(57)【要約】  本開示は、がんおよび他の障害の治療で使用される新規の改善されたＩＬ−１５融合タンパク質を提供する。種々の実施形態において、本発明の融合タンパク質は、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉドメイン（「ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ複合体」とも称される）およびＦｃドメインという２つの機能的ドメインを有し、それぞれの機能的ドメインは様々な形態を取ることができ、且つ、ＩＬ−１５はＦｃドメインのＣ末端に融合されていることで、ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉとの共発現および非共有結合的な複合体形成をするように構成される。重要なこととして、本発明の融合タンパク質は、現在までに評価された、ＩＬ−１５療法で確認された制限のいくつかに取り組むものであり、具体的には、本融合タンパク質により、インビボにおけるＩＬ−１５の半減期の延長が示され、ｒＩＬ−１５療法や関連サイトカイン療法と比較して優れた前臨床活性が示されている。【選択図】  図１Ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離されたインターロイキン−１５（ＩＬ−１５）融合タンパク質複合体であって、（１）Ｆｃドメインに連結されているＩＬ−１５ポリペプチド（またはそのバリアント）と；（２）前記ＩＬ−１５ポリペプチドに非共有結合的に連結されているＩＬ−１５受容体α（「ＩＬ−１５Ｒα」）ドメインと、を含むことにより、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体を形成している、上記複合体。
【請求項２】
前記ＩＬ−１５ポリペプチドが前記ＦｃドメインのＣ末端に連結されている、請求項１に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項３】
前記ＩＬ−１５ポリペプチドが前記ＦｃドメインのＮ末端に連結されている、請求項１に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項４】
前記ＩＬ−１５ポリペプチドが配列番号２に記載のアミノ酸配列を含むＩＬ−１５ポリペプチドである、請求項１〜３のいずれか一項に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項５】
前記ＩＬ−１５ポリペプチドが、配列番号２の３０位、３１位、３２位、５８位、６２位、６３位、６７位、６８位、または１０８位に１または複数のアミノ酸の置換または欠失を含むＩＬ−１５バリアントポリペプチドである、請求項１〜４のいずれか一項に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項６】
前記ＩＬ−１５ポリペプチドが、配列番号２の５８位にＳからＤへの置換を含むＩＬ−１５バリアントポリペプチドである、請求項１〜５のいずれか一項に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項７】
前記ＩＬ−１５Ｒαドメインが配列番号４に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項８】
前記ＩＬ−１５ＲαドメインがＩＬ−１５受容体αのＳｕｓｈｉ（「ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ」）ドメインであり、前記ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉドメインは配列番号５に記載の配列に対して少なくとも９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項９】
前記ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉドメインが配列番号５に記載のアミノ酸配列を含む、請求項８に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項１０】
前記Ｆｃドメインが、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメイン、ヒトＩｇＧ２のＦｃドメイン、ヒトＩｇＧ３のＦｃドメイン、ヒトＩｇＧ４のＦｃドメイン、ＩｇＡのＦｃドメイン、ＩｇＤのＦｃドメイン、ＩｇＥのＦｃドメイン、ＩｇＧのＦｃドメイン、およびＩｇＭのＦｃドメインからなる群から選択される、請求項１〜９のいずれか一項に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項１１】
各Ｆｃドメインが、エフェクター機能がサイレンシングされた、且つ／または、半減期を延長する機能を有する、Ｆｃドメインである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項１２】
前記Ｆｃドメインが、配列番号６に記載のアミノ酸配列、配列番号７に記載のアミノ酸配列、および配列番号８に記載のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＦｃドメインである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項１３】
各ＩＬ−１５ポリペプチドがペプチドリンカーによりＦｃドメインに共有結合的に結合している、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項１４】
前記ペプチドリンカーが配列番号９〜１２に記載の配列からなる群から選択される、請求項１３に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項１５】
単離されたＩＬ−１５融合タンパク質複合体であって、（１）Ｆｃドメインに連結されているＩＬ−１５Ｒαドメインと；（２）前記ＩＬ−１５Ｒαドメインに非共有結合的に連結されているＩＬ−１５ポリペプチド（またはそのバリアント）と、を含むことにより、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体を形成しており、前記ＩＬ−１５ポリペプチドは配列番号２の５８位にＳからＤへの置換を含むＩＬ−１５バリアントポリペプチドである、上記複合体。
【請求項１６】
前記ＩＬ−１５Ｒαドメインが前記ＦｃドメインのＣ末端に連結されている、請求項１５に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項１７】
前記ＩＬ−１５Ｒαドメインが前記ＦｃドメインのＮ末端に連結されている、請求項１５に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項１８】
前記ＩＬ−１５Ｒαドメインが配列番号４に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１５〜１７のいずれか一項に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項１９】
前記ＩＬ−１５ＲαドメインがＩＬ−１５受容体αのＳｕｓｈｉ（「ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ」）ドメインであり、前記ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉドメインは配列番号５に記載の配列に対して少なくとも９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１５〜１７のいずれか一項に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項２０】
前記ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉドメインが配列番号５に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１９に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項２１】
前記Ｆｃドメインが、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメイン、ヒトＩｇＧ２のＦｃドメイン、ヒトＩｇＧ３のＦｃドメイン、ヒトＩｇＧ４のＦｃドメイン、ＩｇＡのＦｃドメイン、ＩｇＤのＦｃドメイン、ＩｇＥのＦｃドメイン、ＩｇＧのＦｃドメイン、およびＩｇＭのＦｃドメインからなる群から選択される、請求項１５〜２０のいずれか一項に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項２２】
各Ｆｃドメインが、エフェクター機能がサイレンシングされた、且つ／または、半減期を延長する機能を有する、Ｆｃドメインである、請求項１５〜２１のいずれか一項に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項２３】
前記Ｆｃドメインが、配列番号６に記載のアミノ酸配列、配列番号７に記載のアミノ酸配列、および配列番号８に記載のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＦｃドメインである、請求項１５〜２２のいずれか一項に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項２４】
各ＩＬ−１５ポリペプチドがペプチドリンカーによりＦｃドメインに共有結合的に結合している、請求項１５〜２３のいずれか一項に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項２５】
前記ペプチドリンカーが配列番号９〜１２に記載の配列からなる群から選択される、請求項２４に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項２６】
単離されたＩＬ−１５融合タンパク質複合体であって、（１）２つのＦｃドメインに連結されている２つのＩＬ−１５ポリペプチド（またはそのバリアント）と；（２）それぞれのＩＬ−１５ポリペプチドに非共有結合的に連結されている２つのＩＬ−１５Ｒαドメインと、を含むことにより、二量体ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体を形成している、上記複合体。
【請求項２７】
前記２つのＩＬ−１５ポリペプチドが前記２つのＦｃドメインのＣ末端に連結されている、請求項２６に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項２８】
前記２つのＩＬ−１５ポリペプチドが前記２つのＦｃドメインのＮ末端に連結されている、請求項２６に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項２９】
前記ＩＬ−１５ポリペプチドの少なくとも一方が配列番号２に記載のアミノ酸配列を含むＩＬ−１５ポリペプチドである、請求項２６〜２８のいずれか一項に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項３０】
前記ＩＬ−１５ポリペプチドの少なくとも一方が、配列番号２の３０位、３１位、３２位、５８位、６２位、６３位、６７位、６８位、または１０８位に１または複数のアミノ酸の置換または欠失を含むＩＬ−１５バリアントポリペプチドである、請求項２６〜２８のいずれか一項に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項３１】
前記ＩＬ−１５ポリペプチドの少なくとも一方が、配列番号２の５８位にＳからＤへの置換を含むＩＬ−１５バリアントポリペプチドである、請求項２６〜３０のいずれか一項に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項３２】
前記ＩＬ−１５Ｒαドメインが配列番号４に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２６〜３１のいずれか一項に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項３３】
前記ＩＬ−１５ＲαドメインがＩＬ−１５受容体αのＳｕｓｈｉ（「ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ」）ドメインであり、前記ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉドメインは配列番号５に記載の配列に対して少なくとも９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２６〜３１のいずれか一項に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項３４】
前記ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉドメインが配列番号５に記載のアミノ酸配列を含む、請求項３３に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項３５】
前記Ｆｃドメインが、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメイン、ヒトＩｇＧ２のＦｃドメイン、ヒトＩｇＧ３のＦｃドメイン、ヒトＩｇＧ４のＦｃドメイン、ＩｇＡのＦｃドメイン、ＩｇＤのＦｃドメイン、ＩｇＥのＦｃドメイン、ＩｇＧのＦｃドメイン、およびＩｇＭのＦｃドメインからなる群から選択される、請求項２６〜３４のいずれか一項に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項３６】
各Ｆｃドメインが、エフェクター機能がサイレンシングされた、且つ／または、半減期を延長する機能を有する、Ｆｃドメインである、請求項２６〜３５のいずれか一項に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項３７】
前記Ｆｃドメインが、配列番号６に記載のアミノ酸配列、配列番号７に記載のアミノ酸配列、および配列番号８に記載のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＦｃドメインである、請求項２６〜３６のいずれか一項に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項３８】
各ＩＬ−１５ポリペプチドがペプチドリンカーによりＦｃドメインに共有結合的に結合している、請求項２６〜３７のいずれか一項に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項３９】
前記ペプチドリンカーが配列番号９〜１２に記載の配列からなる群から選択される、請求項３８に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項４０】
単離されたＩＬ−１５融合タンパク質複合体であって、（１）２つのＦｃドメインに連結されている２つのＩＬ−１５Ｒαドメインと；（２）前記ＩＬ−１５Ｒαドメインに非共有結合的に連結されている２つのＩＬ−１５ポリペプチド（またはそのバリアント）と、を含むことにより、二量体ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体を形成しており、前記ＩＬ−１５ポリペプチドの少なくとも一方は配列番号２の５８位にＳからＤへの置換を含むＩＬ−１５バリアントポリペプチドである、上記複合体。
【請求項４１】
前記２つのＩＬ−１５Ｒαドメインが前記２つのＦｃドメインのＣ末端に連結されている、請求項４０に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項４２】
前記ＩＬ−１５Ｒαドメインが前記２つのＦｃドメインのＮ末端に連結されている、請求項４０に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項４３】
前記ＩＬ−１５Ｒαドメインが配列番号４に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４０〜４２のいずれか一項に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項４４】
前記ＩＬ−１５ＲαドメインがＩＬ−１５受容体αのＳｕｓｈｉ（「ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ」）ドメインであり、前記ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉドメインは配列番号５に記載の配列に対して少なくとも９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含む、請求項４０〜４２のいずれか一項に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項４５】
前記ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉドメインが配列番号５に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４４に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項４６】
前記Ｆｃドメインが、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメイン、ヒトＩｇＧ２のＦｃドメイン、ヒトＩｇＧ３のＦｃドメイン、ヒトＩｇＧ４のＦｃドメイン、ＩｇＡのＦｃドメイン、ＩｇＤのＦｃドメイン、ＩｇＥのＦｃドメイン、ＩｇＧのＦｃドメイン、およびＩｇＭのＦｃドメインからなる群から選択される、請求項４０〜４５のいずれか一項に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項４７】
各Ｆｃドメインが、エフェクター機能がサイレンシングされた、且つ／または、半減期を延長する機能を有する、Ｆｃドメインである、請求項４０〜４６のいずれか一項に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項４８】
前記Ｆｃドメインが、配列番号６に記載のアミノ酸配列、配列番号７に記載のアミノ酸配列、および配列番号８に記載のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＦｃドメインである、請求項４０〜４７のいずれか一項に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項４９】
各ＩＬ−１５ポリペプチドがペプチドリンカーによりＦｃドメインに共有結合的に結合している、請求項４０〜４８のいずれか一項に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項５０】
前記ペプチドリンカーが配列番号９〜１２に記載の配列からなる群から選択される、請求項４９に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体。
【請求項５１】
単離されたＩＬ−１５融合タンパク質複合体であって、（１）異種タンパク質に連結されているＩＬ−１５ポリペプチド（またはそのバリアント）と；（２）前記ＩＬ−１５ポリペプチドに非共有結合的に連結されているＩＬ−１５Ｒαドメインと、を含むことにより、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−異種タンパク質融合タンパク質を形成している、上記複合体。
【請求項５２】
単離されたＩＬ−１５融合タンパク質複合体であって、（１）異種タンパク質に連結されているＩＬ−１５Ｒαドメインと；（２）前記ＩＬ−１５Ｒαドメインに非共有結合的に連結されているＩＬ−１５ポリペプチド（またはそのバリアント）と、を含むことにより、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−異種タンパク質融合タンパク質を形成している、上記複合体。
【請求項５３】
前記異種タンパク質が半減期の延長を可能にする完全長のヌル抗体または抗体断片からなる群から選択される、請求項５１〜５８のいずれか一項に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−異種タンパク質融合タンパク質。
【請求項５４】
前記異種タンパク質がＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体と相加効果または相乗効果を示す完全長ＩｇＧまたは二重特異性ダイアボディからなる群から選択される、請求項５１〜５２のいずれか一項に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−異種タンパク質融合タンパク質。
【請求項５５】
請求項１〜５４のいずれか一項に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質を、薬剤的に許容できる担体と混合して含む、医薬組成物。
【請求項５６】
対象におけるがんまたはがん転移の治療方法において、治療有効量の請求項５５に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、上記方法。
【請求項５７】
前記がんが、膵がん、胃がん、卵巣がん、大腸がん、メラノーマ、白血病、骨髄異形成症候群、肺がん、肝臓がん、乳がん、前立腺がん、脳がん、膀胱がん、頭頸部がん、または横紋筋肉腫からなる群から選択される、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記方法はがんまたはがん転移を治療することが可能な第２の治療法をさらに含み；前記併用療法はエフェクター細胞による腫瘍細胞の殺傷を増加させる、請求項５６〜５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
対象におけるウイルス感染症の治療方法であって、治療有効量の請求項５５に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、上記方法。
【請求項６０】
樹状細胞（ｄｅｎｄｒｉｃ  ｃｅｌｌ）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＮＫ細胞、ＴＣＲ−Ｔ細胞；ＣＡＲ−ＮＫ細胞、ｉＰＳ誘導ＮＫ細胞、ｉＰＳ誘導ＴＣＲ−Ｔ細胞、ｉＰＳ誘導ＣＡＲ−Ｔ細胞、またはｉＰＳ誘導ＣＡＲ−ＮＫ細胞を用いる細胞療法を含むがこれらに限定はされない、細胞生存および半減期を維持するための養子細胞移植によるＮＫ細胞・Ｔ細胞療法またはＣＡＲ−ＮＫ・ＣＡＲ−Ｔ療法と組み合わされた、インビトロおよびインビボにおいてＮＫ細胞およびＴ細胞を増殖および更新する方法であって；
治療有効量の請求項５５に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、
上記方法。
【請求項６１】
ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα融合タンパク質複合体の作製方法であって、ａ）宿主細胞においてＩＬ−１５ＲαドメインとＦｃドメインに結合したＩＬ−１５ポリペプチドとを共発現させることと；ｂ）前記ＩＬ−１５Ｒαドメインと前記ＩＬ−１５−Ｆｃ融合タンパク質とを発現させるのに十分な条件の下、培地中で前記宿主細胞を培養することと；ｃ）前記宿主細胞または前記培地からＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質複合体を精製することと、を含む、上記作製方法。
【請求項６２】
ＩＬ−１５Ｒαドメインとの共発現により凝集の抑制と発現の増加をもたらす、ＩＬ−１５融合タンパク質発現の改善方法。
【請求項６３】
請求項１〜５４のいずれか一項に記載のＩＬ−１５−Ｆｃドメイン融合タンパク質をコードする核酸分子。
【請求項６４】
請求項１〜５４のいずれか一項に記載のＩＬ−１５Ｒαドメインをコードする核酸分子。
【請求項６５】
請求項６３に記載の核酸分子を含む発現ベクター。
【請求項６６】
請求項６４に記載の核酸分子を含む発現ベクター。
【請求項６７】
請求項６３に記載の核酸分子をさらに含む、請求項６６に記載の発現ベクター。
【請求項６８】
請求項６５〜６７のいずれか一項に記載の発現ベクターのうちの１または複数を含む宿主細胞。
【請求項６９】
請求項１〜６８のいずれか一項に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα融合タンパク質複合体の製造方法であって、前記ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα融合タンパク質複合体の発現を促進する条件下で請求項１〜６８に記載の宿主細胞を培養することと、前記ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα融合タンパク質複合体を回収することと、を含む、上記製造方法。
【請求項７０】
請求項６９に記載の方法によって製造された単離されたＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα融合タンパク質複合体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連特許出願］
本出願は２０１８年６月２２日に出願された米国仮出願第６２／６８９，０５１号の利益を主張するものであり、当該特許仮出願の全内容は参照により本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００２】
がんは伝統的に化学療法、放射線、標的療法、および外科手術によって治療されてきたが、過去１０年間の間に、がん治療の第五の柱として免疫療法が現れ、がんとの闘いに大きな変革をもたらした。Ｔ細胞チェックポイント（ＣＴＬＡ−４およびＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１）阻害剤の開発により、免疫療法薬のベンチマークが確立された。これらの治療法は、腫瘍特異的Ｔ細胞プールの効率的な増殖および再活性化によって、ある特定のがん患者において５０％に達する奏効率をもたらすことが示された。
【０００３】
最近、４αヘリックスバンドルファミリーのサイトカインメンバーであるインターロイキン−１５（ＩＬ−１５）が、がん治療用の免疫調節剤候補として登場した。ＩＬ−１５はその特異的受容体であるＩＬ−１５Ｒαに結合するが、ＩＬ−１５Ｒαは抗原を提示する樹状細胞、単球、およびマクロファージ上に発現されており、Ｔ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞をはじめとする反応性細胞上の、ＩＬ−１５Ｒβと共通サイトカイン受容体γ鎖（γｃ）とから構成されるヘテロ二量体型受容体複合体をトランス活性化することで、シグナル伝達を惹起する。ＩＬ−１５は広い活性を示し、Ｔ細胞、Ｂ細胞、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の分化と増殖を誘導する。また、ＩＬ−１５は、ＣＤ８陽性Ｔ細胞の細胞溶解活性を増強し、抗原を経験したＣＤ８陽性且つＣＤ４４高発現のメモリーＴ細胞を長期に誘導する。ＩＬ−１５はＢ細胞による分化と免疫グロブリン合成を刺激し、樹状細胞の成熟を誘導する。ＩＬ−１５は、免疫抑制性の制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）は刺激しない。そのため、仮説として、ＩＬ−１５活性の増強は、自然免疫と適応免疫を強化し、腫瘍への攻撃を引き起こすことで、有望な抗がん治療剤になる可能性があると考えられている（Ｓｔｅｅｌら、Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、３３巻（１号）：頁３５−４１、２０１２年）。
【０００４】
転移性悪性黒色腫患者における組換えヒトＩＬ−１５点滴静注のファースト・イン・ヒューマン第Ｉ相臨床試験において、ＩＬ−１５が転移性悪性腫瘍患者に安全に投与できることと、ＩＬ−１５投与が血液中のリンパ球サブセットの恒常性に著しい変化を与え、ＮＫ細胞およびγδ細胞が最も劇的な影響を受け、次いでＣＤ８メモリーＴ細胞が影響受けることが報告された（Ｃｏｎｌｏｎら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．、３３巻（１号）、頁７４−８２）。
【０００５】
ＩＬ−１５をがん免疫療法薬として用いることで免疫応答を増強するというこれらの新たな進歩にもかかわらず、ＩＬ−１５を治療薬として効果的に使用することには未だに制限がある。例えば、ＩＬ−１５は半減期が短く（４０分未満）、そのため、１）そのインビボ抗腫瘍効果が妨げられるほどに生物学的利用能が低く、また、２）治療関連暴露量を達成するために高用量の投与を必要とするため、毒性がもたらされる。さらに、ＩＬ−１５は標準的な哺乳類細胞系では発現レベルが低いと理解されている。
【０００６】
がん治療において有効性が高く且つ安全な新規の治療薬の供給が、尚も強く求められている。
【発明の概要】
【０００７】
一つの態様において、本発明は、がんの治療で使用される新規の改善されたＩＬ−１５融合タンパク質を提供する。種々の実施形態において、本発明の融合タンパク質は、それぞれ様々な形態を取ることができる、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５受容体α（ＩＬ−１５Ｒα）成分（「ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体」とも称される）およびＦｃドメインという、２つの機能的ドメインを有する。種々の実施形態において、融合タンパク質は、ＩＬ−１５がＦｃドメインのＣ末端またはＦｃドメインのＮ末端のいずれかに融合されており、ＩＬ−１５Ｒαドメインと共発現されて非共有結合的に複合体形成するように、構成される（図１Ｂおよび図１Ｃ参照）。
【０００８】
種々の実施形態において、本発明のＩＬ−１５融合タンパク質は、ＩＬ−１５ドメインが配列番号２に記載の成熟ヒトＩＬ−１５ポリペプチド（ｈｕＩＬ−１５またはＩＬ−１５野生型（ｗｔ）とも称される）の配列を含む、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体を含む。種々の実施形態において、ＩＬ−１５ドメインは、配列番号２に記載の成熟ヒトＩＬ−１５ポリペプチドの配列に由来する配列を含むＩＬ−１５バリアント（または変異体）となるであろう。ＩＬ−１５のバリアント（または変異体）は、元のアミノ酸、成熟配列内での上記元のアミノ酸の位置、およびバリアント型のアミノ酸、を用いて呼称される。例えば、ｈｕＩＬ−１５「Ｓ５８Ｄ」は、配列番号２の５８位にＳからＤへの置換を含むヒトＩＬ−１５を表す。種々の実施形態において、ＩＬ−１５バリアントは、天然ＩＬ−１５ポリペプチドと比較した場合のＩＬ−１５Ｒβに対する結合活性の増加や機能活性の増大などから示されるように、ＩＬ−１５スーパーアゴニストとして機能する。種々の実施形態において、ＩＬ−１５バリアントは、天然ＩＬ−１５ポリペプチドと比較した場合の、ＩＬ−１５Ｒβに対する結合活性はあるが機能活性を持たないことなどから示されるように、ＩＬ−１５アンタゴニストとして機能する。種々の実施形態において、ＩＬ−１５バリアントは、天然ＩＬ−１５ポリペプチドと比較して、ＩＬ−１５Ｒβγｃ受容体に対し、結合親和性が増加しているか、または結合活性が減少している。種々の実施形態において、ＩＬ−１５バリアントの配列は、天然ＩＬ−１５配列と比較して、少なくとも１つ（すなわち、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、またはそれ以上）のアミノ酸変化を有する。アミノ酸変化としては、ＩＬ−１５Ｒβおよび／またはＩＬ−１５Ｒγｃおよび／またはＩＬ−１５Ｒβγｃと相互作用するＩＬ−１５のドメインに、アミノ酸置換、アミノ酸欠失、またはアミノ酸挿入のうちの１または複数を含ませることができる。種々の実施形態において、アミノ酸変化は、配列番号２の３０位、３１位、３２位、５８位、６２位、６３位、６７位、６８位、または１０８位における、１または複数のアミノ酸置換またはアミノ酸欠失である。種々の実施形態において、アミノ酸変化は、成熟ヒトＩＬ−１５配列の、３０位におけるＤからＴへの置換、３１位におけるＶからＹへの置換、３２位におけるＨからＥへの置換、５８位におけるＳからＤへの置換、６２位におけるＴからＤへの置換、６３位におけるＶからＦへの置換、６７位におけるＩからＶへの置換、６８位におけるＩからＦもしくはＨもしくはＤもしくはＫへの置換、または、１０８位におけるＱからＡもしくはＭもしくはＳへの置換であるか、これらの置換の任意の組み合わせである。種々の実施形態において、アミノ酸変化は成熟ヒトＩＬ−１５配列の５８位におけるＳからＤへの置換である。種々の実施形態において、ＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号２のＳ５８Ｄ変異を含むＩＬ−１５バリアントを含む。
【０００９】
種々の実施形態において、本発明のＩＬ−１５融合タンパク質は、ＩＬ−１５ＲαがＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉドメイン（配列番号５）もしくはＩＬ−１５Ｒα細胞外ドメイン（配列番号４）またはＩＬ−１５Ｒαの任意の結合性機能的ドメインのいずれかを含む、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体を含む。種々の実施形態において、ＩＬ−１５Ｒαドメインは、配列番号４に記載の配列に対して少なくとも９０％である配列を含む。種々の実施形態において、ＩＬ−１５Ｒαドメインは、配列番号４に記載の配列に対して少なくとも９５％である配列を含む。種々の実施形態において、ＩＬ−１５Ｒαドメインは、配列番号５に記載の配列に対して少なくとも９０％である配列を含むＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉドメインである。種々の実施形態において、ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉドメインは、配列番号５に記載の配列に対して少なくとも９５％である配列を含む。
【００１０】
種々の実施形態において、本発明のＩＬ−１５融合タンパク質は、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ複合体と、少なくとも１つの異種タンパク質とを含む。
【００１１】
種々の実施形態において、本発明のＩＬ−１５融合タンパク質は、ＩＬ−１５が上記異種タンパク質のＣ末端またはＮ末端のいずれかに融合されている、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体を含む。
【００１２】
種々の実施形態において、本発明のＩＬ−１５融合タンパク質は、二量体型または単量体型のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−異種タンパク質複合体を含有する。
【００１３】
種々の実施形態において、異種タンパク質はＦｃドメイン（またはその機能性断片）である。種々の実施形態において、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメイン、ヒトＩｇＧ２のＦｃドメイン、ヒトＩｇＧ３のＦｃドメイン、ヒトＩｇＧ４のＦｃドメイン、ＩｇＡのＦｃドメイン、ＩｇＤのＦｃドメイン、ＩｇＥのＦｃドメイン、ＩｇＧのＦｃドメイン、およびＩｇＭのＦｃドメインからなる群から選択されるか、またはこれらの任意の組み合わせである。種々の実施形態において、Ｆｃドメインは、補体結合特性またはＦｃ受容体結合特性が変化したＦｃドメインをもたらすアミノ酸変化を含む。補体結合特性またはＦｃ受容体結合特性が変化したＦｃドメインを生成するアミノ酸変化は、当該技術分野において公知である。種々の実施形態において、二量体型ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体−Ｆｃ融合タンパク質の作製に使用されるＦｃドメイン配列は、配列番号６に記載のヒトＩｇＧ１−Ｆｃドメイン配列である。配列番号６は、ＦｃγＲの結合やＣ１ｑの結合を断つアミノ酸置換を含む。種々の実施形態において、一価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体−Ｆｃ融合タンパク質の作製に使用されるヘテロ二量体Ｆｃドメイン配列は、配列番号７に記載のＫｎｏｂ−Ｆｃドメイン配列である。配列番号７は、ＦｃγＲの結合やＣ１ｑの結合を断つアミノ酸置換を含む。種々の実施形態において、一価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体−Ｆｃ融合タンパク質の作製に使用されるヘテロ二量体Ｆｃドメイン配列は、配列番号８に記載のＨｏｌｅ−Ｆｃドメイン配列である。配列番号８は、ＦｃγＲの結合やＣ１ｑの結合を断つアミノ酸置換を含む。
【００１４】
種々の実施形態において、本発明のＩＬ−１５融合タンパク質はＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体を含み、異種タンパク質は、半減期延長のための完全長非結合性抗体であるか、または、ターゲティング、多機能性、および半減期延長のために使用される特異的な抗体もしくは断片である。
【００１５】
種々の実施形態において、本発明のＩＬ−１５融合タンパク質はＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体を含み、異種タンパク質は、完全長ＩｇＧ型または抗体断片型の抗体（単一特異性または二重特異性）であり、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ複合体との相加効果または相乗効果を示す。
【００１６】
種々の実施形態において、本発明のＩＬ−１５融合タンパク質はＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体を含み、異種タンパク質は、ＩＬ−１５の局所濃度と腫瘍微小環境への浸透とを増大させることで、腫瘍細胞殺傷効果を増大し、全身毒性を低減する、組織特異的ターゲティングまたは腫瘍特異的ターゲティングを可能にする。
【００１７】
種々の実施形態において、異種タンパク質は、ポリペプチドリンカー配列によって、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ複合体のＩＬ−１５ポリペプチド（またはその機能性断片）に共有結合的に連結されている。種々の実施形態において、リンカーは、二次構造が比較的少ない、５個、１０個、１５個、２０個、３０個、４０個（またはその間の数字）、またはそれ以上のアミノ酸からなる人工配列であり得る。種々の実施形態において、リンカーは、Ｇ／Ｓ含量が豊富である（例えば、リンカー内の少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％、またはそれ以上のアミノ酸がＧまたはＳである）。種々の実施形態において、リンカーは、配列番号９〜１２に記載の配列の群から選択される。各々のペプチドリンカー配列は独立して選択できる。
【００１８】
別の態様において、本開示は、本発明の単離されたＩＬ−１５融合タンパク質を、薬剤的に許容できる担体と混合して含む、医薬組成物を提供する。
【００１９】
別の態様において、本開示は、対象におけるがんまたはがん転移を治療するための方法において、それを必要とする対象に治療有効量の本発明の医薬組成物を投与することを含む、上記方法を提供する。１つの実施形態において、対象はヒト対象である。種々の実施形態において、がんは、膵がん、胃がん、肝臓がん、乳がん、卵巣がん、大腸がん、メラノーマ、白血病、骨髄異形成症候群、肺がん、前立腺がん、脳がん、膀胱がん、頭頸部がん、横紋筋肉腫から選択される。
【００２０】
別の態様において、本開示は、対象におけるがんまたはがん転移を治療するための方法において、治療有効量の本発明の医薬組成物を、以下からなる群から選択される第２の治療法と組み合わせて投与することを含む、上記方法を提供する：細胞障害性化学療法、免疫療法、小分子キナーゼ阻害剤標的療法、外科手術、放射線療法、幹細胞移植、細胞療法（ＣＡＲ−Ｔ細胞、ＣＡＲ−ＮＫ細胞、ｉＰＳ誘導ＮＫ細胞、ｉＰＳ誘導ＣＡＲ−ＮＫ細胞、ｉＰＳ誘導Ｔ細胞、ｉＰＳ誘導ＣＡＲ−Ｔ細胞またはＴＣＲ−Ｔ細胞を含む）、およびカルメット・ゲラン桿菌（ＢＣＧ）などのワクチン。種々の実施形態において、併用療法は、治療有効量の免疫療法を対象に投与することを含み得るが、免疫療法としては、特定の腫瘍抗原に対する枯渇抗体（ｄｅｐｌｅｔｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）を用いた治療；抗体薬物複合体を用いた治療；ＣＤ２７６、ＣＤ２７２、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ４０、ＳＩＲＰａ、ＣＤ４７、ＯＸ−４０、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、ＬＡＧ３、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、４−１ＢＢ、ＴＩＭ−３、Ｂ７−Ｈ４、Ｓｉｇｌｅｃ７、Ｓｉｇｌｅｃ８、Ｓｉｇｌｅｃ９、Ｓｉｇｌｅｃ１５、およびＶＩＳＴＡなどの共刺激分子または共抑制分子（免疫チェックポイント）に対するアゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、または阻止抗体を用いた治療；ブリナツモマブなどの二重特異性Ｔ細胞誘導抗体（ＢｉＴＥ（登録商標））を用いた治療：ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−２１、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、およびＩＦＮ−γなどの生物学的応答調節物質の投与を含む治療；シプロイセルＴなどの治療用ワクチンを用いた治療；樹状細胞ワクチンまたは腫瘍抗原ペプチドワクチンを用いた治療；キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−Ｔ細胞を用いた治療；ＣＡＲ−ＮＫ細胞を用いた治療；腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を用いた治療；養子移植抗腫瘍Ｔ細胞（生体外で増殖された且つ／またはＴＣＲトランスジェニックのＴ細胞）を用いた治療；ＴＡＬＬ−１０４細胞を用いた治療；ＴＬＲ４アゴニストＣｐＧ、ＴＬＲ７アゴニストＣｐＧ、ＴＬＲ８アゴニストＣｐＧ、ＴＬＲ９アゴニストＣｐＧ、およびイミキモドなどのＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）作用剤などの免疫刺激剤を用いた治療；並びに、カルメット・ゲラン桿菌（ＢＣＧ）などのワクチンを用いた治療が挙げられるが、これらに限定はされず；上記の併用療法はエフェクター細胞による腫瘍細胞の殺傷を増大させ、すなわち、同時に投与された場合、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質と免疫療法との間には相乗作用が存在する。
【００２１】
別の態様において、本開示は、細胞生存および半減期を維持するための任意の養子細胞移植によるＮＫ細胞・Ｔ細胞治療またはＣＡＲ−ＮＫ・ＣＡＲ−Ｔ療法と組み合わされた、インビトロおよびインビボにおける、ＮＫ細胞およびＴ細胞を増殖および更新する方法を提供する。
【００２２】
別の態様において、本開示は、対象におけるウイルス感染症を治療するための方法において、それを必要とする対象に治療有効量の本発明の医薬組成物を投与することを含む、上記方法を提供する。１つの実施形態において、対象はヒト対象である。
【００２３】
別の態様において、本開示は、がん治療用の医薬を調製するためのＩＬ−１５融合タンパク質の使用を提供する。
【００２４】
別の態様において、本開示は、ウイルス感染症治療用の医薬を調製するためのＩＬ−１５融合タンパク質の使用を提供する。
【００２５】
別の態様において、本開示は、本開示のＩＬ−１５融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む単離された核酸分子を提供する。種々の実施形態において、単離された核酸分子は、本明細書に記載のポリヌクレオチドを含み、さらに、本明細書に記載の少なくとも１つの異種タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む。種々の実施形態において、上記の核酸分子は、本明細書に記載のリンカーをコードするポリヌクレオチドをさらに含む。種々の実施形態において、上記の核酸分子は、配列番号５６〜６３に記載のヌクレオチド配列を含む。
【００２６】
別の態様において、本開示は、本明細書に記載の核酸を含むベクターを提供する。種々の実施形態において、上記のベクターは発現ベクターである。別の態様において、本開示は、本開示の核酸を含む単離された細胞を提供する。種々の実施形態において、上記の細胞は、本開示の発現ベクターを含む宿主細胞である。別の態様において、タンパク質またはポリペプチドの発現を促進する条件下で上記の宿主細胞を培養することによる、ＩＬ−１５融合タンパク質を作製する方法が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】図１は、本発明のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のいくつかの型を示している。（Ａ）ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合体型。（Ｂ）一価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）−Ｆｃ融合体型。（Ｃ）二価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）−Ｆｃ融合体型。（Ｄ）一価ＩＬ−１５（非共有結合性）／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質型。（Ｅ）二価ＩＬ−１５（非共有結合性）／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質型。それぞれの融合タンパク質型において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体はＦｃドメインのＣ末端またはＮ末端のいずれにあってもよく；ＩＬ−１５ＲαはＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉドメインまたはＩＬ−１５ＲαＥＣＤのいずれであってもよい。
【図２】図２Ａは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより確認された、純度を示している。図２Ｂは、ＳＥＣ−ＨＰＬＣにより測定された、例示的なＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質であるＰ−０２１７、Ｐ−０２３４、およびＰ−０３１３の、単量体割合を示している。３種全ての融合タンパク質がＣ末端にＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体を含む。Ｐ−０２１７は一価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）−Ｆｃ融合体であり、Ｐ−０２３４はＰ−０２１７の二量体型の対応物であり、Ｐ−０３１３はＰ−０２３４と同じ融合体構成を共有しているが、ＩＬ−１５ドメインにおけるＳ５８Ｄ置換によってのみ異なっている。
【図３】図３は、異なる構成のいくつかのＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の、ＳＥＣ（サイズ除去クロマトグラフィー）のクロマトグラムを示している。特に記載がない限り、これらの例示的な融合タンパク質の全てが、Ｃ末端にＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体を含む。Ｐ−０１６２は、単量体型ＩＬ−１５単独−Ｆｃ融合タンパク質である。Ｐ−０１９７は、一価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）−Ｆｃ融合体であり、その模式図は図１Ｂに示されている。Ｐ−０１５３は、ヘテロ二量体Ｆｃ融合体型（図１Ａ）の、単量体型ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα融合体である。Ｐ−０１６７およびＰ−０１９８は、それぞれＰ−０１６２およびＰ−０１９７の二量体型の対応物である。Ｐ−０２３４、Ｐ−０２２０、およびＰ−０２２３は全て、二価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質（図１Ｃ）である。Ｐ−０２２０はＩＬ−１５ＲαＥＣＤを含有しており、Ｐ−０２３４はＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ＋ドメインを含有しており；Ｐ−０２２３は、そのＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体がＦｃのＮ末端に結合しているＰ−０２３４と異なっている。
【図４】図４は、ＥＬＩＳＡアッセイにおける、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合体型の差異による、ＩＬ−１５Ｒβへの結合活性に対する影響を示している。ＩＬ−１５Ｒαにより、ＩＬ−１５−Ｆｃ融合タンパク質のＩＬ−１５Ｒβ結合活性が増加することが示されている。Ｐ−０１５７（白丸）はＮ末端二価ＩＬ−１５（非共有結合性）／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質であり；Ｐ−０１５３（黒丸）はＣ末端ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質であり；Ｐ−０１６２（黒三角）はＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉが複合体形成されていないＣ末端一価ＩＬ−１５−Ｆｃ融合タンパク質である。
【図５】図５は、ＩＬ−１５−Ｆｃ融合タンパク質の生物活性に対するＩＬ−１５Ｒαの影響を示している。ＩＬ−１５Ｒαにより、ＩＬ−１５−Ｆｃ融合タンパク質の生物活性が増強することが示されている。ＣＤ６９陽性ＮＫ細胞（図５Ａ）およびＣＤ８  Ｔ細胞（図５Ｂ）の誘導について、エキソビボヒトＰＢＭＣ  ＦＡＣＳベースアッセイで測定を行った。Ｐ−０１９７（白丸）はＣ末端一価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質であり；Ｐ−０１６２（黒丸）は、Ｐ−０１９７と同じ構造を有するが、ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉが複合体形成されていない融合タンパク質である。
【図６】図６は、ＩＬ−１５−Ｆｃ融合タンパク質の生物活性に対する、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体形成の構成の差異による影響を示している。ＣＤ６９陽性ＮＫ細胞（図６Ａ）およびＣＤ８陽性Ｔ細胞（図６Ｂ）の誘導について、エキソビボヒトＰＢＭＣ  ＦＡＣＳベースアッセイで測定を行った。Ｐ−０１６５（黒丸）はＣ末端一価ＩＬ−１５（非共有結合性）／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質であり；Ｐ−０１９７（白丸）はＣ末端一価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質であり；Ｐ−０１５３（白三角）はＣ末端ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質である。
【図７】図７は、異なる型のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の生物活性に対するリンカーの影響を示している。ＣＤ６９陽性ＮＫ細胞（図７Ａ）およびＣＤ８  Ｔ細胞（図７Ｂ）の誘導について、エキソビボヒトＰＢＭＣ  ＦＡＣＳベースアッセイで測定を行った。Ｐ−０１６５（黒丸）およびＰ−０１６６（白丸）は、１５アミノ酸の剛直なリンカーおよび１０アミノ酸の柔軟なリンカーをそれぞれ有する、一価ＩＬ−１５（非共有結合性）／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合体である。Ｐ−０１９７（黒三角）、Ｐ−０２０７（白三角）、およびＰ−０２１７（星）は、剛直なリンカー、１０アミノ酸のＧＳリッチの柔軟なリンカー、および１５アミノ酸のＧＳリッチの柔軟なリンカーをそれぞれ有する、一価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質である。
【図８】図８は、Ｎ末端側融合であるかＣ末端側融合であるかの、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の活性に対する影響を示している。処置後、エキソビボヒトＰＢＭＣ  ＦＡＣＳベースアッセイにおいて、Ｋｉ６７陽性ＣＤ８  Ｔ細胞の割合を測定した。（Ａ）Ｐ−０２１８（黒丸）および標準（白丸）は、それぞれ、Ｃ末端二価ＩＬ−１５（非共有結合性）／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質およびＮ末端二価ＩＬ−１５（非共有結合性）／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質である。（Ｂ）Ｐ−０２３４（黒三角）およびＰ−０２２３（白三角）は、それぞれ、Ｃ末端二価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質およびＮ末端二価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質である。
【図９】図９は、ＩＬ−１５Ｒα完全ＥＣＤドメインであるかＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉドメインであるかの、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の生物活性に対する影響を示している。ＣＤ６９陽性ＮＫ細胞の誘導について、エキソビボヒトＰＢＭＣ  ＦＡＣＳベースアッセイで測定を行った。（Ａ）Ｐ−０２３４（黒丸）およびＰ−０２２０（白丸）は、ＩＬ−１５Ｒαｓｕｓｈｉおよび完全ＥＣＤをそれぞれ有する、Ｃ末端二価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質である。（Ｂ）Ｐ−０２２３（黒丸）およびＰ−０２２４（白丸）は、ＩＬ−１５Ｒαｓｕｓｈｉおよび完全ＥＣＤをそれぞれ有する、Ｎ末端二価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質である。（Ｃ）Ｐ−０２２１（黒丸）およびＰ−０２２２（白丸）は、ＩＬ−１５Ｒαｓｕｓｈｉおよび完全ＥＣＤをそれぞれ有する、Ｎ末端一価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質である。
【図１０】図１０は、ＩＬ−１５ポリペプチドにおけるＳ５８Ｄ置換が、ＩＬ−１５融合タンパク質の、ＣＤ８＋Ｔ細胞（Ａ）、ＣＤ４＋Ｔ細胞（Ｂ）、およびＮＫ細胞（Ｃ）上でＳＴＡＴ５リン酸化を誘導する能力を、増強したことを示している。Ｐ−０２１８（白丸）およびＰ−０３１４（黒丸）は、野生型のＩＬ−１５およびＳ５８ＤバリアントのＩＬ−１５をそれぞれ含む、二価ＩＬ−１５（非共有結合性）／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質である。Ｐ−０２３４（白三角）およびＰ−０３１３（黒三角）は、野生型のＩＬ−１５およびＳ５８ＤバリアントのＩＬ−１５をそれぞれ含む、二価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質である。
【図１１】図１１は、ＩＬ−１５（Ｓ５８Ｄ）バリアントを含有する融合タンパク質が、ＣＤ８＋Ｔ細胞（Ａ）、ＣＤ４＋Ｔ細胞（Ｂ）、およびＮＫ細胞（Ｃ）上でＫｉ６７発現を誘導する能力の増強を示したことを示している。Ｐ−０２１８（白丸）およびＰ−０３１４（黒丸）は、野生型のＩＬ−１５およびＳ５８ＤバリアントのＩＬ−１５をそれぞれ含む、二価ＩＬ−１５（非共有結合性）／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質である。Ｐ−０２３４（白三角）およびＰ−０３１３（黒三角）は、野生型のＩＬ−１５およびＳ５８ＤバリアントのＩＬ−１５をそれぞれ含む、二価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質である。
【図１２】図１２は、４日間反復投与試験での、ｒｈＩＬ−１５、標準、およびＰ−０２３４で処置されたマウスにおけるＩＬ−１５の血清中濃度を示している。雌Ｂ  Ｂａｌｂ／Ｃマウスに、溶媒、ｒｈＩＬ−１５（０．０３ｍｇ／ｋｇ）、標準（０．１ｍｇ／ｋｇおよび０．５ｍｇ／ｋｇ）、またはＰ−０２３４（０．１ｍｇ／ｋｇおよび０．５ｍｇ／ｋｇ）を、毎日腹腔内注射した。４日目の最後の注射の１時間後に、終末部の血液（ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｂｌｏｏｄ）を採血し、ＥＬＩＳＡアッセイを用いて血清中ＩＬ−１５レベルを測定した。
【図１３】図１３は、４日間反復投与試験での、ｒｈＩＬ−１５、標準、およびＰ−０２３４で処置されたＢａｌｂ／Ｃマウスにおける体重（Ａ）および０日目からの体重の変化率（Ｂ）を示している。データは平均値±ＳＥＭとして表されている。統計解析として、１元配置分散分析と、その後にテューキーの事後検定を行った。＊＊＊０日目との比較でｐ＜０．００１；＃ＰＢＳ群との比較でｐ＜０．０５。
【図１４】図１４は、４日間反復投与試験における、Ｂａｌｂ／Ｃマウスの末梢血中のＮＫ細胞の増殖能および増殖に対する、ＩＬ−１５化合物の効果を示している。４回の毎日投与の後に、血液を採取し、ＦＡＣＳでＫｉ６７の測定およびＮＫ細胞の表現型検査を行った。（Ａ）Ｋｉ６７増殖能マーカー陽性のＮＫ細胞の割合；（Ｂ）ＣＤ３陰性リンパ球集団におけるＮＫ細胞の割合。データは平均値±ＳＥＭとして表した。統計解析として、１元配置分散分析と、その後にテューキーの事後検定を行った。＊＊＊＊溶媒群との比較でｐ＜０．０００１、＃等価用量の標準との比較でｐ＜０．００１、＃＃等価用量の標準との比較でｐ＜０．０１。
【図１５】図１５は、４日間反復投与試験における、Ｂａｌｂ／Ｃマウスの脾臓ＮＫ細胞の増殖能、増殖、および活性化に対する、ＩＬ−１５化合物の効果を示している。（Ａ）Ｋｉ６７増殖能マーカー陽性の脾臓ＮＫ細胞の割合；（Ｂ）脾臓における総ＮＫ細胞；（Ｃ）ＣＤ６９陽性脾臓ＮＫ細胞の割合。データは平均値±ＳＥＭとして表した。統計解析として、１元配置分散分析と、その後にテューキーの事後検定を行った。＊＊＊＊溶媒群との比較でｐ＜０．０００１、＊＊溶媒群との比較でｐ＜０．０１、＊溶媒群との比較でｐ＜０．０５。
【図１６】図１６は、Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおける単回腹腔内注射後のＰ−０３１３および標準の血清中濃度を示している。０．３ｍｇ／ｋｇのＰ−０３１３または標準で処置されたマウスから、−２４時間（投与前）、並びに投与の１時間後、４時間後、２４時間後、７２時間後、１４４時間後、および１９２時間後に、血液を採取した。（Ａ）インハウスＥＬＩＳＡアッセイによるヒトＦｃ−ＩＬ−１５複合体の検出；（Ｂ）市販ＥＬＩＳＡアッセイによるヒトＩＬ−１５の検出。
【図１７】図１７は、８日間に亘る、Ｐ−０３１３および標準の単回注射後のＢａｌｂ／Ｃマウスの体重を示している。
【図１８】図１８は、Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおける単回注射後のＮＫ細胞（Ａ）およびＣＤ８＋Ｔ細胞（Ｂ）上のＫｉ６７発現に対する、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の、用量依存的な効果および時間依存的な効果を示している。−２４時間（投与前）、並びに１時間、４時間、２４時間、７２時間、１４４時間、および１９２時間の時点で血液を採取し、ＦＡＣＳ分析でリンパ球の表現型検査およびＫｉ６７の測定を行った。データは平均値±ＳＥＭとして表されている。統計解析として、２元配置分散分析と、その後にテューキーの事後検定を行った。各時点のＰＢＳ群との比較で、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、＊＊ｐ＜０．０１、＊ｐ＜０．０５。
【図１９】図１９は、Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおける単回注射後の末梢血中のＮＫ細胞（Ａ）およびＣＤ８＋Ｔ細胞（Ｂ）の増殖に対する、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の、用量依存的な効果および時間依存的な効果を示している。−２４時間（投与前）、並びに１時間、４時間、２４時間、７２時間、１４４時間、および１９２時間の時点で血液を採取して、ＦＡＣＳ分析でリンパ球の表現型検査を行った。データは平均値±ＳＥＭとして表されている。統計解析として、２元配置分散分析と、その後にテューキーの事後検定を行った。各時点のＰＢＳ群との比較で、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊ｐ＜０．０５。
【図２０】図２０は、マウスＣＴ２６肺転移モデルにおける、Ｐ−０３１３および標準による肺転移の阻害を示している。溶媒、標準（０．３ｍｇ／ｋｇ）、またはＰ−０３１３（０．０３ｍｇ／ｋｇおよび０．１ｍｇ／ｋｇ）の投与を、ＣＴ２６細胞注射の１日後から開始して、５日おき（Ｑ５Ｄ）に３回行った。１６日目にマウスを屠殺し、顕微鏡で肺における転移性結節のカウントを行った。（Ａ）各治療群の転移性結節を示す、代表的な肺の写真。（Ｂ）光学顕微鏡にて得られた肺結節数。データは平均値±ＳＥＭとして表されている。統計解析として、１元配置分散分析と、その後にテューキーの事後検定を行った。ＰＢＳ群との比較で、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、＊ｐ＜０．０５。
【図２１】図２１は、Ｐ−０３１３または標準で処置後のＣＴ２６肺転移モデルにおける免疫薬力学的プロファイリング（ｉｍｍｕｎｏ−ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃ  ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ）を示している。Ｐ−０３１３、標準、またはＰＢＳを５日おきに３回腹腔内注射した３日後のフローサイトメトリーにより、ＣＴ２６転移マウスにおいて、全血１μｌ当たりの、循環しているＡ）ＮＫ細胞、およびＢ）ＣＤ８＋Ｔ細胞の数が増加していることが確認された。データは平均値±ＳＥＭとして表されている。統計解析として、１元配置分散分析と、その後にテューキーの事後検定を行った。ＰＢＳ群との比較で、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊ｐ＜０．０１。
【図２２】図２２は、ＣＴ２６肺転移モデルの、Ｐ−０３１３または標準で処置されたマウスにおける脾臓重量を示している。脾臓は、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質を５日おきに３回腹腔内注射した３日後に摘出した。データは平均値±ＳＥＭとして表されている。統計解析として、１元配置分散分析と、その後にテューキーの事後検定を行った。＊＊＊＊ＰＢＳ群との比較でｐ＜０．０００１。
【図２３】図２３は、Ｐ−０３１３または標準で処置されたＣＴ２６肺転移マウスにおける肝毒性評価を示している。処置を５日おきに３回行った３日後に肝臓を摘出した。Ａ）肝臓重量；Ｂ）血清中ＡＬＴ値；およびＣ）血清中ＡＳＴ値。血清中のＡＬＴ値とＡＳＴ値とは、市販のＥＬＩＳＡキットを用いて測定した。データは平均値±ＳＥＭとして表されている。
【図２４】図２４は、皮下に樹立されたＣＴ２６マウス大腸腫瘍モデルにおける、Ｐ−０３１３の抗腫瘍活性を示している。０日目に、１×１０５個のＣＴ２６細胞を皮下注射した。平均腫瘍体積が約７０ｍｍ３になったとき（１１日目）から開始して、溶媒（ＰＢＳ）またはＰ−０３１３（０．１ｍｇ／ｋｇまたは０．０５ｍｇ／ｋｇ）の注射を５日おきに２回行った。（Ａ）ＣＴ２６皮下腫瘍の成長曲線。（Ｂ）ベースラインからの体重の変遷。データは平均値±ＳＥＭとして表されている。統計解析として、２元配置分散分析と、その後にテューキーの事後検定を行った。＊＊ＰＢＳ群との比較でｐ＜０．０００１。
【図２５】図２５は、（Ａ）ＰＢＳ溶媒、（Ｂ）０．０５ｍｇ／ｋｇのＰ−０３１３、または（Ｃ）０．０１ｍｇ／ｋｇのＰ−０３１３を投与された個々のマウスにおける皮下ＣＴ２６腫瘍の成長曲線を示している。ｎ＝１０／群。
【図２６】図２６は、ＣＴ２６マウス大腸癌による腫瘍モデルの、Ｐ−０３１３処置群マウスにおける、ＮＫ細胞およびＣＤ８  Ｔ細胞の増殖能および増殖を示している。腫瘍移植の１１日後から開始して、処置を５日おきに２回行った後に、１９日目のフローサイトメトリーにより、ＮＫ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞において、Ｋｉ６７発現の増加（Ａ〜Ｂ）および循環細胞数（全血１μｌ当たり）の増加（Ｃ−Ｄ）が確認された。データは平均値±ＳＥＭとして表されている。統計解析として、１元配置分散分析と、その後にテューキーの事後検定を行った。ＰＢＳ群との比較で、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、＊Ｐ＜０．０５。
【図２７】図２７は、Ｐ−０３１３で処置されたＣＴ２６大腸腫瘍担持マウスにおける、脾臓ＮＫ細胞および脾臓ＣＤ８  Ｔ細胞の免疫表現型検査を示している。腫瘍移植の１１日後から開始して、処置を５日おきに２回行った後に、２１日目のフローサイトメトリーにより、脾臓ＮＫ細胞数の増加（Ａ）およびＣＤ８＋Ｔ細胞数の増加（Ｂ）が確認された。データは平均値±ＳＥＭとして表されている。統計解析として、１元配置分散分析と、その後にテューキーの事後検定を行った。＊＊＊＊ＰＢＳ群との比較でｐ＜０．０００１。
【図２８】図２８は、樹立されていないＣＴ２６大腸腫瘍モデルにおける、Ｐ−０３１３の抗腫瘍活性を示している。１×１０５個のＣＴ２６細胞を皮下移植した３日後、マウスに溶媒（ＰＢＳ）またはＰ−０３１３（０．１ｍｇ／ｋｇ）を５日おきに５回注射した。（Ａ）０日目の腫瘍細胞移植後のＣＴ２６皮下腫瘍の成長曲線。（Ｂ）２５日目の腫瘍重量。データは平均値±ＳＥＭとして表されている。統計解析として、１元配置分散分析と、その後にテューキーの事後検定を行った。ＰＢＳ群との比較で、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊ｐ＜０．０５。
【図２９】図２９は、Ｐ−０３１３で処置されたＣＴ２６担癌マウスにおける、脾臓重量および体重増減率を示している。ＣＴ２６腫瘍細胞移植の３日後、マウスに溶媒（ＰＢＳ）またはＰ−０３１３（０．１ｍｇ／ｋｇ）を５日おきに５回注射した。（Ａ）２５日目の脾臓重量。（Ｂ）２５日間に亘る体重の増減率。データは平均値±ＳＥＭとして表されている。統計解析として、１元配置分散分析と、その後にテューキーの事後検定を行った。＊＊ＰＢＳ群との比較でｐ＜０．０１。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
本開示は、がんおよび他の障害の治療で使用される新規の改善されたＩＬ−１５融合タンパク質を提供する。種々の実施形態において、本発明の融合タンパク質は、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉドメイン（「ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ複合体」とも称される）およびＦｃドメインという２つの機能的ドメインを有し、それぞれの機能的ドメインは様々な形態を取ることができ、且つ、ＩＬ−１５がＦｃドメインのＣ末端またはＮ末端に融合され、ＩＬ−１５Ｒα、ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ、またはＩＬ−１５ＲαＥＣＤと共発現および非共有結合的な複合体形成をするように構成される。
【００２９】
本開示は、アミノ酸置換、アミノ酸欠失、アミノ酸挿入を有し、がんおよび他の障害の治療で使用されるＩＬ−１５スーパーアゴニストまたはＩＬ−１５アンタゴニストとして機能する、ＩＬ−１５バリアントを提供する。
【００３０】
本発明者らが理解するところでは、ＩＬ−１５またはＩＬ−１５融合タンパク質の循環半減期を延ばし、および／または、その生物活性を増大させるためには、ＩＬ−１５をヒトＩｇＧのＦｃ部分のＮ末端またはＣ末端に共有結合的に連結することにより、ＩＬ−１５のそのシグナル伝達受容体への提示を増強し、ＩＬ−１５の融合タンパク質からの解離を抑制し、遊離ヒトＩＬ−１５の副作用と関連する頻度が高い遊離ＩＬ−１５のピーク血清中濃度を制限することが、非常に望ましい。さらに、本発明者らは、ＩＬ−１５をそのシグナル伝達受容体へより自然に提示するために、ＩＬ−１５に非共有結合的に結合したＩＬ−１５Ｒαドメインを含有する融合タンパク質複合体を作製することが非常に望ましいと考えた。本発明の型を用いることで、タンパク質発現を増加させ、免疫原性を低減し、ＩＬ−１５分解を保護することが可能であることを、本発明者らは示してる。本発明で開示または説明された種々の実施形態では、生物活性の増強、および発現増加や低凝集性などの開発適合性（ｄｅｖｅｌｏｐａｂｉｌｉｔｙ）を達成するために、ＩＬ−１５−ＩＬ−１５Ｒα複合体を二量体型でＣ末端に配置することが望ましい。重要なこととして、本発明の融合タンパク質は、現在までに評価された、ＩＬ−１５療法で確認された制限のいくつかに取り組むものであり、具体的には、本融合タンパク質により、インビボにおけるＩＬ−１５の半減期の延長が示され、ｒＩＬ−１５療法や関連サイトカイン療法と比較して優れた前臨床活性が示されている。
【００３１】
定義
本明細書において、「ポリペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」という用語は同義的に使用されており、アミノ酸残基のポリマーを指している。種々の実施形態において、「ペプチド」、「ポリペプチド」、および「タンパク質」は、α炭素同士がペプチド結合を通じて連結されているアミノ酸鎖である。鎖の一方の末端（アミノ末端）の末端アミノ酸はすなわち遊離アミノ基を有しており、一方、鎖の他方の末端（カルボキシ末端）の末端アミノ酸は遊離カルボキシル基を有している。本明細書で使用される場合、用語「アミノ末端」（Ｎ末端と省略）は、ペプチドのアミノ末端のアミノ酸上の遊離α−アミノ基を指すか、あるいは、ペプチド内の任意の他の場所のアミノ酸のα−アミノ基（ペプチド結合に参加している場合のアミノ基）を指す。同様に、用語「カルボキシ末端」は、ペプチドのカルボキシ末端の遊離カルボキシル基、またはペプチド内の任意の他の場所のアミノ酸のカルボキシル基を指す。ペプチドは、実質的に任意のポリアミノ酸も包含し、ペプチド模倣薬が挙げられるがこれに限定はされず、例えば、アミノ酸同士がアミド結合ではなくエーテルによって連結されているものなどである。
【００３２】
本開示のポリペプチドは、例えば、（１）タンパク質分解に対する感受性の低減、（２）酸化に対する感受性の低減、（３）タンパク質複合体形成を目的とした結合親和性の変化、（４）結合親和性の変化、および、（５）他の物理化学的特性または機能特性の付与または改変など、いかなる方法およびいかなる理由で改変されたポリペプチドも包含する。例えば、天然配列に（例えば、分子間接触を形成しているドメインの外側のポリペプチド部分に）、単一のアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）がなされていてもよいし、複数のアミノ酸置換がなされていてもよい。「保存的アミノ酸置換」とは、ポリペプチド内の、あるアミノ酸の、機能的に類似したアミノ酸との置換を指す。下記の６つのグループはそれぞれ、互いに保存的置換であるアミノ酸を含んでいる。：
１）アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、およびスレオニン（Ｔ）
２）アスパラギン酸（Ｄ）、およびグルタミン酸（Ｅ）
３）アスパラギン（Ｎ）、およびグルタミン（Ｑ）
４）アルギニン（Ｒ）、およびリジン（Ｋ）
５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）
６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、およびトリプトファン（Ｗ）
【００３３】
「非保存的アミノ酸置換」とは、これらのクラスの１つの構成要素の別のクラスの構成要素への置換を指す。そのような変化を起こす際、種々の実施形態においては、アミノ酸の疎水性親水性指標が考慮される場合がある。各アミノ酸には、その疎水性および電荷特性に基づいて、疎水性親水性指標が割り振られている。それぞれの疎水性親水性指標は以下である、イソロイシン（＋４．５）；バリン（＋４．２）；ロイシン（＋３．８）；フェニルアラニン（＋２．８）；システイン／シスチン（＋２．５）；メチオニン（＋１．９）；アラニン（＋１．８）；グリシン（−０．４）；トレオニン（−０．７）；セリン（−０．８）；トリプトファン（−０．９）；チロシン（−１．３）；プロリン（−１．６）；ヒスチジン（−３．２）；グルタミン酸（−３．５）；グルタミン（−３．５）；アスパラギン酸（−３．５）；アスパラギン（−３．５）；リジン（−３．９）；およびアルギニン（−４．５）。
【００３４】
タンパク質に相互作用的な生物学的機能を付与する際のアミノ酸疎水性親水性指標の重要性は、当該技術分野においては理解されているところである（例えば、Ｋｙｔｅら、１９８２年、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１５７：１０５−１３１を参照）。ある特定のアミノ酸を、同様の疎水性親水性指標または疎水性親水性スコアを有する他のアミノ酸に置換しても、同様の生物活性が保持され得ることが知られている。疎水性親水性指標に基づいて変化を起こす際、種々の実施形態においては、両者の疎水性親水性指標が±２以内であるアミノ酸同士の置換が含まれる。種々の実施形態においては±１以内のものが含まれ、種々の実施形態においては±０．５以内のものが含まれる。
【００３５】
また、特に、このように作製された生物学的な機能を持つタンパク質またはペプチドの、本明細書において開示される免疫学的な実施形態での使用が意図されている場合、類似アミノ酸同士の置換は、親水性に基づくことで、効率的に為すことができると、当該技術分野では理解されている。種々の実施形態において、隣接アミノ酸の親水性によって制御される、タンパク質の局所的な平均親水性の最大値は、その免疫原性および抗原性と相関しており、すなわち、当該タンパク質の生物学的特性と相関している。
【００３６】
下記の親水性値がこれらのアミノ酸残基に割り振られている：アルギニン（＋３．０）；リジン（＋３．０）；アスパラギン酸（＋３．０．＋−．１）；グルタミン酸（＋３．０．＋−．１）；セリン（＋０．３）；アスパラギン（＋０．２）；グルタミン（＋０．２）；グリシン（０）；トレオニン（−０．４）；プロリン（−０．５．＋−．１）；アラニン（−０．５）；ヒスチジン（−０．５）；システイン（−１．０）；メチオニン（−１．３）；バリン（−１．５）；ロイシン（−１．８）；イソロイシン（−１．８）；チロシン（−２．３）；フェニルアラニン（−２．５）、およびトリプトファン（−３．４）。同様の親水性値に基づいた変化を起こす際、種々の実施形態においては、親水性値が±２以内であるアミノ酸同士の置換が含まれ、種々の実施形態においては±１以内のものが含まれ、種々の実施形態においては±０．５以内のものが含まれる。
【００３７】
例示的なアミノ酸置換を表１に記載する。
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【００３８】
当業者であれば、周知の手法を用いて、本明細書に記載されているポリペプチドの好適なバリアントを決定することができる。種々の実施形態において、当業者は、活性に重要であるとは考えられていない領域を標的とすることにより、活性を破壊することなく変化を起こすことができる、上記分子の好適な領域を、特定することができる。他の実施形態において、当業者は、類似ポリペプチド間で保存されている、上記分子の残基および部分を特定することができる。さらなる実施形態においては、生物活性または構造にとって重要であり得る領域でさえも、生物活性を破壊することも、ポリペプチド構造に悪影響を与えることもなく、保存的アミノ酸置換を起こすことができる。
【００３９】
さらに、当業者は、活性または構造にとって重要な類似ポリペプチド内の残基を特定する構造・機能研究を調査することができる。そのような比較を考慮に入れて、当業者は、類似ポリペプチドの活性または構造にとって重要なアミノ酸残基に対応する、ポリペプチド内のアミノ酸残基の重要性を予測することができる。当業者は、そのような予測された重要アミノ酸残基のために、化学的に類似したアミノ酸置換を選択することができる。
【００４０】
また、当業者は、三次元構造およびアミノ酸配列を、類似ポリペプチドの当該構造と関連させて解析することができる。そのような情報に照らして、当業者は、その三次元構造に関して、ポリペプチドのアミノ酸残基の並びを予測することができる。種々の実施形態において、当業者は、ポリペプチドの表面上に存在すると予測されたアミノ酸残基に、このような残基は他の分子との重要な相互作用に関与している場合があるため、根本的な変化が生じないように、選択を行うことができる。さらに、当業者は、所望のアミノ酸残基のそれぞれに単一のアミノ酸置換を含む試験バリアントを作製することができる。その後、当業者に公知の活性定量法を用いて、バリアントのスクリーニングを行うことができる。そのようなバリアントを用いることで、好適なバリアントに関する情報を集めてもよい。例えば、特定のアミノ酸残基への変化が活性の破壊、活性の好ましくない低減、または不適切な活性をもたらすことが分かった場合、そのような変化を有するバリアントを避けることができる。言い換えれば、そのような通例の実験から集められた情報に基づいて、当業者は、単独または他の変異と組み合わせた、さらなる置換が避けられるべきアミノ酸を容易に確認することができる。
【００４１】
用語「ポリペプチド断片」および「切断型ポリペプチド」とは、本明細書で使用される場合、対応する完全長タンパク質と比較して、アミノ末端および／またはカルボキシ末端に欠失を有するポリペプチドを指す。ある実施形態において、断片は、例えば、５以上、１０以上、２５以上、５０以上、１００以上、１５０以上、２００以上、２５０以上、３００以上、３５０以上、４００以上、４５０以上、５００以上、６００以上、７００以上、８００以上、９００以上、または１０００以上のアミノ酸長とすることができる。ある実施形態において、断片は、例えば、１０００以下、９００以下、８００以下、７００以下、６００以下、５００以下、４５０以下、４００以下、３５０以下、３００以下、２５０以下、２００以下、１５０以下、１００以下、５０以下、２５以下、１０以下、または５以下のアミノ酸長ともすることができる。断片には、その一方または両方の末端に、１または複数の追加のアミノ酸をさらに含ませることができ、例えば、異なる天然タンパク質由来のアミノ酸配列（例えば、Ｆｃまたはロイシンジッパードメイン）または人工アミノ酸配列（例えば、人工リンカー配列）を含ませることができる。
【００４２】
「ポリペプチドバリアント」、「ハイブリッドポリペプチド」、および「ポリペプチド変異体」という用語は、本明細書で使用される場合、別のポリペプチド配列と比較して、１または複数のアミノ酸残基がアミノ酸配列に挿入されている、１または複数のアミノ酸残基がアミノ酸配列から欠失している、且つ／または、１または複数のアミノ酸残基がアミノ酸配列中に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。ある実施形態において、挿入、欠失、または置換されているアミノ酸残基の数は、例えば、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも２５、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも１２５、少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２２５、少なくとも２５０、少なくとも２７５、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、または少なくとも５００のアミノ酸長とすることができる。本開示のハイブリッドは融合タンパク質を包含する。
【００４３】
ポリペプチドの「誘導体」とは、化学的に修飾されたポリペプチドであって、例えば、ポリエチレングリコール、アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン）などの別の化学的部分への結合、リン酸化、およびグリコシル化などである。
【００４４】
本明細書において、用語「％配列同一性」は、用語「％同一性」と同義的に使用されており、配列アラインメント用プログラムを用いてアラインメントされた場合の、２以上のペプチド配列間のアミノ酸配列同一性の値、または２以上のヌクレオチド配列間のヌクレオチド配列同一性の値を指す。例えば、本明細書で使用される場合、８０％同一性は、規定のアルゴリズムで測定された８０％配列同一性と同じことを意味し、所与の配列が別の長さの別の配列に対して少なくとも８０％の同一性を有することを意味している。ある実施形態において、％同一性は、所与の配列に対しての、例えば、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％、またはそれ以上の配列同一性から選択される。ある実施形態において、％同一性は、例えば、約６０％〜約７０％、約７０％〜約８０％、約８０％〜約８５％、約８５％〜約９０％、約９０％〜約９５％、または約９５％〜約９９％の範囲内である。
【００４５】
本明細書において、用語「％配列相同性」は、用語「％相同性」と同義的に使用されており、配列アラインメント用プログラムを用いてアラインメントされた場合の、２以上のペプチド配列間のアミノ酸配列相同性の値、または２以上のヌクレオチド配列間のヌクレオチド配列相同性の値を指す。例えば、本明細書で使用される場合、８０％相同性は、規定のアルゴリズムで測定された８０％配列相同性と同じことを意味し、すなわち、所与の配列の相同体は所与の配列のある長さに亘って８０％超の配列相同性を有する。ある実施形態において、％相同性は、所与の配列に対しての、例えば、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％、またはそれ以上の配列相同性から選択される。ある実施形態において、％相同性は、例えば、約６０％〜約７０％、約７０％〜約８０％、約８０％〜約８５％、約８５％〜約９０％、約９０％〜約９５％、または約９５％〜約９９％の範囲内である。
【００４６】
２つの配列間の同一性を確認するために用いることができる例示的なコンピュータプログラムとしては、ＮＣＢＩウェブサイトにおいてインターネット上で一般に入手可能な一連のＢＬＡＳＴプログラム、例えば、ＢＬＡＳＴＮ、ＢＬＡＳＴＸ、およびＴＢＬＡＳＴＸ、ＢＬＡＳＴＰおよびＴＢＬＡＳＴＮ、が挙げられるが、これらに限定はされない。また、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２１５巻：頁４０３−１０、１９９０年（公表された初期設定、すなわち、パラメーターｗ＝４、パラメーターｔ＝１７、に特に関連して）、およびＡｌｔｓｃｈｕｌら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、２５巻：頁３３８９−３４０２、１９９７年を参照されたい。ＧｅｎＢａｎｋ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓや他の公開データベースのアミノ酸配列と比較して所与のアミノ酸配列を評価する場合、配列検索は通常、ＢＬＡＳＴＰプログラムを用いて行う。Ｔｈｅ  ＢＬＡＳＴＸプログラムは、ＧｅｎＢａｎｋ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓや他の公開データベースのアミノ酸配列に対して、全ての読み取り枠で翻訳された核酸配列の検索に好ましい。オープンギャップペナルティ＝１１．０、ギャップ伸長ペナルティ＝１．０という初期パラメーターを用いて、ＢＬＡＳＴＰおよびＢＬＡＳＴＸの両方を実行し、ＢＬＯＳＵＭ−６２行列を利用する。上記文献参照。
【００４７】
パーセント配列同一性の算出に加え、ＢＬＡＳＴアルゴリズムは、２つの配列間の類似性の統計解析も行う（例えば、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０巻：頁５８７３−５７８７、１９９３年を参照）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムによって提供される類似性尺度の１つとして、最小和確率（ｓｍａｌｌｅｓｔ  ｓｕｍ  ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ）（Ｐ（Ｎ））があり、これは、２つのヌクレオチド配列間または２つのアミノ酸配列間で一致が偶然に生じる確率を示す。例えば、試験核酸を参照核酸と比較した場合の最小和確率が、例えば、約０．１未満、約０．０１未満、または約０．００１未満である場合、核酸は参照配列に類似しているとみなされる。
【００４８】
用語「異種の」とは、本明細書で使用される場合、構成や状態が天然のものではない、または天然には存在しないことを指し、例えば、既存の天然構成または天然状態を、別の供給源由来の構成または状態と置き替えることにより達成することができる構成や状態を指す。同様に、そのタンパク質が天然で発現される生物以外の生物でのタンパク質の発現は、異種の発現系および異種のタンパク質となる。
【００４９】
用語「抗体」は、本明細書で使用される場合、免疫グロブリン遺伝子または免疫グロブリン遺伝子の断片に実質的または部分的にコードされた１または複数のポリペプチドを含み、且つ、腫瘍抗原に対する特異性または病的状態において過剰発現される分子に対する特異性を有する、タンパク質を指す。認識されている免疫グロブリン遺伝子には、κ定常領域遺伝子、λ定常領域遺伝子、α定常領域遺伝子、γ定常領域遺伝子、δ定常領域遺伝子、ε定常領域遺伝子、およびμ定常領域遺伝子、並びにこれらの遺伝子のサブタイプ、さらには無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子も含まれる。軽鎖（ＬＣ）はκ軽鎖またはλ軽鎖のいずれかに分類される。重鎖（ＨＣ）はγ重鎖、μ重鎖、α重鎖、δ重鎖、またはε重鎖に分類され、これが、免疫グロブリンのクラス（それぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ）を定義する。典型的な免疫グロブリン（例えば、抗体）構造単位は、四量体を成す。四量体はそれぞれ、各対が１つの「軽鎖」（約２５ｋＤ）と１つの「重鎖」（約５０〜７０ｋＤ）とを有する、２組の同一ポリペプチド鎖対から構成される。それぞれの鎖のＮ末端が、抗原認識に最も大きく関与する、１００〜１１０程度またはそれ以上のアミノ酸からなる可変領域を規定する。
【００５０】
用語「Ｆｃ領域」とは、本明細書で使用される場合、免疫グロブリン重鎖のＣ−末端領域を規定するものであり、インタクト抗体のパパイン分解によって生成され得る。Ｆｃ領域は、天然配列のＦｃ領域であってもよいし、バリアントＦｃ領域であってもよい。免疫グロブリンのＦｃ領域は、通常、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインという２つの定常ドメインを含み、所望によりＣＨ４ドメインを含む。抗体のＦｃ部分はいくつかの重要なエフェクター機能を媒介しており、例えば、サイトカイン誘導、ＡＤＣＣ、ファゴサイトーシス、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、並びに抗体および抗原抗体複合体の半減期／クリアランス速度を媒介している（例えば、新生児ＦｃＲ（ＦｃＲｎ）はエンドソーム内の酸性ｐＨでＩｇＧのＦｃ領域に結合し、ＩｇＧを分解から保護し、ＩｇＧの長期血中半減期に寄与する）。抗体のエフェクター機能を改変するためのＦｃ部分のアミノ酸残基の置換は、当該技術分野において公知である（例えば、Ｗｉｎｔｅｒら、米国特許第５，６４８，２６０号および同第５，６２４，８２１号を参照）。
【００５１】
「ポリヌクレオチド」とは、ヌクレオチド単位から構成される重合体を指す。ポリヌクレオチドは、デオキシリボ核酸（「ＤＮＡ」）およびリボ核酸（「ＲＮＡ」）などの天然核酸だけでなく、核酸アナログも包含する。核酸アナログは、天然ホスホジエステル結合以外の他のヌクレオチドとの結合に参加しているヌクレオチドである非天然塩基を含むもの、ホスホジエステル結合以外の結合を通じて付加された塩基を含むもの、を包含する。すなわち、核酸アナログは、例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロトリエステル、ホスホルアミダート、ボラノリン酸、メチルホスホン酸、キラル−メチルホスホン酸、２−Ｏ−メチルリボヌクレオチド、ペプチド−核酸（ＰＮＡ）などを包含し、これらに限定はされない。このようなポリヌクレオチドは、自動ＤＮＡ合成装置などを用いて合成することができる。用語「核酸」は、通常、大型のポリヌクレオチドを指す。用語「オリゴヌクレオチド」は、通常は短いポリヌクレオチドを指し、通常は約５０ヌクレオチド以下である。ヌクレオチド配列がＤＮＡ配列（すなわち、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ）で表されている場合、「Ｕ」が「Ｔ」と置き換わったＲＮＡ配列（すなわち、Ａ、Ｕ、Ｇ、Ｃ）もこれに包含されることは理解されたい。
【００５２】
本明細書では従来の表示法を用いてポリヌクレオチド配列を記載している。一本鎖ポリヌクレオチド配列の左側の末端が５’末端であり；二本鎖ポリヌクレオチド配列の左手方向を５’方向と称する。新生ＲＮＡ転写物への５’方向から３’方向へのヌクレオチド付加を転写方向と称する。ｍＲＮＡと同じ配列を有するＤＮＡ鎖を「コード鎖」と称し；ＤＮＡから転写されたｍＲＮＡと同じ配列を有し、ＲＮＡ転写物の５’末端の５’側に位置するＤＮＡ鎖上の配列を「上流配列」と称し；ＲＮＡと同じ配列を有し、コードＲＮＡ転写物の３’末端の３’側にあるＤＮＡ鎖上の配列を「下流配列」と称する。
【００５３】
「相補的」とは、位相幾何学的な適合性、すなわち、２つのポリヌクレオチドの相互作用し合う表面同士の一致性をいう。すなわち、この２つの分子は相補的と記載することができ、さらには、接触表面特徴が互いに相補的である。第一のポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が第二のポリヌクレオチドのポリヌクレオチド結合パートナーのヌクレオチド配列と実質的に同一である場合、または、第一のポリヌクレオチドがストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で第二のポリヌクレオチドにハイブリダイズ可能である場合、第一のポリヌクレオチドは第二のポリヌクレオチドに相補的である。
【００５４】
「ベクター」は、それに連結した別の核酸を細胞に導入するのに使用できるポリヌクレオチドである。ベクターの１種として「プラスミド」があるが、プラスミドとは、その中に追加の核酸セグメントを連結することができる、直鎖状または環状の二本鎖ＤＮＡ分子をいう。別の種類のベクターとしてウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、複製欠損アデノウイルス、および複製欠損アデノ随伴ウイルス）があり、このウイルスゲノムの中には追加のＤＮＡセグメントを導入することができる。ある特定のベクターは導入された宿主細胞内で自律増殖が可能である（例えば、細菌性複製開始点を含む細菌ベクターおよびエピソーム性の哺乳類ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム性の哺乳類ベクター）は、宿主細胞内への導入後に宿主細胞のゲノムに組み入れられることで、宿主ゲノムと共に複製される。「発現ベクター」は選択されたポリヌクレオチドの発現を指示することができるベクターの一種である。
【００５５】
「制御配列」は、それが機能的に連結された核酸の発現（例えば、発現量、発現タイミング、または発現場所）に影響を与える核酸である。制御配列は、例えば、被制御核酸に対して直接、あるいは、１または複数の他の分子（例えば、当該制御配列および／または当該核酸に結合するポリペプチド）の作用を通じて、その効果を及ぼし得る。制御配列の例としては、プロモーター、エンハンサー、および他の発現調節エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）が挙げられる。制御配列のさらなる例が、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ、１９９０年、Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１８５巻、アカデミックプレス社、サンディエゴ、カリフォルニア州、およびＢａｒｏｎら、１９９５年、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、２３巻、頁３６０５−０６に記載されている。制御配列がヌクレオチド配列の発現（例えば、発現量、発現タイミング、または発現場所）に影響を及ぼしている場合、当該ヌクレオチド配列は当該制御配列に「機能的に連結」されていることになる。
【００５６】
「宿主細胞」は、本開示のポリヌクレオチドの発現に用いることができる細胞である。宿主細胞は原核生物とすることができ、例えば、大腸菌とすることができ、あるいは、宿主細胞は真核生物とすることができ、例えば、単細胞の真核生物（例えば、酵母または他の真菌）、植物細胞（例えば、タバコ植物細胞またはトマト植物細胞）、動物細胞（例えば、ヒト細胞、サル細胞、ハムスター細胞、ラット細胞、マウス細胞、または昆虫細胞）、またはハイブリドーマとすることができる。通常、宿主細胞は、ポリペプチドコード核酸による形質転換またはそのトランスフェクトが可能な培養細胞であり、当該宿主細胞においてこのポリペプチドコード核酸の発現が可能となる。発現対象の核酸で形質転換された、またはそれをトランスフェクトされた宿主細胞を表すために、「組換え宿主細胞」という表現が用いられている場合がある。宿主細胞はまた、上記核酸を含んではいるが、それを所望のレベルでは発現していない細胞とすることもできるが、ただし、上記核酸と機能的に連結するように制御配列が当該宿主細胞に導入されている場合は除く。宿主細胞という用語は、特定の対象細胞を指すだけでなく、そのような細胞の子孫や潜在的な子孫も指すと理解される。突然変異や環境の影響などによってある特定の改変が後の世代において生じ得るため、そのような子孫は実際には親細胞と同一でない場合があるが、その場合であっても、本明細書で使用される上記用語の範囲内に包含される。
【００５７】
用語「単離された分子」（ここで、分子はポリペプチドまたはポリヌクレオチドなどである）は、その起源または派生源に基づいて、（１）天然状態のそれに伴っている天然付随成分を付随していない分子、（２）同じ種由来の他の分子を実質的に含んでいない分子、（３）異なる種由来の細胞によって発現された分子、または（４）天然では生じない分子である。すなわち、化学的に合成された分子、または天然にそれが生じる細胞とは異なる細胞系で発現された分子が、その天然付随成分から「単離」されることとなる。当該技術分野において周知の精製法を用いて、分子を、単離により天然付随成分を実質的に含まないものとしてもよい。当該技術分野において周知のいくつかの手段で、分子の純度または均一性を評価することができる。例えば、当該技術分野において周知の方法を用いて、ポリアクリルアミドゲル電気泳動およびゲル染色によりポリペプチドを可視化することで、ポリペプチド試料の純度を評価することができる。ある特定の目的のために、ＨＰＬＣまたは当該技術分野において周知の他の精製手段を用いることで、より高い解像度を得てもよい。
【００５８】
試料の少なくとも約６０％〜７５％が単一のポリペプチド種を示す場合に、タンパク質またはポリペプチドは「実質的に純粋な」、「実質的に均一な」、または「実質的に精製された」ものである。このポリペプチドまたはタンパク質は単量体であっても多量体であってもよい。実質的に純粋なポリペプチドまたはタンパク質は、通常、タンパク質試料の約５０％（Ｗ／Ｗ）、約６０％（Ｗ／Ｗ）、約７０％（Ｗ／Ｗ）、約８０％（Ｗ／Ｗ）、または約９０％（Ｗ／Ｗ）を構成しており、より頻繁には約９５％を構成しており、９９％超純粋となることが好ましい。タンパク質の純度または均一性は、タンパク質試料をポリアクリルアミドゲル電気泳動にかけた後、当該技術分野において周知の染色法によるゲル染色で単一ポリペプチドバンドを可視化するなどの、当該技術分野において周知のいくつかの手段で、示すことができる。ある特定の目的のために、ＨＰＬＣまたは当該技術分野において周知の他の精製手段を用いることで、より高い解像度を得てもよい。
【００５９】
「リンカー」とは、共有結合的に、またはイオン結合、ファンデルワールス結合、もしくは水素結合を通じて、２つの他分子を連結する分子のことをいい、例えば、ある相補的配列の５’末端にハイブリダイズし、さらに、別の相補的配列の３’末端にハイブリダイズすることで、２つの非相補的配列を連結する核酸分子である。「切断可能なリンカー」とは、切断可能なリンカーによって連結されている２つの成分を分離するために、分解または他の方法による切断が可能なリンカーを指す。切断可能なリンカーは一般的には酵素によって切断され、典型的にはペプチダーゼ、プロテアーゼ、ヌクレアーゼ、リパーゼなどによって切断される。切断可能なリンカーは、例えば温度変化、ｐＨ変化、塩濃度変化などの、環境要因によって切断される場合もある。
【００６０】
「標識」または「標識化」という用語は、本明細書で使用される場合、抗体に別の分子を組み込むことをいう。１つの実施形態において、標識は検出可能なマーカーであり、例えば、放射性標識されたアミノ酸の組み込み、またはマークを付けたアビジンにより検出可能なビオチニル部分のポリペプチドへの付加（例えば、光学的方法または熱量測定法（ｃａｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ  ｍｅｔｈｏｄ）で検出可能な蛍光マーカーまたは酵素活性を含むストレプトアビジン）である。別の実施形態において、標識またはマーカーは、治療用の標識またはマーカーとすることができ、例えば、薬剤複合体または毒素である。ポリペプチドおよび糖タンパク質の種々の標識法が、当該技術分野において公知であり、使用されてよい。ポリペプチド用の標識の例として、以下が挙げられるが、これらに限定はされない：放射性同位元素または放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、１５Ｎ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ）、蛍光ラベル（例えば、ＦＩＴＣ蛍光体、ローダミン蛍光体、ランタニド蛍光体）、酵素標識（例えば、西洋わさびペルオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）、化学発光マーカー、ビオチニル基、二次レポーターによって認識される所定のポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体に対する結合部位、金属結合ドメイン、エピトープ標識）、磁性を有する薬剤、例えばガドリニウムキレート、毒素、例えば百日咳毒素、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、エチジウムブロマイド、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド（ｔｅｎｏｐｏｓｉｄｅ）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド類、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシン、並びにこれらのアナログまたはホモログ。いくつかの実施形態において、標識は、起こり得る立体障害を抑制するため、様々な長さのスペーサーアームによって付加される。
【００６１】
用語「免疫療法」とは、がん治療のことをいい、例えば、特定の腫瘍抗原に対する枯渇抗体を用いた治療；抗体薬物複合体を用いた治療；ＣＤ２７６、ＣＤ２７２、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ４０、ＳＩＲＰａ、ＣＤ４７、ＯＸ−４０、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、ＬＡＧ３、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、４−１ＢＢ、ＴＩＭ−３、Ｂ７−Ｈ４、Ｓｉｇｌｅｃ７、Ｓｉｇｌｅｃ８、Ｓｉｇｌｅｃ９、Ｓｉｇｌｅｃ１５、およびＶＩＳＴＡなどの共刺激分子または共抑制分子（免疫チェックポイント）に対するアゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、または阻止抗体を用いた治療；ブリナツモマブなどの二重特異性Ｔ細胞誘導抗体（ＢｉＴＥ（登録商標））を用いた治療：ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、およびＩＦＮ−γなどの生物学的応答調節物質の投与を含む治療；シプロイセルＴなどの治療用ワクチンを用いた治療；樹状細胞ワクチンまたは腫瘍抗原ペプチドワクチンを用いた治療；キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−Ｔ細胞を用いた治療；ＣＡＲ−ＮＫ細胞を用いた治療；腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を用いた治療；養子移植抗腫瘍Ｔ細胞（生体外で増殖された且つ／またはＴＣＲトランスジェニックのＴ細胞）を用いた治療；ＴＡＬＬ−１０４細胞を用いた治療；Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニストＣｐＧおよびイミキモドなどの免疫刺激剤を用いた治療、並びにＢＣＧなどのワクチンを用いた治療が挙げられるが、これらに限定はされず、上記の併用療法はエフェクター細胞による腫瘍細胞の殺傷を増大させ、すなわち、同時に投与された場合、ＩＬ−１５構築物と免疫療法との間には相乗作用が存在する。
【００６２】
「有効量」または「治療有効量」という用語は、本明細書で使用される場合、その症状の１または複数を改善、緩和、軽減、および／または遅延するなど、特定の障害、状態、または疾患を治療するのに十分な化合物または組成物の量を指す。ＮＨＬおよび他のがん、または他の望ましくない細胞の増殖に関して、有効量は、以下に十分な量を含む：（ｉ）がん細胞数の減少；（ｉｉ）腫瘍サイズの減少；（ｉｉｉ）末梢器官へのがん細胞浸潤の阻害、遅滞、ある程度の減速、好ましくは停止；（ｉｖ）腫瘍転移の阻害（すなわち、ある程度の減速、好ましくは停止）；（ｖ）腫瘍増殖の阻害；（ｖｉ）腫瘍の発生および／もしくは再発の抑制または遅延；並びに／または、（ｖｉｉ）がんと関連した症状のうちの１もしくは複数のある程度の軽減。有効量は、一回または複数回の投与で投与することができる。
【００６３】
用語「患者」、「個体」、および「対象」は、同義的に使用されている場合があり、哺乳動物を指し、ヒトまたはヒト以外の霊長類が好ましいが、家畜化された哺乳類（例えば、イヌまたはネコ）、実験用の哺乳類（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ハムスター、モルモット）、および農業用の哺乳類（例えば、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ）を指す場合もある。種々の実施形態において、患者は、病院、精神科医療施設で医師もしくは他の医療従事者の治療を受けている、外来患者としての、または他の臨床状況下の、ヒト（例えば、成人男性、成人女性、青年期男性、青年期女性、男児、女児）とすることができる。種々の実施形態において、患者は、免疫無防備状態の患者または免疫系が弱まった患者としてもよく、例えば、原発性免疫不全症患者、エイズ患者；ある特定の免疫抑制剤を服用しているがん患者および移植患者；並びに、免疫系に影響を及ぼす遺伝病（例えば、先天性無ガンマグロブリン血症、先天性ＩｇＡ欠損症）を有する患者が挙げられるが、これらに限定はされない。種々の実施形態において、患者は免疫原性のがんを有しており、例えば、膀胱がん、肺がん、メラノーマ、および変異率が高いと報告されている他のがん（Ｌａｗｒｅｎｃｅら、Ｎａｔｕｒｅ、４９９巻（７４５７号）：頁２１４−２１８、２０１３年）が挙げられるが、これらに限定はされない。
【００６４】
「医薬組成物」は、哺乳動物における製薬学的用途において好適な組成物を指す。医薬組成物は、薬理学的有効量の活性薬剤と、薬剤的に許容できる担体と、を含む。「薬理学的有効量」とは、意図された薬理学的結果を得るのに有効な薬剤量を指す。「薬剤的に許容できる担体」とは、任意の標準的な医薬担体、溶媒、緩衝液、および医薬品添加物を指し、例えば、リン酸緩衝生理食塩水、５％ブドウ糖水溶液、水中油型エマルションまたは油中水型エマルションなどのエマルション、並びに、様々な種類の湿潤剤および／または補助剤などである。好適な医薬担体および製剤については、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第２１版、２００５年、マック出版社（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ）、イーストン、に記載がある。「薬剤的に許容できる塩」は、製薬学的用途で化合物に配合できる塩であり、例えば、金属塩（ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩など）、アンモニア塩、有機アミン塩が挙げられる。
【００６５】
「投与する」または「投与させる（ｃａｕｓｅ  ｔｏ  ｂｅ  ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ）」という表現は、当該の薬剤／化合物の患者への投与を管理および／または許可する、医療専門家（例えば、医師）、または患者の医学的ケアを管理する人、によって行われる行為を指す。投与させることには、診断、および／または適切な治療レジメンの決定、および／または患者への特定の薬剤／化合物の処方が含まれ得る。このような処方は、例えば、処方箋書式の草案、医療記録の注釈などを包含し得る。投与が本明細書に記載されている場合、「投与させること」も企図される。
【００６６】
「抵抗性または難治性のがん」とは、化学療法、外科手術、放射線療法、幹細胞移植、および免疫療法などをはじめとするこれまでの抗がん治療には反応しない腫瘍細胞またはがんを指す。腫瘍細胞は、治療開始時から抵抗性または難治性である可能性もあるし、治療の中で抵抗性または難治性になる場合もある。難治性の腫瘍細胞には、治療の開始に反応しない、または、短期間の初期反応は示すが、治療に反応はしない、腫瘍が含まれる。難治性の腫瘍細胞には、抗がん治療による治療に反応するが、その後引き続く治療には反応しない腫瘍も含まれる。本発明の目的上、難治性の腫瘍細胞は、抗がん療法による治療で阻害されたように見えたが、治療の中止後に５年以内、場合によっては１０年以内、またはそれ以上の期間以内に再発する腫瘍も包含する。抗がん治療では、化学療法剤単独、放射線単独、標的療法単独、外科手術単独、またはこれらの組み合わせが使用できる。説明の簡略化のためであり、限定を目的としたものではないが、上記の難治性腫瘍細胞は抵抗性腫瘍と交換可能であると理解されたい。
【００６７】
「治療する」、「治療すること」、および「治療」という用語は、生物学的な障害および／またはその付随症状の少なくとも１つを軽減または取り除く方法を指す。本明細書で使用される場合、疾患、障害、または状態を「軽減する」とは、当該疾患、障害、または状態の症状の重症度および／または発生頻度を低減させることを意味する。さらに、本明細書における「治療」に関する記載は、治癒的、対症的および予防的な治療に関する記載を包含する。
【００６８】
本明細書に記載の本開示の態様および実施形態は、態様および実施形態「からなるもの」、および／または態様および実施形態「から本質的になるもの」、を包含すると理解される。
【００６９】
本明細書における「約」値またはパラメーターを指す記載は、その値またはパラメーターそれ自体を対象とした変動を包含（および説明）する。例えば、「約Ｘ」を指す記載は、「Ｘ」という記載を包含する。
【００７０】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、文脈によって特に明示されていない限り、「ａ」、「または（ｏｒ）」、および「ｔｈｅ」といった単数形は複数形を包含する。本明細書に記載の本開示の態様および変更形態は、態様および変更形態「からなるもの」、および／または態様および変更形態「から本質的になるもの」、を包含すると理解される。
【００７１】
ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ複合体
インターロイキン−１５（ＩＬ−１５）は、抗ＩＬ−２中和抗体の存在下でＩＬ−２依存性ＣＴＬＬ−２  Ｔ細胞株の増殖を刺激する能力に基づいて、２つの別個のグループにより同定されたサイトカインである（Ｓｔｅｅｌら、Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、３３巻（１号）：頁３５−４１、２０１２年）。ＩＬ−１５およびインターロイキン−２（ＩＬ−２）は、受容体（Ｒ）シグナル伝達成分（ＩＬ−２／１５Ｒβγｃ）の共有にみられるように、インビトロにおいて同様の生物学的特性を有する。しかし、ＩＬ−２に対するＩＬ−１５の特殊性が独自の私有のα鎖受容体によってもたらされ、このα鎖受容体によりヘテロ三量体型の高親和性受容体複合体であるＩＬ−１５ＲαβγおよびＩＬ−２Ｒαβγが完成されることで、リガンドおよび発現された高親和性受容体に依存した応答性の差異が生じる。興味深いことに、ＩＬ−１５転写物およびＩＬ−１５Ｒα転写物は共に、ＩＬ−２／ＩＬ−２Ｒαよりもかなり広い組織分布を有する。さらに、複数の複雑な転写後制御機構がＩＬ−１５発現を厳密に制御している。すなわち、ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒαの発現の複雑な制御と、さらには発現パターンの差異から、この受容体／リガンド対の重要なインビボ機能は、ＩＬ−２とＩＬ−２Ｒαの機能とは異なる可能性がある。ＩＬ−１５の生物学的特性を調べている研究によって、現在までに、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ−Ｔ細胞、および小腸上皮内リンパ細胞の発生および機能におけるＩＬ−１５の重要性など、いくつかの重要な非冗長的な役割が確認されている。関節リウマチなどの自己免疫プロセスや、成人Ｔ細胞白血病などの悪性腫瘍におけるＩＬ−１５の役割から、ＩＬ−１５の調節異常は宿主に有害作用をもたらす恐れが示唆される（Ｆｅｈｎｉｇｅｒら、Ｂｌｏｏｄ、９７巻：頁１４−３２、２００１年）。
【００７２】
本明細書で使用される場合、「ネイティブＩＬ−１５」および「ネイティブインターロイキン−１５」という用語は、タンパク質またはポリペプチドの文脈の中で、未成熟型または前駆型、および成熟型を包含して、任意の天然哺乳類インターロイキン−１５アミノ酸配列を指す。種々のネイティブ哺乳類インターロイキン−１５種のアミノ酸配列のＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号の非限定例としては、ＮＰ＿０００５７６（ヒト、未成熟型）、ＣＡＡ６２６１６（ヒト、未成熟型）、ＮＰ＿００１００９２０７（イエネコ（Ｆｅｌｉｓ  ｃａｔｕｓ）、未成熟型）、ＡＡＢ９４５３６（ラッタス属、未成熟型）、ＡＡＢ４１６９７（ラッタス属、未成熟型）、ＮＰ＿０３２３８３（ハツカネズミ（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）、未成熟型）、ＡＡＲ１９０８０（イヌ）、ＡＡＢ６０３９８（アカゲザル（Ｍａｃａｃａ  ｍｕｌａｔｔａ）、未成熟型）、ＡＡＩ００９６４（ヒト、未成熟型）、ＡＡＨ２３６９８（ハツカネズミ（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）、未成熟型）、およびＡＡＨ１８１４９（ヒト）が挙げられる。本発明の種々の実施形態において、ネイティブＩＬ−１５は、天然哺乳類ＩＬ−１５の未成熟型または前駆型である。他の実施形態において、ネイティブＩＬ−１５は、天然哺乳類ＩＬ−１５の成熟型である。種々の実施形態において、ネイティブＩＬ−１５は、天然ヒトＩＬ−１５の前駆型である。種々の実施形態において、ネイティブＩＬ−１５は、天然ヒトＩＬ−１５の成熟型である。種々の実施形態において、ネイティブＩＬ−１５タンパク質／ポリペプチドは、単離または精製されたものである。種々の実施形態において、ＩＬ−１５ドメインは、下記の配列番号１に記載のヒトＩＬ−１５前駆体配列のアミノ酸配列に由来するものである：
ＭＲＩＳＫＰＨＬＲＳＩＳＩＱＣＹＬＣＬＬＬＮＳＨＦＬＴＥＡＧＩＨＶＦＩＬＧＣＦＳＡＧＬＰＫＴＥＡＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号１）
【００７３】
ＩＬ−１５受容体は、ベータ（β）・ガンマ（γ）サブユニット（ＩＬ−２受容体と共有）と、アルファ（α）サブユニット（ＩＬ−１５と高親和性で結合）と、からなるＩ型サイトカイン受容体である。完全長ヒトＩＬ−１５Ｒαは、３２アミノ酸長のシグナルペプチド、１７３アミノ酸長の細胞外ドメイン、２１アミノ酸長の膜貫通領域、３７アミノ酸長の細胞質側末端、および複数のＮ結合型またはＯ結合型糖鎖付加部位を有するタイプ１膜貫通型タンパク質である（Ａｎｄｅｒｓｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ、２７０巻：頁２９８６２−２９８６９、１９９５年）。以前に、ＩＬ−１５Ｒαの細胞外ドメイン全体に相当するＩＬ−１５Ｒα鎖の天然可溶型が、高親和性のＩＬ−１５アンタゴニストとして働くことが明らかにされた。しかし、その知見とは際立って対照的であることに、ＩＬ−１５に対する結合親和性の大部分を占める、ＩＬ−１５Ｒαの組換え型の可溶性ｓｕｓｈｉドメインが、ＩＬ−１５Ｒβ／γヘテロ二量体を介したＩＬ−１５の結合性および生物学的効果（増殖およびアポトーシスからの保護）を増強することで強力なＩＬ−１５アゴニストとして働き、一方で三分子型ＩＬ−１５Ｒα／β／γ膜受容体のＩＬ−１５結合性と機能には影響を与えないことが明らかとなった。これらの結果から、天然に産生されている場合、このような可溶性ｓｕｓｈｉドメインがＩＬ−１５のトランスプレゼンテーション機構に関与している可能性が示唆された（Ｍｏｒｔｉｅｒら、Ｊ．Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ、２８１巻（３号）：頁１６１２−１６１９、２００６年）。
【００７４】
本明細書で使用される場合、「ネイティブＩＬ−１５Ｒα」および「ネイティブインターロイキン−１５受容体α」という用語は、タンパク質またはポリペプチドの文脈の中で、未成熟型または前駆型、成熟型および天然アイソフォームを包含して、任意の天然哺乳類インターロイキン−１５受容体α（「ＩＬ−１５Ｒα」）アミノ酸配列を指す。種々のネイティブ哺乳類ＩＬ−１５Ｒαのアミノ酸配列のＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号の非限定例としては、ＮＰ＿００２１８０（ヒト）、ＡＢＫ４１４３８（アカゲザル（Ｍａｃａｃａ  ｍｕｌａｔｔａ））、ＮＰ＿０３２３８４（ハツカネズミ（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ））、Ｑ６０８１９（ハツカネズミ（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ））、Ｑ１３２６１（ヒト）が挙げられる。種々の実施形態において、ネイティブＩＬ−１５Ｒαは、天然哺乳類ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドの未成熟型である。種々の実施形態において、ネイティブＩＬ−１５Ｒαは、天然哺乳類ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドの成熟型である。種々の実施形態において、ネイティブＩＬ−１５Ｒαは、天然哺乳類ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドの一形態である。種々の実施形態において、ネイティブＩＬ−１５Ｒαは、天然哺乳類ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドの完全長形態である。種々の実施形態において、ネイティブＩＬ−１５Ｒαは、天然ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドの未成熟型である。種々の実施形態において、ネイティブＩＬ−１５Ｒαは、天然ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドの成熟型である。種々の実施形態において、ネイティブＩＬ−１５Ｒαは、天然ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドの形態である。種々の実施形態において、ネイティブＩＬ−１５Ｒαは、天然ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドの完全長形態である。種々の実施形態において、ネイティブＩＬ−１５Ｒαタンパク質またはポリペプチドは、単離または精製されたものである。種々の実施形態において、ＩＬ−１５Ｒαドメインは、下記の配列番号３に記載のヒトＩＬ−１５Ｒα配列のアミノ酸配列に由来するものである：
ＭＡＰＲＲＡＲＧＣＲＴＬＧＬＰＡＬＬＬＬＬＬＬＲＰＰＡＴＲＧＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＰＡＬＶＨＱＲＰＡＰＰＳＴＶＴＴＡＧＶＴＰＱＰＥＳＬＳＰＳＧＫＥＰＡＡＳＳＰＳＳＮＮＴＡＡＴＴＡＡＩＶＰＧＳＱＬＭＰＳＫＳＰＳＴＧＴＴＥＩＳＳＨＥＳＳＨＧＴＰＳＱＴＴＡＫＮＷＥＬＴＡＳＡＳＨＱＰＰＧＶＹＰＱＧＨＳＤＴＴＶＡＩＳＴＳＴＶＬＬＣＧＬＳＡＶＳＬＬＡＣＹＬＫＳＲＱＴＰＰＬＡＳＶＥＭＥＡＭＥＡＬＰＶＴＷＧＴＳＳＲＤＥＤＬＥＮＣＳＨＨＬ（配列番号３）
【００７５】
種々の実施形態において、ネイティブＩＬ−１５Ｒαは、天然ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドの完全細胞外形態である。種々の実施形態において、ネイティブＩＬ−１５Ｒαタンパク質またはポリペプチドは、単離または精製されたものである。種々の実施形態において、ＩＬ−１５Ｒα細胞外ドメインは、下記の配列番号４に記載のヒトＩＬ−１５Ｒα配列のアミノ酸配列に由来するものである：
ＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＰＡＬＶＨＱＲＰＡＰＰＳＴＶＴＴＡＧＶＴＰＱＰＥＳＬＳＰＳＧＫＥＰＡＡＳＳＰＳＳＮＮＴＡＡＴＴＡＡＩＶＰＧＳＱＬＭＰＳＫＳＰＳＴＧＴＴＥＩＳＳＨＥＳＳＨＧＴＰＳＱＴＴＡＫＮＷＥＬＴＡＳＡＳＨＱＰＰＧＶＹＰＱＧＨＳＤＴＴ（配列番号４）
【００７６】
種々の実施形態において、本発明のＩＬ−１５融合タンパク質は、ＩＬ−１５ドメインが下記の配列番号２に記載の成熟ヒトＩＬ−１５ポリペプチドのアミノ酸配列を含み：
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号２）、
ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉドメインが下記の配列番号５に記載の成熟ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドのアミノ酸配列を含む：
ＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＰＡＬＶＨＱＲＰＡＰＰ（配列番号５）、
ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ複合体を含む。
【００７７】
種々の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ複合体のＩＬ−１５ドメインは、配列番号２に記載の成熟ヒトＩＬ−１５ポリペプチドの配列に由来する配列を含むＩＬ−１５バリアント（または変異体）となる。ＩＬ−１５のバリアント（または変異体）は、元のアミノ酸、成熟配列内での上記元のアミノ酸の位置、およびバリアント型のアミノ酸、を用いて呼称される。例えば、「ｈｕＩＬ−１５Ｓ５８Ｄ」は、配列番号２の５８位にＳからＤへの置換を含むヒトＩＬ−１５を表す。種々の実施形態において、ＩＬ−１５バリアントは、ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドと結合し、ＩＬ−１５のアゴニストまたはアンタゴニストとして機能する。種々の実施形態において、アゴニスト活性を有するＩＬ−１５バリアントは、スーパーアゴニスト活性を有する。種々の実施形態において、ＩＬ−１５バリアントは、ＩＬ−１５Ｒαとの結び付きとは無関係に、ＩＬ−１５のアゴニストまたはアンタゴニストとして機能できる。ＩＬ−１５アゴニストは、野生型ＩＬ−１５と比較した場合の同等または増加した生物活性により例証される。ＩＬ−１５アンタゴニストは、野生型ＩＬ−１５と比較した場合の生物活性の減少、またはＩＬ−１５介在反応を阻害する能力により例証される。種々の実施形態において、ＩＬ−１５バリアントは、増加または減少した活性で、ＩＬ−１５ＲβγＣ受容体に結合する。種々の実施形態において、ＩＬ−１５バリアントの配列は、ネイティブＩＬ−１５配列と比較した場合に、少なくとも１つのアミノ酸変化、例えば置換または欠失、を有し、このような変化により、ＩＬ−１５アゴニスト活性またはＩＬ−１５アンタゴニスト活性が得られる。種々の実施形態において、アミノ酸置換／欠失は、ＩＬ−１５Ｒβおよび／またはγＣと相互作用するＩＬ−１５のドメイン内にある。種々の実施形態において、アミノ酸置換／欠失は、ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドへの結合性にも、ＩＬ−１５バリアントの産生にも、影響を与えない。ＩＬ−１５バリアントを作製するのに好適なアミノ酸置換／欠失は、既知のＩＬ−１５構に基づいて、ＩＬ−１５と構造既知のＩＬ−２などの類似分子との比較に基づいて、本明細書で提供されるような、合理的もしくは無作為の変異誘発と機能分析を通じて、または他の経験的方法を通じて、特定することができる。さらに、好適なアミノ酸置換は、保存的な変化および追加のアミノ酸の挿入とすることもできるし、非保存的な変化および追加のアミノ酸の挿入とすることもできる。種々の実施形態において、本発明のＩＬ−１５バリアントは、配列番号２に記載の成熟ヒトＩＬ−１５配列の３０位、３１位、３２位、６２位、６３位、６７位、６８位、または１０８位に、１または２以上のアミノ酸置換／欠失を含有する。種々の実施形態において、Ｄ３０Ｔ（「Ｄ３０」は、ネイティブ成熟ヒトＩＬ−１５配列内のアミノ酸「Ｄ」と残基位置「３０」位を指し、「Ｔ」はＩＬ−１５バリアント内のその位置における置換後のアミノ酸残基を指す）置換、Ｖ３１Ｙ置換、Ｈ３２Ｅ置換、Ｔ６２Ｄ置換、Ｉ６８Ｆ置換、またはＱ１０８Ｍ置換は、アンタゴニスト活性を有するＩＬ−１５バリアントを生じ、Ｓ５８Ｄ置換は、アゴニスト活性を有するＩＬ−��５バリアントを生じる。
【００７８】
種々の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ複合体のＩＬ−１５ドメインは、１１１位〜１１４位に欠失があるヒトＩＬ−１５バリアントポリペプチド（配列番号３９）となる。種々の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ複合体のＩＬ−１５ドメインは、１０９位〜１１４位に欠失があるヒトＩＬ−１５バリアントポリペプチド（配列番号４０）となる。種々の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ複合体のＩＬ−１５ドメインは、１０８位〜１１４位に欠失があるヒトＩＬ−１５バリアントポリペプチド（配列番号４１）となる。種々の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ複合体のＩＬ−１５ドメインは、１０５位〜１１４位に欠失があるヒトＩＬ−１５バリアントポリペプチド（配列番号４２）となる。種々の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ複合体のＩＬ−１５ドメインは、Ｎ９５位の後に「ＧＳ」挿入を有するヒトＩＬ−１５バリアントポリペプチド（配列番号４３）となる。種々の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ複合体のＩＬ−１５ドメインは、Ｎ９５位の後に「ＧＧＳＧＧ」挿入を有するヒトＩＬ−１５バリアントポリペプチド（配列番号４４）となる。種々の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ複合体のＩＬ−１５ドメインは、Ｎ９５位の後に「ＧＳＳＧＧＳＧＧＳ」挿入を有するヒトＩＬ−１５バリアントポリペプチド（配列番号４５）となる。
【００７９】
Ｆｃドメイン
ＩｇＧクラスの免疫グロブリンはヒト血液中で最も豊富なタンパク質である。ＩｇＧクラス免疫グロブリンの循環血中半減期は２１日間もの長さに達し得る。ＩｇＧのＦｃ領域を種々のサイトカインや受容体などの別のタンパク質のドメインと組み合わせた、融合タンパク質の報告がある（例えば、Ｃａｐｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３３７巻：頁５２５−５３１、１９８９年；Ｃｈａｍｏｗら、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、１４巻：頁５２−６０、１９９６年）；米国特許第５，１１６，９６４号および同第５，５４１，０８７号を参照）。融合タンパク質の原型は、ＩｇＧのＦｃのヒンジ領域内のシステイン残基を介して連結された、重鎖の可変領域およびＣＨ１ドメインと軽鎖がないＩｇＧ分子に似た分子となった、ホモ二量体タンパク質である。Ｆｃドメインを含む融合タンパク質の二量体特性は、他の分子とのより高次の相互作用（すなわち二価または二重特異的結合）を実現する際に有利となり得る。構造的な相同性により、Ｆｃ融合タンパク質は、同様のアイソタイプをもつヒトＩｇＧと同等のインビボ薬物動態プロファイルを示す。
【００８０】
用語「Ｆｃ」は、単量体形態であっても多量体形態であってもよい、全長抗体の非抗原結合性断片の配列を含む分子または配列を指す。ネイティブＦｃのオリジナルとなる免疫グロブリン供給源は、ヒト由来のものが好ましく、任意の免疫グロブリンであってよい。ネイティブＦｃは、共有結合的結合（すなわち、ジスルフィド結合）および非共有結合的結合により、連結されて二量体形態または多量体形態になり得る、単量体ポリペプチドから構成される。ネイティブＦｃ分子の単量体サブユニット間の分子間ジスルフィド結合の数は、クラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ）またはサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＡ１、ＩｇＧＡ２）に応じて、１〜４の幅がある。ネイティブＦｃの一例として、ＩｇＧのパパイン分解から生じるジスルフィド結合二量体がある（Ｅｌｌｉｓｏｎら、（１９８２年）、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、１０巻：頁４０７１−９）。用語「ネイティブＦｃ」とは、本明細書で使用される場合、単量体形態、二量体形態、および多量体形態の総称である。プロテインＡに対する結合部位、プロテインＧに対する結合部位、種々のＦｃ受容体に対する結合部位、および補体タンパク質に対する結合部位を含有するＦｃドメイン。
【００８１】
種々の実施形態において、用語「Ｆｃバリアント」とは、ネイティブＦｃから改変を受けたが、サルベージ受容体であるＦｃＲｎに対する結合部位を尚も含んでいる、分子または配列を指す。国際公開第９７／３４６３１号（１９９７年９月２５日に公開）および国際公開第９６／３２４７８号には、例示的なＦｃバリアント、およびサルベージ受容体との相互作用に関する記載があり、当該国際公開は参照により本明細書に援用される。さらに、ネイティブＦｃは、本発明の融合分子には必要とされない構造的特徴または生物活性を与えることから、除去されてもよい部位を含む。すなわち、種々の実施形態においては、用語「Ｆｃバリアント」は、以下に影響または関与する１または複数のネイティブＦｃ部位または残基を欠く分子または配列を含む：（１）ジスルフィド結合形成、（２）選択された宿主細胞との不適合性、（３）選択された宿主細胞における発現後のＮ末端の異種性、（４）グリコシル化、（５）補体との相互作用、（６）サルベージ受容体以外のＦｃ受容体への結合、または、（７）抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）。
【００８２】
用語「Ｆｃドメイン」は、上記で定義された、ネイティブＦｃおよびＦｃバリアントの分子および配列を包含する。ＦｃバリアントおよびネイティブＦｃと同様、用語「Ｆｃドメイン」は、全長抗体から消化された、または組換え遺伝子発現もしくは他の手段で生成された、単量体形態または多量体形態の、分子を包含する。
【００８３】
一つの態様では、本発明のＩＬ−１５融合タンパク質は、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ複合体と、当該ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ複合体に直接またはペプチドリンカー配列を介して結合している少なくとも１つの異種タンパク質と、を含むことにより、ＩＬ−１５融合タンパク質を形成している。本明細書で使用される場合、用語「融合タンパク質」とは、組換えＤＮＡ技術により結合された異種ポリペプチドを有するタンパク質を指す。種々の実施形態において、異種タンパク質はＦｃドメイン（またはその機能性断片）であり、得られる融合タンパク質はＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ複合体−Ｆｃ融合タンパク質である。種々の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ複合体は、融合分子に延長された半減期を与える少なくとも１つのポリペプチドに融合されている。このようなポリペプチドとしては、ＩｇＧ  Ｆｃもしくは新生児Ｆｃγ／受容体に結合する他のポリペプチド、ヒト血清アルブミン、または、ＦｃＲｎに対する定常ドメインもしくは断片の親和性を増大させる１もしくは複数のアミノ酸改変を有する、ＩｇＧ定常ドメイン、もしくはＦｃＲｎと結合するその一部の存在によって、延長されたインビボ半減期を有する、ＩｇＧ、ＩｇＧ以外の免疫グロブリン、タンパク質、および非タンパク質薬剤をはじめとする、長い血中半減期を有するタンパク質に結合するポリペプチド、が挙げられる。このような、延長された半減期を有するタンパク質および分子は、そのような分子の治療的、予防的、または診断的な使用において、必要とされる量および／または投与頻度が少なくなるという利点がある（例えば、米国特許第７，６５８，９２１号参照）。種々の実施形態において、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメイン、ヒトＩｇＧ２のＦｃドメイン、ヒトＩｇＧ３のＦｃドメイン、ヒトＩｇＧ４のＦｃドメイン、ＩｇＡのＦｃドメイン、ＩｇＤのＦｃドメイン、ＩｇＥのＦｃドメイン、ＩｇＧのＦｃドメイン、およびＩｇＭのＦｃドメインからなる群から選択されるか、またはこれらの任意の組み合わせである。種々の実施形態において、Ｆｃドメインは、補体結合特性またはＦｃ受容体結合特性が変化したＦｃドメインをもたらすアミノ酸変化を含む。補体結合特性またはＦｃ受容体結合特性が変化したＦｃドメインを生成するアミノ酸変化は、当該技術分野において公知である。
【００８４】
種々の実施形態において、二量体型ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体−Ｆｃ融合タンパク質の作製に使用されるＦｃドメイン配列は、以下の配列番号６に記載のヒトＩｇＧ１−Ｆｃドメイン配列であり：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号６）、
配列番号６は、ＦｃγＲの結合やＣ１ｑの結合を断つアミノ酸置換（下線部）を含む。
【００８５】
種々の実施形態において、一価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体−Ｆｃ融合タンパク質の作製に使用されるヘテロ二量体Ｆｃドメイン配列は、以下の配列番号７に記載のＫｎｏｂ−Ｆｃドメイン配列であり：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号７）、
配列番号７は、ＦｃγＲの結合やＣ１ｑの結合を断つアミノ酸置換（下線部）を含む。
【００８６】
種々の実施形態において、一価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体−Ｆｃ融合タンパク質の作製に使用されるヘテロ二量体Ｆｃドメイン配列は、以下の配列番号８に記載のＨｏｌｅ−Ｆｃドメイン配列であり：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号８）、
配列番号８は、ＦｃγＲの結合やＣ１ｑの結合を断つアミノ酸置換（下線部）を含む。
リンカー
【００８７】
種々の実施形態において、異種タンパク質（例えば、Ｆｃドメイン）は、ポリペプチドリンカー配列によって、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ複合体のＩＬ−１５ポリペプチド（またはその機能性断片）に共有結合的に連結されている。種々の実施形態において、リンカーは、二次構造が比較的少ない、５個、１０個、１５個、２０個、３０個、４０個（またはその間の数字）、またはそれ以上のアミノ酸からなる人工配列であり得る。種々の実施形態において、リンカーは、Ｇ／Ｓ含量が豊富である（例えば、リンカー内の少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％、またはそれ以上のアミノ酸がＧまたはＳである）。種々の実施形態において、リンカーは、配列番号９〜１２および配列番号４７に記載の配列の群から選択される。各々のペプチドリンカー配列は独立して選択できる。
【００８８】
新規のＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ複合体−Ｆｃ融合タンパク質の例
種々の実施形態において、本発明のＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質（以後、「Ｐ−０１５３」とも称する）は、下記の配列番号１３に記載のアミノ酸配列を有する第１鎖（Ｈｏｌｅ−Ｆｃ−リンカー−ＩＬ−１５）：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＳＰＰＳＰＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号１３）、
（ここで、ＩＬ−１５ドメイン配列は下線が引かれており、ペプチドリンカー配列は太字となっている）と；
下記の配列番号１４に記載のアミノ酸配列を有する第２鎖（Ｋｎｏｂ−Ｆｃ−リンカー−ＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋）：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＳＰＰＳＰＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＰＡＬＶＨＱＲＰＡＰＰ（配列番号１４）
（ここで、ＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋ドメイン配列は下線が引かれており、ペプチドリンカー配列は太字となっている）と、を含む。
【００８９】
種々の実施形態において、本発明のＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質（以後、「Ｐ−０１５６」とも称する）は、下記の配列番号１５に記載のアミノ酸配列を有する第１鎖（ＩＬ−１５−リンカー−Ｈｏｌｅ−Ｆｃ）：
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳＧＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１５）
（ここで、ＩＬ−１５ドメイン配列は下線が引かれており、ペプチドリンカー配列は太字となっている）と；
下記の配列番号１６に記載のアミノ酸配列を有する第２鎖（ＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋−リンカー−Ｋｎｏｂ−Ｆｃ）：
ＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＰＡＬＶＨＱＲＰＡＰＰＧＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１６）
（ここで、ＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋ドメイン配列は下線が引かれており、ペプチドリンカー配列は太字となっている）と、を含む。
【００９０】
種々の実施形態において、本発明のＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質（以後、「Ｐ−０１５５」とも称する）は、下記の配列番号１８に記載のアミノ酸配列を有する第１鎖（Ｈｏｌｅ−Ｆｃ−リンカー−ＩＬ−１５）：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号１８）
（ここで、ＩＬ−１５ドメイン配列は下線が引かれており、ペプチドリンカー配列は太字となっている）と；
下記の配列番号１７に記載のアミノ酸配列を有する第２鎖（Ｋｎｏｂ−Ｆｃ−リンカー−ＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋）：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＰＡＬＶＨＱＲＰＡＰＰ（配列番号１７）
（ここで、ＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋ドメイン配列は下線が引かれており、ペプチドリンカー配列は太字となっている）と、を含む。
【００９１】
種々の実施形態において、本発明の一価ＩＬ−１５−Ｆｃ融合タンパク質（以後、「Ｐ−０１６２」とも称する）は、配列番号１３に記載のアミノ酸配列を有する第１鎖（Ｈｏｌｅ  Ｆｃ−リンカー−ＩＬ−１５）と、配列番号７に記載のアミノ酸配列を有する第２鎖（Ｋｎｏｂ−Ｆｃ）と、を含む。
【００９２】
種々の実施形態において、本発明の二価ＩＬ−１５−Ｆｃ融合タンパク質（以後、「Ｐ−０１６７」とも称する）は、配列番号１３に記載のアミノ酸配列を有する第１鎖（Ｈｏｌｅ  Ｆｃ−リンカー−ＩＬ−１５）と、下記の配列番号５５に記載のアミノ酸配列を有する第２鎖（Ｋｎｏｂ−Ｆｃ−リンカー−ＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋）と、を含む：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＳＰＰＳＰＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号５５）
（ここで、ＩＬ−１５ドメイン配列は下線が引かれており、ペプチドリンカー配列は太字となっている）。
【００９３】
種々の実施形態において、本発明の一価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質（以後、「Ｐ−０１９７」とも称する）は、配列番号１３に記載のアミノ酸配列を有する第１鎖（Ｈｏｌｅ−Ｆｃ−リンカー−ＩＬ−１５）と、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有する第２鎖（ＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋）と、配列番号７に記載のアミノ酸配列を有する第３鎖（Ｋｎｏｂ−Ｆｃ）と、を含む。
【００９４】
種々の実施形態において、本発明の二価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質（以後、「Ｐ−０１９８」とも称する）は、配列番号１３に記載のアミノ酸配列を有する第１鎖（Ｈｏｌｅ−Ｆｃ−リンカー−ＩＬ−１５）と、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有する第２鎖（ＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋）と、配列番号５５に記載のアミノ酸配列を有する第３鎖（Ｋｎｏｂ−Ｆｃ−リンカー−ＩＬ−１５）と、を含む。
【００９５】
種々の実施形態において、本発明の一価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質（以後、「Ｐ−０２０１」とも称する）は、配列番号１５に記載のアミノ酸配列を有する第１鎖（ＩＬ−１５−リンカー−Ｈｏｌｅ−Ｆｃ）と、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有する第２鎖（ＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋）と、配列番号７に記載のアミノ酸配列を有する第３鎖（Ｋｎｏｂ−Ｆｃ）と、を含む。
【００９６】
種々の実施形態において、本発明の一価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質（以後、「Ｐ−０２０７」とも称する）は、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を有する第１鎖（Ｈｏｌｅ−Ｆｃ−リンカー−ＩＬ−１５）と、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有する第２鎖（ＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋）と、配列番号７に記載のアミノ酸配列を有する第３鎖（Ｋｎｏｂ−Ｆｃ）と、を含む。
【００９７】
種々の実施形態において、本発明の一価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質（以後、「Ｐ−０２１７」とも称する）は、下記の配列番号５４に記載のアミノ酸配列を有する第１鎖（Ｈｏｌｅ−Ｆｃ−リンカー−ＩＬ−１５）：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号５４）
（ここで、ＩＬ−１５ドメイン配列は下線が引かれており、ペプチドリンカー配列は太字となっている）と；配列番号５に記載のアミノ酸配列を有する第２鎖（ＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋）と、配列番号７に記載のアミノ酸配列を有する第３鎖（Ｋｎｏｂ−Ｆｃ）と、を含む。
【００９８】
種々の実施形態において、本発明の一価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）複合体−Ｆｃ融合タンパク質（以後、「Ｐ−０２１９」とも称する）は、配列番号５４に記載のアミノ酸配列を有する第１鎖（Ｈｏｌｅ−Ｆｃ−リンカー−ＩＬ−１５）と、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有する第２鎖（ＩＬ−１５Ｒ&#120572;−ＥＣＤ）と、配列番号７に記載のアミノ酸配列を有する第３鎖（Ｋｎｏｂ−Ｆｃ）と、を含む。
【００９９】
種々の実施形態において、本発明の一価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質（以後、「Ｐ−０２２１」とも称する）は、下記の配列番号１９に記載のアミノ酸配列を有する第１鎖（ＩＬ−１５−リンカー−Ｈｏｌｅ−Ｆｃ）：
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号：１９）
（ここで、ＩＬ−１５ドメイン配列は下線が引かれており、ペプチドリンカー配列は太字となっている）と；配列番号５に記載のアミノ酸配列を有する第２鎖（ＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋）と、配列番号７に記載のアミノ酸配列を有する第３鎖（Ｋｎｏｂ−Ｆｃ）と、を含む。
【０１００】
種々の実施形態において、本発明の一価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質（以後、「Ｐ−０２２２」とも称する）は、配列番号１９に記載のアミノ酸配列を有する第１鎖（ＩＬ−１５−リンカー−Ｈｏｌｅ−Ｆｃ）と、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有する第２鎖（ＩＬ−１５Ｒα−ＥＣＤ）と、配列番号７に記載のアミノ酸配列を有する第３鎖（Ｋｎｏｂ−Ｆｃ）と、を含む。
【０１０１】
種々の実施形態において、本発明の二価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質（以後、「Ｐ−０２３４」とも称する）は、下記の配列番号２０に記載のアミノ酸配列を有する第１鎖（Ｆｃ−リンカー−ＩＬ−１５）：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号２０）
（ここで、ＩＬ−１５ドメイン配列は下線が引かれており、ペプチドリンカー配列は太字となっている）と；
配列番号５に記載のアミノ酸配列を有する第２鎖（ＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋）と、を含む。
【０１０２】
種々の実施形態において、本発明の二価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質（以後、「Ｐ−０２２３」とも称する）は、下記の配列番号２１に記載のアミノ酸配列を有する第１鎖（ＩＬ−１５−リンカー−Ｆｃ）：
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２１）
（ここで、ＩＬ−１５ドメイン配列は下線が引かれており、ペプチドリンカー配列は太字となっている）と；
配列番号５に記載のアミノ酸配列を有する第２鎖（ＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋）と、を含む。
【０１０３】
種々の実施形態において、本発明の二価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質（以後、「Ｐ−０２２０」とも称する）は、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を有する第１鎖（Ｆｃ−リンカー−ＩＬ−１５）と、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有する第２鎖（ＩＬ−１５Ｒα−ＥＣＤ）と、を含む。
【０１０４】
種々の実施形態において、本発明の二価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質（以後、「Ｐ−０２２４」とも称する）は、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を有する第１鎖（ＩＬ−１５−リンカー−Ｆｃ）と、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有する第２鎖（ＩＬ−１５Ｒα−ＥＣＤ）と、を含む。
【０１０５】
種々の実施形態において、本発明の一価ＩＬ−１５（非共有結合性）／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質（以後、「Ｐ−０１６５」とも称する）は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有する第１鎖（ＩＬ−１５）と、配列番号１４に記載のアミノ酸配列を有する第２鎖（Ｋｎｏｂ−Ｆｃ−リンカー−ＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋）と、配列番号８に記載のアミノ酸配列を有する第３鎖（Ｈｏｌｅ−Ｆｃ）と、を含む。
【０１０６】
種々の実施形態において、本発明の一価ＩＬ−１５（非共有結合性）／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質（以後、「Ｐ−０１６６」とも称する）は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有する第１鎖（ＩＬ−１５）と、下記の配列番号２２に記載のアミノ酸配列を有する第２鎖（Ｋｎｏｂ−Ｆｃ−リンカー−ＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋）：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＰＡＬＶＨＱＲＰＡＰＰ（配列番号２２）
（ここで、ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉドメイン配列は下線が引かれており、ペプチドリンカー配列は太字となっている）と；配列番号８に記載のアミノ酸配列を有する第３鎖（Ｈｏｌｅ−Ｆｃ）と、を含む。
【０１０７】
種々の実施形態において、本発明の二価ＩＬ−１５（非共有結合性）／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質（以後、「Ｐ−０２１８」とも称する）は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有する第１鎖（ＩＬ−１５）と、下記の配列番号２３に記載のアミノ酸配列を有する第２鎖（Ｆｃ−リンカー−ＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋）：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＰＡＬＶＨＱＲＰＡＰＰ（配列番号２３）
（ここで、ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉドメイン配列は下線が引かれており、ペプチドリンカー配列は太字となっている）と、を含む。
【０１０８】
種々の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ複合体は、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、および配列番号４５に記載の配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＩＬ−１５バリアントを含む。
【０１０９】
種々の実施形態において、本発明の二価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質（以後、「Ｐ−０３１３」とも称する）は、下記の配列番号４６に記載のアミノ酸配列を有する第１鎖（Ｆｃ−リンカー−ＩＬ−１５−Ｓ５８Ｄ）：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＤＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号４６）
（ここで、ＩＬ−１５  Ｓ５８Ｄバリアント配列は下線が引かれており、ペプチドリンカー配列は太字となっている）と；配列番号５に記載のアミノ酸配列を有する第２鎖（ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ）と、を含む。
【０１１０】
種々の実施形態において、本発明のＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ複合体−Ｆｃ融合タンパク質（以後、「Ｐ−０３１４」とも称する）は、配列番号２３に記載のアミノ酸配列を有する第１鎖（Ｆｃ−リンカー−ＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋）と、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を有する第２鎖（ＩＬ−１５  Ｓ５８Ｄ）と、を含む。
【０１１１】
種々の実施形態において、本発明の一価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質（以後、「Ｐ−０６６６」とも称する）は、下記の配列番号４８に記載のアミノ酸配列を有する第１鎖（Ｈｏｌｅ−Ｆｃ−リンカー−ＩＬ−１５−Ｓ５８Ｄ）：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＤＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号４８）
（ここで、ＩＬ−１５ドメイン配列は下線が引かれており、ペプチドリンカー配列は太字となっている）と；配列番号５に記載のアミノ酸配列を有する第２鎖（ＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋）と、配列番号７に記載のアミノ酸配列を有する第３鎖（Ｋｎｏｂ−Ｆｃ）と、を含む。
【０１１２】
種々の実施形態において、本発明の一価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質（以後、「Ｐ−０６６７」とも称する）は、下記の配列番号４９に記載のアミノ酸配列を有する第１鎖（ＩＬ−１５−Ｓ５８Ｄ−リンカー−Ｈｏｌｅ−Ｆｃ）：
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＤＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号４９）
（ここで、ＩＬ−１５ドメイン配列は下線が引かれており、ペプチドリンカー配列は太字となっている）と；配列番号５に記載のアミノ酸配列を有する第２鎖（ＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋）と、配列番号７に記載のアミノ酸配列を有する第３鎖（Ｋｎｏｂ−Ｆｃ）と、を含む。
【０１１３】
種々の実施形態において、本発明の二価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質（以後、「Ｐ−０６６８」とも称する）は、下記の配列番号５０に記載のアミノ酸配列を有する第１鎖（ＩＬ−１５−リンカー−Ｆｃ）：
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＤＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号５０）
（ここで、ＩＬ−１５ドメイン配列は下線が引かれており、ペプチドリンカー配列は太字となっている）と；
配列番号５に記載のアミノ酸配列を有する第２鎖（ＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋）と、を含む。
【０１１４】
種々の実施形態において、本発明の一価ＩＬ−１５（非共有結合性）／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質（以後、「Ｐ−０６６９」とも称する）は、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を有する第１鎖（ＩＬ−１５  Ｓ５８Ｄ）と、配列番号２２に記載のアミノ酸配列を有する第２鎖（Ｋｎｏｂ−Ｆｃ−リンカー−ＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋）と、配列番号８に記載のアミノ酸配列を有する第３鎖（Ｈｏｌｅ−Ｆｃ）と、を含む。
【０１１５】
種々の実施形態において、本発明の一価ＩＬ−１５（非共有結合性）／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質（以後、「Ｐ−０６７０」とも称する）は、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を有する第１鎖（ＩＬ−１５  Ｓ５８Ｄ）と、下記の配列番号５１に記載のアミノ酸配列を有する第２鎖（ＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋−リンカー−Ｋｎｏｂ−Ｆｃ）：
ＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＰＡＬＶＨＱＲＰＡＰＰＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号５１）
（ここで、ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉドメイン配列は下線が引かれており、ペプチドリンカー配列は太字となっている）と；配列番号８に記載のアミノ酸配列を有する第３鎖（Ｈｏｌｅ−Ｆｃ）と、を含む。
【０１１６】
種々の実施形態において、本発明の二価ＩＬ−１５（非共有結合性）／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質（以後、「Ｐ−０６７１」とも称する）は、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を有する第１鎖（ＩＬ−１５  Ｓ５８Ｄ）と、下記の配列番号５２に記載のアミノ酸配列を有する第２鎖（ＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋−リンカー−Ｆｃ）：
ＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＰＡＬＶＨＱＲＰＡＰＰＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号５２）
（ここで、ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉドメイン配列は下線が引かれており、ペプチドリンカー配列は太字となっている）と、を含む。
【０１１７】
ポリヌクレオチド
別の態様において、本開示は、本開示の、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５バリアント、ＩＬ−１５Ｒα、ＩＬ−１５Ｒαバリアント、Ｆｃ、Ｆｃバリアント、ＩＬ−１５−Ｆｃ融合タンパク質、ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質、またはＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む、単離された核酸分子を提供する。主題の核酸は一本鎖であっても二本鎖であってもよい。このような核酸はＤＮＡ分子であってもＲＮＡ分子であってもよい。ＤＮＡとしては、例えば、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、合成ＤＮＡ、ＰＣＲで増幅されたＤＮＡ、およびこれらの組み合わせが挙げられる。ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ複合体をコードするゲノムＤＮＡは、多くの種に対応したゲノムライブラリーから得られる。合成ＤＮＡは、重複するオリゴヌクレオチド断片を化学合成した後、それらの断片をアセンブルし、コード領域および隣接配列の一部または全部を再構成することにより得られる。ＲＮＡは、Ｔ７プロモーターを用いたベクターなどの高レベルのｍＲＮＡ合成を指示する原核生物発現ベクターと、ＲＮＡポリメラーゼとから得ることができる。ｃＤＮＡは、ＩＬ−１５を発現する種々の組織から単離されたｍＲＮＡから調製されたライブラリーから得られる。本開示のＤＮＡ分子は、完全長遺伝子だけでなく、ポリヌクレオチドやその断片も包含する。完全長遺伝子は、Ｎ末端シグナル配列をコードする配列も包含し得る。このような核酸が、新規ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質を作製するための方法などで使用され得る。種々の実施形態において、上記の核酸分子は配列番号５６〜６３に記載のヌクレオチド配列を含む。
【０１１８】
種々の実施形態において、単離された核酸分子は、本明細書に記載のポリヌクレオチドを含み、さらに、本明細書に記載の少なくとも１つの異種タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む。種々の実施形態において、上記の核酸分子は、本明細書に記載のリンカーまたはヒンジリンカーをコードするポリヌクレオチドをさらに含む。
【０１１９】
種々の実施形態において、本開示の組換え核酸は、発現コンストラクト内の１または複数の制御ヌクレオチド配列に機能的に連結されていてもよい。制御配列は、当該技術分野において承認されたもので、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質の発現を指示するように選択される。すなわち、制御配列という用語には、プロモーター、エンハンサー、および他の発現調節エレメントが包含される。例示的な制御配列が、Ｇｏｅｄｄｅｌ；Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、アカデミックプレス社、サンディエゴ、カリフォルニア州（１９９０）に記載されている。典型的には、上記の１または複数の制御ヌクレオチド配列として、プロモーター配列、リーダー配列またはシグナル配列、リボソーム結合部位、転写開始配列および転写終結配列、翻訳開始配列および翻訳終結配列、並びにエンハンサー配列またはアクチベーター配列を含むことができるが、これらに限定はされない。当該技術分野において公知の構成的プロモーターまたは誘導性プロモーターが、本開示により企図されている。プロモーターは、天然プロモーターであってもよいし、あるいは、２つ以上のプロモーターエレメントを組み合わせたハイブリッドプロモーターであってもよい。発現コンストラクトは、プラスミドなどの、細胞内またはエピソーム内に存在するものであってもよいし、あるいは、発現コンストラクトを染色体に挿入してもよい。種々の実施形態において、形質転換宿主細胞のセレクションを可能とするために、発現ベクターは選択マーカー遺伝子を含む。選択マーカー遺伝子は当該技術分野において周知であり、使用される宿主細胞によって異なる。
【０１２０】
本開示の別の態様において、主題の核酸は、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ複合体をコードしている、少なくとも１つの制御配列に機能的に連結されたヌクレオチド配列を含む発現ベクター内にある状態で、提供される。用語「発現ベクター」は、ポリヌクレオチド配列からポリペプチドを発現させるための、プラスミド、ファージ、ウイルス、またはベクターを指す。宿主細胞における発現に好適なベクターは容易に利用可能なものであり、ベクターへの核酸分子の挿入は標準的な組換えＤＮＡ技術を用いて行われる。そのようなベクターには、作動可能なように連結されている場合にＤＮＡ配列の発現を調節する、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質をコードするＤＮＡ配列を発現させるためにこれらのベクターに用いることができる、種々様々な発現調節配列を含ませることができる。このような有用な発現調節配列としては、例えば、ＳＶ４０の初期プロモーターおよび後期プロモーター、ｔｅｔプロモーター、アデノウイルスまたはサイトメガロウイルスの前初期プロモーター、ＲＳＶプロモーター、ｌａｃ系、ｔｒｐ系、ＴＡＣ系またはＴＲＣ系、Ｔ７ＲＮＡポリメラーゼによって発現が指示されるＴ７プロモーター、λファージの主要なオペレーター領域およびプロモーター領域、ｆｄコートタンパク質に対する調節領域、３−ホスホグリセリン酸キナーゼまたは他の解糖酵素に対するプロモーター、酸性ホスファターゼ（例えば、ＰｈｏＳ）のプロモーター、酵母α接合因子のプロモーター、バキュロウイルス系の多角体プロモーター、並びに、原核細胞もしくは真核細胞またはそれらのウイルスの遺伝子の発現を調節することが知られている他の配列、並びにこれらの種々の組み合わせ、が挙げられる。発現ベクターの設計が、形質転換される宿主細胞の選択および／または発現が所望されるタンパク質の種類などの要因によって異なる場合があることは理解されよう。さらに、ベクターのコピー数、そのコピー数を調節する能力、および当該ベクターにコードされる任意の他のタンパク質（抗生物質マーカーなど）の発現についても、考慮がなされるべきである。
【０１２１】
クローニングされた遺伝子またはその一部を、原核細胞もしくは真核細胞（酵母細胞、鳥類細胞、昆虫細胞、または哺乳類細胞）のいずれか、またはその両方での発現に好適なベクターにライゲーションすることで、本開示の組換え核酸を産生させることが可能となる。組換えＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ複合体を産生させるための発現用溶媒は、プラスミドと他のベクターを含む。例えば、好適なベクターとしては、大腸菌などの原核細胞における発現用の、以下の各種プラスミドが挙げられる：ｐＢＲ３２２由来プラスミド、ｐＥＭＢＬ由来プラスミド、ｐＥＸ由来プラスミド、ｐＢＴａｃ由来プラスミド、およびｐＵＣ由来プラスミド。
【０１２２】
哺乳類発現ベクターの中には、細菌内のベクターの増殖を促進する原核生物性配列と、真核細胞で発現される１または複数の真核生物性転写単位とを、両方含有するものがある。ｐｃＤＮＡＩ／ａｍｐ由来ベクター、ｐｃＤＮＡＩ／ｎｅｏ由来ベクター、ｐＲｃ／ＣＭＶ由来ベクター、ｐＳＶ２ｇｐｔ由来ベクター、ｐＳＶ２ｎｅｏ由来ベクター、ｐＳＶ２−ｄｈｆｒ由来ベクター、ｐＴｋ２由来ベクター、ｐＲＳＶｎｅｏ由来ベクター、ｐＭＳＧ由来ベクター、ｐＳＶＴ７由来ベクター、ｐｋｏ−ｎｅｏ由来ベクター、およびｐＨｙｇ由来ベクターは、真核細胞のトランスフェクションに好適な哺乳類発現ベクターの例である。これらのベクターのいくつかは、原核細胞および真核細胞の両方における複製および薬剤耐性セレクションを促すための、ｐＢＲ３２２などの細菌性プラスミド由来の配列による改変を受けている。あるいは、真核細胞におけるタンパク質の一過性発現のために、ウシパピローマウイルス（ＢＰＶ−１）、またはエプスタイン・バーウイルス（ｐＨＥＢｏ、ｐＲＥＰ由来、およびｐ２０５）などのウイルスの誘導体を用いることができる。他のウイルス（レトロウイルスを含む）発現系の例は、下記の遺伝子治療送達系の説明に見出すことができる。プラスミドの調製および宿主生物の形質転換で使用される種々の方法は、当該技術分野において周知である。原核細胞および真核細胞の両方に好適な他の発現系、並びに一般的な組換え法については、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第２版、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、Ｆｒｉｔｓｃｈ、およびＭａｎｉａｔｉｓ（編）（コールド・スプリング・ハーバー研究所出版局、１９８９年）、１６章および１７章を参照されたい。場合によっては、バキュロウイルス発現系を使用して組換えポリペプチドを発現することが望ましいことがある。そのようなバキュロウイルス発現系の例としては、ｐＶＬ由来ベクター（ｐＶＬ１３９２、ｐＶＬ１３９３、およびｐＶＬ９４１など）、ｐＡｃＵＷ由来ベクター（ｐＡｃＵＷ１など）、およびｐＢｌｕｅＢａｃ由来ベクター（Ｂ−ｇａｌ含有ｐＢｌｕｅＢａｃＩＩＩなど）が挙げられる。
【０１２３】
種々の実施形態において、主題のＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質をＣＨＯ細胞で産生させるためのベクターが設計されることとなり、例えば、Ｐｃｍｖ−Ｓｃｒｉｐｔベクター（ストラタジーン社、ラ・ホーヤ、カリフォルニア州）、ｐｃＤＮＡ４ベクター（インビトロジェン社、カールズバッド、カリフォルニア州）、およびｐＣＩ−ｎｅｏベクター（プロメガ社、マディソン、ウィスコンシン州）などである。後述するように、主題の遺伝子コンストラクトを用いて、培養液中で増殖された細胞において主題のＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質の発現を引き起こし、例えば、タンパク質（融合タンパク質またはバリアントタンパク質を含む）を産生させ、精製を行うことができる。
【０１２４】
本開示はまた、１または複数の主題のＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む組換え遺伝子をトランスフェクトされた宿主細胞に関する。宿主細胞は任意の原核細胞または真核細胞であり得る。例えば、本開示のＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ複合体は、大腸菌などの細菌細胞で発現されてもよく、昆虫細胞（例えば、バキュロウイルス発現系を使用）で発現されてもよく、酵母で発現されてもよく、あるいは哺乳類細胞で発現されてもよい。他の好適な宿主細胞が当業者に公知である。
【０１２５】
これを受けて、本開示はさらに、主題のＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質を産生する方法に関する。例えば、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ複合体をコードする発現ベクターでトランスフェクトされた宿主細胞を適切な条件下で培養することにより、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ複合体を発現させることができる。ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ複合体は、分泌後、当該ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質を含有する細胞および培地の混合物から単離することができる。あるいは、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ複合体を細胞質または膜画分に保持させ、細胞を回収、溶解し、上記タンパク質を単離してもよい。細胞培養液には宿主細胞、培地、および他の副生成物が含まれる。細胞培養に好適な培地は当該技術分野において周知のものである。
【０１２６】
本開示のポリペプチドおよびタンパク質は、当業者に周知のタンパク質精製法に従って精製することができる。これらの方法は、あるレベルでの、タンパク質性画分と非タンパク質性画分の粗分画を含む。ペプチドポリペプチドを他のタンパク質から分離した後、目的のペプチドまたはポリペプチドをクロマトグラフ法および電気泳動法によりさらに精製することで、部分的または完全な精製（すなわち均一になるまでの精製）を達成することができる。「単離されたポリペプチド」または「精製されたポリペプチド」という用語は、本明細書で使用される場合、ポリペプチドがその天然で入手可能な状態に対し任意の程度精製されている、他の成分から単離可能な組成物を指すことが意図されている。精製されたポリペプチドとは、そのため、それを天然に生じ得る環境から分離されたポリペプチドも指す。一般に、「精製された」とは、分画を受けて種々の他成分を除去された、発現されたその生物活性を実質的に保持している、ポリペプチド組成物を指す。用語「実質的に精製された」が用いられている場合、この呼称は、ポリペプチドまたはペプチドが組成物の主成分を形成している、例えば、組成物中のタンパク質の約５０％以上、約６０％以上、約７０％以上、約８０％以上、約８５％以上、または約９０％以上を構成している、ペプチド組成物またはポリペプチド組成物を指す。
【０１２７】
精製に用いるのに好適な種々の方法は、当業者に周知なものである。これらの方法としては、例えば、硫酸アンモニウム、ＰＥＧ、抗体（免疫沈降）などを用いた沈降、または熱変性による沈降の後に、遠心分離；アフィニティークロマトグラフィー（プロテインＡカラム）、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィーなどのクロマトグラフィー；等電点電気泳動；ゲル電気泳動；これらの方法の組み合わせ、を行うことが挙げられる。当該技術分野では周知のことであるが、種々の精製工程を実行する順番は変更しても、あるいは、ある特定の工程を省いても、尚も、実質的に精製されたポリペプチドを調製するのに好適な方法となり得ると考えられる。
【０１２８】
医薬組成物
別の態様において、本開示は、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質を、薬剤的に許容できる担体と混合して含む、医薬組成物を提供する。そのような薬剤的に許容できる担体は、当業者に周知で理解されるものであり、広範に説明がなされている（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１８版、Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ（編）、マック出版社、１９９０年を参照）。薬剤的に許容できる担体は、組成物のｐＨ、モル浸透圧濃度、粘度、透明度、色、等張性、匂い、無菌性、安定性、溶解速度、遊離速度、吸着性、または浸透性などを変化、維持または保存する目的で含まれ得る。このような医薬組成物は、当該ポリペプチドの物理的状態、安定性、インビボ放出速度、およびインビボクリアランス速度に影響し得る。好適な薬剤的に許容できる担体（ｃａｒｒｉｅｒ）としては、アミノ酸（グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、またはリジンなど）；抗菌剤；抗酸化剤（アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウム、または亜硫酸水素ナトリウムなど）；緩衝剤（ホウ酸塩、炭酸水素塩、トリス塩酸、クエン酸塩、リン酸塩、他の有機酸など）；増量剤（ｂｕｌｋｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）（マンニトールまたはグリシンなど）、キレート化剤（エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）など）；錯化剤（カフェイン、ポリビニルピロリドン、β−シクロデキストリン、またはヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンなど）；充填剤（ｆｉｌｌｅｒ）；単糖類；二糖類および他の炭水化物（グルコース、マンノース、またはデキストリンなど）；タンパク質（血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなど）；着色剤；着香剤および希釈剤（ｄｉｌｕｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）；乳化剤；親水性ポリマー（ポリビニルピロリドンなど）；低分子量ポリペプチド；塩形成性対イオン（ナトリウムなど）；保存剤（塩化ベンザルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸、または過酸化水素など）；溶媒（グリセリン、プロピレングリコール、またはポリエチレングリコールなど）；糖アルコール（マンニトールまたはソルビトールなど）；懸濁化剤；界面活性剤または湿潤剤（プルロニック、ＰＥＧ、ソルビタンエステル、ポリソルベート、例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、トリトン、トロメタミン、レシチン、コレステロール、チロキサポール（ｔｙｌｏｘａｐａｌ）など）；安定化剤（スクロースまたはソルビトール）；等張化剤（ｔｏｎｉｃｉｔｙ  ｅｎｈａｎｃｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）（ハロゲン化アルカリ金属（好ましくは塩化ナトリウムまたは塩化カリウム、マンニトール  ソルビトールなど）；送達担体（ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｖｅｈｉｃｌｅ）；賦形剤（ｄｉｌｕｅｎｔ）；医薬品添加物（ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ）、および／または補助剤（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ａｄｊｕｖａｎｔ）が挙げられるが、これらに限定はされない。
【０１２９】
医薬組成物中の主要な溶媒または担体は、本質的に水性であっても非水性であってもよい。例えば、好適な溶媒または担体は、注射用蒸留水であってもよく、生理的食塩水であってもよく、人工脳脊髄液であってもよく、非経口投与用の組成物に通常含まれる他の物質を添加することができる。さらなる例示的な溶媒として、血清アルブミンを混合した中性緩衝生理食塩水または生理食塩水がある。他の例示的な医薬組成物は、約ｐＨ７．０〜８．５のトリス緩衝液、または約ｐＨ４．０〜５．５の酢酸緩衝溶液を含み、当該緩衝液にはソルビトールまたはその好適な代替物をさらに含ませてもよい。本開示の１つの実施形態において、所望の純度を有する選択された組成物を任意の製剤化剤（ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ａｇｅｎｔ）（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、上記）と混合することによって、凍結乾燥ケークまたは水溶液の形態で、保存用に、組成物を調製してもよい。さらに、治療用組成物は、スクロースなどの適切な医薬品添加物を用いて、凍結乾燥物として製剤化してもよい。最適な医薬組成物は、意図された投与経路、送達様式、および目的の用量などに基づいて、当業者によって決定される。
【０１３０】
非経口投与が企図される場合、治療用医薬組成物は、薬剤的に許容できる溶媒中に所望のＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ複合体を含む、発熱物質を含まない非経口投与において許容される水溶液の形態であり得る。特に好適な非経口注射用溶媒は滅菌蒸留水であり、滅菌蒸留水中では、ポリペプチドは適切に保存された無菌の等張液として製剤化される。種々の実施形態において、注射投与に好適な医薬製剤が、水溶液中で製剤化され得るが、ハンクス液、リンゲル液、または生理的緩衝食塩水などの生理的に適合性の緩衝液中で製剤化されることが好ましい。水性の注射用懸濁液には、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストランなどの、当該懸濁液の粘度を増加させる物質を含有させてもよい。さらに、活性化合物の懸濁液は、適切な油性の注射用懸濁液として調製してもよい。所望により、懸濁液には、好適な安定剤、すなわち、化合物の溶解性を増加させることで高度に濃縮された溶液の調製を可能にする薬剤、を含有させてもよい。
【０１３１】
種々の実施形態において、治療用医薬組成物は、コロイド分散系を用いた標的化送達用に製剤化され得る。コロイド分散系としては、高分子複合体、ナノカプセル、マイクロスフェア、ビーズ、並びに、水中油型エマルション、ミセル、混合ミセル、およびリポソームを含む脂質をベースとした系が挙げられる。リポソーム生成で有用な脂質の例としては、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミンなどのホスファチジル化合物、スフィンゴ脂質、セレブロシド、およびガングリオシドが挙げられる。例示的なリン脂質としては、卵ホスファチジルコリン（ｅｇｇ  ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン、およびジステアロイルホスファチジルコリンが挙げられる。リポソームのターゲティングは、例えば、臓器特異性、細胞特異性、および細胞小器官特異性に基づいても可能であり、当該技術分野において公知である。
【０１３２】
種々の実施形態において、医薬組成物の経口投与が企図される。この様式で投与される医薬組成物は、錠剤およびカプセル剤などの固体剤形の調剤で通例使用される担体を含ませて製剤化することもできるし、含ませずに製剤化することもできる。経口投与用の固体剤形（カプセル剤、錠剤、丸剤、糖剤、散剤、粒剤など）では、１または複数の本開示の治療用化合物を、１または複数の薬剤的に許容できる担体と混合してよく、例えば、クエン酸ナトリウムもしくはリン酸二カルシウム、および／または下記のうち任意のものである：（１）デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、および／またはケイ酸などの充填剤または増量剤；（２）例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、および／またはアカシアなどの結合剤；（３）グリセロールなどの保湿剤；（４）寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモデンプンまたはタピオカデンプン、アルギン酸、ある種のケイ酸塩、および炭酸ナトリウムなどの崩壊剤；（５）パラフィンなどの溶解遅延剤（ｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｒｅｔａｒｄｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）；（６）第４級アンモニウム化合物などの吸収促進剤；（７）例えば、セチルアルコールおよびグリセロールモノステアレートなどの湿潤剤；（８）カオリン粘土およびベントナイト粘土などの吸着剤；（９）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体のポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、およびこれらの混合物などの滑沢剤；並びに、（１０）着色剤。カプセル剤、錠剤、および丸剤の場合、医薬組成物は緩衝剤を含んでいてもよい。ラクトースすなわち乳糖、および高分子量ポリエチレングリコールなどの医薬品添加物を用いた、軟ゼラチンカプセル中および硬ゼラチンカプセル中の充填剤として、同様の種類の固体組成物を使用してもよい。経口投与用の液体剤形としては、薬剤的に許容できる乳剤、マイクロエマルション、水剤、懸濁剤、シロップ剤、およびエリキシル剤が挙げられる。有効成分に加えて、液体剤形には、当該技術分野において一般に使用される不活性な賦形剤を含有させてもよく、例えば、水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、油（具体的には、綿実油、落花生油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコールソルビタン脂肪酸エステル、並びにこれらの混合物などである。不活性な賦形剤に加えて、経口用組成物には、湿潤剤、乳化剤、懸濁化剤、甘味剤、着香剤、着色剤、芳香剤、および保存剤などの補助剤を含ませることができる。
【０１３３】
種々の実施形態において、医薬組成物の皮膚または粘膜への局所投与が企図される。局所製剤には、皮膚浸透促進剤または角質層浸透促進剤として有効であると知られている各種薬剤のうちの１または複数をさらに含ませてもよい。これらの例としては、２−ピロリドン、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、ジメチルアセトアミド、ジメチルホルムアミド、プロピレングリコール、メチルアルコール、イソプロピルアルコール、ジメチルスルホキシド、およびアゾン（ａｚｏｎｅ）がある。製剤を美容上許容できるものにするために、追加の薬剤をさらに含ませてもよい。これらの例としては、脂肪、ろう、油、色素、香料、保存剤、安定剤、および界面活性剤がある。当該技術分野において公知のものなどの、角質溶解薬を含ませてもよい。例としてはサリチル酸および硫黄がある。局所的投与用または経皮投与用の剤形としては、散剤、噴霧剤、軟膏剤、パスタ剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、水剤、貼付剤、および吸入剤が挙げられる。活性化合物は、無菌条件下で、薬剤的に許容できる基剤（ｃａｒｒｉｅｒ）と、必要な場合、任意の保存剤、緩衝剤、または噴射剤と混合してよい。軟膏剤、パスタ剤、クリーム剤、およびゲル剤には、本開示の主題の化合物（例えば、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質）の他に、動物性脂肪、植物性脂肪、油、ろう、パラフィン、デンプン、トラガント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、タルク、および酸化亜鉛などの医薬品添加物、またはこれらの混合物、を含有させてもよい。
【０１３４】
本明細書における使用が企図される追加の医薬組成物としては、持続送達製剤または送達制御製剤において、ポリペプチドを含む製剤が挙げられる。種々の実施形態において、医薬組成物は、徐放性ハイドロゲルとしてナノ粒子中に配合されていてもよいし、あるいは、腫瘍溶解性ウイルスに組み入れられていてもよい。リポソーム担体、生体内分解性の微小粒子または多孔質ビーズ、およびデポ剤などの、種々の他の持続送達手段または制御送達手段を製剤化するための方法も、当業者に公知である。
【０１３５】
治療的に使用される医薬組成物の有効量は、治療の内容および目的などによって異なる。すなわち、当業者には理解されることであるが、治療に適した用量レベルは、部分的には、送達される分子、ポリペプチドが使用される予定の適応症、投与経路、並びに、患者のサイズ（体重、体表面、または臓器サイズ）および状態（年齢、および全体的な健康）に応じて変動することとなる。このため、臨床医は、最適な治療効果を得るために、用量設定と、投与経路の変更を行うことができる。典型的な用量は、上記の要因に応じて、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上の範囲を取り得る。好ましくは、ポリペプチド組成物を皮下または静脈内に注射または投与してもよい。持効性の医薬組成物を、特定の製剤の半減期およびクリアランス速度に応じて、３日〜４日毎、毎週、隔週、または毎月、投与してもよい。投与頻度は、使用される製剤でのポリペプチドの薬物動態パラメーターに依存することとなる。典型的には、組成物は、目的の効果を達成する用量に達するまで投与される。組成物は、そのため、単回投与として投与されてもよいし、あるいは長期に亘る複数回投与（投与当たり同じまたは異なる濃度）として投与されてもよいし、あるいは持続点滴として投与されてもよい。適切な投与量のさらなる改善が定期的に行われる。適切な用量反応データを用いて、適切な投与量を確認してもよい。
【０１３６】
医薬組成物の投与経路は、公知の方法に従うものであり、例えば、経口、静脈内経路、腹腔内経路、腫瘍内経路、脳内経路（脳実質内経路）、脳室内経路、筋肉内経路、眼内経路、動脈内経路、門脈内経路、病巣内経路による注射、髄内、くも膜下腔内、膀胱内、心室内、経皮、皮下、もしくは腹腔内；並びに、鼻腔内手段、経腸手段、局所的手段、舌下手段、経尿道手段、経膣手段、もしくは経直腸手段、持続放出系、または埋込デバイスによる投与経路である。所望により、組成物は、ボーラス投与で投与してもよいし、点滴で持続的に投与してもよいし、あるいは、埋込デバイスにより投与してもよい。あるいはまたはさらに、組成物は、目的分子が吸着または封入されている膜、スポンジ、または別の適切な材料の埋め込みによって、局所的に投与してもよい。埋込デバイスが使用される場合、デバイスは任意の好適な組織または臓器に埋め込むことができ、目的分子の送達は、拡散、時限放出ボーラス（ｔｉｍｅｄ−ｒｅｌｅａｓｅ  ｂｏｌｕｓ）、または連続投与を介してもよい。
【０１３７】
治療用途
本開示は、対象におけるがん細胞を治療する方法であって、上記対象に、薬剤的に許容できる担体中の、治療有効量（単独療法レジメンとして、または併用療法レジメンにおいて）の本開示のＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質を投与することを含み、そのような投与によってがん細胞の成長および／または増殖が阻害される、上記方法を提供する。特に、本開示のＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質は、がんとして特徴付けられる障害を治療する際に有用である。このような障害としては、固形腫瘍、例えば、乳がん、気道がん、脳がん、生殖器がん、消化管がん、尿路がん、眼がん、肝臓がん、皮膚がん、頭頸部がん、甲状腺がん、副甲状腺がん、およびこれらの遠隔転移、リンパ腫、肉腫、多発性骨髄腫、並びに白血病が挙げられるが、これらに限定はされない。乳がんの例としては、浸潤性乳管癌、浸潤性小葉癌、乳管内上皮内癌、および非浸潤性小葉癌が挙げられるが、これらに限定はされない。気道のがんの例としては、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、気管支腺腫、および胸膜肺芽腫が挙げられるが、これらに限定はされない。脳がんの例としては、脳幹神経膠腫、視床下部神経膠腫、小脳星状細胞腫、大脳星状細胞腫、神経芽細胞腫、髄芽腫、上衣腫、神経外胚葉性腫瘍、および松果体腫瘍が挙げられるが、これらに限定はされない。男性生殖器の腫瘍としては、前立腺がんおよび精巣がんが挙げられるが、これらに限定はされない。女性生殖器の腫瘍としては、子宮内膜がん、子宮頸部がん、卵巣がん、膣がん、および外陰がん、並びに子宮肉腫が挙げられるが、これらに限定はされない。消化管の腫瘍としては、肛門がん、結腸がん、大腸がん、食道がん、胆嚢がん、胃がん、肝がん、乳がん、膵がん、直腸がん、小腸がん、および唾液腺がんが挙げられるが、これらに限定はされない。尿路の腫瘍としては、膀胱がん、陰茎がん、腎がん、腎盂がん、尿管がん、および尿道がんが挙げられるが、これらに限定はされない。眼がんとしては、眼球内黒色腫および網膜芽細胞腫が挙げられるが、これらに限定はされない。肝がんの例としては、肝細胞癌（線維層板状異型を伴うまたは伴わない肝細胞癌）、胆管癌（肝内胆管癌）、および肝細胞癌と胆管癌の混合型が挙げられるが、これらに限定はされない。皮膚がんとしては、扁平上皮癌、カポジ肉腫、悪性黒色腫、メルケル細胞皮膚がん、および非黒色腫皮膚がんが挙げられるが、これらに限定はされない。頭頸部がんとしては、鼻咽腔がん、並びに唇および口腔のがんが挙げられるが、これらに限定はされない。リンパ腫としては、エイズ関連リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、ホジキン病、および中枢神経系のリンパ腫が挙げられるが、これらに限定はされない。肉腫としては、軟部組織の肉腫、骨肉腫、悪性線維性組織球腫、リンパ肉腫、および横紋筋肉腫が挙げられるが、これらに限定はされない。白血病としては、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、および毛様細胞性白血病が挙げられるが、これらに限定はされない。ある実施形態において、がんは、アクチビンＡ、ミオスタチン、ＴＧＦ−β、およびＧＤＦ１５などのＴＧＦ−βファミリーメンバーの発現量が多いがんとなり、例えば、膵がん、胃がん、卵巣がん、大腸がん、メラノーマ  白血病、肺がん、前立腺がん、脳がん、膀胱がん、および頭頸部がんである。
【０１３８】
本開示は、補助療法として既存のがん治療の治療効果を増強することを通じて、難治性または抵抗性の液性腫瘍または固形腫瘍を治療する方法を提供する。
【０１３９】
本開示はまた、対象におけるＡ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ＨＩＶ感染症におけるエイズ、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）感染症、性器疣贅などを含むウイルス感染症を治療する方法であって、それを必要としているヒト患者に、薬剤的に許容できる担体中の本開示のＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質を投与することを含み、そのような投与によってウイルスの増殖および／または複製が阻害される、上記方法を提供する。
【０１４０】
「治療有効量」または「治療有効用量」とは、治療予定の障害の１または複数の症状をある程度軽減する、投与予定の治療薬の量を指す。
【０１４１】
初めに、ＩＣ５０測定により、細胞培養アッセイから治療有効量が評価され得る。次に、動物モデルにおいて、細胞培養液中で測定された上記ＩＣ５０を含む循環血漿中濃度範囲を達成するように、用量が製剤化され得る。そのような情報を用いることで、ヒトで有用な用量をより正確に求めることができる。血漿中レベルがＨＰＬＣなどによって測定され得る。対象の状態を鑑みて、個々の医師により、的確な組成、投与経路、および用量が選択され得る。
【０１４２】
投与計画は最適な所望の反応（例えば、治療的反応または予防的反応）が得られるように調整できる。例えば、単回ボーラス投与が行われ、何回かの分割量（複数回投与量または反復投与量または維持投与量）が長期に亘って投与され、治療状況の必要性に比例して用量が増減され得る。投与のしやすさと投与量の均一性のために、投薬単位形態で非経口組成物を製剤化することが、特に有利である。投薬単位形態とは、本明細書で使用される場合、治療される哺乳類対象に対する統一された用量として適した物理的に分離している単位を指し、それぞれの単位は必要な医薬担体と併せて目的の治療効果を生むと計算された所定量の活性化合物を含有する。本開示の投薬単位形態の規格は、主に、抗体の独自の特徴、および達成されるべき特定の治療効果または予防効果によって決定される。
【０１４３】
すなわち、当業者には理解されることであるが、本明細書に提供される開示に基づいて、用量および投与計画は当該治療分野で周知の方法に従って調整される。すなわち、最大耐量を容易に確立でき、検出可能な治療効果を対象に与える有効量も決定でき、同様に、検出可能な治療効果を対象に与えるようにそれぞれの薬剤を投与するための時間的要件も決定できる。よって、本明細書にはある特定の用量および投与計画が例示されているが、これらの例は、本開示を実施する際に対象に与えられ得る用量および投与計画を何ら限定するものではない。
【０１４４】
なお、用量の値は、改善されるべき状態の種類および重症度によって異なり、単回用量または反復用量を含み得る。さらには、いかなる特定の対象に対しても、具体的な投与計画は、個々の必要性や組成物の投与を管理または監督する人の専門家としての判断に従って長期間に亘って調整されるべきということ、並びに、本明細書に記載された用量範囲は例示のみを目的としており、特許請求された組成物の範囲や実践を限定する意図はないことも、理解されたい。さらに、本開示の組成物を用いた投与計画は、疾患の種類、対象の年齢、体重、性別、医学的状態、状態の重症度、投与経路、および使用される特定の抗体を含む様々な要因に基づかせてもよい。すなわち、投与計画は多様であり得るが、標準的な方法を用いてルーチンに決定できる。例えば、用量は薬物動態パラメーターまたは薬力学的パラメーターに基づいて調整され得るが、これらのパラメーターとしては、毒性作用および／または実験室値などの臨床的効果が含まれ得る。すなわち、本開示は、当業者によって求められる、対象者内用量漸増を包含する。適切な用量および投与計画の決定は、関連技術分野で周知であり、本明細書で開示された教示が提供されれば当業者に達成されることは理解される。
【０１４５】
治療有効量または予防有効量の本開示のＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質の、例示的であり非限定的な一日量の範囲は、０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、０．０００１〜９０ｍｇ／ｋｇ体重、０．０００１〜８０ｍｇ／ｋｇ体重、０．０００１〜７０ｍｇ／ｋｇ体重、０．０００１〜６０ｍｇ／ｋｇ体重、０．０００１〜５０ｍｇ／ｋｇ体重、０．０００１〜４０ｍｇ／ｋｇ体重、０．０００１〜３０ｍｇ／ｋｇ体重、０．０００１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重、０．０００１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、０．０００１〜５ｍｇ／ｋｇ体重、０．０００１〜４ｍｇ／ｋｇ体重、０．０００１〜３ｍｇ／ｋｇ体重、０．０００１〜２ｍｇ／ｋｇ体重、０．０００１〜１ｍｇ／ｋｇ体重、０．００１０〜５０ｍｇ／ｋｇ体重、０．００１０〜４０ｍｇ／ｋｇ体重、０．００１０〜３０ｍｇ／ｋｇ体重、０．００１０〜２０ｍｇ／ｋｇ体重、０．００１０〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、０．００１０〜５ｍｇ／ｋｇ体重、０．００１０〜４ｍｇ／ｋｇ体重、０．００１０〜３ｍｇ／ｋｇ体重、０．００１０〜２ｍｇ／ｋｇ体重、０．００１０〜１ｍｇ／ｋｇ体重、０．０１〜５０ｍｇ／ｋｇ体重、０．０１〜４０ｍｇ／ｋｇ体重、０．０１〜３０ｍｇ／ｋｇ体重、０．０１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重、０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、０．０１〜５ｍｇ／ｋｇ体重、０．０１〜４ｍｇ／ｋｇ体重、０．０１〜３ｍｇ／ｋｇ体重、０．０１〜２ｍｇ／ｋｇ体重、０．０１〜１ｍｇ／ｋｇ体重、０．１〜５０ｍｇ／ｋｇ体重、０．１〜４０ｍｇ／ｋｇ体重、０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ体重、０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重、０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、０．１〜５ｍｇ／ｋｇ体重、０．１〜４ｍｇ／ｋｇ体重、０．１〜３ｍｇ／ｋｇ体重、０．１〜２ｍｇ／ｋｇ体重、または０．１ｍｇ／ｋｇ体重、１〜５０ｍｇ／ｋｇ体重、１〜４０ｍｇ／ｋｇ体重、１〜３０ｍｇ／ｋｇ体重、１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重、１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、１〜５ｍｇ／ｋｇ体重、１〜４ｍｇ／ｋｇ体重、１〜３ｍｇ／ｋｇ体重、１〜２ｍｇ／ｋｇ体重、または１〜１ｍｇ／ｋｇ体重とすることができる。なお、用量の値は、改善されるべき状態の種類および重症度によって異なり得る。さらには、いかなる特定の対象に対しても、具体的な投与計画は、個々の必要性や組成物の投与を管理または監督する人の専門家としての判断に従って長期間に亘って調整されるべきということ、並びに、本明細書に記載された用量範囲は例示のみを目的としており、特許請求された組成物の範囲や実践を限定する意図はないことも、理解されたい。
【０１４６】
本開示の医薬組成物の毒性および治療指数は、ＬＤ５０（集団の５０％に対し致死的な用量）やＥＤ５０（集団の５０％に治療効果のある用量）などを求めるための、細胞培養液または実験動物における標準的な薬学的手法で求めることができる。中毒量と治療有効量との間の用量比が治療指数であり、ＬＤ５０／ＥＤ５０の比として表すことができる。大きな治療指数を示す組成物が一般的に好ましい。
【０１４７】
ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質医薬組成物の投与の投与頻度は、治療法および治療される特定の疾患の性質に応じたものとなる。対象は、毎週または毎月などの一定間隔を置いて、目的の治療結果が達成されるまで治療できる。例示的な投与頻度として、毎週１回または２回；隔週で週１回または２回；２週間毎に１回；３週間毎に１回；毎週１回を２週間、その後月１回；毎週１回を３週間、その後月１回；月１回；２か月毎に１回；３か月毎に１回；４か月毎に１回；５か月毎に１回；もしくは６か月毎に１回、または年１回が挙げられるが、これらに限定はされない。
【０１４８】
併用療法
本明細書で使用される場合、本開示のＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質と１または複数の他の治療薬とを参照した、「同時投与」、「同時投与される」、および「〜と組み合わせて」という用語は、以下を意味することが意図され、以下を指して包含する：治療を必要としている対象への本開示のＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質と治療薬とのそのような組み合わせの同時投与であって、そのような成分が合剤化されて単一剤形となり、上記各成分が実質的に同時に上記対象に放出される、同時投与；治療を必要としている対象への本開示のＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質と治療薬とのそのような組み合わせの実質的な同時投与であって、そのような成分が互いに別々に製剤化されて別々の剤形となり、それらが上記対象によって実質的に同時に摂取された際、上記各成分が実質的に同時に上記対象に放出される、実質的な同時投与；治療を必要としている対象への本開示のＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質と治療薬とのそのような組み合わせの連続投与であって、そのような成分が互いに別々に製剤化されて別々の剤形となり、それらが各投与の間にかなりの時間間隔を置いて上記対象によって連続した時間に摂取された際、上記各成分が実質的に異なる時間に上記対象に放出される、連続投与；並びに、治療を必要としている対象への本開示のＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質と治療薬とのそのような組み合わせの連続投与であって、そのような成分が合剤化されて単一剤形となり、上記各成分が徐放的に放出される際、それらが同時および／または異なる時間に同時発生的、連続的、および／または重複的に上記対象に放出され、各部分は同じ経路または異なる経路で投与され得る、連続投与。
【０１４９】
別の態様において、本開示は、対象におけるがんまたはがん転移を治療するための方法であって、免疫療法、細胞障害性化学療法、小分子キナーゼ阻害剤標的療法、外科手術、放射線療法、および幹細胞移植を包含するがこれらに限定はされない第二の治療法と組み合わせて、治療有効量の本発明の医薬組成物を投与することを含む、上記方法を提供する。例えば、そのような方法は、予防的に、がんの予防、外科手術後のがんの再発および転移の予防で、他の従来のがん治療法の補助療法として、用いることができる。本開示が認めるところによれば、本明細書に記載の併用法の使用を通じて、従来のがん治療法（例えば、化学療法、放射線療法、光線療法、免疫療法、および外科手術）の有効性を増強することができる。
【０１５０】
幅広い従来化合物が抗悪性腫瘍活性を有することが示されている。これらの化合物は、固形腫瘍を退縮させる、転移とさらなる成長を抑制する、または、白血病性もしくは骨髄の悪性腫瘍における悪性Ｔ細胞の数を減少させる、化学療法における医薬品として使用されている。化学療法は様々な種類の悪性腫瘍の治療で有効であったが、多くの抗悪性腫瘍化合物は望ましくない副作用を誘導する。２種以上の異なる治療を組み合わせた場合、それらの治療が、相乗的に働いて、各治療の用量の削減を可能とすることにより、より高用量で各化合物が発現する有害な副作用が低減される場合があることが示されている。他の例では、治療に対して抵抗性の悪性腫瘍は、２種以上の異なる治療の併用療法に対して反応する場合がある。
【０１５１】
種々の実施形態において、化学療法剤などの第二の抗がん剤が患者に投与されることとなる。例示的な化学療法剤の一覧には、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、マイトマイシン、ナイトロジェンマスタード、クロラムブシル、メルファラン、シクロホスファミド、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、ベンダムスチン、シタラビン（ＣＡ）、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、フロクスウリジン（５−ＦＵｄＲ）、メトトレキサート（ＭＴＸ）、コルヒチン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド、テニポシド、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ペントスタチン、クラドリビン、シタラビン、ゲムシタビン、プララトレキサート、ミトキサントロン、ジエチルスチルベストロール（ＤＥＳ）、フルダラビン（ｆｌｕｒａｄａｂｉｎｅ）、イホスファミド、ヒドロキシ尿素タキサン類（ｈｙｄｒｏｘｙｕｒｅａｔａｘａｎｅｓ）（パクリタキセルおよびドセタキセル（ｄｏｘｅｔａｘｅｌ）など）、および／または、アントラサイクリン系抗生物質、並びに、限定はされないが、ＤＡ−ＥＰＯＣＨ、ＣＨＯＰ、ＣＶＰ、またはＦＯＬＦＯＸなどの薬剤の組み合わせが挙げられるが、これらに限定はされない。種々の実施形態において、そのような化学療法剤の用量としては以下が挙げられるが、これらに限定はされない：約１０ｍｇ／ｍ２、約２０ｍｇ／ｍ２、約３０ｍｇ／ｍ２、約４０ｍｇ／ｍ２、約５０ｍｇ／ｍ２、約６０ｍｇ／ｍ２、約７５ｍｇ／ｍ２、約８０ｍｇ／ｍ２、約９０ｍｇ／ｍ２、約１００ｍｇ／ｍ２、約１２０ｍｇ／ｍ２、約１５０ｍｇ／ｍ２、約１７５ｍｇ／ｍ２、約２００ｍｇ／ｍ２、約２１０ｍｇ／ｍ２、約２２０ｍｇ／ｍ２、約２３０ｍｇ／ｍ２、約２４０ｍｇ／ｍ２、約２５０ｍｇ／ｍ２、約２６０ｍｇ／ｍ２、および約３００ｍｇ／ｍ２のうちのいずれか。
【０１５２】
種々の実施形態において、本開示の併用療法は、治療有効量の免疫療法を対象に投与することをさらに含んでもよく、例えば、特定の腫瘍抗原に対する枯渇抗体を用いた治療；抗体薬物複合体を用いた治療；ＣＤ２７６、ＣＤ２７２、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ４０、ＳＩＲＰａ、ＣＤ４７、ＯＸ−４０、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、ＬＡＧ３、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、４−１ＢＢ、ＴＩＭ−３、Ｂ７−Ｈ４、Ｓｉｇｌｅｃ７、Ｓｉｇｌｅｃ８、Ｓｉｇｌｅｃ９、Ｓｉｇｌｅｃ１５、およびＶＩＳＴＡなどの共刺激分子または共抑制分子（免疫チェックポイント）に対するアゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、または阻止抗体を用いた治療；ブリナツモマブなどの二重特異性Ｔ細胞誘導抗体（ＢｉＴＥ（登録商標））を用いた治療：ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−２１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、およびＩＦＮ−γなどの生物学的応答調節物質の投与を含む治療；シプロイセルＴなどの治療用ワクチンを用いた治療；樹状細胞ワクチンまたは腫瘍抗原ペプチドワクチンを用いた治療；ＮＫ細胞を用いた治療；ＴＣＲ−Ｔ細胞を用いた治療；キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−Ｔ細胞を用いた治療；ＣＡＲ−ＮＫ細胞を用いた治療；ｉＰＳ誘導ＮＫ細胞、ｉＰＳ誘導ＴＣＲ−Ｔ細胞、ｉＰＳ誘導ＣＡＲ−Ｔ細胞、またはｉＰＳ誘導ＣＡＲ−ＮＫ細胞を用いた治療；樹状細胞（ｄｅｎｄｒｉｃ  ｃｅｌｌ）を用いた治療；腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を用いた治療；養子移植抗腫瘍Ｔ細胞（生体外で増殖された且つ／またはＴＣＲトランスジェニックのＴ細胞）を用いた治療；カルメット・ゲラン桿菌（ＢＣＧ）などのワクチンを用いた治療；ＴＡＬＬ−１０４細胞を用いた治療；並びに、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニストＣｐＧおよびイミキモドなどの免疫刺激剤を用いた治療が挙げられるが、これらに限定はされず、上記の併用療法はエフェクター細胞による腫瘍細胞の殺傷を増大させ、すなわち、同時に投与された場合、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質と免疫療法との間には相乗作用が存在する。
【０１５３】
種々の実施形態において、併用療法は、同一の医薬組成物中で、または別々の医薬組成物中で、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質と第二の薬剤組成物とを同時に投与することを含む。種々の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質組成物と第二の薬剤組成物は、逐次的に投与され、すなわち、第二の薬剤組成物の投与の前または後に、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質組成物が投与される。種々の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質組成物と第二の薬剤組成物の投与は同時発生的であり、すなわち、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質組成物の投与時期と第二の薬剤組成物の投与時期は互いに重なっている。種々の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質組成物と第二の薬剤組成物の投与は、同時発生的ではない。例えば、種々の実施形態においては、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質組成物の投与は、第二の薬剤組成物が投与される前に終了される。種々の実施形態において、第二の薬剤組成物投与は、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質組成物が投与される前に終了される。
【実施例】
【０１５４】
以下の実施例は、本開示をより十分に例示するために提供されており、本開示の範囲を限定するものとは解釈されない。
実施例１
ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質の構築、発現、および精製
【０１５５】
全ての遺伝子には、哺乳類細胞における発現用のコドン最適化を行い、合成して、レシピエント哺乳類発現ベクター（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ）にサブクローニングした。ＣＭＶプロモーターによってタンパク質発現が駆動され、ＣＤＳの３’末端には合成ＳＶ４０ポリＡシグナル配列が存在している。上記コンストラクトのＮ末端にはリーダー配列が設けられており、これにより、分泌のための適切なシグナル伝達とプロセシングが実行される。ポリエチレンイミン（ＰＥＩ、分子量２５，０００、直鎖、ポリサイエンス社（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ））を用いて、浮遊液中で増殖中のＨＥＫ２９３−Ｆ細胞を上記哺乳類発現ベクターでコトランスフェクトすることにより、上記融合タンパク質を産生させた。２種以上の発現ベクターが存在していた場合、ベクターは１：１の比でトランスフェクトされることとなる。トランスフェクションにおいては、ＨＥＫ２９３細胞は無血清ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｍｅｄｉｕｍ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ））中で培養した。１０００ｍｌの振盪フラスコ（最大ワーキングボリュームは３３０ｍＬ）内で産生させる場合、トランスフェクションの２４時間前に、ＨＥＫ２９３細胞を０．８×１０６細胞／ｍｌの密度で播種した。総量３３０μｇのＤＮＡに達する発現ベクターを、１６．７ｍｌのＯｐｔｉ−ＭｅＭ培地（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）と混合した。１６．７ｍｌのＯｐｔｉ−ＭｅＭ培地で希釈した０．３３ｍｇのＰＥＩを添加した後、その混合物を１５秒間ボルテックスし、次いで室温で１０分間静置した。その後、このＤＮＡ／ＰＥＩ液を上記細胞に添加し、８％ＣＯ２雰囲気の恒温器内で３７℃でインキュベートした。終濃度２ｍｇ／Ｌの酪酸ナトリウム（ミリポアシグマ社）を４日目の細胞培養液に添加することで、タンパク質発現の維持を補助した。６日間の培養後、上清を収集し、２２００ｒｐｍで２０分間の遠心分離により精製を行った。この液を滅菌ろ過（０．２２μｍフィルター、コーニング社）した。プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーを用いて、細胞培養上清から分泌タンパク質を精製した。
【０１５６】
プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーを用いて、細胞培養上清から分泌タンパク質を精製した。細胞培養上清を、５カラム体積分（ＣＶ）のリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．２）（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）で平衡化したＨｉＴｒａｐ  ＭａｂＳｅｌｅｃｔ  ＳｕＲｅ  ５ｍｌカラム（ＧＥヘルスケア社）にローディングした。５ＣＶのＰＢＳ（ｐＨ７．２）で洗浄することで未結合のタンパク質を除去し、２５ｍＭクエン酸ナトリウム、２５ｍＭ塩化ナトリウム（ｐＨ３．２）で標的タンパク質を溶出させた。３％１Ｍ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ１０．２）の添加によりタンパク質溶液を中和した。Ａｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ−１５  Ｕｌｔｒａｃｅｌ  １０Ｋ（メルクミリポア社）を用いて、標的タンパク質の濃縮と、緩衝液のＰＢＳ（ｐＨ７．２）への交換を行った。
【０１５７】
精製された分子の純度および分子量を、還元剤の存在下および非存在下のＳＤＳ−ＰＡＧＥと、クーマシー（Ｉｍｐｅｒｉａｌ（商標）タンパク質染色、サーモフィッシャーサイエンティフィック社）染色により、分析した。ＮｕＰＡＧＥ（登録商標）Ｐｒｅ−Ｃａｓｔゲルシステム（４〜１２％Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ、サーモフィッシャーサイエンティフィック社）を製造業者の説明書に従い使用した。Ａｇｉｌｅｎｔ  １２００高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）システムで分子の凝集量を分析した。２５℃の、１５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．０）を移動相として用いる、ＡｄｖａｎｃｅＢｉｏサイズ排除カラム（３００Å、４．６×１５０ｍｍ、２．７μｍ、ＬＣカラム、アジレント社）に試料を注入した。
【０１５８】
Ｎａｎｏｄｒｏｐ分光光度計（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）を用いて２８０ｎｍの吸光度を測定し、アミノ酸配列に基づいて算出されたモル吸光係数で除算することにより、精製されたタンパク質試料のタンパク質濃度を求めた。Ｅｎｄｏｓａｆｅ  ｎｅｘｇｅｎ−ＰＴＳ（チャールスリバー社）を製造業者の取扱説明書に従って用いて、精製タンパク質試料のエンドトキシンレベルを測定した。
【０１５９】
単離されたＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合体構築物のタンパク質プロファイルを示す一例として、、Ｐ−０２１７、Ｐ−０２３４、およびＰ−０３１３のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を図２Ａに示す。Ｐ−０２１７、Ｐ−０２３４、およびＰ−０３１３は全て、Ｃ末端にＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体を含むＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質である。Ｐ−０２１７は一価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）−Ｆｃ融合体であり、Ｐ−０２３４はＰ−０２１７の二量体型の対応物であり、Ｐ−０３１３はＰ−０２３４と同じ融合体構成を共有しているが、ＩＬ−１５ドメインにおけるＳ５８Ｄ置換によってのみ異なっている。
【０１６０】
一価Ｆｃ融合体および二価Ｆｃ融合体の両方において、理論分子量８．６ｋＤａのＩＬ−１５Ｒαｓｕｓｈｉ＋ドメインが、Ｆｃドメインに融合したＩＬ−１５またはＩＬ−１５バリアントと非共有結合的に結び付いているが、これが変性条件下で解離し、シャープなバンドとして予想された位置まで移動した（図２Ａ）。ＩＬ−１５Ｒα−ｓｕｓｈｉ＋のバンドがゲル上に存在していたことから、細胞培養増殖中にＩＬ−１５とＩＬ−１５Ｒαとが非共有結合的に結び付いていたことが確認され；係る結び付きは、低ｐＨ溶出条件下でのプロテインＡ精製の際も維持された。
【０１６１】
図２Ｂのサイズ排除クロマトグラムから、３種全ての融合タンパク質において、ポリッシング工程を行っていない初期のプロテインＡ捕捉工程後に、凝集が１〜２％のしか見られなかったことから、上記２種類の融合体型の凝集傾向が小さいことが示された。主ピークがシャープであることから、ネイティブな緩衝液条件下ではＩＬ−１５とＩＬ−１５Ｒαの結び付きが堅固であることがさらに示唆される。
【０１６２】
さらに、融合タンパク質の発現レベルは、同じベクター・培養条件下でＦｃ単独タンパク質の発現レベルと同等（２倍差以内）であった。この収率が高く凝集が少ないという性質により、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）Ｆｃ融合タンパク質の一価型と二価型の両方の、好ましい開発適合性プロファイルが示された。さらに、Ｐ−０３１３によって例示される、ＩＬ−１５におけるアミノ酸置換は融合タンパク質の発現プロファイルには影響しておらず；Ｐ−０３１３はその野生型等価物であるＰ−０２３４とほぼ同じ純度と凝集傾向を示した（図２）。
【０１６３】
実施例２
種々の融合タンパク質型の純度に焦点を当てた開発適合性評価によって、融合タンパク質の開発適合性プロファイルを強化することにおける、適切に複合体化されたＩＬ−１５Ｒαドメインの役割が明確に示された
プロテインＡ精製試料のＳＥＣ分析を用いて、タンパク質の凝集傾向および純度に対する融合体型の差異による影響を評価した。本発明者らの所見によれば、タンパク質発現レベルは細胞増殖のばらつきによって異なるバッチ間で異なる場合があるが、タンパク質の凝集傾向および純度は、特定のタンパク質に関連した固有の特性であるため、Ｐ−０２３４に関して図３Ｆおよび図３Ｈに例示されているように、ロット間のばらつきは小さいようであった。
【０１６４】
まず、５種類の分子に基づいて、ＩＬ−１５−Ｆｃ融合タンパク質のタンパク質純度に対するＩＬ−１５Ｒαの複合体形成の影響を評価した。Ｐ−０１６２は、Ｈｏｌｅ−Ｆｃ−リンカー１−ＩＬ−１５鎖（配列番号１３）と空の（ｅｍｐｔｙ）Ｋｎｏｂ−Ｆｃ鎖（配列番号７）とを含む、Ｃ末端単量体ＩＬ−１５単独−Ｆｃ融合タンパク質である。Ｐ−０１９７は、Ｃ末端一価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）−Ｆｃ融合体であり、その模式図は図１Ｂに示されている。Ｐ−０１９７は、ＩＬ−１５と非共有結合的に複合体形成している遊離ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ＋ドメインの存在によってのみ、Ｐ−０１６２と異なる。Ｐ−０１５３は、ヘテロ二量体Ｆｃ融合体型の、Ｎ末端単量体ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα融合体であり、図１Ａにそのイラスト（ｃａｒｔｏｏｎ  ｄｉａｇｒａｍ）が示されている。Ｐ−０１６７およびＰ−０１９８は、それぞれＰ−０１６２およびＰ−０１９７の二量体対応物である。５種類の分子のサイズ排除分離の図表を図３Ａ〜図３Ｅに示す。
【０１６５】
図３Ａから分かるように、ＩＬ−１５Ｒαを含まないＩＬ−１５−Ｆｃ単量体型融合体は、８４．５％の単量体含有量を有し、不純物の大部分は分子量がより小さいものである。対照的に、Ｐ−０１９７は９８．６％の単量体含有量を含み（図３Ｂ）、そのような著しいタンパク質改善に、遊離ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ＋ドメインが寄与していることは明白であった。ＩＬ−１５−Ｆｃ融合タンパク質のタンパク質品質に対する遊離ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ＋ドメインの影響が、さらに二量体型においても明確にされ、このことは、それぞれ図３Ｄおよび図３ＥのＰ−０１６７およびＰ−０１９８のＳＥＣクロマトグラムにより示されている。Ｐ−０１６７は、主要ピークの両側に肩を有する、ブロードで変則的なピークを含んでいる。さらに注目すべきことに、Ｐ−０１６７は、新鮮ヒトＰＢＭＣのＮＫ細胞およびＴ細胞の活性化において、いかなる生体外活性も示さず、これはタンパク質の誤った折り畳みによるものと考えられた。しかしながら、二量体形態の非共有結合的に結合したＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ＋ドメインを含むＰ−０１９８は、９０．５％の単量体含有量を有するシャープな主要ピークを示した（図３Ｅ）。少し興味深いことに、ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ＋ドメインが遊離状態ではなく、Ｐ−０１５３でのようにマッチするヘテロ二量体Ｆｃに共有結合的に融合していた場合、ＩＬ−１５−Ｆｃとのその複合体形成は、タンパク質純度にいかなる改善ももたらさず；むしろ、そのタンパク質試料は、２５％超の二量体と、より分子量が高い可溶性凝集体を含有することとなっている（図３Ｃ）。ＩＬ−１５とＩＬ−１５Ｒαの両方のＦｃドメインへの融合は、それらの生理学的な相互作用を抑制する空間的な拘束を生み出していると考えられた。要約すると、ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ＋ドメインは、ＩＬ−１５−Ｆｃ融合タンパク質の純度および生物物理学的特性を顕著に改善できるが、ただし、ＩＬ−１５Ｒαドメインが好ましい非拘束的な様式でＩＬ−１５と結合可能な場合のみである。
【０１６６】
第二に、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の開発適合性に対する、ＩＬ−１５ＲαＥＣＤ（配列番号４）の影響とＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ＋（配列番号５）の影響の比較を、Ｐ−０２３４とＰ−０２２０を比較することにより、評価した。両方の構築物が、図１Ｃに示されているような同じ構成を共有しているＣ末端Ｆｃ融合体であり、Ｐ−０２３４においてはＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ＋ドメインが含まれ、Ｐ−０２２０においてはＩＬ−１５ＲαＥＣＤが含まれている。それらのＳＥＣクロマトグラムが図３Ｆおよび図３Ｇにそれぞれ示されている。ＩＬ−１５ＲαＥＣＤドメインを含むタンパク質であるＰ−０２２０は、そのＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ＋を含有する対応物であるＰ−０２３４よりも純度が低いだけでなく（８８．５％対１００％）、同一バッチの細胞において発現レベルが１／２．５倍の低さとなった。要約すると、より開発適合性の高いＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質を構築する際に、ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ＋ドメインがＩＬ−１５ＲαＥＣＤよりも好ましいパートナーであることは明らかである。
【０１６７】
さらに、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の開発適合性に対する融合体末端の影響を評価した。Ｐ−０２３４およびＰ−０２２３は、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ複合体がそれぞれＦｃのＣ末端およびＮ末端に取り付けられた二量体ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質である。これらのＳＥＣクロマトグラム（図３Ｈおよび図３Ｉ）は、純度においてはやや微妙な差異しか示していない（９８．５％対９３．９％）。しかし、精製後のＰ−０２２３は、より分子量が大きい種のブロードなピークと、より分子量が小さい不純物を含有する小さいがはっきりと分かるピークとを、一貫して含有しており、これらはＰ−０２３４には実質的に含まれていなかった。差は小さいものの、Ｃ末端融合を有するＰ−０２３４は、確かにより良好なＳＥＣ純度プロファイルを有しており、両方の分子が同等のレベルで発現されることを考えると、開発適合性の観点から好ましい型である。
【０１６８】
結論として、ＩＬ−１５ＲαサブユニットとＩＬ−１５−Ｆｃ融合体とを複合体形成することで、有意に発現と純度を改善し、凝集を低減することができ；そのような改善には、空間的な束縛を最小限にしながら、ＩＬ−１５ＲαがＩＬ−１５と適切に結び付くことが必要となる。そして、ＩＬ−１５ＲαＥＣＤの切断型であるＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ＋は、生産性評価と純度評価の両方に基づいて、完全長ＥＣＤよりも好ましいように思われた。さらに、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体をＦｃのＣ末端に配置することは、高い純度を達成する上でＮ末端融合よりも有利である。従って、Ｐ−０２３４によって例示される、二量体ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）Ｃ末端Ｆｃ融合型が、これらの好ましい成分を全て組み込んでおり、優位な型である。
【０１６９】
実施例３
ＩＬ−１５Ｒαの非共有結合的な結び付きがＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の受容体結合および生物活性を増強する
ＩＬ−１５はその特異的受容体ＩＬ−１５Ｒαに高い親和性で結合し、両者は抗原提示細胞上に発現される。ＩＬ−１５ＲαがＩＬ−１５と結び付くことで、ＮＫ細胞、Ｔ細胞、およびＢ細胞を含む応答中のリンパ球上のＩＬ−１５Ｒβとγｃから構成されるヘテロ二量体受容体複合体に、ＩＬ−１５がトランス提示される。リガンド−三量体型受容体複合体（ＩＬ−１５−ＩＬ−１５Ｒαβγ）の形成は、細胞内シグナル伝達カスケードを惹起し、下流の生物学的効果をもたらす。ＩＬ−１５受容体の生物学的性質が複雑であることから、立体構造的に効率的なリガンド−三量体型受容体シグナリング複合体を実現する、最適なＩＬ−１５融合タンパク質を設計するための検証が避けられている。
【０１７０】
ＩＬ−１５をヒトＩｇＧのＦｃ部分のＮ末端またはＣ末端に共有結合させることは、ＩＬ−１５をＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質と非共有結合的に結び付けることよりも、インビボ半減期延長においてより有利であるだろうと仮説を立てた。さらに、ＩＬ−１５−Ｆｃ融合タンパク質が、中間親和性ＩＬ−２Ｒβγ受容体とのその相互作用を増強し、高親和性リガンド−三量体型受容体シグナリング複合体の形成を促進するためには、ＩＬ−１５Ｒαドメインが必要であるとの仮説を立てた。さらに、ＩＬ−１５ＲαドメインのＩＬ−１５−Ｆｃ融合タンパク質との非共有結合的な結び付きは、天然のＩＬ−１５とＩＬ−１５Ｒαとの結び付きと、ＩＬ−１５のトランス提示に最適な高次構造とを保持していると考えられる。さらに、ＩＬ−１５とＩＬ−１５Ｒαドメインとの間の結合親和性は極めて高いため、そのような融合タンパク質複合体の生成は可能であると考えた。
【０１７１】
様々な立体配置でＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαドメイン複合体を含む、様々な型のＩＬ−１５−Ｆｃ融合タンパク質を構築した。融合タンパク質のＩＬ−１５Ｒβサブユニットへの結合活性を測定し、ヒトＣＤ８細胞およびヒトＮＫ細胞上のＣＤ６９発現を測定することにより、リンパ球活性化を刺激する際の融合タンパク質の生物活性を分析した。融合タンパク質の例示的な構造図が図１に示される。
【０１７２】
結合活性はＥＬＩＳＡアッセイで試験した。簡潔に説明すると、Ｎｕｎｃ  Ｍａｘｉｓｏｒｐ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）プレートを、炭酸水素塩緩衝液（ｐＨ９．４）（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）中、１μｇ／ウェル（１００μｌ／ウェル）のｈｕＩＬ−１５Ｒβ−６Ｈｉｓで一晩、４℃でコーティングした。ＰＢＳ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０で３回洗浄後、プレートをＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ（３００μｌ／ウェル）を加えて室温で２時間インキュベートし、非特異的な結合のブロッキングを行った。洗浄後、ブロッキング用緩衝液で３倍段階希釈した各ＩＬ−１５化合物をプレートに添加し（１００μｌ／ウェル）、室温で１時間インキュベートした。洗浄後、Ｆｃ融合体の検出を、ブロッキング用緩衝液（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）（１００μｌ／ウェル）中１：５０００希釈の西洋わさびペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合型ヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ二次抗体と室温で１時間インキュベートすることにより行った。洗浄後、ＴＭＢ基質（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）を添加した（１００μｌ／ウェル）。プレートを密封し、室温の暗所で５〜２０分間インキュベートした。２Ｎ硫酸（リッカ・ケミカル社（Ｒｉｃｃａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ））（５０μＬ／ウェル）を加えることで反応を止め、４５０〜５９０ｎｍでの吸光度を読み取った。
【０１７３】
ヒトＮＫ細胞上およびヒトＣＤ８  Ｔ細胞上でのＣＤ６９発現の誘導を測定することにより、生物活性の測定を行った。ＣＤ６９は、リンパ球活性化の際、初期に誘導される細胞表面糖タンパク質である。ＩＬ−１５処理後にＣＤ６９を発現するＮＫ細胞またはＣＤ８  Ｔ細胞細胞の数／割合を分析するために、生体外ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）アッセイを確立した。具体的には、オクラホマ血液研究所（Ｂｌｏｏｄ  Ｏｋｌａｈｏｍａ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）より購入したバフィーコートからのフィコール・ハイパック遠心分離によって、ヒトＰＢＭＣを単離した。精製後のヒトＰＢＭＣを各ＩＬ−１５試験化合物の段階希釈系列で処理し、３７℃で４８時間インキュベートした。細胞を３００Ｇ遠心分離で収集し、ＦＡＣＳ用緩衝液に再懸濁した。Ｈｕｍａｎ  ＴｒｕＳｔａｉｎ  ＦｃＸ（１：５０希釈）を添加してＦｃ受容体をブロッキングした後、抗ヒトＣＤ５６−ＦＩＴＣ抗体、抗ヒトＣＤ６９−ＰＥ抗体、および抗ヒトＣＤ８−ＡＰＣ抗体（１：５０希釈）を用いて細胞を染色した。上記抗体と一緒に室温で３０分間インキュベートした後、細胞を収集し、洗浄し、ＦＡＣＳ用緩衝液に再懸濁し、フローサイトメトリー分析用に準備を行った。ＣＤ５６＋ＮＫ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞上のＣＤ６９発現を測定した。データはゲーティングされた集団中のＣＤ６９陽性細胞の割合（％）として表現される。
【０１７４】
Ｐ−０１５７はＮ末端二価ＩＬ−１５（非共有結合性）／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ−Ｆｃ融合タンパク質であり；Ｐ−０１５３はＣ末端ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質であり；Ｐ−０１６２はＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉが複合体形成されていないＣ末端一価Ｆｃ−ＩＬ−１５融合タンパク質である。ＥＬＩＳＡ結合アッセイから、ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉドメインの組み入れにより、ＩＬ−１５Ｒαが複合体形成していない融合タンパク質（Ｐ−０１６２）と比較して、ＩＬ−１５−Ｆｃ融合タンパク質（Ｐ−０１５７およびＰ０１５３）のＩＬ−１５Ｒβへの結合強度が著しく増加することが示され（図４）、このことは、融合タンパク質の受容体との相互作用を促進する際の、ＩＬ−１５Ｒαの重要な役割を示唆している。さらに、ＩＬ−１５がＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質に非共有結合的に結合している場合（Ｐ−０１５７）とは対照的に、ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒαの両方がＦｃにヘテロ二量体形態で共有結合的に共役している場合（Ｐ−０１５３）に、受容体結合活性が低減したが（図４）、このことは、立体構造的に制限された融合体型は受容体結合活性に負の影響を与えるであろうことを示唆している。
【０１７５】
結合強度と一貫して、ＩＬ−１５Ｒαの組み込みは、ＩＬ−１５Ｒαを含まない融合タンパク質と比較した場合、ＩＬ−１５融合タンパク質の生物活性も増大させた。Ｐ−０１９７はＣ末端一価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質であり、Ｐ−０１６２はＩＬ−１５Ｒαｓｕｓｈｉが含まれていないＰ−０１９７と同じ構造を共有している。Ｐ−０１９７は、ＣＤ６９陽性ＮＫ細胞（図５Ａ）およびＣＤ８  Ｔ細胞（図５Ｂ）の誘導において、Ｐ−０１６２と比較して、それぞれ１０倍および６倍の作用強度の増加を示したが、これは、ＩＬ−１５Ｒαが含まれていることによるものである。
【０１７６】
最後に、３種類のＣ末端一価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の生物活性を比較した。Ｐ−０１６５は、Ｆｃドメインに融合されたＩＬ−１５ＲαとＩＬ−１５とが非共有結合的に結合しているＦｃ融合タンパク質であり；Ｐ−０１９７は、逆に構成され、Ｆｃドメインに融合されたＩＬ−１５とＩＬ−１５Ｒαとが非共有結合的に結合しており；Ｐ−０１５３は、ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒαの両方がＦｃドメインに融合されているヘテロ二量体構造を有する。図６に示されているように、ＩＬ−１５またはＩＬ−１５Ｒαとの非共有結合的な複合体形成による融合タンパク質は、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαがＦｃに共有結合的に融合されている融合タンパク質、およびＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαがＦｃにヘテロ二量体として融合されている融合タンパク質の両者よりも、ＣＤ６９陽性ＮＫ細胞（図６Ａ）およびＣＤ８  Ｔ細胞（図６Ｂ）の誘導において、より良好な作用強度を示した。データから、ＩＬ−１５とＩＬ−１５Ｒαとの間の立体構造的に最適な結び付きが、ＩＬ−１５融合タンパク質がその受容体と結合しその生物活性を発現する上で、極めて重要であることが示唆される。ヘテロ二量体Ｆｃ融合体型など、立体構造的な制限の増大は、生物活性に負の影響を与える。
【０１７７】
実施例４
ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の活性に対するリンカーの影響
タンパク質ドメイン同士を連結するための好適なリンカーの選択は、融合タンパク質の設計において極めて重要である。ペプチドリンカーは、融合タンパク質ドメイン同士の間に空間的な距離を与えることで、それらが独立してフォールディングされることを可能にするだけでなく、融合タンパク質の構造的な安定性および機能特性に直接的な影響を与える。ここでは、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の生物活性に対するリンカーの柔軟性および長さの影響について調べる。
【０１７８】
前述の通りのエキソビボヒトＰＢＭＣ  ＦＡＣＳベースアッセイでヒトＮＫ細胞上およびＣＤ８  Ｔ細胞上のＣＤ６９発現の誘導を測定することにより、生物活性の確認を行った。Ｐ−０１６５およびＰ−０１６６は、１０アミノ酸の剛直なリンカーおよび柔軟なリンカーをそれぞれ有する、単量体ＩＬ−１５（非共有結合性）／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合体である。Ｐ−０１９７、Ｐ−０２０７、およびＰ−０２１７は、剛直なリンカー、１０アミノ酸長のＧＳリッチな柔軟リンカー、および１５アミノ酸長のＧＳリッチな柔軟リンカーをそれぞれ有する、一価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質である。結果から、ＦｃとＩＬ−１５（Ｐ−０１６５およびＰ−０１６６）とを連結している、またはＦｃとＩＬ−１５Ｒα（Ｐ−０１９７、Ｐ−０２０７、およびＰ−０２１７）とを連結しているペプチドリンカーの剛直性または長さは、試験された融合タンパク質の生物活性に影響を与えないことが示された（図７Ａおよび図７Ｂ）。
【０１７９】
実施例５
ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα融合タンパク質の活性に対する結合価の影響
治療用途のＦｃ融合タンパク質は大部分がホモ二量体であるが、これは、ヒンジ領域に形成されるジスルフィド結合によって、ＩｇＧ１のＦｃが天然にホモ二量体化するためである。二量体型のタンパク質は、アビディティー、安定性、量、サイズ、および機能の点で有利である。しかし、Ｆｃに操作を加えた場合、単量体型のＦｃ融合タンパク質が生み出される可能性があった。この変化が、生物活性、薬物動態学、副作用に影響を与えたり、二量体型タンパク質のサイズを減少させて組織透過性に繋がる可能性があった。ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の生物活性に対する結合価の影響を評価するため、種々のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合体構成を有する、単量体形態およびホモ二量体形態を両方構築し、生物活性を試験した。
【０１８０】
前述の通りのエキソビボヒトＰＢＭＣ  ＦＡＣＳベースアッセイでヒトＮＫ細胞上およびＣＤ８  Ｔ細胞上のＣＤ６９発現の誘導を測定することにより、生物活性の確認を行った。結果から、試験された全ての融合体型（表２）を通して、ホモ二量体形態であるＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、それぞれの単量体型対応物と比較して生物活性においておよそ２倍の増強を示すことが示され、これにより、二量体型の結合価が機能性に利点を与え得ることが示唆された。
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【０１８１】
実施例６
ＩＬ−１５の生物活性に対するＮ末端Ｆｃ融合またはＣ末端Ｆｃ融合の影響
Ｆｃ融合タンパク質は、スペーサーリンカーが連結するＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体を、ＦｃのＮ末端またはＣ末端のどちらに配置することでも、構築することができる。融合タンパク質のフォールディングと発現が正しく行われているかどうか、および、生物活性が保持されているかどうかによって、最適な骨格を決定した。リンカーで空間を空けてＦｃのＮ末端またはＣ末端のいずれかにＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体を取り付けることで、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質を作製した。ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体はまた、Ｃ末端融合およびＮ末端融合に関連して、異なるように構成した。Ｐ−０２１８はＣ末端型の二価ＩＬ−１５（非共有結合性）／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質であり、標準はＩＬ−１５にＮ７２Ｄ置換を追加で有するＰ−０２１８のＮ末端型対応物である。Ｐ−０２３４はＣ末端型の二価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質であり、Ｐ−０２２３はＰ−０２３４のＮ末端型対応物である。
【０１８２】
ＩＬ−１５化合物処理後のＮＫ細胞およびＣＤ８  Ｔ細胞の核内のＫｉ６７発現を測定することにより、融合タンパク質の生物活性を測定した。ＩＬ−１５は、ＮＫ細胞、Ｔ細胞、およびＢ細胞の増殖および分化を刺激する強力なリンパ球増殖因子である。Ｋｉ６７は、細胞周期の全ての活動期（Ｇ１、Ｓ、Ｇ２、およびＭ）で誘導されるが、静止期（Ｇ０）では誘導されず、そのため細胞増殖能マーカーとなる、核タンパク質である。
【０１８３】
エキソビボヒトＰＢＭＣアッセイを確立した。簡潔に述べると、精製後のヒトＰＢＭＣをＩＬ−１５試験化合物の段階希釈系列で処理し、３７℃で３日間インキュベートした。２日間毎に、培地の５０％に対して、新鮮な培地および試験化合物で補充を行った。３日目、細胞をＦＡＣＳ用緩衝液（１％ＦＢＳ／ＰＢＳ）で１回洗浄し、Ｆｃブロッカーと、抗ヒトＣＤ５６−ＦＩＴＣ、抗ヒトＣＤ８−ＡＰＣ、および抗ヒトＣＤ４−Ｐｅｒｃｐ−ｃｙ５．５（１：５０希釈）を含む表面マーカー抗体とで１回目の染色を行った。３０分間のインキュベーションと洗浄の後、細胞ペレットを２００μｌ／ウェルの１×Ｆｏｘｐ３固定・透過処理用ワーキング溶液で完全に再懸濁し、室温の暗所で３０分間インキュベートした。遠心分離後、２００μｌの１×透過処理用緩衝液を各ウェルに添加し、さらなる洗浄を行った。細胞ペレットを抗ヒトＫｉ６７−ＰＥ（１：１０希釈）を含む透過処理用緩衝液で再懸濁した。室温で３０分間インキュベートした後、細胞を収集し、洗浄し、ＦＡＣＳ用緩衝液に再懸濁し、フローサイトメトリー分析用に準備を行った。データは、ゲーティングされた集団におけるＫｉ６７陽性細胞の割合（％）として表される。
【０１８４】
図８に示されているように、Ｃ末端型Ｆｃ融合体（Ｐ−０２１８およびＰ−０２３４）は、Ｎ末端型Ｆｃ融合体対応物（標準およびＰ−０２２３）よりも強力な、Ｋｉ６７陽性ＣＤ８  Ｔ細胞の誘導、すなわちＣＤ８  Ｔ細胞増殖の誘導を一貫して示した（図８Ａおよび図８Ｂ）。データから、ＦｃのＣ末端がＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体の好ましい連結部位であり、生物活性の保存を可能とすることが示唆される。
【０１８５】
実施例７
ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の活性に対する受容体αドメインの選択の影響
ＩＬ−１５はＩＬ−１５Ｒαの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に結合するが、この結合は主にｓｕｓｈｉドメインと呼ばれる保存されたタンパク質結合モチーフによるものである。融合タンパク質の構築においては、サイズと構造的複雑さを低減するために、このＩＬ−１５Ｒαの短い切断型が好ましい場合がある。結合特異性および親和性を確認するため、ＩＬ−１５の結合性を付与するＥＣＤドメインの全体または一部（追加の１２アミノ酸を有するＳｕｓｈｉドメイン）を融合タンパク質内に構築し、機能活性を測定した。
【０１８６】
Ｐ−０２３４およびＰ−０２２０は、ＩＬ−１５Ｒαがそれぞれｓｕｓｈｉおよび完全ＥＣＤである、Ｃ末端二量体ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）融合タンパク質である。Ｐ−０２２３およびＰ−０２２４は、ＩＬ−１５Ｒαがそれぞれｓｕｓｈｉおよび完全ＥＣＤである、Ｎ末端二量体ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質である。Ｐ−０２２１およびＰ−０２２２は、ＩＬ−１５Ｒαがそれぞれｓｕｓｈｉおよび完全ＥＣＤである、Ｎ末端一価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質である。結果から、融合体型がＮ末端型かＣ末端型か、二量体型か単量体型かにかかわらず、ＩＬ−１５Ｒαｓｕｓｈｉドメインと非共有結合的に複合体形成した融合タンパク質は、ＩＬ−１５Ｒα完全ＥＣＤと複合体形成したものよりも、ＣＤ６９陽性ＮＫ細胞の誘導においてより強力であることが示された（図９）。データから、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質を構築し、ＩＬ−１５がシグナル伝達受容体と相互作用するのに最適な高次構造を付与することにおいて、ＩＬ−１５Ｒαｓｕｓｈｉドメインが完全ＥＣＤよりも好ましいことが示唆される。
【０１８７】
実施例８
ＩＬ−１５変異体、およびＩＬ−１５Ｒβに対するバリアント融合タンパク質の結合活性
ＩＬ−１５のアゴニスト、スーパーアゴニスト、またはアンタゴニストを探索する際、ＩＬ−１５と受容体βまたは受容体γとの間の接触相間のヒトＩＬ−１５ペプチド配列に、欠失、挿入、または点変異を導入した。これらのバリアントを様々な型のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質に導入し、前述の通りの酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）によってＩＬ−１５Ｒβに対する結合活性を定量した。
【０１８８】
表３は、Ｃ末端ＩＬ−１５バリアント／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質のＩＬ−１５Ｒβ結合活性を示している。ＩＬ−１５バリアントは、ヒトＩＬ−１５ペプチドにアミノ酸欠失、アミノ酸挿入、またはアミノ酸点変異が導入されたものである。ＩＬ−１５のＣ末端から３個のアミノ酸を切断した場合、完全長野生型ＩＬ−１５融合タンパク質と比較して、ＩＬ−１５Ｒβに対する融合タンパク質の結合活性は保持されたが、一方、ＩＬ−１５のＣ末端から６個または９個のアミノ酸をさらに切断した場合、融合タンパク質結合活性に漸減が見られた。Ｎ９５の後の様々な長さのＧＳ挿入によって、融合タンパク質のＩＬ−１５Ｒβ結合活性の減少が生じた。１０８位における単一点変異（Ｑ１０８ＳおよびＱ１０８Ａ）、並びに組み合わせ変異（Ｑ１０８Ｓ、Ｄ３０Ｔ、Ｖ３１Ｙ、Ｈ３１Ｅ）は、野生型融合タンパク質のＲβ結合活性を大部分保持した。
【０１８９】
表４は、ヒトＩＬ−１５ドメインが５８位、６２位、６３位、６７位、または６８位に１つのアミノ酸置換を含んでいる、単量体ＩＬ−１５バリアント（非共有結合性）／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のＩＬ−１５Ｒβ結合活性を示している。ＩＬ−１５（Ｉ６７Ｖ）バリアントを含むＦｃ融合タンパク質であるＰ−０１８５は、野生型融合タンパク質と同様の、ＩＬ−１５Ｒβに対する結合活性を示した。５８位にセリンからアスパラギン酸へのアミノ酸置換（Ｓ５８Ｄ）を有するＩＬ−１５バリアントを含む融合タンパク質であるＰ−０１８２は、ＩＬ−１５Ｒβに対する結合活性において、野生型融合タンパク質と比較して４倍の増強を示した。ＩＬ−１５ペプチドの６２位、６３位、および６８位における置換は、融合タンパク質のＩＬ−１５Ｒβ結合活性に、異なる程度の低減をもたらした。
【０１９０】
表５は、ヒトＩＬ−１５が５８位もしくは６８位に１つのアミノ酸置換を含んでいる、またはＮ９５の後にアミノ酸挿入を含んでいる、二量体ＩＬ−１５バリアント／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質のＩＬ−１５Ｒβ結合活性を示している。同様に、Ｐ−０１８２で見られたように（表４）、Ｓ５８Ｄを有する同じＩＬ−１５バリアントを含むＰ−０３１３は、その各々の野生型融合タンパク質Ｐ−０２３４と比較した場合に、ＩＬ−１５Ｒβに対する結合活性において２倍の増強を示した。このデータから、ＩＬ−１５ペプチドにおけるＳ５８Ｄ置換が、受容体結合活性の増強により、ＩＬ−１５をスーパーアゴニストへと調整し得るとの考えが補強された。
【０１９１】
要約すると、ＩＬ−１５バリアント−Ｆｃ融合タンパク質を作製したところ、ＩＬ−１５Ｒβ結合活性が異なることが確認された。ＩＬ−１５バリアントのいくつかは、それらの野生型対応物と比較した場合に、ＩＬ−１５Ｒβに対する結合活性の減少を示した（表３〜５）。Ｐ−０１７３、Ｐ−０１７９、Ｐ−０１８０、Ｐ−０１８１、Ｐ−０１８５などのいくつかのバリアントは、野生型と同様の、ＩＬ−１５Ｒβに対する結合活性を保持した（表３）。ヒトＩＬ−１５ドメインの５８位のセリンがアスパラギン酸に置換された単一点変異は、融合タンパク質（Ｐ−０１８２およびＰ−０３１３）の、ＩＬ−１５Ｒβに対する結合活性を増強させた（表４および表５）。
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【０１９２】
実施例９
ＩＬ−１５バリアント／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の機能活性
ＩＬ−１５バリアント／ＩＬ−１５Ｒα複合体のＦｃ融合タンパク質を、リンパ球活性化の刺激におけるその機能活性について評価した。前述のように、リンパ球活性化マーカーであるＣＤ６９を発現するＣＤ８  Ｔ細胞の数／割合（％）を分析するために、エキソビボヒトＰＢＭＣアッセイを確立した。
【０１９３】
Ｐ−０２３４は、ＩＬ−１５のＦｃへの共有結合的な連結、Ｃ末端での融合、二量体型の結合価、および非共有結合的なＩＬ−１５Ｒαｓｕｓｈｉの複合体形成を含む、好ましい構成の組み合わせにより最適化された、Ｃ末端二量体ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαｓｕｓｈｉ（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質である。Ｐ−０３１３はＰ−０２３４のＳ５８Ｄ対応物である。Ｐ−０３１３はＰ−０２３４と同じ融合体構成を共有しているが、ＩＬ−１５ポリペプチドにおけるＳ５８Ｄ置換の点でのみ異なっている。Ｐ−０３１３は、上述の通り（表５）、野生型対応物Ｐ−０２３４と比較して、ＩＬ−１５Ｒβ結合活性の増加を示した。ＩＬ−１５Ｒβに対する結合活性の増強と一貫して、Ｓ５８Ｄ変異を有するバリアントＰ−０３１３は、ＣＤ６９陽性Ｔ細胞の誘導活性の増加も示し（表６）、これにより、Ｐ−０３１３がスーパーアゴニスト活性を示すことが確認された。興味深いことに、野生型融合タンパク質と同等にＩＬ−１５Ｒβに結合した（表３）、２種類のＩＬ−１５バリアント融合タンパク質（Ｐ−０１７９およびＰ−０１８１）は、ＣＤ６９陽性ＣＤ８  Ｔ細胞誘導能の完全喪失を示し（表６）、これら２種類のＩＬ−１５バリアントの、γＣと相互作用する能力が損なわれている可能性と、それによる、シグナル伝達活性の消失と、生物学的機能の抑制が示唆される。Ｐ−０１７９およびＰ−０１８１を含むこれらのバリアントは、内在性ＩＬ−１５の機能をブロックするドミナントネガティブなアンタゴニストとして働く可能性がある。
【０１９４】
加えて、ＩＬ−１５バリアント／ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ複合体のＦｃ融合タンパク質もＣＤ６９アッセイで試験したところ、それらの生物活性は、各々の野生型融合体と比較した場合に、保持または低減された（表６および表７）。
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【０１９５】
実施例１０
ＩＬ−１５（Ｓ５８Ｄ）／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のシグナル伝達活性
ＩＬ−１５（Ｓ５８Ｄ）バリアントは、ＩＬ−１５Ｒβに対する結合活性の増加と、ＣＤ６９陽性リンパ球の刺激活性の増強を示した。本試験では、ＮＫ細胞およびＴ細胞における、シグナル伝達性転写因子５の細胞内リン酸化（ｐＳＴＡＴ５）の刺激における、ＩＬ−１５（Ｓ５８Ｄ）／ＩＬ−１５Ｒα融合タンパク質のシグナル伝達活性を調べた。
【０１９６】
ＩＬ−１５化合物処理後のエキソビボヒトＰＢＭＣアッセイにおける細胞内ＦＡＣＳ分析により、ＳＴＡＴ５リン酸化を測定した。簡潔に述べると、精製後のヒトＰＢＭＣをＩＬ−１５試験化合物の段階希釈系列で処理し、３７℃で１５分間インキュベートした。処理の終わりに、細胞をＦＡＣＳ用緩衝液（１％ＦＢＳ／ＰＢＳ）で１回洗浄し、１５０μｌ／ウェルの予め温めた３７℃のＣｙｔｏｆｉｘ固定用緩衝液中で１５分間インキュベートした。固定後の細胞は、１５０μｌ／ウェルの予め冷やした４℃のＰｅｒｍ  ｂｕｆｆｅｒ  ＩＩで３０分間、再度洗浄と再懸濁を行うべきである。Ｈｕｍａｎ  ＴｒｕＳｔａｉｎ  ＦｃＸ（１：５０希釈）を添加してＦｃ受容体をブロッキングした後、抗ヒトＣＤ５６−ＦＩＴＣ、抗ヒトｐＳＴＡＴ５−ＰＥ、抗ヒトＣＤ８−ＡＰＣ、および抗ヒトＣＤ４−Ｐｅｒｃｐ−ｃｙ５．５（１：５０希釈）を用いて細胞を染色した。上記抗体と一緒に室温で４５分間インキュベートした後、細胞を収集し、洗浄し、ＦＡＣＳ用緩衝液に再懸濁し、フローサイトメトリー分析用に準備を行った。データは、ゲーティングされた集団におけるｐＳＴＡＴ５陽性細胞の割合（％）として表される。
【０１９７】
２種類の型のＦｃ融合タンパク質、二価ＩＬ−１５（非共有結合性）／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合体およびＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質、にＳ５８Ｄ変異を導入した。Ｐ−０２１８およびＰ−０３１４は、それぞれ野生型ＩＬ−１５およびＳ５８ＤバリアントＩＬ−１５を含む、Ｃ末端二量体ＩＬ−１５（非共有結合性）／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質である。Ｐ−０２３４およびＰ−０３１３は、それぞれ野生型ＩＬ−１５およびＳ５８ＤバリアントＩＬ−１５を含む、Ｃ末端二量体ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質である。融合体の構成に関係なく、ＩＬ−１５（Ｓ５８Ｄ）バリアント融合タンパク質（Ｐ−０３１４およびＰ−０３１３）は、ＣＤ８  Ｔ細胞（図１０Ａ）、ＣＤ４  Ｔ細胞（図１０Ｂ）、およびＮＫ細胞（図１０Ｃ）で、それら各々の野生型融合タンパク質（Ｐ−０２１８およびＰ−０２３４）と比較した場合に、ＳＴＡＴ５リン酸化の刺激活性において、約２倍の増加を示した。データから、ＩＬ−１５ペプチドにけるＳ５８Ｄ置換が、各種ＩＬ−１５タンパク質のスーパーアゴニスト活性を繋がることが確認された。
【０１９８】
実施例１１
ＩＬ−１５（Ｓ５８Ｄ）／ＩＬ−１５−Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の細胞増殖活性
ＩＬ−１５Ｒβに結合し、ＳＴＡＴ５リン酸化を刺激し、ＣＤ６９発現を誘導する能力の増加が確認された後、ＩＬ−１５（Ｓ５８Ｄ）バリアント−Ｆｃ融合タンパク質を、細胞増殖を刺激するそれらの能力について、野生型融合タンパク質との比較において、ＮＫ細胞およびＣＤ８  Ｔ細胞におけるＫｉ６７発現の測定により、試験した。ヒトＰＢＭＣを漸増量のＩＬ−１５融合体分子で処理し、前述の通り、ＣＤ５６＋ＮＫ細胞集団およびＣＤ８＋Ｔ細胞集団にゲーティングした細胞内ＦＡＣＳ分析でＫｉ６７発現を測定した。
【０１９９】
ＳＴＡＴ５リン酸化において観察されたことと同様に、（図１１）に示されるように、ＩＬ−１５（Ｓ５８Ｄ）バリアントの融合タンパク質はまた、ＣＤ８＋Ｔ細胞（図１１Ａ）、ＣＤ４＋Ｔ細胞（図１１Ｂ）、およびＣＤ５６＋ＮＫ細胞（図１１Ｃ）において、Ｋｉ６７発現の刺激活性において、野生型と比較して２倍の増加を示した。これらのデータから、ＩＬ−１５ドメインにおけるＳ５８Ｄ変異の導入が、受容体結合、細胞内シグナル伝達、細胞表面マーカーの活性化、および細胞増殖の活性化を含む一連の生物活性の増強をもたらすことが、確固となった。
【０２００】
実施例１２
マウスにおける、ｒｈＩＬ−１５および標準と比較した、Ｐ−０２３４による４日間反復投与試験
ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、インビトロおよびエキソビボで、ＩＬ−１５Ｒβに結合し、細胞内シグナル伝達カスケードを誘導し、ＮＫリンパ球およびＣＤ８  Ｔリンパ球の増殖を刺激する強力な能力を示した。ここで、マウスにおいて、血清中暴露量と、ＮＫ細胞の増殖能および増殖に対する各種ＩＬ−１５化合物の効果を調べた。試験されたタンパク質として、組換えヒトネイティブＩＬ−１５（ｒｈＩＬ−１５）、Ｐ−０２３４（Ｃ末端二価ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質）、および標準化合物（ＩＬ−１５にＮ７２Ｄ変異を含むＮ末端二価ＩＬ−１５（非共有結合性）／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質）が含まれる。
【０２０１】
７週齢の雌Ｂａｌｂ／ｃマウスを、チャールスリバー研究所から入手し、試験前に少なくとも７日間自社で順化した。マウスに、４日間に亘って、等モル量のＩＬ−１５化合物を含む注射剤を、毎日腹腔内投与した。処置には、溶媒、０．０３ｍｇ／ｋｇのｒｈＩＬ−１５（４０ｐｍｏｌ／ｋｇ）、０．１ｍｇ／ｋｇおよび０．５ｍｇ／ｋｇの標準（４０ｐｍｏｌ／ｋｇおよび２００ｐｍｏｌ／ｋｇ）、並びに０．１ｍｇ／ｋｇおよび０．５ｍｇ／ｋｇのＰ−０２３４（４０ｐｍｏｌ／ｋｇおよび２００ｐｍｏｌ／ｋｇ）が含まれる。各群には５匹のマウスを含ませた。処置前および処置中に体重を毎日記録した。最後の注射から１時間後にマウスを屠殺し、心穿刺により終末部の血液を採取した。
【０２０２】
ヘパリン処置した全血および脾臓を採取し、ＮＫ細胞表現型検査およびＫｉ６７細胞内染色を行った。赤血球を溶解し、精製抗マウスＣＤ１６／ＣＤ３２（１：５０希釈）でＦｃ受容体をブロッキングした後、単一細胞懸濁液中の単核の血液細胞および脾臓細胞を、抗マウスＣＤ３−ＦＩＴＣおよび抗マウスＣＤ４９ｂ−ＡＰＣ（１：５０希釈）を含むＮＫ細胞表面マーカーにより、室温、暗所で３０分間染色した。細胞内Ｋｉ６７染色においては、細胞ペレットを２００μｌ／ウェルの１×Ｆｏｘｐ３固定／透過処理用ワーキング溶液で完全に再懸濁し、室温、暗所で３０分間インキュベートした。細胞を２００μｌの１×透過処理用緩衝液で洗浄し、Ｆｃ受容体を精製抗マウスＣＤ１６／ＣＤ３２（１：５０希釈）でブロッキングした。次に細胞を、Ｋｉ６７−ＰＥ、並びにＮＫ細胞集団用の抗マウスＣＤ３−ＦＩＴＣおよび抗マウスＣＤ４９ｂ−ＡＰＣ（１：５０希釈）で染色した。３０分間インキュベートした後、細胞を収集し、洗浄し、ＦＡＣＳ用緩衝液に再懸濁し、フローサイトメトリー分析用に準備を行った。ＧｒａｐｈＰａｄ  ｐｒｉｓｍソフトウェアにおけるテューキーの事後多重比較による１元配置分散分析で統計解析を行った。
【０２０３】
図１２は、ＩＬ−１５化合物の最後の注射から１時間後の時点の、ＩＬ−１５の血清中濃度を示している。製造業者の取扱説明書に従って、ＩＬ−１５を検出する市販ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄシステムズ社；カタログ番号ＤＹ２４７）によって、ＩＬ−１５を測定した。化合物の毎日投与を４回行った後、ＩＬ−１５の累積血清中濃度は、等モル量で投与された場合、Ｐ−０２３４で処置されたマウスにおいて最も高く、標準で処置されたマウスでは中間であり、ｒｈＩＬ−１５で処置されたマウスで最も低かった（図１２）。０，１ｍｇ／ｋｇおよび０．５ｍｇ／ｋｇで投与された標準とＰ−０２３４とを比較すると、Ｐ−０２３４は一貫して、標準と比較して６倍および４倍より高い血清中濃度を示した。ＩＬ−１５の平均血清中濃度は、ｒｈＩＬ−１５（０．０３ｍｇ／ｋｇ投与）の場合は３．２±０．６（ｎｇ／ｍｌ）であり、標準化合物（それぞれ、０．１ｍｇ／ｋｇ投与および０．５ｍｇ／ｋｇ投与）の場合は１３±８および１２１±３６（ｎｇ／ｍｌ）であり、Ｐ−０２３４（それぞれ、０．１ｍｇ／ｋｇ投与および０．５ｍｇ／ｋｇ投与）の場合は７２±１４および４４３±５７（ｎｇ／ｍｌ）であった。より優れた血清中暴露量は、Ｐ−０２３４が標準およびｒｈＩＬ−１５との比較でより長いインビボ半減期および血清中貯留を示し得ることを示唆している。
【０２０４】
処置群の間で総体重に差はなかったが、高用量標準処置マウスは４日間の処置の間に６％近くの体重を失った（図１３Ａおよび図１３Ｂ）。０日目のベースライン値と、および溶媒群と比較して、効果は統計的に有意であり、このことは、投与量を制限する毒性の可能性が標準化合物には確認されたが、Ｐ−０２３４には確認されなかったことを示唆している。
【０２０５】
試験されたＩＬ−１５化合物は全て、末梢血中のＫｉ６７陽性ＮＫ細胞の割合を増加させ（図１４Ａ）、これによりＮＫ細胞の増殖能の増強が示唆された。しかし、ＣＤ３陰性末梢血リンパ球中のＮＫ細胞数の割合の有意な増加は、両方の試験投与量レベルにおいて、Ｐ−０２３４処置マウスでのみ見られた（図１４Ｂ）。ＮＫ細胞の割合の増加は、ｒｈＩＬ−１５処置マウスや低用量標準処置マウスにおいても観察されたが、効果は統計的有意性には達していなかった（図１４Ｂ）。興味深いことに、高用量標準処置マウスでは、末梢血中のＮＫ細胞数の減少が確認された（図１４Ｂ）。このような薬力学的用量反応の逆転は、毒性を示唆するものであり、この群で確認された体重減少と一致する。
【０２０６】
また、リンパ球の増殖能および増殖に対するＩＬ−１５化合物の影響を、リンパ系器官である脾臓において調べた。末梢血で確認されたことと同様に、全てのＩＬ−１５化合物が、溶媒と比較して、脾臓のＫｉ６７陽性ＮＫ細胞を増加させた（図１５Ａ）。低用量標準と、Ｐ−０２３４だけが、脾臓内のＮＫ細胞の総数を有意に増加させた（図１５Ｂ）。同様に、脾臓におけるＮＫ細胞増殖に対し用量反応の逆転が標準において確認されたが（図１５Ｂ）、このことは、終了の４日後に測定された脾臓ＮＫ細胞上の高度且つ持続的なＣＤ６９発現と関連付けられた（図１５Ｃ）。標準化合物がＮＫ細胞を過剰に刺激し、細胞を疲弊させ得ることが、データから示唆される。ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質にはＩＬ−１５が非共有結合的に結合しているため、ＩＬ−１５が融合複合体から解離し、リンパ球の過剰刺激、細胞の疲弊、毒性、および体重減少をもたらし得る。
【０２０７】
実施例１３
単回注射後のマウスにおけるＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の薬物動態学的効果および薬力学的効果
Ｃ末端二価ＩＬ−１５（Ｓ５８Ｄ）／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質であるＰ−０３１３を用いた用量反応研究を、単回注射後のＢａｌｂ／Ｃマウスにおいて実施した。末梢血リンパ球の増殖能および増殖に対する効果を、経時的にモニターした。加えて、単回注射後に、Ｐ−０３１３の薬物動態学および薬力学（ＰＫ／ＰＤ）を、ＩＬ−１５にＮ７２Ｄ変異を含むＮ末端二価ＩＬ−１５（非共有結合性）／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質である標準のＰＫ／ＰＤと比較した。
【０２０８】
７週齢の雌ｂａｌｂ／ｃマウスを、チャールスリバー研究所から入手し、試験前に少なくとも７日間自社で順化した。溶媒、標準（０．３ｍｇ／ｋｇ）、またはＰ−０３１３（０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、および０．３ｍｇ／ｋｇ）を０時点にマウスに腹腔内投与した。注射の−２４時間（投与前）、並びに注射の１時間後、４時間後、２４時間後、７２時間後、１２０時間後、および１９２時間後の時点に、血液試料を採取した。処置前および処置中に体重を毎日記録した。各群には５匹のマウスを含ませた。
【０２０９】
ヘパリン処理した全血を用いて免疫表現型検査を行い、体積を記録した。ＢＤ  ｐｈａｒｍ溶解緩衝液を用いて赤血球を溶解させた後、トリパンブルーで死細胞を除外することで総生単核血液細胞をカウントし、Ｋｉ６７の細胞内染色に進んだ。細胞ペレットを２００μｌ／ウェルの１×Ｆｏｘｐ３固定／透過処理用ワーキング溶液で完全に再懸濁し、室温、暗所で３０分間インキュベートした。遠心分離後、２００μｌの１×透過処理用緩衝液を各ウェルに添加し、さらなる洗浄を行った。精製抗マウスＣＤ１６／ＣＤ３２（１：５０希釈）でＦｃ受容体をブロッキングした後、抗マウスＣＤ３−ＦＩＴＣ、Ｋｉ６７−ＰＥ、抗マウスＣＤ４９ｂ−ＡＰＣ、および抗マウスＣＤ８−Ｐｅｒｃｐｃｙ５．５（１：５０希釈）で細胞を染色した。３０分間インキュベートした後、細胞を収集し、洗浄し、ＦＡＣＳ用緩衝液に再懸濁し、フローサイトメトリーで分析した。ＧｒａｐｈＰａｄ  ｐｒｉｓｍソフトウェアにおけるテューキーの多重比較検定による１元配置分散分析で統計解析を行った。
【０２１０】
上記化合物の血清中濃度を、２種類の異なるＥＬＩＳＡアッセイを用いて測定した。ＩＬ−１５およびＦｃの複合体を測定するための自家ＥＬＩＳＡアッセイを開発した。市販ＥＬＩＳＡアッセイはＩＬ−１５単独を測定するものであり、ヒトＩＬ−１５に対し反応性の捕捉抗体および検出抗体を両方含む。自家ＥＬＩＳＡアッセイ用に、ＭａｘｉＳｏｒｐプレートを、抗ＩＬ−１５抗体（Ｒ＆Ｄシステムズ社ＭＡＢ６４７）で、４℃で一晩コーティングした。ＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋでプレートをブロッキングした。種々の希釈度の標準および試料をプレートに加え、室温で１時間インキュベートした。抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ−ＨＲＰで活性化合物を検出し、Ｕｌｔｒａ  ＴＭＢ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎを用いてシグナルを検出した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍにおける非線形回帰曲線当てはめからの内挿を用いて、値を算出した。
【０２１１】
最初の２４時間の時点では、両方の化合物が、同等の血清中濃度で血清中で検出可能であった。ピーク濃度は腹腔内投与の４時間後に確認された。７２時間の時点では、Ｐ−０３１３のみが測定可能なまま残り、標準は３匹全てのマウスで検出不可となった（図１６Ａ〜図１６Ｂ）。２種類の異なるＥＬＩＳＡアッセイを用いて同様の結果が得られたことから、Ｐ−０３１３が標準よりも優れた薬物動態プロファイルを有することが確認された。この結果から、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）−Ｆｃ融合タンパク質であるＰ−０２３４が標準よりも多い血清中暴露量を示すという、実施例１２で示された以前の知見が裏付けられた。これらのデータは、ＩＬ−１５の生体内半減期の延長において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（非共有結合性）−Ｆｃ融合体構成が、ＩＬ−１５（非共有結合性）／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の構成よりも優れていることの強い裏付けである。
【０２１２】
いずれの処置群にも有意な体重変化は確認されなかった（図１７）。
【０２１３】
Ｐ−０３１３処置マウスのＮＫ細胞およびＣＤ８  Ｔ細胞で、Ｋｉ６７発現の用量依存的な増加が確認された（図１８Ａおよび図１８Ｂ）。効果は７２時間の時点でピークとなり、標準では１２０時間まで持続し、Ｐ−０３１３ではさらに１９２時間にまで及び（図１８Ａ）、Ｐ−０３１３が標準よりも長時間作用することが示された。加えて、Ｐ−０３１３は標準の用量の１／３倍〜１／１０倍の低用量で同様のＫｉ６７誘導を示し、Ｐ−０３１３が標準よりも効果が大きいことが示された（図１８Ａおよび図１８Ｂ）。ＣＤ８  Ｔ細胞に対する用量の１／１０倍の低用量で、ＮＫ細胞に対し大きな反応が確認され、ＮＫ細胞がＣＤ８  Ｔ細胞よりもＰ−０３１３処置に対する感受性が高いことが示された。
【０２１４】
細胞増殖能マーカーＫｉ６７の増加が確認されたことと一致して、血液中のＮＫ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の用量依存的な増殖がＰ−０３１３処置群で確認された（図１９Ａおよび図１９Ｂ）。細胞増殖は７２時間の時点で確認され、１２０時間の時点でピークとなった。Ｐ−０３１３は、ＮＫ細胞を、それぞれ０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、および０．３ｍｇ／ｋｇの用量で、ベースラインから４倍、１５倍、５０倍、および１６３倍増加させ（図１９Ｂ）、また、ＣＤ８  Ｔ細胞を０．１ｍｇ／ｋｇおよび０．３ｍｇ／ｋｇの用量でベースラインから１０倍および５０倍増加させた（図１９Ｂ）。それに対し、標準は、０．３ｍｇ／ｋｇ用量でのみ、末梢ＮＫ細胞を２８倍増加させ、ＣＤ８  Ｔ細胞を１２倍増加させた（図１９Ａおよび図１９Ｂ）。
【０２１５】
要約すると、Ｐ−０３１３は、ＮＫ細胞およびＣＤ８  Ｔ細胞の増殖能および増殖に対して、標準化合物よりも優れた薬物動態学的特性および薬力学的特性を示した。
【０２１６】
実施例１４
マウス結腸がんの肺転移の阻害に対するＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の効果
腫瘍モデルにおいてＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の転移抑制効果および免疫応答を調べるために、１×１０５個のマウス結腸癌細胞ＣＴ２６−ＷＴ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２６３８）を、雌ｂａｌｂ／Ｃマウス（１０〜１２週齢）に静脈内注射した。翌日から、０．０３ｍｇ／ｋｇもしくは０．１ｍｇ／ｋｇのＰ−０３１３、または０．３ｍｇ／ｋｇの標準化合物を、静脈内注射で５日間投与した（細胞移植後１日目、６日目、１１日目）。陰性対照として溶媒（ＰＢＳ）を含め、各群には８匹のマウスを含ませた。１５日目、血液試料を採取し、リンパ球の表現型検査および肝酵素の測定を行った。１６日目、全てのマウスを屠殺し、組織摘出を行った。肺を１５％墨汁で膨らませ、Ｆｅｋｅｔｅ液（１０％ホルムアルデヒド、５％氷酢酸、および６０％エタノール）で脱染した。光学顕微鏡下の全肺について、肺腫瘍小結節をカウントし、処置群と溶媒対照との間の腫瘍小結節数の違いにより転移抑制効果を表した。
【０２１７】
免疫応答を研究するために、１５日目にマウス末梢血をヘパリン処理チューブに採取し、マウス毎にアッセイに用いた血液の体積を記録した。赤血球をＢＤ  ｐｈａｒｍ溶解緩衝液で溶解させた後、トリパンブルーで死細胞を除外することで、総生単核血液細胞をカウントし、それを用いて前述の通りに細胞内染色を行い、免疫細胞の表現型検査、およびＫｉ６７増殖能分析を行った。細胞の固定、透過処理、および抗体染色の後、細胞を収集し、洗浄し、ＦＡＣＳ用緩衝液に再懸濁し、フローサイトメトリーで分析した。
【０２１８】
図２０Ａは、肺小結節を図示するための、各群の肺の代表的な写真を示している。肺転移性病変を、顕微鏡を用いてカウントし定量化した（図２０Ｂ）。図２０に示されているように、０．３ｍｇ／ｋｇで投与された標準分子は、肺転移を阻害し、肺小結節数を８４％減少させ、肺転移の形成および増殖を抑制する上でＩＬ−１５経路の活性化が有効であることが確認された。際立った点として、１／３倍の低用量（０．１ｍｇ／ｋｇ）のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ複合体Ｐ−０３１３の投与が、肺転移の発生を完全に阻害し、８匹全ての処置マウスにおいて確認された結節は０個であった（図２０Ａおよび図２０Ｂ）。肺転移の形成および増殖の抑制における標準に対するＰ−０３１３の優位性は、上記（実施例１２および実施例１３）で明らかとなった薬物動態学的効果および薬力学的効果の増強と一致している。Ｐ−０３１３のＩＬ−１５部分はＦｃドメインに共有結合的に連結されているため、ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉドメインを介してＦｃ鎖に非共有結合的に連結されたＩＬ−１５を含む標準と比較して、Ｐ−０３１３はＩＬ−１５血中半減期の顕著な改善を示した（実施例１３）。０．０３ｍｇ／ｋｇ用量のＰ−０３１３も約３５％の阻害効果で肺転移を抑制した（図２０Ａおよび図２０Ｂ）。この所見は、Ｐ−０３１３が標準よりもずっと低い用量で有効であることをさらに強調するものであったが、インビボにおけるＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ複合体の抗がん作用に対する、当該複合体の体内分布および生物学的利用能の重要性が明確に示されている。
【０２１９】
５日おきの反復投与を３回行った後、末梢血中のＮＫ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖は共に、Ｐ−０３１３処置マウスにおいて有意に増加したままであり（図２１Ａおよび図２１Ｂ）、これは、この処置群の脾臓重量の有意な増加と相関していた（図２２）。対照的に、０．３ｍｇ／ｋｇ標準処置群においては、ごく僅かなＣＤ８＋Ｔ細胞増殖しか確認されず；対照群と比較して循環ＮＫ細胞数の増加は確認されなかった（図２１Ａおよび図２１Ｂ）。しかし、標準処置群では、脾臓重量が有意に増加した（図２２）。データから、反復投与の後、増殖したリンパ球が貯蔵のためにリンパ組織に移動している可能性、あるいは、細胞疲弊が発生している可能性が示唆される。３つ全ての処置群が腫瘍抑制効果を示したことから、ＣＤ８＋Ｔ細胞またはＮＫ細胞のどちらかが、腫瘍抑制効果に関与するエフェクターサブセットであり得ることが、データから示唆された。しかし、０．１ｍｇ／ｋｇ  Ｐ−０３１３処置群で見られた肺転移の完全な根絶によって、ＮＫ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の両方に関係する作用が、最も強い腫瘍増殖阻害を誘導することが示唆された。
【０２２０】
肝臓重量、並びにアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）の血清中濃度を測定することで、処置に伴う肝毒性を評価した。図２３Ａ〜図２３Ｃに示されているように、溶媒群と比較して、いずれの処置群の肝臓重量、ＡＬＴ値、ＡＳＴ値のいずれにおいても増加は見られなかった。データから、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の強力な抗腫瘍効果は肝毒性を伴わないことが示唆された。
【０２２１】
実施例１５
マウスにおける樹立されたＣＴ２６固形腫瘍増殖に対するＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の効果
樹立腫瘍モデルでＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の抗腫瘍活性および免疫応答をさらに調べるため、雌Ｂａｌｂ／Ｃマウス（１０〜１２週齢）の右側腹部に、１×１０５個のＣＴ２６細胞を皮下注射した。１１日目、平均腫瘍体積が約７０ｍｍ３となったとき、マウスを無作為に３つの群（ｎ＝１０／群）に分け、無作為化の同日に、溶媒（ＰＢＳ）またはＰ−０３１３（０．１ｍｇ／ｋｇまたは０．０５ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内注射を行った。１６日目に、各試験薬剤の腹腔内注射を追加で１回行った（計２回の投与）。週３回ノギスを用いて腫瘍を測定し、腫瘍体積を以下の通りに算出した：体積＝０．５×（幅）２×（長さ）。１９日目、免疫応答の研究のために、非終末部の末梢血をヘパリン処理チューブに採取した。２１日目、全てのマウスを屠殺し、組織摘出を行った。
【０２２２】
図２４Ａに示されているように、ＰＢＳ処置マウスは巨大な皮下腫瘍を急速に発達させた。０．１ｍｇ／ｋｇまたは０．０５ｍｇ／ｋｇのＰ−０３１３によるいずれのマウス処置も、腫瘍増殖の遅延においておよそ等効力であった（図２４Ａ）。３つ全ての処置群の、個々のマウスについて、腫瘍増殖曲線をプロットした（図２５Ａ〜図２５Ｃ）。試験された２つの用量群において、特に初期段階に、マウスがＰ−０３１３処置に良好に反応し、腫瘍増殖の遅延および腫瘍増殖の同期阻害を示したことは明白である（図２５Ａ〜図２５Ｃ）。腫瘍接種後２１日目、ＰＢＳ処置マウスの平均腫瘍体積は８２０ｍｍ３であったが、それに対し、Ｐ−０３１３処置マウスでは両方の用量で４１０ｍｍ３であった（図２５Ａ、＊＊Ｐ＜０．０１；一元配置分散分析とテューキーの事後検定（Ｔｕｋｅｙ’ｓ  ｐｏｓｔ−ｔｅｓｔ））。高用量（０．１ｍｇ／ｋｇ）のＰ−０３１３が初期には低用量群よりも大きな腫瘍量減少を示したが、治療が進むにつれてその差異が次第に小さくなっていったことは、注目に値する。
【０２２３】
Ｐ−０３１３処置マウスは２１日間の試験を通してＰＢＳ処置マウスと同様の体重増加を示し（図２４Ｂ）、Ｐ−０３１３が、２つの試験用量においては、良好な耐容性を示し、明らかな毒性を伴わないことが示唆された。
【０２２４】
次に、末梢血中および脾臓内のＣＤ８  Ｔ細胞およびＮＫ細胞集団に対するＰ−０３１３の効果を調べた。担癌マウスに対するＰ−０３１３投与は、ＮＫ細胞およびＣＤ８  Ｔ細胞の増殖能を強力に誘導し（図２６Ａおよび図２６Ｂ）、ＮＫ細胞およびＣＤ８  Ｔ細胞の増殖を用量依存的に誘導し（図２６Ｃおよび図２６Ｄ）、非担癌マウスで確認されたものと同程度の免疫細胞反応を誘導した（実施例１３）。これら２つのリンパ球集団の間で、ＮＫ細胞においてより倍率の高い変化が確認された（０．１ｍｇ／ｋｇ用量群は約１００倍、０．０５ｍｇ／ｋｇ用量群は約３８倍）。ＣＤ８＋Ｔ細胞は０．１ｍｇ／ｋｇ用量で約５．４倍増殖し、０．０５ｍｇ／ｋｇ用量群は約２．７倍であった。
【０２２５】
Ｐ−０３１３はまた、末梢血中のものと同様に、脾臓内のＮＫ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞両方の増殖も増強したが（図２７Ａおよび図２７Ｂ）、脾臓における規模／変化倍率はそれほど大きくはなかった。ＮＫ細胞においてより大きな変化倍率が確認された（０．１ｍｇ／ｋｇ用量群は約１０倍、０．０５ｍｇ／ｋｇ用量群は約８倍）。ＣＤ８＋Ｔ細胞は０．１ｍｇ／ｋｇ用量で約２．７倍増殖し、０．０５ｍｇ／ｋｇ用量群はごく僅かな増殖であった。
【０２２６】
まとめると、これらのデータから、Ｐ−０３１３処置により、固形腫瘍増殖の有意な遅延および阻害が可能であり、この腫瘍抑制効果が、担癌マウスにおける細胞傷害性のＮＫ細胞およびＣＤ８  Ｔ細胞の増殖能および増殖と相関していることが示され、これらは、ＩＬ−１５の全体的な免疫調節性と一致している。Ｐ−０３１３はエフェクター機能を欠くＦｃ領域を有しているため、インビボでのＰ−０３１３の抗腫瘍活性は、直接的な腫瘍細胞の殺傷が原因ではなく、細胞傷害性のＣＤ８＋Ｔ細胞およびＮＫ細胞のロバストな活性化による、腫瘍細胞に対する強力な免疫応答が原因である。
【０２２７】
実施例１６
Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおける樹立されていないＣＴ２６固形腫瘍の増殖に対するＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の効果
Ｐ−０３１３の抗腫瘍活性を確認するため、樹立されていないＣＴ２６腫瘍モデルで同様の研究を行った。１×１０５個のＣＴ２６細胞の腫瘍細胞皮下移植の３日後、マウスの腹腔内に溶媒（ＰＢＳ）またはＰ−０３１３（０．１ｍｇ／ｋｇ）を５日毎に合計５回注射した。マウスは２５日目に屠殺し、腫瘍の測定は週２〜３回行った。
【０２２８】
樹立されたＣＴ２６腫瘍モデル（実施例１４）で見られたことと同様に、Ｐ−０３１３は、腫瘍増殖の顕著な阻害（図２８Ａ）と、固形腫瘍量の有意な減少（図２８Ｂ）を示した。５回の反復投与により、Ｐ−０３１３処置マウスは、ほどほどの脾臓重量増加を示したが（図２９Ａ）、体重増加には有意な減少はなく（図２９Ｂ）、Ｐ−０３１３の耐容性が良好であることが示された。
【０２２９】
全体として、これらのデータから、Ｐ−０３１３が、耐容性良好な安全性を有する、固形腫瘍および液性腫瘍、並びに腫瘍細胞転移に対する有効な免疫療法剤であることが実証された。
【０２３０】
本願で開示および特許請求されている物品および方法は全て、本開示に照らし合わせることで、必要以上の実験を行うことなく作製および実行することができる。本開示の物品および方法を好ましい実施形態の観点から説明したが、本開示の精神および範囲から逸脱しない範囲で、物品および方法に変更を適用してもよいことは、当業者には明らかである。当業者には明らかな、そのような変更形態および均等物は全て、現存するものであれ後に開発されるものであれ、添付の特許請求の範囲によって定義される本開示の精神および範囲に包含されると見なされる。本明細書で引用された特許、特許出願、および刊行物は全て、本開示が属する技術分野における当業者の水準を示すものである。全ての特許、特許出願、および刊行物は、あたかも個々の刊行物が、その全体があらゆる目的で参照により援用されると明確且つ個別に示されているのと同程度に、それらの全体があらゆる目的で参照により本明細書に援用される。本明細書に例示的に記載された開示は、本明細書に特には開示されていない任意の要素の非存在下で、好適に実施されている場合がある。すなわち、本開示は好ましい実施形態および任意の特徴によって具体的に開示されたが、本明細書で開示された概念の変更および変形が当業者によって為されてもよいこと、並びに、そのような変更形態および変形形態が添付の特許請求の範囲によって定義される本開示の範囲内であると見なされることを理解されたい。
［配列表］
添付の配列表に列挙された核酸配列およびアミノ酸配列では、米国特許法施行規則§１．８２２の規定の通り、ヌクレオチド塩基は標準的な略語を用いて示しており、アミノ酸は３文字表記を用いて示している。
配列番号１はヒトＩＬ−１５前駆体のアミノ酸配列である。
配列番号２はヒトＩＬ−１５成熟型のアミノ酸配列である。
配列番号３はヒトＩＬ−１５Ｒαのアミノ酸配列である。
配列番号４はヒトＩＬ−１５Ｒαの細胞外ドメインのアミノ酸配列である。
配列番号５はヒトＩＬ−１５Ｒαのｓｕｓｈｉドメイン＋のアミノ酸配列である。
配列番号６はヒトＩｇＧ１−Ｆｃのアミノ酸配列である。
配列番号７はＫｎｏｂ−Ｆｃのアミノ酸配列である。
配列番号８はＨｏｌｅ−Ｆｃのアミノ酸配列である。
配列番号９〜１２は各種ペプチドリンカーのアミノ酸配列である。
配列番号１３はＨｏｌｅ−Ｆｃ−リンカー１−ＩＬ−１５鎖のアミノ酸配列である。
配列番号１４はＫｎｏｂ−Ｆｃ−リンカー１−ＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋鎖のアミノ酸配列である。
配列番号１５はＩＬ−１５−リンカー４−Ｈｏｌｅ−Ｆｃ鎖のアミノ酸配列である。
配列番号１６はＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋−リンカー４−Ｋｎｏｂ−Ｆｃ鎖のアミノ酸配列である。
配列番号１７はＫｎｏｂ−Ｆｃ−リンカー２−ＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋鎖のアミノ酸配列である。
配列番号１８はＨｏｌｅ−Ｆｃ−リンカー２−ＩＬ−１５鎖のアミノ酸配列である。
配列番号１９はＩＬ−１５−リンカー３−Ｈｏｌｅ−Ｆｃ鎖のアミノ酸配列である。
配列番号２０はＦｃ−リンカー３−ＩＬ−１５鎖のアミノ酸配列である。
配列番号２１はＩＬ−１５−リンカー３−Ｆｃ鎖のアミノ酸配列である。
配列番号２２はＫｎｏｂ−Ｆｃ−リンカー２−ＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋鎖のアミノ酸配列である。
配列番号２３はＦｃ−リンカー２−ＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋鎖のアミノ酸配列である。
配列番号２４〜４５は各種ＩＬ−１５バリアントポリペプチドのアミノ酸配列である。
配列番号４６はＦｃ−リンカー３−ＩＬ−１５−Ｓ５８Ｄ鎖のアミノ酸配列である。
配列番号４７はペプチドリンカーのアミノ酸配列である。
配列番号４８はＨｏｌｅ−Ｆｃ−リンカー３−ＩＬ−１５−Ｓ５８Ｄ鎖のアミノ酸配列である。
配列番号４９はＩＬ−１５−Ｓ５８Ｄ−リンカー３−Ｈｏｌｅ−Ｆｃ鎖のアミノ酸配列である。
配列番号５０はＩＬ−１５−Ｓ５８Ｄ−リンカー３−Ｆｃ鎖のアミノ酸配列である。
配列番号５１はＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋リンカー２−Ｋｎｏｂ−Ｆｃ鎖のアミノ酸配列である。
配列番号５２はＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋リンカー２−Ｆｃ鎖のアミノ酸配列である。
配列番号５３はＨｏｌｅ−Ｆｃ−リンカー１−ＩＬ−１５−Ｓ５８Ｄ鎖のアミノ酸配列である。
配列番号５４はＨｏｌｅ−Ｆｃ−リンカー３−ＩＬ−１５鎖のアミノ酸配列である。
配列番号５５はＫｎｏｂ−Ｆｃ−リンカー１−ＩＬ−１５鎖のアミノ酸配列である。
配列番号５６〜６３は各種ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合体鎖をコードしているヌクレオチド配列である。
配列番号６４および配列番号６５は２種類の標準ポリペプチド鎖のアミノ酸配列である。
配列表
ヒトＩＬ−１５前駆体配列
ＭＲＩＳＫＰＨＬＲＳＩＳＩＱＣＹＬＣＬＬＬＮＳＨＦＬＴＥＡＧＩＨＶＦＩＬＧＣＦＳＡＧＬＰＫＴＥＡＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号１）
ヒトＩＬ−１５成熟型配列
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号２）
ヒトＩＬ−１５Ｒα配列
ＭＡＰＲＲＡＲＧＣＲＴＬＧＬＰＡＬＬＬＬＬＬＬＲＰＰＡＴＲＧＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＰＡＬＶＨＱＲＰＡＰＰＳＴＶＴＴＡＧＶＴＰＱＰＥＳＬＳＰＳＧＫＥＰＡＡＳＳＰＳＳＮＮＴＡＡＴＴＡＡＩＶＰＧＳＱＬＭＰＳＫＳＰＳＴＧＴＴＥＩＳＳＨＥＳＳＨＧＴＰＳＱＴＴＡＫＮＷＥＬＴＡＳＡＳＨＱＰＰＧＶＹＰＱＧＨＳＤＴＴＶＡＩＳＴＳＴＶＬＬＣＧＬＳＡＶＳＬＬＡＣＹＬＫＳＲＱＴＰＰＬＡＳＶＥ  ＭＥＡＭＥＡＬＰＶＴＷＧＴＳＳＲＤＥＤＬＥＮＣＳＨＨＬ（配列番号３）
ヒトＩＬ−１５Ｒαの細胞外ドメイン
ＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＰＡＬＶＨＱＲＰＡＰＰＳＴＶＴＴＡＧＶＴＰＱＰＥＳＬＳＰＳＧＫＥＰＡＡＳＳＰＳＳＮＮＴＡＡＴＴＡＡＩＶＰＧＳＱＬＭＰＳＫＳＰＳＴＧＴＴＥＩＳＳＨＥＳＳＨＧＴＰＳＱＴＴＡＫＮＷＥＬＴＡＳＡＳＨＱＰＰＧＶＹＰＱＧＨＳＤＴＴ（配列番号４）
ヒトＩＬ−１５Ｒαのｓｕｓｈｉドメイン＋
ＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＰＡＬＶＨＱＲＰＡＰＰ（配列番号５）
ヒトＩｇＧ１−Ｆｃ
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号６）
Ｋｎｏｂ−Ｆｃ
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号７）
Ｈｏｌｅ−Ｆｃ
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号８）
ペプチドリンカー配列
ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＳＰＰＳＰ（配列番号９）
ペプチドリンカー配列
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０）
ペプチドリンカー配列
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１）
ペプチドリンカー配列
Ｇ（配列番号１２）
Ｈｏｌｅ−Ｆｃ−リンカー１−ＩＬ−１５鎖
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＳＰＰＳＰＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号１３）
Ｋｎｏｂ−Ｆｃ−ＩＬ−リンカー１−ＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋鎖
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＳＰＰＳＰＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＰＡＬＶＨＱＲＰＡＰＰ（配列番号１４）
ＩＬ−１５−リンカー４−Ｈｏｌｅ−Ｆｃ鎖
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳＧＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１５）
ＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋−リンカー４−Ｋｎｏｂ−Ｆｃ鎖
ＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＰＡＬＶＨＱＲＰＡＰＰＧＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１６）
Ｋｎｏｂ−Ｆｃ−リンカー２−ＩＬ−１５Ｒα−＋鎖
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＰＡＬＶＨＱＲＰＡＰＰ（配列番号１７）
Ｈｏｌｅ−Ｆｃ−リンカー２−ＩＬ−１５鎖
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号１８）
ＩＬ−１５−リンカー３−Ｈｏｌｅ−Ｆｃ鎖
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１９）
Ｆｃ−リンカー３−ＩＬ−１５鎖
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号２０）
ＩＬ−１５−リンカー３−Ｆｃ鎖
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２１）
Ｋｎｏｂ−Ｆｃ−リンカー２−ＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋鎖
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＰＡＬＶＨＱＲＰＡＰＰ
（配列番号２２）
Ｆｃ−リンカー２−ＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋鎖
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＰＡＬＶＨＱＲＰＡＰＰ
（配列番号２３）
ヒトＩＬ−１５  Ｓ５８Ｄバリアントポリペプチド
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＤＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号２４）
ヒトＩＬ−１５  Ｔ６２Ｄバリアントポリペプチド
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＤＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号２５）
ヒトＩＬ−１５  Ｖ６３Ｆバリアントポリペプチド
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＦＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号２６）
ヒトＩＬ−１５  Ｉ６７Ｖバリアントポリペプチド
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＶＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号２７）
ヒトＩＬ−１５  Ｉ６８Ｆバリアントポリペプチド
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＦＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号２８）
ヒトＩＬ−１５  Ｉ６８Ｋバリアントポリペプチド
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＫＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号２９）
ヒトＩＬ−１５  Ｉ６８Ｄバリアントポリペプチド
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＤＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号３０）
ヒトＩＬ−１５  Ｉ６８Ｈバリアントポリペプチド
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＨＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号３１）
ヒトＩＬ−１５  Ｑ１０８Ａバリアントポリペプチド
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＡＭＦＩＮＴＳ（配列番号３２）
ヒトＩＬ−１５  Ｑ１０８Ｍバリアントポリペプチド
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＭＭＦＩＮＴＳ（配列番号３３）
ヒトＩＬ−１５  Ｑ１０８Ｓバリアントポリペプチド
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＳＭＦＩＮＴＳ（配列番号３４）
ヒトＩＬ−１５  Ｑ１０８Ｓ／Ｄ３０Ｔバリアントポリペプチド
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＴＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＳＭＦＩＮＴＳ（配列番号３５）
ヒトＩＬ−１５  Ｑ１０８Ｓ／Ｖ３１Ｙバリアントポリペプチド
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＹＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＳＭＦＩＮＴＳ（配列番号３６）
ヒトＩＬ−１５  Ｑ１０８Ｓ／Ｈ３２Ｅバリアントポリペプチド
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＥＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＳＭＦＩＮＴＳ（配列番号３７）
ヒトＩＬ−１５  Ｑ１０８Ｓ／Ｄ３０Ｔ／Ｖ３１Ｙ／Ｈ３２Ｅバリアントポリペプチド
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＴＹＥＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＳＭＦＩＮＴＳ（配列番号３８）
ヒトＩＬ−１５  １１１〜１１４位欠失バリアントポリペプチド
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦ（配列番号３９）
ヒトＩＬ−１５  １０９〜１１４位欠失バリアントポリペプチド
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱ（配列番号４０）
ヒトＩＬ−１５  １０８〜１１４位欠失バリアントポリペプチド
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶ（配列番号４１）
ヒトＩＬ−１５  １０５〜１１４位欠失バリアントポリペプチド
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶ（配列番号４２）
Ｎ９５後に「ＧＳ」が挿入されたヒトＩＬ−１５バリアントポリペプチド
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＧＳＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号４３）
Ｎ９５後に「ＧＧＳＧＧ」が挿入されたヒトＩＬ−１５バリアントポリペプチド
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＧＧＳＧＧＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号４４）
Ｎ９５後に「ＧＳＳＧＧＳＧＧＳ」が挿入されたヒトＩＬ−１５バリアントポリペプチド
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＧＳＳＧＳＳＧＧＳＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号４５）
Ｆｃ−リンカー３−ＩＬ−１５  Ｓ５８Ｄ鎖
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＤＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号４６）
ペプチドリンカー配列
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号４７）
Ｈｏｌｅ−Ｆｃ−リンカー３−ＩＬ−１５  Ｓ５８Ｄ鎖
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＤＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号４８）
ＩＬ−１５  Ｓ５８Ｄ−リンカー３−Ｈｏｌｅ−Ｆｃ鎖
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＤＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号４９）
ＩＬ−１５  Ｓ５８Ｄ−リンカー３−Ｆｃ鎖
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＤＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号５０）
ＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋リンカー２−Ｋｎｏｂ−Ｆｃ鎖
ＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＰＡＬＶＨＱＲＰＡＰＰＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ  
（配列番号５１）
ＩＬ−１５Ｒα−Ｓｕｓｈｉ＋リンカー２−Ｆｃ鎖
ＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＰＡＬＶＨＱＲＰＡＰＰＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ  
（配列番号５２）
Ｈｏｌｅ−Ｆｃ−リンカー１−ＩＬ−１５−Ｓ５８Ｄ鎖
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＳＰＰＳＰＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＤＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号５３）
Ｈｏｌｅ−Ｆｃ−リンカー３−ＩＬ−１５鎖
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号５４）
Ｋｎｏｂ−Ｆｃ−リンカー１−ＩＬ−１５鎖
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＳＰＰＳＰＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号５５）
Ｐ−０３１３第１鎖のヌクレオチド配列
ａｔｇｇａｔａｔｇｃｇｇｇｔｇｃｃｔｇｃｔｃａｇｃｔｇｃｔｇｇｇｃｃｔｇｃｔｇｃｔｇｃｔｇｔｇｇｃｔｇｃｇａｇｇｇｇｃｔａｇａｔｇｔｇａｔａａａａｃｔｃａｔａｃｔｔｇｔｃｃｔｃｃａｔｇｃｃｃａｇｃａｃｃｔｇａｇｇｃａｇｃａｇｇｃｇｃｃｃｃａｔｃｃｇｔｇｔｔｃｃｔｇｔｔｔｃｃｃｃｃｔａａｇｃｃｃａａｇｇａｃａｃａｃｔｇａｔｇａｔｃｔｃｃｃｇｔａｃｇｃｃａｇａｇｇｔｇａｃａｔｇｃｇｔｇｇｔｇｇｔｇｇａｃｇｔｇａｇｃｃａｃｇａｇｇａｃｃｃｃｇａｇｇｔｇａａｇｔｔｔａａｃｔｇｇｔａｃｇｔｇｇａｃｇｇｃｇｔｇｇａｇｇｔｇｃａｃａａｔｇｃｃａａｇａｃａａａｇｃｃｔａｇｇｇａｇｇａｇｃａｇｔａｃａａｔｔｃｔａｃｃｔａｔｃｇｃｇｔｇｇｔｇａｇｃｇｔｇｃｔｇａｃａｇｔｇｃｔｇｃａｃｃａｇｇａｔｔｇｇｃｔｇａａｃｇｇｃａａｇｇａｇｔａｔａａｇｔｇｃａａｇｇｔｇｔｃｃａａｔａａｇｇｃｃｃｔｇｃｃｔｇｃｃｃｃａａｔｃｇａｇａａｇａｃｃａｔｃｔｃｔａａｇｇｃｃａａｇｇｇｃｃａｇｃｃｃａｇａｇａｇｃｃｔｃａｇｇｔｇｔａｃａｃａｃｔｇｃｃｔｃｃａａｇｃａｇａｇａｃｇａｇｃｔｇａｃｃａａｇａａｃｃａｇｇｔｇｔｃｃｃｔｇａｃａｔｇｔｃｔｇｇｔｇａａｇｇｇｃｔｔｃｔａｔｃｃｃｔｃｔｇａｔａｔｃｇｃｃｇｔｇｇａｇｔｇｇｇａｇａｇｃａａｔｇｇｃｃａｇｃｃｔｇａｇａａｃａａｔｔａｃａａｇａｃｃａｃａｃｃｃｃｃｔｇｔｇｃｔｇｇａｃａｇｃｇａｔｇｇｃｔｃｃｔｔｃｔｔｔｃｔｇｔａｔｔｃｃａａｇｃｔｇａｃｃｇｔｇｇａｔａａｇｔｃｔｃｇｇｔｇｇｃａｇｃａｇｇｇｃａａｃｇｔｇｔｔｔｔｃｃｔｇｃｔｃｔｇｔｇａｔｇｃａｃｇａａｇｃａｃｔｇｃａｔａａｃｃａｃｔａｃａｃｃｃａｇａａｇａｇｃｃｔｇａｇｃｃｔｇｔｃｃｃｃｃｇｇｇｇｇａｇｇｃｇｇａｇｇａｔｃｔｇｇｔｇｇｃｇｇａｇｇａａｇｃｇｇａｇｇｃｇｇｃｇｇｃｔｃｃａａｃｔｇｇｇｔｇａａｔｇｔｇａｔｃａｇｃｇａｃｃｔｇａａｇａａｇａｔｃｇａｇｇａｔｃｔｇａｔｃｃａｇｔｃｃａｔｇｃａｃａｔｃｇａｃｇｃｃａｃｃｃｔｇｔａｔａｃａｇａｇｔｃｔｇａｔｇｔｇｃａｃｃｃｃａｇｃｔｇｃａａｇｇｔｇａｃｃｇｃｃａｔｇａａｇｔｇｔｔｔｔｃｔｇｃｔｇｇａｇｃｔｇｃａｇｇｔｃａｔｃａｇｃｃｔｇｇａｇｔｃｃｇｇｃｇａｃｇｃａｇａｃａｔｃｃａｃｇａｔａｃｃｇｔｇｇａｇａａｔｃｔｇａｔｃａｔｃｃｔｇｇｃｃａａｃａａｔｔｃｃｃｔｇｔｃｔａｇｃａａｃｇｇｃａａｔｇｔｇａｃａｇａｇｔｃｔｇｇｃｔｇｃａａｇｇａｇｔｇｔｇａｇｇａｇｃｔｇｇａｇｇａｇａａｇａａｔａｔｃａａａｇａｇｔｔｃｃｔｇｃａｇａｇｔｔｔｃｇｔｃｃａｃａｔｃｇｔｃｃａｇａｔｇｔｔｔａｔｃａａｔａｃｃｔｃａ
（配列番号５６）
ＩＬ−１５ＲαＳｕｓｈｉ＋ドメイン（融合タンパク質Ｐ−０３１３、Ｐ−０２３４、Ｐ−０６６６、およびＰ−０６６８の第２鎖）のヌクレオチド配列
ａｔｇｇｃｔｃｃａｃｇｇｃｇｇｇｃｔｃｇｇｇｇｃｔｇｔｃｇｃａｃｃｃｔｇｇｇｇｃｔｇｃｃｔｇｃｔｃｔｇｃｔｇｃｔｇｃｔｇｃｔｇｃｔｇｃｔｇａｇａｃｃａｃｃｔｇｃｔａｃａｃｇｃｇｇｃａｔｃａｃｃｔｇｃｃｃａｃｃｔｃｃａａｔｇａｇｃｇｔｇｇａｇｃａｃｇｃａｇａｃａｔｃｔｇｇｇｔｇａａｇｔｃｔｔａｃａｇｃｃｔｇｔａｔａｇｃｃｇｇｇａｇａｇａｔａｃａｔｃｔｇｃａａｃｔｃｃｇｇｃｔｔｃａａｇｃｇｇａａｇｇｃｃｇｇｃａｃｃａｇｃｔｃｃｃｔｇａｃａｇａｇｔｇｃｇｔｇｃｔｇａａｃａａｇｇｃｃａｃａａａｔｇｔｇｇｃｃｃａｃｔｇｇａｃｃａｃａｃｃｔｔｃｃｃｔｇａａｇｔｇｃａｔｃｃｇｇｇａｃｃｃｃｇｃｃｃｔｇｇｔｇｃａｃｃａｇｃｇｃｃｃａｇｃｃｃｃｃｃｃｔ（配列番号５７）
Ｐ−０２３４第１鎖のヌクレオチド配列
ａｔｇｇａｔａｔｇｃｇｇｇｔｇｃｃｔｇｃｔｃａｇｃｔｇｃｔｇｇｇｃｃｔｇｃｔｇｃｔｇｃｔｇｔｇｇｃｔｇｃｇａｇｇｇｇｃｔａｇａｔｇｔｇａｔａａａａｃｔｃａｔａｃｔｔｇｔｃｃｔｃｃａｔｇｃｃｃａｇｃａｃｃｔｇａｇｇｃａｇｃａｇｇｃｇｃｃｃｃａｔｃｃｇｔｇｔｔｃｃｔｇｔｔｔｃｃｃｃｃｔａａｇｃｃｃａａｇｇａｃａｃａｃｔｇａｔｇａｔｃｔｃｃｃｇｔａｃｇｃｃａｇａｇｇｔｇａｃａｔｇｃｇｔｇｇｔｇｇｔｇｇａｃｇｔｇａｇｃｃａｃｇａｇｇａｃｃｃｃｇａｇｇｔｇａａｇｔｔｔａａｃｔｇｇｔａｃｇｔｇｇａｃｇｇｃｇｔｇｇａｇｇｔｇｃａｃａａｔｇｃｃａａｇａｃａａａｇｃｃｔａｇｇｇａｇｇａｇｃａｇｔａｃａａｔｔｃｔａｃｃｔａｔｃｇｃｇｔｇｇｔｇａｇｃｇｔｇｃｔｇａｃａｇｔｇｃｔｇｃａｃｃａｇｇａｔｔｇｇｃｔｇａａｃｇｇｃａａｇｇａｇｔａｔａａｇｔｇｃａａｇｇｔｇｔｃｃａａｔａａｇｇｃｃｃｔｇｃｃｔｇｃｃｃｃａａｔｃｇａｇａａｇａｃｃａｔｃｔｃｔａａｇｇｃｃａａｇｇｇｃｃａｇｃｃｃａｇａｇａｇｃｃｔｃａｇｇｔｇｔａｃａｃａｃｔｇｃｃｔｃｃａａｇｃａｇａｇａｃｇａｇｃｔｇａｃｃａａｇａａｃｃａｇｇｔｇｔｃｃｃｔｇａｃａｔｇｔｃｔｇｇｔｇａａｇｇｇｃｔｔｃｔａｔｃｃｃｔｃｔｇａｔａｔｃｇｃｃｇｔｇｇａｇｔｇｇｇａｇａｇｃａａｔｇｇｃｃａｇｃｃｔｇａｇａａｃａａｔｔａｃａａｇａｃｃａｃａｃｃｃｃｃｔｇｔｇｃｔｇｇａｃａｇｃｇａｔｇｇｃｔｃｃｔｔｃｔｔｔｃｔｇｔａｔｔｃｃａａｇｃｔｇａｃｃｇｔｇｇａｔａａｇｔｃｔｃｇｇｔｇｇｃａｇｃａｇｇｇｃａａｃｇｔｇｔｔｔｔｃｃｔｇｃｔｃｔｇｔｇａｔｇｃａｃｇａａｇｃａｃｔｇｃａｔａａｃｃａｃｔａｃａｃｃｃａｇａａｇａｇｃｃｔｇａｇｃｃｔｇｔｃｃｃｃｃｇｇｇｇｇａｇｇｃｇｇａｇｇａｔｃｔｇｇｔｇｇｃｇｇａｇｇａａｇｃｇｇａｇｇｃｇｇｃｇｇｃｔｃｃａａｃｔｇｇｇｔｇａａｔｇｔｇａｔｃａｇｃｇａｃｃｔｇａａｇａａｇａｔｃｇａｇｇａｔｃｔｇａｔｃｃａｇｔｃｃａｔｇｃａｃａｔｃｇａｃｇｃｃａｃｃｃｔｇｔａｔａｃａｇａｇｔｃｔｇａｔｇｔｇｃａｃｃｃｃａｇｃｔｇｃａａｇｇｔｇａｃｃｇｃｃａｔｇａａｇｔｇｔｔｔｔｃｔｇｃｔｇｇａｇｃｔｇｃａｇｇｔｃａｔｃａｇｃｃｔｇｇａｇｔｃｃｇｇｃｇａｃｇｃａａｇｃａｔｃｃａｃｇａｔａｃｃｇｔｇｇａｇａａｔｃｔｇａｔｃａｔｃｃｔｇｇｃｃａａｃａａｔｔｃｃｃｔｇｔｃｔａｇｃａａｃｇｇｃａａｔｇｔｇａｃａｇａｇｔｃｔｇｇｃｔｇｃａａｇｇａｇｔｇｔｇａｇｇａｇｃｔｇｇａｇｇａｇａａｇａａｔａｔｃａａａｇａｇｔｔｃｃｔｇｃａｇａｇｔｔｔｃｇｔｃｃａｃａｔｃｇｔｃｃａｇａｔｇｔｔｔａｔｃａａｔａｃｃｔｃａ
（配列番号５８）
Ｐ−０６６６第１鎖のヌクレオチド配列
ａｔｇｇａｔａｔｇｃｇａｇｔｇｃｃｔｇｃｔｃａｇｃｔｇｃｔｇｇｇｃｃｔｇｃｔｇｃｔｇｃｔｇｔｇｇｃｔｇｃｇｇｇｇｇｇｃｔａｇａｔｇｃｇａｔａａａａｃｔｃａｔａｃｃｔｇｔｃｃｔｃｃａｔｇｃｃｃａｇｃａｃｃｔｇａｇｇｃａｇｃａｇｇｃｇｃｃｃｃａｔｃｃｇｔｇｔｔｃｃｔｇｔｔｔｃｃｃｃｃｔａａｇｃｃｃａａｇｇａｃａｃｃｃｔｇａｔｇａｔｃｔｃｔｃｇｔａｃｇｃｃｃｇａｇｇｔｇａｃａｔｇｃｇｔｇｇｔｇｇｔｇｇａｃｇｔｇａｇｃｃａｃｇａｇｇａｃｃｃｃｇａｇｇｔｇａａｇｔｔｃａａｃｔｇｇｔａｃｇｔｇｇａｔｇｇｃｇｔｇｇａｇｇｔｇｃａｃａａｔｇｃｃａａｇａｃａａａｇｃｃｔｃｇｇｇａｇｇａｇｃａｇｔａｃａａｃｔｃｃａｃｃｔａｔａｇａｇｔｇｇｔｇｔｃｔｇｔｇｃｔｇａｃａｇｔｇｃｔｇｃａｃｃａｇｇａｃｔｇｇｃｔｇａａｃｇｇｃａａｇｇａｇｔａｃａａｇｔｇｃａａｇｇｔｇｔｃｃａａｔａａｇｇｃｃｃｔｇｃｃａｇｃｃｃｃｃａｔｃｇａｇａａｇａｃｃａｔｃａｇｃａａｇｇｃｃａａｇｇｇｃｃａｇｃｃｔａｇｇｇａｇｃｃａｃａｇｇｔｇｔａｔａｃｃｃｔｇｃｃａｃｃｃｔｇｃｃｇｃｇａｇｇａｇａｔｇａｃａａａｇａａｃｃａｇｇｔｇｔｃｃｃｔｇｔｃｔｔｇｔｇｃｃｇｔｇａａｇｇｇｃｔｔｃｔａｃｃｃｔｔｃｔｇａｃａｔｃｇｃｃｇｔｇｇａｇｔｇｇｇａｇａｇｃａａｔｇｇｃｃａｇｃｃａｇａｇａａｃａａｔｔａｔａａｇａｃｃａｃａｃｃｔｃｃａｇｔｇｃｔｇｇａｃｔｃｔｇａｔｇｇｃａｇｃｔｔｃｔｔｔｃｔｇｇｔｇａｇｃａａｇｃｔｇａｃｃｇｔｇｇａｔａａｇｔｃｃａｇｇｔｇｇｃａｇｃａｇｇｇｃａａｃｇｔｇｔｔｔａｇｃｔｇｔｔｃｃｇｔｇａｔｇｃａｃｇａｇｇｃｃｃｔｇｃａｃａａｔｃａｃｔａｃａｃａｃａｇａａｇｔｃｔｃｔｇａｇｃｃｔｇｔｃｃｃｃｃｇｇｇｇｇａｇｇｃｇｇａｇｇａｔｃｔｇｇｔｇｇｃｇｇａｇｇａａｇｃｇｇａｇｇｃｇｇｃｇｇｃｔｃｃａａｃｔｇｇｇｔｇａａｔｇｔｇａｔｃａｇｃｇａｃｃｔｇａａｇａａｇａｔｃｇａｇｇａｔｃｔｇａｔｃｃａｇｔｃｃａｔｇｃａｃａｔｃｇａｃｇｃｃａｃｃｃｔｇｔａｔａｃａｇａｇｔｃｔｇａｔｇｔｇｃａｃｃｃｃａｇｃｔｇｃａａｇｇｔｇａｃｃｇｃｃａｔｇａａｇｔｇｔｔｔｔｃｔｇｃｔｇｇａｇｃｔｇｃａｇｇｔｃａｔｃａｇｃｃｔｇｇａｇｔｃｃｇｇｃｇａｃｇｃａｇａｃａｔｃｃａｃｇａｔａｃｃｇｔｇｇａｇａａｔｃｔｇａｔｃａｔｃｃｔｇｇｃｃａａｃａａｔｔｃｃｃｔｇｔｃｔａｇｃａａｃｇｇｃａａｔｇｔｇａｃａｇａｇｔｃｔｇｇｃｔｇｃａａｇｇａｇｔｇｔｇａｇｇａｇｃｔｇｇａｇｇａｇａａｇａａｔａｔｃａａａｇａｇｔｔｃｃｔｇｃａｇａｇｔｔｔｃｇｔｃｃａｃａｔｃｇｔｃｃａｇａｔｇｔｔｔａｔｃａａｔａｃｃｔｃａ（配列番号５９）
Ｐ−０６６６第３鎖のヌクレオチド配列
ａｔｇｇａｔａｔｇｃｇｇｇｔｇｃｃｔｇｃｔｃａｇｃｔｇｃｔｇｇｇｃｃｔｇｃｔｇｃｔｇｃｔｇｔｇｇｃｔｇｃｇａｇｇｇｇｃｔａｇａｔｇｔｇａｔａａａａｃｔｃａｔａｃｔｔｇｔｃｃｔｃｃａｔｇｃｃｃａｇｃａｃｃｔｇａｇｇｃａｇｃａｇｇｃｇｃｃｃｃａｔｃｃｇｔｇｔｔｃｃｔｇｔｔｔｃｃｃｃｃｔａａｇｃｃｃａａｇｇａｃａｃａｃｔｇａｔｇａｔｃｔｃｃｃｇｔａｃｇｃｃａｇａｇｇｔｇａｃａｔｇｃｇｔｇｇｔｇｇｔｇｇａｃｇｔｇｔｃｔｃａｃｇａｇｇａｃｃｃｃｇａｇｇｔｇａａｇｔｔｃａａｃｔｇｇｔａｃｇｔｇｇａｔｇｇｃｇｔｇｇａｇｇｔｇｃａｃａａｔｇｃｃａａｇａｃｃａａｇｃｃｃａｇｇｇａｇｇａｇｃａｇｔａｃａａｃａｇｃａｃｃｔａｔｃｇｃｇｔｇｇｔｇｔｃｃｇｔｇｃｔｇａｃａｇｔｇｃｔｇｃａｃｃａｇｇａｃｔｇｇｃｔｇａａｃｇｇｃａａｇｇａｇｔａｔａａｇｔｇｃａａｇｇｔｇｔｃｃａａｔａａｇｇｃｃｃｔｇｃｃａｇｃｃｃｃｃａｔｃｇａｇａａｇａｃｃａｔｃａｇｃａａｇｇｃａａａｇｇｇａｃａｇｃｃｔｃｇｇｇａｇｃｃａｃａｇｇｔｇｔｇｃａｃｃｃｔｇｃｃａｃｃｃｔｃｔａｇａｇａｇｇａｇａｔｇａｃａａａｇａａｃｃａｇｇｔｇａｇｃｃｔｇｔｇｇｔｇｔｃｔｇｇｔｇａａｇｇｇｃｔｔｃｔａｃｃｃｔｔｃｃｇａｃａｔｃｇｃｃｇｔｇｇａｇｔｇｇｇａｇｔｃｔａａｔｇｇｃｃａｇｃｃａｇａｇａａｃａａｔｔａｃａａｇａｃｃａｃａｃｃｔｃｃａｇｔｇｃｔｇｇａｃｔｃｔｇａｔｇｇｃａｇｃｔｔｃｔｔｔｃｔｇｔａｔｔｃｔａａｇｃｔｇａｃｃｇｔｇｇａｔａａｇａｇｃａｇｇｔｇｇｃａｇｃａｇｇｇｃａａｃｇｔｇｔｔｔｔｃｃｔｇｃｔｃｔｇｔｇａｔｇｃａｃｇａｇｇｃｃｃｔｇｃａｃａａｔｃａｃｔａｃａｃａｃａｇａａｇａｇｃｃｔｇｔｃｃｃｔｇｔｃｔｃｃｃｇｇｇ（配列番号６０）
Ｐ−０６６８第１鎖のヌクレオチド配列
ａｔｇｔａｔｃｇｇａｔｇｃａｇｃｔｇｃｔｇｔｃｔｔｇｔａｔｃｇｃｔｃｔｇｔｃａｃｔｇｇｃｔｃｔｇｇｔｃａｃｔａａｔｔｃｔａａｃｔｇｇｇｔｃａａｔｇｔｃａｔｔｔｃｔｇａｔｃｔｇａａｇａａｇａｔｃｇａｇｇａｃｃｔｇａｔｃｃａｇａｇｃａｔｇｃａｃａｔｃｇａｔｇｃｃａｃｃｃｔｇｔａｃａｃａｇａｇｔｃｃｇａｃｇｔｇｃａｃｃｃａｔｃｔｔｇｃａａｇｇｔｇａｃｃｇｃａａｔｇａａｇｔｇｔｔｔｃｃｔｇｃｔｇｇａｇｃｔｇｃａｇｇｔｃａｔｃａｇｃｃｔｇｇａｇａｇｃｇｇｃｇａｃｇｃａｇａｔａｔｃｃａｃｇａｔａｃｃｇｔｇｇａｇａａｃｃｔｇａｔｃａｔｃｃｔｇｇｃａａａｃａａｔｔｃｃｃｔｇａｇｃｔｃｃａａｃｇｇａａａｔｇｔｇａｃａｇａｇｔｃｔｇｇａｔｇｃａａｇｇａｇｔｇｔｇａｇｇａｇｃｔｇｇａｇｇａｇａａｇａａｃａｔｃａａｇｇａｇｔｔｃｃｔｇｃａｇｔｃｔｔｔｔｇｔｇｃａｃａｔｃｇｔｇｃａｇａｔｇｔｔｃａｔｃａａｔａｃａｔｃｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃｔｃｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃｔｃｔｇｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃａｇｃｔｇｃｃｃｃｃｃｔｔｇｔｃｃａｇｃｃｃｃｃｇａｇｇｃｃｇｃｔｇｇｇｇｃａｃｃａａｇｃｇｔｇｔｔｃｃｔｇｔｔｃｃｃｔｃｃａａａａｃｃａａａａｇａｔａｃｔｃｔｇａｔｇａｔｔａｇｃｃｇｔａｃｇｃｃａｇａｇｇｔｇａｃａｔｇｃｇｔｇｇｔｇｇｔｇｇａｃｇｔｇａｇｃｃａｃｇａｇｇａｃｃｃｃｇａｇｇｔｇａａｇｔｔｔａａｃｔｇｇｔａｃｇｔｇｇａｃｇｇｃｇｔｇｇａｇｇｔｇｃａｃａａｔｇｃｃａａｇａｃａａａｇｃｃｔａｇｇｇａｇｇａｇｃａｇｔａｃａａｔｔｃｔａｃｃｔａｔｃｇｃｇｔｇｇｔｇａｇｃｇｔｇｃｔｇａｃａｇｔｇｃｔｇｃａｃｃａｇｇａｔｔｇｇｃｔｇａａｃｇｇｃａａｇｇａｇｔａｔａａｇｔｇｃａａｇｇｔｇｔｃｃａａｔａａｇｇｃｃｃｔｇｃｃｔｇｃｃｃｃａａｔｃｇａｇａａｇａｃｃａｔｃｔｃｔａａｇｇｃｃａａｇｇｇｃｃａｇｃｃｃａｇａｇａｇｃｃｔｃａｇｇｔｇｔａｃａｃａｃｔｇｃｃｔｃｃａａｇｃａｇａｇａｃｇａｇｃｔｇａｃｃａａｇａａｃｃａｇｇｔｇｔｃｃｃｔｇａｃａｔｇｔｃｔｇｇｔｇａａｇｇｇｃｔｔｃｔａｔｃｃｃｔｃｔｇａｔａｔｃｇｃｃｇｔｇｇａｇｔｇｇｇａｇａｇｃａａｔｇｇｃｃａｇｃｃｔｇａｇａａｃａａｔｔａｃａａｇａｃｃａｃａｃｃｃｃｃｔｇｔｇｃｔｇｇａｃａｇｃｇａｔｇｇｃｔｃｃｔｔｃｔｔｔｃｔｇｔａｔｔｃｃａａｇｃｔｇａｃｃｇｔｇｇａｔａａｇｔｃｔｃｇｇｔｇｇｃａｇｃａｇｇｇｃａａｃｇｔｇｔｔｔｔｃｃｔｇｃｔｃｔｇｔｇａｔｇｃａｃｇａａｇｃａｃｔｇｃａｔａａｃｃａｃｔａｃａｃｃｃａｇａａｇａｇｃｃｔｇａｇｃｃｔｇｔｃｃｃｃｃｇｇｇ（配列番号６１）
Ｐ−０３１４第１鎖のヌクレオチド配列
ａｔｇｇａｔａｔｇｃｇｇｇｔｇｃｃｔｇｃｔｃａｇｃｔｇｃｔｇｇｇｃｃｔｇｃｔｇｃｔｇｃｔｇｔｇｇｃｔｇｃｇａｇｇｇｇｃｔａｇａｔｇｔｇａｔａａａａｃｔｃａｔａｃｔｔｇｔｃｃｔｃｃａｔｇｃｃｃａｇｃａｃｃｔｇａｇｇｃａｇｃａｇｇｃｇｃｃｃｃａｔｃｃｇｔｇｔｔｃｃｔｇｔｔｔｃｃｃｃｃｔａａｇｃｃｃａａｇｇａｃａｃａｃｔｇａｔｇａｔｃｔｃｃｃｇｔａｃｇｃｃａｇａｇｇｔｇａｃａｔｇｃｇｔｇｇｔｇｇｔｇｇａｃｇｔｇａｇｃｃａｃｇａｇｇａｃｃｃｃｇａｇｇｔｇａａｇｔｔｔａａｃｔｇｇｔａｃｇｔｇｇａｃｇｇｃｇｔｇｇａｇｇｔｇｃａｃａａｔｇｃｃａａｇａｃａａａｇｃｃｔａｇｇｇａｇｇａｇｃａｇｔａｃａａｔｔｃｔａｃｃｔａｔｃｇｃｇｔｇｇｔｇａｇｃｇｔｇｃｔｇａｃａｇｔｇｃｔｇｃａｃｃａｇｇａｔｔｇｇｃｔｇａａｃｇｇｃａａｇｇａｇｔａｔａａｇｔｇｃａａｇｇｔｇｔｃｃａａｔａａｇｇｃｃｃｔｇｃｃｔｇｃｃｃｃａａｔｃｇａｇａａｇａｃｃａｔｃｔｃｔａａｇｇｃｃａａｇｇｇｃｃａｇｃｃｃａｇａｇａｇｃｃｔｃａｇｇｔｇｔａｃａｃａｃｔｇｃｃｔｃｃａａｇｃａｇａｇａｃｇａｇｃｔｇａｃｃａａｇａａｃｃａｇｇｔｇｔｃｃｃｔｇａｃａｔｇｔｃｔｇｇｔｇａａｇｇｇｃｔｔｃｔａｔｃｃｃｔｃｔｇａｔａｔｃｇｃｃｇｔｇｇａｇｔｇｇｇａｇａｇｃａａｔｇｇｃｃａｇｃｃｔｇａｇａａｃａａｔｔａｃａａｇａｃｃａｃａｃｃｃｃｃｔｇｔｇｃｔｇｇａｃａｇｃｇａｔｇｇｃｔｃｃｔｔｃｔｔｔｃｔｇｔａｔｔｃｃａａｇｃｔｇａｃｃｇｔｇｇａｔａａｇｔｃｔｃｇｇｔｇｇｃａｇｃａｇｇｇｃａａｃｇｔｇｔｔｔｔｃｃｔｇｃｔｃｔｇｔｇａｔｇｃａｃｇａａｇｃａｃｔｇｃａｔａａｃｃａｃｔａｃａｃｃｃａｇａａｇａｇｃｃｔｇａｇｃｃｔｇｔｃｃｃｃｃｇｇｇｇｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃａｇｃｇｇａｇｇｃｇｇｃｇｇｃｔｃｃａｔｃａｃｃｔｇｔｃｃａｃｃｃｃｃｔａｔｇａｇｃｇｔｇｇａｇｃａｃｇｃｃｇａｔａｔｃｔｇｇｇｔｇａａｇａｇｃｔａｃｔｃｃｃｔｇｔａｔａｇｃｃｇｇｇａｇａｇａｔａｔａｔｃｔｇｃａａｔｔｃｃｇｇｃｔｔｔａａｇｃｇｃａａｇｇｃｃｇｇｃａｃｃｔｃｔａｇｃｃｔｇａｃａｇａｇｔｇｃｇｔｇｃｔｇａａｃａａｇｇｃｃａｃｃａａｔｇｔｇｇｃｃｃａｃｔｇｇａｃａａｃｃｃｃａａｇｃｃｔｇａａｇｔｇｔａｔｔａｇａｇａｃｃｃｔｇｃｃｃｔｇｇｔｇｃａｔｃａｇｃｇｇｃｃｔｇｃｔｃｃｃｃｃａ（配列番号６２）
Ｐ−０３１４第２鎖のヌクレオチド配列
ａｔｇｔａｃｃｇｇａｔｇｃａｇｃｔｇｃｔｇｔｃｃｔｇｃａｔｃｇｃｃｃｔｇｔｃｔｃｔｇｇｃｃｃｔｇｇｔｇａｃｃａａｃｔｃｔａａｔｔｇｇｇｔｇａａｃｇｔｇａｔｃａｇｃｇａｃｃｔｇａａｇａａｇａｔｃｇａｇｇａｔｃｔｇａｔｃｃａｇｔｃｔａｔｇｃａｃａｔｃｇａｃｇｃｃａｃｃｃｔｇｔａｔａｃａｇａｇａｇｃｇａｔｇｔｇｃａｃｃｃｃｔｃｃｔｇｃａａｇｇｔｇａｃａｇｃｃａｔｇａａｇｔｇｔｔｔｃｃｔｇｃｔｇｇａｇｃｔｇｃａｇｇｔｃａｔｃａｇｃｃｔｇｇａｇａｇｃｇｇｃｇａｃｇｃａｇａｃａｔｃｃａｃｇａｔａｃｃｇｔｇｇａｇａａｃｃｔｇａｔｃａｔｃｃｔｇｇｃｃａａｔａａｃｔｃｃｃｔｇａｇｃｔｃｃａａｃｇｇｃａａｔｇｔｇａｃａｇａｇｔｃｔｇｇｃｔｇｃａａｇｇａｇｔｇｔｇａｇｇａｇｃｔｇｇａｇｇａｇａａｇａａｃａｔｃａａｇｇａｇｔｔｃｃｔｇｃａｇａｇｃｔｔｔｇｔｇｃａｃａｔｃｇｔｇｃａｇａｔｇｔｔｔａｔｃａａｔａｃｃｔｃｃ（配列番号６３）
標準の第１鎖
ＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号６４）
標準の第２鎖
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＤＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号６５）
【図１−１】
2021528104.tif 000010
【図１−２】
2021528104.tif 000011
【図２】
2021528104.tif 000012
【図３】
2021528104.tif 000013
【図４】
2021528104.tif 000014
【図５】
2021528104.tif 000015
【図６】
2021528104.tif 000016
【図７】
2021528104.tif 000017
【図８】
2021528104.tif 000018
【図９】
2021528104.tif 000019
【図１０】
2021528104.tif 000020
【図１１】
2021528104.tif 000021
【図１２】
2021528104.tif 000022
【図１３】
2021528104.tif 000023
【図１４】
2021528104.tif 000024
【図１５】
2021528104.tif 000025
【図１６】
2021528104.tif 000026
【図１７】
2021528104.tif 000027
【図１８】
2021528104.tif 000028
【図１９】
2021528104.tif 000029
【図２０】
2021528104.tif 000030
【図２１】
2021528104.tif 000031
【図２２】
2021528104.tif 000032
【図２３】
2021528104.tif 000033
【図２４】
2021528104.tif 000034
【図２５】
2021528104.tif 000035
【図２６】
2021528104.tif 000036
【図２７】
2021528104.tif 000037
【図２８】
2021528104.tif 000038
【図２９】
2021528104.tif 000039
【配列表】
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【国際調査報告】
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