(57)【要約】  本開示は、生物活性分子コンジュゲート、その調製方法及び使用に関し、特に、ＡＤＣ又はＳＭＤＣにおいて薬物及びターゲティング部分のカップリングを改善することによって得られる新規の生物活性分子コンジュゲート、さらにはその調製方法及び異常な細胞活性に関連する疾患を処置するための医薬品の製造におけるその使用に関する。【選択図】  図１
2021506743.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）に示される化合物又はその薬学的に許容される塩。
Ｔ−［Ｌ１−（Ｌ２）ｍ１−（Ｌ３）ｍ２−（Ｌ４）ｍ３−Ｅ］−Ｇ    式（Ｉ）
［式中、
Ｔは生物活性分子の断片、好ましくは抗腫瘍生物活性を有する分子の断片であり；
Ｌ１は、アミノ酸、２〜１０個のアミノ酸から構成されるペプチド、オリゴ糖、−（ＣＨ２）ｔ１−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｔ１−（ＣＨ２）ｔ２−、
【化１】
2021506743.tif 000233
から選択され；
Ｒ、Ｒ’、Ｒ１及びＲ２のそれぞれは独立に、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、ハロゲン、カルボン酸基、スルホン酸基、シアノ、Ｃ１〜６アルキル、ハロゲン化Ｃ１〜６アルキル、シアノで置換されているＣ１〜６アルキル（例えば−ＣＨ２ＣＮ）、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ２〜１０アルケニル、Ｃ２〜１０アルキニル、Ｃ３〜６シクロアルキル、６〜１０員アリール又は５〜１２員ヘテロアリールであり、各Ｚ１は独立に、アミノ酸又は２〜１０個のアミノ酸から構成されるペプチドであり、ｔ１及びｔ２のそれぞれは独立に０、１、２、３、４、５又は６であり、ｘ１及びｘ２のそれぞれは独立に０、１、２、３、４、５又は６であり、各ｘ３は独立に０、１、２、３又は４であり、Ｌ１はＬ１の１位でＴに結合しており；
Ｌ２は、アミノ酸、２〜１０個のアミノ酸から構成されるペプチド、オリゴ糖、−（ＣＨ２）ｔ１−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｔ１−（ＣＨ２）ｔ２−、
【化２】
2021506743.tif 000234
から選択され；Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６のそれぞれは、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、ハロゲン、カルボン酸基、スルホン酸基、ＣＮ、Ｃ１〜６アルキル、ハロゲン化Ｃ１〜６アルキル、シアノで置換されているＣ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ２〜１０アルケニル、Ｃ２〜１０アルキニル又はＣ３〜６シクロアルキルから独立に選択されるか、又はＲ３／Ｒ４、Ｒ５／Ｒ６又はＲ３／Ｒ５は、それに結合している炭素原子と一緒に３〜８員環を形成しており、ｔ１及びｔ２のそれぞれは独立に０、１、２、３、４、５又は６であり、ｙ１及びｙ２のそれぞれは独立に０、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０であり、Ｌ２はＬ２の１位でＬ１に結合しており；
Ｌ３は、１個又は複数のＲ７で置換されていてもよい次の基：アミノ、３〜８員シクロアルキレン、３〜８員脂肪族ヘテロシクリレン、６〜１２員架橋ヘテロシクリレン、６〜１２員スピロヘテロシクリレン、６〜１２員縮合ヘテロシクリレン、６〜１０員アリーレン、５〜１２員ヘテロアリーレン又は３〜８員シクロアルキレン−Ｗ−から選択され；Ｗは酸素又はＮＲ８であり、Ｒ７は、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、ハロゲン、＝Ｏ、ＣＮ、カルボキシル、スルホン酸基、Ｃ１〜６アルキル、ハロゲン化Ｃ１〜６アルキル、シアノで置換されているＣ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ２〜１０アルケニル又はＣ２〜１０アルキニルから独立に選択され、Ｒ８は、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ又はシアノＣ１〜２アルキルから独立に選択され、Ｌ３はＬ３の１位でＬ２に結合しており；
Ｌ４は
【化３】
2021506743.tif 000235
から選択され、Ｚ５は、好ましくは、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、アミド基、スルフリル、スルフィニル、６〜１０員アリーレン又は５〜６員ヘテロアリーレンから選択され；Ｚ２は、Ｃ１〜６アルキレン、Ｃ２〜１０アルケニレン、Ｃ２〜１０アルキニレン、Ｃ３〜８シクロアルキレン、６〜１０員アリーレン又は５〜１４員ヘテロアリーレンから選択され；Ｒ９はＨ（水素）又はＣ１〜６アルキルから選択され；Ｚ３は存在しないか、又はＣ１〜６アルキレン、ハロゲン化Ｃ１〜６アルキレン、又はアルコキシで置換されているＣ１〜６アルキレンから選択されるか；又はＲ９及びＺ３は、それに結合している窒素原子と一緒に４〜８員ヘテロシクリルを形成しており；αは独立に０、１、２、３，４、５又は６であり；Ｌ４はＬ４の２位でＥに結合しており；
Ｅは、１個又は複数のＲ１２で置換されていてもよい次の基：ピリミジレン、キノリレン又はピロロ［２，３−ｄ］ピリミジレンから選択され；Ｒ１２は、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、ハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ１〜６アルキル又はハロゲン化Ｃ１〜６アルキルから独立に選択され；
Ｇは求核性置換のための脱離基であり；
ｍ１、ｍ２及びｍ３のそれぞれは独立に０、１、２、３、４，５、６、７、８、９又は１０である。］
【請求項２】
Ｌ１が、Ｖａｌ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ａｓｎ、２〜５個のアミノ酸から構成されるペプチド、
【化４】
2021506743.tif 000236
から選択され；Ｒ、Ｒ’、Ｒ１及びＲ２のそれぞれが独立に、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜１０アルケニル、Ｃ２〜１０アルキニル又はＣ３〜６シクロアルキルであり、Ｚ１が、Ｖａｌ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ｖａｌ、Ｃｉｔ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｌｙｓ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ａｃ）、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ａｃ）、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ又はＡｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎであり、ｘ１が０、１、２又は３であり、ｘ３が０、１、２、３又は４である、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項３】
Ｌ１が、Ｖａｌ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ｃｉｔ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｌｙｓ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ａｃ）、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ａｃ）、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ、
【化５】
2021506743.tif 000237
から選択され；Ｒ、Ｒ’及びＲ１のそれぞれが独立に、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜１０アルケニル、Ｃ２〜１０アルキニル又はＣ３〜６シクロアルキルであり、Ｚ１が、Ｖａｌ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ｖａｌ、Ｃｉｔ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｌｙｓ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ａｃ）、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ａｃ）、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ又はＡｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎであり、ｘ１及びｘ３のそれぞれが独立に０、１、２又は３である、請求項１又は２に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項４】
Ｌ１が、Ｌｙｓ、Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｌｙｓ−Ｖａｌ、
【化６】
2021506743.tif 000238
から選択され；Ｒ、Ｒ’及びＲ１のそれぞれが独立に、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）又はＣ１〜４アルキルであり、Ｚ１が、Ｃｉｔ、Ｌｙｓ、Ｃｉｔ−Ｖａｌ、Ｃｉｔ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ａｌａ又はＬｙｓ−Ｖａｌであり、ｘ１及びｘ３のそれぞれが独立に０、１又は２である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項５】
Ｌ１が、Ｌｙｓ、Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｌｙｓ−Ｖａｌ、
【化７】
2021506743.tif 000239
から選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項６】
Ｌ１が
【化８】
2021506743.tif 000240
から選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項７】
Ｌ２が、Ｖａｌ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ａｓｎ、２〜５個のアミノ酸から構成されるペプチド、
【化９】
2021506743.tif 000241
から選択され；Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６のそれぞれが、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、ハロゲン、カルボン酸基、スルホン酸基、ＣＦ３、ＣＮ、ＣＨ２ＣＮ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル又はＣ３〜６シクロアルキルから独立に選択され、ｙ１及びｙ２のそれぞれが独立に０、１、２、３、４、５、６、７又は８であり、Ｌ２がＬ２の１位でＬ１に結合しており；
ｍ１が０、１、２又は３である、
請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項８】
Ｌ２が、Ｖａｌ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｌｙｓ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ａｃ）、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ａｃ）、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ、
【化１０】
2021506743.tif 000242
から選択され；Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６のそれぞれが、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、ハロゲン、カルボン酸基、スルホン酸基、ＣＦ３、ＣＮ、ＣＨ２ＣＮ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル又はＣ３〜６シクロアルキルから独立に選択され、ｙ１及びｙ２のそれぞれが独立に０、１、２、３、４、５、６、７又は８であり、Ｌ２がＬ２の１位でＬ１に結合しており；
ｍ１が０、１又は２である、
請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項９】
Ｌ２が、
【化１１】
2021506743.tif 000243
から選択され；Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６のそれぞれが、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）又はＣ１〜４アルキルから独立に選択され、ｙ１及びｙ２のそれぞれが独立に０、１、２、３、４、５、６、７又は８であり、Ｌ２がＬ２の１位でＬ１に結合しており；
ｍ１が１である、
請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１０】
Ｌ２が、
【化１２】
2021506743.tif 000244
から選択される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１１】
Ｌ２が
【化１３】
2021506743.tif 000245
から選択される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１２】
Ｌ３が、１個又は複数のＲ７で置換されていてもよい次の基：アミノ、３〜８員シクロアルキレン、３〜８員脂肪族ヘテロシクリレン、６〜１２員架橋ヘテロシクリレン、６〜１２員スピロヘテロシクリレン、６〜１２員縮合ヘテロシクリレン、６〜１０員アリーレン、５〜１２員ヘテロアリーレン又は３〜８員シクロアルキレン−Ｗ−から選択され；Ｗが酸素又はＮＲ８であり、Ｒ７が、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、ハロゲン、＝Ｏ、ＣＦ３、ＣＮ、ＣＨ２ＣＮ、カルボキシル、スルホン酸基、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ２〜６アルケニル又はＣ２〜６アルキニルから独立に選択され；好ましくは、前記３〜８員脂肪族ヘテロシクリレン、６〜１２員架橋ヘテロシクリレン、６〜１２員スピロヘテロシクリレン又は６〜１２員縮合ヘテロシクリレンが１個又は複数の窒素原子を有し；好ましくは、前記３〜８員脂肪族ヘテロシクリレン、６〜１２員架橋ヘテロシクリレン、６〜１２員スピロヘテロシクリレン又は６〜１２員縮合ヘテロシクリレンが１個又は複数の第四級化窒素原子を有し；好ましくは、前記３〜８員脂肪族ヘテロシクリレン、６〜１２員架橋ヘテロシクリレン、６〜１２員スピロヘテロシクリレン又は６〜１２員縮合ヘテロシクリレンが１個又は複数の窒素原子を有し、少なくとも１個の窒素原子が＝Ｏで置換されており；Ｒ８が、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ３〜６アルキニル、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ又はシアノＣ１〜２アルキルから独立に選択され；
ｍ２が０、１、２又は３である、
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１３】
Ｌ３が、１個又は複数のＲ７で置換されていてもよい次の基：アミノ、３〜６員脂肪族ヘテロシクリレン又は５〜１０員ヘテロアリーレンから選択され；Ｒ７が、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、ハロゲン、＝Ｏ、ＣＦ３、ＣＮ、ＣＨ２ＣＮ、カルボキシル、スルホン酸基、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ２〜６アルケニル又はＣ２〜６アルキニルから独立に選択され；好ましくは、前記３〜６員脂肪族ヘテロシクリレンが１個又は複数の窒素原子を有し；好ましくは、前記３〜６員脂肪族ヘテロシクリレンが１個又は複数の第四級化窒素原子を有し；好ましくは、前記３〜６員脂肪族ヘテロシクリレンが１個又は複数の窒素原子を有し、少なくとも１個の窒素原子が＝Ｏで置換されており；
ｍ２が０、１又は２である、
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１４】
Ｌ３が、１個又は複数のＲ７で置換されていてもよい５〜６員ヘテロアリーレンから選択され；Ｒ７が、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、ハロゲン、＝Ｏ、ＣＦ３、ＣＮ、ＣＨ２ＣＮ、カルボキシル、スルホン酸基、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ２〜６アルケニル又はＣ２〜６アルキニルから独立に選択され；
ｍ２が１である、
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１５】
Ｌ３が、１個又は複数のＲ７で置換されていてもよい次の基：アミノ、Ｎ−メチルピペリジレン、ピラゾリレン又はトリアゾリレンから選択され；Ｒ７が、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、ハロゲン、＝Ｏ、ＣＦ３、ＣＮ、ＣＨ２ＣＮ、カルボキシル、スルホン酸基、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ２〜６アルケニル又はＣ２〜６アルキニルから独立に選択され；
ｍ２が０又は１である、
請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１６】
Ｌ３がトリアゾリレンから選択され；
ｍ２が０又は１である、
請求項１〜１５のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１７】
Ｌ４が、
【化１４】
2021506743.tif 000246
から選択され、Ｚ４が６〜１０員アリーレン又は５〜６員ヘテロアリーレンであり；Ｒ１０がＨ（水素）又はＣ１〜６アルキルから選択され；Ｚ２が、Ｃ１〜６アルキレン、Ｃ２〜１０アルケニレン、Ｃ２〜１０アルキニレン又はＣ３〜８シクロアルキレンから選択され；Ｒ９がＨ（水素）又はＣ１〜６アルキルから選択され；Ｚ３が存在しないか又はＣ１〜６アルキレンから選択されるか；又はＲ９及びＺ３が、それに結合している窒素原子と一緒に４〜８員ヘテロシクリレンを形成しており；αが独立に０、１、２、３、４、５又は６であり、Ｌ４がＬ４の２位でＥに結合しており；Ｌ４がＬ４の２位でＥに結合しており；
ｍ３が０、１、２又は３である、
請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１８】
Ｌ４が、
【化１５】
2021506743.tif 000247
から選択され、Ｚ４がベンゼン環であり、Ｒ１０がＨ（水素）又はＣ１〜６アルキルから選択され；Ｚ２が、Ｃ１〜６アルキレン、Ｃ２〜１０アルケニレン、Ｃ２〜１０アルキニレン又はＣ３〜８シクロアルキレンから選択され；Ｒ９がＨ（水素）又はＣ１〜６アルキルから選択され；Ｚ３が存在しないか又はＣ１〜６アルキレンから選択されるか、又はＲ９及びＺ３が、それに結合している窒素原子と一緒に４〜８員ヘテロシクリレンを形成しており；αが独立に０、１、２、３、４、５又は６であり、Ｌ４がＬ４の２位でＥに結合しており；Ｌ４がＬ４の２位でＥに結合しており；
ｍ３が０、１、２又は３である、
請求項１７に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１９】
Ｌ４が、
【化１６】
2021506743.tif 000248
から選択され、Ｚ４が５〜６員ヘテロアリーレンであり；Ｒ１０がＨ（水素）又はＣ１〜６アルキルから選択され；Ｚ２が、Ｃ１〜６アルキレン、Ｃ２〜１０アルケニレン、Ｃ２〜１０アルキニレン又はＣ３〜８シクロアルキレンから選択され；Ｒ９がＨ（水素）又はＣ１〜６アルキルから選択され；Ｚ３が存在しないか又はＣ１〜６アルキレンから選択されるか；又はＲ９及びＺ３が、それに結合している窒素原子と一緒に４〜８員ヘテロシクリレンを形成しており；αが独立に０、１、２、３，４、５又は６であり；Ｌ４がＬ４の２位でＥに結合しており；
ｍ３が０、１、２又は３である、
請求項１〜１８のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項２０】
Ｌ４が、
【化１７】
2021506743.tif 000249
から選択され；ｍ３が１である、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項２１】
Ｌ４が、
【化１８】
2021506743.tif 000250
から選択され；ｍ３が１である、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項２２】
Ｌ４が
【化１９】
2021506743.tif 000251
から選択され；ｍ３が１である、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項２３】
Ｅが、１個又は複数のＲ１２で置換されていてもよいピリミジレンから選択され；Ｒ１２がＨ（水素）又はＤ（ジュウテリウム）から独立に選択される、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項２４】
Ｇが、ハロゲン、ＯＭｓ、ＯＴｓ、ＯＴｆ、ニトロ又は１個若しくは複数のＲ１３で置換されていてもよい次の基：アルキルチオ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、アルキルスルフィニル、アリールスルフィニル、ヘテロアリールスルフィニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル又はヘテロアリールスルホニルから選択され；Ｒ１３が、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、ハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ１〜６アルキル、ハロゲン化Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、６〜１０員アリール又は５〜１２員ヘテロアリールから独立に選択される、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項２５】
Ｇが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＭｓ、ＯＴｓ、ＯＴｆ、メチルスルホニル、エチルスルホニル、ｐ−トルエンスルホニル又はナフタレンスルホニルから選択される、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項２６】
Ｇが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＯＭｓ、ＯＴｓ、メチルスルホニル又はｐ−トルエンスルホニルから選択される、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項２７】
ＧがＣｌ又はメチルスルホニルから選択される、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項２８】
【化２０】
2021506743.tif 000252
において、Ｇが好ましくはメチルスルホニルであり、Ｅが好ましくはピリミジレンであり、ｍ３が１である、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項２９】
【化２１】
2021506743.tif 000253
が
【化２２】
2021506743.tif 000254
であり、ｍ４が好ましくは０〜６の整数であり、メチルスルホニルが、ピリミジン環中の窒素原子に隣接する炭素原子上の置換基である、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項３０】
【化２３】
2021506743.tif 000255
が
【化２４】
2021506743.tif 000256
であり、ｍ５が好ましくは０〜６の整数であり、メチルスルホニルが、ピリミジン環中の窒素原子に隣接する炭素原子上の置換基である、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項３１】
【化２５】
2021506743.tif 000257
が
【化２６】
2021506743.tif 000258
であり、ｍ６が好ましくは０〜６の整数であり、メチルスルホニルが、ピリミジン環中の窒素原子に隣接する炭素原子上の置換基である、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項３２】
【化２７】
2021506743.tif 000259
が
【化２８】
2021506743.tif 000260
であり、ｍ７が１〜５の整数であり、メチルスルホニルが、ピリミジン環中の窒素原子に隣接する炭素原子上の置換基である、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項３３】
【化２９】
2021506743.tif 000261
が
【化３０】
2021506743.tif 000262
であり、ｍ８が１〜５の整数であり、メチルスルホニルが、ピリミジン環中の窒素原子に隣接する炭素原子上の置換基である、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項３４】
【化３１】
2021506743.tif 000263
が
【化３２】
2021506743.tif 000264
であり、ｍ９が１〜５の整数であり、Ｒ１３が水素又はＣ１〜６アルキルから選択され、メチルスルホニルが、ピリミジン環中の窒素原子に隣接する炭素原子上の置換基である、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項３５】
【化３３】
2021506743.tif 000265
が
【化３４】
2021506743.tif 000266
であり、ｍ１０が０〜６の整数であり、Ｚ４が５〜６員ヘテロアリーレンから選択され；メチルスルホニルが、ピリミジン環中の窒素原子に隣接する炭素原子上の置換基である、請求項１〜３４のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項３６】
【化３５】
2021506743.tif 000267
が
【化３６】
2021506743.tif 000268
であり、Ｚ４が、ピリジレン、ピリミジレン、ピラゾリレン、チアゾリレン、オキサゾリレン又はトリアゾリレンから選択され；メチルスルホニルが、ピリミジン環中の窒素原子に隣接する炭素原子上の置換基である、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項３７】
【化３７】
2021506743.tif 000269
が
【化３８】
2021506743.tif 000270
であり、Ｚ４がオキサゾリレン又はチアゾリレンから選択され、メチルスルホニルが、ピリミジン環中の窒素原子に隣接する炭素原子上の置換基である、請求項１〜３６のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項３８】
【化３９】
2021506743.tif 000271
が
【化４０】
2021506743.tif 000272
である、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項３９】
−［Ｌ１−（Ｌ２）ｍ１−（Ｌ３）ｍ２−（Ｌ４）ｍ３−Ｅ］−Ｇが、次の断片：
【化４１−１】
2021506743.tif 000273
【化４１−２】
2021506743.tif 000274
【化４１−３】
2021506743.tif 000275
【化４１−４】
2021506743.tif 000276
から選択される、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項４０】
Ｔが生物活性分子の断片であり、前記生物活性分子が、白金金属錯体（例えばオキサリプラチン）又は金金属錯体などの金属錯体；ブレオマイシン又はピンヤンマイシンなどのグリコペプチド抗生物質；トポイソメラーゼＩ阻害薬（例えば、カンプトテシン、ヒドロキシカンプトテシン、９−アミノカンプトテシン、ＳＮ−３８、イリノテカン、トポテカン、ベロテンシアン又はルビテカン）又はトポイソメラーゼＩＩ阻害薬（例えば、アクチノマイシンＤ、アドリアマイシン、ドキソルビシン、デュオカルマイシン、ダウノルビシン、ミトキサントロン、ポドフィロトキシン又はエトポシド）などのＤＮＡトポイソメラーゼ阻害薬；メトトレキサート、５−フルオロウラシル、シタラビン、ゲムシタビン、メルカプトプリン、ペントスタチン、フルダラビン、クラドリビン又はナラビンなどのＤＮＡ合成に干渉する薬物；チューブリン阻害薬、ビンブラスチンアルカロイド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、パクリタキセル、ドセタキセル又はカバジタキセルなどの構造タンパク質に作用する薬物；セリン／トレオニンキナーゼ阻害薬、チロシンキナーゼ阻害薬、アスパルトキナーゼ阻害薬又はヒスチジンキナーゼ阻害薬などの腫瘍細胞シグナル伝達経路阻害薬；プロテアソーム阻害薬；ヒストンデアセイラーゼ阻害薬；腫瘍血管新生阻害薬；サイクリン阻害薬；メイタンシン誘導体；カリケアマイシン誘導体；オーリスタチン誘導体；ピロロベンゾジアゼピン二量体（ＰＢＤ）誘導体；メルファラン；マイトマイシンＣ；クロラムブシル；又は腫瘍細胞の増殖を阻害する、腫瘍細胞のアポトーシス又は壊死を促進する他の活性物質から選択される、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項４１】
前記生物活性分子が、
【化４２】
2021506743.tif 000277
［式中、Ｒ１４は、Ｒ１５で置換されているアシル又はスルホニルから選択され、Ｒ１５は、Ｃ１〜６アルキル、ハロゲン化Ｃ１〜６アルキル、６〜１０員アリール又は５〜１２員ヘテロアリールから選択され；Ｒ１６は、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、Ｃ１〜６アルキル、又はＲ１７で置換されているＣ１〜６アルキルから選択され、Ｒ１７は、これらに限定されないが、フェニル及びピリジルを含むアリール又はヘテロアリールから選択され、ｍ１１は０、１又は２である。］
から選択される、請求項１〜４０のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項４２】
前記生物活性分子が、
【化４３】
2021506743.tif 000278
［式中、Ｒ１４は、Ｒ１５で置換されているアシル又はスルホニルから選択され、Ｒ１５は、Ｃ１〜６アルキル、ハロゲン化Ｃ１〜６アルキル、６〜１０員アリール又は５〜１２員ヘテロアリールから選択され；Ｒ１６は、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、Ｃ１〜６アルキル、Ｒ１７で置換されているＣ１〜６アルキルから選択され、Ｒ１７はアリール又はヘテロアリールから選択され、ｍ１１は０、１、又は２である。］
から選択される、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項４３】
前記生物活性分子が、
【化４４】
2021506743.tif 000279
から選択される、請求項１〜４２のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項４４】
前記生物活性分子が、
【化４５】
2021506743.tif 000280
から選択される、請求項１〜４３のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項４５】
前記生物活性分子が、
【化４６】
2021506743.tif 000281
から選択される、請求項１〜４４のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項４６】
前記生物活性分子が、
【化４７】
2021506743.tif 000282
から選択される、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項４７】
前記生物活性分子が
【化４８】
2021506743.tif 000283
から選択される、請求項１〜４６のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項４８】
Ｔが、
【化４９−１】
2021506743.tif 000284
【化４９−２】
2021506743.tif 000285
【化４９−３】
2021506743.tif 000286
から選択される、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項４９】
Ｔが、
【化５０−１】
2021506743.tif 000287
【化５０−２】
2021506743.tif 000288
から選択される、請求項１〜４８のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項５０】
Ｔが、
【化５１】
2021506743.tif 000289
から選択される、請求項１〜４９のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項５１】
Ｔが、
【化５２】
2021506743.tif 000290
から選択される、請求項１〜５０のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項５２】
Ｔが
【化５３】
2021506743.tif 000291
から選択される、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項５３】
前記化合物が、
【化５４−１】
2021506743.tif 000292
【化５４−２】
2021506743.tif 000293
【化５４−３】
2021506743.tif 000294
【化５４−４】
2021506743.tif 000295
【化５４−５】
2021506743.tif 000296
【化５４−６】
2021506743.tif 000297
【化５４−７】
2021506743.tif 000298
【化５４−８】
2021506743.tif 000299
【化５４−９】
2021506743.tif 000300
【化５４−１０】
2021506743.tif 000301
から選択される、請求項１〜５２のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項５４】
前記化合物が、
【化５５−１】
2021506743.tif 000302
【化５５−２】
2021506743.tif 000303
【化５５−３】
2021506743.tif 000304
【化５５−４】
2021506743.tif 000305
【化５５−５】
2021506743.tif 000306
【化５５−６】
2021506743.tif 000307
【化５５−７】
2021506743.tif 000308
【化５５−８】
2021506743.tif 000309
から選択される、請求項１〜５３のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項５５】
生物活性分子、リンカー及びターゲティング部分を含み、前記ターゲティング部分が、活性基（例えばチオール基）を介して前記リンカーに連結されてコンジュゲートを形成している、コンジュゲート。
【請求項５６】
下記式（ＩＩ）に示される構造を有する、請求項５５に記載のコンジュゲート。
｛Ｔ−［Ｌ１−（Ｌ２）ｍ１−（Ｌ３）ｍ２−（Ｌ４）ｍ３−Ｅ］｝γ−Ａ    式（ＩＩ）
［式中、
Ａはターゲティング部分（例えば、小分子リガンド、タンパク質、ポリペプチド又は非タンパク質試薬（例えば、糖、ＲＮＡ又はＤＮＡ））であり；γは１〜１０の整数又は小数であり；好ましくは、γは５〜８（例えば、５、６、７又は８）の整数又は小数であり；
残りの基は請求項１〜５４のいずれか一項に記載されている通りである。］
【請求項５７】
Ａの標的が、上皮成長因子、Ｔｒｏｐ−２、ＣＤ３７、ＨＥＲ２、ＣＤ７０、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、Ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ、Ｆｏｌａｔｅ  ｅｃｅｏｐｔｏｒ１、Ｍｕｃｉｎ  １、ＣＤ１３８、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ３０、ＳＬＴＲＫ６、Ｎｅｃｔｉｎ  ４、Ｔｉｓｓｕｅ  ｆａｃｔｏｒ、Ｍｕｃｉｎ１６、Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎｒｅｃｅｏｐｔｏｒ、ＳＴＥＡＰ１、ＳＬＣ３９Ａ６、Ｇｕａｎｙｌｙｌｃｙｃｌａｓｅ  Ｃ、ＰＳＭＡ、ＣＣＤ７９ｂ、ＣＤ２２、Ｓｏｄｉｕｍ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｃｏｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ  ２Ｂ、ＧＰＮＭＢ、Ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ、ＡＧＳ−１６、ＥＧＦＲ、ＣＤ３３、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７４、ＣＤ５６、ＰＤ−Ｌ１、ＴＡＣＳＴＤ２、ＤＲ５、Ｅ１６、ＳＴＥＡＰ１、０７７２Ｐ、ＭＰＦ、Ｎａｐｉ３ｂ、Ｓｅｍａ  ５ｂ、ＰＳＣＡ  ｈｌｇ、ＥＴＢＲ、ＭＳＧ７８３、ＳＴＥＡＰ２、ＴｒｐＭ４、ＣＲＩＰＴＯ、ＣＤ２１、ＣＤ７９ｂ、ＦｃＲＨ２、ＮＣＡ、ＭＤＰ、ＩＬ２０Ｒα、Ｂｒｅｖｉｃａｎ、ＥｐｈＢ２Ｒ、ＡＳＬＧ６５９、ＰＳＣＡ、ＧＥＤＡ、ＢＡＦＦ−Ｒ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＸＣＲ５、ＨＬＡ−ＤＯＢ、Ｐ２Ｘ５、ＣＤ７２、ＬＹ６４、ＦｃＲＨ１、ＩＲＴＡ２、ＴＥＮＢ２、ｉｎｔｅｇｒｉｎ  α５β６、α４β７、ＦＧＦ２、ＦＧＦＲ２、Ｈｅｒ３、ＣＤ７０、ＣＡ６、ＤＬＬ３、ＤＬＬ４、Ｐ−ｃａｄｈｅｒｉｎ、ＥｐＣＡＭ、ｐＣＡＤ、ＣＤ２２３、ＬＹＰＤ３、ＬＹ６Ｅ、ＥＦＮＡ４、ＲＯＲ１、ＳＬＩＴＲＫ６、５Ｔ４、ＥＮＰＰ３、ＳＬＣ３９Ａ６、Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２、ＢＭＰＲ１Ｂ、Ｅ１６、ＳＴＥＡＰ１、Ｔｙｒｏ７、０７７２Ｐ、ＭＰＦ、Ｎａｐｉ３ｂ、Ｓｅｍａ  ５ｂ、ＰＳＣＡ  ｈｌｇ、ＥＴＢＲ、ＭＳＧ７８３、ＳＴＥＡＰ２、ＴｒｐＭ４、ＣＲＩＰＴＯ、ＣＤ２１、ＣＤ７９ｂ、ＦｃＲＨ２、ＮＣＡ、ＭＤＰ、ＩＬ２０Ｒα、Ｂｒｅｖｉｃａｎ、ＥｐｈＢ２Ｒ、ＡＳＬＧ６５９、ＰＳＣＡ、ＧＥＤＡ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＸＣＲ５、ＨＬＡ−ＤＯＢ、Ｐ２Ｘ５、ＣＤ７２、ＬＹ６４、ＦｃＲＨ１、ＩＲＴＡ２、ｃ−Ｍｅｔ、ＡｐｏＥ、ＣＤ１  ｌｃ、ＣＤ４０、ＣＤ４５（ＰＴＰＲＣ）、ＣＤ４９Ｄ（ＩＴＧＡ４）、ＣＤ８０、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＴＳＤ、ＧＺＭＢ、Ｌｙ８６、ＭＳ４Ａ７、ＰＩＫ３ＡＰ１、ＰＩＫ３ＣＤ、ＣＣＲ５、ＩＦＮＧ、ＩＬ１０ＲＡ１、ＩＬ−６、ＡＣＴＡ２、ＣＯＬ７Ａ１、ＬＯＸ、ＬＲＲＣ１５、ＭＣＰＴ８、ＭＭＰ１０、ＮＯＧ、ＳＥＲＰＩＮＥｌ、ＳＴＡＴ１、ＴＧＦＢＲ１、ＣＴＳＳ、ＰＧＦ、ＶＥＧＦＡ、Ｃ１ＱＡ、Ｃ１ＱＢ、ＡＮＧＰＴＬ４、ＥＧＬＮ、ＡＮＧＰＴＬ４、ＥＧＬＮ３、ＢＮＩＰ３、ＡＩＦ１、ＣＣＬ５、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＩＦＩ６、ＰＬＯＤ２、ＫＩＳＳ１Ｒ、ＳＴＣ２、ＤＤＩＴ４、ＰＦＫＦＢ３、ＰＧＫ１、ＰＤＫ１、ＡＫＲ１Ｃ１、ＡＫＲ１Ｃ２、ＣＡＤＭ１、ＣＤＨ１１、ＣＯＬ６Ａ３、ＣＴＧＦ、ＨＭＯＸ１、ＫＲＴ３３Ａ、ＬＵＭ、ＷＮＴ５Ａ、ＩＧＦＢＰ３、ＭＭＰ１４、ＣＤＣＰ１、ＰＤＧＦＲＡ、ＴＣＦ４、ＴＧＦ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ２、ＣＤ１  ｌｂ、ＡＤＧＲＥ１、ＥＭＲ２、ＴＮＦＲＳＦ２１、ＵＰＫ１Ｂ、ＴＮＦＳＦ９、ＭＭＰ１６、ＭＦＩ２、ＩＧＦ−１Ｒ、ＲＮＦ４３、ＮａＰｉ２ｂ、Ｂ���ＭＡ又はＴＥＮＢ２から選択される、請求項５５又は５６に記載のコンジュゲート。
【請求項５８】
Ａが、葉酸誘導体、グルタミン酸尿素誘導体、ソマトスタチン誘導体、アリールスルホンアミド誘導体（例えば炭酸脱水酵素ＩＸ阻害薬）、２つの脂肪族インドールを接続するポリエン、シアニン色素又はＩＲ−７８３若しくはその誘導体などの小分子リガンドである、請求項５５〜５７のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項５９】
Ａが、
【化５６】
2021506743.tif 000310
から選択される、請求項５５〜５８のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項６０】
Ａが、モノクローナル抗体などの抗体又はその抗原結合断片であり、前記モノクローナル抗体又はその抗原結合断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、ｄＡｂ、相補性決定断片、一本鎖抗体（例えばｓｃＦｖ）、非ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、完全ヒト化抗体、プロボディ、二重特異性抗体又は多重特異性抗体を含む、請求項５５〜５９のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項６１】
Ａが抗Ｈｅｒ２モノクローナル抗体又は抗Ｔｒｏｐ−２モノクローナル抗体であり、好ましくは、前記抗Ｔｒｏｐ−２モノクローナル抗体が、サシツズマブ、Ｍ１、Ｍ２又はＭ３の抗体から選択され；好ましくは、前記抗Ｈｅｒ２モノクローナル抗体がトラスツズマブ又はペルツズマブから選択され；
前記サシツズマブの重鎖が配列番号１９に記載のアミノ酸配列を有し；軽鎖が配列番号２０に記載のアミノ酸配列を有し；
抗体Ｍ１の重鎖可変領域が配列番号１１に記載のアミノ酸配列を有し；軽鎖可変領域が配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有し；
抗体Ｍ２の重鎖可変領域が配列番号１３に記載のアミノ酸配列を有し；軽鎖可変領域が配列番号１４に記載のアミノ酸配列を有し；
抗体Ｍ３の重鎖可変領域が配列番号１５に記載のアミノ酸配列を有し；軽鎖可変領域が配列番号１６に記載のアミノ酸配列を有し；
抗体Ｍ１、Ｍ２及びＭ３の重鎖定常領域が配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有し；軽鎖定常領域が配列番号９に記載のアミノ酸配列を有する、
請求項５５〜６０のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項６２】
Ａが抗Ｈｅｒ２モノクローナル抗体又は抗Ｔｒｏｐ−２モノクローナル抗体であり、好ましくは、前記抗Ｔｒｏｐ−２モノクローナル抗体がサシツズマブから選択され、前記抗Ｈｅｒ２モノクローナル抗体がトラスツズマブ又はペルツズマブから選択される、請求項５５〜６１のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項６３】
Ａが、細胞表面インテグリン受容体を認識するＲＧＤペプチド；ＥＧＦ、ＰＤＧＦ若しくはＶＥＧＦなどの細胞表面成長因子受容体を認識する成長因子；又は機能性細胞表面プラスミノーゲン活性化因子、ボンベシン、ブラジキニン、ソマトスタチン若しくは前立腺特異的膜抗原受容体を認識し得るペプチドから選択される、請求項５５〜６２のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項６４】
Ａが、ＣＤ４０リガンド、ＣＤ３０リガンド、ＯＸ４０リガンド、ＰＤ−１リガンド、ＥｒｂＢリガンド、Ｈｅｒ２リガンド、ＴＡＣＳＴＤ２リガンド、又はＤＲ５リガンドから選択される、請求項５５〜６３のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項６５】
【化５７−１】
2021506743.tif 000311
【化５７−２】
2021506743.tif 000312
【化５７−３】
2021506743.tif 000313
【化５７−４】
2021506743.tif 000314
【化５７−５】
2021506743.tif 000315
【化５７−６】
2021506743.tif 000316
【化５７−７】
2021506743.tif 000317
【化５７−８】
2021506743.tif 000318
【化５７−９】
2021506743.tif 000319
［式中、γは１〜１０の整数又は小数であり、ｍＡｂは抗Ｔｒｏｐ−２モノクローナル抗体又は抗Ｈｅｒ２モノクローナル抗体であり；好ましくは、前記抗Ｔｒｏｐ−２モノクローナル抗体は、サシツズマブ、Ｍ１、Ｍ２又はＭ３から選択され、前記抗Ｈｅｒ２モノクローナル抗体はトラスツズマブ又はペルツズマブから選択され；好ましくは、γは５〜８（例えば、５、６、７又は８）の整数又は小数である。］
から選択される、請求項５５〜６４のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項６６】
【化５８−１】
2021506743.tif 000320
【化５８−２】
2021506743.tif 000321
【化５８−３】
2021506743.tif 000322
【化５８−４】
2021506743.tif 000323
【化５８−５】
2021506743.tif 000324
【化５８−６】
2021506743.tif 000325
【化５８−７】
2021506743.tif 000326
［式中、γは１〜１０の整数又は小数であり、ｍＡｂは抗Ｔｒｏｐ−２モノクローナル抗体又は抗Ｈｅｒ２モノクローナル抗体であり；好ましくは、前記抗Ｔｒｏｐ−２モノクローナル抗体はサシツズマブから選択され、前記抗Ｈｅｒ２モノクローナル抗体はトラスツズマブ又はペルツズマブから選択され；好ましくは、γは５〜８（例えば、５、６、７又は８）の整数又は小数である。］
から選択される、請求項５５〜６５のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項６７】
【化５９−１】
2021506743.tif 000327
【化５９−２】
2021506743.tif 000328
【化５９−３】
2021506743.tif 000329
【化５９−４】
2021506743.tif 000330
［式中、Ａ１はサシツズマブであり、γは１〜１０の整数又は小数であり；好ましくは、γは５〜８の整数又は小数である。］
から選択される、請求項５５〜６６のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項６８】
【化６０−１】
2021506743.tif 000331
【化６０−２】
2021506743.tif 000332
［式中、Ａ１はサシツズマブであり、γは１〜１０の整数又は小数であり；好ましくは、γは、５〜８の整数又は小数、例えば６〜７、６〜７．５、６〜８、６．５〜７、６．５〜７．５、６．５〜８、７〜８又は７．５〜８の整数又は小数である。］
から選択される、請求項５５〜６７のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項６９】
【化６１】
2021506743.tif 000333
［式中、Ａ１はサシツズマブであり、γは１〜１０の整数又は小数であり；好ましくは、γは、５〜８の整数又は小数、例えば６〜７、６〜７．５、６〜８、６．５〜７、６．５〜７．５、６．５〜８、７〜８又は７．５〜８の整数又は小数である。］
から選択される、請求項５５〜６８のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項７０】
【化６２−１】
2021506743.tif 000334
【化６２−２】
2021506743.tif 000335
【化６２−３】
2021506743.tif 000336
【化６２−４】
2021506743.tif 000337
［式中、Ａ２はトラスツズマブであり、γは１〜１０の整数又は小数であり；好ましくは、γは、５〜８の整数又は小数、例えば６〜７、６〜７．５、６〜８、６．５〜７、６．５〜７．５、６．５〜８、７〜８又は７．５〜８の整数又は小数である。］
から選択される、請求項５５〜６９のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項７１】
【化６３−１】
2021506743.tif 000338
【化６３−２】
2021506743.tif 000339
［式中、Ａ２はトラスツズマブであり、γは１〜１０の整数又は小数であり；好ましくは、γは、５〜８の整数又は小数、例えば６〜７、６〜７．５、６〜８、６．５〜７、６．５〜７．５、６．５〜８、７〜８又は７．５〜８の整数又は小数である。］
から選択される、請求項５５〜７０のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項７２】
【化６４】
2021506743.tif 000340
［式中、Ａ２はトラスツズマブであり、γは１〜１０の整数又は小数であり；好ましくは、γは、５〜８の整数又は小数、例えば６〜７、６〜７．５、６〜８、６．５〜７、６．５〜７．５、６．５〜８、７〜８又は７．５〜８の整数又は小数である。］
から選択される、請求項５５〜７１のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項７３】
【化６５−１】
2021506743.tif 000341
【化６５−２】
2021506743.tif 000342
【化６５−３】
2021506743.tif 000343
【化６５−４】
2021506743.tif 000344
［式中、Ａ３はペルツズマブであり、γは１〜１０の整数又は小数であり；好ましくは、γは、５〜８の整数又は小数、例えば６〜７、６〜７．５、６〜８、６．５〜７、６．５〜７．５、６．５〜８、７〜８又は７．５〜８の整数又は小数である。］
から選択される、請求項５５〜７２のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項７４】
【化６６−１】
2021506743.tif 000345
【化６６−２】
2021506743.tif 000346
［式中、Ａ３はペルツズマブであり、γは１〜１０の整数又は小数であり；好ましくは、γは、５〜８の整数又は小数、例えば６〜７、６〜７．５、６〜８、６．５〜７、６．５〜７．５、６．５〜８、７〜８又は７．５〜８の整数又は小数である。］
から選択される、請求項５５〜７３のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項７５】
【化６７−１】
2021506743.tif 000347
【化６７−２】
2021506743.tif 000348
【化６７−３】
2021506743.tif 000349
【化６７−４】
2021506743.tif 000350
［式中、Ａ４は抗体Ｍ１であり、γは１〜１０の整数又は小数であり；好ましくは、γは、５〜８の整数又は小数、例えば６〜７、６〜７．５、６〜８、６．５〜７、６．５〜７．５、６．５〜８、７〜８又は７．５〜８の整数又は小数である。］
から選択される、請求項５５〜７４のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項７６】
【化６８】
2021506743.tif 000351
［式中、Ａ４は抗体Ｍ１であり、γは１〜１０の整数又は小数であり；好ましくは、γは、５〜８の整数又は小数、例えば６〜７、６〜７．５、６〜８、６．５〜７、６．５〜７．５、６．５〜８、７〜８又は７．５〜８の整数又は小数である。］
から選択される、請求項５５〜７５のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項７７】
【化６９−１】
2021506743.tif 000352
【化６９−２】
2021506743.tif 000353
【化６９−３】
2021506743.tif 000354
【化６９−４】
2021506743.tif 000355
［式中、Ａ５は抗体Ｍ２であり、γは１〜１０の整数又は小数であり；好ましくは、γは、５〜８の整数又は小数、例えば６〜７、６〜７．５、６〜８、６．５〜７、６．５〜７．５、６．５〜８、７〜８又は７．５〜８の整数又は小数である。］
から選択される、請求項５５〜７６のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項７８】
【化７０】
2021506743.tif 000356
［式中、Ａ５は抗体Ｍ２であり、γは１〜１０の整数又は小数であり；好ましくは、γは、５〜８の整数又は小数、例えば６〜７、６〜７．５、６〜８、６．５〜７、６．５〜７．５、６．５〜８、７〜８又は７．５〜８の整数又は小数である。］
から選択される、請求項５５〜７７のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項７９】
【化７１−１】
2021506743.tif 000357
【化７１−２】
2021506743.tif 000358
【化７１−３】
2021506743.tif 000359
【化７１−４】
2021506743.tif 000360
［式中、Ａ６は抗体Ｍ３であり、γは１〜１０の整数又は小数であり；好ましくは、γは、５〜８の整数又は小数、例えば６〜７、６〜７．５、６〜８、６．５〜７、６．５〜７．５、６．５〜８、７〜８又は７．５〜８の整数又は小数である。］
から選択される、請求項５５〜７８のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項８０】
【化７２】
2021506743.tif 000361
［式中、Ａ６は抗体Ｍ３であり、γは１〜１０の整数又は小数であり；好ましくは、γは、５〜８の整数又は小数、例えば６〜７、６〜７．５、６〜８、６．５〜７、６．５〜７．５、６．５〜８、７〜８又は７．５〜８の整数又は小数である。］
から選択される、請求項５５〜７９のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項８１】
請求項５５〜８０のいずれか一項に記載のコンジュゲートを調製するための方法であって、式（Ｉ）の化合物のリンカーを前記ターゲティング部分の活性基とカップリングするステップを含む方法。
【請求項８２】
式（Ｉ）の化合物のリンカーを前記ターゲティング部分の活性基とカップリングしてＣ−Ｓ結合を形成するステップを含む、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
前記コンジュゲートの前記ターゲティング部分が、抗Ｈｅｒ２モノクローナル抗体若しくは抗Ｔｒｏｐ−２モノクローナル抗体又はその活性断片若しくは変異体であり；好ましくは、前記抗Ｔｒｏｐ−２モノクローナル抗体が、サシツズマブ、Ｍ１、Ｍ２又はＭ３の抗体から選択され、前記抗Ｈｅｒ２モノクローナル抗体がトラスツズマブ又はペルツズマブから選択される、請求項８１又は８２に記載の方法。
【請求項８４】
前記コンジュゲートの前記ターゲティング部分が、抗Ｈｅｒ２モノクローナル抗体若しくは抗Ｔｒｏｐ−２モノクローナル抗体又はその活性断片若しくは変異体であり；好ましくは、前記抗Ｔｒｏｐ−２モノクローナル抗体がサシツズマブから選択され、前記抗Ｈｅｒ２モノクローナル抗体がトラスツズマブ又はペルツズマブから選択される、請求項８１〜８３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８５】
前記コンジュゲートの前記ターゲティング部分の式（Ｉ）の化合物に対するモル比が１：（１〜２０）であり；好ましくは、前記カップリングが水及び／又は有機溶媒中で実施され；好ましくは、前記有機溶媒が、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、Ｎ−メチルピロリドン、ニトリル（例えばアセトニトリル）、アルコール（例えば、メタノール、エタノール）又はそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項８１〜８４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８６】
カップリング生成物を精製するステップをさらに含み；好ましくは、前記カップリング生成物がクロマトグラフィーによって精製され；好ましくは、前記クロマトグラフィーが、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー又はアフィニティークロマトグラフィーの１つ又は複数を含む、請求項８１〜８５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８７】
請求項１〜５４のいずれか一項に記載の化合物若しくはその薬学的に許容される塩又は請求項５５〜８０のいずれか一項に記載のコンジュゲート、及び１種若しくは複数の医薬品添加剤を含む医薬組成物。
【請求項８８】
異常な細胞活性と関連する疾患（例えばがん）を処置するための医薬品の製造における、請求項１〜５４のいずれか一項に記載の化合物若しくはその薬学的に許容される塩又は請求項５５〜８０のいずれか一項に記載のコンジュゲート若しくは請求項８７に記載の医薬組成物の使用。
【請求項８９】
異常な細胞活性と関連する疾患（例えばがん）を処置するための、請求項１〜５４のいずれか一項に記載の化合物若しくはその薬学的に許容される塩又は請求項５５〜８０のいずれか一項に記載のコンジュゲート若しくは請求項８７に記載の医薬組成物の使用。
【請求項９０】
前記がんが、食道がん（例えば、食道腺癌、食道扁平上皮細胞癌）、脳腫瘍、肺がん（例えば、小細胞肺がん、非小細胞肺がん）、扁平上皮細胞癌、膀胱がん、胃がん、卵巣がん、腹膜がん、膵臓がん、乳がん、頭頚部がん、子宮頸がん、子宮内膜がん、結腸直腸がん、肝臓がん、腎臓がん、非ホジキンリンパ腫、中枢神経系腫瘍（例えば、神経膠腫、多形性神経膠芽腫、膠腫又は肉腫）、前立腺がん及び甲状腺がんなどの固形腫瘍又は非固形腫瘍から選択される、請求項８８又は８９に記載の使用。
【請求項９１】
異常な細胞活性と関連する疾患（例えばがん）を処置する方法であって、有効量の請求項１〜５４のいずれか一項に記載の化合物若しくはその薬学的に許容される塩又は請求項５５〜８０のいずれか一項に記載のコンジュゲート若しくは請求項８７に記載の医薬組成物を、それを必要とする個体に投与するステップを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の分野】
【０００１】
本開示は、医療技術の技術分野に属し、生物活性分子コンジュゲート、その調製方法、及びこれに限定されないが、新生物疾患の予防及び／又は処置における使用を含む、異常な細胞活性と関連する疾患の予防及び／又は処置における使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
かつては化学療法が、がんのための標準治療であったが、高い死滅効果を有する生物活性分子は、正常細胞を誤って死滅させて重篤な副作用をもたらし得る。標的治療が、標的性及び抗腫瘍活性によって、腫瘍学の分野における注目の研究トピックとなっている。２０世紀移行、生体高分子薬（例えば、治療用抗体又は抗体断片）及び標的化小分子リガンドを用いる抗腫瘍薬及び腫瘍標的治療の開発において、飛躍的進歩が成されている。しかしながら、それらの高い標的性にも関わらず、生体高分子薬は、固形腫瘍に対して限定的な治癒効果しか有せず；加えて、生物活性分子は多くの場合に、がん細胞に対する生物活性分子の高い死滅効果にも関わらず、標的性を欠き、正常細胞を図らずも損傷し、重篤な毒性及び副作用をもたらす。
【０００３】
最近の研究によって、治療用抗体を生物活性分子と連結して抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を形成し得ることが見出されている。ＡＤＣは、抗体の標的効果と生物活性分子の活性が組み合わされているため、生物活性分子は「生物学的ミサイル（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｍｉｓｓｉｌｅ）」になっている。ＡＤＣは、抗体によってガイドされて標的細胞に結合し、次いで、細胞によって内在化されて薬物を放出し、それによって関連疾患を処置する。腫瘍細胞関連標的への特異性及び標的性によって、抗体の応用価値は、処置に反映されるだけでなく、薬物標的送達のための理想的な担体ともなり、薬物の副作用を減少させる。小分子薬物コンジュゲート（ＳＭＤＣ）は、抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）と同じ原理、すなわち、化学的プロセスによって腫瘍細胞の表面上の受容体に選択的に結合し、それによって、腫瘍細胞へのエフェクター分子（生物活性分子）の標的性を改善し得るいくつかの小分子リガンドとの生物活性分子のカップリングに基づき設計される。ＳＭＤＣとＡＤＣとの相違は、ＳＭＤＣが抗体の代わりに小分子リガンドを使用すること、及び市場で入手可能なＳＭＤＣがまだ存在しないことである。
【０００４】
現在、４種の市販のＡＤＣが存在する：マイロターグ（Ｍｙｌｏｔａｒｇ）（ゲムツズマブ−オゾガマイシン）、アドセトリス（Ａｄｃｅｔｒｉｓ）（ブレンツキシマブ−ベドチン、ＣＤ３０モノクローナル抗体−ＭＭＡＥ）、カドサイラ（Ｋａｄｃｙｌａ）（トラスツズマブ−エムタンシン）及びベスポンサ（Ｂｅｓｐｏｎｓａ）（イノツズマブ−オゾガマイシン、ＣＤ２２モノクローナル抗体−カリケアマイシン）。ＡＤＣは一般に、抗体、生物活性分子及びリンカーからなる。生物活性分子は、リンカーを介して抗体に共有結合性にカップリングされており；抗体（例えば、モノクローナル抗体）は、腫瘍細胞の表面上の特異的標的を特異的に認識し得るので、したがって、ＡＤＣががん細胞の表面に到達するようにガイドし、ＡＤＣが細胞内取り込み作用によってがん細胞に侵入することを可能にし；次いで、生物活性分子ががん細胞において放出されて、正常な組織細胞を損傷することなく、がん細胞を特異的に死滅させる効果を達成する。
【０００５】
リシンは、抗体における最も一般的な連結部位であり、リシンのε−アミノ基は、リンカーの活性化カルボキシル基と反応してアミド結合を形成し得る。部位特異的カップリングのための技法は現在、利用可能であり、すなわち、リンカーのカルボキシル基が活性化され、次いで、抗体中の特異的リシンε−アミノ基と共にアミド結合を形成して、カップリングを完了する。しかしながら、そのようなアミド結合は、インビボで酵素酵素の作用下で加水分解しやすく、結果として、標的細胞に到達する前に生物活性分子及び抗体が解離して毒性の上昇をもたらし、同時にＡＤＣの標的性は失われる。
【０００６】
抗体システインのチオ基は通常、ジスルフィド結合の形態で存在する。抗体中のジスルフィド結合を開くと、カップリング部位として複数の遊離スルフヒドリル基を得ることができる。抗体のスルフヒドリル基とカップリングさせる方法の１つは、抗体の遊離スルフヒドリル基とマレイミドとの間のマイケル付加反応、又は独特の構造の硫黄架橋結合を形成する、特異的な基質と抗体の遊離スルフヒドリル基との間の２つのマイケル付加反応である。しかしながら、多くの文献が、チオール−マイケル付加方法によって得られるＡＤＣは全身循環において逆マイケル付加を受けて、毒性反応をもたらすであろうことを報告している。国際公開第２０１６１４２０４９号特許は、生物活性分子としてのアマトキシン、並びにメチルスルホニル置換ベンゾビスオキサジアゾールの構造を有する生物活性分子及びリンカーを含む構造を開示しているが、抗体とのカップリングの詳細は具体的には記載されていない。
【発明の内容】
【０００７】
本発明は、ＡＤＣ又はＳＭＤＣにおいて薬物及びターゲティング部分のカップリング法を改善することによって得られる新規の生物活性分子コンジュゲートを開示する。前記コンジュゲートは、高い安定性、きわめて高いカップリング効率（９０％）及び高いＤＡＲ（５〜８）を有する。本開示は上の知見に基づく。精力的な研究によって、本発明のＡＤＣ、例えばＢＴ００１０２１（実施例３２）では、静脈内投与後、腫瘍における生物活性小分子毒素の暴露が血漿におけるより有意に高く、他方、Ｉｍｍｕ−１３２は、同じ投与経路下で腫瘍曝露より有意に高い血漿暴露を有することが意外にも見い出された。したがって、本発明のＡＤＣは、Ｉｍｍｕ−１３２よりも良好な治療ウィンドウを有する。本発明者らはまた、本発明のＡＤＣが、胃がん、乳がん及び非小細胞肺がんの動物モデルにおいてＩｍｍｕ−１３２より高い有効性を有することに驚いた。
【０００８】
本開示の第１の態様は、下記式（Ｉ）に示される化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。
Ｔ−［Ｌ１−（Ｌ２）ｍ１−（Ｌ３）ｍ２−（Ｌ４）ｍ３−Ｅ］−Ｇ    式（Ｉ）
［式中、
Ｔは生物活性分子の断片、好ましくは抗腫瘍生物活性を有する分子の断片であり；
Ｌ１は、アミノ酸、２〜１０個のアミノ酸から構成されるペプチド、オリゴ糖、−（ＣＨ２）ｔ１−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｔ１−（ＣＨ２）ｔ２−、
【化１】
2021506743.tif 000003
から選択され；
ここで、Ｒ、Ｒ’、Ｒ１及びＲ２のそれぞれは独立に、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、ハロゲン、カルボン酸基、スルホン酸基、シアノ、Ｃ１〜６アルキル、ハロゲン化Ｃ１〜６アルキル（例えば、−ＣＦ３）、シアノで置換されているＣ１〜６アルキル（例えば−ＣＨ２ＣＮ）、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ２〜１０アルケニル、Ｃ２〜１０アルキニル、Ｃ３〜６シクロアルキル、６〜１０員アリール又は５〜１２員ヘテロアリールであり、各Ｚ１は独立に、アミノ酸又は２〜１０個のアミノ酸から構成されるペプチドであり、ｔ１及びｔ２のそれぞれは独立に０、１、２、３、４、５又は６であり、ｘ１及びｘ２のそれぞれは独立に０、１、２、３、４、５又は６であり、各ｘ３は独立に０、１、２、３又は４であり、Ｌ１はＬ１の１位でＴに結合しており；
Ｌ２は、アミノ酸、２〜１０個のアミノ酸から構成されるペプチド、オリゴ糖、−（ＣＨ２）ｔ１−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｔ１−（ＣＨ２）ｔ２−、
【化２】
2021506743.tif 000004
から選択され；Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６のそれぞれは、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、ハロゲン、カルボン酸基、スルホン酸基、ＣＮ、Ｃ１〜６アルキル、ハロゲン化Ｃ１〜６アルキル、シアノで置換されているＣ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ２〜１０アルケニル、Ｃ２〜１０アルキニル又はＣ３〜６シクロアルキルから独立に選択されるか、又はＲ３／Ｒ４、Ｒ５／Ｒ６又はＲ３／Ｒ５は、それに結合している炭素原子と一緒に３〜８員環を形成しており、ｔ１及びｔ２のそれぞれは独立に０、１、２、３、４、５又は６であり、ｙ１及びｙ２のそれぞれは独立に０、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０であり、Ｌ２はＬ２の１位でＬ１に結合しており；
Ｌ３は、１個又は複数のＲ７で置換されていてもよい次の基：アミノ、３〜８員シクロアルキレン、３〜８員脂肪族ヘテロシクリレン、６〜１２員架橋ヘテロシクリレン、６〜１２員スピロヘテロシクリレン、６〜１２員縮合ヘテロシクリレン、６〜１０員アリーレン（例えば、フェニレン又はナフチレン）、５〜１２員ヘテロアリーレン又は３〜８員シクロアルキレン−Ｗ−から選択され；Ｗは酸素又はＮＲ８であり、Ｒ７は、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、ハロゲン、＝Ｏ、ＣＮ、カルボキシル、スルホン酸基、Ｃ１〜６アルキル、ハロゲン化Ｃ１〜６アルキル、シアノで置換されているＣ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ２〜１０アルケニル又はＣ２〜１０アルキニルから独立に選択され、Ｒ８は、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ又はシアノＣ１〜２アルキルから独立に選択され、Ｌ３はＬ３の１位でＬ２に結合しており；
Ｌ４は
【化３】
2021506743.tif 000005
から選択され、Ｚ５は、好ましくは、Ｃ２〜６アルケニリデン、Ｃ２〜６アルキニリデン、アミド基、スルフリル、スルフィニル、６〜１０員アリーレン又は５〜６員ヘテロアリーレンから選択され；Ｚ２は、Ｃ１〜６アルキレン、Ｃ２〜１０アルケニレン、Ｃ２〜１０アルキニレン、Ｃ３〜８シクロアルキレン、６〜１０員アリーレン又は５〜１４員ヘテロアリーレンから選択され；Ｒ９はＨ（水素）又はＣ１〜６アルキルから選択され；Ｚ３は存在しないか、又はＣ１〜６アルキレン、ハロゲン化Ｃ１〜６アルキレン、又はアルコキシで置換されているＣ１〜６アルキレンから選択されるか；又はＲ９及びＺ３は、それに結合している窒素原子と一緒に４〜８員ヘテロシクリルを形成しており；αは独立に０、１、２、３，４、５又は６であり；Ｌ４はＬ４の２位でＥに結合しており；
Ｅは、１個又は複数のＲ１２で置換されていてもよい次の基：６〜１０員アリーレン又は５〜１４員ヘテロアリーレンから選択され；Ｒ１２は、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、ハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ１〜６アルキル又はハロゲン化Ｃ１〜６アルキルから独立に選択され；
Ｇは、求核性置換のための脱離基、例えば、ハロゲン、スルホニル、スルホン酸エステル基、ニトロなどであり；
ｍ１、ｍ２及びｍ３のそれぞれは独立に０、１、２、３、４，５、６、７、８、９又は１０である。］
【０００９】
一部の好ましい実施形態では、Ｌ１は、Ｖａｌ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ａｓｎ、２〜５個のアミノ酸から構成されるペプチド、
【化４】
2021506743.tif 000006
から選択され；Ｒ、Ｒ’、Ｒ１及びＲ２のそれぞれは独立に、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜１０アルケニル、Ｃ２〜１０アルキニル又はＣ３〜６シクロアルキルであり、Ｚ１は、Ｖａｌ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ｖａｌ、Ｃｉｔ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｌｙｓ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ａｃ）、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ａｃ）、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ又はＡｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎであり、ｘ１は０、１、２又は３であり、ｘ３は０、１、２、３又は４である。
【００１０】
一部の好ましい実施形態では、Ｌ１は、Ｖａｌ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ｃｉｔ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｌｙｓ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ａｃ）、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ａｃ）、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ、
【化５】
2021506743.tif 000007
から選択され；Ｒ、Ｒ’及びＲ１のそれぞれは独立に、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜１０アルケニル、Ｃ２〜１０アルキニル又はＣ３〜６シクロアルキルであり、Ｚ１は、Ｖａｌ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ｖａｌ、Ｃｉｔ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｌｙｓ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ａｃ）、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ａｃ）、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ又はＡｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎであり、ｘ１及びｘ３のそれぞれは独立に０、１、２又は３である。
【００１１】
一部の好ましい実施形態では、Ｌ１は、Ｌｙｓ、Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｌｙｓ−Ｖａｌ、
【化６】
2021506743.tif 000008
から選択され；Ｒ、Ｒ’及びＲ１のそれぞれは独立に、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）又はＣ１〜４アルキルであり、Ｚ１は、Ｃｉｔ、Ｌｙｓ、Ｃｉｔ−Ｖａｌ、Ｃｉｔ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ａｌａ又はＬｙｓ−Ｖａｌであり、ｘ１及びｘ３のそれぞれは独立に０、１又は２である。
【００１２】
一部の好ましい実施形態では、Ｌ１は、Ｌｙｓ、Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｌｙｓ−Ｖａｌ、
【化７】
2021506743.tif 000009
から選択される。
【００１３】
一部の好ましい実施形態では、Ｌ１は
【化８】
2021506743.tif 000010
から選択される。
【００１４】
一部の好ましい実施形態では、Ｌ２は、Ｖａｌ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ａｓｎ、２〜５個のアミノ酸から構成されるペプチド、
【化９】
2021506743.tif 000011
から選択され；Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６のそれぞれは、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、ハロゲン、カルボン酸基、スルホン酸基、ＣＦ３、ＣＮ、ＣＨ２ＣＮ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル又はＣ３〜６シクロアルキルから独立に選択され、ｙ１及びｙ２のそれぞれは独立に０、１、２、３、４、５、６、７又は８であり、Ｌ２はＬ２の１位でＬ１に結合しており；
ｍ１は０、１、２又は３である。
【００１５】
一部の好ましい実施形態では、Ｌ２は、Ｖａｌ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｌｙｓ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ａｃ）、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ａｃ）、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ、
【化１０】
2021506743.tif 000012
から選択され；Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６のそれぞれは、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、ハロゲン、カルボン酸基、スルホン酸基、ＣＦ３、ＣＮ、ＣＨ２ＣＮ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル又はＣ３〜６シクロアルキルから独立に選択され、ｙ１及びｙ２のそれぞれは独立に０、１、２、３、４、５、６、７又は８であり、Ｌ２はＬ２の１位でＬ１に結合しており；
ｍ１は０、１又は２である。
【００１６】
一部の好ましい実施形態では、Ｌ２は、
【化１１】
2021506743.tif 000013
から選択され；Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６のそれぞれは、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）又はＣ１〜４アルキルから独立に選択され、ｙ１及びｙ２のそれぞれは独立に０、１、２、３、４、５、６、７又は８であり、Ｌ２はＬ２の１位でＬ１に結合しており；
ｍ１は１である。
【００１７】
一部の好ましい実施形態では、Ｌ２は、
【化１２】
2021506743.tif 000014
から選択される。
【００１８】
一部の好ましい実施形態では、Ｌ２は
【化１３】
2021506743.tif 000015
から選択される。
【００１９】
一部の好ましい実施形態では、Ｌ３は、１個又は複数のＲ７で置換されていてもよい次の基：アミノ、３〜８員シクロアルキレン、３〜８員脂肪族ヘテロシクリレン、６〜１２員架橋ヘテロシクリレン、６〜１２員スピロヘテロシクリレン、６〜１２員縮合ヘテロシクリレン、６〜１０員アリーレン、５〜１２員ヘテロアリーレン又は３〜８員シクロアルキレン−Ｗ−から選択され；Ｗは酸素又はＮＲ８であり、Ｒ７は、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、ハロゲン、＝Ｏ、ＣＦ３、ＣＮ、ＣＨ２ＣＮ、カルボキシル、スルホン酸基、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ２〜６アルケニル又はＣ２〜６アルキニルから独立に選択され；好ましくは、３〜８員脂肪族ヘテロシクリレン、６〜１２員架橋ヘテロシクリレン、６〜１２員スピロヘテロシクリレン又は６〜１２員縮合ヘテロシクリレンは１個又は複数の窒素原子を有し；好ましくは、３〜８員脂肪族ヘテロシクリレン、６〜１２員架橋ヘテロシクリレン、６〜１２員スピロヘテロシクリレン又は６〜１２員縮合ヘテロシクリレンは１個又は複数の第四級化窒素原子を有し；好ましくは、３〜８員脂肪族ヘテロシクリレン、６〜１２員架橋ヘテロシクリレン、６〜１２員スピロヘテロシクリレン又は６〜１２員縮合ヘテロシクリレンは１個又は複数の窒素原子を有し、少なくとも１個の窒素原子は＝Ｏで置換されており；Ｒ８は、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ３〜６アルキニル、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ又はシアノＣ１〜２アルキルから独立に選択され；
ｍ２は０、１、２又は３である。
【００２０】
一部の好ましい実施形態では、Ｌ３は、１個又は複数のＲ７で置換されていてもよい次の基：アミノ、３〜６員脂肪族ヘテロシクリレン又は５〜１０員ヘテロアリーレンから選択され；Ｒ７は、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、ハロゲン、＝Ｏ、ＣＦ３、ＣＮ、ＣＨ２ＣＮ、カルボキシル、スルホン酸基、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ２〜６アルケニル又はＣ２〜６アルキニルから独立に選択され；好ましくは、３〜６員脂肪族ヘテロシクリレンは１個又は複数の窒素原子を有し；好ましくは、３〜６員脂肪族ヘテロシクリレンは１個又は複数の第四級化窒素原子を有し；好ましくは、３〜６員脂肪族ヘテロシクリレンは１個又は複数の窒素原子を有し、少なくとも１個の窒素原子は＝Ｏで置換されており；
ｍ２は０、１又は２である。
【００２１】
一部の好ましい実施形態では、Ｌ３は、１個又は複数のＲ７で置換されていてもよい次の基：アミノ又は５〜６員ヘテロアリーレンから選択され；Ｒ７は、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、ハロゲン、＝Ｏ、ＣＦ３、ＣＮ、ＣＨ２ＣＮ、カルボキシル、スルホン酸基、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ２〜６アルケニル又はＣ２〜６アルキニルから独立に選択され；ｍ２は０又は１である。
【００２２】
一部の好ましい実施形態では、Ｌ３は、１個又は複数のＲ７で置換されていてもよい次の基：アミノ、Ｎ−メチルピペリジレン、ピラゾリレン又はトリアゾリレンから選択され；Ｒ７は、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、ハロゲン、＝Ｏ、ＣＦ３、ＣＮ、ＣＨ２ＣＮ、カルボキシル、スルホン酸基、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ２〜６アルケニル又はＣ２〜６アルキニルから独立に選択され；ｍ２は０又は１である。
【００２３】
一部の好ましい実施形態では、Ｌ３はトリアゾリレンから選択され；ｍ２は０又は１である。
【００２４】
一部の好ましい実施形態では、Ｌ３は
【化１４】
2021506743.tif 000016
から選択される。ｍ２は０又は１である。好ましくは、Ｌ３はＬ３の１位でＬ２に結合している。
【００２５】
一部の好ましい実施形態では、Ｌ３は、１個又は複数のＲ７で置換されていてもよい次の基：アミノ、
【化１５】
2021506743.tif 000017
から選択され；
Ｒ７は、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、＝Ｏ、ＣＮ、ＣＨ２ＣＮ、メチル又はＣＦ３から独立に選択され；
ＷはＮＲ８であり、Ｒ８は、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ３〜６アルキニル又はＣ３〜６シクロアルキルから選択される。
【００２６】
一部の好ましい実施形態では、Ｌ３は、
【化１６】
2021506743.tif 000018
から選択され；
ここで、各Ｒｑは、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ３〜６アルキニル又はＣ３〜８シクロアルキルから独立に選択され；β１は０、１又は２であり；β２は１、２又は３である。
【００２７】
一部の好ましい実施形態では、Ｌ３は
【化１７】
2021506743.tif 000019
から選択される。
【００２８】
一部の好ましい実施形態では、Ｌ４は、
【化１８】
2021506743.tif 000020
から選択され、Ｚ４は６〜１０員アリール又は５〜６員ヘテロアリールであり；Ｒ１０はＨ（水素）又はＣ１〜６アルキルから選択され；Ｚ２は、Ｃ１〜６アルキレン、Ｃ２〜１０アルケニレン、Ｃ２〜１０アルキニレン又はＣ３〜８シクロアルキレンから選択され；Ｒ９はＨ（水素）又はＣ１〜６アルキルから選択され；Ｚ３は存在しないか又はＣ１〜６アルキレンから選択され；又はＲ９及びＺ３は、それに結合している窒素原子と一緒に４〜８員ヘテロシクリレンを形成しており；αは独立に０、１、２、３、４、５又は６であり、Ｌ４はＬ４の２位でＥに結合しており；
ｍ３は０、１、２又は３である。
【００２９】
一部の好ましい実施形態では、Ｌ４は、
【化１９】
2021506743.tif 000021
から選択され、Ｚ４はベンゼン環であり、Ｒ１０はＨ（水素）及びＣ１〜６アルキルから選択され；Ｚ２は、Ｃ１〜６アルキレン、Ｃ２〜１０アルケニレン、Ｃ２〜１０アルキニレン又はＣ３〜８シクロアルキレンから選択され；Ｒ９はＨ（水素）又はＣ１〜６アルキルから選択され；Ｚ３は存在しないか又はＣ１〜６アルキレンから選択されるか、又はＲ９及びＺ３は、それに結合している窒素原子と一緒に４〜８員ヘテロシクリレンを形成しており；αは独立に０、１、２、３、４、５又は６であり、Ｌ４はＬ４の２位でＥに結合しており；Ｌ４は２位でＥに結合しており；
ｍ３は０、１、２又は３である。
【００３０】
一部の好ましい実施形態では、Ｌ４は、
【化２０】
2021506743.tif 000022
から選択され、Ｚ４は５〜６員ヘテロアリーレンであり；Ｒ１０はＨ（水素）又はＣ１〜６アルキルから選択され；Ｚ２は、Ｃ１〜６アルキレン、Ｃ２〜１０アルケニレン、Ｃ２〜１０アルキニレン又はＣ３〜８シクロアルキレンから選択され；Ｒ９はＨ（水素）又はＣ１〜６アルキルから選択され；Ｚ３は存在しないか又はＣ１〜６アルキレンから選択されるか；又はＲ９及びＺ３は、それに結合している窒素原子と一緒に４〜８員ヘテロシクリレンを形成しており；αは独立に０、１、２、３，４、５又は６であり；Ｌ４はＬ４の２位でＥに結合しており；
ｍ３は０、１、２又は３である。
【００３１】
一部の好ましい実施形態では、Ｌ４は、
【化２１】
2021506743.tif 000023
から選択され；
ｍ３は１である。
【００３２】
一部の好ましい実施形態では、Ｌ４は、
【化２２】
2021506743.tif 000024
から選択され；
ｍ３は１である。
【００３３】
一部の好ましい実施形態では、Ｌ４は
【化２３】
2021506743.tif 000025
から選択され；
ｍ３は１である。
【００３４】
一部の好ましい実施形態では、Ｅは、１個又は複数のＲ１２で置換されていてもよい５〜１０員ヘテロアリーレンから選択され；Ｒ１２は、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、ハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ１〜４アルキル又はハロゲン化Ｃ１〜４アルキルから独立に選択される。
【００３５】
一部の好ましい実施形態では、Ｅは、１個又は複数のＲ１２で置換されていてもよい次の基：ピリミジレン、キノリレン又はピロロ［２，３−ｄ］ピリミジレンから選択され；Ｒ１２は、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、ハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ１〜２アルキル又はハロゲン化Ｃ１〜２アルキルから独立に選択される。
【００３６】
一部の好ましい実施形態では、Ｅは、１個又は複数のＲ１２で置換されていてもよいピリミジニルから選択され；Ｒ１２はＨ（水素）又はＤ（ジュウテリウム）から独立に選択される。
【００３７】
一部の好ましい実施形態では、Ｇは、ハロゲン、ＯＭｓ、ＯＴｓ、ＯＴｆ、ニトロ、又は１個若しくは複数のＲ１３で置換されていてもよい次の基：アルキルチオ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、アルキルスルフィニル、アリールスルフィニル、ヘテロアリールスルフィニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル若しくはヘテロアリールスルホニルのいずれか１つから選択され；Ｒ１３は、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、ハロゲン、ＣＮ、ニトロ、Ｃ１〜６アルキル、ハロゲン化Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、６〜１０員アリール又は５〜１２員ヘテロアリールから独立に選択される。
【００３８】
一部の好ましい実施形態では、Ｇは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＭｓ、ＯＴｓ、ＯＴｆ、メチルスルホニル、エチルスルホニル、ｐ−トルエンスルホニル又はナフタレンスルホニルから選択される。
【００３９】
一部の好ましい実施形態では、Ｇは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＯＭｓ、ＯＴｓ、メチルスルホニル又はｐ−トルエンスルホニルから選択される。
【００４０】
一部の好ましい実施形態では、ＧはＣｌ又はメチルスルホニルから選択される。
【００４１】
一部の好ましい実施形態では、
【化２４】
2021506743.tif 000026
において、Ｇは好ましくはメチルスルホニルであり、Ｅは好ましくはピリミジレンであり、ｍ３は１である。
【００４２】
一部の好ましい実施形態では、
【化２５】
2021506743.tif 000027
は
【化２６】
2021506743.tif 000028
であり、ｍ４は好ましくは０〜６の整数であり、メチルスルホニルは、ピリミジン環中の窒素原子に隣接する炭素原子上の置換基である。
【００４３】
一部の好ましい実施形態では、
【化２７】
2021506743.tif 000029
は
【化２８】
2021506743.tif 000030
であり、ｍ５は好ましくは０〜６の整数であり、メチルスルホニルは、ピリミジン環中の窒素原子に隣接する炭素原子上の置換基である。
【００４４】
一部の好ましい実施形態では、
【化２９】
2021506743.tif 000031
は
【化３０】
2021506743.tif 000032
であり、ｍ６は好ましくは０〜６の整数であり、メチルスルホニルは、ピリミジン環中の窒素原子に隣接する炭素原子上の置換基である。
【００４５】
一部の好ましい実施形態では、
【化３１】
2021506743.tif 000033
は
【化３２】
2021506743.tif 000034
であり、ｍ７は１〜５の整数であり、メチルスルホニルは、ピリミジン環中の窒素原子に隣接する炭素原子上の置換基である。
【００４６】
一部の好ましい実施形態では、
【化３３】
2021506743.tif 000035
は
【化３４】
2021506743.tif 000036
であり、ｍ８は１〜５の整数であり、メチルスルホニルは、ピリミジン環中の窒素原子に隣接する炭素原子上の置換基である。
【００４７】
一部の好ましい実施形態では、
【化３５】
2021506743.tif 000037
は
【化３６】
2021506743.tif 000038
であり、ｍ９は１〜５の整数であり、Ｒ１３は水素又はＣ１〜６アルキルから選択され、メチルスルホニルは、ピリミジン環中の窒素原子に隣接する炭素原子上の置換基である。
【００４８】
一部の好ましい実施形態では、
【化３７】
2021506743.tif 000039
は
【化３８】
2021506743.tif 000040
であり、ｍ１０は０〜６の整数であり、Ｚ４は５〜６員ヘテロアリーレンから選択され；メチルスルホニルは、ピリミジン環中の窒素原子に隣接する炭素原子上の置換基である。
【００４９】
一部の好ましい実施形態では、
【化３９】
2021506743.tif 000041
は
【化４０】
2021506743.tif 000042
であり、Ｚ４は、ピリジレン、ピリミジレン、ピラゾリレン、チアゾリレン、オキサゾリレン又はトリアゾリレンから選択され；メチルスルホニルは、ピリミジン環中の窒素原子に隣接する炭素原子上の置換基であり；より好ましくは、ｍ１０は０〜６の整数である。
【００５０】
一部の好ましい実施形態では、
【化４１】
2021506743.tif 000043
は
【化４２】
2021506743.tif 000044
であり、Ｚ４は、ピリジレン、ピリミジレン、ピラゾリレン又はトリアゾリレンから選択される。より好ましくは、ｍ１０は０〜６の整数である。
【００５１】
一部の好ましい実施形態では、
【化４３】
2021506743.tif 000045
は
【化４４】
2021506743.tif 000046
であり、Ｚ４はオキサゾリレン又はチアゾリレンから選択され、メチルスルホニルは、ピリミジン環中の窒素原子に隣接する炭素原子の置換基である。より好ましくは、ｍ１０は０〜６の整数である。
【００５２】
一部の好ましい実施形態では、
【化４５】
2021506743.tif 000047
は
【化４６】
2021506743.tif 000048
であり、ｍ１０は０〜６の整数であり、Ｚ４は６〜１０員アリーレンから選択され；メチルスルホニルは、窒素原子に隣接する炭素原子の置換基である。より好ましくは、ｍ１０は０〜６の整数である。
【００５３】
一部の好ましい実施形態では、
【化４７】
2021506743.tif 000049
は
【化４８】
2021506743.tif 000050
であり、ｍ１０は０〜６の整数であり、Ｚ４はベンゼン環である。
【００５４】
一部の好ましい実施形態では、
【化４９】
2021506743.tif 000051
は
【化５０】
2021506743.tif 000052
である。
【００５５】
一部の好ましい実施形態では、式（Ｉ）中の
【化５１】
2021506743.tif 000053
は次の断片から選択される。
【化５２−１】
2021506743.tif 000054
【化５２−２】
2021506743.tif 000055
【化５２−３】
2021506743.tif 000056
【化５２−４】
2021506743.tif 000057
【００５６】
一部の好ましい実施形態では、Ｔは生物活性分子の断片である。一部の好ましい実施形態では、生物活性分子は、白金金属錯体（例えばオキサリプラチン）又は金金属錯体などの金属錯体；ブレオマイシン又はピンヤンマイシン（ｐｉｎｇｙａｎｇｍｙｃｉｎ）などのグリコペプチド抗生物質；トポイソメラーゼＩ阻害薬（例えば、カンプトテシン、ヒドロキシカンプトテシン、９−アミノカンプトテシン、ＳＮ−３８、イリノテカン、トポテカン、ベロテンシアン（ｂｅｌｌｏｔｅｎｃｉａｎ）又はルビテカン）又はトポイソメラーゼＩＩ阻害薬（例えば、アクチノマイシンＤ、アドリアマイシン、アドリアマイシン、ドキソルビシン、デュオカルマイシン、ダウノルビシン、ミトキサントロン、ポドフィロトキシン又はエトポシド）などのＤＮＡトポイソメラーゼ阻害薬；メトトレキサート、５−フルオロウラシル、シタラビン、ゲムシタビン、メルカプトプリン、ペントスタチン、フルダラビン、クラドリビン又はナラビン（ｎａｒａｂｉｎｅ）などのＤＮＡ合成に干渉する薬物；チューブリン阻害薬、ビンブラスチンアルカロイド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、パクリタキセル、ドセタキセル又はカバジタキセルなどの構造タンパク質に作用する薬物；セリン／トレオニンキナーゼ阻害薬、チロシンキナーゼ阻害薬、アスパルトキナーゼ阻害薬又はヒスチジンキナーゼ阻害薬などの腫瘍細胞シグナル伝達経路阻害薬；プロテアソーム阻害薬；ヒストンデアセイラーゼ（ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｙｌａｓｅ）阻害薬；腫瘍血管新生阻害薬；サイクリン阻害薬；メイタンシン誘導体；カリケアマイシン誘導体；オーリスタチン誘導体；ピロロベンゾジアゼピン二量体（ＰＢＤ）誘導体；メルファラン；マイトマイシンＣ；クロラムブシル；及び腫瘍細胞の増殖を阻害する、腫瘍細胞のアポトーシス又は壊死を促進する他の活性物質から選択される。
【００５７】
一部の好ましい実施形態では、生物活性分子は、
【化５３】
2021506743.tif 000058
［式中、Ｒ１４は、Ｒ１５で置換されているアシル又はスルホニルから選択され、Ｒ１５は、Ｃ１〜６アルキル、ハロゲン化Ｃ１〜６アルキル、６〜１０員アリール又は５〜１２員ヘテロアリールから選択され；Ｒ１６は、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、Ｃ１〜６アルキル、又はＲ１７で置換されているＣ１〜６アルキルから選択され、Ｒ１７は、これらに限定されないが、フェニル及びピリジルを含むアリール又はヘテロアリールから選択され、ｍ１１は０、１又は２である。］
から選択される。
【００５８】
一部の好ましい実施形態では、生物活性分子は、
【化５４】
2021506743.tif 000059
［式中、Ｒ１４は、Ｒ１５で置換されているアシル又はスルホニルから選択され、Ｒ１５は、Ｃ１〜６アルキル、ハロゲン化Ｃ１〜６アルキル、６〜１０員アリール又は５〜１２員ヘテロアリールから選択され；Ｒ１６は、Ｈ（水素）、Ｄ（ジュウテリウム）、Ｃ１〜６アルキル、Ｒ１７で置換されているＣ１〜６アルキルから選択され、Ｒ１７は、これらに限定されないが、フェニル又はピリジルを含むアリール又はヘテロアリールから選択され、ｍ１１は０、１又は２である。］
から選択される。
【００５９】
一部の好ましい実施形態では、生物活性分子は、
【化５５】
2021506743.tif 000060
から選択される。
【００６０】
一部の好ましい実施形態では、生物活性分子は、
【化５６】
2021506743.tif 000061
から選択される。
【００６１】
一部の好ましい実施形態では、生物活性分子は、
【化５７】
2021506743.tif 000062
から選択される。
【００６２】
一部の好ましい実施形態では、生物活性分子は、
【化５８】
2021506743.tif 000063
から選択される。
【００６３】
一部の好ましい実施形態では、生物活性分子は
【化５９】
2021506743.tif 000064
から選択される。
【００６４】
一部の好ましい実施形態では、Ｔは、
【化６０−１】
2021506743.tif 000065
【化６０−２】
2021506743.tif 000066
【化６０−３】
2021506743.tif 000067
から選択される。
【００６５】
一部の好ましい実施形態では、Ｔは、
【化６１−１】
2021506743.tif 000068
【化６１−２】
2021506743.tif 000069
【化６１−３】
2021506743.tif 000070
から選択される。
【００６６】
一部の好ましい実施形態では、Ｔは、
【化６２】
2021506743.tif 000071
から選択される。
【００６７】
一部の好ましい実施形態では、Ｔは、
【化６３】
2021506743.tif 000072
から選択される。
【００６８】
一部の好ましい実施形態では、Ｔは
【化６４】
2021506743.tif 000073
から選択される。
【００６９】
一部の好ましい実施形態では、式（Ｉ）に示される化合物は、
【化６５−１】
2021506743.tif 000074
【化６５−２】
2021506743.tif 000075
【化６５−３】
2021506743.tif 000076
【化６５−４】
2021506743.tif 000077
【化６５−５】
2021506743.tif 000078
【化６５−６】
2021506743.tif 000079
【化６５−７】
2021506743.tif 000080
【化６５−８】
2021506743.tif 000081
【化６５−９】
2021506743.tif 000082
【化６５−１０】
2021506743.tif 000083
から選択される。
【００７０】
一部の好ましい実施形態では、化合物は、
【化６６−１】
2021506743.tif 000084
【化６６−２】
2021506743.tif 000085
【化６６−３】
2021506743.tif 000086
【化６６−４】
2021506743.tif 000087
【化６６−５】
2021506743.tif 000088
【化６６−６】
2021506743.tif 000089
【化６６−７】
2021506743.tif 000090
【化６６−８】
2021506743.tif 000091
から選択される。
【００７１】
第２の態様では、本開示は、生物活性分子、リンカー及びターゲティング部分を含むコンジュゲートを提供する。ターゲティング部分は、活性基（例えばチオール基）を介してリンカーに連結されてコンジュゲートを形成している。
【００７２】
一部の好ましい実施形態では、コンジュゲートの構造は下記式（ＩＩ）に示される構造である。
｛Ｔ−［Ｌ１−（Ｌ２）ｍ１−（Ｌ３）ｍ２−（Ｌ４）ｍ３−Ｅ］｝γ−Ａ    式（ＩＩ）
［式中、
Ａはターゲティング部分（例えば、小分子リガンド、タンパク質、ポリペプチド又は非タンパク質試薬（例えば、糖、ＲＮＡ又はＤＮＡ））であり；γは１〜１０の整数又は小数であり；好ましくは、γは５〜８（例えば、５、６、７又は８）の整数又は小数であり；
残りの基は本開示の第１の態様に記載されている通りである。］
【００７３】
一部の好ましい実施形態では、Ａの標的は、上皮成長因子、Ｔｒｏｐ−２、ＣＤ３７、ＨＥＲ２、ＣＤ７０、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、Ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ、Ｆｏｌａｔｅ  ｅｃｅｏｐｔｏｒ１、Ｍｕｃｉｎ  １、ＣＤ１３８、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ３０、ＳＬＴＲＫ６、Ｎｅｃｔｉｎ  ４、Ｔｉｓｓｕｅ  ｆａｃｔｏｒ、Ｍｕｃｉｎ１６、Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎｒｅｃｅｏｐｔｏｒ、ＳＴＥＡＰ１、ＳＬＣ３９Ａ６、Ｇｕａｎｙｌｙｌｃｙｃｌａｓｅ  Ｃ、ＰＳＭＡ、ＣＣＤ７９ｂ、ＣＤ２２、Ｓｏｄｉｕｍ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｃｏｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ  ２Ｂ、ＧＰＮＭＢ、Ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ、ＡＧＳ−１６、ＥＧＦＲ、ＣＤ３３、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７４、ＣＤ５６、ＰＤ−Ｌ１、ＴＡＣＳＴＤ２、ＤＲ５、Ｅ１６、ＳＴＥＡＰ１、０７７２Ｐ、ＭＰＦ、Ｎａｐｉ３ｂ、Ｓｅｍａ  ５ｂ、ＰＳＣＡ  ｈｌｇ、ＥＴＢＲ、ＭＳＧ７８３、ＳＴＥＡＰ２、ＴｒｐＭ４、ＣＲＩＰＴＯ、ＣＤ２１、ＣＤ７９ｂ、ＦｃＲＨ２、ＮＣＡ、ＭＤＰ、ＩＬ２０Ｒα、Ｂｒｅｖｉｃａｎ、ＥｐｈＢ２Ｒ、ＡＳＬＧ６５９、ＰＳＣＡ、ＧＥＤＡ、ＢＡＦＦ−Ｒ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＸＣＲ５、ＨＬＡ−ＤＯＢ、Ｐ２Ｘ５、ＣＤ７２、ＬＹ６４、ＦｃＲＨ１、ＩＲＴＡ２、ＴＥＮＢ２、ｉｎｔｅｇｒｉｎ  α５β６、α４β７、ＦＧＦ２、ＦＧＦＲ２、Ｈｅｒ３、ＣＤ７０、ＣＡ６、ＤＬＬ３、ＤＬＬ４、Ｐ−ｃａｄｈｅｒｉｎ、ＥｐＣＡＭ、ｐＣＡＤ、ＣＤ２２３、ＬＹＰＤ３、ＬＹ６Ｅ、ＥＦＮＡ４、ＲＯＲ１、ＳＬＩＴＲＫ６、５Ｔ４、ＥＮＰＰ３、ＳＬＣ３９Ａ６、Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２、ＢＭＰＲ１Ｂ、Ｅ１６、ＳＴＥＡＰ１、Ｔｙｒｏ７、０７７２Ｐ、ＭＰＦ、Ｎａｐｉ３ｂ、Ｓｅｍａ  ５ｂ、ＰＳＣＡ  ｈｌｇ、ＥＴＢＲ、ＭＳＧ７８３、ＳＴＥＡＰ２、ＴｒｐＭ４、ＣＲＩＰＴＯ、ＣＤ２１、ＣＤ７９ｂ、ＦｃＲＨ２、ＮＣＡ、ＭＤＰ、ＩＬ２０Ｒα、Ｂｒｅｖｉｃａｎ、ＥｐｈＢ２Ｒ、ＡＳＬＧ６５９、ＰＳＣＡ、ＧＥＤＡ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＸＣＲ５、ＨＬＡ−ＤＯＢ、Ｐ２Ｘ５、ＣＤ７２、ＬＹ６４、ＦｃＲＨ１、ＩＲＴＡ２、ｃ−Ｍｅｔ、ＡｐｏＥ、ＣＤ１  ｌｃ、ＣＤ４０、ＣＤ４５（ＰＴＰＲＣ）、ＣＤ４９Ｄ（ＩＴＧＡ４）、ＣＤ８０、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＴＳＤ、ＧＺＭＢ、Ｌｙ８６、ＭＳ４Ａ７、ＰＩＫ３ＡＰ１、ＰＩＫ３ＣＤ、ＣＣＲ５、ＩＦＮＧ、ＩＬ１０ＲＡ１、ＩＬ−６、ＡＣＴＡ２、ＣＯＬ７Ａ１、ＬＯＸ、ＬＲＲＣ１５、ＭＣＰＴ８、ＭＭＰ１０、ＮＯＧ、ＳＥＲＰＩＮＥｌ、ＳＴＡＴ１、ＴＧＦＢＲ１、ＣＴＳＳ、ＰＧＦ、ＶＥＧＦＡ、Ｃ１ＱＡ、Ｃ１ＱＢ、ＡＮＧＰＴＬ４、ＥＧＬＮ、ＡＮＧＰＴＬ４、ＥＧＬＮ３、ＢＮＩＰ３、ＡＩＦ１、ＣＣＬ５、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＩＦＩ６、ＰＬＯＤ２、ＫＩＳＳ１Ｒ、ＳＴＣ２、ＤＤＩＴ４、ＰＦＫＦＢ３、ＰＧＫ１、ＰＤＫ１、ＡＫＲ１Ｃ１、ＡＫＲ１Ｃ２、ＣＡＤＭ１、ＣＤＨ１１、ＣＯＬ６Ａ３、ＣＴＧＦ、ＨＭＯＸ１、ＫＲＴ３３Ａ、ＬＵＭ、ＷＮＴ５Ａ、ＩＧＦＢＰ３、ＭＭＰ１４、ＣＤＣＰ１、ＰＤＧＦＲＡ、ＴＣＦ４、ＴＧＦ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ２、ＣＤ１  ｌｂ、ＡＤＧＲＥ１、ＥＭＲ２、ＴＮＦＲＳＦ２１、ＵＰＫ１Ｂ、ＴＮＦＳＦ９、ＭＭＰ１６、ＭＦＩ２、ＩＧＦ−１Ｒ、���ＮＦ４３、ＮａＰｉ２ｂ、ＢＣＭＡ又はＴＥＮＢ２から選択される。
【００７４】
一部の好ましい実施形態では、Ａは、葉酸誘導体、グルタミン酸尿素誘導体、ソマトスタチン誘導体、アリールスルホンアミド誘導体（例えば炭酸脱水酵素ＩＸ阻害薬）、２つの脂肪族インドールを接続するポリエン、シアニン色素又はＩＲ−７８３若しくはその誘導体などの小分子リガンドである。
【００７５】
一部の好ましい実施形態では、Ａは、
【化６７】
2021506743.tif 000092
から選択される。
【００７６】
一部の好ましい実施形態では、Ａは、モノクローナル抗体などの抗体又はその抗原結合断片であり、ここで、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、ｄＡｂ、相補性決定断片、一本鎖抗体（例えばｓｃＦｖ）、非ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、完全ヒト化抗体、プロボディ、二重特異性抗体又は多重特異性抗体を含む。
【００７７】
一部の好ましい実施形態では、Ａは、トラスツズマブ、ペルツズマブなどの抗Ｈｅｒ２モノクローナル抗体；又はサシツズマブなどの抗Ｔｒｏｐ−２モノクローナル抗体である。
【００７８】
一部の好ましい実施形態では、Ａは、抗体Ｍ１、Ｍ２又はＭ３などの抗Ｔｒｏｐ−２モノクローナル抗体である。
【表１】
2021506743.tif 000093
【００７９】
各領域又はドメインにおけるアミノ酸の指定は、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＆  Ｌｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１〜９１７；Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８９）、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７８〜８８３の定義に従い得る。
１．疎水性に修飾された抗体Ｍ１の重鎖及び軽鎖配列
Ｍ１の重鎖可変領域のアミノ酸配列：（１２１ａａ）
ＱＶＱＬＱＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＫＱＡＰＧＱＧＬＫＷＭＧＷＩＮＴＤＳＧＥＰＴＹＴＤＤＦＫＧＲＦＡＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＳＳＬＫＡＤＤＴＡＶＹＦＣＡＲＧＧＦＧＳＳＹＷＹＦＤＶＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳ（配列番号１１）
Ｍ１の軽鎖可変領域のアミノ酸配列：（１０７ａａ）
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＳＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹＴＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＨＹＳＴＰＬＴＦＧＡＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１２）
２．疎水性に修飾された抗体Ｍ２の重鎖及び軽鎖配列
Ｍ２の重鎖可変領域のアミノ酸配列：（１２１ａａ）
ＱＶＱＬＱＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＫＱＡＰＧＱＧＬＫＷＭＧＷＩＮＴＤＳＧＥＰＴＹＴＤＤＦＫＧＲＦＡＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＳＳＬＫＡＤＤＴＡＶＹＦＣＡＲＧＧＦＧＳＳＹＷＹＦＤＶＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳ（配列番号１３）
Ｍ２の軽鎖可変領域のアミノ酸配列：（１０７ａａ）
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＳＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹＴＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＨＹＩＴＰＬＴＦＧＡＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１４）
３．疎水性に修飾された抗体Ｍ３の重鎖及び軽鎖配列
Ｍ３の重鎖可変領域のアミノ酸配列：（１２１ａａ）
ＱＶＱＬＱＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＫＱＡＰＧＱＧＬＫＷＭＧＷＩＮＴＤＳＧＥＰＴＹＴＤＤＦＫＧＲＦＡＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＳＳＬＫＡＤＤＴＡＶＹＦＣＡＲＧＧＦＧＳＳＹＷＹＦＤＶＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳ（配列番号１５）
Ｍ３の軽鎖可変領域のアミノ酸配列：（１０７ａａ）
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＩＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹＴＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＨＹＳＴＰＬＴＦＧＡＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１６）
Ｍ１、Ｍ２、Ｍ３の軽鎖定常領域の配列：（１０７ａａ）
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号９）
Ｍ１、Ｍ２、Ｍ３の重鎖定常領域の配列：（３３０ａａ）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１０）
【００８０】
重鎖の末端Ｌｙｓは容易に欠失するが、そのような欠失は生物活性に影響を及ぼさない。Ｄｉｃｋ、Ｌ．Ｗ．ら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．、１００：１１３２〜１１４３を参照されたい。重鎖の末端でＬｙｓが欠失した上記モノクローナル抗体Ｍ１、Ｍ２、Ｍ３及びそれらの配列又は断片はすべて、本発明のＭ１、Ｍ２、Ｍ３モノクローナル抗体に該当する。
【００８１】
一部の好ましい実施形態では、Ａは、細胞表面インテグリン受容体を認識するＲＧＤペプチド；ＥＧＦ、ＰＤＧＦ若しくはＶＥＧＦなどの細胞表面成長因子受容体を認識する成長因子；又は機能性細胞表面プラスミノーゲン活性化因子、ボンベシン、ブラジキニン、ソマトスタチン若しくは前立腺特異的膜抗原受容体を認識し得るペプチドから選択される。
【００８２】
一部の好ましい実施形態では、Ａは、ＣＤ４０リガンド、ＣＤ３０リガンド、ＯＸ４０リガンド、ＰＤ−１リガンド、ＥｒｂＢリガンド、Ｈｅｒ２リガンド、ＴＡＣＳＴＤ２リガンド、又はＤＲ５リガンドから選択される。
【００８３】
一部の好ましい実施形態では、コンジュゲートは下記から選択される。
【化６８−１】
2021506743.tif 000094
【化６８−２】
2021506743.tif 000095
【化６８−３】
2021506743.tif 000096
【化６８−４】
2021506743.tif 000097
【化６８−５】
2021506743.tif 000098
【化６８−６】
2021506743.tif 000099
【化６８−７】
2021506743.tif 000100
【化６８−８】
2021506743.tif 000101
【化６８−９】
2021506743.tif 000102
［式中、γは１〜１０の整数又は小数であり、ｍＡｂは抗Ｔｒｏｐ−２モノクローナル抗体又は抗Ｈｅｒ２モノクローナル抗体であり；好ましくは、抗Ｔｒｏｐ−２モノクローナル抗体は、サシツズマブ、Ｍ１、Ｍ２又はＭ３の抗体から選択され、抗Ｈｅｒ２モノクローナル抗体はトラスツズマブ又はペルツズマブであり；好ましくは、γは５〜８（例えば、５、６、７又は８）の整数又は小数である。］
【００８４】
一部の好ましい実施形態では、コンジュゲートは下記から選択される。
【化６９−１】
2021506743.tif 000103
【化６９−２】
2021506743.tif 000104
【化６９−３】
2021506743.tif 000105
【化６９−４】
2021506743.tif 000106
【化６９−５】
2021506743.tif 000107
【化６９−６】
2021506743.tif 000108
【化６９−７】
2021506743.tif 000109
［式中、γは１〜１０の整数又は小数であり、ｍＡｂは抗Ｔｒｏｐ−２モノクローナル抗体又は抗Ｈｅｒ２モノクローナル抗体であり；好ましくは、抗Ｔｒｏｐ−２モノクローナル抗体はサシツズマブから選択され、抗Ｈｅｒ２モノクローナル抗体はトラスツズマブ又はペルツズマブから選択され；好ましくは、γは５〜８（例えば、５、６、７又は８）の整数又は小数である。］
【００８５】
一部の好ましい実施形態では、コンジュゲートは下記である。
【化７０−１】
2021506743.tif 000110
【化７０−２】
2021506743.tif 000111
【化７０−３】
2021506743.tif 000112
【化７０−４】
2021506743.tif 000113
［式中、Ａ１はサシツズマブであり、γは１〜１０の整数又は小数であり；好ましくは、γは、５〜８の整数又は小数、例えば６〜７、６〜７．５、６〜８、６．５〜７、６．５〜７．５、６．５〜８、７〜８又は７．５〜８の整数又は小数である。］
【００８６】
一部の好ましい実施形態では、コンジュゲートは下記である。
【化７１−１】
2021506743.tif 000114
【化７１−２】
2021506743.tif 000115
［式中、Ａ１はサシツズマブであり、γは１〜１０の整数又は小数であり；好ましくは、γは、５〜８の整数又は小数、例えば６〜７、６〜７．５、６〜８、６．５〜７、６．５〜７．５、６．５〜８、７〜８又は７．５〜８の整数又は小数である。］
【００８７】
一部の好ましい実施形態では、コンジュゲートは下記である。
【化７２】
2021506743.tif 000116
［式中、Ａ１はサシツズマブであり、γは１〜１０の整数又は小数であり；好ましくは、γは、５〜８の整数又は小数、例えば６〜７、６〜７．５、６〜８、６．５〜７、６．５〜７．５、６．５〜８、７〜８又は７．５〜８の整数又は小数である。］
【００８８】
一部の好ましい実施形態では、コンジュゲートは下記である。
【化７３】
2021506743.tif 000117
［式中、Ａ１はサシツズマブの断片であり、γは１〜１０の整数又は小数であり；好ましくは、γは、５〜８の整数又は小数、例えば６〜７、６〜７．５、６〜８、６．５〜７、６．５〜７．５、６．５〜８、７〜８又は７．５〜８の整数又は小数である。］
【００８９】
一部の好ましい実施形態では、コンジュゲートは下記である。
【化７４−１】
2021506743.tif 000118
【化７４−２】
2021506743.tif 000119
【化７４−３】
2021506743.tif 000120
【化７４−４】
2021506743.tif 000121
［式中、Ａ２はトラスツズマブであり、γは１〜１０の整数又は小数であり；好ましくは、γは、５〜８の整数又は小数、例えば６〜７、６〜７．５、６〜８、６．５〜７、６．５〜７．５、６．５〜８、７〜８又は７．５〜８の整数又は小数である。］
【００９０】
一部の好ましい実施形態では、コンジュゲートは下記である。
【化７５−１】
2021506743.tif 000122
【化７５−２】
2021506743.tif 000123
［式中、Ａ２はトラスツズマブであり、γは１〜１０の整数又は小数であり；好ましくは、γは、５〜８の整数又は小数、例えば６〜７、６〜７．５、６〜８、６．５〜７、６．５〜７．５、６．５〜８、７〜８又は７．５〜８の整数又は小数である。］
【００９１】
一部の好ましい実施形態では、コンジュゲートは下記である。
【化７６】
2021506743.tif 000124
［式中、Ａ２はトラスツズマブであり、γは１〜１０の整数又は小数であり；好ましくは、γは、５〜８の整数又は小数、例えば６〜７、６〜７．５、６〜８、６．５〜７、６．５〜７．５、６．５〜８、７〜８又は７．５〜８の整数又は小数である。］
【００９２】
一部の好ましい実施形態では、コンジュゲートは下記である。
【化７７−１】
2021506743.tif 000125
【化７７−２】
2021506743.tif 000126
【化７７−３】
2021506743.tif 000127
【化７７−４】
2021506743.tif 000128
［式中、Ａ３はペルツズマブであり、γは１〜１０の整数又は小数であり；好ましくは、γは、５〜８の整数又は小数、例えば６〜７、６〜７．５、６〜８、６．５〜７、６．５〜７．５、６．５〜８、７〜８又は７．５〜８の整数又は小数である。］
【００９３】
一部の好ましい実施形態では、コンジュゲートは下記である。
【化７８−１】
2021506743.tif 000129
【化７８−２】
2021506743.tif 000130
［式中、Ａ３はペルツズマブであり、γは１〜１０の整数又は小数であり；好ましくは、γは、５〜８の整数又は小数、例えば６〜７、６〜７．５、６〜８、６．５〜７、６．５〜７．５、６．５〜８、７〜８又は７．５〜８の整数又は小数である。］
【００９４】
一部の好ましい実施形態では、コンジュゲートは下記である。
【化７９−１】
2021506743.tif 000131
【化７９−２】
2021506743.tif 000132
【化７９−３】
2021506743.tif 000133
【化７９−４】
2021506743.tif 000134
［式中、Ａ４は抗体Ｍ１であり、γは１〜１０の整数又は小数であり；好ましくは、γは、５〜８の整数又は小数、例えば６〜７、６〜７．５、６〜８、６．５〜７、６．５〜７．５、６．５〜８、７〜８又は７．５〜８の整数又は小数である。］
【００９５】
一部の好ましい実施形態では、コンジュゲートは下記である。
【化８０】
2021506743.tif 000135
［式中、Ａ４は抗体Ｍ１であり、γは１〜１０の整数又は小数であり；好ましくは、γは、５〜８の整数又は小数、例えば６〜７、６〜７．５、６〜８、６．５〜７、６．５〜７．５、６．５〜８、７〜８又は７．５〜８の整数又は小数である。］
【００９６】
一部の好ましい実施形態では、コンジュゲートは下記である。
【化８１−１】
2021506743.tif 000136
【化８１−２】
2021506743.tif 000137
【化８１−３】
2021506743.tif 000138
【化８１−４】
2021506743.tif 000139
［式中、Ａ５は抗体Ｍ２であり、γは１〜１０の整数又は小数であり；好ましくは、γは、５〜８の整数又は小数、例えば６〜７、６〜７．５、６〜８、６．５〜７、６．５〜７．５、６．５〜８、７〜８又は７．５〜８の整数又は小数である。］
【００９７】
一部の好ましい実施形態では、コンジュゲートは下記である。
【化８２】
2021506743.tif 000140
［式中、Ａ５は抗体Ｍ２であり、γは１〜１０の整数又は小数であり；好ましくは、γは、５〜８の整数又は小数、例えば６〜７、６〜７．５、６〜８、６．５〜７、６．５〜７．５、６．５〜８、７〜８又は７．５〜８の整数又は小数である。］
【００９８】
一部の好ましい実施形態では、コンジュゲートは下記である。
【化８３−１】
2021506743.tif 000141
【化８３−２】
2021506743.tif 000142
【化８３−３】
2021506743.tif 000143
【化８３−４】
2021506743.tif 000144
［式中、Ａ６は抗体Ｍ３であり、γは１〜１０の整数又は小数であり；好ましくは、γは、５〜８の整数又は小数、例えば６〜７、６〜７．５、６〜８、６．５〜７、６．５〜７．５、６．５〜８、７〜８又は７．５〜８の整数又は小数である。］
【００９９】
一部の好ましい実施形態では、コンジュゲートは下記である。
【化８４】
2021506743.tif 000145
［式中、Ａ６は抗体Ｍ３であり、γは１〜１０の整数又は小数であり；好ましくは、γは、５〜８の整数又は小数、例えば６〜７、６〜７．５、６〜８、６．５〜７、６．５〜７．５、６．５〜８、７〜８又は７．５〜８の整数又は小数である。］
【０１００】
別の態様では、本開示は、第２の態様のコンジュゲートを調製するための方法であって、式（Ｉ）の化合物のリンカーをターゲティング部分の活性基とカップリングするステップを含む方法を提供する。
【０１０１】
一部の好ましい実施形態では、方法は、ターゲティング部分のジスルフィド結合を還元剤（例えばＴＣＥＰ）によって開いてスルフヒドリル基を得るステップを含む。
【０１０２】
一部の好ましい実施形態では、方法は、式（Ｉ）の化合物のリンカーとターゲティング部分のスルフヒドリル基との間のＣ−Ｓ結合を形成するステップを含む。
【０１０３】
一部の好ましい実施形態では、ターゲティング部分は、抗Ｈｅｒ２モノクローナル抗体（例えば、トラスツズマブ、ペルツズマブ）若しくは抗Ｔｒｏｐ−２モノクローナル抗体（例えば、サシツズマブ、Ｍ１、Ｍ２又はＭ３）、又はそれらの活性断片又は変異体である。
【０１０４】
一部の好ましい実施形態では、ターゲティング部分の式（Ｉ）の化合物に対するモル比は１：（１〜２０）であり；好ましくは、カップリングは水及び／又は有機溶媒中で実施され；好ましくは、有機溶媒は、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、Ｎ−メチルピロリドン、ニトリル（例えばアセトニトリル）、アルコール（例えば、メタノール、エタノール）又はそれらの任意の組み合わせから選択される。
【０１０５】
一部の好ましい実施形態では、方法は、カップリング生成物を精製するステップをさらに含み；好ましくは、カップリング生成物はクロマトグラフィー（例えば、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー又はアフィニティークロマトグラフィーの１つ又は複数）によって精製される。
【０１０６】
別の態様では、本開示は、本開示の第１の態様の化合物若しくはその薬学的に許容される塩又は第２の態様のコンジュゲート、及び１種又は複数の医薬品添加剤を含む医薬組成物を提供する。
【０１０７】
別の態様では、本開示は、異常な細胞活性と関連する疾患（例えばがん）を処置するための医薬品の製造における、第１の態様の化合物若しくはその薬学的に許容される塩又は第２の態様のコンジュゲートの使用を提供する。
【０１０８】
一部の好ましい実施形態では、がんは、食道がん（例えば、食道腺癌、食道扁平上皮細胞癌）、脳腫瘍、肺がん（例えば、小細胞肺がん、非小細胞肺がん）、扁平上皮細胞癌、膀胱がん、胃がん、卵巣がん、腹膜がん、膵臓がん、乳がん、頭頚部がん、子宮頸がん、子宮内膜がん、結腸直腸がん、肝臓がん、腎臓がん、非ホジキンリンパ腫、中枢神経系腫瘍（例えば、神経膠腫、多形性神経膠芽腫、膠腫又は肉腫）、前立腺がん及び甲状腺がんなどの固形腫瘍又は非固形腫瘍である。
【０１０９】
別の態様では、本開示は、異常な細胞活性と関連する疾患（例えばがん）の処置における、第１の態様の化合物若しくはその薬学的に許容される塩又は第２の態様のコンジュゲート若しくは医薬組成物の使用を提供する。
【０１１０】
別の態様では、本開示は、異常な細胞活性と関連する疾患（例えばがん）を処置する方法であって、有効量の第１の態様の化合物若しくはその薬学的に許容される塩又は第２の態様のコンジュゲート若しくは医薬組成物を、それを必要とする個体に投与するステップを含む方法を提供する。
【０１１１】
別段の定めがない限り、本開示で使用されるすべての科学的及び専門用語は、当業者によって一般に理解される意味を有する。さらに、本明細書で使用される細胞培養、分子遺伝学、核酸化学及び免疫学実験手順はすべて、対応する分野において広く使用されるルーチン的なステップである。加えて、関連用語の定義及び説明を、本開示のより良好な理解のために下に示す。
【０１１２】
本開示では、医薬品添加剤は、製薬及び製剤化で使用される賦形剤及び添加剤を指し、安全性の点において合理的と評価されてきた物質であり、活性成分に加えて医薬製剤に含まれる。賦形剤、担体及び安定性促進剤として使用されることに加えて、医薬品添加剤はまた、可溶化、持続放出などの重要な機能を有し、薬物の品質、安全性及び有効性に影響を及ぼし得る重要な成分である。医薬品添加剤は、供給源によって、天然物質、半合成物質及び全合成物質に分けることができ；作用及び使用によって、溶媒、噴射剤、溶解補助剤、共溶媒、乳化剤、着色剤、結合剤、崩壊剤、充填剤、滑沢剤、湿潤剤、浸透圧調節剤、安定剤、流動促進剤、香味剤、防腐剤、懸濁化剤、コーティング物質、芳香剤、抗付着剤、抗酸化剤、キレート化剤、透過促進剤、ｐＨ調節剤、緩衝剤、可塑剤、界面活性剤、発泡剤、消泡剤、増粘剤、封入剤、湿潤剤、吸収剤、希釈剤、凝集剤及び解こう剤、フィルター助剤及び放出遅延剤に分けることができ；投与経路によって、経口投与、注射、粘膜、経皮又は局所投与、経鼻又は経口吸入及び眼投与に分けることができる。同じ医薬品添加剤を、投与経路が異なる医薬製剤のために使用することができ、異なる効果及び使用を有する。
【０１１３】
医薬組成物を投与経路に応じて、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、経口液、経口懸濁液、経口乳剤、散剤、チンキ剤、シロップ剤、注射剤、坐剤、軟膏剤、クリーム剤、ペースト剤、眼用製剤、丸剤、真皮下剤（ｓｕｂｄｅｒｍａｌ）、エアロゾル剤、散剤及び噴霧剤など、様々な適切な剤形に製剤化することができる。医薬組成物又は適切な剤形は、本開示の化合物又はその薬学的に許容される塩若しくはコンジュゲート０．０１ｍｇ〜１０００ｍｇ、適切には０．１ｍｇ〜８００ｍｇ、好ましくは０．５〜５００ｍｇ、好ましくは０．５〜３５０ｍｇ、特に好ましくは１から１〜２５０ｍｇを含有し得る。
【０１１４】
医薬組成物を、注射液、注射用の滅菌散剤、及び注射用濃縮液を含む注射剤の形態で投与することができる。許容される担体及び溶媒には、水、リンゲル液及び等張性塩化ナトリウム液が含まれる。加えて、モノグリセリド又はジグリセリドなどの滅菌非揮発性油も、溶媒又は懸濁媒として使用することができる。
【０１１５】
本開示では、「個体」という用語には、ヒト個体又は非ヒト動物が含まれる。例示的なヒト個体には、疾患（例えば、本明細書に記載の疾患）を有するヒト個体（患者と称される）又は正常な個体が含まれる。本開示における「非ヒト動物」という用語には、非哺乳類（例えば、鳥類、両生類及び爬虫類）な非ヒト霊長類、家畜、及び／又は家庭用動物（例えば、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウシ及びブタ）などの哺乳類などのすべての脊椎動物が含まれる。
【０１１６】
本開示では、「有効量」という用語は、投与した後に処置疾患の１種又は複数の症状をある程度軽減する化合物の量を指す。
【０１１７】
本開示では、「コンジュゲート」という用語は、生物活性分子をターゲティング部分と連結することによって得られる物質を指す。本開示の一部の実施形態では、生物活性分子を、リンカーを介してターゲティング部分に連結する。リンカーを特異的環境（例えば、細胞内低ｐＨ環境）中、又は特異的作用（例えば、リソソームのプロテアーゼの作用）下で切断し、それによって、生物活性分子をターゲティング部分から解離させることができる。本開示の一部の実施形態では、リンカーは、ペプチド又はジスルフィド結合などの切断可能又は切断不可能な単位を含む。本開示の一部の実施形態では、生物活性分子を、特異的環境又は作用下で切断され、それによって生物活性分子をターゲティング部分から解離し得る共有結合によって、ターゲティング部分に直接連結する。
【０１１８】
本開示では、「生物活性物質」及び「生物活性分子」という用語は、細胞機能を阻害又は阻止する、及び／又は細胞死又は破壊をもたらす物質を指す。本開示の一部の実施形態では、コンジュゲート中の生物活性物質又は生物活性分子は抗腫瘍生物活性を有する分子である。例えば：Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２などの放射性同位体又はＬｕの放射性同位体；白金金属錯体、金金属錯体又はオキサリプラチンなどの金属錯体；ブレオマイシン又はピンヤンマイシンなどのグリコペプチド抗生物質；トポイソメラーゼＩ阻害薬、例えば、カンプトテシン、ヒドロキシカンプトテシン、９−アミノカンプトテシン、ＳＮ−３８、イリノテカン、トポテカン、ベロテンシアン若しくはルビテカン、又はトポイソメラーゼＩＩ阻害薬、例えば、アクチノマイシンＤ、アドリアマイシン、ドキソルビシン、デュオカルマイシン、ダウノルビシン、ミトキサントロン、ポドフィロトキシン、エトポシドなどのＤＮＡトポイソメラーゼ阻害薬；メトトレキサート、５−フルオロウラシル、シタラビン、ゲムシタビン、メルカプトプリン、ペントスタチン、フルダラビン、クラドリビン又はナラビンなどのＤＮＡ合成に干渉する薬物；チューブリン阻害薬、ビンブラスチンアルカロイド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、パクリタキセル、ドセタキセル又はカバジタキセルなどの構造タンパク質に作用する薬物；セリン／トレオニンキナーゼ阻害薬、チロシンキナーゼ阻害薬、アスパルトキナーゼ阻害薬又はヒスチジンキナーゼ阻害薬などの腫瘍細胞シグナル伝達経路阻害薬；また、プロテアソーム阻害薬；ヒストンデアセイラーゼ阻害薬；腫瘍血管新生阻害薬；サイクリン阻害薬；メイタンシン誘導体；カリケアマイシン誘導体；オーリスタチン誘導体；ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）誘導体；メルファラン；マイトマイシンＣ；クロラムブシル；並びに腫瘍細胞の増殖を阻害する、腫瘍細胞のアポトーシス又は壊死を促進する他の活性物質；核溶解酵素などの酵素及びその断片；抗生物質；断片及び／又はそのバリアントを含む、細菌、真菌、植物又は動物に由来する小分子毒素又は酵素的に活性な毒素などの毒素；成長阻害薬；並びに薬物分子が含まれる。「毒素」という用語は、細胞の成長又は増殖に対して有害作用を有する物質を指す。
【０１１９】
本開示では、「小分子」という用語は、生物活性を有する小分子薬物を指す。
【０１２０】
本開示では、「リンカー」という用語は、生物活性分子をターゲティング部分と連結する断片を指す。
【０１２１】
本開示では、「ターゲティング部分」という用語は、細胞表面上の標的（又は標的の一部）に特異的に結合し得るコンジュゲートの部分を指す。コンジュゲートを、ターゲティング部分と標的との間の相互作用によって特異的な細胞集団に送達することができる。
【０１２２】
本開示では、コンジュゲートのターゲティング部分が抗体である場合、コンジュゲートは「薬物−抗体コンジュゲートと称され得る。本開示において、「薬物−抗体コンジュゲート」及び「免疫コンジュゲート」は互換的である。
【０１２３】
本開示では、「抗体」という用語は、その最も広い意味では、抗体が必要な生物活性を有するならば、完全モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、及び少なくとも２つの完全抗体から形成される多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）を含むと解釈される。本開示では、「抗体」及び「免疫グロブリン」という用語は互換的である。
【０１２４】
本開示では、「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な抗体の群からの抗体を指す。すなわち、少数の起こり得る天然変異を除いて、群を構成する抗体は同一である。モノクローナル抗体は抗原の１つの決定基（エピトープ）に対する高い特異性を有するが、これと比較されるポリクローナル抗体は種々の決定基（エピトープ）に対する種々の抗体を含有する。特異性に加えて、モノクローナル抗体は、合成中に他の抗体によって汚染されていないという利点を有する。ここで、「モノクローナル」という修飾語句は、その抗体が実質的に均一な抗体群に由来することによって特徴づけられることを示しており、特別な方法によって調製されると解釈されるべきではない。
【０１２５】
本開示の一部の実施形態では、モノクローナル抗体はまた特にキメラ抗体を含む。すなわち、その抗体が、必要とされる生物活性を有するならば、重鎖及び／又は軽鎖の一部はある種類、あるクラス又はあるサブクラスの抗体と同じ又は同種であり、残りは別の種類、別のクラス又は別のサブクラスの抗体と同じ又は同種である（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；及びＭｏｒｒｉｓｏｎら、１９８４、ＰＮＡＳ、８１：６８５１−６８５５を参照されたい）。本開示で利用可能なキメラ抗体は、非ヒト霊長類（例えば、古来のサル又はオランウータン）由来の可変領域抗原結合配列及びヒト定常領域配列を含有する霊長類化抗体を含む。
【０１２６】
「抗体断片」という用語は、抗体の一部、好ましくは抗原結合領域又は可変領域を指す。抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、ｄＡｂ及び相補性決定断片、ダイアボディ、線状抗体及び一本鎖抗体分子が含まれる。
【０１２７】
「二官能性抗体コンジュゲート」としても公知の「二重特異性抗体」という用語は、カップリングアームを介して第１の抗体（断片）及び第２の抗体（断片）によって形成されるコンジュゲートを指す。このコンジュゲートは各抗体の活性を維持し、したがって二官能性及び二重特異性特性を有する。
【０１２８】
「多重特異性抗体」という用語には、例えば、３つの異なる抗原結合特異性を有する抗体である三重特異性抗体、及び４つの異なる抗原結合特異性を有する抗体である四重特異性抗体が含まれる。
【０１２９】
「完全抗体」という用語は、抗原結合可変領域、軽鎖定常領域（ＣＬ）及び重鎖定常領域（ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３）を含有する抗体を指す。定常領域は、天然配列（例えばヒト天然定常領域配列）又はそのアミノ酸配列バリアントであり得る。完全抗体は、好ましくは１つ又は複数のエフェクター機能を有する完全抗体である。
【０１３０】
「プロボディ」という用語は、その標的に特異的に結合し得、マスクされた基とカップリングされ得る抗体又は抗体断片を含む修飾抗体であり、マスクされた基とは、ここでは、標的への抗体又は抗体断片の結合能に関する切断定数（ｃｌｅａｖａｇｅ  ｃｏｎｓｔａｎｔ）が、その標的への、マスクされた基とカップリングされていない抗体又は抗体断片の結合能に関する切断定数よりも少なくとも１００倍又は１０００倍又は１００００倍高いことを指す。
【０１３１】
本開示では、非ヒト（例えばマウス）抗体の「ヒト化」形態は、最小限の非ヒト免疫グロブリン配列を含有するキメラ抗体を指す。大部分のヒト化抗体は、ヒトレシピエント免疫グロブリンの超可変領域中の残基が、必要な特異性、親和性及び機能を有する非ヒト（例えば、マウス、ラット、ウサギ又は非ヒト霊長類）超可変領域（ドナー抗体）中の残基で置換されているものである。一部の実施形態では、ヒト免疫グロブリンのフレーム領域（ＦＲ）中の残基も、非ヒト残基で置換されている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体又はドナー抗体中に存在しない残基も含有していてもよい。そのような修飾は、抗体性能をさらに最適化するために作製される。ヒト化抗体は一般に、少なくとも１つの可変領域、典型的には２つの可変領域を含有し、ここで、すべて又はほとんどすべての超可変ループが非ヒト免疫グロブリンに対応するが、すべて又はほとんどすべてのＦＲがヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ、通常はヒト免疫グロブリンＦｃ）の少なくとも一部を含有していてもよい。詳細については、例えば、Ｊｏｎｅｓら、１９８６、Ｎａｔｕｒｅ、３２１：５２２〜５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、１９８８、Ｎａｔｕｒｅ、３３２：３２３〜３２９；及びＰｒｅｓｔａ、１９９２、Ｃｕｒｒ  Ｏｐ  Ｓｔｒｕｃｔ  Ｂｗｌ  ２：５９３〜５９６を参照されたい。
【０１３２】
完全抗体は、重鎖定常領域のアミノ酸配列に従って異なる「群」に分類され得る。主な５つの群は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭであり、そのうちのいくつかはまた、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２などの異なる「サブクラス」（アイソタイプ）にさらに分類され得る。抗体の重鎖定常領域の異なる群は、それぞれα、β、ε、γ及びμと呼ばれる。免疫グロブリンのサブユニット構造及び３Ｄ配置の種々のクラスが、当技術分野で周知である。
【０１３３】
本開示では、抗体中のアミノ酸置換は多くの場合に、Ｌ−アミノ酸で置換されているが、実施形態はそれに限定されない。一部の実施形態では、抗体ペプチド鎖は、１個又は複数のＤ−アミノ酸を含有し得る。Ｄ−アミノ酸を含有するペプチドは、口腔、腸管又は血漿において、Ｌ−アミノ酸のみを含有するペプチドよりも安定性が高く、分解性が低いことがある。
【０１３４】
本開示で使用されるモノクローナル抗体は、多数の方法によって生成することができる。例えば、本開示中で使用されるモノクローナル抗体は、多数の種（マウス、ハムスター、ラット及びヒトの細胞を含む）を使用するハイブリドーマ方法（例えば、Ｋｏｈｌｅｒら、１９７５、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５を参照されたい）によって、又は組み換えＤＮＡ技法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）によって得ることができるか、又はファージ抗体ライブラリから単離することができる（例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら、１９９１、Ｎａｔｕｒｅ、３５２：６２４〜６２８；及びＭａｒｋｓら、１９９１、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２２２：５８１〜５９７を参照されたい）。本開示で使用することができるモノクローナル抗体には、これらに限定されないが、トラスツズマブ及びペルツズマブなどの抗Ｈｅｒ２モノクローナル抗体、又はサシツズマブ（すなわち、イサクツズマブ（Ｉｓａｃｔｕｚｕｍａｂ）又はｈＲＳ７抗体）などの抗Ｔｒｏｐ−２モノクローナル抗体、Ｍ１、Ｍ２又はＭ３が含まれる。
【０１３５】
一部の好ましい実施形態では、Ａの標的は、上皮成長因子、Ｔｒｏｐ−２、ＣＤ３７、ＨＥＲ２、ＣＤ７０、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、Ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ、Ｆｏｌａｔｅ  ｅｃｅｏｐｔｏｒ１、Ｍｕｃｉｎ  １、ＣＤ１３８、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ３０、ＳＬＴＲＫ６、Ｎｅｃｔｉｎ  ４、Ｔｉｓｓｕｅ  ｆａｃｔｏｒ、Ｍｕｃｉｎ１６、Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎｒｅｃｅｏｐｔｏｒ、ＳＴＥＡＰ１、ＳＬＣ３９Ａ６、Ｇｕａｎｙｌｙｌｃｙｃｌａｓｅ  Ｃ、ＰＳＭＡ、ＣＣＤ７９ｂ、ＣＤ２２、Ｓｏｄｉｕｍ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｃｏｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ  ２Ｂ、ＧＰＮＭＢ、Ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ、ＡＧＳ−１６、ＥＧＦＲ、ＣＤ３３、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７４、ＣＤ５６、ＰＤ−Ｌ１、ＴＡＣＳＴＤ２、ＤＲ５、Ｅ１６、ＳＴＥＡＰ１、０７７２Ｐ、ＭＰＦ、Ｎａｐｉ３ｂ、Ｓｅｍａ  ５ｂ、ＰＳＣＡ  ｈｌｇ、ＥＴＢＲ、ＭＳＧ７８３、ＳＴＥＡＰ２、ＴｒｐＭ４、ＣＲＩＰＴＯ、ＣＤ２１、ＣＤ７９ｂ、ＦｃＲＨ２、ＮＣＡ、ＭＤＰ、ＩＬ２０Ｒα、Ｂｒｅｖｉｃａｎ、ＥｐｈＢ２Ｒ、ＡＳＬＧ６５９、ＰＳＣＡ、ＧＥＤＡ、ＢＡＦＦ−Ｒ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＸＣＲ５、ＨＬＡ−ＤＯＢ、Ｐ２Ｘ５、ＣＤ７２、ＬＹ６４、ＦｃＲＨ１、ＩＲＴＡ２、ＴＥＮＢ２、ｉｎｔｅｇｒｉｎ  α５β６、α４β７、ＦＧＦ２、ＦＧＦＲ２、Ｈｅｒ３、ＣＤ７０、ＣＡ６、ＤＬＬ３、ＤＬＬ４、Ｐ−ｃａｄｈｅｒｉｎ、ＥｐＣＡＭ、ｐＣＡＤ、ＣＤ２２３、ＬＹＰＤ３、ＬＹ６Ｅ、ＥＦＮＡ４、ＲＯＲ１、ＳＬＩＴＲＫ６、５Ｔ４、ＥＮＰＰ３、ＳＬＣ３９Ａ６、Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２、ＢＭＰＲ１Ｂ、Ｅ１６、ＳＴＥＡＰ１、Ｔｙｒｏ７、０７７２Ｐ、ＭＰＦ、Ｎａｐｉ３ｂ、Ｓｅｍａ  ５ｂ、ＰＳＣＡ  ｈｌｇ、ＥＴＢＲ、ＭＳＧ７８３、ＳＴＥＡＰ２、ＴｒｐＭ４、ＣＲＩＰＴＯ、ＣＤ２１、ＣＤ７９ｂ、ＦｃＲＨ２、ＮＣＡ、ＭＤＰ、ＩＬ２０Ｒα、Ｂｒｅｖｉｃａｎ、ＥｐｈＢ２Ｒ、ＡＳＬＧ６５９、ＰＳＣＡ、ＧＥＤＡ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＸＣＲ５、ＨＬＡ−ＤＯＢ、Ｐ２Ｘ５、ＣＤ７２、ＬＹ６４、ＦｃＲＨ１、ＩＲＴＡ２、ｃ−Ｍｅｔ、ＡｐｏＥ、ＣＤ１  ｌｃ、ＣＤ４０、ＣＤ４５（ＰＴＰＲＣ）、ＣＤ４９Ｄ（ＩＴＧＡ４）、ＣＤ８０、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＴＳＤ、ＧＺＭＢ、Ｌｙ８６、ＭＳ４Ａ７、ＰＩＫ３ＡＰ１、ＰＩＫ３ＣＤ、ＣＣＲ５、ＩＦＮＧ、ＩＬ１０ＲＡ１、ＩＬ−６、ＡＣＴＡ２、ＣＯＬ７Ａ１、ＬＯＸ、ＬＲＲＣ１５、ＭＣＰＴ８、ＭＭＰ１０、ＮＯＧ、ＳＥＲＰＩＮＥｌ、ＳＴＡＴ１、ＴＧＦＢＲ１、ＣＴＳＳ、ＰＧＦ、ＶＥＧＦＡ、Ｃ１ＱＡ、Ｃ１ＱＢ、ＡＮＧＰＴＬ４、ＥＧＬＮ、ＡＮＧＰＴＬ４、ＥＧＬＮ３、ＢＮＩＰ３、ＡＩＦ１、ＣＣＬ５、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＩＦＩ６、ＰＬＯＤ２、ＫＩＳＳ１Ｒ、ＳＴＣ２、ＤＤＩＴ４、ＰＦＫＦＢ３、ＰＧＫ１、ＰＤＫ１、ＡＫＲ１Ｃ１、ＡＫＲ１Ｃ２、ＣＡＤＭ１、ＣＤＨ１１、ＣＯＬ６Ａ３、ＣＴＧＦ、ＨＭＯＸ１、ＫＲＴ３３Ａ、ＬＵＭ、ＷＮＴ５Ａ、ＩＧＦＢＰ３、ＭＭＰ１４、ＣＤＣＰ１、ＰＤＧＦＲＡ、ＴＣＦ４、ＴＧＦ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ２、ＣＤ１  ｌｂ、ＡＤＧＲＥ１、ＥＭＲ２、ＴＮＦＲＳＦ２１、ＵＰＫ１Ｂ、ＴＮＦＳＦ９、ＭＭＰ１６、ＭＦＩ２、ＩＧＦ−１Ｒ、���ＮＦ４３、ＮａＰｉ２ｂ、ＢＣＭＡ及びＴＥＮＢ２から選択される。
【０１３６】
本開示の一部の実施形態では、ターゲティング部分Ａの標的は、細胞表面インテグリン受容体を認識するＲＧＤペプチド；ＥＧＦ、ＰＤＧＦ又はＶＥＧＦなどの細胞表面成長因子受容体を認識する成長因子；及び機能性細胞表面プラスミノーゲン活性化因子、ボンベシン、ブラジキニン、ソマトスタチン又は前立腺特異的膜抗原受容体を認識し得るペプチドから選択される。
【０１３７】
本開示の一部の実施形態では、ターゲティング部分Ａの標的は、ＣＤ４０リガンド、ＣＤ３０リガンド、ＯＸ４０リガンド、ＰＤ−１リガンド、ＥｒｂＢリガンド、Ｈｅｒ２リガンド、ＴＡＣＳＴＤ２リガンド及びＤＲ５リガンドから選択される。
【０１３８】
本開示の一部の実施形態では、ターゲティング部分Ａは、トラスツズマブ若しくはペルツズマブなどの抗Ｈｅｒ２モノクローナル抗体；又はサシツズマブ、Ｍ１、Ｍ２若しくはＭ３などの抗Ｔｒｏｐ−２モノクローナル抗体である。
【０１３９】
本開示の一部の実施形態では、ターゲティング部分はトラスツズマブ又はペルツズマブである。トラスツズマブは抗Ｈｅｒ２モノクローナル抗体であり、そのアミノ酸配列は当業者に公知であり、配列の概要については例えばＣＮ１０３３１９５９９を参照されたい。
【０１４０】
本開示の一部の実施形態では、ターゲティング部分の重鎖の末端Ｌｙｓは容易に欠失されるが、そのような欠失は生物活性に影響を及ぼさない。Ｄｉｃｋ、Ｌ．Ｗ．ら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．、１００：１１３２〜１１４３を参照されたい。例えば、ターゲティング部分は、重鎖の末端Ｌｙｓが欠失したサシツズマブなどの抗Ｔｒｏｐ−２モノクローナル抗体、Ｍ１、Ｍ２又はＭ３であり、例えば、ターゲティング部分は、重鎖の末端Ｌｙｓが欠失したトラスツズマブ又はペルツズマブなどの抗Ｈｅｒ２モノクローナル抗体である。
【０１４１】
トラスツズマブの例示的な重鎖及び軽鎖配列については配列番号１７及び配列番号１８を参照されたい。本開示では、参照される又は関係するトラスツズマブの重鎖及び軽鎖配列は、それぞれ配列番号１７及び配列番号１８に示される配列を用いて記載される。ペルツズマブの例示的な重鎖及び軽鎖配列については米国特許第７５６０１１１号の配列番号１６及び配列番号１５を参照されたい。
【０１４２】
配列番号１７（重鎖配列）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（Ｋ）
【０１４３】
配列番号１８（軽鎖配列）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
【０１４４】
本開示の一部の実施形態では、ターゲティング部分の抗Ｔｒｏｐ−２抗体は、米国特許第７，５１７，９６４号に記載のＲＳ７（すなわち本開示のサシツズマブ）；及び米国特許出願公開第２０１２／０２３７５１８号に記載のｈＲＳ７（すなわち本開示のサシツズマブ）である。本開示で利用可能な抗Ｔｒｏｐ−２抗体は、スクリーニングによって、中国特許第１０３４７６９４１Ａ号に開示されている担体設計、構築及び抗体をディスプレイする抗体のライブラリの構築によって得ることもできるし、又はＳｏｒｒｅｎｔｏ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．のＧ−ＭＡＢ（登録商標）ライブラリをスクリーニングすることによって得ることもできる。
【０１４５】
モノクローナル抗体サシツズマブの重鎖配列及び軽鎖アミノ酸配列についてはそれぞれ例えば配列番号１９及び配列番号２０を参照されたい。
【０１４６】
配列番号１９（重鎖配列）
ＱＶＱＬＱＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＫＱＡＰＧＱＧＬＫＷＭＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＴＤＤＦＫＧＲＦＡＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＳＳＬＫＡＤＤＴＡＶＹＦＣＡＲＧＧＦＧＳＳＹＷＹＦＤＶＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（Ｋ）
【０１４７】
重鎖の末端Ｋ（又はｌｙｓ）は容易に欠失されるが、そのような欠失は生物活性に影響を及ぼさない。Ｄｉｃｋ，Ｌ．Ｗ．ら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  Ｂｉｏｅｎｇ．、１００：１１３２〜１１４３を参照されたい。
【０１４８】
配列番号２０（軽鎖配列）
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＩＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹＴＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＨＹＩＴＰＬＴＦＧＡＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
【０１４９】
本開示では、ＥｒｂＢ２及びＨｅｒ２／ｎｅｕは互換的であり、その両方が、天然配列のヒトＨｅｒ２タンパク質（Ｇｅｎｅｂａｎｋ  ＣＡＳ番号Ｘ０３３６３、例えば、Ｓｅｍｂａら、１９８５、ＰＮＡＳ、８２：６４９７〜６５０１；及びＹａｍａｍｏｔｏら、１９８６、Ｎａｔｕｒｅ、３１９：２３０〜２３４を参照されたい）及びアミノ酸配列バリアントなどのその機能性誘導体を表す。ＥｒｂＢ２は、ヒトＨｅｒ２をコードする遺伝子を表し、ｎｅｕは、ラットｐ１８５ｎｅｕをコードする遺伝子を表す。一部の実施形態では、本開示の化合物又はコンジュゲートは、乳がん細胞、卵巣がん細胞、胃がん細胞、子宮内膜がん細胞、唾液腺がん細胞、肺がん細胞、腎臓がん細胞、結腸がん細胞、甲状腺がん細胞、膵臓がん細胞、膀胱がん細胞又は肝臓がん細胞など、ＥｒｂＢ２受容体を発現する細胞を阻害する、又は死滅させることができる。
【０１５０】
本開示では、Ｔｒｏｐ−２又はＴＲＯＰ２は、ＴＡＣＳＴＤ２、Ｍ１Ｓ１、ＧＡ７３３−１、ＥＧＰ−１としても公知のヒト栄養膜細胞表面抗原２を指し、これは、多くのヒト腫瘍（例えば、乳がん、結腸直腸がん、肺がん、膵臓がん、卵巣がん、前立腺がん及び子宮頸がん）で発現される細胞表面受容体である。一部の実施形態では、本開示の化合物又はコンジュゲートは、乳がん細胞、結腸直腸がん細胞、肺がん細胞、膵臓がん細胞、卵巣がん細胞、前立腺がん細胞又は子宮頸がん細胞など、ＴＲＯＰ２受容体を発現する細胞を阻害する、又は死滅させることができる。
【０１５１】
本明細書で使用する場合、本発明のコンジュゲート中に含有される
【化８５】
2021506743.tif 000146
は、ターゲティング部分が抗体である場合、抗体におけるスルフヒドリル基及びリンカーの特異的な連結様式を示す。
【０１５２】
本明細書で使用する場合、「Ｃ１〜６アルキル」という用語は、例えば、「Ｃ１〜４アルキル」及び「Ｃ１〜３アルキル」を含む、１〜６個の炭素原子を含有する直鎖又は分枝アルキルを指す。具体的な例には、これらに限定されないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソ−ペンチル、２−メチルブチル、ネオペンチル、１−エチルプロピル、ｎ−ヘキシル、イソヘキシル、３−メチルペンチル、２−メチルペンチル、１−メチルペンチル、３，３−ジメチルブチル、２，２−ジメチルブチル、１，１−ジメチルブチル、１，２−ジメチルブチル、１，３−ジメチルブチル、２，３−ジメチルブチル、２−エチルブチル及び１，２−ジメチルプロピルが含まれる。
【０１５３】
本明細書で使用する場合、「Ｃ２〜６アルケニル」という用語は、例えば、「Ｃ２〜４アルケニル」を含む、少なくとも１つの二重結合及び２〜６個の炭素原子を含有する直鎖、分枝又は環式アルケニルを指す。「Ｃ２〜６アルケニル」の例には、これらに限定されないが、ビニル、１−プロペニル、２−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、１，３−ブタジエニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−ペンテニル、１，３−ペンタジエニル、１，４−ペンタジエニル、１−ヘキセニル、２−ヘキセニル、３−ヘキセニル、１，４−ヘキサジエニル、シクロペンテニル、１，３−シクロペンタジエニル、シクロヘキセニル及び１，４−シクロヘキサジエニルが含まれる。
【０１５４】
本明細書で使用する場合、「Ｃ２〜６アルキニル」という用語は、例えば、「Ｃ２〜４アルキニル」を含む、少なくとも１つの三重結合及び２〜６個の炭素原子を含有する直鎖又は分枝アルキニルを指す。「Ｃ２〜６アルキニル」の例には、これらに限定されないが、エチニル、プロピニル、２−ブチニル、２−ペンチニル、３−ペンチニル、４−メチル−２−ペンチニル、２−ヘキシニル、３−ヘキシニル及び５−メチル−２−ヘキシニルが含まれる。
【０１５５】
本明細書で使用する場合、「ハロゲン」という用語には、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素が含まれる。
【０１５６】
本明細書で使用する場合、「３〜８員シクロアルキル」又は「Ｃ３〜８シクロアルキル」という用語は、例えば、「３〜６員シクロアルキル」、「４〜６員シクロアルキル」、「５〜７員シクロアルキル」又は「５〜６員シクロアルキル」を含む、３〜８個の炭素原子を含有する飽和環式アルキルを指す。具体的な例には、これらに限定されないが、シクロプロパニル、シクロブチルアルキル、ペンタニル、シクロヘキシル、シクロヘプチル及びシクロオクタデシルが含まれる。
【０１５７】
本明細書で使用する場合、「Ｃ１〜６アルコキシ」という用語は、Ｃ１〜６アルキル−Ｏ−の構造を有する基を指し、ここで、Ｃ１〜６アルキルは、前で定義した通りである。具体的な例には、これらに限定されないが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ペントキシ及びヘキシルオキシが含まれる。
【０１５８】
本明細書で使用する場合、「３〜８員脂肪族ヘテロシクリル」という用語は、３〜８個の環形成原子（環形成原子のうちの少なくとも１個は、窒素原子、酸素原子又は硫黄原子などのヘテロ原子である）を含有する環式基を指す。任意選択で、環式構造中の環形成原子（例えば、炭素原子、窒素原子又は硫黄原子）は、酸素で置換されていてよい。「３〜８員脂肪族ヘテロシクリル」には、例えば、これらに限定されないが、オキシラニル、オキソシクロブチル、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、ピペリジニル、ピペラジニル、テトラヒドロピラニル及びホモピペラジニルを含む「３〜８員窒素含有脂肪族ヘテロシクリル」、「３〜８員酸素含有脂肪族ヘテロシクリル」、「３〜６員脂肪族ヘテロシクリル」、「３〜６員酸素含有脂肪族ヘテロシクリル」、「４〜７員脂肪族ヘテロシクリル」、「４〜６員脂肪族ヘテロシクリル」、「５〜７員脂肪族ヘテロシクリル」、「５〜６員脂肪族ヘテロシクリル」、「５〜６員窒素含有脂肪族ヘテロシクリル」が含まれる。
【０１５９】
本明細書で使用する場合、「６〜１２員スピロシクリル」という用語は、６〜１２個の環形成炭素原子を含有し、１個の炭素原子を共有する２つ以上の環式構造によって形成される環式構造を指す。任意選択で、環式構造中の炭素原子は酸素で置換されていてよい。「６〜１２員スピロシクリル」には、例えば、「６〜１１員スピロシクリル」、「６〜１０員スピロシクリル」、「７〜１０員スピロシクリル」、「７〜９員スピロシクリル」、「７〜８員スピロシクリル」、「９〜１０員スピロシクリル」及び「３〜１０員スピロシクリル」が含まれる。具体的な例には、これらに限定されないが、
【化８６】
2021506743.tif 000147
が含まれる。
【０１６０】
本明細書で使用する場合、「６〜１２員架橋シクリル」という用語は、６〜１２個の環形成炭素原子を含有し、２個の隣接炭素原子を共有する２つ以上の環式構造によって形成される環式構造を指す。任意選択で、環式構造中の炭素原子は酸素で置換されていてよい。「６〜１２員架橋シクリル」には、例えば、「６〜１１員架橋シクリル」、「５〜１０員架橋シクリル」、「７〜１０員架橋シクリル」、「７〜９員架橋シクリル」、「７〜８員架橋シクリル」、「９〜１０員架橋シクリル」及び「３〜１０員架橋シクリル」が含まれる。具体的な例には、これらに限定されないが、
【化８７】
2021506743.tif 000148
が含まれる。
【０１６１】
本明細書で使用する場合、「６〜１２員縮合シクリル」という用語は、「６〜１１員縮合シクリル」、「６〜１０員縮合シクリル」、「６〜８員縮合シクリル」、「１０〜１２員縮合シクリル」、「７〜１０員縮合シクリル」を含む、６〜１２個の環形成炭素原子を含有し、２個の隣接する原子を共有する２つ以上の環式構造によって形成される環式構造を指す。「６〜１２員縮合シクリル」の例には、これらに限定されないが、
【化８８】
2021506743.tif 000149
が含まれる。
【０１６２】
本明細書で使用する場合、「６〜１２員スピロヘテロシクリル」という用語は、６〜１２個の環形成炭素原子（そのうちの少なくとも１個は、窒素原子、酸素原子又は硫黄原子などのヘテロ原子である）を含有し、１個の環形成原子を共有する２つ以上の環式構造によって形成される環式構造を指す。任意選択で、環式構造中の環形成原子（例えば、炭素原子、窒素原子又は硫黄原子）は、酸素で置換されていてよい。「６〜１２員スピロヘテロシクリル」には、例えば、「６〜１１員スピロヘテロシクリル」、「５〜１０員スピロヘテロシクリル」、「７〜１１員スピロヘテロシクリル」、「７〜１０員スピロヘテロシクリル」、「７〜９員スピロヘテロシクリル」、「７〜８員スピロヘテロシクリル」、「９〜１０員スピロヘテロシクリル」及び「３〜１０員スピロヘテロシクリル」が含まれる。具体的な例には、これらに限定されないが、
【化８９】
2021506743.tif 000150
が含まれる。
【０１６３】
本明細書で使用する場合、「６〜１２員架橋ヘテロシクリル」という用語は、６〜１２個の環形成原子（そのうちの少なくとも１個は、窒素原子、酸素原子又は硫黄原子などのヘテロ原子である）を含有し、２個の非隣接環形成原子を共有する２つ以上の環式構造によって形成される環式構造を指す。任意選択で、環式構造中の環形成原子（例えば、炭素原子、窒素原子又は硫黄原子）は、酸素で置換されていてよい。「６〜１２員架橋ヘテロシクリル」には、例えば、「６〜１１員架橋ヘテロシクリル」、「６〜９員架橋ヘテロシクリル」、「６〜１０員架橋ヘテロシクリル」、「７〜１０員架橋ヘテロシクリル」、「７〜９員架橋ヘテロシクリル」、「７〜８員架橋ヘテロシクリル」、「８員架橋ヘテロシクリル」、「９〜１０員架橋ヘテロシクリル」及び「３〜１０員架橋ヘテロシクリル」が含まれる。具体的な例には、これらに限定されないが、
【化９０】
2021506743.tif 000151
が含まれる。
【０１６４】
本明細書で使用する場合、「６〜１２員縮合ヘテロシクリル」という用語は、６〜１２個の環形成原子（そのうちの少なくとも１個は、窒素原子、酸素原子又は硫黄原子などのヘテロ原子である）を含有し、２個の隣接する原子を共有する２つ以上の環式構造によって形成される環式構造を指す。任意選択で、環式構造中の環形成原子（例えば、炭素原子、窒素原子又は硫黄原子）は、酸素で置換されていてよい。「６〜１２員縮合ヘテロシクリル」には、例えば、「６〜１１員縮合ヘテロシクリル」、「５〜１０員縮合ヘテロシクリル」、「７〜１０員縮合ヘテロシクリル」、「３〜１０員縮合ヘテロシクリル」、「３〜１０員窒素含有縮合ヘテロシクリル」、「９〜１０員縮合ヘテロシクリル」、「９〜１０員窒素含有縮合ヘテロシクリル」及び「６〜１２員酸素含有縮合ヘテロシクリル」が含まれる。具体的な例には、これらに限定されないが、テトラヒドロイミダゾ［４，５−ｃ］ピリジル、３，４−ジヒドロキナゾリニル、１，２−ジヒドロキノキサリニル、ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソリル、１，３−ジヒドロイソベンゾフラニル、４Ｈ−１，３−ベンゾオキサジニル、４，６−ジヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｄ］イミダゾリル、３ａ，４，６，６ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｄ］イミダゾリル、４，６−ジヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾリル、４，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾリル、ベンゾイミダゾリジニル、オクタヒドロ−ベンゾ［ｄ］イミダゾリル、デカヒドロキノリル、ヘキサヒドロチエノイミダゾリル、ヘキサヒドロフロイミダゾリル、４，５，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾリル、オクタヒドロシクロペンタノ［ｃ］ピロリル、ジヒドロインドリル、ジヒドロイソインドリル、ベンゾオキサゾリジニル、ベンゾチアゾリジニル、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリニル、１，２，３，４−テトラヒドロキノリニル及び４Ｈ−１，３−ベンゾオキサジニルが含まれる。
【０１６５】
本明細書で使用する場合、「アリール」という用語は、６〜２０員アリール、６〜１０員アリール及び５〜８員アリールなど、芳香族性を有する単環式又は多環式ヒドロカルボニルを指す。具体的な例には、これらに限定されないが、フェニル、ナフチル、アントラセニル及びフェナントリルが含まれる。「６〜２０員アリール」は、６〜２０個の環形成原子を含有するアリールを指す。
【０１６６】
本明細書で使用する場合、「ヘテロアリール」という用語は、少なくとも１個の環形成原子が窒素原子、酸素原子又は硫黄原子などのヘテロ原子である芳香族性を有する環式基を指す。任意選択で、環式構造中の環形成原子（例えば、炭素原子、窒素原子又は硫黄原子）は、酸素で置換されていてよい。具体的な例には、これらに限定されないが、フリル、チエニル、ピロリル、チアゾリル、イソチアゾリル、チアジアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、１，２，３−トリアゾリル、１，２，４−トリアゾリル、１，２，３−オキサジアゾリル、１，２，４−オキサジアゾリル、１，２，５−オキサジアゾリル、１，３，４−オキサジアゾリル、ピリジル、２−ピリドン、４−ピリドン、ピリミジニル、１，４−ジオキサシクロヘキサジエニル、２Ｈ−１，２−オキサジニル、４Ｈ−１，２−オキサジニル、６Ｈ−１，２−オキサジニル、４Ｈ−１，３−オキサジニル、６Ｈ−１，３−オキサジニル、４Ｈ−１，４−オキサジニル、ピリダジニル、ピラジニル、１，２，３−トリアジニル、１，３，５−トリアジニル、１，２，４，５−テトラジニル、アザシクロヘプタトリエニル、１，３−ジアザシクロヘプタトリエニル及びアザシクロオクタテトラエニルなどの５〜１０員ヘテロアリール、５〜１０員窒素含有ヘテロアリール、６〜１０員酸素含有ヘテロアリール、６〜８員窒素含有ヘテロアリール及び５〜８員酸素含有ヘテロアリールが含まれる。
【０１６７】
発明の有益な効果
本開示は、ＡＤＣ又はＳＭＤＣにおいて薬物及びターゲティング部分のカップリング方法を改善することによって、ある種の新規の生物活性分子コンジュゲートを得るものである。本開示の一部の実施形態では、生物活性分子コンジュゲートは、抗体中の遊離スルフヒドリルによってＡＤＣリンカー上のヘテロアリール環を求核性置換することによって得られる。このカップリングによって得られたコンジュゲートは、次の技術的効果のうちの少なくとも１つを達成することができる：
（１）高い安定性；
（２）高いＤＡＲ、一部の実施形態ではコンジュゲートのＤＡＲ値は５〜８に達し得る；
（３）きわめて高いカップリング効率、一部の実施形態ではカップリング効率は９０％に達し得る；
（４）カップリングによって得られたコンジュゲートは循環中の薬物の安定性を効果的に改善し、非標的細胞における薬物の予期されていない解離を減少させ得る；
（５）コンジュゲートはまた、細胞での生物活性分子の有効な放出を増加させて、毒性の低下及び有効性の上昇という目的を達成し得る；
（６）コンジュゲートは良好な腫瘍組織標的性を有する；及び
（７）コンジュゲートは腫瘍の動物モデルに対して高い有効性を有する。
【０１６８】
加えて、本開示に記載のカップリング方法は広い適用範囲を有し、生物活性分子を抗体又は標的化小分子リガンドとカップリングさせる際に広く使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【０１６９】
【図１】ＢＴ００１００２のＴＩＣ（トータルイオンクロマトグラム）を示している。
【図２】ＢＴ００１００２のカップリングされた軽鎖のデコンボリューションダイアグラムを示している。
【図３】ＢＴ００１００２のカップリングされた重鎖のデコンボリューションダイアグラムを示している。
【図４】ＢＴ００１００４のＴＩＣ（トータルイオンクロマトグラム）を示している。
【図５】ＢＴ００１００４のカップリングされた軽鎖のデコンボリューションダイアグラムを示している。
【図６】ＢＴ００１００４のカップリングされた重鎖のデコンボリューションダイアグラムを示している。
【図７】ＢＴ００１００２のＳＥＣクロマトグラムを示している。
【図８】ＢＴ００１００２の分子量マーカーのＳＥＣクロマトグラムを示している。
【図９】ＢＴ００１００４のＳＥＣクロマトグラムを示している。
【図１０】ＢＴ００１０１２のカップリングされた軽鎖のデコンボリューションダイアグラムを示している。
【図１１】ＢＴ００１０１２のカップリングされた重鎖のデコンボリューションダイアグラムを示している。
【図１２】ＢＴ００１０１３のカップリングされた軽鎖のデコンボリューションダイアグラムを示している。
【図１３】ＢＴ００１０１３のカップリングされた重鎖のデコンボリューションダイアグラムを示している。
【図１４】ＢＴ００１０１８のカップリングされた軽鎖のデコンボリューションダイアグラムを示している。
【図１５】ＢＴ００１０１８のカップリングされた重鎖のデコンボリューションダイアグラムを示している。
【図１６】ＢＴ００１０２１のカップリングされた軽鎖のデコンボリューションダイアグラムを示している。
【図１７】ＢＴ００１０２１のカップリングされた重鎖のデコンボリューションダイアグラムを示している。
【図１８】ＢＴ００１０２３のカップリングされた軽鎖のデコンボリューションダイアグラムを示している。
【図１９】ＢＴ００１０２３のカップリングされた重鎖のデコンボリューションダイアグラムを示している。
【図２０】ＢＴ００１０４０のカップリングされた軽鎖のデコンボリューションダイアグラムを示している。
【図２１】ＢＴ００１０４０のカップリングされた重鎖のデコンボリューションダイアグラムを示している。
【図２２】ＢＴ００１０４１のカップリングされた軽鎖のデコンボリューションダイアグラムを示している。
【図２３】ＢＴ００１０４１のカップリングされた重鎖のデコンボリューションダイアグラムを示している。
【図２４】ＢＴ００１０４２のカップリングされた軽鎖のデコンボリューションダイアグラムを示している。
【図２５】ＢＴ００１０４２のカップリングされた重鎖のデコンボリューションダイアグラムを示している。
【図２６】ＢＴ００１０４３のカップリングされた軽鎖のデコンボリューションダイアグラムを示している。
【図２７】ＢＴ００１０４３のカップリングされた重鎖のデコンボリューションダイアグラムを示している。
【図２８】ＢＴ００１０４４のカップリングされた軽鎖のデコンボリューションダイアグラムを示している。
【図２９】ＢＴ００１０４４のカップリングされた重鎖のデコンボリューションダイアグラムを示している。
【図３０】ＢＴ００１０４６のカップリングされた軽鎖のデコンボリューションダイアグラムを示している。
【図３１】ＢＴ００１０４６のカップリングされた重鎖のデコンボリューションダイアグラムを示している。
【図３２】ＢＴ００１０４７のカップリングされた軽鎖のデコンボリューションダイアグラムを示している。
【図３３】ＢＴ００１０４７のカップリングされた重鎖のデコンボリューションダイアグラムを示している。
【図３４】ＢＴ００１０１２のＳＥＣクロマトグラムを示している。
【図３５】ＢＴ００１０１３のＳＥＣクロマトグラムを示している。
【図３６】ＢＴ００１０１８のＳＥＣクロマトグラムを示している。
【図３７】ＢＴ００１０２１のＳＥＣクロマトグラムを示している。
【図３８】ＢＴ００１０２３のＳＥＣクロマトグラムを示している。
【図３９】ＢＴ００１０４２のＳＥＣクロマトグラムを示している。
【図４０】ＢＴ００１０４３のＳＥＣクロマトグラムを示している。
【図４１】ＢＴ００１０４４のＳＥＣクロマトグラムを示している。
【図４２】ＢＴ００１０４６のＳＥＣクロマトグラムを示している。
【図４３】ＢＴ００１０４７のＳＥＣクロマトグラムを示している。
【図４４】ＮＣＩ−Ｎ８７ヒト胃がんモデルにおけるマウスの各群の腫瘍成長体積の変化が示されている。
【図４５】ＮＣＩ−Ｎ８７ヒト胃がんモデルにおけるマウスの各群の体重変化が示されている。
【図４６】ＨＣＣ１８０６ヒト乳がんモデルにおけるマウスの各群の腫瘍成長体積の変化が示されている。
【図４７Ａ】ＨＣＣ８２７ヒト非小細胞肺がんの異種移植片モデルにおけるマウスの各群の腫瘍成長体積の変化が示されている。
【図４７Ｂ】ＨＣＣ８２７ヒト非小細胞肺がんの異種移植片モデルにおけるマウスの各群の体重変化が示されている。
【図４８Ａ】ＮＣＩ−Ｎ８７ヒト胃がんの異種移植片モデルにおけるマウスの各群の腫瘍成長体積の変化が示されている。
【図４８Ｂ】ＮＣＩ−Ｎ８７ヒト胃がんの異種移植片モデルにおけるマウスの各群の体重変化が示されている。
【図４９Ａ】ＭＤＡ−ＭＢ−２３１ヒト乳がんの担腫瘍マウスモデルにおけるマウスの各群の腫瘍成長体積の変化が示されている。
【図４９Ｂ】ＭＤＡ−ＭＢ−２３１ヒト乳がんの担腫瘍マウスモデルにおけるマウスの各群の体重変化が示されている。
【発明を実施するための具体的な様式】
【０１７０】
本開示を具体的な実施形態と組み合わせてさらに例示するが、本開示はそれらの実施形態に限定されない。当業者は、本開示の基本的なアイデア及び範囲から逸脱することなく、本開示の教示に従って様々な変更又は改善が成され得ることを理解すべきである。
【０１７１】
本発明における略語は次の意味を有する：
【表２】
2021506743.tif 000152
【０１７２】
調製溶液
次の実施例に記載の化合物の構造を核磁気共鳴（１Ｈ  ＮＭＲ）又は質量分析法（ＭＳ）によって決定した。
【０１７３】
核磁気共鳴（１Ｈ  ＮＭＲ）は、Ｂｒｕｋｅｒ  ４００ＭＨｚ  ＮＭＲ分光計を使用することによって決定した。重水素化メタノール（ＣＤ３ＯＤ）、重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）又は重水素化ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ−Ｄ６）が決定のための溶媒であり、テトラメチルシラン（ＴＭＳ）が内標準物質であった。
【０１７４】
実施例で使用される核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルの略語を下に示した。
ｓ：一重線、ｄ：二重線、ｔ：三重線、ｑ：四重線、ｄｄ：二重二重線、ｑｄ：四重線二重線、ｄｄｄ：二重二重二重線、ｄｄｔ：二重二重三重線、ｄｄｄｄ：二重二重二重二重線、ｍ：多重線、ｂｒ：ブロード、Ｊ：結合定数、Ｈｚ：ヘルツ、ＤＭＳＯ−ｄ６：重水素化ジメチルスルホキシド。δ値はｐｐｍで表した。
【０１７５】
質量スペクトル（ＭＳ）を、Ａｇｉｌｅｎｔ（ＥＳＩ）質量分析計（モデル：Ａｇｉｌｅｎｔ  ６１２０Ｂ）を用いて決定した。
【０１７６】
分取液体クロマトグラフィー：
方法Ａ：
クロマトグラフィーカラム：  Ｄａｉｓｏｇｅｌ  Ｃ１８  １０μｍ  １００×２５０ｍｍ
移動相Ａ：水；移動相Ｂ：アセトニトリル
【表３】
2021506743.tif 000153
【０１７７】
方法Ｂ：
クロマトグラフィーカラム：  Ｄａｉｓｏｇｅｌ  Ｃ１８  １０μｍ  ５０×２５０ｍｍ
移動相Ａ：水；移動相Ｂ：アセトニトリル
【表４】
2021506743.tif 000154
【０１７８】
方法Ｃ：
クロマトグラフィーカラム：  Ｄａｉｓｏｇｅｌ  Ｃ１８  １０μｍ  ５０×２５０ｍｍ
移動相Ａ：０．１％トリフルオロ酢酸含有水；移動相Ｂ：アセトニトリル
【表５】
2021506743.tif 000155
【０１７９】
方法Ｄ：
クロマトグラフィーカラム：  Ｗａｔｅｒｓ  ＳｕｎＦｉｒｅ  Ｃ１８  ５μｍ  １９×２５０ｍｍ
移動相Ａ：アセトニトリル；移動相Ｂ：０．０５％ギ酸含有水
時間：０分〜１６分；移動相Ａ：１０％〜９０％；流速：２８ｍＬ／分
【０１８０】
Ｉ．生物活性分子の合成
実施例１：  （２Ｓ）−Ｎ−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（２Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（１−（（４−アミノベンジル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−プロピオニル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−ヘプタノイル−４−イル）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブチリルアミノ）−Ｎ，３−ジメチルブチルアミド（Ｔ００１）の合成
【化９１】
2021506743.tif 000156
【０１８１】
ステップ１：  ｔｅｒｔ−ブチル（４−（（２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブチリルアミノ）−Ｎ，３−ジメチルブチリルアミノ）−３−メトキシ−５メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロピオンアミド）−３−フェニルプロピオンアミド）メチル）フェニル）カルバマートの合成
室温で１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（２．０ｍｇ、１４．７４μｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、次いでｔｅｒｔ−ブチル４−メチルアミノベンジルカルバマート（４．０ｍｇ、１６．１μｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（８．５ｍｇ、６６．８μｍｏｌ）、（（２Ｒ、３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブチリルアミノ）−Ｎ，３−ジメチルブチリルアミノ）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロピオニル）−Ｌ−フェニルアラニン（１０．０ｍｇ、１３．５μｍｏｌ、市販）を連続的に添加した。５分間撹拌した後、１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファート（１０．０ｍｇ、２０．１μｍｏｌ）をそれに添加し、０℃で１時間撹拌した。原料の反応を高速液体クロマトグラフィー−質量分析法によってモニターした。原料が消費された後、反応溶液を分取液体クロマトグラフィー（方法Ｄ）によって精製して標題化合物（白色の固体９．０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：９５０．５［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１８２】
ステップ２：  （２Ｓ）−Ｎ−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（２Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（１−（（４−アミノベンジル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−プロピオニル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−ヘプタノイル−４−イル）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブチリルアミノ）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミドの合成
室温でｔｅｒｔ−ブチル（４−（（２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブチリルアミノ）−Ｎ，３−ジメチルブチリル）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロピオニル）−３−フェニルプロパンアミド）メチル）フェニル）カルバマート（９．０ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（０．５ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、次いで、ジオキサン中の塩化水素溶液（１ｍＬ、４．０Ｍ）を添加し、撹拌下、室温で３時間反応させた。原料の反応を高速液体クロマトグラフィー−質量分析法によってモニターした。原料が消費された後、溶媒を減圧下で蒸発させ、粗生成物を分取液体クロマトグラフィー（方法Ｃ）によって精製して、標題化合物のトリフルオロ酢酸塩（白色の固体５．０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：８５０．５［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１８３】
実施例２：  （Ｓ）−Ｎ−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（４−アミノベンジル）アミノ）１−オキソ−３−フェニルプロパ−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプチル−４−イル）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブチリルアミノ）−Ｎ，３−ジメチルブチルアミド（Ｔ０１１）の合成
【化９２】
2021506743.tif 000157
【０１８４】
ステップ１：  ｔｅｒｔ−ブチ（Ｓ）−（４−（（２−（（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３−フェニルプロピオンアミド）メチル）フェニル）ｌカルバマートの合成
０℃で、４−アミノベンジルアミン（２２２ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）及びＮ−メチルモルホリン（３０６ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）中の（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３−フェニルプロピオン酸（３８７ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、次いで１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（２０３ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）及び１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリド（２８８ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を連続的に添加した。得られた混合物を０℃で終夜反応させた。反応溶液を水（５０ｍＬ）に注ぎ入れると、白色の固体が沈殿した。固体を濾過し、濾過ケーキを水（２０ｍＬ×３）で洗浄した。固体をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して標題化合物（白色の固体３８０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：５９２．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１８５】
ステップ２：  ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−（４−（（２−アミノ−３−フェニルプロピオンアミド）メチル）フェニル）カルバマートの合成
水酸化リチウム一水和物（２１ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）を水（１ｍＬ）に溶解し、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−（４−（（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３−フェニルプロピオンアミド）メチル）フェニル）カルバマート（１０２ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（２ｍＬ）溶液に添加した。得られた混合物を室温で２時間反応させた。反応溶液に水（２０ｍＬ）を添加し、酢酸エチル（３０ｍＬ×４）で抽出した。有機相を合わせ、飽和生理食塩水（３０ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。次いで、乾燥剤を濾過により除去し、溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣を分取液体クロマトグラフィー（方法Ｄ）によって精製して、標題化合物（白色の固体６５ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：３７０．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１８６】
ステップ３：  （４−（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−（（メチルアミノ）−３−メチルブチリルアミノ）−Ｎ，３−ジメチルブチリルアミノ）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロピオンアミド）−３−フェニルプロピオンアミド）メチル）フェニル）カルバマートの合成
０℃で、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−（４−（（２−アミノ−３−フェニルプロピオンアミド）メチル）フェニル）カルバマート（１５ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）及びＮ−メチルモルホリン（１２ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）中の（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブチリルアミノ）−Ｎ，３−ジメチルブチリルアミノ）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル−３−メトキシ−２−メチルプロピオン酸（２４ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、次いで１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（８ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）及び１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリド（１２ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）を連続的に添加した。得られた混合物を０℃で終夜反応させた。反応溶液を分取液体クロマトグラフィー（方法Ｄ）によって精製して標題化合物（白色の固体２４ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：９５０．６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１８７】
ステップ４：  （Ｓ）−Ｎ−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（４−アミノベンジル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパ−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプチル−４−イル）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブチリルアミノ）−Ｎ，３−ジメチルブチルアミドの合成
トリフルオロ酢酸（０．５ｍＬ）をジクロロメタン（１．５ｍＬ）中の（４−（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−（メチルアミノ）−３−メチルブチリルアミノ）−Ｎ、３−ジメチルブチリルアミノ）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロピオンアミド）メチル）フェニル）カルバマート（１４．０ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。得られた混合物を室温で１時間反応させた。次いで、溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣を分取液体クロマトグラフィー（方法Ｃ）によって精製して、標題化合物のトリフルオロ酢酸塩（白色の固体４．２ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：８５０．６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１８８】
次の分子を同様の合成方法によって合成することができる。
【表６】
2021506743.tif 000158
【０１８９】
実施例３：  （Ｓ）−Ｎ−（２−（４−エチル−４−ヒドロキシル−３，１４−ジオン−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’，６，７］インド［１，２−ｂ］キノリン−１１−イル）エチル）−Ｎ−イソプロピルアセトアミドの合成
【化９３】
2021506743.tif 000159
【０１９０】
塩酸ベロテカン（１．０ｇ、２．１３ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．６５ｇ、０．９ｍＬ）をジクロロメタン（５０ｍＬ）に室温で溶解し、無水酢酸（０．２２ｇ、２．１３ｍｍｏｌ）をゆっくりと滴下添加した。得られた混合物を室温で１時間反応させた。有機相を水（１０ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。不溶性物質を濾過により除去し、溶媒を蒸発させ、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール＝５０／１）によって精製して、標題化合物（１ｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：４７６．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１９１】
実施例４：  （Ｓ）−Ｎ−（２−（４−エチル−４−ヒドロキシル−３，１４−ジオン−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’，６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−１１−イル）エチル）−Ｎ−イソプロピルメタンスルホンアミドの合成
【化９４】
2021506743.tif 000160
【０１９２】
塩化メチルスルホニル（４６２ｍｇ、１２．７７ｍｍｏｌ、純度：約７０％）をジクロロメタン（４０ｍＬ）中の塩酸ベロテカン（３ｇ、６．３８ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（２．５８ｇ、２５．５４ｍｍｏｌ）の溶液に滴下添加した。得られた混合物を室温で２時間反応させた。吸引濾過を行い、濾過ケーキをジクロロメタン（３ｍＬ）で３回洗浄して、標題化合物（２．２ｇ）を得た。
【０１９３】
構造特性データは次の通りである。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．３２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、８．２０（ｄｄ，Ｊ＝８．４，１．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．９３〜７．８４（ｍ，１Ｈ）、７．７９（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．３５（ｓ，１Ｈ）、６．５６（ｓ，１Ｈ）、５．４４（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，４Ｈ）、３．９８（ｐ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ）、３．５０（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）、３．４２〜３．３５（ｍ，２Ｈ）、３．００（ｓ，３Ｈ）、１．９３〜１．８２（ｍ，２Ｈ）、１．１５（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，６Ｈ）、０．８８（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ）。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：５１２．２［Ｍ＋Ｈ］＋。［α］Ｄ２０は＋２８．１９°（ｃ＝０．１０１ｇ／１００ｍＬ，ＣＨ３ＣＮ）である。
【０１９４】
合成方法が説明されていない残りの生物活性分子は市販されているか、又は従来技術に開示の方法によって調製することができる。
【０１９５】
ＩＩ．生物活性分子及びリンカーを含有する化合物の合成
実施例５：  （Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（４−（４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）ブチリルアミド）−３−メチルブチリルアミド）−Ｎ−（４−（（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブチリルアミノ）−Ｎ，３−ジメチルブチリルアミノ）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロピオンアミド）−３−フェニルプロピオンアミド）メチル）フェニル）−５−ウレイドバレルアミドの合成
【化９５】
2021506743.tif 000161
【０１９６】
ステップ１：  ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）ブチラート（化合物１−２）の合成
室温で、化合物１−１（５００ｍｇ、３．２７ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）に溶解し、水素化ナトリウム（１３０ｍｇ、３．２７ｍｍｏｌ）をそれにバッチでゆっくりと添加した。得られた混合物を室温で１０分間撹拌し、続いて４−ブロモ酪酸ｔ−ブチル（７２５ｍｇ、３．２７ｍｍｏｌ）を滴下添加し、次いで室温で２時間反応させた。反応を飽和塩化アンモニウム水溶液でクエンチし、酢酸エチル（５０ｍＬ×３）で抽出した。次いで、有機相を合わせ、飽和生理食塩水（５０ｍＬ×３）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。乾燥剤を濾過により除去し、溶媒を減圧下で蒸発させて、標題化合物（５００ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：２９６．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１９７】
ステップ２：  ４−（４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）酪酸（化合物１−３）の合成
室温で、化合物１−２（５００ｍｇ、１．６９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（６ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（３ｍＬ）を添加し、室温で４時間反応させた。次いで、溶媒を減圧下で蒸発させて、標題化合物（４００ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：２４０．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１９８】
ステップ３：  （９Ｈ−フルオレン−９−イル）−メチル−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンチル−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブチル−２−イル）−カルバマート（化合物１−５）の合成
室温で４−（Ｎ−Ｂｏｃ−アミノメチル）−アニリン（６．０ｇ、２７ｍｍｏｌ）、化合物１−４（３．３５ｇ、６．７５ｍｍｏｌ）及び２−エチオキシル−１−エトキシカルボキシル−１，２−ジヒドロキノリン（３．３４ｇ、１３．５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１４０ｍＬ）及びメタノール（７０ｍＬ）の混合溶媒に溶解し、次いで、４５℃に加温し、その温度で８．０時間反応させた。室温に冷却した後、大量の固体が沈澱し、それを吸引濾過に掛けて、標題化合物（３．６５ｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：７０１．４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１９９】
ステップ４：  （９Ｈ−フルオレン−９−イル）−メチル−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（アミノメチル）フェニル））アミノ）−１−オキソ−５−５−ウレイドペンチル−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブチル−２−イル）−カルバマート（化合物１−６）の合成
室温でトリフルオロ酢酸（１５ｍＬ）を化合物１−５（３．０ｇ、４．２９ｍｍｏｌ）に添加し、室温で１．０時間撹拌した。次いで、溶媒を減圧下で蒸発させて黄色の油状物を得た。無水ジエチルエーテル（２０ｍＬ）を添加すると、大量の固体が沈殿した。０．５時間激しく撹拌した後、吸引濾過を実施して、標題化合物のトリフルオロ酢酸塩（３．０６ｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：６０１．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２００】
ステップ５：  （９Ｈ−フルオレン−９−イル）−メチル−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（（Ｒ）−２−（（ｔ−ブチルオキシカルボリル）アミノ）−３−フェニルプロピオンアミド）メチル）フェニル）アミノ−１−オキソ−５−ウレイドペンチル−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブチル−２−イル）−カルバマート（化合物１−７）の合成
室温でＢｏｃ−Ｄ−フェニルアラニン（１．１ｇ、４．２ｍｍｏｌ）及び化合物１−６のトリフルオロ酢酸塩（３．０ｇ、４．２ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４０ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、次いで１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリド（１．２ｇ、６．３ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（０．９ｇ、６．３ｍｍｏｌ）及びＮ−メチルモルホリン（１．７ｇ、１６．８ｍｍｏｌ）を連続的に添加した。その温度で反応系を１．０時間撹拌した。次いで、反応溶液を氷水（４００ｍＬ）に滴下添加し、０．５時間激しく撹拌すると、大量の固体が沈澱した。吸引濾過を実施して標題化合物（３．３ｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：８４８．４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２０１】
ステップ６：  （９Ｈ−フルオレン−９−イル）−メチル−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（（Ｒ）−２−アミノ−３−フェニルプロピオンアミド）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンチル−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブチル−２−イル）−カルバマート（化合物１−８）の合成
室温で化合物１−７（３．０ｇ、３．３ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸（３０ｍＬ）に溶解し、室温で１．０時間撹拌した。溶媒を減圧下で蒸発して、黄色の油状物を得た。無水ジエチルエーテル（１００ｍＬ）を添加し、０．５時間激しく撹拌すると、大量の固体が沈殿した。吸引濾過を実施して標題化合物のトリフルオロ酢酸塩（２．１ｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：７４８．４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２０２】
ステップ７：  （９Ｈ−フルオレン−９−イル）−メチル−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−ブチリルアミド）−Ｎ，３−ジメチルアミノ）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロ−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロピオンアミド）−３−フェニルプロピオンアミド）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタ−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバマート（化合物１−９）の合成
室温で（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−（ジメチルアミノ）−３−ブチリルアミノ）−Ｎ，３−ジメチルブチリルアミノ）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロ−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロピオン酸（１．３ｇ、２．１７ｍｍｏｌ）及び化合物１−８のトリフルオロ酢酸塩（１．８ｇ、２．１７ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、次いで１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（４４０ｍｇ、３．２６ｍｍｏｌ）及びＮ−メチルモルホリン（６５８ｍｇ、６．５１ｍｍｏｌ）を連続的に添加し、最後に１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリド（６２４ｍｇ、１．３８ｍｍｏｌ）を添加した。反応溶液を０℃で５時間撹拌し、分取液体クロマトグラフィー（方法Ｄ）によって精製して、標題化合物（１．８ｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１３２９．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２０３】
ステップ８：  （Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−ブチリルアミノ）−Ｎ−（４−（（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−ブチリルアミノ）−Ｎ，３−ジメチルブチリルアミノ）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロ−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロピオンアミド）−３−フェニルプロピオンアミド）メチル）フェニル）−５−ウレイドバレルアミド（化合物１−１０）の合成
室温で、化合物１−９（５００ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）に溶解し、ピペリジン（３２４ｍｇ、３．８ｍｍｏｌ）を添加し、室温で３時間撹拌した。次いで精製を分取液体クロマトグラフィー（方法Ｄ）で行って標題化合物（３５０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１１０７．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２０４】
ステップ９：  （Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（４−（４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）ブチリルアミド）−３−メチルブチリルアミド）−Ｎ−（４−（（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブチリルアミノ）−Ｎ，３−ジメチルブチリルアミノ）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロピオンアミド）−３−フェニルプロピオンアミド）メチル）フェニル）−５−ウレイドバレルアミド（化合物ＴＬ００１）の合成
室温で化合物１−１０（６０ｍｇ、０．０５４ｍｍｏｌ）及び４−（４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）酪酸（２６ｍｇ、０．０６６ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１０５ｍｇ、０．８１ｍｍｏｌ）及び１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−オキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファート（２８１ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）を連続的に添加した。反応系を室温で３時間撹拌した。次いで精製を分取液体クロマトグラフィー（方法Ｄ）で行って標題化合物（３０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：６６４．５［Ｍ／２＋Ｈ］＋。
【０２０５】
実施例６：  （Ｓ）−Ｎ−（４−（（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブチリルアミノ）−Ｎ，３−ジメチルブチリルアミノ）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロピオンアミド）−３−フェニルプロピオンアミド）メチル）フェニル）−２−（（Ｓ）−３−メチル−２−（４−（４−（メチルスルホニル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）−ブチリルアミド）−ブチリルアミド）−５−ウレイドバレルアミド
【化９６】
2021506743.tif 000162
【０２０６】
ステップ１：  ４−（４−（メチルチオ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）酪酸（化合物２−２）の合成
室温で、４−（４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）酪酸（３００ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ）をメタノール（８ｍＬ）に溶解し、ナトリウムメタンチオール（３５１ｍｇ、５．０２ｍｍｏｌ）を１回で添加し、次いで、５０℃に加温し、終夜反応させた。精製を分取液体クロマトグラフィー（方法Ｄ）で行って標題化合物（１２０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：２５２．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２０７】
ステップ２：  （Ｓ）−Ｎ−（４−（（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブチリルアミノ）−Ｎ，３−ジメチルブチリルアミノ）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロピオンアミド）−３−フェニルプロピオンアミド）メチル）フェニル）−２−（（Ｓ）−３−メチル−２−（４−（４−（メチルｔｈｉｏ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）−ブチリルアミド）−ブチリルアミド）−５−ウレイドバレルアミド（化合物２−３）の合成
４−（４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）酪酸を４−（４−（メチルチオ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）酪酸に置き換えたことを除いて、実施例５のステップ９に記載の操作と同様の操作を実施した。精製を分取液体クロマトグラフィー（方法Ｄ）を用いて行って標題化合物（２０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：６７０．５［Ｍ／２＋Ｈ］＋。
【０２０８】
ステップ３：  （Ｓ）−Ｎ−（４−（（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブチリルアミノ）−Ｎ，３−ジメチルブチリルアミノ）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロピオンアミド）−３−フェニルプロピオンアミド）メチル）フェニル）−２−（（Ｓ）−３−メチル−２−（４−（４−（メチルスルホニル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）−ブチリルアミド）−ブチリルアミド）−５−ウレイドバレルアミド（化合物ＴＬ００２）の合成
室温で、化合物２−３（２０ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解し、ｍ−クロロペルオキシ安息香酸（４．０ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で２時間反応させた。精製を分取液体クロマトグラフィー（方法Ｄ）で行って標題化合物（５．０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：６８６．５［Ｍ／２＋Ｈ］＋。
【０２０９】
実施例７：  Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブチリルアミノ）−Ｎ，３−ジメチルブチリルアミノ）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロピオンアミド−３−フェニルプロピオンアミド）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイド−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキシブタン−２−イル）−６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−５−ヘキシンアミド
【化９７】
2021506743.tif 000163
【０２１０】
ステップ１：  メチル６−（２−（メチルチオ）ピリミジン−５−イル）−５−ヘキシノアート（化合物３−２）の合成
室温で、メチル５−ヘキシノアート（５００ｍｇ、３．９７ｍｍｏｌ）及び５−ブロモ−２−メチルチオピリミジンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３ｍｌ）に溶解し、次いでトリエチルアミン（３ｍｌ）、ヨウ化銅（７５ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）及びビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）ジクロリド（２７９ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を連続的に添加した。得られた混合物を窒素保護下９５℃に加熱し、撹拌下６時間反応させ、水でクエンチし、酢酸エチル（２０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を合わせ、飽和生理食塩水（２０ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。乾燥剤を濾過により除去し、溶媒を減圧下で蒸発させた。精製を分取液体クロマトグラフィー（方法Ｄ）で行って標題化合物（３００ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：２５１．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２１１】
ステップ２：  ６−（２−（メチルチオ）ピリミジン−５−イル）−５−ヘキシン酸（化合物３−３）の合成
室温で、化合物３−２（２００ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン及び水（４ｍＬ／４ｍＬ）の混合溶液に溶解し、水酸化リチウム一水和物（２３５ｍｇ、５．６ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌下、室温で４時間反応させ、次いで、水で希釈し、酢酸エチル（２０ｍｌ×２）で抽出した。水相を１Ｎ塩酸でｐＨ＝３に調節し、酢酸エチル（２０ｍＬ×３）で抽出し、次いで、有機相を合わせ、飽和生理食塩水（２０ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。乾燥剤を濾過により除去し、溶媒を減圧下で蒸発させて、標題化合物（１２０ｍｇ）を得た。
【０２１２】
ステップ３：  ６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−５−ヘキシン酸（化合物３−４）の合成
室温で、化合物３−３（２０ｍｇ、０．０８５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（４ｍＬ）に溶解し、ｍ−クロロペルオキシ安息香酸（２２ｍｇ、０．１２７ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌下、室温で終夜反応させた。精製を分取液体クロマトグラフィー（方法Ｄ）で行って標題化合物（２０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：２６９．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２１３】
ステップ４：  Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブチリルアミノ）−Ｎ，３−ジメチルブチリルアミノ）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロピオンアミド）−３−フェニルプロピオンアミド）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイド−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキシブタン−２−イル）−６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−５−ヘキシンアミド（化合物ＴＬ００３）
４−（４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）酪酸を６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−５−ヘキシン酸に置き換えたことを除いて、実施例５のステップ９に記載の操作と同様の操作を実施した。精製を分取液体クロマトグラフィー（方法Ｄ）を用いて行って標題化合物（１４ｍ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：６７９．０［Ｍ／２＋Ｈ］＋。
【０２１４】
実施例８：  （Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルメチルスルホンアミド）−エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’，６，７］−インドリジノ［１，２−ｂ］−キノリン−４−イル（４−（（Ｓ）−４２−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−４，８，３７−トリオキソ−２−（３−ウレイドプロピル）−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノンオキシ−３，９，３６−アザテトラコサン−４１−アミド）ベンジル）カルボナート
【化９８】
2021506743.tif 000164
【０２１５】
ステップ１：  メチル（Ｓ）−（１−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタン−２−イル）−（９Ｈ−フルオレニル）カルバマート（化合物１９−２）の合成
室温でＦｍｏｃ−Ｌ−シトルリン（５．０ｇ、１２．５８ｍｍｏｌ）、ｐ−アミノベンジルアルコール（６．２０ｇ、５０．３２ｍｍｏｌ）及び２−エトキシ−１−エトキシカルボキシル−１，２−ジヒドロキノリン（６．２２ｇ、２５．１６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１００ｍＬ）に溶解し、４５℃に加熱し、６時間反応させた。反応溶液を減圧下で濃縮し、無水ジエチルエーテル（１００ｍＬ）と撹拌して、標題化合物（６．０ｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：５０３．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２１６】
ステップ２：  （Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）−５−ウレイドバレルアミド（化合物１９−３）の合成
室温で化合物１９−２（１．０ｇ、１．９９ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（８ｍＬ）に溶解し、室温で３０分間、ピペリジン（３３９ｍｇ、３．９８ｍｍｏｌ）を滴下添加して反応させた。次いでジクロロメタン（１０ｍＬ）を添加し、続いて１０分間撹拌した。反応溶液を減圧下で濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物（４００ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：２８１．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２１７】
ステップ３：  （Ｓ）−２−（３２−アジド−５−オキソ−３，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０−ノニルオキサ−６−アザトリアセトアミド）−Ｎ−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）−５−ウレイドバレルアミド（化合物１９−４）の合成
化合物１９−３（１５０ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）及び３２−アジド−５−オキソ−３，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０−ノンオキシ−６−アザトリシクロウンデカン酸（２９６ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、次いで２−エトキシ−１−エトキシカルボキシル−１，２−ジヒドロキノリン（１４５ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温にし、終夜反応させた。反応溶液を減圧下で濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物（２００ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：８１７．５［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２１８】
ステップ４：  ４−（（Ｓ）−３５−アジド−４，８−ジオキソ−２−（３−ウレイドプロピル）−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノンオキシ−３，９−アザテトラコサン）ベンジル（（Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルメチルスルホニルアミノ）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’，６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル）カルボナート（化合物１９−５）の合成
室温で（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−エチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオン−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’，６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−１１−イル）エチル）−Ｎ−イソプロピルメタンスルホンアミド（２００ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、ジクロロメタン（１．０ｍｌ）中の４−ジメチルアミノピリジン（５７３ｍｇ、４．６９ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、次いでジクロロメタン（１．０ｍｌ）中のトリホスゲン（１１６ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）の溶液をゆっくりと滴下添加した。得られた混合物を撹拌下、０℃で１時間反応させた。ジクロロメタン（２．０ｍＬ）中の化合物１９−４（１５９ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）の溶液を反応溶液に添加し、室温で１時間反応させた。精製を分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｄ）で行って標題化合物（１６０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：６７８．０［Ｍ／２＋Ｈ］＋。
【０２１９】
ステップ５：  ４−（（Ｓ）−３５−アミノ−４，８−ジオキソ−２−（３−ウレイドプロピル）−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノンオキシ−３，９−アザテトラコサン）ベンジル（（Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルメチルスルホニルアミノ）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’，６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル）カルボナート（化合物１９−６）の合成
室温で化合物１９−５（８０ｍｇ、０．０５９ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１．０ｍｌ）に溶解し、０℃に冷却し、次いで、ジクロロメタン（１．０ｍｌ）中の４−ジメチルアミノピリジン（５７３ｍｇ、４．６９ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、二酸化白金（１５ｍｇ、０．０５９ｍｍｏｌ）を窒素保護下１回のバッチで添加し、次いで、空気を水素と３回置換し、室温で６時間反応させた。反応溶液を濾過し、濾液を濃縮して、粗生成物を得た。これを分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｄ）によって精製して標題化合物（４０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：６６５．０［Ｍ／２＋Ｈ］＋。
【０２２０】
ステップ６：  （Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルメチルスルホンアミド）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’，６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル（４−（（Ｓ）−４２−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−４，８，３７−トリオキソ−２−（３−ウレイドプロピル）−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノンオキシ−３，９，３６−アザテトラコサン−４１−アミド）ベンジル）カルボナート（化合物ＴＬ０１９）の合成
化合物１９−６（３０ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）及び６−（２−メチルスルホニルピリミジン−５−イル）−５−ヘキシン酸（６．４ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、次いでベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリピロリジニルヘキサフルオロホスファート（１６．５ｍｇ、０．０３２ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（６．２ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ）を連続的に添加した。得られた混合物を室温で２時間反応させた。精製を分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｄ）で行って標題化合物（１０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：７９０．０［Ｍ／２＋Ｈ］＋。
【０２２１】
実施例９：  （Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルメタンスルホンアミド）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’，６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル−（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−３−メチル−２−（６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル））−５−ヘキシンアミド）ブチルアミド−５−ウレイドバレリルアミド）ベンジル）カルボナート
【化９９】
2021506743.tif 000165
【０２２２】
ステップ１：  メチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイドバレリルアミド−２−イル）アミノ））−３−メチル−ブチルアミド−２−イル）−（９Ｈ−フルオレニル）カルバマート
化合物１９−１を化合物２８−１に置き換えたことを除いて、実施例８のステップ１に記載の操作と同様の操作を実施して、標題化合物（３１０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：６０２．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２２３】
ステップ２：  （Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブチルアミド）−Ｎ−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）−５−ウレイドバレルアミド（化合物２８−２）の合成
化合物１９−２を化合物２８−２に置き換えたことを除いて、実施例８のステップ２に記載の操作と同様の操作を実施して、標題化合物（１５０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：３８０．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２２４】
ステップ３：  Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタ−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−５−ヘキシンアミド（化合物２８−４）の合成
室温でベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリピロリジニルヘキサフルオロホスファート（３１３ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１９４ｍｇ、１．５０ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）中の６−（２−メチルスルホニルピリミジン−５−イル）−５−ヘキシン酸（１３５ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）及び（２Ｓ）−２−（（（２Ｓ）−２−アミノ−３−メチル−ブチリル）アミノ）−Ｎ−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）−５−ウレイド−バレルアミド（１９０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、撹拌下、室温で３時間反応させた。反応溶液を分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｄ）によって精製して標題化合物（７８ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：６３０．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２２５】
ステップ４：  （Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルメタンスルホンアミド）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’，６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル−（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−３−メチル−２−（６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル））−５−ヘキシンアミド）ブチルアミド−５−ウレイドバレリルアミド）ベンジル）カルボナート（化合物ＴＬ０２８）の合成
化合物１９−４を化合物２８−４に置き換えたことを除いて、実施例８のステップ４に記載の操作と同様の操作を実施して、標題化合物（１．７６ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１１６７．４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２２６】
実施例１０：  （Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルメチルスルホンアミド）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’，６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル−（４−（（２Ｓ，５Ｓ）−５−イソプロピル−３８−（４−（（６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−５−ヘキシンアミド）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−４，７，１１−トリオキソ−２−（３−ウレイドプロピル）−９，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６−ノンオキシ−３，６，１２−トリアゾトリアコンチルアミド）ベンジル）カルボナート
【化１００】
2021506743.tif 000166
【０２２７】
ステップ１：  （Ｓ）−２−（（Ｓ）−３５−アジド−２−イソプロピル−４，８−ジオキソ−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノンオキシ−３，９−アザテトラコシル）−Ｎ−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）−５−ウレイドバレルアミド（化合物２９−１）の合成
化合物１９−３を化合物２８−３に置き換えたことを除いて、実施例８のステップ３に記載の操作と同様の操作を実施して、標題化合物（１８０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：９１６．５［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２２８】
ステップ２：  ４−（（２Ｓ，５Ｓ）−３８−アジド−５−イソプロピル−４，７，１１−トリオキソ−２−（３−ウレイドプロピル）−９，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６−ノンオキシ−３，６，１２−トリアザトリアコンチルアミド）ベンジル（（Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルメチルスルホンアミド）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’，６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル）カルボナート（化合物２９−２）の合成
化合物１９−４を化合物２９−１に置き換えたことを除いて、実施例８のステップ４に記載の操作と同様の操作を実施して、標題化合物（３０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：７２７．５［Ｍ／２＋Ｈ］＋。
【０２２９】
ステップ３：  （Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルメチルスルホンアミド）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’，６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル−（４−（（２Ｓ，５Ｓ）−５−イソプロピル−３８−（４−（（６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−５−ヘキシンアミド）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−４，７，１１−トリオキソ−２−（３−ウレイドプロピル）−９，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６−ノンオキシ−３，６，１２−トリアゾトリアコンチルアミド）ベンジル）カルボナート（化合物ＴＬ０２９）の合成
室温で、化合物２９−２（２０ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ）及び６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−Ｎ−（２−プロピンｎ−１−イル）−５−ヘキシンアミド（４．３ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ）をジメチルスルホキシド及び水の混合溶媒（１ｍＬ／０．２５ｍＬ）に溶解し、次いで、臭化銅（３．９５ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌下１時間反応させた。精製を分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｄ）で行って標題化合物（１５ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：８８０．０［Ｍ／２＋Ｈ］＋。
【０２３０】
実施例１１：  （Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルメタンスルホンアミド）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル（４−（（２Ｓ，５Ｓ）−５−イソプロピル−４５−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−４，７，１１，４０−テトラオキソ−２−（３−ウレイドプロピル）−９，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６−ノンオキシ−３，６，１２，３９−テトラアザペンタテトラコンタン−４４−カルバモイル）ベンジル）カルボナート
【化１０１】
2021506743.tif 000167
【０２３１】
ステップ１：  （Ｓ）−２−（（Ｓ）−３５−アミノ−２−イソプロピル−４，８−ジオキソ−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノンオキシ−３，９−ジアザペンタトリアコントアミド）−Ｎ−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）−５−ウレイドバレルアミドの合成
２０℃で化合物２９−１（４００ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）をメタノール及びテトラヒドロフラン（２．０ｍＬ：４．０ｍＬ）に溶解した。溶解の完了後、二酸化白金（４０ｍｇ）を窒素保護下１回のバッチで添加し、次いで混合溶液を水素置換に３回掛けた。水素化は２０℃で２時間行った。反応溶液を濾過した。濾過ケーキをメタノールで洗浄した。濾液を減圧下で濃縮した。残渣を分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｄ）によって精製して標題化合物（２００ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：８９０．４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２３２】
ステップ２：  Ｎ−（（６Ｓ，９Ｓ）−１−アミノ−６−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）カルバモイル）−９−イソプロピル−１，８，１１，１５−テトラオキソ−１３，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０−ノンオキシ−２，７，１０，１６−テトラアザドテトラコント−４２−イル）−６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）ヘキサ−５−イニルアミドの合成
２０℃で、化合物２２−１（２５０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．０ｍＬ）に溶解し、次いでＨＡＴＵ（１６０ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１０９ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）を連続的に添加し、続いて室温で終夜撹拌した。精製を分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｄ）で行って標題化合物（２５０ｍｇ）を得た。
【０２３３】
ステップ３：  （Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルメタンスルホンアミド）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル（４−（（２Ｓ，５Ｓ）−５−イソプロピル−４５−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−４，７，１１，４０−テトラオキソ−２−（３−ウレイドプロピル）−９，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６−ノンオキシ−３，６，１２，３９−テトラアザペンタテトラコンタン−４４−カルバモイル）ベンジル）カルボナート（化合物ＴＬ０２２）の合成
２０℃で（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−エチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオン−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−１１−イル）エチル）−Ｎ−イソプロピルメタンスルホンアミド（７０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（４．０ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、次いで、ジクロロメタン（１．０ｍｌ）中のｐ−ジメチルアミノピリジン（２００ｍｇ、１．６４ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、ジクロロメタン（１．０ｍｌ）中のトリホスゲン（４０．６ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）の溶液をゆっくりと滴下添加した。得られた混合物を撹拌下、０℃で１時間反応させた。未反応のトリホスゲンに窒素を吹き込み、ジクロロメタン（２．０ｍＬ）中の化合物２２−２（１３９ｍｇ、０１２ｍｍｏｌ）の溶液を反応溶液に添加し、撹拌下、０℃で１時間反応させた。精製を分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｄ）で行って標題化合物（１．５ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：８３９．５［Ｍ／２＋Ｈ］＋。
【０２３４】
実施例１２：  ４−（（Ｓ）−２−（４−アミノブチル）−４２−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−４，８，３７−トリオキソ−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノナオキサ−３，９，３６−トリアザデドテトラコンチル−４１−アルキンアミド）ベンジル−（（Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルメチルスルホニル）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロン［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル）カルボナート
【化１０２】
2021506743.tif 000168
【０２３５】
ステップ１：  （Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルメタンスルホンアミド）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロン［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル（４−（（Ｓ）−２−（４−（（（４−メトキシフェニル）ベンズヒドリル）アミノ）ブチル）−４２−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−４，８，３７−トリオキソ−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノナオキサ−３，９，３６−トリアザドテトラコンチル−４１−アルキンアミド）ベンジルカルボナートの合成
室温で、６−（−２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）ヘキサ−５−イン酸（１２ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解し、次いで、２−（７−アゾベンゾトリアゾール）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル尿素ヘキサフルオロホスファート（２１．２ｍｇ、０．０５６ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（８．６ｍｇ、０．０６７ｍｍｏｌ）を添加し、１０分間撹拌し、化合物２４−１（３５ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌下１時間反応させた。精製を分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｂ）で行って標題化合物（２０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１８２１．８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２３６】
ステップ２：  ４−（（Ｓ）−２−（４−アミノブチル）−４２−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−４，８，３７−トリオキソ−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノナオキサ−３，９，３６−トリアザデドテトラコンチル−４１−アルキンアミド）ベンジル−（（Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルメチルスルホニル）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロン［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル）カルボナート（化合物ＴＬ０２４）の合成
室温で、化合物２４−２（２０ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１ｍＬ）に溶解し、２０分間、アセトニトリル（０．５ｍｌ）中のトリフルオロ酢酸（０．５ｍｌ）の溶液を滴下添加し、撹拌した。精製を分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｃ）で行って標題化合物のトリフルオロ酢酸塩（１２ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１５４９．６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２３７】
実施例１３：  （Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルメチルスルホンアミド）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル−４−（（２Ｓ，５Ｓ）−５−イソプロピル−２−メチル−３８−（４−（（６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）イル）ヘキサ−５−インアミド）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−４，７，１１−トリオキソ−９，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６−ノンオキシ−３，６，１２−トリアザトリアコントアザンアミド）ベンジル）カルボナートの合成
【化１０３】
2021506743.tif 000169
【０２３８】
ステップ１：  （Ｓ）−（９Ｈ−フルオレン−９−イル）−メチル（１−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロピル−２−イル）カルバマートの調製
室温で、２−エトキシ−１−エトキシカルボキシル−１，２−ジヒドロキノリン（１．３１ｇ、５．３０ｍｍｏｌ）及びｐ−アミノベンジルアルコール（５９３ｍｇ、４．８２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３５ｍＬ）中の化合物３０−１（１．５ｇ、４．８２ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、撹拌下３時間反応させた。精製をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで行って標題化合物（１．８ｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：４１７．２［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２３９】
ステップ２：  （Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）プロピオンアミドの調製
室温で、エチレンジアミン（５ｍＬ）をジクロロメタン（２０ｍＬ）中の化合物３０−２（１．８ｇ、４．３２ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、２時間反応させた。精製をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで行って標題化合物（８２０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１９５．１［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２４０】
ステップ３：  （９Ｈ−フルオレン−９−イル）−メチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−カルバマートの調製
室温で、（２Ｓ）−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−メチル−酪酸（８７５ｍｇ、２．５８ｍｍｏｌ）、Ｏ−ベンゾトリアゾリル−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（１．４５ｇ、３．８３ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．００ｇ、７．７４ｍｍｏｌ）及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（５２５ｍｇ、３．８９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２ｍＬ）中の化合物３０−３（５０３ｍｇ、２．５８ｍｍｏｌ）の溶液に連続的に添加し、撹拌下４時間反応させた。精製をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで行って標題化合物（１．１ｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：５１６．２［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２４１】
ステップ４：  （Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパ−２−イル）−３−メチルブタンアミドの調製
室温で、エチレンジアミン（２ｍＬ）をジクロロメタン（８ｍＬ）中の化合物３０−４（１．１ｇ、２．１３ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、撹拌下１時間反応させた。精製をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで行って標題化合物（６１０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：２９４．２［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２４２】
ステップ５：  （Ｓ）−２−（３２−アジド−５−オキソ−３，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０−ノンオキシ−６−ジアザペンタトリアコントアミド）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）−３−メチルブチルアミドの調製
室温で、Ｏ−ベンゾトリアゾリル−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（１６０ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（５７ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１０９ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）及び３２−アジド−５−オキソ−３，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０−ノンオキシ−６−アザトリシクロデカン−１−酸（１５６ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３ｍＬ）中の化合物３０−５（８４ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、撹拌下４時間反応させた。精製をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで行って標題化合物（１６３ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：８３０．４［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２４３】
ステップ６：  ４−（（２Ｓ，５Ｓ）−３８アジド−５−イソプロピル−２−メチル−４，７，１１−トリオキソ−９，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６−ノンオキシ−３，６，１２−トリアザトリアコントアミノ）ベンジル（（Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルメチルスルホニルアミノ）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル）カルボナートの調製
窒素保護下、０℃でジクロロメタン（０．３ｍＬ）中のトリホスゲン（１６ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）の溶液をジクロロメタン（０．７ｍＬ）中の４−ジメチルアミノピリジン（６５ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）及び（Ｓ）−Ｎ−（２−（４−エチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−１１−イル）エチル）−Ｎ−イソプロピルメタンスルホンアミド（４５ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）の混合溶液に滴下添加し、０℃で１時間反応させた。次いで、ジクロロメタン（１ｍＬ）中の化合物３０−６（７３ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）の溶液を反応溶液に滴下添加し、０℃で１時間反応させた。精製をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで行って標題化合物（３３ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１３６７．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２４４】
ステップ７：  （Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルメチルスルホンアミド）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル−４−（（２Ｓ，５Ｓ）−５−イソプロピル−２−メチル−３８−（４−（（６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）イル）ヘキサ−５−インアミド）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−４，７，１１−トリオキソ−９，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６−ノンオキシ−３，６，１２−トリアザトリアコントアザンアミド）ベンジルカルボナート（化合物ＴＬ０３０）の調製
室温で、臭化銅（５ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）及び化合物３０−７（２０ｍｇ、１５ｕｍｏｌ）を、水及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．２ｍｌ：０．８ｍｌ）中の６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−Ｎ−（プロパ−２−イン−１−イル）−ヘキサ−５−イニルアミド（９ｍｇ、０．００７ｍｍｏｌ）の溶液に滴下添加し、撹拌下４時間反応させた。精製を分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｄ）で行って標題化合物（４．１５ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１６７２．７［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２４５】
実施例１４：  ４−（（Ｓ）−２−（４−アミノブチル）−３５−（４−（（６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）ヘキサ−５−インアミド）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−４，８−ジオキソ−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノナオキサ−３，９−ジアザペンタトリアコントアミド）ベンジル（（Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルメチルスルホンアミド）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル）カルボナート
【化１０４】
2021506743.tif 000170
【０２４６】
ステップ１：  ６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−Ｎ−（プロパ−２−イン−１−イル）ヘキサ−５−インアミドの合成
２５℃で、プロパ−２−イニル−１−アミン（１８９ｍｇ、３．４ｍｍｏｌ）及び化合物３−４（８００ｍｇ、２．８３ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解し、次いでＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（７３８ｍｇ、５．６７ｍｍｏｌ）及びＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（１．６３ｇ、４．２５ｍｍｏｌ）を連続的に添加し、撹拌下２時間反応させた。反応溶液を減圧下で濃縮し、残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／石油エーテル＝３／１）によって精製して、標題化合物（７００ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：３０６．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２４７】
ステップ２：  ４−（（Ｓ）−３５−アジド−２−（４−（（（４−メトキシフェニル）ベンズヒドリル）アミノ）ブチル）−４，８−ジオキソ−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノンアゾ−３，９−ジアザペンタトリアコントアミノ）ベンジル（（Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルメタンスルホンアミド）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラノ［２，３−ｂ］−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル）カルボナートの合成
窒素保護下、２５℃でＴ−０３０（２５０ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、次いでジクロロメタン（３ｍＬ）中の４−ジメチルアミノピリジン（４７８ｍｇ、３．９１ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、続いて、ジクロロメタン（１０ｍＬ）中のトリホスゲン（７２ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）の溶液をゆっくり滴下添加し、撹拌下、０℃で２０分間反応させた。反応溶液に窒素を２０分間吹き込み、次いで、ジクロロメタン（７ｍＬ）中の（Ｓ）−２−（３２−アジド−５−オキソ−３，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０−ノナオキサ−６−アザトリアセトアミド）−Ｎ−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）−６（（（４−メトキシフェニル）ベンズヒドリル）アミノ）アセトアミド（５１８ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、撹拌下、０℃で１時間反応させた。反応溶液を減圧下で濃縮し、残渣を分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ａ）によって精製して、標題化合物（５００ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１５９７．５［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２４８】
ステップ３：  （Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルメタンスルホンアミド）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル（４−（（Ｓ）−２−（４−（（（４−メトキシフェニル）ジフェニルメチル）アミノ）ブチル）−３５−（４−（（６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）ヘキサ−５−インアミド）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−４，８−ジオキソ−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノンオキシ−３，９−ジアザペンタトリアコントアミド）ベンジル）カルボナートの合成
室温で、化合物３３−１（１４ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）をジメチルスルホキシド及び水（２．０ｍＬ：０．５ｍＬ）に溶解し、続いて、臭化銅（１１ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌下１時間反応させた。精製を分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｂ）で行って標題化合物（３０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：８１５．９［（Ｍ−２７３）／２＋Ｈ］＋。
【０２４９】
ステップ４：  ４−（（Ｓ）−２−（４−アミノブチル）−３５−（４−（（６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）ヘキサ−５−インアミド）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−４，８−ジオキソ−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノナオキサ−３，９−ジアザペンタトリアコントアミド）ベンジル（（Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルメチルスルホンアミド）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル）カルボナート（化合物ＴＬ０３３）の合成
化合物３３−２（３０ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１．０ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（０．２ｍＬ）を反応溶液に添加し、室温で３０分間反応させた。精製を分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｃ）で行って標題化合物のトリフルオロ酢酸塩（２０．０ｍｇ）を得た。標題化合物の同定は次の通りである。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．１８（ｓ，１Ｈ）、９．１０（ｓ，２Ｈ）、８．３８（ｔ，Ｊ＝５．５６Ｈｚ，１Ｈ）、８．３２（ｄ，Ｊ＝８．４０Ｈｚ，１Ｈ）、８．２２〜８．２０（ｍ，２Ｈ）、８．０９（ｔ，Ｊ＝５．６８Ｈｚ，１Ｈ）、７．９１〜７．８７（ｍ，２Ｈ）、７．８２〜７．７８（ｍ，１Ｈ），７．６９（ｂｒｓ，３Ｈ）、７．６１（ｄ，Ｊ＝８．５６Ｈｚ，２Ｈ）、７．３２（ｄ，Ｊ＝８．５６Ｈｚ，２Ｈ）、７．０６（ｓ，１Ｈ）、５．５６（ｄ，Ｊ＝１６．９６Ｈｚ，１Ｈ）、５．５１（ｄ，Ｊ＝１６．９６Ｈｚ，１Ｈ）、５．４７（ｄ，Ｊ＝１９．２８Ｈｚ，１Ｈ）、５．４２（ｄ，Ｊ＝１９．２８Ｈｚ，１Ｈ）、５．１４（ｄ，Ｊ＝１２．２０Ｈｚ，１Ｈ）、５．０７（ｄ，Ｊ＝１２．１６Ｈｚ，１Ｈ）、４．４８（ｔ，Ｊ＝５．２４Ｈｚ，２Ｈ）、４．４６〜４．４３（ｍ，１Ｈ）、４．２９（ｄ，Ｊ＝５．６０Ｈｚ，２Ｈ）、４．０８〜３．９５（ｍ，５Ｈ）、３．７９（ｔ，Ｊ＝５．２８Ｈｚ，２Ｈ）、３．５１〜３．４３（ｍ，３２Ｈ）、３．４０（ｓ，３Ｈ）、３．３９〜３．３５（ｍ，２Ｈ）、３．３０〜３．２６（ｍ，２Ｈ）、３．００（ｓ，３Ｈ）、２．８２〜２．７４（ｍ，２Ｈ）、２．５６（ｔ，Ｊ＝７．０８Ｈｚ，２Ｈ）、２．２９（ｔ，Ｊ＝７．３６Ｈｚ，２Ｈ）、２．２３〜２．１３（ｍ，２Ｈ）、１．８２（ｐ，Ｊ＝７．２４Ｈｚ，２Ｈ）、１．７８〜１．６３（ｍ，２Ｈ）、１．６１〜１．４９（ｍ，２Ｈ）、１．４２〜１．２７（ｍ，２Ｈ）、１．１５（ｄ，Ｊ＝６．８０Ｈｚ，３Ｈ）、１．１３（ｄ，Ｊ＝６．７６Ｈｚ，３Ｈ）、０．９０（ｔ，Ｊ＝７．３２Ｈｚ，３Ｈ）。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：８１６．０［Ｍ／２＋Ｈ］＋。［α］Ｄ２０は−１９．５５°（ｃ＝１．０００ｇ／１００ｍＬ，ＣＨ３ＣＮ）である。
【０２５０】
実施例１５：  ４−（（Ｓ）−２−（４−アミノブチル）−３５−（４−（（６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）ヘキサ−５−インアミド）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−４，８−ジオキソ−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノンオキシ−３，９−ジアザペンタトリアコントアミド）ベンジル（（Ｓ）−１１−ジエチル−９−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−カルボナート
【化１０５】
2021506743.tif 000171
【０２５１】
ステップ１：  ４−（（Ｓ）−３５−アジド−２−（４−（（（４−メトキシフェニル）ジフェニルメチル）アミノ）ブチル）−４，８−ジオキソ６，１２，１５，１８，２１，２４，２７−ノンオキシ−（（Ｓ）−９−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−４，１１−ジエチル−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル）カルボナートの合成
室温で化合物３４−１（１００ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を無水ジクロロメタン（２ｍｌ）に窒素保護下溶解し、次いで０℃に冷却し、続いて無水ジクロロメタン（０．５ｍｌ）中の４−ジメチルアミノピリジン（１４４ｍｇ、１．１８ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、次いで無水ジクロロメタン（０．５ｍｌ）中のトリホスゲン（４１ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）の溶液をゆっくりと滴下添加した。得られた混合物を撹拌下、０℃で１時間反応させた。次いで、無水ジクロロメタン（０．５ｍＬ）中の（Ｓ）−２−（３２−アジド−５−オキソ−３，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０−ノナオキサ−６−アザトリアセトアミド）−Ｎ−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）−６（（（４−メトキシフェニル）ベンズヒドリル）アミノ）アセトアミド（１６０ｍｇ、０．１５μｍｏｌ）の溶液を反応溶液に添加し、室温で１時間反応させた。精製を分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｂ）で行って標題化合物（６０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１５９２．７［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２５２】
ステップ２：  （Ｓ）−９−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−４，１１−ジエチル−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル−４−（（Ｓ）−２−（４−（（（６−２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−３５−（４−（（６−２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）ヘキサ−５−インアミド）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−ジオキソ６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノンオキシ−３，９−ジアザペンタトリアコントアミド）カルボナートの合成
室温で、化合物３４−２（４０ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）及び６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−Ｎ−（プロパ−２−イン−１−イル）ヘキサ−５−イニルアミド（１１．５０ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）をジメチルスルホキシド及び水（０．５ｍｌ：０．１ｍｌ）に溶解し、臭化銅（９．０１ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を撹拌下１時間反応させた。精製を分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｂ）で行って標題化合物（２０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１８９７．５［Ｍ＋Ｈ］。
【０２５３】
ステップ３：  ４−（（Ｓ）−２−（４−アミノブチル）−３５−（４−（（６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）ヘキサ−５−インアミド）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−４，８−ジオキソ−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノンオキシ−３，９−ジアザペンタトリアコントアミド）ベンジル（（Ｓ）−１１−ジエチル−９−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−カルボナート（化合物ＴＬ０３４）の合成
室温で、化合物３４−３（３０ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）をアセトニトリル及び水（０．４ｍＬ：０．１ｍＬ）に溶解し、次いで、トリフルオロ酢酸及びアセトニトリル（０．５ｍＬ：０．５ｍＬ）の混合溶液を滴下添加し、室温で２時間撹拌した。精製を分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｃ）で行って標題化合物のトリフルオロ酢酸塩（１２ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１５１１．５［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２５４】
実施例１６：  ４−（（Ｓ）−２−（４−アミノブチル）−３５−（４−（（６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）ヘキサ−５−インアミド）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−４，８−ジオキソ−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノナオキサ−３，９−ジアザペンタトリアコントアミド）ベンジル（（Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルメチルスルホンアミド）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル）カルボナートの合成
【化１０６】
2021506743.tif 000172
【０２５５】
ステップ１：  （（Ｓ）−３５−アジド−２−（４−（（（４−メトキシフェニル）ジフェニルメチル）アミノ）ブチル）−４，８−ジオキソ−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノンオキシ−３，９−ジアザペンタトリアコントアミド）ベンジル（（Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルアセトアミド）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１，２，３，６−トリアザシクロヘプタン−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル）カルボナートの合成
化合物３４−１を化合物３５−１に置き換えたことを除いて、実施例１５のステップ１に記載の操作と同様の操作を実施して、標題化合物（６０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１５６１．５［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２５６】
ステップ２：  （Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルアセトアミド）エチル）−３，１４−ジオキソ３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル）−４−（（Ｓ）−２−（４−（（（４−メトキシフェニル）ジフェニルメチル）アミノ）ブチル）−３５−（４−（（６−２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）ヘキサ−５−インアミド）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−４，８−ジオキソ−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノンオキシ−３，９−ジアザペンタトリアコントアミド］カルボナートの合成
化合物３４−２を化合物３５−２に置き換えたことを除いて、実施例１５のステップ２に記載の合成方法と同様の合成方法を採用して、標題化合物（２０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１８６６．５［Ｍ＋Ｈ］。
【０２５７】
ステップ３：  ４−（（Ｓ）−２−（４−アミノブチル）−３５−（４−（（６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）ヘキサ−５−インアミド）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−４，８−ジオキソ−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノナオキサ−３，９−ジアザペンタトリアコントアミド）ベンジル（（Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルアセトアミド）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル）カルボナート（化合物ＴＬ０３５）の合成
化合物３４−３を化合物３５−３に置き換えたことを除いて、実施例１５のステップ３に記載の合成方法と同様の合成方法を採用して、標題化合物のトリフルオロ酢酸塩（４．９ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１５９４．５［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２５８】
実施例１７：  ４−（（Ｓ，Ｚ）−２−（４−アミノブチル）−４２−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−４，８，３７−トリオキソ−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノナオキサ−３，９，３６−トリアザドテトラコンチル−４１−アルケンアミド）ベンジル−（（Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルアセトアミド）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロン［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル）カルボナートの合成
【化１０７】
2021506743.tif 000173
【０２５９】
ステップ１：  （Ｚ）−６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）ヘキサ−５−エン酸の合成
２０℃で、化合物３−４（２００ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）をメタノール（８．０ｍＬ）に溶解し、リンドラー触媒（２０ｍｇ）を窒素保護下添加し、次いで溶液を水素置換に３回掛けた。水素化は２０℃で３時間行った。濾過後、濾液を脱水機に掛けて、標題化合物（１５０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：２７１．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２６０】
ステップ２：  （Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルアセトアミド）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロン［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル（４−（（Ｓ，Ｚ）−２−（４−（（（４−メトキシフェニル）ベンズヒドリル）アミノ）ブチル）−４２−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−４，８，３７−トリオキソ−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノナオキサ−３，９，３６−トリアザドテトラコンチル−４１−アルケンアミド）ベンジルカルボナートの合成
室温で、化合物４５−２（８ｍｇ、０．０３０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解し、次いで２−（７−アゾベンゾトリアゾール）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（１４．９ｍｇ、０．０３９ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（８．８ｍｇ、０．０６８ｍｍｏｌ）を添加した。反応溶液を室温で１０分間撹拌し、次いで、化合物４８−１（３０ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌下、室温で１時間反応させた。精製を分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｂ）で行って標題化合物（３０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１７８７．８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２６１】
ステップ３：  ４−（（Ｓ，Ｚ）−２−（４−アミノブチル）−４２−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−４，８，３７−トリオキソ−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノナオキサ−３，９，３６−トリアザデドテトラコンチル−４１−アルケンアミド）ベンジル−（（Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルアセトアミド）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロン［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル）カルボナート（化合物ＴＬ０４５）の合成
室温で、化合物４５−３（３０ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１ｍｌ）に溶解し、アセトニトリル（０．５ｍｌ）中のトリフルオロ酢酸（０．５ｍｌ）の溶液を滴下添加した。反応溶液を室温で２０分間撹拌した。精製を分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｃ）で行って標題化合物のトリフルオロ酢酸塩（９ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１５１５．６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２６２】
実施例１８：  ４−（（Ｓ）−２−（４−アミノブチル）−４２−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−４，８，３７−トリオキソ−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノナオキサ−３，９，３６−トリアザデドテトラコンチル−４１−アルキンアミド）ベンジル−（（Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルアセトアミド）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロン［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル）カルボナート
【化１０８】
2021506743.tif 000174
【０２６３】
ステップ１：  （Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルアセトアミド）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロン［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル（４−（（Ｓ）−２−（４−（（（４−メトキシフェニル）ベンズヒドリル）アミノ）ブチル）−４２−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−４，８，３７−トリオキソ−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノナオキサ−３，９，３６−トリアザドテトラコンチル−４１−アルキンアミド）ベンジルカルボナートの合成
化合物２４−１を化合物４８−１に置き換えたことを除いて、実施例１２のステップ１に記載の合成方法と同様の合成方法を採用して、標題化合物（１５ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１７８５．８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２６４】
ステップ２：  ４−（（Ｓ）−２−（４−アミノブチル）−４２−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−４，８，３７−トリオキソ−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノナオキサ−３，９，３６−トリアザデドテトラコンチル−４１−アルキンアミド）ベンジル−（（Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルアセトアミド）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロン［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル）カルボナート（化合物ＴＬ０４８）の合成
化合物２４−２を化合物４８−２に置き換えたことを除いて、実施例１２のステップ２に記載の合成方法と同様の合成方法を採用して、標題化合物のトリフルオロ酢酸塩（１１．３５ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１５１３．７［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２６５】
実施例１９：  ４−（（Ｓ）−２−（４−アミノブチル）−３５−（４−（（２−（２−（（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）チアゾール−４−カルボキサミド）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−４，８−ジオキソ−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノナオキサ−３，９−ジアザペンタトリアコントアミノ）ベンジル（（Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルメチルスルホンアミド）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロン［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル）カルボナート
【化１０９】
2021506743.tif 000175
【０２６６】
ステップ１：  ２−（２−（メチルチオ）ピリミジン−５−イル）チアゾール−４−カルボン酸の合成
化合物４９−１（１００ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）、２−ブロモ−４−チアゾールカルボン酸（９９．０１ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（１３７．０３ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ）及び［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセニル］パラジウムジクロリド（２９．０２ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４ｍＬ）及び水（１ｍｌ）に窒素保護下溶解し、反応系を１００℃に加熱し、４時間撹拌した。次いで、反応溶液を室温に冷却し、水に滴下した。濾過後、濾液を収集し、酢酸エチル（１０ｍＬ×３）で抽出した。水相を収集し、希塩酸でｐＨ＝３に調節して、固体を沈澱させ、濾過した。濾過ケーキを収集して標題化合物（７０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：２５４．０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２６７】
ステップ２：  ２−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）チアゾール−４−カルボン酸の合成
化合物４９−２（７３ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１５ｍＬ）に溶解し、ｍ−クロロペルオキシ安息香酸（１７５．５３ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ、８５％）を添加した。反応系を室温で終夜撹拌した。溶媒を減圧下で濃縮した。精製を分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｄ）で行って標題化合物（２０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：２８６．０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２６８】
ステップ３：  ２−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−Ｎ−（プロパ−２−イン−１−イル）チアゾ−４−カルボキサミドの合成
化合物４９−３（２０ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解し、Ｏ−（７−ベンゾトリアゾール）−Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（３９．９８ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を添加した。得られた反応系を０℃に冷却し、次いでＮ、Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２２．６５ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）及びプロパルギルアミン（４．６３ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）を反応系に添加した。反応溶液を室温で３時間撹拌した。精製を分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｄ）で行って標題化合物（１０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：３２３．０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２６９】
ステップ４：  （Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルメタンスルホンアミド）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロン［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル−（４−（（Ｓ）−２−（４−（（（４−メトキシフェニル）ベンズヒドリル）アミノ）ブチル）−３５−（４−（（２−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）チアゾール−４−カルボキサミド）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−４，８−ジオキソ−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノナゼザ−３，９−ジアザペンタトリアコントアミノ）ベンジル）カルボナートの合成
室温で、化合物３３−１（３０ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）及び化合物４９−４（９．０８ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）をジメチルスルホキシド及び水（２ｍＬ／０．５ｍＬ）に溶解し、臭化銅（５．３９ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌下２時間反応させた。濾過後、濾液を分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｂ）によって精製して標題化合物（２０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１６４７．３［Ｍ＋Ｈ−２７３］＋。
【０２７０】
ステップ５：  ４−（（Ｓ）−２−（４−アミノブチル）−３５−（４−（（２−（２−（（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）チアゾール−４−カルボキサミド）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−４，８−ジオキソ−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノナオキサ−３，９−ジアザペンタトリアコントアミノ）ベンジル（（Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルメチルスルホンアミド）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロン［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル）カルボナートの合成
室温で、化合物４９−５（２０ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（０．２ｍＬ）を滴下添加した。得られた反応溶液を室温で２０分間撹拌した。次いで反応溶液を濃縮した。残渣を分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｃ）によって精製して標題化合物のトリフルオロ酢酸塩（８ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１６４７．９［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２７１】
実施例２０：  ４−（（Ｓ）−２−（４−アミノ酪酸）−３５−（４−（（２−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−オキサゾール−４−ホルミルアミノ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−４，８−ジオキソ−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノンオキシ−３，９−ジアザペンタトリアコントアミド）ベンジル−（（Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルメチルスルホンアミド）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル）カルボナート
【化１１０】
2021506743.tif 000176
【０２７２】
ステップ１：  エチル２−（２−（メチルチオ）ピリミジン−５−イル）オキサゾール−４−カルボキシラートの合成
２５℃で、エチル２−ブロモオキサゾール−４−カルボキシラート（１００ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）及び化合物４９−１（１２６ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン及び水（４ｍＬ／２ｍＬ）の混合溶媒に溶解し、次いで炭酸カリウム（１２５ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）及び［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウムジクロリド（３３ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）をＮ２保護下連続的に添加し、混合物を９０℃に加熱し、３時間反応させた。反応溶液をケイソウ土に通して濾過した。濾液を水（５０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（３０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を合わせ、乾燥した。乾燥剤を濾過により除去し、濾液を減圧下で濃縮して、粗生成物を得た。これを分取薄層クロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝２／１）によって精製して標題化合物（４０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：２６６．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２７３】
ステップ２：  ２−（２−（メチルチオ）ピリミジン−５−イル）オキサゾール−４−カルボン酸の合成
２５℃で化合物５０−１（５０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン及び水の混合溶媒（４ｍＬ／２ｍＬ）に溶解し、溶解の完了後、水酸化リチウム一水和物（４０ｍｇ、０．９４ｍｍｏｌ）をそれに添加し、２５℃で１時間反応させた。反応溶液を水（１５ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（２０ｍＬ×２）で抽出した。水相を１Ｎ希塩酸でｐＨ＝２〜３に調節し、次いでジクロロメタン／メタノール（ｖ：ｖ＝１０：１）の混合溶媒（２０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を合わせ、飽和生理食塩水（３０ｍＬ×１）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。乾燥剤を濾過により除去し、濾液を濃縮して、標題化合物（４０ｍｇ）を得た。これを精製せずにさらなる反応でそのまま使用した。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：２３８．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２７４】
ステップ３：  ２−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）オキサゾール−４−カルボン酸の合成
２５℃で化合物５０−２（４０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（６ｍＬ）に溶解し、溶解の完了後、ｍ−クロロペルオキシ安息香酸（２９ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）をそれに添加し、撹拌下、２５℃で１４時間反応させた。反応溶液を濃縮し、残渣を分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｄ）によって精製して、標題化合物（２０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：２６９．９［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２７５】
ステップ４：  ２−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−Ｎ−（プロパ−２−イン−１−イル）−オキサゾール−４−ホルムアミドの合成
２５℃で、化合物５０−３（２０ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（４ｍＬ）に溶解し、次いでＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（４２ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１９ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を連続的に添加し、５分間撹拌した。続いてプロパルギルアミン（５．０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、得られた混合物を室温で３０分間撹拌した。反応溶液を濃縮し、残渣を分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｄ）によって精製して、標題化合物（５．０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：３０６．９［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２７６】
ステップ５：  （Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルメタンスルホンアミド）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル４−（（Ｓ）−２−（４−（（（４−メトキシフェニル）ジフェニルメチル）アミノ）ブチル）−３５−（４−（（２−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）オキサゾール−４−ホルミルアミノ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−４，８−ジオキソ−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノンオキシ−３，９−ジアザペンタトリアコントアミド）ベンジル）カルボナートの合成
２５℃で、化合物５０−４（６．０ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）及び化合物３３−１（３０ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）をジメチルスルホキシド及び水の混合溶媒（２ｍＬ／０．５ｍＬ）に溶解し、臭化銅（５．０ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）を１回のバッチで添加した。得られた混合物を室温で２時間反応させた。反応溶液を濾過し、分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｂ）によって精製して、標題化合物（２５ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１６３１．３［（Ｍ−２７３＋Ｈ］＋。
【０２７７】
ステップ６：  ４−（（Ｓ）−２−（４−アミノ酪酸）−３５−（４−（（２−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）オキサゾール−４−ホルミルアミノ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−４，８−ジオキソ−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノンオキシ−３，９−ジアザペンタトリアコントアミド）ベンジル−（（Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルメチルスルホンアミド）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル）カルボナートの合成
２５℃で化合物５０−５（２０ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２．０ｍＬ）に溶解した。溶解の完了後、反応混合物にトリフルオロ酢酸（０．２ｍＬ）を添加し、２５℃で１０分間反応させた。反応溶液を濃縮し、残渣を分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｃ）によって精製して、標題化合物のトリフルオロ酢酸塩（３．０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：８１６．５［Ｍ／２＋Ｈ］＋。
【０２７８】
実施例２１：  Ｎ−（（１−（（６Ｓ，９Ｓ）−１−アミノ−６−（（４−（（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパンアミド）メチル）フェニル）カルバモイル）−９−イソプロピル−１，８，１１，１５−テトラオキシ−１３，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０−ノナオキサ−２，７，１０，１６−テトラアザアントラセン−４２−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）−６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−５−ヘキシンアミド
【化１１１】
2021506743.tif 000177
【０２７９】
ステップ１：  ９−フルオレニルメチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−ブチリルアミド）−Ｎ，３−ジメチルブチリルアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロ−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロピオンアミド）−３−フェニルプロピオンアミド）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタ−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバマートの合成
室温で化合物５１−１（１００ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）及び９−フルオレニルメチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（（Ｓ）−２−アミノ−３−フェニルプロパンアミド）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ペンチルウレイド−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバマートトリフルオロアセタート（１４４ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、次いで１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（３４ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルモルホリン（５１ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）及び１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリド（４８ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を連続的に添加した。添加後、反応溶液を０℃で５時間撹拌した。反応溶液を水（２０ｍＬ）に注ぎ入れて、白色の固体を沈澱させ、続いて吸引濾過した。濾過ケーキを洗浄し、乾燥して、標題化合物（２００ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１３２９．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２８０】
ステップ２：  （Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−ブチリルアミノ）−Ｎ−（４−（（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−ブチリルアミノ）−Ｎ，３−ジメチルブチリルアミノ）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロ−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロピオンアミド）−３−フェニルプロピオンアミド）メチル）フェニル）−５−ウレイドバレルアミドの合成
室温で、化合物５１−２（２００ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）に溶解し、ピペリジン（０．５ｍＬ）を添加した。反応溶液を室温で２時間撹拌し、次いで分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｄ）によって精製して、標題化合物（６５ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１１０７．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２８１】
ステップ３：  （Ｓ）−２−（（Ｓ）−３５−アジド−２−イソプロピル−４，８−ジオキソ−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノナオキサ−３，９−ジアザペンタトリアコントアミノ）−Ｎ−（４−（（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパンアミド）メチル）フェニル）−５−ウレイドバレルアミドの合成
３２−アジド−５−オキソ−３，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０−ノナオキサ−６−アザトリカルボン酸（３３．１ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）に溶解し、次いでＯ−（７−アザベンゾトリアゾール）−Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（３８ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２６ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を添加した。反応溶液を室温で１０分間撹拌し、次いで、０℃に冷却し、化合物５１−３（５５ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を添加した。反応溶液を室温で２時間撹拌し、分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｄ）によって精製して、標題化合物（５６ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：８２１．８［Ｍ／２＋Ｈ］＋。
【０２８２】
ステップ４：  Ｎ−（（１−（（６Ｓ，９Ｓ）−１−アミノ−６−（（４−（（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパンアミド）メチル）フェニル）カルバモイル）−９−イソプロピル−１，８，１１，１５−テトラオキシ−１３，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０−ノナオキサ−２，７，１０，１６−テトラアザアントラセン−４２−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）−６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−５−ヘキシンアミドの合成
室温で、化合物５１−４（５６ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）及び６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−Ｎ−（プロパ−２−イン−１−イル）−５−ヘキシンアミド（１６ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）をジメチルスルホキシド及び水の混合溶液（２ｍＬ／０．５ｍＬ）に溶解し、臭化銅（１０ｍｇ、６８．１７ｕｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を２時間撹拌し、次いで濾過した。濾液を分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｄ）によって精製して標題化合物（５０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：９７４．３［Ｍ／２＋Ｈ］＋。
【０２８３】
実施例２２：  ４−（（２Ｓ，５Ｓ）−５−イソプロピル−３８−（４−（（６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−５−ヘキシンアミド）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−４，７，１１−トリオキソ−２−（３−ウレイドプロピル）−９，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６−ノナオキサ−３，６，１２−トリアザドテトラコンチル）ベンジル−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキシプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキシヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）（メチル）カルバマート
【化１１２】
2021506743.tif 000178
【０２８４】
ステップ１：  ４−（（２Ｓ，５Ｓ）−３８−アジド−５−イソプロピル−４，７，１１−トリオキソ−２−（３−ウレイドプロピル）−９，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６−ノナオキサ−３，６，１２−トリアザドテトラコンチル）ベンジル−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキシプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキシヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）（メチル）カルバマート
室温で、化合物５３−１（１００ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）に溶解し、次いで１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１３ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３６ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）及び化合物５２−１（６７ｍｇ、０．０９ｍｏｌ）を添加した。反応溶液を室温で１６時間撹拌し、次いで分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｄ）によって精製して、標題化合物（１２０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：８３０．１［Ｍ／２＋Ｈ］＋。
【０２８５】
ステップ２：  ４−（（２Ｓ，５Ｓ）−５−イソプロピル−３８−（４−（（６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−５−ヘキシンアミド）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−４，７，１１−トリオキソ−２−（３−ウレイドプロピル）−９，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６−ノナオキサ−３，６，１２−トリアザドテトラコンチル）ベンジル−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキシプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキシヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）（メチル）カルバマートの合成
室温で、化合物５２−２（２２ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）をジメチルスルホキシド及び水の混合溶液（３ｍＬ／０．３ｍＬ）に溶解し、次いで、臭化銅（１８ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を添加し、１時間撹拌した。反応溶液を濾過した。濾液を分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｄ）によって精製して標題化合物（９２ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：９８２．８［Ｍ／２＋Ｈ］＋。
【０２８６】
実施例２３：  （Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（２Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（Ｓ）−３−メチル２−（メチル（（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−３−メチル−２−（３２−（４−（（６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）ヘキサ−５−カルバモイル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−５−オキソ−３，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０−ノンオキシ−６−アザトリアコントアミノ）ブチリルアミノ）−５−ウレイドバレリルアミノ）ベンジル）オキシ）カルボニル）アミノ）ブチリルアミノ）−３−メトキシ−５−メチルヘプチル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロピオニル）−Ｌ−フェニルアラニンの合成
【化１１３】
2021506743.tif 000179
【０２８７】
ステップ１：  ４−（（２Ｓ，５Ｓ）−３８−アジド−５−イソプロピル−４，７，１１−トリオキソ−２−（３−ウレイドプロピル）−９，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６−ノンオキシ−３，６，１２−トリアザオクタトリアコントアミノ）ベンジル−（４−ニトロフェニル）−カルボナートの合成
２５℃で、化合物２９−１（５００ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）に溶解し、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１４１ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ）を添加し、続いてジクロロメタン（１ｍＬ）中のジ（ｐ−ニトロベンゾール）カルボナート（３３２ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ）の溶液を滴下添加した。添加後、混合物を撹拌下、２５℃で３時間反応させた。反応溶液を逆カラム（Ｃ１８）クロマトグラフィー（アセトニトリル／水＝１：２）によって精製して標題化合物（４００ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１０８１．９［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２８８】
ステップ２：  （Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（２Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（３２−アジド−５−オキソ−３，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０−ノンオキシ−６−アザトリアコントアミド）−３−メチルブチリルアミノ）−５−ウレイドペンタノイルアミノ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）−３−メチルブチリルアミノ）−Ｎ，３−ジメチルブチリルアミノ）−３−メトキシ−５−メチルヘプチル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロピオニル）−Ｌ−フェニルアラニンの合成
２５℃で化合物５３−１（６０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）及び（（２Ｒ）−３−（（２Ｓ）−１−（（３Ｒ、５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（Ｓ）−３−メチル−２−（メチルアミノ）ブチリルアミノ）ブチリルアミノ）−３−メトキシ−５−メチルヘプチル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチプロピオニル）−Ｌ−フェニルアラニン（４１ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）に溶解した。溶解の完了後、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（８ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）を添加した。添加後、混合物を２５℃で１６時間撹拌した。反応溶液を分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｄ）によって精製して標題化合物（３８ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：８３７．２［Ｍ／２＋Ｈ］＋。
【０２８９】
ステップ３：  （Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（２Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（Ｓ）−３−メチル２−（メチル（（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−３−メチル−２−（３２−（４−（（６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）ヘキサ−５−カルバモイル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−５−オキソ−３，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０−ノンオキシ−６−アザトリアコントアミノ）ブチリルアミノ）−５−ウレイドバレリルアミノ）ベンジル）オキシ）カルボニル）アミノ）ブチリルアミノ）−３−メトキシ−５−メチルヘプチル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロピオニル）−Ｌ−フェニルアラニンの合成
２５℃で２−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−Ｎ−（プロパ−２−イン−１−イル）−オキサゾール−４−ホルムアミド（９ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）及び化合物５３−２（５０ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）をジメチルスルホキシド及び水（１ｍＬ／０．２５ｍＬ）の混合溶媒に溶解した。溶解の完了後、臭化銅（１１ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を添加した。添加後、混合物をＮ２保護下１時間撹拌した。次いで、濾過を行い、濾液を分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｄ）によって精製して、標題化合物（２５ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：９８９．９［Ｍ／２＋Ｈ］＋。
【０２９０】
実施例２４：  ４−（（Ｓ）−２−（４−アミノブチル）−３５−（４−（（６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−５−ヘキシンアミド）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−４，８−ジオキソ−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノナオキサ−３，９−ジアザペンタトリアコントアミノ）ベンジル−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキシプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキシヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）（メチル）カルバマート
【化１１４】
2021506743.tif 000180
【０２９１】
ステップ１：  （Ｓ）−４−（３５−アジド−２−（４−（（（４−メトキシフェニル）ベンズヒドリル）アミノ）ブチリル）−４，８−ジオキソ−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノナオキサ−３，９−ジアザペンタトリアコントアミノ）ベンジル−（４−ニトロフェニル）−カルボナートの合成
室温で、化合物５４−１  １ｇ、０．９５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２０ｍｌ）に溶解し、次いでＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４８８ｍｇ、３．７７ｍｍｏｌ）を添加し、続いてジクロロメタン（１０ｍＬ）中のジ−（ｐ−ニトロフェニル）−カルボナート（８６０ｍｇ、２．８３ｍｍｏｌ）の溶液を滴下添加した。得られた反応溶液を室温で６時間撹拌し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール＝４０／１）によって精製して、標題化合物（９００ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：９５３．０［Ｍ＋Ｈ−２７３］＋。
【０２９２】
ステップ２：  ４−（（Ｓ）−３５−アジド−２−（４−（（（４−メトキシフェニル）ベンズヒドリル）アミノ）ブチリル）−４，８−ジオキソ−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノナオキサ−３，９−ジアザペンタトリアコントアミノ）ベンジル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキシプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキシヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）（メチル）カルバマートの合成
室温で化合物５４−２（２ｍｌ）に１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（３３ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）、Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４８ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）、次いで化合物５２−１（８８ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を添加した。得られた反応溶液を室温で１６時間撹拌し、次いで分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｂ）によって精製して、標題化合物（１５０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１８０３．６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２９３】
ステップ３：  ４−（（Ｓ）−２−（４−（（（４−メトキシフェニル）ベンズヒドリル）アミノ）ブチリル）−３５−（４−（（６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−５−ヘキシンアミド）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−４，８−ジオキソ−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノナオキサ−３，９−ジアザペンタトリアコントアミノ）ベンジル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキシプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキシヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）（メチル）カルバマートの合成
室温で、化合物５４−３（１００ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）及び６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−Ｎ−（プロパ−２−イン−１−イル）−５−ヘキシンアミド（２６ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）をジメチルスルホキシド（２ｍＬ）及び水（０．５ｍＬ）に溶解し、次いで、臭化銅（１６ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を添加し、２時間撹拌した。次いで、濾過を行い、濾液を分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｂ）によって精製して、標題化合物（７０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１９３６．６［Ｍ＋Ｈ−２７３］＋。
【０２９４】
ステップ４：  ４−（（Ｓ）−２−（４−アミノブチル）−３５−（４−（（６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−５−ヘキシンアミド）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−４，８−ジオキソ−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノナオキサ−３，９−ジアザペンタトリアコントアミノ）ベンジル−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキシプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキシヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）（メチル）カルバマートの合成
室温で、化合物５４−４（７０ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（０．２ｍＬ）を滴下添加した。得られた反応溶液を室温で２０分間撹拌し、次いで濃縮し、残渣を分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｃ）によって精製して、標題化合物のトリフルオロ酢酸塩（５５ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：９１８．８［Ｍ／２＋Ｈ］＋。
【０２９５】
実施例２５：  ４−（（Ｓ）−２−（４−アミノブチル）−３５−（４−（（４−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）ベンズアミド）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−４，８−ジオキソ−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノンオキシ−３，９−ジアザペンタトリアコントアミド）ベンジル（（Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルメチルスルホンアミド）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル）カルボナートの合成
【化１１５】
2021506743.tif 000181
【０２９６】
ステップ１：  メチル４−（２−（メチルチオ）ピリミジン−５−イル）ベンゾアートの合成
２５℃で化合物４９−１（２５２ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）、水（３ｍＬ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（４０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（２７７ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（５ｍＬ）中のｐ−ブロモ安息香酸メチル（２１５ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液に連続的に添加し、８０℃で４時間撹拌した。反応溶液を酢酸エチル（３０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を合わせ、乾燥し、次いで、不溶性物質を濾過により除去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物（２２０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：２６１．０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２９７】
ステップ２：  ４−（２−（メチルチオ）ピリミジン−５−イル）安息香酸の合成
２５℃で、水酸化リチウム一水和物（３２２ｍｇ、７．６８ｍｍｏｌ）及び水（３ｍｌ）をそれぞれテトラヒドロフラン（３ｍｌ）中の化合物５５−１（５００ｍｇ、１．９２ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、４時間撹拌した。反応溶液を１Ｎ塩酸でｐＨ＝３〜４に調節し、酢酸エチル（２０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を合わせ、乾燥した。不溶性物質を濾過により除去し、残渣を分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｄ）によって精製して、標題化合物（４３０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：２４６．９［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２９８】
ステップ３：  ４−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）安息香酸の合成
２５℃で、ｍ−クロロペルオキシ安息香酸（４２０ｍｇ、２．４４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５ｍｌ）中の化合物５５−２（２００ｍｇ、０．８１ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、５時間撹拌し、次いでシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物（１８０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：２７９．０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２９９】
ステップ４：  ４−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−Ｎ−（プロパ−２−イン−１−イル）ベンズアミドの合成
２５℃で、ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（１００ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１０ｍＬ）中の化合物５５−３（５０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、３０分間撹拌し、次いで、プロピニルアミン（１０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（７０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を反応溶液に添加し、撹拌下２．５時間反応させた。反応溶液をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して標題化合物（２０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：３１６．０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３００】
ステップ５：  （Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルメタンスルホンアミド）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル（４−（（Ｓ）−２−（４−（（（４−メトキシフェニル）ｄｉフェニルメチル）アミノ）ブチル）−３５−（４−（（４−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）ベンズアミド）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−４，８−ジオキソ−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノンオキシ−３，９−ジアザペンタトリアコントアミド）ベンジル）カルボナートの合成
Ｎ２保護下、２５℃で、ヨウ化銅（１０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）及び水（２ｍＬ）を化合物５５−４（１６ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）及び化合物３３−１（８０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）のジメチルスルホキシド溶液（２ｍＬ）に連続的に添加し、撹拌下１時間反応させた。精製（方法Ｂ）を行って標題化合物（７９ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１６４１．５［Ｍ−２７３＋Ｈ］＋。
【０３０１】
ステップ６：  ４−（（Ｓ）−２−（４−アミノブチル）−３５−（４−（（４−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）ベンズアミド）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−４，８−ジオキソ−６，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ノンオキシ−３，９−ジアザペンタトリアコントアミド）ベンジル（（Ｓ）−４−エチル−１１−（２−（Ｎ−イソプロピルメチルスルホンアミド）エチル）−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル）カルボナートの合成
２５℃で、化合物５５−５（５５ｍｇ、０．０２９ｍｍｏｌ）を水／アセトニトリルの混合溶媒（０．１ｍＬ／０．５ｍＬ）中のトリフルオロ酢酸（０．５ｍＬ）に添加し、撹拌下１５分間反応させた。反応溶液を分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｃ）によって精製して標題化合物のトリフルオロ酢酸塩（４２ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：８２１．０［Ｍ／２＋Ｈ］＋。
【０３０２】
実施例２６：  Ｎ−（（１−（（６Ｓ，９Ｓ）−１−アミノ−６−（（４−（（Ｓ）−３−アジド−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブチリルアミノ）−Ｎ，３−ジメチルブチリルアミノ）−３−メトキシ−５−メチルヘプチル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロピオンアミド）プロピル）フェニル）カルバモイル）−９−イソプロピル−１，８，１１，１５−テトラオキソ−１３，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０−ノンオキシ−２，７，１０，１６−テトラアザドテトラコンタ−４２−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）−６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）ヘキサ−５−イニルアミド
【化１１６】
2021506743.tif 000182
【０３０３】
ステップ１：  ３２−（４−（（６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）ヘキサ−５−インアミド）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−５−オキソ−３，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０−ノンオキシ−６−アザドトリアコンタン酸（ａｚａｄｏｔｒｉａｃｏｎｔａｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）の合成
２０℃で、化合物５６−１（７５０ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）及び６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）−Ｎ−（プロパ−２−イン−１−イル）ヘキサ−５−イニルアミド（４９６ｍｇ、１．５４ｍｍｏｌ）をジメチルスルホキシド（１０ｍＬ）に溶解し、臭化銅（４６５ｍｇ、３．２１ｍｍｏｌ）を１回のバッチで添加した。添加後、混合物を撹拌下１２時間反応させた。反応溶液を濾過し、濾液を分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｄ）によって精製して、標題化合物（５００ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：８６０．４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３０４】
ステップ２：  （９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（Ｓ）−３−アジド−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブチリルアミノ）−Ｎ，３−ジメチルブチリルアミノ）−３−メトキシ−５−メチルヘプチル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロピオンアミド）プロピル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタノイルアミノ−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバマートの合成
２５℃で、（Ｓ）−Ｎ−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（４−アミノフェニル）−３−アジドプロピル−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプチル−４−イル）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブチリルアミノ）−Ｎ，３−ジメチルブチリルアミン（１８５ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）に溶解し、次いで、ＨＡＴＵ（１３７ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）を添加し、５分間撹拌し、続いて（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３−メチルブチリルアミノ）−５−ウレイドペンタン酸（１３１ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で３０分間撹拌した。反応溶液をさらなる反応でそのまま使用した。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：６２６．０［Ｍ／２＋Ｈ］＋。
【０３０５】
ステップ３：  （Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブチリルアミノ）−Ｎ−（４−（（Ｓ）−３−アジド−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブチリルアミノ）−Ｎ，３−ジメチルブチリルアミノ）−３−メトキシ−５−メチルヘプチル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロピオンアミド）プロピル）フェニル）−５−ウレイドバレルアミドの合成
２５℃でジエチルアミン（０．５ｍＬ）をステップ２で得られた反応溶液に添加し、添加後３０分間撹拌して反応させた。反応溶液を分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｄ）によって精製して標題化合物（７０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：５１５．０［Ｍ／２＋Ｈ］＋。
【０３０６】
ステップ４：  Ｎ−（（１−（（６Ｓ，９Ｓ）−１−アミノ−６−（（４−（（Ｓ）−３−アジド−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブチリルアミノ）−Ｎ，３−ジメチルブチリルアミノ）−３−メトキシ−５−メチルヘプチル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロピオンアミド）プロピル）フェニル）カルバモイル）−９−イソプロピル−１，８，１１，１５−テトラオキソ−１３，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０−ノンオキシ−２，７，１０，１６−テトラアザドテトラコンタ−４２−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）−６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）ヘキサ−５−イニルアミドの合成
２５℃で、（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブチリルアミノ）−Ｎ−（４−（（Ｓ）−３−アジド−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブチリルアミノ）−Ｎ，３−ジメチルブチリルアミノ）−３−メトキシ−５−メチルヘプチル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロピオンアミド）プロピル）フェニル）−５−ウレイドバレルアミド（９５ｍｇ、０．０９２ｍｍｏｌ）及び３２−（４−（（６−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−５−イル）ヘキサ−５−インアミド）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−５−オキソ−３，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０−ノンオキシ−６−アザドトリアコンタン酸（７９ｍｇ、０．０９２ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４ｍＬ）に溶解し、ＨＡＴＵ（７０ｍｇ、０．１８４ｍｍｏｌ）を１回のバッチで添加した。混合物を室温で１時間撹拌した。反応溶液を分取高速液体クロマトグラフィー（方法Ｄ）によって精製して標題化合物（３０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：９３５．８［Ｍ／２＋Ｈ］＋。
【０３０７】
ＩＩＩ．生物活性分子及びリンカーを含有する化合物と抗体とのカップリング
実施例２７：  ＢＴ００１００２の調製
抗体サシツズマブ０．３ｍＬ（抗Ｔｒｏｐ−２、３３．５ｍｇ／ｍＬ）を、２０ｍＭ  ＰＢ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ及び２０ｍＭエデト酸ナトリウムを含有する溶液（ｐＨ７．６）０．２５ｍｌで希釈し、それに、２０ｍＭ  ＰＢ及び１５０ｍＭ  ＮａＣｌを含有する溶液（ｐＨ７．６）０．４５ｍｌを添加し、均一に混合した。混合物を１Ｍ  Ｋ２ＨＰＯ４溶液でｐＨ＝７．４に調節し、次いで、１０ｍＭ  ＴＣＥＰ（トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン）溶液を添加し、均一に混合し、室温で３０分間放置した。この溶液系に、ジメチルスルホキシドに溶解したＴＬ００３を１５当量の量で添加し、均一に混合し、室温で２時間放置した。添加後、１００ｍＭシステイン６．１μｌを添加して、反応を停止した。最後に、バッファーをＧ−２５ゲルカラムによってｐＨ６．４４の２０ｍＭ  ＰＢバッファー溶液と置き換えて、ＴＬ００３とサシツズマブとのカップリング生成物を得、これをＢＴ００１００２と名付けた。
【化１１７】
2021506743.tif 000183
【０３０８】
実施例２８：  ＢＴ００１００４の調製
サシツズマブ０．２８５ｍＬ（抗Ｔｒｏｐ−２、１７．６ｍｇ／ｍＬ）を希釈剤０．０９５ｍＬ（２０ｍＭ  ＰＢ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ及び２０ｍＭエデト酸ナトリウム、ｐＨ７．６を含有する溶液）で希釈した。次いで、希釈溶液を１Ｍ  Ｎａ２ＨＰＯ４溶液でｐＨ７．４に調節し、１０ｍＭ  ＴＣＥＰ溶液を添加し、均一に混合し、室温で３０分間放置した。この溶液系に、ジメチルスルホキシドに溶解したＴＬ０１９を９当量の量で添加し、均一に混合し、室温で２時間放置した。最後に、バッファーをＧ−２５ゲルカラムによってｐＨ６．５のＰＢＳバッファー溶液と置き換えて、ＴＬ０１９とサシツズマブとのカップリング生成物を得、これをＢＴ００１００４と名付けた。
【化１１８】
2021506743.tif 000184
【０３０９】
実施例２９：  ＢＴ００１０１２の調製
ＴＬ００３をＴＬ０２４のトリフルオロ酢酸塩に置き換えたことを除いて、実施例２７に記載の方法と同様の方法を採用して、ＴＬ０２４とサシツズマブとのカップリング生成物を得、これをＢＴ００１０１２と名付けた。
【化１１９】
2021506743.tif 000185
【０３１０】
実施例３０：  ＢＴ００１０１３の調製
ＴＬ００３をＴＬ０４８のトリフルオロ酢酸塩に置き換えたことを除いて、実施例２７に記載の方法と同様の方法を採用して、ＴＬ０４８とサシツズマブとのカップリング生成物を得、これをＢＴ００１０１３と名付けた。
【化１２０】
2021506743.tif 000186
【０３１１】
実施例３１：  ＢＴ００１０１８の調製
ＴＬ００３をＴＬ０３０に置き換えたことを除いて、実施例２７に記載の方法と同様の方法を採用して、ＴＬ０３０とサシツズマブとのカップリング生成物を得、これをＢＴ００１０１８と名付けた。
【化１２１】
2021506743.tif 000187
【０３１２】
実施例３２：  ＢＴ００１０２１の調製
サシツズマブ０．３ｍＬ（抗Ｔｒｏｐ−２、３３．５ｍｇ／ｍＬ）を、２０ｍＭ  ＰＢ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ及び２０ｍＭエデト酸ナトリウムを含有する溶液（ｐＨ７．６）０．２５ｍｌで希釈し、次いで、２０ｍＭ  ＰＢ及び１５０ｍＭ  ＮａＣｌを含有する溶液（ｐＨ７．６）０．４５ｍＬを添加し、均一に混合した。混合物を１Ｍ  Ｎａ２ＨＰＯ４溶液でｐＨ＝７．４に調節し、次いで、１０ｍＭ  ＴＣＥＰ（トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン）溶液を添加し、均一に混合し、室温で３０分間放置した。この溶液系に、ジメチルスルホキシドに溶解したＴＬ０３３のトリフルオロ酢酸塩を１０当量の量で添加し、均一に混合し、室温で２時間放置した。次いで、１００ｍＭシステイン６．１μｌを添加して反応を停止させた。最後に、バッファーをＧ−２５ゲルカラムによってｐＨ６．５のＰＢＳバッファー溶液に置き換えて、ＴＬ０３３とサシツズマブとのカップリング生成物を得、これをＢＴ００１０２１と名付けた。
【化１２２】
2021506743.tif 000188
【０３１３】
実施例３３：  ＢＴ００１０２２の調製
ＴＬ００３をＴＬ０３４のトリフルオロ酢酸塩に置き換えたことを除いて、実施例２７に記載の方法と同様の方法を採用して、ＴＬ０３４とサシツズマブとのカップリング生成物を得、これをＢＴ００１０２２と名付けた。
【化１２３】
2021506743.tif 000189
【０３１４】
実施例３４：  ＢＴ００１０２３の調製
ＴＬ００３をＴＬ０３５のトリフルオロ酢酸塩に置き換えたことを除いて、実施例２７に記載の方法と同様の方法を採用して、ＴＬ０３５とサシツズマブとのカップリング生成物を得、これをＢＴ００１０２３と名付けた。
【化１２４】
2021506743.tif 000190
【０３１５】
実施例３５：  ＢＴ００１０３２の調製
ＴＬ００３をＴＬ０４５のトリフルオロ酢酸塩に置き換えたことを除いて、実施例２７に記載の方法と同様の方法を採用して、ＴＬ０４５とサシツズマブとのカップリング生成物を得、これをＢＴ００１０３２と名付けた。
【化１２５】
2021506743.tif 000191
【０３１６】
実施例３６：  ＢＴ００１０３３の調製
ＴＬ００３をＴＬ０３３のトリフルオロ酢酸塩に置き換え、サシツズマブを抗体Ｍ１に置き換えたことを除いて、実施例２７に記載の方法と同様の方法を採用して、ＴＬ０３３と抗体Ｍ１とのカップリング生成物を得、これをＢＴ００１０３３と名付けた。
【化１２６】
2021506743.tif 000192
【０３１７】
実施例３７：  ＢＴ００１０３４の調製
ＴＬ００３をＴＬ０３３のトリフルオロ酢酸塩に置き換え、サシツズマブを抗体Ｍ２に置き換えたことを除いて、実施例２７に記載の方法と同様の方法を採用して、ＴＬ０３３と抗体Ｍ２とのカップリング生成物を得、これをＢＴ００１０３４と名付けた。
【化１２７】
2021506743.tif 000193
【０３１８】
実施例３８：  ＢＴ００１０３５の調製
抗体Ｍ３  ０．３ｍＬ（抗Ｔｒｏｐ−２、３３．５ｍｇ／ｍＬ）を２０ｍＭ  ＰＢ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ及び２０ｍＭエデト酸ナトリウムを含有する溶液（ｐＨ７．６）０．２５ｍｌで希釈し、次いで、２０ｍＭ  ＰＢ及び１５０ｍＭ  ＮａＣｌを含有する溶液（ｐＨ７．６）０．４５ｍＬを添加し、均一に混合した。混合物を１Ｍ  Ｎａ２ＨＰＯ４溶液でｐＨ＝７．４に調節し、次いで、１０ｍＭ  ＴＣＥＰ（トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン）溶液を添加し、均一に混合し、室温で３０分間放置した。溶液系に、ジメチルスルホキシドに溶解したＴＬ０３３のトリフルオロ酢酸塩を１０当量の量で添加し、均一に混合した。得られた混合物を室温で２時間放置した。次いで、１００ｍＭシステイン６．１μｌを添加して反応を停止させた。最後に、バッファーをＧ−２５ゲルカラムによってｐＨ６．５のＰＢＳバッファー溶液と置き換えて、ＴＬ０３３と抗体Ｍ３とのカップリング生成物を得、これをＢＴ００１０３５と名付けた。
【化１２８】
2021506743.tif 000194
【０３１９】
実施例３９：  ＢＴ００１０３６の調製
ＴＬ００３をＴＬ０３３のトリフルオロ酢酸塩に置き換え、サシツズマブをトラスツズマブに置き換えたことを除いて、実施例２７に記載の方法と同様の方法を採用して、ＴＬ０３３とトラスツズマブとのカップリング生成物を得、これをＢＴ００１０３６と名付けた。
【化１２９】
2021506743.tif 000195
【０３２０】
実施例４０：  ＢＴ００１０４０の調製
ＴＬ００３をＴＬ０４９のトリフルオロ酢酸塩に置き換えたことを除いて、実施例２７に記載の方法と同様の方法を採用して、ＴＬ０４９とサシツズマブとのカップリング生成物を得、これをＢＴ００１０４０と名付けた。
【化１３０】
2021506743.tif 000196
【０３２１】
実施例４１：  ＢＴ００１０４１の調製
ＴＬ００３をＴＬ０５０のトリフルオロ酢酸塩に置き換えたことを除いて、実施例２７に記載の方法と同様の方法を採用して、ＴＬ０５０とサシツズマブとのカップリング生成物を得、これをＢＴ００１０４１と名付けた。
【化１３１】
2021506743.tif 000197
【０３２２】
実施例４２：  ＢＴ００１０４２の調製
ＴＬ００３をＴＬ０５１に置き換えたことを除いて、実施例２７に記載の方法と同様の方法を採用して、ＴＬ０５１とサシツズマブとのカップリング生成物を得、これをＢＴ００１０４２と名付けた。
【化１３２】
2021506743.tif 000198
【０３２３】
実施例４３：  ＢＴ００１０４３の調製
ＴＬ００３をＴＬ０５２に置き換えたことを除いて、実施例２７に記載の方法と同様の方法を採用して、ＴＬ０５２とサシツズマブとのカップリング生成物を得、これをＢＴ００１０４３と名付けた。
【化１３３】
2021506743.tif 000199
【０３２４】
実施例４４：  ＢＴ００１０４４の調製
ＴＬ００３をＴＬ０５３に置き換えたことを除いて、実施例２７に記載の方法と同様の方法を採用して、ＴＬ０５３とサシツズマブとのカップリング生成物を得、これをＢＴ００１０４４と名付けた。
【化１３４】
2021506743.tif 000200
【０３２５】
実施例４５：  ＢＴ００１０４５の調製
ＴＬ００３をＴＬ０５４のトリフルオロ酢酸塩に置き換えたことを除いて、実施例２７に記載の方法と同様の方法を採用して、ＴＬ０５４をサシツズマブとのカップリング生成物を得、これをＢＴ００１０４５と名付けた。
【化１３５】
2021506743.tif 000201
【０３２６】
実施例４６：  ＢＴ００１０４６の調製
ＴＬ００３をＴＬ０５５のトリフルオロ酢酸塩に置き換えたことを除いて、実施例２７に記載の方法と同様の方法を採用して、ＴＬ０５５とサシツズマブとのカップリング生成物を得、これをＢＴ００１０４６と名付けた。
【化１３６】
2021506743.tif 000202
【０３２７】
実施例４７：  ＢＴ００１０４７の調製
ＴＬ００３をＴＬ０５６に置き換えたことを除いて、実施例２７に記載の方法と同様の方法を採用して、ＴＬ０５６とサシツズマブとのカップリング生成物を得、これをＢＴ００１０４７と名付けた。
【化１３７】
2021506743.tif 000203
【０３２８】
実施例４８：  ＬＣ−ＭＳによるＢＴ００１００２の分子量の決定
カップリングによって得られたＢＴ００１００２の分子量をＬＣ−ＭＳによって分析した。
ＬＣ条件：
液体クロマトグラフィーカラム：  ＡＣＱＵＩＴＵ  ＵＰＬＣ（登録商標）Ｐｒｏｔｅｉｎ  ＢＥＨ  Ｃ４  １．７μｍ，２．１ｍｍ×１００ｍｍ；
移動相Ａ：０．１％ＦＡ／９８％Ｈ２Ｏ／２％ＡＣＮ；移動相Ｂ：０．１％ＦＡ／２％Ｈ２Ｏ／９８％ＡＣＮ；
流速：０．２５ｍＬ／分；サンプル室温度：８℃；カラム温度：６０℃；サンプルサイズ：１μｇ；
【表７】
2021506743.tif 000204
ＭＳ条件：
質量分析計モデル：  Ｔｒｉｐｌｅ  ＴＯＦ  ５６００＋；
ＧＳ１  ６０；ＧＳ２  ６０；ＣＵＲ３０；ＴＥＭ６００；ＩＳＶＦ５０００；ＤＰ３００；ＣＥ１０  ｍ／ｚ６００−５０００；
結果を図１〜３に示した。
【０３２９】
ＢＴ００１００２の理論分子量及び測定分子量
【表８】
2021506743.tif 000205
【０３３０】
表において、ｍＡｂはモノクローナル抗体を表し；ＬＣは抗体の軽鎖を表し；ＨＣは抗体の重鎖を表し；ＤＡＲ１は、１つの抗体の軽鎖／重鎖及び１つの生物活性分子を含有するコンジュゲートを表し；ＤＡＲ２は、１つの抗体の軽鎖／重鎖及び２つの生物活性分子を含有するコンジュゲートを表し；ＤＡＲ３は、１つの抗体の軽鎖／重鎖及び３つの生物活性分子を含有するコンジュゲートを表し；ＤＡＲ４は、１つの抗体の軽鎖／重鎖及び４つの生物活性分子を含有するコンジュゲートを表し；グリコ型は、２つの重鎖からなるグリカンの構造を表し：Ｇ０Ｆは、ガラクトシル化を欠いたフコシル化を表す。本明細書における下記のｍＡｂ、ＬＣ、ＨＣ、ＤＡＲ１、ＤＡＲ２、ＤＡＲ３、ＤＡＲ４、及びＧ０Ｆは上記の通りである。
【０３３１】
図１〜３から分かるように、抗体の軽鎖及び重鎖の分子量は両方とも、ＴＬ００３とカップリングされた後に変化し、ここで、軽鎖は１つの生物活性分子とカップリングされ、重鎖は３つの生物活性分子とカップリングされた。したがって、生物活性分子に対する抗体のＤＡＲは８であったと推測できる。
【０３３２】
実施例４９：  ＬＣ−ＭＳによるＢＴ００１００４の分子量の決定
カップリングによって得られたＢＴ００１００４の分子量をＬＣ−ＭＳによって分析した。
ＬＣ条件：
液体クロマトグラフィーカラム：  ＡＣＱＵＩＴＵ  ＵＰＬＣ（登録商標）Ｐｒｏｔｅｉｎ  ＢＥＨ  Ｃ１８  １．７μｍ，２．１ｍｍ×１００ｍｍ；
移動相Ａ：０．１％ＦＡ／９８％Ｈ２Ｏ／２％ＡＣＮ；移動相Ｂ：０．１％ＦＡ／２％Ｈ２Ｏ／９８％ＡＣＮ；
流速：０．２５ｍＬ／分；サンプル室温度：８℃；カラム温度：６０℃；サンプルサイズ：１μｇ；
【表９】
2021506743.tif 000206
ＭＳ条件：
質量分析計モデル：  Ｔｒｉｐｌｅ  ＴＯＦ  ５６００＋；
ＧＳ１  ６０；ＧＳ２  ６０；ＣＵＲ３０；ＴＥＭ  ３５０；ＩＳＶＦ５５００；ＤＰ３００；ＣＥ１０；ｍ／ｚ６００〜５０００；
結果を図４〜６に示した。
【０３３３】
ＢＴ００１００４の理論分子量及び測定分子量
【表１０】
2021506743.tif 000207
ＬＣは抗体の軽鎖を表し；ＨＣは抗体の重鎖を表す。
【０３３４】
図４〜６から分かるように、ＢＴ００１００４では、抗体の軽鎖は０〜１つの生物活性分子とカップリングされ（ＬＣ及びＤＡＲ１はそれぞれ１４％及び８６％を占めた）、重鎖は１〜３つの生物活性分子とカップリングされた（ＤＡＲ１、ＤＡＲ２及びＤＡＲ３はそれぞれ１３％、１９％及び６８％を占めた）。したがって、生物活性分子に対する抗体のＤＡＲは７．０と計算できる。
【０３３５】
実施例５０：  ＬＣ−ＭＳによるＢＴ００１０１２の分子量の決定
実施例４８に記載の方法と同様の方法を採用し、結果を図１０及び１１に示した。
【０３３６】
ＴＬ０２４及び抗体をカップリングすることによって得られたＢＴ００１０１２の軽鎖及び重鎖の理論分子量及び測定分子量（主なグリコ型Ｇ０Ｆから計算）を下の表に示した。
【表１１】
2021506743.tif 000208
【０３３７】
図１０及び１１から分かるように、ＢＴ００１０１２では、抗体の軽鎖は０〜１つの毒素とカップリングされ（ＬＣ及びＤＡＲ１はそれぞれ１２．９％及び８７．１％を占めた）、重鎖は１〜３つの毒素とカップリングされた（ＤＡＲ１、ＤＡＲ２及びＤＡＲ３はそれぞれ３．４％、１０．８％及び７５．８％を占めた）。したがって、毒素に対する抗体のＤＡＲは７．０と計算できる。
【０３３８】
実施例５１：  ＬＣ−ＭＳによるＢＴ００１０１３の分子量の決定
実施例４８に記載の方法と同様の方法を採用し、結果を図１２及び１３に示した。
【０３３９】
ＴＬ０４８及び抗体をカップリングすることによって得られたＢＴ００１０１３の軽鎖及び重鎖の理論分子量及び測定分子量（主なグリコ型Ｇ０Ｆに基づき計算）を下の表に示した。
【表１２】
2021506743.tif 000209
【０３４０】
図１２及び１３から分かるように、ＢＴ００１０１３では、抗体の軽鎖は０〜１つの毒素とカップリングされ（ＬＣ及びＤＡＲ１はそれぞれ６．８％及び９３．２％を占めた）、重鎖は１〜４つの毒素とカップリングされた（ＤＡＲ１、ＤＡＲ２、ＤＡＲ３及びＤＡＲ４はそれぞれ１２．８％、１２．８％、６４．９％及び９．５％を占めた）。したがって、毒素に対する抗体のＤＡＲは７．３と計算できる。
【０３４１】
実施例５２：  ＬＣ−ＭＳによるＢＴ００１０１８の分子量の決定
実施例４８に記載の方法と同様の方法を採用し、結果を図１４及び１５に示した。
【０３４２】
ＴＬ０３０及び抗体をカップリングすることによって得られたＢＴ００１０１８の軽鎖及び重鎖の理論分子量及び測定分子量（主なグリコ型Ｇ０Ｆに基づき計算）を下の表に示した。
【表１３】
2021506743.tif 000210
【０３４３】
図１４及び１５から分かるように、ＢＴ００１０１８では、抗体の軽鎖は０〜１つの毒素とカップリングされ（ＬＣ及びＤＡＲ１はそれぞれ５５．３％及び４４．７％を占めた）、重鎖は１〜３つの毒素とカップリングされた（ＤＡＲ１、ＤＡＲ２、ＤＡＲ３及びＤＡＲ４はそれぞれ１９．６％、２３．３％及び４９．６％を占めた）。したがって、毒素に対する抗体のＤＡＲは５．２と計算できる。
【０３４４】
実施例５３：  ＬＣ−ＭＳによるＢＴ００１０２１の分子量の決定
カップリングされたＢＴ００１０２１の分子量をＬＣ−ＭＳによって分析した。
ＬＣ条件：
液体クロマトグラフィーカラム：  ＡＣＱＵＩＴＵ  ＵＰＬＣ（登録商標）Ｐｒｏｔｅｉｎ  ＢＥＨ  Ｃ４  １．７μｍ，２．１ｍｍ×１００ｍｍ；
移動相Ａ：０．１％ＦＡ／９８％Ｈ２Ｏ／２％ＡＣＮ；移動相Ｂ：０．１％ＦＡ／２％Ｈ２Ｏ／９８％ＡＣＮ；
流速：０．２５ｍＬ／分；サンプル室温度：８℃；カラム温度：６０℃；サンプルサイズ：１μｇ；
【表１４】
2021506743.tif 000211
ＭＳ条件：
質量分析計モデル：  Ｔｒｉｐｌｅ  ＴＯＦ  ５６００＋；
ＧＳ１  ６０；ＧＳ２  ６０；ＣＵＲ３０；ＴＥＭ６００；ＩＳＶＦ５０００；ＤＰ３００；ＣＥ１０  ｍ／ｚ６００−５０００；
結果を図１６及び１７に示した。
【０３４５】
ＴＬ０３３及び抗体をカップリングすることによって得られたＢＴ００１０２１の軽鎖及び重鎖の理論分子量及び測定分子量（主なグリコ型Ｇ０Ｆに基づき計算）を下の表に示した。
【表１５】
2021506743.tif 000212
【０３４６】
図１６及び１７から分かるように、ＢＴ００１０２１では、抗体の軽鎖は０〜１つの毒素とカップリングされ（ＬＣ及びＤＡＲ１はそれぞれ４．５％及び９５．５％を占めた）、重鎖は１〜３つの毒素とカップリングされた（ＤＡＲ１、ＤＡＲ２、ＤＡＲ３及びＤＡＲ４はそれぞれ１５．３％、１７．６％及び６７．１％を占めた）。したがって、毒素に対する抗体のＤＡＲは６．９と計算できる。
【０３４７】
実施例５４：  ＬＣ−ＭＳによるＢＴ００１０２３の分子量の決定
実施例４８に記載の方法と同様の方法を採用し、結果を図１８及び１９に示した。
【０３４８】
ＴＬ０３５及び抗体をカップリングすることによって得られたＢＴ００１０２３の軽鎖及び重鎖の理論分子量及び測定分子量（主なグリコ型Ｇ０Ｆに基づき計算）を下の表に示した。
【表１６】
2021506743.tif 000213
【０３４９】
図１８及び１９から分かるように、ＢＴ００１０２３では、抗体の軽鎖は０〜１つの毒素とカップリングされ（ＬＣ及びＤＡＲ１はそれぞれ１５％及び８５％を占めた）、重鎖は０〜３つの毒素とカップリングされた（ＨＣ、ＤＡＲ１、ＤＡＲ２及びＤＡＲ３はそれぞれ６．７％、１６．７％、１２．７％及び６３．９％を占めた）。したがって、毒素に対する抗体のＤＡＲは６．４と計算できる。
【０３５０】
実施例５５：  ＬＣ−ＭＳによるＢＴ００１０４０の分子量の決定
カップリングによって得られたＢＴ００１０４０の分子量をＬＣ−ＭＳによって分析した。
液体クロマトグラフィーカラム：  Ｔｈｅｒｍｏ  ＭａｂＰａｃＴＭ  ＲＰ  ４μｍ，３．０ｍｍ×１００ｍｍ
移動相Ａ：０．１％ＦＡ／９８％Ｈ２Ｏ／２％ＡＣＮ；移動相Ｂ：０．１％ＦＡ／２％Ｈ２Ｏ／９８％ＡＣＮ
流速：０．２５ｍＬ／分；サンプル室温度：８℃；カラム温度：６０℃；サンプルサイズ：１μｇ
【表１７】
2021506743.tif 000214
ＭＳ条件：
質量分析計モデル：  Ｔｒｉｐｌｅ  ＴＯＦ  ５６００＋
ＧＳ１  ３５；ＧＳ２  ３５；ＣＵＲ３０；ＴＥＭ３５０；ＩＳＶＦ５０００；ＤＰ２５０；ｍ／ｚ６００〜５０００
【０３５１】
ＴＬ０４９及び抗体をカップリングすることによって得られたＢＴ００１０４０の軽鎖及び重鎖の理論分子量及び測定分子量（主なグリコ型Ｇ０Ｆに基づき計算）を下の表に示した。
【表１８】
2021506743.tif 000215
【０３５２】
図２０及び２１から分かるように、ＢＴ００１０４０では、抗体の軽鎖は０〜１つの生物活性分子とカップリングされ（ＬＣ及びＤＡＲ１はそれぞれ４．９％及び９５．１％を占めた）、重鎖は１〜４の生物活性分子とカップリングされた（ＤＡＲ１、ＤＡＲ２、ＤＡＲ３及びＤＡＲ４はそれぞれ１６．５％、１４．３％、５２．６％及び１６．６％を占めた）。したがって、生物活性分子に対する抗体のＤＡＲは７．３と計算できる。
【０３５３】
実施例５６：  ＬＣ−ＭＳによるＢＴ００１０４１の分子量の決定
実施例５５に記載の方法と同様の方法を採用し、結果を図２２及び２３に示した。
【０３５４】
ＴＬ０５０及び抗体をカップリングすることによって得られたＢＴ００１０４１の軽鎖及び重鎖の理論分子量及び測定分子量（主なグリコ型Ｇ０Ｆに基づき計算）を下の表に示した。
【表１９】
2021506743.tif 000216
【０３５５】
図２２及び２３から分かるように、ＢＴ００１０４１では、抗体の軽鎖は０〜１つの生物活性分子とカップリングされ（ＬＣ及びＤＡＲ１はそれぞれ１０．５％及び８９．５％を占めた）、重鎖は１〜４つの生物活性分子とカップリングされた（ＤＡＲ１、ＤＡＲ２、ＤＡＲ３及びＤＡＲ４はそれぞれ２１．３％、１４．８％、５７．９％及び６．０％を占めた）。したがって、生物活性分子に対する抗体のＤＡＲは６．８と計算できる。
【０３５６】
実施例５７：  ＬＣ−ＭＳによるＢＴ００１０４２の分子量の決定
実施例５５に記載の方法と同様の方法を採用し、結果を図２４及び２５に示した。
【０３５７】
ＴＬ０５１及び抗体をカップリングすることによって得られたＢＴ００１０４２の軽鎖及び重鎖の理論分子量及び測定分子量（主なグリコ型Ｇ０Ｆに基づき計算）を下の表に示した。
【表２０】
2021506743.tif 000217
【０３５８】
図２４及び２５から分かるように、ＢＴ００１０４２では、抗体の軽鎖は０〜１つの生物活性分子とカップリングされ（ＬＣ及びＤＡＲ１はそれぞれ１４．９％及び８５．１％を占めた）、重鎖は１〜３つの生物活性分子とカップリングされた（ＤＡＲ１、ＤＡＲ２及びＤＡＲ３はそれぞれ１９．７％、９．４％及び７０．９％を占めた）。したがって、生物活性分子に対する抗体のＤＡＲは６．７と計算できる。
【０３５９】
実施例５８：  ＬＣ−ＭＳによるＢＴ００１０４３の分子量の決定
実施例５５に記載の方法と同様の方法を採用し、結果を図２６及び２７に示した。
【０３６０】
ＴＬ０５２及び抗体をカップリングすることによって得られたＢＴ００１０４３の軽鎖及び重鎖の理論分子量及び測定分子量（主なグリコ型Ｇ０Ｆに基づき計算）を下の表に示した。
【表２１】
2021506743.tif 000218
【０３６１】
図２６及び２７から分かるように、ＢＴ００１０４３では、抗体の軽鎖は０〜１つの生物活性分子とカップリングされ（ＬＣ及びＤＡＲ１はそれぞれ９．１％及び９０．９％を占めた）、重鎖は１〜３つの生物活性分子とカップリングされた（ＤＡＲ１、ＤＡＲ２及びＤＡＲ３はそれぞれ２０．１％、１１．４％及び６８．４％を占めた）。したがって、生物活性分子に対する抗体のＤＡＲは６．８と計算できる。
【０３６２】
実施例５９：  ＬＣ−ＭＳによるＢＴ００１０４４の分子量の決定
実施例５５に記載の方法と同様の方法を採用し、結果を図２８及び２９に示した。
【０３６３】
ＴＬ０５３及び抗体をカップリングすることによって得られたＢＴ００１０４４の軽鎖及び重鎖の理論分子量及び測定分子量（主なグリコ型Ｇ０Ｆに基づき計算）を下の表に示した。
【表２２】
2021506743.tif 000219
【０３６４】
図２８及び２９から分かるように、ＢＴ００１０４４では、抗体の軽鎖は０〜１つの生物活性分子とカップリングされ（ＬＣ及びＤＡＲ１はそれぞれ２３．０％及び７７．０％を占めた）、重鎖は１〜３つの生物活性分子とカップリングされた（ＤＡＲ１、ＤＡＲ２及びＤＡＲ３はそれぞれ１９．４％、１１．４％及び６９．３％を占めた）。したがって、生物活性分子に対する抗体のＤＡＲは６．５と計算できる。
【０３６５】
実施例６０：  ＬＣ−ＭＳによるＢＴ００１０４６の分子量の決定
実施例５５に記載の方法と同様の方法を採用し、結果を図３０及び３１に示した。
【０３６６】
ＴＬ０５５及び抗体をカップリングすることによって得られたＢＴ００１０４６の軽鎖及び重鎖の理論分子量及び測定分子量（主なグリコ型Ｇ０Ｆに基づき計算）を下の表に示した。
【表２３】
2021506743.tif 000220
【０３６７】
図３０及び３１から分かるように、ＢＴ００１０４６では、抗体の軽鎖は０〜１つの生物活性分子とカップリングされ（ＬＣ及びＤＡＲ１はそれぞれ３３．８％及び６６．２％を占めた）、重鎖は０〜３つの生物活性分子とカップリングされた（ＤＡＲ０、ＤＡＲ１、ＤＡＲ２及びＤＡＲ３はそれぞれ２１．９％、６．１％、９．６％及び６２．３％を占めた）。したがって、生物活性分子に対する抗体のＤＡＲは５．６と計算できる。
【０３６８】
実施例６１：  ＬＣ−ＭＳによるＢＴ００１０４７の分子量の決定
実施例５５に記載の方法と同様の方法を採用し、結果を図３２及び３３に示した。
【０３６９】
ＴＬ０５６及び抗体をカップリングすることによって得られたＢＴ００１０４７の軽鎖及び重鎖の理論分子量及び測定分子量（主なグリコ型Ｇ０Ｆに基づき計算）を下の表に示した。
【表２４】
2021506743.tif 000221
【０３７０】
図３２及び３３から分かるように、ＢＴ００１０４７では、抗体の軽鎖は０〜１つの生物活性分子とカップリングされ（ＬＣ及びＤＡＲ１はそれぞれ１３．７％及び８６．３％を占めた）、重鎖は１〜３つの生物活性分子とカップリングされた（ＤＡＲ１、ＤＡＲ２及びＤＡＲ３はそれぞれ２２．２％、１３．５％及び６４．３％を占めた）。したがって、生物活性分子に対する抗体のＤＡＲは６．６と計算できる。
【０３７１】
実施例６２：  サイズ排除クロマトグラフィー分析
カップリング反応をＳＥＣ−ＨＰＬＣによってモニターし、コンジュゲートをＳＥＣによって試験した。
クロマトグラフィーの条件：
液体クロマトグラフィーカラム：  ＴＯＳＯＨ  ＴＳＫｇｅｌ  ＳｕｐｅｒＳＷ  ｍＡｂ，４μｍ，７．８ｍｍ×３００ｍｍ；
移動相：１００ｍｍｏｌ／Ｌ  Ｎａ２ＨＰＯ４，１００ｍｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ，５％イソプロパノール，ｐＨ７．０；
流速：０．５ｍｌ／分；検出波長：２８０ｎｍ；カラム温度：室温；サンプル室温度：８℃；
サンプルサイズ：３０μｇ；定組成運転：３０分。
【０３７２】
ＴＬ００３と抗体とのカップリングによって得られたＢＴ００１００２のＳＥＣクロマトグラム及び分子量マーカーＳＥＣクロマトグラムをそれぞれ図７及び８に示した。分子量マーカーによれば、カップリング生成物の主なピークの分子量は約１５０ｋＤである、すなわち、ＴＬ００３と抗体とのカップリングによって得られたＢＴ００１００２では、軽鎖及び重鎖は解離しておらず、抗体はなおその完全な構造を維持していることが確認される。
【０３７３】
ＴＬ０１９と抗体とのカップリングによって得られたＢＴ００１００４のＳＥＣクロマトグラムを図９に示す。ＳＥＣにおける保持時間及びピーク面積比によれば、主なカップリング生成物の分子量は約１５０ｋＤである、すなわち、ＴＬ０１９と抗体とのカップリングによって得られたＢＴ００１００４はなお抗体の完全な構造を維持していることが確認される。
【０３７４】
ＴＬ０２４と抗体とのカップリングによって得られたＢＴ００１０１２のＳＥＣクロマトグラムを図３４に示す。ＳＥＣにおける保持時間及びピーク面積比によれば、主なカップリング生成物の分子量は約１５０ｋＤである、すなわち、ＴＬ０２４と抗体とのカップリングによって得られたＢＴ００１０１２はなお抗体の完全な構造を維持していることが確認される。
【０３７５】
ＴＬ０４８と抗体とのカップリングによって得られたＢＴ００１０１３のＳＥＣクロマトグラムを図３５に示す。ＳＥＣにおける保持時間及びピーク面積比によれば、主なカップリング生成物の分子量は約１５０ｋＤである、すなわち、ＴＬ０４８と抗体とのカップリングによって得られたＢＴ００１０１３はなお抗体の完全な構造を維持していることが確認される。
【０３７６】
ＴＬ０３０と抗体とのカップリングによって得られたＢＴ００１０１８のＳＥＣクロマトグラムを図３６に示す。ＳＥＣにおける保持時間及びピーク面積比によれば、主なカップリング生成物の分子量は約１５０ｋＤである、すなわち、ＴＬ０３０と抗体とのカップリングによって得られたＢＴ００１０１８はなお抗体の完全な構造を維持していることが確認される。
【０３７７】
ＴＬ０３３と抗体とのカップリングによって得られたＢＴ００１０２１のＳＥＣクロマトグラムを図３７に示す。ＳＥＣにおける保持時間及びピーク面積比によれば、主なカップリング生成物の分子量は約１５０ｋＤである、すなわち、ＴＬ０３３と抗体とのカップリングによって得られたＢＴ００１０２１はなお抗体の完全な構造を維持していることが確認される。
【０３７８】
ＴＬ０３５と抗体とのカップリングによって得られたＢＴ００１０２３のＳＥＣクロマトグラムを図３８に示す。ＳＥＣにおける保持時間及びピーク面積比によれば、主なカップリング生成物の分子量は約１５０ｋＤである、すなわち、ＴＬ０３５と抗体とのカップリングによって得られたＢＴ００１０２３はなお抗体の完全な構造を維持していることが確認される。
【０３７９】
ＴＬ０５１と抗体とのカップリングによって得られたＢＴ００１０４２のＳＥＣクロマトグラムを図３９に示す。ＳＥＣにおける保持時間及びピーク面積比によれば、主なカップリング生成物の分子量は約１５０ｋＤである、すなわち、ＴＬ０５１と抗体とのカップリングによって得られたＢＴ００１０４２はなお抗体の完全な構造を維持していることが確認される。
【０３８０】
ＴＬ０５２と抗体とのカップリングによって得られたＢＴ００１０４３のＳＥＣクロマトグラムを図４０に示す。ＳＥＣにおける保持時間及びピーク面積比によれば、主なカップリング生成物の分子量は約１５０ｋＤである、すなわち、ＴＬ０５２と抗体とのカップリングによって得られたＢＴ００１０４３はなお抗体の完全な構造を維持していることが確認される。
【０３８１】
ＴＬ０５３と抗体とのカップリングによって得られたＢＴ００１０４４のＳＥＣクロマトグラムを図４１に示す。ＳＥＣにおける保持時間及びピーク面積比によれば、主なカップリング生成物の分子量は約１５０ｋＤである、すなわち、ＴＬ０５３と抗体とのカップリングによって得られたＢＴ００１０４４はなお抗体の完全な構造を維持していることが確認される。
【０３８２】
ＴＬ０５５と抗体とのカップリングによって得られたＢＴ００１０４６のＳＥＣクロマトグラムを図４２に示す。ＳＥＣにおける保持時間及びピーク面積比によれば、主なカップリング生成物の分子量は約１５０ｋＤである、すなわち、ＴＬ０５５と抗体とのカップリングによって得られたＢＴ００１０４６はなお抗体の完全な構造を維持していることが確認される。
【０３８３】
ＴＬ０５６と抗体とのカップリングによって得られたＢＴ００１０４７のＳＥＣクロマトグラムを図４３に示す。ＳＥＣにおける保持時間及びピーク面積比によれば、主なカップリング生成物の分子量は約１５０ｋＤである、すなわち、ＴＬ０５６と抗体とのカップリングによって得られたＢＴ００１０４７はなお抗体の完全な構造を維持していることが確認される。
【０３８４】
実施例６３：  インビトロでの細胞の活性に対する生物活性分子及び抗体薬物コンジュゲートの阻害効果の試験
初めに、腫瘍細胞ＭＤＡ−ＭＢ−４６８（Ｔｒｏｐ−２陽性細胞株）及びＨＣＣ１８０６（Ｔｒｏｐ−２陽性細胞株）を培養した。本開示に開示の生物活性分子及びＡＤＣ分子を腫瘍細胞と共に同時培養し、次いでＣＣＫ８試薬（Ｄｏｊｉｎｄｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｃａｔ：ＣＫ０４、Ｌｏｔ：ＪＪ７４４）を添加した。ミトコンドリアにおけるデヒドロゲナーゼの活性をマイクロプレートリーダー（製造者：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ、ｍｏｄｅｌ：ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｍ２）からの示度（検出波長は４５０ｎｍであった）によって試験して、細胞増殖に対するＡＤＣの阻害効果を評価した。腫瘍細胞の供給源を表１に示した。
【表２５】
2021506743.tif 000222
【０３８５】
インビトロ細胞活性試験：  生物活性分子又はＡＤＣを対応する試験培地（２％ＦＢＳ含有）で希釈した（１２の濃度勾配）。腫瘍細胞を従来の方法によってトリプシンでトリプシン処理し、収集し、カウントし、次いで対応する試験培地（２％ＦＢＳ含有）で再懸濁した。希釈した生物活性分子又はＡＤＣを９６ウェルプレートに添加し、次いで細胞を添加した。ＣＣＫ８試薬２０μＬを各ウェルに添加し、４時間反応させ、示度（検出波長は４５０ｎｍであった）をマイクロプレートリーダーから取った。実験条件及び試験結果を表２及び表３に示した。
【０３８６】
【表２６】
2021506743.tif 000223
【０３８７】
試験結果は、生物活性分子のすべてが腫瘍細胞に対して死滅効果を有したことを示した。
【０３８８】
【表２７】
2021506743.tif 000224
【０３８９】
試験結果は、新規のカップリング法によって得られたＡＤＣ分子が腫瘍細胞に対して死滅効果を有したことを示した。これは、新規のカップリング法によって形成されたＡＤＣが腫瘍細胞に対して死滅効果を有し、新規のカップリング方法がＡＤＣ分子の合成において実行可能であったことを示している。
【０３９０】
実施例６４：  インビボでの抗体薬物コンジュゲート及び生物活性分子の薬力学的試験
被験薬物
薬物名、供給源及び調製方法：
ＢＴ００１０２１、液体アリコットを−２０℃で５．４４ｍｇ／ｍｌの濃度で貯蔵し、使用前に生理食塩水で投与量に希釈して試験溶液を得た；
Ｉｍｍｕ−１３２（国際公開第２０１５／０１２９０４Ａ２号の実施例２に従って調製、ＤＡＲ＝５．４、ＩＭＭＵ−１３２とも記載される）、液体アリコットを−２０℃で１３．１５８ｍｇ／ｍｌの濃度で貯蔵し、使用前に生理食塩水で投与量に希釈して試験溶液を得た；
Ｔ−０３０の固体粉末を１００％ＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ）で５．２ｍｇ／ｍＬの濃度の溶液に調製し、液体アリコットを−２０℃で貯蔵し、使用前に生理食塩水で所望の用量に希釈して、試験溶液を得た；
ＳＮ−３８（ＳＮ３８とも記載される）の固体粉末を１００％ＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ）で３．２３ｍｇ／ｍｌの濃度の溶液に調製し、液体アリコットを−２０℃で貯蔵し、使用前に生理食塩水で投与量に希釈して試験溶液を得た。
注：  毒素を調製し、ＡＤＣサンプルの等モル比で投与した。
【０３９１】
Ｔ−０３０、ＳＮ−３８及びＩｍｍｕ−１３２の構造は下の通りであった：
【化１３８】
2021506743.tif 000225
【０３９２】
実験動物及び細胞株
Ｂａｌｂ／ｃ−ｎｕマウス（Ｂｅｉｊｉｎｇ  Ｖｉｔａｌ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．，  Ｌｔｄ．、生産免許番号：ＳＣＸＫ（Ｂｅｉｊｉｎｇ）２０１６−００１１）；胃がん細胞株ＮＣＩ−Ｎ８７（ＡＴＣＣ）、乳がん細胞株ＨＣＣ１８０６（ＣＯＢＩＯＥＲ  Ｎａｎｊｉｎｇ）。
【０３９３】
実験群化及び評価方法
１００〜２００ｍｍ３の腫瘍体積を有する担腫瘍マウス（６マウス／群）を無作為に群化した（群の数はサンプル数に従って決定した）。投与体積は１０ｍｌ／ｋｇであり、投与経路は尾静脈内注射であった。マウスに週２回投与し、腫瘍直径をノギスで測定し、腫瘍体積を次の計算式に基づき計算した：Ｖ＝０．５ａ×ｂ２［式中、ａ及びｂはそれぞれ腫瘍の長径及び短径を表す。］。動物の死亡を毎日観察及び記録した。
【０３９４】
腫瘍成長阻害率ＴＧＩ（％）を次の式から計算して、抗体薬物コンジュゲートの腫瘍阻害効果を評価した。
ＴＧＩ（％）＝［１−（ＶＴｅｎｄ−ＶＴｓｔａｒｔ）／（ＶＣｅｎｄ−ＶＣｓｔａｒｔ）］×１００％
［式中、
ＶＴｅｎｄ：処置群における実験終了時の平均腫瘍体積
ＶＴｓｔａｒｔ：処置群における投与開始時の平均腫瘍体積
ＶＣｅｎｄ：対照群における実験終了時の平均腫瘍体積
ＶＣｓｔａｒｔ：対照群における投与開始時の平均腫瘍体積］
【０３９５】
次の実験例１及び２では、ヒト腫瘍細胞の皮下異種移植片によって構築された担腫瘍マウスの腫瘍増殖に対する抗体コンジュゲートＢＴ００１０２１の阻害を評価した。具体的には、実験例１及び２では、担腫瘍マウスモデルをヒト胃がん細胞株ＮＣＩ−Ｎ８７又はヒト三重陰性乳がん細胞株ＨＣＣ１８０６の皮下異種移植片によって構築した。腫瘍体積が約１００ｍｍ３になった後、マウスを無作為に群化し、ＢＴ００１０２１を週２回、合計６回にわたって静脈内投与した。腫瘍体積及び動物体重の変化を週２回測定して、担腫瘍マウスに対する抗体薬物コンジュゲートの有効性（腫瘍阻害効果）を評価した。
【０３９６】
実験例１．抗体薬物コンジュゲート及び生物活性分子によるＮＣＩ−Ｎ８７の阻害
実験方法：
ＮＣＩ−Ｎ８７細胞を、１０％ウシ胎児血清を含有する１６４０培養培地中、３７℃及び５％ＣＯ２で培養した。指数増殖期のＮＣＩ−Ｎ８７細胞を収集し、ＰＢＳ中で適切な濃度まで再懸濁し、雌のＢａｌｂ／ｃ−ｎｕマウスに皮下接種して胃がんモデルを構築した。平均腫瘍体積が約９０ｍｍ３になったときに、マウスを腫瘍サイズに従って生理食塩水群、ＢＴ００１０２１（３ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、ＢＩＷ×３Ｗ）群、陽性の薬物Ｉｍｍｕ−１３２（３ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、ＢＩＷ×３Ｗ）群、Ｔ０３０群及びＳＮ３８群に無作為に群化し、続いて、対応する薬物を週２回、合計６回にわたって尾静脈内注射した。投与後、マウスの腫瘍体積及び体重を定期的に観察及び測定した。具体的な結果を表４、図４４及び４５に示した。
【０３９７】
結論：
実験例では、ヒト胃がん細胞株ＮＣＩ−Ｎ８７を用いてヒト胃がんの皮下異種移植片モデルを構築し、ＮＣＩ−Ｎ８７ヒト胃がんの担腫瘍マウスモデルにおけるＢＴ００１０２１の有効性を評価した。
【０３９８】
実験結果は、ＢＴ００１０２１（３ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、ＢＩＷ×３Ｗ）がＮＣＩ−Ｎ８７胃がんの異種移植片モデルマウスの腫瘍成長を有意に阻害し、投与の終了時には腫瘍退縮が生じ得ることを示し、抗腫瘍活性は、陽性対照Ｉｍｍｕ−１３２の抗腫瘍活性よりも優れていた。観察期間中、すべての処置群において、動物の死亡も有意な動物の体重減少も生じず、これは、ＢＴ００１０２１が有意な毒性を有しなかったことを示した。
【０３９９】
【表２８】
2021506743.tif 000226
【０４００】
実験例２．抗体薬物コンジュゲートによるＨＣＣ１８０６の阻害
実験方法：
ＨＣＣ１８０６細胞を、１０％ウシ胎児血清を含有する１６４０培養培地中、３７℃及び５％ＣＯ２で培養した。指数増殖期のＨＣＣ１８０６細胞を収集し、ＰＢＳ中で適切な濃度に再懸濁し、雌のＢａｌｂ／ｃ−ｎｕマウスに皮下接種して乳がんモデルを構築した。平均腫瘍体積が約１３０ｍｍ３になったときに、マウスを腫瘍サイズに従って生理食塩水群、ＢＴ００１０２１（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、ＢＩＷ×３Ｗ）群及び陽性の薬物Ｉｍｍｕ−１３２（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、ＢＩＷ×３Ｗ）群に無作為に群化し、続いて、対応する薬物を週２回、合計５回にわたって尾静脈内注射した。投与後、マウスの腫瘍体積を定期的に観察及び測定した。具体的な結果を表５、図４６に示した。
【０４０１】
結論：
実験例では、ヒト乳がん細胞株ＨＣＣ１８０６を用いてヒト乳がんの皮下異種移植片モデルを構築し、ＨＣＣ１８０６ヒト乳がんの担腫瘍マウスモデルにおけるＢＴ００１０２１の有効性を評価した。
【０４０２】
実験結果は、ＢＴ００１０２１（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、ＢＩＷ×３Ｗ）がＨＣＣ１８０６乳がんの異種移植片モデルマウスの腫瘍成長を有意に阻害し得ることを示し、抗腫瘍活性は、陽性の対照Ｉｍｍｕ−１３２の抗腫瘍活性よりも優れていた。
【０４０３】
【表２９】
2021506743.tif 000227
【０４０４】
表４、表５及び図４４〜４６によれば、本発明の抗体薬物ＢＴ００１０２１はＮＣＩ−Ｎ８７マウスモデルにおける腫瘍成長を有意に阻害できた。ＢＴ００１０２１は、同じ投与量でＩｍｍｕ−１３２よりも有意に優れており、有意な体重減少も有意な薬物毒性も有しなかった。ＨＣＣ１８０６マウスモデルにおいて、腫瘍の高い悪性度のために投与量を１０ｍｇ／ｋｇに増加させたときに、Ｉｍｍｕ−１３２は有意な阻害活性を示さなかったが、ＢＴ００１０２１は腫瘍成長を有意に阻害できた。結果は、本発明のＢＴ００１０２１が高い有効性及び優れた安全性を有したことを示した。
【０４０５】
実験例１及び２の皮下異種移植片モデルにおいて、ＢＴ００１０２１の抗腫瘍活性は、同じ投与量でＩｍｍｕ−１３２の抗腫瘍活性よりも有意に優れており、これは、ＢＴ００１０２１が固形腫瘍を処置する可能性を有し、臨床的にＩｍｍｕ−１３２よりも多くの患者に有益であると予測され得ることを示唆した。
【０４０６】
実験例３．抗体薬物コンジュゲートによるＨＣＣ８２７の阻害
実験例３を用いて、ＨＣＣ８２７非小細胞肺がんの皮下異種移植片ヒト腫瘍細胞によって構築された担腫瘍マウスモデルの増殖に対するＢＴ００１０２１及びＢＴ００１０３５の阻害効果を評価した。具体的には、実験では、担腫瘍マウスモデルをヒト非小細胞肺がん細胞株ＨＣＣ８２７の皮下異種移植片によって構築した。腫瘍体積が約１００ｍｍ３になった後、マウスを無作為に群化し、ＢＴ００１０２１及びＢＴ００１０３５を週２回、合計６回にわたって静脈内投与した。次いで、腫瘍体積及び動物体重における変化を週２回測定して、担腫瘍マウスに対するＢＴ００１０２１及びＢＴ００１０３５の有効性（腫瘍阻害効果）を計算した。
【０４０７】
実験方法：
ＨＣＣ８２７細胞を、１０％ウシ胎児血清を含有する１６４０培養培地中、３７℃及び５％ＣＯ２で培養した。指数増殖期のＨＣＣ８２７細胞を収集し、ＰＢＳ中で適切な濃度に再懸濁し、雌のＢａｌｂ／ｃ−ｎｕマウスに皮下接種して、肺がんの異種移植片モデルを構築した。平均腫瘍体積が約８０ｍｍ３になったときに、マウスを腫瘍サイズに従って生理食塩水群、陽性の薬物Ｉｍｍｕ−１３２（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、ＢＩＷ×３Ｗ）群、ＢＴ００１０２１（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、ＢＩＷ×３Ｗ）群及びＢＴ００１０３５（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、ＢＩＷ×３Ｗ）群に無作為に群化し、続いて、対応する薬物を週２回、合計６回にわたって尾静脈内注射した。投与後、マウスの腫瘍体積及び体重を定期的に観察及び測定した。結果を表６、図４７Ａ及び図４７Ｂに示した。
【０４０８】
結論：
実験結果は、ＢＴ００１０２１及びＢＴ００１０３５がＨＣＣ８２７非小細胞肺がんの異種移植片モデルマウスの腫瘍成長を有意に阻害し、投与の終了時には腫瘍退縮が生じ得たことを示し、抗腫瘍活性は、陽性対照Ｉｍｍｕ−１３２群の抗腫瘍活性よりも優れていた。観察期間中、すべての処置群において、動物の死亡も有意な動物の体重減少も生じず、有意な薬物毒性は観察されなかった。処置期間中、マウスは、評価されたすべての薬物について良好な忍容性を示した。
【０４０９】
【表３０】
2021506743.tif 000228
【０４１０】
表６、図４７Ａ及び図４７Ｂによれば、ＢＴ００１０２１及びＢＴ００１０３５は両方とも、評価期間中、腫瘍成長に対して有意な阻害活性を有したが、それらは、同じ投与量でＩｍｍｕ−１３２の阻害活性よりも有意に優れている。処置中、すべての群で、有意な体重減少も有意な薬物毒性も観察されなかった。結果は、ＢＴ００１０２１及びＢＴ００１０３５が両方とも優れた抗腫瘍活性を有したことを示した。
【０４１１】
皮下異種移植片モデルでは、ＢＴ００１０２１及びＢＴ００１０３５の両方の抗腫瘍活性は、同じ投与量でＩｍｍｕ−１３２の抗腫瘍活性よりも有意に優れていて、ＢＴ００１０２１及びＢＴ００１０３５が両方とも、固形腫瘍を処置する可能性を有し、臨床的にＩｍｍｕ−１３２よりも多くの患者に有益であると予測され得ることを示唆した。
【０４１２】
実験例４．抗体薬物コンジュゲートによるＮＣＩ−Ｎ８７の阻害
実験例４を用いて、ヒト腫瘍細胞の皮下異種移植片によって構築された担腫瘍マウスの腫瘍増殖に対する抗体薬物コンジュゲートＢＴ００１０３６の阻害を評価した。具体的には、実験では、担腫瘍マウスモデルをヒト胃癌細胞株ＮＣＩ−Ｎ８７の皮下異種移植片によって構築した。腫瘍体積が約１４０ｍｍ３になった後、マウスを無作為に群化し、ＢＴ００１０３６を週２回、合計６回にわたって静脈内投与した。腫瘍体積及び動物の体重の変化を週２回測定して、担腫瘍マウスに対する抗体薬物コンジュゲートの有効性（腫瘍阻害効果）を評価した。
【０４１３】
実験方法：
ＮＣＩ−Ｎ８７細胞を、１０％ウシ胎児血清を含有する１６４０培養培地中、３７℃及び５％ＣＯ２で培養した。指数増殖期のＮＣＩ−Ｎ８７細胞を収集し、ＰＢＳ中で適切な濃度に再懸濁し、雌のＢａｌｂ／ｃ−ｎｕマウスに皮下接種して胃癌の異種移植片モデルを構築した。平均腫瘍体積が約１４０ｍｍ３になったときに、マウスを腫瘍サイズに従って生理食塩水群、ＢＴ００１０３６（１．５ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、ＢＩＷ×３Ｗ）群及びＢＴ００１０３６（３ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、ＢＩＷ×３Ｗ）群に無作為に群化し、続いて、対応する薬物を週２回、合計６回にわたって尾静脈内注射した。投与後、マウスの腫瘍体積及び体重を定期的に観察及び測定した。具体的な結果を表７、図４８Ａ及び図４８Ｂに示した。
【０４１４】
【表３１】
2021506743.tif 000229
【０４１５】
結論：
実験例では、ヒト胃癌の皮下異種移植片モデルを、ヒト胃癌細胞株ＮＣＩ−Ｎ８７の皮下異種移植片によって構築し、ＮＣＩ−Ｎ８７ヒト胃癌の担腫瘍マウスモデルにおけるＢＴ００１０３６の有効性を評価した。
【０４１６】
実験結果は、ＢＴ００１０３６の高用量及び低用量（１．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ）の両方が、優れた抗腫瘍活性で、ＮＣＩ−Ｎ８７胃癌の異種移植片モデルマウスの腫瘍成長を有意に阻害し、投与の終了時に腫瘍退縮が生じ得たことを示した。観察期間中、すべての処置群で、動物の死亡及び有意な動物の体重減少は生じず、有意な薬物毒性は観察されなかった。処置期間中、マウスは、評価されたすべての薬物について良好な忍容性を示した。
【０４１７】
実験例５．抗体薬物コンジュゲートによるＭＤＡ−ＭＢ−２３１の阻害
実験例５を用いて、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳癌の皮下異種移植片ヒト腫瘍細胞によって構築された担腫瘍マウスモデルの増殖に対するＢＴ００１０２１の阻害効果を評価した。具体的には、実験では、担腫瘍マウスモデルをヒト乳癌細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１の皮下異種移植片によって構築した。腫瘍体積が約１３０ｍｍ３になった後、マウスを無作為に群化し、ＢＴ００１０２１を週２回、合計６回にわたって静脈内投与した。次いで、腫瘍体積及び動物の体重の変化を測定して、担腫瘍マウスに対するＢＴ００１０２１の有効性（腫瘍阻害効果）を計算した。
【０４１８】
実験方法：
ＮＣＩ−ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を、１０％ウシ胎児血清を含有するＲＰＭＩ１６４０培養培地中、３７℃及び５％ＣＯ２で培養した。指数増殖期のＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を収集し、ＰＢＳ中で適切な濃度に再懸濁し、雌のＢａｌｂ／ｃ−ｎｕマウスに皮下接種して肺癌の異種移植片モデルを構築した。平均腫瘍体積が約１３０ｍｍ３になったときに、マウスを腫瘍サイズに従って生理食塩水群及びＢＴ００１０２１（３ｍｇ／ｋｇ）群に無作為に群化し、続いて、対応する薬物を週２回、合計６回にわたって尾静脈内注射した。投与後、マウスの腫瘍体積及び体重を定期的に観察及び測定した。結果を表８、図４９Ａ及び図４９Ｂに示した。
【０４１９】
結論：
結果は、ＢＴ００１０２１がＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳癌の異種移植片モデルマウスの腫瘍成長を有意に阻害し、投与の終了時に腫瘍退縮が生じ得たことを示した。観察期間中、すべての処置群において、動物の死亡も有意な動物の体重減少も生じず、有意な薬物毒性は観察されなかった。処置期間中、マウスは、評価されたすべての薬物について良好な忍容性を示した。
【０４２０】
【表３２】
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【０４２１】
皮下異種移植片モデルでは、ＢＴ００１０２１は、有意な抗腫瘍活性を有した。観察期間中、すべての処置群において、動物の死亡も有意な動物の体重減少も生じず、有意な薬物毒性は観察されなかった。処置期間中、マウスは、評価されたすべての薬物について良好な忍容性を示した。
【０４２２】
実施例６５：  インビボでの抗体薬物コンジュゲート及び生物活性分子の薬物動態の試験
実験例６を用いて、インビボでの抗体薬物コンジュゲート及び生物活性分子の薬物動態を評価した。具体的には、実験では、担腫瘍マウスモデルを、Ｂａｌｂ／ｃ−ｎｕマウスへのヒト胃癌細胞株ＮＣＩ−Ｎ８７の皮下異種移植によって構築した。腫瘍体積が１００〜２００ｍｍ３になった後、マウスを無作為に群化し、ＢＴ００１０２１及びＴ−０３０の単回用量を静脈内投与した。腫瘍組織及び血清中のＴ−０３０の濃度を決定して、担腫瘍マウスにおける抗体コンジュゲートＢＴ００１０２１及び生物活性分子Ｔ−０３０のインビボでの薬物動態を評価した。
【０４２３】
被験薬物
薬物名及び調製方法：
ＢＴ００１０２１、液体アリコットを−２０℃で２０ｍｇ／ｍｌの濃度で貯蔵し、使用前に生理食塩水で所望の用量に希釈して、試験溶液を得た；
Ｔ−０３０、ジメチルスルホキシドで１ｍｇ／ｍｌに調製し、生理学的生理食塩水で所望の用量に希釈して、試験溶液を得た。
実験動物及び細胞株：
Ｂａｌｂ／ｃ−ｎｕマウス（Ｂｅｉｊｉｎｇ  Ｖｉｔａｌ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．、生産免許番号：ＳＣＸＫ（Ｂｅｉｊｉｎｇ）２０１６−００１１）；胃癌細胞株ＮＣＩ−Ｎ８７（ＡＴＣＣ）。
実験群及び評価方法：
１００〜２００ｍｍ３の腫瘍体積を有する担腫瘍マウス（４マウス／群）を無作為に群化し（群の数はサンプル数に従って決定した）、投与経路は単回の尾静脈内注射であった。
【０４２４】
実験例６．インビボでの担腫瘍マウスにおけるＢＴ００１０２１及びＴ−０３０の薬物動態の試験
実験方法：
ＮＣＩ−Ｎ８７細胞を、１０％熱不活化ウシ胎児血清を含有する１６４０培養培地中、３７℃及び５％ＣＯ２で培養した。指数増殖期のＮＣＩ−Ｎ８７細胞を収集し、ＰＢＳ中で適切な濃度に再懸濁し、Ｂａｌｂ／ｃ−ｎｕマウスに皮下接種して肺癌の異種移植片モデルを構築した。平均腫瘍体積が約１００〜２００ｍｍ３になったときに、マウスを腫瘍サイズに従って生理食塩水群、Ｔ−０３０（０．２３ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、単回用量）群及びＢＴ００１０２１（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、単回用量）群に無作為に群化し、続いて、対応する薬物を尾静脈内注射した。Ｔ−０３０群では、血清及び腫瘍組織を投与から１時間、２時間、４時間、８時間、２４時間及び７２時間後に収集した（Ｔ−０３０は、投与から７２時間後には血清及び腫瘍組織で検出されず、したがって、血清及び腫瘍組織を投与から１６８時間後には収集しなかった）。ＢＴ００１０２１群では、血清及び腫瘍組織を投与から１時間、２時間、４時間、８時間、２４時間、７２時間及び１６８時間後に収集して、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって、血清及び腫瘍中のＴ−０３０の濃度を試験した。具体的な結果を表９に示した。Ｔ−０３０（０．２３ｍｇ／ｋｇ）の投与用量を同モル用量（１０ｍｇ／ｋｇ）のＢＴ００１０２１に変えた。
【０４２５】
【表３３】
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【０４２６】
結論：
ＢＴ００１０２１（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群の腫瘍及び血清中の薬物のＡＵＣｌａｓｔはそれぞれ、８５０．１ｈ×ｎｇ／ｍｌ及び１７４．９７ｈ×ｎｇ／ｍｌであったが、Ｔ−０３０投与群の腫瘍及び血清中の薬物のＡＵＣｌａｓｔはそれぞれ、３．８５ｈ×ｎｇ／ｍｌ及び５．５８ｈ×ｎｇ／ｍｌであった。比較は、ＢＴ００１０２１投与群のＴ−０３０の曝露量がＴ−０３０投与群の暴露量と比較して有意に増加したことを示した。加えて、ＢＴ００１０２１投与群の腫瘍中の生物活性分子Ｔ−０３０の曝露量は血清中の暴露量よりも有意に高いが、Ｔ−０３０投与群の血清及び腫瘍中の活性生体分子の曝露量は基本的に同じであり、これは、抗体薬物コンジュゲート（ＢＴ００１０２１）が高い腫瘍組織標的性を有したことを示した。
【０４２７】
ＢＴ００１０２１（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群の腫瘍及び血清中の生物活性分子Ｔ−０３０のＣｍａｘはそれぞれ、７．８２ｎｇ／ｍｌ及び１１．７ｎｇ／ｍｌであったが、Ｔ−０３０投与群の腫瘍及び血清中の生物活性分子Ｔ−０３０のＣｍａｘはそれぞれ、１．２０ｎｇ／ｍｌ及び１．８１ｎｇ／ｍｌであり、これは、抗体薬物コンジュゲート（ＢＴ００１０２１）が腫瘍組織及び血清において、より高い生物活性分子（Ｔ−０３０）の濃度を有したことを示した。
【０４２８】
ＢＴ００１０２１（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群の腫瘍における生物活性分子Ｔ−０３０のＴ１／２は９３．１４時間であったが、Ｔ−０３０投与群の腫瘍における生物活性分子Ｔ−０３０のＴ１／２は、２．５５時間であり、これは、抗体薬物コンジュゲート（ＢＴ００１０２１）が腫瘍組織において、より長い半減期を有したことを示した。
【０４２９】
結論として、ＢＴ００１０２１は、対応する生物活性分子（Ｔ−０３０）と比較して有意な腫瘍組織標的性及び良好な薬物動態特性を有した。
【０４３０】
実験例７．インビボでの抗体薬物コンジュゲートＢＴ００１０２１及びＩｍｍｕ−１３２の薬物動態の試験。
実験では、担腫瘍マウスモデルをＢａｌｂ／ｃ−ｎｕマウスへのヒト胃癌細胞株ＮＣＩ−Ｎ８７の皮下異種移植片によって構築した。腫瘍体積が１００〜２００ｍｍ３になった後、マウスを無作為に群化し、ＢＴ００１０２１及びＩｍｍｕ−１３２の単回用量を静脈内投与した。腫瘍組織及び血清中のＢＴ００１０２１に対応する生物活性分子Ｔ−０３０及びＳＮ−３８並びにＩｍｍｕ−１３２の濃度をそれぞれ測定して、インビボにおける担腫瘍マウスでの抗体コンジュゲートＢＴ００１０２１及びＩｍｍｕ−１３２の薬物動態を評価した。
【０４３１】
被験薬物
薬物名及び調製方法：
ＢＴ００１０２１、液体アリコットを−２０℃で２０ｍｇ／ｍｌの濃度で貯蔵し、使用前に生理食塩水で所望の用量に希釈して、試験溶液を得た；
Ｉｍｍｕ−１３２を生理学的生理食塩水で所望の用量に希釈して、試験溶液を得た。
実験動物及び細胞株：
Ｂａｌｂ／ｃ−ｎｕマウス（Ｂｅｉｊｉｎｇ  Ｖｉｔａｌ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．、生産免許番号：ＳＣＸＫ（Ｂｅｉｊｉｎｇ）２０１６−００１１）；胃癌細胞株ＮＣＩ−Ｎ８７（ＡＴＣＣ）。
実験群及び評価方法：
１００〜２００ｍｍ３の腫瘍体積を有する担腫瘍マウス（マウス４匹／群）を無作為に群化し（群の数はサンプル数に従って決定した）、投与経路は単回の尾静脈内注射であった。
【０４３２】
実験方法：
ＮＣＩ−Ｎ８７細胞を、１０％熱不活化ウシ胎児血清を含有する１６４０培養培地中、３７℃及び５％ＣＯ２で培養した。指数増殖期のＮＣＩ−Ｎ８７細胞を収集し、ＰＢＳ中で適切な濃度に再懸濁し、Ｂａｌｂ／ｃ−ｎｕマウスに皮下接種して肺癌の異種移植片モデルを構築した。平均腫瘍体積が約１００〜２００ｍｍ３になったときに、マウスを腫瘍サイズに従ってＢＴ００１０２１（５ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、単回用量）群及びＩｍｍｕ−１３２（５ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、単回用量）群に無作為に群化し、続いて、対応する薬物を尾静脈内注射した。血清及び腫瘍組織をそれぞれ、投与から２時間、２４時間、４８時間及び７２時間後に収集して、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって血清及び腫瘍中のＴ−０３０又はＳＮ−３８の濃度を試験した。
【０４３３】
【表３４】
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【０４３４】
結論：
ＢＴ００１０２１投与群の腫瘍及び血清中の小さな毒素分子のＡＵＣｌａｓｔはそれぞれ、４２７．２ｈ×ｎｇ／ｍｌ及び１１５．３ｈ×ｎｇ／ｍｌであったが、Ｉｍｍｕ−１３２投与群の腫瘍及び血清中の小さな毒素分子のＡＵＣｌａｓｔはそれぞれ、１１６．８ｈ×ｎｇ／ｍｌ及び４２２．７ｈ×ｎｇ／ｍｌであった。ＢＴ００１０２１投与群の腫瘍中の小さな毒素分子のＣｍａｘは６．８ｎｇ／ｍｌであったが、Ｉｍｍｕ−１３２投与群の腫瘍中の小さな毒素分子のＣｍａｘは、２．８ｎｇ／ｍｌであった。結果は、ＢＴ００１０２１がＩｍｍｕ−１３２と比較して、より良好な腫瘍組織標的性、より良好な薬物動態特性及びより良好な治療ウィンドウを有したことを示した。
【０４３５】
本発明を実施するための具体的な様式を詳細に記載してきたが、詳細に対して様々な変更及び代替がすべての公開されている教示に従ってなされ得、そのような変化が本発明の保護範囲内であることは当業者に理解されるべきである。本発明の全範囲は、添付の特許請求の範囲及びその任意の均等物によって与えられる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７Ａ】
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【図４７Ｂ】
2021506743.tif 000409
【図４８Ａ】
2021506743.tif 000410
【図４８Ｂ】
2021506743.tif 000411
【図４９Ａ】
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【図４９Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
2021506743.tif 000414
2021506743.tif 000415
2021506743.tif 000416
2021506743.tif 000417
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