(57)【要約】【課題】多くの最適化された抗Ｃ−ＫＩＴ抗体、およびその医療用途を提供する。【解決手段】  本明細書において、Ｃ−ＫＩＴに特異的に結合する抗体分子、その抗原結合部分、およびその医学的使用方法が開示される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗Ｃ−ＫＩＴ抗体またはその抗原結合部分であって、前記抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、
（ａ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（配列番号１３）のＨＣＤＲ１、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号１４）のＨＣＤＲ２、およびＧＶＹＹＹＤＹ（配列番号１５）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（配列番号１６）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号２４）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＹＮＳＹＰＲＴ（配列番号１２）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｂ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（配列番号１３）のＨＣＤＲ１、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号１４）のＨＣＤＲ２、およびＧＶＹＹＹＤＹ（配列番号１５）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（配列番号１６）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号２４）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＹＡＮＹＰＲＴ（配列番号２５）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｃ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（配列番号１３）のＨＣＤＲ１、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号１４）のＨＣＤＲ２、およびＧＶＹＹＹＤＹ（配列番号１５）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（配列番号１６）のＬＣＤＲ１、ＳＡＳＳＬＱＳ（配列番号１７）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＹＡＮＹＰＲＴ（配列番号２５）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｄ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（配列番号１３）のＨＣＤＲ１、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号１４）のＨＣＤＲ２、およびＧＶＹＹＹＤＹ（配列番号１５）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（配列番号１６）のＬＣＤＲ１、ＳＡＳＳＬＱＳ（配列番号１７）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＹＮＳＹＰＲＴ（配列番号１２）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｅ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（配列番号１３）のＨＣＤＲ１、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号１４）のＨＣＤＲ２、およびＧＶＹＹＬＤＹ（配列番号１８）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＶＡ（配列番号１９）のＬＣＤＲ１、ＳＡＳＹＲＱＳ（配列番号２０）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＹＮＳＹＰＲＴ（配列番号１２）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｆ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（配列番号１３）のＨＣＤＲ１、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号１４）のＨＣＤＲ２、およびＧＶＹＹＦＤＥ（配列番号２１）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＧＶＲＴＮＬＡ（配列番号２２）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＳＲＱＳ（配列番号２３）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＹＮＳＹＰＲＴ（配列番号１２）のＬＣＤＲ３を含有し、または
（ｇ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＤＦＹＭＮ（配列番号１８０）のＨＣＤＲ１、ＭＧＲＩＹＰＡＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号２６）のＨＣＤＲ２、およびＧＶＷＹＹＤＹ（配列番号２７）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（配列番号１６）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号２４）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＹＡＮＹＰＲＴ（配列番号２５）のＬＣＤＲ３を含有する、抗体またはその抗原結合部分。
【請求項２】
（ａ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１８５を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１８６を含有し、
（ｂ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１８７を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１８８を含有し、
（ｃ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１８９を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１９０を含有し、
（ｄ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１９１を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１９２を含有し、
（ｅ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１９３を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１９４を含有し、または
（ｆ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１９５を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１９６を含有する、請求項１に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項３】
抗Ｃ−ＫＩＴ抗体またはその抗原結合部分であって、前記抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、
（ａ）ＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列Ｇ−Ｙ−Ｔ−Ｆ−Ｔ−Ｘ1−Ｘ2−Ｙ−Ｘ3−Ｎを含有し、式中、Ｘ1は、ＤまたはＤの保存的置換であり、Ｘ2は、ＹまたはＹの保存的置換であり、そしてＸ3は、ＭまたはＭの保存的置換であり  （配列番号１）、
（ｂ）ＨＣＤＲ２は、Ｘ1−Ｘ2−Ｒ−Ｉ−Ｙ−Ｐ−Ｘ3−Ｘ4−Ｇ−Ｎ−Ｔ−Ｙ−Ｙ−Ａ−Ｑ−Ｋ−Ｆ−Ｑ−Ｇを含有し、式中、Ｘ1は、ＭまたはＭの保存的置換であり、Ｘ2は、ＧまたはＧの保存的置換であり、Ｘ3は、ＧまたはＧの保存的置換であり、そしてＸ4は、ＳまたはＳの保存的置換であり（配列番号２）、
（ｃ）ＨＣＤＲ３は、Ｇ−Ｖ−Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4-Ｘ5を含有し、式中、Ｘ1は、Ｙまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ2は、Ｙまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ3は、Ｆまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ4は、Ｄまたは任意の他のアミノ酸であり、そしてＸ5は、Ｙまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号３）、
（ｄ）ＬＣＤＲ１は、Ｒ−Ａ−Ｓ−Ｑ−Ｇ−Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4−Ｌ−Ａを含有し、式中、Ｘ1は、ＩまたはＩの保存的置換であり、Ｘ2は、ＲまたはＲの保存的置換であり、Ｘ3は、Ｔまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ4は、Ｎまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号７）、
（ｅ）ＬＣＤＲ２は、Ｘ1−Ａ−Ｓ−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4−Ｓを含有し、式中、Ｘ1は、Ａまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ2は、Ｓまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ3は、Ｌまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ4は、Ｑまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号８）、および
（ｆ）ＬＣＤＲ３は、Ｑ−Ｑ−Ｙ−Ｘ1−Ｘ2−Ｙ−Ｐ−Ｒ−Ｔを含有し、式中、Ｘ1は、Ｎまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ2は、Ｓまたは任意の他のアミノ酸である（配列番号９）、抗体またはその抗原結合部分。
【請求項４】
抗Ｃ−ＫＩＴ抗体またはその抗原結合部分であって、前記抗体または抗原結合部分は、Ｃ−ＫＩＴへの結合に関し、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部分と交差競合し、ならびに
（ａ）完全生殖細胞系列ヒトフレームワークアミノ酸配列を含有し、および／または
（ｂ）ＬＣＤＲ３中に脱アミド化部位を含有せず、および／または
（ｃ）ＨＣＤＲ１および／またはＬＣＤＲ２中に高いＭＨＣクラスＩＩ結合アフィニティを有するヒト生殖細胞系列ペプチド配列を含有し、および／または
（ｄ）抗体ｈ３７Ｍの可変ドメイン配列を含有する抗Ｃ−ＫＩＴ抗体と比較して少ない数の免疫原性ペプチドを含有し、および／または
（ｅ）抗体ｈ３７Ｍの可変ドメイン配列を含有する抗Ｃ−ＫＩＴ抗体と比較して低い免疫原性を呈し、および／または
（ｆ）抗体ｈ３７Ｍの可変ドメイン配列を含有する抗Ｃ−ＫＩＴ抗体と類似した受容体内部移行の有効性を呈し、抗体ｈ３７Ｍの可変ドメイン配列を含有する抗Ｃ−ＫＩＴ抗体に対して、Ｃ−ＫＩＴシグナル伝達遮断において低い有効性を呈し、および／または
（ｇ）免疫エフェクターが無効である、抗体またはその抗原結合部分。
【請求項５】
前記抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項６】
前記ＶＨ領域、前記ＶＬ領域、または前記ＶＨ領域と前記ＶＬ領域の両方は、１つまたは複数のヒトフレームワーク領域のアミノ酸配列を含有する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項７】
前記ＶＨ領域、前記ＶＬ領域、または前記ＶＨ領域と前記ＶＬ領域の両方は、前記ＣＤＲが挿入されたヒト可変領域フレームワークスキャホールドのアミノ酸配列を含有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項８】
前記ＶＨ領域は、前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３のアミノ酸配列が挿入されたＩＧＨＶ１−４６ヒト生殖細胞系列スキャホールドのアミノ酸配列を含有する、請求項１または３に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項９】
前記ＶＬ領域は、前記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が挿入されたＩＧＫＶ１−１６ヒト生殖細胞系列スキャホールドのアミノ酸配列を含有する、請求項１、３および８のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１０】
前記抗体は、免疫グロブリン定常領域を含有する、請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１１】
前記免疫グロブリン定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡまたはＩｇＹである、請求項１０に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１２】
前記免疫グロブリン定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２である、請求項１１に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１３】
前記免疫グロブリン定常領域は、免疫学的に不活性である、請求項１０に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１４】
前記免疫グロブリン定常領域は、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域、またはＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＰ３３１Ｓのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域である、請求項１０に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１５】
前記免疫グロブリン定常領域は、配列番号１９７、配列番号１９８、配列番号１９９、配列番号２００、配列番号２０１または配列番号２０２を含有する、請求項１０に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１６】
前記抗体または抗原結合部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）2、Ｆｄ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）、マキシボディ、ミニボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ−ＮＡＲ、またはｂｉｓ−ｓｃＦｖである、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１７】
前記抗体は、モノクローナルである、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１８】
前記抗体は、四量体抗体、四価抗体、または多特異性抗体である、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１９】
前記抗体は、第一の抗原と第二の抗原に特異的に結合する二特異性抗体であり、前記第一の抗原はＣ−ＫＩＴであり、前記第二の抗原はＣ−ＫＩＴではない、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項２０】
前記抗体または抗原結合部分は、（ａ）ヒトＣ−ＫＩＴに特異的に結合する、または（ｂ）ヒトＣ−ＫＩＴおよびカニクイザルＣ−ＫＩＴに特異的に結合する、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項２１】
治療剤に結合された請求項１〜２０のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部分を含有する免疫結合体。
【請求項２２】
前記治療剤が、細胞毒素、放射性同位体、化学療法剤、免疫調節剤、抗血管新生剤、抗増殖剤、アポトーシス促進剤、細胞増殖抑制酵素、細胞溶解性酵素、治療用核酸、抗血管新生剤、抗増殖剤、またはアポトーシス促進剤である、請求項２１に記載の免疫結合体。
【請求項２３】
請求項１〜２０のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部分、または請求項２１または２２に記載の免疫結合体、および薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤を含有する医薬組成物。
【請求項２４】
単離核酸分子であって、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部分の
（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列、
（ｂ）ＶＬ領域のアミノ酸配列、または
（ｃ）ＶＨ領域とＶＬ領域の両方のアミノ酸配列、をコードする単離核酸分子。
【請求項２５】
請求項２４に記載の核酸分子を含有する発現ベクター。
【請求項２６】
請求項２４に記載の核酸分子、または請求項２３に記載の発現ベクターを含有する組み換え宿主細胞。
【請求項２７】
抗Ｃ−ＫＩＴ抗体またはその抗原結合部分を作製する方法であって、
前記核酸分子が発現される条件下で、請求項２５に記載の発現ベクターを含有する組み換え宿主細胞を培養し、それにより前記抗体または抗原結合部分を作製することと、および
前記宿主細胞または培養物から、前記抗体または抗原結合部分を単離することと、を含む、方法。
【請求項２８】
対象において、免疫反応を強化する方法であって、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の抗体もしくは抗原結合部分、請求項２１または２２に記載の免疫結合体、または請求項２３に記載の医薬組成物の治療有効量を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項２９】
対象において、癌、自己免疫性疾患、炎症性疾患、心血管疾患、または線維症を治療する方法であって、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の抗体もしくは抗原結合部分、請求項２１または２２に記載の免疫結合体、または請求項２３に記載の医薬組成物の治療有効量を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項３０】
前記癌が、消化管間質癌（ＧＩＳＴ）、膵臓癌、メラノーマ、乳癌、肺癌、気管支癌、結腸直腸癌、前立腺癌、胃癌、卵巣癌、膀胱癌、脳腫瘍または中枢神経系の癌、末梢神経系の癌、食道癌、子宮頸癌、子宮癌または子宮内膜癌、口腔または咽頭の癌、肝癌、腎癌、精巣癌、胆管癌、小腸癌または虫垂癌、唾液腺癌、甲状腺癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫、または血液組織の癌である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記自己免疫性疾患または前記炎症性疾患は、関節炎、喘息、多発性硬化症、乾癬、クローン病、炎症性腸疾患、紅斑性狼瘡、グレーブス病、橋本甲状腺炎、または強直性脊椎炎である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
前記心血管疾患が、冠動脈心疾患またはアテローム性動脈硬化症である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３３】
前記線維症が、心筋梗塞、狭心症、変形性関節症、肺線維症、嚢胞性線維症、気管支炎または喘息である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３４】
癌、自己免疫性疾患、炎症性疾患、心血管疾患、または線維症の治療における使用のための請求項１〜２０のいずれか１項に記載の抗体もしくは抗原結合部分、請求項２１または２２に記載の免疫結合体、または請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項３５】
前記癌が、消化管間質癌（ＧＩＳＴ）、膵臓癌、メラノーマ、乳癌、肺癌、気管支癌、結腸直腸癌、前立腺癌、胃癌、卵巣癌、膀胱癌、脳腫瘍または中枢神経系の癌、末梢神経系の癌、食道癌、子宮頸癌、子宮癌または子宮内膜癌、口腔または咽頭の癌、肝癌、腎癌、精巣癌、胆管癌、小腸癌または虫垂癌、唾液腺癌、甲状腺癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫、または血液組織の癌である、請求項３４に記載の使用のための抗体もしくは抗原結合部分、免疫結合体、または医薬組成物。
【請求項３６】
前記自己免疫性疾患または前記炎症性疾患は、関節炎、喘息、多発性硬化症、乾癬、クローン病、炎症性腸疾患、紅斑性狼瘡、グレーブス病、橋本甲状腺炎、または強直性脊椎炎である、請求項３４に記載の使用のための抗体もしくは抗原結合部分、免疫結合体、または医薬組成物。
【請求項３７】
前記心血管疾患が、冠動脈心疾患またはアテローム性動脈硬化症である、請求項３４に記載の使用のための抗体もしくは抗原結合部分、免疫結合体、または医薬組成物。
【請求項３８】
前記線維症が、心筋梗塞、狭心症、変形性関節症、肺線維症、嚢胞性線維症、気管支炎または喘息である、請求項３４に記載の使用のための抗体もしくは抗原結合部分、免疫結合体、または医薬組成物。
【請求項３９】
医薬品としての使用のための、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の抗体もしくは抗原結合部分、請求項２１または２２に記載の免疫結合体、または請求項２３に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年４月２０日に出願された英国特許出願第１８０６４６８．３号明細書、および２０１８年２月９日に出願された英国特許出願第１８０２２０１．２号明細書の利益を主張するものであり、それら各開示内容は、その全体で参照により本明細書に援用される。
【０００２】
電子的に提出されるテキストファイルに関する説明
本明細書とともに電子的に提出される以下のテキストファイルの内容は、その全体で参照により本明細書に援用される：コンピューター読み取り可能な形式の配列表のコピー（ファイルの名称：ＵＨＦＬ＿００１＿０１ＷＯ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、データ記録日：２０１９年２月８日、ファイルサイズは１０１，２７４バイト）。
【０００３】
本発明は、Ｃ−ＫＩＴ（ＫＩＴ、Ｃｌｕｓｔｅｒ  ｏｆ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  １１７（ＣＤ１１７）、ＰＢＴ、ＳＣＦＲ、ＫＩＴ  ｐｒｏｔｏ−ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅとしても知られる）に特異的に結合する抗体分子およびその医学的使用に関する。
【背景技術】
【０００４】
Ｃ−ＫＩＴ（ＫＩＴ、Ｃｌｕｓｔｅｒ  ｏｆ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  １１７  （ＣＤ１１７）、ＰＢＴ、ＳＣＦＲ、ＫＩＴ  ｐｒｏｔｏ−ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅとしても知られる）は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する膜貫通型タンパク質であり、可溶性因子のＳＣＦ（ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ  ｆａｃｔｏｒ（幹細胞因子））に結合する。Ｃ−ＫＩＴは、造血幹細胞、ならびに例えば成熟肥満細胞などの複数の他の細胞型で多く発現される受容体チロシンキナーゼＩＩＩ型であり、それら細胞でＳＣＦのシグナル伝達はサイトカインとして作用する。ＳＣＦに結合すると、この受容体は二量体化して、そのチロシンキナーゼ活性を活性化させる。このキナーゼ活性化により、シグナル伝達分子のさらに下流の活性化が生じる。それら分子は、細胞生存、増殖および分化において役割を果たすことが知られている。
【０００５】
例えば構造的に活性な変異体といったＣ−ＫＩＴの改変型は、例えば消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、肥満細胞腫瘍およびメラノーマなどのいくつかの重大な癌型の進行と密接に関連している。前臨床および臨床試験の結果から、Ｃ−ＫＩＴ−ＳＣＦシグナル伝達を遮断することで複数の癌において明白な治療利益が得られることが示唆されたが、この結果は主にＣ−ＫＩＴキナーゼ機能の低分子阻害剤を使用して得られたものである。治療後には抵抗性変異体が広く発生し、そのため低分子キナーゼ阻害剤の治療有効性が失われてしまう。受容体が二量体化する能力を遮断することでＫＩＴシグナル伝達をアンタゴナイズする治療用抗体は、以下の２つのメカニズムを介してキナーゼ阻害剤抵抗性を克服し、抗腫瘍効果を介在する可能性がある。１．受容体を、非活性な単量体型へと固定させることにより、ＫＩＴシグナル伝達経路を強力に阻害する。２．抗体エフェクター−機能介在性の免疫細胞の会合。重要なことは、近年の前臨床試験において、（間質細胞により産生されるＳＣＦを介した）腫瘍微小環境中に存在する肥満細胞のＣ−ＫＩＴ−ＳＣＦシグナル伝達が、下流のサイトカインシグナル伝達を促進し、例えば骨髄由来抑制性細胞（ＭＤＳＣ：Ｍｙｅｌｏｉｄ−Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  Ｃｅｌｌ）といった骨髄細胞をリクルートし得ると認められたことである。ＭＤＳＣは、腫瘍に対する免疫反応を抑制する重要な細胞集団であると考えられており、ＫＩＴシグナル伝達のアンタゴニズムを介して腫瘍浸潤を間接的に阻害することは、魅力的な治療戦略となり得る。
【０００６】
現在承認されている抗体治療剤の大部分は、免疫化されたげっ歯類に由来する。そうした抗体の多くが、マウスの相補性決定領域（ＣＤＲ）のヒトｖ−遺伝子フレームワーク配列への「移植」を介した、「ヒト化」として知られるプロセスを経ている（Ｎｅｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  ９：７６７−７７４を参照のこと）。このプロセスは多くの場合、不正確であり、得られた抗体の表的結合アフィニティの低下が生じる。元の抗体の結合アフィニティに戻すために、通常、移植されたｖ−ドメインの可変ドメインフレームワーク中の重要な位置にマウス残基が導入される（「復帰突然変異（ｂａｃｋ−ｍｕｔａｔｉｏｎ）」としても知られる）。
【０００７】
ＣＤＲ移植および復帰突然変異によりヒト化された抗体は臨床において、完全マウスｖ−ドメインと比較して低い免疫反応率を誘導することが示されているが、この基礎的な移植法を使用してヒト化された抗体は、物理的に不安定である可能性があり、移植ＣＤＲループ内に免疫原性モチーフがいまだ保存されていることから、重大な臨床開発リスクを負っている。タンパク質の免疫原性に関する動物実験は、ヒトでの免疫反応の予測とはならないことが多く、治療用途の抗体操作は、予測されるヒトＴ細胞エピトープ含量、非ヒト生殖細胞系列アミノ酸含量、および精製タンパク質が凝集してしまう可能性を最小化することに焦点が置かれている。
【０００８】
ゆえに理想的なヒト化アンタゴニスト抗Ｃ−ＫＩＴ抗体は、ｖ−ドメイン中に、詳細に特徴解析されたヒト生殖細胞系列配列のフレームワークとＣＤＲの両方に存在する残基と同一の残基を可能な限り多く有している抗体である。潜在的患者の最大数において高度に発現される、高い安定性の生殖細胞系列との同一性を高レベルにすることで、臨床で望ましくない免疫原性を有する治療用抗体のリスクが最小化され、または異常に高い製造「原価」が最小化される。
【０００９】
Ｔｏｗｎｓｅｎｄら  （２０１５；ＰＮＡＳ  １１２：１５３５４−１５３５９）は、抗体の作製方法を記載しており、当該方法においてラット抗体、ウサギ抗体およびマウス抗体に由来するＣＤＲは、好ましいヒトフレームワーク内に移植され、次いで「拡張バイナリー置換（ａｕｇｍｅｎｔｅｄ  ｂｉｎａｒｙ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）」と呼ばれるヒト生殖細胞系列化（ｈｕｍａｎ  ｇｅｒｍ−ｌｉｎｉｎｇ）方法が行われる。この方法は、オリジナル抗体のパラトープにおいては基礎的な柔軟性を示したが、正確性の高い抗体−抗原の共結晶構造データは無い場合には、任意の所与の抗体のＣＤＲループ中のどの個々の残基がどの組み合わせでヒト生殖細胞系列に転換され得るかを確実に予測することは不可能である。さらにＴｏｗｎｓｅｎｄらの研究では、ヒト生殖細胞系列中に存在する残基を超えた、発症リスクモチーフの除去が有益となる可能性がある位置での追加の突然変異生成には対処していない。これは技術的な限界であり、このプロセスは本質的に不充分なものであるため、ＣＤＲ中の開発障害モチーフが保持されてしまう。
【００１０】
このようにＣＤＲの生殖細胞系列化は複雑で多因子的な課題であるため、本例においては以下をはじめとする複合的な分子の機能特性が維持されることが好ましい：標的結合特異性、ヒトおよび実験動物種（例えばカニクイザルとして知られるｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ  ｍｏｎｋｅｙ、すなわちＭａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）の両方に由来するＣ−ＫＩＴに対するアフィニティ、ｖ−ドメインの生物物理的安定性、ならびに／または研究、臨床および商業で使用されるタンパク質発現プラットフォームからのＩｇＧ収率。抗体操作実験から、重要なＣＤＲ中のたった１つの残基位置での突然変異であっても、これら望ましい分子特性のすべてに対し劇的な影響を与え得ることが示されている。
【００１１】
ＷＯ２０１４０１８６２５Ａ１は、「３７Ｍ」と名づけられたアンタゴニスト性マウス抗Ｃ−ＫＩＴ  ＩｇＧ分子、ならびに３７Ｍのヒト化型の調製を記載している。その３７Ｍのヒト化型は、古典的なヒト化技術、すなわちＫａｂａｔ規定のマウスＣＤＲをヒトの重鎖および軽鎖のフレームワーク配列に移植することにより作製されており、ヒトフレームワーク残基の一部は、対応する位置の３７Ｍマウス残基に復帰突然変異されている可能性がある。上述の理由によって、ＷＯ２０１４０１８６２５Ａ１に記載される３７Ｍのヒト化型は理想的ではない。
【００１２】
本発明は、多くの最適化された抗Ｃ−ＫＩＴ抗体、およびその医療用途を提供する。
【発明の概要】
【００１３】
本発明の１つの態様によると、ヒトＣ−ＫＩＴ、および任意でカニクイザルＣ−ＫＩＴにも特異的に結合する抗体分子、またはその抗原結合部分が提供され、当該抗体分子または抗原結合部分は、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＨＣＤＲ１：Ｇ−Ｙ−Ｔ−Ｆ−Ｔ−ＤまたはＤの保存的置換−ＹまたはＹの保存的置換−Ｙ−ＭまたはＭの保存的置換−Ｎ（配列番号１）、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＨＣＤＲ２：ＭまたはＭの保存的置換（例えば、Ｉ）−ＧまたはＧの保存的置換（例えば、Ａ）−Ｒ−Ｉ−Ｙ−Ｐ−ＧまたはＧの保存的置換（例えば、Ａ）−ＳまたはＳの保存的置換（例えば、ＡまたはＴ）−Ｇ−Ｎ−Ｔ−Ｙ−Ｙ−Ａ−Ｑ−Ｋ−Ｆ−Ｑ−Ｇ（配列番号２）、および
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＨＣＤＲ３：Ｇ−Ｖ−Ｙまたは任意のアミノ酸（例えば、ＷまたはＦ）−Ｙまたは任意のアミノ酸（例えば、ＥまたはＨ）−Ｆまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｙ、ＱまたはＬ）−Ｄまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｇ、ＮまたはＳ）−Ｙまたは任意のアミノ酸（例えば、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ）（配列番号３）、を含む重鎖可変領域を含有する。
【００１４】
本発明の態様において、抗体分子または抗原結合部分のＨＣＤＲ１は、配列ＧＹＴＦＴＤＹＹＩＮ（配列番号４、ＷＯ２０１４０１８６２５Ａ１に開示される３７Ｍマウス／ヒト化抗体のＨＣＤＲ１）を除外してもよく、抗体分子または抗原結合部分のＨＣＤＲ２は、配列ＩＡＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号５、ＷＯ２０１４０１８６２５Ａ１に開示される３７Ｍマウス／ヒト化抗体のＨＣＤＲ２）を除外してもよく、および／または抗体分子または抗原結合部分のＨＣＤＲ３は、配列ＧＶＹＹＦＤＹ（配列番号６、ＷＯ２０１４０１８６２５Ａ１に開示される３７Ｍマウス／ヒト化抗体のＨＣＤＲ３）を除外してもよい。
【００１５】
抗体または抗原結合部分は、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＬＣＤＲ１：Ｒ−Ａ−Ｓ−Ｑ−Ｇ−ＩまたはＩの保存的置換−ＲまたはＲの保存的置換−Ｔまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｎ）−Ｎまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｙ）−Ｌ−Ａ（配列番号７）、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＬＣＤＲ２：Ａまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｓ、Ｙ）−Ａ−Ｓ−Ｓまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｙ）−Ｌまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｒ）−Ｑまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｙ）−Ｓ（配列番号８）、および
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＬＣＤＲ３：Ｑ−Ｑ−Ｙ−Ｎまたは任意のアミノ酸（例えば、Ａ）−Ｓまたは任意のアミノ酸（例えば、ＮまたはＤ）−Ｙ−Ｐ−Ｒ−Ｔ（配列番号９）、を含む軽鎖可変領域をさらに含有してもよい。
【００１６】
本発明の態様において、抗体分子または抗原結合部分のＬＣＤＲ１は、配列ＫＡＳＱＮＶＲＴＮＶＡ（配列番号１０、ＷＯ２０１４０１８６２５Ａ１に開示される３７Ｍマウス／ヒト化抗体のＬＣＤＲ１）を除外してもよく、および／または抗体分子または抗原結合部分のＬＣＤＲ２は、配列ＳＡＳＹＲＹＳ（配列番号１１、ＷＯ２０１４０１８６２５Ａ１に開示される３７Ｍマウス／ヒト化抗体のＬＣＤＲ２）を除外してもよい。一部の実施形態において、抗体分子または抗原結合部分のＬＣＤＲ１は、配列ＫＡＳＱＮＶＲＴＮＶＡ（配列番号１０、ＷＯ２０１４０１８６２５Ａ１に開示される３７Ｍマウス／ヒト化抗体のＬＣＤＲ１）を除外してもよく、および／または抗体分子または抗原結合部分のＬＣＤＲ２は、配列ＳＡＳＹＲＹＳ（配列番号１１、ＷＯ２０１４０１８６２５Ａ１に開示される３７Ｍマウス／ヒト化抗体のＬＣＤＲ２）を除外してもよく、および／または抗体分子または抗原結合部分のＬＣＤＲ３は、配列ＱＱＹＮＳＹＰＲＴ（配列番号１２、ＷＯ２０１４０１８６２５Ａ１に開示される３７Ｍマウス／ヒト化抗体のＬＣＤＲ３）を除外してもよい。
【００１７】
一部の態様において、本明細書は、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において、
（ａ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（配列番号１３）のＨＣＤＲ１、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号１４）のＨＣＤＲ２、およびＧＶＹＹＹＤＹ（配列番号１５）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（配列番号１６）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号２４）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＹＮＳＹＰＲＴ（配列番号１２）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｂ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（配列番号１３）のＨＣＤＲ１、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号１４）のＨＣＤＲ２、およびＧＶＹＹＹＤＹ（配列番号１５）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（配列番号１６）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号２４）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＹＡＮＹＰＲＴ（配列番号２５）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｃ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（配列番号１３）のＨＣＤＲ１、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号１４）のＨＣＤＲ２、およびＧＶＹＹＹＤＹ（配列番号１５）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（配列番号１６）のＬＣＤＲ１、ＳＡＳＳＬＱＳ（配列番号１７）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＹＡＮＹＰＲＴ（配列番号２５）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｄ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（配列番号１３）のＨＣＤＲ１、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号１４）のＨＣＤＲ２、およびＧＶＹＹＹＤＹ（配列番号１５）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（配列番号１６）のＬＣＤＲ１、ＳＡＳＳＬＱＳ（配列番号１７）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＹＮＳＹＰＲＴ（配列番号１２）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｅ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（配列番号１３）のＨＣＤＲ１、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号１４）のＨＣＤＲ２、およびＧＶＹＹＬＤＹ（配列番号１８）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＶＡ（配列番号１９）のＬＣＤＲ１、ＳＡＳＹＲＱＳ（配列番号２０）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＹＮＳＹＰＲＴ（配列番号１２）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｆ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（配列番号１３）のＨＣＤＲ１、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号１４）のＨＣＤＲ２、およびＧＶＹＹＦＤＥ（配列番号２１）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＧＶＲＴＮＬＡ（配列番号２２）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＳＲＱＳ（配列番号２３）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＹＮＳＹＰＲＴ（配列番号１２）のＬＣＤＲ３を含有し、または
（ｇ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＤＦＹＭＮ（配列番号１８０）のＨＣＤＲ１、ＭＧＲＩＹＰＡＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号２６）のＨＣＤＲ２、およびＧＶＷＹＹＤＹ（配列番号２７）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（配列番号１６）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号２４）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＹＡＮＹＰＲＴ（配列番号２５）のＬＣＤＲ３を含有する。
【００１８】
一部の態様において、本明細書は、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において、
当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、
（ａ）配列番号１３のＨＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１４のＨＣＤＲ２、および
（ｃ）配列番号１５、配列番号１８、または配列番号２１のＨＣＤＲ３を含有し、および
当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、
（ａ’）配列番号１６、配列番号１９、または配列番号２２のＬＣＤＲ１、
（ｂ’）配列番号２４、配列番号１７、配列番号２０、または配列番号２３のＬＣＤＲ２、および
（ｃ’）配列番号１２または配列番号２５のＬＣＤＲ３を含有する。
【００１９】
一部の態様において、本明細書は、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において、
（ａ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１８５を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１８６を含有し、
（ｂ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１８７を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１８８を含有し、
（ｃ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１８９を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１９０を含有し、
（ｄ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１９１を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１９２を含有し、
（ｅ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１９３を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１９４を含有し、または
（ｆ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１９５を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１９６を含有する。
【００２０】
一部の態様において、本明細書は、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において、
（ａ）ＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列Ｇ−Ｙ−Ｔ−Ｆ−Ｔ−Ｘ1−Ｘ2−Ｙ−Ｘ3−Ｎを含有し、式中、Ｘ1は、ＤまたはＤの保存的置換であり、Ｘ2は、ＹまたはＹの保存的置換であり、そしてＸ3は、ＭまたはＭの保存的置換であり  （配列番号１）、
（ｂ）ＨＣＤＲ２は、Ｘ1−Ｘ2−Ｒ−Ｉ−Ｙ−Ｐ−Ｘ3−Ｘ4−Ｇ−Ｎ−Ｔ−Ｙ−Ｙ−Ａ−Ｑ−Ｋ−Ｆ−Ｑ−Ｇを含有し、式中、Ｘ1は、ＭまたはＭの保存的置換であり、Ｘ2は、ＧまたはＧの保存的置換であり、Ｘ3は、ＧまたはＧの保存的置換であり、そしてＸ4は、ＳまたはＳの保存的置換であり（配列番号２）、
（ｃ）ＨＣＤＲ３は、Ｇ−Ｖ−Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4-Ｘ5を含有し、式中、Ｘ1は、Ｙまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ2は、Ｙまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ3は、Ｆまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ4は、Ｄまたは任意の他のアミノ酸であり、そしてＸ5は、Ｙまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号３）、
（ｄ）ＬＣＤＲ１は、Ｒ−Ａ−Ｓ−Ｑ−Ｇ−Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4−Ｌ−Ａを含有し、式中、Ｘ1は、ＩまたはＩの保存的置換であり、Ｘ2は、ＲまたはＲの保存的置換であり、Ｘ3は、Ｔまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ4は、Ｎまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号７）、
（ｅ）ＬＣＤＲ２は、Ｘ1−Ａ−Ｓ−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4−Ｓを含有し、式中、Ｘ1は、Ａまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ2は、Ｓまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ3は、Ｌまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ4は、Ｑまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号８）、および
（ｆ）ＬＣＤＲ３は、Ｑ−Ｑ−Ｙ−Ｘ1−Ｘ2−Ｙ−Ｐ−Ｒ−Ｔを含有し、式中、Ｘ1は、Ｎまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ2は、Ｓまたは任意の他のアミノ酸である（配列番号９）。
【００２１】
さらに本発明により、治療剤に結合された、本明細書に規定される抗体分子またはその抗原結合部分を含有する免疫結合体が提供される。
【００２２】
別の態様において、本発明は、本明細書に規定される抗体分子またはその抗原結合部分をコードする核酸分子を提供する。
【００２３】
さらに、本発明の核酸分子を含有するベクターが提供される。
【００２４】
また、本明細書に規定される本発明の核酸分子またはベクターを含有する宿主細胞も提供される。
【００２５】
さらなる態様において、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体および／またはその抗原結合部分を作製する方法も提供され、当該方法は、当該抗体および／もしくはその抗原結合部分の発現ならびに／または産生が生じる条件下で、本発明の宿主細胞を培養する工程、および当該宿主細胞または培養物から、当該抗体および／またはその抗原結合部分を単離する工程、を含む。
【００２６】
本発明の別の態様において、本明細書に規定される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分、または本明細書に規定される本発明の核酸分子、または本明細書に規定される本発明のベクターを含有する医薬組成物が提供される。
【００２７】
さらに、対象において免疫反応を強化する方法が提供され、当該方法は、本明細書に規定される本発明の抗体分子またはその抗原結合部分の有効量、または本明細書に規定される本発明の免疫結合体の有効量、または本明細書に規定される本発明の核酸分子の有効量、または本明細書に規定される本発明のベクターの有効量、または本明細書に規定される本発明の医薬組成物の有効量を投与する工程を含む。
【００２８】
さらなる態様において、対象において癌を治療または予防する方法が提供され、当該方法は、本明細書に規定される本発明の抗体分子またはその抗原結合部分の有効量、または本明細書に規定される本発明の免疫結合体の有効量、または本明細書に規定される本発明の核酸分子の有効量、または本明細書に規定される本発明のベクターの有効量、または本明細書に規定される本発明の医薬組成物の有効量を投与する工程を含む。
【００２９】
本発明はさらに、癌の治療における使用のための、本明細書に規定される本発明の抗体分子またはその抗原結合部分、または本明細書に規定される本発明の免疫結合体、または本明細書に規定される本発明の核酸分子、または本明細書に規定される本発明のベクター、または本明細書に規定される本発明の医薬組成物を提供する。
【００３０】
別の態様において、本発明は、例えば抗癌剤などの第二の治療剤との併用において、別個に使用する、連続して使用する、または同時に使用するための、本明細書に規定される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分、または免疫結合体、または核酸分子、またはベクター、または治療方法を提供する。
【００３１】
さらなる態様において、癌の治療のための医薬品の製造における、本明細書に規定される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分の使用、または本明細書に規定される本発明の免疫結合体の使用、または本明細書に規定される本発明の核酸分子の使用、または本明細書に規定される本発明のベクターの使用、または本明細書に規定される本発明の医薬組成物の使用が提供される。
【００３２】
本発明はさらに、対象において自己免疫性疾患もしくは炎症性疾患を治療または予防する方法を提供するものであり、当該方法は、本明細書に規定される抗体分子またはその抗原結合部分の有効量、または本明細書に規定される免疫結合体の有効量、または本明細書に規定される核酸分子の有効量、または本明細書に規定されるベクターの有効量、または本明細書に規定される医薬組成物の有効量を投与する工程を含む。
【００３３】
自己免疫性疾患または炎症性疾患は、関節炎、喘息、多発性硬化症、乾癬、クローン病、炎症性腸疾患、紅斑性狼瘡、グレーブス病、および橋本甲状腺炎、ならびに強直性脊椎炎からなる群からすべての態様において選択されてもよい。
【００３４】
また、自己免疫性疾患または炎症性疾患の治療における使用のための、本明細書に規定される抗体分子もしくはその抗原結合部分、または本明細書に規定される免疫結合体、または本明細書に規定される核酸分子、または本明細書に規定されるベクター、または本明細書に規定される医薬組成物が提供される。
【００３５】
さらに、自己免疫性疾患または炎症性疾患の治療のための医薬品の製造における、本明細書に規定される抗体分子またはその抗原結合部分の使用、または本明細書に規定される免疫結合体の使用、または本明細書に規定される核酸分子の使用、または本明細書に規定されるベクターの使用、または本明細書に規定される医薬組成物の使用が提供される。
【００３６】
本発明はさらに、対象において心血管疾患もしくは線維症を治療または予防する方法を提供するものであり、当該方法は、本明細書に規定される抗体分子またはその抗原結合部分の有効量、または本明細書に規定される免疫結合体の有効量、または本明細書に規定される核酸分子の有効量、または本明細書に規定されるベクターの有効量、または本明細書に規定される医薬組成物の有効量を投与する工程を含む。
【００３７】
さらに、医薬品としての使用のための、本明細書に規定される抗体分子もしくはその抗原結合部分、または本明細書に規定される免疫結合体、または本明細書に規定される核酸分子、または本明細書に規定されるベクター、または本明細書に規定される医薬組成物が提供される。また、心血管疾患または線維症の治療における使用のための、本明細書に規定される抗体分子もしくはその抗原結合部分、または本明細書に規定される免疫結合体、または本明細書に規定される核酸分子、または本明細書に規定されるベクター、または本明細書に規定される医薬組成物が提供される。
【００３８】
さらに、自己免疫性疾患、炎症性疾患、または線維症の治療のための医薬品の製造における、本明細書に規定される抗体分子またはその抗原結合部分の使用、または本明細書に規定される免疫結合体の使用、または本明細書に規定される核酸分子の使用、または本明細書に規定されるベクターの使用、または本明細書に規定される医薬組成物の使用が提供される。
【００３９】
本発明の任意の態様における心血管疾患は、例えば冠動脈心疾患またはアテローム性動脈硬化症であってもよい。
【００４０】
本発明の任意の態様における線維症は、心筋梗塞、狭心症、変形性関節症、肺線維症、嚢胞性線維症、気管支炎および喘息からなる群から選択されてもよい。
【００４１】
本発明はさらに、ヒトＣ−ＫＩＴに特異的に結合し、および任意でカニクイザルＣ−ＫＩＴにも特異的に結合する抗体分子、またはその抗原結合部分を作製する方法を提供するものであり、当該方法は、
（１）非ヒト源由来の抗Ｃ−ＫＩＴ  ＣＤＲをヒトｖ−ドメインフレームワーク内に移植し、ヒト化抗Ｃ−ＫＩＴ抗体分子またはその抗原結合部分を作製する工程、
（２）ＣＤＲ中に１つまたは複数の変異を含有する当該ヒト化抗Ｃ−ＫＩＴ抗体分子またはその抗原結合部分のクローンのファージライブラリーを作製する工程、
（３）ヒトＣ−ＫＩＴへの結合、および任意でカニクイザルＣ−ＫＩＴへの結合についても当該ファージライブラリーをスクリーニングする工程、
（４）スクリーニング工程（３）から、ヒトＣ−ＫＩＴに特異的に結合する、および任意でカニクイザルＣ−ＫＩＴにも特異的に結合するクローンを選択する工程、および
（５）工程（４）から選択された、ヒトＣ−ＫＩＴに特異的に結合し、および任意でカニクイザルＣ−ＫＩＴにも特異的に結合する抗体分子、またはその抗原結合部分を作製する工程、を含む。
【００４２】
当該方法は、工程（４）で選択されたクローンに基づき、例えば工程（４）で選択されたクローンのＣＤＲ中の特定の位置でのさらなる探索的な突然変異誘導に基づき、追加のクローンを作製して、ヒト化を強化する工程、および／またはヒトＴ細胞エピトープ含量を最小化する工程、および／または工程（５）で作製された抗体分子もしくはその抗原結合部分の製造特性を改善する工程をさらに含んでもよい。
【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１Ａ】図１Ａ〜図１Ｂ。ライブラリーから誘導された、ヒトおよびカニクイザルのＣ−ＫＩＴ−Ｆｃタンパク質に対する抗Ｃ−ＫＩＴ  ｓｃＦｖの直接結合ＥＬＩＳＡおよびＨＴＲＦ競合スクリーニング。クローンは、各ラウンドにおけるビオチニル化されたヒトおよび／またはカニクイザルのＣ−ＫＩＴ−Ｆｃタンパク質に対する別個のファージ選択ブランチから誘導された。複数回の選択ラウンドの後、ライブラリーから誘導されたクローン（黒丸）は、ヒト（図１Ａ）およびカニクイザル（図１Ｂ）の両方のＣ−ＫＩＴ−Ｆｃに対する結合に関してスクリーニングされ、および両オルソログに対するｈ３７Ｍ  ＩｇＧ１のエピトープ遮断に関してスクリーニングされた。陰性対照（非Ｃ−ＫＩＴ結合）および陽性対照のｈ３７Ｍ  ｓｃＦｖはそれぞれ灰色の三角形および四角で表されている。
【図１Ｂ】同上。
【図２Ａ】図２Ａ〜図２Ｂ。生殖細胞系列に対する変異に関する、ＣＤＲ残基の寛容の分析。ＥＬＩＳＡ陽性の２１９個の固有ｓｃＦｖクローン群のＣＤＲ（配列番号４、５および６）における、マウスアミノ酸保持頻度の図をそれぞれＶH（図２Ａ）ドメインおよびＶL（図２Ｂ）ドメインに対して示す。ＨＣＤＲ３以外では、ヒト／マウス残基の突然変異誘導の標的とされた残基のみプロットされている。Ｘ軸上のカッコ内に記載されるＣＤＲ残基は、移植に使用されたヒト生殖細胞系列（ＩＧＫＶ１−１６およびＩＧＨＶ１−４６）中に存在する残基と同一である。カッコ内には無いが、その値が０に設定されているＨＣＤＲ２中の残基は、移植プロセスの間にヒト生殖細胞系列へと変異された。両方の図において、７５％での灰色の破線は、ヒト生殖細胞系列によるマウス残基の置換の寛容性に対するカットオフを表している。
【図２Ｂ】同上。
【図３Ａ】図３Ａ〜図３Ｂ。ヒトおよびカニクイザルのＣ−ＫＩＴ−Ｆｃタンパク質へのＩｇＧ結合に関する、直接的力価測定ＥＬＩＳＡ。キメラ抗Ｃ−ＫＩＴ（ｍ３７Ｍ）、ヒト化ｈ３７Ｍ、ヒトＩｇＧ１形式のライブラリー由来クローンおよびデザインクローンが、ヒト（図３Ａ）およびカニクイザル（図３Ｂ）のＣ−ＫＩＴ−Ｆｃタンパク質に対する直接結合ＥＬＩＳＡにおいて力価測定された（μｇ／ｍＬ）。３７Ｍ、ライブラリー由来クローン、およびデザインクローンＭＨは、Ｃ−ＫＩＴの両方のオルソログに対して結合活性を示した。すべてのライブラリー由来クローン、およびいくつかのデザインクローンは、ほぼ同等、または改善されたヒトおよびカニクイザルＣ−ＫＩＴ結合を保有していた。一方ですべてのＴＴＰクローンおよびＭＨクローンの４、６、７、９、１３、１４および１５はすべて、１つまたは両方のオルソログに対し、結合シグナルの低下を示した。
【図３Ｂ】同上。
【図４Ａ】図４Ａ〜図４Ｅ。ＨＴＲＦ系の液相、高感度、Ｃ−ＫＩＴエピトープ競合アッセイ。ヒトまたはカニクイザルのＣ−ＫＩＴに対するｈ３７Ｍ  ＩｇＧのＨＴＲＦ結合シグナルを、ライブラリー由来リードおよびデザインリードを含む力価測定された競合ＩｇＧ、それに加えて陰性対照としてのアイソタイプＩｇＧ１および陽性対照としての非標識ｈ３７Ｍ  ＩｇＧ１の存在下で検証した。すべてのライブラリー由来ＩｇＧ、および複数のデザインＩｇＧは、ヒト（図４Ａ）およびカニクイザル（図４Ｃ、図４Ｄ）のＣ−ＫＩＴに対して、完全に濃度依存性のｈ３７Ｍ結合阻害を示し、非標識ｈ３７Ｍ  ＩｇＧと同等であった。このことから、共有エピトープおよび結合アフィニティが維持されたことが示唆される。すべてのＴＴＰクローンと、それに加えてＭＨクローンの４、６、７および９は、ヒト（図４Ｂ）またはカニクイザル（図４Ｅ）のＣ−ＫＩＴのいずれかに対して、ｈ３７Ｍの結合を阻害する能力が低下したことが判明した。
【図４Ｂ】同上。
【図４Ｃ】同上。
【図４Ｄ】同上。
【図４Ｅ】同上。
【図５Ａ】図５Ａ〜図５Ｆ。ライブラリー由来リードおよび初代デザインリードのヒトおよびカニクイザルのＣ−ＫＩＴ＋ＣＨＯ−Ｋ１細胞に対するフローサイトメトリー結合。ヒトＣ−ＫＩＴがトランスフェクトされたＣＨＯ−Ｋ１細胞（図５Ａ、図５Ｂ）、カニクイザルＣ−ＫＩＴがトランスフェクトされたＣＨＯ−Ｋ１細胞（図５Ｃ、図５Ｄ）、および野生型（ＷＴ、すなわち非トランスフェクト）ＣＨＯ−Ｋ１細胞（図５Ｅ、図５Ｆ）に対する特異的結合に関して、抗Ｃ−ＫＩＴ対照のｍ３７Ｍおよびｈ３７Ｍ、ＩｇＧ１形式のライブラリー由来リードおよびデザインリードを検証した。ＩｇＧは、０．０２〜１００μｇ／ｍｌの範囲の濃度で検証された。すべてのＣ−ＫＩＴ特異的抗体で、ヒトおよびカニクイザルの細胞株の両方に対し、濃度依存性の結合が観察された。一方でアイソタイプ対照では観察されなかった。野生型ＣＨＯ−Ｋ１細胞に対し、バックグラウンドを超える結合シグナルは観察されなかった。
【図５Ｂ】同上。
【図５Ｃ】同上。
【図５Ｄ】同上。
【図５Ｅ】同上。
【図５Ｆ】同上。
【図６Ａ】図６Ａ〜図６Ｂ。ヒトおよびカニクイザルのＣ−ＫＩＴ−Ｆｃタンパク質への第二世代デザインＩｇＧ結合に関する、直接的力価測定ＥＬＩＳＡ。抗Ｃ−ＫＩＴ  ｈ３７Ｍ、ＭＨ５、およびヒトＩｇＧ１形式の第二世代デザインクローンを、ヒト（図６Ａ）およびカニクイザル（図６Ｂ）のＣ−ＫＩＴ−Ｆｃタンパク質に対する直接結合ＥＬＩＳＡにおいて力価測定した（μｇ／ｍＬ）。ｈ３７Ｍ、およびＭＨ５クローンは、Ｃ−ＫＩＴの両方のオルソログに対して結合活性を示した。ＭＨ５．３３以外のすべてのデザインクローンがヒトおよびカニクイザルのＣ−ＫＩＴ結合を保有していたが、クローンＭＨ５．１、５．２、５．３、５．２２、５．２３、５．２４、５．３４および５．３５のみが、クローンｈ３７Ｍと同等の両オルソログに対する結合を示した。
【図６Ｂ】同上。
【図７Ａ】図７Ａ〜図７Ｂ。重要な第二世代デザインリードに対する、ＨＴＲＦ系Ｃ−ＫＩＴエピトープ競合アッセイ。ヒトまたはカニクイザルのＣ−ＫＩＴに対するｈ３７Ｍ  ＩｇＧのＨＴＲＦ結合シグナルを、力価測定されたＩｇＧ１形式の競合第二世代デザインリード、それに加えて陰性対照としてのアイソタイプＩｇＧ１および陽性対照としての非標識ｈ３７Ｍ  ＩｇＧ１の存在下で検証した。すべてのＩｇＧ（アイソタイプ対照のＩｇＧ１を除く）は、非標識ｈ３７Ｍ  ＩｇＧと類似した、完全に濃度依存性のヒトＣ−ＫＩＴ（図７Ａ）およびカニクイザルＣ−ＫＩＴ（図７Ｂ）へのｈ３７Ｍ結合の阻害を呈した。
【図７Ｂ】同上。
【図８Ａ】図８Ａ〜図８Ｃ。第二世代デザインリードに関する、ヒトおよびカニクイザルのＣ−ＫＩＴ＋ＣＨＯ−Ｋ１細胞へのフローサイトメトリー結合。ヒトＣ−ＫＩＴがトランスフェクトされたＣＨＯ−Ｋ１細胞（図８Ａ）、カニクイザルＣ−ＫＩＴがトランスフェクトされたＣＨＯ−Ｋ１細胞（図８Ｂ）、および野生型（ＷＴ、すなわち非トランスフェクト）ＣＨＯ−Ｋ１細胞（図８Ｃ）に対する特異的結合に関して、ＩｇＧ１形式の抗Ｃ−ＫＩＴライブラリー由来リードおよびデザインリードを検証した。ＩｇＧは、２４〜１００，０００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で検証された。すべてのＣ−ＫＩＴ特異的抗体で、ヒトおよびカニクイザルの細胞株の両方に対し、濃度依存性の結合が観察された。一方でアイソタイプ対照では観察されなかった。野生型ＣＨＯ−Ｋ１細胞に対し、バックグラウンドを超える結合シグナルは観察されなかった。
【図８Ｂ】同上。
【図８Ｃ】同上。
【図９Ａ】図９Ａ〜図９Ｆ。重点リードクローンの結合特異性分析。ｈ３７Ｍ抗体およびＩｇＧ１形式の複数のリード抗体に関する、１μｇ／ｍｌでのオフターゲットホモログ結合リスクを、Ｃ−ＫＩＴ−Ｆｃオルソログおよび１４個のヒト免疫グロブリンスーパーファミリータンパク質のパネルに対する直接的ＥＬＩＳＡにより検証した。すべてのＩｇＧに関し、ヒトおよびカニクイザルのＣ−ＫＩＴ−Ｆｃ単独に対する結合が観察された。任意の他のヒトタンパク質またはオルソログタンパク質に対する、バックグラウンドを超える結合は観察されなかった。
【図９Ｂ】同上。
【図９Ｃ】同上。
【図９Ｄ】同上。
【図９Ｅ】同上。
【図９Ｆ】同上。
【図１０Ａ】図１０Ａ〜図１０Ｃ。開発リスクＥＬＩＳＡ。このアッセイにより、ＩｇＧ１形式のＥ−Ｃ７抗体、Ｅ−Ｃ３抗体、ＭＨ１抗体、ＭＨ５抗体、ＭＨ５．２２抗体およびｈ３７Ｍ抗体が、負の電荷を有する生体分子のインスリン（図１０Ａ）、二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）（図１０Ｂ）、および一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）（図１０Ｃ）に対し、陰性対照のＩｇＧ１  ウステキヌマブ（Ｕｓｔｅｋｉｎｕｍａｂ）アナログよりも低い、または同等の結合を呈することが示された。ボコシズマブ（Ｂｏｃｏｃｉｚｕｍａｂ）およびブリアキヌマブ（Ｂｒｉａｋｉｎｕｍａｂ）のアナログに観察されるような、これら分子に対する強力なオフターゲット結合は、治療抗体の貧弱な薬物動態に関する高リスク指標であることが示されている。
【図１０Ｂ】同上。
【図１０Ｃ】同上。
【図１１Ａ】図１１Ａ〜図１１Ｈ。リード抗体ｖ−ドメインにおける、Ｔ細胞エピトープペプチド含量。ｈ３７Ｍ抗体（図１１Ａ）、Ｅ−Ｃ７抗体（図１１Ｂ）、Ｆ−Ｃ５抗体（図１１Ｃ）、Ｅ−Ｃ３抗体（図１１Ｄ）、ＭＨ１抗体（図１１Ｅ）、ＭＨ５抗体（図１１Ｆ）、ＭＨ５．２２抗体（図１１Ｇ）およびＭＨ５−ＤＩ抗体（図１１Ｈ）のｖ−ドメインを、生殖細胞系列（ＧＥ）、高アフィニティ外来物（ＨＡＦ：Ｈｉｇｈ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｆｏｒｅｉｇｎ）、低アフィニティ外来物（ＬＡＦ：Ｌｏｗ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｆｏｒｅｉｇｎ）およびＴＣＥＤ＋Ｔ細胞受容体エピトープの存在に関して検証した。ｈ３７ＭのＶＨドメインとＶＬドメインの両方とも、複数の高リスクなヒトＴ細胞エピトープを含有し、生殖細胞系列エピトープは殆ど含有しないことが判明した。すべてのリードクローンでは、高リスクエピトープ含量は大幅に減少され、生殖細胞系列エピトープは改善されていた。
【図１１Ｂ】同上。
【図１１Ｃ】同上。
【図１１Ｄ】同上。
【図１１Ｅ】同上。
【図１１Ｆ】同上。
【図１１Ｇ】同上。
【図１１Ｈ】同上。
【図１２Ａ】図１２Ａ〜図１２Ｃ。ヒトＦｃγＲＩＩｂに対する、ＩｇＧ１  Ｆｃ操作バリアントのアフィニティ解析。精製された抗ＫＩＴ  ＩｇＧを、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｔ２００機器の「定常状態」アフィニティ測定において、ＦｃγＲＩＩｂに対する結合アフィニティに関して解析した。クローンｈ３７Ｍ−ＩｇＧ１（図１２Ａ）、クローンｈ３７Ｍ−ＩｇＧ１−３Ｍ（図１２Ｂ）、およびクローンＭＨ１−ＩｇＧ−４Ｍ（図１２Ｃ）はすべて、ＦｃγＲＩＩｂに対し測定可能な結合を呈しており、ＭＨ１−ＩｇＧ−４Ｍは、全濃度範囲にわたり、全体的に最も低い結合シグナルを示した。Ａ〜Ｃにおいて、チップ相互作用の生データは、それぞれの上のパネルに示されており、各濃度当たりの反応単位（ＲＵ：Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｕｎｉｔ）に対してプロットされた曲線は、下のパネルに示されている。
【図１２Ｂ】同上。
【図１２Ｃ】同上。
【図１３Ａ】図１３Ａ〜図１３Ｃ。ヒトプロテオーム再配置（ｒｅ−ａｒｒａｙ）解析。５５２８個の固有タンパク質の完全スクリーニングを行った後、結合特異性の解析をチップに対して行った。チップには、潜在的に関連性のある標的をコードするプラスミドが配置されており、当該プラスミドを使用してＨＥＫ２９３細胞がトランスフェクトされた。すべてのプラスミドのトランスフェクションが、一緒にコードされたマーカーのＺＳグリーンをスクリーニングすることにより確認された（図１３Ａ）。次いで個別のチップが、リツキシマブアナログおよび二次標識抗体のみ（図１３Ａ）、０．５および２μｇ／ｍｌのｈ３７Ｍ（図１３Ｂ）、ならびに０．５および２μｇ／ｍｌのＭＨ１（図１３Ｃ）を使用してプローブされた。これらの解析により、ｈ３７ＭとＭＨ１の両方ともが、Ｃ−ＫＩＴに対して高い特異性の結合を呈したことが確認された。すべてのチップ上で、ＭＭＰ７、ＣＲＩＭ１およびＦ１３Ａ１に対する結合シグナルは二次抗体のアーチファクトであることが判明した（図１３Ａ）。
【図１３Ｂ】同上。
【図１３Ｃ】同上。
【図１４Ａ】図１４Ａ〜図１４Ｃ。抗Ｃ−ＫＩＴ細胞殺傷解析。内部移行と毒素送達を、ヒトＣ−ＫＩＴ（図１４Ａ）およびカニクイザルＣ−ＫＩＴ（図１４Ｂ）をトランスフェクトされたＣＨＯ細胞、ならびにヒト赤白血病細胞株のＴＦ−１（図１４Ｃ）に対して、ＦａｂＺＡＰ試薬の存在下で検証した。クローンｈ３７Ｍ、クローンＭＨ１、およびＩｇＧ１−３Ｍ形式のクローンＭＨ５−ＤＩはすべて、高い有効性で高度に類似した細胞殺傷を誘導した。
【図１４Ｂ】同上。
【図１４Ｃ】同上。
【図１５Ａ】図１５Ａ〜図１５Ｂ。ｈ３７Ｍ、ＭＨ１、ＭＨ５に対するＨＴＲＦ系Ｃ−ＫＩＴエピトープ競合アッセイ。ヒトまたはカニクイザルのＣ−ＫＩＴに対するｈ３７Ｍ  ＩｇＧのＨＴＲＦ結合シグナルを、力価測定された競合物質のＭＨ１、およびＩｇＧ１−３Ｍ形式のＭＨ５、それに加えて陰性対照としてのアイソタイプＩｇＧ１と陽性対照としての非標識ｈ３７Ｍ  ＩｇＧ１−３Ｍの存在下で検証した。すべてのＩｇＧ（アイソタイプ対照のＩｇＧ１を除く）は、非標識ｈ３７Ｍと重複する、完全に濃度依存性のヒトＣ−ＫＩＴ（図１５Ａ）およびカニクイザルＣ−ＫＩＴ（図１５Ｂ）へのｈ３７Ｍ結合の阻害を呈した。
【図１５Ｂ】同上。
【図１６】図１６。Ｃ−ＫＩＴ／ＳＣＦ誘導型細胞増殖の阻害に関するＴＦ−１細胞系アッセイ。ヒトＴＦ−１細胞株は、ＳＣＦの存在下で培養された。ＳＣＦはＣ−ＫＩＴを介して細胞増殖を促進する。抗体を７２時間適用し、レザズリン蛍光を介して増殖が測定された。ｈ３７Ｍは、検証された他のいずれの抗体よりも予想を超えて顕著に有効性が高いことが判明した。
【発明を実施するための形態】
【００４４】
本発明の第一の態様によると、ヒトＣ−ＫＩＴ、および任意でカニクイザルＣ−ＫＩＴにも特異的に結合する抗体分子、またはその抗原結合部分が提供され、当該抗体分子または抗原結合部分は、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＨＣＤＲ１（重鎖相補性決定領域１）：Ｇ−Ｙ−Ｔ−Ｆ−Ｔ−ＤまたはＤの保存的置換−ＹまたはＹの保存的置換−Ｙ−ＭまたはＭの保存的置換−Ｎ（配列番号１）、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＨＣＤＲ２（重鎖相補性決定領域２）：ＭまたはＭの保存的置換（例えば、Ｉ）−ＧまたはＧの保存的置換（例えば、Ａ）−Ｒ−Ｉ−Ｙ−Ｐ−ＧまたはＧの保存的置換（例えば、Ａ）−ＳまたはＳの保存的置換（例えば、ＡまたはＴ）−Ｇ−Ｎ−Ｔ−Ｙ−Ｙ−Ａ−Ｑ−Ｋ−Ｆ−Ｑ−Ｇ（配列番号２）、および
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＨＣＤＲ３（重鎖相補性決定領域３）：Ｇ−Ｖ−Ｙまたは任意のアミノ酸（例えば、ＷまたはＦ）−Ｙまたは任意のアミノ酸（例えば、ＥまたはＨ）−Ｆまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｙ、ＱまたはＬ）−Ｄまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｇ、ＮまたはＳ）−Ｙまたは任意のアミノ酸（例えば、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ）（配列番号３）、を含む重鎖可変領域を含有する。
【００４５】
一部の態様では、本明細書に提供される抗Ｃ−ＫＩＴ抗体または抗原結合部分は、配列番号２０８を含有する、または配列番号２０８からなるＣ−ＫＩＴタンパク質に特異的に結合する。一部の態様では、本明細書に提供される抗Ｃ−ＫＩＴ抗体または抗原結合部分は、配列番号２０８に対して、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を有するＣ−ＫＩＴタンパク質に特異的に結合する。一部の態様では、本明細書に提供される抗Ｃ−ＫＩＴ抗体または抗原結合部分は、配列番号２０９もしくは配列番号２１０を含有する、または配列番号２０９もしくは配列番号２１０からなる核酸分子にコードされるＣ−ＫＩＴタンパク質に特異的に結合する。
【００４６】
本発明の態様において、抗体分子または抗原結合部分のＨＣＤＲ１は、配列ＧＹＴＦＴＤＹＹＩＮ（配列番号４、ＷＯ２０１４０１８６２５Ａ１に開示される３７Ｍマウス／ヒト化抗体のＨＣＤＲ１）を除外してもよく、抗体分子または抗原結合部分のＨＣＤＲ２は、配列ＩＡＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号５、ＷＯ２０１４０１８６２５Ａ１に開示される３７Ｍマウス／ヒト化抗体のＨＣＤＲ２）を除外してもよく、および／または抗体分子または抗原結合部分のＨＣＤＲ３は、配列ＧＶＹＹＦＤＹ（配列番号６、ＷＯ２０１４０１８６２５Ａ１に開示される３７Ｍマウス／ヒト化抗体のＨＣＤＲ３）を除外してもよい。
【００４７】
抗体または抗原結合部分は、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＬＣＤＲ１（軽鎖相補性決定領域１）：Ｒ−Ａ−Ｓ−Ｑ−Ｇ−ＩまたはＩの保存的置換−ＲまたはＲの保存的置換−Ｔまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｎ）−Ｎまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｙ）−Ｌ−Ａ（配列番号７）、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＬＣＤＲ２（軽鎖相補性決定領域２）：Ａまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｓ、Ｙ）−Ａ−Ｓ−Ｓまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｙ）−Ｌまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｒ）−Ｑまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｙ）−Ｓ（配列番号８）、および
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＬＣＤＲ３（軽鎖相補性決定領域３）：Ｑ−Ｑ−Ｙ−Ｎまたは任意のアミノ酸（例えば、Ａ）−Ｓまたは任意のアミノ酸（例えば、ＮまたはＤ）−Ｙ−Ｐ−Ｒ−Ｔ（配列番号９）、を含む軽鎖可変領域をさらに含有してもよい。
【００４８】
本発明の一部の態様において、抗体分子または抗原結合部分のＬＣＤＲ１は、配列ＫＡＳＱＮＶＲＴＮＶＡ（配列番号１０、ＷＯ２０１４０１８６２５Ａ１に開示される３７Ｍマウス／ヒト化抗体のＬＣＤＲ１）を除外してもよく、および／または抗体分子または抗原結合部分のＬＣＤＲ２は、配列ＳＡＳＹＲＹＳ（配列番号１１、ＷＯ２０１４０１８６２５Ａ１に開示される３７Ｍマウス／ヒト化抗体のＬＣＤＲ２）を除外してもよい。一部の実施形態において、抗体分子または抗原結合部分のＬＣＤＲ１は、配列ＫＡＳＱＮＶＲＴＮＶＡ（配列番号１０、ＷＯ２０１４０１８６２５Ａ１に開示される３７Ｍマウス／ヒト化抗体のＬＣＤＲ１）を除外してもよく、および／または抗体分子または抗原結合部分のＬＣＤＲ２は、配列ＳＡＳＹＲＹＳ（配列番号１１、ＷＯ２０１４０１８６２５Ａ１に開示される３７Ｍマウス／ヒト化抗体のＬＣＤＲ２）を除外してもよく、および／または抗体分子または抗原結合部分のＬＣＤＲ３は、配列ＱＱＹＮＳＹＰＲＴ（配列番号１２、ＷＯ２０１４０１８６２５Ａ１に開示される３７Ｍマウス／ヒト化抗体のＬＣＤＲ３）を除外してもよい。
【００４９】
一部の態様において、本明細書は、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において、
（ａ）ＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列Ｇ−Ｙ−Ｔ−Ｆ−Ｔ−Ｘ1−Ｘ2−Ｙ−Ｘ3−Ｎを含有し、式中、Ｘ1は、ＤまたはＤの保存的置換であり、Ｘ2は、ＹまたはＹの保存的置換であり、そしてＸ3は、ＭまたはＭの保存的置換であり（配列番号１）、
（ｂ）ＨＣＤＲ２は、Ｘ1−Ｘ2−Ｒ−Ｉ−Ｙ−Ｐ−Ｘ3−Ｘ4−Ｇ−Ｎ−Ｔ−Ｙ−Ｙ−Ａ−Ｑ−Ｋ−Ｆ−Ｑ−Ｇを含有し、式中、Ｘ1は、ＭまたはＭの保存的置換（例えば、Ｉ）であり、Ｘ2は、ＧまたはＧの保存的置換（例えば、Ａ）であり、Ｘ3は、ＧまたはＧの保存的置換（例えば、Ａ）であり、そしてＸ4は、ＳまたはＳの保存的置換（例えば、ＡまたはＴ）であり（配列番号２）、
（ｃ）ＨＣＤＲ３は、Ｇ−Ｖ−Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4-Ｘ5を含有し、式中、Ｘ1は、Ｙまたは任意の他のアミノ酸（例えば、ＷまたはＦ）であり、Ｘ2は、Ｙまたは任意の他のアミノ酸（例えば、ＥまたはＨ）であり、Ｘ3は、Ｆまたは任意の他のアミノ酸（例えば、Ｙ、ＱまたはＬ）であり、Ｘ4は、Ｄまたは任意の他のアミノ酸（例えば、Ｇ、ＮまたはＳ）であり、そしてＸ5は、Ｙまたは任意の他のアミノ酸（例えば、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、ＴまたはＶ）であり（配列番号３）；
（ｄ）ＬＣＤＲ１は、Ｒ−Ａ−Ｓ−Ｑ−Ｇ−Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4−Ｌ−Ａを含有し、式中、Ｘ1は、ＩまたはＩの保存的置換であり、Ｘ2は、ＲまたはＲの保存的置換であり、Ｘ3は、Ｔまたは任意の他のアミノ酸（例えば、Ｎ）であり、Ｘ4は、Ｎまたは任意の他のアミノ酸（例えば、Ｙ）であり（配列番号７）、
（ｅ）ＬＣＤＲ２は、Ｘ1−Ａ−Ｓ−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4−Ｓを含有し、式中、Ｘ1は、Ａまたは任意の他のアミノ酸（例えば、ＳまたはＹ）であり、Ｘ2は、Ｓまたは任意の他のアミノ酸（例えば、Ｙ）であり、Ｘ3は、Ｌまたは任意の他のアミノ酸（例えば、Ｒ）であり、そしてＸ4は、Ｑまたは任意の他のアミノ酸（例えば、Ｙ）であり（配列番号８）、および
（ｆ）ＬＣＤＲ３は、Ｑ−Ｑ−Ｙ−Ｘ1−Ｘ2−Ｙ−Ｐ−Ｒ−Ｔを含有し、式中、Ｘ1は、Ｎまたは任意の他のアミノ酸（例えば、Ａ）であり、Ｘ2は、Ｓまたは任意の他のアミノ酸（例えば、ＮまたはＤ）である（配列番号９）。
【００５０】
一部の態様において、本明細書は、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、この場合において当該抗体は、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって、ＦＲ１−ＨＣＤＲ１−ＦＲ２−ＨＣＤＲ２−ＦＲ３−ＨＣＤＲ３−ＦＲ４を含有する重鎖可変（ＶＨ）領域、およびアミノ末端からカルボキシ末端に向かって、ＦＲ１−ＬＣＤＲ１−ＦＲ２−ＬＣＤＲ２−ＦＲ３−ＬＣＤＲ３−ＦＲ４を含有する軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において、ＨＣＤＲ１は、配列番号１であり、ＨＣＤＲ２は、配列番号２であり、ＨＣＤＲ３は、配列番号３であり、ＬＣＤＲ１は、配列番号７であり、ＬＣＤＲ２は、配列番号８であり、そしてＬＣＤＲ３は、配列番号９であり、この場合において当該重鎖のＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列は、配列番号８９（表２を参照のこと）のＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列であり、この場合において当該軽鎖のＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列は、配列番号９２（表２を参照のこと）のＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列である。
【００５１】
本明細書に詳述されるように、本発明者らは、ＷＯ２０１４０１８６２５Ａ１に開示されるマウス抗Ｃ−ＫＩＴ抗体３７Ｍから誘導されたＣＤＲ配列を使用し、多数の最適化抗Ｃ−ＫＩＴ抗体分子を作製することに初めて成功した。本発明の実施形態において、これら抗体分子は、（適切な動物実験種でのインビボ試験が容易になるように）ヒトＣ−ＫＩＴならびにカニクイザルＣ−ＫＩＴの両方に特異的に結合するよう選択された。本明細書に記載される最適化された抗体分子のさらなる改良によって、可変ドメインの安定性の改善、高い発現収率、および／または免疫原性の低下が提供された。
【００５２】
本発明の好ましい最適化抗Ｃ−ＫＩＴ抗体分子は、対応するマウスＣＤＲまたはその他（例えばフレームワーク）のアミノ酸の位置で、必ずしも最大数のヒト生殖細胞系列の置換を有するとは限らない。以下の実施例の項に詳述されるように、本発明者らは、「最大限にヒト化された」抗体分子は、抗Ｃ−ＫＩＴ結合特性および／または他の望ましい性質に関して、必ずしも「最大限に最適化」されているとは限らないことを見出した。
【００５３】
本発明は、本明細書に記載される抗体分子またはその抗原結合部分のアミノ酸配列に対する改変を包含する。例えば本発明は、その性質に大きな影響を与えない、機能的に同等の可変領域およびＣＤＲを含有する抗体分子およびその対応する抗原結合部分、ならびに活性および／もしくはアフィニティが強化された、または低下したバリアントを包含する。例えばアミノ酸配列は、Ｃ−ＫＩＴに対し所望の結合アフィニティを有する抗体が得られるように変異されてもよい。１残基から数百以上の残基を含有するポリペプチドの長さの範囲のアミノ末端融合および／またはカルボキシル末端融合を含み、ならびに一アミノ酸残基または複数のアミノ酸残基の配列間挿入を含む挿入が予期される。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体分子、またはエピトープタグに融合された抗体分子が挙げられる。抗体分子のその他の挿入バリアントとしては、酵素またはポリペプチドの、抗体Ｎ末端または抗体Ｃ末端への融合が挙げられ、それにより血液循環中の抗体の半減期が延長される。
【００５４】
本発明の抗体分子または抗原結合部分は、グリコシル化ポリペプチドおよび非グリコシル化ポリペプチド、ならびに他の翻訳後修飾を有するポリペプチド、例えば異なる糖類でのグリコシル化、アセチル化およびリン酸化を有するポリペプチドを含んでもよい。例えば１つまたは複数のアミノ酸残基を付加、除去または置換させ、グリコシル化部位を形成または除去させることにより、本発明の抗体分子または抗原結合部分を変異させて、当該翻訳後修飾を変化させてもよい。
【００５５】
本発明の抗体分子または抗原結合部分は、例えば抗体中の潜在的なタンパク質分解部位を除去するアミノ酸置換により改変されてもよい。
【００５６】
抗体分子またはその抗原結合部分において、ＨＣＤＲ１は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｇ−Ｙ−Ｔ−Ｆ−Ｔ−Ｄ／Ｎ−Ｙ／Ｈ／Ｆ−Ｙ−Ｍ／Ｉ−Ｎ（配列番号２８）；ＨＣＤＲ２は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｍ／Ｉ−Ｇ／Ａ−Ｒ−Ｉ−Ｙ−Ｐ−Ｇ／Ａ−Ｓ／Ｔ／Ａ−Ｇ−Ｎ−Ｔ−Ｙ−Ｙ−Ａ−Ｑ−Ｋ−Ｆ−Ｑ−Ｇ（配列番号２９）；そしてＨＣＤＲ３は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｇ−Ｖ−Ｙ／Ｗ／Ｆ−Ｙ／Ｅ／Ｈ−Ｆ／Ｙ／Ｑ／Ｌ−−Ｄ／Ｇ／Ｎ／Ｓ−Ｙ／Ａ／Ｅ／Ｆ／ＧＨ／Ｉ／Ｋ／Ｌ／Ｍ／Ｎ／Ｐ／Ｑ／Ｒ／Ｓ／Ｔ／Ｖ（配列番号３０）。
【００５７】
例えば、ＨＣＤＲ１は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｇ−Ｙ−Ｔ−Ｆ−Ｔ−Ｄ／Ｎ−Ｙ／Ｆ−Ｙ−Ｍ−Ｎ（配列番号３１）；ＨＣＤＲ２は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｍ／Ｉ−Ｇ−Ｒ−Ｉ−Ｙ−Ｐ−Ｇ／Ａ−Ｓ−Ｇ−Ｎ−Ｔ−Ｙ−Ｙ−Ａ−Ｑ−Ｋ−Ｆ−Ｑ−Ｇ（配列番号３２）；そしてＨＣＤＲ３は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｇ−Ｖ−Ｙ／Ｗ−Ｙ／Ｅ／Ｈ−Ｙ／Ｑ／Ｌ−−Ｄ−Ｙ／Ｓ／Ｔ／Ｅ（配列番号３３）。
【００５８】
抗体分子またはその抗原結合部分において、ＬＣＤＲ１は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｒ−Ａ−Ｓ−Ｑ−Ｇ−Ｉ／Ｖ−Ｒ−Ｔ／Ｎ−Ｎ−Ｌ−Ａ（配列番号３４）；ＬＣＤＲ２は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ａ／Ｓ／Ｙ−Ａ−Ｓ−Ｓ−Ｌ−Ｑ−Ｓ（配列番号３５）；そしてＬＣＤＲ３は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｑ−Ｑ−Ｙ−Ｎ／Ａ／Ｓ／Ｅ／Ｔ−Ｓ／Ａ／Ｎ／Ｄ−Ｙ−Ｐ−Ｒ−Ｔ（配列番号３６）。
【００５９】
例えば、ＬＣＤＲ１は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｒ−Ａ−Ｓ−Ｑ−Ｇ−Ｉ−Ｒ−Ｔ／Ｎ−Ｎ−Ｌ−Ａ（配列番号３７）；ＬＣＤＲ２は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ａ−Ａ−Ｓ−Ｓ−Ｌ−Ｑ−Ｓ（配列番号２４）；そしてＬＣＤＲ３は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｑ−Ｑ−Ｙ−Ｎ／Ａ−Ｓ／Ｎ−Ｙ−Ｐ−Ｒ−Ｔ（配列番号３８）。
【００６０】
本発明の特定の実施形態において、抗体分子または抗原結合部分は、以下を含有してもよい：
（ａ）アミノ酸配列のＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（ＨＣＤＲ１；配列番号１３）、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号１４）、ＧＶＷＹＦＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号４０）、ＲＡＳＱＧＶＲＴＮＶＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号３９）、ＳＡＳＳＬＱＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号１７）、ＱＱＹＮＳＹＰＲＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号１２）、［クローン  Ｅ−Ｅ１０］；または
（ｂ）アミノ酸配列のＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（ＨＣＤＲ１；配列番号１３）、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号１４）、ＧＶＹＹＱＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号４１）、ＲＡＳＱＧＶＲＴＮＶＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号３９）、ＡＡＳＳＲＱＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号２３）およびＱＱＹＮＳＹＰＲＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号１２）［クローン  Ｆ−Ｆ２］；
（ｃ）アミノ酸配列のＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（ＨＣＤＲ１；配列番号１３）、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号１４）、ＧＶＹＥＦＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号４２）、ＲＡＳＱＧＶＲＮＮＬＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号４３）、ＡＡＳＹＲＱＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号４４）、およびＱＱＹＮＳＹＰＲＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号１２）［クローン  Ｃ−Ｂ１２］；
（ｄ）アミノ酸配列のＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（ＨＣＤＲ１；配列番号１３）、ＩＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号４５）、ＧＶＹＹＦＤＳ（ＨＣＤＲ３；配列番号４６）、ＲＡＳＱＧＶＲＮＮＶＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号４７）、ＹＡＳＳＬＱＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号４８）、およびＱＱＹＮＳＹＰＲＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号１２）［クローン  Ｃ−Ａ７］；
（ｅ）アミノ酸配列のＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（ＨＣＤＲ１；配列番号１３）、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号１４）、ＧＶＹＨＦＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号４９）、ＲＡＳＱＧＶＲＮＮＶＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号４７）、ＡＡＳＹＬＱＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号５０）、およびＱＱＹＮＳＹＰＲＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号１２）［クローン  Ｃ−Ａ５］；
（ｆ）アミノ酸配列のＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（ＨＣＤＲ１；配列番号１３）、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号１４）、ＧＶＹＹＦＤＴ（ＨＣＤＲ３；配列番号５１）、ＲＡＳＱＧＶＲＴＮＬＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号２２）、ＡＡＳＳＲＱＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号２３）、およびＱＱＹＮＳＹＰＲＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号１２）［クローン  Ｄ−Ａ１０］；
（ｇ）アミノ酸配列のＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（ＨＣＤＲ１；配列番号１３）、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号１４）、ＧＶＹＹＹＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号１５）、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号１６）、ＳＡＳＳＬＱＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号１７）、およびＱＱＹＮＳＹＰＲＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号１２）［クローンＥ−Ｃ７］；
（ｈ）アミノ酸配列のＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（ＨＣＤＲ１；配列番号１３）、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号１４）、ＧＶＹＹＹＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号１５）、ＲＡＳＱＧＶＲＴＮＬＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号２２）、ＳＡＳＳＬＱＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号１７）、およびＱＱＹＮＳＹＰＲＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号１２）［クローンＤ−Ｄ５］；
（ｉ）アミノ酸配列のＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（ＨＣＤＲ１；配列番号１３）、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号１４）、ＧＶＹＹＬＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号１８）、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＶＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号１９）、ＳＡＳＹＲＱＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号２０）、およびＱＱＹＮＳＹＰＲＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号１２）［クローンＥ−Ｃ２］；
（ｊ）アミノ酸配列のＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（ＨＣＤＲ１；配列番号１３）、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号１４）、ＧＶＹＹＬＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号１８）、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号１６）、ＡＡＳＹＲＱＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号４４）、およびＱＱＹＮＳＹＰＲＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号１２）［クローンＦ−Ｂ１１］；
（ｋ）アミノ酸配列のＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（ＨＣＤＲ１；配列番号１３）、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号１４）、ＧＶＹＹＬＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号１８）、ＲＡＳＱＧＶＲＴＮＶＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号３９）、ＳＡＳＳＬＱＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号１７）、およびＱＱＹＮＳＹＰＲＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号１２）［クローンＤ−Ｄ９］；
（ｌ）アミノ酸配列のＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（ＨＣＤＲ１；配列番号１３）、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号１４）、ＧＶＹＹＦＤＥ（ＨＣＤＲ３；配列番号２１）、ＲＡＳＱＧＶＲＴＮＶＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号３９）、ＳＡＳＳＲＱＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号５２）、およびＱＱＹＮＳＹＰＲＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号１２）［クローンＥ−Ｇ７］；
（ｍ）アミノ酸配列のＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（ＨＣＤＲ１；配列番号１３）、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号１４）、ＧＶＹＹＦＤＥ（ＨＣＤＲ３；配列番号２１）、ＲＡＳＱＧＶＲＴＮＬＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号２２）、ＡＡＳＳＲＱＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号２３）、およびＱＱＹＮＳＹＰＲＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号１２）［クローンＦ−Ｃ５］；
（ｎ）アミノ酸配列のＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（ＨＣＤＲ１；配列番号１３）、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号１４）、ＧＶＹＹＹＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号１５）、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号１６）、ＡＡＳＳＬＱＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号２４）、およびＱＱＹＮＳＹＰＲＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号１２）［クローンＭＨ１］；
（ｏ）アミノ酸配列のＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（ＨＣＤＲ１；配列番号１３）、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号１４）、ＧＶＹＹＹＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号１５）、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号１６）、ＳＡＳＳＬＱＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号１７）、およびＱＱＹＡＳＹＰＲＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号５３）［クローンＭＨ２］；
（ｐ）アミノ酸配列のＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（ＨＣＤＲ１；配列番号１３）、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号１４）、ＧＶＹＹＹＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号１５）、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号１６）、ＳＡＳＳＬＱＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号１７）、およびＱＱＹＮＡＹＰＲＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号５４）［クローンＭＨ３］；
（ｑ）アミノ酸配列のＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（ＨＣＤＲ１；配列番号１３）、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号１４）、ＧＶＹＹＹＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号１５）、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号１６）、ＳＡＳＳＬＱＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号１７）、およびＱＱＹＮＤＹＰＲＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号５５）［クローンＭＨ４］；
（ｒ）アミノ酸配列のＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（ＨＣＤＲ１；配列番号１３）、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号１４）、ＧＶＹＹＹＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号１５）、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号１６）、ＳＡＳＳＬＱＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号１７）、およびＱＱＹＡＮＹＰＲＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号２５）［クローンＭＨ５］；
（ｓ）アミノ酸配列のＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（ＨＣＤＲ１；配列番号１３）、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号１４）、ＧＶＹＹＹＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号１５）、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号１６）、ＳＡＳＳＬＱＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号１７）、およびＱＱＹＮＳＹＰＫＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号５６）［クローンＭＨ６］；
（ｔ）アミノ酸配列のＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（ＨＣＤＲ１；配列番号１３）、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号１４）、ＧＶＹＹＹＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号１５）、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号１６）、ＳＡＳＳＬＱＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号１７）、およびＱＱＹＮＳＹＰＨＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号５７）［クローンＭＨ７］；
（ｕ）アミノ酸配列のＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（ＨＣＤＲ１；配列番号１３）、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号１４）、ＧＶＹＹＹＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号１５）、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号１６）、ＳＡＳＳＬＱＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号１７）、およびＱＱＹＳＳＹＰＲＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号５８）［クローンＭＨ８］；
（ｖ）アミノ酸配列のＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（ＨＣＤＲ１；配列番号１３）、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号１４）、ＧＶＹＹＹＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号１５）、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号１６）、ＳＡＳＳＬＱＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号１７）、およびＱＱＹＥＳＹＰＲＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号５９）［クローンＭＨ９］；
（ｗ）アミノ酸配列のＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（ＨＣＤＲ１；配列番号１３）、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号１４）、ＧＶＹＹＹＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号１５）、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号１６）、ＳＡＳＳＬＱＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号１７）、およびＱＱＹＴＳＹＰＲＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号６０）［クローンＭＨ１０］；
（ｘ）アミノ酸配列のＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（ＨＣＤＲ１；配列番号１３）、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号１４）、ＧＶＹＹＹＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号１５）、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号１６）、ＡＡＳＳＬＱＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号２４）、およびＱＱＹＮＡＹＰＲＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号５４）［クローンＭＨ１１］；
（ｙ）アミノ酸配列のＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（ＨＣＤＲ１；配列番号１３）、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号１４）、ＧＶＹＹＹＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号１５）、ＲＡＳＱＧＶＲＴＮＬＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号２２）、ＡＡＳＳＬＱＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号２４）、およびＱＱＹＮＳＹＰＲＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号１２）［クローンＭＨ１２］；
（ｚ）アミノ酸配列のＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（ＨＣＤＲ１；配列番号１３）、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号１４）、ＧＶＹＹＹＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号１５）、ＲＡＳＱＧＶＲＴＮＬＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号２２）、ＡＡＳＳＬＱＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号２４）、およびＱＱＹＮＡＹＰＲＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号５４）［クローンＭＨ１３］；
（ａａ）アミノ酸配列のＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（ＨＣＤＲ１；配列番号１３）、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号１４）、ＧＶＹＹＹＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号１５）、ＲＡＳＱＧＶＲＴＮＬＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号２２）、ＡＡＳＳＬＱＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号２４）、およびＱＱＹＮＳＹＰＲＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号１２）［クローンＭＨ１４］；
（ｂｂ）アミノ酸配列のＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（ＨＣＤＲ１；配列番号１３）、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号１４）、ＧＶＹＹＹＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号１５）、ＲＡＳＱＧＶＲＴＮＬＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号２２）、ＡＡＳＳＬＱＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号２４）、およびＱＱＹＮＡＹＰＲＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号５４）［クローンＭＨ１５］；
（ｃｃ）アミノ酸配列のＧＹＴＦＴＮＹＹＭＮ（ＨＣＤＲ１；配列番号１８１）、ＭＧＲＩＹＰＧＴＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号６１）、ＧＶＷＹＹＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号２７）、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号１６）、ＡＡＳＳＬＱＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号２４）、およびＱＱＹＡＮＹＰＲＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号２５）［クローンＭＨ５．１］；
（ｄｄ）アミノ酸配列のＧＹＴＦＴＤＦＹＭＮ（ＨＣＤＲ１；配列番号１８０）、ＭＧＲＩＹＰＧＴＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号６１）、ＧＶＷＹＹＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号２７）、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号１６）、ＡＡＳＳＬＱＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号２４）、およびＱＱＹＡＮＹＰＲＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号２５）［クローンＭＨ５．２］；
（ｅｅ）アミノ酸配列のＧＹＴＦＴＤＦＹＭＮ（ＨＣＤＲ１；配列番号１８０）、ＭＧＲＩＹＰＡＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号２６）、ＧＶＷＹＹＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号２７）、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号１６）、ＡＡＳＳＬＱＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号２４）、およびＱＱＹＡＮＹＰＲＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号２５）［クローンＭＨ５．２２］；
（ｆｆ）アミノ酸配列のＧＹＴＦＴＤＦＹＭＮ（ＨＣＤＲ１；配列番号１８０）、ＭＧＲＩＹＰＡＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号２６）、ＧＶＷＹＦＤＳ（ＨＣＤＲ３；配列番号６２）、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号１６）、ＡＡＳＳＬＱＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号２４）、およびＱＱＹＡＮＹＰＲＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号２５）［クローンＭＨ５．２３］；
（ｇｇ）アミノ酸配列のＧＹＴＦＴＤＦＹＭＮ（ＨＣＤＲ１；配列番号１８０）、ＭＧＲＩＹＰＡＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号２６）、ＧＶＷＹＦＤＴ（ＨＣＤＲ３；配列番号６３）、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号１６）、ＡＡＳＳＬＱＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号２４）、およびＱＱＹＡＮＹＰＲＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号２５）［クローンＭＨ５．２４］；
（ｈｈ）アミノ酸配列のＧＹＴＦＴＮＹＹＭＮ（ＨＣＤＲ１；配列番号１８１）、ＭＧＲＩＹＰＡＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号２６）、ＧＶＷＹＦＤＳ（ＨＣＤＲ３；配列番号６２）、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号１６）、ＡＡＳＳＬＱＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号２４）、およびＱＱＹＡＮＹＰＲＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号２５）［クローンＭＨ５．３４］；
（ｉｉ）アミノ酸配列のＧＹＴＦＴＮＹＹＭＮ（ＨＣＤＲ１；配列番号１８１）、ＭＧＲＩＹＰＡＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号２６）、ＧＶＷＹＦＤＴ（ＨＣＤＲ３；配列番号６３）、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号１６）、ＡＡＳＳＬＱＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号２４）、およびＱＱＹＡＮＹＰＲＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号２５）［クローンＭＨ５．３５］；
（ｊｊ）アミノ酸配列のＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（ＨＣＤＲ１；配列番号１３）、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号１４）、ＧＶＹＹＹＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号１５）、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号１６）、ＡＡＳＳＬＱＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号２４）、およびＱＱＹＡＮＹＰＲＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号２５）［クローンＭＨ５−ＤＩ］。
【００６１】
一部の態様において、本明細書は、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において、
（ａ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（配列番号１３）のＨＣＤＲ１、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号１４）のＨＣＤＲ２、およびＧＶＹＹＹＤＹ（配列番号１５）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（配列番号１６）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号２４）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＹＮＳＹＰＲＴ（配列番号１２）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｂ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（配列番号１３）のＨＣＤＲ１、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号１４）のＨＣＤＲ２、およびＧＶＹＹＹＤＹ（配列番号１５）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（配列番号１６）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号２４）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＹＡＮＹＰＲＴ（配列番号２５）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｃ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（配列番号１３）のＨＣＤＲ１、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号１４）のＨＣＤＲ２、およびＧＶＹＹＹＤＹ（配列番号１５）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（配列番号１６）のＬＣＤＲ１、ＳＡＳＳＬＱＳ（配列番号１７）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＹＡＮＹＰＲＴ（配列番号２５）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｄ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（配列番号１３）のＨＣＤＲ１、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号１４）のＨＣＤＲ２、およびＧＶＹＹＹＤＹ（配列番号１５）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（配列番号１６）のＬＣＤＲ１、ＳＡＳＳＬＱＳ（配列番号１７）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＹＮＳＹＰＲＴ（配列番号１２）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｅ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（配列番号１３）のＨＣＤＲ１、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号１４）のＨＣＤＲ２、およびＧＶＹＹＬＤＹ（配列番号１８）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＶＡ（配列番号１９）のＬＣＤＲ１、ＳＡＳＹＲＱＳ（配列番号２０）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＹＮＳＹＰＲＴ（配列番号１２）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｆ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（配列番号１３）のＨＣＤＲ１、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号１４）のＨＣＤＲ２、およびＧＶＹＹＦＤＥ（配列番号２１）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＧＶＲＴＮＬＡ（配列番号２２）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＳＲＱＳ（配列番号２３）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＹＮＳＹＰＲＴ（配列番号１２）のＬＣＤＲ３を含有し、または
（ｇ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＤＦＹＭＮ（配列番号１８０）のＨＣＤＲ１、ＭＧＲＩＹＰＡＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号２６）のＨＣＤＲ２、およびＧＶＷＹＹＤＹ（配列番号２７）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（配列番号１６）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号２４）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＹＡＮＹＰＲＴ（配列番号２５）のＬＣＤＲ３を含有する。
【００６２】
一部の態様において、本明細書は、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、この場合において当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において当該ＶＨ領域は、表１２のＶＨ領域アミノ酸配列のうちのいずれか１つを含有し、当該ＶＬ領域は、表１２のＶＬ領域アミノ酸配列のいずれか１つを含有する。
【００６３】
一部の態様において、本明細書は、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において、
（ａ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１８５を含有し、または配列番号１８５からなり、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１８６を含有し、または配列番号１８６からなる；
（ｂ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１８７を含有し、または配列番号１８７からなり、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１８８を含有し、または配列番号１８８からなる；
（ｃ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１８９を含有し、または配列番号１８９からなり、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１９０を含有し、または配列番号１９０からなる；
（ｄ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１９１を含有し、または配列番号１９１からなり、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１９２を含有し、または配列番号１９２からなる；
（ｅ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１９３を含有し、または配列番号１９３からなり、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１９４を含有し、または配列番号１９４からなる；または
（ｆ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１９５を含有し、または配列番号１９５からなり、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１９６を含有し、または配列番号１９６からなる。
【００６４】
一部の態様において、本明細書は、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において、
（ａ）当該ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号１８５に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一であり、当該ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号１８６に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一である；
（ｂ）当該ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号１８７に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一であり、当該ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号１８８に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一である；
（ｃ）当該ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号１８９に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一であり、当該ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号１９０に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一である；
（ｄ）当該ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号１９１に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一であり、当該ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号１９２に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一である；
（ｅ）当該ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号１９３に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一であり、当該ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号１９４に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一である；または
（ｆ）当該ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号１９５に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一であり、当該ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号１９６に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一である。一部の態様において、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体のＣＤＲアミノ酸配列は、列挙される配列中のＣＤＲアミノ酸配列に対して１００％の同一性であるが、ＦＲアミノ酸配列は、列挙される配列中のＦＲアミノ酸配列に対し、１００％未満の同一性である。
【００６５】
一部の態様において、本明細書に規定される抗体または抗原結合部分は、単離されてもよい。
【００６６】
本明細書に規定される抗体分子または抗原結合部分は、Ｃ−ＫＩＴへの結合に関し、本明細書に開示されるＣＤＲセットを含有する抗体またはその抗原結合部分と交差競合してもよい。一部の実施形態では、本発明は、単離された抗Ｃ−ＫＩＴ抗体またはその抗原結合部分を提供するものであり、この場合において当該抗体またはその抗原結合部分は、Ｃ−ＫＩＴへの結合に関し、本明細書に開示されるＣＤＲセットを含有する抗体または抗原結合部分と交差競合し、ならびに（ａ）完全生殖細胞系列ヒトフレームワークアミノ酸配列を含有し、および／または（ｂ）ＬＣＤＲ３中に脱アミド化部位を含有せず、および／または（ｃ）ＨＣＤＲ１および／またはＬＣＤＲ２において、高いＭＨＣクラスＩＩ結合アフィニティを有するヒト生殖細胞系列ペプチド配列を含有し、および／または（ｄ）抗体ｈ３７Ｍの可変ドメイン配列（表２）を含有する抗Ｃ−ＫＩＴ抗体と比較して少ない数の免疫原性ペプチドを含有し、および／または（ｅ）抗体ｈ３７Ｍの可変ドメイン配列（表２）を含有する抗Ｃ−ＫＩＴ抗体と比較して低い免疫原性を呈し、および／または（ｆ）抗体ｈ３７Ｍの可変ドメイン配列（表２）を含有する抗Ｃ−ＫＩＴ抗体と類似した受容体内部移行の有効性を呈し、そして抗体ｈ３７Ｍの可変ドメイン配列（表２）を含有する抗Ｃ−ＫＩＴ抗体よりも低いＣ−ＫＩＴシグナル伝達遮断の有効性を呈し、および／または（ｇ）免疫エフェクターが無効である。
【００６７】
一部の実施形態では、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体または抗原結合部分は、低い免疫原性を有する。ある場合には、抗体または抗原結合部分は、ＧＹＴＦＴＤＹＹＩＮ（配列番号４）のＨＣＤＲ１、ＩＡＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号５）のＨＣＤＲ２、ＧＶＹＹＦＤＹ（配列番号６）のＨＣＤＲ３、ＫＡＳＱＮＶＲＴＮＶＡ（配列番号１０）のＬＣＤＲ１、およびＳＡＳＹＲＹＳ（配列番号１１）のＬＣＤＲ２を含有する抗Ｃ−ＫＩＴ抗体と比較して低い免疫原性を呈する。一部の例では、抗体または抗原結合部分の免疫原性リスクは、インシリコで、当該抗体または部分（例えば抗体または部分の可変領域）におけるＴ細胞エピトープの位置を特定することにより決定されてもよい。
【００６８】
例えば、抗体または抗原結合部分のＴ細胞エピトープは、ｉＴｏｐｅ（商標）を使用して特定されてもよい。ｉＴｏｐｅ（商標）を使用して、ヒトＭＨＣクラスＩＩに対する無差別的な高いアフィニティ結合を有するペプチドのＶＬ領域およびＶＨ領域の配列を分析することができる。無差別的な高いアフィニティＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドは、薬剤タンパク質の臨床免疫原性に関する高いリスク指標であるＴ細胞エピトープの存在と相関すると考えられている。ｉＴｏｐｅ（商標）ソフトウェアは、ペプチドのアミノ酸側鎖と、３４種のヒトＭＨＣクラスＩＩアレルの開放末端結合溝（ｇｒｏｏｖｅ）内の特定の結合ポケット（特にポケット位置；ｐ１、ｐ４、ｐ６、ｐ７およびｐ９）の間の有益な相互作用を予測する。これらのアレルは、広く存在する最も普遍的なＨＬＡ−ＤＲアレルであり、任意の特定の民族集団で多く存在するような重み付けはない。当該アレルのうちの２０種が、「開いた」ｐ１構造を含有している。そして１４種が「閉じた」構造を含有しており、８３位のグリシンがバリンで置換されている。重要な結合残基の位置は、被験タンパク質配列にわたり８アミノ酸が重複している９ｍｅｒペプチドのインシリコ生成により取得される。このプロセスによって、ＭＨＣクラスＩＩ分子に結合する、または結合しないペプチドを高い正確性で識別することに成功した。
【００６９】
抗体または抗原結合部分中のＴ細胞エピトープは、ＴＣＥＤ（商標）（Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｄａｔａｂａｓｅ（商標））を使用してＶＬ領域配列とＶＨ領域配列を解析し、過去にインビトロでの他のタンパク質配列のヒトＴ細胞エピトープマッピング解析により特定されたＴ細胞エピトープとの合致を検索することにより特定されてもよい。ＴＣＥＤ（商標）を使用して、非関連タンパク質に由来するペプチドの大きな（１０，０００個を超えるペプチド）データベースに対する任意の被験配列と、抗体配列を検索する。
【００７０】
一部の実施形態では、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体または抗原結合部分は、その配列において以下のペプチドのうちの１つまたは複数の数が少ないことから、低い免疫原性を呈する場合がある：高アフィニティ外来物（「ＨＡＦ」−高免疫原性リスク）、低アフィニティ外来物（「ＬＡＦ」−低免疫原性リスク）、および／またはＴＣＥＤ＋（過去にＴＣＥＤ（商標）データベースにおいて特定されたエピトープ）。
【００７１】
一部の実施形態では、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体または抗原結合部分は、その配列において高い生殖細胞系列エピトープ（ＧＥ）含量を有する場合がある。一部の例では、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体または抗原結合部分は、その配列において１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個（または２０個より多い）生殖細胞系列エピトープを有する。生殖細胞系列エピトープは、高いＭＨＣクラスＩＩ結合アフィニティを有するヒト生殖細胞系列ペプチド配列として規定され得る。生殖細胞系列エピトープの９ｍｅｒペプチドは、広範な生殖細胞系列ペプチドを用いた過去の研究により立証されたように、Ｔ細胞寛容によって免疫原性である可能性は低い。重要なことは、そうした生殖細胞系列のｖ−ドメインエピトープ（ヒト抗体定常領域中の類似配列によりさらに補助される）は、抗原提示細胞の細胞膜でのＭＨＣクラスＩＩ占有に関しても競合するため、Ｔ細胞刺激に必要とされる「活性化閾値」を達成するのに充分な外来性ペプチド提示のリスクを低下させることである。ゆえにＧＥ含量の高さは抗体治療剤の臨床開発では有益な性質であり、低免疫原性をもたらし得る。一部の例では、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体または抗原結合部分は、高いＭＨＣクラスＩＩ結合アフィニティを有するヒト生殖細胞系列ペプチド配列（例えば生殖細胞系列エピトープ）を、ＨＣＤＲ１および／またはＬＣＤＲ２に含有する。
【００７２】
ある実施形態では、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体または抗原結合部分は、抗体ｈ３７Ｍの可変ドメイン配列（表２）を含む抗Ｃ−ＫＩＴ抗体と比較して、重鎖可変領域および軽鎖可変領域の両方のフレームワークに存在するＨＡＦ、ＬＡＦ、および／またはＴＣＥＤ＋エピトープの数が少ない場合がある。例えば、ｈ３７ＭのＬＣＤＲ−１中に存在するＴＣＥＤ＋およびＨＡＦペプチドの「ＶＴＩＴＣＫＡＳＱ」（配列番号６４）は、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体または抗原結合部分において６位のＫをＲに変異させることで除去され、軽鎖ＧＥの「ＶＴＩＴＣＲＡＳＱ」（配列番号６５；図１１Ｂ〜Ｈ）に転換されてもよい。同様に、ＨＡＦペプチドの「ＬＩＹＳＡＳＳＬＱ」（配列番号６６）および「ＩＹＳＡＳＳＬＱＳ」（配列番号６７）の１つまたは両方は、ＬＣＤＲ２配列を完全生殖細胞系列配列の「ＡＡＳＳＬＱＳ」（配列番号２４）へと変異させることにより、ＧＥ配列へと転換されてもよい。
【００７３】
１つの実施形態では、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体または抗原結合部分は、ＴＣＥＤ＋およびＨＡＦペプチド配列の「ＹＹＩＮＷＶＲＱＡ」（配列番号６８、ＨＣＤＲ−１およびＦＷ２に及ぶ）の３位で、ＩをＭに変えるＨＣＤＲ１生殖細胞系列変異を含有する。
【００７４】
一部の実施形態では、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体または抗原結合部分は、ＨＣＤＲ３においてＹからＷへの変異を含有し、抗体ｈ３７Ｍ中に存在する２つのＬＡＦペプチド配列が排除される。
【００７５】
「交差競合する」、「交差競合」、「交差遮断する」、「交差遮断される」、および「交差遮断すること」という用語は本明細書において相互交換可能に使用され、抗体またはその部分が直接結合する能力、または標的Ｃ−ＫＩＴ（例えば、ヒトＣ−ＫＩＴ）に対する本発明の抗Ｃ−ＫＩＴ抗体のアロステリック調節を介して間接的に結合に干渉する能力を意味する。抗体またはその部分が、別物質による標的結合に干渉することができる度合、つまり本発明により交差遮断する、または交差競合すると言えるかどうかは、競合結合アッセイを使用して決定され得る。結合競合アッセイの一例は、Ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ  Ｔｉｍｅ  Ｒｅｓｏｌｖｅｄ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ（ＨＴＲＦ）である。１つの特に適した定量的交差競合アッセイは、ＦＡＣＳ系またはＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ−系の方法を使用しており、標識（例えばＨｉｓタグ化、ビオチニル化、または放射性標識）抗体またはその部分と、他の抗体またはその部分の間の、標的への結合に関する競合を測定する。一般的に、交差競合抗体またはその部分は、例えば、交差競合アッセイにおいて標的に結合し、アッセイの間に、および第二の抗体またはその部分の存在下で、本発明の免疫グロブリン単一可変ドメインまたはポリペプチドの記録される変位は、所与の量で存在する潜在的に交差遮断する抗体またはその断片による、（例えばＦＡＣＳ系競合アッセイにおける）理論上の最大変位（例えばコールド（例えば非標識）抗体または交差遮断されるために必要なその断片による変位）の１００％以下である。交差競合抗体またはその部分は、１０％〜１００％、または５０％〜１００％の記録される変位を有することが好ましい。
【００７６】
本明細書に規定される抗体分子または抗原結合部分は、１つまたは複数の置換、欠失および／または挿入を含んでもよく、それらにより例えばグリコシル化部位（Ｎ結合型またはＯ結合型）、脱アミノ部位、リン酸化部位または異性化／断片化部位などの翻訳後修飾（ＰＴＭ：ｐｏｓｔ−ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）部位が除去される。
【００７７】
３５０を超えるタイプのＰＴＭが公知である。重要なＰＴＭの型としては、リン酸化、グリコシル化（Ｎ結合型およびＯ結合型）、ＳＵＭＯ化、パルミトイル化、アセチル化、硫酸化、ミリストイル化、プレニル化、および（Ｋ残基およびＲ残基の）メチル化が挙げられる。特定のＰＴＭの原因となる推定アミノ酸部位を特定するための統計的手法は、当分野に公知である（Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６，Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  １：１３１８−１３２１を参照のこと）。例えば置換、欠失および／または挿入によりそうした部位を除去し、次いで任意で（ａ）結合活性、および／または（ｂ）ＰＴＭの消失を検証（実験的に、および／または理論的に）することが予期される。
【００７８】
例えば、３７ＭマウスＬＣＤＲ３（本明細書に規定される、すなわちアミノ酸配列ＱＱＹＮＳＹＰＲＴ（配列番号１２））は、４位の残基（Ｎ）で推定脱アミド部位を有すると特定されている。本発明のＬＣＤＲ３の同じ位置にあるこの部位を、（例えば、Ａ、Ｓ、ＥまたはＴへの）置換により除去することが予期される（例えばクローンＭＨ５およびＭＨ５の変異誘導体、表４および表６）。
【００７９】
抗体分子またはその抗原結合部分は、ヒト、ヒト化またはキメラであってもよい。
【００８０】
抗体分子またはその抗原結合部分は、１つまたは複数のヒト可変ドメインフレームワークスキャホールドを含有してもよく、その中にＣＤＲが挿入される。例えば、ＶＨ領域、ＶＬ領域、またはＶＨ領域とＶＬ領域の両方が、１つまたは複数のヒトフレームワーク領域（ＦＲ）のアミノ酸配列を含有してもよい。
【００８１】
抗体分子またはその抗原結合部分は、ＩＧＨＶ１−４６ヒト生殖細胞系列スキャホールドを含有してもよく、その中に対応するＨＣＤＲ配列が挿入される。抗体分子またはその抗原結合部分は、ＩＧＨＶ１−４６ヒト生殖細胞系列スキャホールドのアミノ酸配列を含有するＶＨ領域を含有してもよく、その中に対応するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３のアミノ酸配列のセットが挿入される。
【００８２】
抗体分子またはその抗原結合部分は、ＩＧＫＶ１−１６ヒト生殖細胞系列スキャホールドを含有してもよく、その中に対応するＬＣＤＲ配列が挿入される。抗体分子またはその抗原結合部分は、ＩＧＫＶ１−１６ヒト生殖細胞系列スキャホールドのアミノ酸配列を含有するＶＬ領域を含有してもよく、その中に対応するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３のアミノ酸配列のセットが挿入される。
【００８３】
抗体分子またはその抗原結合部分は、ＩＧＨＶ１−４６ヒト生殖細胞系列スキャホールドを含有してもよく、その中に対応するＨＣＤＲ配列が挿入され、およびＩＧＫＶ１−１６ヒト生殖細胞系列スキャホールドを含有してもよく、その中に対応するＬＣＤＲ配列が挿入される。抗体分子またはその抗原結合部分は、ＩＧＨＶ１−４６ヒト生殖細胞系列スキャホールドのアミノ酸配列を含有するＶＨ領域を含有してもよく、その中に対応するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３のアミノ酸配列のセットが挿入され、およびＩＧＫＶ１−１６ヒト生殖細胞系列スキャホールドのアミノ酸配列を含有するＶＬ領域を含有してもよく、その中に対応するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３のアミノ酸配列のセットが挿入される。ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は、表４または表６のクローンのいずれか１つのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３のアミノ酸配列であってもよい（６つすべてのＣＤＲ配列が、同じクローン由来である）。
【００８４】
一部の態様では、抗体分子またはその抗原結合部分は、免疫グロブリン定常領域を含有してもよい。一部の態様では、免疫グロブリン定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２である。追加的態様では、免疫グロブリン定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２である。抗体分子またはその抗原結合部分は、免疫学的に不活性な定常領域を含有してもよい。一部の態様では、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体またはその抗原結合部分は、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域、またはＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＰ３３１Ｓのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域を含有する免疫グロブリン定常領域を含有してもよい。一部の態様では、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体は、表１３のアミノ酸配列のうちのいずれか１つを含有する免疫グロブリン定常領域を含有してもよい。表１３のＦｃ領域配列は、ＣＨ１ドメインから始まる。一部の態様では、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体は、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ１−３Ｍ、またはヒトＩｇＧ１−４ＭのＦｃ領域のアミノ酸配列を含有する免疫グロブリン定常領域を含有してもよい。例えば、ヒトＩｇＧ１−３Ｍ  Ｆｃ領域は、以下の置換を含有する：Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａ。一方で、ヒトＩｇＧ１−４Ｍ  Ｆｃ領域は、以下の置換を含有する：Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＰ３３１Ｓ。一部の態様では、免疫グロブリン分子の定常領域中のアミノ酸残基の位置は、ＥＵの用語体系（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５  Ｔｈｅｒａｐ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２：７７−９４）に従って番号付けされる。一部の態様では、免疫グロブリン定常領域は、ＲＤＥＬＴ（配列番号２０３）モチーフ、またはＲＥＥＭ（配列番号２０４）モチーフ（表１３の下線部分）を含有してもよい。ＲＥＥＭ（配列番号２０４）アロタイプは、ＲＤＥＬＴ（配列番号２０３）アロタイプよりも少ないヒト集団に存在する。一部の態様では、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体は、配列番号１９７〜２０２のいずれか１つを含有する免疫グロブリン定常領域を含有してもよい。一部の態様では、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体は、表４または表６のクローンのいずれか１つの６つのＣＤＲアミノ酸配列、または表１３のＦｃ領域アミノ酸配列のいずれか１つを含有してもよい。一部の態様では、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体は、表１３のＦｃ領域アミノ酸配列のいずれか１つを含有する免疫グロブリン重鎖定常領域、およびカッパ軽鎖定常領域またはラムダ軽鎖定常領域である免疫グロブリン軽鎖定常領域を含有してもよい。
【００８５】
一部の態様において、本明細書は、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域、軽鎖可変（ＶＬ）領域、および重鎖定常領域を含有し、この場合において、
（ａ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（配列番号１３）のＨＣＤＲ１、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号１４）のＨＣＤＲ２、およびＧＶＹＹＹＤＹ（配列番号１５）のＨＣＤＲ３を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（配列番号１６）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号２４）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＹＮＳＹＰＲＴ（配列番号１２）のＬＣＤＲ３を含有し、ならびに重鎖定常領域は、配列番号１９７、配列番号１９８、配列番号１９９、配列番号２００、配列番号２０１、または配列番号２０２を含有し、
（ｂ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（配列番号１３）のＨＣＤＲ１、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号１４）のＨＣＤＲ２、およびＧＶＹＹＹＤＹ（配列番号１５）のＨＣＤＲ３を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（配列番号１６）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号２４）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＹＡＮＹＰＲＴ（配列番号２５）のＬＣＤＲ３を含有し、ならびに重鎖定常領域は、配列番号１９７、配列番号１９８、配列番号１９９、配列番号２００、配列番号２０１、または配列番号２０２を含有し、
（ｃ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（配列番号１３）のＨＣＤＲ１、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号１４）のＨＣＤＲ２、およびＧＶＹＹＹＤＹ（配列番号１５）のＨＣＤＲ３を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（配列番号１６）のＬＣＤＲ１、ＳＡＳＳＬＱＳ（配列番号１７）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＹＡＮＹＰＲＴ（配列番号２５）のＬＣＤＲ３を含有し、ならびに重鎖定常領域は、配列番号１９７、配列番号１９８、配列番号１９９、配列番号２００、配列番号２０１、または配列番号２０２を含有し、
（ｄ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（配列番号１３）のＨＣＤＲ１、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号１４）のＨＣＤＲ２、およびＧＶＹＹＹＤＹ（配列番号１５）のＨＣＤＲ３を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（配列番号１６）のＬＣＤＲ１、ＳＡＳＳＬＱＳ（配列番号１７）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＹＮＳＹＰＲＴ（配列番号１２）のＬＣＤＲ３を含有し、ならびに重鎖定常領域は、配列番号１９７、配列番号１９８、配列番号１９９、配列番号２００、配列番号２０１、または配列番号２０２を含有し、
（ｅ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（配列番号１３）のＨＣＤＲ１、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号１４）のＨＣＤＲ２、およびＧＶＹＹＬＤＹ（配列番号１８）のＨＣＤＲ３を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＶＡ（配列番号１９）のＬＣＤＲ１、ＳＡＳＹＲＱＳ（配列番号２０）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＹＮＳＹＰＲＴ（配列番号１２）のＬＣＤＲ３を含有し、ならびに重鎖定常領域は、配列番号１９７、配列番号１９８、配列番号１９９、配列番号２００、配列番号２０１、または配列番号２０２を含有し、
（ｆ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（配列番号１３）のＨＣＤＲ１、ＭＧＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号１４）のＨＣＤＲ２、およびＧＶＹＹＦＤＥ（配列番号２１）のＨＣＤＲ３を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＧＶＲＴＮＬＡ（配列番号２２）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＳＲＱＳ（配列番号２３）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＹＮＳＹＰＲＴ（配列番号１２）のＬＣＤＲ３を含有し、ならびに重鎖定常領域は、配列番号１９７、配列番号１９８、配列番号１９９、配列番号２００、配列番号２０１、または配列番号２０２を含有し、または
（ｇ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＤＦＹＭＮ（配列番号１８０）のＨＣＤＲ１、ＭＧＲＩＹＰＡＳＧＮＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号２６）のＨＣＤＲ２、およびＧＶＷＹＹＤＹ（配列番号２７）のＨＣＤＲ３を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＧＩＲＴＮＬＡ（配列番号１６）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号２４）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＹＡＮＹＰＲＴ（配列番号２５）のＬＣＤＲ３を含有し、ならびに重鎖定常領域は、配列番号１９７、配列番号１９８、配列番号１９９、配列番号２００、配列番号２０１、または配列番号２０２を含有する。
【００８６】
一部の態様において、本明細書は、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域、軽鎖可変（ＶＬ）領域、および重鎖定常領域を含有し、この場合において、
（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１８５を含有し、または配列番号１８５からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１８６を含有し、または配列番号１８６からなり、および重鎖定常領域は、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域、またはＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＰ３３１Ｓのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域を含有し、
（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１８７を含有し、または配列番号１８７からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１８８を含有し、または配列番号１８８からなり、および重鎖定常領域は、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域、またはＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＰ３３１Ｓのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域を含有し、
（ｃ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１８９を含有し、または配列番号１８９からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１９０を含有し、または配列番号１９０からなり、および重鎖定常領域は、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域、またはＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＰ３３１Ｓのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域を含有し、
（ｄ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１９１を含有し、または配列番号１９１からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１９２を含有し、または配列番号１９２からなり、および重鎖定常領域は、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域、またはＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＰ３３１Ｓのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域を含有し、
（ｅ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１９３を含有し、または配列番号１９３からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１９４を含有し、または配列番号１９４からなり、および重鎖定常領域は、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域、またはＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＰ３３１Ｓのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域を含有し、または
（ｆ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１９５を含有し、または配列番号１９５からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１９６を含有し、または配列番号１９６からなり、および重鎖定常領域は、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域、またはＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＰ３３１Ｓのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域を含有する。
【００８７】
一部の態様において、本明細書は、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域、軽鎖可変（ＶＬ）領域、および重鎖定常領域を含有し、この場合において、
（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１８５を含有し、または配列番号１８５からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１８６を含有し、または配列番号１８６からなり、および重鎖定常領域は、配列番号１９７、配列番号１９８、配列番号１９９、配列番号２００、配列番号２０１または配列番号２０２を含有し、
（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１８７を含有し、または配列番号１８７からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１８８を含有し、または配列番号１８８からなり、および重鎖定常領域は、配列番号１９７、配列番号１９８、配列番号１９９、配列番号２００、配列番号２０１または配列番号２０２を含有し、
（ｃ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１８９を含有し、または配列番号１８９からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１９０を含有し、または配列番号１９０からなり、および重鎖定常領域は、配列番号１９７、配列番号１９８、配列番号１９９、配列番号２００、配列番号２０１または配列番号２０２を含有し、
（ｄ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１９１を含有し、または配列番号１９１からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１９２を含有し、または配列番号１９２からなり、および重鎖定常領域は、配列番号１９７、配列番号１９８、配列番号１９９、配列番号２００、配列番号２０１または配列番号２０２を含有し、
（ｅ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１９３を含有し、または配列番号１９３からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１９４を含有し、または配列番号１９４からなり、および重鎖定常領域は、配列番号１９７、配列番号１９８、配列番号１９９、配列番号２００、配列番号２０１または配列番号２０２を含有し、または
（ｆ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１９５を含有し、または配列番号１９５からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１９６を含有し、または配列番号１９６からなり、および重鎖定常領域は、配列番号１９７、配列番号１９８、配列番号１９９、配列番号２００、配列番号２０１または配列番号２０２を含有する。
【００８８】
一部の態様では、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体は、免疫エフェクターが無効であってもよい。一部の態様では、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体またはその抗原結合部分は、免疫エフェクター機能を含まず、任意で免疫エフェクター機能を抑制する。一部の態様では、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体は、ヒトＦｃγＲＩ受容体、ＦｃγＲＩＩａ受容体、ＦｃγＲＩＩＩａ受容体、およびＦｃγＲＩＩＩｂ受容体への測定可能な結合を欠いてもよいが、ヒトＦｃγＲＩＩｂ受容体への結合は維持し、任意で、ヒトＦｃＲｎ受容体への結合も維持する。ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩａ、およびＦｃγＲＩＩＩｂは、活性化受容体の例示である。ＦｃγＲＩＩｂは、阻害性受容体の例示である。ＦｃＲｎは、リサイクル受容体の例示である。一部の態様では、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体またはその抗原結合部分のヒトＦｃ受容体への結合アフィニティは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析により測定されてもよい。一部の態様では、Ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ  Ｔｉｍｅ  Ｒｅｓｏｌｖｅｄ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  （ＨＴＲＦ）を使用して、ヒトＦｃ受容体への抗Ｃ−ＫＩＴ抗体の結合を試験することができる。ＨＴＲＦの１つの例において、ヒトＩｇＧ１（野生型）が標識され、一揃いのＦｃガンマ受容体も同様にされ、次いで操作されたＦｃ断片を含む抗体が、力価測定競合に使用される。一部の態様では、ＫＩＴ陽性細胞と、ヒト白血球および抗Ｃ−ＫＩＴ抗体が混合され、ＣＤＣ、ＡＤＣＣおよび／またはＡＤＣＰによる細胞殺傷が測定されてもよい。一部の態様では、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体は、ヒトＩｇＧ１−３ＭまたはヒトＩｇＧ１−４Ｍ（表１３を参照のこと）のＦｃ領域のアミノ酸配列を含有してもよく、エフェクターが無効である。一部の態様では、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体は、ヒトＩｇＧ１−３ＭまたはヒトＩｇＧ１−４Ｍ（表１３を参照のこと）のＦｃ領域のアミノ酸配列を含有してもよく、エフェクターが無効ではない。
【００８９】
抗体分子またはその抗原結合部分は、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ）2断片、Ｆｖ断片、四量体抗体、四価抗体、多特異性抗体（例えば二特異性抗体）、ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、モノクローナル抗体、または融合タンパク質であってもよい。１つの実施形態では、抗体は、第一の抗原と第二の抗原に特異的に結合する二特異性抗体であってもよく、この場合において第一の抗原はＣ−ＫＩＴであり、第二の抗原はＣ−ＫＩＴではない。抗体分子、ならびにその構築方法および使用方法は、例えばＨｏｌｌｉｇｅｒ  ＆  Ｈｕｄｓｏｎ  （２００５，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２３（９）：１１２６−１１３６）に記載されている。
【００９０】
本発明の別の態様では、治療剤に結合された、本明細書に規定される本発明の抗体分子またはその抗原結合部分を含有する免疫結合体が提供される。
【００９１】
適切な治療剤の例示としては、細胞毒素、放射性同位体、化学療法剤、免疫調節剤、抗血管新生剤、抗増殖剤、アポトーシス促進剤、ならびに細胞増殖抑制酵素および細胞溶解性酵素（例えば、ＲＮＡｓｅ）が挙げられる。さらなる治療剤としては、例えば免疫調節剤、抗血管新生剤、抗増殖剤またはアポトーシス促進剤をコードする遺伝子などの治療用核酸が挙げられる。これらの薬剤の記述子は、相互排他的ではなく、ゆえに治療剤は、上述の用語の１つまたは複数を使用して記載されてもよい。
【００９２】
免疫結合体における使用に適した治療剤の例としては、タキサン、メイタンシン、ＣＣ−１０６５、およびデュオカルマイシン、カリケアミシンおよび他のエンジイン、ならびにオーリスタチン（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）が挙げられる。他の例としては、抗葉酸剤、ビンアルカロイド、およびアントラサイクリンが挙げられる。植物毒素、他の生物活性タンパク質、酵素（すなわちＡＤＥＰＴ）、放射性同位体、光増感剤が、免疫結合体において使用されてもよい。さらに結合体は、細胞毒性剤として二次的な担体、例えばリポソームまたはポリマーなどを使用して作製され得る。適切な細胞毒素としては、細胞の機能を阻害または妨害し、細胞の破壊をもたらす剤が挙げられる。代表的な細胞毒素としては、抗生物質、チューブリン重合の阻害剤、ＤＮＡに結合し、破壊するアルキル化剤、そしてタンパク質合成を破壊する、または例えばタンパク質キナーゼ、ホスファターゼ、トポイソメラーゼ、酵素およびサイクリンなどの必須の細胞タンパク質の機能を破壊する剤が挙げられる。
【００９３】
代表的な細胞毒素としては限定されないが、ドキソルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン、アクラルビシン、ゾルビシン、ミトキサントロン、エピルビシン、カルビシン、ノガラマイシン、メノガリル、ピタルビシン、バルルビシン、シタラビン、ゲムシタビン、トリフルリジン、アンシタビン、エノシタビン、アザシチジン、ドキシフルリジン、ペントスタチン、ブロクスウリジン、カペシタビン、クラドリビン、デシタビン、フロクスウリジン、フルダラビン、グーゲロチン、ピューロマイシン、テガフール、チアゾフリン、アドリアマイシン、シスプラチン、カルボプラチン、シクロフォスファミド、ダカルバジン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、メクロレタミン、プレドニゾン、プロカルバジン、メトトレキサート、フルオロウラシル、エトポシド、タキソール、タキソールアナログ、例えばシスプラチンおよびカルボプラチンなどのプラチン類、マイトマイシン、チオテパ、タキサン、ビンクリスチン、ダウノルビシン、エピルビシン、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、タモキシフェン、イダルビシン、ドラスタチン／オーリスタチン、ヘミアステリン、エスペラミシン、ならびにマイタンシノイドが挙げられる。
【００９４】
適切な免疫調節剤としては、腫瘍に対するホルモンの作用を妨害する抗ホルモン剤、およびサイトカイン産生を抑制する、自己抗原発現を下方制御する、またはＭＨＣ抗原をマスクする免疫抑制剤が挙げられる。
【００９５】
さらに、本明細書に規定される本発明の抗体分子またはその抗原結合部分をコードする核酸分子も提供される。単離された核酸分子は、本明細書に記載される抗Ｃ−ＫＩＴ抗体またはその抗原結合部分の（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列、（ｂ）ＶＬ領域のアミノ酸配列、または（ｃ）ＶＨ領域とＶＬ領域の両方のアミノ酸配列をコードしてもよい。
【００９６】
さらに、本明細書に規定される本発明の核酸分子を含有するベクターが提供される。ベクターは、発現ベクターであってもよい。ベクターは、１つまたは複数の制御配列（例えばプロモーターおよび／またはエンハンサー）をさらに含有してもよい。
【００９７】
また、本明細書に規定される本発明の核酸分子またはベクターを含有する宿主細胞も提供される。宿主細胞は、組み換え宿主細胞であってもよい。
【００９８】
さらなる態様において、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体および／またはその抗原結合部分を作製する方法も提供され、当該方法は、当該抗体および／もしくはその抗原結合部分の発現ならびに／または産生が生じる条件下で、本発明の宿主細胞を培養する工程、および当該宿主細胞または培養物から、当該抗体および／またはその抗原結合部分を単離する工程、を含む。
【００９９】
本発明の別の態様において、本明細書に規定される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分、または本明細書に規定される本発明の核酸分子、または本明細書に規定される本発明のベクターを含有する医薬組成物が提供される。
【０１００】
さらに、対象において免疫反応を強化する方法が提供され、当該方法は、本明細書に規定される本発明の抗体分子またはその抗原結合部分の有効量、または本明細書に規定される本発明の免疫結合体の有効量、または本明細書に規定される本発明の核酸分子の有効量、または本明細書に規定される本発明のベクターの有効量、または本明細書に規定される本発明の医薬組成物の有効量を投与する工程を含む。
【０１０１】
さらなる態様において、対象において癌を治療または予防する方法が提供され、当該方法は、本明細書に規定される本発明の抗体分子またはその抗原結合部分の有効量、または本明細書に規定される本発明の免疫結合体の有効量、または本明細書に規定される本発明の核酸分子の有効量、または本明細書に規定される本発明のベクターの有効量、または本明細書に規定される本発明の医薬組成物の有効量を投与する工程を含む。
【０１０２】
癌は、例えば以下からなる群から選択されてもよい：消化管間質癌（ＧＩＳＴ）、膵臓癌、メラノーマ、乳癌、肺癌、気管支癌、結腸直腸癌、前立腺癌、胃癌、卵巣癌、膀胱癌、脳腫瘍または中枢神経系の癌、末梢神経系の癌、食道癌、子宮頸癌、子宮癌または子宮内膜癌、口腔または咽頭の癌、肝癌、腎癌、精巣癌、胆管癌、小腸癌または虫垂癌、唾液腺癌、甲状腺癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫、および血液組織の癌。
【０１０３】
本発明はさらに、癌の治療における使用のための、本明細書に規定される本発明の抗体分子またはその抗原結合部分、または本明細書に規定される本発明の免疫結合体、または本明細書に規定される本発明の核酸分子、または本明細書に規定される本発明のベクター、または本明細書に規定される本発明の医薬組成物を提供する。
【０１０４】
別の態様において、本発明は、例えば抗癌剤などの第二の治療剤と組み合わされる併用において、別個に使用する、連続して使用する、または同時に使用するための、本明細書に規定される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分、または免疫結合体、または核酸分子、またはベクター、または治療方法を提供する。
【０１０５】
さらなる態様において、癌の治療のための医薬品の製造における、本明細書に規定される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分の使用、または本明細書に規定される本発明の免疫結合体の使用、または本明細書に規定される本発明の核酸分子の使用、または本明細書に規定される本発明のベクターの使用、または本明細書に規定される本発明の医薬組成物の使用が提供される。
【０１０６】
本発明はさらに、対象において自己免疫性疾患もしくは炎症性疾患を治療または予防する方法を提供するものであり、当該方法は、本明細書に規定される抗体分子またはその抗原結合部分の有効量、または本明細書に規定される免疫結合体の有効量、または本明細書に規定される核酸分子の有効量、または本明細書に規定されるベクターの有効量、または本明細書に規定される医薬組成物の有効量を投与する工程を含む。
【０１０７】
自己免疫性疾患または炎症性疾患は、関節炎、喘息、多発性硬化症、乾癬、クローン病、炎症性腸疾患、紅斑性狼瘡、グレーブス病、および橋本甲状腺炎、ならびに強直性脊椎炎からなる群から選択されてもよい。
【０１０８】
また、自己免疫性疾患または炎症性疾患の治療における使用のための、本明細書に規定される抗体分子もしくはその抗原結合部分、または本明細書に規定される免疫結合体、または本明細書に規定される核酸分子、または本明細書に規定されるベクター、または本明細書に規定される医薬組成物が提供される。
【０１０９】
さらに、自己免疫性疾患または炎症性疾患の治療のための医薬品の製造における、本明細書に規定される抗体分子またはその抗原結合部分の使用、または本明細書に規定される免疫結合体の使用、または本明細書に規定される核酸分子の使用、または本明細書に規定されるベクターの使用、または本明細書に規定される医薬組成物の使用が提供される。
【０１１０】
本発明はさらに、対象において心血管疾患もしくは線維症を治療または予防する方法を提供するものであり、当該方法は、本明細書に規定される抗体分子またはその抗原結合部分の有効量、または本明細書に規定される免疫結合体の有効量、または本明細書に規定される核酸分子の有効量、または本明細書に規定されるベクターの有効量、または本明細書に規定される医薬組成物の有効量を投与する工程を含む。
【０１１１】
また、心血管疾患または線維症の治療における使用のための、本明細書に規定される抗体分子もしくはその抗原結合部分、または本明細書に規定される免疫結合体、または本明細書に規定される核酸分子、または本明細書に規定されるベクター、または本明細書に規定される医薬組成物が提供される。
【０１１２】
さらに、心血管疾患または線維症の治療のための医薬品の製造における、本明細書に規定される抗体分子またはその抗原結合部分の使用、または本明細書に規定される免疫結合体の使用、または本明細書に規定される核酸分子の使用、または本明細書に規定されるベクターの使用、または本明細書に規定される医薬組成物の使用が提供される。
【０１１３】
本発明の任意の態様における心血管疾患は、例えば冠動脈心疾患またはアテローム性動脈硬化症であってもよい。
【０１１４】
本発明の任意の態様における線維症は、心筋梗塞、狭心症、変形性関節症、肺線維症、喘息、嚢胞性線維症、および気管支炎からなる群から選択されてもよい。
【０１１５】
１つの実施形態において、本発明は、治療における使用のための本明細書に開示されるアミノ酸配列を含有する抗Ｃ−ＫＩＴ抗体またはその抗原結合部分を提供する。
【０１１６】
本発明の医薬組成物は、薬学的に許容可能な賦形剤、担体または希釈剤を含有してもよい。薬学的に許容可能な賦形剤は、医薬組成物に入れられる化合物または化合物の組み合わせであってもよく、二次的な反応を引き起こさず、例えば、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体分子の投与の促進、その持続期間の延長、および／もしくは体内におけるその有効性の増加、または溶液中の可溶度の上昇を可能にする。これら薬学的に許容可能なビヒクルは公知であり、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体分子の投与様式に応じて当業者により適合される。
【０１１７】
一部の実施形態では、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体分子は、凍結乾燥されて提供され、投与前に再構成されてもよい。例えば凍結乾燥された抗体分子は、滅菌水で再構成され、個体への投与前に生理食塩水と混合される。
【０１１８】
抗Ｃ−ＫＩＴ抗体分子は通常、医薬組成物の形態で投与され、当該医薬組成物は、抗体分子に加えて少なくとも１つの構成要素を含有してもよい。したがって医薬組成物は、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体分子に加えて、薬学的に許容可能な賦形剤、担体、希釈剤、安定剤、または当業者に公知の他の物質を含有してもよい。そうした物質は、非毒性でなければならず、そして抗Ｃ−ＫＩＴ抗体分子の効能に干渉してはならない。担体または他の物質の正確な性質は、投与経路に依存しており、投与経路は、以下に検討されるように、ボーラス、点滴、注射または任意の他の適切な経路であってもよい。
【０１１９】
例えば注射などによる皮下投与または静脈内投与などの非経口投与に関しては、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体分子を含有する医薬組成物は、発熱物質を含まず、適切なｐＨ、等張性および安定性の非経口に受容可能な水溶液の形態であってもよい。当業者であれば、例えば塩化ナトリウム注射溶液、リンゲル注射溶液、乳酸リンゲル注射溶液などの等張ビヒクルを使用して適切な溶液を調製することができる。保存剤、安定剤、緩衝剤、抗酸化剤、および／または他の添加剤を必要に応じて採用してもよく、例えばリン酸塩、クエン酸塩および他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸およびメチオニンをなどの抗酸化剤；保存剤（例えばオクタデシルジメチルベンゾイル塩化アンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンズアルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルアルコールまたはベンジルアルコール；例えばメチルパラベンまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レソルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量ポリペプチド；例えば血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリンなどのタンパク質；例えばポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンまたはリシンなどのアミノ酸；グルコース、マンノースまたはデキストリンなどの単糖、二糖および他の炭水化物；例えばＥＤＴＡなどのキレート剤；例えばスクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトールなどの糖類；例えばナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えばＺｎ−タンパク質錯体）；および／または例えばＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤が挙げられる。
【０１２０】
抗Ｃ−ＫＩＴ抗体分子を含有する医薬組成物は、治療される状態に応じて、単独で投与されてもよく、または他の治療と併用されて、同時に、または連続のいずれかで投与されてもよい。
【０１２１】
本明細書に記載の抗Ｃ−ＫＩＴ抗体分子は、ヒトまたは動物の身体の治療方法に使用されてもよく、治療には、予防的治療（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃまたはｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）が含まれる（例えば、個体において状態が発生する前に、当該個体において当該状態が発生するリスクを低下させる、その発生を遅延させる、または発生後の重大度を低下させるための治療）。治療方法は、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体分子を、その必要のある個体に投与する工程を含んでもよい。
【０１２２】
投与は通常、「治療有効量」であり、これは、患者に対し有益性を示すために充分な量である。そうした有益性は、少なくとも１つの症状の少なくとも改善であってもよい。投与される実際の量、投与速度、および投与の経時変化は、治療される性質および重大度、治療される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、組成物の送達部位、投与方法、投与スケジュール、および医療従事者に公知の他の因子に依存する。例えば用量の決定などの治療の指示は、一般開業医および他の医師の責の範囲内にあり、治療される疾患の症状の重大度、および／または治療される疾患の進行に依存し得る。抗体分子の適切な投与量は、当分野に公知である（Ｌｅｄｅｒｍａｎｎ  Ｊ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  ４７：６５９−６６４；Ｂａｇｓｈａｗｅ  Ｋ．Ｄ．  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ａｎｔｉｂｏｄｙ，Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ４：９１５−９２２）。具体的な用量は、本明細書において、およびＰｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  （２００３）において、投与される薬剤のタイプに応じて示され、使用され得る。抗体分子の治療有効量または適切な投与量は、そのインビトロ活性と、動物モデルにおけるインビボ活性を比較することにより決定され得る。マウスおよび他の実験動物における有効用量を、ヒトに外挿する方法は公知である。正確な投与量は、抗体が予防用または治療用であるか、治療される領域の大きさおよび位置、抗体の正確な性質（例えば全抗体、断片）および抗体に付加された任意の検出可能な標識または他の分子の性質をはじめとする多くの因子に依存する。
【０１２３】
典型的な抗体投与量は、全身投与に対しては１００μｇ〜１ｇ、局所投与に対しては１μｇ〜１ｍｇの範囲である。初回に高い負荷投与量、その後は１つまたは複数回の低負荷投与量が投与されてもよい。典型的には、抗体は、例えばＩｇＧ１アイソタイプまたはＩｇＧ４アイソタイプなどの全抗体である。これは成人患者の単回治療用の投与量であり、小児および幼児に対しては相対的に調整され得、そして分子量に比例して他の抗体形式にも調整され得る。治療は、医師の裁量で毎日、週２回、毎週、または毎月の間隔で繰り返され得る。個々の治療スケジュールは、抗体組成物の薬物動態および薬力学的性質、投与経路、ならびに治療される状態の性質に依存し得る。
【０１２４】
治療は定期的であってもよく、投与の間の期間は、約２週間またはそれ以上であってもよく、例えば約３週間以上、約４週間以上、約１カ月以上、約５週間以上、または約６週間以上であってもよい。例えば、治療は、２週〜４週ごと、または４週〜８週ごとであってもよい。治療は、外科手術の前、および／もしくは後に行われてもよく、ならびに／または外科的治療もしくは浸潤的手順の解剖学的位置に直接投与または適用されてもよい。適切な製剤および投与経路は、上記に記載される。
【０１２５】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ−ＫＩＴ抗体分子は、皮下注射として投与されてもよい。皮下注射は、例えば長期間または短期間の予防／治療用の自己注射器を使用して投与されてもよい。
【０１２６】
一部の好ましい実施形態では、抗Ｃ−ＫＩＴ抗体分子の治療効果は、投与量に応じて、血清抗体半減期の数倍の間、持続し得る。例えば抗Ｃ−ＫＩＴ抗体分子の単回投与の治療効果は、個体において、１カ月以上、２カ月以上、３カ月以上、４カ月以上、５カ月以上、または６カ月以上、持続し得る。
【０１２７】
本発明はさらに、ヒトＣ−ＫＩＴに特異的に結合し、および任意でカニクイザルＣ−ＫＩＴにも特異的に結合する抗体分子、またはその抗原結合部分を作製する方法を提供するものであり、当該方法は、
（１）非ヒト源由来の抗Ｃ−ＫＩＴ  ＣＤＲをヒトｖ−ドメインフレームワーク内に移植し、ヒト化抗Ｃ−ＫＩＴ抗体分子またはその抗原結合部分を作製する工程、
（２）ＣＤＲ中に１つまたは複数の変異を含有する当該ヒト化抗Ｃ−ＫＩＴ抗体分子またはその抗原結合部分のクローンのファージライブラリーを作製する工程、
（３）ヒトＣ−ＫＩＴへの結合、および任意でカニクイザルＣ−ＫＩＴへの結合についても当該ファージライブラリーを選択する工程、
（４）選択工程（３）から、ヒトＣ−ＫＩＴに特異的に結合する、および任意でカニクイザルＣ−ＫＩＴにも特異的に結合するクローンをスクリーニングする工程、および
（５）工程（４）から選択された、ヒトＣ−ＫＩＴに特異的に結合し、および任意でカニクイザルＣ−ＫＩＴにも特異的に結合する抗体分子、またはその抗原結合部分を作製する工程、を含む。
【０１２８】
当該方法は、工程（４）で選択されたクローンに基づき、例えば工程（４）で選択されたクローンのＣＤＲ中の特定の位置でのさらなる探索的な突然変異誘導に基づき、追加のクローンを作製して、ヒト化を強化する工程、および／またはヒトＴ細胞エピトープ含量を最小化する工程、および／または工程（５）で作製された抗体分子もしくはその抗原結合部分の製造特性を改善する工程をさらに含んでもよい。
【０１２９】
上述の方法に適用可能な改善は、以下の実施例１に記載される。
【０１３０】
本明細書において使用される場合、「Ｃ−ＫＩＴ」という用語は、ＣＤ１１７（Ｃｌｕｓｔｅｒ  ｏｆ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  １１７）、およびＣ−ＫＩＴの生物活性の少なくとも一部を保持するそのバリアントを指す。このタンパク質は、ＫＩＴ、ＰＢＴ、ＳＣＦＲ、およびＫＩＴ  ｐｒｏｔｏ−ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅとしても知られている。本明細書において使用される場合、Ｃ−ＫＩＴは、ヒト、ラット、マウスおよびニワトリを含むすべての哺乳動物種の天然Ｃ−ＫＩＴ配列を含む。「Ｃ−ＫＩＴ」という用語は、ヒトＣ−ＫＩＴのバリアント、アイソフォームおよび種ホモログを含むために使用される。ヒトＣ−ＫＩＴ配列の例を、表１４に示す。本発明の抗体は、ヒト以外の種に由来するＣ−ＫＩＴ、特にカニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）由来のＣ−ＫＩＴと交差反応し得る。ある実施形態では、抗体は、完全にヒトＣ−ＫＩＴに特異的であってもよく、非ヒトとの交差反応性を呈さない。
【０１３１】
本明細書において使用される場合、本発明の抗体の文脈において使用される場合の「アンタゴニスト」、または「抗Ｃ−ＫＩＴアンタゴニスト抗体」（「抗Ｃ−ＫＩＴ抗体」と相互交換可能に称される）とは、Ｃ−ＫＩＴに結合することができ、そしてＣ−ＫＩＴの生物活性および／またはＣ−ＫＩＴシグナル伝達により介在される下流経路を阻害することができる抗体を指す。抗Ｃ−ＫＩＴアンタゴニスト抗体には、Ｃ−ＫＩＴシグナル伝達により介在される下流経路を含む、例えばＣ−ＫＩＴに対する受容体結合および／または細胞反応の惹起などのＣ−ＫＩＴの生物活性を遮断する、アンタゴナイズする、抑制する、または低下させる（有意に、を含む）ことができる抗体を包含する。本発明の目的に対し、「抗Ｃ−ＫＩＴアンタゴニスト抗体」という用語が、Ｃ−ＫＩＴそれ自体、およびＣ−ＫＩＴの生物活性（限定されないが、骨髄細胞系列の細胞による貪食活性を強化する能力を含む）、または活性もしくは生物活性の結果が、任意の意義のある程度に実質的に無効化される、減少される、または中和されるすべての用語、タイトル、ならびに機能的状態および機能的特性を包含することが明示的に理解されるであろう。
【０１３２】
他の受容体よりも高いアフィニティ、高いアビディティ、より容易に、および／またはより長い期間、Ｃ−ＫＩＴと結合する場合、当該抗体は、Ｃ−ＫＩＴに「特異的に結合する」、「特異的に相互作用する」、「優先的に結合する」、「結合する」または「相互作用する」。
【０１３３】
「抗体分子」は、例えば炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチドなどの標的に、免疫グロブリン分子の可変領域中に位置する少なくとも１つの抗原認識部位を介して特異的に結合することができる免疫グロブリン分子である。本明細書において使用される場合、「抗体分子」という用語は、損なわれていないポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体のみならず、任意の抗原結合断片（例えば「抗原結合部分」）またはその一本鎖、抗体を含む融合タンパク質、ならびに例えば限定されないが、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体（例えばサメ抗体およびラクダ科抗体）、マキシボディ、ミニボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ−ＮＡＲ、およびｂｉｓ−ｓｃＦｖを含む抗原認識部位を含有する免疫グロブリン分子の任意の他の改変構造体も包含する。
【０１３４】
「抗体分子」は、例えばＩｇＧ、ＩｇＡ、またはＩｇＭ（またはそのサブクラス）などの任意のクラスの抗体を包含し、抗体はいずれか特定のクラスのものである必要はない。その重鎖の定常領域の抗体アミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは、様々なクラスに割り当てられ得る。免疫グロブリンにはＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭの５種類の主要なクラスがある。これらのうちのいくつかは、さらにサブクラス（アイソタイプ）に分けられる場合があり、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２がある。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常領域はそれぞれアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、およびミューと呼ばれる。このサブユニットの構造、および様々なクラスの免疫グロブリンの三次元構造が公知である。
【０１３５】
抗体分子の「抗原結合部分」という用語は、本明細書において使用される場合、Ｃ−ＫＩＴに特異的に結合する能力を保持する、損なわれていない抗体の１つまたは複数の断片を指す。抗体分子の抗原結合機能は、損なわれていない抗体の断片により実現され得る。抗体分子の「抗原結合部分」という用語に包含される結合断片の例示としては、Ｆａｂ；Ｆａｂ’；Ｆ（ａｂ）2；ＶＨドメインとＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；抗体の１つのアームのＶＬドメインおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片；単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）断片、および単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。
【０１３６】
「Ｆｃ領域」という用語は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を規定するために使用される。「Ｆｃ領域」は、天然配列のＦｃ領域またはバリアントのＦｃ領域であってもよい。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変化し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖のＦｃ領域は通常、Ｃｙｓ２２６の位置のアミノ酸残基、またはＰｒｏ２３０の位置のアミノ酸残基から、そのカルボキシル末端に及ぶと規定される。Ｆｃ領域中の残基の番号付けは、ＫａｂａｔにあるＥＵインデックスの番号である。免疫グロブリンのＦｃ領域は一般的に、ＣＨ２とＣＨ３の２つの定常ドメインを含有する。当分野に知られているように、Ｆｃ領域は、二量体型または単量体型で存在し得る。
【０１３７】
抗体の「可変領域」または「ｖ−ドメイン」とは、抗体軽鎖の可変領域、または抗体重鎖の可変領域のいずれか単独、または組み合わせを指す。当分野に知られているように、重鎖および軽鎖の可変領域は各々、超可変領域としても知られている３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）に繋がる４つのフレームワーク領域（ＦＲ）からなり、抗体の抗原認識部位を形成する。ＣＤＲに隣接するＦＲを選択するとき、例えば抗体のヒト化または最適化を行うとき、同じ基準クラスのＣＤＲ配列を含有する抗体由来のＦＲが好ましい。
【０１３８】
本出願において使用されるＣＤＲの定義は、当分野で創出された多くの異質的な、しばしば矛盾するスキームにおいて使用されるドメインを組み合わせており、免疫グロブリンレパートリー分析と、遊離状態および抗原との共結晶状態の抗体の構造分析との組み合わせに基づいている（Ｓｗｉｎｄｅｌｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６，ａｂＹｓｉｓ：Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ，Ａｎａｌｙｓｉｓ，ａｎｄ  Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ．  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．  ［ＰＭＩＤ：２７５６１７０７；Ｅｐｕｂ  ２２  Ａｕｇｕｓｔ  ２０１６］によるレビューを参照のこと）。本明細書において使用されるＣＤＲの定義（「統合された」定義）は、そうしたすべての過去の洞察の教示を組み込んでおり、潜在的に標的−結合の相補性を介在する完全な残基の状況を抽出するために必要なすべての適切なループ位置を含む。
【０１３９】
表１は、本明細書に規定される３７Ｍマウス抗Ｃ−ＫＩＴ抗体のＣＤＲのアミノ酸配列（「統合された」スキーム）を、同じＣＤＲを規定する公知の代替システムと比較して示している。
【０１４０】
本明細書において使用される場合、「保存的置換」という用語は、アミノ酸を、機能活性を大きく有害には変化させない別のアミノ酸で置換することを指す。「保存的置換」の好ましい例は、アミノ酸を、以下のＢＬＯＳＵＭ  ６２置換マトリクス（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  ＆  Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，１９９２，ＰＮＡＳ  ８９：１０９１５−１０９１９を参照のこと）において０以下の値を有する別のアミノ酸で置換することである。
【０１４１】
【化１】
2021513323.tif 000002
【０１４２】
本明細書において使用される場合、「配列同一性」とは、２つ以上のポリヌクレオチド配列間、または２つ以上のポリペプチド配列間の関係性を指す。１つの配列中のある位置が、比較配列の対応する位置で同じ核酸塩基または同じアミノ酸残基により占められている場合、当該配列は、その位置で「同一」であると言われる。配列同一性の百分率は、両方の配列で同じ核酸塩基または同じアミノ酸残基が存在する位置の数を決定して、同一な位置の数を得ることにより算出される。次いで同一な位置の数を、比較ウィンドウ中の位置の総数で割り、１００を乗じて、配列同一性の百分率を得る。配列同一性の百分率は、比較ウィンドウ全体で最適に並べられた２つの配列を比較することにより決定される。ポリヌクレオチド配列の比較ウィンドウは例えば、少なくとも２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００または１０００以上の長さの核酸であってもよい。ポリペプチド配列の比較ウィンドウは例えば、少なくとも２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、３００以上の長さのアミノ酸であってもよい。比較用に配列を最適に並べるために、比較ウィンドウ中のポリヌクレオチド配列またはポリペプチド配列の一部は、ギャップと呼ばれる付加または欠失を含んでもよく、一方で参照配列は不変で維持される。最適並置は、ギャップがあったとしても、参照配列と比較配列の間の「同一な」位置が最大限に多い並置である。２つの配列の間の「配列同一性」の百分率は、「ＢＬＡＳＴ  ２  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ」プログラムのバージョンを使用して決定することができる。このプログラムは、２００４年９月１日以降にＮａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎから入手可能であり、ＢＬＡＳＴＮ（ヌクレオチド配列の比較用）と、ＢＬＡＳＴＰ（ポリペプチド配列の比較用）を組み込んでいる。これらプログラムは、Ｋａｒｌｉｎ  ａｎｄ  Ａｌｔｓｃｈｕｌ（Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９０（１２）：５８７３−５８７７，１９９３）のアルゴリズムに基づいている。「ＢＬＡＳＴ  ２  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ」を利用する場合、２００４年９月１日現在のデフォルトパラメーターであるパラメーター、つまりワードサイズ（３）、オープンギャップペナルティ（１１）、伸長ギャップペナルティ（１）、ギャップドロップオフ（５０）、期待値（１０）および限定されないがマトリクスオプションを含む任意の他の必要なパラメーターを使用してもよい。２つのヌクレオチド配列またはアミノ酸配列は、当該２つの配列が、互いに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する場合、「充分に類似した配列同一性」または「充分な配列同一性」を有するとみなされる。
【０１４３】
「モノクローナル抗体」（Ｍａｂ）という用語は、例えば任意の真核細胞クローン、原核細胞クローンまたはファージクローンなどのクローンの１つのコピーから誘導された抗体またはその抗原結合部分を指し、それが作製された方法は示唆しない。本発明のモノクローナル抗体は、均質、または実質的に均質な集団で存在することが好ましい。
【０１４４】
「ヒト化」抗体分子とは、非ヒト免疫グロブリンに由来する配列を最小限含有するキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはその断片（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、または他の抗原結合性の抗体下位配列）である、非ヒト（例えばマウス）抗体分子またはその抗原結合部分の形態を指す。ヒト化抗体は、レシピエントのＣＤＲ由来の残基が、所望の特異性、アフィニティおよび能力を有する例えばマウス、ラットまたはウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲ由来の残基で置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）であってもよい。
【０１４５】
「ヒト抗体または完全ヒト抗体」とは、ヒト抗体遺伝子を担持するトランスジェニックマウスから誘導された、またはヒト細胞から誘導された抗体分子またはその抗原結合部分を指す。
【０１４６】
「キメラ抗体」という用語は、可変領域配列が１つの種に由来し、定常領域配列は別の種に由来する抗体分子またはその抗原結合部分を指すことが意図され、例えば、可変領域配列はマウス抗体に由来し、定常領域配列はヒト抗体に由来する抗体分子などである。
【０１４７】
「抗体−薬剤結合体」および「免疫結合体」とは、細胞傷害剤、細胞増殖抑制剤、および／または治療剤と結合された、Ｃ−ＫＩＴに結合する抗体分子またはその抗原結合部分を指し、抗体誘導体を含む。
【０１４８】
本発明の抗体分子、またはその抗原結合部分は、例えば組み換え技術、ファージディスプレイ技術、合成技術、またはそうした技術もしくは当分野に既に公知である他の技術との組み合わせなどの当分野に公知の技術を使用して作製され得る。
【０１４９】
「単離された分子」（分子が、例えばポリペプチド、ポリヌクレオチドまたは抗体である場合）という用語は、その起源または誘導体化の源によって、（１）自然状態では付随する天然の関連構成要素と関連していない分子、（２）同じ種由来の他の分子を実質的に含まない分子、（３）異なる種由来の細胞により発現された分子、または（４）自然には存在しない分子である。したがって、化学的に合成された分子、または天然での起源である細胞とは異なる細胞系で発現された分子は、その天然の関連構成要素から「単離される」。さらに分子は、当分野に公知の精製技術を使用した単離などによって、天然の関連構成要素を実質的に含まない状態となり得る。分子純度または均質性は、当分野に公知の多くの手段により解析され得る。例えばポリペプチドサンプルの純度は、当分野に公知の技術を使用してポリアクリルアミドゲル電気泳動を使用し、ゲルを染色してポリペプチドを可視化して解析されてもよい。ある目的に対し、ＨＰＬＣ、または当分野において精製用に公知の他の手段を使用することにより、さらに高い分解能が提供される場合がある。
【０１５０】
「エピトープ」という用語は、抗体分子の抗原結合領域のうちの１つまたは複数で抗体分子に認識され、結合されることができる分子の部分、またはその抗原結合部分を指す。エピトープは、一次、二次または三次のタンパク質構造の規定領域からなる場合があり、抗体またはその抗原結合部分の抗原結合領域に認識される標的の二次構造単位または二次構造ドメインの組み合わせを含む。同じくエピトープは、例えばアミノ酸または糖側鎖などの規定の化学的に活性な分子の表面群からなる場合があり、特定の三次元構造特性ならびに特定の電荷特性を有する場合がある。本明細書において使用される場合、「抗原性エピトープ」という用語は、当分野に公知の任意の方法、例えば従来的な免疫アッセイ法、抗体競合結合アッセイ、またはｘ線結晶法もしくは関連構造決定法（例えばＮＭＲ）により決定されたときに、抗体分子が特異的に結合することができるポリペプチドの部分と規定される。
【０１５１】
「結合アフィニティ」または「ＫＤ」という用語は、特定の抗原−抗体の相互作用の解離速度を指す。ＫＤは、「ｏｆｆ−ｒａｔｅ（ｋoff）」とも呼ばれる解離速度と、「ｏｎ−ｒａｔｅ（ｋon）」、すなわち会合速度の比率である。ゆえにＫDは、ｋoff ／  ｋonに等しく、モル濃度（Ｍ）として表される。従って、ＫDが小さくなると、結合アフィニティは強くなる。ゆえにＫDが１μＭであれば、ＫDが１ｎＭの場合と比較して結合アフィニティが弱いことを示す。抗体のＫＤ値は、当分野に確立された方法を使用して決定され得る。抗体のＫＤの決定方法の１つは、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用するものであり、典型的には、例えばＢＩＡＣＯＲＥ（商標）システムなどのバイオセンサーシステムを使用する。
【０１５２】
「有効性」という用語は、生物活性の測定値であり、本明細書に記載のＣ−ＫＩＴ活性アッセイにおいて測定される活性の５０％を阻害する、抗原Ｃ−ＫＩＴに対する抗体または抗体薬剤結合体のＩＣ50または有効濃度として指定される場合もある。
【０１５３】
本明細書において使用される場合、「有効量」または「治療有効量」という文言は、所望の治療結果を実現するために必要な（用量での、および期間に対する、および投与手段に対する）量を指す。有効量は、活性剤の、対象に治療上有益な影響を与えるために必要な少なくとも最小量であるが、対象に毒性のある量よりは少ない量である。
【０１５４】
本発明の抗体分子の生物活性に関して本明細書において使用される場合、「阻害する」または「中和する」という用語は、限定されないが、Ｃ−ＫＩＴに対する抗体分子の生物活性、または抗体分子とＣ−ＫＩＴの結合相互作用を含む、阻害されるものの進行または重大度を実質的にアンタゴナイズする、妨げる、予防する、抑える、減速させる、破壊する、除去する、停止させる、低下させる、または反転させる抗体の能力を意味する。
【０１５５】
「宿主細胞」には、ポリヌクレオチド挿入物の組み込みのためのベクターに対するレシピエントであってもよく、またはレシピエントである個々の細胞または細胞培養物を含む。宿主細胞は、単一宿主細胞の子孫物を含み、当該子孫物は、自然の、偶発的な、または意図的な変異により、元の親細胞と完全に同一であるとは限らない場合がある（形態において、またはゲノムＤＮＡの相補体において）。宿主細胞には、本発明のポリヌクレオチドをインビボでトランスフェクトされた細胞が含まれる。
【０１５６】
本明細書において使用される場合、「ベクター」とは、宿主細胞において、対象の１つまたは複数の遺伝子または配列を送達することができる、そして好ましくは発現することができる構築物を意味する。ベクターの例としては限定されないが、ウイルスベクター、ネイキッドＤＮＡまたはＲＮＡの発現ベクター、プラスミド、コスミドまたはファージベクター、カチオン縮合剤と関連付けられたＤＮＡまたはＲＮＡの発現ベクター、リポソーム中に封入されたＤＮＡまたはＲＮＡの発現ベクター、および例えばプロデューサー細胞などの特定の真核細胞が挙げられる。
【０１５７】
本明細書において使用される場合、別段が示唆されない限り、「治療すること」という用語は、そうした用語が適用される障害もしくは状態、またはそうした障害もしくは状態の１つまたは複数症状を反転させる、改善させる、進行を阻害する、進行を遅延させる、発症を遅延させる、または予防することを意味する。本明細書において使用される場合、別段の示唆が無い限り、「治療」という用語は、上述に規定される治療の行為を指す。「治療すること」という用語は、対象の補助治療および新補助（ｎｅｏａｄｊｕｖａｎｔ）治療も含む。誤解を避けるために、本明細書において「治療」という言及は、治癒的、緩和的、および予防的な治療に対する言及を含む。誤解を避けるために、本明細書において「治療」という言及は、治癒的、緩和的、および予防的な治療に対する言及もさらに含む。
【０１５８】
本明細書において、実施形態は、「含む」という文言で記載されているか、さもなければ「〜からなる」および／または「本質的に〜からなる」として記載される類似した実施形態も提供されることを理解されたい。
【０１５９】
本発明の態様または実施形態が、マーカッシュ群または他の代替的な群で記載されている場合、本発明は、概して列挙される群全体のみならず、当該群の各メンバーを個々に、および当該主要群の可能性のあるすべての亜群、そして当該群メンバーの１つまたは複数を欠いた主要群も包含する。本発明はさらに、請求される本発明の群メンバーのいずれかの１つまたは複数の明白な除外を予期するものである。
【０１６０】
別段の規定がない限り、本明細書において使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって普遍的に理解される意味と同じ意味を有する。矛盾が生じる場合、本明細書が定義を含み主導をとるものとする。本明細書および請求の範囲の全体を通じて、「含む」という文言、または例えば「含むこと」といった変化形は、記述される整数値の含有、または整数値の群の含有を示唆するが、任意の他の整数値または整数値の群の除外は示唆しないと理解される。文脈により別段であることを要しない限り、単数形の用語は複数を含み、複数形は単数を含むものとする。「例えば」という用語の後に続く任意の例示は、包括的または限定であることは意味しない。
【０１６１】
本発明の実施は、別段の示唆が無い限り、分子生物学（組み換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学、および免疫学の従来的な技術を採用し、それら技術は当分野の技術範囲内にある。
【０１６２】
本発明の特定の非限定的な実施形態を、添付の図面に対して記載する。
【実施例】
【０１６３】
実施例１．最適化抗Ｃ−ＫＩＴ治療用抗体の作製
イントロダクション
本実施例において、本発明者らは、アンタゴニスト性の最適化抗Ｃ−ＫＩＴ抗体パネルの作製に成功した。これら抗Ｃ−ＫＩＴ抗体は、良好に発現され、生物物理的に安定であり、溶解度が高く、そして好ましいヒト生殖細胞系列に対し最大のアミノ酸配列同一性を有している。
【０１６４】
材料及び方法
ＩｇＧのクローニング、一過性発現、精製
抗体ｖ−ドメインをコードするＤＮＡ配列を、制限酵素−ライゲーションクローニングを介して、別個のプラスミドベクター中の別個のＩｇＧ重鎖およびＩｇＧ軽鎖の発現カセット内にクローニングした。抗体は、以下の２つのヒトＩｇＧ１形式で発現された：ＩｇＧ１、およびＩｇＧ１ヌル−下位ヒンジ変異のＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａを有するＩｇＧ１であり、Ｆｃγ受容体誘導型のエフェクター機能が最小化されている。メーカーのプロトコールに従い、無エンドトキシンＩｇＧ発現プラスミド調製物を用いた一過性トランスフェクションの後、ＨＥＫ−２９３ｅｘｐｉ細胞においてＩｇＧは発現された。以下の単工程プロトコールを使用してＩｇＧは精製された：馴化培地を、ＰＢＳ  ｐＨ７．４で前もって平衡化された１ｍＬのＰｒｏＡセファロースカラム上にロードした（正味）。カラムを、５カラム体積のＰＢＳ  ｐＨ７．４で洗浄し、その後、タンパク質を１００ｍＭのグリシン、ｐＨ２．７で溶出させ、３０ｋＤａカットオフ透析膜を使用して、ＰＢＳ  ｐＨ７．４中で透析を行った。
【０１６５】
ＩｇＧ力価測定結合ＥＬＩＳＡｓ
Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏ−Ｏｎｅ  Ｈｉｇｈ  ｂｉｎｄ  ＥＬＩＳＡプレートをコーティングするために、標的タンパク質を炭酸緩衝液中で１μｇ／ｍｌに希釈し、１ウェル当たり１００μｌ、４℃で一晩、添加した。コーティングされたプレートを、ＰＢＳ  ｐＨ７．４で３回洗浄し、１％  ＢＳＡのＰＢＳ溶液（３８０μｌ／ウェル）で１時間、室温でブロッキングし、その後、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０（ＰＢＳＴ）で３回洗浄した。Ｃ−ＫＩＴ抗体（１００μｌ／ウェル；ＰＢＳＴ中で希釈）を添加し、次いで１時間、室温でインキュベートした。次いでプレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、ヤギ抗ヒトカッパ鎖−ＨＲＰ（１００μｌ／ウェル）をＲＴで１時間添加した。次いでプレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、ＰＢＳで２回洗浄した後、１ウェル当たり１００μｌのＴＭＢを添加した。１００μｌの２Ｍ  Ｈ2ＳＯ4／ウェルを加えることで反応を停止させ、４５０ｎｍでプレートリーダー上でＯＤを読み取った。
【０１６６】
抗Ｃ−ＫＩＴ抗体は、ＥＬＩＳＡで多重反応性を検証された。精製された組み換え標的抗原、および非標的抗原を、炭酸緩衝液中、１ウェル当たり１００ｎｇで９６−ｗｅｌｌ  Ｎｕｎｃ  ｍａｘｉｓｏｒｐプレートに４℃で一晩、コーティングした。次いでプレートをＰＢＳで３回洗浄し、１％  ＢＳＡのＰＢＳ溶液でブロッキングを行い、次いでＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０で３回洗浄した。次いで一次抗体の希釈系列を加え、プレートをＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０で３回洗浄し、その後、ヤギ抗ヒトカッパ鎖−ＨＲＰ  １：４，０００の二次抗体を加えた。次いでウェルをＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０で３回洗浄し、ＰＢＳで２回洗浄して、１ウェル当たり１００μｌのＴＭＢペルオキシダーゼ基質を加えて、１００μｌの２Ｍ  Ｈ2ＳＯ4を加えることで反応を停止させて、吸光度を４５０ｎｍで読み取った。過去に記載（Ｍｏｕｑｕｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ｎａｔｕｒｅ  ４６７：５９１−５９５を参照のこと）されるように、陰性荷電された生物分子表面上でＥＬＩＳＡを介してＩｇＧ結合解析が行われた。
【０１６７】
Ｃ−ＫＩＴライブラリーの作製および選択
Ｃ−ＫＩＴ  ｓｃＦｖレパートリーは、大量オリゴヌクレオチド合成およびＰＣＲにより組み立てられた。次いで増幅されたｓｃＦｖレパートリーを制限酵素−ライゲーションを介してファージミドベクター内にクローニングし、大腸菌ＴＧ−１細胞内に形質転換した。ファージレパートリーは、原則として過去に詳述されるようにレスキューされた（Ｆｉｎｌａｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ６８１：３８３−４０１）。
ファージ選択は、ストレプトアビジン磁気マイクロビーズをＣ−ＫＩＴ−Ｆｃタンパク質（ヒトまたはカニクイザルのいずれか）でコーティングし、ビーズをＰＢＳで３回洗浄して、５％スキムミルクタンパク質（ＭＰＢＳ）を加えたＰＢＳ  ｐＨ７．４中に再懸濁させることにより実施された。これらのビーズは、選択のラウンド１では２００ｎＭの標的タンパク質でコーティングされ、次いで、その後のラウンドでは１００、５０および１０ｎＭでコーティングされた。
【０１６８】
ＨＴＲＦ結合競合アッセイ
競合的ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ  ｔｉｍｅ  ｒｅｓｏｌｖｅｄ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ（ＨＴＲＦ）アッセイ法を確立して、移植およびライブラリー由来のクローンによるｈ３７Ｍ  ＩｇＧに対するエピトープ競合を検証した。精製されたｈ３７Ｍ  ＩｇＧ１を、標識キット（ＣｉｓＢｉｏ社）をメーカーの説明書に従い使用して、テルビウムで標識した。最終反応混合物は、上述の通り調製されたビオチニル化ヒトＣ−ＫＩＴ−Ｆｃ、ＳＡ−ＸＬ６６５（ＣｉｓＢｉｏ社）、テルビウム標識された親ｈ３７Ｍ、および対象の競合ＩｇＧを含有した。トータルの反応体積は、１ｘアッセイ緩衝液［５０ｍＭ  リン酸ナトリウム、ｐＨ  ７．５、４００ｍＭ  フッ化カリウム、および０．１％  ＢＳＡ（ｗ／ｖ）］中、２０μｌであった。３８４ウェルの低体積黒色プレート（Ｎｕｎｃ社）に連続して試薬を加えた。室温で１時間、反応を進ませ、その後にプレートをプレートリーダー上で３４０ｎｍの励起、および６１５ｎｍ（ｈ３７Ｍ−テルビウムからのインプットドナー蛍光を測定）と６６５ｎｍ（ＳＡＸＬ６６５からのアウトプットアクセプター蛍光を測定）の２つの発光測定値を用いて読み取った。測定値は、６６５ｎｍ／６１５ｎｍの比率として表されている。
【０１６９】
抗体ｖ−ドメインＴ細胞エピトープ含量：インシリコ分析
インシリコ技術（Ａｂｚｅｎａ，Ｌｔｄ．）は、治療用抗体および治療用タンパク質中のＴ細胞エピトープの位置の特定に基づいており、抗体ｖ−ドメイン中の潜在的な免疫原性を評価するために使用された。ｉＴｏｐｅ（商標）を使用して、ヒトＭＨＣクラスＩＩに対して無差別的な高いアフィニティ結合を有するペプチドに関し、重要なリードのＶＬ配列およびＶＨ配列を解析した。無差別的な高いアフィニティＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドは、薬剤タンパク質の臨床免疫原性に関する高いリスク指標であるＴ細胞エピトープの存在と相関すると考えられている。ｉＴｏｐｅ（商標）ソフトウェアは、ペプチドのアミノ酸側鎖と、３４種のヒトＭＨＣクラスＩＩアレルの開放末端結合溝（ｇｒｏｏｖｅ）内の特定の結合ポケット（特にポケット位置；ｐ１、ｐ４、ｐ６、ｐ７およびｐ９）の間の有益な相互作用を予測する。これらのアレルは、広く存在する最も普遍的なＨＬＡ−ＤＲアレルであり、任意の特定の民族集団で多く存在するような重み付けはない。当該アレルのうちの２０種が、「開いた」ｐ１構造を含有している。そして１４種が「閉じた」構造を含有しており、８３位のグリシンがバリンで置換されている。重要な結合残基の位置は、被験タンパク質配列にわたり８アミノ酸が重複している９ｍｅｒペプチドのインシリコ生成により取得される。このプロセスによって、ＭＨＣクラスＩＩ分子に結合する、または結合しないペプチドを高い正確性で識別することに成功した。
【０１７０】
さらに、ＴＣＥＤ（商標）（Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｄａｔａｂａｓｅ（商標））を使用して配列を解析し、過去にインビトロでの他のタンパク質配列のヒトＴ細胞エピトープマッピング解析により特定されたＴ細胞エピトープとの合致を検索した。ＴＣＥＤ（商標）を使用して、非関連タンパク質に由来するペプチドの大きな（１０，０００個を超えるペプチド）データベースに対する任意の被験配列と、抗体配列を検索する。
【０１７１】
ヒトＦｃ受容体に対するＩｇＧアフィニティのＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析
ＩｇＧに対する相互作用アフィニティは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｔ２００装置を使用した表面プラズモン共鳴により決定された。大部分の解析に対し、Ｈｉｓ６−タグ化ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ（１６７Ｒバリアントおよび１６７Ｈバリアント）、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ（１７６Ｆバリアントおよび１７６Ｖバリアント）、およびＦｃγＲＩＩＩｂ受容体（すべてＳｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ社）が、標準的なアミンカップリング法により抗ＨＩＳ抗体でコーティングされたＣＭ５センサーチップ上に捕捉された。次いで以下のように分析物の受容体特異的な形式が適用された。
【０１７２】
ＦｃγＲＩは、ＩｇＧ１単量体に対するアフィニティが高い受容体である。そのため、１：１の速度論的解析を以下の条件下で実施した：「シングルサイクル」の分析は、３０μｌ／分の流速、１０μｌ／分で約３０ＲＵにロードされた受容体タンパク質（ＨＢＳ−Ｐ＋中で０．２５μｇ／ｍｌに希釈された）、０．４１１ｎＭ〜３３．３３ｎＭの力価の精製抗体の５点の３倍希釈を使用し、２００ｓの会合時間、３００ｓの解離時間が適用された。２ｘの注入用グリシンｐＨ１．５を用いて再生を行い、１：１適合を使用して分析を行った。
【０１７３】
単量体ＩｇＧとＦｃγＲＩＩ受容体およびＦｃγＲＩＩＩ受容体の間の相互作用は、比較的低いアフィニティ相互作用であった。そこで、「定常状態」アフィニティ解析を、以下の条件下で実施した：３０μｌ／分の流速、１０μｌ／分で約６０ＲＵにロードされた受容体タンパク質（ＨＢＳ−Ｐ＋中で０．２５μｇ／ｍｌに希釈された）、３３ｎＭ〜２４０００ｎＭの力価の精製抗体の５点の３倍希釈系で、３０ｓの会合時間、２５ｓの解離時間が適用された。２ｘの注入用グリシンｐＨ１．５を用いて再生を行い、定常状態アフィニティの算定を使用して分析を行った。
【０１７４】
単量体ＩｇＧとＦｃＲｎの間の相互作用は、比較的アフィニティが低く、ｐＨ感受性の相互作用であった。そこで、「定常状態」アフィニティ解析を、以下の条件下で実施した：ＣＭ５チップは、標準的なアミン化学法を使用して、酢酸ナトリウムｐＨ５．５中、ｈＦｃＲｎと直接カップリングされた。ランニング緩衝液は、ＰＢＳ  ０．０５％  Ｐ２０＋１５０ｍＭ  ＮａＣｌ（ｐＨ６．０またはｐＨ７．４）、３０μｌ／分の流速、３０００ｎＭ〜３７．０ｎＭの精製抗体の５点の３倍希釈で、１８ｓの会合時間、１００ｓの解離時間が適用された。０．１ＭのＴｒｉｓ  ｐＨ８．０を用いて再生を行い、定常状態アフィニティの算定を使用して分析を行った。
【０１７５】
抗体ｖ−ドメインの特異性検証：ヒト受容体アレイ解析
ヒト細胞膜受容体プロテオームアレイを、Ｒｅｔｒｏｇｅｎｉｘ  Ｌｔｄ．で実施した。プライマリースクリーニング：ＩｇＧ１−ｈ３７Ｍ抗体およびＩｇＧ１−ＭＨ１抗体を、５５２８個のヒト細胞膜タンパク質および細胞表面連結分泌タンパク質を発現する固定ＨＥＫ２９３細胞／スライドに対し、個々に結合をスクリーニングした（スライドセット当たり、ｎ＝２スライド）。すべてのトランスフェクション効率が、最小閾値を超えていた。抗体結合は、ＡＦ６４７蛍光二次抗ヒトＩｇＧ１抗体を使用して検出された。プライマリーヒット（二重スポット）は、ＩｍａｇｅＱｕａｎｔ上で蛍光（ＡＦ６４７およびＺｓＧｒｅｅｎ１）を解析することにより特定された。全ヒットをコードするベクターを配列解析して、その正確な正体を確認した。確認／特異性スクリーニング：全ヒットをコードするベクターに加えて、ＭＳ４Ａ１（ＣＤ２０）、ＥＧＦＲおよび他のタンパク質をコードする対照ベクターが新しいスライド上に二重でスポットされ、これを使用して、前述のようにヒトＨＥＫ２９３細胞を逆トランスフェクトした。すべてのトランスフェクション効率が、最小閾値を超えていた。同一の固定スライドを、０．５μｇ／ｍｌおよび２μｇ／ｍｌの各被験抗体、１μｇ／ｍｌの陰性対照抗体、１μｇ／ｍｌのリツキシマブのバイオシミラー（陽性対照）、または被験分子無し（二次抗体のみ、陰性対照）（１処置あたりｎ＝１スライド）を用いて処理した。スライドは上述のように解析された。
【０１７６】
アーム化抗体形式の内部移行および細胞殺傷能力の解析
ヒトまたはカニクイザルのｃ−ＫＩＴを安定的に発現するＣＨＯ細胞を、２０％ウシ胎児血清、１ｍＭのＬ−グルタミン、および１μｇ／ｍｌのＧ４１８を含有するＨａｍ’ｓ  Ｆ１２培地中で増殖させ、３８４ウェルの黒色透明底組織培養処理アッセイプレートに播種し（１ウェル当たり３０μｌ中、５００個の細胞）、３７℃で一晩、ＣＯ2インキュベーター中でインキュベートした。精製抗体を培地中で連続希釈し、等量の１２０ｎＭ  Ｆａｂ−ＺＡＰ（Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社、ＩＴ−５１）を加えた。抗体／Ｆａｂ−ＺＡＰ混合物を３７℃で３０分間インキュベートし、その後、細胞アッセイプレートに加えた（１ウェル当たり１０μｌ）。細胞をＣＯ2インキュベーター中で７２時間、３７℃でインキュベートした。各プレートに対し、バックグランド対照ウェル（培地のみ）およびＦａｂ−ＺＡＰ対照ウェル（細胞はＦＡＢ−ＺＡＰ試薬とインキュベートされたが、ｃ−ＫＩＴ抗体は含まれない）がデータ正規化を目的として含まれた。７２時間のインキュベーションの最後に、細胞の活性を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ社  Ｇ７５７１）をメーカーの説明書に従い使用して決定した。各ウェルの相対的発光シグナル（ＲＬＵ）は、ＢＭＧ  ＦＬＵＯｓｔａｒ  Ｏｍｅｇａプレートリーダーを使用して測定された。データは、培地のみのウェルのＲＬＵシグナルを差し引くことでブランク補正され、Ｆａｂ−ＺＡＰ対照ウェルのブランク補正されたシグナルの％として表された。
【０１７７】
１０％ウシ胎児血清、２ｍＭのＬ−グルタミン、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、４．５ｇ／ｌのＤ−グルコース、ペニシリン、ストレプトマイシンおよび２ｎｇ／ｍｌのＧＭ−ＣＳＦを含有するＲＰＭＩ培地中のＴＦ−１細胞を、９６ウェルの黒色透明底組織培養処理アッセイプレートに播種した（１ウェル当たり７５μｌ中、２５００個の細胞）。精製された抗体を培地中で連続希釈し、次いで等量の４０ｎＭ  Ｆａｂ−ＺＡＰを加えた。抗体／Ｆａｂ−ＺＡＰ混合物を３７℃で３０分間インキュベートし、その後、細胞アッセイプレートに加えた（１ウェル当たり２５μｌ）。細胞をＣＯ2インキュベーター中で７２時間、３７℃でインキュベートした。各プレートに対し、バックグランド対照ウェル（培地のみ）およびＦａｂ−ＺＡＰ対照ウェル（細胞はＦＡＢ−ＺＡＰ試薬とインキュベートされたが、ｃ−ＫＩＴ抗体は含まれない）がデータ正規化を目的として含まれた。７２時間のインキュベーションの最後に、細胞の活性を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ社  Ｇ７５７１）をメーカーの説明書に従い使用して決定した。各ウェルの相対的発光シグナル（ＲＬＵ）は、ＢＭＧ  ＦＬＵＯｓｔａｒ  Ｏｍｅｇａプレートリーダーを使用して測定された。データは、培地のみのウェルのＲＬＵシグナルを差し引くことでブランク補正され、Ｆａｂ−ＺＡＰ対照ウェルのブランク補正されたシグナルの％として表された。
【０１７８】
Ｃ−ＫＩＴ受容体活性中和における、抗体の有効性の解析
１０％ウシ胎児血清、２ｍＭのＬ−グルタミン、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、４．５ｇ／ｌのＤ−グルコース、ペニシリン、ストレプトマイシンおよび２ｎｇ／ｍｌのＧＭ−ＣＳＦを含有するＲＰＭＩ培地中のＴＦ−１細胞を、９６ウェルの透明底組織培養処理アッセイプレートに播種した。精製された抗体を培地中で連続希釈し、次いで細胞アッセイプレートに添加して、６０分間、３７℃でインキュベートした。次いで組み換えｈ−ＳＣＦを５０ｎｇ／ｍｌで添加し、細胞をＣＯ2インキュベーター中、７２時間、３７℃でインキュベートした。各プレートに対し、バックグラウンド対照（培地のみ）が、データ正規化を目的として含められた。７２時間のインキュベーションの最後に、細胞の活性を、レザズリン蛍光活性アッセイをメーカーの説明書に従い使用して決定した。
【０１７９】
結果および考察
好ましいヒト生殖細胞系列ｖ−遺伝子へのＣＤＲ移植
アンタゴニスト性マウス抗Ｃ−ＫＩＴ  ＩｇＧ  ３７ＭのＣＤＲ（３７Ｍ；ＷＯ２０１４０１８６２５Ａ１および表２を参照のこと）を、ＣＤＲ移植法を使用して、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリンｖ−ドメインフレームワーク配列スキャホールドに最初に導入した。最適な薬剤様性能を有する最終リード治療用ＩｇＧ化合物に、遺伝子操作努力を傾けるために、親抗体のＣＤＲを、「好ましい」生殖細胞系列スキャホールドのＩＧＨＶ１−４６およびＩＧＫＶ１−１６に移植することを選択した。それらスキャホールドは、良好な溶解性、高い物理的安定性を有することが知られており、発現されたヒト抗体レパートリーにおいて高頻度に使用されている。
【０１８０】
これらスキャホールドおよび移植されたＣＤＲの定義は、表２に概要を掲載した。キメラ抗Ｃ−ＫＩＴ抗体ｍ３７Ｍ、およびヒト化ｈ３７Ｍの重鎖配列と軽鎖配列も表２に示す。ＣＤＲ移植のプロセスは公知であるが、ヒトｖ−ドメイン配列の所与のセットが非ヒトＣＤＲ移植に対する適切なアクセプターフレームワークとして機能するかを予測するのは未だ困難である。不適切なフレームワークの使用は、標的結合機能の消失、タンパク質安定性の問題、さらには最終ＩｇＧの発現の低下につながり得る。実際に、ｈ３７Ｍのフレームワーク領域中に複数のマウス残基が含有されていることで、生殖細胞系列フレームワーク内への直接的なＣＤＲ移植において、完全には標的結合アフィニティが維持され得なかったことが示唆される。そこでＣＤＲ突然変異誘導の鋳型としてＩＧＨＶ１−４６／ＩＧＫＶ１−１６移植が採用され、改善クローンの選択が行われた。
【０１８１】
ライブラリー作製およびスクリーニング
ＣＤＲが移植されたＩＧＫＶ１−１６／ＩＧＨＶ１−４６のｖ−ドメイン配列を、ＶＬ−ＶＨ  ｓｃＦｖ形式の中に組み込み、突然変異誘導ライブラリーカセットは、大量オリゴヌクレオチド合成およびアセンブリにより作製した。最終ｓｃＦｖライブラリーをファージディスプレイベクター内にライゲートし、エレクトロポレーション法を介して大腸菌内に形質転換して、１．０ｘ１０9個の独立したクローンを生成した。ライブラリーの構造品質は、９６個のクローンを配列解析することにより実証された。この配列解析データにより、マウスまたはヒト生殖細胞系列の各相違位置の残基をコードする位置を、効率的におよそ５０％の頻度でサンプリングされたことが示された。ライブラリーは、ヘルパーファージＭ１３を使用してレスキューされ、選択はビオチニル化されたヒトおよびカニクイザルのＣ−ＫＩＴ−Ｆｃタンパク質に対し、複数の別個のブランチにおいて実施された。
【０１８２】
選択後のスクリーニング（図１に示される）およびＤＮＡ配列解析から、２１９個の固有のヒトおよびマウスのＣ−ＫＩＴ結合ｓｃＦｖクローンの存在が明らかになり、それらクローンは、ｈ３７Ｍ  ＩｇＧ１とのエピトープ結合競合を保持しており、ＣＤＲ内に大幅に増加したヒト含量を有しながら、フレームワーク配列は完全に生殖細胞系列を維持していた。これら２１９個のクローンで、すべてのＣＤＲにおいて生殖細胞系列化変異が観察された（表３）。リードクローンは、ヒトおよびカニクイザルのＣ−ＫＩＴ−Ｆｃの両方に対する、ＣＤＲ生殖細胞系列化のレベルと、ＥＬＩＳＡおよびＨＴＲＦシグナルの比較に基づき格付けされた（図１）。次いでこの格付けの上位１３個のクローンのｖ−ドメインをＩｇＧ発現ベクターにサブクローニングし、以下のさらなる検証を行った（表４）。
【０１８３】
生殖細胞系列化変異は、ライブラリー選択から直接誘導されたリードクローンのすべてのＣＤＲにおいて観察されたが、配列解析を行うことで、ヒト化が最大となるようクローンをさらに設計することが可能となる可能性がある。ヒトおよびマウスのタンパク質に対する結合シグナルを有する２１９個の配列−固有ヒットを使用して、この機能的に特徴解析された集団のＣＤＲにおけるマウスアミノ酸の保持頻度を解析した。位置的なアミノ酸保持頻度は、ＶHドメインおよびＶLドメインにある百分率として表されている（図２Ａ、２Ｂ）。ＲＦ＜７５％を有するマウス残基は、標的−結合パラトープに必須ではない可能性がある位置とみなされ、一連のコンビナトリアルデザインにおいて生殖細胞系列化に対し開かれている可能性がある。
【０１８４】
多くの組み合わせのなかで、ＲＦ＞７５％のマウス残基を主に含有する１５個のデザインを、「ＭＨ１〜ＭＨ１５」（ＭＨ＝最大ヒト化（Ｍａｘｉｍａｌｌｙ  Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ））に指定した。ｈ３７ＭのＬＣＤＲ３は、潜在的な脱アミド化部位（ＣＤＲの３位および４位の「ＮＳ」）を含有していたため、複数の「ＭＨ」クローンについても、例えばＮ／Ａ／Ｓ／Ｔ／ＥおよびＳ／Ａ／Ｎ／Ｄなどの可能性のある置換をサンプリングすることで、許容可能な標的結合機能を維持しながら開発リスクモチーフが取り除かれる可能性がある。ＬＣＤＲ３中に存在する単独の非ヒト生殖細胞系列残基（ＣＤＲの８位の「Ｒ」）も、同種置換のＲ／Ｋ／Ｈの寛容性に関してサンプリングし、安定性または免疫原性強化変異が特定され得るかを確立した。別の６個のデザインクローンの「ＴＴＰ１〜６」（「ＴＴＰ」＝総合的に理論上、可能（Ｔｏｔａｌ  Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｌｙ  Ｐｏｓｓｉｂｌｅ））は、ｓｃＦｖ配列の高機能性集団において観察された最もヒト化されたＣＤＲと、脱アミド化モチーフを破壊する変異を組み合わせて生成された（表４）。ＭＨクローンおよびＴＴＰクローンは、（上述の１３個のライブラリー由来クローン、陽性対照のｈ３７Ｍおよびｍ３７Ｍ、ならびに陰性対照の非Ｃ−ＫＩＴ反応性アイソタイプｖ−ドメインとともに）遺伝子合成により生成され、次いで発現ベクターにクローニングされ、ヒトＩｇＧ１として作製された。すべてのＩｇＧが、ＨＥＫ−２９３細胞の一過性トランスフェクションから容易に発現され、精製された。
【０１８５】
リードＩｇＧの特異性および有効性の特徴解析
次いで上述の精製ＩｇＧを、直接力価測定ＥＬＩＳＡ形式において、ヒトおよびカニクイザルのＣ−ＫＩＴ−Ｆｃへの結合に関して検証した（図３）。この解析から、すべてのライブラリー由来クローン、ならびにＭＨ１−３、５、１０、１１および１２のデザインクローンが、ｈ３７Ｍ  ＩｇＧ１と同等のヒトおよびカニクイザルのＣ−ＫＩＴに対する結合アフィニティを維持していたこと、一方で他のＭＨクローンおよびＴＴＰクローンはすべて、両オルソログに対する結合の低下を示したことが示された（図３）。
【０１８６】
直接ＥＬＩＳＡ結合シグナルはアビディティに影響を受け、特異的エピトープの維持を明らかにしないため、すべてのＩｇＧは、液相ＨＴＲＦ競合アッセイにおいて検証された（図４）。すべてのライブラリー由来ＩｇＧおよび複数のデザインＩｇＧは、ヒト（図４Ａ）およびカニクイザル（図４Ｃ、４Ｄ）のｃ−ＫＩＴに対し、完全に濃度依存性のｈ３７Ｍ結合阻害を呈し、重要なリードは、非標識ｈ３７Ｍ  ＩｇＧで観察されたものと類似した高いＩＣ５０値を示した（表５）。これにより、これらクローンにおける共有エピトープおよび結合アフィニティの維持が示された。すべてのＴＴＰクローンと、それに加えてＭＨクローンの４、６、７および９は、ヒト（図４Ｂ）またはカニクイザル（図４Ｅ）のＣ−ＫＩＴのいずれかに対するｈ３７Ｍの結合を完全には阻害しなかったことが判明した。
【０１８７】
細胞膜でのリードＩｇＧ結合特異性のフローサイトメトリー解析
Ｃ−ＫＩＴに対する抗体を、フローサイトメトリーを介して細胞表面での濃度依存性結合に関して分析した。ヒトまたはカニクイザルのいずれかのｃ−ＫＩＴ全長ｃＤＮＡを用いてＣＨＯ−Ｋ１細胞に安定的トランスフェクトを行った。次いで抗Ｃ−ＫＩＴ  ＩｇＧおよびアイソタイプ対照のＩｇＧ１を、１００〜０．０２μｇ／ｍｌの濃度範囲にわたり、すべてＩｇＧ１の形式で、ヒト（図５Ａ、５Ｂ）、カニクイザル（図５Ｃ、５Ｄ）または野生型対照（「ｗｔ」、すなわち非トランスフェクト）ＣＨＯ−Ｋ１細胞（図５Ｅ、５Ｆ）への結合に関して検証した。アイソタイプ対照以外のすべてのＩｇＧが、ヒトおよびカニクイザルのＣ−ＫＩＴ＋細胞に対し、濃度依存性の結合を示した。各ケースにおいて、最大ＭＦＩは、非トランスフェクトＣＨＯ−Ｋ１に対する結合で観察されたバックグラウンドシグナルよりも５０倍超高かった。抗Ｃ−ＫＩＴ抗体は、非トランスフェクトＣＨＯ−Ｋ１細胞に対し、測定可能なバックグラウンド結合を示さず、アイソタイプ対照ＩｇＧ１と同等であった（図５Ｅ、５Ｆ）。
【０１８８】
リードクローンＭＨ５に基づくデザインＩｇＧの解析
上述のように、クローンＭＨ５は、ヒトおよびカニクイザルのＣ−ＫＩＴに対し高い特異的結合を有し、オフターゲット結合の可能性は低く、ＣＤＲ中の脱アミド化の可能性が低く、完全生殖細胞系列フレームワーク領域を有し、そしてＣＤＲ中に複数のヒト生殖細胞系列化変異を有していることが証明された。しかし第一世代のデザインクローンであるため、ＭＨ５の配列はヒト生殖細胞系列含量の改善と軽鎖の品質改善を目的としているが、重鎖は対象ではなかった。ＶＨドメインは未だ多くの非生殖細胞系列（マウス由来）残基をＣＤＲ中に保持しており、図２Ａおよび２Ｂのデータ、および表３に示される観察された機能的変異配列により、まだ修正可能であることが示唆された。発現、安定性、免疫原性または機能的特性を改善し得るＶＨ中のさらなる変異をサンプリングするために、３６個の「第二世代」変異体を表６に示されるように作製した。これらクローンはＩｇＧ１形式で発現および精製され、ＥＬＩＳＡによって、ヒトおよびカニクイザルのＣ−ＫＩＴオルソログ（それぞれ図６Ａおよび６Ｂ）に対する標的結合、ならびにＨＴＲＦによって、両オルソログに対するｈ３７Ｍ／Ｃ−ＫＩＴ相互作用の中和に関し、検証された。この段階でいくつかのクローンに強いＥＬＩＳＡ結合シグナルがあったことから、大部分のＩｇＧのＣＤＲにおいて複数の変異が寛容され得ること、しかしこれらの変化は、有効性に何らかの変化を与えることなく常に組み合わせられるものではないことが判明した。ＨＴＲＦ解析（図７Ａ、７Ｂ）において、重要な第二世代リードであるＭＨ５．１、５．２、５．２２、５．２３、５．２４、５．３３および５．３４が特に、ＩＣ５０算定で有効性の低下を伴うが、ｈ３７Ｍ／Ｃ−ＫＩＴの相互作用を完全に中和できたことが判明した（表７）。
【０１８９】
最終的に第二世代クローンのＭＨ５．１、５．２、５．２２、５．２３、５．２４、５．３３および５．３４を、ヒト（図８Ａ）、カニクイザル（図８Ｂ）または野生型対照（「ｗｔ」、すなわち非トランスフェクト）ＣＨＯ−Ｋ１細胞（図８Ｃ）に対する結合に関してフローサイトメトリーにより検証した。これらの解析から、これら７つの優先第二世代クローンの各々が、ヒトまたはカニクイザルのＫＩＴ＋ＣＨＯ−Ｋ１細胞に対する強力で濃度依存性の結合を呈していたこと、ｈ３７ＭおよびＭＨ５によるシグナルとほぼ同等であったこと、しかし非トランスフェクトＣＨＯ−Ｋ１には観察可能な結合を示さなかったことが確認された。
【０１９０】
「開発可能性」ＥＬＩＳＡアッセイにおけるリードＩｇＧ解析
高アフィニティのリードクローンが、変異および再選択プロセスの間に標的特異性を喪失してしまっていないことを確認するために、クローンＥ−Ｃ２、Ｅ−Ｃ７、ＭＨ１、ＭＨ５、ＭＨ５．２２およびｈ３７Ｍを、免疫グロブリンスーパーファミリー由来の１４個の精製ヒトタンパク質のパネルに対する結合に関し、検証を行った（図９Ａ〜Ｆ）。６個すべてのＩｇＧが、１μｇ／ｍｌで、Ｃ−ＫＩＴ−Ｆｃ（ヒト  ＯＤ４５０ｎｍ＞１．８、カニクイザル＞２．０）に対し強い結合シグナルを呈したが、非常に近縁なマウスおよびラットのＣ−ＫＩＴ−Ｆｃタンパク質を含む他のいずれのタンパク質に対しても検出可能な結合を示さなかった（ＯＤ４５０ｎｍ＜０．１）。このことから、標的結合特異性は、これらのクローンで維持されていることが示された。
【０１９１】
当分野において、いくつかの指標的生物基質に対する、治療用途目的のＩｇＧの結合は、生体利用効率の貧弱さ、およびインビボ半減期の短さによって、患者での性能が低くなるリスクが高いことの指標となることが知られている。そうした３種の生物基質は、インスリン、ｄｓＤＮＡおよびｓｓＤＮＡである。そこでこれら３種の基質を使用してＥＬＩＳＡプレートをコーティングし、最適化されたリード抗体のＩｇＧ１ヌル型の結合を検証した。これらヒトＩｇＧ系抗体の結合シグナルを、多反応性および性能の低さが判明し、臨床試験の進行が停止してしまった「陽性対照」のヒトＩｇＧ抗体（ボコシズマブおよびブリアキヌマブのヒトＩｇＧ１アナログ）と比較した。陰性対照のヒトＩｇＧ１抗体については、ブリアキヌマブと同じ治療標的と反応するが、ｐＫが長く、治療用製品として承認を受けることに成功したＩｇＧ１  ウステキヌマブアナログを使用した。図１０Ａ、ＢおよびＣに示されるＥＬＩＳＡ解析において、陽性対照抗体は、３種すべての基質に対し、予想通りの強い反応性を呈した。一方で、陰性対照のウステキヌマブは、低い反応性を示した。重要なことは、検証されたすべてのＩｇＧ１リードクローンが、３種すべての基質に対し、陰性対照以下の結合を示したことである。この発見は、最適化クローンのＥ−Ｃ２、Ｅ−Ｃ７、ＭＨ１、ＭＨ５およびＭＨ５．２２において、高い特異性、標的誘導結合が維持されていることを強調するものである。
【０１９２】
抗体ｖ−ドメイン  Ｔ細胞エピトープ解析
インシリコ技術（Ａｂｚｅｎａ，Ｌｔｄ．）は、治療用抗体および治療用タンパク質中のＴ細胞エピトープの位置の特定に基づいており、ｈ３７Ｍおよびリード抗体のｖ−ドメインの両方の免疫原性の評価に使用した。ｖ−ドメイン配列の解析は、重複する９ｍｅｒペプチド（各々が最後のペプチドと８残基重複する）を用いて実施され、３４種のＭＨＣクラスＩＩアロタイプの各々に対して検証された。各９ｍｅｒを、ＭＨＣクラスＩＩ分子との潜在的な「適合」および相互作用に基づいてスコア化した。ソフトウェアにより算出されるペプチドスコアは、０〜１の間である。高い平均結合スコアを出したペプチド（ｉＴｏｐｅ（商標）スコアリング機能において＞０．５５）が強調されている。ＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドの＞５０％（すなわち３４種のアレルのうちの１７種）が高い結合アフィニティ（スコア＞０．６）を有する場合、そうしたペプチドは、「高アフィニティ」ＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドと規定され、ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含有するリスクが高いとみなされる。低アフィニティＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドは、多くのアレル（＞５０％）に、＞０．５５の結合スコア（しかし大部分は＞０．６ではない）で結合する。配列のさらなる解析は、ＴＣＥＤ（商標）を使用して実施された。この配列を使用して、ＢＬＡＳＴサーチによりＴＣＥＤ（商標）をデータ検索し、過去にＡｂｚｅｎａ  Ｌｔｄ．で実施されたインビトロＴ細胞エピトープマッピング研究でＴ細胞反応を刺激した非関連タンパク質／抗体由来のペプチド（Ｔ細胞エピトープ）との間の任意の高い配列相同性を特定した。
【０１９３】
ペプチドを、以下の４つのクラスに分類した：高アフィニティ外来物（「ＨＡＦ」−高免疫原性リスク）、低アフィニティ外来物（「ＬＡＦ」−低免疫原性リスク）、ＴＣＥＤ＋（過去にＴＣＥＤ（商標）データベースにおいて特定されたエピトープ）、および生殖細胞系列エピトープ（「ＧＥ」−高いＭＨＣクラスＩＩ結合アフィニティを有するヒト生殖細胞系列ペプチド配列）。生殖細胞系列エピトープの９ｍｅｒペプチドは、広範な生殖細胞系列ペプチドを用いた過去の研究により立証されたように、Ｔ細胞寛容によって免疫原性である可能性は低い。重要なことは、そうした生殖細胞系列のｖ−ドメインエピトープ（ヒト抗体定常領域中の類似配列によりさらに補助される）は、抗原提示細胞の細胞膜でのＭＨＣクラスＩＩ占有に関しても競合するため、Ｔ細胞刺激に必要とされる「活性化閾値」を達成するのに充分な外来性ペプチド提示のリスクを低下させることである。ゆえにＧＥ含量の高さは、抗体治療剤の臨床開発において有益な性質である。
【０１９４】
図１１および表８に示されるように、重要なリードｖ−ドメインは、ｈ３７Ｍと比較してペプチドエピトープ含量において有意に有益な変化を示した。本明細書において採用したｖ−ドメインの操作プロセスは、ｈ３７Ｍのフレームワーク中に含有されるマウス残基（表２）を必要とすることなく、抗ＫＩＴの有効性を維持した抗体の選択に成功した。そのため、ｈ３７Ｍの重鎖および軽鎖のｖ−ドメインの両方のフレームワーク中に存在する複数のＨＡＦエピトープおよびＬＡＦエピトープ（図１１Ａ）を、すべてのライブラリー由来リードおよびデザインリードにおいて削除した（表８）。ＧＥエピトープ含量も有意に増加しており（すべてのリードにおいて４〜≧１０）、特にリードクローンのＶＨ領域（図１１Ｂ〜１１Ｈ）において増加し、ＴＣＥＤ＋エピトープはすべてのリードにおいて低下または除去されていた（表８）。しかし重要なことは、複数の外来性エピトープも、リードクローンのＣＤＲ中に存在する生殖細胞系列変異によって除去されていたことである。例えば、ｈ３７ＭのＬＣＤＲ−１中に存在するＴＣＥＤ＋およびＨＡＦペプチドの「ＶＴＩＴＣＫＡＳＱ」（配列番号６４）は、すべてのリードクローンにおいて、６位のＫをＲに変異させることで除去され、この配列は、軽鎖ＧＥの「ＶＴＩＴＣＲＡＳＱ」（配列番号６５；図１１Ｂ〜１１Ｈ）に転換された。同様に、クローンのＭＨ１（図１１Ｅ）およびＭＨ５．２２（図１１Ｇ）に関し、ＨＡＦペプチドの「ＬＩＹＳＡＳＳＬＱ」（配列番号６６）および「ＩＹＳＡＳＳＬＱＳ」（配列番号６７）の両方が、完全生殖細胞系列配列の「ＡＡＳＳＬＱＳ」（配列番号２４）へのＬＣＤＲ２配列の変異により、ＧＥ配列へと転換された。クローンのＭＨ５およびＭＨ５．２２のＬＣＤＲ−３中に存在する安定化変異（表４および６）は、ＩＧＫＶ１−１６生殖細胞系列から離れた変異であり、エピトープを生じさせないことが判明した。
【０１９５】
ｈ３７ＭのＶＨ領域において、ペプチド配列の「ＹＹＩＮＷＶＲＱＡ」（配列番号６８；ＨＣＤＲ−１およびＦＷ２に及ぶ）は、ＴＣＥＤ＋およびＨＡＦの両方であることが判明した。ＭＨ５．２２以外のすべてのリードに存在する、ＨＣＤＲ−１生殖細胞系列の３位でのＩからＭへの変異（表６）は、このリスクを排し、ペプチド配列をＧＥへと転換させる。しかしクローンＭＨ５．２２に関しては、ＨＣＤＲ−３中のＹからＷへの変異は、２つのＬＡＦペプチド配列を排除することにより相殺される（図１１Ｇ、表８）。上記の発見により、完全配列最適化クローンのＭＨ５−ＤＩの作製が可能となった（ＭＨ５のＬＣＤＲ−２配列を、ＳＡＳＳＬＱＳ（配列番号１７）からＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号２４）へと変化させることによる）。これによりそのプライマリー配列の化学的安定性と免疫原性のリスク特性が最小化された（表８、図１１Ｈ）。
【０１９６】
ヒトＦｃ受容体に対するＩｇＧバリアントのアフィニティのＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析
ＫＩＴ受容体を標的とする抗体は、ヒト臨床試験およびインビトロヒト免疫解析において、肥満細胞上のＫＩＴ会合の間のＦｃ受容体の交差結合が原因で、患者において注射反応のリスクが高いことが示されている（Ｌ’Ｉｔａｌｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２４（１４）：３４６５−３４７４，２０１８）．。抗ＫＩＴ抗体のＦｃ操作バリアントの受容体会合の可能性を検証するために、ｈ３７Ｍを、ＩｇＧ１形式およびＩｇＧ１−３Ｍ形式（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ）で発現させ、クローンＭＨ１は、新規のＩｇＧ１−４Ｍ形式（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ３３１Ｓ）で発現させた。次いで各精製ＩｇＧ１バリアントを、表面プラズモン共鳴解析によってすべてのヒトＦｃ受容体に対する結合アフィニティに関して検証した。これらの解析から、アイソタイプ対照のヒトＩｇＧ１とｈ３７Ｍ−ＩｇＧ１の両方ともが、すべてのヒトＦｃγ受容体に対し強い結合アフィニティを示し（表９）、そしてｐＨ６．０でＦｃＲｎに対して正常なアフィニティを示したが、ｐＨ７．４では示さなかった（表１０）。ｈ３７Ｍ−ＩｇＧ１−３ＭおよびＭＨ１  ＩｇＧ１−４Ｍも、ｐＨ６．０ではＦｃＲｎに対して正常なアフィニティを示すが、ｐＨ７．４では示さない（表１０）。しかし対照的に、両方とも、阻害性受容体のＦｃγＲＩＩｂ以外のいずれのヒトＦｃγ受容体に対しても計測可能な結合アフィニティは示さなかった（表９）。ＦｃγＲＩＩｂに対する最も低いシグナルは、ＭＨ１  ＩｇＧ−４Ｍで観察された（図１２）。アイソタイプ対照のヒトＩｇＧ４抗体で示されるように、このアイソタイプを使用することで、殆どのＦｃγ受容体に対する抗体のアフィニティは低下するが、活性化受容体の相互作用を完全に除去するには不十分である（表９）。
【０１９７】
活性化ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩａ、およびＦｃγＲＩＩＩｂに対する結合が無く、しかし阻害性受容体のＦｃγＲＩＩｂおよびリサイクル受容体のＦｃＲｎに対する結合は維持されていることが、いずれか標準的なＩｇＧ型またはアーム化抗体（抗体薬剤結合型で使用される、または例えばＣＤ３ライゲーション、ＣＤ１６ＡライゲーションまたはＣＤ４７遮断などの別の免疫活性化機序の標的化に使用される）での抗ＫＩＴ治療用抗体の理想的な特徴の組み合わせであり、これにより潜在的に循環中の分子の半減期が最大化され、それと同時に肥満細胞活性化に関連したヒト毒性のリスクが最小化される。
【０１９８】
抗体特異性に関するヒト細胞外プロテオームアレイ解析
抗体の標的認識の精緻な特異性が、薬剤候補として抗体が選択される主な理由の１つである。しかしこの特異性は抗体のインビトロ操作の後には保証されず、特異性が損なわれることはリスクである。本明細書において生成された抗体の発展性を検証するために、５５２８個の固有のヒト細胞膜タンパク質および細胞表面連結分泌タンパク質を発現する細胞の高密度アレイの使用に基づくインビトロ技術（Ｒｅｔｒｏｇｅｎｉｘ，Ｌｔｄ．）を使用して、ＩｇＧ１−ｈ３７ＭおよびＩｇＧ１−ＭＨ１におけるオフターゲット結合の特異性をスクリーニングした。この受容体アレイ結合スクリーニングにより、両方の抗体が膜発現Ｃ−ＫＩＴへの強い結合を示すこと、しかし以下の３種の潜在的なオフターゲット結合の特異性も有することが特定された。ＭＭＰ７、ＣＲＩＭ１およびＦ１３Ａ１。再配置（ｒｅ−ａｒｒａｙ）スライド上でのこれら相互作用の解析によって、これら相互作用が実際にはアーチファクトであり、二次抗体により介在されていたことが示された（図１３Ａ）。したがってＩｇＧ１−ｈ３７ＭおよびＩｇＧ１−ＭＨ１（図１３Ｂ、１３Ｃ）は強い特異性を示し、両方とも公知の２種の以下のｃ−ＫＩＴアイソフォームに対してのみ結合する：アクセッション番号  ＮＭ＿０００２２２．２（基準アイソフォーム；配列番号２０９）およびＮＭ＿００１０９３７７２（短アイソフォーム；配列番号２１０）。クローンのＥ−Ｃ２、Ｅ−Ｃ７、Ｆ−Ｃ５およびＭＨ５に関する反復解析でも、両方のＣ−ＫＩＴアイソフォームに対し、高度に特異的な結合が示された。
【０１９９】
アーム化抗体形式での細胞殺傷能力、およびＣ−ＫＩＴ／ＳＣＦ中和有効性との比較。
抗体薬剤結合体の重要な特性は、抗体の同系標的を発現する細胞内に内部移行する能力である。抗ｃ−ＫＩＴ抗体の内部移行は、サポニン毒素が結合した重鎖および軽鎖特異的ヤギポリクローナルＦａｂを使用して評価された。Ｆａｂ−ＺＡＰ試薬は、ヒトＩｇＧ１に結合する。もし当該ＩｇＧ１が細胞表面上のタンパク質に結合し、内部移行された場合、Ｆａｂ−ＺＡＰ試薬もエンドソーム内に移行される。エンドソーム内に入った時点でサポニン毒素は当該複合体から放出され、リボソームを不活化し、最終的には細胞死をもたらす。したがってこの方法により、抗体薬剤結合体としてのＩｇＧ１抗体の潜在的な有効性の直接的な比較が可能となる。これら内部移行実験において、すべての抗体、ＩｇＧ１−３Ｍ形式のｈ３７Ｍ、ＭＨ１、およびＭＨ５−ＤＩが、高度に強力な内部移行と、ヒトＣ−ＫＩＴ（図１４Ａ）、カニクイザルＣ−ＫＩＴ（図１４Ｂ）を発現するＣＨＯ細胞、およびＴＦ−１ヒト赤白血病株（図１４Ｃ）の殺傷を誘導した。一方で、アイソタイプ対照のヒトＩｇＧ１は、３種の細胞型のいずれの内部移行または殺傷も誘導しなかった。重要なことは、３つすべてのクローンが、ＩＣ５０で計測された場合に非常に類似した有効性を生じさせることであり、３つすべてのＩＣ５０値は、ＫＩＴ＋ＣＨＯ細胞に対し約２倍の範囲内にあり、ＴＦ−１細胞に対しては約４倍の範囲内にある（表１１）。細胞殺傷実験における有効性の値が非常に類似することは予測されており、クローンＭＨ１とＭＨ５は、ヒトＣ−ＫＩＴ（図１５Ａ）およびカニクイザルＣ−ＫＩＴ（図１５Ｂ）に対する結合に関し、上述のように高い感受性で、液相ＨＴＲＦエピトープ競合においてｈ３７Ｍと完全に重複した曲線を示している（ゆえに、Ｃ−ＫＩＴに対するアフィニティが区別できない）。
【０２００】
赤白血病株のＴＦ−１はＣ−ＫＩＴを構造的に発現するため、Ｃ−ＫＩＴに対する天然のリガンドであるＳＣＦが培養培地に添加されたとき、増殖が誘導される。これは、Ｃ−ＫＩＴ／ＳＣＦシグナル伝達の中和における抗Ｃ−ＫＩＴ  ＩｇＧの有効性を検証するための理想的な実験条件である。ＳＣＦ、および細胞増殖を阻害する能力に関し検証される複数の抗体の存在下でＴＦ−１細胞が培養された。この解析によって、検証されたすべての抗体が、ＳＣＦにより誘導される細胞増殖を阻害し得ること、しかしｈ３７Ｍは、他のいずれのクローンよりも有意に強力であったことが示された（図１６）。実際にＩＣ５０値を算出すると、ｈ３７Ｍのみが、ｐＭ範囲で有効性を示し（０．１１ｎＭ）、一方でＭＨ１とＭＨ５−ＤＩはそれぞれ２６．５倍および２４３．６倍、有効性が低かった（表１１）。
【０２０１】
Ｃ−ＫＩＴ／ＳＣＦ阻害と、内部移行および毒素送達における有効性の差は、例えばＭＨ１およびＭＨ５−ＤＩなどのクローンの予想外の大きな利益である。Ｃ−ＫＩＴは骨髄の造血幹細胞上に高度に発現されていることから、癌治療用の抗Ｃ−ＫＩＴ抗体薬剤結合体がｐＭ濃度範囲で毒素を効率的に送達しながら、そうした低濃度で投与されたときにＣ−ＫＩＴ／ＳＣＦシグナル伝達を遮断しなければ、改善された治療指標を示すこととなる。つまり、腫瘍標的化の改善が導かれ、しかし骨髄毒性は低減される（Ｌ’Ｉｔａｌｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２４（１４）：３４６５−３４７４，２０１８）。Ｃ−ＫＩＴ／ＳＣＦシグナル伝達阻害の可能性は低下し、一方でＣ−ＫＩＴ細胞外ドメインへの高いアフィニティ結合は維持されていることで、例えばＣＤ３ライゲーション、ＣＤ１６Ａライゲーション、またはＣＤ４７遮断を介した免疫標的化などにおける、アーム化抗Ｃ−ＫＩＴ抗体の他の形態の治療指標の改善に対しても有益であることが証明されるであろう。したがって、本明細書に記載されるクローン、例えばＩｇＧ１−４Ｍ形式のＭＨ１およびＭＨ５−ＤＩなどは、アーム化抗Ｃ−ＫＩＴ抗体の開発に関し、ｈ３７Ｍ−ＩｇＧ１を超える以下の理想的な改善特性の組み合わせを有している：低い免疫原性、高いアフィニティ／高い特異性のＣ−ＫＩＴ標的化、内部移行を介した毒素送達の高い有効性、Ｃ−ＫＩＴ／ＳＣＦシグナル伝達阻害の可能性の低さ、およびヒトＦｃγ受容体との相互作用が無いこと。
【０２０２】
本発明は好ましい実施形態または例示的実施形態を参照して記載されているが、当業者であれば、本発明の主旨および範囲を逸脱することなくそれらに対する様々な改変および変動を行うことが可能であること、およびそうした改変は本明細書において予期されることが明白であると認識するであろう。本明細書に開示される、および添付の請求の範囲に記載される特定の実施形態に関し、限定は意図されておらず、何らの示唆もないものとする。
【０２０３】
本明細書に引用されるすべての文献は、その全体を参照することにより援用される。
【０２０４】
【表１】
2021513323.tif 000003
【表２】
2021513323.tif 000004
【表３−１】
2021513323.tif 000005
【表３−２】
2021513323.tif 000006
【表４−１】
2021513323.tif 000007
【表４−２】
2021513323.tif 000008
【表５】
2021513323.tif 000009
【表６−１】
2021513323.tif 000010
【表６−２】
2021513323.tif 000011
【表７】
2021513323.tif 000012
【表８】
2021513323.tif 000013
【表９】
2021513323.tif 000014
【表１０】
2021513323.tif 000015
【表１１】
2021513323.tif 000016
【０２０５】
表１２．抗体可変領域アミノ酸配列の例。
抗体ＭＨ１の重鎖可変（ＶＨ）領域
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMNWVRQAPGQGLEWMGRIYPGSGNTYYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGVYYYDYWGQGTLVTVSS  (配列番号185)
【０２０６】
抗体ＭＨ１  ＶＬ軽鎖可変（ＶＬ）領域
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRTNLAWFQQKPGKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPRTFGGGTKVEIK (配列番号186)
【０２０７】
抗体ＭＨ５−ＤＩの重鎖可変（ＶＨ）領域
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMNWVRQAPGQGLEWMGRIYPGSGNTYYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGVYYYDYWGQGTLVTVSS (配列番号187)
【０２０８】
抗体ＭＨ５−ＤＩ軽鎖可変（ＶＬ）領域
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRTNLAWFQQKPGKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYANYPRTFGGGTKVEIK (配列番号188)
【０２０９】
抗体ＭＨ５重鎖可変（ＶＨ）領域
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMNWVRQAPGQGLEWMGRIYPGSGNTYYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGVYYYDYWGQGTLVTVSS (配列番号189)
【０２１０】
抗体ＭＨ５軽鎖可変（ＶＬ）領域
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRTNLAWFQQKPGKAPKSLIYSASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYANYPRTFGGGTKVEIK (配列番号190)
【０２１１】
抗体ＥＣ７の重鎖可変（ＶＨ）領域
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMNWVRQAPGQGLEWMGRIYPGSGNTYYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGVYYYDYWGQGTLVTVSS (配列番号191)
【０２１２】
抗体ＥＣ７軽鎖可変（ＶＬ）領域
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRTNLAWFQQKPGKAPKSLIYSASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPRTFGGGTKVEIK (配列番号192)
【０２１３】
抗体ＥＣ２の重鎖可変（ＶＨ）領域
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMNWVRQAPGQGLEWMGRIYPGSGNTYYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGVYYLDYWGQGTLVTVSS (配列番号193)
【０２１４】
抗体ＥＣ２軽鎖可変（ＶＬ）領域
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRTNVAWLQQKPGKAPKSLIYSASYRQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPRTFGGGTKVEIK (配列番号194)
【０２１５】
抗体Ｆ−Ｃ５の重鎖可変（ＶＨ）領域
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMNWVRQAPGQGLEWMGRIYPGSGNTYYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGVYYFDEWGQGTLVTVSS (配列番号195)
【０２１６】
抗体Ｆ−Ｃ５軽鎖可変（ＶＬ）領域
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGVRTNLAWFQQKPGKAPKSLIYAASSRQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPRTFGGGTKVEIK
(配列番号196)
【０２１７】
表１３．抗体Ｆｃ領域アミノ酸配列の例。
ヒトＩｇＧ１野生型
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (配列番号197)
【０２１８】
ヒトＩｇＧ１−３Ｍ
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (配列番号198)
【０２１９】
ヒトＩｇＧ１−４Ｍ
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPASIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (配列番号199)
【０２２０】
ヒトＩｇＧ１野生型「ＲＥＥＭ」アロタイプ
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (配列番号200)
【０２２１】
ヒトＩｇＧ１−３Ｍ「ＲＥＥＭ」アロタイプ
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (配列番号201)
【０２２２】
ヒトＩｇＧ１−４Ｍ「ＲＥＥＭ」アロタイプ
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPASIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (配列番号202)
【０２２３】
表１４．ヒトＣ−ＫＩＴのアミノ酸配列およびヌクレオチド配列の例。
ヒトＣ−ＫＩＴタンパク質
MRGARGAWDFLCVLLLLLRVQTGSSQPSVSPGEPSPPSIHPGKSDLIVRVGDEIRLLCTDPGFVKWTFEILDETNENKQNEWITEKAEATNTGKYTCTNKHGLSNSIYVFVRDPAKLFLVDRSLYGKEDNDTLVRCPLTDPEVTNYSLKGCQGKPLPKDLRFIPDPKAGIMIKSVKRAYHRLCLHCSVDQEGKSVLSEKFILKVRPAFKAVPVVSVSKASYLLREGEEFTVTCTIKDVSSSVYSTWKRENSQTKLQEKYNSWHHGDFNYERQATLTISSARVNDSGVFMCYANNTFGSANVTTTLEVVDKGFINIFPMINTTVFVNDGENVDLIVEYEAFPKPEHQQWIYMNRTFTDKWEDYPKSENESNIRYVSELHLTRLKGTEGGTYTFLVSNSDVNAAIAFNVYVNTKPEILTYDRLVNGMLQCVAAGFPEPTIDWYFCPGTEQRCSASVLPVDVQTLNSSGPPFGKLVVQSSIDSSAFKHNGTVECKAYNDVGKTSAYFNFAFKGNNKEQIHPHTLFTPLLIGFVIVAGMMCIIVMILTYKYLQKPMYEVQWKVVEEINGNNYVYIDPTQLPYDHKWEFPRNRLSFGKTLGAGAFGKVVEATAYGLIKSDAAMTVAVKMLKPSAHLTEREALMSELKVLSYLGNHMNIVNLLGACTIGGPTLVITEYCCYGDLLNFLRRKRDSFICSKQEDHAEAALYKNLLHSKESSCSDSTNEYMDMKPGVSYVVPTKADKRRSVRIGSYIERDVTPAIMEDDELAIDLEDLLSFSYQVAKGMAFLASKNCIHRDLAARNILLTHGRITKICDFGLARDIKNDSNYVVKGNARLPVKWMAHESIFNCVYTFESDVWSYGIFLWELFSLGSSPYPGMPVDSKFYKMIKEGFRMLSPEHAPAEMYDIMKTCWDADPLKRPTFKQIVQLIEKQISESTNHIYSNLANCSPNRQKPVVDHSVRINSVGSTASSSQPLLVHDDV
(配列番号208)
【０２２４】
ヒトＣ−ＫＩＴタンパク質、転写バリアント２
TCTGGGGGCTCGGCTTTGCCGCGCTCGCTGCACTTGGGCGAGAGCTGGAACGTGGACCAGAGCTCGGATCCCATCGCAGCTACCGCGATGAGAGGCGCTCGCGGCGCCTGGGATTTTCTCTGCGTTCTGCTCCTACTGCTTCGCGTCCAGACAGGCTCTTCTCAACCATCTGTGAGTCCAGGGGAACCGTCTCCACCATCCATCCATCCAGGAAAATCAGACTTAATAGTCCGCGTGGGCGACGAGATTAGGCTGTTATGCACTGATCCGGGCTTTGTCAAATGGACTTTTGAGATCCTGGATGAAACGAATGAGAATAAGCAGAATGAATGGATCACGGAAAAGGCAGAAGCCACCAACACCGGCAAATACACGTGCACCAACAAACACGGCTTAAGCAATTCCATTTATGTGTTTGTTAGAGATCCTGCCAAGCTTTTCCTTGTTGACCGCTCCTTGTATGGGAAAGAAGACAACGACACGCTGGTCCGCTGTCCTCTCACAGACCCAGAAGTGACCAATTATTCCCTCAAGGGGTGCCAGGGGAAGCCTCTTCCCAAGGACTTGAGGTTTATTCCTGACCCCAAGGCGGGCATCATGATCAAAAGTGTGAAACGCGCCTACCATCGGCTCTGTCTGCATTGTTCTGTGGACCAGGAGGGCAAGTCAGTGCTGTCGGAAAAATTCATCCTGAAAGTGAGGCCAGCCTTCAAAGCTGTGCCTGTTGTGTCTGTGTCCAAAGCAAGCTATCTTCTTAGGGAAGGGGAAGAATTCACAGTGACGTGCACAATAAAAGATGTGTCTAGTTCTGTGTACTCAACGTGGAAAAGAGAAAACAGTCAGACTAAACTACAGGAGAAATATAATAGCTGGCATCACGGTGACTTCAATTATGAACGTCAGGCAACGTTGACTATCAGTTCAGCGAGAGTTAATGATTCTGGAGTGTTCATGTGTTATGCCAATAATACTTTTGGATCAGCAAATGTCACAACAACCTTGGAAGTAGTAGATAAAGGATTCATTAATATCTTCCCCATGATAAACACTACAGTATTTGTAAACGATGGAGAAAATGTAGATTTGATTGTTGAATATGAAGCATTCCCCAAACCTGAACACCAGCAGTGGATCTATATGAACAGAACCTTCACTGATAAATGGGAAGATTATCCCAAGTCTGAGAATGAAAGTAATATCAGATACGTAAGTGAACTTCATCTAACGAGATTAAAAGGCACCGAAGGAGGCACTTACACATTCCTAGTGTCCAATTCTGACGTCAATGCTGCCATAGCATTTAATGTTTATGTGAATACAAAACCAGAAATCCTGACTTACGACAGGCTCGTGAATGGCATGCTCCAATGTGTGGCAGCAGGATTCCCAGAGCCCACAATAGATTGGTATTTTTGTCCAGGAACTGAGCAGAGATGCTCTGCTTCTGTACTGCCAGTGGATGTGCAGACACTAAACTCATCTGGGCCACCGTTTGGAAAGCTAGTGGTTCAGAGTTCTATAGATTCTAGTGCATTCAAGCACAATGGCACGGTTGAATGTAAGGCTTACAACGATGTGGGCAAGACTTCTGCCTATTTTAACTTTGCATTTAAAGGTAACAACAAAGAGCAAATCCATCCCCACACCCTGTTCACTCCTTTGCTGATTGGTTTCGTAATCGTAGCTGGCATGATGTGCATTATTGTGATGATTCTGACCTACAAATATTTACAGAAACCCATGTATGAAGTACAGTGGAAGGTTGTTGAGGAGATAAATGGAAACAATTATGTTTACATAGACCCAACACAACTTCCTTATGATCACAAATGGGAGTTTCCCAGAAACAGGCTGAGTTTTGGGAAAACCCTGGGTGCTGGAGCTTTCGGGAAGGTTGTTGAGGCAACTGCTTATGGCTTAATTAAGTCAGATGCGGCCATGACTGTCGCTGTAAAGATGCTCAAGCCGAGTGCCCATTTGACAGAACGGGAAGCCCTCATGTCTGAACTCAAAGTCCTGAGTTACCTTGGTAATCACATGAATATTGTGAATCTACTTGGAGCCTGCACCATTGGAGGGCCCACCCTGGTCATTACAGAATATTGTTGCTATGGTGATCTTTTGAATTTTTTGAGAAGAAAACGTGATTCATTTATTTGTTCAAAGCAGGAAGATCATGCAGAAGCTGCACTTTATAAGAATCTTCTGCATTCAAAGGAGTCTTCCTGCAGCGATAGTACTAATGAGTACATGGACATGAAACCTGGAGTTTCTTATGTTGTCCCAACCAAGGCCGACAAAAGGAGATCTGTGAGAATAGGCTCATACATAGAAAGAGATGTGACTCCCGCCATCATGGAGGATGACGAGTTGGCCCTAGACTTAGAAGACTTGCTGAGCTTTTCTTACCAGGTGGCAAAGGGCATGGCTTTCCTCGCCTCCAAGAATTGTATTCACAGAGACTTGGCAGCCAGAAATATCCTCCTTACTCATGGTCGGATCACAAAGATTTGTGATTTTGGTCTAGCCAGAGACATCAAGAATGATTCTAATTATGTGGTTAAAGGAAACGCTCGACTACCTGTGAAGTGGATGGCACCTGAAAGCATTTTCAACTGTGTATACACGTTTGAAAGTGACGTCTGGTCCTATGGGATTTTTCTTTGGGAGCTGTTCTCTTTAGGAAGCAGCCCCTATCCTGGAATGCCGGTCGATTCTAAGTTCTACAAGATGATCAAGGAAGGCTTCCGGATGCTCAGCCCTGAACACGCACCTGCTGAAATGTATGACATAATGAAGACTTGCTGGGATGCAGATCCCCTAAAAAGACCAACATTCAAGCAAATTGTTCAGCTAATTGAGAAGCAGATTTCAGAGAGCACCAATCATATTTACTCCAACTTAGCAAACTGCAGCCCCAACCGACAGAAGCCCGTGGTAGACCATTCTGTGCGGATCAATTCTGTCGGCAGCACCGCTTCCTCCTCCCAGCCTCTGCTTGTGCACGACGATGTCTGAGCAGAATCAGTGTTTGGGTCACCCCTCCAGGAATGATCTCTTCTTTTGGCTTCCATGATGGTTATTTTCTTTTCTTTCAACTTGCATCCAACTCCAGGATAGTGGGCACCCCACTGCAATCCTGTCTTTCTGAGCACACTTTAGTGGCCGATGATTTTTGTCATCAGCCACCATCCTATTGCAAAGGTTCCAACTGTATATATTCCCAATAGCAACGTAGCTTCTACCATGAACAGAAAACATTCTGATTTGGAAAAAGAGAGGGAGGTATGGACTGGGGGCCAGAGTCCTTTCCAAGGCTTCTCCAATTCTGCCCAAAAATATGGTTGATAGTTTACCTGAATAAATGGTAGTAATCACAGTTGGCCTTCAGAACCATCCATAGTAGTATGATGATACAAGATTAGAAGCTGAAAACCTAAGTCCTTTATGTGGAAAACAGAACATCATTAGAACAAAGGACAGAGTATGAACACCTGGGCTTAAGAAATCTAGTATTTCATGCTGGGAATGAGACATAGGCCATGAAAAAAATGATCCCCAAGTGTGAACAAAAGATGCTCTTCTGTGGACCACTGCATGAGCTTTTATACTACCGACCTGGTTTTTAAATAGAGTTTGCTATTAGAGCATTGAATTGGAGAGAAGGCCTCCCTAGCCAGCACTTGTATATACGCATCTATAAATTGTCCGTGTTCATACATTTGAGGGGAAAACACCATAAGGTTTCGTTTCTGTATACAACCCTGGCATTATGTCCACTGTGTATAGAAGTAGATTAAGAGCCATATAAGTTTGAAGGAAACAGTTAATACCATTTTTTAAGGAAACAATATAACCACAAAGCACAGTTTGAACAAAATCTCCTCTTTTAGCTGATGAACTTATTCTGTAGATTCTGTGGAACAAGCCTATCAGCTTCAGAATGGCATTGTACTCAATGGATTTGATGCTGTTTGACAAAGTTACTGATTCACTGCATGGCTCCCACAGGAGTGGGAAAACACTGCCATCTTAGTTTGGATTCTTATGTAGCAGGAAATAAAGTATAGGTTTAGCCTCCTTCGCAGGCATGTCCTGGACACCGGGCCAGTATCTATATATGTGTATGTACGTTTGTATGTGTGTAGACAAATATTTGGAGGGGTATTTTTGCCCTGAGTCCAAGAGGGTCCTTTAGTACCTGAAAAGTAACTTGGCTTTCATTATTAGTACTGCTCTTGTTTCTTTTCACATAGCTGTCTAGAGTAGCTTACCAGAAGCTTCCATAGTGGTGCAGAGGAAGTGGAAGGCATCAGTCCCTATGTATTTGCAGTTCACCTGCACTTAAGGCACTCTGTTATTTAGACTCATCTTACTGTACCTGTTCCTTAGACCTTCCATAATGCTACTGTCTCACTGAAACATTTAAATTTTACCCTTTAGACTGTAGCCTGGATATTATTCTTGTAGTTTACCTCTTTAAAAACAAAACAAAACAAAACAAAAAACTCCCCTTCCTCACTGCCCAATATAAAAGGCAAATGTGTACATGGCAGAGTTTGTGTGTTGTCTTGAAAGATTCAGGTATGTTGCCTTTATGGTTTCCCCCTTCTACATTTCTTAGACTACATTTAGAGAACTGTGGCCGTTATCTGGAAGTAACCATTTGCACTGGAGTTCTATGCTCTCGCACCTTTCCAAAGTTAACAGATTTTGGGGTTGTGTTGTCACCCAAGAGATTGTTGTTTGCCATACTTTGTCTGAAAAATTCCTTTGTGTTTCTATTGACTTCAATGATAGTAAGAAAAGTGGTTGTTAGTTATAGATGTCTAGGTACTTCAGGGGCACTTCATTGAGAGTTTTGTCTTGGATATTCTTGAAAGTTTATATTTTTATAATTTTTTCTTACATCAGATGTTTCTTTGCAGTGGCTTAATGTTTGAAATTATTTTGTGGCTTTTTTTGTAAATATTGAAATGTAGCAATAATGTCTTTTGAATATTCCCAAGCCCATGAGTCCTTGAAAATATTTTTTATATATACAGTAACTTTATGTGTAAATACATAAGCGGCGTAAGTTTAAAGGATGTTGGTGTTCCACGTGTTTTATTCCTGTATGTTGTCCAATTGTTGACAGTTCTGAAGAATTCTAATAAAATGTACATATATAAATCAAAAAAAAAAAAAAAA (配列番号209)
【０２２５】
ヒトＣ−ＫＩＴタンパク質、転写バリアント２
TCTGGGGGCTCGGCTTTGCCGCGCTCGCTGCACTTGGGCGAGAGCTGGAACGTGGACCAGAGCTCGGATCCCATCGCAGCTACCGCGATGAGAGGCGCTCGCGGCGCCTGGGATTTTCTCTGCGTTCTGCTCCTACTGCTTCGCGTCCAGACAGGCTCTTCTCAACCATCTGTGAGTCCAGGGGAACCGTCTCCACCATCCATCCATCCAGGAAAATCAGACTTAATAGTCCGCGTGGGCGACGAGATTAGGCTGTTATGCACTGATCCGGGCTTTGTCAAATGGACTTTTGAGATCCTGGATGAAACGAATGAGAATAAGCAGAATGAATGGATCACGGAAAAGGCAGAAGCCACCAACACCGGCAAATACACGTGCACCAACAAACACGGCTTAAGCAATTCCATTTATGTGTTTGTTAGAGATCCTGCCAAGCTTTTCCTTGTTGACCGCTCCTTGTATGGGAAAGAAGACAACGACACGCTGGTCCGCTGTCCTCTCACAGACCCAGAAGTGACCAATTATTCCCTCAAGGGGTGCCAGGGGAAGCCTCTTCCCAAGGACTTGAGGTTTATTCCTGACCCCAAGGCGGGCATCATGATCAAAAGTGTGAAACGCGCCTACCATCGGCTCTGTCTGCATTGTTCTGTGGACCAGGAGGGCAAGTCAGTGCTGTCGGAAAAATTCATCCTGAAAGTGAGGCCAGCCTTCAAAGCTGTGCCTGTTGTGTCTGTGTCCAAAGCAAGCTATCTTCTTAGGGAAGGGGAAGAATTCACAGTGACGTGCACAATAAAAGATGTGTCTAGTTCTGTGTACTCAACGTGGAAAAGAGAAAACAGTCAGACTAAACTACAGGAGAAATATAATAGCTGGCATCACGGTGACTTCAATTATGAACGTCAGGCAACGTTGACTATCAGTTCAGCGAGAGTTAATGATTCTGGAGTGTTCATGTGTTATGCCAATAATACTTTTGGATCAGCAAATGTCACAACAACCTTGGAAGTAGTAGATAAAGGATTCATTAATATCTTCCCCATGATAAACACTACAGTATTTGTAAACGATGGAGAAAATGTAGATTTGATTGTTGAATATGAAGCATTCCCCAAACCTGAACACCAGCAGTGGATCTATATGAACAGAACCTTCACTGATAAATGGGAAGATTATCCCAAGTCTGAGAATGAAAGTAATATCAGATACGTAAGTGAACTTCATCTAACGAGATTAAAAGGCACCGAAGGAGGCACTTACACATTCCTAGTGTCCAATTCTGACGTCAATGCTGCCATAGCATTTAATGTTTATGTGAATACAAAACCAGAAATCCTGACTTACGACAGGCTCGTGAATGGCATGCTCCAATGTGTGGCAGCAGGATTCCCAGAGCCCACAATAGATTGGTATTTTTGTCCAGGAACTGAGCAGAGATGCTCTGCTTCTGTACTGCCAGTGGATGTGCAGACACTAAACTCATCTGGGCCACCGTTTGGAAAGCTAGTGGTTCAGAGTTCTATAGATTCTAGTGCATTCAAGCACAATGGCACGGTTGAATGTAAGGCTTACAACGATGTGGGCAAGACTTCTGCCTATTTTAACTTTGCATTTAAAGAGCAAATCCATCCCCACACCCTGTTCACTCCTTTGCTGATTGGTTTCGTAATCGTAGCTGGCATGATGTGCATTATTGTGATGATTCTGACCTACAAATATTTACAGAAACCCATGTATGAAGTACAGTGGAAGGTTGTTGAGGAGATAAATGGAAACAATTATGTTTACATAGACCCAACACAACTTCCTTATGATCACAAATGGGAGTTTCCCAGAAACAGGCTGAGTTTTGGGAAAACCCTGGGTGCTGGAGCTTTCGGGAAGGTTGTTGAGGCAACTGCTTATGGCTTAATTAAGTCAGATGCGGCCATGACTGTCGCTGTAAAGATGCTCAAGCCGAGTGCCCATTTGACAGAACGGGAAGCCCTCATGTCTGAACTCAAAGTCCTGAGTTACCTTGGTAATCACATGAATATTGTGAATCTACTTGGAGCCTGCACCATTGGAGGGCCCACCCTGGTCATTACAGAATATTGTTGCTATGGTGATCTTTTGAATTTTTTGAGAAGAAAACGTGATTCATTTATTTGTTCAAAGCAGGAAGATCATGCAGAAGCTGCACTTTATAAGAATCTTCTGCATTCAAAGGAGTCTTCCTGCAGCGATAGTACTAATGAGTACATGGACATGAAACCTGGAGTTTCTTATGTTGTCCCAACCAAGGCCGACAAAAGGAGATCTGTGAGAATAGGCTCATACATAGAAAGAGATGTGACTCCCGCCATCATGGAGGATGACGAGTTGGCCCTAGACTTAGAAGACTTGCTGAGCTTTTCTTACCAGGTGGCAAAGGGCATGGCTTTCCTCGCCTCCAAGAATTGTATTCACAGAGACTTGGCAGCCAGAAATATCCTCCTTACTCATGGTCGGATCACAAAGATTTGTGATTTTGGTCTAGCCAGAGACATCAAGAATGATTCTAATTATGTGGTTAAAGGAAACGCTCGACTACCTGTGAAGTGGATGGCACCTGAAAGCATTTTCAACTGTGTATACACGTTTGAAAGTGACGTCTGGTCCTATGGGATTTTTCTTTGGGAGCTGTTCTCTTTAGGAAGCAGCCCCTATCCTGGAATGCCGGTCGATTCTAAGTTCTACAAGATGATCAAGGAAGGCTTCCGGATGCTCAGCCCTGAACACGCACCTGCTGAAATGTATGACATAATGAAGACTTGCTGGGATGCAGATCCCCTAAAAAGACCAACATTCAAGCAAATTGTTCAGCTAATTGAGAAGCAGATTTCAGAGAGCACCAATCATATTTACTCCAACTTAGCAAACTGCAGCCCCAACCGACAGAAGCCCGTGGTAGACCATTCTGTGCGGATCAATTCTGTCGGCAGCACCGCTTCCTCCTCCCAGCCTCTGCTTGTGCACGACGATGTCTGAGCAGAATCAGTGTTTGGGTCACCCCTCCAGGAATGATCTCTTCTTTTGGCTTCCATGATGGTTATTTTCTTTTCTTTCAACTTGCATCCAACTCCAGGATAGTGGGCACCCCACTGCAATCCTGTCTTTCTGAGCACACTTTAGTGGCCGATGATTTTTGTCATCAGCCACCATCCTATTGCAAAGGTTCCAACTGTATATATTCCCAATAGCAACGTAGCTTCTACCATGAACAGAAAACATTCTGATTTGGAAAAAGAGAGGGAGGTATGGACTGGGGGCCAGAGTCCTTTCCAAGGCTTCTCCAATTCTGCCCAAAAATATGGTTGATAGTTTACCTGAATAAATGGTAGTAATCACAGTTGGCCTTCAGAACCATCCATAGTAGTATGATGATACAAGATTAGAAGCTGAAAACCTAAGTCCTTTATGTGGAAAACAGAACATCATTAGAACAAAGGACAGAGTATGAACACCTGGGCTTAAGAAATCTAGTATTTCATGCTGGGAATGAGACATAGGCCATGAAAAAAATGATCCCCAAGTGTGAACAAAAGATGCTCTTCTGTGGACCACTGCATGAGCTTTTATACTACCGACCTGGTTTTTAAATAGAGTTTGCTATTAGAGCATTGAATTGGAGAGAAGGCCTCCCTAGCCAGCACTTGTATATACGCATCTATAAATTGTCCGTGTTCATACATTTGAGGGGAAAACACCATAAGGTTTCGTTTCTGTATACAACCCTGGCATTATGTCCACTGTGTATAGAAGTAGATTAAGAGCCATATAAGTTTGAAGGAAACAGTTAATACCATTTTTTAAGGAAACAATATAACCACAAAGCACAGTTTGAACAAAATCTCCTCTTTTAGCTGATGAACTTATTCTGTAGATTCTGTGGAACAAGCCTATCAGCTTCAGAATGGCATTGTACTCAATGGATTTGATGCTGTTTGACAAAGTTACTGATTCACTGCATGGCTCCCACAGGAGTGGGAAAACACTGCCATCTTAGTTTGGATTCTTATGTAGCAGGAAATAAAGTATAGGTTTAGCCTCCTTCGCAGGCATGTCCTGGACACCGGGCCAGTATCTATATATGTGTATGTACGTTTGTATGTGTGTAGACAAATATTTGGAGGGGTATTTTTGCCCTGAGTCCAAGAGGGTCCTTTAGTACCTGAAAAGTAACTTGGCTTTCATTATTAGTACTGCTCTTGTTTCTTTTCACATAGCTGTCTAGAGTAGCTTACCAGAAGCTTCCATAGTGGTGCAGAGGAAGTGGAAGGCATCAGTCCCTATGTATTTGCAGTTCACCTGCACTTAAGGCACTCTGTTATTTAGACTCATCTTACTGTACCTGTTCCTTAGACCTTCCATAATGCTACTGTCTCACTGAAACATTTAAATTTTACCCTTTAGACTGTAGCCTGGATATTATTCTTGTAGTTTACCTCTTTAAAAACAAAACAAAACAAAACAAAAAACTCCCCTTCCTCACTGCCCAATATAAAAGGCAAATGTGTACATGGCAGAGTTTGTGTGTTGTCTTGAAAGATTCAGGTATGTTGCCTTTATGGTTTCCCCCTTCTACATTTCTTAGACTACATTTAGAGAACTGTGGCCGTTATCTGGAAGTAACCATTTGCACTGGAGTTCTATGCTCTCGCACCTTTCCAAAGTTAACAGATTTTGGGGTTGTGTTGTCACCCAAGAGATTGTTGTTTGCCATACTTTGTCTGAAAAATTCCTTTGTGTTTCTATTGACTTCAATGATAGTAAGAAAAGTGGTTGTTAGTTATAGATGTCTAGGTACTTCAGGGGCACTTCATTGAGAGTTTTGTCTTGGATATTCTTGAAAGTTTATATTTTTATAATTTTTTCTTACATCAGATGTTTCTTTGCAGTGGCTTAATGTTTGAAATTATTTTGTGGCTTTTTTTGTAAATATTGAAATGTAGCAATAATGTCTTTTGAATATTCCCAAGCCCATGAGTCCTTGAAAATATTTTTTATATATACAGTAACTTTATGTGTAAATACATAAGCGGCGTAAGTTTAAAGGATGTTGGTGTTCCACGTGTTTTATTCCTGTATGTTGTCCAATTGTTGACAGTTCTGAAGAATTCTAATAAAATGTACATATATAAATCAAAAAAAAAAAAAAAA
(配列番号210)
【図１Ａ】
2021513323.tif 000017
【図１Ｂ】
2021513323.tif 000018
【図２Ａ】
2021513323.tif 000019
【図２Ｂ】
2021513323.tif 000020
【図３Ａ】
2021513323.tif 000021
【図３Ｂ】
2021513323.tif 000022
【図４Ａ】
2021513323.tif 000023
【図４Ｂ】
2021513323.tif 000024
【図４Ｃ】
2021513323.tif 000025
【図４Ｄ】
2021513323.tif 000026
【図４Ｅ】
2021513323.tif 000027
【図５Ａ】
2021513323.tif 000028
【図５Ｂ】
2021513323.tif 000029
【図５Ｃ】
2021513323.tif 000030
【図５Ｄ】
2021513323.tif 000031
【図５Ｅ】
2021513323.tif 000032
【図５Ｆ】
2021513323.tif 000033
【図６Ａ】
2021513323.tif 000034
【図６Ｂ】
2021513323.tif 000035
【図７Ａ】
2021513323.tif 000036
【図７Ｂ】
2021513323.tif 000037
【図８Ａ】
2021513323.tif 000038
【図８Ｂ】
2021513323.tif 000039
【図８Ｃ】
2021513323.tif 000040
【図９Ａ】
2021513323.tif 000041
【図９Ｂ】
2021513323.tif 000042
【図９Ｃ】
2021513323.tif 000043
【図９Ｄ】
2021513323.tif 000044
【図９Ｅ】
2021513323.tif 000045
【図９Ｆ】
2021513323.tif 000046
【図１０Ａ】
2021513323.tif 000047
【図１０Ｂ】
2021513323.tif 000048
【図１０Ｃ】
2021513323.tif 000049
【図１１Ａ】
2021513323.tif 000050
【図１１Ｂ】
2021513323.tif 000051
【図１１Ｃ】
2021513323.tif 000052
【図１１Ｄ】
2021513323.tif 000053
【図１１Ｅ】
2021513323.tif 000054
【図１１Ｆ】
2021513323.tif 000055
【図１１Ｇ】
2021513323.tif 000056
【図１１Ｈ】
2021513323.tif 000057
【図１２Ａ】
2021513323.tif 000058
【図１２Ｂ】
2021513323.tif 000059
【図１２Ｃ】
2021513323.tif 000060
【図１３Ａ】
2021513323.tif 000061
【図１３Ｂ】
2021513323.tif 000062
【図１３Ｃ】
2021513323.tif 000063
【図１４Ａ】
2021513323.tif 000064
【図１４Ｂ】
2021513323.tif 000065
【図１４Ｃ】
2021513323.tif 000066
【図１５Ａ】
2021513323.tif 000067
【図１５Ｂ】
2021513323.tif 000068
【図１６】
2021513323.tif 000069
【配列表】
2021513323000001.app
【国際調査報告】
2021513323.tif 000070
2021513323.tif 000071