(57)【要約】  本発明は、レチノイドおよびシリブム・マリアヌム（Ｓｉｌｙｂｕｍ  ｍａｒｉａｎｕｍ）（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の抽出物の組合せ、このような組合せを含む皮膚科および皮膚化粧品組成物、ならびに医薬品としてのこれらの使用、特にざ瘡、脂漏症、脂漏性皮膚炎および／または酒さの処置におけるこれらの使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
レチノイドおよびシリブム・マリアヌム（Ｓｉｌｙｂｕｍ  ｍａｒｉａｎｕｍ）（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の抽出物を含んでなる組合せであって、
前記シリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の抽出物が、乾燥抽出物の重量を基準として０．２重量％未満のシリマリンを含んでなるシリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の痩果の抽出物であることを特徴とする、組合せ。
【請求項２】
前記シリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の抽出物が、乾燥抽出物の重量を基準として０．１重量％未満のシリマリンを含んでなるシリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の痩果の抽出物であることを特徴とする、請求項１に記載の組合せ。
【請求項３】
前記シリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の抽出物が、乾燥抽出物の重量を基準として０．５重量％〜２．５重量％、特に１．０重量％〜２．０重量％、例えば約１．５重量％のβ−シトステロールを、有利には０．４未満、特に０．０７未満のシリマリン／β−シトステロールの重量比で、乾燥抽出物の重量を基準として特に２〜７重量％、特に３〜６重量％、例えば、３〜５重量％のステロールとともに含むことを特徴とする、請求項１または２に記載の組合せ。
【請求項４】
前記シリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の抽出物が、乾燥抽出物の重量を基準として３重量％〜１５重量％、特に４重量％〜１０重量％、特に４重量％〜６重量％、例えば約５重量％の遊離リノール酸を、乾燥抽出物の重量を基準として特に１０重量％〜５０重量％、特に１０重量％〜３０重量％、特に１５重量％〜２５重量％の遊離脂肪酸とともに含むことを特徴とする、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項５】
前記シリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の抽出物が、乾燥抽出物の重量を基準として０．０１重量％〜０．５重量％、特に０．０５重量％〜０．２重量％、例えば約０．１重量％のトコフェロールを、有利には１未満、特に０．１未満のシリマリン／トコフェロールの重量比で含むことを特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項６】
前記レチノイドが、様々な異性体の形態のレチノール、レチンアルデヒドおよびレチノイン酸から選択されることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項７】
前記レチノイドが、レチンアルデヒドであることを特徴とする、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項８】
前記レチノイドが、レチンアルデヒドであり、前記シリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の抽出物が、乾燥抽出物の重量を基準として０．２重量％未満、好ましくは０．１重量％未満のシリマリンを含んでなるシリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の痩果の抽出物であることを特徴とする、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項９】
医薬品として使用するための、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項１０】
ざ瘡、脂漏症、酒さおよび／または脂漏性皮膚炎の処置において使用するための、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項１１】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の少なくとも１つの組合せを、少なくとも１種の皮膚科的または皮膚化粧品的に許容可能な賦形剤とともに含んでなる皮膚科または皮膚化粧品組成物。
【請求項１２】
前記組成物が、前記組成物の総重量を基準として０．０１〜１０重量％、好ましくは０．０５〜５重量％のシリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の抽出物を、乾燥抽出物の重量基準で含んでなることを特徴とする、請求項１１に記載の皮膚科または皮膚化粧品組成物。
【請求項１３】
前記組成物が、前記組成物の総重量を基準として０．００１〜５重量％、好ましくは０．０１〜１重量％のレチノイド含んでなることを特徴とする、請求項１１または１２に記載の皮膚科または皮膚化粧品組成物。
【請求項１４】
局所適用、特に皮膚への局所適用を目的とすることを特徴とする、請求項１１〜１３のいずれか一項に記載の皮膚科または皮膚化粧品組成物。
【請求項１５】
ざ瘡、脂漏症、酒さおよび／または脂漏性皮膚炎の処置において使用するための、請求項１１〜１４のいずれか一項に記載の皮膚科または皮膚化粧品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、レチノイドおよびシリブム・マリアヌム（Ｓｉｌｙｂｕｍ  ｍａｒｉａｎｕｍ）（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の抽出物の組合せ、ならびに、このような組合せを含む、皮膚科または皮膚化粧品組成物（dermatological or dermocosmetic composition）、好ましくは、局所用組成物、特にざ瘡、脂漏症、酒さおよび／または脂漏性皮膚炎の処置（treatment）のための、皮膚科または皮膚化粧品組成物、好ましくは、局所用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
学名シリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．は、高さ１メートル超に達することができる頑強な茎を有する一年生または二年生のキク科ファミリーに属する植物を表す。その大きな光沢があり托葉のない互生葉は、白い斑があり、葉端部に硬くとがった棘を有する。花は頂生頭状花に群化し、しばしば単生である。これらは、非常に鋭い先端を有する大きな有棘苞葉によって囲まれている。５葉の管状花は赤紫色である。果実は、光沢のある黒色またはイエローマーブルの痩果であり、基部において歯状剛毛の輪が頂点にある。この植物の通俗名は、ミルクシスルである。
【０００３】
シリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の痩果（しばしば誤って、文献では、種子と呼ばれている）およびその製剤は、伝統的に、肝性起源を原因とする消化機能障害の対症療法において経口的に使用される。
【０００４】
文献では、シリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の痩果の主要活性成分は、シリマリン、いくつかのフラボノリグナン（主にシリビン、イソシリビン、シリクリスチンおよびシリジアニン）の混合物である。痩果は、３重量％以下のシリマリンを含む。痩果は、油（２０〜３０重量％）、粘液およびタンパク質も含む。
【０００５】
加えて、ビタミンＡ欠乏症は、ざ瘡患者の皮膚において見られた（Roellman, O., and Vahlquist, A. (1985)。皮膚および血清中のビタミンＡ  −  尋常性ざ瘡、アトピー性皮膚炎、尋常性魚鱗癬および扁平苔癬の研究。Br. J. Dermatol. 113(4), 405-413) およびその代謝における欠乏症は毛嚢脂腺上皮において記載されている（Everts, H. B. (2012)。毛嚢および皮脂腺における内因性レチノイド。Biochim. Biophys. Acta 1821(1), 222-229）。局所適用におけるレチンアルデヒドは、ヒト皮膚におけるビタミンＡの異なる成分の送達を可能とする（Sorg, O., and Saurat, J. H. (2014)。皮膚老化における局所レチノイド：太陽光誘発上皮ビタミンＡ欠乏症に関連する注目最新情報。Dermatology 228(4), 314-325）、ざ瘡になり易い皮膚の予防および治療において既に使用されている特性。
【発明の概要】
【０００６】
これに関連して、本出願者は、驚くべきことに、シリブム・マリアヌム（Ｓｉｌｙｂｕｍ  ｍａｒｉａｎｕｍ）の抽出物との組合せで、レチンアルデヒド（レチナールとも呼ぶ）などのレチノイドは、ざ瘡、脂漏症、酒さまたは脂漏性皮膚炎の処置のための向上した特性を示すことを実証した。特に、得られた研究結果は、皮膚細胞によるレチノイド酸の産生におけるシリブム・マリアヌムの抽出物と関連するレチンアルデヒドの相乗的役割を実証した。
【０００７】
したがって、本発明の主題は、レチノイドおよびシリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の抽出物を含んでなる組合せに関する。
【０００８】
本発明の更なる主題は、医薬品として使用するための、レチノイドおよびシリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の抽出物を含んでなる組合せに関する。
【０００９】
本発明の更なる主題は、ざ瘡、脂漏症、酒さおよび／または脂漏性皮膚炎の処置において使用するための、レチノイドおよびシリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の抽出物を含んでなる組合せに関する。
【００１０】
本発明の更なる主題は、ざ瘡、脂漏症、酒さおよび／または脂漏性皮膚炎の処置のための医薬品を製造するための、レチノイドおよびシリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の抽出物を含んでなる組合せの使用に関する。
【００１１】
本発明の更なる主題は、ざ瘡、脂漏症、酒さおよび／または脂漏性皮膚炎の処置における、レチノイドおよびシリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の抽出物を含んでなる組合せの使用に関する。
【００１２】
本発明の更なる主題は、レチノイドおよびシリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の抽出物を含んでなる組合せの有効量を、それを必要とするヒトに投与することを含む、ざ瘡、脂漏症、酒さおよび／または脂漏性皮膚炎の処置方法に関する。
【００１３】
本発明の更なる主題は、レチノイドおよびシリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の抽出物を、少なくとも１種の皮膚科的または皮膚化粧品的に許容可能な賦形剤（dermatologically or dermocosmetically acceptable excipient）とともに含んでなる皮膚科または皮膚化粧品組成物、好ましくは局所用組成物に関する。
【００１４】
本発明の更なる主題は、ざ瘡、脂漏症、酒さおよび／または脂漏性皮膚炎の処置において使用するための、レチノイドおよびシリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の抽出物を、少なくとも１種の皮膚科的または皮膚化粧品的に許容可能な賦形剤とともに含んでなる皮膚科または皮膚化粧品組成物、好ましくは局所用組成物に関する。
【００１５】
本発明の更なる主題は、ざ瘡、脂漏症、酒さおよび／または脂漏性皮膚炎の処置における、レチノイドおよびシリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の抽出物を、少なくとも１種の皮膚科的または皮膚化粧品的に許容可能な賦形剤とともに含んでなる皮膚科または皮膚化粧品組成物、好ましくは局所用組成物の使用に関する。
【００１６】
本発明の更なる主題は、レチノイドおよびシリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の抽出物を、少なくとも１種の皮膚科的または皮膚化粧品的に許容可能な賦形剤とともに含んでなる皮膚科または皮膚化粧品組成物の有効量を、それを必要とするヒトに投与すること、好ましくは局所投与することを含む、ざ瘡、脂漏症、酒さおよび／または脂漏性皮膚炎の処置方法に関する。
【００１７】
本発明の更なる主題は、
（ｉ）レチノイドと、
（ｉｉ）シリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の抽出物と
を含んでなる、同時、個別または逐次使用のための組合せ製品としての皮膚科または皮膚化粧品組成物、好ましくは局所用組成物に関する。
【００１８】
本発明の更なる主題は、
（ｉ）レチノイドと、
（ｉｉ）シリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の抽出物と
を含んでなる、ざ瘡、脂漏症、酒さおよび／または脂漏性皮膚炎の処置における同時、個別または逐次使用のための組合せ製品としての皮膚科または皮膚化粧品組成物、好ましくは局所用組成物に関する。
【００１９】
本発明の更なる主題は、ざ瘡、脂漏症、酒さおよび／または脂漏性皮膚炎の処置における、レチノイドおよびシリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の抽出物を含んでなる組合せの同時、個別または逐次使用に関する。
【００２０】
本発明の更なる主題は、レチノイドの有効量およびシリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の抽出物の有効量を、それを必要とするヒトに同時、個別または逐次投与することを含む、ざ瘡、脂漏症、酒さおよび／または脂漏性皮膚炎の処置方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】図１は、プロトコール１に従って得られたシリブム・マリアヌムの抽出物ＩのＵＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図２】図２Ａ、２Ｂおよび２Ｃは、それぞれ、プロトコール２に従って得られたシリブム・マリアヌムの抽出物Ｍ、抽出物Ｅおよび抽出物ＩのＵＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図３】図３Ａ、３Ｂおよび３Ｃは、それぞれ、プロトコール３に従って得られたシリブム・マリアヌムの抽出物Ｅ、抽出物Ｍおよび抽出物ＩのＧＣ／ＭＳクロマトグラムの１０〜２２分ゾーン（脂肪酸ゾーンに相当する）を示す。
【図４】図４Ａ、４Ｂおよび４Ｃは、それぞれ、プロトコール３に従って得られたシリブム・マリアヌムの抽出物Ｅ、抽出物Ｍおよび抽出物ＩのＧＣ／ＭＳクロマトグラムの２２〜２８分ゾーン（ステロールゾーンに相当する）を示す。
【図５】図５は、受けた処置、すなわち、媒体（ＥｔＯＨ）単独、２μＭ  レチンアルデヒド（２μＭ  ＲＡＬ）、５０μｇ／ｍＬ  シリブム・マリアヌム抽出物（５０μｇ／ｍＬ  ＳＹＬ）または２μＭ  レチンアルデヒドと５０μｇ／ｍＬ  シリブム・マリアヌム抽出物との組合せ（ＲＡＬ＋ＳＹＬ）の関数としての、皮膚細胞によって産生された全レチノイドの量を示す。
【図６】図６は、受けた処置、すなわち、媒体（ＥｔＯＨ）単独、２μＭ  レチノール（２μＭ  ＲＯＬ）、５０μｇ／ｍＬ  シリブム・マリアヌム抽出物（５０μｇ／ｍＬ  ＳＹＬ）または２μＭ  レチノールと５０μｇ／ｍＬ  シリブム・マリアヌム抽出物との組合せ（ＲＯＬ＋ＳＹＬ）の関数としての、皮膚細胞によって産生された全レチノイドの量を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
定義
本明細書において、植物であるシリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．は、シリブム・マリアヌムと略記される場合があり、レチンアルデヒドは、ＲＡＬと略記される場合がある。
【００２３】
本発明の目的のため、「脂肪酸」は、１６〜２２個の炭素原子（カルボン酸官能基の炭素原子を含む）を含んでなるカルボン酸Ｒ１ＣＯ２Ｈであって、鎖Ｒ１が直鎖状または分岐鎖状の飽和またはＣ＝Ｃ二重結合を含んでなる炭化水素鎖であるカルボン酸Ｒ１ＣＯ２Ｈを意味する。
【００２４】
本発明の目的のため、「遊離」脂肪酸（リノール酸を含む）は、他の分子と結合していない脂肪酸（例えば、グリセロールもしくはその誘導体と結合するとグリセリドとなる脂肪酸、またはアルコールと結合すると脂肪酸エステルとなる脂肪酸）を意味する。
【００２５】
本発明の目的のため、「Ｃ１〜Ｃ３アルコール」は、アルコールＲ２ＯＨであって、鎖Ｒ２が１〜３個の炭素原子を含んでなる直鎖状または分岐鎖状の飽和炭化水素鎖であるアルコールＲ２ＯＨを意味する。それは、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノールまたはイソプロパノール、特にメタノール、エタノールまたはイソプロパノールであってよい。好ましくは、イソプロパノールである。
【００２６】
本発明において、「皮膚科的または皮膚化粧品的に許容可能」は、一般的に安全、有害性でなく、生物学的にもその他でも望ましくなくはなく、かつ、処置のための使用または化粧品としての使用、特に局所適用による使用に許容可能な皮膚科または皮膚化粧品組成物の製造に有用であることを意味する。
【００２７】
本明細書において、「約」は、目的の値が、記載された値より１０％、特に５％、もしくは１％低いまたは高いことを意味する。
【００２８】
本発明の目的のため、「乾燥抽出物」は、抽出溶媒を含まない、または極めて微量（insignificant trace amount）の抽出溶媒しか含まない抽出物を意味する。したがって、このような乾燥抽出物は、シリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．由来の物質しか含まない。それは、極めて微量の抽出溶媒を含んでもよい。
【００２９】
本発明の目的のため、「イソシリビン」は、２種のジアステレオマーであるイソシリビンＡおよびイソシリビンＢを意味する。
【００３０】
当技術分野において「シリビニン」とも呼ばれる用語「シリビン」は、本発明において、４種のジアステレオマーであるシリビンＡ、シリビンＢ、２，３−ｃｉｓ−シリビンＡおよび２，３−ｃｉｓ−シリビンＢを意味する。
【００３１】
本発明の目的のため、「シリクリスチン」は、２種のジアステレオマーであるシリクリスチンＡおよびシリクリスチンＢを意味する。
【００３２】
本発明の目的のため、「シリマリン」は、次の４種のフラボノリグナン：シリビン、イソシリビン、シリクリスチンおよびシリジアニンの混合物を主に（少なくとも９５重量％）含んでなるシリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の痩果の精製抽出物を意味する（Kuki et al. 2012）。したがって、０．２重量％未満のシリマリン含有率は、シリマリン成分の総量が０．２重量％未満であることを意味する。このような含有率は、特に高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）または超高速液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）により、全シリマリン成分に対応するピーク総面積を算出することによって決定することができ、その際、特に、参照シリマリンサンプル（例えば、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ社から入手することができる）をこれらのピーク位置を判定するために使用することができる。
【００３３】
本発明の目的のため、「シリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の痩果由来油と非混和性の有機溶媒」は、シリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の痩果から得られる油と混合することができない、または、部分的にしか混合することができない有機溶媒であって、有機溶媒とシリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の痩果由来油との混合物が、少なくとも２つの別々の相を観察することができる不均一混合物を与える有機溶媒を意味する。
【００３４】
本発明の目的のため、「ステロール」は、３位の炭素（carbon 3）が水酸基ＯＨを有するステラン核を有する分子を意味し、該ステラン核は、以下の構造を有する。
【００３５】
【化１】
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【００３６】
本発明の目的のため、「トコフェロール」は、α−トコフェロール、β−トコフェロール、γ−トコフェロールおよびδ−トコフェロールを意味する。
【００３７】
レチノイド
本発明との関連で使用されるレチノイドは、様々な異性体（特に、全てのｔｒａｎｓ、１３−ｃｉｓおよび９−ｃｉｓ）の形態のレチノール、レチンアルデヒドおよびレチノイン酸から選択され得る。有利には、レチノイドは、レチノールまたはレチンアルデヒドである。好ましくは、レチノイドは、レチンアルデヒドである。
【００３８】
シリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の抽出物
本発明との関連で使用される抽出物は、シリブム・マリアヌムの抽出物、特にシリブム・マリアヌムの痩果の抽出物である。
【００３９】
特定の実施形態によれば、本発明による抽出物は、乾燥抽出物の重量を基準として０．２重量％未満、好ましくは０．１重量％未満のシリマリンを含む。
【００４０】
特定の実施形態によれば、本発明による抽出物は、乾燥抽出物の重量を基準として少なくとも０．５重量％、好ましくは少なくとも１．０重量％のβ−シトステロールを含む。特に、本発明による抽出物は、乾燥抽出物の重量を基準として０．５重量％〜２．５重量％、特に１．０重量％〜２．０重量％、例えば、約１．５重量％のβ−シトステロールを含む。有利には、本発明による抽出物は、乾燥抽出物の重量を基準として０．２重量％未満、好ましくは０．１重量％未満のシリマリンを含む。本発明による抽出物におけるシリマリン／β−シトステロールの重量比は、０．４未満、特に０．０７未満であってよい。本発明による抽出物は、乾燥抽出物の重量を基準として２〜７重量％、特に３〜６重量％、例えば、３〜５重量％のステロールを含んでいてもよい。
【００４１】
別の特定の実施形態によれば、本発明による抽出物は、乾燥抽出物の重量を基準として少なくとも３重量％、好ましくは少なくとも４重量％の遊離リノール酸を含む。特に、本発明による抽出物は、乾燥抽出物の重量を基準として３重量％〜１５重量％、特に４重量％〜１０重量％、特に４重量％〜６重量％、例えば、約５重量％の遊離リノール酸を含む。有利には、本発明による抽出物は、乾燥抽出物の重量を基準として０．２重量％未満、好ましくは０．１重量％未満のシリマリンを含む。本発明による抽出物は、乾燥抽出物の重量を基準として１０重量％〜７０重量％、特に１０重量％〜３０重量％、特に１５重量％〜２５重量％の遊離脂肪酸を含んでいてもよい。
【００４２】
別の特定の実施形態によれば、本発明による抽出物は、乾燥抽出物の重量を基準として０．５重量％〜２．５重量％、特に１．０重量％〜２．０重量％、例えば、約１．５重量％のβ−シトステロール、および、乾燥抽出物の重量を基準として３重量％〜１５重量％、特に４重量％〜１０重量％、特に４重量％〜６重量％、例えば、約５重量％の遊離リノール酸を含む。有利には、本発明による抽出物は、乾燥抽出物の重量を基準として０．２重量％未満、好ましくは０．１重量％未満のシリマリンを含む。本発明による抽出物におけるシリマリン／β−シトステロールの重量比は、０．４未満、特に０．０７未満であってよい。本発明による抽出物は、乾燥抽出物の重量を基準として２〜７重量％、特に３〜６重量％、例えば、３〜５重量％のステロール、および、乾燥抽出物の重量を基準として１０重量％〜５０重量％、特に１０重量％〜３０重量％、特に１５重量％〜２５重量％の遊離脂肪酸を含んでいてもよい。
【００４３】
本発明による抽出物は、乾燥抽出物の重量を基準として少なくとも０．０１重量％、特に少なくとも０．０５重量％のトコフェロールを含む。特に、本発明による抽出物は、乾燥抽出物の重量を基準として０．０１重量％〜０．５重量％、特に０．０５重量％〜０．２重量％、例えば、約０．１重量％のトコフェロールを含む。有利には、本発明による抽出物は、乾燥抽出物の重量を基準として０．２重量％未満、好ましくは０．１重量％未満のシリマリンを含む。本発明による抽出物におけるシリマリン／トコフェロールの重量比は、１未満、特に０．１未満であってよい。
【００４４】
別の特定の実施形態によれば、本発明による抽出物は、乾燥抽出物の重量を基準として０．２重量％未満、好ましくは０．１重量％未満のシリマリン；乾燥抽出物の重量を基準として０．５重量％〜２．５重量％、特に１．０重量％〜２．０重量％、例えば、約１．５重量％のβ−シトステロール；乾燥抽出物の重量を基準として３重量％〜１５重量％、特に４重量％〜１０重量％、特に４重量％〜６重量％、例えば、約５重量％の遊離リノール酸；および、乾燥抽出物の重量を基準として０．０１重量％〜０．５重量％、特に０．０５重量％〜０．２重量％、例えば、約０．１重量％のトコフェロールを含む。本発明による抽出物は、乾燥抽出物の重量を基準として２〜７重量％、特に３〜６重量％、例えば、３〜５重量％のステロール、および、乾燥抽出物の重量を基準として１０重量％〜５０重量％、特に１０重量％〜３０重量％、特に１５重量％〜２５重量％の遊離脂肪酸を含んでいてもよい。本発明による抽出物におけるシリマリン／β−シトステロールの重量比は、特に０．４未満、特に０．０７未満であってよい。本発明による抽出物におけるシリマリン／トコフェロールの重量比は、特に１未満、特に０．１未満であってよい。
【００４５】
好ましくは、本発明による抽出物は、乾燥抽出物である。
【００４６】
本発明による抽出物は、ヒドロトロピック水溶液（aqueous hydrotropic solution）、亜臨界水、または、場合により水との混合物である、シリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の痩果由来油と非混和性の有機溶媒、特に、場合により水との混合物である、シリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の痩果由来油と非混和性の有機溶媒（例えば、Ｃ１〜Ｃ３アルコール等）を含んでなる、特に、それからなる抽出溶媒を用いたシリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の痩果由来油の抽出によって得ることができる。
【００４７】
特に、抽出溶媒は、場合により水との混合物である、メタノール、エタノールまたはイソプロパノールを含んでなり、特に、それからなり、有機溶媒／水の体積比は、特に８０／２０〜１００／０、特に８５／１５〜９５／５、特に約９０／１０である。有利には、抽出溶媒は、イソプロパノール／水の混合物であり、特に、体積比が約９０／１０のイソプロパノール／水の混合物である。
【００４８】
シリブム・マリアヌムの痩果由来油は、特に加圧による、有利にはコールドプレス（すなわち、加熱なし、室温）による、シリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．痩果（痩果は全部であってもよいし、断片であってもよい）からの抽出によって有利に得ることができる。
【００４９】
シリブム・マリアヌムの痩果由来油の抽出ステップは、１〜１２時間、特に１５〜２５℃の温度、特に約２０℃の温度で、シリブム・マリアヌムの痩果由来油と抽出溶媒とを混合することによって行うことができる。この抽出を行うために使用される抽出溶媒の量は、有利には、油１ｇに対して、０．５〜３ｇ、特に１〜３ｇである。
【００５０】
次いで、得られた抽出相を脂質相から分離した後、乾燥し、特に減圧下で、部分的または完全に蒸発させて、抽出溶媒を実質的に取り除き、溶媒が全部除去された乾燥抽出物、または、残溶媒に希釈された濃縮抽出物を得ることができる。
【００５１】
本発明による組合せ
本発明による組合せは、上記の通り定義されたレチノイドおよび上記の通り定義されたシリブム・マリアヌム（Ｌ．）Ｇａｅｒｔｎ．の抽出物を含んでなる。
【００５２】
本発明による組合せは、好ましくは、レチノイドとしてのレチンアルデヒドと、シリマリンを本質的に含まない、すなわち、乾燥抽出物の重量を基準として０．２重量％未満、好ましくは０．１重量％未満のシリマリンを含んでなる、シリブム・マリアヌムの抽出物、特にシリブム・マリアヌムの抽出物の痩果の抽出物との組合せである。
【００５３】
本発明による皮膚科および皮膚化粧品組成物
本発明は、その主題として、より詳細には局所的適用、特に皮膚への適用を目的とした、上記少なくとも１種の組合せを、少なくとも１種の皮膚科的または皮膚化粧品的に許容可能な賦形剤とともに含んでなる皮膚科または皮膚化粧品組成物も有する。
【００５４】
本発明による皮膚科および皮膚化粧品組成物を、有効成分の特性および到達性を改良するために、特に皮膚浸透を可能とする賦形剤と共に、局所投与用に通常公知である形態で、すなわち、特にローション剤、フォーム剤、ゲル剤、分散剤、エマルジョン剤、噴霧剤、血清剤、マスク剤またはクリーム剤で提供してよい。有利には、これはクリーム剤である。
【００５５】
これらの組成物は、一般的には、本発明による組合せの成分に加えて、生理学的に許容可能な媒体、一般的には、水ベースまたは溶媒ベースの媒体、例えば、アルコール、エーテルまたはグリコールを含む。これらの組成物は、界面活性剤、錯生成剤、防腐剤、安定剤、乳化剤、増粘剤、ゲル化剤、湿潤剤、皮膚軟化剤、微量元素、エッセンシャルオイル、香料、染料、テカリ防止剤、化学的または無機フィルター、保湿剤、温泉水などを含んでもよい。
【００５６】
これらの組成物は、相補的または可能性がある相乗効果をもたらす他の活性成分を含んでもよい。
【００５７】
有利には、本発明による組成物は、組成物の総重量を基準として、０．０１〜１０重量％、好ましくは０．０５〜５重量％の本発明によるシリブム・マリアヌムの抽出物（好ましくは、乾燥抽出物の重量基準）を含んでなる。
【００５８】
有利には、本発明による組成物は、組成物の総重量を基準として、０．００１〜５重量％、好ましくは０．０１〜１重量％のレチノイドを含んでなる。
【００５９】
処置用途
本発明による組合せおよび本発明による皮膚科または皮膚化粧品組成物は、好ましくは局所的適用、特に皮膚への適用により、ざ瘡（例えば、思春期ざ瘡とも呼ばれる若年性ざ瘡、または遅発性ざ瘡、嚢胞性であり得る）、脂漏症、脂漏性皮膚炎および／または酒さの処置において有用である。
【実施例】
【００６０】
以下の非限定的実施例によって本発明を例証する。
【００６１】
Ｉ．本発明による抽出物の製造の実施例
イソプロパノール抽出物９０（抽出物Ｉ）は、以下の方法により得られる：
・シリブム・マリアヌム痩果から油を得るためのシリブム・マリアヌム痩果のコールドプレス、
・イソプロパノール／水の混合物（９０／１０  ｖ／ｖ）によるシリブム・マリアヌム痩果からの油の抽出であって、油グラム当たり１グラムのイソプロパノール／水の混合物を使用した２０℃で２時間の抽出、
・イソプロパノール相の回収、および
・溶媒の蒸発。
【００６２】
メタノール（抽出物Ｍ）およびエタノール９０（抽出物Ｅ）抽出物を、イソプロパノール／水の混合物（９０／１０  ｖ／ｖ）を、それぞれ、メタノールおよびエタノール／水の混合物（９０／１０  ｖ／ｖ）に置き換えた同様な方法で得た。シリブム・マリアヌム痩果からの油の抽出は、１体積の油に対して、それぞれ、３体積のメタノールおよび３体積のエタノール／メタノール混合物（９０／１０  ｖ／ｖ）を用いて、２０℃、２時間行う。
【００６３】
これらの異なる抽出物を、以下に詳述されるプロトコールに従って、質量分析法（ＧＣ−ＭＳ）と連結された超高速液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）またはガスクロマトグラフィーによって特性決定した。
【００６４】
得られた抽出物の評価のためのプロトコール：
１．プロトコール１：ＵＰＬＣによるシリマリン含有率の評価
サンプルおよび対照の製造：
−  対照シリマリン：１０ｍＬのメタノール／水の混合物（６０：４０）（ｖ／ｖ）中のシリマリンの溶液５ｍｇを製造。
−  サンプル：
・抽出物Ａ：１０ｍＬのメタノール／ジクロロメタン混合物（７０：３０）（ｖ／ｖ）中の１００ｍｇの分析しようとする抽出物の溶液を製造。
・抽出物Ｍ、Ｅ、Ｉ：均一かつ透明な溶液を得るまで撹拌しながら３５℃まで分析しようとする乾燥抽出物を加熱。抽出物２００ｍｇ（ｐｅ）を精秤し、抽出物を完全に溶解することができる１０ｍＬのメタノール／ジクロロメタン混合物中に溶解し、溶液をホモジナイズ。この混合物は、メタノール／ジクロロメタンの比（１：１）の混合物から純粋メタノールまでの範囲である。
【００６５】
分析条件：
−  カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＢＥＨ  Ｓｈｉｅｌｄ  Ｃ１８  １５０ｍｍ×２．１ｍｍ−１．７μｍ（Ｗａｔｅｒｓ社）
−  移動相：
Ａ：水＋０．１％ギ酸
Ｂ：アセトニトリル＋０．１％ギ酸
−  勾配：
【表１】
2021506884.tif 000003
−  カラム温度：４０℃
−  流速：０．４ｍＬ／分
−  検出：２８７ｎｍ
−  注入量：１μＬ
【００６６】
２．プロトコール２：ＵＰＬＣによるリノール酸含有率の評価
サンプルおよび対照の製造：
−  対照リノール酸：１０ｍＬの１：１（ｖ／ｖ）メタノール／ジクロロメタン混合物中のリノール酸１０ｍｇの溶液を製造。
−  サンプル：
・抽出物Ｍ、Ｅ、Ｉ：均一かつ透明な溶液を得るまで撹拌しながら３５℃まで分析しようとする乾燥抽出物を加熱。抽出物５０ｍｇ（ｐｅ）を精秤し、抽出物を完全に溶解することができる１ｍＬのメタノール／ジクロロメタン混合物中に溶解し、溶液をホモジナイズ。この混合物は、メタノール／ジクロロメタンの比（１：１）（ｖ／ｖ）の混合物から純粋メタノールまでの範囲である。
【００６７】
分析条件：
−  カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＢＥＨ  Ｓｈｉｅｌｄ  Ｃ１８  １５０ｍｍ×２．１ｍｍ−１．７μｍ（Ｗａｔｅｒｓ社）
−  移動相：
Ａ：水＋０．１％ギ酸
Ｂ：アセトニトリル＋０．１％ギ酸
−  勾配：
【表２】
2021506884.tif 000004
−  カラム温度：４０℃
−  流速：０．４ｍＬ／分
−  検出：２１５ｎｍ
−注入量：１μＬ
【００６８】
３．プロトコール３：ＧＣ／ＭＳによる脂肪酸およびステロール含有率の評価
サンプル製造
−  透明で均一な液体を得るまで撹拌しながら３５℃まで分析しようとする乾燥抽出物を加熱。
−  ８００μＬのメタノール／ジクロロメタン（１：１）（ｖ／ｖ）混合物中に２０ｍｇの抽出物を溶解。
−  ２００μＬの誘導化試薬Ｎ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）トリフルオロアセトアミド（ＢＳＴＦＡ）＋トリメチルクロロシラン（ＴＭＣＳ）（９９：１）（Ｓｕｐｅｌｃｏ−Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を添加。
−  １分間、ボルテックス。
【００６９】
ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）条件
−  カラム：ＤＢ−５ｍｓ（Ａｇｉｌｅｎｔ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）；３０ｍ×０．２５ｍｍ；０．２５μｍ
−  注入：Ｔ＝３００℃；モード＝スプリット；スプリット比＝１００：１
−  オーブン：温度勾配（℃）：
注入温度＝１５０℃
勾配＝最終温度３４０℃まで７℃／分
３４０℃で１０分間保持
−  キャリアガス流速：１ｍＬ／分
−  検出：ＭＳ−ＥＩ；Ｔ＝３００℃；スキャン時間＝０．２秒；フルスキャンスタート質量＝４０；フルスキャンエンド質量＝６００
−  注入量：１μＬ
【００７０】
結果：
抽出物Ｉは、大部分は、ＵＰＬＣにおいて１３〜３０分の保持時間を有する物質を含む（図１参照）。これは、次の特徴を有する：
【００７１】
【表３】
2021506884.tif 000005
【００７２】
シリブム・マリアヌムの３つの抽出物（抽出物Ｉ、ＭおよびＥ）のＵＰＬＣおよびＧＣ／ＭＳクロマトグラムは類似している（図２および３参照）。
【００７３】
ＩＩ．レチノイドおよび本発明によるシリブム・マリアヌムの抽出物を含んでなる組成物の実施例
【００７４】
【表４】
2021506884.tif 000006
【００７５】
【表５】
2021506884.tif 000007
【００７６】
【表６】
2021506884.tif 000008
【００７７】
レチンアルデヒドをベースとした組成物４（クリーム剤）＝ＲＡＬ４
５％グリセリン
１．５％ゲル化剤
１％シリカ
適量の水
を含んでなる混合物中に０．１％（ｗ／ｗ）でレチンアルデヒドを製剤した。
【００７８】
シリブム・マリアヌム抽出物をベースとした組成物５（クリーム剤）＝ＳＹＬ１
イソプロパノール／ＰＥＧ３００（１：１）（ｗ／ｗ）混合物中に７％（ｗ／ｗ）で実施例１において製造された抽出物Ｉを製剤した。
【００７９】
シリブム・マリアヌム抽出物をベースとした組成物６（クリーム剤）＝ＳＹＬ２（パーセンテージｗ／ｗ）
２５％ＳＹＬ１
５％グリセリン
１．５％ゲル化剤
１％シリカ
適量の水
【００８０】
シリブム・マリアヌムの抽出物およびレチンアルデヒドの組合せを含んでなる組成物７（クリーム剤）＝ＡＳＳＯ１（パーセンテージｗ／ｗ）
２５％ＳＹＬ１
０．１％レチンアルデヒド
５％グリセリン
１．５％ゲル化剤
１％シリカ
適量の水
【００８１】
シリブム・マリアヌムの抽出物およびレチンアルデヒドの組合せを含んでなる組成物８（クリーム剤）＝ＡＳＳＯ２（パーセンテージｗ／ｗ）
１２．５％ＳＹＬ１
０．１％レチンアルデヒド
５％グリセリン
１．５％ゲル化剤
１％シリカ
適量の水
【００８２】
ＩＩＩ．臨床試験
試験される異なるクリーム剤を、ＲＡＬ：夕方のみ、を含む組成物を除いて優しくマッサージすることにより１日２回適用、朝および夕方に顔（洗浄された皮膚）に適用した。
【００８３】
臨床皮膚科医により適用され、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）により承認された治験責任医師による全般評価（ＩＧＡ）方法（ざ瘡に対して、ならびに酒さおよび脂漏性皮膚炎に適している）に従って得られた処置効果の分析を行った（Guidance for Industry Acne Vulgaris: Developing Drugs for Treatment）。
【００８４】
このような方法を用いて、観察されたざ瘡の重症度に従って次のＩＧＡグレードに分類する：
【００８５】
【表７】
2021506884.tif 000009
【００８６】
様々な分析の結果を下記に示す。
【００８７】
【表８】
2021506884.tif 000010
【００８８】
【表９】
2021506884.tif 000011
【００８９】
結論
上記臨床試験における、それぞれ、レチンアルデヒドとシリブム・マリアヌム抽出物との組合せ、レチンアルデヒド単独またはシリブム・マリアヌム抽出物単独をベースとした異なる処置で得られた結果は、シリブム・マリアヌム抽出物と組み合わせたレチンアルデヒドはより良好な臨床結果を得ることを可能とすることを示している。
【００９０】
ＩＶ．インビトロ試験：レチンアルデヒド（ＲＡＬ）またはレチノール（ＲＯＬ）＋シリブム・マリアヌム抽出物（ＳＹＬ）の組合せによるビタミンＡ欠乏症補正の評価
材料および方法：
培養：
実験３日前、ウェル（各ウェル２ｍＬ）当たり４０，０００細胞の密度で２６ウェルプレートにおいてＡ４３１表皮がん細胞を培養。
【００９１】
細胞処置（条件当たり３ウェル、ウェル当たり２ｍＬ；最終濃度）：
・エタノール（溶媒）：１％エタノール：
・ＲＯＬ：１％エタノール中１０μＭ  ＲＯＬ
・ＲＡＬ：１％エタノール中２μＭ  ＲＡＬ：
・ＳＹＬ：１％エタノール中シリブム・マリアヌムの抽出物Ｉ  ５０μｇ／ｍＬ：
・ＲＯＬ＋ＳＹＬ：１％エタノール中１０μＭ  ＲＯＬ＋シリブム・マリアヌムの抽出物  ５０μｇ／ｍＬ
・ＲＡＬ＋ＳＹＬ：１％エタノール中２μＭ  ＲＡＬ＋シリブム・マリアヌムの抽出物  ５０μｇ／ｍＬ
【００９２】
インキュベーション：１時間
細胞収穫：
・培地を取り除き、ＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）で２回洗浄；
・ウェル当たり５００μＬのＥＤＴＡ−ＮａＯＨ（０．０２％エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）＋２００μＭ  ＮａＯＨ）を添加し、１０〜１５分間放置してから、ゴムスクレーパーを用いて細胞を剥離して抽出ガラスチューブへ移動；
・１０μＬの２０ｍＭ  ＨＣｌを添加し、短時間超音波処理してから、タンパク質を決定するために１．５ｍＬエッペンドルフチューブへ１０μＬの懸濁液を移動；
・ガラスチューブへ、５００μＬの２００μＭブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）／エタノール、２０μＬの２０μＭレチニル酢酸（内部標準）を添加し、次いで４ｍＬのヘキサンを添加；
・３０秒間激しくボルテックスしてから、チューブを遠心分離（９００ｇ、５分）；
・キャップをしていないガラスチューブ中へ上澄み液を移動し、窒素下蒸発乾燥；
・２００μＬのメタノール中に再溶解してから、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）バイアルへ移動。
【００９３】
ＨＰＬＣによるレチノイド分析：
・クォータナリポンプおよびＤＡＤ検出器を備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＨＰＬＣ
・Ｍａｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇｅｌカラム  Ｎｕｃｌｅｏｄｕｒ  Ｃ１８  Ｐｙｒａｍｉｄ  ３μｍ
・移動相：
０〜６分：１００％メタノール
６〜８分：メタノール／ＴＨＦ（４：１）まで線形勾配
８〜１８分：メタノール／ＴＨＦ（４：１）
１８〜２０分：１００％メタノールまで線形勾配
２０〜３０分：１００％メタノール
・検出：３２５ｎｍ（レチノール、レチニルエステル）；３８３ｎｍ（レチナール）。
【００９４】
結果：
得られた結果を図５および６に示す。
【００９５】
結論：
シリブム・マリアヌム抽出物単独は、有機なレチノイド産生物を含まない。
【００９６】
他方、皮膚細胞は、レチンアルデヒドまたはレチノールの存在下より、シリブム・マリアヌム抽出物とレチンアルデヒドまたはレチノールとの組合せの存在下では有意に多いレチノイドを産生し、本発明による組合せの相乗効果を実証している。
【図１】
2021506884.tif 000012
【図２】
2021506884.tif 000013
【図３】
2021506884.tif 000014
【図４】
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【図５】
2021506884.tif 000016
【図６】
2021506884.tif 000017
【国際調査報告】
2021506884.tif 000018
2021506884.tif 000019
2021506884.tif 000020
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