(57)【要約】  創傷治癒プロセス中に瘢痕を最小限にするための方法が記載されている。創傷上に形成される瘢痕の出現を改善するための方法がやはり記載されている。本方法は、ボツリヌス毒素サブタイプＥ（ＢｏＮＴ／Ｅ）の治療有効量を創傷の近くで投与するステップを含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
創傷の近くで、患者に速効性神経毒の治療有効量を投与するステップを含む、瘢痕を最小限にするための方法。
【請求項２】
前記速効性神経毒が、ボツリヌス神経毒血清型Ｅを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記治療有効量が、約１０-3Ｕ／ｋｇ〜約３５Ｕ／ｋｇの間の量を含む、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記治療有効量が、約０．２ナノグラム〜約２ナノグラムの間の量を含む、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記投与するステップが、注射により投与するステップを含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記注射により投与するステップが、筋肉内注射である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
ボツリヌス毒素サブタイプＡを患者に投与するステップをさらに含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
患者に、よりゆっくり作用する神経毒を投与するステップをさらに含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
患者に、よりゆっくり回復する神経毒を投与するステップをさらに含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記創傷が、外科的切開を含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記外科的切開が、美容外科手技の結果である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記外科的切開が、モース手順の結果である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
ボツリヌス毒素サブタイプＥ（ＢｏＮＴ／Ｅ）の治療有効量を創傷の近くで投与するステップを含む、創傷上に形成される瘢痕の出現を改善するための方法。
【請求項１４】
創傷が、外科的創傷である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記投与するステップが、外科手技前に行われる、請求項１３または請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記投与するステップが、外科手技後に行われる、請求項１３〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記外科的創傷が、対象において既存の瘢痕と重複する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
前記治療有効量が、ＢｏＮＴ／Ｅで治療されなかった患者において、類似の創傷上に形成される瘢痕に比べ、瘢痕の発赤を減少させる量を含む、請求項１３〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記治療有効量が、ＢｏＮＴ／Ｅで治療されなかった患者において、類似の創傷上に形成される瘢痕に比べ、瘢痕のこわばりを減少させる量を含む、請求項１３〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
創傷の近くで、ボツリヌス毒素サブタイプＡを投与するステップをさらに含む、請求項１３〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年１２月１８日出願の米国仮出願第６２／５９９，９７２号の優先権の利益を主張し、その全体を、参照により本明細書に組み込む。
本開示は、瘢痕を最小化するための神経毒の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
外科手技および他の侵襲的手技または損傷は、瘢痕になるおそれがある。組織または関節を機械的に固定化することは、瘢痕を最小化することにおいて有効であり得、創傷に伴う瘢痕形成に関連する臨床成績を向上する方法の必要性が依然としてある。
【発明の概要】
【０００３】
本明細書中に開示されるのは、瘢痕を最小化することにおける使用のための組成物および方法である。例えば、開示される実施形態は、創傷の近くの筋張力を低下させ、したがって、瘢痕を予防するまたは減少させるための「速効性の」ボツリヌス毒素の使用を含む。
第１の態様では、瘢痕を最小化するための方法が提供される。本方法は、創傷の近くで患者に、速効性神経毒の治療有効量を投与するステップを含む。
別の態様では、外科手技を行う患者における瘢痕形成の予防のための方法が提供される。本方法は、外科手技において生成する創傷の近くで、患者に速効性神経毒の治療有効量を投与するステップを含む。
別の態様では、創傷の周囲の動的張力を速やかに低下させるための方法が提供される。本方法は、創傷の近くで、患者に速効性および／または短時間の神経毒の治療有効量を投与するステップを含む。
別の態様では、外科手技を最近行った患者においておよび創傷の瘢痕が可視化する前に、瘢痕形成を予防するための方法が提供される。本方法は、外科手技において生成する創傷の近くで、患者に速効性神経毒の治療有効量を投与するステップを含む。
別の態様では、既に瘢痕を有する患者において瘢痕を治療するための方法が提供される。本方法は、創傷の近くで、患者に速効性および／または短時間の神経毒の治療有効量を投与するステップを含む。
一実施形態では、速効性神経毒は、ボツリヌス神経毒血清型Ｅを含む。
【０００４】
一実施形態では、治療有効量は、約１０-3Ｕ／ｋｇ〜約３５Ｕ／ｋｇの間の量を含む。別の実施形態では、治療有効量は、約１Ｕ／ｋｇ〜約２５Ｕ／ｋｇの間の量を含む。さらに別の実施形態では、治療有効量は、約５Ｕ／ｋｇ〜約１５Ｕ／ｋｇの間の量を含む。
さらなる別の実施形態では、治療有効量は、約０．２ナノグラム〜約２ナノグラムの間の量を含む。
別の実施形態では、皮膚切開または裂傷の近くの筋肉の活動は、低下し、したがって、瘢痕形成を減少させるまたは予防する。
別の実施形態では、ボツリヌス毒素は、高速回復の毒素である。
さらなる別の実施形態では、「速効性」のボツリヌス毒素は、やはり高速回復の毒素である。
さらなる別の実施形態では、本方法は、例えば、よりゆっくり作用する神経毒と組み合わせた、速効性ボツリヌス神経毒の投与をさらに含む。一実施形態では、よりゆっくり作用する神経毒は、ボツリヌス毒素サブタイプＡ（ＢｏＮＴ／Ａ）である。
他の実施形態では、本方法は、例えば、よりゆっくり回復する神経毒と組み合わせた、高速回復のボツリヌス神経毒の投与をさらに含む。
別の実施形態では、本方法は、追加の外科手技を含む。例えば、開示される実施形態は、例えば、皮膚充填剤注射、アイリフト、鼻形成術、豊胸術、開放骨折、裂傷の治療などと組み合わせた、速効性ボツリヌス神経毒の投与を含む。
ＢｏＮＴ／Ｅによる早発性の筋弛緩効果として、対象、例えば、顔の裂傷の修復を行う対象などにおける創傷治癒の改善および瘢痕形成の減少を示す。ＢｏＮＴ／Ｅにより提供されたより短時間の筋弛緩（２〜４週間）は、ＢｏＮＴ／Ａ生成物による３〜４カ月と比較して、やはり望ましい。
【０００５】
別の態様では、瘢痕の出現を改善するために瘢痕組織形成を減少させる方法が提供される。本方法は、創傷において動的張力を低下させる、および／または創傷の近くで筋肉を麻痺させるのに有効な量で、ボツリヌス毒素Ｅ型を含む配合物を創傷の近くで投与するステップを含む。一実施形態では、ＢｏＮＴ／Ｅを投与することによって、ボツリヌス毒素Ａ型（ＢｏＮＴ／Ａ）で治療されなかったまたは治療された類似の創傷に比べ、創傷の瘢痕組織形成が減少される。
一実施形態では、創傷は、対象における基底細胞癌または有棘細胞癌の除去のために生成する。別の実施形態では、創傷は、モース術中に生成する。
さらなる別の実施形態では、創傷は、顔面である。他の実施形態では、創傷は、眼の周り、前頭部上、鼻の上、頭皮上、または耳の周りである。
さらなる別の実施形態では、創傷は、前頭部上の単一の創傷である。
他の実施形態では、ＢｏＮＴ／Ｅを含む配合物または組成物は、筋肉内投与される。
【０００６】
一実施形態では、本配合物は、モース術後に投与される。別の実施形態では、本配合物は、モース術前に投与される。
別の実施形態では、本配合物は、モース術後約１０分〜約１時間以内に投与される。
他の実施形態では、瘢痕の出現は、臨床医により、ＶＡＳ（視覚的アナログスケール）を用いて評価される。別の実施形態では、瘢痕の出現は、対象により、瘢痕美容術評価および評価スケール（ＳＣＡＲＳ：Ｓｃａｒ  Ｃｏｓｍｅｓｉｓ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｒａｔｉｎｇ  Ｓｃａｌｅ）を用いて評価される。さらなる別の実施形態では、瘢痕の出現は、対象により、患者および観察者の瘢痕評価スケール（Ｐａｔｉｅｎｔ  ａｎｄ  Ｏｂｓｅｒｖｅｒ  Ｓｃａｒ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  Ｓｃａｌｅ）を用いて評価される。
別の態様では、瘢痕の出現を改善する方法が提供される。本方法は、発赤を減少させる、こわばりを減らすおよび／または瘢痕の変色を減らすために有効な量で、ボツリヌス毒素Ｅ型を含む配合物を、創傷の近くで投与するステップを含み、発赤、こわばりおよび／または変色の減少は、創傷治癒の最初の４８時間、７２時間、１週間または１カ月において観察される。一実施形態では、これらの減少は、患者によりおよび／または観察者、例えば、臨床医により評価され、ボツリヌス毒素Ａ型（ＢｏＮＴ／Ａ）で治療されなかったまたは治療された類似の創傷に対して相対的なものである。
【０００７】
別の態様では、創傷において瘢痕組織形成を減少させる方法が提供される。本方法は、ボツリヌス毒素Ｅ型を含む配合物を創傷の近くで、皮下投与するステップを含み、それにより、前記投与は、ボツリヌス毒素Ａ型で治療されなかったまたは治療された類似の創傷に比べ、創傷の瘢痕組織形成を減少させる。
一実施形態では、創傷は、弛緩された皮膚の張力ライン（ｓｋｉｎ  ｔｅｎｓｉｏｎ  ｌｉｎｅ）に垂直である。
一実施形態では、ボツリヌス毒素Ｅ型は、創傷への動的張力を低下させるために有効な量で投与される。別の実施形態では、創傷は、外科的切開である。
さらなる別の態様では、創傷上に形成される瘢痕の出現を改善するための方法が提供される。本方法は、ボツリヌス毒素サブタイプＥ（ＢｏＮＴ／Ｅ）の治療有効量を創傷の近くで投与するステップを含む。
一実施形態では、創傷は、外科的創傷である。別の実施形態では、ＢｏＮＴ／Ｅは、外科手技前に投与される。さらなる別の実施形態では、ＢｏＮＴ／Ｅは、外科手技後に投与される。
一実施形態では、外科的創傷は、対象において既存の瘢痕と重複する。
【０００８】
一実施形態では、治療有効量は、ＢｏＮＴ／Ｅで治療されなかった患者において、類似の創傷上に形成される瘢痕に比べ、瘢痕の発赤を減少させる量を含む。
さらなる別の実施形態では、治療有効量は、ＢｏＮＴ／Ｅで治療されなかった患者において、類似の創傷上に形成される瘢痕に比べ、瘢痕のこわばりを減少させる量を含む。
さらなる別の実施形態では、創傷の近くにおけるボツリヌス毒素サブタイプＡの量は、創傷生成前、創傷生成中または創傷生成後にやはり投与される。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】ボツリヌス神経毒（ＢｏＮＴ）の１次構造の描画を示す図である。
【図２Ａ−２Ｄ】ＢｏＮＴ／Ｅ（図２Ａ、２Ｃ）およびＢｏＮＴ／Ｂ（図２Ｂ、２Ｄ）を示す略図およびリボン図である。触媒の、転座、および結合ドメインは、それぞれ、ＣＤ、ＴＤ、およびＢＤと標識される。
【図３Ａ−３Ｂ】筋肉を同定する、人体の、前方図（図３Ａ）および後方図（図３Ｂ）の説明を示す図である。
【図４】同定された神経を有する人体の説明を示す図である。
【図５】実施例１に記載された試験についての前頭部の注射部位を示す図である。
【図６】実施例４に記載された試験についての前頭部の注射部位を示す図である。
【図７Ａ】モース術（破線で塗りつぶされたバー）中の前頭筋において筋肉内にＢｏＮＴ／Ｅで治療されたヒトの患者におけるおよびモース術（プラセボ、オープンバー）の一部としてボツリヌス毒素で治療しなかったヒトの患者における、２〜８日目、２〜３０日目および２〜９０日目の、観察者により評定された視覚的アナログスケール（ＶＡＳ）の平均変化を示すバーグラフである。
【図７Ｂ】モース術（破線で塗りつぶされたバー）中の前頭筋において筋肉内にＢｏＮＴ／Ｅで治療されたヒトの患者におけるおよびモース術（プラセボ、オープンバー）の一部としてボツリヌス毒素で治療しなかったヒトの患者における、２〜８日目、２〜３０日目および２〜９０日目の患者および観察者の瘢痕評価スケール（ＰＯＳＡＳ）を用いた瘢痕の評価の患者によって報告されたカラーコンポーネントの平均変化を示すバーグラフである。
【図７Ｃ】モース術（破線で塗りつぶされたバー）中の前頭筋において筋肉内にＢｏＮＴ／Ｅで治療されたヒトの患者におけるおよびモース術（プラセボ、オープンバー）の一部としてボツリヌス毒素で治療しなかったヒトの患者における、２〜８日目、２〜３０日目および２〜９０日目の、患者および観察者の瘢痕評価スケール（ＰＯＳＡＳ）を用いた瘢痕の評価の患者によって報告されたこわばりの構成要素の平均変化を示すバーグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本明細書中に開示される実施形態は、局所の筋肉の活動を低下させることができ、それにより、瘢痕、例えば、外科手術から生じる瘢痕の発生を減少させることができる。いくつかの実施形態では、外科手術は、美容外科、例えば、鼻形成術、アイリフト、「おなか」の脂肪を取る手術などを含むことができる。他の実施形態では、外科手術は、医学的手技の他のタイプ、例えば、虫垂の除去、臓器移植、帝王切開などを含むことができる。いくつかの実施形態では、本方法は、創傷の近くで、開示された組成物を投与するステップを含む。
創傷修復の美容上の効果は、閉鎖の質、感染、および縫合の質を含めた、多くの因子に依存する。最重要な因子は、創縁における張力であり、これは、炎症を増加させる傾向があり、線維症および紅斑をもたらす。張力は、静的な張力（創傷の位置、サイズ、閉鎖技法などの結果である）および動的張力から構成される。この動的張力は、創傷の基礎となる筋肉の活動により引き起こされる。詳細には、弛緩された皮膚の張力ライン（ＲＳＴＬ）と平行に、修復される創傷は、動的張力が小さく、良好な美容上の結果を伴って治癒する。これらのＲＳＴＬと垂直である瘢痕は、張力が増加しており、これによって、炎症の増加、コラーゲンおよびグリコサミノグリカンの沈着の増加、線維芽細胞の応答の増加、および不十分な創傷治癒および瘢痕の増加をもたらされる。ボツリヌス毒素により、基礎となる筋肉に対する神経支配を除去することにより動的張力を低下させることによって、瘢痕を潜在的に小さくする非常に興味深い方法を提示する。
【００１１】
いくつかの実施形態では、外科手術は、がん、例えば、皮膚がんを治療する、外科手術、例えば、モース術を含むことができる。モース顕微鏡手術は、眼、鼻、唇、耳、頭皮、手指、足指または性器の周りの美容的におよび機能的に重要な領域におけるものを含めた、多くの基底細胞癌（ＢＣＣ）および有棘細胞癌（ＳＣＣ）を治療するための最も有効な技法と考えられる。
ＢＣＣは、皮膚の基底細胞中に生じる、異常な、制御の効かない増殖または病変であり、これは、表皮の最深の層（皮膚の最外側の層）に皺を寄せる。ＢＣＣは、しばしば、開放創、赤色斑、淡紅色の成長、光沢のある隆起、または瘢痕のように見え、累積的なおよび激しい、時々の日光曝露の組合せにより、通常、引き起こされる。基底細胞癌の４００万を超える症例が、毎年米国で診断される。実際に、ＢＣＣは、すべてのがんの最も頻繁に起こる形態である。３種のすべての新たながんの１種以上は、皮膚がんであり、大多数は、ＢＣＣである。
【００１２】
ＳＣＣは、皮膚の中間層および外層を構成する扁平細胞中で発生する皮膚がんの一般的な形態である。これらは、一部の症例で侵襲性であるおそれがあるが、通常、生命を脅かさない。未治療の、皮膚の有棘細胞癌は、大きく成長しまたは身体の他の部分に広がり、重篤な合併症を引き起こすおそれがある。ほとんどのＳＣＣは、陽光からまたは日焼けマシーン（ｔａｎｎｉｎｇ  ｂｅｄ）もしくは日焼けランプから、紫外線（ＵＶ）照射への長期の曝露から生じる。ＵＶ光の回避は、皮膚の有棘細胞癌および皮膚がんの他の形態のリスクを減らすのに役立つ。扁平細胞は、身体において多くの場所で見出され、有棘細胞癌は、扁平細胞が見出されるいかなる場所でも生じ得る。皮膚の有棘細胞癌は、皮膚において見出される扁平細胞中で形成されるがんを意味する。
モースはまた、不明瞭な縁を有する、または以前の治療後に再発する、大型の、侵襲性のまたは速やかに増殖するＢＣＣまたはＳＣＣに推奨される。何人かの外科医は、黒色腫のいくつかの症例においてモース術をうまく用いている。この手順は、患者が待つ間、検査室での作業を含めて段階的に行われる。これによって、健康な組織を残しながら、最も高い治癒率ですべての癌性の細胞を除去することが可能になる。この手順は、以前に治療していなかった皮膚がんの治癒率が９９％までであり、以前の治療後に再発する皮膚がんの治癒率が、９４％までである。
【００１３】
この手順は、表皮内黒色腫（外科医に応じて、治癒率７７％〜９８％）、および黒色腫のいくつかのタイプ（治癒率５２％）の除去において用いられている。表皮内黒色腫の別の試験によって、凍結切片モースの場合、モースによる治癒率は９５％、および固定組織モース法の場合、９８〜９９％であることが明らかにされた。
モース手順は、切除縁の完全な検査が可能になる病変切開法（ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ｓｅｃｔｉｏｎｉｎｇ  ｍｅｔｈｏｄ）である。これは、切開の標準的な「ブレッド・ローフィング」技法と異なり、切除縁のランダムなサンプルが検査される。モース術は、４ステップで行われる。すなわち、
ａ．組織の外科的除去（腫瘍外科学）
ｂ．組織の断片のマッピング、凍結およびクリオスタットを用いた５〜１０マイクロメータ間の組織の切断、ならびにヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）による染色または（トルイジンブルーを含めた）他の染色
ｃ．スライドガラスの解釈（病理学）
ｄ．外科的欠損の考え得る再建（再建外科）
【００１４】
モース手順は、診療所で局所麻酔薬下で通常行われる。小型の小刀を利用して、可視の腫瘍の周りを切断する。非常に小型の切除縁は、通常、「自由縁」または関与しない皮膚１〜１．５ｍｍを含めて、利用される。除去される自由縁の量は、皮膚がんの標準的な切除に要する通常の４〜６ｍｍよりもはるかに少ない。組織をそれぞれ外科的除去した後、検体を処理し、クリオスタット上で切断し、スライドに置き、Ｈ＆Ｅで染色し、次いで、癌性の細胞についての切片を検査するモース外科医／病理学者により読み取られる。がんが見出される場合、その場所は、マップに印を付け（組織の図）、外科医は、患者から得られた、示された癌性組織を除去する。この手順は、さらなるがんが見出されなくなるまで繰り返される。次いで、症例の大多数は、モース外科医により再建される。
明細書中に開示される実施形態は、局所の筋肉の活動を低下させることができ、それにより、瘢痕、例えば、外傷から生じる瘢痕の発生を減少させることができる。例えば、外傷性障害（ｔｒａｕｍａｔｉｃ  ｉｎｊｕｒｙ）に続いて、開示される実施形態は、外傷、例えば、裂傷または肢切断の近くで、開示された組成物を投与するステップを含むことができる。
いくつかの実施形態では、外科手術は、美容外科、例えば、鼻形成術、アイリフト、「おなか」の脂肪を取る手術などを含むことができる。他の実施形態では、外科手術は、医学的手技の他のタイプ、例えば、虫垂の除去、臓器移植、帝王切開（ｃａｅｓａｒｉａｎ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ）などを含むことができる。いくつかの実施形態では、これらの方法は、創傷の近くで、開示された組成物を投与するステップを含む。
【００１５】
開示される実施形態を実施するのに有用な投与部位は、筋肉の活動が低下されようとする任意の領域を含むことができる。例えば、顔の美容外科の手順と組み合わせて使用される場合、開示される実施形態は、皺眉筋（ｃｏｒｒｕｇａｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｃｉｌｌｉ）および鼻根筋；眼輪筋（ｏｂｉｃｕｌａｒｉｓ  ｏｃｕｌｉ）；眼輪筋の上外側の線維；前頭筋；鼻筋；上唇鼻翼挙筋（ｌｅｖａｔｏｒ  ｌａｂｉｉ  ｓｕｐｅｒｉｏｒｉｓ  ａｌｅｑｕｅ  ｎａｓｉ）；口輪筋（ｏｂｉｃｕｌａｒｉｓ  ｏｒｉｓ）；咬筋；口角下制筋；および広頸筋を含めた、眉間の複合体への投与を含むことができる。
他の外科手技と組み合わせて使用される場合、開示される実施形態は、例えば、腕、脚、胴などの筋肉への投与を含むことができる。
開示される実施形態は、切開の近くの筋張力を低下させるために、この手順の前に外科的部位を準備するための方法を含むことができる。
いくつかの実施形態では、本明細書中に開示される組成物は、速効性ボツリヌス毒素、例えば、ボツリヌスＥ型を含むことができる。
いくつかの実施形態では、本明細書中に開示される組成物は、高速回復のボツリヌス毒素、例えば、ボツリヌスＥ型を含むことができる。
いくつかの実施形態では、本明細書中に開示される組成物は、速効性の、高速回復のボツリヌス毒素、例えば、ボツリヌスＥ型を含むことができる。
【００１６】
定義
「投与」または「投与する」とは、医薬組成物または有効成分を対象に与える（すなわち、投与する）ステップを意味する。本明細書中に開示される医薬組成物は、多くの適切な経路によって投与することができる。例えば、筋肉内、皮内、皮下投与、くも膜下腔内投与、腹腔内投与、局所（経皮）、点滴注入、および（例えば、緩徐放出デバイス、例えば、ポリマーインプラントまたは小型の浸透圧ポンプ（ｍｉｎｉｏｓｍｏｔｉｃ  ｐｕｍｐ）の）移植は、すべて、適切な投与の経路であり得る。
「緩和する」とは、疼痛、頭痛、または任意の症候または状態もしくは障害の原因の発生の軽減を意味する。したがって、緩和するには、多少の軽減、有意な軽減、ほぼ完全な軽減、および完全な軽減が含まれる。
【００１７】
用語「アミノ酸」とは、天然に存在するまたは合成のアミノ酸、ならびにアミノ酸類似体、立体異性体、および天然に存在するアミノ酸と同様に機能するアミノ酸模倣体を意味する。この定義により含められるのは、天然アミノ酸であり、例えば、次の通りである。（１）ヒスチジン（Ｈｉｓ；Ｈ）（２）イソロイシン（Ｉｌｅ；Ｉ）（３）ロイシン（Ｌｅｕ；Ｌ）（４）リジン（Ｌｙｓ；Ｋ）（５）メチオニン（Ｍｅｔ；Ｍ）（６）フェニルアラニン（Ｐｈｅ；Ｆ）（７）トレオニン（Ｔｈｒ；Ｔ）（８）トリプトファン（Ｔｒｐ；Ｗ）（９）バリン（Ｖａｌ；Ｖ）（１０）アルギニン（Ａｒｇ；Ｒ）（１１）システイン（Ｃｙｓ；Ｃ）（１２）グルタミン（Ｇｌｎ；Ｑ）（１３）グリシン（Ｇｌｙ；Ｇ）（１４）プロリン（Ｐｒｏ；Ｐ）（１５）セリン（Ｓｅｒ；Ｓ）（１６）チロシン（Ｔｙｒ；Ｙ）（１７）アラニン（Ａｌａ；Ａ）（１８）アスパラギン（Ａｓｎ；Ｎ）（１９）アスパラギン酸（Ａｓｐ；Ｄ）（２０）グルタミン酸（Ｇｌｕ；Ｅ）（２１）セレノシステイン（Ｓｅｃ；Ｕ）であり；次の非天然アミノ酸、すなわち、（ａ）シトルリン（Ｃｉｔ）；（ｂ）シスチン；（ｃ）γアミノ酪酸（ＧＡＢＡ）；（ｄ）オルニチン（Ｏｒｎ）；（ｆ）テアニン；（ｇ）ホモシステイン（Ｈｅｙ）；（ｈ）チロキシン（Ｔｈｘ）；およびアミノ酸誘導体、例えば、ベタイン；カルニチン；カルノシンクレアチン；ヒドロキシトリプトファン；ヒドロキシプロリン（Ｈｙｐ）；Ｎ−アセチルシステイン；Ｓ−アデノシルメチオニン（ＳＡＭ−ｅ）；タウリン；チラミンが含まれる。
【００１８】
「動物性タンパク質がない」とは、血液由来の、血液をプールしたおよび他の動物由来の生成物または化合物の非存在を意味する。「動物」とは、哺乳動物（例えば、ヒト）、鳥類、は虫類、魚、昆虫、クモまたは他の動物種を意味する。「動物」は、微生物、例えば、細菌を除外する。したがって、動物性タンパク質がない医薬組成物は、ボツリヌス神経毒を含むことができる。例えば、「動物性タンパク質がない」医薬組成物は、血清由来アルブミン、ゼラチンおよび他の動物由来タンパク質、例えば、免疫グロブリンなどが、実質的にないまたは本質的にないまたは完全にない医薬組成物を意味する。動物性タンパク質がない医薬組成物の一例としては、（有効成分としての）ボツリヌス毒素および安定剤または賦形剤として適当な多糖を含むまたはそれらからなる医薬組成物である。
【００１９】
「ボツリヌス毒素」または「ボツリヌス神経毒」とは、クロストリジウム・ボツリヌム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）により生成された神経毒、ならびに非クロストリジウム種によりにより組み換えて作製されたボツリヌス毒素（またはその軽鎖もしくは重鎖）を意味する。本明細書では、語句「ボツリヌス毒素」は、それぞれの場合では、前述のうちいずれかの、ボツリヌス毒素血清型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、ＨおよびＸ、ならびにそれらのサブタイプ、モザイク毒素、例えば、ＢｏＮＴ／ＤＣおよびＢｏＮＴ／ＣＤ、ならびにそれらのサブタイプの任意の他のタイプ、または任意の再設計されたタンパク質、類似体、誘導体、相同体、部分、準部分、変異体またはバージョンを包含する。本明細書では、「ボツリヌス毒素」はまた、「改変ボツリヌス毒素」を包含する。本明細書では、さらなる「ボツリヌス毒素」はまた、ボツリヌス毒素複合体、（例えば、３００、６００および９００ｋＤａの複合体）、ならびに複合タンパク質と関連しないボツリヌス毒素（１５０ｋＤａ）の神経毒性構成成分を包含する。「精製されたボツリヌス毒素」とは、他のタンパク質および培養または発酵プロセスから得られるとき、ボツリヌス毒素に伴い得る不純物から、単離される、または実質的に単離される、純粋なボツリヌス毒素またはボツリヌス毒素複合体を意味する。したがって、精製されたボツリヌス毒素は、非ボツリヌス毒素タンパク質および不純物が少なくとも９５％、より好ましくは、少なくとも９９％除去され得る。
【００２０】
「クロストリジウム神経毒」は、クロストリジウム毒素が細胞を中毒させる全体的細胞機序を実行することができるクロストリジウム毒素株により産生された任意の毒素を意味し、低いまたは高い親和性のクロストリジウム毒素受容体へのクロストリジウム毒素の結合、毒素／受容体複合体の内部移行、細胞質へのクロストリジウム毒素軽鎖の転座およびクロストリジウム毒素基質の酵素的修飾を包含する。クロストリジウム毒素の限定されない例には、ボツリヌス毒素、例えば、ＢｏＮＴ／Ａ、ＢｏＮＴ／Ｂ、ＢｏＮＴ／Ｃ1、ＢｏＮＴ／Ｄ、ＢｏＮＴ／ＣＤ、ＢｏＮＴ／ＤＣ、ＢｏＮＴ／Ｅ、ＢｏＮＴ／Ｆ、ＢｏＮＴ／Ｇ、（ＦＡまたはＨＡタイプとしても公知の）ＢｏＮＴ／Ｈ、ＢｏＮＴ／Ｘ、破傷風毒素（ＴｅＮＴ）、バラティイ毒素（ＢａＮＴ：Ｂａｒａｔｉｉ  ｔｏｘｉｎ）、およびブチリカム毒素（ＢｕＮＴ：Ｂｕｔｙｒｉｃｕｍ  ｔｏｘｉｎ）が含まれる。ＢｏＮＴ／Ｃ2細胞毒およびＢｏＮＴ／Ｃ3細胞毒は、神経毒でなく、用語「クロストリジウム毒素」から除外される。用語クロストリジウム毒素はまた、単独で（すなわち、ＮＡＰｓを含まず）クロストリジウム毒素およそ１５０−ｋＤａを含む。クロストリジウム毒素には、天然に存在するクロストリジウム毒素変異体、例えば、クロストリジウム毒素アイソフォームおよびクロストリジウム毒素サブタイプ；天然に存在しないクロストリジウム毒素変異体、例えば、保存的クロストリジウム毒素変異体、非保存的クロストリジウム毒素変異体、クロストリジウム毒素キメラ変異体およびそれらの活性クロストリジウム毒素フラグメント、またはその任意の組合せが含まれる。クロストリジウム毒素はまた、クロストリジウム毒素複合体を含み、これは、クロストリジウム毒素および非毒素関連タンパク質（ＮＡＰｓ）を含む複合体、例えば、ボツリヌス毒素複合体、破傷風毒素複合体、バラティイ毒素複合体、およびブチリカム毒素複合体を意味する。クロストリジウム毒素複合体の限定されない例には、クロストリジウム・ボツリヌムにより産生されたもの、例えば、９００−ｋＤａ  ＢｏＮＴ／Ａ複合体、５００−ｋＤａ  ＢｏＮＴ／Ａ複合体、３００−ｋＤａ  ＢｏＮＴ／Ａ複合体、５００−ｋＤａ  ＢｏＮＴ／Ｂ複合体、５００−ｋＤａ  ＢｏＮＴ／Ｃ1複合体、５００−ｋＤａ  ＢｏＮＴ／Ｄ複合体、３００−ｋＤａ  ＢｏＮＴ／Ｄ複合体、３００−ｋＤａ  ＢｏＮＴ／Ｅ複合体、および３００−ｋＤａ  ＢｏＮＴ／Ｆ複合体が含まれる。
【００２１】
生物活性成分に適用される「有効な量」とは、対象における所望の変化を一般に十分に受ける成分の量を意味する。例えば、所望の効果が、瘢痕形成の減少である場合、成分の有効な量は、瘢痕形成の少なくとも実質的な減少をもたらし、重大な毒性をもたらさない量である。本実施形態の他の態様では、クロストリジウム毒素有効成分の治療有効濃度は、栄養物に伴う症候を軽減し、例えば、最大でも１０％、最大でも２０％、最大でも３０％、最大でも４０％、最大でも５０％、最大でも６０％、最大でも７０％、最大でも８０％、最大でも９０％または最大でも１００％まで治療される。
【００２２】
本明細書では、「速効性」は、例えば、ボツリヌス神経毒Ａ型、例えば、オナボツリナムトキシンＡにより産生されたものよりも速やかに患者に効果をもたらすボツリヌス毒素を意味する。例えば、速効性ボツリヌス毒素の効果は、１２時間、２４時間または３６時間以内に生じ得る。したがって、速効性毒素、例えば、Ｅ型などに比べ、ボツリヌス毒素Ａ型は、「よりゆっくり作用する」ボツリヌス毒素として分類することができる。いくつかの場合では、よりゆっくり作用するボツリヌス毒素は、「中時間作用性」毒素と称される。いくつかの実施形態では、速効性ボツリヌス毒素は、その投与後６時間、１２時間、２４時間または３６時間以内に測定可能な治療効果をもたらす、および／またはその効果は、オナボツリナムトキシンＡにより生じる治療効果よりも少なくとも約５０％早く観察される。
本明細書では、「高速回復の」とは、効果が、例えば、ボツリヌス神経毒Ａ型、例えば、オナボツリナムトキシンＡなどにより産生されたものよりも速やかに患者において減弱するボツリヌス毒素を意味する。いくつかの実施形態では、高速回復のボツリヌス毒素の治療効果は、その投与後約３カ月、２カ月または６週間以内に減弱し、その効果は、オナボツリナムトキシンＡにより生じた効果よりも約５０％早く減弱する。例えば、高速回復のボツリヌス毒素の効果は、例えば、１２０時間、１５０時間、３００時間、３５０時間、４００時間、５００時間、６００時間、７００時間、８００時間以内に減弱することができる。ボツリヌス毒素Ａ型は、１２カ月まで（European J. Neurology 6(Supp 4):S111-S1150:1999）、およびいくつかの状況では、例えば、多汗症（ｈｙｐｅｒｈｙｄｒｏｓｉｓ）の治療において、腺を治療するために用いられた場合、２７カ月もの間、有効性を有することができるということが知られている。例えば、Bushara K., Botulinum toxin and rhinorrhea, Otolaryngol Head Neck Surg 1996;114(3):507およびThe Laryngoscope 109:1344-1346:1999を参照のこと。しかしながら、ボツリヌス神経毒Ａ型の筋肉内注射の通常の期間は、一般に、約３〜４カ月である。したがって、高速回復の毒素、例えば、Ｅ型などに比べ、ボツリヌス毒素Ａ型、例えば、オナボツリナムトキシンＡなどは、「よりゆっくり回復する」または「長時間作用型」ボツリヌス毒素として分類することができる。
【００２３】
本明細書では、「中時間作用性」は、速効性毒素よりもゆっくりとした効果をもたらすボツリヌス毒素を意味する。
「局所投与」は、動物の身体でのまたは動物の身体上の部位の近くでのまたは動物の身体内での医薬品の直接投与を意味し、その部位で、医薬品の生物学的効果が、例えば、筋肉内または皮内もしくは皮下注射または局所投与によるものなどが望ましい。局所投与は、全身の投与経路、例えば、静脈内または経口投与などを除外する。局所投与は、医薬品が、患者に適用される局所投与のタイプである。
「神経毒」とは、神経細胞表面受容体への特異的な親和性を有する生物活性分子を意味する。神経毒には、純粋な毒素としてのおよび１種または複数の非毒素、毒素関連タンパク質と結合したものとしてのクロストリジウム毒素が含まれる。
【００２４】
「患者」とは、医療もしくは獣医学的ケアを受けるヒトまたは非ヒト対象を意味する。
「医薬組成物」とは、有効な医薬成分、例えば、クロストリジウム毒素有効成分、例えば、ボツリヌス毒素など、および少なくとも１種の追加の成分、例えば、安定剤または賦形剤などを含む組成物を意味する。したがって、医薬組成物は、対象、例えば、ヒトの患者などへの診断的または治療的投与に適している配合物である。医薬組成物は、例えば、凍結乾燥したまたは真空乾燥した状態で、凍結乾燥したまたは真空乾燥した医薬組成物の再溶解後に形成された溶液、または再溶解を要さない溶液または固体としてであり得る。記載した通り、医薬組成物は、液体または固体であり得る。医薬組成物は、動物−タンパク質がないものであり得る。
外科的部位を「準備する」とは、切開領域において筋張力を低下させるために、本明細書中に開示される組成物を投与することを意味する。
【００２５】
本明細書では、「補充の投与」は、初回の神経毒投与に続くボツリヌス投与を意味する。
「治療用配合物」とは、障害、または疾患および／またはそれに伴う症候、例えば、周辺の筋肉の活動により特徴付けられる障害または疾患を治療し、それにより緩和するために用いることができる配合物を意味する。
「治療有効濃度」、「治療有効量」、「有効な量」、「有効な投与量」および「治療上有効な投与量」とは、所望の治療効果を達成するのに必要な薬剤（例えば、ボツリヌス毒素またはボツリヌス毒素を含む医薬組成物）の最小投与量を意味し、重大なネガティブなまたは過度の副作用を引き起こさずに治療される疾患、障害または状態を伴う症候を軽減するのに十分な投与量が含まれる。
「治療する」、「治療している」、または「治療」とは、例えば、傷害されたまたは損傷した組織を治癒することにより、または既存のまたは知覚された疾患、障害もしくは状態を変更する、変化させる、促進する、改善する、軽快させるおよび／または美しくすることにより、所望の治療上のもしくは美容上の効果を達成するように、疾患、障害もしくは状態の緩和または軽減（これには、多少の軽減、かなりの軽減、ほぼ完全な軽減、および完全な軽減が含まれる）、回復、または予防（一時的にまたは恒久的に）を意味する。
【００２６】
「単位」または「Ｕ」とは、市販のボツリヌス神経毒Ａ型の単位として、等価な神経筋遮断効果を有することが標準化された活性ボツリヌス神経毒の量を意味する。
本明細書では、「創傷」とは、例えば、傷害によりまたは意図的に引き起こされる皮膚の破損を意味する。
本開示の代替の実施形態、要素、またはステップのグループ化は、限定と解釈されないものとする。各グループメンバーは、個別にまたは本明細書中に開示される他のグループメンバーとの任意の組合せで、参照し、特許請求することができる。一群の中の１つまたは複数のメンバーが、便宜および／または特許性の理由で、群に含まれても群から抹消されてもよいことが予想される。任意のかかる包含または抹消が生じる場合、本明細書は、改変された群を含むと考えられ、したがって、添付された特許請求の範囲において用いられるすべてのマーカッシュ群の書面による説明を満たす。
【００２７】
別段示されない限り、本明細書および特許請求の範囲において用いられる特徴、項目、物質量、パラメータ、特性、用語などを表すすべての数字は、用語「約」により、すべての場合において改変されると理解されるものとする。本明細書では、用語「約」とは、そのように認定された特徴、項目、物質量、パラメータ、特性、または用語が、記載された特徴、項目、物質量、パラメータ、特性、または用語の値を上回るまたは下回るプラスまたはマイナス１０パーセントの範囲を包含することを意味する。したがって、別に示されない限り、本明細書に記載のおよび特許請求の範囲に付随する数値的パラメータは、変わり得る近似である。少なくとも、および特許請求の範囲と等価な教義の適用を限定する試みとしてでなく、各数値的な指示は、報告された有意な桁の数に照らしておよび通常の切り捨て技法を適用することにより、少なくとも解釈されるべきである。本開示の広範な範囲に記載される数値的な範囲および値が、近似であるにもかかわらず、特定の例に記載の数値的な範囲および値は、可能な限り正確に記載される。しかしながら、任意の数値的な範囲または値は、本来、そのそれぞれの検査の測定値において見出される標準偏差により必然的に生じるいくつかの誤差を含む。本明細書中の値の数値的な範囲の列挙は、その範囲内に属する数値をそれぞれ分けるために個別に参照される簡潔な方法として役立つことを単に目的としている。本明細書中で別段示されない限り、数値的な範囲の各個々の値は、本明細書中で個別に列挙されたかのように、本明細書に組み込まれる。
【００２８】
用語「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」および本開示に記載されている文脈において（特に、以下の特許請求の範囲の文脈において）用いられる類似の対象は、本明細書中で別段示されない限りまたは文脈によって明らかに矛盾しない限り、単数形および複数形を包含するものと解釈されるものである。本明細書中に記載のすべての方法は、本明細書中で別段示されない限りまたは別段文脈によって明らかに矛盾しない限り、任意の適した順序で行うことができる。本明細書中で示される、任意のおよびすべての例、または模範的な言語（例えば、「など」）の使用は、本開示を単によりよく解明することを目的とし、別段主張された範囲で制限を課さない。本明細書中の言語は、本明細書中に開示される実施形態の実行に不可欠な任意の特許請求されない要素を示すものと解釈されるべきである。
【００２９】
神経毒組成物
本明細書中に開示される実施形態は、神経毒組成物、例えば、高速回復の神経毒を含む。かかる神経毒は、任意の薬学的に許容される形態で、任意の薬学的に許容される配合物中に配合することができる。神経毒は、任意の製造業者により供給される任意の薬学的に許容される形態において用いることもできる。
神経毒は、クロストリジウム細菌により、例えば、クロストリジウム・ボツリヌム、クロストリジウム・ブチリクム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｕｔｙｒｉｃｕｍ）、またはクロストリジウム・ベラッティ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｅｒａｔｔｉ）細菌などにより、作製することができる。さらに、神経毒は、改変された神経毒であり得；これは、自然のまたは野生型の神経毒と比較して、抹消された、改変されたまたは置き換えられたそのアミノ酸のうちの少なくとも１種を有する神経毒である。さらに、神経毒は、神経毒またはその誘導体またはフラグメントを組換えにより生成することができる。
【００３０】
図１は、ボツリヌス神経毒（ＢｏＮＴ）の１次構造を示す。図２Ａ〜２Ｄは、ＢｏＮＴ／Ｅ（図２Ａ、２Ｃ）およびＢｏＮＴ／Ｂ（図２Ｂ、２Ｄ）を示す略図およびリボン図である。触媒の、転座、および結合ドメインは、それぞれ、ＣＤ、ＴＤ、およびＢＤと標識される。
いくつかの実施形態では、開示されたボツリヌス神経毒Ｅ型（ＢｏＮＴ／Ｅ）組成物は、Ａ型と比較して、アミノ酸相同性が４０％であり、これらは、ジスルフィド結合により連結された、２本の鎖、１００ｋＤａ重鎖（ＨＣ）および５０ｋＤａ軽鎖（ＬＣ）からなる同じ基本的なドメイン構造を共有し、例えば、Whelan et al., The complete amino acid sequence of the Clostridium botulinum type-E neurotoxin, derived by nucleotide-sequence analysis of the encoding gene, Eur. J. Biochem. 204(2):657-667(1992)を参照のこと。ＨＣは、受容体結合ドメインおよび転座ドメインを含有し、ＬＣは、シナプトソーム関連タンパク質（ＳＮＡＰ）酵素活性を含有する。ドメイン構造は、すべてのボツリヌス神経毒血清型により共有される同じ構造である。
【００３１】
開示される実施形態では、神経毒は、単位剤形で配合され；例えば、これは、バイアル中の無菌溶液としてまたは適したビヒクル、例えば、注射用の生理食塩水などを再溶解するための凍結乾燥した粉末を含有するバイアルまたは小袋として提供することができる。
いくつかの実施形態では、ボツリヌス毒素は、生理食塩水および低温殺菌されたヒト血清アルブミンを含有する溶液中に配合され、これは、毒素を安定化させ、非特異的な吸着による損失を最小限にする。溶液は、無菌ろ過し（０．２μｍフィルター）、個別のバイアルに充てんし、次いで、真空乾燥して、無菌の凍結乾燥した粉末を得ることができる。使用において、粉末は、無菌の保存処理されていない通常の生理食塩水（注射用塩化ナトリウム０．９％）を加えることにより再溶解することができる。
一実施形態では、ボツリヌスＥ型は、５−ｍＬバイアルでｐＨ６．０で０．０３Ｍリン酸ナトリウム、０．１２Ｍ塩化ナトリウム、およびヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）１ｍｇ／ｍＬ中で名目上の濃度が２０ｎｇ／ｍＬである注射用無菌溶液中で供給される。別の実施形態では、ボツリヌスＥ型は、リン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、およびＨＳＡを含む液体配合物として提供される。さらなる別の実施形態では、ボツリヌスＥ型は、界面活性剤および二糖を含む凍結乾燥したまたは液体の配合物として供給される。
【００３２】
本組成物が、神経毒の単一タイプ、例えば、ボツリヌスＥ型のみを含有することができても、開示された組成物は、神経毒の２種以上のタイプを含むことができ、これによって、これらの障害の治療効果の促進をもたらすことができる。例えば、患者に投与される組成物は、ボツリヌスＡ型およびＥ型を含むことができる。２種の異なる神経毒を含有する単一の組成物の投与によって、神経毒のそれぞれの有効な濃度が、所望の治療効果をさらに達成しながら、単一の神経毒が、患者に投与される場合よりも低いことを可能にすることができる。患者に投与される組成物は、１種もしくは複数の神経毒と組み合わせて、他の薬学的に有効な成分、例えば、タンパク質受容体またはイオンチャンネルモジュレーターなどを含有することもできる。これらのモジュレーターは、様々なニューロン間の神経伝達の減少に寄与し得る。例えば、組成物は、ＧＡＢＡA受容体によって媒介される阻害効果を促進するγアミノ酪酸（ＧＡＢＡ）Ａ型受容体モジュレーターを含有することができる。ＧＡＢＡA受容体は、細胞膜にわたって、電流の流れを効率的に短絡することによりニューロン活動を阻害する。ＧＡＢＡA受容体モジュレーターは、ＧＡＢＡA受容体の阻害効果を増強し、ニューロンからの電気または化学シグナル伝達を減少させることができる。ＧＡＢＡA受容体モジュレーターの例には、ベンゾジアゼピン類、例えば、ジアゼパム、オキサクセパム（ｏｘａｘｅｐａｍ）、ロラゼパム、プラゼパム、アルプラゾラム、ハラゼパム（ｈａｌａｚｅａｐａｍ）、クロルジアゼポキシド（ｃｈｏｒｄｉａｚｅｐｏｘｉｄｅ）、およびクロラゼプ酸（ｃｈｌｏｒａｚｅｐａｔｅ）が含まれる。組成物は、グルタメート受容体により媒介される興奮効果を低下させるグルタメート受容体モジュレーターを含有することもできる。グルタメート受容体モジュレーターの例には、ＡＭＰＡ、ＮＭＤＡ、および／またはグルタメート受容体のカイニン酸タイプによって、電流束（ｃｕｒｒｅｎｔ  ｆｌｕｘ）を阻害する薬剤が含まれる。
【００３３】
治療の方法
本明細書中に開示される方法は、速効性神経毒の患者への投与を含むことができる。好ましい実施形態では、神経毒は、ボツリヌスＥ型である。
本明細書中に開示される方法は、速効性神経毒の患者への補充の投与を含むことができる。補充の投与を含む実施形態は、事前の神経毒投与の結果の医師または患者の評価をさらに含むことができる。
いくつかの実施形態では、速効性神経毒の投与は、外科手技前に行われる。いくつかの実施形態では、投与は、例えば、この手順前の６時間以内、この手順前の５時間以内、この手順前の４時間以内、この手順前の３時間以内、この手順前の２時間以内、この手順前の６０分以内、この手順前の５０分以内、この手順前の４０分以内、この手順前の３０分以内、この手順前の２０分以内、この手順前の１０分以内、この手順前の５分以内、この手順前の２分以内などに行われる。
【００３４】
代替の実施形態では、速効性神経毒の投与は、外科手技と同時に行われる。
他の実施形態では、速効性神経毒の投与は、外科手技後に行われる。例えば、投与は、この手順の後１分以内、この手順の後２分以内、この手順の後３分以内、この手順の後４分以内、この手順の後５分以内、この手順の後６分以内、この手順の後７分以内、この手順の後８分以内、この手順の後９分以内、この手順の後１０分以内、この手順の後２０分以内、この手順の後３０分以内、この手順の後４０分以内、この手順の後５０分以内、この手順の後６０分以内、この手順の後９０分以内、この手順の後１２０分以内、この手順の後１８０分以内、この手順の後２４０分以内、この手順の後３００分以内などに行うことができる。いくつかの他の実施形態では、投与は、この手順の後１〜３日以内に行うことができる。さらなる他の実施形態では、投与は、この手順の後３カ月以内に行うことができる。
【００３５】
補充の投与を含む実施形態では、初回の神経毒投与の結果の評価は、例えば、初回の投与の６時間、初回の投与の８時間、初回の投与の１０時間、初回の投与の１２時間、初回の投与の１４時間、初回の投与の１６時間、初回の投与の１８時間、初回の投与の２４時間、初回の投与の３０時間、初回の投与の３６時間、初回の投与の４２時間、初回の投与の４８時間、初回の投与の５４時間、初回の投与の６０時間、初回の投与の６６時間、初回の投与の７２時間、初回の投与の７８時間、初回の投与の８４時間、初回の投与の９０時間、初回の投与の９６時間、初回の投与の１０２時間、初回の投与の１０８時間、初回の投与の１１４時間、初回の投与の１２０時間、初回の投与の１週間、初回の投与の２週間、初回の投与の３週間、初回の投与の４週間、初回の投与の５週間、初回の投与の６週間、初回の投与の７週間、初回の投与の８週間、初回の投与の９週間、初回の投与の１０週間、初回の投与の１１週間、初回の投与の１２週間以内などに行うことができる。
補充の投与を含む実施形態では、補充の投与量の投与は、例えば、評価の６時間、評価の８時間、評価の１０時間、評価の１２時間、評価の１４時間、評価の１６時間、評価の１８時間、評価の２４時間、評価の３０時間、評価の３６時間、評価の４２時間、評価の４８時間、評価の５４時間、評価の６０時間、評価の６６時間、評価の７２時間、評価の７８時間、評価の８４時間、評価の９０時間、評価の９６時間、評価の１０２時間、評価の１０８時間、評価の１１４時間、評価の１２０時間、評価の１週間、評価の２週間、評価の３週間、評価の４週間、評価の５週間、評価の６週間、評価の７週間、評価の８週間、評価の９週間、評価の１０週間、評価の１１週間、評価の１２週間以内などに行うことができる。
【００３６】
いくつかの実施形態では、補充の投与自体は、例えば、速効性神経毒の初回の投与の６時間、初回の投与の８時間、初回の投与の１０時間、初回の投与の１２時間、初回の投与の１４時間、初回の投与の１６時間、初回の投与の１８時間、初回の投与の２４時間、初回の投与の３０時間、初回の投与の３６時間、初回の投与の４２時間、初回の投与の４８時間、初回の投与の５４時間、初回の投与の６０時間、初回の投与の６６時間、初回の投与の７２時間、初回の投与の７８時間、初回の投与の８４時間、初回の投与の９０時間、初回の投与の９６時間、初回の投与の１０２時間、初回の投与の１０８時間、初回の投与の１１４時間、初回の投与の１２０時間、初回の投与の１週間、初回の投与の２週間、初回の投与の３週間、初回の投与の４週間、初回の投与の５週間、初回の投与の６週間、初回の投与の７週間、初回の投与の８週間、初回の投与の９週間、初回の投与の１０週間、初回の投与の１１週間、初回の投与の１２週間、例えば、以内などに行うことができる。いくつかの実施形態では、補充の投与は、例えば、初回の投与の３〜６カ月、例えば、以内に行うことができる。いくつかの実施形態では、補充の投与は、初回の投与と同時に行うことができる。
【００３７】
本明細書中に開示される方法は、（例えば、速効性神経毒を用いて）速やかに開始する効果を提供することができる。例えば、開示される実施形態は、例えば、投与後３０分、投与後４５分、投与後６０分、投与後７５分、投与後９０分、投与後２時間、投与後３時間、投与後４時間、投与後５時間、投与後６時間、投与後７時間、投与後８時間、投与後９時間、投与後１０時間、投与後１１時間、投与後１２時間、投与後１３時間、投与後１４時間、投与後１５時間、投与後１６時間、投与後１７時間、投与後１８時間、投与後１９時間、投与後２０時間、投与後２１時間、投与後２２時間、投与後２３時間、投与後２４時間、投与後３０時間、投与後３６時間、投与後４２時間、投与後４８時間、投与後３日、投与後４日、投与後５日、投与後６日、投与後７日以内などに、外科的切開の近くで筋肉の活動を低下させることができる。
本明細書中に開示される方法は、（例えば、高速回復の神経毒を用いて）より短時間に、筋肉の活動の低下を提供することができる。例えば、開示される実施形態は、例えば、投与後３日、投与後４日、投与後５日、投与後６日、投与後７日、投与後８日、投与後９日、投与後１０日、投与後１１日、投与後１２日、投与後１３日、投与後１４日、投与後１５日、投与後１６日、投与後１７日、投与後１８日、投与後１９日、投与後２０日、投与後２１日、投与後２２日、投与後２３日、投与後２４日、投与後２５日、投与後２６日、投与後２７日、投与後２８日、投与後２９日、投与後３０日、投与後４５日、投与後６０日、投与後７５日、投与後９０日、投与後１０５日以内などに、鎮静する筋肉の活動の低下を提供することができる。
【００３８】
副作用は、ボツリヌス注射に伴うおそれがある。開示される実施形態は、慣習的な神経毒治療、例えば、長時間作用型神経毒、例えば、Ａ型などを用いた治療より、より少ない副作用または副作用の短縮期間をもたらす神経毒治療を提供することができる。
例えば、開示される実施形態は、複視またはかすみ目、眼瞼麻痺（対象は、全開で眼瞼を持ち上げることができない）、顔面筋の運動の喪失、嗄声、膀胱の制御の喪失、息切れ、嚥下困難、話しにくさ、死亡などのより少ない（またはより短時間）事例をもたらし得る。
開示された方法は、瘢痕を起こしやすい領域、例えば、外科的切開の近くの領域、または皮膚への任意の傷害、例えば、外傷性障害の近くの領域への投与を含む。開示される実施形態は、瘢痕を起こしやすい領域、例えば、骨格筋組織または平滑筋組織の近位の筋肉への投与を含む。
【００３９】
さらに、開示される実施形態は、さらにある期間の筋肉の活動の低下を提供することができる。例えば、長時間作用型神経毒によって、効果の期間中に２０％分散すると、有効な期間において１カ月の差をもたらすことができる。開示された高速回復の神経毒によって、この２０％の分散は、有効な期間においてそれほど大幅な差をもたらさない。
開示された速効性神経毒組成物は、針または無針デバイスを用いて個体に注射することができる。特定の実施形態では、本方法は、個体において本組成物を皮下注射するステップを含む。例えば、投与は、約３０ゲージ以下の針によって、本組成物を注射することを含むことができる。特定の実施形態では、本方法は、ボツリヌス毒素Ｅ型を含む組成物を投与するステップを含む。
これらの組成物の注射は、注射筒、カテーテル、針および注射のための他の手段により行うことができる。注射は、それだけには限らないが、顔、頸部、胴、腕、手、脚、および足を含めて、治療を必要とする哺乳動物の身体の任意の領域で行うことができる。注射は、特定の領域、例えば、表皮、真皮、脂肪、筋肉、または皮下層などにおいて任意の位置にすることができる。
【００４０】
例えば、開示された組成物の投与に適した骨格筋は、図３Ａ〜３Ｂ中に示された図解の、筋肉、または筋肉の組合せのうちのいずれかを含むことができる。
投与は、図４の概略図中に示される神経のうちの１つもしくは複数へのまたはその近傍への注射を含むことができる。
開示された組成物の投与に適した平滑筋は、血管壁、胃壁、尿管、腸、大動脈中（中膜層）、眼の虹彩、前立腺、胃腸管、気道、小動脈、細動脈、生殖器系（両方の性別）、静脈、腎臓の糸球体（メサンギウム細胞と呼ばれる）、膀胱、子宮、皮膚の立毛筋、毛様体筋、括約筋、気管、胆管などのうちのいずれかを含むことができる。
開示された方法下での注射の頻度および量は、治療される特定の領域の性質および場所に基づいて決定することができる。しかしながら、特定の場合では、繰り返される注射は、最適な結果を達成するために望ましいこともある。各特定の場合の注射の頻度および量は、当業者により決定することができる。
【００４１】
投与の経路および用量の例が提供されるが、適切な投与の経路および用量は、主治医により状況に応じて、一般に決定される。かかる決定は、当業者には日常的である（例えば、Harrison's Principles of Internal Medicine(1998), edited by Anthony Fauci et al., 14th edition, published by McGraw Hillにより出版、を参照のこと）。例えば、開示された本発明によるクロストリジウム神経毒の投与用の経路および用量は、診断基準、例えば、選ばれた神経毒の溶解度の特徴ならびに治療される状態の強度および範囲などに基づいて、選択することができる。
速効性神経毒は、約１０-3Ｕ／ｋｇ〜約３５Ｕ／ｋｇの間の量で投与することができる。一実施形態では、神経毒は、約１０-2Ｕ／ｋｇ〜約２５Ｕ／ｋｇの間の量で投与される。別の実施形態では、神経毒は、約１０-1Ｕ／ｋｇ〜約１５Ｕ／ｋｇの間の量で投与される。別の実施形態では、神経毒は、約１Ｕ／ｋｇ〜約１０Ｕ／ｋｇの間の量で投与される。多くの場合では、神経毒、例えば、ボツリヌスＥ型など約１単位〜約５００単位の投与は、有効な治療による緩和を提供する。一実施形態では、神経毒、例えば、ボツリヌスＥ型など約５単位〜約２００単位は、用いることができ、別の実施形態では、神経毒、例えば、ボツリヌスＥ型など約１０単位〜約１００単位は、標的組織、例えば、筋肉に局所投与することができる。
【００４２】
いくつかの実施形態では、投与は、神経毒約１０単位、または神経毒約２０単位、または神経毒約３０単位、または神経毒約４０単位、または神経毒約５０単位、または神経毒約６０単位、または神経毒約７０単位、または神経毒約８０単位、または神経毒約９０単位、または神経毒約１００単位、または神経毒約１１０単位、または神経毒約１２０単位、または神経毒約１３０単位、または神経毒約１４０単位、または神経毒約１５０単位、または神経毒約１６０単位、または神経毒約１７０単位、または神経毒約１８０単位、または神経毒約１９０単位、または神経毒約２００単位、または神経毒約２１０単位、または神経毒約２２０単位、または神経毒約２３０単位、または神経毒約２４０単位、または神経毒約２５０単位、または神経毒約２６０単位、または神神経毒約２７０単位、または神経毒約２８０単位、または神経毒約２９０単位、または神経毒約２９０単位、または神経毒約３００単位、または神経毒約３１０単位、または神経毒約３２０単位、または神経毒約３３０単位、または神経毒約３４０単位、または神経毒約３５０単位、または神経毒約３６０単位、または神経毒約３７０単位、または神経毒約３８０単位、または神経毒約３９０単位、または神経毒約４００単位、または神経毒約４１０単位、または神経毒約４２０単位、または神経毒約４３０単位、または神経毒約４４０単位、または神経毒約４５０単位、または神経毒約４６０単位、または神経毒約４７０単位、または神経毒約４８０単位、または神経毒約４９０単位、または神経毒約５００単位などの投与量を含むことができる。
【００４３】
いくつかの実施形態では、投与は、神経毒約０．１ナノグラム（ｎｇ）、神経毒０．２ｎｇ、神経毒０．３ｎｇ、神経毒０．４ｎｇ、神経毒０．５ｎｇ、神経毒０．６ｎｇ、神経毒０．７ｎｇ、神経毒０．８ｎｇ、神経毒０．９ｎｇ、神経毒１．０ｎｇ、神経毒１．１ｎｇ、神経毒１．２ｎｇ、神経毒１．３ｎｇ、神経毒１．４ｎｇ、神経毒１．５ｎｇ、神経毒１．６ｎｇ、神経毒１．７ｎｇ、神経毒１．８ｎｇ、神経毒１．９ｎｇ、神経毒２．０ｎｇ、神経毒２．１ｎｇ、神経毒２．２ｎｇ、神経毒２．３ｎｇ、神経毒２．４ｎｇ、神経毒２．５ｎｇ、神経毒２．６ｎｇ、神経毒２．７ｎｇ、神経毒２．８ｎｇ、神経毒２．９ｎｇ、神経毒３．０ｎｇ、神経毒３．１ｎｇ、神経毒３．２ｎｇ、神経毒３．３ｎｇ、神経毒３．４ｎｇ、神経毒３．５ｎｇ、神経毒３．６ｎｇ、神経毒３．７ｎｇ、神経毒３．８ｎｇ、神経毒３．９ｎｇ、神経毒４．０ｎｇ、神経毒４．１ｎｇ、神経毒４．２ｎｇ、神経毒４．３ｎｇ、神経毒４．４ｎｇ、神経毒４．５ｎｇ、神経毒５ｎｇ、神経毒６ｎｇ、神経毒７ｎｇ、神経毒８ｎｇ、神経毒９ｎｇ、神経毒１０ｎｇなどの投与量を含むことができる。
【００４４】
いくつかの実施形態では、投与は、神経毒約０．１ナノグラム（ｎｇ）〜神経毒２０ｎｇの間、神経毒約１ｎｇ〜神経毒１９ｎｇの間、神経毒約２ｎｇ〜神経毒１８ｎｇの間、神経毒約３ｎｇ〜神経毒１７ｎｇの間、神経毒約４ｎｇ〜神経毒１６ｎｇの間、神経毒約５ｎｇ〜神経毒１５ｎｇの間、神経毒約６ｎｇ〜神経毒１４ｎｇの間、神経毒約７ｎｇ〜神経毒１３ｎｇの間、神経毒約８ｎｇ〜神経毒１２ｎｇの間、神経毒約９ｎｇ〜神経毒１１ｎｇの間などの投与量を含むことができる。いくつかの実施形態では、投与は、神経毒約０．１ナノグラム（ｎｇ）、神経毒０．２ｎｇ、神経毒０．３ｎｇ、神経毒０．４ｎｇ、神経毒０．５ｎｇ、神経毒０．６ｎｇ、神経毒０．７ｎｇ、神経毒０．８ｎｇ、神経毒０．９ｎｇ、神経毒１．０ｎｇ、神経毒１．１ｎｇ、神経毒１．２ｎｇ、神経毒１．３ｎｇ、神経毒１．４ｎｇ、神経毒１．５ｎｇ、神経毒１．６ｎｇ、神経毒１．７ｎｇ、神経毒１．８ｎｇ、神経毒１．９ｎｇ、神経毒２．０ｎｇ、神経毒２．１ｎｇ、神経毒２．２ｎｇ、神経毒２．３ｎｇ、神経毒２．４ｎｇ、神経毒２．５ｎｇ、神経毒２．６ｎｇ、神経毒２．７ｎｇ、神経毒２．８ｎｇ、神経毒２．９ｎｇ、神経毒３．０ｎｇ、神経毒３．１ｎｇ、神経毒３．２ｎｇ、神経毒３．３ｎｇ、神経毒３．４ｎｇ、神経毒３．５ｎｇ、神経毒３．６ｎｇ、神経毒３．７ｎｇ、神経毒３．８ｎｇ、神経毒３．９ｎｇ、神経毒４．０ｎｇ、神経毒４．１ｎｇ、神経毒４．２ｎｇ、神経毒４．３ｎｇ、神経毒４．４ｎｇ、神経毒４．５ｎｇ、神経毒５ｎｇ、神経毒６ｎｇ、神経毒７ｎｇ、神経毒８ｎｇ、神経毒９ｎｇ、神経毒１０ｎｇなどの１回または複数回の注射を含むことができる。
【００４５】
いくつかの実施形態では、投与は、神経毒約０．１ナノグラム（ｎｇ）〜神経毒２０ｎｇの間、神経毒約１ｎｇ〜神経毒１９ｎｇの間、神経毒約２ｎｇ〜神経毒１８ｎｇの間、神経毒約３ｎｇ〜神経毒１７ｎｇの間、神経毒約４ｎｇ〜神経毒１６ｎｇの間、神経毒約５ｎｇ〜神経毒１５ｎｇの間、神経毒約６ｎｇ〜神経毒１４ｎｇの間、神経毒約７ｎｇ〜神経毒１３ｎｇの間、神経毒約８ｎｇ〜神経毒１２ｎｇの間、神経毒約９ｎｇ〜神経毒１１ｎｇの間などの１回または複数回の注射を含むことができる。
しかしながら、最終的に、投与される毒素の物質量およびその投与の頻度は、治療に責任がある医師の判断であり、安全性の問題および毒素によってもたらされる効果に相応しい。
いくつかの実施形態では、投与は、１回または複数回の注射、例えば、実質的に、切開部位または１つもしくは複数の切開ラインに沿った、注射を含むことができる。いくつかの実施形態では、投与は、特異的パターン、例えば、Ｗパターン、およびＸパターン、Ｚパターン、星パターン、円パターン、半円パターン、正方形パターン、長方形パターン、三日月パターン、またはそれらの組合せにおける注射を含むことができる。
【００４６】
試験は、ヒトにおけるＢｏＮＴ／Ｅの作用の開始、安全性および忍容性を評価するために、ＢｏＮＴ／Ｅが、眉間ラインの治療を行っているヒトの患者に投与された場合に行われた。本試験は、実施例１に記載される。ＢｏＮＴ／Ｅは、図５で例示される通り、５つの注射地点で、鼻根筋に投与される。ＢｏＮＴ／Ｅによって、早発性の作用を有する、ならびに好ましい安全性および忍容性プロファイルを有する眉間ラインの重症度の改善がもたらされる。
ＢｏＮＴ／Ｅが、基底細胞癌の外科治療を行っているヒトの患者に投与された場合、別の試験を行った。実施例５に記載される通り、前頭部上の基底細胞癌の単一の病変を除去するためのモース術について予定された、１２名のヒト対象を、治療群（ｎ＝８）およびプラセボ群（ｎ＝４）にランダム化した。両群の対象は、外科的部位の近くの前頭筋に単回筋肉内注射を投与され、治療群に、ＢｏＮＴ／Ｅの投与量を施行し、プラセボ群に、生理食塩水を施行した。本試験２日目に開始し（術後２４時間）、各対象を、ＶＡＳ、ＳＣＡＲおよびＰＯＳＡＳスケールを用いて評価した（実施例４を参照のこと）。対象を、試験の８、３０および９０日目に、様々なスケールを用いて再度評価した。結果を、図７Ａ〜７Ｃ中に示し、ｘ〜ｙ日目として示される各バーグラフ中のｘ−軸に沿った時点は、ｙ日〜ｘ日目に評価スコアの変化として算出される。
【００４７】
図７Ａは、２〜８日目、２〜３０日目および２〜９０日目に観察者によって評定された視覚的アナログスケール（ＶＡＳ）の平均変化を示すバーグラフである。ＶＡＳは、０〜１０の数値的スケールであり、０は、考え得る最悪の瘢痕であり、１０は、考え得る最良の瘢痕である。グラフ中、破線で塗りつぶされたバーは、モース術中に前頭筋において筋肉内にＢｏＮＴ／Ｅで治療された患者に対応し、オープンバー（塗りつぶしなし）は、生理食塩水で処置されたプラセボ群における患者に対応する。ＢｏＮＴ／Ｅで治療した対象は、ＢｏＮＴ／Ｅにより治療されなかった対象に比べ、外科的創傷治癒中の、急性瘢痕形成フェーズ中の２日目および３０日目に行われた評価のためのＶＡＳスコアに、より大きな平均変化があった。
患者および観察者の瘢痕評価スケール（ＰＯＳＡＳ）を用いて、患者は、２、８、３０および９０日目にこれらの瘢痕の色を評価した。色成分は、１〜１０のスケールであり、スコア１は、対象の正常な皮膚の色に対応し、スコア１０は、対象の正常な皮膚に比べ、瘢痕の「非常に異なる」色に対応する。図７Ｂ中のバーグラフによって、モース術中の前頭筋における筋肉内のＢｏＮＴ／Ｅの投与が、外科手術後の最初の３０日の間患者により観察された変色を改善することが示される。
【００４８】
本試験中の患者にやはり、ＰＯＳＡＳを用いて、創傷部位における組織のこわばりを評価した。１〜１０のスケールを用いて、スコア１は、対象の正常な皮膚のこわばりに対応し、スコア１０は、対象の正常な皮膚に比べ「非常に異なる」こわばりに対応し、患者は、２、８、３０および９０日目に評価した。図７Ｃは、２〜８日目、２〜３０日目および２〜９０日目の患者および観察者の瘢痕評価スケール（ＰＯＳＡＳ）を用いた、瘢痕評価の患者によって報告されたこわばりの構成要素の平均変化を示すバーグラフである。モース術中に前頭筋において筋肉内にＢｏＮＴ／Ｅで治療された患者（破線で塗りつぶされたバー）は、モース術の一部としてボツリヌス毒素で治療しなかった患者（プラセボ、オープンバー）と比較して、瘢痕の物理的特性の改善が報告された。
実施例５の試験における対象に、瘢痕に伴うかゆみおよび疼痛について質問した。対象に、２、８、３０および９０日に、以下のように尋ねた。「過去２４時間に瘢痕から来るかゆみに悩まされましたか？」２、８、３０および９０日目に対象にやはり尋ねた。「過去２４時間に瘢痕から来る疼痛に悩まされましたか？」。質問に肯定的に答えた対象の要約を、以下の表に示す。
【００４９】
かゆみに関して、質問に「はい」と答えた対象の数およびパーセント
【表１】
2021506985.tif 000002
疼痛に関して、質問に「はい」と答えた対象の数およびパーセント
【表２】
2021506985.tif 000003
【００５０】
ＢｏＮＴ／Ｅで治療した対象は、創傷生成の約２１日目、２５日目、または３０日目後まで、創傷生成後に開始する創傷治癒中の急性瘢痕形成フェーズの間の瘢痕に伴うかゆみの軽減および疼痛の軽減が報告された。したがって、一実施形態では、創傷の治癒に伴う瘢痕形成を最小化するおよび瘢痕の出現を改善する方法を、瘢痕に伴うかゆみおよび／または疼痛を軽減する方法と同時に行う。すなわち、ＢｏＮＴ／Ｅによる、創傷または創傷の基礎をなす筋肉の治療は、瘢痕の出現の改善をもたらし、瘢痕形成（もしくは創傷治癒）に伴うかゆみまたは疼痛を軽減する。一実施形態では、ＢｏＮＴ／Ｅの投与によって、ＢｏＮＴ／Ｅ治療を受けている患者の７５％またはそれ以上で、瘢痕を伴う２４〜４８時間のかゆみの感覚が軽減される。別の実施形態では、ＢｏＮＴ／Ｅの投与によって、ＢｏＮＴ／Ｅ治療を受けている患者の少なくとも約２５％または５０％で、創傷生成の２〜８日後または１週間後におよび創傷治癒中に疼痛が軽減される。
外科的創傷の写真を、本試験の１日目の外科手術前におよび２日目（外科手術の２４時間後）および３０日目および９０日目に撮影した。写真（本明細書中で示さない）によって、ＢｏＮＴ／Ｅで治療した対象が、ＢｏＮＴ／Ｅで治療されていない対象に比べ、３０日目および９０日目の瘢痕の発赤が少ないことが明らかである。
したがって、一態様では、創傷の瘢痕を最小化するための方法は、創傷の近くでボツリヌス神経毒Ｅ型毒素を投与することにより提供される。実施例５のデータにより証明される通り、創傷または創傷の近くの筋肉に投与されたＢｏＮＴ／Ｅは、プラセボに比べ瘢痕の出現のアウトカムを改善し、特に、創傷生成後の最初の週または創傷生成の１０日後の瘢痕形成の急性期中に、かゆみが軽減するおよび疼痛があまりないという追加の利点を得る。
【００５１】
別の態様では、創傷の瘢痕を最小化するための方法または瘢痕の出現を改善するための方法が提供される。本方法は、創傷生成前、創傷生成中または創傷生成後に、創傷にまたは創傷の近くでＢｏＮＴ／Ｅを投与するステップを含む。ＢｏＮＴ／Ｅの投与は、瘢痕の出現を改善するおよび／または瘢痕形成を最小化する、ＢｏＮＴ／Ｅ投与後２〜８日以内に瘢痕の変色をさらに改善する。一実施形態では、治療方法は、ＢｏＮＴ／Ｅによる治療の３０日、６０日または９０日後、瘢痕の発赤を軽減させる。別の実施形態では、治療方法は、ＢｏＮＴ／Ｅで治療されていない対象に比べ、治療後の最初の３０日の間瘢痕のこわばりを軽減する。
実施例５中の試験によって、その作用が、よりゆっくり作用する毒素よりも速やかな効果を有するように、速効性ＢｏＮＴ／Ｅが、創傷治癒中に利点を提供することが示される。瘢痕形成の生物学が開始される場合、創傷生成後の時間および日において創傷部位で存在する速効性毒素は、瘢痕の全体的な出現、その発赤およびこわばりの軽減ならびに疼痛およびかゆみの軽減における利点を示す。ＢｏＮＴ／Ｅは、創傷生成後、数分および数時間後に、さらに、ＢｏＮＴ／Ｅが創傷生成前に投与される場合は創傷生成前に、創傷の近くで、筋肉を鎮め、または本質的に麻痺させる早発性の作用を提供する。短期間のＢｏＮＴ／Ｅは、創傷治癒プロセスが、およそ数週間から１カ月であると有利であり、これは、ＢｏＮＴ／Ｅの効果の期間と相関する。
【００５２】
一実施形態では、瘢痕を最小限にするまたは既存の瘢痕上に生成した創傷上に形成される瘢痕の瘢痕出現を改善することが考えられる。例えば、以前の外科手技として同じもしくは類似の部位における第２の外科手技を有する対象は、以前の外科手術による既存の瘢痕と重複する部位で生成した外科的創傷を有する。既存の瘢痕上に形成された瘢痕は、皮膚上に形成される瘢痕よりもさらなる変色および／または発赤を示し得る。本明細書中の治療方法は、既存の瘢痕と部分的にまたは本質的に完全に重複する部位にある創傷を有する患者の場合に考えられる。
制御放出系は、本明細書中に記載の実施形態において用いて、ある特定の期間にわたって予定された速度でｉｎ  ｖｉｖｏで神経毒を送達することができる。一般に、放出速度は、その系の設計により決定され、環境条件、例えば、ｐＨなどとほとんど無関係であり得る。数年間にわたって、薬物を送達することができる制御放出系は、公知である。これに反して、徐放系は、一般的には、２４時間以下で薬物を送達し、環境因子は、放出速度に影響を与え得る。したがって、植込み型制御放出系（「インプラント」）からの神経毒の放出速度は、担体インプラント材料および薬物自体の生理化学特性の一機能である。一般的には、インプラントは、宿主応答をほとんどまたはまったく誘発しない不活性材料から作られる。
【００５３】
制御放出系は、担体に取り込まれた神経毒を含み得る。担体は、ポリマーでもバイオセラミック材料でもよい。制御放出系は、患者の身体の選択された場所に注射する、挿入するまたは移植することができ、所望の治療有効性をもたらす様式および濃度で、神経毒が、インプラントにより放出される長い期間、そこに存在している。
ポリマー材料は、拡散、化学反応または溶媒活性化により、ならびに磁性、超音波または温度変化因子による影響において、神経毒を放出することができる。拡散は、リザーバーまたはマトリックスからであり得る。化学的制御は、ポリマーからの薬物のポリマー分解または切断によることもある。ポリマーの膨潤または浸透圧効果は、溶媒活性化に関与し得る。
インプラントは、安定化させた神経毒の所望の量を、塩化メチレンに溶解した適当なポリマーの溶液に混合することにより調製することができる。溶液は、室温で調製することができる。次いで、溶液を、ペトリ皿に移し、真空乾燥器中で、塩化メチレンを蒸発させることができる。所望のインプラントサイズ、したがって、取り込まれた神経毒の量に応じて、乾燥した神経毒を取り込んでいるインプラントの適当な量を、金型中で約８０００ｐ．ｓ．ｉで５秒間または３０００ｐ．ｓ．ｉ．で１７秒間加圧して、神経毒を封入しているインプラントディスクを形成させる。
【００５４】
好ましくは、用いられるインプラント材料は、実質的に、非毒性、非癌原性、および非免疫原性である。適当なインプラント材料には、ポリマー、例えば、ポリ（メタクリル酸２−ヒドロキシエチル）（ｐ−ＨＥＭＡ）、ポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）（ｐ−ＮＶＰ）＋、ポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ）、ポリ（アクリル酸）（ＰＭ）、ポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）、エチレン−酢酸ビニル（ＥＶＡｃ）コポリマー、ポリビニルピロリドン／メチルアクリレートコポリマー、ポリメタクリル酸メチル（ＰＭＭＡ）、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、ポリ酸無水物、ポリ（オルトエステル）、コラーゲンおよびセルロース誘導体およびバイオセラミックス、例えば、ヒドロキシアパタイト（ＨＰＡ）、リン酸三カルシウム（ＴＣＰ）、およびリン酸アリミノカルシウム（ＡＬＣＡＰ）が含まれる。乳酸、グリコール酸およびコラーゲンを用いて、生分解性インプラントを作製することができる。
【００５５】
インプラント材料は、生分解性でも生体内分解性でもよい。生体内分解性インプラントの有利な点は、患者から除去する必要がないことである。生体内分解性インプラントは、生物活性物質の膜またはマトリックス放出に基づくことができる。ＰＬＡ−ＰＧＡから調製される生分解性ミクロスフェアは、皮下または筋肉内投与用に公知である。
開示される実施形態を実行するためのキットはまた、本開示により包含される。本キットは、３０ゲージまたはより小型の針または対応する注射筒を備えることができる。本キットはまた、クロストリジウム神経毒組成物、例えば、ボツリヌスＥ型毒素組成物などを含む。神経毒組成物は、注射筒中で提供することができる。本組成物は、針を通して注射可能である。これらのキットは、注射筒および針のサイズならびにその中に含有する注射可能な組成物の体積に基づいた様々な形態で設計され、特定の欠如に基づき、これらのキットは治療するために設計される。
【実施例】
【００５６】
次の限定されない例は、代表的な実施形態のより完全な理解を容易にするために、例示的な目的のみに提供される。本実施例は、本明細書中に記載される実施形態のうちいかなるものをも限定すると解釈されるべきではない。
（実施例１）
眉間ラインを治療するためのボツリヌス毒素Ｅ型の使用
ヒトにおけるランダム化、二重盲検、プラセボ対照、漸増投与コホート、第２ａ相試験を実施して、眉間皺線を有する対象における開示された速効性Ｅ型組成物の単一治療サイクルの安全性および有効性を評価した。本試験を、本プロトコールおよび適用可能なすべての連邦規程および州規定に従って実施した。組成物は、ボツリヌス神経毒サブタイプＥ（ＢｏＮＴ／Ｅ、「ＥＢ−００１」）から構成される。
全投与量を、５回の注射に分け；図５に示される通り、正中線で鼻根筋に１回の注射ならびに両側的に中央のおよび側方の皺筋のそれぞれに単回の注射を行った。全投与量は、次の通りである。
【表３】
2021506985.tif 000004
各対象は、５回の注射を受け、部位当たり注射される体積は、０．１ｍＬであった。側方の皺筋への注射のスペーシングは、潜在的な下垂症を最小限にすることが知られる、眼窩上縁の上の１センチメートルまたは約１センチメートルであった。
【００５７】
（実施例２）
眉毛の持ち上げのためのボツリヌス毒素Ｅ型の使用
６０歳の女性は、眉骨（ｂｒｏｗ  ｂｏｎｅ）の下に伸びている眉毛を示す。医師は、本明細書中に開示される組成物を推奨し、これを、各眼の上に皮下に注射する。各注射部位に、Ｅ型ボツリヌス毒素約１０単位を投与し、眼の両側に数回注射をした。眉の垂下を、約２日以内に軽減し、投与の３カ月後に実質的に緩和する。
【００５８】
（実施例３）
豊胸術のためのボツリヌス毒素Ｅ型の使用
３０歳女性は、豊胸手術を選択する。この手順の４時間前に、ボツリヌス毒素Ｅ型を、外科的切開される場所の近くに投与する。投与によって、切開の領域における筋張力が低下し、最小限の瘢痕をもたらす。この手順の２週間後、補充の投与量を投与する。
【００５９】
（実施例４）
モース術後に瘢痕を減少させるためのボツリヌス毒素Ｅ型の使用
４４歳女性を、前頭部領域における皮膚がん、特に、基底細胞癌（ＢＣＣ’ｓ）と診断する。ＢＣＣ’ｓ以外に、患者は、良好な健康状態であり、妊娠しておらず、妊娠の予定はなく、または授乳中でない。患者はまた、神経筋接合部（重症筋無力症、イートン・ランバート症候群、または筋萎縮性側索硬化症）の既存の障害がない。患者は、モース手順前の過去３０日に、いかなる美容上の手順、レーザーにより肌表面を直す治療（ｌａｓｅｒ  ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）、または前頭部領域におけるレチノイド療法も行っていない。患者は、ベースラインで眉もしくは眼瞼の下垂症を有さず、肥厚性瘢痕またはケロイド形成または患者の医師により評価された他の創傷の異常のいかなる病歴もない。
患者は、タバコを用いず、一切使ったこともなく、体重は、１４０ポンドである。
患者は、モース術を行うことを選択する。モース術の目標は、周囲の健康な組織への損傷を最小限にしながら、可能な限り、多くの皮膚がんを取り除くことである。モース術は、局所麻酔薬を用いて外来患者ベースで通常行う。
皮膚がんの根は、腫瘍の可視化部分を超えて伸展するおそれがある。これらの根が除去されない場合、がんは、再発する。モース手順は、可視化病変を検査し、どの組織を除去するか計画するＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｍｏｈｓ  Ｓｕｒｇｅｒｙ（ＡＣＭＳ）の専門医と共に開始する。次いで、患者は、局所麻酔を受け、この手順を始める。
【００６０】
この手順は、１回の来診ですべて段階的に行われ、患者は、各段階の間待つ。組織の層を除去した後、外科医は、現地の検査室内で顕微鏡下でそれを検査する。技術者の助けによって、外科医は、次いで、これらの切片のそれぞれを色素で色分けし、皮膚に参照用マークを付けて、切片の発生源を示す。次いで、組織がそれぞれ少量ずつ由来する場合、外科的部位のマップは、正確に追跡されて描画される。任意のがん細胞が残存する場合、外科医は、可能な限り多くの健康な組織を残しながら、その正確な場所から組織の別の層を除去する。検査室では、外科医は、顕微鏡を用いて、残存するがんの証拠を探して、組織の各切片の底面および端を検査する。外科医が、顕微鏡下でがん細胞を見出す場合、外科医は、「マップ」上のそれらの場所にマークを付け、患者に戻って、皮膚の別のより深い層を除去するが、がん細胞が由来するところからのみ正確に除去する。本方法は、モース術によって、考え得る最小の瘢痕になることを保証する。
医師は、がん細胞が残存しなくなるまで、本プロセスを繰り返す。
【００６１】
外科手術後、患者の前頭部における２ｃｍの単一の瘢痕を、名目上の濃度０．０３Ｍリン酸ナトリウム、０．１２Ｍ塩化ナトリウム、およびヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）１ｍｇ／ｍＬ中のＢｏＮＴ／Ｅ１９．１ｎｇ／ｍＬ（ｐＨ６．０）を含む５−ｍＬバイアルで注射用無菌溶液として供給されるボツリヌス毒素Ｅ型で治療する。ＢｏＮＴ／Ｅの全投与量は、２．８ｎｇであり、前頭筋に２列（反転したＷパターン；図６を参照のこと）の５カ所の注射部位に分けた。前頭筋への注射のための注射の深さは、皮下出血の可能性を最小限にしながら、表在の前頭筋組織に影響を与えるために、皮下レベルまでである。針を、注射中上方におよび側方に置き、針先を３０°の角度に傾けて投与する。
フォローアップ来診を、２、８、３０、および９０日目に予定する。１日目の外科手術前の間（投薬前に）、１日目の外科手術後、ならびに２、８、３０日目（ＥＴ）、および９０日目（ＥＯＳ）、標準化された顔写真を、本試験マニュアル中の指示ごとに撮影する。
フォローアップ来診には、次が含まれる。
ａ．視覚的アナログスケール（ＶＡＳ）を用いた瘢痕評価
ｂ．瘢痕美容術評価および評価スケール（ＳＣＡＲＳ）
ｃ．患者および観察者の瘢痕評価スケール（ＰＯＳＡＳ）
ｄ．顔面皺尺度（ＦＷＳ−ＩＡ：Ｆａｃｉａｌ  ｗｒｉｎｋｌｅ  ｓｃａｌｅ）を用いた、最大限の努力時および安静時の前頭部ラインの観察者の評価
【００６２】
ＶＡＳは、固定長（１０ｃｍ）の直線の水平線を用いて、最悪から最良まで瘢痕の出現を評価する。これらの末端を、左（最悪）から右（最良）まで置かれた瘢痕の出現の極限として定義する。評価者は、瘢痕の出現を示すラインに印を付ける。
ＳＣＡＲＳは、０（考え得る最良の瘢痕）から１５（考え得る最悪の瘢痕）までに及ぶ全患者および観察者のスコアを用いた、術後ケア（ｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ  ｓｃａｒｅ）美容術を評価する（Kantor, Reliability and Photographic Equivalency of the Scar Cosmesis Assessment and Rating(SCAR)Scale, an Outcome Measure for Postoperative Scars, JAMA Dermatol. 153(1):55-60, 2017）。ＳＣＡＲスケールのスコア付けは、観察者６名によってスコアされる項目および患者２名によってスコアされる項目に基づいている。
ＰＯＳＡＳは、疼痛およびそう痒の自覚的な症候を含み、バンクーバー瘢痕スケール（ＶＳＳ）によって得られた客観的データを拡大する。ＰＯＳＡＳは、２つの数値的な数値スケール、すなわち、患者の瘢痕評価スケールおよび観察者の瘢痕評価スケールからなる。ＰＯＳＡＳは、血管分布、色素沈着、厚さ、緩和、柔軟性、および表面領域を評価し、これに、疼痛、かゆみ、呈色、こわばり、厚さ、および緩和の患者の評価が組み込まれる（Draaijers et al., The patient and observer scar assessment scale:a reliable and feasible tool for scar evaluation, Plast Reconstr. Surg. 113(7):1960-1965, 2004）。ＰＯＳＡＳは、疼痛およびそう痒の自覚的な症候を考慮する唯一の尺度であるが、他のスケールのように、これは、疼痛またはそう痒が、生活の質を妨げるかどうかに関して、機能的な測定をやはり欠いている。線形回帰分析によって、観察者の意見が、血管新生化、厚さ、色素沈着、および緩和により影響され、患者の意見が、そう痒および瘢痕の厚さにより、主に影響されることが実証されている。ＰＯＳＡＳは、術後瘢痕に適用され、乳がんの外科手術後の線形の瘢痕の評価に用いられ、患者の評点を得る追加の利点を有するＶＳＳと比較した場合、内的一貫性および観察者間の信頼性が実証されている。
【００６３】
ＦＷＳ−ＩＡは、次の通り前頭部ラインの重症度を示す４点スケールである。０＝なし、１＝軽度、２＝中等度、または３＝重度。観察者の評価に基づいて、ＦＷＳ−ＩＡは、最大の上昇時におよび安静時に評価される。
毒素（ＳＯＴ）効果の拡散は、フォローアップ来診で示されない。
【００６４】
（実施例５）
瘢痕を最小限にするおよび瘢痕の出現を改善するためのボツリヌス毒素Ｅ型の使用
５８〜７５歳の間のおよび前頭部上の基底細胞癌の単一の病変を除去するためにモース術が予定されるヒト対象１２名を、治療群（ｎ＝８）およびプラセボ群（ｎ＝４）にランダム化した。両群の対象に、外科的部位の近くの前頭筋に単回筋肉内注射を投与し、治療群に、ＢｏＮＴ／Ｅの投与量を施行し、プラセボ群に、生理食塩水を施行した。対象および試験スタッフを盲検化し；スポンサーを、非盲検化した。下記の表に、対象の人口統計をまとめる。
【００６５】
【表４】
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【００６６】
試験１日目に、対象を、外科手技のために入院させ、プラセボまたはＢｏＮＴ／Ｅを、筋肉内注射によって投与した。外科手術を行って、癌を除去し、創傷（長さ約２ｃｍ）を閉じた。試験２日目に、外科手術の２４時間後、各対象を、ＶＡＳ、ＳＣＡＲおよびＰＯＳＡＳスケールを用いて評価した（実施例４を参照のこと）。８日目に、対象を、様々なスケールを用いて再度評価し、外側縫合を除去した。３０日目および９０日目に、対象を、様々なスケールを用いて再度評価し、本試験を、９０日目に正式に結論付けた。結果を、図７Ａ〜７Ｃに示す。
【００６７】
結びに、本明細書の態様が、ある特定の実施形態を参照することにより重要とされるが、当業者は、これらの開示された実施形態が、本明細書中に開示される主題の原理を例示しているに過ぎないことを容易にわかるということが理解されよう。したがって、開示された主題が、本明細書中に記載の、ある特定の方法論、プロトコール、および／または試薬などをまったく限定しないということを理解すべきである。したがって、開示された主題の様々な修正または開示された主題への様々な変更または開示された主題の改変の構成は、本明細書の精神から逸脱することなく、本明細書中の教示に従ってなされ得る。最後に、本明細書中で用いられる用語は、記載されている詳細な実施形態の目的のために過ぎず、本開示の範囲を制限することを意図しておらず、これは、特許請求の範囲により単に定義される。したがって、本開示の実施形態は、示され記載される通り正確にこれらに限定されない。
【００６８】
特定の実施形態は、本明細書中で記載され、本明細書中に記載の方法およびデバイスを実施するための、発明者に公知のベストモードを含む。もちろん、記載されたこれらの実施形態に関する変形形態は、前述の説明を読んだ後、当業者に明らかになる。したがって、本開示は、適用法規により定められた通り、ここに添付した特許請求の範囲に列挙された主題のすべての修正形態および相当物を含む。さらに、それらのすべての考え得る変形形態における上記実施形態の任意の組合せは、本明細書中で別段示されない限りまたは別段文脈によって明らかに矛盾しない限り、開示により包含される。本明細書中に開示される詳細な実施形態は、言語からなるまたは本質的に言語からなるものを用いて、特許請求の範囲においてさらに限定することができる。特許請求の範囲において用いられる場合、補正ごとに出願したまたは追加した通りか否か、移行句「からなる」は、特許請求の範囲に指定されない任意の要素、ステップ、または成分を除外する。移行句「本質的にからなる」は、指定された材料またはステップならびに基本的なおよび新規な特徴に実質的に影響を及ぼさないものに特許請求の範囲を限定する。そのように特許請求する本開示の実施形態は、本来的にまたは明確に記載され、本明細書中で可能になる。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【国際調査報告】
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