(57)【要約】本開示は、移植片対腫瘍免疫応答などの有効な免疫応答を維持しながら、移植片対宿主疾患からの保護を増強するための方法を含む、造血幹細胞移植の改善のための方法を提供する。本開示は、例えば、造血幹細胞および前駆細胞、制御性Ｔ細胞、ならびに通常型Ｔ細胞を投与する方法であって、通常型Ｔ細胞が、造血幹細胞および前駆細胞ならびに制御性Ｔ細胞の後に投与される、方法を提供する。本開示はまた、例えば、造血幹細胞および前駆細胞、制御性Ｔ細胞、ならびに通常型Ｔ細胞を投与するための方法であって、制御性Ｔ細胞が投与前に凍結保存されていない、方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
処置を必要とするヒト対象の処置方法であって、前記ヒト対象に、
ａ）造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）の集団、
ｂ）制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を含む細胞の集団、および
ｃ）通常型Ｔ細胞（Ｔｃｏｎ）の集団を投与することを含み、
前記ＨＳＰＣの集団および前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記Ｔｃｏｎの集団の前に投与され、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団の投与前に凍結保存されていない、方法。
【請求項２】
前記ＨＳＰＣが、ＣＤ３４＋である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記Ｔｒｅｇが、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記Ｔｃｏｎが、ＣＤ３＋である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、ＣＤ４５＋細胞を含み、前記ＣＤ４５＋細胞の９０％超が、Ｔｒｅｇである、請求項１、２、および４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記Ｔｒｅｇが、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍまたはＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記ＨＳＰＣの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０５個超のＨＳＰＣを含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記ＨＳＰＣの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり５×１０５〜２×１０７個のＨＳＰＣを含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０５個超のＴｒｅｇを含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０５〜１×１０７個のＴｒｅｇを含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり５×１０５〜４×１０６個のＴｒｅｇを含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０７個未満のＴｃｏｎを含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０５〜１×１０７個のＴｃｏｎを含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり５×１０５〜４×１０６個のＴｃｏｎを含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記ヒト対象に、インバリアントナチュラルキラーＴ細胞（ｉＮＫＴ）の集団を投与することをさらに含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記ｉＮＫＴが、ＣＤ３＋Ｖα２４Ｊα１８＋である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ｉＮＫＴの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり５×１０２個超のｉＮＫＴを含む、請求項１５または１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ｉＮＫＴの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり５×１０２〜１×１０７個のｉＮＫＴを含む、請求項１５〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記ヒト対象に、記憶Ｔ細胞（Ｔｍｅｍ）の集団を投与することをさらに含む、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記Ｔｍｅｍが、ＣＤ３＋ＣＤ４５ＲＡ−ＣＤ４５ＲＯ＋である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記Ｔｍｅｍの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり３×１０５個超のＴｍｅｍを含む、請求項１９または２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記Ｔｍｅｍの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり３×１０５〜１×１０９個のＴｍｅｍを含む、請求項１９〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記投与することが、前記ヒト対象に、前記ＨＳＰＣの集団、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団、および前記Ｔｃｏｎの集団を注入することを含む、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ＨＳＰＣの集団の少なくとも１２時間後に投与される、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ＨＳＰＣの集団の２４〜９６時間後に投与される、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ＨＳＰＣの集団の３６〜６０時間後に投与される、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団の少なくとも１２時間後に投与される、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団の２４〜９６時間後に投与される、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団の３６〜６０時間後に投与される、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記ヒト対象が、前記Ｔｃｏｎの集団の投与後３０日以内に移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）を発症しない、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記ヒト対象が、前記Ｔｃｏｎの集団の投与後１００日以内に移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）を発症しない、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記ヒト対象が、前記Ｔｃｏｎの集団の投与後２００日以内に移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）を発症しない、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記ヒト対象が、前記Ｔｃｏｎの集団の投与後１年以内に移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）を発症しない、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記ヒト対象が、癌について処置されている、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記投与することにより、投与前の前記ヒト対象に比して、前記ヒト対象における造血キメリズムが増強される、請求項１〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
前記投与することにより、投与前の前記ヒト対象に比して、前記ヒト対象における癌の寛解が増強される、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記ＨＳＰＣの集団が、前記ヒト対象に対して同種である、請求項１〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記ＨＳＰＣの集団が、前記ヒト対象に対してＨＬＡ適合であるドナーから得られる、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記ＨＳＰＣの集団が、前記ヒト対象に対してＨＬＡ不適合であるドナーから得られる、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記ＨＳＰＣの集団が、前記ヒト対象に対してハプロタイプ一致であるドナーから得られる、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記ヒト対象に対して同種である、請求項１〜４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記ヒト対象に対してＨＬＡ適合であるドナーから得られる、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記ヒト対象に対してＨＬＡ不適合であるドナーから得られる、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記ヒト対象に対してハプロタイプ一致であるドナーから得られる、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ヒト対象に対して同種である、請求項１〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ヒト対象に対してＨＬＡ適合であるドナーから得られる、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ヒト対象に対してＨＬＡ不適合であるドナーから得られる、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ヒト対象に対してハプロタイプ一致であるドナーから得られる、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
前記ヒト対象に、移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）予防剤を投与することをさらに含む、請求項１〜４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
前記ＧＶＨＤ予防剤が、タクロリムスまたはシロリムスである、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記Ｔｃｏｎの集団の投与前に凍結保存されている、請求項１〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
前記Ｔｃｏｎの集団が、末梢血から得られる、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
処置を必要とするヒト対象の処置方法であって、前記ヒト対象に、
ａ）造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）の集団、
ｂ）制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を含む細胞の集団、および
ｃ）通常型Ｔ細胞（Ｔｃｏｎ）の集団を投与することを含み、
前記ＨＳＰＣの集団および前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記通常型Ｔ細胞の集団の前に投与され、前記ヒト対象が、前記Ｔｃｏｎの集団の投与後３０日以内に移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）を発症しない、方法。
【請求項５４】
前記ＨＳＰＣが、ＣＤ３４＋である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記Ｔｒｅｇが、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍである、請求項５３または５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記Ｔｃｏｎが、ＣＤ３＋である、請求項５３〜５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、ＣＤ４５＋細胞を含み、前記ＣＤ４５＋細胞の９０％超が、Ｔｒｅｇである、請求項５３、５４、および５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
前記Ｔｒｅｇが、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍまたはＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋である、請求項５３〜５４または５６〜５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
前記ＨＳＰＣの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０５個超のＨＳＰＣを含む、請求項５３〜５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
前記ＨＳＰＣの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり５×１０５〜２×１０７個のＨＳＰＣを含む、請求項５３〜５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６１】
前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０５個超のＴｒｅｇを含む、請求項５３〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６２】
前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０５〜１×１０７個のＴｒｅｇを含む、請求項５３〜６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり５×１０５〜４×１０６個のＴｒｅｇを含む、請求項５３〜６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０７個未満のＴｃｏｎを含む、請求項５３〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０５〜１×１０７個のＴｃｏｎを含む、請求項５３〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６６】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり５×１０５〜４×１０６個のＴｃｏｎを含む、請求項５３〜６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
前記ヒト対象に、インバリアントナチュラルキラーＴ細胞（ｉＮＫＴ）の集団を投与することをさらに含む、請求項５３〜６６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６８】
前記ｉＮＫＴが、ＣＤ３＋Ｖα２４Ｊα１８＋である、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記ｉＮＫＴの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり５×１０２個超のｉＮＫＴを含む、請求項６７または６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記ｉＮＫＴの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり５×１０２〜１×１０７個のｉＮＫＴを含む、請求項６７〜６９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７１】
前記ヒト対象に、記憶Ｔ細胞（Ｔｍｅｍ）の集団を投与することをさらに含む、請求項５３〜７０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
前記Ｔｍｅｍが、ＣＤ３＋ＣＤ４５ＲＡ−ＣＤ４５ＲＯ＋である、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記Ｔｍｅｍの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり３×１０５個超のＴｍｅｍを含む、請求項７１または７２に記載の方法。
【請求項７４】
前記Ｔｍｅｍの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり３×１０５〜１×１０９個のＴｍｅｍを含む、請求項７１または７２に記載の方法。
【請求項７５】
前記投与することが、前記ヒト対象に、前記ＨＳＰＣの集団、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団、および前記Ｔｃｏｎの集団を注入することを含む、請求項５３〜７４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７６】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ＨＳＰＣの集団の少なくとも１２時間後に投与される、請求項５３〜７５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７７】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ＨＳＰＣの集団の２４〜９６時間後に投与される、請求項５３〜７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７８】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ＨＳＰＣの集団の３６〜６０時間後に投与される、請求項５３〜７７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７９】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団の少なくとも１２時間後に投与される、請求項５３〜７８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８０】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団の２４〜９６時間後に投与される、請求項５３〜７９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８１】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団の３６〜６０時間後に投与される、請求項５３〜８０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８２】
前記ヒト対象が、前記Ｔｃｏｎの集団の投与後１００日以内に移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）を発症しない、請求項５３〜８１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８３】
前記ヒト対象が、前記Ｔｃｏｎの集団の投与後２００日以内に移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）を発症しない、請求項５３〜８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８４】
前記ヒト対象が、前記Ｔｃｏｎの集団の投与後１年以内に移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）を発症しない、請求項５３〜８３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８５】
前記ヒト対象が、癌について処置されている、請求項５３〜８４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８６】
前記投与することにより、投与前の前記ヒト対象に比して、前記ヒト対象における造血キメリズムが増強される、請求項５３〜８５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８７】
前記投与することにより、投与前の前記ヒト対象に比して、前記ヒト対象における癌の寛解が増強される、請求項５３〜８６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８８】
前記ＨＳＰＣの集団が、前記ヒト対象に対して同種である、請求項５３〜８７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８９】
前記ＨＳＰＣの集団が、前記ヒト対象に対してＨＬＡ適合であるドナーから得られる、請求項５３〜８８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９０】
前記ＨＳＰＣの集団が、前記ヒト対象に対してＨＬＡ不適合であるドナーから得られる、請求項５３〜８８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９１】
前記ＨＳＰＣの集団が、前記ヒト対象に対してハプロタイプ一致であるドナーから得られる、請求項５３〜８８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９２】
前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記ヒト対象に対して同種である、請求項５３〜９１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９３】
前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記ヒト対象に対してＨＬＡ適合であるドナーから得られる、請求項５３〜９２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９４】
前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記ヒト対象に対してＨＬＡ不適合であるドナーから得られる、請求項５３〜９２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９５】
前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記ヒト対象に対してハプロタイプ一致であるドナーから得られる、請求項５３〜９２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９６】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ヒト対象に対して同種である、請求項５３〜９５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９７】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ヒト対象に対してＨＬＡ適合であるドナーから得られる、請求項５３〜９６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９８】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ヒト対象に対してＨＬＡ不適合であるドナーから得られる、請求項５３〜９６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９９】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ヒト対象に対してハプロタイプ一致であるドナーから得られる、請求項５３〜９６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１００】
前記ヒト対象に、移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）予防剤を投与することをさらに含む、請求項５３〜９９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０１】
前記ＧＶＨＤ予防剤が、タクロリムスまたはシロリムスである、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団の投与前に凍結保存されていない、請求項５３〜１０１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０３】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記Ｔｃｏｎの集団の投与前に凍結保存されている、請求項５３〜１０２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０４】
前記Ｔｃｏｎの集団が、末梢血から得られる、請求項５３〜１０３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０５】
処置を必要とするヒト対象の処置方法であって、前記ヒト対象に、
ａ）造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）の集団、
ｂ）制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を含む細胞の集団、および
ｃ）通常型Ｔ細胞（Ｔｃｏｎ）の集団を投与することを含み、
前記ＨＳＰＣの集団および前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記Ｔｃｏｎの集団の前に投与され、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、ＣＤ４５＋細胞を含み、前記ＣＤ４５＋細胞の９０％超が、Ｔｒｅｇである、方法。
【請求項１０６】
前記ＨＳＰＣが、ＣＤ３４＋である、請求項１０５に記載の方法。
【請求項１０７】
前記Ｔｒｅｇが、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍまたはＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋である、請求項１０５または１０６に記載の方法。
【請求項１０８】
前記Ｔｃｏｎが、ＣＤ３＋である、請求項１０５〜１０７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０９】
前記ＨＳＰＣの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０５個超のＨＳＰＣを含む、請求項１０５〜１０８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１０】
前記ＨＳＰＣの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり５×１０５〜２×１０７個のＨＳＰＣを含む、請求項１０５〜１０９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１１】
前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０５個超のＴｒｅｇを含む、請求項１０５〜１１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１２】
前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０５〜１×１０７個のＴｒｅｇを含む、請求項１０５〜１１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１３】
前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり５×１０５〜４×１０６個のＴｒｅｇを含む、請求項１０５〜１１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１４】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０７個未満のＴｃｏｎを含む、請求項１０５〜１１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１５】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０５〜１×１０７個のＴｃｏｎを含む、請求項１０５〜１１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１６】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり５×１０５〜４×１０６個のＴｃｏｎを含む、請求項１０５〜１１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１７】
前記ヒト対象に、インバリアントナチュラルキラーＴ細胞（ｉＮＫＴ）の集団を投与することをさらに含む、請求項１０５〜１１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１８】
前記ｉＮＫＴが、ＣＤ３＋Ｖα２４Ｊα１８＋である、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１１９】
前記ｉＮＫＴの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり５×１０２個超のｉＮＫＴを含む、請求項１１７または１１８に記載の方法。
【請求項１２０】
前記ｉＮＫＴの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり５×１０２〜１×１０７個のｉＮＫＴを含む、請求項１１７または１１８に記載の方法。
【請求項１２１】
前記ヒト対象に、記憶Ｔ細胞（Ｔｍｅｍ）の集団を投与することをさらに含む、請求項１０５〜１２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２２】
前記Ｔｍｅｍが、ＣＤ３＋ＣＤ４５ＲＡ−ＣＤ４５ＲＯ＋である、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２３】
前記Ｔｍｅｍの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり３×１０５個超のＴｍｅｍを含む、請求項１２１または１２２に記載の方法。
【請求項１２４】
前記Ｔｍｅｍの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり３×１０５〜１×１０９個のＴｍｅｍを含む、請求項１２１または１２２に記載の方法。
【請求項１２５】
前記投与することが、前記ヒト対象に、前記ＨＳＰＣの集団、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団、および前記Ｔｃｏｎの集団を注入することを含む、請求項１０５〜１２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２６】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ＨＳＰＣの集団の少なくとも１２時間後に投与される、請求項１０５〜１２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２７】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ＨＳＰＣの集団の２４〜９６時間後に投与される、請求項１０５〜１２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２８】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ＨＳＰＣの集団の３６〜６０時間後に投与される、請求項１０５〜１２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２９】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団の少なくとも１２時間後に投与される、請求項１０５〜１２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３０】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団の２４〜９６時間後に投与される、請求項１０５〜１２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３１】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団の３６〜６０時間後に投与される、請求項１０５〜１３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３２】
前記ヒト対象が、前記Ｔｃｏｎの集団の投与後３０日以内に移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）を発症しない、請求項１０５〜１３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３３】
前記ヒト対象が、前記Ｔｃｏｎの集団の投与後１００日以内に移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）を発症しない、請求項１０５〜１３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３４】
前記ヒト対象が、前記Ｔｃｏｎの集団の投与後２００日以内に移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）を発症しない、請求項１０５〜１３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３５】
前記ヒト対象が、前記Ｔｃｏｎの集団の投与後１年以内に移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）を発症しない、請求項１０５〜１３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３６】
前記ヒト対象が、癌について処置されている、請求項１０５〜１３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３７】
前記投与することにより、投与前の前記ヒト対象に比して、前記ヒト対象における造血キメリズムが増強される、請求項１０５〜１３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３８】
前記投与することにより、投与前の前記ヒト対象に比して、前記ヒト対象における癌の寛解が増強される、請求項１０５〜１３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３９】
前記ＨＳＰＣの集団が、前記ヒト対象に対して同種である、請求項１０５〜１３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４０】
前記ＨＳＰＣの集団が、前記ヒト対象に対してＨＬＡ適合であるドナーから得られる、請求項１０５〜１３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４１】
前記ＨＳＰＣの集団が、前記ヒト対象に対してＨＬＡ不適合であるドナーから得られる、請求項１０５〜１３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４２】
前記ＨＳＰＣの集団が、前記ヒト対象に対してハプロタイプ一致であるドナーから得られる、請求項１０５〜１３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４３】
前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記ヒト対象に対して同種である、請求項１０５〜１４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４４】
前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記ヒト対象に対してＨＬＡ適合であるドナーから得られる、請求項１０５〜１４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４５】
前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記ヒト対象に対してＨＬＡ不適合であるドナーから得られる、請求項１０５〜１４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４６】
前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記ヒト対象に対してハプロタイプ一致であるドナーから得られる、請求項１０５〜１４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４７】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ヒト対象に対して同種である、請求項１０５〜１４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４８】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ヒト対象に対してＨＬＡ適合であるドナーから得られる、請求項１０５〜１４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４９】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ヒト対象に対してＨＬＡ不適合であるドナーから得られる、請求項１０５〜１４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５０】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ヒト対象に対してハプロタイプ一致であるドナーから得られる、請求項１０５〜１４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５１】
前記ヒト対象に、移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）予防剤を投与することをさらに含む、請求項１０５〜１５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５２】
前記ＧＶＨＤ予防剤が、タクロリムスまたはシロリムスである、請求項１５１に記載の方法。
【請求項１５３】
前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団の投与前に凍結保存されていない、請求項１０５〜１５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５４】
前記Ｔｃｏｎの集団が、前記Ｔｃｏｎの集団の投与前に凍結保存されている、請求項１０５〜１５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５５】
前記Ｔｃｏｎの集団が、末梢血から得られる、請求項１０５〜１５４のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
初回寛解後の白血病およびリンパ腫などの高リスク血液悪性腫瘍を有するかまたは難治性の再発を有する患者は、標準的な化学療法ではほとんど治癒しない。
【０００２】
骨髄破壊的同種造血細胞移植（ＨＣＴ）は、これらの患者における生存率の改善に関連し、無病生存率が１０〜５０％の範囲であり、非再発死亡率が３０〜５０％の範囲である。急性移植片対宿主疾患（ａＧＶＨＤ）に関連する早期病的状態および死亡率は、慢性ＧＶＨＤに関連する長期病的状態と同様に、ＨＣＴの成功を制限する主な要因である。
【０００３】
参照による組み込み
本明細書で言及されるすべての刊行物、特許、および特許出願は、各個々の刊行物、特許、または特許出願が参照により組み込まれるように具体的かつ個別に示されるのと同じ程度に、参照により本明細書に組み込まれる。
【発明の概要】
【０００４】
いくつかの実施形態では、処置を必要とするヒト対象を処置する方法であって、前記ヒト対象に、ａ）造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）の集団、ｂ）制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を含む細胞の集団、およびｃ）通常型Ｔ細胞（Ｔｃｏｎ）の集団を投与することを含み、前記ＨＳＰＣの集団および前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記Ｔｃｏｎの集団の前に投与され、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の投与前に凍結保存されていない、方法が本明細書に開示される。
【０００５】
いくつかの実施形態では、処置を必要とするヒト対象を処置する方法であって、前記ヒト対象に、ａ）造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）の集団、ｂ）制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を含む細胞の集団、およびｃ）通常型Ｔ細胞（Ｔｃｏｎ）の集団を投与することを含み、前記ＨＳＰＣの集団および前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記通常型Ｔ細胞の集団の前に投与され、前記ヒト対象が、前記Ｔｃｏｎの集団の投与後３０日以内に移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）を発症しない、方法が本明細書に開示される。
【０００６】
いくつかの実施形態では、処置を必要とするヒト対象を処置する方法であって、前記ヒト対象に、ａ）造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）の集団、ｂ）制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を含む細胞の集団、およびｃ）通常型Ｔ細胞（Ｔｃｏｎ）の集団を投与することを含み、前記ＨＳＰＣの集団および前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記Ｔｃｏｎの集団の前に投与され、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、ＣＤ４５＋細胞を含み、前記ＣＤ４５＋細胞の９０％超が、Ｔｒｅｇである、方法が本明細書に開示される。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】Ｔｃｏｎの前にＨＳＰＣおよびＴｒｅｇを投与することを含む臨床試験の患者の特徴を提供する。
【図２】元の臨床プロトコルスキームおよび修正された臨床プロトコルスキームを例示する。
【図３】対象への投与のための末梢血アフェレシス生成物由来のＴｒｅｇ細胞の濃縮を例示する。
【図４】混合リンパ球反応（ＭＬＲ）におけるＴｒｅｇを含む細胞の集団の抑制能力を例示する。
【図５】Ｔｃｏｎの前にＨＳＰＣおよびＴｒｅｇを投与することを含む臨床試験の用量漸増スキームを例示する。
【図６】新鮮なＴｒｅｇによる移植片の生成および投与の概略図を提供する。
【図７】臨床試験におけるドナー由来のＴｒｅｇの細胞用量収率を示す。
【図８】臨床試験における対象のための細胞投与の詳細を提供する。
【図９】臨床試験の臨床転帰データを要約する。
【図１０】ＨＣＴ後の標準化時点での免疫細胞再構築を例示する。
【図１１】ＨＣＴの６０日後におけるＴｒｅｇの特徴およびＨＣＴの９０日後におけるＴｒｅｇ  ＴＣＲレパートリーの多様性を例示する。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
以下の記載および例は、本発明の実施形態を詳細に例示する。本発明は、本明細書に記載される特定の実施形態に限定されず、したがって変動し得ることを理解されたい。当業者は、本発明の多くの変形および修正が存在することを認識し、これらはその範囲内に包含される。
【０００９】
本明細書で使用する場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が別のことを明示的に示さない限り、複数の指示対象を含む。
【００１０】
本明細書で使用する場合、参照数値およびその文法的等価物に関連して、「約」という用語およびその文法的等価物は、その値からプラスまたはマイナス１０％の範囲の値を含むことができる。例えば、「約１０」の量は、９〜１１の量を含む。参照数値に関連して、「約」という用語はまた、その値からプラスまたはマイナス１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、または１％の範囲の値を含むことができる。
【００１１】
概要
本明細書には、同種造血幹細胞移植（ＨＣＴ）の改善のための方法が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示の方法は、移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）を予防または軽減しながら、癌を有する対象に投与されたＨＣＴの移植片対腫瘍（ＧＶＴ）効果を保持する。
【００１２】
ＨＣＴは、通常はドナーの骨髄、末梢血、または臍帯血に由来する多能性造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）をレシピエントに移植することである。レシピエントを、腫瘍細胞および宿主免疫細胞を含む造血細胞を死滅させることができる骨髄破壊的前処置に供することができる。次いで、レシピエントに移入されるＨＳＰＣは、造血コンパートメントを再構成することができる。ＨＣＴは、移植片対腫瘍（ＧＶＴ）と称されるドナーＴ細胞が抗腫瘍効果を発揮する能力に起因する癌の処置として有用であり得る。化学療法に対して不応性である血液悪性腫瘍を有する患者において、ＨＣＴは、生存率の改善に関連している。
【００１３】
しかしながら、ドナーＴ細胞はまた、非腫瘍宿主細胞を攻撃し、これにより、移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）が生じ得る。ＧＶＨＤは、ＨＣＴ後合併症の主な原因であり、致命的であり得る。ＧＶＨＤの管理には、毒性を引き起こし、感染に対する感受性を増加させ、または抗腫瘍免疫を鈍化させることができる免疫抑制療法または細胞傷害性媒介物（ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ｍｅｄｉａｔｉｏｎ）が必要とされ得る。急性移植片対宿主疾患（ａＧＶＨＤ）に関連する早期病的状態および死亡率は、慢性ＧＶＨＤ（ｃＧＶＨＤ）に関連した長期病的状態と同様に、ＨＣＴの成功を制限する主な要因である。ＧＶＨＤは、ＨＬＡ適合移植および不適合移植の両方のリスクである。ＧＶＨＤは、ドナーおよびレシピエントがＨＬＡ適合であっても発生し得るが、それは、免疫系が、依然としてそれらの組織間の他の違いを認識することができるからである。様々な免疫抑制剤の使用にもかかわらず、ＨＬＡ適合同胞ドナー（ＭＳＤ）由来の同種ＨＣＴ後のａＧＶＨＤの発生率は、２０〜６０％である。
【００１４】
ＧＶＴおよびＧＶＨＤの両方は、Ｔ細胞受容体による同族抗原の認識時に免疫応答を開始する通常型Ｔ細胞（Ｔｃｏｎ）によって主に媒介される。ＨＣＴ移植片からＴ細胞を枯渇させることにより、ＧＶＨＤが軽減され得るが、ＧＶＴの軽減および癌再発の可能性の増加も引き起こし得る。Ｔｃｏｎに加えて、Ｔｒｅｇは、炎症を負に制御し、かつ、免疫寛容を促進するＴ細胞の追加のサブセットである。Ｔｒｅｇは、例えば、レシピエント抗原を認識するドナーＴｃｏｎによって誘発される炎症を含む炎症の負の制御により、ＧＶＨＤを予防または軽減することができる。
【００１５】
ＨＳＰＣを含む集団、Ｔｒｅｇを含む集団、およびＴｃｏｎを含む集団を含む、細胞の特定の集団を対象に投与することを含む、ＨＣＴの改善のための方法が本明細書に提供される。理論に束縛されることを望むものではないが、Ｔｒｅｇの投与により、ＧＶＨＤを軽減させることができ、Ｔｃｏｎの投与により、ＧＶＴが増強され、したがって、本開示は、両方を投与して、ＧＶＨＤを最小限に抑えながらＧＶＴを増強するための方法を提供する。理論に束縛されることを望むものではないが、本発明のこれらの有益な態様は、本明細書に記載の細胞を投与する順序（例えば、Ｔｃｏｎの前にＴｒｅｇを投与すること）または投与前のＴｒｅｇの凍結保存をしないことに関連付けられ得る。したがって、本明細書に開示される方法は、移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）を予防または軽減しながら、癌を有する対象に提供されるＨＣＴの移植片対腫瘍（ＧＶＴ）効果を保持することができる。いくつかの実施形態では、２つ以上の細胞の集団は、異なる時間に投与され、例えば、ＨＳＰＣおよびＴｒｅｇをＴｃｏｎの前に投与することができる。
【００１６】
１つ以上の細胞の集団は、新鮮であることができ、１つ以上の細胞の集団は、解凍前および対象への投与前に凍結保存することができる。理論に束縛されることを望むものではないが、新鮮なＴｒｅｇを投与することにより、対象のＧＶＨＤを軽減させることができ、および／または凍結保存されたＴｃｏｎを投与することにより、対象のＧＶＨＤを軽減させることができる。例えば、新鮮なＴｒｅｇの後に凍結保存されたＴｃｏｎを投与することにより、対象におけるＧＶＨＤを軽減させ、対象におけるＧＶＴを促進させ、またはＧＶＨＤの不在下で対象におけるＧＶＴを促進させることができる。
【００１７】
本開示はまた、高い割合のＴｒｅｇを含む細胞の集団を生成するように選別された、Ｔｒｅｇを含む細胞の集団を提供する。いくつかの実施形態では、Ｔｃｏｎを投与する前に、高い割合の新鮮なＴｒｅｇを含む細胞の集団を投与することにより、対象におけるＧＶＨＤを軽減させる。
【００１８】
造血細胞移植および癌
本明細書には、癌を有するレシピエント対象が、造血幹細胞移植（ＨＣＴ）を受ける方法が提供される。ＨＣＴは、対象における癌の処置または軽減に有用であり得る。いくつかの実施形態では、移植片対腫瘍（ＧＶＴ）免疫応答を誘発するために、通常型Ｔ細胞（Ｔｃｏｎ）の集団が対象に投与される。
【００１９】
高リスクの血液悪性腫瘍を有する患者は、標準的な化学療法で治癒されることはほとんどない。高リスクの悪性腫瘍には、例えば、初回寛解後に進行した白血病もしくはリンパ腫、またはリフラクトリー・リラプスを伴う白血病もしくはリンパ腫が含まれる。骨髄破壊的同種造血幹細胞移植（ＨＣＴ）は、これらの患者における生存率の改善に関連し、無病生存率が１０〜５０％の範囲であり、非再発死亡率が３０〜５０％の範囲である。
【００２０】
造血幹細胞移植（ＨＣＴ）は、通常は骨髄、末梢血、または臍帯血に由来する、多能性造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）の移植である。ＨＳＰＣは、広範な自己再生能、および特殊な細胞種に分化する能力、例えば、全ての造血細胞系統を再構築する能力を有し得る。ＨＳＰＣは、２つの娘細胞が異なる表現型で産生される非同調（ａｓｙｎｃｈｒｏｎｏｕｓ）複製を受け得る。造血幹細胞は、有糸分裂静止形態で存在し得る。
【００２１】
ＨＳＰＣは、骨髄または末梢血から採取することによって得ることができる。骨髄は、ドナーが局所麻酔下または全身麻酔下にある際に、後腸骨稜または前腸骨稜から吸引することができる。ＨＳＰＣは、例えば末梢血アフェレシスによって、末梢血から採取することによって得ることができる。採取された幹細胞の数は、動員剤（ｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｇｅｎｔ）、すなわち、幹細胞を骨髄から末梢血に動員する薬剤でドナーを処置することによって増加させることができる。動員剤の非限定的な例には、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、モゾビル、およびこれらの組み合わせが含まれる。幹細胞を末梢血中に動員するための技術は、例えば、１０〜４０μ／ｋｇ／日の動員剤をドナーに投与することを含むことができる。動員剤は、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０回の投与でドナーに投与することができる。アフェレシス生成物は、例えば、動員剤の投与の約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、２８、または３０時間後にドナーから単離することができる。
【００２２】
本開示の方法は、癌を有するヒト対象を処置するために使用することができる。いくつかの実施形態では、対象は、癌に対して、例えば化学療法剤または放射線での治療によって処置されている。本開示の方法は、血液悪性腫瘍、例えば、白血病またはリンパ腫の処置に有用であり得る。本開示の方法によって処置することができる血液悪性腫瘍の例には、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、ならびにホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫などのリンパ腫が含まれるが、これらに限定されない。癌は、固形腫瘍であり得る。いくつかの実施形態では、癌は、原発性または転移性の腫瘍である。
【００２３】
本発明の方法を使用して処置することができる癌の種類には、白血病、リンパ腫、副腎皮質癌、肛門癌、再生不良性貧血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨転移、脳癌、中枢神経系（ＣＮＳ）癌、末梢神経系（ＰＮＳ）癌、乳癌、子宮頸癌、小児非ホジキンリンパ腫、結腸癌および直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、ユーイング腫瘍ファミリー（例えば、ユーイング肉腫）、眼の癌、胆嚢癌、胃腸カルチノイド腫瘍、胃腸間質腫瘍、妊娠性絨毛性疾患、有毛細胞白血病、ホジキンリンパ腫、カポジ肉腫、腎臓癌、喉頭および咽頭癌、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、小児白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、肝臓癌、肺癌、肺カルチノイド腫瘍、男性乳癌、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、骨髄増殖性障害、副鼻腔癌および鼻腔癌、鼻咽頭癌、神経芽細胞腫、口腔癌および口腔咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、陰茎癌、下垂体腫瘍、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、肉腫、黒色腫皮膚癌、非黒色腫皮膚癌、胃癌、精巣癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮癌（例えば、子宮肉腫）、移行上皮癌、膣癌、外陰癌、中皮腫、扁平上皮癌または類表皮癌、気管支腺腫、絨毛癌、頭頸部癌、奇形腫、およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症が含まれるが、これらに限定されない。
【００２４】
造血細胞移植および移植片対宿主疾患
本開示は、造血幹細胞移植（ＨＣＴ）の改善のための方法であって、ＧＶＨＤを軽減または予防する、方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＨＣＴレシピエント対象に、本明細書に記載の細胞の集団が投与され、レシピエント対象は、細胞の投与後の特定の期間内に（例えば、３０日、１００日、または２００日以内に）ＧＶＨＤを発症しない。例えば、本明細書に記載の細胞の集団をＨＣＴレシピエント対象に投与することができ、レシピエント対象がＧＶＨＤを発症する可能性は、異なるプロトコルに従ってＨＣＴを受けた対象に比して、細胞の投与後の特定の期間内において（例えば、３０日、１００日、または２００日以内において）軽減し得る。Ｔｒｅｇを含む細胞の集団は、ＨＣＴレシピエント対象に投与することができ、Ｔｒｅｇの集団は、ＨＣＴレシピエント対象におけるＧＶＨＤを軽減または予防する役割を果たすことができる。新鮮なＴｒｅｇを含む細胞の集団は、ＨＣＴレシピエント対象に投与することができ、ＨＣＴレシピエント対象におけるＧＶＨＤを軽減または予防する役割を果たすことができる。いくつかの実施形態では、高い割合のＴｒｅｇ（例えば、ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋またはＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍ細胞）を含む細胞の集団がＨＣＴレシピエント対象に投与され、ＨＣＴレシピエント対象におけるＧＶＨＤを軽減または予防する役割を果たす。
【００２５】
移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）は、同種移植環境において生じ得る炎症性疾患である。ＧＶＨＤは、ドナー細胞（移植片）がレシピエント細胞（宿主）を攻撃することを伴う。ＧＶＨＤは、急性ＧＶＨＤ（ａＧＶＨＤ）および慢性ＧＶＨＤ（ｃＧＶＨＤ）に分類することができる。ａＧＶＨＤは、典型的には、移植後の最初の３ヶ月に生じる。ａＧＶＨＤは、生命を脅かし得、例えば、皮膚、腸、および／または肝臓に浸潤し得る。ｃＧＶＨＤは、典型的には、移植後の最初の３ヶ月後に生じる。ｃＧＶＨＤは、後期処置関連合併症の主要原因であり、生命を脅かし得る。炎症に加えて、ｃＧＶＨＤは、線維症の発症を生じさせ得、これは機能障害をもたらし得る。
【００２６】
急性移植片対宿主疾患（ａＧＶＨＤ）に関連する早期病的状態および死亡率は、慢性ＧＶＨＤ（ｃＧＶＨＤ）に関連する長期病的状態と同様に、ＨＣＴの成功を制限する主な要因である。タクロリムス、シクロスポリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸塩、抗胸腺細胞グロブリン、およびコルチコステロイドなどの様々な免疫抑制剤の使用にもかかわらず、ＨＬＡ適合同胞ドナー（ＭＳＤ）からの同種ＨＣＴ後のａＧＶＨＤの発生率は、２０〜６０％である。ＭＳＤおよびＴ細胞が豊富な（Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｐｌｅｔｅ）移植片を使用して同種ＨＣＴを受けた患者の約３分の１が、慢性ＧＶＨＤを発症する。
【００２７】
ＧＶＨＤ重症度は、例えばＧｌｕｃｋｓｂｅｒｇグレード（Ｉ〜ＩＶ）または国際骨髄移植レジストリ（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｏｎｅ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｒｅｇｉｓｔｒｙ）（ＩＢＭＴＲ）グレード分類システム（Ａ〜Ｄ）を使用して、グレード分類することができる。急性ＧＶＨＤの重症度は、皮膚、肝臓、および消化管の浸潤の程度の評価によって決定される。個々の臓器浸潤のステージを患者のパフォーマンスステータスと組み合わせて（Ｇｌｕｃｋｓｂｅｒｇ）、または組み合わせずに（ＩＢＭＴＲ）、予後に関して重要であり得る総合的グレードを生成する。グレード分類は、予防または処置に対する応答、生存率に対する影響、および移植片対白血病効果との関連性を評価する観点から重要である。
【００２８】
グレードＩ（Ａ）ＧＶＨＤは、軽度の疾患として特徴付けられ、グレードＩＩ（Ｂ）ＧＶＨＤは中程度として特徴付けられ、グレードＩＩＩ（Ｃ）は重度として特徴付けられ、グレードＩＶ（Ｄ）は生命を脅かすものとして特徴付けられる。ＩＢＭＴＲグレード分類システムにより、急性ＧＶＨＤの重症度は次のように定義される。即ち、グレードＡ：ステージ１の皮膚浸潤のみ（体の２５％未満にわたる斑点状丘疹）、肝臓または胃腸浸潤なし、グレードＢ：ステージ２の皮膚浸潤、ステージ１〜２の腸または肝臓浸潤、グレードＣ：ステージ３の任意の臓器系の浸潤（全身性紅皮症、ビリルビン６．１〜１５．０ｍｇ／ｄＬ、下痢１５００〜２０００ｍＬ／日）、グレードＤ：ステージ４の任意の臓器系の浸潤（水疱形成を伴う全身性紅皮症、ビリルビン＞１５ｍｇ／ｄＬ、下痢＞２０００ｍＬ／日または疼痛またはイレウス）である。中程度から重度のＧＶＨＤを有する患者は、軽度の疾患を有する患者と比較して有意に高い死亡率を有し、例えば、グレードＩＩＩ（Ｃ）のａＧＶＨＤを有する患者の推定５年間生存率は２５％であるが、グレードＩＶ（Ｄ）の患者の推定５年間生存率は５％である。
【００２９】
ＧＶＨＤの管理は、免疫抑制療法（例えば、高用量コルチコステロイド、免疫抑制剤の長期投与）または細胞傷害性媒介物を必要としてもよく、これらは全て、毒性に関連する。多くの場合、免疫抑制療法は、ＧＶＨＤを効果的に処置し得ないか、または感染に対する感受性の増加もしくは抗腫瘍免疫の鈍化をもたらし得る。
【００３０】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、ＨＣＴレシピエント対象におけるＧＶＨＤを予防または軽減する。例えば、本明細書に開示される方法は、ＨＣＴを受けた対象におけるＧＶＨＤの任意の発現を予防することができる。
【００３１】
本明細書に開示される方法は、例えば、ＨＣＴを受けた対象におけるステージ１以上の任意のＧＶＨＤ、ステージ２以上の任意のＧＶＨＤ、ステージ３以上の任意のＧＶＨＤ、またはステージ４の任意のＧＶＨＤを予防することができる。
【００３２】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、本明細書に開示される細胞の集団を投与した後、少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３６５、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００日間超またはそれ以上の間、ＨＣＴを受けた対象におけるステージ１、２、３、または４の任意のＧＶＨＤを予防する。
【００３３】
本開示は、本明細書に開示される細胞の集団を投与した後、最大で約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３６５、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００日間またはそれ以下の間、ＨＣＴを受けた対象におけるステージ１、２、３、または４の任意のＧＶＨＤを予防することができる方法を提供する。
【００３４】
本開示は、例えば、ＨＣＴを受けた対象において、グレードＡ以上の任意のＧＶＨＤ、グレードＢ以上の任意のＧＶＨＤ、グレードＣ以上の任意のＧＶＨＤ、またはグレードＤの任意のＧＶＨＤを予防することができる方法を提供する。
【００３５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、本明細書に開示される細胞の集団を投与した後、少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３６５、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００日間超またはそれ以上の間、ＨＣＴを受けた対象におけるグレードＡ、Ｂ、Ｃ、またはＤの任意のＧＶＨＤを予防することができる。
【００３６】
本開示は、本明細書に開示される細胞の集団を投与した後、最大で約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３６５、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０，１０００間日またはそれ以下の間、ＨＣＴを受けた対象におけるグレードＡ、Ｂ、Ｃ、またはＤの任意のＧＶＨＤを予防することができる方法を提供する。
【００３７】
本明細書に開示される方法は、例えば、他のＨＣＴ方法に比して、ステージ１以上、ステージ２以上、ステージ３以上、またはステージ４のＧＶＨＤを示すＨＣＴレシピエント対象の割合を低下させることができる。
【００３８】
本明細書に開示される方法は、例えば、本明細書に開示される細胞の集団を投与した後、他のＨＣＴ方法に比して、少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３６５、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００日間またはそれ以上の間、ステージ１以上、ステージ２以上、ステージ３以上、またはステージ４のＧＶＨＤを示すＨＣＴレシピエント対象の割合を低下させることができる。
【００３９】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、本明細書に開示される細胞の集団を投与した後、他のＨＣＴ方法に比して、最大で約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３６５、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００日間またはそれ以下の間、ステージ１以上、ステージ２以上、ステージ３以上、またはステージ４のＧＶＨＤを示すＨＣＴレシピエント対象の割合を低下させる。
【００４０】
本明細書には、例えば、他のＨＣＴ方法に比して、グレードＡ以上、グレードＢ以上、グレードＣ以上、またはグレードＤのＧＶＨＤを示すＨＣＴレシピエント対象の割合を低下させることができる方法が開示される。
【００４１】
本明細書に開示される方法は、例えば、本明細書に開示されるような細胞の集団を投与した後、他のＨＣＴ方法に比して、少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３６５、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００日間またはそれ以上の間、グレードＡ以上、グレードＢ以上、グレードＣ以上、またはグレードＤのＧＶＨＤを示すＨＣＴレシピエント対象の割合を低下させることができる。
【００４２】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、本明細書に開示される細胞の集団を投与した後、他のＨＣＴ方法に比して、最大で約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３６５、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００日間またはそれ以下の間、グレードＡ以上、グレードＢ以上、グレードＣ以上、またはグレードＤのＧＶＨＤを示すＨＣＴレシピエント対象の割合を低下させる。
【００４３】
ＨＣＴおよびＧＶＨＤにおける免疫細胞
本明細書には、造血幹細胞移植（ＨＣＴ）の改善のための方法であって、例えば、ＴｃｏｎがＨＳＰＣおよび／もしくはＴｒｅｇの後に投与されない、またはＴｒｅｇが凍結保存されている、またはＴｃｏｎが凍結保存されていない、あるいはそれらの任意の組み合わせである比較可能な処置方法と比較して、ＧＶＨＤが軽減または予防される、方法が提供される。通常型Ｔ細胞（Ｔｃｏｎ）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、インバリアントナチュラルキラーＴ細胞（ｉＮＫＴ）、および記憶Ｔ細胞（Ｔｍｅｍ）などの免疫細胞のサブセットは、ＨＣＴ後のＧＶＨＤの態様に寄与し得、例えば、ＧＶＴ免疫応答、免疫再構成、感染感受性、および生存率に寄与し得る。
【００４４】
本明細書には、ＴｃｏｎおよびＴｒｅｇの集団をＨＣＴレシピエント対象に投与することを含む方法が開示される。いくつかの実施形態では、ｉＮＫＴも投与される。いくつかの実施形態では、Ｔｍｅｍも投与される。本開示は、ＨＣＴレシピエント対象における臨床転帰の成功に寄与するこれらの細胞の集団を投与するためのパラメータを提供する。理論に束縛されることを望むものではないが、ＨＣＴレシピエント対象における臨床転帰の成功に寄与し得るパラメータには、例えば、投与される集団、異なる集団の投与の順序およびタイミング、集団の純度基準、集団を得るための方法、集団を取り扱うまたは保存する方法（例えば、新鮮な細胞の集団対凍結細胞の集団の使用）、投与される集団の投与量、集団を得るための方法、およびこれらの組み合わせが含まれる。
【００４５】
ＧＶＨＤは、レシピエント抗原の認識時に炎症反応を引き起こし得るドナーＴ細胞によって主に媒介される。ドナー移植片のＴ細胞枯渇（ＴＣＤ）は、急性および慢性のＧＶＨＤの可能性を低下させるために行うことができる。Ｔ細胞は、レクチンなどのタンパク質リガンドへのＴ細胞の物理的吸着、Ｔ細胞特異的抗体を用いた免疫除去、および免疫親和性技術（例えば、免疫吸着カラムでのＴ細胞もしくはリンパ球特異的抗体の使用、磁気活性化細胞選別（ＭＡＣＳ）、または蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ））を含むがこれらに限定されない方法を使用して、枯渇させることができる。ＴＣＤ技術をドナー移植片に適用することにより、Ｔ細胞が１０倍〜１０５倍枯渇し、ＧＶＨＤの発生率が低下し得る。しかしながら、Ｔ細胞の欠如により、移植片対腫瘍（ＧＶＴ）免疫応答が低減し得るため、ＴＣＤにより、癌再発の発生率も増加し得る。さらに、ＴＣＤにより、免疫回復が損われ、感染に対する感受性が増加し得る。
【００４６】
ＧＶＴおよびＧＶＨＤは両方とも、Ｔ細胞受容体による同族抗原（ＧＶＴの腫瘍抗原、ＧＶＨＤの非腫瘍レシピエント抗原）の認識時に免疫応答を開始する通常型Ｔ細胞（Ｔｃｏｎ）によって主に媒介される。Ｔｃｏｎは、例えば、ＧＶＴ、ＧＶＨＤ、またはこれらの組み合わせに寄与し得る。理論に束縛されることを望むものではないが、Ｔｒｅｇ投与後のＴｃｏｎ投与により、ＧＶＴ免疫が増強され、および／または感染に対する感受性を低減させることができる。
【００４７】
本明細書で使用する場合、Ｔｃｏｎは、広義には、全てのＣＤ３＋Ｔ細胞、中程度〜高レベルのＣＤ１２７を発現する細胞、ＣＤ３および中程度〜高レベルのＣＤ１２７を発現する細胞、またはＣＤ３、中程度〜高レベルのＣＤ１２７、およびＣＤ４もしくはＣＤ８を発現する細胞を指すことができる。いくつかの実施形態では、Ｔｃｏｎは、Ｖα２４Ｊα１８ＴＣＲを発現しない。ＴｃｏｎおよびＴｒｅｇは、互いに排他的でない細胞の集団であり得る。いくつかの実施形態では、ＴｃｏｎおよびＴｒｅｇは、互いに排他的な細胞の集団である。
【００４８】
制御性Ｔ細胞（「Ｔｒｅｇ」）は、免疫系の活性化を抑制し、それによって免疫寛容を維持することができるＴ細胞の特殊な亜集団である。理論に束縛されることを望むものではないが、本開示の方法によって投与されるＴｒｅｇの集団は、例えば、移植レシピエントにおけるＧＶＨＤを軽減もしくは予防し、および／または移植レシピエントにおける免疫再構成を改善することによって、良い臨床転帰に寄与し得る。通常型Ｔ細胞（Ｔｃｏｎ）を投与する前にＨＳＰＣと共にＴｒｅｇを投与することにより、例えば、移植片対腫瘍（ＧＶＴ）の保持およびＧＶＨＤの予防を促進することができる。通常型Ｔ細胞（Ｔｃｏｎ）を投与する前にＨＳＰＣと共にＴｒｅｇを投与することにより、例えば、代替のＨＣＴ方法に比して、移植片対腫瘍（ＧＶＴ）の保持を促進し、ＧＶＨＤを軽減することができる。通常型Ｔ細胞（Ｔｃｏｎ）を投与する前にＨＳＰＣと共にＴｒｅｇを投与することにより、例えば、代替のＨＣＴ方法に比して、移植片対腫瘍（ＧＶＴ）効果の保持を促進し、ＧＶＨＤのリスクを軽減することができる。理論に束縛されることを望むものではないが、例えば代替のＨＣＴ方法に比して、Ｔｒｅｇの投与により、ＧＶＨＤを予防することができ、Ｔｃｏｎの投与により、ＧＶＴ効果を促進することができる。いくつかの実施形態では、代替のＨＣＴ方法に比して、Ｔｒｅｇを投与することより、ＧＶＨＤを発症するリスクを低下させ、Ｔｃｏｎを投与することにより、ＧＶＴ効果を促進する。
【００４９】
天然の制御性Ｔ細胞（ｎＴｒｅｇ）および誘導性制御性Ｔ細胞（ｉＴｒｅｇ）を含む様々な種類のＴｒｅｇ、例えば、ＴＣＲαβ＋ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞がある。ｎＴｒｅｇは、胸腺で産生され、長寿命の自己抗原特異的リンパ球系として末梢に送達されるＴ細胞である。ｉＴｒｅｇは、循環リンパ球から動員され、末梢における特定の刺激条件下で制御特性を得る。ｎＴｒｅｇおよびｉＴｒｅｇは、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋であり、両方とも用量依存的様式でＣＤ４＋ＣＤ２５−Ｔ細胞の増殖を阻害することができ、両方ともアネルギー性であり、ＴＣＲ刺激時に増殖しない。ＣＤ４およびＣＤ２５に対して陽性であることに加えて、Ｔｒｅｇは、細胞内マーカーである転写因子ＦＯＸＰ３に対して陽性である。Ｔｒｅｇは、様々なマーカー発現プロファイルに基づいて同定または選択され得る。Ｔｒｅｇを選択するために使用することができるマーカー発現プロファイルの非限定的な例には、（１）ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍ、（２）ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋、（３）ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋、（５）ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍ、（６）ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍＦＯＸＰ３＋、（７）ＣＤ３＋ＦＯＸＰ３＋、（８）ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋、（９）ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋、（１０）ＣＤ３＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋、（１１）ＣＤ３＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍ、（１２）ＣＤ４＋ＣＤ２５＋、（１３）ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍＦＯＸＰ３＋、（１４）ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋、（１５）ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋、（１６）ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋、または（１７）ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍが含まれる。
【００５０】
特定の発現プロファイルに基づく選択は、細胞外マーカーに基づいて、細胞透過性を必要とせずに、例えばＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍに基づく選択によって達成することができる。
【００５１】
本開示の方法において、ＨＣＴを受けた対象にＴｒｅｇを投与することは、例えば、移植片拒絶を予防するために役立ち、ＧＶＨＤを予防するために役立ち、ＧＶＨＤを軽減するために役立ち、造血再構成を促進し、免疫再構成を促進し、混合キメリズムを促進し、またはこれらの組み合わせであり得る。
【００５２】
本開示の方法において、インバリアントナチュラルキラーＴ細胞（ｉＮＫＴ）を対象に投与することができる。ｉＮＫＴは、ヒトにおけるＶα２４Ｊα１８ＴＣＲα鎖（本明細書では「Ｖα２４Ｊα１８＋」と称する）を含む高度に保存されたαβ−Ｔ細胞受容体を発現するＣＤ１ｄ拘束性ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞のサブクラスである。ｉＮＫＴ細胞は、α−ガラクトシルセラミド（ＧａｌＣｅｒ）、ＰＢＳ−５７、ＰＢＳ−４４、または他の天然もしくは合成糖脂質を充填したＣＤ１ｄ多量体と結合させることによって同定することができ、四量体、デンドリマー、および他の構造、Ｆｃ融合物、またはこれらの任意の組み合わせとして見出すことができる。別の同定方法は、抗体またはＶα２４Ｊα１８領域を特異的に認識する抗体の組み合わせである。例には、Ｖα２４抗体、Ｊα１８抗体、またはＶα２４Ｊα１８ＴＣＲの特有の領域に特異的に結合し、かつ、ｉＮＫＴ細胞を同定するために使用することができるモノクローナル抗体クローン６Ｂ１１が含まれる。ｉＮＫＴは、ＣＤ３＋Ｖα２４Ｊα１８＋であり得る。
【００５３】
本開示の方法において、ｉＮＫＴをＨＣＴを受けた対象に投与することにより、例えば、生着が促進され、ＧＶＴが促進され、ＧＶＨＤが軽減され、癌再発に対する感受性が低下し、感染に対する感受性が低下し、またはこれらの組み合わせであり得る。いくつかの実施形態では、ｉＮＫＴは、Ｔｒｅｇの活性を促進する。いくつかの実施形態では、ｉＮＫＴは、ＨＳＰＣの活性を促進する。
【００５４】
本開示の方法において、記憶Ｔ細胞（Ｔｍｅｍ）が対象に投与され得る。Ｔｍｅｍは、例えば、表現型マーカーＣＤ４５ＲＯ、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＣＤ３、ＣＤ４またはＣＤ８、ＣＤ９５、およびＩＬ−２Ｒβ発現する、抗原経験（ａｎｔｉｇｅｎ  ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅｄ）Ｔ細胞を指すことができる。記憶Ｔ細胞は、免疫を提供し、非活性状態で長期間持続することができる。記憶Ｔ細胞は、抗原による再チャレンジ（ｒｅ−ｃｈａｌｌｅｎｇｅ）時に、急速にエフェクター機能を獲得することができる。記憶Ｔ細胞の集団には、サブクラスである中心記憶Ｔ細胞およびエフェクター記憶Ｔ細胞の任意の組み合わせを含むことができる。いくつかの実施形態では、Ｔｍｅｍは、ＣＤ３＋ＣＤ４５ＲＡ−ＣＤ４５ＲＯ＋である。本開示の方法において、ＨＣＴを受けた対象に投与されるＴｍｅｍにより、例えば、ＧＶＴが促進され、ＧＶＨＤが軽減され、癌再発に対する感受性が低下し、感染に対する感受性が低下し、またはこれらの組み合わせであり得る。
【００５５】
ＨＬＡタイプおよびドナー／ホスト適合
本開示は、細胞の集団を対象に投与することを含む方法を提供する。レシピエントに投与される細胞の集団は、同種ドナーに由来し得る。候補者およびレシピエントをＨＬＡタイピングして、それらが任意のＨＬＡ対立遺伝子において適合するかどうかを決定することができる。
【００５６】
主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）抗原とも広く称されるヒト白血球抗原（ＨＬＡ）は、細胞に抗原同一性を付与し得る細胞の表面上で発現されるタンパク質分子である。ＨＬＡ／ＭＨＣ抗原は、免疫エフェクター細胞と同じ造血幹細胞源に由来するもの（「自己」）または別の造血細胞源に由来するもの（「非自己」）としてＴ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞によって認識され得る標的分子である。ＨＬＡクラスＩ抗原（ヒトではＡ、Ｂ、およびＣ）は、大多数の細胞によって発現されるが、ＨＬＡクラスＩＩ抗原（ヒトではＤＲ、ＤＰ、およびＤＱ）は、主にプロフェッショナル抗原提示細胞で発現される。両方のＨＬＡクラスがＧＶＨＤに関与している。
【００５７】
ＨＬＡ抗原は、高多型（ｈｉｇｈｌｙ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ）遺伝子によってコードされ、各ＨＬＡクラスＩおよびＩＩ遺伝子について様々な対立遺伝子が存在する。対立遺伝子産物は、αおよび／またはβドメイン（複数可）中の１つ以上のアミノ酸において異なる。特定の抗体または核酸試薬のパネルは、クラスＩおよびクラスＩＩ分子を発現する白血球を使用して個体のＨＬＡハプロタイプをタイピングするために使用される。ＨＬＡ対立遺伝子は、様々なレベルの詳細で説明され得る。殆どの命名は、ＨＬＡおよび遺伝子座の名称で始まり、次いで、＊および対立遺伝子を特定するいくつかの（偶数）桁数である。最初の２桁は、対立遺伝子の群を特定する。古いタイピング方法論は、対立遺伝子を完全に区別できないことが多く、このレベルで中断した。第３桁から第４桁は、同義の対立遺伝子を特定する。第５桁から第６桁は、遺伝子のコードフレーム内の任意の同義の変異を示す。第７桁および第８桁は、コード領域外の変異を区別する。Ｌ、Ｎ、Ｑ、またはＳなどの文字が、発現レベルまたはこれに関する既知の他の非ゲノムデータを特定するために、対立遺伝子の命名後にあってもよい。したがって、完全に説明される対立遺伝子は、ＨＬＡ−ｐｒｅｆｉｘおよび遺伝子座表記を含まない、最大９桁の長さであり得る。
【００５８】
３つのＨＬＡ遺伝子は、可能性がある移植ドナーおよびレシピエントのＨＬＡタイピングに最も重要であると考えられ、これは、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、およびＨＬＡ−ＤＲである。ヒト対象はそれぞれ２コピーを保有するため、ＨＬＡタイピングされる遺伝子は合計６つある。
【００５９】
ＨＬＡ適合とは、６つのＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、およびＨＬＡ−ＤＲ対立遺伝子のうちの６つ全てがドナーとレシピエントとの間で適合であるドナー−レシピエントのペアを指す。ＨＬＡ不適合とは、少なくとも１つのＨＬＡ抗原がドナーとレシピエントとの間で不適合であるドナー−レシピエントのペアを指す。ＧＶＨＤは、ドナーおよびレシピエントがＨＬＡ適合であっても発生し得るが、それは、免疫系が、それらの組織間の他の違いを依然として認識することができるためである。
【００６０】
一方の親から遺伝したＨＬＡ対立遺伝子のセットは、ハプロタイプを形成する。いくつかの対立遺伝子およびハプロタイプが他の対立遺伝子よりも一般的であり、それらは異なる人種および民族集団において異なる頻度で分布するため、患者のハプロタイプを同定することは、適合ドナーを見出す確率を予測するために役立ち、検索戦略の開発を支援することができる。ＨＬＡハプロタイプ一致とは、１つの染色体がドナーとレシピエントとの間で少なくともＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、およびＨＬＡ−ＤＲにおいて一致する、ドナー−レシピエントのペアを指す。ハプロタイプ一致であるペアは、他の対立遺伝子、例えば、他の染色体上の他のＨＬＡ遺伝子、またはいずれかの染色体上の追加の組織適合性遺伝子座において適合してもよいし、または適合しなくてもよい。そのようなドナーは、しばしば家族において生じ、例えば、親は、子供とハプロタイプ一致であり、兄弟姉妹は、ハプロタイプ一致であり得る。
【００６１】
本開示は、細胞の集団を対象に投与することを含む方法を提供する。レシピエントに投与される細胞の集団は、同種ドナーに由来し得る。
【００６２】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される細胞の集団は、ドナーおよびレシピエントをＨＬＡタイピングした後、例えば、ドナーおよびレシピエントにおいてＨＬＡ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−ＢおよびＨＬＡ−ＤＲをタイピングにすることによって、ドナーおよびレシピエントがＨＬＡ適合またはＨＬＡ不適合であるかどうかを決定した後、レシピエント対象に投与される。本開示のドナー−レシピエントのペアは、ＨＬＡ適合、ＨＬＡ不適合、またはハプロタイプ一致であり得る。ドナーおよびレシピエントは、親族であり得る（例えば、親、子供、兄弟姉妹、祖父母、孫、叔母、叔父、またはいとこであり得る）。ドナーおよびレシピエントは、親族であり得、ＨＬＡ適合、ＨＬＡ不適合、またはハプロタイプ一致であり得る。ドナーおよびレシピエントは、親族でなくてもよい。
【００６３】
キメリズム
ドナーからレシピエントへの移植細胞の投与後、レシピエントにおいてキメリズムをモニタリングすることができる。キメリズムは、ＨＣＴを受けた個体におけるドナー細胞および宿主細胞の混合を指すことができる。ＧＶＨＤのリスクは、完全キメリズムではなく、混合キメリズムを有する患者において著しく低下し、この理由から混合キメリズムを達成することが望ましい。さらに、免疫不全および感染は、混合キメリズムに対して、完全キメリズムにおいてより頻繁に観察される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、ヒト対象が混合キメリズムを達成することを可能にする。
【００６４】
移植後の任意の時点で所与の細胞系統において９５％超のドナー細胞を示す対象は、完全なドナーキメリズムを有すると称することができる。そのような分析において１％超であるが９５％未満のドナーＤＮＡを示す対象は、混合キメリズムを有すると称することができる。混合キメリズムを示す対象は、キメリズムの進展に従ってさらに分類することができ、混合キメリズムの改善は、少なくとも６ヶ月間にわたるドナー細胞の割合の連続的な増加を含むことができる。安定した混合キメリズムは、ドナー細胞を完全に喪失せずに、時間経過に伴うレシピエント細胞の割合の変動を含み得る。
【００６５】
対象が完全キメラ、混合キメラ、または非キメラであるかどうかの決定は、移植片レシピエント、例えば末梢血または骨髄由来の造血細胞試料の分析によって行うことができる。任意の好都合なタイピング方法によって分析を行うことができる。いくつかの実施形態では、全ての単核細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＣＤ５６＋ＮＫ細胞、およびＣＤ１５＋好中球間でのキメリズムの程度は、マイクロサテライト分析のためのプローブを用いたＰＣＲを使用して定期的にモニタリングされる。例えば、市販のキットを使用して、単鎖末端反復配列長における多型に基づいて、細胞から抽出されたドナーおよび宿主遺伝子材料を定量化することができる。自動リーダーは、人工ドナーおよび宿主細胞混合物からの標準曲線に基づいてドナー種細胞の割合を提供する。
【００６６】
方法
細胞の取得
本開示の１つ以上の細胞の集団は、単一のドナーから得ることができ、例えば、単一のドナーの動員された末梢血アフェレシスから得ることができる。ＨＳＰＣ、Ｔｒｅｇ、Ｔｃｏｎ、ｉＮＫＴ、Ｔｍｅｍ、またはこれらの任意の組み合わせは、単一のドナーから得ることができる。
【００６７】
本開示の１つ以上の細胞の集団は、１人のドナーから得ることができ、本開示の１つ以上の追加の細胞の集団は、第２のドナーから得ることができる。本開示の１つの細胞の集団は、単一のドナーから得ることができ、本開示の第２の細胞の集団は、複数のドナーから得ることができる。
【００６８】
本開示の集団は、複数のドナーから得ることができ、例えば、複数のドナーの動員された末梢血アフェレシスから得ることができる。ＨＳＰＣは、複数のドナーから得ることができる。Ｔｒｅｇは、複数のドナーから得ることができる。Ｔｃｏｎは、複数のドナーから得ることができる。ｉＮＫＴは、複数のドナーから得ることができる。Ｔｍｅｍは、複数のドナーから得ることができる。
【００６９】
本開示のドナーおよびレシピエントは、同種であり得る。本開示のドナーおよびレシピエントは、ＨＬＡ適合であり得る。本開示のドナーおよびレシピエントは、ＨＬＡ不適合、例えば、主なＨＬＡ対立遺伝子のうちの１、２、３、４、５、または６つで不適合であり得る。本開示のドナーおよびレシピエントは、ハプロタイプ一致であり得る。
【００７０】
いくつかの実施形態では、本開示の細胞の集団は、全血から得ることができる。本開示の細胞の集団は、末梢血アフェレシス生成物、例えば、動員された末梢血アフェレシス生成物から得ることができる。本開示の細胞の集団は、少なくとも１つのアフェレシス生成物、２つのアフェレシス生成物、３つのアフェレシス生成物、４つのアフェレシス生成物、５つのアフェレシス生成物、６つのアフェレシス生成物、またはそれ以上の生成物から得ることができる。
【００７１】
いくつかの実施形態では、本開示の細胞の集団は、骨髄から得ることができる。いくつかの実施形態では、本開示の細胞の集団は、臍帯血から得ることができる。
【００７２】
細胞の処理
本開示の細胞の集団は、別の細胞の集団、例えば、末梢血または末梢血アフェレシス生成物から選択することによって精製することができる。細胞の集団の選択方法は、目的の細胞の集団の正または負の選択を伴う方法を含むことができる。細胞の集団の選択方法は、抗体、全長抗体、抗体の断片、天然に存在する抗体、合成抗体、操作された抗体、全長アフィボディ、アフィボディの断片、全長アフィリン、アフィリンの断片、全長アンチカリン、アンチカリンの断片、全長アビマー、アビマーの断片、全長ＤＡＲＰｉｎ、ＤＡＲＰｉｎの断片、全長フィノマー、フィノマーの断片、全長クニッツ（ｋｕｎｉｔｚ）ドメインペプチド、クニッツドメインペプチドの断片、全長モノボディ、モノボディの断片、ペプチド、またはポリアミノ酸を含むがこれらに限定されない、親和性試薬を含むことができる。いくつかの実施形態では、親和性試薬は、検出試薬および／または精製試薬に直接的に結合されている。いくつかの場合には、検出試薬および精製試薬は同じである。他の場合には、検出試薬および精製試薬は異なる。例えば、検出試薬および／または精製試薬は、蛍光性、磁気性等である。いくつかの場合には、検出試薬および／または精製試薬は、カラム精製のための磁性粒子である。例えば、磁気カラム精製は、カラム、抗体、緩衝液、調製材料および試薬のＭｉｌｔｅｎｙｉシステム（ＣｌｉｎｉＭＡＣｓ）を使用して行ってもよい。
【００７３】
親和性試薬は、目的の細胞の集団に対して正または負の選択を行うために抗体またはその断片もしくは誘導体の結合特異性を利用する、免疫親和性試薬を含むことができる。細胞の集団の選択方法は、特定の抗体およびマイクロビーズを用いた磁気活性化細胞選別（ＭＡＣＳ）など、親和性剤およびカラムを含むことができる。細胞の集団の選択方法は、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を含むことができ、細胞の集団は、１つ以上の蛍光結合抗体を用いた染色プロファイルに基づいて選別される。細胞の集団の選択方法は、物理的吸着、例えば、レクチンなどのタンパク質リガンドへのＴ細胞の物理的吸着を含むことができる。
【００７４】
本開示のＨＳＰＣの集団は、ＣＤ３４の発現に基づいて選択することができる。例えば、本開示のＨＳＰＣの集団は、磁気活性化細胞選別（ＭＡＣＳ）または蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）システムの一部として抗ＣＤ３４抗体を使用して選択することができる。
【００７５】
細胞の集団中のＨＰＳＣの数は、例えば、フローサイトメトリーによりＣＤ３４＋細胞を定量化することによって決定することができる。いくつかの実施形態では、用量計算は、細胞生存率測定の尺度、例えば、ヨウ化プロピジウムもしくは７−ＡＡＤを用いたフローサイトメトリーまたはトリパンブルー色素排除により決定された生存率に基づいて調整される。
【００７６】
本開示のＴｒｅｇを含む細胞の集団は、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ２５、ＣＤ１２７、ＦＯＸＰ３、およびこれらの組み合わせを含むマーカーの発現に基づいて選択することができる。
【００７７】
Ｔｒｅｇを含む細胞の集団は、磁気活性化細胞選別（ＭＡＣＳ）を使用して選択することができる。Ｔｒｅｇを含む細胞の集団は、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を使用して選択することができる。Ｔｒｅｇを含む細胞の集団は、複数の手順、例えば、複数のＭＡＣＳ選択、複数のＦＡＣＳ選択、またはＭＡＣＳおよびＦＡＣＳ選択の組み合わせを使用して選択することができる。例えば、ＣＤ２５の発現について第１の選択を行ってもよく、例えばＭＡＣＳを用いて、造血細胞試料からＣＤ２５＋細胞を単離する。ＣＤ２５＋細胞をＣＤ４およびＣＤ１２７に特異的な抗体と接触させ、ＦＡＣＳを使用してＣＤ４＋ＣＤ１２７ｄｉｍである細胞を単離することによって、第２の選択を行ってもよい。
【００７８】
Ｔｒｅｇを含む細胞の集団は、全血から単離することができる。Ｔｒｅｇを含む細胞の集団は、末梢血アフェレシス生成物から単離することができる。Ｔｒｅｇを含む細胞の集団は、１つ以上の他の細胞種について事前に濃縮および／または枯渇した細胞の集団から単離することができ、例えば、ＣＤ３４＋細胞を枯渇させた細胞の集団から単離することができる。いくつかの実施形態では、Ｔｒｅｇは、ＣＤ３４＋ＭＡＣＳ選択のフロースルー画分から単離される。
【００７９】
細胞の集団中のＴｒｅｇの数は、例えば、フローサイトメトリーによって決定することができ、Ｔｒｅｇは、例えば、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍまたはＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋として同定することができる。用量計算は、細胞生存率測定の尺度、例えば、ヨウ化プロピジウムもしくは７−ＡＡＤを用いたフローサイトメトリーまたはトリパンブルー色素排除により決定された生存率に基づいて調整することができる。
【００８０】
Ｔｃｏｎの集団は、末梢血から供給することができる。Ｔｒｅｇの集団は、末梢血アフェレシス生成物から供給することができる。
【００８１】
いくつかの実施形態では、選択工程は行わず、Ｔｃｏｎの集団は末梢血またはアフェレシス生成物のアリコートから直接供給される。いくつかの実施形態では、細胞の集団は、例えば、ＭＡＣＳ、ＦＡＣＳ、またはこれらの組み合わせを使用した様々なマーカーの発現に基づいて選別することによって、Ｔｃｏｎについて濃縮することができる。Ｔｃｏｎの集団は、ＣＤ３＋細胞について選別することによって濃縮することができる。Ｔｃｏｎの集団は、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋細胞について選別することによって濃縮することができる。Ｔｃｏｎの集団は、負の選択によって濃縮することができ、非Ｔｃｏｎ細胞は、例えば、ＣＤ３４、ＣＤ１９、ＣＤ２５、またはこれらの組み合わせを発現する細胞のＭＡＣＳ枯渇によって除去される。
【００８２】
集団中に存在するＴｃｏｎの数は、例えば、フローサイトメトリーによりＣＤ３＋細胞を定量化することによって定量化することができる。アリコート中のＣＤ３＋細胞の数を決定し、適切な用量のＣＤ３細胞を含む体積をレシピエントに投与することができる。用量計算は、細胞生存率の尺度、例えば、ヨウ化プロピジウムもしくは７−ＡＡＤを用いたフローサイトメトリーまたはトリパンブルー色素排除により決定された生存率に基づいて調整することができる。
【００８３】
本開示のアフェレシス生成物は、２つの部分に分けることができ、一方の部分は、Ｔｃｏｎ細胞を提供するために使用され、他方の部分は、ＨＳＰＣおよびＴｒｅｇを単離および精製するために使用される。いくつかの実施形態では、ＣＤ３４＋細胞は、アフェレシス生成物から単離および精製され、これによりＣＤ３４陰性細胞画分が作られ、次いで、Ｔｒｅｇが単離される。
【００８４】
ｉＮＫＴの集団は、末梢血から供給することができる。ｉＮＫＴの集団は、末梢血アフェレシス生成物から供給することができる。
【００８５】
細胞の集団は、例えば、ＭＡＣＳ、ＦＡＣＳ、またはこれらの組み合わせを使用して、様々なマーカーの発現に基づいて選別することによって、ｉＮＫＴについて濃縮することができる。ｉＮＫＴの集団は、例えば、ＣＤ３＋Ｖα２４Ｊα１８＋細胞の選別によって濃縮することができる。
【００８６】
集団に存在するｉＮＫＴの数は、例えば、フローサイトメトリーによりＣＤ３＋Ｖα２４Ｊα１８＋細胞を定量化することによって定量化することができる。アリコート中のＣＤ３＋Ｖα２４Ｊα１８＋細胞の数を決定し、適切な用量のｉＮＫＴを含む体積をレシピエントに投与することができる。いくつかの実施形態では、用量計算は、細胞生存率測定の尺度、例えば、ヨウ化プロピジウムもしくは７−ＡＡＤを用いたフローサイトメトリーまたはトリパンブルー色素排除により決定される生存率に基づいて調整される。
【００８７】
Ｔｍｅｍの集団は、末梢血から供給することができる。Ｔｍｅｍの集団は、末梢血アフェレシス生成物から供給することができる。
【００８８】
細胞の集団は、例えば、ＭＡＣＳ、ＦＡＣＳ、またはこれらの組み合わせを使用して、様々なマーカーの発現に基づいて選別することによって、Ｔｍｅｍについて濃縮することができる。Ｔｍｅｍの集団は、例えば、ＣＤ３＋ＣＤ４５ＲＡ−ＣＤ４５ＲＯ＋細胞について選別することによって濃縮することができる。
【００８９】
集団中に存在するＴｍｅｍの数は、例えば、フローサイトメトリーによりＣＤ３＋ＣＤ４５ＲＡ−ＣＤ４５ＲＯ＋細胞を定量化することによって定量化することができる。アリコート中のＣＤ３＋ＣＤ４５ＲＡ−ＣＤ４５ＲＯ＋細胞の数を決定し、適切な用量のＴｍｅｍを含む体積をレシピエントに投与することができる。用量計算は、細胞生存率測定の尺度、例えば、ヨウ化プロピジウムもしくは７−ＡＡＤを用いたフローサイトメトリーまたはトリパンブルー色素排除により決定された生存率に基づいて調整することができる。
【００９０】
新鮮な細胞または凍結保存された細胞の使用
本開示の細胞の集団は、単離後新鮮に、または凍結保存およびその後の解凍後に投与することができる。
【００９１】
ドナーから新鮮に単離された細胞（「新鮮な細胞」）は、レシピエント対象に投与され得る。新鮮な細胞は、緩衝液、例えば、０．５％ヒト血清アルブミンを含むＣｌｉｎｉＭＡＣＳ  ＰＢＳ−ＥＤＴＡ緩衝液、または２％ヒト血清アルブミンを補充したｐＨ７．４のＰｌａｓｍａ−Ｌｙｔｅ−Ａに保存することができる。新鮮な細胞は、低温（例えば、２〜８℃）で保存することができるが、凍結保存／凍結することはできない。
【００９２】
ドナーから新鮮な細胞の集団を取得した後、新鮮な細胞は、対象への投与前に、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、１２０、１５０、２００、または３００時間超、またはそれ以上の間、保存することができる。
【００９３】
ドナーから新鮮な細胞の集団を取得した後、新鮮な細胞は、対象への投与前に、最大で約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、１２０、１５０、２００、３００時間またはそれ以下の間、保存することができる。
【００９４】
本開示の細胞は、凍結保存することができる。いくつかの実施形態では、凍結保存は、本明細書に開示される方法に有益であり得る。例えば、その後の解凍および対象への投与の前のＴｃｏｎの凍結保存により、ＧＶＨＤが軽減され得る。
【００９５】
凍結保存は、保存剤（例えば、ＤＭＳＯ）の添加、および氷結晶形成中の浸透圧細胞傷害を予防するために速度制御冷凍庫中で細胞を徐々に冷却することを含むことができる。凍結保存は、市販の凍結保存試剤および材料、例えば、ＣｒｙｏｂａｇｓおよびＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０を含むことができる。
【００９６】
凍結保存された細胞は、低温で数時間〜数年の範囲の期間にわたって保存することができる。凍結保存された細胞は、超低温、例えば、−５０℃、−６０℃、−７０℃、−８０℃、−９０℃、−１００℃、−１１０℃、−１２０℃、−１３０℃、−１４０℃、−１５０℃、−１６０℃、−１７０℃、−１８０℃、−１９０℃、−１９６℃またはそれ以下で保存することができる。凍結保存された細胞は、液体窒素を含む保存デバイス中で保存することができる。
【００９７】
細胞は、本開示の他の方法の前または後、例えば、選別方法の前または後、細胞生存率もしくは特定の種類の細胞の濃度を決定するなどの特徴付け方法の前または後に、凍結保存することができる。
【００９８】
いくつかの実施形態では、全血は凍結保存することができる。全血は、選別または特徴付けなしに凍結保存することができる。全血は、選別後であるが、特徴付けなしに、凍結保存することができる。全血は、特徴付け後であるが、選別することなく、凍結保存することができる。全血は、特徴付けおよび選別後に凍結保存することができる。全血は、本開示の細胞種を定量化した後に凍結保存することができる。全血は、通常型Ｔ細胞（Ｔｃｏｎ、例えば、ＣＤ３＋細胞）を定量化した後に凍結保存することができる。全血は、本開示の全ての細胞または細胞の集団（例えば、通常型Ｔ細胞）の生存率を定量化した後に凍結保存することができる。
【００９９】
本開示の末梢血アフェレシス生成物は、凍結保存することができる。末梢血アフェレシス生成物は、選別または特徴付けなしに凍結保存することができる。末梢血アフェレシス生成物は、選別後であるが、特徴付けなしに、凍結保存することができる。末梢血アフェレシス生成物は、特徴付け後であるが、選別することなく、凍結保存することができる。末梢血アフェレシス生成物は、特徴付けおよび選別後に凍結保存することができる。末梢血アフェレシス生成物は、本開示の細胞種を定量化した後に凍結保存することができる。末梢血アフェレシス生成物は、通常型Ｔ細胞（Ｔｃｏｎ、例えば、ＣＤ３＋細胞）を定量化した後に凍結保存することができる。末梢血アフェレシス生成物は、本開示の全ての細胞または細胞の集団（例えば、通常型Ｔ細胞）の生存率を定量化した後に凍結保存することができる。
【０１００】
別の細胞の集団から選別または選択された細胞の集団を凍結保存することができ、例えば、ＨＳＰＣ、Ｔｒｅｇ、Ｔｃｏｎ、ｉＮＫＴ、またはＴｍｅｍの集団を凍結保存することができる。
【０１０１】
本開示の細胞は、任意量の時間にわたって凍結保存することができる。本開示の細胞は、解凍および対象への投与前に、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、または９６時間超またはそれ以上の間、凍結保存してもよい。
【０１０２】
本開示の細胞は、解凍および対象への投与前に、最大で約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、または９６時間またはそれ以下の間、凍結保存することができる。
【０１０３】
本開示の細胞は、解凍および対象への投与前に、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、または９６日間超またはそれ以上の間、凍結保存することができる。
【０１０４】
本開示の細胞は、解凍および対象への投与前に、最大で約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、または９６日間またはそれ以下の間、凍結保存することができる。
【０１０５】
細胞の投与
投与の順序およびタイミング
本明細書には、細胞の集団を対象に投与することを含む、同種造血幹細胞移植の増強のための方法が開示される。
【０１０６】
いくつかの実施形態では、造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）の集団、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を含む細胞の集団、および通常型Ｔ細胞（Ｔｃｏｎ）の集団が対象に投与される。
【０１０７】
ＨＳＰＣの集団およびＴｒｅｇを含む細胞の集団は、同時もしくは同様の時間または異なる時間に投与することができる。
【０１０８】
ＨＳＰＣの集団およびＴｒｅｇを含む細胞の集団は、最大で約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、または４８時間空けて投与することができる。
【０１０９】
Ｔｃｏｎの集団は、ＨＳＰＣの集団の後に対象に投与され得る。
【０１１０】
Ｔｃｏｎの集団は、ＨＳＰＣの集団の少なくとも約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、または９６時間超後に対象に投与され得る。
【０１１１】
いくつかの実施形態では、Ｔｃｏｎの集団は、ＨＳＰＣの集団の最大で約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、または９６時間後に対象に投与される。
【０１１２】
Ｔｃｏｎの集団は、ＨＳＰＣの集団の約６〜９６、１２〜８４、１２〜７２、１２〜６６、１２〜６０、１２〜５４、１２〜４８、１２〜４２、１２〜３６、１２〜３０、１２〜２４、１２〜１８、１８〜７２、１８〜６６、１８〜６０、１８〜５４、１８〜４８、１８〜４２、１８〜３６、１８〜３０、１８〜２４、２４〜７２、２４〜６６、２４〜６０、２４〜５４、２４〜４８、２４〜４２、２４〜３６、２４〜３０、３０〜７２、３０〜６６、３０〜６０、３０〜５４、３０〜４８、３０〜４２、３０〜３６、３６〜７２、３６〜６６、３６〜６０、３６〜５４、３６〜４８、３６〜４２、４２〜７２、４２〜６６、４２〜６０、４２〜５４、４２〜４８、４８〜７２、４８〜６６、４８〜６０、４８〜５４、５４〜７２、５４〜６６、５４〜６０、６０〜７２、６０〜６６、または６６〜７２時間後に対象に投与され得る。
【０１１３】
Ｔｃｏｎの集団は、Ｔｒｅｇを含む細胞の集団の後に対象に投与され得る。
【０１１４】
Ｔｃｏｎの集団は、Ｔｒｅｇを含む細胞の集団の少なくとも約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、または９６時間超後に対象に投与され得る。
【０１１５】
いくつかの実施形態では、Ｔｃｏｎの集団は、Ｔｒｅｇを含む細胞の集団の最大で約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、または９６時間後に対象に投与される。
【０１１６】
Ｔｃｏｎの集団は、例えば、Ｔｒｅｇの集団の約６〜９６、１２〜８４、１２〜７２、１２〜６６、１２〜６０、１２〜５４、１２〜４８、１２〜４２、１２〜３６、１２〜３０、１２〜２４、１２〜１８、１８〜７２、１８〜６６、１８〜６０、１８〜５４、１８〜４８、１８〜４２、１８〜３６、１８〜３０、１８〜２４、２４〜７２、２４〜６６、２４〜６０、２４〜５４、２４〜４８、２４〜４２、２４〜３６、２４〜３０、３０〜７２、３０〜６６、３０〜６０、３０〜５４、３０〜４８、３０〜４２、３０〜３６、３６〜７２、３６〜６６、３６〜６０、３６〜５４、３６〜４８、３６〜４２、４２〜７２、４２〜６６、４２〜６０、４２〜５４、４２〜４８、４８〜７２、４８〜６６、４８〜６０、４８〜５４、５４〜７２、５４〜６６、５４〜６０、６０〜７２、６０〜６６、または６６〜７２時間後に対象に投与され得る。
【０１１７】
Ｔｃｏｎの集団は、ＨＳＰＣの集団およびＴｒｅｇを含む細胞の集団の後に対象に投与され得る。
【０１１８】
Ｔｃｏｎの集団は、例えば、ＨＳＰＣの集団およびＴｒｅｇを含む細胞の集団の少なくとも約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、または９６時間超後に対象に投与され得る。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、Ｔｃｏｎの集団は、ＨＳＰＣの集団およびＴｒｅｇを含む細胞の集団の最大で約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、または９６時間後に対象に投与される。
【０１２０】
Ｔｃｏｎの集団は、例えば、ＨＳＰＣの集団およびＴｒｅｇを含む細胞の集団の約６〜９６、１２〜８４、１２〜７２、１２〜６６、１２〜６０、１２〜５４、１２〜４８、１２〜４２、１２〜３６、１２〜３０、１２〜２４、１２〜１８、１８〜７２、１８〜６６、１８〜６０、１８〜５４、１８〜４８、１８〜４２、１８〜３６、１８〜３０、１８〜２４、２４〜７２、２４〜６６、２４〜６０、２４〜５４、２４〜４８、２４〜４２、２４〜３６、２４〜３０、３０〜７２、３０〜６６、３０〜６０、３０〜５４、３０〜４８、３０〜４２、３０〜３６、３６〜７２、３６〜６６、３６〜６０、３６〜５４、３６〜４８、３６〜４２、４２〜７２、４２〜６６、４２〜６０、４２〜５４、４２〜４８、４８〜７２、４８〜６６、４８〜６０、４８〜５４、５４〜７２、５４〜６６、５４〜６０、６０〜７２、６０〜６６、または６６〜７２時間後に対象に投与され得る。
【０１２１】
いくつかの実施形態では、造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）の集団、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を含む細胞の集団、通常型Ｔ細胞（Ｔｃｏｎ）の集団、およびインバリアントナチュラルキラーＴ細胞（ｉＮＫＴ）の集団が、対象に投与される。
【０１２２】
ｉＮＫＴの集団は、ＨＳＰＣの集団と同時にまたは同様の時間に対象に投与され得る。いくつかの実施形態では、ｉＮＫＴの集団は、ＨＳＰＣの集団の後に対象に投与される。
【０１２３】
ｉＮＫＴの集団は、ＨＳＰＣの集団の少なくとも約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、または９６時間超後に対象に投与され得る。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、ｉＮＫＴの集団は、ＨＳＰＣの集団の最大で約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、または９６時間後に対象に投与される。
【０１２５】
ｉＮＫＴの集団は、例えば、ＨＳＰＣの集団の約６〜９６、１２〜８４、１２〜７２、１２〜６６、１２〜６０、１２〜５４、１２〜４８、１２〜４２、１２〜３６、１２〜３０、１２〜２４、１２〜１８、１８−７２、１８〜６６、１８〜６０、１８〜５４、１８〜４８、１８〜４２、１８〜３６、１８〜３０、１８〜２４、２４〜７２、２４〜６６、２４〜６０、２４〜５４、２４〜４８、２４〜４２、２４〜３６、２４〜３０、３０〜７２、３０〜６６、３０〜６０、３０〜５４、３０〜４８、３０〜４２、３０〜３６、３６〜７２、３６〜６６、３６〜６０、３６〜５４、３６〜４８、３６〜４２、４２〜７２、４２〜６６、４２〜６０、４２〜５４、４２〜４８、４８〜７２、４８〜６６、４８〜６０、４８〜５４、５４〜７２、５４〜６６、５４〜６０、６０〜７２、６０〜６６、または６６〜７２時間後に対象に投与され得る。
【０１２６】
ｉＮＫＴの集団は、Ｔｒｅｇを含む細胞の集団と同時にまたは同様の時間に対象に投与され得る。いくつかの実施形態では、ｉＮＫＴの集団は、Ｔｒｅｇを含む細胞の集団の後に対象に投与される。
【０１２７】
ｉＮＫＴの集団は、Ｔｒｅｇを含む細胞の集団の少なくとも約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、または９６時間後に対象に投与され得る。
【０１２８】
いくつかの実施形態では、ｉＮＫＴの集団は、Ｔｒｅｇを含む細胞の集団の最大で約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、または９６時間後に対象に投与される。
【０１２９】
ｉＮＫＴの集団は、例えば、Ｔｒｅｇを含む細胞の集団の約６〜９６、１２〜８４、１２〜７２、１２〜６６、１２〜６０、１２〜５４、１２〜４８、１２〜４２、１２〜３６、１２〜３０、１２〜２４、１２〜１８、１８〜７２、１８〜６６、１８〜６０、１８〜５４、１８〜４８、１８〜４２、１８〜３６、１８〜３０、１８〜２４、２４〜７２、２４〜６６、２４〜６０、２４〜５４、２４〜４８、２４〜４２、２４〜３６、２４〜３０、３０〜７２、３０〜６６、３０〜６０、３０〜５４、３０〜４８、３０〜４２、３０〜３６、３６〜７２、３６〜６６、３６〜６０、３６〜５４、３６〜４８、３６〜４２、４２〜７２、４２〜６６、４２〜６０、４２〜５４、４２〜４８、４８〜７２、４８〜６６、４８〜６０、４８〜５４、５４〜７２、５４〜６６、５４〜６０、６０〜７２、６０〜６６、または６６〜７２時間後に対象に投与され得る。
【０１３０】
いくつかの実施形態では、造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）の集団、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を含む細胞の集団、通常型Ｔ細胞（Ｔｃｏｎ）の集団、および記憶Ｔ細胞（Ｔｍｅｍ）の集団が、対象に投与される。
【０１３１】
Ｔｍｅｍの集団は、ＨＳＰＣの集団と同時にまたは同様の時間に対象に投与され得る。いくつかの実施形態では、Ｔｍｅｍの集団は、ＨＳＰＣの集団の後に対象に投与される。
【０１３２】
Ｔｍｅｍの集団は、ＨＳＰＣの集団の少なくとも約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、または９６時間超後に対象に投与され得る。
【０１３３】
いくつかの実施形態では、Ｔｍｅｍの集団は、ＨＳＰＣの集団の最大で約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、または９６時間後に対象に投与される。
【０１３４】
Ｔｍｅｍの集団は、ＨＳＰＣの集団の約６〜９６、１２〜８４、１２〜７２、１２〜６６、１２〜６０、１２〜５４、１２〜４８、１２〜４２、１２〜３６、１２〜３０、１２〜２４、１２〜１８、１８〜７２、１８〜６６、１８〜６０、１８〜５４、１８〜４８、１８〜４２、１８〜３６、１８〜３０、１８〜２４、２４〜７２、２４〜６６、２４〜６０、２４〜５４、２４〜４８、２４〜４２、２４〜３６、２４〜３０、３０〜７２、３０〜６６、３０〜６０、３０〜５４、３０〜４８、３０〜４２、３０〜３６、３６〜７２、３６〜６６、３６〜６０、３６〜５４、３６〜４８、３６〜４２、４２〜７２、４２〜６６、４２〜６０、４２〜５４、４２〜４８、４８〜７２、４８〜６６、４８〜６０、４８〜５４、５４〜７２、５４〜６６、５４〜６０、６０〜７２、６０〜６６、または６６〜７２時間後に対象に投与され得る。
【０１３５】
Ｔｍｅｍの集団は、Ｔｒｅｇを含む細胞の集団と同時にまたは同様の時間に対象に投与され得る。いくつかの実施形態では、Ｔｍｅｍの集団は、Ｔｒｅｇを含む細胞の集団の後に対象に投与される。
【０１３６】
Ｔｍｅｍの集団は、Ｔｒｅｇを含む細胞の集団の少なくとも約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、または９６時間超後に対象に投与され得る。
【０１３７】
いくつかの実施形態では、Ｔｍｅｍの集団は、Ｔｒｅｇを含む細胞の集団の最大で約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、または９６時間後に対象に投与される。
【０１３８】
Ｔｍｅｍの集団は、Ｔｒｅｇを含む細胞の集団の約６〜９６、１２〜８４、１２〜７２、１２〜６６、１２〜６０、１２〜５４、１２〜４８、１２〜４２、１２〜３６、１２〜３０、１２〜２４、１２〜１８、１８〜７２、１８〜６６、１８〜６０、１８〜５４、１８〜４８、１８〜４２、１８〜３６、１８〜３０、１８〜２４、２４〜７２、２４〜６６、２４〜６０、２４〜５４、２４〜４８、２４〜４２、２４〜３６、２４〜３０、３０〜７２、３０〜６６、３０〜６０、３０〜５４、３０〜４８、３０〜４２、３０〜３６、３６〜７２、３６〜６６、３６〜６０、３６〜５４、３６〜４８、３６〜４２、４２〜７２、４２〜６６、４２〜６０、４２〜５４、４２〜４８、４８〜７２、４８〜６６、４８〜６０、４８〜５４、５４〜７２、５４〜６６、５４〜６０、６０〜７２、６０〜６６、または６６〜７２時間後に対象に投与され得る。
【０１３９】
用量
ＨＳＰＣ
対象に投与されるＨＰＳＣの集団は、レシピエントの体重１キログラムあたり、少なくとも約１×１０４、１×１０５、５×１０５、６×１０５、７×１０５、８×１０５、９×１０５、１×１０６、１．１×１０６、１．２×１０６、１．３×１０６、１．４×１０６、１．５×１０６、１．６×１０６、１．７×１０６、１．８×１０６、１．９×１０６、２×１０６、２．１×１０６、２．２×１０６、２．３×１０６、２．４×１０６、２．５×１０６、２．６×１０６、２．７×１０６、２．８×１０６、２．９×１０６、３×１０６、３．１×１０６、３．２×１０６、３．３×１０６、３．４×１０６、３．５×１０６、３．６×１０６、３．７×１０６、３．８×１０６、３．９×１０６、４×１０６、４．１×１０６、４．２×１０６、４．３×１０６、４．４×１０６、４．５×１０６、４．６×１０６、４．７×１０６、４．８×１０６、４．９×１０６、５×１０６、５．１×１０６、５．２×１０６、５．３×１０６、５．４×１０６、５．５×１０６、５．６×１０６、５．７×１０６、５．８×１０６、５．９×１０６、６×１０６、６．５×１０６、７×１０６、７．５×１０６、８×１０６、８．５×１０６、９×１０６、９．５×１０６、１×１０７、１．５×１０７、２×１０７、２．５×１０７、３×１０７、３．５×１０７、４×１０７、４．５×１０７、５×１０７、５．５×１０７、６×１０７、６．５×１０７、７×１０７、７．５×１０７、８×１０７、８．５×１０７、９×１０７、９．５×１０７、１×１０８、１×１０８、１．５×１０８、２×１０８、２．５×１０８、３×１０８、３．５×１０８、４×１０７、４．５×１０８、５×１０８、５．５×１０８、６×１０８、６．５×１０８、７×１０８、７．５×１０８、８×１０８、８．５×１０８、９×１０８、９．５×１０８、１×１０９個超またはそれ以上の細胞の用量で投与することができる。
【０１４０】
いくつかの実施形態では、対象に投与されるＨＰＳＣの集団は、レシピエントの体重１キログラムあたり、最大で約１×１０４、１×１０５、５×１０５、６×１０５、７×１０５、８×１０５、９×１０５、１×１０６、１．１×１０６、１．２×１０６、１．３×１０６、１．４×１０６、１．５×１０６、１．６×１０６、１．７×１０６、１．８×１０６、１．９×１０６、２×１０６、２．１×１０６、２．２×１０６、２．３×１０６、２．４×１０６、２．５×１０６、２．６×１０６、２．７×１０６、２．８×１０６、２．９×１０６、３×１０６、３．１×１０６、３．２×１０６、３．３×１０６、３．４×１０６、３．５×１０６、３．６×１０６、３．７×１０６、３．８×１０６、３．９×１０６、４×１０６、４．１×１０６、４．２×１０６、４．３×１０６、４．４×１０６、４．５×１０６、４．６×１０６、４．７×１０６、４．８×１０６、４．９×１０６、５×１０６、５．１×１０６、５．２×１０６、５．３×１０６、５．４×１０６、５．５×１０６、５．６×１０６、５．７×１０６、５．８×１０６、５．９×１０６、６×１０６、６．５×１０６、７×１０６、７．５×１０６、８×１０６、８．５×１０６、９×１０６、９．５×１０６、１×１０７、１．５×１０７、２×１０７、２．５×１０７、３×１０７、３．５×１０７、４×１０７、４．５×１０７、５×１０７、５．５×１０７、６×１０７、６．５×１０７、７×１０７、７．５×１０７、８×１０７、８．５×１０７、９×１０７、９．５×１０７、１×１０８、１×１０８、１．５×１０８、２×１０８、２．５×１０８、３×１０８、３．５×１０８、４×１０７、４．５×１０８、５×１０８、５．５×１０８、６×１０８、６．５×１０８、７×１０８、７．５×１０８、８×１０８、８．５×１０８、９×１０８、９．５×１０８、１×１０９個またはそれ以下の細胞の用量で投与することができる。
【０１４１】
対象に投与されるＨＰＳＣの集団は、例えば、レシピエントの体重１キログラムあたり、少なくとも約１×１０４、１×１０５、５×１０５、６×１０５、７×１０５、８×１０５、９×１０５、１×１０６、１．１×１０６、１．２×１０６、１．３×１０６、１．４×１０６、１．５×１０６、１．６×１０６、１．７×１０６、１．８×１０６、１．９×１０６、２×１０６、２．１×１０６、２．２×１０６、２．３×１０６、２．４×１０６、２．５×１０６、２．６×１０６、２．７×１０６、２．８×１０６、２．９×１０６、３×１０６、３．１×１０６、３．２×１０６、３．３×１０６、３．４×１０６、３．５×１０６、３．６×１０６、３．７×１０６、３．８×１０６、３．９×１０６、４×１０６、４．１×１０６、４．２×１０６、４．３×１０６、４．４×１０６、４．５×１０６、４．６×１０６、４．７×１０６、４．８×１０６、４．９×１０６、５×１０６、５．１×１０６、５．２×１０６、５．３×１０６、５．４×１０６、５．５×１０６、５．６×１０６、５．７×１０６、５．８×１０６、５．９×１０６、６×１０６、６．５×１０６、７×１０６、７．５×１０６、８×１０６、８．５×１０６、９×１０６、９．５×１０６、１×１０７、１．５×１０７、２×１０７、２．５×１０７、３×１０７、３．５×１０７、４×１０７、４．５×１０７、５×１０７、５．５×１０７、６×１０７、６．５×１０７、７×１０７、７．５×１０７、８×１０７、８．５×１０７、９×１０７、９．５×１０７、１×１０８、１×１０８、１．５×１０８、２×１０８、２．５×１０８、３×１０８、３．５×１０８、４×１０７、４．５×１０８、５×１０８、５．５×１０８、６×１０８、６．５×１０８、７×１０８、７．５×１０８、８×１０８、８．５×１０８、９×１０８、９．５×１０８、１×１０９個またはそれ以上のＣＤ３４＋細胞の用量で投与することができる。
【０１４２】
対象に投与されるＨＰＳＣの集団は、レシピエントの体重１キログラムあたり、最大で約１×１０４、１×１０５、５×１０５、６×１０５、７×１０５、８×１０５、９×１０５、１×１０６、１．１×１０６、１．２×１０６、１．３×１０６、１．４×１０６、１．５×１０６、１．６×１０６、１．７×１０６、１．８×１０６、１．９×１０６、２×１０６、２．１×１０６、２．２×１０６、２．３×１０６、２．４×１０６、２．５×１０６、２．６×１０６、２．７×１０６、２．８×１０６、２．９×１０６、３×１０６、３．１×１０６、３．２×１０６、３．３×１０６、３．４×１０６、３．５×１０６、３．６×１０６、３．７×１０６、３．８×１０６、３．９×１０６、４×１０６、４．１×１０６、４．２×１０６、４．３×１０６、４．４×１０６、４．５×１０６、４．６×１０６、４．７×１０６、４．８×１０６、４．９×１０６、５×１０６、５．１×１０６、５．２×１０６、５．３×１０６、５．４×１０６、５．５×１０６、５．６×１０６、５．７×１０６、５．８×１０６、５．９×１０６、６×１０６、６．５×１０６、７×１０６、７．５×１０６、８×１０６、８．５×１０６、９×１０６、９．５×１０６、１×１０７、１．５×１０７、２×１０７、２．５×１０７、３×１０７、３．５×１０７、４×１０７、４．５×１０７、５×１０７、５．５×１０７、６×１０７、６．５×１０７、７×１０７、７．５×１０７、８×１０７、８．５×１０７、９×１０７、９．５×１０７、１×１０８、１×１０８、１．５×１０８、２×１０８、２．５×１０８、３×１０８、３．５×１０８、４×１０７、４．５×１０８、５×１０８、５．５×１０８、６×１０８、６．５×１０８、７×１０８、７．５×１０８、８×１０８、８．５×１０８、９×１０８、９．５×１０８、１×１０９個またはそれ以下のＣＤ３４＋細胞の用量で投与することができる。
【０１４３】
例えば、対象に投与されるＨＰＳＣの集団は、レシピエントの体重１キログラムあたり、１×１０４〜１×１０９、１×１０５〜１×１０８、１×１０５〜２×１０７、５×１０５〜２×１０７、５×１０５〜１．５×１０７、５×１０５〜１×１０７、５×１０５〜９×１０６、５×１０５〜８×１０６、５×１０５〜７×１０６、５×１０５〜６×１０６、５×１０５〜５×１０６、５×１０５〜４×１０６、５×１０５〜３×１０６、５×１０５〜２×１０６、５×１０５〜１×１０６、１×１０６〜１．５×１０７、１×１０６〜１×１０７、１×１０６〜９×１０６、１×１０６〜８×１０６、１×１０６〜７×１０６、１×１０６〜６×１０６、１×１０６〜５×１０６、１×１０６〜４×１０６、１×１０６〜３×１０６、１×１０６〜２×１０６、１．５×１０６〜１．５×１０７、１．５×１０６〜１×１０７、１．５×１０６〜９×１０６、１．５×１０６〜８×１０６、１．５×１０６〜７×１０６、１．５×１０６〜６×１０６、１．５×１０６〜５×１０６、１．５×１０６〜４×１０６、１．５×１０６〜３×１０６、１．５×１０６〜２×１０６、２×１０６〜１．５×１０７、２×１０６〜１×１０７、２×１０６〜９×１０６、２×１０６〜８×１０６、２×１０６〜７×１０６、２×１０６〜６×１０６、２×１０６〜５×１０６、２×１０６〜４×１０６、２×１０６〜３×１０６、２．５×１０６〜１．５×１０７、２．５×１０６〜１×１０７、２．５×１０６〜９×１０６、２．５×１０６〜８×１０６、２．５×１０６〜７×１０６、２．５×１０６〜６×１０６、２．５×１０６〜５×１０６、２．５×１０６〜４×１０６、または２．５×１０６〜３×１０６個の細胞の用量で投与することができる。
【０１４４】
対象に投与されるＨＰＳＣの集団は、例えば、レシピエントの体重１キログラムあたり、１×１０４〜１×１０９、１×１０５〜１×１０８、１×１０５〜２×１０７、５×１０５〜２×１０７、５×１０５〜１．５×１０７、５×１０５〜１×１０７、５×１０５〜９×１０６、５×１０５〜８×１０６、５×１０５〜７×１０６、５×１０５〜６×１０６、５×１０５〜５×１０６、５×１０５〜４×１０６、５×１０５〜３×１０６、５×１０５〜２×１０６、５×１０５〜１×１０６、１×１０６〜１．５×１０７、１×１０６〜１×１０７、１×１０６〜９×１０６、１×１０６〜８×１０６、１×１０６〜７×１０６、１×１０６〜６×１０６、１×１０６〜５×１０６、１×１０６〜４×１０６、１×１０６〜３×１０６、１×１０６〜２×１０６、１．５×１０６〜１．５×１０７、１．５×１０６〜１×１０７、１．５×１０６〜９×１０６、１．５×１０６〜８×１０６、１．５×１０６〜７×１０６、１．５×１０６〜６×１０６、１．５×１０６〜５×１０６、１．５×１０６〜４×１０６、１．５×１０６〜３×１０６、１．５×１０６〜２×１０６、２×１０６〜１．５×１０７、２×１０６〜１×１０７、２×１０６〜９×１０６、２×１０６〜８×１０６、２×１０６〜７×１０６、２×１０６〜６×１０６、２×１０６〜５×１０６、２×１０６〜４×１０６、２×１０６〜３×１０６、２．５×１０６〜１．５×１０７、２．５×１０６〜１×１０７、２．５×１０６〜９×１０６、２．５×１０６〜８×１０６、２．５×１０６〜７×１０６、２．５×１０６〜６×１０６、２．５×１０６〜５×１０６、２．５×１０６〜４×１０６、または２．５×１０６〜３×１０６個のＣＤ３４＋細胞の用量で投与することができる。
【０１４５】
本開示のＨＳＰＣの集団は、ＣＤ３４＋細胞について、定義された純度レベルを有することができる。
【０１４６】
例えば、本開示のＨＳＰＣの集団は、全細胞、有核細胞、またはＣＤ４５＋細胞の割合として、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％超、またはそれ以上のＣＤ３４＋細胞を含むことができる。
【０１４７】
いくつかの実施形態では、本開示のＨＳＰＣの集団は、全細胞、有核細胞、またはＣＤ４５＋細胞の割合として、最大で約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以下のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０１４８】
本開示のＨＳＰＣの集団は、定義されたレベルの汚染ＣＤ３＋細胞を有することができる。
【０１４９】
例えば、レシピエントの体重１キログラムあたり、少なくとも約１×１０２、２×１０２、３×１０２、４×１０２、５×１０２、６×１０２、７×１０２、８×１０２、９×１０２、１×１０３、２×１０３、３×１０３、４×１０３、５×１０３、６×１０３、７×１０３、８×１０３、９×１０３、１×１０４、２×１０４、３×１０４、４×１０４、５×１０４、６×１０４、７×１０４、８×１０４、９×１０４、１×１０５個超、またはそれ以上のＣＤ３＋細胞が、本開示のＨＳＰＣの集団中に存在する。
【０１５０】
いくつかの実施形態では、レシピエントの体重１キログラムあたり、最大で約１×１０２、２×１０２、３×１０２、４×１０２、５×１０２、６×１０２、７×１０２、８×１０２、９×１０２、１×１０３、２×１０３、３×１０３、４×１０３、５×１０３、６×１０３、７×１０３、８×１０３、９×１０３、１×１０４、２×１０４、３×１０４、４×１０４、５×１０４、６×１０４、７×１０４、８×１０４、９×１０４、１×１０５個、またはそれ以下のＣＤ３＋細胞が、本開示のＨＳＰＣの集団中に存在する。
【０１５１】
本開示のＨＳＰＣの集団は、全細胞、有核細胞、またはＣＤ４５＋細胞の割合として、少なくとも約０．００１％、０．００２％、０．００３％、０．００４％、０．００５％、０．００６％、０．００７％、０．００８％、０．００９％、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％、０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１％、１．１％、１．２％、１．３％、１．４％、１．５％、１．６％、１．７％、１．８％、１．９％、２％、２．１％、２．２％、２．３％、２．４％、２．５％、２．６％、２．７％、２．８％、２．９％、３％、３．１％、３．２％、３．３％、３．４％、３．５％、３．６％、３．７％、３．８％、３．９％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％超、またはそれ以上のＣＤ３＋細胞を含むことができる。
【０１５２】
いくつかの実施形態では、本開示のＨＳＰＣの集団は、全細胞、有核細胞、またはＣＤ４５＋細胞の割合として、最大で約０．００１％、０．００２％、０．００３％、０．００４％、０．００５％、０．００６％、０．００７％、０．００８％、０．００９％、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％、０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１％、１．１％、１．２％、１．３％、１．４％、１．５％、１．６％、１．７％、１．８％、１．９％、２％、２．１％、２．２％、２．３％、２．４％、２．５％、２．６％、２．７％、２．８％、２．９％、３％、３．１％、３．２％、３．３％、３．４％、３．５％、３．６％、３．７％、３．８％、３．９％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、またはそれ以下のＣＤ３＋細胞を含むことができる。
【０１５３】
Ｔｒｅｇ
対象に投与されるＴｒｅｇを含む細胞の集団は、レシピエントの体重１キログラムあたり、少なくとも約１×１０４、１×１０５、２×１０５、３×１０５、４×１０５、５×１０５、６×１０５、７×１０５、８×１０５、９×１０５、１×１０６、１．１×１０６、１．２×１０６、１．３×１０６、１．４×１０６、１．５×１０６、１．６×１０６、１．７×１０６、１．８×１０６、１．９×１０６、２×１０６、２．１×１０６、２．２×１０６、２．３×１０６、２．４×１０６、２．５×１０６、２．６×１０６、２．７×１０６、２．８×１０６、２．９×１０６、３×１０６、３．１×１０６、３．２×１０６、３．３×１０６、３．４×１０６、３．５×１０６、３．６×１０６、３．７×１０６、３．８×１０６、３．９×１０６、４×１０６、４．１×１０６、４．２×１０６、４．３×１０６、４．４×１０６、４．５×１０６、４．６×１０６、４．７×１０６、４．８×１０６、４．９×１０６、５×１０６、５．１×１０６、５．２×１０６、５．３×１０６、５．４×１０６、５．５×１０６、５．６×１０６、５．７×１０６、５．８×１０６、５．９×１０６、６×１０６、６．５×１０６、７×１０６、７．５×１０６、８×１０６、８．５×１０６、９×１０６、９．５×１０６、１×１０７、１．５×１０７、２×１０７、２．５×１０７、３×１０７、３．５×１０７、４×１０７、４．５×１０７、５×１０７、５．５×１０７、６×１０７、６．５×１０７、７×１０７、７．５×１０７、８×１０７、８．５×１０７、９×１０７、９．５×１０７、１×１０８、１×１０８、１．５×１０８、２×１０８、２．５×１０８、３×１０８、３．５×１０８、４×１０７、４．５×１０８、５×１０８、５．５×１０８、６×１０８、６．５×１０８、７×１０８、７．５×１０８、８×１０８、８．５×１０８、９×１０８、９．５×１０８、１×１０９個超またはそれ以上の細胞の用量で投与することができる。
【０１５４】
いくつかの実施形態では、対象に投与されるＴｒｅｇを含む細胞の集団は、レシピエントの体重１キログラムあたり、最大で約１×１０４、１×１０５、２×１０５、３×１０５、４×１０５、５×１０５、６×１０５、７×１０５、８×１０５、９×１０５、１×１０６、１．１×１０６、１．２×１０６、１．３×１０６、１．４×１０６、１．５×１０６、１．６×１０６、１．７×１０６、１．８×１０６、１．９×１０６、２×１０６、２．１×１０６、２．２×１０６、２．３×１０６、２．４×１０６、２．５×１０６、２．６×１０６、２．７×１０６、２．８×１０６、２．９×１０６、３×１０６、３．１×１０６、３．２×１０６、３．３×１０６、３．４×１０６、３．５×１０６、３．６×１０６、３．７×１０６、３．８×１０６、３．９×１０６、４×１０６、４．１×１０６、４．２×１０６、４．３×１０６、４．４×１０６、４．５×１０６、４．６×１０６、４．７×１０６、４．８×１０６、４．９×１０６、５×１０６、５．１×１０６、５．２×１０６、５．３×１０６、５．４×１０６、５．５×１０６、５．６×１０６、５．７×１０６、５．８×１０６、５．９×１０６、６×１０６、６．５×１０６、７×１０６、７．５×１０６、８×１０６、８．５×１０６、９×１０６、９．５×１０６、１×１０７、１．５×１０７、２×１０７、２．５×１０７、３×１０７、３．５×１０７、４×１０７、４．５×１０７、５×１０７、５．５×１０７、６×１０７、６．５×１０７、７×１０７、７．５×１０７、８×１０７、８．５×１０７、９×１０７、９．５×１０７、１×１０８、１×１０８、１．５×１０８、２×１０８、２．５×１０８、３×１０８、３．５×１０８、４×１０７、４．５×１０８、５×１０８、５．５×１０８、６×１０８、６．５×１０８、７×１０８、７．５×１０８、８×１０８、８．５×１０８、９×１０８、９．５×１０８、１×１０９個またはそれ以下の細胞の用量で投与することができる。
【０１５５】
対象に投与されるＴｒｅｇを含む細胞の集団は、例えば、レシピエントの体重１キログラムあたり、少なくとも約１×１０５、２×１０５、３×１０５、４×１０５、５×１０５、６×１０５、７×１０５、８×１０５、９×１０５、１×１０６、１．１×１０６、１．２×１０６、１．３×１０６、１．４×１０６、１．５×１０６、１．６×１０６、１．７×１０６、１．８×１０６、１．９×１０６、２×１０６、２．１×１０６、２．２×１０６、２．３×１０６、２．４×１０６、２．５×１０６、２．６×１０６、２．７×１０６、２．８×１０６、２．９×１０６、３×１０６、３．１×１０６、３．２×１０６、３．３×１０６、３．４×１０６、３．５×１０６、３．６×１０６、３．７×１０６、３．８×１０６、３．９×１０６、４×１０６、４．１×１０６、４．２×１０６、４．３×１０６、４．４×１０６、４．５×１０６、４．６×１０６、４．７×１０６、４．８×１０６、４．９×１０６、５×１０６、５．１×１０６、５．２×１０６、５．３×１０６、５．４×１０６、５．５×１０６、５．６×１０６、５．７×１０６、５．８×１０６、５．９×１０６、６×１０６、６．５×１０６、７×１０６、７．５×１０６、８×１０６、８．５×１０６、９×１０６、９．５×１０６、１×１０７、１．５×１０７、２×１０７、２．５×１０７、３×１０７、３．５×１０７、４×１０７、４．５×１０７、５×１０７、５．５×１０７、６×１０７、６．５×１０７、７×１０７、７．５×１０７、８×１０７、８．５×１０７、９×１０７、９．５×１０７、１×１０８、１×１０８、１．５×１０８、２×１０８、２．５×１０８、３×１０８、３．５×１０８、４×１０７、４．５×１０８、５×１０８、５．５×１０８、６×１０８、６．５×１０８、７×１０８、７．５×１０８、８×１０８、８．５×１０８、９×１０８、９．５×１０８、１×１０９個超またはそれ以上のＴｒｅｇの用量で投与することができ、Ｔｒｅｇは、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍ、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍ、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍＦＯＸＰ３＋、ＣＤ３＋ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ３＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ３＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍ、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍＦＯＸＰ３＋、ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋、またはＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍとして定義される。
【０１５６】
対象に投与されるＴｒｅｇを含む細胞の集団は、例えば、レシピエントの体重１キログラムあたり、最大で約１×１０４、１×１０５、５×１０５、６×１０５、７×１０５、８×１０５、９×１０５、１×１０６、１．１×１０６、１．２×１０６、１．３×１０６、１．４×１０６、１．５×１０６、１．６×１０６、１．７×１０６、１．８×１０６、１．９×１０６、２×１０６、２．１×１０６、２．２×１０６、２．３×１０６、２．４×１０６、２．５×１０６、２．６×１０６、２．７×１０６、２．８×１０６、２．９×１０６、３×１０６、３．１×１０６、３．２×１０６、３．３×１０６、３．４×１０６、３．５×１０６、３．６×１０６、３．７×１０６、３．８×１０６、３．９×１０６、４×１０６、４．１×１０６、４．２×１０６、４．３×１０６、４．４×１０６、４．５×１０６、４．６×１０６、４．７×１０６、４．８×１０６、４．９×１０６、５×１０６、５．１×１０６、５．２×１０６、５．３×１０６、５．４×１０６、５．５×１０６、５．６×１０６、５．７×１０６、５．８×１０６、５．９×１０６、６×１０６、６．５×１０６、７×１０６、７．５×１０６、８×１０６、８．５×１０６、９×１０６、９．５×１０６、１×１０７、１．５×１０７、２×１０７、２．５×１０７、３×１０７、３．５×１０７、４×１０７、４．５×１０７、５×１０７、５．５×１０７、６×１０７、６．５×１０７、７×１０７、７．５×１０７、８×１０７、８．５×１０７、９×１０７、９．５×１０７、１×１０８、１×１０８、１．５×１０８、２×１０８、２．５×１０８、３×１０８、３．５×１０８、４×１０７、４．５×１０８、５×１０８、５．５×１０８、６×１０８、６．５×１０８、７×１０８、７．５×１０８、８×１０８、８．５×１０８、９×１０８、９．５×１０８、１×１０９個またはそれ以下のＴｒｅｇの用量で投与することができ、Ｔｒｅｇは、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍ、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍ、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍＦＯＸＰ３＋、ＣＤ３＋ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ３＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ３＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍ、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍＦＯＸＰ３＋、ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋、またはＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍとして定義される。
【０１５７】
対象に投与されるＴｒｅｇを含む細胞の集団は、レシピエントの体重１キログラムあたり、１×１０４〜１×１０９、１×１０５〜１×１０８、１×１０５〜１×１０７、５×１０５〜１×１０７、５×１０５〜５×１０６、５×１０５〜４×１０６、５×１０５〜３×１０６、５×１０５〜２×１０６、５×１０５〜１×１０６、１×１０６〜１×１０７、１×１０６〜５×１０６、１×１０６〜４×１０６、１×１０６〜３×１０６、１×１０６〜２×１０６、１×１０６〜１．５×１０６、１．５×１０６〜１×１０７、１．５×１０６〜５×１０６、１．５×１０６〜４×１０６、１．５×１０６〜３×１０６、１．５×１０６〜２×１０６、２×１０６〜１×１０７、２×１０６〜５×１０６、２×１０６〜４×１０６、２×１０６〜３×１０６、２×１０６〜１×１０７、２×１０６〜５×１０６、２×１０６〜４×１０６、２×１０６〜３×１０６、２×１０６〜２×１０６、２．５×１０６〜１×１０７、２．５×１０６〜５×１０６、２．５×１０６〜４×１０６、または２．５×１０６〜３×１０６個の細胞の用量で投与することができる。
【０１５８】
いくつかの実施形態では、対象に投与されるＴｒｅｇを含む細胞の集団は、レシピエントの体重１キログラムあたり、１×１０４〜１×１０９、１×１０５〜１×１０８、１×１０５〜１×１０７、５×１０５〜１×１０７、５×１０５〜５×１０６、５×１０５〜４×１０６、５×１０５〜３×１０６、５×１０５〜２×１０６、５×１０５〜１×１０６、１×１０６〜１×１０７、１×１０６〜５×１０６、１×１０６〜４×１０６、１×１０６〜３×１０６、１×１０６〜２×１０６、１×１０６〜１．５×１０６、１．５×１０６〜１×１０７、１．５×１０６〜５×１０６、１．５×１０６〜４×１０６、１．５×１０６〜３×１０６、１．５×１０６〜２×１０６、２×１０６〜１×１０７、２×１０６〜５×１０６、２×１０６〜４×１０６、２×１０６〜３×１０６、２×１０６〜１×１０７、２×１０６〜５×１０６、２×１０６〜４×１０６、２×１０６〜３×１０６、２×１０６〜２×１０６、２．５×１０６〜１×１０７、２．５×１０６〜５×１０６、２．５×１０６〜４×１０６、または２．５×１０６〜３×１０６個のＴｒｅｇの用量で投与することができ、Ｔｒｅｇは、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍ、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍ、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍＦＯＸＰ３＋、ＣＤ３＋ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ３＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ３＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍ、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍＦＯＸＰ３＋、ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋、またはＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍとして定義される。
【０１５９】
本開示のＴｒｅｇを含む細胞の集団は、例えば、全細胞、有核細胞、またはＣＤ４５＋細胞の割合として、少なくとも約５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％超、またはそれ以上のＦＯＸＰ３＋細胞を含むことができる。
【０１６０】
いくつかの実施形態では、本開示のＴｒｅｇを含む細胞の集団は、全細胞、有核細胞、またはＣＤ４５＋細胞の割合として、最大で約５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以下のＦＯＸＰ３＋細胞を含む。
【０１６１】
本開示のＴｒｅｇを含む細胞の集団は、例えば、全細胞、有核細胞、またはＣＤ４５＋細胞の割合として、少なくとも約５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％超、またはそれ以上のＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍ細胞を含むことができる。
【０１６２】
いくつかの実施形態では、本開示のＴｒｅｇを含む細胞の集団は、全細胞、有核細胞、またはＣＤ４５＋細胞の割合として、最大で約５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以下のＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍ細胞を含む。
【０１６３】
例えば、本開示のＴｒｅｇを含む細胞の集団は、全細胞、有核細胞、またはＣＤ４５＋細胞の割合として、少なくとも約５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％超、またはそれ以上のＴｒｅｇを含むことができ、Ｔｒｅｇは、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍ、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍ、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍＦＯＸＰ３＋、ＣＤ３＋ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ３＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ３＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍ、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍＦＯＸＰ３＋、ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋、またはＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍとして定義される。
【０１６４】
いくつかの実施形態では、本開示のＴｒｅｇを含む細胞の集団は、全細胞、有核細胞、またはＣＤ４５＋細胞の割合として、最大で約５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以下のＴｒｅｇを含み、Ｔｒｅｇは、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍ、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍ、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍＦＯＸＰ３＋、ＣＤ３＋ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ３＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ３＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍ、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍＦＯＸＰ３＋、ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋、またはＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍとして定義される。
【０１６５】
本開示のＴｒｅｇを含む細胞の集団は、全細胞、有核細胞、またはＣＤ４５＋細胞の割合として、例えば、５０％〜１００％、６０％〜１００％、７０％〜１００％、７５％〜１００％、８０％〜１００％、８１％〜１００％、８２％〜１００％、８３％〜１００％、８４％〜１００％、８４％〜１００％、８６％〜１００％、８７％〜１００％、８８％〜１００％、８９％〜１００％、９０％〜９１％、９２％〜１００％、９３％〜１００％、９４％〜１００％、９５％〜１００％、９６％〜１００％、９７％〜１００％、９８％〜１００％、９９％〜１００％、９９．５％〜１００％、５０％〜９９％、６０％〜９９％、７０％〜９９％、８０％〜９９％、８１％〜９９％、８２％〜９９％、８３％〜９９％、８４％〜９９％、８５％〜９９％、８６％〜９９％、８７％〜９９％、８８％〜９９％、８９％〜９９％、９０％〜９９％、９１％〜９９％、９２％〜９９％、９４％〜９９％、９５％〜９９％、９６％〜９７％、９８％〜９９％、５０％〜９８％、６０％〜９８％、７０％〜９８％、８０％〜９８％、８１％〜９８％、８２％〜９８％、８３％〜９８％、８４％〜９８％、８５％〜９８％、８６％〜９８％、８７％〜９８％、８８％〜９８％、８９％〜９８％、９０％〜９８％、９１％〜９８％、９２％〜９８％、９４％〜９８％、９５％〜９８％、９６％〜９７％、９８％〜９８％、５０％〜９７％、６０％〜９７％、７０％〜９７％、８０％〜９７％、８１％〜９７％、８２％〜９７％、８３％〜９７％、８４％〜９７％、８５％〜９７％、８６％〜９７％、８７％〜９７％、８８％〜９７％、８９％〜９７％、９０％〜９７％、９１％〜９７％、９２％〜９７％、９４％〜９７％、９５％〜９７％、９６％〜９７％、５０％〜９６％、６０％〜９６％、７０％〜９６％、８０％〜９６％、８１％〜９６％、８２％〜９６％、８３％〜９６％、８４％〜９６％、８５％〜９６％、８６％〜９６％、８７％〜９６％、８８％〜９６％、８９％〜９６％、９０％〜９６％、９１％〜９６％、９２％〜９６％、９４％〜９６％、９５％〜９６％、５０％〜９５％、６０％〜９５％、７０％〜９５％、８０％〜９５％、８１％〜９５％、８２％〜９５％、８３％〜９５％、８４％〜９５％、８５％〜９５％、８６％〜９５％、８７％〜９５％、８８％〜９５％、８９％〜９５％、９０％〜９５％、９１％〜９５％、９２％〜９５％、または９４％〜９５％のＦＯＸＰ３＋細胞を含むことができる。
【０１６６】
本開示のＴｒｅｇを含む細胞の集団は、全細胞、有核細胞、またはＣＤ４５＋細胞の割合として、５０％〜１００％、６０％〜１００％、７０％〜１００％、７５％〜１００％、８０％〜１００％、８１％〜１００％、８２％〜１００％、８３％〜１００％、８４％〜１００％、８４％〜１００％、８６％〜１００％、８７％〜１００％、８８％〜１００％、８９％〜１００％、９０％〜９１％、９２％〜１００％、９３％〜１００％、９４％〜１００％、９５％〜１００％、９６％〜１００％、９７％〜１００％、９８％〜１００％、９９％〜１００％、９９．５％〜１００％、５０％〜９９％、６０％〜９９％、７０％〜９９％、８０％〜９９％、８１％〜９９％、８２％〜９９％、８３％〜９９％、８４％〜９９％、８５％〜９９％、８６％〜９９％、８７％〜９９％、８８％〜９９％、８９％〜９９％、９０％〜９９％、９１％〜９９％、９２％〜９９％、９４％〜９９％、９５％〜９９％、９６％〜９７％、９８％〜９９％、５０％〜９８％、６０％〜９８％、７０％〜９８％、８０％〜９８％、８１％〜９８％、８２％〜９８％、８３％〜９８％、８４％〜９８％、８５％〜９８％、８６％〜９８％、８７％〜９８％、８８％〜９８％、８９％〜９８％、９０％〜９８％、９１％〜９８％、９２％〜９８％、９４％〜９８％、９５％〜９８％、９６％〜９７％、９８％〜９８％、５０％〜９７％、６０％〜９７％、７０％〜９７％、８０％〜９７％、８１％〜９７％、８２％〜９７％、８３％〜９７％、８４％〜９７％、８５％〜９７％、８６％〜９７％、８７％〜９７％、８８％〜９７％、８９％〜９７％、９０％〜９７％、９１％〜９７％、９２％〜９７％、９４％〜９７％、９５％〜９７％、９６％〜９７％、５０％〜９６％、６０％〜９６％、７０％〜９６％、８０％〜９６％、８１％〜９６％、８２％〜９６％、８３％〜９６％、８４％〜９６％、８５％〜９６％、８６％〜９６％、８７％〜９６％、８８％〜９６％、８９％〜９６％、９０％〜９６％、９１％〜９６％、９２％〜９６％、９４％〜９６％、９５％〜９６％、５０％〜９５％、６０％〜９５％、７０％〜９５％、８０％〜９５％、８１％〜９５％、８２％〜９５％、８３％〜９５％、８４％〜９５％、８５％〜９５％、８６％〜９５％、８７％〜９５％、８８％〜９５％、８９％〜９５％、９０％〜９５％、９１％〜９５％、９２％〜９５％、または９４％〜９５％のＴｒｅｇを含むことができ、Ｔｒｅｇは、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍ、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍ、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍＦＯＸＰ３＋、ＣＤ３＋ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ３＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ３＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍ、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍＦＯＸＰ３＋、ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋、またはＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍとして定義される。
【０１６７】
本開示のＴｒｅｇを含む細胞の集団は、定義されたレベルの汚染非Ｔｒｅｇ細胞を有することができる。
【０１６８】
例えば、レシピエントの体重１キログラムあたり、少なくとも約１×１０２、２×１０２、３×１０２、４×１０２、５×１０２、６×１０２、７×１０２、８×１０２、９×１０２、１×１０３、２×１０３、３×１０３、４×１０３、５×１０３、６×１０３、７×１０３、８×１０３、９×１０３、１×１０４、２×１０４、３×１０４、４×１０４、５×１０４、６×１０４、７×１０４、８×１０４、９×１０４、１×１０５個超、またはそれ以上の非Ｔｒｅｇ細胞が、本開示のＴｒｅｇを含む細胞の集団中に存在することができ、非Ｔｒｅｇ細胞は、ＦＯＸＰ３−またはＣＤ１２７＋／ｂｒｉｇｈｔである。
【０１６９】
いくつかの実施形態では、レシピエントの体重１キログラムあたり、最大で約１×１０２、２×１０２、３×１０２、４×１０２、５×１０２、６×１０２、７×１０２、８×１０２、９×１０２、１×１０３、２×１０３、３×１０３、４×１０３、５×１０３、６×１０３、７×１０３、８×１０３、９×１０３、１×１０４、２×１０４、３×１０４、４×１０４、５×１０４、６×１０４、７×１０４、８×１０４、９×１０４、１×１０５個、またはそれ以下の非Ｔｒｅｇ細胞が、本開示のＴｒｅｇを含む細胞の集団中に存在することができ、非Ｔｒｅｇ細胞は、ＦＯＸＰ３−またはＣＤ１２７＋／ｂｒｉｇｈｔである。
【０１７０】
本開示のＴｒｅｇを含む細胞の集団は、全細胞、有核細胞、またはＣＤ４５＋細胞の割合として、例えば、少なくとも約０．００１％、０．００２％、０．００３％、０．００４％、０．００５％、０．００６％、０．００７％、０．００８％、０．００９％、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％、０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１％、１．１％、１．２％、１．３％、１．４％、１．５％、１．６％、１．７％、１．８％、１．９％、２％、２．１％、２．２％、２．３％、２．４％、２．５％、２．６％、２．７％、２．８％、２．９％、３％、３．１％、３．２％、３．３％、３．４％、３．５％、３．６％、３．７％、３．８％、３．９％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％超、またはそれ以上の非Ｔｒｅｇ細胞を含むことができ、非Ｔｒｅｇ細胞は、ＦＯＸＰ３−またはＣＤ１２７＋／ｂｒｉｇｈｔである。
【０１７１】
いくつかの実施形態では、本開示のＴｒｅｇを含む細胞の集団は、全細胞、有核細胞、またはＣＤ４５＋細胞の割合として、例えば、最大で約０．００１％、０．００２％、０．００３％、０．００４％、０．００５％、０．００６％、０．００７％、０．００８％、０．００９％、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％、０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１％、１．１％、１．２％、１．３％、１．４％、１．５％、１．６％、１．７％、１．８％、１．９％、２％、２．１％、２．２％、２．３％、２．４％、２．５％、２．６％、２．７％、２．８％、２．９％、３％、３．１％、３．２％、３．３％、３．４％、３．５％、３．６％、３．７％、３．８％、３．９％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、またはそれ以下の非Ｔｒｅｇ細胞を含み、非Ｔｒｅｇ細胞は、ＦＯＸＰ３−またはＣＤ１２７＋／ｂｒｉｇｈｔである。
【０１７２】
Ｔｃｏｎ
対象に投与されるＴｃｏｎの集団は、レシピエントの体重１キログラムあたり、例えば、少なくとも約１×１０４、１×１０５、２×１０５、３×１０５、４×１０５、５×１０５、６×１０５、７×１０５、８×１０５、９×１０５、１×１０６、１．１×１０６、１．２×１０６、１．３×１０６、１．４×１０６、１．５×１０６、１．６×１０６、１．７×１０６、１．８×１０６、１．９×１０６、２×１０６、２．１×１０６、２．２×１０６、２．３×１０６、２．４×１０６、２．５×１０６、２．６×１０６、２．７×１０６、２．８×１０６、２．９×１０６、３×１０６、３．１×１０６、３．２×１０６、３．３×１０６、３．４×１０６、３．５×１０６、３．６×１０６、３．７×１０６、３．８×１０６、３．９×１０６、４×１０６、４．１×１０６、４．２×１０６、４．３×１０６、４．４×１０６、４．５×１０６、４．６×１０６、４．７×１０６、４．８×１０６、４．９×１０６、５×１０６、５．１×１０６、５．２×１０６、５．３×１０６、５．４×１０６、５．５×１０６、５．６×１０６、５．７×１０６、５．８×１０６、５．９×１０６、６×１０６、６．５×１０６、７×１０６、７．５×１０６、８×１０６、８．５×１０６、９×１０６、９．５×１０６、１×１０７、１．５×１０７、２×１０７、２．５×１０７、３×１０７、３．５×１０７、４×１０７、４．５×１０７、５×１０７、５．５×１０７、６×１０７、６．５×１０７、７×１０７、７．５×１０７、８×１０７、８．５×１０７、９×１０７、９．５×１０７、１×１０８、１×１０８、１．５×１０８、２×１０８、２．５×１０８、３×１０８、３．５×１０８、４×１０７、４．５×１０８、５×１０８、５．５×１０８、６×１０８、６．５×１０８、７×１０８、７．５×１０８、８×１０８、８．５×１０８、９×１０８、９．５×１０８、１×１０９個超、またはそれ以上の細胞の用量で投与することができる。
【０１７３】
いくつかの実施形態では、対象に投与されるＴｃｏｎの集団は、レシピエントの体重１キログラムあたり、最大で約１×１０４、１×１０５、２×１０５、３×１０５、４×１０５、５×１０５、６×１０５、７×１０５、８×１０５、９×１０５、１×１０６、１．１×１０６、１．２×１０６、１．３×１０６、１．４×１０６、１．５×１０６、１．６×１０６、１．７×１０６、１．８×１０６、１．９×１０６、２×１０６、２．１×１０６、２．２×１０６、２．３×１０６、２．４×１０６、２．５×１０６、２．６×１０６、２．７×１０６、２．８×１０６、２．９×１０６、３×１０６、３．１×１０６、３．２×１０６、３．３×１０６、３．４×１０６、３．５×１０６、３．６×１０６、３．７×１０６、３．８×１０６、３．９×１０６、４×１０６、４．１×１０６、４．２×１０６、４．３×１０６、４．４×１０６、４．５×１０６、４．６×１０６、４．７×１０６、４．８×１０６、４．９×１０６、５×１０６、５．１×１０６、５．２×１０６、５．３×１０６、５．４×１０６、５．５×１０６、５．６×１０６、５．７×１０６、５．８×１０６、５．９×１０６、６×１０６、６．５×１０６、７×１０６、７．５×１０６、８×１０６、８．５×１０６、９×１０６、９．５×１０６、１×１０７、１．５×１０７、２×１０７、２．５×１０７、３×１０７、３．５×１０７、４×１０７、４．５×１０７、５×１０７、５．５×１０７、６×１０７、６．５×１０７、７×１０７、７．５×１０７、８×１０７、８．５×１０７、９×１０７、９．５×１０７、１×１０８、１×１０８、１．５×１０８、２×１０８、２．５×１０８、３×１０８、３．５×１０８、４×１０７、４．５×１０８、５×１０８、５．５×１０８、６×１０８、６．５×１０８、７×１０８、７．５×１０８、８×１０８、８．５×１０８、９×１０８、９．５×１０８、１×１０９個、またはそれ以下の細胞の用量で投与することができる。
【０１７４】
対象に投与されるＴｃｏｎの集団は、レシピエントの体重１キログラムあたり、少なくとも約１×１０５、２×１０５、３×１０５、４×１０５、５×１０５、６×１０５、７×１０５、８×１０５、９×１０５、１×１０６、１．１×１０６、１．２×１０６、１．３×１０６、１．４×１０６、１．５×１０６、１．６×１０６、１．７×１０６、１．８×１０６、１．９×１０６、２×１０６、２．１×１０６、２．２×１０６、２．３×１０６、２．４×１０６、２．５×１０６、２．６×１０６、２．７×１０６、２．８×１０６、２．９×１０６、３×１０６、３．１×１０６、３．２×１０６、３．３×１０６、３．４×１０６、３．５×１０６、３．６×１０６、３．７×１０６、３．８×１０６、３．９×１０６、４×１０６、４．１×１０６、４．２×１０６、４．３×１０６、４．４×１０６、４．５×１０６、４．６×１０６、４．７×１０６、４．８×１０６、４．９×１０６、５×１０６、５．１×１０６、５．２×１０６、５．３×１０６、５．４×１０６、５．５×１０６、５．６×１０６、５．７×１０６、５．８×１０６、５．９×１０６、６×１０６、６．５×１０６、７×１０６、７．５×１０６、８×１０６、８．５×１０６、９×１０６、９．５×１０６、１×１０７、１．５×１０７、２×１０７、２．５×１０７、３×１０７、３．５×１０７、４×１０７、４．５×１０７、５×１０７、５．５×１０７、６×１０７、６．５×１０７、７×１０７、７．５×１０７、８×１０７、８．５×１０７、９×１０７、９．５×１０７、１×１０８、１×１０８、１．５×１０８、２×１０８、２．５×１０８、３×１０８、３．５×１０８、４×１０７、４．５×１０８、５×１０８、５．５×１０８、６×１０８、６．５×１０８、７×１０８、７．５×１０８、８×１０８、８．５×１０８、９×１０８、９．５×１０８、１×１０９個超、またはそれ以上のＴｃｏｎの用量で投与することができ、ＴｃｏｎはＣＤ３＋として定義される。
【０１７５】
対象に投与されるＴｃｏｎの集団は、レシピエントの体重１キログラムあたり、最大で約１×１０４、１×１０５、５×１０５、６×１０５、７×１０５、８×１０５、９×１０５、１×１０６、１．１×１０６、１．２×１０６、１．３×１０６、１．４×１０６、１．５×１０６、１．６×１０６、１．７×１０６、１．８×１０６、１．９×１０６、２×１０６、２．１×１０６、２．２×１０６、２．３×１０６、２．４×１０６、２．５×１０６、２．６×１０６、２．７×１０６、２．８×１０６、２．９×１０６、３×１０６、３．１×１０６、３．２×１０６、３．３×１０６、３．４×１０６、３．５×１０６、３．６×１０６、３．７×１０６、３．８×１０６、３．９×１０６、４×１０６、４．１×１０６、４．２×１０６、４．３×１０６、４．４×１０６、４．５×１０６、４．６×１０６、４．７×１０６、４．８×１０６、４．９×１０６、５×１０６、５．１×１０６、５．２×１０６、５．３×１０６、５．４×１０６、５．５×１０６、５．６×１０６、５．７×１０６、５．８×１０６、５．９×１０６、６×１０６、６．５×１０６、７×１０６、７．５×１０６、８×１０６、８．５×１０６、９×１０６、９．５×１０６、１×１０７、１．５×１０７、２×１０７、２．５×１０７、３×１０７、３．５×１０７、４×１０７、４．５×１０７、５×１０７、５．５×１０７、６×１０７、６．５×１０７、７×１０７、７．５×１０７、８×１０７、８．５×１０７、９×１０７、９．５×１０７、１×１０８、１×１０８、１．５×１０８、２×１０８、２．５×１０８、３×１０８、３．５×１０８、４×１０７、４．５×１０８、５×１０８、５．５×１０８、６×１０８、６．５×１０８、７×１０８、７．５×１０８、８×１０８、８．５×１０８、９×１０８、９．５×１０８、１×１０９個、またはそれ以下のＴｃｏｎの用量で投与することができ、ＴｃｏｎはＣＤ３＋として定義される。
【０１７６】
いくつかの実施形態では、対象に投与されるＴｃｏｎの集団は、レシピエントの体重１キログラムあたり、１×１０４〜１×１０９、１×１０５〜１×１０８、１×１０５〜１×１０７、５×１０５〜１×１０７、５×１０５〜５×１０６、５×１０５〜４×１０６、５×１０５〜３×１０６、５×１０５〜２×１０６、５×１０５〜１×１０６、１×１０６〜１×１０７、１×１０６〜５×１０６、１×１０６〜４×１０６、１×１０６〜３×１０６、１×１０６〜２×１０６、１×１０６〜１．５×１０６、１．５×１０６〜１×１０７、１．５×１０６〜５×１０６、１．５×１０６〜４×１０６、１．５×１０６〜３×１０６、１．５×１０６〜２×１０６、２×１０６〜１×１０７、２×１０６〜５×１０６、２×１０６〜４×１０６、２×１０６〜３×１０６、２×１０６〜１×１０７、２×１０６〜５×１０６、２×１０６〜４×１０６、２×１０６〜３×１０６、２×１０６〜２×１０６、２．５×１０６〜１×１０７、２．５×１０６〜５×１０６、２．５×１０６〜４×１０６、または２．５×１０６〜３×１０６個の細胞の用量で投与することができる。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、対象に投与されるＴｃｏｎの集団は、レシピエントの体重１キログラムあたり、１×１０４〜１×１０９、１×１０５〜１×１０８、１×１０５〜１×１０７、５×１０５〜１×１０７、５×１０５〜５×１０６、５×１０５〜４×１０６、５×１０５〜３×１０６、５×１０５〜２×１０６、５×１０５〜１×１０６、１×１０６〜１×１０７、１×１０６〜５×１０６、１×１０６〜４×１０６、１×１０６〜３×１０６、１×１０６〜２×１０６、１×１０６〜１．５×１０６、１．５×１０６〜１×１０７、１．５×１０６〜５×１０６、１．５×１０６〜４×１０６、１．５×１０６〜３×１０６、１．５×１０６〜２×１０６、２×１０６〜１×１０７、２×１０６〜５×１０６、２×１０６〜４×１０６、２×１０６〜３×１０６、２×１０６〜１×１０７、２×１０６〜５×１０６、２×１０６〜４×１０６、２×１０６〜３×１０６、２×１０６〜２×１０６、２．５×１０６〜１×１０７、２．５×１０６〜５×１０６、２．５×１０６〜４×１０６、または２．５×１０６〜３×１０６個のＴｃｏｎの容量で投与することができ、ＴｃｏｎはＣＤ３＋として定義される。
【０１７８】
本開示のＴｃｏｎの集団は、全細胞、有核細胞、またはＣＤ４５＋細胞の割合として、少なくとも約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％超、またはそれ以上のＣＤ３＋細胞を含むことができる。
【０１７９】
本開示のＴｃｏｎの集団は、全細胞、有核細胞、またはＣＤ４５＋細胞の割合として、最大で約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以下のＣＤ３＋細胞を含むことができる。
【０１８０】
例えば、本開示のＴｃｏｎの集団は、全細胞、有核細胞、またはＣＤ４５＋細胞の割合として、約１０％〜１００％、１０％〜９０％、１０％〜８０％、１０％〜７０％、１０％〜６０％、１０％〜５０％、１０％〜４０％、１０％〜３０％、１０％〜２０％、２０％〜１００％、２０％〜９０％、２０％〜８０％、２０％〜７０％、２０％〜６０％、２０％〜５０％、２０％〜４０％、２０％〜３０％、３０％〜１００％、３０％〜９０％、３０％〜８０％、３０％〜７０％、３０％〜６０％、３０％〜５０％、３０％〜４０％、４０％〜１００％、４０％〜９０％、４０％〜８０％、４０％〜７０％、４０％〜６０％、４０％〜５０％、５０％〜１００％、５０％〜９０％、５０％〜８０％、５０％〜７０％、５０％〜６０％、６０％〜１００％、６０％〜９０％、６０％〜８０％、６０％〜７０％、７０％〜１００％、７０％〜９０％、７０％〜８０％、８０％〜１００％、８０％〜９０％、または９０％〜１００％のＣＤ３＋細胞を含むことができる。
【０１８１】
ｉＮＫＴ
対象に投与されるｉＮＫＴの集団は、レシピエントの体重１キログラムあたり、少なくとも約１×１０４、１×１０５、５×１０５、６×１０５、７×１０５、８×１０５、９×１０５、１×１０６、１．１×１０６、１．２×１０６、１．３×１０６、１．４×１０６、１．５×１０６、１．６×１０６、１．７×１０６、１．８×１０６、１．９×１０６、２×１０６、２．１×１０６、２．２×１０６、２．３×１０６、２．４×１０６、２．５×１０６、２．６×１０６、２．７×１０６、２．８×１０６、２．９×１０６、３×１０６、３．１×１０６、３．２×１０６、３．３×１０６、３．４×１０６、３．５×１０６、３．６×１０６、３．７×１０６、３．８×１０６、３．９×１０６、４×１０６、４．１×１０６、４．２×１０６、４．３×１０６、４．４×１０６、４．５×１０６、４．６×１０６、４．７×１０６、４．８×１０６、４．９×１０６、５×１０６、５．１×１０６、５．２×１０６、５．３×１０６、５．４×１０６、５．５×１０６、５．６×１０６、５．７×１０６、５．８×１０６、５．９×１０６、６×１０６、６．５×１０６、７×１０６、７．５×１０６、８×１０６、８．５×１０６、９×１０６、９．５×１０６、１×１０７、１．５×１０７、２×１０７、２．５×１０７、３×１０７、３．５×１０７、４×１０７、４．５×１０７、５×１０７、５．５×１０７、６×１０７、６．５×１０７、７×１０７、７．５×１０７、８×１０７、８．５×１０７、９×１０７、９．５×１０７、１×１０８、１×１０８、１．５×１０８、２×１０８、２．５×１０８、３×１０８、３．５×１０８、４×１０７、４．５×１０８、５×１０８、５．５×１０８、６×１０８、６．５×１０８、７×１０８、７．５×１０８、８×１０８、８．５×１０８、９×１０８、９．５×１０８、１×１０９個超、またはそれ以上の細胞の用量で投与することができる。
【０１８２】
対象に投与されるｉＮＫＴの集団は、レシピエントの体重１キログラムあたり、最大で約１×１０４、１×１０５、５×１０５、６×１０５、７×１０５、８×１０５、９×１０５、１×１０６、１．１×１０６、１．２×１０６、１．３×１０６、１．４×１０６、１．５×１０６、１．６×１０６、１．７×１０６、１．８×１０６、１．９×１０６、２×１０６、２．１×１０６、２．２×１０６、２．３×１０６、２．４×１０６、２．５×１０６、２．６×１０６、２．７×１０６、２．８×１０６、２．９×１０６、３×１０６、３．１×１０６、３．２×１０６、３．３×１０６、３．４×１０６、３．５×１０６、３．６×１０６、３．７×１０６、３．８×１０６、３．９×１０６、４×１０６、４．１×１０６、４．２×１０６、４．３×１０６、４．４×１０６、４．５×１０６、４．６×１０６、４．７×１０６、４．８×１０６、４．９×１０６、５×１０６、５．１×１０６、５．２×１０６、５．３×１０６、５．４×１０６、５．５×１０６、５．６×１０６、５．７×１０６、５．８×１０６、５．９×１０６、６×１０６、６．５×１０６、７×１０６、７．５×１０６、８×１０６、８．５×１０６、９×１０６、９．５×１０６、１×１０７、１．５×１０７、２×１０７、２．５×１０７、３×１０７、３．５×１０７、４×１０７、４．５×１０７、５×１０７、５．５×１０７、６×１０７、６．５×１０７、７×１０７、７．５×１０７、８×１０７、８．５×１０７、９×１０７、９．５×１０７、１×１０８、１×１０８、１．５×１０８、２×１０８、２．５×１０８、３×１０８、３．５×１０８、４×１０７、４．５×１０８、５×１０８、５．５×１０８、６×１０８、６．５×１０８、７×１０８、７．５×１０８、８×１０８、８．５×１０８、９×１０８、９．５×１０８、１×１０９個、またはそれ以下の細胞の用量で投与することができる。
【０１８３】
いくつかの実施形態では、対象に投与されるｉＮＫＴの集団は、レシピエントの体重１キログラムあたり、少なくとも約１×１０４、１×１０５、５×１０５、６×１０５、７×１０５、８×１０５、９×１０５、１×１０６、１．１×１０６、１．２×１０６、１．３×１０６、１．４×１０６、１．５×１０６、１．６×１０６、１．７×１０６、１．８×１０６、１．９×１０６、２×１０６、２．１×１０６、２．２×１０６、２．３×１０６、２．４×１０６、２．５×１０６、２．６×１０６、２．７×１０６、２．８×１０６、２．９×１０６、３×１０６、３．１×１０６、３．２×１０６、３．３×１０６、３．４×１０６、３．５×１０６、３．６×１０６、３．７×１０６、３．８×１０６、３．９×１０６、４×１０６、４．１×１０６、４．２×１０６、４．３×１０６、４．４×１０６、４．５×１０６、４．６×１０６、４．７×１０６、４．８×１０６、４．９×１０６、５×１０６、５．１×１０６、５．２×１０６、５．３×１０６、５．４×１０６、５．５×１０６、５．６×１０６、５．７×１０６、５．８×１０６、５．９×１０６、６×１０６、６．５×１０６、７×１０６、７．５×１０６、８×１０６、８．５×１０６、９×１０６、９．５×１０６、１×１０７、１．５×１０７、２×１０７、２．５×１０７、３×１０７、３．５×１０７、４×１０７、４．５×１０７、５×１０７、５．５×１０７、６×１０７、６．５×１０７、７×１０７、７．５×１０７、８×１０７、８．５×１０７、９×１０７、９．５×１０７、１×１０８、１×１０８、１．５×１０８、２×１０８、２．５×１０８、３×１０８、３．５×１０８、４×１０７、４．５×１０８、５×１０８、５．５×１０８、６×１０８、６．５×１０８、７×１０８、７．５×１０８、８×１０８、８．５×１０８、９×１０８、９．５×１０８、１×１０９個超、またはそれ以上のＣＤ３＋Ｖα２４Ｊα１８＋細胞の用量で投与することができる。
【０１８４】
いくつかの実施形態では、対象に投与されるｉＮＫＴの集団は、レシピエントの体重１キログラムあたり、最大で約１×１０４、１×１０５、５×１０５、６×１０５、７×１０５、８×１０５、９×１０５、１×１０６、１．１×１０６、１．２×１０６、１．３×１０６、１．４×１０６、１．５×１０６、１．６×１０６、１．７×１０６、１．８×１０６、１．９×１０６、２×１０６、２．１×１０６、２．２×１０６、２．３×１０６、２．４×１０６、２．５×１０６、２．６×１０６、２．７×１０６、２．８×１０６、２．９×１０６、３×１０６、３．１×１０６、３．２×１０６、３．３×１０６、３．４×１０６、３．５×１０６、３．６×１０６、３．７×１０６、３．８×１０６、３．９×１０６、４×１０６、４．１×１０６、４．２×１０６、４．３×１０６、４．４×１０６、４．５×１０６、４．６×１０６、４．７×１０６、４．８×１０６、４．９×１０６、５×１０６、５．１×１０６、５．２×１０６、５．３×１０６、５．４×１０６、５．５×１０６、５．６×１０６、５．７×１０６、５．８×１０６、５．９×１０６、６×１０６、６．５×１０６、７×１０６、７．５×１０６、８×１０６、８．５×１０６、９×１０６、９．５×１０６、１×１０７、１．５×１０７、２×１０７、２．５×１０７、３×１０７、３．５×１０７、４×１０７、４．５×１０７、５×１０７、５．５×１０７、６×１０７、６．５×１０７、７×１０７、７．５×１０７、８×１０７、８．５×１０７、９×１０７、９．５×１０７、１×１０８、１×１０８、１．５×１０８、２×１０８、２．５×１０８、３×１０８、３．５×１０８、４×１０７、４．５×１０８、５×１０８、５．５×１０８、６×１０８、６．５×１０８、７×１０８、７．５×１０８、８×１０８、８．５×１０８、９×１０８、９．５×１０８、１×１０９個、またはそれ以下のＣＤ３＋Ｖα２４Ｊα１８＋細胞の用量で投与することができる。
【０１８５】
対象に投与されるｉＮＫＴの集団は、例えば、レシピエントの体重１キログラムあたり、１×１０４〜１×１０９、１×１０５〜１×１０８、１×１０５〜２×１０７、５×１０５〜２×１０７、５×１０５〜１．５×１０７、５×１０５〜１×１０７、５×１０５〜９×１０６、５×１０５〜８×１０６、５×１０５〜７×１０６、５×１０５〜６×１０６、５×１０５〜５×１０６、５×１０５〜４×１０６、５×１０５〜３×１０６、５×１０５〜２×１０６、５×１０５〜１×１０６、１×１０６〜１．５×１０７、１×１０６〜１×１０７、１×１０６〜９×１０６、１×１０６〜８×１０６、１×１０６〜７×１０６、１×１０６〜６×１０６、１×１０６〜５×１０６、１×１０６〜４×１０６、１×１０６〜３×１０６、１×１０６〜２×１０６、１．５×１０６〜１．５×１０７、１．５×１０６〜１×１０７、１．５×１０６〜９×１０６、１．５×１０６〜８×１０６、１．５×１０６〜７×１０６、１．５×１０６〜６×１０６、１．５×１０６〜５×１０６、１．５×１０６〜４×１０６、１．５×１０６〜３×１０６、１．５×１０６〜２×１０６、２×１０６〜１．５×１０７、２×１０６〜１×１０７、２×１０６〜９×１０６、２×１０６〜８×１０６、２×１０６〜７×１０６、２×１０６〜６×１０６、２×１０６〜５×１０６、２×１０６〜４×１０６、２×１０６〜３×１０６、２．５×１０６〜１．５×１０７、２．５×１０６〜１×１０７、２．５×１０６〜９×１０６、２．５×１０６〜８×１０６、２．５×１０６〜７×１０６、２．５×１０６〜６×１０６、２．５×１０６〜５×１０６、２．５×１０６〜４×１０６、または２．５×１０６〜３×１０６個の細胞の用量で投与することができる。
【０１８６】
対象に投与されるｉＮＫＴの集団は、レシピエントの体重１キログラムあたり、１×１０４〜１×１０９、１×１０５〜１×１０８、１×１０５〜２×１０７、５×１０５〜２×１０７、５×１０５〜１．５×１０７、５×１０５〜１×１０７、５×１０５〜９×１０６、５×１０５〜８×１０６、５×１０５〜７×１０６、５×１０５〜６×１０６、５×１０５〜５×１０６、５×１０５〜４×１０６、５×１０５〜３×１０６、５×１０５〜２×１０６、５×１０５〜１×１０６、１×１０６〜１．５×１０７、１×１０６〜１×１０７、１×１０６〜９×１０６、１×１０６〜８×１０６、１×１０６〜７×１０６、１×１０６〜６×１０６、１×１０６〜５×１０６、１×１０６〜４×１０６、１×１０６〜３×１０６、１×１０６〜２×１０６、１．５×１０６〜１．５×１０７、１．５×１０６〜１×１０７、１．５×１０６〜９×１０６、１．５×１０６〜８×１０６、１．５×１０６〜７×１０６、１．５×１０６〜６×１０６、１．５×１０６〜５×１０６、１．５×１０６〜４×１０６、１．５×１０６〜３×１０６、１．５×１０６〜２×１０６、２×１０６〜１．５×１０７、２×１０６〜１×１０７、２×１０６〜９×１０６、２×１０６〜８×１０６、２×１０６〜７×１０６、２×１０６〜６×１０６、２×１０６〜５×１０６、２×１０６〜４×１０６、２×１０６〜３×１０６、２．５×１０６〜１．５×１０７、２．５×１０６〜１×１０７、２．５×１０６〜９×１０６、２．５×１０６〜８×１０６、２．５×１０６〜７×１０６、２．５×１０６〜６×１０６、２．５×１０６〜５×１０６、２．５×１０６〜４×１０６、または２．５×１０６〜３×１０６個のＣＤ３＋Ｖα２４Ｊα１８＋細胞の用量で投与することができる。
【０１８７】
Ｔｍｅｍ
対象に投与されるＴｍｅｍの集団は、レシピエントの体重１キログラムあたり、少なくとも約１×１０４、１×１０５、５×１０５、６×１０５、７×１０５、８×１０５、９×１０５、１×１０６、１．１×１０６、１．２×１０６、１．３×１０６、１．４×１０６、１．５×１０６、１．６×１０６、１．７×１０６、１．８×１０６、１．９×１０６、２×１０６、２．１×１０６、２．２×１０６、２．３×１０６、２．４×１０６、２．５×１０６、２．６×１０６、２．７×１０６、２．８×１０６、２．９×１０６、３×１０６、３．１×１０６、３．２×１０６、３．３×１０６、３．４×１０６、３．５×１０６、３．６×１０６、３．７×１０６、３．８×１０６、３．９×１０６、４×１０６、４．１×１０６、４．２×１０６、４．３×１０６、４．４×１０６、４．５×１０６、４．６×１０６、４．７×１０６、４．８×１０６、４．９×１０６、５×１０６、５．１×１０６、５．２×１０６、５．３×１０６、５．４×１０６、５．５×１０６、５．６×１０６、５．７×１０６、５．８×１０６、５．９×１０６、６×１０６、６．５×１０６、７×１０６、７．５×１０６、８×１０６、８．５×１０６、９×１０６、９．５×１０６、１×１０７、１．５×１０７、２×１０７、２．５×１０７、３×１０７、３．５×１０７、４×１０７、４．５×１０７、５×１０７、５．５×１０７、６×１０７、６．５×１０７、７×１０７、７．５×１０７、８×１０７、８．５×１０７、９×１０７、９．５×１０７、１×１０８、１×１０８、１．５×１０８、２×１０８、２．５×１０８、３×１０８、３．５×１０８、４×１０７、４．５×１０８、５×１０８、５．５×１０８、６×１０８、６．５×１０８、７×１０８、７．５×１０８、８×１０８、８．５×１０８、９×１０８、９．５×１０８、１×１０９個超、またはそれ以上の細胞の用量で投与することができる。
【０１８８】
対象に投与されるＴｍｅｍの集団は、レシピエントの体重１キログラムあたり、最大で約１×１０４、１×１０５、５×１０５、６×１０５、７×１０５、８×１０５、９×１０５、１×１０６、１．１×１０６、１．２×１０６、１．３×１０６、１．４×１０６、１．５×１０６、１．６×１０６、１．７×１０６、１．８×１０６、１．９×１０６、２×１０６、２．１×１０６、２．２×１０６、２．３×１０６、２．４×１０６、２．５×１０６、２．６×１０６、２．７×１０６、２．８×１０６、２．９×１０６、３×１０６、３．１×１０６、３．２×１０６、３．３×１０６、３．４×１０６、３．５×１０６、３．６×１０６、３．７×１０６、３．８×１０６、３．９×１０６、４×１０６、４．１×１０６、４．２×１０６、４．３×１０６、４．４×１０６、４．５×１０６、４．６×１０６、４．７×１０６、４．８×１０６、４．９×１０６、５×１０６、５．１×１０６、５．２×１０６、５．３×１０６、５．４×１０６、５．５×１０６、５．６×１０６、５．７×１０６、５．８×１０６、５．９×１０６、６×１０６、６．５×１０６、７×１０６、７．５×１０６、８×１０６、８．５×１０６、９×１０６、９．５×１０６、１×１０７、１．５×１０７、２×１０７、２．５×１０７、３×１０７、３．５×１０７、４×１０７、４．５×１０７、５×１０７、５．５×１０７、６×１０７、６．５×１０７、７×１０７、７．５×１０７、８×１０７、８．５×１０７、９×１０７、９．５×１０７、１×１０８、１×１０８、１．５×１０８、２×１０８、２．５×１０８、３×１０８、３．５×１０８、４×１０７、４．５×１０８、５×１０８、５．５×１０８、６×１０８、６．５×１０８、７×１０８、７．５×１０８、８×１０８、８．５×１０８、９×１０８、９．５×１０８、１×１０９個、またはそれ以下の細胞の用量で投与することができる。
【０１８９】
例えば、対象に投与されるＴｍｅｍの集団は、レシピエントの体重１キログラムあたり、少なくとも約１×１０４、１×１０５、５×１０５、６×１０５、７×１０５、８×１０５、９×１０５、１×１０６、１．１×１０６、１．２×１０６、１．３×１０６、１．４×１０６、１．５×１０６、１．６×１０６、１．７×１０６、１．８×１０６、１．９×１０６、２×１０６、２．１×１０６、２．２×１０６、２．３×１０６、２．４×１０６、２．５×１０６、２．６×１０６、２．７×１０６、２．８×１０６、２．９×１０６、３×１０６、３．１×１０６、３．２×１０６、３．３×１０６、３．４×１０６、３．５×１０６、３．６×１０６、３．７×１０６、３．８×１０６、３．９×１０６、４×１０６、４．１×１０６、４．２×１０６、４．３×１０６、４．４×１０６、４．５×１０６、４．６×１０６、４．７×１０６、４．８×１０６、４．９×１０６、５×１０６、５．１×１０６、５．２×１０６、５．３×１０６、５．４×１０６、５．５×１０６、５．６×１０６、５．７×１０６、５．８×１０６、５．９×１０６、６×１０６、６．５×１０６、７×１０６、７．５×１０６、８×１０６、８．５×１０６、９×１０６、９．５×１０６、１×１０７、１．５×１０７、２×１０７、２．５×１０７、３×１０７、３．５×１０７、４×１０７、４．５×１０７、５×１０７、５．５×１０７、６×１０７、６．５×１０７、７×１０７、７．５×１０７、８×１０７、８．５×１０７、９×１０７、９．５×１０７、１×１０８、１×１０８、１．５×１０８、２×１０８、２．５×１０８、３×１０８、３．５×１０８、４×１０７、４．５×１０８、５×１０８、５．５×１０８、６×１０８、６．５×１０８、７×１０８、７．５×１０８、８×１０８、８．５×１０８、９×１０８、９．５×１０８、１×１０９個超、またはそれ以上のＣＤ３＋ＣＤ４５ＲＡ−ＣＤ４５ＲＯ＋細胞の用量で投与することができる。
【０１９０】
いくつかの実施形態では、対象に投与されるＴｍｅｍの集団は、レシピエントの体重１キログラムあたり、最大で約１×１０４、１×１０５、５×１０５、６×１０５、７×１０５、８×１０５、９×１０５、１×１０６、１．１×１０６、１．２×１０６、１．３×１０６、１．４×１０６、１．５×１０６、１．６×１０６、１．７×１０６、１．８×１０６、１．９×１０６、２×１０６、２．１×１０６、２．２×１０６、２．３×１０６、２．４×１０６、２．５×１０６、２．６×１０６、２．７×１０６、２．８×１０６、２．９×１０６、３×１０６、３．１×１０６、３．２×１０６、３．３×１０６、３．４×１０６、３．５×１０６、３．６×１０６、３．７×１０６、３．８×１０６、３．９×１０６、４×１０６、４．１×１０６、４．２×１０６、４．３×１０６、４．４×１０６、４．５×１０６、４．６×１０６、４．７×１０６、４．８×１０６、４．９×１０６、５×１０６、５．１×１０６、５．２×１０６、５．３×１０６、５．４×１０６、５．５×１０６、５．６×１０６、５．７×１０６、５．８×１０６、５．９×１０６、６×１０６、６．５×１０６、７×１０６、７．５×１０６、８×１０６、８．５×１０６、９×１０６、９．５×１０６、１×１０７、１．５×１０７、２×１０７、２．５×１０７、３×１０７、３．５×１０７、４×１０７、４．５×１０７、５×１０７、５．５×１０７、６×１０７、６．５×１０７、７×１０７、７．５×１０７、８×１０７、８．５×１０７、９×１０７、９．５×１０７、１×１０８、１×１０８、１．５×１０８、２×１０８、２．５×１０８、３×１０８、３．５×１０８、４×１０７、４．５×１０８、５×１０８、５．５×１０８、６×１０８、６．５×１０８、７×１０８、７．５×１０８、８×１０８、８．５×１０８、９×１０８、９．５×１０８、１×１０９個、またはそれ以下のＣＤ３＋ＣＤ４５ＲＡ−ＣＤ４５ＲＯ＋細胞の用量で投与することができる。
【０１９１】
いくつかの実施形態では、対象に投与されるＴｍｅｍの集団は、レシピエントの体重１キログラムあたり、１×１０４〜１×１０９、１×１０５〜１×１０８、１×１０５〜２×１０７、５×１０５〜２×１０７、５×１０５〜１．５×１０７、５×１０５〜１×１０７、５×１０５〜９×１０６、５×１０５〜８×１０６、５×１０５〜７×１０６、５×１０５〜６×１０６、５×１０５〜５×１０６、５×１０５〜４×１０６、５×１０５〜３×１０６、５×１０５〜２×１０６、５×１０５〜１×１０６、１×１０６〜１．５×１０７、１×１０６〜１×１０７、１×１０６〜９×１０６、１×１０６〜８×１０６、１×１０６〜７×１０６、１×１０６〜６×１０６、１×１０６〜５×１０６、１×１０６〜４×１０６、１×１０６〜３×１０６、１×１０６〜２×１０６、１．５×１０６〜１．５×１０７、１．５×１０６〜１×１０７、１．５×１０６〜９×１０６、１．５×１０６〜８×１０６、１．５×１０６〜７×１０６、１．５×１０６〜６×１０６、１．５×１０６〜５×１０６、１．５×１０６〜４×１０６、１．５×１０６〜３×１０６、１．５×１０６〜２×１０６、２×１０６〜１．５×１０７、２×１０６〜１×１０７、２×１０６〜９×１０６、２×１０６〜８×１０６、２×１０６〜７×１０６、２×１０６〜６×１０６、２×１０６〜５×１０６、２×１０６〜４×１０６、２×１０６〜３×１０６、２．５×１０６〜１．５×１０７、２．５×１０６〜１×１０７、２．５×１０６〜９×１０６、２．５×１０６〜８×１０６、２．５×１０６〜７×１０６、２．５×１０６〜６×１０６、２．５×１０６〜５×１０６、２．５×１０６〜４×１０６、または２．５×１０６〜３×１０６個の細胞の用量で投与することができる。
【０１９２】
対象に投与されるＴｍｅｍの集団は、レシピエントの体重１キログラムあたり、例えば、１×１０４〜１×１０９、１×１０５〜１×１０８、１×１０５〜２×１０７、５×１０５〜２×１０７、５×１０５〜１．５×１０７、５×１０５〜１×１０７、５×１０５〜９×１０６、５×１０５〜８×１０６、５×１０５〜７×１０６、５×１０５〜６×１０６、５×１０５〜５×１０６、５×１０５〜４×１０６、５×１０５〜３×１０６、５×１０５〜２×１０６、５×１０５〜１×１０６、１×１０６〜１．５×１０７、１×１０６〜１×１０７、１×１０６〜９×１０６、１×１０６〜８×１０６、１×１０６〜７×１０６、１×１０６〜６×１０６、１×１０６〜５×１０６、１×１０６〜４×１０６、１×１０６〜３×１０６、１×１０６〜２×１０６、１．５×１０６〜１．５×１０７、１．５×１０６〜１×１０７、１．５×１０６〜９×１０６、１．５×１０６〜８×１０６、１．５×１０６〜７×１０６、１．５×１０６〜６×１０６、１．５×１０６〜５×１０６、１．５×１０６〜４×１０６、１．５×１０６〜３×１０６、１．５×１０６〜２×１０６、２×１０６〜１．５×１０７、２×１０６〜１×１０７、２×１０６〜９×１０６、２×１０６〜８×１０６、２×１０６〜７×１０６、２×１０６〜６×１０６、２×１０６〜５×１０６、２×１０６〜４×１０６、２×１０６〜３×１０６、２．５×１０６〜１．５×１０７、２．５×１０６〜１×１０７、２．５×１０６〜９×１０６、２．５×１０６〜８×１０６、２．５×１０６〜７×１０６、２．５×１０６〜６×１０６、２．５×１０６〜５×１０６、２．５×１０６〜４×１０６、または２．５×１０６〜３×１０６個のＣＤ３＋ＣＤ４５ＲＡ−ＣＤ４５ＲＯ＋細胞の用量で投与することができる。
【０１９３】
Ｔｒｅｇ対Ｔｃｏｎの比
本開示の方法において、対象に投与されるＴｃｏｎ：Ｔｒｅｇの比は、例えば、約１：１００、１：５０、１：２５、１：２０、１：１５、１：１０、１：９、１：８、１：７、１：６、１：５、１：４、１：３、１：２．５、１：２、１．５：２、１：１．５、１：１、１．５：１、２：１、２：１．５、２．５：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１５：１、２０：１、２５：１、５０：１、または１００：１であり得る。
【０１９４】
前処置レジメン、ＧＶＨＤ予防剤、および追加の薬剤
本開示の方法のいくつかの実施形態では、対象は、本明細書に記載の細胞の集団の注入の前に、骨髄破壊的前処置で処置され得る。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、対象への１つ以上の免疫抑制剤または他の薬剤の投与を含むことができる。
【０１９６】
免疫抑制剤は、例えば、レシピエント免疫系による移植片の拒絶を予防するため、または移植片がレシピエント細胞を攻撃することに起因するＧＶＨＤを予防もしくは軽減するために、対象に投与され得る。免疫抑制剤には、例えば、カルシニューリン活性を阻害するために結合タンパク質と組み合わされるカルシニューリン阻害剤、およびモノクローナル抗体が含まれる。
【０１９７】
カルシニューリン阻害剤には、例えば、タクロリムス、シクロスポリンＡなどが含まれる。アジュバント剤は、カルシニューリン阻害剤と組み合わせることができ、例えば、ステロイド、アザチオプリン、マイコフェノール酸モフェチル、およびシロリムスを含む。免疫抑制剤として有用なモノクローナル抗体には、例えば、アンタゴニスト抗体（例えば、バシリキシマブおよびダクリズマブなどのＩＬ−２Ｒに拮抗する抗体）、ならびに抗体依存性細胞傷害によって免疫細胞の集団を枯渇させる抗体（例えば、ムロモナブ−ＣＤ３などのＴ細胞枯渇のための抗ＣＤ３抗体）が含まれる。
【０１９８】
本開示の方法は、抗腫瘍剤、またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグを、それを必要とする対象に投与することをさらに含むことができる。抗腫瘍剤の例には、抗腫瘍アルキル化剤、抗腫瘍代謝産物、抗腫瘍抗生物質、植物由来抗腫瘍剤、抗腫瘍有機白金化合物、抗腫瘍カンプトテシン誘導体、抗腫瘍チロシンキナーゼ阻害剤、モノクローナル抗体、インターフェロン、生物学的応答修飾剤、および抗腫瘍活性を有する他の薬剤、またはその薬学的に許容される塩が含まれるが、これらに限定されない。
【０１９９】
例示的な実施形態
いくつかの実施形態では、処置を必要とするヒト対象の処置方法であって、ａ）造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）の集団であって、前記ＨＳＰＣの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０５個超のＨＳＰＣ（好ましくは５×１０５〜２×１０７個のＨＳＰＣ）を含み、前記ＨＰＳＣが、ＣＤ３４＋である、造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）の集団、ｂ）制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を含む細胞の集団であって、前記Ｔｒｅｇが、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍまたはＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋であり、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０５個超のＴｒｅｇ（好ましくは５×１０５〜４×１０６個のＴｒｅｇ）を含み、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団の投与前に凍結保存されていない、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を含む細胞の集団、およびｃ）通常型Ｔ細胞の集団（Ｔｃｏｎ）であって、前記Ｔｃｏｎが、ＣＤ３＋であり、前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０７個未満のＴｃｏｎ（好ましくは５×１０５〜４×１０６個のＴｃｏｎ）を含む、通常型Ｔ細胞の集団（Ｔｃｏｎ）を前記ヒト対象に投与することを含み、前記ＨＳＰＣの集団および前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記Ｔｃｏｎの集団の前に（好ましくは３６〜６０時間前に）投与される、方法が、本明細書に開示される。
【０２００】
いくつかの実施形態では、処置を必要とするヒト対象の処置方法であって、ａ）造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）の集団であって、前記ＨＳＰＣの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０５個超のＨＳＰＣ（好ましくは５×１０５〜２×１０７個のＨＳＰＣ）を含み、前記ＨＰＳＣが、ＣＤ３４＋である、造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）の集団、ｂ）制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を含む細胞の集団であって、前記Ｔｒｅｇが、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍまたはＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋であり、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０５個超のＴｒｅｇ（好ましくは５×１０５〜４×１０６のＴｒｅｇ）を含み、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団の投与前に凍結保存されていない、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を含む細胞の集団、ｃ）通常型Ｔ細胞の集団（Ｔｃｏｎ）であって、前記Ｔｃｏｎが、ＣＤ３＋であり、前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０７個未満のＴｃｏｎ（好ましくは５×１０５〜４×１０６個のＴｃｏｎ）を含む、通常型Ｔ細胞の集団（Ｔｃｏｎ）、およびｄ）移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）予防剤（好ましくはタクロリムスまたはシロリムス）を前記ヒト対象に投与することを含み、前記ＨＳＰＣの集団および前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記Ｔｃｏｎの集団の前に（好ましくは３６〜６０時間前に）投与され、前記ヒト対象が、前記Ｔｃｏｎの集団の投与後３０日以内（好ましくは１年以内）に移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）を発症しない、方法が、本明細書に開示される。
【０２０１】
いくつかの実施形態では、処置を必要とするヒト対象の処置方法であって、ａ）造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）の集団であって、前記ＨＳＰＣの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０５個超のＨＳＰＣ（好ましく５×１０５〜２×１０７個のＨＳＰＣ）を含み、前記ＨＰＳＣが、ＣＤ３４＋である、造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）の集団、ｂ）制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を含む細胞の集団であって、前記Ｔｒｅｇが、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍまたはＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋であり、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０５個超のＴｒｅｇ（好ましくは５×１０５〜４×１０６個のＴｒｅｇ）を含み、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、ＣＤ４５＋細胞を含み、前記ＣＤ４５＋細胞の５０％超（好ましくは９０％超）が、Ｔｒｅｇであり、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団の投与前に凍結保存されていない、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を含む細胞の集団、およびｃ）通常型Ｔ細胞の集団（Ｔｃｏｎ）であって、前記Ｔｃｏｎが、ＣＤ３＋であり、前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０７個未満のＴｃｏｎ（好ましくは５×１０５〜４×１０６個のＴｃｏｎ）を含み、前記Ｔｃｏｎの集団が、前記Ｔｃｏｎの集団の投与前に凍結保存されている、通常型Ｔ細胞の集団（Ｔｃｏｎ）を前記ヒト対象に投与することを含み、前記ＨＳＰＣの集団および前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記Ｔｃｏｎの集団の前に（好ましくは３６〜６０時間前に）投与される、方法が、本明細書に開示される。
【０２０２】
いくつかの実施形態では、処置を必要とするヒト対象の処置方法であって、ａ）造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）の集団であって、前記ＨＳＰＣの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０５個超のＨＳＰＣ（好ましくは５×１０５〜２×１０７個のＨＳＰＣ）を含み、前記ＨＰＳＣが、ＣＤ３４＋である、造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）の集団、ｂ）制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を含む細胞の集団であって、前記Ｔｒｅｇが、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍまたはＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋であり、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０５個超のＴｒｅｇ（好ましくは５×１０５〜４×１０６個のＴｒｅｇ）を含み、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団の投与前に凍結保存されていない、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を含む細胞の集団、ｃ）通常型Ｔ細胞の集団（Ｔｃｏｎ）であって、前記Ｔｃｏｎが、ＣＤ３＋であり、前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０７個未満のＴｃｏｎ（好ましくは５×１０５〜４×１０６個のＴｃｏｎ）を含み、前記Ｔｃｏｎの集団が、前記Ｔｃｏｎの集団の投与前に凍結保存されている、通常型Ｔ細胞の集団（Ｔｃｏｎ）、およびｄ）移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）予防剤（好ましくはタクロリムスまたはシロリムス）を前記ヒト対象に投与することを含み、前記ＨＳＰＣの集団および前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記Ｔｃｏｎの集団の前に（好ましくは３６〜６０時間前に）投与され、前記ヒト対象が、前記Ｔｃｏｎの集団の投与後３０日以内（好ましくは１年以内）に移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）を発症しない、方法が、本明細書に開示される。
【０２０３】
いくつかの実施形態では、処置を必要とするヒト対象の処置方法であって、ａ）造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）の集団であって、前記ＨＳＰＣの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０５個超のＨＳＰＣ（好ましくは５×１０５〜２×１０７個のＨＳＰＣ）を含み、前記ＨＰＳＣが、ＣＤ３４＋である、造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）の集団、ｂ）制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を含む細胞の集団であって、前記Ｔｒｅｇが、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍまたはＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋であり、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０５個超のＴｒｅｇ（好ましくは５×１０５〜４×１０６個のＴｒｅｇ）を含み、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、ＣＤ４５＋細胞を含み、前記ＣＤ４５＋細胞の５０％超（好ましくは９０％超）が、Ｔｒｅｇであり、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団の投与前に凍結保存されていない、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を含む細胞の集団、ｃ）通常型Ｔ細胞の集団（Ｔｃｏｎ）であって、前記Ｔｃｏｎが、ＣＤ３＋であり、前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０７個未満のＴｃｏｎ（好ましくは５×１０５〜４×１０６個のＴｃｏｎ）を含む、通常型Ｔ細胞の集団（Ｔｃｏｎ）、およびｄ）移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）予防剤（好ましくはタクロリムスまたはシロリムス）を前記ヒト対象に投与することを含み、前記ＨＳＰＣの集団および前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記Ｔｃｏｎの集団の前に（好ましくは３６〜６０時間前に）投与され、前記ヒト対象が、前記Ｔｃｏｎの集団の投与後３０日以内（好ましくは１年以内）に移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）を発症しない、方法が、本明細書に開示される。
【０２０４】
いくつかの実施形態では、処置を必要とするヒト対象の処置方法であって、ａ）造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）の集団であって、前記ＨＳＰＣの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０５個超のＨＳＰＣ（好ましくは５×１０５〜２×１０７個のＨＳＰＣ）を含み、前記ＨＰＳＣが、ＣＤ３４＋である、造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）の集団、ｂ）制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を含む細胞の集団であって、前記Ｔｒｅｇが、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍまたはＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋であり、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０５個超のＴｒｅｇ（好ましくは５×１０５〜４×１０６個のＴｒｅｇ）を含み、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、ＣＤ４５＋細胞を含み、前記ＣＤ４５＋細胞の５０％超（好ましくは９０％超）が、Ｔｒｅｇであり、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団の投与前に凍結保存されていない、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を含む細胞の集団、およびｃ）通常型Ｔ細胞の集団（Ｔｃｏｎ）であって、前記Ｔｃｏｎが、ＣＤ３＋であり、前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０７個未満のＴｃｏｎ（好ましくは５×１０５〜４×１０６個のＴｃｏｎ）を含み、前記Ｔｃｏｎの集団が、前記Ｔｃｏｎの集団の投与前に凍結保存されている、通常型Ｔ細胞の集団（Ｔｃｏｎ）を前記ヒト対象に投与することを含み、前記ＨＳＰＣの集団および前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記Ｔｃｏｎの集団の前に（好ましくは３６〜６０時間前に）投与され、前記ヒト対象が、前記Ｔｃｏｎの集団の投与後３０日以内（好ましくは１年以内）に移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）を発症しない、方法が、本明細書に開示される。
【０２０５】
いくつかの実施形態では、処置を必要とするヒト対象の処置方法であって、ａ）造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）の集団であって、前記ＨＳＰＣの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０５個超のＨＳＰＣ（好ましくは５×１０５〜２×１０７個のＨＳＰＣ）を含み、前記ＨＰＳＣが、ＣＤ３４＋である、造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）の集団、ｂ）制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を含む細胞の集団であって、前記Ｔｒｅｇが、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍまたはＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋であり、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０５個超のＴｒｅｇ（好ましくは５×１０５〜４×１０６個のＴｒｅｇ）を含み、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、ＣＤ４５＋細胞を含み、前記ＣＤ４５＋細胞の５０％超（好ましくは９０％超）が、Ｔｒｅｇであり、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団の投与前に凍結保存されていない、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を含む細胞の集団、ｃ）通常型Ｔ細胞の集団（Ｔｃｏｎ）であって、前記Ｔｃｏｎが、ＣＤ３＋であり、前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１キログラムあたり１×１０７個未満のＴｃｏｎ（好ましくは５×１０５〜４×１０６個のＴｃｏｎ）を含み、前記Ｔｃｏｎの集団が、前記Ｔｃｏｎの集団の投与前に凍結保存されている、通常型Ｔ細胞の集団（Ｔｃｏｎ）、およびｄ）移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）予防剤（好ましくはタクロリムスまたはシロリムス）を前記ヒト対象に投与することを含み、前記ＨＳＰＣの集団および前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記Ｔｃｏｎの集団の前に（好ましくは３６〜６０時間前に）投与される、方法が、本明細書に開示される。
【０２０６】
いくつかの実施形態では、処置を必要とするヒト対象の処置方法であって、ａ）造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）の集団であって、前記ＨＳＰＣの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０５個超のＨＳＰＣ（好ましくは５×１０５〜２×１０７個のＨＳＰＣ）を含み、前記ＨＰＳＣが、ＣＤ３４＋である、造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）の集団、ｂ）制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を含む細胞の集団であって、前記Ｔｒｅｇが、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍまたはＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋であり、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０５個超のＴｒｅｇ（好ましくは５×１０５〜４×１０６個のＴｒｅｇ）を含み、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、ＣＤ４５＋細胞を含み、前記ＣＤ４５＋細胞の５０％超（好ましくは９０％超）が、Ｔｒｅｇであり、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団の投与前に凍結保存されていない、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を含む細胞の集団、ｃ）通常型Ｔ細胞の集団（Ｔｃｏｎ）であって、前記Ｔｃｏｎが、ＣＤ３＋であり、前記Ｔｃｏｎの集団が、前記ヒト対象の体重１キログラムあたり１×１０７個未満のＴｃｏｎ（好ましくは５×１０５〜４×１０６個のＴｃｏｎ）を含み、前記Ｔｃｏｎの集団が、前記Ｔｃｏｎの集団の投与前に凍結保存されている、通常型Ｔ細胞の集団（Ｔｃｏｎ）、およびｄ）移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）予防剤（好ましくはタクロリムスまたはシロリムス）を前記ヒト対象に投与することを含み、前記ＨＳＰＣの集団および前記Ｔｒｅｇを含む細胞の集団が、前記Ｔｃｏｎの集団の前に（好ましくは３６〜６０時間前に）投与され、前記ヒト対象が、前記Ｔｃｏｎの集団の投与後３０日以内（好ましくは１年以内）に移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）を発症しない、方法が、本明細書に開示される。
【実施例】
【０２０７】
実施例１：Ｔｃｏｎの前にＨＳＰＣおよびＴｒｅｇを投与することを含む臨床試験
本実施例は、ＧＶＨＤの不在下で免疫再構築およびＧＶＴを達成することを含む、癌を有する対象を処置するための本明細書に開示される方法の有用性を例示する。
【０２０８】
本研究は、ＨＬＡ適合同胞ドナーを含む高リスク悪性腫瘍を有する１２名の患者を含んだ。本研究は、Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｂｏａｒｄ（ＮＣＴ  ０１６６０６０７）およびＦＤＡ  ＩＮＤ  １４６８６によって承認された。ヘルシンキ宣言に合致するすべての患者およびドナーについて、書面によるインフォームドコンセントを得た。
【０２０９】
研究設計
患者の特徴を図１に提供し、略語は次の通りである。即ち、ＴＢＩ：全身照射、Ｃｙ：シトキサン、ＶＰ−１６：エトポシド、Ｂｕ：ブスルファン、ＡＭＬ：急性骨髄性白血病、ＣＲ：完全寛解、ＭＤＳ：骨髄異形成症候群、ＲＡＥＢ２：過剰芽球性不応性貧血２、ＮＨＬ：非ホジキンリンパ腫、ＥＴＰ−ＡＬＬ：早期Ｔ細胞前駆性急性リンパ性白血病、ＭＲＤ：微小残存病変、ＣＭＬ：慢性骨髄性白血病、ＭＦ：骨髄線維症である。
【０２１０】
骨髄破壊的前処置後、対象に、ＨＳＰＣの集団およびＴｒｅｇの集団を０日目に投与し、続いてＴｃｏｎの集団を２日目に投与した。本研究の主な目的は、この手法の有効性、安全性、および実行可能性を決定し、注入されるＴｒｅｇおよびＴｃｏｎの最大耐量を決定し、ＨＣＴの１年後のＥＦＳを決定することであった。安全性は、処置に起因する任意のグレード２以上の重篤な有害事象として評価し、特定の用量制限毒性は、急性ＧＶＨＤ＞グレード２、グレード４  ＨＣＴの２８日後まで持続する好中球減少症、およびグレード３〜５サイトカイン／放出症候群／急性注入反応として定義した。
【０２１１】
登録のための包含的基準は、自家ＨＣＴに適さない高リスク特徴を有すること、年齢≦６０歳、ＨＬＡ適合親族ドナーがいること、および以前に骨髄破壊療法またはＨＣＴを行っていないことを伴う、急性白血病（原発性難治性、ＣＲ１後微小残存病変（ＭＲＤ）陽性または高リスクの特徴を有するＣＲ１）、慢性骨髄性白血病（移行期または急性転化期）、骨髄異形成症候群（中間リスク２または高リスク）、骨髄増殖性障害、非ホジキンリンパ腫である。
【０２１２】
元の臨床プロトコルスキームを図２Ａに示す。ＴｒｅｇをＨＳＰＣドナー移植片と共に、Ｔｃｏｎ投与の２日前に投与した。元のプロトコルに対する５人の患者の最初のコホートを確保した後、ＧＶＨＤが認められた。凍結されたＴｒｅｇ細胞ではなく新鮮なＴｒｅｇ細胞を利用し、標的化用量の単剤タクロリムス（４〜６ｎｇ／ｍｌ）またはシロリムス（６〜８ｎｇ／ｍｌ）ＧＶＨＤ予防を導入するように、プロトコルを修正した（図２Ｂ）。
【０２１３】
前処置レジメンおよび支持療法
臨床プロトコルは、登録された対象の疾患の特徴に応じて異なる骨髄破壊的前処置レジメンの使用を支持した。急性白血病、高リスクＣＭＬ、骨髄異形成症候群、および骨髄増殖性障害の場合、前処置は、分割全身照射：ｆＴＢＩ（１３２０ｃＧｙ、４日間にわたって分割される）、ＶＰ１６（６０ｍｇ／ｋｇ、単回注入として）およびシクロホスファミド（６０ｍｇ／ｋｇ、単回注入として）またはブスルファン（最初は３．６ｍｇ／ｋｇ  ｑ２４、４日間にわたって注入、８００〜９００ｎＭのブスルファンレベルを標的とする）、ならびにシクロホスファミド（注入１回あたり６０ｍｇ／ｋｇ、２回の注入）を含んだ。非ホジキンリンパ腫の場合、前処置は、カルムスチン（３００ｍｇ／ｍ２）、ＶＰ１６（６０ｍｇ／ｋｇ）、およびシクロホスファミド（１００ｍｇ／ｋｇ）からなるものとした。
【０２１４】
元のプロトコルでの対象は、ＧＶＨＤ予防を受けなかったが、プロトコル修正後、シロリムスがＴｒｅｇ機能を促進するという前臨床の証拠に基づいて、対象は、タクロリムスまたはシロリムスのいずれかを受けることができるものとした。ＢＵ／Ｃｙ前処置を行った対象における肝中心静脈閉塞症（ＳＯＳ）の一例の後、シロリムスＧＶＨＤ予防は、ＴＢＩに基づく前処置を行った対象のみに制限された。
【０２１５】
感染性疾患予防は、アシクロビル４００ｍｇ  ＴＩＤ  ＰＯ（１年間）、単効（ｓｉｎｇｌｅ  ｓｔｒｅｎｇｔｈ）バクトリム（３０〜６０日目）、およびシプロフロキサシン５００ｍｇ  ＰＯ  ＢＩＤ（生着まで−２日目）からなるものとした。ＥＢＶ（２週間毎）およびＣＭＶ（毎週）についての定量ＰＣＲによるウイルス監視を、＋１４日目から開始して＋１００日目まで行った。
【０２１６】
移植工学技術
１０ｍｃｇ／ｋｇのｒｈＧ−ＣＳＦ（Ｎｅｕｐｏｇｅｎ，Ａｍｇｅｎ，Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ，ＣＡ）を１日５回投与した後に、Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｃａｒｅにおいて、連続フローセル分離器（ＳＰＥＣＴＲＡ；Ｃｏｂｅ  ＢＣＴ）を使用して、アフェレシスによってボランティアドナーからドナー細胞を得た。２回の連続したアフェレシス収集を４日目および５日目に行い、細胞生成物を合わせた。Ｉｓｏｌｅｘ  ３００ｉ（Ｂａｘｔｅｒ  ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，ＩＬ）またはＣｌｉｎｉＭＡＣＳ  Ｃｅｌｌ  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ，Ｂｅｒｇｉｓｈ  Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）のいずれかを使用して、ＣＤ３４＋細胞を収集した。ＣＤ３４減少（フロースルー）画分を保持し、ドナーＴｒｅｇの単離に使用した。細胞選択のために、臨床グレード試薬をＢＭＴ細胞療法施設内の優良製造規範（Ｇｏｏｄ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ）下で使用した。
【０２１７】
次に、ビーズ精製（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用して、ＣＤ２５＋細胞をＣＤ３４枯渇画分から選択した。Ｔｃｏｎは陰性画分から取得し、陽性画分はＴｒｅｇ精製に使用した。ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍ細胞を、ＢＤ  Ｉｎｆｌｕｘ細胞選別機（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ  ＣＡ）を使用してＦＡＣＳによってさらに選択した。ＣＤ４およびＦｏｘＰ３発現について分析した、ＣＤ３４＋選択、ＣＤ２５＋細胞選択、およびＣＤ４＋ＣＤ１２７＋細胞選別後に収集された細胞の代表的な分析を図３に示す。免疫磁気選択によるＣＤ３４＋細胞の枯渇（左パネル）、免疫磁気選択によるＣＤ２５＋の選択（中央パネル）、およびＣＤ４＋ＣＤ１２７低ＣＤ２５＋細胞のＦＡＣＳ選別による精製（右パネル）後のＴｒｅｇの濃縮を示している。代表的なプロットは、１人の患者から提供される。見られるように、高純度のＴｒｅｇが得られた。これらの細胞は、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）において高度に抑制された。図４Ａは、ＦＡＣＳによって分析した、アロ−ＭＬＲ中のＴｒｅｇと共に／Ｔｒｅｇなし（１：１の比）でのＴ細胞培養ＨＬＡ不適合ＰＢＭＣのＣＦＳＥｄｉｍの集団の割合を示す。ＭＬＲについて、ドナー末梢血またはアフェレシス由来の濃縮されたＣＤ４＋およびＣＤ８＋細胞（２×１０５個、ＭＡＣＳビーズＭｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を、応答物（Ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ）として、９６ウェル平底プレート中に３つ組で設定した。応答物を、製造業者の説明書に従って、０日目にＣｅｌｌＴｒａｃｅ  ＣＦＳＥで標識付けし（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、分子プローブ）、または５日間アッセイの最後の１６時間、１μＣｉ／ウェル［３Ｈ、チミジン、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ］でパルスした。刺激剤は、健康なドナーからの９つの異なるバフィーコートの組み合わせであり、セシウム照射器（１５７Ｃｓ）で３３Ｇｙで照射し、１：０、１：１、１：２、および１：４の比率の応答物対刺激剤（Ｒ：Ｓ）に設定した。１：１、１：０．５、１：０．２５、および１：１０の応答物対抑制剤（Ｒ：ＳＵＰ）の比率で、Ｔｒｅｇを抑制剤として添加した。培地（ｃＲＰＭＩ）にＯＫＴ３（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を補充した。結果をフローサイトメトリー（ＬＳＲＩＩ  ＢＤ）またはＢｅｔａ計数リーダー（Ｔｏｍｔｅｃ、Ｗａｌｌａｃ）によって５日目に読み取った。さらなる結果を図４Ｂ〜Ｃに示す。
【０２１８】
臨床選別のために、抗体を、低ｐＨで３０分間保持したプロテインＡ（またはＧ）カラム上で再精製した。抗体をＦＩＴＣおよびＡｌｅｘａｆｌｕｏｒ６４７と結合させ、滅菌濾過し、単回使用アリコートで保存した。
【０２１９】
用量漸増および移植片特性
骨髄破壊的前処置後、対象に、ＨＳＰＣの集団およびＴｒｅｇの集団を０日目に投与し、続いてＴｃｏｎの集団を２日目に投与した。
【０２２０】
本研究は、図５に示すように用量漸増スキームを含むものとした。Ｔｒｅｇ用量漸増をＴｒｅｇ：Ｔｃｏｎの比率として確立し、初回投与コホート標的用量は、３名の患者の最初のコホートにおいて１×１０６個のＴｒｅｇ／ｋｇおよび３×１０６個のＣＤ３＋Ｔｃｏｎ／ｋｇであった。ＧＶＨＤが１名の患者において観察されたため、所定の用量漸増計画に従って、１×１０６個のＴｒｅｇ／ｋｇおよび１×１０６個のＴｃｏｎ／ｋｇでの１：１のＴｒｅｇ：Ｔｃｏｎ比率での追加の３名の対象へとグループを拡げた。これらの追加の対象に用量制限毒性が観察されなかったため、標的用量を３×１０６個のＴｒｅｇ／ｋｇおよび３×１０６個のＣＤ３＋Ｔｃｏｎ／ｋｇに漸増させた。追加の３人の患者に用量制限毒性が観察されなかった後、２つのアフェレシス収集物から収集することができるＴｒｅｇの最大技術用量（ｍａｘｉｍａｌ  ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  ｄｏｓｅ）でもある最大耐容標的用量を確立し、追加の３人の患者をこの用量レベルで確保した。多くの患者において、３×１０６個のＴｒｅｇ／ｋｇの達成は実行可能ではなく、達成された細胞用量を何であれ投与した。
【０２２１】
図６に、新鮮なＴｒｅｇを用いた修正プロトコルの移植片生成および投与の概略図を提供する。１．０×１０６個／ｋｇのＴｒｅｇ用量における全ての対象は、このＴｒｅｇの標的用量を受けたが、全ての対象が３．０×１０６個のＴｒｅｇ／ｋｇの標的用量を受けたわけではない。図７は、中央値２．５×１０６個のＴｒｅｇ／ｋｇ（範囲は２．４〜３．０×１０６個のＴｒｅｇ／ｋｇである）を投与した対象の細胞用量収率を示す。細胞内サイトカイン染色によるＦＯＸＰ３＋発現に基づいて、Ｔｒｅｇの回収率中央値は６７％であり（範囲は５０．７〜８７．８％である）、Ｔｒｅｇ純度中央値は９４％であった（９１〜９６％）。１名を除くすべての患者は、ＣＤ３４＋用量＞２．０×１０６個の細胞／ｋｇを達成し、用量中央値は３．９×１０６個の細胞／ｋｇであった（範囲１．２〜１５．９×１０６個）。投与の詳細を図８に提供する。
【０２２２】
細胞注入、生着、および臨床転帰
臨床転帰を図９に要約する。注入反応は観察されなかった。１２名の対象の全員が一次完全ドナー生着を達成したが、高リスクＲＡＥＢ−２ＭＤＳを有する最低用量レベル（１×１０６個のＴｒｅｇ／ｋｇおよび１×１０６個のＣＤ３＋Ｔｃｏｎ／ｋｇ）を受けた対象１名は二次移植片不全を有していた。この対象を含め、好中球は中央値１１日目（１０〜１６日目）で１．０×１０９個／Ｌに達した。血小板は、中央値１６日目（９〜２５日目）で５０×１０９／Ｌに達した。プロトコル修正前に、処置した５名の患者のうち３名が完全寛解を達成した（そのうち２名は１年超の寛解を維持した）。（ＧＶＨＤ予防を用いた新鮮なＴｒｅｇへの）プロトコル修正後、７名の患者のうち５名が完全寛解を達成し（そのうち４名は１年超の寛解を維持した）、ＧＶＨＤは観察されなかった。
【０２２３】
Ｔｒｅｇ：Ｔｃｏｎを１：３の比率で受けた初期患者では、急性ＧＶＨＤグレードＩＩＩが観察された。したがって、ＴｒｅｇおよびＴｃｏｎの両方について、１×１０６／ｋｇの用量で、プロトコルに従って比率を１：１に調整した。この用量レベルで処置した最初の３名の対象のうち、１例の急性ＧＶＨＤが観察された（グレードＩＩＩ）。さらに２名の患者をこの比率で処置した。追加の１名の患者が、ステロイド応答性である急性グレードＩ皮膚ＧＶＨＤを発症した。
【０２２４】
新鮮なＴｒｅｇのみを使用し、シロリムスによる低用量単剤ＧＶＨＤ予防を含むように（この薬剤がＴｒｅｇを保護することが示されているため）、プロトコルを修正した（図２）。肝中心静脈閉塞症のリスクがシロリムスで増加し得る臨床状況では、低用量タクロリムスに置き換えた。プロトコル修正後、ＧＶＨＤの追加の症例は、その後の７名の患者において観察されなかったが、１名の対象は高トランスアミナーゼ血症を有し、可能性がある肝臓ＧＶＨＤまたは薬物不耐性について処置され、薬物を変更した後、高トランスアミナーゼ血症の迅速な解消が観察された。
【０２２５】
合計１１名の患者は６ヶ月超の生存率を達成し、慢性ＧＶＨＤについて評価することができた。フォローアップ中央値の４８１日目では（範囲は２１２〜１８８７日である）、１１名の対象のうちの２名は慢性ＧＶＨＤを発症し、両名とも初期プロトコルコホートにあった。両名とも以前のグレードＩＩＩ急性ＧＶＨＤを有し、慢性ＧＶＨＤの発現は皮膚に限定され、ステロイド応答性であった。プロトコル修正後、第２のコホートの患者は、慢性ＧＶＨＤを発症しなかった。
【０２２６】
プロトコル修正後、ブスルファンおよびシクロホスファミド前処置により前処置し、ＧＶＨＤ予防のためにシロリムスを受けた１人の患者は、軽度のＳＯＳを有し、デフィブロタイドおよび支持療法で処置されて解消された。１２人の患者のうち１１人が粘膜炎を経験した（グレード１が４人、グレード２が３人、グレード３が４人）。
【０２２７】
免疫再構成
本研究に登録された患者の免疫再構築を評価するために、骨髄破壊的ＨＣＴを受け、かつ、急性または慢性のＧＶＨＤまたは再発を有しなかった５人の同時並行患者からなる比較標準治療対照コホートを同定した。フローサイトメトリーを使用して、免疫細胞サブセットを、ＨＣＴ後の標準化時点で凍結および解凍ＰＢＭＣから定量化した（図１０）。
【０２２８】
Ｔｒｅｇの事前注入を有するまたは有しないＢＭＴ患者由来のＰＢＭＣを液体窒素から回収した。ＰＢＭＣをＭＡＣＳ緩衝液で洗浄し、汎ＰＢＭＣパネルまたはＴｒｅｇ活性化パネルで４℃で１時間染色した。ＭＡＣＳ緩衝液で洗浄した後、染色細胞を４％ホルムアルデヒドで４℃で一晩固定した。フローサイトメトリー分析をＬＳＲ  ＩＩで行い、データをＦｌｏｗＪｏソフトウェアによって分析した。０．５μＭシスプラチナム（Ｆｌｕｉｄｉｇｍカタログ番号２０１０６４）を使用して、生存染色を室温で５分間行った。細胞表面抗体マスターミックスを調製し、０．２μｍフィルターを通して濾過した。細胞をマスターミックス中に再懸濁し、３０分間インキュベートした。細胞を洗浄し、製造業者の推奨に従って調製した固定溶液（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号００−５５２３）中でインキュベートした。細胞を室温で１時間固定し、洗浄し、次いで、細胞内抗体混合物と共に、透過緩衝液（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号００−５５２３）中で１時間インキュベートした。
【０２２９】
初期コホートでの患者は、修正プロトコルまたは標準治療下で処置された患者と比較して、比較的低いＴ、Ｂ、ＮＫ、およびＴｒｅｇ再構成を示した（図１０）。新鮮なＴｒｅｇを用いる修正プロトコルで処置された患者は、標準治療対照と比較して、Ｔ、Ｂ、ＮＫ、ＤＣ、および単球集団において概して同程度の免疫再構築を有するように見えた。ｉＮＫＴ細胞の絶対数は、対照と比較した場合、初期および修正された患者コホートの両方では、最初の６ヶ月には有意に低かった（スチューデント両側Ｔ検定、ｐ＜０．０１）。
【０２３０】
新鮮なＴｒｅｇを用いる修正プロトコルで処置された患者は、急性または慢性のＧＶＨＤを発症しなかった標準治療対照と比較して、ＨＣＴ後のＴｒｅｇの割合および絶対値において同程度の免疫再構築を有するように見えた（スチューデント両側Ｔ検定、ｐ＝０．０１）。フローサイトメトリーによるＴｒｅｇの表現型特徴付けにより、表面受容体ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ４５ＲＯ、またはＦＯＸＰ３の発現の統計学的差異は示されなかった。これはＣｙＴＯＦによって確認され、エクスビボにおいて、刺激なしで、細胞内ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α発現の増加がないように見えたことが追加で観察された。図１１Ａは、ＨＣＴ後６０日目にフローサイトメトリーによって定量化されたＴｒｅｇ（ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍでゲーティングされる（ｇａｔｅｄ））の特徴を示す。図１１Ｂは、ＨＣＴ後６０日目にＣｙＴＯＦによって定量化されたＴｒｅｇ（ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍでゲーティングされる）の特徴を示す。
【０２３１】
Ｔｒｅｇ  ＴＣＲレパートリー分析
ＨＣＴ後におけるＴｒｅｇコンパートメントのＴＣＲレパートリー再構成を評価するために、ＦＡＣＳを使用して、移植後約９０日目に患者由来のＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍＴｒｅｇを精製した。ＴＣＲレパートリー分析のために、２段階の単離手順により、Ｔｒｅｇを患者のＰＢＭＣから濃縮した。ＣＤ２５  ＭｉｃｒｏＢｅａｄｓ  ＩＩ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を使用し、製造業者の説明書に従って、ＣＤ２５＋細胞をＰＢＭＣから単離した。抗ＣＤ３（ＯＫＴ３、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、−ＣＤ４（ＯＫＴ４、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、−ＣＤ８（ＲＰＡ−Ｔ８、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、−ＣＤ２５（ＢＣ９６、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、および−ＣＤ１２７（Ａ０１９Ｄ５、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）抗体で染色した後、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８−、ＣＤ２５＋、ＣＤ１２７ｄｉｍ細胞を単離し、ＴＲＩｚｏｌ（登録商標）Ｐｌｕｓ試薬によって溶解し、−８０℃で保存した。２，７００〜４８，０００個のＴｒｅｇ細胞を単離した。
【０２３２】
ＲＮＡを鋳型として使用し、ＴＣＲＡまたはＴＣＲＢ定常領域において修飾遺伝子特異的プライマーを用いた５’ＲＡＣＥ方法論を使用して、ＴＣＲ  Ｒｅｐ−Ｓｅｑを行った。精製した５’ＲＡＣＥ  ＰＣＲ生成物を処理して、ＫＡＰＡ  Ｈｙｐｅｒ  Ｐｒｅｐキットを使用して配列決定ライブラリを作製した。Ｉｌｌｕｍｉｎａ  ＭｉＳｅｑ試薬５００サイクルＶ２キットを使用して、ペアエンド（ｐａｉｒｅｄ−ｅｎｄ）２５０×２サイクルにより、配列決定を行った。ＴＣＲＡおよびＴＣＲＢ再配列分析のために、ＭｉＳｅｑからのペアエンド読み取りをＭｉｘＣＲに提出した。各試料において特有のＣＤＲ３アミノ酸配列（ＣＤＲ３クローン）をＭｉｘＣＲ結果に基づいて要約した。単一コピーのＣＤＲ３クローンを除去した。クロノタイプの頻度は、クロノタイプのコピー数を試料中のすべてのクロノタイプの総コピー数で割って計算した。データをバイオインフォマティクス分析に供した。標準治療または新鮮なＴｒｅｇが投与された修正臨床試験プロトコル後、Ｔｒｅｇの多様性に統計学的差異はなかった（図１１Ｃ）。
【０２３３】
相互参照
本出願は、２０１８年２月８日に出願された米国仮特許出願第６２／６２８，１０５号の利益を主張し、この米国仮特許出願は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【国際調査報告】
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