(57)【要約】  本発明は、鉄依存性細胞分解を誘導することによって免疫応答を高める方法を提供する。免疫応答の増加は、例えば、感染症又は癌の処置に使用することができる。本発明はまた、鉄依存性細胞分解を誘導する、免疫刺激剤でもある化合物を同定するためのスクリーニングアッセイを提供する。本発明は、鉄依存性細胞分解を受けている細胞によって産生される免疫刺激剤を同定するための方法をさらに提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
免疫細胞の免疫活性を高める方法であって：
（ｉ）標的細胞を、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤に接触させること、及び
（ｉｉ）前記免疫細胞を、前記標的細胞を前記薬剤に接触させない場合の免疫細胞に対して前記免疫細胞の免疫活性を高めるのに十分な量の前記薬剤と接触させられた標的細胞に、又は前記薬剤と接触させられた標的細胞によって産生される後細胞シグナル伝達因子に曝露することを含み、前記鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤が、アンチポーター系Ｘｃ−の阻害剤、ＧＰＸ４の阻害剤、及びスタチンからなる群から選択される、方法。
【請求項２】
免疫細胞のＮＦｋＢのレベル又は活性を高める方法であって：
（ｉ）標的細胞を、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤に接触させること、及び
（ｉｉ）前記免疫細胞を、前記標的細胞を前記薬剤に接触させない場合の免疫細胞に対して前記免疫細胞のＮＦｋＢのレベル又は活性を高めるのに十分な量の前記薬剤と接触させられた標的細胞に、又は前記薬剤と接触させられた標的細胞によって産生される後細胞シグナル伝達因子に曝露することを含み、前記鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤が、アンチポーター系Ｘｃ−の阻害剤、ＧＰＸ４の阻害剤、及びスタチンからなる群から選択される、方法。
【請求項３】
免疫細胞のインターフェロン調節因子（ＩＲＦ）又はインターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）のレベル又は活性を高める方法であって：
（ｉ）標的細胞を、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤に接触させること、及び
（ｉｉ）前記免疫細胞を、前記標的細胞を前記薬剤に接触させない場合の免疫細胞に対して前記免疫細胞のＩＲＦ又はＳＴＩＮＧのレベル又は活性を高めるのに十分な量の前記薬剤と接触させられた標的細胞に、又は前記薬剤と接触させられた標的細胞によって産生される後細胞シグナル伝達因子に曝露することを含み、前記鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤が、アンチポーター系Ｘｃ−の阻害剤、ＧＰＸ４の阻害剤、及びスタチンからなる群から選択される、方法。
【請求項４】
免疫細胞の免疫促進性サイトカインのレベル又は活性を高める方法であって：
（ｉ）標的細胞を、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤に接触させること、及び
（ｉｉ）前記免疫細胞を、前記標的細胞を前記薬剤に接触させない場合の免疫細胞に対して前記免疫細胞の免疫促進性サイトカインのレベル又は活性を高めるのに十分な量の前記薬剤と接触させられた標的細胞に、又は前記薬剤と接触させられた標的細胞によって産生される後細胞シグナル伝達因子に曝露することを含み、前記鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤が、アンチポーター系Ｘｃ−の阻害剤、ＧＰＸ４の阻害剤、及びスタチンからなる群から選択される、方法。
【請求項５】
前記鉄依存性細胞分解がフェロトーシスである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記アンチポーター系Ｘｃ−の阻害剤が、エラスチン又はその誘導体又は類似体である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記エラスチン又はその誘導体又は類似体が：
【化１】
2021528393.tif 000036
の式又はその薬学的に許容される塩又はエステルを有し、式中、
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、ヒドロキシ、及びハロゲンからなる群から選択され；
Ｒ２は、Ｈ、ハロ、及びＣ１〜４アルキルからなる群から選択され；
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、５〜７員ヘテロシクロアルキル、及び５〜６員ヘテロアリールからなる群から選択され；
Ｒ４は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルからなる群から選択され；
Ｒ５はハロであり；
【化２】
2021528393.tif 000037
は、任意選択により＝Ｏで置換され；且つ
ｎは０〜４までの整数である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記エラスチンの類似体がＰＥ又はＩＫＥである、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記ＧＰＸ４の阻害剤が、（１Ｓ，３Ｒ）−ＲＳＬ３又はその誘導体又は類似体、ＭＬ１６２、ＤＰＩ化合物７、ＤＰＩ化合物１０、ＤＰＩ化合物１２、ＤＰＩ化合物１３、ＤＰＩ化合物１７、ＤＰＩ化合物１８、ＤＰＩ化合物１９、ＦＩＮ５６、及びＦＩＮＯ２からなる群から選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＲＳＬ３誘導体又は類似体が、構造式（Ｉ）：
【化３】
2021528393.tif 000038
によって表される化合物、又はそのエナンチオマー、光学異性体、ジアステレオマー、Ｎ−オキシド、結晶形態、水和物、又は薬学的に許容される塩であり、式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ６は独立に、Ｈ、Ｃ１〜８アルキル、Ｃ１〜８アルコキシ、Ｃ１〜８アラルキル、３〜８員炭素環、３〜８員複素環、３〜８員アリール、又は３〜８員ヘテロアリール、アシル、アルキルスルホニル、及びアリールスルホニルから選択され、各アルキル、アルコキシ、アラルキル、炭素環、複素環、アリール、ヘテロアリール、アシル、アルキルスルホニル、及びアリールスルホニルは、任意選択により少なくとも１つの置換基で置換され；
Ｒ４及びＲ５は独立に、Ｈ１Ｃ１〜８アルキル、Ｃ１〜８アルコキシ、３〜８員炭素環、３〜８員複素環、３〜８員アリール、又は３〜８員ヘテロアリール、カルボキシレート、エステル、アミド、炭水化物、アミノ酸、アシル、アルコキシ置換アシル、アルジトール、ＮＲ７Ｒ８、ＯＣ（Ｒ７）２ＣＯＯＨ、ＳＣ（Ｒ７）２ＣＯＯＨ、ＮＨＣＨＲ７ＣＯＯＨ、ＣＯＲ８、ＣＯ２Ｒ８、硫酸塩、スルホンアミド、スルホキシド、スルホン酸塩、スルホン、チオアルキル、チオエステル、及びチオエーテルから選択され、各アルキル、アルコキシ、炭素環、複素環、アリール、ヘテロアリール、カルボキシレート、エステル、アミド、炭水化物、アミノ酸、アシル、アルコキシ置換アシル、アルジトール、ＮＲ７Ｒ８、ＯＣ（Ｒ７）２ＣＯＯＨ、ＳＣ（Ｒ７）２ＣＯＯＨ、ＮＨＣＨＲ７ＣＯＯＨ、ＣＯＲ８、ＣＯ２Ｒ８、硫酸塩、スルホンアミド、スルホキシド、スルホン酸塩、スルホン、チオアルキル、チオエステル、及びチオエーテルは、任意選択により少なくとも１つの置換基で置換され；
Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１〜８アルキル、炭素環、アリール、ヘテロアリール、複素環、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、及びアルキル複素環から選択され、各アルキル、炭素環、アリール、ヘテロアリール、複素環、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、及びアルキル複素環は、任意選択により少なくとも１つの置換基で置換することができ；
Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１〜８アルキル、Ｃ１〜８アルケニル、Ｃ１〜８アルキニル、アリール、炭素環、ヘテロアリール、複素環、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、アルキル複素環、及びヘテロ芳香族から選択され、各アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、炭素環、ヘテロアリール、複素環、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、アルキル複素環、及びヘテロ芳香族は、任意選択により少なくとも１つの置換基で置換することができ；且つ
Ｘは、それが結合している環上の０〜４個の置換基である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＲＳＬ３誘導体又は類似体が、構造式（ＩＩ）：
【化４】
2021528393.tif 000039
によって表される化合物又はそのＮ−オキシド、結晶形態、水和物、又は薬学的に許容される塩であり；
式中：
Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、及び−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｘＯＨからなる群から選択され；
Ｘは、１〜６の整数であり；且つ
Ｒ２、Ｒ２'、Ｒ３、及びＲ３'は独立に、Ｈ、Ｃ３〜８シクロアルキル、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、又はＲ２及びＲ２'は共に結合し、ピリジニル又はピラニルを形成することができ、且つＲ３及びＲ３'は共に結合し、ピリジニル又はピラニルを形成することができる、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＲＳＬ３誘導体又は類似体が、構造式（ＩＩＩ）：
【化５】
2021528393.tif 000040
によって表される化合物又はその立体異性体、又はその薬学的に許容される塩であり；式中：
ｎは、２、３、又は４であり；Ｒは、置換若しくは非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、置換若しくは非置換Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル基、置換若しくは非置換Ｃ２〜Ｃ８ヘテロシクロアルキル基、置換若しくは非置換Ｃ６〜Ｃ１０芳香環基、又は置換若しくは非置換Ｃ３〜Ｃ８ヘテロアリール環基であり；置換は、各基の１つ又は複数の水素原子が：ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロゲン化Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、ハロゲン化Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、ＣＯＯＨ（カルボキシ）、ＣＯＯＣ１〜Ｃ６アルキル、ＯＣＯＣ１〜Ｃ６アルキルからなる群から選択される基によって置換されることを意味する、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
前記スタチンが、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、セリバスタチン、及びシンバスタチンからなる群から選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記免疫細胞が、マクロファージ、単球、樹状細胞、Ｔ細胞、ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、又はＣＤ３＋細胞である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記免疫細胞がＴＨＰ−１細胞である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
インビトロ又はエクスビボで行われる、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
インビボで行われる、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
ステップ（ｉ）がインビトロで行われ、ステップ（ｉｉ）がインビボで行われる、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
細胞、組織、又は対象の免疫活性を高める方法であって、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤で処置されていない細胞、組織、又は対象と比較して免疫活性を高めるのに十分な量の前記鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤を前記細胞、組織、又は対象に投与することを含む、方法。
【請求項２０】
前記対象が、免疫活性の上昇を必要としている、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤が、前記細胞、組織、又は対象におけるＮＦｋＢのレベル又は活性、インターフェロン調節因子（ＩＲＦ）又はインターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）のレベル又は活性、マクロファージのレベル又は活性、単球のレベル又は活性、樹状細胞のレベル又は活性、Ｔ細胞のレベル又は活性、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、又はＣＤ３＋細胞のレベル又は活性、及び免疫促進性サイトカインのレベル又は活性のうちの１つ又は複数を高めるのに十分な量で投与される、請求項１９又は２０に記載の方法。
【請求項２２】
細胞、組織、又は対象のＮＦｋＢのレベル又は活性を高める方法であって、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤で処置されていない細胞、組織、又は対象と比較してＮＦｋＢのレベル又は活性を高めるのに十分な量の前記鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤を前記細胞、組織、又は対象に投与することを含む、方法。
【請求項２３】
前記対象が、ＮＦｋＢのレベル又は活性の上昇を必要としている、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＮＦｋＢのレベル又は活性が、前記鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤で処置されていない細胞、組織、又は対象と比較して少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％、又は少なくとも２倍、４倍、６倍、８倍、又は１０倍上昇する、請求項２２又は２３に記載の方法。
【請求項２５】
細胞、組織、又は対象のインターフェロン調節因子（ＩＲＦ）又はインターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）のレベル又は活性を高める方法であって、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤で処置されていない細胞、組織、又は対象と比較してＩＲＦ又はＳＴＩＮＧのレベル又は活性を高めるのに十分な量の前記鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤を前記細胞、組織、又は対象に投与することを含む、方法。
【請求項２６】
前記対象が、ＩＲＦ又はＳＴＩＮＧのレベル又は活性の上昇を必要としている、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記ＩＲＦ又はＳＴＩＮＧのレベル又は活性が、前記鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤で処置されていない細胞、組織、又は対象と比較して少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％、又は少なくとも２倍、４倍、６倍、８倍、又は１０倍上昇する、請求項２５又は２６に記載の方法。
【請求項２８】
組織又は対象のマクロファージ、単球、樹状細胞、又はＴ細胞のレベル又は活性を高める方法であって、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤で処置されていない組織又は対象と比較してマクロファージ、単球、樹状細胞、又はＴ細胞のレベル又は活性を高めるのに十分な量の前記鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤を前記組織又は対象に投与することを含む、方法。
【請求項２９】
前記対象が、マクロファージ、単球、樹状細胞、又はＴ細胞のレベル又は活性の上昇を必要としている、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記マクロファージ、単球、樹状細胞、又はＴ細胞のレベル又は活性が、前記鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤で処置されていない組織又は対象と比較して少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％、又は少なくとも２倍、４倍、６倍、８倍、又は１０倍上昇する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
組織又は対象のＣＤ４＋、ＣＤ８＋、又はＣＤ３＋細胞のレベル又は活性を高める方法であって、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤で処置されていない組織又は対象と比較してＣＤ４＋、ＣＤ８＋、又はＣＤ３＋細胞のレベル又は活性を高めるのに十分な量の前記鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤を前記組織又は対象に投与することを含む、方法。
【請求項３２】
前記対象が、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、又はＣＤ３＋細胞のレベル又は活性の上昇を必要としている、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、又はＣＤ３＋細胞のレベル又は活性が、前記鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤で処置されていない組織又は対象と比較して少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％、又は少なくとも２倍、４倍、６倍、８倍、又は１０倍上昇する、請求項３１又は３２に記載の方法。
【請求項３４】
細胞、組織、又は対象の免疫促進性サイトカインのレベル又は活性を高める方法であって、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤で処置されていない細胞、組織、又は対象と比較して免疫促進性サイトカインのレベル又は活性を高めるのに十分な量の前記鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤を前記細胞、組織、又は対象に投与することを含む、方法。
【請求項３５】
前記対象が、免疫促進性サイトカインのレベル又は活性の上昇を必要としている、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記免疫促進性サイトカインのレベル又は活性が、前記鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤で処置されていない細胞、組織、又は対象と比較して少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％、又は少なくとも２倍、４倍、６倍、８倍、又は１０倍上昇する、請求項３４又は３５に記載の方法。
【請求項３７】
投与前に、ＮＦｋＢのレベル又は活性；マクロファージのレベル又は活性；単球のレベル又は活性；樹状細胞のレベル又は活性；ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、又はＣＤ３＋細胞のレベル又は活性；Ｔ細胞のレベル又は活性；及び免疫促進性サイトカインのレベル又は活性のうちの１つ又は複数について前記細胞、組織、又は対象を評価することをさらに含む、請求項１〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
投与後に、ＮＦｋＢのレベル又は活性；マクロファージのレベル又は活性；単球のレベル又は活性；樹状細胞のレベル又は活性；ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、又はＣＤ３＋細胞のレベル又は活性；Ｔ細胞のレベル又は活性；及び免疫促進性サイトカインのレベル又は活性のうちの１つ又は複数について前記細胞、組織、又は対象を評価することをさらに含む、請求項１〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記免疫促進性サイトカインが、ＩＦＮ−α、ＩＬ−１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１７、及びＧＭＣＳＦから選択される、請求項４及び３４〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
免疫活性の上昇を必要とする対象を処置する方法であって、前記対象の免疫活性を高めるのに十分な量の鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤を対象に投与することを含む、方法。
【請求項４１】
前記対象が、感染症に罹患している、請求項１９〜４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記感染症が慢性感染症である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記慢性感染症が、ＨＩＶ感染症、ＨＣＶ感染症、ＨＢＶ感染症、ＨＰＶ感染症、Ｂ型肝炎感染症、Ｃ型肝炎感染症、ＥＢＶ感染症、ＣＭＶ感染症、ＴＢ感染症、及び寄生虫による感染症から選択される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記細胞又は組織が、癌細胞又は癌性組織である、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
前記対象が癌に罹患している、請求項１９〜４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
前記癌が、黒色腫、腎細胞癌、非小細胞肺癌、非扁平上皮肺癌、尿路上皮癌、ホジキンリンパ腫、頭頸部扁平上皮癌、肝細胞癌、大腸癌、胃腺癌、胃食道接合部腺癌、及びメルケル細胞癌から選択される、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記鉄依存性細胞分解がフェロトーシスである、請求項１〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
それを必要とする対象の癌を処置する方法であって、（ａ）免疫療法剤と（ｂ）鉄依存性細胞分解を誘導し、それにより前記対象の癌を処置する薬剤を組み合わせて前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項４９】
前記鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤が、前記対象の免疫応答を高めるのに有効な量で対象に投与される、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記免疫療法剤が、トール様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、細胞ベースの治療法、サイトカイン、癌ワクチン、及び免疫チェックポイント分子の免疫チェックポイントモジュレーターからなる群から選択される、請求項４８に記載の方法。
【請求項５１】
前記ＴＬＲアゴニストが、Ｃｏｌｅｙの毒素及びカルメットゲラン桿菌（ＢＣＧ）から選択される、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記免疫チェックポイント分子が、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、４−１ＢＢ、ＡＤＯＲＡ２Ａ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ−４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ−３、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ−３、及びＶＩＳＴＡから選択される、請求項５０に記載の方法。
【請求項５３】
前記免疫チェックポイント分子が、刺激性免疫チェックポイント分子であり、前記免疫チェックポイントモジュレーターが、刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニストである、請求項５０に記載の方法。
【請求項５４】
前記免疫チェックポイント分子が、抑制性免疫チェックポイント分子であり、前記免疫チェックポイントモジュレーターが、抑制性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストである、請求項５０に記載の方法。
【請求項５５】
前記免疫チェックポイントモジュレーターが、小分子、阻害性ＲＮＡ、アンチセンス分子、及び免疫チェックポイント分子結合タンパク質から選択される、請求項５０〜５４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
前記免疫チェックポイント分子がＰＤ−１であり、前記免疫チェックポイントモジュレーターがＰＤ−１阻害剤である、請求項５０に記載の方法。
【請求項５７】
前記ＰＤ−１阻害剤が、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ピジリズマブ、ＳＨＲ−１２１０、ＭＥＤＩ０６８０Ｒ０１、ＢＢｇ−Ａ３１７、ＴＳＲ−０４２、ＲＥＧＮ２８１０、及びＰＦ−０６８０１５９１から選択される、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記免疫チェックポイント分子がＰＤ−Ｌ１であり、前記免疫チェックポイントモジュレーターがＰＤ−Ｌ１阻害剤である、請求項５０に記載の方法。
【請求項５９】
前記ＰＤ−Ｌ１阻害剤が、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＭＤＸ−１１０５、ＡＭＰ−２２４、及びＬＹ３３０００５４から選択される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記免疫チェックポイント分子がＣＴＬＡ−４であり、前記免疫チェックポイントモジュレーターがＣＴＬＡ−４阻害剤である、請求項５０に記載の方法。
【請求項６１】
前記ＣＴＬＡ−４阻害剤が、イピリムマブ、トレメリムマブ、ＪＭＷ−３Ｂ３、及びＡＧＥＮ１８８４から選択される、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤が、前記免疫療法剤の投与前又は投与と同時に投与される、請求項４８〜６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
前記鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤が、前記免疫療法剤の投与後に投与される、請求項４８〜６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
処置に対する前記癌の応答が、前記免疫療法剤のみによる処置と比較して改善されている、請求項４８〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
前記応答が、前記免疫療法剤のみによる処置と比較して少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、又は少なくとも８０％改善されている、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記応答が、腫瘍量の減少、腫瘍サイズの減少、腫瘍増殖の阻害、処置前の進行性癌を有する対象における癌の安定化の達成、癌が進行するまでの時間の延長、及び生存期間の延長のうちのいずれか１つ又は複数を含む、請求項６４又は６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤と前記免疫療法剤が相乗的に作用する、請求項４８〜６６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６８】
前記癌が、免疫チェックポイント療法に応答する癌である、請求項４８〜６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
前記癌が、癌腫、肉腫、リンパ腫、黒色腫、及び白血病から選択される、請求項４８〜６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７０】
前記癌が、黒色腫、腎細胞癌、非小細胞肺癌、非扁平上皮肺癌、尿路上皮癌、ホジキンリンパ腫、頭頸部扁平上皮癌、肝細胞癌、大腸癌、胃腺癌、胃食道接合部腺癌、及びメルケル細胞癌から選択される、請求項４８〜６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７１】
前記癌が腎細胞癌である、請求項４８〜６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
前記対象がヒトである、請求項１９〜７１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７３】
前記鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤が、アンチポーター系Ｘｃ−の阻害剤、ＧＰＸ４の阻害剤、及びスタチンからなる群から選択される、請求項１〜７２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７４】
前記アンチポーター系Ｘｃ−の阻害剤が、エラスチン又はその誘導体又は類似体である、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記エラスチン又はその誘導体又は類似体が：
【化６】
2021528393.tif 000041
の式又はその薬学的に許容される塩又はエステルを有し、式中、
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、ヒドロキシ、及びハロゲンからなる群から選択され；
Ｒ２は、Ｈ、ハロ、及びＣ１〜４アルキルからなる群から選択され；
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、５〜７員ヘテロシクロアルキル、及び５〜６員ヘテロアリールからなる群から選択され；
Ｒ４は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルからなる群から選択され；
Ｒ５はハロであり；
【化７】
2021528393.tif 000042
は、任意選択により＝Ｏで置換され；且つ
ｎは０〜４までの整数である、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
前記エラスチンの類似体がＰＥ又はＩＫＥである、請求項７４に記載の方法。
【請求項７７】
前記ＧＰＸ４の阻害剤が、（１Ｓ，３Ｒ）−ＲＳＬ３又はその誘導体又は類似体、ＭＬ１６２、ＤＰＩ化合物７、ＤＰＩ化合物１０、ＤＰＩ化合物１２、ＤＰＩ化合物１３、ＤＰＩ化合物１７、ＤＰＩ化合物１８、ＤＰＩ化合物１９、ＦＩＮ５６、及びＦＩＮＯ２からなる群から選択される、請求項７３に記載の方法。
【請求項７８】
前記ＲＳＬ３誘導体又は類似体が、構造式（Ｉ）：
【化８】
2021528393.tif 000043
によって表される化合物、又はそのエナンチオマー、光学異性体、ジアステレオマー、Ｎ−オキシド、結晶形態、水和物、又は薬学的に許容される塩であり、式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ６は独立に、Ｈ、Ｃ１〜８アルキル、Ｃ１〜８アルコキシ、Ｃ１〜８アラルキル、３〜８員炭素環、３〜８員複素環、３〜８員アリール、又は３〜８員ヘテロアリール、アシル、アルキルスルホニル、及びアリールスルホニルから選択され、各アルキル、アルコキシ、アラルキル、炭素環、複素環、アリール、ヘテロアリール、アシル、アルキルスルホニル、及びアリールスルホニルは、任意選択により少なくとも１つの置換基で置換され；
Ｒ４及びＲ５は独立に、Ｈ１Ｃ１〜８アルキル、Ｃ１〜８アルコキシ、３〜８員炭素環、３〜８員複素環、３〜８員アリール、又は３〜８員ヘテロアリール、カルボキシレート、エステル、アミド、炭水化物、アミノ酸、アシル、アルコキシ置換アシル、アルジトール、ＮＲ７Ｒ８、ＯＣ（Ｒ７）２ＣＯＯＨ、ＳＣ（Ｒ７）２ＣＯＯＨ、ＮＨＣＨＲ７ＣＯＯＨ、ＣＯＲ８、ＣＯ２Ｒ８、硫酸塩、スルホンアミド、スルホキシド、スルホン酸塩、スルホン、チオアルキル、チオエステル、及びチオエーテルから選択され、各アルキル、アルコキシ、炭素環、複素環、アリール、ヘテロアリール、カルボキシレート、エステル、アミド、炭水化物、アミノ酸、アシル、アルコキシ置換アシル、アルジトール、ＮＲ７Ｒ８、ＯＣ（Ｒ７）２ＣＯＯＨ、ＳＣ（Ｒ７）２ＣＯＯＨ、ＮＨＣＨＲ７ＣＯＯＨ、ＣＯＲ８、ＣＯ２Ｒ８、硫酸塩、スルホンアミド、スルホキシド、スルホン酸塩、スルホン、チオアルキル、チオエステル、及びチオエーテルは、任意選択により少なくとも１つの置換基で置換され；
Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１〜８アルキル、炭素環、アリール、ヘテロアリール、複素環、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、及びアルキル複素環から選択され、各アルキル、炭素環、アリール、ヘテロアリール、複素環、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、及びアルキル複素環は、任意選択により少なくとも１つの置換基で置換することができ；
Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１〜８アルキル、Ｃ１〜８アルケニル、Ｃ１〜８アルキニル、アリール、炭素環、ヘテロアリール、複素環、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、アルキル複素環、及びヘテロ芳香族から選択され、各アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、炭素環、ヘテロアリール、複素環、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、アルキル複素環、及びヘテロ芳香族は、任意選択により少なくとも１つの置換基で置換することができ；且つ
Ｘは、それが結合している環上の０〜４個の置換基である、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記ＲＳＬ３誘導体又は類似体が、構造式（ＩＩ）：
【化９】
2021528393.tif 000044
によって表される化合物又はそのＮ−オキシド、結晶形態、水和物、又は薬学的に許容される塩であり；
式中：
Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、及び−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｘＯＨからなる群から選択され；
Ｘは、１〜６の整数であり；且つ
Ｒ２、Ｒ２'、Ｒ３、及びＲ３'は独立に、Ｈ、Ｃ３〜８シクロアルキル、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、又はＲ２及びＲ２'は共に結合し、ピリジニル又はピラニルを形成することができ、且つＲ３及びＲ３'は共に結合し、ピリジニル又はピラニルを形成することができる、請求項７７に記載の方法。
【請求項８０】
前記ＲＳＬ３誘導体又は類似体が、構造式（ＩＩＩ）：
【化１０】
2021528393.tif 000045
によって表される化合物又はその立体異性体、又はその薬学的に許容される塩であり；式中：
ｎは、２、３、又は４であり；Ｒは、置換若しくは非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、置換若しくは非置換Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル基、置換若しくは非置換Ｃ２〜Ｃ８ヘテロシクロアルキル基、置換若しくは非置換Ｃ６〜Ｃ１０芳香環基、又は置換若しくは非置換Ｃ３〜Ｃ８ヘテロアリール環基であり；置換は、各基の１つ又は複数の水素原子が：ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロゲン化Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、ハロゲン化Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、ＣＯＯＨ（カルボキシ）、ＣＯＯＣ１〜Ｃ６アルキル、ＯＣＯＣ１〜Ｃ６アルキルからなる群から選択される基によって置換されることを意味する、請求項７７に記載の方法。
【請求項８１】
前記スタチンが、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、セリバスタチン、及びシンバスタチンからなる群から選択される、請求項７３に記載の方法。
【請求項８２】
前記鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤が、ソラフェニブ又はその誘導体又は類似体、スルファサラジン、グルタミン酸塩、ＢＳＯ、ＤＰＩ２、シスプラチン、システイナーゼ、シリカベースのナノ粒子、ＣＣＩ４、クエン酸鉄アンモニウム、トリゴネリン、及びブルサトール（ｂｒｕｓａｔｏｌ）からなる群から選択される、請求項１〜７２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８３】
前記鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤が、以下の特徴：
（ａ）インビトロで標的細胞の鉄依存性細胞分解及びその後の共培養細胞における免疫応答の活性化を誘導する；
（ｂ）インビトロでの標的細胞の鉄依存性細胞分解及びその後の共培養マクロファージ、例えばＲＡＷ２６４．７マクロファージの活性化を誘導する；
（ｃ）インビトロでの標的細胞の鉄依存性細胞分解及びその後の共培養単球、例えばＴＨＰ−１単球の活性化を誘導する；
（ｄ）インビトロでの標的細胞の鉄依存性細胞分解及びその後の共培養骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣ）の活性化を誘導する；
（ｅ）インビトロで標的細胞の鉄依存性細胞分解及びその後の共培養細胞におけるＮＦｋＢ、ＩＲＦ、及び／又はＳＴＩＮＧのレベル又は活性の上昇を誘導する；
（ｆ）インビトロでの標的細胞の鉄依存性細胞分解及びその後の共培養細胞における免疫促進性サイトカインのレベル又は活性の上昇を誘導する；並びに
（ｇ）インビトロでの標的細胞の鉄依存性細胞分解及びその後の共培養されたＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、及び／又はＣＤ３＋細胞の活性化を誘導する、のうちの１つ又は複数を有する、請求項１〜７２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８４】
前記鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤が癌細胞を標的とする、請求項１〜７２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８５】
免疫刺激剤をスクリーニングする方法であって：
（ａ）複数の試験薬（例えば、試験薬のライブラリー）を用意すること；
（ｂ）鉄依存性細胞分解を誘導する能力について前記複数の試験薬のそれぞれを評価すること；
（ｃ）候補免疫刺激剤として、鉄依存性細胞分解を誘導する試験薬を選択すること；及び
（ｄ）免疫応答を刺激する能力について前記候補免疫刺激剤を評価することを含む、方法。
【請求項８６】
前記評価するステップ（ｂ）が、細胞又は組織を前記複数の試験薬のそれぞれに接触させることを含む、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
前記評価するステップ（ｂ）が、前記複数の試験薬のそれぞれを動物に投与することを含む、請求項８５に記載の方法。
【請求項８８】
前記評価するステップ（ｂ）が、前記試験薬と接触した細胞又は組織における、脂質過酸化反応、活性酸素種（ＲＯＳ）、イソプロスタン、マロンジアルデヒド（ＭＤＡ）、鉄、グルタチオンペルオキシダーゼ４（ＧＰＸ４）、プロスタグランジン−エンドペルオキシドシンターゼ２（ＰＴＧＳ２）、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）、及びグルタチオン（ＧＳＨ）からなる群から選択されるマーカーのレベル又は活性を測定することをさらに含む、請求項８６に記載の方法。
【請求項８９】
前記評価するステップ（ｂ）が、前記試験薬と接触した細胞又は組織におけるマーカーのレベル又は活性を、前記試験薬と接触していない対照細胞又は組織におけるマーカーのレベル又は活性と比較することをさらに含む、請求項８５に記載の方法。
【請求項９０】
前記評価するステップ（ｄ）が、インビトロで、前記鉄依存性細胞分解を誘導する試験薬を免疫刺激活性について評価することを含む、請求項８５に記載の方法。
【請求項９１】
前記評価するステップ（ｄ）が、動物における免疫応答を測定することを含む、請求項８５に記載の方法。
【請求項９２】
脂質過酸化反応、イソプロスタン、活性酸素種（ＲＯＳ）、鉄、ＰＴＧＳ２、及びＣＯＸ−２からなる群から選択されるマーカーのレベル若しくは活性の上昇、又はＧＰＸ４、ＭＤＡ、及びＧＳＨからなる群から選択されるマーカーのレベル又は活性の低下が、前記試験薬が鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤であることを示す、請求項８５〜９１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９３】
前記候補免疫刺激剤を評価することが、前記選択された候補免疫刺激剤と接触した細胞を免疫細胞と共に培養するか、又は前記選択された候補免疫刺激剤と接触した細胞によって産生される後細胞シグナル伝達因子に免疫細胞を曝露して、前記免疫細胞のＮＦκＢ、ＩＲＦ、若しくはＳＴＩＮＧのレベル又は活性を測定することを含む、請求項８５に記載の方法。
【請求項９４】
前記候補免疫刺激剤を評価することが、選択された候補免疫刺激剤と接触した細胞と共にＴ細胞を培養するか、又は選択された候補免疫刺激剤と接触した細胞によって産生される後細胞シグナル伝達因子にＴ細胞を曝露して、Ｔ細胞の増殖及び活性化を測定することを含む、請求項８５に記載の方法。
【請求項９５】
免疫刺激剤を同定する方法であって：
（ａ）細胞内で鉄依存性細胞分解を誘導するのに十分な量の鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤と細胞を接触させること；
（ｂ）前記鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤との接触後に前記細胞によって産生される１つ又は複数の後細胞シグナル伝達因子を単離すること；及び
（ｃ）前記１つ又は複数の後細胞シグナル伝達因子を、免疫応答を刺激する能力についてアッセイすることを含む、方法。
【請求項９６】
免疫応答を刺激する試験薬を選択することをさらに含む、請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
前記細胞内で鉄依存性細胞分解のマーカーを検出することをさらに含む、請求項９５に記載の方法。
【請求項９８】
（ｉ）前記鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤との接触後に前記細胞によって産生される前記１つ又は複数の後細胞シグナル伝達因子のレベルを測定すること；
（ｉｉ）前記鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤との接触後に前記細胞によって産生される前記１つ又は複数の後細胞シグナル伝達因子のレベルを、前記鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤で処置されていない対照細胞における前記１つ又は複数の試験薬のレベルと比較すること；及び
（ｉｉｉ）前記対照細胞と比較して、前記鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤と接触した細胞においてレベルの上昇を示す後細胞シグナル伝達因子を選択して、ステップ（ｃ）でアッセイするための前記１つ又は複数の後細胞シグナル伝達因子を生成することをさらに含む、請求項９５に記載の方法。
【請求項９９】
前記対照細胞が、鉄依存性細胞分解ではない細胞死を誘導する薬剤で処置される、請求項９８に記載の方法。
【請求項１００】
前記アッセイが、前記１つ又は複数の後細胞シグナル伝達因子を動物に投与して、前記動物の免疫応答を測定することを含む、請求項９５に記載の方法。
【請求項１０１】
前記アッセイが、免疫細胞を、前記１つ又は複数の後細胞シグナル伝達因子で処置して、前記免疫細胞のＮＦκＢ活性のレベル又は活性を測定することを含む、請求項９５に記載の方法。
【請求項１０２】
前記アッセイが、Ｔ細胞を、前記１つ又は複数の後細胞シグナル伝達因子で処置して、前記Ｔ細胞の活性化又は増殖を測定することを含む、請求項９５に記載の方法。
【請求項１０３】
前記アッセイが、免疫細胞を前記１つ又は複数の後細胞シグナル伝達因子と接触させて、前記免疫細胞のＮＦκＢ、ＩＲＦ、又はＳＴＩＮＧのレベル又は活性を測定することを含む、請求項９５に記載の方法。
【請求項１０４】
前記免疫細胞がＴＨＰ−１細胞である、請求項９３又は１０３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、それぞれ内容がその全体の参照により本明細書に組み込まれる、２０１８年６月１５日に出願された米国仮特許出願第６２／６８５，７７０号明細書、及び２０１８年１２月１９日に出願された米国仮特許出願第６２／７８１，８１９号明細書の優先権を主張する。
【背景技術】
【０００２】
多細胞生物では、細胞死は、組織の恒常性を維持し、且つ潜在的に有害な細胞を排除すると考えられている重要で活発なプロセスである。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
特定の態様では、本開示は、免疫細胞の免疫活性を高める方法に関し、この方法は：（ｉ）標的細胞を、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤に接触させること、及び（ｉｉ）免疫細胞を、標的細胞を薬剤に接触させない場合の免疫細胞に対して免疫細胞の免疫活性を高めるのに十分な量の薬剤と接触させられた標的細胞に、又は該薬剤と接触させられた標的細胞によって産生される後細胞シグナル伝達因子（ｐｏｓｔｃｅｌｌｕｌａｒ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ）に曝露することを含み、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤は、アンチポーター系Ｘｃ−（ａｎｔｉｐｏｒｔｅｒ  ｓｙｓｔｅｍ  Ｘｃ−）の阻害剤、ＧＰＸ４の阻害剤、及びスタチンからなる群から選択される。
【０００４】
特定の態様では、本開示は、免疫細胞のＮＦｋＢのレベル又は活性を高める方法に関し、この方法は：（ｉ）標的細胞を、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤に接触させること、及び（ｉｉ）免疫細胞を、標的細胞を薬剤に接触させない場合の免疫細胞に対して免疫細胞のＮＦｋＢのレベル又は活性を高めるのに十分な量の該薬剤と接触させられた標的細胞に、又は該薬剤と接触させられた標的細胞によって産生される後細胞シグナル伝達因子に曝露することを含み、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤は、アンチポーター系Ｘｃ−の阻害剤、ＧＰＸ４の阻害剤、及びスタチンからなる群から選択される。
【０００５】
特定の態様では、本開示は、免疫細胞のインターフェロン調節因子（ＩＲＦ）又はインターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）のレベル又は活性を高める方法に関し、この方法は：（ｉ）標的細胞を、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤に接触させること、及び（ｉｉ）免疫細胞を、標的細胞を薬剤に接触させない場合の免疫細胞に対して免疫細胞のＩＲＦ又はＳＴＩＮＧのレベル又は活性を高めるのに十分な量の該薬剤と接触させられた標的細胞に、又は該薬剤と接触させられた標的細胞によって産生される後細胞シグナル伝達因子に曝露することを含み、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤は、アンチポーター系Ｘｃ−の阻害剤、ＧＰＸ４の阻害剤、及びスタチンからなる群から選択される。
【０００６】
特定の態様では、本開示は、免疫細胞の免疫促進性サイトカインのレベル又は活性を高める方法に関し、この方法は：（ｉ）標的細胞を、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤に接触させること、及び（ｉｉ）免疫細胞を、標的細胞を薬剤に接触させない場合の免疫細胞に対して免疫細胞の免疫促進性サイトカインのレベル又は活性を高めるのに十分な量の該薬剤と接触させられた標的細胞に、又は該薬剤と接触させられた標的細胞によって産生される後細胞シグナル伝達因子に曝露することを含み、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤は、アンチポーター系Ｘｃ−の阻害剤、ＧＰＸ４の阻害剤、及びスタチンからなる群から選択される。
【０００７】
特定の実施形態では、鉄依存性細胞分解はフェロトーシスである。特定の実施形態では、アンチポーター系Ｘｃ−の阻害剤は、エラスチン又はその誘導体又は類似体である。
【０００８】
特定の実施形態では、エラスチン又はその誘導体又は類似体は：
【化１】
2021528393.tif 000002
の式又はその薬学的に許容される塩又はエステルを有し、式中、
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、ヒドロキシ、及びハロゲンからなる群から選択され；
Ｒ２は、Ｈ、ハロ、及びＣ１〜４アルキルからなる群から選択され；
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、５〜７員ヘテロシクロアルキル、及び５〜６員ヘテロアリールからなる群から選択され；
Ｒ４は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルからなる群から選択され；
Ｒ５はハロであり；
【化２】
2021528393.tif 000003
は、任意選択により＝Ｏで置換され；且つ
ｎは０〜４までの整数である。
【０００９】
特定の実施形態では、エラスチンの類似体はＰＥ又はＩＫＥである。
【００１０】
特定の実施形態では、ＧＰＸ４の阻害剤は、（１Ｓ，３Ｒ）−ＲＳＬ３又はその誘導体又は類似体、ＭＬ１６２、ＤＰＩ化合物７、ＤＰＩ化合物１０、ＤＰＩ化合物１２、ＤＰＩ化合物１３、ＤＰＩ化合物１７、ＤＰＩ化合物１８、ＤＰＩ化合物１９、ＦＩＮ５６、及びＦＩＮＯ２からなる群から選択される。
【００１１】
特定の実施形態では、ＲＳＬ３誘導体又は類似体は、構造式（Ｉ）：
【化３】
2021528393.tif 000004
によって表される化合物、又はそのエナンチオマー、光学異性体、ジアステレオマー、Ｎ−オキシド、結晶形態、水和物、又は薬学的に許容される塩であり、式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ６は独立に、Ｈ、Ｃ１〜８アルキル、Ｃ１〜８アルコキシ、Ｃ１〜８アラルキル、３〜８員炭素環、３〜８員複素環、３〜８員アリール、又は３〜８員ヘテロアリール、アシル、アルキルスルホニル、及びアリールスルホニルから選択され、各アルキル、アルコキシ、アラルキル、炭素環、複素環、アリール、ヘテロアリール、アシル、アルキルスルホニル、及びアリールスルホニルは、任意選択により少なくとも１つの置換基で置換され；
Ｒ４及びＲ５は独立に、Ｈ１Ｃ１〜８アルキル、Ｃ１〜８アルコキシ、３〜８員炭素環、３〜８員複素環、３〜８員アリール、又は３〜８員ヘテロアリール、カルボキシレート、エステル、アミド、炭水化物、アミノ酸、アシル、アルコキシ置換アシル、アルジトール、ＮＲ７Ｒ８、ＯＣ（Ｒ７）２ＣＯＯＨ、ＳＣ（Ｒ７）２ＣＯＯＨ、ＮＨＣＨＲ７ＣＯＯＨ、ＣＯＲ８、ＣＯ２Ｒ８、硫酸塩、スルホンアミド、スルホキシド、スルホン酸塩、スルホン、チオアルキル、チオエステル、及びチオエーテルから選択され、各アルキル、アルコキシ、炭素環、複素環、アリール、ヘテロアリール、カルボキシレート、エステル、アミド、炭水化物、アミノ酸、アシル、アルコキシ置換アシル、アルジトール、ＮＲ７Ｒ８、ＯＣ（Ｒ７）２ＣＯＯＨ、ＳＣ（Ｒ７）２ＣＯＯＨ、ＮＨＣＨＲ７ＣＯＯＨ、ＣＯＲ８、ＣＯ２Ｒ８、硫酸塩、スルホンアミド、スルホキシド、スルホン酸塩、スルホン、チオアルキル、チオエステル、及びチオエーテルは、任意選択により少なくとも１つの置換基で置換され；
Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１〜８アルキル、炭素環、アリール、ヘテロアリール、複素環、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、及びアルキル複素環から選択され、各アルキル、炭素環、アリール、ヘテロアリール、複素環、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、及びアルキル複素環は、任意選択により少なくとも１つの置換基で置換することができ；
Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１〜８アルキル、Ｃ１〜８アルケニル、Ｃ１〜８アルキニル、アリール、炭素環、ヘテロアリール、複素環、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、アルキル複素環、及びヘテロ芳香族から選択され、各アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、炭素環、ヘテロアリール、複素環、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、アルキル複素環、及びヘテロ芳香族は、任意選択により少なくとも１つの置換基で置換することができ；且つ
Ｘは、それが結合している環上の０〜４個の置換基である。
【００１２】
特定の実施形態では、ＲＳＬ３誘導体又は類似体は、構造式（ＩＩ）：
【化４】
2021528393.tif 000005
によって表される化合物又はそのＮ−オキシド、結晶形態、水和物、又は薬学的に許容される塩であり；
式中：
Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、及び−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｘＯＨからなる群から選択され；
Ｘは、１〜６の整数であり；且つ
Ｒ２、Ｒ２'、Ｒ３、及びＲ３'は独立に、Ｈ、Ｃ３〜８シクロアルキル、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、又はＲ２及びＲ２'は共に結合して、ピリジニル又はピラニルを形成することができ、且つＲ３及びＲ３'は共に結合して、ピリジニル又はピラニルを形成することができる。
【００１３】
特定の実施形態では、ＲＳＬ３誘導体又は類似体は、構造式（ＩＩＩ）：
【化５】
2021528393.tif 000006
によって表される化合物又はその立体異性体、又はその薬学的に許容される塩であり；式中：
ｎは、２、３、又は４であり；Ｒは、置換若しくは非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、置換若しくは非置換Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル基、置換若しくは非置換Ｃ２〜Ｃ８ヘテロシクロアルキル基、置換若しくは非置換Ｃ６〜Ｃ１０芳香環基、又は置換若しくは非置換Ｃ３〜Ｃ８ヘテロアリール環基であり；置換は、各基の１つ又は複数の水素原子が：ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロゲン化Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、ハロゲン化Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、ＣＯＯＨ（カルボキシ）、ＣＯＯＣ１〜Ｃ６アルキル、ＯＣＯＣ１〜Ｃ６アルキルからなる群から選択される基によって置換されることを意味する。
【００１４】
特定の実施形態では、スタチンは、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、セリバスタチン、及びシンバスタチンからなる群から選択される。特定の実施形態では、免疫細胞は、マクロファージ、単球、樹状細胞、Ｔ細胞、ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、又はＣＤ３＋細胞である。特定の実施形態では、免疫細胞はＴＨＰ−１細胞である。
【００１５】
特定の実施形態では、この方法は、インビトロ又はエクスビボで行われる。特定の実施形態では、この方法はインビボで行われる。特定の実施形態では、ステップ（ｉ）がインビトロで行われ、ステップ（ｉｉ）がインビボで行われる。
【００１６】
特定の態様では、本開示は、細胞、組織、又は対象の免疫活性を高める方法に関し、この方法は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤で処置されていない細胞、組織、又は対象と比較して免疫活性を高めるのに十分な量の鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤を細胞、組織、又は対象に投与することを含む。
【００１７】
一実施形態では、対象は、免疫活性の上昇を必要としている。
【００１８】
一実施形態では、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤は、細胞、組織、又は対象におけるＮＦｋＢのレベル又は活性、ＩＲＦ又はＳＴＩＮＧのレベル又は活性、マクロファージのレベル又は活性、単球のレベル又は活性、樹状細胞のレベル又は活性、Ｔ細胞のレベル又は活性、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、又はＣＤ３＋細胞のレベル又は活性、及び免疫促進性サイトカインのレベル又は活性のうちの１つ又は複数を高めるのに十分な量で投与される。
【００１９】
特定の態様では、本開示は、細胞、組織、又は対象のＮＦｋＢのレベル又は活性を高める方法に関し、この方法は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤で処置されていない細胞、組織、又は対象と比較してＮＦｋＢのレベル又は活性を高めるのに十分な量の鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤を細胞、組織、又は対象に投与することを含む。
【００２０】
一実施形態では、対象は、ＮＦｋＢのレベル又は活性の上昇を必要としている。
【００２１】
一実施形態では、ＮＦｋＢのレベル又は活性は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤で処置されていない細胞、組織、又は対象と比較して少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％、又は少なくとも２倍、４倍、６倍、８倍、又は１０倍上昇する。
【００２２】
特定の態様では、本開示は、細胞、組織、又は対象のＩＲＦ又はＳＴＩＮＧのレベル又は活性を高める方法に関し、この方法は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤で処置されていない細胞、組織、又は対象と比較してＩＲＦ又はＳＴＩＮＧのレベル又は活性を高めるのに十分な量の鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤を細胞、組織、又は対象に投与することを含む。
【００２３】
一実施形態では、対象は、ＩＲＦ又はＳＴＩＮＧのレベル又は活性の上昇を必要としている。
【００２４】
一実施形態では、ＩＲＦ又はＳＴＩＮＧのレベル又は活性は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤で処置されていない細胞、組織、又は対象と比較して少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％、又は少なくとも２倍、４倍、６倍、８倍、又は１０倍上昇する。
【００２５】
特定の態様では、本開示は、組織又は対象のマクロファージ、単球、樹状細胞、又はＴ細胞のレベル又は活性を高める方法に関し、この方法は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤で処置されていない組織又は対象と比較してマクロファージ、単球、樹状細胞、又はＴ細胞のレベル又は活性を高めるのに十分な量の鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤を組織又は対象に投与することを含む。
【００２６】
一実施形態では、対象は、マクロファージ、単球、樹状細胞、又はＴ細胞のレベル又は活性の上昇を必要としている。
【００２７】
一実施形態では、マクロファージ、単球、樹状細胞、又はＴ細胞のレベル又は活性は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤で処置されていない組織又は対象と比較して少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％、又は少なくとも２倍、４倍、６倍、８倍、又は１０倍上昇する。
【００２８】
特定の態様では、本開示は、組織又は対象のＣＤ４＋、ＣＤ８＋、又はＣＤ３＋細胞のレベル又は活性を高める方法に関し、この方法は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤で処置されていない組織又は対象と比較してＣＤ４＋、ＣＤ８＋、又はＣＤ３＋細胞のレベル又は活性を高めるのに十分な量の鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤を対象に投与することを含む。
【００２９】
一実施形態では、対象は、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、又はＣＤ３＋細胞のレベル又は活性の上昇を必要としている。
【００３０】
一実施形態では、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、又はＣＤ３＋細胞のレベル又は活性は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤で処置されていない組織又は対象と比較して少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％、又は少なくとも２倍、４倍、６倍、８倍、又は１０倍上昇する。
【００３１】
特定の態様では、本開示は、細胞、組織、又は対象の免疫促進性サイトカインのレベル又は活性を高める方法に関し、この方法は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤で処置されていない細胞、組織、又は対象と比較して免疫促進性サイトカインのレベル又は活性を高めるのに十分な量の鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤を細胞、組織、又は対象に投与することを含む。
【００３２】
一実施形態では、対象は、免疫促進性サイトカインのレベル又は活性の上昇を必要としている。
【００３３】
一実施形態では、免疫促進性サイトカインのレベル又は活性は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤で処置されていない細胞、組織、又は対象と比較して少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％、又は少なくとも２倍、４倍、６倍、８倍、又は１０倍上昇する。
【００３４】
一実施形態では、免疫促進性サイトカインは、ＩＦＮ−α、ＩＬ−１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１７、及びＧＭＣＳＦから選択される。
【００３５】
一実施形態では、この方法は、投与前に、ＮＦｋＢのレベル又は活性；マクロファージのレベル又は活性；単球のレベル又は活性；樹状細胞のレベル又は活性；ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、又はＣＤ３＋細胞のレベル又は活性；Ｔ細胞のレベル又は活性；及び免疫促進性サイトカインのレベル又は活性のうちの１つ又は複数について細胞、組織、又は対象を評価することをさらに含む。
【００３６】
一実施形態では、この方法は、投与後に、ＮＦｋＢのレベル又は活性；マクロファージのレベル又は活性；単球のレベル又は活性；樹状細胞のレベル又は活性；ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、又はＣＤ３＋細胞のレベル又は活性；Ｔ細胞のレベル又は活性；及び免疫促進性サイトカインのレベル又は活性のうちの１つ又は複数について細胞、組織、又は対象を評価することをさらに含む。
【００３７】
実施形態では、免疫促進性サイトカインは、ＩＦＮ−α、ＩＬ−１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１７、及びＧＭＣＳＦから選択される。
【００３８】
一実施形態では、対象は感染症に罹患している。
【００３９】
一実施形態では、感染症は慢性感染症である。
【００４０】
実施形態では、慢性感染症は、ＨＩＶ感染症、ＨＣＶ感染症、ＨＢＶ感染症、ＨＰＶ感染症、Ｂ型肝炎感染症、Ｃ型肝炎感染症、ＥＢＶ感染症、ＣＭＶ感染症、ＴＢ感染症、及び寄生虫による感染症から選択される。
【００４１】
一実施形態では、細胞又は組織は、癌細胞又は癌性組織である。
【００４２】
一実施形態では、対象は癌と診断されている。
【００４３】
特定の態様では、本開示は、免疫活性の上昇を必要とする対象を処置する方法に関し、この方法は、対象の免疫活性を高めるのに十分な量の鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤を対象に投与することを含む。
【００４４】
一実施形態では、対象は慢性感染症に罹患している。
【００４５】
実施形態では、慢性感染症は、ＨＩＶ感染症、ＨＣＶ感染症、ＨＢＶ感染症、ＨＰＶ感染症、Ｂ型肝炎感染症、Ｃ型肝炎感染症、ＥＢＶ感染症、ＣＭＶ感染症、ＴＢ感染症、及び寄生虫による感染症から選択される。
【００４６】
一実施形態では、対象は癌を有する。
【００４７】
実施形態では、癌は、黒色腫、腎細胞癌、非小細胞肺癌、非扁平上皮肺癌、尿路上皮癌、ホジキンリンパ腫、頭頸部扁平上皮癌、肝細胞癌、大腸癌、胃腺癌、胃食道接合部腺癌、及びメルケル細胞癌から選択される。
【００４８】
一実施形態では、鉄依存性細胞分解はフェロトーシスである。
【００４９】
特定の態様では、本開示は、癌と診断された対象を処置する方法に関し、この方法は、（ａ）免疫療法剤と（ｂ）鉄依存性細胞分解を誘導し、それにより対象の癌を処置する薬剤を組み合わせて対象に投与することを含む。
【００５０】
一実施形態では、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤は、対象の免疫応答を高めるのに有効な量で対象に投与される。
【００５１】
一実施形態では、免疫療法剤は、トール様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、細胞ベースの治療法、サイトカイン、癌ワクチン、及び免疫チェックポイント分子の免疫チェックポイントモジュレーターからなる群から選択される。
【００５２】
一実施形態では、ＴＬＲアゴニストは、Ｃｏｌｅｙの毒素及びカルメットゲラン桿菌（ＢＣＧ）から選択される。
【００５３】
一実施形態では、免疫チェックポイント分子は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、４−１ＢＢ、ＡＤＯＲＡ２Ａ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ−４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ−３、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ−３、及びＶＩＳＴＡから選択される。
【００５４】
一実施形態では、免疫チェックポイント分子は、刺激性免疫チェックポイント分子であり、免疫チェックポイントモジュレーターは、刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニストである。
【００５５】
一実施形態では、免疫チェックポイント分子は、抑制性免疫チェックポイント分子であり、免疫チェックポイントモジュレーターは、抑制性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストである。
【００５６】
一実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、小分子、阻害性ＲＮＡ、アンチセンス分子、及び免疫チェックポイント分子結合タンパク質から選択される。
【００５７】
一実施形態では、免疫チェックポイント分子はＰＤ−１であり、免疫チェックポイントモジュレーターはＰＤ−１阻害剤である。
【００５８】
一実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ピジリズマブ、ＳＨＲ−１２１０、ＭＥＤＩ０６８０Ｒ０１、ＢＢｇ−Ａ３１７、ＴＳＲ−０４２、ＲＥＧＮ２８１０、及びＰＦ−０６８０１５９１から選択される。
【００５９】
一実施形態では、免疫チェックポイント分子はＰＤ−Ｌ１であり、免疫チェックポイントモジュレーターはＰＤ−Ｌ１阻害剤である。
【００６０】
一実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＭＤＸ−１１０５、ＡＭＰ−２２４、及びＬＹ３３０００５４から選択される。
【００６１】
一実施形態では、免疫チェックポイント分子はＣＴＬＡ−４であり、免疫チェックポイントモジュレーターはＣＴＬＡ−４阻害剤である。
【００６２】
一実施形態では、ＣＴＬＡ−４阻害剤は、イピリムマブ、トレメリムマブ、ＪＭＷ−３Ｂ３、及びＡＧＥＮ１８８４から選択される。
【００６３】
実施形態では、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤は、免疫チェックポイントモジュレーターの投与前、投与後、又は同時に投与される。
【００６４】
一実施形態では、処置に対する癌の応答は、免疫チェックポイントモジュレーターのみによる処置と比較して改善されている。
【００６５】
実施形態では、応答は、例えば対象の集団において、免疫チェックポイントモジュレーターのみによる処置と比較して少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、又は少なくとも８０％改善されている。
【００６６】
一実施形態では、応答は、腫瘍量の減少、腫瘍サイズの減少、腫瘍増殖の阻害、処置前の進行性癌を有する対象における癌の安定化の達成、癌が進行するまでの時間の延長、及び生存期間の延長のうちのいずれか１つ又は複数を含む。
【００６７】
一実施形態では、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤と免疫チェックポイントモジュレーターは相乗的に作用する。
【００６８】
一実施形態では、癌は、免疫チェックポイント療法に応答する癌である。
【００６９】
実施形態では、癌は、癌腫、肉腫、リンパ腫、黒色腫、及び白血病から選択される。
【００７０】
様々な実施形態では、癌は、黒色腫、腎細胞癌、非小細胞肺癌、非扁平上皮肺癌、尿路上皮癌、ホジキンリンパ腫、頭頸部扁平上皮癌、肝細胞癌、大腸癌、胃腺癌、胃食道接合部腺癌、及びメルケル細胞癌から選択される。
【００７１】
特定の実施形態では、癌は腎細胞癌である。
【００７２】
一実施形態では、対象はヒトである。
【００７３】
一実施形態では、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤は、アンチポーター系Ｘｃ−の阻害剤、ＧＰＸ４の阻害剤、及びスタチンからなる群から選択される。
【００７４】
一実施形態では、アンチポーター系Ｘｃ−の阻害剤は、エラスチン又はその誘導体又は類似体である。
【００７５】
一実施形態では、エラスチンの類似体はＰＥ又はＩＫＥである。
【００７６】
一実施形態では、ＧＰＸ４の阻害剤は、（１Ｓ，３Ｒ）−ＲＳＬ３又はその誘導体又は類似体、ＭＬ１６２、ＤＰＩ化合物７、ＤＰＩ化合物１０、ＤＰＩ化合物１２、ＤＰＩ化合物１３、ＤＰＩ化合物１７、ＤＰＩ化合物１８、ＤＰＩ化合物１９、ＦＩＮ５６、及びＦＩＮＯ２からなる群から選択される。
【００７７】
一実施形態では、スタチンは、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、セリバスタチン、及びシンバスタチンからなる群から選択される。
【００７８】
一実施形態では、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤は、ソラフェニブ又はその誘導体又は類似体、スルファサラジン、グルタミン酸塩、ＢＳＯ、ＤＰＩ２、シスプラチン、システイナーゼ、シリカベースのナノ粒子、ＣＣＩ４、クエン酸鉄アンモニウム、トリゴネリン、及びブルサトール（ｂｒｕｓａｔｏｌ）からなる群から選択される。
【００７９】
一実施形態では、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤は、以下の特徴のうちの１つ又は複数を有する：
（ａ）インビトロで標的細胞の鉄依存性細胞分解及びその後の共培養細胞における免疫応答の活性化を誘導する；
（ｂ）インビトロでの標的細胞の鉄依存性細胞分解及びその後の共培養マクロファージ、例えばＲＡＷ２６４．７マクロファージの活性化を誘導する；
（ｃ）インビトロでの標的細胞の鉄依存性細胞分解及びその後の共培養単球、例えばＴＨＰ−１単球の活性化を誘導する；
（ｄ）インビトロでの標的細胞の鉄依存性細胞分解及びその後の共培養骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣ）の活性化を誘導する；
（ｅ）インビトロで標的細胞の鉄依存性細胞分解及びその後の共培養細胞におけるＮＦｋＢ、ＩＲＦ、及び／又はＳＴＩＮＧのレベル又は活性の上昇を誘導する；
（ｆ）インビトロでの標的細胞の鉄依存性細胞分解及びその後の共培養細胞における免疫促進性サイトカインのレベル又は活性の上昇を誘導する；並びに
（ｇ）インビトロでの標的細胞の鉄依存性細胞分解及びその後の共培養されたＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、及び／又はＣＤ３＋細胞の活性化を誘導する。
【００８０】
実施形態では、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤は癌細胞を標的とする。
【００８１】
特定の態様では、本開示は、免疫刺激剤をスクリーニングする方法に関し、この方法は：
（ａ）複数の試験薬（例えば、試験薬のライブラリー）を用意すること；
（ｂ）鉄依存性細胞分解を誘導する能力について複数の試験薬のそれぞれを評価すること；
（ｃ）候補免疫刺激剤として、鉄依存性細胞分解を誘導する試験薬を選択すること；及び
（ｄ）免疫応答を刺激する能力について候補免疫刺激剤を評価することを含む。
【００８２】
一実施形態では、評価するステップ（ｂ）は、細胞又は組織を複数の試験薬のそれぞれに接触させることを含む。
【００８３】
一実施形態では、評価するステップ（ｂ）は、複数の試験薬のそれぞれを動物に投与することを含む。
【００８４】
一実施形態では、評価するステップ（ｂ）は、試験薬と接触した細胞又は組織における、脂質過酸化反応、活性酸素種（ＲＯＳ）、イソプロスタン、マロンジアルデヒド（ＭＤＡ）、鉄、グルタチオンペルオキシダーゼ４（ＧＰＸ４）、プロスタグランジン−エンドペルオキシドシンターゼ２（ＰＴＧＳ２）、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）、及びグルタチオン（ＧＳＨ）からなる群から選択されるマーカーのレベル又は活性を測定することをさらに含む。
【００８５】
一実施形態では、評価するステップ（ｂ）は、試験薬と接触した細胞又は組織におけるマーカーのレベル又は活性を、試験薬と接触していない対照細胞又は組織におけるマーカーのレベル又は活性と比較することをさらに含む。
【００８６】
一実施形態では、評価するステップ（ｄ）は、鉄依存性細胞分解を誘導する試験薬を免疫刺激活性について評価することを含む。
【００８７】
一実施形態では、評価するステップ（ｄ）は、動物における免疫応答を測定することを含む。
【００８８】
一実施形態では、脂質過酸化反応、イソプロスタン、活性酸素種（ＲＯＳ）、鉄、ＰＴＧＳ２、及びＣＯＸ−２からなる群から選択されるマーカーのレベル若しくは活性の上昇、又はＧＰＸ４、ＭＤＡ、及びＧＳＨからなる群から選択されるマーカーのレベル又は活性の低下は、試験薬が鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤であることを示す。
【００８９】
一実施形態では、候補免疫刺激剤を評価することは、選択された候補免疫刺激剤と接触した細胞を免疫細胞と共に培養するか、又は選択された候補免疫刺激剤と接触した細胞によって産生される後細胞シグナル伝達因子に免疫細胞を曝露して、免疫細胞のＮＦκＢ、ＩＲＦ、若しくはＳＴＩＮＧのレベル又は活性を測定することを含む。
【００９０】
一実施形態では、免疫細胞はＴＨＰ−１細胞である。
【００９１】
一実施形態では、候補免疫刺激剤を評価することは、選択された候補免疫刺激剤と接触した細胞と共にＴ細胞を培養するか、又は選択された候補免疫刺激剤と接触した細胞によって産生される後細胞シグナル伝達因子にＴ細胞を曝露して、Ｔ細胞の増殖及び活性化を測定することを含む。
【００９２】
特定の態様では、本開示は、免疫刺激剤を同定する方法に関し、この方法は：
（ａ）細胞内で鉄依存性細胞分解を誘導するのに十分な量の鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤と細胞を接触させること；
（ｂ）鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤との接触後に細胞によって産生される１つ又は複数の後細胞シグナル伝達因子を単離すること；及び
（ｃ）１つ又は複数の後細胞シグナル伝達因子を、免疫応答を刺激する能力についてアッセイすることを含む。
【００９３】
一実施形態では、この方法は、免疫応答を刺激する試験薬を選択することをさらに含む。
【００９４】
一実施形態では、この方法は、細胞内で鉄依存性細胞分解のマーカーを検出することをさらに含む。
【００９５】
一実施形態では、この方法は：
（ｉ）鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤との接触後に細胞によって産生される１つ又は複数の後細胞シグナル伝達因子のレベルを測定すること；
（ｉｉ）鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤との接触後に細胞によって産生される１つ又は複数の後細胞シグナル伝達因子のレベルを、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤で処置されていない対照細胞における１つ又は複数の試験薬のレベルと比較すること；及び
（ｉｉｉ）対照細胞と比較して、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤と接触した細胞においてレベルの上昇を示す後細胞シグナル伝達因子を選択して、ステップ（ｃ）でアッセイするための１つ又は複数の後細胞シグナル伝達因子を生成することをさらに含む。
【００９６】
一実施形態では、対照細胞は、鉄依存性細胞分解ではない細胞死を誘導する薬剤で処置される。
【００９７】
一実施形態では、アッセイは、１つ又は複数の後細胞シグナル伝達因子を動物に投与して、動物の免疫応答を測定することを含む。
【００９８】
一実施形態では、アッセイは、免疫細胞を１つ又は複数の後細胞シグナル伝達因子で処置して、免疫細胞のＮＦκＢ活性のレベル又は活性を測定することを含む。
【００９９】
一実施形態では、アッセイは、Ｔ細胞を１つ又は複数の後細胞シグナル伝達因子で処置して、Ｔ細胞の活性化又は増殖を測定することを含む。
【０１００】
一実施形態では、アッセイは、免疫細胞を１つ又は複数の後細胞シグナル伝達因子と接触させて、免疫細胞のＮＦκＢ、ＩＲＦ、又はＳＴＩＮＧのレベル又は活性を測定することを含む。
【０１０１】
一実施形態では、免疫細胞はＴＨＰ−１細胞である。
【図面の簡単な説明】
【０１０２】
【図１Ａ】図１Ａは、様々な濃度のエラスチンで処置されたＨＴ１０８０線維肉腫細胞を示す。
【図１Ｂ】図１Ｂは、エラスチンで処置されたＨＴ１０８０細胞と共培養されたＴＨＰ１単球のＮＦｋＢ活性を示す。エラーバーは、３つの複製間の標準偏差を表す。
【図１Ｃ】図１Ｃは、ＤＭＳＯ又は様々な濃度のエラスチン（ＥＲＡＳ）又はエラスチン類似体ピペラジンエラスチン（ＰＥ）又はイミダゾールケトエラスチン（ＩＫＥ）で処置されたＨＴ１０８０線維肉腫細胞を示す。ＤＭＳＯ対照は左端にある。エラスチン又はエラスチン類似体の濃度は左から右に上昇し、図１Ａに示されているものと同じである。
【図１Ｄ】図１Ｄは、エラスチン（ＥＲＡＳ）又はエラスチン類似体ピペラジンエラスチン（ＰＥ）又はイミダゾールケトエラスチン（ＩＫＥ）で処置されたＨＴ１０８０細胞と共培養されたＴＨＰ１単球のＮＦｋＢ活性を示す。ＤＭＳＯ対照は左端にある。エラスチン又はエラスチン類似体の濃度は左から右に上昇し、図１Ｂに示されているものと同じである。エラーバーは、３つの複製間の標準偏差を表す。
【図２Ａ】図２Ａは、様々な濃度のエラスチンで処置された膵臓癌細胞（ＰＡＮＣ１）を示す。
【図２Ｂ】図２Ｂは、エラスチンで処置されたＰＡＮＣ１細胞と共培養されたＴＨＰ１単球のＮＦｋＢ活性を示す。
【図３Ａ】図３Ａは、様々な濃度のエラスチンで処置された腎細胞癌細胞（Ｃａｋｉ−１）を示す。
【図３Ｂ】図３Ｂは、エラスチンで処置されたＣａｋｉ−１細胞と共培養されたＴＨＰ１単球のＮＦｋＢ活性を示す。
【図４Ａ】図４Ａは、様々な濃度のＲＳＬ３で処置された腎細胞癌細胞（Ｃａｋｉ−１）を示す。
【図４Ｂ】図４Ｂは、ＲＳＬ３で処置されたＣａｋｉ−１細胞と共培養されたＴＨＰ１単球のＮＦｋＢ活性を示す。
【図５Ａ】図５Ａは、様々な濃度のＲＳＬ３で処置されたＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞白血病細胞を示す。
【図５Ｂ】図５Ｂは、ＲＳＬ３で処置されたＪｕｒｋａｔ細胞と共培養されたＴＨＰ１単球のＮＦｋＢ活性を示す。
【図６Ａ】図６Ａは、様々な濃度のＲＳＬ３で処置されたＡ２０Ｂ細胞白血病細胞を示す。
【図６Ｂ】図６Ｂは、ＲＳＬ３で処置されたＡ２０細胞と共培養されたＴＨＰ１単球のＮＦｋＢ活性を示す。
【図６Ｃ】図６Ｃは、ＲＳＬ３で処置されたＡ２０細胞と共培養されたＴＨＰ１単球のＩＲＦ活性を示す。
【図７Ａ】図７Ａは、様々な濃度のエラスチンのみで、又はフェロトーシス阻害剤（フェロスタチン−１（Ｆｅｒｒｏｓｔａｔｉｎ−１）、リプロクススタチン−１（Ｌｉｐｒｏｘｓｔａｔｉｎ−１）、又はトロロックス）と組み合わせて処置されたＨＴ１０８０線維肉腫細胞の生存率を示す。
【図７Ｂ】図７Ｂは、エラスチンのみで、又はフェロトーシス阻害剤（フェロスタチン−１、リプロクススタチン−１、又はトロロックス）と組み合わせて処置されたＨＴ１０８０線維肉腫細胞と共培養されたＴＨＰ１単球のＮＦｋＢ活性を示す。
【図８Ａ】図８Ａは、様々な濃度のエラスチンのみで、又はフェロトーシス阻害剤（フェロスタチン−１、β−メルカプトエタノール、又はデフェロキサミン）と組み合わせて処置されたＨＴ１０８０線維肉腫細胞の生存率を示す。
【図８Ｂ】図８Ｂは、エラスチンのみで、又はフェロトーシス阻害剤（フェロスタチン−１、β−メルカプトエタノール、又はデフェロキサミン）と組み合わせて処置されたＨＴ１０８０線維肉腫細胞と共培養されたＴＨＰ１単球のＮＦｋＢ活性を示す。
【図９Ａ】図９Ａは、ｓｉＲＮＡ対照（ｓｉＣｏｎｔｒｏｌ）又はＡＣＳＬ４遺伝子に対するｓｉＲＮＡ（ｓｉＡＣＳＬ４）と組み合わせられた様々な濃度のエラスチンで処置されたＨＴ１０８０線維肉腫細胞の生存率を示す。
【図９Ｂ】図９Ｂは、ＤＭＳＯで、又はｓｉＲＮＡ対照（ｓｉＣｏｎｔｒｏｌ）、ＡＣＳＬ４遺伝子に対するｓｉＲＮＡ（ｓｉＡＣＳＬ４）、若しくはＣＡＲＳ遺伝子に対するｓｉＲＮＡ（ｓｉＣＡＲＳ）と組み合わせられたエラスチンで処置されたＨ１０８０線維肉腫細胞の生存率を示す。
【図９Ｃ】図９Ｃは、ＤＭＳＯで、又はｓｉＲＮＡ対照（ｓｉＣｏｎｔｒｏｌ）、ＡＣＳＬ４遺伝子に対するｓｉＲＮＡ（ｓｉＡＣＳＬ４）、若しくはＣＡＲＳ遺伝子に対するｓｉＲＮＡ（ｓｉＣＡＲＳ）と組み合わせられたエラスチンで処置されたＨＴ１０８０線維肉腫細胞と共培養されたＴＨＰ１単球のＮＦｋＢ活性の倍率変化を示す。
【図１０Ａ】図１０Ａは、ＤＭＳＯ又は様々な濃度のＲＳＬ３のみで、又はフェロスタチン−１と組み合わせて処置されたＡ２０リンパ腫細胞の生存率を示す。
【図１０Ｂ】図１０Ｂは、ＤＭＳＯ又は様々な濃度のＲＳＬ３のみで、又はフェロスタチン−１と組み合わせて処置されたＡ２０リンパ腫細胞と共培養されたＴＨＰ１単球のＮＦｋＢ活性を示す。
【図１１Ａ】図１１Ａは、ＤＭＳＯ又は様々な濃度のＭＬ１６２のみで、又はフェロスタチン−１と組み合わせて処置されたＡ２０リンパ腫細胞の生存率を示す。
【図１１Ｂ】図１１Ｂは、ＤＭＳＯ又は様々な濃度のＭＬ１６２のみで、又はフェロスタチン−１と組み合わせて処置されたＡ２０リンパ腫細胞と共培養されたＴＨＰ１単球のＮＦｋＢ活性を示す。
【図１２Ａ】図１２Ａは、ＤＭＳＯ又は様々な濃度のＭＬ２１０のみで、又はフェロスタチン−１と組み合わせて処置されたＡ２０リンパ腫細胞の生存率を示す。
【図１２Ｂ】図１２Ｂは、ＤＭＳＯ又は様々な濃度のＭＬ２１０のみで、又はフェロスタチン−１と組み合わせて処置されたＡ２０リンパ腫細胞と共培養されたＴＨＰ１単球のＮＦｋＢ活性を示す。
【図１３Ａ】図１３Ａは、ＤＭＳＯ又は様々な濃度のＲＳＬ３のみで、又はフェロスタチン−１と組み合わせて処置されたＣａｋｉ−１腎癌細胞の生存率を示す。
【図１３Ｂ】図１３Ｂは、ＤＭＳＯ又は様々な濃度のＲＳＬ３のみで、又はフェロスタチン−１と組み合わせて処置されたＣａｋｉ−１腎癌細胞と共培養されたＴＨＰ１単球のＮＦｋＢ活性を示す。
【図１４Ａ】図１４Ａは、ＤＭＳＯ又は様々な濃度のＭＬ１６２のみで、又はフェロスタチン−１と組み合わせて処置されたＣａｋｉ−１腎癌細胞の生存率を示す。
【図１４Ｂ】図１４Ｂは、ＤＭＳＯ又は様々な濃度のＭＬ１６２のみで、又はフェロスタチン−１と組み合わせて処置されたＣａｋｉ−１腎癌細胞と共培養されたＴＨＰ１単球のＮＦｋＢ活性を示す。
【発明を実施するための形態】
【０１０３】
本開示は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤を細胞、組織、又は対象に投与することを含む、細胞、組織、又は対象における免疫活性を高める方法に関する。本出願人は、驚くべきことに、免疫細胞のＮＦＫＢ及びＩＲＦ活性の上昇によって証明されるように、鉄依存性細胞分解（例えば、フェロトーシス）の誘導が免疫応答を高めることを示した。従って、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤の投与を使用して、癌又は感染症などの免疫活性の上昇から恩恵を受け得る障害を処置することができる。
【０１０４】
Ｉ．定義
「投与する（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒ）」、「投与（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ）」、又は「投与（ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）」」という用語は、医薬組成物又は薬剤を対象の系に、又は対象の内部若しくは外部の特定の領域に送達するあらゆる方法を含む。
【０１０５】
本明細書で使用される「併用投与」、「同時投与」、若しくは「併用療法」は、別個の製剤若しくは単一の医薬製剤を使用する２つ以上の活性剤の投与、又は両方（若しくはすべて）の活性剤がそれらの生物学的活性を発揮する期間が重複するような任意の順序での連続投与として理解される。本明細書では、１つの活性剤（例えば、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤）が第２の薬剤の活性を改善することができる、例えば、標的細胞、例えば癌細胞を第２の薬剤の活性に感作させることができることが企図される。「併用投与」は、薬剤が同時に、同じ頻度で、又は同じ投与経路によって投与される必要はない。本明細書で使用される「併用投与」、「同時投与」、又は「併用療法」には、１つ又は複数の追加の抗癌剤、例えば免疫チェックポイントモジュレーターと鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤との投与が含まれる。免疫チェックポイントモジュレーターの例が本明細書に示される。
【０１０６】
本明細書で使用される「フェロトーシス」は、鉄依存性であって、活性酸素種の産生を伴う調節された細胞死のプロセスを指す。
【０１０７】
「細胞分解」とは、細胞内の物質を再配列し、散在させ、最終的には細胞死をもたらし得る動的プロセスを指す。細胞分解プロセスには、後細胞シグナル伝達因子の産生及びその細胞からの放出が含まれる。
【０１０８】
本明細書で使用される「上昇する」（又は「活性化する」）及び「低下する」という用語はそれぞれ、参照と比較してパラメータの量、機能、又は活性をより上昇させる又はより低下させる調節を指す。例えば、本明細書に記載の調製物の投与に続いて、パラメータ（例えば、ＮＦｋＢの活性化、マクロファージの活性化、腫瘍のサイズ又は増殖）は、投与前のパラメータ量に対して少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９８％以上対象で上昇又は低下し得る。一般に、測定基準は、投与に続いて、投与の効果が現れた時点、例えば、治療計画が開始されてから少なくとも１日後、１週間後、１ヶ月後、３ヶ月後、６ヶ月後に測定される。同様に、前臨床パラメータ（インビトロでの細胞のＮＦｋＢの活性化、及び／又は本明細書に記載の調製物による試験哺乳動物の腫瘍負荷の低下など）は、投与前のパラメータの量と比較して少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９８％以上上昇し得る。
【０１０９】
本明細書で使用される「抗腫瘍剤」は、癌の処置に使用される薬物を指す。抗腫瘍剤には、化学療法剤（例えば、アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗腫瘍抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤、有糸分裂阻害剤、コルチコステロイド、及び酵素）、生物学的抗癌剤、及び免疫チェックポイント調節剤が含まれる。
【０１１０】
「癌治療計画」又は「抗腫瘍療法」は、特定のスケジュールで対象への特定の量の１つ又は複数の抗腫瘍剤の投与を含む、癌の処置のための臨床的に認められた投薬プロトコルである。
【０１１１】
本明細書で使用される「免疫チェックポイント」又は「免疫チェックポイント分子」は、シグナルを調節する免疫系の分子である。免疫チェックポイント分子は、刺激性チェックポイント分子である、即ちシグナルを上昇させるか、又は抑制性チェックポイント分子である、即ちシグナルを低下させることができる。本明細書で使用される「刺激性チェックポイント分子」は、シグナルを上昇させる又は共刺激性である免疫系の分子である。本明細書で使用される「抑制性チェックポイント分子」は、シグナルを低下させる又は共抑制性である免疫系の分子である。
【０１１２】
本明細書で使用される「免疫チェックポイントモジュレーター」は、対象における免疫チェックポイントの活性を変化させることができる薬剤である。特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、限定されるものではないが、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、４−１ＢＢ、ＡＤＯＲＡ２Ａ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ−４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ−３、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ−３、及びＶＩＳＴＡを含む、１つ又は複数の免疫チェックポイント分子の機能を変化させる。免疫チェックポイントモジュレーターは、免疫チェックポイントのアゴニスト又はアンタゴニストであり得る。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、免疫チェックポイント結合タンパク質（例えば、抗体、抗体Ｆａｂ断片、二価抗体、抗体薬物コンジュゲート、ｓｃＦｖ、融合タンパク質、二価抗体、又は四価抗体）である。他の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは小分子である。特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１、又は抗ＣＴＬＡ−４結合タンパク質、例えば、抗体又は抗体断片である。
【０１１３】
本明細書で使用される「免疫療法剤」は、免疫応答を誘導又は増強する、薬学的に許容される化合物、組成物、又は療法剤を指す。免疫療法剤には、限定されるものではないが、免疫チェックポイントモジュレーター、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、細胞ベースの治療法、サイトカイン、及び癌ワクチンが含まれる。
【０１１４】
本明細書で使用される「腫瘍性障害」又は「癌」又は「新生物」は、限定されるものではないが：白血病、リンパ腫、黒色腫、癌腫、及び肉腫を含む、ヒトに見られるすべての種類の癌又は新生物を指す。本明細書で使用される「腫瘍性障害」、「癌」、及び「新生物」という用語は、互換的に、そして単数形又は複数形のいずれかで使用され、宿主生物にとって細胞を異常にする悪性形質転換を受けた細胞を指す。原発性癌細胞（即ち、悪性形質転換部位の近くから得られた細胞）は、十分に確立された技術、特に組織学的検査によって非癌性細胞と容易に区別することができる。本明細書で使用される癌細胞の定義には、原発性癌細胞だけでなく、癌幹細胞、並びに、癌前駆細胞又は癌細胞の祖先に由来する任意の細胞が含まれる。これには、転移した癌細胞、並びに癌細胞に由来するインビトロ培養物及び細胞株が含まれる。
【０１１５】
癌のステージ分類の特定の基準は、腫瘍サイズ、組織学的特徴、腫瘍マーカー、及び当業者に公知の他の基準に基づく特定の癌の種類に依存する。一般に、癌のステージは次のように説明することができる：（ｉ）ステージ０、上皮内癌；（ｉｉ）ステージＩ、ステージＩＩ、及びステージＩＩＩ（数値が大きいほど、腫瘍のサイズ、並びに／又は癌がリンパ節及び／若しくは組織の近くで最初に発生した臓器若しくは原発腫瘍の位置に隣接する臓器を超えた癌の転移を含む、より広範な疾患を示す）；並びに（ｉｉｉ）ステージＩＶ（癌が遠隔の組織又は臓器に転移している）。
【０１１６】
「後細胞シグナル伝達因子」は、最終的に細胞から放出され、他の細胞の生物学的活性に影響を与える細胞分解（例えば、鉄依存性細胞分解）を受けている細胞によって生成される分子及び細胞断片である。後細胞シグナル伝達因子には、タンパク質、ペプチド、炭水化物、脂質、核酸、小分子、及び細胞断片（例えば、小胞及び細胞膜断片）が含まれ得る。
【０１１７】
「固形腫瘍」は、例えばＣＡＴスキャン、ＭＲイメージング、Ｘ線、超音波、又は触診などの方法によって腫瘍量に基づいて検出可能であり、且つ／又は患者から入手可能なサンプル中の１つ又は複数の癌特異的抗原の発現のために検出可能である腫瘍である。腫瘍は、測定可能な寸法である必要はない。
【０１１８】
本発明の方法によって処置される「対象」は、ヒト又は非ヒト動物のいずれか、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトを意味し得る。特定の実施形態では、対象は、発明の方法を使用する処置の開始前に、検出可能な癌又は診断された癌を有する。特定の実施形態では、対象は、本発明の方法を使用する処置の開始前に、検出可能な感染症又は診断された感染症、例えば慢性感染症を有する。
【０１１９】
「治療有効量」とは、疾患を処置するために患者に投与されると、その疾患のそのような処置を有効にするのに十分な化合物の量を意味する。疾患を予防するために投与される場合、その量は、疾患の発症を回避又は遅らせるのに十分である。「治療有効量」は、化合物、疾患及びその重症度、並びに処置される患者の年齢、体重などによって異なる。治療有効量は治癒的である必要はない。治療有効量は、疾患又は状態の発生を防ぐ必要はない。代わりに治療有効量は、疾患又は状態の発症、重症度、又は進行を少なくとも遅延又は軽減する量である。
【０１２０】
本明細書で使用される場合、「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、「処置（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、及びその同源語は、疾患、病的状態、又は障害を改善する、和らげる、安定化させる、予防する、又は治癒することを目的とした対象の医学的管理を指す。この用語には、積極的処置（疾患、病的状態、又は障害を改善することを目的とした処置）、原因処置（関連する疾患、病的状態、又は障害の原因を対象とした処置）、緩和処置（症状を軽減するように設計された処置）、予防的処置（関連する疾患、病的状態、又は障害の発症を最小限に抑えるか、又は部分的若しくは完全に阻害することを目的とした処置）；及び支援処置（別の療法を補完するために使用される処置）が含まれる。
【０１２１】
ＩＩ．鉄依存性細胞分解
細胞分解は、細胞内の物質を再配列して散在させる動的なプロセスであり、その結果、他の細胞の生物活性に大きな影響を与え得る後細胞シグナル伝達因子、又は「エフェクター」が生成され、放出される。細胞分解は、調節された細胞死のプロセスで起こり、複数の分子メカニズムによって制御される。異なるタイプの細胞分解は、異なる後細胞シグナル伝達因子の産生をもたらし、それにより異なる生物学的効果を媒介する。例えば、本出願人は、驚くべきことに、鉄依存性細胞分解の誘導が、免疫細胞のＮＦＫＢ及びＩＲＦ活性の上昇によって証明されるよう、免疫応答を高めることができることを示した。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、鉄依存性細胞分解はフェロトーシスである。フェロトーシスは、鉄依存性活性酸素種（ＲＯＳ）の生成を伴う調節された細胞死のプロセスである。いくつかの実施形態では、フェロトーシスは、致死レベルまでの脂質ヒドロペルオキシドの鉄依存性蓄積を伴う。フェロトーシスに対する感受性は、アミノ酸、鉄、及び多不飽和脂肪酸の代謝を含む多くの生物学的プロセス、並びにグルタチオン、リン脂質、ＮＡＤＰＨ、及びコエンザイムＱ１０の生合成に密接に関連している。フェロトーシスは、ミトコンドリアとは無関係であるが、いくつかの細胞環境においてＮＡＤＰＨオキシダーゼに依存する、細胞質及び脂質のＲＯＳの両方の産生をもたらす代謝機能障害を伴う（Ｄｉｘｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｃｅｌｌ  １４９（５）：１０６０−７２）。
【０１２３】
鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤
鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤が本明細書で提供される。そのような薬剤は、十分な量で十分な期間存在する場合、鉄依存性細胞分解のプロセスを誘導することができる。特定の実施形態では、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤は、免疫刺激性の後細胞シグナル伝達因子などの後細胞シグナル伝達因子が細胞によって産生されるが、細胞死を引き起こさないように細胞内の鉄依存性細胞分解のプロセスを誘導する。他の実施形態では、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤は、後細胞シグナル伝達因子、例えば、免疫刺激性の後細胞シグナル伝達因子が細胞集団の細胞の一部によって産生されるように、細胞集団の一部、例えば、集団の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は９５％以上の細胞において鉄依存性細胞分解のプロセスを誘導する。細胞死は、細胞集団の細胞の一部のすべて又はごく一部で起こり得る。
【０１２４】
鉄依存性細胞分解、例えば、フェロトーシスを誘導する広範囲の薬剤が当技術分野で公知であり、このような薬剤は、本発明によって提供される様々な方法に有用である。例えば、Ｒａｓ  ａｎｄ  ＳＴの根絶剤（ｅｒａｄｉｃａｔｏｒ）（エラスチン）と呼ばれる発癌性ＲＡＳ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｌｅｔｈａｌ（ＲＳＬ）小分子及び発癌性Ｒａｓ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｌｅｔｈａｌ  ３（ＲＳＬ３）の２つは、癌で一般的に変異している低分子量ＧＴＰアーゼのファミリーである発癌性変異ＲＡＳタンパク質を発現する細胞にとって選択的に致死性である小分子として最初に同定された（その全体が本明細書に組み込まれる、Ｃａｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６，Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ  ７３：２１９５−２２０９を参照）。具体的には、エンジニアリングされたヒト線維芽細胞株において、小分子エラスチンは、発癌性ＨＲＡＳを過剰発現する細胞において優先的致死を誘導することが見出された（その全体が本明細書に組み込まれる、Ｄｏｌｍａ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ．３：２８５−２９６を参照）。エラスチンは、シスチン−グルタミン酸アンチポーター系Ｘｃ−を機能的に阻害する。系Ｘｃ−は、ジスルフィド架橋によって１回膜貫通調節タンパク質ＳＬＣ３Ａ２（４Ｆ２ｈｃ、ＣＤ９８ｈｃ）に連結された１２回膜貫通トランスポータータンパク質ＳＬＣ７Ａ１１（ｘＣＴ）から構成されるヘテロ二量体細胞表面アミノ酸アンチポーターである。アンチポーター系Ｘｃ−は、細胞内グルタミン酸塩と引き換えに、システインの酸化型である細胞外シスチンを移入する（その全体が本明細書に組み込まれる、Ｃａｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６，Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ  ７３：２１９５−２２０９を参照）。エラスチンで処理された細胞は、システインが奪われ、抗酸化剤グルタチオンを合成することができない。グルタチオンの枯渇は、最終的に過剰な脂質過酸化及びＲＯＳの増加をもたらし、これにより、鉄依存性細胞分解が引き起こされる。エラスチン誘導性フェロトーシス細胞死は、形態学的基準、生化学的、及び遺伝的基準に基づくと、アポトーシス、壊死、及びオートファジーとは異なる（その全体が本明細書に組み込まれる、Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｃｅｌｌ  １５６：３１７−３３１を参照）。
【０１２５】
いくつかの実施形態では、鉄依存性細胞分解、例えば、フェロトーシスを誘導し、本明細書で提供される方法に有用である薬剤は、アンチポーター系Ｘｃ−の阻害剤である。アンチポーター系Ｘｃ−の阻害剤には、アンチポーター系Ｘｃ−結合タンパク質（例えば、抗体又は抗体断片）、核酸阻害剤（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド又はｓｉＲＮＡ）、及びアンチポーター系Ｘｃ−を特異的に阻害する小分子が含まれる。例えば、いくつかの実施形態では、アンチポーター系Ｘｃ−の阻害剤は、結合タンパク質、例えば、ＳＬＣ７Ａ１１又はＳＬＣ３Ａ２を特異的に阻害する抗体又は抗体断片である。いくつかの実施形態では、アンチポーター系Ｘｃ−の阻害剤は、ＳＬＣ７Ａ１１又はＳＬＣ３Ａ２を特異的に阻害する核酸阻害剤である。いくつかの実施形態では、アンチポーター系Ｘｃ−の阻害剤は、ＳＬＣ７Ａ１１又はＳＬＣ３Ａ２を特異的に阻害する小分子である。抗体及び核酸阻害剤は、当技術分野で周知であり、本明細書に詳細に記載されている。アンチポーター系Ｘｃ−の小分子阻害剤には、限定されるものではないが、エラスチン、スルファサラジン、ソラフェニブ、及びそれらの類似体又は誘導体が含まれる（その全体が本明細書に組み込まれる、Ｃａｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６，Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ  ７３：２１９５−２２０９、例えば、図２を参照）。
【０１２６】
特定の実施形態では、鉄依存性細胞分解、例えば、フェロトーシスを誘導する薬剤は、エラスチン又はその類似体又は誘導体である。エラスチンの類似体には、限定されるものではないが、以下の表１に列挙されている化合物が含まれる。表１に列挙されている参考文献のそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１２７】
【表１】
2021528393.tif 000007
【０１２８】
本明細書で使用される場合、特段の記載がない限り、「エラスチン」という用語には、限定されるものではないが、Ｎ−オキシド、結晶形態、水和物、塩、エステル、及びそれらのプロドラッグを含む、任意の薬学的に許容される形態のエラスチンが含まれる。本明細書で使用される場合、「エラスチン誘導体又はエラスチン類似体」という用語は、エラスチンと同様の構造及び機能を有する化合物を指す。いくつかの実施形態では、エラスチン誘導体／エラスチン類似体は：
【化６】
2021528393.tif 000008
の式又はその薬学的に許容される塩又はエステルのエラスチン誘導体／エラスチン類似体を含み、式中
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、ヒドロキシ、及びハロゲンからなる群から選択され；
Ｒ２は、Ｈ、ハロ、及びＣ１〜４アルキルからなる群から選択され；
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、５〜７員ヘテロシクロアルキル、及び５〜６員ヘテロアリールからなる群から選択され；
Ｒ４は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルからなる群から選択され；
Ｒ５はハロであり；
【化７】
2021528393.tif 000009
は、任意選択により＝Ｏで置換され；且つ
ｎは０〜４までの整数である。
【０１２９】
一実施形態では、エラスチン誘導体又は類似体は、構造式（Ｉ）：
【化８】
2021528393.tif 000010
によって表される化合物又はその薬学的に許容される塩であり、式中：
Ｒａは、ハロゲン、置換若しくは非置換アルキル、置換若しくは非置換アルケニル、置換若しくは非置換アルキニル、置換若しくは非置換アリール−Ｏ−、置換若しくは非置換アルキル−Ｏ−、置換若しくは非置換アルケニル−Ｏ−、又は置換若しくは非置換アルキニル−Ｏ−であり、アルキル、アルケニル、及びアルキニルは、任意選択によりＮＲ、Ｏ、又はＳ（Ｏ）ｎによって中断され；
各Ｒ２は独立に、ハロゲン、置換若しくは非置換アルキル、置換若しくは非置換アリール、置換若しくは非置換非芳香族複素環、−ＣＮ、−ＣＯＯＲ'、−ＣＯＮ（Ｒ）２、−ＮＲＣ（Ｏ）Ｒ、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）２、−ＮＯ２、−ＯＨ、及び−ＯＲ'からなる群から選択され；
各Ｒ３は独立に、ハロゲン、置換若しくは非置換アルキル、置換若しくは非置換アリール、置換若しくは非置換非芳香族複素環、−（ＣＯ）Ｒ、−ＣＮ、−ＣＯＯＲ'、−ＣＯＮ（Ｒ）２、−ＮＲＣ（Ｏ）Ｒ、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）２、−ＮＯ２、−ＯＨ、及び−ＯＲ'からなる群から選択され；
Ｒ４及びＲ５は、−Ｈ、置換若しくは非置換アルキル、置換若しくは非置換アルケニル、置換若しくは非置換アルキニル、置換若しくは非置換非芳香族複素環、及び置換若しくは非置換アリールからなる群から独立に選択され、アルキル、アルケニル、及びアルキニルは、任意選択によりＮＲ、Ｏ、又はＳ（Ｏ）ｎによって中断される；又は、Ｒ４及びＲ５が共に結合して、炭素環又は複素環基を形成し；
Ｖは、−ＮＨ−Ｌ−Ａ−Ｑ又は
【化９】
2021528393.tif 000011
であり、
式中、環Ｃは、置換若しくは非置換複素環式芳香環又は非芳香環であり；
Ａは、ＮＲ又はＯである；又はＡは、共有結合であり；
Ｌは、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つ又は複数のヘテロ原子によって任意選択により中断される置換若しくは非置換ヒドロカルビル基であり；
Ｑは、−Ｒ、−−−Ｃ（Ｏ）Ｒ'、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ'、及び−Ｓ（Ｏ）２Ｒ'からなる群から選択され；
各Ｒは独立に、−Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、又は非芳香族複素環であり、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、又は非芳香族複素環基が置換若しくは非置換であり；
各Ｒ'は独立に、アルキル、アルケニル、アルキニル基、非芳香族複素環、又はアリール基であり、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、非芳香族複素環基、又はアリール基は、置換若しくは非置換であり；
ｊは、０〜４の整数であり；
ｊ及びｋの少なくとも１つが１〜４の整数である場合、ｋは、０〜４の整数であり；
各ｎは独立に、０、１、又は２である。
【０１３０】
別の実施形態では、エラスチン誘導体は、上記の実施形態に開示されている構造式（Ｉ）によって表される化合物であり；式中、Ｖは、
【化１０】
2021528393.tif 000012
である。
【０１３１】
上記の構造に含まれるＶの適切な例は：
【化１１】
2021528393.tif 000013
であり、他のすべての変数は、上記の実施形態に開示された通りである。
【０１３２】
一実施形態では、エラスチン誘導体又は類似体は、構造式（ＩＩ）：
【化１２】
2021528393.tif 000014
によって表される化合物又はそのＮ−オキシド、結晶形態、水和物、若しくは薬学的に許容される塩であり、
式中、Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、及びＣＦ３からなる群から選択され、各Ｃ１〜６アルキルは、原子、又はハロゲン原子、飽和若しくは不飽和Ｃ３〜６−複素環、及びアミンからなる群から選択される基で任意選択により置換されてもよく、各複素環は、Ｃ１〜４脂肪族からなる群から選択される原子又は基で任意選択により置換され、Ｃ１〜４脂肪族は、Ｃ１〜４アルキル−アリール−Ｏ−Ｃ１〜４アルキルで任意選択により置換されていてもよく；
Ｒ２は、Ｈ、ハロ、及びＣ１〜６脂肪族からなる群から選択され；且つ
Ｒ３は、ハロ原子である。
【０１３３】
別の実施形態では、エラスチン誘導体又は類似体は、構造式（ＩＩＩ）：
【化１３】
2021528393.tif 000015
によって表される化合物又はそのＮ−オキシド、結晶形態、水和物、又は薬学的に許容される塩であり、
式中、
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、ヒドロキシ、及びハロゲンからなる群から選択され；
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ３〜８シクロアルキル、Ｃ３〜８ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、及びＣ１〜４アラルキルからなる群から選択され；
Ｒ３は、存在しないか、又はＣ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、カルボニル、Ｃ３〜８シクロアルキル、及びＣ３〜８ヘテロシクロアルキルからなる群から選択され；
Ｘは、Ｃ、Ｎ、及びＯからなる群から選択され；且つ
ｎは０〜６の整数であり、
ただし、ＸがＣであり、ｎ＝０であり、Ｒ３が存在しない場合、Ｒ２がＣＨ３であると、Ｒ１はＨであり得ない。
【０１３４】
特定の実施形態では、エラスチン誘導体は、構造式（ＩＶ）：
【化１４】
2021528393.tif 000016
によって表される化合物又はそのＮ−オキシド、結晶形態、水和物、又は薬学的に許容される塩であり、
式中、すべての変数の定義は、式（ＩＩＩ）の化合物を開示する上記の実施形態で定義されている通りである。
【０１３５】
別の実施形態では、エラスチン誘導体又は類似体は、構造式（Ｖ）：
【化１５】
2021528393.tif 000017
によって表される化合物又はその薬学的に許容される塩であり、
式中、Ｒ１は、Ｈ、−Ｚ−Ｑ−Ｚ、−Ｃ１〜８アルキル−Ｎ（Ｒ２）（Ｒ４）、−Ｃ１〜８アルキル−ＯＲ３、３〜８員炭素環又は複素環、アリール、ヘテロアリール、及びＣ１〜４アラルキルから選択され；
Ｒ２及びＲ４は、各出現に対してそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アラルキル、アリール、ヘテロアリール、アシル、アルキルスルホニル、及びアリールスルホニルから選択されるが、Ｒ２及びＲ４の両方が、同じＮ原子上にあり、両方ともＨであることがない場合、Ｒ２及びＲ４は異なり、Ｒ２及びＲ４の両方が、同じＮ原子上にあり、Ｒ２及びＲ４のいずれかがアシル、アルキルスルホニル、又はアリールスルホニルである場合、他方はＨ、Ｃ１〜８アルキル、Ｃ１〜４アラルキル、アリール、及びヘテロアリールから選択され；
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アラルキル、アリール、及びヘテロアリールから選択され；
Ｗは
【化１６】
2021528393.tif 000018
から選択され；
Ｑは、Ｏ及びＮＲ２から選択され；且つ
Ｚは、各出現に対して独立に、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、及びＣ２〜６アルキニルから選択される。Ｚがアルケニル又はアルキニル基である場合、１つ又は複数の二重結合又は三重結合は、好ましくは基の末端にない（それにより、例えば、エノールエーテル、アルキノールエーテル、エナミン、及び／又はイナミンが排除される）。
【０１３６】
特定の実施形態では、化合物は、上記の開示された実施形態の構造式（Ｖ）によって表され；式中
Ｒ２及びＲ４は、各出現に対してそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アラルキル、アリール、ヘテロアリール、アシル、アルキルスルホニル、及びアリールスルホニルから選択されるが、Ｒ２及びＲ４の両方が、同じＮ原子上にあり、両方ともＨであることがない場合、Ｒ２及びＲ４は異なり；
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、アリール、及びヘテロアリールから選択され；
Ｚは、各出現に対して独立に、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、及びＣ２〜６アルキニルから選択され；
各複素環基は、窒素、酸素、及び硫黄から選択される１〜４個のヘテロ原子を含む３〜１０員非芳香環であり；
各アリールはフェニルであり；
各ヘテロアリールは、窒素、酸素、及び硫黄から選択される１〜４個のヘテロ原子を含む５〜７員芳香環であり；且つ
各複素環、アリール、及びヘテロアリール基は、ハロゲン、ヒドロキシル、カルボキシル、アルコキシカルボニル、ホルミル、アシル、チオエステル、チオアセテート、チオホルメート、アルコキシル、ホスホリル、ホスフェート、ホスホネート、ホスフィネート、アミノ、アミド、アミジノ、イミノ、シアノ、ニトロ、アジド、スルフヒドリル、アルキルチオ、サルフェート、スルホネート、スルファモイル、及びスルホンアミドからなる群から選択される１つ又は複数の部分によって任意選択により置換される。
【０１３７】
「置換された」という用語は、骨格の１つ又は複数の炭素上の水素を置換する置換基を有する部分を指す。置換基には、例えば、ハロゲン、ヒドロキシル、カルボニル（カルボキシル、アルコキシカルボニル、ホルミル、又はアシルなど）、チオカルボニル（チオエステル、チオアセテート、又はチオホルメートなど）、アルコキシル、ホスホリル、ホスフェート、ホスホネート、ホスフィネート、アミノ、アミド、アミジン、イミン、シアノ、ニトロ、アジド、スルフヒドリル、アルキルチオ、サルフェート、スルホネート、スルファモイル、スルホンアミド、スルホニル、ヘテロシクリル、アラルキル、又は芳香族若しくはヘテロ芳香族部分が含まれ得る。当業者であれば、炭化水素鎖で置換された部分は、適切な場合、それ自体で置換できることを理解されよう。
【０１３８】
特定の実施形態では、アンチポーター系Ｘｃ−の阻害剤は、
【化１７】
2021528393.tif 000019
又はその薬学的に許容される塩である。
【０１３９】
特定の実施形態では、アンチポーター系Ｘｃ−の阻害剤は、
【化１８】
2021528393.tif 000020
又はその薬学的に許容される塩である。
【０１４０】
特定の実施形態では、アンチポーター系Ｘｃ−の阻害剤は、
【化１９】
2021528393.tif 000021
又はその薬学的に許容される塩である。
【０１４１】
追加のエラスチン誘導体又は類似体は、例えば、それぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／１０９００９号パンフレット、米国特許第９６９５１３３号明細書、同第８５３５８９７号明細書、国際公開第２０１５／０５１１４９号パンフレット、米国特許出願公開第２００８／０２９９０７６号明細書、同第２００７／０１６１６４４号明細書、国際公開第２００８／０１３９８７号パンフレット、米国特許第８５７５１４３号明細書、同第８５１８９５９号明細書、国際公開第２００７／０７６０８５号パンフレット、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ（２０１５），２５（２１），４７８７−４７９２、ｅＬｉｆｅ（２０１４），３、Ｌｅｔｔｅｒｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２０１５），１２（６），３８５−３９３、Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｌｅｔｔｒｅ（２０１２），４（５），１３４４−１３５１、ＰＬｏＳ  Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ（２０１４），１０（６）、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ（２０１１），２１（１８），５２３９−５２４３、Ｉｎｄｉａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｓｅｃｔｉｏｎ  Ｂ：Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２０１０），４９Ｂ（７），９２３−９２８、Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ（２００９），３９（１８），３２１７−３２３１、Ｉｎｄｉａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｓｅｃｔｉｏｎ  Ｂ：Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９９４），３３Ｂ（３），２６０−５、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ＨｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃＣｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９８３），２０（５），１３３９−４９、Ｃｈｅｍｉｃａｌ＆Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ（１９７９），２７（１１），２６７５−８７、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９７７），２０（３），３７９−８６、Ｉｎｄｉａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９７１），９（３），２０１−６、及びＪｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９６８），１１（２），３９２−５に記載されている。
【０１４２】
いくつかの実施形態では、鉄依存性細胞分解（例えば、フェロトーシス）を誘導し、本明細書で提供される方法に有用な薬剤は、グルタチオンペルオキシダーゼ４（ＧＰＸ４）の阻害剤である。ＧＰＸ４は、過酸化水素及び有機過酸化物の還元を触媒し、それにより細胞を膜脂質過酸化又は酸化ストレスから保護するリン脂質ヒドロペルオキシダーゼである。従って、ＧＰＸ４は、酸化環境で生き残る細胞の能力に寄与する。ＧＰＸ４の阻害は、フェロトーシスによる細胞死を誘導し得る（Ｙａｎｇ，Ｗ．Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｆｅｒｒｏｐｔｏｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  ｂｙ  ＧＰＸ４．Ｃｅｌｌ  １５６，３１７−３３１（２０１４）を参照）。ＧＰＸ４の阻害剤には、ＧＰＸ４結合タンパク質（例えば、抗体又は抗体断片）、核酸阻害剤（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド又はｓｉＲＮＡ）、及びＧＰＸ４を特異的に阻害する小分子が含まれる。ＧＰＸ４の小分子阻害剤には、限定されるものではないが、以下の表２に列挙されている化合物が含まれる。表２に列挙されている各参考文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１４３】
【表２】
2021528393.tif 000022
【０１４４】
特定の実施形態では、ＧＰＸ４阻害剤は、
【化２０】
2021528393.tif 000023
又はその薬学的に許容される塩である。
【０１４５】
ＲＳＬ３は、ＧＰＸ４の既知の阻害剤である。ノックダウン研究では、ＲＳＬ３は、ＲＡＳ発現細胞の死を選択的に媒介し、脂質ＲＯＳ蓄積の増加として同定された。米国特許第８，５４６，４２１号明細書を参照されたい。
【０１４６】
いくつかの実施形態では、ＧＰＸ４の阻害剤は、ＲＳＬ３のジアステレオ異性体である。
【０１４７】
特定の実施形態では、ＲＳＬ３のジアステレオ異性体は、
【化２１】
2021528393.tif 000024
又はその薬学的に許容される塩である。
【０１４８】
特定の実施形態では、ＲＳＬ３のジアステレオ異性体は、
【化２２】
2021528393.tif 000025
又はその薬学的に許容される塩である。
【０１４９】
特定の実施形態では、ＲＳＬ３のジアステレオ異性体は、
【化２３】
2021528393.tif 000026
又はその薬学的に許容される塩である。
【０１５０】
いくつかの実施形態では、ＧＰＸ４の阻害剤は、限定されるものではないが、Ｎ−オキシド、結晶形態、水和物、塩、エステル、及びそれらのプロドラッグを含む薬学的に許容される形態のＲＳＬ３である。
【０１５１】
いくつかの実施形態では、ＧＰＸ４の阻害剤は、ＲＳＬ３又はその誘導体又は類似体である。ＲＳＬ３の誘導体及び類似体は、当技術分野で公知であり、例えば、それぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２００８／１０３４７０号パンフレット、同第２０１７／１２０４４５号パンフレット、同第２０１８１１８７１１号パンフレット、米国特許第８５４６４２１号明細書、及び中国特許第１０８４０９７３７号明細書に記載されている。
【０１５２】
いくつかの実施形態では、ＲＳＬ３誘導体又は類似体は、構造式（Ｉ）：
【化２４】
2021528393.tif 000027
によって表される化合物、又はそのエナンチオマー、光学異性体、ジアステレオマー、Ｎ−オキシド、結晶形態、水和物、又は薬学的に許容される塩であり、式中
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ６は独立に、Ｈ、Ｃ１〜８アルキル、Ｃ１〜８アルコキシ、Ｃ１〜８アラルキル、３〜８員炭素環、３〜８員複素環、３〜８員アリール、又は３〜８員ヘテロアリール、アシル、アルキルスルホニル、及びアリールスルホニルから選択され、各アルキル、アルコキシ、アラルキル、炭素環、複素環、アリール、ヘテロアリール、アシル、アルキルスルホニル、及びアリールスルホニルは、任意選択により少なくとも１つの置換基で置換され；
Ｒ４及びＲ５は独立に、Ｈ１Ｃ１〜８アルキル、Ｃ１〜８アルコキシ、３〜８員炭素環、３〜８員複素環、３〜８員アリール、又は３〜８員ヘテロアリール、カルボキシレート、エステル、アミド、炭水化物、アミノ酸、アシル、アルコキシ置換アシル、アルジトール、ＮＲ７Ｒ８、ＯＣ（Ｒ７）２ＣＯＯＨ、ＳＣ（Ｒ７）２ＣＯＯＨ、ＮＨＣＨＲ７ＣＯＯＨ、ＣＯＲ８、ＣＯ２Ｒ８、硫酸塩、スルホンアミド、スルホキシド、スルホン酸塩、スルホン、チオアルキル、チオエステル、及びチオエーテルから選択され、各アルキル、アルコキシ、炭素環、複素環、アリール、ヘテロアリール、カルボキシレート、エステル、アミド、炭水化物、アミノ酸、アシル、アルコキシ置換アシル、アルジトール、ＮＲ７Ｒ８、ＯＣ（Ｒ７）２ＣＯＯＨ、ＳＣ（Ｒ７）２ＣＯＯＨ、ＮＨＣＨＲ７ＣＯＯＨ、ＣＯＲ８、ＣＯ２Ｒ８、硫酸塩、スルホンアミド、スルホキシド、スルホン酸塩、スルホン、チオアルキル、チオエステル、及びチオエーテルは、任意選択により少なくとも１つの置換基で置換され；
Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１〜８アルキル、炭素環、アリール、ヘテロアリール、複素環、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、及びアルキル複素環から選択され、各アルキル、炭素環、アリール、ヘテロアリール、複素環、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、及びアルキル複素環は、任意選択により少なくとも１つの置換基で置換することができ；
Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１〜８アルキル、Ｃ１〜８アルケニル、Ｃ１〜８アルキニル、アリール、炭素環、ヘテロアリール、複素環、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、アルキル複素環、及びヘテロ芳香族から選択され、各アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、炭素環、ヘテロアリール、複素環、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、アルキル複素環、及びヘテロ芳香族は、任意選択により少なくとも１つの置換基で置換することができ；且つ
Ｘは、それが結合している環上の０〜４個の置換基である。
【０１５３】
一実施形態では、ＲＳＬ３誘導体又は類似体は、構造式（ＩＩ）：
【化２５】
2021528393.tif 000028
によって表される化合物又はそのＮ−オキシド、結晶形態、水和物、又は薬学的に許容される塩であり：
式中
Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、及び−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｘＯＨからなる群から選択され；
Ｘは、１〜６の整数であり；且つ
Ｒ２、Ｒ２'、Ｒ３、及びＲ３'は独立に、Ｈ、Ｃ３〜８シクロアルキル、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、又はＲ２及びＲ２'は共に結合して、ピリジニル又はピラニルを形成することができ、且つＲ３及びＲ３'は共に結合して、ピリジニル又はピラニルを形成することができる。
【０１５４】
一実施形態では、ＲＳＬ３誘導体又は類似体は、構造式（ＩＩＩ）：
【化２６】
2021528393.tif 000029
によって表される化合物又はその立体異性体、又はその薬学的に許容される塩であり；式中：
ｎは、２、３、又は４であり；Ｒは、置換若しくは非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、置換若しくは非置換Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル基、置換若しくは非置換Ｃ２〜Ｃ８ヘテロシクロアルキル基、置換若しくは非置換Ｃ６〜Ｃ１０芳香環基、又は置換若しくは非置換Ｃ３〜Ｃ８ヘテロアリール環基であり；置換は、各基の１つ又は複数の水素原子が：ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロゲン化Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、ハロゲン化Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、ＣＯＯＨ（カルボキシ）、ＣＯＯＣ１〜Ｃ６アルキル、ＯＣＯＣ１〜Ｃ６アルキルからなる群から選択される基によって置換されることを意味する。
【０１５５】
いくつかの実施形態では、ＧＰＸ４阻害剤は、
【化２７】
2021528393.tif 000030
又はその薬学的に許容される塩である。
【０１５６】
ＭＬ１６２は、フェロトーシスを誘導するＧＰＸ４の直接阻害剤として同定されている（Ｄｉｘｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５，ＡＣＳ  Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏ．１０，１６０４−１６０９を参照）。
【０１５７】
いくつかの実施形態では、ＧＰＸ４阻害剤は、限定されるものではないが、Ｎ−オキシド、結晶形態、水和物、塩、エステル、及びそれらのプロドラッグを含むＭＬ１６２の薬学的に許容される形態である。
【０１５８】
いくつかの実施形態では、ＧＰＸ４の阻害剤は、ＭＬ１６２又はその誘導体又は類似体である。
【０１５９】
いくつかの実施形態では、ＧＰＸ４阻害剤は
【化２８】
2021528393.tif 000031
又はその薬学的に許容される塩である。
【０１６０】
いくつかの実施形態では、ＧＰＸ４阻害剤は、限定されるものではないが、Ｎ−オキシド、結晶形態、水和物、塩、エステル、及びそれらのプロドラッグを含むＭＬ２１０の薬学的に許容される形態である。
【０１６１】
いくつかの実施形態では、ＧＰＸ４の阻害剤は、ＭＬ２１０又はその誘導体又は類似体である。
【０１６２】
いくつかの実施形態では、ＧＰＸ４の阻害剤は、ＦＩＮ５６又はその誘導体又は類似体である。
【０１６３】
一実施形態では、ＦＩＮ５６又はその誘導体又は類似体は、式：
【化２９】
2021528393.tif 000032
によって表されるか、又はその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、立体異性体、幾何異性体、溶媒和物、又はプロドラッグであり、式中
ｎ＝０〜２であり、ｎ＝１の場合、Ｘは、ＣＨ２、Ｏ、ＮＲＡ、ＣＯ、及びＣ＝ＮＯＲＡから選択され、ｎ＝２の場合、Ｘ＝ＣＨ２であり、
Ｙは、Ｏ、Ｓ、ＮＯＲＡ、又はＮＲＡであり、
ＲＡは、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、−Ｃ（＝Ｏ）ＲＢ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＢ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＢＲＣ、−Ｃ（＝ＮＲＢ）ＲＣ、−ＮＲＢＲＣ、ヘテロシクロアルキル、アリール又はポリ芳香族、ヘテロアリール、アリールアルキル、及びアルキルアリールから選択され、
前記ＲＢ及びＲｃのそれぞれは独立に、Ｈ、アルキル、又はヘテロアルキルであり、Ｕ及びＶはそれぞれ独立に、Ｃ＝Ｏ及びＯ＝Ｓ＝Ｏから選択され、ＵがＣ＝Ｏである場合、Ｖは、Ｃ＝Ｏではなく、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４はそれぞれ独立に、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、アリールシクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキルから選択され、ＮＲ１Ｒ２及びＮＲ３Ｒ４はそれぞれ独立に結合してヘテロシクロアルキルを形成することができ、
Ｒ５及びＲ６はそれぞれ独立に、Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、アルコキシ、チオアルコキシ、アルキル、ハロゲン、ＣＮ、ＣＦ３、ＮＯ２、ＣＯＯＲＤ、ＣＯＮＲＤＲＥ、ＮＲＤＲＥ、ＮＲＤＣＯＲＥ、ＮＲＤＳＯ２ＲＥ、及びＮＲＦＣＯＮＲＤＲＥから選択され；
ＲＤ、ＲＥ、及びＲＦは独立に、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキル、又はヘテロシクロアルキルであり；
ＸがＯであり、ＹがＯであり、Ｕ及びＶの両方がＯ＝Ｓ＝Ｏである場合、ＮＲ１Ｒ２及びＮＲ３Ｒ４は同一ではなく、Ｒ１及びＲ３がそれぞれ独立に、Ｈ及び低級アルキルから選択され、Ｒ２及びＲ４はそれぞれ独立に、低級アルコキシ（低級アルキル）、ジ（低級）アルキルアミノ（低級）アルキル、ハロベンジル、モルホリノ（低級）アルキルから選択される、又はＮＲ１Ｒ２及びＮＲ３Ｒ４は独立に、ピペリジノ、モルホリノ、ピペラジノ、Ｎ−フェニルピペラジノ、エチルアミノ、又は置換グリシンであり、
Ｘが（ＣＨ２）２であり、ＹがＯ又はＮＯＨであり、Ｕ及びＶがそれぞれＯ＝Ｓ＝Ｏである場合、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のいずれもメチルではなく、
ｎ＝Ｏであり、ＹがＯ又はＮＯＨであり、Ｕ及びＶがそれぞれＯ＝Ｓ＝Ｏである場合、ＮＲ１Ｒ２及びＮＲ３Ｒ４は同一ではなく、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４はそれぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ１Ｏアルキル、Ｃｉβアルキル、Ｃ１７アルキル、フェニル、ベンジル、ナフタレニル、ピペリジノ、ピリジニル、ピラゾリル、ベンズイミダゾリル、トリアゾリルから選択される；又はＮＲ１Ｒ２及びＮＲ３Ｒ４は独立に、ピペリジノ、モルホリノ、又はピペラジノであり、
ＸがＣＯであり、ＹがＯであり、Ｕ及びＶがそれぞれＯ＝Ｓ＝Ｏである場合、ＮＲ１Ｒ２及びＮＲ３Ｒ４は同一ではなく、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４はそれぞれ独立に、メチル、エチル、ヒドロキシｄ−Ｃｒａｌｋｙｌ、ＳＨ、ＲＯ、ＣＯＯＨ、ＳＯ、ＮＨ２、及びフェニルから選択される、又は非同一のＮＲ１Ｒ２及びＮＲ３Ｒ４の一方又は両方は、非置換ピペリジノ、Ｎ−メチルピペラジノ、又はＮ−メチルホモピペラジノであり、
ＸがＣ＝Ｏ又はＣ＝ＮＯＨであり、ＹがＯ又はＮＯＨであり、Ｕ及びＶがそれぞれＯ＝Ｓ＝Ｏであり、Ｒ１又はＲ２の一方及びＲ３又はＲ４の一方がフェニルである場合、Ｒ１又はＲ２の他方及びＲ３又はＲ４の他方は、Ｈでもアルキルでもない。
【０１６４】
一実施形態では、ＦＩＮ５６誘導体又はその類似体は、以下の式：
【化３０】
2021528393.tif 000033
で表されるか、又はその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、立体異性体、又は幾何異性体であり、
式中、ｎ＝１〜２であり、ｎ＝１である場合、Ｘは、ＣＨ２、Ｏ、ＣＯ、及びＣ＝ＮＯＲＡから選択され；ｎ＝２である場合、Ｘ＝ＣＨ２であり、
Ｙは、Ｏ、Ｓ、ＮＯＲＡ、又はＮＲＡであり、
Ｕ及びＶはそれぞれ、Ｏ＝Ｓ＝Ｏであり、
ＲＡは、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、−Ｃ（＝Ｏ）ＲＢ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＢ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＢＲＣ、−Ｃ（＝ＮＲＢ）ＲＣ、−ＮＲＢＲＣ、ヘテロシクロアルキル、アリール又はポリ芳香族、ヘテロアリール、アリールアルキル、及びアルキルアリールから選択され、
前記ＲＢ及びＲｃのそれぞれは独立に、Ｈ、アルキル、又はヘテロアルキルであり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４はそれぞれ独立に、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、アリールシクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキルから選択され、ＮＲ１Ｒ２及びＮＲ３Ｒ４のそれぞれは独立に、結合してヘテロシクロアルキルを形成することができ、
Ｒ５及びＲ６はそれぞれ独立に、Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、アルコキシ、チオアルコキシ、アルキル、ハロゲン、ＣＮ、ＣＦ３、ＮＯ２、ＣＯＯＲＤ、ＣＯＮＲＤＲＥ、ＮＲＤＲＥ、ＮＲＤＣＯＲＥ、ＮＲＤＳＯ２ＲＥ、及びＮＲＦＣＯＮＲＤＲＥから選択され；
ＲＤ、ＲＥ、及びＲＦは独立に、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキル、又はヘテロシクロアルキルであり；ＸがＯであり、ＹがＯであり、Ｕ及びＶの両方がＯ＝Ｓ＝Ｏである場合、ＮＲ１Ｒ２及びＮＲ３Ｒ４は同一ではなく、Ｒ１及びＲ３はそれぞれ独立に、Ｈ及び低級アルキルから選択され、Ｒ２及びＲ４はそれぞれ独立に、低級アルコキシ（低級アルキル）、ジ（低級）アルキルアミノ（低級）アルキル、ハロベンジル、モルホリノ（低級）アルキルから選択される、又はＮＲ１Ｒ２及びＮＲ３Ｒ４は独立に、ピペリジノ、モルホリノ、ピペラジノ、Ｎ−フェニルピペラジノ、エチルアミノ、又は置換グリシンであり、
Ｘが（ＣＨ２）２であり、ＹがＯ又はＮＯＨである場合、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のいずれもメチルではなく、
ＸがＣＯであり、ＹがＯである場合、ＮＲ１Ｒ２及びＮＲ３Ｒ４は同一ではなく、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４はそれぞれ独立に、メチル、エチル、ヒドロキシ−Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、ＳＨ、ＲＯ、ＣＯＯＨ、ＳＯ、ＮＨ２、及びフェニルから選択される、又は非同一のＮＲ１Ｒ２及びＮＲ３Ｒ４の一方又は両方は、非置換ピペリジノ、Ｎ−メチルピペラジノ、又はＮ−メチルホモピペラジノであり、前記非置換ピぺリジノ、Ｎ−メチルピペラジノ、又はＮ−メチルホモピペラジノのＮＲ１Ｒ２及びＮＲ３Ｒ４部分は、同一ではなく、
ＸがＣ＝Ｏ又はＣ＝ＮＯＨであり、ＹがＯ又はＮＯＨであり、Ｒ１又はＲ２の一方及びＲ３又はＲ４の一方がフェニルである場合、Ｒ１又はＲ２の他方及びＲ３又はＲ４の他方は、Ｈでもアルキルでもない。
【０１６５】
一実施形態では、ＦＩＮ５６誘導体又はその類似体は、以下の式：
【化３１】
2021528393.tif 000034
で表されるか、又はそれらの薬学的に許容される塩、エステル、アミド、立体異性体又は幾何異性体であり、
式中、ＲＡは水素であり、Ｒ７及びＲ８は独立に、Ｈ及びＳＯ２ＮＲ３Ｒ４から選択され、Ｒ７及びＲ８の一方は水素であり、ＮＲ１Ｒ２及びＮＲ３Ｒ４は独立に、環に１つの窒素を含む６〜１５員ヘテロシクロアルキルである。
【０１６６】
追加のＦＩＮ５６誘導体又は類似体は、例えば、それぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２００８／１４０７９２号パンフレット、同第２０１０／０８２９１２号パンフレット、同第２０１７／０５８７１６号パンフレット、米国特許第６６９３１３６号明細書、Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（２０１６），１２（７），４９７−５０３  ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｈｅｍｂｉｏ．２０７９，ＡＣＳ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（２０１５），１０（７），１６０４−１６０９  ｄｏｉ：１０．１０２１／ａｃｓｃｈｅｍｂｉｏ．５ｂ００２４５，Ｄｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，（２０１５）Ｖｏｌ．７６，Ｎｏ．８Ｂ（Ｅ）．Ｏｒｄｅｒ  Ｎｏ．：ＡＡＩ３６８８５６６．ＰｒｏＱｕｅｓｔ  Ｄｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎｓ＆Ｔｈｅｓｅｓ．１２０  ｐａｇｅｓに記載されている。
【０１６７】
いくつかの実施形態では、鉄依存性細胞分解（例えば、フェロトーシス）を誘導し、本明細書で提供される方法に有用な薬剤はスタチンである。一実施形態では、スタチンは、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、セリバスタチン、及びシンバスタチンからなる群から選択される。
【０１６８】
一実施形態では、鉄依存性細胞分解（例えば、フェロトーシス）を誘導し、本明細書で提供される方法に有用な薬剤は、グルタミン酸塩、ＢＳＯ、ＤＰＩ２（その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｃｅｌｌ  １５６：３１７−３３１；図５及びＳ５を参照）、シスプラチン、システイナーゼ、シリカベースのナノ粒子、ＣＣＩ４、クエン酸鉄アンモニウム、トリゴネリン、及びブルサトールからなる群から選択される。
【０１６９】
鉄依存性細胞分解を誘導する追加の薬剤は、当技術分野で公知であり、例えば、それぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第８５１８９５９号明細書；同第８５３５８９７号明細書；同第８５４６４２１号明細書；同第９５８０３９８号明細書；同第９６９５１３３号明細書；米国特許出願公開第２０１０／００８１６５４号明細書；同第２０１５／００７９０３５号明細書；同第２０１５／０１７５５５８号明細書；同第２０１６／０２２９８３６号明細書；同第２０１６／０２９７７４８号明細書；同第２０１６／０３３２９７４号明細書；Ｃｅｌｌ．２０１２  Ｍａｙ  ２５；１４９（５）：１０６０−７２．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｅｌｌ．２０１２．０３．０４２；
Ｃｅｌｌ．２０１４  Ｊａｎ  １６；１５６（１−２）：３１７−３３１．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｅｌｌ．２０１３．１２．０１０；
Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ．２０１４  Ｍａｒ  ２６；１３６（１２）：４５５１−６．ｄｏｉ：１０．１０２１／ｊａ４１１００６ａ；
Ｅｌｉｆｅ．２０１４  Ｍａｙ  ２０；３：ｅ０２５２３．ｄｏｉ：１０．７５５４／ｅＬｉｆｅ．０２５２３；
Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．２０１４  Ｎｏｖ  ２５；１１１（４７）：１６８３６−４１．ｄｏｉ：１０．１０７３／ｐｎａｓ．１４１５５１８１１１；
Ｎａｔ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．２０１４  Ｄｅｃ；１６（１２）：１１８０−９１．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｂ３０６４；
ＡＣＳ  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ．２０１５  Ｊｕｌ  １７；１０（７）：１６０４−９．ｄｏｉ：１０．１０２１／ａｃｓｃｈｅｍｂｉｏ．５ｂ００２４５；
Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ．２０１５  Ｎｏｖ  １；２５（２１）：４７８７−９２．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｂｍｃｌ．２０１５．０７．０１８；
Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．２０１６  Ｍａｙ；１５（５）：３４８−６６．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｒｄ．２０１５．６；
Ｃｅｌｌ  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ．２０１６  Ｆｅｂ  １８；２３（２）：２２５−２３５．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｈｅｍｂｉｏｌ．２０１５．１１．０１６；
Ｎａｔ  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ．２０１６  Ｊｕｌ；１２（７）：４９７−５０３．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｈｅｍｂｉｏ．２０７９；
Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．２０１６  Ａｕｇ  ２３；１１３（３４）：Ｅ４９６６−７５．ｄｏｉ：１０．１０７３／ｐｎａｓ．１６０３２４４１１３；ＡＣＳ  Ｃｅｎｔ  Ｓｃｉ．２０１６  Ｓｅｐ  ２８；２（９）：６５３−６５９；
Ｎａｔ  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ．２０１７  Ｊａｎ；１３（１）：８１−９０．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｈｅｍｂｉｏ．２２３８；
Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．２０１７  Ｊａｎ  １５；４８２（３）：４１９−４２５．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｂｂｒｃ．２０１６．１０．０８６；Ｎａｔ  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ．２０１８  Ｍａｙ；１４（５）：５０７−５１５．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓ４１５８９−０１８−００３１−６；
Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ．２０１８  Ａｐｒ  ２４．ｐｉｉ：Ｓ０３０４−３８３５（１８）３０２８８−Ｘ．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃａｎｌｅｔ．２０１８．０４．０２１；
Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．２０１８  Ａｐｒ  ２４．ｄｏｉ：１０．１０２１／ａｃｓ．ｊｍｅｄｃｈｅｍ．８ｂ００３１５；
Ｅｕｒ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．２０１８  Ｍａｙ  １０；１５１：４３４−４４９．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｅｊｍｅｃｈ．２０１８．０４．００５；Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．２０１８  Ｍａｒ  １５；１３５：２４２−２５２．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍ．２０１８．０３．０１５；
Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ．２０１８  Ｍａｒ  １４；１４０（１０）：３７９８−３８０８．ｄｏｉ：１０．１０２１／ｊａｃｓ．８ｂ００９９８；
Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．２０１８  Ｆｅｂ  ２６；４９７（１）：２３３−２４０．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｂｂｒｃ．２０１８．０２．０６１；
Ｏｒｇ  Ｂｉｏｍｏｌ  Ｃｈｅｍ．２０１８  Ｆｅｂ  ２８；１６（９）：１４６５−１４７９．ｄｏｉ：１０．１０３９／ｃ７ｏｂ０３０８６ｊ；
Ａｒｃｈ  Ｔｏｘｉｃｏｌ．２０１８  Ａｐｒ；９２（４）：１５０７−１５２４．ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ００２０４−０１８−２１７０−７；
Ｉｎｔ  Ｊ  Ｏｎｃｏｌ．２０１８  Ｍａｒ；５２（３）：１０１１−１０２２．ｄｏｉ：１０．３８９２／ｉｊｏ．２０１８．４２５９；
Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ．２０１８  Ａｐｒ  ２８；４２０：２１０−２２７．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃａｎｌｅｔ．２０１８．０１．０６１．Ｆｅｂ  １；
Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃ  Ｂｉｏｌ  Ｍｅｄ．２０１８  Ｍａｒ；１１７：４５−５７．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｆｒｅｅｒａｄｂｉｏｍｅｄ．２０１８．０１．０１９；
Ｓｃｉ  Ｒｅｐ．２０１８  Ｊａｎ  １２；８（１）：５７４．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓ４１５９８−０１７−１８９３５−１；
Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ．２０１８  Ｍａｒ  １；４１６：１２４−１３７．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃａｎｌｅｔ．２０１７．１２．０２５；
ＣｈｅｍＭｅｄＣｈｅｍ．２０１８  Ｊａｎ  ２２；１３（２）：１６４−１７７．ｄｏｉ：１０．１００２／ｃｍｄｃ．２０１７００６２９；
Ｒｅｄｏｘ  Ｂｉｏｌ．２０１８  Ａｐｒ；１４：５３５−５４８．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｒｅｄｏｘ．２０１７．１１．００１；
Ａｒｃｈ  Ｔｏｘｉｃｏｌ．２０１８  Ｆｅｂ；９２（２）：７５９−７７５．ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ００２０４−０１７−２０６６−ｙ；
Ｎａｔ  Ｃｈｅｍ．２０１７  Ｏｃｔ；９（１０）：１０２５−１０３３．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｈｅｍ．２７７８；
Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃ  Ｂｉｏｌ  Ｍｅｄ．２０１７  Ｎｏｖ；１１２：５９７−６０７．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｆｒｅｅｒａｄｂｉｏｍｅｄ．２０１７．０９．００２；
ＡＣＳ  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ．２０１７  Ｏｃｔ  ２０；１２（１０）：２５３８−２５４５．ｄｏｉ：１０．１０２１／ａｃｓｃｈｅｍｂｉｏ．７ｂ００７３０．２０；
ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．２０１７  Ａｕｇ  ２１；１２（８）：ｅ０１８２９２１．ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．０１８２９２１．ｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ２０１７；Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．２０１７  Ｓｅｐ  ３０；４９１（４）：９１９−９２５．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｂｂｒｃ．２０１７．０７．１３６；
Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０１７  Ｓｅｐ  １５；１４０：４１−５２．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｂｃｐ．２０１７．０６．１１２．２３；
Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  Ｔｒｅａｔ．２０１８  Ａｐｒ；５０（２）：４４５−４６０．ｄｏｉ：１０．４１４３／ｃｒｔ．２０１６．５７２；
Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  Ｄｉｓｃｏｖ．２０１７  Ｆｅｂ  ２７；３：１７０１３．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｃｄｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．２０１７．１３．ｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ２０１７；Ｎａｔ  Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１６  Ｎｏｖ；１１（１１）：９７７−９８５．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｎａｎｏ．２０１６．１６４；
Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．２０１６  Ｎｏｖ  ２５；４８０（４）：６０２−６０７．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｂｂｒｃ．２０１６．１０．０９９；Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ．２０１６  Ｎｏｖ  １５；７（４６）：７４６３０−７４６４７．ｄｏｉ：１０．１８６３２／ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ．１１８５８；
Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ．２０１６  Ｏｃｔ  １０；３８１（１）：１６５−７５．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃａｎｌｅｔ．２０１６．０７．０３３．２９；
Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  Ｄｉｓ．２０１６  Ｊｕｌ  ２１；７：ｅ２３０７．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｃｄｄｉｓ．２０１６．２０８；
Ｏｎｃｏｌ  Ｒｅｐ．２０１６  Ａｕｇ；３６（２）：９６８−７６．ｄｏｉ：１０．３８９２／ｏｒ．２０１６．４８６７．３１；
Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．２０１６  Ｍａｙ  １３；４７３（４）：７７５−７８０．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｂｂｒｃ．２０１６．０３．０５２；Ｍｏｌ  Ｃａｒｃｉｎｏｇ．２０１７  Ｊａｎ；５６（１）：７５−９３．ｄｏｉ：１０．１００２／ｍｃ．２２４７４；
ＡＣＳ  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ．２０１６  Ｍａｙ  ２０；１１（５）：１３０５−１２．ｄｏｉ：１０．１０２１／ａｃｓｃｈｅｍｂｉｏ．５ｂ００９００；
Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．２０１６  Ｍａｒ  １０；５９（５）：２０４１−５３．ｄｏｉ：１０．１０２１／ａｃｓ．ｊｍｅｄｃｈｅｍ．５ｂ０１６４１；
Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅ．２０１５  Ｏｃｔ  １５；２２（１１）：１０４５−５４．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｐｈｙｍｅｄ．２０１５．０８．００２；
Ｂｉｏｌ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｕｌｌ．２０１５；３８（８）：１２３４−９．ｄｏｉ：１０．１２４８／ｂｐｂ．ｂ１５−０００４８；
Ｏｎｃｏｓｃｉｅｎｃｅ．２０１５  Ｍａｙ  ２；２（５）：５１７−３２．ｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ２０１５；
Ｐａｔｈｏｌ  Ｏｎｃｏｌ  Ｒｅｓ．２０１５  Ｓｅｐ；２１（４）：１１１５−２１．ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ１２２５３−０１５−９９４６−３；
Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１４  Ｎｏｖ；３４（１１）：６４１７−２２；及び
Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．２０１３  Ｏｃｔ  １；１３３（７）：１７３２−４２．ｄｏｉ：１０．１００２／ｉｊｃ．２８１５９；
に記載されている。
【０１７０】
一実施形態では、鉄依存性細胞分解（例えば、フェロトーシス）を誘導し、本明細書で提供される組成物及び方法に有用な薬剤は、免疫細胞などの共培養細胞において１つ又は複数の望ましい免疫効果を誘発する。例えば、実施形態では、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤は、以下の特徴のうちの１つ又は複数を有する：
（ａ）インビトロでの標的細胞の鉄依存性細胞分解及び共培養細胞における免疫応答の活性化を誘導する；
（ｂ）インビトロでの標的細胞の鉄依存性細胞分解及び共培養マクロファージ、例えばＲＡＷ２６４．７マクロファージの活性化を誘導する；
（ｃ）インビトロでの標的細胞の鉄依存性細胞分解及び共培養単球、例えばＴＨＰ−１単球の活性化を誘導する；
（ｄ）インビトロで標的細胞の鉄依存性細胞分解及び共培養骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣ）の活性化を誘導する；
（ｅ）インビトロで標的細胞の鉄依存性細胞分解を誘導し、共培養細胞におけるＮＦｋＢ、ＩＲＦ、及び／又はＳＴＩＮＧのレベル又は活性を高める；
（ｆ）インビトロで標的細胞の鉄依存性細胞分解を誘導し、共培養細胞における免疫促進性サイトカインのレベル又は活性を高める；
（ｇ）インビトロでの標的細胞の鉄依存性細胞分解及び共培養ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、及び／又はＣＤ３＋細胞の活性化を誘導する；並びに
（ｈ）インビトロでの標的細胞の鉄依存性細胞分解を誘導し、Ｔ細胞のレベル又は活性を高める。
【０１７１】
標的細胞の鉄依存性細胞分解を誘導することに加えて、共培養細胞において前記免疫効果を誘導する薬剤を決定するための多数の方法が当技術分野で公知であり、本明細書に提供され、詳細に説明される。
【０１７２】
本発明の特定の態様では、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤の癌細胞などの特定の標的細胞への送達を目的とする、又は送達を誘導することが望ましいであろう。従って、いくつかの実施形態では、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤は癌細胞を標的とする。癌細胞を治療薬の標的にする方法は、当技術分野で公知であり、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１７／０１５１３４５号明細書に記載されている。例えば、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤は、例えば、複合体で又はコンジュゲートとして、癌細胞マーカーに特異的に結合する分子と組み合わせることによって癌細胞を標的とすることができる。本明細書で使用される「癌細胞マーカー」という用語は、癌細胞の表面に存在するポリペプチドを指す。例えば、癌細胞マーカーは、癌細胞受容体、例えば、細胞外環境中の分子に特異的に結合するポリペプチドであり得る。癌細胞マーカー（例えば、受容体）は、癌細胞にのみ提示されるポリペプチド、同じ又は異なる組織型の正常細胞よりも高いレベルで癌細胞に提示されるポリペプチド、又は癌性細胞型及び正常細胞型の両方に提示されるポリペプチドであり得る。いくつかの実施形態では、癌細胞マーカー（例えば、受容体）は、癌細胞において、発現及び／又は活性が変化した（例えば、正常よりも高い又は低い）ポリペプチドであり得る。いくつかの実施形態では、癌細胞マーカー（例えば、受容体）は、癌の疾患過程に関与するポリペプチドであり得る。いくつかの実施形態では、癌細胞マーカー（例えば、受容体）は、細胞死及び／又はアポトーシスの制御に関与するポリペプチドであり得る。癌細胞マーカーの非限定的な例としては、限定されるものではないが、ＥＧＦＲ、ＥＲ、ＰＲ、ＨＥＲ２、ＰＤＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ、ＭＥＴ、ｃ−ＭＥＴ、ＡＬＫ、ＣＤ１１７、ＲＥＴ、ＤＲ４、ＤＲ５、及びＦａｓＲが挙げられる。いくつかの実施形態では、癌細胞マーカー（例えば、受容体）に特異的に結合する分子は、抗体又はその癌細胞マーカー結合断片である。いくつかの実施形態では、癌細胞マーカーは受容体であり、癌細胞受容体に特異的に結合する分子は、受容体のリガンド又はリガンド模倣物である。
【０１７３】
従って、いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤及び癌細胞マーカー（例えば、受容体）に特異的に結合する分子を含む複合体又はコンジュゲートを含むことが想定される。特定の実施形態では、複合体又はコンジュゲートは、薬学的に許容されるデンドリマー、例えばＰＡＭＡＭデンドリマーを含む。特定の実施形態では、複合体はリポソームを含む。特定の実施形態では、複合体は、微粒子又はナノ粒子を含む。
【０１７４】
ＩＩＩ．免疫活性を高める方法
本明細書に記載の鉄依存性細胞分解（例えば、フェロトーシス）を誘導する薬剤を使用して、細胞、組織、又は対象、例えば免疫活性の上昇から利益を得ることになる対象における免疫活性を高めることができる。例えば、いくつかの態様では、本開示は、細胞、組織、又は対象における免疫活性を高める方法に関し、この方法は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤を、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤で処置されていない細胞、組織、又は対象と比較して免疫活性を高めるのに十分な量で細胞、組織、又は対象に投与することを含む。いくつかの態様では、本開示は、組織又は対象における免疫活性を高める方法に関し、この方法は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤を、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤で処置されていない組織又は対象と比較して免疫活性を高めるのに十分な量で組織又は対象に投与することを含む。
【０１７５】
一実施形態では、対象は、免疫活性の上昇を必要としている。
【０１７６】
鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤の投与は、免疫活性を調節する後細胞シグナル伝達因子の産生をもたらす。免疫活性は、肥満細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好塩基球、好中球、単球、マクロファージ、樹状細胞、好酸球、及びリンパ球（例えば、Ｂ−リンパ球（Ｂ細胞））、及びＴリンパ球（Ｔ細胞））を含む広範囲の免疫細胞と後細胞シグナル伝達因子の相互作用によって調節することができる。
【０１７７】
肥満細胞は、ヒスタミンと抗凝固剤であるヘパリンが豊富な顆粒を含む顆粒球の一種である。活性化されると、肥満細胞は、炎症性化合物を顆粒から局所微小環境に放出する。肥満細胞は、アレルギー、アナフィラキシー、創傷治癒、血管新生、免疫寛容、病原体に対する防御、及び血液脳関門機能において役割を果たす。
【０１７８】
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、一切の事前の刺激も免疫化もなしに特定の腫瘍及びウイルス感染細胞を溶解する細胞傷害性リンパ球である。ＮＫ細胞はまた、様々なサイトカイン、例えば、ＩＦＮ−ガンマ（ＩＦＮγ）、ＴＮＦ−アルファ（ＴＮＦα）、ＧＭ−ＣＳＦ、及びＩＬ−３の強力な産生細胞である。従って、ＮＫ細胞は、免疫系の制御性細胞としても機能し、他の細胞及び反応に影響を与えるとも考えられている。ヒトでは、ＮＫ細胞は、ＣＤ５６＋ＣＤ３−リンパ球として広く定義されている。ＮＫ細胞の細胞毒性は、細胞表面の受容体からの活性化シグナルと抑制性シグナルのバランスによって厳密に制御されている。ＮＫ細胞の活性化を阻害する主な受容体群は、抑制性キラー免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）である。標的細胞上の自己ＭＨＣクラスＩ分子を認識すると、これらの受容体は、シグナル伝達カスケードの活性化を停止する阻害シグナルを伝達し、正常なＭＨＣクラスＩ発現を示す細胞をＮＫ細胞溶解から保護する。活性化受容体には、標的細胞表面上の様々なリガンドとの結合を介して細胞溶解作用に向けてバランスを押し上げる天然の細胞毒性受容体（ＮＣＲ）及びＮＫＧ２Ｄが含まれる。従って、標的細胞のＮＫ細胞の認識は、複数の活性化及び抑制性受容体から送達されるシグナルの統合を含むプロセスによって厳密に制御される。
【０１７９】
単球は、組織に動員されるまで数時間／数日の間血中を循環する骨髄由来単核食細胞である。Ｗａｃｌｅｃｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１８，Ｖｉｒｕｓｅｓ（１０）２：６５を参照されたい。単球の表面での様々なケモカイン受容体及び細胞接着分子の発現により、これらが、骨髄を出て血中に入り、その後、血液から組織内に動員されるのが可能となる。単球は、ウイルス感染、細菌感染、真菌感染、又は寄生虫感染に対する応答を提供する免疫系の生得的な武器（ｉｎｎａｔｅ  ａｒｍ）に属する。それらの機能には、食作用による病原体の死滅、活性酸素種（ＲＯＳ）、一酸化窒素（ＮＯ）、ミエロペルオキシダーゼ、及び炎症性サイトカインの産生が含まれる。特定の条件下では、単球は、癌並びに感染症及び自己免疫疾患の際にＴ細胞応答を刺激又は阻害し得る。単球はまた、組織の修復及び血管新生に関与する。
【０１８０】
マクロファージは、食作用と呼ばれるプロセスで、細胞残屑、異物、微生物、癌細胞などの物質を飲み込んで消化する。食作用に加えて、マクロファージは、非特異的防御（自然免疫）において重要な役割を果たし、リンパ球などの他の免疫細胞を動員することによって特定の防御機構（適応免疫）を開始するのにも役立つ。例えば、マクロファージは、Ｔ細胞への抗原プレゼンター（ａｎｔｉｇｅｎ  ｐｒｅｓｅｎｔｅｒ）として重要である。マクロファージは、炎症を増加させ、免疫系を刺激するだけでなく、重要な抗炎症の役割も果たし、サイトカインの放出を介して免疫反応を低下させ得る。炎症を促進するマクロファージは、Ｍ１マクロファージと呼ばれ、炎症を軽減して組織の修復を促進するマクロファージは、Ｍ２マクロファージと呼ばれる。
【０１８１】
樹状細胞（ＤＣ）は、病原体に対する免疫応答を刺激し、無害な抗原に対する免疫恒常性を維持する上で重要な役割を果たす。ＤＣは、免疫応答の誘導及び調節に不可欠な、特殊な抗原感知細胞及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）の異種群を表す。末梢血では、ヒトＤＣは、Ｔ細胞（ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８）、Ｂ細胞（ＣＤ１９、ＣＤ２０）、及び単球マーカー（ＣＤ１４、ＣＤ１６）を欠いているが、ＨＬＡ−ＤＲ及び他のＤＣ系統マーカー（例えば、ＣＤ１ａ、ＣＤ１ｃ）を高度に発現する細胞として特徴づけられる。Ｍｕｒｐｈｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊａｎｅｗａｙ'ｓ  Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ．８ｔｈ  ｅｄ．Ｇａｒｌａｎｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ；Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ，ＵＳＡ：２０１２．８６８ｐを参照されたい。
【０１８２】
「リンパ球」という用語は、体全体のリンパ組織及び正常な成人で形成される小さな白血球を指し、疾患から体を防御するのに大きな役割を果たす、循環血液中の白血球の総数の約２２〜２８％を占める。個々のリンパ球は、（例えば、Ｔ細胞受容体とＢ細胞受容体を形成するために）それらの遺伝物質の組換えを介して、構造的に関連する抗原の限られたセットに応答することにコミットしているという点で特殊化されている。免疫系が所与の抗原と最初に接触する前に存在するこのコミットメントは、リンパ球の表面膜における抗原上の決定基（エピトープ）に特異的な受容体の存在によって表される。各リンパ球は、受容体のユニークな集団を有しており、そのすべてが同一の結合部位を有する。リンパ球の１つのセット又はクローンは、その受容体の結合領域の構造が別のクローンとは異なるため、認識できるエピトープが異なる。リンパ球は、それらの受容体の特異性だけでなく、それらの機能も互いに異なる（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ  １：Ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｙｓｔｅｍ：ａｎ  ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（１９９９），ａｔ  ｐ．１０２）。
【０１８３】
リンパ球には、抗体分泌細胞の前駆細胞であるＢリンパ球（Ｂ細胞）、及びＴリンパ球（Ｔ細胞）が含まれる。
【０１８４】
Ｂリンパ球（Ｂ細胞）
Ｂリンパ球は、骨髄の造血細胞に由来する。成熟したＢ細胞は、その細胞表面によって認識されるエピトープを発現する抗原で活性化することができる。活性化プロセスは、抗原による膜Ｉｇ分子の架橋に依存し、直接的である（架橋依存性Ｂ細胞活性化）、又は同族支援（ｃｏｇｎａｔｅ  ｈｅｌｐ）と呼ばれるプロセスにおけるヘルパーＴ細胞との相互作用を介し、間接的であり得る。多くの生理学的状況では、受容体架橋刺激及び同族支援は、相乗作用を助けてより活発なＢ細胞応答を引き起こす（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ  １：Ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｙｓｔｅｍ：ａｎ  ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（１９９９））。
【０１８５】
各Ｂ細胞は、同一の可変領域を有するＩｇ分子を発現するため、架橋依存性Ｂ細胞活性化には、抗原が細胞表面受容体の結合部位に相補的なエピトープの複数のコピーを発現する必要がある。このような要件は、微生物の莢膜多糖又はウイルスエンベロープタンパク質などの、反復エピトープを有する他の抗原によって満たされる。架橋依存性Ｂ細胞活性化は、これらの微生物に対して開始される主要な防御免疫応答である（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ  １：Ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｙｓｔｅｍ：ａｎ  ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ”，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（１９９９））。
【０１８６】
同族支援により、Ｂ細胞は、受容体を架橋できない抗原に対する応答を開始することができ、同時に、弱い架橋事象によって刺激されたときにＢ細胞を不活化から救う共刺激シグナルを提供する。同族支援は、Ｂ細胞の膜免疫グロブリン（Ｉｇ）による抗原の結合、抗原のエンドサイトーシス、及び細胞のエンドソーム／リソソーム区画内のペプチドへのその断片化に依存する。得られたペプチドのいくつかは、クラスＩＩ主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子として知られている特殊な一連の細胞表面タンパク質の溝にロードされる。得られたクラスＩＩ／ペプチド複合体は、細胞表面で発現され、ＣＤ４＋  Ｔ細胞と呼ばれる一連のＴ細胞の抗原特異的受容体のリガンドとして機能する。ＣＤ４＋  Ｔ細胞は、Ｂ細胞クラスＩＩ／ペプチド複合体に特異的な受容体をその表面に有する。Ｂ細胞活性化は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を介したＴ細胞の結合に依存するだけでなく、この相互作用により、Ｔ細胞上の活性化リガンド（ＣＤ４０リガンド）が、Ｂ細胞活性化をシグナル伝達するＢ細胞（ＣＤ４０）上の受容体に結合することも可能になる。加えて、Ｔヘルパー細胞は、Ｂ細胞上のサイトカイン受容体に結合することによって、刺激されたＢ細胞の成長及び分化を調節するいくつかのサイトカインを分泌する（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ  １：Ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｙｓｔｅｍ：ａｎ  ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，“Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（１９９９））。
【０１８７】
抗体産生の同族支援の間に、ＣＤ４０リガンドは、活性化されたＣＤ４＋  Ｔヘルパー細胞で一過性に発現され、抗原特異的Ｂ細胞上のＣＤ４０に結合し、それにより第２の共刺激シグナルを変換する。後者のシグナルは、抗原に遭遇した胚中心Ｂ細胞のアポトーシスを防止することによるＢ細胞の増殖及び分化並びにメモリーＢ細胞の生成に不可欠である。Ｂ細胞及びＴ細胞の両方でのＣＤ４０リガンドの過剰発現は、ヒトＳＬＥ患者の病原性自己抗体産生に関係している（Ｄｅｓａｉ−Ｍｅｈｔａ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．，“Ｈｙｐｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＣＤ４０  ｌｉｇａｎｄ  ｂｙ  Ｂ  ａｎｄ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｌｕｐｕｓ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ  ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｙ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｖｏｌ．９７（９），２０６３−２０７３，（１９９６））。
【０１８８】
Ｔリンパ球（Ｔ細胞）
造血組織の前駆体に由来するＴリンパ球は、胸腺で分化し、末梢リンパ組織及びリンパ球の再循環プールに撒かれる。Ｔリンパ球又はＴ細胞は、幅広い免疫機能を仲介する。免疫機能には、Ｂ細胞が抗体産生細胞に成長するのを助ける能力、単球／マクロファージの殺菌作用を高める能力、特定のタイプの免疫応答の阻害、標的細胞の直接的な死滅、及び炎症反応の動員が含まれる。これらの効果は、特定の細胞表面分子のＴ細胞発現及びサイトカインの分泌に依存する（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ  １：Ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｙｓｔｅｍ：ａｎ  ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ”，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（１９９９））。
【０１８９】
Ｔ細胞は、Ｂ細胞とは抗原認識のメカニズムが異なる。Ｂ細胞の受容体である免疫グロブリンは、可溶性分子又は粒子表面の個々のエピトープに結合する。Ｂ細胞受容体は、天然分子の表面に発現するエピトープを認識する。抗体及びＢ細胞受容体は、細胞外液中の微生物に結合して防御するように進化したが、Ｔ細胞は、他の細胞の表面にある抗原を認識し、これらの抗原提示細胞（ＡＰＣ）と相互作用してその挙動を変化させることによってそれらの機能を仲介する。Ｔ細胞を活性化できる末梢リンパ器官には、主要な３種類のＡＰＣ：樹状細胞、マクロファージ、及びＢ細胞が存在する。これらの中で樹状細胞が最も強力であり、その唯一の機能は外来抗原をＴ細胞に提示することである。未熟な樹状細胞は、皮膚、腸、気道を含む体全体の組織に存在する。未熟な樹状細胞は、これらの部位で侵入微生物に遭遇すると、病原体及びその産物を取り込み、リンパを介して局所リンパ節又は腸関連リンパ器官に輸送する。病原体との遭遇により、樹状細胞が、抗原捕捉細胞からＴ細胞を活性化できるＡＰＣに成熟するように誘導される。ＡＰＣは、Ｔ細胞を活性化してエフェクター細胞にする際に役割を果たす３種類のタンパク質分子：（１）Ｔ細胞受容体に外来抗原を提示するＭＨＣタンパク質；（２）Ｔ細胞表面の相補的受容体に結合する共刺激タンパク質；及び（３）活性化するまで十分に長くＴ細胞をＡＰＣに結合することを可能にする細胞間接着分子を表面に提示する（“Ｃｈａｐｔｅｒ  ２４：Ｔｈｅ  ａｄａｐｔｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｙｓｔｅｍ，”Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｅｌｌ，Ａｌｂｅｒｔｓ，Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，ＮＹ，（２００２））。
【０１９０】
Ｔ細胞は、それらが発現する細胞表面受容体に基づいて２つの異なるクラスに細分される。Ｔ細胞の大部分は、α鎖とβ鎖からなるＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現する。Ｔ細胞の小群は、γ鎖とδ鎖からなる受容体を発現する。α／β  Ｔ細胞には、２つの亜系統：補助受容体分子ＣＤ４を発現するＴ細胞（ＣＤ４＋  Ｔ細胞）；及びＣＤ８を発現するＴ細胞（ＣＤ８＋  Ｔ細胞）が存在する。これらの細胞は、抗原を認識する方法と、エフェクター及び調節機能が異なる。
【０１９１】
ＣＤ４＋  Ｔ細胞は、免疫系の主要な制御性細胞である。それらの制御機能は、Ｔ細胞が活性化されると発現が誘導されるＣＤ４０リガンドなどのそれらの細胞表面分子の発現、及び活性化されると分泌する様々なサイトカインの発現の両方に依存する。
【０１９２】
Ｔ細胞はまた、重要なエフェクター機能を媒介し、そのいくつかは、それらが分泌するサイトカインのパターンによって決定される。サイトカインは、標的細胞に対して直接的に毒性であり得、強力な炎症メカニズムを動員し得る。
【０１９３】
加えて、Ｔ細胞、特にＣＤ８＋  Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）によって認識される抗原を発現する標的細胞を効率的に溶解できるＣＴＬに成長し得る（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ  １：Ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｙｓｔｅｍ：ａｎ  ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（１９９９））。
【０１９４】
Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）は、クラスＩＩ又はクラスＩ  ＭＨＣタンパク質の特殊な溝に結合した抗原のタンパク質分解によって得られるペプチドからなる複合体を認識する。ＣＤ４＋  Ｔ細胞は、ペプチド／クラスＩＩ複合体のみを認識し、ＣＤ８＋  Ｔ細胞は、ペプチド／クラスＩ複合体を認識する（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ  １：Ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｙｓｔｅｍ：ａｎ  ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（１９９９））。
【０１９５】
ＴＣＲのリガンド（即ち、ペプチド／ＭＨＣタンパク質複合体）はＡＰＣ内で生成される。一般に、クラスＩＩ  ＭＨＣ分子は、エンドサイトーシスプロセスを介してＡＰＣに取り込まれたタンパク質に由来するペプチドに結合する。次に、これらのペプチドがロードされたクラスＩＩ分子が細胞の表面に発現され、これらは、発現した細胞表面複合体を認識できるＴＣＲを有するＣＤ４＋  Ｔ細胞によって結合され得る。従って、ＣＤ４＋  Ｔ細胞は、細胞外供給源に由来する抗原と反応するように特殊化されている（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ  １：Ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｙｓｔｅｍ：ａｎ  ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（１９９９））。
【０１９６】
対照的に、クラスＩ  ＭＨＣ分子には、ウイルスタンパク質などの内部合成タンパク質に由来するペプチドが主にロードされている。これらのペプチドは、プロテオソームによるタンパク質分解によって細胞質タンパク質から生成され、粗面小胞体に移動する。このようなペプチドは、一般に、９アミノ酸長から構成されており、クラスＩ  ＭＨＣ分子に結合して細胞表面に運ばれ、適切な受容体を発現するＣＤ８＋  Ｔ細胞によって認識され得る。これにより、Ｔ細胞系、特にＣＤ８＋  Ｔ細胞に、生物の残りの細胞のタンパク質（例えば、ウイルス抗原）又は変異抗原（活性腫瘍遺伝子産物など）とは異なるタンパク質、又はこれらよりもはるかに大量に産生されるタンパク質を発現する細胞を、これらのタンパク質が無傷の形で細胞表面に発現も分泌もされなくても、検出する能力が付与される（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ  １：Ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｙｓｔｅｍ：ａｎ  ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（１９９９））。
【０１９７】
Ｔ細胞はまた、機能に基づいてヘルパーＴ細胞；細胞性免疫の誘導に関与するＴ細胞；サプレッサーＴ細胞；及び細胞傷害性Ｔ細胞として分類することができる。
【０１９８】
ヘルパーＴ細胞
ヘルパーＴ細胞は、Ｂ細胞を刺激してタンパク質及びその他のＴ細胞依存性抗原に対する抗体反応を引き起こすＴ細胞である。Ｔ細胞依存性抗原は、個々のエピトープが１回のみ又は限られた回数しか出現しないため、Ｂ細胞の膜免疫グロブリン（Ｉｇ）を架橋できないか、非効率的にしか架橋できない免疫原である。Ｂ細胞は、それらの膜Ｉｇを介して抗原に結合し、この複合体は、エンドサイトーシスを受ける。エンドソーム及びリソソーム区画内で、抗原は、タンパク質分解酵素によってペプチドに断片化され、生成されたペプチドの１つ又は複数がクラスＩＩ  ＭＨＣ分子にロードされ、この小胞区画を通過する。次に、得られたペプチド／クラスＩＩ  ＭＨＣ複合体は、Ｂ細胞表面膜に輸送される。ペプチド／クラスＩＩ分子複合体に特異的な受容体を有するＴ細胞は、Ｂ細胞表面でこの複合体を認識する（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ  １：Ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｙｓｔｅｍ：ａｎ  ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ（１９９９））。
【０１９９】
Ｂ細胞の活性化は、そのＴＣＲを介したＴ細胞の結合、及びＴ細胞ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）とＢ細胞上のＣＤ４０との相互作用の両方に依存する。Ｔ細胞は、ＣＤ４０Ｌを構成的に発現しない。むしろ、ＣＤ４０Ｌの発現は、Ｔ細胞のＴＣＲによって認識される同族抗原及びＣＤ８０又はＣＤ８６の両方を発現するＡＰＣとの相互作用の結果として誘導される。ＣＤ８０／ＣＤ８６は、一般に、Ｂ細胞の休止状態ではなく活性化によって発現されるため、活性化Ｂ細胞及びＴ細胞を伴うヘルパーの相互作用が、効率的な抗体産生をもたらし得る。しかしながら、多くの場合、Ｔ細胞上のＣＤ４０Ｌの最初の誘導は、樹状細胞などのＣＤ８０／８６を構成的に発現するＡＰＣの表面での抗原の認識に依存する。次に、このような活性化ヘルパーＴ細胞は、Ｂ細胞と効率的に相互作用して支援することができる。Ｂ細胞上の膜Ｉｇの架橋は、たとえ非効率的であっても、ＣＤ４０Ｌ／ＣＤ４０相互作用と相乗作用して、活発なＢ細胞の活性化をもたらし得る。増殖、Ｉｇの分泌、及び発現しているＩｇクラスのクラスの切り替えを含む、Ｂ細胞応答におけるその後の事象は、Ｔ細胞由来サイトカインの作用に依存するか、又はその作用によって増強される（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ  １：Ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｙｓｔｅｍ：ａｎ  ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（１９９９））。
【０２００】
ＣＤ４＋  Ｔ細胞は、主にサイトカインＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、及びＩＬ−１０を分泌する細胞（ＴＨ２細胞）、又は主にＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、及びリンホトキシンを産生する細胞（ＴＨ１細胞）に分化する傾向がある。ＴＨ２細胞は、Ｂ細胞が抗体産生細胞に成長するのを助けるのに非常に効果的であり、ＴＨ１細胞は、単球及びマクロファージの殺菌活性の増強に関与し、結果として細胞内の小胞区画の微生物の溶解効率を向上させる、細胞免疫応答の効果的な誘導因子である。ＴＨ２細胞の表現型（即ち、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、及びＩＬ−１０）を有するＣＤ４＋  Ｔ細胞は効率的なヘルパー細胞であるが、ＴＨ１細胞はヘルパーになる能力も有する（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ  １：Ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｙｓｔｅｍ：ａｎ  ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，“Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（１９９９））。
【０２０１】
細胞性免疫誘導へのＴ細胞の関与
Ｔ細胞はまた、単球及びマクロファージの能力を増強して、細胞内微生物を破壊するように作用し得る。特に、ヘルパーＴ細胞によって産生されるインターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）は、単核食細胞が、一酸化窒素の生成及び腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）産生の誘導を含む、細胞内細菌及び寄生虫を破壊するいくつかのメカニズムを促進する。ＴＨ１細胞は、ＩＦＮ−γを産生するため、殺菌作用を高めるのに効果的である。対照的に、ＴＨ２細胞によって産生される２つの主要なサイトカインであるＩＬ−４及びＩＬ−１０は、これらの活性をブロックする（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ  １：Ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｙｓｔｅｍ：ａｎ  ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（１９９９））。
【０２０２】
制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞
免疫恒常性は、免疫応答の開始とダウンレギュレーションとの間の制御されたバランスによって維持される。アポトーシス及びＴ細胞アネルギーの両方のメカニズム（抗原との遭遇後にＴ細胞が本質的に機能的に不活性化される耐性メカニズム（Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｒ．Ｈ．，“Ｔ  ｃｅｌｌ  ａｎｅｒｇｙ”，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，Ｖｏｌ．２１：３０５−３３４（２００３））は、免疫応答のダウンレギュレーションに寄与する。第３のメカニズムは、サプレッサー又は制御性ＣＤ４＋  Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞による活性化Ｔ細胞の能動的抑制によって提供される（Ｒｅｖｉｅｗｅｄ  ｉｎ  Ｋｒｏｎｅｎｂｅｒｇ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，“Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ｂｙ  ｓｅｌｆ−ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ”，Ｎａｔｕｒｅ，Ｖｏｌ．４３５：５９８−６０４（２００５））。ＩＬ−２受容体アルファ（ＩＬ−２Ｒα）鎖を構成的に発現するＣＤ４＋  Ｔｒｅｇ（ＣＤ４＋ＣＤ２５＋）は、アネルギー性及び抑制性である天然に存在するＴ細胞のサブセットである（Ｔａａｍｓ，Ｌ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，“Ｈｕｍａｎ  ａｎｅｒｇｉｃ／ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ  ＣＤ４＋ＣＤ２５＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ：ａ  ｈｉｇｈｌｙ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ  ａｎｄ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ−ｐｒｏｎｅ  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ”，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｖｏｌ．３１：１１２２−１１３１（２００１））。ヒトＣＤ４＋ＣＤ２５＋  Ｔｒｅｇは、マウスの対応物と同様に胸腺で生成され、細胞間接触依存性メカニズムを介してレスポンダーＴ細胞の増殖を抑制する能力、ＩＬ−２を産生できないこと、及びインビトロでのアネルギー表現型によって特徴づけられる。ヒトＣＤ４＋ＣＤ２５＋  Ｔ細胞は、ＣＤ２５の発現レベルに応じて抑制性（ＣＤ２５ｈｉｇｈ）細胞及び非抑制性（ＣＤ２５ｌｏｗ）細胞に分割することができる。転写因子のフォークヘッドファミリーのメンバーであるＦＯＸＰ３は、マウス及びヒトＣＤ４＋ＣＤ２５＋  Ｔｒｅｇで発現することが示され、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋  Ｔｒｅｇの発生を制御するマスター遺伝子であると考えられる（Ｂａｔｔａｇｌｉａ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，“Ｒａｐａｍｙｃｉｎ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｅｘｐａｎｓｉｏｎ  ｏｆ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｏｆ  ｂｏｔｈ  ｈｅａｌｔｈｙ  ｓｕｂｊｅｃｔｓ  ａｎｄ  ｔｙｐｅ  １  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｐａｔｉｅｎｔｓ”，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，Ｖｏｌ．１７７：８３３８−８３４７，（２００６））。従って、いくつかの実施形態では、免疫応答の上昇は、制御性Ｔ細胞の活性化又は増殖の欠如に関連し得る。
【０２０３】
細胞傷害性Ｔリンパ球
標的細胞内で産生されたタンパク質からペプチドを認識するＣＤ８＋  Ｔ細胞は、標的細胞の溶解を引き起こすという点で細胞傷害性を有する。ＣＴＬ誘導性溶解のメカニズムには、標的細胞の膜に挿入してその細胞の溶解を促進できる分子であるパーフォリンのＣＴＬによる産生が含まれる。パーフォリンを介した溶解は、活性化されたＣＴＬによって産生される一連の酵素であるグランザイムによって促進される。多くの活性ＣＴＬはまた、それらの表面に大量のｆａｓリガンドを発現する。ＣＴＬの表面のｆａｓリガンドと標的細胞の表面のｆａｓとの相互作用は、標的細胞のアポトーシスを開始し、これらの細胞の死をもたらす。ＣＴＬを介した溶解は、ウイルスに感染した細胞を破壊するための主要なメカニズムであると考えられる。
【０２０４】
リンパ球の活性化
「活性化」又は「リンパ球の活性化」という用語は、ＲＮＡ、タンパク質、及びＤＮＡの合成及びリンホカインの産生をもたらし；その後、様々なエフェクター細胞及びメモリー細胞の増殖及び分化が生じる、特定の抗原、非特異的マイトジェン、又は同族異系細胞によるリンパ球の刺激を指す。Ｔ細胞の活性化は、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体と、クラスＩ又はクラスＩＩ  ＭＨＣ分子の溝に結合したペプチドであるその同族リガンドとの相互作用に依存する。受容体の結合によって引き起こされる分子事象は複雑である。初期のステップでは、チロシンキナーゼの活性化が、いくつかのシグナル伝達経路を制御する一連の基質のチロシンリン酸化をもたらすと考えられる。これらには、ＴＣＲをｒａｓ経路に連結する一連のアダプタータンパク質、ホスホリパーゼＣγ１が含まれ、そのチロシンリン酸化は、その触媒活性を高め、イノシトールリン脂質代謝経路に関与し、細胞内遊離カルシウム濃度の上昇、並びにプロテインキナーゼＣと、細胞の成長及び分化を制御する他の一連の酵素の活性化をもたらす。Ｔ細胞の完全な応答性には、受容体の関与に加えて、アクセサリー細胞が提供する共刺激活性、例えば、ＡＰＣ上のＣＤ８０及び／又はＣＤ８６によるＴ細胞上のＣＤ２８の関与が必要である。
【０２０５】
Ｔメモリー細胞
適応免疫応答による病原体の認識と根絶に続いて、Ｔ細胞の大部分（９０〜９５％）が、残りの細胞と共にアポトーシスを受け、メモリーＴ細胞、指定セントラルメモリーＴ細胞（ＴＣＭ）、エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）、及び常在メモリーＴ細胞（ＴＲＭ）のプールが形成される（Ｃｌａｒｋ，Ｒ．Ａ．，“Ｒｅｓｉｄｅｎｔ  ｍｅｍｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  ｄｉｓｅａｓｅ”，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．，７，２６９ｒｖ１，（２０１５））。
【０２０６】
標準的なＴ細胞と比較して、これらのメモリーＴ細胞は、特定の表面マーカーの発現、様々なサイトカインプロファイルの迅速な産生、直接エフェクター細胞機能の能力、独自のホーミング分布パターンなどの異なる表現型で長寿命である。メモリーＴ細胞は、オフェンダー（ｏｆｆｅｎｄｅｒ）の再感染を排除し、それにより免疫系のバランスを迅速に回復するために、それぞれの抗原に再曝露されると迅速な応答を示す。自己免疫メモリーＴ細胞が自己免疫疾患の処置又は治癒のほとんどの試みを妨げることを実証する証拠が増えている（Ｃｌａｒｋ，Ｒ．Ａ．，“Ｒｅｓｉｄｅｎｔ  ｍｅｍｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  ｄｉｓｅａｓｅ”，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．，Ｖｏｌ．７，２６９ｒｖ１，（２０１５））。
【０２０７】
鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤は、本明細書に記載の免疫細胞、例えば、マクロファージ、単球、樹状細胞、及びＣＤ４＋、ＣＤ８＋、又はＣＤ３＋細胞（例えば、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、又はＣＤ３＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性を高める後細胞シグナル伝達因子の産生を誘導することによって組織又は対象における免疫活性を高めることができる。例えば、一実施形態では、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤は、組織又は対象において、マクロファージのレベル又は活性、単球のレベル又は活性、樹状細胞のレベル又は活性、Ｔ細胞のレベル又は活性、及びＣＤ４＋、ＣＤ８＋、又はＣＤ３＋細胞（例えば、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、又はＣＤ３＋  Ｔ細胞）のレベル又は活性のうちの１つ又は複数を上昇させるのに十分な量で投与される。
【０２０８】
鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤はまた、免疫促進性サイトカインのレベル又は活性を高める後細胞シグナル伝達因子の産生を誘導することによって細胞、組織、又は対象における免疫活性を高めることもできる。例えば、いくつかの実施形態では、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤は、細胞、組織、又は対象において免疫促進性サイトカインのレベル又は活性を上昇させるのに十分な量で投与される。一実施形態では、免疫促進性サイトカインは、ＩＦＮ−α、ＩＬ−１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１７、及びＧＭＣＳＦから選択される。
【０２０９】
鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤はまた、活性化Ｂ細胞の核因子カッパ軽鎖エンハンサー（ＮＦｋＢ）、インターフェロン調節因子（ＩＲＦ）、及びインターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）などの免疫応答の正の調節因子のレベル又は活性を高める後細胞シグナル伝達因子の産生を誘導することによって細胞、組織、又は対象における免疫活性を高めることができる。例えば、いくつかの実施形態では、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤は、細胞、組織、又は対象におけるＮＦｋＢ、ＩＲＦ、及び／又はＳＴＩＮＧのレベル又は活性を上昇させるのに十分な量で投与される。
【０２１０】
いくつかの実施形態では、本開示は、免疫細胞の免疫活性を高める方法に関し、この方法は：（ｉ）標的細胞を、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤に接触させること、及び（ｉｉ）免疫細胞を、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤に標的細胞を接触させない場合の免疫細胞に対して免疫細胞の免疫活性を高めるのに十分な量の該薬剤と接触させられた標的細胞に、又は該薬剤と接触させられた標的細胞によって産生される後細胞シグナル伝達因子に曝露することを含む。
【０２１１】
いくつかの実施形態では、本開示は、免疫細胞のＮＦｋＢのレベル又は活性を高める方法に関し、この方法は：（ｉ）標的細胞を、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤に接触させること、及び（ｉｉ）免疫細胞を、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤に標的細胞を接触させない場合の免疫細胞に対して免疫細胞のＮＦｋＢのレベル又は活性を高めるのに十分な量の該薬剤と接触させられた標的細胞に、又は該薬剤と接触させられた標的細胞によって産生される後細胞シグナル伝達因子に曝露することを含む。
【０２１２】
いくつかの実施形態では、本開示は、免疫細胞のインターフェロン調節因子（ＩＲＦ）又はインターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）のレベル又は活性を高める方法に関し、この方法は：（ｉ）標的細胞を、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤に接触させること、及び（ｉｉ）免疫細胞を、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤に標的細胞を接触させない場合の免疫細胞に対して免疫細胞のＩＲＦ又はＳＴＩＮＧのレベル又は活性を高めるのに十分な量の該薬剤と接触させられた標的細胞に、又は該薬剤と接触させられた標的細胞によって産生される後細胞シグナル伝達因子に曝露することを含む。
【０２１３】
いくつかの実施形態では、本開示は、免疫細胞の免疫促進性サイトカインのレベル又は活性を高める方法に関し、この方法は（ｉ）標的細胞を、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤に接触させること、及び（ｉｉ）免疫細胞を、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤に標的細胞を接触させない場合の免疫細胞に対して免疫細胞の免疫促進性サイトカインのレベル又は活性を高めるのに十分な量の該薬剤と接触させられた標的細胞に、又は該薬剤と接触させられた標的細胞によって産生される後細胞シグナル伝達因子に曝露することを含む。
【０２１４】
いくつかの実施形態では、この方法はインビトロで行われる。いくつかの実施形態では、この方法はエクスビボで行われる。いくつかの実施形態では、この方法はインビボで行われる。いくつかの実施形態では、ステップ（ｉ）はインビトロで行われ、ステップ（ｉｉ）はインビボで行われる。
【０２１５】
いくつかの実施形態では、免疫細胞は、マクロファージ、単球、樹状細胞、Ｔ細胞、ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、又はＣＤ３＋細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞はＴＨＰ−１細胞である。
【０２１６】
いくつかの実施形態では、本開示は、免疫細胞の免疫活性を高める方法に関し、この方法は、免疫細胞を、標的細胞、又は該標的細胞によって産生される後細胞シグナル伝達因子に接触させることを含み、該標的細胞は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤に標的細胞を接触させない場合の免疫細胞に対して免疫細胞の免疫活性を高めるのに十分な量の鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤に事前に接触させられている。
【０２１７】
いくつかの実施形態では、本開示は、免疫細胞のＮＦｋＢのレベル又は活性を高める方法に関し、この方法は、免疫細胞を、標的細胞、又は標的細胞によって産生される後細胞シグナル伝達因子に接触させることを含み、該標的細胞は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤に標的細胞を接触させない場合の免疫細胞に対して免疫細胞のＮＦｋＢのレベル又は活性を高めるのに十分な量の鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤に事前に接触させられている。
【０２１８】
いくつかの実施形態では、本開示は、免疫細胞のインターフェロン調節因子（ＩＲＦ）又はインターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）のレベル又は活性を高める方法に関し、この方法は、免疫細胞を、標的細胞、又は標的細胞によって産生される後細胞シグナル伝達因子に接触させることを含み、該標的細胞は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤に標的細胞を接触させない場合の免疫細胞に対して免疫細胞のインターフェロン調節因子（ＩＲＦ）又はインターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）のレベル又は活性を高めるのに十分な量の鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤に事前に接触させられている。
【０２１９】
いくつかの実施形態では、本開示は、免疫細胞の免疫促進性サイトカインのレベル又は活性を高める方法に関し、この方法は、免疫細胞を、標的細胞、又は標的細胞によって産生される後細胞シグナル伝達因子に接触させることを含み、該標的細胞は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤に標的細胞を接触させない場合の免疫細胞に対して免疫細胞の免疫促進性サイトカインのレベル又は活性を高めるのに十分な量の鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤に事前に接触させられている。
【０２２０】
いくつかの実施形態では、免疫細胞を標的細胞に接触させるステップはインビトロで行われる。いくつかの実施形態では、免疫細胞を標的細胞に接触させるステップはエクスビボで行われる。いくつかの実施形態では、免疫細胞を標的細胞に接触させるステップはインビボで行われる。
【０２２１】
いくつかの実施形態では、標的細胞は、インビトロで薬剤と事前に接触させられていた。いくつかの実施形態では、標的細胞は、エクスビボで薬剤と事前に接触させられていた。いくつかの実施形態では、標的細胞は、インビボで薬剤と事前に接触させられていた。
【０２２２】
いくつかの実施形態では、本開示は、組織又は対象の免疫細胞の免疫活性を高める方法に関し、この方法は、組織又は対象の標的細胞を、標的細胞が鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤と接触していない組織又は対象の免疫細胞に対して免疫細胞の免疫活性を高めるのに十分な量の鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤に接触させることを含む。
【０２２３】
いくつかの実施形態では、本開示は、組織又は対象の免疫細胞のＮＦｋＢのレベル又は活性を高める方法に関し、この方法は、組織又は対象の標的細胞を、標的細胞が鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤と接触していない組織又は対象の免疫細胞に対して免疫細胞のＮＦｋＢのレベル又は活性を高めるのに十分な量の鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤に接触させることを含む。
【０２２４】
いくつかの実施形態では、本開示は、組織又は対象の免疫細胞のＩＲＦ又はＳＴＩＮＧのレベル又は活性を高める方法に関し、この方法は、組織又は対象の標的細胞を、標的細胞が鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤と接触していない組織又は対象の免疫細胞に対して免疫細胞のＩＲＦ又はＳＴＩＮＧのレベル又は活性を高めるのに十分な量の鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤に接触させることを含む。
【０２２５】
いくつかの実施形態では、本開示は、組織又は対象の免疫細胞の免疫促進性サイトカインのレベル又は活性を高める方法に関し、この方法は、組織又は対象の標的細胞を、標的細胞が鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤と接触していない組織又は対象の免疫細胞に対して免疫細胞の免疫促進性サイトカインのレベル又は活性を高めるのに十分な量の鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤に接触させることを含む。いくつかの実施形態では、標的細胞と免疫細胞は、組織又は対象において近接又は物理的に接触している。いくつかの実施形態では、標的細胞と免疫細胞は、対象の同じ組織又は器官に存在する。
【０２２６】
いくつかの態様では、本開示は、細胞、組織、又は対象のＮＦｋＢのレベル又は活性を高める方法に関し、この方法は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤で処置されていない細胞、組織、又は対象に対してＮＦｋＢのレベル又は活性を高めるのに十分な量の鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤を細胞、組織、又は対象に投与することを含む。
【０２２７】
一実施形態では、対象は、ＮＦｋＢのレベル又は活性の上昇を必要としている。
【０２２８】
一実施形態では、ＮＦｋＢのレベル又は活性は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤で処置されていない細胞、組織、又は対象に対して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％、又は少なくとも２倍、４倍、６倍、８倍、若しくは１０倍上昇する。
【０２２９】
いくつかの態様では、本開示は、細胞、組織、又は対象のＩＲＦ又はＳＴＩＮＧのレベル又は活性を高める方法に関し、この方法は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤で処置されていない細胞、組織、又は対象に対してＩＲＦ又はＳＴＩＮＧのレベル又は活性を高めるのに十分な量の鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤を細胞、組織、又は対象に投与することを含む。
【０２３０】
一実施形態では、対象は、ＩＲＦ又はＳＴＩＮＧのレベル又は活性の上昇を必要としている。
【０２３１】
一実施形態では、ＩＲＦ又はＳＴＩＮＧのレベル又は活性は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤で処置されていない細胞、組織、又は対象に対して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％、又は少なくとも２倍、４倍、６倍、８倍、若しくは１０倍上昇する。
【０２３２】
いくつかの態様では、本開示は、組織又は対象のマクロファージ、単球、Ｔ細胞、及び／又は樹状細胞のレベル又は活性を高める方法に関し、この方法は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤で処置されていない組織、又は対象に対してマクロファージ、単球、Ｔ細胞、及び／又は樹状細胞のレベル又は活性を高めるのに十分な量の鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤を組織又は対象に投与することを含む。
【０２３３】
一実施形態では、対象は、マクロファージ、単球、又は樹状細胞のレベル又は活性の上昇を必要としている。
【０２３４】
一実施形態では、マクロファージ、単球、Ｔ細胞、又は樹状細胞のレベル又は活性は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤で処置されていない組織又は対象に対して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％、又は少なくとも２倍、４倍、６倍、８倍、若しくは１０倍上昇する。
【０２３５】
いくつかの態様では、本開示は、組織又は対象のＣＤ４＋、ＣＤ８＋、又はＣＤ３＋細胞のレベル又は活性を高める方法に関し、この方法は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤で処置されていない組織、又は対象に対してＣＤ４＋、ＣＤ８＋、又はＣＤ３＋細胞のレベル又は活性を高めるのに十分な量の鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤を対象に投与することを含む。
【０２３６】
一実施形態では、対象は、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、又はＣＤ３＋細胞のレベル又は活性の上昇を必要としている。
【０２３７】
一実施形態では、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、又はＣＤ３＋細胞のレベル又は活性は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤で処置されていない組織又は対象に対して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％、又は少なくとも２倍、４倍、６倍、８倍、若しくは１０倍上昇する。
【０２３８】
いくつかの態様では、本開示は、細胞、組織、又は対象の免疫促進性サイトカインのレベル又は活性を高める方法に関し、この方法は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤で処置されていない細胞、組織、又は対象に対して免疫促進性サイトカインのレベル又は活性を高めるのに十分な量の鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤を細胞、組織、又は対象に投与することを含む。
【０２３９】
一実施形態では、対象は、免疫促進性サイトカインのレベル又は活性の上昇を必要としている。
【０２４０】
一実施形態では、免疫促進性サイトカインのレベル又は活性は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤で処置されていない細胞、組織、又は対象に対して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％、又は少なくとも２倍、４倍、６倍、８倍、若しくは１０倍上昇する。
【０２４１】
一実施形態では、免疫促進性サイトカインは、ＩＦＮ−α、ＩＬ−１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１７、及びＧＭＣＳＦから選択される。
【０２４２】
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤の投与前に、細胞、組織、又は対象を：ＮＦｋＢのレベル又は活性；マクロファージのレベル又は活性；単球のレベル又は活性；樹状細胞のレベル又は活性；ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、又はＣＤ３＋細胞のレベル又は活性；Ｔ細胞のレベル又は活性；及び免疫促進性サイトカインのレベル又は活性のうちの１つ又は複数について評価することをさらに含む。
【０２４３】
一実施形態では、本発明の方法は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤の投与後に、細胞、組織、又は対象を：ＮＦｋＢ、ＩＲＦ、又はＳＴＩＮＧのレベル又は活性；マクロファージのレベル又は活性；単球のレベル又は活性；樹状細胞のレベル又は活性；ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、又はＣＤ３＋細胞のレベル又は活性；Ｔ細胞のレベル又は活性；及び免疫促進性サイトカインのレベル又は活性のうちの１つ又は複数について評価することをさらに含む。
【０２４４】
ＮＦｋＢ、ＩＲＦ、又はＳＴＩＮＧのレベル又は活性；マクロファージのレベル又は活性；単球のレベル又は活性；樹状細胞のレベル又は活性；ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、又はＣＤ３＋細胞のレベル又は活性；Ｔ細胞のレベル又は活性；及び免疫促進性サイトカインのレベル又は活性を測定する方法は当技術分野で公知である。
【０２４５】
例えば、ＮＦｋＢ、ＩＲＦ、又はＳＴＩＮＧのタンパク質のレベル又は活性は、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット又はインサイチューハイブリダイゼーションを含む当技術分野で公知の適切な技術によって測定することができる。ＮＦｋＢ、ＩＲＦ、又はＳＴＩＮＧをコードする核酸（例えば、ｍＲＮＡ）のレベルは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅反応、逆転写酵素ＰＣＲ分析、定量的リアルタイムＰＣＲ、一本鎖高次構造多型分析（ＳＳＣＰ）、ミスマッチ切断検出、ヘテロ二重鎖分析、ノーザンブロット分析、インサイチューハイブリダイゼーション、アレイ分析、デオキシリボ核酸配列決定、制限断片長多型分析、及びそれらの組み合わせ又は部分的な組み合わせを含む当技術分野で公知の適切な技術を用いて測定することができる。
【０２４６】
マクロファージのレベル及び活性を測定するための方法は、例えば、Ｃｈｉｔｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｃｕｒｒ  Ｐｒｏｔｏｃ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４：１−３３に記載されている。単球のレベル及び活性は、例えば、Ｈｅｎｎｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ４２３：７８−８４に記載されているようにフローサイトメトリーによって測定することができる。樹状細胞のレベル及び活性は、例えば、Ｄｉｘｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ．６９（７）：４３５１−４３５７に記載されているようにフローサイトメトリーによって測定することができる。これらの参考文献のそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０２４７】
Ｔ細胞のレベル又は活性は、ヒトＣＤ４＋  Ｔ細胞ベースの増殖アッセイを使用して評価することができる。例えば、細胞は、蛍光色素５，６−カルボキシフルオレセインジアセテートスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）で標識されている。増殖するこれらの細胞は、フローサイトメトリーによって直接測定されるＣＦＳＥ蛍光強度の低下を示す。別法では、放射性チミジンの取り込みを使用して、Ｔ細胞の増殖速度を評価することができる。
【０２４８】
いくつかの実施形態では、免疫応答の上昇は、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の活性化の低下に関連し得る。機能的活性Ｔｒｅｇは、インビトロでのＴｒｅｇ抑制アッセイを使用して評価することができる。そのようなアッセイは、Ｃｏｌｌｉｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｖｉｇｎａｌｉに記載されている（その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．２０１１；７０７：２１−３７）。
【０２４９】
免疫促進性サイトカインのレベル又は活性は、例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞で定量することができる。実施形態では、免疫促進性サイトカインは、インターフェロンアルファ（ＩＦＮ−α）、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ＩＬ−４、ＩＬ−６、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）、ＩＬ−１７、及び顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭＣＳＦ）から選択される。定量は、抗原刺激に応答して所与のサイトカイン（例えば、ＩＦＮ−α）を分泌するＴ細胞を検出するＥＬＩＳＰＯＴ（酵素結合免疫スポット）技術を使用して行うことができる。Ｔ細胞は、例えば抗ＩＦＮ−α抗体でコーティングされたウェル内で抗原提示細胞と共に培養される。分泌されたＩＦＮ−αは、コーティングされた抗体によって捕捉され、発色基質に結合した二次抗体で明らかになる。従って、局所的に分泌されたサイトカイン分子はスポットを形成し、各スポットは１つのＩＦＮ−α分泌細胞に対応する。スポットの数により、分析されたサンプル中の所与の抗原に特異的なＩＦＮ−α分泌細胞の頻度を決定することができる。ＥＬＩＳＰＯＴアッセイは、ＴＮＦ−α、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、及びＧＭＣＳＦの検出についても説明されている。
【０２５０】
ＩＶ．障害を処置する方法
本出願人は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤での細胞の処置が、免疫活性を高める後細胞シグナル伝達因子の産生及び放出をもたらすことを示した。従って、鉄依存性細胞分解を誘導し、免疫活性を高める薬剤は、癌及び感染症などの、免疫活性の上昇から恩恵を受け得る障害の処置に使用することができる。
【０２５１】
Ａ．感染病
本明細書で提供されるように、鉄依存性細胞分解（例えば、フェロトーシス）を誘導する薬剤は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞など）を活性化することができ、従って、細菌及び／又はウイルス感染の阻害、及び／又は感染症を処置するための免疫監視及び免疫記憶機能の回復などの免疫細胞機能を増強することができる。従って、いくつかの実施形態では、本発明の組成物（例えば鉄依存性細胞分解（例えば、フェロトーシス）を誘導する薬剤を含む）は、対象の感染症又は感染病、例えば、慢性感染症を処置するために使用される。
【０２５２】
本明細書で使用される「感染」という用語は、生物（即ち、対象）の細胞又は組織が感染因子に感染している（例えば、対象が細胞内病原体感染、例えば慢性細胞内病原体感染を有する）あらゆる状態を指す。本明細書で使用される「感染因子」という用語は、感染した生物の少なくとも１つの細胞内の外来の生物学的実体（即ち、病原体）を指す。例えば、感染因子には、限定されるものではないが、細菌、ウイルス、原生動物、及び真菌が含まれる。細胞内病原体は特に興味深いものである。感染病は、感染因子によって引き起こされる障害である。一部の感染因子は、特定の条件下では認識できる症状も疾患も引き起こさないが、変化した条件下では症状又は疾患を引き起こし得る。主題の方法は、限定されるものではないが、ウイルス感染症、例えば、レトロウイルス、レンチウイルス、ヘパドナウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、又はヒトパピローマウイルス；細胞内細菌感染症、例えば、マイコバクテリウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、クラミドフィラ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ）、エールリヒア（Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ）、リケッチア（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ）、ブルセラ（Ｂｒｕｃｅｌｌａ）、レジオネラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）、フランシセラ（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ）、リステリア（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）、コクシエラ（Ｃｏｘｉｅｌｌａ）、ナイセリア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、イェルシニア属（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｓｐ）、又はヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）；及び細胞内原生動物病原体、例えば、プラスモディウム属（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｐ）、トリパノソーマ属（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｓｐ．）、ジアルジア属（Ｇｉａｒｄｉａ  ｓｐ．）、トキソプラズマ属（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｓｐ．）、又はリーシュマニア属（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｓｐ．）を含む慢性病原体感染症の処置に使用することができる。
【０２５３】
本明細書に記載の組成物を使用して処置できる感染病には、限定されるものではないが：ＨＩＶ、インフルエンザ、ヘルペス、ジアルジア（Ｇｉａｒｄｉａ）、マラリア、リーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）、ウイルス性肝炎（Ａ型、Ｂ型、又はＣ型）による病原性感染、ヘルペスウイルス（例えば、ＶＺＶ、ＨＳＶ−Ｉ、ＨＡＶ−６、ＨＳＶ−ＩＩ、及びＣＭＶ、エプスタイン・バー・ウイルス）、アデノウイルス、インフルエンザウイルス、フラビウイルス（ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓｅｓ）、エコー・ウイルス、ライノウイルス、コクサッキーウイルス、コロナウイルス、ＲＳウイルス、ムンプスウイルス、ロタウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、パルボウイルス、ワクシニアウイルス、ＨＴＬＶウイルス、デングウイルス、パピローマウイルス、軟属腫ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ＪＣウイルス、及びアルボウイルス脳炎ウイルス（ａｒｂｏｖｉｒａｌ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ  ｖｉｒｕｓ）、細菌であるクラミジア（ｃｈｌａｍｙｄｉａ）、リケッチア細菌（ｒｉｋｅｔｔｓｉａｌ  ｂａｃｔｅｒｉａ）、マイコバクテリウム（ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ）、ブドウ球菌（ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ）、連鎖球菌（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）、肺炎球菌（ｐｎｅｕｍｏｎｏｃｏｃｃｉ）、髄膜炎菌（ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃｉ）、及びコノコッキ（ｃｏｎｏｃｏｃｃｉ）、クレブシエラ（ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、プロテウス（ｐｒｏｔｅｕｓ）、セラチア（ｓｅｒｒａｔｉａ）、シュードモナス（ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、レジオネラ（ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）、ジフテリア（ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ）、サルモネラ（ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、バチルス（ｂａｃｉｌｌｉ）、コレラ（ｃｈｏｌｅｒａ）、破傷風（ｔｅｔａｎｕｓ）、ボツリヌス（ｂｏｔｕｌｉｓｍ）、炭疽菌（ａｎｔｈｒａｘ）、ペスト（ｐｌａｇｕｅ）、レプトスピラ（ｌｅｐｔｏｓｐｉｒｏｓｉｓ）、及びライム病細菌による病原性感染、真菌であるカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）（アルビカンス（ａｌｂｉｃａｎｓ）、クルセイ（ｋｒｕｓｅｉ）、グラブラタ（ｇｌａｂｒａｔａ）、トロピカリス（ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）など）、クリプトコッカス・ネフォルアマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）（フミガーツス（ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、ニゲル（ｎｉｇｅｒ）など）、ケカビ属（Ｇｅｎｕｓ  Ｍｕｃｏｒａｌｅｓ）（ムコール（ｍｕｃｏｒ）、アブシジア（ａｂｓｉｄｉａ）、リゾプス（ｒｈｉｚｏｐｈｕｓ））、スポロトリクス・シェンキイ（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ  ｓｃｈｅｎｋｉｉ）、ブラストミセス・デルマティティジス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）、パラコクシジオイデス・ブラジリエンシス（Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）、コクシジオイデス・イミチス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓ）、及びヒストプラスマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）による病原性感染、並びに寄生虫である赤痢アメーバ（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ）、大腸バランチジウム（Ｂａｌａｎ��ｉｄｉｕｍ  ｃｏｌｉ）、ネグレリアフォーレリ（Ｎａｅｇｌｅｒｉａｆｏｗｌｅｒｉ）、アカントアメーバ属（Ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ  ｓｐ．）、ジアルジア（Ｇｉａｒｄｉａ  ｌａｍｂｉａ）、クリプトスポリジウム属（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ  ｓｐ．）、ニューモシスチス・カリニ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｃａｒｉｎｉｉ）、三日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘ）、バベシア・ミクロチ（Ｂａｂｅｓｉａ  ｍｉｃｒｏｔｉ）、ブルーストリパノソーマ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ）、クルーズトリパノソーマ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ）、ドノバン・リーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ）、トキソプラズマ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉ）、及び／又はニッポストランジラス・ブラジリエンシス（Ｎｉｐｐｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）による病原性感染が含まれる。
【０２５４】
「慢性感染症」という用語は、約１ヶ月以上、例えば、少なくとも１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、又は６ヶ月続く感染症を指す。いくつかの実施形態では、慢性感染症は、感染領域内及び／又はその周辺での抗炎症性ケモカインの産生の増加に関連している。慢性感染症には、限定されるものではないが、ＨＩＶ、ＨＰＶ、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ＥＢＶ、ＣＭＶ、結核菌（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、細胞内細菌、及び寄生虫による感染症が含まれる。いくつかの実施形態では、慢性感染症は細菌感染症である。いくつかの実施形態では、慢性感染症はウイルス感染症である。
【０２５５】
Ｂ．癌
本明細書に示されるように、鉄依存性細胞分解（例えば、フェロトーシス）を誘導する薬剤は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞など）を活性化することができ、従って、例えば免疫療法に関係するような免疫細胞機能を促進することができる。従って、特定の態様では、本開示は、癌と診断された対象を処置する方法に関し、この方法は、（ａ）免疫療法抗腫瘍剤と（ｂ）鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤を組み合わせて対象に投与し、それにより対象の癌を処置することを含む。
【０２５６】
免疫系が自己と非自己を区別するのを防止する、様々な複雑で重複するメカニズムを利用する癌細胞の能力は、免疫監視を回避するための癌の基本的なメカニズムを表している。メカニズムには、抗原提示の阻害、Ｔ細胞の活性化又は阻害を制御する調節経路の破壊（免疫チェックポイント調節）、免疫抑制に寄与する細胞（Ｔｒｅｇ、ＭＤＳＣ）の動員、又は免疫活性に影響を与える因子（ＩＤＯ、ＰＧＥ２）の放出が含まれる（それぞれの内容がその全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｈａｒｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｃａｎｃｅｒ  １：１２；Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ３９：１；Ｐａｒｄｏｌｌ，ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ：Ｃａｎｃｅｒ  １２：２５２；ａｎｄ  Ｓｈａｒｍａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５，Ｃｅｌｌ  １６１：２０５を参照）。
【０２５７】
免疫チェックポイントモジュレーター
いくつかの実施形態では、免疫療法剤は、免疫チェックポイント分子の免疫チェックポイントモジュレーターである。例として、ＬＡＧ−３（Ｔｒｉｅｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７１：１３９３−１４０５）、ＴＩＭ−３（Ｓａｋｕｉｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０７：２１８７−２１９４）、及びＶＩＳＴＡ（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０８：５７７−５９２）が挙げられる。免疫応答を改善する共刺激分子の例としては、ＩＣＯＳ（Ｆａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２１１：７１５−７２５）、ＯＸ４０（Ｃｕｒｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．７３：７１８９−７１９８）、及び４−１ＢＢ（Ｍｅｌｅｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．３：６８２−６８５）が挙げられる。
【０２５８】
免疫チェックポイントは、刺激性免疫チェックポイント（即ち、免疫応答を刺激する分子）又は抑制性免疫チェックポイント（即ち、免疫応答を抑制する分子）であり得る。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、抑制性免疫チェックポイントのアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、刺激性免疫チェックポイントのアゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、免疫チェックポイント結合タンパク質（例えば、抗体、抗体Ｆａｂ断片、二価抗体、抗体薬物コンジュゲート、ｓｃＦｖ、融合タンパク質、二価抗体、又は四価抗体）である。特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、２つ以上の免疫チェックポイントに結合するか、又はその活性を調節することができる。刺激性及び抑制性免疫チェックポイントの例、並びに本発明の方法で使用できるこれらの免疫チェックポイントを調節する分子の例が以下に示される。
【０２５９】
ｉ．刺激性免疫チェックポイント分子
ＣＤ２７は、ナイーブＴ細胞の抗原特異的増殖を支援し、Ｔ細胞記憶の生成に不可欠である（例えば、Ｈｅｎｄｒｉｋｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７１（５）：４３３−４０を参照）。ＣＤ２７は、Ｂ細胞の記憶マーカーでもある（例えば、Ａｇｅｍａｔｓｕ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｈｉｓｔｏｌ．Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌ．１５（２）：５７３−６を参照）。ＣＤ２７活性は、リンパ球及び樹状細胞上のそのリガンドであるＣＤ７０の一時的な有効性によって支配される（例えば、Ｂｏｒｓｔ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７（３）：２７５−８１を参照）。ＣＤ２７に特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＤ２７の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＤ２７に結合する薬剤（例えば、抗ＣＤ２７抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＣＤ２７アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＣＤ２７アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターはＣＤ２７結合タンパク質（例えば、抗体）である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、バリルマブ（ｖａｒｌｉｌｕｍａｂ）（Ｃｅｌｌｄｅｘ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）である。追加のＣＤ２７結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，２４８，１８３号明細書、同第９，１０２，７３７号明細書、同第９，１６９，３２５号明細書、同第９，０２３，９９９号明細書、同第８，４８１，０２９号明細書；米国特許出願公開第２０１６／０１８５８７０号明細書、同第２０１５／０３３７０４７号明細書、同第２０１５／０２９９３３０号明細書、同第２０１４／０１１２９４２号明細書、同第２０１３／０３３６９７６号明細書、同第２０１３／０２４３７９５号明細書、同第２０１３／０１８３３１６号明細書、同第２０１２／０２１３７７１号明細書、同第２０１２／００９３８０５号明細書、同第２０１１／０２７４６８５号明細書、同第２０１０／０１７３３２４号明細書；並びに国際公開第２０１５／０１６７１８号パンフレット、同第２０１４／１４０３７４号パンフレット、同第２０１３／１３８５８６号パンフレット、同第２０１２／００４３６７号パンフレット、同第２０１１／１３０４３４号パンフレット、同第２０１０／００１９０８号パンフレット、及び同第２００８／０５１４２４号パンフレットに開示されている。
【０２６０】
ＣＤ２８．分化抗原群２８（ＣＤ２８）は、Ｔ細胞の活性化及び生存に必要な共刺激シグナルを提供するＴ細胞で発現するタンパク質の１つである。Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）に加えてＣＤ２８を介したＴ細胞刺激は、様々なインターロイキン（特にＩＬ−６）の産生のための強力なシグナルを提供することができる。樹状細胞で発現するその２つのリガンドであるＣＤ８０及びＣＤ８６との結合は、Ｔ細胞の増殖を促進する（例えば、Ｐｒａｓａｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ'ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１（７）：２８３４−８を参照）。ＣＤ２８に特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＤ２８の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＤ２８に結合する薬剤（例えば、抗ＣＤ２８抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＣＤ２８アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＣＤ２８アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、Ｄ２８結合タンパク質（例えば、抗体）である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＴＡＢ０８（ＴｈｅｒａＭａｂ  ＬＬＣ）、ルリズマブ（ｌｕｌｉｚｕｍａｂ）（ＢＭＳ−９３１６９９（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）としても知られている）、及びＦＲ１０４（ＯＳＥ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）からなる群から選択される。追加のＣＤ２８結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，１１９，８４０号明細書、同第８，７０９，４１４号明細書、同第９，０８５，６２９号明細書、同第８，０３４，５８５号明細書、同第７，９３９，６３８号明細書、同第８，３８９，０１６号明細書、同第７，５８５，９６０号明細書、同第８，４５４，９５９号明細書、同第８，１６８，７５９号明細書、同第８，７８５，６０４号明細書、同第７，７２３，４８２号明細書；米国特許出願公開第２０１６／００１７０３９号明細書、同第２０１５／０２９９３２１号明細書、同第２０１５／０１５０９６８号明細書、同第２０１５／００７１９１６号明細書、同第２０１５／０３７６２７８号明細書、同第２０１３／００７８２５７号明細書、同第２０１３／０２３０５４０号明細書、同第２０１３／００７８２３６号明細書、同第２０１３／０１０９８４６号明細書、同第２０１３／０２６６５７７号明細書、同第２０１２／０２０１８１４号明細書、同第２０１２／００８２６８３号明細書、同第２０１２／０２１９５５３号明細書、同第２０１１／０１８９７３５号明細書、同第２０１１／００９７３３９号明細書、同第２０１０／０２６６６０５号明細書、同第２０１０／０１６８４００号明細書、同第２００９／０２４６２０４号明細書、同第２００８／００３８２７３号明細書；並びに国際公開第２０１５１９８１４７号パンフレット、同第２０１６／��５４２１号パンフレット、同第２０１４／１２０９１６８号パンフレット、同第２０１１／１０１７９１号パンフレット、同第２０１０／００７３７６号パンフレット、同第２０１０／００９３９１号パンフレット、同第２００４／００４７６８号パンフレット、同第２００２／０３０４５９号パンフレット、同第２００２／０５１８７１号パンフレット、及び同第２００２／０４７７２１号パンフレットに開示されている。
【０２６１】
ＣＤ４０．分化抗原群４０（ＣＤ４０、ＴＮＦＲＳＦ５としても知られている）は、抗原提示細胞を含む様々な免疫系細胞に見られる。別名ＣＤ１５４として知られているＣＤ４０Ｌは、ＣＤ４０のリガンドであり、活性化されたＣＤ４＋  Ｔ細胞の表面に一過性に発現する。ＣＤ４０シグナル伝達は、樹状細胞を「許可（ｌｉｃｅｎｓｅ）して」成熟させ、それによりＴ細胞の活性化及び分化を引き起こすことが知られている（例えば、Ｏ'Ｓｕｌｌｉｖａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３（１）：８３−１０７を参照）。ＣＤ４０に特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＤ４０の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターはＣＤ４０に結合する薬剤（例えば、抗ＣＤ４０抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＣＤ４０アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＣＤ４０アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ダセツズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、ＣＰ−８７０、８９３（Ｐｆｉｚｅｒ）、ブレセルマブ（Ａｓｔｅｌｌａｓ  Ｐｈａｒｍａ）、ルカツムマブ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＣＦＺ５３３（Ｎｏｖａｒｔｉｓ；例えば、Ｃｏｒｄｏｂａ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ａｍ．Ｊ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．１５（１１）：２８２５−３６を参照）、ＲＧ７８７６（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．）、ＦＦＰ１０４（ＰａｎＧｅｎｅｔｉｃｓ，Ｂ．Ｖ．）、ＡＰＸ００５（Ａｐｅｘｉｇｅｎ）、ＢＩ６５５０６４（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、Ｃｈｉ  Ｌｏｂ  ７／４（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ＵＫ；例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２１（６）：１３２１−８を参照）、ＡＤＣ−１０１３（ＢｉｏＩｎｖｅｎｔ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）、ＳＥＡ−ＣＤ４０（Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、ＸｍＡｂ  ５４８５（Ｘｅｎｃｏｒ）、ＰＧ１２０（ＰａｎＧｅｎｅｔｉｃｓ  Ｂ．Ｖ．）、テネリキシマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ；例えば、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ａｍ．Ｊ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．１１（５）：９４７−５７を参照）、及びＡＫＨ３（Ｂｉｏｇｅｎ；例えば、国際公開第２０１６／０２８８１０号パンフレットを参照）からなる群から選択されるＣＤ４０結合タンパク質である。追加のＣＤ４０結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，２３４，０４４号明細書、同第９，２６６，９５６号明細書、同第９，１０９，０１１号明細書、同第９，０９０，６９６号明細書、同第９，０２３，３６０号明細書、同第９，０２３，３６１号明細書、同第９，２２１，９１３号明細書、同第８，９４５，５６４号明細書、同第８，９２６，９７９号明細書、同第８���８２８，３９６号明細書、同第８，６３７，０３２号明細書、同第８，２７７，８１０号明細書、同第８，０８８，３８３号明細書、同第７，８２０，１７０号明細書、同第７，７９０，１６６号明細書、同第７，４４５，７８０号明細書、同第７，３６１，３４５号明細書、同第８，９６１，９９１号明細書、同第８，６６９，３５２号明細書、同第８，９５７，１９３号明細書、同第８，７７８，３４５号明細書、同第８，５９１，９００号明細書、同第８，５５１，４８５号明細書、同第８，４９２，５３１号明細書、同第８，３６２，２１０号明細書、同第８，３８８，９７１号明細書；米国特許出願公開第２０１６／００４５５９７号明細書、同第２０１６／０１５２７１３号明細書、同第２０１６／００７５７９２号明細書、同第２０１５／０２９９３２９号明細書、同第２０１５／００５７４３７号明細書、同第２０１５／０３１５２８２号明細書、同第２０１５／０３０７６１６号明細書、同第２０１４／００９９３１７号明細書、同第２０１４／０１７９９０７号明細書、同第２０１４／０３４９３９５号明細書、同第２０１４／０２３４３４４号明細書、同第２０１４／０３４８８３６号明細書、同第２０１４／０１９３４０５号明細書、同第２０１４／０１２０１０３号明細書、同第２０１４／０１０５９０７号明細書、同第２０１４／０２４８２６６号明細書、同第２０１４／００９３４９７号明細書、同第２０１４／００１０８１２号明細書、同第２０１３／００２４９５６号明細書、同第２０１３／００２３０４７号明細書、同第２０１３／０３１５９００号明細書、同第２０１２／００８７９２７号明細書、同第２０１２／０２６３７３２号明細書、同第２０１２／０３０１４８８号明細書、同第２０１１／００２７２７６号明細書、同第２０１１／０１０４１８２号明細書、同第２０１０／０２３４５７８号明細書、同第２００９／０３０４６８７号明細書、同第２００９／０１８１０１５号明細書、同第２００９／０１３０７１５号明細書、同第２００９／０３１１２５４号明細書、同第２００８／０１９９４７１号明細書、同第２００８／００８５５３１号明細書、同第２０１６／０１５２７２１号明細書、同第２０１５／０１１０７８３号明細書、同第２０１５／００８６９９１号明細書、同第２０１５／００８６５５９号明細書、同第２０１４／０３４１８９８号明細書、同第２０１４／０２０５６０２号明細書、同第２０１４／０００４１３１号明細書、同第２０１３／００１１４０５号明細書、同第２０１２／０１２１５８５号明細書、同第２０１１／００３３４５６号明細書、同第２０１１／０００２９３４号明細書、同第２０１０／０１７２９１２号明細書、同第２００９／００８１２４２号明細書、同第２００９／０１３００９５号明細書、同第２００８／０２５４０２６号明細書、同第２００８／００７５７２７号明細書、同第２００９／０３０４７０６号明細書、同第２００９／０２０２５３１号明細書、同第２００９／０１１７１１１号明細書、同第２００９／００４１７７３号明細書、同第２００８／０２７４１１８号明細書、同第２００８／００５７０７０号明細書、同第２００７／００９８７１７号明細書、同第２００７／０２１８０６０号明細書、同第２００７���００９８７１８号明細書、同第２００７／０１１０７５４号明細書；並びに国際公開第２０１６／０６９９１９号パンフレット、同第２０１６／０２３９６０号パンフレット、同第２０１６／０２３８７５号パンフレット、同第２０１６／０２８８１０号パンフレット、同第２０１５／１３４９８８号パンフレット、同第２０１５／０９１８５３号パンフレット、同第２０１５／０９１６５５号パンフレット、同第２０１４／０６５４０３号パンフレット、同第２０１４／０７０９３４号パンフレット、同第２０１４／０６５４０２号パンフレット、同第２０１４／２０７０６４号パンフレット、同第２０１３／０３４９０４号パンフレット、同第２０１２／１２５５６９号パンフレット、同第２０１２／１４９３５６号パンフレット、同第２０１２／１１１７６２号パンフレット、同第２０１２／１４５６７３号パンフレット、同第２０１１／１２３４８９号パンフレット、同第２０１０／１２３０１２号パンフレット、同第２０１０／１０４７６１号パンフレット、同第２００９／０９４３９１号パンフレット、同第２００８／０９１９５４号パンフレット、同第２００７／１２９８９５号パンフレット、同第２００６／１２８１０３号パンフレット、同第２００５／０６３２８９号パンフレット、同第２００５／０６３９８１号パンフレット、同第２００３／０４０１７０号パンフレット、同第２００２／０１１７６３号パンフレット、同第２０００／０７５３４８号パンフレット、同第２０１３／１６４７８９号パンフレット、同第２０１２／０７５１１１号パンフレット、同第２０１２／０６５９５０号パンフレット、同第２００９／０６２０５４号パンフレット、同第２００７／１２４２９９号パンフレット、同第２００７／０５３６６１号パンフレット、同第２００７／０５３７６７号パンフレット、同第２００５／０４４２９４号パンフレット、同第２００５／０４４３０４号パンフレット、同第２００５／０４４３０６号パンフレット、同第２００５／０４４８５５号パンフレット、同第２００５／０４４８５４号パンフレット、同第２００５／０４４３０５号パンフレット、同第２００３／０４５９７８号パンフレット、同第２００３／０２９２９６号パンフレット、同第２００２／０２８４８１号パンフレット、同第２００２／０２８４８０号パンフレット、同第２００２／０２８９０４号パンフレット、同第２００２／０２８９０５号パンフレット、同第２００２／０８８１８６号パンフレット、及び同第２００１／０２４８２３号パンフレットに開示されている。
【０２６２】
ＣＤ１２２．ＣＤ１２２は、インターロイキン−２受容体ベータサブユニットであり、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞の増殖を増加させることが知られている。例えば、Ｂｏｙｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２（３）：１８０−１９０を参照されたい。ＣＤ１２２に特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＤ１２２の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＤ１２２に結合する薬剤（例えば、抗ＣＤ１２２抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＣＤ１２２アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＣＤ２２アゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ヒト化ＭｉＫ−ベータ−１（Ｒｏｃｈｅ；例えば、参照により組み込まれるＭｏｒｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ'ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０３（２）：４０１−６を参照されたい）。追加のＣＤ１２２結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第９，０２８，８３０号明細書に開示されている。
【０２６３】
ＯＸ４０．ＯＸ４０受容体（ＣＤ１３４としても知られている）は、エフェクター及びメモリーＴ細胞の増殖を促進する。ＯＸ４０はまた、Ｔ制御性細胞の分化及び活性を抑制し、サイトカインの産生を調節する（例えば、Ｃｒｏｆｔ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．２２９（１）：１７３−９１を参照）。ＯＸ４０に特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＯＸ４０の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターはＯＸ４０に結合する薬剤（例えば、抗ＯＸ４０抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＯＸ４０アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＯＸ４０アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＭＥＤＩ６４６９（ＡｇｏｎＯｘ／Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）、ポガリズマブ（ｐｏｇａｌｉｚｕｍａｂ）（ＭＯＸＲ０９１６及びＲＧ７８８８としても知られている；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）、タボリキシズマブ（ｔａｖｏｌｉｘｉｚｕｍａｂ）（ＭＥＤＩ０５６２としても知られている；Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）、及びＧＳＫ３１７４９９８（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）からなる群から選択されるＯＸ４０結合タンパク質（例えば、抗体）である。追加のＯＸ−４０結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，１６３，０８５号明細書、同第９，０４０，０４８号明細書、同第９，００６，３９６号明細書、同第８，７４８，５８５号明細書、同第８，６１４，２９５号明細書、同第８，５５１，４７７号明細書、同第８，２８３，４５０号明細書、同第７，５５０，１４０号明細書；米国特許出願公開第２０１６／００６８６０４号明細書、同第２０１６／００３１９７４号明細書、同第２０１５／０３１５２８１号明細書、同第２０１５／０１３２２８８号明細書、同第２０１４／０３０８２７６号明細書、同第２０１４／０３７７２８４号明細書、同第２０１４／００４４７０３号明細書、同第２０１４／０２９４８２４号明細書、同第２０１３／０３３０３４４号明細書、同第２０１３／０２８０２７５号明細書、同第２０１３／０２４３７７２号明細書、同第２０１３／０１８３３１５号明細書、同第２０１２／０２６９８２５号明細書、同第２０１２／０２４４０７６号明細書、同第２０１１／０００８３６８号明細書、同第２０１１／０１２３５５２号明細書、同第２０１０／０２５４９７８号明細書、同第２０１０／０１９６３５９号明細書、同第２００６／０２８１０７２号明細書；並びに国際公開第２０１４／１４８８９５号パンフレット、同第２０１３／０６８５６３号パンフレット、同第２０１３／０３８１９１号パンフレット、同第２０１３／０２８２３１号パンフレット、同第２０１０／０９６４１８号パンフレット、同第２００７／０６２２４５号パンフレット、及び同第２００３／１０６４９８号パンフレットに開��されている。
【０２６４】
ＧＩＴＲ．糖質コルチコイド誘発性ＴＮＦＲファミリー関連遺伝子（ＧＩＴＲ）は、Ｔｒｅｇ、ＣＤ４、及びＣＤ８  Ｔ細胞で構成的又は条件付きで発現する腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）スーパーファミリーのメンバーである。ＧＩＴＲは、ＴＣＲのライゲーション及び活性化に続いて、エフェクターＴ細胞で急速にアップレギュレートされる。ヒトＧＩＴＲリガンド（ＧＩＴＲＬ）は、二次リンパ器官及び一部の非リンパ組織のＡＰＣで構成的に発現する。ＧＩＴＲ：ＧＩＴＲＬの相互作用の下流効果は、Ｔｒｅｇ活性の減弱を誘発し、ＣＤ４＋  Ｔ細胞の活性を増強し、結果としてＴｒｅｇを介した免疫抑制が逆転し、免疫刺激が増加する。ＧＩＴＲに特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＧＩＴＲの活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＧＩＴＲに結合する薬剤（例えば、抗ＧＩＴＲ抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＧＩＴＲアゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＧＩＴＲアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＴＲＸ５１８（Ｌｅａｐ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＭＫ−４１６６（Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．）、ＭＥＤＩ−１８７３（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）、ＩＮＣＡＧＮ１８７６（Ａｇｅｎｕｓ／Ｉｎｃｙｔｅ）、及びＦＰＡ１５４（Ｆｉｖｅ  Ｐｒｉｍｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）からなる群から選択されるＧＩＴＲ結合タンパク質（例えば、抗体）である。追加のＧＩＴＲ結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，３０９，３２１号明細書、同第９，２５５，１５２号明細書、同第９，２５５，１５１号明細書、同第９，２２８，０１６号明細書、同第９，０２８，８２３号明細書、同第８，７０９，４２４号明細書、同第８，３８８，９６７号明細書；米国特許出願公開第２０１６／０１４５３４２号明細書、同第２０１５／０３５３６３７号明細書、同第２０１５／００６４２０４号明細書、同第２０１４／０３４８８４１号明細書、同第２０１４／００６５１５２号明細書、同第２０１４／００７２５６６号明細書、同第２０１４／００７２５６５号明細書、同第２０１３／０１８３３２１号明細書、同第２０１３／０１０８６４１号明細書、同第２０１２／０１８９６３９号明細書；並びに国際公開第２０１６／０５４６３８号パンフレット、同第２０１６／０５７８４１号パンフレット、同第２０１６／０５７８４６号パンフレット、同第２０１５／１８７８３５号パンフレット、同第２０１５／１８４０９９号パンフレット、同第２０１５／０３１６６７号パンフレット、同第２０１１／０２８６８３号パンフレット、及び同第２００４／１０７６１８号パンフレットに開示されている。
【０２６５】
ＩＣＯＳ．誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ、ＣＤ２７８としても知られている）は、活性化されたＴ細胞で発現される。そのリガンドはＩＣＯＳＬであり、主にＢ細胞及び樹状細胞で発現される。ＩＣＯＳは、Ｔ細胞エフェクター機能において重要である。ＩＣＯＳの発現は、Ｔ細胞の活性化時にアップレギュレートされる（例えば、Ｆａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２１１（４）：７１５−２５を参照）。ＩＣＯＳに特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＩＣＯＳの活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＩＣＯＳに結合する薬剤（例えば、抗ＩＣＯＳ抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＩＣＯＳアゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＩＣＯＳアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＭＥＤＩ−５７０（ＪＭａｂ−１３６としても知られている、Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）、ＧＳＫ３３５９６０９（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ／ＩＮＳＥＲＭ）、及びＪＴＸ−２０１１（Ｊｏｕｎｃｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）からなる群から選択されるＩＣＯＳ結合タンパク質（例えば、抗体）である。追加のＩＣＯＳ結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，３７６，４９３号明細書、同第７，９９８，４７８号明細書、同第７，４６５，４４５号明細書、同第７，４６５，４４４号明細書；米国特許出願公開第２０１５／０２３９９７８号明細書、同第２０１２／００３９８７４号明細書、同第２００８／０１９９４６６号明細書、同第２００８／０２７９８５１号明細書；並びに国際公開第２００１／０８７９８１号パンフレットに開示されている。
【０２６６】
４−１ＢＢ．４−１ＢＢ（ＣＤ１３７としても知られている）は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体スーパーファミリーのメンバーである。４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）は、プライミングされたＣＤ４＋及びＣＤ８＋  Ｔ細胞、活性化ＮＫ細胞、ＤＣ、及び好中球で誘導的に発現されるＩＩ型膜貫通糖タンパク質であり、活性化マクロファージ、Ｂ細胞、及びＤＣに見られる４−１ＢＢリガンド（４−１ＢＢＬ）に結合するとＴ細胞共刺激分子として機能する。４−１ＢＢ受容体のライゲーションは、ＮＦ−κＢ、ｃ−Ｊｕｎ、及びｐ３８シグナル伝達経路の活性化をもたらし、特に、抗アポトーシス遺伝子ＢｃＬ−ｘ（Ｌ）及びＢｆｌ−１の発現をアップレギュレートすることによってＣＤ８＋  Ｔ細胞の生存を促進することが示されている。このように、４−１ＢＢは、最適以下の免疫応答を促進する、又は救済さえもするように機能する。４−１ＢＢに特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、４−１ＢＢの活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、４−１ＢＢに結合する薬剤（例えば、抗４−１ＢＢ抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターは４−１ＢＢアゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターは４−１ＢＢアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ウレルマブ（ＢＭＳ−６６３５１３としても知られている；Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）又はウトミルマブ（ｕｔｏｍｉｌｕｍａｂ）（Ｐｆｉｚｅｒ）である４−１ＢＢ結合タンパク質である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、４−１ＢＢ結合タンパク質（例えば、抗体）である。４−１ＢＢ結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，３８２，３２８号明細書、同第８，７１６，４５２号明細書、同第８，４７５，７９０号明細書、同第８，１３７，６６７号明細書、同第７，８２９，０８８号明細書、同第７，６５９，３８４号明細書；米国特許出願公開第２０１６／００８３４７４号明細書、同第２０１６／０１５２７２２号明細書、同第２０１４／０１９３４２２号明細書、同第２０１４／０１７８３６８号明細書、同第２０１３／０１４９３０１号明細書、同第２０１２／０２３７４９８号明細書、同第２０１２／０１４１４９４号明細書、同第２０１２／００７６７２２号明細書、同第２０１１／０１７７１０４号明細書、同第２０１１／０１８９１８９号明細書、同第２０１０／０１８３６２１号明細書、同第２００９／００６８１９２号明細書、同第２００９／００４１７６３号明細書、同第２００８／０３０５１１３号明細書、同第２００８／０００８７１６号明細書；及び国際公開第２０１６／０２９０７３号パンフレット、同第２０１５／１８８０４７号パンフレット、同第２０１５／１７９２３６号パンフレット、同第２０１５／１１９９２３号パンフレット、���第２０１２／０３２４３３号パンフレット、同第２０１２／１４５１８３号パンフレット、同第２０１１／０３１０６３号パンフレット、同第２０１０／１３２３８９号パンフレット、同第２０１０／０４２４３３号パンフレット、同第２００６／１２６８３５号パンフレット、同第２００５／０３５５８４号パンフレット、同第２００４／０１０９４７号パンフレット；並びにＭａｒｔｉｎｅｚ−Ｆｏｒｅｒｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９０（１２）：６６９４−７０６，ａｎｄ  Ｄｕｂｒｏｔ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５９（８）：１２２３−３３に開示されている。
【０２６７】
ｉｉ．抑制性免疫チェックポイント分子
ＡＤＯＲＡ２Ａ．アデノシンＡ２Ａ受容体（Ａ２Ａ４）は、７回膜貫通型アルファヘリックスを有するＧタンパク質共役型受容体（ＧＰＣＲ）ファミリーのメンバーであり、癌の治療法における重要なチェックポイントと見なされている。Ａ２Ａ受容体は、過剰反応性免疫細胞を負に調節することができる（例えば、Ｏｈｔａ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｎａｔｕｒｅ  ４１４（６８６６）：９１６−２０を参照）。ＡＤＯＲＡ２Ａに特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＡＤＯＲＡ２Ａの活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＡＤＯＲＡ２Ａに結合する薬剤（例えば、抗ＡＤＯＲＡ２Ａ抗体）である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＡＤＯＲＡ２Ａ結合タンパク質（例えば、抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＡＤＯＲＡ２Ａアゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターは、ＡＤＯＲＡ２Ａアンタゴニストである。ＡＤＯＲＡ２Ａ結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１４／０３２２２３６号明細書に開示されている。
【０２６８】
Ｂ７−Ｈ３．Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６としても知られている）は、Ｔ細胞応答を共刺激又は下方調節する分子群であるＢ７スーパーファミリーに属している。Ｂ７−Ｈ３は、ヒトＴ細胞応答を強力且つ一貫して下方調節する（例えば、Ｌｅｉｔｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３９（７）：１７５４−６４を参照）。Ｂ７−Ｈ３に特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、Ｂ７−Ｈ３の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、Ｂ７−Ｈ３に結合する薬剤（例えば、抗Ｂ７−Ｈ３抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＢ７−Ｈ３アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＢ７−Ｈ３アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＤＳ−５５７３（Ｄａｉｉｃｈｉ  Ｓａｎｋｙｏ，Ｉｎｃ．）、エノブリツズマブ（ｅｎｏｂｌｉｔｕｚｕｍａｂ）（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ，Ｉｎｃ．）、及び８Ｈ９（Ｓｌｏａｎ  Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ；ｓｅｅ，ｅ．ｇ．，Ａｈｍｅｄ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２９０（５０）：３００１８−２９）からなる群から選択される抗Ｂ７−Ｈ３結合タンパク質である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、Ｂ７−Ｈ３結合タンパク質（例えば、抗体）である。Ｂ７−Ｈ３結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，３７１，３９５号明細書、同第９，１５０，６５６号明細書、同第９，０６２，１１０号明細書、同第８，８０２，０９１号明細書、同第８，５０１，４７１号明細書、同第８，４１４，８９２号明細書；米国特許出願公開第２０１５／０３５２２２４号明細書、同第２０１５／０２９７７４８号明細書、同第２０１５／０２５９４３４号明細書、同第２０１５／０２７４８３８号明細書、同第２０１４／０３２８７５号明細書、同第２０１４／０１６１８１４号明細書、同第２０１３／０２８７７９８号明細書、同第２０１３／００７８２３４号明細書、同第２０１３／０１４９２３６号明細書、同第２０１２／０２９４７９６０号明細書、同第２０１０／０１４３２４５号明細書、同第２００２／０１０２２６４号明細書；国際公開第２０１６／１０６００４号パンフレット、同第２０１６／０３３２２５号パンフレット、同第２０１５／１８１２６７号パンフレット、同第２０１４／０５７６８７号パンフレット、同第２０１２／１４７７１３号パンフレット、同第２０１１／１０９４００号パンフレット、同第２００８／１１６２１９号パンフレット、同第２００３／０７５８４６号パンフレット、同第２００２／０３２３７５号パンフレット；並びにＳｈｉ  ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．Ｒｅｐ．１４（１）：９４３−８に開示されている。
【０２６９】
Ｂ７−Ｈ４．Ｂ７−Ｈ４（Ｏ８Ｅ、ＯＶ０６４、及びＶセットドメインを含むＴ細胞活性化阻害剤（ＶＴＣＮ１）としても知られている）は、Ｂ７スーパーファミリーに属している。細胞周期を停止させることにより、Ｔ細胞のＢ７−Ｈ４ライゲーションは、増殖、サイトカインの分泌、及び細胞毒性の発生に対して顕著な抑制効果を有する。マウスへのＢ７−Ｈ４Ｉｇの投与は、抗原特異的Ｔ細胞応答を阻害するが、特定のモノクローナル抗体による内因性Ｂ７−Ｈ４の阻害は、Ｔ細胞応答を促進する（例えば、Ｓｉｃａ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １８（６）：８４９−６１を参照）。Ｂ７−Ｈ４に特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、Ｂ７−Ｈ４の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、Ｂ７−Ｈ４に結合する薬剤（例えば、抗Ｂ７−Ｈ４抗体）である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、Ｂ７−Ｈ４結合タンパク質（例えば、抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＢ７−Ｈ４アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＢ７−Ｈ４アンタゴニストである。Ｂ７−Ｈ４結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，２９６，８２２号明細書、同第８，６０９，８１６号明細書、同第８，７５９，４９０号明細書、同第８，３２３，６４５号明細書；米国特許出願公開第２０１６／０１５９９１０号明細書、同第２０１６／００１７０４０号明細書、同第２０１６／０１６８２４９号明細書、同第２０１５／０３１５２７５号明細書、同第２０１４／０１３４１８０号明細書、同第２０１４／０３２２１２９号明細書、同第２０１４／０３５６３６４号明細書、同第２０１４／０３２８７５１号明細書、同第２０１４／０２９４８６１号明細書、同第２０１４／０３０８２５９号明細書、同第２０１３／００５８８６４号明細書、同第２０１１／００８５９７０号明細書、同第２００９／００７４６６０号明細書、同第２００９／０２０８４８９号明細書；並びに国際公開第２０１６／０４０７２４号パンフレット、同第２０１６／０７０００１号パンフレット、同第２０１４／１５９８３５号パンフレット、同第２０１４／１００４８３号パンフレット、同第２０１４／１００４３９号パンフレット、同第２０１３／０６７４９２号パンフレット、同第２０１３／０２５７７９号パンフレット、同第２００９／０７３５３３号パンフレット、同第２００７／０６７９９１号パンフレット、及び同第２００６／１０４６７７号パンフレットに開示されている。
【０２７０】
ＢＴＬＡ．ＣＤ２７２としても知られているＢ及びＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）は、そのリガンドとしてＨＶＥＭ（Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ  Ｅｎｔｒｙ  Ｍｅｄｉａｔｏｒ）を有する。ＢＴＬＡの表面発現は、ヒトＣＤ８＋  Ｔ細胞がナイーブ細胞からエフェクター細胞の表現型に分化する際に徐々にダウンレギュレートされるが、腫瘍特異的なヒトＣＤ８＋  Ｔ細胞は高レベルのＢＴＬＡを発現する（例えば、Ｄｅｒｒｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１２０（１）：１５７−６７を参照）。ＢＴＬＡに特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＢＴＬＡの活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＢＴＬＡに結合する薬剤（例えば、抗ＢＴＬＡ抗体）である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＢＴＬＡ結合タンパク質（例えば、抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＢＴＬＡアゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＢＴＬＡアンタゴニストである。ＢＴＬＡ結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，３４６，８８２号明細書、同第８，５８０，２５９号明細書、同第８，５６３，６９４号明細書、同第８，２４７，５３７号明細書；米国特許出願公開第２０１４／００１７２５５号明細書、同第２０１２／０２８８５００号明細書、同第２０１２／０１８３５６５号明細書、同第２０１０／０１７２９００号明細書；並びに国際公開第２０１１／０１４４３８号パンフレット及び同第２００８／０７６５６０号パンフレットに開示されている。
【０２７１】
ＣＴＬＡ−４．細胞傷害性Ｔリンパ球抗原−４（ＣＴＬＡ−４）は、免疫調節性ＣＤ２８−Ｂ７免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーであり、ナイーブ及び休止Ｔリンパ球に作用して、Ｂ７依存性経路及びＢ７非依存性経路の両方を介して免疫抑制を促進する（例えば、Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．，Ａｒｔｉｃｌｅ  ＩＤ  ４６８３６０７，１４  ｐｐ．を参照）。ＣＴＬＡ−４は、ＣＤ１５２とも呼ばれることが知られている。ＣＴＬＡ−４は、Ｔ細胞活性化の閾値を調節する。例えば、Ｇａｊｅｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６（６）：３９００−７を参照されたい。ＣＴＬＡ−４に特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＴＬＡ−４の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＴＬＡ−４に結合する薬剤（例えば、抗ＣＴＬＡ−４抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＣＴＬＡ−４アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＣＴＬＡ−４アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ；Ｍｅｄａｒｅｘ／Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、トレメリムマブ（以前はチシリムマブ；Ｐｆｉｚｅｒ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＪＭＷ−３Ｂ３（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ａｂｅｒｄｅｅｎ）、及びＡＧＥＮ１８８４（Ａｇｅｎｕｓ）からなる群から選択されるＣＴＬＡ−４結合タンパク質（例えば、抗体）である。追加のＣＴＬＡ−４結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第８，６９７，８４５号明細書；米国特許出願公開第２０１４／０１０５９１４号明細書、同第２０１３／０２６７６８８号明細書、同第２０１２／０１０７３２０号明細書、同第２００９／０１２３４７７号明細書；並びに国際公開第２０１４／２０７０６４号パンフレット、同第２０１２／１２０１２５号パンフレット、同第２０１６／０１５６７５号パンフレット、同第２０１０／０９７５９７号パンフレット、同第２００６／０６６５６８号パンフレット、及び同第２００１／０５４７３２号パンフレットに開示されている。
【０２７２】
ＩＤＯ．インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）は、免疫抑制性を有するトリプトファン異化酵素である。もう１つの重要な分子は、ＴＤＯ、トリプトファン２，３−ジオキシゲナーゼである。ＩＤＯは、Ｔ細胞及びＮＫ細胞を抑制し、Ｔｒｅｇ及び骨髄由来サプレッサー細胞を生成して活性化し、そして腫瘍の血管新生を促進することが知られている。参照により本明細書に組み込まれる、Ｐｒｅｎｄｅｒｇａｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．６３（７）：７２１−３５。
【０２７３】
ＩＤＯに特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＩＤＯの活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＩＤＯに結合する薬剤（例えば、抗ＩＤＯ抗体などのＩＤＯ結合タンパク質）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＩＤＯアゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＩＤＯアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ノルハルマン、ロスマリン酸、ＣＯＸ−２阻害剤、アルファ−メチル−トリプトファン、及びエパカドスタットからなる群から選択される。一実施形態では、モジュレーターはエパカドスタットである。
【０２７４】
ＫＩＲ．キラー免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の機能を負に調節して、ＮＫを介した細胞溶解から細胞を保護するＭＨＣＩ結合分子の多様なレパートリーを含む。ＫＩＲは、一般的にはＮＫ細胞で発現されるが、腫瘍特異的ＣＴＬでも検出されている。ＫＩＲに特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＫＩＲの活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＫＩＲに結合する薬剤（例えば、抗ＫＩＲ抗体）である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＫＩＲ結合タンパク質（例えば、抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＫＩＲアゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＫＩＲアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、リリルマブ（ＢＭＳ−９８６０１５としても知られている；Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）である。追加のＫＩＲ結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第８，９８１，０６５号明細書、同第９，０１８，３６６号明細書、同第９，０６７，９９７号明細書、同第８，７０９，４１１号明細書、同第８，６３７，２５８号明細書、同第８，６１４，３０７号明細書、同第８，５５１，４８３号明細書、同第８，３８８，９７０号明細書、同第８，１１９，７７５号明細書；米国特許出願公開第２０１５／０３４４５７６号明細書、同第２０１５／０３７６２７５号明細書、同第２０１６／００４６７１２号明細書、同第２０１５／０１９１５４７号明細書、同第２０１５／０２９０３１６号明細書、同第２０１５／０２８３２３４号明細書、同第２０１５／０１９７５６９号明細書、同第２０１４／０１９３４３０号明細書、同第２０１３／０１４３２６９号明細書、同第２０１３／０２８７７７０号明細書、同第２０１２／０２０８２３７号明細書、同第２０１１／０２９３６２７号明細書、同第２００９／００８１２４０号明細書、同第２０１０／０１８９７２３号明細書；並びに国際公開第２０１６／０６９５８９号パンフレット、同第２０１５／０６９７８５号パンフレット、同第２０１４／０６６５３２号パンフレット、同第２０１４／０５５６４８号パンフレット、同第２０１２／１６０４４８号パンフレット、同第２０１２／０７１４１１号パンフレット、同第２０１０／０６５９３９号パンフレット、同第２００８／０８４１０６号パンフレット、同第２００６／０７２６２５号パンフレット、同第２００６／０７２６２６号パンフレット、及び同第２００６／００３１７９号パンフレットに開示されている。
【０２７５】
ＬＡＧ−３．リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ−３、ＣＤ２２３としても知られている）は、ＭＨＣＩＩに競合的に結合して、Ｔ細胞活性化の共阻害チェックポイントとして機能するＣＤ４関連膜貫通タンパク質である（例えば、Ｇｏｌｄｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｄｒａｋｅ（２０１１）Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３４４：２６９−７８を参照）。ＬＡＧ−３に特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＬＡＧ−３の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＬＡＧ−３に結合する薬剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＬＡＧ−３アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＬＡＧ−３アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ；以前はランブロリズマブ；Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．，Ｉｎｃ．）、ニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ；Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ピジリズマブ（ＣＴ−０１１、ＣｕｒｅＴｅｃｈ）、ＳＨＲ−１２１０（Ｉｎｃｙｔｅ／Ｊｉａｎｇｓｕ  Ｈｅｎｇｒｕｉ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ−５１４としても知られている；Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ  Ｉｎｃ．／Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）、ＰＤＲ００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＢＧＢ−Ａ３１７（ＢｅｉＧｅｎｅ  Ｌｔｄ．）、ＴＳＲ−０４２（ＡＮＢ０１１としても知られている；ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏ／Ｔｅｓａｒｏ，Ｉｎｃ．）、ＲＥＧＮ２８１０（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．／Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）、及びＰＦ−０６８０１５９１（Ｐｆｉｚｅｒ）からなる群から選択されるＬＡＧ−３結合タンパク質（例えば、抗体）である。追加のＰＤ−１結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，１８１，３４２号明細書、同第８，９２７，６９７号明細書、同第７，４８８，８０２号明細書、同第７，０２９，６７４号明細書；米国特許出願公開第２０１５／０１５２１８０号明細書、同第２０１１／０１７１２１５号明細書、同第２０１１／０１７１２２０号明細書；並びに国際公開第２００４／０５６８７５号パンフレット、同第２０１５／０３６３９４号パンフレット、同第２０１０／０２９４３５号パンフレット、同第２０１０／０２９４３４号パンフレット、同第２０１４／１９４３０２号パンフレットに開示されている。
【０２７６】
ＰＤ−１．プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１、ＣＤ２７９及びＰＤＣＤ１としても知られている）は、免疫系を負に調節する抑制性受容体である。主にナイーブＴ細胞に影響を与えるＣＴＬＡ−４とは対照的に、ＰＤ−１は、免疫細胞でより広く発現され、末梢組織及び腫瘍微小環境で成熟Ｔ細胞活性を調節する。ＰＤ−１は、Ｔ細胞受容体シグナル伝達を妨げることによってＴ細胞応答を阻害する。ＰＤ−１は、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２の２つのリガンドを有する。ＰＤ−１に特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＰＤ−１の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＰＤ−１に結合する薬剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＰＤ−１アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＰＤ−１アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ；以前はランブロリズマブ；Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．，Ｉｎｃ．）、ニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ；Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ピジリズマブ（ＣＴ−０１１，ＣｕｒｅＴｅｃｈ）、ＳＨＲ−１２１０（Ｉｎｃｙｔｅ／Ｊｉａｎｇｓｕ  Ｈｅｎｇｒｕｉ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ−５１４としても知られている；Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ  Ｉｎｃ．／Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）、ＰＤＲ００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＢＧＢ−Ａ３１７（ＢｅｉＧｅｎｅ  Ｌｔｄ．）、ＴＳＲ−０４２（ＡＮＢ０１１としても知られている；ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏ／Ｔｅｓａｒｏ，Ｉｎｃ．）、ＲＥＧＮ２８１０（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．／Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）、及びＰＦ−０６８０１５９１（Ｐｆｉｚｅｒ）からなる群から選択されるＰＤ−１結合タンパク質（例えば、抗体）である。追加のＰＤ−１結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，１８１，３４２号明細書、同第８，９２７，６９７号明細書、同第７，４８８，８０２号明細書、同第７，０２９，６７４号明細書；米国特許出願公開第２０１５／０１５２１８０号明細書、同第２０１１／０１７１２１５号明細書、同第２０１１／０１７１２２０号明細書；並びに国際公開第２００４／０５６８７５号パンフレット、同第２０１５／０３６３９４号パンフレット、同第２０１０／０２９４３５号パンフレット、同第２０１０／０２９４３４号パンフレット、同第２０１４／１９４３０２号パンフレットに開示されている。
【０２７７】
ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−Ｌ２．ＰＤリガンド１（ＰＤ−Ｌ１、Ｂ７−Ｈ１としても知られている）及びＰＤリガンド２（ＰＤ−Ｌ２、ＰＤＣＤ１ＬＧ２、ＣＤ２７３、及びＢ７−ＤＣとしても知られている）はＰＤ−１受容体に結合する。両方のリガンドは、ＣＤ２８及びＣＴＬＡ−４と相互作用するＢ７−１及びＢ７−２タンパク質と同じＢ７ファミリーに属している。ＰＤ−Ｌ１は、例えば、上皮細胞、内皮細胞、免疫細胞を含む多くの細胞型で発現し得る。ＰＤＬ−１のライゲーションは、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、及びＩＬ−２の産生を減少させ、Ｔ細胞の反応性及び増殖の低下並びに抗原特異的Ｔ細胞アネルギーに関連する抗炎症性サイトカインであるＩＬ１０の産生を刺激する。ＰＤＬ−２は、主に抗原提示細胞（ＡＰＣ）で発現される。ＰＤＬ２ライゲーションもまたＴ細胞の抑制をもたらすが、ＰＤＬ−１−ＰＤ−１相互作用がＧ１／Ｇ２期での細胞周期停止を介して増殖を阻害する場合、ＰＤＬ２−ＰＤ−１結合は、低い抗原濃度でＢ７：ＣＤ２８シグナルをブロックして、高い抗原濃度でサイトカインの産生を減少させることによって、ＴＣＲを介したシグナル伝達を阻害することが示されている。ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２に特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。
【０２７８】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＰＤ−Ｌ１の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＰＤ−Ｌ１に結合する薬剤（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＰＤ−Ｌ１アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＰＤ−Ｌ１アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ−４７３６としても知られている；ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ／Ｃｅｌｇｅｎｅ  Ｃｏｒｐ．／Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）、アテゾリズマブ（Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ；ＭＰＤＬ３２８０Ａ及びＲＧ７４４６としても知られている；Ｇｅｎｅｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃとしても知られている；Ｍｅｒｃｋ  Ｓｅｒｏｎｏ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ＭＤＸ−１１０５（Ｍｅｄａｒｅｘ／Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｅｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ＡＭＰ−２２４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ，ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ＬＹ３３０００５４（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏ．）からなる群から選択されるＰＤ−Ｌ１結合タンパク質（例えば、抗体又はＦｃ融合タンパク質）である。追加のＰＤ−Ｌ１結合タンパク質は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１６／００８４８３９号明細書、同第２０１５／０３５５１８４号明細書、同第２０１６／０１７５３９７号明細書、及び国際公開第２０１４／１０００７９号パンフレット、同第２０１６／０３０３５０号パンフレット、同第２０１３１８１６３４号パンフレットに開示されている。
【０２７９】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＰＤ−Ｌ２の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＰＤ−Ｌ２に結合する薬剤（例えば、抗ＰＤ−Ｌ２抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＰＤ−Ｌ２アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＰＤ−Ｌ２アンタゴニストである。ＰＤ−Ｌ２結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，２５５，１４７号明細書、同第８，１８８，２３８号明細書；米国特許出願公開第２０１６／０１２２４３１号明細書、同第２０１３／０２４３７５２号明細書、同第２０１０／０２７８８１６号明細書、同第２０１６／０１３７７３１号明細書、同第２０１５／０１９７５７１号明細書、同第２０１３／０２９１１３６号明細書、同第２０１１／０２７１３５８号明細書；並びに国際公開第２０１４／０２２７５８号パンフレット、及び同第２０１０／０３６９５９号パンフレットに開示されている。
【０２８０】
ＴＩＭ−３．Ｔ細胞免疫グロブリンムチン３（ＴＩＭ−３、Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体（ＨＡＶＣＲ２）としても知られている）は、Ｓ型レクチンガレクチン−９（Ｇａｌ−９）に結合するＩ型糖タンパク質受容体である。ＴＩＭ−３は、リンパ球、肝臓、小腸、胸腺、腎臓、脾臓、肺、筋肉、網状赤血球、及び脳組織に広く発現されるリガンドである。Ｔｉｍ−３は当初、ＩＦＮ−γを分泌するＴｈ１及びＴｃ１細胞で選択的に発現されるとして同定された（Ｍｏｎｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｎａｔｕｒｅ  ４１５：５３６−４１）。ＴＩＭ−３受容体によるＧａｌ−９の結合は、下流のシグナル伝達を引き起こしてＴ細胞の生存及び機能を負に調節する。ＴＩＭ−３に特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＴＩＭ−３の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＴＩＭ−３に結合する薬剤である（例えば、抗ＴＩＭ−３抗体）。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＴＩＭ−３アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＴＩＭ−３アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＴＳＲ−０２２（ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏ／Ｔｅｓａｒｏ，Ｉｎｃ．）及びＭＧＢ４５３（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）からなる群から選択される抗ＴＩＭ−３抗体である。追加のＴＩＭ−３結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，１０３，８３２号明細書、同第８，５５２，１５６号明細書、同第８，６４７，６２３号明細書、同第８，８４１，４１８号明細書；米国特許出願公開第２０１６／０２００８１５号明細書、同第２０１５／０２８４４６８号明細書、同第２０１４／０１３４６３９号明細書、同第２０１４／００４４７２８号明細書、同第２０１２／０１８９６１７号明細書、同第２０１５／００８６５７４号明細書、同第２０１３／００２２６２３号明細書；並びに国際公開第２０１６／０６８８０２号パンフレット、同第２０１６／０６８８０３号パンフレット、同第２０１６／０７１４４８号パンフレット、同第２０１１／１５５６０７号パンフレット、及び同第２０１３／００６４９０号パンフレットに開示されている。
【０２８１】
ＶＩＳＴＡ．Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ、血小板受容体Ｇｉ２４としても知られている）は、Ｔ細胞応答を負に調節するＩｇスーパーファミリーリガンドである。例えば、Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０８：５７７−９２を参照されたい。ＡＰＣで発現したＶＩＳＴＡはＣＤ４＋及びＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖及びサイトカインの産生を直接抑制する（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．２０８（３）：５７７−９２）。ＶＩＳＴＡに特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＶＩＳＴＡの活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＶＩＳＴＡに結合する薬剤（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＶＩＳＴＡアゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＶＩＳＴＡアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＴＳＲ−０２２（ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏ／Ｔｅｓａｒｏ，Ｉｎｃ．）及びＭＧＢ４５３（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）からなる群から選択されるＶＩＳＴＡ結合タンパク質（例えば、抗体）である。ＶＩＳＴＡ結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１６／００９６８９１号明細書、同第２０１６／００９６８９１号明細書；並びに国際公開第２０１４／１９０３５６号パンフレット、同第２０１４／１９７８４９号パンフレット、同第２０１４／１９０３５６号パンフレット、及び同第２０１６／０９４８３７号パンフレットに開示されている。
【０２８２】
本明細書に開示される方法で使用できる追加の免疫療法剤には、限定されるものではないが、トール様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、細胞ベースの治療法、サイトカイン、及び癌ワクチンが含まれる。
【０２８３】
ＴＬＲアゴニスト
ＴＬＲは、微生物に由来する構造的に保存された分子を認識する単回膜貫通非触媒受容体である。ＴＬＲは、インターロイキン１受容体と共に、「インターロイキン１受容体／Ｔｏｌｌ様受容体スーパーファミリー」として知られている受容体スーパーファミリーを形成する。このファミリーのメンバーは、細胞外ロイシンリッチリピート（ＬＲＲ）ドメイン、膜近傍システイン残基の保存されたパターン、並びにＭｙＤ８８、ＴＩＲドメイン含有アダプター（ＴＲＡＰ）、及びＩＦＮβを誘導するＴＩＲドメイン含有アダプター（ＴＲＩＦ）を含むＴＩＲドメイン含有アダプターを動員することによって下流シグナル伝達のプラットフォームを形成する細胞質内シグナル伝達ドメインによって構造的に特徴づけられる（Ｏ'Ｎｅｉｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ７，３５３）。
【０２８４】
ＴＬＲには、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、及びＴＬＲ１０が含まれる。ＴＬＲ２は、ペプチドグリカン、細菌性リポペプチド、リポテイコ酸、マイコバクテリアリポアラビノマンナン、及び酵母の細胞壁成分を含む多数の微生物産物に対する細胞応答を仲介する。ＴＬＲ４は、パターン認識受容体（ＰＲＲ）ファミリーに属する膜貫通タンパク質である。その活性化は、細胞内シグナル伝達経路ＮＦ−κＢ、及び自然免疫系の活性化に関与する炎症性サイトカインの産生をもたらす。ＴＬＲ５は、移動性細菌の侵入から細菌フラジェリンを認識することが知られており、炎症性腸疾患を含む多くの疾患の発症に関与していることが示されている。
【０２８５】
ＴＬＲアゴニストは当技術分野で公知であり、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１４／００３０２９４号明細書に記載されている。例示的なＴＬＲ２アゴニストには、マイコバクテリア細胞壁糖脂質、リポアラビノマンナン（ＬＡＭ）及びマンノシル化ホスファチジルイノシトール（ＰＩＩＭ）、ＭＡＬＰ−２、及びＰａｍ３Ｃｙｓ、及びそれらの合成変異体が含まれる。例示的なＴＬＲ４アゴニストには、リポ多糖又はその合成変異体（例えば、ＭＰＬ及びＲＣ５２９）及びリピドＡ又はその合成変異体（例えば、アミノアルキルグルコサミニド４−ホスフェート）が含まれる。例えば、Ｃｌｕｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，ｐ．３０４４−３０５２：７３；Ｌｅｍｂｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１８０，７５７４−７５８１；ａｎｄ  Ｅｖａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ  ２：２１９−２９を参照されたい。例示的なＴＬＲ５アゴニストには、フラジェリン又はその合成変異体（例えば、ＴＬＲ５活性化に必須ではないフラジェリンの部分を除去することによって作製された、免疫原性が低下した薬理学的に最適化されたＴＬＲ５アゴニスト（ＣＢＬＢ５０２など））が含まれる。
【０２８６】
追加のＴＬＲアゴニストには、コーリーの毒（Ｃｏｌｅｙ'ｓ  ｔｏｘｉｎ）及びカルメットゲラン桿菌（ＢＣＧ）が含まれる。コーリーの毒は、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）種及びセラチア・マルセッセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）種の死菌からなる混合物である。Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２６（６Ａ）：３９９７−４００２を参照されたい。ＢＣＧは、弱毒化された生きたウシ結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｏｖｉｓ）の菌株から調製される。Ｖｅｎｋａｔａｓｗａｍｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｖａｃｃｉｎｅ．３０（６）：１０３８−１０４９を参照されたい。
【０２８７】
細胞ベースの治療法
癌処置のための細胞ベースの治療法には、対象への免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ナチュラルキラー細胞、及び樹状細胞）の投与が含まれる。自家細胞ベースの治療法では、免疫細胞は、それらが投与される同じ対象に由来する。同族異系細胞ベースの治療法では、免疫細胞は、ある対象に由来し、別の対象に投与される。免疫細胞は、対象に投与する前に、例えばサイトカインでの処置によって活性化することができる。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞免疫療法でのように、対象への投与の前に遺伝子組換えされている。
【０２８８】
いくつかの実施形態では、細胞ベースの治療法は、養子細胞移植（ＡＣＴ）を含む。ＡＣＴは、典型的には３つの部分：リンパ球枯渇、細胞投与、及び高用量のＩＬ−２による治療法から構成される。ＡＣＴで投与できる細胞の種類には、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）導入Ｔ細胞、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞が含まれる。
【０２８９】
腫瘍浸潤リンパ球は、乳癌を含む多くの固形腫瘍で観察されている免疫細胞である。腫瘍浸潤リンパ球は、細胞傷害性Ｔ細胞とヘルパーＴ細胞の混合物、並びにＢ細胞、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、及び樹状細胞を含む細胞の集団である。自家ＴＩＬ治療法の一般的な手順は次のとおりである：（１）切除された腫瘍を断片に消化する；（２）各断片をＩＬ−２で増殖させ、リンパ球の増殖により腫瘍を破壊する；（３）リンパ球の純粋な集団の存在の確認後、これらのリンパ球を増殖させる；及び（４）１０１１個の細胞まで増殖した後、リンパ球を患者に注入する。その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３４８（６２３０）：６２−６８を参照されたい。
【０２９０】
ＴＣＲが形質導入されたＴ細胞は、腫瘍特異的ＴＣＲの遺伝子誘導を介して作製される。これは、多くの場合、特定の抗原特異的ＴＣＲをレトロウイルス骨格にクローニングすることによって行われる。血液が患者から採取され、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）が抽出される。ＰＢＭＣは、ＩＬ−２の存在下、ＣＤ３で刺激され、抗原特異的ＴＣＲをコードするレトロウイルスで形質導入される。これらの形質導入ＰＢＭＣは、インビトロでさらに増殖され、患者に注入される。その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｒｏｂｂｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２１（５）：１０１９−１０２７を参照されたい。
【０２９１】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、細胞外抗原認識ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞質シグナル伝達ドメイン（ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、及び４−１ＢＢなど）を含む組換え受容体である。ＣＡＲは、抗原結合機能及びＴ細胞活性化機能の両方を備えている。従って、ＣＡＲ発現Ｔ細胞は、糖脂質、炭水化物、及びタンパク質を含む幅広い細胞表面抗原を認識し、細胞質共刺激の活性化を介してこれらの抗原を発現する悪性細胞を攻撃することができる。その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｐａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１８，Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  １７：９１を参照されたい。
【０２９２】
いくつかの実施形態では、細胞ベースの治療法は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞ベースの治療法である。ＮＫ細胞は、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子の発現の事前のいかなる感作も制限もすることなく、腫瘍細胞を殺す能力を有する大顆粒リンパ球である。Ｕｐｐｅｎｄａｈｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１７，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ８：１８２５を参照されたい。高用量ＩＬ−２治療法による自家リンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞の養子移入は、ヒトの臨床試験で評価されている。ＬＡＫ免疫療法と同様に、サイトカイン誘導キラー（ＣＩＫ）細胞は、抗ＣＤ３  ｍＡｂ、ＩＦＮ−γ、及びＩＬ−２の刺激による末梢血単核細胞培養から生じる。ＣＩＫ細胞は、混合Ｔ−ＮＫ表現型（ＣＤ３＋ＣＤ５６＋）を特徴とし、卵巣癌及び子宮頸癌に対してＬＡＫ細胞と比較して細胞毒性の増強を示す。一次減量手術及び補助カルボプラチン／パクリタキセル化学療法後の自家ＣＩＫ細胞の養子移入を調べるヒト臨床試験も行われている。Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ３７（２）：１１６−１２２を参照されたい。
【０２９３】
いくつかの実施形態では、細胞ベースの治療法は、樹状細胞ベースの免疫療法である。腫瘍溶解物で処置された樹状細胞（ＤＣ）のワクチン接種は、インビトロ及びインビボの両方で治療的抗腫瘍免疫応答を高めることが示されている。Ｊｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１８，Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  １１（３）：６８６−６９０を参照されたい。ＤＣは、抗原を捕捉して処理し、リンパ器官に移動し、リンパ球共刺激分子を発現し、免疫応答を開始するサイトカインを分泌する。ＤＣはまた、腫瘍関連抗原に特異的な受容体を発現する免疫エフェクター細胞（Ｔ細胞）を刺激し、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞などの免疫抑制因子の数を減少させる。例えば、腫瘍細胞溶解物−ＤＣハイブリッドに基づく腎細胞癌（ＲＣＣ）のＤＣワクチン接種戦略は、前臨床及び臨床試験で治療可能性を示した。Ｌｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ５６：１８１７−１８２９を参照されたい。
【０２９４】
サイトカイン
ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、及びＩＬ−２１を含むいくつかのサイトカインは、ＮＫ細胞及びＴ細胞などの免疫細胞の活性化のための癌の処置に使用されてきた。ＩＬ−２は、抗腫瘍免疫を誘導することを期待して、臨床的に使用された最初のサイトカインの１つであった。高用量の単剤として、ＩＬ−２は、腎細胞癌（ＲＣＣ）及び転移性黒色腫の一部の患者に寛解をもたらす。低用量のＩＬ−２も調べられ、生物学的活性を維持しながら毒性を低減するように、ＩＬ−２αβγ受容体（ＩＬ−２Ｒαβγ）を選択的に連結することを目的としている。その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｒｏｍｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃａ，Ｖｏｌｕｍｅ  ２０１４，Ａｒｔｉｃｌｅ  ＩＤ  ２０５７９６，１８  ｐａｇｅｓを参照されたい。
【０２９５】
インターロイキン−１５（ＩＬ−１５）は、インターロイキン−２（ＩＬ−２）と構造的に類似したサイトカインである。ＩＬ−２と同様に、ＩＬ−１５は、ＩＬ−２／ＩＬ−１５受容体ベータ鎖（ＣＤ１２２）及び共通のガンマ鎖（ガンマ−Ｃ、ＣＤ１３２）から構成される複合体に結合し、この複合体を介してシグナルを伝達する。組換えＩＬ−１５は、固形腫瘍（例えば、黒色腫、腎細胞癌）の処置、及び癌患者の養子移入後のＮＫ細胞の支援について評価されている。上で引用したＲｏｍｅｅ  ｅｔ  ａｌ．を参照されたい。
【０２９６】
ＩＬ−１２は、ｐ３５及びｐ４０サブユニット（ＩＬ−１２α及びβ鎖）から構成されるヘテロ二量体サイトカインであり、ＮＫ細胞の細胞毒性を増強する能力に基づいて、最初は「ＮＫ細胞刺激因子（ＮＫＳＦ）」として同定された。病原体に接触すると、ＩＬ−１２は、活性化樹状細胞及びマクロファージによって放出され、主に活性化Ｔ細胞及びＮＫ細胞で発現するその同族受容体に結合する。多くの前臨床試験により、ＩＬ−１２は抗腫瘍候補であることが示唆されている。上で引用したＲｏｍｅｅ  ｅｔ  ａｌ．を参照されたい。
【０２９７】
ＩＬ−１８は、炎症性ＩＬ−１ファミリーのメンバーであり、ＩＬ−１２と同様に、活性化食細胞から分泌される。ＩＬ−１８は、前臨床動物モデルで有意な抗腫瘍活性を示し、ヒトの臨床試験で評価されている。Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １２：４２６５−４２７３を参照されたい。
【０２９８】
ＩＬ−２１は、ＮＫ細胞及びＣＤ８＋  Ｔ細胞を刺激する能力があるため、抗腫瘍免疫療法に使用されてきた。エクスビボでのＮＫ細胞の増殖では、膜結合型ＩＬ−２１がＫ５６２刺激細胞で発現され、効果的な結果が得られている。Ｄｅｎｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ７（１）ｅ３０２６４を参照されたい。組換えヒトＩＬ−２１は、可溶性ＣＤ２５を増加させ、ＣＤ８＋細胞上でのパーフォリン及びグランザイムＢの発現を誘導することも示された。ＩＬ−２１は、固形腫瘍の処置に関するいくつかの臨床試験で評価されている。上で引用したＲｏｍｅｅ  ｅｔ  ａｌ．を参照されたい。
【０２９９】
癌ワクチン
治療用癌ワクチンは、適切なアジュバントの助けを借りて、癌に対する患者自身の免疫応答、特にＣＤ８＋  Ｔ細胞媒介応答を強化することによって癌細胞を除去する。癌ワクチンの治療効果は、正常細胞に対する腫瘍細胞による腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）の差次的発現に依存している。ＴＡＡは、細胞タンパク質に由来し、免疫寛容又は自己免疫効果を回避するために、主に又は選択的に癌細胞に発現させる必要がある。Ｃｉｒｃｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５，Ｖａｃｃｉｎｅｓ    ３（３）：５４４−５５５を参照されたい。癌ワクチンには、例えば、樹状細胞（ＤＣ）ベースのワクチン、ペプチド／タンパク質ワクチン、遺伝子ワクチン、及び腫瘍細胞ワクチンが含まれる。Ｙｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１８，Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ９（２）：２６３−２６８を参照されたい。
【０３００】
鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤及び免疫療法剤を含む併用療法
鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤を少なくとも１つの免疫チェックポイントモジュレーターと組み合わせて対象に投与することによる腫瘍性障害の処置のための方法が提供される。特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、対象の免疫応答を刺激する。例えば、いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、刺激性免疫チェックポイント（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、又は４−１ＢＢ）の発現若しくは活性を刺激又は増加させる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、抑制性免疫チェックポイント（例えば、Ａ２Ａ４、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ−４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ−３、又はＶＩＳＴＡ）の発現若しくは活性を阻害又は減少させる。
【０３０１】
特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、４−１ＢＢ、Ａ２Ａ４、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ−４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ−３、及びＶＩＳＴＡからなる群から選択される免疫チェックポイント分子を標的とする。特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、４−１ＢＢ、Ａ２Ａ４、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ−３、及びＶＩＳＴＡからなる群から選択される免疫チェックポイント分子を標的とする。特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ１、及びＰＤ−１からなる群から選択される免疫チェックポイント分子を標的とする。さらに特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−１から選択される免疫チェックポイント分子を標的とする。
【０３０２】
いくつかの実施形態では、２つ以上（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれ以上）の免疫チェックポイントモジュレーターが対象に投与される。２つ以上の免疫チェックポイントモジュレーターが投与される場合、モジュレーターは、それぞれが刺激性免疫チェックポイント分子を標的とするか、又はそれぞれが抑制性免疫チェックポイント分子を標的とすることができる。他の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターには、刺激性免疫チェックポイントを標的とする少なくとも１つのモジュレーター、及び抑制性免疫チェックポイント分子を標的とする少なくとも１つの免疫チェックポイントモジュレーターが含まれる。特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、結合タンパク質、例えば抗体である。本明細書で使用される「結合タンパク質」という用語は、標的分子、例えば免疫チェックポイント分子に特異的に結合することができるタンパク質又はポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、抗体又はその抗原結合部分であり、標的分子は、免疫チェックポイント分子である。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、標的分子（例えば、免疫チェックポイント分子）に特異的に結合するタンパク質又はポリペプチドである。いくつかの実施形態では、結合タンパク質はリガンドである。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は受容体である。本発明の方法で使用され得る結合タンパク質の例としては、限定されるものではないが、ヒト化抗体、抗体Ｆａｂ断片、二価抗体、抗体薬物コンジュゲート、ｓｃＦｖ、融合タンパク質、二価抗体、及び四価抗体が挙げられる。
【０３０３】
本明細書で使用される「抗体」という用語は、４つのポリペプチド鎖、２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖から構成される任意の免疫グロブリン（Ｉｇ）分子、又は任意の機能的断片、突然変異体、変異体、若しくはそれらの誘導体を指す。そのような突然変異体、変異体、又は誘導体の抗体型は当技術分野で公知である。完全長抗体では、各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲ又はＶＨと略される）及び重鎖定常領域から構成される。重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３の３つのドメインから構成されている。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲ又はＶＬと略される）及び軽鎖定常領域から構成されている。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣＬから構成されている。ＶＨ及びＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域にさらに細分することができ、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域が点在する。各ＶＨ及びＶＬは、３つのＣＤＲと４つのＦＲから構成され、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序で配置されている。免疫グロブリン分子は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）、又はサブクラスであり得る。いくつかの実施形態では、抗体は完全長抗体である。いくつかの実施形態では、抗体はマウス抗体である。いくつかの実施形態では、抗体はヒト抗体である。いくつかの実施形態では、抗体はヒト化抗体である。他の実施形態では、抗体はキメラ抗体である。キメラ及びヒト化抗体は、ＣＤＲグラフト化アプローチ（例えば、米国特許第５，８４３，７０８号明細書；同第６，１８０，３７０号明細書；同第５，６９３，７６２号明細書；同第５，５８５，０８９号明細書；及び同第５，５３０，１０１号明細書を参照）、チェーンシャッフリング戦略（例えば、米国特許第５，５６５，３３２号明細書；Ｒａｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）ＰＲＯＣ．ＮＡＴ'Ｌ．ＡＣＡＤ．ＳＣＩ．ＵＳＡ  ９５：８９１０−８９１５を参照）、及び分子モデリング戦略（米国特許第５，６３９，６４１号明細書）などを含む当業者に周知の方法によって調製することができる。
【０３０４】
本明細書で使用される抗体の「抗原結合部分」（又は単に「抗体部分」）という用語は、抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ又は複数の断片を指す。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体の断片によって果たされ得ることが示されている。そのような抗体の実施形態はまた、二重特異性（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）、二重特異性（ｄｕａｌ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ）、又は多重特異性の形態であり得；２つ以上の異なる抗原に特異的に結合する。抗体の「抗原結合部分」という用語に含まれる結合断片の例としては、（ｉ）Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨ１ドメインからなる一価断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ'）２断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片；（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）単一可変ドメインを含むｄＡｂ断片（その内容が参照により本明細書に組み込まれる、Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）ＮＡＴＵＲＥ  ３４１：５４４−５４６；及び国際公開第９０／０５１４４  Ａ１号パンフレット）；並びに（ｖｉ）分離した相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインであるＶＬとＶＨは、別々の遺伝子によってコードされているが、ＶＬ及びＶＨ領域が対になって一価分子を形成する単一のタンパク質鎖としてこれらを作製できる合成リンカーによって、組換え法を使用して結合することができる（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られている；例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）ＳＣＩＥＮＣＥ  ２４２：４２３−４２６；ａｎｄ  Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）ＰＲＯＣ．ＮＡＴ'Ｌ．ＡＣＡＤ．ＳＣＩ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３を参照）。このような一本鎖抗体はまた、抗体の「抗原結合部分」という用語に含まれることを意図している。ダイアボディなどの他の形態の一本鎖抗体も含まれる。抗原結合部分はまた、単一ドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、ナノボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ−ＮＡＲ、及びｂｉｓ−ｓｃＦｖに組み込むことができる（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｈｕｄｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２３：１１２６−１１３６，２００５を参照）。
【０３０５】
本明細書で使用される「ＣＤＲ」という用語は、抗体可変配列内の相補性決定領域を指す。重鎖及び軽鎖の各可変領域には３つのＣＤＲがあり、これらは、可変領域ごとにＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と呼ばれる。本明細書で使用される「ＣＤＲセット」という用語は、抗原に結合することができる単一可変領域に存在する３つのＣＤＲ群を指す。これらのＣＤＲの正確な境界は、方式によって定義が異なっている。Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，ＳＥＱＵＥＮＣＥＳ  ＯＦ  ＰＲＯＴＥＩＮＳ  ＯＦ  ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＩＣＡＬ  ＩＮＴＥＲＥＳＴ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７）ａｎｄ（１９９１））によって記述された方式は、抗体の任意の可変領域に適用可能な明確な残基付番方式を提供するだけではなく、３つのＣＤＲを定義する正確な残基境界も提供する。これらのＣＤＲは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲと呼ばれることもある。Ｃｈｏｔｈｉａ及び同僚らは、アミノ酸配列のレベルで大きな多様性があるにもかかわらず、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ内の特定の小部分がほぼ同一のペプチド骨格構造を採用していることを見出した（Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｊ．ＭＯＬ．ＢＩＯＬ．１９６：９０１−９１７、及びＣｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）ＮＡＴＵＲＥ  ３４２：８７７−８８３）。これらの小部分は、Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３又はＨ１、Ｈ２、及びＨ３として指定され、「Ｌ」及び「Ｈ」はそれぞれ、軽鎖領域及び重鎖領域を示す。これらの領域は、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲと呼ばれることがあり、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲと重複する境界を有する。Ｋａｂａｔ  ＣＤＲと重複するＣＤＲを定義する他の境界は、Ｐａｄｌａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）ＦＡＳＥＢ  Ｊ．９：１３３−１３９、及びＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｊ．ＭＯＬ．ＢＩＯＬ．２６２（５）：７３２−４５に記載されている。さらに他のＣＤＲ境界定義は、上記の方式の１つに厳密には従わない場合もあるが、それでもＫａｂａｔ  ＣＤＲと重複する。ただし、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲは、特定の残基又は残基群、又はＣＤＲ全体でさえも抗原結合に大きな影響を与えないという予測又は実験結果に照らして短縮又は延長することができる。本明細書で使用される方法は、これらの方式のいずれかに従って定義されるＣＤＲを利用できるが、好ましい実施形態は、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａ方式で定義されたＣＤＲを使用する。
【０３０６】
本明細書で使用される「ヒト化抗体」という用語は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含むキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、又はそれらの断片（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、又は他の抗体の抗原結合サブ配列など）である非ヒト（例えば、マウス）抗体を指す。ほとんどの場合、ヒト化抗体及びその抗体断片は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）の残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット、又はウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲの残基で置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体又は抗体断片）である。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基が、対応する非ヒト残基に置き換えられる。さらに、ヒト化抗体／抗体断片は、レシピエント抗体にも、移入されたＣＤＲ又はフレームワーク配列にも見られない残基を含み得る。これらの変更により、抗体又は抗体断片の性能をさらに改善して最適化することができる。一般に、ヒト化抗体又はその抗体断片は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、ＣＤＲ領域のすべて又は実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンの領域に対応し、ＦＲ領域のすべて又は大部分は、ヒト免疫グロブリン配列の領域である。ヒト化抗体又は抗体断片はまた、免疫グロブリンの定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンのＦｃの少なくとも一部を含み得る。さらなる詳細については、それぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９８６）ＮＡＴＵＲＥ  ３２１：５２２−５２５；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）ＮＡＴＵＲＥ  ３３２：３２３−３２９；ａｎｄ  Ｐｒｅｓｔａ（１９９２）ＣＵＲＲ．ＯＰ．ＳＴＲＵＣＴ．ＢＩＯＬ．２：５９３−５９６を参照されたい。
【０３０７】
本明細書で使用される「免疫コンジュゲート」又は「抗体薬物コンジュゲート」という用語は、抗体又はその抗原結合断片と、化学療法剤、毒素、免疫療法剤、及びイメージングプローブなどの別の薬剤との結合を指す。結合は、共有結合、又は静電力などによる非共有相互作用であり得る。免疫コンジュゲートを形成するために、当技術分野で知られている様々なリンカーを使用することができる。加えて、免疫コンジュゲートは、免疫コンジュゲートをコードするポリヌクレオチドから発現され得る融合タンパク質の形態で提供することができる。本明細書で使用される「融合タンパク質」は、元々は別個のタンパク質（ペプチド及びポリペプチドを含む）をコードする２つ以上の遺伝子又は遺伝子断片の結合によって作製されたタンパク質を指す。融合遺伝子の翻訳により、元のタンパク質のそれぞれに由来する機能特性を備えた単一のタンパク質が生じる。
【０３０８】
「二価抗体」は、２つの抗原結合部位を含む抗体又はその抗原結合断片を指す。２つの抗原結合部位は、同じ抗原に結合するか、又はそれぞれが異なる抗原に結合することができ、その場合、抗体又は抗原結合断片は、「二重特異性」として特徴づけられる。「四価抗体」は、４つの抗原結合部位を含む抗体又はその抗原結合断片を指す。特定の実施形態では、四価抗体は二重特異性である。特定の実施形態では、四価抗体は、多重特異性、即ち、３つ以上の異なる抗原に結合する。
【０３０９】
Ｆａｂ（抗原結合断片）抗体断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び重鎖定常領域１（ＣＨ１）部分からなるポリペプチドと、軽鎖可変（ＶＬ）及び軽鎖定数（ＣＬ）部分かなるポリペプチドとから構成される抗体の一価抗原結合ドメインを含む免疫反応性ポリペプチドであり、ＣＬ及びＣＨ１部分は、好ましくはＣｙｓ残基間のジスルフィド結合によって１つに結合される。
【０３１０】
免疫チェックポイントモジュレーター抗体には、限定されるものではないが、少なくとも４つの主要な種類：（ｉ）Ｔ細胞又はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞における阻害経路を直接ブロックする抗体（例えば、ニボルマブ及びペンブロリズマブなどのＰＤ−１標的抗体、ＴＩＭ−３を標的とする抗体、並びにＬＡＧ−３、２Ｂ４、ＣＤ１６０、Ａ２ａＲ、ＢＴＬＡ、ＣＧＥＮ−１５０４９、及びＫＩＲを標的とする抗体）、（ｉｉ）Ｔ細胞又はＮＫ細胞における直接刺激経路を活性化する抗体（例えば、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、及び４−１ＢＢを標的とする抗体）、（ｉｉｉ）免疫細胞における抑制経路をブロックする抗体、又は抗体依存性細胞毒性に依存して免疫細胞の抑制集団を枯渇させる抗体（例えば、イピリムマブなどのＣＴＬＡ−４標的抗体、ＶＩＳＴＡを標的とする抗体、及びＰＤ−Ｌ２、Ｇｒ１、及びＬｙ６Ｇを標的とする抗体）、並びに（ｉｖ）癌細胞における抑制経路を直接ブロックする抗体、又は抗体依存性細胞毒性に依存して癌細胞に対する細胞毒性を強める抗体（例えば、リツキシマブ、ＰＤ−Ｌ１を標的とする抗体、並びにＢ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｇａｌ−９、及びＭＵＣ１を標的とする抗体）が含まれる。チェックポイント阻害剤の例としては、例えば、イピリムマブ又はトレメリムマブなどのＣＴＬＡ−４の阻害剤；抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１、又は抗ＰＤ−Ｌ２抗体などのＰＤ−１経路の阻害剤が挙げられる。例示的な抗ＰＤ−１抗体は、国際公開第２００６／１２１１６８号パンフレット、同第２００８／１５６７１２号パンフレット、同第２０１２／１４５４９３号パンフレット、同第２００９／０１４７０８号パンフレット、及び同第２００９／１１４３３５号パンフレットに記載されている。例示的な抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、国際公開第２００７／００５８７４号パンフレット、同第２０１０／０７７６３４号パンフレット、及び同第２０１１／０６６３８９号パンフレットに記載されており、例示的な抗ＰＤ−Ｌ２抗体は、国際公開第２００４／００７６７９号パンフレットに記載されている。
【０３１１】
特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、融合タンパク質、例えば、免疫チェックポイントモジュレーターの活性を調節する融合タンパク質である。
【０３１２】
一実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、治療用核酸分子、例えば、免疫チェックポイントタンパク質又はｍＲＮＡの発現を調節する核酸である。核酸治療薬は当技術分野で周知である。核酸治療薬には、細胞内の標的配列に相補的な一本鎖及び二本鎖（即ち、少なくとも１５ヌクレオチド長の相補的領域を有する核酸治療薬）核酸の両方が含まれる。特定の実施形態では、核酸治療薬は、免疫チェックポイントタンパク質をコードする核酸配列を標的とする。
【０３１３】
アンチセンス核酸治療薬は、典型的には約１６〜３０ヌクレオチド長の一本鎖核酸治療薬であり、培養物内又は生物内のいずれかの標的細胞の標的核酸配列に相補的である。
【０３１４】
別の態様では、薬剤は、一本鎖アンチセンスＲＮＡ分子である。アンチセンスＲＮＡ分子は、標的ｍＲＮＡ内の配列に相補的である。アンチセンスＲＮＡは、ｍＲＮＡと塩基対を形成し、翻訳機構を物理的に妨害することによって化学量論的に翻訳を阻害することができる。Ｄｉａｓ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ  １：３４７−３５５を参照されたい。アンチセンスＲＮＡ分子は、標的ｍＲＮＡに相補的な約１５〜３０ヌクレオチドを有し得る。アンチセンス核酸、化学修飾、及び治療用途に関する特許には、例えば：化学修飾されたＲＮＡ含有治療化合物に関する米国特許第５，８９８，０３１号明細書；これらの化合物を治療薬としての使用方法に関する米国特許第６，１０７，０９４号明細書；一本鎖の化学的に修飾されたＲＮＡ様化合物を投与することによって患者を処置する方法に関する米国特許第７，４３２，２５０号明細書；及び一本鎖の化学的に修飾されたＲＮＡ様化合物を含む医薬組成物に関する米国特許第７，４３２，２４９号明細書が含まれる。米国特許第７，６２９，３２１号明細書は、複数のＲＮＡヌクレオシド及び少なくとも１つの化学修飾を有する一本鎖オリゴヌクレオチドを用いて標的ｍＲＮＡを切断する方法に関する。この段落に記載されている各特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０３１５】
本発明の方法で使用するための核酸治療薬には、二本鎖核酸治療薬も含まれる。本明細書で互換的に使用される「ｄｓＲＮＡ剤」、「ｄｓＲＮＡ」、「ｓｉＲＮＡ」、「ｉＲＮＡ剤」とも呼ばれる「ＲＮＡｉ剤」、「二本鎖ＲＮＡｉ剤」、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）分子は、以下に定義されるように２つの逆平行の実質的に相補的な核酸鎖を含む二本鎖構造を有するリボ核酸分子の複合体を指す。本明細書で使用されるＲＮＡｉ剤はまた、ｄｓｉＲＮＡを含み得る（例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２００７０１０４６８８号明細書を参照されたい）。一般に、各鎖のヌクレオチドの大部分はリボヌクレオチドであるが、本明細書に記載されるように、各鎖又は両鎖はまた、１つ又は複数の非リボヌクレオチド、例えばデオキシリボヌクレオチド及び／又は修飾ヌクレオチドを含み得る。加えて、本明細書で使用されるように、「ＲＮＡｉ剤」は、化学修飾を有するリボヌクレオチドを含み得；ＲＮＡｉ剤は、複数のヌクレオチドに実質的な修飾を含み得る。そのような修飾は、本明細書に開示される又は当技術分野で公知のあらゆるタイプの修飾を含み得る。ｓｉＲＮＡ型の分子で使用されるいずれの修飾も、本明細書及び特許請求の範囲のために「ＲＮＡｉ剤」に含まれる。本発明の方法で使用されるＲＮＡｉ剤は、例えば、それぞれその全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第／２０１２／０３７２５４号パンフレット及び同第２００９／０７３８０９号パンフレットに開示されるような化学修飾を有する薬剤を含む。
【０３１６】
免疫チェックポイントモジュレーターは、例えば標準投与量を使用することによって、腫瘍性障害を処置するために適切な投与量で投与することができる。当業者は、日常的な実験によって、腫瘍性障害を処置する目的で、免疫チェックポイントモジュレーターの効果的で非毒性の量がどの程度であるかを決定することができるであろう。免疫チェックポイントモジュレーターの標準投与量は、当業者に公知であり、例えば、免疫チェックポイントモジュレーターの製造業者によって提供される製品の説明書から得ることができる。免疫チェックポイントモジュレーターの標準投与量の例が以下の表３に示される。他の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、特定の腫瘍性障害の処置のための標準治療の下で腫瘍性障害を処置するために使用される免疫チェックポイントモジュレーターの標準投与量とは異なる（例えば、より低い）投与量で投与される。
【０３１７】
【表３】
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【０３１８】
特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターの投与量は、特定の腫瘍性障害に対する免疫チェックポイントモジュレーターの標準投与量よりも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、又は９０％低い。特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターの投与量は、特定の腫瘍性障害に対する免疫チェックポイントモジュレーターの標準投与量の９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、又は５％である。免疫チェックポイントモジュレーターの組み合わせが投与される一実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターの少なくとも１つは、特定の腫瘍性障害に対する免疫チェックポイントモジュレーターの標準用量よりも低い用量で投与される。免疫チェックポイントモジュレーターの組み合わせが投与される一実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターの少なくとも２つは、特定の腫瘍性障害に対する免疫チェックポイントモジュレーターの標準用量よりも低い用量で投与される。免疫チェックポイントモジュレーターの組み合わせが投与される一実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターの少なくとも３つは、特定の腫瘍性障害に対する免疫チェックポイントモジュレーターの標準用量よりも低い用量で投与される。免疫チェックポイントモジュレーターの組み合わせが投与される一実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターのすべては、特定の腫瘍性障害に対する免疫チェックポイントモジュレーターの標準用量よりも低い用量で投与される。
【０３１９】
鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤と免疫チェックポイントモジュレーターの同時投与
本明細書で使用される「併用投与する」、「同時投与する」、又は「同時投与」という用語は、免疫チェックポイントモジュレーターの投与の前、同時又は実質的に同時、その後、又は断続的な鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤の投与を指す。特定の実施形態では、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤は、免疫チェックポイントモジュレーターの投与の前に投与される。特定の実施形態では、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤は、免疫チェックポイントモジュレーターと同時に投与される。特定の実施形態では、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤は、免疫チェックポイントモジュレーターの投与後に投与される。
【０３２０】
鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤と免疫チェックポイントモジュレーターは相加的又は相乗的に作用し得る。一実施形態では、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤と免疫チェックポイントモジュレーターは相乗的に作用する。いくつかの実施形態では、相乗効果は、腫瘍性障害の処置においてである。例えば、一実施形態では、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤と免疫チェックポイントモジュレーターとの組み合わせは、免疫チェックポイントモジュレーターが標的とする癌に対する免疫応答の永続性を改善する、即ち、持続時間を延長する。いくつかの実施形態では、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤と免疫チェックポイントモジュレーターは相加的に作用する。
【０３２１】
本発明の併用療法は、腫瘍性障害の処置に利用することができる。いくつかの実施形態では、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤と免疫チェックポイントモジュレーターとの併用療法は腫瘍細胞の増殖を阻害する。従って、本発明は、腫瘍細胞の増殖が阻害されるように、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤及び少なくとも１つの免疫チェックポイントモジュレーターを対象に投与することを含む、対象における腫瘍細胞の増殖を阻害する方法をさらに提供する。特定の実施形態では、癌の処置は、対照と比較して生存を延長すること、又は腫瘍進行までの時間を延ばすことを含む。いくつかの実施形態では、対照は、免疫チェックポイントモジュレーターでは処置されるが、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤では処置されない対象である。いくつかの実施形態では、対照は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤では処置されるが、免疫チェックポイントモジュレーターでは処置されない対象である。いくつかの実施形態では、対照は、免疫チェックポイントモジュレーターでも、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤でも処置されない対象である。特定の実施形態では、対象はヒト対象である。好ましい実施形態では、対象は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤の初回投与又は免疫チェックポイントモジュレーターの初回投与の前に腫瘍を有するとして識別されている。特定の実施形態では、対象は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤の初回投与時又は免疫チェックポイントモジュレーターの初回投与時に腫瘍を有する。
【０３２２】
特定の実施形態では、併用療法の少なくとも１サイクル、２サイクル、３サイクル、４サイクル、又は５サイクルが対象に施される。対象は、各サイクルの終了時に応答基準について評価される。対象はまた、治療計画が十分に許容されていることを確認するために、有害事象（例えば、凝固、貧血、肝臓及び腎臓機能など）について各サイクルのすべてで監視される。
【０３２３】
２つ以上の免疫チェックポイントモジュレーター、例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれ以上の免疫チェックポイントモジュレーターを、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤と組み合わせて投与できることに留意されたい。
【０３２４】
一実施形態では、本明細書に記載される鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤及び免疫チェックポイントモジュレーターの投与は、腫瘍性障害を有する対象の腫瘍のサイズ、重量、又は体積の減少、進行までの時間の増加、腫瘍増殖の阻害、及び／又は生存期間の延長の１つ又は複数をもたらす。特定の実施形態では、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤及び免疫チェックポイントモジュレーターの投与は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤のみ又は免疫チェックポイントモジュレーターのみが投与された対応する対照対象と比較して少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２００％、３００％、４００％、又は５００％、腫瘍のサイズ、重量、又は体積を減少させ、進行までの時間を増加させ、腫瘍増殖を阻害し、且つ／又は対象の生存期間を延長する。特定の実施形態では、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤及び免疫チェックポイントモジュレーターの投与は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤のみ又は免疫チェックポイントモジュレーターのみが投与された腫瘍性障害に罹患した対照対象の対応する集団と比較して少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２００％、３００％、４００％、又は５００％、腫瘍のサイズ、重量、又は体積を低下させ、進行までの時間を増加させ、腫瘍増殖を阻害し、且つ／又は腫瘍性障害に罹患した対象の集団の生存期間を延長する。他の実施形態では、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤及び免疫チェックポイントモジュレーターの投与は、処置前に進行性腫瘍性障害を有する対象の腫瘍性障害を安定させる。
【０３２５】
特定の実施形態では、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤及び少なくとも１つの免疫チェックポイントモジュレーターによる処置は、例えば、１つ又は複数の抗腫瘍剤（例えば化学療法剤）の標準投与量を投与することによって、処置されるべき特定の癌の処置のための標準治療などの追加の抗腫瘍剤と組み合わせられる。特定の癌の種類の標準治療は、例えば、癌の種類及び重症度、対象の年齢、体重、性別、及び／若しくは病歴、並びに以前の処置の成功又は失敗に基づいて、当業者によって決定することができる。本発明の特定の実施形態では、標準治療は、外科手術、放射線、ホルモン療法、抗体療法、成長因子による治療法、サイトカイン、及び化学療法のいずれか１つ又はそれらの組み合わせを含む。一実施形態では、追加の抗腫瘍剤は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤及び／又は免疫チェックポイントモジュレーターでもない。
【０３２６】
本明細書に開示される方法での使用に適した追加の抗腫瘍剤には、限定されるものではないが、化学療法剤（例えば、アルトレタミン、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、ダカルバジン、ロムスチン、メルファラン、オキサリプラチン、テモゾロミド、チオテパなどのアルキル化剤；５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）などの代謝拮抗剤；カペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ（登録商標））、シタラビン（Ａｒａ−Ｃ（登録商標））、フロクスウリジン、フルダラビン、ゲムシタビン（Ｇｅｍｚａｒ（登録商標））、ヒドロキシ尿素、メトトレキサート、ペメトレキセド（Ａｌｉｍｔａ（登録商標））；アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、エピルビシン、イダルビシン）、アクチノマイシン−Ｄ、ブレオマイシン、マイトマイシン−Ｃ、ミトキサントロン（トポイソメラーゼＩＩ阻害剤としても機能する）などの抗腫瘍抗生物質；トポテカン、イリノテカン（ＣＰＴ−１１）、エトポシド（ＶＰ−１６）、テニポシド、ミトキサントロン（抗腫瘍抗生物質としても機能する）などのトポイソメラーゼ阻害剤；ドセタキセル、エストラムスチン、イクサベピロン、パクリタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビンなどの有糸分裂阻害剤；プレドニゾン、メチルプレドニゾロン（Ｓｏｌｕｍｅｄｒｏｌ（登録商標））、デキサメタゾン（Ｄｅｃａｄｒｏｎ（登録商標））などのコルチコステロイド；Ｌ−アスパラギナーゼ及びボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））などの酵素が含まれる。抗腫瘍剤にはまた、生物学的抗癌剤、例えば、抗ＴＮＦ抗体、例えば、アダリムマブ又はインフリキシマブ；リツキシマブなどの抗ＣＤ２０抗体、ベバシズマブなどの抗ＶＥＧＦ抗体；トラスツズマブなどの抗ＨＥＲ２抗体；パリビズマブなどの抗ＲＳＶが含まれる。本発明の方法を使用する処置のための癌には、例えば、限定されるものではないが、肉腫、黒色腫、癌腫、白血病、及びリンパ腫を含む、哺乳動物に見られるあらゆる種類の癌又は新生物又は悪性腫瘍が含まれる。
【０３２７】
「肉腫」という用語は、一般に胚性結合組織のような物質からなり、且つ一般に線維状又は均質な物質に埋め込まれた密集した細胞から構成される腫瘍を指す。本発明の方法で処置することができる肉腫の例としては、例えば、軟骨肉腫、線維肉腫、リンパ肉腫、黒色肉腫、粘液肉腫、骨肉腫、アベメシ肉腫（Ａｂｅｍｅｔｈｙ'ｓ  ｓａｒｃｏｍａ）、脂肪性肉腫、脂肪肉腫、肺巣状軟部肉腫、エナメル上皮線維肉腫、ブドウ状肉腫、緑色肉腫（ｃｈｌｏｒｏｍａ  ｓａｒｃｏｍａ）、絨毛膜癌、胎児性肉腫、ウィルムス腫瘍肉腫、子宮内膜肉腫、間質肉腫、ユーイング肉腫、筋膜肉腫、線維芽細胞肉腫、巨細胞肉腫、顆粒球性肉腫、ホジキン肉腫、特発性多発性色素性出血性肉腫、Ｂ細胞の免疫芽球性肉腫、リンパ腫、Ｔ細胞の免疫芽球性肉腫、イエンセン肉腫、カポジ肉腫、クッパー細胞肉腫、血管肉腫、白血肉腫、悪性間葉腫、傍骨性肉腫、細網肉腫、ラウス肉腫、漿液嚢肉腫（ｓｅｒｏｃｙｓｔｉｃ  ｓａｒｃｏｍａ）、滑膜肉腫、子宮肉腫、粘液性脂肪肉腫、平滑筋肉腫、紡錘細胞肉腫、線維形成性肉腫（ｄｅｓｍｏｐｌａｓｔｉｃ  ｓａｒｃｏｍａ）、及び毛細血管拡張性肉腫が挙げられる。
【０３２８】
「黒色腫」という用語は、皮膚及び他の器官のメラニン細胞系から生じる腫瘍を意味すると解釈される。本発明の方法で処置することができる黒色腫には、例えば、末端黒子型黒色腫、メラニン欠乏性黒色腫、良性若年性黒色腫、クラウドマン黒色腫、Ｓ９１黒色腫、ハーディング−パッセー黒色腫、若年性黒色腫、悪性黒子型黒色腫、悪性黒色腫、結節性黒色腫、爪下黒色腫、及び表在拡大型黒色腫が含まれる。
【０３２９】
「癌腫」という用語は、周囲の組織に浸潤して転移を引き起こす傾向がある上皮細胞からなる悪性新生物を指す。本明細書に記載されるように本発明の方法で処置することができる癌腫には、例えば、腺房癌、腺房細胞癌、腺嚢胞癌、腺様嚢胞癌、腺腫様癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ａｄｅｎｏｍａｔｏｓｕｍ）、副腎皮質癌、肺胞上皮癌、肺胞細胞癌、基底細胞癌（ｂａｓａｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、基底細胞癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｂａｓｏｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、肺類基底細胞癌（ｂａｓａｌｏｉｄ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、基底扁平上皮癌（ｂａｓｏｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、気管支肺胞上皮癌（ｂｒｏｎｃｈｉｏａｌｖｅｏｌａｒ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、気管支癌、気管支原性癌  、大脳様癌、胆管細胞癌、絨毛膜癌、膠様癌、結腸の結腸腺癌、面皰癌、子宮体癌（ｃｏｒｐｕｓ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、篩状癌（ｃｒｉｂｒｉｆｏｒｍ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、鎧状癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｅｎ  ｃｕｉｒａｓｓｅ）、皮膚癌、円柱状癌（ｃｙｌｉｎｄｒｉｃａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、円柱状細胞癌（ｃｙｌｉｎｄｒｉｃａｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、腺管癌、硬膜癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｄｕｒｕｍ）、胎児性癌（ｅｍｂｒｙｏｎａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、脳様癌（ｅｎｃｅｐｈａｌｏｉｄ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、類表皮癌（ｅｐｉｅｒｍｏｉｄ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、上皮性腺様癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｅ  ａｄｅｎｏｉｄｅｓ）、外向発育癌（ｅｘｏｐｈｙｔｉｃ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、潰瘍癌、線維性癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｆｉｂｒｏｓｕｍ）、膠様癌、コロイド線癌（ｇｅｌａｔｉｎｏｕｓ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、巨細胞癌（ｇｉａｎｔ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、巨細胞癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｇｉｇａｎｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、腺癌、顆粒膜細胞癌、毛母癌、血様癌（ｈｅｍａｔｏｉｄ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、肝細胞癌、ヒュルトレ細胞癌、肺硝子癌（ｈｙａｌｉｎｅ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、副腎様癌（ｈｙｐｅｍｅｐｈｒｏｉｄ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、小児胎児性癌（ｉｎｆａｎｔｉｌｅ  ｅｍｂｒｙｏｎａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、上皮内癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｉｎ  ｓｉｔｕ）、表皮内癌、上皮内癌（ｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、クロムペッヘル癌（Ｋｒｏｍｐｅｃｈｅｒ'ｓ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、クルチツキー細胞癌（Ｋｕｌｃｈｉｔｚｋｙ−ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、大細胞癌、レンズ状癌（ｌｅｎｔｉｃｕｌａｒ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、レンズ状癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｌｅｎｔｉｃｕｌａｒｅ）、脂肪腫性癌（ｌｉｐｏｍａｔｏｕｓ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、リンパ上皮癌、髄様癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｍｅｄｕｌｌａｒｅ）、髄様癌（ｍｅｄｕｌｌａｒｙ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、黒色癌、軟性癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｍｏｌｌｅ）、メルケル細胞癌、粘液性癌（ｍｕｃｉｎｏｕｓ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、粘液性癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｍｕｃｉｐａｒｕｍ）、粘液細胞癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｍｕｃｏｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、粘膜表皮癌、粘液癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｍｕｃｏｓｕｍ）、粘膜癌、粘液腫様癌（ｃａｒｃｉｎ��ｍａ  ｍｙｘｏｍａｔｏｄｅｓ）、鼻咽腔癌、燕麦細胞癌、骨化性癌、類骨癌、乳頭癌、門脈周囲性癌種（ｐｅｒｉｐｏｒｔａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、前浸潤癌、棘細胞癌、粥状癌種（ｐｕｌｔａｃｅｏｕｓ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、腎臓の腎細胞癌、予備細胞癌、肉腫性癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｓａｒｃｏｍａｔｏｄｅｓ）、シュナイダー癌、硬性癌、陰嚢癌、印環細胞癌、単純癌、小細胞癌、ソラノイド癌、球状細胞精巣癌、紡錘細胞癌、海綿様癌、扁平上皮癌（ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、扁平上皮癌（ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、紐様癌（ｓｔｒｉｎｇ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、毛細血管拡張性癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔａｔｉｃｕｍ）、毛細血管拡張性癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔｏｄｅｓ、移行上皮癌）、結節癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ）、結節癌（ｔｕｂｅｒｏｕｓ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、疣贅性癌（ｖｅｒｒｕｃｏｕｓ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、子宮頸部扁平上皮癌、扁桃扁平上皮細胞癌（ｔｏｎｓｉｌ  ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、及び絨毛癌が含まれる。特定の実施形態では、癌は腎細胞癌である。
【０３３０】
「白血病」という用語は、「芽球」と呼ばれる未熟な白血球の異常な増加を特徴とする血液又は骨髄の癌の一種を指す。白血病は、様々な疾患を網羅する広義の用語である。次に、白血病は、血液、骨髄、及びリンパ系に影響を与えるさらに広範な疾患群の一部であり、これらはすべて血液新生物として知られている。白血病は、急性リンパ性（又はリンパ芽球性）白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性（又は骨髄性又は非リンパ性）白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、及び慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）の４つの主要な区分に分類することができる。白血病のさらなる種類には、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、Ｔ細胞前リンパ球性白血病（Ｔ−ＰＬＬ）、大顆粒リンパ球性白血病、及び成人Ｔ細胞白血病が含まれる。特定の実施形態では、白血病は急性白血病を含む。特定の実施形態では、白血病は慢性白血病を含む。
【０３３１】
「リンパ腫」という用語は、リンパ細胞に由来する血球腫瘍群を指す。リンパ腫の２つの主要な種類は、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）と非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。リンパ腫には、リンパ組織のあらゆる新生物が含まれる。主なクラスは、リンパ液及び血液の両方に属し、両方に広がる白血球の一種であるリンパ球の癌である。
【０３３２】
いくつかの実施形態では、組成物は、様々なタイプの固形腫瘍、例えば、乳癌（例えば、三重陰性乳癌）、膀胱癌、泌尿生殖器癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓（腎細胞）癌、膵臓癌、前立腺癌、甲状腺癌（例えば、甲状腺乳頭癌）、皮膚癌、骨癌、脳腫瘍、子宮頸癌、肝臓癌、胃癌、口腔癌（ｍｏｕｔｈ  ａｎｄ  ｏｒａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、食道癌、腺様嚢胞癌、神経芽細胞腫、精巣癌、子宮癌、甲状腺癌、頭頸部癌、腎臓癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌）、中皮腫、卵巣癌、肉腫、胃癌、子宮癌、子宮頸癌、髄芽細胞腫、及び外陰癌の処置に使用される。特定の実施形態では、皮膚癌には、黒色腫、扁平上皮癌、及び皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）が含まれる。
【０３３３】
本発明の組成物で処置することができる追加の癌には、例えば、多発性骨髄腫、原発性血小板血症、原発性マクログロブリン血症、悪性膵臓インスリノーマ、悪性カルチノイド、悪性高カルシウム血症、子宮内膜癌、副腎皮質癌、及び悪性線維性組織球腫が含まれる。
【０３３４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の併用療法は、すでに別の抗腫瘍性療法（例えば、化学療法）で癌の処置に失敗した対象に施すことができる。「抗腫瘍療法に失敗した対象」とは、ＲＥＣＩＳＴ  １．１基準に基づく抗腫瘍療法による処置に応答しない、若しくは応答しなくなった、即ち、標的病変における完全寛解、部分寛解、若しくは安定した疾患を達成しない；又は、抗腫瘍療法の最中又は完了後のいずれかで、単独で又は外科手術及び／又は放射線療法と組み合わせて、非標的病変の完全寛解又は非ＣＲ／非ＰＤを達成しない癌対象であり、この外科手術及び／又は放射線療法は、多くの場合、抗腫瘍療法と組み合わせて臨床的に必要である。ＲＥＣＩＳＴ  １．１基準は、例えば、Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ４５：２２８−２４（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されており、以下でより詳細に論じられる。失敗した抗腫瘍療法は、例えば、腫瘍の増殖、腫瘍負荷の増加、及び／又は腫瘍の転移をもたらす。本明細書で使用される失敗した抗腫瘍療法には、用量制限毒性、例えば、抗腫瘍剤による処置の継続若しくは再開を可能にするために解決できないグレードＩＩＩ又はグレードＩＶ毒性のために終了した治療計画、又は毒性を引き起こした療法が含まれる。一実施形態では、対象は、１つ又は複数の抗血管新生剤の投与を含む抗腫瘍療法による処置に失敗している。
【０３３５】
失敗した抗腫瘍療法には、長期間、例えば、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも１２ヶ月、少なくとも１８ヶ月、又は臨床的に定義された治療よりも短い任意の期間にわたって、すべての標的及び非標的病変に対して少なくとも疾患の安定が得られない治療計画が含まれる。失敗した抗腫瘍療法には、抗腫瘍剤による処置中に少なくとも１つの標的病変の進行性疾患が生じる治療計画、又は治療計画の終了から２週間未満、１ヶ月未満、２ヶ月未満、３ヶ月未満、４ヶ月未満、５ヶ月未満、６ヶ月未満、１２ヶ月未満、又は１８ヶ月未満で、又は臨床的に定義された治療よりも短い任意の期間未満で進行性疾患が生じる治療計画が含まれる。
【０３３６】
失敗した抗腫瘍療法には、癌の処置を受けた対象が臨床的に定義された治癒、例えば治療計画の終了から５年間の完全寛解を達成し、その後、対象が、例えば、治療計画の終了から５年超、６年超、７年超、８年超、９年超、１０年超、１１年超、１２年超、１３年超、１４年超、又は１５年超してから異なる癌と診断される治療計画は含まれない。
【０３３７】
ＲＥＣＩＳＴ基準は、臨床的に認められた評価基準であり、固形腫瘍測定への標準的なアプローチを提供するため、及び臨床試験で使用するための腫瘍サイズの変化の客観的評価の定義を提供するために使用される。このような基準は、固形腫瘍の処置を受けている個人の寛解を監視するためにも使用することができる。ＲＥＣＩＳＴ  １．１基準については、参照により本明細書に組み込まれる、Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ４５：２２８−２４で詳細に議論されている。標的病変の寛解基準は次のとおりである：
【０３３８】
完全寛解（ＣＲ）：すべての標的病変の消失。あらゆる病理学的リンパ節（標的又は非標的）が、短軸において１０ｍｍ未満まで縮小しなければならない。
【０３３９】
部分寛解（ＰＲ）：ベースラインの合計直径を基準として、標的病変の直径の合計が少なくとも３０％減少する。
【０３４０】
進行性疾患（ＰＤ）：試験における最小合計を基準として、標的病変の直径の合計が少なくとも２０％増加する（これには、試験における最小の場合、ベースライン合計が含まれる）。２０％の相対的な増加に加えて、合計は少なくとも５ｍｍの絶対的な増加も示さなければならない（注：１つ又は複数の新しい病変の出現も進行と見なされる）。
【０３４１】
安定した疾患（ＳＤ）：試験中の最小の合計直径を基準として、ＰＲを満たす十分な収縮もＰＤを満たす十分な増加もない。
【０３４２】
ＲＥＣＩＳＴ  １．１基準では、測定可能であり得るが測定する必要がなく、所望の時点でのみ定性的に評価する必要がある病変として定義される非標的病変も考慮される。非標的病変の寛解基準は次のとおりである：
【０３４３】
完全寛解（ＣＲ）：すべての非標的病変の消失と腫瘍マーカーレベルの正常化。すべてのリンパ節は、そのサイズが非病理学的でなければならない（短軸で１０ｍｍ未満）。
【０３４４】
非ＣＲ／非ＰＤ：１つ又は複数の非標的病変の持続及び／又は正常限界を超える腫瘍マーカーレベルの維持。
【０３４５】
進行性疾患（ＰＤ）：既存の非標的病変の明確な進行。１つ又は複数の新しい病変の出現も進行と見なされる。非標的疾患に基づく「明確な進行」を達成するには、たとえ標的疾患にＳＤ又はＰＲが存在したとしても、治療法を中止に値するのに十分に全腫瘍量が増加するように、非標的疾患の全体的なレベルが大幅に悪化する必要がある。１つ又は複数の非標的病変のサイズの適度な「増加」は、通常は明確な進行状態を満たすのに十分ではない。従って、標的疾患におけるＳＤ又はＰＲに直面した非標的疾患の変化のみに基づいた全体的な進行の決定は非常にまれである。
【０３４６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の併用療法は、難治性癌を有する対象に投与することができる。「難治性癌」は、外科手術が効果的でない悪性腫瘍であり、最初から化学療法又は放射線療法に反応しないか、又は時間の経過と共に化学療法又は放射線療法に反応しなくなる。
【０３４７】
Ｖ．医薬組成物及び投与方式
本明細書に記載の医薬組成物は、任意の適切な製剤で対象に投与することができる。製剤には、例えば、液体、半固体、及び固体の剤形が含まれる。好ましい形態は、意図される投与方式及び治療用途によって決まる。
【０３４８】
特定の実施形態では、組成物は経口投与に適している。特定の実施形態では、製剤は、局所投与、並びに静脈内注射、腹腔内注射、筋肉内注射、及び皮下注射を含む非経口投与に適している。特定の実施形態では、組成物は静脈内投与に適している。
【０３４９】
非経口投与用の医薬組成物には、水溶性形態の活性化合物の水溶液が含まれる。静脈内投与の場合、製剤は水溶液であり得る。水溶液には、ハンクス液、リンゲル液、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、生理食塩水緩衝液、又は非経口的に送達される製剤の適切なｐＨ及び浸透圧を達成する他の適切な塩又は組み合わせが含まれ得る。水溶液を使用して、投与用の製剤を所望の濃度に希釈することができる。水溶液は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、又はデキストランなどの、溶液の粘度を増加させる物質を含み得る。いくつかの実施形態では、製剤は、二塩基性リン酸ナトリウム、一塩基性リン酸カリウム、塩化カリウム、塩化ナトリウム、及び注射用水を含むリン酸緩衝生理食塩水を含む。
【０３５０】
局所投与に適した製剤には、塗布剤、ローション、クリーム、軟膏、又はペーストなどの皮膚への浸透に適した液体又は半液体の製剤、及び目、耳、又は鼻への投与に適した点滴剤が含まれる。経口投与に適した製剤には、不活性希釈剤又は同化可能な食用担体を含む製剤が含まれる。経口投与用の製剤は、ハードシェル又はソフトシェルのゼラチンカプセルに封入してもよいし、又は錠剤に圧縮してもよいし、又は飲食物の食品に直接含めてもよい。単位剤形がカプセルである場合、単位剤形は、上記のタイプの材料に加えて、液体担体を含み得る。様々な他の材料が、コーティングとして又は他の方法で投与単位の物理的形態を変更するために存在し得る。本発明での使用に適した医薬組成物には、その意図された目的を達成するために活性成分が有効量で含まれている組成物が含まれる。有効量の決定は、特に本明細書で提供される詳細な開示を考慮すると、当業者の能力の十分に範囲内である。活性成分に加えて、これらの医薬組成物には、薬学的に使用できる調製物への活性化合物の処理を容易にする賦形剤及び助剤を含む適切な薬学的に許容される担体が含まれ得る。
【０３５１】
当業者には容易に明らかであるように、投与される有用なインビボ投与量及び特定の投与方式は、年齢、体重、苦痛の重症度、及び処置される哺乳動物種、利用される特定の化合物、及びこれらの化合物が利用される特定の用途に応じて異なる。有効な投与量レベル、即ち、所望の結果を達成するために必要な投与量レベルの決定は、例えば、ヒト臨床試験、動物モデル、及びインビトロ試験などの日常的な方法を使用して当業者が行うことができる。
【０３５２】
特定の実施形態では、組成物は経口的に送達される。特定の実施形態では、組成物は非経口的に投与される。特定の実施形態では、組成物は、注射又は注入によって送達される。特定の実施形態では、組成物は、経粘膜を含めて局所的に送達される。特定の実施形態では、組成物は、吸入によって送達される。一実施形態では、本明細書で提供される組成物は、腫瘍に直接注射することによって投与することができる。いくつかの実施形態では、組成物は、静脈内注射又は静脈内注入によって投与することができる。特定の実施形態では、投与は全身性である。特定の実施形態では、投与は局所的である。
【０３５３】
ＶＩ．鉄依存性細胞分解を誘導する免疫刺激剤の同定方法
当技術分野で公知であり、本明細書に記載される鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤に加えて、本開示はさらに、鉄依存性細胞分解を誘導し、且つ免疫活性を刺激する他の化合物を同定するための方法に関する。
【０３５４】
例えば、特定の態様では、本開示は、免疫刺激剤をスクリーニングする方法に関し、この方法は：
（ａ）複数の試験薬（例えば、試験薬のライブラリー）を用意すること；
（ｂ）鉄依存性細胞分解（例えば、フェロトーシス）を誘導する能力について、複数の試験薬のそれぞれを評価すること；
（ｃ）候補免疫刺激剤として、鉄依存性細胞分解（例えば、フェロトーシス）を増加させる試験薬を選択すること；及び
（ｄ）免疫応答を高める能力について候補免疫刺激剤を評価することを含む。
【０３５５】
いくつかの実施形態では、鉄依存性細胞分解（例えば、フェロトーシス）を誘導する能力について試験薬を評価することは、細胞又は組織を複数の試験薬のそれぞれに接触させることを含む。
【０３５６】
いくつかの方法が当技術分野で公知であり、これらを利用して、鉄依存性細胞分解（例えば、フェロトーシス）を受けている細胞を同定し、特定のマーカーの検出を介して他のタイプの細胞分解及び／又は細胞死と区別することができる（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｓｔｏｃｋｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１７，Ｃｅｌｌ  １７１：２７３−２８５を参照）。例えば、鉄依存性細胞分解は致死的な過酸化脂質に起因し得るため、過酸化脂質の測定は、鉄依存性細胞分解を受けている細胞を特定する１つの方法を提供する。Ｃ１１−ＢＯＤＩＰＹ及びＬｉｐｅｒｆｌｕｏは、脂質ＲＯＳを検出するための迅速で間接的な手段を提供する親油性ＲＯＳセンサーである（Ｄｉｘｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｃｅｌｌ  １４９：１０６０−１０７２）。液体クロマトグラフィー（ＬＣ）／タンデム質量分析（ＭＳ）分析を使用して、特定の酸化脂質を直接検出することもできる（Ｆｒｉｅｄｍａｎｎ  Ａｎｇｅｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｎａｔ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１６：１１８０−１１９１；Ｋａｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１７，Ｎａｔ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１３：８１−９０）。イソプロスタン及びマロンジアルデヒド（ＭＤＡ）を使用して、過酸化脂質を測定することもできる（Ｍｉｌｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｎａｔ．Ｐｒｏｔｏｃ．２：２２１−２２６；Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１７，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ６６（２）：４４９−４６５）。ＭＤＡを測定するためのキットが市販されている（Ｂｅｙｏｔｉｍｅ，Ｈａｉｍｅｎ，Ｃｈｉｎａ）。
【０３５７】
鉄依存性細胞分解を試験するための他の有用なアッセイには、鉄の存在量及びＧＰＸ４活性の測定が含まれる。鉄の存在量は、誘導結合プラズマＭＳ又はカルセインＡＭ消光、及びその他の特定の鉄プローブを使用して測定でき（Ｈｉｒａｙａｍａ  ａｎｄ  Ｎａｇａｓａｗａ，２０１７，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｎｕｔｒ．６０：３９−４８；Ｓｐａｎｇｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６，Ｎａｔ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１２：６８０−６８５）、ＧＰＸ４活性は、ＬＣ−ＭＳを使用した細胞溶解物中のホスファチジルコリンヒドロペルオキシドの還元を用いて検出することができる（Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｃｅｌｌ  １５６：３１７−３３１）。さらに、鉄依存性細胞分解は、グルタチオン（ＧＳＨ）含量を測定することによって評価することができる。ＧＳＨは、例えば、市販のＧＳＨ−Ｇｌｏグルタチオンアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を使用することによって測定することができる。
【０３５８】
鉄依存性細胞分解はまた、１つ又は複数のマーカータンパク質の発現を測定することによって評価することができる。適切なマーカータンパク質には、限定されるものではないが、グルタチオンペルオキシダーゼ４（ＧＰＸ４）、プロスタグランジン−エンドペルオキシドシンターゼ２（ＰＴＧＳ２）、及びシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）が含まれる。マーカータンパク質又はマーカータンパク質をコードする核酸の発現レベルは、限定されるものではないが、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅反応、逆転写酵素ＰＣＲ分析、定量的リアルタイムＰＣＲ、一本鎖高次構造多型分析（ＳＳＣＰ）、ミスマッチ切断検出、ヘテロ二重鎖分析、ノーザンブロット分析、ウェスタンブロット分析、インサイチューハイブリダイゼーション、アレイ分析、デオキシリボ核酸配列決定、制限断片長多型分析、及びそれらの組み合わせ又は部分的な組み合わせを含む当技術分野で公知の適切な技術を使用して決定することができる。
【０３５９】
いくつかの実施形態では、鉄依存性細胞分解を誘導する能力について試験薬を評価することは、試験薬と接触した細胞又は組織におけるフェロトーシスマーカー、例えば、過酸化脂質、活性酸素種（ＲＯＳ）、イソプロスタン、マロンジアルデヒド（ＭＤＡ）、鉄、グルタチオンペルオキシダーゼ４（ＧＰＸ４）、プロスタグランジン−エンドペルオキシドシンターゼ２（ＰＴＧＳ２）、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）、及びグルタチオン（ＧＳＨ）からなる群から選択されるマーカーのレベル又は活性を測定することを含む。
【０３６０】
いくつかの実施形態では、鉄依存性細胞分解を誘導する能力について試験薬を評価することは、試験薬と接触した細胞又は組織におけるマーカーのレベル又は活性を、試験薬と接触していない対照細胞又は組織におけるマーカーのレベル又は活性と比較することを含む。
【０３６１】
一実施形態では、過酸化脂質、イソプロスタン、活性酸素種（ＲＯＳ）、鉄、ＰＴＧＳ２及びＣＯＸ−２からなる群から選択されるマーカーのレベル又は活性の上昇、又はＧＰＸ４、ＭＤＡ、及びＧＳＨからなる群から選択されたマーカーのレベル又は活性の低下は、試験薬が鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤であることを示す。
【０３６２】
一実施形態では、鉄依存性細胞分解を誘導する能力について試験薬を評価することは、試験薬と接触した細胞又は組織における過酸化脂質を測定することを含む。
【０３６３】
一実施形態では、試験薬と接触した細胞又は組織における過酸化脂質のレベルの上昇は、試験薬が鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤であることを示す。
【０３６４】
一実施形態では、鉄依存性細胞分解を誘導する能力について試験薬を評価することは、試験薬の１つ又は複数の活性（例えば、過酸化脂質などのフェロトーシスマーカー及び／又は免疫刺激活性の調節）が既知のフェロトーシス阻害剤（例えば、フェロスタチン、Ｂ−メルカプトエタノール、又は鉄キレート剤）によって阻害されるか否かを評価することをさらに含む。
【０３６５】
一実施形態では、免疫応答を高める能力について候補免疫刺激剤を評価することは、免疫刺激活性について鉄依存性細胞分解を誘導する試験薬を評価することを含む。免疫応答を評価するための本明細書に記載の方法のいずれも、候補免疫刺激剤を評価するために使用することができる。
【０３６６】
一実施形態では、候補免疫刺激剤を評価することは、選択された候補免疫刺激剤と接触した細胞と共に免疫細胞を培養するか、又は選択された候補免疫刺激剤と接触した細胞によって産生される後細胞シグナル伝達因子に免疫細胞を曝露して、免疫細胞におけるＮＦκＢ、ＩＲＦ、若しくはＳＴＩＮＧのレベル若しくは活性を測定することを含む。
【０３６７】
一実施形態では、免疫細胞はＴＨＰ−１細胞である。例えば、ＮＦκＢ及びＩＲＦ活性は、市販のＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）で測定できる。ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞は、ＮＦＫＢ又はＩＲＦ経路のいずれかが活性化されるとレポータータンパク質を誘導するヒト単球細胞である。ＴＨＰ−１細胞は、選択された候補免疫刺激剤と接触した細胞と共に培養するか、又は選択された候補免疫刺激剤と接触した細胞によって産生される後細胞シグナル伝達因子に曝露し、次にＮＦＫＢ及びＩＲＦ活性の検出のために２００μｌのＱｕａｎｔｉＢｌｕｅ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）又は５０μｌのＱｕａｎｔｉＬｕｃと混合することができる。ＮＦＫＢ及びＩＲＦ活性は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓプレートリーダーで吸光度又は発光を測定することで定量することができる。
【０３６８】
一実施形態では、候補免疫刺激剤を評価することは、選択された候補免疫刺激剤と接触した細胞と共にＴ細胞を培養するか、又は選択された候補免疫刺激剤と接触した細胞によって産生される後細胞シグナル伝達因子にＴ細胞を曝露して、Ｔ細胞の活性化及び増殖を測定することを含む。
【０３６９】
一実施形態では、免疫細胞はマクロファージである。例えば、ＮＦκＢ及びＩＲＦ活性は、市販のＲａｗ−Ｄｕａｌ（商標）及びＪ７７４−Ｄｕａｌ（商標）マクロファージ細胞（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）で測定することができる。Ｒａｗ−Ｄｕａｌ（商標）及びＪ７７４−Ｄｕａｌ（商標）細胞は、ＮＦＫＢ又はＩＲＦ経路のいずれかが活性化されるとレポータータンパク質を誘導するマウスマクロファージ細胞株である。マクロファージ細胞は、選択された候補免疫刺激剤と接触した細胞と共に培養するか、又は選択された候補免疫刺激剤と接触した細胞によって産生される後細胞シグナル伝達因子に曝露し、次にＮＦＫＢ及びＩＲＦ活性の検出のために２００μｌのＱｕａｎｔｉＢｌｕｅ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）又は５０μｌのＱｕａｎｔｉＬｕｃのいずれかと混合することができる。ＮＦＫＢ及びＩＲＦ活性は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓプレートリーダーで吸光度又は発光を測定することで定量することができる。
【０３７０】
一実施形態では、免疫細胞は樹状細胞である。例えば、ｃｏ刺激マーカー（例えば、ＣＤ８０、ＣＤ８６）又は増強された抗原提示のマーカー（例えば、ＭＨＣＩＩ）は、フローサイトメトリーによって樹状細胞で測定することができる。樹状細胞は、選択された候補免疫刺激剤と接触した細胞と共に培養するか、又は選択された候補免疫刺激剤と接触した細胞によって産生される化合物に曝露し、次に活性化状態を示す細胞表面マーカーに特異的な抗体で染色することができる。続いて、これらのマーカーの発現レベルが、フローサイトメトリーによって決定される。
【０３７１】
候補免疫刺激剤はまた、マクロファージ及び／又は樹状細胞における免疫促進性サイトカインのレベルを測定することによって評価することができる。例えば、いくつかの実施形態では、候補免疫刺激剤を評価することは、マクロファージ細胞及び／又は樹状細胞を、選択された候補免疫刺激剤と接触した細胞と共に培養するか、又はマクロファージ細胞及び／又は樹状細胞を、選択された候補免疫刺激剤と接触した細胞によって産生される後細胞シグナル伝達因子と接触させて、免疫促進性サイトカイン（例えば、ＩＦＮ−α、ＩＬ−１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１７、及びＧＭＣＳＦ）のレベルを測定することを含む。免疫促進性サイトカインのレベルは、ＥＬＩＳＡなどの当技術分野で公知の方法によって決定することができる。
【０３７２】
ＶＩＩ．鉄依存性細胞分解によって産生される後細胞免疫刺激剤の同定方法
本出願人は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤による細胞の処置が、免疫活性を高める後細胞シグナル伝達因子の産生及び放出をもたらすことを示した。従って、鉄依存性細胞分解を誘導して免疫活性を高める薬剤は、癌及び感染症などの免疫活性の上昇から恩恵を受け得る障害の処置に使用することができる。代替のアプローチでは、分解細胞によって産生される後細胞シグナル伝達因子を単離し、免疫活性についてスクリーニングすることができる。このようにして、免疫活性を高める後細胞シグナル伝達因子又は「エフェクター」を、障害の処置に使用するために同定することができる。
【０３７３】
例えば、特定の態様では、本開示は、免疫刺激剤を同定する方法に関し、この方法は：
（ａ）細胞内で鉄依存性細胞分解を誘導するのに十分な量の鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤に細胞を接触させること；
（ｂ）鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤との接触後に細胞によって産生される１つ又は複数の後細胞シグナル伝達因子を単離すること；及び
（ｃ）免疫応答を調節する、例えば、高める又は誘導する能力について、１つ又は複数の後細胞シグナル伝達因子をアッセイすることを含む。
【０３７４】
細胞によって産生される１つ又は複数の後細胞シグナル伝達因子は、例えば、細胞が増殖する培地から細胞を（例えば、遠心分離によって）分離し、この馴化培地をさらに分析することができる。例えば、いくつかの実施形態では、馴化培地は、有機溶媒で抽出され、続いてＨＰＬＣ分画される。他の実施形態では、馴化培地は、サイズ排除クロマトグラフィーにかけられ、異なる画分が収集される。例えば、馴化培地をサイズ排除カラムに通し、ＦＰＬＣで分画することができる。
【０３７５】
免疫応答を調節する後細胞シグナル伝達因子の能力は、後細胞シグナル伝達因子を免疫細胞と接触させて、免疫活性を評価することによってアッセイすることができる。ＮＦｋＢ、ＩＲＦ、及び／又はＳＴＩＮＧのレベル又は活性、マクロファージのレベル又は活性、単球のレベル又は活性、樹状細胞のレベル又は活性、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、又はＣＤ３＋細胞のレベル又は活性、Ｔ細胞のレベル又は活性、及び免疫促進性サイトカインのレベル又は活性の測定などの免疫応答の測定のための本明細書に記載の方法のいずれかを使用して、免疫応答を調節する後細胞シグナル伝達因子の能力を測定することができる。例えば、いくつかの実施形態では、後細胞シグナル伝達因子を含む収集された画分は、ＴＨＰ−１  Ｄｕａｌ細胞に適用され、ＮＦＫＢ及び／又はＩＲＦ１レポーターの活性が評価される。陽性ヒットの画分は、ＴＨＰ−１  Ｄｕａｌ細胞でＮＦＫＢ又はＩＲＦ活性を誘導する能力によって確認される。陽性ヒットの画分は、免疫活性を有する特定の化合物を特定するために、質量分析（大分子）又はＮＭＲ（小分子）によってさらに特徴づけることができる。個々の化合物又は種の免疫活性は、そのような化合物又は種の合成又は組換え型をＴＨＰ−１  Ｄｕａｌ細胞に添加し、続いて上記のようにＮＦＫＢ又はＩＲＦの活性を測定することによって試験することができる。
【０３７６】
後細胞シグナル伝達因子の免疫活性は、後細胞シグナル伝達因子をマクロファージ、単球、樹状細胞、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、又はＣＤ３＋細胞、及び／又はＴ細胞に適用して、細胞のレベル又は活性を測定することによって決定することができる。例えば、一実施形態では、アッセイは、免疫細胞を１つ又は複数の後細胞シグナル伝達因子で処置して、免疫細胞のＮＦκＢ活性のレベル又は活性を測定することを含む。一実施形態では、アッセイは、Ｔ細胞を１つ又は複数の後細胞シグナル伝達因子で処置して、Ｔ細胞の活性化又は増殖を測定することを含む。一実施形態では、アッセイは、免疫細胞を１つ又は複数の後細胞シグナル伝達因子と接触させて、免疫細胞のＮＦκＢ、ＩＲＦ、又はＳＴＩＮＧのレベル又は活性を測定することを含む。一実施形態では、免疫細胞はＴＨＰ−１細胞である。
【０３７７】
後細胞シグナル伝達因子の免疫刺激活性はまた、動物モデル、例えば動物癌モデルで評価することができる。例えば、いくつかの実施形態では、後細胞シグナル伝達因子が動物に投与され、免疫応答が、例えば、ＮＦκＢ、ＩＲＦ、及び／又はＳＴＩＮＧのレベル又は活性、マクロファージのレベル又は活性、又は単球のレベル又は活性、樹状細胞のレベル又は活性、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、又はＣＤ３＋細胞のレベル又は活性、Ｔ細胞のレベル又は活性、及び後細胞シグナル伝達因子の投与後の免疫促進性サイトカインのレベル又は活性の変化を測定することによって動物で測定される。
【０３７８】
一実施形態では、この方法は、免疫応答を刺激する後細胞シグナル伝達因子を選択することをさらに含む。
【０３７９】
一実施形態では、この方法は、細胞内の鉄依存性細胞分解（例えば、フェロトーシス）のマーカーを検出することをさらに含む。
【０３８０】
細胞分解を受けていない細胞と比較して、鉄依存性細胞分解（例えば、フェロトーシス）においてより高いレベルで産生される後細胞シグナル伝達因子は、処置細胞及び未処置細胞における後細胞シグナル伝達因子のレベルを比較することによって同定することができる。例えば、一実施形態では、この方法は：
（ｉ）鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤との接触後に細胞によって産生される１つ又は複数の後細胞シグナル伝達因子のレベルを測定すること；
（ｉｉ）鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤との接触後に細胞によって産生される１つ又は複数の後細胞シグナル伝達因子のレベルを、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤で処置されていない対照細胞における１つ又は複数の後細胞シグナル伝達因子のレベルと比較すること；及び
（ｉｉｉ）ステップ（ｃ）でアッセイするための１つ又は複数の後細胞シグナル伝達因子を得るために、対照細胞と比較して、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤と接触した細胞においてレベルの増加を示す後細胞シグナル伝達因子を選択することをさらに含む。
【０３８１】
鉄依存性細胞分解（例えば、フェロトーシス）に特異的であるか、又は他の細胞死プロセスと比較して鉄依存性細胞分解（例えば、フェロトーシス）においてより高いレベルで産生される後細胞シグナル伝達因子もまた、異なる細胞死プロセスを受けている細胞における後細胞シグナル伝達因子のレベルを比較することによって同定することができる。
【０３８２】
例えば、上記の方法の一実施形態では、対照細胞は、鉄依存性細胞分解ではない細胞分解、例えば、アポトーシス、ネクロトーシス、又はパイロトーシス（ｐｙｒｏｐｔｏｓｉｓ）などのフェロトーシスではない細胞死プロセスを誘導する薬剤で処置される。
【実施例】
【０３８３】
実施例１：エラスチンで処置したＨＴ１０８０線維肉腫細胞によるヒト単球の活性化／刺激
薬剤／治療デザイン：
ＨＴ１０８０線維肉腫細胞を、対照（ＤＭＳＯ）又は様々な用量のエラスチン、ピペラジンエラスチン（ＰＥ）、又はイミダゾールケトエラスチン（ＩＫＥ）のいずれかで２４時間処置してから、ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞とさらに２４時間共培養した。エラスチンはＳｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ（Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）から購入し、ＤＭＳＯに溶解した。続いて、ＴＨＰ１の上清を、活性化Ｂ細胞の核因子カッパ軽鎖エンハンサー（ＮＦＫＢ）又はインターフェロン調節因子（ＩＲＦ）レポーターの活性について評価した。
【０３８４】
材料／方法：
ＨＴ１０８０細胞はＡＴＣＣから入手し、ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞はＩｎｖｉｖｏＧｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から入手した。ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞は、ＮＦＫＢ又はＩＲＦ経路のいずれかが活性化されるとレポータータンパク質を誘導するヒト単球細胞である。両方の細胞型は、アッセイの期間中、９６ウェルプレートで培養した。ＨＴ１０８０細胞は、１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭで培養し、ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞は、１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩで培養した。エラスチン、ＰＥ、又はＩＫＥを投与する２４時間前に、０．５％の最終ＤＭＳＯ濃度で７，５００個のＨＴ１０８０細胞をプレーティングした。処置の２４時間後、ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞（２５，０００細胞／ウェル）をＨＴ１０８０細胞に加えた。２４時間後、３０μｌの上清を２００μｌのＱｕａｎｔｉＢｌｕｅ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）（ＮＦＫＢレポーター活性用）又は５０μｌのＱｕａｎｔｉＬｕｃ（ＩＲＦレポーター活性用）と混合し、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓプレートリーダーで吸光度又は発光を記録した。
【０３８５】
結論：
図１Ａに示されているように、エラスチン処置は、ＨＴ１０８０細胞の生存率に悪影響を及ぼした。図１Ｂは、ビヒクル対照ＤＭＳＯではなくエラスチンで処置したＨＴ１０８０細胞が、ＴＨＰ１単球でＮＦＫＢシグナル伝達を誘発したことを示す。エラスチン類似体ＰＥ及びＩＫＥもまた、ＨＴ１０８０細胞の生存率に悪影響を及ぼし（図１Ｃ）、ＴＨＰ１単球でＮＦＫＢシグナル伝達を誘発した（図１Ｄ）。
【０３８６】
実施例２：エラスチンで処置したＰＡＮＣ１膵臓癌細胞によるヒト単球の活性化／刺激
薬剤／治療デザイン：
ＰＡＮＣ１膵臓癌細胞を、対照（ＤＭＳＯ）又は様々な用量のエラスチンのいずれかで２４時間処置してから、ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞とさらに２４時間共培養した。エラスチンはＳｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ（Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）から購入し、ＤＭＳＯに溶解した。続いて、ＴＨＰ１の上清を、ＮＦＫＢ又はＩＲＦレポーターの活性について評価した。
【０３８７】
材料／方法：
ＰＡＮＣ１細胞はＡＴＣＣから入手し、ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞はＩｎｖｉｖｏＧｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から入手した。両方の細胞型は、アッセイの期間中、９６ウェルプレートで培養した。エラスチンを投与する２４時間前に、０．５％の最終ＤＭＳＯ濃度で７，５００個のＰＡＮＣ−１細胞をプレーティングした。処置の２４時間後、ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞（２５，０００細胞／ウェル）をＰＡＮＣ−１細胞に加えた。２４時間後、３０μｌの上清を２００μｌのＱｕａｎｔｉＢｌｕｅ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）又は５０μｌのＱｕａｎｔｉＬｕｃと混合し、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓプレートリーダーで吸光度又は発光を記録した。
【０３８８】
結論：
図２Ａに示されているように、エラスチン処置は、ＰＡＮＣ１細胞の生存率に悪影響を及ぼした。図１Ｂは、ビヒクル対照ＤＭＳＯではなくエラスチンで処置したＰＡＮＣ１細胞がＴＨＰ１単球でＮＦＫＢシグナル伝達を誘発したことを示す。
【０３８９】
実施例３：エラスチンで処置したＣａｋｉ−１腎細胞癌細胞によるヒト単球の活性化／刺激
薬剤／治療デザイン：
Ｃａｋｉ−１腎細胞癌細胞を、対照（ＤＭＳＯ）又は様々な用量のエラスチンのいずれかで２４時間処置してから、ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞とさらに２４時間共培養した。エラスチンは、Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ（Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）から購入し、ＤＭＳＯに溶解した。続いて、ＴＨＰ１の上清を、ＮＦＫＢ又はＩＲＦレポーターの活性について評価した。
【０３９０】
材料／方法：
Ｃａｋｉ−１細胞はＡＴＣＣから入手し、ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞はＩｎｖｉｖｏＧｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から入手した。両方の細胞型は、アッセイの期間中、９６ウェルプレートで培養した。エラスチンを投与する２４時間前に、０．５％の最終ＤＭＳＯ濃度で７，５００個のＣａｋｉ−１細胞をプレーティングした。処置の２４時間後、ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞（２５，０００細胞／ウェル）をＣａｋｉ−１細胞に加えた。２４時間後、３０μｌの上清を２００μｌのＱｕａｎｔｉＢｌｕｅ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）又は５０μｌのＱｕａｎｔｉＬｕｃと混合し、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓプレートリーダーで吸光度又は発光を記録した。
【０３９１】
結論：
図３Ａに示されているように、エラスチン処置はＣａｋｉ−１細胞の生存率に悪影響を及ぼした。図３Ｂは、ビヒクル対照ＤＭＳＯではなくエラスチンで処置したＣａｋｉ−１細胞がＴＨＰ１単球でＮＦＫＢシグナル伝達を誘発したことを示す。
【０３９２】
実施例４：ＲＳＬ３で処置したＣａｋｉ−１腎細胞癌細胞によるヒト単球の活性化／刺激
薬剤／治療デザイン：
Ｃａｋｉ−１腎細胞癌細胞を、対照（ＤＭＳＯ）又は様々な用量のＲＳＬ３のいずれかで２４時間処置してから、ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞とさらに２４時間共培養した。ＲＳＬ３はＳｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍから購入し、ＤＭＳＯに溶解した。続いて、ＴＨＰ１の上清を、ＮＦＫＢ又はＩＲＦレポーターの活性について評価した。
【０３９３】
材料／方法：
Ｃａｋｉ−１細胞はＡＴＣＣから入手し、ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞はＩｎｖｉｖｏＧｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から入手した。両方の細胞型は、アッセイの期間中、９６ウェルプレートで培養した。ＲＳＬ３を投与する２４時間前に、０．５％の最終ＤＭＳＯ濃度で７，５００個のＣａｋｉ−１細胞をプレーティングした。処置の２４時間後、ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞（２５，０００細胞／ウェル）をＣａｋｉ−１細胞に加えた。２４時間後、３０μｌの上清を２００μｌのＱｕａｎｔｉＢｌｕｅ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）又は５０μｌのＱｕａｎｔｉＬｕｃと混合し、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓプレートリーダーで吸光度又は発光を記録した。
【０３９４】
結論：
図４Ａに示されているように、ＲＳＬ３処置は、Ｃａｋｉ−１細胞の生存率に悪影響を及ぼした。図４Ｂは、ビヒクル対照ＤＭＳＯではなくＲＳＬ３で処置したＣａｋｉ−１細胞がＴＨＰ１単球でＮＦＫＢシグナル伝達を誘発したことを示す。
【０３９５】
実施例５：ＲＳＬ３で処置したＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞白血病細胞によるヒト単球の活性化／刺激
薬剤／治療デザイン：
Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞白血病細胞を、対照（ＤＭＳＯ）又は様々な用量のＲＳＬ３のいずれかで２４時間処置してから、ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞とさらに２４時間共培養した。ＲＳＬ３はＳｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ（Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）から購入し、ＤＭＳＯに溶解した。続いて、ＴＨＰ１の上清を、ＮＦＫＢ又はＩＲＦレポーターの活性について評価した。
【０３９６】
材料／方法：
Ｊｕｒｋａｔ細胞はＡＴＣＣから入手し、ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞はＩｎｖｉｖｏＧｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から入手した。両方の細胞型は、アッセイの期間中、９６ウェルプレートで培養した。ＲＳＬ３を投与する２４時間前に、０．５％の最終ＤＭＳＯ濃度で１００，０００個のＪｕｒｋａｔ細胞をプレーティングした。処置の２４時間後、ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞（２５，０００細胞／ウェル）をＪｕｒｋａｔ細胞に加えた。２４時間後、３０μｌの上清を２００μｌのＱｕａｎｔｉＢｌｕｅ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）又は５０μｌのＱｕａｎｔｉＬｕｃと混合し、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓプレートリーダーで吸光度又は発光を記録した。
【０３９７】
結論：
図５Ａに示されているように、ＲＳＬ３処置は、Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞白血病細胞の生存率に悪影響を及ぼした。図５Ｂは、ビヒクル対照ＤＭＳＯではなくＲＳＬ３で処置したＪｕｒｋａｔ細胞がＴＨＰ１単球でＮＦＫＢシグナル伝達を誘発したことを示す。
【０３９８】
実施例６：ＲＳＬ３で処置したＡ２０Ｂ細胞白血病細胞によるヒト単球の活性化／刺激
薬剤／治療デザイン：
Ａ２０  Ｂ細胞白血病細胞を、対照（ＤＭＳＯ）又は様々な用量のＲＳＬ３で２４時間処置してから、ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞とさらに２４時間共培養した。ＲＳＬ３は、Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ（Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）から購入し、ＤＭＳＯに溶解した。続いて、ＴＨＰ１の上清を、ＮＦＫＢ又はＩＲＦレポーターの活性について評価した。
【０３９９】
材料／方法：
Ａ２０細胞はＡＴＣＣから入手し、ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞はＩｎｖｉｖｏＧｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から入手した。両方の細胞型は、アッセイの期間中、９６ウェルプレートで培養した。ＲＳＬ３を投与する２４時間前に、０．５％の最終ＤＭＳＯ濃度で５０，０００個のＡ２０細胞をプレーティングした。処置の２４時間後、ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞（２５，０００細胞／ウェル）をＡ２０細胞に加えた。２４時間後、３０μｌの上清を２００μｌのＱｕａｎｔｉＢｌｕｅ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）又は５０μｌのＱｕａｎｔｉＬｕｃと混合し、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓプレートリーダーで吸光度又は発光を記録した。
【０４００】
結論：
図６Ａに示されているように、ＲＳＬ−３処置は、Ａ２０  Ｂ細胞白血病細胞の生存率に悪影響を及ぼした。ビヒクル対照ＤＭＳＯではなくＲＳＬ３で処置したＡ２０細胞は、ＴＨＰ１単球でＮＦＫＢ（図６Ｂ）及びＩＲＦ（図６Ｃ）シグナル伝達を誘発した。
【０４０１】
実施例７：エラスチンで処置したＨＴ１０８０線維肉腫細胞によって誘発される炎症促進性シグナル伝達の特異性
薬剤／治療デザイン：
ＨＴ１０８０線維肉腫細胞を、１μＭのフェロスタチンの存在下又は非存在下で、対照（ＤＭＳＯ）又は様々な用量のエラスチン（例えば、０．０９８μＭ、０．１９５μＭ、０．３９１μＭ、０．７８１μＭ、１．５６３μＭ、３．１２５μＭ、６．２５μＭ、１２．５μＭ、及び２５μＭ）のいずれかで２４時間処置してから、ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞とさらに２４時間共培養する。フェロスタチンはＳｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ（Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）から購入し、ＤＭＳＯに溶解する。続いて、ＴＨＰ１の上清を、ＮＦＫＢ又はＩＲＦレポーターの活性について評価する。ＨＴ１０８０細胞はＡＴＣＣから入手し、ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞はＩｎｖｉｖｏＧｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から入手する。両方の細胞型は、アッセイの期間中、９６ウェルプレートで培養する。エラスチン処置ＨＴ１０８０細胞によって誘発されるＮＦＫＢシグナル伝達の誘導の特異性を、ＨＴ１０８０細胞の同時フェロスタチン処置によるその逆転によって評価する。
【０４０２】
実施例８：エラスチンで処置したＣａｋｉ−１細胞によって誘発される炎症促進性シグナル伝達の特異性
薬剤／治療デザイン：
Ｃａｋｉ−１腎癌細胞は、１μＭのフェロスタチン（Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ；Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）の存在下又は非存在下で、対照（ＤＭＳＯ）又は様々な用量のエラスチン（例えば、０．０９８μＭ、０．１９５μＭ、０．３９１μＭ、０．７８１μＭ、１．５６３μＭ、３．１２５μＭ、６．２５μＭ、１２．５μＭ、及び２５μＭ）のいずれかで２４時間処置してから、ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞とさらに２４時間共培養する。続いて、ＴＨＰ１の上清を、ＮＦＫＢ又はＩＲＦレポーターの活性について評価する。Ｃａｋｉ−１細胞はＡＴＣＣから入手し、ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞はＩｎｖｉｖｏＧｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から入手する。両方の細胞型は、アッセイの期間中、９６ウェルプレートで培養する。エラスチン処置Ｃａｋｉ−１細胞によって誘発されるＮＦＫＢシグナル伝達の誘導の特異性を、Ｃａｋｉ−１細胞の同時フェロスタチン処置によるその逆転によって評価する。
【０４０３】
実施例９：ＲＳＬ３で処置したＣａｋｉ−１腎癌細胞によって誘発される炎症促進性シグナル伝達の特異性
薬剤／治療デザイン：
Ｃａｋｉ−１腎癌細胞を、１μＭのフェロスタチンの存在下又は非存在下で、対照（ＤＭＳＯ）又は様々な用量のＲＳＬ３（例えば、０．００２μＭ、０．００５μＭ、０．０１４μＭ、０．０４１μＭ、０．１２３μＭ、０．３７０μＭ、１．１１１μＭ、３．３３３μＭ、及び１０μＭ）のいずれかで２４時間処置してから、ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞とさらに２４時間共培養する。続いて、ＴＨＰ１の上清を、ＮＦＫＢ又はＩＲＦレポーターの活性について評価する。Ｃａｋｉ−１細胞はＡＴＣＣから入手し、ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞はＩｎｖｉｖｏＧｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から入手する。両方の細胞型は、アッセイの期間中、９６ウェルプレートで培養する。ＲＳＬ３処置Ｃａｋｉ−１細胞によって誘発されるＮＦＫＢシグナル伝達の誘導の特異性を、Ｃａｋｉ−１細胞の同時フェロスタチン処置によるその逆転によって評価する。
【０４０４】
実施例１０：ＲＳＬ３で処置したＡ２０細胞によって誘発される炎症促進性シグナル伝達の特異性
薬剤／治療デザイン：
Ａ２０リンパ腫細胞を、１μＭのフェロスタチンの存在下又は非存在下で、対照（ＤＭＳＯ）又は様々な用量のＲＳＬ３（例えば、０．００２μＭ、０．００５μＭ、０．０１４μＭ、０．０４１μＭ、０．１２３μＭ、０．３７０μＭ、１．１１１μＭ、３．３３３μＭ、及び１０μＭ）のいずれかで２４時間処置してから、ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞とさらに２４時間共培養する。続いて、ＴＨＰ１の上清を、ＮＦＫＢ又はＩＲＦレポーターの活性について評価する。Ａ２０細胞はＡＴＣＣから入手し、ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞はＩｎｖｉｖｏＧｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から入手する。両方の細胞型は、アッセイの期間中、９６ウェルプレートで培養する。ＲＳＬ３処置Ａ２０細胞によって誘発されるＮＦＫＢシグナル伝達の誘導の特異性を、Ａ２０細胞の同時フェロスタチン処置によるその逆転によって評価する。
【０４０５】
実施例１１：Ａ２０リンパ腫腫瘍異種移植片のＲＳＬ３処置によるインビボでの抗腫瘍／炎症促進性応答の誘導
薬剤／治療デザイン：
ＢＡＬＢ／Ｃマウスに、５×１０６個のＡ２０リンパ腫細胞を皮下注射する。腫瘍のサイズが１５０〜２００ｍｍ３の中央値に達したら、マウスにビヒクル又はＲＳＬ３を注射によって腫瘍内投与する。４８時間後、腫瘍浸潤細胞、リンパ球、及び脾細胞に対して免疫表現型の検査を行って、骨髄細胞及びリンパ球の動員と活性化の状態を特徴づける。免疫表現型の検査は、腫瘍切片の免疫組織化学／免疫蛍光染色によって、又は腫瘍を単一細胞懸濁液で最初に解離させ、次に細胞をフローサイトメトリーに供することによって行う（Ｊ  Ｖｉｓ  Ｅｘｐ．，２０１５，（９８）：５２６５７；Ｊ  Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．２０１５  Ｆｅｂ  ３；１０７（３）；Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ．２０１２  Ｊｕｌ；２（７）：６０８−２３）。ビヒクルと比較して、ＲＳＬ３処置による炎症促進性応答の誘導は、単球、マクロファージ、及びＴ細胞の腫瘍微小環境への動員の増加によって評価する。さらに、抗腫瘍免疫応答は、ＣＤ４＋ＦｏｘＰ３＋  Ｔ制御性細胞の同時活性化を伴わない、マクロファージ（ＭＨＣＩＩ及びＣＤ８０）ＣＤ１１＋ＣＤ１０３＋樹状細胞（ＭＨＣＩＩ）並びにＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞（Ｋｉ６７及びＣＤ６９）の両方における活性化マーカーの増加を測定することによって評価する。加えて、ＲＳＬ３による腫瘍増殖の阻害を、３週間又は腫瘍が２０００ｍｍ３の最大サイズに達するまでの腫瘍サイズの測定によって評価する。
【０４０６】
実施例１２：Ａ２０リンパ腫腫瘍異種移植片の局所ＲＳＬ３処置によるインビボでの全身性抗腫瘍／炎症促進性応答の誘導
薬剤／治療デザイン：
ＢＡＬＢ／Ｃマウスに、５×１０６個のＡ２０リンパ腫細胞を体の２つの異なる部位に皮下注射する。腫瘍が１５０〜２００ｍｍ３の中央値に達したら、１つの腫瘍部位にビヒクル又はＲＳＬ３をマウスに腫瘍内投与する。ＲＳＬ３による腫瘍増殖の阻害を、３週間後の又は腫瘍が２０００ｍｍ３の最大サイズに達するまでの、処置済み及び未処置（対側）の腫瘍の両方の腫瘍サイズの測定によって評価する。加えて、全身適応免疫応答の関与を、対側の腫瘍部位内の腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を分析することによって評価する。対側腫瘍における治療的に適切な適応免疫応答を、Ｔエフェクター細胞（ＦｏｘＰ３−ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞）の数量的増加、又はＴ細胞（ＣＤ６９、ｋｉ６７）、マクロファージ（ＭＨＣＩＩ及びＣＤ８０）、若しくはＣＤ１１＋ＣＤ１０３＋樹状細胞（ＭＨＣＩＩ）の活性化状態の増加のいずれかによって評価する。
【０４０７】
実施例１３：ヒト臨床試験における腎細胞癌を処置するためのＲＳＬ３の使用
薬剤／治療デザイン：
ＲＳＬ３は、炎症促進性シグナル伝達を引き起こすように腎細胞癌細胞の細胞死を誘導する。ＲＳＬ３の使用を含む本開示の方法の使用により、本実施例は、ＲＳＬ３の治療効果の証拠を提供する予定である。
【０４０８】
無作為化比較試験（ＲＣＴ）を行って、１回又は２回の抗血管新生治療法に失敗した腎癌患者の処置における、ＲＳＬ３のみ又はニボルマブと組み合わせて複数回注入した後のＲＳＬ３の安全性及び有効性をニボルマブの複数回注入と比較して評価する。
【０４０９】
抗血管新生療法に失敗した進行性ＲＣＣの１００人の患者を、ＲＳＬ３のみ（１日１０ｍｇ）、ニボルマブのみ（２週間ごとに３ｍｇ／ｋｇ）、又はニボルマブと組み合わせたＲＳＬ３のいずれかを投与するために無作為化する。患者は、少なくとも７０％のカルノスキースコア（ＫＰＳ：Ｋａｒｎｏｓｋｙ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  Ｓｃｏｒｅ）を有し、脳転移の証拠がなく、ニボルマブによる前処置を受けておらず、且つ活動性の自己免疫疾患又は全身性免疫抑制を必要とする病状がないことが求められる。ＫＰＳランキングは、１００〜０までであり、１００は疾患の証拠がなく、０は死亡であり、患者が化学療法に耐える能力を評価するために使用される。
【０４１０】
腫瘍の評価は、処置開始後８週目に開始し、その後最初の１年間は８週間ごとに行い、進行又は処置の中止まで１２週間ごとに行う。ＲＳＬ３の有効性は、全生存率の評価によって判断する。
【０４１１】
実施例１４：Ｂ１６．ＢＬ６黒色腫腫瘍異種移植片のピペラジンエラスチン及び抗ＣＴＬＡ４抗体（９Ｄ９）処置の組み合わせによるインビボでの抗腫瘍免疫応答の誘導
薬剤／治療デザイン：
Ｃ５７／ＢＬ６マウスに、１×１０５個のＢ１６．ＢＬ６黒色腫細胞を皮下注射する。マウスに、ビヒクル、ピペラジンエラスチン（４０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）、抗ＣＴＬＡ４抗体９Ｄ９（１０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）、又はピペラジンエラスチンと９Ｄ９の組み合わせを腫瘍内投与する。腫瘍のサイズが１５０〜２００ｍｍ３の中央値に達したらマウスに投与する。４８時間後、腫瘍浸潤細胞、リンパ球、及び脾細胞に対して免疫表現型検査を行って、骨髄細胞及びリンパ球の動員と活性化の状態を特徴づける。ビヒクルと比較して、ピペラジンエラスチンと９Ｄ９処置の組み合わせによる最大の炎症性応答の誘導を、いずれかの処置のみと比較した腫瘍微小環境へのＣＤ３＋  Ｔ細胞の動員の増加によって評価する。加えて、いずれかの処置のみと比較した併用療法による腫瘍増殖の最大阻害を、３週間後の又は腫瘍が２０００ｍｍ３の最大サイズに達するまでの腫瘍サイズの測定によって評価する。
【０４１２】
実施例１５：炎症促進性フェロトーシスを誘導する化合物をスクリーニングする方法
薬剤／治療デザイン：
３８４ウェルフォーマットにおけるＣａｋｉ−１腎癌細胞を、フェロトーシス阻害剤（フェロスタチン、Ｂ−メルカプトエタノール、又は鉄キレート剤）の非存在下又は存在下で、化学スクリーニングライブラリーの試験化合物に２４〜４８時間曝露する。続いて、ＴＨＰ１二重細胞を、処置したＣａｋｉ−１細胞と共培養する。ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞の添加の２４時間後、上清を、ＮＦＫＢ又はＩＲＦレポーターの活性について評価する。フェロトーシス阻害剤の非存在下ではＮＦＫＢ又はＩＲＦレポーターの活性を誘導するが、フェロトーシス阻害剤の存在下ではＮＦＫＢ又はＩＲＦレポーターの活性を誘導しない化合物を炎症促進性化合物として選択する。
【０４１３】
実施例１６：フェロトーシス誘導物質で処置した細胞に由来する物質の炎症性を試験する方法
薬剤／治療デザイン：
Ｃａｋｉ−１腎癌細胞を、エラスチン又はＲＳＬ３（又は他のフェロトーシス誘導物質）に曝露し、２４〜４８時間後に馴化培地を収集する。続いて、馴化培地を有機溶媒で抽出し、続いてＨＰＬＣ分画を行う。具体的には、馴化培地を、酢酸エチルを用いて抽出し、濃縮し、そして極性によって分画する。別法では、馴化培地をサイズ排除クロマトグラフィーにかけて画分を収集する。具体的には、馴化培地をサイズ排除カラムに通し、ＦＰＬＣで分画する。収集した画分を、ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞に２４時間加え、その後レポーター活性を評価する。陽性ヒットの画分は、ＴＨＰ１  Ｄｕａｌ細胞でＮＦＫＢ又はＩＲＦ活性を誘導する能力によって確認する。陽性ヒットの画分は、炎症活性を有する特定の化合物を特定するために、質量分析（大分子）又はＮＭＲ（小分子）によってさらに特徴づける。個々の化合物又は種の炎症性は、そのような化合物又は種の合成又は組換え型をＴＨＰ１  Ｄｕａｌ細胞に添加し、続いて上記のようにＮＦＫＢ又はＩＲＦ活性を測定することによって試験する。
【０４１４】
実施例１７：エラスチンで処置したＨＴ１０８０線維肉腫細胞によって誘発される炎症促進性シグナル伝達の特異性
薬剤／治療デザイン：
ＨＴ１０８０線維肉腫細胞を、様々な用量のエラスチン（例えば、０．８μＭ、０．１６μＭ、０．３１μＭ、０．６３μＭ、１．２５μＭ、２．５μＭ、５μＭ、１０μＭ、又は２０μＭ）のみで、又はフェロトーシス阻害剤（１μＭ  フェロスタチン−１、１μＭ  リプロクススタチン−１、１００μＭ  トロロックス、２５μＭ  β−メルカプトエタノール、若しくは１００μＭ  デフェロキサミン）との組み合わせで２４時間処置してから、ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞とさらに２４時間共培養する。フェロスタチン−１及びリプロクススタチン−１は、Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ（Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）から購入し、ＤＭＳＯに溶解した。トロロックスは、Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ  Ｉｎｃから購入し、ＤＭＳＯに再懸濁した。メシル酸デフェロキサミンは、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから購入し、水に再懸濁した。β−メルカプトエタノールはＬｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから購入した。続いて、ＴＨＰ１の上清を、ＮＦＫＢ活性について評価した。ＨＴ１０８０細胞は、ＡＴＣＣから入手し、ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞はＩｎｖｉｖｏＧｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から入手した。両方の細胞型は、アッセイの期間中、９６ウェルプレートで培養した。
【０４１５】
結果：
図７Ａ及び図８Ａに示されているように、ＨＴ１０８０線維肉腫細胞のエラスチン処置により、細胞の生存率が用量依存的に低下し、この生存率の低下は、各フェロトーシス阻害剤によって弱められた。図７Ｂ及び図８Ｂに示されているように、ＨＴ１０８０線維肉腫細胞のエラスチン処置により、ＴＨＰ１細胞のＮＦＫＢ活性が用量依存的に増加し、このＮＦＫＢ活性の増加は、各フェロトーシス阻害剤によって無効にされた。これらの結果は、細胞死がエラスチン処置ＨＴ１０８０細胞によって誘発されるＮＦＫＢシグナル伝達の誘導に役割を果たすことを実証している。
【０４１６】
実施例１８：ＡＣＳＬ４及びＣＡＲＳ遺伝子のノックダウンは、ＨＴ１０８０線維肉腫細胞におけるエラスチン媒介細胞死を阻害する
薬剤／治療デザイン：
ＨＴ１０８０細胞（５，０００個の細胞／ウェル）を、ＤｈａｒｍａＦＥＣＴ  Ｉトランスフェクション試薬（Ｃａｔａｌｏｇ  ＃  Ｔ−２００１）及び対照ｓｉＲＮＡ（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ  Ｃａｔａｌｏｇ  ＃  Ｄ−００１８１０−１０−０５）又はＡＣＳＬ４を標的とするｓｉＲＮＡ［３７．５ｎＭ］（図９Ａ、Ｄｈａｒｍａｃｏｎ  Ｃａｔａｌｏｇ  ＃  Ｌ−００９３６４−００−００５）又はＡＣＳＬ４（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｉｌｅｎｃｅｒ  Ｓｅｌｅｃｔ  Ｃａｔａｌｏｇ  ＃'ｓ  ：ｓ５００１、ｓ５００１、ｓ５００２）若しくはＣＡＲＳ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｉｌｅｎｃｅｒ  Ｓｅｌｅｃｔ  Ｃａｔａｌｏｇ  ＃'ｓ  ：Ｓ２４０４、ｓ２４０５、ｓ２４０６）に対するｓｉＲＮＡのプール（図９Ｂ／Ｃ）を用いて９６ウェルフォーマットで逆トランスフェクトした。トランスフェクションの４８時間後、細胞培養培地を、様々な濃度のエラスチン（図９Ａ）又は固定濃度のエラスチン（１０μＭ、図９Ｂ／Ｃ）を含む新鮮な培地に交換した。加えて、５０，０００個のレポーターＴＨＰ１−ｄｕａｌ細胞をいくつかのプレートに追加した（図９Ｃ）。２４時間後、ＨＴ１０８０細胞の生存率を測定するか（図９Ａ／Ｂ）、又はＴＨＰ１の上清をＮＦＫＢ活性について評価した（図９Ｃ）。ＨＴ１０８０細胞はＡＴＣＣから入手し、ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞はＩｎｖｉｖｏＧｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から入手した。
【０４１７】
結果：
ＡＣＳＬ４遺伝子は、細胞内のアラキドン酸のレベルを制御し、細胞死の調節に関与するアシル−ＣｏＡシンテターゼである長鎖脂肪酸−ＣｏＡリガーゼ４をコードする。ＣＡＲＳ遺伝子は、システイニル−ｔＲＮＡシンテターゼをコードする。ＣＡＲＳのノックダウンは、脂質活性酸素種の誘導を防止することによってエラスチン誘導性フェロトーシスを阻害することが示されている。Ｈａｙａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６，Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  Ｄｉｆｆｅｒ．２３（２）：２７０−２７８を参照されたい。図９Ａ及び図９Ｂに示されているように、ＨＴ１０８０細胞におけるＡＣＬＳ４又はＣＡＲＳのいずれかの遺伝子ノックダウンは、エラスチンの存在下で培養したＨＴ１０８０細胞の生存率をある程度助ける。加えて、ＨＴ１０８０細胞におけるＡＣＬＳ４又はＣＡＲＳのいずれかの遺伝子ノックダウンは、エラスチン処置ＨＴ１０８０細胞と共培養された単球のＮＦＫＢ活性を無効にする（図９Ｃ）。これらの結果は、細胞死がエラスチン処理ＨＴ１０８０細胞によって誘発されるＮＦＫＢシグナル伝達の誘導に役割を果たすこと、及び特定の細胞内タンパク質の欠如がフェロトーシスの炎症促進性を低下させることを実証している。
【０４１８】
実施例１９：ＧＰＸ４阻害剤（ＲＳＬ３、ＭＬ１６２、又はＭＬ２１０）で処置したＡ２０細胞によって誘発される炎症促進性シグナル伝達の特異性
薬剤／治療デザイン：
Ａ２０リンパ腫細胞を、１μＭ  フェロスタチン−１の存在下又は非存在下で、様々な用量（例えば、０．００２μＭ、０．００５μＭ、０．０１４μＭ、０．０４１μＭ、０．１２３μＭ、０．３７０μＭ、１．１１１μＭ、３．３３３μＭ、及び１０μＭ）のＧＰＸ４阻害剤（ＲＳＬ３、ＭＬ１６２、又はＭＬ２１０）で２４時間処置した。ＭＬ１６２は、Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ  Ｉｎｃから購入し、ＤＭＳＯに再懸濁した。ＭＬ２１０は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから購入し、ＤＭＳＯに再懸濁した。Ａ２０リンパ腫細胞も、陰性対照としてＤＭＳＯで処置した。ＤＭＳＯ又はＧＰＸ４阻害剤での処置の２４時間後、Ａ２０リンパ腫細胞を、ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞とさらに２４時間共培養した。続いて、ＴＨＰ１の上清を、ＮＦＫＢレポーターの活性について評価した。Ａ２０細胞はＡＴＣＣから入手し、ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞はＩｎｖｉｖｏＧｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から入手した。両方の細胞型は、アッセイの期間中、９６ウェルプレートで培養した。
【０４１９】
結果：
図１０Ａ、図１１Ａ、及び図１２Ａに示されているように、Ａ２０リンパ腫細胞の各ＧＰＸ４阻害剤（ＲＳＬ３、ＭＬ１６２、又はＭＬ２１０）での処置により、細胞の生存率が用量依存的に低下し、この生存率の低下は、フェロトーシス阻害剤であるフェロスタチン−１によって弱められた。図１０Ｂ、図１１Ｂ、及び図１２Ｂに示されているように、Ａ２０リンパ腫細胞のＧＰＸ４阻害剤での処置により、ＴＨＰ１細胞のＮＦＫＢ活性が用量依存的に増加し、このＮＦＫＢ活性の増加は、フェロトーシス阻害剤であるフェロスタチン−１によって弱められた。これらの結果は、細胞死が、ＧＰＸ−４阻害剤で処置したＡ２０リンパ腫細胞によって誘発されるＮＦＫＢシグナル伝達の誘導に役割を果たすことを実証している。
【０４２０】
実施例２０：ＧＰＸ４阻害剤（ＲＳＬ３又はＭＬ１６２）で処置したＣａｋｉ−１腎癌細胞によって誘発される炎症促進性シグナル伝達の特異性
薬剤／治療デザイン：
Ｃａｋｉ−１腎癌細胞を、１μＭ  フェロスタチンの存在下又は非存在下で、対照（ＤＭＳＯ）又は様々な用量（例えば、０．００２μＭ、０．００５μＭ、０．０１４μＭ、０．０４１μＭ、０．１２３μＭ、０．３７０μＭ、１．１１１μＭ、３．３３３μＭ、及び１０μＭ）のＧＰＸ４阻害剤（ＲＳＬ３又はＭＬ１６２）のいずれかで２４時間処置してから、ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞とさらに２４時間共培養した。続いて、ＴＨＰ１の上清を、ＮＦＫＢレポーターの活性について評価した。Ｃａｋｉ−１細胞はＡＴＣＣから入手し、ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ細胞はＩｎｖｉｖｏＧｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から入手した。両方の細胞型は、アッセイの期間中、９６ウェルプレートで培養した。
【０４２１】
結果：
図１３Ａ及び図１４Ａに示されているように、Ｃａｋｉ−１腎癌細胞のＧＰＸ４阻害剤（ＲＳＬ３又はＭＬ１６２）での処置により、細胞の生存率が用量依存的に低下し、この生存率の低下は、フェロトーシス阻害剤であるフェロスタチン−１によって弱められた。図１３Ｂ及び図１４Ｂに示されているように、Ｃａｋｉ−１腎癌細胞のＲＳＬ３又はＭＬ１６２での処置により、ＴＨＰ１細胞のＮＦＫＢ活性が用量依存的に増加し、このＮＦＫＢ活性の増加は、フェロトーシス阻害剤であるフェロスタチン−１によって弱められた。これらの結果は、細胞死が、ＧＰＸ−４阻害剤処置Ｃａｋｉ−１腎癌細胞によって誘発されるＮＦＫＢシグナル伝達の誘導に役割を果たすことを実証している。
【０４２２】
等価物
当業者は、本明細書に記載の特定の実施形態及び方法の多くの等価物を認識する、又は日常的な実験のみを使用して確認することができるであろう。そのような等価物は、以下の特許請求の範囲に含まれることが意図されている。
【０４２３】
参照による組み込み
本出願で言及される各参考文献、特許、及び特許出願は、あたかも各参照が個別に組み込まれると述べられたかのように、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【国際調査報告】
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