(57)【要約】  本開示は、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体との組合せのＳＴＩＮＧアゴニスト分子を含む医薬組成物に関する。本組合せは、癌の治療に治療有効な量で独立して又は別個に投与することができる。医薬品の製造のためのこのような組合せの使用；医薬としてのこのような組合せの使用；このような組合せを含むキットオブパーツ；及びこのような組合せの治療方法も提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニスト分子；及び
ｉｉ）インターロイキン−１５（ＩＬ−１５）／ＩＬ−１５受容体アルファ（ＩＬ−１５Ｒａ）複合体
を含む組合せ。
【請求項２】
前記ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体が、ヒトＩＬ−１５及びヒト可溶性ＩＬ−１５Ｒａのヘテロ二量体複合体である、請求項１に記載の組合せ。
【請求項３】
前記ヒトＩＬ−１５が、配列番号１のアミノ酸配列の残基４９〜１６２を含み、前記ヒト可溶性ＩＬ−１５Ｒａが、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の組合せ。
【請求項４】
前記ＳＴＩＮＧアゴニスト分子が、ＳＴＩＮＧ１００、ＳＴＩＮＧ１０１、ＳＴＩＮＧ１０２、ＳＴＩＮＧ１０３、ＳＴＩＮＧ１０４、ＳＴＩＮＧ１０５、ＳＴＩＮＧ１０６及びＳＴＩＮＧ１０７からなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項５】
前記ＳＴＩＮＧアゴニスト分子が、ＳＴＩＮＧ１００を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項６】
前記ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体が、グリコシル化されている、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項７】
前記ＳＴＩＮＧアゴニスト分子及び前記ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を、同時に又は連続的に投与する、医薬品としての使用のための、請求項１に記載の組合せ。
【請求項８】
癌の治療のための治療有効量の前記ＳＴＩＮＧアゴニスト分子及びＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項９】
癌の治療のための医薬品の製造のための、請求項１に記載の組合せの使用。
【請求項１０】
前記癌として、結腸癌、肝臓癌、小細胞肺癌、肺の非小細胞癌、黒色腫、膵臓癌、皮膚癌、子宮癌、卵巣癌、胃癌、カポジ肉腫、及び扁平上皮癌が挙げられる、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
前記癌として、Ｔ細胞リンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；１つ以上の慢性白血病、例として、限定されるものではないが、例えば、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）；バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、有毛細胞白血病、小細胞又は大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性リンパ増殖性病態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽細胞リンパ腫及び形質細胞様樹状細胞腫瘍が挙げられる、請求項９に記載の使用。
【請求項１２】
癌の治療方法であって、有効量の請求項１に記載の組合せをそれが必要とされる対象に投与することを含み、前記癌は、耐性又は難治性である方法。
【請求項１３】
前記ＳＴＩＮＧアゴニスト分子及び前記ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を、同時に又は連続的に投与する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
追加の治療剤を投与することをさらに含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞拡大を促進する方法であって、ＳＴＩＮＧアゴニスト分子との組合せの有効量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を投与することを含む方法。
【請求項１６】
前記ＳＴＩＮＧアゴニスト分子が、ＳＴＩＮＧ１００、ＳＴＩＮＧ１０１、ＳＴＩＮＧ１０２、ＳＴＩＮＧ１０３、ＳＴＩＮＧ１０４、ＳＴＩＮＧ１０５、ＳＴＩＮＧ１０６及びＳＴＩＮＧ１０７からなる群から選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＳＴＩＮＧアゴニスト分子が、ＳＴＩＮＧ１００を含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体が、ヒトＩＬ−１５及びヒト可溶性ＩＬ−１５Ｒａのヘテロ二量体複合体である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
前記ヒトＩＬ−１５が、配列番号１のアミノ酸配列の残基４９〜１６２を含み、前記ヒト可溶性ＩＬ−１５Ｒａが、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＳＴＩＮＧアゴニスト分子及びＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を、同時に又は連続的に投与することを含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項２１】
前記腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞拡大が、結腸癌、肝臓癌、小細胞肺癌、肺の非小細胞癌、黒色腫、膵臓癌、皮膚癌、子宮癌、卵巣癌、胃癌、カポジ肉腫、及び扁平上皮癌の治療に治療有効である、請求項１５〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞拡大が、Ｔ細胞リンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；１つ以上の慢性白血病、例として、限定されるものではないが、例えば、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）；バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、有毛細胞白血病、小細胞又は大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性リンパ増殖性病態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽細胞リンパ腫及び形質細胞様樹状細胞腫瘍の治療に治療有効である、請求項１５〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
腫瘍特異的ＮＫ細胞拡大を促進する方法であって、ＳＴＩＮＧアゴニスト分子との組合せの有効量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を投与することを含む方法。
【請求項２４】
前記ＳＴＩＮＧアゴニスト分子が、ＳＴＩＮＧ１００、ＳＴＩＮＧ１０１、ＳＴＩＮＧ１０２、ＳＴＩＮＧ１０３、ＳＴＩＮＧ１０４、ＳＴＩＮＧ１０５、ＳＴＩＮＧ１０６及びＳＴＩＮＧ１０７からなる群から選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記ＳＴＩＮＧアゴニスト分子が、ＳＴＩＮＧ１００を含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体が、ヒトＩＬ−１５及びヒト可溶性ＩＬ−１５Ｒａのヘテロ二量体複合体である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２７】
前記ヒトＩＬ−１５が、配列番号１のアミノ酸配列の残基４９〜１６２を含み、前記ヒト可溶性ＩＬ−１５Ｒａが、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記ＳＴＩＮＧアゴニスト分子及びＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を、同時に又は連続的に投与することを含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２９】
前記腫瘍特異的ＮＫ細胞拡大が、結腸癌、肝臓癌、小細胞肺癌、肺の非小細胞癌、黒色腫、膵臓癌、皮膚癌、子宮癌、卵巣癌、胃癌、カポジ肉腫、及び扁平上皮癌の治療に治療有効である、請求項２３〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記腫瘍特異的ＮＫ細胞拡大が、Ｔ細胞リンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；１つ以上の慢性白血病、例として、限定されるものではないが、例えば、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）；バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、有毛細胞白血病、小細胞又は大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性リンパ増殖性病態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽細胞リンパ腫及び形質細胞様樹状細胞腫瘍の治療に治療有効である、請求項２３〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、効力を向上させる追加の薬剤、例えば、ＩＬ−１５受容体アルファ（「ＩＬ−１５Ｒａ」）に結合しているインターロイキン−１５（「ＩＬ−１５」）を含む複合体との組合せのＳＴＩＮＧアゴニスト分子に関する。具体的な態様において、組合せは、自然免疫の誘導が有益である障害、例えば、癌の予防、治療、及び／又は管理において有用である。
【背景技術】
【０００２】
自然免疫は、環境刺激、例として、限定されるものではないが、病原体、例えば、細菌又はウイルスと闘う急速な非特異的免疫応答である。適応免疫は緩慢であるが、より特異的な免疫応答であり、それは長期持続又は保護的免疫を宿主に付与し、細胞及び体液性免疫を促進するためのナイーブＴリンパ球のＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞及び／又はＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞への分化及び活性化を含む。自然免疫系の抗原提示細胞、例えば、樹上細胞又はマクロファージは、外来抗原を食作用及びプロセシングに供し、Ｔ細胞への細胞表面上でそれらを提示し、それによりＴ細胞応答を活性化させることにより自然免疫系と適応免疫系との間の重要なリンクとして機能する。
【０００３】
ＳＴＩＮＧ（インターフェロン遺伝子の刺激因子）は、自然免疫シグナリングを容易にする小胞体アダプターである（Ｉｓｈｉｋａｗａ  ａｎｄ  Ｂａｒｂｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  ２００８，４５５（７２１３）：６７４−６７８）。ＳＴＩＮＧは、４つの推定膜貫通領域を含み（Ｏｕｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２０１２）３６，１０７３）、主に小胞体中に存在し、ＮＦ−ｋＢ、ＳＴＡＴ６、及びＩＲＦ３転写経路を活性化させてＩ型インターフェロン（例えば、ＩＦＮ−α及びＩＦＮ−β）の発現を誘導し、発現後に強力な抗ウイルス状態を発揮し得ることが報告された（Ｉｓｈｉｋａｗａ  ａｎｄ  Ｂａｒｂｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  ２００８，４５５（７２１３）：６７４−６７８；Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ（２０１１）１４７，４３６−４４６）。対照的に、ＳＴＩＮＧの損失により、ネズミ胚線維芽細胞はマイナス鎖ウイルス、例として、水疱性口炎ウイルスの感染に極端に感受性となった（Ｉｓｈｉｋａｗａ  ａｎｄ  Ｂａｒｂｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ．２００８，４５５（７２１３）：６７４−６７８）。
【０００４】
サイトカインのインターロイキン−１５（ＩＬ−１５）は、体内の多くの細胞により産生されるリンホカインのアルファ−４ヘリックスバンドルファミリーのメンバーである。ＩＬ−１５は、自然及び適応免疫系の両方の活性のモジュレーション、例えば、侵入病原体に対するメモリーＴ細胞応答の維持、アポトーシスの阻害、樹状細胞の活性化、並びにナチュラルキラー（ＮＫ）細胞増殖及び細胞毒性活性の誘導における極めて重要な役割を担う。ＩＬ−１５シグナリングは、３つのポリペプチド、タイプ特異的ＩＬ−１５受容体アルファ（「ＩＬ−１５Ｒａ」）、ＩＬ−２／ＩＬ−１５受容体ベータ（又はＣＤ１２２）（「β」）、及び複数のサイトカイン受容体により共有される共通ガンマ鎖（又はＣＤ１３２）（「γ」）からなるＩＬ−１５受容体のヘテロ二量体複合体を介して生じることが示されている。免疫系におけるその多面的役割に基づき、ＩＬ−１５媒介機能をモジュレートするために設計される種々の治療法が探索されてきた。近年の報告は、ＩＬ−１５は、ｓＩＬ−１５Ｒａ、又はｓｕｓｈｉドメインと複合体化された場合、その免疫向上機能を維持することを示唆している。組換えＩＬ−１５及びＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、種々の前臨床モデルにおいてメモリーＣＤ８Ｔ細胞及びＮＫ細胞の拡大を異なる程度で促進し、腫瘍拒絶を向上させることが示されている。さらに、マウスモデルにおけるＩＬ−１５又はＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体含有構築物の腫瘍標的化は、同系腫瘍が移植された免疫コンピテント動物又はヒト腫瘍細胞系が注射されたＴ及びＢ細胞欠損ＳＣＩＤマウス（ＮＫ細胞を保持）のいずれにおいても改善された抗腫瘍応答をもたらした。向上した抗腫瘍活性は、腫瘍内のＮＫ及び／又はＣＤ８細胞傷害性Ｔ細胞拡大の向上をもたらすＩＬ−１５含有部分の増加した半減期並びに腫瘍細胞の表面上のＩＬ−１５のトランス提示に依存的であることが考えられる。したがって、ＩＬ−１５を発現するように遺伝子操作された腫瘍細胞は、Ｔ細胞及びＮＫ細胞リクルートメント、増殖及び機能を向上させることにより樹立腫瘍の拒絶を促進することも報告された（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．１０６：７５１３−７５１８；Ｍｕｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５（２）：２８９−２９３；Ｅｖａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７９（１）：６６−７３；Ｋｌｅｂａｎｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．１０１（７）：１９６９−７４；Ｓｎｅｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１１）Ｂｌｏｏｄ．１１８（２６）：６８４５−６８４８；Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８８（１２）：６１５６−６１６４）。
【０００５】
したがって、抗腫瘍免疫を向上させる治療アプローチは、免疫応答の１つ以上の段階における複数の構成成分の標的化により免疫応答が最適化される場合、より効率的に機能し得る。したがって、疾患、特に癌の治療のための新たな免疫療法の必要性は依然として満たされていない。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
したがって、抗腫瘍免疫を向上させ、そのため、例えば、組合せの治療剤の単剤療法投与と比較して障害の治療における優れた有益な効果、例えば、向上した抗癌効果、低減した毒性及び／又は低減した副作用を提供し得る組合せ療法が本明細書に開示される。例えば、組合せ中の治療剤の１つ以上は、単剤療法投与と比較して同一の治療効果を達成するために要求されるものより低い投与量で、又はより短い投与期間、又はより低頻度で投与することができる。より具体的には、組合せ中の治療剤の１つを投与して他の薬剤の効果を向上させることができる。したがって、組合せ療法を使用して癌を治療するための組成物及び方法が開示される。
【０００７】
一実施形態において、本開示は、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体との組合せのＳＴＩＮＧアゴニスト分子を含む組合せを提供する。
【０００８】
一実施形態において、ＳＴＩＮＧアゴニスト分子は、ジヌクレオチドである。別の実施形態において、ＳＴＩＮＧアゴニスト分子は、環式ジヌクレオチド（ＣＤＮ）である。本明細書に開示される実施形態において、ＳＴＩＮＧアゴニスト分子は、
【化１】
2021512104.tif 000002
からなる群から選択される。
【０００９】
一実施形態において、組合せのＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、野生型ＩＬ−１５Ｒａ又はＩＬ−１５Ｒａ誘導体に共有又は非共有結合している野生型ＩＬ−１５又はＩＬ−１５誘導体を含み得る。一実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、野生型ＩＬ−１５及び野生型ＩＬ−１５Ｒａを含む。別の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、ＩＬ−１５誘導体及び野生型ＩＬ−１５Ｒａを含む。別の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、野生型ヘテロ二量体形態である。別の実施形態において、ＩＬ−１５は、ヒトＩＬ−１５であり、ＩＬ−１５Ｒａは、ヒトＩＬ−１５Ｒａである。具体的な実施形態において、ヒトＩＬ−１５は、表１に記載のとおり、配列番号１のアミノ酸配列又は配列番号１のアミノ酸残基４９〜１６２を含み、ヒトＩＬ−１５Ｒａは、配列番号６のアミノ酸配列又はその断片を含む。別の実施形態において、ＩＬ−１５は、表１に記載のとおり、配列番号１のアミノ酸配列又は配列番号１のアミノ酸残基４９〜１６２を含み、ＩＬ−１５Ｒａは、配列番号７又は配列番号１０のアミノ酸配列を含む。具体的な実施形態において、ヒトＩＬ−１５は、表１に記載のとおり、配列番号１のアミノ酸配列のアミノ酸残基４９〜１６２を含み、ヒトＩＬ−１５Ｒａは、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。
【００１０】
他の実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａは、グリコシル化がＩＬ−１５Ｒａの質量の少なくとも２０％、３０％、４０％若しくは５０％以上を占めるようにグリコシル化されている。別の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、野生型ＩＬ−１５及びＩＬ−１５Ｒａ誘導体を含む。別の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、ＩＬ−１５誘導体及びＩＬ−１５Ｒａ誘導体を含む。一実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、野生型ＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態である。別の実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、内因性プロテアーゼによる開裂を阻害する突然変異を含む。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａの細胞外ドメイン開裂部位は、異種プロテアーゼにより特異的に認識される開裂部位により置き換えられている。一実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａの細胞外ドメイン開裂部位は、異種細胞外ドメイン開裂部位（例えば、ＩＬ−１５Ｒａを開裂させる内因性プロセシング酵素と無関連の別の酵素により認識及び開裂される異種膜貫通ドメイン）により置き換えられている。
【００１１】
具体的な実施形態において、本開示は、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体との組合せのＳＴＩＮＧアゴニスト分子を含む組合せであって、ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニスト分子は、分子ＳＴＩＮＧ１００〜ＳＴＩＮＧ１０７からなる群から選択され；ｉｉ）ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、ヒトＩＬ−１５及びヒト可溶性ＩＬ−１５Ｒａのヘテロ二量体複合体であり、ヒトＩＬ−１５は、配列番号１のアミノ酸配列の残基４９〜１６２を含み、ヒト可溶性ＩＬ−１５Ｒａは、配列番号１０のアミノ酸配列を含む組合せを提供する。
【００１２】
組合せ療法の使用
本明細書に開示される組合せは、抗腫瘍免疫、免疫細胞機能の増加（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖、ＮＫ細胞増殖、制御性Ｔ細胞機能の阻害、複数の細胞タイプ、例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞の活性に対する効果の１つ以上）、及び腫瘍浸潤リンパ球の増加の１つ以上をもたらし得る。一実施形態において、組合せ中のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の使用は免疫応答を刺激し、ＳＴＩＮＧアゴニスト分子の使用から生じる自然免疫を向上させ得る。したがって、このような組合せを使用して対象における抗腫瘍免疫の向上が望まれる障害、例えば、癌を治療し、又は予防することができる。このような組合せ療法は、例えば、癌免疫療法及び他の病態、例えば、慢性感染の治療に使用することができる。一実施形態において、対象にＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体との組合せのＳＴＩＮＧアゴニスト分子を投与することにより対象における障害、例えば、過剰増殖病態又は障害（例えば、癌）を治療する（例えば、阻害し、低減させ、改善し、又は予防する）方法が本明細書に提供される。対象における障害、例えば、過剰増殖病態又は障害（例えば、癌）の治療（例えば、阻害、低減、改善、又は予防）における使用のための、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体との組合せのＳＴＩＮＧアゴニスト分子も提供される。対象における障害、例えば、過剰増殖病態又は障害（例えば、癌）の治療（例えば、阻害、低減、改善、又は予防）のための医薬品の調製における使用のための、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体との組合せのＳＴＩＮＧアゴニスト分子がさらに提供される。
【００１３】
ＳＴＩＮＧアゴニスト分子及びＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の抗腫瘍免疫の増強は、以下に記載の実施例１において実証された。一部の実施形態において、組合せを使用して癌を治療することができる。癌としては、限定されるものではないが、種々の器官系の肉腫、腺癌、芽細胞腫、及び癌腫、例えば、肝臓、肺、乳房、リンパ、胆管腸管（ｂｉｌｉａｒｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ）（例えば、結腸）、腎尿路生殖器（例えば、腎臓、尿路上皮細胞）、前立腺及び咽頭を冒すものが挙げられる。
【００１４】
腺癌としては、悪性腫瘍、例えば、ほとんどの結腸癌、腎臓癌、腎細胞癌、肝臓癌、小細胞肺癌、肺の非小細胞癌、小腸の癌及び食道の癌が挙げられる。一実施形態において、癌は、黒色腫、例えば、進行期黒色腫である。治療することができる他の癌の例としては、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部の癌、皮膚又は眼内悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、直腸結腸癌、腹膜の癌、胃癌、食道癌、唾液腺癌、精巣癌、子宮癌、卵管の癌腫、子宮内膜の癌腫、頸部の癌腫、膣の癌腫、外陰の癌腫、陰茎癌、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、子宮頸癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道の癌、小腸の癌、内分泌系の癌、甲状腺の癌、副甲状腺の癌、副腎の癌、軟部組織の肉腫、尿道の癌、陰茎の癌、慢性又は急性白血病、例として、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病、幼児の固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱の癌、腎臓又は尿管の癌、腎盂の癌腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊椎軸腫瘍、脳幹グリオーマ、下垂体腺腫、カポジ肉腫、神経内分泌腫瘍（例として、カルチノイド腫瘍、ガストリノーマ、及び膵島細胞癌）、中皮腫、神経鞘腫（例として、聴神経腫）、髄膜腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；１つ以上の慢性白血病、例として、限定されるものではないが、例えば、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）；追加の血液癌又は血液病態、例として、限定されるものではないが、例えば、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、有毛細胞白血病、小細胞又は大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性リンパ増殖病態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽細胞リンパ腫及び形質細胞様樹状細胞腫瘍が挙げられる。
【００１５】
一実施形態において、ＳＴＩＮＧアゴニスト分子及びＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の組合せは、対象に別個に又は一緒に投与される。別の実施形態において、ＳＴＩＮＧアゴニスト分子及びＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の組合せは、同時に又は連続的に投与される。
【００１６】
本出願はまた、本明細書に開示されるＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体をコードする核酸、並びにその核酸を含むベクター、及びその核酸又はベクターを含む宿主細胞を提供する。本明細書に開示されるＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を産生する方法であって、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体をコードする核酸を発現する宿主細胞を培養し；培養物からＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を回収することを含む方法も提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】結腸直腸癌（ＭＣ３８）のマウスモデルにおけるｈｅｔＩＬ１５及びＳＴＩＮＧアゴニスト分子の組合せの薬物動態（ＰＤ）及び効力を示す表である。
【図２】結腸直腸癌のマウスモデルの組合せの試験設計及び投与スケジュールを示す。
【図３】図３Ａは、単一治療剤としてのｈｅｔＩＬ１５、単一治療剤としてのＳＴＩＮＧ１００及びｈｅｔＩＬ１５／ＳＴＩＮＧ１００組合せを増加用量のＳＴＩＮＧ１００で用いた結腸直腸癌モデルにおけるマウスの腫瘍容積の曲線を示す。図３Ｂは、同一の投与レジメンを用いたマウスの生存率のグラフである。
【図４】ｈｅｔＩＬ１５及びＳＴＩＮＧ１００が単一治療剤として及び組合せで十分に忍容されることを実証する、結腸直腸腫瘍モデルにおけるマウスの体重を示すグラフである。
【図５】図５Ａ−Ｆは、単剤療法としてのＳＴＩＮＧ１００又はｈｅｔＩＬ１５が若干の腫瘍成長遅延のみをもたらすが、ＳＴＩＮＧ１００及びｈｅｔＩＬ１５の組合せが持続的な完全寛解をもたらすことを示す。図５Ｆは、コホート中の７匹のマウスのうち５匹の完全な回復を示し、完全回復率は７１％である。
【図６】図６Ａ−Ｃは、ｈｅｔＩＬ１５／ＳＴＩＮＧ１００組合せが抗腫瘍免疫を向上させることを示す。図６ＡはＣＤ８＋Ｔ細胞の増加を示すグラフである一方、図６ＢはＮＫ細胞の増加を示す。図６Ｃは、単一治療剤としてのｈｅｔＩＬ１５及びＳＴＩＮＧ１００、及び次いでｈｅｔＩＬ１５／ＳＴＩＮＧ１００組合せを増加用量のＳＴＩＮＧ１００で用いたＣＤ８＋Ｔ細胞の数を示す。
【図７】図７Ａ−Ｂは、ｈｅｔＩＬ１５／ＳＴＩＮＧ１００組合せにより処理されたマウスが持続的な抗腫瘍免疫を発現することを示す。図７Ａは、ｈｅｔＩＬ１５／ＳＴＩＮＧ１００組合せにより処理されたマウスが、同一タイプの腫瘍細胞（ＭＣ３８）により再チャレンジされた場合に腫瘍を形成しないことを示す。図７Ｂは、正常、非処理マウスから採取された脾細胞、ＭＣ３８結腸直腸腫瘍が移植されたマウス及びｈｅｔＩＬ１５／ＳＴＩＮＧ１００組合せにより処理され、再チャレンジされたマウスから採取された脾細胞により産生されたＩＦＮγの量を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本開示は、ＳＴＩＮＧアゴニスト分子とＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体とを含む組合せ、並びにそのような組合せの医薬組成物、産生方法、及び使用方法を提供する。
【００１９】
定義
特に定義のない限り、本明細書において使用される全ての技術及び科学用語は、本開示が属する分野の当業者により一般に理解されるものと同一の意味を有する。
【００２０】
本明細書において使用される用語「ＳＴＩＮＧアゴニスト分子」は、ＳＴＩＮＧに結合し、ＳＴＩＮＧを活性化させ得る化合物を指す。ＳＴＩＮＧ活性の活性化としては、例えば、炎症性サイトカイン、例として、インターフェロン、例えば、１型インターフェロン、例として、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、３型インターフェロン、例えば、ＩＦＮγ、又は他の炎症促進性分子、例として、限定されるものではないが、ＩＰ１０、ＴＮＦ、ＩＬ−６、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＣＬ４、ＣＸＣＬ１１、ＣＣＬ５、ＣＣＬ３、又はＣＣＬ８の刺激を挙げることができる。ＳＴＩＮＧアゴニスト活性としては、ＴＡＮＫ結合キナーゼ（ＴＢＫ）１リン酸化、ＳＴＩＮＧリン酸化、インターフェロン調節因子（ＩＲＦ）活性化（例えば、ＩＲＦ３活性化）、ＮＦκＢ活性化、ＳＴＡＴ６活性化、インターフェロン−γ−誘導性タンパク質（ＩＰ−１０）、又は他の炎症性タンパク質及びサイトカインの分泌の刺激を挙げることもできる。ＳＴＩＮＧアゴニスト活性は、例えば、インターフェロン刺激アッセイ、レポーター遺伝子アッセイ（例えば、ｈＳＴＩＮＧ  ｗｔアッセイ、又はＴＨＰ−１  Ｄｕａｌアッセイ）、ＴＢＫ１活性化アッセイ、ＩＰ−１０アッセイ、ＳＴＩＮＧ生化学［３Ｈ］ｃＧＡＭＰ競合アッセイ、又は当業者に公知の他のアッセイを使用して検出されるＳＴＩＮＧ経路の活性化を刺激する化合物の能力により決定することができる。ＳＴＩＮＧアゴニスト活性は、ＳＴＩＮＧ又はＳＴＩＮＧ経路により活性化されるタンパク質をコードする遺伝子の転写のレベルを増加させる化合物の能力により決定することもできる。このような活性は、例えば、定量的リアルタイムＰＣＲ、ＲＮＡｓｅｑ、Ｎａｎｏｓｔｒｉｎｇ又は分泌タンパク質の検出のための種々のアッセイ（サイトカインビーズアレイ、ＥＬＩＳＡ）により検出することができる。一部の実施形態において、ＳＴＩＮＧノックアウト細胞系における化合物の活性を試験するためのアッセイを使用して化合物がＳＴＩＮＧに特異的であるか否かを決定することができ、ＳＴＩＮＧに特異的な化合物は、ＳＴＩＮＧ経路が部分的又は完全に枯渇した細胞系における活性を有することが予測されない。
【００２１】
「との組合せの」又は「の組合せ」は、組合せの薬剤が同時に投与され、及び／又は送達のために一緒に配合されなければならないことを意味するものではないが、それらの送達方法は本明細書に記載の範囲内である。ＳＴＩＮＧアゴニスト分子は、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体よりも前に、それと同時に、又はその後に投与することができ、その逆も可能であり、すなわち、ＳＴＩＮＧアゴニスト分子及びＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は任意の順序で投与することができる。一般に、それぞれの薬剤は、その薬剤について決定された用量において、及び／又は時間スケジュールで投与する。この組合せにおいて利用されるそれぞれの治療剤は、単一組成物中で一緒に投与し、又は異なる組成物中で別個に投与することができることがさらに認識される。一般に、組合せの治療剤は、それらが個々に利用されるレベルを超過しないレベルにおいて利用されることが予測される。一部の実施形態において、組合せにおいて利用される薬剤のレベルは、個々に利用されるレベルよりも低い。一部の実施形態において、組合せの薬剤は、互いに独立して販売されてもいる完全に別個の医薬剤形又は医薬配合物として使用することもでき、それらの組合せの使用の可能性の説明は、包装用品、例えば、リーフレットなど、又は他の情報に存在し、又は提供される。
【００２２】
用語「アミノ酸」は、天然存在及び合成アミノ酸、並びに天然存在アミノ酸と同様の様式で機能するアミノ酸アナログ及びアミノ酸模倣体を指す。天然存在アミノ酸は、遺伝子コードによりコードされるもの、並びに後に修飾されるそれらのアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、ガンマ−カルボキシグルタミン酸、及びＯ−ホスホセリンである。アミノ酸アナログは、天然存在アミノ酸と同一の基本化学構造、すなわち、水素に結合しているアルファ炭素、カルボキシル基、アミノ基、及びＲ基を有する化合物、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムを指す。このようなアナログは、修飾Ｒ基（例えば、ノルロイシン）又は修飾ペプチド骨格を有するが、天然存在アミノ酸と同一の基本化学構造を保持する。アミノ酸模倣体は、アミノ酸の一般化学構造と異なる構造を有するが、天然存在アミノ酸と同様の様式で機能する化合物を指す。
【００２３】
用語「保存的改変バリアント」は、アミノ酸及び核酸配列の両方に当てはまる。特定の核酸配列に関して、保存的改変バリアントは、同一又は本質的に同一のアミノ酸配列をコードするそれらの核酸を指し、又は核酸がアミノ酸配列をコードしない場合、本質的に同一の配列を指す。遺伝子コードの縮重のため、多数の機能的に同一の核酸が任意の所与のタンパク質をコードする。例えば、コドンＧＣＡ、ＧＣＣ、ＧＣＧ及びＧＣＵは全て、アミノ酸アラニンをコードする。したがって、アラニンがコドンにより規定されるあらゆる位置において、コドンは、コードされるポリペプチドを変更せずに記載の対応するコドンのいずれかに変更することができる。このような核酸バリエーションは、保存的改変バリエーションの１つの種である「サイレントバリエーション」である。ポリペプチドをコードする本明細書におけるあらゆる核酸配列は、核酸のあらゆる可能なサイレントバリエーションも記載する。当業者は、核酸中のそれぞれのコドン（通常、メチオニンについての唯一のコドンであるＡＵＧ、及び通常、トリプトファンについての唯一のコドンであるＴＧＧを除く）を機能的に同一の分子を生じさせるために改変することができることを認識する。したがって、ポリペプチドをコードする核酸のそれぞれのサイレントバリエーションは、それぞれの記載の配列中に黙示的に含まれる。
【００２４】
ポリペプチド配列について、「保存的改変バリアント」は、化学的に類似のアミノ酸によるアミノ酸の置換をもたらすポリペプチド配列に対する個々の置換、欠失又は付加を含む。機能的に類似のアミノ酸を提供する保存的置換表は、当分野において周知である。このような保存的改変バリアントは、多型バリアント、種間ホモログ、及びアレルに加えられ、それらを排除しない。以下の８つの群は、互いについての保存的置換であるアミノ酸を含有する：１）アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）；２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）；４）アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）；５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）；６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）；７）セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）；及び８）システイン（Ｃ）、メチオニン（Ｍ）（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ（１９８４）参照）。一実施形態において、用語「保存的配列改変」は、そのアミノ酸配列を含有するＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の結合特性に有意に影響も変更もしないアミノ酸改変を指すために使用される。
【００２５】
２つ以上の核酸又はポリペプチド配列に関する用語「同一」又は「同一性」パーセントは、同一である２つ以上の配列又は部分配列を指す。２つの配列が、以下の配列比較アルゴリズムの１つを使用して計測して、又は手作業のアラインメント及び目視検査により比較ウインドウにわたる最大対応、又は指定領域について比較し、アラインした場合、同一であるアミノ酸残基及びヌクレオチドの規定の割合（すなわち、規定の領域にわたる、又は規定されない場合、配列全体にわたる６０％の同一性、場合により、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性）を有する場合、２つの配列は「実質的に同一」である。場合により、同一性は、少なくとも約５０ヌクレオチド（又は１０アミノ酸）長である領域にわたり、又はより好ましくは、１００〜５００又は１０００ヌクレオチド長以上（又は２０、５０、２００アミノ酸長以上）である領域にわたり存在する。場合により、同一性は、少なくとも５０ヌクレオチド（又は１０アミノ酸）長である領域にわたり、又はより好ましくは、１００〜５００又は１０００ヌクレオチド長以上（又は２０、５０、２００アミノ酸長以上）である領域にわたり存在する。
【００２６】
配列比較のため、典型的には、１つの配列は試験配列を比較する参照配列として機能する。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験及び参照配列をコンピュータに入力し、必要により部分配列座標を指定し、配列アルゴリズムプログラムパラメータを指定する。デフォルトプログラムパラメータを使用することができ、又は代替的パラメータを指定することができる。次いで、配列比較アルゴリズムは、プログラムパラメータに基づき参照配列に対する試験配列についての配列同一性パーセントを計算する。
【００２７】
本明細書において使用される「比較ウインドウ」は、配列を同一数の連続位置の参照配列と、２つの配列を最適にアラインした後に比較することができる２０〜６００、通常、約５０〜約２００、より通常、約１００〜約１５０からなる群から選択される連続位置の数のいずれか１つのセグメントへの言及を含む。比較のための配列のアラインメントの方法は、当分野において周知である。比較のための配列の最適なアラインメントは、例えば、Ｓｍｉｔｈ  ＆  Ｗａｔｅｒｍａｎ（１９７０）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２ｃの局所相同性アルゴリズムにより、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ＆  Ｗｕｎｓｃｈ，（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３の相同性アラインメントアルゴリズムにより、Ｐｅａｒｓｏｎ  ＆  Ｌｉｐｍａｎ，（１９８８）ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ８５：２４４４の類似性検索法により、それらのアルゴリズムのコンピュータ化実装（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．におけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ）により、又は手作業のアラインメント及び目視検査（例えば、Ｂｒｅｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．（ｒｉｎｇｂｏｕ  ｅｄ．，２００３）参照）により実施することができる。
【００２８】
配列同一性パーセント及び配列類似性の決定に好適なアルゴリズムの２つの例は、ＢＬＡＳＴ及びＢＬＡＳＴ２．０アルゴリズムであり、それらはそれぞれＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９７７）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２；及びＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０に記載されている。ＢＬＡＳＴ分析を実行するためのソフトウェアは、アメリカ国立生物工学情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）を介して公的に入手可能である。このアルゴリズムは、データベース配列中の同一長さのワードとアラインした場合にある正の値の閾値スコアＴにマッチし、又はそれを満たすクエリ配列中の長さＷの短いワードを同定することにより、高スコア配列ペア（ｈｉｇｈ  ｓｃｏｒｉｎｇ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｐａｉｒ）（ＨＳＰ）を同定することを最初に含む。Ｔは、隣接ワードスコア閾値として言及される（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．、前掲）。これらの初期隣接ワードヒットは、それらを含有するより長いＨＳＰを見出すための検索を開始するためのシードとして機能する。ワードヒットは、累積アラインメントスコアを増加させることができる限り、それぞれの配列に沿って両方向で拡張される。累積スコアは、ヌクレオチド配列についてはパラメータＭ（マッチ残基のペアについての報酬スコア；常に＞０）及びＮ（ミスマッチ残基についてのペナルティスコア；常に＜０）を使用して計算される。アミノ酸配列については、累積スコアを計算するためにスコアマトリクスが使用される。それぞれの方向におけるワードヒットの拡張は、累積アラインメントスコアがその最大達成値から量Ｘだけ下落する場合；１つ以上の負のスコア残基アラインメントの蓄積に起因して累積スコアが０以下に達する場合；又はいずれかの配列の末端に到達される場合に停止される。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメータＷ、Ｔ、及びＸは、アラインメントの感度及び速度を決定する。ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列について）は、デフォルトとしてワード長さ（Ｎ）１１、期待値（Ｅ）又は１０、Ｍ＝５、Ｎ＝−４、及び両鎖の比較を使用する。アミノ酸配列について、ＢＬＡＳＴＰプログラムは、デフォルトとしてワード長さ３、及び期待値（Ｅ）１０、並びにＢＬＯＳＵＭ６２スコアマトリクス（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  ＆  Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，（１９８９）ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ８９：１０９１５参照）のアラインメント（Ｂ）５０、期待値（Ｅ）１０、Ｍ＝５、Ｎ＝−４、及び両鎖の比較を使用する。
【００２９】
ＢＬＡＳＴアルゴリズムは、２つの配列間の類似性の統計的分析も実行する（例えば、Ｋａｒｌｉｎ  ＆  Ａｌｔｓｃｈｕｌ，（１９９３）ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ９０：５８７３−５７８７参照）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムにより提供される類似性の１つの尺度は、最小和確率（Ｐ（Ｎ））であり、それは２つのヌクレオチド又はアミノ酸配列間のマッチが偶然生じる確率の指標を提供する。例えば、核酸は、試験核酸と参照核酸との比較における最小和確率が約０．２未満、より好ましくは、約０．０１未満、最も好ましくは、約０．００１未満である場合、参照配列と類似するとみなされる。
【００３０】
２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれたＥ．Ｍｅｙｅｒｓ及びＷ．Ｍｉｌｌｅｒ（Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．，（１９８８）４：１１−１７）のアルゴリズムを使用して、ＰＡＭ１２０加重残基表（ｗｅｉｇｈｔ  ｒｅｓｉｄｕｅ  ｔａｂｌｅ）、１２のギャップ長さペナルティ及び４のギャップペナルティを使用して決定することもできる。さらに、２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＧＣＧソフトウェアパッケージ中のＧＡＰプログラムに組み込まれたＮｅｅｄｌｅｍａｎ  ＆  Ｗｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ，Ｂｉｏｌ．（１９７０）４８：４４４−４５３）アルゴリズムを使用して、ＢＬＯＳＵＭ６２マトリクス又はＰＡＭ２５０マトリクスのいずれか、並びにギャップ加重１６、１４、１２、１０、８、６、又は４及び長さ加重１、２、３、４、５、又は６を使用して決定することができる。
【００３１】
上記の配列同一性の割合以外で、２つの核酸配列又はポリペプチドが実質的に同一である別の指標は、以下に記載のとおり、第１の核酸によりコードされるポリペプチドが第２の核酸によりコードされるポリペプチドに対して産生された抗体と免疫学的に交差反応性であることである。したがって、ポリペプチドは、典型的には、例えば、２つのペプチドが保存的置換だけ異なる第２のポリペプチドと実質的に同一である。２つの核酸配列が実質的に同一である別の指標は、以下に記載のとおり、２つの分子又はそれらの相補体がストリンジェントな条件下で互いにハイブリダイズすることである。２つの核酸配列が実質的に同一であるさらに別の指標は、同一のプライマーを使用して配列を増幅させることができることである。
【００３２】
用語「核酸」は、本明細書において用語「ポリヌクレオチド」と互換的に使用され、デオキシリボヌクレオチド又はリボヌクレオチド及び一本鎖又は二本鎖形態のいずれかのそれらの重合体を指す。この用語は、参照核酸と類似の結合特性を有し、参照ヌクレオチドと類似の様式で代謝される合成、天然存在、及び非天然存在の公知のヌクレオチドアナログ又は改変骨格残基又は結合を含有する核酸を包含する。このようなアナログの例としては、限定されるものではないが、ホスホロチオエート、ホスホラミデート、メチルホスホネート、キラルメチルホスホネート、２−Ｏ−メチルリボヌクレオチド、ペプチド核酸（ＰＮＡ）が挙げられる。
【００３３】
特に示されない限り、特定の核酸配列は、その保存的改変バリアント（例えば、縮重コドン置換）及び相補性配列、並びに明示される配列も黙示的に包含する。具体的には、以下に詳述されるとおり、縮重コドン置換は、１つ以上の選択（又は全ての）コドンの３番目の位置が混合塩基及び／又はデオキシイノシン残基により置換されている配列を生成することにより達成することができる（Ｂａｔｚｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．１９：５０８１；Ｏｈｔｓｕｋａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５−２６０８；及びＲｏｓｓｏｌｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ  ８：９１−９８）。
【００３４】
用語「作動可能に結合している」は、２つ以上のポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ）セグメント間の機能的関係を指す。典型的には、これは、転写される配列に対する転写制御配列の機能的関係を指す。例えば、プロモーター又はエンハンサー配列は、それが適切な宿主細胞又は他の発現系中でコード配列の転写を刺激し、又はモジュレートする場合、コード配列に作動可能に結合している。一般に、転写される配列に作動可能に結合しているプロモーター転写調節配列は、転写される配列に物理的に連続しており、すなわち、それらはシス作用性である。しかしながら、一部の転写調節配列、例えば、エンハンサーは、それらが転写をエンハンスするコード配列に物理的に連続している必要もなく、近接して局在している必要もない。
【００３５】
本明細書において使用される用語「最適化」は、産生細胞又は生物、一般に真核細胞、例えば、ピチア属（Ｐｉｃｈｉａ）の細胞、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）又はヒト細胞において好ましいコドンを使用してアミノ酸配列をコードするようにヌクレオチド配列が変更されていることを意味する。最適化ヌクレオチド配列は、「親」配列としても公知の出発ヌクレオチド配列により最初にコードされるアミノ酸配列を完全に又は可能な限り多く保持するように遺伝子操作される。本明細書における最適化配列は、哺乳動物細胞において好ましいコドンを有するように遺伝子操作されている。しかしながら、他の真核細胞又は原核細胞中でのこれらの配列の最適化発現も本明細書において想定される。最適化ヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列も、最適化と称される。
【００３６】
用語「ポリペプチド」及び「タンパク質」は、アミノ酸残基の重合体を指すために本明細書において互換的に使用される。この用語は、１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然存在アミノ酸の人工化学模倣体であるアミノ酸重合体に、並びに天然存在アミノ酸重合体及び非天然存在アミノ酸重合体に当てはまる。特に示されない限り、特定のポリペプチド配列は、その保存的改変バリアントも黙示的に包含する。
【００３７】
用語「組換え宿主細胞」（又は単に「宿主細胞」）は、組換え発現ベクターが導入されている細胞を指す。このような用語は、特定の対象細胞だけでなく、そのような細胞の子孫も指すことを意図されることが理解されるべきである。ある改変は突然変異又は環境的影響のいずれかに起因して後続の世代において生じ得るため、そのような子孫は、実際、親細胞と同一でないことがあるが、本明細書において使用される用語「宿主細胞」の範囲内に依然として含まれる。
【００３８】
用語「対象」は、ヒト及び非ヒト動物を含む。非ヒト動物としては、全ての脊椎動物、例えば、哺乳動物及び非哺乳動物、例えば、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両生類、及び爬虫類が挙げられる。注釈がある場合を除き、用語「患者」又は「対象」は、本明細書において互換的に使用される。
【００３９】
本明細書において使用される用語「治療する」、「治療される」、「治療すること」及び「治療」は、疾患の症状、合併症、又は生化学的兆候の発症を緩和し、又は遅延させ、疾患、病態、又は障害のさらなる症状の発生を予防し、又はさらなる発生を停止させ、若しくは阻害する組成物の投与を含む。治療は、本明細書に記載の治療尺度により計測することができる。「治療」の方法は、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体との組合せのＳＴＩＮＧアゴニスト分子を対象に投与して癌又は癌と関連する病態を治癒し、その重症度を低減させ、又はその１つ以上の症状を改善し、そのような治療の不存在下で予測されるものを上回って対象の健常又は生存期間を延長することを含む。例えば、「治療」は、少なくとも５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％以上の対象における病状の緩和を含む。
【００４０】
用語「予防する」は、ＳＴＩＮＧアゴニスト分子及びＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の組成物又は組合せを投与して疾患の発症を予防し、若しくは遅延させ、又はその臨床若しくは亜臨床症状の顕在化を予防すること、すなわち、予防的投与、又は疾患の顕在化後の症状の治療的抑制若しくは緩和を含む。
【００４１】
用語「ベクター」は、ポリヌクレオチド分子に結合している別のポリヌクレオチドを輸送し得るポリヌクレオチド分子を指すものとする。あるタイプのベクターは「プラスミド」であり、それは追加のＤＮＡセグメントをライゲートすることができる環状二本鎖ＤＮＡループを指す。別のタイプのベクターはウイルスベクターであり、追加のＤＮＡセグメントをウイルスゲノム中にライゲートすることができる。あるベクターは、それらが導入される宿主細胞中で自己複製し得る（例えば、細菌複製起点を有する細菌ベクター及びエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞中への導入時に宿主細胞のゲノム中に組み込むことができ、それにより宿主ゲノムとともに複製される。さらに、あるベクターは、それらが作動可能に結合している遺伝子の発現を指向し得る。このようなベクターは、本明細書において「組換え発現ベクター」（又は単に「発現ベクター」）と称される。一般に、組換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターは、プラスミドの形態であることが多い。本明細書において、「プラスミド」及び「ベクター」は、プラスミドが最も一般に使用されるベクターの形態であるため互換的に使用することができる。しかしながら、それは発現ベクターのそのような他の形態、例えば、同等の機能を提供するウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス及びアデノ随伴ウイルス）を含むものとする。
【００４２】
ＳＴＩＮＧアゴニスト分子
ＳＴＩＮＧアゴニスト分子の合成例は、国際公開第２０１４１８９８０５号パンフレットにおける合成の記載に従って見出すことができる。
【００４３】
具体的には、化合物（ＳＴＩＮＧ１００）
【化２】
2021512104.tif 000003
を以下のスキーム：
【化３】
2021512104.tif 000004
に従って合成した。
【００４４】
５ｇ（５．１５ｍｍｏｌ）のＮ−ベンゾイル−５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２’−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−３’−Ｏ−［（２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノフィニル］アデノシン（１）の２５ｍｌのアセトニトリル中溶液に、０．１８ｍｌ（１０ｍモル）の水及び１．２０ｇ（６．２ｍｍｏｌ）のトリフルオロ酢酸ピリジニウムを添加した。室温において５分間撹拌した後、２５ｍｌのｔｅｒｔブチルアミンを添加し、反応物を室温において１５分間撹拌した。溶媒を減圧下で除去して（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−ベンズアミド−９Ｈ−プリン−９−イル）−２−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）テトラヒドロフラン−３−イル水素ホスホネートを泡状物として得、次いでそれをアセトニトリル（２×５０ｍｌ）と同時蒸発させ、次いで６０ｍｌのジクロロメタン中で溶解させた。この溶液に水（０．９ｍｌ、５０ｍモル）及び６０ｍｌのジクロロメタン中６％（ｖ／ｖ）のジクロロ酢酸（４４ｍｍｏｌ）を添加した。室温において１０分後、反応物をピリジン（７．０ｍｌ、８７ｍｍｏｌ）の添加によりクエンチし、油状物に濃縮し、それを４０ｍｌの無水アセトニトリルとの３回の同時蒸発により乾燥させ、１２ｍｌの容量の（２）を得た。
【００４５】
Ｎ−ベンゾイル−５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−３’−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−２’−Ｏ−［（２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノフィニル］アデノシン（（３）、６．４ｇ、６．６ｍモル）を４０ｍｌの無水アセトニトリル中で溶解させ、４０ｍｌの無水アセトニトリルとの３回の同時蒸発により乾燥させ、最後に２０ｍｌ残した。３Åのモレキュラーシーブを添加し、溶液を使用までアルゴン下で貯蔵した。２０ｍｌのアセトニトリル中の共沸乾燥（３）（６．４ｇ、６．６ｍモル）を、（２）（５．１５ｍｍｏｌ）の１２ｍｌの無水アセトニトリル中溶液にシリンジを介して添加した。室温において５分間撹拌した後、１．１４ｇ（５．６ｍｍｏｌ）の３−（（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメチリデン）アミノ）−３Ｈ−１，２，４−ジチアゾール−５−チオン（ＤＤＴＴ）を添加し、反応物を室温において３０分間撹拌した。反応物を濃縮し、残留油状物を８０ｍｌのジクロロメタン中で溶解させた。水（０．９ｍｌ、５０ｍｍｏｌ）及び８０ｍｌのジクロロメタン中６％（ｖ／ｖ）ジクロロ酢酸（５８ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を室温において１０分間撹拌した。５０ｍｌのピリジンを添加してジクロロ酢酸をクエンチした。溶媒を減圧下で除去して粗製（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−ベンズアミド−９Ｈ−プリン−９−イル）−２−（（（（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２−（６−ベンズアミド−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−５−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−３−イル）オキシ）（２−シアノエトキシ）ホスホロチオイル）オキシ）メチル）−４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）テトラヒドロフラン−３−イル水素ホスホネートを固体として得、次いでそれを１５０ｍｌの乾燥ピリジン中で溶解させ、約１００ｍｌの容量に濃縮した。次いで、２−クロロ−５，５−ジメチル−１，３，２−ジオキサホスホリナン−２−オキシド（ＤＭＯＣＰ、３．４４ｇ、１８ｍモル）を添加し、反応物を室温において５分間撹拌した。３．２ｍｌの水を直ちに添加し、次いで３−Ｈ−１，２−ベンゾジチオール−３−オン（１．３ｇ、７．７ｍモル）を添加し、反応物を室温において５分間撹拌した。次いで、反応混合物を、２０ｇのＮａＨＣＯ３を含有する７００ｍｌの水中に注ぎ、室温において５分間撹拌し、次いで分液漏斗中に注ぎ、８００ｍｌの１：１の酢酸エチル：ジエチルエーテルにより抽出した。水層を６００ｍｌの１：１の酢酸エチル：ジエチルエーテルにより再度抽出した。有機層を合わせ、減圧下で濃縮してジアステレオ異性体（５ａ）及び（５ｂ）を含有する約１１ｇの油状物を生じさせた。上記の粗製混合物をジクロロメタン中で溶解させ、２５０ｇのシリカカラムにアプライした。ジクロロメタン中のエタノールの勾配（０〜１０％）を使用してカラムから所望のジアステレオ異性体を溶出させた。所望のジアステレオ異性体（５ａ）及び（５ｂ）を含有する分画を合わせ、濃縮し、２．２６ｇの約５０％の（５ａ）及び５０％の（５ｂ）を得た。
【００４６】
シリカゲルカラムからの２．２６ｇの粗製（５ａ）及び（５ｂ）を、厚壁ガラス圧力管に移した。６０ｍｌのメタノール及び６０ｍｌの濃縮水性アンモニアを添加し、油浴中で撹拌しながら管を５０℃において１６時間加熱した。反応混合物を周囲温度近くに冷却し、窒素ガス流により３０分間スパージし、次いで大型丸底フラスコに移した。揮発物のほとんどを減圧下で慎重に除去して発泡及び突沸を回避した。水が依然として存在する場合、残留物を冷凍し、凍結乾固させた。凍結乾燥粗製混合物を約５０ｍｌのＣＨ３ＣＮ／１０ｍＭの水性酢酸トリエチルアンモニウム（６０／４０）中に取った。０．４５ミクロンのＰＴＦＥ濾過後、４〜５ｍｌの試料部分をＣ−１８  Ｄｙｎａｍａｘカラム（４０×２５０ｍｍ）にアプライした。アセトニトリルの勾配及び１０ｍＭの水性酢酸トリエチルアンモニウム（５０ｍｌ／分の流量における２０分間にわたる３０％〜５０％のＣＨ３ＣＮ）により溶出を実施した。純粋な（６）を含有する分取ＨＰＬＣランからの分画をプールし、蒸発させてＣＨ３ＣＮを除去し、凍結乾燥させて３６０ｍｇの純粋な（６）（ＲｐＲｐジアステレオ異性体）をビス−トリエチルアンモニウム塩として得た。
【００４７】
２７０ｍｇ（０．２４ｍｍｏｌ）の（６）に、５．０ｍｌの無希釈トリメチルアミントリヒドロフルオリドを添加した。混合物を室温において約４０時間撹拌した。分析ＨＰＬＣにより反応の完了を確認した後、試料を４５ｍｌの冷蔵撹拌１Ｍの重炭酸トリエチルアンモニウム中への滴加により中和した。中和溶液をＷａｔｅｒｓ  Ｃ−１８  Ｓｅｐ−Ｐａｋ上で脱塩し、生成物をＣＨ３ＣＮ／１０ｍＭの水性酢酸トリエチルアンモニウム（５：１）により溶出させた。ＣＨ３ＣＮを減圧下で蒸発させ、残留水溶液を冷凍し、凍結乾燥させた。水からの複数回の凍結乾燥ラウンドにより、１２２ｍｇ（５７％）の（Ｔ１−２）をビス−トリエチルアンモニウム塩として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，４５ｏＣ，（ＣＤ３）２ＳＯ−１５μＬ  Ｄ２Ｏ）δ  ８．５８（ｓ，１Ｈ），８．４１（ｓ，１Ｈ），８．１８（ｓ，１Ｈ），８．１５（ｓ，１Ｈ），６．１２（ｄ，Ｊ＝８．０，１Ｈ），５．９２（ｄ，Ｊ＝７．０，１Ｈ），５．３０（ｔｄ，Ｊ＝８．５，４．０，１Ｈ），５．２４−５．２１（ｍ，１Ｈ），５．０３（ｄｄ，Ｊ＝７．５，４．５，１Ｈ），４．３９（ｄ，Ｊ＝４，１Ｈ），４．２３（ｄｄ，Ｊ＝１０．５，４．０，１Ｈ），４．１８（ｓ，１Ｈ），４．１４−４．０８（ｍ，２Ｈ），３．８５−３．８３（ｍ，１Ｈ），３．７３（ｄ，Ｊ＝１２．０，１Ｈ），３．０６（ｑ，Ｊ＝７．５，１２Ｈ），１．１５（ｔ，Ｊ＝７．５，１Ｈ）；３１Ｐ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，４５ｏＣ，（ＣＤ３）ＩＳＯ−１５ｐＬ  Ｄ２Ｏ）６  ５８．８１，５２．５４；ＨＲＭＳ（ＦＴ−ＩＣＲ）Ｉ／ｚ  Ｃ２０Ｈ２４Ｏ１０Ｎ１０Ｐ２Ｓ２に対する計算値（Ｍ−Ｈ）６８９．０５２１，実測値６８９．０５１４．
【００４８】
ＳＴＩＮＧアゴニストアッセイの一例は以下のとおりである。ＨＥＫ−２９３Ｔ細胞をヒトＳＴＩＮＧ（ヒトＳＴＩＮＧ野生型中にクローンを作製するために２３２位において導入されたＡｒｇ突然変異を有するアクセッションＢＣ０４７７７９）及び５×ＩＳＲＥ−ｍＩＦＮｂ−ＧＬ４プラスミド（５つのインターフェロン刺激応答エレメント及びホタルルシフェラーゼＧＬ４の発現をドライブする最小マウスインターフェロンベータプロモーター）の混合物により逆形質移入した。ＦｕＧＥＮＥ形質移入試薬（３：１のＦｕＧＥＮＥ：ＤＮＡの比）を使用して、ＦｕＧＥＮＥ：ＤＮＡ混合物をＨＥＫ−２９３Ｔ細胞に懸濁液中で添加し、３８４ウェルプレート中にプレーティングすることにより細胞を形質移入した。細胞を一晩インキュベートし、化合物により処理した。９〜１４時間後、ＢｒｉｇｈｔＧｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加し、Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダー上で読み取ることによりプレートを読み取った。バックグラウンドに対する倍率変化を計算し、５０μＭにおける２’３’−ｃＧＡＭＰにより誘導された倍率変化に正規化した。プレートをトリプリケートでランした。ＥＣ５０値をＩＰ−１０分泌アッセイについて記載のとおり計算した。
【００４９】
ＩＬ−１５
本明細書において使用される用語「ＩＬ−１５」及び「インターロイキン−１５」は、野生型ＩＬ−１５又はＩＬ−１５誘導体を指す。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５は、単離され、組換え産生されている。タンパク質又はポリペプチドに関して本明細書において使用される用語「野生型ＩＬ−１５」及び「野生型インターロイキン−１５」は、任意の哺乳動物インターロイキン−１５アミノ酸配列、例として未成熟又は前駆体及び成熟形態を指す。野生型哺乳動物インターロイキン−１５の種々の種のアミノ酸配列についてのＧｅｎｅＢａｎｋアクセッション番号の非限定的な例としては、ＮＰ＿０００５７６（ヒト）、ＣＡＡ６２６１６（ヒト）、ＡＡＩ００９６４（ヒト）、ＡＡＨ１８１４９（ヒト）、ＮＰ＿００１００９２０７（イエネコ（Ｆｅｌｉｓ  ｃａｔｕｓ））、ＡＡＢ９４５３６（ドブネズミ（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ））、ＡＡＢ４１６９７（ドブネズミ（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ））、ＮＰ＿０３２３８３（ハツカネズミ（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ））、ＡＡＨ２３６９８（ハツカネズミ（ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ））、ＡＡＲ１９０８０（イヌ）、ＡＡＢ６０３９８（アカゲザル（Ｍａｃａｃａ  ｍｕｌａｔｔａ））が挙げられる。配列番号１に提供される長鎖シグナルペプチド（下線）及び成熟ヒト天然ＩＬ−１５（イタリック）を含むヒトＩＬ−１５の未成熟／前駆体形態のアミノ酸配列。一部の実施形態において、ＩＬ−１５は、哺乳動物ＩＬ−１５の未成熟又は前駆体形態である。他の実施形態において、ＩＬ−１５は、哺乳動物ＩＬ−１５の成熟形態である。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５は、ヒトＩＬ−１５の前駆体形態である。別の実施形態において、ＩＬ−１５は、ヒトＩＬ−１５の成熟形態である。一実施形態において、ＩＬ−１５タンパク質／ポリペプチドは、単離又は精製されている。
【００５０】
核酸に関して本明細書において使用される用語「ＩＬ−１５」及び「インターロイキン−１５」は、哺乳動物インターロイキン−１５、例として未成熟又は前駆体及び成熟形態をコードする任意の核酸配列を指す。野生型哺乳動物ＩＬ−１５の種々の種のヌクレオチド配列についてのＧｅｎｅＢａｎｋアクセッション番号の非限定的な例としては、ＮＭ＿０００５８５（ｈｕｍａｎ）、ＮＭ＿００８３５７（ハツカネズミ（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ））、及びＲＮＵ６９２７２（ドブネズミ（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ））が挙げられる。配列番号２に提供される長鎖シグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列（下線）及び成熟ヒトＩＬ−１５をコードするヌクレオチド配列（イタリック）を含むヒトＩＬ−１５の未成熟／前駆体形態をコードするヌクレオチド配列。具体的な実施形態において、核酸は、単離又は精製核酸である。一部の実施形態において、核酸は、哺乳動物ＩＬ−１５の未成熟又は前駆体形態をコードする。他の実施形態において、核酸は、哺乳動物ＩＬ−１５の成熟形態をコードする。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５をコードする核酸は、ヒトＩＬ−１５の前駆体形態をコードする。別の実施形態において、ＩＬ−１５をコードする核酸は、ヒトＩＬ−１５の成熟形態をコードする。
【００５１】
タンパク質又はポリペプチドに関して本明細書において使用される用語「ＩＬ−１５誘導体」及び「インターロイキン−１５誘導体」は、（ａ）野生型哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドと少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％又は９９％同一であるポリペプチド；（ｂ）野生型哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドをコードする核酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％又は９９％同一である核酸配列によりコードされるポリペプチド；（ｃ）野生型哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドに対して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個又はそれ以上のアミノ酸突然変異（すなわち、付加、欠失及び／又は置換）を含有するポリペプチド；（ｄ）核酸によりコードされるポリペプチドは、高い又は中程度のストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下で野生型哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドをコードする核酸にハイブリダイズし得る；（ｅ）高い又は中程度のストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下で少なくとも２０個の連続アミノ酸、少なくとも３０個の連続アミノ酸、少なくとも４０個の連続アミノ酸、少なくとも５０個の連続アミノ酸、少なくとも１００個の連続アミノ酸、又は少なくとも１５０個の連続アミノ酸の野生型哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドの断片をコードする核酸配列にハイブリダイズし得る核酸配列によりコードされるポリペプチド；及び／又は；（ｆ）哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドの断片を指す。ＩＬ−１５誘導体としては、哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドの成熟形態のアミノ酸配列及び異種シグナルペプチドアミノ酸配列を含むポリペプチドも挙げられる。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５誘導体は、野生型ヒトＩＬ−１５ポリペプチドの誘導体である。別の実施形態において、ＩＬ−１５誘導体は、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドの未成熟又は前駆体形態の誘導体である。別の実施形態において、ＩＬ−１５誘導体は、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドの成熟形態の誘導体である。別の実施形態において、ＩＬ−１５誘導体は、例えば、Ｚｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９），Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８３：３５９８又は米国特許第８，１６３，８７９号明細書に記載のＩＬ−１５Ｎ７２Ｄである。別の実施形態において、ＩＬ−１５誘導体は、米国特許第８，１６３，８７９号明細書に記載のＩＬ−１５バリアントのものである。一実施形態において、ＩＬ−１５誘導体は、単離又は精製されている。
【００５２】
好ましい実施形態において、ＩＬ−１５誘導体は、当該技術分野において周知のアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）、共免疫沈降により計測してＩＬ−１５Ｒａポリペプチドに結合する野生型哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドの機能の少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％又は９９％を保持する。別の好ましい実施形態において、ＩＬ−１５誘導体は、当該技術分野において周知のアッセイ、例えば、電気泳動移動度シフトアッセイ、ＥＬＩＳＡ及び他の免疫アッセイにより計測してＩＬ−１５媒介シグナル伝達を誘導する野生型哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドの機能の少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％又は９９％を保持する。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５誘導体は、例えば、当該技術分野において周知のリガンド／受容体結合アッセイにより評価してＩＬ−１５Ｒａ及び／又はＩＬ−１５Ｒβγに結合する。同一性パーセントは、当業者に公知の任意の方法を使用して、上記のとおり決定することができる。
【００５３】
核酸に関して本明細書において使用される用語「ＩＬ−１５誘導体」及び「インターロイキン−１５誘導体」は、（ａ）野生型哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドをコードする核酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％又は９９％同一である核酸配列；（ｂ）野生型哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドのアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％又は９９％同一であるポリペプチドをコードする核酸配列；（ｃ）哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドをコードする核酸配列に対して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個又はそれ以上の核酸塩基突然変異（すなわち、付加、欠失及び／又は置換）を含有する核酸配列；（ｄ）高い又は中程度のストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下で哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドをコードする核酸配列にハイブリダイズする核酸配列；（ｅ）高い又は中程度のストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下で哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドをコードする核酸配列の断片にハイブリダイズする核酸配列及び／又は（ｆ）哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドをコードする核酸配列の断片をコードする核酸配列を指す。具体的な実施形態において、核酸に関するＩＬ−１５誘導体は、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードする核酸配列の誘導体である。別の実施形態において、核酸に関するＩＬ−１５誘導体は、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドの未成熟又は前駆体形態をコードする核酸配列の誘導体である。別の実施形態において、核酸に関するＩＬ−１５誘導体は、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドの成熟形態をコードする核酸配列の誘導体である。別の実施形態において、核酸に関するＩＬ−１５誘導体は、例えば、Ｚｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９；前掲）、又は米国特許第８，１６３，８７９号明細書に記載のＩＬ−１５Ｎ７２Ｄをコードする核酸配列である。別の実施形態において、核酸に関するＩＬ−１５誘導体は、米国特許第８，１６３，８７９号明細書に記載のＩＬ−１５バリアントの１つをコードする核酸配列である。
【００５４】
ＩＬ−１５誘導体核酸配列としては、哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチド、例として、ＩＬ−１５ポリペプチドの成熟及び未成熟形態をコードするコドン最適化核酸配列が挙げられる。他の実施形態において、ＩＬ−１５誘導体核酸としては、哺乳動物ＩＬ−１５ＲＮＡ転写産物の安定性を増加させるためにアミノ酸配列への影響なしで潜在的スプライス部位及び不安定エレメント（例えば、Ａ／Ｔ又はＡ／Ｕリッチエレメント）を排除する突然変異を含有する哺乳動物ＩＬ−１５ＲＮＡ転写産物をコードする核酸が挙げられる。一実施形態において、ＩＬ−１５誘導体核酸配列としては、ＰＣＴ国際公開第２００７／０８４３４２号パンフレットに記載のコドン最適化核酸配列が挙げられる。ある実施形態において、ＩＬ−１５誘導体核酸配列は、配列番号４のコドン最適化配列である（そのような核酸配列によりコードされるアミノ酸配列は、配列番号５に提供される）。
【００５５】
一実施形態において、ＩＬ−１５誘導体核酸配列は、当該技術分野において周知のアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）、共免疫沈降により計測してＩＬ−１５Ｒａに結合する野生型哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドの機能の少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％又は９９％を保持するタンパク質又はポリペプチドをコードする。別の好ましい実施形態において、ＩＬ−１５誘導体核酸配列は、当該技術分野において周知のアッセイ、例えば、電気泳動移動度シフトアッセイ、ＥＬＩＳＡ及び他の免疫アッセイにより計測してＩＬ−１５媒介シグナル伝達を誘導する野生型哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドの機能の少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％又は９９％を保持するタンパク質又はポリペプチドをコードする。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５誘導体核酸配列は、例えば、当該技術分野において周知のリガンド／受容体結合アッセイにより評価してＩＬ−１５Ｒａ及び／又はＩＬ−１５Ｒβγに結合するタンパク質又はポリペプチドをコードする。
【００５６】
ＩＬ−１５Ｒａ
本明細書において使用される用語「ＩＬ−１５Ｒａ」及び「インターロイキン−１５受容体アルファ」は、野生型ＩＬ−１５Ｒａ、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体、又は野生型ＩＬ−１５Ｒａ及びＩＬ−１５Ｒａ誘導体を指す。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａは、単離され、組換え産生されている。タンパク質又はポリペプチドに関して本明細書において使用される用語「野生型ＩＬ−１５Ｒａ」及び「野生型インターロイキン−１５受容体アルファ」は、任意の哺乳動物インターロイキン−１５受容体アルファ（「ＩＬ−１５Ｒａ」）アミノ酸配列、例として、未成熟又は前駆体及び成熟形態及びアイソフォームを指す。種々の野生型哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａのアミノ酸配列についてのＧｅｎｅＢａｎｋアクセッション番号の非限定的な例としては、ＮＰ＿００２１８０（ヒト）、ＡＢＫ４１４３８（アカゲザル（Ｍａｃａｃａ  ｍｕｌａｔｔａ））、ＮＰ＿０３２３８４（ハツカネズミ（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ））、Ｑ６０８１９（ハツカネズミ（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ））、ＣＡＩ４１０８２（ヒト）が挙げられる。配列番号６に提供されるシグナルペプチド（下線）及び成熟ヒト野生型ＩＬ−１５Ｒａ（イタリック）を含む全長ヒトＩＬ−１５Ｒａの未成熟形態のアミノ酸配列。配列番号７に提供されるシグナルペプチド（下線）及び成熟ヒト可溶性ＩＬ−１５Ｒａ（イタリック）を含む可溶性ヒトＩＬ−１５Ｒａの未成熟形態のアミノ酸配列。一部の実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａは、哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの未成熟形態である。他の実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａは、哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの成熟形態である。ある実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａは、哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの可溶性形態である。他の実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａは、哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの全長形態である。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａは、ヒトＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの未成熟形態である。別の実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａは、ヒトＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの成熟形態である。ある実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａは、ヒトＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの可溶性形態である。他の実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａは、ヒトＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの全長形態である。一実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａタンパク質又はポリペプチドは、単離又は精製されている。
【００５７】
核酸に関して本明細書において使用される用語「ＩＬ−１５Ｒａ」及び「インターロイキン−１５受容体アルファ」は、哺乳動物インターロイキン−１５受容体アルファ、例として、未成熟又は前駆体及び成熟形態をコードする任意の核酸配列を指す。種々の種の野生型哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａのヌクレオチド配列についてのＧｅｎｅＢａｎｋアクセッション番号の非限定的な例としては、ＮＭ＿００２１８９（ヒト）、ＥＦ０３３１１４（アカゲザル（Ｍａｃａｃａ  ｍｕｌａｔｔａ））、及びＮＭ＿００８３５８（ハツカネズミ（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ））が挙げられる。配列番号８に提供されるシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列（下線）及び成熟ヒトＩＬ−１５Ｒａをコードするヌクレオチド配列（イタリック）を含むヒトＩＬ−１５Ｒａの未成熟形態をコードするヌクレオチド配列。配列番号９に提供されるシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列（下線）及び成熟ヒト可溶性ＩＬ−１５Ｒａをコードするヌクレオチド配列（イタリック）を含む可溶性ヒトＩＬ−１５Ｒａタンパク質又はポリペプチドの未成熟形態をコードするヌクレオチド配列）。具体的な実施形態において、核酸は、単離又は精製核酸である。一部の実施形態において、核酸は、哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの未成熟形態をコードする。他の実施形態において、核酸は、哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの成熟形態をコードする。ある実施形態において、核酸は、哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの可溶性形態をコードする。他の実施形態において、核酸は、哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの全長形態をコードする。具体的な実施形態において、核酸は、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドの前駆体形態をコードする。別の実施形態において、核酸は、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドの成熟をコードする。ある実施形態において、核酸は、ヒトＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの可溶性形態をコードする。他の実施形態において、核酸は、ヒトＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの全長形態をコードする。
【００５８】
タンパク質又はポリペプチドに関して本明細書において使用される用語「ＩＬ−１５Ｒａ誘導体」及び「インターロイキン−１５受容体アルファ誘導体」は、（ａ）野生型哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドと少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％又は９９％同一であるポリペプチド；（ｂ）野生型哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドをコードする核酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％又は９９％同一である核酸配列によりコードされるポリペプチド；（ｃ）野生型哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドに対して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個又はそれ以上のアミノ酸突然変異（すなわち、付加、欠失及び／又は置換）を含有するポリペプチド；（ｄ）高い又は中程度のストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下で野生型哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドをコードする核酸配列にハイブリダイズし得る核酸配列によりコードされるポリペプチド；（ｅ）高い又は中程度のストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下で少なくとも２０個の連続アミノ酸、少なくとも３０個の連続アミノ酸、少なくとも４０個の連続アミノ酸、少なくとも５０個の連続アミノ酸、少なくとも１００個の連続アミノ酸、又は少なくとも１５０個の連続アミノ酸の野生型哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドの断片をコードする核酸配列にハイブリダイズし得る核酸配列によりコードされるポリペプチド；（ｆ）野生型哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの断片；及び／又は（ｇ）本明細書に記載の規定のＩＬ−１５Ｒａ誘導体を指す。ＩＬ−１５Ｒａ誘導体としては、哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの成熟形態のアミノ酸配列及び異種シグナルペプチドアミノ酸配列を含むポリペプチドも挙げられる。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、野生型ヒトＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの誘導体である。別の実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドの未成熟形態の誘導体である。別の実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドの成熟形態の誘導体である。一実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの可溶性形態である。ある実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体としては、哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態が挙げられ、それらの可溶性形態は天然存在でない。ＩＬ−１５Ｒａ誘導体の他の例としては、本明細書に記載のヒトＩＬ−１５Ｒａのトランケート可溶性形態が挙げられる。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、精製又は単離されている。
【００５９】
好ましい実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、当該技術分野において周知のアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）、共免疫沈降により計測してＩＬ−１５ポリペプチドに結合する野生型哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの機能の少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％又は９９％を保持する。別の好ましい実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、当該技術分野において周知のアッセイ、例えば、電気泳動移動度シフトアッセイ、ＥＬＩＳＡ及び他の免疫アッセイにより計測してＩＬ−１５媒介シグナル伝達を誘導する野生型哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの機能の少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％又は９９％を保持する。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、当該技術分野において周知の方法、例えば、ＥＬＩＳＡなどにより評価してＩＬ−１５に結合する。
【００６０】
核酸に関して本明細書において使用される用語「ＩＬ−１５Ｒａ誘導体」及び「インターロイキン−１５受容体アルファ誘導体」は、（ａ）哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドをコードする核酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％又は９９％同一である核酸配列；（ｂ）野生型哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドのアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％又は９９％同一であるポリペプチドをコードする核酸配列；（ｃ）哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドをコードする核酸配列に対して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個又はそれ以上の核酸突然変異（すなわち、付加、欠失及び／又は置換）を含有する核酸配列；（ｄ）高い又は中程度のストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下で哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドをコードする核酸配列にハイブリダイズする核酸配列；（ｅ）高い又は中程度のストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下で哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドをコードする核酸配列の断片にハイブリダイズする核酸配列；（ｆ）哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドをコードする核酸配列の断片をコードする核酸配列；及び／又は（ｇ）本明細書に記載の規定のＩＬ−１５Ｒａ誘導体をコードする核酸配列を指す。具体的な実施形態において、核酸に関するＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、ヒトＩＬ−１５Ｒａポリペプチドをコードする核酸配列の誘導体である。別の実施形態において、核酸に関するＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、ヒトＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの未成熟形態をコードする核酸配列の誘導体である。別の実施形態において、核酸に関するＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、ヒトＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの成熟形態をコードする核酸配列の誘導体である。一実施形態において、核酸に関するＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、可溶性である哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの誘導体をコードする核酸配列を指す。ある実施形態において、核酸に関するＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、天然存在でない哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態をコードする核酸配列を指す。一部の実施形態において、核酸に関するＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、天然存在でないＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態であるヒトＩＬ−１５Ｒａの誘導体をコードする核酸配列を指す。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体核酸配列は、単離又は精製されている。
【００６１】
ＩＬ−１５Ｒａ誘導体核酸配列としては、ＩＬ−１５Ｒａポリペプチド、例として、ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの成熟及び未成熟形態をコードするコドン最適化核酸配列が挙げられる。他の実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体核酸としては、ＩＬ−１５ＲａＲＮＡ転写産物の安定性を増加させるためにアミノ酸配列に影響せずに潜在的スプライス部位及び不安定エレメント（例えば、Ａ／Ｔ又はＡ／Ｕリッチエレメント）を排除する突然変異を含有するＩＬ−１５ＲａＲＮＡ転写産物をコードする核酸が挙げられる。ある実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体核酸配列は、配列番号１１又は配列番号１３のコドン最適化配列である（そのような核酸配列によりコードされるアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１２及び配列番号１４に提供される）。
【００６２】
具体的な実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体核酸配列は、当該技術分野において周知のアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）、共免疫沈降により計測してＩＬ−１５に結合する野生型哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの機能の少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％又は９９％を保持するタンパク質又はポリペプチドをコードする。別の好ましい実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体核酸配列は、当該技術分野において周知のアッセイ、例えば、電気泳動移動度シフトアッセイ、ＥＬＩＳＡ及び他の免疫アッセイにより計測してＩＬ−１５媒介シグナル伝達を誘導する野生型哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａの機能の少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％又は９９％を保持するタンパク質又はポリペプチドをコードする。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体核酸配列は、当該技術分野において周知の方法、例えば、ＥＬＩＳＡなどにより評価してＩＬ−１５に結合するタンパク質又はポリペプチドをコードする。
【００６３】
ヒトＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態が本明細書に記載される。ヒトＩＬ−１５Ｒａのトランケート可溶性形態である規定のＩＬ−１５Ｒａ誘導体も本明細書に記載される。これらの規定のＩＬ−１５Ｒａ誘導体及びヒトＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態は、部分的には、ヒトＩＬ−１５Ｒａのタンパク質分解開裂部位の同定をベースとする。ＩＬ−１５Ｒａのグリコシル化に基づき特徴づけされるＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態が本明細書にさらに記載される。
【００６４】
ヒトＩＬ−１５Ｒａのタンパク質分解開裂は、野生型全長ヒトＩＬ−１５Ｒａの未成熟形態の提供されるアミノ酸配列中で太字で示され、下線が付される残基（すなわち、Ｇｌｙ１７０及びＨｉｓ１７１）間で生じる：
【化４】
2021512104.tif 000005
【００６５】
したがって、一態様において、ヒトＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態（例えば、ヒトＩＬ−１５Ｒａの精製可溶性形態）であって、ヒトＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態のアミノ酸配列が野生型膜結合ヒトＩＬ−１５Ｒａのタンパク質分解開裂の部位において終結するヒトＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態が本明細書に提供される。特に、ヒトＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態（例えば、ヒトＩＬ−１５Ｒａの精製可溶性形態）であって、ヒトＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態のアミノ酸配列が、ＰＱＧ（配列番号２０）（Ｇは、Ｇｌｙ１７０である）で終結するヒトＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態が本明細書に提供される。特定の実施形態において、配列番号７に示されるアミノ酸配列を有するヒトＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態（例えば、ヒトＩＬ−１５Ｒａの精製可溶性形態）が本明細書に提供される。一部の実施形態において、（ｉ）配列番号７と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％又は９９％同一であり；（ｉｉ）アミノ酸配列ＰＱＧ（配列番号２０）で終結するポリペプチドであるＩＬ−１５Ｒａ誘導体（例えば、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体の精製及び／又は可溶性形態）が本明細書に提供される。他の特定の実施形態において、配列番号１０のアミノ酸配列を有するヒトＩＬ−１５Ｒａ（例えば、ヒトＩＬ−１５Ｒａの精製可溶性形態）の可溶性形態が本明細書に提供される）。一部の実施形態において、配列番号１０と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％又は９９％同一であるポリペプチドであるＩＬ−１５Ｒａ誘導体（例えば、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体の精製及び／又は可溶性形態）であって、場合により、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体の可溶性形態のアミノ酸配列がＰＱＧ（配列番号２０）で終結するＩＬ−１５Ｒａ誘導体が本明細書に提供される。
【００６６】
一部の実施形態において、ヒトＩＬ−１５ＲａのＩＬ−１５Ｒａ誘導体であって、可溶性であり：（ａ）ＩＬ−１５Ｒａ誘導体のＣ末端における最後のアミノ酸がアミノ酸残基ＰＱＧＨＳＤＴＴ（配列番号１５）からなり；（ｂ）ＩＬ−１５Ｒａ誘導体のＣ末端における最後のアミノ酸がアミノ酸残基ＰＱＧＨＳＤＴ（配列番号１６）からなり；（ｃ）ＩＬ−１５Ｒａ誘導体のＣ末端における最後のアミノ酸がアミノ酸残基ＰＱＧＨＳＤ（配列番号１７）からなり；（ｄ）ＩＬ−１５Ｒａ誘導体のＣ末端における最後のアミノ酸がアミノ酸残基ＰＱＧＨＳ（配列番号１８）からなり；又は（ｅ）ＩＬ−１５Ｒａ誘導体のＣ末端における最後のアミノ酸がアミノ酸残基ＰＱＧＨ（配列番号１９）からなるＩＬ−１５Ｒａ誘導体が本明細書に提供される。ある実施形態において、これらのＩＬ−１５Ｒａ誘導体のアミノ酸配列は、配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一である。一部の実施形態において、これらのＩＬ−１５Ｒａ誘導体は精製されている。
【００６７】
別の態様において、ＩＬ−１５Ｒａのグリコシル化形態（例えば、ＩＬ−１５Ｒａの精製グリコシル化形態）であって、ＩＬ−１５Ｒａのグリコシル化が、当業者に公知の技術により評価してＩＬ−１５Ｒａの質量（分子量）の少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、又は２０％〜２５％、２０％〜３０％、２５％〜３０％、２５％〜３５％、３０％〜３５％、３０％〜４０％、３５％〜４０％、３５％〜４５％、４０％〜５０％、４５％〜５０％、２０％〜４０％、若しくは２５％〜５０％を占めるＩＬ−１５Ｒａのグリコシル化形態が本明細書に提供される。ＩＬ−１５Ｒａのグリコシル化が占めるＩＬ−１５Ｒａ（例えば、精製ＩＬ−１５Ｒａ）の質量（分子量）の割合は、例えば、限定されるものではないが、ゲル電気泳動及びゲルの定量的密度測定、並びにＩＬ−１５Ｒａのグリコシル化形態（例えば、ＩＬ−１５Ｒａの精製グリコシル化形態）と、ＩＬ−１５Ｒａの非グリコシル化形態（例えば、ＩＬ−１５Ｒａの精製非グリコシル化形態）との平均質量（分子量）の比較を使用して決定することができる。一実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ（例えば、精製ＩＬ−１５Ｒａ）の平均質量（分子量）は、マトリックスとしてシナピン酸を使用するＣｏｖａｌＸ  ＨＭ−１高質量検出器を備えるＶｏｙａｇｅｒ  Ｄｅ−Ｐｒｏ（登録商標）上でＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳスペクトルを使用して決定することができ、ＩＬ−１５Ｒａのグリコシル化形態（例えば、ＩＬ−１５Ｒａの精製グリコシル化形態）の質量をＩＬ−１５Ｒａの非グリコシル化形態（例えば、ＩＬ−１５Ｒａの精製非グリコシル化形態）の質量と比較してグリコシル化が占める質量の割合を決定することができる。
【００６８】
別の態様において、ＩＬ−１５Ｒａのグリコシル化形態であって、ＩＬ−１５Ｒａがあるアミノ酸残基においてグリコシル化（Ｎ−又はＯ−グリコシル化）されているＩＬ−１５Ｒａのグリコシル化形態が本明細書に提供される。ある実施形態において、以下のグリコシル化部位；（ｉ）ＩＬ−１５Ｒａ中のアミノ酸配列
【化５】
2021512104.tif 000006
の５位におけるトレオニン上のＯ−グリコシル化；
（ｉｉ）ＩＬ−１５Ｒａ中のアミノ酸配列
【化６】
2021512104.tif 000007
の７位におけるセリン上のＯ−グリコシル化；
（ｉｉｉ）ＩＬ−１５Ｒａ中のアミノ酸配列
【化７】
2021512104.tif 000008
の８位におけるセリン上の、又はＩＬ−１５Ｒａ中のアミノ酸配列
【化８】
2021512104.tif 000009
の８位のセリン上のＮ−グリコシル化；
（ｉｖ）ＩＬ−１５Ｒａ中のアミノ酸配列
【化９】
2021512104.tif 000010
のＳｅｒ１８上のＮ−グリコシル化；
（ｖ）ＩＬ−１５Ｒａ中のアミノ酸配列
【化１０】
2021512104.tif 000011
（配列番号２４）の２０位におけるセリン上のＮ−グリコシル化；
（ｖｉ）ＩＬ−１５Ｒａ中のアミノ酸配列
【化１１】
2021512104.tif 000012
（配列番号２４）の２３位におけるセリン上のＮ−グリコシル化；及び／又は
（ｖｉｉ）ＩＬ−１５Ｒａ中のアミノ酸配列
【化１２】
2021512104.tif 000013
（配列番号２４）の３１位におけるセリン上のＮ−グリコシル化の１、２、３、４、５、６、７つ、又は全てにおいてグリコシル化されているヒトＩＬ−１５Ｒａが本明細書に提供される。
【００６９】
具体的な実施形態において、グリコシル化ＩＬ−１５Ｒａは、野生型ヒトＩＬ−１５Ｒａである。他の具体的な実施形態において、グリコシル化ＩＬ−１５Ｒａは、ヒトＩＬ−１５ＲａのＩＬ−１５Ｒａ誘導体である。一部の実施形態において、グリコシル化ＩＬ−１５Ｒａは、野生型可溶性ヒトＩＬ−１５Ｒａ、例えば、配列番号７又は配列番号１０である。他の実施形態において、グリコシル化ＩＬ−１５Ｒａは、ヒトＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態であるＩＬ−１５Ｒａ誘導体である。ある実施形態において、グリコシル化ＩＬ−１５Ｒａは、精製又は単離されている。
【００７０】
ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体
本明細書において使用される用語「ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体」は、互いに共有又は非共有結合しているＩＬ−１５及びＩＬ−１５Ｒａを含む複合体を指す。好ましい実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａは、ＩＬ−１５についての比較的高い親和性、例えば、当該技術分野において公知の技術、例えば、ＫｉｎＥｘＡアッセイ、プラズマ表面共鳴（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）アッセイ）により計測して１０〜５０ｐＭのＫＤを有する。別の好ましい実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、当該技術分野において周知のアッセイ、例えば、電気泳動移動度シフトアッセイ、ＥＬＩＳＡ及び他の免疫アッセイにより計測してＩＬ−１５媒介シグナル伝達を誘導する。一部の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、βγ鎖に特異的に結合する能力を保持する。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、細胞から単離されている。
【００７１】
ＩＬ−１５受容体のβγサブユニットに結合し、ＩＬ−１５シグナル伝達（例えば、Ｊａｋ／Ｓｔａｔシグナル伝達）を誘導し、ＩＬ−１５媒介免疫機能を向上させる複合体であって、インターロイキン−１５受容体アルファ（「ＩＬ−１５Ｒａ」）に共有又は非共有結合しているＩＬ−１５を含む複合体（「ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体」）が本明細書に提供される。ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、βγ受容体複合体に結合し得る。
【００７２】
ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、野生型ＩＬ−１５又はＩＬ−１５誘導体及び野生型ＩＬ−１５Ｒａ又はＩＬ−１５Ｒａ誘導体から構成され得る。ある実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、ＩＬ−１５又はＩＬ−１５誘導体及び上記のＩＬ−１５Ｒａを含む。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、ＩＬ−１５又はＩＬ−１５誘導体及び配列番号１０のアミノ酸配列を有するＩＬ−１５Ｒａを含む。別の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、ＩＬ−１５又はＩＬ−１５誘導体及び上記のＩＬ−１５Ｒａのグリコシル化形態を含む。
【００７３】
具体的な実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、野生型ＩＬ−１５又はＩＬ−１５Ｒａ誘導体及び可溶性ＩＬ−１５Ｒａ（例えば、野生型可溶性ヒトＩＬ−１５Ｒａ）を含む。別の具体的な実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、ＩＬ−１５誘導体及びＩＬ−１５Ｒａ誘導体から構成される。別の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、野生型ＩＬ−１５及びＩＬ−１５Ｒａ誘導体から構成される。一実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、ＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態である。ＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態の具体例は、上記のものである。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態は、野生型ＩＬ−１５Ｒａの膜貫通ドメイン、及び場合により、野生型ＩＬ−１５Ｒａの細胞内ドメインを欠く。別の実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、野生型ＩＬ−１５Ｒａの細胞外ドメイン又はその断片である。ある実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、野生型ＩＬ−１５Ｒａのｓｕｓｈｉドメイン又はエキソン２を含む細胞外ドメインの断片である。一部の実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、野生型ＩＬ−１５Ｒａのｓｕｓｈｉドメイン又はエキソン２を含む細胞外ドメインの断片及びエキソン３によりコードされる少なくとも１つのアミノ酸を含む。ある実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、野生型ＩＬ−１５Ｒａのｓｕｓｈｉドメイン又はエキソン２を含む細胞外ドメインの断片及びＩＬ−１５Ｒａヒンジ領域又はその断片を含む。ある実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａは、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。
【００７４】
別の実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、野生型ＩＬ−１５Ｒａを開裂させる内因性プロテアーゼによる開裂を阻害する細胞外ドメイン開裂部位中の突然変異を含む。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａの細胞外ドメイン開裂部位は、異種の公知のプロテアーゼにより認識及び開裂される開裂部位により置き換えられている。このような異種プロテアーゼ開裂部位の非限定的な例としては、フーリンプロテアーゼにより認識及び開裂されるＡｒｇ−Ｘ−Ｘ−Ａｒｇ（配列番号２５）；並びにトロンビンプロテアーゼにより認識及び開裂されるＡ−Ｂ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｘ−Ｙ（配列番号２６）（Ａ及びＢは、疎水性アミノ酸であり、Ｘ及びＹは、非酸性アミノ酸である）及びＧｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙが挙げられる。
【００７５】
別の実施形態において、ＩＬ−１５は、例えば、国際公開第２００７／０８４３４２号パンフレット及び国際公開第２０１０／０２００４７号パンフレット；並びに米国特許第５，９６５，７２６号明細書；同第６，１７４，６６６号明細書；同第６，２９１，６６４号明細書；同第６，４１４，１３２号明細書；及び同第６，７９４，４９８号明細書に記載の方法を使用してＩＬ−１５の発現を向上させるために最適化された核酸配列によりコードされる。
【００７６】
ある実施形態において、配列番号２２、２３及び２４を参照して上記のグリコシル化部位の１、２、３、４、５、６、７つ、又は全てにおいてグリコシル化されているヒトＩＬ−１５Ｒａを含むＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体が本明細書に提供される。具体的な実施形態において、グリコシル化ＩＬ−１５Ｒａは、野生型ヒトＩＬ−１５Ｒａである。他の具体的な実施形態において、グリコシル化ＩＬ−１５Ｒａは、ヒトＩＬ−１５ＲａのＩＬ−１５Ｒａ誘導体である。一部の実施形態において、グリコシル化ＩＬ−１５Ｒａは、野生型可溶性ヒトＩＬ−１５Ｒａ、例えば、配列番号７又は１０である。本明細書において使用される「ｈｅｔＩＬ１５」は、配列番号１のアミノ酸配列の残基４９〜１６２を含むヒトＩＬ−１５及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むヒト可溶性ＩＬ−１５Ｒａである。他の実施形態において、グリコシル化ＩＬ−１５Ｒａは、ヒトＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態であるＩＬ−１５Ｒａ誘導体である。ある実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、精製又は単離されている。
【００７７】
ＩＬ−１５及びＩＬ−１５Ｒａに加え、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、異種分子を含むことができる。一部の実施形態において、異種分子は、タンパク質安定性を増加させる。このような分子の非限定的な例としては、ＩＬ−１５又はＩＬ−１５Ｒａのインビボ半減期を増加させるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ＩｇＧ免疫グロブリンのＦｃドメイン若しくはその断片、又はアルブミンが挙げられる。ある実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａは、免疫グロブリン（例えば、ＩｇＧ１）のＦｃドメイン又はその断片にコンジュゲート／融合している。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５ＲａＦｃ融合タンパク質は、配列番号２７又は２８のアミノ酸配列を含む。別の実施形態において、ＩＬ−１５ＲａＦｃ融合タンパク質は、Ｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１１），Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ５６：８０４−８１０、米国特許第８，５０７，２２２号明細書又は米国特許第８，１２４，０８４号明細書に記載のＩＬ−１５Ｒａ／Ｆｃ融合タンパク質である。異種分子を含むそれらのＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体において、異種分子は、ＩＬ−１５及び／又はＩＬ−１５Ｒａにコンジュゲートすることができる。一実施形態において、異種分子は、ＩＬ−１５Ｒａにコンジュゲートしている。別の実施形態において、異種分子は、ＩＬ−１５にコンジュゲートしている。
【００７８】
ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の構成成分は、非共有結合若しくは共有結合のいずれかを使用して（例えば、ペプチド結合を介してアミノ酸配列を組み合わせることにより）直接融合することができ、及び／又は１つ以上のリンカーを使用して組み合わせることができる。ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の調製に好適なリンカーは、２つ以上の構成成分に一緒に結合し得るペプチド、アルキル基、化学置換アルキル基、ポリマー、又は任意の他の共有結合若しくは非共有結合化学物質を含む。ポリマーリンカーは、当該技術分野において公知の任意のポリマー、例として、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。一部の実施形態において、リンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個又はそれ以上のアミノ酸長のペプチドである。具体的な実施形態において、リンカーは、ＩＬ−１５Ｒａに結合するＩＬ−１５の能力を保存するほど十分長い。他の実施形態において、リンカーは、βγ受容体複合体に結合し、ＩＬ−１５シグナル伝達を媒介するアゴニストとして作用するＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の能力を保存するほど十分長い。
【００７９】
特定の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、本明細書に記載の方法における投与前（例えば、細胞をＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体と接触させる前又は対象へのＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の投与前）、プレカップリングする。他の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、本明細書に記載の方法における使用前にプレカップリングしない。
【００８０】
具体的な実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、当該技術分野において周知のアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＰＯＴ、ＥＬＩＳＡ、及び細胞増殖アッセイを使用してＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体が投与されない対象における免疫機能に対して対象における免疫機能を少なくとも９９％、少なくとも９５％、少なくとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、少なくとも５０％、少なくとも４５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも３５％、少なくとも３０％、少なくとも２５％、少なくとも２０％、又は少なくとも１０％だけ向上させ、又は誘導する。具体的な実施形態において、免疫機能は、サイトカイン放出（例えば、インターフェロン−ガンマ、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、又はトランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）−ベータ）である。一実施形態において、ＩＬ−１５媒介免疫機能は、ＮＫ細胞増殖であり、それは、例えば、フローサイトメトリーによりアッセイしてＮＫ細胞のマーカー（例えば、ＣＤ５６）を発現する細胞の数を検出することができる。別の実施形態において、ＩＬ−１５媒介免疫機能は、抗体産生であり、それは、例えば、ＥＬＩＳＡによりアッセイすることができる。一部の実施形態において、ＩＬ−１５媒介免疫機能は、エフェクター機能であり、それは、例えば、細胞毒性アッセイ又は当該技術分野において周知の他のアッセイによりアッセイすることができる。
【００８１】
組合せのポリペプチドを産生する方法
上記の組合せのＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を産生するための発現ベクター及び宿主細胞も提供される。種々の発現ベクターを用いてＩＬ−１５及びＩＬ−１５Ｒａポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを発現させることができる。ウイルスベース及び非ウイルス発現ベクターの両方を使用して哺乳動物宿主細胞中でポリペプチドを産生することができる。非ウイルスベクター及び系としては、典型的には、タンパク質又はＲＮＡの発現のための発現カセットを有するプラスミド、エピソームベクター、及びヒト人工染色体が挙げられる（例えば、Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ．１５：３４５参照）。例えば、哺乳動物（例えば、ヒト）細胞中でのポリペプチドの発現に有用な非ウイルスベクターとしては、ｐＴｈｉｏＨｉｓ  Ａ、Ｂ及びＣ、ｐｃＤＮＡ３．１／Ｈｉｓ、ｐＥＢＶＨｉｓ  Ａ、Ｂ及びＣ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）、ＭＰＳＶベクター、及び他のタンパク質を発現させるための当分野において公知の多数の他のベクターが挙げられる。有用なウイルスベクターとしては、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルスをベースとするベクター、ＳＶ４０をベースとするベクター、パピローマウイルス、ＨＢＰエプスタインバーウイルス、ワクシニアウイルスベクター及びセムリキフォレストウイルス（ＳＦＶ）が挙げられる。Ｂｒｅｎｔ  ｅｔ  ａｌ．、前掲；Ｓｍｉｔｈ，（１９９５）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４９：８０７；及びＲｏｓｅｎｆｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｃｅｌｌ  ６８：１４３参照。
【００８２】
発現ベクターの選択は、ベクターを発現させるべき意図される宿主細胞に依存する。典型的には、発現ベクターは、ポリヌクレオチドに作動可能に結合しているプロモーター及び他の調節配列（例えば、エンハンサー）を含有する。一実施形態において、誘導性プロモーターを用いて誘導条件下以外での挿入配列の発現を防止する。誘導性プロモーターとしては、例えば、アラビノース、ｌａｃＺ、メタロチオネインプロモーター又は熱ショックプロモーターが挙げられる。形質移入生物の培養物は、発現産物がより良好に宿主細胞により忍容されるコード配列の集団にバイアスをかけずに非誘導条件下で拡大することができる。プロモーターに加え、他の調節エレメントも効率的な発現に要求され、又は所望され得る。これらのエレメントは、典型的には、ＡＴＧ開始コドン及び隣接リボソーム結合部位又は他の配列を含む。さらに、発現の効率は、使用される細胞系に適切なエンハンサーの包含により向上し得る（例えば、Ｓｃｈａｒｆ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｒｅｓｕｌｔｓ  Ｐｒｏｂｌ．Ｃｅｌｌ  Ｄｉｆｆｅｒ．２０：１２５；及びＢｉｔｔｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８７）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１５３：５１６参照）。例えば、ＳＶ４０エンハンサー又はＣＭＶエンハンサーを使用して哺乳動物宿主細胞中での発現を増加させることができる。
【００８３】
発現ベクターは、ＩＬ−１５又はＩＬ−１５Ｒａ配列によりコードされるポリペプチドを有する融合タンパク質を形成するための分泌シグナル配列位置も提供し得る。大抵、挿入配列は、ベクター中での包含前にシグナル配列に結合される。
【００８４】
ＩＬ−１５及びＩＬ−１５Ｒａタンパク質を保有し、発現させるための宿主細胞は、原核又は真核のいずれでもよい。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）は、ＩＬ−１５及びＩＬ−１５Ｒａポリヌクレオチドのクローニング及び発現に有用な１つの原核宿主である。使用に好適な他の微生物宿主としては、細菌、例えば、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、及び他の腸内細菌科（ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、例えば、サルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、セラチア属（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、及び種々のシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種が挙げられる。これらの原核宿主において、典型的には、宿主細胞と適合性の発現制御配列（例えば、複製起点）を含有する発現ベクターを作製することもできる。さらに、多数の種々の周知のプロモーター、例えば、ラクトースプロモーター系、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系、ベータ−ラクタマーゼプロモーター系、又はファージラムダからのプロモーター系が存在する。プロモーターは、典型的には、場合によりオペレーター配列と発現を制御し、転写及び翻訳を開始及び完了させるためのリボソーム結合部位配列などを有する。他の微生物、例えば、酵母を用いてＩＬ−１５及びＩＬ−１５Ｒａポリペプチドを発現させることもできる。バキュロウイルスベクターとの組合せの昆虫細胞を使用することもできる。
【００８５】
一実施形態において、哺乳動物宿主細胞を使用して本開示のポリペプチドを発現させ、産生することができる。例えば、これらは、内因性免疫グロブリン遺伝子を発現するハイブリドーマ細胞系又は外因性発現ベクターを保有する哺乳動物細胞系のいずれでもよい。これらとしては、任意の正常致死又は正常若しくは異常不死動物又はヒト細胞が挙げられる。例えば、インタクトな免疫グロブリンを分泌し得る多数の好適な宿主細胞系、例として、ＣＨＯ細胞系、種々のＣｏｓ細胞系、ＨｅＬａ細胞、骨髄腫細胞系、形質転換Ｂ細胞及びハイブリドーマが開発されている。哺乳動物細胞系の例としては、限定されるものではないが、ＣＯＳ、ＣＨＯ、ＨｅＬａ、ＮＩＨ３Ｔ３、ＨｅｐＧ２、ＭＣＦ７、ＨＥＫ２９３、ＨＥＫ２９３Ｔ、ＲＤ、ＰＣ１２、ハイブリドーマ、プレＢ細胞、２９３、２９３Ｈ、Ｋ５６２、ＳｋＢｒ３、ＢＴ４７４、Ａ２０４、Ｍ０７Ｓｂ、ＴＦβ１、Ｒａｊｉ、Ｊｕｒｋａｔ、ＭＯＬＴ−４、ＣＴＬＬ−２、ＭＣ−ＩＸＣ、ＳＫ−Ｎ−ＭＣ、ＳＫ−Ｎ−ＭＣ、ＳＫ−Ｎ−ＤＺ、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ、Ｃ１２７、Ｎ０、及びＢＥ（２）−Ｃ細胞が挙げられる。発現のための宿主として利用可能な他の哺乳動物細胞系は当分野において公知であり、それとしては、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から利用可能な多くの不死化細胞系が挙げられる。ポリペプチドを発現させるための哺乳動物組織細胞培養物の使用は、一般に、例えば、Ｗｉｎｎａｃｋｅｒ，ＦＲＯＭ  ＧＥＮＥＳ  ＴＯ  ＣＬＯＮＥＳ，ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎ．Ｙ．，Ｎ．Ｙ．，１９８７に考察されている。
【００８６】
別の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、ＣＨＯ細胞中での発現によりグリコシル化され、複合体中のそれぞれのポリペプチドの少なくとも０．５％、１％、２％、３％、５％以上が、α２，３−結合シアル酸残基を有する。ＣＨＯ細胞発現は、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体中のポリペプチドが分岐ＧｌｃＮＡｃを含有しないことを提供する。
【００８７】
哺乳動物宿主細胞のための発現ベクターは、発現制御配列、例えば、複製起点、プロモーター、及びエンハンサー（例えば、Ｑｕｅｅｎ，ｅｔ  ａｌ．，（１９８６）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．８９：４９−６８参照）、並びに必要なプロセシング情報部位、例えば、リボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位、及び転写ターミネーター配列を含み得る。これらの発現ベクターは、通常、哺乳動物遺伝子に、又は哺乳動物ウイルスに由来するプロモーターを含有する。好適なプロモーターは、構成的、細胞タイプ特異的、段階特異的、及び／又はモジュレート可能若しくは調節可能であり得る。有用なプロモーターとしては、限定されるものではないが、メタロチオネインプロモーター、構成的アデノウイルス主要後期プロモーター、デキサメタゾン誘導性ＭＭＴＶプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＭＲＰ  ｐｏＩＩＩＩプロモーター、構成的ＭＰＳＶプロモーター、テトラサイクリン誘導性ＣＭＶプロモーター（例えば、ヒト最初期ＣＭＶプロモーター）、構成的ＣＭＶプロモーター、及び当分野において公知のプロモーター−エンハンサーの組合せが挙げられる。
【００８８】
目的ポリヌクレオチド配列を含有する発現ベクターを導入する方法は、細胞宿主のタイプに応じて変動する。例えば、塩化カルシウム形質移入は、一般に原核細胞に利用される一方、リン酸カルシウム処理又はエレクトロポレーションを他の細胞宿主に使用することができる。（一般に、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．、前掲参照）。他の方法としては、例えば、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム処理、リポソーム媒介形質転換、注射及びマイクロインジェクション、弾道法（ｂａｌｌｉｓｔｉｃ  ｍｅｔｈｏｄ）、ビロソーム、イムノリポソーム、ポリカチオン：核酸コンジュゲート、ネイキッドＤＮＡ、人工ビリオン、ヘルペスウイルス構造タンパク質ＶＰ２２への融合（Ｅｌｌｉｏｔ  ＆  Ｏ’Ｈａｒｅ，（１９９７）Ｃｅｌｌ  ８８：２２３）、薬剤により向上されるＤＮＡの取り込み、及びエクスビボ形質導入が挙げられる。
【００８９】
組換えＩＬ−１５及びＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの長期高収量産生のため、安定的細胞系を生成することができる。例えば、細胞系は、同一又は別個の核酸構築物上に選択マーカー遺伝子を含有可能な本明細書に記載の核酸構築物を使用して形質転換することができる。選択マーカー遺伝子は、同時形質移入により同一の細胞中に導入することができる。ベクターの導入後、細胞を濃縮培地中で１〜２日間成長させてから選択培地に交換して導入核酸を良好に発現する細胞の成長及び回収を可能とする。安定的形質転換細胞の耐性クローンは、細胞タイプに適切である当該技術分野において周知の組織培養技術を使用して増殖させることができる。特定の実施形態において、細胞系は、無血清培地中で成長するように適合されたものである。一実施形態において、細胞系は、シェーカーフラスコ中で無血清培地中で成長するように適合されたものである。一実施形態において、細胞系は、撹拌又は回転フラスコ中で成長するように適合されたものである。ある実施形態において、細胞系は、懸濁液中で培養される。特定の実施形態において、細胞系は、接着しておらず、又は非接着細胞として成長するように適合されたものである。ある実施形態において、細胞系は、低カルシウム条件下で成長するように適合されたものである。一部の実施形態において、細胞系は、低血清培地中で培養され、又は成長するように適合されている。
【００９０】
具体的な実施形態において、組換えＩＬ−１５及びＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの高収量産生の特に好ましい方法は、米国特許第４，８８９，８０３号明細書に記載の連続的に増加するレベルのメトトレキサートの使用によるＤＨＦＲ欠損ＣＨＯ細胞中のジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）増幅の使用を介するものである。このような細胞から得られたポリペプチドは、グリコシル化形態であることができる。
【００９１】
一実施形態において、細胞系は、ヒトＩＬ−１５及び可溶性ヒトＩＬ−１５Ｒａの安定的ヘテロ二量体を発現するように遺伝子操作し、次いでそれを精製し、ヒトに投与することができる。一実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａヘテロ二量体の安定性は、ＩＬ−１５及びＩＬ−１５Ｒａの両方を組換え発現する細胞系から産生された場合に増加する。
【００９２】
具体的な実施形態において、宿主細胞は、ＩＬ−１５及び全長ＩＬ−１５Ｒａを組換え発現する。別の具体的な実施形態において、宿主細胞は、ＩＬ−１５及びＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態を組換え発現する。別の具体的な実施形態において、宿主細胞は、ＩＬ−１５及び細胞の表面から開裂されず、細胞と会合したままであるＩＬ−１５Ｒａの膜結合形態を組換え発現する。一部の実施形態において、ＩＬ−１５及び／又はＩＬ−１５Ｒａ（全長又は可溶性形態）を組換え発現する宿主細胞は、別のポリペプチド（例えば、サイトカイン又はその断片）も組換え発現する。
【００９３】
ある実施形態において、このような宿主細胞は、このような宿主細胞は、ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドに加え、ＩＬ−１５ポリペプチドを組換え発現する。ＩＬ−１５及び／又はＩＬ−１５Ｒａをコードする核酸を使用してＩＬ−１５及びＩＬ−１５Ｒａの単離及び精製のためにＩＬ−１５及びＩＬ−１５Ｒａを多量に組換え発現する哺乳動物細胞を生成することができ、好ましくは、ＩＬ−１５及びＩＬ−１５Ｒａは、複合体として会合している。一実施形態において、多量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、対照細胞（例えば、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒａ、若しくはＩＬ−１５及びＩＬ−１５Ｒａの両方を組換え発現するように遺伝子操作されていない細胞、又は空ベクターを含む細胞）により内因的に発現されるＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の量よりも少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、又は２０倍よりも多い、細胞により発現されるＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の量を指す。一部の実施形態において、本明細書に記載の宿主細胞は、当業者に公知の技術（例えば、ＥＬＩＳＡ）により計測しておよそ０．１ｐｇ〜２５ｐｇ、０．１ｐｇ〜２０ｐｇ、０．１ｐｇ〜１５ｐｇ、０．１ｐｇ〜１０ｐｇ、０．１ｐｇ〜５ｐｇ、０．１ｐｇ〜２ｐｇ、２ｐｇ〜１０ｐｇ、又は５〜２０ｐｇのＩＬ−１５を発現する。ある実施形態において、本明細書に記載の宿主細胞は、当該技術分野において公知の技術（例えば、ＥＬＩＳＡ）により計測して１日当たりおよそ０．１〜０．２５ｐｇ、１日当たり０．２５〜０．５ｐｇ、１日当たり０．５〜１ｐｇ、１日当たり１〜２ｐｇ、１日当たり２〜５ｐｇ、又は１日当たり５〜１０ｐｇのＩＬ−１５を発現する。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａは、ＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態である。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａは、安定的ヘテロ二量体でＩＬ−１５と会合しているＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態であり、それは収量を増加させ、生物活性ヘテロ二量体ＩＬ−１５／可溶性ＩＬ−１５Ｒａサイトカインの産生及び精製を簡易化させる。
【００９４】
組換えＩＬ−１５及びＩＬ−１５Ｒａは、組換えタンパク質産生及び精製の方法を使用して精製することができ、それらは当該技術分野において周知である、例えば、ＰＣＴ国際公開第２００７／０７０４８８号パンフレット参照。簡潔に述べると、ポリペプチドは、細胞内で、ペリプラズム空間中で産生することができ、又は培地中で直接分泌させることができる。ポリペプチドを含む細胞溶解物又は上清は、例えば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、及び親和性クロマトグラフィーを使用して精製することができる。タンパク質精製のための他の技術、例えば、イオン交換カラム上の分別、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカ上でのクロマトグラフィー、ヘパリンＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）（ゲル濾過物質；Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ）上でのクロマトグラフィー、アニオン又はカチオン交換樹脂（例えば、ポリアスパラギン酸カラム）上でのクロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、及び硫酸アンモニウム沈殿も利用可能である。
【００９５】
一部の実施形態において、ＩＬ−１５及びＩＬ−１５Ｒａは、合成し、又は異なる細胞により組換え発現させ、続いて単離し、合わせてＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体をインビトロで形成してから対象に投与する。他の実施形態において、ＩＬ−１５及びＩＬ−１５Ｒａは、合成し、又は異なる細胞により組換え発現させ、続いて単離し、次いでＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体をインサイチュー又はインビボで対象に同時投与する。さらに他の実施形態において、ＩＬ−１５及びＩＬ−１５Ｒａは、合成し、又は同一の細胞により一緒に発現させ、形成されたＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を単離する。
【００９６】
予防的及び治療的使用
本開示は、増加した細胞増殖又は癌と関連する疾患又は障害を治療する方法を提供する。具体的な実施形態において、本開示は、適応症、例として、限定されるものではないが、種々の器官系の肉腫、腺癌、芽細胞腫、及び癌腫、例えば、肝臓、肺、乳房、リンパ、胆管腸管（例えば、結腸）、腎尿路生殖器（例えば、腎臓、尿路上皮細胞）、前立腺及び咽頭を冒すものを治療する方法を提供する。腺癌としては、悪性腫瘍、例えば、ほとんどの結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、小細胞肺癌、肺の非小細胞癌、小腸の癌及び食道の癌が挙げられる。一実施形態において、癌は、黒色腫、例えば、進行期黒色腫である。治療することができる他の癌の例としては、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部の癌、皮膚又は眼内悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、直腸結腸癌、腹膜の癌、胃癌、食道癌、唾液腺癌、精巣癌、子宮癌、卵管の癌腫、子宮内膜の癌腫、頸部の癌腫、膣の癌腫、外陰の癌腫、陰茎癌、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、子宮頸癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道の癌、小腸の癌、内分泌系の癌、甲状腺の癌、副甲状腺の癌、副腎の癌、軟部組織の肉腫、尿道の癌、陰茎の癌、慢性又は急性白血病、例として、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病、幼児の固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱の癌、腎臓又は尿管の癌、腎盂の癌腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊椎軸腫瘍、脳幹グリオーマ、下垂体腺腫、カポジ肉腫、神経内分泌腫瘍（例として、カルチノイド腫瘍、ガストリノーマ、及び膵島細胞癌）、中皮腫、神経鞘腫（例として、聴神経腫）、髄膜腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；１つ以上の慢性白血病、例として、限定されるものではないが、例えば、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）；追加の血液癌又は血液病態、例として、限定されるものではないが、例えば、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、有毛細胞白血病、小細胞又は大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性リンパ増殖病態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽細胞リンパ腫及び形質細胞様樹状細胞腫瘍が挙げられる。
【００９７】
さらに、ＳＴＩＮＧアゴニスト分子とＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体との組合せを使用してとりわけ、他の癌治療法に耐性であり、又は難治性になった患者の疾患進行を治療し、予防し、遅延させ、又は回復させることができる。ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体との組合せのＳＴＩＮＧアゴニスト分子を投与することにより、抗腫瘍免疫を部分的に又は完全に向上させることができる。
【００９８】
さらなる実施形態において、本明細書に記載のＳＴＩＮＧアゴニスト分子とＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体との組合せは、それが必要とされる患者に、以下に考察される別の治療剤とともに投与することができる。例えば、本開示の組合せは、１つ以上の追加の治療剤、例えば、１つ以上の抗癌剤、細胞毒性又は細胞増殖抑制剤、ホルモン治療、ワクチン、及び／又は他の免疫療法と同時配合し、及び／又は同時投与することができる。他の実施形態において、組合せは、他の治療的治療モダリティ、例として、手術、放射線照射、凍結手術、及び／又は温熱療法と投与することができる。このような組合せ療法は、有利には、より低い投与量の投与治療剤を利用し得、したがって、種々の単剤療法に伴う考えられる毒性又は合併症を回避する。
【００９９】
当業者により認識されるとおり、本開示の組合せを利用する治療法は、上記の複数のクラスの薬剤とともに施与することができる。本開示の組合せを別の１つ又は複数の薬剤と一緒に投与する場合、２つ（以上）を連続的に任意の順序で、又は同時に投与することができる。一部の態様において、本開示の組合せは、１つ以上の他の薬剤又は方法を用いる治療法も受容する対象に投与される。他の態様において、組合せは、手術による治療とともに投与される。治療レジメンは相加的であり得、又はそれは相乗的結果を生じさせ得る。
【０１００】
医薬組成物
本開示は、薬学的に許容可能な担体と一緒に又は別個に配合されたＳＴＩＮＧアゴニスト分子とＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体との組合せを含む医薬組成物を提供する。ＳＴＩＮＧアゴニスト分子及びＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、患者に「非固定組合せ」として投与することができ、すなわち、ＳＴＩＮＧアゴニスト分子及びＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を別個の実体として規定の時間制限なしで同時に、ともに、又は連続的に投与し、そのような投与は、患者の体内で治療有効レベルの２つの薬剤を提供する。したがって、用語「非固定組合せ」は、特に、本明細書に定義される組合せの薬剤（ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニスト分子及び（ｉｉ）ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を互いに独立して、又は区別される量の組合せ薬剤との異なる固定組合せの使用により、すなわち、同時に又は異なる時点において投与することができるという意味で「キットオブパーツ」を定義し、組合せ薬剤は、互いに独立して販売されてもいる完全に別個の医薬剤形又は医薬組成物として使用することもでき、それらの組合せ使用の可能性の説明は、包装用品、例えば、リーフレットなどに、又は例えば、医師及び医療従事者に提供される他の情報に存在し、又は提供される。次いで、独立配合物又はキットオブパーツのパーツは、同時に又は時間的にずらして、すなわち、キットオブパーツの任意のパーツについて異なる時点において、及び等しい又は異なる時間間隔で投与することができる。具体的な実施形態において、時間間隔は、パーツの組合せ使用における治療される疾患に対する効果が、組合せ薬剤（ｉ）及び（ｉｉ）のいずれか１つのみの使用により得られる効果よりも大きくなり、したがって、ともに活性であるように選択される。組合せ製剤中で投与すべき組合せ薬剤（ｉ）と組合せ薬剤（ｉｉ）との総量の比は、例えば、治療すべき患者の部分集団の必要性又は単一患者の必要性（必要性は患者の年齢、性別、体重などに起因して異なり得る）に対処するように変えることができる。
【０１０１】
本開示の医薬組成物は、種々の器官系の肉腫、腺癌、芽細胞腫、及び癌腫、例えば、肝臓、肺、乳房、リンパ、胆管腸管（例えば、結腸）、腎尿路生殖器（例えば、腎臓、尿路上皮細胞）、前立腺及び咽頭を冒すものの治療に好適な１つ以上の他の治療剤をさらに含有し得る。腺癌としては、悪性腫瘍、例えば、ほとんどの結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、小細胞肺癌、肺の非小細胞癌、小腸の癌及び食道の癌が挙げられる。一実施形態において、癌は、黒色腫、例えば、進行期黒色腫である。治療することができる他の癌の例としては、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部の癌、皮膚又は眼内悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、直腸結腸癌、腹膜の癌、胃癌、食道癌、唾液腺癌、精巣癌、子宮癌、卵管の癌腫、子宮内膜の癌腫、頸部の癌腫、膣の癌腫、外陰の癌腫、陰茎癌、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、子宮頸癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道の癌、小腸の癌、内分泌系の癌、甲状腺の癌、副甲状腺の癌、副腎の癌、軟部組織の肉腫、尿道の癌、陰茎の癌、慢性又は急性白血病、例として、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病、幼児の固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱の癌、腎臓又は尿管の癌、腎盂の癌腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊椎軸腫瘍、脳幹グリオーマ、下垂体腺腫、カポジ肉腫、神経内分泌腫瘍（例として、カルチノイド腫瘍、ガストリノーマ、及び膵島細胞癌）、中皮腫、神経鞘腫（例として、聴神経腫）、髄膜腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；１つ以上の慢性白血病、例として、限定されるものではないが、例えば、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）；追加の血液癌又は血液病態、例として、限定されるものではないが、例えば、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、有毛細胞白血病、小細胞又は大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性リンパ増殖病態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽細胞リンパ腫及び形質細胞様樹状細胞腫瘍が挙げられる。
【０１０２】
本開示の医薬組成物は、組成物を向上させ、若しくは安定化させ、又は組成物の調製を容易にするための薬学的に許容可能な担体と投与することができる。薬学的に許容可能な担体としては、生理学的に適合性の溶媒、分散媒、コーティング、抗菌及び抗真菌剤、等張及び吸収遅延剤などが挙げられる。
【０１０３】
本開示の医薬組成物は、当分野において公知の種々の方法により投与することができる。投与の経路及び／又は方式は、所望の結果に応じて変動し得る。投与は、静脈内、筋肉内、腹腔内、若しくは皮下であり得、又は標的の部位に近接して投与される。薬学的に許容可能な担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄又は表皮投与（例えば、注射又は注入による）に好適であるべきである。投与経路に応じて、活性化合物、すなわち、ＳＴＩＮＧアゴニスト分子及び／又はＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、化合物を不活性化させ得る酸又は他の天然条件の作用から化合物を保護するための材料中でコーティングすることができる。
【０１０４】
組成物は、無菌且つ流体であるべきである。流動性は、例えば、コーティング、例えば、レシチンの使用により、分散液の場合には要求される粒子サイズの維持により、及び界面活性剤の使用により維持することができる。多くの場合、等張剤、例えば、糖、多価アルコール、例えば、マンニトール又はソルビトール、及び塩化ナトリウムを組成物中に含めることが好ましい。注射組成物の長期吸収は、組成物中に吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム又はゼラチンを含めることにより生じさせることができる。
【０１０５】
本開示の医薬組成物は、当分野において周知且つ定型的に実施される方法に従って調製することができる。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，２０ｔｈ  ｅｄ．，（２０００）；及びＳｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，（１９７８）参照。医薬組成物は、好ましくは、ＧＭＰ条件下で製造される。典型的には、治療有効用量又は有効用量の組合せのＳＴＩＮＧアゴニスト分子及びＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を医薬組成物において用いることができる。ＳＴＩＮＧアゴニスト分子及びＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、当業者に公知の慣用の方法により薬学的に許容可能な剤形に配合される。投与量レジメンは、最適な所望の応答（例えば、治療応答）を提供するように調整される。例えば、組合せのそれぞれの構成成分について、単一ボーラスを投与することができ、いくつかの分割用量を経時的に投与することができ、又は用量を治療状況の要求により示されるとおり漸減又は漸増させることができる。投与の容易性及び投与量の均一性のために単位剤形で非経口組成物を配合することが特に有利である。本明細書において使用される単位剤形は、治療すべき対象のための単位投与量として好適な、物理的に区別される単位を指し；それぞれの単位は、要求される医薬担体とともに所望の治療効果を生じさせるように計算された所定量の活性化合物を含有する。
【０１０６】
本開示の医薬組成物中の活性成分の実際の投与量レベルは、患者に毒性をもたらさずに特定の患者、組成物、及び投与方式についての所望の治療応答を達成するために有効な活性成分の量を得るように変えることができる。選択される投与量レベルは、種々の薬物動態因子、例として、用いられる組合せの特定の構成成分の活性、用いられる特定の化合物の投与経路、投与時間、排泄速度、治療の継続期間、用いられる特定の組成物との組合せにおいて使用される他の薬物、化合物及び／又は材料、治療される患者の年齢、性別、体重、病態、全身健康状態及び既往歴、並びに同様の因子に依存する。
【０１０７】
医師は、所望の治療効果を達成するために要求されるものよりも低いレベルにおける医薬組成物中の組合せの用量を開始し、所望の効果が達成されるまで投与量を漸増させることができる。一般に、本明細書に記載の障害の治療のための有効用量の本開示の組成物は、多くの異なる因子、例として、投与手段、標的部位、患者の生理学的状態、投与される他の医薬、及び治療が予防的か治療的かに応じて変動する。治療投与量は、安全性及び効力を最適化するために力価測定する必要がある。ＳＴＩＮＧアゴニスト分子の投与について、投与量は、宿主体重１ｋｇ当たり約０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ、より通常は、０．０１〜１５ｍｇ／ｋｇの範囲である。例示的な治療レジメンは、２週間に１回又は１ヵ月に１回又は３〜６ヵ月に１回の全身投与を伴う。ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の皮下投与について、用量は、約０．２５〜８μｇ／ｋｇ／日の範囲である。例示的な治療レジメンは、２週間にわたり週３回投与し、次いで２週間休止してから治療サイクルを繰り返す治療サイクルにおける皮下投与を伴う。
【０１０８】
ＳＴＩＮＧアゴニスト分子とＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体とを含む組合せについて、ＳＴＩＮＧアゴニスト分子及び／又はＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、複数回投与することができる。単一投与間の間隔は、週１回、月１回又は年１回であり得る。間隔は、患者におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の計測により示されるとおり不規則でもよい。或いは、組合せの構成成分は、徐放性配合物として投与することができ、その場合、要求される投与の頻度は少ない。投与量及び頻度は、患者におけるＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の半減期に応じて変動する。投与量及び投与の頻度は、治療が予防的か治療的かに応じて変動する。予防的用途において、比較的低い投与量が比較的低頻度の間隔において長期間にわたり投与される。一部の患者は、その生涯にわたり治療を受容し続ける。治療的用途において、疾患の進行が低減又は終結するまで、好ましくは、患者が疾患の症状の部分的又は完全な改善を示すまで比較的短い間隔における比較的高い投与量が要求されることがある。その後、患者に予防レジメンを施与することができる。
【０１０９】
具体的な実施形態、引用及び参照文献
種々の参照文献、例として、特許出願、特許、及び科学刊行物が本明細書に引用され；それぞれのそのような参照文献の開示は、参照により全体として本明細書に組み込まれる。
【実施例】
【０１１０】
以下の実施例は、本発見の範囲を説明するために提供されるが、それを限定するものではない。発見の他の変法は、当業者に容易に明らかであり、添付の特許請求の範囲により包含される。
【０１１１】
実施例１：ＭＣ３８腫瘍モデルにおけるｈｅｔＩＬ１５及びＳＴＩＮＧ１００の組合せ
ＮＫ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＩＬ−１５／可溶性ＩＬ−１５Ｒａ複合体（「ｈｅｔＩＬ−１５」）により刺激される。ＳＴＩＮＧ１００は自然免疫系を刺激し、したがってそれら２つの免疫活性化剤は相乗作用し、１）腫瘍中への免疫浸潤を増加させること、及び２）腫瘍に浸潤する免疫構成成分の活性化を向上させることによりロバストな抗腫瘍免疫応答をドライブし得る。この効果を実証するため、ＭＣ３８腫瘍モデルにおけるインビボ組合せ実験を以下に詳述されるとおり実施した。
【０１１２】
ＭＣ３８ネズミ結腸癌細胞（ＮＣＩ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ  ＭＤ）を、ＤＭＥＭ＋１０％の熱不活化ウシ胎児血清中で成長させた。６〜８週齢Ｃ５７Ｂｌ／６マウスを、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）から購入した。移植前、ＭＣ３８細胞をＰＢＳ中で１回洗浄し、１×１０６個の細胞／１００μＬのＰＢＳにおいて再懸濁させ、１×１０６個の細胞を右上脇腹中に皮下移植した。腫瘍を６日間成長させ、ほぼ１０９ｍｍ３の平均腫瘍サイズを有する処理群に無作為化した。腫瘍移植６日後、ＳＴＩＮＧ１００を腫瘍中にＰＢＳ中１μｇ又は１０μｇのいずれかの用量において５０μＬの容量で注射し、又はＰＢＳを対照として同一容量で注射した。腫瘍移植６、８、及び１０日後、ｈｅｔＩＬ１５を３μｇ（単鎖ＩＬ−１５当量）において腹腔中に注射した。両方の分子の投与量を図１に示し、投与のタイミングを図２に示す。次いで、それぞれの群からの８匹の予め割り当てたマウスを、腫瘍が１，５００ｍｍ３の最大サイズに達するまで試験の継続期間にわたり測径器により計測した。
【０１１３】
腫瘍移植１１日後、それぞれの群からの５匹の予め割り当てたマウスを安楽死させ、脾臓、流入領域リンパ節（腋窩）、非流入領域リンパ節（対側鼠径）、及び腫瘍を単離した。器官を７０μｍフィルターに通してＰＢＳ＋２％のウシ胎児血清＋２ｍＭのＥＤＴＡ中に導通させることにより脾臓及びリンパ節の単一細胞懸濁液を生成した。腫瘍をコラゲナーゼ、ジスパーゼ、及びＤＮアーゼの溶液中で２０分間の約３ラウンドにわたり、それぞれのラウンド間で機械的に破壊しながら消化した。次いで、細胞を抗体パネルにより染色し、ＢＤ  Ｆｏｒｔｅｓｓａ（登録商標）（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）上でランさせ、ＦｌｏｗＪｏ（登録商標）において免疫存在及び活性化について分析した。
【０１１４】
５０日後に腫瘍が検出不能な初回チャレンジからのマウスについて、再チャレンジを、事前にチャレンジしなかった（ナイーブ）対照週齢適合マウスのセットとともにマウスの対側上脇腹中への１×１０６個のＭＣ３８の注射により実施し、マウスのモニタリングを測径器により再度実施した。再チャレンジの２１日後、上記のとおりマウスから脾細胞を単離し、１）単独、２）放射線照射（１０，０００ラド）ＭＣ３８との１０：１の比、又は３）抗ＣＤ３／２８Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（Ｇｉｂｃｏ）との１：２の比のいずれかでＤＭＥＭ＋１０％のＦＢＳ中で４８時間培養した。次いで、ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ  ＃ＤＹ４８５）を使用してＩＦＮ−γ産生を計測した。
【０１１５】
ｈｅｔＩＬ１５とＳＴＩＮＧ１００との間で、強力な相乗効果、例として、初回チャレンジに対する改善された生存率が観察された（図３Ａ〜Ｂ）。ｈｅｔＩＬ１５／ＳＴＩＮＧ１００組合せの投与は十分忍容され、体重変化は見られなかった（図４）。それぞれの個々のマウスコホートの結果を図５Ａ〜Ｆに示し、図５Ｆに示されるとおり、マウスの７１％（５／７匹）における腫瘍の完全寛解及び根絶が挙げられる。ロバストな免疫浸潤及び活性化が、特に腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞（図６Ａ〜Ｃ）について見られた。最後に、インビボ及びインビトロの両方における再チャレンジに対する強力な応答（図７Ａ〜Ｂ）が観察され、ｈｅｔＩＬ１５／ＳＴＩＮＧ１００組合せが持続的な抗腫瘍免疫を生成することを示した。
【０１１６】
【表１】
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【０１１７】
【表２】
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【０１１８】
【表３】
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【０１１９】
【表４】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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