(57)【要約】  本発明は、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に反応しない患者における、典型的に、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤で処置され、該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に対する反応性を失った患者における、アルツハイマー病又はアルツハイマー関連障害の処置のための、バクロフェン及びアカンプロセートを用いた組合せ及び方法に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に反応しない対象におけるアルツハイマー病又はアルツハイマー病関連障害の処置に使用するための、バクロフェン及びアカンプロセート、又は薬学的に許容されるそれらの塩若しくは誘導体を含む組成物。
【請求項２】
前記対象は、前記アセチルコリンエステラーゼ阻害剤での処置後の認知試験におけるその能力が最適以下であるとき、前記アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に反応していない、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記対象は、認知試験におけるその能力が前記アセチルコリンエステラーゼ阻害剤によって改善されないとき、前記アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に反応していない、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記認知試験は、ＡＤＡＳ−Ｃｏｇ、ＭＭＳＥ、及びＣＤＲ−ＳＢから選ばれる、請求項２又は３に記載の組成物。
【請求項５】
前記対象は、治療量の前記アセチルコリンエステラーゼ阻害剤での処置を受けており、前記アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に対する最適な反応性を失った患者である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
前記対象は、少なくとも１２週の期間、前記アセチルコリンエステラーゼ阻害剤での処置を受けている患者である、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記対象は、少なくとも６か月の期間、前記アセチルコリンエステラーゼ阻害剤での処置を受けている患者である、請求項５に記載の組成物。
【請求項８】
前記アセチルコリンエステラーゼ阻害剤は、ドネペジル、リバスチグミン、及びガランタミンからなる群より選ばれる、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
前記アセチルコリンエステラーゼ阻害剤はドネペジルである、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記アセチルコリンエステラーゼ阻害剤をさらに含む、請求項１〜９のいずれかに記載の組成物。
【請求項１１】
前記アセチルコリンエステラーゼ阻害剤は、１日につき１ｍｇ〜２０ｍｇの用量のドネペジルである、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記アセチルコリンエステラーゼ阻害剤は、１日につき１ｍｇ〜３０ｍｇの用量のリバスチグミンである、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１３】
前記アセチルコリンエステラーゼ阻害剤は、１日につき８ｍｇ〜４０ｍｇの用量のガランタミンである、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１４】
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤での処置を受けている対象におけるアルツハイマー病又はアルツハイマー病関連障害の処置に使用するための、バクロフェン及びアカンプロセート、又は薬学的に許容されるそれらの塩若しくは誘導体を含む組成物であって、前記対象が前記アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に対する反応性を失ったとき前記対象に投与される、組成物。
【請求項１５】
唯一の活性剤としてバクロフェンとアカンプロセートとを含む、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
薬学的に許容される担体又は賦形剤をさらに含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記組成物内の化合物は、一緒に、個別に、又は連続して製剤化又は投与される、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１８】
アカンプロセート／バクロフェンの比（Ｗ：Ｗ）は、０．０５〜１０００の間に含まれる、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１９】
バクロフェンの用量は１００ｍｇ／ｄａｙ未満である、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２０】
アカンプロセートの用量は１０００ｍｇ／ｄａｙ未満である、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２１】
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に反応しない対象におけるアルツハイマー病又はアルツハイマー病関連障害の処置に使用するための、バクロフェン及びアカンプロセート、又は薬学的に許容されるその塩若しくは誘導体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に反応しない患者における、典型的に、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤で処置され、該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に対する反応性を失った患者における、アルツハイマー病又はアルツハイマー関連障害の処置のための組合せ及び方法に関する。より具体的には、本発明は、既にアセチルコリンエステラーゼ阻害剤で処置され、該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に対する反応性を失ったアルツハイマー病又はアルツハイマー関連障害の患者のための、バクロフェンとアカンプロセートとの組合せを用いた、新しい組合せ療法に関する。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病（Alzheimer’s disease、ＡＤ）は、皮質連合野の関与に起因し得る、失語症（発話及び発話理解における機能障害がある言語障害）、協調運動障害（運動又は知覚機能の欠失により、特定の目的を持った動作と身ぶりとを調和させおこなう能力の低下）、並びに失認（もの、ひと、音、かたち、又は匂いを認識する能力）とともに、記憶障害を特徴とする原型的皮質性認知症である。痙性対麻痺（下肢におこる衰弱）などの特別な症状も関与し得る（参考文献１〜４）。
【０００３】
アルツハイマー病（ＡＤ）の発症は年齢とともに急増する。ＡＤは、現在、認知症の最も一般的な原因となっている。ＡＤは、臨床的には、徐々に進行して、末期患者は寝たきりになったり失禁するようになり、療護が必要になるという、認知機能の全体的な低下によって特徴づけられる。診断後、平均して９年で死に至る（参考文献５）。
【０００４】
ＡＤの発症率は年齢とともに急増する。国際連合の人口予測では、８０歳を超える人口は２０５０年までに３．７億人近くになると推定されている。現在のところ、８５歳を超える人口の５０％がＡＤに罹患していると推定される。つまり、５０年以内に、全世界で１億人を超える人々が認知症に罹患すると考えられる。継続的な療護や他のサービスを必要とする非常に多数の人々が、医療的、経済的、及び人的資源に深刻な影響を与えることが考えられる（参考文献６）。
【０００５】
記憶障害は疾患の初期の特徴であり、エピソード記憶（日々の出来事の記憶）に関与する。意味記憶（言語や視覚的意味についての記憶）は疾患の後期に関わる。一方で、作業記憶（情報を一時的に保存し利用するために用いられる構造やプロセスに関わる短期記憶）と手続き記憶（技術や手段の長期記憶である無意識記憶）は後期まで保持される。疾患が進行すると、言語障害、視知覚や空間障害、失認や失行のさらなる特徴が現れる。
【０００６】
アルツハイマー病の従来像は十分に特徴を示しており、約８０％の症例において特定が可能である（参考文献７）。しかしながら臨床的な不均質性は生じ、これは臨床的管理のために重要であるだけでなく、機能的に異なる症状に対する特定の薬剤処置のさらなる関与も示すものである（参考文献８）。
【０００７】
ＡＤの病理学的特徴は、βアミロイドペプチド（Ａβ）を含む細胞外アミロイド斑の蓄積、タウタンパク質からなる細胞内神経原線維変化(NFT)、並びに進行的なニューロン及びシナプスの機能障害及び喪失を含む（参考文献９〜１１）。ＡＤの病因論は依然として理解が難しく、過去１０年で、ＡＤの病因についてのいくつかの主要な仮説が提示されており、これらは、ＡＤの発症におけるアセチルコリン作動性シグナル伝達の減少の特定の役割に起因する「コリン作動性仮説」と、神経変性プロセスがアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）の異常プロセシングにより引き起される一連のイベントであることを示す「アミロイド・カスケード仮説」（参考文献１２）と、細胞骨格の変化が病的イベントを引き起こすことを提示する修正「タウ仮説」（参考文献１３）と、近年における、ＡＤの病因論及び進行における免疫シグナル伝達の変化に優先順位をつける神経免疫調節仮説とである（参考文献１４）。ＡＤ進行の解釈として最も広く受け入れられている説は、依然として「アミロイド・カスケード仮説」であり（参考文献１５〜１７）、ＡＤ研究者らは、アミロイド形成性Ａβペプチドに関連する毒性の根底にあるメカニズムを特定することに主に注力している。重要な点として、ＡＤにおける血管新生の異常及び血液脳関門の機能停止として現れる微小血管透過性及び血管リモデリングの変化が、ＡＰＰ毒性に関与する主要なイベントとして特定されている（参考文献１８）。
【０００８】
シナプス密度の変化は、ＡＰＰの蓄積及びタウ凝集よりも認知障害に関係の深い病理的病変である。コリン作動性末端が最も脆弱であり、続いてグルタミン酸作動性末端、最後はＧＡＢＡ作動性末端であるという神経伝達物質特異的に、アミロイド病変が進行するようであるということが研究において明らかになっている（参考文献１１）。グルタミン酸は、哺乳動物の神経系において最も豊富な興奮性神経伝達物質であり、その機能作用は、ＧＡＢＡ作動抑制性ニューロン受容体によって十分に反バランスとなる。病的状態のもとでは、シナプス間隙のグルタミン酸異常蓄積がグルタミン酸受容体の過剰活性を引き起し（参考文献１９）、認知機能障害そして最終的にニューロン細胞死という結果を招く。このプロセスは興奮毒性と名付けられ、一般に急性及び慢性的神経障害時のニューロン組織に見受けられるものであり、現在ではＡＤの主要な病理学的誘因の１つとして認識されている。さらに、ＡＤに見受けられる抑制性ＧＡＢＡ仲介ニューロン回路の機能障害は、ニューロン細胞における調節不全グルタミン酸シグナル伝達において負の影響を増大させ得る。
【０００９】
軽度から中等度のＡＤと診断された患者は、一般に、標準治療と考えられるドネペジル（ＤＮＰ）、ガランタミン、又はリバスチグミンなどのアセチルコリンエステラーゼ阻害剤（参考文献１９）で処置される。しかしながら、一部の患者はそうした治療に反応しない。また、反応する患者においても、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤の効果は、処置開始後数か月で、疾患の進行とともに経時で急速に減少し、患者は他の処置が選択できなくなる、ということが認められる。例えば、ドネペジルにおける研究では、処置により、最初の１２週間で患者の認知機能が改善されてから、患者の認知機能は低下し始め、処置の開始後ものの３０週でそのベースラインレベルに達することが示された（参考文献２０、２１、２２、及び２３）。リバスチグミン（参考文献２４）とガランタミン（参考文献２５）において、同じ限定的な効果が記載されている。ゆえに、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤は最初の１２週間のみ患者の認知機能を改善するという結果となる。その期間後は、患者の認知機能は再び低下し始める。処置のほんの６か月〜１２か月後には、大部分の患者は、処置前に有したレベルの認知障害を取り戻し、その認知機能は残念ながらさらに低下する。したがって、そうした患者はアセチルコリンエステラーゼ阻害剤に対するその反応性を失うこととなる。
【００１０】
特許文献１は、ＡＤ処置に使用にするための薬剤の組合せ、特にバクロフェンとアカンプロセートとの組合せを公開している。また、特許文献１は、上記組み合わせを、ドネペジル、ガランタミン、リバスチグミン、及びタクリンなどの既存のＡＤ処置とさらに組み合わせることができることを公開している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】国際公開第２０１２／１１７０７６号
【発明の概要】
【００１２】
本明細書において、バクロフェンとアカンプロセートとは、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に反応しないか、又はアセチルコリンエステラーゼ阻害剤に対する反応性を失った患者におけるＡＤの有効な組合せ療法として用いられ得ることが分かった。この組合せ療法はそうした患者に有効であり、またアセチルコリンエステラーゼ阻害剤に対する反応性を回復し得る。
【００１３】
したがって、バクロフェンとアカンプロセートとの組合せ、又はそれらの塩若しくは誘導体を患者に投与することを含む、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤での処置に反応しない患者におけるアルツハイマー病を処置するための新しい治療方法及び組成物を提供することが本発明の目的である。
【００１４】
バクロフェンとアカンプロセートとの組合せ、又はそれらの塩若しくは誘導体を患者に投与することを含む、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤での処置に反応しない患者における該処置に対する反応性を回復するための方法及び組成物を提供することが本発明のさらなる目的である。
【００１５】
バクロフェンとアカンプロセートとの組合せ、又はそれらの塩若しくは誘導体を患者に投与することを含む、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤で処置され、該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に対する反応性を失った患者におけるアルツハイマー病を処置するための新しい治療方法及び組成物を提供することが本発明の他の目的である。
【００１６】
本発明は、なかでも、バクロフェンとアカンプロセートとの組合せが、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤での治療を受けており、該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に対する最適な反応性を失ったアルツハイマー病の患者に実質的な予期せぬ恩恵をもたらす、という本発明者らによる予期せぬ発見に基づく。
【００１７】
また、本発明は、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に反応しない対象におけるアルツハイマー病又はアルツハイマー病関連障害の処置に使用するための、バクロフェン及びアカンプロセート、又は薬学的に許容される塩若しくは誘導体を含む組成物に関する。
【００１８】
本発明のさらなる目的は、患者が、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤での処置を受けており、該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に対する反応性を失っている、ＡＤ又はＡＤ関連障害に罹患する患者におけるＡＤ又はＡＤ関連障害の処置に使用するための、バクロフェンとアカンプロセートとの組合せを含む組成物に関する。
【００１９】
また、本発明の他の目的は、患者が、少なくとも１２週間、好ましくは６か月間、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤での処置を受けており、該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に対する反応性を失っている、ＡＤ又はＡＤ関連障害に罹患する患者におけるＡＤ又はＡＤ関連障害の処置に使用するための、バクロフェンとアカンプロセートとの組合せを含む組成物に関する。
【００２０】
本発明の組成物は、唯一の活性成分としてバクロフェンとアカンプロセートとを含み得る。あるいは、組成物は、特にアセチルコリンエステラーゼ阻害剤などのさらなる活性成分を含み得る。これに関して、本発明のさらなる目的は、対象が、最初にアセチルコリンエステラーゼ阻害剤での治療を受けており、該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に対する反応性を失っている、処置を必要とする対象におけるＡＤおよび関連障害の処置に使用するための、バクロフェンとアカンプロセートとアセチルコリンエステラーゼ阻害剤との組合せを含む組成物に関する。特定の実施形態において、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤は、ドネペジル、ガランタミン、及びリバスチグミンから選ばれる。より具体的に、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤はドネペジルである。
【００２１】
本願にさらに開示されるように、本発明の組合せ療法における化合物は、共に、個別に、連続して、及び／又は繰り返して対象に投与することができる。
【００２２】
本発明の組成物は、典型的には１つ以上の薬学的に許容される賦形剤又は担体をさらに含む。また、本発明に使用されるような化合物は、塩、水和物、エステル、エーテル、酸、アミド、ラセミ体、又は異性体の形態であり得る。また、化合物は徐放性製剤の形態であり得る。また、化合物のプロドラッグ又は誘導体が使用され得る。
【００２３】
好ましい実施形態において、化合物は、それ自体で、又はその塩、水和物、エステル、エーテルの形態、又は徐放性形態において使用される。本発明に使用するための特に好ましい塩はアカンプロセートカルシウム塩である。
【００２４】
他の好ましい実施形態において、プロドラッグ又は誘導体が使用される。
【００２５】
対象又は患者は、疾患の任意の段階にある、任意の哺乳動物、特にヒトであり得る。
【００２６】
本発明の好ましい目的は、ヒト対象がアセチルコリンエステラーゼ阻害剤での処置を受けており、該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に対する反応性を失っている、処置を必要とするヒト対象におけるアルツハイマー病を処置する方法に関し、該方法は、有効量の、少なくともバクロフェン及びアカンプロセート、又はそれらの塩若しくは誘導体を、共に、個別に、又は連続してヒト対象に投与することを含む。好ましい実施形態において、方法は、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤を対象に投与することをさらに含む。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】図１は、マウスのＡβ２５−３５誘発自発的交替低下における、単独の、又は低下するドネペジルに対するアドオン療法としてのアカンプロセート及びバクロフェンの回復効果を示す。（Ａ）１日目（Ｄ０１）に、マウスに、アミロイドβペプチド（２５−３５）又はスクランブルＡβをＩＣＶで注射する。１９日後（Ｄ２０）に、動物に、１日に１回、強制経口投与で処置（ビヒクル又はドネペジル（ＤＮＰ）（１ｍｇ／ｋｇ））を行った（ビヒクルでの処置は図１に示さず）。Ｄ３０に、ドネペジル処置の一グループは、ドネペジル処置だけを続け（グループ３）、ドネペジル処置の他のグループは、ドネペジル処置に加え、アカンプロセート（ＡＣＰ）とバクロフェン（ＢＣＬ）とを（それぞれ０．２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ）投与した（グループ４）。Ｄ３０とＤ３８に、各グループにおける動物の認知機能をＹ迷路試験によって試験した。Ｄ３９／Ｄ４０に、各グループにおける動物の認知機能を受動的回避試験によって試験した。（Ｂ）１日目（Ｄ０１）に、マウスに、アミロイドβペプチド（２５−３５）又はスクランブルＡβ（Ｓｃ．Ａβ）をＩＣＶで注射する。１９日後（Ｄ２０）、動物に、１日に１回、強制経口投与で処置（ビヒクル、ドネペジル（ＤＮＰ）（１ｍｇ／ｋｇ）又はアカンプロセート（ＡＣＰ）とバクロフェン（ＢＣＬ）との組合せ（それぞれ０．２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ））を行った（ビヒクルでの処置は図１に示さず）。Ｄ３０において、ドネペジル処置の一グループ（１ｍｇ／ｋｇ）に、ドネペジル処置だけを続けた（グループ５）。他のグループでは、ドネペジル処置（１ｍｇ／ｋｇ）をＤ３０に停止し、アカンプロセートとバクロフェンと（それぞれ０．２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ）の投与に置き換えた（グループ６）。最後にＤ３０に、アカンプロセートとバクロフェンとの処置（それぞれ０．２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ）の一グループは、アカンプロセートとバクロフェンとの処置だけを続けた（グループ７）。Ｄ３０とＤ４０に、各グループにおける動物の認知機能をＹ迷路試験によって試験した。Ｄ４１／Ｄ４２に、各グループにおける動物の認知機能を受動的回避試験によって試験した。
【図２】図２は、マウスのＡβ２５−３５誘発自発的交替低下における、単独の、又は低下するドネペジルに対するアドオン療法としての、アカンプロセート及びバクロフェンの回復効果を示す。（Ａ）及び（Ｂ）Ｙ迷路によって評価される自発的交替の実施を、図１Ａのプロトコル又は図１Ｂのプロトコルに従って試験したグループについてそれぞれ１１日の処置後のＤ３０に行った。（Ｃ）及び（Ｄ）Ｙ迷路によって評価される自発的交替の実施を、図１Ａ又は図１Ｂのプロトコルに従って試験した動物のグループについてそれぞれ１９日の処置後のＤ３８及び２２日の処置後のＤ４１に行った。１．Ｓｃ．Ａβを注射した動物グループ＋ビヒクル処置。２．Ａβ２５−３５を注射した動物グループ＋ビヒクル処置。３．（グループ３）Ａβ２５−３５を注射した動物グループ＋Ｄ２０〜Ｄ４０にドネペジル（１ｍｇ／ｋｇ）。４．（グループ４）Ａβ２５−３５を注射した動物グループ＋Ｄ２０〜Ｄ４０にドネペジル（１ｍｇ／ｋｇ）＋Ｄ３０〜Ｄ４０にアカンプロセート及びバクロフェン（それぞれ０．２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ）。５．（グループ５）Ａβ２５−３５を注射した動物グループ＋Ｄ２０〜Ｄ４２にドネペジル（１ｍｇ／ｋｇ）。６．（グループ６）Ａβ２５−３５を注射した動物グループ＋Ｄ２０〜Ｄ２９にドネペジル（１ｍｇ／ｋｇ）、その後Ｄ３０〜Ｄ４２にアカンプロセート及びバクロフェン（それぞれ０．２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ）。７．（グループ７）Ａβ２５−３５を注射した動物グループ＋Ｄ２０〜Ｄ４２にアカンプロセート及びバクロフェン（それぞれ０．２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ）。データを平均値及び標準誤差として表す。グループにつきｎ＝８、Ａβ２５−３５／ビヒクルグループに対して***ｐ＜０．００１、Ｓｃ．Ａβ／ビヒクルグループに対して##ｐ＜０．０１、###ｐ＜０．００１。ＡＮＯＶＡの後、ダネットの検定を行った。
【図３】図３は、マウスのＡβ２５−３５誘発ステップスルー受動的回避低下における、単独の、又は低下するドネペジルに対するアドオン療法としてのアカンプロセート及びバクロフェンの回復効果を示す。（Ａ）及び（Ｂ）受動的回避試験によって評価されるステップスルー待機を、図１Ａのプロトコル又は図１Ｂのプロトコルに従って試験したグループについてそれぞれ２１日の処置後のＤ４０又は２３日の処置後のＤ４２に行った。（Ｃ）及び（Ｄ）受動的回避によって評価される脱出待機を、図１Ａのプロトコル又は図１Ｂのプロトコルに従って試験したグループについてそれぞれ２１日の処置後のＤ４０又は２３日の処置後のＤ４２に行った。１．Ｓｃ．Ａβを注射した動物グループ＋ビヒクル処置。２．Ａβ２５−３５を注射した動物グループ＋ビヒクル処置。３．Ａβ２５−３５を注射した動物グループ＋Ｄ２０〜Ｄ４０にドネペジル（１ｍｇ／ｋｇ）。４．Ａβ２５−３５を注射した動物グループ＋Ｄ２０〜Ｄ４０にドネペジル（１ｍｇ／ｋｇ）＋Ｄ３０〜Ｄ４０にアカンプロセート及びバクロフェン（それぞれ０．２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ）。５．Ａβ２５−３５を注射した動物グループ＋Ｄ２０〜Ｄ４２にドネペジル（１ｍｇ／ｋｇ）。６．Ａβ２５−３５を注射した動物グループ＋Ｄ２０〜Ｄ２９にドネペジル（１ｍｇ／ｋｇ）、その後Ｄ３０〜Ｄ４２にアカンプロセート及びバクロフェン（それぞれ０．２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ）。７．Ａβ２５−３５を注射した動物グループ＋Ｄ２０〜Ｄ４２にアカンプロセート及びバクロフェン（それぞれ０．２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ）。データを平均値及び標準誤差として表す。グループにつきｎ＝８、Ａβ２５−３５／ビヒクルグループに対して***ｐ＜０．００１、Ｓｃ．Ａβ／ビヒクルグループに対して#ｐ＜０．０５、##ｐ＜０．０１、###ｐ＜０．００１。クラスカル−ウォリスの後、ダン検定を行った。
【図４】図４は、ＡＤマウスモデルにおいて疾患の後期に処置を開始したときドネペジルの効果が低下することを示すため用いた３つの独立した研究を示す。１日目（Ｄ０１）に、マウスに、アミロイドβペプチド（２５−３５）又はスクランブルＡβをＩＣＶ脳室内注射した。（Ａ）Ｄ８に開始して１０日間、（Ｂ）Ｄ２０に開始して１１日間、（Ｃ）Ｄ２０に開始して２１日間、ビヒクル又はドネペジルを、１日に１回、強制経口投与で投与した。（Ａ）Ｄ１５、（Ｂ）Ｄ２８、（Ｃ）Ｄ３０及びＤ３８に、動物の認知機能をＹ迷路試験によって試験した。（Ａ）Ｄ１６〜１７、（Ｂ）Ｄ２９〜３０、（Ｃ）Ｄ３９〜４０に、動物の認知機能を受動的回避試験によって試験した。
【図５】図５は、疾患の種々の時点における、マウスのＡβ２５−３５誘発認知障害におけるＤＮＰの作用を示す。１．Ｓｃ．Ａβを注射した動物グループ＋ビヒクル処置。２．Ａβ２５−３５を注射した動物グループ＋ビヒクル処置。３．Ａβ２５−３５を注射した動物グループ＋（Ａ）Ｄ０８〜Ｄ１７、（Ｂ）Ｄ２０〜Ｄ３０、及び（Ｃ）Ｄ２０〜Ｄ４０にドネペジル。（Ａ）Ｄ１５、（Ｂ）Ｄ２８に、動物の認知機能をＹ迷路試験によって試験し、データを平均値及び標準誤差として表す。（Ａ）Ｄ１６〜１７、（Ｂ）Ｄ２９〜３０に、動物の認知機能を受動的回避試験によって試験し、データを平均値及び標準誤差として表す。（Ｃ）Ｄ３０及びＤ３８に、動物の認知機能を試験し、データを薬効率の平均値及び標準誤差として表す。グループにつきｎは少なくとも８、Ａβ２５−３５／ビヒクルグループに対して*ｐ＜０．０５、**ｐ＜０．０１、***ｐ＜０．００１、Ｓｃ．Ａβ／ビヒクルグループに対して#ｐ＜０．０５、##＜ｐ＜０．０１、###ｐ＜０．００１。自発的交替能力についてＡＮＯＶＡの後、ダネットの検定を行い、受動的回避試験についてクラスカル−ウォリス後、ダン検定を行った。
【図６】図６は以下を示す。（Ａ）疾患の後期に処置を開始したときドネペジルの作用が低下する。マウスのＡβ２５−３５誘発自発的交替低下における、ドネペジルでの１０日の処置期間の薬効率を、Ｙ迷路で評価した。（Ｂ）マウスのＡβ２５−３５誘発認知障害における、ドネペジルでの１０日の処置期間の薬効率を、受動的回避試験（ステップスルー待ち時間パラメータ）によって評価した。グループにつきｎは少なくとも８であり、データを平均値及び標準誤差として表す。
【図７】図７は、マウスのＡβ２５−３５誘発自発的交替低下における、低下するドネペジルに対するアカンプロセート及びバクロフェンのアドオン療法の回復効果を示す。１日目（Ｄ０１）に、マウスに、アミロイドβペプチド（２５−３５）又はスクランブルＡβをＩＣＶ脳室内注射した。６日後（Ｄ０７）に、動物に、１日に１回、強制経口投与で処置（ビヒクル又はドネペジル（ＤＮＰ）（１ｍｇ／ｋｇ））を行った。Ｄ０７、Ｄ１４、Ｄ２１、Ｄ２８、Ｄ３５、Ｄ４１、及びＤ４８に、認知機能をＹ迷路試験によって試験する。一グループにおいて、動物がドネペジルに対する反応性を失ったとき（Ｄ４９）、ドネペジルでの処置をＤ１００まで続けた（グループ３）。動物の他のグループにおいて、動物がドネペジルに対する反応性を失ったとき（Ｄ４９）、アカンプロセートとバクロフェンとの組合せ（それぞれ０．２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ）を加えた。その後、Ｄ５６、Ｄ６３、Ｄ７０、Ｄ７７、Ｄ９１、及びＤ９８に、認知機能をＹ迷路によって試験した。実験の最後に（Ｄ９９／Ｄ１００）、恐怖条件づけ記憶をステップスルー受動的回避（ＳＴＰＡ）によって評価した。
【図８】図８は、マウスのＡβ２５−３５誘発自発的交替低下における、低下するドネペジルに対するアカンプロセート及びバクロフェンのアドオン療法の回復効果を示す。（Ａ）自発的交替の展開をＤ７〜Ｄ１００に動物においてＹ迷路で評価した。（Ｂ）受動的回避試験によって評価されるステップスルー待機をＤ９９／１００に行った。１．Ｓｃ．Ａβを注射した動物グループ＋ビヒクル処置。２．Ａβ２５−３５を注射した動物グループ＋ビヒクル処置。３．（グループ３）Ａβ２５−３５を注射した動物グループ＋ドネペジル（１ｍｇ／ｋｇ）。４．（グループ４）Ａβ２５−３５を注射した動物グループ＋Ｄ０７〜Ｄ１００にドネペジル（１ｍｇ／ｋｇ）、そしてＤ４９〜Ｄ１００にアカンプロセート及びバクロフェン（それぞれ０．２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ）を加える。データを平均値及び標準誤差として表す。ｎ＝８、Ａβ２５−３５／ビヒクルグループに対して**ｐ＜０．０１、Ｓｃ．Ａβ／ビヒクルグループに対して###ｐ＜０．００１。ＳＴＬ測定のため、クラスカル−ウォリスの後、ダン検定を行った。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤での処置に反応しない（又は反応性を失った）対象におけるアルツハイマー病（ＡＤ）又はＡＤ関連障害を処置するための新しい治療方法及び組成物を提供することが本発明の目的である。
【００２９】
本発明は、ＡＤ、又は、認知症によって特徴づけられる、並びに／若しくはβアミロイドペプチドの異常プロセシング及び機能に関連する任意の障害などの、ＡＤ関連障害の処置に適する。本発明の文脈において、「ＡＤ関連障害」という用語は、ＡＤ型老年性認知症（ＳＤＡＴ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、血管性認知症、軽度認知障害（ＭＣＩ）、及び加齢性記憶障害（ＡＡＭＩ）、パーキンソン病認知症、レビー小体型認知症、混合型認知症、クロイツフェルト−ヤコブ病、正常圧水頭症、ハンチントン病、ウェルニッケ−コルサコフ症候群、外傷性脳損傷、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、ダウン症候群、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、多発性硬化症を含む。
【００３０】
本明細書で使用するとき、「処置」は、上述の疾患又は障害によって引き起された症状又は上述の疾患若しくは障害の原因の、治療、遅延、又は軽減を含む。処置という用語は、病気の進行及び関連症状のコントロール又は軽減又は回復を特に含む。処置という用語は、特に、処置する対象における、βアミロイド（Ａベータ若しくはＡβが互換的に用いられる）ペプチドによって引き起こされる毒性に対する防護、又は、該毒性の低減若しくは遅延を含む。また、処置という用語は、特に、認知機能若しくは症状の改善、又は神経細胞の防護を指す。
【００３１】
本明細書で使用するとき、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤、より具体的には、ドネペジル、ガランタミン、及びリバスチグミンからなるリストから選ばれるアセチルコリンエステラーゼ阻害剤での処置に対して「無反応／反応しない（反応していない）」又は「反応性を失った」という用語は、該阻害剤に対する反応の完全な又は部分的な欠如を指す。反応の完全な欠如は、阻害剤が患者に任意の恩恵、特に認知における任意の恩恵をもたらさないということを示す。反応の部分な欠如は、阻害剤が患者に最適以下の作用／恩恵、特に認知における最適以下の恩恵をもたらすということを示す。部分的とは、患者において観察される最適な反応の９５％〜１％、典型的に、最適な反応の６０％未満、又は５０％未満など、７０％未満の任意の不完全な作用を意味する。
【００３２】
特定の実施形態において、患者は、その認知能力が上記阻害剤によって改善されない若しくは安定化しない、又はさらにそうした阻害剤での処置にも関わらず低下する（低下し続ける）とき、反応していない。認知能力は、例えば、見当識、記憶、遂行機能、記銘、注意、計算、想起、視空間認知能力、言語又は実行、判断、及び問題解決を指す。当業者は、患者の認知能力を評価する方法を熟知している。これに関して、ＡＤ又はＡＤ関連障害に適用可能な認知試験もまた開発されている。例えば、ＡＤＡＳ−Ｃｏｇ（参考文献２６）、ＭＭＳＥ（参考文献２７）、ＣＤＲ（参考文献２８）、ＣＤＲ−ＳＯＢ若しくはＣＤＲ−ＳＢ（参考文献２９）、ＣＩＢＩＣ（参考文献３０）、ＩＤＤＤ（参考文献３１）、ＩＡＤＬ（参考文献３２）、ＩＳＡＡＣ（参考文献３３）、又はＡＤＣＯＭＳ（参考文献３４）はすべて、ＡＤ又はＡＤ関連障害の患者の認知機能を評価するために一般に使用される試験である。ＡＤＡＳ−Ｃｏｇ（Cognitive subscale of the Alzheimer’s Disease Assessment Scale、アルツハイマー病評価尺度）は、０〜７０のスコア範囲で、見当識、記憶、遂行機能、視空間認知能力、言語又は実行を評価する試験であり、より高いスコアは大きい障害を示す。この試験において、２つの連続する試験におけるスコアの増加は、患者の認知機能障害の増大を反映する。特定の実施形態において、患者のＡＤＡＳ−Ｃｏｇ法におけるスコアが、１か月間隔で行われる２つの試験において少なくとも５％増加する場合、患者は阻害剤に対して反応していない（又は反応性を失っている）。ＭＭＳＥ（Mini-Mental State Examination、ミニメンタルステート検査）は、見当識、記銘、注意、及び計算、想起、及び言語を評価する試験である。ＭＭＳＥは０〜３０のスコア範囲を有し、より高いスコアはより優れた認知機能を示す。この試験において、２つの連続する試験におけるスコアの減少は、患者の認知機能障害の増大を反映する。特定の実施形態において、患者のＭＭＳＥ法におけるスコアが、１か月間隔で行われる２つの試験において少なくとも５％減少する場合、患者は阻害剤に対して反応していない（又は反応性を失っている）。ＣＤＲ−ＳＯＢ／ＣＤＲ−ＳＢ（Clinical Dementia Rating Scale - Sum of Box、臨床認知症評価尺度−ボックス合計)は、０〜１８のスコア範囲で、記憶、見当識、判断及び問題解決、地域社会の活動／関わり、家庭及び趣味、身の回りの世話である６つの認知カテゴリーにおいて機能する患者の能力を評価する試験であり、より高いスコアはより大きな障害を示す。この試験において、２つの連続する試験におけるスコアの増加は、患者の認知機能障害の増大を反映する。特定の実施形態において、患者のＣＤＲ−ＳＯＢ法におけるスコアが、１か月間隔で行われる２つの試験において少なくとも５％増加する場合、患者は阻害剤に対して反応していない（又は反応性を失っている）。患者の認知機能のばらつきを評価するため、少なくとも２つの連続する試験を行う必要がある。２つの試験の間の期間は、１、２、３、若しくは４週、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、若しくは１２か月、又は１、若しくは２年であり得る。また、ＡＤ又はＡＤ関連障害を有する患者は、認知機能が改善又は安定化する���となく少なくとも１２週の期間、好ましくは少なくとも４、５、又は６か月、さらにより好ましくは少なくとも１、２、又は３年、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤で処置しているとき、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に無反応であると考えられ得る。アセチルコリンエステラーゼ阻害剤でアルツハイマーの患者に行われた臨床試験のエビデンスのように、上記阻害剤の使用は、最初の１２週間認知機能を改善させた後、患者の認知機能は再び低下し始め、通常、処置開始後ほんの６か月で、処置前における患者の認知障害のレベルに達する。これは、例えばドネペジル（参考文献２０〜２３）、リバスチグミン（参考文献２４）、及びガランタミン（参考文献２５）で示されている。
【００３３】
本発明の文脈において、特定の薬剤又は化合物の指定は、具体的に名前を挙げた分子だけでなく、任意の化学純度の、任意の薬学的に許容されるそれらの塩、水和物、誘導体、異性体、ラセミ体、コンジュゲート、プロドラッグ、又は誘導体も含むことを意味する。
【００３４】
「組合せ又は併用処置／療法」という用語は、生物学的作用を引き起こすため、少なくともバクロフェンとアカンプロセートとが対象に共に投与されるという処置を指す。同様に、「組合せ又は併用処置／療法」とは、生物学的作用を引き起こすため、少なくともバクロフェン、アカンプロセート、及びアセチルコリンエステラーゼ阻害剤、より具体的にはドネペジル、リバスチグミン、又はガランタミンが対象に共に投与されるという処置を指す。本発明における組合せの療法では、少なくとも２つ又は３つの薬剤を一緒に又は個別に、共に又は連続して投与することができる。また、少なくとも２つ又は３つの薬剤は、種々の経路及びプロトコルによって投与することができる。つまり、これらは一緒に製剤化することができるが、組合せの薬剤をまた個別に製剤化することもできる。
【００３５】
本明細書で使用されるとき、「プロドラッグ」という用語は本発明の化合物の任意の機能性誘導体（又は前駆体）に関し、生体系へ投与されると、例えば自然化学反応、酵素触媒化学反応、及び／又は、代謝化学反応などの結果として前述の化合物が生成されるものである。プロドラッグは、通常、不活性であるか又は生じる薬剤より低活性であり、例えば、薬剤の物理化学的特性の改善、特定組織への薬剤の標的化、薬剤の薬剤動態及び薬力学的特性の改善、並びに／又は、望ましくない副作用を少なくすることなどに使用可能である。プロドラッグの設計に適する一般の官能基の一部として、カルボキシル基、ヒドロキシル基、アミン基、ホスフェート／ホスホネート基及びカルボニル基が含まれるが、これらに限定されない。典型的にこれらの基の修飾によって製造されるプロドラッグは、エステル類、カーボネート類、カルバメート類、アミド類及びホスフェート類を含むが、これらに限定されない。適切なプロドラッグを選択するための詳細な技術ガイダンスは技術常識とされる（参考文献３５〜３９）。さらに、プロドラッグの調製は当業者には既知の従来の方法によって行うことができる。その他のプロドラッグを合成するために使用可能な方法は、本主題の数多くの先行文献に記載されている（参考文献３５〜４２）。例として、アルバクロフェン・プラカルビルは、ＣｈｅｍＩＤ  ｐｌｕｓアドバンスデータベース（ウェブサイトchem.sis.nlm.nih.gov/chemidplus/）に掲載されており、アルバクロフェン・プラカルビルはバクロフェンの既知のプロドラッグである（参考文献４３及び４４）。
【００３６】
化合物の「誘導体」という用語は、そのような化合物の酸、アミド、エステル、エーテル、アセチル化変異体、ヒドロキシル化変異体、又はアルキル化（Ｃ１−Ｃ６）変異体などの、その化合物に機能上及び／又は構造上関連する任意の分子を含む。また、誘導体という用語は、先に挙げたような１つ以上の置換基を失った状態の構造上関連する化合物も含む。例として、ホモタウリンはアカンプロセートの脱アセチル化誘導体である。化合物の好ましい誘導体は、既知の方法で測定するとき、その化合物にある程度の類似性を有する分子である。類似化合物は、親分子とのその類似性指標と共に、ＰｕｂＣｈｅｍ（http://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/search/）又はＤｒｕｇＢａｎｋ（http://www.drugbank.ca/）などの数多くのデータベースに見受けられる（参考文献４５）。より好ましい実施形態では、誘導体は、親薬剤に対して、０．４を超える、好ましくは０．５を超える、より好ましくは０．６を超える、さらにより好ましくは０．７を超える谷本類似性指標（Tanimotosimilarity index）を有する必要がある。谷本類似性指標は、２分子間の構造的類似の程度を測定するために広く使用されている。また谷本類似性指標は、インターネット上で使用可能なｔｈｅ  Ｓｍａｌｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｓｕｂｇｒａｐｈ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒ（http://www.ebi.ac.uk/thornton-srv/software/SMSD/）（参考文献４６〜４７）などのソフトウェアにより解析可能である。好ましい誘導体は構造上及び機能上の両面において親化合物に関連する必要がある、言い換えると、誘導体はまた親薬剤の活性の少なくとも一部を保持する、より好ましくは、誘導体はＡβに対する防護活性を有する必要がある。
【００３７】
また、「誘導体」という用語は薬剤の代謝物も含み、これは例えば、生体への投与後、通常は特殊な酵素系を介したその薬剤の（生化学的）改変又は作用からもたらされて、その薬剤の生物活性を示す又は保持する分子などである。代謝物は親薬剤の治療的作用の多くを担っていることが開示されている。特定の実施形態では、本明細書で使用されるとき「代謝物」は、親薬剤の活性の少なくとも一部を保持し、好ましくはＡβ毒性に対する防護活性を有する、改変又は作用後の薬剤を指す。
【００３８】
「塩」という用語は、薬学的に許容され且つ比較的非毒性である、本発明における化合物の無機又は有機酸付加塩に関する。医薬塩の形成では、酸性、塩基性、又は双性イオン性の薬剤分子を対イオンとペアリングさせて薬剤の塩型を生成することを含む。中和反応に多種多様な化学種を使用することができる。このように、本発明の薬学的に許容される塩は、塩基として機能する主化合物を無機又は有機酸と反応させて塩を形成することにより得られる塩を含み、例として、酢酸、硝酸、酒石酸、塩酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、カンファースルホン酸、シュウ酸、マレイン酸、コハク酸、又はクエン酸の塩が挙げられる。また、本発明の薬学的に許容される塩は、主化合物が酸として機能し、適切な塩基と反応させて、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、アンモニウム塩又はコリン塩などを形成する塩も含む。所定の有効成分の塩の大部分は生物学的に同等であるが、なかでも、溶解性又は生物学的利用能が増加するものもある。現在、塩の選択は、Ｈ．Ｓｔａｈｌ及びＣ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈのハンドブックによる教示のように、薬剤開発過程において一般的な標準作業になっている（参考文献４８）。
【００３９】
好ましい実施形態において、化合物の指定は、化合物自体だけでなく、任意の薬学的に許容されるその塩、水和物、異性体、ラセミ体、エステル、又はエーテルも指すことを意味する。
【００４０】
さらに好ましい実施形態において、化合物の指定は、それ自体を特に指定する化合物だけでなく、任意の薬学的に許容されるその塩も指すことを意味する。
【００４１】
特定の実施形態において、化合物の徐放性製剤が使用される。
【００４２】
上述のように、本発明は、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤で処置され、該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に対する反応性を失った対象における、ＡＤ若しくはＡＤ関連障害に関与するＡβ毒性に対する強力な予期せぬ防護作用、及び／又は認知機能の改善を示す、特定の薬剤の組合せに関する。ゆえに、これらの薬剤の組合せは、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤で処置され、該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に対する反応性を失った対象におけるＡＤ又はＡＤ関連障害を処置する新しい手法に相当する。より具体的に、本発明は、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤で処置され、該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に対する反応性を失った対象のＡＤ又はＡＤ関連障害におけるインビボでの有意な作用を示す、アカンプロセートと組み合わせたバクロフェンを含む組成物を開示する。
【００４３】
実際に、本発明は、実験の項において、バクロフェンとアカンプロセートとを含む組合せの療法により、ＡＤ又はＡＤ関連障害に罹患する患者が既にアセチルコリンエステラーゼ阻害剤で処置されるとともに、該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に対する反応性を失っているなかで、該患者の病状を実質的に改善することができるということを示す。特に、バクロフェンとアカンプロセートとの組合せが、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤で処置されるとともに、該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に対する反応性を失った、ＩＣＶによるβアミロイド中毒動物の認知機能において強力で予期せぬ作用を有し、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤で処置されるとともに、該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に対する反応性を失った対象におけるＡＤ又はＡＤ関連障害の新しい治療の手法に相当する、ということを、発明者らは驚いたことに発見した。実施例において開示されるように、少なくともバクロフェンとアカンプロセートとを用いる組成物療法は、Ａβペプチドにより中毒化されるとともに、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤、より具体的には治療有効量のドネペジルで既に処置された動物における認知機能に強力で予期せぬ作用を有する。より重要な点として、バクロフェンとアカンプロセートとの組合せにより、動物がアセチルコリンエステラーゼ阻害剤に反応しなくなった段階における認知機能を速やかに回復するということを、これらの組合せがインビボにおいて示した。ゆえに、この組合せは、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤で処置され、該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に対する反応性を失った対象におけるＡＤ又はＡＤ関連障害を処置する新しい手法に相当する。
【００４４】
ゆえに、本発明は、バクロフェン及びアカンプロセートの組成物に基づく、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤で処置され、該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に対する反応性を失った対象におけるＡＤ又はＡＤ関連障害のための新しい療法を提案する。
【００４５】
さらなる実施形態において、本発明は、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤で処置され、該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に対する反応性を失った対象におけるＡＤ又はＡＤ関連障害の処置に使用するための、バクロフェンとアカンプロセートとを含む組成物に関する。
【００４６】
さらなる実施形態において、本発明は、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤で処置され、該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に対する反応性を失った対象におけるＡＤ又はＡＤ関連障害を処置する薬剤の製造のためのバクロフェン及びアカンプロセートの使用に関する。
【００４７】
また、本発明は、バクロフェン及びアカンプロセートの組成物に基づく、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤で処置され、該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に対する反応性を失った対象におけるＡＤ又はＡＤ関連障害のための新しい療法を提案し、これにおいて、認知試験における該対象の能力が、同じ認知試験における対象の以前の能力と比較して患者の認知機能障害の増大を示す場合、該対象が該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に無反応であると考えられる。
【００４８】
さらなる実施形態において、本発明は、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤で処置され、該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に対する反応性を失った対象におけるＡＤ又はＡＤ関連障害の処置に使用するための、バクロフェンとアカンプロセートとを含む組成物に関し、これにおいて、認知試験における該対象の能力が、同じ認知試験における対象の以前の能力と比較して患者の認知機能障害の増大を示す場合、該対象が該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に無反応であると考えられる。
【００４９】
さらなる実施形態において、本発明は、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤で処置され、該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に対する反応性を失った対象におけるＡＤ又はＡＤ関連障害を処置する薬剤の製造のためのバクロフェン及びアカンプロセートの使用に関し、これにおいて、認知試験における該対象の能力が、同じ認知試験における対象の以前の能力と比較して患者の認知機能障害の増大を示す場合、該対象が該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に無反応であると考えられる。
【００５０】
本発明は、バクロフェン及びアカンプロセートの組成物に基づく、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤で処置され、該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に対する反応性を失った対象におけるＡＤ又はＡＤ関連障害のための新しい療法をさらに提案し、これにおいて、該対象は、少なくとも１２週の期間後、該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤での処置に対する反応性を失っていると考えられる。
【００５１】
さらなる実施形態において、本発明は、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤で処置され、該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に対する反応性を失った対象におけるＡＤ又はＡＤ関連障害の処置に使用するための、バクロフェンとアカンプロセートとを含む組成物に関し、これにおいて、該対象は、少なくとも１２週の期間後、該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤での処置に対する反応性を失っていると考えられる。
【００５２】
さらなる実施形態において、本発明は、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤で処置され、該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に対する反応性を失った対象におけるＡＤ又はＡＤ関連障害を処置する薬剤の製造のためのバクロフェン及びアカンプロセートの使用に関し、これにおいて、該対象は、少なくとも１２週の期間後、該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤での処置に対する反応性を失っていると考えられる。
【００５３】
バクロフェン及びアカンプロセートの例示のＣＡＳ番号を以下の表１に示す。また、表１は、本発明の組成物に使用されるこれらの化合物の一般的な塩、ラセミ体、プロドラッグ、代謝物、又は誘導体も非限定的に示す。
【表１】
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【００５４】
バクロフェンのプロドラッグの具体例は、Ｈａｎａｆｉ等、２０１１による文献（参考文献４９）に記載されており、特に、中枢神経系標的に特定の指向性を持つバクロフェンエステル及びバクロフェンエステルカルバメートが挙げられる。つまり、そうしたプロドラッグは本発明の組成物に特に適している。前述したバクロフェン・プラカルビルも既知のプロドラッグであり、本発明の組成物においてバクロフェンの代わりに使用することができる。バクロフェンの他のプロドラッグは、国際公開第２０１０／１０２０７１号、米国特許出願公開第２００９／１９７９５８号、国際公開第２００９／０９６９８５号、国際公開第２００９／０６１９３４号、国際公開第２００８／０８６４９２号、米国特許出願公開第２００９／２１６０３７号、国際公開第２００５／０６６１２２号、米国特許出願公開第２０１１／０２１５７１号、国際公開第２００３／０７７９０２号、及び国際公開第２０１０／１２０３７０号の特許出願に見受けられる。
【００５５】
アカンプロセートのパントイン酸エステル、ネオペンチルスルホニルエステル、ネオペンチルスルホニルエステルのプロドラッグ、又は潜在性カルボキシレートネオペンチルスルホニルエステルプロドラッグなどの、アカンプロセートの有用なプロドラッグは、特に、国際公開第２００９／０３３０６９号、国際公開第２００９／０３３０６１号、国際公開第２００９／０３３０５４号、国際公開第２００９／０５２１９１号、国際公開第２００９／０３３０７９号、米国特許出願公開第２００９／００９９２５３号、米国特許出願公開第２００９／００６９４１９号、米国特許出願公開第２００９／００８２４６４号、米国特許出願公開第２００９／００８２４４０号、及び米国特許出願公開第２００９／００７６１４７号に挙げられる。
【００５６】
重視されるように、バクロフェンとアカンプロセートとの組合せは、例えばドネペジル（ＣＡＳ：１２００１４−０６−４）、ガランタミン（ＣＡＳ：３５７−７０−０）、又はリバスチグミン（ＣＡＳ：１２３４４１−０３−２）などのアセチルコリンエステラーゼ阻害剤をさらに含み得る。
【００５７】
このように、本発明の組合せはまた、バクロフェン、アカンプロセート、及びアセチルコリンエステラーゼ阻害剤、より具体的にはドネペジル、ガランタミン、及びリバスチグミンからなるリストから選ばれるアセチルコリンエステラーゼ阻害剤の組合せを含む。
【００５８】
好ましい実施形態において、本発明の薬剤は、最も有効な作用を得るため、組み合わせの、個別の、又は連続の投与のための組合せで用いられる。
【００５９】
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤で処置され、該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に対する反応性を失った対象におけるＡＤ又はＡＤ関連障害の処置に使用するための本発明の好ましい組成物は、組み合わせの、個別の、又は連続の投与のための、以下の薬剤の組合せの１つを含む。
バクロフェンとアカンプロセート、
バクロフェンとアカンプロセートとドネペジル、
バクロフェンとアカンプロセートとリバスチグミン、
バクロフェンとアカンプロセートとガランタミン。
【００６０】
好ましい実施形態において、本発明の薬剤は、最も有効な作用を得るため、組み合わせの、個別の、又は連続の投与のための組合せで用いられる。
【００６１】
他の好ましい実施形態において、処置を必要とする対象はＡＤ又はＡＤ関連障害を有する対象であり、該対象は、既に治療量のアセチルコリンエステラーゼ阻害剤で処置されており、該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤にもはや反応せず、より具体的には、該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤は、ドネペジル、リバスチグミン、及びガランタミンからなるリストから選ばれ、さらにより好ましくはドネペジルである。
【００６２】
他の好ましい実施形態において、処置を必要とする対象はＡＤ又はＡＤ関連障害を有する対象であり、該対象は、既に治療量のアセチルコリンエステラーゼ阻害剤で処置されており、該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤にもはや反応せず、認知試験における該対象の能力が、同じ認知試験における対象の以前の能力と比較して患者の認知機能の障害の増大を示す場合、該対象が該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に無反応であると考えられる。
【００６３】
本発明に使用される認知試験によって評価される認知機能の具体的な例は、見当識、記憶、遂行機能、記銘、注意、計算、想起、視空間認識能力、言語、及び実行である。
【００６４】
本発明に使用される認知試験の具体的な例は、ＡＤＡＳ−Ｃｏｇ、ＭＭＳＥ、ＣＤＲ、ＣＤＲ−ＳＯＢ／ＳＢ、ＣＩＢＩＣ、ＩＤＤＤ、ＱｏＬ、ＩＡＤＬ、ＩＳＡＡＣ、又はＡＤＣＯＭＳである。
【００６５】
２つの連続する試験の間の期間は、１、２、３、若しくは４週、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、若しくは１２か月、又は１、若しくは２年であり得る。
【００６６】
さらなる好ましい実施形態において、処置を必要とする対象はＡＤ又はＡＤ関連障害を有する対象であり、該対象は、既に治療量のアセチルコリンエステラーゼ阻害剤で処置されており、該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤にもはや反応せず、該対象が、少なくとも１２週間、好ましくは４、５〜６か月間、さらにより好ましくは少なくとも１、２、又は３年間アセチルコリンエステラーゼ阻害剤で処置されている場合、該アセチルコリンエステラーゼ阻害剤に無反応であると考えられる。
【００６７】
このように、本発明の目的はまた、上述のようなヒト対象におけるＡＤ又はＡＤ関連障害を処置するための上述のような組成物にある。
【００６８】
前述のように、本発明の組合せ療法において、化合物又は薬剤は、一緒に又は個別に製剤化することができ、一緒に、個別に、又は連続して投与することができる。
【００６９】
本発明のさらなる目的は、上述のようなヒト対象におけるＡＤ又はＡＤ関連障害を処置する薬剤を製造するための上述のような組成物の使用にある。
【００７０】
本発明は、上述のようなヒト対象におけるＡＤ又はＡＤ関連障害を処置する方法をさらに提供し、該方法は、処置を必要とする対象に、有効量の、上述で開示されるような組成物を投与することを含む。
【００７１】
本発明のさらなる目的は、上述のようなヒト対象におけるＡＤ又はＡＤ関連障害を処置する方法であり、該方法は、処置を必要とする対象に、有効量の、上述で開示されるような組成物を、共に、個別に、又は連続して投与することを含む。
【００７２】
好ましい実施形態において、本発明は、処置を必要とする対象における、上述のようなヒト対象におけるＡＤ又はＡＤ関連障害を処置する方法に関し、該方法は、有効量のバクロフェンとアカンプロセートとを共に、個別に、又は連続して対象に投与することを含む。
【００７３】
本発明の組成物は、典型的に、１つ以上の薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む。また、本発明における使用において、薬剤又は化合物は、通常、薬学的に許容される賦形剤又は担体と混合される。
【００７４】
これに関して、本発明のさらなる目的は医薬組成物を調製する方法であって、該方法は、上述の化合物を適切な賦形剤又は担体に混合することを含む。
【００７５】
特定の実施形態において、この方法は、バクロフェンとアカンプロセートとを適切な賦形剤又は担体に混合することを含む。
【００７６】
本発明の好ましい実施形態において、上述したように、化合物はそれ自体で、又は薬学的に許容されるその塩、プロドラッグ、誘導体、若しくは徐放性製剤の形態で使用される。
【００７７】
本発明の組合せ療法は、対象又は具体的な病態に応じてインビボにおいて非常に有効であるが、対象において処置される病態に有益なさらなる薬剤又は処置と併せて、又は共に、又は組み合わせてさらに用いることができる。
【００７８】
本発明における治療は、自宅、医師のオフィス、クリニック、病院の外来部門、又は病院で行われ、医師は治療の効果を綿密に観察し、必要な任意の調整を行うことができる。
【００７９】
治療の継続期間は、処置される疾患の段階、患者の年齢及び状態、並びに患者の処置に対する反応の様子に対応する。組合せの各成分の投与量、投与頻度及び投与モードは独立してコントロールすることができる。例として、１つの薬剤を経口で投与する一方で、第２の薬剤を筋肉内に投与することができる。組合せ療法は、患者の身体が任意の予期せぬ副作用から回復する時間がとれるように休止期間をはさんだ断続的周期で行うことができる。また、薬剤は、１回の投与ですべての薬剤を送達するように一緒に製剤化することができる。
【００８０】
組合せの各薬剤の投与は、他の成分と組み合わせて、患者の状態を改善することができる、又は疾患若しくは障害を効果的に処置できる薬剤の濃度をもたらす任意の適切な手段で行うことができる。
【００８１】
組合せの薬剤を純粋な化学物質として投与することは可能であるが、それらを医薬組成物（この文脈では医薬製剤としても言及される）として提供することが好ましい。適当な組成物は、経口投与、経直腸投与、局所投与（経皮、経口腔及び舌下投与を含む）、又は非経口投与（皮下、筋肉内、静脈内及び皮内投与を含む）に適切なものを含む。
【００８２】
より一般的には、これらの医薬製剤は、所定の処置期間に単一包装（通常はブリスターパック）において使用される多数の単位用量含む「患者用パック」又は計量単位用量を投与するための他の手段で、患者に処方される。患者用パックは、患者が患者用パックに含まれる添付文書を常に利用できる（従来処方では普通は紛失している）という点で、薬剤師が医薬の患者供給分をバルク供給分から分ける従来の処方よりも利点がある。この添付文書の封入により、医師の指示に対する患者コンプライアンスが改善されることが示されている。したがって、本発明は、製剤に適切な包装材料を組み合わせた、本明細書に前述するような医薬製剤をさらに含む。このような患者用パックにおいて、組合せ処置のための意図される製剤の使用は、指示、使いやすさ、提供性、適合性及び／又はその処置に最も適切に製剤を使用することを補助する他の手段によって推察することができる。患者用パックは、このような手段により、本発明の組合せを用いる処置への使用に特に適切であり適合するものである。
【００８３】
薬剤は、任意の適切な担体物質において任意の適量で含有することができる。薬剤は、組成物の総重量の９９重量％以下の量にすることができる。組成物は、経口、非経口（例えば、静脈内、筋肉内）、経直腸、経皮、経鼻、経膣、吸入、皮膚（パッチ）、又は経眼の投与経路に適する投与剤形として提供されるとよい。したがって、組成物は、例えば、錠剤、カプセル剤、丸剤、散剤、顆粒剤、懸濁剤、乳剤、液剤、ヒドロゲルを含むゲル剤、泥膏剤、軟膏剤、クリーム剤、硬膏剤、飲薬、浸透圧送達装置、坐剤、浣腸剤、注射剤、インプラント、噴霧剤、又はエアゾル剤の剤形をとることができる。
【００８４】
医薬組成物は、従来の製薬の実施法薬務に従い製剤化することができる（例えば、参考文献５０、５１を参照）。
【００８５】
本発明における医薬組成物は、実質的に投与直後、又は投与後の任意の所定の時点若しくは期間に活性薬剤を放出するように製剤化することができる。
【００８６】
放出制御製剤は、（ｉ）長時間にわたり体内で実質的に一定濃度の薬剤をもたらす製剤、（ｉｉ）所定の遅延時間後に長時間にわたり体内で実質的に一定濃度の薬剤をもたらす製剤、（ｉｉｉ）活性薬剤物質の血漿レベルの変動に関連する望ましくない副作用を最小限に抑えながら、体内で比較的一定の有効薬剤レベルを維持することにより、所定の期間、薬剤作用を持続させる製剤、（ｉｖ）例えば患部組織若しくは臓器の近く、又はその中に放出制御組成物を空間配置することにより、薬剤作用を局在化させる製剤、及び（ｖ）薬剤を特定の標的細胞型に送達するために担体又は化学的誘導体を使用することにより、薬剤作用を標的化させる製剤、を含む。
【００８７】
放出制御製剤の剤形における薬剤の投与は、その薬剤が、（ｉ）低い治療指数（即ち、有害な副作用又は毒性反応をもたらす血漿濃度と治療効果をもたらす血漿濃度との間の差が小さい。一般に、治療指数（ＴＩ）は、５０％有効量（ＥＤ５０）に対する５０％致死量（ＬＤ５０）の比として規定される）、（ｉｉ）狭い消化管吸収域、又は（ｉｉｉ）非常に短い生物学的半減期（これにより、血漿レベルを治療レベルに維持するために１日に頻回の投与が必要となる）を有する場合に特に好ましい。
【００８８】
対象の薬剤の放出速度が代謝速度を上回る放出制御を得るために、多数の方策のいずれも追求することができる。放出制御は、例えば様々なタイプの放出制御組成物やコーティングを含む、種々の製剤パラメータ及び成分を適切に選択することにより得られる。したがって、薬剤は、適切な賦形剤で、投与により薬剤を制御放出する医薬組成物に製剤化される（単一又は複数単位の錠剤又はカプセル剤組成物、油性液剤、懸濁剤、乳剤、マイクロカプセル、マイクロスフェア、ナノ粒子、パッチ、及びリポソーム）。
【００８９】
＜経口使用のための固体投与剤形＞
経口使用のための製剤は、薬学的に許容される非毒性の賦形剤との混合物中に本発明の組成物を含む錠剤を含む。これらの賦形剤は、例として、不活性希釈剤又は充填剤（例えばショ糖、微結晶性セルロース、バレイショデンプンを包むデンプン、炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、又はリン酸ナトリウム）、顆粒剤及び崩壊剤（例えば微結晶性セルロースを含むセルロース誘導体、バレイショデンプンを含むデンプン、クロスカルメロースナトリウム、アルギネート、又はアルギン酸）、結合剤（例えばアカシア、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、デンプン、アルファ化デンプン、微結晶性セルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、エチルセルロース、ポリビニルピロリドン、又はポリエチレングリコール）、並びに潤滑剤、滑剤、及び粘着防止剤（例えばステアリン酸、シリカ、又はタルク）であるとよい。他の薬学的に許容される賦形剤は、着色剤、香料、可塑剤、湿潤剤、緩衝剤などであり得る。
【００９０】
錠剤は、素錠であるか、又は任意的に消化管での崩壊や吸収を遅延させることにより長時間にわたる持続作用を得るために、既知の手法によりコーティングすることができる。コーティングは、薬剤活性物質を所定のパターンで放出するようにつくる（例えば、放出制御製剤を得るため）、又は胃の通過後まで薬剤活性物質を放出しないようにつくる（腸溶性コーティング）ことができる。コーティングは、糖衣、フィルムコーティング（例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、メチルヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、アクリレート共重合体、ポリエチレングリコール及び／若しくはポリビニルピロリドンに基づく）、又は腸溶コーティング（例えば、メタクリル酸共重合体、酢酸フタル酸セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、ポリビニルアセテートフタレート、セラック、及び／若しくはエチルセルロースに基づく）であってもよい。また、例えばモノステアリン酸グリセリル又はジステアリン酸グリセリルなどの時間遅延物質を利用することができる。
【００９１】
固体の錠剤組成物は、不要な化学変化（例えば活性薬剤物質の放出前の化学分解）から組成物を保護するように構成したコーティングを含むことができる。コーティングは、Encyclopedia of Pharmaceutical Technologyに記載されるものと同様の方法で固体投与剤形に施すことができる。
【００９２】
薬剤は、錠剤において混合されている、又は仕切られている。例として、第１の薬剤の放出前に第２の薬剤の大部分が放出されるように、第１の薬剤は錠剤の内側に、そして第２の薬剤は外側に含まれる。
【００９３】
また、経口使用のための製剤は、チュアブル錠として、又は活性成分が不活性固体希釈剤（例えばバレイショデンプン、微結晶性セルロース、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム若しくはカオリン）と混合された硬ゼラチンカプセル剤として、又は活性成分が水性媒体又は流動パラフィン若しくはオリーブ油などの油性媒体と混合された軟ゼラチンカプセル剤として提供されることもできる。散剤及び顆粒剤は、錠剤及びカプセル剤について上記で述べた成分を用いて、従来法で調製することができる。
【００９４】
経口使用のための放出制御組成物は、例えば、活性薬剤物質の溶解及び／又は拡散をコントロールすることにより活性薬剤を放出するように構成されるとよい。
【００９５】
溶解制御放出又は拡散制御放出は、薬剤の錠剤製剤、カプセル剤製剤、ペレット製剤、若しくは顆粒製剤に適切なコーティングを施すことにより、又は薬剤を適切なマトリックスに組み込むことにより得ることができる。放出制御コーティングは、上記のコーティング物質のうちの１種以上、並びに／又は、例えば、セラック、ミツロウ、グリコワックス（ｇｌｙｃｏｗａｘ）、ヒマシ油、カルナウバロウ、ステアリルアルコール、モノステアリン酸グリセリル、ジステアリン酸グリセリル、パルミトステアリン酸グリセロール、エチルセルロース、アクリル樹脂、ｄｌ−ポリ乳酸、酢酸酪酸セルロース、ポリ塩化ビニル、ポリ酢酸ビニル、ビニルピロリドン、ポリエチレン、ポリメタクリレート、メチルメタクリレート、２−ヒドロキシメタクリレート、メタクリレートヒドロゲル、１，３−ブチレングリコール、エチレングリコールメタクリレート、及び／若しくは、ポリエチレングリコールを含むことができる。また、放出制御マトリックス製剤において、マトリックス材料は、例えば水和メチルセルロース、カルナウバロウ及びステアリルアルコール、カーボポール９３４（ｃａｒｂｏｐｏｌ  ９３４）、シリコーン、トリステアリン酸グリセリル、メチルアクリレート−メチルメタクリレート、ポリ塩化ビニル、ポリエチレン、及び／又は、ハロゲン化フルオロカーボンを含むことができる。
【００９６】
また、本願に記載の組合せにおける１種以上の薬剤を含む放出制御組成物は、浮揚性錠剤又はカプセル剤（即ち、経口投与されると、所定の時間、胃の内容物上に浮いている錠剤又はカプセル剤）の剤形であってもよい。薬剤の浮揚性錠剤の製剤は、賦形剤及び２０〜７５％（ｗ／ｗ）の親水コロイド（ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、又はヒドロキシプロピルメチルセルロースなど）と薬剤との混合物を顆粒化することにより調製することができる。そして、得られた顆粒は次に錠剤へと圧縮することができる。この錠剤は、胃液と接触すると、その表面周囲に実質上水不透過性のゲルバリアを形成する。このゲルバリアは１未満の密度を維持することに関与し、それによって錠剤が胃液中で浮揚性を保持できる。
【００９７】
＜経口投与用液剤＞
水の添加による水性懸濁液の調製に適する散剤、分散性散剤、又は顆粒剤は、経口投与に適した投与剤形である。懸濁液としての製剤は、分散剤又は湿潤剤、懸濁剤、及び１種以上の保存剤との混合物において活性成分を提供する。適切な懸濁剤は、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、アルギン酸ナトリウムなどである。
【００９８】
＜非経口投与用組成物＞
また、医薬組成物は、薬学的に許容される従来の非毒性の担体及びアジュバントを含む、投与剤形、製剤で、又は適切な送達装置若しくはインプラントを介して、注射、点滴、又はインプラント（静脈内、筋肉内、皮下など）によって非経口投与することができる。このような組成物の製剤及び調製は医薬品製剤における当業者には周知である。
【００９９】
非経口使用の組成物は、適切な保存剤が添加され得る（以下を参照のこと）単位投与剤形として（例えば、単回投与用アンプルとして）、又は数回の用量を含むバイアルとして提供することができる。組成物は、液剤、懸濁剤、乳剤、点滴装置、若しくはインプラント用の送達装置の形態をとることができ、又は使用前に水若しくは別の適切なビヒクルで再構成されるドライパウダーとして提供することができる。組成物は、活性薬剤の他に、非経口投与に許容される適切な担体及び／又は賦形剤を含むことができる。活性薬剤は、制御放出のためにマイクロスフェア、マイクロカプセル、ナノ粒子、リポソームなどに組み込むことができる。組成物は、懸濁化剤、可溶化剤、安定化剤、ｐＨ調整剤、及び／又は分散化剤を含むことができる。
【０１００】
本発明における医薬組成物は滅菌注射に適した剤形であり得る。このような組成物を調製するため、適切な活性薬剤を非経口投与に許容される液体ビヒクルに溶解又は懸濁する。利用され得る許容可能なビヒクル及び溶媒は、水、適切なｐＨに調整するために適量の塩酸、水酸化ナトリウムを添加した水、又は適切な緩衝剤、１，３−ブタンジオール、リンゲル液、及び生理食塩液である。また、水性製剤は１種以上の保存剤（例えばｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチル、又はｐ−ヒドロキシ安息香酸ｎ−プロピル）を含むことができる。化合物の１つが水にあまり溶けないか又はわずかに溶ける場合に、溶解増強剤もしくは可溶化剤を添加することができ、あるいはこの溶媒に１０〜６０％（ｗ／ｗ）のプロピレングリコールなどを含ませるとよい。
【０１０１】
非経口放出制御組成物は、水性懸濁剤、マイクロスフェア、マイクロカプセル、磁性マイクロスフェア、油性液剤、油性懸濁剤、又は乳剤の剤形であるとよい。あるいは、活性薬剤は、生体適合性の担体、リポソーム、ナノ粒子、インプラント、又は点滴装置に組み込むことができる。マイクロスフェア及び／又はマイクロカプセルの調製に使用される材料は、例えば、ポリグラクチン、ポリ（イソブチルシアノアクリレート）、ポリ（２−ヒドロキシエチル−Ｌ−グルタミン）などの、生分解性／生浸食性（bioerodible）ポリマーである。非経口放出制御製剤を製剤化するときに使用され得る生体適合性担体は、炭水化物（例えばデキストラン）、タンパク質（例えばアルブミン）、リポタンパク質、又は抗体である。インプラントに使用される材料は、非生分解性（例えばポリジメチルシロキサン）、又は生分解性（例えばポリ（カプロラクトン）、ポリ（グリコール酸）、若しくはポリ（オルトエステル））であり得る。
【０１０２】
＜その他の経路＞
好ましさや便利さには欠けるが、他の投与経路やそのための他の製剤が考慮され得る。これに関して、直腸用途では、組成物に適する投与剤形は、坐剤（乳剤又は懸濁剤型）、及び直腸用ゼラチンカプセル剤（液剤又は懸濁剤）を含む。典型的な坐剤製剤では、活性薬剤は、カカオバター、エステル化脂肪酸、グリセリンゼラチンなどの薬学的に許容される適切な坐剤基剤、及びポリエチレングリコールなど種々の水溶性又は分散性基剤と組み合わせられる。種々の添加剤、増強剤、又は界面活性剤を組み込むことができる。
【０１０３】
また、医薬組成物は、マイクロスフェアやリポソームを含む薬学的に許容される従来の非毒性の担体及び賦形剤を含む投与剤形又は製剤として、経皮吸収するように皮膚に局所投与することができる。製剤は、クリーム剤、軟膏剤、ローション剤、リニメント剤、ゲル剤、ヒドロゲル剤、液剤、懸濁剤、スティック剤、噴霧剤、泥膏剤、硬膏剤、及び他の種類の経皮薬物送達システムを含む。薬学的に許容される担体又は賦形剤は、乳化剤、酸化防止剤、緩衝化剤、保存剤、保湿剤、浸透促進剤、キレート化剤、ゲル形成剤、軟膏基剤、香料、及び皮膚保護剤を含むことができる。
【０１０４】
保存剤、保湿剤、浸透促進剤は、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル若しくはｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピルなどのパラベン、及び塩化ベンザルコニウム、グリセリン、プロピレングリコール、尿素などであってもよい。
【０１０５】
また、皮膚への局所投与ついて前述された医薬組成物は、処置される身体の箇所又はその近傍への局所投与に関連して使用することができる。組成物は、直接的な塗布か、又は、包帯あるいは硬膏、パッド、スポンジ、ストリップ、若しくは他の形態の可撓性の適切な材料などの特別な薬物送達手段による塗布に適応させることができる。
【０１０６】
＜投与量及び処置の期間＞
組合せの薬剤は、同一若しくは異なる医薬製剤のいずれかで共に、又は連続して投与することができるということが理解される。連続して投与する場合、第２の（又は追加の）活性成分の投与における遅延時間は、活性成分の組合せにおける有効な作用の恩恵を失わないようにする必要がある。本記載の組合せにとって最小限の要件は、組合せでは、活性成分の組合せにおける有効な作用の恩恵のある組合せでの使用を意図する必要があるということである。意図される組合せでの使用は、使いやすさ、提供性、適合性及び／又は本発明の組合せの使用を補助する他の手段によって推察することができる。
【０１０７】
本発明の組合せにおける薬剤の治療有効量は、例えば、アルツハイマー病又はアルツハイマー病関連障害の症状を軽減するため、臨床的に疾患の進行が明らかになるとそれを停止若しくは遅延させるために有効である量を含む。
【０１０８】
本発明の活性薬剤はそれぞれ、一緒に、個別に、又は連続して投与される、単一用量、又は、分割用量で、例えば１日２回、３回、又は４回投与することができる。組合せにおける各薬剤の１日単回用量が好ましく、単一医薬組成物（単位投与剤形）におけるすべての薬剤の１日単回用量が最も好ましい。
【０１０９】
投与は、数日から数年間にわたって１日１回から複数回行われ得、患者の生涯にわたることすらあり得る。長期にわたる投与又は少なくとも定期的に繰り返される長期投与が多くの症例において提示される。
【０１１０】
「単位投与剤形」という用語は、ヒト対象のための単位投与量として適した物理的に個別のユニット（カプセル剤、錠剤、又は充填済み注射シリンジなど）を指し、各ユニットは、必要とされる製剤担体を伴って、所望の治療効果を生じるように算出された所定量の活性物質を含む。
【０１１１】
好ましい単位投与組成物における各薬剤の量は、投与方法、患者の体重及び年齢、疾患の段階、処置される個人の一般的健康状態を考慮した潜在的な副作用のリスクを含む複数の要因に対応するものである。さらに、特定の患者についての薬理遺伝学（治療薬の薬物動態、薬力学又は有効性プロファイルにおける遺伝子型の影響）情報が、使用投与量に影響し得る。
【０１１２】
高投与量が必要とされ得る特に障害性の症例の対応時を除いて、組合せにおける各薬剤の好ましい投与量は、通例、長期維持的処置に通常処方されるか又は第３フェーズ臨床試験において安全が証明された投与量を超えない用量の範囲内である。
【０１１３】
本発明に使用される薬剤の投与量の具体例は、
１〜１０００ｍｇ／ｄａｙ、好ましくは４００ｍｇ／ｄａｙ未満、より好ましくは２００ｍｇ／ｄａｙ未満、さらにより好ましくは５０ｍｇ／ｄａｙ未満のアカンプロセート（このような用量は経口投与に特に適する）、
０．０１〜１５０ｍｇ／ｄａｙ、好ましくは１００ｍｇ／ｄａｙ未満、より好ましくは５０ｍｇ／ｄａｙ未満、さらにより好ましくは２５ｍｇ／ｄａｙ未満のバクロフェン（このような用量は経口投与に特に適する）、
０．１〜１００ｍｇ／ｄａｙ、好ましくは０．５〜５０ｍｇ／ｄａｙ、より好ましくは１〜２０ｍｇ／ｄａｙ、より好ましくは４〜１５ｍｇ／ｄａｙ、さらにより好ましくは５ｍｇ／ｄａｙ又は１０ｍｇ／ｄａｙのドネペジル（このような用量は経口投与に特に適する）、
０．１〜１００ｍｇ／ｄａｙ、好ましくは１〜５０ｍｇ／ｄａｙ、より好ましくは８〜４０ｍｇ／ｄａｙ、より好ましくは１６〜３２ｍｇ／ｄａｙ、さらにより好ましくは２４ｍｇ／ｄａｙのガランタミン（このような用量は経口投与に特に適する）、
０．１〜１００ｍｇ／ｄａｙ、好ましくは０．５〜５０ｍｇ／ｄａｙ、より好ましくは１〜３０ｍｇ／ｄａｙ、より好ましくは３〜１８ｍｇ／ｄａｙ、さらにより好ましくは３ｍｇ／ｄａｙ、６ｍｇ／ｄａｙ、９ｍｇ／ｄａｙ又は１８ｍｇ／ｄａｙのリバスチグミン（このような用量は経口投与に特に適する）、である。
【０１１４】
本発明の組成物において、バクロフェンとアカンプロセートとは種々の比、例えば、０．０５〜１０００（Ｗ：Ｗ）、好ましくは０．０５〜１００（Ｗ：Ｗ）、より好ましくは０．０５〜５０（Ｗ：Ｗ）の間に含まれるアカンプロセート／バクロフェンの重量比において使用することができる。
【０１１５】
実際に投与される薬剤の量は、処置される疾患、投与されるその組成物、各患者の年齢、体重及び反応、患者の症状の重症度、並びに選択される投与経路を含む関連する状況に照らして、医師により決定されるということが理解される。したがって、上述の投与量範囲は、本明細書における教示の一般的なガイダンス及びサポートを提供するものであって、本発明の範囲を限定するものではない。
【０１１６】
以下の実施例は例示の目的で提供され、限定するものではない。
【実施例】
【０１１７】
［Ａ)治療有効量のドネペジルに無反応のインビボモデルにおけるＡβ毒性に関連する疾患のバクロフェン及びアカンプロセートの処置］
＜プロトコル＞
＜＜動物＞＞
体重３０〜３５ｇのオスのスイスマウスをジャンヴィエ研究所（Saint Berthevin、仏国）から購入した。飼育及び実験は、ＡＭＹＬＧＥＮの動物施設内で行った（Direction Regionale de l'Alimentation, de l'Agriculture et de la Foret du Languedoc-Roussillon, agreement #A 34-169-002 from May 02, 2014）。挙動実験時以外は、飼料と水とを適宜利用できるように、動物をグループで飼育した。温度及び湿度をコントロールし、動物施設を１２ｈ／１２ｈの明暗周期下においた（午後７時に消灯）。油性マーカーを用いて尾に標識づけしてマウスに番号をつけた。すべての動物の処置は、２０１０年９月２２日の欧州連合指令（2010/63/UE）を厳守して行われる。
【０１１８】
動物の衛生、動物の一般的状態、及び活動を毎日確認した。体重を１週間に３回モニターした。急性又は遅延性死亡率を確認した。
【０１１９】
＜＜アミロイドペプチド注射（ＩＣＶによる）＞＞
オスのスイスマウスを、イソフルラン２．５％で５分麻酔した。１日目に、動物に、４ｍｍ長の２８ゲージステンレス鋼針によって脳室内（ＩＣＶ）注射した。３μｌの注射量を３０秒内に徐々に送達し、さらに３０秒間、針をその位置においてから、取り除いた。以前に記載された方法（参考文献５２〜５６）に従って、アミロイドペプチド２５−３５（Ａβ２５−３５）ペプチド（９ｎｍｏｌ／ｍｏｕｓｅ）又はスクランブルＡβペプチド（Ｓｃ．Ａβ）（９ｎｍｏｌ／ｍｏｕｓｅ）を、３μｌ／ｍｏｕｓｅの最終量で、動物に注射した。ＡＭＹＬＧＥＮ独自の方法に従って、Ａβ２５−３５ペプチドの均質な調製を行った。
【０１２０】
＜＜処置＞＞
すべての動物に、ｉｎｏｘスチールカニューレを用いて強制経口投与を行った（５ｍＬ／ｋｇ）。すべての処置は、各マウスの個々の体重に応じて算出した量で投与した（５ｍＬ／ｋｇ）。ビヒクル及びドネペジル（１ｍｇ／ｋｇ）の投与を１日１回行い、混合のアカンプロセート／バクロフェンの投与を１日２回行った（それぞれ０．２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ）。
【０１２１】
第１セットの実験において（図１Ａ）、ドネペジル（１ｍｇ／ｋｇ）の処置を、ｉｃｖ注射後１９日（Ｄ２０）で開始し、２１日間行った（Ｄ４０）（グループ３及び４）。Ｄ３０において、ドネペジル処置の一グループの動物に、ドネペジル処置に加え、アカンプロセートとバクロフェンと（それぞれ０．２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ）を投与した（グループ４）。
【０１２２】
第２セットの実験において（図１Ｂ）、ドネペジル（１ｍｇ／ｋｇ）（グループ５）又はアカンプロセートとバクロフェンとの組合せ（それぞれ０．２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ）（グループ７）の処置を、ｉｃｖ注射後１９日（Ｄ２０）で開始し、２つのグループの動物において２３日間行った（Ｄ４２）。最初にドネペジルで処置した第３グループの動物（グループ６）では、ドネペジルでの処置をＤ３０に停止し、Ｄ４２までアカンプロセートとバクロフェンと（それぞれ０．２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ）の投与に置き換えた。
【０１２３】
＜＜自発的交替能力（Ｙ迷路）＞＞
空間作業記憶の指標であるＹ迷路における自発的交替能力について、マウスを試験した。Ｙ迷路は、Ｉｔｏｈ等、１９９３（参考文献５７）、並びにＨｉｒａｍａｔｓｕ及びＩｎｏｕｅ、１９９９（参考文献５８）に従って設計され、灰色のポリ塩化ビニル製である。各アーム部は、長さ４０ｃｍ、高さ１３ｃｍ、底部幅３ｃｍ、上部幅１０ｃｍであり、等しい角度で連結する。各マウスを１つのアーム部の端部に配置し、８分のセッション時に迷路を自由に動き回らせた。同一のアーム部に戻り得ることを含む一連のアーム部進入を、処置に盲検である実験者によって目視で確認した。交替は３つのアーム部すべてに連続的に進入する場合と定める。したがって、最大の交替回数はアーム部への総進入回数引く２であり、交替率は（実際の交替数／最大の交替数）×１００で算出された。算出したパラメータは、交替率（記憶指標）及びアーム部への総進入回数（探査指標）であった（参考文献５２〜５６）。
【０１２４】
極端な挙動を示す動物（交替率＜２０％、若しくは＞９０％、又はアーム部への進入回数＜８）は除いた。第１セットの実験において（図１Ａ）、処置開始後、Ｄ３０及びＤ３８に、動物を試験した。第２セットの実験において（図１Ｂ）、処置開始後、Ｄ３０及びＤ４０に、動物を試験した。
【０１２５】
＜＜受動的回避試験（ＳＴＰＡ）＞＞
文脈長期記憶の指標である受動的回避能力について、すべての動物を試験した。装置は２つの区画（１５ｃｍ×２０ｃｍ×高さ１５ｃｍ）の箱であり、１区画は白色ポリ塩化ビニルの壁で明るく、もう１区画は黒色ポリ塩化ビニルの壁で暗くなっており、格子状の床を有するものである。各区画はギロチン戸で隔てられている。装置の４０ｃｍ上に配置された６０Ｗの照明が実験時に白色の区画を照らす。格子状の床には、ショック発生スクランブラ（shock generator scrambler）（MedAssociates、米国）を使用して、無作為のフットショック（３秒間の０．３ｍＡ）が行われる。訓練セッション時、最初にギロチン戸を閉じておいた。各マウスを白色の区画に配置した。５秒後に戸を上昇させた。マウスが暗い区画に入り四肢を格子状の床に着けたとき、戸を閉じ、フットショックを３秒間行った。ステップスルー待ち時間、つまり暗い区画に入るのにかかる待ち時間、及び発声回数を記録した。記憶テストを訓練の２４時間後に行った。各マウスを再び白色の区画に配置した。５秒後に戸を上昇させた。ステップスルー待ち時間を３００秒のカットオフ時間まで記録した（参考文献５２〜５６）。
【０１２６】
第１セットの実験において（図１Ａ）、処置開始後、Ｄ３９及びＤ４０に、動物を試験した。第２セットの実験において（図１Ｂ）、処置開始後、Ｄ４１及びＤ４２に、動物を試験した。
【０１２７】
＜＜統計分析＞＞
すべての値を平均値±標準誤差として表した。一元配置のＡＮＯＶＡ（Ｆ値）、その後にダネット事後多重比較検定を用いて、統計分析を種々の条件において行った。上限カットオフ時間を設定したので、受動的回避待ち時間はガウス分布に従うものではない。したがって、これらは、クラスカル−ウォリスのノンパラメトリックＡＮＯＶＡ（Ｈ値）、その後にダン多重比較検定を用いて分析した。ｐ＜０．０５を統計的に有意であるとした。
【０１２８】
＜結果＞
１日目に、すべての動物に、Ａβ又はＳｃ．ＡβのＩＣＶ注射を行った。病変が既に現れている、ＩＣＶ後１９日（Ｄ２０）からＤ４０に、ドネペジル、アカンプロセートとバクロフェンとの組合せ、又はビヒクルでの処置を開始した。Ｄ３０において、ドネペジルで処置した一グループの動物に、アカンプロセートとバクロフェンとを少なくとも１１日間加えた（Ｄ３０〜Ｄ４０又はＤ４２）。Ｄ３０において、これもドネペジルで処置した他のグループの動物は、ドネペジルでの処置を停止し、代わりにアカンプロセートとバクロフェンとの組合せを投与した。動物の認知機能を、Ｄ３０、及びＤ３８又はＤ４０に自発的交替能力試験によって試験し、Ｄ３９〜４０、又はＤ４１〜４２に受動的回避試験について試験した（図１Ａ及び図１Ｂ）。
【０１２９】
Ｙ迷路によって評価される自発的交替能力は、動物の空間作業記憶を表す。Ｓｃ．ＡβのＩＣＶ注射と比較して、１回のＡβ２５−３５のＩＣＶ注射により認知障害を誘発することができることが示されている。ドネペジル（１ｍｇ／ｋｇ）、又はアカンプロセートとバクロフェンとの組合せ（それぞれ０．２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ）でＤ２０に開始した、１１日の処置により、Ａβ２５−３５誘発認知障害が部分的に軽減された（図２Ａ〜図２Ｂ）。ドネペジルの活性は、長期の処置期間後（Ｄ２０〜Ｄ３８又はＤ４０）、全面的に失われた（図２Ｃ〜図２Ｄ）。アカンプロセートとバクロフェンとの組合せ（それぞれ０．２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ）の活性は、長期の処置期間後、向上した（図２Ｂ〜図２Ｄ）。特に、１０日のドネペジル処置、その後の単独の（図２Ｄ）又はドネペジルに加えた（図２Ｃ）最大１１日間のアカンプロセート及びバクロフェン（それぞれ０．２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ）により、Ａβ２５−３５誘発認知障害を十分に回復した。
【０１３０】
受動的回避試験は恐怖条件づけ記憶を表し、また長期記憶に関連する。Ｓｃ．ＡβのＩＣＶ注射と比較して、１回のＡβ２５−３５のＩＣＶ注射により認知障害を誘発することができることが示されている。ドネペジル（１ｍｇ／ｋｇ）、又はアカンプロセートとバクロフェンとの組合せ（それぞれ０．２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ）（Ｄ２０〜Ｄ４０又はＤ４２）で処置した動物のステップスルー待ち時間及び脱出待ち時間は、Ｓｃ．Ａβ注射動物グループ＋ビヒクルより有意に少ない。試験条件下でＤ２０に投与したとき、ドネペジル（１ｍｇ／ｋｇ）単独、又はバクロフェンとアカンプロセートとの組合せ（それぞれ０．２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ）単独により、長期記憶が部分的に回復することを、このデータは示唆した（図３）。特に、最初にドネペジル（１ｍｇ／ｋｇ）で処置し、単独の（図３Ｂ〜図３Ｄ）又はドネペジル処置に加えて（図３Ａ〜図３Ｃ）アカンプロセート及びバクロフェン（それぞれ０．２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ）（Ｄ３０〜Ｄ４０、Ｄ４２）を投与した動物は、受動的回避試験によって評価される恐怖条件づけ記憶において、Ｓｃ．Ａβ注射動物グループ＋ビヒクルと、同等の能力を示した。
【０１３１】
＜結論＞
Ｄ２０〜Ｄ３０に投与したＤＮＰ（１ｍｇ／ｋｇ）は、Ｙ迷路によって評価されるＡβ２５−３５誘発認知障害を回復する部分的活性を示した。Ｄ３８〜Ｄ４０において、この作用は持続しなかった。
【０１３２】
Ｄ２０〜Ｄ３０に投与したアカンプロセートとバクロフェンとの組合せ（それぞれ０．２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ）は、Ｙ迷路によって評価されるＡβ２５−３５誘発認知障害を部分的に回復することができた。この作用は、Ｄ４０において実質的に向上した。
【０１３３】
ドネペジル（１ｍｇ／ｋｇ）で１０日間（Ｄ２０〜Ｄ２９）、その後アカンプロセート及びバクロフェン（それぞれ０．２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ）でさらに１３日間（Ｄ３０〜Ｄ４２）動物を処置したとき、アカンプロセート及びバクロフェンでの処置により、Ｙ迷路及び受動的回避試験によって評価されるＡβ２５−３５誘発認知障害を十分に回復することができた。
【０１３４】
同様に、ドネペジル（１ｍｇ／ｋｇ）で２１日間（Ｄ２０〜Ｄ４０）、アカンプロセート及びバクロフェン（それぞれ０．２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ）を加えてその後１１日間（Ｄ３０〜Ｄ４０）動物を処置したとき、組合せ処置により、Ｙ迷路及び受動的回避試験によって評価されるＡβ２５−３５誘発認知障害を十分に回復することができた。
【０１３５】
これらのデータは、単独の、又はドネペジル処置におけるアドオン療法としてのアカンプロセート及びバクロフェンの投与により、ドネペジル処置に対してその反応性を失ったマウスにおいて認知障害を十分に回復することができることを示した。
【０１３６】
Ａβ２５−３５誘発認知障害の同じモデルにおいて、同じ用量及び同じ処置期間のバクロフェンとアカンプロセートとの組合せの単独投与が、マウスの認知障害を十分に回復できないことを考慮すると、この結果は特に驚くものであった。
【０１３７】
［Ｂ)インビボモデルにおけるＡβ毒性に関連する疾患のドネペジル処置］
＜プロトコル＞
＜＜動物＞＞
体重３０〜３５ｇのオスのスイスマウスをジャンヴィエ研究所（Saint Berthevin、仏国）で購入した。飼育及び実験は、ＡＭＹＬＧＥＮの動物施設内で行った（Direction Regionale de l'Alimentation, de l'Agriculture et de la Foret du Languedoc-Roussillon, agreement #A 34-169-002 from May 02, 2014）。挙動実験時以外は、飼料と水とを適宜利用できるように、動物をグループで飼育した。温度及び湿度をコントロールし、動物施設を１２ｈ／１２ｈの明暗周期下においた（午後７時に消灯）。油性マーカーを用いて尾に標識づけしてマウスに番号をつけた。すべての動物の処置は、２０１０年９月２２日の欧州連合指令（2010/63/UE）を厳守して行われる。
【０１３８】
動物の衛生、動物の一般的状態、及び活動を毎日確認した。体重を１週間に３回モニターした。急性又は遅延性死亡率を確認した。
【０１３９】
＜＜アミロイドペプチド注射（ＩＣＶによる）＞＞
オスのスイスマウスを、イソフルラン２．５％で５分麻酔した。１日目（Ｄ０１）に、動物に、４ｍｍ長の２８ゲージステンレス鋼針によって脳室内（ＩＣＶ）注射した。３μｌの注射量を３０秒内に徐々に送達し、さらに３０秒間、針をその位置においてから、取り除いた。以前に記載された方法（参考文献５２〜５６）に従って、アミロイドペプチド２５−３５（Ａβ２５−３５）ペプチド（９ｎｍｏｌ／ｍｏｕｓｅ）又はスクランブルＡβペプチド（Ｓｃ．Ａβ）（９ｎｍｏｌ／ｍｏｕｓｅ）を、３μｌ／ｍｏｕｓｅの最終量で、動物に注射した。ＡＭＹＬＧＥＮ所有の方法に従って、Ａβ２５−３５ペプチドの均質な調製を行った。
【０１４０】
＜＜処置＞＞
すべての動物に、ｉｎｏｘスチールカニューレを用いて強制経口投与を行った。Ｄ８〜Ｄ１７まで、又はＤ２０〜Ｄ３０まで、又はＤ２０〜Ｄ４０に、１日に１回、ビヒクル又はドネペジル（１ｍｇ／ｋｇ）を投与した。すべての処置は、各マウスの個々の体重に応じて算出した量で投与した（５ｍＬ／ｋｇ）。
【０１４１】
＜＜自発的交替能力（Ｙ迷路）＞＞
空間作業記憶の指標であるＹ迷路における自発的交替能力について、マウスを試験した。Ｙ迷路は、Ｉｔｏｈ等、１９９３（参考文献５７）、並びにＨｉｒａｍａｔｓｕ及びＩｎｏｕｅ、１９９９（参考文献５８）に従って設計され、灰色のポリ塩化ビニル製である。各アーム部は、長さ４０ｃｍ、高さ１３ｃｍ、底部幅３ｃｍ、上部幅１０ｃｍであり、等しい角度で連結する。各マウスを１つのアーム部の端部に配置し、８分のセッション時に迷路を自由に動き回らせた。同一のアーム部に戻り得ることを含む一連のアーム部進入を、処置に盲検である実験者によって目視で確認した。交替は３つのアーム部すべてに連続的に進入する場合と定める。したがって、最大の交替回数はアーム部への総進入回数引く２であり、交替率は（実際の交替数／最大の交替数）×１００で算出された。算出したパラメータは、交替率（記憶指標）及びアーム部への総進入回数（探査指標）であった（参考文献５２〜５６）。
【０１４２】
極端な挙動を示す動物（交替率＜２０％、若しくは＞９０％、又はアーム部への進入回数＜８）は除いた。処置開始後、Ｄ１５、Ｄ２８、Ｄ３０及びＤ３８に、動物を毎週試験した。
【０１４３】
＜＜受動的回避試験（ＳＴＰＡ）＞＞
文脈長期記憶の指標である受動的回避能力について、すべての動物を試験した。装置は２つの区画（１５ｃｍ×２０ｃｍ×高さ１５ｃｍ）の箱であり、１区画は白色ポリ塩化ビニルの壁で明るく、もう１区画は黒色ポリ塩化ビニルの壁で暗くなっており、格子状の床を有するものである。各区画はギロチン戸で隔てられている。装置の４０ｃｍ上に配置された６０Ｗの照明が実験時に白色の区画を照らす。格子状の床には、ショック発生スクランブラ（shockgenerator scrambler）（MedAssociates、米国）を使用して、無作為のフットショック（３秒間の０．３ｍＡ）が行われる。訓練セッション時、最初にギロチン戸を閉じておいた。各マウスを白色の区画に配置した。５秒後に戸を上昇させた。マウスが暗い区画に入り四肢を格子状の床に着けたとき、戸を閉じ、フットショックを３秒間行った。ステップスルー待ち時間、つまり暗い区画に入るのにかかる待ち時間、及び発声回数を記録した。記憶テストを訓練の２４時間後に行った。各マウスを再び白色の区画に配置した。５秒後に戸を上昇させた。ステップスルー待ち時間を３００秒のカットオフ時間まで記録した（参考文献５２〜５６）。
【０１４４】
処置開始後、Ｄ１６／１７、及びＤ２９／３０、及びＤ３９／４０に、動物を毎週試験した。
【０１４５】
＜＜統計分析＞＞
すべての値を平均値±標準誤差として表した。一元配置のＡＮＯＶＡ（Ｆ値）、その後にダネット事後多重比較検定を用いて、統計分析を種々の条件において行った。上限カットオフ時間を設定したので、受動的回避待ち時間はガウス分布に従うものではない。したがって、これらは、クラスカル−ウォリスのノンパラメトリックＡＮＯＶＡ（Ｈ値）、その後にダン多重比較検定を用いて分析した。ｐ＜０．０５を統計的に有意であるとした。
【０１４６】
＜結果＞
１日目に、すべての動物に、Ａβ又はＳｃ．ＡβいずれかのＩＣＶ注射を行った。ドネペジル又はビヒクルでの処置をＤ８に開始し１０日間、Ｄ２０に開始し１１日間（Ｂ）又は２１日間（Ｃ）行った（図４）。
【０１４７】
処置をＤ８に開始すると、１ｍｇ／Ｋｇのドネペジル用量により、Ｙ迷路によって評価されるＡβ２５−３５誘発認知障害を十分に回復することができた。Ｄ２０〜Ｄ３０に投与したドネペジルは部分的に活性であった（最適活性の４４％）（図５Ａ及び図５Ｂの上部グラフ）。そうした反応は最適以下のものである。
【０１４８】
受動的回避試験は恐怖条件づけ記憶を表し、また長期記憶に関連する。Ｓｃ．ＡβのＩＣＶ注射と比較して、１回のＡβ２５−３５のＩＣＶ注射により認知障害を誘発することができることが示されている。処置をＤ８に開始すると、１ｍｇ／Ｋｇのドネペジル用量により、受動的回避試験によって評価されるＡβ２５−３５誘発認知障害を十分に回復することができた。Ｄ２０〜Ｄ３０に投与したドネペジルは部分的に活性であった（図５Ａ及び図５Ｂの下部グラフ）。
【０１４９】
最後の実験において、ドネペジル処置をＤ２０に開始し、Ｄ４０まで行った（２１日の処置）。Ｄ３０及びＤ３８に、動物の認知機能をＹ迷路試験によって試験した。Ｄ３０に、ドネペジル作用（１ｍｇ／Ｋｇ）は部分的に活性であり（活性の４３％、ゆえにＤ２０〜Ｄ３０にドネペジルを投与した後の上述の結果をさらに再現する）、Ｄ３８に、薬効ははるかに小さく、統計的に有意でなく、たった２５％であった。これらのデータは、ドネペジル作用が経時で明らかに低下することを示唆する。
【０１５０】
＜結論＞
このデータは、この治療量のドネペジル（１ｍｇ／Ｋｇ）が、十分な治療効果を与えることができることを示した。実際に、この用量のドネペジルは、病変の誘発後７日に開始して１１日間投与されたとき、マウスのＡβ２５−３５誘発認知障害の十分な回復をもたらした。処置の開始を遅らせたとき（Ｄ２０）、有効治療量を使用しても、ドネペジルに対する反応性は最適以下であった。この設計により、臨床的背景において見受けられるドネペジルの反応性の喪失を再現することができた。前述で強調したように、ドネペジルにおける研究では、処置により、最初の１２週間で患者の認知機能が改善されてから、患者の認知機能は低下し始め、処置の開始後ものの３０週でそのベースラインレベルに達することが示された（参考文献２０〜２３）。また、リバスチグミン（参考文献２４）とガランタミン（参考文献２５）において、同じ限定的な効果が記載されている。したがって、患者はアセチルコリンエステラーゼ阻害剤に対するその反応性を経時で失うと考えられる。
【０１５１】
［Ｃ)治療有効量のドネペジルに対する反応性を失ったインビボモデルにおけるＡβ毒性に関連する疾患のバクロフェン及びアカンプロセートの処置］
＜プロトコル＞
＜＜動物＞＞
ジャンヴィエ研究所（Saint Berthevin、仏国）より入手した、体重３０〜３５ｇのオスのスイスマウスを飼育し、実験をＡＭＹＬＧＥＮの動物施設内で行った（Direction Regionale de l'Alimentation, de l'Agriculture et de la Foret du Languedoc-Roussillon, agreement #A 34-169-002 from May 02, 2014）。挙動実験時以外は、飼料と水とを適宜利用できるように、動物をグループで飼育した。温度及び湿度をコントロールし、動物施設を１２ｈ／１２ｈの明暗周期下においた（午後７時に消灯）。油性マーカーを用いて尾に標識づけしてマウスに番号をつけた。すべての動物の処置は、２０１０年９月２２日の欧州連合指令（2010/63/UE）を厳守して行われた。
【０１５２】
動物の衛生、動物の一般的状態、及び活動を毎日確認した。体重を１週間に３回モニターした。急性又は遅延性死亡率を確認した。
【０１５３】
＜＜アミロイドペプチド注射（ＩＣＶによる）＞＞
イソフルラン２．５％で５分麻酔したオスのスイスマウスを拘束し、頭部を固定し、そしてペプチドを、４ｍｍ長の２８ゲージステンレス鋼針によって脳室内に（ＩＣＶ）注射した。３μｌの注射量を３０秒内に徐々に送達し、さらに３０秒間、針をその位置においてから、取り除いた（参考文献５９）。以前に記載された方法（参考文献５２〜５６）に従って、アミロイドペプチド２５−３５（Ａβ２５−３５）ペプチド（９ｎｍｏｌ／ｍｏｕｓｅ）又はスクランブルＡβペプチド（Ｓｃ．Ａβ）（９ｎｍｏｌ／ｍｏｕｓｅ）で、３μｌ／ｍｏｕｓｅの最終量において、動物に処置した。ＡＭＹＬＧＥＮの方法に従って、Ａβ２５−３５ペプチドの均質な調製を行った。
【０１５４】
＜＜処置＞＞
すべての動物に、ｉｎｏｘスチールカニューレを用いて強制経口投与を行った。すべての処置は、各マウスの個々の体重に応じて算出した量で投与した（５ｍＬ／ｋｇ）。ビヒクル及びドネペジル（１ｍｇ／ｋｇ）の投与を１日１回行い、混合のアカンプロセート／バクロフェンの投与を１日２回行った（それぞれ０．２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ）。２つのグループの動物に、Ｄ７から、研究の最後のＤ１００まで、ドネペジル（１ｍｇ／ｋｇ）を投与した。第１グループの動物において、研究全体でドネペジルのみを投与した（グループ３）。第２グループの動物において、Ｄ４８に、Ｙ迷路によって評価されるようにドネペジル活性が失われたとき、ドネペジル処置に加え、アカンプロセートとバクロフェンとの組合せ（それぞれ０．２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ）を投与した（グループ４）。
【０１５５】
＜＜自発的交替能力（Ｙ迷路）＞＞
空間作業記憶の指標であるＹ迷路における自発的交替能力について、Ｄ７、Ｄ１４、Ｄ２１、Ｄ２８、Ｄ３５、Ｄ４２、Ｄ４９、Ｄ５６、Ｄ６３、Ｄ７０、Ｄ７７、Ｄ９１、及びＤ９８に、マウスを試験した。Ｙ迷路は、Ｉｔｏｈ等、１９９３（参考文献５７）、並びにＨｉｒａｍａｔｓｕ及びＩｎｏｕｅ、１９９９（参考文献５８）に従って設計され、灰色のポリ塩化ビニル製である。各アーム部は、長さ４０ｃｍ、高さ１３ｃｍ、底部幅３ｃｍ、上部幅１０ｃｍであり、等しい角度で連結する。各マウスを１つのアーム部の端部に配置し、８分のセッション時に迷路を自由に動き回らせる。同一のアーム部に戻り得ることを含む一連のアーム部進入を、処置に盲検である実験者によって目視で確認する。交替は３つのアーム部すべてに連続的に進入する場合と定める。したがって、最大の交替回数はアーム部への総進入回数引く２であり、交替率は（実際の交替数／最大の交替数）×１００で算出する。パラメータは交替率（記憶指標）及びアーム部への総進入回数（探査指標）を含む（参考文献５２〜５６）。
【０１５６】
極端な挙動を示す動物（交替率＜２０％、若しくは＞９０％、又はアーム部への進入回数＜８）は除く。
【０１５７】
＜＜受動的回避試験（ＳＴＰＡ）＞＞
実験の最後に（Ｄ９９／Ｄ１００）、文脈長期記憶の指標である受動的回避能力について、すべての動物を試験した。装置は２つの区画（１５ｃｍ×２０ｃｍ×高さ１５ｃｍ）の箱であり、１区画は白色ポリ塩化ビニルの壁で明るく、もう１区画は黒色ポリ塩化ビニルの壁で暗くなっており、格子状の床を有するものである。各区画はギロチン戸で隔てられている。装置の４０ｃｍ上に配置された６０Ｗの照明が実験時に白色の区画を照らす。格子状の床には、ショック発生スクランブラ（shock generator scrambler）（MedAssociates、米国）を使用して、無作為のフットショック（３秒間の０．３ｍＡ）が行われる。訓練セッション時、最初にギロチン戸を閉じておく。各マウスを白色の区画に配置する。５秒後に戸を上昇させる。マウスが暗い区画に入り四肢を格子状の床に着けるとき、戸を閉じ、フットショックを３秒間行う。ステップスルー待ち時間、つまり暗い区画に入るのにかかる待ち時間、及び発声回数を記録する。記憶テストを訓練の２４時間後に行う。各マウスを白色の区画に再び配置する。５秒後に戸を上昇させる。ステップスルー待ち時間を３００秒のカットオフ時間まで記録した（参考文献５２〜５６）。
【０１５８】
＜＜統計分析＞＞
すべての値を平均値±標準誤差として表す。一元配置のＡＮＯＶＡ（Ｆ値）、その後にダネット事後多重比較検定を用いて、統計分析を種々の条件において行う。上限カットオフ時間を設定したので、受動的回避待ち時間はガウス分布に従うものではない。したがって、これらは、クラスカル−ウォリスのノンパラメトリックＡＮＯＶＡ（Ｈ値）、その後にダン多重比較検定を用いて分析する。ｐ＜０．０５を統計的に有意であるとする。
【０１５９】
＜結果＞
Ｄ７に開始したＤＮＰ処置は、Ｄ２１〜Ｄ２８に最大の作用を示した。この作用は、Ｓｃ．Ａβと有意に異ならなかった（ＤＮＰ処置動物では７０〜７０％の交替率、Ｓｃ．Ａβ−ビヒクル処置動物では７６％の交替率）（図８Ａ）。Ｄ４２において、ＤＮＰの効果は低下し、動物の認知機能は、ビヒクルで処置したＡβ２５−３５注射動物のものと同様になった（Ａβ２５−３５−ＤＮＰ処置動物では４７％の交替率、それに対してＡβ２５−３５−ビヒクル処置動物では５１％の交替率）（図８Ａ）。Ｄ４８後、ドネペジルのみで処置した動物のグループにおいて、ドネペジル不活性がＤ１００まで持続し、その認知障害は、Ａβ２５−３５注射及びビヒクル処置動物のものと同様であった。
【０１６０】
Ｄ４８において、Ｙ迷路によって評価されるようにドネペジル（１ｍｇ／ｋｇ）活性が失われたとき、一グループの動物（グループ４）に、アカンプロセートとバクロフェンとの組合せ（それぞれ０．２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ）をＤ４９に加え、Ｄ１００まで行った。
【０１６１】
アカンプロセートとバクロフェンとの組合せを加えた後１週で、動物は認知機能の有意な改善を示した。実際に、Ｄ５６において、アカンプロセートとバクロフェンとの組合せを加えた動物とスクランブルＡβペプチドを注射した動物との間の統計的差異は見受けられなかった。アカンプロセートとバクロフェンとの組合せの追加開始後ほんの２週で、十分な回復が得られた（図８Ａ）。同様に、実験の最後において（Ｄ９９／Ｄ１００）、ＳＴＰＡによって評価される恐怖条件づけ記憶は、ドネぺジルのみで処置した動物では変化した。対照的に、アカンプロセートとバクロフェンとの組合せを加えた動物のグループにおいて、認知障害が十分に回復した（２７４秒のＳＴＬ対Ｓｃ．Ａβビヒクル処置の２５１秒）（図８Ｂ）。
【０１６２】
このデータは、ドネペジル効果の喪失後におけるアカンプロセートとバクロフェンとの組合せの追加により、Ａβ２５−３５誘発認知障害のマウスモデルにおける空間作業記憶及び長期記憶としての認知機能が十分且つ迅速に回復されることを示した。
【０１６３】
＜結論＞
このデータは、治療有効量のドネペジルが、アルツハイマー病のマウスモデルにおいて、マウスの認知障害の改善、有効で有意な作用をもたらすことをさらに裏付けた。
【０１６４】
また、データは、マウスが治療有効量のドネペジルに対して無反応になるにつれ、この作用が低下することをさらに示した。
【０１６５】
最も重要な点として、データは、この段階でアカンプロセートとバクロフェンとの組合せでマウスをさらに処置することにより、マウスの認知機能の十分な回復がもたらされることを示した。アカンプロセートとバクロフェンとの組合せの投与後ほんの２週で、十分な回復が得られた。
【０１６６】
Ａβ２５−３５誘発認知障害の同じモデルにおいて、同じ用量で１１日間（Ｄ２０〜Ｄ３０）及び最大２１〜２３日間（Ｄ２０〜Ｄ４０、Ｄ４１／Ｄ４２）のバクロフェンとアカンプロセートとの組合せの単独投与が、マウスの認知障害を軽減するものの、十分に回復できなかったことを考慮すると、この結果は特に驚くものである（図２Ｄ及び図３Ｄ参照）。
【０１６７】
［参考文献］
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【図１】
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【図２Ａ−Ｂ】
2021512174.tif 000004
【図２Ｃ−Ｄ】
2021512174.tif 000005
【図３Ａ−Ｂ】
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【図３Ｃ−Ｄ】
2021512174.tif 000007
【図４】
2021512174.tif 000008
【図５Ａ】
2021512174.tif 000009
【図５Ｂ】
2021512174.tif 000010
【図５Ｃ】
2021512174.tif 000011
【図６】
2021512174.tif 000012
【図７】
2021512174.tif 000013
【図８】
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【国際調査報告】
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2021512174.tif 000016
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