(57)【要約】  本発明は、結晶無水物または三水和物としての、４−（４−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボニル）−６−メトキシピリジン−２−イル）安息香酸のトリス塩、および多形体、医薬組成物、剤形、ならびに動物における、アセチル−ＣｏＡカルボキシレート（ＡＣＣ）酵素の阻害により調節される疾患、状態または障害の処置におけるその使用を提供する。【選択図】図１
2021504442.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
４−（４−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボニル）−６−メトキシピリジン−２−イル）安息香酸の２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）プロパン−１，３−ジオール結晶塩。
【請求項２】
４−（４−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボニル）−６−メトキシピリジン−２−イル）安息香酸と塩との比が、１：１である、請求項１に記載の結晶塩。
【請求項３】
無水結晶塩である、請求項１または２に記載の結晶塩。
【請求項４】
無水結晶塩が、９．６、１０．７および１１．３  ２Θ、±０．２°２Θの回折角にピークを含むＰＸＲＤパターンを有する、請求項３に記載の結晶塩。
【請求項５】
無水結晶塩が、１５１１、１５６１および１６１５ｃｍ−１、±２ｃｍ−１にピークシフトを含むラマンスペクトルを有する、請求項３または４に記載の結晶塩。
【請求項６】
無水結晶塩が、２２．９、１４６．２および１６１．９ｐｐｍ、±０．２ｐｐｍで化学シフトを含む１３ＣｓｓＮＭＲスペクトルを有する、請求項３〜５のいずれか一項に記載の結晶塩。
【請求項７】
無水結晶塩が、１５１１および１６１５ｃｍ−１、±２ｃｍ−１にピークシフトを含むラマンスペクトル、ならびに２２．９、１４６．２または１６１．９ｐｐｍ、±０．２ｐｐｍで少なくとも１つの化学シフトを含む１３ＣｓｓＮＭＲスペクトルからなる群から選択される分析パラメータ−を有する、請求項３に記載の結晶塩。
【請求項８】
無水結晶塩が、実質的に純粋である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の結晶塩。
【請求項９】
三水和物結晶塩である、請求項１または２に記載の結晶塩。
【請求項１０】
三水和物結晶塩が、８．４、９．０および１０．５  ２Θ、±０．２°２Θの回析角にピークを含むＰＸＲＤパターンを有する、請求項９に記載の三水和物結晶塩。
【請求項１１】
三水和物結晶塩が、１５０７、１５５７および１６１０ｃｍ−１、±２ｃｍ−１にピークシフトを含むラマンスペクトルを有する、請求項９または１０に記載の三水和物結晶塩。
【請求項１２】
三水和物結晶塩が、１９．２、１４９．５、および１６３．８ｐｐｍ、±０．２ｐｐｍで化学シフトを含む１３ＣｓｓＮＭＲスペクトルを有する、請求項９〜１１のいずれか一項に記載の三水和物結晶塩。
【請求項１３】
三水和物結晶塩が、８．４および９．０  ２Θ、±０．２°２Θの回析角にピークを含むＰＸＲＤパターン、
１５５７および１６１０ｃｍ−１、±２ｃｍ−１にピークシフトを含むラマンスペクトル、ならびに
１９．２、１４９．５または１６３．８ｐｐｍ、±０．２ｐｐｍで少なくとも１つの化学シフトを含む１３ＣｓｓＮＭＲスペクトル
からなる群から選択される分析パラメータ−を有する、請求項９に記載の三水和物結晶塩。
【請求項１４】
三水和物結晶塩が、８．４および９．０  ２Θ、±０．２°２Θの回析角にピークを含むＰＸＲＤパターン、ならびに１５０７、１５５７または１６１０ｃｍ−１、±２ｃｍ−１で少なくとも１つのピークシフトを含むラマンスペクトルからなる群から選択される分析パラメータ−を有する、請求項９に記載の三水和物結晶塩。
【請求項１５】
三水和物結晶塩が、８．４および９．０  ２Θ、±０．２°２Θの回析角でピークを含むＰＸＲＤパターン、ならびに１９．２、１４９．５または１６３．８ｐｐｍ、±０．２ｐｐｍで少なくとも１つの化学シフトを含む１３ＣｓｓＮＭＲスペクトルからなる群から選択される分析パラメータ−を有する、請求項９に記載の三水和物結晶塩。
【請求項１６】
三水和物結晶塩が、実質的に純粋である、請求項１および２ならびに９〜１５のいずれか一項に記載の結晶塩。
【請求項１７】
治療有効量の請求項１〜１６のいずれか一項に記載の結晶塩を薬学的に許容される担体と共に含む、医薬組成物。
【請求項１８】
前記哺乳動物における、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨおよびＴ２Ｄから選択される疾患を処置する方法であって、治療有効量の請求項１〜１６のいずれか一項に記載の結晶塩を哺乳動物へ投与するステップを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、４−（４−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボニル）−６−メトキシピリジン−２−イル）安息香酸のトリス塩、および結晶形態、多形体、医薬組成物、剤形、ならびに動物における、アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）酵素の阻害によって調節される疾患、状態または障害の処置におけるその使用を提供する。
【背景技術】
【０００２】
４−（４−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボニル）−６−メトキシピリジン−２−イル）安息香酸（本発明で化合物１と称される）は、選択的ＡＣＣ阻害剤であり、参照によりそのすべてがこれによってすべての目的のためにそれらの全体が本明細書に組み込まれる、国際出願ＰＣＴ／ＩＢ２０１１／０５４１１９の米国国内段階である米国特許第８，８５９，５７７の実施例９における遊離酸として調製された。化合物１は、遊離酸として、好適ではない物理化学的特性を有する。
【０００３】
塩の形成は、その化学構造を修飾することなく薬剤の物理化学的特性および合成的な生物的特性を変更する手段を提供する。塩形態は、薬剤の性質に劇的な影響を有し得る。好適な塩形態の選択は、任意の塩が形成され得るかどうかを含む多くの因子を評価することを含む。この選択に含まれる他の因子としては、吸湿性、安定性、溶解度、および発見され得た任意の塩形態のプロセスプロファイルが挙げられる。
【０００４】
非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）は、メタボリックシンドロームの肝臓所見であり、脂肪肝、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、繊維症、硬変症、および最終的には肝細胞がんを包含する肝臓状態の範囲である。ＮＡＦＬＤおよびＮＡＳＨは、上昇した肝脂質を有する個体のうちの最大の割合を占めているため、主要な脂肪肝臓疾患であると考えられている。ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨの重症度は、脂質、炎症性細胞浸潤物、肝細胞バルーニングの存在、および繊維症の程度に基づく。脂肪肝を有するすべての個体がＮＡＳＨへと進行するわけではないが、有意な部分がそのようになる。
【０００５】
肝脂質の堆積が肝臓インスリン抵抗性を引き起こして２型糖尿病（Ｔ２Ｄ）の発病の一因となることが、一層明らかになってきている。Ｓａｖａｇｅらは、ＡＣＣ１およびＡＣＣ２が、両方とも、肝細胞における脂肪酸化の調整に関与しており、その一方で、ラットの肝臓中で優勢なイソ型であるＡＣＣ１が、脂肪酸合成の唯一の調整物質であることを明示した。さらに、それらのモデルにおいて、インビボで、肝臓マロニル−ＣｏＡレベルを有意に低下させ、飢餓状態における脂肪酸化を増加させ、脂質堆積を低減させ、インスリン作用を改善するために、両方のイソ型が合わされて低減することが必要とされる。そのため、肝臓のＡＣＣ１およびＡＣＣ２阻害剤が、ＮＡＦＬＤおよび肝臓インスリン抵抗性の処置において有用であり得る。Ｓａｖａｇｅ，Ｄ．Ｂ．ら、「Ｒｅｖｅｒｓａｌ  ｏｆ  ｄｉｅｔ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｓｔｅａｔｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｂｙ  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ａｃｅｔｙｌ−ＣｏＡ  ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅｓ  １  ａｎｄ  ２」、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．２００６；１１６（３）：８１７〜２４頁を参照されたい。Ｏｈ，Ｗ．ら、「Ｇｌｕｃｏｓｅ  ａｎｄ  ｆａｔ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ｉｎ  ａｄｉｐｏｓｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｏｆ  ａｃｅｔｙｌ−ＣｏＡ  ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ  ２  ｋｎｏｃｋｏｕｔ  ｍｉｃｅ」、ＰＮＡＳ、１０２（５）１３８４〜１３８９頁（２００５）もまた参照されたい。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
したがって、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨおよびＴ２Ｄを含む疾患を処置するためのＡＣＣ１および／またはＡＣＣ２阻害剤を含有する経口薬品への必要性が存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、本明細書で化合物１と称される４−（４−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボニル）−６−メトキシピリジン−２−イル）安息香酸のトリス塩の結晶多形体（ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｓ）、ここで、この結晶塩は、無水物または水和物、より特定すると三水和物であることができ、ならびに多形体、医薬組成物、剤形、ならびに動物における、アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）酵素の阻害によって調節される疾患、状態または障害の処置におけるその使用を提供する。本発明の新規の結晶形態は、改善された溶解度および生物学的利用能を含む薬剤としての使用にとって、とりわけ好適な性質を有する。
【０００８】
化合物１の固体結晶形態が本明細書で開示され、ここで、各固体形態は、単独でまたは組み合わせで、粉末Ｘ線回析パターンピークまたは２つ以上のピークの組み合わせ、固相ＮＭＲ１３Ｃ化学シフトまたは２つ以上の化学シフトの組み合わせ、およびラマンピークシフトまたは２つ以上のラマンピークシフトの組み合わせなどであるがこれらに限定されないいくつかの異なる分析パラメータ−によって独自に特定され得る。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】Ｃｕ照射源を備えたＢｒｕｋｅｒ  ＡＸＳ  Ｄ４  Ｅｎｄｅａｖｏｒ回析計で実行された形態１の例示的なＰＸＲＤパターンを示す図である。
【図２】ＦＴ−ＩＲベンチに取り付けられたＮｉｃｏｌｅｔ  ＮＸＲ  ＦＴ−ラマン補機を用いて収集した形態１の例示的なラマンスペクトルを示す図である。
【図３】Ｂｒｕｋｅｒ−ＢｉｏＳｐｉｎ  Ａｖａｎｃｅ  ＩＩＩ  ５００  ＭＨｚ（周波数１Ｈ）ＮＭＲ分光計中に配置させたＢｒｕｋｅｒ−ＢｉｏＳｐｉｎ  ＣＰＭＡＳプローブにおいて行われた形態１の例示的な１３ＣｓｓＮＭＲを示す図である。
【図４】Ｃｕ照射源を備えたＢｒｕｋｅｒ  ＡＸＳ  Ｄ４  Ｅｎｄｅａｖｏｒ回析計で実行された形態２の例示的なＰＸＲＤパターンを示す図である。
【図５】ＦＴ−ＩＲベンチに取り付けられたＮｉｃｏｌｅｔ  ＮＸＲ  ＦＴ−ラマン補機を用いて収集した形態２の例示的なラマンスペクトルを示す図である。
【図６】Ｂｒｕｋｅｒ−ＢｉｏＳｐｉｎ  Ａｖａｎｃｅ  ＩＩＩ  ５００  ＭＨｚ（周波数１Ｈ）ＮＭＲ分光計中に配置させたＢｒｕｋｅｒ−ＢｉｏＳｐｉｎ  ＣＰＭＡＳプローブにおいて行われた形態２の例示的な１３ＣｓｓＮＭＲを示す図である。
【図７】形態２の例示的な単一の結晶構造を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
化合物１は、２つのイオン性部位、ピぺリジン環上の窒素、およびカルボン酸を含有する。本発明は、化合物１（４−（４−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボニル）−６−メトキシピリジン−２−イル）安息香酸）の結晶トリス塩を提供する。本発明は、化合物１のモノ−トリス塩に関する。モノ−トリス塩の結晶形態は２つ存在し、形態１は無水結晶固体であり、形態２は三水和物結晶固体である。形態３は非晶質形態である。
【００１１】
定義
用語「トリス」は、２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）プロパン−１，３−ジオールを意味し、これはまたＴＨＡＭおよびトロメタミンとしても知られる。化合物１のトリス塩は、２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）プロパン−１，３−ジオールを使用して作製された化合物１の塩を意味する。トリスは、化合物１のカルボン酸部分を伴う。別段の指定がない限り、化合物１のトリス塩に言及するとき、対イオンと化合物１とは、化学量論比、約１：１にある。
【００１２】
用語「形態１」は、モノ−トリス塩としての、化合物１の無水結晶２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）プロパン−１，３−ジオール（トリス）塩を意味する。形態１が、水を含まないが、材料が完全に乾燥されていない場合に、水を含む残存する溶媒が存在し得ることが意図される。
【００１３】
用語「形態２」は、モノ−トリス塩としての、化合物１の三水和物結晶２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）プロパン−１，３−ジオール（トリス）塩を意味する。
用語「三水和物」は、本明細書で使用される場合、約３つの水分子が含まれることを指す。
【００１４】
用語「約」は、所与の値または範囲の１０％内、好ましくは５％内、より好ましくは１％内を一般に意味する。あるいは、用語「約」は、当業者によって考慮されるとき、平均の、許容される標準誤差内を意味する。
【００１５】
Ｇまたはｇは、グラムであり、ｍｇは、ミリグラムを意味する。
Ｈまたはｈは、時間を意味する。
ＩＰＡは、イソプロピルアルコールを意味する。
【００１６】
Ｌは、リットルである。
ｍＬは、ミリリットルである。
ＭＣＣは、微結晶セルロースを意味する。
【００１７】
ＲＨは、相対湿度を意味する。
ＲＴまたはｒｔは室温を意味し、これは周囲温度と同一である（約２０〜２５℃）。
１Ｈ  核磁気共鳴法（ＮＭＲ）スペクトルは、すべての事例において、提案されている構造と一致した。特徴的な化学的シフト（δ）は、重水素溶媒中の残存するプロトンシグナルに対する百万分率（ｐｐｍ）で示され（ＣＨＣｌ３は７．２７ｐｐｍで、ＣＤ２ＨＯＤは３．３１ｐｐｍで）、主要なピークの指定のための従来の略語、例えばｓ、シングレット、ｄ、ダブレット、ｔ、トリプレット、ｑ、カルテット、ｍ、マルチプレット、ｂｒ、ブロードを用いて報告される。
【００１８】
ｓｓＮＭＲは、固相ＮＭＲを意味する。
ＰＸＲＤは、粉末Ｘ線回析を意味する。
ＲＨは、相対湿度を意味する。
【００１９】
用語「実質的に同じ」は、Ｘ線粉末回析パターンを説明するのに使用されるとき、ピークが＋／−０．２°２Θの標準偏差内にあるパターンを含むことを意味する。
本明細書で使用される場合、特定の結晶形態に関する用語「実質的に純粋」は、結晶形態が、１０重量％未満、好ましくは５重量％未満、好ましくは３重量％未満、好ましくは１重量％未満の、化合物１の任意の他の物理的形態を含むことを意味する。
【００２０】
ｐＫａが低いため、化合物１の窒素においてはごくわずかの対イオンしか塩を形成しないと評価され、結果が不良であり、例えば対イオンとして硫酸を使用するときわめて吸湿性の固体が得られた。
【００２１】
調べた多くの対イオンは、単離したときに塩形態を取るのではなく遊離酸となった：ヒスチジン、リジン（ＮａおよびＣａを伴う）、Ｌ−オルニチン（Ｎａを伴う）。アルギニン（Ｎａを伴う）を使用する試みは、乾燥時の分離のために、遊離酸をもたらした。多くの対イオンを評価した結果を表１に示す。塩は、化合物１の原液を、対イオン源に、化合物１に対して約１：１の比で添加することによって得られた。化合物１（遊離酸として）に対するモル比を１：１とする対イオンの計算量は、対イオンを特定する欄の中に括弧内に示される。添加された対イオンの実際量は、括弧内に示され、ここで、その結果は、異なる溶液中のそれぞれの対イオンについて示される。所与の溶液中の化合物１（遊離酸として）の原液が調製され、所与の溶媒中の対イオンに添加され、次いで追加の溶媒が添加されて、表１の溶媒の下の括弧内に示される総容量を生じた。各試料は１週間観察され、その間、試料は約５０℃に約３時間加熱され、撹拌しながら室温に冷却させた。メタノール（ＭｅＯＨ）、エタノール（ＥｔＯＨ）および酢酸イソプロパノール／酢酸エチル（ＩＰＡＣ／ＥｔＯＡｃ）の実験では、試料は総計３週間観察された。表１は、この時間の間に観察されたものを示す。いくつかの試料の場合、１週間後にヘプタン２ｍＬが添加され、これは、表１中で＊を付けて識別される。メタノールおよびアセトニトリル（ＡＣＮ）の場合、原液は１５ｍｇ／ｍＬであった。エタノールの場合、原液は３０ｍｇ／ｍＬであった。ＩＰＡＣ／ＥｔＯＡｃの場合、原液は、数滴の水を含んで、ＩＰＡＣ５０ｍＬ／ＥｔＯＡｃ５ｍＬ中１３．６ｍｇ／ｍＬであった。総容量（ｖｏｌ．）は、列挙された、調べた各溶媒の下の括弧内に示される。
【００２２】
【表１−１】
2021504442.tif 000003
【００２３】
【表１−２】
2021504442.tif 000004
【００２４】
固体が形成し得たかどうかの決定は、この評価における１つの因子にすぎなかった。カルシウム、カリウムおよびナトリウムを使用して塩を作製するときに結晶固体が形成したものの、その結晶固体は、吸湿性が高すぎて評価を続けることができなかった。吸湿性データは、それが主に目視を通して観察されたため、これらの塩のうちの多くで得られなかった。例えば、カルシウム塩およびカリウム塩形態はろ過紙上で回収されたため、固体材料はガムに変わった。コリン塩としての化合物１は単離され、吸湿性は、相対湿度３０％で２０％超の重量変化があると見出された。その上、固体は、ジエタノールアミン、ジエチルアミンおよびピペラジンの塩について得られたものの、これらの塩は追究されなかった。例えば、Ｃ．Ｓａａｌ、Ａ．Ｂｅｃｋｅｒ、Ｅｕｒｏ，Ｊ．のＰｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ４９（２０１３）６１４〜６２３頁、Ｐａｕｌｌｅｋｕｈｎ，Ｇ．Ｓｔｅｆｆｅｎら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００７、５０、６６６５〜６６８２頁を参照されたい。
【００２５】
さらに、固体が得られたものの、塩が実際に形成したかどうかを決定するために１Ｈ  ＮＭＲのようなさらなる評価が用いられた。いくつかの事例では、得られた固体は化合物１（遊離酸として）であり、対イオンを伴っていなかった。
【００２６】
ＲＨ２０％超での周囲温度で、形態２は、形態１と形態２との間で、より安定な形態である。溶媒条件は、形態１が得られるか形態２が得られるかに影響する。ＩＰＡ／水中での限界水分活性０．２が結晶形態２をもたらすと決定された。水の存在下で使用されるとき、以下の溶媒が形態２をもたらす：５〜１５％の水／９５〜８５％のアセトン、４％の水／９６％のアセトニトリル、１％の水／９９％の酢酸ブチル、１％の水／９９％の酢酸イソプロピル、１％の水／９９％の酢酸エチル、２％の水／９８％のジクロロエチレン、２％の水／９８％のメチルエチルケトン、３〜６％の水／９７〜９４％の２−メチルテトラヒドロフラン、および４％の水／９６％のｎ−プロパノール。
【００２７】
化合物１はまた、溶解度に関しても困難に直面した。表２は、化合物１（遊離酸として）および様々な塩の溶解度を示す。化合物１（遊離酸として）は、通例の経口投与用の剤形を作製するには許容されない形態であることが判明した。化合物１（遊離酸として）は結晶であったものの、熱力学的溶解度は一致しなかった。カルシウム塩は、低ｐＨにおいて、溶解度が過度に低かった。
【００２８】
【表２】
2021504442.tif 000005
【００２９】
化合物１（遊離酸として）が一致した結果をもたらさなかったため、塩形態が追究され、限定なしに、遊離酸が複数の非化学両論的な水和物／溶媒和物として存在し得ると考えられた。表２に見られるように、遊離酸の溶解度は、各ｐＨでの３種のバッチの間で多様であった。
【００３０】
表３に示されるように、薬物動態学研究において、遊離酸とトリス塩とを比較するさらなる作業が行われた。化合物１のモノ−トリス塩は、それが形態１であっても形態２であっても、類似の薬物動態を有した。化合物１のモノ−トリス塩は、化合物１（遊離酸として）よりもはるかに良好な薬物動態を有した。懸濁液は無水形態１で調製されたが、水性媒体と仮定すると、三水和物形態２もまた、おそらく存在するであろう。懸濁液中に存在する形態は同定されなかった。
【００３１】
【表３】
2021504442.tif 000006
【００３２】
形態１は、無水物であり、周囲温度において水分活性約０．２未満（２０％ＲＨ）で熱力学的に安定である。形態１は、図１に示されるのと実質的に同じＰＸＲＤパターンを有する。形態１の特徴的なＰＸＲＤピーク（２Θ±０．２°２Θで表される）は、９．６、１０．７および１１．３においてである。図１中のＰＸＲＤパターンについてのピーク位置および強度が表４に示される。
【００３３】
【表４】
2021504442.tif 000007
【００３４】
形態１は、図２に示されるのと実質的に同じラマンスペクトルを有する。形態１は、特徴的なラマンピークシフト（ｃｍ−１で表される）を、５６８、６９８、９８９、１２１８、１５１１、１５６１および１６１５、±２ｃｍ−１で有する。図２中の形態１のピーク位置（±２ｃｍ−１）および正規化された強度（Ｗ＝弱い、Ｍ＝中程度、Ｓ＝強い）が表５に列挙される。
【００３５】
【表５】
2021504442.tif 000008
【００３６】
形態１は、図３に示されるのと実質的に同じ１３ＣｓｓＮＭＲスペクトルを有する。形態１は、特徴的な１３ＣｓｓＮＭＲ化学シフト（ｐｐｍで表される）を、２２．９、１４６．２、１５７．９、１６１．９および１７２．９、±０．２ｐｐｍで有する。図３に示される形態１の１３Ｃ化学シフト（±０．２ｐｐｍ）が表６に列挙される。
【００３７】
【表６】
2021504442.tif 000009
【００３８】
形態２は、三水和物であり、周囲温度および相対湿度２０％で、水分活性が約０．２超と熱力学的に安定である。形態２は、図４に示されるのと実質的に同じＰＸＲＤパターンを有する。形態２の特徴的なＰＸＲＤピーク（２Θ±０．２°２Θで表される）は、８．４、９．０、１０．５、１５．０および２４．７においてである。図４中のＰＸＲＤパターンのピーク位置および強度が表７に示される。
【００３９】
【表７】
2021504442.tif 000010
【００４０】
形態２は、図５に示されるのと実質的に同じラマンスペクトルを有する。形態２は、特徴的なラマンピークシフト（ｃｍ−１で表される）を、５６２、６９２、９８４、１２２５、１５０７、１５５７および１６１０、±２ｃｍ−１で有する。図５中の形態２のピーク位置（±２ｃｍ−１）および正規化された強度（Ｗ＝弱い、Ｍ＝中程度、Ｓ＝強い）が表８に列挙される。
【００４１】
【表８】
2021504442.tif 000011
【００４２】
形態２は、図６に示されるのと実質的に同じ１３ＣｓｓＮＭＲスペクトルを有する。形態２は、特徴的な１３ＣｓｓＮＭＲ化学シフト（ｐｐｍで表される）を、１９．２、１４９．５、１５５．６、１６３．８および１８８．３、±０．２ｐｐｍで有する。図６に示される形態２の１３Ｃ化学シフト（±０．２ｐｐｍ）が表９に列挙される。
【００４３】
【表９】
2021504442.tif 000012
【００４４】
本明細書で提供される開示に基づき、当業者であれば、形態１および形態２のそれぞれが、多様な組み合わせにおいて、いくつかの異なるスペクトルピークまたはパターンによって独自に同定され得ることを認めるであろう。以下に記載するのは、形態１と形態２とを別々に同定するのに使用され得る特徴的なピーク値の例示的な組み合わせであるが、これらの例示的組み合わせが本明細書に開示の他のピーク値の組み合わせを限定するものとは決して見られるべきでない。
【００４５】
本発明の一側面は、４−（４−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボニル）−６−メトキシピリジン−２−イル）安息香酸（化合物１）の結晶２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）プロパン−１，３−ジオール塩を提供する。
【００４６】
本発明の別の側面は、４−（４−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボニル）−６−メトキシピリジン−２−イル）安息香酸（化合物１）と塩との比が１：１である、化合物１の結晶塩を提供する。
【００４７】
本発明の別の側面は、化合物１の無水結晶塩としての結晶塩（形態１）を提供する。
本発明の別の側面は、化合物１の三水和物結晶塩としての結晶塩（形態２）を提供する。
【００４８】
本発明の別の側面は、９．６、１０．７および１１．３  ２Θ、±０．２°２Θの回析角にピークを含むＰＸＲＤパターンを有する、形態１を提供する。
本発明の別の側面は、図１に示されるのと実質的に同じ、２Θで表されるピークを含むＰＸＲＤパターンを有する、形態１を提供する。
【００４９】
本発明の別の側面は、１５１１、１５６１および１６１５ｃｍ−１、±２ｃｍ−１にピークシフトを含むラマンスペクトルを有する、形態１を提供する。
本発明の別の側面は、９８９、１２１８、１５１１、１５６１および１６１５ｃｍ−１、±２ｃｍ−１にピークシフトを含むラマンスペクトルを有する、形態１を提供する。
【００５０】
本発明の別の側面は、５６８、６９８、９８９、１２１８、１５１１、１５６１および１６１５ｃｍ−１、±２ｃｍ−１にピークシフトを含むラマンスペクトルを有する、形態１を提供する。
【００５１】
本発明の別の側面は、図２に示されるのと実質的に同じピークシフト（ｃｍ−１で表される）を含むラマンスペクトルを有する、形態１を提供する。
本発明の別の側面は、２２．９、１４６．２および１６１．９ｐｐｍ、±０．２ｐｐｍで化学シフトを含む１３ＣｓｓＮＭＲスペクトルを有する、形態１を提供する。
【００５２】
本発明の別の側面は、２２．９、１４６．２、１５７．９、１６１．９および１７２．９ｐｐｍ、±０．２ｐｐｍで化学シフトを含む１３ＣｓｓＮＭＲスペクトルを有する、形態１を提供する。
【００５３】
本発明の別の側面は、図３に示されるのと実質的に同じ化学シフト（ｐｐｍで表される）を含む１３ＣｓｓＮＭＲスペクトルを有する、形態１を提供する。
本発明の別の側面は、１５６１および１６１５ｃｍ−１、±２ｃｍ−１にピークシフトを含むラマンスペクトル、ならびに２２．９、１４６．２または１６１．９ｐｐｍ、±０．２ｐｐｍで少なくとも１つの化学シフトを含む１３ＣｓｓＮＭＲスペクトルからなる群から選択される分析パラメータ−を有する、形態１を提供する。
【００５４】
本発明の別の側面は、１５１１および１５６１ｃｍ−１、±２ｃｍ−１にピークシフトを含むラマンスペクトル、ならびに２２．９、１４６．２または１６１．９ｐｐｍ、±０．２ｐｐｍで少なくとも１つの化学シフトを含む１３ＣｓｓＮＭＲスペクトルからなる群から選択される分析パラメータ−を有する、形態１を提供する。
【００５５】
本発明の別の側面は、１６１５ｃｍ−１、±２ｃｍ−１にピークシフトを含むラマンスペクトル、および２２．９、１４６．２または１６１．９ｐｐｍ、±０．２ｐｐｍで少なくとも１つの化学シフトを含む１３ＣｓｓＮＭＲスペクトルからなる群から選択される分析パラメータ−を有する、形態１を提供する。
【００５６】
本発明の別の側面は、１５６１ｃｍ−１、±２ｃｍ−１にピークシフトを含むラマンスペクトル、および２２．９、１４６．２または１６１．９ｐｐｍ、±０．２ｐｐｍで少なくとも１つの化学シフトを含む１３ＣｓｓＮＭＲスペクトルからなる群から選択される分析パラメータ−を有する、形態１を提供する。
【００５７】
本発明の別の側面は、２２．９および１６１．９ｐｐｍ、±０．２ｐｐｍでの化学シフトを含む１３ＣｓｓＮＭＲスペクトル、ならびに１５１１、１５６１または１６１５ｃｍ−１、±２ｃｍ−１で少なくとも１つのピークシフトを含むラマンスペクトルからなる群から選択される分析パラメータ−を有する、形態１を提供する。
【００５８】
本発明の別の側面は、１４６．２および１６１．９ｐｐｍ、±０．２ｐｐｍで化学シフトを含む１３ＣｓｓＮＭＲスペクトル、ならびに１５１１、１５６１または１６１５ｃｍ−１、±２ｃｍ−１で少なくとも１つのピークシフトを含むラマンスペクトルからなる群から選択される分析パラメータ−を有する、形態１を提供する。
【００５９】
本発明の別の側面は、９．６および１０．７  ２Θ、±０．２°２Θの回析角にピークを含むＰＸＲＤパターン、ならびに１５１１、１５６１または１６１５ｃｍ−１、±２ｃｍ−１で少なくとも１つのピークシフトを含むラマンスペクトルからなる群から選択される分析パラメータ−を有する、形態１を提供する。
【００６０】
本発明の別の側面は、９．６および１０．７  ２Θ、±０．２°２Θの回析角にピークを含むＰＸＲＤパターン、ならびに２２．９、１４６．２または１６１．９ｐｐｍ、±０．２ｐｐｍで少なくとも１つの化学シフトを含む１３ＣｓｓＮＭＲスペクトルからなる群から選択される分析パラメータ−を有する、形態１を提供する。
【００６１】
本発明の別の側面は、８．４、９．０、１０．５  ２Θ、±０．２°２Θの回析角にピークを含むＰＸＲＤパターンを有する、形態２を提供する。
本発明の別の側面は、８．４、９．０、１０．５、１５．０および２４．７  ２Θ、±０．２°２Θの回析角にピークを含むＰＸＲＤパターンを有する、形態２を提供する。
【００６２】
本発明の別の側面は、図４に示されるのと実質的に同じピーク（２Θで表される）を含むＰＸＲＤパターンを有する、形態２を提供する。
本発明の別の側面は、１５０７、１５５７および１６１０ｃｍ−１、±２ｃｍ−１にピークシフトを含むラマンスペクトルを有する、形態２を提供する。
【００６３】
本発明の別の側面は、９８４、１２２５、１５０７、１５５７および１６１０ｃｍ−１、±２ｃｍ−１にピークシフトを含むラマンスペクトルを有する、形態２を提供する。
本発明の別の側面は、５６２、６９２、９８４、１２２５、１５０７、１５５７および１６１０ｃｍ−１、±２ｃｍ−１にピークシフトを含むラマンスペクトルを有する、形態２を提供する。
【００６４】
本発明の別の側面は、図５に示されるのと実質的に同じピークシフト（ｃｍ−１で表される）を含むラマンスペクトルを有する、形態２を提供する。
本発明の別の側面は、１９．２、１４９．５および１６３．８ｐｐｍ、±０．２ｐｐｍで化学シフトを含む１３ＣｓｓＮＭＲスペクトルを有する、形態２を提供する。
【００６５】
本発明の別の側面は、１９．２、１４９．５、１５５．６、１６３．８および１８８．３ｐｐｍ、±０．２ｐｐｍで化学シフトを含む１３ＣｓｓＮＭＲスペクトルを有する、形態２を提供する。
【００６６】
本発明の別の側面は、図６に示されるのと実質的に同じ化学シフト（ｐｐｍで表される）を含む１３ＣｓｓＮＭＲスペクトルを有する、形態２を提供する。
本発明の別の側面は、
８．４および９．０  ２Θ、±０．２°２Θの回析角にピークを含むＰＸＲＤパターン、
１５５７および１６１０ｃｍ−１、±２ｃｍ−１にピークシフトを含むラマンスペクトル、ならびに
１９．２、１４９．５または１６３．８ｐｐｍ、±０．２ｐｐｍで少なくとも１つの化学シフトを含む１３ＣｓｓＮＭＲスペクトル
からなる群から選択される分析パラメータ−を有する、形態２を提供する。
【００６７】
本発明の別の側面は、
８．４および１０．５  ２Θ、±０．２°２Θの回析角にピークを含むＰＸＲＤパターン、
１５０７および１６１０ｃｍ−１、±２ｃｍ−１にピークシフトを含むラマンスペクトル、ならびに
１９．２、１４９．５または１６３．８ｐｐｍ、±０．２ｐｐｍで少なくとも１つの化学シフトを含む１３ＣｓｓＮＭＲスペクトル
からなる群から選択される分析パラメータ−を有する、形態２を提供する。
【００６８】
本発明の別の側面は、１５５７ｃｍ−１、±２ｃｍ−１にピークシフトを含むラマンスペクトル、および１９．２、１４９．５または１６３．８ｐｐｍ、±０．２ｐｐｍで少なくとも１つの化学シフトを含む１３ＣｓｓＮＭＲスペクトルからなる群から選択される分析パラメータ−を有する、形態２を提供する。
【００６９】
本発明の別の側面は、１６１０ｃｍ−１、±２ｃｍ−１にピークシフトを含むラマンスペクトル、および１９．２、１４９．５または１６３．８ｐｐｍ、±０．２ｐｐｍで少なくとも１つの化学シフトを含む１３ＣｓｓＮＭＲスペクトルからなる群から選択される分析パラメータ−を有する、形態２を提供する。
【００７０】
本発明の別の側面は、１９．２および１４９．５ｐｐｍ、±０．２ｐｐｍで化学シフトを含む１３ＣｓｓＮＭＲスペクトル、ならびに１５０７、１５５７または１６１０ｃｍ−１、±２ｃｍ−１で少なくとも１つのピークシフトを含むラマンスペクトルからなる群から選択される分析パラメータ−を有する、形態２を提供する。
【００７１】
本発明の別の側面は、１４９．５および１６３．８ｐｐｍ、±０．２ｐｐｍで化学シフトを含む１３ＣｓｓＮＭＲスペクトル、ならびに１５０７、１５５７または１６１０ｃｍ−１、±２ｃｍ−１で少なくとも１つのピークシフトを含むラマンスペクトルからなる群から選択される分析パラメータ−を有する、形態２を提供する。
【００７２】
本発明の別の側面は、８．４および９．０  ２Θ、±０．２°２Θの回析角にピークを含むＰＸＲＤパターン、ならびに１５０７、１５５７および１６１０ｃｍ−１、±２ｃｍ−１で少なくとも１つのピークシフトを含むラマンスペクトルからなる群から選択される分析パラメータ−を有する、形態２を提供する。
【００７３】
本発明の別の側面は、８．４および９．０  ２Θ、±０．２°２Θの回析角にピークを含むＰＸＲＤパターン、ならびに１９．２、１４９．５または１６３．８ｐｐｍ、±０．２ｐｐｍで少なくとも１つの化学シフトを含む１３ＣｓｓＮＭＲスペクトルからなる群から選択される分析パラメータ−を有する、形態２を提供する。
【００７４】
本発明はまた、
薬品としての使用のための、本明細書に記載されている形態１および／または形態２を含む化合物１の結晶塩、
治療有効量の、形態１および／または形態２を含む化合物１の結晶塩を、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨおよびＴ２Ｄを含む疾患を処置するために哺乳動物に投与することを含む方法、ならびに
本明細書に記載されている形態１および／または形態２を含む化合物１の結晶塩の、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨおよびＴ２Ｄを含む疾患を処置するための薬品の製造のための、使用
も含む。
【００７５】
本発明のさらなる側面は、本明細書に記載されている形態１または形態２を含む医薬組成物を提供する。さらなる側面では、本発明は、形態１もしくは形態２を含む経口剤形、または本明細書に記載されている医薬組成物の任意の１種を提供する。例えば、一態様では、経口剤形は、錠剤、丸剤またはカプセル剤である。例えば、一態様では、経口剤形は、錠剤またはカプセル剤である。
【００７６】
本発明の化合物および／または前記化合物を含有する組成物のための投薬レジメンは、患者のタイプ、年齢、体重、性別および医学的状態、状態の重症度、投与経路、ならびに利用される特定の化合物の活性度を含む多様な因子に基づく。そのため、投薬レジメンは、広く多様であり得る。体重約１００ｋｇを有する正常な成人ヒトの場合、典型的な１日投与量は、体重１ｋｇ当たり約０．００１ｍｇ〜約１０ｍｇの範囲内が典型的に十分であり、好ましくは約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５．０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇである。ただし、一般の投与範囲内のいくらかの多様性が、処置される対象の年齢および体重、企図される投与経路および投与される特定の化合物などに応じて必要とされ得る。特定の患者のための投薬量範囲および最適な投薬量の決定は、良好には、本開示の利益を有する当業者の能力の範囲内にある。本発明の化合物は、徐放性製剤、制御放出性製剤および遅延放出性製剤において使用され得、これらの形態はまた、当業者に周知であることも特記される。
【００７７】
別の側面では、本発明は、医薬組成物を含む。このような医薬組成物は、形態１または形態２を、薬学的に許容される担体と共に含む。他の薬理学的に活性な物質もまた存在し得る。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」としては、生理学的に適合性である任意のおよびすべての溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などが挙げられる。薬学的に許容される担体の例としては、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなどのうちの１種または複数、ならびにこれらの組み合わせが挙げられ、かつ組成物中に、等張剤、例えば、糖、塩化ナトリウム、またはマンニトールもしくはソルビトールなどのポリアルコールが挙げられ得る。湿潤剤などの薬学的に許容される物質、または湿潤剤もしくは乳化剤、保存剤または緩衝剤などの少量の補助物質が、抗体または抗体部分の、貯蔵寿命または有効性を高める。
【００７８】
固体剤形の経口投与は、例えば、所定量の本発明の少なくとも１種の化合物をそれぞれが含有する硬カプセル剤または軟カプセル剤、丸剤、カシェ剤、ロゼンジ剤または錠剤などの個別の単位において提示されてもよい。別の態様では、経口投与は、散剤または顆粒剤の形態にあってもよい。別の態様では、経口剤形は、舌下の、例えばロゼンジ剤である。このような固体剤形では、式Ｉの化合物は、１種または複数の補助剤と通常組み合わされる。このようなカプセル剤または錠剤は、制御放出性製剤を含有してもよい。カプセル剤、錠剤および丸剤の事例では、剤形はまた、緩衝剤を含んでもよく、または腸溶コーティングで調製されてもよい。
【実施例】
【００７９】
化合物１の調製において、本明細書に記載されている調製方法のうちのいくつかが遠隔官能基（例えば、第一級アミン、第二級アミン、式Ｉの前駆体におけるカルボキシル）の保護を必要とし得ることが特記される。このような保護への必要性は、遠隔官能基の性質、および調製方法の条件に応じて多様となる。このような保護への必要性は、当業者によって直ちに決定される。このような保護／脱保護方法の使用はまた、当業者内にある。保護基およびそれらの使用の一般的記載については、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９１を参照されたい。さらに、本発明は、本明細書で提供されている、多様であり得る特定の合成方法に限定されることはない。
中間体１：１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン、ヒドロクロリド塩
【００８０】
【化１】
2021504442.tif 000013
【００８１】
ステップ１．ｔｅｒｔ−ブチル９−オキソ−３−アザスピロ［５．５］ウンデカ−７−エン−３−カルボキシレート
【００８２】
【化２】
2021504442.tif 000014
【００８３】
乾燥した反応器へ、ｔｅｒｔ−ブチル４−ホルミルピペリジン−１−カルボキシレート（１０８ｋｇ）、シクロヘキサン（１０８０Ｌ）およびピロリジン（６４．８ｋｇ）を２５〜３０℃で装入した。混合物を５〜１０分撹拌し、次いで、１２〜１６時間加熱して還流させ、その間、Ｄｅａｎ−Ｓｔａｒｋ  ｔｒａｐを用いて水を回収した。次いで、反応混合物を、５０〜６０℃に冷却し、その温度で真空を適用して過度なピロリジンおよびシクロヘキサンを蒸留した。次いで、反応混合物を２５〜３０℃に冷却し、シクロヘキサン（６４８Ｌ）、続いてメチルビニルケトン（４９．６３ｋｇ）を装入した。混合物を１２〜１６時間撹拌し、次いでろ過し、ろ液を、清浄で乾燥した反応器中へ装入した。溶液を１０〜１５℃に冷却し、次いで、酢酸（５４．７５ｋｇ）の水（５４Ｌ）溶液をゆっくりと添加し、温度を１５℃未満に維持した。添加の終了時に、混合物を２５〜３０℃に加温し、１２〜１６時間撹拌した。層を分離して水性を酢酸エチル（３２４Ｌ）で抽出した。合わせた有機層を重炭酸ナトリウム（３２．３４ｋｇ）の水（３２４Ｌ）溶液で洗浄し、次いで硫酸ナトリウムで脱水した。固体を酢酸エチル（５４Ｌ）で洗浄し、合わせたろ液を、減圧下約４０℃未満で濃縮した。ｎ−ヘプタン（２１６Ｌ）を反応器中に装入し、蒸留を、乾燥するまで減圧下４０℃未満で継続した。混合物を２５〜３０℃に冷却し、ｎ−ヘプタン（２１６Ｌ）を反応器中へ装入した。混合物を１〜２時間撹拌し、その後、固体が形成した。次いで、その固体をろ過し、ｎ−ヘプタン（５４Ｌ）で洗浄し、４０〜５０℃で１０〜１２時間乾燥させて、所望の材料が生成した（９０．１ｋｇ、収率６７％）。
ステップ２：（Ｅ）−ｔｅｒｔ−ブチル１０−（（ジメチルアミノ）メチレン）−９−オキソ−３−アザスピロ［５．５］ウンデカ−７−エン−３−カルボキシレート
【００８４】
【化３】
2021504442.tif 000015
【００８５】
清浄で乾燥した反応器へ、ｔｅｒｔ−ブチル９−オキソ−３−アザスピロ［５．５］ウンデカ−７−エン−３−カルボキシレート（５０ｋｇ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５００Ｌ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（１３５ｋｇ）を、窒素雰囲気下２５〜３０℃で装入した。反応混合物を５〜１０分撹拌し、次いで、１２０〜１３０℃に２０時間加熱した。次いで、混合物を５０〜６０℃に冷却し、溶媒を高真空下６０℃未満で蒸留した。ミックス−キシレン（２００Ｌ）を４５℃未満で装入し、溶媒を高真空下６０℃未満で蒸留した。この操作をミックス−キシレン（２００Ｌ）の別のロットで繰り返した。次いで、トルエン（２００Ｌ）を反応器中へ装入し、溶媒を高真空下６０℃未満で蒸留した。この操作を、トルエン（２００Ｌ）の第２のロットで繰り返した。次いで、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１００Ｌ）を３０℃未満で装入し、溶媒を高真空下４０℃未満で蒸留した。混合物を１５〜２０℃に冷却し、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１００Ｌ）を２０℃未満で装入した。混合物を２０〜３０分間撹拌し、固体をろ過し、メチルｔｅｒｔ−ブチエーテル（５０Ｌ）で洗浄し、真空なしで５０〜５５℃で１０時間乾燥させて、所望の化合物を得た（５２．１ｋｇ、収率８７％）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.48 (s, 1H), 6.57 (d, J=9.97 Hz, 1H), 5.99 (d, J=10.16 Hz, 1H), 3.32-3.51 (m, 4H), 3.06 (s, 6H), 2.72 (s, 2H), 1.57-1.66 (m, 2H), 1.41-1.53 (m, 11H).
ステップ３．ｔｅｒｔ−ブチル１−イソプロピル−１，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート
【００８６】
【化４】
2021504442.tif 000016
【００８７】
清浄で乾燥した反応器へ、（Ｅ）−ｔｅｒｔ−ブチル１０−（（ジメチルアミノ）メチレン）−９−オキソ−３−アザスピロ［５．５］ウンデカ−７−エン−３−カルボキシレート（８０ｋｇ）、トルエン（７０４Ｌ）およびトリメチルアミン（１６Ｌ）を２５〜３０℃で装入した。反応混合物を７０〜８０℃に加温し、イソプロピルヒドラジンヒドロクロリド塩のメタノール（１．２５当量、総量１４１ｋｇ）溶液を４〜５時間かけて添加した。次いで、反応混合物を７０〜８０℃で８〜１０時間撹拌し、その後、１５〜２５℃に冷却した。次いで、クエン酸（４８ｋｇ）の水（４８０Ｌ）溶液をゆっくりと添加し、内部温度を２５℃未満に維持した。酢酸エチル（２０８Ｌ）を添加し、混合物を１０分間撹拌した。層を分離し、有機層を、続けて、クエン酸（４８ｋｇ）の水（４８０Ｌ）溶液、次いで水（３２０Ｌ）のみで洗浄した。合わせた水性層を酢酸エチル（３２０Ｌ）で抽出した。次いで、合わせた有機層を硫酸ナトリウム（８ｋｇ）で脱水し、溶媒を、減圧下４０℃未満で蒸発させて乾燥させた。ジクロロメタン（２４０Ｌ）を反応器中へ装入し、混合物を透明になるまで２５〜３０℃で撹拌した。活性化炭素（１．８４ｋｇ）、ケイ酸マグネシウム（１．８４ｋｇ）およびシリカゲル（３２ｋｇ、１００〜２００メッシュ）を２５〜３０℃で続けて装入し、不均一な混合物を１時間撹拌した。次いで、スラリーを、Ｈｙｆｌｏｗ床上でろ過し、Ｈｙｆｌｏｗスーパーセル（８ｋｇ）とジクロロメタン（４０Ｌ）とを混合して調製した。ケークをジクロロメタン（１２０Ｌで３回）で洗浄した。合わせたろ液を反応器中へ装入し戻し、溶媒を減圧下４０℃未満で蒸発させた。次いで、ｎ−ヘプタン（１６０Ｌ）を装入し、減圧下４０℃未満で蒸留した。ｎ−ヘプタン（２００Ｌ）を反応器中へ装入し、混合物を０〜５℃に冷却した。１２〜１５時間撹拌した後、固体を０℃でろ過し、冷却（０〜５℃）ｎ−ヘプタン（１６０Ｌ）で洗浄し、真空下４０〜５０℃で乾燥させて標記化合物を得た（８２．４ｋｇ、収率７５％）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.25 (s, 1H), 6.42 (dd, J=10.05, 0.49 Hz, 1H) 5.84 (d, J=9.95 Hz, 1H), 4.42-4.52 (m, 1H), 3.36-3.53 (m, 4H), 2.62 (s, 2H) 1.56-1.68 (m, 2H) 1.45-1.55 (m, 17H).
ステップ４．１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン、ヒドロクロリド塩
【００８８】
【化５】
2021504442.tif 000017
【００８９】
清浄で乾燥した反応器へ、ｔｅｒｔ−ブチル１−イソプロピル−１，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（６０ｋｇ）およびメタノール（６００Ｌ）を２５〜３０℃で装入した。Ｎ−ブロモサクシニミド（３２．４ｋｇ）を５部分において２５〜３０℃で３０〜４０分かけて添加し、撹拌を３０〜６０分間続けた。チオ硫酸ナトリウム五水和物（５．４ｋｇ）の水（１０２Ｌ）溶液をゆっくりと添加し、内部温度を３０℃未満に維持した。混合物を２０〜３０分間撹拌し、次いで、溶媒を減圧下４５℃未満で蒸発させた。残渣を２５〜３０℃に冷却し、２−メチルテトラヒドロフラン（４２０Ｌ）を水（９０Ｌ）と一緒に反応器中へ装入した。混合物を１５〜２０分間撹拌し、次いで層を分離し、水性層を２−メチルテトラヒドロフラン（１２０Ｌ）でさらに抽出した。合わせた有機抽出物を、２５〜３０℃で１５〜２０分間、水酸化ナトリウム（４．８ｋｇ）の水（１２０Ｌ）溶液で処理した。層を分離し、有機層を、水（１２０Ｌ）、続いて塩化ナトリウム（１２ｋｇ）の水（１２０Ｌ）溶液で洗浄し、次いで硫酸ナトリウム（６ｋｇ）で脱水した。ろ過後、ケークを２−メチルテトラヒドロフラン（３０Ｌ）で洗浄し、合わせたろ液を反応器中へ装入し戻した。溶媒を、減圧下４５℃未満で完全に蒸留し、残渣をテトラヒドロフラン（２０１Ｌ）に可溶化させた。清浄で乾燥した別の反応器へ、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（６０．６ｋｇ）およびテトラヒドロフラン（３６０Ｌ）を２５〜３０℃で装入した。その混合物へ、残渣のテトラヒドロフラン溶液をゆっくりと添加し、温度を３０℃未満に維持した。次いで、反応混合物を６０〜６５℃に加温し、その温度で１〜２時間保った。完了したら、混合物を０〜１０℃に冷却し、塩酸（１Ｎ、１９６Ｌ）の溶液でゆっくりとクエンチし、内部温度を１０℃未満に維持した。反応混合物を２５〜３０℃に加温させ、酢酸エチル（７９８Ｌ）を装入した。１５〜２０分間撹拌した後、層を分離し、水性層を酢酸エチル（１６０Ｌ）でさらに抽出した。合わせた有機層を水（１６０Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウム（８ｋｇ）で脱水し、ろ過し、ケークを酢酸エチル（３００Ｌ）で洗浄した。溶媒を、減圧下４５℃未満で完全に蒸留し、反応器中へ、２５〜３０℃で酢酸エチル（５４０Ｌ）を、続いてメタノール（１５６Ｌ）を装入した。混合物を０〜５℃に冷却し、この点において塩化アセチル（７９．８ｋｇ）をゆっくりと添加し、温度を特定の範囲内に維持した。次いで、混合物を２０〜２５℃に加温させ、撹拌しながらこの温度で４〜５時間保った。得られたスラリーをろ過し、固体を酢酸エチル（１２０Ｌ）で洗浄し、次いで４０〜４５℃で８〜１０時間乾燥させて、所望の粗生成物を供給した（３３．５ｋｇ、収率６５％）。
【００９０】
清浄で乾燥した反応器中２５〜３０℃でこの粗固体（５６．８ｋｇ）をメタノール（４５４．４Ｌ）に可溶化させて最終精製ステップを実施した。溶液を３０〜４５分間撹拌し、次いで、清浄で乾燥した反応器中へ、０．２ミクロンカートリッジフィルターを通して２５〜３０℃で通過させた。メタノールを、約１ｖｏｌの溶媒が残るまで、減圧下５０℃未満で蒸留した。反応混合物を２５〜３０℃に冷却し、新しいアセトニトリル（１１３．６Ｌ）を０．２ミクロンカートリッジフィルターを通して装入した。溶媒を、約１ｖｏｌの溶媒が残るまで、減圧下５０℃未満で蒸留した。反応混合物を２５〜３０℃に冷却し、新しいアセトニトリル（１９０Ｌ）を、反応器中へ、０．２ミクロンカートリッジフィルターを通して装入した。混合物を６５〜７０℃に加温して４５分間撹拌し、次いで２５〜３０℃に冷却して１時間撹拌した。得られたスラリーをろ過し、ケークを冷却（１５℃）アセトニトリル（５６．８Ｌ）で洗浄した。固体を減圧下４０〜５０℃で８時間乾燥させて中間体１を得た（３６．４ｋｇ、収率６４％）。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7.43 (s, 1H), 5.32-5.42 (m, 1H), 3.15-3.25 (m, 4H), 2.89 (s, 2H), 2.64 (s, 2H), 1.69-1.90 (m, 4H), 1.37-1.45 (m, 6H);ＥＳＩ［Ｍ＋Ｈ］＋＝２４８。
中間体２：２−（４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）フェニル）−６−メトキシイソニコチン酸
【００９１】
【化６】
2021504442.tif 000018
【００９２】
清浄で乾燥した反応器へ、２，６−ジクロロイソニコチン酸（３０ｋｇ）およびメタノール（１２０Ｌ）を２０〜２５℃で装入した。スラリーを５分間撹拌し、次いで６５℃に加熱した（還流）。次いで、ナトリウムメトキシドのメタノール（３０％、８７．２ｋｇ）溶液を、添加漏斗によって少なくとも４時間かけてゆっくりと装入した。漏斗をメタノール（１５Ｌ）で濯ぎ、撹拌を６５℃で少なくとも１５時間継続した。次いで、混合物を４５℃に冷却し、残存容量が約９０Ｌになるまで減圧下で蒸留した。次いで、重炭化カリウム（２８．２ｋｇ）および炭酸カリウム（２１．６ｋｇ）の水（１８０Ｌ）溶液を反応器中へ４０〜４５℃で装入した。水性溶液を含有する反応器を水（２１Ｌ）で濯ぎ、洗浄液を反応混合物中へ装入した。混合物を、約２４０Ｌの残存容量まで、減圧下８０℃未満で蒸留し、次いで２０〜２５℃に冷却した。
【００９３】
清浄で乾燥した別の反応器へ、ｔｅｒｔ−ブチル４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキソボロラン−２−イル）ベンゾエート（５２．３ｋｇ）およびジオキサン（３４０ｋｇ）を装入し、完全な溶解まで２〜２５℃で撹拌した。次いで、かつての反応器の含有物を４０℃に加熱して完全な溶解度を確実し、この新しい反応器中へ移した。反応混合物を２０〜２５℃に冷却し、真空／窒素サイクルによって脱酸素化ステップを実施した。混合物を０〜１０℃にさらに冷却し、反応器中へ、酢酸パラジウム（０．６５ｋｇ）、続いて窒素流下でトリフェニルホスフィン（２．４６ｋｇ）を装入した。混合物を２０〜２５℃に加温し、真空／窒素サイクルによって別の脱酸素化ステップを実施した。次いで、混合物を８０℃に加熱し、この温度で少なくとも１８時間維持した。混合物を２０〜２５℃に冷却し、次いで、反応器中へ、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１３３．２ｋｇ）および水（３０Ｌ）を続けて装入した。層を分離し、水性を水（１１０Ｌ）で希釈し、次いで、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１１０Ｌ）で抽出した。合わせた有機抽出物をクエン酸（５２ｋｇ）の水（８４Ｌ）溶液で洗浄し、層を分離した。水性層をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（８８．８ｋｇ）でさらに抽出し、有機層を合わせ、次いで、塩化ナトリウム（４３ｋｇ）の第３の水（８０Ｌ）溶液で３回洗浄した。最終的な層分離の後、有機層を、木炭カートリッジを含有するパルフィルターを通してろ過し、ケークをメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１１．２ｋｇ）で洗浄した。ろ液を減圧下５０℃未満で蒸留して約９０Ｌまで減らし、次いで、続けてヘプタン（１２０Ｌ）で５０℃未満において共蒸留して約１２０Ｌまで減らした。次いで、混合物を１時間かけて２０〜２５℃に冷却し、次いで、この温度でさらに１時間撹拌した。スラリーをろ過し、ケークを、ヘプタンで３回（３×１８Ｌ）、次いでアセトニトリルで３回（３×１８Ｌ）、洗浄した。得られた湿った固体を真空下および窒素流下で４５℃未満において少なくとも１５時間乾燥させて中間体２を得た（４４．６ｋｇ、収率８７％）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.13 (s, 2H), 8.09 (s, 2H), 7.97 (d, J=1.17 Hz, 1H), 7.34 (d, J=0.98 Hz, 1H), 4.08 (s, 3H), 1.61 (s, 9H);ＥＳＩ［Ｍ＋Ｈ］＋＝３３０。
中間体３：ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボニル）−６−メトキシピリジン−２−イル）ベンゾエート
【００９４】
【化７】
2021504442.tif 000019
【００９５】
丸底フラスコへ、２−（４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）フェニル）−６−メトキシイソニコチン酸（中間体２、１５．２ｇ、４６．２ｍｍｏｌ）および酢酸エチル（１４０ｍＬ）を装入した。１，１’−カルボニルジイミダゾール（８．９８ｇ、５５．４ｍｍｏｌ）を１部分において添加し、室温で１時間撹拌した。１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンヒドロクロリド（中間体１、１４．８ｇ、５２．２ｍｍｏｌ）、続いてＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（９．１ｍＬ、５２．２ｍＬ）を添加し、反応物を室温で１８時間撹拌した。水性２Ｍ  ＨＣｌ（４０ｍＬ）、続いて１Ｍ硫酸水素カリウム（４０ｍＬ）およびヘプタン５０ｍＬを添加した。得られた混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を分離漏斗へ移した。有機相を分離し、水（２０ｍＬ）、飽和重炭酸ナトリウム（３０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）、ブライン（２０ｍＬ）で続けて洗浄し、硫酸マグネシウム２０ｇおよびシリカゲル１０ｇで脱水し、ろ過し、真空中で濃縮した。濃縮の終了に向けて固体が形成し始めた。残渣を酢酸エチル４０ｍＬ中８０℃で撹拌し、ヘプタン（１２０ｍＬ）をゆっくりと滴下添加した。混合物を８０℃で１時間撹拌し、次いで、１時間にわたって撹拌しながらゆっくりと室温に冷却し、室温で１８時間撹拌した。固体を、ろ過によって回収し、水および酢酸エチル−ヘプタン（１：３）で洗浄し、真空下５０℃で１８時間乾燥させて中間体３を得た（１９．６４ｇ、収率７６％）。
中間体３の代替的調製：
清浄で乾燥した反応器へ、アセトニトリル（２１９ｋｇ）および２−（４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）フェニル）−６−メトキシイソニコチン酸（中間体２、３４．８ｋｇ）を２０〜２５℃で装入した。混合物を５分間撹拌し、次いで、１，１−カルボジイミダゾール（１８．９ｋｇ）を３連続部分において装入した。スラリーを２０〜２５℃で少なくとも１時間さらに撹拌し、次いで、反応器中へ、１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンヒドロクロリド塩（中間体１、３３．０ｋｇ）、続いてＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２０．５ｋｇ）を、ポンプによって装入した。試薬用ポンプならびに反応器の壁をアセトニトリル（１３．７ｋｇ）で洗浄し、撹拌を２０〜２５℃で少なくとも２時間継続した。完了したら、混合物に、ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボニル）−６−メトキシピリジン−２−イル）ベンゾエート（中間体３、２０９ｇ）をシード添加し、少なくとも３０分間撹拌した。結晶化が開始したことを確認した後、クエン酸一水和物（５８．５ｋｇ）の水（２５７Ｌ）溶液を１時間かけて装入した。得られたスラリーを２０〜２５℃で少なくとも２時間さらに撹拌し、次いでろ過し、ケークを、アセトニトリル（６８．４ｋｇ）と水（８７Ｌ）との混合物で洗浄した。この洗浄液を、反応器を濯ぐのにも使用した。固体を減圧下５５℃未満で乾燥させ、中間体３を得た（４３．４４ｋｇ、収率７３％）。
化合物１（遊離酸として）：４−（４−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボニル）−６−メトキシピリジン−２−イル）安息香酸
【００９６】
【化８】
2021504442.tif 000020
【００９７】
丸底フラスコへ、ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボニル）−６−メトキシピリジン−２−イル）ベンゾエート（３．７ｇ、６．６ｍｍｏｌ）およびトルエン（２５ｍＬ）を装入した。８５％リン酸（３．０ｍＬ）を撹拌しながら滴下添加し、反応物を６０℃に４時間加熱した。無色の濃厚なガムが形成した。反応物を室温に冷却し、水を添加した。白色固体を観察した。トルエン有機層を廃棄し、水性相および固体を取りおいた。酢酸エチルを添加し（６０ｍＬ）、４Ｎ  ＮａＯＨ溶液を添加してｐＨを約７に調整した。層を分離して水性を酢酸エチル（５０ｍＬ）で抽出した。合わせた酢酸エチル有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、真空中で濃縮して白色固体を得た。これらを酢酸エチル（８０ｍＬ）に５０℃で溶解し、ヘプタン（９０ｍＬ）をゆっくりと添加した。熱を除去し、混合物を室温に冷却し、１６時間撹拌した。得られた固体を、ろ過によって回収し、母液で濯ぎ、乾燥させて標記化合物を白色固体として得た（化合物１の遊離形態、２．１５ｇ、収率６５％）。
化合物１（遊離酸として）の代替的調製：
清浄で乾燥した反応器へ、アセトニトリル（１３０．４ｋｇ）およびｔｅｒｔ−ブチル４−（４−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボニル）−６−メトキシピリジン−２−イル）ベンゾエート（中間体３、２０．７２ｋｇ）を２０〜２５℃で装入した。混合物を５分間撹拌し、次いで、ｐ−トルエンスルホン酸（８．５ｋｇ）を、穏やかな窒素スウィープ下、装入した。反応混合物を７０℃に加温し、この温度で少なくとも６．５時間維持した。完了したら、混合物を４０℃に冷却し、化合物１（１０４ｇ）をシード添加し、水（８３Ｌ）を少なくとも１時間かけてゆっくりと装入した。混合物を４０℃で最短４時間さらに撹拌し、次いで、２時間かけて２０〜２５℃に冷却した。少なくとも２時間さらに撹拌してから、ろ過し、ケークをアセトニトリル（３３ｋｇ）および水（４１Ｌ）の溶液で濯いだ。この洗浄液を、反応器を濯ぐのにも使用した。得られた固体を減圧下５５℃未満で乾燥させて化合物１を得た（１６．５ｋｇ、収率８９％）。
形態１−化合物１の無水モノ−トリスの調製：
【００９８】
【化９】
2021504442.tif 000021
【００９９】
バイアルへ、４−（４−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボニル）−６−メトキシピリジン−２−イル）安息香酸（１５１ｍｇ、０．３００ｍｍｏｌ）およびエタノール３ｍＬを装入した。混合物を８０℃に５分間加熱して固体を溶解し、次いで室温に冷却した。トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（３９ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で一晩撹拌した。ヘプタン（２．２５ｍＬ）を滴下添加してスラリーを得、それを５０℃に加熱して透明な溶液を得た。混合物を、撹拌しながら一晩室温に冷却した。白色固体を観察し、混合物をさらなる３日間撹拌した。材料をろ過し、真空オーブン内５０℃で一晩乾燥させて形態１を得た（１５１ｍｇ、０．２４２ｍｍｏｌ、収率８１％）。
形態１−化合物１の無水モノ−トリスの代替的調製：
清浄で乾燥した反応器へ、エタノール（８３Ｌ）を装入し、続いて化合物１（９．４３ｋｇ）およびトリス（２．５５ｋｇ）を添加し、その間、混合物を２０〜２５℃の温度に維持した。タンクの壁をエタノール（２Ｌ）で濯ぎ、得られた混合物を６５〜７０℃で加熱し、この温度で、すべての固体が溶解するまで少なくとも３０分間維持し、次いで４５〜５０℃に冷却した。１０μｍインラインのポロプロピレンフィルターを通した温かいろ過を実施し、反応器ならびにフィルターをエタノール（９Ｌ）で洗浄した。ｎ−ヘプタン（２４Ｌ）を同じインラインフィルターを通して温溶液中へ装入し、混合物に、エタノール（０．５Ｌ）中４−（４−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボニル）−６−メトキシピリジン−２−イル）安息香酸無水トリス塩（１００ｇ）を４５〜５０℃でシード添加した。この温度を少なくとも２時間保ち、その後、２０〜２５℃に少なくとも２時間かけて冷却した。撹拌を少なくとも５日間継続した。次いで、スラリーをろ過し、ケークをエタノール（１３Ｌ）とｎ−ヘプタン（６Ｌ）との混合物で洗浄した。固体を減圧下４５℃未満で少なくとも１２時間乾燥させて実施例１を得た（１１．７ｋｇ、収率７７％）。
形態２−化合物１のモノ−トリス塩の三水和物の調製：
【０１００】
【化１０】
2021504442.tif 000022
【０１０１】
形態２を、形態１から転換して得た。５０ｍＬ  ＥａｓｙＭａｘ反応器中へ、形態１（１．７２１４ｇ、２．７６０ｍｍｏｌ）、イソプロパノール（１６．５０ｍＬ、２１５．８ｍｍｏｌ）および水（６８８μＬ、３８．１９０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を反応器ジャケット温度２５℃で約７２時間撹拌した（３００ｒｐｍ）。次いで、反応混合物を４０℃で１５分にわたり加温し、４０℃で約２４時間保ち、一度に２０℃に冷却して試験用試料を取り出した。形態の混合物をＰＸＲＤで見て、それによって、追加の水（６８８μＬ、３８．１９０ｍｍｏｌ）を添加した。撹拌速度を４００ｒｐｍに上げ、スラリーを６時間撹拌させ、次いで１５℃に冷却した。固体を６０ｍＬ／４０Ｍフィルター上で単離し、９６／４のイソプロパノール／水で洗浄した。得られた材料は、ＰＸＲＤによって、形態２と一致した。
形態２−化合物１のモノ−トリス塩の三水和物の代替的調製：
清浄で乾燥した反応器へ、イソプロパノール（６０．４ｋｇ）を装入し、化合物１（１６．６８ｋｇ）およびトリス（４．４２ｋｇ）を添加し、その間、混合物を２０〜２５℃の温度で維持した。混合物を５分間撹拌し、次いで水（６．７ｋｇ）を装入し、スラリーを５５℃に加温した。今や透明な溶液を、清浄で乾燥した予加温した反応器（５０〜５５℃）中に、インライン１０μｍポリプロピレンフィルターを通してろ過した。次いで、溶液に、化合物１のモノ−トリス塩を三水和物（１６７ｇ）としてシード添加した。シードが持続していることを確認した後、混合物を少なくとも２時間かけて１５℃に冷却し、次いで最短１６時間、１５℃に維持した。スラリーをろ過し、ケークを冷却イソプロパノール（１３．１ｋｇ）で洗浄した。次いで、固体を減圧下２５℃未満で乾燥させて形態２のみを得た（２２．１ｋｇ、収率９８％）。
【０１０２】
形態２の中に３つの水分子が存在することを確認するために、Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄ８  Ｖｅｎｔｕｒｅ回析計を用いて室温でデータを収集した。図７を参照されたい。構造を、単斜クラス空間群Ｐ２１／ｃ（Ｖｅｒｓｉｏｎ５．１、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＸＳ、１９９７）におけるＳＨＥＬＸソフトウェアスイートを用いた固有のフェージングによって解明した。構造を、続けて、フルマトリックス最小二乗法によって精緻化した。すべての非水素原子を見出し、異方性変位パラメータ−を用いて精緻化した。
【０１０３】
窒素および酸素上に位置する水素原子をフーリエ差マップから見出し、制限した距離で精緻化した。残存する水素原子を、計算した位置の中に置き、それらの担体原子上に乗せた。
【０１０４】
最終的なＲ指数は７．２％であった。最終差フーリエは、欠けているまたは位置違いの電子密度は示さなかった。
表１０は、形態２に関して収集したデータを提供する：
【０１０５】
【表１０】
2021504442.tif 000023
【０１０６】
薬学動態研究：
薬学動態研究を、オスの（絶食の）カニクイザル（各製剤当たりｎ＝２）において実施した。形態１と形態２とを比較するために経口ピルを調製した。別個に、化合物１のトリス塩と化合物１の遊離酸とを比較するために懸濁液を調製した。投薬を、それぞれ２、５または１０ｍｇ／ｋｇを含有する経口用量として投与した。一連の血液試料を、０、０．２５、０．５、１、２、４、７および２４時間の時点で、大腿静脈を介してシリンジにより回収し、Ｋ３ＥＤＴＡバキュテナー中へ移した。次いで、血液試料を遠心分離し、血漿を取り込み、分析まで−２０℃または−８０℃で貯蔵した。
経口投与用の固体錠剤：
経口錠剤を、形態１または形態２と、６４重量％の結晶セルロース（Ａｖｉｃｅｌ  ＰＨ１０２）、３２重量％のラクトース一水和物（Ｆａｓｔ  Ｆｌｏ  ３１６）、３重量％のデンプングリコール酸ナトリウム（Ｅｘｐｌｏｔａｂ（商標登録））および１重量％のステアリン酸マグネシウムを含有した賦形剤の標準ブレンドとを混合して調製した。適当量の形態１または形態２のいずれかを乳鉢中へ移した。次いで、その乳鉢に、対応量の賦形剤ブレンドを幾何級数的に添加し、乳棒を用いてそれぞれ形態１または形態２と完全に混合した。混合物を容器に移し、タービュラミキサーにおいて５分間ブレンドして、賦形剤と混合したそれぞれの形態１または形態２を含有するブレンドを得た。形態１の場合、ブレンドは、１９重量％の形態１と８１重量％の賦形剤ブレンドとを含有した。形態２の場合、ブレンドは、２１重量％の形態２と７９重量％の賦形剤ブレンドとを含有した。
【０１０７】
錠剤を調製するために、各ブレンドを、０．２３６２’’の標準的な丸い凹型ツーリングを備えたＫｏｒｓｃｈ  ＸＰ−１  一地点打錠機へ移した。錠剤を圧縮して１００ｍｇの錠剤重量を達成し、標的錠剤の硬度は、１分当たり１５個の錠剤の打錠速度で、４ｋｐから９ｋｐの間であった。
経口投与用懸濁液：
代表的なバッチサイズの０．５％（ｗ／ｖ）メチルセルロース（Ｍｅｔｈｏｃｅｌ（商標登録）Ａ４Ｍ）溶液１Ｌを調製するために、脱イオン水およそ０．４Ｌを８０〜９０℃に加熱し、その後、メチルセルロース（Ｍｅｔｈｏｃｅｌ（商標登録）Ａ４Ｍ）５ｇを添加し、粒子が完全に濡れるまで完全に混合した。次いで、混合物を熱から取り出した。次いで、冷水（０．６Ｌ）を添加し、その間、すべてのメチルセルロース粒子が溶解するまで氷浴中で連続的に撹拌した。
【０１０８】
遊離酸から調製した化合物１の１０ｍｇ／ｍＬ懸濁液：化合物１（２２０ｍｇ）の遊離酸を乳鉢中へ移した。固体粉末を、乳棒を用いてすりつぶした（塊が壊れた）。０．５％ｗ／ｖメチルセルロース（Ｍｅｔｈｏｃｅｌ（登録商標）Ａ４Ｍ）２ｍＬを粉末に滴下添加した。ビヒクルと遊離酸とをよく混合して、滑らかなペーストを形成した。ビヒクルの残部を少量のアリコートで添加し、その間、均一な懸濁液が得られるまで混合した。懸濁液を、ドロッパーを用いて３０ｍＬガラス瓶へ移し、容量２２ｍＬに作り上げて、化合物１の遊離酸の濃度１０ｍｇ／ｍＬを達成した。ｐＨは６．０４であると測定した。ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ（商標登録）８０）２２μＬを懸濁液に添加した。０．５％ｗ／ｖメチルセルロース（Ｍｅｔｈｏｃｅｌ（登録商標）Ａ４Ｍ）中の化合物１の遊離酸１０ｍｇ／ｍＬ、０．１％ｖ／ｖポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ（商標登録）８０）の製剤を得た。
【０１０９】
化合物１のトリス塩から調製した化合物１の２．５ｍｇ／ｍＬ懸濁液：形態１（１５７ｍｇ）を乳鉢へ移した。固体粉末を、乳棒を用いてすりつぶした（塊が壊れた）。少量の０．５％ｗ／ｖメチルセルロース（Ｍｅｔｈｏｃｅｌ（商標登録）Ａ４Ｍ）を粉末に添加して滑らかなペーストを形成した。ビヒクルの残部を少量のアリコートで添加して、その間、均一な懸濁液が得られるまで混合した。懸濁液を容器へ移し、最終容量５０ｍＬへ作り上げた。いくつかのクランプを観察したが、およそ１時間撹拌した後、軽質懸濁液を得た。
分析データ：
吸湿性：
吸湿性を、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ製またはＳｕｒｆａｃｅ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｓｙｓｔｅｍｓ製の動的蒸気吸収器具を用いて測定した。各形態の試料を、各ＲＨレベルで、５分で重量変化０．００１％以下の重量平衡（プラトーとして見られる）に達するか、または１２０分の最大時間のいずれかまで、増加的ＲＨレベルへ曝露した。５分で０．００１％の重量平衡または１２０分の短い方の後、次いで試料を次のＲＨレベルへ曝露した。形態１では重量が失われ得た初期の乾燥期間が存在し、形態２では乾燥は利用しなかった。このプロセスは、１０％ＲＨで開始し、ＲＨを２０％ＲＨに増加し、次いで各インターバル後に１０％ＲＨ増加とする（５分で０．００１％以下の平衡または１２０分、いずれか早い方）。９０％ＲＨで、ＲＨは、同じ平衡基準を用いて１０％ＲＨに逆転し戻った。吸湿性は、９０％ＲＨで測定した重量獲得％の係数として測定する。形態１は、９０％ＲＨ／２５℃で約１％の吸湿性を有する。形態２もまた、９０％ＲＨ／２５℃で約１％の吸湿性を有する。
表２に示す熱力学的溶解度：
表２で確認する遊離酸または塩としての化合物１は、乾燥粉末として受け取り、０．４５μｍポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）膜を備えたＷｈａｔｍａｎ  Ｍｉｎｉ−Ｕｎｉｐｒｅｐシリンジレスフィルターデバイス中へ予備秤量した。所望の媒体４５０μＬをフィルターに添加し、室温で２４時間かき混ぜた。２４時間後、試料をろ過し、ろ液を、定量化のための窒素検出器中へ注入した
緩衝剤の調製：
・  ｐＨ１．２：ＮａＣｌ１．０ｇを秤量し、ビーカーへ移す。ＨＰＬＣグレード水約４５０ｍＬを添加してＮａＣｌを溶解させる。溶液を、３６．６％ＨＣｌでｐＨ１．２へ滴定する。溶液を５００ｍＬ容量フラスコへ移し、ＨＰＬＣグレード水で５００ｍＬにする。
・  ｐＨ６．５：５０ｍＭのＮａＰＯ４二塩基約２５０ｍＬを、５０ｍＭのＮａＰＯ４一塩基約５００ｍＬでｐＨ６．５へ滴定する。終了時の総容量は、５０ｍＭのＮａＰＯ４一塩基を５０ｍＭのＮａＰＯ４二塩基に添加するときに溶液がｐＨ６．５に達する点を有する、容量である。
・  ｐＨ７．４：５０ｍＭのＮａＰＯ４二塩基約２００ｍＬを、５０ｍＭのＮａＰＯ４一塩基約５０ｍＬでｐＨ７．４へ滴定する。終了時の総容量は、５０ｍＭのＮａＰＯ４一塩基を５０ｍＭのＮａＰＯ４二塩基に添加するときに溶液がｐＨ７．４に達する点を有する、容量である。
粉末Ｘ線回析：
粉末Ｘ線回析分析を、Ｃｕ照射源を備えたＢｒｕｋｅｒ  ＡＸＳ  Ｄ４  Ｅｎｄｅａｖｏｒ回析計を用いて行った。発散スリットを０．６ｍｍに設定し、一方で、第２のオプティクスには可変スリットを用いた。回析した放射線は、ＰＳＤ−Ｌｙｎｘ  Ｅｙｅ検出器によって検出した。Ｘ線チューブの電圧は４０ｋＶに、アンペア数は４０ｍＡに設定した。データは、ステップサイズ０．０３７°および１０秒のステップ当たりの時間を用いて、３．０〜４０．０°２ΘのＣＵ（ｋ−α平均）で、Θ−２Θ角度計において収集した。試料を、ケイ素低バックグラウンド試料ホルダー中に入れて調製し、回収する間、回転させた。データを、Ｂｒｕｋｅｒ  ＤＩＦＦＲＡＣ  Ｐｌｕｓソフトウェアを用いて収集し、ＥＶＡ  ｄｉｆｆｒａｃｔ  ｐｌｕｓソフトウェア（ｖｅｒｓｉｏｎ４．２．１）により分析を実施した。ＰＸＲＤデータファイルは、ピークサーチ処理の前には処理しなかった。ＥＶＡソフトウェア中のピークサーチアルゴリズムを用いて、閾値１で選択したピークを、事前のピーク割当を作製するために使用した。妥当性を確保するために、調整を手動で行った：自動割当の成果を目視でチェックし、ピーク位置をピーク最大に調整した。相対強度３％以上を有するピークを一般に選んだ。分解されなかったまたはノイズと一致したピークは、選択しなかった。ＰＸＲＤからのピーク位置に伴う典型的な誤差を、ＵＳＰにおいて＋／−０．２°２Θまでと記述した（ＵＳＰ−９４１）。
ＦＴ−ラマン：
ラマンスペクトルを、ＦＴ−ＩＲベンチに取り付けたＮｉｃｏｌｅｔ  ＮＸＲ  ＦＴ−ラマン補機を用いて収集した。分光計に１０６４ｎｍのＮｄ：ＹＶＯ４レーザーおよび液体窒素で冷却するゲルマニウム検出器を装備した。データ獲得前に、ポリスチレンを使用して、機器性能および較正検証を行った。形態１または形態２の試料を、スペクトル収集の間に静的であったガラスＮＭＲチューブにおいて分析した。錠剤試料を錠剤試料ホルダー中で回収し、インタクトな錠剤上の１つのスポットを分析した。スペクトルをレーザーパワー０．５Ｗおよび５１２の共添加スキャンを用いて収集した。収集範囲は３７００−１００ｃｍ−１とした。これらのスペクトルを分解能２ｃｍ−１およびＨａｐｐ−Ｇｅｎｚｅｌアポディゼーションを用いて記録した。上記のラマン法を利用すると、スペクトル測定に伴う可能な多様度は、±２ｃｍ−１である。試料（ニートＡＰＩと薬剤製品との両方）を周囲条件（約２３℃および３０％から６０％の間のＲＨ）で回収した。形態１は乾燥剤と共に貯蔵すべきであり、一方で、形態２は周囲条件（１５〜３０℃および周囲湿度）で貯蔵してもよい。
【０１１０】
強度スケールを、ピークピック処理の前に、１に正規化した。ピークを、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｎｉｃｏｌｅｔ  Ｏｍｎｉｃ９．７．４６ソフトウェアを用いて手動で確定した。ピーク位置をピーク最大でピック処理し、各側に傾斜が存在した場合はピークをそれ自体として確定するのみとし、ピーク上のショルダーは含めなかった。形態１または形態２の場合、ピークピック処理の間、感度８０での絶対閾値０．００４〜０．０１７を利用した。ピーク位置は、標準的な実践法を用いて最も近い整数へ丸めた（０．５は切り上げ、０．４は切り下げ）。正規化したピーク強度でのピークは、（１〜０．７５）は強いと標識し、（０．７４〜０．３０）は中程度と標識し、（０．２９〜０）は弱いと標識した。
固相ＮＭＲ：
固相ＮＭＲ（ｓｓＮＭＲ）分析を、Ｂｒｕｋｅｒ−ＢｉｏＳｐｉｎ  Ａｖａｎｃｅ  ＩＩＩ  ５００  ＭＨｚ（周波数１Ｈ）ＮＭＲ分光計中に位置させたＢｒｕｋｅｒ−ＢｉｏＳｐｉｎ  ＣＰＭＡＳ  ｐｒｏｂｅにおいて行った。形態１の材料を、標準ドライブキャップで封止した４ｍｍローター中へパッケージングし、そのスペクトルを周囲温度で収集した。形態２の材料を、ｏ−リングを含有するドライブキャップで封止した４ｍｍローター中へパッケージングして脱水を防いだ。形態２スペクトルを２５℃で収集した（ＰｂＮＯ３の化学シフトにより較正した）。パッケージングしたローターを、マジックアングルで方向付けし、１５．０ｋＨｚでスピンさせた。１３ＣｓｓＮＭＲスペクトルを、プロトン脱カップリング架橋極性化マジックアングルスピニング（ＣＰＭＡＳ）実験を用いて収集した。８０〜９０ｋＨＺの相修飾プロトン脱カップリング領域を、スペクトル獲得中に適用した。架橋極性化接触時間を２ｍｓに、リサイクル遅延を１０秒に設定した。スキャンの数を、シグナル対ノイズの適切な比を得るように調節した。炭素化学シフトスケールを、結晶アダマンタンの外部標準における１３Ｃ  ＣＰＭＡＳ実験を用い、その高磁場共鳴を２９．５ｐｐｍに設定して、照合した（ニートＴＭＳから決定した）。
【０１１１】
自動ピークピック処理を、Ｂｒｕｋｅｒ−ＢｉｏＳｐｉｎ  ＴｏｐＳｐｉｎ  ｖｅｒｓｉｏｎ３．５ソフトウェアを用いて実施した。一般に、事前のピーク選択のために相対強度５％の閾値を用いた。自動ピークピック処理の成果を目視でチェックして妥当性を確実し、必要に応じて補正を手動で行った。特定の１３Ｃ固相ＮＭＲピーク値を本明細書で報告しているものの、機器、試料および試料準備の相違に起因してこれらのピーク値の範囲が存在する。これは、固相ＮＭＲの技術分野においてピーク位置に固有の変動があるため、通常の実践である。１３Ｃ化学シフトのｘ軸値の典型的な変動は、結晶固体の場合、±０．２ｐｐｍの桁である。本明細書で報告する固相ＮＭＲピーク高さは、相対強度である。固相ＮＭＲ強度は、ＣＰＭＡＳ実験パラメータ−の実際のセットアップ、および試料の熱履歴に応じて多様であり得る。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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