(57)【要約】本出願は、抗原およびアジュバントを含むＴ細胞、そのようなＴ細胞を製造する方法、ならびに、個体における免疫応答をモジュレートするためのものなど、そのようなＴ細胞を使用する方法を提供する。一部の態様では、本発明は、抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞であって、抗原は改変Ｔ細胞に対して外因性でありかつ免疫原性エピトープを含み、アジュバントは細胞内に存在する、改変Ｔ細胞を提供する。一部の実施形態では、本発明は、配列番号１８〜２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む抗原を含む改変Ｔ細胞を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞であって、前記抗原は前記改変Ｔ細胞に対して外因性でありかつ免疫原性エピトープを含み、前記アジュバントは細胞内に存在する、改変Ｔ細胞。
【請求項２】
配列番号１８〜２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む抗原を含む改変Ｔ細胞。
【請求項３】
抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞であって、前記抗原は免疫原性エピトープを含み、前記改変Ｔ細胞は、
ａ）インプットＴ細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、前記抗原および前記アジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成するステップ；ならびに
ｂ）前記抗原および前記アジュバントが前記摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプットＴ細胞と前記抗原および前記アジュバントとをインキュベートし、それによって、前記抗原およびアジュバントを含む前記改変Ｔ細胞を作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、改変Ｔ細胞。
【請求項４】
前記摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる前記抗原の濃度は約０．１μＭ〜約１ｍＭであり、および／または前記摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる前記アジュバントの濃度は約０．１μＭ〜約１ｍＭである、請求項３に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項５】
前記摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる前記抗原の前記アジュバントに対する比は約１００００：１〜約１：１００００である、請求項３または４に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項６】
抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞であって、前記抗原は免疫原性エピトープを含み、前記改変Ｔ細胞は、
ａ）前記アジュバントを含むインプットＴ細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成するステップ；ならびに
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプットＴ細胞と前記抗原とをインキュベートし、それによって、前記抗原および前記アジュバントを含む前記改変Ｔ細胞を作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、改変Ｔ細胞。
【請求項７】
前記摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる前記抗原の濃度は約０．１μＭ〜約１ｍＭである、請求項６に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項８】
抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞であって、前記抗原は免疫原性エピトープを含み、前記改変Ｔ細胞は、
ａ）前記抗原を含むインプットＴ細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、前記アジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成するステップ；ならびに
ｂ）前記アジュバントが前記摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプットＴ細胞と前記アジュバントとをインキュベートし、それによって、前記抗原および前記アジュバントを含む前記改変Ｔ細胞を作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、改変Ｔ細胞。
【請求項９】
前記摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる前記アジュバントの濃度は約０．１μＭ〜約１ｍＭである、請求項８に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項１０】
前記インプットＴ細胞に、それが前記狭窄を通過するときに変形力が印加され、それによって、前記インプットＴ細胞の前記摂動が引き起こされる、請求項３〜９のいずれか一項に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項１１】
前記プロセスは、前記インプットＴ細胞および／または前記改変Ｔ細胞と、さらなるインキュベーションステップなしで調製される対応する改変Ｔ細胞と比較して前記改変Ｔ細胞の生存能力および／または機能を増強する作用物質とをインキュベートするステップをさらに含む、請求項３〜１０のいずれか一項に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項１２】
前記作用物質は、エンドサイトーシスを増強するまたは安定剤もしくは補因子として作用する化合物である、請求項１１に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項１３】
前記狭窄の前記直径は、前記インプットＴ細胞の前記直径未満である、請求項３〜１２のいずれか一項に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項１４】
前記狭窄の前記直径は、前記インプットＴ細胞の前記直径の約２０％〜約９９％である、請求項１３に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項１５】
前記狭窄の前記直径は、前記インプットＴ細胞の前記直径の約２０％〜約６０％である、請求項１４に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項１６】
前記抗原および／またはアジュバントは、前記改変Ｔ細胞の細胞質基質および／または小胞に存在する、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項１７】
前記小胞はエンドソームである、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項１８】
前記抗原および／または前記アジュバントは、前記改変Ｔ細胞の多数の区画に存在する、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項１９】
前記抗原または免疫原性エピトープは、前記改変Ｔ細胞の表面に結合している、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項２０】
前記アジュバントは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＩＦＮ−α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ−Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、イミキモド、レシキモド、またはリポ多糖（ＬＰＳ）である、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項２１】
前記アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮである、請求項２０に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項２２】
前記ＣｐＧ  ＯＤＮは、クラスＡ  ＣｐＧ  ＯＤＮ、クラスＢ  ＣｐＧ  ＯＤＮ、またはクラスＣ  ＣｐＧ  ＯＤＮである、請求項２１に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項２３】
前記免疫原性エピトープは疾患関連抗原に由来する、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項２４】
前記免疫原性エピトープは、罹患細胞から単離されたペプチドまたはｍＲＮＡに由来する、請求項２３に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項２５】
前記免疫原性エピトープは非自己抗原に由来する、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項２６】
前記免疫原性エピトープは、腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、または真菌抗原に由来する、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項２７】
前記免疫原性エピトープはヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原に由来する、請求項２６に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項２８】
前記ＨＰＶはＨＰＶ−１６またはＨＰＶ−１８である、請求項２７に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項２９】
前記抗原は、ＨＰＶ  Ｅ６および／またはＥ７に由来するＨＬＡ−Ａ２拘束性ペプチドを含む、請求項２７または２８に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項３０】
前記ＨＬＡ−Ａ２拘束性ペプチドは、配列番号１〜４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項２９に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項３１】
前記抗原は、配列番号１８〜２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項３０に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項３２】
複数の免疫原性エピトープを含む複数の抗原を含む、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項３３】
前記複数の免疫原性エピトープを含む前記複数の抗原を含む前記改変Ｔ細胞の個体への投与後、前記複数の免疫原性エピトープのいずれも、他の免疫原性エピトープのいずれに対する前記個体における免疫応答も減少させない、請求項３２に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項３４】
前記抗原はポリペプチドであり、前記免疫原性エピトープは免疫原性ペプチドエピトープである、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項３５】
前記免疫原性ペプチドエピトープは、Ｎ末端隣接ポリペプチドおよび／またはＣ末端隣接ポリペプチドに融合している、請求項３０に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項３６】
前記抗原は、免疫原性ペプチドエピトープおよび１つまたは複数の異種ペプチド配列を含むポリペプチドである、請求項３０に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項３７】
前記抗原は、異種ペプチド配列がＮ末端および／またはＣ末端で隣接している免疫原性ペプチドエピトープを含むポリペプチドである、請求項３４に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項３８】
隣接する前記異種ペプチド配列は疾患関連免疫原性ペプチドに由来する、請求項３５に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項３９】
前記Ｎ末端隣接ポリペプチドは配列番号５〜１０のいずれか１つのアミノ酸配列を含み、および／または前記Ｃ末端隣接ポリペプチドは配列番号１１〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項３５に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項４０】
前記抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項４１】
約０．１μＭ〜約１ｍＭの濃度で前記アジュバントを含む、請求項１〜４０のいずれか一項に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項４２】
約０．１μＭ〜約１ｍＭの濃度で前記抗原を含む、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項４３】
前記抗原の前記アジュバントに対する比は約１００００：１〜約１：１００００である、請求項１〜４２のいずれか一項に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項４４】
ａ）前記抗原、ｂ）前記抗原および少なくとも１つの他の抗原、ならびに／またはｃ）前記抗原および前記アジュバント、を含む複合体を含む、請求項１〜４３のいずれか一項に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項４５】
前記改変Ｔ細胞は、作用物質をさらに含み、前記作用物質は、前記作用物質を含まない対応する改変Ｔ細胞と比較して前記改変Ｔ細胞の生存能力および／または機能を増強する、請求項１〜４４のいずれか一項に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項４６】
前記作用物質は、エンドサイトーシス、安定剤、または補因子を増強する化合物である、請求項４５に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項４７】
前記作用物質はアルブミンである、請求項４５に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項４８】
前記アルブミンは、マウス、ウシ、またはヒトアルブミンである、請求項４７に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項４９】
前記作用物質は、二価金属カチオン、グルコース、ＡＴＰ、カリウム、グリセロール、トレハロース、Ｄ−スクロース、ＰＥＧ１５００、Ｌ−アルギニン、Ｌ−グルタミン、またはＥＤＴＡである、請求項４５に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項５０】
前記作用物質はマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）を含む、請求項４９に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項５１】
共刺激分子のうちの１つまたは複数の発現を増加させるようにさらに改変されている、請求項１〜５０のいずれか一項に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項５２】
前記共刺激分子は、Ｂ７−Ｈ２（ＩＣＯＳＬ）、Ｂ７−１（ＣＤ８０）、Ｂ７−２（ＣＤ８６）、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＣＤ４０、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ３０Ｌ、ＴＩＭ４、ＳＬＡＭ、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ１５５、またはＣＤ１１２である、請求項５１に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項５３】
前記１つまたは複数の共刺激分子の増加した発現をもたらす核酸を含む、請求項５１または５２に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項５４】
ＭＨＣクラスＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む、請求項１〜５３のいずれか一項に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項５５】
ＭＨＣクラスＩＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む、請求項１〜５４のいずれか一項に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項５６】
前記改変Ｔ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答は、前記さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答と比較して低下している、請求項５４に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項５７】
前記改変Ｔ細胞が投与された個体におけるそれらの循環半減期は、前記さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞が投与された個体におけるそれらの循環半減期と比較して増加している、請求項５４または５６に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項５８】
ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、またはナチュラルキラーＴ細胞のうちの１つまたは複数を含む、請求項１〜５７のいずれか一項に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項５９】
ＣＤ３＋  Ｔ細胞、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＡ＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＯ＋  Ｔ細胞、またはγδ−Ｔ細胞のうちの１つまたは複数を含む、請求項１〜５８のいずれか一項に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項６０】
請求項１〜５９のいずれか一項に記載の改変Ｔ細胞を含む組成物。
【請求項６１】
請求項１〜５９のいずれか一項に記載の改変Ｔ細胞および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項６２】
個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、請求項１〜５９のいずれか一項に記載の改変Ｔ細胞、請求項６０に記載の組成物、または請求項６１に記載の医薬組成物を前記個体に投与するステップを含む、方法。
【請求項６３】
個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、
ａ）配列番号１８〜２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む抗原を含む改変Ｔ細胞を前記個体に投与するステップ；および
ｂ）アジュバントを前記個体に投与するステップ
を含む、方法。
【請求項６４】
個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、
ａ）インプットＴ細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成し、前記抗原は免疫原性エピトープを含むステップ；
ｂ）前記抗原および前記アジュバントが前記摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプットＴ細胞と前記抗原および前記アジュバントとをインキュベートし、それによって、前記抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞を作出するステップ；ならびに
ｃ）前記改変Ｔ細胞を前記個体に投与するステップ
を含む、方法。
【請求項６５】
前記摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる前記抗原の濃度は約０．１μＭ〜約１ｍＭであり、および／または前記摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる前記アジュバントの濃度は約０．１μＭ〜約１ｍＭである、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる前記抗原の前記アジュバントに対する比は約１００００：１〜約１：１００００である、請求項６４または６５に記載の方法。
【請求項６７】
個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、
ａ）アジュバントを含むインプットＴ細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成し、前記抗原は免疫原性エピトープを含むステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプットＴ細胞と前記抗原とをインキュベートし、それによって、前記抗原および前記アジュバントを含む改変Ｔ細胞を作出するステップ；ならびに
ｃ）前記改変Ｔ細胞を前記個体に投与するステップ
を含む、方法。
【請求項６８】
前記摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる前記抗原の濃度は約０．１μＭ〜約１ｍＭである、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、
ａ）抗原を含むインプットＴ細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記抗原は免疫原性エピトープを含み、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、アジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成するステップ；
ｂ）前記アジュバントが前記摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプットＴ細胞と前記アジュバントとをインキュベートし、それによって、前記抗原および前記アジュバントを含む改変Ｔ細胞を作出するステップ；ならびに
ｃ）前記改変Ｔ細胞を前記個体に投与するステップ
を含む、方法。
【請求項７０】
前記摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる前記アジュバントの濃度は約０．１μＭ〜約１ｍＭである、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記改変Ｔ細胞は、約０．１μＭ〜約１ｍＭの濃度で前記抗原を含む、請求項６４〜７０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
前記改変Ｔ細胞は、約０．１μＭ〜約１ｍＭの濃度で前記アジュバントを含む、請求項６４〜７１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７３】
前記改変Ｔ細胞における前記抗原の前記アジュバントに対する比は約１００００：１〜約１：１００００である、請求項６４〜７２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７４】
前記改変Ｔ細胞は、ａ）前記抗原、ｂ）前記抗原および少なくとも１つの他の抗原、ならびに／またはｃ）前記抗原および前記アジュバント、を含む複合体を含む、請求項６４〜７３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７５】
個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、
ａ）インプットＴ細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成し、前記抗原は免疫原性エピトープを含むステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプットＴ細胞と前記抗原とをインキュベートし、それによって、前記抗原を含む改変Ｔ細胞を作出するステップ；
ｃ）前記改変Ｔ細胞を前記個体に投与するステップ；および
ｄ）アジュバントを前記個体に投与するステップ
を含む、方法。
【請求項７６】
前記摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる前記抗原の濃度は約０．１μＭ〜約１ｍＭである、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記インプットＴ細胞に、それが前記狭窄を通過するときに変形力が印加され、それによって、前記インプットＴ細胞の前記摂動が引き起こされる、請求項６４〜７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７８】
前記インプットＴ細胞および／または改変Ｔ細胞と、さらなるインキュベーションステップなしで調製される対応する改変Ｔ細胞と比較して前記改変Ｔ細胞の生存能力および／または機能を増強する作用物質とをインキュベートするステップをさらに含む、請求項６４〜７７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７９】
前記作用物質は、エンドサイトーシス、安定剤、または補因子を増強する化合物である、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
前記免疫応答は増強される、請求項６４〜７９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８１】
前記増強した免疫応答は前記抗原に向けられたものである、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
前記狭窄の前記直径は、前記インプットＴ細胞の前記直径未満である、請求項６４〜８１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８３】
前記狭窄の前記直径は、前記インプットＴ細胞の前記直径の約２０％〜約９９％である、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
前記狭窄の前記直径は、前記インプットＴ細胞の前記直径の約２０％〜約６０％である、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
前記抗原および／またはアジュバントは、前記改変Ｔ細胞の細胞質基質および／または小胞に存在する、請求項６４〜８４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８６】
前記小胞はエンドソームである、請求項６４〜８５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８７】
前記抗原および／または前記アジュバントは、前記改変Ｔ細胞の多数の区画に存在する、請求項６４〜８６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８８】
前記抗原または免疫原性エピトープは、前記改変Ｔ細胞の表面に結合している、請求項６４〜８７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８９】
前記アジュバントは、ＣｐＧ  ＯＤＮ、ＩＦＮ−α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ−Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、イミキモド、レシキモド、および／またはリポ多糖（ＬＰＳ）である、請求項６４〜８８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９０】
前記アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮである、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
前記ＣｐＧ  ＯＤＮは、クラスＡ  ＣｐＧ  ＯＤＮ、クラスＢ  ＣｐＧ  ＯＤＮ、またはクラスＣ  ＣｐＧ  ＯＤＮである、請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
前記免疫原性エピトープは疾患関連抗原に由来する、請求項６４〜９１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９３】
前記免疫原性エピトープは、罹患細胞から単離されたペプチドまたはｍＲＮＡに由来する、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
前記免疫原性エピトープは非自己抗原に由来する、請求項６４〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９５】
前記免疫原性エピトープは、腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、または真菌抗原に由来する、請求項６４〜９４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９６】
前記免疫原性エピトープはヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原に由来する、請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
前記ＨＰＶはＨＰＶ−１６またはＨＰＶ−１８である、請求項９６に記載の方法。
【請求項９８】
前記抗原は、ＨＰＶ  Ｅ６および／またはＥ７に由来するＨＬＡ−Ａ２拘束性ペプチドを含む、請求項９６または９７に記載の方法。
【請求項９９】
前記ＨＬＡ−Ａ２拘束性ペプチドは、配列番号１〜４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項９８に記載の方法。
【請求項１００】
前記抗原は、配列番号１８〜２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０１】
前記改変Ｔ細胞は、複数の免疫原性エピトープを含む複数の抗原を含む、請求項６４〜１００のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０２】
前記複数の免疫原性エピトープのいずれも、他の免疫原性エピトープのいずれに対する前記個体における免疫応答も減少させない、請求項６４〜１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
前記抗原はポリペプチドであり、前記免疫原性エピトープは免疫原性ペプチドエピトープである、請求項６４〜１０２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０４】
前記免疫原性ペプチドエピトープは、Ｎ末端隣接ポリペプチドおよび／またはＣ末端隣接ポリペプチドに融合している、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０５】
前記Ｎ末端隣接ポリペプチドおよび／または前記Ｃ末端隣接ポリペプチドに融合した前記免疫原性ペプチドエピトープは、天然に存在しない配列である、請求項１０４に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項１０６】
前記Ｎ末端および／またはＣ末端隣接ポリペプチドは、免疫原性合成長鎖ペプチド（ＳＬＰ）に由来する、請求項１０５に記載の方法。
【請求項１０７】
前記Ｎ末端および／またはＣ末端隣接ポリペプチドは、疾患関連免疫原性ＳＬＰに由来する、請求項１０５に記載の方法。
【請求項１０８】
前記Ｎ末端隣接ポリペプチドは配列番号５〜１０のいずれか１つのアミノ酸配列を含み、および／または前記Ｃ末端隣接ポリペプチドは配列番号１１〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項１０５に記載の方法。
【請求項１０９】
前記抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る、請求項６４〜１０８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１０】
前記改変Ｔ細胞は、作用物質をさらに含み、前記作用物質は、前記作用物質を含まない対応する改変Ｔ細胞と比較して前記改変Ｔ細胞の生存能力および／または機能を増強する、請求項６４〜１０９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１１】
前記作用物質は、エンドサイトーシス、安定剤、または補因子を増強する化合物である、請求項１１０に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項１１２】
前記作用物質はアルブミンである、請求項１１１に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項１１３】
前記アルブミンは、マウス、ウシ、またはヒトアルブミンである、請求項１１２に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項１１４】
前記作用物質は、二価金属カチオン、グルコース、ＡＴＰ、カリウム、グリセロール、トレハロース、Ｄ−スクロース、ＰＥＧ１５００、Ｌ−アルギニン、Ｌ−グルタミン、またはＥＤＴＡである、請求項１１０に記載の改変Ｔ細胞。
【請求項１１５】
前記改変Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む、請求項６４〜１１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１６】
前記改変Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む、請求項６４〜１１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１７】
前記改変Ｔ細胞の同種異系の状況における投与に応答した前記個体において開始された自然免疫応答は、前記さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答と比較して低下している、請求項１１５に記載の方法。
【請求項１１８】
前記改変Ｔ細胞が投与された個体におけるそれらの循環半減期は、前記さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞が投与された個体におけるそれらの循環半減期と比較して増加している、請求項１１５または１１７に記載の方法。
【請求項１１９】
前記改変Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、またはナチュラルキラーＴ細胞のうちの１つまたは複数を含む、請求項６４〜１１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２０】
前記改変Ｔ細胞は、ＣＤ３＋  Ｔ細胞、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＡ＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＯ＋  Ｔ細胞、またはγδ−Ｔ細胞のうちの１つまたは複数を含む、請求項６４〜１１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２１】
前記改変Ｔ細胞は前記個体に対して同種異系である、請求項６４〜１２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２２】
前記改変Ｔ細胞は前記個体に対して自家である、請求項６４〜１２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２３】
前記個体は、炎症および／または免疫応答をモジュレートするよう事前調整されている、請求項６４〜１２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２４】
第２のアジュバントを前記個体に投与するステップをさらに含む、請求項６４〜１２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２５】
前記第２のアジュバントは、ＩＦＮ−α、ＬＰＳ、またはＣｐＧ  ＯＤＮである、請求項１２４に記載の方法。
【請求項１２６】
前記改変Ｔ細胞および前記第２のアジュバントは並行してまたは同時に投与される、請求項１２４または１２５に記載の方法。
【請求項１２７】
前記改変Ｔ細胞および前記第２のアジュバントは逐次的に投与される、請求項１２４または１２５に記載の方法。
【請求項１２８】
前記改変Ｔ細胞は、前記第２のアジュバントを投与する前に投与される、請求項１２４〜１２７に記載の方法。
【請求項１２９】
前記改変Ｔ細胞は、前記第２のアジュバントの投与後に投与される、請求項１２４〜１２８に記載の方法。
【請求項１３０】
前記改変Ｔ細胞は、免疫チェックポイント阻害剤の投与の前、それと並行して、または後に投与される、請求項６４〜１２９に記載の方法。
【請求項１３１】
前記免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、またはＢＴＬＡのいずれか１つを標的にする、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３２】
前記改変Ｔ細胞は、化学療法の投与の前、それと並行して、または後に投与される、請求項６４〜１３１に記載の方法。
【請求項１３３】
前記化学療法はシスプラチンを含む、請求項１３２に記載の方法。
【請求項１３４】
前記個体への前記改変Ｔ細胞の投与は、前記抗原に特異的な細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の活性化および／または増殖をもたらす、請求項６４〜１３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３５】
前記個体への前記改変Ｔ細胞の投与は、前記抗原に特異的なヘルパーＴ（Ｔｈ）細胞の活性化および／または増殖をもたらす、請求項６４〜１３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３６】
前記個体に投与される前記改変Ｔ細胞の量は約１×１０６〜約１×１０１２個細胞である、請求項６４〜１３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３７】
前記改変Ｔ細胞の複数回投与を含む、請求項６４〜１３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３８】
前記改変Ｔ細胞の２回の連続投与の間の時間間隔は約１日〜約３０日である、請求項１３７に記載の方法。
【請求項１３９】
個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、前記方法は、抗原と会合した改変Ｔ細胞を前記個体に投与するステップを含み、前記改変Ｔ細胞は、
ａ）抗原がインプットＴ細胞の細胞表面と会合するのを可能にするのに十分な時間、前記インプットＴ細胞と前記抗原および／またはアジュバントとをインキュベートし、前記抗原は免疫原性エピトープを含み、それによって、前記抗原と会合した改変Ｔ細胞を作出するステップ；ならびに
ｂ）前記改変Ｔ細胞を前記個体に投与するステップ
を含むプロセスによって調製される、方法。
【請求項１４０】
前記ＨＰＶ抗原は、配列番号１８〜２５のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１３９に記載の方法。
【請求項１４１】
前記ＨＰＶ抗原は配列番号２３のアミノ酸配列を含む、請求項１４０に記載の方法。
【請求項１４２】
前記アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮまたはＬＰＳである、請求項１３９〜１４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４３】
前記ＣｐＧ  ＯＤＮは、ＣｐＧ  ＯＤＮ  １０１８、ＣｐＧ  ＯＤＮ  １８２６、またはＣｐＧ  ＯＤＮ  ２００６である、請求項１４２に記載の方法。
【請求項１４４】
手術、治療、または診断によるヒトまたは動物身体の処置の方法における使用のための、請求項１〜５９のいずれか一項に記載の改変Ｔ細胞を含む組成物。
【請求項１４５】
個体における免疫応答をモジュレートするための方法における使用のための、請求項１〜５９のいずれか一項に記載の改変Ｔ細胞を含む組成物であって、前記方法は、前記改変Ｔ細胞を前記個体に投与するステップを含む、組成物。
【請求項１４６】
手術、治療、または診断によるヒトまたは動物身体の処置の方法における使用のための、改変Ｔ細胞を含む組成物であって、前記改変Ｔ細胞は、配列番号１８〜２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む抗原を含む、組成物。
【請求項１４７】
個体における免疫応答をモジュレートする方法における使用のための、改変Ｔ細胞を含む組成物であって、前記改変Ｔ細胞は、配列番号１８〜２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む抗原を含む、組成物。
【請求項１４８】
手術、治療、または診断によるヒトまたは動物身体の処置の方法における使用のための、改変Ｔ細胞を含む組成物であって、前記改変Ｔ細胞は、
ａ）インプットＴ細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成し、前記抗原は免疫原性エピトープを含むステップ；
ｂ）前記抗原および前記アジュバントが前記摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプットＴ細胞と前記抗原および前記アジュバントとをインキュベートし、それによって、前記抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞を作出するステップ
を含む方法によって調製される、組成物。
【請求項１４９】
個体における免疫応答をモジュレートする方法における使用のための、改変Ｔ細胞を含む組成物であって、前記改変Ｔ細胞は、
ａ）インプットＴ細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成し、前記抗原は免疫原性エピトープを含むステップ；
ｂ）前記抗原および前記アジュバントが前記摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプットＴ細胞と前記抗原および前記アジュバントとをインキュベートし、それによって、前記抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞を作出するステップ
を含む方法によって調製される、組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年３月１２日に出願された米国仮出願第６２／６４１，９８７号、２０１８年９月２８日に出願された米国仮出願第６２／７３８，９４１号、２０１９年１月１８日に出願された米国仮出願第６２／７９４，５１６号に対する優先権を主張するものであり、これらはこれにより参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
ＡＳＣＩＩテキストファイルにおける配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルにおける以下の提出の内容は、その全体が、参照により本明細書に組み込まれる：コンピューター可読形式（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：７５０３２２００１５４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴ、記録日：２０１９年３月１１日、サイズ：１４ＫＢ）。
【０００３】
発明の分野
本開示は、概して、抗原および／またはアジュバントを含むＴ細胞、そのようなＴ細胞を製造する方法、ならびに、個体における免疫応答をモジュレートするためのものなど、そのようなＴ細胞を使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
発明の背景
免疫療法は、受動または能動のいずれかの２つの主なタイプの介入に分けられ得る。受動プロトコールは、あらかじめ活性化されたおよび／もしくは操作された細胞、疾患特異的治療用抗体、ならびに／またはサイトカインの投与を含む。能動免疫療法ストラテジーは、ｉｎ  ｖｉｖｏで免疫系エフェクター機能を刺激することを対象とする。いくつかの現在の能動プロトコールは、疾患関連ペプチド、溶解物、または同種異系の細胞全体を用いたワクチン接種ストラテジー、腫瘍抗原送達のためのビヒクルとしての自家ＤＣの注入、および免疫チェックポイントモジュレーターの注入を含む。Papaioannou,  Nikos  E.,  et  al.  Annals  of  translational  medicine  4.14  (2016)を参照されたい。
【０００５】
疾患関連抗原によって刺激されたＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）およびＣＤ４＋ヘルパーＴ（Ｔｈ）細胞は、罹患細胞を標的にしかつ破壊する潜在力を有するが、しかしながら、内因性Ｔ細胞応答を誘導するための現在の方法は問題に直面している。
特許出願および刊行物を含めた本明細書で引用されるすべての参考文献は、これにより参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Papaioannou,  Nikos  E.,  et  al.  Annals  of  translational  medicine  4.14  (2016)
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
発明の簡単な概要
一部の態様では、本発明は、抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞であって、抗原は改変Ｔ細胞に対して外因性でありかつ免疫原性エピトープを含み、アジュバントは細胞内に存在する、改変Ｔ細胞を提供する。一部の実施形態では、本発明は、配列番号１８〜２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む抗原を含む改変Ｔ細胞を提供する。
【０００８】
一部の態様では、本発明は、抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞であって、抗原は免疫原性エピトープを含み、改変Ｔ細胞は、ａ）インプットＴ細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄（cell-deforming  constriction）に通すステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きなインプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成するステップ；ならびにｂ）抗原およびアジュバントが摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプットＴ細胞と抗原およびアジュバントとをインキュベートし、それによって、抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞を作出するステップを含むプロセスによって調製される改変Ｔ細胞を提供する。一部の実施形態では、摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる抗原の濃度は約０．１μＭ〜約１ｍＭであり、および／または摂動インプットＴ細胞とインキュベートされるアジュバントの濃度は約０．１μＭ〜約１ｍＭである。一部の実施形態では、摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる抗原のアジュバントに対する比は約１００００：１〜約１：１００００である。
【０００９】
一部の態様では、本発明は、抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞であって、抗原は免疫原性エピトープを含み、改変Ｔ細胞は、ａ）アジュバントを含むインプットＴ細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成するステップ；ならびにｂ）抗原が摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプットＴ細胞と抗原とをインキュベートし、それによって、抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞を作出するステップを含むプロセスによって調製される改変Ｔ細胞を提供する。一部の実施形態では、摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる抗原の濃度は約０．１μＭ〜約１ｍＭである。
【００１０】
一部の態様では、本発明は、抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞であって、抗原は免疫原性エピトープを含み、改変Ｔ細胞は、ａ）抗原を含むインプットＴ細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、アジュバントが通過するのに十分に大きなインプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成するステップ；ならびにｂ）アジュバントが摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプットＴ細胞とアジュバントとをインキュベートし、それによって、抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞を作出するステップを含むプロセスによって調製される改変Ｔ細胞を提供する。一部の実施形態では、摂動インプットＴ細胞とインキュベートされるアジュバントの濃度は約０．１μＭ〜約１ｍＭである。
【００１１】
一部の実施形態では、インプットＴ細胞に、それが狭窄を通過するときに変形力が印加され、それによって、インプットＴ細胞の摂動が引き起こされる。一部の実施形態では、プロセスは、インプットＴ細胞および／または改変Ｔ細胞と、さらなるインキュベーションステップなしで調製される対応する改変Ｔ細胞と比較して、改変Ｔ細胞の生存能力および／または機能を増強する作用物質とをインキュベートするステップをさらに含む。一部の実施形態では、作用物質は、エンドサイトーシスを増強するまたは安定剤もしくは補因子として作用する化合物である。一部の実施形態では、狭窄の直径は、インプットＴ細胞の直径未満である。一部の実施形態では、狭窄の直径は、インプットＴ細胞の直径の約２０％〜約９９％である。一部の実施形態では、狭窄の直径は、インプットＴ細胞の直径の約２０％〜約６０％である。
【００１２】
一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、改変Ｔ細胞の細胞質基質および／または小胞に存在する。一部の実施形態では、小胞はエンドソームである。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、改変Ｔ細胞の多数の区画に存在する。一部の実施形態では、抗原または免疫原性エピトープは、改変Ｔ細胞の表面に結合している。
【００１３】
一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＩＦＮ−α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ−Ｉアゴニスト、またはポリＩ：Ｃである。一部の実施形態では、アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮである。一部の実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮは、クラスＡ  ＣｐＧ  ＯＤＮ、クラスＢ  ＣｐＧ  ＯＤＮ、またはクラスＣ  ＣｐＧ  ＯＤＮである。
【００１４】
一部の実施形態では、免疫原性エピトープは疾患関連抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、罹患細胞から単離されたペプチドまたはｍＲＮＡに由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは非自己抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、または真菌抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープはヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原に由来する。一部の実施形態では、ＨＰＶはＨＰＶ−１６またはＨＰＶ−１８である。一部の実施形態では、抗原は、ＨＰＶ  Ｅ６および／またはＥ７に由来するＨＬＡ−Ａ２拘束性ペプチドを含む。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａ２拘束性ペプチドは、配列番号１〜４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗原は、配列番号１８〜２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、複数の免疫原性エピトープを含む複数の抗原を含む。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープを含む複数の抗原を含む改変Ｔ細胞の個体への投与後、複数の免疫原性エピトープのいずれも、他の免疫原性エピトープのいずれに対する個体における免疫応答も減少させない。一部の実施形態では、抗原はポリペプチドであり、免疫原性エピトープは免疫原性ペプチドエピトープである。一部の実施形態では、免疫原性ペプチドエピトープは、Ｎ末端隣接ポリペプチドおよび／またはＣ末端隣接ポリペプチドに融合している。一部の実施形態では、抗原は、免疫原性ペプチドエピトープおよび１つまたは複数の異種ペプチド配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、抗原は、異種ペプチド配列がＮ末端および／またはＣ末端で隣接している免疫原性ペプチドエピトープを含むポリペプチドである。一部の実施形態では、隣接する異種ペプチド配列は疾患関連免疫原性ペプチドに由来する。一部の実施形態では、Ｎ末端隣接ポリペプチドは配列番号５〜１０のいずれか１つのアミノ酸配列を含み、および／またはＣ末端隣接ポリペプチドは配列番号１１〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る。
【００１５】
一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、約０．１μＭ〜約１ｍＭの濃度でアジュバントを含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、約０．１μＭ〜約１ｍＭの濃度で抗原を含む。一部の実施形態では、抗原のアジュバントに対する比は約１００００：１〜約１：１００００である。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ａ）抗原、ｂ）抗原および少なくとも１つの他の抗原、ならびに／またはｃ）抗原およびアジュバント、を含む複合体を含む。
【００１６】
一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、作用物質をさらに含み、この作用物質は、この作用物質を含まない対応する改変Ｔ細胞と比較して、改変Ｔ細胞の生存能力および／または機能を増強する。一部の実施形態では、作用物質は、エンドサイトーシス、安定剤、または補因子を増強する化合物である。一部の実施形態では、作用物質はアルブミンである。一部の実施形態では、アルブミンは、マウス、ウシ、またはヒトアルブミンである。一部の実施形態では、作用物質は、二価金属カチオン、グルコース、ＡＴＰ、カリウム、グリセロール、トレハロース、Ｄ−スクロース、ＰＥＧ１５００、Ｌ−アルギニン、Ｌ−グルタミン、またはＥＤＴＡである。一部の実施形態では、作用物質はマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）を含む。
【００１７】
一部の実施形態では、細胞は、共刺激分子のうちの１つまたは複数の発現を増加させるようにさらに改変されている。一部の実施形態では、共刺激分子は、Ｂ７−Ｈ２（ＩＣＯＳＬ）、Ｂ７−１（ＣＤ８０）、Ｂ７−２（ＣＤ８６）、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＣＤ４０、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ３０Ｌ、ＴＩＭ４、ＳＬＡＭ、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ１５５、またはＣＤ１１２である。一部の実施形態では、細胞は、１つまたは複数の共刺激分子の増加した発現をもたらす核酸を含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む。
【００１８】
一部の実施形態では、改変Ｔ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答は、さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答と比較して低下している。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞が投与された個体におけるそれらの循環半減期は、さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞が投与された個体におけるそれらの循環半減期と比較して増加している。
【００１９】
一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、またはナチュラルキラーＴ細胞のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ＣＤ３＋  Ｔ細胞、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＡ＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＯ＋  Ｔ細胞、またはγδ−Ｔ細胞のうちの１つまたは複数を含む。
【００２０】
一部の態様では、本発明は、本明細書で記載される改変Ｔ細胞のいずれかを含む組成物を提供する。一部の態様では、本発明は、本明細書で記載される改変Ｔ細胞および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
【００２１】
一部の態様では、本発明は、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、本明細書で記載される改変Ｔ細胞、本明細書で記載される組成物、または本明細書で記載される医薬組成物を個体に投与するステップを含む方法を提供する。
【００２２】
一部の態様では、本発明は、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、ａ）配列番号１８〜２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む抗原を含む改変Ｔ細胞を個体に投与するステップ；およびｂ）アジュバントを個体に投与するステップを含む方法を提供する。
【００２３】
一部の態様では、本発明は、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、ａ）インプットＴ細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きなインプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成し、抗原は免疫原性エピトープを含むステップ；ｂ）抗原およびアジュバントが摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプットＴ細胞と抗原およびアジュバントとをインキュベートし、それによって、抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞を作出するステップ；ならびにｃ）改変Ｔ細胞を個体に投与するステップを含む方法を提供する。一部の実施形態では、摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる抗原の濃度は約０．１μＭ〜約１ｍＭであり、および／または摂動インプットＴ細胞とインキュベートされるアジュバントの濃度は約０．１μＭ〜約１ｍＭである。一部の実施形態では、摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる抗原のアジュバントに対する比は約１００００：１〜約１：１００００である。
【００２４】
一部の態様では、本発明は、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、ａ）アジュバントを含むインプットＴ細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成し、抗原は免疫原性エピトープを含むステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプットＴ細胞と抗原とをインキュベートし、それによって、抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞を作出するステップ；ならびにｃ）改変Ｔ細胞を個体に投与するステップを含む方法を提供する。一部の実施形態では、摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる抗原の濃度は約０．１μＭ〜約１ｍＭである。
【００２５】
一部の態様では、本発明は、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、ａ）抗原を含むインプットＴ細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、抗原は免疫原性エピトープを含み、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、アジュバントが通過するのに十分に大きなインプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成するステップ；ｂ）アジュバントが摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプットＴ細胞とアジュバントとをインキュベートし、それによって、抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞を作出するステップ；ならびにｃ）改変Ｔ細胞を個体に投与するステップを含む方法を提供する。一部の実施形態では、摂動インプットＴ細胞とインキュベートされるアジュバントの濃度は約０．１μＭ〜約１ｍＭである。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、約０．１μＭ〜約１ｍＭの濃度で抗原を含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、約０．１μＭ〜約１ｍＭの濃度でアジュバントを含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞における抗原のアジュバントに対する比は約１００００：１〜約１：１００００である。
【００２６】
一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ａ）抗原、ｂ）抗原および少なくとも１つの他の抗原、ならびに／またはｃ）抗原およびアジュバント、を含む複合体を含む。
【００２７】
一部の態様では、本発明は、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、ａ）インプットＴ細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成し、抗原は免疫原性エピトープを含むステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプットＴ細胞と抗原とをインキュベートし、それによって、抗原を含む改変Ｔ細胞を作出するステップ；ｃ）改変Ｔ細胞を個体に投与するステップ；およびｄ）アジュバントを個体に投与するステップを含む方法を提供する。一部の実施形態では、摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる抗原の濃度は約０．１μＭ〜約１ｍＭである。
【００２８】
一部の実施形態では、インプットＴ細胞に、それが狭窄を通過するときに変形力が印加され、それによって、インプットＴ細胞の摂動が引き起こされる。一部の実施形態では、方法は、インプットＴ細胞および／または改変Ｔ細胞と、さらなるインキュベーションステップなしで調製される対応する改変Ｔ細胞と比較して、改変Ｔ細胞の生存能力および／または機能を増強する作用物質とをインキュベートするステップをさらに含む。一部の実施形態では、作用物質は、エンドサイトーシス、安定剤、または補因子を増強する化合物である。方法の一部の実施形態では、免疫応答は増強される。一部の実施形態では、増強した免疫応答は抗原に向けられたものである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、インプットＴ細胞の直径未満である。一部の実施形態では、狭窄の直径は、インプットＴ細胞の直径の約２０％〜約９９％である。一部の実施形態では、狭窄の直径は、インプットＴ細胞の直径の約２０％〜約６０％である。
【００２９】
一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、改変Ｔ細胞の細胞質基質および／または小胞に存在する。一部の実施形態では、小胞はエンドソームである。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、改変Ｔ細胞の多数の区画に存在する。一部の実施形態では、抗原または免疫原性エピトープは、改変Ｔ細胞の表面に結合している。
【００３０】
一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧ  ＯＤＮ、ＩＦＮ−α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ−Ｉアゴニスト、またはポリＩ：Ｃである。一部の実施形態では、アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮである。一部の実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮは、クラスＡ  ＣｐＧ  ＯＤＮ、クラスＢ  ＣｐＧ  ＯＤＮ、またはクラスＣ  ＣｐＧ  ＯＤＮである。
【００３１】
一部の実施形態では、免疫原性エピトープは疾患関連抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、罹患細胞から単離されたペプチドまたはｍＲＮＡに由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは非自己抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、または真菌抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープはヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原に由来する。一部の実施形態では、ＨＰＶはＨＰＶ−１６またはＨＰＶ−１８である。一部の実施形態では、抗原は、ＨＰＶ  Ｅ６および／またはＥ７に由来するＨＬＡ−Ａ２拘束性ペプチドを含む。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａ２拘束性ペプチドは、配列番号１〜４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗原は、配列番号１８〜２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、複数の免疫原性エピトープを含む複数の抗原を含む。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのいずれも、他の免疫原性エピトープのいずれに対する個体における免疫応答も減少させない。一部の実施形態では、抗原はポリペプチドであり、免疫原性エピトープは免疫原性ペプチドエピトープである。一部の実施形態では、免疫原性ペプチドエピトープは、Ｎ末端隣接ポリペプチドおよび／またはＣ末端隣接ポリペプチドに融合している。一部の実施形態では、Ｎ末端隣接ポリペプチドおよび／またはＣ末端隣接ポリペプチドに融合した免疫原性ペプチドエピトープは、天然に存在しない配列である。一部の実施形態では、Ｎ末端および／またはＣ末端隣接ポリペプチドは、免疫原性合成長鎖ペプチド（ＳＬＰ）に由来する。一部の実施形態では、Ｎ末端および／またはＣ末端隣接ポリペプチドは、疾患関連免疫原性ＳＬＰに由来する。一部の実施形態では、Ｎ末端隣接ポリペプチドは配列番号５〜１０のいずれか１つのアミノ酸配列を含み、および／またはＣ末端隣接ポリペプチドは配列番号１１〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る。
【００３２】
一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、作用物質をさらに含み、この作用物質は、この作用物質を含まない対応する改変Ｔ細胞と比較して、改変Ｔ細胞の生存能力および／または機能を増強する。一部の実施形態では、作用物質は、エンドサイトーシス、安定剤、または補因子を増強する化合物である。一部の実施形態では、作用物質はアルブミンである。一部の実施形態では、アルブミンは、マウス、ウシ、またはヒトアルブミンである。一部の実施形態では、作用物質は、二価金属カチオン、グルコース、ＡＴＰ、カリウム、グリセロール、トレハロース、Ｄ−スクロース、ＰＥＧ１５００、Ｌ−アルギニン、Ｌ−グルタミン、またはＥＤＴＡである。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む。
【００３３】
一部の実施形態では、改変Ｔ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答は、さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答と比較して低下している。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞が投与された個体におけるそれらの循環半減期は、さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞が投与された個体におけるそれらの循環半減期と比較して増加している。
【００３４】
一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、またはナチュラルキラーＴ細胞のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ＣＤ３＋  Ｔ細胞、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＡ＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＯ＋  Ｔ細胞、またはγδ−Ｔ細胞のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は個体に対して同種異系である。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は個体に対して自家である。一部の実施形態では、個体は、炎症および／または免疫応答をモジュレートするよう事前調整されている。
【００３５】
一部の実施形態では、方法は、第２のアジュバントを個体に投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、第２のアジュバントはＩＦＮ−αまたはＣｐＧ  ＯＤＮである。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞および第２のアジュバントは並行してまたは同時に投与される。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞および第２のアジュバントは逐次的に投与される。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、第２のアジュバントを投与する前に投与される。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、第２のアジュバントの投与後に投与される。
【００３６】
一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、免疫チェックポイント阻害剤の投与の前、それと並行して、または後に投与される。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、およびＴＩＭ−３のいずれか１つを標的にする。一部の実施形態では、個体への改変Ｔ細胞の投与は、抗原に特異的な細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の活性化および／または増殖（expansion）をもたらす。一部の実施形態では、個体への改変Ｔ細胞の投与は、抗原に特異的なヘルパーＴ（Ｔｈ）細胞の活性化および／または増殖をもたらす。一部の実施形態では、個体に投与される改変Ｔ細胞の量は約１×１０６〜約１×１０１２個細胞である。
【００３７】
一部の実施形態では、方法は、改変Ｔ細胞の複数回投与を含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞の２回の連続投与の間の時間間隔は約１日〜約３０日である。
【００３８】
一部の態様では、本発明は、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、方法は、抗原と会合した改変Ｔ細胞を個体に投与するステップを含み、改変Ｔ細胞は、
【００３９】
ａ）抗原がインプットＴ細胞の細胞表面と会合するのを可能にするのに十分な時間、インプットＴ細胞と抗原および／またはアジュバントとをインキュベートし、抗原は免疫原性エピトープを含み、それによって、抗原と会合した改変Ｔ細胞を作出するステップ；ならびにｂ）改変Ｔ細胞を個体に投与するステップを含むプロセスによって調製される、方法を提供する。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号１８〜２５のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は配列番号２３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮである。一部の実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮは、ＣｐＧ  ＯＤＮ  １０１８、ＣｐＧ  ＯＤＮ  １８２６、またはＣｐＧ  ＯＤＮ  ２００６である。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１Ａ】図１Ａは、処置群およびスケジュールの代表的な概略図を示す。
【図１Ｂ】図１Ｂは、未処置群（Ｔ細胞の養子移植なし）および図１Ａで概説された処置群Ｂ〜Ｅからのマウスの間で比較した、式（（長さ×幅２）／２）によって測定される腫瘍成長を示す。
【００４１】
【図２Ａ】図２Ａは、Ｅ７抗原を評価するための代表的な概略図を示す。
【図２Ｂ】図２Ｂは、ＩＦＮ−γ産生ＣＤ８＋  Ｔ細胞に対するＳＬＰ配列の影響が、ＴＡＰＣワクチン接種に応答して生じたことを示す。
【００４２】
【図３】図３は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏヒトモデルにおけるＥ６レスポンダーＴ細胞において抗原特異的免疫応答を誘導するＥ６  ＳＬＰの能力を示すグラフである。
【００４３】
【図４】図４は、Ｅ７１１−２０レスポンダーＴ細胞において抗原特異的免疫応答を誘導するＥ７  ＳＬＰの能力、およびｉｎ  ｖｉｔｒｏヒトモデルにおけるＳＱＺ  Ｔ細胞ＡＰＣ（Ｔａｐｃ）活性化に対するＳＬＰ配列の影響を示す。
【００４４】
【図５】図５は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏヒトモデルにおいてＳＱＺ  Ｔ細胞ＡＰＣについての抗原の用量を評価するための研究の結果を示す。
【００４５】
【図６−１】図６は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏヒトモデルにおいてＳＱＺ  Ｔ細胞ＡＰＣについてのドナーの変動性を決定するための研究の結果を示す。
【図６−２】図６は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏヒトモデルにおいてＳＱＺ  Ｔ細胞ＡＰＣについてのドナーの変動性を決定するための研究の結果を示す。
【００４６】
【図７Ａ】図７Ａは、異なるアジュバントを使用して免疫応答の頑健性を比較するための実験の概略図である。
【図７Ｂ】図７Ｂは、ポリＩ：ＣおよびＣｐＧ  ＯＤＮを使用して免疫応答の頑健性を比較するための実験の結果を示す。
【００４７】
【図８Ａ】図８Ａは、免疫応答におけるＣｐＧ  ＯＤＮの濃度の効果を評価する実験の概略図である。
【図８Ｂ】図８Ｂは、免疫応答におけるＣｐＧ  ＯＤＮの濃度の効果を評価する実験の結果を示す。
【００４８】
【図９Ａ】図９Ａは、免疫応答におけるＣｐＧ  ＯＤＮの投与スケジュールを評価する実験の概略図である。
【図９Ｂ】図９Ｂは、免疫応答におけるＣｐＧ  ＯＤＮの投与スケジュールを評価する実験の結果を示す。
【００４９】
【図１０Ａ】図１０Ａは、ＴＡＰＣ抗腫瘍機能についての細胞内および全身性のアジュバント投与の組合せを評価するための実験の概略図である。
【図１０Ｂ】図１０Ｂは、各実験群についてのＴ細胞応答を示す。
【図１０Ｃ】図１０Ｃは、各実験群についての腫瘍の成長を示す。
【図１０Ｄ】図１０Ｄは、未処置動物に対して、ＳＱＺ（Ｅ７＋ＣｐＧ）で処置された動物における再チャレンジ後の腫瘍成長を示す。
【００５０】
【図１１Ａ】図１１Ａは、ＴＡＰＣ抗腫瘍機能についての多数のＨＰＶ抗原を組み合わせる効果を評価するための実験の概略図である。
【図１１Ｂ】図１１Ｂは、各実験群についてのＴ細胞応答を示す。
【図１１Ｃ】図１１Ｃは、各実験群についての腫瘍の成長を示す。
【００５１】
【図１２Ａ】図１２Ａは、Ｅ７特異的ＴＡＰＣ抗腫瘍効果についてのＣｐＧアジュバントの投与経路の重要性を評価する実験の結果を示す。投与スケジュールを提供する。
【図１２Ｂ】図１２Ｂは、各処置群内の個々のマウスについての経時的な腫瘍体積を示す。
【００５２】
【図１３】図１３は、Ｅ７特異的Ｔ細胞腫瘍浸潤をもたらす共投与アジュバントの能力を査定するための実験の概略図を示す。Ｔ細胞応答を下側パネルに示す。
【００５３】
【図１４Ａ】図１４Ａは、Ｅ７合成長鎖ペプチド（ＳＬＰ）＋ＣｐＧをロードされたＴＡＰＣのプライムおよびブーストの両方のためのワクチン接種スケジュールを決定するための実験の概略図である。
【図１４Ｂ】図１４Ｂは、各実験群についての腫瘍の成長を示す。
【００５４】
【図１５】図１５は、ＳＱＺ化ＴＡＰＣを直接抗原に提示することができることを示すための実験の結果を示す。
【００５５】
【図１６】図１６は、アジュバントのＳＱＺ送達が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＴ細胞サイトカインレベルを有意に変えないことを示す。
【００５６】
【図１７】図１７は、抗原＋／−アジュバントのＳＱＺ送達が、ｉｎ  ｖｉｖｏで血清サイトカインレベルを有意に変えないことを示す。
【００５７】
【図１８】図１８Ａは、ＭＨＣ−Ｉ上に提示された最小エピトープの相対量に関して、細胞の集団を表すヒストグラムを示している。図１８Ｂは、平均蛍光強度によって測定される、細胞あたりの抗原提示の量を示している。
【００５８】
【図１９】図１９は、ＣＭＶ  ｐｐ６５抗原をロードされたＴ細胞が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルにおけるｐｐ６５レスポンダーＴ細胞において抗原特異的免疫応答を誘導する能力を示している。
【００５９】
【図２０】図２０は、アジュバントの共投与あり、またはなしで、ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＳＬＰによるＳＱＺロードＴＡＰＣにより投与された腫瘍への腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）動員の相対量を示す。
【００６０】
【図２１】図２１は、より短期間（右側腹部腫瘍、０日目に注射）およびより長期間の保護（左側腹部腫瘍、６０日目に注射）の両方について、ＨＰＶ関連腫瘍に対する予防的処置のためにＡＰＣとしての機能を果たすＳＱＺロードＴ細胞の能力を決定するための実験における経時的な腫瘍体積を示す。
【００６１】
【図２２】図２２は、ＨＰＶ関連腫瘍に対する治療的処置のためにＡＰＣとしての機能を果たすＳＱＺロードＴ細胞の能力における、Ｔ細胞の用量、アジュバントの共投与、および投与の数（プライム、対プライム／ブースト）の効果を決定するための実験における経時的な腫瘍体積を示す。図２２において、「Ｐ」はプライムを示し、「Ｂ」はブーストを示す。
【発明を実施するための形態】
【００６２】
発明の詳細な説明
抗原提示細胞（ＡＰＣ）は、ＣＴＬの内因性活性化を誘導することにおいて重要な役割を果たす。本研究では、がんおよび感染性疾患を含めた様々な適応症に対する免疫応答をモジュレートすることにおける使用のための、Ｔ細胞ＡＰＣ（ＴＡＰＣ）を操作するＣｅｌｌＳｑｕｅｅｚｅ（登録商標）プラットフォームの実行が記載される。Ｔ細胞への標的抗原および／またはアジュバントの効率的な細胞質基質送達を可能にすることによって、このプラットフォームは、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける標的抗原の有効なＭＨＣ−Ｉ提示およびＣＴＬの刺激を誘導する能力を実証している。
【００６３】
本出願は、一部の態様では、抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞であって、抗原は免疫原性エピトープを含み、アジュバントは細胞内に存在する、改変Ｔ細胞を提供する。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ａ）インプットＴ細胞を細胞変形狭窄に通すステップであって、狭窄の直径は、インプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きなインプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成するステップ；ならびにｂ）抗原およびアジュバントが摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプットＴ細胞と抗原およびアジュバントとをインキュベートし、それによって、抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞を作出するステップ、によって調製される。個体における免疫応答をモジュレートするための、例えば個体における免疫応答を増強するための、改変Ｔ細胞を使用する方法も提供される。一部の実施形態では、増強した免疫応答は抗原に向けられたものである。一部の実施形態では、細胞変形狭窄は、本明細書で記載されるマイクロ流体チャネルのいずれかなどのマイクロ流体チャネルに含有される。
【００６４】
他の態様では、ａ）抗原を含む改変Ｔ細胞であって、抗原は免疫原性エピトープを含む、改変Ｔ細胞；およびｂ）アジュバント、を個体に投与するステップを含む、個体における免疫応答をモジュレートする方法が提供される。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ａ）インプットＴ細胞を細胞変形狭窄に通すステップであって、狭窄の直径は、インプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成するステップ；およびｂ）抗原が摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプットＴ細胞と抗原とをインキュベートし、それによって、抗原を含む改変Ｔ細胞を作出するステップ、によって調製される。一部の実施形態では、免疫応答は増強される。一部の実施形態では、増強した免疫応答は抗原に向けられたものである。一部の実施形態では、細胞変形狭窄は、本明細書で記載されるマイクロ流体チャネルのいずれかなどのマイクロ流体チャネルに含有される。
【００６５】
一般的技法
本明細書に記載または参照される技法および手順は、一般に、十分に理解されており、例えば、Molecular  Cloning:  A  Laboratory  Manual  (Sambrook  et  al.,  4th  ed.,  Cold  Spring  Harbor  Laboratory  Press,  Cold  Spring  Harbor,  N.Y.,  2012)；Current  Protocols  in  Molecular  Biology  (F.M.  Ausubel,  et  al.  eds.,  2003)；the  series  Methods  in  Enzymology  (Academic  Press,  Inc.)；PCR  2:  A  Practical  Approach  (M.J.  MacPherson,  B.D.  Hames  and  G.R.  Taylor  eds.,  1995)；Antibodies,  A  Laboratory  Manual  (Harlow  and  Lane,  eds.,  1988)；Culture  of  Animal  Cells:  A  Manual  of  Basic  Technique  and  Specialized  Applications  (R.I.  Freshney,  6th  ed.,  J.  Wiley  and  Sons,  2010)；Oligonucleotide  Synthesis  (M.J.  Gait,  ed.,  1984)；Methods  in  Molecular  Biology,  Humana  Press;  Cell  Biology:  A  Laboratory  Notebook  (J.E.  Cellis,  ed.,  Academic  Press,  1998)；Introduction  to  Cell  and  Tissue  Culture  (J.P.  Mather  and  P.E.  Roberts,  Plenum  Press,  1998)；Cell  and  Tissue  Culture:  Laboratory  Procedures  (A.  Doyle,  J.B.  Griffiths,  and  D.G.  Newell,  eds.,  J.  Wiley  and  Sons,  1993-8)；Handbook  of  Experimental  Immunology  (D.M.  Weir  and  C.C.  Blackwell,  eds.,  1996)；Gene  Transfer  Vectors  for  Mammalian  Cells  (J.M.  Miller  and  M.P.  Calos,  eds.,  1987)；PCR:  The  Polymerase  Chain  Reaction,  (Mullis  et  al.,  eds.,  1994)；Current  Protocols  in  Immunology  (J.E.  Coligan  et  al.,  eds.,  1991)；Short  Protocols  in  Molecular  Biology  (Ausubel  et  al.,  eds.,  J.  Wiley  and  Sons,  2002)；Immunobiology  (C.A.  Janeway  et  al.,  2004)；Antibodies  (P.  Finch,  1997)；Antibodies:  A  Practical  Approach  (D.  Catty.,  ed.,  IRL  Press,  1988-1989)；Monoclonal  Antibodies:  A  Practical  Approach  (P.  Shepherd  and  C.  Dean,  eds.,  Oxford  University  Press,  2000)；Using  Antibodies:  A  Laboratory  Manual  (E.  Harlow  and  D.  Lane,  Cold  Spring  Harbor  Laboratory  Press,  1999)；The  Antibodies  (M.  Zanetti  and  J.  D.  Capra,  eds.,  Harwood  Academic  Publishers,  1995)；およびCancer:  Principles  and  Practice  of  Oncology  (V.T.  DeVita  et  al.,  eds.,  J.B.  Lippincott  Company,  2011)に記載されている広く利用されている方法論などの、従来の方法論を使用して、当業者によって一般的に用いられている。
【００６６】
定義
本明細書を解釈する目的のために、以下の定義が適用され、適切である場合は常に、単数で使用されている用語は、複数も含み、逆もまた同様である。下記に説明する任意の定義が、参照により本明細書に組み込まれる任意の文書と矛盾する場合、説明する定義が優先されるものとする。
【００６７】
本明細書で使用される場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、他に指示されない限り、複数の参照を含む。
【００６８】
本明細書に記載の本発明の態様および実施形態は、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」および「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」の態様および実施形態を含むことが理解される。
【００６９】
本明細書で使用される「約」という用語は、本技術分野における当業者に容易に公知である、それぞれの値についての通常の誤差範囲を指す。本明細書における「約」の値またはパラメーターへの言及は、その値またはパラメーターそれ自体を対象にする実施形態を含む（および記載する）。
【００７０】
本明細書で使用される「ポア」という用語は、限定なく、材料内の孔、裂け目、空洞、開口部、割れ目、間隙または穿孔部を含む、開口を指す。一部の例では、（示される場合）用語は、本開示の表面内のポアを指す。他の例では、（示される場合）ポアは、細胞膜におけるポアを指すことができる。
【００７１】
本明細書で使用される「膜」という用語は、ポアを含有する選択的な障壁またはシートを指す。用語は、境界または裏打ちとしての機能を果たす柔軟なシート様構造を含む。一部の例では、用語は、ポアを含有する表面またはフィルターを指す。この用語は、「細胞膜」という用語とは区別される。
【００７２】
本明細書で使用される「フィルター」という用語は、ポアの選択的通過を可能にする多孔性物品を指す。一部の例では、用語は、ポアを含有する表面または膜を指す。
【００７３】
本明細書で使用される「不均質」という用語は、構造または組成において、混ぜ合わされるか、または均一ではないものを指す。一部の例では、用語は、所与の表面内で多様なサイズ、形状または分布を有するポアを指す。
【００７４】
本明細書で使用される「均質」という用語は、全体にわたって、構造または組成が一貫しているか、または均一であるものを指す。一部の例では、用語は、所与の表面内で一貫したサイズ、形状または分布を有するポアを指す。
【００７５】
コード配列および制御配列などの核酸配列に関連する場合の「異種」という用語は、通常、互いに接合されない、および／または通常、特定の細胞と関連しない配列を表す。そのため、核酸構築物またはベクターの「異種」領域は、本来は、他の分子との関連で見出されない別の核酸分子内の、またはそれらに結合した核酸のセグメントである。例えば、核酸構築物の異種領域は、本来は、コード配列との関連で見出されない配列に隣接するコード配列を含み得る。異種コード配列の別の例は、コード配列それ自体が、本来は見出されない構築物（例えば、生来の遺伝子（native  gene）と異なるコドンを有する合成配列）である。同様に、細胞に通常存在しない構築物で形質転換された細胞は、本発明の目的のために、異種とみなされるはずである。対立遺伝子変形形態または天然に存在する変異事象は、本明細書で使用される場合、異種ＤＮＡを生じさせない。
【００７６】
ペプチド配列およびポリペプチド配列などのアミノ酸配列に関連する場合の「異種」という用語は、通常、互いに接合されない、および／または通常、特定の細胞と関連しない配列を表す。そのため、ペプチド配列の「異種」領域は、本来は、他の分子との関連で見出されない別のアミノ酸分子内の、またはそれらに結合したアミノ酸のセグメントである。例えば、ペプチド構築物の異種領域は、本来は、ペプチドのアミノ酸配列との関連で見出されない配列に隣接するペプチドのアミノ酸配列を含み得る。異種ペプチド配列の別の例は、ペプチド配列それ自体が、本来は見出されない構築物（例えば、生来の遺伝子からコードされる異なるアミノ酸を有する合成配列）である。同様に、細胞に通常存在しないアミノ酸構築物を発現するベクターで形質転換された細胞は、本発明の目的のために、異種とみなされるはずである。対立遺伝子変形形態または天然に存在する変異事象は、本明細書で使用される場合、異種ペプチドを生じさせない。
【００７７】
「外因性」という用語は、細胞との関連で、抗原またはアジュバントなどの作用物質に関して使用される場合、細胞の外側から送達される（つまり、細胞の外側由来の）作用物質を指す。細胞は、すでに存在する作用物質を有しても有しなくてもよく、外因性作用物質が送達された後に作用物質を産生しても産生しなくてもよい。
【００７８】
本明細書で使用される場合、「阻害する」という用語は、特定の標的の存在または活性を、遮断する、低下させる、除去する、または他の方法で拮抗させる作用を指し得る。阻害は、部分的な阻害または完全な阻害を指し得る。例えば、免疫応答を阻害するとは、免疫応答の遮断、低下、除去、または任意の他の拮抗をもたらす任意の作用を指し得る。他の例では、核酸の発現の阻害としては、限定されるものではないが、核酸の転写の低下、ｍＲＮＡの存在量の低下（例えば、ｍＲＮＡ転写をサイレンシングする）、ｍＲＮＡの分解、ｍＲＮＡの翻訳の阻害などが挙げられ得る。
【００７９】
本明細書で使用される場合、「抑制する」という用語は、特定の標的の存在または活性を、減少させる、低下させる、妨げる、制限する、軽減する、または他の方法で減退させる作用を指し得る。抑制は、部分的な抑制または完全な抑制を指し得る。例えば、免疫応答を抑制するとは、免疫応答を減少させること、低下させること、妨げること、制限すること、軽減すること、または他の方法で減退させることをもたらす任意の作用を指し得る。他の例では、核酸の発現の抑制としては、限定されるものではないが、核酸の転写の低下、ｍＲＮＡの存在量の低下（例えば、ｍＲＮＡ転写をサイレンシングする）、ｍＲＮＡの分解、ｍＲＮＡの翻訳の阻害などが挙げられ得る。
【００８０】
本明細書で使用される場合、「増強する」という用語は、特定の標的の存在または活性を、改善する、ブーストする、高める、または他の方法で増加させる作用を指し得る。例えば、免疫応答を増強するとは、免疫応答を改善すること、ブーストすること、高めること、または他の方法で増加させることをもたらす任意の作用を指し得る。例示的な一例では、免疫応答を増強するとは、免疫応答を改善する、ブーストする、高める、もしくは他の方法で増加させるために、抗原および／またはアジュバントを用いることを指し得る。他の例では、核酸の発現を増強することとしては、限定されるものではないが、核酸の転写の増加、ｍＲＮＡの存在量の増加（例えば、ｍＲＮＡ転写を増加させる）、ｍＲＮＡの分解の減少、ｍＲＮＡの翻訳の増加などが挙げられ得る。
【００８１】
本明細書で使用される場合、「モジュレートする」という用語は、特定の標的の存在または活性を、変化させる、変える、変動させる、または他の方法で改変する作用を指し得る。例えば、免疫応答をモジュレートするとは、免疫応答を変化させること、変えること、変動させること、または他の方法で改変することをもたらす任意の作用を指し得る。他の例では、核酸の発現をモジュレートすることとしては、限定されるものではないが、核酸の転写における変化、ｍＲＮＡの存在量における変化（例えば、ｍＲＮＡ転写を増加させる）、ｍＲＮＡの分解における対応する変化、ｍＲＮＡの翻訳における変化などが挙げられ得る。
【００８２】
本明細書で使用される場合、「誘導する」という用語は、開始する、促す、刺激する、確立する、または他の方法で結果を生成する作用を指し得る。例えば、免疫応答を誘導するとは、所望の免疫応答を開始すること、促すこと、刺激すること、確立すること、または他の方法で生成することをもたらす任意の作用を指し得る。他の例では、核酸の発現を誘導することとしては、限定されるものではないが、核酸の転写の開始、ｍＲＮＡの翻訳の開始などが挙げられ得る。
【００８３】
「相同な」という用語は、本明細書で使用される場合、同じ生物に由来する分子を指す。一部の例では、用語は、所与の生物の中に通常見出されるまたは発現される核酸またはタンパク質を指す。
【００８４】
本明細書で使用される「ポリヌクレオチド」または「核酸」という用語は、リボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドのいずれかの、任意の長さのポリマー形態のヌクレオチドを指す。そのため、この用語は、限定されるものではないが、一本鎖、二本鎖または多重鎖のＤＮＡまたはＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッド、あるいはプリンおよびピリミジン塩基、または他の天然の、化学的もしくは生化学的に修飾された、非天然もしくは誘導体化されたヌクレオチド塩基を含むポリマーを含む。ポリヌクレオチドの主鎖は、糖およびリン酸基（ＲＮＡまたはＤＮＡにおいて典型的に見出され得る通り）、または修飾もしくは置換された糖もしくはリン酸基を含むことができる。あるいは、ポリヌクレオチドの主鎖は、ホスホルアミデートおよびホスホロチオエートなどの合成サブユニットのポリマーを含むことができ、そのため、オリゴデオキシヌクレオシドホスホルアミデート（Ｐ−ＮＨ２）、または混合ホスホルアミデート−ホスホジエステルオリゴマーであり得る。加えて、二本鎖ポリヌクレオチドは、相補鎖を合成すること、および適切な条件下で鎖をアニーリングすることによる、またはＤＮＡポリメラーゼを適切なプライマーと共に使用して相補鎖をｄｅ  ｎｏｖｏで合成することによるいずれかで、化学合成の一本鎖ポリヌクレオチド生成物から得ることができる。
【００８５】
「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指すために互換可能に使用され、最小の長さに限定されない。アミノ酸残基のそのようなポリマーは、天然または非天然のアミノ酸残基を含有し得、限定されるものではないが、ペプチド、オリゴペプチド、アミノ酸残基の二量体、三量体および多量体が挙げられる。全長タンパク質およびその断片は両方とも定義により包含される。用語は、ポリペプチドの発現後修飾、例えば、グリコシル化、シアリル化、アセチル化、リン酸化なども含む。さらにまた、本発明の目的のために、「ポリペプチド」は、タンパク質が所望の活性を維持する限り、天然配列に対する欠失、付加および置換（一般に、本来は、保存的）などの修飾を含むタンパク質を指す。これらの修飾は、部位特異的変異誘発によるような計画的なものであってもよく、またはタンパク質を産生する宿主の変異もしくはＰＣＲ増幅に起因するエラーによるなど偶発的なものであってもよい。
【００８６】
本明細書で使用される場合、「アジュバント」という用語は、免疫応答を直接的または間接的にモジュレートおよび／または発生させる物質を指す。一般に、アジュバントは、抗原と併せて投与されて、抗原単独と比較して抗原に対する免疫応答の増強をもたらす。さまざまなアジュバントが本明細書に記載される。
【００８７】
「ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド」および「ＣｐＧ  ＯＤＮ」という用語は、ホスフェートによって分離されるシトシンおよびグアニンのジヌクレオチド（本明細書において「ＣｐＧ」ジヌクレオチドまたは「ＣｐＧ」とも称する）を含有するＤＮＡ分子を指す。本開示のＣｐＧ  ＯＤＮは、少なくとも１つの非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含有する。すなわち、ＣｐＧジヌクレオチド中のシトシンは、メチル化されない（すなわち、５−メチルシトシンではない）。ＣｐＧ  ＯＤＮは、部分的または完全なホスホロチオエート（ＰＳ）主鎖を有していてもよい。
【００８８】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」または「薬学的に適合する」は、生物学的、または別段望ましくないものではない材料を意味し、例えば、材料は、任意の有意な望ましくない生物学的効果を引き起こすまたはそれが含有される組成物の他の構成要素のいずれかと有害な形式で相互作用することなく、患者に投与される医薬組成物に組み込まれ得る。薬学的に許容される担体または賦形剤は、好ましくは、毒性学的および製造試験の必要な基準を満たしており、ならびに／または米国食品医薬品局によって作られた不活性成分ガイド（Inactive  Ingredient  Guide）に含まれる。
【００８９】
本明細書で記載される構造的および機能的な特徴のいずれかに関して、これらの特徴を決定する方法は、当技術分野において公知である。
【００９０】
改変Ｔ細胞
ある特定の態様では、抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞であって、抗原は改変Ｔ細胞に対して外因性でありかつ免疫原性エピトープを含み、アジュバントは細胞内に存在する、改変Ｔ細胞が提供される。外因性抗原は、改変される対象となるＴ細胞に導入される、Ｔ細胞の外側にある供給源由来の１つまたは複数の抗原であり、外因性抗原の導入の前または後のいずれかにＴ細胞に存在し得（つまり、内因性であり）、ゆえにそのようなものとしてＴ細胞によって産生され得る（例えば、Ｔ細胞のゲノムによってコードされる）抗原を含む。例えば、一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、抗原の内因性供給源を含む第１のプール、および改変される対象となるＴ細胞の外側で産生されかつＴ細胞に導入される抗原の外因性供給源を含む第２のプール、という抗原の２つのプールを含む。一部の実施形態では、抗原は個体における疾患細胞において異所的に発現されまたは過剰発現され、改変Ｔ細胞は、個体に由来し、改変される対象となるＴ細胞の外側で産生されかつＴ細胞に導入される抗原またはその中に含有される免疫原性エピトープの外因性供給源を含む。一部の実施形態では、抗原は、ネオエピトープを含む新抗原（例えば、変更した自己タンパク質またはその一部分）であり、改変Ｔ細胞は、改変される対象となるＴ細胞の外側で産生されかつＴ細胞に導入される、ネオエピトープを含む抗原またはその断片の外因性供給源を含む。一部の実施形態では、アジュバントは改変Ｔ細胞に対して外因性である。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、改変Ｔ細胞の多数の区画に存在する。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、改変Ｔ細胞の細胞質基質および／または小胞に存在する。一部の実施形態では、小胞はエンドソームである。一部の実施形態では、抗原または免疫原性エピトープは、改変Ｔ細胞の表面に結合している。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、またはナチュラルキラーＴ細胞のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ＣＤ３＋  Ｔ細胞、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＡ＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＯ＋  Ｔ細胞、またはγδ−Ｔ細胞のうちの１つまたは複数を含む。
【００９１】
ある特定の態様では、配列番号１８〜２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む抗原を含む改変Ｔ細胞が提供される。一部の実施形態では、抗原は、改変Ｔ細胞の多数の区画に存在する。一部の実施形態では、抗原は、改変Ｔ細胞の細胞質基質および／または小胞に存在する。一部の実施形態では、小胞はエンドソームである。一部の実施形態では、抗原またはその中に含有される免疫原性エピトープは、改変Ｔ細胞の表面に結合している。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、およびナチュラルキラーＴ細胞のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ＣＤ３＋  Ｔ細胞、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＡ＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＯ＋  Ｔ細胞、およびγδ−Ｔ細胞のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞はアジュバントをさらに含む。
【００９２】
本明細書で記載される改変Ｔ細胞のいずれかによる一部の実施形態では、改変Ｔ細胞はアジュバントを含む。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＩＦＮ−α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ−Ｉアゴニスト、またはポリＩ：Ｃである。一部の実施形態では、アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮである。一部の実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮは、長さが約５０ヌクレオチド以下（約４５、４０、３５、３０、２５、２０、またはそれを下回る数のいずれか以下など）である。一部の実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮは、クラスＡ  ＣｐＧ  ＯＤＮ、クラスＢ  ＣｐＧ  ＯＤＮ、またはクラスＣ  ＣｐＧ  ＯＤＮである。一部の実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮは、配列番号２６〜３７のいずれか１つのヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮは、配列番号３０のヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮは、配列番号３１のヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、複数の異なるＣｐＧ  ＯＤＮを含む。例えば、一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、クラスＡ、クラスＢ、およびクラスＣ  ＣｐＧ  ＯＤＮの中から選択される複数の異なるＣｐＧ  ＯＤＮを含む。
【００９３】
一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧ  ＯＤＮ、ＬＰＳ、ＩＦＮ−α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ−Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、またはＴＬＲ９アゴニストである。特定の実施形態では、アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮである。一部の実施形態では、アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮである。一部の実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮは、クラスＡ  ＣｐＧ  ＯＤＮ、クラスＢ  ＣｐＧ  ＯＤＮ、またはクラスＣ  ＣｐＧ  ＯＤＮである。一部の実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮアジュバントは、ＣｐＧ  ＯＤＮ  １０１８、ＣｐＧ  ＯＤＮ  １５８５、ＣｐＧ  ＯＤＮ  ２２１６、ＣｐＧ  ＯＤＮ  ２３３６、ＣｐＧ  ＯＤＮ  １６６８、ＣｐＧ  ＯＤＮ  １８２６、ＣＰＧ  ＯＤＮ  ２００６、ＣｐＧ  ＯＤＮ  ２００７、ＣｐＧ  ＯＤＮ  ＢＷ００６、ＣｐＧ  ＯＤＮ  Ｄ−ＳＬ０１、ＣｐＧ  ＯＤＮ  ２３９５、ＣｐＧ  ＯＤＮ  Ｍ３６２、ＣｐＧ  ＯＤＮ  Ｄ−ＳＬ０３の群から選択されたものを含む。一部の実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮアジュバントは、ＣｐＧ  ＯＤＮ  １８２６（ＴＣＣＡＴＧＡＣＧＴＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴ；配列番号３０）またはＣｐＧ  ＯＤＮ  ２００６（ＣｐＧ  ＯＤＮ  ７９０９としても公知）（ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ；配列番号３１）オリゴヌクレオチドである。一部の実施形態では、アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮ  ７９０９である。一部の実施形態では、ＲＩＧ−Ｉアゴニストは、ポリイノシン酸：ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）を含む。複数のアジュバントを抗原とともに使用して、免疫応答の誘発も増強し得る。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、１種を上回る種類のアジュバントを含む。複数のアジュバントを抗原とともに使用して、免疫応答の誘発も増強し得る。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、１種を上回る種類のアジュバントを含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、アジュバントＣｐＧ  ＯＤＮ、ＬＰＳ、ＩＦＮ−α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ−Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、またはＴＬＲ９アゴニストの任意の組合せを含む。
【００９４】
本明細書で記載される改変Ｔ細胞のいずれかによる一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、免疫原性エピトープを含む抗原を含む。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは疾患関連抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、罹患細胞から単離されたペプチドまたはｍＲＮＡに由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、罹患細胞において異所的に発現したまたは過剰発現したタンパク質に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、新抗原、例えばがん関連新抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、ネオエピトープ、例えばがん関連ネオエピトープを含む。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは非自己抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、変異したまたは別様に変更した自己抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、または真菌抗原に由来する。一部の実施形態では、抗原は、異種ペプチド配列に融合した免疫原性エピトープを含む。一部の実施形態では、抗原は複数の免疫原性エピトープを含む。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープの一部は、同じ供給源に由来する。例えば、一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープの一部は、同じウイルス抗原に由来する。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのすべては、同じ供給源に由来する。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのいずれも、同じ供給源に由来しない。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は複数の異なる抗原を含む。
【００９５】
本明細書で記載される免疫原性エピトープを含む抗原のいずれかによる一部の実施形態では、抗原はポリペプチドであり、免疫原性エピトープは免疫原性ペプチドエピトープである。一部の実施形態では、免疫原性ペプチドエピトープは、Ｎ末端隣接ポリペプチドおよび／またはＣ末端隣接ポリペプチドに融合している。一部の実施形態では、Ｎ末端隣接ポリペプチドおよび／またはＣ末端隣接ポリペプチドに融合した免疫原性ペプチドエピトープは、天然に存在しない配列である。一部の実施形態では、Ｎ末端および／またはＣ末端隣接ポリペプチドは、免疫原性合成長鎖ペプチド（ＳＬＰ）に由来する。一部の実施形態では、Ｎ末端および／またはＣ末端隣接ポリペプチドは、疾患関連免疫原性ＳＬＰに由来する。一部の実施形態では、Ｎ末端隣接ポリペプチドは配列番号５〜１０のいずれか１つのアミノ酸配列を含み、および／またはＣ末端隣接ポリペプチドは配列番号１１〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。
【００９６】
本明細書で記載される免疫原性エピトープを含む抗原のいずれかによる一部の実施形態では、抗原またはその中に含有される免疫原性エピトープは、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原に由来する。一部の実施形態では、抗原またはその中に含有される免疫原性エピトープは、ＨＰＶ−１６、１８、２６、３１、３３、３５、３９、４５、５１、５２、５３、５６、５８、５９、６６、６８、７３、および８２のいずれかに由来する。一部の実施形態では、抗原またはその中に含有される免疫原性エピトープは、ＨＰＶ−１６抗原またはＨＰＶ−１８抗原に由来する。さらなる実施形態では、抗原またはその中に含有される免疫原性エピトープは、ＨＰＶ  Ｅ６抗原（例えば、ＨＰＶ−１６またはＨＰＶ−１８  Ｅ６抗原）またはＨＰＶ  Ｅ７抗原（例えば、ＨＰＶ−１６またはＨＰＶ−１８  Ｅ７抗原）に由来する。一部の実施形態では、抗原は、ＨＰＶ  Ｅ６および／またはＥ７に由来するＨＬＡ−Ａ２拘束性ペプチドを含む。一部の実施形態では、抗原は、残基２９と３８との間にＨＰＶ−１６  Ｅ６タンパク質の断片（すなわち、ＨＰＶ−１６  Ｅ６２９〜３８）を含む。一部の実施形態では、抗原は、残基４８と５７との間にＨＰＶ−１６  Ｅ６タンパク質の断片（すなわち、ＨＰＶ−１６  Ｅ６４８〜５７）を含む。一部の実施形態では、抗原は、残基１１と２０との間にＨＰＶ−１６  Ｅ７タンパク質の断片（すなわち、ＨＰＶ−１６  Ｅ７１１〜２０）を含む。一部の実施形態では、抗原は、残基４９と５７との間にＨＰＶ−１６  Ｅ７タンパク質の断片（すなわち、ＨＰＶ−１６  Ｅ７４９〜５７）を含む。一部の実施形態では、抗原は、配列番号１〜４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗原は、配列番号５〜１０のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＮ末端ポリペプチドおよび配列番号１１〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣ末端ポリペプチドを隣接した、配列番号１〜４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗原は、配列番号１８〜２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。
【００９７】
本明細書で記載される免疫原性エピトープを含む抗原のいずれかによる一部の実施形態では、抗原またはその中に含有される免疫原性エピトープは、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）抗原に由来する。一部の実施形態では、抗原またはその中に含有される免疫原性エピトープは、Ｍｅｒｌｉｎ、Ｔｏｌｅｄｏ、Ｄａｖｉｓ、Ｅｓｐ、Ｋｅｒｒ、Ｓｍｉｔｈ、ＴＢ４０Ｅ、ＴＢ４０Ｆ、ＡＤ１６９、またはＴｏｗｎｅ  ＨＣＭＶ株のいずれかに由来する。一部の実施形態では、抗原またはその中に含有される免疫原性エピトープは、ＡＤ１６９  ＨＣＭＶ株抗原またはＭｅｒｌｉｎ  ＨＣＭＶ株抗原に由来する。さらなる実施形態では、抗原またはその中に含有される免疫原性エピトープは、ｐＵＬ４８、ｐＵＬ４７、ｐＵＬ３２、ｐＵＬ８２、ｐＵＬ８３、およびｐＵＬ９９、ｐＵＬ６９、ｐＵＬ２５、ｐＵＬ５６、ｐＵＬ９４、ｐＵＬ９７、ｐＵＬ１４４、またはｐＵＬ１２８に由来する。一部の実施形態では、抗原は、ＨＣＭＶ  ｐＵＬ８３に由来するＨＬＡ−Ａ２拘束性ペプチドを含む。
【００９８】
本明細書で記載される免疫原性エピトープを含む抗原のいずれかによる一部の実施形態では、抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る。一部の実施形態では、抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る。一部の実施形態では、抗原は、ＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る。一部の実施形態では、抗原は、複数の免疫原性エピトープを含み、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドおよびＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープの一部は、同じ供給源に由来する。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのすべては、同じ供給源に由来する。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのいずれも、同じ供給源に由来しない。
【００９９】
本明細書で記載される改変Ｔ細胞のいずれかによる一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、複数の免疫原性エピトープを含む複数の抗原を含む。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープを含む複数の抗原を含む改変Ｔ細胞の個体への投与後、複数の免疫原性エピトープのいずれも、他の免疫原性エピトープのいずれに対する個体における免疫応答も減少させない。
【０１００】
本明細書で記載される改変Ｔ細胞のいずれかによる一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、抗原およびアジュバントを含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、約１ｐＭ〜約１０ｍＭの濃度でアジュバントを含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、約０．１μＭ〜約１０ｍＭの濃度でアジュバントを含む。例えば、一部の実施形態では、改変Ｔ細胞におけるアジュバントの濃度は、約１ｐＭ、約１０ｐＭ、約１００ｐＭ、約１ｎＭ、約１０ｎＭ、約１００ｎＭ、約１μＭ、約１０μＭ、約１００μＭ、約１ｍＭ、または約１０ｍＭ未満のいずれかである。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞におけるアジュバントの濃度は約１０ｍＭよりも大きい。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞における抗原の濃度は、約１ｐＭ〜約１０ｐＭ、約１０ｐＭ〜約１００ｐＭ、約１００ｐＭ〜約１ｎＭ、約１ｎＭ〜約１０ｎＭ、約１０ｎＭ〜約１００ｎＭ、約１００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１００μＭ、約１００μＭ〜約１ｍＭ、または１ｍＭ〜約１０ｍＭのいずれかである。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞における抗原のアジュバントに対するモル比は、約１００００：１〜約１：１００００のいずれかである。例えば、一部の実施形態では、改変Ｔ細胞における抗原のアジュバントに対するモル比は、約１００００：１、約１０００：１、約２００：１、約１００：１、約１０：１、約１：１、約１：１０、約１：１００、約１：１０００、または約１：１００００のいずれかである。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞における抗原のアジュバントに対するモル比は、約１００００：１〜約１０００：１、約１０００：１〜約１００：１、約１００：１〜約１０：１、約１０：１〜約１：１、約１：１〜約１：１０、約１：１０〜約１：１００、約１：１００〜約１：１０００、約１：１０００〜約１：１００００のいずれかである。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ａ）抗原、ｂ）抗原および少なくとも１つの他の抗原、ならびに／またはｃ）抗原およびアジュバント、を含む複合体を含む。
【０１０１】
本明細書で記載される改変Ｔ細胞のいずれかによる一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、作用物質をさらに含み、この作用物質は、この作用物質を含まない対応する改変Ｔ細胞と比較して、改変Ｔ細胞の生存能力および／または機能を増強する。一部の実施形態では、作用物質は安定剤または補因子である。一部の実施形態では、作用物質はアルブミンである。一部の実施形態では、アルブミンは、マウス、ウシ、またはヒトアルブミンである。一部の実施形態では、作用物質は、二価金属カチオン、グルコース、ＡＴＰ、カリウム、グリセロール、トレハロース、Ｄ−スクロース、ＰＥＧ１５００、Ｌ−アルギニン、Ｌ−グルタミン、またはＥＤＴＡである。
【０１０２】
本明細書で記載される方法または組成物のいずれか１つによる一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、作用物質を含まない対応する複数の改変Ｔ細胞と比較して、改変Ｔ細胞の生存能力および／または機能を増強する作用物質をさらに含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、凍結融解サイクル時に改変Ｔ細胞の生存能力および／または機能を増強する作用物質を、前記作用物質を含まない対応する改変Ｔ細胞と比較して、さらに含む。一部の実施形態では、作用物質は、冷凍保存（cyropreservation）剤および／または低温保存剤（hypothermic  preservation  agent）である。一部の実施形態では、冷凍保存剤も低温保存剤も、任意の凍結融解サイクルの前に作用物質を含まない対応する改変Ｔ細胞と比較して、作用物質を含む改変Ｔ細胞において１０％または２０％を上回る細胞死を引き起こさない。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞の少なくとも約７０％、約８０％、または約９０％は、最高で１、２、３、４、５回の凍結融解サイクルの後に生存可能である。一部の実施形態では、作用物質は、エンドサイトーシスを増強する化合物、安定剤、または補因子である。一部の実施形態では、作用物質はアルブミンである。一部の実施形態では、アルブミンは、マウス、ウシ、またはヒトアルブミンである。一部の実施形態では、作用物質はヒトアルブミンである。一部の実施形態では、作用物質は、二価金属カチオン、グルコース、ＡＴＰ、カリウム、グリセロール、トレハロース、Ｄ−スクロース、ＰＥＧ１５００、Ｌ−アルギニン、Ｌ−グルタミン、またはＥＤＴＡのうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、二価金属カチオンは、Ｍｇ２＋、Ｚｎ２＋またはＣａ２＋のうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、作用物質は、ピルビン酸ナトリウム、アデニン、トレハロース、デキストロース、マンノース、スクロース、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ＤＭＳＯ、ＨＥＰＥＳ、グリセロール、グルタチオン、イノシン、二塩基性リン酸ナトリウム、一塩基性リン酸ナトリウム、ナトリウム金属イオン、カリウム金属イオン、マグネシウム金属イオン、塩化物、アセテート、グルコネート、スクロース、水酸化カリウム、または水酸化ナトリウムのうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、作用物質は、ピルビン酸ナトリウム、アデニン、Ｒｅｊｕｖｅｓｏｌ（登録商標）、トレハロース、デキストロース、マンノース、スクロース、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ（登録商標）、ＤＭＳＯ、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ２、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ５、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１５、ＨＥＰＥＳ、グリセロール、グルタチオン、ＨｙｐｏＴｈｅｒｍｏｓｏｌ（登録商標）のうちの１つまたは複数である。
【０１０３】
本明細書で記載される改変Ｔ細胞のいずれかによる一部の実施形態では、改変Ｔ細胞はさらなる改変を含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩ発現を減少させるさらなる改変を含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩ発現を増加させるさらなる改変を含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩＩ発現を減少させるさらなる改変を含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩＩ発現を増加させるさらなる改変を含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答は、さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答と比較して低下している。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞が投与された個体におけるそれらの循環半減期は、さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞が投与された個体におけるそれらの循環半減期と比較して増加している。
【０１０４】
ある特定の態様では、配列番号１８〜２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む抗原を含む改変Ｔ細胞が提供される。一部の実施形態では、抗原は、改変Ｔ細胞の多数の区画に存在する。一部の実施形態では、抗原は、改変Ｔ細胞の細胞質基質および／または小胞に存在する。一部の実施形態では、小胞はエンドソームである。一部の実施形態では、抗原またはその中に含有される免疫原性エピトープは、改変Ｔ細胞の表面に結合している。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、またはナチュラルキラーＴ細胞のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ＣＤ３＋  Ｔ細胞、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＡ＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＯ＋  Ｔ細胞、またはγδ−Ｔ細胞のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞はアジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ａ）インプットＴ細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成するステップ；およびｂ）抗原が摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプットＴ細胞と抗原とをインキュベートし、それによって、抗原を含む改変Ｔ細胞を作出するステップを含むプロセスによって調製される。一部の実施形態では、摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる抗原の濃度は約１ｐＭ〜１０ｍＭである。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、本明細書で記載されるアジュバントのいずれかなどのアジュバントをさらに含む。
【０１０５】
ある特定の態様では、抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞であって、抗原は免疫原性エピトープを含み、改変Ｔ細胞は、ａ）インプットＴ細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きなインプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成するステップ；ならびにｂ）抗原およびアジュバントが摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプットＴ細胞と抗原およびアジュバントとをインキュベートし、それによって、抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞を作出するステップを含むプロセスによって調製される改変Ｔ細胞が提供される。一部の実施形態では、摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる抗原の濃度は約１ｐＭ〜１０ｍＭであり、および／または摂動インプットＴ細胞とインキュベートされるアジュバントの濃度は約１ｐＭ〜１０ｍＭである。一部の実施形態では、摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる抗原の濃度は約０．１μＭ〜１０ｍＭであり、および／または摂動インプットＴ細胞とインキュベートされるアジュバントの濃度は約０．１μＭ〜１０ｍＭである。一部の実施形態では、摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる抗原のアジュバントに対する比は約１００００：１〜約１：１００００である。
【０１０６】
ある特定の態様では、抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞であって、抗原は免疫原性エピトープを含み、改変Ｔ細胞は、ａ）アジュバントを含むインプットＴ細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成するステップ；ならびにｂ）抗原が摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプットＴ細胞と抗原とをインキュベートし、それによって、抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞を作出するステップを含むプロセスによって調製される改変Ｔ細胞が提供される。一部の実施形態では、摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる抗原の濃度は約１ｐＭ〜１０ｍＭである。
【０１０７】
ある特定の態様では、抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞であって、抗原は免疫原性エピトープを含み、改変Ｔ細胞は、ａ）抗原を含むインプットＴ細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、アジュバントが通過するのに十分に大きなインプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成するステップ；ならびにｂ）アジュバントが摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプットＴ細胞とアジュバントとをインキュベートし、それによって、抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞を作出するステップを含むプロセスによって調製される改変Ｔ細胞が提供される。一部の実施形態では、摂動インプットＴ細胞とインキュベートされるアジュバントの濃度は約１ｐＭ〜１０ｍＭである。
【０１０８】
本明細書で記載される改変Ｔ細胞は、一部の実施形態では、インプットＴ細胞を通過させる細胞変形狭窄を採用するプロセスによって調製される。一部の実施形態では、狭窄の直径は、インプットＴ細胞の直径未満である。一部の実施形態では、狭窄の直径は、インプットＴ細胞の直径の約２０％〜約９９％である。一部の実施形態では、狭窄の直径は、インプットＴ細胞の直径の約２０％〜約６０％である。一部の実施形態では、細胞変形狭窄は、本明細書で記載されるマイクロ流体チャネルのいずれかなどのマイクロ流体チャネルに含有される。マイクロ流体チャネルは、下記のマイクロ流体デバイスと題された節で記載されるものなど、本明細書で記載されるマイクロ流体デバイスのいずれかに含有され得る。ゆえに、インプットＴ細胞を通過させる細胞変形狭窄を含むマイクロ流体チャネルを採用するプロセスによって調製される本明細書で記載される改変Ｔ細胞のいずれかによる一部の実施形態では、プロセスは、本明細書で記載されるマイクロ流体システムのいずれかに含有される細胞変形狭窄を含むマイクロ流体チャネルにインプットＴ細胞を通すステップを含む。一部の実施形態では、インプットＴ細胞に、それが狭窄を通過するときに変形力が印加され、それによってインプットＴ細胞の摂動が引き起こされる。
【０１０９】
インプットＴ細胞は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染の部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、および腫瘍を含めた多くの供給源から得ることができる。本発明の一部の実施形態では、当技術分野において入手可能ないくつものＴ細胞系が使用され得る。本発明の一部の実施形態では、Ｔ細胞は、Ｆｉｃｏｌｌ（商標）分離など、当業者に公知のいくつもの技法を使用して対象から回収された血液の単位から得ることができる。一部の実施形態では、個体の循環血液由来の細胞はアフェレーシスによって得られる。アフェレーシス産物は、典型的に、Ｔ細胞、単球、顆粒細胞、Ｂ細胞、他の有核白血球、赤血球、および血小板を含めたリンパ球を含有する。一部の実施形態では、アフェレーシスによって回収された細胞を洗浄して、血漿画分を除去し、後続のプロセシングステップのために適当な緩衝液または培地に細胞を入れてよい。一部の実施形態では、細胞をリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で洗浄する。一部の実施形態では、洗浄液はカルシウムを欠き、マグネシウムを欠いてもよくまたはすべての二価カチオンではないとしても多くを欠いてもよい。当業者であれば容易に解するはずであるように、洗浄ステップは、製造業者の指示に従い、半自動「フロースルー」遠心分離（例えば、Ｃｏｂｅ  ２９９１セルプロセッサー、Ｂａｘｔｅｒ  ＣｙｔｏＭａｔｅ、またはＨａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ  Ｃｅｌｌ  Ｓａｖｅｒ  ５）を使用することによってなど、当業者に公知の方法によって遂行され得る。洗浄後、細胞は、バッファ有りまたは無しのＣａ２＋不含、Ｍｇ２＋不含ＰＢＳ、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ  Ａ、または他の食塩液など、多様な生体適合性緩衝液に再懸濁され得る。あるいは、アフェレーシス試料の望ましくない構成要素は除去され得、細胞は培養培地に直接再懸濁され得る。
【０１１０】
一部の実施形態では、Ｔ細胞は、例えばＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配による遠心分離によってまたは向流遠心分離溶出（counterflow  centrifugal  elutriation）によって、赤血球を溶解しかつ単球を枯渇させることによって、末梢血リンパ球から単離される。ＣＤ３＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ４５ＲＯ＋  Ｔ細胞、およびγδ−Ｔ細胞など、Ｔ細胞の特異的亜集団は、陽性または陰性選択技法によってさらに単離され得る。例えば、一部の実施形態では、Ｔ細胞は、所望のＴ細胞の陽性選択に十分な期間の、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ−４５０  ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｔなどの抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８（すなわち、３×２８）コンジュゲートビーズとのインキュベーションによって単離される。一部の実施形態では、期間は約３０分間である。一部の実施形態では、期間は３０分間〜３６時間またはそれよりも長い時間、およびその間にあるすべての整数値に及ぶ。一部の実施形態では、期間は少なくとも１、２、３、４、５、または６時間である。一部の実施形態では、期間は１０〜２４時間である。一部の実施形態では、インキュベーション期間は２４時間である。白血病を有する患者由来のＴ細胞の単離に関して、２４時間などのより長いインキュベーション時間の使用は、細胞収率を増加させ得る。腫瘍組織からまたは免疫に欠陥のある個体から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を単離することにおいてなど、他の細胞タイプと比較してＴ細胞がほとんどない任意の状況において、より長いインキュベーション時間を使用してＴ細胞を単離し得る。さらに、より長いインキュベーション時間の使用は、ＣＤ８＋  Ｔ細胞の捕捉の効率を増加させ得る。ゆえに、時間を単に短くするもしくは長くすることによって、Ｔ細胞はＣＤ３／ＣＤ２８ビーズに結合することが可能となり、および／またはビーズのＴ細胞に対する比を増加させるもしくは減少させることによって、Ｔ細胞の亜集団は、培養開始時にもしくはプロセス中の他の時点で、好んでもしくは逆らって優先的に選択され得る。加えて、ビーズまたは他の表面上の抗ＣＤ３および／または抗ＣＤ２８抗体の比を増加させるまたは減少させることによって、Ｔ細胞の亜集団は、培養開始時にまたは他の所望の時点で、好んでまたは逆らって優先的に選択され得る。当業者であれば、複数ラウンドの選択も本発明の状況において使用され得ることを認識するはずである。一部の実施形態では、活性化および増殖プロセスにおいて、選択手順を実施し、「非選択」細胞を使用すること（陰性選択）が望ましくあり得る。「非選択」細胞は、さらなるラウンドの選択にも供され得る。
【０１１１】
陰性選択によるＴ細胞集団の富化は、陰性選択される細胞に固有の表面マーカーに対する抗体の組合せを用いて遂行され得る。１つの方法は、陰性選択される細胞上に存在する細胞表面マーカーに対するモノクローナル抗体のカクテルを使用する陰性磁気免疫付着またはフローサイトメトリーによる細胞選別および／または選択である。例えば、陰性選択によりＣＤ４＋細胞を富化するために、モノクローナル抗体カクテルは、典型的に、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ−ＤＲ、およびＣＤ８に対する抗体を含む。一部の実施形態では、ＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＧＩＴＲ＋、およびＦｏｘＰ３＋を典型的に発現する制御性Ｔ細胞を富化するまたは陽性選択することが望ましくあり得る。あるいは、一部の実施形態では、Ｔ制御性細胞を、抗ＣＤ２５コンジュゲートビーズまたは選択の他の同様の方法によって枯渇させる。
【０１１２】
陽性または陰性選択による細胞の所望の集団の単離に関して、細胞および表面（例えば、ビーズなどの粒子）の濃度は様々であり得る。一部の実施形態では、ビーズと細胞とを一緒に混合する体積を大幅に減少させて（すなわち、細胞の濃度を増加させる）、細胞とビーズとの最大接触を確保することが望ましくあり得る。例えば、一部の実施形態では、約２０億個細胞／ｍＬの濃度が使用される。一部の実施形態では、約１０億個細胞／ｍＬの濃度が使用される。一部の実施形態では、約１億個細胞／ｍＬを上回る濃度が使用される。一部の実施形態では、約１０００万個、１５００万個、２０００万個、２５００万個、３０００万個、３５００万個、４０００万個、４５００万個、または５０００万個細胞／ｍＬのいずれかの細胞の濃度が使用される。一部の実施形態では、約７５００万個、８０００万個、８５００万個、９０００万個、９５００万個、または１億個細胞／ｍＬのいずれかの細胞の濃度が使用される。一部の実施形態では、約１億２５００万個または約１億５０００万個細胞／ｍＬの濃度が使用される。高濃度を使用することは、細胞収率、細胞活性化、および細胞増殖の増加をもたらし得る。さらに、高い細胞濃度の使用は、ＣＤ２８陰性Ｔ細胞など、目的の標的抗原を弱く発現し得る細胞の、または多くの腫瘍細胞が存在する試料（すなわち、白血病血液、腫瘍組織等）からの細胞のより効率的な捕捉を可能にする。細胞のそのような集団は、治療的価値を有し得、得ることが望ましい。例えば、高濃度の細胞を使用することは、より弱いＣＤ２８発現を通常有するＣＤ８＋  Ｔ細胞のより効率的な選択を可能にする。
【０１１３】
組成物
ある特定の態様では、本明細書で記載される実施形態のいずれかに従った、抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞を含む組成物（例えば、医薬組成物）が提供される。一部の実施形態では、組成物は、改変Ｔ細胞および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物である。
【０１１４】
免疫応答をモジュレートするための方法
ある特定の態様では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、本明細書で記載される実施形態のいずれかに従った改変Ｔ細胞、本明細書で記載される実施形態のいずれかに従った組成物、または本明細書で記載される実施形態のいずれかに従った医薬組成物を個体に投与するステップを含む方法が提供される。
【０１１５】
ある特定の態様では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、ａ）インプットＴ細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きなインプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成し、抗原は免疫原性エピトープを含むステップ；ｂ）抗原およびアジュバントが摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプットＴ細胞と抗原およびアジュバントとをインキュベートし、それによって、抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞を作出するステップ；ならびにｃ）改変Ｔ細胞を個体に投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる抗原の濃度は約１ｐＭ〜１０ｍＭであり、および／または摂動インプットＴ細胞とインキュベートされるアジュバントの濃度は約１ｐＭ〜１０ｍＭである。一部の実施形態では、摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる抗原のアジュバントに対する比は約１００００：１〜約１：１００００である。一部の実施形態では、摂動インプットＴ細胞とインキュベートされるアジュバントの濃度は約０．１μＭ〜約１０ｍＭである。例えば、一部の実施形態では、摂動Ｔ細胞とインキュベートされるアジュバントの濃度は、約１ｐＭ、約１０ｐＭ、約１００ｐＭ、約１ｎＭ、約１０ｎＭ、約１００ｎＭ、約１μＭ、約１０μＭ、約１００μＭ、約１ｍＭ、または約１０ｍＭ未満のいずれかである。一部の実施形態では、摂動Ｔ細胞とインキュベートされるアジュバントの濃度は約１０ｍＭよりも大きい。一部の実施形態では、摂動Ｔ細胞とインキュベートされる抗原の濃度は、約１ｐＭ〜約１０ｐＭ、約１０ｐＭ〜約１００ｐＭ、約１００ｐＭ〜約１ｎＭ、約１ｎＭ〜約１０ｎＭ、約１０ｎＭ〜約１００ｎＭ、約１００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１００μＭ、約１００μＭ〜約１ｍＭ、または１ｍＭ〜約１０ｍＭのいずれかである。一部の実施形態では、摂動Ｔ細胞とインキュベートされる抗原のアジュバントに対するモル比は、約１００００：１〜約１：１００００のいずれかである。例えば、一部の実施形態では、摂動Ｔ細胞とインキュベートされる抗原のアジュバントに対するモル比は、約１００００：１、約１０００：１、約１００：１、約１０：１、約１：１、約１：１０、約１：１００、約１：１０００、または約１：１００００のいずれかである。一部の実施形態では、摂動Ｔ細胞とインキュベートされる抗原のアジュバントに対するモル比は、約１００００：１〜約１０００：１、約１０００：１〜約１００：１、約１００：１〜約１０：１、約１０：１〜約１：１、約１：１〜約１：１０、約１：１０〜約１：１００、約１：１００〜約１：１０００、約１：１０００〜約１：１００００のいずれかである。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントはナノ粒子中に封入される。
【０１１６】
ある特定の態様では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、ａ）アジュバントを含むインプットＴ細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成し、抗原は免疫原性エピトープを含むステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプットＴ細胞と抗原とをインキュベートし、それによって、抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞を作出するステップ；ならびにｃ）改変Ｔ細胞を個体に投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる抗原の濃度は約１ｐＭ〜１０ｍＭである。一部の実施形態では、抗原はナノ粒子中に封入される。
【０１１７】
ある特定の態様では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、ａ）抗原を含むインプットＴ細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、抗原は免疫原性エピトープを含み、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、アジュバントが通過するのに十分に大きなインプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成するステップ；ｂ）アジュバントが摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプットＴ細胞とアジュバントとをインキュベートし、それによって、抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞を作出するステップ；ならびにｃ）改変Ｔ細胞を個体に投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、摂動インプットＴ細胞とインキュベートされるアジュバントの濃度は約１ｐＭ〜１０ｍＭである。一部の実施形態では、アジュバントはナノ粒子中に封入される。
【０１１８】
改変Ｔ細胞を採用する、免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによる一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、抗原およびアジュバントを含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、約１ｐＭ〜約１０ｍＭの濃度で抗原を含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、約１ｐＭ〜約１０ｍＭの濃度でアジュバントを含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞における抗原のアジュバントに対する比は約１００００：１〜約１：１００００である。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ａ）抗原、ｂ）抗原および少なくとも１つの他の抗原、ならびに／またはｃ）抗原およびアジュバント、を含む複合体を含む。
【０１１９】
ある特定の態様では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、ａ）配列番号１８〜２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む抗原を含む改変Ｔ細胞を個体に投与するステップ；およびｂ）アジュバントを個体に投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、アジュバントは、改変Ｔ細胞と並行してまたは同時に投与される。一部の実施形態では、アジュバントおよび改変Ｔ細胞は逐次的に投与される。一部の実施形態では、アジュバントは、改変Ｔ細胞の投与前に投与される。一部の実施形態では、アジュバントは、改変Ｔ細胞の投与後に投与される。一部の実施形態では、アジュバントは、全身に、例えば静脈内に投与される。一部の実施形態では、アジュバントは、局所的に、例えば腫瘍内に投与される。一部の実施形態では、アジュバントは細胞に含有されず、例えばアジュバントは溶液中に遊離している。一部の実施形態では、アジュバントは、Ｔ細胞などの細胞に含有される。一部の実施形態では、アジュバントは、本明細書で記載される細胞内送達の方法のいずれかに従って、Ｔ細胞に送達される。一部の実施形態では、抗原を含む改変Ｔ細胞は、ｃ）インプットＴ細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成するステップ；およびｄ）抗原が摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプットＴ細胞と抗原とをインキュベートし、それによって、抗原を含む改変Ｔ細胞を作出するステップを含むプロセスによって調製される。一部の実施形態では、摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる抗原の濃度は約１ｐＭ〜１０ｍＭである。一部の実施形態では、抗原はナノ粒子中に封入される。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞はアジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞に含有されるアジュバントおよびステップｂ）のアジュバントは、同じ化合物である。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞に含有されるアジュバントおよびステップｂ）のアジュバントは、異なる化合物である。
【０１２０】
ある特定の態様では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、ａ）インプットＴ細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成し、抗原は免疫原性エピトープを含むステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプットＴ細胞と抗原とをインキュベートし、それによって、抗原を含む改変Ｔ細胞を作出するステップ；ｃ）改変Ｔ細胞を個体に投与するステップ；およびｄ）アジュバントを個体に投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、アジュバントは、改変Ｔ細胞と並行してまたは同時に投与される。一部の実施形態では、アジュバントおよび改変Ｔ細胞は逐次的に投与される。一部の実施形態では、アジュバントは、改変Ｔ細胞の投与前に投与される。一部の実施形態では、アジュバントは、改変Ｔ細胞の投与後に投与される。一部の実施形態では、アジュバントは、全身に、例えば静脈内に投与される。一部の実施形態では、アジュバントは、局所的に、例えば腫瘍内に投与される。一部の実施形態では、アジュバントは細胞に含有されず、例えばアジュバントは溶液中に遊離している。一部の実施形態では、アジュバントは、Ｔ細胞などの細胞に含有される。一部の実施形態では、アジュバントは、本明細書で記載される細胞内送達の方法のいずれかに従って、Ｔ細胞に送達される。一部の実施形態では、摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる抗原の濃度は約１ｐＭ〜１０ｍＭである。一部の実施形態では、抗原はナノ粒子中に封入される。
【０１２１】
本明細書で記載される個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによる一部の実施形態では、免疫応答は増強される。一部の実施形態では、増強した免疫応答は抗原に向けられたものである。
【０１２２】
本明細書で記載される個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによる一部の実施形態では、方法は、インプットＴ細胞を通過させる細胞変形狭窄を採用する。一部の実施形態では、狭窄の直径は、インプットＴ細胞の直径未満である。一部の実施形態では、狭窄の直径は、インプットＴ細胞の直径の約２０％〜約９９％である。一部の実施形態では、狭窄の直径は、インプットＴ細胞の直径の約２０％〜約６０％である。一部の実施形態では、細胞変形狭窄は、本明細書で記載されるマイクロ流体チャネルのいずれかなどのマイクロ流体チャネルに含有される。マイクロ流体チャネルは、下記のマイクロ流体デバイスと題された節で記載されるものなど、本明細書で記載されるマイクロ流体デバイスのいずれかに含有され得る。ゆえに、インプットＴ細胞を通過させる細胞変形狭窄を含むマイクロ流体チャネルを採用する、本明細書で記載される個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによる一部の実施形態では、方法は、本明細書で記載されるマイクロ流体システムのいずれかに含有される細胞変形狭窄を含むマイクロ流体チャネルにインプットＴ細胞を通すステップを含む。一部の実施形態では、インプットＴ細胞に、それが狭窄を通過するときに変形力が印加され、それによってインプットＴ細胞の摂動が引き起こされる。
【０１２３】
本明細書で記載される個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによる一部の実施形態では、方法は、抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞を採用する。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、改変Ｔ細胞の細胞質基質および／または小胞に存在する。一部の実施形態では、小胞はエンドソームである。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、改変Ｔ細胞の多数の区画に存在する。一部の実施形態では、抗原または免疫原性エピトープは、改変Ｔ細胞の表面に結合している。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、またはナチュラルキラーＴ細胞のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ＣＤ３＋  Ｔ細胞、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＡ＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＯ＋  Ｔ細胞、またはγδ−Ｔ細胞のうちの１つまたは複数を含む。
【０１２４】
本明細書で記載される個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによる一部の実施形態では、方法は、アジュバントを含む改変Ｔ細胞を採用する。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＩＦＮ−α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ−Ｉアゴニスト、またはポリＩ：Ｃである。一部の実施形態では、アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮである。一部の実施形態では、アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮである。一部の実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮは、長さが約５０ヌクレオチド以下（約４５、４０、３５、３０、２５、２０、またはそれを下回る数のいずれか以下など）である。一部の実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮは、クラスＡ  ＣｐＧ  ＯＤＮ、クラスＢ  ＣｐＧ  ＯＤＮ、またはクラスＣ  ＣｐＧ  ＯＤＮである。一部の実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮは、配列番号２６〜３７のいずれか１つのヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮは、配列番号３０のヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮは、配列番号３１のヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、複数の異なるＣｐＧ  ＯＤＮを含む。例えば、一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、クラスＡ、クラスＢ、およびクラスＣ  ＣｐＧ  ＯＤＮの中から選択される複数の異なるＣｐＧ  ＯＤＮを含む。
【０１２５】
例示的なアジュバントは、限定されることなく、インターフェロン遺伝子刺激因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニスト、レチノイン酸誘導性（induicible）遺伝子Ｉ（ＲＩＧ−Ｉ）アゴニスト、ならびにＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、および／またはＴＬＲ９に対するアゴニストを含む。例示的なアジュバントは、限定されることなく、ＣｐＧ  ＯＤＮ、インターフェロン−α（ＩＦＮ−α）、ポリイノシン酸：ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）、イミキモド（Ｒ８３７）、レシキモド（Ｒ８４８）、またはリポ多糖（ＬＰＳ）を含む。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧ  ＯＤＮ、ＬＰＳ、ＩＦＮ−α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ−Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、またはＴＬＲ９アゴニストである。特定の実施形態では、アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮである。一部の実施形態では、アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮである。一部の実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮは、クラスＡ  ＣｐＧ  ＯＤＮ、クラスＢ  ＣｐＧ  ＯＤＮ、またはクラスＣ  ＣｐＧ  ＯＤＮである。一部の実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮアジュバントは、ＣｐＧ  ＯＤＮ  １０１８、ＣｐＧ  ＯＤＮ  １５８５、ＣｐＧ  ＯＤＮ  ２２１６、ＣｐＧ  ＯＤＮ  ２３３６、ＣｐＧ  ＯＤＮ  １６６８、ＣｐＧ  ＯＤＮ  １８２６、ＣＰＧ  ＯＤＮ  ２００６、ＣｐＧ  ＯＤＮ  ２００７、ＣｐＧ  ＯＤＮ  ＢＷ００６、ＣｐＧ  ＯＤＮ  Ｄ−ＳＬ０１、ＣｐＧ  ＯＤＮ  ２３９５、ＣｐＧ  ＯＤＮ  Ｍ３６２、ＣｐＧ  ＯＤＮ  Ｄ−ＳＬ０３の群から選択されたものを含む。一部の実施形態では、ＣｐＧ  ＯＤＮアジュバントは、ＣｐＧ  ＯＤＮ  １８２６（ＴＣＣＡＴＧＡＣＧＴＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴ；配列番号３０）またはＣｐＧ  ＯＤＮ  ２００６（ＣｐＧ  ＯＤＮ  ７９０９としても公知）（ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ；配列番号３０）オリゴヌクレオチドである。一部の実施形態では、アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮ  ７９０９である。一部の実施形態では、ＲＩＧ−Ｉアゴニストは、ポリイノシン酸：ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）を含む。複数のアジュバントを抗原とともに使用して、免疫応答の誘発も増強し得る。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、１種を上回る種類のアジュバントを含む。複数のアジュバントを抗原とともに使用して、免疫応答の誘発も増強し得る。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、１種を上回る種類のアジュバントを含む。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、アジュバントＣｐＧ  ＯＤＮ、ＬＰＳ、ＩＦＮ−α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ−Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、またはＴＬＲ９アゴニストの任意の組合せを含む。
【０１２６】
本明細書で記載される実施形態のいずれかでは、別様に示されていない限り、アジュバントは、（ａ）摂動インプットＴ細胞とインキュベートされかつそれを通過するアジュバント、または（ｂ）個体に改変Ｔ細胞と共投与されるアジュバント、を指し得る。
【０１２７】
本明細書で記載される個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによる一部の実施形態では、方法は、免疫原性エピトープを含む抗原を含む改変Ｔ細胞を採用する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは疾患関連抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、罹患細胞から単離されたペプチドまたはｍＲＮＡに由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、疾患細胞において異所的に発現したまたは過剰発現したタンパク質に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、新抗原、例えばがん関連新抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、ネオエピトープ、例えばがん関連ネオエピトープを含む。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは非自己抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、変異したまたは別様に変更した自己抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、または真菌抗原に由来する。一部の実施形態では、抗原は複数の免疫原性エピトープを含む。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープの一部は、同じ供給源に由来する。例えば、一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープの一部は、同じウイルス抗原に由来する。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのすべては、同じ供給源に由来する。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのいずれも、同じ供給源に由来しない。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は複数の異なる抗原を含む。
【０１２８】
免疫原性エピトープを含む抗原を含む改変Ｔ細胞を採用する、本明細書で記載される個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによる一部の実施形態では、抗原はポリペプチドであり、免疫原性エピトープは免疫原性ペプチドエピトープである。一部の実施形態では、免疫原性ペプチドエピトープは、Ｎ末端隣接ポリペプチドおよび／またはＣ末端隣接ポリペプチドに融合している。一部の実施形態では、Ｎ末端隣接ポリペプチドおよび／またはＣ末端隣接ポリペプチドに融合した免疫原性ペプチドエピトープは、天然に存在しない配列である。一部の実施形態では、Ｎ末端および／またはＣ末端隣接ポリペプチドは、免疫原性合成長鎖ペプチド（ＳＬＰ）に由来する。一部の実施形態では、Ｎ末端および／またはＣ末端隣接ポリペプチドは、疾患関連免疫原性ＳＬＰに由来する。一部の実施形態では、Ｎ末端隣接ポリペプチドは配列番号５〜１０のいずれか１つのアミノ酸配列を含み、および／またはＣ末端隣接ポリペプチドは配列番号１１〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。
【０１２９】
免疫原性エピトープを含む抗原を含む改変Ｔ細胞を採用する、本明細書で記載される個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによる一部の実施形態では、抗原またはその中に含有される免疫原性エピトープは、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原に由来する。一部の実施形態では、抗原またはその中に含有される免疫原性エピトープは、ＨＰＶ−１６、１８、２６、３１、３３、３５、３９、４５、５１、５２、５３、５６、５８、５９、６６、６８、７３、および８２のいずれかに由来する。一部の実施形態では、抗原またはその中に含有される免疫原性エピトープは、ＨＰＶ−１６抗原またはＨＰＶ−１８抗原に由来する。さらなる実施形態では、抗原またはその中に含有される免疫原性エピトープは、ＨＰＶ  Ｅ６抗原（例えば、ＨＰＶ−１６またはＨＰＶ−１８  Ｅ６抗原）またはＨＰＶ  Ｅ７抗原（例えば、ＨＰＶ−１６またはＨＰＶ−１８  Ｅ７抗原）に由来する。一部の実施形態では、抗原は、ＨＰＶ  Ｅ６および／またはＥ７に由来するＨＬＡ−Ａ２拘束性ペプチドを含む。一部の実施形態では、抗原は、残基２９と３８との間にＨＰＶ−１６  Ｅ６タンパク質の断片（すなわち、ＨＰＶ−１６  Ｅ６２９〜３８）を含む。一部の実施形態では、抗原は、残基４８と５７との間にＨＰＶ−１６  Ｅ６タンパク質の断片（すなわち、ＨＰＶ−１６  Ｅ６４８〜５７）を含む。一部の実施形態では、抗原は、残基１１と２０との間にＨＰＶ−１６  Ｅ７タンパク質の断片（すなわち、ＨＰＶ−１６  Ｅ７１１〜２０）を含む。一部の実施形態では、抗原は、残基４９と５７との間にＨＰＶ−１６  Ｅ７タンパク質の断片（すなわち、ＨＰＶ−１６  Ｅ７４９〜５７）を含む。一部の実施形態では、抗原は、配列番号１〜４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗原は、配列番号５〜１０のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＮ末端ポリペプチドおよび配列番号１１〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣ末端ポリペプチドを隣接した、配列番号１〜４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗原は、配列番号１８〜２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。
【０１３０】
免疫原性エピトープを含む抗原を含む改変Ｔ細胞を採用する、本明細書で記載される個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによる一部の実施形態では、抗原またはその中に含有される免疫原性エピトープは、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）抗原に由来する。一部の実施形態では、ＨＣＭＶは、ＡＤ１６９株またはＭｅｒｌｉｎ  ＨＣＭＶ株である。一部の実施形態では、抗原は、ＨＣＭＶ  ｐＵＬ８３に由来するＨＬＡ−Ａ２拘束性ペプチドを含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、複数の免疫原性エピトープを含む複数の抗原を含む。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープを含む複数の抗原を含む改変Ｔ細胞の個体への投与後、複数の免疫原性エピトープのいずれも、他の免疫原性エピトープのいずれに対する個体における免疫応答も減少させない。一部の実施形態では、抗原はポリペプチドであり、免疫原性エピトープは免疫原性ペプチドエピトープである。一部の実施形態では、免疫原性ペプチドエピトープは、Ｎ末端隣接ポリペプチドおよび／またはＣ末端隣接ポリペプチドに融合している。一部の実施形態では、抗原は、免疫原性ペプチドエピトープおよび１つまたは複数の異種ペプチド配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、抗原は、異種ペプチド配列がＮ末端および／またはＣ末端で隣接している免疫原性ペプチドエピトープを含むポリペプチドである。一部の実施形態では、隣接する異種ペプチド配列は疾患関連免疫原性ペプチドに由来する。
【０１３１】
免疫原性エピトープを含む抗原を含む改変Ｔ細胞を採用する、本明細書で記載される個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによる一部の実施形態では、抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る。一部の実施形態では、抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る。一部の実施形態では、抗原は、ＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る。一部の実施形態では、抗原は、複数の免疫原性エピトープを含み、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドおよびＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープの一部は、同じ供給源に由来する。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのすべては、同じ供給源に由来する。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのいずれも、同じ供給源に由来しない。
【０１３２】
改変Ｔ細胞を採用する、本明細書で記載される個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによる一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、複数の免疫原性エピトープを含む複数の抗原を含む。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのいずれも、他の免疫原性エピトープのいずれに対する個体における免疫応答も減少させない。
【０１３３】
改変Ｔ細胞を採用する、本明細書で記載される個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによる一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、抗原およびアジュバントを含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、約１ｐＭ〜約１０ｍＭの濃度でアジュバントを含む。例えば、一部の実施形態では、改変Ｔ細胞におけるアジュバントの濃度は、約１ｐＭ、約１０ｐＭ、約１００ｐＭ、約１ｎＭ、約１０ｎＭ、約１００ｎＭ、約１μＭ、約１０μＭ、約１００μＭ、約１ｍＭ、または約１０ｍＭ未満のいずれかである。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞におけるアジュバントの濃度は約１０ｍＭよりも大きい。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞における抗原の濃度は、約１ｐＭ〜約１０ｐＭ、約１０ｐＭ〜約１００ｐＭ、約１００ｐＭ〜約１ｎＭ、約１ｎＭ〜約１０ｎＭ、約１０ｎＭ〜約１００ｎＭ、約１００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１００μＭ、約１００μＭ〜約１ｍＭ、または１ｍＭ〜約１０ｍＭのいずれかである。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞における抗原のアジュバントに対するモル比は、約１００００：１〜約１：１００００のいずれかである。例えば、一部の実施形態では、改変Ｔ細胞における抗原のアジュバントに対するモル比は、約１００００：１、約１０００：１、約１００：１、約１０：１、約１：１、約１：１０、約１：１００、約１：１０００、または約１：１００００のいずれかである。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞における抗原のアジュバントに対するモル比は、約１００００：１〜約１０００：１、約１０００：１〜約１００：１、約１００：１〜約１０：１、約１０：１〜約１：１、約１：１〜約１：１０、約１：１０〜約１：１００、約１：１００〜約１：１０００、約１：１０００〜約１：１００００のいずれかである。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ａ）抗原、ｂ）抗原および少なくとも１つの他の抗原、ならびに／またはｃ）抗原およびアジュバント、を含む複合体を含む。
【０１３４】
改変Ｔ細胞を採用する、本明細書で記載される個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによる一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、作用物質をさらに含み、この作用物質は、この作用物質を含まない対応する改変Ｔ細胞と比較して、改変Ｔ細胞の生存能力および／または機能を増強する。一部の実施形態では、作用物質は安定剤または補因子である。一部の実施形態では、作用物質はアルブミンである。一部の実施形態では、アルブミンは、マウス、ウシ、またはヒトアルブミンである。一部の実施形態では、作用物質は、二価金属カチオン、グルコース、ＡＴＰ、カリウム、グリセロール、トレハロース、Ｄ−スクロース、ＰＥＧ１５００、Ｌ−アルギニン、Ｌ−グルタミン、またはＥＤＴＡである。
【０１３５】
改変Ｔ細胞を採用する、本明細書で記載される個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによる一部の実施形態では、改変Ｔ細胞はさらなる改変を含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩ発現を減少させるさらなる改変を含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩ発現を増加させるさらなる改変を含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩＩ発現を減少させるさらなる改変を含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩＩ発現を増加させるさらなる改変を含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答は、さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答と比較して低下している。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞が投与された個体におけるそれらの循環半減期は、さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞が投与された個体におけるそれらの循環半減期と比較して増加している。
【０１３６】
本明細書で記載される改変Ｔ細胞を採用する、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによる一部の実施形態では、方法は、改変Ｔ細胞を個体に投与するステップを含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は個体に対して同種異系である。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は個体に対して自家である。一部の実施形態では、個体は、炎症および／または免疫応答をモジュレートするよう事前調整されている。一部の実施形態では、個体は、炎症および／または免疫応答を低減するよう事前調整されている。一部の実施形態では、個体は、炎症および／または免疫応答を増加させるよう事前調整されている。一部の実施形態では、個体への改変Ｔ細胞の投与は、抗原に特異的な細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の活性化および／または増殖をもたらす。一部の実施形態では、個体への改変Ｔ細胞の投与は、抗原に特異的なヘルパーＴ（Ｔｈ）細胞の活性化および／または増殖をもたらす。一部の実施形態では、個体に投与される改変Ｔ細胞の量は約１×１０６〜約１×１０１２個細胞である。一部の実施形態では、個体に投与される改変Ｔ細胞の量は、約１×１０６、１×１０７、１×１０８、１×１０９、１×１０１０、１×１０１１、および約１×１０１２個細胞のいずれか未満である。一部の実施形態では、個体に投与される改変Ｔ細胞の量は、約１×１０６〜１×１０７、１×１０７〜１×１０８、１×１０８〜１×１０９、１×１０９〜１×１０１０、１×１０１０〜１×１０１１、および１×１０１１〜１×１０１２個細胞のいずれかである。一部の実施形態では、方法は改変Ｔ細胞の複数回投与を含む。一部の実施形態では、方法は、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０回、または約１０回を上回る回数の投与のいずれかを含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞の２回の連続投与の間の時間間隔は約１日〜約１ヶ月である。一部の実施形態では、投与は、毎日、２日ごと、３日ごと、４日ごと、５日ごと、６日ごと、毎週、隔週、または毎月である。一部の実施形態では、連続投与は、最高で１年間またはそれを上回る期間与えられる。
【０１３７】
本明細書で記載される改変Ｔ細胞を採用する、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによる一部の実施形態では、方法は、第２のアジュバントを個体に投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、第２のアジュバントは、全身に、例えば静脈内に投与される。一部の実施形態では、第２のアジュバントは、局所的に、例えば腫瘍内に投与される。一部の実施形態では、第２のアジュバントは細胞に含有されず、例えば第２のアジュバントは溶液中に遊離している。一部の実施形態では、第２のアジュバントはＩＦＮ−αまたはＣｐＧ  ＯＤＮである。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞に含有されるアジュバントおよび第２のアジュバントは、同じ化合物である。例えば、一部の実施形態では、改変Ｔ細胞はＣｐＧ  ＯＤＮを含み、第２のアジュバントもＣｐＧ  ＯＤＮである。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞に含有されるアジュバントおよび第２のアジュバントは、異なる化合物である。例えば、一部の実施形態では、改変Ｔ細胞はＣｐＧ  ＯＤＮを含み、第２のアジュバントはＩＦＮ−αである。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞および第２のアジュバントは並行してまたは同時に投与される。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞および第２のアジュバントは逐次的に投与される。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、第２のアジュバントを投与する前に投与される。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、第２のアジュバントの投与後に投与される。
【０１３８】
本明細書で記載される改変Ｔ細胞を採用する、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによる一部の実施形態では、方法は、免疫チェックポイント阻害剤を個体に投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞および免疫チェックポイント阻害剤は個体に並行して投与される。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞および免疫チェックポイント阻害剤は個体に同時に投与される。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞および免疫チェックポイント阻害剤は個体に逐次的に投与される。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、個体への免疫チェックポイント阻害剤の投与後に個体に投与される。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、個体への免疫チェックポイント阻害剤の投与前に個体に投与される。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、およびＴＩＭ−３のいずれか１つを標的にする。例示的な免疫チェックポイント阻害剤は、限定なく、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３またはＴＩＭ−３を標的にする。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、またはＴＩＭ−３のうちの１つまたは複数を標的にする。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１に結合する抗体、ＰＤ−Ｌ１を結合する抗体、ＣＴＬＡ−４を結合する抗体、ＬＡＧ３を結合する抗体、またはＴＩＭ−３を結合する抗体のうちの１つまたは複数である。さらなる実施形態では、抗体は、全長抗体または任意のバリアント、例えば、限定されるものではないが、抗体断片、一本鎖可変断片（ＳｃＦｖ）、または抗原結合断片（Ｆａｂ）であり得る。さらなる実施形態では、抗体は、二重特異性、三重特異性、または多重特異性であり得る。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、またはＴＩＭ−３のうちの１つまたは複数に結合するか、および／またはこれらを阻害する、１つまたは複数の化学化合物である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、またはＴＩＭ−３のうちの１つまたは複数に結合するか、および／またはこれらを阻害する、１つまたは複数のペプチドである。
【０１３９】
他の例示的な免疫チェックポイント阻害剤は、限定なく、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、またはＢＴＬＡを標的にする。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数を標的にする。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＩＧＩＴに結合する抗体、ＶＩＳＴＡを結合する抗体、ＴＩＭ１を結合する抗体、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）を結合する抗体、またはＢＴＬＡを結合する抗体のうちの１つまたは複数である。さらなる実施形態では、抗体は、全長抗体または任意のバリアント、例えば、限定されるものではないが、抗体断片、一本鎖可変断片（ＳｃＦｖ）、または抗原結合断片（Ｆａｂ）であり得る。さらなる実施形態では、抗体は、二重特異性、三重特異性、または多重特異性であり得る。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ−３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数に結合するか、および／またはこれらを阻害する、１つまたは複数の化学化合物である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ−３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数に結合するか、および／またはこれらを阻害する、１つまたは複数のペプチドである。
【０１４０】
化学療法を、本明細書で記載される改変Ｔ細胞のいずれか１つと組み合わせて使用して、がん、例えばＨＰＶ関連がんに対して相加的または相乗的な効果を達成し得る。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞を含む組成物は、化学療法の投与と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞を含む組成物および化学療法は同時に投与される。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞を含む組成物および化学療法は逐次的に投与される。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞を含む組成物は、化学療法の投与と組み合わせておよび免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて投与される。
【０１４１】
一部の実施形態では、改変Ｔ細胞を含む組成物は、化学療法の投与の前に投与される。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞を含む組成物は、化学療法の投与の後に投与される。例えば、改変Ｔ細胞を含む組成物は、化学療法の投与の約１時間〜約１週間前に投与される。例えば、一部の実施形態では、改変Ｔ細胞を含む組成物は、化学療法の投与の約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約６時間、約８時間、約１０時間、約１２時間、約１４時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４２時間、約４８時間、約６０時間、約３日、約４日、約５日、約６日、または約７日前に投与される。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞を含む組成物は、化学療法の投与の約１時間〜約２時間、約２時間〜約３時間、約３時間〜約４時間、約４時間〜約６時間、約６時間〜約８時間、約８時間〜約１０時間、約１０時間〜約１２時間、約１２時間〜約１４時間、約１４時間〜約１６時間、約１６時間〜約１８時間、約１８時間〜約２０時間、約２０時間〜約２４時間、約２４時間〜約３０時間、約３０時間〜約３６時間、約３６時間〜約４２時間、約４２時間〜約４８時間、約４８時間〜約６０時間、約６０時間〜約３日、約３日〜約４日、約４日〜約５日、約５日〜約６日、約６日〜約７日前に投与される。
【０１４２】
一部の実施形態では、改変Ｔ細胞を含む組成物は、化学療法の投与の後に投与される。例えば、改変Ｔ細胞を含む組成物は、化学療法の投与の約１時間〜約１週間後に投与される。例えば、一部の実施形態では、改変Ｔ細胞を含む組成物は、化学療法の投与の約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約６時間、約８時間、約１０時間、約１２時間、約１４時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４２時間、約４８時間、約６０時間、約３日、約４日、約５日、約６日、または約７日後に投与される。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞を含む組成物は、化学療法の投与の約１時間〜約２時間、約２時間〜約３時間、約３時間〜約４時間、約４時間〜約６時間、約６時間〜約８時間、約８時間〜約１０時間、約１０時間〜約１２時間、約１２時間〜約１４時間、約１４時間〜約１６時間、約１６時間〜約１８時間、約１８時間〜約２０時間、約２０時間〜約２４時間、約２４時間〜約３０時間、約３０時間〜約３６時間、約３６時間〜約４２時間、約４２時間〜約４８時間、約４８時間〜約６０時間、約６０時間〜約３日、約３日〜約４日、約４日〜約５日、約５日〜約６日、約６日〜約７日後に投与される。
【０１４３】
一部の実施形態では、方法は、改変Ｔ細胞を含む組成物の複数回投与、および／または化学療法の複数回投与を含む。例えば、一部の実施形態では、方法は、改変Ｔ細胞を含む組成物および／または化学療法の２回の投与、３回の投与、４回の投与、５回の投与、６回の投与、７回の投与、８回の投与、９回の投与、１０回の投与、１１回の投与、１２回の投与、１３回の投与、１４回の投与、または１５回の投与を含む。例えば、一部の実施形態では、方法は、改変Ｔ細胞を含む組成物および／または化学療法の５回未満の投与、１０回未満の投与、１５回未満の投与、２０回未満の投与、２５回未満の投与、３０回未満の投与、５０回未満の投与、７５回未満の投与、１００回未満、または２００回未満の投与を含む。
【０１４４】
例示的な化学療法は、細胞周期依存性または細胞周期非依存性であり得る。一部の実施形態では、化学療法は、１つまたは複数の化学療法剤を含む。一部の実施形態では、化学療法剤は、がんにおける、細胞分裂、ＤＮＡ、または代謝のうちの１つまたは複数を標的にし得る。一部の実施形態では、化学療法剤は、限定されるものではないが、シスプラチン、オキサリプラチン、またはカルボプラチンなどの白金系作用物質である。一部の実施形態では、化学療法剤はタキサン（ドセタキセルまたはパクリタキセルなど）である。一部の実施形態では、化学療法剤は、５−フルオロウラシル、ドキソルビシン、またはイリノテカンである。一部の実施形態では、化学療法剤は、アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗腫瘍抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤、または有糸分裂阻害剤のうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、化学療法はシスプラチンを含む。
【０１４５】
放射線療法を、本明細書で記載される改変Ｔ細胞のいずれか１つと組み合わせて使用して、がん、例えばＨＰＶ関連がんに対して相加的または相乗的な効果を達成し得る。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞を含む組成物は、放射線療法の投与と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞を含む組成物および放射線療法は同時に投与される。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞を含む組成物および放射線療法は逐次的に投与される。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞を含む組成物は、放射線療法の投与と組み合わせて、化学療法と組み合わせて、および／または免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて投与される。
【０１４６】
一部の実施形態では、改変Ｔ細胞を含む組成物は、放射線療法の投与の前に投与される。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞を含む組成物は、放射線療法の投与の後に投与される。例えば、改変Ｔ細胞を含む組成物は、放射線療法の投与の約１時間〜約１週間前に投与される。例えば、一部の実施形態では、改変Ｔ細胞を含む組成物は、放射線療法の投与の約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約６時間、約８時間、約１０時間、約１２時間、約１４時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４２時間、約４８時間、約６０時間、約３日、約４日、約５日、約６日、または約７日前に投与される。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞を含む組成物は、放射線療法の投与の約１時間〜約２時間、約２時間〜約３時間、約３時間〜約４時間、約４時間〜約６時間、約６時間〜約８時間、約８時間〜約１０時間、約１０時間〜約１２時間、約１２時間〜約１４時間、約１４時間〜約１６時間、約１６時間〜約１８時間、約１８時間〜約２０時間、約２０時間〜約２４時間、約２４時間〜約３０時間、約３０時間〜約３６時間、約３６時間〜約４２時間、約４２時間〜約４８時間、約４８時間〜約６０時間、約６０時間〜約３日、約３日〜約４日、約４日〜約５日、約５日〜約６日、約６日〜約７日前に投与される。
【０１４７】
一部の実施形態では、改変Ｔ細胞を含む組成物は、放射線療法の投与の後に投与される。例えば、改変Ｔ細胞を含む組成物は、放射線療法の投与の約１時間〜約１週間後に投与される。例えば、一部の実施形態では、改変Ｔ細胞を含む組成物は、放射線療法の投与の約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約６時間、約８時間、約１０時間、約１２時間、約１４時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４２時間、約４８時間、約６０時間、約３日、約４日、約５日、約６日、または約７日後に投与される。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞を含む組成物は、放射線療法の投与の約１時間〜約２時間、約２時間〜約３時間、約３時間〜約４時間、約４時間〜約６時間、約６時間〜約８時間、約８時間〜約１０時間、約１０時間〜約１２時間、約１２時間〜約１４時間、約１４時間〜約１６時間、約１６時間〜約１８時間、約１８時間〜約２０時間、約２０時間〜約２４時間、約２４時間〜約３０時間、約３０時間〜約３６時間、約３６時間〜約４２時間、約４２時間〜約４８時間、約４８時間〜約６０時間、約６０時間〜約３日、約３日〜約４日、約４日〜約５日、約５日〜約６日、約６日〜約７日後に投与される。
【０１４８】
一部の実施形態では、方法は、改変Ｔ細胞を含む組成物の複数回投与、および／または放射線療法の複数回投与を含む。例えば、一部の実施形態では、方法は、改変Ｔ細胞を含む組成物および／または放射線療法の２回の投与、３回の投与、４回の投与、５回の投与、６回の投与、７回の投与、８回の投与、９回の投与、１０回の投与、１１回の投与、１２回の投与、１３回の投与、１４回の投与、または１５回の投与を含む。例えば、一部の実施形態では、方法は、改変Ｔ細胞を含む組成物および／または放射線療法の５回未満の投与、１０回未満の投与、１５回未満の投与、２０回未満の投与、２５回未満の投与、３０回未満の投与、５０回未満の投与、７５回未満の投与、１００回未満、または２００回未満の投与を含む。
【０１４９】
ある特定の態様では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、方法は、抗原と会合した改変Ｔ細胞を個体に投与するステップを含み、改変Ｔ細胞は、ａ）抗原がインプットＴ細胞の細胞表面と会合するのを可能にするのに十分な時間、インプットＴ細胞とｉ）抗原またはｉｉ）抗原およびアジュバントとをインキュベートし、抗原は免疫原性エピトープを含み、それによって、抗原と会合した改変Ｔ細胞を作出するステップ；ならびにｂ）改変Ｔ細胞を個体に投与するステップを含むプロセスによって調製される、方法が提供される。
【０１５０】
ある特定の態様では、医学的処置の方法における使用のための改変Ｔ細胞であって、前記方法は、ａ）抗原を含むインプットＴ細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、抗原は免疫原性エピトープを含み、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、アジュバントが通過するのに十分に大きなインプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成するステップ；ｂ）アジュバントが摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプットＴ細胞とアジュバントとをインキュベートし、それによって、抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞を作出するステップ；ならびにｃ）改変Ｔ細胞を個体に投与するステップを含む、改変Ｔ細胞が提供される。一部の実施形態では、摂動インプットＴ細胞とインキュベートされるアジュバントの濃度は約１ｐＭ〜１０ｍＭである。一部の実施形態では、アジュバントはナノ粒子中に封入される。
【０１５１】
ある特定の態様では、個体におけるがん、感染性疾患、またはウイルス関連疾患を処置することにおける使用のための改変Ｔ細胞であって、前記方法は、ａ）抗原を含むインプットＴ細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、抗原は免疫原性エピトープを含み、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、アジュバントが通過するのに十分に大きなインプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成するステップ；ｂ）アジュバントが摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプットＴ細胞とアジュバントとをインキュベートし、それによって、抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞を作出するステップ；ならびにｃ）改変Ｔ細胞を個体に投与するステップを含む、改変Ｔ細胞が提供される。一部の実施形態では、抗原は、がん、感染性疾患、またはウイルス関連疾患と関連している。一部の実施形態では、摂動インプットＴ細胞とインキュベートされるアジュバントの濃度は約１ｐＭ〜１０ｍＭである。一部の実施形態では、アジュバントはナノ粒子中に封入される。
【０１５２】
一部の実施形態では、本発明の改変Ｔ細胞は、個体における寛容を誘導しない。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、個体における免疫応答を抑制しない。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は寛容原性因子を含まない。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、寛容原性因子と組み合わせて投与されない。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、寛容原性因子の投与の前、それと同時に、または後に投与されない。
【０１５３】
抗原
一部の実施形態では、本発明は、免疫応答をモジュレートする抗原の送達を採用し、抗原は、本明細書で記載される方法のいずれかによってＴ細胞に送達される。一部の実施形態では、抗原は単一抗原である。一部の実施形態では、抗原は抗原の混合物である。抗原は、細胞または抗体媒介性免疫応答などの特異的な免疫応答を刺激する物質である。抗原は、特定の抗原に対して特異的である、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）などの免疫細胞によって発現される受容体に結合する。抗原−受容体結合は、その後、細胞活性化、サイトカイン産生、細胞遊走、細胞傷害性因子の分泌および抗体産生などの下流の免疫エフェクター経路をもたらす、細胞内シグナル伝達経路を誘因する。
【０１５４】
一部の実施形態では、抗原はポリペプチド抗原である。一部の実施形態では、抗原は疾患関連抗原である。一部の実施形態では、抗原は、細菌、真菌、ウイルス、またはアレルゲンなど、外来供給源に由来する。一部の実施形態では、抗原は、自己タンパク質（すなわち、自己抗原）または自己タンパク質の一部分など、内部供給源に由来する。一部の実施形態では、抗原は、変異したまたは別様に変更した自己抗原である。一部の実施形態では、抗原は腫瘍抗原である。一部の実施形態では、抗原は細胞溶解物中にある。自己抗原は、生物自身の細胞の上または中に存在する抗原である。自己抗原は、通常では免疫応答を刺激しないが、Ｉ型糖尿病もしくは関節リウマチなどの自己免疫疾患の状況においてまたは過剰発現したもしくは異常に／異所的に発現した場合には免疫応答を刺激し得る。
【０１５５】
一部の実施形態では、抗原はウイルスと関連している。一部の実施形態では、抗原はウイルス抗原である。例示的なウイルス抗原は、ＨＰＶ抗原、ＨＣＭＶ抗原、ＳＡＲＳ−ＣｏＶ抗原、およびインフルエンザ抗原を含む。
【０１５６】
一部の実施形態では、抗原は、微生物、例えば細菌と関連している。一部の実施形態では、モジュレートされた免疫応答は、微生物、例えば細菌に対する増加した病因性免疫応答を含む。
【０１５７】
ある特定の態様では、本発明は、Ｔ細胞に抗原を送達するための方法であって、方法は、Ｔ細胞を含む細胞懸濁液を狭窄に通すステップであって、前記狭窄はＴ細胞を変形させ、それによって、抗原が細胞に入るような細胞の摂動を引き起こし、前記細胞懸濁液と抗原とを接触させるステップを含む、方法を採用する。一部の実施形態では、抗原は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ、またはｉｎ  ｖｉｖｏでＴ細胞に送達される。
【０１５８】
一部の実施形態では、送達する抗原は精製される。一部の実施形態では、抗原は、少なくとも約６０重量％（乾燥重量）の目的の抗原である。一部の実施形態では、精製抗原は、少なくとも約７５％、９０％、または９９％の目的の抗原である。一部の実施形態では、精製抗原は、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９８％、９９％、または１００％（ｗ／ｗ）の目的の抗原である。純度は、限定されることなく、カラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法、質量分析、またはＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル電気泳動を含めた、任意の公知の方法によって判定される。精製ＤＮＡまたはＲＮＡは、外因性の核酸、炭水化物、および脂質を含んでいないＤＮＡまたはＲＮＡとして定義される。
【０１５９】
アジュバント
アジュバントを使用して、抗原に対する免疫応答などの免疫細胞応答（例えば、Ｔ細胞応答）をブーストし得る。複数のアジュバントを使用しても免疫応答を増強し得、抗原とともに使用して、例えば、抗原単独に対する免疫応答と比較して、抗原に対する免疫応答を増強し得る。一部の実施形態では、本発明は、免疫応答を増強するアジュバントの送達を採用し、アジュバントは、本明細書で記載される方法のいずれかによってＴ細胞に送達される。一部の実施形態では、アジュバントは、抗原に対する免疫応答を増強する。例えば、アジュバントは、抗原提示細胞による抗原の免疫原性提示を促進し得る。一部の実施形態では、アジュバントは抗原と同時に導入される。一部の実施形態では、アジュバントおよび抗原は逐次的に導入される。一部の実施形態では、アジュバントは、抗原の導入前に導入される。一部の実施形態では、アジュバントは、抗原の導入後に導入される。一部の実施形態では、アジュバントは、アジュバントの非存在下におけるＴ細胞ホーミングと比較して、Ｔ細胞ホーミング（例えば、腫瘍などの標的組織へのＴ細胞ホーミング）を変更する。一部の実施形態では、アジュバントは、アジュバントの非存在下におけるＴ細胞増殖と比較して、Ｔ細胞増殖を増加させる。
【０１６０】
ある特定の態様では、本発明は、インプットＴ細胞から抗原を含む免疫原性抗原提示Ｔ細胞を作出するための方法であって、インプットＴ細胞を狭窄に通し、前記狭窄はインプットＴ細胞を変形させ、それによって、抗原がインプットＴ細胞に入るような細胞の摂動を引き起こし、それによって、抗原を含む免疫原性抗原提示Ｔ細胞を作出する、方法を採用する。
【０１６１】
ある特定の態様では、本発明は、Ｔ細胞にアジュバントを送達するための方法であって、方法は、Ｔ細胞を含む細胞懸濁液を狭窄に通すステップであって、前記狭窄はＴ細胞を変形させ、それによって、アジュバントが細胞に入るようなＴ細胞の摂動を引き起こし、前記細胞懸濁液とアジュバントとを接触させるステップを含む方法を採用する。一部の実施形態では、アジュバントは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ、またはｉｎ  ｖｉｖｏでＴ細胞に送達される。
【０１６２】
マイクロ流体システムおよびその構成要素
細胞変形狭窄を提供するマイクロ流体チャネル
一部の実施形態では、本発明は、Ｔ細胞を含む細胞懸濁液を狭窄に通すことによって免疫応答をモジュレートするための方法であって、狭窄はＴ細胞を変形させ、それによって、抗原および／またはアジュバントがＴ細胞に入るようなＴ細胞の摂動を引き起こし、狭窄はマイクロ流体チャネル内に含有される、方法を提供する。一部の実施形態では、多数の狭窄が、マイクロ流体チャネル内に並列におよび／または直列に配置し得る。本明細書に開示の方法における使用のための細胞変形狭窄を含有する例示的なマイクロ流体チャネルは、ＷＯ２０１３０５９３４３に記載されている。本明細書に開示の方法における使用のための例示的なポアを有する表面は、ＷＯ２０１７０４１０５０に記載されている。
【０１６３】
一部の実施形態では、マイクロ流体チャネルは、管腔を含み、緩衝液に懸濁されたＴ細胞が通過することができるように構成され、マイクロ流体チャネルは、狭窄を含む。マイクロ流体チャネルは、ケイ素、金属（例えば、ステンレス鋼）、プラスチック（例えば、ポリスチレン）、セラミック、ガラス、結晶性基材、アモルファス基材、またはポリマー（例えば、ポリ−メチルメタクリレート（ＰＭＭＡ）、ＰＤＭＳ、環状オレフィンコポリマー（ＣＯＣ）など）を含む、いくつかの材料のうちのいずれか１つで作られ得る。マイクロ流体チャネルの製作は、ドライエッチング、ウェットエッチング、フォトリソグラフィー、射出成型、レーザーアブレーションまたはＳＵ−８マスクを含む、当技術分野において公知の任意の方法によって行うことができる。
【０１６４】
一部の実施形態では、マイクロ流体チャネル内の狭窄は、入口部分、中心点および出口部分を含む。一部の実施形態では、マイクロ流体チャネル内の狭窄の長さ、深さおよび幅は、変動させることができる。一部の実施形態では、マイクロ流体チャネル内の狭窄の直径は、Ｔ細胞の直径の関数である。一部の実施形態では、マイクロ流体チャネル内の狭窄の直径は、Ｔ細胞の直径の約２０％〜約９９％である。一部の実施形態では、狭窄のサイズは、Ｔ細胞の直径の約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９９％である。一部の実施形態では、狭窄のサイズは、Ｔ細胞の最小断面距離の約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９９％である。一部の実施形態では、チャネルは、約２μｍ〜約１０μｍの狭窄の幅、またはそれらの間の任意の幅もしくは幅の範囲を含む。例えば、狭窄の幅は、約２μｍ、約３μｍ、約４μｍ、約５μｍ、約６μｍ、または約７μｍのうちのいずれか１つであり得る。一部の実施形態では、チャネルは、約１０μｍの狭窄の長さ、および約４μｍの狭窄の幅を含む。チャネルの断面、入口部分、中心点および出口部分も変動させることができる。例えば、断面は、円形、楕円形、細長いスリット、正方形、六角形、または三角形の形状であり得る。入口部分は、狭窄の角度を規定し、狭窄の角度は、チャネルの目詰まりを低下させるために最適化され、Ｔ細胞への化合物の増強された送達のために最適化される。出口部分の角度も同様に変動させることができる。例えば、出口部分の角度は、非層流をもたらし得る乱流の可能性を低下させるために構成される。一部の実施形態では、入口部分および／または出口部分の壁は、直線状である。他の実施形態では、入口部分および／または出口部分の壁は、湾曲している。
【０１６５】
本明細書で記載される方法または組成物のいずれか１つによる一部の実施形態では、狭窄の直径は、Ｔ細胞直径の関数である。一部の実施形態では、Ｔ細胞の直径は、Ｔ細胞の最小断面距離によって測定される。
【０１６６】
本明細書で記載される方法または組成物のいずれか１つによる一部の実施形態では、狭窄の直径は、インプットＴ細胞の平均直径の約１０％〜約９９％である。一部の実施形態では、狭窄の直径は、インプットＴ細胞の平均直径の約１０％〜約９０％、約１０％〜約８０％、約１０％〜約７０％、約２０％〜約６０％、約４０％〜約６０％、または約３０％〜約４５％のいずれか１つである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、インプットＴ細胞の平均直径の約１０％〜約２０％、約２０％〜約３０％、約３０％〜約４０％、約４０％〜約５０％、約５０％〜約６０％、約６０％〜約７０％、約７０％〜約８０％、約８０％〜約９０％、または約９０％〜約９９％のいずれか１つである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、インプットＴ細胞の平均直径の約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％のいずれか１つである。
【０１６７】
本明細書で記載される方法または組成物のいずれか１つによる一部の実施形態では、狭窄の直径は約１．５μｍ〜約１０μｍである。一部の実施形態では、狭窄の直径は約２μｍ〜約８μｍである。一部の実施形態では、狭窄の直径は約２．５μｍ〜約６μｍである。一部の実施形態では、狭窄の直径は約３μｍ〜約５μｍである。一部の実施形態では、狭窄の直径は約３μｍ〜約４μｍである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、約１．５μｍ〜約１０μｍ、約１．７５μｍ〜約９μｍ、約２μｍ〜約８μｍ、約２．２５μｍ〜約７μｍ、約２．５μｍ〜約６μｍ、約２．７５μｍ〜約５．５μｍ、約３μｍ〜約５μｍ、約３μｍ〜約４μｍ、約３．１μｍ〜約３．９μｍ、約３．２μｍ〜約３．８μｍ、約３．３μｍ〜約３．７μｍ、または約３．４μｍ〜約３．６μｍのいずれか１つである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、約１．０μｍ、１．２μｍ、１．４μｍ、１．６μｍ、１．８μｍ、２．０μｍ、２．２μｍ、２．４μｍ、２．６μｍ、２．８μｍ、３．０μｍ、３．２μｍ、３．４μｍ、３．６μｍ、３．８μｍ、４．０μｍ、４．２μｍ、４．４μｍ、４．６μｍ、４．８μｍ、５．０μｍ、５．５μｍ、６．０μｍ、６．５μｍ、７．０μｍ、８．０μｍ、９．０μｍ、または約１０．０μｍのいずれか１つである。一部の実施形態では、狭窄の直径は約３．５μｍである。
【０１６８】
本明細書に記載の方法または組成物のいずれか１つによる一部の実施形態では、狭窄の直径は、約３μｍ〜約１５μｍである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、約３μｍ〜約１０μｍである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、約４μｍ〜約１０μｍである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、約４．２μｍ〜約６μｍである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、約４．２μｍ〜約４．８μｍである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、約２μｍ〜約１４μｍ、約４μｍ〜約１２μｍ、約６μｍ〜約９μｍ、約４μｍ〜約６μｍ、約４μｍ〜約５μｍ、約３．５μｍ〜約７μｍ、約３．５μｍ〜約６．３μｍ、約３．５μｍ〜約５．６μｍ、約３．５μｍ〜約４．９μｍ、約４．２μｍ〜約６．３μｍ、約４．２μｍ〜約５．６μｍ、または約４．２μｍ〜約４．９μｍのうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、約２μｍ、２．５μｍ、３μｍ、３．５μｍ、４μｍ、４．５μｍ、５μｍ、５．５μｍ、６μｍ、６．５μｍ、７μｍ、７．５μｍ、８μｍ、８．５μｍ、９μｍ、９．５μｍ、１０μｍ、１０．５μｍ、１１μｍ、１１．５μｍ、１２μｍ、１２．５μｍ、１３μｍ、１３．５μｍ、１４μｍ、１４．５μｍ、または１５μｍのうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、約４．０μｍ、４．１μｍ、４．２μｍ、４．３μｍ、４．４μｍ、４．５μｍ、４．６μｍ、４．７μｍ、４．８μｍ、４．９μｍ、または５．０μｍのうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、約４．５μｍである。
【０１６９】
本明細書に記載の方法または組成物のいずれか１つによる一部の実施形態では、インプットＴ細胞は、約０．００１ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分の流速、またはそれらの間の任意の速度もしくは速度の範囲で、狭窄を通過する。一部の実施形態では、流速は、約０．００１ｍＬ／分〜約１７５ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分〜約１５０ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分〜約１２５ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分〜約１００ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分〜約５０ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分〜約２５ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分〜約１０ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分〜約７．５ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分〜約５．０ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分〜約２．５ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分〜約１ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分〜約０．１ｍＬ／分、または約０．００１ｍＬ／分〜約０．０１ｍＬ／分である。一部の実施形態では、流速は、約０．００１ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分、約０．０１ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分、約０．１ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分、約１ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分、約１０ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分、約５０ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分、約７５ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分、約１００ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分、約１５０ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分、約０．５ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分、約１ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分、約２．５ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分、約５ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分、約７．５ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分、約１０ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分、約２５ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分、または約１７５ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分である。一部の実施形態では、インプットＴ細胞は、約１０ｍＬ／分〜約２００ｍＬ／分の流速で、狭窄を通過する。一部の実施形態では、インプットＴ細胞は、約１００ｍＬ／分の流速で、狭窄を通過する。
【０１７０】
本明細書に記載の方法または組成物のいずれか１つによる一部の実施形態では、狭窄は、当技術分野において公知の任意の形状、例えば、３次元形状または２次元形状を有することができる。狭窄の断面形状などの２次元形状は、限定なく、円形、楕円形、丸形、正方形、星形、三角形、多角形、五角形、六角形、七角形、または八角形であり得る。狭窄の３次元形状は、限定なく、円柱状、円錐状または立方体状であり得る。一部の実施形態では、狭窄の断面形状は、長方形である。一部の実施形態では、狭窄の断面形状は、スリットである。一部の実施形態では、狭窄の断面形状は、約２．５μｍ〜約１０μｍの幅および／または約１μｍ〜約２００μｍの深さを含むスリットである。一部の実施形態では、狭窄の断面形状は、約３μｍ〜約６μｍの幅および／または約４０μｍ〜約１２０μｍの深さを含むスリットである。一部の実施形態では、狭窄の断面形状は、約３．２μｍ〜約４μｍの幅および／または約２０μｍ〜約８０μｍの深さを含むスリットである。一部の実施形態では、狭窄の断面形状は、約３．５μｍの幅および／または約８０μｍの深さを含むスリットである。他の実施形態では、狭窄の断面形状は、約４μｍ〜約１０μｍの幅および／または約１μｍ〜約２００μｍの深さを含むスリットである。一部の実施形態では、狭窄の断面形状は、約４．２μｍ〜約６μｍの幅および／または約４０μｍ〜約１２０μｍの深さを含むスリットである。一部の実施形態では、狭窄の断面形状は、約４．２μｍ〜約６μｍの幅および／または約２０μｍ〜約８０μｍの深さを含むスリットである。一部の実施形態では、狭窄の断面形状は、約４．５μｍの幅および／または約８０μｍの深さを含むスリットである。一部の実施形態では、スリットは、約１０μｍ〜約３０μｍの長さを含む。一部の実施形態では、スリットは、約２μｍ〜約５０μｍの長さを含む。一部の実施形態では、スリットは、約２μｍ〜約５μｍ、約５μｍ〜約１０μｍ、約１０μｍ〜約１５μｍ、約１５μｍ〜約２０μｍ、約２０μｍ〜約２５μｍ、約２５μｍ〜約３０μｍ、約３０μｍ〜約３５μｍ、約３５μｍ〜約４０μｍ、約４０μｍ〜約４５μｍ、または約４５μｍ〜約５０μｍのうちのいずれか１つの長さを含む。一部の実施形態では、スリットは、約１０μｍの長さを含む。
【０１７１】
細胞変形狭窄を提供するためのポアを有する表面
一部の実施形態では、本発明は、Ｔ細胞を含む細胞懸濁液を狭窄に通すことによって免疫応答をモジュレートするための方法であって、狭窄はＴ細胞を変形させ、それによって、抗原および／またはアジュバントがＴ細胞に入るようなＴ細胞の摂動を引き起こし、狭窄はポアであるまたはポア内に含有される、方法を提供する。一部の実施形態では、ポアは、表面に含有される。本明細書に開示の方法における使用のためのポアを有する例示的な表面は、ＷＯ２０１７０４１０５０に記載されている。
【０１７２】
本明細書に開示の表面は、いくつかの材料のいずれか１つで作られ、いくつかの形態のいずれか１つをとることができる。一部の実施形態では、表面はフィルターである。一部の実施形態では、表面は膜である。一部の実施形態では、フィルターは、タンジェンシャルフローフィルターである。一部の実施形態では、表面は、スポンジまたはスポンジ様のマトリックスである。一部の実施形態では、表面はマトリックスである。
【０１７３】
一部の実施形態では、表面は、蛇行状のパス表面である。一部の実施形態では、蛇行状のパス表面は、酢酸セルロースを含む。一部の実施形態では、表面は、限定なく、合成または天然ポリマー、ポリカーボネート、ケイ素、ガラス、金属、合金、硝酸セルロース、銀、酢酸セルロース、ナイロン、ポリエステル、ポリエーテルスルホン、ポリアクリロニトリル（ＰＡＮ）、ポリプロピレン、ＰＶＤＦ、ポリテトラフルオロエチレン、混合セルロースエステル、ポーセレン、およびセラミックから選択される材料を含む。
【０１７４】
本明細書に開示の表面は、当技術分野で公知の任意の形状、例えば、３次元形状を有することができる。表面の２次元形状は、限定なく、円形、楕円形、丸形、正方形、星形、三角形、多角形、五角形、六角形、七角形、または八角形であり得る。一部の実施形態では、表面は、丸形の形状である。一部の実施形態では、表面３次元形状は、円柱状、円錐状、または立方体状である。
【０１７５】
表面は、さまざまな断面の幅および厚さを有することができる。一部の実施形態では、表面の断面の幅は、約１ｍｍ〜約１ｍ、またはそれらの間の任意の断面の幅もしくは断面の幅の範囲である。一部の実施形態では、表面は、規定された厚さを有する。一部の実施形態では、表面の厚さは均一である。一部の実施形態では、表面の厚さは可変である。例えば、一部の実施形態では、表面の部分は、表面の他の部分よりも厚いか、または薄い。一部の実施形態では、表面の厚さは、約１％〜約９０％、またはそれらの間の任意のパーセンテージもしくはパーセンテージの範囲で変動する。一部の実施形態では、表面は、約０．０１μｍ〜約５ｍｍの厚さ、またはそれらの間の任意の厚さもしくは厚さの範囲である。
【０１７６】
一部の実施形態では、狭窄は、ポアであるか、またはポア内に含有される。ポアの断面の幅は、処置されるＴ細胞の種類に関係する。一部の実施形態では、ポアのサイズは、Ｔ細胞、または処置されるＴ細胞のクラスターの直径の関数である。一部の実施形態では、ポアのサイズは、ポアを通過する際にＴ細胞が摂動されるようなものである。一部の実施形態では、ポアのサイズは、Ｔ細胞の直径未満である。一部の実施形態では、ポアのサイズは、Ｔ細胞の直径の約１０％〜約９９％である。一部の実施形態では、ポアのサイズは、Ｔ細胞の直径の約１０％、約１５％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９９％である。最適なポアのサイズ、またはポアの断面の幅は、印加および／またはＴ細胞の種類に基づいて、変動させることができる。一部の実施形態では、ポアのサイズは、約２μｍ〜約１４μｍである。一部の実施形態では、ポアのサイズは、約２μｍ、約３μｍ、約４μｍ、約５μｍ、約８μｍ、約１０μｍ、約１２μｍ、または約１４μｍである。一部の実施形態では、断面の幅は、約２μｍ〜約１４μｍである。一部の実施形態では、ポアの断面は、約２μｍ、約３μｍ、約４μｍ、約５μｍ、約８μｍ、約１０μｍ、約１２μｍ、または約１４μｍである。
【０１７７】
ポアの通路の入口および出口は、さまざまな角度を有し得る。ポアの角度は、Ｔ細胞が通過する間に、ポアの目詰まりを最小化するために選択することができる。一部の実施形態では、表面を通した流速は、約０．００１ｍＬ／ｃｍ２／秒〜約１００Ｌ／ｃｍ２／秒またはその間にある任意の速度もしくは速度の範囲である。例えば、入口または出口部分の角度は、約０〜約９０度であり得る。一部の実施形態では、入口または出口部分は、９０度よりも大きくあり得る。一部の実施形態では、ポアは、同一の入口および出口の角度を有する。一部の実施形態では、ポアは、異なる入口および出口の角度を有する。一部の実施形態では、ポアの縁は、滑らかであり、例えば、丸みを帯びているか、または湾曲している。滑らかなポアの縁は、突起、隆線および起伏のある部分がない、連続的な、平坦かつ平らな表面を有する。一部の実施形態では、ポアの縁は、鋭い。鋭いポアの縁は、先端が尖っているか、または鋭角である、細い縁を有する。一部の実施形態では、ポアの通路は、まっすぐである。まっすぐなポアの通路は、曲線、屈曲、角度および他の凸凹を含まない。一部の実施形態では、ポアの通路は、湾曲している。湾曲したポアの通路は、屈曲しているか、または直線から外れる。一部の実施形態では、ポアの通路は、複数の曲線、例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれよりも多くの湾曲を有する。ポアを通る流速も調整することができる。
【０１７８】
ポアは、２次元または３次元形状を含む、当技術分野において公知の任意の形状を有することができる。ポアの形状（例えば、断面形状）は、限定なく、円形、楕円形、丸形、正方形、星形、三角形、多角形、五角形、六角形、七角形、および八角形であり得る。一部の実施形態では、ポアの断面は、丸形の形状である。一部の実施形態では、ポアの３次元形状は、円柱状または円錐状である。一部の実施形態では、ポアは、溝がある入口および出口の形状を有する。一部の実施形態では、ポアの形状は、所与の表面内のポアの間で均質（すなわち、一貫したまたは規則的）である。一部の実施形態では、ポアの形状は、所与の表面内のポアの間で不均質（すなわち、混合または変動する）である。
【０１７９】
本明細書に記載の表面は、総ポア数の範囲を有することができる。一部の実施形態では、ポアは、総表面積の約１０％〜約８０％を包含する。一部の実施形態では、表面は、約１．０×１０５〜約１．０×１０３０個の総ポア、またはそれらの間の任意の数もしくは数の範囲を含有する。一部の実施形態では、表面は、約１０〜約１．０×１０１５ポア／ｍｍ２の表面積を含む。
【０１８０】
ポアは、所与の表面内に非常に多くの様式で分布し得る。一部の実施形態では、ポアは、所与の表面内に並行して分布する。そのような一例では、ポアは、同じ方向に並んで分布し、所与の表面内で同じ距離離れている。一部の実施形態では、ポアの分布は、規則正しいか、または均質である。そのような一例では、ポアは、規則的な系統的パターンで分布するか、または所与の表面内で同じ距離離れている。一部の実施形態では、ポアの分布は、ランダムまたは不均質である。そのような一例では、ポアは、不規則的な無秩序のパターンで分布するか、または所与の表面内で異なる距離離れている。一部の実施形態では、多数の表面は、直列で分布する。多数の表面は、均質または不均質な表面のサイズ、形状および／または粗さであり得る。多数の表面は、均質または不均質なポアのサイズ、形状および／または数を有するポアをさらに含有することができ、それによって、異なるＴ細胞型へのある範囲の化合物の同時送達を可能にする。
【０１８１】
一部の実施形態では、個々のポアは、均一な幅寸法（すなわち、ポアの通路の長さに沿って一定の幅）を有する。一部の実施形態では、個々のポアは、可変の幅（すなわち、ポアの通路の長さに沿って増加または減少する幅）を有する。一部の実施形態では、所与の表面内のポアは、同じ個々のポアの深さを有する。一部の実施形態では、所与の表面内のポアは、異なる個々のポアの深さを有する。一部の実施形態では、ポアは、互いに直接隣接している。一部の実施形態では、ポアは、ある距離により、互いに離れている。一部の実施形態では、ポアは、約０．００１μｍ〜約３０ｍｍの距離、またはそれらの間の任意の距離もしくは距離の範囲により、互いに離れている。
【０１８２】
一部の実施形態では、表面は、材料でコーティングされる。材料は、限定なく、テフロン（登録商標）、接着コーティング、界面活性剤、タンパク質、接着分子、抗体、抗凝固剤、細胞機能をモジュレートする因子、核酸、脂質、炭水化物または膜貫通タンパク質を含む、当技術分野において公知の任意の材料から選択することができる。一部の実施形態では、表面は、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）でコーティングされる。一部の実施形態では、材料は、表面に共有結合的に付加される。一部の実施形態では、材料は、表面に非共有結合的に付加されるか、または吸着される。一部の実施形態では、表面分子は、Ｔ細胞がポアを通過するときに放出される。
【０１８３】
一部の実施形態では、表面は、修飾された化学的性質を有する。一部の実施形態では、表面は極性である。一部の実施形態では、表面は親水性である。一部の実施形態では、表面は非極性である。一部の実施形態では、表面は疎水性である。一部の実施形態では、表面は帯電している。一部の実施形態では、表面は、正および／または負に帯電している。一部の実施形態では、表面は、一部の領域において正に帯電し、他の領域において負に帯電することができる。一部の実施形態では、表面は、全体として正電荷、または全体として負電荷を有する。一部の実施形態では、表面は、滑らか、電解研磨される、粗い、またはプラズマ処理される、のうちのいずれか１つであり得る。一部の実施形態では、表面は、双性イオンまたは双極性化合物を含む。一部の実施形態では、表面はプラズマ処理される。
【０１８４】
一部の実施形態では、表面は、より大きなモジュール内に含有される。一部の実施形態では、表面は、プラスチックまたはガラスシリンジなどのシリンジ内に含有される。一部の実施形態では、表面は、プラスチックフィルターホルダー内に含有される。一部の実施形態では、表面は、ピペットチップ内に含有される。
【０１８５】
細胞摂動
一部の実施形態では、本発明は、Ｔ細胞を含む細胞懸濁液を狭窄に通すことによって免疫応答をモジュレートするための方法であって、狭窄はＴ細胞を変形させ、それによって、抗原および／またはアジュバントがＴ細胞に入るようなＴ細胞の摂動を引き起こし、Ｔ細胞における摂動は、Ｔ細胞の外側からの材料がＴ細胞内に移動するのを可能にする、Ｔ細胞における開裂（例えば、孔、裂け目、空洞、開口部、ポア、割れ目、間隙、穿孔部）である、方法を提供する。変形は、例えば、機械的ひずみおよび／またはせん断力によって引き起こすことができる。一部の実施形態では、摂動は、Ｔ細胞膜内の摂動である。一部の実施形態では、摂動は一過性である。一部の実施形態では、Ｔ細胞摂動は、約１．０×１０−９秒〜約２時間、またはそれらの間の任意の時間もしくは時間の範囲で持続する。一部の実施形態では、Ｔ細胞摂動は、約１．０×１０−９秒〜約１秒、約１秒〜約１分、または約１分〜約１時間、持続する。一部の実施形態では、Ｔ細胞摂動は、約１．０×１０−９〜約１．０×１０−１、約１．０×１０−９〜約１．０×１０−２、約１．０×１０−９〜約１．０×１０−３、約１．０×１０−９〜約１．０×１０−４、約１．０×１０−９〜約１．０×１０−５、約１．０×１０−９〜約１．０×１０−６、約１．０×１０−９〜約１．０×１０−７、または約１．０×１０−９〜約１．０×１０−８秒のうちのいずれか１つの間、持続する。一部の実施形態では、Ｔ細胞摂動は、約１．０×１０−８〜約１．０×１０−１、約１．０×１０−７〜約１．０×１０−１、約１．０×１０−６〜約１．０×１０−１、約１．０×１０−５〜約１．０×１０−１、約１．０×１０−４〜約１．０×１０−１、約１．０×１０−３〜約１．０×１０−１、または約１．０×１０−２〜約１．０×１０−１秒のうちのいずれか１つの間、持続する。本明細書に記載の方法によって作り出されるＴ細胞摂動（例えば、ポアまたは孔）は、補体または細菌溶血素によって作り出されるものなどの、多量体ポア構造を形成するためのタンパク質サブユニットのアセンブリーの結果として形成されない。
【０１８６】
Ｔ細胞が狭窄を通過するときに、狭窄は、Ｔ細胞膜に傷害を一時的に与え、これが、摂動による材料の受動的拡散を可能にする。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、およそ１００μ秒の短い期間のみ変形されて、細胞シグナル伝達機構によりアポトーシス経路を活性化する機会を最小化するが、他の持続時間も可能である（例えば、数ナノ秒〜数時間の範囲）。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、約１．０×１０−９秒〜約２時間、またはそれらの間の任意の時間もしくは時間の範囲で、変形される。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、約１．０×１０−９秒〜約１秒、約１秒〜約１分、または約１分〜約１時間、変形される。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、約１．０×１０−９〜約１．０×１０−１、約１．０×１０−９〜約１．０×１０−２、約１．０×１０−９〜約１．０×１０−３、約１．０×１０−９〜約１．０×１０−４、約１．０×１０−９〜約１．０×１０−５、約１．０×１０−９〜約１．０×１０−６、約１．０×１０−９〜約１．０×１０−７、または約１．０×１０−９〜約１．０×１０−８秒のうちのいずれか１つの間、変形される。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、約１．０×１０−８〜約１．０×１０−１、約１．０×１０−７〜約１．０×１０−１、約１．０×１０−６〜約１．０×１０−１、約１．０×１０−５〜約１．０×１０−１、約１．０×１０−４〜約１．０×１０−１、約１．０×１０−３〜約１．０×１０−１、または約１．０×１０−２〜約１．０×１０−１秒のうちいずれか１つの間、変形される。一部の実施形態では、Ｔ細胞を変形させることは、限定なく、約１μｓ〜少なくとも約７５０μｓ、例えば、少なくとも約１μｓ、１０μｓ、５０μｓ、１００μｓ、５００μｓ、または７５０μｓの範囲の時間、Ｔ細胞を変形させることを含む。
【０１８７】
一部の実施形態では、Ｔ細胞への抗原および／またはアジュバントの通過は、Ｔ細胞が狭窄を通過するのと同時に、および／またはＴ細胞の摂動と同時に起こる。一部の実施形態では、Ｔ細胞への化合物の通過は、Ｔ細胞が狭窄を通過した後に起こる。一部の実施形態では、Ｔ細胞への化合物の通過は、Ｔ細胞が狭窄を通過したおよそ数分後に起こる。一部の実施形態では、Ｔ細胞への化合物の通過は、Ｔ細胞が狭窄を通過した約１．０×１０−２秒〜少なくとも約３０分後に起こる。例えば、Ｔ細胞への化合物の通過は、Ｔ細胞が狭窄を通過した、約１．０×１０−２秒〜約１秒、約１秒〜約１分、または約１分〜約３０分後に起こる。一部の実施形態では、Ｔ細胞への化合物の通過は、Ｔ細胞が狭窄を通過した、約１．０×１０−２秒〜約１０分、約１．０×１０−２秒〜約５分、約１．０×１０−２秒〜約１分、約１．０×１０−２秒〜約３０秒、約１．０×１０−２秒〜約１０秒、約１．０×１０−２秒〜約１秒、または約１．０×１０−２秒〜約０．１秒後に起こる。一部の実施形態では、Ｔ細胞への化合物の通過は、Ｔ細胞が狭窄を通過した、約１．０×１０−１秒〜約１０分、約１秒〜約１０分、約１０秒〜約１０分、約５０秒〜約１０分、約１分〜約１０分、または約５分〜約１０分後に起こる。一部の実施形態では、狭窄を通過した後のＴ細胞における摂動は、Ｔ細胞が狭窄を通過した後、およそ約５分以内に修正される。
【０１８８】
一部の実施形態では、狭窄を通過した後の細胞生存率は、約５％〜約１００％である。一部の実施形態では、狭窄を通過した後の細胞生存率は、少なくとも約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％である。一部の実施形態では、細胞生存率は、Ｔ細胞が狭窄を通過した約１．０×１０−２秒〜少なくとも約１０日後に測定される。例えば、細胞生存率は、Ｔ細胞が狭窄を通過した、約１．０×１０−２秒〜約１秒、約１秒〜約１分、約１分〜約３０分、または約３０分〜約２時間後に測定される。一部の実施形態では、細胞生存率は、Ｔ細胞が狭窄を通過した、約１．０×１０−２秒〜約２時間、約１．０×１０−２秒〜約１時間、約１．０×１０−２秒〜約３０分、約１．０×１０−２秒〜約１分、約１．０×１０−２秒〜約３０秒、約１．０×１０−２秒〜約１秒、または約１．０×１０−２秒〜約０．１秒後に測定される。一部の実施形態では、細胞生存率は、Ｔ細胞が狭窄を通過した、約１．５時間〜約２時間、約１時間〜約２時間、約３０分〜約２時間、約１５分〜約２時間、約１分〜約２時間、約３０秒〜約２時間、または約１秒〜約２時間後に測定される。一部の実施形態では、細胞生存率は、Ｔ細胞が狭窄を通過した、約２時間〜約５時間、約５時間〜約１２時間、約１２時間〜約２４時間、または約２４時間〜約１０日後に測定される。
【０１８９】
送達パラメーター
いくつかのパラメーターが、本明細書に記載の方法による免疫応答をモジュレートするためのＴ細胞への化合物の送達に影響を与え得る。一部の実施形態では、細胞懸濁液は、狭窄を通過する前、それと並行して、またはその後に、化合物と接触する。Ｔ細胞は、送達するための化合物を含む溶液に懸濁されて狭窄を通過し得るが、化合物は、Ｔ細胞が狭窄を通過した後に、細胞懸濁液に添加することができる。一部の実施形態では、送達される化合物は、狭窄にコーティングされる。
【０１９０】
Ｔ細胞への化合物の送達に影響を与え得るパラメーターの例としては、限定されるものではないが、狭窄の寸法、狭窄の入口の角度、狭窄の表面の性質（例えば、粗さ、化学修飾、親水性、疎水性など）、運転流束（例えば、狭窄を通る細胞通過時間）、Ｔ細胞の濃度、細胞懸濁液中の化合物の濃度、および狭窄を通過した後にＴ細胞を回復させるまたはインキュベートする時間の量が挙げられ、Ｔ細胞に送達される化合物の通過に影響を及ぼし得る。Ｔ細胞への化合物の送達に影響を与える追加のパラメーターとしては、狭窄におけるＴ細胞の速度、狭窄におけるせん断速度、細胞懸濁液の粘度、流速に垂直な速度成分、および狭窄における時間を挙げることができる。そのようなパラメーターは、化合物の送達を制御するために設計することができる。一部の実施形態では、Ｔ細胞の濃度は、約１０〜少なくとも約１０１２個細胞／ｍＬ、またはそれらの間の任意の濃度もしくは濃度の範囲に及ぶ。一部の実施形態では、送達化合物の濃度は、約１０ｎｇ／ｍＬ〜約１ｇ／ｍＬ、またはそれらの間の任意の濃度もしくは濃度の範囲に及び得る。一部の実施形態では、送達化合物の濃度は、約１ｐＭ〜少なくとも約２Ｍ、またはそれらの間の任意の濃度もしくは濃度の範囲に及び得る。
【０１９１】
本開示の方法において使用される温度は、化合物の送達および細胞生存率に影響を及ぼすように調整することができる。一部の実施形態では、方法は、約−５℃〜約４５℃で行われる。例えば、方法は、室温（例えば、約２０℃）、生理学的温度（例えば、約３７℃）、生理学的温度よりも高い（例えば、約３７℃よりも高い〜４５℃、またはそれよりも高い）もしくは低下した温度（例えば、約−５℃〜約４℃）、またはこれらの例示的な温度の間の温度で行うことができる。
【０１９２】
さまざまな方法を利用して、狭窄を通してＴ細胞を駆動することができる。例えば、圧力を、入口側のポンプ（例えば、コンプレッサー）によって印加することができ、真空を、出口側の真空ポンプによって印加することができ、毛細管作用を、チューブによって適用することができ、および／またはシステムに、重力を供給することができる。変位に基づく流動システムを使用することもできる（例えば、シリンジポンプ、蠕動ポンプ、手動シリンジまたはピペット、ピストンなど）。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、陽圧または陰圧によって狭窄を通過する。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、一定圧力または可変圧力によって狭窄を通過する。一部の実施形態では、圧力は、シリンジを使用して印加される。一部の実施形態では、圧力は、気体（例えば、気体シリンダーからの）を使用して印加される陽圧である。一部の実施形態では、圧力は、ポンプを使用して印加される。一部の実施形態では、ポンプは、蠕動ポンプまたはダイヤフラムポンプである。一部の実施形態では、圧力は、真空を使用して印加される。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ｇ力によって狭窄を通過する。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、遠心力によって狭窄を通過する。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、毛細管圧によって狭窄を通過する。
【０１９３】
一部の実施形態では、流体の流動は、狭窄を通してＴ細胞を方向づける。一部の実施形態では、流体の流動は、Ｔ細胞が狭窄を通過する前の乱流である。乱流は、所与のポイントでの速度が、大きさおよび方向が不規則に変動する流体の流動である。一部の実施形態では、狭窄を通る流体の流動は、層流である。層流は、すべてのポイントでの流動の方向が一定のままである、固体境界付近の流体における途切れない流動を含む。一部の実施形態では、流体の流動は、Ｔ細胞が狭窄を通過した後の乱流である。Ｔ細胞が狭窄を通過する速度は、変動させることができる。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、均一な細胞スピードで狭窄を通過する。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、変動する細胞スピードで狭窄を通過する。
【０１９４】
他の実施形態では、組合せ処置は、Ｔ細胞を含む細胞懸濁液を、狭窄に通過させることによって、免疫応答をモジュレートするために使用され、狭窄は、Ｔ細胞を変形させ、それによって、抗原および／またはアジュバントが、例えば、本明細書に記載の方法でＴ細胞に入るように、Ｔ細胞の摂動を引き起こした後、狭窄の下流で電場に曝露される。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、狭窄を通過した後、少なくとも１つの電極によって生じた電場を通過する。一部の実施形態では、電場は、Ｔ細胞の核などのＴ細胞の内側の第２の場所への化合物の送達を支援する。例えば、細胞変形狭窄および電場の組合せは、Ｔ細胞（例えば、細胞核）に、抗体をコードするプラスミドを送達し、抗体のｄｅ  ｎｏｖｏ産生をもたらす。一部の実施形態では、１つまたは複数の電極は、電場を生じるために細胞変形狭窄に近接している。一部の実施形態では、電場は、約０．１ｋＶ／ｍ〜約１００ＭＶ／ｍ、またはそれらの間の任意の数もしくは数の範囲である。一部の実施形態では、集積回路を使用して、電極を駆動するための電気シグナルを提供する。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、約１ｎｓ〜約１ｓのパルス幅、および約１００ｎｓ〜約１０ｓ、またはそれらの間の任意の時間もしくは時間の範囲の期間、電場に曝露される。
【０１９５】
Ｔ細胞への送達のための細胞懸濁液
細胞懸濁液は、混合されるか、または精製された、Ｔ細胞の集団であり得る。一部の実施形態では、細胞懸濁液は、全血などの混合細胞集団である。一部の実施形態では、細胞懸濁液は、Ｔ細胞の精製された集団などの精製細胞集団である。
【０１９６】
細胞懸濁液の組成（例えば、容量オスモル濃度、塩濃度、血清含有量、細胞濃度、ｐＨなど）は、免疫応答をモジュレートするための化合物の送達に影響し得る。一部の実施形態では、懸濁液は全血を含む。あるいは、細胞懸濁液は、血液以外の生理食塩溶液または生理学的媒体中の細胞の混合物である。一部の実施形態では、細胞懸濁液は水溶液を含む。一部の実施形態では、水溶液は、細胞培養培地、（リン酸緩衝食塩水）ＰＢＳ、塩、金属イオン、糖、成長因子、動物由来生成物、増量材料、界面活性剤、潤滑剤、脂質、ビタミン、アミノ酸、タンパク質、細胞周期阻害剤、および／またはアクチン重合に影響する作用物質を含む。一部の実施形態では、細胞培養培地は、ＤＭＥＭ、Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ（登録商標）、ＩＭＤＭ、ＲＰＭＩ、Ｘ−Ｖｉｖｏ１０およびＸ−Ｖｉｖｏ１５である。加えて、溶液緩衝液（solution  buffer）は、例えば、狭窄またはポアの目詰まりを低下または排除し、細胞生存率を改善するように設計することができる、１つまたは複数の潤滑剤（プルロニック（登録商標）または他の界面活性剤）を含むことができる。例示的な界面活性剤としては、限定なく、ポロキサマー；ポリソルベート；マンニトール、ソルビトールなどの糖または糖アルコール；動物由来血清；およびアルブミンタンパク質が挙げられる。
【０１９７】
ある特定の種類のＴ細胞による一部の構成では、Ｔ細胞は、Ｔ細胞の内部への化合物の送達を助ける１つまたは複数の溶液中でインキュベートすることができる。一部の実施形態では、水溶液は、アクチン重合に影響する作用物質を含む。一部の実施形態では、アクチン重合に影響する作用物質は、ラトランクリンＡ、サイトカラシンおよび／またはコルヒチンである。例えば、Ｔ細胞は、ラトランクリン（Lantrunculin）Ａ（０．１μｇ／ｍＬ）などの解重合溶液中で、送達前に１時間インキュベートして、アクチン細胞骨格を解重合することができる。追加の例として、Ｔ細胞は、１０μＭのコルヒチン（Ｓｉｇｍａ）中で、送達前に２時間インキュベートして、微小管ネットワークを解重合することができる。
【０１９８】
一部の実施形態では、細胞集団は、開示される方法における使用の前に、富化される。例えば、細胞は、体液、例えば、末梢血から得られ、必要に応じて、富化されるか、またはＴ細胞を濃縮するために精製される。細胞は、限定なく、磁気細胞分離、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）または密度勾配遠心分離を含む、当技術分野において公知の任意の方法によって富化されてもよい。
【０１９９】
細胞懸濁液の粘度も、本明細書に開示される方法に影響し得る。一部の実施形態では、細胞懸濁液の粘度は、約８．９×１０−４Ｐａ・ｓ〜約４．０×１０−３Ｐａ・ｓ、またはそれらの間の任意の値もしくは値の範囲のいずれか１つの間に及ぶ。一部の実施形態では、粘度は、約８．９×１０−４Ｐａ・ｓ〜約４．０×１０−３Ｐａ・ｓ、約８．９×１０−４Ｐａ・ｓ〜約３．０×１０−３Ｐａ・ｓ、約８．９×１０−４Ｐａ・ｓ〜約２．０×１０−３Ｐａ・ｓ、または約８．９×１０−３Ｐａ・ｓ〜約１．０×１０−３Ｐａ・ｓのうちのいずれか１つの間に及ぶ。一部の実施形態では、粘度は、約０．８９ｃＰ〜約４．０ｃＰ、約０．８９ｃＰ〜約３．０ｃＰ、約０．８９ｃＰ〜約２．０ｃＰ、または約０．８９ｃＰ〜約１．０ｃＰのうちのいずれか１つの間に及ぶ。一部の実施形態では、細胞懸濁液の粘度がせん断ひずみの条件下で減少する、せん断減粘効果が観察される。粘度は、限定なく、ガラス毛細管粘度計などの粘度計、またはレオメーターを含む、当技術分野において公知の任意の方法によって測定することができる。粘度計は、１つの流動条件下で粘度を測定するが、レオメーターは、流動条件と共に変動する粘度を測定するために使用される。一部の実施形態では、粘度は、血液などのせん断減粘性溶液について測定される。一部の実施形態では、粘度は、約−５℃〜約４５℃で測定される。例えば、粘度は、室温（例えば、約２０℃）、生理学的温度（例えば、約３７℃）、生理学的温度よりも高い（例えば、約３７℃よりも高い〜４５℃、またはそれよりも高い）、低下した温度（例えば、約−５℃〜約４℃）、またはこれらの例示的な温度の間の温度で測定される。
【０２００】
システムおよびキット
一部の態様では、本発明は、本明細書で記載される方法のいずれかにおける使用のためのものなど、本明細書で記載される実施形態のいずれかに従った狭窄、Ｔ細胞懸濁液、抗原、またはアジュバントのうちの１つまたは複数を含むシステムを提供する。システムは、「マイクロ流体システムおよびその構成要素」と題された上記の節で開示されるものを含めた、本明細書で開示される物質の組成および方法に関して記載される任意の実施形態を含み得る。一部の実施形態では、細胞変形狭窄は、Ｔ細胞への送達に適したサイズになっている。一部の実施形態では、運転流速、細胞および化合物濃度、温度、狭窄における細胞の速度、ならびに細胞懸濁液の組成（例えば、容量オスモル濃度、塩濃度、血清含有量、細胞濃度、ｐＨ等）などの送達パラメーターは、免疫応答をモジュレートするための化合物の最大応答のために最適化される。
【０２０１】
個体における免疫応答をモジュレートすることにおける使用のためのキットまたは製品も提供される。一部の実施形態では、キットは、本明細書で記載される改変Ｔ細胞のいずれかを含めた、抗原および／またはアジュバントを含む改変Ｔ細胞を含む。一部の実施形態では、キットは、個体における免疫応答をモジュレートすることにおける使用のための改変Ｔ細胞を作出することにおける使用のための、狭窄、Ｔ細胞懸濁液、抗原、またはアジュバントのうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、キットは、適切なパッケージ内に、本明細書で記載される構成要素（例えば、ポアを含有するマイクロ流体チャネルもしくは表面、細胞懸濁液、および／または化合物）を含む。適切なパッケージ材料は当技術分野において公知であり、例えばバイアル（密封バイアルなど）、容器、アンプル、瓶、広口瓶、フレキシブル包装材料（例えば、密封マイラーまたはプラスチック袋）等を含む。これら製品は、さらに滅菌され得かつ／または密封され得る。
【０２０２】
本発明は、本明細書で記載される方法の構成要素を含むキットも提供し、個体における免疫応答をモジュレートする前記方法を実施するための指示、ならびに／またはＴ細胞に抗原および／もしくはアジュバントを導入するための指示をさらに含み得る。本明細書で記載されるキットは、本明細書で記載される方法のいずれかを実施するための指示；例えば、個体における免疫応答をモジュレートするための指示、または抗原および／もしくはアジュバントを含有するようにＴ細胞を改変するための指示とともに、バッファ、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、および添付文書を含めた他の材料をさらに含み得る。
【０２０３】
例示的な実施形態
実施形態１。  抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞であって、前記抗原は前記改変Ｔ細胞に対して外因性でありかつ免疫原性エピトープを含み、前記アジュバントは細胞内に存在する、改変Ｔ細胞。
【０２０４】
実施形態２。  配列番号１８〜２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む抗原を含む改変Ｔ細胞。
【０２０５】
実施形態３。  抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞であって、前記抗原は免疫原性エピトープを含み、前記改変Ｔ細胞は、
ａ）インプットＴ細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、前記抗原および前記アジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成するステップ；ならびに
ｂ）前記抗原および前記アジュバントが前記摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプットＴ細胞と前記抗原および前記アジュバントとをインキュベートし、それによって、前記抗原およびアジュバントを含む前記改変Ｔ細胞を作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、改変Ｔ細胞。
【０２０６】
実施形態４。  前記摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる前記抗原の濃度は約０．１μＭ〜約１ｍＭであり、および／または前記摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる前記アジュバントの濃度は約０．１μＭ〜約１ｍＭである、実施形態３に記載の改変Ｔ細胞。
【０２０７】
実施形態５。  前記摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる前記抗原の前記アジュバントに対する比は約１００００：１〜約１：１００００である、実施形態３または４に記載の改変Ｔ細胞。
【０２０８】
実施形態６。  抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞であって、前記抗原は免疫原性エピトープを含み、前記改変Ｔ細胞は、
ａ）前記アジュバントを含むインプットＴ細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成するステップ；ならびに
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプットＴ細胞と前記抗原とをインキュベートし、それによって、前記抗原および前記アジュバントを含む前記改変Ｔ細胞を作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、改変Ｔ細胞。
【０２０９】
実施形態７。  前記摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる前記抗原の濃度は約０．１μＭ〜約１ｍＭである、実施形態６に記載の改変Ｔ細胞。
【０２１０】
実施形態８。  抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞であって、前記抗原は免疫原性エピトープを含み、前記改変Ｔ細胞は、
ａ）前記抗原を含むインプットＴ細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、前記アジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成するステップ；ならびに
ｂ）前記アジュバントが前記摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプットＴ細胞と前記アジュバントとをインキュベートし、それによって、前記抗原および前記アジュバントを含む前記改変Ｔ細胞を作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、改変Ｔ細胞。
【０２１１】
実施形態９。  前記摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる前記アジュバントの濃度は約０．１μＭ〜約１ｍＭである、実施形態８に記載の改変Ｔ細胞。
【０２１２】
実施形態１０。  前記インプットＴ細胞に、それが前記狭窄を通過するときに変形力が印加され、それによって、前記インプットＴ細胞の前記摂動が引き起こされる、実施形態３〜９のいずれか一つに記載の改変Ｔ細胞。
【０２１３】
実施形態１１。  前記プロセスは、前記インプットＴ細胞および／または前記改変Ｔ細胞と、さらなるインキュベーションステップなしで調製される対応する改変Ｔ細胞と比較して前記改変Ｔ細胞の生存能力および／または機能を増強する作用物質とをインキュベートするステップをさらに含む、実施形態３〜１０のいずれか一つに記載の改変Ｔ細胞。
【０２１４】
実施形態１２。  前記作用物質は、エンドサイトーシスを増強するまたは安定剤もしくは補因子として作用する化合物である、実施形態１１に記載の改変Ｔ細胞。
【０２１５】
実施形態１３。  前記狭窄の前記直径は、前記インプットＴ細胞の前記直径未満である、実施形態３〜１２のいずれか一つに記載の改変Ｔ細胞。
【０２１６】
実施形態１４。  前記狭窄の前記直径は、前記インプットＴ細胞の前記直径の約２０％〜約９９％である、実施形態１３に記載の改変Ｔ細胞。
【０２１７】
実施形態１５。  前記狭窄の前記直径は、前記インプットＴ細胞の前記直径の約２０％〜約６０％である、実施形態１４に記載の改変Ｔ細胞。
【０２１８】
実施形態１６。  前記抗原および／またはアジュバントは、前記改変Ｔ細胞の細胞質基質および／または小胞に存在する、実施形態１〜１５のいずれか一つに記載の改変Ｔ細胞。
【０２１９】
実施形態１７。  前記小胞はエンドソームである、実施形態１〜１６のいずれか一つに記載の改変Ｔ細胞。
【０２２０】
実施形態１８。  前記抗原および／または前記アジュバントは、前記改変Ｔ細胞の多数の区画に存在する、実施形態１〜１７のいずれか一つに記載の改変Ｔ細胞。
【０２２１】
実施形態１９。  前記抗原または免疫原性エピトープは、前記改変Ｔ細胞の表面に結合している、実施形態１〜１８のいずれか一つに記載の改変Ｔ細胞。
【０２２２】
実施形態２０。  前記アジュバントは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＩＦＮ−α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ−Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、イミキモド、レシキモド、またはリポ多糖（ＬＰＳ）である、実施形態１〜１９のいずれか一つに記載の改変Ｔ細胞。
【０２２３】
実施形態２１。  前記アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮである、実施形態２０に記載の改変Ｔ細胞。
【０２２４】
実施形態２２。  前記ＣｐＧ  ＯＤＮは、クラスＡ  ＣｐＧ  ＯＤＮ、クラスＢ  ＣｐＧ  ＯＤＮ、またはクラスＣ  ＣｐＧ  ＯＤＮである、実施形態２１に記載の改変Ｔ細胞。
【０２２５】
実施形態２３。  前記免疫原性エピトープは疾患関連抗原に由来する、実施形態１〜２２のいずれか一つに記載の改変Ｔ細胞。
【０２２６】
実施形態２４。  前記免疫原性エピトープは、罹患細胞から単離されたペプチドまたはｍＲＮＡに由来する、実施形態２３に記載の改変Ｔ細胞。
【０２２７】
実施形態２５。  前記免疫原性エピトープは非自己抗原に由来する、実施形態１〜２４のいずれか一つに記載の改変Ｔ細胞。
【０２２８】
実施形態２６。  前記免疫原性エピトープは、腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、または真菌抗原に由来する、実施形態１〜２５のいずれか一つに記載の改変Ｔ細胞。
【０２２９】
実施形態２７。  前記免疫原性エピトープはヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原に由来する、実施形態２６に記載の改変Ｔ細胞。
【０２３０】
実施形態２８。  前記ＨＰＶはＨＰＶ−１６またはＨＰＶ−１８である、実施形態２７に記載の改変Ｔ細胞。
【０２３１】
実施形態２９。  前記抗原は、ＨＰＶ  Ｅ６および／またはＥ７に由来するＨＬＡ−Ａ２拘束性ペプチドを含む、実施形態２７または２８に記載の改変Ｔ細胞。
【０２３２】
実施形態３０。  前記ＨＬＡ−Ａ２拘束性ペプチドは、配列番号１〜４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態２９に記載の改変Ｔ細胞。
【０２３３】
実施形態３１。  前記抗原は、配列番号１８〜２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態３０に記載の改変Ｔ細胞。
【０２３４】
実施形態３２。  複数の免疫原性エピトープを含む複数の抗原を含む、実施形態１〜３０のいずれか一つに記載の改変Ｔ細胞。
【０２３５】
実施形態３３。  前記複数の免疫原性エピトープを含む前記複数の抗原を含む前記改変Ｔ細胞の個体への投与後、前記複数の免疫原性エピトープのいずれも、他の免疫原性エピトープのいずれに対する前記個体における免疫応答も減少させない、実施形態３２に記載の改変Ｔ細胞。
【０２３６】
実施形態３４。  前記抗原はポリペプチドであり、前記免疫原性エピトープは免疫原性ペプチドエピトープである、実施形態１〜３３のいずれか一つに記載の改変Ｔ細胞。
【０２３７】
実施形態３５。  前記免疫原性ペプチドエピトープは、Ｎ末端隣接ポリペプチドおよび／またはＣ末端隣接ポリペプチドに融合している、実施形態３０に記載の改変Ｔ細胞。
【０２３８】
実施形態３６。  前記抗原は、免疫原性ペプチドエピトープおよび１つまたは複数の異種ペプチド配列を含むポリペプチドである、実施形態３０に記載の改変Ｔ細胞。
【０２３９】
実施形態３７。  前記抗原は、異種ペプチド配列がＮ末端および／またはＣ末端で隣接している免疫原性ペプチドエピトープを含むポリペプチドである、実施形態３４に記載の改変Ｔ細胞。
【０２４０】
実施形態３８。  隣接する前記異種ペプチド配列は疾患関連免疫原性ペプチドに由来する、実施形態３５に記載の改変Ｔ細胞。
【０２４１】
実施形態３９。  前記Ｎ末端隣接ポリペプチドは配列番号５〜１０のいずれか１つのアミノ酸配列を含み、および／または前記Ｃ末端隣接ポリペプチドは配列番号１１〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態３５に記載の改変Ｔ細胞。
【０２４２】
実施形態４０。  前記抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る、実施形態１〜３９のいずれか一つに記載の改変Ｔ細胞。
【０２４３】
実施形態４１。  約０．１μＭ〜約１ｍＭの濃度で前記アジュバントを含む、実施形態１〜４０のいずれか一つに記載の改変Ｔ細胞。
【０２４４】
実施形態４２。  約０．１μＭ〜約１ｍＭの濃度で前記抗原を含む、実施形態１〜４１のいずれか一つに記載の改変Ｔ細胞。
【０２４５】
実施形態４３。  前記抗原の前記アジュバントに対する比は約１００００：１〜約１：１００００である、実施形態１〜４２のいずれか一つに記載の改変Ｔ細胞。
【０２４６】
実施形態４４。  ａ）前記抗原、ｂ）前記抗原および少なくとも１つの他の抗原、ならびに／またはｃ）前記抗原および前記アジュバント、を含む複合体を含む、実施形態１〜４３のいずれか一つに記載の改変Ｔ細胞。
【０２４７】
実施形態４５。  前記改変Ｔ細胞は、作用物質をさらに含み、前記作用物質は、前記作用物質を含まない対応する改変Ｔ細胞と比較して前記改変Ｔ細胞の生存能力および／または機能を増強する、実施形態１〜４４のいずれか一つに記載の改変Ｔ細胞。
【０２４８】
実施形態４６。  前記作用物質は、エンドサイトーシス、安定剤、または補因子を増強する化合物である、実施形態４５に記載の改変Ｔ細胞。
【０２４９】
実施形態４７。  前記作用物質はアルブミンである、実施形態４５に記載の改変Ｔ細胞。
【０２５０】
実施形態４８。  前記アルブミンは、マウス、ウシ、またはヒトアルブミンである、実施形態４７に記載の改変Ｔ細胞。
【０２５１】
実施形態４９。  前記作用物質は、二価金属カチオン、グルコース、ＡＴＰ、カリウム、グリセロール、トレハロース、Ｄ−スクロース、ＰＥＧ１５００、Ｌ−アルギニン、Ｌ−グルタミン、またはＥＤＴＡである、実施形態４５に記載の改変Ｔ細胞。
【０２５２】
実施形態５０。  前記作用物質はマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）を含む、実施形態４９に記載の改変Ｔ細胞。
【０２５３】
実施形態５１。  共刺激分子のうちの１つまたは複数の発現を増加させるようにさらに改変されている、実施形態１〜５０のいずれか一つに記載の改変Ｔ細胞。
【０２５４】
実施形態５２。  前記共刺激分子は、Ｂ７−Ｈ２（ＩＣＯＳＬ）、Ｂ７−１（ＣＤ８０）、Ｂ７−２（ＣＤ８６）、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＣＤ４０、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ３０Ｌ、ＴＩＭ４、ＳＬＡＭ、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ１５５、またはＣＤ１１２である、実施形態５１に記載の改変Ｔ細胞。
【０２５５】
実施形態５３。  前記１つまたは複数の共刺激分子の増加した発現をもたらす核酸を含む、実施形態５１または５２に記載の改変Ｔ細胞。
【０２５６】
実施形態５４。  ＭＨＣクラスＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む、実施形態１〜５３のいずれか一つに記載の改変Ｔ細胞。
【０２５７】
実施形態５５。  ＭＨＣクラスＩＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む、実施形態１〜５４のいずれか一つに記載の改変Ｔ細胞。
【０２５８】
実施形態５６。  前記改変Ｔ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答は、前記さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答と比較して低下している、実施形態５４に記載の改変Ｔ細胞。
【０２５９】
実施形態５７。  前記改変Ｔ細胞が投与された個体におけるそれらの循環半減期は、前記さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞が投与された個体におけるそれらの循環半減期と比較して増加している、実施形態５４または５６に記載の改変Ｔ細胞。
【０２６０】
実施形態５８。  ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、またはナチュラルキラーＴ細胞のうちの１つまたは複数を含む、実施形態１〜５７のいずれか一つに記載の改変Ｔ細胞。
【０２６１】
実施形態５９。  ＣＤ３＋  Ｔ細胞、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＡ＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＯ＋  Ｔ細胞、またはγδ−Ｔ細胞のうちの１つまたは複数を含む、実施形態１〜５８のいずれか一つに記載の改変Ｔ細胞。
【０２６２】
実施形態６０。  実施形態１〜５９のいずれか一つに記載の改変Ｔ細胞を含む組成物。実施形態６１。  実施形態１〜５９のいずれか一つに記載の改変Ｔ細胞および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【０２６３】
実施形態６２。  個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、実施形態１〜５９のいずれか一つに記載の改変Ｔ細胞、実施形態６０に記載の組成物、または実施形態６１に記載の医薬組成物を前記個体に投与するステップを含む、方法。
【０２６４】
実施形態６３。  個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、
ａ）配列番号１８〜２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む抗原を含む改変Ｔ細胞を前記個体に投与するステップ；および
ｂ）アジュバントを前記個体に投与するステップ
を含む、方法。
【０２６５】
実施形態６４。  個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、
ａ）インプットＴ細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成し、前記抗原は免疫原性エピトープを含むステップ；
ｂ）前記抗原および前記アジュバントが前記摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプットＴ細胞と前記抗原および前記アジュバントとをインキュベートし、それによって、前記抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞を作出するステップ；ならびに
ｃ）前記改変Ｔ細胞を前記個体に投与するステップ
を含む、方法。
【０２６６】
実施形態６５。  前記摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる前記抗原の濃度は約０．１μＭ〜約１ｍＭであり、および／または前記摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる前記アジュバントの濃度は約０．１μＭ〜約１ｍＭである、実施形態６４に記載の方法。
【０２６７】
実施形態６６。  前記摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる前記抗原の前記アジュバントに対する比は約１００００：１〜約１：１００００である、実施形態６４または６５に記載の方法。
【０２６８】
実施形態６７。  個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、
ａ）アジュバントを含むインプットＴ細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成し、前記抗原は免疫原性エピトープを含むステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプットＴ細胞と前記抗原とをインキュベートし、それによって、前記抗原および前記アジュバントを含む改変Ｔ細胞を作出するステップ；ならびに
ｃ）前記改変Ｔ細胞を前記個体に投与するステップ
を含む、方法。
【０２６９】
実施形態６８。  前記摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる前記抗原の濃度は約０．１μＭ〜約１ｍＭである、実施形態６７に記載の方法。
【０２７０】
実施形態６９。  個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、
ａ）抗原を含むインプットＴ細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記抗原は免疫原性エピトープを含み、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、アジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成するステップ；
ｂ）前記アジュバントが前記摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプットＴ細胞と前記アジュバントとをインキュベートし、それによって、前記抗原および前記アジュバントを含む改変Ｔ細胞を作出するステップ；ならびに
ｃ）前記改変Ｔ細胞を前記個体に投与するステップ
を含む、方法。
【０２７１】
実施形態７０。  前記摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる前記アジュバントの濃度は約０．１μＭ〜約１ｍＭである、実施形態６９に記載の方法。
【０２７２】
実施形態７１。  前記改変Ｔ細胞は、約０．１μＭ〜約１ｍＭの濃度で前記抗原を含む、実施形態６４〜７０のいずれか一つに記載の方法。
【０２７３】
実施形態７２。  前記改変Ｔ細胞は、約０．１μＭ〜約１ｍＭの濃度で前記アジュバントを含む、実施形態６４〜７１のいずれか一つに記載の方法。
【０２７４】
実施形態７３。  前記改変Ｔ細胞における前記抗原の前記アジュバントに対する比は約１００００：１〜約１：１００００である、実施形態６４〜７２のいずれか一つに記載の方法。
【０２７５】
実施形態７４。  前記改変Ｔ細胞は、ａ）前記抗原、ｂ）前記抗原および少なくとも１つの他の抗原、ならびに／またはｃ）前記抗原および前記アジュバント、を含む複合体を含む、実施形態６４〜７３のいずれか一つに記載の方法。
【０２７６】
実施形態７５。  個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、
ａ）インプットＴ細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成し、前記抗原は免疫原性エピトープを含むステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプットＴ細胞と前記抗原とをインキュベートし、それによって、前記抗原を含む改変Ｔ細胞を作出するステップ；
ｃ）前記改変Ｔ細胞を前記個体に投与するステップ；および
ｄ）アジュバントを前記個体に投与するステップ
を含む、方法。
【０２７７】
実施形態７６。  前記摂動インプットＴ細胞とインキュベートされる前記抗原の濃度は約０．１μＭ〜約１ｍＭである、実施形態７５に記載の方法。
【０２７８】
実施形態７７。  前記インプットＴ細胞に、それが前記狭窄を通過するときに変形力が印加され、それによって、前記インプットＴ細胞の前記摂動が引き起こされる、実施形態６４〜７６のいずれか一つに記載の方法。
【０２７９】
実施形態７８。  前記インプットＴ細胞および／または改変Ｔ細胞と、さらなるインキュベーションステップなしで調製される対応する改変Ｔ細胞と比較して前記改変Ｔ細胞の生存能力および／または機能を増強する作用物質とをインキュベートするステップをさらに含む、実施形態６４〜７７のいずれか一つに記載の方法。
【０２８０】
実施形態７９。  前記作用物質は、エンドサイトーシス、安定剤、または補因子を増強する化合物である、実施形態７８に記載の方法。
【０２８１】
実施形態８０。  前記免疫応答は増強される、実施形態６４〜７９のいずれか一つに記載の方法。
【０２８２】
実施形態８１。  前記増強した免疫応答は前記抗原に向けられたものである、実施形態８０に記載の方法。
【０２８３】
実施形態８２。  前記狭窄の前記直径は、前記インプットＴ細胞の前記直径未満である、実施形態６４〜８１のいずれか一つに記載の方法。
【０２８４】
実施形態８３。  前記狭窄の前記直径は、前記インプットＴ細胞の前記直径の約２０％〜約９９％である、実施形態８２に記載の方法。
【０２８５】
実施形態８４。  前記狭窄の前記直径は、前記インプットＴ細胞の前記直径の約２０％〜約６０％である、実施形態８３に記載の方法。
【０２８６】
実施形態８５。  前記抗原および／またはアジュバントは、前記改変Ｔ細胞の細胞質基質および／または小胞に存在する、実施形態６４〜８４のいずれか一つ一つに記載の方法。
【０２８７】
実施形態８６。  前記小胞はエンドソームである、実施形態６４〜８５のいずれか一つに記載の方法。
【０２８８】
実施形態８７。  前記抗原および／または前記アジュバントは、前記改変Ｔ細胞の多数の区画に存在する、実施形態６４〜８６のいずれか一つに記載の方法。
【０２８９】
実施形態８８。  前記抗原または免疫原性エピトープは、前記改変Ｔ細胞の表面に結合している、実施形態６４〜８７のいずれか一つに記載の方法。
【０２９０】
実施形態８９。  前記アジュバントは、ＣｐＧ  ＯＤＮ、ＩＦＮ−α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ−Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、イミキモド、レシキモド、および／またはリポ多糖（ＬＰＳ）である、実施形態６４〜８８のいずれか一つに記載の方法。
【０２９１】
実施形態９０。  前記アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮである、実施形態８９に記載の方法。
【０２９２】
実施形態９１。  前記ＣｐＧ  ＯＤＮは、クラスＡ  ＣｐＧ  ＯＤＮ、クラスＢ  ＣｐＧ  ＯＤＮ、またはクラスＣ  ＣｐＧ  ＯＤＮである、実施形態９０に記載の方法。
【０２９３】
実施形態９２。  前記免疫原性エピトープは疾患関連抗原に由来する、実施形態６４〜９１のいずれか一つに記載の方法。
【０２９４】
実施形態９３。  前記免疫原性エピトープは、罹患細胞から単離されたペプチドまたはｍＲＮＡに由来する、実施形態９２に記載の方法。
【０２９５】
実施形態９４。  前記免疫原性エピトープは非自己抗原に由来する、実施形態６４〜９３のいずれか一つに記載の方法。
【０２９６】
実施形態９５。  前記免疫原性エピトープは、腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、または真菌抗原に由来する、実施形態６４〜９４のいずれか一つに記載の方法。
【０２９７】
実施形態９６。  前記免疫原性エピトープはヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原に由来する、実施形態９５に記載の方法。
【０２９８】
実施形態９７。  前記ＨＰＶはＨＰＶ−１６またはＨＰＶ−１８である、実施形態９６に記載の方法。
【０２９９】
実施形態９８。  前記抗原は、ＨＰＶ  Ｅ６および／またはＥ７に由来するＨＬＡ−Ａ２拘束性ペプチドを含む、実施形態９６または９７に記載の方法。
【０３００】
実施形態９９。  前記ＨＬＡ−Ａ２拘束性ペプチドは、配列番号１〜４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態９８に記載の方法。
【０３０１】
実施形態１００。  前記抗原は、配列番号１８〜２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態９９に記載の方法。
【０３０２】
実施形態１０１。  前記改変Ｔ細胞は、複数の免疫原性エピトープを含む複数の抗原を含む、実施形態６４〜１００のいずれか一つに記載の方法。
【０３０３】
実施形態１０２。  前記複数の免疫原性エピトープのいずれも、他の免疫原性エピトープのいずれに対する前記個体における免疫応答も減少させない、実施形態６４〜１０１に記載の方法。
【０３０４】
実施形態１０３。  前記抗原はポリペプチドであり、前記免疫原性エピトープは免疫原性ペプチドエピトープである、実施形態６４〜１０２のいずれか一つに記載の方法。
【０３０５】
実施形態１０４。  前記免疫原性ペプチドエピトープは、Ｎ末端隣接ポリペプチドおよび／またはＣ末端隣接ポリペプチドに融合している、実施形態１０３に記載の方法。
【０３０６】
実施形態１０５。  前記Ｎ末端隣接ポリペプチドおよび／または前記Ｃ末端隣接ポリペプチドに融合した前記免疫原性ペプチドエピトープは、天然に存在しない配列である、実施形態１０４に記載の改変Ｔ細胞。
【０３０７】
実施形態１０６。  前記Ｎ末端および／またはＣ末端隣接ポリペプチドは、免疫原性合成長鎖ペプチド（ＳＬＰ）に由来する、実施形態１０５に記載の方法。
【０３０８】
実施形態１０７。  前記Ｎ末端および／またはＣ末端隣接ポリペプチドは、疾患関連免疫原性ＳＬＰに由来する、実施形態１０５に記載の方法。
【０３０９】
実施形態１０８。  前記Ｎ末端隣接ポリペプチドは配列番号５〜１０のいずれか１つのアミノ酸配列を含み、および／または前記Ｃ末端隣接ポリペプチドは配列番号１１〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態１０５に記載の方法。
【０３１０】
実施形態１０９。  前記抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る、実施形態６４〜１０８のいずれか一つに記載の方法。
【０３１１】
実施形態１１０。  前記改変Ｔ細胞は、作用物質をさらに含み、前記作用物質は、前記作用物質を含まない対応する改変Ｔ細胞と比較して前記改変Ｔ細胞の生存能力および／または機能を増強する、実施形態６４〜１０９のいずれか一つに記載の方法。
【０３１２】
実施形態１１１。  前記作用物質は、エンドサイトーシス、安定剤、または補因子を増強する化合物である、実施形態１１０に記載の改変Ｔ細胞。
【０３１３】
実施形態１１２。  前記作用物質はアルブミンである、実施形態１１１に記載の改変Ｔ細胞。
【０３１４】
実施形態１１３。  前記アルブミンは、マウス、ウシ、またはヒトアルブミンである、実施形態１１２に記載の改変Ｔ細胞。
【０３１５】
実施形態１１４。  前記作用物質は、二価金属カチオン、グルコース、ＡＴＰ、カリウム、グリセロール、トレハロース、Ｄ−スクロース、ＰＥＧ１５００、Ｌ−アルギニン、Ｌ−グルタミン、またはＥＤＴＡである、実施形態１１０に記載の改変Ｔ細胞。
【０３１６】
実施形態１１５。  前記改変Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む、実施形態６４〜１１４のいずれか一つに記載の方法。
【０３１７】
実施形態１１６。  前記改変Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む、実施形態６４〜１１５のいずれか一つに記載の方法。
【０３１８】
実施形態１１７。  前記改変Ｔ細胞の同種異系の状況における投与に応答した前記個体において開始された自然免疫応答は、前記さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞の同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答と比較して低下している、実施形態１１５に記載の方法。
【０３１９】
実施形態１１８。  前記改変Ｔ細胞が投与された個体におけるそれらの循環半減期は、前記さらなる改変を含まない対応する改変Ｔ細胞が投与された個体におけるそれらの循環半減期と比較して増加している、実施形態１１５または１１７に記載の方法。
【０３２０】
実施形態１１９。  前記改変Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、またはナチュラルキラーＴ細胞のうちの１つまたは複数を含む、実施形態６４〜１１８のいずれか一つに記載の方法。
【０３２１】
実施形態１２０。  前記改変Ｔ細胞は、ＣＤ３＋  Ｔ細胞、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＡ＋  Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＯ＋  Ｔ細胞、またはγδ−Ｔ細胞のうちの１つまたは複数を含む、実施形態６４〜１１９のいずれか一つに記載の方法。
【０３２２】
実施形態１２１。  前記改変Ｔ細胞は前記個体に対して同種異系である、実施形態６４〜１２０のいずれか一つに記載の方法。
【０３２３】
実施形態１２２。  前記改変Ｔ細胞は前記個体に対して自家である、実施形態６４〜１２１のいずれか一つに記載の方法。
【０３２４】
実施形態１２３。  前記個体は、炎症および／または免疫応答をモジュレートするよう事前調整されている、実施形態６４〜１２２のいずれか一つに記載の方法。
【０３２５】
実施形態１２４。  第２のアジュバントを前記個体に投与するステップをさらに含む、実施形態６４〜１２３のいずれか一つに記載の方法。
【０３２６】
実施形態１２５。  前記第２のアジュバントは、ＩＦＮ−α、ＬＰＳ、またはＣｐＧ  ＯＤＮである、実施形態１２４に記載の方法。
【０３２７】
実施形態１２６。  前記改変Ｔ細胞および前記第２のアジュバントは並行してまたは同時に投与される、実施形態１２４または１２５に記載の方法。
【０３２８】
実施形態１２７。  前記改変Ｔ細胞および前記第２のアジュバントは逐次的に投与される、実施形態１２４または１２５に記載の方法。
【０３２９】
実施形態１２８。  前記改変Ｔ細胞は、前記第２のアジュバントを投与する前に投与される、実施形態１２４〜１２７に記載の方法。
【０３３０】
実施形態１２９。  前記改変Ｔ細胞は、前記第２のアジュバントの投与後に投与される、実施形態１２４〜１２８に記載の方法。
【０３３１】
実施形態１３０。  前記改変Ｔ細胞は、免疫チェックポイント阻害剤の投与の前、それと並行して、または後に投与される、実施形態６４〜１２９に記載の方法。
【０３３２】
実施形態１３１。  前記免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、またはＢＴＬＡのいずれか１つを標的にする、実施形態１３０に記載の方法。
【０３３３】
実施形態１３２。  前記改変Ｔ細胞は、化学療法の投与の前、それと並行して、または後に投与される、実施形態６４〜１３１に記載の方法。
【０３３４】
実施形態１３３。  前記化学療法はシスプラチンを含む、実施形態１３２に記載の方法。
【０３３５】
実施形態１３４。  前記個体への前記改変Ｔ細胞の投与は、前記抗原に特異的な細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の活性化および／または増殖をもたらす、実施形態６４〜１３３のいずれか一つに記載の方法。
【０３３６】
実施形態１３５。  前記個体への前記改変Ｔ細胞の投与は、前記抗原に特異的なヘルパーＴ（Ｔｈ）細胞の活性化および／または増殖をもたらす、実施形態６４〜１３４のいずれか一つに記載の方法。
【０３３７】
実施形態１３６。  前記個体に投与される前記改変Ｔ細胞の量は約１×１０６〜約１×１０１２個細胞である、実施形態６４〜１３５のいずれか一つに記載の方法。
【０３３８】
実施形態１３７。  前記改変Ｔ細胞の複数回投与を含む、実施形態６４〜１３６のいずれか一つに記載の方法。
【０３３９】
実施形態１３８。  前記改変Ｔ細胞の２回の連続投与の間の時間間隔は約１日〜約３０日である、実施形態１３７に記載の方法。
【０３４０】
実施形態１３９。  個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、前記方法は、抗原と会合した改変Ｔ細胞を前記個体に投与するステップを含み、前記改変Ｔ細胞は、
ａ）抗原がインプットＴ細胞の細胞表面と会合するのを可能にするのに十分な時間、前記インプットＴ細胞と前記抗原および／またはアジュバントとをインキュベートし、前記抗原は免疫原性エピトープを含み、それによって、前記抗原と会合した改変Ｔ細胞を作出するステップ；ならびに
ｂ）前記改変Ｔ細胞を前記個体に投与するステップ
を含むプロセスによって調製される、方法。
【０３４１】
実施形態１４０。  前記ＨＰＶ抗原は、配列番号１８〜２５のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１３９に記載の方法。
【０３４２】
実施形態１４１。  前記ＨＰＶ抗原は配列番号２３のアミノ酸配列を含む、実施形態１４０に記載の方法。
【０３４３】
実施形態１４２。  前記アジュバントはＣｐＧ  ＯＤＮまたはＬＰＳである、実施形態１３９〜１４１のいずれか一つに記載の方法。
【０３４４】
実施形態１４３。  前記ＣｐＧ  ＯＤＮは、ＣｐＧ  ＯＤＮ  １０１８、ＣｐＧ  ＯＤＮ  １８２６、またはＣｐＧ  ＯＤＮ  ２００６である、実施形態１４２に記載の方法。
【０３４５】
実施形態１４４。  手術、治療、または診断によるヒトまたは動物身体の処置の方法における使用のための、実施形態１〜５９のいずれか一つに記載の改変Ｔ細胞を含む組成物。
【０３４６】
実施形態１４５。  個体における免疫応答をモジュレートするための方法における使用のための、実施形態１〜５９のいずれか一つに記載の改変Ｔ細胞を含む組成物であって、前記方法は、前記改変Ｔ細胞を前記個体に投与するステップを含む、組成物。
【０３４７】
実施形態１４６。  手術、治療、または診断によるヒトまたは動物身体の処置の方法における使用のための、改変Ｔ細胞を含む組成物であって、前記改変Ｔ細胞は、配列番号１８〜２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む抗原を含む、組成物。
【０３４８】
実施形態１４７。  個体における免疫応答をモジュレートする方法における使用のための、改変Ｔ細胞を含む組成物であって、前記改変Ｔ細胞は、配列番号１８〜２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む抗原を含む、組成物。
【０３４９】
実施形態１４８。  手術、治療、または診断によるヒトまたは動物身体の処置の方法における使用のための、改変Ｔ細胞を含む組成物であって、前記改変Ｔ細胞は、
ａ）インプットＴ細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成し、前記抗原は免疫原性エピトープを含むステップ；  
ｂ）前記抗原および前記アジュバントが前記摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプットＴ細胞と前記抗原および前記アジュバントとをインキュベートし、それによって、前記抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞を作出するステップ
を含む方法によって調製される、組成物。
【０３５０】
実施形態１４９。  個体における免疫応答をモジュレートする方法における使用のための、改変Ｔ細胞を含む組成物であって、前記改変Ｔ細胞は、
ａ）インプットＴ細胞を含む細胞懸濁液を細胞変形狭窄に通すステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＴ細胞の直径の関数であり、それによって、抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプットＴ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＴ細胞を形成し、前記抗原は免疫原性エピトープを含むステップ；  
ｂ）前記抗原および前記アジュバントが前記摂動インプットＴ細胞に入るのを可能にするのに十分な時間、前記摂動インプットＴ細胞と前記抗原および前記アジュバントとをインキュベートし、それによって、前記抗原およびアジュバントを含む改変Ｔ細胞を作出するステップ
を含む方法によって調製される、組成物。
【実施例】
【０３５１】
当業者は、いくつかの実施形態が本発明の範囲および精神内で可能であることを認識する。本発明は、ここに、以下の非限定的な実施例を参照することによって、より詳細に記載する。以下の実施例は、本発明をさらに説明するが、当然ながら、その範囲を決して限定するものとして解釈されるべきではない。
【０３５２】
（実施例１）
治療的環境において腫瘍の成長阻害をもたらすために必要なＴＡＰＣの最小有効細胞用量を決定するために、プライム／ブーストのＴＡＰＣの４つの異なる用量を、時間に対してプロットされた腫瘍の面積を用いる、ＴＣ１腫瘍モデルにおいて試験した。
【０３５３】
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌マウスに、０日目に、ＴＣ１腫瘍細胞（５０ｋ個細胞／マウス）を右後側腹部に注射した。４日目（プライム）および７日目（ブースト）に、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌ドナーマウス由来のＴ細胞を単離し、ＳＱＺを使用して、２００μｇ／ｍＬのＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６、および事前に複合体を形成させた４０μＭのＥ７  ＳＬＰ（
【化１】
2021517813.tif 000002
；配列番号２５）＋４０μＭのマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）をロードした。動物（１０匹のマウス／群）に、Ｅ７＋ＭＳＡ＋ＣｐＧがロードされたＴ細胞（５０Ｍ個細胞／ｍＬ）の適切な用量を静脈内注射し、ＴＣ−１腫瘍成長を、腫瘍移植の１週間後に開始して、週あたり２回測定し、未処置マウスにおける腫瘍成長と比較した。処置群およびスケジュールの代表的な概略図を図１Ａに概説する。
【０３５４】
式（（長さ×幅２）／２）によって測定される腫瘍成長を、未処置群（Ｔ細胞の養子移植なし）および図１Ａで概説された処置群Ｂ〜Ｅからのマウスの間で比較し、図１Ｂに示す。すべての処置条件は、完全な腫瘍低下をもたらし、試験された最低細胞用量（２．５Ｍ個細胞のプライム、１Ｍ個細胞のブースト）は、依然として、より高い細胞用量と同じ腫瘍低下を達成することが可能であり、１８日目に未処置と比べてそれぞれ統計学的有意性に達したことを示す（＃Ｐ＜０．０００１）。
【０３５５】
（実施例２）
Ｅ７  ＳＬＰの設計を決定するために、ネイティブＥ７  ＳＬＰ、および天然配列がすべてのシステインをセリンで置き換えられたものの２つの異なるＥ７  ＳＬＰを、ＣｐＧ共投与と一緒にＴ  ＡＰＣにＳＱＺ化し、各条件を、ＩＣＳによるＩＦＮ−γ産生について評価した。
【０３５６】
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌ドナーマウス由来のＴ細胞を単離し、ＳＱＺを使用して、各種の用量のＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６（左−２００μｇ／ｍＬ、右−２５μｇ／ｍＬ）、および事前に複合体を形成させた４０μＭのＥ７ネイティブもしくは古典的ＳＬＰ＋４０μＭのマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）をロードするか、または、Ｔ細胞を、陰性対照（Ｅｎｄｏ−群ＢおよびＤ）としてＳＱＺの非存在下、同じ条件でインキュベートした。動物（５匹のマウス／群）に、１００μＬの体積で（５０Ｍ個細胞／ｍＬ）、５Ｍ個のロードされたまたはインキュベートされたＴ細胞を静脈内注射した。８日目に、脾臓を収集し、ＩＦＮ−γ産生ＣＤ８＋  Ｔ細胞の％を、ＩＣＳによって定量した。処置群およびスケジュールの代表的な概略図を図２Ａに概説する。
【０３５７】
ＩＦＮ−γ産生ＣＤ８＋  Ｔ細胞の％は、ｃＥ７を使用するＥｎｄｏ対照群において最も高く、これは、ｃＥ７によるＳＱＺまたはｎＥ７によるＥｎｄｏと有意には異ならなかった。予想外にも、ＳＱＺ対Ｅｎｄｏに対する利益はなかったが、他のすべてと比べて、ＳＱＺ  ｎＥ７条件におけるＩＦＮ−γ産生ＣＤ８＋  Ｔ細胞の％の注目すべき減少があった。このデータは、ＳＬＰ配列が、特に抗原がＳＱＺを使用してＴ細胞にロードされる場合、Ｔ  ＡＰＣワクチン接種に応答して生じるＩＦＮ−γ産生ＣＤ８＋  Ｔ細胞の％に対して影響があることを示す。
【０３５８】
（実施例３）
ｉｎ  ｖｉｔｒｏヒトモデルにおいて、Ｅ６レスポンダーＴ細胞において抗原特異的免疫応答を誘導するＥ６  ＳＬＰの能力を決定するために、初代ヒトＴ細胞にＥ６  ＳＬＰをロードし、レスポンダー細胞のＩＦＮ−γの分泌をＥＬＩＳＡによって測定した。
【０３５９】
ヒトＴ細胞を、ＨＬＡ−Ａ０２＋ドナーのＰＢＭＣ（１０Ｍ個細胞／ｍＬ）から単離し、ＨＬＡ−Ａ０２拘束性最小Ｅ６２９−３８エピトープ（
【化２】
2021517813.tif 000003
；配列番号１８）を含有する５０μＭのＥ６  ＳＬＰを、ＳＱＺによって細胞内に送達し、ＥＬＩＳＡによって測定されるＩＦＮ−γのレベルを、ＳＱＺ条件、およびＥ６  ＳＬＰがＳＱＺ化（Ｅｎｄｏ）の非存在下でＴＡＰＣとインキュベートされた対照の間で比較した。次いで、ＴＡＰＣを、１：１の刺激因子：エフェクターの比で、Ｅ６特異的ＣＤ８＋レスポンダー細胞と共培養し、ＩＬ−２（１００Ｕ／ｍＬ）の存在下で培養した。１８時間後、上清を各条件から収集し、ＩＦＮ−γ産生のレベルを、ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＡ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）によって評価した。
【０３６０】
試験されたＥ６  ＳＬＰは、ＳＱＺを使用して細胞内に送達されると、図３に示すように、Ｅ６レスポンダーＣＤ８＋  Ｔ細胞と共培養された場合、＞１０倍のＩＦＮ−γ産生の増加をもたらした（＃Ｐ＜０．０００１）。これらの知見は、多数のＨＰＶ抗原（Ｅ６およびＥ７）に対する抗原特異的免疫応答を誘発するＴ  ＡＰＣの能力を示す。
【０３６１】
（実施例４）
ｉｎ  ｖｉｔｒｏヒトモデルにおいて、Ｅ７１１−２０レスポンダーＴ細胞において抗原特異的免疫応答を誘導するＥ７  ＳＬＰの能力、およびＳＱＺ  Ｔ細胞ＡＰＣ（Ｔａｐｃ）の活性化に対するＳＬＰ配列の影響を決定するために、複数のドナー由来の初代ヒトＴ細胞に異なるＥ７  ＳＬＰをロードし、レスポンダー細胞のＩＦＮ−γの分泌をＥＬＩＳＡによって測定した。
【０３６２】
ヒトＴ細胞を、ＨＬＡ−Ａ０２＋ドナーのＰＢＭＣ（１０Ｍ個細胞／ｍＬ）から単離し、５０μＭのＯＬ−Ｅ７１−３５（
【化３】
2021517813.tif 000004
；配列番号２２）またはＥ７．６（
【化４】
2021517813.tif 000005
；配列番号２３）のＳＬＰを、ＳＱＺによって細胞内に送達し、ＥＬＩＳＡによって測定されるＩＦＮ−γのレベルを、ＳＱＺ条件、およびＥ７  ＳＬＰがＳＱＺ化（Ｅｎｄｏ）の非存在下でＴａｐｃとインキュベートされた対照の間で比較した。次いで、ＴＡＰＣを、４：１の刺激因子：エフェクターの比で、Ｅ７１１−２０特異的ＣＤ８＋レスポンダー細胞と共培養し、ＩＬ−２（１００Ｕ／ｍＬ）の存在下で培養した。２４時間後、上清を各条件から収集し、ＩＦＮ−γ産生のレベルを、ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＡ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）によって評価した。
【０３６３】
ネイティブＯＬ−Ｅ７１−３５  ＳＬＰは、Ｅｎｄｏと比較してＳＱＺを使用して送達された場合、最小のＩＦＮ−γ応答を誘発した（図４）。しかしながら、別の反応性ＳＬＰ（Ｅ６２１−４５  ＱＬＣＴＥＬＱＴＸＸＸＸＸＸＸＸＸＹＣＫＱＱＬＬ）の隣接領域の間に挿入されたＥ７最小エピトープ（ＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ；配列番号３）を含むＥ７．６は、マッチしたＥｎｄｏ対照と比べて、試験された３人のドナーすべてにおいて、Ｅｎｄｏ対照と比較して、より高いＩＦＮ−γ応答を誘導した（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１；＃Ｐ＜０．０００１）。この知見は、ＳＬＰの免疫原性における隣接領域の配列の重要性を強調し、反応性であることが公知の他のＳＬＰの隣接領域を、直交する最小エピトープと併せて使用して、増加した免疫応答を達成することができるという裏付けを提供する。
【０３６４】
（実施例５）
ｉｎ  ｖｉｔｒｏヒトモデルにおいて、ＳＱＺ  Ｔ細胞ＡＰＣに対する抗原の用量を評価するために、初代ヒトＴ細胞に各種の用量のＥ７  ＳＬＰをロードし、ＥＬＩＳＡによってＩＦＮ−γについて評価した。
【０３６５】
ヒトＴ細胞を、ＨＬＡ−Ａ０２＋ドナーのＰＢＭＣ（１０Ｍ個細胞／ｍＬ）から単離し、各種の用量（５０および１００μＭ）のＥ７  ＳＬＰ（
【化５】
2021517813.tif 000006
；配列番号２３）をＳＱＺによって細胞内に送達し、ＥＬＩＳＡによって測定されるＩＦＮ−γのレベルを、ＳＱＺ条件、およびＥ７  ＳＬＰがＳＱＺ化（Ｅｎｄｏ）の非存在下でＴ  ＡＰＣとインキュベートされる対照の間で比較した。次いで、Ｔ  ＡＰＣを、４：１の刺激因子：エフェクターの比で、Ｅ７１１−２０特異的ＣＤ８＋レスポンダー細胞と共培養し、ＩＬ−２（１００Ｕ／ｍＬ）の存在下で培養した。２４時間後、上清を各条件から収集し、ＩＦＮ−γ産生のレベルを、ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＡ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）によって評価した。加えて、Ｂ−ＬＣＬ細胞をＥＬＩＳＡの１時間前に最小Ｅ７エピトープ（ＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ；配列番号３）の存在下でインキュベートした、ペプチドパルス陽性対照を用いた。
【０３６６】
試験した３人のドナー全員で、ＩＦＮ−γの一貫性のある増加は、ＳＬＰがＳＱＺの非存在下でＴ細胞とインキュベートされる同等の対照（Ｅｎｄｏ）と比べて、すべてのＳＱＺ条件で起こる（図５）。ドナー１および３は、５０μＭのＥ７  ＳＬＰで統計学的に有意な増加を示し（８６６８−＊Ｐ＜０．０５；８２９９−＃Ｐ＜０．０００１）、より高い１００μＭのＥ７  ＳＬＰで有意性の傾向があった。あらゆるドナーについて、５０μＭおよび１００μＭの間で統計学的有意差はなかったが、５０μＭのＥ７  ＳＬＰにより、一貫した同等またはより高いＩＦＮ−γの応答があった。
【０３６７】
（実施例６）
ｉｎ  ｖｉｔｒｏヒトモデルにおいて、ＳＱＺ  Ｔ細胞ＡＰＣに対するドナーの変動性を決定するとともに、複数のＨＬＡ−Ａ０２＋ドナー由来の初代ヒトＴ細胞におけるＥ７に対する有意な免疫応答を誘導するＥ６およびＥ７  ＳＬＰの最適な組合せおよび用量を特定するために、Ｅ６およびＥ７  ＳＬＰをロードし、ＥＬＩＳＡによってＩＦＮ−γについて評価した。
【０３６８】
ヒトＴ細胞を、ＨＬＡ−Ａ０２＋ドナーのＰＢＭＣ（１０Ｍ個細胞／ｍＬ）から単離し、２５または５０μＭのＥ６  ＳＬＰ（
【化６】
2021517813.tif 000007
；配列番号１９）およびＥ７．６  ＳＬＰ（
【化７】
2021517813.tif 000008
；配列番号２３）をＳＱＺによって細胞内に送達し、ＥＬＩＳＡによって測定されるＩＦＮ−γのレベルを、ＳＱＺ条件、およびＳＬＰがＳＱＺ化（Ｅｎｄｏ）の非存在下でＴＡＰＣとインキュベートされる対照の間で比較した。Ｂ−ＬＣＬ細胞を、ＴＡＰＣ生成と同じ時間、最小Ｅ７エピトープ（ＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ；配列番号３）の存在下でインキュベートした、ペプチドパルス陽性対照を用いた。次いで、ＴＡＰＣおよび陽性対照を、４：１の刺激因子：エフェクターの比で、Ｅ７１１−２０特異的ＣＤ８＋レスポンダー細胞と共培養し、ＩＬ−２（１００Ｕ／ｍＬ）の存在下で培養した。２４時間後、上清を各条件から収集し、ＩＦＮ−γ産生のレベルを、ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＡ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）によって評価した。
【０３６９】
示される７人のドナーのうち５人は、図６に示すように、ＳＱＺ  Ｅ６＋Ｅ７  ＳＬＰで処置された場合に、ＳＬＰがＳＱＺの非存在下でＴ細胞とインキュベートされる同等の対照（Ｅｎｄｏ）と比べて、ＩＦＮ−γの一貫性のある増加を示した（ドナー１〜３、５〜６：＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００５）。ＳＱＺ化Ｔ  ＡＰＣで処置された場合に、Ｅｎｄｏ対照と比べて統計学的に有意な増加がなかった２人のドナーのうち、両方のドナー（ドナー４および７）は、試験されたＳＱＺ化Ｔ  ＡＰＣの１用量で検出可能な増加がある状態を有しており（ドナー４−５０μＭ、ドナー７−２５μＭ）、有意性の傾向があった。まとめると、これらのデータは、異なるドナーのＴ  ＡＰＣが差次的免疫賦活活性を有することを示し、本発明者らは、複数のドナー全体にわたってＩＦＮ−γ産生の一貫性のある増加があること、およびＥ７特異的免疫応答は、多数の抗原／ＳＬＰ、この場合はＨＰＶ特異的Ｅ６抗原と組み合わせた場合に、依然として有意であることを知ることができる。
【０３７０】
（実施例７）
最もロバストな免疫応答をもたらすアジュバントを決定するのを助けるために、本発明者らは、ｉｎ  ｖｉｖｏの抗原特異的応答を誘導するＴ  ＡＰＣの能力において、異なる経路で作用する２つのアジュバントの効果を試験した。この効果を、フローサイトメトリーによる四量体およびＩＣＳ染色によって、定量した。
【０３７１】
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌ドナーマウス由来のＴ細胞を単離し、ＳＱＺを使用して、４００μｇ／ｍＬのＯｖａ＋各種の濃度の高および低分子量のポリＩ：Ｃ（１０、３０、１００、３００、１０００μｇ／ｍＬ）をロードし、陰性対照（Ｅｎｄｏ−群ＣおよびＥ）としてＳＱＺの非存在下で同じ条件でインキュベートされたＴ細胞と比較した。Ｏｖａ＋２００μｇ／ｍＬのＣｐＧでＳＱＺ化されたＴ細胞を陽性対照として使用した（群Ｆ）。０日目に、マウス（５匹／群、３匹の未処置）に、１００μＬの体積で（５０Ｍ個細胞／ｍＬ）、５Ｍ個のロードされたまたはインキュベートされたＴ細胞を注射した。７日目に、脾臓を収集し、Ｏｖａ特異的Ｔ細胞を、フローサイトメトリーを使用して、四量体染色によって定量しながら、一部の脾細胞を透過処理し、終夜固定した。翌日（８日目）、ＩＦＮ−γのレベルを、陽性対照として作用するＰＭＡ／イオノマイシンを用いて、ＩＣＳによって決定した。処置群およびスケジュールの代表的な概略図を図７Ａに概説する。
【０３７２】
四量体またはＩＦＮ−γ産生ＣＤ８＋  Ｔ細胞の％は、ＣｐＧでアジュバントされた群で最も高かったが、ＬＭＷまたはＨＭＷのポリＩ：Ｃでアジュバントされたすべての条件は、未処置に対して、Ｏｖａ特異的またはＩＦＮ−γ産生ＣＤ８＋  Ｔ細胞のパーセンテージを増加させなかった（図７Ｂ）。ポリＩ：ＣがＴＬＲ３アゴニストであり、ＣｐＧがＴＬＲ９アゴニストであるので、このデータは、Ｔ  ＡＰＣワクチン接種によるアジュバントとして、ポリＩ：Ｃに対するＣｐＧの優位性を裏付けるが、ＴＬＲ３の活性化は、この環境において有利ではない場合があることを示唆する。
【０３７３】
（実施例８）
最もロバストな免疫応答をもたらすＣｐＧアジュバントの濃度を決定するのを助けるために、本発明者らは、ｉｎ  ｖｉｖｏの抗原特異的応答を誘導するＴ  ＡＰＣの能力における、ＣｐＧの複数の用量の効果を試験した。この効果を、フローサイトメトリーによる四量体およびＩＣＳ染色によって、定量した。
【０３７４】
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌ドナーマウス由来のＴ細胞を単離し、ＳＱＺを使用して、４００μｇ／ｍＬのＯｖａ＋各種の濃度のＣｐＧ１８２６（５０、１００、２００μｇ／ｍＬ）をロードし、陰性対照（Ｅｎｄｏ−群Ｂ、ＤおよびＦ）としてＳＱＺの非存在下で同じ条件でインキュベートされたＴ細胞と比較した。０日目に、マウス（５匹／群、３匹の未処置）に、１００μＬの体積で（５０Ｍ個細胞／ｍＬ）、５Ｍ個のロードされたまたはインキュベートされたＴ細胞を注射した。７日目に、脾臓を収集し、Ｏｖａ特異的Ｔ細胞を、フローサイトメトリーを使用して、四量体染色によって定量しながら、一部の脾細胞を透過処理し、終夜固定した。翌日（８日目）、ＩＦＮ−γのレベルを、陽性対照として作用するＰＭＡ／イオノマイシンを用いて、ＩＣＳによって決定した。処置群およびスケジュールの代表的な概略図を図８Ａに概説する。
【０３７５】
四量体またはＩＦＮ−γ産生ＣＤ８＋  Ｔ細胞の％は、２００μｇ／ｍＬのＣｐＧによる群で最も高く、クラスＩペプチド／ＭＨＣ−Ｉについて関連するＥｎｄｏ対照と有意に異なったが（四量体について＊Ｐ＜０．０５、ＩＦＮ−γについて＃Ｐ＜０．０００１）、すべての他の条件は、未処置またはそれらの代表的なＥｎｄｏ対照に対して、有意な応答を誘発しなかった（図８Ｂ）。Ｏｖａ特異的Ｔ細胞の活性化は、クラスＩペプチドでのみ観察され、ＣＤ８＋  Ｔ細胞応答をもたらすＯｖａ抗原の直接の提示を裏付ける。
【０３７６】
（実施例９）
ロバストな免疫応答をもたらすＣｐＧアジュバント投与のためのスケジュールを評価するのを助けるために、本発明者らは、ｉｎ  ｖｉｖｏの抗原特異的応答を誘導するＴ  ＡＰＣの能力における、ＣｐＧの複数の投与スケジュールの効果を試験した。この効果を、フローサイトメトリーによる四量体およびＩＣＳ染色によって、定量した。
【０３７７】
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌ドナーマウス由来のＴ細胞を単離し、ＳＱＺを使用して、４００μｇ／ｍＬのＯｖａをロードし、マウス（５匹／群、３匹の未処置）に、１００μＬの体積で（５０Ｍ個細胞／ｍＬ）、５Ｍ個のロードされたまたはインキュベートされたＴ細胞を注射した。ドナーマウスのＣｐＧ１８２６（２５μｇ／ｍＬ）の全身共投与を、Ｔ  ＡＰＣのプライム（０日目）と同時に、または１もしくは２日後のプライム（それぞれ、１または２日目）のいずれかで行い、陰性対照（群Ｂ、ＤおよびＦ）としてＳＱＺの非存在下で同じ条件でインキュベートされたＴ細胞と比較した。（Ｏｖａ＋２００μｇ／ｍＬのＣｐＧ）でＳＱＺ化されたＴ細胞を陽性対照として使用した（群Ｈ）。７日目に、脾臓を収集し、Ｏｖａ特異的Ｔ細胞を、フローサイトメトリーを使用して、四量体染色によって定量しながら、一部の脾細胞を透過処理し、終夜固定した。翌日（８日目）、ＩＦＮ−γのレベルを、陽性対照として作用するＰＭＡ／イオノマイシンを用いて、ＩＣＳによって決定した。処置群およびスケジュールの代表的な概略図を図９Ａに概説する。
【０３７８】
四量体またはＩＦＮ−γ産生ＣＤ８＋  Ｔ細胞の％は、ＯｖａおよびＣｐＧがＴ  ＡＰＣに共送達された群で最も高かったが、プライムと同じ日の共投与（群Ｂ）はあるレベルのＯｖａ特異的活性化を示す唯一の共投与ＣｐＧ群であり、有意性の傾向があった（図９Ｂ）。しかしながら、このデータは、抗原＋ＣｐＧの共送達が最も高いＯｖａ特異的ＣＤ８＋  Ｔ細胞の活性化をもたらし得るという観察を裏付けるが、ＣｐＧの全身投与を遅らせると、同時のプライムおよびアジュバントの共投与と比較してより低い応答をもたらす。
【０３７９】
（実施例１０）
Ｔ  ＡＰＣ抗腫瘍機能に対する細胞内および全身のアジュバント投与の組合せを決定するために、ＣｐＧ対ＩＦＮ−αの投与の複数の経路を、予防的ＴＣ−１マウス腫瘍モデルにおいて、本発明者らのＥ７特異的Ｔ  ＡＰＣと併せて比較した。抗原特異的Ｔ細胞応答を、四量体染色およびフローサイトメトリーによって測定しながら、抗腫瘍効果を、腫瘍成長予防によって測定した。
【０３８０】
−１４日目（プライム）および−７日目（ブースト）に、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌ドナーマウス由来のＴ細胞を単離し、ＳＱＺを使用して、事前に複合体を形成させた４０μＭのＥ７  ＳＬＰ（
【化８】
2021517813.tif 000009
；配列番号２５）＋４０μＭのマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）（群ＢおよびＣ）またはＥ７  ＳＬＰ＋ＭＳＡ＋２００μｇ／ｍＬのＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６（群Ｄ、ＥおよびＦ）をロードした。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌レシピエントマウス（１０匹のマウス／群）に、１００μＬのロードされたＴ細胞（５Ｍ個細胞／動物）を静脈内注射しながら、群ＢおよびＥの動物は、静脈内にＣｐＧ（２５μｇ）も受け、群ＣおよびＦは、ＩＶでＩＦＮ−α（１０ｋ  ＩＵ）を受けた。−８日目および−３日目に、１００μＬのマウス血液を採取し、Ｅ７特異的ＣＤ８＋  Ｔ細胞の％を、四量体染色およびフローサイトメトリーによって定量した。０日目に、レシピエントマウスに、ＴＣ１腫瘍細胞（１００ｋ個細胞／マウス）を右後側腹部に注射し、ＴＣ−１腫瘍成長を、１１日目に開始して、週あたり２回測定し、未処置マウスにおける腫瘍成長と比較した。処置群およびスケジュールの代表的な概略図を図１０Ａに概説する。
【０３８１】
Ｅ７特異的Ｔ細胞のパーセンテージを、Ｅ７＋ＭＳＡまたはＥ７＋ＭＳＡ＋ＣｐＧ  ＳＱＺ化Ｔ細胞＋／−ＣｐＧもしくはＩＦＮ−αの共投与によるプライム（−８日目）およびブースト（−３日目）の後、Ｅ７四量体染色によって、マウスにおいて測定した（図１０Ｂ）。Ｅ７特異的Ｔ細胞の最も高い相対割合は、ＳＱＺ  Ｅ７＋ＣｐＧ共投与群およびＳＱＺ（Ｅ７＋ＣｐＧ）＋ＩＦＮ−α共投与群において観察された。Ｅ７特異的なプライム後のＣＤ８＋  Ｔ細胞の相対数は、驚くべきことに、ＳＱＺ  Ｅ７＋ＣｐＧの共投与と比べて、ＳＱＺ（Ｅ７＋ＣｐＧ）＋ＣｐＧの共投与において低かったが（＊Ｐ＜０．０５）、ＩＦＮ−αとＳＱＺ（Ｅ７＋ＣｐＧ）Ｔ細胞の共投与は、ＣｐＧとＳＱＺ（Ｅ７＋ＣｐＧ）Ｔ細胞の共投与よりも、Ｅ７特異的Ｔ細胞の有意に高い数をもたらした（＊Ｐ＜０．０５）。ブースト（−３日目）後、ＳＱＺ  Ｅ７＋ＣｐＧ共投与群およびＳＱＺ（Ｅ７＋ＣｐＧ）＋ＩＦＮ−α共投与群が最も高いＥ７特異的Ｔ細胞の％をもたらした、同様の傾向が観察された。しかしながら、ＳＱＺ（Ｅ７＋ＣｐＧ）＋ＩＦＮ−α共投与群からの最も高い応答は、ＳＱＺ  Ｅ７＋ＩＦＮ−α共投与およびＳＱＺ（Ｅ７＋ＣｐＧ）＋ＣｐＧの共投与よりも有意に高く、ＩＦＮ−α共投与は、ＳＱＺ（Ｅ７＋ＣｐＧ）Ｔ細胞と組み合わせて使用した場合に、抗原特異的Ｔ細胞のより高いパーセンテージをもたらすことを示す。式（（長さ×幅２）／２）によって測定される腫瘍成長を、未処置群（Ｔ細胞の養子移植なし）および図１０Ｃで概説された処置群Ｂ〜Ｆからのマウスの間で比較した。ＳＱＺ（Ｅ７＋ＣｐＧ）＋ＩＦＮ−α共投与群の高い腫瘍成長の低下および生存優位性は、四量体染色と良く一致し、Ｅ７特異的Ｔ細胞の最も高い誘導が最良の抗腫瘍活性をもたらしたことを示す。興味深いことに、ＳＱＺ（Ｅ７＋ＣｐＧ）群におけるＥ７特異的Ｔ細胞の低％にもかかわらず、この処置は、非常に高いレベルの抗腫瘍活性も与え、これは、すべてのマウスの生存期間を、６０日を過ぎて延長した唯一の他の群（ＳＱＺ（Ｅ７＋ＣｐＧ）＋ＩＦＮ−α共投与に加えて）である。以前に述べた群ＤおよびＦよりもわずかに低いが、群ＣおよびＥにおいて、認識可能な生存期間の延長および腫瘍成長阻害があった。７８日目に、群Ｄからの７匹の腫瘍がないマウスに、逆（左）の側腹部に５０ｋ個の細胞を再チャレンジし、年齢がマッチした未処置動物（１０匹のマウス）と比較した（図１０Ｄ）。群Ｄからのマウスは、それらの最初のチャレンジを受けた未処置マウスと比較して再チャレンジ後に腫瘍成長の有意な低下を有しており（＊＊＊Ｐ＜０．００５）、この抗腫瘍効果が２か月を過ぎて持続するという裏付けを提供する。
【０３８２】
（実施例１１）
Ｔ  ＡＰＣ抗腫瘍機能に対する複数のＨＰＶ抗原を組み合わせる効果を決定するために、予防的ＴＣ−１マウス腫瘍モデルにおいて、Ｅ６およびＥ７合成長鎖ペプチド（ＳＬＰ）単独、および本発明者らのＥ７特異的Ｔ  ＡＰＣとの組合せ。Ｅ７特異的Ｔ細胞応答を、四量体染色およびフローサイトメトリーによって測定しながら、抗腫瘍効果を、腫瘍成長予防によって測定した。
【０３８３】
−１４日目（プライム）および−８日目（ブースト）に、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌ドナーマウス由来のＴ細胞を単離し、ＳＱＺを使用して、表ＸＸに従って、事前に複合体を形成させた２０μＭのマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）＋２０μＭのＥ６（ＶＹＳＫＱＱＬＬＲＲＥＶＹＤＦＡＦＲＤＬＳＩＶＹＲＤＧＮＰＹＡＶＳＤＫ；配列番号２１）および／もしくはＥ７  ＳＬＰ（ＧＱＡＥＰＤＲＡＨＹＮＩＶＴＦＳＳＫＳＤＳＴＬＲＬＳＶＱＳＴＨＶＤＩＲ；配列番号２５）、または両方＋／−２００μｇ／ｍＬのＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６の組合せをロードした。ＳＱＺの非存在下で群Ｂと同じ条件でインキュベートされたＴ細胞を陰性対照として使用した（群Ｃ）。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌レシピエントマウス（５〜１０匹のマウス／群）に、１００μＬのロードされたＴ細胞（５Ｍ個細胞／動物）を静脈内注射した。−３日目に、１００μＬのマウス血液を採取し、Ｅ７特異的ＣＤ８＋  Ｔ細胞の％を、四量体染色およびフローサイトメトリーによって定量した。０日目に、レシピエントマウスに、ＴＣ１腫瘍細胞（１００ｋ個細胞／マウス）を右後側腹部に注射し、ＴＣ−１腫瘍成長を、１１日目に開始して、週あたり２回測定し、未処置マウスにおける腫瘍成長と比較した。処置群およびスケジュールの代表的な概略図を図１１Ａに概説する。
【０３８４】
Ｅ７特異的Ｔ細胞のパーセンテージを、ブースト（−３日目）の後、Ｅ７四量体染色によってマウスで測定し、図１１Ｂに示すように、最も高い効果は、ＣｐＧ＋Ｅ７  ＳＱＺ  Ｔ  ＡＰＣ（群Ｂ）で観察された。興味深いことに、群Ｂの応答は、未処置、ならびにＥ７およびＥ６の組合せよりも有意に高く（群Ｆ−＃Ｐ＜０．０００１）、Ｅ６  ＳＬＰの添加がＥ７特異的応答を鈍らせる証拠を提供する。群Ｂは、Ｅｎｄｏ対照（群Ｃ）の明らかな例外で、他の処置群と有意に異なり、群Ｂは明らかに高く、統計学的有意性の傾向があった。図１１Ｃに示すように、式（（長さ×幅２）／２）によって測定される腫瘍成長を、未処置群（Ｔ細胞の養子移植なし）および図１１Ａで概説された処置群Ｂ〜Ｇからのマウスの間で比較した。高い腫瘍成長の予防は、Ｅ７＋ＣｐＧでＳＱＺ化されたＴ細胞、およびＥ７＋ＣｐＧの存在下、ＳＱＺの非存在下でインキュベートされたＴ細胞による群で起こった。群Ｄ〜Ｆは、未処置（群Ａ）およびＥ６＋ＣｐＧがＳＱＺ化Ｔ細胞（群Ｇ）と比べて、あるレベルの腫瘍成長阻害を示したが、群ＢおよびＣよりもすべて有効性が低かった。
【０３８５】
（実施例１２）
Ｅ７特異的Ｔ  ＡＰＣの抗腫瘍効果に対するＣｐＧアジュバントの投与の経路の重要性を決定するために、Ｅ７  ＳＬＰをＣｐＧと組み合わせてＴ細胞に送達し、Ｔ細胞に送達するか、またはレシピエント動物に全身共投与し、抗腫瘍効果を腫瘍成長阻害によって測定した。
【０３８６】
０日目に、レシピエントマウスに、ＴＣ１腫瘍細胞（５０ｋ個細胞／マウス）を右後側腹部に注射した。１０日目（プライム）および２０日目（ブースト）に、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌ドナーマウス由来のＴ細胞を単離し、ＳＱＺを使用して、事前に複合体を形成させた２０μＭのマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）＋２０μＭのＥ７（
【化９】
2021517813.tif 000010
；配列番号２５）をロードし、ＯＤＮ１８２６を、２００μｇ／ｍＬでＳＱＺによって共送達するか（群Ｄ）、または２５μｇ／マウスで全身的に動物に共投与し（群Ｃ）、未処置（群Ａ）およびＣｐＧ単独の全身投与（群Ｂ）と比較した。レシピエントマウス（８〜１０匹のマウス／群）を、１００μＬのロードされたＴ細胞（５Ｍ個細胞／動物）で処置した。ＴＣ−１腫瘍成長を、１０日目に開始して、週あたり２回測定した。処置群およびスケジュールの代表的な概略図を図１２Ａに概説する。
【０３８７】
ＨＰＶ関連がん（ＴＣ−１）の治療モデルにおいて、Ｅ７  ＳＬＰでＳＱＺ化されたＴ  ＡＰＣは、未処置およびＣｐＧ注射単独と比べて、腫瘍負荷の有意な低下をもたらした（１７日目：群Ｃ−Ｐ＜０．０５；２０日目：群ＣおよびＤ−Ｐ＜０．０００１）（図１２Ｂ）。これらのデータは、治療環境において、ＣｐＧアジュバントの全身共投与および細胞内送達の両方とも、未処置またはアジュバント単独と比べて、腫瘍負荷の有意な低下をもたらすことを示す。
【０３８８】
（実施例１３）
Ｅ７特異的Ｔ細胞腫瘍浸潤をもたらす共投与されたアジュバントの能力を評価するために、ＣｐＧ対ＩＦＮ−αを、治療的ＴＣ−１マウス腫瘍モデルにおいて、本発明者らのＥ７特異的Ｔ  ＡＰＣと組み合わせて比較した。抗原特異的Ｔ細胞応答を、四量体染色およびフローサイトメトリーによって、腫瘍浸潤リンパ球において測定した。
【０３８９】
０日目に、レシピエントマウスに、ＴＣ１腫瘍細胞（５０ｋ個細胞／マウス）を右後側腹部に注射した。１０日目に、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌ドナーマウス由来のＴ細胞を単離し、ＳＱＺを使用して、事前に複合体を形成させた２０μＭのＥ７  ＳＬＰ（
【化１０】
2021517813.tif 000011
；配列番号２５）＋２０μＭのマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）をロードした。ＳＱＺロードＴ細胞（５Ｍ個細胞／動物）を、単独（群Ｃ）で投与し、一緒に、ＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６（２５μｇ／マウス−群Ｄ）またはＩＦＮ−α（１０ｋ  ＩＵ／マウス−群Ｅ）を、１００μＬの総体積で静脈内注射した。マウスに、ＣｐＧ（２５μｇ−群Ａ）またはＩＦＮ−α単独（１０ｋ  ＩＵ−群Ｂ）も全身に注射した。１７日目に、腫瘍を収集し、ＣＤ８＋腫瘍浸潤Ｔ細胞を単離し、Ｅ７特異的反応性を四量体染色によって評価した。処置群およびスケジュールの代表的な概略図を図１３に概説する。
【０３９０】
Ｅ７特異的ＣＤ８＋  Ｔ細胞のパーセンテージを、プライムの７日後（１７日目）、Ｅ７四量体染色によってマウスで測定し、ＣＤ８＋細胞のうちのＥ７特異的Ｔ細胞のパーセンテージの代表的な例を、図１３の下部パネルに示す。アジュバント単独の注射は、認識できる量のＥ７特異的Ｔ細胞を生じなかったが、Ｅ７  ＳＬＰのＳＱＺ送達は、Ｅ７特異的Ｔ細胞の４０％の増加を与え、ＣｐＧおよびＩＦＮ−αと組み合わせたＥ７送達Ｔ細胞は、さらに高いパーセンテージの抗原特異的Ｔ細胞をもたらした（それぞれ、７０および８０％）。このデータは、Ｅ７  ＳＬＰがロードされたＴ細胞がＣｐＧまたはＩＦＮ−αなどの全身アジュバントと組み合わせて投与された場合に、よりロバストなＥ７特異的Ｔ細胞応答が生じることを示す。
【０３９１】
（実施例１４）
Ｅ７合成長鎖ペプチド（ＳＬＰ）＋ＣｐＧをロードされたＴ  ＡＰＣのプライムおよびブーストの両方についてのワクチン接種スケジュールを決定するために、本発明者らは、異なる時点で本発明者らのＴ  ＡＰＣワクチンで、差次的な数のブーストで処置された、治療的ＴＣ−１マウス腫瘍モデルを使用した。抗腫瘍効果を、腫瘍成長阻害によって測定した。
【０３９２】
０日目に、レシピエントマウスに、ＴＣ１腫瘍細胞（５０ｋ個細胞／マウス）を右後側腹部に注射し、ＴＣ−１腫瘍成長を、１１日目に開始して、週あたり２回測定し、未処置マウスにおける腫瘍成長と比較した。３または６日目に、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌ドナーマウス由来のＴ細胞を単離し、ＳＱＺを使用して、表ＸＸに従って、事前に複合体を形成させた２０μＭのマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）＋２０μＭのＥ７  ＳＬＰ（
【化１１】
2021517813.tif 000012
；配列番号２５）＋２００μｇ／ｍＬのＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６をロードし、続いて、１００μＬのロードされたＴ細胞（５Ｍ個細胞／動物）をレシピエントマウスに静脈内注射した。処置群およびスケジュールの代表的な概略図を図１４Ａに概説する。
【０３９３】
腫瘍成長阻害は、Ｅ７＋ＣｐＧでＳＱＺ化されたＴ細胞を用いるすべての群で起こり、未処置に対する統計学的有意性が、２０日目が得られる（２０日目−すべての群でＰ＜０．０５；２４日目−すべての群でＰ＜０．０００１）。このデータは、Ｔ  ＡＰＣワクチンによる投与スケジュールは、６日目対３日目でプライムした場合に、同様に良好に働くことができ、２１日目の２回目のブーストの追加には認識可能な利益はなかったことを示す。
【０３９４】
（実施例１５）
ＳＱＺによる細胞内に抗原が送達されたＴ細胞による抗原提示のメカニズムをより良好に理解するために、Ｏｖａを、野生型マウスまたはＭＨＣ−Ｉノックアウトマウスに注射された野生型Ｔ細胞に送達するか、またはそれらとＳＱＺの非存在下でインキュベートした。脾臓を収集し、Ｏｖａ特異的Ｔ細胞（ＯＴ−Ｉ）の増殖の量を、ＣＦＳＥ染色によって定量した。
【０３９５】
０日目に、ＯＴ−Ｉ雌ドナーマウス由来のＴ細胞を単離し、２μＭのＣＦＳＥで標識し、２．５Ｍ個の細胞を、野生型またはＭＨＣ−Ｉノックアウトマウスのいずれかに、１００μＬのＰＢＳ中で、後眼窩（ＲＯ）に注射した。また、０日目に、４００μｇ／ｍＬのＯｖａを、ＣＤ４５．１ドナーマウス（４匹のマウス／群）から単離されたＴ細胞にロードするか、またはそれらとインキュベートし、５Ｍ個のＴ細胞をＲＯに注射した。３日目に、脾臓を収集し、Ｏｖａ特異的Ｔ細胞の増殖のレベルを、ＣＦＳＥ染色によって評価した。
【０３９６】
Ｏｖａ特異的Ｔ細胞の増殖の量を、Ｏｖａ応答性ＯＴ−Ｉ  ＣＤ８＋  Ｔ細胞のＣＦＳＥ標識化によって評価した。抗原がロードされたＴＡＰＣの提示のメカニズムを決定するために、ＭＨＣ−Ｉが欠損したマウスをレシピエントマウスとして使用した。これは、ＳＱＺ化Ｔ細胞の死による抗原の間接的な取り込み、および養子移植されたＯＴ−Ｉ細胞へのＭＨＣ−Ｉにおける交差提示に起因する、内因性マウスＡＰＣによるＯｖａ抗原の提示を不可能にするはずである。レシピエントマウスがＭＨＣ−Ｉを欠く場合、Ｏｖａ特異的ＯＴ−Ｉ細胞の増殖は依然として起こることが見出され、ＳＱＺ化Ｔ  ＡＰＣが抗原を直接提示している証拠を提供する（図１５）。これらのデータは、ＳＱＺ媒介性細胞内送達抗原の直接提示を裏付ける。
【０３９７】
（実施例１６）
サイトカイン産生を変えるためのＳＱＺの性向を評価するために、Ｔ細胞を、ＣｐＧでＳＱＺ送達し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏマウスモデルにおいて、Ｔ細胞のサイトカインレベルを変える能力について評価した。上清中のサイトカインレベルを、マルチプレックスサイトカインキットを使用して、プロファイルした。
【０３９８】
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌レシピエントマウスをプライムし、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌ドナーマウス由来のＴ細胞を単離し、２００μｇ／ｍＬのＣｐＧでＳＱＺ化し、上清を２４時間後に採取した（Ｎ＝２）。上清を、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｍｉｌｌｉｐｌｅｘマルチプレックスサイトカインキットによってサイトカインレベルについて評価し、未処置のＴ細胞と比べて、倍率変化の差として表した。
【０３９９】
未処置細胞と比べて、ＳＱＺを介してＣｐＧをロードされたＴ細胞の上清中のサイトカインレベルの間の有意な変化はなかった（図１６）。このデータは、アジュバントのＳＱＺ送達は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＴ細胞サイトカインレベルを有意に変えないことを示す。
【０４００】
（実施例１７）
サイトカイン産生を変えるためのＳＱＺの性向を評価するために、ＯｖａまたはＯｖａ＋ＣｐＧのいずれかでＳＱＺ送達されたＴ細胞を、ｉｎ  ｖｉｖｏマウスモデルにおいて、血清サイトカインレベルを変える能力について評価した。血清サイトカインを、マルチプレックスサイトカインキットを使用して、プロファイルした。
【０４０１】
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌レシピエントマウスをプライムし、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌ドナーマウス由来のＴ細胞を単離し、４００μｇ／ｍＬのＯｖａまたはＯｖａ＋２００μｇ／ｍＬのＣｐＧのいずれかでＳＱＺ化し、血液を、６時間後に尾静脈から、およびプライムの２４時間後に心穿刺を介して採取した。血清を、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｍｉｌｌｉｐｌｅｘマルチプレックスサイトカインキットによってサイトカインレベルについて評価し、倍率変化対未処置のＴ細胞として表した。
【０４０２】
ＳＱＺを介してＯｖａまたはＯｖａ＋ＣｐＧをロードされたＴ細胞でプライムされたマウスの血清中のサイトカインレベルの間の有意な変化はなかった（図１７）。加えて、有意差は、プライムの６時間後および２４時間後の間で観察されなかった。これらのデータは、抗原＋／−アジュバントのＳＱＺ送達は、ｉｎ  ｖｉｖｏで血清サイトカインレベルを有意に変えないことを示す。
【０４０３】
（実施例１８）
本実施例は、一部には、Ｔ細胞に導入された抗原（Ｔ−ＡＰＣ）が、迅速にプロセシングされかつ直接提示されることを実証する。
【０４０４】
抗原提示細胞としてのＴ細胞（Ｔ−ＡＰＣ）の抗原提示の速度論を決定するために、抗原をＳＱＺによってＴ細胞に送達し、ＭＨＣ−Ｉに結合している最小ペプチドの存在を免疫染色およびフローサイトメトリーによって経時的に評価した。
【０４０５】
具体的には、Ｃ５６ＢＬ／６Ｊマウス由来のマウスＴ細胞を単離し、ペイロードなし（ＳＱＺ：抗原なし）またはＳＱＺロードされた２００μｇ／ｍＬのＯｖａタンパク質（ＳＱＺ：オボアルブミン−Ｎ＝３技術的反復）のいずれかでＳＱＺプロセシングした。２時間〜２４時間の様々な時点で、処置されたＴ細胞を、Ｏｖａ最小エピトープ（ＳＩＩＮＦＥＫＬ；配列番号５２）を特異的に認識する抗体（２５−Ｄ１．１６）で染色し、その後にフローサイトメトリーが続いた。ＯＶＡタンパク質からプロセシングされ、ＭＨＣ−Ｉ上に提示されている任意の最小エピトープは、免疫染色によって検出されるはずであり、抗原提示の量をフローサイトメトリーによって決定した。
【０４０６】
ＭＨＣ−Ｉ上に様々なレベルのＳＩＩＮＦＥＫＬ（配列番号５２）を提示する細胞の相対的集団を、０、２、４、および２４時間の時点で重ね合わせたヒストグラムによって描写した（ダークグレーはＳＱＺ：抗原なしを表す；ライトグレーはＳＱＺ：オボアルブミンを表す）（図１８Ａ）。ＳＱＺ：オボアルブミンを表すヒストグラムにおける右方向へのシフトは、ＳＱＺ：抗原なし対照と比較して、増加したＳＩＩＮＦＥＫＬ（配列番号５２）染色を有する集団、ゆえにＭＨＣ−Ｉ上にプロセシングされた抗原を提示する細胞の集団の増加を示した。抗原をロードされたＴ−ＡＰＣの上記シフトは２時間の時点で明らかであり、２４時間後にのみ抗原提示の小さな減少が観察された。経時的な細胞あたりのＭＨＣ−Ｉ上のＳＩＩＮＦＥＫＬ（配列番号５２）提示の相対量を、細胞の平均蛍光強度（ＭＦＩ）によって測定した（図１８Ｂ）。ＳＱＺ：オボアルブミン集団は、２時間後にＳＩＩＮＦＥＫＬ（配列番号５２）のかなりの提示を示し、４時間の時点で最大の提示が観察され、それに続いて４〜２４時間に経時的なわずかな減少が観察された。測定された時間経過を通じて、ＳＱＺ：抗原なし対照に対する抗原提示の差は観察されなかった。まとめると、このデータは、Ｔ細胞への抗原のＳＱＺ媒介性ローディングが抗原の迅速な提示（２〜４時間）にもたらしたことを支持する。
【０４０７】
（実施例１９）
本実施例は、一部には、疾患関連抗原をＳＱＺロードされたＴ細胞（Ｔ−ＡＰＣ）が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの抗原特異的Ｔ細胞応答を効率的に刺激することを実証する。
【０４０８】
疾患関連抗原をＳＱＺロードされたヒトＴ細胞（Ｔ−ＡＰＣ）が抗原特異的Ｔ細胞応答を刺激する能力を決定するために、Ｔ細胞にＣＭＶ関連抗原をＳＱＺロードし、抗原特異的レスポンダーＴ細胞と共培養し、炎症性サイトカイン分泌のレベルをＥＬＩＳＡによって測定した。
【０４０９】
具体的には、ＨＬＡ−Ａ２＋ドナー由来のヒトＴ細胞を単離し、ＣＭＶ  ｐｐ６５  ＳＬＰ（５０μＭ）を、Ｔ細胞とインキュベートした（Ｅｎｄｏ）、またはＳＱＺによってＴ細胞に送達した（ＳＱＺ）。次いで、ＥｎｄｏＴ細胞またはＳＱＺ  Ｔ細胞（６０ｋ個細胞／ウェル）をｐｐ６５レスポンダーＴ細胞（３０ｋ個細胞／ウェル）と２：１比でインキュベートし、ＩＬ−２（１００Ｕ／ｍＬ）およびＣｐＧ  ２００６（１μＭ）の存在下で２４時間共培養した。次いで、上清を回収し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの抗原特異的免疫刺激の量を示すＩＦＮ−γ分泌のレベルについてＥＬＩＳＡによって分析した。
【０４１０】
ｐｐ６５  ＳＬＰ（Ｅｎｄｏ）とインキュベートされたＴ細胞と比較した場合、ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＡによって測定されるように、ＳＱＺロードされたＴ細胞によるｐｐ６５特異的レスポンダーの刺激の相当なかつ統計的に有意な増加があった（Ｐ＜０．００５）。これらのデータは、疾患関連抗原をＳＱＺロードすることによって、ヒトＴ細胞が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで疾患関連抗原特異的Ｔ細胞応答を刺激することにおいて効率的なＡＰＣになるように改変され得たことを示している。
【０４１１】
（実施例２０）
抗原特異的腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を誘導するＳＱＺロードワクチンの能力におけるアジュバントの重要性を評価するために、細胞にモデル抗原をロードし、アジュバントと成熟させ、腫瘍を有するマウスに注射した。腫瘍に動員された抗原特異的Ｔ細胞の相対パーセンテージをフローサイトメトリーによって測定した。
【０４１２】
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌マウスに、０日目に、ＴＣ１腫瘍細胞（５０ｋ個細胞／マウス）を右後側腹部に注射した。１５日目（プライム）に、マウスＴ細胞を、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊドナーマウスの脾臓から得、ＳＱＺ（４０ｐｓｉ、３．５μｍの狭窄、室温）を介して、事前に複合体を形成させた５μＭのＥ７  ＳＬＰ（
【化１２】
2021517813.tif 000013
；配列番号２５）＋５μＭのマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）をロードし、３７℃で１時間インキュベートした。雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊレシピエントマウス（１０匹／群）に、１００μＬのビヒクル（ＰＢＳ−未処置）またはＥ７ロードＴ細胞（１Ｍ個細胞／マウス）＋／−ＣｐＧ１８２６（２５μｇ／マウス）のいずれかを１５日目に後眼窩に注射した。２５日目に、腫瘍を収集し、Ｅ７特異的ＴＩＬの量をフローサイトメトリーによって測定した。
【０４１３】
ＳＱＺロードＴ  ＡＰＣ単独は、少ないが（約１５％）、統計学的に有意ではないＥ７特異的ＴＩＬの数の増加をもたらしたが、ＣｐＧと共注射した場合、より高く、かつ有意なＴＩＬの数の増加があった（約５５％、Ｔ  ＡＰＣ単独と比較して＊＊Ｐ＜０．０１；未処置と比較して＊＊＊Ｐ＜０．０００５）。このデータは、Ｅ７ロードＴ  ＡＰＣと一緒にＣｐＧを共注射することは、Ｔ  ＡＰＣ単独と比較して非常に高いＴＩＬの動員をもたらすことを示す。
【０４１４】
（実施例２１）
予防的環境においてＴ  ＡＰＣ＋アジュバントワクチンの持続性を評価するために、Ｔ  ＡＰＣ処置マウスを、初回応答および６０日後の再チャレンジの両方で、ＨＰＶ  Ｅ７発現ＴＣ１腫瘍モデルの腫瘍成長について、未処置マウスと比較し、腫瘍の面積を時間に対してプロットした。
【０４１５】
−１４日目に、脾細胞をＣ５７ＢＬ／６Ｊ雌ドナーマウスから収集し、Ｔ細胞を免疫磁気分離によって単離した。次に、マウスＴ細胞に、ＳＱＺ（４５ｐｓｉ、３．５μｍの狭窄）を介して、事前に複合体を形成させた２０μＭのＥ７  ＳＬＰ（
【化１３】
2021517813.tif 000014
；配列番号２５）＋２０μＭのマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）をロードし、３７℃で１時間インキュベートした。雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊレシピエントマウス（１０匹のマウス／群、２０匹のマウス／群である未処置コホートＩを除く）に、１００μＬのビヒクル（ＰＢＳ−未処置）またはＥ７ロードＴ細胞（１Ｍ個細胞／マウス）＋ＣｐＧ１８２６（２５μｇ／マウス）のいずれかを、後眼窩に注射した［プライム］。−７日目に、脾臓をＣ５７ＢＬ／６Ｊ雌ドナーマウスから収集し、Ｔ細胞を単離し、ＳＱＺ化し、厳密に−１４日目にレシピエントマウスに注射した［ブースト］。０日目に、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌マウスに、右後側腹部に注射した（ＴＣ１腫瘍細胞（５０ｋ個細胞／マウス）により６４日目まで腫瘍細胞を移植されていない１０匹の未処置コホート２を除く）。ＴＣ−１腫瘍成長を、腫瘍移植の１週間後に開始して、週あたり２回測定し、最長１２０日間、未処置マウスにおける腫瘍成長と比較した。
【０４１６】
式（（長さ×幅２）／２）によって測定される腫瘍成長を、未処置群および０日目に腫瘍細胞をチャレンジされたＴ  ＡＰＣ処置群からのマウスの間で比較し、すべてのマウスは、未処置群において４７日目までに人道的なエンドポイントに達し、Ｔ  ＡＰＣマウスのうち２匹を除くすべてにおいて、Ｔ  ＡＰＣ群について有意な腫瘍成長の遅延があったが、残りのマウス（８匹）は、腫瘍の再チャレンジまで腫瘍なしのままであった。興味深いことに、６４日目に腫瘍が移植された未処置マウスをそれらの反対側の側腹部に腫瘍を再移植されたＴ  ＡＰＣ処置マウスと比較すると、依然として腫瘍成長の遅延があり、マウスのうち３匹では、２次腫瘍チャレンジ後でさえ、測定可能な腫瘍が成長しなかった。これらのデータは、Ｅ７ロードＴ  ＡＰＣ＋アジュバントによる処置は、抗原特異的腫瘍成長阻害だけでなく、２次腫瘍チャレンジにもかかわらず、＞１００日を超えてさらに持続し得る腫瘍予防をもたらすことができることを示唆する。
【０４１７】
（実施例２２）
治療的ワクチン環境において、異なるＴ  ＡＰＣの濃度およびプライム−ブーストスケジュールの影響を評価するために、Ｔ  ＡＰＣ処置マウス（多数の濃度およびプライム−ブーストスケジュール）を、ＨＰＶ  Ｅ７発現ＴＣ１腫瘍モデルの腫瘍成長について未処置マウスと比較し、腫瘍の面積を時間に対してプロットした。
【０４１８】
０日目に、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌マウスに、ＴＣ１腫瘍細胞（５０ｋ個細胞／マウス）を右後側腹部に注射した。１０日目（プライム）に、マウスＴ細胞を、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊドナーマウスの脾臓から、免疫磁気分離によって得、ＳＱＺ（４５ｐｓｉ、３．５μｍの狭窄）を介して、事前に複合体を形成させた２０μＭのＥ７  ＳＬＰ（
【化１４】
2021517813.tif 000015
；配列番号２５）＋２０μＭのマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）をロードし、３７℃で１時間インキュベートした。次いで、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊレシピエントマウス（１０匹／群）に、１００μＬのビヒクル（ＰＢＳ）またはＴ  ＡＰＣ（０．２５または１Ｍ個細胞／マウス）＋ＣｐＧ１８２６（２５μｇ／マウス）のいずれかを後眼窩に注射した。１７日目に、プライム／ブースト群は、１０日目に、同一の形式で、Ｔ  ＡＰＣによる２回目の注射を受けた。ＴＣ−１腫瘍成長を、腫瘍移植の１週間後に開始して、週あたり２回測定し、最長６６日間、未処置マウスにおける腫瘍成長と比較した。
【０４１９】
式（（長さ×幅２）／２）によって測定される腫瘍成長、および腫瘍成長の速度においてわずかな遅延のみをもたらす低用量のＴ  ＡＰＣ群（０．２５Ｍ個細胞／マウス）＋ＣｐＧ（プライムのみ）を、未処置と比較した。低用量のＴ  ＡＰＣ＋ＣｐＧ（０．２５Ｍ個プライム／ブースト）による１７日目のブーストを含めると、同じ濃度のプライムのみの条件と比べて腫瘍成長阻害の増強が、未処置と比べてはるかに大きな阻害が見られた。抗原ロードＴ  ＡＰＣの１Ｍ個／マウス（プライムのみ）への用量の増加は、より低用量のＴ  ＡＰＣ＋ＣｐＧ（プライムのみ）と比べて、わずかな腫瘍成長阻害をもたらした。興味深いことに、高用量のＴ  ＡＰＣ＋ＣｐＧ（プライムのみ）の使用は、腫瘍成長からの最良の保護をもたらし、腫瘍退縮は、２０〜４０日目の間に起こり、観察された群のいずれかのうちで最も高いレベルの成長阻害を有した。まとめると、これらのデータは、細胞用量の増加、アジュバントの包含、またはプライム＋ブーストの投与スケジュールがＴ  ＡＰＣワクチンの有効性を増強することができることを強調する。
【表１−１】
2021517813.tif 000016
【表１−２】
2021517813.tif 000017
【表１−３】
2021517813.tif 000018
【図１Ａ】
2021517813.tif 000019
【図１Ｂ】
2021517813.tif 000020
【図２Ａ】
2021517813.tif 000021
【図２Ｂ】
2021517813.tif 000022
【図３】
2021517813.tif 000023
【図４】
2021517813.tif 000024
【図５】
2021517813.tif 000025
【図６−１】
2021517813.tif 000026
【図６−２】
2021517813.tif 000027
【図７Ａ】
2021517813.tif 000028
【図７Ｂ】
2021517813.tif 000029
【図８Ａ】
2021517813.tif 000030
【図８Ｂ】
2021517813.tif 000031
【図９Ａ】
2021517813.tif 000032
【図９Ｂ】
2021517813.tif 000033
【図１０Ａ】
2021517813.tif 000034
【図１０Ｂ】
2021517813.tif 000035
【図１０Ｃ】
2021517813.tif 000036
【図１０Ｄ】
2021517813.tif 000037
【図１１Ａ】
2021517813.tif 000038
【図１１Ｂ】
2021517813.tif 000039
【図１１Ｃ】
2021517813.tif 000040
【図１２Ａ】
2021517813.tif 000041
【図１２Ｂ】
2021517813.tif 000042
【図１３】
2021517813.tif 000043
【図１４Ａ】
2021517813.tif 000044
【図１４Ｂ】
2021517813.tif 000045
【図１５】
2021517813.tif 000046
【図１６】
2021517813.tif 000047
【図１７】
2021517813.tif 000048
【図１８】
2021517813.tif 000049
【図１９】
2021517813.tif 000050
【図２０】
2021517813.tif 000051
【図２１】
2021517813.tif 000052
【図２２】
2021517813.tif 000053
【配列表】
2021517813000001.app
【国際調査報告】
2021517813.tif 000054
2021517813.tif 000055
2021517813.tif 000056
2021517813.tif 000057
2021517813.tif 000058
2021517813.tif 000059