(57)【要約】  本発明は、二重特異性抗体及びＩＬ−１５を用いて、対象においてＴ細胞を活性化する方法及び対象におけるがんを処置する方法に関する。本発明はまた、二重特異性抗体とＩＬ−１５とを含む、医薬組成物及びにキットに関する。本発明は更に、対象においてＴ細胞を活性化するのに使用するための二重特異性抗体、対象においてＴ細胞を活性化するための医薬の製造において使用するための二重特異性抗体、並びに二重特異性抗体及び前述のＩＬ−１５を含む製品に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象においてＴ細胞を活性化する方法であって、前記対象に、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分を投与することを含む、方法。
【請求項２】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及び前記ＩＬ−５部分を投与することにより、ＣＬＥＣ１２Ａを発現する細胞を特異的に標的化するように前記Ｔ細胞を活性化する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及び前記ＩＬ−５部分を投与することにより、ＣＬＥＣ１２Ａを発現する細胞を特異的に標的化し、溶解するように、前記Ｔ細胞を活性化する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記対象が、がんを有する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
対象におけるがんを処置する方法であって、前記対象に、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分を投与することを含む、方法。
【請求項６】
前記対象が、ヒトである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記がんが骨髄起源のものである、請求項４〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記がんが、白血病又は前白血病から選択される、請求項４〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記がんが、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、及び慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）から選択される、請求項４〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及び前記ＩＬ−１５部分が、前記対象に、並行して投与される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、前記ＩＬ−１５部分より前に、前記対象に投与される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＩＬ−１５部分が、前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体より前に、前記対象に投与される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
腫瘍細胞上のＣＬＥＣ１２Ａに対する前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の結合親和性が、ＣＤ３への結合の親和性よりも少なくとも２倍、４倍、６倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、又は５０倍高い、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、ＣＤ３εに結合する、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに結合する第１の重鎖可変領域を含み、前記第１の重鎖可変領域が、
（ａ）アミノ酸配列ＳＧＹＴＦＴＧＹ（配列番号９）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＩＮＰＳＧＧＳ（配列番号１０）を含む重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＧＴＴＧＤＷＦＤＹ（配列番号１１）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｂ）アミノ酸配列ＳＧＹＴＦＴＳＹ（配列番号１３）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＩＮＰＳＧＧＳ（配列番号１４）を含む重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＧＮＹＧＤＥＦＤＹ（配列番号１５）を含む重鎖ＣＤＲ３、又は
（ｃ）アミノ酸配列ＳＧＹＴＦＴＧＹ（配列番号１７）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＷＩＮＰＮＳＧＧ（配列番号１８）を含む重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＤＧＹＦＡＤＡＦＤＹ（配列番号１９）を含む重鎖ＣＤＲ３を含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに結合する第１の重鎖可変領域を含み、前記第１の重鎖可変領域が、配列番号１２、１６、又は２０に示されるＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに結合する第１の重鎖可変領域を含み、前記第１の重鎖可変領域が、配列番号１２、１６、又は２０に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに結合する第１の重鎖可変領域を含み、前記第１の重鎖可変領域が、配列番号１２、１６、又は２０に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、ＣＤ３に結合する第２の重鎖可変領域を含み、前記第２の重鎖可変領域が、
（ａ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＮＧＲＫＱ（配列番号２２）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｂ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＳＧＳＫＫＮ（配列番号３０）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｃ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＨＧＲＫＱ（配列番号３２）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｄ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＨＡＲＫＱ（配列番号３４）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｅ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＮＡＲＫＱ（配列番号３６）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｆ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＮＴＲＫＱ（配列番号４５）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｇ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＤＧＫＮＴ（配列番号４７）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｈ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＧＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＹＹＤＧＳＲＴ（配列番号４９）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、又は
（ｉ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＫＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＨＤＧＲＫＴ（配列番号５１）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３を含む、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、ヒトＣＤ３に結合する第２の重鎖可変領域を含み、前記第２の重鎖可変領域が、配列番号２４〜２９、３１、３３、３５、３７〜４４、４６、４８、５０、及び５２に示される群から選択されるＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、ヒトＣＤ３に結合する第２の重鎖可変領域を含み、前記第２の重鎖可変領域が、配列番号２４〜２９、３１、３３、３５、３７〜４４、４６、４８、５０、又は５２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、ヒトＣＤ３に結合する第２の重鎖可変領域を含み、前記第２の重鎖可変領域が、配列番号２４〜２９、３１、３３、３５、３７〜４４、４６、４８、５０、及び５２に示される群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに結合する第１の重鎖可変領域と、ヒトＣＤ３に結合する第２の重鎖可変領域とを含み、前記第１のＶＨのアミノ酸配列が、配列番号１２、１６、及び２０から選択され、前記第２のＶＨのアミノ酸配列が、配列番号２４〜２９、３１、３３、３５、３７〜４４、４６、４８、５０、又は５２から選択される、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに結合する第１の重鎖可変領域と、ヒトＣＤ３に結合する第２の重鎖可変領域とを含み、前記第１のＶＨが、アミノ酸配列ＳＧＹＴＦＴＧＹ（配列番号９）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＩＮＰＳＧＧＳ（配列番号１０）を含む重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＧＴＴＧＤＷＦＤＹ（配列番号１１）を含む重鎖ＣＤＲ３を含み、前記第２のＶＨが、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＮＡＲＫＱ（配列番号３６）を含む重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３を含む、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含む第１の重鎖可変領域と、配列番号３７に示されるアミノ酸配列を含む第２の重鎖可変領域とを含む、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに結合する第１のＶＨ／ＶＬ結合領域と、ヒトＣＤ３に結合する第２のＶＨ／ＶＬ領域とを含み、前記第１及び第２のＶＨ／ＶＬ結合領域のＶＬが、共通軽鎖を含む、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記共通軽鎖が、アミノ酸配列ＱＳＩＳＳＹ（配列番号５３）を含む可変軽鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号５４）を含む軽鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＱＱＳＹＳＴＰ（配列番号５５）を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記第１及び第２のＶＬが、それぞれ、配列番号５７又は配列番号５８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一である可変軽鎖を含む、請求項２６又は２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の、前記ＣＬＥＣ１２Ａ結合可変領域を含む前記重鎖の定常領域及び前記ＣＤ３結合可変領域を含む前記重鎖の定常領域が、適合性のあるヘテロ二量体化ドメインを含む、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、変異したＣＨ２及び／又は下方ヒンジドメインを含むＦｃ部分を含むＩｇＧ抗体であり、前記Ｆｃ部分のヒトＦｃガンマ受容体への結合が、低減されている、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記変異体ＣＨ２及び／又は下方ヒンジドメインが、２３５位及び／又は２３６位（ＥＵ番号付け）に、アミノ置換を含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記変異体ＣＨ２及び／又は下方ヒンジドメインが、Ｌ２３５Ｇ及び／又はＧ２３６Ｒ置換を含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記ＩＬ−１５部分が、天然に存在するＩＬ−１５、組み換えＩＬ−１５、合成ＩＬ−１５、修飾されたＩＬ−１５、ＰＥＧ化されたＩＬ−１５、ＩＬ−１５及び異種融合パートナーを含む融合タンパク質、ＩＬ−１５模倣体、又はこれらのうちのいずれか１つの機能性断片である、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記ＩＬ−１５部分が、ヒトＩＬ−１５である、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記ヒトＩＬ−１５が、組み換えヒトＩＬ−１５（ｒｈＩＬ−１５）である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記ＩＬ−１５部分が、ＩＬ−１５及び可溶性ＩＬ−１５Ｒａ（ｓＩＬ−１５Ｒａ）を含む複合体である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３７】
前記ＩＬ−１５部分が、ＩＬ−１５ＲａＳｕ／Ｆｃである、請求項３３に記載の方法。
【請求項３８】
前記ＩＬ−１５部分が、ＩＬ−１５と水溶性ポリマーとのコンジュゲートである、請求項３３に記載の方法。
【請求項３９】
ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体とＩＬ−１５部分とを含む、医薬組成物。
【請求項４０】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及び前記ＩＬ−１５部分が、単一製剤で提供される、請求項３９に記載の医薬組成物。
【請求項４１】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及び前記ＩＬ−１５部分が、別個の製剤で提供される、請求項３９に記載の医薬組成物。
【請求項４２】
ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体と、ＩＬ−１５部分と、前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及び前記ＩＬ−１５部分を請求項１〜３８のいずれか一項に記載の方法において使用するための説明書と、を含む、キット。
【請求項４３】
対象においてＴ細胞を活性化するのに使用するためのＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体であって、前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、ＩＬ−１５部分と同時に、それとは別個に、又はそれと連続的に投与される、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項４４】
対象においてＴ細胞を活性化するための医薬の製造において使用するためのＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体であって、前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、ＩＬ−１５部分と同時に、それとは別個に、又はそれと連続的に投与される、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項４５】
対象においてＴ細胞を活性化する際に同時、別個、又は連続的に使用するための組み合わせ調製物として、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分を含む、製品。
【請求項４６】
対象におけるがんの処置に使用するためのＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１７年１２月１日に出願された米国特許出願第６２／５９３，５０９号に対する優先権を主張するものであり、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、二重特異性抗体を用いて、対象においてＴ細胞を活性化する方法及び対象におけるがんを処置する方法に関する。本発明はまた、二重特異性抗体を含む、医薬組成物及びキットにも関する。本発明は更に、対象においてＴ細胞を活性化するのに使用するための二重特異性抗体、対象においてＴ細胞を活性化するための医薬の製造において使用するための二重特異性抗体、及び二重特異性抗体を含む製品に関する。
【背景技術】
【０００３】
骨髄系悪性腫瘍は、骨髄、血液、及び他の組織におけるクローン性骨髄芽球の増殖を特徴とする、不均質な群の造血系がんを含む。例えば、急性骨髄性白血病（Ａｃｕｔｅ  Ｍｙｅｌｏｉｄ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ、ＡＭＬ）は、骨髄、血液、及び他の組織におけるクローン性骨髄芽球の増殖を特徴とする、侵襲的な悪性疾患である。ヨーロッパ及び米国において、毎年およそ３０，０００人の患者が、ＡＭＬと診断されている。これらの患者の大部分は、６０歳以上である。完全寛解（ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｒｅｍｉｓｓｉｏｎ、ＣＲ）は、６０歳よりも若齢の患者のうちの７０〜８０％において、いくつかの集中化学療法の組み合わせにより達成することができるが、これらの応答患者の大部分については、再発が生じ、全般的な５年生存率は４０〜４５％である。６０歳以上の患者の予後は更に悪く、中央値の生存期間は１年未満である（Ｒｏｂｏｚ，Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｈｅｍａｔｏｌ．Ｅｄｕｃ．Ｐｒｏｇｒａｍ（２０１１），ｐｐ．４３−５０）。現在のＡＭＬの標準的な処置は、高い罹患率及び更には死亡率と関連付けられ、ＣＲとなった患者の大部分が、化学療法後の残存する白血病性幹細胞に起因して再発する。更なる投与量強化は、許容できない毒性に起因して制限される。
【０００４】
慢性骨髄性白血病（ｃｈｒｏｎｉｃ  ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）又は慢性顆粒球性白血病としても知られる慢性骨髄性白血病（Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｍｙｅｌｏｉｄ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ、ＣＭＬ）は、三病期疾患である。ＣＭＬは、通常、成熟顆粒球の過剰産生を特徴とする慢性期（ＣＰ）（血液及び骨髄中の芽球が１０％未満である）、定義が不十分であることが多い中間期（１０〜２０％の芽球を有する）を呈し、処置しなければ、ＣＭＬは、恒常的に、急性リンパ性又は骨髄性白血病に類似する急性期（血液又は骨髄中の芽球が２０％を上回る）へと変化する（Ａｐｐｅｒｌｅｙ，Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌ．２００７；８（１２）：１１１６−１１２８）。ＣＭＬは、世界中で年間発生率１〜２／１００，０００例であり、わずかに男性の方が多く、成人白血病の１５％を占めており（Ｒｅｄａｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．２００４；４（１）：８５−９６）、発生時の中央値年齢は６０歳である（Ｈｏｇｌｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２０１５；９４（Ｓｕｐｐｌ．２）：２４１−２４７）。現在、いくつかのＡＢＬチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）が、ＣＭＬ患者の最前線の治療法として承認されているが、ＴＫＩは、かなりの割合の患者で失敗する（Ｃｌａｒｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．４７：１３−２３，２０１７）。
【０００５】
骨髄異形成症候群（Ｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｔｉｃ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ、ＭＤＳ）は、不均質な群のクローン性骨髄疾患であり、末梢血血球減少症につながる無効造血、及び患者のうちのおよそ約３５〜４０％における急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）への進行を特徴とする。一般集団におけるＭＤＳの発生率は、１００，０００人当たり５の新しい症例として報告されている。ＭＤＳは、男性が女性よりも高い頻度で罹患し、ＡＭＬ及びＣＭＬと同様に、その発生率は年齢とともに増加する（Ｒｏｌｌｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  １１２：４５−５２，２００８）。現在、アザシチジン及びデシタビンが、全てのタイプのＭＤＳについて最前線の治療法として承認されているが、患者の臨床転帰は不十分である。更に、同種造血幹細胞移植は、ＭＤＳ患者のための唯一の潜在的に治癒的な治療法として特定されているが、患者の大多数について年齢が進行していることに起因して、限られた数の患者にしか有用ではない（Ｔｅｆｆｅｒｉ，Ｎ．Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６１（１９）：１８７２−１８７５，２００９）。
【０００６】
したがって、骨髄系悪性腫瘍における応答又は生存の進歩は、主要な研究課題となったままである。したがって、特に、高齢患者において、好ましくは毒性の低い、ＡＭＬ、ＣＭＬ、及びＭＤＳなどの骨髄系悪性腫瘍の有効な処置モダリティに対する緊急性の必要性が依然として存在する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｒｏｂｏｚ，Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｈｅｍａｔｏｌ．Ｅｄｕｃ．Ｐｒｏｇｒａｍ（２０１１），ｐｐ．４３−５０
【非特許文献２】Ａｐｐｅｒｌｅｙ，Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌ．２００７；８（１２）：１１１６−１１２８
【非特許文献３】Ｒｅｄａｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．２００４；４（１）：８５−９６
【非特許文献４】Ｈｏｇｌｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２０１５；９４（Ｓｕｐｐｌ．２）：２４１−２４７
【非特許文献５】Ｃｌａｒｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．４７：１３−２３，２０１７
【非特許文献６】Ｒｏｌｌｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  １１２：４５−５２，２００８
【非特許文献７】Ｔｅｆｆｅｒｉ，Ｎ．Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６１（１９）：１８７２−１８７５，２００９
【発明の概要】
【０００８】
本発明は、少なくとも部分的に、ＩＬ−１５部分の存在下におけるＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性ＩｇＧ抗体の投与が、ＣＬＥＣ１２Ａレベルを発現する細胞、例えば、骨髄性白血病細胞を特異的に標的化するＴ細胞の活性化を増強するという発見に基づく。この組み合わせは、ＣＬＥＣ１２Ａを発現するＡＭＬ芽球及び白血病性幹細胞を殺滅するように、免疫系、より具体的にはＴ細胞に指示し、したがって、現在承認されている治療法よりも、がん患者の予後の改善をもたらす標的化療法を提供する。
【０００９】
一態様では、対象においてＴ細胞を活性化する方法であって、対象に、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分を投与することを含む、方法が、提供される。
【００１０】
関連する態様では、対象におけるがんを処置する方法であって、対象に、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分を投与することを含む、方法が、提供される。
【００１１】
また、単一製剤又は別個の製剤において製剤化されたＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体とＩＬ−１５部分とを含む、医薬組成物及びキットも提供される。
【００１２】
加えて、
対象においてＴ細胞を活性化するのに使用するためのＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体であって、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、ＩＬ−１５部分と同時に、それとは別個に、又はそれと連続的に投与される、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体、
対象においてＴ細胞を活性化するための医薬の製造において使用するためのＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体であって、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、ＩＬ−１５部分と同時に、それとは別個に、又はそれと連続的に投与される、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体、
対象においてＴ細胞を活性化するのに同時、別個、又は連続的に使用するための組み合わせ調製物として、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分を含む、製品、
対象におけるがんの処置に使用するためのＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分が、提供される。
【００１３】
本開示のその他の特徴及び利点は、以下の発明を実施するための形態及び実施例から明らかとなるが、これらは、限定として解釈されるべきではない。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】示されるように試験したＩｇＧの存在下において、Ｅ：Ｔ比５：１でＨＬ−６０細胞と共培養した健常ドナーＴ細胞を用いた細胞毒性アッセイの結果を示す、棒グラフである。
【図２Ａ】Ｅ：Ｔ比１：１０で７２時間ＨＬ−６０細胞と共培養した健常ドナーＴ細胞を用いたＨＬ−６０細胞毒性アッセイにおける、ＰＢ９１２２ｐ０１により誘導されるＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化に対する、ＩＬ−１５の効果を示すグラフである。ＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化は、フローサイトメトリーによって定量化した。
【図２Ｂ】Ｅ：Ｔ比１：１０で７２時間ＨＬ−６０細胞と共培養した健常ドナーＴ細胞を用いたＨＬ−６０細胞毒性アッセイにおける、ＰＢ９１２２ｐ０１により誘導されるＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化に対する、ＩＬ−１５の効果を示すグラフである。ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化は、フローサイトメトリーによって定量化した。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
一態様では、対象においてＴ細胞を活性化する方法であって、対象に、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分を投与することを含む、方法が、提供される。いくつかの実施形態では、本方法は、ＣＬＥＣ１２Ａを発現する細胞に特異的に結合するＴ細胞を活性化する。関連する態様では、対象におけるがんを処置する方法であって、対象に、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分を投与することを含む、方法が、提供される。いくつかの実施形態では、がんは、ＣＬＥＣ１２Ａを発現するものである。
【００１６】
ＩＬ−１５部分は、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性ＩｇＧ抗体の存在下において、例えば、骨髄性白血病細胞の、ＣＬＥＣ１２Ａレベルを発現する細胞を標的とするＴ細胞の活性化を増強する。ＩＬ−１５部分は、例えば、ＡＭＬの場合、低頻度で存在し得るＴ細胞の生存を補助する。この組み合わせは、ＣＬＥＣ１２Ａを発現するＡＭＬ芽球及び白血病性幹細胞を殺滅するように、免疫系、より具体的にはＴ細胞に指示し、したがって、現在承認されている治療法よりも、がん患者の予後の改善をもたらす標的化療法を提供する。
【００１７】
本発明の方法では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−５部分を投与することにより、ＣＬＥＣ１２Ａを発現する細胞を特異的に標的化するようにＴ細胞を活性化することができる。ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−５部分を投与することにより、ＣＬＥＣ１２Ａを発現する細胞を特異的に標的化し、溶解するように、Ｔ細胞を活性化することができる。
【００１８】
本明細書に開示されるように、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分は、並行して、又はいずれかの順序で投与することができる。例えば、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分は、同時に、別個に、又は連続的に投与することができる。いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の投与は、ＩＬ−１５部分の投与の前に行われる。他の実施形態では、ＩＬ−１５部分の投与は、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の投与の前に行われる。他の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分の両方が、同時に投与される。
【００１９】
本明細書をより容易に理解することができるように、特定の用語を、まず定義する。更なる定義は、発明を実施するための形態全体に記載されている。別途記載されない限り、本明細書において使用される全ての技術用語及び科学用語は、当業者によって一般的に理解されているものと同じ意味を有し、免疫学、タンパク質化学、生化学、組み換えＤＮＡ技術、及び薬理学の従来の方法が用いられる。
【００２０】
本明細書において使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈によりそうでない旨が明確に指示されない限り、複数形の指示対象を含む。「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語、並びに「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、及び「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」などの他の形態の使用は、限定的ではない。
【００２１】
本明細書において使用される場合、「ＣＬＥＣ１２Ａ」という用語は、Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡを指す。ＣＬＥＣ１２Ａはまた、Ｃ型レクチンタンパク質ＣＬＬ−１；ＭＩＣＬ；樹状細胞関連レクチン２；Ｃ型レクチンスーパーファミリー；骨髄阻害性Ｃ型レクチン様受容体；Ｃ型レクチン様分子−１；ＤＣＡＬ２；ＣＬＬ１；Ｃ型レクチン様分子１；ＤＣＡＬ−２；キラー細胞レクチン様受容体サブファミリーＬ、メンバー１（Ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌ  ｌｅｃｔｉｎ  ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｕｂｆａｍｉｌｙ  Ｌ，ｍｅｍｂｅｒ  １、ＫＬＲＬ１）；ＣＤ３７１（分化のクラスター３７１）（Ｂａｋｋｅｒ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００４，６４，ｐ８８４３  ５０；ＧｅｎＢａｎｋ（商標）受託番号：ＡＹ５４７２９６；Ｚｈａｎｇ  Ｗ．ｅｔ  ａｌ．ＧｅｎＢａｎｋ（商標）受託番号：ＡＦ２４７７８８；Ａ．Ｓ．Ｍａｒｓｈａｌｌ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２００４，２７９，ｐ１４７９２−８０２；ＧｅｎＢａｎｋ（商標）受託番号：ＡＹ４９８５５０；Ｙ．Ｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  ２００４，１０４，ｐ２８５８  ６６；Ｈ．Ｆｌｏｙｄ，ｅｔ  ａｌ．ＧｅｎＢａｎｋ（商標）受託番号：ＡＹ４２６７５９；Ｃ．Ｈ．Ｃｈｅｎ，ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  ２００６，１０７，ｐ１４５９  ６７）とも称される。識別子：ＨＧＮＣ：３１７１３；Ｅｎｔｒｅｚ  Ｇｅｎｅ：１６０３６４；Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１７２３２２；ＯＭＩＭ：６１２０８８；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｑ５ＱＧＺ９。
【００２２】
ＣＬＥＣ１２Ａは、ＣＤ３４陰性又はＣＤ３４低発現の白血病性幹細胞（部分集団）を含め、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）（Ａ．Ｂ．Ｂａｋｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００４，６４，ｐ８４４３  ５０；Ｖａｎ  Ｒｈｅｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．２００７  Ｂｌｏｏｄ  １１０：２６５９；Ｍｏｓｈａｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２００８  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ  ２６：３０５９）、並びに骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）（Ｂａｋｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２００４，上記及びＴｏｆｆ−Ｐｅｔｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．１７５（３）：３９３−４０１，２０１６）において、白血病性芽球細胞及び白血病性幹細胞に発現される、抗原である。ＣＬＥＣ１２Ａの発現は、その他の点では、造血系の細胞、特に、末梢血及び骨髄における骨髄系統、すなわち、顆粒球、単球、及び樹状細胞前駆体に制限されると考えられている。より重要なことに、ＣＬＥＣ１２Ａは、正常な造血幹細胞には存在しない。本明細書においてＣＬＥＣ１２Ａに言及される場合、別途具体的に示されない限り、ヒトＣＬＥＣ１２Ａ（配列番号１）を指す。
【００２３】
「ＣＬＥＣ１２Ａ」という用語は、Ｂａｋｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００４，６４，ｐ８４４３−５０及びＭａｒｓｈａｌｌ  ２００４−Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７９（１５）、ｐ１４７９２−８０２に記載されているものを含め、骨髄発現プロファイル（表面発現レベル及びｍＲＮＡレベルの両方）を保持する、本明細書において言及される全てのバリアント（スプライス及び変異など）並びにそのアイソフォームを意味する。受託番号は、主に、同定の更なる方法として提供されるが、タンパク質の実際の配列は、例えば、いくつかのがんなどで生じるものなどのコード遺伝子における変異に起因して、変化し得る。
【００２４】
「ＣＤ３」（分化のクラスター３）という用語は、ＣＤ３γ鎖（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ  Ｐ０９６９３）、ＣＤ３δ鎖（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ  Ｐ０４２３４）、ＣＤ３ε鎖（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ  Ｐ０７７６６）、及びＣＤ３ゼータ鎖ホモ二量体（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ  Ｐ２０９６３）から構成される、タンパク質複合体を指す。ＣＤ３εは、様々な別名で知られており、そのうちのいくつかは、「ＣＤ３ｅ分子、イプシロン（ＣＤ３−ＴＣＲ複合体）」；「ＣＤ３ｅ抗原、イプシロンポリペプチド（ＴｉＴ３複合体）」；Ｔ細胞表面抗原Ｔ３／Ｌｅｕ−４イプシロン鎖；Ｔ３Ｅ；Ｔ細胞抗原受容体複合体、Ｔ３のイプシロンサブユニット；ＣＤ３ｅ抗原；ＣＤ３−イプシロン３；ＩＭＤ１８；ＴＣＲＥである。このＣＤ３Ｅ遺伝子の識別子は、ＨＧＮＣ：１６７４；Ｅｎｔｒｅｚ  Ｇｅｎｅ：９１６；Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１９８８５１；ＯＭＩＭ：１８６８３０；及びＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ０７７６６である。これらの鎖は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）及びζ鎖と会合して、Ｔリンパ球において活性化シグナルを生成する。ＴＣＲ、ζ鎖、及びＣＤ３分子が、一緒になって、ＴＣＲ複合体を構成する。ＣＤ３はＴ細胞上に発現される。本明細書においてＣＤ３に言及される場合、別途具体的に示されない限り、ヒトＣＤ３（配列番号２〜５）を指す。
【００２５】
「ＩＬ−１５」及び「ＩＬ−１５部分」という用語は、本明細書において互換可能に使用され、ＩＬ−１５の生物活性を有するペプチド又はタンパク質部分を指す。ＩＬ−１５又はＩＬ−１５部分は、天然のＩＬ−１５、典型的には、天然のヒトＩＬ−１５、並びにそれに実質的に相同な任意のタンパク質又はポリペプチドの生物活性を有し得る。この用語は、天然に、組み換えで、及び合成的に産生された部分、並びに例えば変異によって修飾されたペプチド及びタンパク質を含む。これらの用語はまた、追加のグリコシル化部位を有する類似体、カルボキシ末端に少なくとも１つ以上の追加のアミノ酸を有する類似体、及びＩＬ−１５断片も含む。
【００２６】
「ＩＬ−１５断片」という用語は、ＩＬ−１５部分の一部又は断片のアミノ酸配列を有し、ＩＬ−１５の生物活性を有する（したがって機能性断片である）、任意のタンパク質又はポリペプチドを意味する。断片には、ＩＬ−１５部分のタンパク質分解によって産生されるタンパク質又はポリペプチド、並びに当該技術分野において慣例的な方法による化学合成によって産生されるタンパク質又はポリペプチドが含まれる。
【００２７】
本明細書において使用される場合、「天然のＩＬ−１５」及び「天然のインターロイキン−１５」という用語は、未成熟又は前駆体及び成熟形態を含む、任意の天然に存在する哺乳動物インターロイキン−１５アミノ酸配列を指す。インターロイキン−１５（ＩＬ−１５）は、体内の多くの細胞によって産生される、リンホカインの４つのアルファ−ヘリックス束ファミリーのメンバーである。天然のＩＬ−１５は、自然免疫系及び適応免疫系の両方の活性を調節する際の中心的な役割、例えば、侵襲性病原体に対するメモリーＴ細胞応答の維持、アポトーシスの阻害、樹状細胞の活性化、並びにナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の増殖及び細胞毒性活性の誘導を果たす。様々な種の天然の哺乳動物インターロイキン−１５のアミノ酸配列のＧｅｎｅＢａｎｋ受託番号の非限定的な例としては、ＮＰ０００５７６（ヒト、未成熟形態）、ＣＡＡ６２６１６（ヒト、未成熟形態）、ＮＰ−−００１００９２０７（ネコ、未成熟形態）、ＡＡＢ９４５３６（クマネズミ、未成熟形態）、ＡＡＢ４１６９７（クマネズミ、未成熟形態）、ＮＰ−−０３２３８３（ハツカネズミ、未成熟形態）、ＡＡＲ１９０８０（イヌ）、ＡＡＢ６０３９８（アカゲザル、未成熟形態）、ＡＡＩ００９６４（ヒト、未成熟形態）、ＡＡＨ２３６９８（ハツカネズミ、未成熟形態）、及びＡＡＨ１８１４９（ヒト）が挙げられる。本明細書において天然のＩＬ−１５に言及される場合、別途具体的に示されない限り、ヒトＩＬ−１５（配列番号６）を指す。
【００２８】
ＩＬ−１５受容体は、タイプ特異的ＩＬ−１５受容体アルファ（「ＩＬ−１５Ｒａ」）、ＩＬ−２／ＩＬ−１５受容体−β（又はＣＤ１２２）、及び複数のサイトカイン受容体によって共有される共通γ鎖（又はＣＤ１３２）の３つのポリペプチドからなる。ＩＬ−１５シグナル伝達は、ＩＬ−１５Ｒａ、β、及びγのヘテロ二量体複合体を通じて、β及びγのヘテロ二量体複合体を通じて、又はマスト細胞上に見出されるサブユニットＩＬ−１５ＲＸを通じて、生じることが示されている。ＩＬ−１５受容体は、「天然のＩＬ−１５Ｒａ」及び「天然のインターロイキン−１５受容体アルファ」であり得、タンパク質又はポリペプチドの文脈において、未成熟又は前駆体及び成熟形態、並びに天然に存在するアイソフォームを含む、任意の天然に存在する哺乳動物インターロイキン−１５受容体アルファ（「ＩＬ−１５Ｒａ」）アミノ酸配列を指す。様々な天然の哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａのアミノ酸配列のＧｅｎｅＢａｎｋ受託番号の非限定的な例としては、ＮＰ＿００２１８０（ヒト）、ＡＢＫ４１４３８（アカゲザル）、ＮＰ＿０３２３８４（ハツカネズミ）、Ｑ６０８１９（ハツカネズミ）、ＣＡ１４１０８２（ヒト）挙げられる。本明細書においてＩＬ−１５Ｒａに言及される場合、別途具体的に示されない限り、成熟ヒトＩＬ−１５Ｒａ（配列番号７）、例えば、可溶性ヒトＩＬ−１５Ｒａ（配列番号８）を指す。
【００２９】
本明細書において使用される場合、「抗体」という用語は、抗原上のエピトープに結合する１つ以上のドメインを含む、タンパク質の免疫グロブリンクラスに属するタンパク質分子を意味し、そのようなドメインは、抗体の可変領域に由来するか又はそれと配列相同性を共有する。抗体は、典型的には、２つの重鎖及び２つの軽鎖をそれぞれ有する基本構造単位から作製される。治療用の抗体は、好ましくは、処置される対象の天然の抗体（例えば、ヒト対象についてはヒト抗体）に可能な限り近いものである。本発明による抗体は、任意の特定の形式又はそれを産生する方法に限定されない。
【００３０】
「二重特異性抗体」は、抗体の１つのドメインが第１の抗原に結合し、抗体の第２のドメインが第２の抗原に結合し、第１及び第２の抗原が同一ではない、本明細書に記載される抗体である。「二重特異性抗体」という用語はまた、１つの重鎖可変領域／軽鎖可変領域（ＶＨ／ＶＬ）の組み合わせが抗原上の第１のエピトープに結合し、第２のＶＨ／ＶＬの組み合わせが第２のエピトープに結合する、抗体も包含する。この用語は、ＶＨが、第１の抗原を特異的に認識することができ、免疫グロブリン可変領域においてＶＨと対合されたＶＬが、第２の抗原を特異的に認識することができる、抗体を更に含む。結果として得られるＶＨ／ＶＬ対は、抗原１又は抗原２のいずれかに結合する。そのような抗体は、例えば、国際公開第２００８／０２７２３６号、国際公開第２０１０／１０８１２７号、及びＳｃｈａｅｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ（Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２０，４７２−４８６，２０１１年１０月）に記載されている、「２種１体型（ｔｗｏ−ｉｎ−ｏｎｅ）抗体」と呼ばれる。本発明による二重特異性抗体は、任意の特定の二重特異性形態又はそれを産生する方法に限定されない。
【００３１】
本明細書において使用される場合、「共通軽鎖」という用語は、二重特異性抗体における２つの軽鎖（又はそのＶＬ部分）を指す。２つの軽鎖（又はそのＶＬ部分）は、同一であってもよく、又はいくつかのアミノ酸配列差を有してもよいが、完全長抗体の結合特異性は、影響を受けない。「共通軽鎖」、「共通ＶＬ」、「単一軽鎖」、「単一ＶＬ」という用語は、「再構成された」という用語が付加される場合もされない場合も、全てが本明細書において互換可能に使用される。「共通」はまた、アミノ酸配列が同一ではない軽鎖の機能的等価物も指す。機能的結合領域の形成に影響を及ぼさない変異（欠失、置換、挿入、及び／又は付加）が存在する、軽鎖の多くのバリアントが存在する。本発明の軽鎖はまた、０〜１０個、好ましくは、０〜５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有する、本明細書に示される軽鎖であってもよい。例えば、保存的アミノ酸変化、重鎖と対合した場合に結合特異性に寄与しないか若しくは部分的にしか寄与しない領域におけるアミノ酸の変化などを導入し、試験することによって、同一ではないが依然として機能的に同等である軽鎖を調製するか又は見出すことは、本明細書において使用される共通軽鎖の定義の範囲内である。
【００３２】
本発明による「完全長ＩｇＧ」又は「完全長抗体」という用語は、本質的に完全なＩｇＧを含むものとして定義されるが、必ずしもインタクトなＩｇＧの全ての機能を有するわけではない。誤解を避けるために、完全長ＩｇＧは、２つの重鎖及び２つの軽鎖を含む。それぞれの鎖は、定常（Ｃ）領域及び可変（Ｖ）領域を含み、これは、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＶＨ、及びＣＬ、ＶＬと表記されるドメインに分解することができる。ＩｇＧ抗体は、Ｆａｂ部分に含まれる可変領域ドメインを介して抗原に結合し、結合した後、定常ドメインを通じて、ほとんどがＦｃ部分を通じて、免疫系の分子及び細胞と相互作用することができる。本発明による完全長抗体は、所望の特性を提供する変異が存在し得るＩｇＧ分子を包含する。完全長ＩｇＧは、領域のうちのいずれの実質的な部分の欠失も有するべきではない。しかしながら、得られるＩｇＧ分子の結合特性を本質的に変化させることなく、１つ又はいくつかのアミノ酸残基が欠失されたＩｇＧ分子は、「完全長ＩｇＧ」という用語に包含される。例えば、そのようなＩｇＧ分子は、好ましくは非ＣＤＲ領域に、１〜１０個のアミノ酸残基の欠失を有してもよく、その場合、欠失されるアミノ酸は、ＩｇＧの抗原又はエピトープ結合特異性に必須ではない。
【００３３】
本明細書においてアミノ酸配列について言及される「同一性パーセント（％）」は、最適な比較の目的で配列をアライメントした後に、選択された配列におけるアミノ酸残基と同一である、候補配列におけるアミノ酸残基の割合として定義される。２つの配列間のアライメントを最適化するために、比較される２つの配列のうちのいずれかに、ギャップを導入してもよい。そのようなアライメントは、比較される配列の全長にわたって行われ得る。あるいは、アライメントは、より短い長さ、例えば、約２０個、約５０個、約１００個、又はそれ以上の核酸／塩基又はアミノ酸にわたって行われてもよい。配列同一性は、報告されたアライメント領域にわたる２つの配列間の同一なマッチの割合である。
【００３４】
２つの配列間における配列の比較及び配列同一性の割合の判定は、数学的アルゴリズムを使用して達成することができる。当業者であれば、２つの配列をアライメントし、２つの配列間の同一性を判定するために、いくつかの異なるコンピュータプログラムが利用可能であるという事実を認識するであろう（Ｋｒｕｓｋａｌ，Ｊ．Ｂ．（１９８３）Ａｎ  ｏｖｅｒｖｉｅｗ  ｏｆ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  Ｉｎ  Ｄ．Ｓａｎｋｏｆｆ  ａｎｄ  Ｊ．Ｂ．Ｋｒｕｓｋａｌ，（ｅｄ．），Ｔｉｍｅ  ｗａｒｐｓ，ｓｔｒｉｎｇ  ｅｄｉｔｓ  ａｎｄ  ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ：ｔｈｅ  ｔｈｅｏｒｙ  ａｎｄ  ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ，ｐｐ．１−４４  Ａｄｄｉｓｏｎ  Ｗｅｓｌｅｙ）。２つのアミノ酸配列又は核酸配列間の配列同一性パーセントは、２つの配列のアライメントのためのＮｅｅｄｌｅｍａｎ及びＷｕｎｓｃｈアルゴリズムを使用して判定されてもよい。（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ，Ｓ．Ｂ．ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，Ｃ．Ｄ．（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８，４４３−４５３）。Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズムは、コンピュータプログラムＮＥＥＤＬＥにおいて実装されている。本発明の目的で、ＥＭＢＯＳＳパッケージからのＮＥＥＤＬＥプログラムを使用して、アミノ酸及び核酸配列の同一性パーセントを判定することができる（バージョン２．８．０以上、ＥＭＢＯＳＳ：Ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｏｐｅｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｓｕｉｔｅ（２０００）Ｒｉｃｅ，Ｐ．ＬｏｎｇｄｅｎＪ．ａｎｄ  Ｂｌｅａｓｂｙ，Ａ．Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １６，（６）ｐｐ２７６−２７７，ｈｔｔｐ：／／ｅｍｂｏｓｓ．ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．ｎｌ／）。タンパク質配列については、ＥＢＬＯＳＵＭ６２が、置換マトリックスに使用される。ＤＮＡ配列については、ＤＮＡＦＵＬＬが使用される。使用されるパラメータは、ギャップオープンペナルティ１０及びギャップ伸長ペナルティ０．５である。
【００３５】
上述のようにプログラムＮＥＥＤＬＥによってアライメントした後、クエリ配列と本発明の配列との間の配列同一性の割合は、以下のように計算される。アライメントにおけるギャップの総数を減算した後に、両方の配列における同一なアミノ酸又は同一なヌクレオチドを示すアライメントにおける対応する位置の数を、アライメントの全長で除す。
【００３６】
抗体は、典型的に、抗原のエピトープを認識し、そのようなエピトープは、他の化合物中にも同様に存在し得るため、抗原、例えば、ＣＬＥＣ１２Ａ又はＣＤ３を「特異的に認識する」本発明による抗体は、他の化合物が同じ種類のエピトープを含む場合に、そのような他の化合物も同様に認識し得る。したがって、抗原及び抗体の相互作用に関して「特異的に認識する」という用語は、同じ種類のエピトープを含む他の化合物への抗体の結合を排除するものではない。
【００３７】
「エピトープ」又は「抗原決定基」という用語は、免疫グロブリン又は抗体が特異的に結合する抗原上の部位を指す。エピトープは、連続的なアミノ酸、又はタンパク質の３次折り畳みによって並置された非連続的なアミノ酸の両方から形成され得る（いわゆる線形エピトープ及び立体構造エピトープ）。連続的な線形アミノ酸から形成されるエピトープは、典型的に、変性溶媒に曝露された場合に保持されるが、３次折り畳みによって形成されるエピトープは、典型的に、変性溶媒での処置で失われる。エピトープは、典型的に、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸を固有の空間構造で含み得る。エピトープの空間構造を判定する方法は、当業者に既知であり、これには、当該技術分野における技法、例えば、エピトープの性質に応じて、Ｘ線結晶構造解析、ＨＤＸ−ＭＳ、及び２次元核磁気共鳴、ペプスキャン、及びアラニンスキャニングが含まれる（例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６，Ｇ．Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．（１９９６）を参照されたい）。
【００３８】
「異常細胞」という用語は、本明細書において使用される場合、腫瘍細胞、より具体的には、造血系起源の腫瘍細胞を含み、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）を引き起こす細胞などの前白血病細胞、及び急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）腫瘍細胞又は慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞などの白血病細胞も含む。
【００３９】
「免疫エフェクター細胞」又は「エフェクター細胞」という用語は、本明細書において使用される場合、活性化されると標的細胞の生存に影響を及ぼし得る、哺乳動物の免疫系における天然の細胞レパートリー内の細胞を指す。免疫エフェクター細胞としては、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、細胞傷害性Ｔ細胞を含むＴ細胞、又はＢ細胞などのリンパ系の細胞、単球又はマクロファージ、樹状細胞、及び好中球性顆粒球などの骨髄系の細胞が挙げられる。したがって、エフェクター細胞は、好ましくは、ＮＫ細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、マクロファージ、樹状細胞、又は好中球性顆粒球である。異常細胞へのエフェクター細胞の動員は、エフェクター細胞が異常細胞を直接的に殺滅させるか、又は殺滅を間接的に開始することができるように、免疫エフェクター細胞を、異常標的細胞に近接した状態にすることを意味する。
【００４０】
本明細書において使用される場合、「対象」及び「患者」という用語は、互換可能に使用され、ヒト、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウサギ、ネコ、イヌ、サル、ウシ、ウマ、ブタなどの哺乳動物（例えば、がんを有する患者、例えば、ヒト患者）を指す。
【００４１】
本明細書において使用される場合、「処置する（ｔｒｅａｔ）」、「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、及び「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は、疾患と関連する症状、併発症、状態、若しくは生化学的兆候の進行、発達、重症度、若しくは再発を逆転、緩和、改善、阻害、若しくは遅延、若しくは予防する目的で行われる任意の種類の介入若しくはプロセス、又はそれらの目的で活性剤若しくは活性剤の組み合わせを対象に投与することを指す。
【００４２】
本明細書において使用される場合、「有効な処置」又は「肯定的な治療応答」は、有益な効果、例えば、疾患又は障害、例えば、がんの少なくとも１つの症状の改善をもたらす処置を指す。有益な効果は、本方法による治療法の開始前に行われた測定又は観察からの改善を含む、ベースラインからの改善の形態をとることができる。例えば、有益な効果は、疾患の臨床症状若しくは診断症状又はがんのマーカーの減少又は排除によって証明されるように、任意の臨床ステージにある対象におけるがんの進行の遅延、安定化、停止、又は逆転の形態をとることができる。有効な処置は、例えば、がん細胞の数を低減させる、腫瘍サイズ若しくは腫瘍細胞の数を減少させる、循環腫瘍細胞の存在を減少させる、腫瘍の転移を低減若しくは予防する、腫瘍成長を遅延若しくは停止させる、及び／又は腫瘍の再発生若しくは再発を予防若しくは遅延することができる。
【００４３】
「有効量」又は「治療有効量」という用語は、所望される生物学的、治療的、及び／又は予防的結果を提供する薬剤又は薬剤の組み合わせの量を指す。その結果は、疾患の兆候、症状、若しくは原因のうちの１つ以上の低減、改善、緩和（ｐａｌｌｉａｔｉｏｎ）、軽減、遅延、及び／若しくは緩和（ａｌｌｅｖｉａｔｉｏｎ）、又は生物系の任意の他の所望される変化であり得る。いくつかの実施形態では、有効量は、腫瘍の発達を遅延させるのに十分な量である。いくつかの実施形態では、有効量は、腫瘍再発を予防又は遅延させるのに十分な量である。有効量は、１回以上の投与で投与することができる。薬物又は組成物の有効量は、（ｉ）がん細胞の数を減少させ得る、（ｉｉ）腫瘍サイズを減少させ得る、（ｉｉｉ）末梢臓器へのがん細胞浸潤をある程度阻害、遅延、遅延し、停止させ得る、（ｉｖ）腫瘍転移を阻害し得る、（ｖ）腫瘍成長を阻害し得る、（ｖｉ）腫瘍の発生及び／若しくは再発を予防若しくは遅延させ得る、並びに／又は（ｖｉｉ）がんに関連する症状のうちの１つ以上を緩和し得る。一実施例では、「有効量」は、急性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、又は慢性骨髄性白血病などのがんの減少（例えば、がん細胞の数の減少）又はがんの進行の遅延をもたらす、組み合わせでのＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分の量である。有効量の組み合わせ治療薬は、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体とＩＬ−１５部分との組み合わせを指す「有効レジメン」で、本明細書に記載される方法に従って投与され、投与の順序及び投薬頻度は、処置をもたらすのに適したものである。
【００４４】
本明細書において使用される場合、「相乗性」、「治療的相乗性」、及び「相乗作用」という用語は、治療剤の組み合わせ（例えば、ＩＬ−１５部分と組み合わせたＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体）での患者の処置が、組み合わせのうちのそれぞれ個別の構成要素を単独で使用した場合に達成される結果よりも治療上優れた結果を示す、現象を指す（例えば、Ｔ．Ｈ．Ｃｏｒｂｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９８２，Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｒｅｐｏｒｔｓ，６６，１１８７を参照されたい）。この文脈において、治療上優れた結果は、以下のうちの１つ以上を含む（ａ）組み合わせと同じ投与量におけるそれぞれの薬剤単独による別々の効果の合計を上回る、治療応答の増加、（ｂ）治療有効性の減少を伴わない、組み合わせ内の１つ以上の薬剤の投与量の減少、（ｃ）組み合わせと同じ用量におけるそれぞれの薬剤の単剤療法以上の治療上の利益を受けながらの、有害事象の発生率の減少、（ｄ）それぞれの薬剤の単剤療法を上回る治療上の利益を受けながらの、用量制限毒性の低減、（ｅ）薬物耐性の誘導の遅延又は最小化。異種移植片モデルにおいて、構成成分のそれぞれが、その個々の最大耐容量を超えない投与量で存在する、その最大耐容量で使用される組み合わせは、組み合わせの投与によって達成される腫瘍成長の減少が、構成成分を単独で投与した場合の最良の構成成分による腫瘍成長の減少の値よりも大きい場合、治療的相乗性を示す。薬物の組み合わせの相乗作用は、例えば、Ｃｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙ（Ｃｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇｕｌ．１９８４；２２：２７−５５；Ｃｈｏｕ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１０；７０（２）：４４０−４４６）の組み合わせ指数（ＣＩ）定理に従って決定することができる。
【００４５】
「再発」又は「再発生」又は「復活」は、本明細書において互換可能に使用され、改善又は応答の期間の後の、がんの回復、又は回復の兆候及び症状の放射線による診断を指す。
【００４６】
ＩＩ．ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体
本明細書に開示されるように、本明細書に提供される方法において使用するための二重特異性抗体としては、ＣＬＥＣ１２Ａに結合する１つの重鎖可変領域／軽鎖可変領域（ＶＨ／ＶＬ）の組み合わせと、ＣＤ３に結合するその第２のＶＨ／ＶＬの組み合わせとを含む、二重特異性抗体が挙げられる。
【００４７】
抗原結合領域
ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体において使用するのに好適なＣＬＥＣ１２Ａ重鎖可変（ＶＨ）領域としては、ＣＬＥＣ１２Ａに結合するものが挙げられる。好ましい実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体のＣＬＥＣ１２Ａ  ＶＨ領域は、腫瘍細胞上に発現されるＣＬＥＣ１２Ａに結合する。ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体において使用するための例示的なＣＬＥＣ１２Ａ  ＶＨ領域は、例えば、国際公開第２０１７／０１０８７４号、同第２０１４／０５１４３３号、及び同第２００５／０００８９４号（これらのそれぞれは、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている。
【００４８】
いくつかの実施形態では、腫瘍細胞上のＣＬＥＣ１２Ａに対するＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の結合親和性は、ＣＤ３への結合の親和性よりも、少なくとも２倍、４倍、６倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、又は５０倍高い。特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａに対するＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体のＣＬＥＣ１２Ａ結合親和性は、約１×１０−６Ｍ〜１×１０−１０Ｍ、約１×１０−７Ｍ〜１×１０−１０Ｍ、又は約１×１０−８〜１×１０−１０である。いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａに対するＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体のＣＬＥＣ１２Ａ結合親和性は、少なくとも１×１０−８Ｍ、好ましくは少なくとも１×１０−９Ｍである。特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａに対するＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の結合親和性は、例えば、約２×１０−９Ｍ、約３×１０−９Ｍ、約４×１０−９Ｍ、約５×１０−９Ｍ、約６×１０−９Ｍ、約７×１０−９Ｍ、８×１０−９Ｍ、又は約９×１０−９Ｍを含め、約１×１０−８Ｍ〜１×１０−９Ｍであり、ＣＤ３に対するＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の結合親和性は、少なくとも３０倍低い、少なくとも４０倍低い、又は少なくとも５０倍低い。
【００４９】
特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体のＣＤ３  ＶＨ領域は、マウス抗ＣＤ３抗体、ｍＯＫＴ３の親和性より有意に低い親和性（ＫＤ）で、ヒトＴ細胞株の細胞表面に発現されるＣＤ３／ＴＣＲに結合する。いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体のＣＤ３  ＶＨ領域は、少なくとも１×１０−６Ｍの結合親和性で、ＣＤ３に結合する。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体のＣＤ３結合親和性は、約１×１０−６Ｍ〜１×１０−１０Ｍである。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体のＣＤ３  ＶＨ領域のＣＤ３結合親和性は、約１×１０−７Ｍ〜１×１０−８Ｍである。
【００５０】
いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに結合する第１の重鎖可変領域を含み、ここで、重鎖可変領域は、
（ａ）アミノ酸配列ＳＧＹＴＦＴＧＹ（配列番号９）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＩＮＰＳＧＧＳ（配列番号１０）を含む重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＧＴＴＧＤＷＦＤＹ（配列番号１１）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｂ）アミノ酸配列ＳＧＹＴＦＴＳＹ（配列番号１３）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＩＮＰＳＧＧＳ（配列番号１４）を含む重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＧＮＹＧＤＥＦＤＹ（配列番号１５）を含む重鎖ＣＤＲ３、又は
（ｃ）アミノ酸配列ＳＧＹＴＦＴＧＹ（配列番号１７）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＷＩＮＰＮＳＧＧ（配列番号１８）を含む重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＤＧＹＦＡＤＡＦＤＹ（配列番号１９）を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。
【００５１】
同じ種類の結合活性を保持しながら（本質的に同等なのであって、その量は必ずしも同等ではない）、列挙されるＣＤＲ配列からの１つ、２つ、又は３つのアミノ酸残基の保存的変更が、許容される。したがって、重鎖ＣＤＲ  １、２、及び３の配列は、好ましくは、列挙されたＣＤＲ配列から３つ以下、好ましくは２つ以下、より好ましくは１つ以下のアミノ酸が異なっている配列を含む。特定の実施形態では、重鎖ＣＤＲ  １、２、及び３の配列は、列挙されたＣＤＲ配列と同一である。
【００５２】
いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに結合する重鎖可変領域を含み、ここで、この重鎖可変領域は、配列番号１２、１６、又は２０に示されるＶＨ領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む。
【００５３】
いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに結合する重鎖可変領域を含み、ここで、この重鎖可変領域は、配列番号１２、１６、又は２０に示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９７％、より好ましくは少なくとも９８％、より好ましくは少なくとも９９％同一であるか、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む。
【００５４】
いくつかの実施形態では、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに結合する二重特異性抗体の重鎖可変領域は、重鎖可変領域の３つのＣＤＲ配列の外側の配列において、０〜１０個、好ましくは０〜５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有し得る。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は、示されるアミノ酸配列に対して、０〜９個、０〜８個、０〜７個、０〜６個、０〜５個、０〜４個、好ましくは０〜３個、好ましくは０〜２個、好ましくは０〜１個、好ましくは０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを含む。
【００５５】
特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに結合する重鎖可変領域を含み、ここで、この重鎖可変領域は、配列番号１２、１６、及び２０から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００５６】
ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体において使用するのに好適なＣＤ３重鎖可変（ＶＨ）領域としては、ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖、ＣＤ３ε鎖、又はＣＤ３δ／ＣＤ３ε若しくはＣＤ３γ／ＣＤ３εの組み合わせに結合することができるものが挙げられる。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体のＣＤ３  ＶＨ領域は、ＣＤ３ε鎖に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３  ＶＨ領域は、ヒトＣＤ３に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３  ＶＨ領域は、ヒトＣＤ３ε鎖に結合する。
【００５７】
ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体において使用するための例示的なＣＤ３結合領域は、国際公開第２０１７／０１０８７４号、同第２０１４／０５１４３３号、及び同第２００５／１１８６３５号（これらのそれぞれは、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている。
【００５８】
特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ＣＤ３に結合する重鎖可変領域を含み、ここで、この重鎖可変領域は、
（ａ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＮＧＲＫＱ（配列番号２２）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｂ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＳＧＳＫＫＮ（配列番号３０）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｃ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＨＧＲＫＱ（配列番号３２）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｄ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＨＡＲＫＱ（配列番号３４）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｅ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＮＡＲＫＱ（配列番号３６）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｇ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＮＴＲＫＱ（配列番号４５）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｈ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＤＧＫＮＴ（配列番号４７）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｉ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＧＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＹＹＤＧＳＲＴ（配列番号４９）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、又は
（ｊ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＫＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＨＤＧＲＫＴ（配列番号５１）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。
【００５９】
アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含むＣＤＲ１は、ＩＭＧＴに従って定義される。ＣＤＲ１は、Ｋａｂａｔに従って定義されるアミノ酸配列ＳＹＧＭＨ（配列番号６０）を含み得る。
【００６０】
同じ種類の結合活性を保持しながら（本質的に同等なのであって、その量は必ずしも同等ではない）、列挙されるＣＤＲ配列からの１つ、２つ、又は３つのアミノ酸残基の変更が、許容される。したがって、重鎖ＣＤＲ  １、２、及び３の配列は、好ましくは、列挙されたＣＤＲ配列から３つ以下、好ましくは２つ以下、より好ましくは１つ以下のアミノ酸が異なっている配列を含む。特定の実施形態では、重鎖ＣＤＲ  １、２、及び３の配列は、列挙されたＣＤＲ配列と同一である。
【００６１】
いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ヒトＣＤ３に結合する重鎖可変領域を含み、ここで、この重鎖可変領域は、配列番号２４〜２９、３１、３３、３５、３７〜４４、４６、４８、５０、及び５２に示されるＶＨ領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む。
【００６２】
いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ヒトＣＤ３に結合する重鎖可変領域を含み、ここで、この重鎖可変領域は、配列番号２４〜２９、３１、３３、３５、３７〜４４、４６、４８、５０、及び５２に示されるＶＨ領域配列のうちの１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９７％、より好ましくは少なくとも９８％、より好ましくは少なくとも９９％同一であるか、又は１００％同一であるものを含む。
【００６３】
特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ヒトＣＤ３に結合する重鎖可変領域を含み、ここで、この重鎖可変領域は、配列番号３７〜４４に示される配列ＶＨ領域のうちの１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９７％、より好ましくは少なくとも９８％、より好ましくは少なくとも９９％同一であるか、又は１００％同一であるものを含む。
【００６４】
いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ３に結合する二重特異性抗体の重鎖可変領域は、重鎖可変領域の３つのＣＤＲ配列の外側の配列において、０〜１０個、好ましくは０〜５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有し得る。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は、示されるアミノ酸配列に対して、０〜９個、０〜８個、０〜７個、０〜６個、０〜５個、０〜４個、好ましくは０〜３個、好ましくは０〜２個、好ましくは０〜１個、好ましくは０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを含む。
【００６５】
ＣＬＥＣ１２Ａ又はＣＤ３結合を保持する、開示されるアミノ酸配列の更なるバリアントは、これまでに記載されているように（例えば、米国特許出願公開第２０１６／０３６８９８８号）、例えば、再構成されたヒトＩＧＫＶｌ−３９／ＩＧＫＪｌ  ＶＬ領域（Ｄｅ  Ｋｒｕｉｆ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ．２０１０（１０６）７４１−５０））を含むファージディスプレイライブラリー、及び本明細書に開示されるＣＬＥＣ１２Ａ又はＣＤ３  ＶＨ領域のアミノ酸配列にアミノ酸置換を組み込んだＶＨ領域の集合から、得ることができる。ＣＬＥＣ１２Ａ又はＣＤ３に結合するＦａｂ領域をコードするファージを選択し、フローサイトメトリーによって分析し、シーケンシングして、抗原結合を保持するアミノ酸置換、挿入、欠失、又は付加を有するバリアントを特定することができる。例えば、米国特許出願公開第２０１６／０３６８９８８号に記載されるように、ＣＤ３  ＶＨ領域は、Ａ５０位において置換されてもよく、Ｓ、Ｙ、Ｍ、又はＱによって修飾されてもよく、Ｄ５９は、Ｌ、Ｉ、Ｖ、Ｆ、Ｒ、Ａ、Ｎ、Ｈ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、又はＥ、好ましくはＹ又はＥによって置換されてもよく、Ａ６１は、Ｎ、Ｉ、Ｈ、Ｑ、Ｌ、Ｒ、Ｙ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｄ、Ｋ、Ｖによって置換されてもよく、Ｆ１０５は、Ｙ又はＭによって置換されてもよい。許容されるアミノ酸置換は、保管後、実施例５Ａに記載されている方法をＣＩＥＸ−ＨＰＬＣとともに使用して、容易に見出すことができる。
【００６６】
特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ヒトＣＤ３に結合する重鎖可変領域を含み、ここで、この重鎖可変領域は、配列番号２４〜２９、３１、３３、３５、３７〜４４、４６、４８、５０、又は５２から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００６７】
特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ヒトＣＤ３に結合する重鎖可変領域を含み、ここで、この重鎖可変領域は、配列番号３７〜４４から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００６８】
特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに結合する第１の重鎖可変領域と、ヒトＣＤ３に結合する第２の重鎖可変領域とを含み、ここで、第１のＶＨ領域は、配列番号１２、１６、及び２０に示されるＶＨ領域のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９７％、より好ましくは少なくとも９８％、より好ましくは少なくとも９９％同一であるか、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含み、第２のＶＨ領域は、配列番号３７〜４４に示されるＶＨ領域配列のうちの１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９７％、より好ましくは少なくとも９８％、より好ましくは少なくとも９９％同一であるか、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む。
【００６９】
特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに結合する第１の重鎖可変領域と、ヒトＣＤ３に結合する第２の重鎖可変領域とを含み、ここで、
（ａ）第１の重鎖可変領域は、
（ｉ）アミノ酸配列ＳＧＹＴＦＴＧＹ（配列番号９）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＩＮＰＳＧＧＳ（配列番号１０）を含む重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＧＴＴＧＤＷＦＤＹ（配列番号１１）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｉｉ）アミノ酸配列ＳＧＹＴＦＴＳＹ（配列番号１３）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＩＮＰＳＧＧＳ（配列番号１４）を含む重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＧＮＹＧＤＥＦＤＹ（配列番号１５）を含む重鎖ＣＤＲ３、又は
（ｉｉｉ）アミノ酸配列ＳＧＹＴＦＴＧＹ（配列番号１７）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＷＩＮＰＮＳＧＧ（配列番号１８）を含む重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＤＧＹＦＡＤＡＦＤＹ（配列番号１９）を含む重鎖ＣＤＲ３を含み、
（ｂ）第２の重鎖可変領域は、
（ｉ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＮＧＲＫＱ（配列番号２２）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｉｉ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＳＧＳＫＫＮ（配列番号３０）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｉｉｉ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＨＧＲＫＱ（配列番号３２）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｉｖ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＨＡＲＫＱ（配列番号３４）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｖ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＮＡＲＫＱ（配列番号３６）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｖｉ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＮＴＲＫＱ（配列番号４５）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｖｉｉ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＤＧＫＮＴ（配列番号４７）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｖｉｉｉ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＧＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＹＹＤＧＳＲＴ（配列番号４９）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、又は
（ｉｘ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＫＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＨＤＧＲＫＴ（配列番号５１）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。
【００７０】
特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに結合する第１の重鎖可変領域と、第２の重鎖可変領域とを含み、ここで、第１のＶＨ領域は、アミノ酸配列ＳＧＹＴＦＴＧＹ（配列番号９）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＩＮＰＳＧＧＳ（配列番号１０）を含む重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＧＴＴＧＤＷＦＤＹ（配列番号１１）を含む重鎖ＣＤＲ３を含み、第２のＶＨ領域は、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＮＡＲＫＱ（配列番号３６）を含む重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。
【００７１】
特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに結合する第１の重鎖可変領域と、ヒトＣＤ３に結合する第２の重鎖可変領域とを含み、ここで、第１のＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１２、１６、及び２０から選択され、第２のＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号２４〜２９、３１、３３、３５、３７〜４４、４６、４８、５０、及び５２から選択される。
【００７２】
特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに結合する第１の重鎖可変領域と、ヒトＣＤ３に結合する第２の重鎖可変領域とを含み、ここで、第１のＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１２であり、第２のＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３７〜４４から選択される。
【００７３】
一実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに結合する第１の重鎖可変領域と、ヒトに結合する第２の重鎖可変領域とを含み、ここで、第１のＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１２に記載されており、第２のＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３７に記載されている。
【００７４】
軽鎖可変領域
ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体のＶＨ／ＶＬ  ＣＬＥＣ１２Ａ結合領域及びＣＤ３結合領域のＶＨ／ＶＬ結合領域の軽鎖可変領域は、親ＣＬＥＣ１２Ａ単一特異性抗体のＶＬ領域及び／若しくは親ＣＤ３単一特異性抗体のＶＬ領域と同じであってもよく、又は二重特異性抗体がＣＬＥＣ１２Ａ及びＣＤ３抗原の両方への結合を保持する限り、代替的なＶＬ領域が、一方若しくは両方のＶＨ／ＶＬ領域の組み合わせに使用されてもよい。
【００７５】
いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体のＶＨ／ＶＬ  ＣＬＥＣ１２Ａ結合領域のＶＬ領域は、ＶＨ／ＶＬ  ＣＤ３結合領域のＶＬ領域と類似である。特定の実施形態では、第１及び第２のＶＨ／ＶＬ領域の組み合わせにおけるＶＬ領域は、同一である。
【００７６】
特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の一方又は両方のＶＨ／ＶＬ結合領域の軽鎖可変領域は、共通軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、一方又は両方のＶＨ／ＶＬ結合領域の共通軽鎖可変領域は、生殖系列Ｏ１２可変領域Ｖセグメントを含む。特定の実施形態では、一方又は両方のＶＨ／ＶＬ結合領域の軽鎖可変領域は、カッパ軽鎖ＶセグメントＩｇＶκ１−３９＊０１を含む。ＩｇＶκ１−３９は、免疫グロブリン可変カッパ１−３９遺伝子の短縮形である。この遺伝子はまた、免疫グロブリンカッパ可変１−３９、ＩＧＫＶ１３９、ＩＧＫＶ１−３９、Ｏ１２ａ、又はＯ１２としても知られている。この遺伝因子についての外部識別子は、ＨＧＮＣ：５７４０、Ｅｎｔｒｅｚ  Ｇｅｎｅ：２８９３０、Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００２４２３７１である。Ｖ領域のアミノ酸配列は、配列番号５６に提供される。Ｖ領域は、５つのＪ領域のうちの１つと組み合わせることができる。好ましいＪ領域は、ｊｋ１及びｊｋ５であり、合わせた配列は、ＩＧＫＶ１−３９／ｊｋ１及びＩＧＫＶ１−３９／ｊｋ５として示され、代替名は、ＩｇＶκ１−３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１又はＩｇＶκ１−３９＊０１／ＩＧＪκ５＊０１である（ＩＭＧＴデータベースのワールドワイドウェブｉｍｇｔ．ｏｒｇによる命名法）。特定の実施形態では、一方又は両方のＶＨ／ＶＬ結合領域の軽鎖可変領域は、カッパ軽鎖ＩｇＶκ１−３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１又はＩｇＶκ１−３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０５（それぞれ、配列番号５７及び配列番号５８）を含む。
【００７７】
いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の一方又は両方のＶＨ／ＶＬ結合領域の軽鎖可変領域は、アミノ酸配列ＱＳＩＳＳＹ（配列番号５３）を含むＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＡＡＳを含むＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＱＱＳＹＳＴＰ（配列番号５５）を含むＬＣＤＲ３（すなわち、ＩＭＧＴによるＩＧＫＶ１−３９のＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の一方又は両方のＶＨ／ＶＬ結合領域の軽鎖可変領域は、アミノ酸配列ＱＳＩＳＳＹ（配列番号５３）を含むＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＡＡＳＬＱＳ（配列番号５４）を含むＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＱＱＳＹＳＴＰ（配列番号５５）を含むＬＣＤＲ３を含む。
【００７８】
いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の一方又は両方のＶＨ／ＶＬ結合領域は、配列番号５７に示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９７％、より好ましくは少なくとも９８％、より好ましくは少なくとも９９％同一であるか、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の一方又は両方のＶＨ／ＶＬ結合領域は、配列番号５８に示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９７％、より好ましくは少なくとも９８％、より好ましくは少なくとも９９％同一であるか、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。
【００７９】
例えば、いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の一方又は両方のＶＨ／ＶＬ結合領域の可変軽鎖は、配列番号５７又は配列番号５８に対して、０〜１０個、好ましくは０〜５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有し得る。いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の一方又は両方のＶＨ／ＶＬ結合領域の軽鎖可変領域は、示されるアミノ酸配列に対して、０〜９個、０〜８個、０〜７個、０〜６個、０〜５個、０〜４個、好ましくは０〜３個、好ましくは０〜２個、好ましくは０〜１個、好ましくは０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを含む。
【００８０】
他の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の一方又は両方のＶＨ／ＶＬ結合領域の軽鎖可変領域は、配列番号５７又は配列番号５８のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の両方のＶＨ／ＶＬ結合領域は、同一のＶＬ領域を含む。一実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の両方のＶＨ／ＶＬ結合領域のＶＬは、配列番号５７に示されるアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の両方のＶＨ／ＶＬ結合領域のＶＬは、配列番号５８に示されるアミノ酸配列を含む。
【００８１】
二重特異性形式
本明細書に開示される方法において使用するためのＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、いくつかの形式で提供され得る。二重特異性抗体の多数の異なる形式が、当該技術分野において既知であり、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ（Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  Ｔｏｄａｙ，２０１５  Ｊｕｌ；２０（７）：８３８−４７；ＭＡｂｓ，２０１２  Ｍａｒ−Ａｐｒ；４（２）：１８２−９７）及びＳｐｉｅｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，（Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｆｏｒｍａｔｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１５）、ｈｔｔｐ：／／ｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｍｏｌｉｍｍ．２０１５．０１．００３）によって考察されており、これらは、それぞれ、参照により本明細書に組み込まれる。例えば、２つのＶＨ／ＶＬの組み合わせを有する古典的な抗体ではない二重特異性抗体形式は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、少なくとも１つの可変ドメインを有する。この可変ドメインが、第２の結合活性を提供する一本鎖Ｆｖ断片、モノボディ、ＶＨ、及びＦａｂ断片に連結され得る。
【００８２】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法において使用されるＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、一般に、ヒトＩｇＧサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）のものである。特定の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ１サブクラスのものである。完全長ＩｇＧ抗体が、それらの好ましい半減期のため、及び低免疫原性の理由から、好ましい。したがって、特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、完全長ＩｇＧ分子である。ある実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、完全長ＩｇＧ１分子である。
【００８３】
したがって、特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、結晶化断片（Ｆｃ）を含む。ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体のＦｃは、ヒト定常領域から構成されることが好ましい。ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の定常領域又はＦｃは、天然に存在するヒト抗体の定常領域との、１つ以上、好ましくは１０個以下、好ましくは５個以下のアミノ酸の違いを含み得る。例えば、特定の実施形態では、二重特異性抗体のそれぞれのＦａｂアームは、二重特異性抗体の形成を促進する修飾、Ｆｃにより媒介されるエフェクター機能に影響を及ぼす修飾、及び／又は本明細書に記載される他の特徴を含む、Ｆｃ領域を更に含んでもよい。
【００８４】
好ましい実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性完全長ＩｇＧ抗体は、二重特異性ＩｇＧ抗体とＦｃガンマ（Ｆｃγ）受容体との相互作用が低減されるように、変異した下方ヒンジ及び／又はＣＨ２ドメインを有する。本明細書において使用される場合、「二重特異性ＩｇＧ抗体とＦｃガンマ受容体との相互作用が低減されるように」という用語は、かかるＦｃガンマ受容体が抗体の近傍に存在する場合に、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体とＦｃガンマ受容体との相互作用が低減されることを意味する。特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体とＦｃ受容体との相互作用は、本質的に消滅される。低減されたＦｃγ受容体結合を有する二重特異性抗体は、以前に説明されている（米国特許出願公開第２０１４／０１２００９６号、参照により本明細書に組み込まれる）。
【００８５】
特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、アミノ酸２３５位及び／又は２３６位（ＥＵ番号付け）に少なくとも１つの置換を有する変異した下方ヒンジ及び／又はＣＨ２ドメインを含む。好ましくは、２３５位及び２３６位の両方のアミノ酸が置換される。米国特許出願公開第２０１４／０１２００９６号に記載されるように、これらの部位における置換は、抗体と、腫瘍細胞又はエフェクター細胞上に存在するＦｃ受容体との間の相互作用を本質的に防止することができる。したがって、特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、Ｌ２３５Ｇ及び／又はＧ２３６Ｒ置換を含む変異したＣＨ２及び／又は下方ヒンジドメインを含む。好ましくは、Ｌ２３５Ｇ及びＧ２３６Ｒの両方が置換される。あるいは、当業者であれば、置換２３４Ｆ、２３５Ｅ、及び／又は３３１Ｓを含む、下方ヒンジ及び／又はＣＨ２ドメイン変異を導入し得る（Ｏｇａｎｅｓｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌ．２００８（Ｄ６４）７００）。好ましくは、３つ全ての置換が、この代替法では導入される。
【００８６】
二重特異性抗体の産生及び単離
二重特異性抗体は、典型的に、抗体をコードする核酸を発現する細胞によって産生される。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に開示される二重特異性ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３抗体は、二重特異性ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３抗体の重鎖及び軽鎖可変領域及び定常領域をコードする１つ以上の核酸を含む細胞を提供することによって、産生される。細胞は、好ましくは、動物細胞、より好ましくは哺乳動物細胞、より好ましくは霊長類細胞、最も好ましくはヒト細胞である。好適な細胞は、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体を含むことができ、好ましくはそれを産生することができる、任意の細胞である。
【００８７】
抗体産生に好適な細胞は、当該技術分野において既知であり、それには、ハイブリドーマ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳ０細胞、又はＰＥＲ−Ｃ６細胞が含まれる。様々な機関及び企業が、例えば、臨床使用のための、抗体の大規模な産生のための細胞株を開発している。そのような細胞株の非限定的な例は、ＣＨＯ細胞、ＮＳ０細胞、又はＰＥＲ．Ｃ６細胞である。特に好ましい実施形態では、細胞は、ヒト細胞である。好ましくは、アデノウイルスＥ１領域又はその機能的等価物によって形質転換される細胞である。そのような細胞株の好ましい例は、ＰＥＲ．Ｃ６細胞株又はその等価物である。特に好ましい実施形態では、細胞は、ＣＨＯ細胞又はそのバリアントである。好ましくは、抗体の発現にグルタミンシンターゼ（ＧＳ）ベクター系を利用するバリアントである。１つの好ましい実施形態では、細胞は、ＣＨＯ細胞である。
【００８８】
いくつかの実施形態では、細胞は、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体を構成する異なる軽鎖及び重鎖を発現する。特定の実施形態では、細胞は、２つの異なる重鎖及び少なくとも１つの軽鎖を発現する。１つの好ましい実施形態では、細胞は、異なる抗体種（異なる重鎖及び軽鎖の組み合わせ）の数を低減するために、本明細書に記載される「共通軽鎖」を発現する。例えば、それぞれのＶＨ領域は、当該技術分野において既知の二重特異性ＩｇＧの産生方法（国際公開第２０１３／１５７９５４号、参照により本明細書に組み込まれる）を使用して、再構成されたヒトＩＧＫＶ１−３９／ＩＧＫＪ１（ｈｕＶκ１−３９）軽鎖とともに、発現ベクターにクローニングされる。ｈｕＶκ１−３９は、２つ以上の重鎖と対合することが可能であり、それによって、多様な特異性を有する抗体が生じ、それにより二重特異性分子の生成が促進されることが、以前に示されている（Ｄｅ  Ｋｒｕｉｆ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２００９（３８７）５４８−５８；国際公開第２００９／１５７７７１号）。
【００８９】
共通軽鎖及び同量の２つの重鎖を発現する抗体産生細胞は、典型的に、二重特異性抗体を５０％生成し、単一特異性抗体（すなわち、同一の重鎖軽鎖の組み合わせを有する）をそれぞれ２５％ずつ産生する。それぞれの単一特異性抗体の産生よりも二重特異性抗体の産生に有利ないくつかの方法が、公開されている。そのようなものは、典型的に、重鎖の定常領域を、それらがホモ二量体化よりもヘテロ二量体化（すなわち、他方の重鎖／軽鎖の組み合わせの重鎖との二量体化）を優先するように修飾することによって達成される。好ましい実施形態では、本発明の二重特異性抗体は、適合性のあるヘテロ二量体化ドメインを有する２つの異なる免疫グロブリン重鎖を含む。様々な適合性のあるヘテロ二量体化ドメインが、当該技術分野において記載されている。この適合性のあるヘテロ二量体化ドメインは、好ましくは、適合性のある免疫グロブリン重鎖ＣＨ３ヘテロ二量体化ドメインである。当該技術分野では、重鎖のこのようなヘテロ二量体化を達成することができる様々な方法が、記載されている。
【００９０】
ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体を産生するための１つの好ましい方法は、米国特許第９，２４８，１８１号及び同第９，３５８，２８６号に開示されている。具体的には、本質的に二重特異性完全長ＩｇＧ分子のみを産生するための好ましい変異は、第１のＣＨ３ドメインにおけるアミノ酸置換Ｌ３５１Ｋ及びＴ３６６Ｋ（ＥＵ番号付け）（「ＫＫバリアント」重鎖）、並びに第２のドメインにおけるアミノ酸置換Ｌ３５１Ｄ及びＬ３６８Ｅ（「ＤＥバリアント」重鎖）、又はその逆である。前述のように、ＤＥバリアント及びＫＫバリアントは、優先的に対合して、ヘテロ二量体（いわゆる「ＤＥＫＫ」二重特異性分子）を形成する。ＤＥバリアント重鎖のホモ二量体化（ＤＥＤＥホモ二量体）又はＫＫバリアント重鎖のホモ二量体化（ＫＫＫＫホモ二量体）は、同一の重鎖間のＣＨ３−ＣＨ３界面における荷電残基間の強い反発力に起因して、ほとんど発生しない。
【００９１】
したがって、一実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａに結合する可変ドメインを含む重鎖／軽鎖の組み合わせは、重鎖のＤＥバリアントを含む。この実施形態では、ＣＤ３に結合する可変ドメインを含む重鎖／軽鎖の組み合わせは、重鎖のＫＫバリアントを含む。
【００９２】
ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の特徴付け
候補ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３  ＩｇＧ二重特異性抗体は、任意の好適なアッセイを使用して、結合について試験することができる。例えば、ＨＰＢ−ＡＬＬ細胞において膜に発現されるＣＤ３への結合は、フローサイトメトリーによって（国際公開第２０１４／０５１４３３号に既に記載されているＦＡＣＳ手順に従って）評価することができる。一実施形態では、候補ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の、ＨＰＢ  ＡＬＬ細胞上のＣＤ３への結合は、当該技術分野において既知の標準的な手順に従って実施されるフローサイトメトリーによって示される。細胞に発現されるＣＤ３への結合は、ＣＤ３δ／ε又はＣＤ３γ／εをトランスフェクトしたＣＨＯ細胞を使用して確認される。候補二重特異性ＩｇＧ１のＣＬＥＣ１２Ａへの結合は、ＣＬＥＣ１２Ａ発現コンストラクトをトランスフェクトしたＣＨＯ細胞を使用して決定され、ＣＤ３単一特異性抗体及びＣＬＥＣ１２Ａ単一特異性抗体、並びに無関係のＩｇＧ１アイソタイプ対照ｍＡｂが、対照としてアッセイに含まれる（例えば、ＣＤ３及び破傷風毒素（ＴＴ）などの別の抗原に結合する抗体）。
【００９３】
標的に対する候補ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体のＣＤ３及びＣＬＥＣ１２Ａ  Ｆａｂの親和性は、ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｔ１００を使用して、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術によって測定することができる。簡潔に述べると、抗ヒトＩｇＧマウスモノクローナル抗体（Ｂｅｃｔｏｎ  ａｎｄ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、カタログ番号５５５７８４）を、遊離アミン化学（ＮＨＳ／ＥＤＣ）を使用して、ＣＭ５センサーチップの表面に結合する。次いで、ｂｓＡｂを、センサー表面に捕捉する。続いて、組み換え精製抗原ヒトＣＬＥＣ１２Ａ（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｃ、カタログ番号１１８９６−Ｈ０７Ｈ）及びヒトＣＤ３δε−Ｆｃタンパク質を、ある濃度範囲でセンサー表面に流して、結合速度及び解離速度を測定する。それぞれのサイクルの後に、センサー表面を、ＨＣｌのパルスによって再生し、ｂｓＡｂを、再び捕捉する。得られたセンサグラムから、ヒトＣＤ３及びＣＬＥＣ１２Ａへの結合についての結合速度及び解離速度並びに親和性の値が、既に記載されているように（例えば、米国特許出願公開第２０１６／０３６８９８８号）、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアを使用して決定される。
【００９４】
ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体のＴ細胞刺激能力は、国際公開第２０１４／０５１４３３号及び米国特許出願公開第２０１６／０３６８９８８号に記載される手順に従って得られた健常ドナーの休止Ｔ細胞を使用したアッセイにおいて判定することができる。例えば、候補ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）又は１０％正常ヒト血清（ＨＳ）において、エフェクター：標的の細胞比１０：１又は５：１で、白血病由来ＨＬ６０細胞株に由来する細胞とともに２日間インキュベートした精製健常ドナー休止Ｔ細胞において、試験される。結果は、ＣＤ４陽性又はＣＤ８陽性Ｔ細胞集団内のＣＤ６９陽性細胞又はＣＤ２５陽性細胞の割合として表される。
【００９５】
標的細胞の溶解を誘導するＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の能力は、国際公開第２０１４／０５１４３３号及び米国特許出願公開第２０１６／０３６８９８８号に記載される手順に従って、カルボキシフルオレセイン二酢酸スクシンイミジルエステル（ｃａｒｂｏｘｙｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ  ｄｉａｃｅｔａｔｅ  ｓｕｃｃｉｍｉｄｙｌ  ｅｓｔｅｒ、ＣＦＳＥ）で標識し、健常ドナーに由来するＴ細胞とともに共培養した白血病細胞、例えば、ＨＬ−６０細胞を使用したアッセイにおいて、試験することができる。生存しているＣＦＳＥ陽性細胞を、フローサイトメトリーによって定量化し、結果を、ＰＢＳ対照条件に関連する特異的溶解の割合として表す。
【００９６】
ＩＩＩ．ＩＬ−１５部分
ＩＬ−１５受容体に結合し、受容体を活性化する（例えば、ＩＬ−１５受容体アゴニストとして作用する）任意の分子を、本方法において使用することができる。好適なＩＬ−１５受容体アゴニストは、当該技術分野において既知であり、これには、天然に存在するＩＬ−１５；組み換えＩＬ−１５；合成ＩＬ−１５；修飾されたＩＬ−１５；ＰＥＧ化されたＩＬ−１５；ＩＬ−１５及び異種融合パートナーを含む融合タンパク質；並びにＩＬ−１５Ｒに結合し、それを活性化する天然に存在する、ＩＬ−１５の機能性断片；並びにＩＬ−１５模倣体が含まれる。ＩＬ−１５は、ヒト、マウス、ラットなどの組織からの天然に存在するＩＬ−１５の単離；合成手段による産生；及び組み換え手段による産生を含む、任意の従来的な方法で産生することができる。ＩＬ−１５アミノ酸配列は、当該技術分野において既知である。例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ７５１９１５、ＮＰ７５１９１４、ＮＰ０００５７６、ＮＰ０３７２６１、ＮＰ０３２３８３、及びＰ９７６０４を参照されたい。
【００９７】
例示的なＩＬ−１５部分は、本明細書、文献、並びに例えば米国特許出願公開第２００６／０１０４９４５号、同第２０１５／０３５９８５３号、同第２０１７／００２０９６３号、国際公開第２０１７／０６２８３５号、Ｐｅｔｔｉｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２（４）：２３１２−２３１８）、及びＷｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３  Ｏｎｃｏｌｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２（１１）ｅ２６４４２：ｌ−３）に記載されている。例えば、ＩＬ−１５スーパーアゴニスト変異体と二量体ＩＬ−１５Ｒａドメイン（ＩＬ−１５ＲａＳｕ／Ｆｃ）との複合体（米国特許第９，２５５，１４１号及び同第９，３２８，１５９号）、並びに組み換えヒトＩＬ−１５（ｒｈＩＬ−１５）を含む、多量体可溶性ＩＬ−１５融合分子が、市販入手可能である（例えば、（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ，Ｒｏｃｋｙ  Ｈｉｌｌ，Ｎ．Ｊ．；ＣｅｌｌＧｅｎｉｘ）。
【００９８】
いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５部分は、組み換えヒトＩＬ−１５（ｈＩＬ−１５）である。他の実施形態では、ＩＬ−１５部分は、可溶性ＩＬ−１５受容体又は受容体断片（ｓＩＬ−１５Ｒａ）である。他の実施形態では、ＩＬ−１５部分は、例えば、米国特許第９，２５５，１４１号及び同第９，３２８，１５９号に記載されるように、ＩＬ−１５及びｓＩＬ−１５Ｒａを含む複合体である。更に他の実施形態では、ＩＬ−１５部分は、ＩＬ−１５の長時間作用型、例えば、例として国際公開第２０１５／８１５３７３号に記載されるような、ＩＬ−１５と水溶性ポリマーとのコンジュゲートである。
【００９９】
いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５部分は、ＩＬ−１５Ｒサブユニットに対するＩＬ−１５の高い親和性を維持しながら、ＩＬ−１５受容体複合体のβ若しくはγサブユニットへのＩＬ−１５の結合に干渉することができるＩＬ−１５分子上の特定の部位において、ＰＥＧ、ｍＰＥＧ、デキストラン、ＰＶＰ、ＰＶＡ、ポリアミノ酸、例えば、ポリ−Ｌリジン若しくはポリヒスチジン、アルブミン、及びゼラチンを含む、当該技術分野において既知のバイオアベイラビリティを拡大するための手段を含み得る。加えて、ＩＬ−１５は、ＩＬ−１５Ｒサブユニットに対するＩＬ−１５の高い親和性を維持しながら、ＩＬ−１５受容体複合体のβ又はγサブユニットへのＩＬ−１５の結合に干渉することができる部位において、特異的にグリコシル化され得る。コンジュゲーションに好ましい基は、ＰＥＧ、デキストラン、及びＰＶＰである。ＰＥＧ部分は、ＰＥＧの大きな分子サイズを利用するために、既知の部位においてＩＬ−１５に結合され得、タンパク質中に天然に存在するリジン若しくはシステイン残基を利用することによって、又は部位特異的ＰＥＧ化によって、ＩＬ−１５に結合され得る。
【０１００】
更なるＩＬ−１５部分を産生するために、任意の既知のＩＬ−１５ポリペプチドの配列を、当該技術分野において既知の様々な方法で改変して、標的化された変化を配列に生じさせることができる。バリアントポリペプチドは、通常、天然に存在する配列と実質的に類似である、すなわち、少なくとも１つのアミノ酸が異なり、少なくとも２つのアミノ酸が異なってもよいが、約１０個より多く異なることはない。配列の変化は、置換、挿入、又は欠失であり得る。保存的アミノ酸置換としては、典型的に、以下の群内の置換が挙げられる：（グリシン、アラニン）；（バリン、イソロイシン、ロイシン）；（アスパラギン酸、グルタミン酸）；（アスパラギン、グルタミン）；（セリン、スレオニン）；（リジン、アルギニン）；又は（フェニルアラニン、チロシン）。アミノ酸残基及び非天然のアミノ酸残基の置換及び付加のための技法は、当業者に周知である（例えば、Ｊ．Ｍａｒｃｈ，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，４ｔｈ  Ｅｄ．（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，１９９２）。
【０１０１】
一次アミノ酸配列を改変する場合もしない場合もある、目的の修飾としては、ポリペプチドの化学的誘導体化、例えば、アセチル化又はカルボキシル化；グリコシル化部位を導入又は除去するアミノ酸配列における変化；ポリエチレングリコール部分による修飾（ＰＥＧ化）を受けやすいタンパク質を作製するアミノ酸配列における変化などが挙げられる。グリコシル化の修飾、例えば、合成及びプロセシングステップ又は更なるプロセシングステップの間に、ポリペプチドのグリコシル化パターンを修飾することによって作製されるもの；例えば、ポリペプチドを、哺乳動物のグリコシル化又は脱グリコシル化酵素など、グリコシル化に影響を及ぼす酵素に曝露することによるものもまた、含まれる。リン酸化されたアミノ酸残基、例えば、ホスホチロシン、ホスホセリン、又はホスホスレオニンを有する配列もまた、包含される。例えば、ＩＬ−１５ポリペプチドは、Ｎ末端アミノ酸が、ホルミル基、アセチル基、マロニル基などのアシル基でアシル化された、Ｎ−ブロック種を含んでもよい。また、コンセンサスＩＬ−１５、例えば、２つ以上の既知のＩＬ−１５アミノ酸配列のコンセンサスであるアミノ酸配列を含むＩＬ−１５も、使用に好適である。
【０１０２】
タンパク質分解に対する耐性を改善するため、可溶性特性を最適化するため、又は治療剤としてより適したものにするために、通常の化学的技法を使用して修飾されているＩＬ−１５ポリペプチドもまた、使用に好適である。例えば、ペプチドの骨格は、安定性を増強するために環化されてもよい（Ｆｒｉｅｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：２３７８３−２３７８９を参照されたい）。天然に存在するＬ−アミノ酸以外の残基、例えば、Ｄ−アミノ酸又は非天然の合成アミノ酸を含む類似体が使用されてもよい。タンパク質は、安定性を増強するために、ＰＥＧ化されてもよい。ポリペプチドは、アルブミン又は別の異種融合パートナーに融合されてもよい。
【０１０３】
ＩＬ−１５の短縮バージョン、ハイブリッドバリアント、及びペプチド模倣体もまた、ＩＬ−１５部分としての機能を果たし得る。少なくともある程度のＩＬ−１５活性を維持する、前述のもののいずれかの生物学的に活性な断片、欠失バリアント、置換バリアント、又は付加バリアントもまた、ＩＬ−１５部分としての機能を果たし得る。
【０１０４】
ＩＬ−１５部分は、インビトロ合成によって、当該技術分野において既知の従来的な方法を使用して、組み換え方法によって、調製されてもよく、又は誘導された細胞若しくはタンパク質を自然に産生する細胞から単離されてもよい。所望される場合、合成中又は発現中に、他の分子又は表面への連結を可能にする様々な基を、ポリペプチドに導入することができる。したがって、チオエーテルを作製するためにシステインを使用することができ、金属イオン錯体に連結するためにヒスチジンを使用することができ、アミド又はエステルを形成するためにカルボキシル基を使用することができ、アミドを形成するためにアミノ基を使用することができるなどである。例えば、ＩＬ−１５ポリペプチドは、細菌宿主、例えば、大腸菌又は真核生物宿主細胞（例えば、酵母、哺乳動物細胞、例えば、ＣＨＯ細胞など）に形質転換又はトランスフェクトしたＤＮＡ配列の発現によって、産生され得る。これらの実施形態では、ＩＬ−１５は、「組み換えＩＬ−１５」である。宿主細胞が細菌宿主細胞である場合、ＩＬ−１５は、Ｎ末端メチオニンを含むように修飾されてもよい。
【０１０５】
インビトロにおいてＩＬ−１５活性を判定するための様々な方法が、当該技術分野において記載されている。例えば、ＩＬ−１５の活性は、ｐＳＴＡＴアッセイにおいて評価することができる。簡潔に述べると、ＩＬ−１５依存性ＣＴＬＬ−２細胞を、ＩＬ−１５活性を有する試験物品に曝露すると、シグナル伝達カスケード結果の開始により、定量的に測定することができるチロシン残基６９４（Ｔｙｒ６９４）におけるＳＴＡＴ５のリン酸化を含む結果が生じる。アッセイプロトコール及びキットは既知であり、例えば、ＭＳＤ  Ｐｈｏｓｐｈｏ（Ｔｙｒ６９４）／Ｔｏｔａｌ  ＳＴＡＴａ、ｂ  Ｗｈｏｌｅ  Ｃｅｌｌ  Ｌｙｓａｔｅ  Ｋｉｔ（Ｍｅｓｏ  Ｓｅａｌ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，ＬＬＣ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）が挙げられる。本明細書に提供される方法において使用するのに好適なＩＬ−１５部分は、５分間又は１０分間のうちの少なくとも一方で、約３００ｎｇ／ｍＬ未満（より好ましくは約１５０ｎｇ／ｍＬ未満）のｐＳＴＡＴ５  ＥＣ５０値を呈し得る。
【０１０６】
ＩＶ．医薬組成物
一態様では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体と、ＩＬ−１５部分と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物が提供される。本明細書において使用される場合、「薬学的に許容される」という用語は、動物、特に、ヒトにおける使用が、政府規制機関によって承認されているか、又は米国薬局方若しくは別の一般に認識されている薬局方において記載されていることを意味し、これには、生理学的に適合性のあるありとあらゆる溶媒、塩、分散媒、コーティング剤、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤などが含まれる。「担体」という用語は、化合物が一緒に投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤、又はビヒクルを指す。そのような薬学的担体は、滅菌液、例えば、石油、動物、植物、若しくは合成起源のものを含む、水及び油、例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油、グリセロールポリエチレングリコールリシノレートなどであり得る。水又は生理食塩水溶液並びに水性デキストロース及びグリセロール溶液が、担体として、特に、注射用溶液として、利用され得る。非経口投与のための液体組成物は、注射又は連続注入による投与のために製剤化され得る。注射又は注入による投与経路としては、膀胱内、腫瘍内、静脈内、腹腔内、筋肉内、髄腔内、及び皮下が挙げられる。投与経路（例えば、静脈内、皮下、関節内など）に応じて、活性化合物は、化合物を不活性化し得る酸の作用及び他の天然の条件から化合物を保護するために、材料中にコーティングされてもよい。
【０１０７】
ヒト患者への投与に好適な医薬組成物は、典型的に、非経口投与のために、例えば、液体担体、又は静脈内投与のための溶液若しくは懸濁液への再構成に好適なものにおいて、製剤化される。組成物は、投与の容易さ及び投薬量の均一性のために、投薬単位形態で製剤化されてもよい。
【０１０８】
また、経口又は非経口投与のいずれかのために、使用直前に、液体調製物に変換することが意図された、固体調製物も含まれる。そのような液体形態としては、溶液、懸濁液、及びエマルションが挙げられる。
【０１０９】
Ｖ．処置
本明細書において提供される組成物及び方法は、患者において１つ又は複数のＴ細胞を活性化するのに特に有用である。患者は、がんを罹患している可能性がある。したがって、組成物及び方法は、骨髄性白血病及び骨髄起源の前白血病疾患を含む、様々な骨髄系悪性腫瘍の処置において使用され得る。したがって、本明細書に提供される方法に従って処置することができる疾患としては、骨髄性白血病（例えば、ＡＭＬ及びＣＭＬ）又は前白血病疾患、例えば、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）（及びＡＭＬへの進行）が挙げられる。
【０１１０】
本明細書において使用される場合、組み合わせ投与（共投与）は、同じか若しくは異なる投薬形態、別個の投与、又は連続的な投与において、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分を、同時に投与することを含む。したがって、いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、対象においてＴ細胞を活性化するための方法において使用され得、ここで、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ＩＬ−１５部分と同時に、それとは別個に、又はそれと連続的に投与される。他の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、対象におけるがんの処置において使用され得、ここで、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ＩＬ−１５部分と同時に、それとは別個に、又はそれと連続的に投与される。
【０１１１】
他の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、対象においてＴ細胞を活性化するための医薬の製造において使用するためのものであってもよく、ここで、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ＩＬ−１５部分と同時に、それとは別個に、又はそれと連続的に投与される。ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分を含む製品は、対象においてＴ細胞を活性化するのに同時、別個、又は連続的に使用するための組み合わせ調製物であり得る。他の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、対象におけるがんを処置するための医薬の製造において使用するためのものであってもよく、ここで、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ＩＬ−１５部分と同時に、それとは別個に、又はそれと連続的に投与される。ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分を含む製品は、対象におけるがんを処置するのに同時、別個、又は連続的に使用するための組み合わせ調製物であり得る。
【０１１２】
ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分は、好適な投薬量、経路（例えば、静脈内、腹腔内、筋肉内、髄腔内、又は皮下）に従って投与することができる。
【０１１３】
ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分は、任意の好適なスケジュールに従って投与することもできる。例えば、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分は、単一製剤で同時に投与することができる。あるいは、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分は、別個の投与のために製剤化することができ、その場合、それらは、並行して、又は連続的に投与される。
【０１１４】
例えば、いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、最初に投与され、続いて、ＩＬ−１５部分が投与され得るか、又はその逆であってもよい。上記の処置及び使用の方法における投薬レジメンは、最適な所望される応答（例えば、治療応答）を提供するように調整される。本方法において提供される実際の投与量は、対象の年齢、体重、及び全般的な状態、並びに処置される状態の重症度及び医療従事者の判断に応じて変動するであろう。
【０１１５】
例えば、単回ボーラスが投与されてもよく、いくつかの分割された投与量を経時的に投与してもよく、又は投与量は、治療状況の緊急性によって示されるように、比例的に低減若しくは増加されてもよい。一実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ＩＬ−１５部分の投与の前に投与され、例えば、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、最初に患者に投与され、その後に、ＩＬ−１５部分の投与が続く。一実施形態では、ＩＬ−１５部分は、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の投与の前に投与され、例えば、ＩＬ−１５部分が、最初に患者に投与され、その後に（例えば、１分以上後、１時間以上後、又は１日以上後に）ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の投与が続く。そのような並行投与又は連続投与により、結果として、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分の両方が、処置される患者に同時に存在することになる。ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分の両方が並行して存在することは、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体により誘導されるＴ細胞機能及びＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体に媒介されるＴ細胞により誘導される標的細胞の溶解を補助する。
【０１１６】
別の実施形態では、ＩＬ−１５部分及びＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、同時に投与される。
【０１１７】
一実施形態では、対象には、単回投与量のＩＬ−１５部分及び単回投与量のＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が投与される。いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分は、処置の過程にわたり、反復して投与される。例えば、特定の実施形態では、複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上）投与量のＩＬ−１５部分及び複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上）投与量のＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、処置を必要とする対象に投与される。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５部分及びＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の投与は、週ごと又は月ごとに行われてもよく、このレジメンでは、それらは、同じ日に（例えば、同時に）投与されてもよく、又は１つずつ順に（例えば、互いに前後１分以上、１時間以上、若しくは１日以上で）投与されてもよい。別個に投与される場合、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分は、同じ投与（すなわち、投薬）プロトコールに従って投与されてもよいが、必ずしもそうでなくてもよい。例えば、１サイクルの処置は、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体を１回又は複数回投与することを含み得、一方で治療有効投与量のＩＬ−１５部分は、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体よりも多いか又は少ない頻度で投与され得る。特定の実施形態では、ＩＬ−１５部分及びＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体のそれぞれの投与量の投与は、同じ日であってもよく、又は代替として、ＩＬ−１５部分は、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３抗体の１日以上前又は後に投与されてもよい。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及び／又はＩＬ−１５部分の投与量は、経時的に変化する。例えば、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及び／又はＩＬ−１５部分は、最初に高用量で投与されてもよく、経時的に低下してもよい。別の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及び／又はＩＬ−１５部分は、最初に低用量で投与され、経時的に増加する。
【０１２０】
別の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及び／又はＩＬ−１５部分の量は、それぞれの投与量について一定である。別の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及び／又はＩＬ−１５部分の量は、それぞれの投与量で変動する。例えば、それぞれの維持（又は継続）投与量は、最初に投与される負荷投与量よりも高くてもよく、又は同じであってもよい。別の実施形態では、それぞれの維持投与量は、負荷投与量よりも低くてもよく、又は同じであってもよい。臨床医は、処置される患者の状態によって保証される好ましい投与量を利用してもよい。投与量は、疾患のステージなどを含む多数の因子に依存し得る。そのような因子のうちの１つ以上の存在に基づいた、投与されるべき具体的な投与量は、当業者の技能の範囲内である。一般に、処置は、化合物の最適投与量未満である、より低い投与量で開始される。その後、投与量は、状況下における最適な効果が達成されるまで、少量ずつ増加される。便宜上、合計１日投薬量は、所望される場合、１日の間で分割され、部分ごとに投与されてもよい。間欠療法（例えば、３週間のうち１週間、又は４週間のうち３週間）もまた、使用され得る。
【０１２１】
特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、０．１、０．３、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０ｍｇ／体重ｋｇの投与量で投与される。別の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０ｍｇ／体重ｋｇの投与量で投与される。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法において使用されるＩＬ−１５部分は、組み換えヒトＩＬ−１５（ｈＩＬ−１５）である。特定の実施形態では、ｒｈＩＬ−１５は、１日当たり約０．１２５μｇ／ｋｇ〜１日当たり２．０μｇ／ｋｇの投与量で投与される。特定の実施形態では、ｒｈＩＬ−１５は、１日当たり０．１２５、０．２５、０．５、１．０、又は２．０μｇ／ｋｇで投与される。特定の実施形態では、ｒｈＩＬ−１５は、静脈内ボーラスによって投与される。他の実施形態では、ｒｈＩＬ−１５は、連続的な静脈内注入（ＣＩＶ）によって投与される。特定の実施形態では、ｒｈＩＬ−１５は、２〜１０日間、５〜１０日間、又は７〜１０日間、ＣＩＶによって投与される。一実施形態では、ｒｈＩＬ−１５は、１０日間、ＣＩＶによって投与される。関連する実施形態では、ｒｈＩＬ−１５は、約３０〜６０日の処置サイクルで投与され、ここで、ｒｈＩＬ−１５は、それぞれのサイクルの最初の５〜１０日間、ＣＩＶによって投与される。
【０１２３】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法に従って投与されるＩＬ−１５部分は、可溶性ＩＬ−１５受容体又は受容体断片（ｓＩＬ−１５Ｒａ）である。他の実施形態では、ＩＬ−１５部分は、例えば、米国特許第９，２５５，１４１号及び同第９，３２８，１５９号に記載されるように、ＩＬ−１５及びｓＩＬ−１５Ｒａを含む複合体である。特定の実施形態では、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、対象に、約０．１μｇ／ｋｇ〜約２０μｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ〜約２０μｇ／ｋｇ、約２０μｇ／ｋｇ〜約４０μｇ／ｋｇ、又は約２５μｇ／ｋｇ〜５０μｇ／ｋｇの投与量で投与される。
【０１２４】
特定の実施形態では、ＩＬ−１５部分は、皮下投与されるＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａである。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、毎日、１日おき、３日おき、４日おき、５日おき、６日おき、又は７日おきの頻度で投与される。特定の実施形態では、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａは、１週間に１、２、３、４、５、６、又は７日間投与される。特定の実施形態では、第１のサイクル及びそれぞれの後続サイクルの投与量は、０．１μｇ／ｋｇ〜１μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ〜５μｇ／ｋｇ、又は５μｇ／ｋｇ〜１０μｇ／ｋｇである。別の実施形態では、第１のサイクル及びそれぞれの後続のサイクルの第１の投与量は、０．１μｇ／ｋｇ〜０．５μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ〜２μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ〜３μｇ／ｋｇ、２μｇ／ｋｇ〜５μｇ／ｋｇ、又は２μｇ／ｋｇ〜４μｇ／ｋｇである。別の実施形態では、第１のサイクル及びそれぞれの後続のサイクルの投与量は、０．１μｇ／ｋｇ、０．２５μｇ／ｋｇ、０．５μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ、１．２５μｇ／ｋｇ、１．５μｇ／ｋｇ、１．７５μｇ／ｋｇ、２μｇ／ｋｇ、２．２５μｇ／ｋｇ、２．５μｇ／ｋｇ、２．７５μｇ／ｋｇ、３μｇ／ｋｇ、３．２５μｇ／ｋｇ、３．５μｇ／ｋｇ、４μｇ／ｋｇ、４．２５μｇ／ｋｇ、４．５μｇ／ｋｇ、４．７５μｇ／ｋｇ、又は５μｇ／ｋｇである。一実施形態では、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体が、２週間連続で１週間に３回皮下投与される、２８日サイクルに従って投与される。
【０１２５】
更に他の実施形態では、本明細書に提供される方法において使用されるＩＬ−１５部分は、ＩＬ−１５の長時間作用型、例えば、例として国際公開第２０１５８１５３７３号に記載されるような、ＩＬ−１５と水溶性ポリマーとのコンジュゲートである。当業者であれば、ＩＬ−１５受容体（「ＩＬ−１５Ｒ」）において臨床的に関連するアゴニスト活性を提供するのに十分な、長時間作用性のＩＬ−１５アゴニストの量を決定することができる。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５ポリマーコンジュゲートは、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．００１〜約５ｍｇ／ｋｇの投与量で投与される。特定の実施形態では、ＩＬ−１５ポリマーコンジュゲートは、約０．０３ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇの投与量で投与される。特定の実施形態では、ＩＬ−１５ポリマーコンジュゲートは、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、又は約３．０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与される。他の実施形態では、ＩＬ−１５ポリマーコンジュゲートは、約０．００２５ｍｇ／ｋｇ、約０．００８ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０２５ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、又は約０．２５ｍｇ／ｋｇの投与量で投与される。
【０１２６】
本明細書に記載される処置方法は、典型的に、患者の治療を監督している臨床医が、処置方法が有効である、すなわち、患者が処置に応答していると考える限り、継続される。処置方法が有効であることを示す非限定的なパラメータとしては、以下のうちの１つ以上を挙げることができる：腫瘍細胞の減少；腫瘍細胞増殖の阻害；腫瘍細胞の排除；無増悪生存期間；好適な腫瘍マーカーによる適切な応答（該当する場合）；ＮＫ（ナチュラルキラー）細胞数の増加；ＣＬＥＣ１２Ａ特異的Ｔ細胞数の増加、及びＣＬＥＣ１２Ａ特異的メモリーＴ細胞数の増加。
【０１２７】
ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体を投与する頻度に関して、当業者であれば、適切な頻度を決定することができるであろう。例えば、臨床医は、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体を、比較的低頻度で（例えば、２週間に１回）投与し、患者に許容される投与量間の期間を徐々に短縮するように決定することができる。ＩＬ−１５部分を投与する頻度に関して、これらの薬剤の頻度は、類似の様式で決定することができる。請求される方法による治療過程に関連する例示的な時間の長さとしては、以下が挙げられる：約１週間、２週間、約３週間、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、約１３週間、約１４週間、約１５週間、約１６週間、約１７週間、約１８週間、約１９週間、約２０週間、約２１週間、約２２週間、約２３週間、約２４週間、約７ヶ月間、約８ヶ月間、約９ヶ月間、約１０ヶ月間、約１１ヶ月間、約１２ヶ月間、約１３ヶ月間、約１４ヶ月間、約１５ヶ月間、約１６ヶ月間、約１７ヶ月間、約１８ヶ月間、約１９ヶ月間、約２０ヶ月間、約２１ヶ月間、約２２ヶ月間、約２３ヶ月間、約２４ヶ月間、約３０ヶ月間、約３年間、約４年間、約５年間、永続的（例えば、進行中の維持療法）。前述の持続時間は、１回又は複数回の処置サイクルと関連付けられ得る。
【０１２８】
結果
本明細書に提供される処置方法の有効性は、任意の好適な手段を使用して評価することができる。一実施形態では、組み合わせ処置の臨床的有効性は、骨髄におけるＡＭＬ芽球の低減を客観的な応答基準として使用して分析される。本明細書に開示される方法に従って処置される患者、例えば、ヒトは、好ましくは、がんの少なくとも１つの兆候において改善を経験する。いくつかの実施形態では、以下のうちの１つ以上が生じ得る：がん細胞数が低減され得る；がん再発が予防又は遅延される；がんと関連する症状のうちの１つ以上が、ある程度緩和され得る。加えて、Ｔ細胞により媒介される標的細胞の溶解を判定するためのインビトロアッセイ（国際公開第２０１７／０１０８７４号に記載される）を、対象から単離したＡＭＬ腫瘍芽球を用いて行ってもよい。
【０１２９】
別の実施形態では、処置の方法は、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体又はＩＬ−１５部分（例えば、ｒｈＩＬ−１５）単独で達成されるものよりも良好な、同等の臨床的利益率（ＣＢＲ＝ＣＲ（完全応答）、ＰＲ（部分応答）、又はＳＤ（安定疾患）≧６ヶ月）をもたらす。
【０１３０】
いくつかの実施形態では、腫瘍細胞は、本明細書に記載される処置の後、もはや検出可能ではない。いくつかの実施形態では、対象は、部分的又は完全寛解である。特定の実施形態では、対象は、全生存期間、中央値生存率、及び／又は無増悪生存期間の増加を有する。
【０１３１】
ＶＩ．追加の薬剤／治療法
本発明の組み合わせ（例えば、ＩＬ−１５部分と組み合わせたＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体）は、処置されているがんに対する特定の有用性のために選択される他の周知の治療法とともに使用することもできる。本発明の組み合わせは、適切な場合には、代替として、既知の薬学的に許容される薬剤と連続的に使用してもよい。
【０１３２】
化学療法剤の安全かつ有効な投与方法は、当業者に既知である。加えて、それらの投与は、標準的な文献に記載されている。例えば、化学療法剤の多くの投与は、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（ＰＤＲ）、例えば、１９９６年版（Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｍｏｎｔｖａｌｅ，Ｎ．Ｊ．０７６４５−１７４２，ＵＳＡ）に記載されており、この開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１３３】
化学療法剤及び／又は放射線療法の投与は、処置されている疾患並びにその疾患に対する化学療法剤及び／又は放射線療法の既知の効果に応じて変化させることができることが、当業者には明らかであろう。また、熟練した臨床医の知識によると、治療プロトコール（例えば、投薬量及び投与回数）は、患者に対する投与された治療剤の観察された効果を考慮して、及び投与された治療剤に対する疾患の観察された応答を考慮して、変化させることができる。
【０１３４】
ＶＩＩ．キット及び製品
また、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体と、ＩＬ−１５部分と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物を、前述の方法において使用するために適合された治療有効量で含む、キット又は製品も、本明細書において提供される。いくつかの実施形態では、キット又は製品はまた、所望により、施術者（例えば、医師、看護師、又は患者）が、がんを有する患者に、中に含まれる組成物を投与することを可能にするための、例えば、投与スケジュールを含む、説明書も含み得る。
【０１３５】
いくつかの実施形態では、キット又は製品は、上記に提供された方法に従って、単回投与に有効な量のＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分をそれぞれが含有する、単回投与医薬組成物の複数のパッケージを含む。医薬組成物を投与するのに必要な機器又はデバイスもまた、キット又は製品に含まれ得る。例えば、キット又は製品は、同じ容器又は別々の異なる組成物として投与される別個の容器に、単位投薬量のＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分を含有する、１つ以上の予め充填されたシリンジを提供し得る。
【０１３６】
特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分のうちの一方又は両方が、添付の説明書に従った再構成及びそれに続く投与に好適な固体形態で提供される。
【０１３７】
なおも更なる実施形態では、組成物又は組み合わせ又はキット又は製品は、１つ以上の追加の活性剤を含む。
【０１３８】
Ｇｅｎｂａｎｋエントリ、特許及び公開特許出願、並びにウェブサイトを含む、本明細書に記載される全ての文献及び参照文献は、本明細書に完全に又は部分的に記載されているのと同じ程度に、参照により明示的に本明細書に組み込まれる。
【０１３９】
明確さ及び簡潔な説明の目的で、特徴は、同じか又は別個の実施形態の一部として本明細書に記載されているが、しかしながら、本発明の範囲は、記載される特徴の全て又は一部の組み合わせを有する実施形態を含んでもよいことが理解されよう。
【０１４０】
本発明は、以下の実施例を参照することによって説明されるが、これは、例示にすぎず、本発明を制限することを意図するものではない。本発明は、詳細に、かつその具体的な実施形態を参照して説明されているが、その趣旨及び範囲から逸脱することなくそれに様々な変更及び修正を行うことができることが、当業者には明らかであろう。
【０１４１】
実施例１
ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性ＩｇＧにより誘導されるＣＬＥＣ１２Ａ特異的ＨＬ６０細胞毒性に対するＩＬ−１５の効果
材料及び方法
試薬
１．ＩＭＤＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、番号２１９８０−０６５）
２．ＰＢＳ（Ｂｒａｕｎ、番号２２０／１２２５７９７４／１１１０）
３．ＨＳ血清（ＰＡＡ、番号Ｃ１５−０２０、ロット番号１３）
４．ＦＢＳ
５．Ｆａｃｓ緩衝液ＰＢＳ／０，５％ＢＳＡ
６．ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ、番号Ａ９９６４７）
７．ＨＬ−６０細胞株（培養物は対数期にあるべき）
８．健常ドナーに由来するヘパリン化血液
９．汎Ｔ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  ｂｉｏｔｅｃ、番号１３０−０９６−５３５）
１０．ＣＦＳＥ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、番号Ｃ１１−５７）
１１．９６ウェル平底プレート（Ｃｏｓｔａｒ番号３５９６）
１２．ＩＬ−１５（ストック濃度２０ｕｇ／ｍｌ、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ番号１３０−０９５−７６６）
【０１４２】
ＦＡＣＳ用抗体
１．ＣＤ３ＰｅＣＹ７（ＵＣＨＴ１）（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、番号３００４２０）
２．ＣＤ２５ＰＥ（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ、番号Ａ０７７７４）
３．ＣＤ６９ＡＰＣ（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ、番号Ａ８０７１１）
４．ＣＤ８ＰＥＣＹ７（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ番号７３７６６１）
５．ＣＤ４ＥＣＤ（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ番号６６０４７２７）
【０１４３】
作製した抗体及び希釈物
【０１４４】
【表１】
2021504413.tif 000002
【０１４５】
末梢血単核細胞からのＣＤ３＋Ｔ細胞の単離
ＰＢＭＣを、健常ドナーから採取したヘパリン化血液から単離し、ＭＡＣＳ緩衝液中で洗浄し、そこに懸濁させ、計数のために５０μＬのサンプルを採取し、残りを遠心分離して細胞をペレット化した（５分間、５００Ｇ、室温）。細胞を、１０×１０６個／ＭＡＣＳ緩衝液４０μｌの密度で、ＭＡＣＳ緩衝液中に再懸濁させ、ＣＤ３選択プロトコールは、製造業者によって提供されるものであった（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍｉｌｔｅｎｙｉｂｉｏｔｅｃ．ｃｏｍ／ｄｏｗｎｌｏａｄ／ｄａｔａｓｈｅｅｔｓ＿ｅｎ／１８９７／ＤＳ１３０＿０９６＿５３５．ｐｄｆ）。
【０１４６】
精製されたＣＤ３＋Ｔ細胞の数及び純度を、それぞれ、計数チャンバ及びＦＡＣＳによって判定した。ＦＡＣＳについては、１００μｌの精製されたＣＤ３＋Ｔ細胞を、１μｌのＣＤ３ＰＥＣＹ７とともに、４℃で２０分間インキュベートし、ＦＡＣＳ機で測定した。計数については、単離したＴ細胞を、１０％  ＤＭＳＯ含有培地において凍結させ、使用するまで液体窒素中で保存した。アッセイについては、ＣＤ３＋Ｔ細胞を、水浴において３７℃で解凍し、過剰なアッセイ培地を使用して洗浄し、遠心分離し（５分間、５００Ｇ、室温）、４０，０００個の細胞／ｍｌの密度で再懸濁させた。５０μｌの上記の細胞を使用して、１ウェル当たりの密度を得、２０００個のＣＤ３＋Ｔ細胞／アッセイウェルが得られた。
【０１４７】
ＨＬ−６０親細胞株のＣＦＳＥ標識
ＨＬ−６０細胞株を、前述の方法に従って懸濁液中で増殖させ、培養フラスコから採取した。サンプルを採取して、細胞密度を判定し、非ＣＦＳＥ標識対照として使用した。
【０１４８】
細胞を、過剰なＰＢＳで１回洗浄し（５分間、５００Ｇ、室温）、ＰＢＳ中１０×１０６個／ｍｌの密度で再懸濁させた。ＰＢＳ中のＣＦＳＥストック（濃度５ｍＭ）の、２．５μＭの濃度までの２０００倍希釈物を利用した。１体積のＨＬ−６０（ＰＢＳ中、密度１０×１０６／ｍｌ）及び１体積のＰＢＳ中２．５μＭ  ＣＦＳＥを添加し、穏やかに混合した後、３７℃で１０分間インキュベートすることによって、標識を行った。等体積のＦＢＳを添加し、混合物を、室温で２分間インキュベートした。標識した細胞を、遠心分離（５分間、５００Ｇ、室温）によってペレット化し、上清を廃棄した。細胞を、細胞毒性アッセイに使用した血清を有する過剰培地中に再懸濁させ、２回洗浄した。次いで、細胞を、アッセイ培地を含有する血清中に再懸濁させた（約１×１０６／ｍｌ）。サンプルを使用して、計数（１０μｌ）を行い、ＣＦＳＥ標識効率（１００μｌ）を確認し、細胞密度を、アッセイ培地を使用して０．２×１０６／ｍｌに調整した。
【０１４９】
結果
エフェクターＴ細胞を増強するために、ＩＬ−２及び／又はＩＬ−１５を、共培養物に添加した。まず、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の作用様式に対する両方のサイトカインの効果を、ＨＬ−６０細胞毒性アッセイにおいて評価した。このアッセイでは、ＨＬ−６０細胞及び健常ドナーに由来するＴ細胞を、Ｅ：Ｔ比５：１で培養した。このアッセイにおいてサイトカインの効果を研究するために、野生型Ｆｃを有する抗破傷風毒素（ＴＴ）抗体、単一特異性抗ＣＤ３抗体、修飾されたＦｃを有する二重特異性対照抗体ＴＴ／ＣＤ３、及びＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の存在下において、１００Ｕ／ｍＬのＩＬ−２及び５ｎｇ／ｍＬのＩＬ−１５を添加した。図１に示される結果は、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体と同じＦｃ部分を有する形式である対照ＴＴ／ＣＤ３二重特異性抗体において観察されるように、ＩＬ−２及びＩＬ−１５の組み合わせにより、ＩＬ−２及びＩＬ−１５なしの対照サンプルと比較して、有意なバックグラウンド溶解が誘導されたことを示す。ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体と組み合わせたＩＬ−１５部分の効果を分析するために、２．５、５、１０、及び２０ｎｇ／ｍＬの４つの濃度のＩＬ−１５を、試験した。実験条件は以下の通りであった。
・エフェクター細胞として健常ドナーＴ細胞
・標的細胞としてＨＬ−６０
・Ｅ：Ｔ比１：１０
・ＩｇＧは１０００ｎｇ／ｍＬで試験
・分析日：３日間
・読み取り：Ｔ細胞活性化（ＣＤ４及びＣＤ８  Ｔ細胞上のＣＤ２５及びＣＤ６９）。
【０１５０】
アッセイについては、１００μｌの上記密度の細胞を使用して、２０，０００個のＨＬ−６０細胞／ウェルを得た。それぞれのアッセイウェルに、１０％  ＨＳを有するＩＭＤＭ中、５０μｌの抗体希釈液；１０％  ＨＳを有するＩＭＤＭ中、１００ｕｌの０．２×１０６個／ｍｌのＣＦＳＥ標識ＨＬ−６０細胞；１０％  ＨＳを有するＩＭＤＭ中、５０ｕｌの２０００個の細胞／ｍｌのＭＡＣＳ選別ＣＤ３＋Ｔ細胞を添加した。ＩＬ−１５は、１日目に添加した。
【０１５１】
結果は、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の活性が、ＩＬ−１５の添加によって増強されたことを示す。すなわち、観察されたＣＤ４  Ｔ細胞（図２Ａ）及びＣＤ８  Ｔ細胞（図２Ｂ）の活性化の増強は、ＩＬ−１５の用量と相関性があった。更に、ＩＬ−１５の存在下において観察された活性の増強は、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体に特異的であり、ＣＬＥＣ１２Ａ標的特異的であった。ＩＬ−１５の存在下において、ＴＴ／ＣＤ３二重特異性対照抗体では、明らかなＴ細胞活性化は観察されなかった（ＰＢ９１２４ｐ０１）。
【０１５２】
したがって、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体とのＩＬ−１５の組み合わせは、ＣＬＥＣ１２Ａ標的に媒介されるＴ細胞活性化を効果的に増強した。
【０１５３】
【表２−１】
2021504413.tif 000003
【表２−２】
2021504413.tif 000004
【表２−３】
2021504413.tif 000005
【図１】
2021504413.tif 000006
【図２Ａ】
2021504413.tif 000007
【図２Ｂ】
2021504413.tif 000008
【配列表】
2021504413000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和2年7月30日(2020.7.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１７年１２月１日に出願された米国特許出願第６２／５９３，５０９号に対する優先権を主張するものであり、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、二重特異性抗体を用いて、対象においてＴ細胞を活性化する方法及び対象におけるがんを処置する方法に関する。本発明はまた、二重特異性抗体を含む、医薬組成物及びキットにも関する。本発明は更に、対象においてＴ細胞を活性化するのに使用するための二重特異性抗体、対象においてＴ細胞を活性化するための医薬の製造において使用するための二重特異性抗体、及び二重特異性抗体を含む製品に関する。
【背景技術】
【０００３】
骨髄系悪性腫瘍は、骨髄、血液、及び他の組織におけるクローン性骨髄芽球の増殖を特徴とする、不均質な群の造血系がんを含む。例えば、急性骨髄性白血病（Ａｃｕｔｅ  Ｍｙｅｌｏｉｄ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ、ＡＭＬ）は、骨髄、血液、及び他の組織におけるクローン性骨髄芽球の増殖を特徴とする、侵襲的な悪性疾患である。ヨーロッパ及び米国において、毎年およそ３０，０００人の患者が、ＡＭＬと診断されている。これらの患者の大部分は、６０歳以上である。完全寛解（ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｒｅｍｉｓｓｉｏｎ、ＣＲ）は、６０歳よりも若齢の患者のうちの７０〜８０％において、いくつかの集中化学療法の組み合わせにより達成することができるが、これらの応答患者の大部分については、再発が生じ、全般的な５年生存率は４０〜４５％である。６０歳以上の患者の予後は更に悪く、中央値の生存期間は１年未満である（Ｒｏｂｏｚ，Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｈｅｍａｔｏｌ．Ｅｄｕｃ．Ｐｒｏｇｒａｍ（２０１１），ｐｐ．４３−５０）。現在のＡＭＬの標準的な処置は、高い罹患率及び更には死亡率と関連付けられ、ＣＲとなった患者の大部分が、化学療法後の残存する白血病性幹細胞に起因して再発する。更なる投与量強化は、許容できない毒性に起因して制限される。
【０００４】
慢性骨髄性白血病（ｃｈｒｏｎｉｃ  ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）又は慢性顆粒球性白血病としても知られる慢性骨髄性白血病（Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｍｙｅｌｏｉｄ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ、ＣＭＬ）は、三病期疾患である。ＣＭＬは、通常、成熟顆粒球の過剰産生を特徴とする慢性期（ＣＰ）（血液及び骨髄中の芽球が１０％未満である）、定義が不十分であることが多い中間期（１０〜２０％の芽球を有する）を呈し、処置しなければ、ＣＭＬは、恒常的に、急性リンパ性又は骨髄性白血病に類似する急性期（血液又は骨髄中の芽球が２０％を上回る）へと変化する（Ａｐｐｅｒｌｅｙ，Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌ．２００７；８（１２）：１１１６−１１２８）。ＣＭＬは、世界中で年間発生率１〜２／１００，０００例であり、わずかに男性の方が多く、成人白血病の１５％を占めており（Ｒｅｄａｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．２００４；４（１）：８５−９６）、発生時の中央値年齢は６０歳である（Ｈｏｇｌｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２０１５；９４（Ｓｕｐｐｌ．２）：２４１−２４７）。現在、いくつかのＡＢＬチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）が、ＣＭＬ患者の最前線の治療法として承認されているが、ＴＫＩは、かなりの割合の患者で失敗する（Ｃｌａｒｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．４７：１３−２３，２０１７）。
【０００５】
骨髄異形成症候群（Ｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｔｉｃ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ、ＭＤＳ）は、不均質な群のクローン性骨髄疾患であり、末梢血血球減少症につながる無効造血、及び患者のうちのおよそ約３５〜４０％における急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）への進行を特徴とする。一般集団におけるＭＤＳの発生率は、１００，０００人当たり５の新しい症例として報告されている。ＭＤＳは、男性が女性よりも高い頻度で罹患し、ＡＭＬ及びＣＭＬと同様に、その発生率は年齢とともに増加する（Ｒｏｌｌｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  １１２：４５−５２，２００８）。現在、アザシチジン及びデシタビンが、全てのタイプのＭＤＳについて最前線の治療法として承認されているが、患者の臨床転帰は不十分である。更に、同種造血幹細胞移植は、ＭＤＳ患者のための唯一の潜在的に治癒的な治療法として特定されているが、患者の大多数について年齢が進行していることに起因して、限られた数の患者にしか有用ではない（Ｔｅｆｆｅｒｉ，Ｎ．Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６１（１９）：１８７２−１８７５，２００９）。
【０００６】
したがって、骨髄系悪性腫瘍における応答又は生存の進歩は、主要な研究課題となったままである。したがって、特に、高齢患者において、好ましくは毒性の低い、ＡＭＬ、ＣＭＬ、及びＭＤＳなどの骨髄系悪性腫瘍の有効な処置モダリティに対する緊急性の必要性が依然として存在する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｒｏｂｏｚ，Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｈｅｍａｔｏｌ．Ｅｄｕｃ．Ｐｒｏｇｒａｍ（２０１１），ｐｐ．４３−５０
【非特許文献２】Ａｐｐｅｒｌｅｙ，Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌ．２００７；８（１２）：１１１６−１１２８
【非特許文献３】Ｒｅｄａｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．２００４；４（１）：８５−９６
【非特許文献４】Ｈｏｇｌｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２０１５；９４（Ｓｕｐｐｌ．２）：２４１−２４７
【非特許文献５】Ｃｌａｒｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．４７：１３−２３，２０１７
【非特許文献６】Ｒｏｌｌｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  １１２：４５−５２，２００８
【非特許文献７】Ｔｅｆｆｅｒｉ，Ｎ．Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６１（１９）：１８７２−１８７５，２００９
【発明の概要】
【０００８】
本発明は、少なくとも部分的に、ＩＬ−１５部分の存在下におけるＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性ＩｇＧ抗体の投与が、ＣＬＥＣ１２Ａレベルを発現する細胞、例えば、骨髄性白血病細胞を特異的に標的化するＴ細胞の活性化を増強するという発見に基づく。この組み合わせは、ＣＬＥＣ１２Ａを発現するＡＭＬ芽球及び白血病性幹細胞を殺滅するように、免疫系、より具体的にはＴ細胞に指示し、したがって、現在承認されている治療法よりも、がん患者の予後の改善をもたらす標的化療法を提供する。
【０００９】
一態様では、対象においてＴ細胞を活性化する方法であって、対象に、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分を投与することを含む、方法が、提供される。
【００１０】
関連する態様では、対象におけるがんを処置する方法であって、対象に、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分を投与することを含む、方法が、提供される。
【００１１】
また、単一製剤又は別個の製剤において製剤化されたＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体とＩＬ−１５部分とを含む、医薬組成物及びキットも提供される。
【００１２】
加えて、
対象においてＴ細胞を活性化するのに使用するためのＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体であって、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、ＩＬ−１５部分と同時に、それとは別個に、又はそれと連続的に投与される、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体、
対象においてＴ細胞を活性化するための医薬の製造において使用するためのＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体であって、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、ＩＬ−１５部分と同時に、それとは別個に、又はそれと連続的に投与される、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体、
対象においてＴ細胞を活性化するのに同時、別個、又は連続的に使用するための組み合わせ調製物として、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分を含む、製品、
対象におけるがんの処置に使用するためのＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分が、提供される。
【００１３】
本開示のその他の特徴及び利点は、以下の発明を実施するための形態及び実施例から明らかとなるが、これらは、限定として解釈されるべきではない。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】示されるように試験したＩｇＧの存在下において、Ｅ：Ｔ比５：１でＨＬ−６０細胞と共培養した健常ドナーＴ細胞を用いた細胞毒性アッセイの結果を示す、棒グラフである。
【図２Ａ】Ｅ：Ｔ比１：１０で７２時間ＨＬ−６０細胞と共培養した健常ドナーＴ細胞を用いたＨＬ−６０細胞毒性アッセイにおける、ＰＢ９１２２ｐ０１により誘導されるＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化に対する、ＩＬ−１５の効果を示すグラフである。ＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化は、フローサイトメトリーによって定量化した。
【図２Ｂ】Ｅ：Ｔ比１：１０で７２時間ＨＬ−６０細胞と共培養した健常ドナーＴ細胞を用いたＨＬ−６０細胞毒性アッセイにおける、ＰＢ９１２２ｐ０１により誘導されるＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化に対する、ＩＬ−１５の効果を示すグラフである。ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化は、フローサイトメトリーによって定量化した。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
一態様では、対象においてＴ細胞を活性化する方法であって、対象に、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分を投与することを含む、方法が、提供される。いくつかの実施形態では、本方法は、ＣＬＥＣ１２Ａを発現する細胞に特異的に結合するＴ細胞を活性化する。関連する態様では、対象におけるがんを処置する方法であって、対象に、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分を投与することを含む、方法が、提供される。いくつかの実施形態では、がんは、ＣＬＥＣ１２Ａを発現するものである。
【００１６】
ＩＬ−１５部分は、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性ＩｇＧ抗体の存在下において、例えば、骨髄性白血病細胞の、ＣＬＥＣ１２Ａレベルを発現する細胞を標的とするＴ細胞の活性化を増強する。ＩＬ−１５部分は、例えば、ＡＭＬの場合、低頻度で存在し得るＴ細胞の生存を補助する。この組み合わせは、ＣＬＥＣ１２Ａを発現するＡＭＬ芽球及び白血病性幹細胞を殺滅するように、免疫系、より具体的にはＴ細胞に指示し、したがって、現在承認されている治療法よりも、がん患者の予後の改善をもたらす標的化療法を提供する。
【００１７】
本発明の方法では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−５部分を投与することにより、ＣＬＥＣ１２Ａを発現する細胞を特異的に標的化するようにＴ細胞を活性化することができる。ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−５部分を投与することにより、ＣＬＥＣ１２Ａを発現する細胞を特異的に標的化し、溶解するように、Ｔ細胞を活性化することができる。
【００１８】
本明細書に開示されるように、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分は、並行して、又はいずれかの順序で投与することができる。例えば、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分は、同時に、別個に、又は連続的に投与することができる。いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の投与は、ＩＬ−１５部分の投与の前に行われる。他の実施形態では、ＩＬ−１５部分の投与は、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の投与の前に行われる。他の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分の両方が、同時に投与される。
【００１９】
本明細書をより容易に理解することができるように、特定の用語を、まず定義する。更なる定義は、発明を実施するための形態全体に記載されている。別途記載されない限り、本明細書において使用される全ての技術用語及び科学用語は、当業者によって一般的に理解されているものと同じ意味を有し、免疫学、タンパク質化学、生化学、組み換えＤＮＡ技術、及び薬理学の従来の方法が用いられる。
【００２０】
本明細書において使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈によりそうでない旨が明確に指示されない限り、複数形の指示対象を含む。「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語、並びに「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、及び「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」などの他の形態の使用は、限定的ではない。
【００２１】
本明細書において使用される場合、「ＣＬＥＣ１２Ａ」という用語は、Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡを指す。ＣＬＥＣ１２Ａはまた、Ｃ型レクチンタンパク質ＣＬＬ−１；ＭＩＣＬ；樹状細胞関連レクチン２；Ｃ型レクチンスーパーファミリー；骨髄阻害性Ｃ型レクチン様受容体；Ｃ型レクチン様分子−１；ＤＣＡＬ２；ＣＬＬ１；Ｃ型レクチン様分子１；ＤＣＡＬ−２；キラー細胞レクチン様受容体サブファミリーＬ、メンバー１（Ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌ  ｌｅｃｔｉｎ  ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｕｂｆａｍｉｌｙ  Ｌ，ｍｅｍｂｅｒ  １、ＫＬＲＬ１）；ＣＤ３７１（分化のクラスター３７１）（Ｂａｋｋｅｒ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００４，６４，ｐ８８４３  ５０；ＧｅｎＢａｎｋ（商標）受託番号：ＡＹ５４７２９６；Ｚｈａｎｇ  Ｗ．ｅｔ  ａｌ．ＧｅｎＢａｎｋ（商標）受託番号：ＡＦ２４７７８８；Ａ．Ｓ．Ｍａｒｓｈａｌｌ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２００４，２７９，ｐ１４７９２−８０２；ＧｅｎＢａｎｋ（商標）受託番号：ＡＹ４９８５５０；Ｙ．Ｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  ２００４，１０４，ｐ２８５８  ６６；Ｈ．Ｆｌｏｙｄ，ｅｔ  ａｌ．ＧｅｎＢａｎｋ（商標）受託番号：ＡＹ４２６７５９；Ｃ．Ｈ．Ｃｈｅｎ，ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  ２００６，１０７，ｐ１４５９  ６７）とも称される。識別子：ＨＧＮＣ：３１７１３；Ｅｎｔｒｅｚ  Ｇｅｎｅ：１６０３６４；Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１７２３２２；ＯＭＩＭ：６１２０８８；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｑ５ＱＧＺ９。
【００２２】
ＣＬＥＣ１２Ａは、ＣＤ３４陰性又はＣＤ３４低発現の白血病性幹細胞（部分集団）を含め、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）（Ａ．Ｂ．Ｂａｋｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００４，６４，ｐ８４４３  ５０；Ｖａｎ  Ｒｈｅｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．２００７  Ｂｌｏｏｄ  １１０：２６５９；Ｍｏｓｈａｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２００８  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ  ２６：３０５９）、並びに骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）（Ｂａｋｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２００４，上記及びＴｏｆｆ−Ｐｅｔｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．１７５（３）：３９３−４０１，２０１６）において、白血病性芽球細胞及び白血病性幹細胞に発現される、抗原である。ＣＬＥＣ１２Ａの発現は、その他の点では、造血系の細胞、特に、末梢血及び骨髄における骨髄系統、すなわち、顆粒球、単球、及び樹状細胞前駆体に制限されると考えられている。より重要なことに、ＣＬＥＣ１２Ａは、正常な造血幹細胞には存在しない。本明細書においてＣＬＥＣ１２Ａに言及される場合、別途具体的に示されない限り、ヒトＣＬＥＣ１２Ａ（配列番号１）を指す。
【００２３】
「ＣＬＥＣ１２Ａ」という用語は、Ｂａｋｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００４，６４，ｐ８４４３−５０及びＭａｒｓｈａｌｌ  ２００４−Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７９（１５）、ｐ１４７９２−８０２に記載されているものを含め、骨髄発現プロファイル（表面発現レベル及びｍＲＮＡレベルの両方）を保持する、本明細書において言及される全てのバリアント（スプライス及び変異など）並びにそのアイソフォームを意味する。受託番号は、主に、同定の更なる方法として提供されるが、タンパク質の実際の配列は、例えば、いくつかのがんなどで生じるものなどのコード遺伝子における変異に起因して、変化し得る。
【００２４】
「ＣＤ３」（分化のクラスター３）という用語は、ＣＤ３γ鎖（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ  Ｐ０９６９３）、ＣＤ３δ鎖（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ  Ｐ０４２３４）、ＣＤ３ε鎖（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ  Ｐ０７７６６）、及びＣＤ３ゼータ鎖ホモ二量体（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ  Ｐ２０９６３）から構成される、タンパク質複合体を指す。ＣＤ３εは、様々な別名で知られており、そのうちのいくつかは、「ＣＤ３ｅ分子、イプシロン（ＣＤ３−ＴＣＲ複合体）」；「ＣＤ３ｅ抗原、イプシロンポリペプチド（ＴｉＴ３複合体）」；Ｔ細胞表面抗原Ｔ３／Ｌｅｕ−４イプシロン鎖；Ｔ３Ｅ；Ｔ細胞抗原受容体複合体、Ｔ３のイプシロンサブユニット；ＣＤ３ｅ抗原；ＣＤ３−イプシロン３；ＩＭＤ１８；ＴＣＲＥである。このＣＤ３Ｅ遺伝子の識別子は、ＨＧＮＣ：１６７４；Ｅｎｔｒｅｚ  Ｇｅｎｅ：９１６；Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１９８８５１；ＯＭＩＭ：１８６８３０；及びＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ０７７６６である。これらの鎖は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）及びζ鎖と会合して、Ｔリンパ球において活性化シグナルを生成する。ＴＣＲ、ζ鎖、及びＣＤ３分子が、一緒になって、ＴＣＲ複合体を構成する。ＣＤ３はＴ細胞上に発現される。本明細書においてＣＤ３に言及される場合、別途具体的に示されない限り、ヒトＣＤ３（配列番号２〜５）を指す。
【００２５】
「ＩＬ−１５」及び「ＩＬ−１５部分」という用語は、本明細書において互換可能に使用され、ＩＬ−１５の生物活性を有するペプチド又はタンパク質部分を指す。ＩＬ−１５又はＩＬ−１５部分は、天然のＩＬ−１５、典型的には、天然のヒトＩＬ−１５、並びにそれに実質的に相同な任意のタンパク質又はポリペプチドの生物活性を有し得る。この用語は、天然に、組み換えで、及び合成的に産生された部分、並びに例えば変異によって修飾されたペプチド及びタンパク質を含む。これらの用語はまた、追加のグリコシル化部位を有する類似体、カルボキシ末端に少なくとも１つ以上の追加のアミノ酸を有する類似体、及びＩＬ−１５断片も含む。
【００２６】
「ＩＬ−１５断片」という用語は、ＩＬ−１５部分の一部又は断片のアミノ酸配列を有し、ＩＬ−１５の生物活性を有する（したがって機能性断片である）、任意のタンパク質又はポリペプチドを意味する。断片には、ＩＬ−１５部分のタンパク質分解によって産生されるタンパク質又はポリペプチド、並びに当該技術分野において慣例的な方法による化学合成によって産生されるタンパク質又はポリペプチドが含まれる。
【００２７】
本明細書において使用される場合、「天然のＩＬ−１５」及び「天然のインターロイキン−１５」という用語は、未成熟又は前駆体及び成熟形態を含む、任意の天然に存在する哺乳動物インターロイキン−１５アミノ酸配列を指す。インターロイキン−１５（ＩＬ−１５）は、体内の多くの細胞によって産生される、リンホカインの４つのアルファ−ヘリックス束ファミリーのメンバーである。天然のＩＬ−１５は、自然免疫系及び適応免疫系の両方の活性を調節する際の中心的な役割、例えば、侵襲性病原体に対するメモリーＴ細胞応答の維持、アポトーシスの阻害、樹状細胞の活性化、並びにナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の増殖及び細胞毒性活性の誘導を果たす。様々な種の天然の哺乳動物インターロイキン−１５のアミノ酸配列のＧｅｎｅＢａｎｋ受託番号の非限定的な例としては、ＮＰ０００５７６（ヒト、未成熟形態）、ＣＡＡ６２６１６（ヒト、未成熟形態）、ＮＰ−−００１００９２０７（ネコ、未成熟形態）、ＡＡＢ９４５３６（クマネズミ、未成熟形態）、ＡＡＢ４１６９７（クマネズミ、未成熟形態）、ＮＰ−−０３２３８３（ハツカネズミ、未成熟形態）、ＡＡＲ１９０８０（イヌ）、ＡＡＢ６０３９８（アカゲザル、未成熟形態）、ＡＡＩ００９６４（ヒト、未成熟形態）、ＡＡＨ２３６９８（ハツカネズミ、未成熟形態）、及びＡＡＨ１８１４９（ヒト）が挙げられる。本明細書において天然のＩＬ−１５に言及される場合、別途具体的に示されない限り、ヒトＩＬ−１５（配列番号６）を指す。
【００２８】
ＩＬ−１５受容体は、タイプ特異的ＩＬ−１５受容体アルファ（「ＩＬ−１５Ｒａ」）、ＩＬ−２／ＩＬ−１５受容体−β（又はＣＤ１２２）、及び複数のサイトカイン受容体によって共有される共通γ鎖（又はＣＤ１３２）の３つのポリペプチドからなる。ＩＬ−１５シグナル伝達は、ＩＬ−１５Ｒａ、β、及びγのヘテロ二量体複合体を通じて、β及びγのヘテロ二量体複合体を通じて、又はマスト細胞上に見出されるサブユニットＩＬ−１５ＲＸを通じて、生じることが示されている。ＩＬ−１５受容体は、「天然のＩＬ−１５Ｒａ」及び「天然のインターロイキン−１５受容体アルファ」であり得、タンパク質又はポリペプチドの文脈において、未成熟又は前駆体及び成熟形態、並びに天然に存在するアイソフォームを含む、任意の天然に存在する哺乳動物インターロイキン−１５受容体アルファ（「ＩＬ−１５Ｒａ」）アミノ酸配列を指す。様々な天然の哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａのアミノ酸配列のＧｅｎｅＢａｎｋ受託番号の非限定的な例としては、ＮＰ＿００２１８０（ヒト）、ＡＢＫ４１４３８（アカゲザル）、ＮＰ＿０３２３８４（ハツカネズミ）、Ｑ６０８１９（ハツカネズミ）、ＣＡ１４１０８２（ヒト）挙げられる。本明細書においてＩＬ−１５Ｒａに言及される場合、別途具体的に示されない限り、成熟ヒトＩＬ−１５Ｒａ（配列番号７）、例えば、可溶性ヒトＩＬ−１５Ｒａ（配列番号８）を指す。
【００２９】
本明細書において使用される場合、「抗体」という用語は、抗原上のエピトープに結合する１つ以上のドメインを含む、タンパク質の免疫グロブリンクラスに属するタンパク質分子を意味し、そのようなドメインは、抗体の可変領域に由来するか又はそれと配列相同性を共有する。抗体は、典型的には、２つの重鎖及び２つの軽鎖をそれぞれ有する基本構造単位から作製される。治療用の抗体は、好ましくは、処置される対象の天然の抗体（例えば、ヒト対象についてはヒト抗体）に可能な限り近いものである。本発明による抗体は、任意の特定の形式又はそれを産生する方法に限定されない。
【００３０】
「二重特異性抗体」は、抗体の１つのドメインが第１の抗原に結合し、抗体の第２のドメインが第２の抗原に結合し、第１及び第２の抗原が同一ではない、本明細書に記載される抗体である。「二重特異性抗体」という用語はまた、１つの重鎖可変領域／軽鎖可変領域（ＶＨ／ＶＬ）の組み合わせが抗原上の第１のエピトープに結合し、第２のＶＨ／ＶＬの組み合わせが第２のエピトープに結合する、抗体も包含する。この用語は、ＶＨが、第１の抗原を特異的に認識することができ、免疫グロブリン可変領域においてＶＨと対合されたＶＬが、第２の抗原を特異的に認識することができる、抗体を更に含む。結果として得られるＶＨ／ＶＬ対は、抗原１又は抗原２のいずれかに結合する。そのような抗体は、例えば、国際公開第２００８／０２７２３６号、国際公開第２０１０／１０８１２７号、及びＳｃｈａｅｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ（Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２０，４７２−４８６，２０１１年１０月）に記載されている、「２種１体型（ｔｗｏ−ｉｎ−ｏｎｅ）抗体」と呼ばれる。本発明による二重特異性抗体は、任意の特定の二重特異性形態又はそれを産生する方法に限定されない。
【００３１】
本明細書において使用される場合、「共通軽鎖」という用語は、二重特異性抗体における２つの軽鎖（又はそのＶＬ部分）を指す。２つの軽鎖（又はそのＶＬ部分）は、同一であってもよく、又はいくつかのアミノ酸配列差を有してもよいが、完全長抗体の結合特異性は、影響を受けない。「共通軽鎖」、「共通ＶＬ」、「単一軽鎖」、「単一ＶＬ」という用語は、「再構成された」という用語が付加される場合もされない場合も、全てが本明細書において互換可能に使用される。「共通」はまた、アミノ酸配列が同一ではない軽鎖の機能的等価物も指す。機能的結合領域の形成に影響を及ぼさない変異（欠失、置換、挿入、及び／又は付加）が存在する、軽鎖の多くのバリアントが存在する。本発明の軽鎖はまた、０〜１０個、好ましくは、０〜５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有する、本明細書に示される軽鎖であってもよい。例えば、保存的アミノ酸変化、重鎖と対合した場合に結合特異性に寄与しないか若しくは部分的にしか寄与しない領域におけるアミノ酸の変化などを導入し、試験することによって、同一ではないが依然として機能的に同等である軽鎖を調製するか又は見出すことは、本明細書において使用される共通軽鎖の定義の範囲内である。
【００３２】
本発明による「完全長ＩｇＧ」又は「完全長抗体」という用語は、本質的に完全なＩｇＧを含むものとして定義されるが、必ずしもインタクトなＩｇＧの全ての機能を有するわけではない。誤解を避けるために、完全長ＩｇＧは、２つの重鎖及び２つの軽鎖を含む。それぞれの鎖は、定常（Ｃ）領域及び可変（Ｖ）領域を含み、これは、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＶＨ、及びＣＬ、ＶＬと表記されるドメインに分解することができる。ＩｇＧ抗体は、Ｆａｂ部分に含まれる可変領域ドメインを介して抗原に結合し、結合した後、定常ドメインを通じて、ほとんどがＦｃ部分を通じて、免疫系の分子及び細胞と相互作用することができる。本発明による完全長抗体は、所望の特性を提供する変異が存在し得るＩｇＧ分子を包含する。完全長ＩｇＧは、領域のうちのいずれの実質的な部分の欠失も有するべきではない。しかしながら、得られるＩｇＧ分子の結合特性を本質的に変化させることなく、１つ又はいくつかのアミノ酸残基が欠失されたＩｇＧ分子は、「完全長ＩｇＧ」という用語に包含される。例えば、そのようなＩｇＧ分子は、好ましくは非ＣＤＲ領域に、１〜１０個のアミノ酸残基の欠失を有してもよく、その場合、欠失されるアミノ酸は、ＩｇＧの抗原又はエピトープ結合特異性に必須ではない。
【００３３】
本明細書においてアミノ酸配列について言及される「同一性パーセント（％）」は、最適な比較の目的で配列をアライメントした後に、選択された配列におけるアミノ酸残基と同一である、候補配列におけるアミノ酸残基の割合として定義される。２つの配列間のアライメントを最適化するために、比較される２つの配列のうちのいずれかに、ギャップを導入してもよい。そのようなアライメントは、比較される配列の全長にわたって行われ得る。あるいは、アライメントは、より短い長さ、例えば、約２０個、約５０個、約１００個、又はそれ以上の核酸／塩基又はアミノ酸にわたって行われてもよい。配列同一性は、報告されたアライメント領域にわたる２つの配列間の同一なマッチの割合である。
【００３４】
２つの配列間における配列の比較及び配列同一性の割合の判定は、数学的アルゴリズムを使用して達成することができる。当業者であれば、２つの配列をアライメントし、２つの配列間の同一性を判定するために、いくつかの異なるコンピュータプログラムが利用可能であるという事実を認識するであろう（Ｋｒｕｓｋａｌ，Ｊ．Ｂ．（１９８３）Ａｎ  ｏｖｅｒｖｉｅｗ  ｏｆ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  Ｉｎ  Ｄ．Ｓａｎｋｏｆｆ  ａｎｄ  Ｊ．Ｂ．Ｋｒｕｓｋａｌ，（ｅｄ．），Ｔｉｍｅ  ｗａｒｐｓ，ｓｔｒｉｎｇ  ｅｄｉｔｓ  ａｎｄ  ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ：ｔｈｅ  ｔｈｅｏｒｙ  ａｎｄ  ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ，ｐｐ．１−４４  Ａｄｄｉｓｏｎ  Ｗｅｓｌｅｙ）。２つのアミノ酸配列又は核酸配列間の配列同一性パーセントは、２つの配列のアライメントのためのＮｅｅｄｌｅｍａｎ及びＷｕｎｓｃｈアルゴリズムを使用して判定されてもよい。（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ，Ｓ．Ｂ．ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，Ｃ．Ｄ．（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８，４４３−４５３）。Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズムは、コンピュータプログラムＮＥＥＤＬＥにおいて実装されている。本発明の目的で、ＥＭＢＯＳＳパッケージからのＮＥＥＤＬＥプログラムを使用して、アミノ酸及び核酸配列の同一性パーセントを判定することができる（バージョン２．８．０以上、ＥＭＢＯＳＳ：Ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｏｐｅｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｓｕｉｔｅ（２０００）Ｒｉｃｅ，Ｐ．ＬｏｎｇｄｅｎＪ．ａｎｄ  Ｂｌｅａｓｂｙ，Ａ．Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １６，（６）ｐｐ２７６−２７７，ｈｔｔｐ：／／ｅｍｂｏｓｓ．ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．ｎｌ／）。タンパク質配列については、ＥＢＬＯＳＵＭ６２が、置換マトリックスに使用される。ＤＮＡ配列については、ＤＮＡＦＵＬＬが使用される。使用されるパラメータは、ギャップオープンペナルティ１０及びギャップ伸長ペナルティ０．５である。
【００３５】
上述のようにプログラムＮＥＥＤＬＥによってアライメントした後、クエリ配列と本発明の配列との間の配列同一性の割合は、以下のように計算される。アライメントにおけるギャップの総数を減算した後に、両方の配列における同一なアミノ酸又は同一なヌクレオチドを示すアライメントにおける対応する位置の数を、アライメントの全長で除す。
【００３６】
抗体は、典型的に、抗原のエピトープを認識し、そのようなエピトープは、他の化合物中にも同様に存在し得るため、抗原、例えば、ＣＬＥＣ１２Ａ又はＣＤ３を「特異的に認識する」本発明による抗体は、他の化合物が同じ種類のエピトープを含む場合に、そのような他の化合物も同様に認識し得る。したがって、抗原及び抗体の相互作用に関して「特異的に認識する」という用語は、同じ種類のエピトープを含む他の化合物への抗体の結合を排除するものではない。
【００３７】
「エピトープ」又は「抗原決定基」という用語は、免疫グロブリン又は抗体が特異的に結合する抗原上の部位を指す。エピトープは、連続的なアミノ酸、又はタンパク質の３次折り畳みによって並置された非連続的なアミノ酸の両方から形成され得る（いわゆる線形エピトープ及び立体構造エピトープ）。連続的な線形アミノ酸から形成されるエピトープは、典型的に、変性溶媒に曝露された場合に保持されるが、３次折り畳みによって形成されるエピトープは、典型的に、変性溶媒での処置で失われる。エピトープは、典型的に、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸を固有の空間構造で含み得る。エピトープの空間構造を判定する方法は、当業者に既知であり、これには、当該技術分野における技法、例えば、エピトープの性質に応じて、Ｘ線結晶構造解析、ＨＤＸ−ＭＳ、及び２次元核磁気共鳴、ペプスキャン、及びアラニンスキャニングが含まれる（例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６，Ｇ．Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．（１９９６）を参照されたい）。
【００３８】
「異常細胞」という用語は、本明細書において使用される場合、腫瘍細胞、より具体的には、造血系起源の腫瘍細胞を含み、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）を引き起こす細胞などの前白血病細胞、及び急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）腫瘍細胞又は慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞などの白血病細胞も含む。
【００３９】
「免疫エフェクター細胞」又は「エフェクター細胞」という用語は、本明細書において使用される場合、活性化されると標的細胞の生存に影響を及ぼし得る、哺乳動物の免疫系における天然の細胞レパートリー内の細胞を指す。免疫エフェクター細胞としては、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、細胞傷害性Ｔ細胞を含むＴ細胞、又はＢ細胞などのリンパ系の細胞、単球又はマクロファージ、樹状細胞、及び好中球性顆粒球などの骨髄系の細胞が挙げられる。したがって、エフェクター細胞は、好ましくは、ＮＫ細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、マクロファージ、樹状細胞、又は好中球性顆粒球である。異常細胞へのエフェクター細胞の動員は、エフェクター細胞が異常細胞を直接的に殺滅させるか、又は殺滅を間接的に開始することができるように、免疫エフェクター細胞を、異常標的細胞に近接した状態にすることを意味する。
【００４０】
本明細書において使用される場合、「対象」及び「患者」という用語は、互換可能に使用され、ヒト、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウサギ、ネコ、イヌ、サル、ウシ、ウマ、ブタなどの哺乳動物（例えば、がんを有する患者、例えば、ヒト患者）を指す。
【００４１】
本明細書において使用される場合、「処置する（ｔｒｅａｔ）」、「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、及び「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は、疾患と関連する症状、併発症、状態、若しくは生化学的兆候の進行、発達、重症度、若しくは再発を逆転、緩和、改善、阻害、若しくは遅延、若しくは予防する目的で行われる任意の種類の介入若しくはプロセス、又はそれらの目的で活性剤若しくは活性剤の組み合わせを対象に投与することを指す。
【００４２】
本明細書において使用される場合、「有効な処置」又は「肯定的な治療応答」は、有益な効果、例えば、疾患又は障害、例えば、がんの少なくとも１つの症状の改善をもたらす処置を指す。有益な効果は、本方法による治療法の開始前に行われた測定又は観察からの改善を含む、ベースラインからの改善の形態をとることができる。例えば、有益な効果は、疾患の臨床症状若しくは診断症状又はがんのマーカーの減少又は排除によって証明されるように、任意の臨床ステージにある対象におけるがんの進行の遅延、安定化、停止、又は逆転の形態をとることができる。有効な処置は、例えば、がん細胞の数を低減させる、腫瘍サイズ若しくは腫瘍細胞の数を減少させる、循環腫瘍細胞の存在を減少させる、腫瘍の転移を低減若しくは予防する、腫瘍成長を遅延若しくは停止させる、及び／又は腫瘍の再発生若しくは再発を予防若しくは遅延することができる。
【００４３】
「有効量」又は「治療有効量」という用語は、所望される生物学的、治療的、及び／又は予防的結果を提供する薬剤又は薬剤の組み合わせの量を指す。その結果は、疾患の兆候、症状、若しくは原因のうちの１つ以上の低減、改善、緩和（ｐａｌｌｉａｔｉｏｎ）、軽減、遅延、及び／若しくは緩和（ａｌｌｅｖｉａｔｉｏｎ）、又は生物系の任意の他の所望される変化であり得る。いくつかの実施形態では、有効量は、腫瘍の発達を遅延させるのに十分な量である。いくつかの実施形態では、有効量は、腫瘍再発を予防又は遅延させるのに十分な量である。有効量は、１回以上の投与で投与することができる。薬物又は組成物の有効量は、（ｉ）がん細胞の数を減少させ得る、（ｉｉ）腫瘍サイズを減少させ得る、（ｉｉｉ）末梢臓器へのがん細胞浸潤をある程度阻害、遅延、遅延し、停止させ得る、（ｉｖ）腫瘍転移を阻害し得る、（ｖ）腫瘍成長を阻害し得る、（ｖｉ）腫瘍の発生及び／若しくは再発を予防若しくは遅延させ得る、並びに／又は（ｖｉｉ）がんに関連する症状のうちの１つ以上を緩和し得る。一実施例では、「有効量」は、急性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、又は慢性骨髄性白血病などのがんの減少（例えば、がん細胞の数の減少）又はがんの進行の遅延をもたらす、組み合わせでのＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分の量である。有効量の組み合わせ治療薬は、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体とＩＬ−１５部分との組み合わせを指す「有効レジメン」で、本明細書に記載される方法に従って投与され、投与の順序及び投薬頻度は、処置をもたらすのに適したものである。
【００４４】
本明細書において使用される場合、「相乗性」、「治療的相乗性」、及び「相乗作用」という用語は、治療剤の組み合わせ（例えば、ＩＬ−１５部分と組み合わせたＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体）での患者の処置が、組み合わせのうちのそれぞれ個別の構成要素を単独で使用した場合に達成される結果よりも治療上優れた結果を示す、現象を指す（例えば、Ｔ．Ｈ．Ｃｏｒｂｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９８２，Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｒｅｐｏｒｔｓ，６６，１１８７を参照されたい）。この文脈において、治療上優れた結果は、以下のうちの１つ以上を含む（ａ）組み合わせと同じ投与量におけるそれぞれの薬剤単独による別々の効果の合計を上回る、治療応答の増加、（ｂ）治療有効性の減少を伴わない、組み合わせ内の１つ以上の薬剤の投与量の減少、（ｃ）組み合わせと同じ用量におけるそれぞれの薬剤の単剤療法以上の治療上の利益を受けながらの、有害事象の発生率の減少、（ｄ）それぞれの薬剤の単剤療法を上回る治療上の利益を受けながらの、用量制限毒性の低減、（ｅ）薬物耐性の誘導の遅延又は最小化。異種移植片モデルにおいて、構成成分のそれぞれが、その個々の最大耐容量を超えない投与量で存在する、その最大耐容量で使用される組み合わせは、組み合わせの投与によって達成される腫瘍成長の減少が、構成成分を単独で投与した場合の最良の構成成分による腫瘍成長の減少の値よりも大きい場合、治療的相乗性を示す。薬物の組み合わせの相乗作用は、例えば、Ｃｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙ（Ｃｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇｕｌ．１９８４；２２：２７−５５；Ｃｈｏｕ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１０；７０（２）：４４０−４４６）の組み合わせ指数（ＣＩ）定理に従って決定することができる。
【００４５】
「再発」又は「再発生」又は「復活」は、本明細書において互換可能に使用され、改善又は応答の期間の後の、がんの回復、又は回復の兆候及び症状の放射線による診断を指す。
【００４６】
ＩＩ．ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体
本明細書に開示されるように、本明細書に提供される方法において使用するための二重特異性抗体としては、ＣＬＥＣ１２Ａに結合する１つの重鎖可変領域／軽鎖可変領域（ＶＨ／ＶＬ）の組み合わせと、ＣＤ３に結合するその第２のＶＨ／ＶＬの組み合わせとを含む、二重特異性抗体が挙げられる。
【００４７】
抗原結合領域
ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体において使用するのに好適なＣＬＥＣ１２Ａ重鎖可変（ＶＨ）領域としては、ＣＬＥＣ１２Ａに結合するものが挙げられる。好ましい実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体のＣＬＥＣ１２Ａ  ＶＨ領域は、腫瘍細胞上に発現されるＣＬＥＣ１２Ａに結合する。ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体において使用するための例示的なＣＬＥＣ１２Ａ  ＶＨ領域は、例えば、国際公開第２０１７／０１０８７４号、同第２０１４／０５１４３３号、及び同第２００５／０００８９４号（これらのそれぞれは、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている。
【００４８】
いくつかの実施形態では、腫瘍細胞上のＣＬＥＣ１２Ａに対するＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の結合親和性は、ＣＤ３への結合の親和性よりも、少なくとも２倍、４倍、６倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、又は５０倍高い。特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａに対するＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体のＣＬＥＣ１２Ａ結合親和性は、約１×１０−６Ｍ〜１×１０−１０Ｍ、約１×１０−７Ｍ〜１×１０−１０Ｍ、又は約１×１０−８〜１×１０−１０である。いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａに対するＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体のＣＬＥＣ１２Ａ結合親和性は、少なくとも１×１０−８Ｍ、好ましくは少なくとも１×１０−９Ｍである。特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａに対するＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の結合親和性は、例えば、約２×１０−９Ｍ、約３×１０−９Ｍ、約４×１０−９Ｍ、約５×１０−９Ｍ、約６×１０−９Ｍ、約７×１０−９Ｍ、８×１０−９Ｍ、又は約９×１０−９Ｍを含め、約１×１０−８Ｍ〜１×１０−９Ｍであり、ＣＤ３に対するＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の結合親和性は、少なくとも３０倍低い、少なくとも４０倍低い、又は少なくとも５０倍低い。
【００４９】
特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体のＣＤ３  ＶＨ領域は、マウス抗ＣＤ３抗体、ｍＯＫＴ３の親和性より有意に低い親和性（ＫＤ）で、ヒトＴ細胞株の細胞表面に発現されるＣＤ３／ＴＣＲに結合する。いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体のＣＤ３  ＶＨ領域は、少なくとも１×１０−６Ｍの結合親和性で、ＣＤ３に結合する。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体のＣＤ３結合親和性は、約１×１０−６Ｍ〜１×１０−１０Ｍである。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体のＣＤ３  ＶＨ領域のＣＤ３結合親和性は、約１×１０−７Ｍ〜１×１０−８Ｍである。
【００５０】
いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに結合する第１の重鎖可変領域を含み、ここで、重鎖可変領域は、
（ａ）アミノ酸配列ＳＧＹＴＦＴＧＹ（配列番号９）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＩＮＰＳＧＧＳ（配列番号１０）を含む重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＧＴＴＧＤＷＦＤＹ（配列番号１１）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｂ）アミノ酸配列ＳＧＹＴＦＴＳＹ（配列番号１３）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＩＮＰＳＧＧＳ（配列番号１４）を含む重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＧＮＹＧＤＥＦＤＹ（配列番号１５）を含む重鎖ＣＤＲ３、又は
（ｃ）アミノ酸配列ＳＧＹＴＦＴＧＹ（配列番号１７）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＷＩＮＰＮＳＧＧ（配列番号１８）を含む重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＤＧＹＦＡＤＡＦＤＹ（配列番号１９）を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。
【００５１】
同じ種類の結合活性を保持しながら（本質的に同等なのであって、その量は必ずしも同等ではない）、列挙されるＣＤＲ配列からの１つ、２つ、又は３つのアミノ酸残基の保存的変更が、許容される。したがって、重鎖ＣＤＲ  １、２、及び３の配列は、好ましくは、列挙されたＣＤＲ配列から３つ以下、好ましくは２つ以下、より好ましくは１つ以下のアミノ酸が異なっている配列を含む。特定の実施形態では、重鎖ＣＤＲ  １、２、及び３の配列は、列挙されたＣＤＲ配列と同一である。
【００５２】
いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに結合する重鎖可変領域を含み、ここで、この重鎖可変領域は、配列番号１２、１６、又は２０に示されるＶＨ領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む。
【００５３】
いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに結合する重鎖可変領域を含み、ここで、この重鎖可変領域は、配列番号１２、１６、又は２０に示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９７％、より好ましくは少なくとも９８％、より好ましくは少なくとも９９％同一であるか、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む。
【００５４】
いくつかの実施形態では、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに結合する二重特異性抗体の重鎖可変領域は、重鎖可変領域の３つのＣＤＲ配列の外側の配列において、０〜１０個、好ましくは０〜５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有し得る。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は、示されるアミノ酸配列に対して、０〜９個、０〜８個、０〜７個、０〜６個、０〜５個、０〜４個、好ましくは０〜３個、好ましくは０〜２個、好ましくは０〜１個、好ましくは０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを含む。
【００５５】
特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに結合する重鎖可変領域を含み、ここで、この重鎖可変領域は、配列番号１２、１６、及び２０から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００５６】
ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体において使用するのに好適なＣＤ３重鎖可変（ＶＨ）領域としては、ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖、ＣＤ３ε鎖、又はＣＤ３δ／ＣＤ３ε若しくはＣＤ３γ／ＣＤ３εの組み合わせに結合することができるものが挙げられる。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体のＣＤ３  ＶＨ領域は、ＣＤ３ε鎖に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３  ＶＨ領域は、ヒトＣＤ３に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３  ＶＨ領域は、ヒトＣＤ３ε鎖に結合する。
【００５７】
ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体において使用するための例示的なＣＤ３結合領域は、国際公開第２０１７／０１０８７４号、同第２０１４／０５１４３３号、及び同第２００５／１１８６３５号（これらのそれぞれは、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている。
【００５８】
特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ＣＤ３に結合する重鎖可変領域を含み、ここで、この重鎖可変領域は、
（ａ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＮＧＲＫＱ（配列番号２２）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｂ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＳＧＳＫＫＮ（配列番号３０）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｃ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＨＧＲＫＱ（配列番号３２）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｄ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＨＡＲＫＱ（配列番号３４）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｅ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＮＡＲＫＱ（配列番号３６）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｇ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＮＴＲＫＱ（配列番号４５）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｈ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＤＧＫＮＴ（配列番号４７）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｉ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＧＹＧ（配列番号６２）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＹＹＤＧＳＲＴ（配列番号４９）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、又は
（ｊ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＫＹＧ（配列番号６３）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＨＤＧＲＫＴ（配列番号５１）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。
【００５９】
アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含むＣＤＲ１は、ＩＭＧＴに従って定義される。ＣＤＲ１は、Ｋａｂａｔに従って定義されるアミノ酸配列ＳＹＧＭＨ（配列番号６０）を含み得る。
【００６０】
同じ種類の結合活性を保持しながら（本質的に同等なのであって、その量は必ずしも同等ではない）、列挙されるＣＤＲ配列からの１つ、２つ、又は３つのアミノ酸残基の変更が、許容される。したがって、重鎖ＣＤＲ  １、２、及び３の配列は、好ましくは、列挙されたＣＤＲ配列から３つ以下、好ましくは２つ以下、より好ましくは１つ以下のアミノ酸が異なっている配列を含む。特定の実施形態では、重鎖ＣＤＲ  １、２、及び３の配列は、列挙されたＣＤＲ配列と同一である。
【００６１】
いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ヒトＣＤ３に結合する重鎖可変領域を含み、ここで、この重鎖可変領域は、配列番号２４〜２９、３１、３３、３５、３７〜４４、４６、４８、５０、及び５２に示されるＶＨ領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む。
【００６２】
いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ヒトＣＤ３に結合する重鎖可変領域を含み、ここで、この重鎖可変領域は、配列番号２４〜２９、３１、３３、３５、３７〜４４、４６、４８、５０、及び５２に示されるＶＨ領域配列のうちの１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９７％、より好ましくは少なくとも９８％、より好ましくは少なくとも９９％同一であるか、又は１００％同一であるものを含む。
【００６３】
特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ヒトＣＤ３に結合する重鎖可変領域を含み、ここで、この重鎖可変領域は、配列番号３７〜４４に示される配列ＶＨ領域のうちの１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９７％、より好ましくは少なくとも９８％、より好ましくは少なくとも９９％同一であるか、又は１００％同一であるものを含む。
【００６４】
いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ３に結合する二重特異性抗体の重鎖可変領域は、重鎖可変領域の３つのＣＤＲ配列の外側の配列において、０〜１０個、好ましくは０〜５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有し得る。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は、示されるアミノ酸配列に対して、０〜９個、０〜８個、０〜７個、０〜６個、０〜５個、０〜４個、好ましくは０〜３個、好ましくは０〜２個、好ましくは０〜１個、好ましくは０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを含む。
【００６５】
ＣＬＥＣ１２Ａ又はＣＤ３結合を保持する、開示されるアミノ酸配列の更なるバリアントは、これまでに記載されているように（例えば、米国特許出願公開第２０１６／０３６８９８８号）、例えば、再構成されたヒトＩＧＫＶｌ−３９／ＩＧＫＪｌ  ＶＬ領域（Ｄｅ  Ｋｒｕｉｆ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ．２０１０（１０６）７４１−５０））を含むファージディスプレイライブラリー、及び本明細書に開示されるＣＬＥＣ１２Ａ又はＣＤ３  ＶＨ領域のアミノ酸配列にアミノ酸置換を組み込んだＶＨ領域の集合から、得ることができる。ＣＬＥＣ１２Ａ又はＣＤ３に結合するＦａｂ領域をコードするファージを選択し、フローサイトメトリーによって分析し、シーケンシングして、抗原結合を保持するアミノ酸置換、挿入、欠失、又は付加を有するバリアントを特定することができる。例えば、米国特許出願公開第２０１６／０３６８９８８号に記載されるように、ＣＤ３  ＶＨ領域は、Ａ５０位において置換されてもよく、Ｓ、Ｙ、Ｍ、又はＱによって修飾されてもよく、Ｄ５９は、Ｌ、Ｉ、Ｖ、Ｆ、Ｒ、Ａ、Ｎ、Ｈ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、又はＥ、好ましくはＹ又はＥによって置換されてもよく、Ａ６１は、Ｎ、Ｉ、Ｈ、Ｑ、Ｌ、Ｒ、Ｙ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｄ、Ｋ、Ｖによって置換されてもよく、Ｆ１０５は、Ｙ又はＭによって置換されてもよい。許容されるアミノ酸置換は、保管後、実施例５Ａに記載されている方法をＣＩＥＸ−ＨＰＬＣとともに使用して、容易に見出すことができる。
【００６６】
特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ヒトＣＤ３に結合する重鎖可変領域を含み、ここで、この重鎖可変領域は、配列番号２４〜２９、３１、３３、３５、３７〜４４、４６、４８、５０、又は５２から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００６７】
特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ヒトＣＤ３に結合する重鎖可変領域を含み、ここで、この重鎖可変領域は、配列番号３７〜４４から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００６８】
特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに結合する第１の重鎖可変領域と、ヒトＣＤ３に結合する第２の重鎖可変領域とを含み、ここで、第１のＶＨ領域は、配列番号１２、１６、及び２０に示されるＶＨ領域のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９７％、より好ましくは少なくとも９８％、より好ましくは少なくとも９９％同一であるか、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含み、第２のＶＨ領域は、配列番号３７〜４４に示されるＶＨ領域配列のうちの１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９７％、より好ましくは少なくとも９８％、より好ましくは少なくとも９９％同一であるか、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む。
【００６９】
特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに結合する第１の重鎖可変領域と、ヒトＣＤ３に結合する第２の重鎖可変領域とを含み、ここで、
（ａ）第１の重鎖可変領域は、
（ｉ）アミノ酸配列ＳＧＹＴＦＴＧＹ（配列番号９）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＩＮＰＳＧＧＳ（配列番号１０）を含む重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＧＴＴＧＤＷＦＤＹ（配列番号１１）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｉｉ）アミノ酸配列ＳＧＹＴＦＴＳＹ（配列番号１３）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＩＮＰＳＧＧＳ（配列番号１４）を含む重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＧＮＹＧＤＥＦＤＹ（配列番号１５）を含む重鎖ＣＤＲ３、又は
（ｉｉｉ）アミノ酸配列ＳＧＹＴＦＴＧＹ（配列番号１７）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＷＩＮＰＮＳＧＧ（配列番号１８）を含む重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＤＧＹＦＡＤＡＦＤＹ（配列番号１９）を含む重鎖ＣＤＲ３を含み、
（ｂ）第２の重鎖可変領域は、
（ｉ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＮＧＲＫＱ（配列番号２２）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｉｉ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＳＧＳＫＫＮ（配列番号３０）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｉｉｉ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＨＧＲＫＱ（配列番号３２）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｉｖ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＨＡＲＫＱ（配列番号３４）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｖ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＮＡＲＫＱ（配列番号３６）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｖｉ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＮＴＲＫＱ（配列番号４５）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｖｉｉ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＤＧＫＮＴ（配列番号４７）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｖｉｉｉ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＧＹＧ（配列番号６２）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＹＹＤＧＳＲＴ（配列番号４９）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、又は
（ｉｘ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＫＹＧ（配列番号６３）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＨＤＧＲＫＴ（配列番号５１）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。
【００７０】
特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに結合する第１の重鎖可変領域と、第２の重鎖可変領域とを含み、ここで、第１のＶＨ領域は、アミノ酸配列ＳＧＹＴＦＴＧＹ（配列番号９）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＩＮＰＳＧＧＳ（配列番号１０）を含む重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＧＴＴＧＤＷＦＤＹ（配列番号１１）を含む重鎖ＣＤＲ３を含み、第２のＶＨ領域は、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＮＡＲＫＱ（配列番号３６）を含む重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。
【００７１】
特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに結合する第１の重鎖可変領域と、ヒトＣＤ３に結合する第２の重鎖可変領域とを含み、ここで、第１のＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１２、１６、及び２０から選択され、第２のＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号２４〜２９、３１、３３、３５、３７〜４４、４６、４８、５０、及び５２から選択される。
【００７２】
特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに結合する第１の重鎖可変領域と、ヒトＣＤ３に結合する第２の重鎖可変領域とを含み、ここで、第１のＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１２であり、第２のＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３７〜４４から選択される。
【００７３】
一実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに結合する第１の重鎖可変領域と、ヒトに結合する第２の重鎖可変領域とを含み、ここで、第１のＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１２に記載されており、第２のＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３７に記載されている。
【００７４】
軽鎖可変領域
ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体のＶＨ／ＶＬ  ＣＬＥＣ１２Ａ結合領域及びＣＤ３結合領域のＶＨ／ＶＬ結合領域の軽鎖可変領域は、親ＣＬＥＣ１２Ａ単一特異性抗体のＶＬ領域及び／若しくは親ＣＤ３単一特異性抗体のＶＬ領域と同じであってもよく、又は二重特異性抗体がＣＬＥＣ１２Ａ及びＣＤ３抗原の両方への結合を保持する限り、代替的なＶＬ領域が、一方若しくは両方のＶＨ／ＶＬ領域の組み合わせに使用されてもよい。
【００７５】
いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体のＶＨ／ＶＬ  ＣＬＥＣ１２Ａ結合領域のＶＬ領域は、ＶＨ／ＶＬ  ＣＤ３結合領域のＶＬ領域と類似である。特定の実施形態では、第１及び第２のＶＨ／ＶＬ領域の組み合わせにおけるＶＬ領域は、同一である。
【００７６】
特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の一方又は両方のＶＨ／ＶＬ結合領域の軽鎖可変領域は、共通軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、一方又は両方のＶＨ／ＶＬ結合領域の共通軽鎖可変領域は、生殖系列Ｏ１２可変領域Ｖセグメントを含む。特定の実施形態では、一方又は両方のＶＨ／ＶＬ結合領域の軽鎖可変領域は、カッパ軽鎖ＶセグメントＩｇＶκ１−３９＊０１を含む。ＩｇＶκ１−３９は、免疫グロブリン可変カッパ１−３９遺伝子の短縮形である。この遺伝子はまた、免疫グロブリンカッパ可変１−３９、ＩＧＫＶ１３９、ＩＧＫＶ１−３９、Ｏ１２ａ、又はＯ１２としても知られている。この遺伝因子についての外部識別子は、ＨＧＮＣ：５７４０、Ｅｎｔｒｅｚ  Ｇｅｎｅ：２８９３０、Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００２４２３７１である。Ｖ領域のアミノ酸配列は、配列番号５６に提供される。Ｖ領域は、５つのＪ領域のうちの１つと組み合わせることができる。好ましいＪ領域は、ｊｋ１及びｊｋ５であり、合わせた配列は、ＩＧＫＶ１−３９／ｊｋ１及びＩＧＫＶ１−３９／ｊｋ５として示され、代替名は、ＩｇＶκ１−３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１又はＩｇＶκ１−３９＊０１／ＩＧＪκ５＊０１である（ＩＭＧＴデータベースのワールドワイドウェブｉｍｇｔ．ｏｒｇによる命名法）。特定の実施形態では、一方又は両方のＶＨ／ＶＬ結合領域の軽鎖可変領域は、カッパ軽鎖ＩｇＶκ１−３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１又はＩｇＶκ１−３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０５（それぞれ、配列番号５７及び配列番号５８）を含む。
【００７７】
いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の一方又は両方のＶＨ／ＶＬ結合領域の軽鎖可変領域は、アミノ酸配列ＱＳＩＳＳＹ（配列番号５３）を含むＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＡＡＳを含むＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＱＱＳＹＳＴＰ（配列番号５５）を含むＬＣＤＲ３（すなわち、ＩＭＧＴによるＩＧＫＶ１−３９のＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の一方又は両方のＶＨ／ＶＬ結合領域の軽鎖可変領域は、アミノ酸配列ＱＳＩＳＳＹ（配列番号５３）を含むＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＡＡＳＬＱＳ（配列番号５４）を含むＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＱＱＳＹＳＴＰ（配列番号５５）を含むＬＣＤＲ３を含む。
【００７８】
いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の一方又は両方のＶＨ／ＶＬ結合領域は、配列番号５７に示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９７％、より好ましくは少なくとも９８％、より好ましくは少なくとも９９％同一であるか、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の一方又は両方のＶＨ／ＶＬ結合領域は、配列番号５８に示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９７％、より好ましくは少なくとも９８％、より好ましくは少なくとも９９％同一であるか、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。
【００７９】
例えば、いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の一方又は両方のＶＨ／ＶＬ結合領域の可変軽鎖は、配列番号５７又は配列番号５８に対して、０〜１０個、好ましくは０〜５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有し得る。いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の一方又は両方のＶＨ／ＶＬ結合領域の軽鎖可変領域は、示されるアミノ酸配列に対して、０〜９個、０〜８個、０〜７個、０〜６個、０〜５個、０〜４個、好ましくは０〜３個、好ましくは０〜２個、好ましくは０〜１個、好ましくは０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを含む。
【００８０】
他の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の一方又は両方のＶＨ／ＶＬ結合領域の軽鎖可変領域は、配列番号５７又は配列番号５８のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の両方のＶＨ／ＶＬ結合領域は、同一のＶＬ領域を含む。一実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の両方のＶＨ／ＶＬ結合領域のＶＬは、配列番号５７に示されるアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の両方のＶＨ／ＶＬ結合領域のＶＬは、配列番号５８に示されるアミノ酸配列を含む。
【００８１】
二重特異性形式
本明細書に開示される方法において使用するためのＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、いくつかの形式で提供され得る。二重特異性抗体の多数の異なる形式が、当該技術分野において既知であり、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ（Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  Ｔｏｄａｙ，２０１５  Ｊｕｌ；２０（７）：８３８−４７；ＭＡｂｓ，２０１２  Ｍａｒ−Ａｐｒ；４（２）：１８２−９７）及びＳｐｉｅｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，（Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｆｏｒｍａｔｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１５）、ｈｔｔｐ：／／ｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｍｏｌｉｍｍ．２０１５．０１．００３）によって考察されており、これらは、それぞれ、参照により本明細書に組み込まれる。例えば、２つのＶＨ／ＶＬの組み合わせを有する古典的な抗体ではない二重特異性抗体形式は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、少なくとも１つの可変ドメインを有する。この可変ドメインが、第２の結合活性を提供する一本鎖Ｆｖ断片、モノボディ、ＶＨ、及びＦａｂ断片に連結され得る。
【００８２】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法において使用されるＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、一般に、ヒトＩｇＧサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）のものである。特定の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ１サブクラスのものである。完全長ＩｇＧ抗体が、それらの好ましい半減期のため、及び低免疫原性の理由から、好ましい。したがって、特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、完全長ＩｇＧ分子である。ある実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、完全長ＩｇＧ１分子である。
【００８３】
したがって、特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、結晶化断片（Ｆｃ）を含む。ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体のＦｃは、ヒト定常領域から構成されることが好ましい。ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の定常領域又はＦｃは、天然に存在するヒト抗体の定常領域との、１つ以上、好ましくは１０個以下、好ましくは５個以下のアミノ酸の違いを含み得る。例えば、特定の実施形態では、二重特異性抗体のそれぞれのＦａｂアームは、二重特異性抗体の形成を促進する修飾、Ｆｃにより媒介されるエフェクター機能に影響を及ぼす修飾、及び／又は本明細書に記載される他の特徴を含む、Ｆｃ領域を更に含んでもよい。
【００８４】
好ましい実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性完全長ＩｇＧ抗体は、二重特異性ＩｇＧ抗体とＦｃガンマ（Ｆｃγ）受容体との相互作用が低減されるように、変異した下方ヒンジ及び／又はＣＨ２ドメインを有する。本明細書において使用される場合、「二重特異性ＩｇＧ抗体とＦｃガンマ受容体との相互作用が低減されるように」という用語は、かかるＦｃガンマ受容体が抗体の近傍に存在する場合に、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体とＦｃガンマ受容体との相互作用が低減されることを意味する。特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体とＦｃ受容体との相互作用は、本質的に消滅される。低減されたＦｃγ受容体結合を有する二重特異性抗体は、以前に説明されている（米国特許出願公開第２０１４／０１２００９６号、参照により本明細書に組み込まれる）。
【００８５】
特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、アミノ酸２３５位及び／又は２３６位（ＥＵ番号付け）に少なくとも１つの置換を有する変異した下方ヒンジ及び／又はＣＨ２ドメインを含む。好ましくは、２３５位及び２３６位の両方のアミノ酸が置換される。米国特許出願公開第２０１４／０１２００９６号に記載されるように、これらの部位における置換は、抗体と、腫瘍細胞又はエフェクター細胞上に存在するＦｃ受容体との間の相互作用を本質的に防止することができる。したがって、特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、Ｌ２３５Ｇ及び／又はＧ２３６Ｒ置換を含む変異したＣＨ２及び／又は下方ヒンジドメインを含む。好ましくは、Ｌ２３５Ｇ及びＧ２３６Ｒの両方が置換される。あるいは、当業者であれば、置換２３４Ｆ、２３５Ｅ、及び／又は３３１Ｓを含む、下方ヒンジ及び／又はＣＨ２ドメイン変異を導入し得る（Ｏｇａｎｅｓｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌ．２００８（Ｄ６４）７００）。好ましくは、３つ全ての置換が、この代替法では導入される。
【００８６】
二重特異性抗体の産生及び単離
二重特異性抗体は、典型的に、抗体をコードする核酸を発現する細胞によって産生される。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に開示される二重特異性ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３抗体は、二重特異性ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３抗体の重鎖及び軽鎖可変領域及び定常領域をコードする１つ以上の核酸を含む細胞を提供することによって、産生される。細胞は、好ましくは、動物細胞、より好ましくは哺乳動物細胞、より好ましくは霊長類細胞、最も好ましくはヒト細胞である。好適な細胞は、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体を含むことができ、好ましくはそれを産生することができる、任意の細胞である。
【００８７】
抗体産生に好適な細胞は、当該技術分野において既知であり、それには、ハイブリドーマ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳ０細胞、又はＰＥＲ−Ｃ６細胞が含まれる。様々な機関及び企業が、例えば、臨床使用のための、抗体の大規模な産生のための細胞株を開発している。そのような細胞株の非限定的な例は、ＣＨＯ細胞、ＮＳ０細胞、又はＰＥＲ．Ｃ６細胞である。特に好ましい実施形態では、細胞は、ヒト細胞である。好ましくは、アデノウイルスＥ１領域又はその機能的等価物によって形質転換される細胞である。そのような細胞株の好ましい例は、ＰＥＲ．Ｃ６細胞株又はその等価物である。特に好ましい実施形態では、細胞は、ＣＨＯ細胞又はそのバリアントである。好ましくは、抗体の発現にグルタミンシンターゼ（ＧＳ）ベクター系を利用するバリアントである。１つの好ましい実施形態では、細胞は、ＣＨＯ細胞である。
【００８８】
いくつかの実施形態では、細胞は、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体を構成する異なる軽鎖及び重鎖を発現する。特定の実施形態では、細胞は、２つの異なる重鎖及び少なくとも１つの軽鎖を発現する。１つの好ましい実施形態では、細胞は、異なる抗体種（異なる重鎖及び軽鎖の組み合わせ）の数を低減するために、本明細書に記載される「共通軽鎖」を発現する。例えば、それぞれのＶＨ領域は、当該技術分野において既知の二重特異性ＩｇＧの産生方法（国際公開第２０１３／１５７９５４号、参照により本明細書に組み込まれる）を使用して、再構成されたヒトＩＧＫＶ１−３９／ＩＧＫＪ１（ｈｕＶκ１−３９）軽鎖とともに、発現ベクターにクローニングされる。ｈｕＶκ１−３９は、２つ以上の重鎖と対合することが可能であり、それによって、多様な特異性を有する抗体が生じ、それにより二重特異性分子の生成が促進されることが、以前に示されている（Ｄｅ  Ｋｒｕｉｆ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２００９（３８７）５４８−５８；国際公開第２００９／１５７７７１号）。
【００８９】
共通軽鎖及び同量の２つの重鎖を発現する抗体産生細胞は、典型的に、二重特異性抗体を５０％生成し、単一特異性抗体（すなわち、同一の重鎖軽鎖の組み合わせを有する）をそれぞれ２５％ずつ産生する。それぞれの単一特異性抗体の産生よりも二重特異性抗体の産生に有利ないくつかの方法が、公開されている。そのようなものは、典型的に、重鎖の定常領域を、それらがホモ二量体化よりもヘテロ二量体化（すなわち、他方の重鎖／軽鎖の組み合わせの重鎖との二量体化）を優先するように修飾することによって達成される。好ましい実施形態では、本発明の二重特異性抗体は、適合性のあるヘテロ二量体化ドメインを有する２つの異なる免疫グロブリン重鎖を含む。様々な適合性のあるヘテロ二量体化ドメインが、当該技術分野において記載されている。この適合性のあるヘテロ二量体化ドメインは、好ましくは、適合性のある免疫グロブリン重鎖ＣＨ３ヘテロ二量体化ドメインである。当該技術分野では、重鎖のこのようなヘテロ二量体化を達成することができる様々な方法が、記載されている。
【００９０】
ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体を産生するための１つの好ましい方法は、米国特許第９，２４８，１８１号及び同第９，３５８，２８６号に開示されている。具体的には、本質的に二重特異性完全長ＩｇＧ分子のみを産生するための好ましい変異は、第１のＣＨ３ドメインにおけるアミノ酸置換Ｌ３５１Ｋ及びＴ３６６Ｋ（ＥＵ番号付け）（「ＫＫバリアント」重鎖）、並びに第２のドメインにおけるアミノ酸置換Ｌ３５１Ｄ及びＬ３６８Ｅ（「ＤＥバリアント」重鎖）、又はその逆である。前述のように、ＤＥバリアント及びＫＫバリアントは、優先的に対合して、ヘテロ二量体（いわゆる「ＤＥＫＫ」二重特異性分子）を形成する。ＤＥバリアント重鎖のホモ二量体化（ＤＥＤＥホモ二量体）又はＫＫバリアント重鎖のホモ二量体化（ＫＫＫＫホモ二量体）は、同一の重鎖間のＣＨ３−ＣＨ３界面における荷電残基間の強い反発力に起因して、ほとんど発生しない。
【００９１】
したがって、一実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａに結合する可変ドメインを含む重鎖／軽鎖の組み合わせは、重鎖のＤＥバリアントを含む。この実施形態では、ＣＤ３に結合する可変ドメインを含む重鎖／軽鎖の組み合わせは、重鎖のＫＫバリアントを含む。
【００９２】
ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の特徴付け
候補ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３  ＩｇＧ二重特異性抗体は、任意の好適なアッセイを使用して、結合について試験することができる。例えば、ＨＰＢ−ＡＬＬ細胞において膜に発現されるＣＤ３への結合は、フローサイトメトリーによって（国際公開第２０１４／０５１４３３号に既に記載されているＦＡＣＳ手順に従って）評価することができる。一実施形態では、候補ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の、ＨＰＢ  ＡＬＬ細胞上のＣＤ３への結合は、当該技術分野において既知の標準的な手順に従って実施されるフローサイトメトリーによって示される。細胞に発現されるＣＤ３への結合は、ＣＤ３δ／ε又はＣＤ３γ／εをトランスフェクトしたＣＨＯ細胞を使用して確認される。候補二重特異性ＩｇＧ１のＣＬＥＣ１２Ａへの結合は、ＣＬＥＣ１２Ａ発現コンストラクトをトランスフェクトしたＣＨＯ細胞を使用して決定され、ＣＤ３単一特異性抗体及びＣＬＥＣ１２Ａ単一特異性抗体、並びに無関係のＩｇＧ１アイソタイプ対照ｍＡｂが、対照としてアッセイに含まれる（例えば、ＣＤ３及び破傷風毒素（ＴＴ）などの別の抗原に結合する抗体）。
【００９３】
標的に対する候補ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体のＣＤ３及びＣＬＥＣ１２Ａ  Ｆａｂの親和性は、ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｔ１００を使用して、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術によって測定することができる。簡潔に述べると、抗ヒトＩｇＧマウスモノクローナル抗体（Ｂｅｃｔｏｎ  ａｎｄ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、カタログ番号５５５７８４）を、遊離アミン化学（ＮＨＳ／ＥＤＣ）を使用して、ＣＭ５センサーチップの表面に結合する。次いで、ｂｓＡｂを、センサー表面に捕捉する。続いて、組み換え精製抗原ヒトＣＬＥＣ１２Ａ（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｃ、カタログ番号１１８９６−Ｈ０７Ｈ）及びヒトＣＤ３δε−Ｆｃタンパク質を、ある濃度範囲でセンサー表面に流して、結合速度及び解離速度を測定する。それぞれのサイクルの後に、センサー表面を、ＨＣｌのパルスによって再生し、ｂｓＡｂを、再び捕捉する。得られたセンサグラムから、ヒトＣＤ３及びＣＬＥＣ１２Ａへの結合についての結合速度及び解離速度並びに親和性の値が、既に記載されているように（例えば、米国特許出願公開第２０１６／０３６８９８８号）、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアを使用して決定される。
【００９４】
ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体のＴ細胞刺激能力は、国際公開第２０１４／０５１４３３号及び米国特許出願公開第２０１６／０３６８９８８号に記載される手順に従って得られた健常ドナーの休止Ｔ細胞を使用したアッセイにおいて判定することができる。例えば、候補ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）又は１０％正常ヒト血清（ＨＳ）において、エフェクター：標的の細胞比１０：１又は５：１で、白血病由来ＨＬ６０細胞株に由来する細胞とともに２日間インキュベートした精製健常ドナー休止Ｔ細胞において、試験される。結果は、ＣＤ４陽性又はＣＤ８陽性Ｔ細胞集団内のＣＤ６９陽性細胞又はＣＤ２５陽性細胞の割合として表される。
【００９５】
標的細胞の溶解を誘導するＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の能力は、国際公開第２０１４／０５１４３３号及び米国特許出願公開第２０１６／０３６８９８８号に記載される手順に従って、カルボキシフルオレセイン二酢酸スクシンイミジルエステル（ｃａｒｂｏｘｙｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ  ｄｉａｃｅｔａｔｅ  ｓｕｃｃｉｍｉｄｙｌ  ｅｓｔｅｒ、ＣＦＳＥ）で標識し、健常ドナーに由来するＴ細胞とともに共培養した白血病細胞、例えば、ＨＬ−６０細胞を使用したアッセイにおいて、試験することができる。生存しているＣＦＳＥ陽性細胞を、フローサイトメトリーによって定量化し、結果を、ＰＢＳ対照条件に関連する特異的溶解の割合として表す。
【００９６】
ＩＩＩ．ＩＬ−１５部分
ＩＬ−１５受容体に結合し、受容体を活性化する（例えば、ＩＬ−１５受容体アゴニストとして作用する）任意の分子を、本方法において使用することができる。好適なＩＬ−１５受容体アゴニストは、当該技術分野において既知であり、これには、天然に存在するＩＬ−１５；組み換えＩＬ−１５；合成ＩＬ−１５；修飾されたＩＬ−１５；ＰＥＧ化されたＩＬ−１５；ＩＬ−１５及び異種融合パートナーを含む融合タンパク質；並びにＩＬ−１５Ｒに結合し、それを活性化する天然に存在する、ＩＬ−１５の機能性断片；並びにＩＬ−１５模倣体が含まれる。ＩＬ−１５は、ヒト、マウス、ラットなどの組織からの天然に存在するＩＬ−１５の単離；合成手段による産生；及び組み換え手段による産生を含む、任意の従来的な方法で産生することができる。ＩＬ−１５アミノ酸配列は、当該技術分野において既知である。例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ７５１９１５、ＮＰ７５１９１４、ＮＰ０００５７６、ＮＰ０３７２６１、ＮＰ０３２３８３、及びＰ９７６０４を参照されたい。
【００９７】
例示的なＩＬ−１５部分は、本明細書、文献、並びに例えば米国特許出願公開第２００６／０１０４９４５号、同第２０１５／０３５９８５３号、同第２０１７／００２０９６３号、国際公開第２０１７／０６２８３５号、Ｐｅｔｔｉｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２（４）：２３１２−２３１８）、及びＷｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３  Ｏｎｃｏｌｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２（１１）ｅ２６４４２：ｌ−３）に記載されている。例えば、ＩＬ−１５スーパーアゴニスト変異体と二量体ＩＬ−１５Ｒａドメイン（ＩＬ−１５ＲａＳｕ／Ｆｃ）との複合体（米国特許第９，２５５，１４１号及び同第９，３２８，１５９号）、並びに組み換えヒトＩＬ−１５（ｒｈＩＬ−１５）を含む、多量体可溶性ＩＬ−１５融合分子が、市販入手可能である（例えば、（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ，Ｒｏｃｋｙ  Ｈｉｌｌ，Ｎ．Ｊ．；ＣｅｌｌＧｅｎｉｘ）。
【００９８】
いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５部分は、組み換えヒトＩＬ−１５（ｈＩＬ−１５）である。他の実施形態では、ＩＬ−１５部分は、可溶性ＩＬ−１５受容体又は受容体断片（ｓＩＬ−１５Ｒａ）である。他の実施形態では、ＩＬ−１５部分は、例えば、米国特許第９，２５５，１４１号及び同第９，３２８，１５９号に記載されるように、ＩＬ−１５及びｓＩＬ−１５Ｒａを含む複合体である。更に他の実施形態では、ＩＬ−１５部分は、ＩＬ−１５の長時間作用型、例えば、例として国際公開第２０１５／８１５３７３号に記載されるような、ＩＬ−１５と水溶性ポリマーとのコンジュゲートである。
【００９９】
いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５部分は、ＩＬ−１５Ｒサブユニットに対するＩＬ−１５の高い親和性を維持しながら、ＩＬ−１５受容体複合体のβ若しくはγサブユニットへのＩＬ−１５の結合に干渉することができるＩＬ−１５分子上の特定の部位において、ＰＥＧ、ｍＰＥＧ、デキストラン、ＰＶＰ、ＰＶＡ、ポリアミノ酸、例えば、ポリ−Ｌリジン若しくはポリヒスチジン、アルブミン、及びゼラチンを含む、当該技術分野において既知のバイオアベイラビリティを拡大するための手段を含み得る。加えて、ＩＬ−１５は、ＩＬ−１５Ｒサブユニットに対するＩＬ−１５の高い親和性を維持しながら、ＩＬ−１５受容体複合体のβ又はγサブユニットへのＩＬ−１５の結合に干渉することができる部位において、特異的にグリコシル化され得る。コンジュゲーションに好ましい基は、ＰＥＧ、デキストラン、及びＰＶＰである。ＰＥＧ部分は、ＰＥＧの大きな分子サイズを利用するために、既知の部位においてＩＬ−１５に結合され得、タンパク質中に天然に存在するリジン若しくはシステイン残基を利用することによって、又は部位特異的ＰＥＧ化によって、ＩＬ−１５に結合され得る。
【０１００】
更なるＩＬ−１５部分を産生するために、任意の既知のＩＬ−１５ポリペプチドの配列を、当該技術分野において既知の様々な方法で改変して、標的化された変化を配列に生じさせることができる。バリアントポリペプチドは、通常、天然に存在する配列と実質的に類似である、すなわち、少なくとも１つのアミノ酸が異なり、少なくとも２つのアミノ酸が異なってもよいが、約１０個より多く異なることはない。配列の変化は、置換、挿入、又は欠失であり得る。保存的アミノ酸置換としては、典型的に、以下の群内の置換が挙げられる：（グリシン、アラニン）；（バリン、イソロイシン、ロイシン）；（アスパラギン酸、グルタミン酸）；（アスパラギン、グルタミン）；（セリン、スレオニン）；（リジン、アルギニン）；又は（フェニルアラニン、チロシン）。アミノ酸残基及び非天然のアミノ酸残基の置換及び付加のための技法は、当業者に周知である（例えば、Ｊ．Ｍａｒｃｈ，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，４ｔｈ  Ｅｄ．（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，１９９２）。
【０１０１】
一次アミノ酸配列を改変する場合もしない場合もある、目的の修飾としては、ポリペプチドの化学的誘導体化、例えば、アセチル化又はカルボキシル化；グリコシル化部位を導入又は除去するアミノ酸配列における変化；ポリエチレングリコール部分による修飾（ＰＥＧ化）を受けやすいタンパク質を作製するアミノ酸配列における変化などが挙げられる。グリコシル化の修飾、例えば、合成及びプロセシングステップ又は更なるプロセシングステップの間に、ポリペプチドのグリコシル化パターンを修飾することによって作製されるもの；例えば、ポリペプチドを、哺乳動物のグリコシル化又は脱グリコシル化酵素など、グリコシル化に影響を及ぼす酵素に曝露することによるものもまた、含まれる。リン酸化されたアミノ酸残基、例えば、ホスホチロシン、ホスホセリン、又はホスホスレオニンを有する配列もまた、包含される。例えば、ＩＬ−１５ポリペプチドは、Ｎ末端アミノ酸が、ホルミル基、アセチル基、マロニル基などのアシル基でアシル化された、Ｎ−ブロック種を含んでもよい。また、コンセンサスＩＬ−１５、例えば、２つ以上の既知のＩＬ−１５アミノ酸配列のコンセンサスであるアミノ酸配列を含むＩＬ−１５も、使用に好適である。
【０１０２】
タンパク質分解に対する耐性を改善するため、可溶性特性を最適化するため、又は治療剤としてより適したものにするために、通常の化学的技法を使用して修飾されているＩＬ−１５ポリペプチドもまた、使用に好適である。例えば、ペプチドの骨格は、安定性を増強するために環化されてもよい（Ｆｒｉｅｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：２３７８３−２３７８９を参照されたい）。天然に存在するＬ−アミノ酸以外の残基、例えば、Ｄ−アミノ酸又は非天然の合成アミノ酸を含む類似体が使用されてもよい。タンパク質は、安定性を増強するために、ＰＥＧ化されてもよい。ポリペプチドは、アルブミン又は別の異種融合パートナーに融合されてもよい。
【０１０３】
ＩＬ−１５の短縮バージョン、ハイブリッドバリアント、及びペプチド模倣体もまた、ＩＬ−１５部分としての機能を果たし得る。少なくともある程度のＩＬ−１５活性を維持する、前述のもののいずれかの生物学的に活性な断片、欠失バリアント、置換バリアント、又は付加バリアントもまた、ＩＬ−１５部分としての機能を果たし得る。
【０１０４】
ＩＬ−１５部分は、インビトロ合成によって、当該技術分野において既知の従来的な方法を使用して、組み換え方法によって、調製されてもよく、又は誘導された細胞若しくはタンパク質を自然に産生する細胞から単離されてもよい。所望される場合、合成中又は発現中に、他の分子又は表面への連結を可能にする様々な基を、ポリペプチドに導入することができる。したがって、チオエーテルを作製するためにシステインを使用することができ、金属イオン錯体に連結するためにヒスチジンを使用することができ、アミド又はエステルを形成するためにカルボキシル基を使用することができ、アミドを形成するためにアミノ基を使用することができるなどである。例えば、ＩＬ−１５ポリペプチドは、細菌宿主、例えば、大腸菌又は真核生物宿主細胞（例えば、酵母、哺乳動物細胞、例えば、ＣＨＯ細胞など）に形質転換又はトランスフェクトしたＤＮＡ配列の発現によって、産生され得る。これらの実施形態では、ＩＬ−１５は、「組み換えＩＬ−１５」である。宿主細胞が細菌宿主細胞である場合、ＩＬ−１５は、Ｎ末端メチオニンを含むように修飾されてもよい。
【０１０５】
インビトロにおいてＩＬ−１５活性を判定するための様々な方法が、当該技術分野において記載されている。例えば、ＩＬ−１５の活性は、ｐＳＴＡＴアッセイにおいて評価することができる。簡潔に述べると、ＩＬ−１５依存性ＣＴＬＬ−２細胞を、ＩＬ−１５活性を有する試験物品に曝露すると、シグナル伝達カスケード結果の開始により、定量的に測定することができるチロシン残基６９４（Ｔｙｒ６９４）におけるＳＴＡＴ５のリン酸化を含む結果が生じる。アッセイプロトコール及びキットは既知であり、例えば、ＭＳＤ  Ｐｈｏｓｐｈｏ（Ｔｙｒ６９４）／Ｔｏｔａｌ  ＳＴＡＴａ、ｂ  Ｗｈｏｌｅ  Ｃｅｌｌ  Ｌｙｓａｔｅ  Ｋｉｔ（Ｍｅｓｏ  Ｓｅａｌ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，ＬＬＣ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）が挙げられる。本明細書に提供される方法において使用するのに好適なＩＬ−１５部分は、５分間又は１０分間のうちの少なくとも一方で、約３００ｎｇ／ｍＬ未満（より好ましくは約１５０ｎｇ／ｍＬ未満）のｐＳＴＡＴ５  ＥＣ５０値を呈し得る。
【０１０６】
ＩＶ．医薬組成物
一態様では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体と、ＩＬ−１５部分と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物が提供される。本明細書において使用される場合、「薬学的に許容される」という用語は、動物、特に、ヒトにおける使用が、政府規制機関によって承認されているか、又は米国薬局方若しくは別の一般に認識されている薬局方において記載されていることを意味し、これには、生理学的に適合性のあるありとあらゆる溶媒、塩、分散媒、コーティング剤、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤などが含まれる。「担体」という用語は、化合物が一緒に投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤、又はビヒクルを指す。そのような薬学的担体は、滅菌液、例えば、石油、動物、植物、若しくは合成起源のものを含む、水及び油、例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油、グリセロールポリエチレングリコールリシノレートなどであり得る。水又は生理食塩水溶液並びに水性デキストロース及びグリセロール溶液が、担体として、特に、注射用溶液として、利用され得る。非経口投与のための液体組成物は、注射又は連続注入による投与のために製剤化され得る。注射又は注入による投与経路としては、膀胱内、腫瘍内、静脈内、腹腔内、筋肉内、髄腔内、及び皮下が挙げられる。投与経路（例えば、静脈内、皮下、関節内など）に応じて、活性化合物は、化合物を不活性化し得る酸の作用及び他の天然の条件から化合物を保護するために、材料中にコーティングされてもよい。
【０１０７】
ヒト患者への投与に好適な医薬組成物は、典型的に、非経口投与のために、例えば、液体担体、又は静脈内投与のための溶液若しくは懸濁液への再構成に好適なものにおいて、製剤化される。組成物は、投与の容易さ及び投薬量の均一性のために、投薬単位形態で製剤化されてもよい。
【０１０８】
また、経口又は非経口投与のいずれかのために、使用直前に、液体調製物に変換することが意図された、固体調製物も含まれる。そのような液体形態としては、溶液、懸濁液、及びエマルションが挙げられる。
【０１０９】
Ｖ．処置
本明細書において提供される組成物及び方法は、患者において１つ又は複数のＴ細胞を活性化するのに特に有用である。患者は、がんを罹患している可能性がある。したがって、組成物及び方法は、骨髄性白血病及び骨髄起源の前白血病疾患を含む、様々な骨髄系悪性腫瘍の処置において使用され得る。したがって、本明細書に提供される方法に従って処置することができる疾患としては、骨髄性白血病（例えば、ＡＭＬ及びＣＭＬ）又は前白血病疾患、例えば、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）（及びＡＭＬへの進行）が挙げられる。
【０１１０】
本明細書において使用される場合、組み合わせ投与（共投与）は、同じか若しくは異なる投薬形態、別個の投与、又は連続的な投与において、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分を、同時に投与することを含む。したがって、いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、対象においてＴ細胞を活性化するための方法において使用され得、ここで、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ＩＬ−１５部分と同時に、それとは別個に、又はそれと連続的に投与される。他の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、対象におけるがんの処置において使用され得、ここで、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ＩＬ−１５部分と同時に、それとは別個に、又はそれと連続的に投与される。
【０１１１】
他の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、対象においてＴ細胞を活性化するための医薬の製造において使用するためのものであってもよく、ここで、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ＩＬ−１５部分と同時に、それとは別個に、又はそれと連続的に投与される。ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分を含む製品は、対象においてＴ細胞を活性化するのに同時、別個、又は連続的に使用するための組み合わせ調製物であり得る。他の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、対象におけるがんを処置するための医薬の製造において使用するためのものであってもよく、ここで、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ＩＬ−１５部分と同時に、それとは別個に、又はそれと連続的に投与される。ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分を含む製品は、対象におけるがんを処置するのに同時、別個、又は連続的に使用するための組み合わせ調製物であり得る。
【０１１２】
ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分は、好適な投薬量、経路（例えば、静脈内、腹腔内、筋肉内、髄腔内、又は皮下）に従って投与することができる。
【０１１３】
ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分は、任意の好適なスケジュールに従って投与することもできる。例えば、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分は、単一製剤で同時に投与することができる。あるいは、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分は、別個の投与のために製剤化することができ、その場合、それらは、並行して、又は連続的に投与される。
【０１１４】
例えば、いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、最初に投与され、続いて、ＩＬ−１５部分が投与され得るか、又はその逆であってもよい。上記の処置及び使用の方法における投薬レジメンは、最適な所望される応答（例えば、治療応答）を提供するように調整される。本方法において提供される実際の投与量は、対象の年齢、体重、及び全般的な状態、並びに処置される状態の重症度及び医療従事者の判断に応じて変動するであろう。
【０１１５】
例えば、単回ボーラスが投与されてもよく、いくつかの分割された投与量を経時的に投与してもよく、又は投与量は、治療状況の緊急性によって示されるように、比例的に低減若しくは増加されてもよい。一実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、ＩＬ−１５部分の投与の前に投与され、例えば、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、最初に患者に投与され、その後に、ＩＬ−１５部分の投与が続く。一実施形態では、ＩＬ−１５部分は、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の投与の前に投与され、例えば、ＩＬ−１５部分が、最初に患者に投与され、その後に（例えば、１分以上後、１時間以上後、又は１日以上後に）ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の投与が続く。そのような並行投与又は連続投与により、結果として、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分の両方が、処置される患者に同時に存在することになる。ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分の両方が並行して存在することは、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体により誘導されるＴ細胞機能及びＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体に媒介されるＴ細胞により誘導される標的細胞の溶解を補助する。
【０１１６】
別の実施形態では、ＩＬ−１５部分及びＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、同時に投与される。
【０１１７】
一実施形態では、対象には、単回投与量のＩＬ−１５部分及び単回投与量のＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が投与される。いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分は、処置の過程にわたり、反復して投与される。例えば、特定の実施形態では、複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上）投与量のＩＬ−１５部分及び複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上）投与量のＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、処置を必要とする対象に投与される。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５部分及びＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の投与は、週ごと又は月ごとに行われてもよく、このレジメンでは、それらは、同じ日に（例えば、同時に）投与されてもよく、又は１つずつ順に（例えば、互いに前後１分以上、１時間以上、若しくは１日以上で）投与されてもよい。別個に投与される場合、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分は、同じ投与（すなわち、投薬）プロトコールに従って投与されてもよいが、必ずしもそうでなくてもよい。例えば、１サイクルの処置は、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体を１回又は複数回投与することを含み得、一方で治療有効投与量のＩＬ−１５部分は、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体よりも多いか又は少ない頻度で投与され得る。特定の実施形態では、ＩＬ−１５部分及びＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体のそれぞれの投与量の投与は、同じ日であってもよく、又は代替として、ＩＬ−１５部分は、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３抗体の１日以上前又は後に投与されてもよい。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及び／又はＩＬ−１５部分の投与量は、経時的に変化する。例えば、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及び／又はＩＬ−１５部分は、最初に高用量で投与されてもよく、経時的に低下してもよい。別の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及び／又はＩＬ−１５部分は、最初に低用量で投与され、経時的に増加する。
【０１２０】
別の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及び／又はＩＬ−１５部分の量は、それぞれの投与量について一定である。別の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及び／又はＩＬ−１５部分の量は、それぞれの投与量で変動する。例えば、それぞれの維持（又は継続）投与量は、最初に投与される負荷投与量よりも高くてもよく、又は同じであってもよい。別の実施形態では、それぞれの維持投与量は、負荷投与量よりも低くてもよく、又は同じであってもよい。臨床医は、処置される患者の状態によって保証される好ましい投与量を利用してもよい。投与量は、疾患のステージなどを含む多数の因子に依存し得る。そのような因子のうちの１つ以上の存在に基づいた、投与されるべき具体的な投与量は、当業者の技能の範囲内である。一般に、処置は、化合物の最適投与量未満である、より低い投与量で開始される。その後、投与量は、状況下における最適な効果が達成されるまで、少量ずつ増加される。便宜上、合計１日投薬量は、所望される場合、１日の間で分割され、部分ごとに投与されてもよい。間欠療法（例えば、３週間のうち１週間、又は４週間のうち３週間）もまた、使用され得る。
【０１２１】
特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、０．１、０．３、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０ｍｇ／体重ｋｇの投与量で投与される。別の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体は、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０ｍｇ／体重ｋｇの投与量で投与される。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法において使用されるＩＬ−１５部分は、組み換えヒトＩＬ−１５（ｈＩＬ−１５）である。特定の実施形態では、ｒｈＩＬ−１５は、１日当たり約０．１２５μｇ／ｋｇ〜１日当たり２．０μｇ／ｋｇの投与量で投与される。特定の実施形態では、ｒｈＩＬ−１５は、１日当たり０．１２５、０．２５、０．５、１．０、又は２．０μｇ／ｋｇで投与される。特定の実施形態では、ｒｈＩＬ−１５は、静脈内ボーラスによって投与される。他の実施形態では、ｒｈＩＬ−１５は、連続的な静脈内注入（ＣＩＶ）によって投与される。特定の実施形態では、ｒｈＩＬ−１５は、２〜１０日間、５〜１０日間、又は７〜１０日間、ＣＩＶによって投与される。一実施形態では、ｒｈＩＬ−１５は、１０日間、ＣＩＶによって投与される。関連する実施形態では、ｒｈＩＬ−１５は、約３０〜６０日の処置サイクルで投与され、ここで、ｒｈＩＬ−１５は、それぞれのサイクルの最初の５〜１０日間、ＣＩＶによって投与される。
【０１２３】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法に従って投与されるＩＬ−１５部分は、可溶性ＩＬ−１５受容体又は受容体断片（ｓＩＬ−１５Ｒａ）である。他の実施形態では、ＩＬ−１５部分は、例えば、米国特許第９，２５５，１４１号及び同第９，３２８，１５９号に記載されるように、ＩＬ−１５及びｓＩＬ−１５Ｒａを含む複合体である。特定の実施形態では、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、対象に、約０．１μｇ／ｋｇ〜約２０μｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ〜約２０μｇ／ｋｇ、約２０μｇ／ｋｇ〜約４０μｇ／ｋｇ、又は約２５μｇ／ｋｇ〜５０μｇ／ｋｇの投与量で投与される。
【０１２４】
特定の実施形態では、ＩＬ−１５部分は、皮下投与されるＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａである。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、毎日、１日おき、３日おき、４日おき、５日おき、６日おき、又は７日おきの頻度で投与される。特定の実施形態では、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａは、１週間に１、２、３、４、５、６、又は７日間投与される。特定の実施形態では、第１のサイクル及びそれぞれの後続サイクルの投与量は、０．１μｇ／ｋｇ〜１μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ〜５μｇ／ｋｇ、又は５μｇ／ｋｇ〜１０μｇ／ｋｇである。別の実施形態では、第１のサイクル及びそれぞれの後続のサイクルの第１の投与量は、０．１μｇ／ｋｇ〜０．５μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ〜２μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ〜３μｇ／ｋｇ、２μｇ／ｋｇ〜５μｇ／ｋｇ、又は２μｇ／ｋｇ〜４μｇ／ｋｇである。別の実施形態では、第１のサイクル及びそれぞれの後続のサイクルの投与量は、０．１μｇ／ｋｇ、０．２５μｇ／ｋｇ、０．５μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ、１．２５μｇ／ｋｇ、１．５μｇ／ｋｇ、１．７５μｇ／ｋｇ、２μｇ／ｋｇ、２．２５μｇ／ｋｇ、２．５μｇ／ｋｇ、２．７５μｇ／ｋｇ、３μｇ／ｋｇ、３．２５μｇ／ｋｇ、３．５μｇ／ｋｇ、４μｇ／ｋｇ、４．２５μｇ／ｋｇ、４．５μｇ／ｋｇ、４．７５μｇ／ｋｇ、又は５μｇ／ｋｇである。一実施形態では、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体が、２週間連続で１週間に３回皮下投与される、２８日サイクルに従って投与される。
【０１２５】
更に他の実施形態では、本明細書に提供される方法において使用されるＩＬ−１５部分は、ＩＬ−１５の長時間作用型、例えば、例として国際公開第２０１５８１５３７３号に記載されるような、ＩＬ−１５と水溶性ポリマーとのコンジュゲートである。当業者であれば、ＩＬ−１５受容体（「ＩＬ−１５Ｒ」）において臨床的に関連するアゴニスト活性を提供するのに十分な、長時間作用性のＩＬ−１５アゴニストの量を決定することができる。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５ポリマーコンジュゲートは、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．００１〜約５ｍｇ／ｋｇの投与量で投与される。特定の実施形態では、ＩＬ−１５ポリマーコンジュゲートは、約０．０３ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇの投与量で投与される。特定の実施形態では、ＩＬ−１５ポリマーコンジュゲートは、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、又は約３．０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与される。他の実施形態では、ＩＬ−１５ポリマーコンジュゲートは、約０．００２５ｍｇ／ｋｇ、約０．００８ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０２５ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、又は約０．２５ｍｇ／ｋｇの投与量で投与される。
【０１２６】
本明細書に記載される処置方法は、典型的に、患者の治療を監督している臨床医が、処置方法が有効である、すなわち、患者が処置に応答していると考える限り、継続される。処置方法が有効であることを示す非限定的なパラメータとしては、以下のうちの１つ以上を挙げることができる：腫瘍細胞の減少；腫瘍細胞増殖の阻害；腫瘍細胞の排除；無増悪生存期間；好適な腫瘍マーカーによる適切な応答（該当する場合）；ＮＫ（ナチュラルキラー）細胞数の増加；ＣＬＥＣ１２Ａ特異的Ｔ細胞数の増加、及びＣＬＥＣ１２Ａ特異的メモリーＴ細胞数の増加。
【０１２７】
ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体を投与する頻度に関して、当業者であれば、適切な頻度を決定することができるであろう。例えば、臨床医は、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体を、比較的低頻度で（例えば、２週間に１回）投与し、患者に許容される投与量間の期間を徐々に短縮するように決定することができる。ＩＬ−１５部分を投与する頻度に関して、これらの薬剤の頻度は、類似の様式で決定することができる。請求される方法による治療過程に関連する例示的な時間の長さとしては、以下が挙げられる：約１週間、２週間、約３週間、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、約１３週間、約１４週間、約１５週間、約１６週間、約１７週間、約１８週間、約１９週間、約２０週間、約２１週間、約２２週間、約２３週間、約２４週間、約７ヶ月間、約８ヶ月間、約９ヶ月間、約１０ヶ月間、約１１ヶ月間、約１２ヶ月間、約１３ヶ月間、約１４ヶ月間、約１５ヶ月間、約１６ヶ月間、約１７ヶ月間、約１８ヶ月間、約１９ヶ月間、約２０ヶ月間、約２１ヶ月間、約２２ヶ月間、約２３ヶ月間、約２４ヶ月間、約３０ヶ月間、約３年間、約４年間、約５年間、永続的（例えば、進行中の維持療法）。前述の持続時間は、１回又は複数回の処置サイクルと関連付けられ得る。
【０１２８】
結果
本明細書に提供される処置方法の有効性は、任意の好適な手段を使用して評価することができる。一実施形態では、組み合わせ処置の臨床的有効性は、骨髄におけるＡＭＬ芽球の低減を客観的な応答基準として使用して分析される。本明細書に開示される方法に従って処置される患者、例えば、ヒトは、好ましくは、がんの少なくとも１つの兆候において改善を経験する。いくつかの実施形態では、以下のうちの１つ以上が生じ得る：がん細胞数が低減され得る；がん再発が予防又は遅延される；がんと関連する症状のうちの１つ以上が、ある程度緩和され得る。加えて、Ｔ細胞により媒介される標的細胞の溶解を判定するためのインビトロアッセイ（国際公開第２０１７／０１０８７４号に記載される）を、対象から単離したＡＭＬ腫瘍芽球を用いて行ってもよい。
【０１２９】
別の実施形態では、処置の方法は、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体又はＩＬ−１５部分（例えば、ｒｈＩＬ−１５）単独で達成されるものよりも良好な、同等の臨床的利益率（ＣＢＲ＝ＣＲ（完全応答）、ＰＲ（部分応答）、又はＳＤ（安定疾患）≧６ヶ月）をもたらす。
【０１３０】
いくつかの実施形態では、腫瘍細胞は、本明細書に記載される処置の後、もはや検出可能ではない。いくつかの実施形態では、対象は、部分的又は完全寛解である。特定の実施形態では、対象は、全生存期間、中央値生存率、及び／又は無増悪生存期間の増加を有する。
【０１３１】
ＶＩ．追加の薬剤／治療法
本発明の組み合わせ（例えば、ＩＬ−１５部分と組み合わせたＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体）は、処置されているがんに対する特定の有用性のために選択される他の周知の治療法とともに使用することもできる。本発明の組み合わせは、適切な場合には、代替として、既知の薬学的に許容される薬剤と連続的に使用してもよい。
【０１３２】
化学療法剤の安全かつ有効な投与方法は、当業者に既知である。加えて、それらの投与は、標準的な文献に記載されている。例えば、化学療法剤の多くの投与は、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（ＰＤＲ）、例えば、１９９６年版（Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｍｏｎｔｖａｌｅ，Ｎ．Ｊ．０７６４５−１７４２，ＵＳＡ）に記載されており、この開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１３３】
化学療法剤及び／又は放射線療法の投与は、処置されている疾患並びにその疾患に対する化学療法剤及び／又は放射線療法の既知の効果に応じて変化させることができることが、当業者には明らかであろう。また、熟練した臨床医の知識によると、治療プロトコール（例えば、投薬量及び投与回数）は、患者に対する投与された治療剤の観察された効果を考慮して、及び投与された治療剤に対する疾患の観察された応答を考慮して、変化させることができる。
【０１３４】
ＶＩＩ．キット及び製品
また、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体と、ＩＬ−１５部分と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物を、前述の方法において使用するために適合された治療有効量で含む、キット又は製品も、本明細書において提供される。いくつかの実施形態では、キット又は製品はまた、所望により、施術者（例えば、医師、看護師、又は患者）が、がんを有する患者に、中に含まれる組成物を投与することを可能にするための、例えば、投与スケジュールを含む、説明書も含み得る。
【０１３５】
いくつかの実施形態では、キット又は製品は、上記に提供された方法に従って、単回投与に有効な量のＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分をそれぞれが含有する、単回投与医薬組成物の複数のパッケージを含む。医薬組成物を投与するのに必要な機器又はデバイスもまた、キット又は製品に含まれ得る。例えば、キット又は製品は、同じ容器又は別々の異なる組成物として投与される別個の容器に、単位投薬量のＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分を含有する、１つ以上の予め充填されたシリンジを提供し得る。
【０１３６】
特定の実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分のうちの一方又は両方が、添付の説明書に従った再構成及びそれに続く投与に好適な固体形態で提供される。
【０１３７】
なおも更なる実施形態では、組成物又は組み合わせ又はキット又は製品は、１つ以上の追加の活性剤を含む。
【０１３８】
Ｇｅｎｂａｎｋエントリ、特許及び公開特許出願、並びにウェブサイトを含む、本明細書に記載される全ての文献及び参照文献は、本明細書に完全に又は部分的に記載されているのと同じ程度に、参照により明示的に本明細書に組み込まれる。
【０１３９】
明確さ及び簡潔な説明の目的で、特徴は、同じか又は別個の実施形態の一部として本明細書に記載されているが、しかしながら、本発明の範囲は、記載される特徴の全て又は一部の組み合わせを有する実施形態を含んでもよいことが理解されよう。
【０１４０】
本発明は、以下の実施例を参照することによって説明されるが、これは、例示にすぎず、本発明を制限することを意図するものではない。本発明は、詳細に、かつその具体的な実施形態を参照して説明されているが、その趣旨及び範囲から逸脱することなくそれに様々な変更及び修正を行うことができることが、当業者には明らかであろう。
【０１４１】
実施例１
ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性ＩｇＧにより誘導されるＣＬＥＣ１２Ａ特異的ＨＬ６０細胞毒性に対するＩＬ−１５の効果
材料及び方法
試薬
１．ＩＭＤＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、番号２１９８０−０６５）
２．ＰＢＳ（Ｂｒａｕｎ、番号２２０／１２２５７９７４／１１１０）
３．ＨＳ血清（ＰＡＡ、番号Ｃ１５−０２０、ロット番号１３）
４．ＦＢＳ
５．Ｆａｃｓ緩衝液ＰＢＳ／０，５％ＢＳＡ
６．ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ、番号Ａ９９６４７）
７．ＨＬ−６０細胞株（培養物は対数期にあるべき）
８．健常ドナーに由来するヘパリン化血液
９．汎Ｔ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  ｂｉｏｔｅｃ、番号１３０−０９６−５３５）
１０．ＣＦＳＥ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、番号Ｃ１１−５７）
１１．９６ウェル平底プレート（Ｃｏｓｔａｒ番号３５９６）
１２．ＩＬ−１５（ストック濃度２０ｕｇ／ｍｌ、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ番号１３０−０９５−７６６）
【０１４２】
ＦＡＣＳ用抗体
１．ＣＤ３ＰｅＣＹ７（ＵＣＨＴ１）（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、番号３００４２０）
２．ＣＤ２５ＰＥ（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ、番号Ａ０７７７４）
３．ＣＤ６９ＡＰＣ（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ、番号Ａ８０７１１）
４．ＣＤ８ＰＥＣＹ７（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ番号７３７６６１）
５．ＣＤ４ＥＣＤ（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ番号６６０４７２７）
【０１４３】
作製した抗体及び希釈物
【０１４４】
【表１】
2021504413.tif 000009
【０１４５】
末梢血単核細胞からのＣＤ３＋Ｔ細胞の単離
ＰＢＭＣを、健常ドナーから採取したヘパリン化血液から単離し、ＭＡＣＳ緩衝液中で洗浄し、そこに懸濁させ、計数のために５０μＬのサンプルを採取し、残りを遠心分離して細胞をペレット化した（５分間、５００Ｇ、室温）。細胞を、１０×１０６個／ＭＡＣＳ緩衝液４０μｌの密度で、ＭＡＣＳ緩衝液中に再懸濁させ、ＣＤ３選択プロトコールは、製造業者によって提供されるものであった（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍｉｌｔｅｎｙｉｂｉｏｔｅｃ．ｃｏｍ／ｄｏｗｎｌｏａｄ／ｄａｔａｓｈｅｅｔｓ＿ｅｎ／１８９７／ＤＳ１３０＿０９６＿５３５．ｐｄｆ）。
【０１４６】
精製されたＣＤ３＋Ｔ細胞の数及び純度を、それぞれ、計数チャンバ及びＦＡＣＳによって判定した。ＦＡＣＳについては、１００μｌの精製されたＣＤ３＋Ｔ細胞を、１μｌのＣＤ３ＰＥＣＹ７とともに、４℃で２０分間インキュベートし、ＦＡＣＳ機で測定した。計数については、単離したＴ細胞を、１０％  ＤＭＳＯ含有培地において凍結させ、使用するまで液体窒素中で保存した。アッセイについては、ＣＤ３＋Ｔ細胞を、水浴において３７℃で解凍し、過剰なアッセイ培地を使用して洗浄し、遠心分離し（５分間、５００Ｇ、室温）、４０，０００個の細胞／ｍｌの密度で再懸濁させた。５０μｌの上記の細胞を使用して、１ウェル当たりの密度を得、２０００個のＣＤ３＋Ｔ細胞／アッセイウェルが得られた。
【０１４７】
ＨＬ−６０親細胞株のＣＦＳＥ標識
ＨＬ−６０細胞株を、前述の方法に従って懸濁液中で増殖させ、培養フラスコから採取した。サンプルを採取して、細胞密度を判定し、非ＣＦＳＥ標識対照として使用した。
【０１４８】
細胞を、過剰なＰＢＳで１回洗浄し（５分間、５００Ｇ、室温）、ＰＢＳ中１０×１０６個／ｍｌの密度で再懸濁させた。ＰＢＳ中のＣＦＳＥストック（濃度５ｍＭ）の、２．５μＭの濃度までの２０００倍希釈物を利用した。１体積のＨＬ−６０（ＰＢＳ中、密度１０×１０６／ｍｌ）及び１体積のＰＢＳ中２．５μＭ  ＣＦＳＥを添加し、穏やかに混合した後、３７℃で１０分間インキュベートすることによって、標識を行った。等体積のＦＢＳを添加し、混合物を、室温で２分間インキュベートした。標識した細胞を、遠心分離（５分間、５００Ｇ、室温）によってペレット化し、上清を廃棄した。細胞を、細胞毒性アッセイに使用した血清を有する過剰培地中に再懸濁させ、２回洗浄した。次いで、細胞を、アッセイ培地を含有する血清中に再懸濁させた（約１×１０６／ｍｌ）。サンプルを使用して、計数（１０μｌ）を行い、ＣＦＳＥ標識効率（１００μｌ）を確認し、細胞密度を、アッセイ培地を使用して０．２×１０６／ｍｌに調整した。
【０１４９】
結果
エフェクターＴ細胞を増強するために、ＩＬ−２及び／又はＩＬ−１５を、共培養物に添加した。まず、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の作用様式に対する両方のサイトカインの効果を、ＨＬ−６０細胞毒性アッセイにおいて評価した。このアッセイでは、ＨＬ−６０細胞及び健常ドナーに由来するＴ細胞を、Ｅ：Ｔ比５：１で培養した。このアッセイにおいてサイトカインの効果を研究するために、野生型Ｆｃを有する抗破傷風毒素（ＴＴ）抗体、単一特異性抗ＣＤ３抗体、修飾されたＦｃを有する二重特異性対照抗体ＴＴ／ＣＤ３、及びＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の存在下において、１００Ｕ／ｍＬのＩＬ−２及び５ｎｇ／ｍＬのＩＬ−１５を添加した。図１に示される結果は、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体と同じＦｃ部分を有する形式である対照ＴＴ／ＣＤ３二重特異性抗体において観察されるように、ＩＬ−２及びＩＬ−１５の組み合わせにより、ＩＬ−２及びＩＬ−１５なしの対照サンプルと比較して、有意なバックグラウンド溶解が誘導されたことを示す。ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体と組み合わせたＩＬ−１５部分の効果を分析するために、２．５、５、１０、及び２０ｎｇ／ｍＬの４つの濃度のＩＬ−１５を、試験した。実験条件は以下の通りであった。
・エフェクター細胞として健常ドナーＴ細胞
・標的細胞としてＨＬ−６０
・Ｅ：Ｔ比１：１０
・ＩｇＧは１０００ｎｇ／ｍＬで試験
・分析日：３日間
・読み取り：Ｔ細胞活性化（ＣＤ４及びＣＤ８  Ｔ細胞上のＣＤ２５及びＣＤ６９）。
【０１５０】
アッセイについては、１００μｌの上記密度の細胞を使用して、２０，０００個のＨＬ−６０細胞／ウェルを得た。それぞれのアッセイウェルに、１０％  ＨＳを有するＩＭＤＭ中、５０μｌの抗体希釈液；１０％  ＨＳを有するＩＭＤＭ中、１００ｕｌの０．２×１０６個／ｍｌのＣＦＳＥ標識ＨＬ−６０細胞；１０％  ＨＳを有するＩＭＤＭ中、５０ｕｌの２０００個の細胞／ｍｌのＭＡＣＳ選別ＣＤ３＋Ｔ細胞を添加した。ＩＬ−１５は、１日目に添加した。
【０１５１】
結果は、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の活性が、ＩＬ−１５の添加によって増強されたことを示す。すなわち、観察されたＣＤ４  Ｔ細胞（図２Ａ）及びＣＤ８  Ｔ細胞（図２Ｂ）の活性化の増強は、ＩＬ−１５の用量と相関性があった。更に、ＩＬ−１５の存在下において観察された活性の増強は、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体に特異的であり、ＣＬＥＣ１２Ａ標的特異的であった。ＩＬ−１５の存在下において、ＴＴ／ＣＤ３二重特異性対照抗体では、明らかなＴ細胞活性化は観察されなかった（ＰＢ９１２４ｐ０１）。
【０１５２】
したがって、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体とのＩＬ−１５の組み合わせは、ＣＬＥＣ１２Ａ標的に媒介されるＴ細胞活性化を効果的に増強した。
【０１５３】
【表２−１】
2021504413.tif 000010
【表２−２】
2021504413.tif 000011
【表２−３】
2021504413.tif 000012
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象においてＴ細胞を活性化する方法であって、前記対象に、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分を投与することを含む、方法。
【請求項２】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及び前記ＩＬ−５部分を投与することにより、ＣＬＥＣ１２Ａを発現する細胞を特異的に標的化するように前記Ｔ細胞を活性化する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及び前記ＩＬ−５部分を投与することにより、ＣＬＥＣ１２Ａを発現する細胞を特異的に標的化し、溶解するように、前記Ｔ細胞を活性化する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記対象が、がんを有する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
対象におけるがんを処置する方法であって、前記対象に、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分を投与することを含む、方法。
【請求項６】
前記対象が、ヒトである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記がんが骨髄起源のものである、請求項４〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記がんが、白血病又は前白血病から選択される、請求項４〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記がんが、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、及び慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）から選択される、請求項４〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及び前記ＩＬ−１５部分が、前記対象に、並行して投与される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、前記ＩＬ−１５部分より前に、前記対象に投与される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＩＬ−１５部分が、前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体より前に、前記対象に投与される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
腫瘍細胞上のＣＬＥＣ１２Ａに対する前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の結合親和性が、ＣＤ３への結合の親和性よりも少なくとも２倍、４倍、６倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、又は５０倍高い、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、ＣＤ３εに結合する、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに結合する第１の重鎖可変領域を含み、前記第１の重鎖可変領域が、
（ａ）アミノ酸配列ＳＧＹＴＦＴＧＹ（配列番号９）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＩＮＰＳＧＧＳ（配列番号１０）を含む重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＧＴＴＧＤＷＦＤＹ（配列番号１１）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｂ）アミノ酸配列ＳＧＹＴＦＴＳＹ（配列番号１３）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＩＮＰＳＧＧＳ（配列番号１４）を含む重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＧＮＹＧＤＥＦＤＹ（配列番号１５）を含む重鎖ＣＤＲ３、又は
（ｃ）アミノ酸配列ＳＧＹＴＦＴＧＹ（配列番号１７）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＷＩＮＰＮＳＧＧ（配列番号１８）を含む重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＤＧＹＦＡＤＡＦＤＹ（配列番号１９）を含む重鎖ＣＤＲ３を含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに結合する第１の重鎖可変領域を含み、前記第１の重鎖可変領域が、配列番号１２、１６、又は２０に示されるＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに結合する第１の重鎖可変領域を含み、前記第１の重鎖可変領域が、配列番号１２、１６、又は２０に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに結合する第１の重鎖可変領域を含み、前記第１の重鎖可変領域が、配列番号１２、１６、又は２０に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、ＣＤ３に結合する第２の重鎖可変領域を含み、前記第２の重鎖可変領域が、
（ａ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＮＧＲＫＱ（配列番号２２）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｂ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＳＧＳＫＫＮ（配列番号３０）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｃ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＨＧＲＫＱ（配列番号３２）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｄ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＨＡＲＫＱ（配列番号３４）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｅ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＮＡＲＫＱ（配列番号３６）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｆ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＮＴＲＫＱ（配列番号４５）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｇ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＤＧＫＮＴ（配列番号４７）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｈ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＧＹＧ（配列番号６２）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＹＹＤＧＳＲＴ（配列番号４９）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３、又は
（ｉ）アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＫＹＧ（配列番号６３）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＨＤＧＲＫＴ（配列番号５１）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３を含む、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、ヒトＣＤ３に結合する第２の重鎖可変領域を含み、前記第２の重鎖可変領域が、配列番号２４〜２９、３１、３３、３５、３７〜４４、４６、４８、５０、及び５２に示される群から選択されるＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、ヒトＣＤ３に結合する第２の重鎖可変領域を含み、前記第２の重鎖可変領域が、配列番号２４〜２９、３１、３３、３５、３７〜４４、４６、４８、５０、又は５２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、ヒトＣＤ３に結合する第２の重鎖可変領域を含み、前記第２の重鎖可変領域が、配列番号２４〜２９、３１、３３、３５、３７〜４４、４６、４８、５０、及び５２に示される群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに結合する第１の重鎖可変領域と、ヒトＣＤ３に結合する第２の重鎖可変領域とを含み、前記第１のＶＨのアミノ酸配列が、配列番号１２、１６、及び２０から選択され、前記第２のＶＨのアミノ酸配列が、配列番号２４〜２９、３１、３３、３５、３７〜４４、４６、４８、５０、又は５２から選択される、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに結合する第１の重鎖可変領域と、ヒトＣＤ３に結合する第２の重鎖可変領域とを含み、前記第１のＶＨが、アミノ酸配列ＳＧＹＴＦＴＧＹ（配列番号９）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＩＮＰＳＧＧＳ（配列番号１０）を含む重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＧＴＴＧＤＷＦＤＹ（配列番号１１）を含む重鎖ＣＤＲ３を含み、前記第２のＶＨが、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号２１）を含む重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＩＷＹＮＡＲＫＱ（配列番号３６）を含む重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＧＴＧＹＮＷＦＤＰ（配列番号２３）を含む重鎖ＣＤＲ３を含む、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含む第１の重鎖可変領域と、配列番号３７に示されるアミノ酸配列を含む第２の重鎖可変領域とを含む、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに結合する第１のＶＨ／ＶＬ結合領域と、ヒトＣＤ３に結合する第２のＶＨ／ＶＬ領域とを含み、前記第１及び第２のＶＨ／ＶＬ結合領域のＶＬが、共通軽鎖を含む、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記共通軽鎖が、アミノ酸配列ＱＳＩＳＳＹ（配列番号５３）を含む可変軽鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号５４）を含む軽鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＱＱＳＹＳＴＰ（配列番号５５）を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記第１及び第２のＶＬが、それぞれ、配列番号５７又は配列番号５８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一である可変軽鎖を含む、請求項２６又は２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の、前記ＣＬＥＣ１２Ａ結合可変領域を含む前記重鎖の定常領域及び前記ＣＤ３結合可変領域を含む前記重鎖の定常領域が、適合性のあるヘテロ二量体化ドメインを含む、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、変異したＣＨ２及び／又は下方ヒンジドメインを含むＦｃ部分を含むＩｇＧ抗体であり、前記Ｆｃ部分のヒトＦｃガンマ受容体への結合が、低減されている、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記変異体ＣＨ２及び／又は下方ヒンジドメインが、２３５位及び／又は２３６位（ＥＵ番号付け）に、アミノ置換を含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記変異体ＣＨ２及び／又は下方ヒンジドメインが、Ｌ２３５Ｇ及び／又はＧ２３６Ｒ置換を含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記ＩＬ−１５部分が、天然に存在するＩＬ−１５、組み換えＩＬ−１５、合成ＩＬ−１５、修飾されたＩＬ−１５、ＰＥＧ化されたＩＬ−１５、ＩＬ−１５及び異種融合パートナーを含む融合タンパク質、ＩＬ−１５模倣体、又はこれらのうちのいずれか１つの機能性断片である、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記ＩＬ−１５部分が、ヒトＩＬ−１５である、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記ヒトＩＬ−１５が、組み換えヒトＩＬ−１５（ｒｈＩＬ−１５）である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記ＩＬ−１５部分が、ＩＬ−１５及び可溶性ＩＬ−１５Ｒａ（ｓＩＬ−１５Ｒａ）を含む複合体である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３７】
前記ＩＬ−１５部分が、ＩＬ−１５ＲａＳｕ／Ｆｃである、請求項３３に記載の方法。
【請求項３８】
前記ＩＬ−１５部分が、ＩＬ−１５と水溶性ポリマーとのコンジュゲートである、請求項３３に記載の方法。
【請求項３９】
ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体とＩＬ−１５部分とを含む、医薬組成物。
【請求項４０】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及び前記ＩＬ−１５部分が、単一製剤で提供される、請求項３９に記載の医薬組成物。
【請求項４１】
前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及び前記ＩＬ−１５部分が、別個の製剤で提供される、請求項３９に記載の医薬組成物。
【請求項４２】
ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体と、ＩＬ−１５部分と、前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及び前記ＩＬ−１５部分を請求項１〜３８のいずれか一項に記載の方法において使用するための説明書と、を含む、キット。
【請求項４３】
対象においてＴ細胞を活性化するのに使用するためのＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体であって、前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、ＩＬ−１５部分と同時に、それとは別個に、又はそれと連続的に投与される、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項４４】
対象においてＴ細胞を活性化するための医薬の製造において使用するためのＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体であって、前記ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体が、ＩＬ−１５部分と同時に、それとは別個に、又はそれと連続的に投与される、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項４５】
対象においてＴ細胞を活性化する際に同時、別個、又は連続的に使用するための組み合わせ調製物として、ＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分を含む、製品。
【請求項４６】
対象におけるがんの処置に使用するためのＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＬ−１５部分。
【国際調査報告】
2021504413.tif 000013
2021504413.tif 000014
2021504413.tif 000015