(57)【要約】【課題】  本発明は、２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体薬物の製造方法及びその応用を開示する。【解決手段】具体的には、一般式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩、及び該化合物又はその薬学的に許容される塩で製造される薬学的に許容される製剤に関する。一般式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩は、生体外で高い溶解度、低い吸湿性を有し、生体内で原薬ブチルフタリドより著しく高いバイオアベイラビリティ及び脳内蓄積濃度及び／又は向上した薬物作用効果を有する。心脳虚血性疾患、心脳動脈閉塞疾患を予防／治療する薬物、及び抗パーキンソン病・抗認知症薬の製造における応用も開示する。【化６１】2021512138.tif 000065【選択図】  図１
2021512138.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式Ｉを有する化合物であるか、又は前記一般式Ｉを有する化合物が無機酸又は有機酸と形成する薬学的に許容される塩である、ことを特徴とする２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体。
【化３８】
2021512138.tif 000042
（前記一般式Ｉにおいて、Ｒ１は水素原子又はＣ１〜Ｃ１０のアルキルを含み、前記Ｃ１〜Ｃ１０のアルキルはアシル又はアシルオキシを含有し、
Ｘで表わされる置換基は
【化３９】
2021512138.tif 000043
であり、ここにおいてＲ２、Ｒ３、Ｒ４はそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルから選ばれ、又は、
Ｘで表わされる置換基は
【化４０】
2021512138.tif 000044
であり、ここにおいてｎは［０，１０］の範囲から選ばれる整数であり、Ｒ５は１つ又は２つの窒素原子を含有する５〜１５員複素環又は置換複素環を含む。）
【請求項２】
下記一般式ＩＩを有する化合物であるか、又は前記一般式ＩＩを有する化合物が無機酸又は有機酸と形成する薬学的に許容される塩である、ことを特徴とする請求項１に記載の２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体。
【化４１】
2021512138.tif 000045
前記Ｒ１はアシルを含有するエチルであり、
前記Ｘで表わされる置換基は
【化４２】
2021512138.tif 000046
であり、ここにおいてＲ２、Ｒ３、Ｒ４はそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルから選ばれ、又は、
前記Ｘで表わされる置換基は
【化４３】
2021512138.tif 000047
であり、ここにおいてｎ＝２であり、Ｒ５は
【化４４】
2021512138.tif 000048
のうちの任意の１種を含む。）
【請求項３】
下記構造の化合物であるか、又は下記構造を有する化合物が無機酸又は有機酸と形成する薬学的に許容される塩である、ことを特徴とする請求項２に記載の２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体。
【化４５】
2021512138.tif 000049
（前記Ｒ１はアシルを含有するエチルであり、
前記Ｘで表わされる置換基は
【化４６】
2021512138.tif 000050
であり、ここにおいて前記Ｒ２はエチル、前記Ｒ３はメチル、前記Ｒ４はメチルである。）
【請求項４】
下記構造の化合物であるか、又は下記構造を有する化合物が無機酸又は有機酸と形成する薬学的に許容される塩である、ことを特徴とする請求項２に記載の２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体。
【化４７】
2021512138.tif 000051
（前記Ｒ１はアシルを含有するエチルであり、
前記Ｘで表わされる置換基は
【化４８】
2021512138.tif 000052
であり、ここにおいてｎ＝２であり、Ｒ５は
【化４９】
2021512138.tif 000053
である。）
【請求項５】
前記無機酸は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸のうちの任意の１種を含み、
前記有機酸は、酢酸、トリフルオロ酢酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、フマル酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、アスコルビン酸、シュウ酸、カンファン酸、グルコン酸、グルクロン酸、パモ酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、スルファミン酸、ｐ−トルエンスルホン酸のうちの任意の１種を含む、ことを特徴とする請求項１に記載の２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体。
【請求項６】
前記一般式Ｉを有する前記化合物の製造方法は、
下記構造１を有する化合物２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸を下記一般式ＩＩＩを有するアシル化試薬とアシル化反応させ、下記一般式ＩＶを有する中間化合物を取得するステップと、
前記中間化合物を下記一般式Ｖを有するエステル化試薬とエステル化反応させ、前記一般式Ｉを有する前記化合物を取得するステップとを含む、ことを特徴とする請求項１〜５のいずれか１項に記載の２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体の製造方法。
【化５０】
2021512138.tif 000054
（前記アシル化試薬では、一般式ＩＩＩのＲ１は水素原子又はＣ１〜Ｃ１０のアルキルを含み、前記Ｃ１〜Ｃ１０のアルキルはアシル又はアシルオキシを含有し、
前記エステル化試薬では、一般式ＶのＸで表わされる置換基は
【化５１】
2021512138.tif 000055
であり、ここにおいてＲ２、Ｒ３、Ｒ４はそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルから選ばれ、又は、
Ｘで表わされる置換基は
【化５２】
2021512138.tif 000056
であり、ここにおいてｎは［０，１０］の範囲から選ばれる整数であり、Ｒ５は１つ又は２つの窒素原子を含有する５〜１５員複素環又は置換複素環を含む。）
【請求項７】
前記アシル化試薬では、一般式ＩＩＩのＲ１はアセチルであり、
前記エステル化試薬では、一般式ＶのＸで表わされる置換基は
【化５３】
2021512138.tif 000057
であり、ここにおいてＲ２、Ｒ３、Ｒ４はそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルから選ばれ、又は、
前記Ｘで表わされる置換基は
【化５４】
2021512138.tif 000058
であり、ここにおいてｎ＝２であり、Ｒ５は、
【化５５】
2021512138.tif 000059
のうちの任意の１種を含む、ことを特徴とする請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記エステル化試薬はＮ，Ｎ−ジメチルエタノールアミンであり、すなわち前記エステル化試薬では、一般式ＶのＸで表わされる置換基は
【化５６】
2021512138.tif 000060
であり、ここにおいて前記Ｒ２はエチル、前記Ｒ３はメチル、前記Ｒ４はメチルであり、
前記中間化合物を下記一般式Ｖを有するエステル化試薬とエステル化反応させ、前記一般式Ｉを有する前記化合物を取得する前記ステップは、
前記中間化合物を前記Ｎ，Ｎ−ジメチルエタノールアミンとエステル化反応させ、下記構造を有する化合物を取得するステップを含む、ことを特徴とする請求項７に記載の製造方法。
【化５７】
2021512138.tif 000061
【請求項９】
前記エステル化試薬は１−（２−ヒドロキシエチル）ピペリジンであり、すなわち前記エステル化試薬では、一般式ＶのＸで表わされる置換基は
【化５８】
2021512138.tif 000062
であり、ここにおいてｎ＝２であり、Ｒ５は
【化５９】
2021512138.tif 000063
であり、
前記中間化合物を下記一般式Ｖを有するエステル化試薬とエステル化反応させ、前記一般式Ｉを有する前記化合物を取得する前記ステップは、
前記中間化合物を前記１−（２−ヒドロキシエチル）ピペリジンとエステル化反応させ、下記構造を有する化合物を取得するステップを含む、ことを特徴とする請求項７に記載の製造方法。
【化６０】
2021512138.tif 000064
【請求項１０】
得られた前記一般式Ｉを有する化合物に無機酸又は有機酸を加えて反応させ、前記一般式Ｉを有する前記化合物が無機酸又は有機酸と形成する薬学的に許容される塩を取得する、塩を製造するステップをさらに含む、ことを特徴とする請求項６に記載の製造方法。
【請求項１１】
前記無機酸は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸のうちの任意の１種を含み、
前記有機酸は、酢酸、トリフルオロ酢酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、フマル酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、アスコルビン酸、シュウ酸、カンファン酸、グルコン酸、グルクロン酸、パモ酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、スルファミン酸、ｐ−トルエンスルホン酸のうちの任意の１種を含む、ことを特徴とする請求項１０に記載の製造方法。
【請求項１２】
固体試薬、半固体試薬及び液体試薬のうちの任意の１種を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体で製造される薬学的に許容される試薬。
【請求項１３】
前記固体試薬は、一般的な錠剤、分散性錠剤、徐放性錠剤、ソフトカプセル剤、ハードカプセル剤、顆粒剤、散剤又は座薬のうちの任意の１種を含み、
前記半固体試薬は、軟膏剤、糊剤、ゲル剤のうちの任意の１種を含み、
前記液体試薬は、注射剤、滴剤、溶液剤、乳剤、懸濁剤のうちの任意の１種を含む、ことを特徴とする請求項１２に記載の試薬。
【請求項１４】
心脳虚血性疾患、心脳動脈閉塞疾患を予防／治療する薬物及び抗パーキンソン病・抗認知症薬の製造に応用される、ことを特徴とする請求項１３に記載の試薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬分野に関し、より具体的には、高い溶解度、低い吸湿性を有し、製剤の製造プロセスがシンプルであり、高いバイオアベイラビリティを有し、脳内蓄積濃度を向上させる２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体薬物、及び心脳虚血性疾患、心脳動脈閉塞疾患を予防／治療する薬物及び抗パーキンソン病・抗認知症薬の製造における応用に関する。
【背景技術】
【０００２】
化学名が３−ブチルイソベンゾフラン−１（３Ｈ）−オン（ｄｌ−３−ｎ−ｂｕｔｙｌｐｈｔｈａｌｉｄｅ、ＮＢＰ、１）のブチルフタリドは、天然食用植物のセロリの種子から抽出されたものであり、中国で開発された、独立した知的財産を持つ虚血性脳卒中を予防・治療する新薬であり、商品名が恩必普であり、薬力学的研究によれば、ｄｌ−ＮＢＰは虚血性脳卒中による脳損傷の複数の病理学的ピロセスに作用し、強い抗脳虚血作用を有する。軽度、中度の急性虚血性脳卒中等の心血管疾患の治療に用いることが２００２年に中国国家食品薬品監督管理局で認められた。近年の実験研究によれば、ＮＢＰは虚血による脳損傷に抵抗できることに加えて、神経変性疾患等の他の神経系の損傷に対しても保護作用を示す。しかし、ＮＢＰの水溶性が低く、室温で薄黄色の油状液体であり、液体医薬品の製剤化が固体医薬品よりも複雑であることを考慮すると、現在、ブチルフタリドに用いられる剤型はブチルフタリドソフトカプセル及びブチルフタリド・塩化ナトリウム注射液であり、ソフトカプセルは、生産コストが高く且つプロセスが複雑であり、経口バイオアベイラビリティが低く、半減期が短く、ブチルフタリドの臨床的効果から、アスパラギン酸アミノ基転移酵素、アラニンアミノ基転移酵素がわずかに高くなる現象が認められる。腹部の不快感、吐き気、発疹や精神症状などの有害反応がたまたま発生し、それによって、その応用及び治療効果が制限されてしまう。
【０００３】
プロドラッグは、もともと生物学的活性を有するが、一定の欠陥がある薬物分子を化学構造的に修飾することで、１つ又は複数の修飾的担体基を連結することにより、生体外で生物学的活性がないか、又は生物学的活性が低下した化合物になり、生体内、特に作用箇所では酵素又は非酵素の作用下で、プロドラッグは、修飾基を除去されて、原薬に回復し、薬効を発揮する。プロドラッグは多くの活性薬物の欠陥の改善、例えば薬物の脂質−水分配係数を増加させ、薬物の標的性及び安定性を向上させ、薬物の毒性や副作用を低減させるなどに寄与する。
【０００４】
中国特許ＣＮ１２４３５４１Ｃは、抗血小板凝集が顕著であり、微小循環を改善し、心、脳虚血、心脳動脈閉塞に対して薬物活性を有する新規薬物２−（αヒドロキシペンチル）ベンゾエートを開示し、そのカリウム塩である２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸カリウム（ｄｌ−ＰＨＰＢ）はブチルフタリドプロドラッグとして、水溶性が大幅に向上する。大量の研究によれば、ｄｌ−ＰＨＰＢは生体内でブチルフタリドに急速に変換可能であり、その治療効果が等量のブチルフタリドに相当するか、又はそれよりも強く、中国特許ＣＮ１０４０８６３９９Ｂは、脳血管疾患を治療する５−ブロモ−２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸ナトリウム塩を開示し、動物モデルを研究した結果、該化合物は、脳虚血再灌流障害に対して保護作用を有し、運動機能障害を改善し、脳梗塞の体積を減少させ、脳浮腫を軽減させることができ、虚血後に投与すると効果的である。そして、ブチルフタリド誘導体のプロドラッグとしての該化合物は、水溶性が大幅に向上する。
【０００５】
しかしながら、２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸及びその誘導体のカリウム塩、ナトリウム塩は、吸湿性が高く、安定性が低く（閉環しやすい）、製剤の製造中には環境、ｐＨ値が厳格に要求され、それにより、生産コストを大幅に増加させてしまう。現在、これらの欠点を解消できる２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸誘導体はなく、従って、高い溶解度、低い吸湿性を有し、固体製剤を製造しやすく、生産コストを低下させ、原薬よりも著しく高いバイオアベイラビリティを有し、生体内で急速に分解して原薬になり、脳内蓄積濃度を向上できる２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸誘導体の開発が非常に必要である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
従来技術の不備に鑑みて、本発明は、新規な、脳部疾患を治療する一般式Ｉの構造が新規な２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸である有機アミンエステル誘導体、その製造方法及び用途を提供することを目的とする。本発明では、進歩性のある研究を行ったところ、本発明の２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体は、溶液中の薬物の溶解度を大幅に向上させ、低い吸湿性を有するとともに、原薬ブチルフタリドよりも著しく高い経口バイオアベイラビリティを有し、ブチルフタリドの脳内蓄積濃度を大幅に向上させ、その脳内蓄積時間を延ばし、良好なドラッガブル、及び優れた臨床応用価値があることを見出した。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の第１の目的は、新規な、脳部疾患を治療する一般式Ｉの構造が２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸である有機アミンエステル誘導体及びその製造方法を提供することである。
【０００８】
上記目的を達成させるために、本発明は、以下の技術案を用いる。
本発明は、一般式Ｉの有機アミンエステル誘導体薬物又はその薬学的に許容される塩を提供し、
【化１】
2021512138.tif 000003
Ｒ１は水素原子又はアシル又はアシルオキシを含有するＣ１〜Ｃ１０のアルキルを表し、Ｘは
【化２】
2021512138.tif 000004
であり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４はそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルから選ばれ、又はＸは
【化３】
2021512138.tif 000005
であり、ここにおいてｎ＝０〜１０であり、Ｒ５は１〜２個のＮ原子を含有する５〜１５員複素環又は置換複素環である。
【０００９】
さらに、本発明は、前記２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体又はその薬学的に許容される塩において、Ｘは
【化４】
2021512138.tif 000006
であり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４はそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルから選ばれ、又はＸは
【化５】
2021512138.tif 000007
であり、ここにおいてｎ＝２であり、Ｒ６は
【化６】
2021512138.tif 000008
から選ばれる、ことを特徴とする前記２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体又はその薬学的に許容される塩を提供する。
【００１０】
またさらに、本発明は、前記２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体薬物の製造方法において、まずブチルフタリドを開環させ、次に塩化アセチルと反応させ、最後にＸ−ＯＨとアシル化させてエステルとし、反応式は以下のとおりであり、
【化７】
2021512138.tif 000009
（式中、Ｘは
【化８】
2021512138.tif 000010
であり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４はそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルから選ばれ、又はＸは
【化９】
2021512138.tif 000011
であり、ここにおいてｎ＝２であり、
Ｒ６は
【化１０】
2021512138.tif 000012
から選ばれる。）
またさらに、ブチルフタリドをアルカリ性条件において開環させ、次に酸性化、アセチル化を順次に行い、それぞれＮ，Ｎ−ジメチルエタノールアミン及び１−（２−ヒドロキシエチル）ピペリジンと縮合してエステルとし、化合物ＤＢ−１及びＤＢ−２を得ることを特徴とする前記２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体薬物の製造方法を提供する。
【００１１】
化合物ＤＢ−１及びＤＢ−２の構造式は以下のとおりである。
【化１１】
2021512138.tif 000013
【００１２】
以下、化合物ＤＢ−１及びＤＢ−２の合成方法について簡単に説明する。
（１）２−（１−アセトキシペンチル）安息香酸（４）の合成
ブチルフタリド（１）をメタノールに溶解させ、適量の水酸化ナトリウム溶液を加え、加熱しながら１ｈ反応させる。減圧下でメタノールを蒸発除去し、蒸留水を加えて希釈し、希塩酸で酸性化し、水層をエチルエーテルで抽出し、エーテル層を合わせて、それぞれトリエチルアミン、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）を加え、塩化アセチルを滴下し、撹拌しながら５ｈ反応させる。水を加えて抽出し、有機層を分離し、濃縮させてワックス状固体を得て、ノルマルヘキサンを再結晶させ、白色針状結晶を得る。
【化１２】
2021512138.tif 000014
【００１３】
（２）化合物ＤＢ−１の合成
化合物（４）を秤取し、塩化メチレン、ＨＡＴＵ、化合物（５）を加え、一晩撹拌しながら反応させ、水で３回抽出し、カラムに通して純化し、白色固体を得て、無水エタノールＨＣｌ液を加えて塩を形成し、エチルエーテルを加えて白色沈殿を形成し、濾過して乾燥させ、化合物ＤＢ−１塩酸塩生成物を得る。
【化１３】
2021512138.tif 000015
【００１４】
（３）化合物ＤＢ−２の合成
化合物４を秤取し、塩化メチレン、ＨＡＴＵ、化合物６を加え、一晩撹拌しながら反応させ、水で３回抽出し、カラムに通して純化し、白色固体を得て、無水エタノールＨＣｌ液を加えて塩を形成し、エチルエーテルを加えて白色沈殿を形成し、濾過して乾燥させ、化合物ＤＢ−２塩酸塩生成物を得る。
【化１４】
2021512138.tif 000016
【００１５】
その中でも、化合物５、６は一般的な化学工業原料であり、市販品として入手できる。
【００１６】
本発明の第２の目的は、本発明の前記２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体又はその薬学的に許容される塩、及び脳部疾患を予防又は治療する薬物の製造におけるその製剤の応用である。前記脳部疾患は、心脳虚血性疾患、心脳動脈閉塞疾患、パーキンソン病や認知症を含む。
【００１７】
本発明の前記２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体又はその薬学的に許容される塩のドラッガブルの改善を研究するために、上記化合物に対して生体外の物理化学的性質の観察及び生体内分布の事前実験を行う。実験結果から明らかなように、溶液への治療用薬物の溶解度を大幅に向上させ、低い吸湿性を有するとともに、原薬ブチルフタリドよりも著しく高い経口バイオアベイラビリティを有し、ブチルフタリドの脳内蓄積濃度を大幅に向上させ、その脳内蓄積時間を延ばし、それによって、生産プロセスを簡略化させ、生産コストを低下させ、治療効果を向上又は投与量を低減させ、毒性や副作用を低減させ、さらに製品の有効性及び安全性を向上させる。
【００１８】
従って、本発明は２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体を提案し、前記２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体は下記一般式Ｉを有する化合物であるか、又は前記一般式Ｉを有する化合物が無機酸又は有機酸と形成する薬学的に許容される塩である。
【化１５】
2021512138.tif 000017
（前記一般式Ｉにおいて、Ｒ１は水素原子又はＣ１〜Ｃ１０のアルキルを含み、前記Ｃ１〜Ｃ１０のアルキルはアシル又はアシルオキシを含有し、
Ｘで表わされる置換基は
【化１６】
2021512138.tif 000018
であり、ここにおいてＲ２、Ｒ３、Ｒ４はそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルから選ばれ、又は、
Ｘで表わされる置換基は
【化１７】
2021512138.tif 000019
であり、ここにおいてｎは［０，１０］の範囲から選ばれる整数であり、Ｒ５は１つ又は２つの窒素原子を含有する５〜１５員複素環又は置換複素環を含む。）
【００１９】
一実施例では、前記２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体は、下記一般式ＩＩを有する化合物であるか、又は前記一般式ＩＩを有する化合物が無機酸又は有機酸と形成する薬学的に許容される塩である、ことを特徴とする。
【化１８】
2021512138.tif 000020
（前記Ｒ１はアシルを含有するエチルであり、
前記Ｘで表わされる置換基は
【化１９】
2021512138.tif 000021
であり、ここにおいてＲ２、Ｒ３、Ｒ４はそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルから選ばれ、又は、
前記Ｘで表わされる置換基は
【化２０】
2021512138.tif 000022
であり、ここにおいてｎ＝２であり、Ｒ５は、
【化２１】
2021512138.tif 000023
のうちの任意の１種を含む。）
【００２０】
一実施例では、前記２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体は下記構造の化合物であるか、又は下記構造を有する化合物が無機酸又は有機酸と形成する薬学的に許容される塩である。
【化２２】
2021512138.tif 000024
（前記Ｒ１はアシルを含有するエチルであり、
前記Ｘで表わされる置換基は
【化２３】
2021512138.tif 000025
であり、ここにおいて前記Ｒ２はエチル、前記Ｒ３はメチル、前記Ｒ４はメチルである。）
【００２１】
一実施例では、前記２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体は下記構造の化合物であるか、又は下記構造を有する化合物が無機酸又は有機酸と形成する薬学的に許容される塩である。
【化２４】
2021512138.tif 000026
（前記Ｒ１はアシルを含有するエチルであり、
前記Ｘで表わされる置換基は
【化２５】
2021512138.tif 000027
であり、ここにおいてｎ＝２であり、Ｒ５は
【化２６】
2021512138.tif 000028
である。）
【００２２】
一実施例では、前記無機酸は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸のうちの任意の１種を含み、
前記有機酸は、酢酸、トリフルオロ酢酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、フマル酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、アスコルビン酸、シュウ酸、カンファン酸、グルコン酸、グルクロン酸、パモ酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、スルファミン酸、ｐ−トルエンスルホン酸のうちの任意の１種を含む。
【００２３】
本発明の実施例は、下記構造１を有する化合物２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸を下記一般式ＩＩＩを有するアシル化試薬とアシル化反応させ、下記一般式ＩＶを有する中間化合物を取得するステップと、
前記中間化合物を下記一般式Ｖを有するエステル化試薬とエステル化反応させ、前記一般式Ｉを有する前記化合物を取得するステップとを含む、前述した２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体の製造方法をさらに提案する。
【化２７】
2021512138.tif 000029
（前記アシル化試薬では、一般式ＩＩＩのＲ１は水素原子又はＣ１〜Ｃ１０のアルキルを含み、前記Ｃ１〜Ｃ１０のアルキルはアシル又はアシルオキシを含有し、
前記エステル化試薬では、一般式ＶのＸで表わされる置換基は
【化２８】
2021512138.tif 000030
であり、ここにおいてＲ２、Ｒ３、Ｒ４はそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルから選ばれ、又は、
Ｘで表わされる置換基は
【化２９】
2021512138.tif 000031
であり、ここにおいてｎは［０，１０］の範囲から選ばれる整数であり、Ｒ５は１つ又は２つの窒素原子を含有する５〜１５員複素環又は置換複素環を含む。）
【００２４】
一実施例では、前記アシル化試薬では、一般式ＩＩＩのＲ１はアセチルであり、
前記エステル化試薬では、一般式ＶのＸで表わされる置換基は
【化３０】
2021512138.tif 000032
であり、ここにおいてＲ２、Ｒ３、Ｒ４はそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルから選ばれ、又は、
前記Ｘで表わされる置換基は
【化３１】
2021512138.tif 000033
であり、ここにおいてｎ＝２であり、Ｒ５は、
【化３２】
2021512138.tif 000034
のうちの任意の１種を含む。
【００２５】
一実施例では、前記エステル化試薬はＮ，Ｎ−ジメチルエタノールアミンであり、すなわち前記エステル化試薬では、一般式ＶのＸで表わされる置換基は
【化３３】
2021512138.tif 000035
であり、ここにおいて前記Ｒ２はエチル、前記Ｒ３はメチル、前記Ｒ４はメチルであり、
前記中間化合物を下記一般式Ｖを有するエステル化試薬とエステル化反応させ、前記一般式Ｉを有する前記化合物を取得する前記ステップは、
前記中間化合物を前記Ｎ，Ｎ−ジメチルエタノールアミンとエステル化反応させ、下記構造を有する化合物を取得するステップを含む。
【化３４】
2021512138.tif 000036
【００２６】
一実施例では、前記エステル化試薬は１−（２−ヒドロキシエチル）ピペリジンであり、すなわち前記エステル化試薬では、一般式ＶのＸで表わされる置換基は
【化３５】
2021512138.tif 000037
であり、ここにおいてｎ＝２であり、Ｒ５は
【化３６】
2021512138.tif 000038
であり、
前記中間化合物を下記一般式Ｖを有するエステル化試薬とエステル化反応させ、前記一般式Ｉを有する前記化合物を取得する前記ステップは、
前記中間化合物を前記１−（２−ヒドロキシエチル）ピペリジンとエステル化反応させ、下記構造を有する化合物を取得するステップを含む。
【化３７】
2021512138.tif 000039
【００２７】
一実施例では、前記方法は、
得られた前記一般式Ｉを有する化合物に無機酸又は有機酸を加えて反応させ、前記一般式Ｉを有する前記化合物が無機酸又は有機酸と形成する薬学的に許容される塩を取得する、塩製造ステップをさらに含む。
【００２８】
一実施例では、前記無機酸は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸のうちの任意の１種を含み、
前記有機酸は、酢酸、トリフルオロ酢酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、フマル酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、アスコルビン酸、シュウ酸、カンファン酸、グルコン酸、グルクロン酸、パモ酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、スルファミン酸、ｐ−トルエンスルホン酸のうちの任意の１種を含む。
【００２９】
本発明の実施例は、固体試薬、半固体試薬及び液体試薬のうちの任意の１種を含む、前述した２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体で製造される薬学的に許容される試薬をさらに提案する。
【００３０】
一実施例では、前記固体試薬は、一般的な錠剤、分散性錠剤、徐放性錠剤、ソフトカプセル剤、ハードカプセル剤、顆粒剤、散剤又は座薬のうちの任意の１種を含み、
前記半固体試薬は、軟膏剤、糊剤、ゲル剤のうちの任意の１種を含み、
前記液体試薬は、注射剤、滴剤、溶液剤、乳剤、懸濁剤のうちの任意の１種を含む。
【００３１】
一実施例では、前記製剤は、心脳虚血性疾患、心脳動脈閉塞疾患を予防／治療する薬物、及び抗パーキンソン病・抗認知症薬の製造に応用される。
【発明の効果】
【００３２】
従来技術に比べて、本発明の技術的効果は、突出した実質的な特徴及び顕著な進歩を有し、具体的には、以下のとおりである。
１）発明者は、革新的に２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸を有機アミン構造で修飾する。有機アミンは、ドラッガブルを著しく改善できる適切な修飾基である。まず有機アミンは、薬物が連結し得る機能基を有し、また、２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミン誘導体は生体内で分解可能であり、２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸を放出し、ブチルフタリドに転化して薬物作用を発揮し、さらに、連結方法がシンプルであり、容易に量産でき、生産コストが低く、応用の将来性が期待でき、さらに、有機アミン誘導体には顕著な毒性や副作用がない。
２）原薬ブチルフタリドに比べて、２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体又はその薬学的に許容される塩は、生体外で高い溶解度、低い吸湿性を有し、ドラッガブルが大幅に改善される。
３）原薬ブチルフタリドに比べて、２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体又はその薬学的に許容される塩は、生体内で高いバイオアベイラビリティ、高い脳内蓄積濃度、及び優れた治療効果を有し、心脳虚血性疾患、心脳動脈閉塞疾患を予防／治療する薬物、及び抗パーキンソン病・抗認知症薬の製造において応用の将来性がより期待できる。
【００３３】
本発明に開示される試験は、本発明の研究開発における多数の実験の例示的な実験に過ぎず、本発明の化合物のドラッガブル及びその安全性、有効性を説明することのみを目的とする。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１】図１はさまざまなｐＨ緩衝溶液及び純水でのＮＢＰ、ＤＢ−１又はＤＢ−２の溶解度を示し、単位はｍｇ／ｍｌである。
【図２】図２はＮＢＰ、ＤＢ−１又はＤＢ−２の平均薬物血中濃度−時間曲線を示し、ｎ＝５である。
【図３】図３は各投与時刻でのＮＢＰ、ＤＢ−１又はＤＢ−２の組織における分布状況を示し、ｎ＝５である。
【発明を実施するための形態】
【００３５】
以下、具体的な実施形態を説明することによって本発明を更に説明するが、これは本発明を制限するものではなく、当業者であれば、本発明の要旨に基づいて、様々な補正や改良を行うことができ、本発明の要旨から逸脱しない限り、いずれも本発明の範囲内に属する。
【００３６】
実施例１  ２−（１−アセトキシペンチル）安息香酸（化合物４）の合成
１．２４ｇ（６．５ｍｍｏｌ）のブチルフタリドを１０ｍＬのメタノールに溶解させ、２ｍｏｌ・Ｌ−１水酸化ナトリウム溶液を１０ｍＬ加え、０．５ｈ還流させた。減圧下でメタノールを蒸発除去し、１０ｍＬの蒸留水を加えて希釈し、−５℃に冷却し、激しく撹拌しながら、ｐＨが２〜３になるまで０．６ｍｏｌ  Ｌ−１の希塩酸で酸性化し、水層をエチルエーテルで抽出し（５０ｍＬ×３）、このエチルエーテル溶液を２００ｍＬの塩化メチレンで希釈し、２．７ｍＬ（１９．６ｍｍｏｌ）のトリエチルアミン、０．５ｇの４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）をそれぞれ加え、−５℃で１．５ｍＬ（１９．６ｍｍｏｌ）の塩化アセチルを滴下し、滴下完了後、−５℃で撹拌しながら５ｈ反応させた。１０ｍＬの水を加え、室温で０．５ｈ撹拌し、有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濾過して濃縮させてワックス状固体を得て、ノルマルヘキサンで再結晶させ、白色針状結晶を得た。
【００３７】
実施例２  化合物ＤＢ−１の合成
０．５ｇの２−（１−アセトキシペンチル）安息香酸を秤取し、５０ｍｌの塩化メチレン、０．９ｇのＨＡＴＵ、０．６ｍｌのＮ，Ｎ−ジメチルエタノールアミンを加え、一晩撹拌しながら反応させ、水で３回抽出し、塩化メチレン／メタノール＝８０：１のカラムに通して純化し、白色固体を得て、無水エタノールＨＣｌ液を加えて塩を形成し、エチルエーテルを加えて白色沈殿を形成し、濾過して、乾燥させ、塩酸塩生成物、すなわち化合物ＤＢ−１塩酸塩を得た。
1H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.88 (dd, J = 7.8, 1.3 Hz, 1H), 7.65 - 7.52 (m, 2H), 7.39 (ddd, J= 8.0, 7.0, 1.7 Hz, 1H), 6.30 (dd, J = 8.4, 4.8 Hz, 1H), 4.70 - 4.55 (m, 2H), 3.60 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 2.94 (s, 6H), 2.04 (s, 3H), 1.79 (dddd, J= 18.7, 14.2, 11.1, 5.7 Hz, 2H), 1.38 - 1.21 (m, 4H), 0.79 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
【００３８】
実施例３  化合物ＤＢ−２の合成
０．５ｇの２−（１−アセトキシペンチル）安息香酸を秤取し、５０ｍｌの塩化メチレン、０．９ｇのＨＡＴＵ、０．８ｍｌの１−（２−ヒドロキシエチル）ピペリジンを加え、一晩撹拌しながら反応させ、水で３回抽出し、塩化メチレン／メタノール＝８０：１のカラムに通して純化し、白色固体を得て、無水エタノールＨＣｌ液を加えて塩を形成し、エチルエーテルを加えて白色沈殿を形成し、濾過して、乾燥させ、塩酸塩生成物、すなわち化合物ＤＢ−２塩酸塩を得た。
【００３９】
実施例４  ブチルフタリド（ＮＢＰ）、ＤＢ−１塩酸塩又はＤＢ−２塩酸塩の、ｐＨ１．０、４．５、６．８の溶液及び水における溶解度に対する観察
１．実験方法
調製されたｐＨ１．０のＨＣｌ溶液、ｐＨ４．５の酢酸塩緩衝液、ｐＨ６．８のリン酸塩緩衝液、５ｍｌの超純水をストッパー付きの目盛付き試験管に加え、供試品（ブチルフタリド（ＮＢＰ）、ＤＢ−１塩酸塩又はＤＢ−２塩酸塩）を少量で秤取してバッチで加え、加えるごとに激しく３０秒振とうし（超音波禁止）、随時に溶解状況を観察し、濁った不溶性粒子又は液滴が見えるまで供試品を加え、最後に状況に応じて所定量の供試品を加えた。３７℃の水浴に入れて一夜振とうし、過飽和溶液とし、遠心又は濾過し（吸着に注意）、１００μＬをＨＰＬＣに入れて各供試薬物の濃度を測定した。
【００４０】
２．実験結果及び分析
さまざまなｐＨ緩衝溶液及び純水でのブチルフタリド（ＮＢＰ）、ＤＢ−１塩酸塩又はＤＢ−２塩酸塩の溶解度の測定結果は、図１に示した。ブチルフタリド（ＮＢＰ）は、単なるフタリド類であり、常温で油状液体であるので、純水での溶解度が非常に低く、その見掛溶解度が０．０７３４±０．０１２３ｍｇ／ｍｌであり、難溶性薬物であった。ｐＨによるフタリド構造への影響がそれほど大きくないことから、ブチルフタリド（ＮＢＰ）のさまざまなｐＨ値の緩衝食塩水での溶解度と、純水での溶解度には有意差がなく、その値が非常に低かった。ＤＢ−１塩酸塩の、純水における見掛溶解度が２０．０１７±２．９７８ｍｇ／ｍｌであり、ＤＢ−２塩酸塩の、純水における見掛溶解度が１１．６５３±１．８９４ｍｇ／ｍｌであり、これらはいずれも可溶性薬物であった。ＤＢ−１塩酸塩又はＤＢ−２塩酸塩は、いずれも有機アミン構造を有するものであるため、ｐＨによるその溶解度への影響が大きく、ｐＨ１．０のＨＣｌ溶液では溶解度が最も大きく、ｐＨの増加に伴って、溶解度が徐々に低下した。ＤＢ−２塩酸塩における有機アミンが環状構造であるため、ＤＢ−１塩酸塩に比べて、ＤＢ−２塩酸塩の溶解度がある程度低下した。有機アミン構造で修飾した後、ＤＢ−１塩酸塩又はＤＢ−２塩酸塩の純水における溶解度が大幅に向上し、後続の研究のために基礎を築き、また、ＤＢ−１塩酸塩又はＤＢ−２塩酸塩のドラッガブルの研究に対してより多くの可能性を提供した。
【００４１】
実施例５  ２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸ナトリウム塩（ＮＢＰ）、ＤＢ−１塩酸塩及びＤＢ−２塩酸塩の吸湿性の観察
１．実験方法
２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸ナトリウム塩、ＤＢ−１及びＤＢ−２のサンプルを３つ正確に秤取し、それぞれのサンプルを０．２ｇとして秤量瓶に入れ、それぞれのサンプル及び秤量瓶の合計質量を秤量して記録した。次に２５℃、かつ相対湿度７５％の恒湿密閉環境でそれぞれ６ｈ、１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ、９６ｈ、１２０ｈ放置した後、それらの質量を秤量し、吸湿による重量増加パーセントを算出した。吸湿による重量増加パーセントを以下の式により算出した。吸湿による重量増加パーセント（％）＝（希釈後のサンプル質量−希釈前のサンプル質量）／希釈前のサンプル質量＊１００％。
【００４２】
２．実験結果及び分析
２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸ナトリウム塩（ＮＢＰ）、ＤＢ−１塩酸塩及びＤＢ−２塩酸塩の吸湿による重量増加パーセントの測定結果は表１に示した。２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸ナトリウム塩（ＮＢＰ）は、２５℃、かつ相対湿度７５％の恒湿密閉環境では、吸湿性が高く、１２０ｈ経過後、その吸湿による重量増加パーセントが２．４９±０．２５％であった。一方、１２０ｈ経過後、ＤＢ−１塩酸塩及びＤＢ−２塩酸塩の吸湿による重量増加パーセントはそれぞれ１．０３±０．０７％及び０．７６±０．０６％であり、このことから、吸湿性が大幅に改善された。薬物の製造・貯蔵には、吸湿性は、非常に重要な性質であり、薬物の安定性に直接影響を与え、ひいては、薬物の作用効果にも影響を与えた。２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸ナトリウム塩（ＮＢＰ）に比べて、ＤＢ−１塩酸塩又はＤＢ−２塩酸塩は、吸湿性が大幅に改善し、後続の研究のために基礎を築き、ＤＢ−１塩酸塩又はＤＢ−２塩酸塩のドラッガブル研究にも、より多くの可能性を提供した。下記表１は、２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸ナトリウム塩（ＮＢＰ）、ＤＢ−１及びＤＢ−２の吸湿による重量増加パーセントの測定結果（％）を示した。
【００４３】
【表１】
2021512138.tif 000040
【００４４】
実施例６  ＤＢ−１又はＤＢ−２を含む注射剤の製造
化合物ＤＢ−１又はＤＢ−２  １ｇを精密に秤取し、適量の注射用水を加え、ｐＨを６．５〜７．２に調整し、注射用水を加えて１０００ｍｌまで定容し、活性炭を加えて熱源を吸着し、０．２２μｍのマイクロポーラスろ過膜で濾過し、無菌アンプル瓶に無菌充填して、静脈注射可能な注射剤を製造した。
【００４５】
実施例７  マウスの薬動学及び生体内分布の実験
１．動物の群分け及び投与計画
９０匹の昆明マウス（雄性、２０±２ｇ）を、１群あたり３０匹で３群にランダムに分けた。第１群はブチルフタリド群であり、６つのチーム（１チームあたり５匹）に分け、１０ｍｇ／ｋｇブチルフタリドで投与した。第２群はＤＢ−１群であり、６つのチーム（１チームあたり５匹）に分け、ブチルフタリドと等モルでＤＢ−１を投与した。第３群はＤＢ−２群であり、６つのチーム（１チームあたり５匹）に分け、ブチルフタリドと等モルでＤＢ−２を投与した。実験前に１２ｈ断食させ、水を自由に摂取させ、すべての群について、５ｍｉｎ、１５ｍｉｎ、３０ｍｉｎ、１ｈ、２ｈ及び４ｈに、眼窩から採血してから殺した直後、マウスの心臓、肝臓、脾臓、肺、腎臓、及び脳を分離し、生理食塩水で洗浄してろ紙で水分を吸い取り、重量を測定して、所定の倍数の生理食塩水を加えてホモジェナイズし、−４０℃冷蔵庫に入れて冷凍しておいた。全血を４５００ｒ／ｍｉｎで５ｍｉｎ遠心し、血漿を吸引して−４０℃の冷蔵庫に入れておいた。保存した組織ホモジェナイズを解凍した後、各組織ホモジェナイズを０．１ｍＬ取り、０．５ｍＬのＥＰチューブに入れ、０．２ｍＬのアセトニトリルタンパク質を加えて沈殿させた。５分間ボルテックス振とうを行い、１００００ｒｐｍで１０ｍｉｎ遠心し、１μＬの上清液をＬＣ−ＭＳ／ＭＳシステムに入れて各供試薬物の濃度を測定した。
【００４６】
２．実験結果及び分析
２．１  マウスの薬物動態学の測定結果
２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸ナトリウム塩（ＮＢＰ）、ＤＢ−１塩酸塩及びＤＢ−２塩酸塩の平均薬物血中濃度−時間曲線は図２に示した。結果から明らかなように、２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸ナトリウム塩（ＮＢＰ）は、マウス生体内で速く解消し、静脈投与してから５ｍｉｎ後、その薬物血中濃度が１２．２４３±１．８４７ｎｍｏｌ／ｍｌであり、投与時間が１ｈになると、０．５４７±０．２８９ｎｍｏｌ／ｍｌに急速に下がり、この解消過程は一次速度動態の特徴を示した。投与して０．０８３ｈ、０．２５ｈ、及び０．５ｈ後、ＤＢ−２塩酸塩の薬物血中濃度は最も低く、静脈投与してから５ｍｉｎ後、その薬物血中濃度が６．２９４±１．２０３ｎｍｏｌ／ｍｌであり、投与時間が１ｈになると、１．４５２±０．６５７ｎｍｏｌ／ｍｌに急速に下がるが、その代謝速度が２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸ナトリウム塩（ＮＢＰ）より遅かった。測定過程に亘って、ＤＢ−１塩酸塩の薬物血中濃度はＤＢ−２塩酸塩より高く、静脈投与してから５ｍｉｎ後、その薬物血中濃度が８．６８４±１．４８２ｎｍｏｌ／ｍｌであり、投与時間が１ｈになると、２．９８１±０．５３４ｎｍｏｌ／ｍｌに急速に下がった。２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸ナトリウム塩（ＮＢＰ）に比べて、ＤＢ−１塩酸塩及びＤＢ−２塩酸塩の生体内での解消レートが遅くなり、それは、ＤＢ−１塩酸塩及びＤＢ−２塩酸塩の溶解度、脂質−水分配係数や解離係数などの物理化学的性質による影響によるが、生体内の代謝過程にも関わると考えられた。
【００４７】
２．２  マウスの生体内分布実験の測定結果
各投与時刻での２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸ナトリウム塩（ＮＢＰ）、ＤＢ−１塩酸塩及びＤＢ−２塩酸塩の組織における分布状況は図３に示した。結果から明らかなように、２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸ナトリウム塩（ＮＢＰ）は、血液脳関門を透過して脳部に入ることができ、腎臓での濃度が高く、それは、該薬物の一部が腎臓で代謝されるためであると考えられ、他の各組織では平均に分布している。２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸ナトリウム塩（ＮＢＰ）は、生体内で速く解消し、投与してから１ｈ後、各組織での濃度が低く、４ｈになると、心臓、肺部及び脳部における含有量が低すぎるので、検出できず、それは、２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸ナトリウム塩（ＮＢＰ）の生体内の薬物動態学の実験結果と一致した。ＤＢ−１塩酸塩及びＤＢ−２塩酸塩も血液脳関門を透過して脳部に入ることができ、各検出時刻に両者の脳部における含有量が２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸ナトリウム塩（ＮＢＰ）よりも著しく高く、このことから、ＤＢ−１塩酸塩及びＤＢ−２塩酸塩は、脳標的薬として有望であることを示した。また、ＤＢ−１塩酸塩及びＤＢ−２塩酸塩の、肺部における含有量も高く、その構造に修飾された有機アミンに関わる可能性があるが、腎臓における含有量が下がるため、腎臓でのＤＢ−１塩酸塩及びＤＢ−２塩酸塩の解消レートが２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸ナトリウム塩（ＮＢＰ）より低いことを推定した。ＤＢ−１塩酸塩に比べて、ＤＢ−２塩酸塩の脳内蓄積濃度が高く、それは、その側鎖の構造に関わった。
【００４８】
２．３  標的性評価
各薬動態学パラメータをＤＡＳ３．２．５ソフトウェアで算出し、２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸ナトリウム塩（ＮＢＰ）、ＤＢ−１塩酸塩及びＤＢ−２塩酸塩の脳標的性の定量的評価には、相対摂取率（Ｒｅｂｒａｉｎ）、ピーク濃度比（Ｃｅｂｒａｉｎ）、薬物標的化指数（Ｄｒｕｇ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｉｎｄｅｘ、ＤＴＩｂｒａｉｎ）といった複数のパラメータを用い、計算式はそれぞれ以下のとおりであった。
【００４９】
Re(brain, DB-1)=(AUCbrain)DB-1/(AUCbrain)NBP
Ce DB-1=(Cmax, brain)DB-1/(Cmax, brain)NBP
DTI DB-1=(AUCbrain/AUCplasma)DB-1/(AUCbrain/ AUCplasma)NBP
Re(brain, DB-2)=(AUCbrain)DB-2/(AUCbrain)NBP
Ce DB-2=(Cmax, brain)DB-2/(Cmax, brain)NBP
DTI DB-2=(AUCbrain/AUCplasma)DB-2/(AUCbrain/ AUCplasma)NBP
【００５０】
Ｒｅ（ｂｒａｉｎ、ＤＢ−１）、Ｒｅ（ｂｒａｉｎ、ＤＢ−２）は、薬物に脳標的性を有するか否かを評価することに用いられ、１より大きいと、薬物は脳標的性を有することを示し、Ｒｅが大きければ大きいほど、脳標的性の効果が優れ、１以下であると、脳標的性がないことを示し、Ｃｅ  ＤＢ−１、Ｃｅ  ＤＢ−２の値は、薬物の脳での標的化分布の効果を示し、Ｃｅ値が大きければ大きいほど、脳での標的化分布の効果が優れ、ＤＴＩは、薬物標的化の有効性を評価する最適な指標であった。各パラメータの算出結果を表２に示した。ＤＢ−１については、脳の相対摂取率Ｒｅは３．６４、ピーク濃度比Ｃｅは２．９３、薬物標的化指数ＤＴＩは１２．４５であった。ＤＢ−２については、脳の相対摂取率Ｒｅは４．２７、ピーク濃度比Ｃｅは３．１９、薬物標的化指数ＤＴＩは１８．０８であった。この結果から分かるように、２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸ナトリウム塩（ＮＢＰ）は、有機アミンで修飾することにより、血漿における分布が減少し、脳における分布が著しく増加し、標的性が顕著であった（ｐ＜０．０５）。下記表２は、２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸ナトリウム塩（ＮＢＰ）、ＤＢ−１及びＤＢ−２の脳標的化パラメータの計算結果（％）を示した。
【００５１】
【表２】
2021512138.tif 000041
【００５２】
３．結論
２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸ナトリウム塩（ＮＢＰ）、ＤＢ−１及びＤＢ−２のマウスの生体内で薬物動態学及び生体内分布実験の研究結果から明らかなように、２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸ナトリウム塩（ＮＢＰ）を有機アミンで修飾することにより、ＤＢ−１及びＤＢ−２化合物の、生体内における代謝動態学及び組織分布を変えることができ、ＤＢ−１及びＤＢ−２化合物の脳における分布濃度を著しく増加させ、脳標的化薬物送達の目的を実現した。ＤＢ−１及びＤＢ−２化合物の脳標的性は、ＤＢ−１塩酸塩及びＤＢ−２塩酸塩の溶解度、脂質−水分配係数や解離係数などの物理化学的性質による影響による可能性があるが、生体内の代謝過程にも関わった。
【００５３】
本明細書に記載の「一実施例」、「実施例」又は「１つ又は複数の実施例」とは、実施例を参照して説明する特定の特徴、構造又は特性が、本発明の少なくとも１つの実施例に含まれることを意味する。さらに、ここで、「一実施例では」という表現が表す例は、必ずしもすべてが同じ実施例を指すとは限らない。
【００５４】
本明細書では、大量の詳細を説明した。しかしながら、本発明の実施例は、これらの詳細がなくても、実施することができる。いくつかの実例では、本明細書に対する理解が不明瞭にならないように、公知の方法、構造及び技術が詳細に示されていない。
【００５５】
なお、以上の実施例は、本発明の技術案を説明するためのものに過ぎず、それを制限するものではなく、前述した実施例を参照しながら、本発明について詳細に説明したが、当業者であれば、前述した各実施例に記載の技術案を補正したり、技術的特徴の一部に対して等同置換を行ったりすることができ、これらの補正や置換により、対応する技術案の主旨が本発明の各実施例の技術案の精神及び範囲から逸脱することはない。
【図１】
2021512138.tif 000066
【図２】
2021512138.tif 000067
【図３】
2021512138.tif 000068
【手続補正書】
【提出日】令和2年9月18日(2020.9.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
上記目的を達成させるために、本発明は、以下の技術案を用いる。
本発明は、一般式Ｉの有機アミンエステル誘導体薬物又はその薬学的に許容される塩を提供し、
【化１】
2021512138.tif 000069
Ｒ１は水素原子又はアシル又はアシルオキシを含有するＣ１〜Ｃ１０のアルキルを表し、Ｘは
【化２】
2021512138.tif 000070
であり、Ｒ２は、Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン、又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキレンであり、Ｒ３、Ｒ４はそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルから選ばれ、又はＸは
【化３】
2021512138.tif 000071
であり、ここにおいてｎ＝０〜１０であり、Ｒ５は１〜２個のＮ原子を含有する５〜１５員複素環又は置換複素環である。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
さらに、本発明は、前記２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体又はその薬学的に許容される塩において、Ｘは
【化４】
2021512138.tif 000072
であり、Ｒ２は、Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン、又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキレンであり、Ｒ３、Ｒ４はそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルから選ばれ、又はＸは
【化５】
2021512138.tif 000073
であり、ここにおいてｎ＝２であり、Ｒ６は
【化６】
2021512138.tif 000074
から選ばれる、ことを特徴とする前記２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体又はその薬学的に許容される塩を提供する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
またさらに、本発明は、前記２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体薬物の製造方法において、まずブチルフタリドを開環させ、次に塩化アセチルと反応させ、最後にＸ−ＯＨとアシル化させてエステルとし、反応式は以下のとおりであり、
【化７】
2021512138.tif 000075
（式中、Ｘは
【化８】
2021512138.tif 000076
であり、Ｒ２は、Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン、又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキレンであり、Ｒ３、Ｒ４はそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルから選ばれ、又はＸは
【化９】
2021512138.tif 000077
であり、ここにおいてｎ＝２であり、
Ｒ６は
【化１０】
2021512138.tif 000078
から選ばれる。）
またさらに、ブチルフタリドをアルカリ性条件において開環させ、次に酸性化、アセチル化を順次に行い、それぞれＮ,Ｎ−ジメチルエタノールアミン及び１−（２−ヒドロキシエチル）ピペリジンと縮合してエステルとし、化合物ＤＢ−１及びＤＢ−２を得ることを特徴とする前記２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体薬物の製造方法を提供する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
従って、本発明は２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体を提案し、前記２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体は下記一般式Ｉを有する化合物であるか、又は前記一般式Ｉを有する化合物が無機酸又は有機酸と形成する薬学的に許容される塩である。
【化１５】
2021512138.tif 000079
（前記一般式Ｉにおいて、Ｒ１は水素原子又はＣ１〜Ｃ１０のアルキルを含み、前記Ｃ１〜Ｃ１０のアルキルはアシル又はアシルオキシを含有し、
Ｘで表わされる置換基は
【化１６】
2021512138.tif 000080
であり、ここにおいてＲ２は、Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン、又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキレンであり、Ｒ３、Ｒ４はそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルから選ばれ、又は、
Ｘで表わされる置換基は
【化１７】
2021512138.tif 000081
であり、ここにおいてｎは［０,１０］の範囲から選ばれる整数であり、Ｒ５は１つ又は２つの窒素原子を含有する５〜１５員複素環又は置換複素環を含む。）
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
一実施例では、前記２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体は、下記一般式IIを有する化合物であるか、又は前記一般式IIを有する化合物が無機酸又は有機酸と形成する薬学的に許容される塩である、ことを特徴とする。
【化１８】
2021512138.tif 000082
（前記Ｒ１はアシルを含有するエチルであり、
前記Ｘで表わされる置換基は
【化１９】
2021512138.tif 000083
であり、ここにおいてＲ２は、Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン、又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキレンであり、Ｒ３、Ｒ４はそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルから選ばれ、又は、
前記Ｘで表わされる置換基は
【化２０】
2021512138.tif 000084
であり、ここにおいてｎ＝２であり、Ｒ５は、
【化２１】
2021512138.tif 000085
のうちの任意の１種を含む。）
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
一実施例では、前記２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体は下記構造の化合物であるか、又は下記構造を有する化合物が無機酸又は有機酸と形成する薬学的に許容される塩である。
【化２２】
2021512138.tif 000086
（前記Ｒ１はアシルを含有するエチルであり、
前記Ｘで表わされる置換基は
【化２３】
2021512138.tif 000087
であり、ここにおいて前記Ｒ２はエチレン基、前記Ｒ３はメチル、前記Ｒ４はメチルである。）
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２３】
本発明の実施例は、下記構造１を有する化合物２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸を下記一般式IIIを有するアシル化試薬とアシル化反応させ、下記一般式IVを有する中間化合物を取得するステップと、
前記中間化合物を下記一般式Vを有するエステル化試薬とエステル化反応させ、前記一般式Ｉを有する前記化合物を取得するステップとを含む、前述した２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体の製造方法をさらに提案する。
【化２７】
2021512138.tif 000088
（前記アシル化試薬では、一般式IIIのＲ１は水素原子又はＣ１〜Ｃ１０のアルキルを含み、前記Ｃ１〜Ｃ１０のアルキルはアシル又はアシルオキシを含有し、
前記エステル化試薬では、一般式VのＸで表わされる置換基は
【化２８】
2021512138.tif 000089
であり、ここにおいてＲ２は、Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン、又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキレンであり、Ｒ３、Ｒ４はそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルから選ばれ、又は、
Ｘで表わされる置換基は
【化２９】
2021512138.tif 000090
であり、ここにおいてｎは［０,１０］の範囲から選ばれる整数であり、Ｒ５は１つ又は２つの窒素原子を含有する５〜１５員複素環又は置換複素環を含む。）
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
一実施例では、前記アシル化試薬では、一般式IIIのＲ１はアセチルであり、
前記エステル化試薬では、一般式VのＸで表わされる置換基は
【化３０】
2021512138.tif 000091
であり、ここにおいてＲ２は、Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン、又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキレンであり、Ｒ３、Ｒ４はそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルから選ばれ、又は、
前記Ｘで表わされる置換基は
【化３１】
2021512138.tif 000092
であり、ここにおいてｎ＝２であり、Ｒ５は、
【化３２】
2021512138.tif 000093
のうちの任意の１種を含む。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
一実施例では、前記エステル化試薬はＮ,Ｎ−ジメチルエタノールアミンであり、すなわち前記エステル化試薬では、一般式VのＸで表わされる置換基は
【化３３】
2021512138.tif 000094
であり、ここにおいて前記Ｒ２はエチレン基、前記Ｒ３はメチル、前記Ｒ４はメチルであり、
前記中間化合物を下記一般式Vを有するエステル化試薬とエステル化反応させ、前記一般式Ｉを有する前記化合物を取得する前記ステップは、
前記中間化合物を前記Ｎ,Ｎ−ジメチルエタノールアミンとエステル化反応させ、下記構造を有する化合物を取得するステップを含む。
【化３４】
2021512138.tif 000095
【手続補正１０】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式Ｉを有する化合物であるか、又は前記一般式Ｉを有する化合物が無機酸又は有機酸と形成する薬学的に許容される塩である、ことを特徴とする２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体。
【化３８】
2021512138.tif 000096
（前記一般式Ｉにおいて、Ｒ１は水素原子又はＣ１〜Ｃ１０のアルキルを含み、前記Ｃ１〜Ｃ１０のアルキルはアシル又はアシルオキシを含有し、
Ｘで表わされる置換基は
【化３９】
2021512138.tif 000097
であり、ここにおいてＲ２はＣ１〜Ｃ１０アルキレン、又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキレンであり、Ｒ３、Ｒ４はそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルから選ばれ、又は、
Ｘで表わされる置換基は
【化４０】
2021512138.tif 000098
であり、ここにおいてｎは［０,１０］の範囲から選ばれる整数であり、Ｒ５は１つ又は２つの窒素原子を含有する５〜１５員複素環又は置換複素環を含む。）
【請求項２】
下記一般式IIを有する化合物であるか、又は前記一般式IIを有する化合物が無機酸又は有機酸と形成する薬学的に許容される塩である、ことを特徴とする請求項１に記載の２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体。
【化４１】
2021512138.tif 000099
前記Ｒ１はアシルを含有するエチルであり、
前記Ｘで表わされる置換基は
【化４２】
2021512138.tif 000100
であり、ここにおいてＲ２はＣ１〜Ｃ１０アルキレン、又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキレンであり、Ｒ３、Ｒ４はそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルから選ばれ、又は、
前記Ｘで表わされる置換基は
【化４３】
2021512138.tif 000101
であり、ここにおいてｎ＝２であり、Ｒ５は
【化４４】
2021512138.tif 000102
のうちの任意の１種を含む。）
【請求項３】
下記構造の化合物であるか、又は下記構造を有する化合物が無機酸又は有機酸と形成する薬学的に許容される塩である、ことを特徴とする請求項２に記載の２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体。
【化４５】
2021512138.tif 000103
（前記Ｒ１はアシルを含有するエチルであり、
前記Ｘで表わされる置換基は
【化４６】
2021512138.tif 000104
であり、ここにおいて前記Ｒ２はエチレン基、前記Ｒ３はメチル、前記Ｒ４はメチルである。）
【請求項４】
下記構造の化合物であるか、又は下記構造を有する化合物が無機酸又は有機酸と形成する薬学的に許容される塩である、ことを特徴とする請求項２に記載の２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体。
【化４７】
2021512138.tif 000105
（前記Ｒ１はアシルを含有するエチルであり、
前記Ｘで表わされる置換基は
【化４８】
2021512138.tif 000106
であり、ここにおいてｎ＝２であり、Ｒ５は
【化４９】
2021512138.tif 000107
である。）
【請求項５】
前記無機酸は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸のうちの任意の１種を含み、
前記有機酸は、酢酸、トリフルオロ酢酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、フマル酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、アスコルビン酸、シュウ酸、カンファン酸、グルコン酸、グルクロン酸、パモ酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、スルファミン酸、ｐ−トルエンスルホン酸のうちの任意の１種を含む、ことを特徴とする請求項１に記載の２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体。
【請求項６】
前記一般式Ｉを有する前記化合物の製造方法は、
下記構造１を有する化合物２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸を下記一般式IIIを有するアシル化試薬とアシル化反応させ、下記一般式IVを有する中間化合物を取得するステップと、
前記中間化合物を下記一般式Vを有するエステル化試薬とエステル化反応させ、前記一般式Ｉを有する前記化合物を取得するステップとを含む、ことを特徴とする請求項１〜５のいずれか１項に記載の２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体の製造方法。
【化５０】
2021512138.tif 000108
（前記アシル化試薬では、一般式IIIのＲ１は水素原子又はＣ１〜Ｃ１０のアルキルを含み、前記Ｃ１〜Ｃ１０のアルキルはアシル又はアシルオキシを含有し、
前記エステル化試薬では、一般式VのＸで表わされる置換基は
【化５１】
2021512138.tif 000109
であり、ここにおいてＲ２はＣ１〜Ｃ１０アルキレン、又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキレンであり、Ｒ３、Ｒ４はそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルから選ばれ、又は、
Ｘで表わされる置換基は
【化５２】
2021512138.tif 000110
であり、ここにおいてｎは［０,１０］の範囲から選ばれる整数であり、Ｒ５は１つ又は２つの窒素原子を含有する５〜１５員複素環又は置換複素環を含む。）
【請求項７】
前記アシル化試薬では、一般式IIIのＲ１はアセチルであり、
前記エステル化試薬では、一般式VのＸで表わされる置換基は
【化５３】
2021512138.tif 000111
であり、ここにおいてＲ２はＣ１〜Ｃ１０アルキレン、又はＣ３〜Ｃ７シクロアルキレンであり、Ｒ３、Ｒ４はそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルから選ばれ、又は、
前記Ｘで表わされる置換基は
【化５４】
2021512138.tif 000112
であり、ここにおいてｎ＝２であり、Ｒ５は、
【化５５】
2021512138.tif 000113
のうちの任意の１種を含む、ことを特徴とする請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記エステル化試薬はＮ,Ｎ−ジメチルエタノールアミンであり、すなわち前記エステル化試薬では、一般式VのＸで表わされる置換基は
【化５６】
2021512138.tif 000114
であり、ここにおいて前記Ｒ２はエチレン基、前記Ｒ３はメチル、前記Ｒ４はメチルであり、
前記中間化合物を下記一般式Vを有するエステル化試薬とエステル化反応させ、前記一般式Ｉを有する前記化合物を取得する前記ステップは、
前記中間化合物を前記Ｎ,Ｎ−ジメチルエタノールアミンとエステル化反応させ、下記構造を有する化合物を取得するステップを含む、ことを特徴とする請求項７に記載の製造方法。
【化５７】
2021512138.tif 000115
【請求項９】
前記エステル化試薬は１−（２−ヒドロキシエチル）ピペリジンであり、すなわち前記エステル化試薬では、一般式VのＸで表わされる置換基は
【化５８】
2021512138.tif 000116
であり、ここにおいてｎ＝２であり、Ｒ５は
【化５９】
2021512138.tif 000117
であり、
前記中間化合物を下記一般式Vを有するエステル化試薬とエステル化反応させ、前記一般式Ｉを有する前記化合物を取得する前記ステップは、
前記中間化合物を前記１−（２−ヒドロキシエチル）ピペリジンとエステル化反応させ、下記構造を有する化合物を取得するステップを含む、ことを特徴とする請求項７に記載の製造方法。
【化６０】
2021512138.tif 000118
【請求項１０】
得られた前記一般式Ｉを有する化合物に無機酸又は有機酸を加えて反応させ、前記一般式Ｉを有する前記化合物が無機酸又は有機酸と形成する薬学的に許容される塩を取得する、塩を製造するステップをさらに含む、ことを特徴とする請求項６に記載の製造方法。
【請求項１１】
前記無機酸は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸のうちの任意の１種を含み、
前記有機酸は、酢酸、トリフルオロ酢酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、フマル酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、アスコルビン酸、シュウ酸、カンファン酸、グルコン酸、グルクロン酸、パモ酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、スルファミン酸、ｐ−トルエンスルホン酸のうちの任意の１種を含む、ことを特徴とする請求項１０に記載の製造方法。
【請求項１２】
固体試薬、半固体試薬及び液体試薬のうちの任意の１種を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の２−（αヒドロキシペンチル）安息香酸の有機アミンエステル誘導体で製造される薬学的に許容される試薬。
【請求項１３】
前記固体試薬は、一般的な錠剤、分散性錠剤、徐放性錠剤、ソフトカプセル剤、ハードカプセル剤、顆粒剤、散剤又は座薬のうちの任意の１種を含み、
前記半固体試薬は、軟膏剤、糊剤、ゲル剤のうちの任意の１種を含み、
前記液体試薬は、注射剤、滴剤、溶液剤、乳剤、懸濁剤のうちの任意の１種を含む、ことを特徴とする請求項１２に記載の試薬。
【請求項１４】
心脳虚血性疾患、心脳動脈閉塞疾患を予防／治療する薬物及び抗パーキンソン病・抗認知症薬の製造に応用される、ことを特徴とする請求項１３に記載の試薬。
【国際調査報告】
2021512138.tif 000119
2021512138.tif 000120
2021512138.tif 000121
2021512138.tif 000122