００９８】
本発明の一態様において、開示された化合物は、約５ｍｇ／日〜１０ｇ／日の量で投与される。いくつかの実施形態において、化合物の各用量は、約５ｍｇ／用量〜１０ｇ／用量の量である。例えば、１日に１回、または分割された用量で、２回〜４回投与される、約０．０５〜１０ｍｇ／ｋｇ／日、約０．１〜７．５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．１〜２ｍｇ／ｋｇ／日または０．５ｍｇ／ｋｇ／日の投与量での本発明の開示された化合物の経口投与によって、満足できる結果が得られる。例えば、静脈内点滴または注入による非経口投与については、約０．０１〜５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０５〜１．０ｍｇ／ｋｇ／日および約０．１〜１．０ｍｇ／ｋｇ／日の投与量を使用することができる。したがって、患者に適切な一日投与量は、経口で約２．５〜５００ｍｇ、経口で約５〜２５０ｍｇ、経口で約５〜１００ｍｇ、または静脈内に約０．５〜２５０ｍｇ、静脈内に約２．５〜１２５ｍｇおよび静脈内に約２．５〜５０ｍｇである。
【００９９】
４．使用、製剤および投与
薬学的に許容され得る組成物
別の実施形態によれば、本発明は、開示された化合物と、薬学的に許容され得る担体、佐剤またはビヒクルとを含む組成物を提供する。ある実施形態において、本発明の組成物は、このような組成物を必要とする患者への投与のために製剤化される。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、患者への経口投与のために製剤化される。
【０１００】
本明細書において使用される「患者」という用語は、動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを意味する。
【０１０１】
「薬学的に許容され得る担体、佐剤またはビヒクル」という用語は、一緒に製剤化される化合物の薬理学的活性を破壊しない無毒の担体、佐剤またはビヒクルを表す。本発明の組成物中で使用され得る薬学的に許容され得る担体、佐剤またはビヒクルには、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質、ホスフェート、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウムなどの緩衝物質、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロースをベースとする物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、蝋、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコールおよび羊毛脂などの、飽和植物脂肪酸、水、塩または電解質の部分グリセリド混合物が含まれるが、これらに限定されない。
【０１０２】
「薬学的に許容され得る誘導体」は、レシピエントに投与したときに、直接または間接に、本発明の化合物または阻害的に活性なこれらの代謝物または残留物を与えることができる本発明の化合物の任意の無毒の塩、エステル、エステルの塩またはその他の誘導体を意味する。
【０１０３】
本発明の組成物は、経口、非経口、吸入スプレーによって、局所、直腸、経鼻、頬側、経膣的にまたは移植されたレザバを介して投与され得る。本明細書において使用される「非経口」という用語には、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑液包内、胸骨内、髄腔内、肝臓内、病巣内および頭蓋内注射または注入技術が含まれる。いくつかの実施形態において、組成物は、経口、腹腔内または静脈内に投与される。本発明の組成物の無菌注射可能形態は、水性または油性懸濁物であり得る。これらの懸濁物は、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を用いて、本分野において公知の技術にしたがって製剤化され得る。無菌の注射可能な調製物は、例えば、１，３−ブタンジオール中の溶液として、無毒の非経口的に許容され得る希釈剤または溶媒中の無菌注射可能溶液または懸濁物でもあり得る。使用し得る許容され得るビヒクルおよび溶媒に属するのは、水、リンゲル溶液および等張の塩化ナトリウム溶液である。さらに、無菌の不揮発油は、溶媒または懸濁媒として慣用的に使用される。
【０１０４】
この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む任意の無刺激不揮発油が使用され得る。オレイン酸などの脂肪酸およびそのグリセリド誘導体が注射剤の調製において有用であり、同様に、特にポリオキシエチル化された様式の、オリーブ油またはひまし油などの薬学的に許容され得る天然油が有用である。これらの油溶液または懸濁物は、カルボキシメチルセルロースまたはエマルジョンおよび懸濁物を含む薬学的に許容され得る剤形の製剤中で一般的に使用される類似の分散剤などの長鎖アルコール希釈剤または分散剤も含有し得る。Ｔｗｅｅｎ、Ｓｐａｎおよび薬学的に許容され得る固体、液体またはその他の剤形の製造において一般的に使用されるその他の乳化剤またはバイオアベイラビリティ増強剤などのその他の一般的に使用される界面活性剤も、製剤化の目的のために使用され得る。
【０１０５】
本発明の薬学的に許容され得る組成物は、カプセル、錠剤、水性懸濁物または溶液を含むがこれらに限定されない任意の経口的に許容され得る剤形で経口投与され得る。経口用途のための錠剤の場合には、一般的に使用される担体は、ラクトースおよびコーンスターチを含む。ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤も、通例、添加される。カプセル形態での経口投与については、有用な希釈剤には、ラクトースおよび乾燥されたコーンスターチが含まれる。経口用途のために水性懸濁物が必要とされる場合、活性成分は、乳化剤および懸濁化剤と組み合わされる。所望であれば、ある種の甘味剤、矯味矯臭剤または着色剤も添加され得る。
【０１０６】
または、本発明の薬学的に許容され得る組成物は、直腸投与のための坐剤の形態で投与され得る。これらは、室温で固体であるが、直腸温度で液体であり、したがって、直腸内で溶解して薬物を放出する適切な非刺激性賦形剤と薬剤を混合することによって調製することができる。このような材料には、カカオバター、ミツロウおよびポリエチレングリコールが含まれる。
【０１０７】
本発明の薬学的に許容され得る組成物は、特に、処置の標的が、目、皮膚または下部腸管の疾患などの局所適用によって容易に到達できる領域または器官を含む場合には、局所的にも投与され得る。適切な局所製剤は、これらの領域または器官のそれぞれに対して容易に調製される。
【０１０８】
下部腸管に対する局所適用は、直腸坐剤製剤（上記参照）で、または適切な注腸製剤で達成することができる。局所的経皮パッチも使用され得る。
【０１０９】
局所適用については、提供される薬学的に許容され得る組成物は、１またはそれを超える担体中に懸濁されたまたは溶解された活性成分を含有する適切な軟膏中に製剤化され得る。本発明の化合物の局所投与用担体には、鉱油、流動ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化蝋および水が含まれるが、これらに限定されない。または、提供される薬学的に許容され得る組成物は、１またはそれを超える薬学的に許容され得る担体中に懸濁されたまたは溶解された活性成分を含有する適切なローションまたはクリーム中に製剤化され得る。適切な担体には、鉱油、モノステアリン酸ソルビタン、ポリソルベート６０、セチルエステル蝋、セテアリルアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコールおよび水が含まれるが、これらに限定されない。
【０１１０】
眼用用途については、提供される薬学的に許容され得る組成物は、等張のｐＨ調整された無菌食塩水中の微粒子化された懸濁物として、または塩化ベンジルアルコニウムなどの防腐剤を加えたもしくは加えない等張のｐＨ調整された無菌食塩水中の溶液として製剤化され得る。または、眼用用途については、薬学的に許容され得る組成物は、ワセリンなどの軟膏中に製剤化され得る。
【０１１１】
本発明の薬学的に許容され得る組成物は、経鼻エアロゾルまたは吸入によっても投与され得る。このような組成物は、薬学的製剤の分野において周知の技術にしたがって調製され、ベンジルアルコールもしくはその他の適切な防腐剤、バイオアベイラビリティを増強するための吸収促進剤、フッ化炭素および／またはその他の慣用の可溶化剤もしくは分散剤を用いて、食塩水中の溶液として調製され得る。
【０１１２】
いくつかの実施形態において、本発明の薬学的に許容され得る組成物は、経口投与のために製剤化される。このような製剤は、食物とともにまたは食物をともなわずに投与され得る。いくつかの実施形態において、本発明の薬学的に許容され得る組成物は、食物をともなわずに投与される。その他の実施形態において、本発明の薬学的に許容され得る組成物は、食物とともに投与される。
【０１１３】
その他の実施形態において、本発明の薬学的に許容され得る組成物は、静脈内（ＩＶ）投与のために製剤化される。
【０１１４】
単一の剤形での組成物を作製するためにある種の材料と組み合わされ得る本発明の化合物の量は、処置される宿主、具体的な投与の様式に応じて変動するであろう。好ましくは、提供される組成物は、０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重／日の阻害剤の投与量がこれらの組成物を受ける患者に投与することができるように製剤化されるべきである。
【０１１５】
任意の特定の患者に対する具体的な投与量および処置レジメンは、使用される具体的な化合物の活性、年齢、体重、全般的な健康、性別、食事、投与の時間、排泄の速度、薬物の組み合わせならびに担当医の判断および処置されている具体的な疾患の重篤度などの様々な要因に依存することも理解されるべきである。組成物中の本発明の化合物の量は、組成物中の具体的な化合物にも依存するであろう。
【０１１６】
化合物および薬学的に許容され得る組成物の使用
本明細書に記載されている化合物および組成物は、一般に、脳損傷および神経変性状態などの様々な疾患および状態の処置ならびに本明細書に開示されている様々な方法にとって有用である。
【０１１７】
本発明において使用される化合物の活性は、インビトロで、インビボでまたは細胞株中でアッセイされ得る。インビトロアッセイには、調節またはタンパク質への結合を決定するアッセイが含まれる。化合物をアッセイするための詳しい条件は、以下の実施例に記載されている。
【０１１８】
本明細書において使用される「処置」、「処置する」および「処置すること」という用語は、本明細書に記載されている疾患もしくは障害または１もしくはそれを超えるこれらの症状を反転させ、緩和させ、その開始を遅延させ、またはその進行を阻止することを表す。いくつかの実施形態において、処置は、１またはそれを超える症状が発症した後に投与され得る。他の実施形態において、処置は、症状の不存在下で投与され得る。例えば、処置は、（例えば、症状の病歴に照らして、および／または遺伝的なもしくはその他の易罹患性要因に照らして）、症状の開始前に、易罹患性の個体に投与され得る。処置は、例えば、症状の再発を予防または遅延するために、症状が消散した後にも継続され得る。
【０１１９】
化合物および組成物は、本発明の方法にしたがって、開示された疾患もしくは状態または付随する状態もしくは症状を処置しもしくはそれらの重篤度を軽減するのに有効な任意の量および任意の投与の経路を用いて投与され得る。必要とされる正確な量は、被験体の種、年齢および全般的な状態、疾患または状態の重篤度、具体的な薬剤、その投与の様式などに応じて、被験体ごとに変動するであろう。本発明の化合物は、投与の容易さおよび投与量の均一性のために、好ましくは、投薬単位形態で製剤化される。本明細書において使用される「投薬単位形態」という表現は、患者が処置されるのに適した薬剤の物理的に分離した単位を表す。しかしながら、本発明の化合物および組成物の総一日使用量は、健全な医学的判断の範疇で、担当医によって決定されるであろう。任意の特定の患者または生物に対する特定の有効用量レベルは、処置されている障害および障害の重篤度；使用されている具体的な化合物の活性；使用されている具体的な組成物；患者の年齢、体重、全般的健康、性別および食事；投与の時間、投与の経路および使用される具体的な化合物の排泄の速度；処置の期間；使用される具体的な化合物と組み合わせてまたは同時に使用される薬物ならびに医学の分野において周知の同様の要因を含む様々な要因に依存することが理解されるであろう。本明細書において使用される「患者」という用語は、動物を意味し、いくつかの実施形態において、哺乳動物を意味し、またはある種の他の実施形態において、ヒトを意味する。
【０１２０】
本発明の薬学的に許容され得る組成物は、処置されている疾患または状態の重篤度に応じて、経口、舌下、直腸、非経口、槽内、膣内、腹腔内、局所（粉末、軟膏または液滴によるなど）、眼内（点眼薬など）、頬側に、経口または経鼻スプレーとしてなど、ヒトおよびその他の動物に投与することができる。ある実施形態において、本発明の化合物は、所望の治療効果を得るために、１日当たり被験体体重の１ｋｇ当たり、約０．０１ｍｇ〜約５０ｍｇまたは約１ｍｇ〜約２５ｍｇの投与量レベルで、１日１回またはそれを超える回数、経口的にまたは非経口的に投与され得る。
【０１２１】
経口投与用の液体剤形には、薬学的に許容され得る、エマルジョン、ミクロエマルジョン、溶液、懸濁物、シロップおよびエリキシル剤が含まれるが、これらに限定されない。活性化合物に加えて、液体剤形は、例えば、水またはその他の溶媒などの本分野において一般的に使用される不活性希釈剤、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に、綿実油、落花生油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステルならびにこれらの混合物などの可溶化剤および乳化剤を含有し得る。不活性希釈剤の他に、経口組成物は、湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤、甘味剤、矯味矯臭剤および香料などの佐剤も含むことができる。
【０１２２】
注射可能な調製物、例えば、無菌の注射可能な水性または油性懸濁物は、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を用いて、公知の技術にしたがって製剤化され得る。無菌の注射可能な調製物は、例えば、１，３−ブタンジオール中の溶液として、無毒の非経口的に許容され得る希釈剤または溶媒中の無菌注射可能溶液、懸濁物またはエマルジョンでもあり得る。使用し得る許容され得るビヒクルおよび溶媒に属するのは、水、リンゲル溶液、米国薬局方および等張の塩化ナトリウム溶液である。さらに、無菌の不揮発油は、溶媒または懸濁媒として慣用的に使用される。この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む任意の無刺激不揮発油を使用することができる。さらに、オレイン酸などの脂肪酸は、注射剤の調製において使用される。
【０１２３】
注射可能な製剤は、例えば、細菌を保持するフィルターを通したろ過によって、または使用前に無菌水もしくはその他の無菌の注射可能媒体中に溶解もしくは分散することができる無菌の固体組成物の形態で滅菌剤を取り込むことによって滅菌することができる。
【０１２４】
本発明の化合物の効果を延長するために、皮下注射または筋肉内注射からの化合物の吸収を遅らせることが多くの場合、望ましい。これは、水溶性が乏しい結晶性または非晶質材料の液体懸濁物の使用によって達成され得る。次いで、化合物の吸収の速度は、その溶解速度に依存し、続いて、溶解速度は、結晶サイズおよび結晶の形態に依存し得る。または、非経口的に投与された化合物形態の遅延された吸収は、油ビヒクル中に化合物を溶解または懸濁することによって達成される。注射可能なデポ形態は、ポリラクチド−ポリグリコリドなどの生分解性ポリマー中で化合物のマイクロカプセル化マトリクスを形成することによって作られる。ポリマーに対する化合物の比率および使用される具体的なポリマーの性質に応じて、化合物放出の速度は調節することができる。その他の生分解性ポリマーの例には、ポリ（オルトエステル）およびポリ（無水物）が含まれる。注射可能なデポ製剤は、身体組織と適合性があるリポソームまたはマイクロエマルジョン中に化合物を捕捉することによっても調製される。
【０１２５】
好ましくは、直腸または膣投与用の組成物は、周囲温度において固体であるが、体温において液体であり、したがって、直腸または膣腔中で融解し、活性化合物を放出する、カカオバター、ポリエチレングリコールまたは坐剤蝋などの適切な非刺激性賦形剤または担体と、本発明の化合物を混合することによって調製することができる坐剤である。
【０１２６】
経口投与用の固体剤形には、カプセル、錠剤、丸薬、粉末および顆粒が含まれる。このような固体剤形において、活性化合物は、クエン酸ナトリウムもしくはリン酸二カルシウムなどの、少なくとも１つの不活性な薬学的に許容され得る賦形剤もしくは担体ならびに／またはａ）デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよびケイ酸などの充填剤もしくは増量剤、ｂ）例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロースおよびアラビアゴムなどの結合剤、ｃ）グリセロールなどの保水剤（ｈｕｍｅｃｔａｎｔ）、ｄ）寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモもしくはタピオカでんぷん、アルギン酸、ある種のシリケートおよび炭酸ナトリウムなどの崩壊剤、ｅ）パラフィンなどの溶解遅延剤、ｆ）四級アンモニウム化合物などの吸収加速剤、ｇ）例えば、セチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセロールなどの湿潤剤、ｈ）カオリンおよびベントナイト粘土などの吸収剤、およびｉ）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムなどの滑沢剤およびこれらの混合物と混合される。カプセル、錠剤および丸薬の場合には、剤形は、緩衝化剤も含み得る。
【０１２７】
類似の種類の固体組成物は、ラクトースまたは乳糖および高分子量ポリエチレングリコールなどの賦形剤を用いて、軟および硬充填ゼラチンカプセル中で、充填剤としても使用され得る。錠剤、糖衣錠、カプセル、丸薬および顆粒の固体剤形は、薬学的製剤化の分野において周知の腸溶コーティングおよびその他のコーティングなどのコーティングおよびシェルを用いて調製することができる。錠剤、糖衣錠、カプセル、丸薬および顆粒の固体剤形は、必要に応じて、乳白剤を含有し得、腸管に限りまたは腸管のある部分中で、必要に応じて、遅延された様式で、活性成分を放出する組成物の固体剤形とすることもできる。使用することができる包埋組成物の例には、ポリマー性物質および蝋が含まれる。類似の種類の固体組成物は、ラクトースまたは乳糖および高分子量ポリエチレングリコールなどの賦形剤を用いて、軟および硬充填ゼラチンカプセル中で、充填剤としても使用され得る。
【０１２８】
活性化合物は、上記されているような１またはそれを超える賦形剤とともにマイクロカプセル化された形態とすることもできる。錠剤、糖衣錠、カプセル、丸薬および顆粒の固体剤形は、薬学的製剤化の分野において周知の腸溶コーティング、放出制御コーティングおよびその他のコーティングなどのコーティングおよびシェルを用いて調製することができる。このような固体剤形においては、活性化合物は、スクロース、ラクトースまたはデンプンなどの少なくとも１つの不活性希釈剤とともに混合され得る。このような剤形は、通常の慣行どおり、不活性希釈剤以外のさらなる物質、例えば、ステアリン酸マグネシウムおよび微結晶セルロースなどの錠剤化滑沢剤およびその他の錠剤化補助物質も含み得る。カプセル、錠剤および丸薬の場合には、剤形は、緩衝化剤も含み得る。カプセル、錠剤および丸薬の剤形は、必要に応じて、乳白剤を含有し得、腸管に限りまたは腸管のある部分中で、必要に応じて、遅延された様式で、活性成分を放出する組成物の剤形とすることもできる。使用することができる包埋組成物の例には、ポリマー性物質および蝋が含まれる。
【０１２９】
本発明の化合物の局所または経皮投与のための剤形には、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ジェル、粉末、溶液、スプレー、吸入剤またはパッチが含まれる。活性成分は、無菌の条件下で、必要に応じて、薬学的に許容され得る担体および任意の必要とされる防腐剤または緩衝液と混合される。眼用製剤、点耳薬および点眼薬も、本発明の範囲内であるものとして想定される。さらに、本発明は、身体への化合物の制御送達を与えるというさらなる利点を有する経皮パッチの使用を想定する。このような剤形は、適切な溶媒中に化合物を溶解または調合することによって作ることができる。皮膚を横切る化合物のフラックスを増加させるために、吸収促進剤を使用することもできる。速度は、速度調節膜を与えることによって、またはポリマーマトリクスもしくはゲル中に化合物を分散することによって調節することができる。
【０１３０】
処置されるべき具体的な状態または疾患に応じて、その状態を処置するために通常投与されるさらなる治療剤も、本発明の組成物中に存在し得る。本明細書において使用される、特定の疾患または状態を処置するために通常投与されるさらなる治療剤は、「処置されている疾患または状態にとって適切」として知られている。
【０１３１】
以下の実施例において記載されているように、ある種の例示的な実施形態において、化合物は、以下の一般的な手法にしたがって調製および使用される。一般的な方法は本発明のある化合物の合成を記しているが、本明細書に記載されているように、以下の一般的な方法および当業者に公知の他の方法を全ての化合物ならびにこれらの化合物の各々のサブクラスおよび種に適用できることが理解できるであろう。
【０１３２】
本明細書中に引用されている各文献の内容は、参照により、その全体が本明細書に組み込まれる。
【実施例】
【０１３３】
実施例１：コカイン自己投与マウスに対するＡＳＴ−００４の効果
本研究は、エネルギー代謝と薬物嗜癖間の関係を調べる初めての研究であると考えられる。
【０１３４】
公表された研究は、コカイン自己投与マウスが、ＶＴＡ中に有意により高いグルタメートレベルを呈することを示す。これは、少なくとも１つには、星状膠細胞中へのグルタメート摂取の減少によるものと思われる。本発明者らのデータは、星状膠細胞機能に対するグルタメートの低下した利用可能性の影響ならびにこの機能の喪失がニューロン活動および薬物探索行動にどのような影響を及ぼすかについて焦点を当てる。
【０１３５】
本発明者らのデータは、ＩＰ３Ｃａ２＋シグナル伝達を刺激するＧタンパク質共役型アゴニストでの処理によって、星状膠細胞中でのミトコンドリアの代謝を増加させることができることを示す（以下の参考文献１）。
【０１３６】
本発明者らは、ＡＳＴ−００４が細胞内Ｃａ２＋を刺激するＡ３Ｒアゴニストであることを見出した（図１）。これは、記録全体を通じて持続した（図１Ａ、Ｂ）。Ｃａ２＋放出の低レベルの刺激は、百日咳毒素処置によって遮断されず、Ｇｑ共役と合致した。積算されたＣａ２＋応答も用量依存性であり（図１Ｃ）、マウス、ラット、ブタおよびヒト脳組織から培養された星状膠細胞中に存在した。
【０１３７】
本発明者らは、星状膠細胞中でＩＰ３媒介性Ｃａ２＋増加を刺激する任意のアゴニストが星状膠細胞中でＡＴＰ産生を増加することを以前に報告した（１）。ＡＳＴ−００４誘導性Ｃａ２＋放出が代謝も増加させることを確認するために、本発明者らは、星状膠細胞（Ｃ８−Ｄ１Ａ、ＡＴＣＣから入手可能）を培養し、標準的なＳｅａｈｏｒｓｅチャンバー（２４ウェル）を用いて、酸素消費速度（ＯＣＲ）を測定した。図２に示されているように、基礎呼吸は３つの実験全てにおいて当初同等であったが、槽にＡＳＴ−００４を添加すると増加した（１５分、第一の矢印）。対照注射下では、最小の変化が観察された。オリゴマイシン注射は、ＡＳＴ−００４（４００ｎＭ）で処理された星状膠細胞に関して、ＡＴＰ産生が有意に多いことを明らかにした。ＦＣＣＰ（ｐ−トリフルオロメトキシカルボニルシアニドフェニルヒドラゾン）の添加による細胞の脱共役は、最大呼吸も、ＡＳＴ−００４で処理された星状膠細胞に関して、有意により高いことを明らかにした。ロテノンおよびアンチマイシンの添加は、非ミトコンドリア源の酸素消費を明らかにし、計算の前に全ての測定からこれを差し引いた。
【０１３８】
次に、本発明者らは、本発明者らの十分に確立された脳卒中の光血栓誘導性モデルを用いて、ＡＳＴ−００４の予想される神経保護効果を試験した（２、３）。予想されたように、本発明者らは、ＡＳＴ−００４処置が脳卒中梗塞体積を有意に低下させ（図３Ａ、Ｂ）これは、Ａ３ＲアンタゴニストＭＲＳ１５２３での前処置によって遮断された（図３Ｃ）。ＡＳＴ−００４は、マウス中で、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）後にも神経保護的であった（図４）。
【０１３９】
インビボ生物発光画像化は、Ａ３ＲアゴニストＡＳＴ−００４が星状膠細胞中のＡＴＰを増加させることを示した（図５）。星状膠細胞中でルシフェラーゼレポーター遺伝子（ＧＦＡＰプロモーター、Ｄｕａｌ−Ｇｌｏマウス、Ｊａｃｋｓｏｎ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を発現しているトランスジェニックマウスを鈍的ＴＢＩ（閉鎖性皮質衝撃）に供した。最初の外傷から２〜４日後に、合成Ｄ−ルシフェリン類縁体（Ｃｙｃｌｕｃ１）をマウスに腹腔内注射し、ＩＶＩＳ  Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｉｍａｇｅｒ上で生物発光シグナルを記録した（図５Ａ）。ＡＳＴ−００４を注射されたマウスが、ビヒクルを注射されたマウスと比較して、有意により高いフォトン束レベルを呈し、星状膠細胞中でのより高いＡＴＰ産生と合致した（図５Ｂ）。
【０１４０】
Ｐ２Ｙ１ＲおよびＡ３Ｒアゴニストは、ＧＬＵＤ１発現に依存する様式で、星状膠細胞中でのミトコンドリアのＡＴＰ産生を増加させた。１つの可能性のある仮説は、α−ＫＧへのグルタメートの異化はＧＬＵＤ１によって媒介され、これは、ＴＣＡサイクル中でのＩＣＤＨおよびαＫＧＤＨのＣａ２＋依存性刺激によって増強されることである。この仮説を試験するために、特異的なｓｈＲＮＡとともに細胞をインキュベートすることによって、星状膠細胞培養物中でＧＬＵＤ１発現レベルを低下させた。ウェスタンブロット分析は、８０％のＧＬＵＤ１レベルの低下を示した（図６Ａ、Ｂ）。ＭＲＳ２３６５（Ｐ２Ｙ１Ｒアゴニスト）でこれらの細胞を２０分間処理すると、ＡＴＰレベルが有意に増加されたが、対照細胞（スクランブルされたｓｈＲＮＡ）中のみで増加された。低下したレベルのＧＬＵＤ１を有する星状膠細胞は応答しなかった（図７Ａ）。これらのデータは、異なるＰ２Ｙ１Ｒアゴニスト２−ＭｅＳＡＤＰを使用した本発明者らの研究室での以前の研究と合致する。ガラクトースの解糖はＡＴＰ中立であるので、本発明者らは、酸化的リン酸化を通じたＡＴＰの生成を細胞に強制させる炭素源であるガラクトースの存在下でこれらの実験を繰り返した。本発明者らは、低下したＧＬＵＤ１レベルを有する星状膠細胞は、同様に、Ｐ２Ｙ１Ｒ刺激に対して非応答性であることを見出した（図７Ｂ）。ＡＳＴ−００４は、ＧＬＵＤ１依存性の様式でＡＴＰレベルも増加させた（図７Ｃ）。
【０１４１】
行動的な実験は、ＡＳＴ−００４がマウスにおけるコカイン自己投与を有意に低下させることを示した（図８）。星状膠細胞中の全てのＡＴＰ依存性保護過程が増強され、単一の過程を標的とすることに伴う制約が回避されるので、この発見は、本質的に強固な治療戦略に結び付く可能性を有する。Ｐ２Ｙ１ＲまたはＡ３Ｒのいずれかの刺激を介したミトコンドリアのＡＴＰ産生の増加は、薬物嗜癖の間のヒトにおける変化した脳の活動および薬物探索に関連する行動を好転させるための有効な生物学的治療となることが見込まれる。
【０１４２】
プロトコールおよび方法：
初代細胞培養
プロトコールは、ＭｃＣａｒｔｈｙら、１９８０（４）から改変した。簡潔に述べると、イソフルランでマウスを麻酔し、次いで、頸椎脱臼した。素早く脳を取り出し、トリプシン中で細かく切断し、３７℃で３０分間インキュベートした。１０％ＦＣＳおよびプリモシン（ｐｒｉｍｏｃｉｎ）を有するＤＭＥＭ／Ｆ−１２培地を加え、脳を砕いて均質化し、１００μＭメッシュを通してろ過し、培養フラスコ中に播種した。翌日、ホモジネートを新しいフラスコに移し、以前のフラスコに新しい培地を加えた。細胞が７０％コンフルエントになるまで、３〜４日ごとにＤＭＥＭ／Ｆ−１２培地を交換しながら、３〜４週間、細胞を増殖させた。
【０１４３】
腹側被蓋野（ＶＴＡ）星状膠細胞に関しては、ＶＴＡ脳領域を抽出し、プールし、実験を行う前に少なくとも２週間、星状膠細胞を培養した。
【０１４４】
ｓｈＲＮＡノックダウン
Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ（ｇｌｕｄ１＃１４５４４６−Ｖ、スクランブル＃１０８０８０について）から取得したｓｈＲＮＡレンチウイルス構築物で細胞を形質導入した。次いで、９６ウェル皿中に、単一細胞／ウェルの密度で細胞を播種し、ピューロマイシンを用いて選択した。クローンを増殖し、ウェスタンブロットによってノックダウンに関して試験した。
【０１４５】
培養細胞についてのウェスタンブロット
培養細胞をリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で２回洗浄し、ＰＩを有するＲＩＰＡ緩衝液（Ｒｏｃｈｅ）を添加した。セルリフターを用いて細胞を掻き取り、１．７ｍＬ  Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管中に置いた。細胞を短時間超音波処理し、最大速度で２０分間、予め冷却された卓上遠心機上で遠心した。タンパク質濃度を測定するために、ＢＣＡアッセイを使用した（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）。１０％ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル上にタンパク質をローディングし、ニトロセルロースに転写した。５％ミルク／ＴＢＳＴまたは３％ＢＳＡ／ＴＢＳＴのいずれかの中で、ブロットをブロックした。ＧＤＨ（Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ、１：１０００）、ＧＦＡＰ（Ａｂｃａｍ、１：５００）、ＧＬＡＳＴ（１：５００）、アクチン（Ｓｉｇｍａ、１：１０００）およびグルタミン合成酵素（１：２５０）についてブロットをプローブした。デンシトメトリーは、ＩｍａｇｅＪソフトウェアを用いて判定し、統計は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて解析した。
【０１４６】
ＡＴＰレベルの測定
白色の不透明な底の９６ウェル皿（Ｃｏｒｎｉｎｇ）中に、３０００〜５０００細胞／ウェルの密度で、星状膠細胞を播種した。細胞をガラクトース培地中で試験した場合には、細胞はガラクトース培地中に播種され、処理に供する前に、最低１６時間放置した。グルコース、ピルベート、フェノールおよびグルタミンを含まないＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）を用いて、ガラクトース培地を作製し、次いで、０．９ｍｇ／ｍＬガラクトース（Ｓｉｇｍａ）、ピルベート（Ｑｕａｌｉｔｙ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、Ｉｎｃ）および１０％透析されたＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）を補充した。別段の記載がなければ、処理は２０分間行い、薬物の濃度は別の箇所に記載した。使用した薬物：ＭＲＳ２３６５、ＭＲＳ２５００、ＡＳＴ−００４、３−プロピル−６−エチル−５−［（エチルチオ）カルボニル］−２フェニル−４−プロピル−３−ピリジンカルボキシレート（ＭＲＳ１５２３）（Ｔｏｃｒｉｓ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ジクロロ酢酸ナトリウム（ＤＣＡ）（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）、オリゴマイシン（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）、１−（２−（２−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ピリジン−３−イル）−３−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）尿素（ＢＰＴＵ）（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）およびＲｕｔｈｅｎｉｕｍ３６０（Ｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ）。次に、細胞から培地を取り除き、１００μＬの新鮮な培地を直ちに添加した。次いで、９５μＬのＡＴＰｌｉｔｅ１−Ｓｔｅｐキットの混合発光基質を添加した（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）。アルミホイルでプレートを包み、ルミノメーター上での読み取りの前に、プレート回転装置上で３分間振盪した。読み取り値は、Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ  Ｐｌｕｓ  Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）によって決定されたタンパク質に対して正規化した。全ての統計は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて解析した。
【０１４７】
Ｃａ２＋測定
Ｃａ２＋活性は、以前に記載されたとおりに画像化した（５）。要約すると、各実験の３および４晩前に、カバーガラス上に星状膠細胞を播種した。実験の３０分前に、蛍光性Ｃａ２＋感受性色素（１０μＭ、Ｃａｌ５２０、細胞透過性、Ａｂｃａｍ）とともに、培養皿をインキュベートした。画像は、１．５画像／秒の速度で、共焦点レーザー走査顕微鏡を用いて取得した。データは、室温で、記録緩衝液（１２０ｍＭ  ＮａＣｌ、４．５ｍＭ  ＫＣｌ、１ｍｍ  ＣａＣｌ２、２ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４）中で取得した。画像は、Ｉｍａｇｅ  ＪおよびＮＩＳ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓを用いて解析した。
【０１４８】
酸素消費速度（ＯＣＲ）
ＯＣＲは、ミトコンドリアの呼吸を計算するために測定され、Ｓｅａｈｏｒｓｅ  ＸＦ９６細胞外フラックスアナライザーを用いて実施した。９６ウェル系は、約５分の間隔で、培養されたインタクトな細胞単層からＯＣＲを測定する。ＯＣＲ測定の少なくとも２日前に、Ｓｅａｈｏｒｓｅマイクロプレート上に星状膠細胞を播種した。順次、ＡＴＰ合成酵素に起因するＯＣＲに対応するＡＴＰ合成酵素阻害剤オリゴマイシンを添加し（残りのＯＣＲは、プロトン漏出である）、続いて、ミトコンドリアを脱共役し、最大呼吸を明らかにするプロトンイオノフォアであるＦＣＣＰを添加することによって、ミトコンドリアの呼吸調節の主な側面の全てを、この機器を用いて測定した。それぞれ、複合体ＩおよびＩＩＩの阻害剤であるロテノンおよびアンチマイシンの注入は、非ミトコンドリア酸素消費を明らかにする。
【０１４９】
脳卒中の光血栓性誘導および病変体積の決定
開頭術を行うために高速電気ドリル（Ｆｉｎｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｔｏｏｌｓ）を使用し、血塊が可視化されるまで、５６１ｎｍレーザーで血管を照射するために、Ｎｉｋｏｎ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  ＴＥ２００を使用したことを除いて、以前に記載されたとおりに（２，３）脳卒中を実施した。次いで、脳卒中形成後３０分以内に、表記濃度の１００μＬの薬物またはビヒクルを動物に腹腔内注射した。
【０１５０】
病変体積を定量するために、イソフルランでマウスを麻酔し、頸椎脱臼によって屠殺し、その後断頭した。脳を素早く取り出し、氷冷されたＰＢＳ中に短時間置き、続いて、ブレインマトリクス（Ｂｒａｉｎｔｒｅｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて、１ｍｍスライスの切片とした。０．５％の２，３，５トリフェニルテトラゾリウムクロリド（ＴＴＣ、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）中に切片を配置し、３７℃で８分間インキュベートし、反転し、さらに８分間インキュベートした。ＴＴＣを取り除き、８％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）中で脳を一晩インキュベートし、その後平台型スキャナを用いてスキャンし、ＩｍａｇｅＪを用いて、病変領域（白い、未染色組織によって表される）を計算した。いくつかの脳については、同側半球をＴＴＣ染色のために採取し、反対側組織を液体窒素中に瞬間凍結して、ウェスタンブロット分析のために使用するまで、−８０℃で保存した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて、統計を解析した。
【０１５１】
コカイン自己投与
本発明者らは、十分に摂食させたマウスにおける静脈内コカイン自己投与を記載する本発明者らの最近公表された研究（６、７）から採用された手法を使用した。雄のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（６〜７週齢）をＪａｃｋｓｏｎ  ｌａｂｓから購入し、食物および水へ自由にアクセスできるようにしながら、１２／１２時間の反転明暗サイクル（０９００時に消灯）で飼育した。コカイン塩酸塩（ＮＩＤＡドラッグサプライプログラム、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤから厚意により提供された）を、無菌生理食塩水（ＮａＣｌ０．９％）中に溶解した。若い成体マウスの典型的な体重（２８ｇ）に基づいて、注入当たり０．５ｍｇ／ｋｇ／１２μＬを送達する濃度でコカインを調製した。マウスの右の頸静脈中に、留置カテーテルを移植した。手術の１週間後に、毎日２時間のセッションで、コカイン静脈内注入を求める鼻の突き出しを行うように、オペラントチャンバー中でマウスを訓練した。各オペラントチャンバーは、鼻の突き出しが注入をもたらす「正しい」穴と機能しない「誤った」穴の両方を含有した。訓練は、１の固定比率（ＦＲ１）の強化スケジュールで行い、少なくとも８つの注入が３日連続することおよび７０％の正／誤鼻の突き出し比率を「学習」と定義した。自己投与が獲得されたら、マウスは、少なくとも７日間、ＦＲ３スケジュールに進み、最後の３日間の安定な摂取としてベースラインを定義した。マウス（ｎ＝５／群）をコカイン摂取によって釣り合わせ、浸透圧ミニポンプを介して食塩水またはＡＳＴ−００４を受けるように割り振った。肩甲骨の間にある背側のポケット中に、食塩水（ピンク、１００μＬ）またはＡＳＴ００４（紫、２．７８ｍＭで１００μＬ）のいずれかを含有する浸透圧ミニポンプ（Ａｌｚｅｔ、モデル１００４）を皮下に移植した。ポンプ移植からの１〜２日間の回復の後に、毎日のコカイン自己投与セッション（ＦＲ３で）を再開し、さらに２週間継続した。提示されているデータは、ベースラインにおける各マウスの個別のコカイン摂取に対して正規化されている。本発明者らのデータは、ＡＳＴ−００４で処置されたマウスは、食塩水処置されたマウスと比べて、２週間にわたって、摂取の減少を示したことを示す。群間での摂取の差は、５日間の自己投与の後に顕著であり、２週間ずっと持続し、ＡＳＴ−００４処置された群では、摂取がベースラインのおよそ６０％に安定して減少した（これに対して、食塩水処置されたマウスは、同じ期間にわたって、摂取の増加を示した。）。
【０１５２】
参考文献
１  Ｗｕ，Ｊ．ら、Ｐｕｒｉｎｅｒｇｉｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ  ＩＰ３−ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｃａ２＋ｒｅｌｅａｓｅ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ  ａｓｔｒｏｃｙｔｅ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ｄｕｒｉｎｇ  ａｇｉｎｇ．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ２７、６５１０−６５２０、ｄｏｉ：１０．１５２３／ＪＮＥＵＲＯＳＣＩ．１２５６−０７．２００７（２００７）。
【０１５３】
２  Ｚｈｅｎｇ，Ｗ．，Ｔａｌｌｅｙ  Ｗａｔｔｓ，Ｌ．，Ｈｏｌｓｔｅｉｎ，Ｄ．Ｍ．，Ｗｅｗｅｒ，Ｊ．＆Ｌｅｃｈｌｅｉｔｅｒ，Ｊ．Ｄ．Ｐ２Ｙ１Ｒ−ｉｎｉｔｉａｔｅｄ、ＩＰ３Ｒ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｓｔｒｏｃｙｔｅ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ａｎｄ  ｐａｒｔｉａｌｌｙ  ｒｅｖｅｒｓｅｓ  ｉｓｃｈｅｍｉｃ  ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｄａｍａｇｅ  ｉｎ  ｍｏｕｓｅ．Ｊ  Ｃｅｒｅｂ  Ｂｌｏｏｄ  Ｆｌｏｗ  Ｍｅｔａｂ  ３３、６００−６１１、ｄｏｉ：１０．１０３８／ｊｃｂｆｍ．２０１２．２１４（２０１３）。
【０１５４】
３  Ｚｈｅｎｇ，Ｗ．ら、Ｐｕｒｉｎｅｒｇｉｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ｅｄｅｍａ  ａｎｄ  ｂｒａｉｎ  ｉｎｆａｒｃｔｓ  ｉｎ  ｍｏｕｓｅ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｐｈｏｔｏｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ｂｙ  ｅｎｅｒｇｉｚｉｎｇ  ｇｌｉａｌ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ．ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ５，ｅ１４４０１、ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．００１４４０１（２０１０）。
【０１５５】
４  ＭｃＣａｒｔｈｙ，Ｋ．Ｄ．＆ｄｅ  Ｖｅｌｌｉｓ，Ｊ．Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｅｐａｒａｔｅ  ａｓｔｒｏｇｌｉａｌ  ａｎｄ  ｏｌｉｇｏｄｅｎｄｒｏｇｌｉａｌ  ｃｅｌｌ  ｃｕｌｔｕｒｅｓ  ｆｒｏｍ  ｒａｔ  ｃｅｒｅｂｒａｌ  ｔｉｓｓｕｅ．Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ８５，８９０−９０２（１９８０）。
【０１５６】
５  Ｌｉｎ，Ｄ．Ｔ．ら、Ｃａ２＋ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ  ａｎｄ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｔｏ  ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ｓｔｒｅｓｓ  ｉｎ  ａｇｉｎｇ  ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  Ａｇｉｎｇ  ２８、９９−１１１、ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｎｅｕｒｏｂｉｏｌａｇｉｎｇ．２００５．１１．００４（２００７）．
【０１５７】
６  ＭｃＣａｌｌ，Ｎ．Ｍ．ら、Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ａｂｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＧＩＲＫ  Ｃｈａｎｎｅｌｓ  ｉｎ  Ｄｏｐａｍｉｎｅ  Ｎｅｕｒｏｎｓ  Ａｌｔｅｒｓ  Ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｃｏｃａｉｎｅ  ｉｎ  Ｍｉｃｅ．Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ：ｏｆｆｉｃｉａｌ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ４２，７０７−７１５、ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｐｐ．２０１６．１３８（２０１７）。
【０１５８】
７  Ｓｈａｒｐｅ，Ａ．Ｌ．，Ｖａｒｅｌａ，Ｅ．，Ｂｅｔｔｉｎｇｅｒ，Ｌ．＆Ｂｅｃｋｓｔｅａｄ，Ｍ．Ｊ．Ｍｅｔｈａｍｐｈｅｔａｍｉｎｅ  ｓｅｌｆ−ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｄｅｃｒｅａｓｅｓ  ＧＩＲＫ  ｃｈａｎｎｅｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｃｕｒｒｅｎｔｓ  ｉｎ  ｍｉｄｂｒａｉｎ  ｄｏｐａｍｉｎｅ  ｎｅｕｒｏｎｓ．Ｉｎｔ  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌ  １８，ｄｏｉ：１０．１０９３／ｉｊｎｐ／ｐｙｕ０７３（２０１４）。
【０１５９】
実施例２：Ａ３アデノシン受容体（Ａ３Ｒ）における化合物のバイアスのかかった受容体活性化作用を測定するための実験プロトコール
ＡＳＴ−００４またはＭＲＳ１８７３（ＡＳＴ−００８）などの開示された化合物が、Ａ３受容体において、バイアスのかかった受容体活性化作用を示すかどうか（機能的選択性またはアゴニスト輸送としても知られる。）を決定するために、以下のアッセイを使用し得る。
【０１６０】
材料。Ｆｌｕｏ−４、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）およびペニシリン−ストレプトマイシンは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）から購入し得る。アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）およびハイグロマイシン−Ｂは、Ｒｏｃｈｅ（Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）から購入し得る。ウシ胎児血清（ＦＢＳ）は、ＴｈｅｒｍｏＴｒａｃｅ（Ｍｅｌｂｏｕｒｎｅ、Ａｕｓｔｒａｌｉａ）から購入し得る。ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ  ＳｕｒｅＦｉｒｅ細胞外シグナル制御キナーゼ１および２（ＥＲＫ１／２）、Ａｋｔ１／２／３およびｃＡＭＰキットは、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ（Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ）から取得し得る。ＭＲＳが前置されている全ての化合物は、以前に記載されているとおりに合成し得る（Ｔｏｓｈら、２０１２ａ、ｂ）。全ての他の試薬は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から購入した。
【０１６１】
細胞培養。以前に記載した方法を用いて（Ｓｔｅｗａｒｔら、２００９）、ヒトＡ３Ｒの配列は、Ｇａｔｅｗａｙエントリーベクター、ｐＤＯＮＲ２０１中にクローニングし、次いで、Ｇａｔｅｗａｙデスティネーションベクター、ｐＥＦ５／ＦＲＴ／Ｖ５−ｄｅｓｔ中に移し得る。以前に記載された方法（Ｍａｙら、２００７）を用いて、Ａ３−ＦｌｐＩｎ−ＣＨＯ細胞を作製し、１０％ＦＢＳおよび選択抗生物質ハイグロマイシン−Ｂ（５００μｇ／ｍＬ）を補充されたＤＭＥＭ中において、５％ＣＯ２を含有する加湿されたインキュベーター中で３７℃に維持し得る。細胞生存、ＥＲＫ１／２リン酸化、Ａｋｔ１／２／３リン酸化およびカルシウム動員アッセイのために、４×１０４細胞／ウェルの密度で、細胞を９６ウェル培養プレート中に播種し得る。６時間後に、無血清ＤＭＥＭで細胞を洗浄し、アッセイを行う前に、５％ＣＯ２中において、３７℃で１２〜１８時間、無血清ＤＭＥＭ中に維持した。ｃＡＭＰアッセイのために、２×１０４細胞／ウェルの密度で、９６ウェル培養プレート中に細胞を播種し、アッセイ前に、５％ＣＯ２中において、３７℃で一晩インキュベートし得る。
【０１６２】
細胞生存アッセイ。培地を除去し、Ａ３Ｒリガンドの不存在下および存在下で、ＡＤＡ（１Ｕ／ｍＬ）およびペニシリン−ストレプトマイシン（０．０５Ｕ／ｍＬ）を含有するＨＥＰＥＳ緩衝化食塩水溶液（１０ｍＭ  ４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、１４６ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  Ｄ−グルコース、５ｍＭ  ＫＣｌ、１ｍＭ  ＭｇＳＯ４、１．３ｍＭ  ＣａＣｌ２および１．５ｍＭ  ＮａＨＣＯ３、ｐＨ７．４５）で置き換えた。次いで、３７℃で、加湿されたインキュベーター中に２４時間、プレートを維持し、その後、５ｍｇ／ｍＬヨウ化プロピジウムを細胞に添加する。次いで、それぞれ、励起および発光を３２０ｎｍおよび６１５ｎｍに設定して、ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）上でプレートを読み取り得る。それぞれ、ＨＥＰＥＳ緩衝液中、ｔ＝０時間で、Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水中、ｔ＝２４時間で測定された、１００％細胞生存および０％細胞生存にデータを正規化する。
【０１６３】
ＥＲＫ１／２およびＡｋｔ１／２／３リン酸化アッセイ。各リガンドに対するＥＲＫ１／２およびＡｋｔ１／２／３リン酸化の濃度応答曲線は、１Ｕ／ｍＬ  ＡＤＡを含有する無血清ＤＭＥＭ中で実施され得る（３７℃で５分の曝露）。アゴニスト刺激は、培地の除去および各ウェルへの１００ｍＬのＳｕｒｅＦｉｒｅ溶解緩衝液の添加によって停止され得る。次いで、プレートを５分間撹拌する。ｐＥＲＫ１／２の検出は、３８４ウェルＰｒｏｘｉＰｌａｔｅ中に、合計１１ｍＬの容量で、溶解物：活性化緩衝液：反応緩衝液：ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎアクセプタービーズ：ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎドナービーズを８０：２０：１２０：１：１ｖ／ｖ／ｖ／ｖ／ｖ希釈することを含み得る。プレートは、暗所にて、３７℃で１時間、インキュベートし得、その後、それぞれ、励起および発光を６３０ｎｍおよび５２０〜６２０ｎｍに設定して、ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）によって蛍光を測定し得る。Ａｋｔ１／２／３リン酸化の検出は、３８４ウェルＰｒｏｘｉｐｌａｔｅ中に、合計９Ｌの容量で、溶解物：活性化緩衝液：反応緩衝液：ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎアクセプタービーズを４０：９．８：３９．２：１ｖ／ｖ／ｖ／ｖ希釈することを使用し得る。プレートは、室温で２時間、暗所においてインキュベートし得、その後、希釈緩衝液：ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎドナービーズの１９：１ｖ／ｖ希釈物を、１１μＬの総容量で添加し得る。プレートは、室温でさらに２時間インキュベートし得、その後、それぞれ、励起および発光を６３０ｎｍおよび５２０〜６２０ｎｍに設定して、ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）上によって蛍光を測定し得る。アゴニスト濃度応答曲線を、１０％ＦＢＳによって媒介されるリン酸化（５分の刺激）に対して正規化する。
【０１６４】
カルシウム動員アッセイ。９６ウェルプレートから培地を除去し、１Ｕ／ｍＬ  ＡＤＡ，２．５ｍＭプロベネシド、０．５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）および１Ｍ  Ｆｌｕｏ４を含有するＨＥＰＥＳ緩衝化食塩水溶液で置き換えた。プレートは、加湿されたインキュベーター中、３７℃で１時間、暗所においてインキュベートし得る。ＦｌｅｘＳｔａｔｉｏｎプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ）は、アゴニストの不存在下および存在下で、ＨＥＰＥＳ緩衝化食塩水溶液の添加を実施し、７５秒間、１．５２秒ごとに蛍光（励起、４８５ｎｍ；発光、５２０ｎｍ）を測定し得る。ピークとベースライン蛍光との差は、細胞内Ｃａ２＋動員に対するマーカーとして測定され得る。細胞数および負荷効率の差を考慮するために、１００μＭ  ＡＴＰによって媒介された応答に対して、Ａ３Ｒアゴニスト濃度応答曲線を正規化し得る。
【０１６５】
ｃＡＭＰ蓄積の阻害アッセイ。培地を刺激緩衝液（１４０ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＫＣｌ、０．８Ｍ  ＭｇＳＯ４、０．２ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４、０．４４ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４、１．３ｍＭ  ＣａＣｌ２、５．６ｍＭ  Ｄ−グルコース、５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、０．１％ＢＳＡ、１Ｕ／ｍＬ  ＡＤＡおよび１０μＭロリプラム、ｐＨ７．４５）と置き換え、３７℃で１時間インキュベートし得る。ｃＡＭＰ蓄積の阻害は、１０分間、Ａ３ＲアゴニストとのＡ３−ＦｌｐＩｎ−ＣＨＯ細胞の事前インキュベーションの後、３μＭフォルスコリンをさらに３０分間添加することによって評価し得る。反応は、緩衝液の急速な除去および５０μＬの氷冷した１００％エタノールの添加によって終結し得る。５０μＬ検出緩衝液（０．１％ＢＳＡ、０．３％Ｔｗｅｅｎ−２０、５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４５）の添加前に、エタノールを蒸発させる。プレートを１０分間撹拌し、その後、１０μＬの溶解物を３８４ウェルＯｐｔｉｐｌａｔｅに移した。検出は、ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎアクセプタービーズ：刺激緩衝液の５μＬの１：４９ｖ／ｖ希釈物の添加を使用し得る。この後に、３０μＬの総容量を形成するために、ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎドナービーズ：検出緩衝液：３．３Ｕ／μＬビオチン化ｃＡＭＰの１：１４６：３ｖ／ｖ／ｖ希釈物１５μＬ。添加前に、ドナービーズ／ビオチン化ｃＡＭＰ混合物を、３０分間平衡化し得る。プレートは、室温で暗所において一晩インキュベートし、その後、それぞれ、励起および発光を６３０ｎｍおよび５２０〜６２０ｎｍに設定して、ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）によって蛍光を測定し得る。３μＭフォルスコリン（０％）または緩衝液（１００％）のみによって媒介された応答に対して、アゴニスト濃度応答曲線を正規化し得る。
【０１６６】
分子モデリング。ヒトＡ３Ｒの相同性モデルを用いて、本研究において調査された全ての化合物に対して、ドッキングシミュレーションを実施することができる。特に、アゴニストが結合されたｈＡ２ＡＡＲ結晶構造（ＰＤＢ  ＩＤ：３ＱＡＫ）に完全に基づいたモデル、ハイブリッドＡ２ＡＡＲ−β２アドレナリン作動性受容体テンプレートに基づいたモデルおよびハイブリッドＡ２ＡＡＲ−オプシンテンプレート（β２アドレナリン受容体Ｘ線構造ＰＤＢ  ＩＤ：３ＳＮ６；オプシン結晶Ｘ線結晶構造ＰＤＢ  ＩＤ：３ＤＱＢ）に基づいたモデル（Ｔｏｓｈら、２０１２ａ）という３つの以前に報告されたモデルを使用することができる。ハイブリッドテンプレートに基づいたモデルは、Ａ２ＡＡＲに基づくモデルと比べて、ＴＭ２の外側への動きを示すであろう。Ｓｃｈｒｏｅｄｉｎｇｅｒスイート（Ｓｃｈｒｏｅｄｉｎｇｅｒ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ２０１３−３、Ｓｃｈｒｏｅｄｉｎｇｅｒ、ＬＬＣ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹ、２０１３）中に実装されたＢｕｉｌｄｅｒツールおよびＬｉｇＰｒｅｐツールを用いて、Ａ３Ｒリガンドの構造を構築し、ドッキングのために準備し得る。Ａ３Ｒモデルにおけるリガンドの分子ドッキングは、ＳｃｈｒｏｅｄｉｎｇｅｒスイートのＧｌｉｄｅパッケージ部分を用いて実施し得る。特に、アデノシン受容体の結合ポケットのいくつかのカギとなる残基、すなわち、Ｐｈｅ（ＥＬ２）、Ａｓｎ（６．５５）、Ｔｒｐ（６．４８）およびＨｉｓ（７．４３）の重心上に、Ｇｌｉｄｅ  Ｇｒｉｄの中央を配置し得る。Ｇｌｉｄｅ  Ｇｒｉｄは、１４Å×１４Å×１４Åの内箱（リガンド直径中点箱）および内箱から各方向に２５Å広がる外箱（その中に全てのリガンド原子が含有されなければならない箱）を用いて構築され得る。リガンドのドッキングは、ＸＰ（（ｅｘｔｒａ  ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ）（超精密））手法を用いて、剛性の結合部位中で行われ得る。実験データと合致する提案された結合コンフォメーションを選択するために、各リガンドに対する最上位スコアのドッキングコンフォメーションをタンパク質−リガンド相互作用の目視による検査および分析に供し得る。
【０１６７】
データ解析。統計解析および曲線フィッティングは、Ｐｒｉｓｍ６（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を用いて実施し得る。シグナル伝達バイアスを定量するために、以前に記載されたように、受容体活性化作用のＢｌａｃｋ−Ｌｅｆｆ動作モデルの誘導を用いて、非線形回帰によって、アゴニスト濃度応答曲線を解析し得る（Ｋｅｎａｋｉｎら、２０１２；Ｗｏｏｔｔｅｎら、２０１３；ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｗｅｓｔｈｕｉｚｅｎら、２０１４）。バイアスのある受容体活性化作用を定量するために、伝達計数τ／ＫＡ［対数Ｌｏｇ（τ／ＫＡ）として表される］を使用し得る。アゴニスト応答に対する細胞依存性の効果を説明するために、基準アゴニストＩＢ−ＭＥＣＡに対して得られた値に対して、伝達比を正規化して、ＡＬｌｏｇ（τ／ＫＡ）を生成し得る。異なるシグナル伝達経路における各アゴニストに対するバイアスを決定するために、ＡＬｏｇ（τ／ＫＡ）を基準経路ｐＥＲＫ１／２に対して正規化し、ＡＡＬｏｇ（τ／ＫＡ）を生成する。バイアスは、１０ＡＡＬｏｇ（τ／ＫＡ）として定義することができ、バイアスの欠如は１、または対数として表したときには０と統計学的に異ならない値をもたらす。全ての結果は、平均６  ＳＥＭとして表し得る。統計解析は、Ｆ検定またはチューキーもしくはダネットの事後検定を用いた片側分散分析を含み、統計的有意性はＰ，０．０５と定める。
【０１６８】
実施例３：ＡＳＴ−００４に対する合成経路
ＡＳＴ−００４およびＭＲＳ１８７３（ＡＳＴ−００８）などの類似の化合物は、本分野において公知の方法にしたがって調製し得る。例えば、ＡＳＴ−００４は、Ｃｈｏｉ，Ｗ．Ｊ．ら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００４，６９，２６３４−２６３６、Ｔｏｓｈ，Ｄ．Ｋ．ら、Ｐｕｒｉｎｅｒｇｉｃ  Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ２０１５，１１，３７１−３８７；およびＣｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．，２００９，１５，６２４４−６２５７に記載されている経路に従うことにより、Ｄ−リボースから調製し得る。下記のスキーム１および２は、合成経路を示す。
スキーム１：ＡＳＴ−００４の合成
【化６７】
2021512897.tif 000069
【０１６９】
Ｚｈａｎ  ｃａｔ−１Ｂは、以下の構造を有する。
【化６８】
2021512897.tif 000070
【０１７０】
スキーム２は、合成の残部を示す。
スキーム２：ＡＳＴ−００４の合成（続き）
【化６９】
2021512897.tif 000071
【０１７１】
本発明の多数の実施形態が記載されているが、上に記載されている具体的な実施例は、本発明の化合物および方法を使用するその他の実施形態を提供するために、慣用的な実験操作を用いて改変し得ることが理解される。したがって、本発明の範囲は、記載されている具体的な実施形態によってではなく、以下の特許請求の範囲によってのみ定義されるべきことが理解されるであろう。
【図１】
2021512897.tif 000077
【図２】
2021512897.tif 000078
【図３】
2021512897.tif 000079
【図４】
2021512897.tif 000080
【図５】
2021512897.tif 000081
【図６】
2021512897.tif 000082
【図７】
2021512897.tif 000083
【図８】
2021512897.tif 000084
【図９】
2021512897.tif 000085
【国際調査報告】
2021512897.tif 000086
2021512897.tif 000087