(57)【要約】【課題】  美白製品の調製におけるカンナビジオールまたは大麻抽出物の用途を提供することを課題とする。【解決手段】  本発明は、医薬と生活化学製品の分野に属し、特に、美白製品の調製におけるカンナビジオールまたは大麻抽出物の用途に関する。具体的に、チロシナーゼ活性を阻害するか、メラニン産生を阻害するか、またはメラノサイト生成を阻害する医薬品あるいは試薬の調製における、以下の（１）〜（２）より選択されるいずれか１つの用途に関し、すなわち（１）カンナビジオールまたはその薬学的に許容される塩あるいはエステル；（２）カンナビジオールを含有する植物抽出物。カンナビジオールまたは大麻抽出物は、チロシナーゼの活性を効果的に阻害でき、良好な皮膚美白効果を有する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
チロシナーゼ活性を阻害するか、メラニン産生を阻害するか、またはメラノサイト生成
を阻害する医薬品あるいは試薬の調製における、以下の（１）〜（２）より選択されるい
ずれか１つの用途：
（１）カンナビジオールまたはその薬学的に許容される塩あるいはエステル
（２）カンナビジオールを含有する植物抽出物；好ましくは、カンナビジオールを含有
する大麻抽出物；好ましくは、カンナビジオールを含有する産業用大麻抽出物。
【請求項２】
前記メラニンは、ユーメラニンである、請求項１に記載の用途。
【請求項３】
前記カンナビジオールを含有する植物抽出物内のカンナビジオールの含有量は、１０％
〜９９％、２０％〜９５％、３０％〜９５％または４０％〜９５％である、請求項１に記
載の用途。
【請求項４】
皮膚美白製品の調製における、以下の（１）〜（２）より選択されるいずれか１つの用
途：
（１）カンナビジオールまたはその薬学的に許容される塩あるいはエステル
（２）カンナビジオールを含有する植物抽出物；好ましくは、カンナビジオールを含有
する大麻抽出物；好ましくは、カンナビジオールを含有する産業用大麻抽出物。
【請求項５】
前記カンナビジオールを含有する植物抽出物内のカンナビジオールの含有量は、１０％
〜９９％、２０％〜９５％、３０％〜９５％または４０％〜９５％である、請求項４に記
載の用途。
【請求項６】
前記皮膚美白製品は、組成物であり；好ましくは、前記組成物は、クリーム、エマルシ
ョン、スプレー剤、ゲル剤あるいはパッチ剤である、請求項４に記載の用途。
【請求項７】
（１）カンナビジオールまたはその薬学的に許容される塩あるいはエステル
（２）カンナビジオールを含有する植物抽出物；好ましくは、カンナビジオールを含有
する大麻抽出物；好ましくは、カンナビジオールを含有する産業用大麻抽出物
有効量は、上記の（１）〜（２）より選択されるいずれか１種を含み、
好ましくは、１種以上の薬学的または生理学的に許容されるアジュバントをさらに含む
、
皮膚美白製品。
【請求項８】
前記カンナビジオールを含有する植物抽出物内のカンナビジオールの含有量は、１０％
〜９９％、２０％〜９５％、３０％〜９５％または４０％〜９５％である、請求項７に記
載の皮膚美白製品。
【請求項９】
組成物であり；好ましくは、前記組成物は、クリーム、エマルション、スプレー剤、ゲ
ル剤あるいはパッチ剤である、請求項７に記載の皮膚美白製品。
【請求項１０】
個別に包装された、請求項７〜９のいずれか一項に記載の皮膚美白製品を含む、皮膚美
白製品キット。
【請求項１１】
（１）カンナビジオールまたはその薬学的に許容される塩あるいはエステル
（２）カンナビジオールを含有する植物抽出物；好ましくは、カンナビジオールを含有
する大麻抽出物；好ましくは、カンナビジオールを含有する産業用大麻抽出物
ニーズのある被験者あるいは細胞に上記の（１）〜（２）より選択されるいずれかの有
効量を投与するステップを含む、インビボまたはインビトロでチロシナーゼの活性を阻害
、メラニン産生の阻害あるいはメラノサイト生成を阻害する方法。
【請求項１２】
前記メラニンは、ユーメラニンである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記カンナビジオールを含有する植物抽出物内のカンナビジオールの含有量は、１０％
〜９９％、２０％〜９５％、３０％〜９５％または４０％〜９５％である、請求項１１に
記載の方法。
【請求項１４】
（１）カンナビジオールまたはその薬学的に許容される塩あるいはエステル
（２）カンナビジオールを含有する植物抽出物；好ましくは、カンナビジオールを含有
する大麻抽出物；好ましくは、カンナビジオールを含有する産業用大麻抽出物
ニーズのある被験者に上記の（１）〜（２）より選択されるいずれかの有効量を投与す
るステップを含む、皮膚美白方法。
【請求項１５】
前記カンナビジオールを含有する植物抽出物内のカンナビジオールの含有量は、１０％
〜９９％、２０％〜９５％、３０％〜９５％または４０％〜９５％である、請求項１４に
記載の方法。
【請求項１６】
チロシナーゼ活性の阻害、メラニン産生の阻害、メラノサイト生成の阻害または皮膚美
白に使用される、カンナビジオールまたはその薬学的に許容される塩あるいはエステル、
もしくはカンナビジオールを含有する植物抽出物。
【請求項１７】
前記メラニンは、ユーメラニンである、請求項１６に記載のカンナビジオールまたはそ
の薬学的に許容される塩あるいはエステル、もしくはカンナビジオールを含有する植物抽
出物。
【請求項１８】
前記カンナビジオールを含有する植物抽出物内のカンナビジオールの含有量は、１０％
〜９９％、２０％〜９５％、３０％〜９５％または４０％〜９５％である、請求項１６に
記載のカンナビジオールまたはその薬学的に許容される塩あるいはエステル、もしくはカ
ンナビジオールを含有する植物抽出物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬と生活化学製品の分野に属し、特に、美白製品の調製におけるカンナビ
ジオールまたは大麻抽出物の用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
メラノサイトは、皮膚の重要な細胞の１つであり、樹状突起が見られる。メラノサイト
は、メラニンの合成を通じて皮膚の色を形成する。皮膚の色の違いは、メラノサイトによ
って合成されるメラニンの量の違いで決まる。メラニンは、生体高分子の色素であり、主
に：ユーメラニン（「真性メラニン」も呼ばれる。）およびフェオメラニンという２つの
キノンポリマーで構成されている。ユーメラニンは、主な色素である。
【０００３】
生化学の観点からみると、チロシンは、メラニンを作る主要原料であり；チロシナーゼ
（ＥＣ１．４．１８．１）は、チロシンをメラニンに変換する主な律速酵素であり、この
酵素の活性の強さがメラニン産生量を決定する。チロシンは、高価の銅イオン（Ｃｕ２＋
）を含有するチロシナーゼの作用下で酸化して３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン（
ＤＯＰＡ）を生成し、次に、チロシナーゼによって酸化されてドーパキノンになり、さら
に酸化されて５，６−ジヒドロキシインドールになり、重合後にユーメラニン（真性メラ
ニン）を生成する。メラニンの合成において、ドーパキノンは別の経路でフェオメラニン
も生成できる。
【０００４】
チロシナーゼは、メラニン（ｍｅｌａｎｉｎ）の生成過程中の主要な律速酵素であり、
所望の美白効果を達成するため、チロシナーゼの阻害が特に重要になる。
【０００５】
カンナビジオール（Ｃａｎｎａｂｉｄｉｏｌ、ＣＢＤ）は、カンナビノイドの中の１つ
の物質であり、通常天然植物の大麻から抽出されている。カンナビジオールは、精神作用
がなく、不安、うつ病、痙攣および腫瘤等に対して治療効果がある。その構造式は、次の
式Ｉで表される。
【０００６】
【化１】
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（式Ｉ）
【０００７】
現在、新しいチロシナーゼ阻害剤および美白製品を開発する必要がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明者は、鋭意研究および創造性の活動を経て、カンナビジオールまたは大麻抽出物
（特に、大麻葉抽出物）がチロシナーゼの活性を効果的に阻害できることを発見して驚い
た。本発明者は、さらに、カンナビジオールまたは、大麻抽出物（特に、大麻葉抽出物）
が良好な皮膚の美白効果を有することを見出した。これにより、以下の発明を提案する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の一側面は、チロシナーゼ活性を阻害するか、メラニン産生を阻害するか、また
はメラノサイト生成を阻害する医薬品あるいは試薬の調製における、以下の（１）〜（２
）より選択されるいずれか１つの用途に関する。
（１）カンナビジオールまたはその薬学的に許容される塩あるいはエステル；
（２）カンナビジオールを含有する植物抽出物；好ましくは、カンナビジオールを含有
する大麻抽出物；好ましくは、カンナビジオールを含有する産業用大麻抽出物。
【００１０】
本発明のいくつかの実施形態において、前記メラニンは、ユーメラニンである。
【００１１】
本発明のいくつかの実施形態において、前記カンナビジオールを含有する植物抽出物内
のカンナビジオールの含有量は、１０％〜９９％、２０％〜９５％、３０％〜９５％また
は４０％〜９５％である。
【００１２】
前記カンナビジオールまたはカンナビジオールを含有する植物抽出物は、当技術分野で
公知の方法を参照して調製することができ、あるいは商業的に入手することができる。前
記大麻抽出物も本発明の調製例１〜２を参照することによって調製することができる。
【００１３】
本発明の別側面は、皮膚美白製品の調製における、以下の（１）〜（２）より選択され
るいずれか１つの用途に関する。
（１）カンナビジオールまたはその薬学的に許容される塩あるいはエステル；
（２）カンナビジオールを含有する植物抽出物；好ましくは、カンナビジオールを含有
する大麻抽出物；好ましくは、カンナビジオールを含有する産業用大麻抽出物。
【００１４】
本発明のいくつかの実施形態において、前記カンナビジオールを含有する植物抽出物内
のカンナビジオールの含有量は、１０％〜９９％、２０％〜９５％、３０％〜９５％また
は４０％〜９５％である。
【００１５】
本発明のいくつかの実施形態において、前記皮膚美白製品は、組成物であり；好ましく
は、前記組成物は、クリーム（スキンケアクリーム）、エマルション、スプレー剤、ゲル
剤あるいはパッチ剤である。
【００１６】
本発明の更なる側面は、有効量が以下の（１）〜（２）より選択されるいずれか１種を
含む皮膚美白製品に関する。
（１）カンナビジオールまたはその薬学的に許容される塩あるいはエステル；
（２）カンナビジオールを含有する植物抽出物；好ましくは、カンナビジオールを含有
する大麻抽出物；好ましくは、カンナビジオールを含有する産業用大麻抽出物；
好ましくは、１種以上の薬学的または生理学的に許容されるアジュバントをさらに含む
。
【００１７】
本発明のいくつかの実施形態において、前記カンナビジオールを含有する植物抽出物内
のカンナビジオールの含有量は、１０％〜９９％、２０％〜９５％、３０％〜９５％また
は４０％〜９５％である。
【００１８】
本発明のいくつかの実施形態において、前記皮膚美白製品は、組成物であり；好ましく
は、前記組成物は、クリーム（スキンケアクリーム）、エマルション、スプレー剤、ゲル
剤あるいはパッチ剤である。
【００１９】
重量％で計算すると、組成物内には０．１％〜９０％の有効成分（カンナビジオールお
よび／またはカンナビジオールを含有する植物抽出物）および１種以上の薬学的または生
理学的に許容されるアジュバントが含まれる。本発明のいくつかの実施形態において、組
成物内には、０．１％〜９０％、０．１％〜５０％、０．１％〜２０％、０．１％〜１０
％、０．１％〜９％、０．１％〜８％、０．１％〜７％、０．１％〜６％、０．１％〜５
％、０．１％〜４％、０．１％〜３％、０．１％〜２％、０．１％〜１％、０．１％〜０
．９％、０．１％〜０．８％、０．１％〜０．７％、０．１％〜０．６％、０．１％〜０
．５％、０．１％〜０．４％、０．１％〜０．３％あるいは０．１％〜０．２％の有効成
分が含まれる。
【００２０】
用語「生理学的に許容される」とは、生理学的に適合性があること、特に、皮膚に刺激
を与えるなどの副作用を起こすことなく、皮膚と接触した時に使用できる皮膚外用製品内
で使用されるものを意味する。特に、例えば化粧品に使用できる希釈剤、界面活性剤、増
粘剤、皮膚軟化剤などである。
【００２１】
当業者の既知の方法を参照して組成物をクリーム（スキンケアクリーム）、エマルショ
ン、スプレー剤、ゲル剤あるいはパッチ剤などの、ヒトでの使用に適した適用形態または
剤形に製剤化することができる。
【００２２】
本発明はまた、個別に包装された、本発明のいずれか一項に記載の皮膚美白製品を含む
、皮膚美白製品キットに関する。
【００２３】
本発明の更なる側面は、ニーズのある被験者あるいは細胞に以下の（１）〜（２）より
選択されるいずれかの有効量を投与するステップを含む、インビボまたはインビトロでチ
ロシナーゼの活性を阻害、メラニン産生の阻害あるいはメラノサイト生成を阻害する方法
に関する。
（１）カンナビジオールまたはその薬学的に許容される塩あるいはエステル；
（２）カンナビジオールを含有する植物抽出物；好ましくは、カンナビジオールを含有
する大麻抽出物；好ましくは、カンナビジオールを含有する産業用大麻抽出物。
【００２４】
本発明の一実施形態において、前記メラニンは、ユーメラニンである。
【００２５】
本発明の一実施形態において、前記カンナビジオールを含有する植物抽出物内のカンナ
ビジオールの含有量は、１０％〜９９％、２０％〜９５％、３０％〜９５％または４０％
〜９５％である。
【００２６】
本発明の更なる側面は、ニーズのある被験者に以下の（１）〜（２）より選択されるい
ずれかの有効量を投与するステップを含む皮膚美白方法に関する。
（１）カンナビジオールまたはその薬学的に許容される塩あるいはエステル；
（２）カンナビジオールを含有する植物抽出物；好ましくは、カンナビジオールを含有
する大麻抽出物；好ましくは、カンナビジオールを含有する産業用大麻抽出物。
【００２７】
本発明の一実施形態において、前記カンナビジオールを含有する植物抽出物内のカンナ
ビジオールの含有量は、１０％〜９９％、２０％〜９５％、３０％〜９５％または４０％
〜９５％である。
【００２８】
本発明の一実施形態において、ニーズのある被験者に対し、少なくとも１日１回、例え
ば１回、２回、または３回以上投与し；投与期間は、少なくとも１週間、少なくとも２週
間、少なくとも３週間、少なくとも４週間あるいはそれ以上とする。投与が１日１回を超
える場合、２回の投与の間の時間間隔は、少なくとも２時間、少なくとも４時間、少なく
とも６時間または少なくとも８時間である。投与する用量は、所望の美白効果を得るのに
必要なレベルよりも低いレベルから始まり、所望の効果が得られるまで用量を徐々に増加
させる。例えばクリームあるいはエマルションの形式で投与する時、皮膚１ｃｍ２あたり
の投与量は、少なくとも約０．００１ｇ、少なくとも約０．００５ｇ、少なくとも約０．
０１ｇ、少なくとも約０．０２ｇ、少なくとも約０．０３ｇ、少なくとも約０．０４ｇ、
少なくとも約０．０５ｇ、少なくとも約０．０６ｇ、少なくとも約０．０７ｇ、少なくと
も約０．０８ｇ、少なくとも約０．０９ｇあるいは少なくとも約０．１ｇである。
【００２９】
本発明のいくつかの実施形態において、美白効果は、肌の明度値によって表される。前
記肌の明度値は、ＬＡＢ色差計で測定できる。
【００３０】
本発明は、またチロシナーゼ活性の阻害、メラニン産生の阻害、メラノサイト生成の阻
害または皮膚美白に使用される、カンナビジオールまたはその薬学的に許容される塩ある
いはエステル、もしくはカンナビジオールを含有する植物抽出物に関する。
【００３１】
本発明の一実施形態において、前記メラニンは、ユーメラニンである。
【００３２】
本発明の一実施形態において、前記カンナビジオールを含有する植物抽出物内のカンナ
ビジオールの含有量は、１０％〜９９％、２０％〜９５％、３０％〜９５％または４０％
〜９５％である。
【００３３】
本発明において、前記大麻抽出物は、大麻の茎、葉、果実、殼、根および花から選択さ
れる１種または複数種を原料とする抽出物である。好ましくは、前記大麻抽出物は、大麻
葉抽出物である。前記大麻は、産業用大麻であることが好ましい。
【００３４】
本発明において、エタノールまたはエタノール溶液の濃度は、特に断らない限り、重量
パーセント（ｗｔ％）である。
【００３５】
本発明において、前記大麻抽出物または大麻葉抽出物内のカンナビジオールの含有量は
、特に明記しない限り、重量パーセント（ｗｔ％）である。
【００３６】
本発明において、用語「スキンケアクリーム」とは、化粧品規格ＱＢ／Ｔ１８５７に適
合する製品を指し；
用語「被験者」は、本発明の美白製品の塗布を受ける動物、特にヒトなどの哺乳動物を
指す場合がある。
【発明の効果】
【００３７】
本発明は、以下の技術的効果の１つ以上を達成した。
（１）カンナビジオールまたは大麻抽出物（特に大麻葉抽出物）は、チロシナーゼの活
性を効果的に阻害できる。
（２）カンナビジオールまたは大麻抽出物（特に大麻葉抽出物）は、メラニンの合成を
効果的に阻害できる。
（３）カンナビジオールまたは大麻抽出物（特に大麻葉抽出物）は、良好な皮膚美白効
果を有する。
（４）カンナビジオールまたは大麻抽出物（特に大麻葉抽出物）は毒性や副作用のない
皮膚美白製品を調製できる。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】チロシナーゼに対する異なる濃度のＣＢＤ（純度９９％）の阻害率を示す棒グラフである。
【図２】チロシナーゼに対する異なる濃度の大麻葉抽出物Ｂ（ＣＢＤ含有率９５％）の阻害率を示す棒グラフである。
【図３】チロシナーゼに対する異なる濃度の大麻葉抽出物Ａ（ＣＢＤ含有率５０％）の阻害率を示す棒グラフである。
【図４】相対細胞生存率に対する異なる濃度の大麻葉抽出物Ｂ（ＣＢＤ含有率９５％）の影響を示すグラフである。
【図５】異なる濃度（０．２％、１％、５％）の大麻葉抽出物Ｂ（ＣＢＤ含有率９５％）がＢ１６細胞に作用した後、細胞内のチロシナーゼ活性の変化を示す棒グラフである（３３ｍＭアルブチンを陽性対照とし、細胞ブランクを陰性対照として、実験データに対し有意な分析（ｐ＜０．０５）を行い、ここで＊＊はＡＮＯＶＡ  ＴＥＳＴ検査でのｐ−ｖａｌｕｅ＜０．０１を示している）。
【図６】異なる濃度の大麻葉抽出物Ｂ（ＣＢＤ含有率９５％）がＢ１６細胞に作用した後、細胞内のメラニン産生量の変化を示す棒グラフである（３３ｍＭアルブチンを陽性対照とし、細胞ブランクを陰性対照として、実験データに対し有意な分析を行い、ここで＊＊はＡＮＯＶＡ  ＴＥＳＴ検査でのｐ−ｖａｌｕｅ＜０．０１を示している）。
【図７】肌の明るさに対する大麻葉抽出物Ａ（ＣＢＤ含有率約５０％）の影響曲線である（ここで、Ｌは肌の明るさを表し、値が大きければ大きいほど白くなる）。
【図８】肌の明るさに対する大麻葉抽出物Ｂ（ＣＢＤ含有率９５％）の影響曲線である（ここで、Ｌは肌の明るさを表し、値が大きければ大きいほど白くなる）。
【図９】肌の明るさに対するＣＢＤ（純度９９％）の影響曲線である（ここで、Ｌは肌の明るさを表し、値が大きければ大きいほど白くなる）。
【発明を実施するための形態】
【００３９】
以下、実施例を参照しつつ本発明の技術的手段を詳細に説明するが、当業者であれば、
下記実施例が本発明を例示するためにのみ使用され、本発明の範囲を限定するものと見な
されるべきではないことを理解するであろう。実施例に具体的条件が示されていない場合
、従来の条件または製造元が推奨する条件に従うものとする。使用する試薬や機器はメー
カーを示していないものは、市場等から入手できる従来製品である。
【００４０】
調製例１：大麻葉抽出物Ａ（ＣＢＤ含有率約５０％）の調製および検出
１．大麻葉抽出物Ａの調製
（１）大麻の葉を洗って、自然乾燥させるか、３０℃〜６０℃で乾燥させ；
（２）粉砕し、４０メッシュのふるいにかけ；
（３）ふるい上の粗い粉末を、７０％エタノールの１０倍量の還流下で１．５時間ずつ
２回抽出し、抽出液を混ぜ合わせ；
（４）相対密度が６０℃で１．０２になるまで減圧下で濃縮し、マクロポーラス樹脂Ｓ
Ｐ−８２５（三菱化学社製、日本）を投入し、２倍の体積（ＢＶ）水、４倍の体積の４５
％エタノール、４〜６倍の体積の７５％エタノールを順次溶出し、次に３ＢＶの９５％エ
タノールでカラムの洗浄・再生を行い；
（５）７５％エタノールで溶出した部分を相対密度が６０℃で０．９０〜０．９５にな
るまで減圧下で濃縮し、そして真空下、６０℃、−０．１０ＭＰａで８〜１２時間乾燥さ
せた。
【００４１】
このようにして大麻葉抽出物が得られ、大麻葉抽出物Ａと命名した。
【００４２】
２．大麻葉抽出物Ａ中のＣＢＤの含有量の測定
カンナビジオールの含有量は、《中国薬局方》２０１５年版第四部の高効率液相法（通
則０５１２）を参照して以下のように測定した。
クロマトグラフィー条件およびシステム適合性試験：フィラーとしてのオクタデシル基
結合シリカゲル（Ｃ１８、４．６×１５０ｍｍ、４μｍ）、移動相としてのアセトニトリ
ル−水（体積比７０：３０）、検出波長は２１０ｎｍ、流速が１ｍｌ／ｍｉｎ、カラム温
度が３５℃。理論段数は、カンナビジオールのピークにより計算すると２０００以上でな
ければならない。
対照溶液の調製：０．５ｍｌのカンナビジオール対照溶液（１．０ｍｇ／ｍｌ）を精密
にはかり取り、５０ｍｌメスフラスコに入れ、目盛まで９０％エタノールで希釈し、よく
振って対照溶液とした。
試料溶液の調製：２５ｍｇの本製品を精密にはかり、２５ｍｌメスフラスコに入れ、目
盛まで９０％エタノールで希釈し、よく振り；１ｍｌを精密にはかり取り、１００ｍｌメ
スフラスコに入れ、目盛まで９０％エタノールで希釈し、よく振ることで得た。
測定法：対照溶液、試料溶液それぞれ１０μｌを精密にはかり取り、液体クロマトグラ
フに入れ、クロマトグラムを記録した。外部標準法に従い、ピーク面積から算出した。
計算式は、下式で表される
【００４３】
（数１）
カンナビジオールの含有量＝
2021506829.tif 000004
上式中、
Ａｓａｍは、試料のカンナビジオールのピーク面積であり；
Ｒｗａｔ％は、試料の含水量であり；
Ｗｓａｍは、試料の重量であり；
Ａｓｔｄは、対照物質のカンナビジオールのピーク面積であり；
Ｃｓｔｄは、対照物質のカンナビジオールの標識濃度であり；
水分測定：カールフィッシャー水分計およびカールフィッシャー試薬で測定し、測定値
は３つの並行群間試験の結果から平均され、Ｒｗａｔ％として記録された。
【００４４】
大麻葉抽出物Ａ中のカンナビジオールの含有量は４９．８ｗｔ％であると測定された。
【００４５】
調製例２：大麻葉抽出物Ｂ（ＣＢＤ含有率９５％）の調製
１．大麻葉抽出物Ｂの調製
（１）自然乾燥させるか、３０℃〜６０℃で乾燥された大麻の葉を取り、７倍量のエタ
ノール（Ｖ／Ｗ）で１．５時間加熱還流し；
（２）それをろ過して残渣を除去し；
（３）濾液を５％水酸化ナトリウム水溶液で２回抽出し、水酸化ナトリウム水溶液は２
０ｗｔ％エタノールを含み；
（４）抽出液を適量の５％硫酸溶液と混合し、混合溶液のｐＨは３であり；
（５）２倍または１倍の体積の酢酸エチルで２回抽出した後、４０℃、−０．１０ＰＭ
で溶媒を回収し；
（６）次に、ＭＣＩカラムクロマトグラフィー（７５〜１５０μｍ、三菱化学社製）に
入れ、２ＢＶ純水、３ＢＶの５０％エタノール、５ＢＶの７５％エタノールの順で溶出し
、その後３ＢＶの９５％エタノールでカラムの洗浄・再生を行い；
（７）７５％エタノールで溶出した部分を相対密度が６０℃で０．９０〜０．９５にな
るまで減圧下で濃縮し、そして真空下、６０℃、−０．１０ＭＰａで８〜１２時間乾燥さ
せた。
【００４６】
このようにして大麻抽出物が得られ、大麻葉抽出物Ｂと命名した。
【００４７】
２．大麻葉抽出物Ｂ中のＣＢＤの含有量の測定
調製例１の方法に従って、大麻葉抽出物Ｂ中のカンナビジオールの含有量は９５ｗｔ％
と測定された。
【００４８】
調製例３：スキンケアクリーム（１）の調製
処方は、以下の表１に示されている。
【００４９】
【表１】
2021506829.tif 000005
【００５０】
ここで、大麻葉抽出物Ａは、調製例１で調製したものであり；ヘンプシードオイルは、
雲南漢素生物科技有限公司から購入したものであり、ＣＯＡ報告書にはＣＢＤが含まれて
いないと記載され；
「エイコシルベヘニルアルコールおよびエイコシルグルコシド」は、ＳＥＰＰＩＣ社か
ら購入し、試薬名が「ＭＯＮＴＡＮＯＶ２０２」（以下同）とした。
【００５１】
調製プロセスは、次の通りである。
（１）油相の各成分を量り取り、撹拌条件下で７５℃に加熱して保温・滅菌し；
（２）水相の各成分を量り取り、撹拌条件下で８０℃に加熱して保温・滅菌し；
（３）油相を水相に加え、３〜５分間ホモジナイズした後、低速で撹拌しながら室温ま
で冷却し生成物を得た。ホモジナイズ操作は、ＩＫＡＴ１８ｄｉｇｉｔａｌＵＬＴＲＡＴ
ＵＲＲＡＸホモジナイザー、８０００ｒｐｍ／３分を使用した。
【００５２】
このようにしてスキンクリーム（１）が得られた。
【００５３】
調製例４：スキンケアクリーム（２）の調製
処方は、以下の表２に示されている。
【００５４】
【表２】
2021506829.tif 000006
【００５５】
ここで、大麻葉抽出物Ｂは、調製例２で調製したものであり；ヘンプシードオイルは、
雲南漢素生物科技有限公司から購入したものであり、ＣＯＡ報告書にはＣＢＤが含まれて
いないと記載されている。
【００５６】
調製プロセスは、前の調製例３に従って実施した。
【００５７】
このようにしてスキンクリーム（２）が得られた。
【００５８】
調製例５：スキンケアクリーム（３）の調製
処方は、以下の表３に示されている。
【００５９】
【表３】
2021506829.tif 000007
【００６０】
ここで、カンナビジオール（純度９９％）は、雲南漢素生物科技有限公司から購入した
ものであり；ヘンプシードオイルは、雲南漢素生物科技有限公司から購入したものであり
、ＣＯＡ報告書にはＣＢＤが含まれていないと記載されている。
【００６１】
調製プロセスは、前の調製例３に従って実施した。
【００６２】
このようにしてスキンクリーム（３）が得られた。
【００６３】
対照調製例：対照クリームの調製
調製例３の処方に照らし合わせ、活性成分、すなわち麻葉抽出物Ａを使用しないことを
除き、残りの成分は完全に同一であった。
【００６４】
調製プロセスは、前の調製例３に従って実施した。
【００６５】
このようにして対照クリームが得られた。
【００６６】
実施例１：インビトロ実験
１．実験細胞、試薬および機器
Ｂ１６細胞は、北京協和医院から購入した。
カンナビジオール（純度９９％）は、雲南漢素生物科技有限公司から購入した。
大麻葉抽出物Ａ（ＣＢＤ含有率約５０％）は、調製例１で調製した。
大麻葉抽出物Ｂ（ＣＢＤ含有率９５％）は調製例２で調製した。
ＤＭＥＭ高グルコース培地およびウシ胎児血清はＧＩＢＣＯＬｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌ
ｏｇｉｅｓ社から購入した。
Ｌ−ドパ、ＴｒｉｔｉｏｎＸ−１００、およびＭＴＴはすべて米国Ｓｉｇｍａ社から購
入した。
アルブチンは、ｂｉｏｌａｎｄ社から購入した。
０．０５％トリプシン（ＥＤＴＡを含む）は、米国ＧＩＢＣＯＬｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｉｅｓ社から購入した。
チロシナーゼ：ＣＡＳ＃：９００２〜１０〜２は、北京Ｓｏｌａｒｂｉｏ科技有限公司
から購入した。
紫外分光光度計、島津社製、日本、ＵＶ−２２０１。
ＷＪ−８０Ａ−IIＣＯ２恒温器、上海聖科儀器設備有限公司製
酵素結合イムノアッセイ検出器、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ
ｓ社製。
【００６７】
２．実験方法
（１）チロシナーゼ阻害率の測定
対数増殖期にあるＢ１６細胞を採集し、トリプシンによる消化後、完全培地（ＤＭＥＭ
高グルコース培地＋１０％ウシ胎児血清）で消化を停止し、計数し；細胞懸濁液を１０×
１０４個の細胞／ｍＬに調整し、９６ウェルプレートに播種し、細胞懸濁液を各ウェル１
００μＬ加え、周縁部（モート部）に滅菌ＰＢＳを入れ、３７℃の５％ＣＯ２インキュベ
ーター内で一晩培養し、培地（ＤＭＥＭ高グルコース培地＋１０％ウシ胎児血清）を吸引
し、実験サンプルを各ウェルに１００μＬずつ入れ、対照群（すなわち、サンプルを含ま
ない培地）も設けた。７２時間作用させた後、１％ＴｒｉｔｉｏｎＸ−１００溶液５０μ
Ｌを添加して細胞を溶解し、−８０℃の超低温フリーザーに１時間素早く静置して凍結保
存し、その後室温で溶かして細胞内のチロシナーゼを細胞外に放出し、３７℃予熱後、１
％Ｌ−ドパ溶液５０μＬを添加し、３７℃で２時間反応させた。各ウェルの吸光度を波長
４９０ｎｍで測定した。サンプルのそれぞれの濃度で３つのサブウェルを設け、平均値を
取った。
【００６８】
実験サンプル
各ウェルの終濃度は、それぞれ０．１％、１％、２％、３％のＣＢＤ（純度９９％）で
あり；
各ウェルの終濃度は、それぞれ０．１％、０．５％、１％、２％の大麻葉抽出物Ｂであ
り；
各ウェルの終濃度は、それぞれ０．５０％、１％、２％、３％の大麻葉抽出Ａであった
。
【００６９】
（数２）
チロシナーゼ阻害率＝  １−（それぞれ濃度の各ウェルの平均吸光度−対照群の平均吸
光度）×１００％。
【００７０】
（２）ＭＴＴ実験
対数増殖期の状態が良好なＢ１６細胞を採集し、トリプシンによる消化後、完全培地で
消化を停止し、計数し；細胞懸濁液を１０×１０４個の細胞／ｍＬに調整し、９６ウェル
プレートに播種し、細胞懸濁液を各ウェル１００μＬ加え、周縁部（モート部）に滅菌Ｐ
ＢＳを入れ、３７℃の５％ＣＯ２インキュベーター内で２４時間培養し、培地を吸引し、
異なる濃度のサンプルを１０μｌ、基本培地を９０μｌの各ウェルに加え、細胞対照ウェ
ルに基本培地１００μｌを加え、３７℃の５％ＣＯ２インキュベーター内で２４時間培養
し；培養終了の４時間前に、サンプルを含有する培地を吸引し、５ｍｇ／ｍｌＭＴＴ溶液
を１０μｌ、基本培地を９０μｌの各ウェルに加え、４時間培養を続けた後、培養を終了
し；ウェルから溶液を慎重に吸引し、ＤＭＳＯ溶液を各ウェルに加え、３７℃で１０分間
溶解し、振盪し、マイクロプレートリーダーにより波長４９０ｎｍで検出し、各ウェルの
吸光度を測定し、それぞれの濃度で３つのサブウェルを設け、平均値を取った。
【００７１】
（数３）
生存率＝（それぞれ濃度の各ウェルの平均吸光度−対照群の平均吸光度）×１００％。
【００７２】
実験サンプル：
各ウェルの終濃度は、それぞれ５％、１．６７％、０．５６％、０．１９％、０．０６
％の大麻葉抽出物Ｂであった。
【００７３】
（３）チロシナーゼ活性の測定
対数増殖期にあるＢ１６細胞を採集し、トリプシンによる消化後、完全培地で消化を停
止し、計数し；細胞懸濁液を１０×１０４個の細胞／ｍＬに調整し、９６ウェルプレート
に播種し、細胞懸濁液を各ウェル１００μＬ加え、周縁部（モート部）に滅菌ＰＢＳを入
れ、３７℃の５％ＣＯ２インキュベーター内で一晩培養し、培地を吸引し、実験サンプル
を各ウェルに１００μＬずつ入れ、４８時間作用させた後、１％ＴｒｉｔｉｏｎＸ−１０
０溶液５０μＬを添加して細胞を溶解し、−８０℃の超低温フリーザーに１時間素早く静
置して凍結保存し、その後室温で溶かして細胞内のチロシナーゼを細胞外に放出し、３７
℃予熱後、１％Ｌ−ドパ溶液５０μＬを添加し、３７℃で２時間反応させた。各ウェルの
吸光度を波長４９０ｎｍで測定した。それぞれの濃度で３つのサブウェルを設け、平均値
を取った。
【００７４】
実験サンプル：
各ウェルの終濃度は、それぞれ０．２％、１％、５％の大麻葉抽出物Ｂであった。
【００７５】
対照物質：３３ｍＭアルブチンと細胞ブランク（培地のみ）。
【００７６】
（数４）
チロシナーゼ活性＝（それぞれ濃度の各ウェルの平均吸光度−対照群の平均吸光度）×
１００％。
【００７７】
（４）メラニン含有量の測定
対数増殖期にあるＢ１６細胞を採集し、トリプシンによる消化後、完全培地で消化を停
止し、計数し；調製された細胞懸濁液を５×１０４個の細胞／ｍＬに調整し、６ウェルプ
レートに加え、細胞懸濁液を各ウェル２ｍＬ加え、３７℃、５％ ＣＯ２条件下にてイン
キュベーター内で一晩培養し；培地を吸引し、異なる濃度の大麻抽出物を各ウェル２ｍＬ
加え、４８時間作用させ、培地を吸引して捨て、トリプシンによる消化後、遠心チューブ
に集め、遠心により細胞を沈殿させ、ＰＢＳで１回洗浄して、１ＭＮａＯＨ（１０％ＤＭ
ＳＯを含む）溶液を加えて溶解し、８０℃の水浴器に入れ、３０分間水浴させ；振盪混合
して、９６ウェルプレートに吸い取り；波長４７５ｎｍで吸光度を測定した。
【００７８】
（数５）
相対的メラニン含有量＝（それぞれ濃度の各ウェルの平均吸光度−対照群の平均吸光度
）×１００％。
【００７９】
３．実験結果
（１）チロシナーゼに対する大麻抽出物の阻害作用
図１、図２および図３に示す。
結果として、ＣＢＤ（純度９９％）、大麻葉抽出物Ｂ（ＣＢＤ含有率９５％）および大
麻葉抽出物Ａ（ＣＢＤ含有率４９．８％）は、いずれもチロシナーゼに対し効果的な阻害
作用があり、かつ各医薬品にとって、用量が増加するにつれて、チロシナーゼの阻害率が
増加したことを示した。
【００８０】
（２）Ｂ１６−ＭＴＴ実験結果
図４に示す。
結果として、一定の範囲内において、Ｂ１６細胞の生存率は、大麻葉抽出物の濃度の増
大に伴い減少し、かつ一定の濃度依存性があることを示している。濃度５％の大麻葉抽出
物Ｂ（ＣＢＤ含有率９５％）で４８時間作用させた場合、細胞生存率が９０．８８％で最
も低くなり；他の濃度における細胞生存率は、均しく９０．８８％を超えた。異なる濃度
で比較しても有意差はなく、細胞毒性が全く観察されないことを示した。
【００８１】
（３）チロシナーゼ活性の変化結果
図５に示す。
結果として、濃度０．２％、１％、５％の大麻葉抽出物Ｂはいずれも細胞内のチロシナ
ーゼ活性を著しく低下させることができ；大麻葉抽出物Ｂの濃度増大に伴い、チロシナー
ゼ活性が低下し、ここでチロシナーゼに対する濃度５％の大麻葉抽出物Ｂの阻害効果が最
も高く、チロシナーゼ活性を７３．１３％に低下させることができる。
【００８２】
（４）メラニン含有量の変化結果を図６に示します。
結果として、異なる濃度の大麻葉抽出物Ｂ（ＣＢＤ含有率９５％）は、細胞内のメラニ
ン合成量を著しく減少させ、さらにＢ１６細胞内のメラニン含有量を前述の７３．７９％
まで減少させることができ；陽性対照は、７９．２４％であり；大麻葉抽出物Ｂ（ＣＢＤ
９５％）の濃度増大に伴い、メラニン含有量は低くなった。メラニン合成に対する異なる
濃度の大麻葉抽出物の影響は、アルブチンと比較して有意差がなかった。
【００８３】
実施例２：細胞毒性実験（ＭＴＴ）
１．実験サンプル
調製例１で調製した大麻葉抽出物Ａ（ＣＢＤ含有率約５０％）。
調製例２で調製した大麻葉抽出物Ｂ（ＣＢＤ含有率９５％）。
カンナビジオール（純度９９％）は、雲南漢素生物科技有限公司から購入した。
ヘンプシードオイルは、雲南漢素生物科技有限公司から購入したものであり、ＣＯＡ報
告書にはＣＢＤが含まれていないと記載されている。
ヒト不死化表皮細胞は、北京協和医院から購入した。
ＭＴＴは、米国Ｓｉｇｍａ公司から購入した。
ＤＭＥＭ高グルコース培地およびウシ胎児血清はＧＩＢＣＯＬｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌ
ｏｇｉｅｓ社から購入した。
ＰＢＳは、米国Ｃｏｒｎｉｎｇ社から購入した。
ＷＪ−８０Ａ−IIＣＯ２恒温器、上海聖科儀器設備有限公司製
酵素結合イムノアッセイ検出器、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ
ｓ社製
【００８４】
２．実験方法
対数増殖期にあるヒト不死化表皮細胞を採集し、細胞懸濁液の濃度を調整し、９６ウェ
ルプレートに細胞懸濁液を１ウェルあたり１００μｌ加え、３７℃、５％ ＣＯ２条件下
にて細胞密度５０００個／ウェルまでインキュベートする。溶液を変えて異なる濃度勾配
の実験サンプル（下記の表４など）を培地に添加し、実験サンプルを含まない培養液を対
照として使用する。３７℃、５％ ＣＯ２条件下にて２４時間インキュベートし、ＭＴＴ
溶液（５ｍｇ／ｍｌ、すなわち０．５％ＭＴＴ）を各ウェル２０μｌ加え、４時間インキ
ュベートし続けた。薬液とＭＴＴを十分に反応させるために、まず遠心した後で培養液を
捨て、ＰＢＳで２〜３回注意深く洗浄した後、ＭＴＴを含む培養液を加えた。培養を停止
し、ウェルから培養液を注意深く吸引した。ジメチルスルホキシドを各ウェル１５０μｌ
加え、シェーカーで低速で１０分間振盪して、結晶を完全に溶解させた。各ウェルの吸光
度（ＯＤ値）を酵素結合イムノアッセイ検出器の波長４９０ｎｍで測定した。
【００８５】
（数６）
細胞生存率＝（測定ウェルＯＤ値−ブランク対照ＯＤ値）／（細胞対照群ＯＤ値−ブラ
ンク対照ＯＤ値）×１００％。
【００８６】
（表４）
ヒト不死化表皮細胞の細胞毒性実験に用いられたサンプルの処方（各成分の含有量は質量
パーセント）
2021506829.tif 000008
【００８７】
３．実験結果
下記の表５に示す。
【００８８】
（表５）
2021506829.tif 000009
【００８９】
結果として、ヘンプシードオイルの添加が細胞に対して一定の毒性を有することを示し
ている。ＣＢＤ（純度９９％）、大麻葉抽出物Ｂ（ＣＢＤ含有率９５％）および大麻葉抽
出物Ａ（ＣＢＤ含有率約５０％）は、細胞増殖をある程度促進し、ヘンプシードオイルの
影響を排除できた。
【００９０】
実施例３：皮膚美白の実験
１．実験サンプル、機器および実験対象
実験サンプル：
調製例３〜５で調製したスキンケアクリーム（１）〜（３）。対照調製例で調製した対
照クリーム。
機器：ＬＡＢ色差計（ＭＰＡ９、ＣＫ電子会社製、ドイツ）
対象：各実験サンプルの被験者は、いずれも２５人であった（男性１０人、女性１５人
、年齢：３０〜５５歳）。
【００９１】
２．実験方法（１つの実験サンプルを例）
１）被験者がサンプルを塗る前、先に実験部位を洗浄し、乾燥させた後サンプルを塗布
した。被験者の左右腕の内側にそれぞれ４×４ｃｍの面積を対称的に画定して、被験領域
および対照領域として使用された。
２）被験者は、適量（約０．５ｇ）のクリームを被験領域に均一に塗布し、同時に被験
者が対照クリーム（ブランク基質として）を対照領域に塗布した。毎日朝晩１回ずつ塗り
、２回の間隔を約８〜１０時間とした。実験期間、被験者の被験領域に他の化粧品を塗布
していなかった。
３）被験者がサンプルを連続的に使用した後、毎週同じ時間にＬａｂ色差計で肌の色の
変化を測定し、平均値を取り、これを４週間続けた。
４）毎回測定した数値、すなわち対照群（２５人の右腕の対照領域）および実験群（２
５人の左腕の被験領域）の肌の明度値（ＬＡＢ値）を統計した。
【００９２】
３．実験結果
表６〜表８および図７〜図９に示す。
【００９３】
（表６）
大麻葉抽出物Ａを使用したスキンケアクリーム（１）
2021506829.tif 000010
【００９４】
（表７）
大麻葉抽出物Ｂを使用したスキンケアクリーム（２）
2021506829.tif 000011
【００９５】
（表８）
純度９９％のＣＢＤを使用したスキンケアクリーム（３）
2021506829.tif 000012
【００９６】
サンプルを使用する前は、３つの実験群と対照群の間に肌の明るさの有意差はなかった
。結果として、サンプルを使用した後、１週目の肌の明度値は有意に変化しなかったが、
２週目から４週間目では、３つの実験群の肌の明度値はすべて大幅に増加したことを示し
た。
【００９７】
本発明の具体的実施形態が詳細に説明されてきたが、当業者は理解するであろう。すで
に開示されているすべての教示によれば、それらの詳細に対して様々な修正および置換を
行うことができ、すべてのかかる変更は本発明の保護範囲内に網羅される。本発明の全範
囲は、添付の特許請求の範囲および任意の均等物によって定義される。
【図１】
2021506829.tif 000013
【図２】
2021506829.tif 000014
【図３】
2021506829.tif 000015
【図４】
2021506829.tif 000016
【図５】
2021506829.tif 000017
【図６】
2021506829.tif 000018
【図７】
2021506829.tif 000019
【図８】
2021506829.tif 000020
【図９】
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【国際調査報告】
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2021506829.tif 000024
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