(57)【要約】  いくつかの実施態様においてここで提供されるのは、ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体を含む、免疫細胞(例えば、ナチュラルキラー(ＮＫ)細胞)ベースの組成物である。ある実施態様において、ＣＡＲの抗ＣＤ１９結合因子部分はヒト化されている。いくつかの実施態様において、ヒト化抗ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞はＣＡＲの発現増強ならびに細胞毒性および／または持続性増強を示す。いくつかの実施態様は、免疫療法における免疫細胞を発現する抗ＣＤ１９  ＣＡＲを使用する方法に関する。
2021528048.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチドであって、キメラ抗原受容体が
細胞外抗ＣＤ１９結合部分(ここで、抗ＣＤ１９結合部分は一本鎖フラグメント可変(ｓｃＦｖ)の可変重(ＶＨ)ドメインおよびｓｃＦｖの可変軽(ＶＬ)ドメインを含む)；
ヒンジ(ここで、ヒンジはＣＤ８アルファヒンジである)；
膜貫通ドメイン(ここで、膜貫通ドメインはＣＤ８アルファ膜貫通ドメインを含む)；および
細胞内シグナル伝達ドメイン(ここで、細胞内シグナル伝達ドメインは配列番号５に少なくとも９５％配列同一性を有する配列によりコードされるＯＸ４０サブドメイン、
配列番号７に少なくとも９５％配列同一性を有する配列によりコードされるＣＤ３ゼータサブドメインを含む)
を含み、
配列番号１１に少なくとも９５％配列同一性を有する配列によりコードされる膜結合インターロイキン−１５(ｍｂＩＬ１５)もコードする、
ポリヌクレオチド。
【請求項２】
コードされたＶＨドメインが配列番号１２０のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３】
コードされたＶＬドメインが配列番号１１８のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４】
ポリヌクレオチドが配列番号１３３、配列番号１３４および配列番号１３５からなる群から選択される少なくとも１つの重鎖相補性決定領域(ＣＤＲ)を含むＶＨドメインをコードし、かつポリヌクレオチドが配列番号１２７、配列番号１２８および配列番号１２９からなる群から選択される少なくとも１つの軽鎖相補性決定領域(ＣＤＲ)を含むＶＬドメインをコードする、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５】
ＶＨドメインが配列番号３３に示すＶＨドメインアミノ酸配列のヒト化に由来しかつＶＬドメインが配列番号３２に示すＶＬドメインアミノ酸配列のヒト化に由来する、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６】
ポリヌクレオチドが配列番号１８７に示すアミノ酸配列と少なくとも９５％配列同一性を有するＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードする、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項７】
ポリヌクレオチドが配列番号１８７に示すアミノ酸配列を含むＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードする、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項８】
ＯＸ４０サブドメインが配列番号５によりコードされる、請求項１〜７の何れかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項９】
コードされたＯＸ４０サブドメインが配列番号６のアミノ酸を含む、請求項１〜７の何れかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項１０】
ＣＤ３ゼータサブドメインが配列番号７によりコードされる、請求項１〜７の何れかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項１１】
コードされたＣＤ３ゼータサブドメインが配列番号８のアミノ酸を含む、請求項１〜７の何れかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項１２】
ｍｂＩＬ１５が配列番号１１によりコードされる、請求項１〜７の何れかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項１３】
コードされたｍｂＩＬ１５が配列番号１２のアミノ酸配列を含む、請求項１〜７の何れかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項１４】
ＶＨドメインが配列番号１２０、配列番号１２１、配列番号１２２および配列番号１２３から選択されるＶＨドメインを含みかつＶＬドメインが配列番号１１７、配列番号１１８および配列番号１１９から選択されるＶＬドメインを含む、請求項１〜５の何れかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項１５】
ポリヌクレオチドが配列番号１２７、配列番号１２８および配列番号１２９からなる群から選択される少なくとも１つの軽鎖相補性決定領域(ＣＤＲ)を含むＶＬドメインをコードする、請求項１〜５の何れかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項１６】
請求項１〜７の何れかに記載のポリヌクレオチドによりコードされるキメラ抗原受容体を発現するナチュラルキラー(ＮＫ)細胞を含む組成物を癌を有する対象に投与することを含む、癌を処置する方法。
【請求項１７】
ＮＫ細胞が対象ではないドナーからの同種細胞である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
ＮＫ細胞が対象からの自己細胞である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
対象にインターロイキン２をさらに投与することを含む、請求項１６〜１８の何れかに記載の方法。
【請求項２０】
ＮＫ細胞投与前に対象に化学療法処置を投与することをさらに含む、請求項１６〜１９の何れかに記載の方法。
【請求項２１】
化学療法処置が対象におけるリンパ球枯渇を誘発する、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
ＣＤ８アルファヒンジが配列番号１によりコードされる、請求項１〜１５の何れかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項２３】
ＣＤ８アルファ膜貫通ドメインが配列番号３によりコードされる、請求項１〜１５または２２の何れかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項２４】
ポリヌクレオチドがＤＡＰ１０ドメインをコードしない、請求項１〜１５または２２〜２３の何れかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項２５】
ポリヌクレオチドがＤＡＰ１２ドメインをコードしない、請求項１〜１５または２２〜２４の何れかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項２６】
ポリヌクレオチドがシグナル伝達サブドメインとしてＣＤ４４およびＣＤ２７の１以上をさらにコードする、請求項１〜１５または２２〜２５の何れかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項２７】
ポリヌクレオチドが検出タグをさらにコードする、請求項１〜１５または２２〜２６の何れかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項２８】
ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチドであって、キメラ抗原受容体が
細胞外抗ＣＤ１９結合部分(ここで、抗ＣＤ１９結合部分は一本鎖フラグメント可変(ｓｃＦｖ)の可変重(ＶＨ)ドメインおよびｓｃＦｖの可変軽(ＶＬ)ドメインを含み、
コードされたＶＨドメインは配列番号１３３、配列番号１３４および配列番号１３５からなる群から選択される少なくとも１つの重鎖相補性決定領域(ＣＤＲ)を含み、
コードされたＶＬドメインが配列番号１２７、配列番号１２８および配列番号１２９からなる群から選択される少なくとも１つの軽鎖相補性決定領域(ＣＤＲ)を含む)；
ヒンジドメイン；
膜貫通ドメイン；
細胞内シグナル伝達ドメイン(ここで、細胞内シグナル伝達ドメインはＯＸ４０サブドメインおよびＣＤ３ゼータサブドメインを含む)
を含み、
膜結合インターロイキン−１５(ｍｂＩＬ１５)もコードする、
ポリヌクレオチド。
【請求項２９】
コードされたＶＨドメインが配列番号１２０のアミノ酸配列を含む、請求項２８に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３０】
コードされたＶＬドメインが配列番号１１８のアミノ酸配列を含む、請求項２８に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３１】
ＣＤ３ゼータサブドメインが配列番号７に少なくとも９５％配列同一性を有する配列によりコードされ、ここで、ＯＸ４０サブドメインが配列番号５に少なくとも９５％配列同一性を有する配列によりコードされ、ｍｂＩＬ１５が配列番号１１に少なくとも９５％配列同一性を有する配列によりコードされる、請求項２８に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３２】
ＶＨドメインが配列番号３３に示すＶＨドメインアミノ酸配列のヒト化に由来しかつＶＬドメインが配列番号３２に示すＶＬドメインアミノ酸配列のヒト化に由来する、請求項２８に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３３】
ポリヌクレオチドが配列番号１８７に示すアミノ酸配列と少なくとも９５％配列同一性を有するＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードする、請求項２８に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３４】
ポリヌクレオチドが配列番号１８７に示すアミノ酸配列を含むＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードする、請求項２８に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３５】
ＯＸ４０サブドメインが配列番号５によりコードされる、請求項２８〜３４の何れかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項３６】
コードされたＯＸ４０サブドメインが配列番号６のアミノ酸を含む、請求項２８〜３４の何れかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項３７】
ＣＤ３ゼータサブドメインが配列番号７によりコードされる、請求項２８〜３４の何れかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項３８】
コードされたＣＤ３ゼータサブドメインが配列番号８のアミノ酸を含む、請求項２８〜３４の何れかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項３９】
ｍｂＩＬ１５が配列番号１１によりコードされる、請求項２８〜３４の何れかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項４０】
コードされたｍｂＩＬ１５が配列番号１２のアミノ酸配列を含む、請求項２８〜３４の何れかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項４１】
請求項２８〜４０の何れかに記載のポリヌクレオチドによりコードされるキメラ抗原受容体を発現するナチュラルキラー(ＮＫ)細胞を含む組成物を癌を有する対象に投与することを含む、癌を処置する方法。
【請求項４２】
ＮＫ細胞が対象ではないドナーからの同種細胞である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
ＮＫ細胞が対象からの自己細胞である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
対象にインターロイキン２をさらに投与することを含む、請求項４０〜４３の何れかに記載の方法。
【請求項４５】
ＮＫ細胞投与前に対象に化学療法処置を投与することをさらに含む、請求項４０〜４４の何れかに記載の方法。
【請求項４６】
化学療法処置が対象におけるリンパ球枯渇を誘発する、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
ＣＤ８アルファヒンジが配列番号１によりコードされる、請求項２８〜４０の何れかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項４８】
ＣＤ８アルファ膜貫通ドメインが配列番号３によりコードされる、請求項２８〜４０または４７の何れかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項４９】
ポリヌクレオチドがＤＡＰ１０ドメインをコードしない、請求項２８〜４０または４７〜４８の何れかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項５０】
ポリヌクレオチドがＤＡＰ１２ドメインをコードしない、請求項２８〜４０または４７〜４９の何れかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項５１】
ポリヌクレオチドがシグナル伝達サブドメインとしてＣＤ４４およびＣＤ２７の１以上をさらにコードする、請求項２８〜４０または４７〜５０の何れかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項５２】
ポリヌクレオチドが検出タグをさらにコードする、請求項２８〜４０または４７〜５１の何れかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項５３】
請求項１〜１５、２２〜４０または４７〜５２の何れかに記載のポリヌクレオチドによりコードされるＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体を発現する、免疫細胞。
【請求項５４】
免疫細胞がＮＫ細胞である、請求項５３に記載の免疫細胞。
【請求項５５】
免疫細胞が免疫細胞を受ける対象に関して同種である、請求項５３および５４の何れかに記載の免疫細胞。
【請求項５６】
処置を必要とする哺乳動物における癌の処置のための、請求項５３〜５５の何れかに記載の免疫細胞の使用。
【請求項５７】
処置を必要とする哺乳動物における癌処置用医薬の製造のための、請求項５３〜５５の何れかに記載の免疫細胞の使用。
【請求項５８】
処置を必要とする哺乳動物におけるＮＫ細胞の細胞毒性増強用医薬の製造における、請求項１〜１５、２２〜４０または４７〜５２の何れかに記載のポリヌクレオチドの使用。
【請求項５９】
処置を必要とする哺乳動物における癌処置用医薬の製造における、請求項１〜１５、２２〜４０または４７〜５２の何れかに記載のポリヌクレオチドの使用。
【請求項６０】
処置を必要とする哺乳動物における癌の処置のための、請求項１〜１５、２２〜４０または４７〜５２の何れかに記載のポリヌクレオチドの使用。
【請求項６１】
細胞免疫療法を使用して癌を処置する方法であって、
対象にＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体(ＣＡＲ)を発現する免疫細胞の集団を投与することを含み、ここで、ＣＡＲは
細胞外抗ＣＤ１９結合部分(ここで、抗ＣＤ１９結合部分は一本鎖フラグメント可変(ｓｃＦｖ)の可変重(ＶＨ)ドメインおよびｓｃＦｖの可変軽(ＶＬ)ドメインを含む)；
ヒンジ(ここで、ヒンジはＣＤ８アルファヒンジである)；
膜貫通ドメイン(ここで、膜貫通ドメインはＣＤ８アルファ膜貫通ドメインを含む)；および
細胞内シグナル伝達ドメイン{ここで、細胞内シグナル伝達ドメインは
ＯＸ４０サブドメイン(ここで、ＯＸ４０サブドメインが配列番号５に少なくとも９５％配列同一性を有する配列によりコードされる)、
ＣＤ３ゼータサブドメイン(ここで、ＣＤ３ゼータサブドメインは配列番号７に少なくとも９５％配列同一性を有する配列によりコードされる)
を含む}
を含み、
ここで、細胞がまた膜結合インターロイキン−１５(ｍｂＩＬ１５)も発現する(ここで、ｍｂＩＬ１５は配列番号１１に少なくとも９５％配列同一性を有する配列によりコードされる)、
方法。
【請求項６２】
免疫細胞の集団がナチュラルキラー(ＮＫ)細胞を含む、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
免疫細胞の集団が対象に対して同種である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６４】
コードされたＶＨドメインが配列番号１２０のアミノ酸配列を含み、コードされたＶＬドメインが配列番号１１８のアミノ酸配列を含み、ＣＤ３ゼータサブドメインが配列番号７に少なくとも９５％配列同一性を有する配列によりコードされ、ＯＸ４０サブドメインが配列番号５に少なくとも９５％配列同一性を有する配列によりコードされ、そして、ｍｂＩＬ１５が配列番号１１に少なくとも９５％配列同一性を有する配列によりコードされる、請求項６１に記載の方法。
【請求項６５】
ポリヌクレオチドが配列番号１８７に示すアミノ酸配列と少なくとも９５％配列同一性を有するＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードする、請求項６１に記載の方法。
【請求項６６】
投与された集団が約２×１０６細胞／対象体重キログラムを含む、請求項６１〜６５の何れかに記載の方法。
【請求項６７】
投与が静脈内である、請求項６１〜６６の何れかに記載の方法。
【請求項６８】
投与の前に対象におけるリンパ球枯渇をもたらす少なくとも１つの処置がある、請求項６１〜６７の何れかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、米国仮特許出願６２／８１４,１８０(２０１９年３月５日出願)、６２／８９５,９１０(２０１９年９月４日出願)および６２／９３２,１６５(２０１９年１１月７日出願)に基づく優先権を主張し、この各々の内容全体を、引用により本明細書に包含させる。
【０００２】
分野
ここに提供する方法および組成物のある実施態様は、ＣＤ１９指向性受容体に関する。ある実施態様において、受容体はキメラである。ある実施態様は、免疫療法において該キメラ受容体を使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
背景
種々の癌に関するおよび癌細胞が有するどのような特徴がその細胞と健常細胞を特に区別するのに使用できるかのさらなる知識が得られつつあり、癌細胞のこの示差的特徴を利用する治療剤が開発下にある。操作された免疫細胞を用いる免疫療法は、癌処置の一つの試みである。
【０００４】
ASCIIテキストファイルの資料の引用による取り込み
本出願は、これと同時に提出された次のASCIIテキストファイルに含まれる配列表を引用することにより本出願中に取り込む：ファイル名：NKT033WO_ST25.txt；２０２０年２月８日作成、４３４KBサイズ。
【発明の概要】
【０００５】
概要
罹患または損傷細胞を特異的に同定し、反応する特定のターゲティングおよび／またはエフェクター分子を発現するように免疫細胞が操作された免疫療法は、疾患処置の新しい技術的進歩を体現する。これは、全細胞が影響を受け、望ましい結果は患者の生存に十分な健常細胞の維持である化学療法などの多くの伝統的なアプローチとは逆に、少なくとも一部、罹患または損傷細胞を特異的に標的化する能力により、有望な進歩をもたらす。免疫療法のひとつアプローチは、目的の異常細胞の標的化認識および破壊を達成するための、免疫細胞によるキメラ受容体の組み換え発現である。
【０００６】
いくつかの実施態様において、ＣＤ１９指向性キメラ受容体を発現する免疫細胞およびまた免疫細胞の集団がここに提供され、当該キメラ受容体は、細胞外抗ＣＤ１９結合部分、ヒンジおよび／または膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインを含むものである。細胞外抗ＣＤ１９結合部分、ヒンジおよび／または膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインを含むものである。さらに、細胞外抗ＣＤ１９結合部分、ヒンジおよび／または膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチド(およびこれらを細胞に導入するベクター)が提供される。
【０００７】
いくつかの実施態様において、細胞外抗ＣＤ１９結合部分(ここで、抗ＣＤ１９結合部分は一本鎖フラグメント可変(ｓｃＦｖ)の可変重(ＶＨ)ドメインおよびｓｃＦｖの可変軽(ＶＬ)ドメインを含む)、ヒンジ、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメイン(ここで、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＯＸ４０サブドメイン、ＣＤ３ゼータサブドメインを含む)を含む、ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチドが提供される。
【０００８】
いくつかの実施態様において、細胞外抗ＣＤ１９結合部分(ここで、抗ＣＤ１９結合部分は一本鎖フラグメント可変(ｓｃＦｖ)の可変重(ＶＨ)ドメインおよびｓｃＦｖの可変軽(ＶＬ)ドメインを含み、ここで、コードされたＶＨドメインは配列番号１３３、配列番号１３４および配列番号１３５からなる群から選択される少なくとも１つの重鎖相補性決定領域(ＣＤＲ)を含み、コードされたＶＬドメインは配列番号１２７、配列番号１２８および配列番号１２９からなる群から選択される少なくとも１つの軽鎖相補性決定領域(ＣＤＲ)を含む)、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、細胞内シグナル伝達ドメイン(ここで、細胞内シグナル伝達ドメインはＯＸ４０サブドメインおよびＣＤ３ゼータサブドメインを含む)を含む、ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチドが提供される。
【０００９】
いくつかの実施態様において、ポリヌクレオチはまた膜結合インターロイキン−１５(ｍｂＩＬ１５)もコードする。しかしながら、ある実施態様において、別のポリヌクレオチドがｍｂＩＬ１５をコードするのに使用される。いくつかの実施態様において、膜貫通ドメインはＣＤ８アルファ膜貫通ドメイン由来であるかまたはそれを含む。いくつかの実施態様において、ＣＤ８アルファ膜貫通ドメインは配列番号３によりコードされる。いくつかの実施態様において、ヒンジはＣＤ８アルファヒンジ由来であるかまたはそれを含む。いくつかの実施態様において、ＣＤ８アルファヒンジは配列番号１によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＯＸ４０サブドメインは配列番号５と少なくとも９０％(例えば、９０〜９５％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％)配列同一性を有する配列によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＣＤ３ゼータサブドメインは配列番号７と少なくとも９０％(例えば、９０〜９５％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％)配列同一性を有する配列によりコードされる。いくつかの実施態様において、ｍｂＩＬ１５は配列番号１１と少なくとも９０％(例えば、９０〜９５％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％)配列同一性を有する配列によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＯＸ４０ドメインは配列番号５によりコードされ、ＣＤ３ゼータサブドメインは配列番号７によりコードされおよび／またはｍｂＩＬ１５(別々にまたはバイシストロン的の何れかでコードされる)は配列番号１１によりコードされる。いくつかの実施態様において、コードされたＯＸ４０サブドメインは、配列番号６のアミノ酸配列を含み、コードされたＣＤ３ゼータサブドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を含みおよび／またはコードされたｍｂＩＬ１５は(別々にまたはバイシストロン的の何れかでコードされる)は配列番号１２のアミノ酸配列を含む。
【００１０】
いくつかの実施態様において、ＶＨドメインは配列番号１２０、配列番号１２１、配列番号１２２および配列番号１２３から選択されるＶＨドメインを含み、ＶＬドメインは配列番号１１７、配列番号１１８および配列番号１１９から選択されるＶＬドメインを含む。いくつかの実施態様において、ポリヌクレオチドは配列番号１２７、配列番号１２８および配列番号１２９からなる群から選択される少なくとも１つの軽鎖相補性決定領域(ＣＤＲ)を含むＶＬドメインをコードする。いくつかの実施態様において、ポリヌクレオチドは配列番号１３３、配列番号１３４および配列番号１３５からなる群から選択される少なくとも１つの重鎖相補性決定領域(ＣＤＲ)を含むＶＨドメインをコードする。いくつかの実施態様において、ポリヌクレオチドは、コードされたタンパク質の潜在的抗原性の低減および／またはコードされたタンパク質の１個以上の特徴(例えば、標的認識および／または結合特徴)のために設計(例えば、操作)される。故に、いくつかの実施態様によると、抗ＣＤ１９結合部分はある配列を含まない。例えば、いくつかの実施態様によると、ポリヌクレオチドは配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４または配列番号５５の１以上をコードしない。いくつかの実施態様において、コードされたＶＨドメインは配列番号１２０に少なくとも９０％(例えば、９０〜９５％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％)配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、コードされたＶＨドメインは配列番号１２０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、コードされたＶＬドメインは配列番号１１８と少なくとも９０％(例えば、９０〜９５％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％)配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、コードされたＶＬドメインは配列番号１１８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＶＨドメインは親アミノ酸配列由来であり、該親配列から修飾される。例えば、変異、短縮化、伸長、保存的置換または他の修飾が、ドメインのその標的への親和性増加、標的へのアビディティー(avidity)増加および／または配列の潜在的抗原性減少のために導入される。いくつかの実施態様において、ＶＨドメインは配列番号３３に示すＶＨドメインアミノ酸配列のヒト化由来である。同様に、いくつかの実施態様において、ＶＬドメインは配列番号３２に示すＶＬドメインアミノ酸配列のヒト化由来である。いくつかの実施態様において、ポリヌクレオチドは、少なくとも配列番号１８７に示すアミノ酸配列と少なくとも９０％(例えば、９０〜９５％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％)配列同一性を有する配列によりコードされるＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードする。いくつかの実施態様において、ポリヌクレオチドは、配列番号１８７に示すアミノ酸配列を含むＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードする。
【００１１】
いくつかの実施態様において、ポリヌクレオチドはＤＡＰ１０ドメインをコードしないかまたはそうでなくても含まない。いくつかの実施態様において、ポリヌクレオチドはＤＡＰ１２ドメインをコードしないかまたはそうでなくても含まない。いくつかの実施態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、構築物を発現する細胞による細胞毒性シグナル発生を有利に増強するさらなるサブドメインを含む。いくつかの実施態様において、ポリヌクレオチドは、さらにシグナル伝達サブドメインとしてＣＤ４４およびＣＤ２７の１以上をコードする。いくつかの実施態様において、ポリヌクレオチドは、所望によりさらに宿主細胞によるポリヌクレオチドによりコードされたタンパク質の発現の検出を可能とする検出タグまたは他の部分(例えば、マーカー)をコードする。
【００１２】
処置を必要とする哺乳動物におけるＮＫ細胞の細胞毒性増強用医薬の製造における、処置を必要とする哺乳動物における癌処置用医薬の製造におけるおよび／または処置を必要とする哺乳動物における癌の処置のためのここに開示するポリヌクレオチドの使用もまたここで提供される。
【００１３】
ここに開示するポリヌクレオチドによりコードされるＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体を発現する操作された免疫細胞もまた、ここで提供される。いくつかの実施態様において、操作された免疫細胞はナチュラルキラー(ＮＫ)細胞である。ある実施態様において、操作された細胞はＴ細胞であるが、ＮＫ細胞およびＴ細胞(および所望により他の免疫細胞型)の組み合わせがある実施態様において使用される。いくつかの実施態様において、免疫細胞は、細胞を受ける対象に対して同種である。処置を必要とする哺乳動物における癌の処置のための、ここに開示するポリヌクレオチドによりコードされるＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体を発現する免疫細胞の使用もまたここで提供される。処置を必要とする哺乳動物における癌処置用医薬の製造のための、ここに開示するポリヌクレオチドによりコードされるＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体を発現する免疫細胞の使用もまたここで提供される。
【００１４】
いくつかの実施態様において、ここに開示するポリヌクレオチドを使用する、癌を処置する方法が提供される。例えば、いくつかの実施態様において、方法は、癌を有する対象に、ここに開示するＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体を発現する免疫細胞の集団を含む組成物を投与することを含む。いくつかの実施態様において、ＣＡＲは、一本鎖フラグメント可変(ｓｃＦｖ)の可変重(ＶＨ)ドメインおよびｓｃＦｖの可変軽(ＶＬ)ドメインを含む細胞外抗ＣＤ１９結合部分、ＣＤ８アルファヒンジなどのヒンジ、ＣＤ８アルファ膜貫通ドメインなどの膜貫通ドメインならびにＯＸ４０サブドメインおよびＣＤ３ゼータサブドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ここで、該細胞はまた膜結合インターロイキン−１５(ｍｂＩＬ１５)も発現する。いくつかの実施態様において、ＯＸ４０サブドメインは、配列番号５に少なくとも９５％配列同一性を有する配列によりコードされ、ＣＤ３ゼータサブドメインは、配列番号７に少なくとも９５％配列同一性を有する配列によりコードされおよび／またはｍｂＩＬ１５は配列番号１１に少なくとも９５％配列同一性を有する配列によりコードされる。いくつかの実施態様において、コードされたＶＨドメインは、配列番号１２０に少なくとも９５％配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、コードされたＶＬドメインは、配列番号１１８に少なくとも９５％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ポリヌクレオチドは、配列番号１８７に示すアミノ酸配列と少なくとも９５％配列同一性を有するＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードする。上記のとおり、いくつかの実施態様において、このようなＣＤ１９  ＣＡＲ構築物を発現する免疫細胞はナチュラルキラー(ＮＫ)細胞である。ある実施態様において、免疫細胞はＴ細胞である。いくつかの実施態様において、ＮＫ細胞およびＴ細胞(および所望により他の免疫細胞)の組み合わせが使用される。いくつかの実施態様において、細胞は、対象ではないドナーからの同種細胞である。いくつかの実施態様において、細胞は、対象からの自己細胞である。同種細胞と自己細胞の混合物も、ある実施態様において使用され得る。いくつかの実施態様において、投与された集団は、約２×１０６細胞／対象体重キログラムを含む。いくつかの実施態様において、投与は静脈内である。いくつかの実施態様において、方法は、対象へのインターロイキン２の１回以上の投与をさらに含む。いくつかの実施態様において、方法はまた対象への他の治療の投与も含む。例えば、いくつかの実施態様において、方法は、細胞投与前の対象への化学療法処置の投与を含む。いくつかの実施態様において、化学療法処置は、対象におけるリンパ球枯渇を誘発する。ある実施態様において、対象は、細胞投与前にシクロホスファミドとフルダラビンの組み合わせを投与される。いくつかの実施態様において、シクロホスファミドは、約４００〜約６００mg／ｍ２の用量で投与される。いくつかの実施態様において、フルダラビンは、約２５〜２５mg／ｍ２の用量で投与される。いくつかの実施態様において、リンパ球枯渇化学療法は操作された免疫細胞投与数日前に投与され、所望により複数回投与される。例えば、いくつ���の実施態様において、リンパ球枯渇化学療法は、ここに開示する操作された免疫細胞投与少なくとも５日、４日および／または３日前に投与される。
【００１５】
いくつかの実施態様において、ヒト化抗ＣＤ１９結合部分、共刺激ドメインおよびシグナル伝達ドメインを含む、ヒト化ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチドが提供される。いくつかの実施態様において、共刺激ドメインは、ＯＸ４０を含む。いくつかの実施態様において、ヒト化抗ＣＤ１９結合部分はヒト化ｓｃＦｖを含み、ここで、重鎖および軽鎖の１以上はヒト化されている。いくつかの実施態様において、重鎖および／または軽鎖のＣＤＲの１以上はヒト化されている。例えば、いくつかの実施態様において、細胞外抗ＣＤ１９結合部分(ここで、抗ＣＤ１９結合部分は重鎖可変(ＶＨ)ドメインおよび軽鎖可変(ＶＬ)ドメインを含み、ＶＨドメインは配列番号１２０、配列番号１２１、配列番号１２２および配列番号１２３から選択されるＶＨドメインを含み、ＶＬドメインは配列番号１１７、配列番号１１８および配列番号１１９から選択されるＶＬドメインを含む)、ヒンジおよび／または膜貫通ドメイン、細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ヒト化ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチドが提供される。
【００１６】
いくつかの実施態様において、ヒト化キメラ抗原受容体(ＣＡＲ)をコードするポリヌクレオチドが提供され、ここで、ＣＡＲは、ヒト化抗ＣＤ１９結合ドメイン、膜貫通ドメイン、ＣＤ３ゼータの天然細胞内シグナル伝達ドメインまたはその機能的フラグメントを含む一次細胞内シグナル伝達ドメインならびにＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＩＣＯＳおよび４−１ＢＢからなる群から選択されるタンパク質の天然細胞内シグナル伝達ドメインまたはその機能的フラグメントを含む共刺激ドメインを含む一本鎖抗体または一本鎖抗体フラグメントを含み、ここで、該抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号１２４、１２７または１３０の軽鎖相補性決定領域１(ＬＣ  ＣＤＲ１)、配列番号１２５、１２８または１３１の軽鎖相補性決定領域２(ＬＣ  ＣＤＲ２)および配列番号１２６、１２９または１３２の軽鎖相補性決定領域３(ＬＣ  ＣＤＲ３)および配列番号１３３、１３６、１３９または１４２の重鎖相補性決定領域１(ＨＣ  ＣＤＲ１)、配列番号１３４、１３７、１４０または１４３の重鎖相補性決定領域２(ＨＣ  ＣＤＲ２)および配列番号１３５、１３８、１４１または１４４の重鎖相補性決定領域３(ＨＣ  ＣＤＲ３)を含む。
【００１７】
いくつかの実施態様において、細胞外抗ＣＤ１９結合部分(ここで、抗ＣＤ１９結合部分は配列番号１１７の可変軽(ＶＬ)ドメインを含むヒト化ｓｃＦｖ配列を含む)、ヒンジおよび／または膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ヒト化ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチドが提供される。いくつかの実施態様において、ポリヌクレオチドは、配列番号１６１、配列番号１６７、配列番号１７３、配列番号１７９、配列番号１８５、配列番号１９１、配列番号１９７または配列番号２０３のヒト化キメラ抗原受容体をコードする。
【００１８】
いくつかの実施態様において、細胞外抗ＣＤ１９結合部分(ここで、抗ＣＤ１９結合部分は配列番号１１８の可変軽(ＶＬ)ドメインを含むヒト化ｓｃＦｖ配列を含む)、ヒンジおよび／または膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ヒト化ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチドが提供される。いくつかの実施態様において、ポリヌクレオチドは、配列番号１６３、配列番号１６９、配列番号１７５、配列番号１８１、配列番号１８７、配列番号１９３、配列番号１９９または配列番号２０５のヒト化キメラ抗原受容体をコードする。
【００１９】
いくつかの実施態様において、細胞外抗ＣＤ１９結合部分(ここで、抗ＣＤ１９結合部分は配列番号１１９の可変軽(ＶＬ)ドメインを含むヒト化ｓｃＦｖ配列を含む)、ヒンジおよび／または膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ヒト化ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチドが提供される。いくつかの実施態様において、ポリヌクレオチドは、配列番号１６５、配列番号１７１、配列番号１７７、配列番号１８３、配列番号１８９、配列番号１９５、配列番号２０１または配列番号２０７のヒト化キメラ抗原受容体をコードする。
【００２０】
いくつかの実施態様において、細胞外抗ＣＤ１９結合部分(ここで、抗ＣＤ１９結合部分は配列番号１２０の可変重(ＶＨ)ドメインを含むヒト化ｓｃＦｖ配列を含む)、ヒンジおよび／または膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ヒト化ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチドが提供される。いくつかの実施態様において、ポリヌクレオチドは、配列番号１６１、配列番号１６３、配列番号１６５、配列番号１８５、配列番号１８７または配列番号１８９のヒト化キメラ抗原受容体をコードする。
【００２１】
いくつかの実施態様において、細胞外抗ＣＤ１９結合部分(ここで、抗ＣＤ１９結合部分は配列番号１２１の可変重(ＶＨ)ドメインを含むヒト化ｓｃＦｖ配列を含む)、ヒンジおよび／または膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ヒト化ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチドが提供される。いくつかの実施態様において、ポリヌクレオチドは、配列番号１６７、配列番号１６９、配列番号１７１、配列番号１９１、配列番号１９３または配列番号１９５のヒト化キメラ抗原受容体をコードする。
【００２２】
いくつかの実施態様において、細胞外抗ＣＤ１９結合部分(ここで、抗ＣＤ１９結合部分は配列番号１２２の可変重(ＶＨ)ドメインを含むヒト化ｓｃＦｖ配列を含む)、ヒンジおよび／または膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ヒト化ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチドが提供される。いくつかの実施態様において、ポリヌクレオチドは、配列番号１７３、配列番号１７５、配列番号１７７、配列番号１９７、配列番号１９９または配列番号２０１のヒト化キメラ抗原受容体をコードする。
【００２３】
いくつかの実施態様において、細胞外抗ＣＤ１９結合部分(ここで、抗ＣＤ１９結合部分は、配列番号１２３の可変重(ＶＨ)ドメインを含むヒト化ｓｃＦｖ配列を含む)、ヒンジおよび／または膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ヒト化ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチドが提供される。いくつかの実施態様において、ポリヌクレオチドは、配列番号１７９、配列番号１８１、配列番号１８３、配列番号２０３、配列番号２０５または配列番号２０７のヒト化キメラ抗原受容体をコードする。
【００２４】
いくつかの実施態様において、提供されるポリヌクレオチドは、膜結合インターロイキン−１５(ｍｂＩＬ１５)もコードする。
【００２５】
いくつかの実施態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＯＸ４０サブドメインを含む。しかしながら、いくつかの実施態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＯＸ４０サブドメイン、ＣＤ２８サブドメイン、ｉＣＯＳサブドメイン、ＣＤ２８−４１ＢＢサブドメイン、ＣＤ２７サブドメイン、ＣＤ４４サブドメインまたはこれらの組み合わせの１以上を含む。
【００２６】
いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はヒンジおよび膜貫通ドメインを含み、ここで、ヒンジはＣＤ８アルファヒンジであり、膜貫通ドメインはＣＤ８アルファまたはＮＫＧ２Ｄ膜貫通ドメインである。いくつかの実施態様において、細胞内シグナル伝達ドメインはＣＤ３ゼータドメインを含む。
【００２７】
いくつかの実施態様において、ポリヌクレオチドは配列番号１１２、１１３または１１４をコードしない。いくつかの実施態様において、ポリヌクレオチドは配列番号１１６をコードしない。
【００２８】
いくつかの実施態様において、ここに提供されるヒト化ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体の１以上を発現する、操作されたＮＫ細胞、操作されたＴ細胞および／またはＮＫ細胞とＴ細胞の混合集団が提供される。
【００２９】
癌を有する対象に、ここに開示するキメラ抗原受容体を発現する操作されたＮＫ細胞および／またはＴ細胞を投与することを含む、癌を有する対象を処置する方法もここで提供される。癌の処置のためのここに提供されるポリヌクレオチドの使用および癌処置用医薬の製造におけるここに提供されるポリヌクレオチドの使用もまたここで提供される。
【００３０】
いくつかの実施態様において、細胞外抗ＣＤ１９結合部分(ここで、抗ＣＤ１９結合部分はｓｃＦｖを含む)、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメイン(ここで、細胞内シグナル伝達ドメインはＣＤ２８共刺激ドメインおよびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインを含む)を含む、ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチドもここで提供される。
【００３１】
いくつかの実施態様において、細胞外抗ＣＤ１９結合部分(ここで、抗ＣＤ１９結合部分はｓｃＦｖを含む)、ヒンジ(ここで、ヒンジはＣＤ８アルファヒンジである)、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメイン(ここで、細胞内シグナル伝達ドメインはＣＤ３ゼータＩＴＡＭを含む)を含む、ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチドもここで提供される。
【００３２】
いくつかの実施態様において、細胞外抗ＣＤ１９結合部分(ここで、抗ＣＤ１９結合部分はｓｃＦｖの可変重鎖またはｓｃＦｖの可変軽鎖を含む)、ヒンジ(ここで、ヒンジはＣＤ８アルファヒンジである)、膜貫通ドメイン(ここで、膜貫通ドメインはＣＤ８アルファ膜貫通ドメインを含む)および細胞内シグナル伝達ドメイン(ここで、細胞内シグナル伝達ドメインはＣＤ３ゼータＩＴＡＭを含む)を含む、ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチドもここで提供される。
【００３３】
いくつかの実施態様において、膜貫通ドメインは、ＣＤ８アルファ膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施態様において、膜貫通ドメインは、ＮＫＧ２Ｄ膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施態様において、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメインを含む。
【００３４】
いくつかの実施態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８シグナル伝達ドメインを含むかまたはそれをさらに含む。いくつかの実施態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、４−１ＢＢシグナル伝達ドメインを含むかまたはそれをさらに含む。いくつかの実施態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＯＸ４０ドメインを含むかまたはそれをさらに含む。いくつかの実施態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、４−１ＢＢシグナル伝達ドメインを含むかまたはそれをさらに含む。いくつかの実施態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＣＯＳ、ＣＤ７０、ＣＤ１６１、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４４およびこれらの組み合わせから選択されるドメインを含むかまたはそれをさらに含む。
【００３５】
いくつかの実施態様において、ポリヌクレオチドは、切断型上皮細胞増殖因子受容体(ＥＧＦＲｔ)もコードする。いくつかの実施態様において、ＥＧＦＲｔは、可溶性因子として細胞で発現される。いくつかの実施態様において、ＥＧＦＲｔは膜結合形態で発現される。いくつかの実施態様において、ＥＧＦＲｔは、操作されたＮＫ細胞で「自殺スイッチ」機能を提供するよう操作される。いくつかの実施態様において、ポリヌクレオチドは膜結合インターロイキン−１５(ｍｂＩＬ１５)もコードする。ここでまた提供されるのは、ここに開示するポリヌクレオチドによりコードされるＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体を発現する、操作された免疫細胞(例えば、ＮＫ細胞またはＴ細胞またはそれらの混合物)である。さらに提供されるのは、癌を有する対象に、ここに開示するキメラ抗原受容体を発現する操作された免疫細胞を投与することを含む、癌を有する対象を処置する方法である。いくつかの実施態様において、癌の処置および／または癌処置用医薬の製造における、ここに開示するポリヌクレオチドの使用が提供される。
【００３６】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９結合部分は重鎖可変(ＶＨ)ドメインおよび軽鎖可変(ＶＬ)ドメインを含む。いくつかの実施態様において、ＶＨドメインは、配列番号３３に示すＶＨドメインアミノ酸配列と少なくとも９５％(例えば、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％)同一性を有する。いくつかの実施態様において、ＶＬドメインは、配列番号３２に示すＶＬドメインアミノ酸配列と少なくとも９５％(例えば、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％)同一性を有する。いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９結合部分は配列番号３３または３２のＶＨおよび／またはＶＬ配列由来である。例えば、いくつかの実施態様において、配列番号３３および／または３２のＶＨ配列およびＶＬ配列は、ヒト化キャンペーンに付され、それ故ヒト対象に投与されたとき、より容易に発現されおよび／または低免疫原性である。故に、いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９結合部分は配列番号３２および／または配列番号３３を含まない。いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９結合部分はＣＤ１９を標的とするｓｃＦｖを含み、ここで、ｓｃＦｖは、配列番号３５の配列または配列番号３５と少なくとも９５％(例えば、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％)同一である配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９結合部分はＣＤ１９を標的とするｓｃＦｖを含み、配列番号３６の配列または配列番号３６と少なくとも９５％同一(例えば、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％)である配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９結合部分は、第一、第二および第三相補性決定領域(それぞれＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２およびＬＣ  ＣＤＲ３)を含む軽鎖ＣＤＲおよび／または第一、第二および第三相補性決定領域(それぞれＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２およびＨＣ  ＣＤＲ３)を含む重鎖ＣＤＲを含む。ある実施態様によって、ＬＣ  ＣＤＲおよびＨＣ  ＣＤＲの種々の組み合わせが使用される。例えば、ある実施態様において、抗ＣＤ１９結合部分はＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ３、ＨＣ  ＣＤ２およびＨＣ、ＣＤＲ３を含む。他の組み合わせがある実施態様において使用される。いくつかの実施態様において、ＬＣ  ＣＤＲ１は、配列番号３７の配列または配列番号３７の配列と少なくとも約９５％相同である配列を含む。いくつかの実施態様において、ＬＣ  ＣＤＲ２は、配列番号３８の配列または配列番号３８の配列と少なくとも約９５％(例えば、９６％、９７％、９８％または９９％)相同である配列を含む。いくつかの実施態様において、ＬＣ  ＣＤＲ３は、配列番号３９の配列または配列番号３９と少なくとも約９５％相同である配列を含む。いくつかの実施態様において、ＨＣ  ＣＤＲ１は、配列番号４０の配列または配列番号４０と少なくとも約９５％相同である配列を含む。いくつかの実施態様において、ＨＣ  ＣＤＲ２は、配列番号４１、４２もしくは４３の配列または配列番号４１、４２もしくは４３と少なくとも約９５％相同である配列を含む。いくつかの実施態様において、ＨＣ  ＣＤＲ３は、配列番号４４の配列または配列番号４４の配列と少なくとも約９５％(例えば、９６％、９７％、９８％、���９％または９９％)相同である配列を含む。
【００３７】
いくつかの実施態様において、軽鎖可変領域(ＶＬ)および重鎖可変領域(ＨＬ)を含む抗ＣＤ１９結合部分も提供し、ＶＬ領域は第一、第二および第三相補性決定領域(それぞれＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２およびＶＬ  ＣＤＲ３)を含み、ＶＨ領域は第一、第二および第三相補性決定領域(それぞれＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２およびＶＨ  ＣＤＲ３)を含む。いくつかの実施態様において、ＶＬ領域は、配列番号４５、４６、４７もしくは４８の配列または配列番号４５、４６、４７もしくは４８の配列と少なくとも約９５％(例えば、９６％、９７％、９８％、９９％または９９％)相同である配列を含む。いくつかの実施態様において、ＶＨ領域は、配列番号４９、５０、５１もしくは５２の配列または配列番号４９、５０、５１もしくは５２の配列と少なくとも約９５％(例えば、９６％、９７％、９８％、９９％または９９％)相同である配列を含む。
【００３８】
いくつかの実施態様において、第一、第二および第三相補性決定領域(それぞれＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２およびＬＣ  ＣＤＲ３)を含む軽鎖ＣＤＲを含む、抗ＣＤ１９結合部分も提供される。いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９結合部分は、さらに、第一、第二および第三相補性決定領域(それぞれＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２およびＨＣ  ＣＤＲ３)を含む重鎖ＣＤＲを含む。いくつかの実施態様において、ＬＣ  ＣＤＲ１は、配列番号５３の配列または配列番号５３と少なくとも約９５％相同である配列を含む。いくつかの実施態様において、ＬＣ  ＣＤＲ２は、配列番号５４の配列または配列番号５４と少なくとも約９５％相同である配列を含む。いくつかの実施態様において、ＬＣ  ＣＤＲ３は、配列番号５５の配列または配列番号５５と少なくとも約９５％相同である配列を含む。いくつかの実施態様において、ＨＣ  ＣＤＲ１は、配列番号５６の配列または配列番号５６と少なくとも約９５％相同である配列を含む。いくつかの実施態様において、ＨＣ  ＣＤＲ２は、配列番号５７の配列または配列番号５７と少なくとも約９５％相同である配列を含む。いくつかの実施態様において、ＨＣ  ＣＤＲ３は、配列番号５８の配列または配列番号５８と少なくとも約９５％相同である配列を含む。いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９結合部分(および故に得られたＣＡＲ)は、例えば、免疫原性および／またはサイトカイン放出症候群などの副作用のリスクを高める可能性のあるような、ある配列を含まないように操作される。故に、いくつかの実施態様によると、抗ＣＤ１９結合部分は、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号３２または配列番号３３の１以上を含まない。
【００３９】
いくつかの実施態様において、キメラ受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＯＸ４０サブドメインを含む。いくつかの実施態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、さらにＣＤ３ゼータサブドメインを含む。いくつかの実施態様において、ＯＸ４０サブドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列(または配列番号１６の配列と少なくとも約９５％相同である配列)を含み、ＣＤ３ゼータサブドメインは、配列番号８のアミノ酸配列(または配列番号８の配列と少なくとも約９５％相同である配列)を含む。
【００４０】
いくつかの実施態様において、ヒンジドメインは、ＣＤ８ａヒンジドメインを含む。いくつかの実施態様において、ＣＤ８ａヒンジドメインは、配列番号２のアミノ酸配列または配列番号２の配列と少なくとも約９５％相同である配列を含む。
【００４１】
いくつかの実施態様において、免疫細胞はまた膜結合インターロイキン−１５(ｍｂＩＬ１５)も発現する。いくつかの実施態様において、ｍｂＩＬ１５は配列番号１２のアミノ酸配列または配列番号１２の配列と少なくとも約９５％相同である配列を含む。
【００４２】
いくつかの実施態様において、ここで、キメラ受容体はＮＫＧ２Ｄ受容体の細胞外ドメインをさらに含む。いくつかの実施態様において、免疫細胞は、ＮＫＧ２Ｄ受容体の細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、細胞毒性シグナル伝達複合体および所望により、ｍｂＩＬ１５を含む第二キメラ受容体を発現する。いくつかの実施態様において、ＮＫＧ２Ｄ受容体の細胞外ドメインは、配列番号２６のアミノ酸配列または配列番号２６の配列と少なくとも約９５％相同である配列を含むＮＫＧ２Ｄの機能的フラグメントを含む。種々の実施態様において、ここに開示するキメラ抗原受容体および／またはキメラ受容体を発現するよう操作された免疫細胞はＮＫ細胞である。ある実施態様において、Ｔ細胞が使用される。いくつかの実施態様において、ＮＫ細胞およびＴ細胞(および／または他の免疫細胞)の組み合わせが使用される。
【００４３】
いくつかの実施態様において、ここに開示するＣＤ１９をターゲティングする操作された免疫細胞を対象に投与することを含む、対象における癌を処置する方法が提供される。またここで提供されるのは、癌の処置のための、ここに開示するＣＤ１９をターゲティングする免疫細胞の使用である。同様に、癌処置用医薬の製造における、ここに開示するＣＤ１９をターゲティングする免疫細胞がここに提供される。いくつかの実施態様において、処置する癌は急性リンパ球性白血病である。
【００４４】
ここに記載する方法および組成物の実施態様の一部は免疫細胞に関する。ある実施態様において、免疫細胞は、細胞外抗ＣＤ１９部分、ヒンジおよび／または膜貫通ドメインおよび／または細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＤ１９指向性キメラ受容体を発現する。ある実施態様において、免疫細胞はナチュラルキラー(ＮＫ)細胞である。ある実施態様において、免疫細胞はＴ細胞である。
【００４５】
ある実施態様において、ヒンジドメインは、ＣＤ８ａヒンジドメインを含む。ある実施態様において、ヒンジドメインは、Ｉｇ４  ＳＨドメインを含む。
【００４６】
ある実施態様において、膜貫通ドメインは、ＣＤ８ａ膜貫通ドメインを含む。ある実施態様において、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメインを含む。ある実施態様において、膜貫通ドメインは、ＣＤ３膜貫通ドメインを含む。
【００４７】
ある実施態様において、シグナル伝達ドメインは、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインを含む。ある実施態様において、シグナル伝達ドメインは、４−１ＢＢシグナル伝達ドメインを含む。ある実施態様において、シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８シグナル伝達ドメインを含む。ある実施態様において、シグナル伝達ドメインは、ＮＫｐ８０シグナル伝達ドメインを含む。ある実施態様において、シグナル伝達ドメインは、ＣＤ１６  ＩＣシグナル伝達ドメインを含む。ある実施態様において、シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータまたはＣＤ３ζ  ＩＴＡＭシグナル伝達ドメインを含む。ある実施態様において、シグナル伝達ドメインは、ｍｂＩＬ−１５シグナル伝達ドメインを含む。ある実施態様において、シグナル伝達ドメインは、２Ａ開裂ドメインを含む。ある実施態様において、ｍＩＬ−１５シグナル伝達ドメインは、２Ａ開裂ドメインによりＣＤ１９指向性キメラ受容体の残りまたは他の部分から離されている。
【００４８】
ある実施態様は、処置を必要とする対象にここに記載する免疫細胞を投与することを含む、方法に関する。ある実施態様において、対象は癌を有する。ある実施態様において、投与は癌を処置、阻止または進行予防する。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１Ａ】ＣＤ１９指向性キメラ受容体の非限定的例の図を含む。
【００５０】
【図１Ｂ】ＣＤ１９指向性キメラ受容体のさらなる非限定的例の図を含む。
【００５１】
【図２】同様にＣＤ１９指向性キメラ受容体の非限定的例の図を含む。
【００５２】
【図３Ａ】同様にＣＤ１９指向性キメラ受容体の非限定的例の図を含む。
【００５３】
【図３Ｂ】同様にＣＤ１９指向性キメラ受容体の非限定的例の図を含む。
【００５４】
【図３Ｃ】同様にＣＤ１９指向性キメラ受容体の非限定的例の図を含む。
【００５５】
【図３Ｄ】同様にヒト化ＣＤ１９結合ドメインを含むＣＤ１９指向性キメラ受容体の非限定的例の図を含む。
【００５６】
【図３Ｅ】同様にヒト化ＣＤ１９結合ドメインを含むＣＤ１９指向性キメラ受容体の非限定的例の図を含む。
【００５７】
【図３Ｆ】同様にヒト化ＣＤ１９結合ドメインを含むＣＤ１９指向性キメラ受容体の非限定的例の図を含む。
【００５８】
【図３Ｇ】同様にタグ配列を伴わないヒト化ＣＤ１９結合ドメインを含むＣＤ１９指向性キメラ受容体の非限定的例の図を含む。
【００５９】
【図３Ｈ】同様にタグ配列を伴わないヒト化ＣＤ１９結合ドメインを含むＣＤ１９指向性キメラ受容体の非限定的例の図を含む。
【００６０】
【図３Ｉ】同様にタグ配列を伴わないヒト化ＣＤ１９結合ドメインを含むＣＤ１９指向性キメラ受容体の非限定的例の図を含む。
【００６１】
【図４】非限定的ＮＫ細胞拡大プロトコールの概略を記載する。
【００６２】
【図５】ここに開示する数実施態様によりＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体の有効性を評価する実験プロトコールの概略を示す。
【００６３】
【図６Ａ】種々の非限定的ＣＤ１９指向性キメラ受容体の抗腫瘍効果に関するインビボデータを記載する。
【００６４】
【図６Ｂ】種々の非限定的ＣＤ１９指向性キメラ受容体の抗腫瘍効果に関するデータ概略を記載する。
【００６５】
【図７】ＮＫ細胞による種々のＣＤ１９指向性キメラ受容体構築物の発現に関するデータを記載する。
【００６６】
【図８Ａ】選択ＣＤ１９指向性キメラ受容体の発現に関する生蛍光データ(平均蛍光強度、ＭＦＩ)を記載する。
【００６７】
【図８Ｂ】示した受容体を発現するＮＫ細胞のパーセントとして示す、選択ＣＤ１９指向性キメラ受容体の発現に関するデータを記載する。
【００６８】
【図９Ａ−９Ｄ】示したＣＤ１９指向性キメラ受容体について細胞毒性(Ｎａｌｍ６細胞またはＲａｊｉ細胞に対する)に関するデータを記載する。
【００６９】
【図９Ｅ】種々のエフェクター：標的比で示したＣＤ１９指向性キメラ受容体について細胞毒性(Ｎａｌｍ６細胞に対する)に関する概略データを示す。
【００７０】
【図９Ｆ】種々のエフェクター：標的比で示したＣＤ１９指向性キメラ受容体について細胞毒性(Ｒａｊｉ細胞に対する)に関する概略データを示す。
【００７１】
【図１０Ａ】形質導入７日後示したＣＤ１９指向性キメラ受容体について細胞毒性(Ｎａｌｍ６細胞に対する)の増強度に関するデータを記載する。
【００７２】
【図１０Ｂ】形質導入７日後示したＣＤ１９指向性キメラ受容体について細胞毒性(Ｒａｊｉ細胞に対する)の増強度に関するデータを記載する。
【００７３】
【図１０Ｃ】形質導入１４日後示したＣＤ１９指向性キメラ受容体について細胞毒性(Ｎａｌｍ６細胞に対する)の増強度に関するデータを記載する。
【００７４】
【図１０Ｄ】形質導入１４日後示したＣＤ１９指向性キメラ受容体について細胞毒性(Ｒａｊｉ細胞に対する)増強度に関するデータを記載する。
【００７５】
【図１１Ａ−１１Ｅ】Ｎａｌｍ６細胞と共培養したときの種々のＣＤ１９指向性キメラ受容体を発現するＮＫ細胞によるサイトカイン放出に関するデータを記載する。図１１ＡはグランザイムＢ放出を記載する。図１１Ｂはパーフォリン放出を記載する。図１１ＣはＴＮＦ−アルファ放出を記載する。図１１ＤはＧＭ−ＣＳＦ放出を記載する。図１１Ｅはインターフェロンガンマ放出を記載する。
【００７６】
【図１２Ａ−１２Ｅ】Ｒａｊｉ細胞と共培養したときの種々のＣＤ１９指向性キメラ受容体を発現するＮＫ細胞によるサイトカイン放出に関するデータを記載する。図１２ＡはグランザイムＢ放出を記載する。図１２Ｂはパーフォリン放出を記載する。図１２ＣはＴＮＦ−アルファ放出を記載する。図１２ＤはＧＭ−ＣＳＦ放出を記載する。図１２Ｅはインターフェロンガンマ放出を記載する。
【００７７】
【図１３】ＰＢＳ、非形質導入ＮＫ細胞または示したＣＤ１９指向性キメラ受容体を発現するＮＫ細胞で処置したマウスの経時的腫瘍負荷に関するインビボ造影データを示し、示した数の操作されたＮＫ細胞を投与した(Ｍ＝１００万細胞)。
【００７８】
【図１４Ａ】図１３に示すインビボデータからの検出蛍光シグナルに関する生データを示し、データはＮａｌｍ６細胞投与後２５日追跡された。
【００７９】
【図１４Ｂ】対数スケールでの図１４Ａからのデータを示す。
【００８０】
【図１４Ｃ】示した構築物を発現する示した細胞によるＣＤ３発現に関するデータを示す。
【００８１】
【図１４Ｄ】示した構築物を発現する示した細胞によるＣＤ５６発現に関するデータを示す。
【００８２】
【図１４Ｅ】示した構築物を発現する示した細胞と接触させたときのＧＦＰ発現腫瘍細胞に関するデータを示す。
【００８３】
【図１４Ｆ】示した構築物を発現する示した細胞と接触させたときのＣＤ１９発現腫瘍細胞に関するデータを示す。
【００８４】
【図１５】選択したヒト化抗ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物の選択した機能的特徴に関するデータを示す。
【００８５】
【図１６】ここでの実施態様に開示の種々のヒト化抗ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物の発現に関するデータを示す。
【００８６】
【図１７Ａ−１７Ｅ】細胞毒性データを示す。１７Ａは、Ｎａｌｍ６細胞に対するここに開示する選択したヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物を発現するように操作された第一ドナーからのＮＫ細胞の細胞毒性に関するデータを示す。１７Ａは、Ｒａｊｉ細胞に対するここに開示する選択したヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物を発現するように操作された第一ドナーからのＮＫ細胞の細胞毒性に関するデータを示す。１７Ｃは、Ｎａｌｍ６細胞に対するここに開示する選択したヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物を発現するように操作された第二ドナーからのＮＫ細胞の細胞毒性に関するデータを示す。１７Ｄは、Ｒａｊｉ細胞に対するここに開示する選択したヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物を発現するように操作された第三ドナーからのＮＫ細胞の細胞毒性に関するデータを示す。１７Ｅは、Ｎａｌｍ６細胞に対するここに開示する選択したヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物を発現するように操作された第三ドナーからのＮＫ細胞の細胞毒性に関するデータを示す。
【００８７】
【図１８】形質導入３日後の示した非限定的抗ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物を発現するＮＫ細胞についての要約(３ドナーから)発現データを示す。
【００８８】
【図１９Ａ−１９Ｄ】細胞毒性再負荷データを示す。図１９Ａは、Ｒａｊｉ細胞をＮＫ細胞培養に７日目およびさらに１４日目に添加した、Ｒａｊｉ細胞に対するここに開示する選択したヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物を発現するように操作された第一ドナーからのＮＫ細胞の細胞毒性に関するデータを示す。図１９Ｂは、Ｎａｌｍ６細胞ＮＫ細胞培養に７日目およびさらに１４日目に添加した、Ｎａｌｍ６細胞に対するここに開示する選択したヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物を発現するように操作された第一ドナーからのＮＫ細胞の細胞毒性に関するデータを示す。図１９Ｃは、Ｒａｊｉ細胞にＮＫ細胞培養を７日目およびさらに１４日目に添加した、Ｒａｊｉ細胞に対するここに開示する選択したヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物を発現するように操作された第二ドナーからのＮＫ細胞の細胞毒性に関するデータを示す。図１９Ｄは、Ｎａｌｍ６細胞をＮＫ細胞培養に７日目およびさらに１４日目に添加した、Ｎａｌｍ６細胞に対するここに開示する選択したヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物を発現するように操作された第二ドナーからのＮＫ細胞の細胞毒性に関連するデータを示す。
【００８９】
【図２０Ａ−２０Ｂ】発現データを示す。図２０Ａは、形質導入１０日後２ドナーからの非限定的例示的ヒト化抗ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物の発現からの蛍光データを示す。図２０Ｂは、ＣＤ１９を発現する細胞のパーセンテージ(ある抗ＣＤ１９  ＣＡＲの発現効率の指標)に関するデータを示す。
【００９０】
【図２１Ａ−２１Ｂ】細胞毒性データを示す。図２１Ａは、Ｒａｊｉ細胞をＮＫ細胞培養に７日目およびさらに１４日目に添加した、ここに開示する選択したヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物を発現するよう操作されたＮＫ細胞(図２０の２ドナーの第一ドナーから)のＲａｊｉ細胞に対する細胞毒性に関するデータを示す。図２１Ｂは、Ｒａｊｉ細胞をＮＫ細胞培養に７日目およびさらに１４日目に添加した、ここに開示する選択したヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物を発現するよう操作されたＮＫ細胞(図２０の２ドナーの第二ドナーから)のＲａｊｉ細胞に対する細胞毒性に関するデータを示す。
【００９１】
【図２２Ａ−２２Ｅ】Ｒａｊｉ細胞と共培養したときの種々のＣＤ１９指向性キメラ受容体を発現するＮＫ細胞によるサイトカイン放出に関するデータを示す。図２２Ａはインターフェロンガンマ放出を示す。図２２ＢはＧＭ−ＣＳＦ放出を示す。図２２Ｃは腫瘍壊死因子放出を示す。図２２Ｄはパーフォリン放出を示す。図２２Ｅはグランザイム放出を示す。
【００９２】
【図２３Ａ−２３Ｄ】ＮＫ細胞生存に関するデータを示す。図２３Ａは、示した非限定的実施態様の抗ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物を発現するよう操作された第一ドナーからのＮＫ細胞の形質導入７日、１３日、１９日および２６日後の生存の分析を示す。図２３Ｂは、示した非限定的実施態様の抗ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物を発現するよう操作された第二ドナーからのＮＫ細胞の形質導入７日、１３日、１９日および２６日後の生存の分析を示す。図２３Ｃは、示した非限定的実施態様の抗ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物を発現するよう操作された第三ドナーからのＮＫ細胞の形質導入１１日、１９日および２６日後の生存の分析を示す。図２３Ｄは、示した非限定的実施態様の抗ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物を発現するよう操作された第四ドナーからのＮＫ細胞の形質導入１１日、１９日および２６日後の生存の分析を示す。各実験について、培地を週２回交換した。
【００９３】
【図２４】形質導入１１日後の示した非限定的実施態様の抗ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物を発現するＮＫ細胞のパーセントに関するデータを示す。
【００９４】
【図２５Ａ−２５Ｉ】種々の非限定的実施態様のここに開示する抗ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物を形質導入したＮＫ細胞によるＣＤ１９発現に関するデータを示す。図２５Ａは、対照としてのＧＦＰ形質導入ＮＫ細胞を示す。図２５Ｂは、ＮＫ１９−１を形質導入したＮＫ細胞におけるＣＤ１９発現を示す。図２５Ｃは、ＮＫ１９Ｈ−１を形質導入したＮＫ細胞におけるＣＤ１９発現を示す。図２５Ｄは、ＮＫ１９Ｈ−２を形質導入したＮＫ細胞におけるＣＤ１９発現を示す。図２５Ｅは、ＮＫ１９Ｈ−３を形質導入したＮＫ細胞におけるＣＤ１９発現を示す。図２５Ｆは、ＮＫ１９Ｈ−４を形質導入したＮＫ細胞におけるＣＤ１９発現を示す。図２５Ｇは、ＮＫ１９Ｈ−５を形質導入したＮＫ細胞におけるＣＤ１９発現を示す。図２５Ｈは、ＮＫ１９Ｈ−１１を形質導入したＮＫ細胞におけるＣＤ１９発現を示す。図２５Ｉは、ＮＫ１９Ｈ−１２を形質導入したＮＫ細胞におけるＣＤ１９発現を示す。
【００９５】
【図２６Ａ−２６Ｄ】細胞毒性データを示す。図２６Ａは、Ｒａｊｉ細胞をＮＫ細胞培養に７日目および再び１４日目に添加した、Ｒａｊｉ細胞に対するここに開示する選択したヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物を発現するよう操作されたＮＫ細胞(第一ドナーから)の細胞毒性に関するデータを示す。図２６Ｂは、Ｎａｌｍ６細胞をＮＫ細胞培養に７日目および再び１４日目に添加した、Ｎａｌｍ６細胞に対するここに開示する選択したヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物を発現するよう操作されたＮＫ細胞(第一ドナーから)の細胞毒性に関するデータを示す。図２６Ｃは、Ｒａｊｉ細胞をＮＫ細胞培養に７日目および再び１４日目に添加した、Ｒａｊｉ細胞に対するここに開示する選択したヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物を発現するよう操作されたＮＫ細胞(第二ドナーから)の細胞毒性に関するデータを示す。図２６Ｄは、Ｎａｌｍ６細胞をＮＫ細胞培養に７日目および再び１４日目に添加した、Ｎａｌｍ６細胞に対するここに開示する選択したヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物を発現するよう操作されたＮＫ細胞(第二ドナーから)の細胞毒性に関するデータを示す。
【００９６】
【図２７Ａ−２７Ｂ】操作されたＮＫ細胞によるＣＤ１９発現に関するデータを示す。図２７Ａは、種々の非限定的なここに開示する抗ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物を発現するよう操作されたドナーからのＮＫ細胞のフローサイトメトリーデータを示す。図２７Ｂは、さらなるドナーから単離したＮＫ細胞の対応するデータを示す。
【００９７】
【図２８Ａ−２８Ｂ】細胞毒性データを示す。図２８Ａは、示した非限定的例示的抗ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物を発現するＮＫ細胞(図２７の第一ドナーから)に曝されたとき(１：１  Ｅ：Ｔ比)の経時的Ｒａｊｉ細胞数を示す。図２８Ｂは、示した非限定的例示的抗ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物を発現するＮＫ細胞(図２７の第二ドナーから)に曝されたとき(１：１  Ｅ：Ｔ比)の経時的Ｒａｊｉ細胞数を示す。
【００９８】
【図２９Ａ−２９Ｅ】種々のヒト化ＣＤ１９指向性ＣＡＲ構築物およびインビボモデルにおけるその有効性に関するデータを示す。図２９Ａは、インビボでＣＤ１９指向性ＣＡＲ構築物の有効性を評価するための、実験プロトコールの概略図を示す。図２９Ｂは、ＮＡＬＭ６腫瘍細胞が投与されており、示した構築物で処置したマウスのインビボ生物発光造影を示す。図２９Ｃは、図２９Ｂから取得した生物発光データの折れ線グラフを示す。図２９Ｄは、各処置群の動物が生存した日数を示す生存曲線を示す。図２９Ｅは、ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物に含まれるタグのＭＦＩにより測定して、ＮＫ細胞による示した構築物の相対的発現レベルを示す。
【００９９】
【図３０Ａ−３０Ｆ】示したＣＤ１９指向性ＣＡＲ構築物の発現を示す。図３０Ａは、ＮＫ細胞投与１５日後マウスからの血液サンプルにおける全ＣＤ５６陽性細胞のパーセンテージとして、示した構築物の発現に関するデータを示す(例えば、図２９Ａにおける略図に従う)。図３０Ｂは、同様にＮＫ細胞投与１５日後、ＣＤ５６陽性かつＦｌａｇタグ(ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物の一部として)を発現する細胞のパーセンテージとして、示した構築物の発現に関するデータを示す。図３０Ｃは、同様にＮＫ細胞投与１５日後の、示した構築物で処置した動物からのサンプルにおけるＧＦＰ＋腫瘍細胞の検出に関するデータを示す。図３０Ｄ、３０Ｅおよび３０Ｆは、ＮＫ細胞投与３２日後の対応するデータを示す。
【０１００】
【図３１Ａ−３１Ｂ】非タグ付ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物の発現に関するデータを示す。ここに記載するとおり、いくつかの実施態様において、ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物は、検出目的でＦｌａｇまたは他のタグを含む。しかしながら、タグを伴うここに開示する全構築物は、タグがなくても本発明に包含される。図３１Ａは、選択した非ｆｌａｇタグ付ヒト化抗ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物の経時的発現に関するデータを示す。図３１Ｂは、示した構築物の検出平均蛍光強度に基づく対応するデータを示す。
【０１０１】
【図３２Ａ−３２Ｄ】腫瘍細胞の第一集団を示した構築物を発現するＮＫ細胞と共培養し、ＮＫ細胞をさらなる腫瘍細胞大量投与で「再負荷」したインビトロ再負荷実験に関するデータを示す。図３２Ａは、Ｒａｊｉ細胞との共培養開始後１０日目のデータを示す。図３２Ｂは、最終時点、１４日目でのＲａｊｉに関するデータを示す。図３２Ｃは、１０日目のＮａｌｍ６細胞に関するデータを示す。図３２Ｄは、１４日目のＮａｌｍ６細胞に関するデータを示す。
【０１０２】
【図３３Ａ−３３Ｊ】示した構築物を発現するＮＫ細胞によるサイトカイン産生の評価に関する。図３３Ａは、Ｒａｊｉ細胞との共培養後の示した構築物を発現するＮＫ細胞によるインターフェロンガンマ発現を示す。図３３Ｂは、Ｒａｊｉ細胞との共培養後の示した構築物を発現するＮＫ細胞によるＧＭ−ＣＳＦ発現を示す。図３３Ｃは、Ｒａｊｉ細胞との共培養後の示した構築物を発現するＮＫ細胞による腫瘍壊死因子アルファの発現を示す。図３３Ｄは、Ｒａｊｉ細胞との共培養後の示した構築物を発現するＮＫ細胞によるパーフォリンの発現を示す。図３３Ｅは、Ｒａｊｉ細胞との共培養後の示した構築物を発現するＮＫ細胞によるグランザイムＢの発現を示す。図３３Ｆは、Ｎａｌｍ６細胞との共培養後の示した構築物を発現するＮＫ細胞によるインターフェロンガンマの発現を示す。図３３Ｇは、Ｎａｌｍ６細胞との共培養後の示した構築物を発現するＮＫ細胞によるＧＭ−ＣＳＦの発現を示す。図３３Ｈは、Ｎａｌｍ６細胞との共培養後の示した構築物を発現するＮＫ細胞による腫瘍壊死因子アルファの発現を示す。図３３Ｉは、Ｎａｌｍ６細胞との共培養後の示した構築物を発現するＮＫ細胞によるパーフォリンの発現を示す。図３３Ｊは、Ｎａｌｍ６細胞との共培養後の示した構築物を発現するＮＫ細胞によるグランザイムＢの発現を示す。
【０１０３】
【図３４】形質導入後４週間にわたるヒト化非タグ付ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物を発現するＮＫ細胞の生存能に関するデータを示す。
【０１０４】
【図３５Ａ−３５Ｄ】種々のヒト化、非タグ付、ＣＤ１９指向性ＣＡＲ構築物およびインビボモデルにおけるその有効性に関するデータを示す。図３５Ａは、インビボでヒト化、非タグ付、ＣＤ１９指向性ＣＡＲ構築物の有効性を評価する実験プロトコールの概略図を示す。図３５Ｂは、ＮＡＬＭ６腫瘍細胞が投与されており、示した構築物で処置されたマウスのインビボ生物発光造影を示す。図３５Ｃは、図３５Ｂから取得した生物発光データの折れ線グラフを示す。図３５Ｄは、ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物に結合するＣＤ１９−Ｆｃ融合タンパク質の検出により測定した、ＮＫ細胞による示した構築物の相対的発現レベルを示す。
【０１０５】
【図３６Ａ−３６Ｆ】示したＣＤ１９指向性ＣＡＲ構築物の発現に関する。図３６Ａは、ＮＫ細胞投与１３日後のマウスからの血液サンプルにおける全ＣＤ５６陽性細胞のパーセンテージとしての示した構築物の発現に関するデータを示す(例えば、図３５Ａにおける略図に従う)。図３６Ｂは、同様にＮＫ細胞投与１３日後示した構築物で処置した動物からのサンプルにおけるＣＤ１９＋腫瘍細胞の検出に関するデータを示す。図３６Ｃは、同様にＮＫ細胞投与１３日後の示した構築物で処置した動物からのサンプルにおけるＧＦＰ＋腫瘍細胞の検出に関するデータを示す。図３６Ｄ、３６Ｅおよび３６Ｆは、ＮＫ細胞投与２７日後の対応するデータを示す。
【０１０６】
【図３７Ａ−３７Ｃ】ここに開示する実施態様による種々のＣＤ１９指向性ＣＡＲのインビボ有効性に関する。図３７Ａは、インビボで種々のＣＤ１９指向性ＣＡＲ構築物を発現するヒト化、ＮＫ細胞の有効性を評価する、実験プロトコールの概略図を示す。試験した種々の実験群は示されるとおりである。「ＩＬ１２／ＩＬ１８」と指定された細胞について、細胞を、各々引用によりその全体として本明細書に包含させる、米国仮特許出願６２／８８１３１１(２０１９年７月３１日出願)および出願６２／９３２,３４２(２０１９年１１月７日出願)に記載のとおり、可溶性ＩＬ１２および／またはＩＬ１８存在下で拡大させた。図３７Ｂおよび３７Ｃは、Ｎａｌｍ６腫瘍細胞を投与し、示した構築物で処置した動物からの生物発光データを示す。
【０１０７】
【図３８Ａ−３８Ｊ】図３７Ｂからの生物発光データのグラフ図を示す。図３８Ａは、非形質導入ＮＫ細胞を受けた動物からの生物発光(光子／秒フラックスとして)を示す。図３８Ｂは、媒体としてＰＢＳを受けた動物で測定したフラックスを示す。図３８Ｃは、ＮＫ１９  ＮＦ２  ＣＡＲ(ＣＡＲの非限定的例として)を発現する予め凍結させたＮＫ細胞を受けた動物で測定したフラックスを示す。図３８Ｄは、ＩＬ１２および／またはＩＬ１８を使用して拡大させた、ＮＫ１９  ＮＦ２  ＣＡＲ(ＣＡＲの非限定的例として)を発現する予め凍結させたＮＫ細胞を受けた動物で測定したフラックスを示す。図３８Ｅおよび図３８Ｆは、ＮＫ１９  ＮＦ２  ＣＡＲ(ＣＡＲの非限定的例として)を発現する新鮮ＮＫ細胞を受けた動物で測定したフラックスを示す。図３８Ｇおよび図３８Ｈは、ＩＬ１２および／またはＩＬ１８を使用して拡大させた、ＮＫ１９  ＮＦ２  ＣＡＲ(ＣＡＲの非限定的例として)を発現する予め新鮮ＮＫ細胞を受けた動物で測定したフラックスを示す。図３８Ｉは、腫瘍接種後最初の３０日にわたる種々の群で測定した生物発光を記載する折れ線グラフを示す。図３８Ｊは、腫瘍接種後最初の５６日にわたる種々の群で測定した生物発光を記載する折れ線グラフを示す。
【０１０８】
【図３９】示した治療を受けたときのマウスの経時的な体重に関するデータを示す。
【発明を実施するための形態】
【０１０９】
詳細な記載
ここに提供する方法および組成物のある実施態様は、ＣＤ１９指向性キメラ受容体に関する。ある実施態様において、該受容体は、ここに記載するとおり細胞で発現される。ある実施態様は、免疫療法における該組成物または細胞を使用する方法に関する。
【０１１０】
用語「抗癌効果」は、腫瘍体積減少、癌細胞数減少、転移数減少、余命延長、癌細胞増殖減少、癌細胞生存減少または癌状態と関連する種々の生理学的症状改善を含むが、これらに限定されない種々の手段により顕在化され得る、生物学的効果をいう。「抗癌効果」は、そもそも癌罹患の阻止に関するＳＩＲの能力によっても顕在化され得る。
【０１１１】
細胞型
ここに提供する方法および組成物のある実施態様は、免疫細胞などの細胞に関する。例えば、免疫細胞は、ここに記載するとおり、ＣＤ１９指向性キメラ受容体などのキメラ受容体を含むように操作されるまたは該キメラ受容体をコードする核酸を含むように操作されることができる。
【０１１２】
従前の抗癌治療は、外科的アプローチ、放射線療法、化学療法またはこれらの方法の組み合わせを利用する。研究により、ある癌の機序の一部について理解が深まってきたため、この知識は標的化癌治療に利用された。標的化治療は、癌細胞増殖を減少または停止させるために癌細胞または癌増殖を支持する細胞(血管細胞など)にみられる特定の遺伝子またはタンパク質を標的とする薬物を用いる癌処置である。さらに最近は、遺伝子操作が、癌と戦う免疫系のある側面を引き出すアプローチの開発を可能としている。幾つかの場合、患者自身の免疫細胞は、その患者の癌タイプを特異的に根絶するよう修飾される。より詳細に後記するとおり、Ｔ細胞またはナチュラルキラー(ＮＫ細胞)などの種々のタイプの免疫細胞が使用され得る。
【０１１３】
癌免疫療法を促進するために、標的結合部分(例えば、癌細胞により発現されるリガンドまたはＣＤ１９指向性キメラ受容体の細胞外結合因子)および細胞毒性シグナル伝達複合体を含む、キメラ抗原受容体(ＣＡＲ)をコードするポリヌクレオチド、ポリペプチドおよびベクターがここに提供される。例えば、ある実施態様は、免疫細胞の癌へのターゲティングおよび癌細胞での細胞毒性効果発揮を促進する、ＣＤ１９指向性キメラ受容体をコードするポリヌクレオチド、ポリペプチドまたはベクターを含む。また提供されるのは、このようなＣＡＲを発現する操作された免疫細胞(例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞)である。いくつかの実施態様において、２以上のサブドメイン、例えば、ここに開示するＣＤ１９結合部分を含む第一ＣＤ１９ターゲティングサブドメインおよびＣ型レクチン様受容体を含む第二サブドメインを含む細胞外ドメインおよび細胞毒性シグナル伝達複合体を含む構築物をコードする、ポリヌクレオチド、ポリペプチドおよびベクターもここに提供される。また提供されるのは、このような二特異的構築物を発現する操作された免疫細胞(例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞)である。多特異的構築物を発現するおよび／または複数の標的マーカーに結合する能力を有する操作された免疫細胞(例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞)も提供される。癌を処置する方法および癌免疫療法に対するこのような細胞の他の使用もここに提供される。
【０１１４】
免疫療法について操作された細胞
いくつかの実施態様において、免疫系細胞は、腫瘍細胞などの標的細胞に対する細胞毒性効果が増強されるように、操作される。例えば、免疫系細胞は、ここに記載するＣＤ１９指向性キメラ受容体を含むように操作され得る。いくつかの実施態様において、白血球細胞または白血球が、それらの生来の機能が異常細胞の増殖および感染性疾患から体を防御することであるため、使用される。ヒト免疫系で特定の役割を果たす多様なタイプの白血球があり、それ故ここに開示する細胞操作の好ましい出発点である。白血球は顆粒球および無顆粒球を含む(それぞれ細胞質に顆粒が存在するまたは存在しない)。顆粒球は好塩基球、好酸球、好中球および肥満細胞を含む。無顆粒球はリンパ球および単球を含む。下記のようなまたは本明細書の他の場所に記載する細胞を、ＣＤ１９指向性キメラ受容体などのキメラ受容体またはキメラ受容体をコードする核酸を含むように操作するおよび／または膜結合インターロイキン１５(ｍｂＩＬ１５)共刺激ドメインを共発現するように操作することができる。
【０１１５】
免疫療法のための単球
単球は白血球のサブタイプである。単球はマクロファージおよび骨髄細胞系譜樹状細胞に分化し得る。単球は適応免疫系と関係し、食作用、抗原提示およびサイトカイン産生の主機能を果たす。食作用は、細胞物質または細胞全体の取り込みと、続く貪食細胞物質の消化および破壊の過程である。いくつかの実施態様において、単球は、ここに開示する、１個以上のさらなる操作された細胞と共に使用される。ここに記載する方法および組成物の実施態様の一部は、ＣＤ１９指向性キメラ受容体またはＣＤ１９指向性キメラ受容体をコードする核酸を含む単球に関する。ここに開示する方法および組成物のいくつかの実施態様は、ＣＤ１９指向性キメラ受容体および膜結合インターロイキン１５(ｍｂＩＬ１５)共刺激ドメインを発現するよう操作された単球に関する。
【０１１６】
免疫療法のためのリンパ球
白血球の他の主要なサブタイプであるリンパ球は、Ｔ細胞(細胞介在、細胞毒性適応免疫)、ナチュラルキラー細胞(細胞介在、細胞毒性自然免疫)およびＢ細胞(液性、抗体駆動適応免疫)を含む。Ｂ細胞は、ここに開示するいくつかの実施態様により操作されるが、いくつかの実施態様はまた操作されたＴ細胞または操作されたＮＫ細胞に関する(Ｔ細胞およびＮＫ細胞の混合物がある実施態様において使用される)。ここに記載する方法および組成物の実施態様の一部は、ＣＤ１９指向性キメラ受容体またはＣＤ１９指向性キメラ受容体をコードする核酸を含むリンパ球に関する。ここに開示する方法および組成物のいくつかの実施態様は、ＣＤ１９指向性キメラ受容体および膜結合インターロイキン１５(ｍｂＩＬ１５)共刺激ドメインを発現するよう操作されたリンパ球に関する。
【０１１７】
免疫療法のためのＴ細胞
Ｔ細胞は、細胞表面のＴ細胞受容体の存在に基づき、他のリンパ球サブタイプ(例えば、Ｂ細胞またはＮＫ細胞)と区別可能である。Ｔ細胞は、エフェクターＴ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞毒性Ｔ細胞、記憶Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、粘膜関連インバリアントＴ細胞およびガンマデルタＴ細胞を含む種々の異なるサブタイプに分けられ得る。ある実施態様において、Ｔ細胞の特定のサブタイプが操作される。ある実施態様において、Ｔ細胞サブタイプの混合プールが操作される。ある実施態様において、ここに開示する細胞毒性受容体複合体を発現するよう操作されるＴ細胞のタイプは特に選択されない。いくつかの実施態様において、サイトカイン刺激の使用などの特定の技術を使用して、特異的マーカープロファイルを有するＴ細胞の拡大／採取増大をする。例えば、いくつかの実施態様において、あるヒトＴ細胞、例えばＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞の活性化は、刺激分子としてのＣＤ３および／またはＣＤ２８の使用により達成される。いくつかの実施態様において、ここに記載する細胞毒性受容体複合体および／またはホーミング部分を発現する治療有効量のＴ細胞を投与することを含む、癌または感染性疾患を処置または予防する方法が提供される。いくつかの実施態様において、操作されたＴ細胞は自己細胞であるが、ある実施態様において、Ｔ細胞は同種細胞である。ここに記載する方法および組成物の実施態様の一部は、ＣＤ１９指向性キメラ受容体またはＣＤ１９指向性キメラ受容体をコードする核酸を含むＴ細胞に関する。ここに開示する方法および組成物のいくつかの実施態様は、ＣＤ１９指向性キメラ受容体および膜結合インターロイキン１５(ｍｂＩＬ１５)共刺激ドメインを発現するよう操作されたＴ細胞に関する。
【０１１８】
免疫療法のためのＮＫ細胞
いくつかの実施態様において、ここに記載する細胞毒性受容体複合体および／またはホーミング部分を発現する治療有効量のナチュラルキラー(ＮＫ)細胞を投与することを含む、癌または感染性疾患を処置または予防する方法が提供される。いくつかの実施態様において、操作されたＮＫ細胞は自己細胞であるが、ある実施態様において、ＮＫ細胞は同種細胞である。いくつかの実施態様において、ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞の潜在的天然細胞毒性が比較的高いため、好ましい。いくつかの実施態様において、ここに開示する操作された細胞が、ＮＫ細胞の細胞毒性活性のさらなる上方制御をでき、標的細胞(例えば、腫瘍または他の罹患細胞)に対する活性をさらに効果的にする点で、予想外に有益である。ここに記載する方法および組成物の実施態様の一部は、ＣＤ１９指向性キメラ受容体またはＣＤ１９指向性キメラ受容体をコードする核酸を含むＮＫに関する。ここに開示する方法および組成物のいくつかの実施態様は、ＣＤ１９指向性キメラ受容体および膜結合インターロイキン１５(ｍｂＩＬ１５)共刺激ドメインを発現するよう操作されたＮＫ細胞に関する。
【０１１９】
癌免疫療法のための造血幹細胞
ある実施態様において、造血幹細胞(ＨＳＣ)は、ここに開示する免疫療法の方法で使用される。いくつかの実施態様において、細胞は、ホーミング部分および／または細胞毒性受容体複合体を発現するよう操作される。ＨＳＣは、いくつかの実施態様において、例えば、癌を寛解させるように戦うために、標的化抗癌エフェクター細胞の持続した供給源をもたらす、長期血液細胞産生のための生着能力を利用するために使用される。いくつかの実施態様において、この進行中の産生は、例えば、腫瘍微小環境による他の細胞型のアネルギーまたは疲弊を相殺することを助ける。いくつかの実施態様において、同種ＨＳＣが使用されるが、ある実施態様において、自己ＨＳＣが使用される。いくつかの実施態様において、ＨＳＣは、ここに開示する１個以上のさらなる操作された細胞型と組み合わせて使用される。ここに記載する方法および組成物の実施態様の一部は、ＣＤ１９指向性キメラ受容体またはＣＤ１９指向性キメラ受容体をコードする核酸を含む、造血幹細胞などの幹細胞に関する。ここに開示する方法および組成物のいくつかの実施態様は、ＣＤ１９指向性キメラ受容体および膜結合インターロイキン１５(ｍｂＩＬ１５)共刺激ドメインを発現するよう操作された、造血幹細胞などの幹細胞に関する。
【０１２０】
細胞外ドメイン(腫瘍結合因子)
ここに記載する組成物および方法のある実施態様は、細胞外ドメインを含む、ＣＤ１９指向性キメラ受容体などのキメラ受容体に関する。ある実施態様において、細胞外ドメインは、ここに記載する腫瘍結合ドメイン(抗原結合タンパク質または抗原結合ドメインとも称する)を含む。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、抗体、抗体フラグメント、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、(Ｆａｂ’)２、単一ドメイン抗体(ＳＤＡＢ)、ｖＨまたはｖＬドメイン、ラクダ類ＶＨＨドメインまたはＤＡＲＰＩＮなどの非免疫グロブリン足場、アフィボディ、アフィリン、アドネクチン、アフィチン、レペボディ、フィノマー、アルファボディ、アビマー、アトリマー、センチリン、プロネクチン、アンチカリン、クニッツドメイン、アルマジロリピートタンパク質、自己抗原、受容体またはリガンドの野生型または非野生型配列に由来するまたはそれを含む。ある実施態様において、腫瘍結合ドメインは、１を超える抗原結合ドメインを含む。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、直接的にまたは所望により存在するリンカーを介して、ＴＣＲドメイン(例えばＴＣＲ−アルファ、ＴＣＲ−ベータｌ、ＴＣＲ−ベータ２、プレＴＣＲ−アルファ、プレＴＣＲ−アルファ−Ｄｅｌ４８、ＴＣＲ−ガンマまたはＴＣＲ−デルタの定常鎖)のＮＨ２末端に操作可能に結合される。
【０１２１】
抗原結合タンパク質
いくつかの実施態様において、抗原結合タンパク質が提供される。ここで使用する用語「抗原結合タンパク質」は、その通常の意味を与えられるべきであり、抗原に結合する抗原結合フラグメントおよび、所望により、抗原結合フラグメントが、該抗原結合タンパク質の抗原への結合を促進する配座をとることを可能とする、足場またはフレームワーク部分を含む、タンパク質を含むべきでもある。ある実施態様において、抗原は癌抗原(例えば、ＣＤ１９)またはそのフラグメントである。ある実施態様において、抗原結合フラグメントは、該抗原に結合する抗体からの少なくとも１つのＣＤＲを含む。ある実施態様において、抗原結合フラグメントは、該抗原に結合する抗体の重鎖または抗原に結合する抗体の軽鎖からの全３個のＣＤＲを含む。なおさらなる実施態様において、抗原結合フラグメントは、該抗原に結合する抗体からの全６個のＣＤＲを含む(重鎖から３個および軽鎖から３個)。いくつかの実施態様において、抗原結合フラグメントは、該抗原に結合する抗体からの１個、２個、３個、４個、５個または６個のＣＤＲを含み、いくつかの実施態様において、ＣＤＲは重鎖および／または軽鎖ＣＤＲのあらゆる組み合わせであり得る。ある実施態様において、抗原結合フラグメントは抗体フラグメントである。
【０１２２】
抗原結合タンパク質の非限定的例は、抗体、抗体フラグメント(例えば、抗体の抗原結合フラグメント)、抗体誘導体および抗体アナログを含む。さらなる具体例は、一本鎖可変フラグメント(ｓｃＦｖ)、ナノボディ(例えばラクダ類重鎖抗体のＶＨドメイン；ＶＨＨフラグメント)、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ(ａｂ’)２フラグメント、Ｆｖフラグメント、Ｆｄフラグメントおよび相補性決定領域(ＣＤＲ)フラグメントを含むが、これらに限定されない。これらの分子は、ヒト、マウス、ラット、ウサギまたはブタ、イヌまたはラクダ類などのあらゆる哺乳動物起源に由来し得る。抗体フラグメントは、インタクト(例えば、天然)抗体と標的抗原への結合について競合でき、フラグメントはインタクト抗体(例えば酵素または化学的開裂)の修飾により産生できまたは組み換えＤＮＡテクノロジーまたはペプチド合成を使用してデノボで合成され得る。抗原結合タンパク質は、例えば、ＣＤＲまたはＣＤＲ誘導体が移植された、代替タンパク質足場または人工足場を含み得る。このような足場は、例えば、抗原結合タンパク質の三次元構造を安定化するために導入された変異を含む、抗体由来足場および、例えば、生体適合性ポリマーを含む、完全合成足場を含むが、これらに限定されない。さらに、ペプチド抗体模倣体(「ＰＡＭ」)、および足場としてフィブロネクチンを利用する抗体模倣体に基づく足場が使用され得る。
【０１２３】
ある実施態様において、抗原結合タンパク質は、単一ポリペプチド鎖または複数ポリペプチド鎖に組み込まれた１個以上の抗体フラグメントを含む。例えば、抗原結合タンパク質は、二重特異性抗体；イントラボディ；ドメイン抗体(単一ＶＬまたはＶＨドメインまたはペプチドリンカーにより連結された２以上のＶＨドメイン)；マキシボディ(Ｆｃ領域に融合した２つのｓｃＦｖｓ)；トリアボディ；テトラボディ；ミニボディ(ＣＨ３ドメインに融合したｓｃＦｖ)；ペプチボディ(Ｆｃ領域に結合した１個以上のペプチド)；直線状抗体(相補的軽鎖ポリペプチドと共に、抗原結合領域対を形成するタンデムＦｄセグメント(ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１)の対)；小モジュール免疫薬；および免疫グロブリン癒合タンパク質(例えばＩｇＧ−ｓｃＦｖ、ＩｇＧ−Ｆａｂ、２ｓｃＦｖ−ＩｇＧ、４ｓｃＦｖ−ＩｇＧ、ＶＨ−ＩｇＧ、ＩｇＧ−ＶＨおよびＦａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ)を含み得るが、これらに限定されない。
【０１２４】
ある実施態様において、抗原結合タンパク質は、免疫グロブリンの構造を有する。ここで使用する用語「免疫グロブリン」は、その通常の意味を与えられるべきであり、各四量体がポリペプチド鎖の２つの同一対を含み、各対が一つの「軽」鎖(約２５kDa)および一つの「重」鎖(約５０〜７０kDa)を有する、四量体分子を含むべきでもある。各鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識を担う約１００〜１１０またはそれ以上のアミノ酸の可変領域からなる。各鎖のカルボキシ末端部分は、主にエフェクター機能を担う定常領域を規定する。
【０１２５】
軽鎖および重鎖内で、可変領域(Ｖ)および定常領域(Ｃ)は、約１２またはそれ以上のアミノ酸の「Ｊ」領域により連結され、重鎖はまた約１０以上のアミノ酸の「Ｄ」領域を含む。各軽鎖／重鎖対の可変領域は、インタクト免疫グロブリンが２つの結合部位を有するよう、抗体結合部位を形成する。
【０１２６】
免疫グロブリン鎖は、相補性決定領域またはＣＤＲとも称される３個の超可変領域により連結される、同じ一般構造の比較的保存されたフレームワーク領域(ＦＲ)を示す。Ｎ末端からＣ末端方向で、軽鎖および重鎖両者はドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を含む。
【０１２７】
ヒト軽鎖はカッパおよびラムダ軽鎖として分類される。抗体「軽鎖」は、天然に存在する配座で抗体分子に存在する２種のポリペプチド鎖の小さい方をいう。カッパ(Ｋ)およびラムダ(λ)軽鎖は、２つの主要な抗体軽鎖アイソタイプをいう。軽鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端方向で、単一免疫グロブリン軽鎖可変領域(ＶＬ)および単一免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン(ＣＬ)を含むポリペプチドも含み得る。
【０１２８】
重鎖は、ミュー(μ)、デルタ(Δ)、ガンマ(γ)、アルファ(α)およびイプシロン(ε)に分類され、それぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥとして抗体のアイソタイプを規定する。抗体「重鎖」は、天然に存在する配座で抗体分子に存在する２種のポリペプチド鎖の大きい方をいい、通常抗体が属するクラスを決定する。重鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端方向で、単一免疫グロブリン重鎖可変領域(ＶＨ)、免疫グロブリン重鎖定常ドメイン１(ＣＨ１)、免疫グロブリンヒンジ領域、免疫グロブリン重鎖定常ドメイン２(ＣＨ２)、免疫グロブリン重鎖定常ドメイン３(ＣＨ３)および所望により免疫グロブリン重鎖定常ドメイン４(ＣＨ４)を含む、ポリペプチドを含み得る。
【０１２９】
ＩｇＧクラスは、サブクラス、すなわち、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４にさらに分割される。ＩｇＡクラスは、サブクラス、すなわちＩｇＡ１およびＩｇＡ２に分割される。ＩｇＭは、ＩｇＭ１およびＩｇＭ２を含むが、これらに限定されないサブクラスを有する。ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＤ抗体の重鎖は３個のドメイン(ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３)を有し、一方ＩｇＭおよびＩｇＥ抗体の重鎖は４個のドメイン(ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４)を有する。免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、サブタイプを含み、何れかの免疫グロブリンアイソタイプ由来であり得る。抗体鎖は、ＣＬドメインとＣＨ１ドメインの間(例えば、軽鎖と重鎖の間)および抗体重鎖のヒンジ領域の間のポリペプチド間ジスルフィド結合により結合される。
【０１３０】
ある実施態様において、抗原結合タンパク質は抗体である。ここで使用する用語「抗体」は、抗原に特異的に結合する免疫グロブリン分子由来のタンパク質またはポリペプチド配列をいう。抗体はモノクローナルでもポリクローナルでも、複数鎖でも一本鎖でもまたはインタクト免疫グロブリンでもよく、天然源または組み換え源由来であり得る。抗体は、免疫グロブリン分子の四量体であり得る。抗体は「ヒト化」、「キメラ」または非ヒトであり得る。抗体は、あらゆるアイソタイプのインタクト免疫グロブリンを含んでよく、例えば、キメラ、ヒト化、ヒトおよび二特異的抗体を含む。インタクト抗体は、一般に少なくとも２個の完全長重鎖および２個の完全長軽鎖を含む。抗体配列は、単一種にのみ由来してよく、または「キメラ」、すなわち、さらに下に記載するとおり、抗体の異なる部分が２つの異なる種由来であり得る。特に断らない限り、用語「抗体」はまた、抗体が２個の完全長軽鎖および重鎖からなる抗体と同一または類似する結合および／または機能を保持する限り、２個の実質的に完全長重鎖および２個の実質的に完全長軽鎖を含む抗体も含む。例えば、重鎖および／または軽鎖のＮ末端および／またはＣ末端に１、２、３、４または５アミノ酸残基置換、挿入または欠失を有する抗体は、該抗体が２個の完全長重鎖および２個の完全長軽鎖を含む抗体と同一または類似する結合および／または機能を保持する限り、本定義に含まれる。抗体の例は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、二特異的抗体および合成抗体を含む。ある実施態様において、モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体が提供される。ここで使用する用語「ポリクローナル抗体」は、その通常の意味を与えられるべきであり、一般に組成および結合特異性の変動が広い、抗体の集団を含むべきでもある。ここで使用する用語「モノクローナル抗体」(「ｍＡｂ」)は、その通常の意味を与えられるべきであり、同一配列を有する抗体の１個以上の集団を含むべきでもある。モノクローナル抗体は、抗原の特定のエピトープで抗原に結合する。
【０１３１】
ある実施態様において、抗原結合タンパク質は抗体のフラグメントまたは抗原結合フラグメントである。用語「抗体フラグメント」は、抗原のエピトープと特異的に相互作用(例えば、結合、立体障害、安定化／脱安定化、空間的分布による)する能力を保持する、抗体の少なくとも１つの部分をいう。抗体フラグメントの例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ(ａｂ’)２、Ｆｖフラグメント、ｓｃＦｖ抗体フラグメント、ジスルフィド結合Ｆｖｓ(ｓｄＦｖ)、ＶＨおよびＣＨＩドメインからなるＦｄフラグメント、直線状抗体、ｓｄＡｂなどの単一ドメイン抗体(ｖＬまたはｖＨいずれか)、ラクダ類ｖＨＨドメイン、ヒンジ領域でジスルフィド架橋により結合された２個のＦａｂフラグメントを含む二価フラグメントなどの抗体フラグメントから形成された多特異的抗体および単離ＣＤＲまたは抗体の他のエピトープ結合フラグメントを含むが、これらに限定されない。抗原結合フラグメントは、単一ドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、ナノボディ、イントラボディ、二重特異性抗体、トリアボディ、テトラボディ、ｖ−ＮＡＲおよびｂｉｓ−ｓｃＦｖにも取り込まれ得る(例えば、Hollinger and Hudson, Nature Biotechnology 23: 1126-1136, 2005参照)。抗原結合フラグメントは、フィブロネクチンIII型(Ｆｎ３)などのポリペプチドに基づく足場に移植もし得る(フィブロネクチンポリペプチドミニボディを記載する米国特許６,７０３,１９９参照)。抗体フラグメントは、癌抗原(例えば、ＣＤ１９)への特異的抗原結合を与えるのに十分な免疫グロブリンの少なくとも１つのＣＤＲを含む、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ(ａｂ’)２および／またはＦｖフラグメントを含み得る。抗体フラグメントは、組み換えＤＮＡ技術またはインタクト抗体の酵素または化学開裂により産生され得る。
【０１３２】
ある実施態様において、Ｆａｂフラグメントが提供される。Ｆａｂフラグメントは、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインを有する一価フラグメントであり、Ｆ(ａｂ’)２フラグメントは、ヒンジ領域でジスルフィド架橋により結合された２個のＦａｂフラグメントを有する二価フラグメントであり、ＦｄフラグメントはＶＨおよびＣＨ１ドメインを有し、Ｆｖフラグメントは抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインを有し、そしてｄＡｂフラグメントは、ＶＨドメイン、ＶＬドメインまたはＶＨもしくはＶＬドメインの抗原結合フラグメントを有する。ある実施態様において、これらの抗体フラグメントは、単一ドメイン抗体、一本鎖抗体、マキシボディ、ミニボディ、イントラボディ、二重特異性抗体、トリアボディ、テトラボディ、ｖ−ＮＡＲおよびｂｉｓ−ｓｃＦｖに取り込まれ得る。ある実施態様において、抗体は、ここに記載する少なくとも１つのＣＤＲを含む。
【０１３３】
いくつかの実施態様において、一本鎖可変フラグメントもここで提供される。ここで使用する用語「一本鎖可変フラグメント」(「ｓｃＦｖ」)は、その通常の意味を与えられるべきであり、ＶＬおよびＶＨ領域が連続的タンパク質鎖を形成するようにリンカー(例えば、アミノ酸残基の合成配列)により連結され、ここで、リンカーはタンパク質鎖がそれ自体に折り畳まれて戻り、一価抗原結合部位を形成するのに十分な長さである、融合タンパク質を含むべきでもある。明確にするために、特に断らない限り、「一本鎖可変フラグメント」は、ここに定義する抗体または抗体フラグメントではない。二重特異性抗体は、２個のポリペプチド鎖を含む二価抗体であり、ここで、各ポリペプチド鎖は、同じ鎖の２個のドメイン間の対形成を減らすかまたは対形成させないために、そうして、各ドメインを他のポリペプチド鎖の相補性ドメインと対形成させるために設定されたリンカーにより結合されたＶＨおよびＶＬドメインを含む。いくつかの実施態様によると、二重特異性抗体の２個のポリペプチド鎖が同一ならば、その対形成に由来する二重特異性抗体は２個の同一抗原結合部位を有する。異なる配列を有するポリペプチド鎖を、２つの異なる抗原結合部位を有する二重特異性抗体の製造に使用し得る。同様に、トリアボディおよびテトラボディは、同一でも異なってもよい３個および４個のポリペプチド鎖を含み、３個および４個の抗原結合部位を形成する、抗体である。
【０１３４】
いくつかの実施態様において、抗原結合タンパク質は１個以上のＣＤＲを含む。ここで使用する用語「ＣＤＲ」は、その通常の意味を与えられるべきであり、抗体可変配列内の相補性決定領域(「最小認識単位」または「超可変領域」とも称される)も含むべきである。ＣＤＲは、抗原結合タンパク質が特定の目的の抗原に特異的に結合することを可能とする。３個の重鎖可変領域ＣＤＲ(ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３)および３個の軽鎖可変領域ＣＤＲ(ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３)がある。２鎖の各々のＣＤＲは、一般にフレームワーク領域により並べられ、標的タンパク質の特定のエピトープまたはドメインに特異的に結合する構造を形成する。Ｎ末端からＣ末端方向で、天然に存在する軽鎖および重鎖可変領域両者は、一般にこれらの要素の次の順に一致する：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４。これらドメイン各々の位置を占拠するアミノ酸に番号を割り当てるナンバリングシステムが考案されている。このナンバリングシステムは、Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest(1987 and 1991, NIH, Bethesda, MD)またはChothia & Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-917; Chothia et al., 1989, Nature 342:878-883に定義されている。ある抗体の相補性決定領域(ＣＤＲ)およびフレームワーク領域(ＦＲ)はこのシステムを使用して特定され得る。免疫グロブリン鎖におけるアミノ酸のための他のナンバリングシステムは、ＩＭＧＴ(登録商標)(the international ImMunoGeneTics information system; Lefranc et al, Dev. Comp. Immunol. 29:185-203; 2005)およびAHo(Honegger and Pluckthun, J. Mol. Biol. 309(3):657-670; 2001)を含む。１個以上のＣＤＲを、抗原結合タンパク質を製造するために共有結合または非共有結合により分子に取り込み得る。いくつかの実施態様において、ここに提供する抗原結合タンパク質は、配列番号１０４および配列番号１０６から選択される重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、ここに提供する抗原結合タンパク質は、配列番号１０５および配列番号１０７から選択される軽鎖可変領域を含む。
【０１３５】
いくつかの実施態様において、抗原結合タンパク質は、例えば、発現、機能改善または宿主による抗原結合タンパク質の免疫応答を低減する目的で、その元の配列から修飾されている。いくつかの実施態様において、抗原結合タンパク質は、配列番号１１７、配列番号１１８および配列番号１１９から選択される軽鎖可変領域および／または少なくとも９０％同一性および／または相同性(例えば、９０〜９５％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％)を有する配列を含む。いくつかの実施態様において、軽鎖可変領域は、配列番号１１７、配列番号１１８または配列番号１１９と類似する、実質的に類似するまたは同一のリガンド結合機能(または他の機能性)で、配列番号１１７、配列番号１１８または配列番号１１９の配列と、５％を超えて(例えば、５〜７％、５〜１０％、１０〜２０％またはそれ以上)異なる。いくつかの実施態様において、抗原結合タンパク質は、配列番号１２０、配列番号１２１、配列番号１２２および配列番号１２３から選択される重鎖可変領域および／または少なくとも９０％同一性および／または相同性(例えば、９０〜９５％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％)を有する配列を含む。いくつかの実施態様において、重鎖可変領域は、配列番号１２０、配列番号１２１、配列番号１２２または配列番号１２３と類似する、実質的に類似するまたは同一のリガンド結合機能(または他の機能性)で、配列番号１２０、配列番号１２１、配列番号１２２または配列番号１２３の配列と、５％を超えて(例えば、５〜７％、５〜１０％、１０〜２０％またはそれ以上)異なる。ある実施態様によって、重鎖および軽鎖領域のあらゆる組み合わせが使用され得る(例えば、ｓｃＦｖの集合において)。いくつかの実施態様において、抗原結合タンパク質は、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４、配列番号１３４、配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８、配列番号１３９、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３および配列番号１４４から選択される１個以上のＣＤＲを含む。
【０１３６】
さらなる実施態様において、ＣＤＲは、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１１４および配列番号１１５から、あらゆる組み合わせで、選択される。ある実施態様において、ＣＤＲを数号させて、ＣＤ１９を指向し、配列番号１１６を含むＣＡＲを産生する。
【０１３７】
いくつかの実施態様において、抗原結合タンパク質は、配列番号８８の配列を有する重鎖を含む。いくつかの実施態様において、重鎖は、配列番号８９、配列番号９０および／または配列番号９１の軽鎖の一つと(例えば、ｓｃＦｖとして)結合する。いくつかの実施態様において、抗原結合タンパク質は、配列番号９２、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、配列番号９９および配列番号１００から選択される１個以上のＣＤＲを含む。
【０１３８】
いくつかの実施態様において、抗原結合タンパク質は、配列番号１５０の配列を有するＦＭＣ６３抗体の軽鎖領域を含む。いくつかの実施態様において、抗原結合タンパク質は、配列番号１４８の配列を有するＦＭＣ６３抗体の軽鎖領域を含む。いくつかの実施態様において、リンカーは重鎖と軽鎖の間で使用され、ある実施態様において、リンカーは、配列番号１４９の配列を含む。いくつかの実施態様において、このような重鎖および軽鎖は、配列番号１５３のもののようなＣＤ２８共刺激ドメインと組み合わせて使用される。しばしばスペーサーがＣＡＲの別の構成部分として使用される。例えば、いくつかの実施態様において、配列番号１５１の配列を含むスペーサーが使用される。いくつかの実施態様において、配列番号１５２の配列を有する膜貫通ドメインが使用される。いくつかの実施態様において、ＣＡＲは、配列番号１４７と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する核酸配列を含む。
【０１３９】
ある実施態様において、ここに提供する抗原結合タンパク質は、大型ポリペプチド鎖の一部として１個以上のＣＤＲを含む。ある実施態様において、抗原結合タンパク質は、１個以上のＣＤＲを他のポリペプチド鎖に共有させる。ある実施態様において、抗原結合タンパク質は、非共有結合性に１個以上のＣＤＲを組み込む。ある実施態様において、抗原結合タンパク質は、生体適合性フレームワーク構造に組み込まれた、ここに記載するＣＤＲの少なくとも１つを含み得る。ある実施態様において、生体適合性フレームワーク構造は、立体配座的に安定な構造支持体またはフレームワークもしくは足場の形成に十分なポリペプチドまたはその一部を含み、これは、局在化表面領域における抗原(例えば、ＣＤＲ、可変領域など)に結合するアミノ酸の１個以上の配列を提示できる。このような構造は、天然に存在するポリペプチドまたはポリペプチド「折り畳み構造」(構造モチーフ)であり得るかまたは天然に存在するポリペプチドまたは折り畳み構造に対してアミノ酸の付加、欠失および／または置換などの１個以上の修飾を有し得る。ある実施態様によって、足場は、ヒト、非ヒト霊長類または他の哺乳動物、他の脊椎動物、無脊椎動物、植物、細菌またはウイルスなどの多様な異なる種(または１を超える種)のポリペプチドに由来し得る。
【０１４０】
ある実施態様によって、生体適合性フレームワーク構造は、免疫グロブリンドメイン以外のタンパク質足場または骨格に基づく。このような実施態様の一部において、これらのフレームワーク構造は、フィブロネクチン、アンキリン、リポカリン、ネオカルジノスタチン、シトクロムｂ、ＣＰ１亜鉛フィンガー、ＰＳＴ１、コイルドコイル、ＬＡＣＩ−Ｄ１、Ｚドメインおよび／またはテンダミスタットドメインに基づく。
【０１４１】
ある実施態様において、１を超える結合部位を有する抗原結合タンパク質が提供される。いくつかの実施態様において、結合部位は互いに同一同一であり、一方ある実施態様において、結合部位は互いに異なる。例えば、抗体は、一般に２つの同一結合部位を有するが、「二特異的」または「二機能性」抗体は、２つの異なる結合部位を有する。二特異的抗原結合タンパク質または抗体の２つの結合部位は、同一または異なるタンパク質標的に存在し得る２つの異なるエピトープに結合する。いくつかの実施態様において、二特異的キメラ抗原受容体が複数腫瘍マーカーを標的とする能力を操作された細胞に与え得るため、これは特に有利である。例えば、ＣＤ１９およびさらなる腫瘍マーカー、例えば、ＣＤ１２３、ＮＫＧ２Ｄまたはここに開示するまたは当分野で腫瘍特異的抗原もしくは腫瘍関連抗原として認められている何らかの他のマーカー。
【０１４２】
ここで使用する用語「キメラ抗体」は、その通常の意味を与えられるべきであり、ある抗体からの１個以上の領域および１個以上の他の抗体からの１個以上の領域を含む、抗体も含むべきである。ある実施態様において、ＣＤＲの１以上は、抗癌抗原(例えば、ＣＤ１９)抗体に由来する。いくつかの実施態様において、ＣＤＲの全ては抗癌抗原抗体(例えば抗ＣＤ１９抗体)に由来する。ある実施態様において、１を超える抗癌抗原抗体からのＣＤＲがキメラ抗体で混合され、適合される。例えば、キメラ抗体は、第一抗癌抗原抗体の軽鎖からのＣＤＲ１、第二抗癌抗原抗体の軽鎖からのＣＤＲ２およびＣＤＲ３および第三抗癌抗原抗体からの重鎖のＣＤＲを含み得る。さらに、ここに開示する抗原結合タンパク質のフレームワーク領域は、同じ抗癌抗原(例えば、ＣＤ１９)抗体、１個以上の異なる抗体、例えばヒト抗体またはヒト化抗体の一つに由来し得る。キメラ抗体の一例において、重鎖および／または軽鎖の部分は、特定の種からの抗体と同一である、相同であるもしくはそれに由来するまたは特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属するが、鎖の残りは、他の種からの１個以上の抗体と同一である、相同であるもしくはそれに由来するまたは他の抗体クラスもしくはサブクラスに属する。またここに提供されるのは、所望の生物学的活性を示すこのような抗体のフラグメントである。
【０１４３】
ある実施態様において、配列番号３３に示すＶＨドメインアミノ酸配列に少なくとも９０％同一性を有する重鎖可変ドメインを含む、抗原結合タンパク質が提供される。ある実施態様において、抗原結合タンパク質は、配列番号３３に示すＶＨドメインアミノ酸配列に少なくとも９５％同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。ある実施態様において、抗原結合タンパク質は、配列番号３３に示すＶＨドメインアミノ酸配列に少なくとも９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施態様において、重鎖可変ドメインは、配列番号３３に示すＶＨドメインアミノ酸配列に１個以上のさらなる変異(例えば、ヒト化目的で)を有し得るが、癌抗原(例えば、ＣＤ１９)への特異的結合を保持する。いくつかの実施態様において、重鎖可変ドメインは、配列番号３３に示すＶＨドメインアミノ酸配列に１個以上のさらなる変異を有し得るが、癌抗原(例えば、ＣＤ１９)への特異的結合が改善する。
【０１４４】
ある実施態様において、抗原結合タンパク質は、配列番号３２に示すＶＬドメインアミノ酸配列に少なくとも９０％同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。ある実施態様において、抗原結合タンパク質は、配列番号３２に示すＶＬドメインアミノ酸配列に少なくとも９５％同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。ある実施態様において、抗原結合タンパク質は、配列番号３２に示すＶＬドメインアミノ酸配列に少なくとも９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施態様において、軽鎖可変ドメインは、配列番号３２に示すＶＬドメインアミノ酸配列に１個以上のさらなる変異(例えば、ヒト化目的で)を有し得るが、癌抗原(例えば、ＣＤ１９)への特異的結合を保持する。いくつかの実施態様において、軽鎖可変ドメインは、配列番号３２に示すＶＬドメインアミノ酸配列に１個以上のさらなる変異を有し得るが、癌抗原(例えば、ＣＤ１９)への特異的結合が改善する。
【０１４５】
ある実施態様において、抗原結合タンパク質は、配列番号３３に示すＶＨドメインアミノ酸配列に少なくとも９０％同一性を有する重鎖可変ドメインおよび配列番号３２に示すＶＬドメインアミノ酸配列に少なくとも９０％同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。ある実施態様において、抗原結合タンパク質は、配列番号３３に示すＶＨドメインアミノ酸配列に少なくとも９５％同一性を有する重鎖可変ドメインおよび配列番号３２に示すＶＬドメインアミノ酸配列に少なくとも９５％同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。ある実施態様において、抗原結合タンパク質は、配列番号３３に示すＶＨドメインアミノ酸配列に少なくとも９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有する重鎖可変ドメインおよび配列番号３２に示すＶＬドメインアミノ酸配列に少なくとも９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。
【０１４６】
ある実施態様において、抗原結合タンパク質は、配列番号３３に示すＶＨドメインアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインおよび配列番号３２に示すＶＬドメインアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。ある実施態様において、軽鎖可変ドメインは、配列番号３２の軽鎖可変ドメインの配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、軽鎖可変ドメインは、配列番号３３に一致する重鎖可変ドメインの配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【０１４７】
ある実施態様において、軽鎖可変ドメインは、配列番号３２のポリヌクレオチド配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、軽鎖可変ドメインは、配列番号３２の配列に一致する軽鎖可変ドメインをコードするポリヌクレオチドの相補体と適度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされる、アミノ酸配列を含む。ある実施態様において、軽鎖可変ドメインは、配列番号３２の配列に一致する軽鎖可変ドメインをコードするポリヌクレオチドの相補体とストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるアミノ酸配列を含む。
【０１４８】
ある実施態様において、重鎖可変ドメインは、配列番号３３の配列に一致する重鎖可変ドメインの配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、重鎖可変ドメインは、配列番号３３の配列に一致する重鎖可変ドメインをコードするポリヌクレオチドの相補体と適度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされる、アミノ酸配列を含む。ある実施態様において、重鎖可変ドメインは、配列番号３３の配列に一致する重鎖可変ドメインをコードするポリヌクレオチドの相補体とストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるアミノ酸配列を含む。
【０１４９】
いくつかの実施態様において、さらなる抗ＣＤ１９結合構築物が提供される。例えば、いくつかの実施態様において、配列番号３５の配列を含む重鎖可変領域を含む、ＣＤ１９を標的とするｓｃＦｖが提供される。ある実施態様において、抗原結合タンパク質は、配列番号３５に示すＨＣＶドメインアミノ酸配列と少なくとも９５％同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。ある実施態様において、抗原結合タンパク質は、配列番号３５に示すＨＣＶドメインアミノ酸配列と少なくとも９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施態様において、重鎖可変ドメインは、配列番号３５に示すＨＣＶドメインアミノ酸配列に１個以上のさらなる変異(例えば、ヒト化目的で)を有し得るが、癌抗原(例えば、ＣＤ１９)への特異的結合を保持する。いくつかの実施態様において、重鎖可変ドメインは、配列番号３５に示すＨＣＶドメインアミノ酸配列における１個以上のさらなる変異を有し得るが、癌抗原(例えば、ＣＤ１９)への特異的結合が改善する。
【０１５０】
さらに、いくつかの実施態様において、ＣＤ１９を標的とするｓｃＦｖは、配列番号３６の配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある実施態様において、抗原結合タンパク質は、配列番号３６に示すＬＣＶドメインアミノ酸配列に少なくとも９５％同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。ある実施態様において、抗原結合タンパク質は、配列番号３６に示すＬＣＶドメインアミノ酸配列に少なくとも９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施態様において、軽鎖可変ドメインは、配列番号３６に示すＬＣＶドメインアミノ酸配列に１個以上のさらなる変異(例えば、ヒト化目的で)を有し得るが、癌抗原(例えば、ＣＤ１９)への特異的結合を保持する。いくつかの実施態様において、軽鎖可変ドメインは、配列番号３６に示すＬＣＶドメインアミノ酸配列に１個以上のさらなる変異を有し得るが、癌抗原(例えば、ＣＤ１９)への特異的結合が改善する。
【０１５１】
いくつかの実施態様において、第一、第二および第三相補性決定領域(それぞれＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２およびＬＣ  ＣＤＲ３)を含む軽鎖ＣＤＲを含む抗ＣＤ１９結合部分も提供される。いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９結合部分は、さらに、第一、第二および第三相補性決定領域(それぞれＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２およびＨＣ  ＣＤＲ３)を含む重鎖ＣＤＲを含む。いくつかの実施態様において、ＬＣ  ＣＤＲ１は配列番号３７の配列を含む。いくつかの実施態様において、ＬＣ  ＣＤＲ１は、配列番号３７の配列と少なくとも約８５％、約９０％、約９５％または約９８％相同性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＬＣ  ＣＤＲ２は、配列番号３８の配列を含む。いくつかの実施態様において、ＬＣ  ＣＤＲ２は、配列番号３８の配列と少なくとも約８５％、約９０％、約９５％または約９８％相同性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＬＣ  ＣＤＲ３は、配列番号３９の配列を含む。いくつかの実施態様において、ＬＣ  ＣＤＲ３は、配列番号３９の配列と少なくとも約８５％、約９０％、約９５％または約９８％相同性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＨＣ  ＣＤＲ１は、配列番号４０の配列を含む。いくつかの実施態様において、ＨＣ  ＣＤＲ１は、配列番号４０の配列と少なくとも約８５％、約９０％、約９５％または約９８％相同性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＨＣ  ＣＤＲ２は配列番号３７の配列を含む。いくつかの実施態様において、ＨＣ  ＣＤＲ２は、配列番号４１、４２もしくは４３の配列と少なくとも約８５％、約９０％、約９５％または約９８％相同性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＨＣ  ＣＤＲ３は、配列番号４４の配列を含む。いくつかの実施態様において、ＨＣ  ＣＤＲ３は、配列番号４４の配列と少なくとも約８５％、約９０％、約９５％または約９８％相同性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１５２】
いくつかの実施態様において、軽鎖可変領域(ＶＬ)および重鎖可変領域(ＨＬ)を含む抗ＣＤ１９結合部分も提供され、ＶＬ領域は、第一、第二および第三相補性決定領域(それぞれＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２およびＶＬ  ＣＤＲ３)を含み、ＶＨ領域は第一、第二および第三相補性決定領域(それぞれＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２およびＶＨ  ＣＤＲ３)を含む。いくつかの実施態様において、ＶＬ領域は配列番号４５、４６、４７もしくは４８の配列を含む。いくつかの実施態様において、ＶＬ領域は、配列番号４５、４６、４７もしくは４８の配列と少なくとも約８５％、約９０％、約９５％または約９８％相同性であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＶＨ領域は、配列番号４９、５０、５１もしくは５２の配列を含む。いくつかの実施態様において、ＶＨ領域は、配列番号４９、５０、５１もしくは５２の配列と少なくとも約８５％、約９０％、約９５％または約９８％相同性であるアミノ酸配列を含む。
【０１５３】
いくつかの実施態様において、第一、第二および第三相補性決定領域(それぞれＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２およびＬＣ  ＣＤＲ３３)を含む、軽鎖ＣＤＲを含む抗ＣＤ１９結合部分も提供される。いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９結合部分は、さらに、第一、第二および第三相補性決定領域(それぞれＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２およびＨＣ  ＣＤＲ３３)を含む、重鎖ＣＤＲを含む。いくつかの実施態様において、ＬＣ  ＣＤＲ１は、配列番号５３の配列を含む。いくつかの実施態様において、ＬＣ  ＣＤＲ１は、配列番号５３の配列と少なくとも約８５％、約９０％、約９５％または約９８％相同性であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＬＣ  ＣＤＲ２は、配列番号５４の配列を含む。いくつかの実施態様において、ＬＣ  ＣＤＲ２は、配列番号５４の配列と少なくとも約８５％、約９０％、約９５％または約９８％相同性であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＬＣ  ＣＤＲ３は、配列番号５５の配列を含む。いくつかの実施態様において、ＬＣ  ＣＤＲ３は、配列番号５５の配列と少なくとも約８５％、約９０％、約９５％または約９８％相同性であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＨＣ  ＣＤＲ１は、配列番号５６の配列を含む。いくつかの実施態様において、ＨＣ  ＣＤＲ１は、配列番号５６の配列と少なくとも約８５％、約９０％、約９５％または約９８％相同性であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＨＣ  ＣＤＲ２は、配列番号５７の配列を含む。いくつかの実施態様において、ＨＣ  ＣＤＲ２は、配列番号５７の配列と少なくとも約８５％、約９０％、約９５％または約９８％相同性であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＨＣ  ＣＤＲ３は、配列番号５８の配列を含む。いくつかの実施態様において、ＨＣ  ＣＤＲ３は、配列番号５８の配列と少なくとも約８５％、約９０％、約９５％または約９８％相同性であるアミノ酸配列を含む。
【０１５４】
例えば、米国特許８,３９９,６４５、米国特許公開２０１８／０１５３９７７、米国特許公開２０１４／０２７１６３５、米国特許公開２０１８／０２５１５１４および米国特許公開２０１８／０３１２５８８(この各々を引用により全体として本明細書に包含させる)に記載のものなど、さらなる抗ＣＤ１９結合部分が当分野で知られる。
【０１５５】
腫瘍リガンドに結合するナチュラルキラーグループドメイン
いくつかの実施態様において、操作されたＮＫ細胞などの免疫細胞が、腫瘍細胞を認識し、かつ破壊する能力について利用される。例えば、操作されたＮＫ細胞は、ＣＤ１９指向性キメラ受容体または該キメラ受容体をコードする核酸を含み得る。ＮＫ細胞は、細胞表面に阻害性受容体および活性化受容体両者を発現する。阻害性受容体は、健常細胞表面に発現される自己分子に結合し(そうして「自己」細胞に対する免疫応答を予防する)、一方活性化受容体は、腫瘍細胞などの異常細胞に発現されるリガンドに結合する。阻害性受容体および活性化受容体の活性化のバランスが活性化受容体に傾いたとき、ＮＫ細胞活性化が起こり、標的(例えば、腫瘍)細胞が溶解される。
【０１５６】
ナチュラルキラーグループ２メンバー(ＮＫＧ２Ｄ)は、細胞に発現される多様なリガンドを認識するＮＫ細胞活性化受容体である。種々のＮＫＧ２Ｄリガンドの表面発現は、健常細胞で一般に低いが、例えば、悪性形質転換により上方制御される。ＮＫＧ２Ｄにより認識されるリガンドの非限定的例は、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５およびＵＬＢＰ６、ならびにＮＫ細胞の細胞溶解または細胞毒性機能を制御する標的細胞に発現される他の分子を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施態様において、Ｔ細胞は、１個以上の腫瘍リガンドに結合し、Ｔ細胞を活性化するための細胞外ドメインを発現するように操作される。例えば、いくつかの実施態様において、Ｔ細胞は、結合因子／活性化部分としてＮＫＧ２Ｄ受容体を発現するよう操作される。いくつかの実施態様において、ここに開示する操作された細胞は、ＮＫＧ２ファミリーの他のメンバー、例えば、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｃおよび／またはＮＫＧ２Ｅを発現するよう、操作される。このような受容体の組み合わせは、ある実施態様において操作される。さらに、いくつかの実施態様において、キラー細胞免疫グロブリン様受容体(ＫＩＲ)などの他の受容体が発現される。
【０１５７】
いくつかの実施態様において、細胞は、腫瘍細胞(例えば、肝細胞)表面のリガンドを認識するために、細胞外成分として完全長ＮＫＧ２Ｄを含む細胞毒性受容体複合体を発現するよう、操作される。ある実施態様において、完全長ＮＫＧ２Ｄは配列番号２７の核酸配列を有する。いくつかの実施態様において、完全長ＮＫＧ２Ｄまたはその機能的フラグメントはヒトＮＫＧ２Ｄである。
【０１５８】
いくつかの実施態様において、細胞は、腫瘍細胞または他の罹患細胞の表面のリガンドを認識するための細胞外成分として、ＮＫＧ２Ｄの機能的フラグメントを含む細胞毒性受容体複合体を発現するよう操作される。ある実施態様において、ＮＫＧ２Ｄの機能的フラグメントは配列番号２５の核酸配列を有する。いくつかの実施態様において、ＮＫＧ２Ｄのフラグメントは、完全長野生型ＮＫＧ２Ｄと少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％相同である。いくつかの実施態様において、フラグメントは、配列番号２５から１個以上のさらなる変異を有し得るが、リガンド結合機能が保持またはある実施態様において増強される。いくつかの実施態様において、ＮＫＧ２Ｄの機能的フラグメントは、配列番号２６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫＧ２Ｄフラグメントは二量体、三量体または他のコンカテマー形態として提供され、このような実施態様はリガンド結合活性増強をもたらす。いくつかの実施態様において、ＮＫＧ２Ｄフラグメントをコードする配列は、所望により完全にまたは一部コドン最適化されている。ある実施態様において、コドン最適化ＮＫＧ２Ｄフラグメントをコードする配列は、配列番号２８の配列を含む。有利に、いくつかの実施態様によると、機能的フラグメントはその天然膜貫通または細胞内ドメインを欠くが、ＮＫＧ２Ｄのリガンドに結合するおよびリガンド結合により活性化シグナルを伝達する能力は保持する。このようなフラグメントのさらなる利点は、ＮＫＧ２Ｄを細胞膜に局在化させるためのＤＡＰ１０発現が必要ないことである。故に、いくつかの実施態様において、ここに開示するポリペプチドによりコードされる細胞毒性受容体複合体はＤＡＰ１０を含まない。いくつかの実施態様において、ＮＫ細胞またはＴ細胞などの免疫細胞は、ＣＤ１９およびＮＧＧ２Ｄリガンドを標的とする１個以上のキメラ受容体を発現するよう操作される。いくつかの実施態様において、このような細胞は、ｍｂＩＬ１５も共発現する。
【０１５９】
いくつかの実施態様において、細胞毒性受容体複合体は、二量体化のために設計される。二量体化は、ある実施態様によって、ホモ二量体またはヘテロ二量体を含み得る。いくつかの実施態様において、二量体化は、細胞毒性受容体複合体(およびゆえに受容体を発現するＮＫ細胞)によるリガンド認識を改善させ、有害毒性効果の低減(または欠如)をもたらす。いくつかの実施態様において、細胞毒性受容体複合体は、内部二量体または１個以上の構成サブユニットの反復を用いる。例えば、いくつかの実施態様において、細胞毒性受容体複合体は、所望により第二ＮＫＧ２Ｄ細胞外ドメインおよび膜貫通／シグナル伝達領域(または別のシグナル伝達領域と共に別の膜貫通領域)に結合した第一ＮＫＧ２Ｄ細胞外ドメインを含み得る。
【０１６０】
いくつかの実施態様において、種々のドメイン／サブドメインは、ＧＳ３リンカー(それぞれ配列番号１５および１６のヌクレオチドおよびタンパク質)(またはＧＳｎリンカー)などのリンカーの使用により分離される。ここに開示する種々の実施態様により使用される他のリンカーは、配列番号１７、１９、２１または２３によりコードされるものを含むが、これらに限定されない。これは、ポリヌクレオチドに沿った受容体複合体の種々の構成部分を分離する可能性を提供し、受容体複合体の発現、安定性および／または機能性を改善し得る。
【０１６１】
細胞毒性シグナル伝達複合体
ここに記載する組成物および方法のある実施態様は、細胞毒性シグナル伝達複合体を含む、ＣＤ１９指向性キメラ受容体などのキメラ受容体に関する。ここに記載するとおり、いくつかの実施態様によると、提供される細胞毒性受容体複合体は、細胞外ドメインの標的細胞表面のリガンドへの結合により、細胞毒性シグナル伝達カスケードを開始する１個以上の膜貫通および／または細胞内ドメインを含む。ここに開示するある実施態様は、腫瘍ターゲティングドメイン(またはＣＤ１９指向性ドメイン)が細胞毒性シグナル伝達複合体に結合した、キメラ抗原受容体構築物に関する。
【０１６２】
いくつかの実施態様において、細胞毒性シグナル伝達複合体は、少なくとも１つの膜貫通ドメイン、少なくとも１つの共刺激ドメインおよび／または少なくとも１つのシグナル伝達ドメインを含む。ある実施態様において、１を超える構成部分があるドメインを構成する、例えば、共刺激ドメインは、２つのサブドメインを含み得る。さらに、ある実施態様において、ドメインは、複数機能で働き得て、例えば、膜貫通ドメインは、シグナル伝達機能も提供するよう働き得る。
【０１６３】
膜貫通ドメイン
ここに記載する組成物および方法のある実施態様は、膜貫通ドメインを含むＣＤ１９指向性キメラ受容体などのキメラ受容体に関する。ある実施態様は、ＮＫＧ２Ｄからの膜貫通ドメインまたは他の膜貫通タンパク質を含む。膜貫通ドメインが用いられるいくつかの実施態様において、用いられる膜貫通タンパク質の一部は、その通常の膜貫通ドメインの少なくとも一部を保持する。
【０１６４】
しかしながら、いくつかの実施態様において、膜貫通ドメインは、通常Ｔ細胞およびＮＫ細胞両者に発現される膜貫通糖タンパク質であるＣＤ８の少なくとも一部を含む。いくつかの実施態様において、膜貫通ドメインは、ＣＤ８αを含む。いくつかの実施態様において、膜貫通ドメインは、「ヒンジ」と称する。いくつかの実施態様において、ＣＤ８αの「ヒンジ」は、配列番号１の核酸配列を有する。いくつかの実施態様において、ＣＤ８αヒンジは切断または修飾され、配列番号１の配列を有するＣＤ８αと少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％相同である。いくつかの実施態様において、ＣＤ８αの「ヒンジ」は、配列番号２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＣＤ８αは、配列番号２の配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％相同であるように、切断または修飾され得る。
【０１６５】
いくつかの実施態様において、膜貫通ドメインは、ＣＤ８α膜貫通領域を含む。いくつかの実施態様において、ＣＤ８α膜貫通ドメインは、配列番号３の核酸配列を有する。いくつかの実施態様において、ＣＤ８αヒンジは切断または修飾され、配列番号３の配列を有するＣＤ８αと少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％相同である。いくつかの実施態様において、ＣＤ８α膜貫通ドメインは、配列番号４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＣＤ８αヒンジは切断または修飾され、配列番号４の配列を有するＣＤ８αと少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％相同である。
【０１６６】
いくつかの実施態様においてまとめると、ＣＤ８ヒンジ／膜貫通複合体は、配列番号１３の核酸配列によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＣＤ８ヒンジ／膜貫通複合体は切断または修飾され、配列番号１３の配列を有するＣＤ８ヒンジ／膜貫通複合体と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％相同である。いくつかの実施態様において、ＣＤ８ヒンジ／膜貫通複合体は、配列番号１４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＣＤ８ヒンジ／膜貫通複合体ヒンジは切断または修飾され、配列番号１４の配列を有するＣＤ８ヒンジ／膜貫通複合体と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％相同である。
【０１６７】
ある実施態様において、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメインまたはそのフラグメントを含む。いくつかの実施態様において、ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号３０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＣＤ２８膜貫通ドメイン複合体ヒンジは切断または修飾され、配列番号３０の配列を有するＣＤ２８膜貫通ドメインと、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％相同である。
【０１６８】
共刺激ドメイン
ここに記載する組成物および方法のある実施態様は、共刺激ドメインを含むＣＤ１９指向性キメラ受容体などのキメラ受容体に関する。種々の膜貫通ドメインおよびシグナル伝達ドメイン(および膜貫通／シグナル伝達ドメイン組み合わせ)に加えて、いくつかの実施態様において、さらなる共活性化分子が提供され得る。これらは、例えば、免疫細胞の活性をさらに増強するある分子であり得る。サイトカインが使用され得るある実施態様において。例えば、非限定的例としてＩＬ−２および／またはＩＬ−１５などのあるインターロイキンが使用される。ある実施態様において、治療のための免疫細胞は、このような分子を分泌型として発現するよう操作される。さらなる実施態様において、このような共刺激ドメインは、膜結合である、自己分泌刺激分子(または送達された隣接細胞の傍分泌刺激因子として)として作用するように、操作される。いくつかの実施態様において、ＮＫ細胞は、膜結合インターロイキン１５(ｍｂＩＬ１５)を発現するように操作される。このような実施態様において、ＮＫにおけるｍｂＩＬ１５発現は、ＮＫ細胞の増殖および／または寿命延長を増強することにより、操作されたＮＫ細胞の細胞毒性効果を増強する。いくつかの実施態様において、ｍｂＩＬ１５は配列番号１１の核酸配列を有する。いくつかの実施態様において、ｍｂＩＬ１５は、配列番号１１の配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％相同を有するように切断または修飾されていてよい。いくつかの実施態様において、ｍｂＩＬ１５は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ｍｂＩＬ１５は切断または修飾され、配列番号１２の配列を有するｍｂＩＬ１５と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％相同である。
【０１６９】
ある実施態様において、ＣＤ１９指向性キメラ受容体または操作された細胞毒性受容体複合体は、１個以上の細胞質プロテアーゼ開裂部位、例えばＴ２Ａ開裂部位、Ｐ２Ａ開裂部位、Ｅ２Ａ開裂部位および／またはＦ２Ａ開裂部位を含むポリヌクレオチドによりコードされる。このような部位は、細胞質プロテアーゼにより認識かつ開裂され、ポリヌクレオチドによりコードされる受容体の種々の構成部分の分離(および別の発現)をもたらし得る。その結果、ある実施態様によって、ＣＤ１９指向性キメラ受容体または操作された細胞毒性受容体複合体の種々の構成部分を、ＮＫ細胞またはＴ細胞に単一ベクターまたは複数ベクターにより送達することができる。故に、図に模式的に示すとおり、構築物は単一ポリヌクレオチドによりコードされるだけでなく、構築物の下流要素が別のタンパク質として細胞により発現されるように、開裂部位を含むことができる(ある実施態様においてＩＬ−１５を伴う場合のような)。いくつかの実施態様において、Ｔ２Ａ開裂部位が使用される。いくつかの実施態様において、Ｔ２Ａ開裂部位は配列番号９の核酸配列を有する。いくつかの実施態様において、Ｔ２Ａ開裂部位は、配列番号９の配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％相同であるように切断または修飾され得る。いくつかの実施態様において、Ｔ２Ａ開裂部位は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、Ｔ２Ａ開裂部位は切断または修飾され、配列番号１０の配列を有するＴ２Ａ開裂部位と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％相同である。
【０１７０】
シグナル伝達ドメイン
ここに記載する組成物および方法のある実施態様は、シグナル伝達ドメインを含むＣＤ１９指向性キメラ受容体などのキメラ受容体に関する。例えば、ここに開示するいくつかの実施態様により操作された免疫細胞は、ＣＤ３  Ｔ細胞受容体複合体の少なくとも１つのサブユニット(またはそのフラグメント)を含む。いくつかの実施態様において、シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータサブユニットを含む。いくつかの実施態様において、ＣＤ３ゼータは、配列番号７の核酸配列によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＣＤ３ゼータは、配列番号７の配列を有するＣＤ３ゼータと少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％相同であるように、切断または修飾され得る。いくつかの実施態様において、ＣＤ３ゼータドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＣＤ３ゼータドメインは、切断または修飾され、配列番号８の配列を有するＣＤ３ゼータドメインと少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％相同である。
【０１７１】
いくつかの実施態様において、予想外に増強されたシグナル伝達が、活動が相乗的に作用する複数シグナル伝達ドメインの使用を介して達成される。例えば、いくつかの実施態様において、シグナル伝達ドメインは、さらにＯＸ４０ドメインを含む。いくつかの実施態様において、ＯＸ４０ドメインは、細胞内シグナル伝達ドメインである。いくつかの実施態様において、ＯＸ４０細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号５の核酸配列を有する。いくつかの実施態様において、ＯＸ４０細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号５の配列を有するＯＸ４０と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％相同であるように、切断または修飾され得る。いくつかの実施態様において、ＯＸ４０細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＯＸ４０細胞内シグナル伝達ドメインは、切断または修飾され、配列番号６の配列を有するＯＸ４０細胞内シグナル伝達ドメインと少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％相同である。いくつかの実施態様において、ＯＸ４０は、構築物における唯一の膜貫通／シグナル伝達ドメインとして使用され、しかしながら、いくつかの実施態様において、ＯＸ４０は１個以上の他のドメインと共に使用され得る。例えば、ＯＸ４０とＣＤ３ゼータの組み合わせがある実施態様において使用される。さらなる例として、ＣＤ２８、ＯＸ４０、４−１ＢＢおよび／またはＣＤ３ゼータの組み合わせがある実施態様において使用される。
【０１７２】
いくつかの実施態様において、シグナル伝達ドメインは、４−１ＢＢドメインを含む。いくつかの実施態様において、４−１ＢＢドメインは、細胞内シグナル伝達ドメインである。いくつかの実施態様において、４−１ＢＢ細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、４−１ＢＢ細胞内シグナル伝達ドメインは、切断または修飾され、配列番号２９の配列を有する４−１ＢＢ細胞内シグナル伝達ドメインと、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％相同である。いくつかの実施態様において、４−１ＢＢは構築物における唯一の膜貫通／シグナル伝達ドメインとして使用され、しかしながら、いくつかの実施態様において、４−１ＢＢは１個以上の他のドメインと共に使用され得る。例えば、４−１ＢＢとＣＤ３ゼータの組み合わせがある実施態様において使用される。さらなる例として、ＣＤ２８、ＯＸ４０、４−１ＢＢおよび／またはＣＤ３ゼータの組み合わせがある実施態様において使用される。
【０１７３】
いくつかの実施態様において、シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８ドメインを含む。いくつかの実施態様において、ＣＤ２８ドメインは、細胞内シグナル伝達ドメインである。いくつかの実施態様において、ＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメインは、切断または修飾され、配列番号３１の配列を有するＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメインと少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％相同である。いくつかの実施態様において、ＣＤ２８は構築物における唯一の膜貫通／シグナル伝達ドメインとして使用され、しかしながら、いくつかの実施態様において、ＣＤ２８は１個以上の他のドメインと共に使用され得る。例えば、ＣＤ２８とＣＤ３ゼータの組み合わせがある実施態様において使用される。さらなる例として、ＣＤ２８、ＯＸ４０、４−１ＢＢおよび／またはＣＤ３ゼータの組み合わせがある実施態様において使用される。
【０１７４】
細胞毒性受容体複合体構築物
ここに記載する組成物および方法のある実施態様は、細胞毒性受容体複合体または細胞毒性受容体複合体構築物を含む、ＣＤ１９指向性キメラ受容体などのキメラ受容体に関する。上記と同様、多様な細胞毒性受容体複合体(細胞毒性受容体とも称する)がここで提供される。Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞などの免疫細胞におけるこれら複合体の発現は、癌細胞などの特定の標的細胞のターゲティングおよび破壊を可能とする。このような細胞毒性受容体複合体の非限定的例を、下にさらに詳述する。
【０１７５】
キメラ抗原受容体細胞毒性受容体複合体構築物
いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体の一般的構造を有する、多様な細胞毒性受容体複合体(細胞毒性受容体とも称する)がここで提供される。図１Ａ、１Ｂおよび２は、癌細胞表面に発現される腫瘍抗原または腫瘍関連抗原に結合し、該キメラ抗原受容体を発現する操作された細胞を活性化する、抗ＣＤ１９部分を含む構築物の非限定的略図を模式的に記載する。図に示されるとおり、キメラ受容体のいくつかの実施態様は、抗ＣＤ１９部分、ＣＤ８ａヒンジドメイン、Ｉｇ４  ＳＨドメイン(またはヒンジ)、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＯＸ４０ドメイン、４−１ＢＢドメイン、ＣＤ２８ドメイン、ＣＤ３ζ  ＩＴＡＭドメインまたはサブドメイン、ＣＤ３ゼータドメイン、ＮＫｐ８０ドメイン、ＣＤ１６  ＩＣドメイン、２Ａ開裂部位および膜結合ＩＬ−１５ドメインを含む(しかし、上記のとおり、いくつかの実施態様において、可溶性ＩＬ−１５が使用される)。いくつかの実施態様において、結合および活性化機能は、別々のドメインにより実施されるよう、操作される。いくつかの実施態様は、１を超える抗ＣＤ１９部分または他の結合因子／活性化部分を有する複合体に関する。ある実施態様において、結合因子／活性化部分は、ＣＤ１９以外に、ここに記載する癌標的などの他のマーカーを標的とする。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体構築物の一般的構造は、ヒンジおよび／または膜貫通ドメインを含む。ある実施態様において、これらは単一ドメインにより満たされまたは、いくつかの実施態様において、複数のサブドメインが使用され得る。受容体複合体は、さらに、ホーミング部分の標的細胞への結合後シグナルを伝達し、最終的に標的細胞に対する細胞毒性効果に至る、シグナル伝達ドメインをさらに含む。いくつかの実施態様において、複合体は、さらに、いくつかの実施態様において、シグナル伝達ドメインの機能を増強するよう、相乗的に作用する、共刺激ドメインを含む。Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞などの免疫細胞におけるこれら複合体の発現は、ＣＤ１９を発現する癌細胞などの特定の標的細胞のターゲティングおよび破壊を可能とする。一部このような受容体複合体は、標的細胞表面のＣＤ１９に結合し、該操作された細胞を活性化させる、抗ＣＤ１９部分またはＣＤ１９結合部分を含む細胞外ドメインを含む。ＣＤ３ゼータＩＴＡＭサブドメインは、シグナル伝達ドメインと協調して作用し得る。ＩＬ−１５ドメイン、例えば、ｍｂＩＬ−１５ドメインは、共刺激ドメインとして作用し得る。ＩＬ−１５ドメイン、例えばｍｂＩＬ−１５ドメインは、それを発現する免疫細胞(例えば、ＮＫ細胞またはＴ細胞)を、特に標的腫瘍細胞に対して効果的とする。ｍｂＩＬ−１５ドメインなどのＩＬ−１５ドメインは、いくつかの実施態様によって、別の構築物でコードされ得る。さらに、要素の各々は、１個以上の別の構築物でコードされ得る。ある実施態様において、細胞毒性受容体またはＣＤ１９指向性受容体は、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％または前記パーセンテージの何れか二つにより定義される範囲で配列番号３４の��列と同一であるアミノ酸配列を含む。
【０１７６】
ある実施態様において、抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ−ＣＤ８ＴＭ／ＯＸ４０／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図１Ａ、ＣＤ１９−１ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９部分、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、ここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含む核酸分子によりコードされるまたはここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、構成部分の例としてここに含まれるもののような、ここに記載する配列番号の１以上に一致する配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、ここに記載する配列番号の１個以上の組み合わせにより得られる配列と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％、配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。
【０１７７】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ−ＣＤ８ＴＭ／ＯＸ４０／ＣＤ３ゼータ／２Ａ／ｍＩＬ−１５キメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図１Ａ、ＣＤ１９−１ｂ参照)。ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９部分、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０ドメイン、ＣＤ３ゼータドメイン、２Ａ開裂部位およびｍＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、ここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含む核酸分子によりコードされるまたはここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、構成部分の例としてここに含まれるもののような、ここに記載する配列番号の１以上に一致する配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、ここに記載する配列番号の１個以上の組み合わせにより得られる配列と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％、配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。
【０１７８】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／Ｉｇ４ＳＨ−ＣＤ８ＴＭ／４−１ＢＢ／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図１Ａ、ＣＤ１９−２ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９部分、Ｉｇ４  ＳＨドメイン、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、４−１ＢＢドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、ここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含む核酸分子によりコードされるまたはここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、構成部分の例としてここに含まれるもののような、ここに記載する配列番号の１以上に一致する配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、ここに記載する配列番号の１個以上の組み合わせにより得られる配列と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％、配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。
【０１７９】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／Ｉｇ４ＳＨ−ＣＤ８ＴＭ／４−１ＢＢ／ＣＤ３ゼータ／２Ａ／ｍＩＬ−１５キメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図１Ａ、ＣＤ１９−２ｂ参照)。ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９部分、Ｉｇ４  ＳＨドメイン、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、４−１ＢＢドメイン、ＣＤ３ゼータドメイン、２Ａ開裂部位およびｍＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、ここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含む核酸分子によりコードされるまたはここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、構成部分の例としてここに含まれるもののような、ここに記載する配列番号の１以上に一致する配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、ここに記載する配列番号の１個以上の組み合わせにより得られる配列と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％、配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。
【０１８０】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ−ＣＤ２８ＴＭ／ＣＤ２８／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図１Ａ、ＣＤ１９−３ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９部分、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、ここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含む核酸分子によりコードされるまたはここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、構成部分の例としてここに含まれるもののような、ここに記載する配列番号の１以上に一致する配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、ここに記載する配列番号の１個以上の組み合わせにより得られる配列と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％、配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。
【０１８１】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ−ＣＤ２８ＴＭ／ＣＤ２８／ＣＤ３ゼータ／２Ａ／ｍＩＬ−１５キメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図１Ａ、ＣＤ１９−３ｂ参照)。ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９部分、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８ドメイン、ＣＤ３ゼータドメイン、２Ａ開裂部位およびｍＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、ここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含む核酸分子によりコードされるまたはここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、構成部分の例としてここに含まれるもののような、ここに記載する配列番号の１以上に一致する配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、ここに記載する配列番号の１個以上の組み合わせにより得られる配列と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％、配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。
【０１８２】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／Ｉｇ４ＳＨ−ＣＤ２８ＴＭ／ＣＤ２８／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図１Ａ、ＣＤ１９−４ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９部分、Ｉｇ４  ＳＨドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、ここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含む核酸分子によりコードされるまたはここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、構成部分の例としてここに含まれるもののような、ここに記載する配列番号の１以上に一致する配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、ここに記載する配列番号の１個以上の組み合わせにより得られる配列と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％、配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。
【０１８３】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／Ｉｇ４ＳＨ−ＣＤ２８ＴＭ／ＣＤ２８／ＣＤ３ゼータ／２Ａ／ｍＩＬ−１５キメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図１Ａ、ＣＤ１９−４ｂ参照)。ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９部分、Ｉｇ４  ＳＨドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８ドメイン、ＣＤ３ゼータドメイン、２Ａ開裂部位およびｍＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、ここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含む核酸分子によりコードされるまたはここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、構成部分の例としてここに含まれるもののような、ここに記載する配列番号の１以上に一致する配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、ここに記載する配列番号の１個以上の組み合わせにより得られる配列と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％、配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。
【０１８４】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／Ｉｇ４ＳＨ−ＣＤ８ＴＭ／ＯＸ４０／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図２Ａ、ＣＤ１９−５ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９部分、Ｉｇ４  ＳＨドメイン、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、ここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含む核酸分子によりコードされるまたはここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、構成部分の例としてここに含まれるもののような、ここに記載する配列番号の１以上に一致する配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、ここに記載する配列番号の１個以上の組み合わせにより得られる配列と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％、配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。
【０１８５】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／Ｉｇ４ＳＨ−ＣＤ８ＴＭ／ＯＸ４０／ＣＤ３ゼータ／２Ａ／ｍＩＬ−１５キメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図２Ａ、ＣＤ１９−５ｂ参照)。ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９部分、Ｉｇ４  ＳＨドメイン、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０ドメイン、ＣＤ３ゼータドメイン、２Ａ開裂部位およびｍＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、ここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含む核酸分子によりコードされるまたはここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、構成部分の例としてここに含まれるもののような、ここに記載する配列番号の１以上に一致する配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、ここに記載する配列番号の１個以上の組み合わせにより得られる配列と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％、配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。
【０１８６】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ−ＣＤ３αＴＭ／ＣＤ２８／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図１Ｂ、ＣＤ１９−６ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９部分、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ３α膜貫通ドメイン、ＣＤ２８ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、ここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含む核酸分子によりコードされるまたはここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、構成部分の例としてここに含まれるもののような、ここに記載する配列番号の１以上に一致する配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、ここに記載する配列番号の１個以上の組み合わせにより得られる配列と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％、配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。
【０１８７】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ−ＣＤ３αＴＭ／ＣＤ２８／ＣＤ３ゼータ／２Ａ／ｍＩＬ−１５キメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図１Ｂ、ＣＤ１９−６ｂ参照)。ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９部分、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ３α膜貫通ドメイン、ＣＤ２８ドメイン、ＣＤ３ゼータドメイン、２Ａ開裂部位およびｍＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、ここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含む核酸分子によりコードされるまたはここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、構成部分の例としてここに含まれるもののような、ここに記載する配列番号の１以上に一致する配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、ここに記載する配列番号の１個以上の組み合わせにより得られる配列と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％、配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。
【０１８８】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ−ＣＤ２８ＴＭ／ＣＤ２８／４−１ＢＢ／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図１Ｂ、ＣＤ１９−７ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９部分、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８ドメイン、４−１ＢＢドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、ここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含む核酸分子によりコードされるまたはここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、構成部分の例としてここに含まれるもののような、ここに記載する配列番号の１以上に一致する配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、ここに記載する配列番号の１個以上の組み合わせにより得られる配列と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％、配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。
【０１８９】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ−ＣＤ２８ＴＭ／ＣＤ２８／４−１ＢＢ／ＣＤ３ゼータ／２Ａ／ｍＩＬ−１５キメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図１Ｂ、ＣＤ１９−７ｂ参照)。ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９部分、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８ドメイン、４−１ＢＢドメイン、ＣＤ３ゼータドメイン、２Ａ開裂部位およびｍＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、ここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含む核酸分子によりコードされるまたはここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、構成部分の例としてここに含まれるもののような、ここに記載する配列番号の１以上に一致する配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、ここに記載する配列番号の１個以上の組み合わせにより得られる配列と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％、配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。
【０１９０】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８アルファヒンジ／ＣＤ８アルファＴＭ／４−１ＢＢ／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図２、ＣＤ１９−８ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９部分、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、４−１ＢＢドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、ここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含む核酸分子によりコードされるまたはここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、構成部分の例としてここに含まれるもののような、ここに記載する配列番号の１以上に一致する配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、ここに記載する配列番号の１個以上の組み合わせにより得られる配列と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％、配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。
【０１９１】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８アルファヒンジ／ＣＤ８アルファＴＭ／４−１ＢＢ／ＣＤ３ゼータ／２Ａ／ｍＩＬ−１５キメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図２、ＣＤ１９−８ｂ参照)。ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９部分、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、４−１ＢＢドメイン、ＣＤ３ゼータドメイン、２Ａ開裂部位およびｍＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、ここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含む核酸分子によりコードされるまたはここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、構成部分の例としてここに含まれるもののような、ここに記載する配列番号の１以上に一致する配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、ここに記載する配列番号の１個以上の組み合わせにより得られる配列と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％、配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。
【０１９２】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８アルファヒンジ／ＣＤ３  ＴＭ／４−１ＢＢ／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図２、ＣＤ１９−３９＿５ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９部分、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ３膜貫通ドメイン、４−１ＢＢドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、ここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含む核酸分子によりコードされるまたはここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、構成部分の例としてここに含まれるもののような、ここに記載する配列番号の１個以上に一致する配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、ここに記載する配列番号の１個以上の組み合わせにより得られる配列と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％、配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。
【０１９３】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８アルファヒンジ／ＣＤ３  ＴＭ／４−１ＢＢ／ＣＤ３ゼータ／２Ａ／ｍＩＬ−１５キメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図２、ＣＤ１９−３９＿５ｂ参照)。ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９部分、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、４−１ＢＢドメイン、ＣＤ３ゼータドメイン、２Ａ開裂部位およびｍＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、ここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含む核酸分子によりコードされるまたはここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、構成部分の例としてここに含まれるもののような、ここに記載する配列番号の１個以上に一致する配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、ここに記載する配列番号の１個以上の組み合わせにより得られる配列と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％、配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。
【０１９４】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８アルファヒンジ／ＣＤ３  ＴＭ／４−１ＢＢ／ＮＫｐ８０キメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図２、ＣＤ１９−３９＿６ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９部分、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ３膜貫通ドメイン、４−１ＢＢドメインおよびＮＫｐ８０ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、ここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含む核酸分子によりコードされるまたはここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、構成部分の例としてここに含まれるもののような、ここに記載する配列番号の１個以上に一致する配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、ここに記載する配列番号の１個以上の組み合わせにより得られる配列と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％、配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。
【０１９５】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８アルファヒンジ／ＣＤ３  ＴＭ／４−１ＢＢ／ＮＫｐ８０／２Ａ／ｍＩＬ−１５キメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図２、ＣＤ１９−３９＿６ｂ参照)。ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９部分、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、４−１ＢＢドメイン、ＮＫｐ８０ドメイン、２Ａ開裂部位およびｍＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、ここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含む核酸分子によりコードされるまたはここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、構成部分の例としてここに含まれるもののような、ここに記載する配列番号の１個以上に一致する配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、ここに記載する配列番号の１個以上の組み合わせにより得られる配列と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％、配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。
【０１９６】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８アルファヒンジ／ＣＤ３  ＴＭ／ＣＤ１６細胞内ドメイン／４−１ＢＢキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図２、ＣＤ１９−３９＿１０ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９部分、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ３膜貫通ドメイン、ＣＤ１６細胞内ドメインおよび４−１ＢＢドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、ここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含む核酸分子によりコードされるまたはここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、構成部分の例としてここに含まれるもののような、ここに記載する配列番号の１以上に一致する配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、ここに記載する配列番号の１個以上の組み合わせにより得られる配列と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％、配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。
【０１９７】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８アルファヒンジ／ＣＤ３  ＴＭ／ＣＤ１６／４−１ＢＢ／２Ａ／ｍＩＬ−１５キメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図２、ＣＤ１９−３９＿１０ｂ参照)。ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９部分、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＣＤ１６細胞内ドメイン、４−１ＢＢドメイン、２Ａ開裂部位およびｍＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、ここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含む核酸分子によりコードされるまたはここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、構成部分の例としてここに含まれるもののような、ここに記載する配列番号の１個以上に一致する配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、ここに記載する配列番号の１個以上の組み合わせにより得られる配列と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％、配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。
【０１９８】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／ＮＫＧ２Ｄ細胞外ドメイン／ＣＤ８ヒンジ−ＣＤ８ＴＭ／ＯＸ４０／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図２、ＣＤ１９／ＮＫＧ２Ｄ−１ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９部分、ＮＫＧ２Ｄ細胞外ドメイン(完全長またはフラグメントいずれか)、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、ここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含む核酸分子によりコードされるまたはここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、構成部分の例としてここに含まれるもののような、ここに記載する配列番号の１個以上に一致する配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、ここに記載する配列番号の１個以上の組み合わせにより得られる配列と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％、配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。
【０１９９】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／ＮＫＧ２Ｄ  ＥＣドメイン／ＣＤ８ヒンジ−ＣＤ８ＴＭ／ＯＸ４０／ＣＤ３ゼータ／２Ａ／ｍＩＬ−１５キメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図２、ＣＤ１９／ＮＫＧ２Ｄ−１ｂ参照)。ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９部分、ＮＫＧ２Ｄ細胞外ドメイン(完全長またはフラグメントいずれか)、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０ドメイン、ＣＤ３ゼータドメイン、２Ａ開裂部位およびｍＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、ここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含む核酸分子によりコードされるまたはここに開示する配列の組み合わせから得られる配列を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、構成部分の例としてここに含まれるもののような、ここに記載する配列番号の１個以上に一致する配列を含む。いくつかの実施態様において、コードする核酸配列またはアミノ酸配列は、ここに記載する配列番号の１個以上の組み合わせにより得られる配列と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％、配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。
【０２００】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ＴＭ／４−１ＢＢ／ＣＤ３ゼータ／ｍｂＩＬ１５キメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ａ、ＮＫ１９参照)。ポリヌクレオチドは、抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、４−１ＢＢドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号８５の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号８５と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号８６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号８６」少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％、配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様における図式的表記およびその使用で、ｍｂＩＬ１５ドメインを欠くＮＫ１９構築物が提供される(図３Ａ、ＮＫ１９  ｏｐｔ.)
【０２０１】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ＴＭ／ＯＸ４０／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ａ、ＮＫ１９−１ａ参照)。ポリヌクレオチドは、抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ａ、ＮＫ１９−１ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０ドメイン、ＣＤ３ゼータドメイン、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号５９の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号５９と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号６０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号６０と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＣＤ１９  ｓｃＦｖはＦｌａｇタグを含まない。
【０２０２】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ２８ＴＭ／ＣＤ２８／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ａ、ＮＫ１９−２ａ参照)。ポリヌクレオチドは、抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ａ、ＮＫ１９−２ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ゼータドメイン、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号６１の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号６１と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号６２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号６２と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＣＤ１９  ｓｃＦｖはＦｌａｇタグを含まない。
【０２０３】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ａＴＭ／ＩＣＯＳ／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ａ、ＮＫ１９−３ａ参照)。ポリヌクレオチドは、抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、誘導性共刺激分子(ＩＣＯＳ)シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ａ、ＮＫ１９−３ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、誘導性共刺激分子(ＩＣＯＳ)シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ゼータドメイン、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号６３の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号６３と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号６４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号６４と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＣＤ１９  ｓｃＦｖはＦｌａｇタグを含まない。
【０２０４】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ａＴＭ／ＣＤ２８／４−１ＢＢ／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ａ、ＮＫ１９−４ａ参照)。ポリヌクレオチドは、抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、４−１ＢＢシグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ａ、ＮＫ１９−４ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、４−１ＢＢシグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ゼータドメイン、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号６５の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号６５と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号６６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号６６と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＣＤ１９  ｓｃＦｖはＦｌａｇタグを含まない。
【０２０５】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＮＫＧ２ＤＴＭ／ＯＸ４０／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ｂ、ＮＫ１９−５ａ参照)。ポリヌクレオチドは、抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、ＣＤ８ａヒンジ、ＮＫＧ２Ｄ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ｂ、ＮＫ１９−５ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、ＣＤ８ａヒンジ、ＮＫＧ２Ｄ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ゼータドメイン、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号６７の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号６７と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号６８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号６８と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＣＤ１９  ｓｃＦｖはＦｌａｇタグを含まない。
【０２０６】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ａＴＭ／ＣＤ４０／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ｂ、ＮＫ１９−６ａ参照)。ポリヌクレオチドは、抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ可変重鎖、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＣＤ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ｂ、ＮＫ１９−６ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ可変重鎖、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＣＤ４０シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ゼータドメイン、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号６９の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号６９と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号７０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号７０と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＣＤ１９  ｓｃＦｖはＦｌａｇタグを含まない。
【０２０７】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ａＴＭ／ＯＸ４０／ＣＤ３ゼータ／２Ａ／ＥＧＦＲｔキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ｂ、ＮＫ１９−７ａ参照)。ポリヌクレオチドは、抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ゼータドメイン、２Ａ開裂部位および上皮細胞増殖因子受容体の切断バージョン(ＥＧＦＲｔ)を含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ｂ、ＮＫ１９−７ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ゼータドメイン、２Ａ開裂部位、上皮細胞増殖因子受容体の切断バージョン(ＥＧＦＲｔ)、さらなる２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号７１の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号７１と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号７２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号７２と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＣＤ１９  ｓｃＦｖはＦｌａｇタグを含まない。
【０２０８】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ａＴＭ／ＣＤ４０／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ｂ、ＮＫ１９−８ａ)参照。ポリヌクレオチドは、抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ可変軽鎖、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＣＤ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ｂ、ＮＫ１９−７ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ可変軽鎖、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＣＤ４０シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ゼータドメイン、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号７３の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号７３と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号７４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号７４と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＣＤ１９  ｓｃＦｖはＦｌａｇタグを含まない。
【０２０９】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ａＴＭ／ＣＤ４０／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ｂ、ＮＫ１９−８ａ参照)。ポリヌクレオチドは、抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ可変軽鎖、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＣＤ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ｂ、ＮＫ１９−７ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ可変軽鎖、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＣＤ４０シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ゼータドメイン、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号７３の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号７３と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号７４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号７４と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＣＤ１９  ｓｃＦｖはＦｌａｇタグを含まない。
【０２１０】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ａＴＭ／ＣＤ２７／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ｃ、ＮＫ１９−９ａ参照)。ポリヌクレオチドは、抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＣＤ２７シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ｃ、ＮＫ１９−９ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＣＤ２７シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ゼータドメイン、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号７５の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号７５と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号７６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号７６と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＣＤ１９  ｓｃＦｖはＦｌａｇタグを含まない。
【０２１１】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ａＴＭ／ＣＤ７０／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ｃ、ＮＫ１９−１０ａ参照)。ポリヌクレオチドは、抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＣＤ７０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ｃ、ＮＫ１９−１０ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＣＤ７０シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ゼータドメイン、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号７７の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号７７と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号７８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号７８と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＣＤ１９  ｓｃＦｖはＦｌａｇタグを含まない。
【０２１２】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ａＴＭ／ＣＤ１６１／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ｃ、ＮＫ１９−１１ａ参照)。ポリヌクレオチドは、抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＣＤ１６１シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ｃ、ＮＫ１９−１１ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＣＤ１６１シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ゼータドメイン、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号７９の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号７９と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号８０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号８０と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＣＤ１９  ｓｃＦｖはＦｌａｇタグを含まない。
【０２１３】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ａＴＭ／ＣＤ４０Ｌ／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ｃ、ＮＫ１９−１２ａ参照)。ポリヌクレオチドは、抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＣＤ４０Ｌシグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ｃ、ＮＫ１９−１２ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＣＤ４０Ｌシグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ゼータドメイン、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号８１の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号８１と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号８２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号８２と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＣＤ１９  ｓｃＦｖはＦｌａｇタグを含まない。
【０２１４】
いくつかの実施態様において、抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ａＴＭ／ＣＤ４４／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ｃ、ＮＫ１９−１３参照)。ポリヌクレオチドは、抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＣＤ４４シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ｃ、ＮＫ１９−１３ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ここに記載する抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＣＤ４４シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ゼータドメイン、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号８３の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号８３と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号８４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号８４と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＣＤ１９  ｓｃＦｖはＦｌａｇタグを含まない。
【０２１５】
いくつかの実施態様において、Ｆｌａｇタグヒト化抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ＴＭ／ＯＸ４０／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ｄ、ＮＫ１９Ｈ−１ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ヒト化されており、第一ヒト化軽鎖および第一ヒト化重鎖(Ｌ１／Ｈ１)を含み、Ｆｌａｇタグ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ｄ、ＮＫ１９Ｈ−１ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ここに記載するヒト化されており、第一ヒト化軽鎖および第一ヒト化重鎖(Ｌ１／Ｈ１)を含み、Ｆｌａｇタグ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号１６０の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号１６０と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号１６１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号１６１と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。
【０２１６】
いくつかの実施態様において、Ｆｌａｇタグヒト化抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ＴＭ／ＯＸ４０／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ｄ、ＮＫ１９Ｈ−２ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ヒト化されており、第二ヒト化軽鎖および第一ヒト化重鎖(Ｌ２／Ｈ１)を含み、Ｆｌａｇタグ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ｄ、ＮＫ１９Ｈ−２ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ここに記載するヒト化されており、第二ヒト化軽鎖および第一ヒト化重鎖(Ｌ２／Ｈ１)を含み、Ｆｌａｇタグ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ゼータドメイン、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号１６２の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号１６２と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号１６３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号１６２と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。
【０２１７】
いくつかの実施態様において、Ｆｌａｇタグヒト化抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ＴＭ／ＯＸ４０／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ｄ、ＮＫ１９Ｈ−３ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ヒト化されており、第三ヒト化軽鎖および第一ヒト化重鎖(Ｌ３／Ｈ１)を含み、Ｆｌａｇタグ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ｄ、ＮＫ１９Ｈ−３ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ここに記載するヒト化されており、第三ヒト化軽鎖および第一ヒト化重鎖(Ｌ３／Ｈ１)を含み、Ｆｌａｇタグ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号１６４の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号１６４と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号１６５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号１６５と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。
【０２１８】
いくつかの実施態様において、Ｆｌａｇタグヒト化抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ＴＭ／ＯＸ４０／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ｄ、ＮＫ１９Ｈ−４ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ヒト化されており、第一ヒト化軽鎖および第二ヒト化重鎖(Ｌ１／Ｈ２)を含み、Ｆｌａｇタグ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ｄ、ＮＫ１９Ｈ−４ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ここに記載するヒト化されており、第一ヒト化軽鎖および第二ヒト化重鎖(Ｌ１／Ｈ２)を含み、Ｆｌａｇタグ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号１６６の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号１６６と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号１６７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号１６７と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。
【０２１９】
いくつかの実施態様において、Ｆｌａｇタグヒト化抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ＴＭ／ＯＸ４０／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ｅ、ＮＫ１９Ｈ−５ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ヒト化されており、第二ヒト化軽鎖および第二ヒト化重鎖(Ｌ２／Ｈ２)を含み、Ｆｌａｇタグ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ｅ、ＮＫ１９Ｈ−５ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ここに記載するヒト化されており、第二ヒト化軽鎖および第二ヒト化重鎖(Ｌ２／Ｈ２)を含み、Ｆｌａｇタグ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号１６８の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号１６８と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号１６９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号１６９と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。
【０２２０】
いくつかの実施態様において、Ｆｌａｇタグヒト化抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ＴＭ／ＯＸ４０／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ｅ、ＮＫ１９Ｈ−６ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ヒト化されており、第三ヒト化軽鎖および第二ヒト化重鎖(Ｌ３／Ｈ２)を含み、Ｆｌａｇタグ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ｅ、ＮＫ１９Ｈ−６ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ここに記載するヒト化されており、第三ヒト化軽鎖および第二ヒト化重鎖(Ｌ３／Ｈ２)を含み、Ｆｌａｇタグ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号１７０の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号１７０と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号１７１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号１７１と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。
【０２２１】
いくつかの実施態様において、Ｆｌａｇタグヒト化抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ＴＭ／ＯＸ４０／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ｅ、ＮＫ１９Ｈ−７ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ヒト化されており、第一ヒト化軽鎖および第三ヒト化重鎖(Ｌ１／Ｈ３)を含み、Ｆｌａｇタグ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ｅ、ＮＫ１９Ｈ−７ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ここに記載するヒト化されており、第一ヒト化軽鎖および第三ヒト化重鎖(Ｌ１／Ｈ３)を含み、Ｆｌａｇタグ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、２Ａ開裂部位、上皮細胞増殖因子受容体の切断バージョン(ＥＧＦＲｔ)、さらなる２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号１７２の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号１７２と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号１７３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号１７４と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。
【０２２２】
いくつかの実施態様において、Ｆｌａｇタグヒト化抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ＴＭ／ＯＸ４０／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ｅ、ＮＫ１９Ｈ−８ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ヒト化されており、第二ヒト化軽鎖および第三ヒト化重鎖(Ｌ２／Ｈ３)を含み、Ｆｌａｇタグ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ｅ、ＮＫＨ１９−８ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ここに記載するヒト化されており、第二ヒト化軽鎖および第三ヒト化重鎖(Ｌ２／Ｈ３)を含み、Ｆｌａｇタグ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号１７４の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号１７４と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号１７５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号１７５と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。
【０２２３】
いくつかの実施態様において、Ｆｌａｇタグヒト化抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ＴＭ／ＯＸ４０／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ｅ、ＮＫ１９Ｈ−９ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ヒト化されており、第三ヒト化軽鎖および第三ヒト化重鎖(Ｌ３／Ｈ３)を含み、Ｆｌａｇタグ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ｅ、ＮＫＨ１９−９ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ここに記載するヒト化されており、第三ヒト化軽鎖および第三ヒト化重鎖(Ｌ３／Ｈ３)を含み、Ｆｌａｇタグ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号１７６の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号１７６と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号１７７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号１７７と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。
【０２２４】
いくつかの実施態様において、Ｆｌａｇタグヒト化抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ＴＭ／ＯＸ４０／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ｅ、ＮＫＨ１９−１０ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ヒト化されており、第一ヒト化軽鎖および第四ヒト化重鎖(Ｌ１／Ｈ４)を含み、Ｆｌａｇタグ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ｅ、ＮＫ１９Ｈ−１０ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ここに記載するヒト化されており、第一ヒト化軽鎖および第四ヒト化重鎖(Ｌ１／Ｈ４)を含み、Ｆｌａｇタグ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号１７８の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号１７８と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号１７９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号１７９と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。
【０２２５】
いくつかの実施態様において、Ｆｌａｇタグヒト化抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ＴＭ／ＯＸ４０／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ｆ、ＮＫ１９Ｈ−１１ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ヒト化されており、第二ヒト化軽鎖および第四ヒト化重鎖(Ｌ２／Ｈ４)を含み、Ｆｌａｇタグ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ｆ、ＮＫ１９Ｈ−１１ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ここに記載するヒト化されており、第二ヒト化軽鎖および第四ヒト化重鎖(Ｌ２／Ｈ４)を含み、Ｆｌａｇタグ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号１８０の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号１８０と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号１８１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号１８１と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。
【０２２６】
いくつかの実施態様において、Ｆｌａｇタグ、ヒト化抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ＴＭ／ＯＸ４０／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ｆ  ＮＫ１９Ｈ−１２ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ヒト化されており、第三ヒト化軽鎖および第四ヒト化重鎖(Ｌ３／Ｈ４)を含み、Ｆｌａｇタグ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ｆ、ＮＫ１９Ｈ−１２ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ここに記載するヒト化されており、第三ヒト化軽鎖および第四ヒト化重鎖(Ｌ３／Ｈ４)を含み、Ｆｌａｇタグ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号１８２の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号１８２と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号１８３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号１８３と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。
【０２２７】
いくつかの実施態様において、Ｆｌａｇタグ、ヒト化抗ＣＤ１９部分および複数共刺激ドメインを含むキメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチドが提供される。例えば、模式的構造は、抗ＣＤ１９部分／膜貫通ドメイン／共刺激ドメイン１／共刺激ドメイン２／共刺激ドメイン３／シグナル伝達ドメインである。共刺激ドメインは、実施態様によって、順番が変わる。例えば、いくつかの実施態様において、共刺激ドメイン(「ＣＳＤ」)は次のとおり配置され得る。ＣＳＤ１／ＣＳＤ２、ＣＳＤ２／ＣＳＤ１、ＣＳＤ１／ＣＳＤ２／ＣＳＤ３、ＣＳＤ１／ＣＳＤ２／ＣＳＤ３、ＣＳＤ３／ＣＳＤ２／ＣＳＤ１など。いくつかの実施態様において、Ｆｌａｇタグ、ヒト化抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ａＴＭ／ＣＤ４４／ＯＸ４０／ＣＤ２７／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ｆ、ＮＫ１９Ｈ−１３ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ヒト化されており、Ｆｌａｇタグ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＣＤ４４共刺激ドメイン、ＯＸ４０共刺激ドメイン、ＣＤ２７共刺激ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ｆ、ＮＫ１９Ｈ−１３ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ヒト化されており、Ｆｌａｇタグ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＣＤ４４共刺激ドメイン、ＯＸ４０共刺激ドメイン、ＣＤ２７共刺激ドメイン、ＣＤ３ゼータドメイン、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むここに記載する抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを含むまたはこれらからなる。
【０２２８】
いくつかの実施態様において、ヒト化抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ＴＭ／ＯＸ４０／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ｇ、ＮＫ１９Ｈ−ＮＦ−１ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ヒト化されており、第一ヒト化軽鎖および第一ヒト化重鎖(Ｌ１／Ｈ１)、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ｇ、ＮＫ１９Ｈ−ＮＦ−１ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ここに記載するヒト化されており、第一ヒト化軽鎖および第一ヒト化重鎖(Ｌ１／Ｈ１)、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号１８４の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号１８４と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号１８５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号１８５と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。
【０２２９】
いくつかの実施態様において、ヒト化抗抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ＴＭ／ＯＸ４０／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ｇ、ＮＫ１９Ｈ−ＮＦ−２ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ヒト化されており、第二ヒト化軽鎖および第一ヒト化重鎖(Ｌ２／Ｈ１)、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ｇ、ＮＫ１９Ｈ−ＮＦ−２ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ここに記載するヒト化されており、第二ヒト化軽鎖および第一ヒト化重鎖(Ｌ２／Ｈ１)、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号１８６の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号１８６と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号１８７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号１８７と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。
【０２３０】
いくつかの実施態様において、ヒト化抗抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ＴＭ／ＯＸ４０／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ｇ、ＮＫ１９Ｈ−ＮＦ−３ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ヒト化されており、第三ヒト化軽鎖および第一ヒト化重鎖(Ｌ３／Ｈ１)、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ｇ、ＮＫ１９Ｈ−ＮＦ−３ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ここに記載するヒト化されており、第三ヒト化軽鎖および第一ヒト化重鎖(Ｌ３／Ｈ１)、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号１８８の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号１８８と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号１８９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号１８９と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。
【０２３１】
いくつかの実施態様において、ヒト化抗抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ＴＭ／ＯＸ４０／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ｇ、ＮＫ１９Ｈ−ＮＦ−４ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ヒト化されており、第一ヒト化軽鎖および第二ヒト化重鎖(Ｌ１／Ｈ２)、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ｇ、ＮＫ１９Ｈ−ＮＦ−４ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ここに記載するヒト化されており、第一ヒト化軽鎖および第二ヒト化重鎖(Ｌ１／Ｈ２)、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号１９０の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号１９０と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号１９１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号１９１と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。
【０２３２】
いくつかの実施態様において、ヒト化抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ＴＭ／ＯＸ４０／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ｈ、ＮＫ１９Ｈ−ＮＦ−５ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ヒト化されており、第二ヒト化軽鎖および第二ヒト化重鎖(Ｌ２／Ｈ２)、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ｈ、ＮＫ１９Ｈ−ＮＦ−５ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ここに記載するヒト化されており、第二ヒト化軽鎖および第二ヒト化重鎖(Ｌ２／Ｈ２)、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号１９２の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号１９２と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号１９３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号１９３と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。
【０２３３】
いくつかの実施態様において、ヒト化抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ＴＭ／ＯＸ４０／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ｈ、ＮＫ１９Ｈ−ＮＦ−６ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ヒト化されており、第三ヒト化軽鎖および第二ヒト化重鎖(Ｌ３／Ｈ２)、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ｈ、ＮＫ１９Ｈ−ＮＦ−６ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ここに記載するヒト化されており、第三ヒト化軽鎖および第二ヒト化重鎖(Ｌ３／Ｈ２)、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号１９４の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号１９４と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号１９５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号１９５と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。
【０２３４】
いくつかの実施態様において、ヒト化抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ＴＭ／ＯＸ４０／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ｇ、ＮＫ１９Ｈ−ＮＦ−７ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ヒト化されており、第一ヒト化軽鎖および第三ヒト化重鎖(Ｌ１／Ｈ３)、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ｈ、ＮＫ１９Ｈ−ＮＦ−７ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ヒト化されており、第一ヒト化軽鎖および第三ヒト化重鎖(Ｌ１／Ｈ３)、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ゼータドメイン、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むここに記載する抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号１９６の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号１９６と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号１９７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号１９７と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。
【０２３５】
いくつかの実施態様において、ヒト化抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ＴＭ／ＯＸ４０／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ｈ、ＮＫ１９Ｈ−ＮＦ−８ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ヒト化されており、第二ヒト化軽鎖および第三ヒト化重鎖(Ｌ２／Ｈ３)、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ｈ、ＮＫＨ１９−ＮＦ−８ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ヒト化されており、第二ヒト化軽鎖および第三ヒト化重鎖(Ｌ２／Ｈ３)、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメイン、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むここに記載する抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ可変軽鎖を含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号１９８の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号１９８と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号１９９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号１９９と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。
【０２３６】
いくつかの実施態様において、ヒト化抗抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ＴＭ／ＯＸ４０／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ｈ、ＮＫ１９Ｈ−ＮＦ−９ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ヒト化されており、第三ヒト化軽鎖および第三ヒト化重鎖(Ｌ３／Ｈ３)、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ｈ、ＮＫＨ１９−ＮＦ−９ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ヒト化されており、第三ヒト化軽鎖および第三ヒト化重鎖(Ｌ３／Ｈ３)、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含むここに記載する抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号２００の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号２００と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号２０１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号２０１と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。
【０２３７】
いくつかの実施態様において、ヒト化抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ＴＭ／ＯＸ４０／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ｈ、ＮＫＨ１９−ＮＦ−１０ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ヒト化されており、第一ヒト化軽鎖および第四ヒト化重鎖(Ｌ１／Ｈ４)、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ｈ、ＮＫ１９Ｈ−ＮＦ−１０ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ヒト化されており、第一ヒト化軽鎖および第四ヒト化重鎖(Ｌ１／Ｈ４)、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含むここに記載する抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号２０２の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号２０２と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号２０３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号２０３と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。
【０２３８】
いくつかの実施態様において、ヒト化抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ＴＭ／ＯＸ４０／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ｉ、ＮＫ１９Ｈ−ＮＦ−１１ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ヒト化されており、第二ヒト化軽鎖および第四ヒト化重鎖(Ｌ２／Ｈ４)、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ｉ、ＮＫ１９Ｈ−ＮＦ−１１ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ヒト化されており、第二ヒト化軽鎖および第四ヒト化重鎖(Ｌ２／Ｈ４)、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含むここに記載する抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号２０４の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号２０４と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号２０５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号２０５と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。
【０２３９】
いくつかの実施態様において、ヒト化抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ＴＭ／ＯＸ４０／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ｉ、ＮＫ１９Ｈ−１２ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ヒト化されており、第三ヒト化軽鎖および第四ヒト化重鎖(Ｌ３／Ｈ４)、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ｉ、ＮＫ１９Ｈ−ＮＦ−１２ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ヒト化されており、第三ヒト化軽鎖および第四ヒト化重鎖(Ｌ３／Ｈ４)、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含むここに記載する抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、この受容体複合体は、配列番号２０６の配列を有する核酸分子によりコードされる。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、配列番号２０６と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有する配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体は、配列番号２０７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ＮＫ１９キメラ抗原受容体は、配列番号２０７と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性、相同性および／または機能的等価性を共有するアミノ酸配列を含む。
【０２４０】
いくつかの実施態様において、Ｆｌａｇタグ、ヒト化抗ＣＤ１９部分および複数共刺激ドメインを含むキメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチドが提供される。例えば、模式的構造は、抗ＣＤ１９部分／膜貫通ドメイン／共刺激ドメイン１／共刺激ドメイン２／共刺激ドメイン３／シグナル伝達ドメインである。共刺激ドメインは、実施態様によって、順番が変わる。例えば、いくつかの実施態様において、共刺激ドメイン(「ＣＳＤ」)は次のとおり配置され得る。ＣＳＤ１／ＣＳＤ２、ＣＳＤ２／ＣＳＤ１、ＣＳＤ１／ＣＳＤ２／ＣＳＤ３、ＣＳＤ１／ＣＳＤ２／ＣＳＤ３、ＣＳＤ３／ＣＳＤ２／ＣＳＤ１など。いくつかの実施態様において、Ｆｌａｇタグ、ヒト化抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ａＴＭ／ＣＤ４４／ＯＸ４０／ＣＤ２７／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ｉ、ＮＫ１９Ｈ−ＮＦ−１３ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ヒト化されており、Ｆｌａｇタグ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＣＤ４４共刺激ドメイン、ＯＸ４０共刺激ドメイン、ＣＤ２７共刺激ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ｉ、ＮＫ１９Ｈ−ＮＦ−１３ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ヒト化されており、Ｆｌａｇタグ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＣＤ４４共刺激ドメイン、ＯＸ４０共刺激ドメイン、ＣＤ２７共刺激ドメイン、ＣＤ３ゼータドメイン、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むここに記載する抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを含むまたはこれらからなる。
【０２４１】
いくつかの実施態様において、Ｆｌａｇタグ、ヒト化抗ＣＤ１９部分および複数共刺激ドメインを含むキメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチドが提供される。例えば、模式的構造は、抗ＣＤ１９部分／膜貫通ドメイン／共刺激ドメイン１／共刺激ドメイン２／共刺激ドメイン３／シグナル伝達ドメインである。共刺激ドメインは、実施態様によって、順番が変わる。例えば、いくつかの実施態様において、共刺激ドメイン(「ＣＳＤ」)は次のとおり配置され得る。ＣＳＤ１／ＣＳＤ２、ＣＳＤ２／ＣＳＤ１、ＣＳＤ１／ＣＳＤ２／ＣＳＤ３、ＣＳＤ１／ＣＳＤ２／ＣＳＤ３、ＣＳＤ３／ＣＳＤ２／ＣＳＤ１など。いくつかの実施態様において、Ｆｌａｇタグ、ヒト化抗ＣＤ１９部分／ＣＤ８ヒンジ／ＣＤ８ａＴＭ／ＣＤ４４／ＯＸ４０／ＣＤ２７／ＣＤ３ゼータキメラ抗原受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される(図３Ｆ、ＮＫ１９Ｈ−１３ａ参照)。ポリヌクレオチドは、ヒト化されており、Ｆｌａｇタグ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＣＤ４４共刺激ドメイン、ＯＸ４０共刺激ドメイン、ＣＤ２７共刺激ドメインおよびＣＤ３ゼータドメインを含む抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを含むまたはこれらからなる。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はｍｂＩＬ１５をさらに含む(図３Ｆ、ＮＫ１９Ｈ−１３ｂ参照)。このような実施態様において、ポリヌクレオチドは、ヒト化されており、Ｆｌａｇタグ、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＣＤ４４共刺激ドメイン、ＯＸ４０共刺激ドメイン、ＣＤ２７共刺激ドメイン、ＣＤ３ゼータドメイン、２Ａ開裂部位およびｍｂＩＬ−１５ドメインを含むここに記載する抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを含むまたはこれらからなる。
【０２４２】
ここに記載するあらゆる受容体構築物について、開示する配列の一定の配列可変性、伸長および／または短縮化が、例えば、クローニングの容易さまたは効率の結果として、配列を組み合わせたとき起こり得ることは認識される(例えば、制限部位の作製のため)。
【０２４３】
処置方法
ある実施態様は、ＣＤ１９指向性キメラ受容体などのキメラ受容体を含む細胞または免疫細胞で癌を処置、軽減、阻止または予防する方法に関する。ある実施態様において、方法は癌の処置または予防を含む。ある実施態様において、方法は、治療有効量のここに記載するＣＤ１９指向性キメラ受容体を発現する免疫細胞を投与することを含む。このように処置され得る癌のタイプの例をここに記載する。
【０２４４】
ある実施態様において、ここに記載する遺伝子操作された細胞での対象の処置は、次の、例えば(ｉ)疾患またはそれに付随する症状の重症度の低減または改善；(ii)疾患に付随する症状の持続期間の低減；(iii)疾患またはそれに付随する症状の進行からの保護；(iv)疾患またはそれに付随する症状の退行；(ｖ)疾患に付随する症状の進展または発症からの保護；(vi)疾患に付随する症状の再発からの保護；(vii)対象の入院低減；(viii)入院の長さの短縮；(ix)疾患を有する対象の生存増加；(ｘ)疾患に付随する症状の数の減少；(xi)他の治療の予防または治療効果の増強、改善、補充、補完または増大を含む、効果の１つ、２つ、３つ、４つまたはそれ以上を達成する。投与投与は、静脈内、動脈内、皮下、筋肉内、肝臓内、腹腔内および／または罹患組織への局所送達を含むが、これらに限定されない多様な経路により得る。
【０２４５】
用法・用量
さらにここに提供されるのは、対象にここに記載するとおり細胞毒性受容体複合体を発現するよう操作された免疫細胞(例えばＮＫ細胞および／またはＴ細胞)を含む組成物を投与することを含む、癌を有する対象を処置する方法である。例えば、ここに記載する組成物および方法のある実施態様は、癌患者処置のための、ＣＤ１９指向性キメラ受容体の使用またはＣＤ１９指向性キメラ受容体を発現する細胞の使用に関する。癌の処置のためのこのように操作された免疫細胞の使用も提供される。
【０２４６】
ある実施態様において、ここに記載する遺伝子操作された細胞での対象の処置は、次の、例えば、(ｉ)疾患またはそれに付随する症状の重症度の低減または改善；(ii)疾患に付随する症状の持続期間の低減；(iii)疾患またはそれに付随する症状の進行からの保護；(iv)疾患またはそれに付随する症状の退行；(ｖ)疾患に付随する症状の進展または発症からの保護；(vi)疾患に付随する症状の再発からの保護；(vii)対象の入院低減；(viii)入院の長さの短縮；(ix)疾患を有する対象の生存増加；(ｘ)疾患に付随する症状の数の減少；(xi)他の治療の予防または治療効果の増強、改善、補充、補完または増大を含む、効果の１つ、２つ、３つ、４つまたはそれ以上を達成する。これらの比較の各々は、例えば、ここに開示する構築物を発現しない細胞を使用する疾患の細胞ベースの免疫療法を含む、疾患の異なる治療に対してである。
【０２４７】
投与投与は、静脈内、動脈内、皮下、筋肉内、肝臓内、腹腔内および／または罹患組織への局所送達を含むが、これらに限定されない多様な経路により得る。ＮＫ細胞および／またはＴ細胞などの免疫細胞の量は、ある対象について、体格、疾患タイプおよび状態ならびに処置の所望の積極性に基づき容易に決定できるが、実施態様によって、約１０５細胞／kg〜約１０１２細胞／kgの範囲である(例えば、１０５〜１０７細胞／kg、１０７〜１０１０細胞／kg、１０１０〜１０１２細胞／kgおよびそれらの重複する範囲)。ある実施態様において、用量漸増レジメンが使用される。いくつかの実施態様において、例えば約１×１０６細胞／kg〜約１×１０８細胞／kgの範囲のＮＫ細胞および／またはＴ細胞などの免疫細胞が投与される。いくつかの実施態様において、投与量は、約２×１０６細胞／kgおよび２×１０７細胞／kgを含み、約２×１０５細胞／kg〜約２×１０８細胞／kgの範囲である。いくつかの実施態様において、用量は、投与時点の生存可能な操作された細胞の最大数により決定される。例えば、ある実施態様において、１回用量は、約２×１０６、約２×１０７または約２×１０８の生存可能な操作された細胞を含み、最大約２×１０５〜約２×１０９の生存可能な操作された細胞を含む。ある実施態様によって、種々のタイプの癌が処置され得る。いくつかの実施態様において、肝細胞癌が処置される。ここにおいて提供されるさらなる実施態様は、次の、急性リンパ芽球性白血病(ＡＬＬ)、急性骨髄性白血病(ＡＭＬ)、副腎皮質癌腫、カポジ肉腫、リンパ腫、消化器癌、虫垂癌、中枢神経系癌、基底細胞癌腫、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳腫瘍(星状細胞腫、脊髄腫瘍、脳幹神経膠腫、神経膠芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣芽腫、上衣腫、髄芽腫、髄上皮腫を含むが、これらに限定されない)、乳癌、気管支腫瘍、バーキットリンパ腫、子宮頸癌、結腸癌、慢性リンパ球性白血病(ＣＬＬ)、慢性骨髄性白血病(ＣＭＬ)、慢性骨髄増殖性障害、腺管癌、子宮内膜癌、食道癌、胃癌、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ヘアリー細胞白血病、腎細胞癌、白血病、口腔癌、鼻咽頭癌、肝臓癌、肺癌(非小細胞肺癌、(ＮＳＣＬＣ)および小細胞肺癌を含むが、これらに限定されない)、膵臓癌、腸癌、リンパ腫、黒色腫、眼癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、下垂体癌、子宮癌および膣癌を含むが、これらに限定されない、非限定的例示的癌の処置または予防を含む。
【０２４８】
ある実施態様において、またここに提供されるのは、各配列番号１〜２０７の核酸またはアミノ酸配列(または配列番号１〜２０７の２以上の組み合わせ)と比較して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％(およびその中の範囲)の配列同一性または相同性を有しまた各配列番号１〜２０７(または配列番号１〜２０７の２以上の組み合わせ)と比較して、(ｉ)増殖増強、(ii)活性化増強、(iii)核酸およびアミノ酸配列によりコードされる受容体を担持するＮＫ細胞が結合するリガンドを提示する細胞に対する細胞毒性活性増強、(iv)腫瘍または感染部位へのホーミング増強、(ｖ)オフターゲット細胞毒性効果低減、(vi)免疫刺激性サイトカインおよびケモカイン(ＩＦＮｇ、ＴＮＦａ、ＩＬ−２２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４およびＣＣＬ５を含むが、これらに限定されない)分泌増強、(vii)自然および適応免疫応答をさらに刺激する能力の増大および(viii)これらの組み合わせを含むが、これらに限定されない機能の１以上を示す核酸およびアミノ酸配列である。
【０２４９】
さらに、いくつかの実施態様において、核酸コードの縮重を考慮すると、ここに開示する核酸に対応するアミノ酸配列が提供される。さらに、ここに明示的に示すものと配列(核酸であれアミノ酸であれ)が異なるが、機能的類似性または同等性を有するものも、本開示の範囲内で考慮される。前記は、変異体、短縮化、置換または他のタイプの修飾を含む。
【０２５０】
いくつかの実施態様において、開示する細胞毒性受容体複合体またはＣＤ１９指向性キメラ受容体をコードするポリヌクレオチドはｍＲＮＡである。ある実施態様において、ポリヌクレオチドはＤＮＡである。ある実施態様において、ポリヌクレオチドは、細胞毒性受容体複合体発現のために少なくとも１つの制御要素と制御可能に結合される。
【０２５１】
いくつかの実施態様によると、さらに提供されるのは、ここに提供されるポリヌクレオチドの何れかをコードするポリヌクレオチドを含むベクターであり、ここで、ポリヌクレオチドは、所望により細胞毒性受容体複合体の発現のために少なくとも１つの制御要素と制御可能に結合される。いくつかの実施態様において、ベクターはレトロウイルスである。
【０２５２】
さらにここで提供されるのは、ここに記載するポリヌクレオチド、ベクターまたは細胞毒性受容体複合体を含む、操作された免疫細胞(例えばＮＫ細胞および／またはＴ細胞)である。さらにここで提供されるのは、操作された免疫細胞(例えばＮＫ細胞および／または操作されたＴ細胞)の混合物を含む組成物であり、各集団は、ここに記載するポリヌクレオチド、ベクターまたは細胞毒性受容体複合体を含む。
【０２５３】
ＮＫ細胞などの免疫細胞またはＴ細胞の用量は、ある対象について、体格、疾患タイプおよび状態ならびに処置の所望の積極性に基づき容易に決定できるが、実施態様によって、約１０５細胞／kg〜約１０１２細胞／kg(例えば、１０５〜１０７細胞／kg、１０７〜１０１０細胞／kg、１０１０〜１０１２細胞／kgおよびその中の重複する範囲)の範囲である。ある実施態様において、用量漸増レジメンが使用される。いくつかの実施態様において、例えば約１×１０６細胞／kg〜約１×１０８細胞／kgの範囲のＮＫ細胞が投与される。ある実施態様によって、種々のタイプの癌または感染疾患が処置され得る。
【０２５４】
癌タイプ
ここに記載する組成物および方法のある実施態様は、癌を有する対象へのＣＤ１９指向性キメラ受容体などのキメラ受容体を含む免疫細胞の投与に関する。ここで提供される種々の実施態様は、次の非限定的例示的癌の処置または予防を含む。癌の例は、急性リンパ芽球性白血病(ＡＬＬ)、急性骨髄性白血病(ＡＭＬ)、副腎皮質癌腫、カポジ肉腫、リンパ腫、消化器癌、虫垂癌、中枢神経系癌、基底細胞癌腫、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳腫瘍(星状細胞腫、脊髄腫瘍、脳幹神経膠腫、頭蓋咽頭腫、上衣芽腫、上衣腫、髄芽腫、髄上皮腫を含むが、これらに限定されない)、乳癌、気管支腫瘍、バーキットリンパ腫、子宮頸癌、結腸癌、慢性リンパ球性白血病(ＣＬＬ)、慢性骨髄性白血病(ＣＭＬ)、慢性骨髄増殖性障害、腺管癌、子宮内膜癌、食道癌、胃癌、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ヘアリー細胞白血病、腎細胞癌、白血病、口腔癌、鼻咽頭癌、肝臓癌、肺癌(非小細胞肺癌、(ＮＳＣＬＣ)および小細胞肺癌を含むが、これらに限定されない)、膵臓癌、腸癌、リンパ腫、黒色腫、眼癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、下垂体癌、子宮癌および膣癌を含むが、これらに限定されない。
【０２５５】
癌標的
ここに記載する組成物および方法のある実施態様は、癌抗原を標的とするキメラ受容体を含む免疫細胞に関する。標的抗原の非限定的例は、ＣＤ５、ＣＤ１９；ＣＤ１２３；ＣＤ２２；ＣＤ３０；ＣＤ１７１；ＣＳ１(ＣＤ２サブセット１、ＣＲＡＣＣ、ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ３１９および１９Ａ２４とも称する)；Ｃ型レクチン様分子−１(ＣＬＬ−１またはＣＬＥＣＬ１)；ＣＤ３３；上皮細胞増殖因子受容体バリアントIII(ＥＧＦＲviii)；ガングリオシドＧ２(ＧＤ２)；ガングリオシドＧＤ３(ａＮｅｕ５Ａｃ(２−８)ａＮｅｕ５Ａｃ(２−３)ｂＤＧａｌｐ(ｌ−４)ｂＤＧｌｃｐ(ｌ−ｌ)Ｃｅｒ)；ＴＮＦ受容体ファミリーメンバーＢ細胞成熟(ＢＣＭＡ)；Ｔｎ抗原((Ｔｎ  Ａｇ)または(ＧａｌＮＡｃａ−Ｓｅｒ／Ｔｈｒ))；前立腺特異的膜抗原(ＰＳＭＡ)；受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１(ＲＯＲ１)；Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３(ＦＬＴ３)；腫瘍関連糖タンパク質７２(ＴＡＧ７２)；ＣＤ３８；ＣＤ４４ｖ６；急性白血病またはリンパ腫で発現されるが、造血前駆細胞で発現されないグリコシル化ＣＤ４３エピトープ、非造血癌で発現されるグリコシル化ＣＤ４３エピトープ、癌胎児性抗原(ＣＥＡ)；上皮性細胞接着分子(ＥＰＣＡＭ)；Ｂ７Ｈ３(ＣＤ２７６)；ＫＩＴ(ＣＤ１１７)；インターロイキン−１３受容体サブユニットアルファ−２(ＩＬ−１３Ｒａ２またはＣＤ２１３Ａ２)；メソテリン；インターロイキン１１受容体アルファ(ＩＬ−ｌｌＲａ)；前立腺幹細胞抗原(ＰＳＣＡ)；プロテアーゼセリン２１(テスティシンまたはＰＲＳＳ２１)；血管内皮細胞増殖因子受容体２(ＶＥＧＦＲ２)；ルイス(Ｙ)抗原；ＣＤ２４；血小板由来増殖因子受容体ベータ(ＰＤＧＦＲ−ベータ)；ステージ特異的胚抗原−４(ＳＳＥＡ−４)；ＣＤ２０；葉酸受容体アルファ(ＦＲａまたはＦＲ１)；葉酸受容体ベータ(ＦＲｂ)；受容体チロシン−タンパク質キナーゼＥＲＢＢ２(Ｈｅｒ２／ｎｅｕ)；ムチン１、細胞表面関連(ＭＵＣ１)；上皮細胞増殖因子受容体(ＥＧＦＲ)；神経細胞接着分子(ＮＣＡＭ)；プロスターゼ；前立腺酸ホスファターゼ(ＰＡＰ)；伸長因子２変異(ＥＬＦ２Ｍ)；エフリンＢ２；線維芽細胞活性化タンパク質アルファ(ＦＡＰ)；インシュリン様増殖因子１受容体(ＩＧＦ−Ｉ受容体)、炭酸脱水酵素IX(ＣＡIX)；プロテアソーム(プロソーム、マクロパイン)サブユニット、ベータタイプ、９(ＬＭＰ２)；糖タンパク質１００(ｇｐ１００)；易切断領域(ＢＣＲ)およびアベルソンマウス白血病ウイルス癌遺伝子ホモログ１(Ａｂｌ)からなる癌遺伝子融合タンパク質(ｂｃｒ−ａｂｌ)；チロシナーゼ；エフリンタイプＡ受容体２(ＥｐｈＡ２)；シアリルルイス接着分子(ｓＬｅ)；ガングリオシドＧＭ３(ａＮｅｕ５Ａｃ(２−３)ｂＤＣｌａｌｐ(ｌ−４)ｂＤＧｌｃｐ(ｌ−ｌ)Ｃｅｒ)；トランスグルタミナーゼ５(ＴＧＳ５)；高分子量黒色腫関連抗原(ＨＭＷＭＡＡ)；ｏ−アセチル−ＧＤ２ガングリオシド(ＯＡｃＧＤ２)；腫瘍内皮マーカー１(ＴＥＭ１／ＣＤ２４８)；腫瘍内皮マーカー７関連(ＴＥＭ７Ｒ)；クローディン６(ＣＬＤＮ６)；甲状腺刺激ホルモン受容体(ＴＳＨＲ)；Ｇタンパク質共役受容体クラスＣ群５、メンバーＤ(ＧＰＲＣ５Ｄ)；染色体Ｘオープンリーディングフレーム６１(ＣＸＯＲＦ６１)；ＣＤ９７；ＣＤ１７９ａ；未分化リンパ腫キナーゼ(ＡＬＫ)；ポリシアル酸；胎盤特異的１(ＰＬＡＣ１)；ｇｌｏｂｏＨグリコセラミドのヘキササッカライド部分(ＧｌｏｂｏＨ)；乳腺分化抗原(ＮＹ−ＢＲ−１)；ウロプラキン２(ＵＰＫ２)；Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１(ＨＡＶＣＲ１)；アドレナリン受容体ベータ３(ＡＤＲＢ３)；パネキシン３(ＰＡＮＸ３)；Ｇタンパク質共役受容体２０(ＧＰＲ２０)；リンパ球抗原６複合体、座位Ｋ９(ＬＹ６Ｋ)；嗅覚受容体５１Ｅ２(または５１Ｅ２)；ＴＣＲガンマ代替リーディングフレームタンパク質(ＴＡＲＰ)；ウィルムス腫瘍タンパク質(ＷＴ１)；癌／精巣抗原１(ＮＹ−ＥＳ０−１)；癌／精巣抗原２(ＬＡＧＥ−ｌａ)；黒色腫関連抗原１(ＭＡＧＥ−Ａ１)；ＥＴＳ転座−バリアント遺伝子６、染色体１２ｐに位置(ＥＴＶ６−ＡＭＬ)；精子タンパク質１７(ＳＰＡ１７)；Ｘ抗原ファミリー、メンバー１Ａ(ＸＡＧＥ１)；アンギオポエチン結合細胞表面受容体２(Ｔｉｅ  ２)；黒色腫癌精巣抗原−１(ＭＡＤ−ＣＴ−１)；黒色腫癌精巣抗原−２(ＭＡＤ−ＣＴ−２)；Ｆｏｓ関連抗原１；腫瘍タンパク質ｐ５３(ｐ５３)；ｐ５３変異体；プロステイン；サバイビン；テロメラーゼ；前立腺癌腫瘍抗原−１(ＰＣＴ  Ａ−ｌまたはガレクチン８)、Ｔ細胞１により認識される黒色腫抗原(ＭｅｌａｎＡまたはＭＡＲＴＩ)；ラット肉腫(Ｒａｓ)変異体；ヒトテロメラーゼ；逆転写酵素(ｈＴＥＲＴ)；肉腫転座ブレークポイント；アポトーシスの黒色腫阻害因子(ＭＬ−ＩＡＰ)；ＥＲＧ(膜貫通プロテアーゼ、セリン２(ＴＭＰＲＳＳ２)ＥＴＳ融合遺伝子)；Ｎ−アセチルグルコサミニル−トランスフェラーゼＶ(ＮＡ１７)；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ−３(ＰＡＸ３)；アンドロゲン受容体；サイクリンＢｌ；ｖ−ｍｙｃトリ骨髄嚢腫ウイルス癌遺伝子神経芽腫由来ホモログ(ＭＹＣＮ)；ＲａｓホモログファミリーメンバーＣ(ＲｈｏＣ)；チロシナーゼ関連タンパク質２(ＴＲＰ−２)；シトクロムＰ４５０  ＩＢ  １(ＣＹＰＩＢ  １)；ＣＣＣＴＣ結合因子(亜鉛フィンガータンパク質)様(ＢＯＲＩＳまたはBrother of the Regulator of Imprinted Sites)、Ｔ細胞３により認識される扁平上皮細胞癌腫抗原(ＳＡＲＴ３)；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ−５(ＰＡＸ５)；プロアクロシン結合タンパク質ｓｐ３２(ＯＹ−ＴＥＳ１)；リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ(ＬＣＫ)；Ａキナーゼアンカータンパク質４(ＡＫＡＰ−４)；滑膜肉腫、Ｘブレークポイント２(ＳＳＸ２)；終末糖化産物受容体(ＲＡＧＥ−１)；腎臓ユビキタス１(ＲＵ１)；腎臓ユビキタス２(ＲＵ２)；レグマイン；ヒトパピローマウイルスＥ６(ＨＰＶ  Ｅ６)；ヒトパピローマウイルスＥ７(ＨＰＶ  Ｅ７)；腸カルボキシルエステラーゼ；ヒートショックタンパク質７０−２変異(ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２)；ＣＤ７９ａ；ＣＤ７９ｂ；ＣＤ７２；白血球関連免疫グロブリン様受容体１(ＬＡＩＲ１)；ＩｇＡ受容体のＦｃフラグメント(ＦＣＡＲまたはＣＤ８９)；白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＡメンバー２(ＬＩＬＲＡ２)；ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ(ＣＤ３００ＬＦ)；Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ(ＣＬＥＣ１２Ａ)；骨髄間質細胞抗原２(ＢＳＴ２)；ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２(ＥＭＲ２)；リンパ球抗原７５(ＬＹ７５)；グリピカン−３(Ｇ���Ｃ３)；Ｆｃ受容体様５(ＦＣＲＬ５)；および免疫グロブリンラムダ様ポリペプチド１(ＩＧＬＬｌ)、ＭＰＬ、ビオチン、ｃ−ＭＹＣエピトープタグ、ＣＤ３４、ＬＡＭＰ１  ＴＲＯＰ２、ＧＦＲアルファ４、ＣＤＨ１７、ＣＤＨ６、ＮＹＢＲ１、ＣＤＨ１９、ＣＤ２００Ｒ、Ｓｌｅａ(ＣＡ１９.９；シアリルルイス抗原)；フコシル−ＧＭｌ、ＰＴＫ７、ｇｐＮＭＢ、ＣＤＨ１−ＣＤ３２４、ＤＬＬ３、ＣＤ２７６／Ｂ７Ｈ３、ＩＬｌ  ｌＲａ、ＩＬ１３Ｒａ２、ＣＤ１７９ｂ−ＩＧＬｌｌ、ＴＣＲガンマ−デルタ、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ３２(ＦＣＧＲ２Ａ)、Ｔｎ  ａｇ、Ｔｉｍｌ−／ＨＶＣＲ１、ＣＳＦ２ＲＡ(ＧＭ−ＣＳＦＲ−アルファ)、ＴＧＦベータＲ２、Ｌｅｗｓ  Ａｇ、ＴＣＲ−ベータｌ鎖、ＴＣＲ−ベータ２鎖、ＴＣＲ−ガンマ鎖、ＴＣＲ−デルタ鎖、ＦＩＴＣ、黄体形成ホルモン受容体(ＬＨＲ)、卵胞刺激ホルモン受容体(ＦＳＨＲ)、ゴナドトロピンホルモン受容体(ＣＧＨＲまたはＧＲ)、ＣＣＲ４、ＧＤ３、ＳＬＡＭＦ６、ＳＬＡＭＦ４、ＨＩＶ１エンベロープ糖タンパク質、ＨＴＬＶｌ−Ｔａｘ、ＣＭＶ  ｐｐ６５、ＥＢＶ−ＥＢＮＡ３ｃ、ＫＳＨＶ  Ｋ８.１、ＫＳＨＶ−ｇＨ、インフルエンザＡヘマグルチニン(ＨＡ)、ＧＡＤ、ＰＤＬ１、グアニリルシクラーゼＣ(ＧＣＣ)、デスモグレイン３に対する自己抗体(Ｄｓｇ３)、デスモグレイン１に対する自己抗体(Ｄｓｇｌ)、ＨＬＡ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＰ、ＨＬＡ−ＤＭ、ＨＬＡ−ＤＯＡ、ＨＬＡ−ＤＯＢ、ＨＬＡ−ＤＱ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−Ｇ、ＩｇＥ、ＣＤ９９、Ｒａｓ  Ｇ１２Ｖ、組織因子１(ＴＦ１)、ＡＦＰ、ＧＰＲＣ５Ｄ、クローディン１８.２(ＣＬＤ１８Ａ２またはＣＬＤＮ１８Ａ.２))、Ｐ−糖タンパク質、ＳＴＥＡＰ１、Ｌｉｖｌ、ネクチン−４、Ｃｒｉｐｔｏ、ｇｐＡ３３、ＢＳＴ１／ＣＤ１５７、低コンダクタンスクロライドチャネルおよびＴＮＴ抗体により認識される抗原を含むが、これらに限定されない。
【０２５６】
さらに、いくつかの実施態様において、細胞外抗ＣＤ１９結合部分(ここで、抗ＣＤ１９結合部分は重鎖可変(ＶＨ)ドメインおよび軽鎖可変(ＶＬ)ドメインを含み、ＶＨドメインは配列番号３３に示すＶＨドメインアミノ酸配列と少なくとも９５％同一性を有するＶＨドメインを含み、ＶＬドメインは配列番号３２に示すＶＬドメインアミノ酸配列と少なくとも９５％同一性を有する)、ヒンジおよび／または膜貫通ドメイン、細胞内シグナル伝達ドメイン(ここで、細胞内シグナル伝達ドメインはＯＸ４０サブドメインを含む)を含む、ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体を含み、また膜結合インターロイキン−１５(ｍｂＩＬ１５)も発現する免疫細胞が提供される。いくつかの実施態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、さらにＣＤ３ゼータサブドメインを含む。いくつかの実施態様において、ＯＸ４０サブドメインは配列番号６のアミノ酸配列を含み、ＣＤ３ゼータサブドメインは配列番号７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ヒンジドメインは、ＣＤ８ａヒンジドメインを含む。いくつかの実施態様において、ＣＤ８ａヒンジドメインは、配列番号２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ｍｂＩＬ１５は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体はＮＫＧ２Ｄ受容体の細胞外ドメインをさらに含む。いくつかの実施態様において、ＮＫＧ２Ｄ受容体の細胞外ドメインは、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＮＫＧ２Ｄの機能的フラグメントを含む。いくつかの実施態様において、免疫細胞はナチュラルキラー(ＮＫ)細胞である。いくつかの実施態様において、免疫細胞はＴ細胞である。いくつかの実施態様において、このような免疫細胞を、癌を処置する方法で対象に投与するか癌処置用医薬の製造におけるなどの他の方法で癌の処置に使用される。いくつかの実施態様において、癌は急性リンパ球性白血病である。
【０２５７】
いくつかの実施態様において、細胞外抗ＣＤ１９結合部分(ここで、抗ＣＤ１９結合部分は重鎖可変(ＶＨ)ドメインおよび軽鎖可変(ＶＬ)ドメインを含み、ＶＨドメインは配列番号３３に示すＶＨドメインアミノ酸配列と少なくとも９５％同一性を有し、ＶＬドメインは、配列番号３２に示すＶＬドメインアミノ酸配列と少なくとも９５％同一性を有する)、ヒンジおよび／または膜貫通ドメイン、細胞内シグナル伝達ドメイン(ここで、細胞内シグナル伝達ドメインはＯＸ４０サブドメインを含む)を含む、ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードし、膜結合インターロイキン−１５(ｍｂＩＬ１５)もまたコードするポリヌクレオチドが提供される。いくつかの実施態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、さらにＣＤ３ゼータサブドメインを含む。いくつかの実施態様において、コードされたＯＸ４０サブドメインは配列番号１６のアミノ酸配列を含み、コードされたＣＤ３ゼータサブドメインは配列番号８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、ヒンジドメインはＣＤ８ａヒンジドメインを含み、配列番号２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、コードされたｍｂＩＬ１５は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、キメラ受容体はＮＫＧ２Ｄ受容体の細胞外ドメインをさらに含む。いくつかの実施態様において、コードされたＮＫＧ２Ｄ受容体の細胞外ドメインは、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＮＫＧ２Ｄの機能的フラグメントを含む。
【０２５８】
細胞外抗ＣＤ１９部分、ヒンジおよび／または膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＤ１９指向性キメラ受容体を発現する免疫細胞もここで提供される。いくつかの実施態様において、免疫細胞はＮＫ細胞である。いくつかの実施態様において、免疫細胞はＴ細胞である。いくつかの実施態様において、ヒンジドメインは、ＣＤ８ａヒンジドメインまたはＩｇ４  ＳＨドメインを含む。いくつかの実施態様において、膜貫通ドメインは、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメインおよび／またはＣＤ３膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施態様において、シグナル伝達ドメインは、ＯＸ４０シグナル伝達ドメイン、４−１ＢＢシグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、ＮＫｐ８０シグナル伝達ドメイン、ＣＤ１６  ＩＣシグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ゼータまたはＣＤ３ζ  ＩＴＡＭシグナル伝達ドメインおよび／またはｍＩＬ−１５シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施態様において、シグナル伝達ドメインは、２Ａ開裂ドメインを含む。いくつかの実施態様において、ｍＩＬ−１５シグナル伝達ドメインは、２Ａ開裂ドメインによりＣＤ１９指向性キメラ受容体の残りまたは他の部分から離されている。いくつかの実施態様において、このような免疫細胞を、癌の処置、阻止または進行予防のために癌を有する対象に投与する。
【０２５９】
細胞外抗ＣＤ１９結合部分(ここで、抗ＣＤ１９結合部分は重鎖可変(ＶＨ)ドメインおよび軽鎖可変(ＶＬ)ドメインを含み、ＶＨドメインは配列番号３３に示すＶＨドメインアミノ酸配列のヒト化によりもたらされるＶＨドメインを含み、ＶＬドメインは配列番号３２に示すＶＬドメインアミノ酸配列のヒト化によりもたらされるＶＬドメイを含む)、ヒンジおよび／または膜貫通ドメイン、細胞内シグナル伝達ドメイン(ここで、細胞内シグナル伝達ドメインはＯＸ４０サブドメインを含む)を含むＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体を発現し、膜結合インターロイキン−１５(ｍｂＩＬ１５)もまた発現する、操作されたＮＫ細胞またはＴ細胞もまたここで提供される。
【０２６０】
細胞外抗ＣＤ１９結合部分(ここで、抗ＣＤ１９結合部分は重鎖可変(ＶＨ)ドメインおよび軽鎖可変(ＶＬ)ドメインを含み、ＶＨドメインは配列番号３３に示すＶＨドメインアミノ酸配列のヒト化によりもたらされるＶＨドメインを含み、ＶＬドメインは配列番号３２に示すＶＬドメインアミノ酸配列のヒト化によりもたらされるＶＬドメイを含む)、ヒンジおよび／または膜貫通ドメイン、細胞内シグナル伝達ドメイン(ここで、細胞内シグナル伝達ドメインはＯＸ４０サブドメインを含む)を含む、ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードし、膜結合インターロイキン−１５(ｍｂＩＬ１５)もまたコードする、ポリヌクレオチドがここで提供される。
【０２６１】
細胞外抗ＣＤ１９結合部分(ここで、抗ＣＤ１９結合部分はｓｃＦｖを含む)、ヒンジ(ここで、ヒンジはＣＤ８アルファヒンジである)、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメイン(ここで、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータＩＴＡＭを含む)を含む、ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチドがここで提供される。いくつかの実施態様において、膜貫通ドメインは、ＣＤ８アルファ膜貫通ドメイン、ＮＫＧ２Ｄ膜貫通ドメインおよび／またはＣＤ２８膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、４−１ＢＢシグナル伝達ドメインおよび／またはＯＸ４０ドメインを含む。いくつかの実施態様において、細胞内シグナル伝達ドメインはＩＣＯＳ、ＣＤ７０、ＣＤ１６１、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４４およびこれらの組み合わせから選択されるドメインもまた含み得る。
【０２６２】
細胞外抗ＣＤ１９結合部分(ここで、抗ＣＤ１９結合部分は、ｓｃＦｖの可変重鎖またはｓｃＦｖの可変軽鎖を含む)、ヒンジ(ここで、ヒンジはＣＤ８アルファヒンジである)、膜貫通ドメイン(ここで、膜貫通ドメインはＣＤ８アルファ膜貫通ドメインを含む)および細胞内シグナル伝達ドメイン(ここで、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータＩＴＡＭを含む)を含む、ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチドがここで提供される。いくつかの実施態様において、ポリヌクレオチドは、切断型上皮細胞増殖因子受容体(ＥＧＦＲｔ)もコードする。いくつかの実施態様において、ポリヌクレオチドは膜結合インターロイキン−１５(ｍｂＩＬ１５)もコードする。ここに提供されるのは、このようなＣＤ１９指向性キメラ抗原を発現する操作されたＮＫ細胞またはＴ細胞およびこのようなＮＫ細胞またはＴ細胞の投与による、癌を処置する方法である。また提供されるのは、癌の処置、例えば、癌処置用医薬の製造における、このようなポリヌクレオチドの使用である。
【０２６３】
細胞外抗ＣＤ１９結合部分(ここで、抗ＣＤ１９結合部分は重鎖可変(ＶＨ)ドメインおよび軽鎖可変(ＶＬ)ドメインを含み、ＶＨドメインは配列番号１２０、配列番号１２１、配列番号１２２および配列番号１２３から選択されるＶＨドメインを含み、ＶＬドメインは配列番号１１７、配列番号１１８および配列番号１１９から選択されるＶＬドメインを含む)、ヒンジおよび／または膜貫通ドメイン、細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ヒト化ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードし、膜結合インターロイキン−１５(ｍｂＩＬ１５)もまたコードする、ポリヌクレオチドがここで提供される。いくつかの実施態様において、細胞内シグナル伝達ドメインはＯＸ４０サブドメイン、ＣＤ２８サブドメイン、ｉＣＯＳサブドメイン、ＣＤ２８−４１ＢＢサブドメイン、ＣＤ２７サブドメイン、ＣＤ４４サブドメインまたはこれらの組み合わせを含む。いくつかの実施態様において、キメラ抗原受容体はヒンジおよび膜貫通ドメインを含み、ここで、ヒンジはＣＤ８アルファヒンジであり、膜貫通ドメインはＣＤ８アルファまたはＮＫＧ２Ｄ膜貫通ドメインである。いくつかの実施態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータドメインを含む。
【０２６４】
ヒト化キメラ抗原受容体(ＣＡＲ)をコードするポリヌクレオチドがここで提供され、ここで、ＣＡＲはヒト化抗ＣＤ１９結合ドメイン、膜貫通ドメイン、ＣＤ３ゼータの天然細胞内シグナル伝達ドメインまたはその機能的フラグメントを含む一次細胞内シグナル伝達ドメインならびにＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＩＣＯＳおよび４−１ＢＢからなる群から選択されるタンパク質の天然細胞内シグナル伝達ドメインまたはその機能的フラグメントを含む共刺激ドメインを含む一本鎖抗体または一本鎖抗体フラグメントを含み、ここで、該抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号１２４、１２７または１３０の軽鎖相補性決定領域１(ＬＣ  ＣＤＲ１)、配列番号１２５、１２８または１３１の軽鎖相補性決定領域２(ＬＣ  ＣＤＲ２)および配列番号１２６、１２９または１３２の軽鎖相補性決定領域３(ＬＣ  ＣＤＲ３)および配列番号１３３、１３６、１３９または１４２の重鎖相補性決定領域１(ＨＣ  ＣＤＲ１)、配列番号１３４、１３７、１４０または１４３の重鎖相補性決定領域２(ＨＣ  ＣＤＲ２)および配列番号１３５、１３８、１４１または１４４の重鎖相補性決定領域３(ＨＣ  ＣＤＲ３)を含む。いくつかの実施態様において、ポリヌクレオチドは、膜結合インターロイキン１５(ｍｂＩＬ１５)をコードする領域をさらに含む。
【０２６５】
ここで提供されるのは、細胞外抗ＣＤ１９結合部分(ここで、抗ＣＤ１９結合部分は配列番号１１７の可変軽(ＶＬ)ドメインを含むヒト化ｓｃＦｖ配列を含む)、ヒンジおよび／または膜貫通ドメイン、細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ヒト化ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードし、膜結合インターロイキン−１５(ｍｂＩＬ１５)もまたコードする、ポリヌクレオチドである。いくつかの実施態様において、ポリヌクレオチドは、配列番号１６１、配列番号１６７、配列番号１７３、配列番号１７９、配列番号１８５、配列番号１９１、配列番号１９７または配列番号２０３のヒト化キメラ抗原受容体をコードする。
【０２６６】
細胞外抗ＣＤ１９結合部分(ここで、抗ＣＤ１９結合部分は配列番号１１８の可変軽(ＶＬ)ドメインを含むヒト化ｓｃＦｖ配列を含む)、ヒンジおよび／または膜貫通ドメイン、細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ヒト化ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードし、膜結合インターロイキン−１５(ｍｂＩＬ１５)もまたコードする、ポリヌクレオチドがここで提供される。いくつかの実施態様において、ポリヌクレオチドは、配列番号１６３、配列番号１６９、配列番号１７５、配列番号１８１、配列番号１８７、配列番号１９３、配列番号１９９または配列番号２０５のヒト化キメラ抗原受容体をコードする。
【０２６７】
細胞外抗ＣＤ１９結合部分(ここで、抗ＣＤ１９結合部分は配列番号１１９の可変軽(ＶＬ)ドメインを含むヒト化ｓｃＦｖ配列を含む)、ヒンジおよび／または膜貫通ドメイン、細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ヒト化ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードし、膜結合インターロイキン−１５(ｍｂＩＬ１５)もまたコードする、ポリヌクレオチドが提供される。いくつかの実施態様において、ポリヌクレオチドは配列番号１６５、配列番号１７１、配列番号１７７、配列番号１８３、配列番号１８９、配列番号１９５、配列番号２０１または配列番号２０７のヒト化キメラ抗原受容体をコードする。
【０２６８】
細胞外抗ＣＤ１９結合部分(ここで、抗ＣＤ１９結合部分は配列番号１２０の可変重(ＶＨ)ドメインを含むヒト化ｓｃＦｖ配列を含む)、ヒンジおよび／または膜貫通ドメイン、細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ヒト化ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードし、膜結合インターロイキン−１５(ｍｂＩＬ１５)もまたコードする、ポリヌクレオチドが提供される。いくつかの実施態様において、ポリヌクレオチドは配列番号１６１、配列番号１６３、配列番号１６５、配列番号１８５、配列番号１８７または配列番号１８９のヒト化キメラ抗原受容体をコードする。
【０２６９】
細胞外抗ＣＤ１９結合部分(ここで、抗ＣＤ１９結合部分は配列番号１２１の可変重(ＶＨ)ドメインを含むヒト化ｓｃＦｖ配列を含む)、ヒンジおよび／または膜貫通ドメイン、細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ヒト化ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードし、膜結合インターロイキン−１５(ｍｂＩＬ１５)もまたコードする、ポリヌクレオチドが提供される。いくつかの実施態様において、ポリヌクレオチドは配列番号１６７、配列番号１６９、配列番号１７１、配列番号１９１、配列番号１９３または配列番号１９５のヒト化キメラ抗原受容体をコードする。
【０２７０】
細胞外抗ＣＤ１９結合部分(ここで、抗ＣＤ１９結合部分は配列番号１２２の可変重(ＶＨ)ドメインを含むヒト化ｓｃＦｖ配列を含む)、ヒンジおよび／または膜貫通ドメイン、細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ヒト化ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードし、膜結合インターロイキン−１５(ｍｂＩＬ１５)もまたコードする、ポリヌクレオチドが提供される。いくつかの実施態様において、ポリヌクレオチドは配列番号１７３、配列番号１７５、配列番号１７７、配列番号１９７、配列番号１９９または配列番号２０１のヒト化キメラ抗原受容体をコードする。
【０２７１】
細胞外抗ＣＤ１９結合部分(ここで、抗ＣＤ１９結合部分は配列番号１２３の可変重(ＶＨ)ドメインを含むヒト化ｓｃＦｖ配列を含む)、ヒンジおよび／または膜貫通ドメイン、細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ヒト化ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードし、膜結合インターロイキン−１５(ｍｂＩＬ１５)もまたコードする、ポリヌクレオチドが提供される。いくつかの実施態様において、ポリヌクレオチドは配列番号１７９、配列番号１８１、配列番号１８３、配列番号２０３、配列番号２０５または配列番号２０７のヒト化キメラ抗原受容体をコードする。
【０２７２】
いくつかの実施態様において、提供されるポリヌクレオチドは配列番号１１２、１１３、１１４または１１６をコードしない。
【０２７３】
細胞外抗ＣＤ１９結合部分、ヒンジおよび／または膜貫通ドメイン、細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ヒト化ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードし、膜結合インターロイキン−１５(ｍｂＩＬ１５)もまたコードするポリヌクレオチドが提供され、ここで、ポリヌクレオチドは配列番号１８４、配列番号１８６、配列番号１９２または配列番号２００と少なくとも９５％同一性を有するポリヌクレオチドからなる群から選択される。いくつかの実施態様において、ポリヌクレオチドは、配列番号１８４の配列、配列番号１８６、配列番号１９２または配列番号２００を有する。いくつかの実施態様において、このようなヒト化ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体を発現する操作されたＮＫ細胞またはＴ細胞が提供される。また提供されるのは、このような操作されたＮＫ細胞またはＴ細胞を癌を有する対象に投与することを含む、対象における癌を処置する方法である。癌処置用医薬の製造におけるなどの癌の処置におけるこのようなポリヌクレオチドの使用も提供される。
【実施例】
【０２７４】
ここに開示する材料および方法は、ここに開示するある実施態様により用いられる、非限定的例である。
【０２７５】
いくつかの実施態様によると、ＮＫ細胞は末梢血単核細胞から単離され、フィーダー細胞株の使用を介して拡大される。下にさらに詳述するとおり、いくつかの実施態様において、フィーダー細胞は、免疫細胞拡大および活性化を促進するために、ある刺激分子(例えばインターロイキン、ＣＤ３、４−１ＢＢＬなど)を発現するよう操作される。操作されたフィーダー細胞は、例えば、国際特許出願ＰＣＴ／ＳＧ２０１８／０５０１３８に開示されており、これは、引用により全体として本明細書に包含させる。いくつかの実施態様において、インターロイキン１２、１８および／または２１などの刺激分子を、例えば種々の時点でかつ特定の量で、共培養培地に別々に加えて、免疫細胞の所望の亜集団の拡大を行わせる。
【０２７６】
ＰＢＭＣから単離したＮＫ細胞を、膜結合ＩＬ１５および４−１ＢＢＬを発現するＫ５６２細胞と共培養し、培地にはＩＬ２を添加した。操作されたＮＫ細胞の一つの群について、可溶性ＩＬ１２および可溶性ＩＬ１８の組み合わせを添加した(０日目)培地で拡大させた。培地を、４日目にさらなる可溶性ＩＬ１２および可溶性ＩＬ１８でリフレッシュした。このような培養方法の実施態様のさらなる詳細は、米国仮特許出願６２／８８１３１１(２０１９年７月３１日出願)に開示されており、引用により全体として本明細書に包含させる。ＣＤ１９指向性キメラ受容体構築物を伴うウイルス形質導入を、７日目に行った。得られた操作されたＮＫ細胞を、１４日またはそれ以上の総培養期間で評価した。
【０２７７】
実施例１
図５は、ここに開示する方法により産生した操作されたＮＫ細胞の抗腫瘍有効性を評価する、模式的実験モデルを記載する。ＮＯＤ−ｓｃｉｄ  ＩＬ２Ｒガンマｎｕｌｌマウスに、２×１０５  Ｎａｌｍ６細胞(Ｂ前駆細胞性白血病細胞株)を０日目に静脈内投与した。４日目、マウスの一群は２.７×１０７個のＮＫ１９  ＣＡＲを発現するＮＫ細胞を受け(図３Ａ参照、ただし、他のＣＤ１９指向性キメラ受容体が使用され得ることは認識されるべきである)、他の群は、可溶性ＩＬ１２／ＩＬ１８を使用して拡大されたＮＫ細胞(ＮＫ１９−ＩＬ１２／１８細胞と特定)を受けた。白血病腫瘍負荷を、３日目、７日目、１１日目、１８日目および２５日目に実施した蛍光造影により評価した。図６Ａは、３日目、７日目、１１日目および１８日目の造影結果を示す。明らかなとおり、ＮＫ１９またはＮＫ１９  ＩＬ１２／１８を受けたマウスの腫瘍負荷は、対照として非形質導入ＮＫ細胞またはＰＢＳを受けたマウスより有意に低かった。図６Ｂは、折れ線グラフで造影データの概要を示す(大きなフラックス(光子／秒)値は、大きな蛍光シグナル検出および大きな腫瘍負荷を示す)。ＮＫ１９およびＮＫ１９  ＩＬ１２／１８両群は、Ｎａｌｍ６白血病細胞注射わずか７日後には、腫瘍負荷が低かった。この差異は１１日目により顕著であり、その時点で、ＰＢＳ群およびＮＴ  ＮＫ細胞群の腫瘍は、大きな増殖を示した。ＰＢＳ群およびＮＴ  ＮＫ細胞群の腫瘍負荷が広範である１８日目ですら、ＮＫ１９群およびＮＫ１９  ＩＬ１２／１８群の腫瘍負荷ははるかに少なかった。予想外に、ＮＫ１９  ＩＬ１２／１８群は、ＮＫ１９構築物を受けたものより低い腫瘍負荷を示した。ＮＫ１９細胞が白血病細胞増殖予防にかなり効果的であり、よって、この効果のさらなる状況が予想外であるだけでなく、上流での細胞拡大方法が細胞数自体だけでなく、拡大細胞の活性レベルにも影響することも、驚くべきことである。
【０２７８】
実施例２
ＣＡＲで使用されるある刺激ドメイン(多くの構築物がタンデム、三重または他の多重形式で複数「シグナル伝達」ドメインを用いることを考慮して、共刺激ドメインとも称する)が、発現(ならびに活性)に影響するかを決定するために実験を実施した。ＮＫ細胞を、図３Ａ〜３Ｃに記載する種々のＣＡＲをコードするウイルスで形質導入することにより産生した(いくつかの実施態様において、他の構築物が使用されるが)。非限定的例として、ＮＫ細胞は、長期細胞生存および増殖を支持する抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、細胞内ＯＸ４０共刺激ドメイン、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインおよび膜結合ＩＬ−１５をコードするバイシストロニックウイルスでの形質導入により産生した(ＮＫ１９、図３Ａ参照)。試験した他のＣＡＲ構築物、ＮＫ１９−１、２、３、４、５、８、９、１０、１１、１２およびＮＫ１９−１３は、同様の形式でＮＫ細胞に形質導入された。発現を決定するためにＦｌａｇドメインを用いる構築物について、いくつかの実施態様において、Ｆｌａｇ(または他のタグドメイン)を含まない類似構築物が提供されることは認識される。
【０２７９】
図７は、ＣＤ１９Ｆｌａｇ検出により証明される、ＮＫ  １９−１〜ＮＫ５およびＮＫ８〜ＮＫ１９−１３の発現データの概要である。データを、存在するＮＫ細胞総数に対する、ＣＤ１９−Ｆｌａｇ発現ＮＫ細胞のパーセンテージとして示す。データを、ＮＫ１９−「Ｘ」  ＣＡＲをコードする対応ウイルスで形質導入後４日目に取得した。発現データから明らかなとおり、全構築物は、少なくとも５５％のＮＫ細胞により発現された。事実、データを作成した１１構築物中８構築物で、ＮＫ細胞総数の約７５％またはそれ以上で発現が検出され、数構築物は８０％を超える効率で発現された。この発現データは、いくつかの実施態様によると、特異的刺激ドメインの選択が、ＮＫ細胞によるＣＡＲのより効率的な発現を可能とし得ることを示す。これは、いくつかの実施態様において、あるＮＫ細胞調製物のかなりの部分が臨床的に有用であるため、有利である(例えば、臨床的に関連する操作されたＮＫ細胞用量を産生するのに必要な挿入ＮＫ細胞が少ない)。
【０２８０】
ここに記載するとおり、種々の共刺激ドメインを、ＣＤ１９(または他の腫瘍マーカー)を標的とするキメラ抗原受容体で用い得る。図８Ａは、種々の共刺激ドメインを使用する、ＣＤ１９をターゲティングするＣＡＲの発現に関するデータを記載する。非限定的例として、共刺激ドメインは、ＯＸ４０、ＣＤ２８、ｉＣＯＳ、ＣＤ２８／４１ＢＢ、ＣＳ２７およびＣＤ４４を含み得るが、これらに限定されない。図８Ａは、ＮＫ細胞による示したＣＡＲ構築物の発現を表す平均蛍光強度データを示す。ＧＦＰ対照で検出される低ＭＦＩにより証明されるとおり、これらのデータは、これらの構築物が(ａ)ＮＫ細胞により発現されるおよび(ｂ)形質導入後４週間にわたりＮＫ細胞により比較的安定に発現されることを示す。図８Ｂは、示した共刺激ドメインを有するＣＡＲの発現効率を示す。約６０％〜約８０％効率範囲で、発現効率は幾分変動があるが、示した共刺激ドメインを有するＣＡＲの各々は良好に発現され、また少なくとも４週間にわたり比較的一定に発現されることが示された。
【０２８１】
種々の共刺激ドメインを利用するＣＤ１９指向性ＣＡＲを発現するＮＫ細胞の細胞毒性有効性に関して、データを図９Ａ〜９Ｆに示す。培養Ｎａｌｍ６細胞またはＲａｊｉ細胞を、示されたＮＫ１９構築物を発現する操作されたＮＫ細胞に曝し、ＮＫ１９−Ｘ発現ＮＫ細胞の暴露で示された日数共培養した(Ｘ軸は日を表す)。図９Ａは、第一ドナーからのＮＫ細胞を、示された構築物で形質導入後７日目のＮａｌｍ６細胞に対する、示された構築物の細胞毒性効果を示す。この実験のエフェクター細胞対標的細胞比は１：１であった。矢印線で示す、ＮＫ１９−１０、ＮＫ１９−８、ＮＫ−１９−１１、ＮＫ１９−５およびＮＫ１９−１２の各々は、検出されるＮａｌｍ６細胞数を、対照としてＧＦＰのみ発現するＮＫ細胞と同等に増加させた。しかしながら、ＮＫ１９−３、ＮＫ１９−９、ＮＫ１９−４、ＮＫ１９−１３、ＮＫ１９−１およびＮＫ１９−２の各々は、Ｎａｌｍ６細胞数増加が顕著に低かった(すなわち、より強い細胞毒性)。いくつかの実施態様において、このような構築物は、それ故ＮＫ細胞で発現され、Ｂ細胞白血病(または他の腫瘍タイプ)の処置に使用される。いくつかの実施態様において、構築物の一つからの刺激ドメインの１以上を、有利に相乗的シグナル伝達および細胞毒性のさらなる増大をもたらす、種々の刺激ドメインと共に他の構築物に操作して挿入される。非限定的例として、ＯＸ４０刺激ドメインを伴うＮＫ１９−１構築物を、いくつかの実施態様において、ＯＸ４０に加えてＣＤ４４刺激ドメインも発現するようさらに操作する。さらなる非限定的例として、ＯＸ４０刺激ドメインを伴うＮＫ１９−１構築物を、いくつかの実施態様において、ＯＸ４０に加えて、ＣＤ４４刺激ドメインおよびＣＤ１７刺激ドメインも発現するようさらに操作する。
【０２８２】
図９Ｂは、形質導入７日後、第二ドナーからの操作されたＮＫ細胞のＲａｊｉＢ細胞白血病細胞に対する対応する細胞毒性データを示す。ここでのエフェクター細胞対標的細胞比はまた１：１であった。図示のとおり、Ｎａｌｍ６細胞に対する操作された構築物の活性と同様、数構築物はＲａｊｉ細胞数を増加させた。しかしながら、ＮＫ１９−１３、ＮＫ  １９−４、ＮＫ１９−２、ＮＫ１９−３、ＮＫ１９−１およびＮＫ１９−９の各々はＲａｊｉ細胞増殖を、かなり程度阻止し、構築物の一部はほどんどＲａｊｉ細胞を増殖させなかった。いくつかの実施態様において、このような構築物は、それ故ＮＫ細胞で発現され、Ｂ細胞白血病(または他の腫瘍タイプ)の処置に使用される。
【０２８３】
図９Ｃは、形質導入１４日後、ドナー１からのＮＫ細胞のＮａｌｍ６細胞に対するに対するデータを示す。エフェクター対標的細胞比は１：１である。図示とおり、形質導入２週間後でさえ、ＮＫ１９−１３、ＮＫ１９−４、ＮＫ１９−３、ＮＫ１９−２、ＮＫ１９−１およびＮＫ１９−９を発現するＮＫ細胞は、実質的に全Ｎａｌｍ６細胞増殖を阻止し、腫瘍細胞に対する高度な細胞毒性効果を示した。いくつかの実施態様において、このような構築物はそれ故ＮＫ細胞で発現され、Ｂ細胞白血病(または他の腫瘍タイプ)の処置に使用される。上記のとおり、いくつかの実施態様において、相乗的ＮＫ細胞刺激および細胞毒性増強をもたらす、２個、３個またはそれ以上の刺激ドメインの組み合わせを用いる構築物が産生される。
【０２８４】
図９Ｄは、形質導入１４日後、ドナー２からのＮＫ細胞のＲａｊｉ細胞に対するデータを示す。エフェクター細胞対標的細胞比は１：２であった。示すとおり、ＧＦＰのみを発現するＮＫ細胞は、未処置Ｒａｊｉ細胞と本質的に同程度のＲａｊｉ細胞増殖を許した。対照的に、ＮＫ１９−３、ＮＫ１９−１、ＮＫ１９−４、ＮＫ１９−１３、ＮＫ１９−２およびＮＫ１９−９を発現するＮＫ細胞の各々は、Ｒａｊｉ細胞増殖を有意に遅延させ、数構築物は、Ｒａｊｉ細胞の増殖をほとんどまたは全く許さなかった。いくつかの実施態様において、このような構築物はそれ故ＮＫ細胞で発現され、Ｂ細胞白血病(または他の腫瘍タイプ)の処置に使用される。上記のとおり、いくつかの実施態様において、相乗的ＮＫ細胞刺激および細胞毒性増強をもたらす、２個、３個またはそれ以上の刺激ドメインの組み合わせを用いる構築物が産生される。
【０２８５】
図９Ｅは、１：１および１：２のＥ：Ｔ比で、形質導入７日後、Ｎａｌｍ６細胞に対する細胞毒性の要約データを示す。Ｅ：Ｔ比１：２で、ＮＫ１９構築物の１個以外全て、ＧＦＰ単独を発現するＮＫ細胞と同等以上の細胞毒性であった。事実、１：２比でさえ、構築物の６個が約５０％またはそれ以上の細胞毒性を達成した。Ｅ：Ｔ  １：１で試験したとき、構築物の７個が約５０％またはそれ以上の細胞毒性を達成し、しかしながら、構築物の５個(ＮＫ１９−１３、ＮＫ１９−２、ＮＫ１９−９、ＮＫ１９−３およびＮＫ１９−１)は、７０％を超える細胞毒性を達成した。図９Ｆは、Ｒａｊｉ細胞に対する対応するデータを示す。試験した全構築物は、１：２および１：１  Ｅ：Ｔ比両者で、ＧＦＰ発現ＮＫ細胞を超える細胞毒性増強を示した。１：２のＥ：Ｔ比で、構築物の４個が４０％細胞毒性を超え、一方１：１で、７個の構築物がその死滅率を超えた。さらに、１：１  Ｅ：Ｔで、３個の構築物が６０％またはそれ以上の細胞毒性を生じ、最も効果的な構築物はほぼ９０％細胞毒性を達成した。まとめると、これらのデータは、種々のＣＤ１９指向性ＣＡＲ構築物が発現され得るだけでなく、安定に発現され、かつ複数癌細胞型で細胞毒性誘導に有効であり、幾つかの場合、８０％死滅率を超えた。さらなる実施態様によると、２個、３個またはそれ以上の刺激ドメインの組み合わせを用いるＣＤ１９ターゲティング構築物が産生され、これは、それらを発現するＮＫ細胞の細胞毒性をさらに増強させる。いくつかの実施態様において、ＣＤ１９指向性構築物は、ＮＫＧ２Ｄのリガンドなどの他の腫瘍マーカーに対する受容体を発現するＮＫ細胞と相乗的に相互作用できる(このようなキメラ受容体担持ＮＫ細胞は、引用により全体として本明細書に包含させる、ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０２４６５０に記載される)。例えば、ＮＫＧ２Ｄのリガンド、ＯＸ４０刺激ドメインおよびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインと結合する結合ドメインを含むキメラ受容体を、ここに開示するＣＤ１９ターゲティング構築物の何れかと共に使用できる。いくつかの実施態様において、このようなキメラ受容体は、配列番号１４５の核酸配列と少なくとも９０％同一の配列である。いくつかの実施態様において、このようなキメラ受容体は、配列番号１４６のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一の配列である。
【０２８６】
選択ＣＤ１９指向性ＣＡＲ構築物の細胞毒性を評価するために、さらに実験を行った。３つの異なるドナー(３つのドナーは１４日間実験の)から単離したＮＫ細胞を、示した構築物、ＮＫ１９−１(ＯＸ４０共刺激ドメイン)；ＮＫ１９−２(ＣＤ２８共刺激ドメイン)；ＮＫ１９−３(ＩＣＯＳ共刺激ドメイン)；ＮＫ１９−４(ＣＤ２８−４１ＢＢ共刺激ドメイン)；ＮＫ１９−９(ＣＤ２７共刺激ドメイン)；およびＮＫ１９−１３(ＣＤ４４共刺激ドメイン)をコードするベクターで形質導入した。形質導入７日(ｎ＝３)または１４日(ｎ＝２)後、これら操作されたＮＫ細胞を、Ｎａｌｍ６細胞またはＲａｊｉ細胞とＥ：Ｔ比１：１で共培養した。結果を図１０Ａに示す(ＧＦＰ発現ＮＫ細胞に対して増強された細胞毒性パーセントとして示す)。図９のデータに一致して、試験した構築物の各々は、Ｎａｌｍ６細胞に対する細胞毒性効果の増強がもたらされ、ＮＫ１９−４での平均４０％増加から、他の５構築物での約５０％増加の全体的平均までの範囲であった。図１０Ｂは、Ｒａｊｉ細胞に対する対応するデータを示す。同様に、各構築物は、ＧＦＰのみを発現するＮＫ細胞より優れ、ＧＦＰ  ＮＫ細胞を超える細胞毒性の平均増加は、約４０％増加から約５０％増加の範囲であった。形質導入１４日後２ドナーからの細胞を使用して、ＮＫ１９−１、ＮＫ１９−９およびＮＫ１９−１３をＮａｌｍ６細胞およびＲａｊｉ細胞で試験した。図１０Ｃは、計算したＧＦＰ発現ＮＫ細胞を超えるこれら構築物の細胞毒性増強を示し、ほぼ８０％増加がＮＫ１９−９発現ＮＫ細胞で、約７５％がＮＫ１９−１発現細胞でおよび６０％超がＮＫ１９−１３発現細胞で見られた。類似する結果がＲａｊｉ細胞に対しても見られた  −  Ｒａｊｉ細胞に対して、ＮＫ１９−１３発現細胞は、細胞毒性の２０％改善を示し、ＮＫ１９−１発現細胞は、約６０％増強された活性を示し、ＮＫ１９−９発現細胞は、ほぼ７０％を超える細胞毒性活性を示した。これらの結果は、ＣＤ１９指向性ＣＡＲを発現する操作されたＮＫ細胞が提供されるここに開示する実施態様の、標的腫瘍細胞に対する細胞毒性増強をもたらす、癌免疫療法の方法としての使用をさらに支持する。
【０２８７】
図１１Ａ〜１１Ｅは、細胞毒性顆粒および炎症促進性サイトカインの放出を介する、ＮＫ細胞が腫瘍およびウイルス感染細胞を制御する機構と結び付けられる、Ｎａｌｍ６細胞と培養したときのＮＫ細胞からのサイトカイン放出プロファイルに関するデータを示す。図１１Ａは、対照またはＧＦＰ発現ＮＫ細胞と比較して、ＮＫ１９−１、ＮＫ１９−９またはＮＫ１９−１３を発現するＮＫ細胞が全て、ＮＫ細胞により放出される顆粒に存在するセリンプロテアーゼであるグランザイムＢを高濃度で発現することを示す。これらＣＤ１９指向性ＣＡＲを発現するＮＫ細胞は、対照ＧＦＰ発現ＮＫ細胞より約４倍多いグランザイムＢを放出した。図１１Ｂは、操作されたＮＫ細胞によるパーフォリンの放出増加に関連するデータを示す。興味深いことに、パーフォリンレベルは、ＧＦＰ発現ＮＫ細胞由来の濃度を超える実質的な上昇はないが(しかし、パーフォリン濃度は対照より上昇した)。パーフォリンは、グランザイムＢ(および他のグランザイム)と協調して働き、パーフォリンは、グランザイムが膜を通過するよう細胞膜に細孔を開け、次いでそのプロテアーゼ効果を細胞内タンパク質標的に発揮するよう機能する。このデータは、パーフォリン放出が、ある構築物に関連してほぼ同じまたは低減しているが、実際細孔生成により効率的であり、よって、同程度の細孔生成をさせるとの可能性をもたらす。あるいは、ＮＫ１９発現ＮＫ細胞から放出されるパーフォリンが、細孔生成に効率が高くないならば、これは、グランザイムＢ(および／または他のグランザイム)の増加を高めることで相殺される。故に、細胞毒性増強がなお達成される。
【０２８８】
図１１Ｃは、対照またはＧＦＰ発現ＮＫ細胞と比較して、ＮＫ１９−１、ＮＫ１９−９またはＮＫ１９−１３を発現するＮＫ細胞が全て炎症性サイトカインＴＮＦアルファを高濃度で放出することを示す。図１１Ｄは、ＮＫ１９発現ＮＫ細胞によるＧＭ−ＣＳＦ放出に関する類似データを示し、図１１Ｅはインターフェロンガンマ放出に関する類似データを示す。同様に、Ｒａｊｉ細胞で試験したとき、図１２Ａ〜１２Ｅに示されるとおり、類似放出パターンがもたらされる。これらのデータは、ＮＫ１９発現細胞が、少なくとも一部、炎症性サイトカインおよび／または細胞毒性顆粒放出増加を介して、細胞毒性効果を発揮することを示す。上記のとおり、いくつかの実施態様において、操作されたＣＡＲは、２つ、３つまたはそれ以上の共刺激ドメイン組み合わせを有するよう設計され、標的癌に対するサイトカイン／顆粒放出および細胞毒性が相乗的に増加する。
【０２８９】
腫瘍進行に対するＮＫ１９構築物の効果の増大のさらなる証拠として、ＮＳＧマウスに０日目に１×１０５  Ｎａｌｍ６細胞(蛍光レポーター発現)を静脈内注射した。３日目、マウスは、ＰＢＳ対照注射、非形質導入ＮＫ細胞(「ＮＴＮＫ」、１０Ｍ)、ＮＫ１９−２発現ＮＫ細胞(１０００万細胞)、ＮＫ１９−９発現細胞(１０００万)、ＮＫ１９−１発現細胞(１０００万)またはＮＫ１９−１発現細胞(３０００万)を受けた。Ｎａｌｍ６細胞検出のための蛍光造影を、３日目、８日目、１１日目、１８日目および２５日目に実施した(造影データは示していない)。このデータを図１３に示す。示すとおり、ＮＫ１９バリアントの何れかを発現するＮＫ細胞の注射は、Ｎａｌｍ６増殖の進行を低減させた。ＮＫ１９−２発現ＮＫ細胞は、８日目にわずかなＮａｌｍ６増殖を示し、１１日目までにさらなるＮａｌｍ６増殖および１８日目までに相当な増殖を示した(しかしＮＴＮＫ細胞でのものより少ない)。ＮＫ１９−９またはＮＫ１９−１(いずれの用量でも)発現ＮＫ細胞いずれも、８日目に造影により検出可能腫瘍負荷を示さなかった。ＮＫ１９−９発現ＮＫ細胞を受けたマウスは、１１日目までにＮａｌｍ６細胞増殖の幾分かの増加を示し、１８日目までにさらに進行した。１１日目、ＮＫ１９−１発現細胞の何れの用量を受けたマウスも、Ｎａｌｍ６細胞増殖を示さなかった。１８日目までに、１０００万ＮＫ１９−９細胞を受けたマウスでは、幾分かの腫瘍増殖が示された。しかしながら、３０００万細胞用量で、ＮＫ１９−９発現ＮＫ細胞を受けたマウスは、ほんのわずかなＮａｌｍ６細胞増殖しか示さなかった。
【０２９０】
図１４Ａは、マウスで検出された、示した(例えば、図１３に示す蛍光シグナル、図１３は２５日目の造影データを示していないことに注意)生物発光強度の折れ線グラフを示す。図１３の画像に一致して、図１４Ａの折れ線グラフは、２５日目の全群のＮａｌｍ６細胞数増加(ＢＬＩ増加により示される)を示し、ＰＢＳおよびＮＴＮＫ群で顕著な細胞数が検出され、ＮＫ１９−２、ＮＫ１９−１(１０Ｍ)およびＮＫ１９−９群で幾分少なかった。ＮＫ１９−１(３０Ｍ)は最小の増加を示し、Ｎａｌｍ６細胞に対する細胞毒性効果により、Ｎａｌｍ６進行速度を低減させる構築物の能力を表す。各構築物は、最終的にＮａｌｍ６の幾分かの増殖を許したが、たとえわずかでも、試験したＮＫ１９構築物は、ＮＫ１９曲線の１１日目までの水平な線により証明されるとおり、増殖の開始を遅延させた。その態様をよく見せるため、データを、図１４Ｂで曲線を離す対数スケールＹ軸で再プロットした。図示されるとおり、ＮＴＮＫおよびＰＢＳ曲線は、ほぼ直後のＮａｌｍ６増殖を示す、３日目以後上昇傾向を示す。対照的に、ＮＫ１９−９、ＮＫ１９−２および両ＮＫ１９−１曲線は、７日目まで下降かまたはわずかな上昇傾向である。１１日目、図１３の画像に一致して、Ｎａｌｍ６細胞増殖がＮＫ１９−９、ＮＫ１９−２およびＮＫ１９−１(１０Ｍ)群で検出される。対照的に、ＮＫ１９−１(３０Ｍ)群は、なお、何ら顕著なＮａｌｍ６細胞増殖がないことを反映する、ほぼベースラインである。ＮＫ１９−９(３０Ｍ群)で１８日目に細胞増殖が上昇傾向となる。ＮＫ１９構築物を投与しても、腫瘍細胞数が増えるが、増殖開始遅延は、いくつかの実施態様において有利である。例えば、これは、ＣＤ１９指向性構築物を発現する操作されたＮＫ細胞のさらなる用量を、患者に再投与する機会を提供する。いくつかの実施態様において、その後の投与(最初の投与で可能であるのと同様)は、所望により、例えば遺伝子編集により、同種異系性(allogenicty)を低減するよう編集されているＮＫ細胞を含む。故に、いくつかの実施態様において、２回、３回、４回またはそれ以上のＣＤ１９指向性ＣＡＲ発現ＮＫ細胞が投与される。腫瘍細胞増殖のこの遅延は、種々の腫瘍マーカーに対するキメラ構築物を発現するＮＫ細胞および／またはある他の多様な抗癌治療(例えば、チェックポイント阻害剤、抗体治療、化学療法など)を、逐次的に(または同時に)投与する機会を提供する。図１４Ｃは、Ｘ軸に示すとおり処置されたマウスから採った血液サンプル内の種々の構築物で形質導入した細胞のＣＤ３発現に関するデータを示す。ＣＤ３はＴ細胞マーカーである。示されるとおり、しかし、ＮＫ１９−１構築物を発現するよう操作されたＴ細胞およびＮＫ細胞およびＴ細胞の混合集団について、ＣＤ３発現はほとんど無視できた。図１４Ｄは、ヒトＮＫ細胞のマーカーであるＣＤ５６発現に関するデータを示す。バックグラウンド染色が僅かにあるが、示した構築物を発現するＮＫ細胞で処置されたマウスからの血液サンプルは、比較的低い((ｉ)血液がマウス血液サンプルであり、マウス細胞が全体の大部分を占めるおよび(ii)ＣＤ５６はヒトＮＫ細胞でしか検出されない(例えば、投与された)を考慮して機体されるとおり)。このデータは、３０Ｍ  ＮＫ１９−１処置群が他の群およびバックグラウンドレベルでＣＤ５６を発現するＴ細胞／ＮＫ＋Ｔ細胞群より顕著に多くのＣＤ５６発現を示す点で、一致する。図１４Ｅは、腫瘍細胞によるＧＦＰ発現に関するデータを示す。血液サンプルを、インビボ実験約３週間で採取した。示すとおり(画像／ＢＬＩデータに一致して)、対照ＰＢＳおよびＮＴＮＫ群は高いＧＦＰ発現パーセンテージを示す(例えば、サンプル中の総生存血液細胞の大部分は腫瘍細胞である)。操作された構築物の各々は、操作された構築物の腫瘍細胞増殖制御／減少に基づく、有意に低いＧＦＰ発現を示す。図１４Ｆは、図１４Ｄに類似するデータであるが、あるマウス血液サンプルにおける全生存細胞にわたって測定したＣＤ１９発現を示す。ＧＦＰと同様、ＰＢＳ群およびＮＫＮＴ群は、約１０〜１２％ＣＤ１９発現を示し、血液サンプルにおける生存細胞の１０〜１２％が腫瘍細胞であり、残りがマウス血液細胞であることを示す。他の実験群において示されるとおり、ＣＤ１９発現がはるかに低いことは、操作されたＣＡＲ構築物の腫瘍細胞の増殖を反映する。これらのデータは、ＣＤ１９指向性ＣＡＲを発現する操作されたＮＫ細胞が高度に細胞毒性であり、癌性腫瘍の処置を可能とする、ここに開示する実施態様に一致する。
【０２９１】
ヒト化構築物のさらなる評価
上に詳述したとおり、いくつかの実施態様において、いくつかの実施態様のここに開示するＣＡＲは、細胞外結合部分におけるようなヒト化配列の使用を含む。いくつかの実施態様において、その領域の１個以上の態様がヒト化キャンペーンに付される。いくつかの実施態様において、抗体の重鎖および／または軽鎖の１以上がヒト化され、これは(上記のとおり)免疫原性低減、安定性増加、長期有効性、効力増加などを含むが、これらに限定されない利点を提供し得る。
【０２９２】
実施例３
図１５は、ここに開示するいくつかの実施態様による一連のヒト化構築物の略図を示す。このような構築物は、識別名の「Ｈ」により指定される。説明として、ＮＫ１９Ｈ−１は、第一軽鎖および第一重鎖(‘Ｌ１Ｈ１’)からなるｓｃＦｖを用いるヒト化抗ＣＤ１９  ＣＡＲであり、一方ＮＫ１９Ｈ−３は、第三軽鎖および第一重鎖(‘Ｌ３Ｈ１’)からなるｓｃＦｖを用いる。図１５はまた２９３Ｔ細胞からの一過性発現および分泌後の、重鎖および軽鎖の種々の組み合わせの安定性および凝集に関するデータを示す。データは、各抗体を７０℃に加熱し、冷却して室温に戻したとき(‘加熱’)対氷上に維持した同じバリアントとき(‘非加熱’)のフローサイトメトリーにより検出した平均蛍光強度に関連して示される。加熱処理後、ＳｃＦｖバリアントを、種々の濃度(０.５、０.２５および０.１２５μg／mL)でフローサイトメトリープロトコールに使用した。蛍光強度消失は、ＳｃＦｖが構造完全性を失うかまたは加熱処理により凝集したことを示す。両条件下で比較できるＭＦＩにより示される最良熱安定性を有するＳｃＦｖは、ある実施態様により、さらなる開発に好ましい。
【０２９３】
構築物の安定性評価後、選択した抗ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物をさらに評価した。図１６は、３ドナー(＃１４０、＃９および＃２０)のＮＫ細胞による示した構築物の発現の要約データを示す。図に記載するとおり、発現を、ＣＤ１９Ｆｌａｇの検出により評価する。データを、存在するＮＫ細胞の総数に対するＣＤ１９−Ｆｌａｇ発現ＮＫ細胞のパーセンテージとして表す。このデータを、ＮＫ１９Ｈ−「Ｘ」  ＣＡＲをコードする適切なウイルスで形質導入した４日後に集めた。発現データにより示されるとおり、選択した構築物の各々は、種々の程度でＮＫ細胞を発現した。発現レベルは、ＮＫ１９Ｈ−２、ＮＫ１９Ｈ−１１およびＮＫ１９Ｈ−１２で総ＮＫ細胞の約２０％発現からの範囲であった。他の構築物の大部分は、非ヒト化ＮＫ１９−１構築物の発現と同等である、ＮＫ細胞の約４０％〜６０％まで十分に発現された。ＮＫ１９Ｈ−５構築物は、ＮＫ細胞の８０％超で発現された。ある構築物はより効率的に発現され得るが、発現レベルが低いものも、いくつかの実施態様において、このような構築物が標的細胞に対してなお顕著な細胞毒性を示したため、評価した。いくつかの実施態様によると、しかしながら、高い発現効率のものが、例えば、あるＮＫ細胞調製物のかなりの部分が臨床的に有用であるため、有利であり得る(例えば、臨床的に関連する操作されたＮＫ細胞用量を産生するのに必要な挿入ＮＫ細胞が少ない)。
【０２９４】
図１７Ａ〜１７Ｅは、このような細胞毒性データを記載する。図１７Ａは、ドナー２０由来であり、示した構築物で形質導入した、ＮＫ細胞のＣＤ１９陽性Ｎａｌｍ６白血病細胞株に対する細胞毒性を示す(Ｅ：Ｔ  １：１；  ２０Ｋ細胞／ウェル)。このデータは、発現レベルが様々であるにも関わらず、ＮＫ１９Ｈ構築物の大部分は、Ｎａｌｍ６標的細胞に細胞毒性効果を発揮できたことを示す。ＮＫ１９Ｈ−１１は、最小有効性を示し、Ｎａｌｍ６細胞増殖を対照のすぐ下のレベルまで増殖を許した。対照的に、ＮＫ１９Ｈ−１およびＮＫ１９Ｈ−３は、非ヒト化ＮＫ１９−１構築物と同等の細胞毒性を示し、共培養のその後の時点で幾分細胞増殖を許した。顕著なことにＮＫ１９Ｈ−４およびＮＫ１９Ｈ−５は有意な細胞毒性を示し、実験を通して非常に限定的なＮａｌｍ６増殖を示すのみであった。
【０２９５】
図１７Ｂは、ＣＤ１９陽性バーキットリンパ腫細胞株Ｒａｊｉに対して試験したドナー２０からのＮＫ細胞を示す。Ｎａｌｍ６細胞と同様、種々のヒト化抗ＣＤ１９構築物は、標的細胞に対し、種々の細胞毒性を示した。図１７Ａのデータと同様、ＮＫ１９Ｈ−１１構築物は限定的細胞毒性を示したが、他の全構築物は、標的細胞に対し有望な細胞毒性を示し、ＮＫ１９Ｈ−１が非ヒト化ＮＫ１９−１構築物と同等に機能し、ＮＫ１９Ｈ−３、１９Ｈ−４および１９Ｈ−５構築物の各々は、高レベルの細胞毒性を示し、共培養のその後の段階までＲａｊｉ増殖を制限した(ＮＫ１９Ｈ−５は、非常に限定的なＲａｊｉ細胞増殖のみを許した)。図１７Ｃは、ドナー１４０からの対応するＮａｌｍ６データを示す。ここで、類似するパターンの有効性が検出され、ＮＫ１９Ｈ−１１は、陰性対照に近似するＮａｌｍ６増殖を許した。しかしながら、ＮＫ１９Ｈ−１、１９Ｈ−３および１９Ｈ−４の各々は、非ヒト化ＮＫ１９−１と少なくとも同程度細胞毒性を示した。同様に、ＮＫ１９Ｈ−５は顕著な細胞毒性を示し、実験をとおして、Ｎａｌｍ６増殖を制限した。図１７Ｄは、Ｒａｊｉ細胞に対するドナー９からのデータを示す。ＮＫ１９Ｈ−１１のみが、何らかの実質的Ｒａｊｉ細胞増殖を許した。対照的に、非ヒト化ＮＫ１９−１またはヒト化ＮＫ１９Ｈ−１、１９Ｈ−３、１９Ｈ−４または１９Ｈ−５構築物何れかを発現するこのドナーからのＮＫ細胞は、細胞毒性効果誘導を介して、Ｒａｊｉ細胞増殖を完全に抑制した。図１７Ｅは、Ｎａｌｍ６細胞に対するドナー９からのＮＫ細胞のデータを示す。この実験で、３個のヒト化構築物(ＮＫ１９Ｈ−１１、１９Ｈ−１および１９Ｈ−３)の細胞毒性は限定的であった。これら構築物のどれかが他のドナーのＮＫ細胞で発現されたとき、細胞毒性を誘発したため、幾分ドナー間変動がある。ＮＫ１９Ｈ−４および１９Ｈ−５構築物は、顕著な細胞毒性効果を示し、実験の経過中、Ｎａｌｍ６増殖をほぼ０に限定した。まとめると、これらのデータは発現データに一致し、いくつかの実施態様によって、ＣＤ１９をターゲティングするヒト化ＣＡＲが、発現効率が変動しても、腫瘍細胞殺滅に有効であることを示す。さらに、ある実施態様によって、発現効率は細胞毒性と相関せず、発現効率が限定的な構築物でも、顕著な細胞毒性を示し得る。
【０２９６】
実施例４
上記と並行したさらなる実験を、さらなるドナーからのＮＫ細胞で実施した。図１８は、示した構築物について３つのドナー(＃９４５、１３７および１３８)からの構築物発現効率を示す。先の実験と同様、図示するデータは、評価したＮＫ細胞の総数中のＣＤ１９−Ｆｌａｇ陽性細胞数を示す。これらドナーについてのデータは、一つのヒト化構築物以外、全てについて高い全体的発現効率を示す。ＮＫ１９Ｈ−３のみが、非ヒト化ＮＫ１９−１構築物より少なく発現された。これらのドナーＮＫ細胞で、ヒト化構築物の発現がＮＫ細胞の約７０％〜８０％で検出された。上記のとおり、発現の評価に続いて、ＣＤ１９発現標的細胞に対する細胞毒性を評価した。図１９Ａは、示した構築物を発現し、Ｒａｊｉ細胞と共培養したドナー(＃１３７)からのＮＫ細胞に関するデータを示す。この実験で、操作された示した構築物を発現するＮＫ細胞を、形質導入後７日およびさらなる腫瘍細胞大量投与を１４日後に添加の２回の時点で腫瘍細胞に曝した。矢印は、腫瘍細胞の２回目の投与を示す。示すとおり、未処理Ｒａｊｉ細胞は、実験を通して拡大した。ＧＦＰまたは非ヒト化ＮＫ１９−１を発現するＮＫ細胞は、対照と比較して、Ｒａｊｉ細胞増殖の減少により示されるとおり、幾分細胞毒性を誘導した。ＮＫＨ１９−３(最低発現効率のヒト化構築物)を発現するＮＫ細胞もＲａｊｉ増殖を減少できた。他のヒト化ＮＫ構築物の各々は、形質導入１４日後でさえ対照と比較してＲａｊｉ細胞増殖を減少でき、これは、ここに開示する操作されたＮＫ細胞の持続性増強を示す。図１９Ｂは、Ｎａｌｍ６細胞に対するドナー１３７ＮＫ細胞の対応するデータを示し、操作されたＮＫ細胞は同様に形質導入後７日目(実験０日目)および１４日目(実験約７日目)に加えた。示した構築物の細胞毒性は、この特定の実験でより変動性であった。しかしながら、いくつかのヒト化抗ＣＤ１９構築物は、顕著な細胞毒性を生じさせることができ、対照と比較して、Ｎａｌｍ６細胞増殖を減少させた。これらのデータは、いくつかの実施態様によると、ある対象には、より頻繁な投与スケジュール(例えば、２日毎、３日毎、４日毎、５日毎など)が有益であることを示唆する。有利に、いくつかの実施態様において、ここに記載する操作されたＮＫ細胞は同種であり、より頻繁な投与レジメンに容易に使用され得る。図１９Ｃは、Ｒａｊｉ細胞に対するドナー１３８の対応するデータを示す。ここで、ヒト化構築物の大部分は、形質導入１４日後Ｒａｊｉ細胞を２回目に投与してさえ、Ｒａｊｉ細胞になお顕著な細胞毒性効果を有した。７つのヒト化構築物中６つがこの行動を示し、非ヒト化ＮＫ１９−１構築物より優れた。図１９Ｄは、Ｎａｌｍ６細胞に対するドナー１３８の対応するデータを示す。Ｎａｌｍ６のさらなる大量投与が実験の最後の段階でＮａｌｍ６増殖を増加させたが、ヒト化構築物のほぼ全てが対照より良好に機能した。事実、ＮＫ１９Ｈ−５担持ＮＫ細胞は、実験の最後の数日までＮａｌｍ６増殖を制限できた(２回目の投与後)。上記のとおり、これらのデータは、ヒト化抗ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物がＮＫ細胞により発現され得るだけでなく、標的細胞に対する細胞毒性活性を、増強した持続性で発揮できることを示す。いくつ��の実施態様において、これは、潜在的免疫原性を制限しながら(少なくとも一部ヒト化および／または投与頻度減少による)、癌処置に有利である長期にわたり複数投与に分けることを可能とする。
【０２９７】
実施例５
さらなるドナーにおける種々のヒト化構築物のさらなるデータを取得した。図２０Ａ〜２０Ｂは、２つのさらなるドナーからのＮＫ細胞における種々の抗ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物の発現データを示す。図２０Ａは、形質導入１０日後、ＮＫ細胞の平均蛍光強度を示す。示すとおり、ここに開示する数実施態様に一致して、ヒト化抗ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物の各々は、非ヒト化抗ＣＤ１９  ＣＡＲと比較して、全体的発現の増強を示した。図２０Ｂは、分析したＮＫ細胞の総数のパーセンテージとしてＣＤ１９−Ｆｌａｇ陽性ＮＫ細胞の発現データを示す。図示のとおり、ヒト化抗ＣＤ１９構築物の各々は、非ヒト化構築物(これは既にＮＫ細胞のほぼ８０％で発現されていた)より効率的に発現された。ヒト化ＣＡＲは、構築物によって、ＮＫ細胞の約８５％〜９５％で発現された。図２１Ａは、形質導入７日後および形質導入１４日後に再びＮＫ細胞と共培養した、ドナー７０３(図２０の２つのドナーの一方)からの操作されたＮＫ細胞のＲａｊｉ細胞に対する細胞毒性データを示す。図示のとおり、Ｒａｊｉ細胞およびＧＦＰ単独を発現するＮＫ細胞は、７日目までおよび再び１４日目まで強固に増殖した。非ヒト化抗ＣＤ１９  ＣＡＲ  ＮＫ１９−１は、７日目までＲａｊｉ細胞増殖を抑制でき、１４日目まで比較的限定された増殖を許した。ヒト化抗ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物の各々は、Ｒａｊｉ細胞増殖をさらに抑制し、構築物の一部は、Ｒａｊｉ細胞増殖を完全に抑制した。図２１Ｂは、ドナー８７７から単離したＮＫ細胞のＲａｊｉ細胞に対する細胞毒性の対応するデータを示す。これらのデータは、先のドナーのものに類似する傾向を示した。２つの対照群は顕著なＲａｊｉ細胞増殖を許したが、ヒト化抗ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物の各々は、顕著な細胞毒性効果を生じた。
【０２９８】
図２２Ａ〜２２Ｅは、示した構築物を発現するＮＫ細胞と共培養したＲａｊｉ細胞からのサイトカイン放出プロファイルを示す。図２２Ａは、Ｒａｊｉ細胞と共培養したＮＫ細胞によるＩＦＮｇ放出を示す。示したヒト化構築物の各々は、非ヒト化ＮＫ１９−１構築物と比較して、ＩＦＮｇ放出を増加させた。同様に、図２２Ｂに示すとおり、ヒト化抗ＣＤ１９構築物は、対照ＮＫ細胞と比較して、多量のＧＭ−ＣＳＦをＮＫ細胞が放出することを可能とした。図２２Ｃは、ヒト化抗ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物が、ＮＫ細胞からのＴＮＦ放出増加を誘導することを示す。パーフォリンレベルは、図２２Ｄに示すとおり、試験した構築物で有意な差はなかった。同様にグランザイムレベルは、これら構築物で比較的一定であった。これらのデータは、まとめると、ある実施態様によって、ＮＫ細胞で発現されるヒト化抗ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物は、これらＮＫ細胞で１個以上のサイトカインの放出量を増やし、これが標的細胞に対する細胞毒性効果に至ることを示す。
【０２９９】
実施例６
上記データは、ヒト化抗ＣＤ１９  ＣＡＲがＮＫ細胞により発現され、標的腫瘍細胞に対する細胞毒性効果を有し得ることを示すが、操作されたＮＫ細胞の寿命延長を決定するためさらなる実験を実施した。示した抗ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物を発現するＮＫ細胞を培養し、形質導入後２６日までの種々の時点で細胞数を測定した。図２３Ａは、ドナー１３７からのＮＫ細胞の生存データを示す。ＧＦＰ発現ＮＫ細胞のデータは、７日目の細胞数が他のあらゆる時点の細胞数より高いことを示し、ＧＦＰがＮＫ細胞にさらなる寿命延長誘導効果がないことが示唆される。同様に、非ヒト化ＮＫ１９−１を発現するＮＫ細胞は、時間と共に細胞数減少を示した。ヒト化構築物の各々は細胞数の観点で幾分変動を示すが、データの傾向から、ヒト化抗ＣＤ１９構築物の発現が長期間ＮＫ細胞を減らすことが示される。ドナー１３８からのＮＫ細胞の細胞生存能を示す図２３Ｂのデータで同様の傾向が示される。分析のタイミングを変えて、図２３Ｃはヒト化構築物の発現が、培養の時間にわたり、長いＮＫ細胞生存をもたらす、類似の傾向(ドナー７０３について)を生じるデータを示す。図２３Ｄは、ヒト化抗ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物の発現が培養の時間にわたりＮＫ細胞死を減少させる、ドナー８７７からのＮＫ細胞のデータを示す。
【０３００】
種々の抗ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物の発現の要約データを図２４に示し、これは、形質導入後１１日目の示した構築物の発現効率を示す。予想通り、ＧＦＰ形質導入ＮＫ細胞はＣＤ１９−Ｆｌａｇ発現を示さず、陰性対照として役立つ。同様に、非ヒト化ＮＫ１９−１構築物は陽性対照として役立つ。評価したヒト化構築物の各々はＮＫ１９−１として増強された発現効率を示し、効率は約８５％〜約９５％の範囲であった(例えば、試験したＮＫ細胞全部の８５％〜９５％がＦｌａｇタグ付ＣＡＲ構築物を発現した)。
【０３０１】
図２５Ａ〜２５Ｉは、ＣＤ１９−Ｆｌａｇ発現(ＣＡＲ発現の指標)が測定される１ドナーからの生フローサイトメトリーデータを示す。図２５Ａは、Ｆｌａｇ発現がほとんどまたは全くないＧＦＰ対照を示す。図２５Ｂは、ＮＫ１９−１陽性対照でのＦｌａｇ検出を示す。図２５Ｃ〜２５Ｉは、示したヒト化抗ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物のＦｌａｇ検出の結果を示し、構築物を発現する細胞のパーセンテージは約８０％〜約９５％であった。上記実験と同様、これらのデータは、ヒト化抗ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物が形質導入ＮＫ細胞ンにより強固に発現され得ることを確認する。
【０３０２】
実施例７
上記実験に類似して、Ｒａｊｉ細胞を、示した種々の構築物で形質導入したドナー１０３からのＮＫ細胞に曝した(図２６Ａ参照)。Ｒａｊｉ細胞を、形質導入７日後ＮＫ細胞と共培養し、ＮＫ細胞を１４日に再び再負荷した。予想どおり、Ｒａｊｉ細胞単独は、増殖し続け、ＧＦＰ形質導入ＮＫ細胞は細胞増殖をわずかに減少させた。対照的に、陽性対照非ヒト化ＮＫ１９−１構築物は、Ｒａｊｉ細胞増殖を実験のかなり最後の段階まで減少させた。ヒト化抗ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物の各々は、Ｒａｊｉ細胞に対して細胞毒性を増強させた。構築物の３つ(ＮＫ１９Ｈ−２、Ｈ−３およびＨ−４)は、実験後の段階でわずかなＲａｊｉ細胞増殖を許し、他のヒト化構築物は、１４日目に再負荷しても、Ｒａｊｉ細胞増殖を有効に排除した。図２６Ｂは、Ｎａｌｍ６細胞に対するドナー１０３  ＮＫ細胞の細胞毒性に関する対応するデータを示す。図示のとおり、抗ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物の全て(ヒト化されていてもしていなくても)は、共培養７日目までＮａｌｍ６細胞に対する顕著な細胞毒性を発揮することが明らかとなった。しかしながら、Ｎａｌｍ６増殖は、１４日目再負荷で全群で増加した。増殖曲線は最初は幾分水平であるが、その後のＮｌａｍ６増殖は速度が上がった。これらのデータは、ある実施態様によって、標的細胞を閾値増殖速度に到達させないために、より頻繁な投与戦略を用いることが示唆される。いくつかの実施態様において、「再負荷」に等しい生理学的条件下で、標的細胞増殖を予防するために、高用量を与えるかおよび／またはより頻繁な投与がなされる。
【０３０３】
図２６Ｃは、ドナー２７５からのＮＫ細胞でのＲａｊｉ細胞(図２６Ａと同様)のデータを示す。図２６Ａのものに類似して、抗ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物の各々は、Ｒａｊｉ細胞に対する顕著な細胞毒性を示し、再負荷しても、標的細胞の限定的増殖しか許さなかった。図２６Ｄは、ドナー２７５からのＮＫ細胞でのＮａｌｍ６細胞(図２６Ｂと同様)のデータを示す。この実験の結果もまたドナー１０３のものに類似し、７日目までＮａｌｍ６細胞は有効に制御されたが、再負荷後細胞毒性は減少した。これらのデータは、ある実施態様によって、特定のドナーおよび／または特定の標的腫瘍タイプに対する投与ストラテジーの開発を示す。例えば、Ｎａｌｍ６細胞はＣＤ１９陽性であるが、例えば、Ｒａｊｉ細胞より少ないＣＤ１９を発現し得て、それにより、Ｎａｌｍ６細胞株に対するドナー１０３および２７５からのＮＫ細胞の細胞毒性が説明される。Ｒａｊｉ細胞に対する形質導入ＮＫ細胞の有効性は、ＮＫ細胞が細胞毒性を発揮でき、形質導入後ほぼ２週間の持続を示す。故に、いくつかの実施態様によると、標的細胞に対する強固かつ継続する細胞毒性を可能とし、腫瘍負荷の制御を達成するために、ＮＫ細胞用量および／または投与頻度を、特定の患者の腫瘍タイプ、天然ＮＫ細胞活性および／または癌の攻撃性／ステージに対して調整できる。
【０３０４】
図２７Ａ〜２７Ｂは、ここに記載する非限定的例示的抗ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物で形質導入した、２つのドナー(図２７Ａで２７６および２７Ｂで８７７)からのＮＫ細胞を特徴づけるフローサイトメトリーデータを示す。図２７Ａおよび２７Ｂの両者とも、ＧＦＰ形質導入ＮＫ細胞はＣＤ１９−Ｆｌａｇをほとんどまたは全く発現しないことを示す。他のパネルの各々は、これらドナーからのＮＫ細胞が陽性対照非ヒト化ＮＫ１９−１構築物だけでなく、選択したヒト化抗ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物も効率的に発現することを示す。これは、抗ＣＤ１９  結合因子のヒト化の発現特徴に対する影響が限定的であることを示す。
【０３０５】
図２８Ａ〜２８Ｂは、Ｅ：Ｔ比１：１でのＲａｊｉ細胞に対する図２７からの２つのドナーのＮＫ細胞の細胞毒性の初期データを示す。上記結果に一致して、選択したヒト化抗ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物の各々は、形質導入ＮＫ細胞に標的Ｒａｊｉ細胞に対する顕著な細胞傷害能を与えた。示した非限定的例示的抗ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物の各々は、Ｒａｊｉ細胞増殖を有効に制御し(非ヒト化ＮＫ１９−１構築物と比較して同等以上)、実験開始後７０時間にわたって、Ｒａｊｉ細胞数が少ない傾向にあった。同様に、図２８Ｂは、ドナー８７７からの形質導入ＮＫ細胞が、非ヒト化ＮＫ１９−１構築物と比較して同等以上にＲａｊｉ細胞増殖を有効に制御することを示す。これらのデータは、上記の他のドナーからのＮＫ細胞で示されるものに一致し、ここに開示する数実施態様により、ヒト化抗ＣＤ１９  ＣＡＲでのＮＫ細胞の形質導入は、操作されたＮＫ細胞を標的腫瘍細胞に対する顕著な細胞毒性効果を発揮させ、腫瘍細胞増殖を有効に制御できることを示す。いくつかの実施態様によると、このような操作された抗ＣＤ１９  ＮＫ細胞(同種であれ自己であれ)は、癌処置のための強固かつ有効な細胞性免疫療法を可能とする。
【０３０６】
実施例８
ここに記載するヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物を評価するためのさらなる実験を実施した。図２９Ａは、実験プロトコールの概略を示す。ＮＳＧマウスに、０日目に１×１０５  Ｎａｌｍ６細胞(蛍光レポーター発現)を静脈内注射した。１日目、マウスはＰＢＳ対照注射、非形質導入Ｋ細胞(「ＮＴＮＫ」、１０Ｍ)、非ヒト化ＮＫ１９−１  ＣＡＲを発現するＮＫ細胞１０００万または種々のヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物の一つを発現するＮＫ細胞１０００万を受けた。採血および蛍光造影を示すとおり実施した。生物発光データを図２９Ｂに示す。図示のとおり、何れかのＣＤ１９  ＣＡＲ構築物を発現するＮＫ細胞の注射は、Ｎａｌｍ６増殖の進行を低減させた。試験したヒト化構築物(ＮＫ１９−Ｈ２、ＮＫ１９−Ｈ５およびＮＫ１９Ｈ−９)の各々は、対照と比較してＮａｌｍ６増殖の顕著な遅延を示した。図２９Ｃは、３１日にわたり測定した生物発光を記載する折れ線グラフである。図示のとおり、この実験で試験したヒト化構築物の各々は、対照と比較して腫瘍進行の減少を示し、非ヒト化ＮＫ１９−１と比較して、わずかな減少を示した。図２９Ｄは、腫瘍進行低減を反映する生存曲線を示し、ＮＫ１９−１または選択したヒト化構築物何れかで処置したマウスは、対照群より長く生存した。図２９Ｅは、ＮＫ細胞に対するヒト化構築物の各々の発現の評価に関するデータを示す。図示のとおり、ヒト化構築物の各々は、非ヒト化ＮＫ１９−１構築物より強固に発現された。ここに開示する数実施態様により、ヒト化構築物の使用は、少なくとも一部、ＮＫ細胞によるＣＡＲの発現(および／または活性)により、より効果的な治療をもたらす。
【０３０７】
図３０Ａ〜３０Ｆは、実験中種々の時点での示した構築物で処置したマウスの血中の細胞の特徴に関する。図３０Ａは、マウスの末梢血におけるヒトＣＤ５６＋細胞のパーセンテージを示し、これは、投与されたＮＫ細胞の実験の最初の１５日間の生存を表す。実験群の各々は、高いパーセンテージの細胞を示し、ＮＫ１９−Ｈ２構築物は試験した中で最も持続性を示した。図３０Ｂは、これら構築物で使用したｆｌａｇ発現タグの検出に基づく類似するデータを示す(しかし、いくつかの実施態様において、タグは使用されない)。これらのデータは、ヒト化構築物が非ヒト化構築物より高いレベルで発現されることを示す。図３０Ｃは、１５日後のＧＦＰ陽性腫瘍細胞の検出を示す。ＣＡＲ発現ＮＫ細胞は、１５日目のそのＮａｌｍ６増殖阻害を反映する、ＧＦＰ発現がほぼ０であった。図３０Ｄ〜３０Ｆは、３２日目の類似データを示す。これらのデータは、ヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物を発現するＮＫ細胞が、その後の時点でのこれら構築物の腫瘍増殖への有効性に一致して、試験したマウスの末梢血に存在する細胞の大きな割合を占めることを示す。図３０Ｆは、３２日目のヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物発現にほとんど差がないことを示す。図３２Ｆは、ヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物を発現するＮＫ細胞の腫瘍増殖制御の増強された能力を反映し、検出されるＧＦＰ陽性細胞が、ＮＫ１９−１を受けた動物と比較してさえヒト化処置群で低い。いくつかの実施態様において、増強された有効性は、少なくとも一部、ヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物の発現増強による。
【０３０８】
実施例９
上記のとおり、ある実施態様において、ＣＡＲ構築物は検出タグを含む。しかしながら、いくつかの実施態様において、タグは使用されない。ｆｌａｇタグを使用しないヒト化ＣＡＲＳを発現を評価するための実験を実施した。この実験は、ｆｌａｇタグを使用しないヒト化ＣＡＲの非限定的例としてＮＫ１９Ｈ−ＮＫ−２、−５および−９を用いた。図３１Ａ〜３１Ｂは、４週間、毎週測定した３つの異なるドナーからのＮＫ細胞による示した構築物の発現データ(３１Ａはパーセント発現、３１Ｂは平均蛍光)を示す。これらのデータは、ここで提供するＣＤ１９  ＣＡＲ構築物のｆｌａｇを使用しないバージョンは、互いに比較的同様に発現されるが、非ヒト化構築物より強固であることを示す。ｆｌａｇを使用しないヒト化構築物の各々は、ＮＫ細胞の少なくとも約７０〜８０％で発現された。
【０３０９】
実施例１０
ヒト化、ｆｌａｇタグ無しＣＤ１９  ＣＡＲ構築物を発現するＮＫ細胞の細胞毒性を評価するための実験を実施した。インビトロ再負荷アッセイを、標的細胞としてＲａｊｉ細胞(図３２Ａ〜３２Ｂ)またはＮａｌｍ６細胞(図３２Ｃ〜３２Ｄ)を使用して、上記のとおり実施した。図３２Ａは、実験１０日目にＲａｊｉのみ対照群で測定した細胞数のパーセントとして測定した、示した処置剤と共培養したＲａｊｉ細胞のパーセントを示す。示すとおり、ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物の各々は、ヒト化の有無にかかわらず、そしてタグの使用の有無にかかわらず、Ｒａｊｉ細胞増殖を１０日目まで実質的に排除した。図３２Ｂは、最終時点を示し、ＣＤ１９  ＣＡＲの実験群の各々でＲａｊｉ細胞の限定的な増殖が残っているが、データは、ＮＫ１９Ｈ−ＮＦ−２およびＮＫ１９Ｈ−ＮＦ−５群でＲａｊｉ増殖がより大きく予防される僅かな傾向を示す。図３２Ｃおよび３２Ｄは、Ｎａｌｍ６細胞を使用した対応するデータを示す。図３２Ｃは、Ｒａｊｉ細胞に類似して、ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物の各々は、ヒト化されていてもされていなくても、そしてタグの有無にかかわらず、Ｎａｌｍ６細胞増殖を１０日目まで実質的に排除したことを示す。最終時点で、全群にわたりＮａｌｍ６細胞増殖があったが、データは増殖阻止にヒト化構築物がより有効である傾向を示した。
【０３１０】
図３３Ａ〜３３Ｊは、示した構築物を発現するＮＫ細胞のサイトカインプロファイル検出に関する。上記のとおり、各処置群からの培養培地を、インターフェロンガンマ(３３Ａ／３３Ｆ)、ＧＭ−ＣＳＦ(３３Ｂ／３３Ｇ)、ＴＮＦ−アルファ(３３Ｃ／３３Ｈ)、パーフォリン(３３Ｄ／３３Ｉ)およびグランザイムＢ(３３Ｅ／３３Ｊ)についてアッセイした。図３３Ａ〜３３ＥはＲａｊｉ細胞再負荷のデータを示し、３３Ｆ〜３３ＪはＮａｌｍ６再負荷のデータを示す。図示のとおり、ｆｌａｇタグを使用しない、ヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲ発現ＮＫ細胞は、類似レベルの類似量のＩＦＮ−ガンマを培地に放出し、これらのレベルは、非ヒト化ＮＫ１９−１  ＣＡＲを発現するＮＫ細胞により放出されるよりわずかに大きかった。同様に、ＧＭ−ＣＳＦ放出は、ヒト化、ｆｌａｇタグを使用しないＣＡＲ担持ＮＫ細胞間でかなり一致し、ＮＫ１９−１発現細胞をわずかに超えるレベルであった。ＴＮＦ−アルファ放出は類似パターンを示し、一方パーフォリン放出は全ＣＤ１９  ＣＡＲ発現ＮＫ細胞間で一致し、対照より下のレベルであった。最後に、Ｒａｊｉ細胞において、グランザイムＢはｆｌａｇタグ無し、ヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲについて類似する程度の放出を示し、ＮＫ１９−１発現細胞をわずかに超えるレベルであった。大部分について、Ｎａｌｍ６実験で取得したデータは類似パターンを示した。いくつかの実施態様によると、細胞毒性介在サイトカインの放出の程度が大きいと、より有効な治療剤となる。ある実施態様において、大きなサイトカイン放出の程度は、少なくとも一部、ＮＫ細胞によるｆｌａｇタグを使用しない、ヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物の発現増強によるおよび／または、少なくとも一部、ｆｌａｇを使用しない、ヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物を発現するＮＫ細胞の持続性の増強による。これらの概念のさらなる支持として、図３４は、ＮＫ１９−１を発現するＮＫ細胞と比較した、４週間培養における、指定するｆｌａｇタグ無し、ヒト化構築物を発現するＮＫ細胞の持続性に関するデータを示す。ヒト化構築物を発現するＮＫ細胞間で全体的細胞数は類似するように見えるが、細胞数は、サイトカインと同じ基本的パターンを示し、すなわち、非ヒト化ＮＫ１９−１を発現するＮＫ細胞より多い。
【０３１１】
実施例１１
上記実験に類似して、ｆｌａｇタグを使用しない、ヒト化構築物の有効性のインビボ評価を実施した。図３５Ａは使用したプロトコールの概略を示す。図３５Ｂは、インビボ生物発光測定を示し、これは、ヒト化、ｆｌａｇタグを使用しない構築物がＮＫ１９−１構築物を発現するＮＫ細胞より大きい程度で腫瘍進行を遅延させるように見えることを示す。図３５Ｃは、造影データを折れ線グラフで再現し、ここで、腫瘍細胞増殖阻害の増強が、マウスがｆｌａｇタグを使用しない、ヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物の何れかを発現するＮＫ細胞を受けたとき、明らかに見られ得る。図３５Ｄは、ＮＫ細胞によるｆｌａｇタグを使用しない、ヒト化構築物の発現増強を反映する。図３６Ａ〜３６Ｆは、実験のタイムラインにわたる示した構築物を発現するＮＫ細胞の持続性に関する。図３６Ａは、ｆｌａｇタグを使用しない、ヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物を発現するＮＫ細胞が、インビボでより持続性であり、１３日目、末梢血のＣＤ５６＋細胞全体の大部分を占めることを示す。図３６Ｂは、１３日目、何らかのＣＤ１９  ＣＡＲを発現するＮＫ細胞が対照より良好に腫瘍増殖を阻害することを示し、ｆｌａｇタグを使用しない、ヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物を発現するＮＫ細胞がＣＤ１９＋腫瘍細胞増殖の制限において、ＮＫ１９−１発現ＮＫ細胞よりわずかな利点を示す。図３６Ｃは、ベンチマークとしてＧＦＰ陽性腫瘍細胞数を使用する、３６Ｂに類似するデータを示す。図３６Ｄは、２７日の持続性データを示し、ここで、ＮＫ１９−ＮＦ−２および−９発現ＮＫ細胞は、他の群と比較して集団数が増加し、より長期わたる持続性の増強を示す。早い時点に類似して、図３６Ｅおよび３６Ｆは、ＣＤ１９ターゲティングＣＡＲ構築物が全て、対照と比較して腫瘍細胞増殖の制限に有効であることを示す。ここで提供されるいくつかの実施態様によると、ＮＫ細胞によるｆｌａｇタグを使用しない、ヒト化ＣＤ１９ターゲティングＣＡＲの発現が、このようなＮＫ細胞のインビボ持続性および細胞毒性を増強させる。
【０３１２】
実施例１１
ここに記載するとおり、いくつかの実施態様において、操作されたＮＫ細胞は同種細胞治療のために調製される。いくつかの実施態様において、投与されるべき操作されたＮＫ細胞それ自体が調製され、次いで、対象におけるその後の使用のために凍結される。凍結保存、続く解凍の工程が、生存能、持続性または細胞毒性の低減など、操作されたＮＫ細胞に悪影響を与えないかを決定するための実験を実施した。図３７Ａは、用いた実験プロトコール略図ならびに使用した実験群および他の条件を示す。「ＩＬ１２／ＩＬ１８」なる名称の細胞について、細胞を、各々引用により全体として本明細書に包含させる、米国仮特許出願６２／８８１３１１(２０１９年７月３１日出願)および出願６２／９３２,３４２(２０１９年１１月７日出願)に記載のとおり、可溶性ＩＬ１２および／またはＩＬ１８の存在下で拡大させた。図３７Ｂおよび３７Ｃは、示した実験群からのインビボ生物発光造影を示す。図３８Ａ〜３８Ｈは、経時的生物発光強度を反映する折れ線グラフを示す。これらのデータを、最初の３０日間を示す図３８Ｉおよび５６日目までのデータを示す図３８Ｊに要約する。図３８Ｉは、ＣＤ１９  ＣＡＲを発現するＮＫ細胞と対照の間の明確な差異を示すが、実験群間には僅かの差異があるだけである。しかしながら、図３８Ｊは、５６日目までのデータを示し、種々のＣＡＲ構築物を発現し、示した条件下で処理したＮＫ細胞の腫瘍細胞増殖を阻害する能力に大きな差異がある。注目すべきは、群の「対」(同じＣＡＲ構築物、新鮮対凍結)が、かなり類似する抗腫瘍活性を示すことである。これは、いくつかの実施態様によると、抗ＣＤ１９  ＣＡＲを発現する操作されたＮＫ細胞は、調製されたときだけでなく、新鮮で投与されたとき有効であることを示す。さらに、いくつかの実施態様によると、抗ＣＤ１９  ＣＡＲを発現する操作されたＮＫ細胞は、調製されたときだけでなく、凍結、次いで解凍および投与されたとき有効である(例えば、同種の状況におけるような)。
【０３１３】
図３９は、５６日間の実験にわたり、示した構築物で処置されたマウスの体重の折れ線グラフを示す。体重減少は、腫瘍増殖増加に相関し、例えば、腫瘍の進行は、マウスの健康状態悪化と対応する体重減少をもたらす(例えば、消耗)。示すとおり、対照群は、３０日目までに体重の相当な減少を示すが、実験群は実験の大部分で体重が増加する。上記生物発光データに一致して、新鮮対凍結調製物の大部分は、体重に対して実質的に類似する効果を示す顕著な傾向がある。いくつかの実施態様によると、抗ＣＤ１９  ＣＡＲを発現する操作されたＮＫ細胞は、調製されたときだけでなく、新鮮で投与されたとき有効であることを示す。さらに、いくつかの実施態様によると、抗ＣＤ１９  ＣＡＲを発現する操作されたＮＫ細胞は、調製されたときだけでなく、凍結、次いで解凍および投与されたとき有効である(例えば、同種の状況におけるような)。
【０３１４】
上記実施態様の特定の特性および態様の種々の組み合わせまたは下位の組み合わせをすることができ、なお、本発明の１個以上の範囲内に入ることが意図される。さらに、ある実施態様に関連するあらゆる特定の特性、態様、方法、性質、特徴、品質、属性、要素などを、ここに示す他の全実施態様で使用し得る。従って、開示する実施態様の種々の特性および態様を、開示する発明の種々のモードをもたらすために、互いに組み合わせても置き換えてもよいことが理解される。故に、ここに開示する本発明の範囲は、上記した特定の開示される実施態様により限定されないことが意図される。さらに、本発明は、種々の修飾および別の形態を受け入れ可能であるが、その具体例は図面に説明され、ここに詳細に記載されている。しかしながら、本発明は開示する特定の形態または方法に限定されず、むしろ逆に、本発明は、記載する種々の実施態様および添付する特許請求の範囲の精神および範囲内に入る全ての修飾、均等物および代替をカバーすることは理解されるべきである。ここに開示するあらゆる方法は、記載する順番で実施する必要はない。ここに開示する方法は、実施者がすべきある行為を含む；しかしながら、明示的であれ暗示的であれ、何らかの第三者によるこれら行為の指示も含み得る。さらに、本発明の特性または態様がマーカッシュグループで記載されるとき、当業者は、本発明はまたそれによりマーカッシュグループの何れかの各個々のメンバーまたはメンバーのサブグループでも記載されることを認識する。
【０３１５】
ここに開示する範囲はまた任意かつ全ての重複、下位範囲およびこれらの組み合わせを含む。「最大」、「少なくとも」、「以上」、「以下」、「から」などの用語は、記載する数値を含む。「約」または「凡そ」などの用語が前にある数値は、記載した数値を含む。例えば、「約９０％」は「９０％」を含む。ある実施態様において、少なくとも９５％配列同一性または相同性は、対照配列に対する９６％、９７％、９８％、９９％および１００％配列同一性または相同性を含む。さらに、配列があるヌクレオチドまたはアミノ酸配列を「含む」と記載されているとき、このような記載は、特に断らない限り、該配列が、記載した配列を「含む」、それ「からなる」またはそれ「から本質的になる」ことも含む。
【０３１６】
いくつかの実施態様において、核酸コードの縮重を考慮した、ここに開示する核酸の何れかに対応するアミノ酸配列が提供される。さらに、明示したものと異なるが、機能的類似性または同等性を有する配列(核酸であれアミノ酸であれ)も、本発明の範囲内で意図される。これは、変異体、短縮化、置換または他のタイプの修飾を含む。
【０３１７】
ここで使用するあらゆる表題または副題は、構成上の目的のためであり、ここに開示する実施態様の限定に使用されるべきではない。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ−１】
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【図３Ｃ−２】
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【図３Ｄ】
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【図３Ｅ−１】
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【図３Ｅ−２】
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【図３Ｆ】
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【図３Ｇ】
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【図３Ｈ−１】
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【図３Ｈ−２】
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【図３Ｉ】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図９Ｄ】
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【図９Ｅ】
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【図９Ｆ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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【図１１−１】
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【図１１−２】
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【図１１−３】
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【図１２−１】
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【図１２−２】
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【図１２−３】
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【図１３−１】
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【図１３−２】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１４Ｃ】
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【図１４Ｄ】
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【図１４Ｅ】
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【図１４Ｆ】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１７Ｃ】
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【図１７Ｄ】
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【図１７Ｅ】
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【図１８】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【図１９Ｃ】
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【図１９Ｄ】
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【図２０】
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【図２１Ａ】
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【図２１Ｂ】
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【図２２−１】
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【図２２−２】
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【図２２−３】
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【図２３Ａ】
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【図２３Ｂ】
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【図２３Ｃ】
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【図２３Ｄ】
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【図２４】
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【図２５−１】
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【図２５−２】
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【図２５−３】
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【図２５−４】
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【図２５−５】
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【図２６Ａ】
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【図２６Ｂ】
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【図２６Ｃ】
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【図２６Ｄ】
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【図２７Ａ−１】
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【図２７Ａ−２】
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【図２７Ａ−３】
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【図２７Ｂ−１】
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【図２７Ｂ−２】
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【図２７Ｂ−３】
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【図２８Ａ】
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【図２８Ｂ】
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【図２９Ａ】
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【図２９Ｂ−１】
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【図２９Ｂ−２】
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【図２９Ｃ】
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【図２９Ｄ】
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【図２９Ｅ】
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【図３０−１】
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【図３０−２】
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【図３０−３】
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【図３１】
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【図３２−１】
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【図３２−２】
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【図３３−１】
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【図３３−２】
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【図３３−４】
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【図３３−５】
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【図３３−６】
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【図３４】
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【図３５−１】
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【図３５−２】
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【図３５−３】
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【図３５−４】
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【図３６−１】
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【図３６−２】
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【図３６−３】
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【図３７Ａ】
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【図３７Ｂ−１】
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【図３７Ｂ−２】
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【図３７Ｂ−３】
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【図３７Ｂ−４】
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【図３７Ｃ−１】
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【図３７Ｃ−２】
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【図３８−１】
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【図３８−２】
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【図３８−３】
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【図３８−４】
2021528048.tif 000124
【図３８−５】
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【図３８−６】
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【図３９】
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【配列表】
2021528048000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和2年12月24日(2020.12.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチドであって、該キメラ抗原受容体が
細胞外抗ＣＤ１９結合部分一本鎖フラグメント可変(ｓｃＦｖ)を含む(ここで、ｓｃＦｖは
可変重(ＶＨ)ドメインおよび
ｓｃＦｖの可変軽(ＶＬ)ドメインを含む)；
ヒンジ；
膜貫通ドメイン；および
細胞内シグナル伝達ドメイン(ここで、細胞内シグナル伝達ドメインは
ＯＸ４０サブドメイン、
ＣＤ３ゼータサブドメインを含む)
を含み、そして、
膜結合インターロイキン−１５(ｍｂＩＬ１５)もコードする(ここで、ｍｂＩＬ１５は配列番号１１に少なくとも９５％配列同一性を有する配列によりコードされる)、
ポリヌクレオチド。
【請求項２】
ＯＸ４０サブドメインが配列番号５に少なくとも９５％配列同一性を有する配列によりコードされ、ＣＤ３ゼータサブドメインが配列番号７に少なくとも９５％配列同一性を有する配列によりコードされる、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３】
コードされたＶＨドメインが配列番号１２０に少なくとも９５％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１または請求項２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４】
コードされたＶＬドメインが配列番号１１８に少なくとも９５％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１〜３の何れかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項５】
ヒンジがＣＤ８アルファヒンジを含み、そして膜貫通ドメインがＣＤ８アルファ膜貫通ドメインを含む、請求項１〜４の何れかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項６】
ポリヌクレオチドが配列番号１８７に示すアミノ酸配列と少なくとも９５％配列同一性を有するＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードする、請求項１〜５の何れかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項７】
ＶＬドメインが配列番号１２４、１２７または１３０の軽鎖相補性決定領域１(ＬＣ  ＣＤＲ１)、配列番号１２５、１２８または１３１の軽鎖相補性決定領域２(ＬＣ  ＣＤＲ２)および配列番号１２６、１２９または１３２の軽鎖相補性決定領域３(ＬＣ  ＣＤＲ３)を含む、請求項１〜６の何れかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項８】
ＶＨドメインが配列番号１３３、１３６、１３９または１４２の重鎖相補性決定領域１(ＨＣ  ＣＤＲ１)、配列番号１３４、１３７、１４０または１４３の重鎖相補性決定領域２(ＨＣ  ＣＤＲ２)および配列番号１３５、１３８、１４１または１４４の重鎖相補性決定領域３(ＨＣ  ＣＤＲ３)を含む、請求項１〜６の何れかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項９】
ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体を発現する免疫細胞であって、該キメラ抗原受容体が
一本鎖フラグメント可変(ｓｃＦｖ)を含む細胞外抗ＣＤ１９結合部分(ここで、ｓｃＦｖが
可変重(ＶＨ)ドメインおよび
ｓｃＦｖの可変軽(ＶＬ)ドメインを含む)；
膜貫通ドメイン；および
細胞内シグナル伝達ドメイン(ここで、細胞内シグナル伝達ドメインは
ＯＸ４０サブドメイン、
ＣＤ３ゼータサブドメインを含む)
を含み；
そして、ポリヌクレオチドが膜結合インターロイキン−１５(ｍｂＩＬ１５)もコードする(ここで、ｍｂＩＬ１５は配列番号１１に少なくとも９５％配列同一性を有する配列によりコードされる)、
免疫細胞。
【請求項１０】
キメラ抗原受容体がヒンジ領域をさらに含み、ここで、ヒンジ領域が細胞外抗ＣＤ１９結合部分と膜貫通ドメインの間にあり、ヒンジがＣＤ８アルファヒンジを含む、請求項９に記載の免疫細胞。
【請求項１１】
膜貫通ドメインがＣＤ８アルファ膜貫通ドメインを含む、請求項９〜１０の何れかに記載の免疫細胞。
【請求項１２】
ＯＸ４０サブドメインが配列番号５に少なくとも９５％配列同一性を有する配列によりコードされる、請求項９〜１１の何れかに記載の免疫細胞。
【請求項１３】
ＣＤ３ゼータサブドメインが配列番号７に少なくとも９５％配列同一性を有する配列によりコードされる、請求項９〜１２の何れかに記載の免疫細胞。
【請求項１４】
コードされたＶＨドメインが配列番号１２０と少なくとも９５％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項９〜１３の何れかに記載の免疫細胞。
【請求項１５】
コードされたＶＬドメインが配列番号１１８と少なくとも９５％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項９〜１４の何れかに記載の免疫細胞。
【請求項１６】
ＶＬドメインが配列番号１２４、１２７または１３０の軽鎖相補性決定領域１(ＬＣ  ＣＤＲ１)、配列番号１２５、１２８または１３１の軽鎖相補性決定領域２(ＬＣ  ＣＤＲ２)および配列番号１２６、１２９または１３２の軽鎖相補性決定領域３(ＬＣ  ＣＤＲ３)を含む、請求項９〜１５の何れかに記載の免疫細胞。
【請求項１７】
ＶＨドメインが配列番号１３３、１３６、１３９または１４２の重鎖相補性決定領域１(ＨＣ  ＣＤＲ１)、配列番号１３４、１３７、１４０または１４３の重鎖相補性決定領域２(ＨＣ  ＣＤＲ２)および配列番号１３５、１３８、１４１または１４４の重鎖相補性決定領域３(ＨＣ  ＣＤＲ３)を含む、請求項９〜１６の何れかに記載の免疫細胞。
【請求項１８】
発現されたＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体が配列番号１８７に示すアミノ酸配列に少なくとも９５％配列同一性を有する、請求項９〜１７の何れかに記載の免疫細胞。
【請求項１９】
免疫細胞がナチュラルキラー(ＮＫ)細胞またはＴ細胞である、請求項９〜１８の何れかに記載の免疫細胞。
【請求項２０】
癌の処置のためのＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチドの使用であって、キメラ抗原受容体が
一本鎖フラグメント可変(ｓｃＦｖ)を含む細胞外抗ＣＤ１９結合部分(ここで、ｓｃＦｖは
可変重(ＶＨ)ドメインおよび
ｓｃＦｖの可変軽(ＶＬ)ドメインを含む)；
膜貫通ドメイン；および
細胞内シグナル伝達ドメイン(ここで、細胞内シグナル伝達ドメインは
ＯＸ４０サブドメイン、
ＣＤ３ゼータサブドメインを含む)
を含み、
ポリヌクレオチドが膜結合インターロイキン−１５(ｍｂＩＬ１５)もコードする、
使用。
【請求項２１】
ｍｂＩＬ１５が配列番号１１に少なくとも９５％配列同一性を有する配列によりコードされる、請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】
ＶＬドメインが配列番号１２４、１２７または１３０の軽鎖相補性決定領域１(ＬＣ  ＣＤＲ１)、配列番号１２５、１２８または１３１の軽鎖相補性決定領域２(ＬＣ  ＣＤＲ２)および配列番号１２６、１２９または１３２の軽鎖相補性決定領域３(ＬＣ  ＣＤＲ３)を含み、ＶＨドメインが配列番号１３３、１３６、１３９または１４２の重鎖相補性決定領域１(ＨＣ  ＣＤＲ１)、配列番号１３４、１３７、１４０または１４３の重鎖相補性決定領域２(ＨＣ  ＣＤＲ２)および配列番号１３５、１３８、１４１または１４４の重鎖相補性決定領域３(ＨＣ  ＣＤＲ３)を含む、請求項２０または２１に記載のポリヌクレオチドの使用。
【請求項２３】
ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体が配列番号１８７に示すアミノ酸配列に少なくとも９５％配列同一性を有する、請求項２０〜２２の何れかに記載のポリヌクレオチドの使用。
【請求項２４】
癌が白血病である、請求項２０〜２３の何れかに記載のポリヌクレオチドの使用。
【請求項２５】
癌がＢ細胞白血病である、請求項２４に記載の使用。
【請求項２６】
癌の処置のためのＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体を発現する免疫細胞の集団を製造する方法であって、
ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチドを含むベクターを複数の免疫細胞に送達し{ここで、キメラ抗原受容体は
一本鎖フラグメント可変(ｓｃＦｖ)を含む細胞外抗ＣＤ１９結合部分(ここで、ｓｃＦｖは
可変重(ＶＨ)ドメインおよび
ｓｃＦｖの可変軽(ＶＬ)ドメインを含む)；および
細胞内シグナル伝達ドメイン(ここで、細胞内シグナル伝達ドメインは
ＯＸ４０サブドメイン、
ＣＤ３ゼータサブドメインを含む)
を含み、
ポリヌクレオチドが膜結合インターロイキン−１５(ｍｂＩＬ１５)もコードする}、
それにより操作された免疫細胞の集団を産生し；
操作された免疫細胞を培養で所望の用量に適する集団に拡大させ、それにより、癌の処置のためのＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体を発現する免疫細胞の集団を製造する、
方法。
【請求項２７】
ベクターがレトロウイルスベクターである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
ポリヌクレオチドが配列番号１１と少なくとも９５％配列同一性を有する配列を有するｍｂＩＬ１５をコードする、請求項２５または２６に記載の方法。
【請求項２９】
ポリヌクレオチドが配列番号１２４、１２７または１３０の軽鎖相補性決定領域１(ＬＣ  ＣＤＲ１)、配列番号１２５、１２８または１３１の軽鎖相補性決定領域２(ＬＣ  ＣＤＲ２)および配列番号１２６、１２９または１３２の軽鎖相補性決定領域３(ＬＣ  ＣＤＲ３)を含むＶＬドメインをコードし、かつポリヌクレオチドが配列番号１３３、１３６、１３９または１４２の重鎖相補性決定領域１(ＨＣ  ＣＤＲ１)、配列番号１３４、１３７、１４０または１４３の重鎖相補性決定領域２(ＨＣ  ＣＤＲ２)および配列番号１３５、１３８、１４１または１４４の重鎖相補性決定領域３(ＨＣ  ＣＤＲ３)を含むＶＨドメインをコードする、請求項２６〜２８の何れかに記載の方法。
【請求項３０】
ポリヌクレオチドが配列番号１８７に示すアミノ酸配列と少なくとも９５％配列同一性を有するＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体をコードする、請求項２６〜２９の何れかに記載の方法。
【請求項３１】
免疫細胞がナチュラルキラー細胞である、請求項２６〜３０の何れかに記載の方法。
【国際調査報告】
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