(57)【要約】  本発明は、式（Ｉ）のポリミキシン化合物並びにその塩、溶媒和物及び保護された形態、式（Ｉ）の化合物を含んでなる医薬組成物、並びに治療の方法、例えば微生物感染を治療するための方法における前記化合物及び組成物の使用を提供する。従って、式（Ｉ）の化合物は、以下：2021528449.tif 000083［式中、−Ｒ１５は式（ＩＩ）：2021528449.tif 000084の基であり、−Ｒ１６は水素であり；−Ｒ１７は水素であり；−Ｌ−は共有結合又はメチレンであり；−Ａｒは所望により置換されているアリールである。基−Ｘ−、−Ｒ１、−Ｒ２、−Ｒ３、−Ｒ４、及び−Ｒ８は、本明細書で定義するとおりである］のように表される。
2021528449.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2021528449.tif 000078
［式中、
−Ｘ−は、−Ｃ（Ｏ）−を表し；
−Ｒ１は、カルボニル基及びこれが接続している炭素に対してアルファにある窒素と一緒に、フェニルアラニン、ロイシン、ノルロイシン、バリン又はノルバリン残基であり；
−Ｒ２は、１個のヒドロキシル基で所望により置換されているＣ１〜４アルキルであり；
−Ｒ３は、カルボニル基及びこれが接続している炭素に対してアルファにある窒素と一緒に、トレオニン残基であり；
−Ｒ４は、カルボニル基及びこれが接続している炭素に対してアルファにある窒素と一緒に、Ｄａｐであり；
−Ｒ８は、水素又はメチルであり；
−Ｒ１５は、基：
【化２】
2021528449.tif 000079
であり、
−Ｒ１６は、水素であり；
−Ｒ１７は、水素であり；
−Ｌ−は、共有結合又はメチレンであり；
−Ａｒは、置換フェニルなどの所望により置換されているアリールである］
の化合物並びにその塩、溶媒和物及び保護された形態。
【請求項２】
−Ｒ１が、カルボニル基及びこれが接続している炭素に対してアルファにある窒素と一緒に、フェニルアラニン又はロイシン残基である、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項３】
−Ｒ２が、カルボニル基及びこれが接続している炭素に対してアルファにある窒素と一緒に、ロイシン、アミノブチラート、イソ−ロイシン、トレオニン、バリン又はノル−バリン残基である、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
−Ｒ２が、カルボニル基及びこれが接続している炭素に対してアルファにある窒素と一緒に、ロイシン又はアミノブチラート残基である、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
−Ｒ４が、カルボニル基及びこれが接続している炭素に対してアルファにある窒素と一緒に、Ｌ−Ｄａｐである、請求項１ないし４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
−Ｒ８がメチルである、請求項１ないし５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
−Ｒ１５が：
【化３】
2021528449.tif 000080
である、請求項１ないし６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
−Ｌ−が共有結合である、請求項１ないし７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
−Ｌ−がメチレンである、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
−Ａｒが所望により置換されているフェニルである、請求項１ないし９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
前記フェニルが１又は２個の基−ＲＳで置換されており、各−ＲＳが独立に、ハロ、アルキル、ハロアルキル及びアリールから選択される、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
前記フェニルが１又は２個の基−ＲＳで置換されており、各−ＲＳが独立に、クロロ、プロピル、フェニル及びチオフェニルから選択される、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１３】
式（ＩＩ）：
【化４】
2021528449.tif 000081
の化合物並びにその塩、溶媒和物及び保護された形態である、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項１４】
式（ＩＩ）：
【化５】
2021528449.tif 000082
の化合物並びにその塩、溶媒和物及び保護された形態である、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項１５】
請求項１ないし１４のいずれか一項に記載の化合物を、所望により１種又は複数の医薬的に受容可能な担体と一緒に含んでなる、医薬組成物。
【請求項１６】
治療又は予防の方法で使用するための、請求項１ないし１４のいずれか一項に記載の化合物又は請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
微生物感染を治療する方法において使用するための、請求項１ないし１４のいずれか一項に記載の化合物又は請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記感染が細菌感染である、請求項１７に記載の化合物又は医薬組成物。
【請求項１９】
前記細菌感染がグラム陰性菌感染である、請求項１８に記載の化合物又は医薬組成物。
【請求項２０】
前記グラム陰性菌感染が、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｓｐｐ．、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ．、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｓｐｐ．、Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｓｐｐ．、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ．、Ｍｏｒｇａｎｅｌｌａ  ｍｏｒｇａｎｉｉ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ及び他の腸内細菌科、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ．、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ、Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ、Ｂｄｅｌｌｏｖｉｂｒｉｏ、酢酸菌、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ並びにアルファプロテオバクテリアから選択される、請求項１９に記載の化合物又は医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１８年６月２５日（２５．０６．２０１８）に出願されたＵＳ６２／６８９６０２の利益及び優先権を主張するものであり、これらの内容は、本明細書中に参考文献としてその全てが援用される。
【０００２】
本発明は、新規なポリミキシン化合物、化合物を含んでなる医薬組成物、並びに医学的治療のための、例えば、特にグラム陰性細菌によって起こされる微生物感染の治療のための化合物及び医薬組成物及び組合せの使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
ＷＯ２０１３／０７２６９５及びＷＯ２０１４／１８８１７８は、ポリミキシンＢ又はコリスチンのＮ末端の脂肪酸アシル部分及び隣接するジアミノ酪酸部分がアミノ置換基を有する末端基によって置き換えられているポリミキシン誘導体を記載している。そのような誘導体は、良好な抗細菌活性を有する一方で、細胞傷害性が緩和されている。
【０００４】
ＷＯ２０１５／１３５９７６も、この場合もポリミキシンＢ又はコリスチンのＮ末端の脂肪アシル部分及び隣接するジアミノ酪酸がアミノ置換基を有する末端基によって置き換えられているポリミキシン誘導体を記載している。この場合、アミノ置換基の特異的な位置及びＮ末端部分における他の置換基の配置が、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ及びＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉなどの広範な重要な病原体にわたる強力な抗菌活性には重要であることが示された。開示の化合物はまた、低い細胞傷害性を保持した。
【０００５】
ＷＯ２０１６／０８３５３１は、この場合もポリミキシンＢ又はコリスチンのＮ末端の脂肪アシル部分及び隣接するジアミノ酪酸が、ＷＯ２０１３／０７２６９５、ＷＯ２０１４／１８８１７８及びＷＯ２０１５／１３５９７６に存在する基などのアミノ置換基を有する末端基によって置き換えられているポリミキシン誘導体を記載している。加えて、６及び／又は７位におけるアミノ酸残基がポリミキシンＢ及びコリスチンについて置換されている。
【０００６】
現在利用可能なポリミキシンよりも、全身性感染の非経口治療のために有用であるために、新たなポリミキシン誘導体は、少なくともこれら公知のポリミキシンの活性に匹敵する一方で、ｉｎ  ｖｉｖｏで有意に低い腎臓毒性を有する必要がある。
【発明の概要】
【０００７】
一般的な側面において、本発明は、３位におけるアミノ酸残基がＤａｐで置換されていて、本明細書で定義するとおりの基−Ｘ−Ｒ１５をそのＮ末端において有する、ポリミキシンＢ又はコリスチンのノナペプチド（ｎｏｎａｐｅｔｉｄｅ）核などの脱アシル化ポリミキシン核を有する化合物を提供する。そのような化合物は、所望により第２の活性剤と組合せて、治療又は予防の方法で使用される。上記化合物は、微生物感染、例えばグラム陰性細菌感染を治療するために使用することができる。
【０００８】
本発明の化合物は、非経口投与後の受容可能な腎臓中薬物レベルとバランスの取れた低い細胞傷害性を有することが示されている。本発明の化合物は、ポリミキシンＢ、更には本出願人が以前に報告したものを含む当技術分野で公知の修飾ポリミキシン化合物の両方よりも優れていることが示されている。この優位性は、次の特徴のうちの一つ又は複数において明白である：より低い細胞傷害性、非経口投与後の受容可能な腎臓中薬物レベル（すなわち、腎臓中薬物レベルが高くないことから生じる、受容可能な腎臓毒性）、マウス大腿及び肺モデルにおける有効性、及び／又は他のものにおいては従来技術化合物と同等でありながら病原細菌株に対しては優れたＭＩＣ。
【０００９】
典型的には、当技術分野で公知の化合物は、これらの有利な特徴の全部ではないが、一つ、又はことによると二つを示す。例えば、細胞傷害性が低いポリミキシン化合物を見出すことは今や比較的一般的なことであるが、この低い細胞傷害性は多くの場合に、抗細菌活性の低下を伴う。更に、細胞傷害性が低い化合物はそれにもかかわらず、投与後に腎臓内で高レベルで見出され得る。従って、そのような化合物は、いっそう毒性であり、医学的治療の方法において有用ではない。
【００１０】
本発明の第１の側面において、式（Ｉ）の化合物、並びにその医薬的に受容可能な塩、溶媒和物、保護された形態及びプロドラッグ形態を提供する。
式（Ｉ）の化合物は下式：
【００１１】
【化１】
2021528449.tif 000003
【００１２】
［式中、
−Ｘ−は、−Ｃ（Ｏ）−を表し；
−Ｒ１は、カルボニル基及びこれが接続している炭素に対してアルファにある窒素と一緒に、フェニルアラニン、ロイシン、ノルロイシン、バリン又はノルバリン残基であり；
−Ｒ２は、１個のヒドロキシル基で所望により置換されているＣ１〜４アルキルであり；
−Ｒ３は、カルボニル基及びこれが接続している炭素に対してアルファにある窒素と一緒に、トレオニン残基であり；
−Ｒ４は、カルボニル基及びこれが接続している炭素に対してアルファにある窒素と一緒に、Ｌ−ＤａｐなどのＤａｐであり；
−Ｒ８は、水素又はメチルであり；
−Ｒ１５は、基：
【００１３】
【化２】
2021528449.tif 000004
【００１４】
であり、
−Ｒ１６は、水素であり；
−Ｒ１７は、水素であり；
−Ｌ−は、共有結合又はメチレン（−ＣＨ２−）であり；
−Ａｒは、置換フェニルなどの所望により置換されているアリールである］
のように表される。
【００１５】
式（Ｉ）の化合物はまた、下式：
【００１６】
【化３】
2021528449.tif 000005
【００１７】
［式中、
−Ｒ１、−Ｒ２、−Ｒ８及び−Ａｒは、上記と同じ意味を有する］
のように表され、更に、その医薬的に受容可能な塩、溶媒和物、保護された形態及びプロドラッグ形態である。
【００１８】
本発明はまた、式（Ｉ）の化合物を所望により１種又は複数の医薬的に受容可能な担体と一緒に含んでなる医薬組成物を提供する。
更なる一つの側面において、治療又は予防の方法において使用するための、式（Ｉ）の化合物、又は式（Ｉ）の化合物を含んでなる医薬組成物を提供する。
【００１９】
また更なる一つの側面において、微生物感染を治療する方法において使用するための、式（Ｉ）の化合物、又は式（Ｉ）の化合物を含んでなる医薬組成物を提供する。
本発明はまた、それを必要とする被験者に式（Ｉ）の化合物、又は式（Ｉ）の化合物を含んでなる医薬組成物を投与するステップを含む、治療の方法を提供する。上記方法は微生物感染を治療するための方法であり得る。
【００２０】
微生物感染は、グラム陰性菌感染などの細菌感染であり得る。グラム陰性菌感染は、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｓｐｐ．、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ．、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｓｐｐ．、Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｓｐｐ．、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ．、及び他の腸内細菌科、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ．、Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ、及びＬｅｇｉｏｎｅｌｌａからなる群から選択され得る。
【００２１】
本発明はまた、式（Ｉ）の化合物、更には式（Ｉ）の化合物の調製において使用するための中間体化合物を調製するための方法を提供する。
本発明のこれら及び他の側面及び態様を下記で更に詳細に記載する。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本発明は、医学的治療において、所望により第２の活性剤と一緒に使用するための、下記で更に詳細に記載するとおりの式（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）の化合物を含む式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００２３】
広くは、式（Ｉ）、（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）の化合物は、ノナペプチド核であるポリミキシン核、及びそのポリミキシン核のＮ末端にある基−Ｘ−Ｒ１５を有する。基−Ｒ１５は、置換γ−アミノプロピル基である。γ−アミノプロピル基は、−Ｘ−部分に対するβ位において、所望により置換されているアリール又はアラルキル基で置換されている。本発明の化合物の環外鎖中の第１のアミノ酸残基（ポリミキシンにおける３位に対応）は、ポリミキシンＢ及びコリスチンにおいて存在するようなＬ−Ｄａｂ残基（Ｌ−ジアミノ酪酸）ではなく、Ｌ−ＤａｐなどのＤａｐ残基（ジアミノプロピオン酸）である。
【００２４】
ポリミキシン化合物の６及び７位（ポリミキシンで使用されるナンバリングに従って）におけるアミノ酸残基は、ポリミキシンＢ及びコリスチンにおいて存在するアミノ酸残基に対応し得る。６及び／又は７位におけるアミノ酸残基は、ポリミキシンＢ及びコリスチン内に存在するものとは異なるアミノ酸残基で置換されていてもよい。
【００２５】
現在公知の一連のポリミキシン化合物よりも全身性感染の非経口治療に有用であるように、新たなポリミキシン誘導体は、少なくともこれら公知のポリミキシン化合物の抗細菌活性に匹敵する一方で、ｉｎ  ｖｉｖｏで有意に低い腎臓毒性を有する必要がある。
【００２６】
現在、ポリミキシン化合物が比較的低い細胞傷害性を示しても十分ではなく、それというのも、そのことが多くの場合にｉｎ  ｖｉｖｏでの毒性の低下を伴わないためであることが見出されている。従って、腎臓における薬物の蓄積及び腎臓からのクリアランスも有利である必要がある。言い換えると、非経口投与後の細胞傷害性及び腎臓中薬物レベルの組合せが、有利なｉｎ  ｖｉｖｏ毒性プロファイルにつながるものである。
【００２７】
これは、以下の表Ａに示されている実施例の比較によって示され得、この際、ＰＭＢＮはポリミキシンＢノナペプチド核を指し、ＰＭＥＮは、ポリミキシンＥノナペプチド核を指し、適切な場合には、示されている３及び６位（ポリミキシンナンバリングによる）におけるアミノ酸残基への置換を伴う（例えば、３位においてＤａｂがＤａｐに置換、６位においてフェニルアラニンがシクロヘキシルアラニン（ＣＨＡ）に置換）。
【００２８】
【表１−１】
2021528449.tif 000006
【００２９】
【表１−２】
2021528449.tif 000007
【００３０】
本出願人は以前に、ＷＯ２０１５／１３５９７６において、Ｎ末端のγ−アミノプロピル基がフェニル又はベンジル部分で置換されているポリミキシンノナペプチドを開示している。しかしながら、それらのフェニル又はベンジル置換基は、−Ｘ−基に対してβ位ではなく、α位に提供されている。ＷＯ２０１５／１３５９７６はまた、Ｎ末端のβ−アミノエチル基がα位においてベンジル基で置換されているポリミキシンノナペプチドを記載している。ここでは、アミノ官能基が、−Ｘ−基に対してγ位ではなくβ位に提供されている。
【００３１】
これらの既知の化合物は、ポリミキシンＢと比較して有望な活性及び中等度に改善された細胞傷害性を示すが、これらの化合物は、投与後に受容可能な腎臓中レベルとバランスの取れた低い細胞傷害性の組合せを示さないということにおいて、本発明の化合物よりも劣る。
【００３２】
これは、以下の表Ｂに示されている実施例の比較によって示され、この際、ＰＭＢＮは、ポリミキシンＢノナペプチド核を指し、適切な場合には、３位におけるアミノ酸残基への置換を伴う（例えば、３位においてＤａｂがＤａｐに置換）。
【００３３】
【表２】
2021528449.tif 000008
【００３４】
本出願人は以前に、ＷＯ２０１６／０８３５３１において、修飾されたＮ末端基、特にβ−アリール又はβ−アラルキル基を含むものを伴うポリミキシンノナペプチドを開示している。しかしながら、これらの既知の化合物は、シクロヘキシルアラニン残基などの親油性アミノ酸残基を６位において有するが、本出願の化合物は、例えば、フェニルアラニン、ロイシン、ノルロイシン、バリン又はノルバリン残基を６位において有する。これらの既知の化合物も再び、投薬後の細胞傷害性及び腎臓中薬物レベルの不十分な組合せを考慮すると、本発明の化合物よりも劣る。
【００３５】
このことは、以下の表Ｃに示されている実施例の比較によって示されており、この際、ＰＭＢＮは、適切な場合には、示されている３及び６位でアミノ酸残基への置換を伴うポリミキシンＢノナペプチド核を指す（例えば、３位においてＤａｂがＤａｐに置換、６位においてフェニルアラニンがシクロヘキシルアラニン（ＣＨＡ）に置換）。
【００３６】
【表３】
2021528449.tif 000009
【００３７】
化合物５０及び５８はＷＯ２０１６／０８３５３１から公知であり、これらは、その出願において異性体１として特定された化合物である。
ポリミキシン化合物
式（Ｉ）の化合物は、ポリミキシンノナペプチドシリーズの化合物のＮ末端誘導体である。式（Ｉ）の化合物の核は、３位におけるアミノ酸残基がＤａｐで置換されているポリミキシンＢノナペプチド（ＰＭＢＮ、ポリミキシンＢ２−１０）などのノナペプチドの誘導体である。所望により、６位及び／又は７位におけるアミノ酸残基が、本明細書に記載のものなどの別のアミノ酸で置換されている。式（Ｉ）の化合物は、ポリミキシン核のＮ末端において基−Ｘ−Ｒ１５を有する。これを下記で詳細に記載する。
【００３８】
−Ｒ１
基−Ｒ１は、カルボニル基及びこれが接続している炭素に対してアルファにある窒素と一緒に、ポリミキシンシリーズの化合物での６位におけるアミノ酸残基に対応する。
【００３９】
６位におけるアミノ酸残基は、ポリミキシンＢの６位におけるアミノ酸残基と同じであってもよい。すなわち、Ｒ１は、カルボニル基及びこれが接続している炭素に対してアルファにある窒素と一緒に、Ｄ−フェニルアラニン残基であってもよい。
【００４０】
６位におけるアミノ酸残基は、コリスチンの６位におけるアミノ酸残基と同じであってもよい。すなわち、Ｒ１は、カルボニル基及びこれが接続している炭素に対してアルファにある窒素と一緒に、Ｄ−ロイシン残基であってもよい。
【００４１】
一つの態様において、−Ｒ１は、カルボニル基及びこれが接続している炭素に対してアルファにある窒素と一緒に、フェニルアラニン、ロイシン、ノルロイシン、バリン又はノルバリン残基である。アミノ酸残基は、Ｄ型であってもよい。
【００４２】
一つの態様において、−Ｒ１は、カルボニル基及びこれが接続している炭素に対してアルファにある窒素と一緒に、フェニルアラニン、ロイシン又はノルロイシン残基などのアミノ酸残基である。アミノ酸残基はＤ型であってもよい。
【００４３】
一つの態様において、−Ｒ１は、カルボニル基及びこれが接続している炭素に対してアルファにある窒素と一緒に、フェニルアラニン残基、例えば、Ｄ−フェニルアラニン、又はＤ−ロイシン残基などのロイシン残基である。
【００４４】
６位におけるアミノ酸残基の置換は、例えば、ＷＯ２０１６／０８３５３１から公知である。
−Ｒ２
基−Ｒ２は、カルボニル基及びこれが接続している炭素に対してアルファにある窒素と一緒に、ポリミキシンシリーズの化合物での７位におけるアミノ酸残基に対応する。
【００４５】
基−Ｒ２は、所望により１個のヒドロキシル基で置換されているＣ１〜４アルキルである。
一つの態様において、−Ｒ２は、Ｃ１〜４アルキルである。この基は、置換されていない。
【００４６】
一つの態様において、−Ｒ２は、１個のヒドロキシル基で所望により置換されている、非置換など、Ｃ４アルキルなどのＣ３〜４アルキルである。
７位における基、アミノ酸残基は、ポリミキシンＢ及びコリスチンの７位におけるアミノ酸残基と同じであってもよい。すなわち、Ｒ２は、カルボニル基及びこれが接続している炭素に対してアルファにある窒素と一緒に、Ｌ−Ｌｅｕ残基であってもよい。
【００４７】
一つの態様において、−Ｒ２は、カルボニル基及びこれが接続している炭素に対してアルファにある窒素と一緒に、ロイシン、イソ−ロイシン、フェニルアラニン、トレオニン、バリン、ノル−バリン、アラニン、トレオニン又はアミノブチラート残基である。アミノ酸残基は、Ｌ型であってもよい。
【００４８】
一つの態様において、−Ｒ２は、カルボニル基及びこれが接続している炭素に対してアルファにある窒素と一緒に、ロイシン、アミノブチラート、又はトレオニン残基である。アミノ酸残基は、Ｌ型であってもよい。
【００４９】
他の態様において、７位におけるアミノ酸残基は、ポリミキシンＢ及びコリスチンとは別のアミノ酸残基で置換されていてもよい。
一つの態様において、−Ｒ２は、カルボニル基及びこれが接続している炭素に対してアルファにある窒素と一緒に、Ｌ−ロイシン、Ｌ−トレオニン又はＬ−Ａｂｕなどのロイシン、トレオニン又はアミノ酪酸（Ａｂｕ）残基である。
【００５０】
７位におけるアミノ酸残基の置換は、例えば特に、ＷＯ２０１６／０８３５３１及びＶｅｌｋｏｖ  ｅｔ  ａｌ．に記載されている。
−Ｒ３
基−Ｒ３は、カルボニル基及びこれが接続している炭素に対してアルファにある窒素と一緒に、ポリミキシンシリーズの化合物での１０位におけるアミノ酸残基に対応する。
【００５１】
基−Ｒ３は、カルボニル基及びこれが接続している炭素に対してアルファにある窒素と一緒に、Ｌ−トレオニンなどのトレオニンである。
−Ｒ４
基−Ｒ４は、カルボニル基及びこれが接続している炭素に対してアルファにある窒素と一緒に、ポリミキシンシリーズの化合物での３位におけるアミノ酸残基に対応する。
【００５２】
本発明の化合物では、３位におけるアミノ酸残基は、ポリミキシンＢ及びコリスチンの３位におけるアミノ酸残基であるＬ−Ｄａｂではない。本発明の化合物では、−Ｒ４は、カルボニル基及びこれが接続している炭素に対してアルファにある窒素と一緒に、Ｌ−ＤａｐなどのＤａｐである。
【００５３】
−Ｒ４がＬ−ＤａｐなどのＤａｐ側鎖である化合物は、ＷＯ２０１５／１３５９７６に記載の方法を使用して調製することができる。
式（Ｉ）の化合物では、Ｄａｐ側鎖内のアミノ基は保護されていてもよく、例えば、そのアミノ基はＢｏｃで保護されていてもよい。
【００５４】
−Ｒ８
基−Ｒ８は、カルボニル基及びこれが、ヒドロキシメチレンスペーサー（−ＣＨ（ＯＨ）−）を介して接続している炭素に対してベータにある窒素と一緒に、ポリミキシンシリーズの化合物での２位におけるアミノ酸残基に対応する。
【００５５】
２位におけるアミノ酸残基は、ポリミキシンＢ及びコリスチンの２位におけるアミノ酸残基と同じであってもよい。すなわち、Ｒ１は、カルボニル基及びこれが、ヒドロキシメチレンスペーサーを介して接続している炭素に対してベータにある窒素と一緒に、Ｌ−トレオニン残基であってもよい。
【００５６】
基−Ｒ８を含むアミノ酸残基は、ポリミキシンシリーズの化合物での２位に対応する。
一つの態様において、−Ｒ８は、メチルである。従って、得られるアミノ酸はＴｈｒである。
【００５７】
一つの態様において、−Ｒ８は、Ｈである。従って、得られるアミノ酸はＳｅｒである。
典型的には、−Ｒ８は、メチルである。
【００５８】
−Ｘ−
基−Ｘ−は、−Ｃ（Ｏ）−＊である。
星印は、ＮＨ、ポリミキシンノナペプチド核のアミノ末端、２位におけるアミノ酸などへの接続点を示している。基−Ｘ−の左側は、−Ｒ１５への接続点である。
【００５９】
−Ｒ１５
基−Ｒ１５は、−Ｘ−と一緒に、ポリミキシン核のＮ末端の修飾部である。
本発明の化合物は、Ｎ末端部分、−Ｒ１５でのγ−アミノプロピル基のβ位において立体中心を含有する。立体異性体の一つが、より低い細胞傷害性及びより低い腎臓中薬物レベルと関連していることが見出されている。この立体異性体は、本出願の実例で詳細に記載するとおり、逆相クロマトグラフィーで、より早く溶離する立体異性体である。
【００６０】
一つの態様において、基−Ｒ１５は：
【００６１】
【化４】
2021528449.tif 000010
【００６２】
である。
この立体型は、逆相クロマトグラフィーにおいて、より早く溶離する立体型である。
別法では、基−Ｒ１５は：
【００６３】
【化５】
2021528449.tif 000011
【００６４】
であり得る。
この立体型は、より遅く溶離する立体型である。
一つの態様において、基−Ｒ１５は：
【００６５】
【化６】
2021528449.tif 000012
【００６６】
である。
一つの態様において、基−Ｒ１５は：
【００６７】
【化７】
2021528449.tif 000013
【００６８】
である。
−Ｒ１５内の例示的な基を以下に提示する。
−Ｒ１６及び−Ｒ１７
基−Ｒ１６及び−Ｒ１７は両方とも水素である。
【００６９】
式（Ｉ）の化合物では、基−ＮＲ１６Ｒ１７は、保護されていてもよく、例えば、基−ＮＲ１６Ｒ１７は、Ｂｏｃ保護されていてもよい。
−Ｌ−
この基は、共有結合メチレン（−ＣＨ２−）であってもよい。
【００７０】
典型的には、−Ｌ−は共有結合である。
−Ａｒ
基−Ａｒは、カルボアリール又はヘテロアリール基などのアリール基である。アリール基は所望により置換されている。
【００７１】
アリール基は、フェニルなどのＣ６アリール基、又はチオフェンなどのＣ５アリール基であってもよい。
基−Ａｒは、フェニルであってもよく、これは所望により置換されており、例えば置換されている。一つの態様において、−Ａｒは、非置換フェニルである。
【００７２】
アリール基は、１個又は複数の基−ＲＳなどで置換されていてもよい。各基−ＲＳは独立に、ハロ、アルキル、ハロアルキル及びアリール、例えば、ハロ及びアルキルから選択される。
【００７３】
アリール基は、１、２又は３個の−ＲＳ基、例えば１又は２個の基、例えば１個の基（一置換）で置換されていてもよい。
ハロ基は、フルオロ、クロロ、ブロモ及びヨードから選択されてよく、フルオロ及びクロロ、例えばクロロから選択され得る。
【００７４】
ハロ基は、クロロであってもよい。
アルキル基は、Ｃ１〜６アルキル、例えばＣ１〜４アルキル、例えばＣ１〜３アルキル、例えばＣ３アルキルであってもよい。
【００７５】
アルキル基は、メチル、エチル、並びにｎ−プロピル及びｉ−プロピルを含むプロピルから選択され得る。
アルキル基は、ｉ−プロピルであってもよい。
【００７６】
ハロアルキル基は、１個又は複数のハロ基で置換されているＣ１〜６アルキル基、例えばＣ１〜４アルキル、例えばＣ１〜２アルキルであってもよい。アルキル基は、フルオロでペル置換されているなど、ハロでペル置換されていてもよい。
【００７７】
ハロアルキル基は、トリフルオロメチルであってもよい。
−ＲＳがアリール基である場合、これはカルボアリール又はヘテロアリールであってもよい。アリールは、Ｃ５〜６アリール、例えばＣ５アリールであってもよい。Ｃ５アリールは、チオフェニル、フラニル、ピロリル、ピラゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル及びイソオキサゾリルから選択され得る。Ｃ６アリールはフェニルであってもよい。
【００７８】
アリール基は、チオフェニル、例えばチオフェン−２−イルであってもよい。
アリール基はそれ自体、１、２又は３個の−ＲＡｒ基、例えば１又は２個の基、例えば１個の基（一置換）で所望により置換されていてもよい。各基−ＲＡｒは独立に、ハロ、アルキル、ハロアルキル及びアリール、例えばハロ及びアルキルから選択される。これらの基は、アリール基が置換されていないことを除いて、上記の基と同じ意味を有してもよい。
【００７９】
基−Ａｒは、ハロフェニル又はアルキルフェニルであってもよい。
ハロフェニルは、２−クロロフェニルなどの２−ハロフェニル、３−クロロフェニルなどの３−ハロフェニル、及び４−クロロフェニルなどの４−ハロフェニルから選択され得る。
【００８０】
アルキルフェニルは、２−イソプロピルフェニルなどの２−アルキルフェニル、３−イソプロピルフェニルなどの３−アルキルフェニル、及び４−イソプロピルフェニルなどの４−アルキルフェニルから選択され得る。
【００８１】
基−Ａｒは、２−クロロフェニル又は３−イソプロピルフェニルであってもよい。
基−Ａｒは、２−クロロフェニルであってもよい。
選択される−Ｒ１５基
基−Ｒ１５は、以下：
【００８２】
【化８】
2021528449.tif 000014
【００８３】
の基から選択され得る。
基−Ｒ１５は、以下：
【００８４】
【化９】
2021528449.tif 000015
【００８５】
の基から選択され得る。
基−Ｒ１５は、以下：
【００８６】
【化１０】
2021528449.tif 000016
【００８７】
の基から選択され得る。
式（Ｉ）の化合物に関連する態様
幾つかの態様において、式（Ｉ）の化合物は、以下に図示するとおりのＲ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４部分の配向を有する式（Ｉａ）：
【００８８】
【化１１】
2021528449.tif 000017
【００８９】
［式中、−Ｘ−、−Ｒ１、−Ｒ２、−Ｒ３、−Ｒ４、−Ｒ８及び−Ｒ１５は、式（Ｉ）の化合物について定義されたとおりである］
の化合物又はその医薬的に受容可能な塩、溶媒和物、保護された形態若しくはプロドラッグ形態である。
【００９０】
式（Ｉａ）の化合物の範囲内では、−Ｒ１は、カルボニル基及びこれが接続している炭素に対してアルファにある窒素と一緒に、Ｄ−フェニルアラニン、Ｄ−ロイシン又はＤ−ノルロイシンである。
【００９１】
式（Ｉａ）の化合物の範囲内では、−Ｒ２は、カルボニル基及びこれが接続している炭素に対してアルファにある窒素と一緒に、Ｌ−ロイシン、Ｌ−アミノブチラート、又はＬ−トレオニン残基である。
【００９２】
式（Ｉａ）の化合物は、−Ｌ−が共有結合又は−ＣＨ２−であり、−Ａｒがハロ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、所望により置換されているアリール及び所望により置換されているヘテロアリールからなる群から選択される１又は２個の基で所望により置換されているフェニルである化合物であってもよい。例えば、−Ａｒは、クロロ、ブロモ、チオフェニル、フェニル、メチル、イソプロピル、及びイソブチルからなる群から選択される１又は２個の基で所望により置換されているフェニルであってもよい。
【００９３】
この場合、−Ａｒは、フェニル、３−クロロフェニル、４−クロロフェニル、３−イソプロピルフェニル、３−イソブチルフェニル、３−メチルフェニル、３−ブロモフェニル、１，１’−ビフェニル−３−イル、３，５−ジクロロフェニル、及びチオフェン−３−イルフェニルから選択されてよい。
【００９４】
本発明の化合物は、
−Ｒ１が、カルボニル基及びこれが接続している炭素に対してアルファにある窒素と一緒に、Ｄ−フェニルアラニン、Ｄ−ロイシン又はＤ−ノルロイシンであり；
−Ｒ２が、カルボニル基及びこれが接続している炭素に対してアルファにある窒素と一緒に、Ｌ−ロイシン、Ｌ−アミノブチラート、又はＬ−トレオニン残基であり；
−Ｒ３が、Ｌ−トレオニンであり；
−Ｒ４が、Ｌ−Ｄａｐであり；
−Ｒ８が、メチルであり；
Ｒ１５−Ｘ−が、
【００９５】
【化１２−１】
2021528449.tif 000018
【００９６】
【化１２−２】
2021528449.tif 000019
【００９７】
からなる群から選択される、式（Ｉ）の化合物並びにその塩、溶媒和物、保護された形態及びプロドラッグ形態であってもよい。
化合物（ＩＩ）及び化合物（ＩＩＩ）
式（Ｉ）の化合物は、以下に示すとおりの式（ＩＩ）：
【００９８】
【化１３】
2021528449.tif 000020
【００９９】
の化合物並びにその塩、溶媒和物及び保護された形態であってもよい。
式（Ｉ）の化合物は、以下に示すとおりの式（ＩＩａ）：
【０１００】
【化１４】
2021528449.tif 000021
【０１０１】
の化合物並びにその塩、溶媒和物及び保護された形態であってもよい。
式（Ｉ）の化合物は、以下に示すとおりの式（ＩＩｂ）：
【０１０２】
【化１５】
2021528449.tif 000022
【０１０３】
の化合物並びにその塩、溶媒和物及び保護された形態であってもよい。
式（Ｉ）の化合物は、以下に示すとおりの式（ＩＩＩ）：
【０１０４】
【化１６】
2021528449.tif 000023
【０１０５】
の化合物並びにその塩、溶媒和物及び保護された形態であってもよい。
式（Ｉ）の化合物は、以下に示すとおりの式（ＩＩＩ）：
【０１０６】
【化１７】
2021528449.tif 000024
【０１０７】
の化合物並びにその塩、溶媒和物及び保護された形態であってもよい。
ポリミキシン化合物
本出願で使用するための化合物は、ポリミキシンＢノナペプチド及びコリスチンノナペプチドなどの既知のポリミキシン化合物の修飾形態に基づく。
【０１０８】
ポリミキシンＢノナペプチドは、以下：
【０１０９】
【化１８】
2021528449.tif 000025
【０１１０】
［式中、２、４及び１０位が示されており（ポリミキシンＢデカペプチドで使用されるナンバリングシステムを参照）、アミノ酸残基は、示されていない限り、Ｌ配置である］
に示す構造を有する。
【０１１１】
本発明の化合物は、（ｉ）Ｎ末端アミノ基、−ＮＨ２が本明細書に記載のとおりの基−ＮＨ−Ｘ−Ｒ１５で置換されており；（ｉｉ）３位におけるアミノ酸残基がＤａｐで置換されており、かつ所望により（ｉｉｉ）２、６及び／又は７位におけるアミノ酸残基が別のアミノ酸残基で置換されている、ポリミキシンＢノナペプチドの誘導体である。
【０１１２】
便宜的に、本発明の化合物は、式（Ｉ）によって表され、２、３、６、７又は１０位におけるアミノ酸はそれぞれ基Ｒ８、Ｒ４、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の性質によって決定される。上記のバリアントを含む本発明の化合物は、生物学的に活性である。
【０１１３】
合成方法
本発明の化合物の調製は、当業者には、特に、修飾ポリミキシンノナペプチドを調製するためのＷＯ２０１５／１３５９７６に記載の方法について知識がある当業者にはよく分かるであろう。本出願で用いられる新規のＮ末端基を考慮して、当技術分野に記載の方法を本出願の化合物の調製において使用するために容易に適合させることができる。
【０１１４】
概して、本発明の化合物は、適切に保護されたポリミキシンノナペプチド中間体を、基−Ｒ１５を有するカルボン酸とカップリングすることによって調製することができる。この反応の生成物は典型的には、式（Ｉ）の化合物の保護された形態である。保護基の除去を所望により行うことができる。これは、ＷＯ２０１５／１３５９７６から公知の一般的な戦略である。
【０１１５】
適切に保護されたノナペプチド中間体自体も、ＷＯ２０１５／１３５９７６に提示の方法に従って調製することができる。本明細書に記載のとおり、適切に保護されたノナペプチド中間体はまた、直鎖ノナペプチドの固相合成、続く、固体支持体からの直鎖形態の切断、次いでその後の、その直鎖形態の４及び１０位におけるアミノ残基間での環化によって調製することができる。
【０１１６】
本発明の化合物は、当業者に公知の方法を使用して従来のペプチド合成によって作製することができる。適切な方法には、ｄｅ  Ｖｉｓｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｒｅｓ，６１，２００３，２９８〜３０６、Ｖａａｒａ  ｅｔ  ａｌ，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，５２，２００８．３２２９〜３２３６、又はＶｅｌｋｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，ＡＣＳ  Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．９，２０１４，１１７２によって記載されたような固相合成が含まれる。これらの方法は、適切な保護戦略、及び環化ステップのための方法を含む。
【０１１７】
必要ならば、式（Ｉ）の化合物は、例えば、生成物のジアステレオマー型を分離するために少なくとも部分的に精製され得る。
本発明の更なる一つの側面において、式（Ｘ）：
【０１１８】
【化１９】
2021528449.tif 000026
【０１１９】
［式中、
−Ｒ１６は、水素であり；
−Ｒ１７は、水素であり；
−Ｌ−は、共有結合又はメチレンであり；
−Ａｒは、置換フェニルなどの所望により置換されているアリールである］
の化合物並びにその塩、溶媒和物、保護された形態及び活性化形態を提供する。
【０１２０】
式（Ｘ）の化合物が、式（Ｉ）の化合物の調製で使用される。典型的には、その保護された形態にあるような化合物（Ｘ）が式（ＸＩ）の保護されたポリミキシンノナペプチドとカップリングされて、式（Ｉ）の化合物の保護された形態をもたらす。
【０１２１】
基−Ｌ−及び−Ａｒに関する式（Ｉ）の化合物での態様が、式（Ｘ）の化合物にも当てはまる。
典型的には、基−ＮＲ１６Ｒ１７であるアミノ官能基を保護する。
【０１２２】
一つの態様において、式（Ｘ）の化合物中のアミノ官能基はＢｏｃ−又はＣＢＺ−保護される。この場合、−Ｒ１６は、水素であり、−Ｒ１７は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−ｔ−Ｂｕ又は−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｂｎである。
【０１２３】
式（ＸＩ）の化合物は、基Ｒ１５−Ｘ−が水素であることを除いて式（Ｉ）の化合物並びにその塩、溶媒和物、及び保護された形態である。
基−Ｒ１、−Ｒ２、−Ｒ３、−Ｒ４及び−Ｒ８に関して式（Ｉ）の化合物で選択された態様が、式（ＸＩ）の化合物にも当てはまる。
【０１２４】
式（ＸＩ）の化合物は典型的には保護され、より具体的には、３、５、８及び９位におけるアミノ酸残基の側鎖中のアミノ基は保護され、例えば、３、５、８及び９位におけるアミノ酸のそれぞれは、Ｂｏｃ保護又はＣＢＺ保護され、２位、及び所望により１０位におけるアミノ酸残基の側鎖中のヒドロキシル基は保護され、例えば、これらのアミノ酸のそれぞれは、ｔＢｕ保護される。
【０１２５】
式（Ｘ）のカルボン酸化合物は、従来のアミドカップリング条件を使用して式（ＸＩ）のアミノ化合物とカップリングすることができる。式（Ｘ）の化合物を活性化形態で使用することができ、この形態は、式（ＸＩ）の化合物との反応のためにｉｎ  ｓｉｔｕで生成することができる。
【０１２６】
活性化形態は、所望により塩基の存在下でのアミド結合形成反応におけるカップリング剤の適切な選択を介してｉｎ  ｓｉｔｕで生成することができる。
式（Ｘ）のカルボン酸は、標準的な活性化剤、例えば、ＤＩＣ（Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド）又はＥＤＣＩ（水溶性カルボジイミド；１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド）などのカルボジイミドの反応によって活性化させることができる。上記酸の活性化形態は、Ｏ−アシルイソ尿素である。
【０１２７】
カルボン酸は、ＨＯＢｔ（１−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール）又はＨＯＡｔ（１−ヒドロキシ−７−アザ−ベンゾトリアゾール）などのヒドロキシベンゾトリアゾール又はヒドロキシアザベンゾトリアゾールによって活性化させることができる。上記酸の活性化形態は、エステルである。
【０１２８】
上記エステルは、カルボジイミド−活性化形態を介して形成することができるか、又は例えば、ＨＡＴＵ、ＨＢＴＵ、ＰｙＢＯＰ、ＰｙＢＲＯＰ、又はＴＢＴＵなどの適切な試薬を使用して、カルボン酸から直接形成することができる。
【０１２９】
有機塩基が、ＤＩＰＥＡ又はＴＥＡなどの活性化形態を形成するために存在してもよい。
保護された形態
式（Ｉ）の化合物、（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）の化合物などの本発明の化合物は、保護された形態で提供することができる。ここで、反応性官能基、例えばアミノ官能基は、合成工程中のその反応を防止するために遮蔽することができる。保護基は、反応性官能基を遮蔽するために提供され、この保護基は、本来の反応基の官能基を明らかにするために合成の後の段階で除去することができる。
【０１３０】
一つの態様において、保護された形態は、アミノ、ヒドロキシル、チオール及び／又はカルボキシル官能基が、保護基によって保護（遮蔽）された化合物である。一つの態様において、保護された形態は、化合物中のアミノ酸残基の側鎖の官能基が保護された化合物である。
【０１３１】
式（Ｉ）、（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）の化合物において、５、８及び９位におけるアミノ酸残基は、Ｄａｂ残基であり、Ｄａｂ残基の側鎖は、アミノ官能基を含む。それぞれのＤａｂ残基のアミノ酸官能基は、本明細書中に記載されるように、アミノ保護基で保護することができる。同様に、３位におけるアミノ酸残基はＤａｐであり、このアミノ酸残基の側鎖はアミノ官能基を含む。
【０１３２】
基−Ｒ１５はアミノ官能基を基−Ｒ１６Ｒ１７の形態で含み、例えば、−Ｒ１６及び−Ｒ１７のそれぞれは水素である。アミノ官能基は、本明細書に記載のとおりのアミノ保護基で保護されていてもよい。
【０１３３】
保護基、例えばアミノ酸残基に対するものは、周知であり、当技術において十分に記載されている。
側基保護を、所望によってアミノ及びカルボキシ保護と一緒に有するアミノ酸は、商業的に入手可能である。従って、保護されたポリミキシン化合物は、適当に保護されたアミノ酸出発物質から調製することができる。
【０１３４】
Ｖｅｌｋｏｖ  ｅｔ  ａｌ．は、適当に保護されたアミノ酸を使用する固相のポリミキシン化合物の工程ごとの調製を記載している。トレオニン及びＤａｂの保護された形態の使用が開示されている（補足情報を参照されたい）。
【０１３５】
保護基が使用されている場合、これは、ポリミキシン核の構造を実質的に破壊しない条件、例えばアミノ酸残基の立体化学を変化しない条件下で除去可能である。
一つの態様において、保護基は、酸に不安定、塩基に不安定であるか、又は還元条件下で除去可能である。
【０１３６】
アミノ官能基のための例示的保護基は、Ｂｏｃ（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）、Ｂｎ（ベンジル、Ｂｚｌ）、ＣｂＺ（ベンジルオキシカルボニル、Ｚ）、２−ＣＬ−Ｚ（２−クロロ）、ｉｖＤｄｅ（１−［４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキサ−１−イリデン］−３−メチルブチル）、Ｆｍｏｃ（フルオレニルメチルオキシカルボニル）、ＨＳＯ３−Ｆｍｏｃ（スルホニル化Ｆｍｏｃ、例えば２−スルホ−Ｆｍｏｃ、例えばＳｃｈｅｃｈｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ２００２，４５（１９）４２６４中に記載されているような）、Ｄｄｅ（１−［４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキサ−１−イリデン］エチル）、Ｍｍｔ（４−メトキシトリチル）、Ｍｔｔ（４−メチルトリチル）、Ｎｖｏｃ（６−ニトロベラトロイルオキシカルボニル）、Ｔｆａ（トリフルオロアセチル）、及びＡｌｌｏｃ（アリルオキシカルボニル）を含む。
【０１３７】
芳香族窒素官能基のための例示的保護基は、Ｂｏｃ、Ｍｔｔ、Ｔｒｔ及びＤｎｐ（ジニトロフェニル）を含む。
一つの態様において、アミノ官能基のための保護基は、Ｂｏｃ、ｉｖＤｄｅ、ＣｂＺ、Ｂｎ並びにＦｍｏｃ及びＨＳＯ３−Ｆｍｏｃから選択される。
【０１３８】
一つの態様において、アミノ官能基のための保護基は、Ｂｏｃ、ｉｖＤｄｅ、Ｆｍｏｃ又はＣｂＺ、例えば、Ｂｏｃ、ｉｖＤｄｅ又はＣｂｚである。
Ｂｏｃ保護を、５、８及び９位に、及び所望により３位に存在するアミノ酸残基の側鎖に存在するアミノ官能基に与えてもよい。
【０１３９】
ヒドロキシル官能基のための例示的保護基は、Ｔｒｔ（トリチル）、Ｂｎ（ベンジル）、及びｔＢｕ（ｔｅｒｔ−ブチル）を含む。
一つの態様において、ヒドロキシル官能基のための保護基はｔＢｕである。
【０１４０】
更なる例示的な保護基は、シリルエーテル保護基、例えばＴＭＳ、ＴＥＳ、ＴＢＳ、ＴＩＰＳ、ＴＢＤＭＳ、及びＴＢＤＰＳを含む。そのような保護基は、例えばＴＢＡＦで除去可能である。
【０１４１】
カルボキシル官能基のための例示的な保護基は、Ｂｎ（ベンジル、Ｂｚ）、ｔＢｕ（ｔｅｒｔ−ブチル）、ＴＭＳＥＴ（トリメチルシリルエチル）及びＤｍａｂ（｛１−［４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキサ−１−イリデン］−３−メチルブチル｝アミノベンジル）を含む。
【０１４２】
芳香族窒素官能基のための例示的保護基は、例えば、そのような官能基が基−Ａｒに存在する場合、Ｂｏｃ、Ｍｔｔ、Ｔｒｔ及びＤｎｐ（ジニトロフェニル）を含む。
幾つかの態様において、幾つかの種類の官能基のみが保護される。例えば、アミノ基を、例えばアミノ酸残基の側鎖のアミノ基のみを保護してもよい。
【０１４３】
一つの態様において、アミノ基及びヒドロキシル基が保護される。
ＬｏｇＰ
式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物などの本発明の化合物は、ある特定の限界内のＬｏｇＰ値として表されるような分配係数を有し得る。分配係数は、化合物の親油性の指標を与え得る。
【０１４４】
本発明者らは、親油性が高い化合物ほど、細胞傷害性が不十分であることを立証している。本発明の化合物は典型的には、下記のＬｏｇＰ値など、低い細胞傷害性と関連するＬｏｇＰ値を有する。
【０１４５】
化合物でのＬｏｇＰ値は、実験的に（例えば、オクタノールと水との間での化合物の分配によって）決定され得るか、又は標準的な計算方法を使用して予測され得る。
例えば、ＬｏｇＰに対する言及は、本明細書中に参考文献としてその全てが援用されるＧｈｏｓｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．Ａ，１９９８，１０２，３７６２〜３７７２に記載の方法を使用して決定され得るＡＬｏｇＰに対する言及であり得る。従って、ＡＬｏｇＰは、ＬｏｇＰでのＧｈｏｓｅ／Ｃｒｉｐｐｅｎ基寄与推定値である。
【０１４６】
一つの態様において、化合物は、少なくとも−６．５、少なくとも−６．６、少なくとも−６．７、少なくとも−６．８、少なくとも−６．９、少なくとも−７．０、少なくとも−７．５、又は少なくとも−８．０のＡＬｏｇＰ値などのＬｏｇＰ値を有する。
【０１４７】
一つの態様において、化合物は、最大で−６．４、最大で−６．３、最大で−６．２、最大で−６．１、最大で−６．０、最大で−５．９、又は最大で−５．８のＡＬｏｇＰ値などのＬｏｇＰ値を有する。
【０１４８】
一つの態様において、化合物は、上記の限界から適切に選択される上限及び下限を有する範囲内、例えば、−５．８〜−８．０、例えば−６．０〜−６．７、例えば−６．３〜−６．７の範囲内のＬｏｇＰ値を有する。これらの範囲は、基−Ｒ２が非置換アルキルであるときに選択され得る。
【０１４９】
別の態様において、化合物は、−６．７〜−７．４の範囲内のＬｏｇＰ値を有する。この範囲は、基−Ｒ２が１個のヒドロキシル基で置換されているアルキルであるときに選択され得る。
【０１５０】
上記で論じた限界内のＡＬｏｇＰ値などのＬｏｇＰ値を有する化合物は、ポリミキシン感受性及びポリミキシン耐性菌株の両方に対して優れた活性を有することが見出されている。上記化合物は、ポリミキシンＢに匹敵する抗菌活性を有し得る。有利には、そのような化合物は、ポリミキシンＢと比較して低い細胞傷害性も有し得る。
【０１５１】
本発明者等は、最適なＬｏｇＰ値を有する化合物を、６及び／又は７位におけるアミノ酸残基の適切な選択と共に（−Ｒ１及び／又は−Ｒ２の適切な選択などと共に）本出願の−Ｒ１５基を選択することによって得ることができることを見出している。
【０１５２】
活性剤
式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物は、それぞれ、第２の活性剤と一緒に使用することができる。本発明人等は、このような組合せが、両方の化合物の個々の活性から予測されるものであるものより大きい生物学的活性を有することを見出している。式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物は、第２の活性剤の活性を増強するために使用することができる。特に、式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物は、薬剤の、例えばグラム陰性細菌に対する抗菌活性を向上するために第２の活性剤と一緒に使用することができる。
【０１５３】
理論によって束縛されることを望むものではないが、式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物は、細胞、例えばグラム陰性細菌の細胞の外部膜に作用して、その細胞への第２の活性剤の取込みを容易にすることができると信じる。従って、外部膜を通ることにおいて他の方法では不可能又は不良であった薬剤を、式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物の作用によって、標的細胞に取り込むことができる。
【０１５４】
一つの態様において、式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物の第２の活性剤との組合せは、グラム陰性細菌に対して活性である。ここで、個々の式（Ｉ）、（ＩＩ）若しくは（ＩＩＩ）の化合物又は第２の活性剤のいずれかが、グラム陰性細菌に対する活性を有することは、必須ではない。
【０１５５】
一つの態様において、第２の活性剤は、特定の微生物、例えば細菌に対する、１０より少ない、５より少ない、又は１マイクログラム／ｍＬより少ない測定されたＭＩＣ値を有する薬剤である。微生物は、グラム陰性菌、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｓ．ｅｎｔｅｒｉｃａ、Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｋ．ｏｘｙｔｏｃａ；Ｅ．ｃｌｏａｃａｅ、Ｅ．ａｅｒｏｇｅｎｅｓ、Ｅ．ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ、Ａ．ｃａｌｃｏａｃｅｔｉｃｕｓ、Ａ．ｂａｕｍａｎｎｉｉ；Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、及びＳｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｔｏｐｈｉｌａからなる群から選択されるグラム陰性菌であることができる。
【０１５６】
グラム陰性細菌に対する活性を有する第２の活性剤の例は、ベータラクタム、テトラサイクリン、アミノグルコシド及びキノロンを含む。
一つの態様において、第２の活性剤は、特定の微生物、例えばグラム陰性細菌に対する、４より大きい、８より大きい、１６より大きい、又は３２マイクログラム／ｍＬより大きい測定されたＭＩＣ値を有する活性剤である。この態様において、第２の活性剤は、グラム陽性細菌に対して活性であることができる。例えば、第２の活性剤は、特定のグラム陽性細菌に対する、１０より小さい、５より小さい又は１マイクログラム／ｍＬより小さい測定されたＭＩＣ値を有する活性剤である。ここで、式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物は、グラム陰性細菌の細胞への第２の活性剤の取込みを容易にするために作用する。従って、第２の活性剤は、グラム陰性細菌の細胞内の標的に作用することが可能であり、この標的は、グラム陽性細菌の細胞中の第２の活性剤の標的と同じであることができる。
【０１５７】
グラム陽性細菌は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ及びＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  細菌、例えばＳ．ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡを含む）、Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ、Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ、及びＥ．ｆａｅｃｉｕｍからなる群から選択することができる。
【０１５８】
グラム陽性細菌に対する活性（例えば、上記で与えたＭＩＣ値で）、及びグラム陰性細菌に対して中程度の活性を有する第２の活性剤の例は、リファンピシン、ノボビオシン、マクロライド、プロイロムリチンを含む。一つの態様において、グラム陰性細菌に対して中程度の活性を有する化合物は、３２より小さい、６４より小さい、又は１２８マイクログラム／ｍＬより小さいグラム陰性細菌に対する測定されたＭＩＣ値を有することができる。
【０１５９】
更に、使用のために適したものは、グラム陽性細菌に対する活性を有し、グラム陰性細菌に対して本質的に不活性である薬剤である。例は、フシジン酸、オキサゾリジニン（例えばリネゾリド）、グリコペプチド（例えばバンコマイシン）、ダプトマイシン及びランチビオティックスを含む。
【０１６０】
一つの態様において、グラム陰性細菌に対して本質的に活性を持たない化合物は、３２より大きい、６４より大きい、１２８より大きい、２５６マイクログラム／ｍＬより大きいグラム陰性細菌に対する測定されたＭＩＣ値を有することができる。
【０１６１】
正常な環境下で、このような薬剤は、グラム陰性細菌の細胞の外部膜を通るその比較的不良な能力のために、グラム陰性細菌に対する使用のためには必ずしも適していない。上記で説明したように、式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物と一緒に使用する場合、このような薬剤は、使用のために適している。
【０１６２】
一つの態様において、活性剤は、リファンピシン（リファンピン）、リファブチン、リファラジル、リファペンチン、リファキシミン、アズトレオナム、オキサシリン、ノボビオシン、フシジン酸、アジスロマイシン、シプロフロキサシン、メロペネム、チゲサイクリン、ミノシクリン、エリスロマイシン、クラリスロマイシン及びムピロシン、並びに医薬的に受容可能な塩、溶媒和物及びこれらのプロドラッグの形態からなる群から選択することができる。
【０１６３】
本発明人等は、式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）のポリミキシン化合物を、微生物感染を治療するためにリファマイシンのファミリー中のある種の化合物と一緒に使用することができることを見出している。リファマイシンのファミリーは、単離したリファマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｓ及びＳＶ、並びにこれらの化合物の全身性供給変種、例えばリファンピシン（リファンピン）、リファブチン、リファラジル、リファペンチン、及びリファキシミン、並びに医薬的に受容可能な塩及びこれらの溶媒和物を含む。
【０１６４】
一つの態様において、活性剤はリファンピシン（リファンピン）並びに医薬的に受容可能な塩、溶媒和物及びこれらのプロドラッグの形態である。
塩、溶媒和物及び他の形態
式（Ｉ）、（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）の化合物の塩の例は、全ての医薬的に受容可能な塩、例えば、制約されるものではないが、強無機酸の酸付加塩、例えばＨＣｌ及びＨＢｒ塩、並びに強有機酸の付加塩、例えばメタンスルホン酸塩を含む。塩の更なる例は、硫酸塩及び酢酸塩、例えばトリフルオロ酢酸塩又はトリクロロ酢酸塩を含む。
【０１６５】
一つの態様において、本開示の化合物は、硫酸塩又はトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）塩として提供される。一つの態様において、本開示の化合物は、酢酸塩などの酢酸塩類として提供される。
【０１６６】
式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物は、更にプロドラッグとして処方することができる。プロドラッグは、本明細書中に記載される、１個又は複数のアミノ基が、ｉｎ  ｖｉｖｏで開裂する基で保護されて、生物学的に活性な化合物を放出することができる抗細菌化合物含むことができる。一つの態様において、プロドラッグは、“アミンプロドラッグ”である。アミンプロドラッグの例は、例えば、Ｂｅｒｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，２００６，５０，１９５３中に記載されているようなスルホメチル、又は例えば、Ｓｃｈｅｃｈｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ２００２，４５（１９）４２６４中に記載されているようなＨＳＯ３−ＦＭＯＣ及びその塩を含む。アミンプロドラッグの更なる例は、Ｋｒｉｓｅ  ａｎｄ  Ｏｌｉｙａｉ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｐｅｃｔｓ，２００７，５（２），１０１−１３１によって与えられている。
【０１６７】
一つの態様において、式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物は、プロドラッグとして提供される。
式（Ｉ）、（ＩＩ）若しくは（ＩＩＩ）の化合物、又は本明細書に記載のいずれかの他の化合物に対する言及は、更にこの化合物の溶媒和物に対する言及でもある。溶媒和物の例は、水和物を含む。
【０１６８】
式（Ｉ）、（ＩＩ）若しくは（ＩＩＩ）の化合物、又は本明細書に記載のいずれかの他の化合物は、原子が、天然に存在する又は天然に存在しない同位元素によって置換された化合物を含む。一つの態様において、同位元素は、安定な同位元素である。従って、本明細書に記載される化合物は、例えば重水素を含有する化合物等を含む。例えば、Ｈは、１Ｈ、２Ｈ（Ｄ）、及び３Ｈ（Ｔ）を含むいずれもの同位元素の形態であることができ；Ｃは、１２Ｃ、１３Ｃ、及び１４Ｃを含むいずれもの同位元素の形態であることができ；Ｏは、１６Ｏ及び１８Ｏを含むいずれもの同位元素の形態であることができる；等である。
【０１６９】
式（Ｉ）、（ＩＩ）若しくは（ＩＩＩ）のある種の化合物、又は本明細書に記載のいずれかの他の化合物は、制約されるものではないが、ｃｉｓ及びｔｒａｎｓ型；Ｅ及びＺ型；ｃ、ｔ、及びｒ型；エンド及びエキソ型；Ｒ、Ｓ及びメソ型；Ｄ及びＬ型；ｄ及びｌ型；（＋）及び（−）型；ケト、エノール、及びエノラート型；シン及びアンチ型；向斜及び背斜型；α及びβ型；アキシアル及びエクアトリアル型；ボート、イス、ネジレ、封筒、及び半イス型；及びこれらの混合物を含む一つ又は複数の特定の幾何、光学、鏡像異性、ジアステレオ異性、エピマー、アトロプ、立体異性、互変異性、配座異性、又はアノマーの形態で存在することができ、本明細書中で、以下集合的に“異性体”（又は異性の形態）と呼ぶ。
【０１７０】
互変異性型に対して以下で考察されるようなものを除き、本明細書中で使用されるような“異性体”の用語から特定的に除外されるものは、構造的（若しくは構成的）異性体（即ち、単に空間中の原子の位置によるより、むしろ原子間の接続において異なる異性体）であることに注意されたい。例えば、メトキシ基、−ＯＣＨ３に対する言及は、その構造異性体、ヒドロキシメチル基、−ＣＨ２ＯＨに対する言及とは解釈されない。同様に、オルト−クロロフェニルに対する言及は、その構造異性体、メタ−クロロフェニルに対する言及とは解釈されない。然しながら、構造の群に対する言及は、その群に入る構造的異性の形態を十分に含むことができる（例えば、Ｃ１〜６アルキルは、ｎ−プロピル及びイソ−プロピルを含み；ブチルは、ｎ−、イソ−、ｓｅｃ−、及びｔｅｒｔ−ブチルを含み；メトキシフェニルは、オルト−、メタ−、及びパラ−メトキシフェニルを含む）。
【０１７１】
他に規定しない限り、特定の化合物に対する言及は、その混合物（例えば、ラセミ混合物）を含む全てのこのような異性の形態を含む。このような異性の形態の調製（例えば不斉合成）及び分離（例えば、分別結晶化及びクロマトグラフ的手段）の方法は、当技術において既知であるか、又は本明細書中で教示される方法、或いは既知の方法を、既知の様式で適合することによるかのいずれかによって容易に得ることができる。
【０１７２】
本発明の一つの側面は、実質的に精製された形態及び／又は実質的に混入物を含まない形態の化合物に関する。
一つの態様において、実質的に精製された形態は、少なくとも５０重量％、例えば少なくとも６０重量％、例えば少なくとも７０重量％、例えば少なくとも８０重量％、例えば少なくとも９０重量％、例えば少なくとも９５重量％、例えば少なくとも９７重量％、例えば少なくとも９８重量％、例えば少なくとも９９重量％である。
【０１７３】
規定されない場合、実質的に精製された形態は、いずれもの立体異性又は鏡像異性の形態の化合物を指す。例えば、一つの態様において、実質的に精製された形態は、即ち、他の化合物に関して精製された、立体異性体の混合物を指す。一つの態様において、実質的に精製された形態は、一つの立体異性体、例えば光学的に純粋な立体異性体を指す。一つの態様において、実質的に精製された形態は、鏡像異性体の混合物を指す。一つの態様において、実質的に精製された形態は、鏡像異性体の等モルの混合物（即ち、ラセミ混合物、ラセミ体）を指す。一つの態様において、実質的に精製された形態は、一つの鏡像異性体、例えば光学的に純粋な鏡像異性体を指す。
【０１７４】
一つの態様において、混入物は、５０重量％より多くない、例えば４０重量％より多くない、例えば３０重量％より多くない、例えば２０重量％より多くない、例えば１０重量％より多くない、例えば５重量％より多くない、例えば３重量％より多くない、例えば２重量％より多くない、例えば１重量％より多くないことを表す。
【０１７５】
規定しない限り、混入物は、他の化合物、即ち、立体異性体又は鏡像異性体以外のものを指す。一つの態様において、混入物は他の化合物及び他の立体異性体を指す。一つの態様において、混入物は、他の化合物及び他の鏡像異性体を指す。
【０１７６】
一つの態様において、実質的に精製された形態は、少なくとも６０％光学的に純粋（即ち、モル基準で化合物の６０％が所望の立体異性体又は鏡像異性体であり、４０％は所望しない立体異性体又は鏡像異性体である）、例えば少なくとも７０％光学的に純粋、例えば少なくとも８０％光学的に純粋、例えば少なくとも９０％光学的に純粋、例えば少なくとも９５％光学的に純粋、例えば少なくとも９７％光学的に純粋、例えば少なくとも９８％光学的に純粋、例えば少なくとも９９％光学的に純粋である。
【０１７７】
治療の方法
式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物、又はこれらの化合物を含有する医薬的製剤は、治療及び予防の方法における使用のために適している。化合物は、それを必要とする被験者に投与することができる。化合物は、活性剤（“第２の活性剤”）、例えば第２の活性剤、即ち、抗細菌剤と一緒の使用のために適している。
【０１７８】
式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物は、療法によるヒト又は動物の身体の治療の方法における使用のためのものである。本発明の幾つかの側面において、式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物は、微生物感染を治療するために、哺乳動物の被験者、例えばヒトに投与することができる。
【０１７９】
本発明のもう一つの側面は、治療における使用のための医薬の製造における式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物の使用に関する。一つの態様において、医薬は、式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物を含んでなる。一つの態様において、医薬は、微生物感染の治療における使用のためのものである。
【０１８０】
用語“微生物感染”は、宿主動物の病原性微生物による侵襲を指す。これは、動物の身体中又は身体上に通常存在する微生物の過剰な増殖を含む。更に一般的に、微生物感染は、微生物集団（一つ又は複数）の存在が宿主動物を損傷しているいずれもの状況であることができる。従って、動物は、過剰の数の微生物集団が動物の身体中に又は身体上に存在する場合、或いは微生物集団（一つ又は複数）の存在が動物の細胞又は他の組織を損傷している場合、微生物感染に“罹って”いる。
【０１８１】
化合物は、微生物感染、又は微生物、例えば細菌からの感染の危険性を有する被験者を治療するために使用することができる。
微生物感染は、細菌感染、例えばグラム陰性菌感染であることができる。
【０１８２】
グラム陰性菌の例は、制約されるものではないが、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｓｐｐ．、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ．、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｓｐｐ．、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ．、及び他の腸内細菌科、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ．、Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ、及びＬｅｇｉｏｎｅｌｌａ並びに多くの他のものを含む。
【０１８３】
医学的に関連するグラム陰性桿菌は、多数の種を含む。その幾つかは、主として、呼吸器の問題（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、主に尿の問題（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｃｌｏａｃａｅ）、及び主に消化器の問題（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｅｎｔｅｒｉｃａ）を起こす。
【０１８４】
院内感染に関係するグラム陰性細菌は、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉを含み、これは、菌血症、続発性髄膜炎、及び病院施設の集中治療室の人工呼吸器関連肺炎を起こす。
【０１８５】
一つの態様において、グラム陰性菌種は、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｓ．ｅｎｔｅｒｉｃａ、Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｋ．ｏｘｙｔｏｃａ；Ｅ．ｃｌｏａｃａｅ、Ｅ．ａｅｒｏｇｅｎｅｓ、Ｅ．ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ、Ａ．ｃａｌｃｏａｃｅｔｉｃｕｓ、Ａ．ｂａｕｍａｎｎｉｉ；Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、及びＳｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｔｏｐｈｉｌａからなる群から選択される。
【０１８６】
一つの態様において、グラム陰性菌種は、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、及びＡ．ｂａｕｍａｎｎｉｉ．からなる群から選択される。
【０１８７】
式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物或いは同一物を含んでなる組成物は、皮膚及び軟組織感染、消化器感染、尿路感染、肺炎、敗血症、腹腔内感染及び産／婦人科感染の治療のために有用である。感染は、グラム陰性細菌感染であることができる。
【０１８８】
式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物或いは同一物を含んでなる組成物は、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染を含むＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ感染、例えば皮膚及び軟組織感染、消化器感染、尿路感染、肺炎及び敗血症の治療のために有用である。
【０１８９】
式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物或いは同一物を含んでなる組成物は、肺炎、創傷感染、尿路感染及び敗血症に対する、Ａ．ｂａｕｍａｎｉｉ感染を含むＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ感染の治療のために有用である。
【０１９０】
式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物或いは同一物を含んでなる組成物は、肺炎、腹腔内感染、尿路感染、髄膜炎及び敗血症に対する、Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染を含むＫｌｅｂｓｉｅｌｌａ感染の治療のために有用である。
【０１９１】
式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物或いは同一物を含んでなる組成物は、菌血症、胆嚢炎、胆管炎、腹腔内感染、尿路感染、新生児髄膜炎、及び肺炎に対する、Ｅ．ｃｏｌｉ感染を含むＥ．ｃｏｌｉ感染の治療のために有用である。
【０１９２】
式（Ｉ）、（ＩＩ）若しくは（ＩＩＩ）の化合物又は同一物を含んでなる組成物は、治療方法において活性剤と一緒に使用され得る。
活性剤は、微生物に対して活性を有する薬剤であり得る。活性剤は、グラム陰性菌に対して活性であり得る。活性剤は、上に示されたリストから選択される微生物に対して活性であり得る。
【０１９３】
一つの態様において、第２の活性剤は、式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物の非存在下でＥ．ｃｏｌｉなどの微生物に対して１０マイクログラム／ｍＬ以下のＭＩＣ値を有する。微生物は、上の群から選択される微生物であり得る。
【０１９４】
第２の活性剤として使用するための具体的な化合物は、本明細書に記載されており、それらには、
リファンピシン、リファブチン、リファラジル、リファペンチン、及びリファキシミン；
オキサシリン、メチシリン、アンピシリン、クロキサシリン、カルベニシリン、ピペラシリン、トリカルシリン、フルクロキサシリン、及びナフシリン；
アジスロマイシン、クラリスロマイシン、エリスロマイシン、テリスロマイシン、セスロマイシン、及びソリスロマイシン；
アズトレオナム及びＢＡＬ３００７２；
メロペネム、ドリペネム、イミペネム、エルタペネム、ビアペネム、トモペネム、及びパニペネム；
チゲサイクリン、オマダサイクリン、エラバサイクリン、ドキシサイクリン、及びミノシクリン；
シプロフロキサシン、レボフロキサシン、モキシフロキサシン、及びデラフロキサシン；
フシジン酸；
ノボビオシン；
テイコプラニン、テラバンシン、ダルババンシン、及びオリタバンシン、
並びにその医薬的に受容可能な塩及び溶媒和物；
が含まれる。
【０１９５】
一つの態様において、第２の活性剤として使用するための具体的な化合物は、本明細書に記載されており、それらには、リファンピシン（リファンピン）、リファブチン、リファラジル、リファペンチン、リファキシミン、アズトレオナム、オキサシリン、ノボビオシン、フシジン酸、アジスロマイシン、シプロフロキサシン、メロペネム、チゲサイクリン、エリスロマイシン、クラリスロマイシン及びムピロシン、並びにその医薬的に受容可能な塩及び溶媒和物が含まれる。
【０１９６】
代替の一つの側面において、式（Ｉ）の化合物は、例えば、抗真菌剤と一緒に組合せて、真菌感染の治療において使用するために適している。抗真菌剤は、ポリエン抗真菌剤、例えば、アンホテリシンＢ、イミダゾール、トリアゾール、又はチアゾール抗真菌剤、例えば、ミコナゾール、フルコナゾール又はアバフンギン、アリルアミン、エキノカンジン、又は別の薬剤、例えば、シクロピロックスから選択され得る。
【０１９７】
治療
用語“治療”は、症状を治療する文脈において本明細書中で使用される場合、ヒト又は動物（例えば獣医学的適用）であるかに関わらず、一般的に、幾つかの所望の治療効果、例えば、症状の進行の阻害が達成される治療及び療法に関係し、進行の速度の減少、進行の速度の停止、症状の徴候の軽減、症状の回復、及び症状の治癒を含む。予防的手段（即ち予防法）としての治療も更に含まれる。例えば、症状をいまだ発症していないが、しかし症状を発症する危険性を持つ患者に伴う使用は、用語“治療”に包含される。
【０１９８】
用語“治療的に有効な量”は、本明細書中で使用する場合、所望の治療計画によって投与された場合、妥当な利益／危険度比と釣り合った、ある程度の所望の治療効果を産生するために有効な化合物、又は物質、化合物を含んでなる組成物又は剤形の量に関する。
【０１９９】
用語“治療”は、本明細書中に記載されるような組合せ治療及び療法を含み、ここにおいて、二つ又はそれより多い治療又は療法が、例えば連続的に又は同時に組み合わされる。
【０２００】
組合せ療法
式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物は、活性剤と併せて投与することができる。
【０２０１】
投与は、同時、別個又は連続であることができる。
投与の方法及び様式は、式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物及び第２の活性剤の薬物動態に依存するものである。
【０２０２】
“同時”投与によって、式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物及び第２の活性剤が、同一経路の投与による単一投与で被験者に投与されることを意味する。
“別個”投与によって、式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物及び第２の薬剤が、同時に起こる二つの異なった経路の投与によって被験者に投与されることを意味する。これは、例えば一つの薬剤が注入によって投与され、他方が注入の過程中に経口投与される場合に起こり得る。
【０２０３】
“連続”によって、二つの薬剤が異なった時点で投与されることを意味し、但し、最初に投与された薬剤の活性が、第２の薬剤が投与された時点で被験者中に存在し、継続していることを条件とする。
【０２０４】
一般的に、連続投与は、二つの薬剤の二番目が、最初の薬剤の４８時間内に、例えば２４時間内、例えば１２、６、４、２又は１時間（単数又は複数）内に投与されるように起こるものである。或いは、最初に活性剤を、続いて式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物を投与することができる。
【０２０５】
最終的に、組合せ治療における化合物及び第２の薬剤の投与の順序並びに時間は、それぞれの薬物動態学的特性に依存するものである。
被験者に投与される式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物の量は、最終的に、被験者の特質及び治療される疾病に依存するものである。同様に、被験者に投与される活性剤の量は、最終的に、被験者の特質及び治療される疾病に依存するものである。
【０２０６】
製剤
一つの側面において、本発明は、式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物を、医薬的に受容可能な担体と一緒に含んでなる医薬組成物を提供する。医薬組成物は、第２の活性剤を更に含んでなることができる。別の態様において、第２の活性剤が療法のために提供される場合、第２の活性剤は、式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物と別個に処方することができる。従って、式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物に関して以下で行われる解説は、別個に処方される場合、第２の活性剤にも適用することができる。
【０２０７】
式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物を、単独で又は第２の活性剤と一緒に投与することは可能であるが、これを、少なくとも一つの本明細書中に記載するような式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物と、制約されるものではないが、医薬的に受容可能な担体、希釈剤、賦形剤、アジュバント、充填剤、緩衝剤、保存剤、抗酸化剤、潤滑剤、安定剤、可溶化剤、界面活性剤（例えば、湿潤剤）、遮蔽剤、着色剤、芳香剤、及び甘味剤を含む、一つ又は複数の当業者にとって周知の他の医薬的に受容可能な成分とを一緒に含んでなる医薬製剤（例えば、組成物、製剤、医薬）として与えることが望ましい。製剤は、更に他の活性剤、例えば、他の治療又は予防剤を含んでなることができる。
【０２０８】
従って、本発明は、更に、先に定義したような医薬組成物、及び本明細書中に記載されるような式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の少なくとも一つの化合物を、一つ又は複数の当業者にとって周知の他の医薬的に受容可能な成分、例えば、担体、希釈剤、賦形剤、等と一緒に混合することを含んでなる医薬組成物を製造する方法を提供する。別々の単位（例えば、錠剤、等）として処方される場合、それぞれの単位は、所定の量（投与量）の化合物を含有する。組成物は、所望によって更に、第２の活性剤を所定の量で含んでなる。
【０２０９】
用語“医薬的に受容可能”は、本明細書中で使用する場合、健全な医学的判断の範囲において、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、或いは他の問題又は合併症を伴わずに、妥当な利益／危険度の比と釣り合って、当該被験者（例えばヒト）の組織との接触における使用のために適している化合物、成分、物質、組成物、剤形、等に関する。それぞれの担体、希釈剤、賦形剤、等は、更に、製剤の他の成分と適合性であるという意味で“受容可能”でなければならない。
【０２１０】
適した担体、希釈剤、賦形剤、等は、標準的な医薬の教科書、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９９０；及びＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，５ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，２００５中に見出すことができる。
【０２１１】
製剤は、薬学の技術で周知のいずれもの方法によって調製することができる。このような方法は、式（Ｉ）又は（ＩＩ）の化合物を、一つ又は複数の補助成分を構成する担体と混合する工程を含む。一般的に、製剤は、化合物を担体（例えば、液体担体、微細に分割された個体担体、等）と共に均一に、緊密に混合し、次いで、必要な場合、生成物を成形することによって調製される。
【０２１２】
製剤は、急速又は緩慢放出；即時、遅延、時限、又は継続放出；或いはこれらの組合せで提供するために調製することができる。
製剤は、適当には、液体、溶液（例えば、水性、非水性）、懸濁液（例えば、水性、非水性）、乳液（例えば、水中油、油中水）、エリキシル、シロップ、舐剤、口腔洗浄剤、ドロップ、錠剤（例えば、被覆錠剤を含む）、顆粒、粉末、ロゼンジ、トローチ、カプセル（例えば、硬質及び軟質ゼラチンカプセルを含む）、カシェー、丸薬、アンプル、ボーラス、座薬、ペッサリー、チンキ、ゲル、ペースト、軟膏、クリーム、ローション、油、泡、噴霧、霧、又はエアゾールの形態であることができる。
【０２１３】
製剤は、適当には、例えば、透過、浸透、及び吸収向上剤を含む一つ又は複数の化合物、及び所望によって一つ又は複数の他の医薬的に受容可能な成分で含浸された貼布、絆創膏、包帯、ドレッシング材、等として提供することができる。製剤は、更に、適当には、デポー又はリザーバーの形態で提供することができる。
【０２１４】
化合物は、一つ又は複数の他の医薬的に受容可能な成分中に溶解、懸濁、又は混合することができる。化合物は、化合物が、例えば血液成分或いは一つ又は複数の器官を標的とするように設計されたリポソーム又は他の微粒子中で提示されることができる。リポソームが使用される場合、リポソームが、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）の化合物及び第２の活性剤の両方を含有することができることが注目される。
【０２１５】
経口投与のために適した製剤は（例えば、経口摂取による）、液体、溶液（例えば、水性、非水性）、懸濁液（例えば、水性、非水性）、乳液（例えば、水中油、油中水）、エリキシル、シロップ、舐剤、錠剤、顆粒、粉末、カプセル、カシェー、丸薬、アンプル、ボーラスを含む。
【０２１６】
頬側投与のために適した製剤は、口腔洗浄剤、ロゼンジ、トローチ、並びに、貼布、絆創膏、デポー、及びリザーバーを含む。ロゼンジは、典型的には、通常スクロース及びアラビアゴム又はトラガカントゴムである芳香基剤中の化合物を含んでなる。トローチは、典型的には、不活性基質、例えばゼラチン及びグリセリン、又はスクロース及びアラビアゴム中の化合物を含んでなる。口腔洗浄剤は、典型的には、適した液体担体中の化合物を含んでなる。
【０２１７】
舌下投与のために適した製剤は、錠剤、ロゼンジ、トローチ、カプセル、及び丸薬を含む。
口腔粘膜経由投与のために適した製剤は、液体、溶液（例えば、水性、非水性）、懸濁液（例えば、水性、非水性）、乳液（例えば、水中油、油中水）、口腔洗浄剤、ロゼンジ、トローチ、並びに貼布、絆創膏、デポー、及びリザーバーを含む。
【０２１８】
非口腔粘膜経由投与のために適した製剤は、液体、溶液（例えば、水性、非水性）、懸濁液（例えば、水性、非水性）、乳液（例えば、水中油、油中水）、座薬、ペッサリー、ゲル、ペースト、軟膏、クリーム、ローション、油、並びに貼布、絆創膏、デポー、及びリザーバーを含む。
【０２１９】
経皮投与のために適した製剤は、ゲル、ペースト、軟膏、クリーム、ローション、及び油、並びに貼布、絆創膏、包帯、ドレッシング、デポー、及びリザーバーを含む。
錠剤は、慣用的手段、例えば、所望によって一つ又は複数の補助成分と共に、圧縮又は成形することによって製造することができる。圧縮錠剤は、自由流動形態、例えば粉末又は顆粒の化合物を、所望によって一つ又は複数の結合剤（例えば、ポビドン、ゼラチン、アラビアゴム、ソルビトール、トラガカントゴム、ヒドロキシピロピルメチルセルロース）；充填剤又は希釈剤（例えば、ラクトース、微結晶セルロース、リン酸水素カルシウム）；潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、シリカ）；崩壊剤（例えば、グリコール酸デンプンナトリウム、架橋ポビドン、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）；表面活性或いは分散又は湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）；保存剤（例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、ｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピル、ソルビン酸）；芳香剤、芳香向上剤、及び甘味剤と共に混合し、適した機械で圧縮することによって調製することができる。成形錠剤は、不活性液体希釈剤で湿潤化された粉末の化合物の混合物を、適した機械で成形することによって製造することができる。錠剤は、所望によって被覆し、又は刻み目を入れることができ、例えば、所望の放出特性を提供するために、各種の比率のヒドロキシプロピルメチルセルロースを使用して、その中の化合物の緩慢又は制御放出を提供するように処方することができる。錠剤は、所望によって被覆、例えば、放出に影響するために、例えば胃ではなく腸の一部における放出を提供するための腸溶性被覆を伴って提供することができる。
【０２２０】
軟膏は、典型的には、化合物及びパラフィン系又は水混和性の軟膏基剤から調製される。
クリームは、典型的には、化合物及び水中油クリーム基剤から調製される。所望する場合、クリーム基剤の水相は、例えば、少なくとも３０重量／重量％の多価アルコール、即ち、二つ又はそれより多いヒドロキシル基を有するアルコール、例えばプロピレングリコール、ブタン−１，３−ジオール、マンニトール、ソルビトール、グリセロール及びポリエチレングリコール並びにこれらの混合物を含むことができる。局所製剤は、好ましくは、皮膚又は影響された他部位を通る化合物の吸収又は浸透を向上する化合物を含むことができる。このような皮膚透過向上物質の例は、ジメチルスルホキシド及び関連する類似体を含む。
【０２２１】
乳剤は、典型的には、化合物及び所望によって単に乳化剤（他にエマルジェント（ｅｍｕｌｇｅｎｔｓ）として知られる）を含んでなることができる、或いは少なくとも一つの乳化剤の脂肪又は油との、或いは脂肪及び油の両方との混合物を含んでなることができる油性相から調製される。親水性乳化剤が、安定剤として作用する親油性乳化剤と一緒に含まれ得る。油及び脂肪の両方を含むことも可能である。まとめれば、安定剤（一つ又は複数）を伴う又は伴わない乳化剤（一つ又は複数）は、いわゆる乳化ワックスを作り出し、油及び／又は脂肪と一緒のワックスは、いわゆる乳化軟膏基剤を作り出し、これは、クリーム製剤の油分散相を形成する。
【０２２２】
適したエマルジェント及び乳化安定剤は、Ｔｗｅｅｎ６０、Ｓｐａｎ８０、セトステアリルアルコール、ミリスチルアルコール、モノステアリン酸グリセリル、及びラウリル硫酸ナトリウムを含む。製剤のための適した油又は脂肪の選択は、医薬的な乳化製剤に使用される可能性のある殆どの油中の化合物の溶解度が、非常に低いものであり得るために、所望の美容的特性を達成することに基づく。従って、クリームは、好ましくは、チューブ又は他の容器からの漏洩を回避するための適した稠度を伴う、べたべたせず、染まらない、洗浄可能な産物でなければならない。例えばジ−イソアジピン酸の直鎖或いは分枝鎖の一又は二塩基性アルキルエステル、ステアリン酸イソセチル、ココナツ脂肪酸のプロピレングリコールのジエステル、ミリスチン酸イソプロピル、オレイン酸デシル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、パルミチン酸２−エチルヘキシル又はクロダモルＣＡＰとして知られる分枝鎖エステルのブレンドを使用することができる。これらは、必要な特性によって、単独で又は組合せて使用することができる。或いは、高融点脂質、例えば白色軟質パラフィン及び／又は液体パラフィン或いは他の鉱油を使用することができる。
【０２２３】
鼻腔内投与のために適した製剤は、担体が液体である場合、例えば鼻腔噴霧、点鼻剤を含み、或いはネブライザーによるエアゾール投与によるものは化合物の水性又は油性溶液を含む。投与の別の方法として、乾燥粉末の送達を、噴霧化エアゾールの代替物として使用することができる。
【０２２４】
鼻腔内投与のために適した製剤は、担体が固体である場合、例えば、嗅ぎ薬が摂取される様式で、即ち鼻に密接して保持された粉末の容器からの鼻腔を経由する急速な吸入によって投与される、例えば約２０ないし約５００ミクロンの範囲の粒子サイズを有する粗い粉末として提示されるものを含む。
【０２２５】
肺投与（例えば、吸入又は吹送療法による）のために適した製剤は、適した噴射剤、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロ−テトラフルオロエタン、二酸化炭素、又は他の適したガスの使用を伴う、加圧パックからのエアゾール噴霧として提示されるものを含む。更に又は別に、肺投与のための製剤は、ネブライザー又は乾燥粉末吸入器からの投与のために処方することができる。例えば、製剤は、肺組織における保持を向上するために適当な投与量（ｄｏｅｓ）の送達を援助するために、肺の適当な部分に達するために適した粒子サイズを提供するために、担体又はリポソームと共に提供することができる。
【０２２６】
眼内投与のために適した製剤は、化合物が適した担体、特に化合物のための水性溶媒中に溶解又は懸濁された点眼剤を含む。
直腸投与のために適した製剤は、例えば天然の又は硬化された油、ワックス、脂肪、半液体又は液体ポリオール、例えば、ココアバター又はサリチル酸塩を含んでなる適した基剤を伴う座薬として；或いは浣腸による治療のための溶液又は懸濁液として提示することができる。
【０２２７】
膣投与のために適した製剤は、化合物に加えて、当技術において適当であると知られたような担体を含有するペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、泡又は噴霧製剤として提示することができる。
【０２２８】
非経口投与（例えば、例えば注射又は注入により静脈内又は皮下で）のために適した製剤は、化合物が、溶解、懸濁、又は他の方法で（例えば、リポソーム又は他の微粒子中の）提供される水性又は非水性の、等張の、パイロジェンフリーの、滅菌液体（例えば、溶液、懸濁液）を含む。このような液体は、更に、他の医薬的に受容可能な成分、例えば抗酸化剤、緩衝液、保存剤、安定剤、殺細菌剤、懸濁剤、増粘剤、及び製剤を、意図する受容者の血液（又は他の関連する体液）と等張にする溶質を含有することができる。賦形剤の例は、例えば、水、アルコール、糖、ポリオール、グリセロール、植物油、等を含む。このような製剤中の使用のために適した等張の担体の例は、塩化ナトリウム液、リンゲル液、又は乳酸リンゲル液を含む。典型的には、液体中の化合物の濃度は、約１ｎｇ／ｍＬから約５００μｇ／ｍＬまで、例えば約１ｎｇ／ｍＬから約１００μｇ／ｍＬまで、例えば約１０ｎｇ／ｍＬから約１０μｇ／ｍＬまで、例えば約１０ｎｇ／ｍＬから約１μｇ／ｍＬまでである。製剤は、単位投与又は多回投与の密封容器、例えばアンプル及びバイアル中で提示することができ、使用の直前に、滅菌液体担体、例えば注射用水の添加のみを必要とする、水冷凍乾燥（凍結乾燥）条件で貯蔵することができる。即時注射溶液及び懸濁液は、滅菌粉末、顆粒、及び錠剤から調製することができる。
【０２２９】
投与量
一般的に、本発明の方法は、抗細菌効果を提供するために、有効な量の式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物を被験者に投与することを含んでなることができる。式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物は、第２の活性剤の活性を増強するために十分な量で投与することができる。第２の活性剤は、抗細菌効果を提供するように有効な量で被験者に投与される。
【０２３０】
式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物又は活性剤、及び式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物又は活性剤を含んでなる組成物の適当な投与量が、患者によって変更することができることは当業者によって認識されるものである。最適な投与量を決定することは、一般的にいずれもの危険性又は有害な副作用に対する治療の利益のレベルの釣り合いをとることを含むものである。選択される投与量のレベルは、制約されるものではないが、式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の特定の化合物又は活性剤の活性、投与の経路、投与の時間、化合物の排出の速度、治療の期間、組合せて使用される他の薬物、化合物、及び／又は物質、症状の重篤度、並びに患者の種、性別、年齢、体重、症状、一般的健康状態、及び従来の病歴を含む各種の因子に依存するものである。式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物又は活性剤の量及び投与の経路は、一般的に投与量は、作用の部位における局所濃度を達成し、実質的に危険な又は有害な副作用を起こすことなく所望の効果を達成するために選択されるものであるが、最終的に医師、獣医師、又は臨床医の裁量にあるものである。
【０２３１】
投与は、治療の過程を通して、一回投与、連続的又は間欠的に（例えば、適当な間隔の分割投与で）行うことができる。投与の最も有効な手段及び投与量を決定する方法は、当業者にとって周知であり、治療のために使用される製剤、治療の目的、治療される標的細胞（一つ又は複数）、及び治療される被験者に伴い変化するものである。一回又は多数回投与は、治療する医師、獣医師、又は臨床医師によって選択される投与量レベル及び様式によって行うことができる。
【０２３２】
一般的に、式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物又は活性剤の適した投与量は、一日当たり、被験者の体重のキログラム当たり約１０μｇないし約２５０ｍｇ（更に典型的には、約１００μｇないし約２５ｍｇ）の範囲である。式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物又は活性剤が、塩、エステル、アミド、プロドラッグ、等である場合、投与される量は、親化合物に基づいて計算され、従って使用される実際の重量は、比例的に増加される。
【０２３３】
キット
本発明の一つの側面は、例えば、典型的には適した容器中で及び／又は適した包装を伴って提供される（ａ）式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物、又は式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）のいずれか一つにおいて定義されるような化合物を含んでなる組成物；及び（ｂ）化合物又は組成物を投与する方法に対する使用のための指示、例えば文書の指示を含んでなるキットに関する。
【０２３４】
文書の指示は、更に式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物が、適した治療剤である適応症のリストを含むことができる。
一つの態様において、キットは、更に（ｃ）第２の活性剤、又は第２の活性剤を含んでなる組成物を含んでなる。ここで、文書の指示は、更に式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物と一緒の第２の活性剤が、治療のために適している適応症のリストを含むことができる。
【０２３５】
投与の経路
式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物、第２の活性剤、又は式（Ｉ）、（ＩＩ）若しくは（ＩＩＩ）の化合物又は第２の活性剤を含んでなる医薬組成物は、全身的に／末梢的に又は局所的に（即ち、所望の作用の部位において）を問わず、いずれもの慣用的な投与の経路によって被験者に投与することができる。
【０２３６】
投与の経路は、制約されるものではないが、口腔（例えば、経口摂取による）；頬側；舌下；経皮（例えば、貼布、プラスター、等を含む）、粘膜経由（例えば、貼布、プラスター、等を含む）、鼻腔内（例えば鼻腔噴霧による）；眼（例えば、点眼剤による）；肺（例えばエアゾールによる、例えば口又は鼻を通して使用する、例えば吸入又は吹送療法による）；直腸（例えば、座薬又は浣腸による）；膣（例えば、ペッサリーによる）；例えば、皮下、皮内、筋肉内、静脈内、動脈内、心臓内、クモ膜下腔内、脊髄内、嚢内、嚢下、眼窩内、腹腔内、気管内、表皮下、関節内、クモ膜下、及び胸骨内を含む注射又は注入による非経口；例えば皮下或いは筋肉内的なデポー又はリザーバーのインプラントによるものを含む。
【０２３７】
被験者／患者
被験者／患者は、脊索動物、脊椎動物、哺乳動物、有胎盤哺乳動物、有袋類（例えば、カンガルー、ウオンバット）、齧歯類（例えば、モルモット、ハムスター、ラット、マウス）、ネズミ（例えば、マウス）、ウサギ（例えば、兎）、鳥類（例えば、鳥）、イヌ（例えば、犬）、ネコ（例えば、猫）、ウマ（例えば、馬）、ブタ（例えば、豚）、ヒツジ（例えば、羊）、ウシ（例えば、牛）、霊長動物、サル（例えば、猿又は類人猿）、サル（例えば、マーモセット、ヒヒ）、類人猿（例えば、ゴリラ、チンパンジー、オランウータン、手長猿）、又はヒトであることができる。更に、被験者／患者は、その成長の形態のいずれか、例えば胎児であることができる。
【０２３８】
一つの態様において、被験者／患者は、ヒトである。
本発明が、微生物感染を有する非ヒト動物に対して実行することができることも更に想定されている。非ヒトの哺乳動物は、齧歯類であることができる。齧歯類は、研究所の研究に使用される、ラット、マウス、モルモット、チンチラ及び他の類似のサイズの小さい齧歯類を含む。
【０２３９】
他の選択肢
先に記載した態様のそれぞれの及びあらゆる適合性の組合せは、それぞれの及びあらゆる組合せが、個々に、明確に引用されているように、本明細書中に明確に開示される。
【０２４０】
本発明の各種の更なる側面及び態様は、本開示の観点から、当業者にとって明白であるものである。
“及び／又は”は、本明細書中で使用される場合、二つの具体的な特徴又は成分のそれぞれの、他方を伴う、又は伴わない具体的な開示と解釈されるものである。例えば、“Ａ及び／又はＢ”は、（ｉ）Ａ、（ｉｉ）Ｂ並びに（ｉｉｉ）Ａ及びＢのそれぞれの、単にそれぞれが本明細書中に個々に記述されたような、具体的な開示と解釈される。
【０２４１】
文脈が他に指示しない限り、先に記載した特徴の記載及び定義が、本発明のいずれもの特定の側面又は態様を制約するものではなく、記載された全ての側面及び態様に均等に適用される。技術的に適当である場合、態様は組合せることができ、従って、開示は、本明細書中に提供される態様の全ての順列及び組合せに拡張される。
【０２４２】
本発明のある種の側面及び態様は、ここに、実施例及び先に記載した図の参照によって例示されるものである。
【実施例】
【０２４３】
以下の実施例は、単に本発明を例示するために提供され、本明細書中に記載されるような本発明の範囲を制約することを意図していない。
【０２４４】
【表４−１】
2021528449.tif 000027
【０２４５】
【表４−２】
2021528449.tif 000028
【０２４６】
合成実施例
Ｎ末端酸の合成
本作業において、３−置換４−アミノブタン酸を適切に保護された形態で使用した。非標準アミノ酸の合成を、鏡像異性体分離のための方法と一緒に下記で詳述する。
【０２４７】
４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−クロロフェニル）ブタン酸  −  異性体１及び異性体２
【０２４８】
【化２０】
2021528449.tif 000029
【０２４９】
（ｉ）３−（３−クロロフェニル）−４−ニトロブタン酸メチル
【０２５０】
【化２１】
2021528449.tif 000030
【０２５１】
３−クロロケイ皮酸（１０ｇ）、メタノール（１００ｍＬ）及び濃硫酸（４ｍＬ）の混合物を２０時間、室温で撹拌した。混合物を乾燥状態まで蒸発し、残渣をジクロロメタン（ＤＣＭ）及び水間に分配した。水相を分離し、追加のＤＣＭで抽出した。有機抽出物を合わせ、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、乾燥状態まで蒸発して、メチルエステルを白色の固体（１０．１９ｇ）として生成した。この固体をニトロメタン（３２ｍＬ）中に溶解し、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）（８．５ｍＬ）で処理した。混合物を２０時間、室温で撹拌し、次いで、乾燥状態まで蒸発し、残渣を０．５Ｍ  ＨＣｌ水溶液及びジエチルエーテル間で分配した。水相を分離し、追加のジエチルエーテルで抽出した。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、乾燥状態まで蒸発した。残渣をシリカで、ヘキサン及び酢酸エチル（０〜１００％）で溶離して精製した。適切な画分を合わせ、乾燥状態まで蒸発して、所望の生成物を黄色の油状物として生成した（９．９３ｇ、収率７０％）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ (ppm) 2.71-2.79 (2H, m), 3.66(3H, s), 3.93-4.01 (1H, m), 4.62及び4.73 (2H, ABq, 見かけ上2x dd , J 12.8, 8.0 Hz), 7.11-7.28 (4H, m).
（ｉｉ）４−アミノ−３−（３−クロロフェニル）ブタン酸メチル
【０２５２】
【化２２】
2021528449.tif 000031
【０２５３】
約０℃で撹拌されている酢酸（９０ｍＬ）中の３−（３−クロロフェニル）−４−ニトロブタン酸メチル（９．９３ｇ）の溶液に、亜鉛粉末（２０．１ｇ）を少しずつ添加した（注：発熱の延長）。混合物を室温に加温し、１９時間撹拌した。混合物を乾燥状態まで蒸発し、残渣をＮａＨＣＯ３水溶液及び酢酸エチル間で分配した。次いで、混合物をセライトに通して濾過し、水相及び有機相を分離した。水相を追加の酢酸エチルで再抽出した。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、乾燥状態まで蒸発し、所望の生成物をオレンジ色油状物（４．８０ｇ）として生成した。
【０２５４】
（ｉｉｉ）標題化合物  −  ラセミ体
４−アミノ−３−（３−クロロフェニル）ブタン酸メチル（４．８０ｇ）、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（５．２８ｇ）及びジクロロメタン（１００ｍＬ）の混合物を１８時間、室温で撹拌した。混合物を乾燥状態まで蒸発し、残渣をシリカで、石油エーテル４０−６０及び酢酸エチル（０〜１００％）で溶離して精製した。適切な画分を合わせ、乾燥状態まで蒸発し、Ｂｏｃ−保護された４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−クロロフェニル）ブタン酸メチルエステルをクリーム状の固体（２．５９ｇ）として生成した。
【０２５５】
４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−クロロフェニル）ブタン酸メチル（２．４９ｇ）、水酸化リチウム（５４６ｍｇ）、１，４−ジオキサン（４０ｍＬ）及び水（４０ｍＬ）の混合物を６４時間、室温で撹拌した。次いで、混合物を乾燥状態まで蒸発した。残渣を水中に溶解し、１Ｍ  ＨＣｌ水溶液で中和し、酢酸エチル（×２）で抽出した。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、乾燥状態まで蒸発し、所望の生成物を黄色の油状物（２．５１ｇ）として生成した。ｍ／ｚ  ３１４（ＭＨ＋）Ｃ１５Ｈ２０ＣｌＮＯ４は３１３．１１を要する。1H NMR (400MHz, CD3OD): δ(ppm) 1.40 (9H, s), 2.42-2.73 (2H, m), 3.24-4.49  (4.4 H, m, CH3OD, CH2,及びCHを含む), 7.17-7.38 (4H, m).
（ｉｖ）標題化合物  −  異性体の分離  −  方法１
４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−クロロフェニル）ブタン酸（２．０９ｇ）を６０ｍｇ／ｍＬまでメタノール中に溶解し、次いで、下記の条件（分取分離条件１）を用いるＳＦＣによって精製した。富化した異性体１（早く流出）及び異性体２（遅く流出）を含有する合わせた画分を合わせ、濃縮し、それぞれを個々に、同じクロマトグラフィー条件下で再精製した。
【０２５６】
次いで、異性体１及び異性体２のそれぞれの合わせた画分を、回転蒸発器を用いてほぼ乾燥状態まで蒸発し、ＤＣＭを含む最終容器に移し、これを、４０℃で窒素流下で除去し、その後、真空オーブン内で４０℃及び５ｍｂａｒで１６時間、貯蔵した。
【０２５７】
４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−クロロフェニル）ブタン酸（異性体１）
白色の固体、８８３ｍｇ、９５．６％ｅｅ。分析システム１で保持時間２．８９分
４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−クロロフェニル）ブタン酸（異性体２）
白色の固体、８７６ｍｇ、９８．６％ｅｅ。分析システム１で保持時間３．２９分
分取分離条件１：
Ｂｅｒｇｅｒ  Ｍｕｌｔｉｇｒａｍ  ＩＩ  ＳＦＣ
カラム詳細：Ｌｕｘ  Ａ１（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、２１．２ｍｍ×２５０ｍｍ、５μｍ）
カラム温度：４０℃
流速：５０ｍＬ／分
ＢＰＲ：１２５ＢａｒＧ
検出器波長：２１０ｎｍ
注入体積：３００μＬ（１８ｍｇ）
定組成条件：１２：８８  ＥｔＯＨ：ＣＯ２（０．１％ｖ／ｖＮＨ３）
分析条件１：
Ｗａｔｅｒｓ  ＵＰＣ２
カラム詳細：Ｌｕｘ  Ｃ４（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、５μｍ）
カラム温度：４０℃
流速：４ｍＬ／分
検出器波長：２１０〜４００ｎｍ
注入体積：１．０μＬ
ＢＰＲ：１２５ＢａｒＧ
定組成条件：１０：９０  ＥｔＯＨ：ＣＯ２（０．１％ｖ／ｖＮＨ３）
（ｖ）標題化合物  −  異性体の分離  −方法２
４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−クロロフェニル）ブタン酸を、下記の条件（分取分離条件２）を用いるＳＦＣによって精製した。分離後に、画分を、回転蒸発器を介して浴温度４０℃で乾燥して、所望の分離された鏡像異性体を得た。より遅く流出した鏡像異性体を同じカラムで、２０％Ｂで溶離して更に精製した。
【０２５８】
分取分離条件２：
機器：Ｔｈａｒ２００分取ＳＦＣ（ＳＦＣ−１０）
カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＡＹ、３００×５０ｍｍ内径、１０μｍ
移動相：ＡはＣＯ２及びＢはＩＰＡ
勾配：Ｂ２５％
流速：２００ｍＬ／分
背圧：１００バール
カラム温度：３８℃
波長：２２０ｎｍ
循環時間：約４．５分
分析条件２：
機器：Ｗａｔｅｒｓ  ＵＰＣ２分析用ＳＦＣ（ＳＦＣ−Ｈ）
カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＡＹ、１５０×４．６ｍｍ内径、３μｍ
移動相：ＡはＣＯ２及びＢはＩＰＡ（０．０５％ＤＥＡ）
勾配：Ｂ５〜４０％
流速：２．５ｍＬ／分
背圧：１００バール
カラム温度：４０℃
波長：２２０ｎｍ
４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−クロロフェニル）ブタン酸（異性体１）。
保持時間２．７９６分。下記の異性体（２）との比較によって、（Ｒ）−立体化学を指定した。
【０２５９】
４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−クロロフェニル）ブタン酸（異性体２）。
保持時間３．２６４分。下記のとおりのＢＯＣ−保護された物質の小分子結晶学によって、（Ｓ）−立体化学を指定した。
【０２６０】
（ｖｉ）立体化学の確認
（Ｓ）−４−アミノ−３−（３−クロロフェニル）ブタン酸のトリフルオロ酢酸塩
ジクロロメタン（２０ｍｌ）中の４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−（３−クロロフェニル）ブタン酸異性体２（分析方法２で保持時間３．２６４分）（１．５ｇ、４．７８ｍｍｏｌ）の冷却された氷水溶液に、トリフルオロ酢酸（５ｍＬ）を添加した。添加の後に、混合物を４時間、この温度で撹拌した。次いで、反応混合物を濃縮した。粗製の混合物を水（１０ｍＬ）中に溶解し、凍結乾燥して、生成物；（Ｓ）−４−アミノ−３−（３−クロロフェニル）ブタン酸のＴＦＡ塩（１．５ｇ、収率９５％）を得た。ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ２１４（Ｍ＋Ｈ）＋
（Ｓ）−４−アミノ−３−（３−クロロフェニル）ブタン酸
水（１０ｍＬ）中の（Ｓ）−４−アミノ−３−（３−クロロフェニル）ブタン酸のトリフルオロ酢酸塩（０．５ｇ、１．５３ｍｍｏｌ）の溶液に、ｐＨが７に達するまで希水酸化アンモニウム水溶液を添加した。得られた溶液を、開放した２５ｍＬフラスコで貯蔵し、一日、室温で放置した。結晶化したら、母液をデカンテーションし、固体の結晶をＸ線回折研究にかけた。
【０２６１】
Ｘ線回折研究によって、化合物が（Ｓ）立体化学を有することが示された。
Ｘ線回折条件：
Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＰＥＸ−ＩＩ  ＣＣＤ回折計を使用した。
【０２６２】
上記結晶はデータ収集中に、３０２．７１Ｋで維持された。Ｏｌｅｘ２（Ｄｏｌｏｍａｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．）を使用して、構造をＳｈｅｌＸＴ［２］構造解析プログラム（Ｓｈｅｌｄｒｉｃｋ  Ａ７１）で、Ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ  Ｐｈａｓｉｎｇ法を用いて解析し、ＳｈｅｌＸＬ［３］精密化パッケージで、Ｌｅａｓｔ  Ｓｑｕａｒｅｓ  ｍｉｎｉｍｉｓａｔｉｏｎ（Ｓｈｅｌｄｒｉｃｋ  Ｃ７１）を用いて精密化した。
【０２６３】
４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（２−クロロフェニル）ブタン酸
【０２６４】
【化２３】
2021528449.tif 000032
【０２６５】
化合物を２−クロロケイ皮酸から、上記ステップ（ｉ）から（ｉｉｉ）に記載のとおりの４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−クロロフェニル）ブタン酸の方法に従って調製した。化合物を無色の油状物として得た。
ｍ／ｚ  ３１４（ＭＨ＋）、Ｃ１５Ｈ２ＯＣｌＮＯ４の正確な質量は、３１３．１１。
【０２６６】
３−ベンジル−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ブタン酸
【０２６７】
【化２４】
2021528449.tif 000033
【０２６８】
３−ベンジル−４−ニトロブタン酸メチル（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ，１９，２００８，９４５）を、上記ステップ（ｉ）から（ｉｉｉ）に記載のとおりの４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−クロロフェニル）ブタン酸の方法に従って、標題化合物に変換した。
ｍ／ｚ  ２９４（ＭＨ＋）、Ｃ１６Ｈ２３ＮＯ４の正確な質量は、２９３．１６。
【０２６９】
４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−イソブチルフェニル）ブタン酸
【０２７０】
【化２５】
2021528449.tif 000034
【０２７１】
（ｉ）３−（３−ブロモフェニル）−４−ニトロブタン酸エチル
【０２７２】
【化２６】
2021528449.tif 000035
【０２７３】
鉱油（３９４．２６ｍｇ、９．８６ｍｍｏｌ）及び１，２−ジメトキシエタン（２２．５ｍＬ）（ＤＭＥ）中の水素化ナトリウム（６０％）の混合物を０℃に冷却した。ホスホノ酢酸トリエチル（１０．２ｍＬ、５１．４３ｍｍｏｌ）を滴下添加し、混合物を１０分間撹拌した。ＤＭＥ（５ｍＬ）中の３−ブロモベンズアルデヒド（１．０ｍＬ、８．５７ｍｍｏｌ）の溶液を滴下添加した。反応混合物を室温に加温し、３時間還流した。
【０２７４】
混合物を乾燥状態まで蒸発し、残渣をヘキサン及び水間で分配した。水層を分離し、追加のヘキサンで抽出した。有機抽出物を合わせ、水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、乾燥状態まで蒸発した。残渣をシリカで石油エーテル４０−６０及び酢酸エチル（０〜１００％）で溶離して精製した。適切な画分を合わせ、乾燥状態まで蒸発して、（Ｅ）−３−（３−ブロモフェニル）プロパ−２−エン酸エチルを白色の固体（１．４４ｇ、６５％）として生成した。これを、４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−クロロフェニル）ブタン酸の調製においてステップ（ｉ）でニトロ化するための上記のとおりの条件を用いて３−（３−ブロモフェニル）−４−ニトロブタン酸エチルに変換して、生成物を収率６０％で得た。
ｍ／ｚ３１６、３１８（ＭＨ＋）。Ｃ１２Ｈ１４ＢｒＮＯ４は３１５．０１を要する。
【０２７５】
（ｉｉ）４−アミノ−３−（３−ブロモフェニル）ブタン酸エチル
【０２７６】
【化２７】
2021528449.tif 000036
【０２７７】
３−（３−ブロモフェニル）−４−ニトロブタン酸エチル（１．０８ｇ）を、４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−クロロフェニル）ブタン酸のためにステップ（ｉｉ）において上記した条件を用いて４−アミノ−３−（３−ブロモフェニル）ブタン酸エチルに変換して、生成物を収率６７％で得た。
ｍ／ｚ２８６及び２８８（ＭＨ＋）、Ｃ１２Ｈ１６ＢｒＮＯ２の正確な質量は、２８５．０４。
【０２７８】
（ｉｉｉ）４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−ブロモフェニル）ブタン酸エチル
【０２７９】
【化２８】
2021528449.tif 000037
【０２８０】
４−アミノ−３−（３−ブロモフェニル）ブタン酸エチル（６５５ｍｇ）を、４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−クロロフェニル）ブタン酸のためにステップ（ｉｉｉ）において上記した条件下で４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−ブロモフェニル）ブタン酸エチルに変換して、生成物を収率７２％で得た。
ｍ／ｚ３８６及び３８８（ＭＨ＋）、Ｃ１７Ｈ２４ＢｒＮＯ４の正確な質量は、３８５．０９。
【０２８１】
（ｉｖ）４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−イソブチルフェニル）ブタン酸エチル
【０２８２】
【化２９】
2021528449.tif 000038
【０２８３】
トルエン（９ｍＬ）中のＲｕｐｈｏｓ（４８．３ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）、第三リン酸カリウム（３３０ｍｇ、１．５５ｍｍｏｌ）、３−（３−ブロモフェニル）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタン酸エチル（２００ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）及びイソブチルボロン酸（１３２ｍｇ、１．２９ｍｍｏｌ）の混合物を排気／窒素フラッシュによって四回脱気し、その後、酢酸パラジウム（ＩＩ）（５．８ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を１００分間、１１０℃で撹拌した。反応混合物を冷却し、その後、これをセライトに通して濾過し、溶液で終夜放置した。混合物を乾燥状態まで蒸発し、シリカで石油エーテル４０−６０及び酢酸エチル（０〜１００％）で溶離して精製した。適切な画分を合わせ、乾燥状態まで蒸発して、４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−イソブチルフェニル）ブタン酸エチルを無色の油状物（７４ｍｇ、３９％）として生成した。
ｍ／ｚ３６４（ＭＨ＋）。Ｃ２１Ｈ３３ＮＯ４の正確な質量は、３６３．２４。
【０２８４】
（ｖ）標題化合物
１，４−ジオキサン（３ｍＬ）及び水（３ｍＬ）中の４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−（３−イソブチルフェニル）ブタン酸エチル（７４ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）及び水酸化リチウム（１５ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）の混合物を１６時間、室温で撹拌した。混合物を乾燥状態まで蒸発し、残渣を酢酸エチル及び水間で分配した。有機相を分離し、廃棄した。水相（ａｑｕｅｏｕｓ）を１Ｍ  ＨＣｌ（水溶液）で酸性化し、酢酸エチル（×２）で抽出した。有機抽出物を合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、乾燥状態まで蒸発して、４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−イソブチルフェニル）ブタン酸を無色の油状物（６５ｍｇ）として生成した。ｍ／ｚ３３６（ＭＨ＋）Ｃ１９Ｈ２９ＮＯ４の正確な質量は、３３５．２１。
【０２８５】
４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−クロロベンジル）ブタン酸
【０２８６】
【化３０】
2021528449.tif 000039
【０２８７】
２−（３−クロロフェニル）アセトアルデヒドを、上記のとおり４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−イソブチルフェニル）ブタン酸のためにステップ（ｉ）において記載したとおり、３−（３−クロロベンジル）−４−ニトロブタン酸エチルに変換した。ステップ（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）においてのとおりの還元及び保護、続く、上記のステップ（ｖ）においてのとおりの加水分解によって、標題化合物を無色の油状物として得た。
ｍ／ｚ３２８（ＭＨ＋）。Ｃ１６Ｈ２２ＣｌＮＯ４の正確な質量は、３２７．１２。
【０２８８】
４−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）−３−（３−イソプロピルフェニル）ブタン酸
【０２８９】
【化３１】
2021528449.tif 000040
【０２９０】
４−アミノ−３−（３−イソプロピルフェニル）ブタン酸エチル（１．５５ｇ、６．２１ｍｍｏｌ）（上記のとおり４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−イソブチルフェニル）ブタン酸、ステップ（ｉ）〜（ｉｉ）の方法を使用して調製）、及び炭酸水素ナトリウム（０．７８３ｇ、９．３２ｍｍｏｌ）の混合物を水（１０ｍＬ）及び１，４−ジオキサン（５ｍＬ）中に溶解した。混合物を氷浴で冷却し、クロロギ酸ベンジルの溶液（０．９８ｍＬ、６．８４ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を１時間、１０℃で撹拌し、次いで、室温に加温した。２０時間撹拌した後に、混合物を乾燥状態まで蒸発し、残渣をジエチルエーテル及び０．５Ｍ  ＨＣｌ水溶液間で分配した。水層を分離し、追加のジエチルエーテルで抽出した。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥し、蒸発した。粗製の生成物をシリカで、石油エーテル４０−６０及び酢酸エチル（０〜１００％）で溶離して精製した。生成物含有画分を合わせ、淡黄色の油状物（１．７４ｇ、７３％）に蒸発した。エチルエステルを、４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−イソブチルフェニル）ブタン酸の調製のためのステップ（ｉｉｉ）で前記したとおり、水酸化リチウムで加水分解し、続いて、シリカで石油エーテル４０−６０及び酢酸エチル（０〜１００％）で溶離してクロマトグラフィー処理して、標題化合物を白色の固体（６０％）として得た。
ｍ／ｚ３５６（ＭＨ＋）。Ｃ２１Ｈ２５ＮＯ４の正確な質量：３５５．１８。
【０２９１】
４−（［１，１’−ビフェニル］−３−イル）−３−（（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）メチル）ブタン酸
【０２９２】
【化３２】
2021528449.tif 000041
【０２９３】
（ｉ）４−アミノ−３−（３−ブロモフェニル）ブタン酸塩酸塩
【０２９４】
【化３３】
2021528449.tif 000042
【０２９５】
４−（３−ブロモフェニル）ピロリジン−２−オン（１．０ｇ、４．１６ｍｍｏｌ）及び６Ｍ  ＨＣｌ水溶液（１５．０ｍＬ、９０ｍｍｏｌ）の混合物を１６時間、１００℃で加熱した。混合物を乾燥状態まで蒸発し、水、続いて酢酸エチル、次いでジクロロメタン（ＤＣＭ）と同時蒸発して、所望の生成物を白色の固体として、推測された定量的収率で生成した。
ｍ／ｚ２５８及び２６０（ＭＨ＋）  Ｃ１０Ｈ１２ＢｒＮＯ２の正確な質量：２５７．０１．
（ｉｉ）３−（３−ブロモフェニル）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタン酸
【０２９６】
【化３４】
2021528449.tif 000043
【０２９７】
４−アミノ−３−（３−ブロモフェニル）ブタン酸塩酸塩（１．３１ｇ、４．４５ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルｔｅｒｔ−ブチルカルボナート（Ｂｏｃ−Ｏ−Ｂｏｃ、１．４１ｇ、６．４５ｍｍｏｌ）、１，４−ジオキサン（８ｍＬ）及び１Ｍ  ＮａＯＨ水溶液（８．０ｍＬ、８ｍｍｏｌ）の混合物を６４時間、室温で撹拌した。混合物を乾燥状態まで蒸発した。残渣を水中に溶解し、１Ｍ  ＨＣｌ水溶液で中和し、酢酸エチル（×２）で抽出した。有機抽出物を合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、乾燥状態まで蒸発して、所望の生成物（１．６０ｇ、８６％）を無色の油状物として得た。
ｍ／ｚ３５７．５及び３５９．４（ＭＨ＋）。Ｃ１５Ｈ２０ＢｒＮＯ４の正確な質量：３５７．０６。
【０２９８】
（ｉｉｉ）標題化合物
１，４−ジオキサン（１３０ｍＬ）中の３−（３−ブロモフェニル）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタン酸（２．６９ｇ、７．５１ｍｍｏｌ）、フェニルボロン酸（２．３ｇ、１８．８ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（８４ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）、Ｘｐｈｏｓ（７１６ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）及び第三リン酸カリウム（４７８１．９ｍｇ、２２．５３ｍｍｏｌ）の混合物を２時間、１００℃で窒素雰囲気下で撹拌した。次いで、混合物を室温に冷却し、セライトに通して濾過し、酢酸エチルで洗浄し、乾燥状態まで蒸発した。残渣をシリカで、石油エーテル及び酢酸エチル（０〜１００％）で溶離して精製した。適切な画分を合わせ、乾燥状態まで蒸発し、所望の生成物１．４４ｇを灰色の固体（収率４２％）として生成した。
実測値ｍ／ｚ３５５（Ｍ＋）。Ｃ２１Ｈ２５ＮＯ４の正確な質量：３５５．１８。
【０２９９】
（ｉｖ）キラル分離
４−（［１，１’−ビフェニル］−３−イル）−３−（（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）メチル）ブタン酸（１．４４ｇ）を３０ｍｇ／ｍＬまでＭｅＯＨ中に溶解し、次いで、下記の方法を用いるＳＦＣによって精製した。次いで、異性体１（早く流出）及び異性体２（遅く流出）のそれぞれの合わせた画分を、回転蒸発器を用いてほぼ乾燥状態まで蒸発し、ＤＣＭを含む最終容器に移し、これを圧縮空気流下で４０℃で除去し、その後、真空炉内で４０℃及び５ｍｂａｒで、恒量まで貯蔵した。
【０３００】
４−（［１，１’−ビフェニル］−３−イル）−３−（（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）メチル）ブタン酸、異性体１。白色の固体５２３ｍｇ。保持時間：（分析条件３）２．７０分。ｅｅ９９．８％。
【０３０１】
４−（［１，１’−ビフェニル］−３−イル）−３−（（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）メチル）ブタン酸、異性体２。白色の固体５３７ｍｇ。保持時間：（分析条件３）３．４６分。ｅｅ９９．８％。
【０３０２】
精製条件３：
Ｂｅｒｇｅｒ  Ｍｕｌｔｉｇｒａｍ  ＩＩ  ＳＦＣ
カラム詳細：Ｌｕｘ  Ａ１（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、２１．２ｍｍ×２５０ｍｍ、５μｍ）
カラム温度：４０℃
流速：５０ｍＬ／分
ＢＰＲ：１００ＢａｒＧ
検出器波長：２１５ｎｍ
注入体積：１，０００μＬ（３０ｍｇ）
定組成条件：１５：８５  ＥｔＯＨ：ＣＯ２（０．２％ｖ／ｖ  ＮＨ３）
分析条件３：
Ｗａｔｅｒｓ  ＵＰＣ２
カラム詳細：Ａｍｙ−Ｃ（ＹＭＣ  Ｇｍｂｈ、４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、５μｍ）
カラム温度：４０℃
流速：４ｍＬ／分
検出器波長：２１０〜４００ｎｍ
注入体積：１．０μＬ
ＢＰＲ：１２５ＢａｒＧ
定組成条件：１５：８５  ＥｔＯＨ：ＣＯ２（０．２％ｖ／ｖ  ＮＨ３）
４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−メチルフェニル）ブタン酸
【０３０３】
【化３５】
2021528449.tif 000044
【０３０４】
４−（３−メチルフェニル）ピロリジン−２−オンを、４−（［１，１’−ビフェニル］−３−イル）−３−（（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）メチル）ブタン酸の調製のためにステップ（ｉ）〜（ｉｉ）において上記した方法を用いて標題化合物に変換した。標題化合物を無色の油状物として得た。
【０３０５】
ｍ／ｚ２９４（ＭＨ＋）。Ｃ１６Ｈ２３ＮＯ４の正確な質量は、２９３．１６。
４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３，５−ジクロロフェニル）ブタン酸
【０３０６】
【化３６】
2021528449.tif 000045
【０３０７】
３，５−ジクロロベンズアルデヒドを、４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−イソブチルフェニル）ブタン酸の調製のためにステップ（ｉ）〜（ｉｉｉ）において上記した方法を用いて標題化合物に変換した。エチルエステルを、（３−イソブチルフェニル）ブタン酸の調製においてステップ（ｖ）のために記載したとおりに加水分解して、標題化合物を無色の油状物として得た。
ｍ／ｚ３４８．（ＭＨ＋）。Ｃ１５Ｈ１９Ｃｌ２ＮＯ４の正確な質量は、３４７．０７。
【０３０８】
４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−（チオフェン−３−イル）フェニル）ブタン酸
【０３０９】
【化３７】
2021528449.tif 000046
【０３１０】
４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−ブロモフェニル）ブタン酸エチル（２０７ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）を、（３−イソブチルフェニル）ブタン酸の調製のためにステップ（ｉｖ）において上記した方法を用いて、３−チエニルボロン酸と反応させた。生成物を、ステップ（ｖ）において記載したとおりに加水分解して、標題化合物を無色の油状物として得た。
ｍ／ｚ３６２（ＭＨ＋）。Ｃ１９Ｈ２３ＮＯ４Ｓの正確な質量は、３６１．１３。
【０３１１】
中間体ポリミキシンノナペプチド及び生成物の化合物
中間体１：Ｈ−Ｔｈｒ（Ｏ−ｔＢｕ）−Ｄａｐ（ＢＯＣ）−シクロ［Ｄａｂ−Ｄａｂ（ＢＯＣ）−ＤＰｈｅ−Ｌｅｕ−Ｄａｂ（ＢＯＣ）−Ｄａｂ（ＢＯＣ）−Ｔｈｒ］
ＷＯ２０１５／１３５９７６において中間体１１  −  テトラ−（Ｎ−Ｂｏｃ）−Ｌ−Ｔｈｒ（Ｏ−ｔＢｕ）−Ｌ−Ｄａｐ−ポリミキシンＢヘプタペプチドとして以前に記載された。
【０３１２】
中間体２：Ｈ−Ｔｈｒ（Ｏ−ｔＢｕ）−Ｄａｐ（ＢＯＣ）−シクロ［Ｄａｂ−Ｄａｂ（ＢＯＣ）−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｄａｂ（ＢＯＣ）−Ｄａｂ（ＢＯＣ）−Ｔｈｒ］
ＷＯ２０１５／１３５９７６において中間体１４  −  テトラ−（Ｎ−Ｂｏｃ）−Ｌ−Ｔｈｒ（Ｏ−ｔＢｕ）−Ｌ−Ｄａｐ−ポリミキシンＥヘプタペプチドとして以前に記載された。
【０３１３】
中間体３：Ｈ−Ｔｈｒ（Ｏ−ｔＢｕ）−Ｄａｐ（ＢＯＣ）−シクロ［Ｄａｂ−Ｄａｂ（ＢＯＣ）−Ｄｌｅｕ−Ｌ−Ａｂｕ−Ｄａｂ（ＢＯＣ）−Ｄａｂ（ＢＯＣ）−Ｔｈｒ（Ｏ−ｔＢｕ）］
【０３１４】
【化３８】
2021528449.tif 000047
【０３１５】
（ｉ）ＣＢＺ−Ｔｈｒ（Ｏ−ｔＢｕ）−Ｄａｐ（Ｂｏｃ）−Ｄａｂ−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−Ｄｌｅｕ−Ｌ−Ａｂｕ−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−Ｔｈｒ（Ｏ−ｔＢｕ）−ＯＨ
直鎖ペプチドＣＢＺ−Ｔｈｒ（Ｏ−ｔＢｕ）−Ｄａｐ（Ｂｏｃ）−Ｄａｂ（ｉｖＤｄｅ）−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−Ｄｌｅｕ−Ｌ−Ａｂｕ−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−Ｔｈｒ（Ｏ−ｔＢｕ）を樹脂上で、Ｆｍｏｃ化学を用いる固相ペプチド合成によって、上記の一般的方法３の方法を用いて調製した。配列は塩化クロロトリチル（ＣＴＣ）−樹脂（２．０ｇ）で開始し、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨを０．７５ｍｍｏｌ／ｇの負荷量で先に負荷した。樹脂結合ペプチド（３．９３ｇ、１．５ｍｍｏｌに対応）を５００ｍＬ円錐フラスコに入れ、ＤＭＦ中４％ヒドラジン（１００ｍＬ）で処理した。混合物を振盪機上に設置し、３０分間、穏やかに振盪した。混合物を焼結カラムに注ぎ入れ、次いで、ＤＭＦ（３×１００ｍＬ）で洗浄した。圧縮空気を施与して最終の痕跡量のＤＭＦを除去した。次いで、手順をＴＨＦ及びＤＣＭで繰り返した。
【０３１６】
次いで、樹脂を４：１のＤＣＭ：ヘキサフルオロイソプロパノール（１００ｍＬ）で処理して、ペプチドを樹脂から切断した。３０分後に、カラムを空にし、この手順を繰り返した。次いで、樹脂をＤＣＭ（１００ｍＬ）で三回洗浄した。合わせた溶離液及び洗浄液を減圧下で蒸発し、終夜、真空中で乾燥した。白色の固体７２４ｍｇ（２．３５ｇ、ｑｕａｎｔ．）を得た。
ｍ／ｚ１５５２、Ｃ７３Ｈ１２６Ｎ１４Ｏ２２は１５５０．９２を要する。
【０３１７】
（ｉｉ）ＣＢＺ−Ｔｈｒ（Ｏ−ｔＢｕ）−Ｄａｐ（Ｂｏｃ）−シクロ［Ｄａｂ−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−ＤＬｅｕ−Ｌ−Ａｂｕ−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−Ｔｈｒ（Ｏ−ｔＢｕ）］
粗製のＣＢＺ−Ｔｈｒ（Ｏ−ｔＢｕ）−Ｄａｐ（Ｂｏｃ）−Ｄａｂ−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−ＤＬｅｕ−Ｌ−Ａｂｕ−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−Ｔｈｒ（Ｏ−ｔＢｕ）−ＯＨ（７２４ｍｇ、０．４６６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（７５ｍＬ）中に溶解し、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（３６１ｍｇ、０．４９ｍＬ、２．８ｍｍｏｌ）で処理し、次いで、氷浴内で冷却した。ジフェニルリン酸アジド（２５６ｍｇ、０．２ｍＬ、０．９３ｍｍｏｌ）を滴下添加し、次いで、混合物を２時間、氷浴で冷却しながら撹拌した。氷浴を取り外し、溶液を更に２時間、室温で撹拌した。溶媒を蒸発し、残渣をＳｉＯ２  ＩＳＣＯカラム（４０ｇ）に施与し、ＤＣＭ中０〜１０％ＭｅＯＨでクロマトグラフィー処理した。生成物含有画分を合わせ、蒸発して白色の泡にした。４１８ｍｇ（５８％）を得た。
ｍ／ｚ１５３４、Ｃ７３Ｈ１２４Ｎ１４Ｏ２１は１５３２．９１を要する。
【０３１８】
（ｉｉｉ）標題化合物
ＣＢＺ−Ｔｈｒ（Ｏ−ｔＢｕ）−Ｄａｐ（Ｂｏｃ）−シクロ［Ｄａｂ−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−ＤＬｅｕ−Ｌ−Ａｂｕ−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−Ｔｈｒ（Ｏ−ｔＢｕ）］（５３１ｍｇ、０．３４６ｍｍｏｌ）をメタノール（５０ｍＬ）中に溶解し、ギ酸アンモニウム（５４５ｍｇ、８．６ｍｍｏｌ）及び１０％Ｐｄ／Ｃ（１７３ｍｇ）で処理した。終夜室温で撹拌した後に、反応混合物をセライトに通して濾過し、残渣をＭｅＯＨで洗浄した。溶媒を蒸発し、残渣を、ＭｅＯＨ１０％を含有するＥｔＯＡｃ中に溶解し、水×３で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を蒸発すると白色の固体が残った。痕跡量のギ酸塩を全て除去するために、固体をメタノール（１６０ｍＬ）中に溶解し、３０分間、Ａｍｂｅｒｓｅｐ９００樹脂（１２ｍＬ）と共に振盪した。混合物を濾過し、乾燥状態まで蒸発して、白色の固体４６４ｍｇ（９６％）を得た。
ｍ／ｚ１４００、Ｃ６５Ｈ１１８Ｎ１４Ｏ１９は１３９８．８７を要する。
【０３１９】
一般的方法
ポリミキシンノナペプチド誘導体の全合成を下記のとおり実施した。
環化に関与するＤａｂ残基のγ−アミノ基のオルトゴナルな保護を伴う直鎖ペプチドを樹脂上で構築し、その際、Ｃ末端アミノ酸（典型的にはＴｈｒ）が固相に接続している。環化に関与するＤａｂ（ポリミキシンナンバリングシステムにおける残基４）の部分的脱保護、続く、樹脂からの取り外しの後に、得られた直鎖ペプチドを樹脂から外して（ｏｆｆ−ｒｅｓｉｎ）環化した。下記のとおりの二つの一般的方法を使用した。
【０３２０】
一般的方法１：アミン基のＣＢＺ保護を用いての全合成
保護された直鎖ペプチド（残基２〜１０及びＮ末端基）の合成を、標準的なＦｍｏｃ固相ペプチド化学を用いる自動ペプチドシンセサイザーで実施した。具体的には、合成を、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＰＥＧ−ＰＳ樹脂を出発物質として使用して行った。Ｆｍｏｃ−アミノ酸のカップリングと末端アミノ基上でのＣＢＺ保護とを、ＤＭＦ中の５モル当量（樹脂負荷に対して）のＦｍｏｃアミノ酸及びＨＡＴＵを使用して行い、その際、ｉｎ  ｓｉｔｕでの活性化を伴い、１０モル当量のＤＩＰＥＡを使用した。Ｆｍｏｃ脱保護を、ジメチルホルムアミド中２０％ピペリジンを用いて行った。ＢＯＣを、環化に関与するＤａｂ上のオルトゴナルな保護基として使用した。
【０３２１】
樹脂結合直鎖ペプチドを２時間、ＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ２Ｏ（９６／２／２ｖ／ｖ）で処理して、環化に関与するＤａｂ残基を露出させ、樹脂からペプチドを切断した。この物質を３時間、ＤＭＦ中でＰｙＢｏｐ／ＨＯＢｔ／ＮＭＭ（当初負荷に対して４／４／８モル当量）を用いて環化した。粗製の物質を部分的に蒸発し、アセトニトリル／水に入れ、終夜凍結乾燥した。次いで、ＣＢＺ基を、酢酸／ＭｅＯＨ／水（５／４／１ｖ／ｖ）中で１０％Ｐｄ／Ｃを用いて除去した。
【０３２２】
粗製の生成物を精製し、ジアステレオマーを分取ＨＰＬＣによって分離した（表３）。ジアステレオマーの各対について、具体的な条件を最適化したことに注意されたい。
一般的方法２：アミン基のＢｏｃ保護を用いての全合成
保護された直鎖ペプチド（残基２〜１０及びＮ末端基）の合成を、標準的なＦｍｏｃ固相ペプチド化学を用いる自動ペプチドシンセサイザーで実施した。具体的には、合成を、塩化クロロトリチル（ＣＴＣ）−樹脂を使用して行い、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ（約０．７８ｍｍｏｌ／ｇを負荷）を０．０５〜０．１ｍｍｏｌスケールで予め負荷した。Ｆｍｏｃ−アミノ酸のカップリングを、ＤＭＦ中の５モル当量（樹脂負荷に対して）のＦｍｏｃアミノ酸及びＨＡＴＵを使用して行い、その際、ｉｎ  ｓｉｔｕでの活性化を伴い、１０モル当量のＤＩＰＥＡを使用した。Ｆｍｏｃ脱保護を、ジメチルホルムアミド中２０％ピペリジンを用いて行った。ｉｖＤｄｅ保護基を、環化に関与するＤａｂ残基上のオルトゴナルな保護基として使用した。
【０３２３】
ｉｖＤｄｅ基を除去するために、直鎖ペプチドをＤＭＦ中３％ヒドラジン（１００μｍｏｌあたり１００ｍＬ、二回繰り返す）で処理し、続いて、ＤＭＦ×３、ＥｔＯＨ×３及びジエチルエーテル×３で洗浄した。次いで、部分的に脱保護された直鎖ペプチドを、ＤＣＭ中２０％ＨＦＩＰで樹脂を洗浄することによって樹脂から切断した。得られた残渣を５０％アセトニトリル／水中に溶解し、終夜、凍結乾燥した。保護された直鎖ペプチドをＤＭＦ（２０ｍＬ／樹脂ｍｍｏｌ）中に溶解し、ＤＰＰＡ、（樹脂の負荷に対して３モル当量）及びＤＩＰＥＡ（樹脂の負荷に対して６モル当量）で環化した。この溶液を終夜、室温で撹拌した。ＢＯＣ基をＴＦＡで除去し、粗製のペプチドを凍結乾燥した。
【０３２４】
粗製の生成物を精製し、ジアステレオマーを、下記の分取ＨＰＬＣ条件４を用いる分取ＨＰＬＣによって分離した。ジアステレオマーの各対について、具体的な条件を最適化したことに注意されたい。
【０３２５】
一般的方法３：ノナペプチドへの酸のカップリング及び分離
ノナペプチドのＮ末端をアミノ酸にカップリングするための方法を実施例化合物５及び６に関して以下に記載する。記載の条件は、ノナペプチド及びアミノ酸の他の組合せにも適合させることができる。
【０３２６】
ステップ１
Ｈ−Ｔｈｒ（Ｏ−ｔＢｕ）−Ｄａｐ（ＢＯＣ）−シクロ［Ｄａｂ−Ｄａｂ（ＢＯＣ）−ＤＰｈｅ−Ｌｅｕ−Ｄａｂ（ＢＯＣ）−Ｄａｂ（ＢＯＣ）−Ｔｈｒ］（中間体１）（０．０７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（４ｍＬ）中に溶解し、４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−クロロフェニル）ブタン酸（ポリミキシン基質に対して１．５当量）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３．０当量）、続いて、ＨＡＴＵ（２．０当量）で処理した。１６時間後に、ＬＣＭＳによって反応の完了を確認し、反応混合物を乾燥状態まで蒸発した。水（約１０ｍＬ）を添加し、混合物を摩砕し、次いで、１時間、激しく撹拌した。得られた沈澱物を濾取し、終夜、真空中で乾燥した。
【０３２７】
ステップ２
ステップ１からのＢｏｃ−保護された誘導体をジクロロメタン（３ｍＬ）中に溶解し、ＴＦＡ（１ｍＬ）で処理した。反応混合物を、ＬＣＭＳによって完全な脱保護が確認されるまで室温で撹拌した。溶媒を蒸発し、残渣を、分取ＨＰＬＣ条件４に示されている条件を用いる分取ＨＰＬＣによってクロマトグラフィー処理して、ジアステレオマーを分離した。早く流出するジアステレオマーを含有する画分を合わせ、低体積まで蒸発し、凍結乾燥して実施例５をＴＦＡ塩として得た。遅く流出するジアステレオマーを含有する画分を合わせ、低体積まで蒸発し、凍結乾燥して実施例６をＴＦＡ塩として得た。
【０３２８】
ジアステレオマーの各対について、具体的な条件を最適化したことに注意されたい。
分取ＨＰＬＣ条件４：
カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｓｕｎｆｉｒｅ  Ｃ１８  ＯＢＤ  ５μｍ×１９ｍｍ×１５０ｍｍ
移動相：Ａ：水／アセトニトリル  ９０／１０、ｖ／ｖ、０．１５％ＴＦＡ。
【０３２９】
Ｂ：アセトニトリル／水  ９０／１０、ｖ／ｖ、０．１５％ＴＦＡ
流速：１０ｍＬ／分
勾配：時間（分）          移動相Ａ％
０                １００％
３                １００％
８                ８５％
１３．５          ８５％
１５              ７５％
１８              ０％
２３              １００％
２５              １００％
検出：２１０ｎｍ
分析用ＨＰＬＣ条件４：
カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｈｙｐｅｒｃｌｏｎｅ  Ｃ１８  ＢＤＳ  ５μｍ×４．６ｍｍ×１５０ｍｍ
移動相：Ａ：水／アセトニトリル  ９０／１０、ｖ／ｖ、０．１５％ＴＦＡ。
【０３３０】
Ｂ：アセトニトリル／水  ９０／１０、ｖ／ｖ、０．１５％ＴＦＡ
流速：１ｍＬ／分
勾配：時間（分）          移動相Ａ％
０              １００％
２０            ４０％
２１            ０％
２３            ０％
２３．５        １００
２５            １００
検出：２１０、２５４ｎｍ
注入体積：２０μＬ
一般的方法３ｂ：ノナペプチドへの個々の鏡像異性体のカップリング
鏡像異性的に純粋なアミノ酸を、鏡像異性的に混合されたアミノ酸のために一般的方法３ａにおいて上記したのと同じ条件を用いてノナペプチド化合物のＮ末端にカップリングした。
【０３３１】
化合物の実施例５及び６
一般的方法３ａの条件下での４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−クロロフェニル）ブタン酸（異性体２）（保持時間３．４６分、分析方法１又は３．２６４分、分析方法２）のカップリング、続く、脱保護によって、実施例５を得た。実施例（５）を、４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−クロロフェニル）ブタン酸（異性体２）から得られた４−アミノ−３−（３−クロロフェニル）ブタン酸の絶対配置のＸ線決定に従って、（Ｓ）立体化学と指定した。
【０３３２】
一般的方法３ａの条件下での４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−クロロフェニル）ブタン酸（異性体１、保持時間２．８９分、分析方法１又は２．７９６分、分析方法２）のカップリング、続く、脱保護によって、実施例６を得た。実施例（６）を、４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−クロロフェニル）ブタン酸（異性体１）から得られた４−アミノ−３−（３−クロロフェニル）ブタン酸の絶対配置のＸ線決定に従って、（Ｒ）立体化学と指定した。
【０３３３】
一般的方法４：酢酸塩への変換
ＡＧ１−Ｘ２樹脂（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｌｔｄ）酢酸塩形態２００−４−メッシュを、１０％酢酸水溶液、続いて、１％酢酸水溶液で洗浄することによって再生し、焼結カートリッジに入れた。水中のＴＦＡ塩としての化合物の溶液を、ＴＦＡ塩１ｇに対して樹脂３０ｇの負荷を用いてカラムに施与し、カラムを、重力下で水で溶離してドリップした。生成物含有画分を合わせ、白色の固体に凍結乾燥した。
【０３３４】
最終化合物の分析を、上記条件を用いるＨＰＬＣによって実施した（分析用ＨＰＬＣ条件）。
酢酸塩としての実施例５及び６の化合物での例示的な分析用データを以下に示す。
【０３３５】
実施例５：（早い方の異性体）酢酸塩の1H NMR (400 MHz, D2O): δ(ppm) 0.70 (3 H, d, J 6.1 Hz), 0.77 (3 H, d, J 6.3 Hz), 0.78-0.90 (1H, m), 1.13 (3H, d, J 6.3 Hz), 1.17 (3H, d, J 6.4Hz), 1.36-1.52 (2H, m), 1.75-2.06 (17 H, m, 1.91, s, OAcを含む), 2.10-2.30 (4H, m), 2.72-2.91 (4H, m), 3.02-3.49 (14H, m), 4.12-4.32 (8 H, m), 4.48 (1 H, dd, J 5.6, 9.0 Hz), 4.54-4.60 (1H, m), 4.63-4.68 (1H, m), 7.25-7.41(9H, m).  m/z 1145 [MH+], 573[M+2H]2+.
実施例６：（遅い方の異性体）酢酸塩の1H NMR (400 MHz, D2O): δ(ppm) 0.60- 0.67 (6 H, m), 0.69 - 0.84 (4 H, m), 1.16 (3H, d, J 6.4Hz), 1.33-1.50 (2 H, m), 1.76-2.04 (19 H, m, 1.88, s, OAcを含む), 2.06-2.26 (4 H, m), 2.67-2.86 (4 H, m), 3.00-3.46 (14 H, m), 3.98-4.04 (1 H, m) 4.14-4.30 (7H, m), 4.45 (1 H, dd, J 5.6, 9.0 Hz), 4.54 (1 H,見かけ上t, J 8.3 Hz), 4.72 (1 H, dd, J 5.0, 8.9 Hz), 7.20-7.40 (9 H, m). m/z 1145 [MH+], 573[M+2H]2+.
全ての実施例において、早く溶離する異性体での１．１３ｐｐｍから、遅く溶離する異性体での約０．６５ｐｐｍへと移動するＴｈｒ残基の化学シフトと共に、ＨＰＬＣ保持時間（早く、及び遅く溶離する異性体）に基づき、ジアステレオマーを指定した。
【０３３６】
実施例化合物
表１に、本発明の実施例化合物を列挙する。これらは、以下：
【０３３７】
【化３９】
2021528449.tif 000048
【０３３８】
に示す一般構造を有する化合物である。
基Ｒは、本発明の化合物における−Ｘ−Ｒ１５に対応し、この基は表に、カルボニル基及びこれが接続している炭素に対してアルファにある窒素と一緒になった場合に、それぞれ基−Ｒ１及び−Ｒ２に対応する６及び７位におけるアミノ酸残基（ポリミキシンナンバリングシステムを用いて、それぞれＡＡ−６及びＡＡ−７）と一緒に示されている。
【０３３９】
これらの実施例化合物において、基−Ｒ３は、カルボニル基及びこれが接続している炭素に対してアルファにある窒素と一緒になって、Ｌ−Ｔｈｒであり、−Ｒ４は、カルボニル基及びこれが接続している炭素に対してアルファにある窒素と一緒になって、Ｌ−Ｄａｐであり（従って、−Ｒ４は、−ＣＨ２ＮＨ２である）、−Ｒ８は、カルボニル基及びこれが接続している炭素に対してアルファにある窒素と一緒になって、Ｌ−Ｔｈｒである（従って、−Ｒ８は、メチルである）。
【０３４０】
側鎖−Ｒにおける絶対立体化学は、既知の絶対立体化学の物質に対応している実施例５及び実施例６との比較によって指定されている。
実施例１〜６及び１５〜３３において、この決定は、ジアステレオマーの相対保持時間及び１Ｈ  ＮＭＲスペクトルの比較によって成された（例えば、２位におけるＴｈｒ残基の化学シフトを考慮した）。
【０３４１】
実施例７〜１４において、この決定は、ジアステレオマーの相対ＨＰＬＣ保持時間の比較によって成された。
表は、実施例化合物でのＨＰＬＣ保持時間を示している。分析で使用されたＨＰＬＣ条件を以下に示す。
カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｈｙｐｅｒｃｌｏｎｅ  ＢＤＳ  Ｃ１８、４．６ｍｍ×１５０ｍｍ、５μｍ
流速：１ｍＬ／分
溶離液：
Ａ＝ＡｃＮ１０％／水９０％／ＴＦＡ０．１５％
Ｂ＝ＡｃＮ９０％／水１０％／ＴＦＡ０．１５％
勾配：分        Ａ％      Ｂ％
０        １００    ０
２０      ４０      ６０
２１      ０        １００
２３      ０        １００
２３．５  １００    ０
２５      １００    ０
決定：２１０、２５４ｎｍ
【０３４２】
【表５−１】
2021528449.tif 000049
【０３４３】
【表５−２】
2021528449.tif 000050
【０３４４】
【表５−３】
2021528449.tif 000051
【０３４５】
【表５−４】
2021528449.tif 000052
【０３４６】
【表５−５】
2021528449.tif 000053
【０３４７】
【表５−６】
2021528449.tif 000054
【０３４８】
【表５−７】
2021528449.tif 000055
【０３４９】
【表５−８】
2021528449.tif 000056
【０３５０】
【表５−９】
2021528449.tif 000057
【０３５１】
【表５−１０】
2021528449.tif 000058
【０３５２】
【表５−１１】
2021528449.tif 000059
【０３５３】
生物学的結果
本発明の化合物を試験し、結果を、当技術分野で以前に報告された化合物を含む比較例と比較した。
【０３５４】
ＭＩＣの決定
接種物を、単離されたコロニー（１８−２４時間のＭｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎ寒天プレートから選択）の直接懸濁液を製造することによって、マクファーランド標準の０．５に調節して調製した。ＭＩＣ試験を、滅菌の９６ウェルマイクロタイタープレート中のカチオン調節されたＭｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎブロス中の抗生物質の一連の２倍希釈によって、１７０μＬ（抗細菌剤を含有する１５０μＬのブロス、２０μＬの接種物）の全体積で行った。アッセイを二重で行った。プレートを、振盪せずに１８〜２０時間、３５℃で好気的にインキュベートし、ＭＩＣを、目に見える増殖を防止した薬物の最低濃度と定義した。幾つかの化合物は多数回の試験にかけられ、このような場合、表示のＭＩＣは、得られた中央値である。ＭＩＣ値はμｇ／ｍＬで示されている。
【０３５５】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ腎臓細胞毒性アッセイ
次のプロトコルに従って、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ腎臓細胞毒性アッセイを行った。
ＨＫ−２細胞を、５ｎｇ／ｍＬの上皮成長因子（ＥＧＦ）及び５０μｇ／ｍＬのウシ下垂体抽出物（ＢＰＥ）を補充された角質細胞−ＳＦＭ培地中で維持し、アッセイした。細胞を１ウェルあたり７，５００細胞で９６ウェルプレートに播種し、終夜、付着させた。ポリミキシンＢ（ＰＭＢ）及び試験化合物を水中１０％ＤＭＳＯ中に溶解して、それぞれ２０及び６０ｍｇ／ｍＬのストック溶液を得た。試験化合物を半対数希釈で３，０００又は１，０００μｇ／ｍＬの最高濃度が得られるように希釈して、９ポイントの濃度範囲とビヒクル対照とを得た。ＰＭＢも、半対数希釈で１，０００μｇ／ｍｌの最高濃度が得られるように希釈した。水及びＤＭＳＯレベルは、それぞれ５％及び０．５％で一定に維持した。試験化合物を細胞と共に２４時間、３７℃、５％ＣＯ２で、加湿雰囲気下でインキュベートした。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−ＢｌｕｅをＰＢＳ中で希釈し（１：４）、２０％（ｖ／ｖ）添加し、３７℃で２時間インキュベートし、その後、蛍光生成物を検出した。
【０３５６】
培地のみのバックグラウンド値を差し引き、その後、データを、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍを使用して分析した。個々の値を各化合物で、ビヒクル対照ウェルに対して正規化した。化合物濃度値をｌｏｇ値としてプロットして、用量反応曲線をフィットさせることを可能にした。曲線の底をゼロにし、ＩＣ５０値を決定した。
【０３５７】
ＩＣ５０値は、同じ実験におけるＰＭＢでのＩＣ５０値に対して表されている。複数の決定が成された場合、中央値が表されている。
４時間目の腎臓中レベル測定
化合物を、遊離塩基１７．２ｍｇ／ｋｇでマウス（ｎ＝２又は３）に皮下投与した。投与から４時間後に、動物を安楽死させ、腎臓を取り出し、脂肪及び結合組織を除去し、秤量し、直ちに急速凍結した。室温で解凍した後に、各動物からの腎臓対を、予め秤量しておいたセリア安定化酸化ジルコニウムビーズを含有する２ｍＬ円錐管に入れた。トリフルオロ酢酸、ＴＦＡ（０．２５ｍＬ、水中０．１５％ｖ／ｖ）を添加し、管をＦａｓｔＰｒｅｐ−２４ホモジナイザー（ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ  Ｅｕｒｏｐｅ）に装填し、それぞれ６ｍ／秒の速度で３０秒のサイクルに三回かけた。ホモジネートのアリコット（２００μＬ）を、計算された体積のＴＦＡ溶液（水中０．１５％ｖ／ｖ）で希釈して、腎臓０．１６７グラム／ホモジネートグラムの最終濃度を得た。
【０３５８】
腎臓ホモジネート（１００μＬ）をメタノール（１９０μＬ）及びＴＦＡ（１１０μＬ、水中１０％ｖ／ｖ）と混合し、タンパク質沈殿のために終夜、−２０℃で貯蔵した。１３，０００ｒｐｍ及び６℃での１０分間の遠心分離後に、上清２００μｌをガラスインサートに移し、ＬＣ−ＭＳ−ＭＳによって分析した。
【０３５９】
【表６−１】
2021528449.tif 000060
【０３６０】
【表６−２】
2021528449.tif 000061
【０３６１】
【表６−３】
2021528449.tif 000062
【０３６２】
追加の生物学的データ
腎臓毒性の比較  −  実施例５並びに参照例Ｄ７７及び３８
マウス（ｎ＝６）に、ポリミキシンＢ、硫酸コリスチン、参照例Ｄ７７、参照例３８又は実施例５を遊離塩基１７．２ｍｇ／ｋｇで一日三回皮下投与した。四日目の初回の投与直後に開始して、マウスを個々の代謝ケージに移し、続く２４時間にわたって尿を収集して、バイオマーカーレベル（アルブミン、シスタチンＣ、ＫＩＭ−１）を決定した。幾何平均バイオマーカーレベルを以下の表に示す：
【０３６３】
【表７】
2021528449.tif 000063
【０３６４】
ＰＭＢ値は、四つの実験からの範囲を、コリスチンは、二つの実験からの範囲を示している。
尿におけるアルブミン、シスタチンＣ又はＫＩＭ−１の上昇は、腎臓損傷の徴候である。実施例５は、腎臓毒性の三つ全てのバイオマーカーで最低レベルを示した。
【０３６５】
参照例Ｄ７７は、ＷＯ２０１５／１３５９７６に記載されている。参照例３８は、ＷＯ２０１６／０８３５３１に記載されている。
腎臓毒性の比較  −  実施例５、９及び１７
マウス（ｎ＝６）に、８時間間隔で四回の投与でＰＭＢ、実施例５、実施例９又は実施例１７を遊離塩基２５ｍｇ／ｋｇで皮下投与した。四回目の投与後に、動物を個々の代謝ケージに移し、尿を２４時間、収集して、尿バイオマーカーを決定した。尿の収集後に、マウスを安楽死させ、組織病理学のために腎臓を採取した。
【０３６６】
【表８】
2021528449.tif 000064
【０３６７】
実施例５又は実施例９群の動物は、組織病理学によると変性又は再生のいずれの徴候も示さなかった。対照的に、ＰＭＢで処置された六匹の動物は全て、軽微な尿細管再生を示した。
【０３６８】
別の実験において、実施例１７をＰＭＢと比較した。
【０３６９】
【表９】
2021528449.tif 000065
【０３７０】
組織病理学的徴候も評価した：
【０３７１】
【表１０】
2021528449.tif 000066
【０３７２】
カニクイザルにおける実施例５及びＰＭＢの腎臓毒性の比較
雄のカニクイザル（ｎ＝３）に一日三回、七日間、実施例５を２０ｍｇ／ｋｇ／用量で１時間かけて静脈内注入によって投与した。別の実験において、雄のサル（ｎ＝３）に同じ期間、ＰＭＢを４ｍｇ／ｋｇ／用量で投与した。両方の実験で、対照動物に一日三回、生理食塩水を投与した。
【０３７３】
七日間の終了時に、血液を採取し、血液尿素窒素及びクレアチニンの血清レベルを腎臓損傷の指標として決定した。実施例５の例では、平均ＢＵＮ及びクレアチニンレベルが生理食塩水対照動物と比較して５０％未満上昇した。しかしながら、ＰＭＢを投与された動物では、ＢＵＮレベルは対照動物と比較して７６％上昇し、クレアチニンレベルは２．６倍高かった。
【０３７４】
七日間の投与期間の終了時に腎臓を採取し、顕微鏡で検査した。ＰＭＢで処置された三匹の動物のうち、二匹が軽度の尿細管変性を、一匹が軽微な尿細管変性を示した。実施例５で処置された動物のうち、一匹は軽度の尿細管変性を示し、二匹は軽微な変性を示した。
【０３７５】
これらの実験における用量は、実施例５では、ＰＭＢよりも５倍多かったが、腎臓毒性の徴候は減少した。投与七日目での一回の投与サイクルからの薬物暴露（ＡＵＣ０〜８ｈｒ）は、実施例５では２３４μｇ．ｈｒ／ｍＬ、及びＰＭＢでは１１７μｇ．ｈｒ／ｍＬであった。
【０３７６】
Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡＴＣＣ  ２５９２２に感染した好中球減少性マウス大腿モデルにおける化合物の有効性
好中球減少性にした後（シクロフォスファミド１５０ｍｇ／ｋｇ  ｄ−４、１００ｍｇ／ｋｇ  ｄ−１）、ＣＤ−１マウス（ｎ＝５）に、各大腿において約１０５ｃｆｕのＥ．ｃｏｌｉ  ＡＴＣＣ２５９２２を接種した。マウスに、０．１２５、０．５、及び３ｍｇ／ｋｇの硫酸ＰＭＢ又は試験化合物（同等重量の遊離塩基）を感染から１、３．５及び６時間後にＩＶ投与した。感染後９時間目に、マウスを安楽死させ、大腿をコロニーカウントのために準備した。
【０３７７】
ビヒクル対照に対するコロニーカウントの減少を以下の表に示す。それぞれの場合に、同じ実験においてＰＭＢで観察された減少をカッコ内に示す：
【０３７８】
【表１１】
2021528449.tif 000067
【０３７９】
全ての化合物が、ＰＭＢと同様に有効であった。
Ｋ．Ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＡＴＣＣ  ４３８１６に感染した好中球減少性マウス大腿モデルにおける化合物の有効性
好中球減少性にした後（シクロフォスファミド１５０ｍｇ／ｋｇ  ｄ−４、１００ｍｇ／ｋｇ  ｄ−１）、ＣＤ−１マウス（ｎ＝５）に、各大腿において約１０５ｃｆｕのＫ．Ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＡＴＣＣ  ４３８１６を接種した。マウスに、適切な用量の硫酸ＰＭＢ又は試験化合物（同等重量の遊離塩基）を感染から２、６及び１０時間後にＩＶ投与した。感染後１６時間目に、マウスを安楽死させ、大腿をコロニーカウントのために準備した。
【０３８０】
ビヒクル対照に対するコロニーカウントの減少を以下の表に示す。それぞれの場合に、同じ実験においてＰＭＢで観察された減少をカッコ内に示す：
【０３８１】
【表１２】
2021528449.tif 000068
【０３８２】
両方の化合物が、ＰＭＢと同様に有効であった。
Ａ．ｂａｕｍａｎｎｉｉ  ＮＣＴＣ１３３０１に感染した好中球減少性マウス大腿モデルにおける化合物の有効性
好中球減少性にした後（シクロフォスファミド１５０ｍｇ／ｋｇ  ｄ−４、１００ｍｇ／ｋｇ  ｄ−１）、ＣＤ−１マウス（ｎ＝５）に、各大腿において約１０５ｃｆｕのＡ．ｂａｕｍａｎｎｉｉ  ＮＣＴＣ１３３０１を接種した。マウスに、０．１２５、０．５、１及び４ｍｇ／ｋｇの硫酸ＰＭＢ又は試験化合物（同等重量の遊離塩基）を感染から２、６及び１０時間後にＩＶ投与した。感染後１６時間目に、マウスを安楽死させ、大腿をコロニーカウントのために準備した。
【０３８３】
ビヒクル対照に対するコロニーカウントの減少を以下の表に示す。それぞれの場合に、同じ実験においてＰＭＢで観察された減少をカッコ内に示す：
【０３８４】
【表１３】
2021528449.tif 000069
【０３８５】
両方の化合物が、ＰＭＢと同様に有効であった。
Ａ．ｂａｕｍａｎｎｉｉ  ＮＣＴＣ１３３０１に感染した好中球減少性マウス肺モデルにおける化合物の有効性
好中球減少性にした後（シクロフォスファミド２００ｍｇ／ｋｇ  ｄ−４、１５０ｍｇ／ｋｇ  ｄ−１）、ＣＤ−１マウス（ｎ＝８）に、肺あたり約１０７ｃｆｕのＡ．ｂａｕｍａｎｎｉｉ  ＮＣＴＣ１３３０１を鼻腔内接種した。マウスに、硫酸ＰＭＢ（２０ｍｇ／ｋｇ）又は適切な用量の試験化合物（同等重量の遊離塩基）を感染から２、６及び１０時間後にＳＣ投与した。感染後１６時間目に、マウスを安楽死させ、肺をコロニーカウントのために準備した。
【０３８６】
ビヒクル対照に対するコロニーカウントの減少を以下の表に示す。それぞれの場合に、同じ実験においてＰＭＢで観察された減少をカッコ内に示す：
【０３８７】
【表１４】
2021528449.tif 000070
【０３８８】
ＰＭＢは、このモデルにおいて、最大耐量でも有効ではなかった。実施例５は２０ｍｇ／ｋｇでも、より有効であり、毒性の低下によって、より高いレベルで投与して、より大きな効果を達成することもできた。
【０３８９】
Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＡＴＣＣ  ２７８５３に感染した好中球減少性マウス肺モデルにおける化合物の有効性
好中球減少性にした後（シクロフォスファミド２００ｍｇ／ｋｇ  ｄ−４、１５０ｍｇ／ｋｇ  ｄ−１）、ＣＤ−１マウス（ｎ＝８）に、肺あたり１０４〜１０５ｃｆｕのＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＡＴＣＣ２７８５３を鼻腔内接種した。マウスに、適切な用量の硫酸ＰＭＢ又は試験化合物（同等重量の遊離塩基）を感染から２、６及び１０時間後にＳＣ投与した。感染後１６時間目に、マウスを安楽死させ、肺をコロニーカウントのために準備した。
【０３９０】
ビヒクル対照に対するコロニーカウントの減少を以下の表に示す。それぞれの場合に、同じ実験においてＰＭＢで観察された減少をカッコ内に示す：
【０３９１】
【表１５】
2021528449.tif 000071
【０３９２】
両方の化合物が、このモデルにおいてＰＭＢよりも優れた有効性を示した。
リファンピシンの存在下での実施例５のＭＩＣ値
【０３９３】
【表１６】
2021528449.tif 000072
【０３９４】
ＭＩＣ値（μｇ／ｍＬ）を、ＣＬＳＩ条件下でのブロス微量希釈によって決定した。
ＰＭＢ及び実施例５は両方とも、ポリミキシンに対して低い感受性を有する菌株に対しても、リファンピシンとの強力な相乗作用を示している。
【０３９５】
立体化学研究
本発明の化合物は、Ｎ末端部分におけるγ−アミノプロピル基のβ位において立体中心を含有する。驚くべきことに、この位置における立体異性体のうちの１種が通常、より低い細胞傷害性及びより低い腎臓中薬物レベルと関連することが見出された。これは、逆相クロマトグラフィーでより早く溶離する立体異性体である。
【０３９６】
例えば、実施例５及び６に関するジアステレオ異性体の対において、逆相ＨＰＬＣカラムからより早く溶離するジアステレオマーは、対応する遅い方の異性体よりも低い腎臓曝露及び低い細胞傷害性を示す。早い方のジアステレオマー（実施例５）は、対応するアミノ酸の小分子Ｘ線解析によると（Ｓ）−４−アミノ−３−（３−クロロフェニル）ブタン酸から得られる（以下のスキームに図示されているとおり）。
【０３９７】
【化４０】
2021528449.tif 000073
【０３９８】
更なる比較を以下の表３に示す。逆相クロマトグラフィーでより早く溶離し、かつ実施例５で示されたものと同様のＮＭＲ化学シフトを有するジアステレオマー（Ｎ末端基でのエピマー）は、上記のとおり、実施例５と同じ絶対立体化学を有する可能性がある。
【０３９９】
表３中の化合物のそれぞれに指定される絶対立体化学は表１に示されている。
【０４００】
【表１７】
2021528449.tif 000074
【０４０１】
細胞傷害性は、ＨＫ−２細胞系に対してポリミキシンＢで記録されたものに対する、測定されたＩＣ５０を指す。
薬物レベルは、マウスモデルにおける１７．２ｍｇ／ｋｇのｓｃ投与後４時間目に腎臓で見出された化合物の量（μｇ／ｇ）を指す。
【０４０２】
追加のデータ
実施例２４の腎臓毒性を、マウスにおける四回の投与後にＰＭＢと比較した
雄のＣＤ−１マウス群（ｎ＝５）に、遊離塩基１２．５若しくは２５ｍｇ／ｋｇのポリミキシンＢ（ＰＭＢ）、又は遊離塩基２５、５０若しくは７５ｍｇ／ｋｇの実施例２４の化合物のいずれかを８時間間隔で四回、皮下投与した。四回目の投与直後に、マウスを代謝ケージに移し、尿を２４時間収集して、尿バイオマーカーを決定した。尿の収集後に、マウスを腎臓組織病理学のために、と殺した。平均バイオマーカーレベルを以下の表４に示す。
【０４０３】
【表１８】
2021528449.tif 000075
【０４０４】
尿バイオマーカーを尿クレアチニンに対して正規化した。
５種全てのバイオマーカーで、５０ｍｇ／ｋｇの実施例２４での表示は、２５ｍｇ／ｋｇのＰＭＢよりも少なく、５種のバイオマーカーのうちの２種（Ｋｉｍ−１、ＮＧＡＬ）で、７５ｍｇ／ｋｇ用量での表示は、２５ｍｇ／ｋｇでのＰＭＢよりも少なかった。
【０４０５】
組織病理学の結果を以下の表５に示す。
【０４０６】
【表１９】
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【０４０７】
５０ｍｇ／ｋｇ用量の実施例２４での腎臓組織病理は、２５ｍｇ／ｋｇ用量でのＰＭＢについてよりも重篤度が低く、腎臓組織病理は、７５ｍｇ／ｋｇ用量の実施例２４で、２５ｍｇ／ｋｇでのＰＭＢの用量と比較して同様であった。
【０４０８】
参照文献
本明細書に記載の文献は全て、本明細書中に参考文献としてその全てが援用される。
【０４０９】
【表２０】
2021528449.tif 000077
【国際調査報告】
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