(57)【要約】  本出願は、被験体におけるＥＧＦＲ阻害に関連する上皮組織疾患の予防又は治療のための薬剤の調製における一酸化窒素放出剤の使用を提供する。本出願はまた、ＥＧＦＲ阻害剤と一酸化窒素放出剤とからなる薬物の組み合わせ又はキットを提供する。
2021506958.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験者におけるＥＧＦＲ阻害に関連する上皮組織疾患の予防又は治療のための薬剤の調製における一酸化窒素放出剤の使用。
【請求項２】
ＥＧＦＲ阻害剤の投与によりＥＧＦＲ阻害が起こる、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
ＥＧＦＲ阻害剤が癌治療のための薬剤からなる、請求項２に記載の使用。
【請求項４】
ＥＧＦＲ阻害剤が、前記ＥＧＦＲタンパク質及び／又は前記ＥＧＦＲタンパク質をコードする核酸に直接作用する、請求項２〜３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５】
ＥＧＦＲ阻害剤が、低分子ＥＧＦＲ阻害剤、ＥＧＦＲを特異的に結合するタンパク質マクロ分子、ＥＧＦＲタンパク質発現を阻害するＲＮＡｉ及び／又はアンチセンスオリゴヌクレオチドからなる、請求項２〜４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６】
低分子ＥＧＦＲ阻害剤が、ＥＧＦＲに可逆的に結合する低分子ＥＧＦＲ阻害剤、ＥＧＦＲに不可逆的に結合する低分子ＥＧＦＲ阻害剤、及び／又は変異ＥＧＦＲに特異的に結合する低分子ＥＧＦＲ阻害剤からなる、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
ＥＧＦＲ阻害剤が、セツキシマブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、エクチニブ、サピチニブ、アファチニブ、ラパチニブ、バンデチニブ、レナチニブ、ブリガチニブ、パニズマブ、ネキシマブ、テセバチニブ、エリチニブ、シルチニブ、ロチレチニブ、カネチニブ、ＡＺＤ３７５９、ＹＺＪ−０３１８、ナプチニブ。  ナコチニブ、ＰＦ−０６７４７７７５、ＳＰＨ１１８８−１１、ポジオチニブ、イブルチニブ、バルリチニブ、エフォチニブ、ＨＭ６１７１３、ＣＫ−１０１、ピロリチニブ、レロチニブ、ＨＳ−１０２９６、ＡＰ３２７８８、シモチニブ、ＧＭＡ２０４、ワルリチニブ  インリチニブ、ナザチニブ、ノスタチニブ、オモチニブ、オキシチニブ、ダシチニブ、エビチニブ、及び／又はＥＡＩ０４５からなる、請求項２〜６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８】
ＥＧＦＲ阻害剤が、１つ以上の他の治療と組み合わせて使用される、請求項２〜７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９】
上皮組織疾患がＥＧＦＲの阻害によって直接引き起こされる、請求項１〜８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１０】
上皮組織疾患が上皮細胞疾患及び／又は内皮細胞疾患を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１１】
上皮細胞が皮膚上皮細胞、口腔上皮細胞、胃上皮細胞、及び／又は小腸上皮細胞を含む、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
内皮細胞が血管内皮細胞からなる、請求項１０に記載の使用。
【請求項１３】
上皮組織障害が、ＥＧＦＲ阻害に伴う発疹、ＥＧＦＲ阻害に伴うにきび、ＥＧＦＲ阻害に伴うそう痒症、ＥＧＦＲ阻害に伴う手足症候群、ＥＧＦＲ阻害に伴う脱毛症、ＥＧＦＲ阻害に伴う毛髪の変質、ＥＧＦＲ阻害に伴う発疹、ＥＧＦＲ阻害に伴うにきび、ＥＧＦＲ阻害に伴うそう痒症、ＥＧＦＲ阻害に伴うそう痒症、ＥＧＦＲ阻害に伴う毛髪の変質、ＥＧＦＲ阻害に伴う紅斑、ＥＧＦＲ阻害に伴う角質剥離、ＥＧＦＲ阻害に伴うヘルペス膿瘍、ＥＧＦＲ阻害に伴う多毛症、ＥＧＦＲ阻害に伴う色素沈着、ＥＧＦＲ阻害に伴う爪の病気（ＥＧＦＲ阻害に伴う爪の障害）、ＥＧＦＲ阻害に伴う爪の障害及び爪裂け、ＥＧＦＲ阻害に伴う皮膚の乾燥、ＥＧＦＲ阻害に伴う知覚過敏、ＥＧＦＲ阻害に伴う粘膜炎、ＥＧＦＲ阻害に伴う鼻咽頭炎、ＥＧＦＲ阻害に伴う鼻出血、ＥＧＦＲ阻害に伴う口腔乾燥、及びＥＧＦＲ阻害に伴う爪の障害、ＥＧＦＲ阻害に関連した口唇炎、ＥＧＦＲ阻害に関連した口内炎、及び／又はＥＧＦＲ阻害に関連した消化管粘膜障害を含むものである、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１４】
上皮組織疾患がＥＧＦＲ阻害に関連した発疹を構成する、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
上皮組織疾患の重症度が、ＮＣＩ−ＣＴＣＡＥ  Ｖ５．０によるグレード１以上、グレード２以上、グレード３以上、グレード４以上、又はグレード５である、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１６】
一酸化窒素放出剤が、ＮＯ＋、ＮＯ−、Ｎ２Ｏ、ＮＯ、Ｎ２Ｏ３、ＮＯ２、ＮＯ３−及びＮＯ２−のうちの少なくとも１つを生成することができる、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１７】
前記一酸化窒素放出剤が直接又は間接的にＮＯを生成する、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１８】
一酸化窒素放出剤がＮＯからなる請求項１〜１７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１９】
一酸化窒素放出剤が、有機分子、無機分子、高分子又はナノ材料、及び／又はアンモニア酸化微生物（ＡＯＭ）からなる、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２０】
一酸化窒素放出剤が有機分子からなり、該有機分子がニトログリセリン、モノ硝酸イソソルビド、ブタンジオールモノ硝酸塩、ペンタエリスリトールテトラニトレート、イソソルビドジニトレート、トルニトレート、ニコランジル、ニトロジヒドロキシメチルブタノール、５−アミノ−３−（４−モルホリニル）−１，２，３-オキサジアゾール、亜硝酸イソアミル、３，３−ジ（アミノエチル）−１−ヒドロキシル−２−カルボニル−１−トリアゼン（ＮＯＣ−１８）、スルホノエート二ナトリウム塩、Ｓ−ニトロソグルタチオン、Ｓ−ニトロソ−Ｎ−アセチルペニシラミン、４−フェニル−３−フロキサンカルボニトリル、（±）−（Ｅ）−４−エチル−２−［（Ｅ）−ヒドロキシイミノ］−５−ニトロ−３−ヘキセンアミド、ストレプトゾシン、ＮＧ−ヒドロキシ−Ｌ−アルギニン酢酸塩、Ｏ２−（２，４−ジニトロフェニル）１−［（４−エトキシカルボニル）ピペラジン−１−イル］ジアゼン−１−リウム−１，２−ジオレート、Ｎ−ニトロソジブチルアミン、３−モルホリノシドノニミン（ＳＩＮ−１）、リンシドミン、モルシドミン、３−（４−アセチルフェニル）シドノン、ジエチルアミンＮＯＮＯａｔｅ／ＡＭ及び／又はイトラミンからなる、請求項１９に記載の使用。
【請求項２１】
一酸化窒素放出剤が有機分子からなり、該有機分子がニトログリセリン、モノ硝酸イソソルビド、及び／又は硝酸イソソルビドからなる、請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】
ＥＧＦＲ阻害に関連する上皮組織疾患が、ＥＧＦＲ阻害に関連する発疹又はそう痒症である、請求項２１に記載の使用。
【請求項２３】
ＥＧＦＲ阻害に関連した発疹又は痒みが少なくとも１０％緩和される、請求項２２に記載の使用。
【請求項２４】
一酸化窒素放出剤が無機分子からなり、無機分子がニトロシル錯体、金属ニトロシル錯体、金属ニトロシルアミノ錯体（Ｍｅｔａｌ  ｎｉｔｒｏｓｙｌ  ｃｏｍｐｌｅｘ）、硝酸塩及び／又は亜硝酸塩からなる、請求項１９に記載の使用。
【請求項２５】
一酸化窒素放出剤が無機分子からなり、無機分子がニトロプルシドナトリウムからなる、請求項２４に記載の使用。
【請求項２６】
ＥＧＦＲ阻害に関連する上皮組織疾患が、ＥＧＦＲ阻害に関連する発疹又はそう痒症である、請求項２５に記載の使用。
【請求項２７】
発疹又はかゆみが少なくとも１０％緩和される、請求項２６に記載の使用。
【請求項２８】
一酸化窒素放出剤がポリマー又はナノ材料からなり、該ポリマー又はナノ材料がＳ-ニトロソチオールナノシリカ球体、Ｓ-ニトロソジエチレントリオールキトサン及び／又はオリゴマーのマロンジアミングラフト化キトサンＮＯＮＯａｔｅからなる、請求項１９に記載の使用。
【請求項２９】
一酸化窒素放出剤がアンモニア酸化微生物（ＡＯＭ）からなり、前記アンモニア酸化微生物（ＡＯＭ）がアンモニア酸化細菌（ＡＯＢ）からなる、請求項１９に記載の使用。
【請求項３０】
一酸化窒素放出剤がアンモニア酸化微生物（ＡＯＭ）からなり、該アンモニア酸化微生物（ＡＯＭ）がニトロソモナス、ニトロソコッカス、ニトロソスピラ、ニトロソシスティス、ニトロソラブス、及び／又はニトロソビブリオを含むものである、請求項２９に記載の使用。
【請求項３１】
一酸化窒素放出剤が、２０００ダルトン以下、１５００ダルトン以下、１２００ダルトン以下、１０００ダルトン以下、９００ダルトン以下、８００ダルトン以下、７００ダルトン以下、６００ダルトン以下、５００ダルトン以下、４００ダルトン以下、３００ダルトン以下、２００ダルトン以下、及び／又は１００ダルトン以下の分子量を有する、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３２】
一酸化窒素放出剤が、以下の群：アゾビトリウムグリコール塩、ヒドロキシジアゼンスルホン酸、Ｓ-ニトロソチオール、フロザナゾキシド、オキシム、Ｎ-ニトロサミン、Ｎ-ヒドロキシグアニジン、硝酸塩、亜硝酸塩、亜硝酸塩、ステノンイミン、ステノン、オキサゾール-５-イミン、オキサゾール-５-オン、ヒドロキシルアミン、ジオキシジブテン、Ｎ-ヒドロキシニトロサミン、Ｎ-ニトロシミン、ヒドロキシウレア及び金属ニトロソアミノ錯体から選ばれる１種以上を有する一酸化窒素放出剤である、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３３】
薬剤が局所投与のために調製される、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３４】
外用剤の投与部位が、癌の発生部位又は癌の潜在的な転移部位ではない、請求項３３に記載の使用。
【請求項３５】
薬剤中の一酸化窒素放出剤の濃度が約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約５０％（ｗ／ｗ）までである、請求項１〜３４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３６】
薬剤が経皮投与に適したものとして調製される、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３７】
薬剤が軟膏として調製される、請求項１〜３６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３８】
薬剤が更に１つ以上の他の有効成分を含む、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３９】
薬剤が前記ＥＧＦＲ阻害剤の治療効果によって実質的に影響を受けない、請求項１〜３８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項４０】
対象が癌患者を含む、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４１】
癌患者がＥＧＦＲ阻害剤を投与されている、投与されている、及び／又は投与される、請求項４０に記載の使用。
【請求項４２】
１）ＥＧＦＲ阻害剤；及び２）一酸化窒素放出剤を含む、組合せ医薬又はキット。
【請求項４３】
ＥＧＦＲ阻害剤及び一酸化窒素放出剤が互いに混合されていない、請求項４２に記載の組合せ医薬又はキット。
【請求項４４】
ＥＧＦＲ阻害剤及び一酸化窒素放出剤がそれぞれ独立して別々の容器中に存在する、請求項４２〜４３のいずれか一項に記載の組合せ医薬又はキット。
【請求項４５】
一酸化窒素放出剤が経皮投与に適するように調製される、請求項４２〜４４のいずれか一項に記載の組合せ医薬又はキット。
【請求項４６】
一酸化窒素放出剤が局所投与のために調製される、請求項４２〜４５のいずれか一項に記載の医薬の組み合わせ又はキット。
【請求項４７】
一酸化窒素放出剤が軟膏として調製される、請求項４２〜４６のいずれか一項に記載の組合せ医薬又はキット。
【請求項４８】
一酸化窒素放出剤の濃度が約０．０００１％（ｗ／ｗ）〜約５０％（ｗ／ｗ）である、４２〜４７のいずれか一項に記載の組合せ医薬又はキット。
【請求項４９】
２）の一酸化窒素放出剤が１）のＥＧＦＲ阻害剤によって引き起こされる疾患又は疾病を予防又は治療することができる、請求項４２〜４８のいずれか一項に記載の組合せ医薬又はキット。
【請求項５０】
２）の一酸化窒素放出剤が１）のＥＧＦＲ阻害剤の治療効果に実質的に影響を及ぼさない、請求項４２〜４９のいずれか一項に記載の組合せ医薬又はキット。
【請求項５１】
２）の一酸化窒素放出剤が、１）のＥＧＦＲ阻害剤の投与前に、同時に、又は投与後に投与されるように使用される、請求項４２〜５０のいずれか一項に記載の組合せ医薬又はキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、ＥＧＦＲ阻害に関連する疾患を予防又は治療するための方法又は使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の変異又は過剰発現はさまざまな癌に関連していることが判明しており、そのような腫瘍の患者は、ＥＧＦＲを阻害する療法（例：ＥＧＦＲ阻害剤の投与）で治療することができる。ただし、このタイプの治療は（特に皮膚、顔の特徴、消化管に）深刻な副作用を引き起こす可能性がある。ＥＧＦＲ阻害剤で治療された患者の５０％以上が皮膚に副作用があると報告されている（例えば、Ｈｅｉｄａｒｙら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ、５８（４）：５４５、２００８を参照）。ＥＧＦＲを阻害する療法の様々な副作用は、治療中止又は用量の減少につながる可能性があり、患者の生活の質を損なう可能性がある。
【０００３】
ＥＧＦＲ阻害療法によって引き起こされる副作用を制御するための治療計画で成功した先行技術はない。したがって、これらの副作用を上手に制御することが可能な治療計画が緊急に必要とされている。
【発明の概要】
【０００４】
本出願は、ＥＧＦＲ阻害に関連する疾患を予防又は治療するための方法又は使用に関する。本出願は、対象におけるＥＧＦＲの阻害に関連する上皮組織疾患の予防又は治療のための薬剤の調製における一酸化窒素放出剤の使用を提供する。本出願はまた、一酸化窒素放出剤を含む医薬、組合せ医薬の又はキット、一酸化窒素放出剤を用い、対象におけるＥＧＦＲの阻害に関連する疾患又は障害を予防又は治療する方法なども提供する。この出願では、一酸化窒素放出剤の使用が、ＥＧＦＲ阻害に関連する疾患又は障害を効果的に予防又は治療できることを見出した。
【０００５】
一態様において、本出願は、対象におけるＥＧＦＲ阻害に関連する上皮組織疾患の予防又は治療のための医薬品の調製における一酸化窒素放出剤の使用を提供する。
【０００６】
いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲの阻害は、ＥＧＦＲ阻害剤の投与によって引き起こされる。
【０００７】
いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤は、癌を治療するための薬物を含む。
【０００８】
いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤は、ＥＧＦＲタンパク質及び／又はＥＧＦＲタンパク質をコードする核酸に直接作用する。
【０００９】
いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤は、小分子ＥＧＦＲ阻害剤、ＥＧＦＲに特異的に結合するタンパク質高分子、ＥＧＦＲタンパク質発現を阻害するＲＮＡｉ、及びＥＧＦＲタンパク質発現を阻害するアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、小分子ＥＧＦＲ阻害剤は、以下の群：ＥＧＦＲに可逆的に結合する小分子ＥＧＦＲ阻害剤、ＥＧＦＲに不可逆的に結合する小分子ＥＧＦＲ阻害剤、及び／又は変異体ＥＧＦＲに特異的に結合する小分子ＥＧＦＲ阻害剤から選択される。
【００１０】
いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤は、ＥＧＦＲ阻害剤はセツキシマブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、イコチニブ、サピチニブ、アファチニブ、ラパチニブ、バンデチニブ、レナチニブ、ブリガチニブ、パニツムマブ、ネクトリズマブ、ニモツズマブ、テセバチニブ、アリチニブ、シリチニブ、ロシレチニブ、カネチニブ、ＡＺＤ３７５９、ＹＺＪ−０３１８、ナピチニブ、ナコチニブ、ＰＦ−０６７４７７７５、ＳＰＨ１１８８−１１、ポジオチニブ、エピチニブ、バルリチニブ、イフルチニブ、ＨＭ６１７１３、ＣＫ−１０１、ピロチン  Ｎｉ、レロチニブ、ＨＳ−１０２９６、ＡＰ３２７８８、シモチニブ、ＧＭＡ２０４、ビルリチニブ、インリチニブ、ナザチニブ、ノステニブ、オモチニブ、オシメルチニブ、ダコミチニブ、アビチニブ及び/又はＥＡＩ０４５を含む。
【００１１】
いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤は、１つ又は複数の他の療法と組み合わせて使用される。
【００１２】
いくつかの実施形態において、上皮組織疾患は、ＥＧＦＲの阻害によって直接引き起こされる。
【００１３】
いくつかの実施形態において、上皮組織疾患には、上皮細胞疾患及び／又は内皮細胞疾患を含む。いくつかの実施形態において、上皮細胞には、皮膚上皮細胞、頬側上皮細胞、胃上皮細胞、及び／又は小腸上皮細胞が含まれる。いくつかの実施形態において、内皮細胞は、血管内皮細胞が含まれる。
【００１４】
いくつかの実施形態において、上皮組織疾患には、ＥＧＦＲ阻害に関連する発疹、ＥＧＦＲ阻害に関連するざ瘡、ＥＧＦＲ阻害に関連する皮膚のかゆみ、ＥＧＦＲ阻害に関連する手足症候群、ＥＧＦＲ阻害に関連する脱毛、ＥＧＦＲ阻害に関連する毛髪の変化、ＥＧＦＲ阻害に関連する紅斑、ＥＧＦＲ阻害に関連する皮膚剥離（Ｓｋｉｎ  ｅｘｆｏｌｉａｔｉｏｎ）、ＥＧＦＲ阻害に関連するヘルペス膿疱、ＥＧＦＲ阻害に関連する多毛症、ＥＧＦＲ阻害に関連する色素沈着過剰（ｈｙｐｅｒ−ｐｉｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ）、ＥＧＦＲ阻害に関連する爪の疾患（ｎａｉｌ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）、ＥＧＦＲ阻害に関連する爪周囲炎及び爪裂、ＥＧＦＲ阻害に関連する乾燥肌、ＥＧＦＲ阻害に関連する過敏症反応、ＥＧＦＲ阻害に関連する粘膜炎、ＥＧＦＲ阻害に関連する鼻咽頭炎、ＥＧＦＲ阻害に関連する鼻出血、ＥＧＦＲ阻害に関連する口渇、ＥＧＦＲ阻害に関連する口唇炎、ＥＧＦＲ阻害に関連する口腔潰瘍、及び／又はＥＧＦＲ阻害に関連する胃腸粘膜の損傷が含まれる。いくつかの実施形態において、上皮組織疾患は、ＥＧＦＲの阻害に関連する発疹を含む。
【００１５】
いくつかの実施形態において、上皮組織疾患の重症度は、ＮＣＩ−ＣＴＣＡＥ  Ｖ５．０グレード１又はそれ以上、グレード２又はそれ以上、グレード３又はそれ以上、グレード４又はそれ以上、又はグレード５に基づく。
【００１６】
いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は、ＮＯ＋、ＮＯ−、Ｎ２Ｏ、ＮＯ、Ｎ２Ｏ３、ＮＯ２、ＮＯ３−及びＮＯ２−のうちの少なくとも１つを生成することができる。いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は直接又は間接的にＮＯを生成する。
【００１７】
いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤はＮＯを含む。
【００１８】
いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は、有機分子、無機分子、ポリマー又はナノ材料、及び／又はアンモニア酸化微生物（ＡＯＭ）を含む。
【００１９】
いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は有機分子を含み、有機分子はニトログリセリン、一硝酸イソソルビド、一硝酸ブタンジオール、四硝酸ペンタエリスリトール、二硝酸イソソルビド、トリニトロエタノールアミン、ニコランジル、ニトロブタノール、５−アミノ−３−（４−モルホリン）グループ）−１，２，３−オキサジアゾール、亜硝酸イソアミル、３，３−ビス（アミノエチル）−１−ヒドロキシ−２−カルボニル−１−トリアゼン（ＮＯＣ−１８）、スルホン酸求核性複合二ナトリウム塩（スルホＮＯＮＯａｔｅ二ナトリウム塩）、Ｓ−ニトロソグルタチオン（Ｓ−Ｎｉｔｒｏｓｏｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ）、Ｓ−ニトロソ−Ｎ−アセチルペニシラミン（Ｓ−Ｎｉｔｒｏｓｏ−Ｎ−ａｃｅｔｙｌｐｅｎｉｃｉｌｌａｍｉｎｅ）、４−フェニル−３−フロキサンカルボニトリル（４−Ｐｈｅｎｙｌ−３−ｆｕｒｏｘａｎｃａｒｂｏｎｉｔｒｉｌｅ）、（±）−（Ｅ）−４−エチル−２−（Ｅ）−オキシミノ−５−ニトロ−３−ヘキサミド（（±）−（Ｅ）−４−Ｅｔｈｙｌ−２−［（Ｅ）−ｈｙｄｒｏｘｙｉｍｉｎｏ］−５−ｎｉｔｒｏ−３−ｈｅｘｅｎａｍｉｄｅ）、ストレプトゾシン（Ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｃｉｎ）、ＮＧ−ヒドロキシ−Ｌ−アルギニンＮＧ−ヒドロキシ−Ｌ−アルギニン酢酸塩（ＮＧ−Ｈｙｄｒｏｘｙ−Ｌ−ａｒｇｉｎｉｎｅ  ａｃｅｔａｔｅ  ｓａｌｔ）、Ｏ２−（２，４−ジニトロフェニル）１−［（４−エトキシカルボニル）ピペラジン−１−イル］  １，２−ジアゼン−１−イウムジオール（Ｏ２−（２，４−Ｄｉｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ）  １−［（４−ｅｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）ｐｉｐｅｒａｚｉｎ−１−ｙｌ］ｄｉａｚｅｎ−１−ｉｕｍ−１，２−ｄｉｏｌａｔｅ）、Ｎ−ニトロジブチルアミン、３−モルホリノシドノニミン（３−ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏｓｙｄｎｏｎｉｍｉｎｅ  （ＳＩＮ−１））、リンシドミン（Ｌｉｎｓｉｄｏｍｉｎｅ）、モルシドミン（Ｍｏｌｓｉｄｏｍｉｎｅ）、３−（４−アセチルフェニル）シドノン（３−（４−ａｃｅｔｙｌｐｈｅｎｙｌ）ｓｙｄｎｏｎｅ）、ジエチルアミン求核錯体／ＡＭ（ジエチルアミン  ＮＯＮＯａｔｅ／ＡＭ）及び／又はイトラミンを含む。
【００２０】
いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は有機分子からなり、有機分子はニトログリセリン、モノ硝酸イソソルビド、及び／又は硝酸イソソルビドからなる。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ阻害に関連する上皮組織疾患は、ＥＧＦＲ阻害に関連する発疹又はそう痒症である。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ阻害に関連する発疹又はそう痒症は、少なくとも１０％緩和される。
【００２１】
いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は無機分子からなり、該無機分子は、ニトロイル錯体、金属ニトロシル錯体、金属ニトロシルアミノ錯体、硝酸塩及び／又は亜硝酸塩からなる。いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は無機分子からなり、該無機分子はニトロプルシドナトリウムからなる。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ阻害に関連する上皮組織疾患は、ＥＧＦＲ阻害に関連する発疹又はそう痒症である。いくつかの実施形態において、発疹又はそう痒症は少なくとも１０％緩和される。
【００２２】
いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は、ポリマー又はナノ材料を含み、該ポリマー又はナノ材料はＳ−ニトロソチオールナノシリコンボール、Ｓ−ニトロソエタンジチオールキチン及び／又はオリゴプロピレンジアミングラフト化キトサンＮＯＮＯａｔｅを含む。
【００２３】
いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は、アンモニア酸化微生物（AOM）からなり、前記アンモニア酸化微生物（ＡＯＭ）は、アンモニア酸化細菌（ＡＯＢ）からなる。いくつかの実施形態において、前記一酸化窒素放出剤は、アンモニア酸化微生物（ＡＯＭ）からなり、前記アンモニア酸化微生物（ＡＯＭ）は、ニトロソモナス（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ）、ニトロソコッカス（Ｎｉｔｒｏｓｏｃｏｃｃｕｓ）、ニトロソスピラ（Ｎｉｔｒｏｓｏｓｐｉｒａ）、ニトロソシスティス（Ｎｉｔｒｏｓｏｃｙｓｔｉｓ）、ニトロソロブス（Ｎｉｔｒｏｓｏｌｏｂｕｓ）、及び／又はニトロソビブリオ（Ｎｉｔｒｏｓｏｖｉｂｒｉｏ）からなる。
【００２４】
いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は、２０００ダルトン以下、１５００ダルトン以下、１２００ダルトン以下、１０００ダルトン以下、９００ダルトン以下、８００ダルトン以下、７００ダルトン以下、６００ダルトン以下、５００ダルトン以下、４００ダルトン以下、３００ダルトン以下、２００ダルトン以下、及び／又は１００ダルトン以下の分子量の値を有する。
【００２５】
いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は、以下の群：アゾニウムジオール塩、ヒドロキシジアゼンスルホン酸、Ｓ−ニトロソチオール、フロキサン、オキシム、Ｎ−ニトロソアミン、Ｎ−ヒドロキシグアニジン、硝酸塩、亜硝酸塩、硝酸塩、亜硝酸塩、シドロニミン、シドロン、オキシトリアゾール−５−イミン、オキシトリアゾール−５−オン、ヒドロキシルアミン、ジオキサジアゼチジン、Ｎ−ヒドロキシニトロソアミン、Ｎ−ニトロソアミン、ヒドロキシ尿素及び金属ニトロソアミン複合体の、１つ以上を有する。
【００２６】
いくつかの実施形態において、薬剤は局所投与用に調製される。いくつかの実施形態において、局所投与の投与部位は、癌の発生部位又は癌の潜在的な転移の部位ではない。
【００２７】
いくつかの実施形態において、薬剤中の一酸化窒素放出剤の濃度は、約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約５０％（ｗ／ｗ）である。
【００２８】
いくつかの実施形態において、薬剤は経皮投与用に調製される。
【００２９】
いくつかの実施形態において、薬剤は軟膏として調製される。
【００３０】
いくつかの実施形態において、１つ以上の他の有効成分が薬剤に含まれる。
【００３１】
いくつかの実施形態において、薬剤は、実質的にＥＧＦＲ阻害剤の治療効果に影響を与えない。
【００３２】
いくつかの実施形態において、対象は、ヒト又は非ヒト動物からなる。いくつかの実施形態において、非ヒト動物は、サル、ニワトリ、ガチョウ、ネコ、イヌ、マウス、及び／又はラットからなる。
【００３３】
いくつかの実施形態において、対象は癌患者を含む。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲの阻害は、対象へのＥＧＦＲ阻害剤の投与によって生じる。いくつかの実施形態において、癌患者は、ＥＧＦＲ阻害剤を投与されたことがあり、現在投与されており、及び／又は将来投与される予定である。いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は、対象へのＥＧＦＲ阻害剤の投与に先立って、ＥＧＦＲ阻害剤の投与と同時に、又は対象への投与後に投与される。
【００３４】
一方、本出願はまた、ＥＧＦＲ阻害に関連した疾患又は病態の予防又は治療に用いられる一酸化窒素放出剤を提供する。
【００３５】
一方、本出願はまた、一酸化窒素放出剤の予防的又は治療的に有効な量を対象に投与することからなる、対象におけるＥＧＦＲ阻害に関連する疾患又は状態を予防又は治療する方法を提供する。
【００３６】
一方、本出願はまた、１）ＥＧＦＲ阻害剤；及び２）一酸化窒素放出剤からなる組合せ医薬又はキットを提供する。
【００３７】
いくつかの実施形態において、組合せ医薬又はキットでは、ＥＧＦＲ阻害剤及び一酸化窒素放出剤は互いに混合されない。
【００３８】
いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤及び一酸化窒素放出剤は、それぞれ別個の容器に独立して存在する。
【００３９】
いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は、経皮投与に適したように調製される。
【００４０】
いくつかの実施形態において、組合せ医薬又はキット中の一酸化窒素放出剤は、局所投与に適したものとして調製される。いくつかの実施形態において、局所投与の投与部位は、癌の発生部位又は癌の潜在的な転移の部位ではない。
【００４１】
いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は軟膏として調製される。
【００４２】
いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は、約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約５０％（ｗ／ｗ）の濃度で存在する。
【００４３】
いくつかの実施形態において、組合せ医薬又はキット中の２）の一酸化窒素放出剤は、１）のＥＧＦＲ阻害剤によって引き起こされる疾患又は状態を予防又は治療することができる。
【００４４】
いくつかの実施形態において、組合せ医薬又はキットにおける２）の一酸化窒素放出剤は、１）のＥＧＦＲ阻害剤の治療効果に実質的に影響を与えない。
【００４５】
いくつかの実施形態において、医薬組合せ又はキット中の２）の一酸化窒素放出剤は、１）のＥＧＦＲ阻害剤の投与の前、同時又は後に投与するために使用される。
【００４６】
当業者は、以下の詳細な説明から、本出願の他の態様及び利点を容易に認識することができる。以下の詳細な説明では、本出願の例示的な実施形態のみが示され、説明されている。当業者が認識するように、この出願の内容により、当業者は、この出願に含まれる本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、開示された特定の実施形態に変更を加えることができる。同様に、本出願の明細書における図面及び説明は、単なる例示であって、限定的なものではない。
【００４７】
この用途に含まれる本発明の特定の特徴は、添付の特許請求の範囲に示されている。この用途に含まれる本発明の特徴及び利点は、以下に詳細に説明される例示的な実施形態及び添付の図面を参照することによって、よりよく理解することができる。図面の簡単な説明は次のとおりである。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】Ｓ−ニトロソチオールナノシリカ球体の例示的な合成ルートが記載されている。
【図２】Ｓ−ニトロソエチレングリコールキチンの例示的な合成ルートが記載されている。
【図３】オリゴプロピレンジアミングラフト化キトサンＮＯＮＯａｔｅの例示的な合成経路が記載されている。
【図４】ＨａＣａＴ細胞へのＥＧＦＲ阻害剤及び一酸化窒素放出剤の同時投与の４８時間後にＣＣＫ−８によって測定された細胞増殖毒性の例示的な結果（実施例６、９、１９、２１−２３、２５−２７、２８−３３、３５−３７のデータを含む）が記載されている。図中、ＮＴＧはニトログリセリン、ＩＳＤＮは硝酸イソソルビド、ＡＦはアファチニブ（Ａｆａｔｉｎｉｂ）を表し、、ＥＲはエルロチニブ（Ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）を表し、、ＯＳはオシメルチニブ（Ｏｓｉｍｅｒｔｉｎｉｂ）を表す。ｔ検定を用いた統計的検定で、＊＊は対応するＥＧＦＲ阻害剤を単独で投与した群と有意に異なるＰ＜０．０１を示し、＊は対応するＥＧＦＲ阻害剤を単独で投与した群とは有意に異なるｐ＜０．０５を示す。棒グラフの上に示される数字は、実施形態の通し番号を表す。
【図５】ＦＨ  ７４  Ｉｎｔ細胞へのＥＧＦＲ阻害剤と一酸化窒素放出剤の同時投与から４８時間後のＣＣＫ−８法によって測定された細胞増殖毒性の例示的な結果（実施例４７−５５のデータを含む）が記載されている。図中、ＮＴＧはニトログリセリンを表し、ＡＦはアファチニブ（Ａｆａｔｉｎｉｂ）を表し、ＥＲはエルロチニブ（Ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）を表し、ＯＳはオシメルチニブ（Ｏｓｉｍｅｒｔｉｎｉｂ）を表す。ｔ検定を用いた統計的検定で、＊＊は対応するＥＧＦＲ阻害剤を単独で投与した群と有意に異なるＰ＜０．０１を示し、＊は対応するＥＧＦＲ阻害剤を単独で投与した群とは有意に異なるｐ＜０．０５を示す。棒グラフの上に示される数字は、実施形態の通し番号を表す。
【図６】ＥＧＦＲ阻害剤と一酸化窒素放出剤をヒト口腔粘膜上皮ケラチノサイト（ＨＯＫ）に同時投与してから４８時間後にＣＣＫ−８法で測定した細胞増殖毒性の例示的な結果（実施例５９−６７からのデータを含む）が記載されている。図中、ＮＴＧはニトログリセリンを表し、ＡＦはアファチニブ（Ａｆａｔｉｎｉｂ）を表し、ＥＲはエルロチニブ（Ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）を表し、ＯＳはオシメルチニブ（Ｏｓｉｍｅｒｔｉｎｉｂ）を表す。ｔ検定を用いた統計的検定で、＊＊は対応するＥＧＦＲ阻害剤を単独で投与した群と有意に異なるＰ＜０．０１を示し、＊は対応するＥＧＦＲ阻害剤を単独で投与した群とは有意に異なるｐ＜０．０５を示す。棒グラフの上に示される数字は、実施形態の通し番号を表す。
【図７】ＨＵＶＥＣ細胞へのＥＧＦＲ阻害剤と一酸化窒素放出剤の同時投与の４８時間後のＣＣＫ−８法により測定された細胞増殖毒性の例示的な結果（実施例７１−７３からのデータを含む）が記載されている。図中、ＮＴＧはニトログリセリンを表し、ＡＦはアファチニブ（Ａｆａｔｉｎｉｂ）を表し、ＥＲはエルロチニブ（Ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）を表し、ＯＳはオシメルチニブ（Ｏｓｉｍｅｒｔｉｎｉｂ）を表す。ｔ検定を用いた統計的検定で、＊＊は対応するＥＧＦＲ阻害剤を単独で投与した群と有意に異なるＰ＜０．０１を示し、＊は対応するＥＧＦＲ阻害剤を単独で投与した群とは有意に異なるｐ＜０．０５を示す。棒グラフの上に示される数字は、実施形態の通し番号を表す。
【図８】ＨＦＦ細胞へのＥＧＦＲ阻害剤と一酸化窒素放出剤の同時投与の４８時間後のＣＣＫ−８法によって測定された細胞増殖毒性の例示的な結果（実施例７４−８２のデータを含む）が記載されている。図中、ＮＴＧはニトログリセリンを表し、ＡＦはアファチニブ（Ａｆａｔｉｎｉｂ）を表し、ＥＲはエルロチニブ（Ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）を表し、ＯＳはオシメルチニブ（Ｏｓｉｍｅｒｔｉｎｉｂ）を表す。ｔ検定を用いた統計的検定で、＊＊は対応するＥＧＦＲ阻害剤を単独で投与した群と有意に異なるＰ＜０．０１を示し、＊は対応するＥＧＦＲ阻害剤を単独で投与した群とは有意に異なるｐ＜０．０５を示す。棒グラフの上に示される数字は、実施形態の通し番号を表す。
【図９】ＥＧＦＲ阻害剤をｈＭＳＣ、ＨＵＶＥＣ、ＨａＣａＴ細胞に１２時間投与した後、一酸化窒素検出キット（Ｓ００２１、Ｂｅｙｏｔｉｍｅ）で測定された細胞内ＮＯレベルの例示的な結果（実施例８６−９１データを含む）が記載されている。図中、ＡＦはアファチニブ（Ａｆａｔｉｎｉｂ）を表し、ＥＲはエルロチニブ（Ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）を表し、コントロールグループは生理的レベルを反映する基本的な媒体である。ｔ検定を用いた統計的検定で、＊＊はコントロール群と有意に異なるＰ＜０．０１を示し、＊はコントロール群とは有意に異なるｐ＜０．０５を示す。棒グラフの上に示される数字は、実施形態の通し番号を表す。
【図１０】一酸化窒素放出剤がＨＦＦ細胞に投与された１２時間後の一酸化窒素検出キット（Ｓ００２１、Ｂｅｙｏｔｉｍｅ）によって測定された細胞外ＮＯレベルの例示的な結果（実施例９２−９５のデータを含む）が記載されている。図中、ＮＴＧはニトログリセリンを表し、ＩＳＭＮはイソソルビド一硝酸塩を表し、ＩＳＤＮはイソソルビド一硝酸塩を表し、ＳＮＰはニトロプルシドナトリウムを表し、対照群は生理的レベルを反映する基本培地である。
【図１１】ＥＧＦＲ阻害剤が発疹を引き起こすラットモデルの右側、背中、及び左側の写真が示される。写真から分かるように、発疹の左右の部分に違いはなく、両側の発疹の程度はほぼ同じである。
【図１２】実施例９６−１３２の（左側に適用された）投与群における代表的なラットの右側、背中、及び左側の写真が示される。写真から分かるように、塗り薬が塗られた左側の発疹は、塗り薬が塗られていない右側の発疹に比べて格段に良くなっている。
【図１３】実施例９６−１３２で投与した（右側被覆）群の代表的なラットの右側、背中、左側の写真を記載する。写真から分かるように、被覆されたラットの右側の発疹は、被覆されていないラットの左側の発疹よりも有意に良好であることがわかる。
【図１４】実施例１３３−１４２で投与した（左側被覆）群の代表的なラットの右側、背中、左側の写真を記載する。写真から分かるように、被覆されたラットの左側の発疹は、被覆されていないラットの右側の発疹よりも有意に良好であることがわかる。
【図１５】実施例１３３−１４２で投与した（右側被覆）群の代表的なラットの右側、背中、左側の写真を記載する。写真から分かるように、被覆されたラットの右側の発疹は、被覆されていないラットの左側の発疹よりも有意に良好であることがわかる。
【図１６】ＥＧＦＲ阻害剤の治療効果に対する本出願の一酸化窒素放出剤の効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００４９】
以下の具体例は、この出願の発明の実施を説明するものであり、この技術に精通している者は、この明細書に開示されている内容から、この出願の他の利点及び効果を容易に理解することができる。本出願の一態様は、対象におけるＥＧＦＲ阻害に関連する上皮組織疾患を予防又は治療するための方法に関し、この方法は、有効量の一酸化窒素放出剤を、それを必要とする対象に投与することを含む。
【００５０】
ＥＧＦＲ及びＥＧＦＲ阻害
【００５１】
本出願において、用語「ＥＧＦＲ」は、一般に、ＥｒｂＢ１又はＨＥＲ１としても知られる上皮成長因子受容体（Ｅｐｅｐｅｒａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ）を指し、これは、ｃ−ｅｒｂＢ１プロトオンコジーンによってコードされる１７０ｋＤａ膜貫通糖タンパク質である。ＥＧＦＲは、受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）のヒト上皮成長因子受容体（ＨＥＲ）ファミリーのメンバーであり、ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２）、ＨＥＲ３（ＥｒｂＢ３）、及びＨＥＲ４（ＥｒｂＢ４）も含まれる。ＥＧＦＲシグナルは、リガンド結合によってトリガーされ、その後、受容体と他のＥｒｂＢファミリーメンバーとの間の構造変化、ホモ二量体化又はヘテロ二量体化、及び受容体のトランス自己リン酸化が誘導され（Ｆｅｒｇｕｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｐｈｙｓ，  ３７：  ３５３−７３，  ２００８を参照のこと。）、シグナル伝達カスケードが開始され、最終的に複数の細胞機能（例えば、細胞の増殖と生存）に影響を与える。ＥＧＦＲの発現又はそのキナーゼ活性の増加は、一連のヒトの癌に関連している（Ｍｅｎｄｅｌｓｏｈｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １９：  ６５５０−６５６５，  ２０００；  ＧｒＵｎｗａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ  ９５：  ８５１−６７，  ２００３；  Ｍｅｎｄｅｌｓｏｈｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｅｍｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ３３：  ３６９−８５，  ２００６を参照のこと。）。ＥＧＦＲの発現の上昇は、神経膠腫、乳癌、卵巣癌、及び子宮頸癌などの多くの癌で見出されていることが知られている。
【００５２】
本出願において、「ＥＧＦＲ阻害」という用語は、何らかの理由（例えば、治療によって引き起こされるか、又は対象自身の身体状態によって引き起こされる）によって引き起こされるＥＧＦＲ活性、発現又は量のあらゆる低下を含む。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲの阻害は、一般に、ＥＧＦＲの活性又は量が少なくとも１０％減少することを意味する。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲの阻害は、一般に、ＥＧＦＲの活性又は量が少なくとも２０％、４０％、５０％、８０％、９０％、９５％以上減少することを意味する。いくつかの実施形態において、減少は、同じタイプの対象（例えば、同じ正常な人又は同じタイプの患者）の標準値と比較される。いくつかの実施形態において、減少は、しばらく前に同じ対象の値と比較される。
【００５３】
ＥＧＦＲ阻害剤
【００５４】
いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲは、ＥＧＦＲ阻害剤の投与により阻害される。
【００５５】
本明細書で使用される「ＥＧＦＲ阻害剤」という用語は、一般に、当技術分野で既知であるか、又は将来見出されるであろう任意のＥＧＦＲ阻害剤を指し、それは、対象に投与されると、対象におけるＥＧＦＲ活性に関連する生物活性の阻害（ＥＧＦＲとその天然リガンドの結合によって生じる下流の生物学的影響の阻害を含む）を引き起こす任意の物質を含む。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤は、ＥＧＦＲ活性又はその任意の下流の生物学的効果を遮断することができる任意の試薬を含む。
【００５６】
ＥＧＦＲ阻害剤は、例えば、試験化合物の投与後のＥＧＦＲ発現レベルの変化を検出することにより、当技術分野で周知の方法によって決定又はスクリーニングすることができる。ＥＧＦＲの発現レベルは、当該分野で公知の方法、例えば、免疫組織化学、ＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲ、インサイチュハイブリダイゼーション、サザンブロット、ウエスタンブロット、ノーザンブロット、分光光度法、ＥＬＩＳＡなどによって検出され得る。
【００５７】
いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤は、対象の癌治療に使用される。
【００５８】
本出願において、、用語「癌」は、一般に、腫瘍又は悪性細胞の成長、増殖、又は転移によって媒介され、固形腫瘍及び非固形腫瘍（例えば、白血病）を引き起こす任意の病状を指す。この出願に記載されている癌には、上皮性悪性腫瘍（上皮由来の癌）、肺癌（例えば、非小細胞肺癌）、乳癌、皮膚癌、膀胱癌、結腸癌、腸（ＧＩ）癌、前立腺癌、膵臓癌、子宮癌、子宮頸がん、卵巣がん、食道がん、頭頸部がん、胃がん、咽喉がんが含まれるが、これらに限定されない。
【００５９】
いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤は、ＥＧＦＲ受容体の細胞内ドメインに直接結合することによってそのキナーゼ活性を遮断することができ；又は、ＥＧＦＲ受容体又はその一部のリガンド結合部位を占め、ＥＧＦＲ受容体とその天然のリガンドにアクセスできなくなり、生物活性が低下又は遮断され；又は、ＥＧＦＲポリペプチドの二量体化を調整したり、ＥＧＦＲポリペプチドと他のタンパク質間の相互作用を調整したりして、ＥＧＦＲのユビキチン化とエンドサイトーシスを増加させ、それによってＥＧＦＲ活性を低下させる。
【００６０】
いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤は、ＥＧＦＲの非特異的阻害剤であり得、すなわち、これらの阻害剤は、ＥＧＦＲを阻害することに加えて、他の標的タンパク質も阻害する。
【００６１】
いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤は、ＥＧＦＲタンパク質又はＥＧＦＲタンパク質をコードする核酸に直接作用する。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤は、ＥＧＦＲタンパク質に直接作用する。本出願において、「直接作用する」という用語が阻害剤及び標的タンパク質を説明するために使用される場合、それは通常、阻害剤及び標的タンパク質が直接できることを意味し、他の分子に（共有結合及び非共有結合を含む）結合をする必要はない。
【００６２】
いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤は、小分子ＥＧＦＲ阻害剤、ＥＧＦＲに特異的に結合するタンパク質高分子（例えば、抗体又はその抗原結合断片）、又はＥＧＦＲタンパク質の発現を阻害するＲＮＡｉ又はアンチセンスオリゴヌクレオチドであり得る。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤は、ＥＧＦＲに特異的に結合する小分子ＥＧＦＲ阻害剤又はタンパク質高分子（例えば、抗体又はその抗原結合フラグメント）であり得る。
【００６３】
本出願において、「核酸」という用語は、一般に、単量体ヌクレオチドから構成されるポリヌクレオチド分子を指す。核酸には、リボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、一本鎖核酸（ｓｓＤＮＡ）、二本鎖核酸（ｄｓＤＮＡ）、低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）及びマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）が含まれる。ポリヌクレオチドの他の非限定的な例には、遺伝子、遺伝子断片、エクソン、イントロン、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ、リボソームＲＮＡ、リボザイム、ｃＤＮＡ、ｓｈＲＮＡ、一本鎖短鎖又は長鎖ＲＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分岐鎖ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、任意の配列の分離ＤＮＡ、コントロール領域、任意の配列の単離されたＲＮＡ、核酸プローブ及びプライマーが含まれる。核酸は線状又は環状であり得る。
【００６４】
本出願において、「ＲＮＡｉ」という用語は、一般に、外因性又は内因性の二本鎖ＲＮＡ分子又は小ＲＮＡがｍＲＮＡを標的とし、それを特異的に分解して遺伝子発現又は翻訳を阻害するプロセスであるＲＮＡ干渉技術を指す。ＲＮＡｉには、ｍｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）と低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）の２種類の低分子ＲＮＡが含まれている。これらの小さなＲＮＡは他のｍＲＮＡ分子に結合して、ｍＲＮＡがタンパク質に翻訳されるのを防ぐなど、それらの活性を増加又は減少させることができる。真核生物の動物では、ＲＮＡｉ経路は、ＲＮａｓｅＩＩＩ酵素（Ｄｉｃｅｒ、ＤＣＬ、Ｄｒｏｓｈａなど）を介して、長い二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）を約２０−２３ヌクレオチドの長さのｓｉＲＮＡ二本鎖フラグメントに切断する。各ｓｉＲＮＡは２つの一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）、つまりパッセンジャー（ｐａｓｓｅｎｇｅｒ）鎖とガイド（ｇｕｉｄｅ）鎖に分割される。パッセンジャー鎖は分解され、ガイド鎖はＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）に統合される。ガイド鎖がｍＲＮＡ分子に相補的である場合、ＲＩＳＣはｍＲＮＡ分子を切断し、それによりｍＲＮＡ分子の分解を引き起こす。
【００６５】
本出願において、「オリゴヌクレオチド」という用語は、一般に、リボ核酸（ＲＮＡ）又はデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）のオリゴマー又はポリマー、又は任意の模倣物又は構造的に修飾された核酸を指す。この用語には、天然に存在する核酸塩基、糖、及びヌクレオシド（バックボーン）共有結合から構成されるオリゴヌクレオチド、及び同様の機能を持つ天然に存在しないオリゴヌクレオチドが含まれる。修飾又は置換されたオリゴヌクレオチドは、例えば細胞取り込みが向上し、標的核酸に対する親和性が向上し、ヌクレアーゼの存在下での安定性が向上するため、一般に天然型よりも優れている。
【００６６】
本出願において、用語「アンチセンスオリゴヌクレオチド」は、一般に、標的核酸の対応する領域又は断片とのハイブリダイゼーションの少なくとも一部を可能にする核酸塩基配列を有する一本鎖オリゴヌクレオチドを指す。本出願によるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、約８−約５０個の核酸塩基（すなわち、約８−約５０個の連結されたヌクレオシド）を含み得る。例えば、約１２−約３０核酸塩基のアンチセンスオリゴヌクレオチドが含まれ得る。いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的ｍＲＮＡ前駆体のスプライシングを変更し、その結果、異なるスプライシング変異体をもたらす。いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１つ又は複数の異なる標的タンパク質の発現を調節する。
【００６７】
いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、修飾された糖、修飾されたヌクレオシド間結合、及び／又は修飾された核酸塩基を有して修飾され得る。例えば、複数のヌクレオシドの１つ又は複数を修飾することができ、例えば、１つ以上の修飾ヌクレオシドは修飾糖を含み、及び／又は１つ以上の修飾ヌクレオシドは修飾核酸塩基を含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの修飾糖は二環式糖であり得る。一部の実施形態において、少なくとも１つの修飾糖は、２’−Ｏ−メトキシエチル糖を含み得る。いくつかの実施形態において、修飾核酸塩基は、５−メチルシトシンであり得る。いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドの１つ以上のヌクレオシド間結合は、修飾されたヌクレオシド間結合であり得る。一部の実施形態において、修飾ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であってよい。
【００６８】
本出願において、「小分子ＥＧＦＲ阻害剤」という用語は、ＥＧＦＲに可逆的に結合する小分子ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、ゲフィチニブ、エルロチニブ、サピチニブ、及びイコチニブ）、ＥＧＦＲに不可逆的に結合する小分子ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、アファチニブ、ダコミチニブ、ラパチニブ（例えば、Ｔｙｋｅｒｂ（登録商標）、ＧＷ５７２０１６  ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、バンデタニブ（例えば、ＺＡＣＴＩＭＡＴＭ、ＺＤ６４７４）、レバチニブ、カネチニブ、バリチニブ、及びレナチニブ）及び／又は変異体ＥＧＦＲに特異的に結合する小分子ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、オシメルチニブ、ナザルチニブ、ノマチニブ、オマチニブ、アビチニブ、ＥＡＩ０４５）を含み得る。
【００６９】
いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤は、これらに限定されるものではないが、低分子化合物、例えば、米国特許のＵＳ５，６１６，５８２、ＵＳ５，４５７，１０５、ＵＳ５，４７５，００１、ＵＳ５，６５４，３０７、ＵＳ５，６７９，６８３、ＵＳ６，０８４，０９５、ＵＳ６，２６５，４１０、ＵＳ６，４５５，５３４、ＵＳ６，５２１，６２０、ＵＳ６，５９６，７２６、ＵＳ６，７１３，４８４、ＵＳ５，７７０，５９９、ＵＳ６，１４０，３３２、ＵＳ５，８６６，５７２、ＵＳ６，３９９，６０２、ＵＳ６，３４４，４５９、ＵＳ６，６０２，８６３、ＵＳ６，３９１，８７４、ＵＳ６，３４４，４５５、ＵＳ５，７６０，０４１、ＵＳ６，００２，００８及びＵＳ５，７４７，４９８に記載されているもの、及び、ＰＣＴ特許出願のＷＯ９８／１４４５１、ＷＯ９８／５００３８、ＷＯ９９／０９０１６及びＷＯ９９／２４０３７に記載されているものからなることができ、その内容の全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００７０】
小分子ＥＧＦＲ阻害剤にはＰＤ１８３８０５（Ｃ１０３３，２−アクリルアミド、Ｎ−［４−［（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−７−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］−６−キナゾリン塩基］−，二塩酸塩、ファイザー）、ＺＭ１０５１８０（６−アミノ−４−（３−メチルフェニル−アミノ）−キナゾリニル、ゼネカ）、ＢＩＢＸ−１３８２（Ｎ−８−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニル）−Ｎ−２−（１−メチル−ピペリジン−４−イル）−ピリミド［５，４−ｄ］ピリミジン−２，８−ジアミン、ベーリンガーインゲルハイム）、ＰＫＩ−１６６（（Ｒ）−４−［４−［（１−フェニルエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル］−フェノール）、（Ｒ）−６−（４−ヒドロキシフェニル）−４−［（１−フェネチル）アミノ］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン）、ＣＬ−３８７７８５（Ｎ−［４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］−６−キナゾリニル］−２−ブチン）、ＥＫＢ−５６９（Ｎ−（４−（（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ）−３−シアノ−７−エトキシ−６−キノリニル）−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド）（ワイス）、イマチニブ、ＳＴＩ−５７１、ＬＦＭ−Ａ１３、ＰＤ１５３０３５、パクリタキセル、ＰＰ１、ＡＥＥ７８８、ＳＵ４１３２、ＳＵ６６５６、セマザニブ、ＳＵ６６６８、ＺＤ６１２６ＡＧ１４７８（スージェン）及び／又はＡＧ１５７１（ＳＵ５２７１；スージェン）が含まれる。
【００７１】
ＥＧＦＲに特異的に結合するタンパク質高分子は、ＥＧＦＲに対する抗体、抗体変異体、融合タンパク質、それらの誘導体又は断片であり得る。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲに特異的に結合するタンパク質高分子は、ＥＧＦＲに特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片である。
【００７２】
本出願で使用される「特異的結合」という用語は、ＥＧＦＲ阻害剤を説明するために使用される場合、通常以下を指す：ＥＧＦＲ阻害剤は複雑な混合物中のＥＧＦＲを認識することができ、阻害剤のＥＧＦＲへの結合定数は他の非特異的結合タンパク質の結合定数の少なくとも２倍である。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤及びＥＧＦＲの平衡解離定数は、１０−６又は１０−７Ｍ以下であり得る。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤及びＥＧＦＲの平衡解離定数は、１０−７Ｍ又は１０−８Ｍ以下であり得る。
【００７３】
本出願で使用される「抗原結合断片」という用語は、１つ又は複数のＣＤＲを含むが完全な抗体構造を持たない抗体断片によって形成される抗体断片を指す。抗原結合フラグメントの例には、限定されるものではないが、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ'断片、Ｆ（ａｂ'）２断片、Ｆｖ断片、一本鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖダイマー、ラクダ化単一ドメイン抗体及びナノボディが含まれる。抗原結合断片は、親抗体と同じ抗原に結合できる。
【００７４】
抗体の「Ｆａｂ」断片は、通常、軽鎖（可変領域と定常領域を含む）と、ジスルフィド結合によって結合された重鎖の可変領域と最初の定常領域で構成される抗体の部分を指す。
【００７５】
「Ｆａｂ '」断片は通常、ヒンジ領域の一部を含むＦａｂ断片を指す。
【００７６】
「Ｆ（ａｂ '）２」断片は通常、Ｆａｂ'の二量体を指す。
【００７７】
抗体の「Ｆｖ」断片は、軽鎖の可変領域と重鎖の可変領域から構成される。
【００７８】
「一本鎖抗体分子」又は「ｓｃＦｖ」は一般に、軽鎖の可変領域と重鎖の可変領域を直接又はペプチド鎖を介して接続することによって形成された操作された抗体を指す。詳細な紹介については、例えば、Ｈｕｓｔｏｎ  ＪＳ  ｅｔ  ａｌ，、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、８５：５８７９（１９８８）を参照されたい。
【００７９】
「ＳｃＦｖ二量体」は一般に、２つのｓｃＦｖによって形成されるポリマーを指す。
【００８０】
「ラクダ化単一ドメイン抗体」（「重鎖抗体」又は「ＨＣＡｂ（重鎖のみ抗体、ＨＣＡｂ）」とも呼ばれる）は、通常は、軽鎖ではなく２つの重鎖可変領域を含む抗体を指す（Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  Ｌ．  ａｎｄ  Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ  Ｓ．，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．  Ｄｅｃ  １０；  ２３１  （１−２）：２５−３８  （１９９９）；  Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ  Ｓ．，  Ｊ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  Ｊｕｎ；  ７４  （４）：２７７−３０２  （２００１）；  ＷＯ９４／０４６７８；  ＷＯ９４／２５５９１；  Ｕ．Ｓ．  Ｐａｔｅｎｔ  ６，００５，０７９））。重鎖抗体はもともとラクダ科（ラクダ、ヒトコブラクダ、ラマ）に由来していた。軽鎖は削除されているが、ラクダ化抗体には抗原結合のすべての機能を有しており（Ｈａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎ  Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ．  ３６３  （６４２８）：４４６−８  （１９９３）；  Ｎｇｕｙｅｎ  ＶＫ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ．  ５４  （１）：３９−４７  （２００２）；  Ｎｇｕｙｅｎ  ＶＫ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．  １０９  （１）：９３−１０１  （２００３）を参照されたい）、これらは参照により本出願に組み込まれる。
【００８１】
「ナノボディ」は通常、重鎖抗体に由来する重鎖可変領域と２つの定常領域ＣＨ２及びＣＨ３から構成されるポリマーを指す。
【００８２】
いくつかの実施形態において、本出願に記載される抗体は、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、マウス抗体、又はウサギ抗体であり得る。いくつかの実施形態において、本出願に記載される抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体又は組換え抗体であり得る。いくつかの実施形態において、本出願に記載される抗体は、単一特異性抗体、二重特異性抗体又は多重特異性抗体であり得る。いくつかの実施形態において、本出願に記載される抗体は更に標識され得る。いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、完全ヒトモノクローナル抗体であってもよく、この抗体は、任意に、遺伝子組換えラット、例えば、内因性ラット免疫グロブリン遺伝子発現を不活性化し、Ｊ遺伝子座欠失及びＣ-κ変異を有する組換えヒト免疫グロブリン遺伝子座を担持する遺伝子組換えラットによって産生され、改変細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）によっても発現されてもよい。
【００８３】
本出願で使用される「完全ヒト」という用語は、抗体又は抗原結合断片に関して使用される場合、一般に、前記抗体又は抗原結合断片のアミノ酸配列が、ヒト又はヒト免疫細胞、又はヒト免疫細胞によって産生された抗体又は抗原結合断片のアミノ酸配列、又は、例えば、ヒト抗体ライブラリーを用いたトランスジェニック非ヒト動物などの非ヒト由来の抗体のアミノ酸配列、又はヒト抗体をコードする他の配列に一致することを意味する。
【００８４】
本出願で使用される「ヒト化」という用語は、抗体又は抗原結合断片に関して使用される場合、一般に、非ヒト動物由来のＣＤＲ、ヒト由来のＦＲ領域、及び適用可能な場合にはヒト由来の定数領域を含む抗体又は抗原結合断片を指す。ヒト由来の抗体又は抗原結合断片は、免疫原性が低いので、いくつかの実施形態において、ヒト治療剤として使用することができる。いくつかの実施形態において、非ヒト動物は哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、モルモット、又はハムスター）であってもよい。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体又は抗原結合フラグメントは、非ヒトであるＣＤＲ配列を除くヒト配列の実質的に全てを含んでいてもよい。
【００８５】
本出願で使用される「キメラ」という用語は、抗体又は抗原結合断片に関して使用される場合、一般に、ある種に由来する重鎖及び／又は軽鎖の一部と、異なる種に由来する前記重鎖及び／又は軽鎖の残りの部分とを有する抗体又は抗原結合断片を指す。 いくつかの実施形態において、キメラ抗体は、ヒトに由来する一定領域及び非ヒト動物（例えば、マウス又はウサギ）に由来する可変領域を含むことができる。
【００８６】
ＥＧＦＲに特異的に結合する例示的なタンパク質高分子には、パニツムマブ、システリズマブ、ニツズマブ、セツキシマブ、ＡＢＸ−ＥＧＦ（ヒト）（Ａｂｇｅｎｉｃｓ、サンフランシスコ、カリフォルニア）、ｈ−Ｒ３（ヒト化）、ＭＤＸ−４４７（デュアル固有、ＥＧＦＲ−ＣＫ６４）、ＭＡｂ  ５７９（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  ＨＢ  ８５０６）、ＭＡｂ  ４５５（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  ＨＢ８５０７）、ＭＡｂ  ２２５（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  ８５０８）及び／又はＭＡｂ  ５２８（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  ８５０９）（米国特許第４，９４３，５３３号を参照）及びその変形；再発明されたヒト２２５（Ｈ２２５）（ＷＯ  ９６／４０２１０を参照）；ＩＭＣ−１１Ｆ８（ＥＧＦＲを標的とする完全長ヒト抗体）（Ｉｍｃｌｏｎｅ）；米国特許第５，２１２，２９０号に記載されているＥＧＦＲ  ２型変異を標的とする抗体；米国特許第５，８９１，９９６号に記載されているＥＧＦＲに結合するヒト化及びキメラ抗体；ＥＭＤ  ５５９００（Ｓｔｒａｇｌｉｏｔｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  ３２Ａ：６３６−６４０（１９９６））；  ＨｕＭａｘ−ＥＧＦＲ（ＧｅｎＭａｂ）；米国特許ＵＳ６，２３５，８８３に記載されている完全ヒト抗体Ｅ１．１、Ｅ２．４、Ｅ２．５、Ｅ６．２、Ｅ６．４、Ｅ２．１１、Ｅ６．３、及びＥ７．６．３、ｍＡｂ  ８０６又はヒト化ｍＡｂ  ８０６  （Ｊｏｈｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７９（２９）：３０３７５−３０３８４（２００４））が含まれ得る。
【００８７】
いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤は、セツキシマブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、エクチニブ、サピチニブ、アファチニブ、ラパチニブ、バンデチニブ、レナチニブ、ブリガチニブ、パニツムマブ、ニンテドリスマブ、テセバチニブ、エリクチニブ、シリバチニブ、ロシレチニブ、カンネチニブ、マルチチニブ、ＡＺＤ３７５９、ＹＺＪ-０３１８。 ナプロテニブ、ナホチニブ、ＰＦ-０６７４７７５、ＳＰＨ１１８８-１１、ポジオチニブ、エピルビチニブ、バルリチニブ、イフルチニブ、ＨＭ６１７１３、ＣＫ-１０１、ピロリジジン、レロチニブ、ＨＳ-１０２９６、ＡＰ３２７８８、シモチニブ、ＧＭＡ２０４。 ヴィルリチニブ、インリチニブ、ナザチニブ、ノスタチニブ、オモタチニブ、オシチニブ、ダクラチニブ、エヴィチニブ、及び／又はＥＡＩ０４５を含むことができる。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤は、セツキシマブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、エクチニブ、サピチニブ、アファチニブ、ラパチニブ、バンデチニブ、レバチニブ、レナチニブ、カンネチニブ、ファリシチニブ、ナザチニブ、ノスタチニブ、オモチニブ、オキシチニブ、及び／又はＥＡＩ０４５を含むことができる。
【００８８】
ＥＧＦＲ阻害剤と他のがん治療薬との併用
【００８９】
いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤は、１つ以上の他の癌治療と組み合わせて使用され得る。前記他の癌治療法は、癌の治療のために当該分野で日常的に使用されている方法であってもよく、例えば、細胞毒性抗癌剤、免疫療法的抗癌剤、又はホルモン療法的抗癌剤などが挙げられる。また、本出願によれば、癌治療に用いられる薬剤は、放射線治療や手術と併用してもよい。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤及び他の抗癌剤が併用される場合、それらは、同時に、又は一定の間隔で別々に被験体に投与されてもよい。
【００９０】
いくつかの実施形態において、本出願に記載のＥＧＦＲ阻害剤は、１つ以上の他の抗癌剤と組み合わせて投与されてもよい。いくつかの実施形態において、１つ以上の他の抗癌剤は、多回投与レジメンの一部として、本出願に記載のＥＧＦＲ阻害剤とは別個に（例えば、順次に、又は異なる重複レジメンで）投与されてもよい。いくつかの実施形態において、これらの抗癌剤は、本出願に記載のＥＧＦＲ阻害剤と配合される単一の用量レジメンの一部であってもよい。別の実施形態において、これらの試薬は、ＥＧＦＲ阻害剤とほぼ同時に投与される別個の用量として投与されてもよい。本出願に記載のＥＧＦＲ阻害剤を１種又はそれ以上の他の抗癌剤と同時に投与する場合、ＥＧＦＲ阻害剤は総投与量に対して約１−９９％の相対量（例えば、約５〜９５％、約１％、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、又は約９９％）の投与量レベルで投与される。
【００９１】
癌の治療に使用される細胞傷害性抗癌剤としては、窒素マスタード、窒素マスタードＮ−オキシド塩酸塩などのアルキル化剤、アゼライン酸、シクロホスファミド、イソシクロホスファミド、チオテパ、イソチオシアネート、カチノン、塩酸ニモスタチン、臭化ミトトロピウム、メフェドロン、ダカルバジン、レモキセチン、プラミフェンリン酸ナトリウム、エチレンネトリアミン、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾトシン、ピポブロマン、エトグルシド、カルボプラチン、シスプラチン、ミリプラチン、ネダプラチン、オキサリプラチン、テネプチン、オロムスチン、ジクロロピリジン、フルピラセタム、プレドニスクリジン、プミテパ、リボムスチン、テモゾロミド、ジクロフェナク、トラバフロキサシン、ジノタスタチン、シンバスタチン、ペニシリン、システアミン（システムスチン）、ビゼレシン；メルカプトプリン、６−メルカプトプリンリボシド、チオプリン、メトトレキサート、ペメトレキセド、エンテシチジン、アルブテリジン、塩酸チサバチン、５−ＦＵ及びその誘導体（例えば、フルオロウラシル、チガフルラン、ＵＦＴ、ドキソルビシン、カルモフラン、カペシタビンなど）などの抗メタボローム剤、アミノプテリン、ネオゾチアミン、テトラヒドロ葉酸カルシウムホルミル、ミルフォイル、葉酸カルシウム、レボフェナートカルシウム、クラドリビン、エメタフォール、フルダラビン、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、ペントキシフィリン、ピラセタム（ピリトレキシム）、ヨードウリジン、ミトグアニドン、チアゾフラン、ビマスタット、ベンダムスチン；アクチノマイシンＤ、アクチノマイシンＣ、マイトマイシンＣ、クロモマイシンＡ３、ブレオマイシン塩酸塩、ブレオマイシン硫酸塩、セチラマイシン塩酸塩、ゾルピデム塩酸塩、マイトキサントロン塩酸塩、及びイダルビシン塩酸塩などの抗腫瘍性抗生物質；及びエトポシド、エトポシドリン酸塩、ビンクリスチン硫酸塩、ビンクリスチン硫酸塩、テニポシド、パクリタキセル、ドセタキセル、及びビンクリスチンなどの植物由来の細胞障害性抗がん剤；及び／又は、ベバシズマブなどのＶＥＧＦ阻害剤、及びＰＣＴ特許出願ＷＯ２００５／０１２３５９、ＷＯ  ２００５／０４４８５３、ＷＯ  ９８／４５３３２、ＷＯ  ９６／３００４６、ＷＯ  ９４／１０２０２、米国特許ＵＳ  ７，０６０，２６９、ＵＳ  ６，５８２，９５９、ＵＳ  ６，７０３，０２０、ＵＳ  ６，０５４，２９７、米国特許出願ＵＳ２００６／００９３６０、ＵＳ  ２００５／００９３６０、ＵＳ  ２００５／０１８６２０８、ＵＳ２００３／０２０６８９９、ＵＳ２００３／０１９０３１７、ＵＳ２００３／０２０３４０９、及びＵＳ２００５／０１１２１２６に開示されているそれらのＶＥＧＦ阻害剤を挙げることができる。
【００９２】
癌の治療に使用される免疫療法的抗癌剤としては、ブピナシニブ、クリゾチン、エトフラン、シイタケ多糖類、ウブナメタシン、インターフェロン、インターロイキン、マクロファージコロニー刺激因子、顆粒球コロニー刺激因子、エリスロポエチン、リンパトキシン、ＢＣＧワクチン、小桿菌、エファビレンツ、レバミソール、多糖類Ｋ、プロコダゾール及び免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＣＴＬＡ４阻害剤、ＴＩＭ−３阻害剤、ＰＤ−１阻害剤（例えば、ニボルマブ（Ｎａｖｕｍａｂ）、ペンブロリズマブ（Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）、ピディリズマブ（Ｐｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ）、ＡＭＰ５１４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ））、ＡＭＰ−２２４、及びＰＣＴ特許出願ＷＯ２００６／１２１１６８、ＷＯ２００９／１１４３３５、ＷＯ２００９／１０１６１１、米国特許ＵＳ  ８６０９０８９、米国特許出願ＵＳ２０１０／０２８３３０、ＵＳ２０１２／０１１４６４９）に開示されている他のＰＤ−１阻害剤。）及び／又はＰＤ−Ｌ１阻害剤（例えば、アテゾリズマブ、アセルマ、デュルバルマブ、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ−４７３６、ＭＳＢ−００１０７１８Ｃ、ＭＤＸ−１１０５、及びＰＣＴ特許出願ＷＯ２０１０／０７７６３４及び米国特許ＵＳ７，９４３，７４３）に開示されている他のＰＤ−Ｌ１阻害剤などを挙げることができる。）。
【００９３】
癌の治療に使用されるホルモン治療用抗癌剤としては、フォスタチン、ヘキストロール、クロミフェン、メドロキシプロゲステロン酢酸塩、メドロキシプロゲステロン酢酸塩、シプロステロン酢酸塩、ダナゾール、アリルストール、プロゲステロン、メパルトリシン、ラロキシフェン又はメロキシフェン、レボフロキサシン、抗エストロゲン剤（例えば、クエン酸タモキシフェン、クエン酸トロメタミン等）、避妊薬、プロスタシクロペンタン、テストステロンラクトン、アミノスクシンイミド、ＬＨ−ＲＨアゴニスト（例えば、酢酸ゴセレリン、ブクセレリン、リュープロリド等）、ドロロキシフェン、エピアンドロスタノール、エチニルエストラジオールスルホン酸塩、フロフェナゾール塩酸塩、アナストロゾール、レトロゾール、エゼチミブ、ボローゾール、抗アンドロゲン（フルタミド、ビカルタミド、ニルタミドなど）、５α−還元酵素阻害剤（例えば、フィナステリド、エプリステリド）、コルチコステロイド（例えば、デキサメタゾン、プレドニゾロン、ベタメタゾン、トリアムシノロンなど）及び／又はアンドロゲン合成阻害剤（例えば、アビラテロンなど）を挙げることができる。
【００９４】
上皮組織疾患
【００９５】
本出願で使用される「上皮組織」という用語は、一般に、皮膚、粘液、管腔、血漿、及び腺腔を含む、身体全体を覆う自由で閉鎖された表面の１つ以上の層からなる細胞を指す。すべての上皮層は、粘膜（又は腔内）空間に面する頂部ドメインと、漿膜（又は深部）空間に面する基底側膜という２つの特異的なドメインを含んでいる。したがって、上皮組織の重要な機能は、これらの２つの空間の間に生じる多くの生理学的プロセスを分離し、制御するための適切なバリア機能を提供することである。上皮組織は、内皮細胞の他に上皮細胞を含んでもよい。上皮細胞は、皮膚上皮細胞、口腔上皮細胞、胃上皮細胞、及び／又は小腸上皮細胞を含むことができる。
【００９６】
本出願で使用される「上皮組織疾患」という用語は、一般に、上皮及び／又は内皮細胞の障害（例えば、ＥＧＦＲ阻害剤の投与に関連した、又はＥＧＦＲ阻害剤の投与によって引き起こされる上皮及び／又は内皮細胞の障害）によって引き起こされる疾患を指す。いくつかの実施形態において、「上皮組織疾患」は、以下のグループから選択される疾患又は状態を含み得る：ＥＧＦＲ阻害に関連する発疹、ＥＧＦＲ阻害に伴うニキビ、ＥＧＦＲ阻害に伴う皮膚のかゆみ、ＥＧＦＲ阻害に伴う手足症候群、ＥＧＦＲ阻害に伴う脱毛、ＥＧＦＲ阻害に伴う毛髪の変化、ＥＧＦＲ阻害に伴う紅斑、ＥＧＦＲ阻害に伴う皮膚の角質化、及び  ＥＧＦＲ阻害性膿疱性疱疹、ＥＧＦＲ阻害性多毛症、ＥＧＦＲ阻害性色素沈着、ＥＧＦＲ阻害性爪疾患、ＥＧＦＲ阻害性爪真菌・割れ爪、ＥＧＦＲ阻害性乾燥肌、ＥＧＦＲ阻害性爪疾患、ＥＧＦＲ阻害性爪疾患、ＥＧＦＲ阻害性爪真菌・割れ爪、ＥＧＦＲ阻害性乾燥肌、ＥＧＦＲ阻害性爪疾患、ＥＧＦＲ阻害性爪疾患、ＥＧＦＲ阻害性爪疾患、ＥＧＦＲ阻害性爪疾患、ＥＧＦＲ阻害性爪真菌・割れ爪、ＥＧＦＲ阻害性爪疾患、ＥＧＦＲ阻害性爪疾患、ＥＧＦＲ阻害性爪疾患、ＥＧＦＲ阻害性爪疾患、ＥＧＦＲ阻害性爪疾患、ＥＧＦＲ阻害性爪疾患、ＥＧＦＲ阻害性爪疾患、ＥＧＦＲ阻害性爪疾患、ＥＧＦＲ阻害性爪疾患、ＥＧＦＲ阻害性爪疾患、ＥＧＦＲ阻害性爪疾患、ＥＧＦＲ阻害性爪疾患、ＥＧＦＲ阻害性爪疾患、ＥＧＦＲ阻害性爪疾患、ＥＧＦＲ阻害性爪疾患、ＥＧＦＲ阻害性爪疾患、ＥＧＦＲ阻害性爪疾患  ＥＧＦＲ阻害に伴う過敏反応、ＥＧＦＲ阻害に伴う粘膜炎、ＥＧＦＲ阻害に伴う鼻咽頭炎、ＥＧＦＲ阻害に伴う鼻出血、ＥＧＦＲ阻害に伴うドライマウス、ＥＧＦＲ阻害に伴う口唇炎、ＥＧＦＲ阻害に伴う口腔潰瘍、ＥＧＦＲ阻害に伴う消化管粘膜障害。例えば、上皮組織疾患は、ＥＧＦＲ阻害に関連した手足症候群を含んでいてもよい。例えば、上皮組織障害は、ＥＧＦＲ阻害に関連した発疹を含んでいてもよい。
【００９７】
本出願では、「ハンドフット症候群」という用語は、ハンドフット症候群（ＨＦＳ）とも呼ばれる。１９８４年にハーバード大学医学部のニューイングランド遺体病院のジェイコブ・ローキッチとセリー・ムーアによって初めて記載された。典型的な臨床症状は進行性で、指（足指）の熱感、疼痛、紅斑性腫脹などの臨床症状を呈し、重症例では鱗屑化、潰瘍化、激痛へと進行する。ＨＦＳの病理学的症状には、例えば、基底ケラチノサイト液胞変性、皮膚周囲リンパ球浸潤、ケラチノサイトアポトーシス、皮膚浮腫などがある。例えば、ＨＦＳは、手のひらや足の裏の鈍痛や、化学療法によって誘発された四肢の紅斑を含むことがある。がん患者は、化学療法や分子標的治療（ＥＧＦＲ阻害剤など）を受けている間に症状が出ることがある。
【００９８】
手足症候群（ＨＦＳ）には現在さまざまな分類方法があるが、その中で、国立癌研究所（ＮＣＩ）分類基準がより一般的に使用されており、手足症候群を３つのレベルに分類する：グレード１は軽度の皮膚の変化又は感覚異常を伴うが、日常の活動には影響しない皮膚炎（指紋の消失、色素沈着、紅斑、剥離、感覚異常、くすみ、皮膚のしびれなど）である；グレード２は、皮膚の変化についてはグレード１と同じであり、痛みを伴い、日常の活動に穏やかに影響し、皮膚表面の完全性をもたらす；グレード３は、潰瘍性皮膚炎又は激しい痛みを伴う皮膚の変化であり、日常生活に深刻な影響を及ぼし、明らかな組織破壊（落屑、水疱、出血、浮腫など）がある。
【００９９】
また、ＨＦＳの等級付けについて世界保健機関（ＷＨＯ）では、手や足の感覚の鈍さ、異常感覚やヒリヒリ感をグレード１、握ったり歩いたりする際の違和感、無痛性の腫れや紅斑をグレード２、手のひらや足の裏、爪周囲の紅斑や浮腫みをグレード３、はがれや潰瘍、キチンとした激痛をグレード４としている。
【０１００】
疾患が発生する場所に応じて、上皮組織疾患は、上皮細胞疾患及び／又は内皮細胞疾患に分けることができる。いくつかの実施形態において、上皮細胞疾患は、ＥＧＦＲ阻害に関連する皮膚上皮細胞疾患（例えば、皮膚の発疹、にきび、酒さ、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、狼瘡、強皮症、胃細胞症、色素沈着、肝斑、白斑、じんま疹、白癬、皮膚かゆみ、脱毛、髪の変化、紅斑、爪周囲炎、爪のひび割れ、乾燥肌、過敏症、乾癬）、ＥＧＦＲ阻害に関連する口腔上皮細胞疾患（例えば、天疱瘡、口唇ヘルペス、ヘルペス性口内炎、肉芽腫性口唇炎、口腔潰瘍、類天疱瘡、シェーグリン症候群、ベーチェット症候群、口腔サルコイドーシスなど）、ＥＧＦＲ阻害に関連する胃上皮細胞疾患（例えば、胃炎、腸上皮化生、胃穿孔、胃瘻、胃潰瘍、及び胃腸ポリープ）、又はＥＧＦＲ阻害に関連する小腸上皮細胞疾患（例えば、腸炎、クローン病、腸穿孔、腸瘻、腸潰瘍、潰瘍性大腸炎、ＮＳＡＩＤ腸症）に分類することができる。
【０１０１】
いくつかの実施形態において、上皮細胞疾患は、皮膚上皮細胞疾患であり得る。いくつかの実施形態において、皮膚上皮細胞疾患は発疹及びかゆみであり得る。
【０１０２】
本出願で使用される「発疹」という用語は、一般的には、皮膚の色、外観又は質感に影響を与える皮膚の変化を意味する。発疹は体の一部分に限られている場合もあれば、皮膚全体に影響を及ぼす場合もある。発疹にはじんましんが含まれることもある。
【０１０３】
いくつかの実施形態において、内皮細胞は血管内皮細胞であり得る。いくつかの実施形態において、内皮細胞疾患は、血管内皮細胞疾患であり得る。血管内皮細胞疾患は、一酸化窒素の産生又はバイオアベイラビリティの低下、及び／又は内皮由来の弛緩及び収縮への相対的寄与の不均衡として現れる可能性がある内皮機能不全を含み得る。血管内皮細胞疾患には、以下が含まれるが、これらに限定されない：ＥＧＦＲ阻害に関連する変性血管疾患（例えば、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症及び細動脈硬化症（例えば、硝子変性細動脈硬化症及び過形成性細動脈硬化症））、ＥＧＦＲ阻害に関連する炎症性血管疾患（例えば、感染性動脈炎、梅毒性動脈炎、巨細胞性動脈炎、閉塞性血栓血管炎、及びリウマチ性動脈炎）、ＥＧＦＲ阻害に関連する機能性血管疾患（例えば、レイノー病、手足のチアノーゼ、紅斑性肢痛）そしてＥＧＦＲ阻害に関連する先天性血管疾患（例えば、先天性動静脈瘻）など。
【０１０４】
上皮組織疾患の重症度は、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅが発行したＣｏｍｍｏｎ  Ａｄｖｅｒｓｅ  Ｅｖｅｎｔ  Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ  Ｓｔａｎｄａｒｄ（ＣＴＣＡＥ）にしたがって分類できる。この標準は、癌治療の臨床試験及びその他の腫瘍学の設定における有害事象の標準分類及び重症度分類標準（ＮＣＩ−ＣＴＣＡＥ  Ｖ５．０）である。いくつかの実施形態において、上皮組織疾患の重症度は、ＮＣＩ−ＣＴＣＡＥ  Ｖ５．０レベル１以上、レベル２以上、レベル３以上、レベル４以上、又はレベル５に基づく場合がある。
【０１０５】
一酸化窒素放出剤
【０１０６】
一酸化窒素合成酵素（ＮＯＳ）は、特定の窒素含有物質に作用して細胞内で一酸化窒素（ＮＯ）を生成する酵素である。ＮＯＳは、誘導性一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）、内皮細胞に見られるホモ接合型一酸化窒素合成酵素（ｅＮＯＳ）、脳や神経細胞に見られるホモ接合型一酸化窒素合成酵素（ｎＮＯＳ）の３つのサブタイプから構成されている。ＮＯＳは哺乳類や一部の細菌でＬ−Ａｒｇを酸化してＮＯを生成する。
【０１０７】
本出願で使用される「一酸化窒素放出剤」という用語は、一般に、直接的又は間接的に寄与し、一酸化窒素を産生及び／又は放出し、及び／又は体内での一酸化窒素の内因性産生を刺激することができる任意の物質を指す。いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は、一酸化窒素に直接寄与し、生成し、及び／又は放出することができる。いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は、他の物質を刺激することにより、一酸化窒素に寄与し、生成し、及び／又は放出することができる。いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は、化学的又は酵素触媒反応において、反応物として一酸化窒素を寄与、生成、及び／又は放出することができる。いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は、他の物質が一酸化窒素を寄与、生成、及び／又は放出するように刺激される化学反応又は酵素触媒反応の触媒として作用してもよい。いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は、一酸化窒素（ＮＯ）からなることができる。
【０１０８】
一酸化窒素放出剤は、当技術分野で知られている任意の方法、例えば、一酸化窒素に寄与し、生成し、放出し、及び／又は直接又は間接的に一酸化窒素を移動させ、及び／又は体内での一酸化窒素の内因性生産を刺激するための被験化合物の能力について、亜硝酸塩、ＮＯ、ＮＯ２−及び／又はＳ−ニトロソチオールレベルを測定することによって同定又はスクリーニングすることができる。亜硝酸塩、ＮＯ、ＮＯ２−及び／又はＳ−ニトロソチオールレベルは、当技術分野で知られている任意の方法を用いて測定することができる。いくつかの実施形態において、亜硝酸塩は、亜硝酸塩を検出することによって、例えば、亜硝酸塩とｐ−アミノベンゼンスルホン酸との反応に基づくＧｒｉｅｓｓ分析（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓｓ）によって、一酸化窒素放出剤を同定又はスクリーニングすることができ、次いで、反応生成物を分光光度法で検出する。また、高感度化学発光法により、９５℃の還流槽内で亜硝酸塩をＮＯに還元して測定することも可能である。いくつかの実施形態において、血中のＨｂ−ＮＯレベルを測定して、一酸化窒素放出剤を同定するか、又はスクリーニングすることができる。ＮＯはヘモグロビン（Ｈｂ）と強固に結合していることが知られており、ＮＯとＨｂの相互作用が血管内でのＮＯ代謝の主要な経路であると考えられている。したがって、血中のＨｂ−ＮＯ濃度は、内因性ＮＯ産生の良好な指標となる。いくつかの実施形態において、全血及び赤血球中の常磁性ヘモグロビン−ＮＯ付加体（Ｈｂ−ＮＯ）は、一酸化窒素リリーラーを同定又はスクリーニングするために、電子常磁性共鳴（ＥＰＲ）分光法によって決定することができる。いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は、ＮＯ特異的電極の電流分析を実行することによって同定又はスクリーニングすることができる。  この方法では、生物や試料にＮＯ電極を挿入する必要がある。いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は、Ｓ−ニトロソチオールを検出することによって同定又はスクリーニングすることができる。化学発光アッセイを、ＥｃｏＭｅｄｉｃｓ  ＣＬＤ  ８８  Ｅｘｈａｌｙｚｅｒ  （Ａｎｎｅｘ，  Ｈｅｒｔｓ，  ＵＫ）において、タンパク質Ｓ−ニトロソチオールを測定するために使用した（Ｆｅｅｌｉｓｃｈ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔ  Ｓ−，  Ｎ−，  ａｎｄ  ｈｅｍｅ−ｎｉｔｒｏｓ（ｙｌ）ａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｔｉｓｓｕｅｓ  ａｎｄ  ｆｌｕｉｄｓ：  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｆａｔｅ  ｏｆ  ＮＯ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．  ＦＡＳＥＢ．  Ｊ  １６，  １７７５−８５  （２００２））。いくつかの実施形態において、ＮＯレベルは、一酸化窒素放出剤を同定又はスクリーニングするための間接的な方法によって検出することができる。例えば、ＮＯレベルを測定するための非侵襲的内皮機能アッセイは、ＥｎｄｏＰＡＴ法により行われる。特定のアッセイは、米国特許第９，６９６，３２４号に記載されている。一酸化窒素放出剤はまた、硝酸還元酵素を用いて血清ＮＯレベルを示す吸光度を測定してＮＯ３−をＮＯ２−に特異的に還元し、ＮＯ２−は着色現像剤と相互作用して着色材料を生成することによって識別又はスクリー���ングすることができる。
【０１０９】
いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は、ＮＯ＋、ＮＯ−、Ｎ２Ｏ、Ｎ２Ｏ３、ＮＯ２、ＮＯ３−、及びＮＯ２−のうちの少なくとも１つに寄与し、生成し、及び／又は放出することができる。いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は、一酸化窒素の少なくとも１つのレドックス形態（ＮＯ＋、ＮＯ−、及びＮＯ）に寄与し、生成し、及び／又は放出することができる。いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は、被験体への投与後に、直接又は間接的に、ＮＯを産生することができる。一酸化窒素は、プロトン源（例えば、プロトン供与体、例えば、水）との反応及び／又は熱分解によることを含む、任意の適切な機構によって一酸化窒素放出剤から放出されてもよい。
【０１１０】
いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は、一酸化窒素の放出を完了させるか、又は一酸化窒素に寄与し、一酸化窒素物質の生物学的活性を所望の作用部位で達成することを可能にする。
【０１１１】
いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は、以下のＮＯドナー基のうちの１つ以上を有し得る：アゾリウムジオール塩、ヒドロキシジアゼンスルホン酸、Ｓ−ニトロソチオール、フロキサン、オキシム、Ｎ−ニトロソアミン、Ｎ−ヒドロキシグアニジン、硝酸塩、亜硝酸塩、硝酸塩、亜硝酸塩、シドイミン、シドン、オキシトリアゾール−５−イミン、オキシトリアゾール−５−ケトン、ヒドロキシルアミン、ジオキサジアゼチジン、Ｎ−ヒドロキシニトロソアミン、Ｎ−ニトロソアミン、ヒドロキシ尿素及び／又は金属ニトロソアミン錯体。例えば、一酸化窒素放出剤は、以下のＮＯドナー基のうちの１つ以上を有し得る：ジアゼニウムジオラート、Ｎ−ジアゼニウムジオラート、ヒドロキシジアゼニウムスルホン酸、Ｓ−ニトロソチオール、フロキサン、オキシム、ニトロソアミン、硝酸塩、亜硝酸塩、Ｎ−ヒドロキシグアニジン、硝酸、亜硝酸、シドロンイミン、シドロン、オキシトリアゾール−５−イミン、オキシトリアゾール−５−オン、ヒドロキシルアミン、ジオキサジアゼチジン、Ｎ−ヒドロキシニトロソアミン、Ｎ−ニトロソアミン、ヒドロキシル尿素、金属ニトロソアミン複合体、ヒドロキシニトロソアミン、ニトロソチオール、ヒドロキシルアミン、ヒドロキシ尿素、Ｎ−ニトロソ−Ｎ−アセチルペニシラミン（ＳＮＡＰ）、ミノキシジル、有機硝酸、金属ＮＯ錯体、チオニン、フラノース、ベンゾフラン。
【０１１２】
例えば、一酸化窒素放出剤は、表１から選択される１つ以上のＮＯドナー基を有し得る：
【０１１３】
表１：ＮＯドナー基
【表１−１】
2021506958.tif 000003
【０１１４】
【表１−２】
2021506958.tif 000004
【０１１５】
いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は、有機分子、無機分子、ポリマー又はナノ材料、アンモニア酸化微生物（ＡＯＭ）、又はそれらの任意の組み合わせであってもよい。本出願で使用される「ポリマー」という用語は、一般に、５００ダルトン以上の分子量を有する任意の化合物を指す。したがって、５００ダルトン未満の分子量を有する任意の化合物は、本出願の目的のために「低分子」と呼ばれ得る。
【０１１６】
いくつかの実施形態において、低分子一酸化窒素放出剤は、有機分子又は無機分子であってもよい。
【０１１７】
いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は、ニトログリセリン、一硝酸イソソルビド、一硝酸ブタンジオール、四硝酸ペンタエリスリトール、イソソルビドジナイトレート、トリニトロエタノールアミン、ニコランジル、ニトロブタノール、５−アミノ−３−（４−モルホリニル）−１，２，３−オキサジアゾール、亜硝酸イソアミル、３，３−ビス（アミノエチル）−１−ヒドロキシ−２−カルボニル−１−トリアゼン（ＮＯＣ−１８）、スルホ求核錯体二ナトリウム塩（スルホＮＯＮＯ酸二ナトリウム塩）、Ｓ−ニトロソグルタチオン（Ｓ−ニトロソグルタチオン）、Ｓ−ニトロソ−Ｎ−アセチルペニシラミン（Ｓ−ニトロソ−Ｎ−アセチルペニシラミン）、４−フェニル−３−フロキサンカルボニトリル（４−フェニル−３−フロキサンカルボニトリル）、（±）−（Ｅ）−４−エチル−２−（Ｅ）−オキシイミノ−５−ニトロ−３−ヘキサンアミド（（±）−（Ｅ）−４−エチル−２−［（Ｅ）−ヒドロキシイミノ］−５−ニトロ−３−ヘキセンアミド）、ストレプトゾシン、ＮＧ−ヒドロキシ−Ｌ−アルギニン酢酸塩、Ｏ２−（２，４−ジニトロフェニル）１−［（４−エトキシカルボニル）ピペラジン−１−イル］１，２−ジオール−ジアゼン−１−イウム（Ｏ２−（２，４−ジニトロフェニル）１−［（４−エトキシカルボニル）ピペラジン−１−イル］ジアゼン−１−イウム−１，２−ジオレート）、Ｎ−ニトロソジブチルアミン、３−モルホリノシドノニミン（ＳＩＮ−１）、リンシドミン、モルシドミン、３−（４−アセチルフェニル）シドノン、ジエチルアミン求核錯体／ＡＭ（ジエチルアミンＮＯＮＯａｔｅ／ＡＭ）及び／又はイトラミン、及び、米国特許第５，６５０，４４２号に記載されている化合物を含み得る有機分子である。いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は、ニトログリセリン、一硝酸イソソルビド及び／又は二硝酸イソソルビドを含み得る。
【０１１８】
本出願において、一酸化窒素放出剤がニトログリセリン、一硝酸イソソルビド及び／又は二硝酸イソソルビドを含む場合、それは、ＥＧＦＲ阻害に関連する上皮組織疾患（例えば、発疹又はＥＧＦＲ阻害に関連するかゆみ）を予防又は治療するための薬剤の調製に使用することができる。例えば、ＥＧＦＲ阻害に伴う発疹又はかゆみを少なくとも１０％軽減する。
【０１１９】
いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は、ニトロキシル錯体、金属ニトロシル錯体、金属ニトロシル錯体、硝酸塩、亜硝酸塩及び/又はニトロプルシドナトリウムを含み得る無機分子であり得る。いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は、ニトロプルシドナトリウムであり得る。
【０１２０】
本出願において、一酸化窒素放出剤がニトロプルシドナトリウムの場合、ＥＧＦＲ阻害に関連する上皮組織疾患（例えば、発疹やＥＧＦＲ阻害に関連するかゆみ）を予防又は治療するための薬剤の調製に使用できる。例えば、ＥＧＦＲ阻害に伴う発疹又はかゆみを少なくとも１０％軽減する。
【０１２１】
いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は、ＮＯドナー基を含むポリマーであり得る。例えば、ＮＯドナーグループは、表１に記載されたＮＯドナーグループを含み得る。架橋又は非架橋ポリマー、デンドリマー、金属化合物、有機金属化合物、無機系化合物、及び他のポリマー足場を含む、任意の適切なポリマーを使用することができる。ＮＯ放出ポリマーには、例えば、ＮＯを放出する共縮合シリカ、ジアゾキシドジサルフェート官能化ポリシロキサン、ＮＯ放出ゼオライトなど（米国特許出願ＵＳ２００６／０２６９６２０又はＵＳ２０１０／０３３１９６８を参照）、ＮＯを放出する有機金属フレームワーク（ＭＯＦ）（米国特許出願ＵＳ２０１０／０２３９５１２又はＵＳ２０１１／００５２６５０を参照）、ＮＯを放出するマルチドナー化合物（米国特許出願ＵＳ２０１４／０１７１３９５を参照）、ＮＯを放出するデンドリマー又は金属構造（米国特許出願ＵＳ２００９／０２１４６１８を参照）、ＮＯ放出コーティング（米国特許出願ＵＳ２０１１／００８６２３４を参照）、及び米国特許出願ＵＳ２０１０／００９８７３３及びＰＣＴ特許出願ＷＯ２０１２／１００１７４に記載されている化合物が含まれる。前述の参考文献の開示は、参照によりその全体が本出願に組み込まれる。いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は、シリカによって形成された共縮合シロキサンネットワークであるナノ結晶などの、ＮＯドナー基を含むナノ材料であってもよい。
【０１２２】
特に、ＮＯ放出ポリマーはまた、Ｓ−ニトロソチオールナノシリカボール、Ｓ−ニトロソエタンジチオールキチン、オリゴプロピレンジアミングラフト化キトサン求核錯体、Ｎｏｖａｎ  Ｉｎｃ．の一酸化窒素放出剤（ＳＢ２０４、ＳＢ２０６、ＳＢ２０８、ＳＢ４１４、ＮＶＮ３１００など）、また、米国特許では、ＵＳ８，２８２，９６７、ＵＳ８，９５６，６５８、ＵＳ８，９６２，０２９、ＵＳ９，４０３，８５１ＵＳ９，４０３，８５２、ＵＳ９，１８７，５０１、ＵＳ８，３９９，００５、ＵＳ８，９８１，１３９、ＵＳ９，７１３，６５２、ＵＳ９，２３８，０３８、ＵＳ９，６６９，０４１、ＵＳ８，５９１，８７６、ＵＳ９，５２６，７３８、ＵＳ９，７３７，５６１ＵＳ９，４２７，６０５、米国特許出願ＵＳ２００９／０２１４６１８、ＵＳ２０１２／００２１０５５、ＵＳ２０１２／００３４１６９、ＵＳ２０１４／０００５４２６、ＵＳ２０１４／００５８１２４、ＵＳ２０１５／０１８２５４３、ＵＳ２０１６／００６０２７９、ＵＳ２０１４／００６５２００、ＵＳ２０１５／０２２５４８８、ＵＳ２０１０／０２９７２００、ＵＳ２０１３／０１９６９５１、ＵＳ２０１３／０３４４３３４、ＵＳ２０１４／００１７１２１、ＵＳ２０１１／００８６２３４、ＵＳ２０１４／０１３４３２１、ＵＳ２０１０／００９８７３３、ＵＳ２０１２／０２３０９２１、ＵＳ２０１４／０１７１３９５、ＵＳ２０１６／００８３３３９、ＵＳ２０１６／０１９９２９５、ＵＳ２０１４／０２５５３１８、ＵＳ２０１７／０２４６２０５、ＵＳ２０１２／０１３６３２３、ＵＳ２０１２／０１５６１６３、ＵＳ２０１４／００５７００１、ＵＳ２０１２／０１３４９５１、ＵＳ２０１７／００５６４３７、ＵＳ２０１７／０３１２３０７、ＵＳ２０１７／０２１６１９７、ＵＳ２０１５／００２４０５２、ＵＳ２００８／０３１１１６３、ＵＳ２０１６／０２５６３６６、ＵＳ２０１５／０１１１９７３、ＵＳ２０１７／０１９６９０５、ＰＣＴ特許出願ＷＯ２０１７／０７９２６８、ＷＯ２００４／００９２５３、ＷＯ２０１７／１５１９０５、ＷＯ２０１６／１６００８９、及びＷＯ２０１７／０１９６１４に開示されているものを含むことができる。
【０１２３】
この用途では、オリゴプロピレンジアミングラフト化キトサン求核錯体は、アゾリウムジオール塩を含み得る。例えば、一酸化窒素放出剤は、オリゴプロピレンジアミングラフト化キトサンＮＯＮＯエートであり得る。この用途では、ＮＯＮＯａｔｅは、化学式Ｒ１Ｒ２Ｎ−（ＮＯ−）−Ｎ＝Ｏを含む化合物を指す場合があり、Ｒ１とＲ２の両方がアルキル基である。
【０１２４】
本出願において、一酸化窒素放出剤は、アンモニア酸化微生物（ＡＯＭ）を含み得る。また、アンモニア酸化微生物（ＡＯＭ）には、アンモニア酸化細菌（ＡＯＢ）が含まれる。例えば、アンモニア酸化微生物（ＡＯＭ）にはニトロソモナス（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ）、ニトロソコッカス（Ｎｉｔｒｏｓｏｃｏｃｃｕｓ）、ニトロソスピラ（Ｎｉｔｒｏｓｏｓｐｉｒａ）、ニトロソシスティス（Ｎｉｔｒｏｓｏｃｙｓｔｉｓ）、ニトロソロブス（Ｎｉｔｒｏｓｏｌｏｂｕｓ）及び／又はニトロソビブリオ（Ｎｉｔｒｏｓｏｖｉｂｒｉｏ）が含まれる。例えば、アンモニア酸化微生物（ＡＯＭ）には、ＡＯＢｉｏｍｅ、ＬＬＣの一酸化窒素を放出する微生物群（例：ＡＯＢ１０１、ＡＯＢ１０２、ＡＯＢ１０３、ＡＯＢ２０１、ＡＯＢ２０１又はＡＯＢ２０３）、及び、米国特許ＵＳ  ７８２０４２０Ｂ２、ＵＳ９７３３８８７０Ｂ２、ＷＯ２０１７００４５３４Ａ２、ＵＳ１００７８０５４Ｂ２、ＵＳ２０１７１８９４５４Ａ１、ＵＳ２０１７０１９１１０９Ａ１、ＵＳ２０１８００９２９４８Ａ１、ＷＯ２０１８０５７７１０Ａ１、ＷＯ２０１８０１７５８３Ａ１、ＷＯ２０１８１１１８８８Ａ１ＵＳ２００７０１４８１３６Ａ１、ＵＳ２００５１０６１２６Ａ１、ＵＳ２０１７００３７３６３Ａ１、ＣＮ１９９７７３１Ａ、ＵＳ２０１７０１８９４５４Ａ１、ＷＯ２０１７００４５５７Ａ１に開示されているものが含まれる場合がある。
【０１２５】
いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は、２０００未満、１５００未満、１２００未満、１０００未満、９００未満、８００未満、７００未満、６００未満、５００未満、４００未満、３００未満、２００未満、又は１００ダルトン未満の分子量であってもよい。例えば、一酸化窒素放出剤は、２０００ダルトン以下、１５００ダルトン以下、１２００ダルトン以下、１０００ダルトン以下、９００ダルトン以下、８００ダルトン以下、７００ダルトン以下、６００ダルトン以下、５００ダルトン以下、４００ダルトン以下、３００ダルトン以下、２００ダルトン以下、及び／又は１００ダルトン以下の分子量の容量を有し得る。
【０１２６】
いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は経皮的に吸収され得る。いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は、生理学的条件下で正、中性、又は負に帯電している。いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤のｌｏｇＰは１−５の間である。いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤のｌｏｇＰは、１．５−３．５の間である。
【０１２７】
予防と治療方法
【０１２８】
本出願の方法は、それを必要とする対象に有効量の一酸化窒素放出剤を投与することを含み、それにより対象におけるＥＧＦＲの阻害に関連する上皮組織疾患を予防又は治療する。
【０１２９】
本出願で使用される「予防」という用語は、一般に、疾患又はその症状の１つ又は複数の発症、再発又は拡大を防止することを指す。この出願では、「予防」は「予防処置」と互換的に使用することができる。特定の実施形態において、「予防」は、一般的に、本出願に記載されている他の薬物の存在下又は非存在下での症状の発症前を指し、本出願に記載されている薬物の治療は、本出願に記載されている疾患又は状態を患っている患者に提供される。特定の実施形態において、特定の疾患の家族歴を有する患者は、予防プログラムの候補となり得る。特定の実施形態において、再発症状の病歴を有する患者も予防の潜在的な標的である。
【０１３０】
本出願で使用される「治療」という用語は、一般に、疾患、又は疾患に関連する１つ又は複数の症状の除去又は改善を指す。いくつかの実施形態において、治療は一般に、疾患に罹患している患者に１つ又は複数の治療薬を投与することによる疾患の排除又は緩和を指す。いくつかの実施形態において、「治療」は、特定の疾患の症状の発症後の他の治療薬の存在下又は非存在下での薬物の投与であり得る。
【０１３１】
本出願で使用される「対象」という用語は、一般に、疾患の診断、予後、改善、予防及び／又は治療を必要とするヒト又は非ヒト動物（哺乳動物を含む）、特に、一酸化窒素放出剤による治療又は予防を必要とする対象を指す。いくつかの実施形態において、対象は、癌患者を含み得る。例えば、癌患者は、ＥＧＦＲ阻害剤を投与された可能性がある、投与されている、及び／又は投与されるであろう。例えば、ＥＧＦＲ阻害剤は、本出願に記載されているＥＧＦＲ阻害剤であってよい。
【０１３２】
いくつかの実施形態において、対象は、ヒト又は非ヒト哺乳動物であり得る。非ヒト哺乳動物は、家畜動物（例えば、ウシ、ブタ、ヒツジ、ニワトリ、ウサギ、又はウマ）、又はげっ歯類（例えば、ラットとマウス）、又は霊長類（例えば、ゴリラとサル）、又は家畜（例えば、犬と猫）などの、ヒト以外の任意の哺乳動物種を含み得る。「対象」は男性でも女性でもよく、年齢もさまざまである。ヒトの「対象」は、白人、アフリカ人、アジア人、ユダヤ人、又は他の人種、あるいはさまざまな人種の混成である可能性がある。ヒトの「対象」は、高齢者、成人、ティーンエイジャー、子供、又は幼児である。
【０１３３】
いくつかの実施形態において、本出願の一酸化窒素放出剤が投与された後、対象の上皮組織疾患の重症度が緩和される。いくつかの実施形態において、寛解は、ＮＣＩ−ＣＴＣＡＥ  Ｖ５．０等級付け基準に基づいて判断され得、例えば、対象の上皮組織疾患の重症度は、グレード５からグレード１に（例えば、グレード５がグレード４、グレード５がグレード３、グレード５がグレード２、グレード４がグレード３、グレード４がグレード２、グレード４がグレード１、グレード３がグレード２、グレード３がグレード１又はグレード２からグレード１に）下がる。いくつかの実施形態において、寛解は一般に、対象における上皮組織疾患の発症又は発症が遅延することを意味する場合がある。
【０１３４】
いくつかの実施形態において、本出願に記載されている一酸化窒素放出剤の有効量を必要とする対象に投与することにより、対象の発疹又は掻痒の重症度をグレード５からグレード１に（例えば、グレード５はグレード４、グレード５はグレード３、グレード５はグレード２、グレード４はグレード３、グレード４はグレード２、グレード４はグレード１、グレード３はグレード２、グレード３はグレード１、又はグレード２はグレード１に）低減することができる。
【０１３５】
いくつかの実施形態において、本出願の方法における一酸化窒素放出剤は、ニトログリセリン、一硝酸イソソルビド又は二硝酸イソソルビドであり得、予防又は治療される上皮組織疾患は、発疹又は掻痒である。いくつかの実施形態において、有効量のニトログリセリン、一硝酸イソソルビド、又は二硝酸イソソルビドを、それを必要とする対象に投与すると、対象の発疹又はかゆみの重症度をグレード５からグレード１に（例えば、グレード５はグレード４、グレード５はグレード３、グレード５はグレード２、グレード４はグレード３、グレード４はグレード２、グレード４はグレード１、グレード３はグレード２、グレード３はグレード１、又はグレード２はグレード１に）軽減することができる。
【０１３６】
いくつかの実施形態において、本出願の方法における一酸化窒素放出剤は、ニトロプルシドナトリウムであり得、予防又は治療されるべき上皮組織疾患は、発疹又はかゆみである。いくつかの実施形態において、有効量のニトロプルシドナトリウムをそれを必要とする対象に投与することにより、対象の発疹又はかゆみの重症度をグレード５からグレード１に（例えば、グレード５はグレード４、グレード５はグレード３、グレード５はグレード２、グレード４はグレード３、グレード４はグレード２、グレード４はグレード１、グレード３はグレード２、グレード３はグレード１、又はグレード２はグレード１に）低下させることができる。
【０１３７】
本出願で使用される「有効量」という用語は、一般に、被験体の疾患若しくは症状を緩和若しくは除去することができ、又は疾患若しくは症状の発症を予防的に抑制若しくは予防することができる量を意味する。有効量とは、対象者の疾患や症状を一定程度に緩和する薬剤の量；疾患又は症状の原因に関連する１つ以上の生理学的パラメーター又は生化学的パラメーターを部分的に又は完全に正常に回復させることができる量；及び／又は、病気や症状を発症する可能性を減らすことができる薬の量であってもよい。
【０１３８】
本出願で提供される一酸化窒素放出剤の治療上有効な用量は、当該技術分野で知られている様々な要因、例えば、特定の化合物の活性、体重、年齢、性別、食生活、排泄率、過去の病歴、現在の治療、投与時期、投与形態、投与方法、投与経路、薬剤の組み合わせ、対象者の健康状態、交差感染の可能性、アレルギー、過敏症、副作用の可能性、及び／又は上皮組織疾患の発生の程度など、に依存してもよい。当技術に熟練した者（例えば、医師又は獣医師）は、これら又は他の条件又は要件に比例して投与量を減少又は増加させることができる。
【０１３９】
ヒトにおける有効量は、実験動物における有効量から推測することができる。例えば、Ｆｒｅｉｒｅｉｃｈらは、動物及びヒトにおける用量の相互関係を記載している（体表面１平方メートル当たりのミリグラムに基づく）（Ｆｒｅｉｒｅｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．  Ｒｅｐ．  ５０，  ２１９  （１９６６））。患者の身長と体重から体表面積を近似することができる。例えば、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｔａｂｌｅｓ，Ｇｅｉｇｙ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ａｒｄｓｌｅｙ，Ｎ．Ｙ．，５３７（１９７０）を参照のこと。
【０１４０】
いくつかの実施形態において、本出願で提供される一酸化窒素放出剤は、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ（例えば、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．００５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．０２ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．１５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．２ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．２５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．３５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．４ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．４５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．５５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．６ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．６５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．７ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．７５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．８ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．８５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．９ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．９５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ又は約９ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ）の治療的有効量で投与することができる。いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は、約５ｍｇ ／ ｋｇ以下の用量で投与される。いくつかの実施形態において、投与される用量は、１ｍｇ／ｋｇ以下、０．５ｍｇ／ｋｇ以下、０．１ｍｇ／ｋｇ以下、０．０５ｍｇ／ｋｇ以下、又は０．０１ｍｇ／ｋｇ以下である。特定の用量は、１日１回、１日２回以上、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、月に１回、又は２か月以上に１回など、複数の投与間隔に分割できる。いくつかの実施形態において、投与される用量は、治療の経過とともに変化し得る。例えば、いくつかの実施形態において、投与される最初の用量は、投与されるその後の用量よりも高くてもよい。いくつかの実施形態において、投与量は、治療過程中の対象の反応にしたがって調整される。被験者の状態を改善する場合、本出願の一酸化窒素放出剤は、必要に応じて維持用量で投与することができる。その後、投与量又は投与頻度又はその両方を、症状が所望のレベルに緩和されたときに改善の状態を維持するレベルに減らすことができる。いくつかの実施形態において、薬物は、対象の病状に応じた間隔で投与されてもよい。
【０１４１】
本出願の医薬において、一酸化窒素放出剤の濃度は、約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約５０％（ｗ／ｗ）、例えば、約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約９０％（ｗ／ｗ）、約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約８０％（ｗ／ｗ）、約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約０．０００１％（ｗ／ｗ）約７０％（ｗ／ｗ）、約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約６０％（ｗ／ｗ）、約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約５０％（ｗ／ｗ）、約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約４０％（ｗ／ｗ）、約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約３０％（ｗ／ｗ）、約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約２０％（ｗ／ｗ）、約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約１０％（ｗ／ｗ）、約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約５％（ｗ／ｗ）、約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約１％（ｗ／ｗ）、約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約０．５％（ｗ／ｗ）、約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約０．１％（ｗ／ｗ）、約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約０．０５％（ｗ／ｗ）、約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約０．０１％（ｗ／ｗ）、約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約０．００５％（ｗ／ｗ）、約０．０００１％（ｗ／ｗ）約０．００５％（ｗ／ｗ）又は約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約０．０００１％（ｗ／ｗ）であってもよい。
【０１４２】
本出願に記載されている一酸化窒素放出剤は、当技術分野で知られている投与方法、例えば、注射（例えば、皮下、腹腔内、関節内、動脈内、くも膜下腔内、胸骨内、くも膜下腔内、病巣内、頭蓋内、筋肉内、皮内及び静脈内ボーラス又は点滴）又は非注射（ 例えば、経口、経鼻、舌下、経膣、直腸又は局所投与）によって投与することができる。本出願に開示されている一酸化窒素放出剤は、この出願に記載されている薬剤の組み合わせ又はキットの形で投与することができる。
【０１４３】
いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤の投与は局所的であり得る。いくつかの実施形態において、局所投与の投与部位は、癌の発生部位又は癌の潜在的な転移の部位でなくてもよい。例えば、投与部分は癌の原発部位ではないかもしれない。別の例では、投与部分は癌の転移部位でなくてもよい。例えば、転移部位は、リンパ節転移、血管転移、及び／又は移植された転移によって引き起こされる癌転移の部位を含み得る。いくつかの実施形態において、転移部位は、骨、脳、肝臓、胃、及び／又は肺を含み得る。別の例として、投与部位は癌の再発部位ではないかもしれない。
【０１４４】
いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は経皮的に投与することができる。
【０１４５】
いくつかの実施形態において、本出願に記載されている一酸化窒素放出剤は、ＥＧＦＲ阻害剤と同時投与することができる。いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は、対象がＥＧＦＲ阻害剤を受ける前に、同時に、又は後に投与することができる。特定の実施形態において、一酸化窒素放出剤は、複数回投与レジメンの一部として、ＥＧＦＲ阻害剤とは別に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は、ＥＧＦＲ阻害剤と同時に投与されてもよい。同時投与の実施形態において、これらの一酸化窒素放出剤は、現在開示されているＥＧＦＲ阻害剤と混合されて単一の組成物になる単一剤形の一部であり得る。他の実施形態において、これらの一酸化窒素放出剤は、ＥＧＦＲ阻害剤とほぼ同時に投与される単回用量として投与されてもよい。本出願に開示されるＥＧＦＲ阻害剤が一酸化窒素放出剤と同時に投与される場合、一酸化窒素放出剤は、総用量に対して約０．００１から１０％（例えば、約０．００５−１０％、約０．００５−８％、約０．０１％−１０％、約０．０５％−１０％、約０．１％−１０％、約０．２％−１０％、約０．３％−１０％、約  ０．４％−１０％、約０．５％−１０％、約０．６％−１０％、約０．７％−１０％、約０．８％−１０％、約０．９％−１０％、約０．９５％−１０％、約１％−１０％、約２％−１０％、約３％−１０％、約５％−１０％、約６％−１０％、約８％−１０％又は約９％−１０％）の投与量レベルが投与され得る。一酸化窒素放出剤及びＥＧＦＲ阻害剤が間隔をおいて投与される実施形態において、一酸化窒素放出剤は、ＥＧＦＲ阻害剤の投与の前又は後に間隔をおいて投与され得る。間隔の時間は１分、２分、５分、１０分、２０分、３０分、４５分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、１２時間、１８時間、１日、２日、３日、１週間、２週間、３週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月以上にすることができる。
【０１４６】
いくつかの実施形態において、本出願に記載されているＥＧＦＲ阻害剤は、一酸化窒素放出剤と同じ投与経路によって、又は異なる投与経路によって投与することができる。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤は全身的又は局所的に投与される。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤は、経皮投与以外の手段、例えば、１日約１回から約６回の経口投与、又は持続注入投与によって投与される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＥＧＦＲ阻害剤は全身投与され、一酸化窒素放出剤は局所投与される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＥＧＦＲ阻害剤は静脈内投与され、一酸化窒素放出剤は経皮投与される。いくつかの実施形態において、本出願に記載されているＥＧＦＲ阻害剤は経口投与されてもよく、一酸化窒素放出剤は経皮投与されてもよい。
【０１４７】
一酸化窒素放出剤と他の治療物質との組合せ
【０１４８】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される一酸化窒素放出剤は、１つ以上の他の治療剤と同時投与されてもよい。本出願における「併用」又は「同時投与」の意味には、一酸化窒素放出剤と第２物質が異なる投与方法で投与されたとしても、別の治療物質の前又は後に投与された一酸化窒素放出剤も治療物質と「併用」されると考えられることも含まれる。可能な場合、本出願において開示される一酸化窒素放出剤と組み合わせて使用される他の治療物質は、他の治療物質の製品説明書の方法、又は、２００３年の医師向けデスクリファレンス（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ'  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，５７ｔｈ  Ｅｄ；Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ，ＩＳＢＮ：  １５６３６３４４５７，第５７版（２００２年１１月））又は、当技術分野で知られている他の方法にしたがって投与され得る。
【０１４９】
特定の実施形態において、１つ又は複数の他の治療薬は、複数回投与レジメンの一部として、本明細書に開示されている一酸化窒素放出剤とは別に投与（例えば、順次、例えば、一酸化窒素放出剤を異なる重複レジメンで投与）されてもよい。他の実施形態において、これらの治療剤は、現在開示されている一酸化窒素放出剤と混合されて単一の組成物になる単一剤形の一部であり得る。別の実施形態において、これらの薬剤は、一酸化窒素放出剤とほぼ同時に投与される単回用量として投与され得る。本出願に開示される一酸化窒素放出剤が１つ以上の他の治療剤と同時に投与される場合、一酸化窒素放出剤は、総用量に対して約１から９９％（例えば、約１−９９％、約１％−９５％、約５％−９９％、約１０％−９９％、約２０％−９９％、約３０％−９９％、約４０％−９９％、約５０％−９９％、約６０％−９９％、約７０％−９９％、約８０％−９９％、約９０％−９９％又は約９５％−９９％）の投与量レベルが投与される。いくつかの実施形態において、１つ又は複数の他の治療薬は、上皮組織疾患を治療するための薬物である。
【０１５０】
上皮組織疾患を治療するための薬物には、抗炎症剤、鎮痛剤、局所麻酔剤、抗ヒスタミン剤、防腐剤、免疫抑制剤及び／又は抗出血剤及びそれらの混合物が含まれ得る。
【０１５１】
抗炎症剤には以下が含まれる：イブプロフェン、ナプロキセン、インドメタシン、メロキシカム、アセトアミノフェン、サリチル酸メチル、サリチル酸モノエチレングリコール、アスピリン、メフェナム酸、フルフェナム酸、インドメタシン、ジクロフェナク、アルクロフェナク、ジクロフェナクナトリウム、ケトプロフェン、プラノプロフェン、フェノプロフェン、スリンダク、フェノクロル酸、シクロインドール、フルルビプロフェン、フェンチン酸、ブチフェナク、ピロキシカム、フェニルブタゾン、ヒドロキシブタゾン、クロルフィゾン、ペンタゾシン、ピピラゾール、塩酸ピペルフェニドン、プロピオン酸クロベタゾール、ベタメタゾンジプロピオネート、ハルベタソルプロピオネート、ジフルラゾンジアセテート、フルオシノロンアセテート、ハシノニド、アセトニド、デキサメタゾン、トリアムシノロンアセトニド、モメタゾンフロエート、フルチカゾンプロピオネート、ベタメタゾンジプロピオネート、フルチカゾンプロピオネート、デソニド、吉草酸ヒドロコルチゾン、プレドニゾロン、プロパムシノロン、フルオシノロンアセトニド、プレドニゾン、デキサメタゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、酢酸プレドニゾン、メチルプレドニゾロン、酢酸デキサメタゾン、ベタメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、フルメタゾン）、フルオロメトロン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン及び／又は酢酸フルオシノロン。
【０１５２】
鎮痛薬には以下が含まれる：アルフェンタニル、ベンゾカイン、ブプレノルフィン、ブトルファノール、ブタンベン、カプサイシン、クロニジン、コデイン、ジブカイン、エンケファリン、フェンタニル、ヒドロコドン、ヒドロモルホン、インドメタシン、リドカイン、ヒドロキシメチルレボロメラン、メラニジン、メタドン、モルヒネ、ニコモルヒネ、オピエート、オブカイン、オキシコドン、オキシモルホン、ペンタゾシン、プラモキシン、プロパラカイン、プロポキシフェン、プロポキシメテカイン、スフェン タニル、テトラカイン及び／又はトラマドール。
【０１５３】
局所麻酔には以下が含まれる：塩酸ジブカイン、塩酸ジブカイン、塩酸リドカイン、リドカイン、ベンゾカイン、２−（ジエチルアミノ）エチルｐ−ブチルアミノ安息香酸塩酸塩、塩酸プロカイン、テトラカイン、塩酸テトラカイン、クロロプロカイン塩酸塩、ヒドロキシプロカイン塩酸塩、メピバカイン、塩酸コカイン、塩酸ピロカイン、ジクロニン及び/又は塩酸ジクロニン。
【０１５４】
抗ヒスタミン剤には以下が含まれる：塩酸ジフェンヒドラミン、サリチル酸ジフェンヒドラミン、ジフェンヒドラミン、塩酸クロルフェニラミン、マレイン酸クロルフェニラミン、イセキシペンチル塩酸塩、トリプレナミン塩酸塩、プロメタジン塩酸塩及び/又はメトピロリジン塩酸塩。
【０１５５】
保存料には以下が含まれる：アルコール、第四級アンモニウム化合物、ホウ酸、クロルヘキシジン及びクロルヘキシジン誘導体、ヨウ素、フェノール、テルペン、チメロサール、チモール、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、クロルヘキシジン、ポビドンヨード、塩化セチルピリジニウム、オイゲノール及び/又は臭化トリメチルアンモニウム。
【０１５６】
出血防止剤には以下が含まれる：トロンビン、ビタミンＫ１、硫酸プロタミン、アミノカプロン酸、トラネキサム酸、副腎ヒドラゾン、副腎クロモヒドラゾンスルホン酸ナトリウム、ルチン及び/又はヘスペリジン。
【０１５７】
一酸化窒素放出剤を含む薬物、薬物の組み合わせ又はキット
【０１５８】
いくつかの実施形態において、一酸化窒素放出剤は、薬物又は薬物の組み合わせの一部として投与され得る。
【０１５９】
いくつかの実施形態において、薬物は、一酸化窒素放出剤及び１つ以上の薬学的に受容可能なキャリアを含み得る。
【０１６０】
いくつかの実施形態において、医薬の組み合わせ又はキットは、１）ＥＧＦＲ阻害剤；及び２）一酸化窒素放出剤を含み得る。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ阻害剤及び一酸化窒素放出剤は、互いに混合されなくてもよい。例えば、ＥＧＦＲ阻害剤及び一酸化窒素放出剤は、互いに独立して別個の容器中に存在し得る。例えば、ＥＧＦＲ阻害剤は１つの試薬瓶に分配されてもよく、一酸化窒素放出剤は別の試薬瓶に分配されてもよい。
【０１６１】
本出願で使用される「薬剤学的に許容される」という用語は、一般に、合理的な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激性、アレルギー反応、又は他の問題又は合併症を伴わずに、ヒト及び動物の組織と接触して使用するのに適しており、かつ合理的な利益／リスク比を有するそれらの化合物、材料、組成物及び／又は剤形を指す。いくつかの実施形態において、薬学的に許容される化合物、材料、組成物及び／又は剤形は、規制機関（例えば、米国食品医薬品局、中国食品医薬品局又は欧州医薬品庁）によって承認されているか、又は一般に認められた薬局方（例えば、米国薬局方、中国薬局方又は欧州薬局方）に記載されている、動物での使用のために（そしてより特にヒトでの使用のために）記載されているものを指す。
【０１６２】
本出願の薬剤、薬剤組み合わせ、又はキットに使用することができる薬学的に許容される賦形剤としては、以下のもの、例えば、薬学的に許容される液体、ゲル又は固体担体、水相媒体（例えば、塩化ナトリウム注射、リンゲル溶液注射、等張性グルコース注射、滅菌水性注射、ブドウ糖又は乳酸リンゲル注射）、不水相媒体（例えば、植物由来の不揮発性油、綿実油、コーン油、ゴマ油、又は落花生油）、抗菌性物質、等張性物質（例えば、塩化ナトリウム又は  グルコース）、緩衝液（例えば、リン酸塩緩衝液又はクエン酸塩緩衝液）、酸化防止剤（例えば、硫酸水素ナトリウム）、麻酔剤（例えば、塩酸プロカイン）、懸濁液／分散液（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、又はポリビニルピロリドン）、キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）又はＥＧＴＡ（エチレングリコールビス（２−アミノエチルエーテル）テトラ  酢酸）、乳化剤（例えば、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）−８０））、希釈剤、アジュバント、賦形剤、非毒性の補助物質、当技術分野で知られている他の成分、又はこれらの多くの組み合わせ、が挙げられるが、これらに限定されるものではない。適用可能な成分は、例えば、充填剤、接着剤、崩壊剤、緩衝剤、防腐剤、滑沢剤、風味増強剤、増粘剤、着色剤、又は乳化剤を含むことができる。
【０１６３】
いくつかの実施形態において、薬剤又は一酸化窒素放出剤は経口製剤である。経口剤は、カプセル、カプセル、錠剤、錠剤、ロゼンジ（味覚ベースとして使用され、通常はスクロースとアラビアガム又はトラガカント）、粉末、顆粒、水性又は非水性の溶液又は懸濁液、油中水又は油中水エマルション、エリキシル又はシロップ、菓子ロゼンジ（白色ゼラチン、グリセリン、ショ糖又はアラビアガムのような不活性基剤に適しているもの）及び／又はうがい薬などを含むが、これらに限定されるものではない。
【０１６４】
経口固形製剤（例えば、カプセル、錠剤、丸薬、糖衣錠、粉末又は顆粒など）は、活性物質及び１つ又は複数の薬学的に許容される賦形剤、クエン酸ナトリウムやリン酸二カルシウムなど、及び／又は次の物質：（１）デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール及び／又はケイ酸などのフィラー又はサプリメント；（２）結合剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース及び／又はアラビアゴム；（３）グリセロールなどの湿潤剤；（４）寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモ又はタピオカ澱粉、アルギン酸、特定のケイ酸塩及び／又は炭酸ナトリウムなどの分解剤；（５）パラフィンなどのブロッカー溶液；（６）四級アンモニウム化合物などの加速吸収剤；（７）アセトール及び／又はモノステアリン酸グリセリルなどの潤滑剤；（８）カオリン及び／又はベントナイトなどの吸収剤；（９）滑剤、例えばタルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム及びそれらの混合物；及び（１０）着色剤、を含み得る。
【０１６５】
経口投与用の液体製剤は、薬学的に許容される乳濁液、マイクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ及びエリキシルを含み得る。活性物質に加えて、液体剤形は、一般的に使用される不活性希釈剤、例えば、水又は他の溶媒、可溶化剤及び乳化剤、例えばエタノール、イソプロパノール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブタンジオール、油脂（特に綿実油、落花生油、トウモロコシ油、オリーブ油、ひまし油、ごま油）、グリセリン、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール及び脂肪酸ソルビトールエステル、及び上記の２つ以上の混合物、を含むこともできる。経口液体製剤は、不活性希釈剤に加えて、湿潤剤、乳化剤、懸濁剤、甘味料、香味剤、色素、香料又は保存剤などのアジュバントを含んでもよい。
【０１６６】
いくつかの実施形態において、薬物又は一酸化窒素放出剤は、注射製剤であり得る。注射製剤は、無菌水溶液、分散液、懸濁液又は乳濁液を含み得る。すべての場合において、注射製剤は無菌でなければならず、注射を容易にするために液体でなければならない。それは、生産及び保管条件下で安定している必要があり、微生物（例えば、細菌及び真菌）による汚染に耐性でなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、又は液体ポリエチレングリコールなど）又はそれらの適切な混合物、及び／又は植物油を含む溶媒又は分散媒であってよい。注射剤は適切な流動性を維持する必要があり、これは、例えば、レシチンなどのコーティングを使用すること、界面活性剤などを使用することなどの、さまざまな方法で維持することができる。抗菌汚染は、さまざまな抗菌剤及び抗真菌剤（例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなど）を追加することで実現できる。
【０１６７】
いくつかの実施形態において、薬剤又は一酸化窒素放出剤は、局所的な経口投与に適している。局所経口投与に適した製剤としては、ショ糖・アラビアガムやヤロウガムなどのフレーバーマトリックス中に一酸化窒素放出剤を含有するロゼンジ、ゼラチン・グリセリンやショ糖・アラビアガムなどの不活性マトリックス中に一酸化窒素放出剤を含有するロゼンジ、好適な液体担体中に一酸化窒素放出剤を含有する洗口剤などが挙げられる。いくつかの実施形態において、薬物又は一酸化窒素放出剤は、経口スプレー製剤又は鼻スプレー製剤であってよい。スプレー製剤は、限定されないが、水性エアロゾル、非水性懸濁液、リポソーム製剤又は固体粒子製剤を含み得る。水性エアロゾルは、一酸化窒素放出剤の水溶液又は懸濁液と、従来の薬学的に許容される賦形剤及び安定剤とを組み合わせることによって処方することができる。担体及び安定剤は、特定の化合物の必要性に応じて変化する可能性があるが、それらには一般に非イオン性界面活性剤（Ｔｗｅｅｎｓ、又はポリエチレングリコール）、オレイン酸、レシチン、アミノ酸（グリシンなど）、緩衝液、塩、糖、又は糖アルコールが含まれる。エアロゾルは通常、等張液から調製され、ネブライザーを介して送達できる。
【０１６８】
本出願において、薬物又は一酸化窒素放出剤は、経皮投与に適するように調製され得る。この適用において、薬物又は一酸化窒素放出剤は、局所投与に適するように調製され得る。いくつかの実施形態において、薬物又は一酸化窒素放出剤は、局所皮膚適用のために調製される。例えば、本出願において、薬物又は一酸化窒素放出剤は、軟膏として調製され得る。例えば、一酸化窒素放出剤は、以下の混合物の１つ以上に懸濁又は溶解され得る：鉱油、液体ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン化合物、乳化ワックス、水。一酸化窒素放出剤はまた、適切なローション又はクリームに処方され得、そして以下の混合物の１つ以上に懸濁又は溶解され得る：鉱油、ソルビタンモノステアレート、ポリエチレングリコール、流動パラフィン、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリルアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコール及び水。
【０１６９】
この出願に記載されている薬物、薬物の組み合わせ又はキットにおいて、一酸化窒素放出剤の濃度は、約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約５０％（ｗ／ｗ）、例えば、それは、約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約９０％（ｗ／ｗ）、約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約８０％（ｗ／ｗ）、約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約０．０００１％（ｗ／ｗ）から７０％（ｗ／ｗ）、約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約６０％（ｗ／ｗ）、約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約５０％（ｗ／ｗ）、約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約４０％（ｗ／ｗ）、約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約３０％（ｗ／ｗ）、約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約２０％（ｗ／ｗ）、約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約１０％（ｗ／ｗ）、約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約５％（ｗ／ｗ）、約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約１％（ｗ／ｗ）、約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約０．５％（ｗ／ｗ）、約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約０．１％（ｗ／ｗ）、約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約０．０５％  （ｗ／ｗ）、約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約０．０１％（ｗ／ｗ）、約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約０．００５％（ｗ／ｗ）、約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約０．００５％（ｗ／ｗ）又は約０．０００１％（ｗ／ｗ）から約０．０００１％（ｗ／ｗ）であり得る。
【０１７０】
本出願の薬剤の組み合わせ又はキットにおいて、２）の一酸化窒素放出剤は、１）のＥＧＦＲ阻害剤によって引き起こされる疾患又は状態を予防又は治療することができる。
【０１７１】
本出願の薬剤の組み合わせ又はキットにおいて、２）の一酸化窒素放出剤は、１）のＥＧＦＲ阻害剤の治療効果に実質的に影響を与えない。
【０１７２】
本出願において、「実質的に影響を受けない」とは、前記薬剤組み合わせ又はキットの２）における前記一酸化窒素放出剤及び前記薬剤組み合わせ又はキットの１）における前記ＥＧＦＲ阻害剤の使用が、前記ＥＧＦＲ阻害剤単独の治療効果と同等であるか、又は前記ＥＧＦＲ阻害剤単独の治療効果と比較して有意な不利益をもたらさないことを意味する場合がある。例えば、任意の被験体について、前記薬剤組み合わせ又はキットの２）における前記一酸化窒素放出剤及び前記薬剤組み合わせ又はキットの１）における前記ＥＧＦＲ阻害剤の使用から生じる腫瘍体積の減少は、前記ＥＧＦＲ阻害剤単独の治療効果と比較して、同じであるか、又は、減少の程度が約５％以上、約４％以上、約３％以上、約２％以上、約１％以上、約０．５％以上、約０．１％以上、約０．０１％以上、約０．００１％以上若しくはそれ以下である。
【０１７３】
本出願の薬剤の組み合わせ又はキットにおいて、２）の一酸化窒素放出剤は、１）のＥＧＦＲ阻害剤の前、同時又は後に投与するために使用される。
【０１７４】
治療的使用
【０１７５】
一態様において、本出願は、ＥＧＦＲ阻害に関連する疾患又は障害（例えば、ＥＧＦＲ阻害に関連する上皮組織疾患）の予防又は治療のための薬剤の調製における一酸化窒素放出剤の使用を提供する。
【０１７６】
一方、本出願は、一酸化窒素放出剤を提供し、これは、ＥＧＦＲ阻害に関連する疾患又は障害（例えば、ＥＧＦＲ阻害に関連する上皮組織疾患）を予防又は治療するために使用される。
【０１７７】
一方、本出願は、対象に予防的又は治療的に有効な量の一酸化窒素放出剤を投与することを含む、対象におけるＥＧＦＲ阻害に関連する疾患又は障害（例えば、ＥＧＦＲ阻害に関連する上皮組織疾患）を予防又は治療する方法を提供する。一部の実施形態において、対象は、ヒト又は非ヒト動物を含み得る。例えば、非ヒト動物は、サル、ニワトリ、ガチョウ、ネコ、イヌ、マウス、及びラットからなる群から選択される動物を含み得る。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲの阻害は、対象へのＥＧＦＲ阻害剤の投与から生じ得る。
【０１７８】
実施例
【０１７９】
実施例１：Ｓ−ニトロソチオールナノシリカ球の合成
【０１８０】
（３−メルカプトプロピル）トリメトキシシラン４ｍｌとオルトケイ酸テトラエチル２ｍｌの混合液を、脱イオン水３０ｍｌ、エタノール３０ｍｌ、アンモニア水３０ｍｌの混合液にインジェクションポンプで０．５ｍｌ／分の速度で注入した。注入中は反応液を０℃に保ち、注入終了後、室温で２．５時間攪拌した後、４０００ｒｐｍで８分間遠心し、沈殿物を１００ｍｌの氷水とエタノール１００ｍｌをそれぞれ加え、真空下で乾燥して、チオール化シリカナノスフィアを得た。
【０１８１】
１５０ｍｇのチオール化シリカナノスフェアを４ｍｌのメタノールに分散させ、０℃に冷却した。２ｍｌの１Ｍ亜硝酸ナトリウムと１ｍＭジエチルトリアミン五酢酸の混合溶液を一定の攪拌下で加え、その後２ｍｌの５Ｍ水溶液を加えた。反応混合物を暗所で０℃で２．５時間撹拌し、４℃で４０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。沈殿物を３０ｍｌの１ｍＭジエチルトリアミン五酢酸水溶液で１回洗浄した。４℃でメタノール４ｍｌ及びメタノール３０ｍｌをそれぞれ加え、固体を収集するために再度遠心分離した。暗所及び−３０℃未満の温度で、固体を真空下で３０分間乾燥させ、乾燥した最終生成物を得た。−２０℃で保存して使用した。
【０１８２】
最終生成物をｐＨ＝７．４のＰＢＳ緩衝液に溶解し、ＺＳ９０タイプの粒子サイズとゼータ電位アナライザーを使用して測定したところ、生成物の流体力学的半径は４２３ｎｍ、多分散性指数は０．０６１であった。溶液のＵＶ可視スペクトル（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  ＥＶ３００  Ｔｙｐｅ  ＵＶ分光光度計を使用して測定）には、３３０ｎｍに特徴的な吸収ピークがある。ＮＯ貯蔵は、Ｂｅｙｏｔｉｍｅ  ＮＯアッセイキット（Ｇｒｉｅｓｓ  Ｍｅｔｈｏｄ、Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｂｅｙｏｔｉｍｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ．から購入）で２００Ｗ光で５時間の条件下検出された、一酸化窒素の総放出量によって特徴付けられた。最終生成物のＮＯ貯蔵は１．８７±０．５５μｍｏｌ／ｍｇと測定された。
【０１８３】
実施例２：Ｓ−ニトロソエタンジチオールキチンの合成
【０１８４】
キチン２ｇと塩化リチウム５ｇをジメチルアセトアミド５０ｍｌに分散させ、Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン２０ｍｌを０℃で加え、ｐ−トルエンスルホニルクロライド２０ｇをジメチルアセトアミド２０ｍｌに溶解し、得られた混合物を、上記で調製したキチン含有溶液に加えた。混合溶液を４℃で２０時間撹拌した後、沈殿と濾過のために３００ｍｌのアセトンに注いだ。沈殿物をそれぞれ３００ｍｌのメタノール、１５０ｍｌのＤＩ水及び３００ｍｌのアセトンで１回洗浄し、次いで真空下で乾燥させてｐ−トシル化キチンを得た。
【０１８５】
ｐ−トシル化キチン１ｇと塩化リチウム２．５ｇをジメチルアセトアミド４０ｍｌに分散させた後、Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン３  ｍｌと１，２−エタンジチオール１．５ｍｌを加えた。混合溶液を窒素雰囲気下、６０℃で２４時間攪拌した後、４００ｍｌのアセトンに注ぎ、沈殿とろ過を行った。沈殿物をそれぞれメタノール４００ｍｌ及びアセトン４００ｍｌで１回洗浄し、真空下で乾燥させてから、ジメチルアセトアミド中の１０ｍＭ  １，４−ジチオトレイトール及びＮ、Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの２５ｍｌ溶液に分散させた。反応混合物を室温で１時間撹拌し、濾過した。沈殿物をそれぞれメタノール４００ｍｌ及びアセトン４００ｍｌで１回洗浄し、真空下で乾燥してチオール化キチン化合物を得た。２００ｍｇのチオール化キチン化合物を５ｍｌのジメチルアセトアミド／メタノール混合溶液（体積比３／１）に分散させ、１ｍｌの亜硝酸ｔｅｒｔ−ブチルを加え、室温で１２時間撹拌した。次に、混合溶液を１００ｍｌのメタノールに加え、３０分間撹拌し、濾過し、真空下で乾燥させて、最終生成物を得た。
【０１８６】
最終製品の赤外線分光法（Ｎｉｃｏｌｅｔ  ６７００  Ｔｙｐｅ赤外線分光計で検出）の主な吸収ピーク（波数）は３６００〜３２００、３２８５、１６５２、１５３７、及び１０２８であった。（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  ＥＶ３００型ＵＶ分光光度計を使用することにより検出される）その拡散反射ＵＶ可視スペクトルは、５４９ｎｍに特徴的な吸収ピークを示す。ＮＯ貯蔵は、Ｂｅｙｏｔｉｍｅ  ＮＯアッセイキット（Ｇｒｉｅｓｓ  Ｍｅｔｈｏｄ、Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｂｅｙｏｔｉｍｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ．から購入）で２００Ｗ光で５時間の条件下検出された、一酸化窒素の総放出量によって特徴付けられた。２００Ｗライトで５時間の条件下で、ＮＯ貯蔵は、Ｂｅｙｏｔｉｍｅ  ＮＯアッセイキット（Ｇｒｉｅｓｓメソッド、Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｂｅｙｏｔｉｍｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ．から購入）で検出された一酸化窒素の総放出量によって特徴付けられました。最終生成物のＮＯ貯蔵は０．３７±０．０８μｍｏｌ／  ｍｇと測定された。
【０１８７】
実施例３：オリゴ−プロピレンジアミングラフト化キトサンノノエート（ＮＯＮＯａｔｅ）の合成
【０１８８】
２−メチルアジリジン２５０μＬを１  Ｍ塩酸水溶液３００μＬと混合し、２０ｍｇ／ｍＬキトサン１０ｍｌに滴下した。混合液を室温で４日間、７８℃で２０時間攪拌した後、アセトン３００  ｍｌに注いで沈殿・遠心分離し、メタノールで２回洗浄した後、真空乾燥し、二級アミン修飾キトサンを得た。Ｈ  ＮＭＲ分光法（Ｂｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ  ＩＩＩ型ＮＭＲ分光計、４００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤを使用）は、０．８〜１．１、１．９、２．３〜２．７、３．３〜４．０、及び４．４にピークを示した。
【０１８９】
５０  ｍｇの二級アミン修飾キトサンを１ｍＬの水と３ｍＬのメタノールの混合溶液に溶解し、混合溶液を１００μＬのナトリウムメトキシド６Ｍ溶液と一緒にＰａｒｒ  ｓｗｉｎｇ水素化装置に加えた。水素化装置を繰り返して高純度窒素でパージして酸素を除去し、ガス状の一酸化窒素で満たし、反応のために４日間室温で１０気圧に保った。反応終了後、反応容器を高純度窒素で繰り返しパージし、未反応の一酸化窒素を除去した。その後、反応混合物を３００ｍＬのアセトンに加えて沈殿させ、遠心分離して沈殿物を回収し、真空乾燥して最終生成物（ジアゼニウムジオラートを含む）を得、これを−２０℃で保存して次の使用に備えた。
【０１９０】
最終生成物の赤外線スペクトル（Ｎｉｃｏｌｅｔ  ６７００型赤外線分光計を使用して検出）は、３６００〜３２００、３２８５、１６５０、１５８７、１２８４、及び１０５９の主な吸収ピーク（波数）を含んでいた。（サーモフィッシャーＥＶ３００型ＵＶ分光光度計を使用することにより検出される）ＵＶ可視スペクトルは、２５２ｎｍに特徴的な吸収ピークを含んでいた。サンプルをＰＢＳ溶液に溶解し、Ｂｅｙｏｔｉｍｅ  ＮＯアッセイキット（Ｇｒｉｅｓｓ  Ｍｅｔｈｏｄ）により全ＮＯ放出量を検出し、サンプルのＮＯ貯蔵量が０．７７±０．１１μｍｏｌ／ｍＬであることを確認した。
【０１９１】
実施例４−４６：皮膚細胞ＨａＣａＴに対するＥＧＦＲ阻害剤の増殖毒性及び一酸化窒素放出剤の改善効果
【０１９２】
培養した皮膚細胞ＨａＣａＴを消化、カウントし、１ウェルあたり５０００〜１００００個の細胞を９６ウェルプレートに播種し、細胞が付着した後、上清を捨てた。ウェルを薬剤非添加の対照群、ＥＧＦＲ阻害剤群、ＥＧＦＲ阻害剤＋一酸化窒素放出剤群、及びブランク溶媒対照群に分けた。ＥＧＦＲ阻害剤群：１００μＬのＥＧＦＲ阻害剤溶液を追加しました（最終濃度は表２に示している；セツキシマブは水溶液であり、他の各ＥＧＦＲ阻害剤はＤＭＳＯを含む溶液であった）；ＥＧＦＲ阻害剤＋一酸化窒素放出剤群：ＥＧＦＲ阻害剤溶液と一酸化窒素放出剤溶液を追加した（ＥＧＦＲ阻害剤と一酸化窒素放出剤の最終濃度を表２に示し、一酸化窒素の溶解度に応じて酸化物放出剤、一酸化窒素放出剤溶液はエタノール溶液又は水溶液であった）；ブランク対照群：通常の培地交換を除いて、追加の溶液は追加されなかった；複数の空の溶媒対照群：対応するＥＧＦＲ阻害剤群又はＥＧＦＲ阻害剤＋一酸化窒素放出剤と同じタイプの溶媒を等量加えた。ＥＧＦＲ阻害剤群及びＥＧＦＲ阻害剤＋一酸化窒素放出剤群における結果に対する溶媒の影響を排除するために、ブランク溶媒対照群をデータ補正に使用した。更に４８時間培養した後、細胞の生存率をＣｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８（ＣＣＫ−８）アッセイキット（Ｃ００３７、Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｂｅｙｏｔｉｍｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ．から購入）で測定して、細胞に対するＥＧＦＲ阻害剤の増殖毒性と増殖毒性に対する一酸化窒素放出剤の改善効果を計算した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６．０ソフトウェアとｔ検定を使用して、結果の統計分析を実行し、グラフを作成した。
【０１９３】
表２に、ＥＧＦＲ阻害剤と一酸化窒素放出剤のさまざまな組み合わせと、対応する実験結果を示す（ここで、細胞生存率の列のデータは、ＥＧＦＲ阻害剤グループと比較して、対応するＥＧＦＲ阻害剤＋一酸化窒素放出剤群によって増加した生存細胞の割合を表す）。図４には、いくつかの典型的な実験結果を列挙した。
【０１９４】
表２：実施例４−４６の実験条件と結果
【表２−１】
2021506958.tif 000005
【０１９５】
【表２−２】
2021506958.tif 000006
【０１９６】
表２及び図４の結果から、ＥＧＦＲ阻害剤は皮膚細胞ＨａＣａＴに対して増殖毒性を有するが、一酸化窒素放出剤はＥＧＦＲ阻害剤によって引き起こされる増殖毒性に対して有意な改善効果をもたらすと結論付けることができる。
【０１９７】
実施例４７−５８：小腸上皮細胞ＦＨ  ７４  Ｉｎｔに対するＥＧＦＲ阻害剤の増殖毒性及び一酸化窒素放出剤の改善効果
【０１９８】
培養された小腸上皮細胞ＦＨｓ  ７４  Ｉｎｔを消化し、カウントし、１ウェルあたり５０００から１００００細胞を９６ウェルプレートに播種した。細胞がプレートに付着した後、上清を捨てた。各ウェルを、薬剤非添加の対照グループ、ＥＧＦＲ阻害剤グループ、ＥＧＦＲ阻害剤＋一酸化窒素放出剤グループ、及びブランク溶媒対照グループに分けた。ＥＧＦＲ阻害剤グループ：１００μＬのＥＧＦＲ阻害剤溶液を追加した（最終濃度は表３に示した。ＥＧＦＲ阻害剤溶液はすべてＤＭＳＯ溶液である）。ＥＧＦＲ阻害剤＋一酸化窒素放出剤グループ：ＥＧＦＲ阻害剤溶液と一酸化窒素放出剤溶液を追加した（ＥＧＦＲ阻害剤と一酸化窒素放出剤の最終濃度を表３に示した。一酸化窒素放出剤溶液は一酸化窒素放出剤の溶解度に応じてエタノール溶液又は水溶液とした）。ブランク対照群：通常の基本培地の交換に加えて、追加の溶液は追加しなかった。複数のブランク溶媒コントロールグループ：対応するＥＧＦＲ阻害剤グループ又はＥＧＦＲ阻害剤＋一酸化窒素放出剤グループと同じ容量の同じタイプの溶液を追加した。ブランク溶媒対照群は、結果に対するＥＧＦＲ阻害剤群及びＥＧＦＲ阻害剤＋一酸化窒素放出剤群の溶媒の影響を排除するために、データ修正に使用された。４８時間培養を継続した後、Ｃｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８（ＣＣＫ−８）検出キット（Ｃ００３７、Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｂｉｙｕｎｔｉａｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．、Ｌｔｄ．、Ｂｅｙｏｔｉｍｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を使用して、細胞の生存率を測定し、ＥＧＦＲ阻害剤の増殖毒性及び増殖毒性に対する一酸化窒素放出剤の緩和効果を計算した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６．０ソフトウェアとｔ検定を使用して、結果を分析し、グラフを描画した。
【０１９９】
表３は、ＥＧＦＲ阻害剤及び一酸化窒素リリーザーの様々な組み合わせを、対応する実験結果とともに示す（ここで、細胞生存率の欄のデータは、ＥＧＦＲ阻害剤群と比較して、対応するＥＧＦＲ阻害剤＋一酸化窒素リリーザー群によって増加した生存細胞の割合を示す）。図５は、より典型的なこれらの実験のいくつかの結果を示している。
【０２００】
表３：実施例４７〜５８の実験条件と結果
【表３−１】
2021506958.tif 000007
【０２０１】
【表３−２】
2021506958.tif 000008
【０２０２】
表３及び図５の結果から、ＥＧＦＲ阻害剤は小腸上皮細胞ＦＨｓ７４Ｉｎｔに対して増殖毒性を有していたが、一酸化窒素放出剤はＥＧＦＲ阻害剤による増殖毒性を有意に緩和していたことがわかる。
【０２０３】
実施例５９−７０：ヒト口腔粘膜上皮ケラチノサイト（ＨＯＫ）に対するＥＧＦＲ阻害剤の増殖毒性及び一酸化窒素放出剤の緩和
【０２０４】
培養したヒト口腔粘膜上皮ケラチノサイトＨＯＫを、９６ウェルプレートに１ウェルあたり５０００〜１００００細胞にて播種した。細胞がウェルに付着した後、上清を捨てた。各ウェルを、薬剤非添加の対照群、ＥＧＦＲ阻害剤群、ＥＧＦＲ阻害剤＋一酸化窒素放出剤群、及びブランク溶媒対照群に分けた。ＥＧＦＲ阻害剤群：１００μＬのＥＧＦＲ阻害剤溶液を追加しす（最終濃度は表４に示される。ＥＧＦＲ阻害剤溶液はすべてＤＭＳＯ溶液である）。ＥＧＦＲ阻害剤＋一酸化窒素放出剤群：ＥＧＦＲ阻害剤溶液と一酸化窒素放出剤溶液を追加した（ＥＧＦＲ阻害剤と一酸化窒素放出剤の最終濃度は、一酸化窒素放出剤の溶解に応じて、表４に示される。一酸化窒素放出剤溶液はエタノール溶液又は水溶液である。ブランク対照群：通常の基本培地の交換に加えて、追加の溶液は追加されなかった。複数のブランク溶媒対照群：対応するＥＧＦＲ阻害剤群又はＥＧＦＲ阻害剤＋一酸化窒素放出剤群と同じ容量の同じタイプの溶液を追加した。ブランク溶媒対照群は、結果に対するＥＧＦＲ阻害剤群及びＥＧＦＲ阻害剤＋一酸化窒素放出剤群の溶媒の影響を排除するために、データ修正に使用された。４８時間培養を継続した後、Ｃｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８（ＣＣＫ−８）検出キット（Ｃ００３７、Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｂｉｙｕｎｔｉａｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．、Ｌｔｄ．、Ｂｅｙｏｔｉｍｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を使用し、ＥＧＦＲ阻害剤の増殖毒性及び増殖毒性に対する一酸化窒素放出剤の緩和効果を計算するため、細胞の生存率を測定した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６．０ソフトウェアとｔ検定を使用して、結果を分析し、グラフを描画した。
【０２０５】
表４は、ＥＧＦＲ阻害剤及び一酸化窒素放出剤の様々な組み合わせを、対応する実験結果とともに示す（ここで、細胞生存率の欄のデータは、ＥＧＦＲ阻害剤群と比較して、対応するＥＧＦＲ阻害剤＋一酸化窒素放出剤群によって増加した生存細胞の割合を示す）。図６は、より典型的なこれらの実験のいくつかの結果を列挙したものである。
【０２０６】
表４：実施例５９〜７０の実験条件と結果
【表４−１】
2021506958.tif 000009
【０２０７】
【表４−２】
2021506958.tif 000010
【０２０８】
表４及び図６の結果から、ＥＧＦＲ阻害剤はヒト口腔粘膜上皮ケラチノサイト（ＨＯＫ）に対して増殖毒性があるのに対し、一酸化窒素放出剤はＥＧＦＲ阻害剤による増殖毒性を有意に緩和することがわかる。
【０２０９】
実施例７１〜７３：ヒト臍帯静脈内皮細胞ＨＵＶＥＣにおけるＥＧＦＲ阻害剤の増殖毒性及び一酸化窒素放出剤の改善
【０２１０】
培養したヒト臍帯静脈内皮細胞ＨＵＶＥＣを消化し、カウントして、９６ウェルプレートに、ウェルあたり５０００から１００００細胞を播種した。細胞がウェルに付着した後、上清を捨てた。各ウェルを、薬剤非添加の対照群、ＥＧＦＲ阻害剤群、ＥＧＦＲ阻害剤＋一酸化窒素放出剤群、及びブランク溶媒対照群に分けた。ＥＧＦＲ阻害剤群：１００μＬのＥＧＦＲ阻害剤溶液を追加した（最終濃度は表５に示される。ＥＧＦＲ阻害剤溶液はすべてＤＭＳＯ溶液である）。ＥＧＦＲ阻害剤＋一酸化窒素放出剤群：ＥＧＦＲ阻害剤溶液と一酸化窒素放出剤溶液を追加した（ＥＧＦＲ阻害剤と一酸化窒素放出剤の最終濃度を表５に示す）。一酸化窒素放出剤の溶解度に応じて、一酸化窒素放出剤溶液はエタノール溶液又は水溶液である）。ブランク対照群：基本培地の通常の交換を除いて、追加の溶液は追加されなかった。ブランク溶媒対照群：対応するＥＧＦＲ阻害剤群又はＥＧＦＲ阻害剤＋一酸化窒素放出剤群と同じ容量の同じタイプの溶液を追加した。ブランク溶媒対照群は、結果に対するＥＧＦＲ阻害剤群及びＥＧＦＲ阻害剤＋一酸化窒素放出剤群の溶媒の影響を排除するために、データ修正に使用された。４８時間培養を継続した後、Ｃｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８（ＣＣＫ−８）検出キット（Ｃ００３７、Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｂｉｙｕｎｔｉａｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．、Ｌｔｄ．、Ｂｅｙｏｔｉｍｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を使用して、ＥＧＦＲ阻害剤の増殖毒性及び増殖毒性に対する一酸化窒素放出剤の緩和効果を計算するため、細胞の生存率を測定した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６．０ソフトウェアとｔ検定を使用して、結果を分析し、グラフを描画した。
【０２１１】
表５は、ＥＧＦＲ阻害剤及び一酸化窒素放出剤の様々な組み合わせを、対応する実験結果とともに示す（ここで、細胞生存率の欄のデータは、ＥＧＦＲ阻害剤群と比較して、対応するＥＧＦＲ阻害剤＋一酸化窒素放出剤群によって増加した生存細胞の割合を示す）。図７に実験結果を示す。
【０２１２】
表５：実施例７１〜７３の実験条件と結果
【表５】
2021506958.tif 000011
【０２１３】
表５及び図７の結果から、ＥＧＦＲ阻害剤はヒト臍帯静脈内皮細胞ＨＵＶＥＣに対して増殖毒性を有していたが、一酸化窒素放出剤はＥＧＦＲ阻害剤による増殖毒性を有意に緩和していたことがわかる。
【０２１４】
実施形態７４〜８５：ヒト包皮線維芽細胞ＨＦＦに対するＥＧＦＲ阻害剤の増殖毒性及び一酸化窒素放出剤の緩和
【０２１５】
培養したヒト包皮線維芽細胞ＨＦＦを消化し、カウントして、９６ウェルプレートにウェルあたり５０００〜１００００細胞を播種した。細胞がウェルに付着した後、上清を捨てた。各ウェルを、薬剤非添加の対照群、ＥＧＦＲ阻害剤群、ＥＧＦＲ阻害剤＋一酸化窒素放出剤群、及びブランク溶媒対照群に分けた。ＥＧＦＲ阻害剤群：１００μＬのＥＧＦＲ阻害剤溶液を追加した（最終濃度は表６に示される。ＥＧＦＲ阻害剤溶液はすべてＤＭＳＯ溶液である）。ＥＧＦＲ阻害剤＋一酸化窒素放出剤群：ＥＧＦＲ阻害剤溶液と一酸化窒素放出剤溶液を追加した（ＥＧＦＲ阻害剤と一酸化窒素放出剤の最終濃度を表５に示す）。一酸化窒素放出剤の溶解度に応じて、一酸化窒素放出剤溶液はエタノール溶液又は水溶液である）。ブランク対照群：基本培地の通常の交換を除いて、追加の溶液は追加されなかった。ブランク溶媒対照群：対応するＥＧＦＲ阻害剤群又はＥＧＦＲ阻害剤＋一酸化窒素放出剤群と同じ容量の同じタイプの溶液を追加した。ブランク溶媒対照群は、結果に対するＥＧＦＲ阻害剤群及びＥＧＦＲ阻害剤＋一酸化窒素放出剤群の溶媒の影響を排除するために、データ修正に使用された。４８時間培養を継続した後、Ｃｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８（ＣＣＫ−８）検出キット（Ｃ００３７、Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｂｉｙｕｎｔｉａｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．、Ｌｔｄ．、Ｂｅｙｏｔｉｍｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を使用して、ＥＧＦＲ阻害剤の増殖毒性及び増殖毒性に対する一酸化窒素放出剤の緩和効果を計算するため、細胞の生存率を測定した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６．０ソフトウェアとｔ検定を使用して、結果を分析し、グラフを描画した。
【０２１６】
表６は、ＥＧＦＲ阻害剤及び一酸化窒素放出剤ーの様々な組み合わせを、対応する実験結果とともに示す（ここで、細胞生存率の欄のデータは、ＥＧＦＲ阻害剤群と比較して、対応するＥＧＦＲ阻害剤＋一酸化窒素放出剤群によって増加した生存細胞の割合を示す）。図８は、より典型的なこれらの実験のいくつかの結果を列挙したものである。
【０２１７】
表６：実施例７４〜８５の実験条件と結果
【表６】
2021506958.tif 000012
【０２１８】
表６及び図８の結果から、ＥＧＦＲ阻害剤はヒト包皮線維芽細胞ＨＦＦに対して増殖毒性を有するが、一酸化窒素放出剤はＥＧＦＲ阻害剤による増殖毒性を有意に緩和することがわかる。
【０２１９】
実施例８６〜９１：細胞内一酸化窒素レベルに対するＥＧＦＲ阻害剤の効果の決定
【０２２０】
培養されたＨａＣａＴ、ＨＵＶＥＣ、及びｈＭＳＣｓ細胞を消化し、カウントして、ウェルあたり１００，０００〜６００，０００細胞を６ウェルプレートに播種した。細胞がウェルに付着したら、上清を捨て、表７に示す最終濃度に希釈したＥＧＦＲ阻害剤溶液１．５ｍＬを６ウェルプレートのウェルに加えた。ブランク対照群では、基本培地の通常の交換を除いて、溶液は追加されなかった。ＥＧＦＲ阻害剤を加えてから１２〜２４時間後、上清を捨て、６ウェルプレートの細胞に１００μＬの細胞溶解液（一酸化窒素検出用、Ｓ３０９０、Ｂｅｙｏｔｉｍｅ）を加え、３０秒間溶解し、５０μＬの細胞溶解液を取った。一酸化窒素検出キット（Ｓ００２１、Ｂｅｙｏｔｉｍｅ）を使用して、細胞溶解液の一酸化窒素含有量を検出した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６．０ソフトウェアとｔ検定を使用して、結果を分析し、グラフを描画した。
【０２２１】
表７は、種々の細胞株における細胞内一酸化窒素レベルに対する種々のＥＧＦＲ阻害剤の効果の結果を示す（ここで、一酸化窒素レベルの欄のデータは、対照の添加と比較して、対応するＥＧＦＲ阻害剤の添加によって減少した一酸化窒素の割合を示す）。図９に実験結果を示す。
【０２２２】
表７：実施例８６〜９１の実験条件と結果
【表７】
2021506958.tif 000013
【０２２３】
表７及び図９の結果から分かるように、ＥＧＦＲ阻害剤は細胞内一酸化窒素レベルを有意に低下させた。
【０２２４】
実施例９２〜９５：細胞外ＮＯレベルに対する一酸化窒素放出剤の効果の決定
【０２２５】
培養したＨＦＦ細胞を消化し、カウントして、１ウェルあたり５，０００から１０，０００細胞を９６ウェルプレートに播種した。
細胞がウェルに付着した後、上清を廃棄し、一酸化窒素放出剤溶液１００μＬを９６ウェルプレートウェルに追加して特定の濃度に希釈した（実施例９２：０．２ｍＭニトログリセリン（ＮＴＧ）；実施例９３：４ｍＭイソソルビドモノニトレート（ＩＳＭＮ）；実施例９４：０．４ｍＭイソソルビドジニトレート（ＩＳＤＮ）；実施例９５：２０ｍＭのニトロプルシドナトリウム（ＳＮＰ））。ブランク対照群では、基本培地の通常の交換を除いて、溶液は追加されなかった。一酸化窒素放出剤を添加した後の各時点（１０分、１時間、３時間及び１２時間）で、各群から５０μＬの上澄みを収集した。一酸化窒素検出キット（Ｓ００２１、Ｂｅｙｏｔｉｍｅ）を使用して、細胞培養液の一酸化窒素含有量を検出した。図１０に実験結果を示した。
【０２２６】
図１０の結果から、一酸化窒素放出剤の投与により細胞外ＮＯ濃度が上昇し、一酸化窒素放出剤の濃度が異なるとＮＯ濃度の上昇が異なることがわかる。一酸化窒素放出剤の投与濃度は、治療中の実際のニーズに応じて適宜選択することができる。
【０２２７】
実施例９６〜１２８：ラット動物モデルにおける低分子ＥＧＦＲ阻害剤による発疹生成の防止を検証する実験
【０２２８】
ラット動物モデルの構築。６週齢の雌ＳＤラットに低分子ＥＧＦＲ阻害剤を毎日経口投与したところ、数日後にラットの背中の広い範囲に発疹が出現した（図１１の写真）。発疹の位置に左右差はなく、発疹の程度も左右で差はなかった。ヒトと同様に、低分子ＥＧＦＲ阻害剤をラットに経口投与したところ、発疹が発生した。発疹の原因はどちらの種でも同じで、症状も非常によく似ていた。したがって、ラットはＥＧＦＲ阻害剤によって誘発される発疹をシミュレートするための非常に優れた動物モデルである。
【０２２９】
ＳＤラットを１週間（約２００ｇ）収容して馴化させた後、ラットを各１０匹ずつのグループに分けた。実験前日にラットの背中の毛を電気カミソリでやさしく除去し、その後、経管投与試験を行った。ＥＧＦＲ阻害剤をＰＢＳ緩衝液で３倍に希釈したヒマシ油：エタノール＝１：１の混合液に溶解した。投与量は表８に示すようにし、１回の投与量が２ｍＬを超えないようにして投与した。投与後、ラットの片側（約１．２ｃｍ×３ｃｍ）に一酸化窒素放出剤軟膏（表８に示す種類及び濃度）を塗布し、もう片側を無処理（ブランクコントロールとして）とし、本剤塗布後、固定キャニスターを用いてラットを約４時間固定した。ＥＧＦＲ阻害剤の投与頻度は、一酸化窒素放出剤を１日１回のみ投与した以外は、表８に示す通りであった。投与及び塗布試験は、ブランクコントロール側に明確な発疹が現れるまで毎日繰り返し、その時点で、塗布側の皮膚が正常な状態を維持しているか、又は非塗布側の発疹よりも著しく薄くなっているラットの数を、効果的に発疹が抑制されたラットの数としてカウントした。
【０２３０】
表８は、種々の低分子ＥＧＦＲ阻害剤及び一酸化窒素阻害剤軟膏の動物実験における組み合わせと、それに対応する実験結果を示す（ここで、制御率欄の値＝発疹を効果的に阻害した群当たりのラット数／群当たりの発疹モデル構築数×１００％である）。
【０２３１】
表８：実施例９６〜１２８の実験条件と結果
【表８−１】
2021506958.tif 000014
【０２３２】
【表８−２】
2021506958.tif 000015
【０２３３】
表８の結果から、低分子ＥＧＦＲ阻害剤によるかぶれの予防には、一酸化窒素阻害剤軟膏が有効であることがわかる。
【０２３４】
実施形態１２９〜１３１：低分子ＥＧＦＲ阻害剤がラット動物モデルにおいて発疹を生じることを防止するための実験の検証
【０２３５】
ラット動物モデルの構築 実施例９６、９９、１０１を参照。
【０２３６】
ニトロソモナス洗浄液の構成
【０２３７】
ニトロソモナス・ユーロレア（ＡＴＣＣ１９７１８）を、暗条件下で約２００ｒｐｍ、２６℃、３〜５日間、暗条件下で、明らかな濁りの出現まで、無機培地（ＡＴＣＣ２２６５）に接種し、細菌の母液、異なる細菌濃度（例えば、１０７、１０８、１０９、１０１０細菌／ｍｌ）に希釈した無機培地との母液、血球カウンターで測定した細菌濃度、すなわち、ニトロソモナス洗浄液を得た。
【０２３８】
様々な低分子ＥＧＦＲ阻害剤及び一酸化窒素放出剤（ニトロソモナス洗浄液）の動物実験的組み合わせを、対応する実験結果とともに表９に示す（ここで、制御率欄の値＝発疹を効果的に阻害した群あたりのラット数／群あたりに構築された発疹モデルの数×１００％である）。
【０２３９】
表９：実施例１２９〜１３１の実験条件と結果
【表９】
2021506958.tif 000016
【０２４０】
実施例１３２：ラット動物モデルにおけるモノクローナル抗体ＥＧＦＲ阻害剤によって引き起こされる発疹の予防を検証するための実験
【０２４１】
ＳＤラットを１週間飼育して適応させた後（約２００ｇ）、ラットを１０匹のグループに分けた。実験前日、ラットの背中の毛を電気かみそりでやさしく取り除いた後、投与試験を行った。通常の生理食塩水で希釈したセツキシマブモノクローナル抗体溶液を毎週１．３ｍｌ／ｋｇ／ｍｉｎの速度でた。１回の注射の注射時間は１５分以上で、投与量は１００ｍｇ／ｋｇとした。注射後、０．１％ニトログリセリン軟膏（約０．１ｇ）をラットの左側（約１．２ｃｍ×３ｃｍ）に毎日塗布し、右側は薬を塗布せずにブランクコントロールとして使用した。薬剤塗布後、ラットを固定筒で４時間固定し、４時間後、ラットを固定から放ち、残薬を塗布部位から水で拭き取り、ケージに戻した。週２回尾静脈に注射し、一酸化窒素放出剤を対照側に明確な発疹が現れるまで背中の片側に毎日塗布した。塗布１５日後、塗布側（左側）の皮膚が正常であるか非塗布側（右側）よりも有意に明るい状態のラットを、発疹を効果的に抑制したラットの数として算出した。
【０２４２】
表１０は、各種モノクローナルＥＧＦＲ阻害剤及び一酸化窒素放出剤軟膏の動物実験における組み合わせ、及びそれに対応する実験結果を示している（ここで、制御率欄の値＝発疹を効果的に阻害した群当たりのラット数／群当たりに構築された発疹モデルの数×１００％である）。
【０２４３】
表１０：実施例１３２の実験条件と結果
【表１０】
2021506958.tif 000017
【０２４４】
表１０の結果から、一酸化窒素放出剤軟膏は、モノクローナル抗体ＥＧＦＲ阻害剤によるかぶれの予防に有効であることがわかる。
【０２４５】
実施例１３３〜１４２：ラット動物モデルにおける発疹を生成するための低分子ＥＧＦＲ阻害剤の治療の検証
【０２４６】
ＳＤラットを１週間飼育して適応させた後（約２００ｇ）、ラットを１０匹のグループに分けた。実験の前日、ラットの背中の毛を電気かみそりでやさしく取り除いた後、胃内投与試験を行った。ＥＧＦＲ阻害剤をヒマシ油：エタノール＝１：１の混合溶液に溶解し、ＰＢＳ緩衝液で３倍に希釈し、胃内投与量は毎回２ｍＬを超えない。投与量を表１１に示す。強制経口投与は、ラットが発疹の症状を示すまで毎日続けられ、その時点で治療実験が開始された。治療実験中、胃内ＥＧＦＲ阻害剤を毎日継続的に投与した。胃内投与後、ラットの片側（約１．２ｃｍ×３ｃｍ）に一酸化窒素放出剤軟膏を塗布し、反対側は（ブランクコントロールとして）塗布せず；薬剤塗布後、ラットを固定筒で約４時間固定し、４時間後にラットを放ち、塗布部位に残った薬剤をきれいな水で拭き取り、マウスケージに戻した。ＥＧＦＲ阻害剤の強制経口投与の頻度を表１１に示すが、一酸化窒素放出剤は１日１回のみ塗布された。毎日ＥＧＦＲ阻害剤で胃を強制経口投与し、背中の片側に一酸化窒素放出剤を塗布した。塗布１５日後、塗布面の皮膚が正常に戻ったか又は非塗布面の発疹よりも有意に明るい状態のラットの数を、発疹を効果的に治療したラットの数として計算した。
【０２４７】
表１１は、種々の低分子ＥＧＦＲ阻害剤と一酸化窒素放出剤軟膏の動物実験的組み合わせと、それに対応する実験結果を示している（ここで、寛解率欄の値＝発疹を効果的に処置した群当たりのラット数／群当たりに構築された発疹モデルの数×１００％である）。
【０２４８】
表１１：実施例１３３〜１４２の実験条件と結果
【表１１−１】
2021506958.tif 000018
【０２４９】
【表１１−２】
2021506958.tif 000019
【０２５０】
表１１の結果から、低分子ＥＧＦＲ阻害剤によるかぶれの治療には、一酸化窒素放出剤軟膏が有効であることが明らかである。
【０２５１】
実施例１４３：ラット動物モデルにおけるモノクローナル抗体ＥＧＦＲ阻害剤により引き起こされる発疹の治療に関する実験
【０２５２】
ＳＤラットを１週間飼育して適応させた後（約２００ｇ）、ラットを１０匹のグループに分けた。実験前日、ラットの背中の毛を電気かみそりでやさしく取り除いた後、投与試験を行った。通常の生理食塩水で希釈したセツキシマブモノクローナル抗体溶液を、毎週１．３ｍｌ／ｋｇ／ｍｉｎの速度で週２回尾静脈から注入した。単回注射の注射時間は１５分以上でなければならず、投与量は１００ｍｇ／ｋｇである。ラットに発疹が現れるまで１〜２週間投与を続け、その時点で治療実験を開始した。治療実験の間、モノクローナル抗体ＥＧＦＲ阻害剤を週に２回連続的に注射し、ラットの左側（約１．２ｃｍ×３ｃｍ）に毎日一酸化窒素放出剤軟膏を塗布し、（ブランク対照として）右側は塗布適用しなかった；薬剤塗布後、ラットを固定筒で約４時間固定し、４時間後にラットを解放し、塗布部位に残った薬剤をきれいな水で拭き取り、マウスケージに戻した。塗布１５日後、塗布側（左側）の皮膚が正常に戻ったか、非塗布側（右側）より有意に明るい状態のラットを、発疹を効果的に治療したラットの数として算出した。
【０２５３】
表１２は、モノクローナルＥＧＦＲ阻害剤と一酸化窒素放出剤軟膏との動物実験における組み合わせと、それに対応する実験結果を示している（ここで、寛解率欄の値＝発疹を効果的に治療した群あたりのラット数／群あたりの発疹モデル構築数×１００％である）。
【０２５４】
表１２：実施例１４３の実験条件と結果
【表１２】
2021506958.tif 000020
【０２５５】
表１２の結果から、一酸化窒素放出剤軟膏は、モノクローナル抗体ＥＧＦＲ阻害剤によるかぶれの治療に有効であることがわかる。
【０２５６】
実施例１４４〜１５３：低分子ＥＧＦＲ阻害剤が発疹を生じるのを防ぐための実験において、０．１％ニトログリセリン軟膏を他の臨床的に入手可能な皮膚薬及び他の一酸化窒素放出剤と比較する。
【０２５７】
ラットに給餌し、１週間適応させた後（約２００ｇ）、ラットを１０匹のグループに分けた。実験の前日、ラットの背中の毛を電気かみそりでやさしく取り除いた後、胃内投与試験を行った。ＥＧＦＲ阻害剤をヒマシ油：エタノール＝１：１の混合溶液に溶解し、ＰＢＳ緩衝液で３倍に希釈した。毎回の強制飼養の量は２ｍＬを超えず、投与量は表１３に示されている。強制経口投与後、ラットの左側（約１．２ｃｍ×３ｃｍ）に０．１％ニトログリセリン軟膏を塗布し、右側には臨床的に入手可能な皮膚薬（実施例１４４〜１５０）又は他の一酸化窒素放出性軟膏（実施例１５１〜１５３）を塗布する。薬剤を塗布した後、ラットを固定筒で約４時間固定し、４時間後ラットを放して水で拭いて塗布部位の残留薬剤を除去し、マウスケージに戻した。ＥＧＦＲ阻害剤の胃内投与の頻度は表１３に示されているが、他の既存の皮膚用薬物及び一酸化窒素放出剤は一度だけ適用される。毎日ＥＧＦＲ阻害剤で胃を強制経口投与し、右側に明確な発疹が現れるまで薬で背中を塗った。右側の広い範囲に発疹が現れたときに、左側の発疹が右側の発疹よりも著しくマイルドになったラットの数を数えた。
【０２５８】
表１３は、０．１％ニトログリセリン軟膏と臨床的に入手可能な皮膚薬（又は他の一酸化窒素放出性軟膏）との動物実験の組み合わせと、それに対応する実験結果を示す（ここで、相対寛解率欄の値＝左側の発疹が右側の発疹よりも有意に軽度であったラットの数／各群に存在する発疹の数×１００％である）。
【０２５９】
表１３：実施例１４４〜１５３の実験条件と結果
【表１３−１】
2021506958.tif 000021
【０２６０】
【表１３−２】
2021506958.tif 000022
【０２６１】
表１３の結果から、０．１％硝酸ニトログリセリン軟膏は、（ＥＧＦＲ阻害剤による発疹に対して実質的に治療効果がない）臨床的に入手可能な皮膚薬よりも、ＥＧＦＲ阻害剤による発疹の抑制に効果的であり、０．１％硝酸ニトログリセリン軟膏は、他の一酸化窒素放出性軟膏よりも、ＥＧＦＲ阻害剤による発疹の抑制に効果的であることが明らかである。
【０２６２】
実施例１５４〜１５６  ラット動物モデルにおける低分子ＥＧＦＲ阻害剤による手足症候群の発生を防止するための実験の検証
【０２６３】
８週齢の雌ＳＤラットに表１４に示す低分子ＥＧＦＲ阻害剤を別々に毎日経口投与し、数日後にラットの前足に手足症候群の症状を発現させたラット動物モデルを構築した。ラットは、ヒトと同様に、指示されたＥＧＦＲ阻害剤を投与した後、非常に類似した手足症候群の症状を発現する。このように、ラットは、手足症候群などのＥＧＦＲ阻害剤による副作用を模倣するための優れた動物モデルである。
【０２６４】
前記ラット（約２００ｇ）を１週間飼育して馴化させた後、１０匹ずつのグループに分けて投与試験を行った。ＥＧＦＲ阻害剤の各種小分子をヒマシ油：エタノール＝１：１の混合液に溶解し、ＥＧＦＲ阻害剤薬液を所望の濃度（ＰＢＳ溶液で約３倍に希釈）になるようにＰＢＳで固定してから吐出させ、各吐出させた量が２ｍＬを超えないようにして、表１４に示すような投与量を投与した。投与後、ラットの左足（前足パッドと前足の隙間）に一酸化窒素放出剤（約０．０５ｇ）を塗布し、右足は薬剤塗布しないままにした。ＥＧＦＲ阻害剤の投与頻度は、一酸化窒素放出剤を１日１回のみ投与した以外は、表１４に示した通りであった。塗布１０〜２０日後、手足症候群の効果的な抑制が認められたラットの数をカウントした（塗布側の手足症候群が正常又は著しく軽度のラットの数を、非塗布側の手足症候群の効果的な抑制が認められたラットの数としてカウントした）。
【０２６５】
表１４は、ＥＧＦＲ阻害剤と一酸化窒素放出剤軟膏の実験における組み合わせと、それに対応する実験結果を示す（ここで、制御率欄の値＝手足症候群を効果的に阻害する各群のラットの数／手足症候群モデルを有する各群のラットの数×１００％、各群の手足症候群モデルの完成率は７０〜９０％、すなわち、１０匹中約７〜９匹のラットが手足症候群モデルを有しており、異なる薬剤群のラットは手足症候群モデルを実現する過程で個体差死又はモデル未完成を呈している）。
【０２６６】
表１４：実施例１５４〜１５６の実験条件と結果
【表１４】
2021506958.tif 000023
【０２６７】
表１４の結果から、本発明の一酸化窒素放出剤は、ＥＧＦＲ阻害剤による手足症候群の予防に有効であることがわかる。
【０２６８】
実施例１５７−１５９  ラット動物モデルにおける手足症候群を誘発する低分子ＥＧＦＲ阻害剤の治療の検証
【０２６９】
ＥＧＦＲ阻害剤をヒマシ油：エタノール＝１：１の混合液に溶解し、ＰＢＳで所望の濃度（ＰＢＳ溶液で約３倍に希釈したもの）に調整してから経口投与した。ＥＧＦＲ阻害剤を手足症候群が出現するまで毎日継続的に投与し、その時点で治療実験を開始した。投与後、一酸化窒素放出剤軟膏（０．０５ｇ）をラットの左足（前足の手のひら、前足の隙間）に塗布し、右足を非塗布対照とした。ＥＧＦＲ阻害剤の投与頻度は表１５の通りであったが、一酸化窒素放出剤の投与は１日１回のみであった。塗布５〜８日後、ＨＦＭＤを効果的に処置できたラットの数をカウントした（非被覆側足よりも正常な、又は著しく軽い被覆側足を有するラットの数を、ＨＦＭＤを効果的に処置できたラットの数としてカウントした）。
【０２７０】
表１５は、各種低分子ＥＧＦＲ阻害剤と一酸化窒素放出剤クリームとの動物実験における組み合わせと、それに対応する実験結果を示すものである（ここで、寛解率欄の値＝各群の手足症候群を効果的に治療したラットの数／各群の手足症候群を有するラットの数×１００％、各群の手足症候群モデルの完成率が６０〜９０％、すなわち、１０匹中６〜９匹程度のラットが手足症候群モデルを有していること、手足症候群モデルを実現する過程で異なる薬剤群のラットが存在すること、個々のラットの死亡やモデルの不成立があること、等である）。
【０２７１】
表１５：実施例１５７〜１５９の実験条件と結果
【表１５】
2021506958.tif 000024
【０２７２】
表１５の結果から、本発明の一酸化窒素放出剤は、ＥＧＦＲ阻害剤に起因する手足症候群の治療に有効であることがわかる。
【０２７３】
実施例１６０  ＥＧＦＲ阻害剤の治療効果に及ぼす一酸化窒素放出剤の効果
【０２７４】
ＢＡＬＢ／Ｃヌードマウスモデル（肺癌細胞Ａ５４９移植腫瘍）を作製し、モデルが安定化した後、モデルマウスをブランク群（５匹）とそれ以外の群（各群１０匹）を除く４群に分けて（４群の平均腫瘍サイズは可能な限り一致していた）、経口投与実験及び薬物散布実験を行った。
【０２７５】
ＥＧＦＲ阻害剤をヒマシ油：エタノール＝１：１（ｖ／ｖ）の混合液に溶解し、ＰＢＳで所望の濃度に固定してから経口投与した（ＰＢＳ溶液で約３倍希釈）、経口投与量は０．２ｍＬを超えないようにし、徐々に増量する。ブランク群を除き、他の３群の腫瘍担持ラットにアファチニブを経口投与し、腫瘍を制御又は縮小させた。同時に、ＥＧＦＲ阻害による上皮組織疾患の予防又は治療のための薬剤を、以下のように経皮投与によりマウスの背部に塗布した：
【０２７６】
Ａ  ブランク群：５匹の腫瘍担持ラット、投与又は薬剤塗布なし；Ｂ  ブランクマトリックス群：腫瘍担持ラット１０匹、アファチニブ経口投与（第１週目１０ｍｇ／ｋｇ、第２週目１５ｍｇ／ｋｇ、第３週目２０ｍｇ／ｋｇ）、背中にブランク軟膏（２１日１回塗布）；Ｃ  ０．１％ニトログリセリン群：腫瘍保有ラット１０匹、０．１％ニトログリセリン軟膏中のアファチニブを経口投与（Ｂ群と同様の方法と頻度）；Ｄ  ０．２％ニトログリセリン群：腫瘍保有ラット１０匹、０．２％ニトログリセリン軟膏中のアファチニブを経口投与（Ｂ群と同様の方法と頻度）；約５．８ｃｍ２の領域をマーカーでマーキングし、適用する領域は、マウスの口からアクセス可能な領域、又は腫瘍のすぐ隣の領域ではないことが望ましい。Ｂ群、Ｃ群、Ｄ群では、１日の経管栄養終了時に、モデルマウスの背部に印を付けた部位に対応する軟膏を綿棒で塗布し、皮膚を湿らせるように均一に広げ、塗布後は、背部に塗布した薬剤が皮膚から吸収されるように、各マウスを比較的独立した空間で４時間静置した。４時間後、マウスの背中に残った軟膏をペーパータオルや水で湿らせたペーパータオルで優しく拭き取った。の後、マウスは、通常の活動のために、以前に収容されていたケージに戻された。腫瘍の大きさを測定し、２日ごとに記録した。２１日間の実験の終わりに、ラットを解剖し、腫瘍を除去し、体重を測定し、記録し、腫瘍体積の変化を異なる実験群で観察した。
【０２７７】
Ｂ群、Ｃ群、Ｄ群（アファチニブ投与群）の腫瘍体積は、Ａ群（アファチニブ非投与群）よりも有意に小さかった；ニトログリセリン軟膏を塗布した群（Ｃ群、Ｄ群）の腫瘍体積は、ブランク軟膏を塗布した群（Ｂ群）の腫瘍体積に近いか、あるいはわずかに小さかった。このように、一酸化窒素放出剤経皮吸収型軟膏は、ＥＧＦＲ阻害剤の腫瘍に対する治療効果に影響を与えなかった。
【０２７８】
出版物、特許出願、特許を含む、本明細書で引用されたすべての参考文献は、参照により本明細書に組み込まれ、各参考文献は、それが参照により個別にかつ具体的に特定されたものであるかのように、また、それが本明細書に完全に記載されたものであるかのように、同じ範囲で本明細書に組み込まれている。
【０２７９】
本出願に記載された文脈（特に、後続の特許請求の範囲の文脈）において、「１つ（ａ）及び（ａｎ）」、「前記（ｔｈｅ）」及び「少なくとも１つ」という用語の使用及び同様の表示は、本明細書に別段の記載がない限り、又は文脈と明らかに矛盾しない限り、単数形及び複数形を含むものとして理解される。本明細書に別段の指示がない限り、又は文脈と明らかに矛盾しない限り、「少なくとも１つ」という用語の後に１つ以上の項目の列挙（例えば、「少なくとも１つのＡ及びＢ」）が続く場合、列挙項目（Ａ又はＢ）からの選択、又は２つ以上の列挙項目（Ａ及びＢ）の任意の組み合わせを意味するものと理解されるべきである。別段の記載がない限り、「含む」、「持っている」、「含む」、及び「含む」という用語は、オープンエンドの用語として理解されるべきである（すなわち、「含むが、これに限定されない」という意味である）。本明細書に別段の記載がない限り、値の範囲の記述は、その範囲内に含まれる個々の値の省略されたリストとしてのみ意図されており、個々の値は、それが本明細書に個別にリストアップされている場合と同様の方法で本明細書に組み込まれている。本明細書に記載されているすべての方法は、本明細書に記載されているか、又は文脈によって明確に矛盾しない限り、任意の適切な順序で実行され得る。特許請求の範囲に別段の要求がない限り、本明細書において、あらゆる例示的又は例示的な言語（例えば、「例示のための」）を使用することは、本出願をより明確にすることのみを意図しており、本出願の範囲を限定することを意図していない。明細書のいかなる文言も、特許請求の範囲に保護を主張していない要素が本出願を遂行するために必要であることを示すように解釈されるべきではない。
【０２８０】
本出願の実施例は、本発明者に知られている本出願を実施するための最良の方法を含む、本明細書に記載されている。 前述の明細書を読むことに基づいて、それらの実施形態の変種は、当技術分野の通常の熟練者には明らかであろう。本発明者は、熟練した当業者が必要に応じてそのような変種を適用することができると予想しており、本発明者は、本明細書に具体的に記載されている以外の方法で本出願を実施することを意図している。したがって、本出願は、適用法により許容されるように、本出願に添付された特許請求の範囲に記載された主題のすべての改変及び同等物を含む。更に、本明細書に別段の記載がない限り、又は文脈によって明確に矛盾しない限り、本出願は、上述した要素のすべての可能な変種の任意の組み合わせを含む。
【図１−１】
2021506958.tif 000025
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2021506958.tif 000031
【図８】
2021506958.tif 000032
【図９】
2021506958.tif 000033
【図１０】
2021506958.tif 000034
【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
2021506958.tif 000038
【図１５】
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【図１６】
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【国際調査報告】
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