(57)【要約】本明細書においては、とりわけ、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する単離されたヒト化抗体が提供される。ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、及び産生方法、ならびにそれに関連する使用方法も本明細書で提供される。好都合なことに、これらの抗体は、多数のＳＩＲＰ−αポリペプチドと高親和性で結合すること、多数の哺乳動物のＳＩＲＰ−αポリペプチド（例えば、ヒトｖ１、ヒトｖ２、カニクイザル、及び／または多数のマウスＳＩＲＰ−αタンパク質）に対する交差反応性、マクロファージの食作用を亢進する能力、樹状細胞の活性化を亢進する能力、及び／またはＣＤ４７を発現する腫瘍のインビボ成長を阻害する能力などの、多くの有用なインビトロ及び／またはインビボ特性のうちの１つ以上を有する。【選択図】図１２
2021518142.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する単離された抗体であって、
（ａ）配列番号２６のアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含む重鎖；及び
（ｂ）式ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＲＩＴＣＳＧＧＳＹＳＳＹＹＹＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＴＬＩＹＳＤＤＫＲＰＳＮＩＰＥＲＦＳＧＳＳＳＧＴＴＶＴＬＴＩＳＧＶＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＧＧＹＤＱＳＳＹＴＮＰＦＧＸ１ＧＴＸ２Ｘ３ＴＶＬ（配列番号７１）に従ったアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む軽鎖を含み、ここで、Ｘ１は、ＧまたはＴであり；Ｘ２は、Ｋ、Ｑ、またはＲであり；及びＸ３は、ＬまたはＶであり、前記ＶＬドメインは、配列番号２５の配列を含まない、前記抗体。
【請求項２】
前記ＶＬドメインが、配列番号３９〜４１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
前記軽鎖が、式ＧＱＰＫＡＮＰＴＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＧＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＫＰＳＫＱＳＸ４Ｘ５ＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ（配列番号７２）に従ったアミノ酸配列を含む軽鎖定常（ＣＬ）ドメイン配列をさらに含み、ここで、Ｘ４Ｘ５が、ＮＤ、ＤＮ、ＤＳ、またはＳＤである、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項４】
前記軽鎖が、配列番号４３〜４６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖定常（ＣＬ）ドメイン配列をさらに含む、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項５】
前記軽鎖が、κ軽鎖定常（ＣＬ）ドメインをさらに含む、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項６】
前記軽鎖が、配列番号３６のアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の抗体。
【請求項７】
前記軽鎖が、λ軽鎖定常（ＣＬ）ドメインをさらに含む、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項８】
前記軽鎖が、配列番号３７または配列番号３８のアミノ酸配列を含む、請求項７に記載の抗体。
【請求項９】
前記軽鎖が、配列番号４８〜５７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項１０】
前記抗体が、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、単一ドメイン抗体、一本鎖重鎖抗体、または一本鎖軽鎖抗体である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１１】
前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１２】
前記重鎖が、Ｆｃ領域を含む重鎖定常ドメインを含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１３】
前記Ｆｃ領域が、ＩｇＧ１  Ｆｃ領域、ＩｇＧ２  Ｆｃ領域、及びＩｇＧ４  Ｆｃ領域からなる群から選択されるヒトＦｃ領域である、請求項１２に記載の抗体。
【請求項１４】
前記Ｆｃ領域が、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域である、請求項１２に記載の抗体。
【請求項１５】
前記Ｆｃ領域が、ＥＵに従ったアミノ酸位置ナンバリングである、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３７Ａ置換を含むヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域である、請求項１２に記載の抗体。
【請求項１６】
前記Ｆｃ領域が、ＥＵに従ったアミノ酸位置ナンバリングである、Ｎ２９７Ａ置換をさらに含む、請求項１５に記載の抗体。
【請求項１７】
前記Ｆｃ領域が、ヒトＩｇＧ２  Ｆｃ領域である、請求項１２に記載の抗体。
【請求項１８】
前記Ｆｃ領域が、ＥＵに従ったアミノ酸位置ナンバリングである、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓ置換を含むヒトＩｇＧ２  Ｆｃ領域である、請求項１２に記載の抗体。
【請求項１９】
前記Ｆｃ領域が、ＥＵに従ったアミノ酸位置ナンバリングである、Ｎ２９７Ａ置換をさらに含む、請求項１７または１８に記載の抗体。
【請求項２０】
前記Ｆｃ領域が、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域であり、前記重鎖が、ＥＵに従ったアミノ酸位置ナンバリングである、Ｓ２２８Ｐ置換を含む、請求項１２に記載の抗体。
【請求項２１】
前記重鎖定常ドメインが、配列番号３１〜３５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の抗体。
【請求項２２】
前記重鎖定常ドメインが、配列番号３３、３４、及び１３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の抗体。
【請求項２３】
前記重鎖定常ドメインが、配列番号１３２〜１３９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の抗体。
【請求項２４】
前記重鎖が、配列番号５８〜６２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項２５】
前記重鎖が、配列番号６０、６１、及び１２９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項２６】
（ａ）前記重鎖が、配列番号６２のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５２のアミノ酸配列を含み；
（ｂ）前記重鎖が、配列番号６２のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５３のアミノ酸配列を含み；
（ｃ）前記重鎖が、配列番号６２のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５４のアミノ酸配列を含み；
（ｄ）前記重鎖が、配列番号６２のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５５のアミノ酸配列を含み；
（ｅ）前記重鎖が、配列番号６２のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５６のアミノ酸配列を含み；または
（ｆ）前記重鎖が、配列番号６２のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５７のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項２７】
（ａ）前記重鎖が、配列番号５８のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５２のアミノ酸配列を含み；
（ｂ）前記重鎖が、配列番号５９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５２のアミノ酸配列を含み；
（ｃ）前記重鎖が、配列番号６０のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５２のアミノ酸配列を含み；
（ｄ）前記重鎖が、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５２のアミノ酸配列を含み；
（ｅ）前記重鎖が、配列番号５８のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５３のアミノ酸配列を含み；
（ｆ）前記重鎖が、配列番号５９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５３のアミノ酸配列を含み；
（ｇ）前記重鎖が、配列番号６０のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５３のアミノ酸配列を含み；
（ｈ）前記重鎖が、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５３のアミノ酸配列を含み；
（ｉ）前記重鎖が、配列番号５８のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５４のアミノ酸配列を含み；
（ｊ）前記重鎖が、配列番号５９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５４のアミノ酸配列を含み；
（ｋ）前記重鎖が、配列番号６０のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５４のアミノ酸配列を含み；
（ｌ）前記重鎖が、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５４のアミノ酸配列を含み；
（ｍ）前記重鎖が、配列番号５８のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５５のアミノ酸配列を含み；
（ｎ）前記重鎖が、配列番号５９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５５のアミノ酸配列を含み；
（ｏ）前記重鎖が、配列番号６０のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５５のアミノ酸配列を含み；
（ｐ）前記重鎖が、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５５のアミノ酸配列を含み；
（ｑ）前記重鎖が、配列番号５８のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５６のアミノ酸配列を含み；
（ｒ）前記重鎖が、配列番号５９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５６のアミノ酸配列を含み；
（ｓ）前記重鎖が、配列番号６０のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５６のアミノ酸配列を含み；
（ｔ）前記重鎖が、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５６のアミノ酸配列を含み；
（ｕ）前記重鎖が、配列番号５８のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５７のアミノ酸配列を含み；
（ｖ）前記重鎖が、配列番号５９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５７のアミノ酸配列を含み；
（ｗ）前記重鎖が、配列番号６０のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５７のアミノ酸配列を含み；または
（ｘ）前記重鎖が、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５７のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項２８】
（ａ）前記重鎖が、配列番号６０のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５５のアミノ酸配列を含み；
（ｂ）前記重鎖が、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５５のアミノ酸配列を含み；
（ｃ）前記重鎖が、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５５のアミノ酸配列を含み；
（ｄ）前記重鎖が、配列番号１２４のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５２のアミノ酸配列を含み；または
（ｅ）前記重鎖が、配列番号１２４のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５５のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項２９】
ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現するマクロファージによる食作用を亢進する、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項３０】
ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現する樹状細胞の活性化を亢進する、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項３１】
ＣＤ４７を発現する腫瘍のインビボ成長を阻害する、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項３２】
薬剤にコンジュゲートされる、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項３３】
二重特異性抗体である、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項３４】
ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する第１の抗原結合ドメインと、がん細胞によって発現される抗原に結合する第２の抗原結合ドメインとを含む、請求項３３に記載の抗体。
【請求項３５】
前記がん細胞によって発現される前記抗原が、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＳ１／ＳＬＡＭＦ７、Ｔｒｏｐ−２、５Ｔ４、ＥｐｈＡ４、ＢＣＭＡ、ムチン１、ムチン１６、ＰＤ−Ｌ１、ＰＴＫ７、ＳＴＥＡＰ１、エンドセリンＢ型受容体、メソテリン、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＮＰＰ３、ＳＬＣ４４Ａ４、ＧＮＭＢ、ネクチン４、ＮａＰｉ２ｂ、ＬＩＶ−１Ａ、グアニル酸シクラーゼＣ、ＤＬＬ３、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、インテグリンαＶβ３、インテグリンα５β１、ＭＥＴ、ＩＧＦ１Ｒ、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＲＡＮＫＬ、ＦＡＰ、テネイシン、Ｌｅｙ、ＥｐＣＡＭ、ＣＥＡ、ｇｐＡ３３、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ７２、ムチン、ＣＡＩＸ、ＥＰＨＡ３、葉酸受容体α、ＧＤ２、ＧＤ３、及びＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ、ＳＳＸ−２、ＭＡＧＥファミリータンパク質、ＭＡＧＥ−Ａ３、ｇｐ１００／ｐｍｅｌ１７、Ｍｅｌａｎ−Ａ／ＭＡＲＴ−１、ｇｐ７５／ＴＲＰ１、チロシナーゼ、ＴＲＰ２、ＣＥＡ、ＰＳＡ、ＴＡＧ−７２、未成熟ラミニン受容体、ＭＯＫ／ＲＡＧＥ−１、ＷＴ−１、ＳＡＰ−１、ＢＩＮＧ−４、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ１、ＰＲＡＭＥ、サバイビン、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、ＭＡＲＴ−２、ｐ５３、Ｒａｓ、β−カテニン、ＴＧＦ−βＲＩＩ、ＨＰＶ  Ｅ６またはＨＰＶ  Ｅ７に由来するペプチドを含むＭＨＣ／ペプチド複合体からなる群から選択される、請求項３４に記載の抗体。
【請求項３６】
ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する第１の抗原結合ドメインと、免疫細胞によって発現される抗原に結合する第２の抗原結合ドメインとを含む、請求項３３に記載の抗体。
【請求項３７】
前記免疫細胞によって発現される前記抗原が、ＢＤＣＡ２、ＢＤＣＡ４、ＩＬＴ７、ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ２、ＬＩＬＲＢ３、ＬＩＬＲＢ４、ＬＩＬＲＢ５、Ｓｉｇｌｅｃ−３、Ｓｉｇｌｅｃ−７、Ｓｉｇｌｅｃ−９、Ｓｉｇｌｅｃ−１５、ＦＧＬ−１、ＣＤ２００、ＣＤ２００Ｒ、ＣＳＦ−１Ｒ、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ１６３、ＣＤ２０６、ＤＥＣ２０５、ＣＤ４７、ＣＤ１２３、アルギナーゼ、ＩＤＯ、ＴＤＯ、ＡｈＲ、ＥＰ２、ＣＯＸ−２、ＣＣＲ２、ＣＣＲ−７、ＣＸＣＲ１、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ７、ＴＧＦ−β  ＲＩ、ＴＧＦ−β  ＲＩＩ、ｃ−Ｋｉｔ、ＣＤ２４４、Ｌ−セレクチン／ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ６８、４１ＢＢ、ＣＴＬＡ４、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ−３、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＣＣＲ４、ＣＤ２５、ＣＤ１０３、ＫＩｒｇ１、Ｎｒｐ１、ＣＤ２７８、Ｇｐｒ８３、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１５４、ＣＤ１６０、ＴＮＦＲ２、ＰＶＲＩＧ、ＤＮＡＭ、及びＩＣＯＳからなる群から選択される、請求項３６に記載の抗体。
【請求項３８】
ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する第１の抗原結合ドメインと、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞によって発現される抗原に結合する第２の抗原結合ドメインとを含む、請求項３３に記載の抗体。
【請求項３９】
前記ＮＫ細胞によって発現される前記抗原が、ＮＫＲ−Ｐ１Ａ、ＣＤ９４、ＫＬＲＧ１、ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ、ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＫＩＲ２ＤＳ２、ＫＩＲ２ＤＳ３、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＫＩＲ２ＤＳ５、ＫＩＲ３ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＣＤ９４、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ１６０、ＣＤ１６、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＤＮＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、ＣＤ２７、ＮＴＢ−Ａ、ＰＳＧＬ１、ＣＤ９６、ＣＤ１００、ＮＫｐ８０、ＳＬＡＭＦ７、及びＣＤ２４４からなる群から選択される、請求項３８に記載の抗体。
【請求項４０】
請求項１〜３９のいずれか１項に記載の抗体をコードする、ポリヌクレオチド。
【請求項４１】
請求項４０に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項４２】
請求項４０に記載のポリヌクレオチドまたは請求項４１に記載のベクターを含む、宿主細胞。
【請求項４３】
前記抗体が産生されるように、請求項４２に記載の宿主細胞を培養することを含む、抗体を産生する方法。
【請求項４４】
前記宿主細胞から前記抗体を回収することをさらに含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
個体のがんを治療するか、個体のがんの進行を遅らせる方法であって、請求項１〜３９のいずれか１項に記載の抗体の有効量を前記個体に投与することを含む、前記方法。
【請求項４６】
前記がんによって発現される抗原に結合する第２の抗体の有効量を前記個体に投与することをさらに含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記がん細胞によって発現される前記抗原が、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＳ１／ＳＬＡＭＦ７、Ｔｒｏｐ−２、５Ｔ４、ＥｐｈＡ４、ＢＣＭＡ、ムチン１、ムチン１６、ＰＴＫ７、ＳＴＥＡＰ１、エンドセリンＢ型受容体、メソテリン、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＮＰＰ３、ＳＬＣ４４Ａ４、ＧＮＭＢ、ネクチン４、ＮａＰｉ２ｂ、ＬＩＶ−１Ａ、グアニル酸シクラーゼＣ、ＤＬＬ３、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、インテグリンαＶβ３、インテグリンα５β１、ＭＥＴ、ＩＧＦ１Ｒ、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＲＡＮＫＬ、ＦＡＰ、テネイシン、Ｌｅｙ、ＥｐＣＡＭ、ＣＥＡ、ｇｐＡ３３、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ７２、ムチン、ＣＡＩＸ、ＥＰＨＡ３、葉酸受容体α、ＧＤ２、ＧＤ３、及びＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ、ＳＳＸ−２、ＭＡＧＥファミリータンパク質、ＭＡＧＥ−Ａ３、ｇｐ１００／ｐｍｅｌ１７、Ｍｅｌａｎ−Ａ／ＭＡＲＴ−１、ｇｐ７５／ＴＲＰ１、チロシナーゼ、ＴＲＰ２、ＣＥＡ、ＰＳＡ、ＴＡＧ−７２、未成熟ラミニン受容体、ＭＯＫ／ＲＡＧＥ−１、ＷＴ−１、ＳＡＰ−１、ＢＩＮＧ−４、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ１、ＰＲＡＭＥ、サバイビン、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、ＭＡＲＴ−２、ｐ５３、Ｒａｓ、β−カテニン、ＴＧＦ−βＲＩＩ、ＨＰＶ  Ｅ６またはＨＰＶ  Ｅ７に由来するペプチドを含むＭＨＣ／ペプチド複合体からなる群から選択される、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
免疫療法剤の有効量を前記個体に投与することをさらに含む、請求項４５〜４７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４９】
前記免疫療法剤が、第２の抗体を含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記第２の抗体が、ＢＤＣＡ２、ＢＤＣＡ４、ＩＬＴ７、ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ２、ＬＩＬＲＢ３、ＬＩＬＲＢ４、ＬＩＬＲＢ５、Ｓｉｇｌｅｃ−３、Ｓｉｇｌｅｃ−７、Ｓｉｇｌｅｃ−９、Ｓｉｇｌｅｃ−１５、ＦＧＬ−１、ＣＤ２００、ＣＤ２００Ｒ、ＣＳＦ−１Ｒ、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ１６３、ＣＤ２０６、ＤＥＣ２０５、ＣＤ４７、ＣＤ１２３、アルギナーゼ、ＩＤＯ、ＴＤＯ、ＡｈＲ、ＥＰ２、ＣＯＸ−２、ＣＣＲ２、ＣＣＲ−７、ＣＸＣＲ１、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ７、ＴＧＦ−β  ＲＩ、ＴＧＦ−β  ＲＩＩ、ｃ−Ｋｉｔ、ＣＤ２４４、Ｌ−セレクチン／ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ６８、４１ＢＢ、ＣＴＬＡ４、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ−３、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＣＣＲ４、ＣＤ２５、ＣＤ１０３、ＫＩｒｇ１、Ｎｒｐ１、ＣＤ２７８、Ｇｐｒ８３、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１５４、ＣＤ１６０、ＴＮＦＲ２、ＰＶＲＩＧ、ＤＮＡＭ、及びＩＣＯＳからなる群から選択される抗原に結合する、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記第２の抗体が、ＰＤ−１に結合する、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記第２の抗体が、ＰＤ−Ｌ１に結合する、請求項５０に記載の方法。
【請求項５３】
前記免疫療法剤が、ワクチン、腫瘍溶解性ウイルス、養子細胞療法、サイトカイン、または小分子剤を含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項５４】
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞によって発現される抗原に結合する第２の抗体の有効量を前記個体に投与することをさらに含む、請求項４５〜５３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５５】
前記ＮＫ細胞によって発現される前記抗原が、ＮＫＲ−Ｐ１Ａ、ＣＤ９４、ＫＬＲＧ１、ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ、ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＫＩＲ２ＤＳ２、ＫＩＲ２ＤＳ３、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＫＩＲ２ＤＳ５、ＫＩＲ３ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＣＤ９４、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ１６０、ＣＤ１６、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＤＮＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、ＣＤ２７、ＮＴＢ−Ａ、ＰＳＧＬ１、ＣＤ９６、ＣＤ１００、ＮＫｐ８０、ＳＬＡＭＦ７、及びＣＤ２４４からなる群から選択される、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
化学療法剤または小分子抗がん剤の有効量を前記個体に投与することをさらに含む、請求項４５〜５５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５７】
標的化小分子阻害剤の有効量を前記個体に投与することをさらに含む、請求項４５〜５６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５８】
前記標的化小分子阻害剤が、ＶＥＧＦＲ及び／またはＰＤＧＦＲ阻害剤、ＥＧＦＲ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、ＣＤＫ４／６阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＫＲＡＳ阻害剤、ＴＲＫ阻害剤、ＢＣＬ２阻害剤、ＩＤＨ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＤＮＡ損傷応答（ＤＤＲ）阻害剤、または低メチル化剤である、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
個体の自己免疫疾患または炎症性疾患を治療するか、個体の自己免疫疾患または炎症性疾患の進行を遅らせる方法であって、請求項１〜３９のいずれか１項に記載の前記抗体の有効量を前記個体に投与することを含む、前記方法。
【請求項６０】
前記自己免疫疾患または炎症性疾患が、多発性硬化症、関節リウマチ、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、抗体媒介性の炎症性疾患または自己免疫疾患、移植片対宿主病、敗血症、糖尿病、乾癬、乾癬性関節炎、アテローム性動脈硬化症、シェーグレン症候群、全身性進行性硬化症、強皮症、急性冠症候群、虚血再灌流、クローン病、潰瘍性大腸炎、子宮内膜症、糸球体腎炎、ＩｇＡ腎症、多発性嚢胞腎疾患、重症筋無力症、特発性肺線維症、肺線維症、肝硬変、心房線維症、心筋線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、喘息、アトピー性皮膚炎、急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）、血管炎及び自己免疫性炎症性筋炎からなる群から選択される、請求項５９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年３月２１日に出願された米国特許仮出願第６２／６４６，２１０号の優先権を主張するものであり、その出願の全体は、参照により本明細書に援用される。
【０００２】
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下の提出の内容は、その全体が参照により本明細書に援用される：７５７９７２０００６４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ｔｘｔ、記録日：２０１９年３月１９日、サイズ：２３０ＫＢ）。
【０００３】
本開示は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する単離されたヒト化抗体、ならびにそれに関連するポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞及び方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
シグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰ−α）は、免疫系の調節に重要な役割を果たす細胞表面受容体ファミリーの１つである（例えば、Ｂａｒｃｌａｙ，Ａ．Ｎ．ａｎｄ  Ｂｒｏｗｎ，Ｍ．Ｈ．（２００６）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：４５７−６４参照）。ＳＩＲＰ−αは、樹状細胞、好酸球、好中球及びマクロファージなどの白血球を含む、種々の細胞の表面上に発現する。ＳＩＲＰ−αは、リガンドなどの外部刺激物と相互作用する細胞外ドメインと、様々な細胞内シグナルを媒介する細胞内ドメインとを含む。
【０００５】
ＳＩＲＰ−αの主な役割の１つは、ＣＤ４７との相互作用による免疫応答の調節であり、ＣＤ４７は、多種多様な細胞の表面上に発現する。ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインが、免疫細胞（例えば、マクロファージ）上に発現されたＳＩＲＰ−αの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合すると、ＳＩＲＰ−α媒介シグナルが免疫細胞内で伝達され、ＣＤ４７発現細胞の食作用が阻止される。このように、ＣＤ４７は、「ｄｏｎ’ｔ  ｅａｔ  ｍｅ」と称されるシグナルを免疫系に伝達し、健康な細胞の食作用を防ぐ働きをする（例えば、ＷＯ２０１５／１３８６００及びＷｅｉｓｋｏｐｆ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３４１：８８−９１参照）。一方で、ＣＤ４７は、様々ながんにおいても高度に発現することが示されており、この場合、ＳＩＲＰ−αとの相互作用は、腫瘍が、免疫監視及びマクロファージによる食作用を回避するために、健全な「ｄｏｎ’ｔ  ｅａｔ  ｍｅ」シグナルを模倣することを可能にすると考えられる（例えば、Ｍａｊｅｔｉ，Ｒ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｃｅｌｌ  １３８：２８６−９９、Ｚｈａｏ，Ｘ．Ｗ．ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１０８：１８３４２−７参照）。したがって、この相互作用を遮断する抗体が非常に望まれている。
【０００６】
ＳＩＲＰ−αは、ヒト、サル及びマウスにおいて高度に多型のタンパク質であることが知られている。例えば、ＮＯＤマウス系統とＣ５７ＢＬ／６マウス系統のＳＩＲＰ−αタンパク質の間には多型の相違が確認されており、これらの多型は、これらのマウス系統において、ＣＤ４７結合及びヒト造血幹細胞の生着に関連する機能上の影響をもたらす。ヒトでは、２個の普及しているＳＩＲＰΑ遺伝子の対立遺伝子が報告されている
（Ｔｒｅｆｆｅｒｓ，ＬＷ．ｅｔ  ａｌ．（２０１８），Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４８：３４４−３５４；Ｚｈａｏ，Ｘ．ｅｔ  ａｌ．（２０１１），ＰＮＡＳ．１０８：１８３４２−４７；ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｈｅｉｊｄｅｎ，Ｊ．（２０１４）．Ｇｅｎｅｔｉｃ  ｖａｒｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  Ｆｃ  ｇａｍｍａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ：Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ  ａｎｄ  ｃｏｐｙ  ｎｕｍｂｅｒ  ｖａｒｉａｔｉｏｎ（Ｄｏｃｔｏｒａｌ  ｄｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎ））。
正常な免疫機能及び腫瘍形成におけるＳＩＲＰ−α−ＣＤ４７相互作用の重要性により、ヒトＳＩＲＰ−αに結合する抗体の特定は、臨床候補の開発にとって極めて興味深いものである。
本明細書において引用される全ての参考文献は、特許出願、特許公報、非特許文献及びＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔアクセッション番号を含め、それぞれの個々の参考文献が参照により援用されることが具体的かつ個別に示される場合と同様に、その全体が参照により本明細書に援用される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】国際公開第２０１５／１３８６００号
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｂａｒｃｌａｙ，Ａ．Ｎ．ａｎｄ  Ｂｒｏｗｎ，Ｍ．Ｈ．（２００６）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：４５７−６４
【非特許文献２】Ｗｅｉｓｋｏｐｆ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３４１：８８−９１
【非特許文献３】Ｍａｊｅｔｉ，Ｒ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｃｅｌｌ  １３８：２８６−９９
【非特許文献４】Ｚｈａｏ，Ｘ．Ｗ．ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１０８：１８３４２−７
【非特許文献５】Ｔｒｅｆｆｅｒｓ，ＬＷ．ｅｔ  ａｌ．（２０１８），Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４８：３４４−３５４
【非特許文献６】ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｈｅｉｊｄｅｎ，Ｊ．（２０１４）．Ｇｅｎｅｔｉｃ  ｖａｒｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  Ｆｃ  ｇａｍｍａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ：Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ  ａｎｄ  ｃｏｐｙ  ｎｕｍｂｅｒ  ｖａｒｉａｔｉｏｎ（Ｄｏｃｔｏｒａｌ  ｄｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎ）
【発明の概要】
【０００９】
これらの必要性及び他の必要性を満たすために、とりわけ、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する単離された抗体が本明細書で提供される。好都合なことに、これらの抗体は、多数のＳＩＲＰ−αポリペプチドと高親和性で結合すること、多数の哺乳動物のＳＩＲＰ−αポリペプチド（例えば、ヒトｖ１、ヒトｖ２、カニクイザル、及び／または多数のマウスＳＩＲＰ−αタンパク質）に対する交差反応性、マクロファージの食作用を亢進する能力、樹状細胞の活性化を亢進する能力、及び／またはＣＤ４７を発現する腫瘍のインビボ成長を阻害する能力などの、多くの有用なインビトロ及び／またはインビボ特性のうちの１つ以上を有する。加えて、本開示は、脱アミドまたは糖化によって改変され得る残基などの潜在的な不安定性を除くように操作されており、バリアント軽鎖を有する抗体を提供することで、製造、保存、及び／または薬物開発に対してより望ましい特徴を有する抗体が得られる。
【００１０】
ある特定の態様では、本開示は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する抗体（例えば、単離された抗体）であって、抗体が、配列番号２６のアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含む重鎖；及び式ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＲＩＴＣＳＧＧＳＹＳＳＹＹＹＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＴＬＩＹＳＤＤＫＲＰＳＮＩＰＥＲＦＳＧＳＳＳＧＴＴＶＴＬＴＩＳＧＶＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＧＧＹＤＱＳＳＹＴＮＰＦＧＸ１ＧＴＸ２Ｘ３ＴＶＬ（配列番号７１）に従ったアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む軽鎖を含み、ここで、Ｘ１は、ＧまたはＴであり；Ｘ２は、Ｋ、Ｑ、またはＲであり；及びＸ３は、ＬまたはＶであり、ＶＬドメインは、配列番号２５の配列を含まない、抗体を提供する。
【００１１】
いくつかの実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号３９〜４１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は、式ＧＱＰＫＡＮＰＴＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＧＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＫＰＳＫＱＳＸ４Ｘ５ＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ（配列番号７２）に従ったアミノ酸配列を含む軽鎖定常（ＣＬ）ドメイン配列をさらに含み、ここで、Ｘ４Ｘ５は、ＮＤ、ＤＮ、ＤＳ、またはＳＤである。いくつかの実施形態では、軽鎖は、配列番号４３〜４６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖定常（ＣＬ）ドメイン配列をさらに含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は、κ軽鎖定常（ＣＬ）ドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は、配列番号３６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は、λ軽鎖定常（ＣＬ）ドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は、配列番号３７または配列番号３８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は、配列番号４８〜５７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００１２】
いくつかの実施形態では、抗体は、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、単一ドメイン抗体、一本鎖重鎖抗体、または一本鎖軽鎖抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｆｃ領域を含む重鎖定常ドメインを含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１  Ｆｃ領域、ＩｇＧ２  Ｆｃ領域、及びＩｇＧ４  Ｆｃ領域からなる群から選択されるヒトＦｃ領域である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＥＵに従ったアミノ酸位置ナンバリングである、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３７Ａ置換を含むヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ２  Ｆｃ領域である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＥＵに従ったアミノ酸位置ナンバリングである、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓ置換を含むヒトＩｇＧ２  Ｆｃ領域である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＥＵに従ったアミノ酸位置ナンバリングである、Ｎ２９７Ａ置換をさらに含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＥＵに従ったアミノ酸位置ナンバリングである、Ｎ２９７Ａ置換を含むヒトＩｇＧ２  Ｆｃ領域である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域であり、重鎖は、ＥＵに従ったアミノ酸位置ナンバリングである、Ｓ２２８Ｐ置換を含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号３１〜３５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖定常ドメインを含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号３３、３４、及び１３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖定常ドメインを含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号１３２〜１３９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖定常ドメインを含む。
【００１３】
いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号５８〜６２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号６０、６１、及び１２９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号１２４〜１３１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００１４】
ある特定の態様では、本開示は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する抗体（例えば、単離された抗体）であって、重鎖は、配列番号６２のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５２のアミノ酸配列を含み；重鎖は、配列番号６２のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５３のアミノ酸配列を含み；重鎖は、配列番号６２のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５４のアミノ酸配列を含み；重鎖は、配列番号６２のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５５のアミノ酸配列を含み；重鎖は、配列番号６２のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５６のアミノ酸配列を含み；または重鎖は、配列番号６２のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５７のアミノ酸配列を含む、抗体を提供する。
【００１５】
ある特定の態様では、本開示は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する抗体（例えば、単離された抗体）であって、重鎖は、配列番号５８のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５２のアミノ酸配列を含み；重鎖は、配列番号５９のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５２のアミノ酸配列を含み；重鎖は、配列番号６０のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５２のアミノ酸配列を含み；重鎖は、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５２のアミノ酸配列を含み；重鎖は、配列番号５８のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５３のアミノ酸配列を含み；重鎖は、配列番号５９のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５３のアミノ酸配列を含み；重鎖は、配列番号６０のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５３のアミノ酸配列を含み；重鎖は、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５３のアミノ酸配列を含み；重鎖は、配列番号５８のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５４のアミノ酸配列を含み；重鎖は、配列番号５９のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５４のアミノ酸配列を含み；重鎖は、配列番号６０のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５４のアミノ酸配列を含み；重鎖は、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５４のアミノ酸配列を含み；重鎖は、配列番号５８のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５５のアミノ酸配列を含み；重鎖は、配列番号５９のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５５のアミノ酸配列を含み；重鎖は、配列番号６０のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５５のアミノ酸配列を含み；重鎖は、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５５のアミノ酸配列を含み；重鎖は、配列番号５８のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５６のアミノ酸配列を含み；重鎖は、配列番号５９のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５６のアミノ酸配列を含み；重鎖は、配列番号６０のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５６のアミノ酸配列を含み；重鎖は、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５６のアミノ酸配列を含み；重鎖は、配列番号５８のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５７のアミノ酸配列を含み；重鎖は、配列番号５９のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５７のアミノ酸配列を含み；重鎖は、配列番号６０のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５７のアミノ酸配列を含み；重鎖は、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５７のアミノ酸配列を含み；重鎖は、配列番号６０のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５５のアミノ酸配列を含み；重鎖は、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５５のアミノ酸配列を含み；重鎖は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５５のアミノ酸配列を含み；重鎖は、配列番号１２４のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５２のアミノ酸配列を含み；または重鎖は、配列番号１２４のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５５のアミノ酸配列を含む、抗体を提供する。
【００１６】
いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現するマクロファージによる食作用を亢進する。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現する樹状細胞の活性化を亢進する。いくつかの実施形態では、抗体は、ＣＤ４７を発現する腫瘍のインビボ成長を阻害する。
【００１７】
上記の実施形態のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、免疫系を調節する薬剤、例えば、細胞毒性剤、標識、または部分にコンジュゲートされる。
【００１８】
上記の実施形態のうちのいずれかの上記の実施形態では、抗体は、二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する第１の抗原結合ドメインと、がん細胞によって発現される抗原に結合する第２の抗原結合ドメインとを含む。いくつかの実施形態では、がん細胞によって発現される抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＳ１／ＳＬＡＭＦ７、Ｔｒｏｐ−２、５Ｔ４、ＥｐｈＡ４、ＢＣＭＡ、ムチン１、ムチン１６、ＰＤ−Ｌ１、ＰＴＫ７、ＳＴＥＡＰ１、エンドセリンＢ型受容体、メソテリン、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＮＰＰ３、ＳＬＣ４４Ａ４、ＧＮＭＢ、ネクチン４、ＮａＰｉ２ｂ、ＬＩＶ−１Ａ、グアニル酸シクラーゼＣ、ＤＬＬ３、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、インテグリンαＶβ３、インテグリンα５β１、ＭＥＴ、ＩＧＦ１Ｒ、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＲＡＮＫＬ、ＦＡＰ、テネイシン、Ｌｅｙ、ＥｐＣＡＭ、ＣＥＡ、ｇｐＡ３３、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ７２、ムチン、ＣＡＩＸ、ＥＰＨＡ３、葉酸受容体α、ＧＤ２、ＧＤ３、及びＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ、ＳＳＸ−２、ＭＡＧＥファミリータンパク質、ＭＡＧＥ−Ａ３、ｇｐ１００／ｐｍｅｌ１７、Ｍｅｌａｎ−Ａ／ＭＡＲＴ−１、ｇｐ７５／ＴＲＰ１、チロシナーゼ、ＴＲＰ２、ＣＥＡ、ＰＳＡ、ＴＡＧ−７２、未成熟ラミニン受容体、ＭＯＫ／ＲＡＧＥ−１、ＷＴ−１、ＳＡＰ−１、ＢＩＮＧ−４、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ１、ＰＲＡＭＥ、サバイビン、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、ＭＡＲＴ−２、ｐ５３、Ｒａｓ、β−カテニン、ＴＧＦ−βＲＩＩ、ＨＰＶ  Ｅ６またはＨＰＶ  Ｅ７に由来するペプチドを含むＭＨＣ／ペプチド複合体からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する第１の抗原結合ドメインと、免疫細胞によって発現される抗原に結合する第２の抗原結合ドメインとを含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞によって発現される抗原は、ＢＤＣＡ２、ＢＤＣＡ４、ＩＬＴ７、ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ２、ＬＩＬＲＢ３、ＬＩＬＲＢ４、ＬＩＬＲＢ５、Ｓｉｇｌｅｃ−３、Ｓｉｇｌｅｃ−７、Ｓｉｇｌｅｃ−９、Ｓｉｇｌｅｃ−１５、ＦＧＬ−１、ＣＤ２００、ＣＤ２００Ｒ、ＣＳＦ−１Ｒ、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ１６３、ＣＤ２０６、ＤＥＣ２０５、ＣＤ４７、ＣＤ１２３、アルギナーゼ、ＩＤＯ、ＴＤＯ、ＡｈＲ、ＥＰ２、ＣＯＸ−２、ＣＣＲ２、ＣＣＲ−７、ＣＸＣＲ１、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ７、ＴＧＦ−β  ＲＩ、ＴＧＦ−β  ＲＩＩ、ｃ−Ｋｉｔ、ＣＤ２４４、Ｌ−セレクチン／ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ６８、４１ＢＢ、ＣＴＬＡ４、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ−３、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＣＣＲ４、ＣＤ２５、ＣＤ１０３、ＫＩｒｇ１、Ｎｒｐ１、ＣＤ２７８、Ｇｐｒ８３、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１５４、ＣＤ１６０、ＴＮＦＲ２、ＰＶＲＩＧ、ＤＮＡＭ、及びＩＣＯＳからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する第１の抗原結合ドメインと、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞によって発現される抗原に結合する第２の抗原結合ドメインとを含む。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞によって発現される抗原は、ＮＫＲ−Ｐ１Ａ、ＣＤ９４、ＫＬＲＧ１、ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ、ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＫＩＲ２ＤＳ２、ＫＩＲ２ＤＳ３、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＫＩＲ２ＤＳ５、ＫＩＲ３ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＣＤ９４、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ１６０、ＣＤ１６、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＤＮＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、ＣＤ２７、ＮＴＢ−Ａ、ＰＳＧＬ１、ＣＤ９６、ＣＤ１００、ＮＫｐ８０、ＳＬＡＭＦ７、及びＣＤ２４４からなる群から選択される。
【００１９】
ある特定の態様では、本開示は、上記の実施形態のいずれか１つによる抗体をコードするポリヌクレオチドを提供する。ある特定の態様では、本開示は、上記の実施形態のいずれか１つによるポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。ある特定の態様では、本開示は、上記の実施形態のいずれか１つによるポリヌクレオチドまたはベクターを含む宿主細胞を提供する。ある特定の態様では、本開示は、抗体が産生されるように、上記の実施形態のいずれか１つによる宿主細胞を培養することを含む、抗体を産生する方法を提供する。いくつかの実施形態では、方法は、宿主細胞から抗体を回収することをさらに含む。
【００２０】
ある特定の態様では、本開示は、個体のがんを治療するか、個体のがんの進行を遅らせる方法であって、上記の実施形態のいずれか１つによる抗体の有効量を個体に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、方法は、がんによって発現される抗原に結合する第２の抗体の有効量を個体に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、がんによって発現される抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＳ１／ＳＬＡＭＦ７、Ｔｒｏｐ−２、５Ｔ４、ＥｐｈＡ４、ＢＣＭＡ、ムチン１、ムチン１６、ＰＴＫ７、ＳＴＥＡＰ１、エンドセリンＢ型受容体、メソテリン、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＮＰＰ３、ＳＬＣ４４Ａ４、ＧＮＭＢ、ネクチン４、ＮａＰｉ２ｂ、ＬＩＶ−１Ａ、グアニル酸シクラーゼＣ、ＤＬＬ３、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、インテグリンαＶβ３、インテグリンα５β１、ＭＥＴ、ＩＧＦ１Ｒ、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＲＡＮＫＬ、ＦＡＰ、テネイシン、Ｌｅｙ、ＥｐＣＡＭ、ＣＥＡ、ｇｐＡ３３、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ７２、ムチン、ＣＡＩＸ、ＥＰＨＡ３、葉酸受容体α、ＧＤ２、ＧＤ３、及びＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ、ＳＳＸ−２、ＭＡＧＥファミリータンパク質、ＭＡＧＥ−Ａ３、ｇｐ１００／ｐｍｅｌ１７、Ｍｅｌａｎ−Ａ／ＭＡＲＴ−１、ｇｐ７５／ＴＲＰ１、チロシナーゼ、ＴＲＰ２、ＣＥＡ、ＰＳＡ、ＴＡＧ−７２、未成熟ラミニン受容体、ＭＯＫ／ＲＡＧＥ−１、ＷＴ−１、ＳＡＰ−１、ＢＩＮＧ−４、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ１、ＰＲＡＭＥ、サバイビン、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、ＭＡＲＴ−２、ｐ５３、Ｒａｓ、β−カテニン、ＴＧＦ−βＲＩＩ、ＨＰＶ  Ｅ６またはＨＰＶ  Ｅ７に由来するペプチドを含むＭＨＣ／ペプチド複合体からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、方法は、免疫療法剤の有効量を個体に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、免疫療法剤は、第２の抗体を含む。いくつかの実施形態では、第２の抗体は、ＢＤＣＡ２、ＢＤＣＡ４、ＩＬＴ７、ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ２、ＬＩＬＲＢ３、ＬＩＬＲＢ４、ＬＩＬＲＢ５、Ｓｉｇｌｅｃ−３、Ｓｉｇｌｅｃ−７、Ｓｉｇｌｅｃ−９、Ｓｉｇｌｅｃ−１５、ＦＧＬ−１、ＣＤ２００、ＣＤ２００Ｒ、ＣＳＦ−１Ｒ、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ１６３、ＣＤ２０６、ＤＥＣ２０５、ＣＤ４７、ＣＤ１２３、アルギナーゼ、ＩＤＯ、ＴＤＯ、ＡｈＲ、ＥＰ２、ＣＯＸ−２、ＣＣＲ２、ＣＣＲ−７、ＣＸＣＲ１、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ７、ＴＧＦ−β  ＲＩ、ＴＧＦ−β  ＲＩＩ、ｃ−Ｋｉｔ、ＣＤ２４４、Ｌ−セレクチン／ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ６８、４１ＢＢ、ＣＴＬＡ４、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ−３、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＣＣＲ４、ＣＤ２５、ＣＤ１０３、ＫＩｒｇ１、Ｎｒｐ１、ＣＤ２７８、Ｇｐｒ８３、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１５４、ＣＤ１６０、ＴＮＦＲ２、ＰＶＲＩＧ、ＤＮＡＭ、及びＩＣＯＳからなる群から選択される抗原���結合する。いくつかの実施形態では、第２の抗体は、ＰＤ−１に結合する。いくつかの実施形態では、第２の抗体は、ＰＤ−Ｌ１に結合する。いくつかの実施形態では、免疫療法剤は、ワクチン、腫瘍溶解性ウイルス、養子細胞療法、サイトカイン、または小分子を含む。いくつかの実施形態では、方法は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞によって発現される抗原に結合する第２の抗体の有効量を個体に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞によって発現される抗原は、ＮＫＲ−Ｐ１Ａ、ＣＤ９４、ＫＬＲＧ１、ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ、ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＫＩＲ２ＤＳ２、ＫＩＲ２ＤＳ３、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＫＩＲ２ＤＳ５、ＫＩＲ３ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＣＤ９４、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ１６０、ＣＤ１６、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＤＮＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、ＣＤ２７、ＮＴＢ−Ａ、ＰＳＧＬ１、ＣＤ９６、ＣＤ１００、ＮＫｐ８０、ＳＬＡＭＦ７、及びＣＤ２４４からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、方法は、化学療法剤または小分子抗がん剤の有効量を個体に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、標的化小分子阻害剤の有効量を個体に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、標的化小分子阻害剤は、ＶＥＧＦＲ及び／またはＰＤＧＦＲ阻害剤、ＥＧＦＲ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、ＣＤＫ４／６阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＫＲＡＳ阻害剤、ＴＲＫ阻害剤、ＢＣＬ２阻害剤、ＩＤＨ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＤＮＡ損傷応答（ＤＤＲ）阻害剤、または低メチル化剤である。
【００２１】
ある特定の態様では、本開示は、個体の自己免疫疾患または炎症性疾患を治療するか、個体の自己免疫疾患または炎症性疾患の進行を遅らせる方法であって、上記の実施形態のいずれか１つによる抗体の有効量を個体に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、自己免疫疾患または炎症性疾患は、多発性硬化症、関節リウマチ、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、抗体媒介性の炎症性疾患または自己免疫疾患、移植片対宿主病、敗血症、糖尿病、乾癬、乾癬性関節炎、アテローム性動脈硬化症、シェーグレン症候群、全身性進行性硬化症、強皮症、急性冠症候群、虚血再灌流、クローン病、潰瘍性大腸炎、子宮内膜症、糸球体腎炎、ＩｇＡ腎症、多発性嚢胞腎疾患、重症筋無力症、特発性肺線維症、線維症（例えば、肺線維症、肝硬変、心房線維症、心筋線維症、骨髄線維症、または後腹膜線維症）、喘息、アトピー性皮膚炎、急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）、血管炎及び自己免疫性炎症性筋炎からなる群から選択される。
【００２２】
本明細書に記載される様々な実施形態の特性の１つ、複数または全てが組み合わされ、本発明の他の実施形態が形成され得ることを理解されたい。本発明のこれらの態様及び他の態様は、当業者に明らかとなるであろう。本発明のこれらの実施形態及び他の実施形態は、以下の詳細な説明によってさらに詳述される。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１−１】単剤活性を評価するためのインビボ同系マウス結腸癌モデルの結果を示す。ＭＣ３８細胞をＣ５７ＢＬ／６マウスに皮下移植し、複数群（８匹／群）に無作為化した。マウスを、ビヒクル（ＰＢＳ）、ＣＤ４７遮断抗ＳＩＲＰ−α抗体ＡＢ２７ｂ、ＣＤ４７遮断抗ＳＩＲＰ−α抗体ＡＢ２５ｂ、またはＣＤ４７遮断抗ＳＩＲＰ−α抗体ＡＢ２５ｃで処置した。処置は、移植後７日目に、腫瘍が平均６０ｍｍ３になったときに開始した。マウスに抗ＳＩＲＰ−α抗体を１０ｍｇ／ｋｇで週２回、３週間にわたって腹腔内（ＩＰ）投与し、腫瘍が約２０００ｍｍ３の体積に達したらマウスを屠殺した。
【図１−２】単剤活性を評価するためのインビボ同系マウス結腸癌モデルの結果を示す。ＭＣ３８細胞をＣ５７ＢＬ／６マウスに皮下移植し、複数群（８匹／群）に無作為化した。マウスを、ビヒクル（ＰＢＳ）、ＣＤ４７遮断抗ＳＩＲＰ−α抗体ＡＢ２７ｂ、ＣＤ４７遮断抗ＳＩＲＰ−α抗体ＡＢ２５ｂ、またはＣＤ４７遮断抗ＳＩＲＰ−α抗体ＡＢ２５ｃで処置した。処置は、移植後７日目に、腫瘍が平均６０ｍｍ３になったときに開始した。マウスに抗ＳＩＲＰ−α抗体を１０ｍｇ／ｋｇで週２回、３週間にわたって腹腔内（ＩＰ）投与し、腫瘍が約２０００ｍｍ３の体積に達したらマウスを屠殺した。
【図２】ＡＢ２１ヒト重鎖及び指定のヒト化軽鎖を有する抗体の発現収率及び結合親和性の比較である。抗体は、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３−ＦＳ細胞（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）における発現によって産生された。
【図３Ａ】Ａ及びＢは、標的としてＥＧＦＲ（＋）ＤＬＤ−１細胞と、食作用細胞としてＭ２マクロファージを使用した、インビトロ食作用アッセイの結果を示す。抗ＳＩＲＰ−α抗体を、抗ＥＧＦＲ抗体セツキシマブと組み合わせて、指定濃度で試験した。食作用をＣＦＳＥ＋細胞のパーセンテージによって測定した。
【図３Ｂ】Ａ及びＢは、標的としてＥＧＦＲ（＋）ＤＬＤ−１細胞と、食作用細胞としてＭ２マクロファージを使用した、インビトロ食作用アッセイの結果を示す。抗ＳＩＲＰ−α抗体を、抗ＥＧＦＲ抗体セツキシマブと組み合わせて、指定濃度で試験した。食作用をＣＦＳＥ＋細胞のパーセンテージによって測定した。
【図４Ａ】Ａ及びＢは、指定の抗ＳＩＲＰ−α抗体によるインビボ樹状細胞活性化アッセイの結果を示す。指定抗体を１０ｍｇ／ｋｇでマウスに静脈内注射し、注射から５時間後に脾臓を摘出した。ＣＤ４＋樹状細胞の活性化マーカーＣＤ８６、ＭＨＣＩＩ及びＣＣＲ７をフローサイトメトリーにより測定した。
【図４Ｂ】Ａ及びＢは、指定の抗ＳＩＲＰ−α抗体によるインビボ樹状細胞活性化アッセイの結果を示す。指定抗体を１０ｍｇ／ｋｇでマウスに静脈内注射し、注射から５時間後に脾臓を摘出した。ＣＤ４＋樹状細胞の活性化マーカーＣＤ８６、ＭＨＣＩＩ及びＣＣＲ７をフローサイトメトリーにより測定した。
【図５−１】抗ＳＩＲＰ−α処置とＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１経路阻害剤を組み合わせた場合の活性を評価するためのインビボ同系マウス結腸癌モデルの結果を示す。ＣＴ２６細胞をＢＡＬＢｃマウスに皮下移植し、複数群（８匹／群）に無作為化した。マウスをビヒクル（ＰＢＳ）、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、ＣＤ４７遮断抗ＳＩＲＰ−α抗体ＡＢ２５ｂまたはＡＢ２５ｂ及びＰＤ−Ｌ１で処置した。処置は、移植後７日目に、腫瘍が平均６０ｍｍ３になったときに開始した。マウスに１０ｍｇ／ｋｇで週２回、３週間にわたって腹腔内（ＩＰ）投与し、腫瘍が約２０００ｍｍ３の体積に達したらマウスを屠殺した。
【図５−２】抗ＳＩＲＰ−α処置とＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１経路阻害剤を組み合わせた場合の活性を評価するためのインビボ同系マウス結腸癌モデルの結果を示す。ＣＴ２６細胞をＢＡＬＢｃマウスに皮下移植し、複数群（８匹／群）に無作為化した。マウスをビヒクル（ＰＢＳ）、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、ＣＤ４７遮断抗ＳＩＲＰ−α抗体ＡＢ２５ｂまたはＡＢ２５ｂ及びＰＤ−Ｌ１で処置した。処置は、移植後７日目に、腫瘍が平均６０ｍｍ３になったときに開始した。マウスに１０ｍｇ／ｋｇで週２回、３週間にわたって腹腔内（ＩＰ）投与し、腫瘍が約２０００ｍｍ３の体積に達したらマウスを屠殺した。
【図６−１】抗ＳＩＲＰ−α処置とＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１経路阻害剤を組み合わせた場合の活性を評価するためのインビボ同系マウス結腸癌モデルの結果を示す。ＭＣ３８細胞をＣ５７ＢＬ／６マウスに皮下移植し、複数群（８匹／群）に無作為化した。マウスを、ビヒクル（ＰＢＳ）、抗ＰＤ−１抗体、ＣＤ４７遮断抗ＳＩＲＰ−α抗体ＡＢ２５ｂ、またはＡＢ２５ｂと抗ＰＤ−１で処置した。処置は、移植後７日目に、腫瘍が平均６０ｍｍ３になったときに開始した。マウスに１０ｍｇ／ｋｇで週２回、３週間にわたって腹腔内（ＩＰ）投与し、腫瘍が約２０００ｍｍ３の体積に達したらマウスを屠殺した。
【図６−２】抗ＳＩＲＰ−α処置とＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１経路阻害剤を組み合わせた場合の活性を評価するためのインビボ同系マウス結腸癌モデルの結果を示す。ＭＣ３８細胞をＣ５７ＢＬ／６マウスに皮下移植し、複数群（８匹／群）に無作為化した。マウスを、ビヒクル（ＰＢＳ）、抗ＰＤ−１抗体、ＣＤ４７遮断抗ＳＩＲＰ−α抗体ＡＢ２５ｂ、またはＡＢ２５ｂと抗ＰＤ−１で処置した。処置は、移植後７日目に、腫瘍が平均６０ｍｍ３になったときに開始した。マウスに１０ｍｇ／ｋｇで週２回、３週間にわたって腹腔内（ＩＰ）投与し、腫瘍が約２０００ｍｍ３の体積に達したらマウスを屠殺した。
【図７】質量分析によって分析された、抗体ＰＣ３３６のペプチドの糖化形態（黒色）対非改変形態（灰色）の総抽出イオンクロマトグラフィー、曲線下面積（ＸＩＣ、ＡＵＣ）を示す。示される配列は、配列番号６４〜６６（左から右へ）である。
【図８】質量分析によって分析された、抗ＳＩＲＰ−α抗体ＰＣ３０１の軽鎖及び重鎖の指定の残基での脱アミドによって修飾されるペプチドのパーセンテージを示す。アミノ酸ナンバリングは、それぞれ、配列番号６３及び５９の軽鎖及び重鎖配列中の残基のシーケンスナンバリングに基づく（Ｋａｂａｔナンバリングではない）。
【図９】糖化部位を除くように操作されている３つのバリアント（配列番号６８〜７０；それぞれ、バージョン１〜３）と一緒に、糖化を施すＫ１０４残基を有するＨｕｍ１軽鎖の（配列番号６７；「元」）断片を示す。糖化部位に下線を付す。
【図１０】元のＨｕｍ１軽鎖（Ｈｕｍ１  ＶＬ及びＩＧＣＬ１定常ドメインを有する）と、６つのバリアントとのアラインメントを示す。各バリアントは、３つの糖化部位バリアント（ｖ１、ｖ２、及びｖ３）のうちの１つと、Ｎ１７１／Ｎ１７２脱アミド部位を置換するためのＤＳまたはＳＤ変異のいずれかとを含む。配列番号４７及び５２〜５７を、それぞれ上から下に示す。配列の相違をアスタリスクで示す。ＣＤＲは、ボックスで示す（それぞれ、配列番号２２、２３、及び２４を表す）。ＣＤＲ描写は、Ｋａｂａｔに従う。アミノ酸ナンバリングは、残基のシーケンスナンバリングに基づく。
【図１１】元のＨｕｍ１軽鎖（Ｈｕｍ１  ＶＬ及びＩＧＣＬ１定常ドメインを有する）と、６つのバリアントとのアラインメントを示す。各バリアントは、３つの糖化部位バリアント（ｖ１、ｖ２、及びｖ３）のうちの１つと、Ｎ１７１／Ｎ１７２脱アミド部位を置換するためのＤＳまたはＳＤ変異のいずれかとを含む。配列番号４７及び５２〜５７を、それぞれ上から下に示す。配列の相違をアスタリスクで示す。ＣＤＲは、ボックスで示す（それぞれ、配列番号２２、２３、及び２４を表す）。ＣＤＲ描写は、Ｋａｂａｔに従う。アミノ酸ナンバリングは、残基のシーケンスナンバリングに基づく。
【図１２】標的としてＥＧＦＲ（＋）ＤＬＤ−１細胞と、食作用細胞としてＭ２マクロファージを使用した、インビトロ食作用アッセイの結果を示す。指定のＦｃ領域を有する抗ＳＩＲＰ−α抗体またはアイソタイプ対照を、抗ＥＧＦＲ抗体セツキシマブと組み合わせて試験した。食作用をＣＦＳＥ＋細胞のパーセンテージによって測定した。
【図１３Ａ】Ａ〜Ｅは、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から様々な細胞型を枯渇する能力について、指定のＦｃ領域を有する抗ＳＩＲＰ−α抗体を試験する枯渇アッセイの結果を示す。図１３Ａ及び１３Ｂは、ｌｉｎ−ＨＬＡＤＲ＋樹状細胞（ＤＣ）の枯渇を示し、異なるドナーから得られたＰＢＭＣを用いて行った実験結果を表す。図１３Ｃは、抗ＳＩＲＰ−α抗体及びアイソタイプ対照によるＣＤ３＋Ｔ細胞の枯渇の欠如を示す。図１３Ｄは、抗ＳＩＲＰ−α抗体及びアイソタイプ対照によるＣＤ１４＋単球の枯渇の欠如を示す。図１３Ｅは、抗ＳＩＲＰ−α抗体及びアイソタイプ対照によるＣＤ２０＋Ｂ細胞の枯渇の欠如を示す。
【図１３Ｂ】Ａ〜Ｅは、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から様々な細胞型を枯渇する能力について、指定のＦｃ領域を有する抗ＳＩＲＰ−α抗体を試験する枯渇アッセイの結果を示す。図１３Ａ及び１３Ｂは、ｌｉｎ−ＨＬＡＤＲ＋樹状細胞（ＤＣ）の枯渇を示し、異なるドナーから得られたＰＢＭＣを用いて行った実験結果を表す。図１３Ｃは、抗ＳＩＲＰ−α抗体及びアイソタイプ対照によるＣＤ３＋Ｔ細胞の枯渇の欠如を示す。図１３Ｄは、抗ＳＩＲＰ−α抗体及びアイソタイプ対照によるＣＤ１４＋単球の枯渇の欠如を示す。図１３Ｅは、抗ＳＩＲＰ−α抗体及びアイソタイプ対照によるＣＤ２０＋Ｂ細胞の枯渇の欠如を示す。
【図１３Ｃ】Ａ〜Ｅは、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から様々な細胞型を枯渇する能力について、指定のＦｃ領域を有する抗ＳＩＲＰ−α抗体を試験する枯渇アッセイの結果を示す。図１３Ａ及び１３Ｂは、ｌｉｎ−ＨＬＡＤＲ＋樹状細胞（ＤＣ）の枯渇を示し、異なるドナーから得られたＰＢＭＣを用いて行った実験結果を表す。図１３Ｃは、抗ＳＩＲＰ−α抗体及びアイソタイプ対照によるＣＤ３＋Ｔ細胞の枯渇の欠如を示す。図１３Ｄは、抗ＳＩＲＰ−α抗体及びアイソタイプ対照によるＣＤ１４＋単球の枯渇の欠如を示す。図１３Ｅは、抗ＳＩＲＰ−α抗体及びアイソタイプ対照によるＣＤ２０＋Ｂ細胞の枯渇の欠如を示す。
【図１３Ｄ】Ａ〜Ｅは、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から様々な細胞型を枯渇する能力について、指定のＦｃ領域を有する抗ＳＩＲＰ−α抗体を試験する枯渇アッセイの結果を示す。図１３Ａ及び１３Ｂは、ｌｉｎ−ＨＬＡＤＲ＋樹状細胞（ＤＣ）の枯渇を示し、異なるドナーから得られたＰＢＭＣを用いて行った実験結果を表す。図１３Ｃは、抗ＳＩＲＰ−α抗体及びアイソタイプ対照によるＣＤ３＋Ｔ細胞の枯渇の欠如を示す。図１３Ｄは、抗ＳＩＲＰ−α抗体及びアイソタイプ対照によるＣＤ１４＋単球の枯渇の欠如を示す。図１３Ｅは、抗ＳＩＲＰ−α抗体及びアイソタイプ対照によるＣＤ２０＋Ｂ細胞の枯渇の欠如を示す。
【図１３Ｅ】Ａ〜Ｅは、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から様々な細胞型を枯渇する能力について、指定のＦｃ領域を有する抗ＳＩＲＰ−α抗体を試験する枯渇アッセイの結果を示す。図１３Ａ及び１３Ｂは、ｌｉｎ−ＨＬＡＤＲ＋樹状細胞（ＤＣ）の枯渇を示し、異なるドナーから得られたＰＢＭＣを用いて行った実験結果を表す。図１３Ｃは、抗ＳＩＲＰ−α抗体及びアイソタイプ対照によるＣＤ３＋Ｔ細胞の枯渇の欠如を示す。図１３Ｄは、抗ＳＩＲＰ−α抗体及びアイソタイプ対照によるＣＤ１４＋単球の枯渇の欠如を示す。図１３Ｅは、抗ＳＩＲＰ−α抗体及びアイソタイプ対照によるＣＤ２０＋Ｂ細胞の枯渇の欠如を示す。
【図１４Ａ】Ａ及びＢは、標的としてＥＧＦＲ（＋）ＤＬＤ−１細胞と、食作用細胞としてＭ２マクロファージを使用した、インビトロ食作用アッセイの結果を示す。指定のＦｃ領域を有する抗ＳＩＲＰ−α抗体を、抗ＥＧＦＲ抗体セツキシマブと組み合わせて試験した。食作用をＣＦＳＥ＋細胞のパーセンテージによって測定した。
【図１４Ｂ】Ａ及びＢは、標的としてＥＧＦＲ（＋）ＤＬＤ−１細胞と、食作用細胞としてＭ２マクロファージを使用した、インビトロ食作用アッセイの結果を示す。指定のＦｃ領域を有する抗ＳＩＲＰ−α抗体を、抗ＥＧＦＲ抗体セツキシマブと組み合わせて試験した。食作用をＣＦＳＥ＋細胞のパーセンテージによって測定した。
【図１５Ａ】Ａ及びＢは、標的としてＥＧＦＲ（＋）ＤＬＤ−１細胞と、食作用細胞としてＭ２マクロファージを使用した、インビトロ食作用アッセイの結果を示す。指定の軽鎖定常ドメイン（λまたはκ）を有する抗ＳＩＲＰ−α抗体を、抗ＥＧＦＲ抗体セツキシマブと組み合わせて試験した。食作用をＣＦＳＥ＋細胞のパーセンテージによって測定した。
【図１５Ｂ】Ａ及びＢは、標的としてＥＧＦＲ（＋）ＤＬＤ−１細胞と、食作用細胞としてＭ２マクロファージを使用した、インビトロ食作用アッセイの結果を示す。指定の軽鎖定常ドメイン（λまたはκ）を有する抗ＳＩＲＰ−α抗体を、抗ＥＧＦＲ抗体セツキシマブと組み合わせて試験した。食作用をＣＦＳＥ＋細胞のパーセンテージによって測定した。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
本開示は、１つ以上のヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、潜在的に興味深い様々なＳＩＲＰ−α結合プロファイルを有する抗体について記載する。加えて、本開示は、多数のＳＩＲＰ−αポリペプチドと高親和性で結合すること、マクロファージの食作用を亢進する能力、樹状細胞の活性化を亢進する能力、及び／またはＣＤ４７を発現する腫瘍のインビボ成長を阻害する能力などの目的とする１つ以上のインビトロ及び／またはインビボ生物学的特性を有する抗ＳＩＲＰ−α抗体について記載する。これらの抗体は、ニワトリ由来の軽鎖を有し、多数の哺乳動物のＳＩＲＰ−αポリペプチドと交差反応する抗体を生成する独特な機会を提供する。実際、これらの抗体は、多数の株由来のヒトＳＩＲＰ−α  ｖ１及びｖ２、カニクイザルＳＩＲＰ−α、及びマウスＳＩＲＰ−αと交差反応することが分かっており、多くの人口にわたって前臨床試験及び臨床応用の両方において非常に有利である。重要なのは、これらの抗体は、脱アミドまたは糖化によって改変され得る残基などの潜在的な不安定性を除くように操作されており、製造、保存、及び／または薬物開発に対してより望ましい特徴を有する抗体が得られる。
【００２５】
一態様では、本明細書で提供されるのは、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する単離された抗体である。さらに、本明細書で提供されるのは、本開示の抗体をコードするポリヌクレオチド及びベクターならびにそれに関連する抗体の産生方法である。
【００２６】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、個体のがんを治療するか、個体のがんの進行を遅らせる方法であって、本開示の抗体の有効量を個体に投与することを含む、方法である。
【００２７】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、個体の自己免疫疾患または炎症性疾患を治療するか、個体の自己免疫疾患または炎症性疾患の進行を遅らせる方法であって、本開示の抗体の有効量を個体に投与することを含む、方法である。
【００２８】
定義
本開示の実施形態を詳述する前に、本開示は、特定の組成物または生物系に限定されず、当然のことながら、変わり得ることを理解されたい。また、本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を記載する目的でのみ使用され、限定を意図するものではないことが理解される。
【００２９】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈により別途明示される場合を除き、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「分子」への言及は、任意選択により、２つ以上のかかる分子の組み合わせなどを含む。
【００３０】
本明細書で使用される「約」という用語は、当業者であれば容易に理解する、それぞれの値の通常の誤差範囲を指す。本明細書における「約」を付した値またはパラメーターへの言及は、その値またはパラメーター自体を対象とする実施形態を含む（かつ記載する）ものである。
【００３１】
本開示の態様及び実施形態は、態様及び実施形態を「含む」、態様及び実施形態「からなる」、ならびに態様及び実施形態「から本質的になる」ことを含むことを理解されたい。
【００３２】
本明細書で使用される「ＳＩＲＰ−αポリペプチド」は、ヒト、サル、齧歯類（例えば、マウスまたはラット）などの哺乳類、及びニワトリなどの鳥類を含む、任意の脊椎動物に由来するゲノムによってコードされる任意の内因性または天然のＳＩＲＰ−αポリペプチドを指し得る。本用語はまた、天然バリアント、例えば、選択的スプライシングバリアント、アレルバリアントまたは多型（例えば、本明細書に記載されるもの）を含む。本用語は、さらに、プロセシングを受けていない完全長のＳＩＲＰ−αポリペプチド、及び細胞内プロセシング（例えば、シグナル配列の除去など）から生じるＳＩＲＰ−αポリペプチドも指し得る。例示的なＳＩＲＰ−αポリペプチド配列については、本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドは、ヒトＳＩＲＰＡ遺伝子によってコードされるもの（例えば、ＮＣＢＩ  Ｇｅｎｅ  ＩＤ  Ｎｏ．１４０８８５によって記述されるもの）である。本明細書に記載されるように、ＳＩＲＰ−αポリペプチドは、種内及び種間で高度に多型であり、例えば、細胞外ドメインにアミノ酸多型を有する、多数のヒトバリアントが挙げられる。
【００３３】
ＳＩＲＰ−αポリペプチドは、リガンド／パートナー、例えば、ＣＤ４７に結合する、細胞外ドメインを含む。ＳＩＲＰ−αポリペプチドは、相同性の高い３つの免疫グロブリン（Ｉｇ）様細胞外ドメイン（Ｄ１、Ｄ２及びＤ３）を含む。ＳＩＲＰ−α  Ｄ１ドメイン（「Ｄ１ドメイン」）は、ＳＩＲＰ−αの膜遠位の細胞外ドメインを指し、ＳＩＲＰ−αのＣＤ４７への結合を媒介する（例えば、Ｈａｔｈｅｒｌｅｙ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  ３１：２６６−７７、Ｈａｔｈｅｒｌｅｙ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８２：１４５６７−７５、Ｈａｔｈｅｒｌｅｙ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８４：２６６１３−９、及びＬｅｅ，Ｗ．Ｙ．ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８５：３７９５３−６３参照）。細胞外ドメインは、一般に、例えば、細胞表面上に発現される、ＳＩＲＰ−αの細胞外部分全体を指し、Ｄ１ドメインなどの別個のＳＩＲＰ−αドメインを含み得る。Ｄ１ドメインは、ＣＤ４７結合の媒介に重要であることが示されている残基を含有する（例えば、Ｌｅｅ，Ｗ．Ｙ．ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７９：７７４１−５０参照）。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する抗体は、Ｄ１ドメインの１つ以上の残基に結合する。
【００３４】
本明細書で使用されるとき、「ＣＤ４７」（インテグリン関連タンパク質（ＩＡＰ）、ＭＥＲ６及びＯＡ３としても知られる）は、その役割のなかでも特に、ＳＩＲＰ−αポリペプチドの結合パートナーとして機能するポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７は、ヒトＣＤ４７ポリペプチド、例えば、ヒトＣＤ４７遺伝子によってコードされるポリペプチド（ＮＣＢＩ  Ｒｅｆ  Ｓｅｑ  ＩＤ  Ｎｏ．９６１によって記述されるものなど）を指す。例示的なヒトＣＤ４７アミノ酸配列は、公知である（例えば、ＮＣＢＩ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＰ＿００１７６８参照）。特に、ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインは、ＳＩＲＰ−α結合に重要であることが知られている、ＣＤ４７のＮ末端細胞外ドメインを指す（例えば、Ｂａｒｃｌａｙ，Ａ．Ｎ．ａｎｄ  Ｂｒｏｗｎ，Ｍ．Ｈ．（２００６）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：４５７−６４及びＨａｔｈｅｒｌｅｙ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８４：２６６１３−９参照）。「ＣＤ４７」という用語はまた、ＳＩＲＰ−αに結合することができる修飾ＣＤ４７ポリペプチド、例えば、別のポリペプチドまたは他の部分（例えば、Ｉｇ  Ｆｃ領域）にコンジュゲートされたＣＤ４７のＩｇＳＦドメインを含むポリペプチドも含み得る。
【００３５】
本明細書で使用されるとき、「ＳＩＲＰ−αシグナル伝達を調節する」とは、ＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現する細胞において、ＳＩＲＰ−αシグナル伝達の１つ以上の側面をアンタゴナイズ、アゴナイズ、または妨害することを指し得る。ＳＩＲＰ−αシグナル伝達は、ＳＩＲＰ−αポリペプチドの活性化によって媒介される１つ以上の細胞内シグナル伝達事象（限定するものではないが、ＳＩＲＰ−αの細胞内領域のチロシンリン酸化、ホスファターゼ（例えば、ＳＨＰ１）結合、アダプタータンパク質結合（例えば、ＳＣＡＰ２、ＦＹＢ及び／またはＧＲＢ２）、サイトカイン産生（例えば、ＩＬ−１０、ＩＬ−１β、ＩＦＮまたはＴＮＦ）、及び一酸化窒素産生を含む）、及び／または１つ以上の細胞間の表現型（限定するものではないが、マクロファージの食作用ならびにマクロファージ、好酸球、好中球、樹状細胞及び骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の他の活性化または抑制表現型を含む）を指し得る。
【００３６】
本明細書で使用されるとき、「抗体」という用語は、インタクト抗体、抗体断片（限定するものではないが、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ダイアボディ、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、単一ドメイン抗体、一本鎖重鎖抗体及び一本鎖軽鎖抗体を含む）（ただし、所望の生物活性（例えば、エピトープ結合）を示す場合に限る）、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、単一特異性抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体様タンパク質を指し得る。
【００３７】
本明細書で使用されるとき、抗体または抗体断片に関して使用される「二重特異性」という用語は、２つの異なる結合特異性を有する、抗体または抗体断片を含む。例えば、各結合特異性は、異なる抗原を認識してもよいし、各結合特異性は、異なる親和性及び／または明確なエピトープで、同じ抗原を認識してもよい。いくつかの実施形態では、それぞれ異なる結合特異性は、１つ以上の異なる抗体抗原結合ドメイン（例えば、可変ドメイン）を含み、したがって、二重特異性抗体または抗体断片は、少なくとも第１の結合特異性を有する第１の抗原結合ドメインと、第２の結合特異性を有する第２の抗原結合ドメインとを含む。種々の例示的な二重特異性抗体フォーマットが本明細書に記載され、また、当該技術分野において知られている。
【００３８】
「単離された」抗体とは、その天然環境の成分（例えば、宿主細胞または生物）から分離及び／または回収された抗体を指し得る。いくつかの実施形態では、抗体は、例えば、銀、クマシーなどによる染色を使用したＳＤＳ−ＰＡＧＥによって、所望の純度重量％（例えば、少なくとも９５％）及び／または均一性まで精製される。いくつかの実施形態では、単離された抗体は、１つ以上の精製工程の後に得られる。
【００３９】
当該技術分野で知られているように、「天然」抗体は、２つの同一の軽鎖（Ｌ）及び２つの同一の重鎖（Ｈ）を含む、典型的にヘテロ四量体である複合体を指す。鎖内ジスルフィド架橋に加えて、様々な数のジスルフィド結合が２つの重鎖を連結し、１つは各軽鎖を重鎖に連結する。重鎖は、可変ドメイン（ＶＨ）と、それに続く（Ｎ末端からＣ末端へ）３つまたは４つの定常ドメインを含む。軽鎖は、可変ドメイン（ＶＬ）と、それに続く定常ドメイン（ＣＬ）を含む。典型的に、哺乳動物の軽鎖は、アミノ酸配列に基づいて、κ及びλの２つの分類のうちの１つに分類される。
【００４０】
「定常ドメイン」は、抗体または断片のうち、より保存されている部分、例えば、可変ドメイン外を指し得る。本用語は、重鎖ヒンジ領域と一緒に、ＣＬドメイン、ならびに重鎖定常ドメインＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含み得る。任意選択で、重鎖定常ドメインは、ＣＨ４重鎖定常ドメインをさらに含み得る。
【００４１】
重鎖の定常ドメインは、５つの主要なタイプ：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭのうちの１つに割り当てることができる。これらの主要なタイプの多くには、いくつかのサブタイプが存在する。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造及び三次元立体構造は、よく知られており、例えば、Ａｂｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ  ｅｄ．（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ，Ｃｏ．，２０００）に概説されている。
【００４２】
本明細書で使用されるとき、「抗体可変ドメイン」という用語は、相補性決定領域（ＣＤＲ、例えば、ＣＤＲ  Ｌ１、ＣＤＲ  Ｌ２、ＣＤＲ  Ｌ３、ＣＤＲ  Ｈ１、ＣＤＲ  Ｈ２及びＣＤＲ  Ｈ３）及びフレームワーク領域（ＦＲ）を含む、抗体の軽鎖及び重鎖の部分を指す。
【００４３】
「可変」という用語は、可変ドメインの部分配列が抗体間で配列の点で実質的に異なり、その抗原に対する特定の抗体の結合特異性にとって重要であるという事実を指す。可変性は、ＶＨ及びＶＬの両ドメイン内の３つの超可変領域（ＨＶＲ）に集中している。可変ドメインのうち、より保存されている部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれ、その間にＨＶＲが点在する。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、各々、ループを形成する３つのＨＶＲによって連結された４つのＦＲ領域を含む（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）参照）。
【００４４】
「超可変領域（ＨＶＲ）」という用語は、高度な配列可変性及び／または既定のループ形成を特徴とする、ＶＨドメイン及びＶＬドメインの小領域を指し得る。これらには、ＶＨドメイン中の３つのＨＶＲ（Ｈ１、Ｈ２及びＨ３）及びＶＬドメイン中の３つのＨＶＲ（Ｌ１、Ｌ２及びＬ３）が含まれる。Ｈ３は、優れた結合特異性を付与するのに重要であると考えられ、Ｌ３及びＨ３は、最大の多様性を示す。Ｊｏｈｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２４８：１−２５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．，２００３）を参照されたい。
【００４５】
ＨＶＲの記述には多くのものが知られている。Ｋａｂａｔ相補性決定領域（ＣＤＲ）は、配列可変性に基づくものであり、最も一般的に使用されている（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））。Ｃｈｏｔｈｉａは、むしろ、構造的ループの位置に言及するものである（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））。ＡｂＭ  ＨＶＲは、Ｋａｂａｔ  ＨＶＲとＣｈｏｔｈｉａ構造的ループとの間の妥協案を示すものであり、Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアで使用されている。「接触」ＨＶＲは、利用可能な複合体結晶構造の分析に基づくものである。これらのＨＶＲの各々の残基を、以下に示す。「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、ＨＶＲ残基以外の可変ドメイン残基である。
【表５】
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【００４６】
「伸長」ＨＶＲも知られている：ＶＬ中、２４〜３６または２４〜３４（Ｌ１）、４６〜５６または５０〜５６（Ｌ２）及び８９〜９７または８９〜９６（Ｌ３）、ならびにＶＨ中、２６〜３５（Ｈ１）、５０〜６５または４９〜６５（Ｈ２）及び９３〜１０２、９４〜１０２または９５〜１０２（Ｈ３）（Ｋａｂａｔナンバリング）。
【００４７】
「Ｋａｂａｔに従うナンバリング」は、Ｋａｂａｔら（上掲）における抗体編成の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインに使用されるナンバリングシステムを指し得る。実際の直鎖状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲまたはＨＶＲの短縮化に応じてアミノ酸がより少ないこともあれば、ＦＲまたはＨＶＲへの挿入に応じて追加のアミノ酸を含有することもある。所与の抗体に対する残基のＫａｂａｔナンバリングは、その抗体の配列と「標準的な」Ｋａｂａｔナンバリング配列との相同領域でのアラインメントによって決定され得る。典型的に、Ｋａｂａｔナンバリングは、可変ドメイン中の残基（おおよそ、軽鎖の残基１〜１０７及び重鎖の残基１〜１１３）に言及する際に使用され、一方、ＥＵナンバリングシステムまたはＥＵインデックス（例えば、ＫａｂａｔにおけるＥＵインデックス、ＥＵ  ＩｇＧ１に従ったナンバリング）は、一般に、重鎖定常領域中の残基に言及する際に使用される。
【００４８】
「完全長」または「インタクト」抗体は、例えば、抗体断片とは対照的に、Ｆｃ領域を有する重鎖を典型的に含む。単一の抗原結合部位を有する抗原結合「Ｆａｂ」断片は、パパイン消化によって、残りのＦｃ断片から分離され得る。Ｆ（ａｂ’）２断片は、抗体のペプシン処理によって生成された、２つの抗原結合部位を含む。しかしながら、抗体断片は、１つ以上の抗体可変領域を含む。
【００４９】
「Ｆｖ」断片は、完全な抗原結合部位を含有する。一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）は、例えば、抗体またはＦａｂ断片のように、ＶＨドメイン及びＶＬドメインが会合し、これにより、ＨＶＲが抗原結合部位を形成するように、ペプチドリンカーによって連結されたＶＨドメイン及びＶＬドメインを含み得る。Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９４），ｐｐ．２６９−３１５を参照されたい。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、抗体Ｆｃドメインに融合している（例えば、ｓｃＦｖ−Ｆｃ）。典型的には、６つのＨＶＲが抗原結合部位を構成するが、３つのＨＶＲを有する単一の可変ドメインであっても、親和性が低くなるものの、抗原に結合することができる。Ｈａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６３：４４６−４４８（１９９３）、Ｓｈｅｒｉｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．３：７３３−７３６（１９９６）を参照されたい。単一ドメイン抗体（例えば、ラクダ抗体）は、典型的に、抗原結合に関する単量体可変ドメインを１つ含む。一本鎖重鎖（ＶＨＨ）抗体及び一本鎖軽鎖抗体も知られている。Ｆａｂ’断片は、典型的に、Ｆａｂ断片よりも数個多い残基をＣ末端に含む。Ｆａｂ’−ＳＨは、遊離チオールを有するシステイン残基を含む。抗体断片の様々な化学的カップリングが当該技術分野において知られている。
【００５０】
「ダイアボディ」は、２つの抗原結合部位を有する抗体断片を含む。これらは、リンカーによって連結されたＶＨドメイン及びＶＬドメインを含み、当該リンカーは、典型的に、同じ鎖中でドメインの対形成が容易になされないような短さである。ダイアボディは、二価または二重特異性であり得る。トリボディ及びテトラボディ、または他の数のＶＨ／ＶＬドメインが知られている。Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）を参照されたい。
【００５１】
本明細書で使用されるとき、「モノクローナル」抗体は、実質的に均質な抗体集団から得られる抗体、例えば、少量のバックグラウンド変異及び／または修飾が認められるが、実質的に同一な抗体を指す。「モノクローナル」は、実質的に均質である抗体の性質を指し、いかなる特定の方法による抗体産生を要するものではない。いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体は、そのＨＶＲ配列、ＶＨ配列及び／またはＶＬ配列及び／または結合特性に基づいて選択され、例えば、クローン（例えば、組換え、ハイブリドーマまたはファージ由来）のプールから選択される。モノクローナル抗体は、例えば、抗体の結合親和性または他の特性に影響を与えるため、ヒト化抗体またはキメラ抗体を作製するため、抗体の産生及び／または均質性を改善するため、多重特異性抗体を設計するために、１つ以上の変異を含むように操作することができ、これにより得られた抗体は、依然として、本質的にモノクローナルとみなされる。モノクローナル抗体集団の個々のモノクローナル抗体は、同じ抗原部位を認識するので、モノクローナル抗体の集団は、ポリクローナル抗体とは区別され得る。モノクローナル抗体産生技術には様々なものが知られており、例えば、ハイブリドーマ法（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５−９７（１９７５）、Ｈｏｎｇｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，１４（３）：２５３−２６０（１９９５）、Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ  ｅｄ．１９８８）、Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１））、組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号参照）、ファージディスプレイ技術（例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）、Ｓｉｄｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）、Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）、及びＬｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）参照、及びヒト免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子座または遺伝子の一部または全てを有する動物におけるヒト抗体またはヒト様抗体の産生技術（例えば、ＷＯ１９９８／２４８９３、ＷＯ１９９６／３４０９６、ＷＯ１９９６／３３７３５、ＷＯ１９９１／１０７４１、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：２５５１（１９９３）、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６２：２５５−２５８（１９９３）、Ｂｒｕｇｇｅｍ��ｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：３３（１９９３）、米国特許第５，５４５，８０７号、同第５，５４５，８０６号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号及び同第５，６６１，０１６号、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３（１９９２）、Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６−８５９（１９９４）、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８１２−８１３（１９９４）、Ｆｉｓｈｗｉｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８４５−８５１（１９９６）、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８２６（１９９６）、ならびにＬｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｈｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３（１９９５）参照）を参照されたい。
【００５２】
「キメラ」抗体は、特定のアイソタイプ、クラスまたは生物由来の重鎖及び／または軽鎖の一部と、別のアイソタイプ、クラスまたは生物由来の別の部分とを含む抗体を指し得る。いくつかの実施形態では、可変領域は、１つの供給源または生物に由来し、定常領域は、別の供給源または生物に由来する。
【００５３】
「ヒト化抗体」は、大部分はヒト配列であるが、最小量の非ヒト（例えば、マウスまたはニワトリ）配列を含む抗体を指し得る。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ヒトレシピエント抗体フレームワーク（ＦＲ）上にグラフト化された、非ヒト（例えば、マウスまたはニワトリ）生物に由来する抗体から得た１つ以上のＨＶＲ配列（目的の結合特異性を有する）を有する。いくつかの実施形態では、非ヒト残基は、例えば、抗体特性を改善するために、ヒトフレームワーク（供給源またはレシピエント抗体のいずれにも存在しないもの）上にさらにグラフト化される。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ここで、超可変ループの全てまたは実質的に全ては、非ヒト免疫グロブリンの超可変ループに対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全ては、ヒト免疫グロブリン配列のＦＲである。ヒト化抗体はまた、任意選択により、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的にはヒト免疫グロブリンの少なくとも一部分を含む。Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９（１９８８）、及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６（１９９２）を参照されたい。
【００５４】
「ヒト」抗体は、ヒトによって産生される抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有する抗体、及び／または本明細書で開示されるような任意のヒト抗体作製技術を使用して作製された抗体を指し得る。ヒト抗体は、当該技術分野において知られている様々な技術を使用して産生され得、これらには、ファージディスプレイライブラリー（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１（１９９１）、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１（１９９１））、Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）、Ｂｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７（１）：８６−９５（１９９１）に記載されているようなヒトモノクローナル抗体作製、抗原刺激に応答して当該抗体を産生するように改変され、その内因性遺伝子座が無効化されているトランスジェニック動物、例えば、免疫化異種マウス（例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術に関する米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号参照）またはヒト免疫グロブリン配列（複数可）を有するニワトリ（例えば、ＷＯ２０１２１６２４２２、ＷＯ２０１１０１９８４４及びＷＯ２０１３０５９１５９参照）に抗原を投与することによるものが含まれる。
【００５５】
本明細書で使用されるとき、「リンカー」という用語は、２つの要素、例えば、タンパク質ドメインの間の連結を指す。いくつかの実施形態では、リンカーは、共有結合またはスペーサーであり得る。「スペーサー」という用語は、２つのポリペプチドまたはポリペプチドドメイン間にスペースまたは柔軟性（またはスペースと柔軟性の両方）を与えるために、２つのポリペプチドまたはポリペプチドドメイン間に存在する部分（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ポリマー）またはアミノ酸配列（例えば、１〜２００個のアミノ酸配列）を指す。いくつかの実施形態では、アミノ酸スペーサーは、ポリペプチドの一次配列の一部である（例えば、ポリペプチド主鎖を介して間隔をあけたポリペプチドまたはポリペプチドドメインに連結されている）。
【００５６】
本明細書で使用される「細胞傷害剤」という用語は、細胞増殖を阻害し、または細胞死を誘発する任意の剤を指し得る。細胞傷害剤には、化学療法剤、放射性同位体、成長阻害剤、及び小分子毒素または酵素活性毒素などの毒素（それらの断片及び／またはバリアントを含む）が含まれるが、これらに限定されない。例示的な細胞傷害剤には、限定するものではないが、代謝阻害剤、抗微小管剤、白金含有化合物、アルキル化剤、プロテアソーム阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼＩ阻害剤、シグナル伝達経路阻害剤、非受容体型チロシンキナーゼ血管新生阻害剤、ホルモン及びホルモン類似体、アポトーシス誘導剤、ＬＤＨ−Ａ阻害剤、細胞周期阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、ならびに抗生剤が挙げられる。
【００５７】
本明細書で使用されるとき、「標識」は、例えば、本開示の標識抗体と巨大分子または細胞との間の結合を検出する剤として機能する任意の部分を含み得る。例示的な標識には、限定するものではないが、蛍光（例えば、化合物またはタンパク質）、放射性または酵素部分、及びアフィニティー精製タグが挙げられる。
【００５８】
本明細書で使用されるとき、抗体は、当該抗体がインビトロ及び／またはインビボでの抗原操作に有用となるのに十分な親和性を有するとき、抗原に「結合する」と言うことができる。いくつかの実施形態では、抗原に「結合」する抗体は、抗原に対し、２５℃で１μＭ以下の解離定数（ＫＤ）を有する。
【００５９】
本明細書で使用されるとき、「親和性／アフィニティー」または「結合親和性」という用語は、２分子間の結合相互作用の強さを指す。一般に、結合親和性は、分子とその結合パートナー（高親和性のＳＩＲＰ−α  Ｄ１バリアントとＣＤ４７など）との間の非共有結合性相互作用の合計の強さを指す。特に指示がない限り、結合親和性は、結合ペアのメンバー間の１：１の相互作用を反映する、固有の結合親和性を指す。２分子間の結合親和性は、一般に、解離定数（ＫＤ）または会合定数（ＫＡ）によって記述される。互いに低い結合親和性を有する２つの分子は、一般にゆっくりと結合し、容易に解離する傾向があり、大きいＫＤを示す。互いに高い結合親和性を有する２つの分子は、一般に容易に結合し、結合を長く維持する傾向があり、小さなＫＤを示す。いくつかの実施形態では、２つの相互作用分子のＫＤは、既知の方法及び技術、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して決定される。ＫＤは、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの比として算出することができる。
【００６０】
本明細書で使用されるとき、「〜未満のＫＤ」という用語は、記載されるＫＤ値に対して、数値的に小さいＫＤ値及び結合親和性の増加を指す。本明細書で使用されるとき、「〜より大きいＫＤ」という用語は、記載されるＫＤ値に対して、数値的に大きいＫＤ値及び結合親和性の減少を指す。
【００６１】
本明細書で使用されるとき、「治療」は、治療される個体または細胞における１つ以上の異常な症状を変更するための分子、化合物、処方物、組成物などの治療的投与を指し得る。治療の望ましい効果は、限定するものではないが、疾患の進行を遅らせること、異常な症状もしくは病態を改善もしくは緩和すること、予後を改善すること、及び／または疾患の寛解を達成することを含み得る。例えば、個体のがんは、限定するものではないが、がん細胞の増殖の減少、がん細胞もしくは腫瘍組織量の排除、がんに起因する症状の軽減、個体の生活の質の向上、他の薬剤（複数可）の投与量の減少、及び／または個体の生存期間の延長など、がんに関連する１つ以上の症状が軽減または排除された場合、「治療」に成功する。別の例として、自己免疫疾患または炎症性疾患は、限定するものではないが、自己反応性免疫細胞及び／または炎症性免疫細胞もしくはサイトカインの減少、免疫活性化及び／または炎症の低下、疾患に起因する器官障害の遅延もしくは軽減、疾患に起因する症状の軽減、個体の生活の質の向上、他の薬剤（複数可）の投与量の減少、及び／または個体の生存期間の延長など、自己免疫疾患または炎症性疾患に関連する１つ以上の症状が軽減または排除された場合、「治療」に成功し得る。
【００６２】
本明細書で使用されるとき、疾患の「進行を遅らせる」とは、疾患の病的経過を減速させること、遅延させること、先延ばしすること、進行延期すること、安定化すること、または妨げることを指し得る。いくつかの実施形態では、本用語は、例えば、個体の疾患発症を予防することにおいて、予防を効果的に成し遂げるのに十分な遅延を指し得る。いくつかの実施形態では、例えば、進行がんにおいて、進行を遅らせることは、転移を遅らせることを含み得る。当業者であれば、当該遅延の正確な長さは、例えば、特定の疾患、個体の状態などに依存し得ることを理解するであろう。
【００６３】
「がん」及び「がん性」という用語は、哺乳動物の１つまたは複数の細胞による制御不全または無秩序な細胞成長／増殖を記述し得る。当該技術分野において知られている任意のがんの種類には、限定するものではないが、癌腫、肉腫、リンパ腫、白血病、リンパ腫及び芽細胞腫などが含まれ得る。このようながんのより具体的な例には、肺癌、扁平上皮細胞癌、脳腫瘍、膠芽腫、頭頸部癌、肝細胞癌、大腸癌（例えば、結腸癌または直腸癌）、肝臓癌、膀胱癌、胃癌、膵臓癌、子宮頸癌、卵巣癌、尿路癌、乳癌、腹膜癌、子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肛門癌、陰茎癌、黒色腫、多発性骨髄腫及びＢ細胞リンパ腫（非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、メルケル細胞癌、毛様細胞性白血病、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、ならびに関連転移が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６４】
本明細書で使用されるとき、「有効量」という用語は、本開示の抗体または本開示の抗体を含有する医薬組成物の量であって、がん、例えば、固形腫瘍または血液癌などの疾患を有する患者の治療または進行遅延において、所望の治療効果を達成するのに十分かつ有効である量を指し得る。いくつかの実施形態では、治療上有効な量は、有害な副作用を回避するものであり、及び／または有益な作用のほうが当該副作用よりも上回るものである。有効量は、治療される個体（例えば、年齢、体重、性別、病態）、及び所望の応答をもたらす作用物質の能力に依存し得る。有効量は、１回以上の投与で投与され得る。臨床的状況と同様に、薬物、化合物または医薬組成物の有効量は、別の薬物、化合物または医薬組成物（別の治療物質など）と併せて達成されてもよいし、そうでなくてもよい。したがって、「有効量」は、１つ以上の追加の治療物質を投与する状況でも考慮され得、単一の作用物質は、それが１つ以上の他の作用物質と併せて望ましい結果を達成し得、または達成するのであれば、有効量で投与されたとみなされ得る。
【００６５】
本明細書で使用されるとき、「医薬組成物」という用語は、有効成分及び賦形剤または希釈剤（または賦形剤と希釈剤の両方）を含み、当該有効成分を好適な投与方法によって投与することを可能にする、医薬処方物または製剤処方物を指し得る。いくつかの実施形態では、本明細書で開示される医薬組成物は、本開示の１つ以上の抗体に適合する、薬学的に許容される構成成分を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、経口投与用の錠剤またはカプセル剤の形態、あるいは、例えば、注射による静脈内または皮下投与用の水性形態である。
【００６６】
本明細書で使用されるとき、「対象」、「個体」及び「患者」という用語は、区別なく用いられ、脊椎動物、例えば、哺乳動物を指す。哺乳動物には、マウス、サル、ヒト、家畜、競技用動物及び愛玩動物が含まれるが、これらに限定されない。
【００６７】
本明細書で使用されるとき、「〜とともに」または「〜と組み合わせて」とは、１つの治療薬を別の治療薬に加えて投与すること（例えば、その前、その間、及び／またはその後）を指し得る。
【００６８】
抗体
本開示のある特定の態様は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する抗体に関する。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。
【００６９】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、表２に示すＶＨドメインを含む重鎖、及び／または式ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＲＩＴＣＳＧＧＳＹＳＳＹＹＹＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＴＬＩＹＳＤＤＫＲＰＳＮＩＰＥＲＦＳＧＳＳＳＧＴＴＶＴＬＴＩＳＧＶＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＧＧＹＤＱＳＳＹＴＮＰＦＧＸ１ＧＴＸ２Ｘ３ＴＶＬ（配列番号７１）に従ったアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む軽鎖を含み、ここで、Ｘ１は、ＧまたはＴであり；Ｘ２は、Ｋ、Ｑ、またはＲであり；Ｘ３は、ＬまたはＶである。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、表２に示すＶＨドメインを含む重鎖と、式ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＲＩＴＣＳＧＧＳＹＳＳＹＹＹＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＴＬＩＹＳＤＤＫＲＰＳＮＩＰＥＲＦＳＧＳＳＳＧＴＴＶＴＬＴＩＳＧＶＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＧＧＹＤＱＳＳＹＴＮＰＦＧＸ１ＧＴＸ２Ｘ３ＴＶＬ（配列番号７１）に従ったアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む軽鎖とを含み、ここで、Ｘ１は、ＧまたはＴであり；Ｘ２は、Ｋ、Ｑ、またはＲであり；Ｘ３は、ＬまたはＶである。上記の実施形態のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号２５の配列を含まない。ある特定の実施形態では、本開示の抗体は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む重鎖と、式ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＲＩＴＣＳＧＧＳＹＳＳＹＹＹＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＴＬＩＹＳＤＤＫＲＰＳＮＩＰＥＲＦＳＧＳＳＳＧＴＴＶＴＬＴＩＳＧＶＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＧＧＹＤＱＳＳＹＴＮＰＦＧＸ１ＧＴＸ２Ｘ３ＴＶＬ（配列番号７１）に従ったアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む軽鎖を含み、ここで、Ｘ１は、ＧまたはＴであり；Ｘ２は、Ｋ、Ｑ、またはＲであり；Ｘ３は、ＬまたはＶである。いくつかの実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号２５の配列を含まない。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、表２に示すＶＨドメインを含む重鎖、及び／または表１に示すＶＬドメインを含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、表２に示すＶＨドメインを含む重鎖と、表１に示すＶＬドメインを含む軽鎖とを含む。
【００７０】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む重鎖、及び／または配列番号３９〜４１から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む重鎖と、配列番号３９〜４１から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む軽鎖とを含む。
【００７１】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、表２に示すＶＨドメインを含む重鎖、及び／または配列番号４８〜５７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、表２に示すＶＨドメインを含む重鎖と、配列番号４８〜５７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む重鎖、及び／または配列番号４８〜５７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む重鎖と、配列番号４８〜５７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号８１のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む重鎖、及び配列番号４８〜５７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号８３のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む重鎖と、配列番号４８〜５７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号７７〜１１１から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む重鎖と、配列番号４８〜５７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号７７〜１１１から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む重鎖と、配列番号４８〜５１から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、表２に示すＶＨドメインを含む重鎖と、配列番号３３、３４、及び１３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む定常ドメイン、及び／または配列番号４８〜５７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号６０、６１、及び１２９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、及び／または配列番号４８〜５７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００７２】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号２６、８１、または８３から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む重鎖と、配列番号４８〜５７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号２６、８１、または８３から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む重鎖と、配列番号３９〜４１から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む重鎖と、配列番号３９〜４１から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む軽鎖とを含む。
【００７３】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号２６、８１、または８３から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む重鎖と、配列番号３９〜４１から選択されるＶＬドメイン配列及び配列番号３６〜３８から選択される配列を含むＣＬドメインを含む軽鎖と、を含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む重鎖と、配列番号３９〜４１から選択されるＶＬドメイン配列及び配列番号３６〜３８から選択される配列を含むＣＬドメインを含む軽鎖とを含む。
【００７４】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号２６、８１、または８３から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む重鎖と、配列番号２５の配列を含むＶＬドメイン及び配列番号４３〜４６から選択されるＣＬドメイン配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む重鎖と、配列番号２５の配列を含むＶＬドメイン及び配列番号４３〜４６から選択されるＣＬドメイン配列を含む軽鎖とを含む。
【００７５】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号８３のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む重鎖と、配列番号３９〜４１から選択されるＶＬドメイン配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号８３のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む重鎖と、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号８３のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む重鎖と、配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【００７６】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号１１９〜１２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号３９〜４１から選択されるＶＬドメイン配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号１１９〜１２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号１１９〜１２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号１１９のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号１２０のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号１２１のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号１２２のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号１２３のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【００７７】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む重鎖と、配列番号１３２〜１３９からなる群から選択される定常ドメイン配列；及び／または配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む重鎖と、配列番号３３、３４、及び１３７からなる群から選択される定常ドメイン配列；及び／または配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む重鎖と、配列番号１３２〜１３９からなる群から選択される定常ドメイン配列；及び／または配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む重鎖と、配列番号３３、３４、及び１３７からなる群から選択される定常ドメイン配列；及び／または配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【００７８】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号１２４〜１３１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；及び／または配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号６０、６１、及び１２９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；及び／または配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号１２４〜１３１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；及び／または配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号６０、６１、及び１２９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；及び／または配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号６０のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号１３７のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５５のアミノ酸配列を含む。
【００７９】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号５８〜６２から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、及び／または式ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＲＩＴＣＳＧＧＳＹＳＳＹＹＹＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＴＬＩＹＳＤＤＫＲＰＳＮＩＰＥＲＦＳＧＳＳＳＧＴＴＶＴＬＴＩＳＧＶＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＧＧＹＤＱＳＳＹＴＮＰＦＧＸ１ＧＴＸ２Ｘ３ＴＶＬ（配列番号７１）に従ったアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む軽鎖を含み、ここで、Ｘ１は、ＧまたはＴであり；Ｘ２は、Ｋ、Ｑ、またはＲであり；Ｘ３は、ＬまたはＶである。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号５８〜６２から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖と、式ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＲＩＴＣＳＧＧＳＹＳＳＹＹＹＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＴＬＩＹＳＤＤＫＲＰＳＮＩＰＥＲＦＳＧＳＳＳＧＴＴＶＴＬＴＩＳＧＶＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＧＧＹＤＱＳＳＹＴＮＰＦＧＸ１ＧＴＸ２Ｘ３ＴＶＬ（配列番号７１）に従ったアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む軽鎖とを含み、ここで、Ｘ１は、ＧまたはＴであり；Ｘ２は、Ｋ、Ｑ、またはＲであり；Ｘ３は、ＬまたはＶである。上記の実施形態のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号２５の配列を含まない。
【００８０】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号５８〜６２から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖と、表１に示すＶＬドメインを含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号５８〜６２から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号３９〜４１から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号５８〜６２から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号４８〜５７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号５８〜６２から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号３９〜４１から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬドメイン及び配列番号３６〜３８から選択されるアミノ酸配列を含むＣＬドメインを含む軽鎖と、を含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号５８〜６２から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン及び配列番号４３〜４６から選択されるアミノ酸配列を含むＣＬドメインを含む軽鎖とを含む。
【００８１】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号６２のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号６２のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号６２のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５４のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号６２のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号６２のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号６２のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５７のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【００８２】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号５８のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号５９のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号６０のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号６１のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【００８３】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号５８のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号５９のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号６０のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号６１のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【００８４】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号５８のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５４のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号５９のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５４のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号６０のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５４のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号６１のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５４のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【００８５】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号５８のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号５９のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号６０のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号６１のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【００８６】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号５８のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号５９のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号６０のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号６１のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【００８７】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号５８のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５７のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号５９のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５７のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号６０のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５７のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号６１のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５７のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【００８８】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号７７〜１１１から選択される配列を含むＶＨドメインを含む重鎖と、配列番号２５の配列を含むＶＬドメインを含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号７７〜１１１から選択される配列を含むＶＨドメインを含む重鎖と、配列番号３９〜４１から選択される配列を含むＶＬドメインを含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号７７〜１１１から選択される配列を含むＶＨドメインを含む重鎖と、配列番号３９〜４１から選択される配列を含むＶＬドメイン及び配列番号３６〜３８から選択される配列を含むＣＬドメインを含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号７７〜１１１から選択される配列を含むＶＨドメインを含む重鎖と、配列番号２５の配列を含むＶＬドメイン及び配列番号４３〜４６から選択される配列を含むＣＬドメインを含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号１１４〜１２３から選択される配列を含む重鎖と、配列番号４７〜６３から選択される配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号１２４〜１３１から選択される配列を含む重鎖と、配列番号４７〜６３から選択される配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号１１４〜１３１から選択される配列を含む重鎖と、配列番号４７〜６３から選択される配列を含む軽鎖とを含む。
【００８９】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号１１４〜１１８から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号４８〜５７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号１１９〜１２３から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号４８〜５７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号１１４〜１２３から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号３９〜４１から選択される配列を含むＶＬドメインを含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号１１４〜１２３から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号３９〜４１から選択される配列を含むＶＬドメイン及び配列番号３６〜３８から選択される配列を含むＣＬドメインを含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号１１４〜１２３から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２５の配列を含むＶＬドメイン及び配列番号４３〜４６から選択される配列を含むＣＬドメインを含む軽鎖とを含む。
【００９０】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、表２に記載される配列を含むＶＨドメインからの３つのＣＤＲ、及び／または表１に記載される配列を含むＶＬドメインからの３つのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、表２に記載されるＶＨドメイン配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である配列を含むＶＨドメイン、及び任意選択で表２に記載される配列を含むＶＨドメインからの３つのＣＤＲ、及び／または表１に記載されるＶＬドメイン配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である配列を含むＶＬドメイン、及び任意選択で表１に記載される配列を含むＶＬドメインからの３つのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、表２に記載される重鎖配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である配列を含む重鎖、及び任意選択で表２に記載される配列を含むＶＨドメインからの３つのＣＤＲ、及び／または表１に記載される軽鎖配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である配列を含む軽鎖、及び任意選択で表１に記載される配列を含むＶＬドメインからの３つのＣＤＲを含む。
【表１−１】
2021518142.tif 000004
【表１−２】
2021518142.tif 000005
【表１−３】
2021518142.tif 000006
【表１−４】
2021518142.tif 000007
【表２−１】
2021518142.tif 000008
【表２−２】
2021518142.tif 000009
【表２−３】
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【表２−４】
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【表２−５】
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【表２−６】
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【表２−７】
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【表２−８】
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【表２−９】
2021518142.tif 000016
【００９１】
上記のように、超可変領域（ＨＶＲ）または相補性決定領域（ＣＤＲ）を記述するための様々な技術が当該技術分野において知られており、本明細書に記載される可変ドメイン配列に適用することができる。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴ、またはこれらの組み合わせによって定義されるＨＶＲ（例えば、１つの記述によって定義される１つ以上のＨＶＲ、及び異なる記述によって定義される１つ以上のＨＶＲ）を含む。本明細書で使用されるとき、特に指定されない限り、ＨＶＲまたはＣＤＲ残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔナンバリングによって定義される。
【００９２】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＡＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＤＬＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むヒトＳＩＲＰ−α  ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＡＩＬＨＣＴＶＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＥＳＴＫＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＴＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むヒトＳＩＲＰ−α  ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＡＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＤＬＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むヒトＳＩＲＰ−α  ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、及びＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＡＩＬＨＣＴＶＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＥＳＴＫＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＴＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むヒトＳＩＲＰ−α  ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。
【００９３】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、サルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）（例えば、サルＳＩＲＰ−αポリペプチドのＤ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、カニクイザルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）（例えば、Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓの生物に認められるもの）に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、少なくとも２つの異なるサルＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、少なくとも２つの異なるカニクイザルＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。例えば、いくつかの実施形態では、抗体は、ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＥＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＡＴＬＮＣＴＡＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＶＧＰＧＲＥＬＩＹＨＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＰＶＳＤＰＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＶＥＬＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むカニクイザルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＥＫＳＶＳＶＡＡＧＤＳＡＴＬＮＣＴＶＳＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＥＬＩＹＮＬＫＥＧＨＦＰＲＶＴＡＶＳＤＰＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＶＥＬＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むカニクイザルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、またはその両方に結合する。
【００９４】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、マウスまたはマウスＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓの生物に認められるもの、例えば、マウスまたはマウスＳＩＲＰ−αポリペプチドのＤ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、２つ以上の異なるマウスＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。異なるマウス系統に由来する様々なマウスＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドが知られている。いくつかの実施形態では、マウスＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドは、ＫＥＬＫＶＴＱＰＥＫＳＶＳＶＡＡＧＤＳＴＶＬＮＣＴＬＴＳＬＬＰＶＧＰＩＫＷＹＲＧＶＧＱＳＲＬＬＩＹＳＦＴＧＥＨＦＰＲＶＴＮＶＳＤＡＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＳＮＶＴＰＥＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＱＫＧＰＳＥＰＤＴＥＩＱＳＧＧＧＴＥＶＹＶＬＡＫＰＳ（配列番号７、１２９マウス系統由来）、ＴＥＶＫＶＩＱＰＥＫＳＶＳＶＡＡＧＤＳＴＶＬＮＣＴＬＴＳＬＬＰＶＧＰＩＲＷＹＲＧＶＧＱＳＲＱＬＩＹＳＦＴＴＥＨＦＰＲＶＴＮＶＳＤＡＴＫＲＳＮＬＤＦＳＩＲＩＳＮＶＴＰＥＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＱＲＧＳＰＤＴＥＩＱＳＧＧＧＴＥＶＹＶＬＡＫ（配列番号８、ＮＯＤマウス系統由来）、ＫＥＬＫＶＴＱＰＥＫＳＶＳＶＡＡＧＤＳＴＶＬＮＣＴＬＴＳＬＬＰＶＧＰＩＲＷＹＲＧＶＧＰＳＲＬＬＩＹＳＦＡＧＥＹＶＰＲＩＲＮＶＳＤＴＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＳＮＶＴＰＡＤＡＧＩＹＹＣＶＫＦＱＫＧＳＳＥＰＤＴＥＩＱＳＧＧＧＴＥＶＹＶＬＡＫ（配列番号９、Ｃ５７ＢＬ／６マウス系統由来）、及びＴＥＶＫＶＴＱＰＥＫＳＶＳＶＡＡＧＤＳＴＩＬＮＣＴＶＴＳＬＬＰＶＧＰＩＲＷＹＲＧＶＧＱＳＲＬＬＩＹＳＦＴＧＥＨＦＰＲＩＲＮＶＳＤＴＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＳＮＶＴＰＥＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＱＲＧＳＳＥＰＤＴＥＩＱＳＧＧＧＴＥＶＹＶＬＡＫ（配列番号１０、ＢＡＬＢ／ｃマウス系統由来）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００９５】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰファミリータンパク質の細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態では、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドは、ヒトＳＩＲＰＢ１遺伝子によってコードされるポリペプチド（例えば、ＮＣＢＩ  Ｒｅｆ  Ｓｅｑ  ＩＤ  Ｎｏ．１０３２６によって記述されるもの）を指す。いくつかの実施形態では、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）は、ＥＤＥＬＱＶＩＱＰＥＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＡＴＬＲＣＡＭＴＳＬＩＰＶＧＰＩＭＷＦＲＧＡＧＡＧＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＥＬＴＫＲＮＮＬＤＦＳＩＳＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号１３）またはＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＩＳＶＡＡＧＥＳＡＴＬＨＣＴＶＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＤＬＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＨＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含む。
【００９６】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態では、ヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドは、ヒトＳＩＲＰＧ遺伝子によってコードされるポリペプチド（例えば、ＮＣＢＩ  Ｒｅｆ  Ｓｅｑ  ＩＤ  Ｎｏ．５５４２３によって記述されるもの）を指す。いくつかの実施形態では、ヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）は、ＥＥＥＬＱＭＩＱＰＥＫＬＬＬＶＴＶＧＫＴＡＴＬＨＣＴＶＴＳＬＬＰＶＧＰＶＬＷＦＲＧＶＧＰＧＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＤＬＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＳＳＩＴＰＡＤＶＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＥＮＶＥＦＫＳＧＰＧＴＥＭＡＬＧＡＫＰＳ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含む。
【００９７】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、ＣＤ４７（例えば、ヒトＣＤ４７）のＩｇＳＦドメインに結合する。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、ＱＬＬＦＮＫＴＫＳＶＥＦＴＦＳＮＤＴＶＶＩＰＣＦＶＴＮＭＥＡＱＮＴＴＥＶＹＶＫＷＫＦＫＧＲＤＩＹＴＦＤＧＡＬＮＫＳＴＶＰＴＤＦＳＳＡＫＩＥＶＳＱＬＬＫＧＤＡＳＬＫＭＤＫＳＤＡＶＳＨＴＧＮＹＴＣＥＶＴＥＬＴＲＥＧＥＴＩＩＥＬＫＹＲＶＶＳ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含むポリペプチドに結合する。
【００９８】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現する細胞のＳＩＲＰ−αシグナル伝達を調節する。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現する細胞のＳＩＲＰ−αシグナル伝達をアンタゴナイズする。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現する細胞のＳＩＲＰ−αシグナル伝達に干渉する。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現する細胞のＳＩＲＰ−αシグナル伝達をアンタゴナイズする。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ−αシグナル伝達には、ＳＩＲＰ−αポリペプチドの活性化によって媒介される１つ以上の細胞内シグナル伝達事象が含まれ、限定するものではないが、ＳＩＲＰ−αの細胞内領域のチロシンリン酸化、ホスファターゼ（例えば、ＳＨＰ１）結合、アダプタータンパク質結合（例えば、ＳＣＡＰ２、ＦＹＢ及び／またはＧＲＢ２）、及び一酸化窒素産生が含まれる。細胞内のＳＩＲＰ−αシグナル伝達を測定するための様々なアッセイには、限定するものではないが、ＳＩＲＰ−αのリン酸化、ＳＨＰ１とＳＨＰ２の共免疫沈降、ＰＩ３−キナーゼシグナル伝達、サイトカイン産生（炎症性サイトカインＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＴＮＦα、ＩＦＮ及び抑制性サイトカインＩＬ−１０、ＩＬ−４、ＩＬ−１３の両方、Ｍ１及びＭ２マクロファージマーカーに対する細胞表面マーカーレベル）または樹状細胞の活性化及び機能が含まれる；Ｋｈａｒｉｔｏｎｅｎｋｏｖ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ  ３８６：１８１−６、Ｏｃｈｉ，Ｆ．ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２３９：４８３−７、Ｋｉｍ，Ｅ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６２：３７７−８６、Ｙｉ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ４３：７６４−７５。
【００９９】
いくつかの実施形態では、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現する細胞は、白血球である。いくつかの実施形態では、細胞は、マクロファージ、樹状細胞、好中球、好酸球または骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現する細胞のＳＩＲＰ−αシグナル伝達を、例えば、本明細書に記載されるまたは当該技術分野において知られているＳＩＲＰ−αシグナル伝達アッセイのうちの１つ以上を使用したとき、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％減少させるか、アンタゴナイズする。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現する細胞のＳＩＲＰ−αシグナル伝達を、例えば、本明細書に記載されるまたは当該技術分野において知られているＳＩＲＰ−αシグナル伝達アッセイのうちの１つ以上を使用したとき、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％増加させるか、アゴナイズする。
【０１００】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、ＳＩＲＰ−αによって媒介される細胞間の表現型を調節する。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現するマクロファージによる食作用を亢進する。例えば、本開示の抗体により処理されたまたは本開示の抗体と接触したマクロファージの貪食能と、当該抗体により処理されていないまたは当該抗体と接触していないマクロファージの貪食能とを比較することができ、あるいは、本開示の抗体により処理されたまたは本開示の抗体と接触した、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現するマクロファージの貪食能と、当該抗体により処理されたまたは当該抗体と接触した、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現しないマクロファージの貪食能とを比較することができる。例示的な食作用アッセイは、例えば、Ｗｉｅｓｋｏｐｆ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ（２０１３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３４１：８８及びＷｉｌｌｉｎｇｈａｍ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１０９：６６６２−７に見ることができる。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現するマクロファージによる食作用を、例えば、本明細書に記載されるまたは当該技術分野において知られている食作用アッセイのうちの１つ以上を使用したとき、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％増加させる。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現する樹状細胞（複数可）の活性化を亢進する（例えば、個々の樹状細胞の活性化レベルの増加、または試料集団のなかで活性化される樹状細胞の割合の増加）。例えば、本開示の抗体により処理されたまたは本開示の抗体と接触した樹状細胞（複数可）の活性化と、当該抗体により処理されていないまたは当該抗体と接触していない樹状細胞（複数可）の活性化とを比較することができ、あるいは、本開示の抗体により処理されたまたは本開示の抗体と接触した、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現する樹状細胞（複数可）の活性化と、当該抗体により処理されたまたは当該抗体と接触した、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現しない樹状細胞（複数可）の活性化とを比較することができる。例示的な樹状細胞活性化アッセイは、本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、樹状細胞（例えば、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現するもの）の活性化を、例えば、本明細書に記載されるまたは当該技術分野において知られている樹状細胞活性化アッセイのうちの１つ以上を使用したとき、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％増加させる。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、ＣＤ４７を発現する腫瘍のインビボ成長を阻害する。例えば、本開示の抗体により処理された、ＣＤ４７を発現する腫瘍のインビボ成長と、本開示の抗体により処理されていない、ＣＤ４７を発現する腫瘍のインビボ成長とを比較することができる。例示的なインビボ腫瘍成長アッセイは、本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、ＣＤ４７を発現する腫瘍のインビボ成長を、例えば、本明細書に記載されるまたは当該技術分野において知られているインビボ腫瘍成長アッセイのうちの１つ以上を使用したとき、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％阻害する。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する（例えば、「遮断」抗体）。例えば、抗体及びＣＤ４７ポリペプチドは、同じＳＩＲＰ−αエピトープに対して「競合」し得、及び／またはＳＩＲＰ−αへの抗体結合は、ＳＩＲＰ−αへのＣＤ４７結合と互いに排他的であり得る。ＳＩＲＰ−αとＣＤ４７との間の結合界面、及び結合に関与する両タンパク質の残基は、知られている。Ｈａｔｈｅｒｌｅｙ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８２：１４５６７−７５及びＮａｋａｉｓｈｉ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３７５：６５０−６０を参照されたい。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、例えば、精製されたＳＩＲＰ−α及び／またはＣＤ４７ポリペプチドを使用する、ＥＬＩＳＡまたはＳＰＲなどのインビトロアッセイにおいて、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）とヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する。
【０１０４】
抗体産生及び他の抗体特性
本開示の抗体は、当該技術分野において知られている任意の手段によって産生することができる。抗体産生のための例示的な技術が以下に記載されるが、これらの例示的な技術は、例示のみを目的に提供されるものであり、限定を意図するものではない。加えて、本明細書に記載される抗体との併用が企図される例示的な抗体の特性もさらに記載される。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、抗原に「結合」する抗体は、抗原に対し、２５℃で１μＭ以下の解離定数（ＫＤ）を有する。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、ヒトｖ１及び／またはｖ２のＳＩＲＰ−αポリペプチドに対して、２５℃で１μＭ以下、２５℃で５００ｎＭ以下、２５℃で４００ｎＭ以下、２５℃で３００ｎＭ以下、２５℃で２５０ｎＭ以下、２５℃で２００ｎＭ以下、２５℃で２００ｎＭ以下、２５℃で１００ｎＭ以下、または２５℃で５０ｎＭ以下の解離定数（ＫＤ）を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチド及び１つ以上の非ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドに結合する抗体は、非ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドよりも高い親和性（例えば、１０倍または１００倍超）でヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドに結合するが、依然として、両方のポリペプチドに「結合する」とみなされる。いくつかの実施形態では、非ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチド及び１つ以上のヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドに結合する抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドよりも高い親和性（例えば、１０倍または１００倍超）で非ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドに結合するが、依然として、両方のポリペプチドに「結合する」とみなされる。結合親和性を決定するためのアッセイは、当該技術分野において知られており、限定するものではないが、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）（例えば、本明細書に記載されるもの）、放射性標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）（例えば、抗体のＦａｂ形態及びその抗原を使用するもの）などが含まれる。
【０１０６】
抗原を作製するには、抗原を天然源から精製してもよいし、別の方法で取得してもよい。あるいは、組換え技術を使用して発現させてもよい。いくつかの実施形態では、抗原は、可溶性タンパク質として使用され得る。いくつかの実施形態では、抗原は、例えば、その免疫原性を高めるために、別のポリペプチドまたは他の部分にコンジュゲートされてもよい。例えば、本明細書に記載される抗原は、Ｆｃ領域に結合され得る。いくつかの実施形態では、細胞表面に抗原を発現する細胞を抗原として使用してもよい。
【０１０７】
ポリクローナル抗体は、抗原及びアジュバントを複数回、皮下（ｓｃ）または腹腔内（ｉｐ）注射することによって動物において産生され得る。例えば、ニワトリの免疫付与に関する説明が本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、抗原は、二官能性剤または誘導化剤を使用して、免疫原性タンパク質、例えば、キーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシサイログロブリンまたはダイズトリプシン阻害剤にコンジュゲートされる。ニワトリを免疫するための例示的な方法が本明細書で提供される。哺乳動物などの他の様々な生物に適した関連方法もまた当該技術分野においてよく知られている。
【０１０８】
上記のように、モノクローナル抗体は、種々の方法によって産生され得る。いくつかの実施形態では、本開示のモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）により最初に記載され、Ｈｏｎｇｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，１４（３）：２５３−２６０（１９９５）、Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ  ｅｄ．１９８８）、及びＨａｍｍｅｒｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）にさらに記載されているハイブリドーマ法を使用して作製される。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）は、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７−９３７（２００５）及びＶｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｆｉｎｄｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５−９１（２００５）に記載されている。ハイブリドーマ細胞が成長した培養培地を、目的の抗体の存在について、例えば、インビトロ結合アッセイ、免疫沈降、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡなどによってスクリーニングすることができ、結合親和性については、例えば、スキャッチャード分析によって決定することができる。所望の結合特性を有する抗体を産生するハイブリドーマを、既知の培養技術を使用してサブクローン化し、成長させ、動物の腹水腫瘍としてインビボで成長させることなどが可能である。
【０１０９】
いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体は、ファージディスプレイライブラリーなどのライブラリー法を使用して作製される。例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）を参照されたい。いくつかの実施形態では、例えば、Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３−４５５（１９９４）に記載されるように、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーをポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によってクローニングし、ファージライブラリーでランダムに組換え、次いで、これらを抗原結合ファージについてスクリーニングする。ファージは、典型的に、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片またはＦａｂ断片のいずれかとして、抗体断片を提示する。あるいは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ，１２：７２５−７３４（１９９３）に記載されるように、ナイーブレパートリー（例えば、ヒト由来）をクローニングすることで、いかなる免疫化も行うことなく、広範囲の非自己抗原及び自己抗原に対する単一の抗体源を得ることができる。最後に、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１−３８８（１９９２）に記載されるように、幹細胞に由来する再構成されていないＶ遺伝子断片をクローニングし、ランダム配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して、高度に可変のＣＤＲ３領域をコード化し、インビトロで再構成を達成することによって、ナイーブライブラリーを人工的に作製することもできる。
【０１１０】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、ニワトリ抗体である。ニワトリ抗体は、当該技術分野において知られている各種技術を使用して産生され得る。例えば、米国特許第６，１４３，５５９号、同第８，５９２，６４４号及び同第９，３８０，７６９号を参照されたい。
【０１１１】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、キメラ抗体である。例えば、米国特許第４，８１６，５６７号及びＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４）を参照されたい。いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、ニワトリ、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、またはサルなどの非ヒト霊長類に由来する可変領域）と、ヒト定常領域とを含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のクラスまたはサブクラスから変更されている、「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。
【０１１２】
いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。非ヒト抗体をヒト化することで、親の非ヒト抗体の特異性及び親和性を保持しながら、ヒトに対する免疫原性を低下させることができる。一般に、ヒト化抗体は、１つ以上の可変ドメインを含み、ＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（またはその一部分）は、非ヒト抗体（例えば、ニワトリ抗体）に由来し、ＦＲ（またはその一部分）は、ヒト抗体配列に由来する。ヒト化抗体はまた、任意選択により、ヒト定常領域の少なくとも一部分を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体中のいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体の特異性または親和性を回復または改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基の由来となる抗体）由来の対応する残基に置換される。ヒト化抗体及びその作製方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）に概説されている。また、ニワトリ抗体をヒト化する方法は、例えば、ＷＯ２００５０１４６５３に記載されている。
【０１１３】
ヒト化に有用なヒトフレームワーク領域には、「ベストフィット」法を使用して選択されるフレームワーク領域、特定の軽鎖可変領域または重鎖可変領域サブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域、ヒト体細胞変異フレームワーク領域またはヒト生殖細胞系列フレームワーク領域、及びＦＲライブラリーのスクリーニングから得られるフレームワーク領域が含まれるが、これらに限定されない。例えば、Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）、Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）、Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）、及びＢａｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４（１９９７）を参照されたい。
【０１１４】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野において知られている各種技術を使用して産生され得る。いくつかの実施形態では、ヒト抗体は、本明細書に記載される遺伝子操作されたニワトリ（例えば、米国特許第８，５９２，６４４号及び同第９，３８０，７６９号参照）及び／またはマウスなどの非ヒト動物によって産生される。ヒト抗体は、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０−４５９（２００８）に概説されている。
【０１１５】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、例えば、本明細書に記載の方法を使用して、ニワトリによって生成されるか、ニワトリに由来する。
【０１１６】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、限定するものではないが、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’−ＳＨ、ＦｖもしくはｓｃＦｖ断片を含む、抗体断片、または単一ドメイン、一本鎖重鎖もしくは一本鎖軽鎖抗体である。抗体断片は、例えば、酵素消化または組換え技術によって生成され得る。いくつかの実施形態では、例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４：１０７−１１７（１９９２）及びＢｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）に記載されるように、インタクト抗体のタンパク質分解消化を使用して、抗体断片が生成される。いくつかの実施形態では、抗体断片は、組換え宿主細胞によって産生される。例えば、Ｆａｂ、Ｆｖ及びＳｃＦｖ抗体断片がＥ．ｃｏｌｉによって発現及び分泌される。あるいは、抗体断片は、抗体ファージライブラリーから単離することができる。
【０１１７】
Ｆａｂ’−ＳＨ断片は、Ｅ．ｃｏｌｉから直接回収し、化学的に結合させてＦ（ａｂ’）２断片を形成することができる。Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６３−１６７（１９９２）を参照されたい。Ｆ（ａｂ’）２断片はまた、組換え宿主細胞培養物から直接単離することもできる。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含む、インビボ半減期が延長されたＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片については、米国特許第５，８６９，０４６号に記載されている。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、抗体は、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）である。ＷＯ９３／１６１８５ならびに米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号を参照されたい。ｓｃＦｖ融合タンパク質は、ｓｃＦｖのアミノ末端またはカルボキシ末端のいずれかでエフェクタータンパク質の融合を生じるように構築され得る。例えば、抗体断片はまた、例えば、米国特許第５，６４１，８７０号に記載されているものなどの「直鎖抗体」であり得る。このような直鎖抗体は、単一特異性または二重特異性であり得る。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、多重特異性抗体である。多重特異性抗体は、２つ以上の抗原に対して、結合特異性を有する（例えば、２、３またはそれを超える結合特異性を有する）。いくつかの実施形態では、抗体は、二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、同じ抗原に対して、２つの異なる結合特異性を含む（例えば、異なる結合親和性及び／または同じ抗原の異なる特異的エピトープを有する）。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、２つの明確に異なる抗原に対する結合特異性を含む。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、完全長またはインタクト抗体である。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、本開示の抗体断片である。
【０１２０】
様々な結合特異性の組み合わせを有する二重特異性または多重特異性抗体が本明細書で企図される。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、本明細書に記載される１つ以上のＳＩＲＰ−αポリペプチドに対する第１の結合特異性を有する。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、がん細胞によって（例えば、細胞表面上に）発現される抗原に対する第２の結合特異性を有する。例示的なかかる抗原には、限定するものではないが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＳ１／ＳＬＡＭＦ７、Ｔｒｏｐ−２、５Ｔ４、ＥｐｈＡ４、ＢＣＭＡ、ムチン１、ムチン１６、ＰＴＫ７、ＰＤ−Ｌ１、ＳＴＥＡＰ１、エンドセリンＢ型受容体、メソテリン、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＮＰＰ３、ＳＬＣ４４Ａ４、ＧＮＭＢ、ネクチン４、ＮａＰｉ２ｂ、ＬＩＶ−１Ａ、グアニル酸シクラーゼＣ、ＤＬＬ３、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、インテグリンαＶβ３、インテグリンα５β１、ＭＥＴ、ＩＧＦ１Ｒ、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＲＡＮＫＬ、ＦＡＰ、テネイシン、Ｌｅｙ、ＥｐＣＡＭ、ＣＥＡ、ｇｐＡ３３、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ７２、ムチン、ＣＡＩＸ、ＥＰＨＡ３、葉酸受容体α、ＧＤ２、ＧＤ３、及びＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ、ＳＳＸ−２、ＭＡＧＥファミリータンパク質、ＭＡＧＥ−Ａ３、ｇｐ１００／ｐｍｅｌ１７、Ｍｅｌａｎ−Ａ／ＭＡＲＴ−１、ｇｐ７５／ＴＲＰ１、チロシナーゼ、ＴＲＰ２、ＣＥＡ、ＰＳＡ、ＴＡＧ−７２、未成熟ラミニン受容体、ＭＯＫ／ＲＡＧＥ−１、ＷＴ−１、ＳＡＰ−１、ＢＩＮＧ−４、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ１、ＰＲＡＭＥ、サバイビン、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、ＭＡＲＴ−２、ｐ５３、Ｒａｓ、β−カテニン、ＴＧＦ−βＲＩＩ、ＨＰＶ  Ｅ６またはＨＰＶ  Ｅ７に由来するペプチドを含むＭＨＣ／ペプチド複合体が挙げられる。理論に束縛されることを望むものではないが、このような結合特異性とＳＩＲＰ−αに対する結合特異性とを組み合わせることは、例えば、第１の結合特異性により、腫瘍細胞によって発現される任意のＣＤ４７に対する、白血球によって発現されるＳＩＲＰ−αの応答性を阻害しつつ、第２の結合特異性により、腫瘍細胞を標的にするようにＦｃＲ発現白血球を指向付けるのに特に有利であると考えられる。
【０１２１】
いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、免疫細胞によって（例えば、細胞表面上に）発現される抗原に対する第２の結合特異性を有する。例示的なかかる抗原には、限定するものではないが、ＢＤＣＡ２、ＢＤＣＡ４、ＩＬＴ７、ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ２、ＬＩＬＲＢ３、ＬＩＬＲＢ４、ＣＳＦ−１Ｒ、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ１６３、ＣＤ２０６、ＤＥＣ２０５、ＣＤ４７、ＣＤ１２３、ＩＤＯ、ＴＤＯ、４１ＢＢ、ＣＴＬＡ４、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ−３、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＣＣＲ４、ＣＤ２５、ＣＤ１０３、ＫＩｒｇ１、Ｎｒｐ１、ＣＤ２７８、Ｇｐｒ８３、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１５４、ＣＤ１６０、ＰＶＲＩＧ、ＤＮＡＭ、及びＩＣＯＳが挙げられる。いくつかの実施形態では、抗原は、骨髄細胞上で発現される。かかる抗原には、ＢＤＣＡ２、ＢＤＣＡ４、ＩＬＴ７、ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ２、ＬＩＬＲＢ３、ＬＩＬＲＢ４、ＣＳＦ−１Ｒ、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ１６３、ＣＤ２０６、ＤＥＣ２０５、ＣＤ４７、ＣＤ１２３、ＩＤＯ、及びＴＤＯを挙げることができるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、抗原は、Ｔ細胞上で発現される。かかる抗原には、４１ＢＢ、ＣＴＬＡ４、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ−３、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＣＣＲ４、ＣＤ２５、ＣＤ１０３、ＫＩｒｇ１、Ｎｒｐ１、ＣＤ２７８、Ｇｐｒ８３、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１５４、ＣＤ１６０、ＴＮＦＲ２、ＰＶＲＩＧ、ＤＮＡＭ、及びＩＣＯＳを挙げることができるが、これらに限定されない。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、ＮＫ細胞によって（例えば、細胞表面上に）発現される抗原に対する第２の結合特異性を有する。例示的なかかる抗原には、限定するものではないが、ＮＫＲ−Ｐ１Ａ（ＫＬＲＢ１）、ＣＤ９４（ＮＫＧ２Ａ）、ＫＬＲＧ１、ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ、ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＫＩＲ２ＤＳ２、ＫＩＲ２ＤＳ３、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＫＩＲ２ＤＳ５、ＫＩＲ３ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＣＤ９４（ＮＫＧ２Ｃ／Ｅ）、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１６（ＦｃγＲＩＩＩＡ）、ＮＫｐ４６（ＮＣＲ１）、ＮＫｐ３０（ＮＣＲ３）、ＮＫｐ４４（ＮＣＲ２）、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＣＲＴＡＭ、ＣＤ２７、ＮＴＢ−Ａ（ＳＬＡＭＦ６）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１、ＣＬＥＣ５Ｃ）、ＳＬＡＭＦ７（ＣＲＡＣＣ、ＣＳ１、ＣＤ３１９）、及びＣＤ２４４（２Ｂ４、ＳＬＡＭＦ４）が挙げられる。
【０１２３】
二重特異性抗体を作製及び精製するための方法は、様々なものが当該技術分野において知られており、多数のアプローチが記載されている。アプローチの１つは、「ノブ・イントゥ・ホール（ｋｎｏｂｓ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅｓ）」または「空隙への突起（ｐｒｏｔｕｂｅｒａｎｃｅ−ｉｎｔｏ−ｃａｖｉｔｙ）」法である（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインモノマーのヘテロ二量体化は、「ノブ・イントゥ・ホール」残基ペア及び電荷残基ペアのように、２つのＦｃドメインモノマーに、異なるが適合する置換を導入することによって促進される。ノブとホールの相互作用は、ヘテロ二量体形成に有利であるが、ノブとノブ及びホールとホールの相互作用は、立体的衝突及び好ましい相互作用の欠如により、ホモ二量体形成を妨害する。ホールは、タンパク質中の元のアミノ酸を、より小さい側鎖体積を有する異なるアミノ酸で置き換えたときに生じる空隙を指す。ノブは、タンパク質中の元のアミノ酸を、より大きい側鎖体積を有する異なるアミノ酸で置き換えたときに生じる突起を指す。例えば、いくつかの実施形態では、置き換えられるアミノ酸は、ＦｃドメインモノマーのＣＨ３抗体定常ドメイン中にあり、２つのＦｃドメインモノマーの二量体化に関与する。いくつかの実施形態では、一方のＣＨ３抗体定常ドメイン中に、他方のＣＨ３抗体定常ドメイン中のノブを収容するようにホールを形成する。これにより、ノブとホールのアミノ酸が２つのＦｃドメインモノマーのヘテロ二量体化を促進または支持するように作用する。いくつかの実施形態では、一方のＣＨ３抗体定常ドメイン中のホールは、他方のＣＨ３抗体定常ドメイン中の元のアミノ酸をより良好に収容するように作成される。いくつかの実施形態では、一方のＣＨ３抗体定常ドメイン中のノブは、他方のＣＨ３抗体定常ドメイン中の元のアミノ酸とさらなる相互作用を形成するように作成される。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、ホールは、ＣＨ３抗体定常ドメイン中のチロシンまたはトリプトファンなどのより大きな側鎖を有するアミノ酸を、アラニン、バリンまたはトレオニンなどのより小さな側鎖を有するアミノ酸で置き換えることによって構築される（例えば、Ｙ４０７Ｖ変異）。同様に、いくつかの実施形態では、ノブは、ＣＨ３抗体定常ドメイン中のより小さな側鎖を有するアミノ酸を、より大きな側鎖を有するアミノ酸で置き換えることによって構築される（例えば、Ｔ３６６Ｗ変異）。いくつかの実施形態では、一方のＦｃドメインモノマーは、ノブ変異Ｔ３６６Ｗを含み、他方のＦｃドメインモノマーは、ホール変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３５８Ａ及びＹ４０７Ｖを含む。いくつかの実施形態では、高親和性ＳＩＲＰ−α  Ｄ１バリアントを含む本開示のポリペプチドを、ノブ変異Ｔ３６６Ｗを含むＦｃドメインモノマーに融合させ、望ましくないノブ−ノブホモ二量体形成を制限する。ノブ・イントゥ・ホールのアミノ酸ペアの例には、限定するものではないが、表３のものが挙げられる。
【表３】
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【０１２５】
別のアプローチは、例えば、ヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインを有する免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合された、所望の結合特異性（抗体−抗原結合部位）を有する抗体可変ドメインを使用する。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、一方のアームに第１の結合特異性を有するハイブリッド免疫グロブリン重鎖を有し、他方のアームにハイブリッド免疫グロブリン重鎖−軽鎖ペア（第２の結合特異性を与える）を有する。ＷＯ９４／０４６９０を参照されたい。別のアプローチは、架橋（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号参照）を使用してヘテロコンジュゲート抗体を作製する。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、化学的連結を使用して作製することができ（例えば、Ｂｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）参照）、インタクト抗体をタンパク質分解的にＦ（ａｂ’）２断片に切断し、これらの断片をジチオール複合化剤の存在下で還元し、チオニトロ安息香酸（ＴＮＢ）誘導体に変換し、その一方を還元によってＦａｂ’−チオールに再変換し、他方のＦａｂ’−ＴＮＢ誘導体と混合し、二重特異性抗体を形成する。いくつかの実施形態では、Ｆａｂ’−ＳＨ断片を化学的に結合させる。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体断片は、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）に記載のように、ロイシンジッパーを使用して細胞培養で作製される。他の二重特異性抗体フォーマットについては、例えば、Ｓｐｉｅｓｓ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６７：９５−１０６を参照されたい。
【０１２６】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、ダイアボディである。例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照されたい。ダイアボディの場合、一方の断片のＶＨドメイン及びＶＬドメインを、他方の断片の相補的なＶＬドメイン及びＶＨドメインと対合させ、これにより、２つの抗原結合部位を形成する。一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体の使用によって二重特異性抗体断片を作製するための別の方策も報告されている。Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１５２：５３６８（１９９４）を参照されたい。
【０１２７】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、単一ドメイン抗体である。単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全てもしくは一部分、または軽鎖可変ドメインの全てもしくは一部分を含む、単一ポリペプチド鎖を指す。ある特定の実施形態では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（例えば、米国特許第６，２４８，５１６Ｂ１号参照）。一実施形態では、単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全てまたは一部分を含む。ラクダ抗体も知られている。
【０１２８】
抗体は、組換え法を使用して産生することができる。抗抗原抗体の組換え産生には、抗体をコードする核酸を単離し、さらなるクローニング（ＤＮＡの増幅）または発現のために複製可能なベクターに挿入する。抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離され、配列決定することができる。多数のベクターが利用可能である。ベクター構成要素には、一般に、次の要素：シグナル配列、複製起点、１つ以上のマーカー遺伝子、エンハンサー要素、プロモーター及び転写終結配列のうちの１つ以上が含まれるが、これらに限定されない。
【０１２９】
本開示の抗体は、例えば、シグナル配列または成熟タンパク質もしくは成熟ポリペプチドのＮ末端に特異的な切断部位を有する他のポリペプチドである、異種ポリペプチドとの融合ポリペプチドとして組換え的に産生することができる。選択される異種シグナル配列は、宿主細胞によって認識され、プロセシングされる（例えば、シグナルペプチダーゼによって切断される）ものであり得る。天然抗体のシグナル配列を認識せず、プロセシングしない原核生物の宿主細胞については、当該シグナル配列を、例えば、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、Ｉｐｐまたは熱安定性エンテロトキシンＩＩリーダーから選択される原核生物のシグナル配列に置き換える。酵母での分泌では、天然シグナル配列は、例えば、酵母インベルターゼリーダー、因子リーダー（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ及びＫｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  α因子リーダーを含む）、または酸性ホスファターゼリーダー、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓグルコアミラーゼリーダーなどに置き換えることができる。哺乳動物細胞の発現では、哺乳動物のシグナル配列及びウイルス分泌リーダー、例えば、単純ヘルペスｇＤシグナルが利用可能である。
【０１３０】
発現ベクターとクローニングベクターはいずれも、１つ以上の選択した宿主細胞において、当該ベクターの複製を可能にする核酸配列、例えば、宿主染色体ＤＮＡとは関係なく当該ベクターの複製を可能にする核酸配列を含有する。この配列は、複製起点または自己複製配列を含み得る。かかる配列は、種々の細菌、酵母及びウイルスのものがよく知られている。一般に、哺乳動物発現ベクターには、複製起点成分は必要とされない（初期プロモーターを含有することから、ＳＶ４０起点が使用されることもある）。
【０１３１】
発現ベクター及びクローニングベクターは、選択遺伝子または選択マーカーを含有し得る。典型的な選択遺伝子は、（ａ）抗生物質もしくは他の毒素、例えば、アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキサートもしくはテトラサイクリンに対する耐性を付与するタンパク質、（ｂ）栄養要求性欠損を補うタンパク質、または（ｃ）複合培地から得られない重要な栄養素を供給するタンパク質をコードする。優性選択の例は、ネオマイシン、ミコフェノール酸及びハイグロマイシンの薬物を使用する。哺乳動物細胞に好適な選択マーカーの別の例は、抗体をコードする核酸を取り込む細胞成分の特定を可能にするものであり、例えば、ＤＨＦＲ、グルタミンシンテターゼ（ＧＳ）、チミジンキナーゼ、メタロチオネインＩ及び−ＩＩ、好ましくは、霊長類メタロチオネイン遺伝子、アデノシンデアミナーゼ、オルニチン脱炭酸酵素などである。例えば、ＤＨＦＲ遺伝子を用いて形質転換された、内因性ＤＨＦＲ活性を欠損するチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株は、その形質転換体を、ＤＨＦＲの競合的アゴニストであるメトトレキサート（Ｍｔｘ）含有培地中で培養することによって特定される。
【０１３２】
あるいは、目的の抗体をコードするＤＮＡ配列、野生型ＤＨＦＲ遺伝子、及びアミノグリコシド３’−ホスホトランスフェラーゼ（ＡＰＨ）などの別の選択マーカーを用いて形質転換または同時形質転換された宿主細胞（特に、内因性ＤＨＦＲを含有する野生型宿主）は、アミノグリコシド系抗生物質（例えば、カナマイシン、ネオマイシンまたはＧ４１８）などの選択マーカーに適した選択剤を含有する培地中で細胞を成長させることによって選択することができる。
【０１３３】
発現ベクター及びクローニングベクターは、一般に、宿主生物によって認識され、抗体をコードする核酸に機能的に連結されたプロモーターを含有する。原核生物宿主での使用に好適なプロモーターには、ｐｈｏＡプロモーター、β−ラクタマーゼ及びラクトースプロモーター系、アルカリホスファターゼプロモーター、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系、ならびにｔａｃプロモーターなどのハイブリッドプロモーターが含まれる。しかしながら、他の既知の細菌プロモーターも好適である。真核生物のプロモーター配列が知られている。酵母プロモーターが当該技術分野においてよく知られており、成長条件によって制御される誘導性プロモーター／エンハンサーを含み得る。実質上、全ての真核細胞遺伝子は、転写が開始される部位から約２５〜３０塩基上流に位置するＡＴリッチ領域を有する。例としては、限定するものではないが、３−ホスホグリセリン酸キナーゼまたは他の解糖系酵素、例えば、エノラーゼ、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ、ヘキソキナーゼ、ピルビン酸デカルボキシラーゼ、ホスホフルクトキナーゼ、グルコース−６−リン酸イソメラーゼ、３−ホスホグリセリン酸ムターゼ、ピルビン酸キナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、ホスホグルコースイソメラーゼ、及びグルコキナーゼに対するプロモーターが挙げられる。哺乳動物の宿主細胞におけるベクターからの抗体転写は、例えば、ウイルスゲノムから得られるプロモーターによって制御することができる。ＳＶ４０ウイルスの初期及び後期プロモーターは、ＳＶ４０ウイルス複製起点をさらに含有するＳＶ４０制限断片として簡便に得られる。ヒトサイトメガロウイルス最初期プロモーターは、ＨｉｎｄＩＩＩ  Ｅ制限断片として簡便に得られる。あるいは、ラウス肉腫ウイルスの長末端反復をプロモーターとして使用することができる。
【０１３４】
高等真核細胞による、本開示の抗体をコードするＤＮＡの転写は、多くの場合、ベクター中にエンハンサー配列を挿入することによって増大する。現在、哺乳動物遺伝子（グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α−フェトプロテイン及びインスリン）に由来する多くのエンハンサー配列が知られている。しかしながら、典型的に、真核細胞ウイルス由来のエンハンサーが使用される。
【０１３５】
真核生物の宿主細胞（酵母、真菌、昆虫、植物、動物、ヒトまたは他の多細胞生物に由来する有核細胞）に使用される発現ベクターはまた、転写の終結及びｍＲＮＡの安定化に必要な配列を含有する。
【０１３６】
本明細書におけるベクターのＤＮＡクローニングまたはＤＮＡ発現に好適な宿主細胞は、上記の原核生物、酵母または高等真核細胞である。この目的に好適な原核生物には、グラム陰性またはグラム陽性微生物などの真正細菌、例えば、ＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａなどのＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｅｒｗｉｎｉａ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｐｒｏｔｅｕｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、例えば、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｓｅｒｒａｔｉａ、例えば、Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃａｎｓ及びＳｈｉｇｅｌｌａなどが含まれる。原核生物に加えて、糸状菌または酵母などの真核微生物も、抗体をコードするベクターに好適なクローニング宿主または発現宿主である。Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅまたは一般的にパン酵母菌は、下等真核生物の宿主微生物のなかでは最も一般的に使用されている。グリコシル化経路が「ヒト化」されており、部分的または完全なヒトグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす、ある特定の真菌株及び酵母株が選択され得る。例えば、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０−２１５（２００６）を参照されたい。
【０１３７】
綿、トウモロコシ、ジャガイモ、ダイズ、ペチュニア、トマト、ウキクサ（Ｌｅｎｉｎａｃｅａｅ）、アルファルファ（Ｍ．ｔｒｕｎｃａｔｕｌａ）及びタバコの植物細胞培養物も宿主として利用することができる。
【０１３８】
グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）から得ることもできる。無脊椎動物細胞の例には、植物細胞及び昆虫細胞が挙げられる。多数のバキュロウイルス系及びバリアントと、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ（幼虫）、Ａｅｄｅｓ  ａｅｇｙｐｔｉ（蚊）、Ａｅｄｅｓ  ａｌｂｏｐｉｃｔｕｓ（蚊）、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ（ショウジョウバエ）及びＢｏｍｂｙｘ  ｍｏｒｉなどの宿主から得られる、対応する許容可能な昆虫宿主細胞が特定されている。
【０１３９】
脊椎動物細胞を宿主として使用してもよく、培養（組織培養）における脊椎動物細胞の増殖が日常的な手段となっている。有用な哺乳動物宿主細胞株の例は、ＳＶ４０により形質転換したサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ１６５１）、ヒト胎児腎臓株（２９３細胞または浮遊培養での成長のためにサブクローニングされた２９３細胞（Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７））、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ１０）、マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０））、サル腎臓細胞（ＣＶ１  ＡＴＣＣ  ＣＣＬ７０）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１５８７）、ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ２）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ３４）、バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ  ３Ａ、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ１４４２）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ７５）、ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２、ＨＢ  ８０６５）、マウス乳腺癌（ＭＭＴ  ０６０５６２、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ５１）、ＴＲＩ細胞（Ｍａｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４−６８（１９８２））、ＭＲＣ  ５細胞、ＦＳ４細胞、及びヒトヘパトーマ株（Ｈｅｐ  Ｇ２）である。他の有用な宿主哺乳動物細胞株には、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４２１６（１９８０））を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ならびにＮＳ０及びＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株が含まれる。抗体産生に好適な特定の宿主哺乳動物細胞株の総説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ  ａｎｄ  Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．２００３），ｐｐ．２５５−２６８を参照されたい。
【０１４０】
本開示の宿主細胞は、種々の培地中で培養することができ、Ｈａｍ’ｓ  Ｆ１０（Ｓｉｇｍａ）、最小必須培地（（ＭＥＭ）、（Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭＩ−１６４０（Ｓｉｇｍａ）、及びダルベッコ改変イーグル培地（（ＤＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ）などの市販の培地が、宿主細胞の培養に好適である。加えて、Ｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．５８：４４（１９７９）、Ｂａｒｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０２：２５５（１９８０）、米国特許第４，７６７，７０４号、同第４，６５７，８６６号、同第４，９２７，７６２号、同第４，５６０，６５５号もしくは同第５，１２２，４６９号、ＷＯ９０／０３４３０、ＷＯ８７／００１９５または米国特許第３０，９８５号に記載されている培地のいずれかを宿主細胞の培養培地として使用してもよい。これらの培地のいずれも、必要に応じて、ホルモン及び／または他の成長因子（インスリン、トランスフェリンまたは上皮成長因子など）、塩（塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム及びリン酸塩など）、緩衝剤（ＨＥＰＥＳなど）、ヌクレオチド（アデノシン及びチミジンなど）、抗生物質（ゲンタマイシン（商標）剤など）、微量元素（マイクロモル範囲の最終濃度で通常存在する無機化合物として定義される）ならびにグルコースまたは同等のエネルギー源が添加され得る。任意の他の必要な添加物も、当業者に知られているであろう適切な濃度で含めることができる。温度、ｐＨなどの培養条件は、発現のために選択された宿主細胞で以前から使用されているものであり、当業者には明らかであろう。
【０１４１】
組換え技術を使用する場合、抗体は、ペリプラズム中に細胞内産生され得るか、培地中に直接分泌され得る。抗体が細胞内で産生される場合、第１工程として、宿主細胞または溶解断片のいずれかである粒子状デブリを、例えば、遠心分離または限外濾過によって除去する。Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６３−１６７（１９９２）は、Ｅ．ｃｏｌｉのペリプラズムに分泌される抗体を単離するための手順について記載している。
【０１４２】
細胞から調製された抗体組成物は、例えば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析及び親和性クロマトグラフィーを使用して精製することができ、親和性クロマトグラフィーは、典型的に好ましい精製工程の１つである。
【０１４３】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、式ＧＱＰＫＡＮＰＴＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＧＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＫＰＳＫＱＳＸ４Ｘ５ＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ（配列番号７２）に従ったアミノ酸配列を含む軽鎖定常（ＣＬ）ドメイン配列を含む軽鎖を含み、ここで、Ｘ４Ｘ５は、ＮＤ、ＤＮ、ＤＳ、またはＳＤである。ある特定の実施形態では、ＣＬドメインは、配列番号４３〜４６から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０１４４】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、限定するものではないが、ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＲＩＴＣ（配列番号２７）、ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＴＬＩＹ（配列番号２８）、ＮＩＰＥＲＦＳＧＳＳＳＧＴＴＶＴＬＴＩＳＧＶＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣ（配列番号２９）、及びＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号３０）を含む、１つ、２つ、３つ、または４つのＩＧＬＶ３フレームワーク配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、構造ＦＷ１−ＨＶＲ−Ｌ１−ＦＷ２−ＨＶＲ−Ｌ２−ＦＷ３−ＨＶＲ−Ｌ３−ＦＷ４を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含み、ここで、ＦＷ１は、配列ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＲＩＴＣ（配列番号２７）を含み、ＦＷ２は、配列ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＴＬＩＹ（配列番号２８）を含み、ＦＷ３は、配列ＮＩＰＥＲＦＳＧＳＳＳＧＴＴＶＴＬＴＩＳＧＶＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣ（配列番号２９）を含み、ＦＷ４は、配列ＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号３０）を含む。
【０１４５】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、κまたはλ軽鎖定常（ＣＬ）ドメインを含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号３６〜３８のうちの１つのアミノ酸配列を含む軽鎖定常ドメインを含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号４３〜４６のうちの１つのアミノ酸配列を含む軽鎖定常ドメインを含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、表１に示す軽鎖定常ドメイン配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号２５の配列を含むＶＬドメインと、配列番号３６〜３８及び４３〜４６から選択されるＣＬドメイン配列とを含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号２５の配列を含むＶＬドメインと、配列番号４３〜４６から選択されるＣＬドメイン配列とを含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号４８〜５１から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号３９〜４１から選択されるＶＬドメイン配列と、配列番号３６〜３８から選択される配列を含むＣＬドメインとを含む軽鎖を含む。上記の軽鎖のいずれかを、表２に示す重鎖または表２に示すＶＨドメインを含む抗体重鎖と組み合わせることができる。
【０１４６】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、Ｆｃ領域を含む重鎖定常ドメインを含む重鎖を含む。例えば、いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒトＦｃ領域、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４及びこれらのサブタイプである。例示的かつ非限定的なＦｃ領域は、表４に示される配列番号３１〜３５及び１３２〜１３９のアミノ酸配列を含む重鎖定常ドメイン内に記載される。いくつかの実施形態では、配列番号３１〜３５及び１３２〜１３９のアミノ酸配列を含む重鎖定常ドメインアミノ酸配列のうちの１つ以上内のＦｃ領域は、例えば、本明細書中、以下に記載される変異のうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、表２に示す重鎖定常ドメイン配列を含む重鎖を含む。
【表４−１】
2021518142.tif 000018
【表４−２】
2021518142.tif 000019
【表４−３】
2021518142.tif 000020
【０１４７】
いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、安定性、グリコシル化パターンまたは他の修飾、エフェクター細胞機能、薬物動態などの１つ以上の抗体特性に影響を与える１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、グリコシル化が減少されているか、最小限である。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、エフェクター機能が除去されているか、低下している。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、安定性が改善されている（例えば、Ｓ２２８Ｐ変異の使用を通じて、ヒンジドメインの安定性が改善されている、及び／またはＩｇＧ４抗体のモノマー交換が低下している）。
【０１４８】
例示的なＦｃ変異（例えば、上記の特性のうちの１つ以上に影響を及ぼすもの）には、限定するものではないが、（ｉ）ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域の変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及び任意選択でＮ２９７Ａ、（ｉｉ）ヒトＩｇＧ２  Ｆｃ領域の変異Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及び任意選択でＮ２９７Ａ、ならびに（ｉｉｉ）ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域の変異Ｓ２２８Ｐ、及び任意選択でＥ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６及びＮ２９７Ａ（ＥＵナンバリング）が挙げられる。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３７Ａ変異を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａ変異を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ２  Ｆｃ領域は、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓ変異を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ２  Ｆｃ領域は、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａ変異を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域は、Ｓ２８８Ｐ変異を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域は、Ｓ２８８Ｐ及びＬ２３５Ｅ変異を含む。
【０１４９】
細胞表面抗原を標的にする抗体は、免疫細胞上のＦｃ受容体（ＦｃＲ）結合に付随する免疫活性化及びエフェクター機能を誘発し得る。ＩｇＧ（γ受容体）、ＩｇＥ（η受容体）、ＩｇＡ（α受容体）及びＩｇＭ（μ受容体）を含む、特定の抗体クラスに特異的であるＦｃ受容体が多数存在する。細胞表面上のＦｃ受容体へ  Ｆｃ領域の結合は、多数の生物反応を誘発し得、当該反応には、抗体被覆粒子の食作用（抗体依存性細胞媒介性食作用またはＡＤＣＰ）、免疫複合体のクリアランス、キラー細胞による抗体被覆細胞の溶解（抗体依存性細胞媒介性細胞傷害またはＡＤＣＣ）及び炎症性メディエーターの放出、胎盤通過、及び免疫グロブリン産生の制御が含まれる。さらに、補体のＣ１成分の抗体への結合は、補体系を活性化し得る。補体の活性化は、細胞病原体の溶解にとって重要であり得る。しかしながら、補体の活性化はまた、炎症反応を刺激することもあり、自己免疫過敏症または他の免疫疾患に関与することもある。ある特定のＦｃ受容体に結合する能力を低下または除去したバリアントＦｃ領域は、局所細胞または局所組織を損傷も破壊もさせずに、リガンド機能を標的化、活性化または中和することによって作用する治療抗体及びＦｃ融合ポリペプチド構築物の開発に有用である。
【０１５０】
いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインモノマーは、第２及び第３の抗体定常ドメイン（例えば、ＣＨ２及びＣＨ３）を含むポリペプチド鎖を指す。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインモノマーはまた、ヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインモノマーは、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＡ及びＩｇＤを含む、任意の免疫グロブリン抗体アイソタイプのものである。さらに、いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインモノマーは、任意のＩｇＧサブタイプ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ２ｃ、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４）のものである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインモノマーは、野生型Ｆｃドメインモノマー配列から１０個もの変化（例えば、１〜１０、１〜８、１〜６、１〜４個のアミノ酸置換、付加もしくは挿入、欠失、またはこれらの組み合わせ）を含み、これらの変化がＦｃドメインとＦｃ受容体との間の相互作用を変化させる。
【０１５１】
いくつかの実施形態では、免疫グロブリンのＦｃドメインモノマーまたはＦｃドメインモノマーの断片は、別のＦｃドメインモノマーとＦｃドメインを形成することができる。いくつかの実施形態では、免疫グロブリンのＦｃドメインモノマーまたはＦｃドメインモノマーの断片は、別のＦｃドメインモノマーとＦｃドメインを形成することができない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドの血清半減期を延長するために、ＦｃドメインモノマーまたはＦｃドメインの断片が本開示のポリペプチドに融合される。いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドに融合されたＦｃドメインモノマーまたはＦｃドメインモノマーの断片は、第２のＦｃドメインモノマーと二量体化してＦｃ受容体に結合するＦｃドメインを形成するか、あるいは、Ｆｃドメインモノマーは、Ｆｃ受容体に結合する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドの血清半減期を延長させるためにポリペプチドに融合されたＦｃドメインまたはＦｃドメイン断片は、いかなる免疫系関連反応も誘導しない。Ｆｃドメインは、ＣＨ３抗体定常ドメイン間の相互作用によって二量体化する２つのＦｃドメインモノマーを含む。
【０１５２】
野生型Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体、例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ及びＦｃγＲＩＶに結合する最小構造を形成する。いくつかの実施形態では、本開示の抗体中のＦｃドメインは、エフェクター機能の低下、例えば、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の低下、補体依存性細胞溶解（ＣＤＣ）の低下、抗体依存性細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）の低下、またはこれらの任意の組み合わせなどをもたらす、１つ以上のアミノ酸置換、付加もしくは挿入、欠失、またはこれらの組み合わせを含む。例えば、本開示の抗体は、ヒトＦｃ受容体に対する結合の減少（例えば、最小限の結合または結合がないこと）ならびに補体タンパク質Ｃ１ｑに対する結合の減少（例えば、最小限の結合または結合がないこと）、ヒトＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、ＦｃγＲＩＩＩＢ、ＦｃγＲＩＩＩＢまたはこれらの任意の組み合わせ及びＣ１ｑに対する結合の減少（例えば、最小限の結合または結合がないこと）、抗体依存性エフェクター機能、例えば、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、ＡＤＣＰまたはこれらの任意の組み合わせなどの変更または低下を示すことができる。例示的な変異には、限定するものではないが、Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｇ２３６、Ｇ２３７、Ｄ２６５、Ｄ２７０、Ｎ２９７、Ｅ３１８、Ｋ３２０、Ｋ３２２、Ａ３２７、Ａ３３０、Ｐ３３１またはＰ３２９に１つ以上のアミノ酸置換が挙げられる（ナンバリングはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１））。
【０１５３】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、ＣＤ１６ａ、ＣＤ３２ａ、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３２ｃ及びＣＤ６４のＦｃγ受容体に対する結合が減少しているか、除去されている。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される非天然Ｆｃ領域を含む抗体は、野生型Ｆｃ領域を含む抗体と比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれを超える、Ｃ１ｑ結合の減少を示す。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される非天然Ｆｃ領域を含む抗体は、野生型Ｆｃ領域を含む抗体と比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれを超える、ＣＤＣの低下を示す。
【０１５４】
いくつかの実施形態では、本明細書におけるＦｃバリアントは、野生型配列と比較して、グリコシル化が最小限であるか、グリコシル化が減少されている。いくつかの実施形態では、脱グリコシル化は、Ｎ２９７Ａを変異させるか、Ｎ２９７をＮではない任意のアミノ酸に変異させることによって達成される。
【０１５５】
いくつかの実施形態では、抗体ＩｇＧ定常領域のバリアント（例えば、Ｆｃバリアント）は、Ｆｃγ受容体に特異的に結合する能力が低下しているか、あるいは、食作用を誘導する能力が低下している。いくつかの実施形態では、抗体ＩｇＧ定常領域のバリアント（例えば、Ｆｃバリアント）は、Ｆｃγ受容体に特異的に結合する能力が低下しており、かつ食作用を誘導する能力が低下している。例えば、いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、エフェクター機能を欠くように変異させる（これは「デッド」Ｆｃドメインに特有である）。例えば、いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ＦｃドメインとＦｃγ受容体との間の相互作用を最小限に抑えることが知られている特定のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインモノマーは、ＩｇＧ１抗体に由来し、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ及びＮ２９７Ａのうちの１つ以上を含む（Ｋａｂａｔ，  ｅｔ  ａｌ（１９９１）によるＥＵナンバリングシステムに従って指定されるアミノ酸位置ナンバリング）。いくつかの実施形態では、かかるＩｇＧ１のＦｃバリアントには、１つ以上の追加の変異が含まれる。ヒトＩｇＧ１のＦｃバリアントに対するこのような追加の変異の非限定的な例には、Ｅ３１８Ａ及びＫ３２２Ａが挙げられる。いくつかの場合において、ヒトＩｇＧ１のＦｃバリアントは、野生型ヒトＩｇＧ１配列と比較して、合計で最大１２、１１、１０、９、８、７、６、５または４個以下の変異を有する。いくつかの実施形態では、かかるＩｇＧ１のＦｃバリアントには、１つ以上の追加の欠失が含まれる。例えば、いくつかの実施形態では、例えば、ポリペプチドが細菌細胞中または哺乳動物細胞中で産生される場合、当該ポリペプチドの均質性を高めるために、ＦｃのＩｇＧ１重鎖定常領域のＣ末端リシンが欠失される。いくつかの場合において、ヒトＩｇＧ１のＦｃバリアントは、野生型ヒトＩｇＧ１配列と比較して、合計で最大１２、１１、１０、９、８、７、６、５または４個以下の欠失を有する。
【０１５６】
いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインモノマーは、ＩｇＧ２抗体に由来し、アミノ酸置換Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１ＳまたはＡ３３０ＳとＰ３３１Ｓの両方を含む。上述のアミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ，ｅｔ  ａｌ（１９９１）に従って定義される。所与の抗体に対するアミノ酸残基のＫａｂａｔナンバリングは、その抗体の配列と「標準的な」Ｋａｂａｔナンバリング配列との相同領域でのアラインメントによって決定され得る。いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントは、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ及びＮ２９７Ａアミノ酸置換のうちの１つ以上を含む、ヒトＩｇＧ２のＦｃ配列を含む（Ｋａｂａｔ，ｅｔ  ａｌ（１９９１）によるＥＵナンバリングシステムに従って指定されるアミノ酸位置ナンバリング）。いくつかの実施形態では、かかるＩｇＧ２のＦｃバリアントには、１つ以上の追加の変異が含まれる。ヒトＩｇＧ２のＦｃバリアントに対するこのような追加の変異の非限定的な例には、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｖ３０９Ｌ及びＨ２６８Ａが挙げられる（Ｋａｂａｔ，ｅｔ  ａｌ（１９９１）によるＥＵナンバリングシステムに従って指定）。いくつかの場合において、ヒトＩｇＧ２のＦｃバリアントは、野生型ヒトＩｇＧ２配列と比較して、合計で最大１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４または３個以下の変異を有する。いくつかの実施形態では、かかるＩｇＧ２のＦｃバリアントには、１つ以上の追加の欠失が含まれる。
【０１５７】
ＦｃバリアントがＩｇＧ４のＦｃバリアントである場合、いくつかの実施形態では、かかるＦｃバリアントは、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５ＥまたはｄｅｌＧ２３６変異を含む（Ｋａｂａｔ，ｅｔ  ａｌ（１９９１）に従って指定されるアミノ酸位置ナンバリング）。いくつかの場合において、ヒトＩｇＧ４のＦｃバリアントは、野生型ヒトＩｇＧ４配列と比較して、合計で最大１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１個の変異（複数可）を有する。
【０１５８】
いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントは、野生型ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域と比較して、対象のＦｃ受容体に対する結合が減少している。いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントは、野生型ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域と比較して、対象のＦｃ受容体に対する結合の除去を示す。いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントは、野生型ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域と比較して、食作用の低下を示す。いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントは、野生型ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域と比較して、食作用の除去を示す。
【０１５９】
抗体依存性細胞媒介性細胞傷害は、本明細書においてＡＤＣＣとも呼ばれ、ある特定の細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞及び好中球）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に分泌型Ｉｇが結合し、これにより、これらの細胞傷害性エフェクター細胞が抗原担持標的細胞に特異的に結合し、続いて、その標的細胞を死滅させることを可能にする、細胞傷害の一形態を指す。抗体依存性細胞媒介性食作用は、本明細書においてＡＤＣＰとも呼ばれ、ある特定の食細胞（例えば、マクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に分泌型Ｉｇが結合し、これにより、食作用エフェクター細胞が抗原担持標的細胞に特異的に結合し、続いて、その標的細胞を取り込み、消化することを可能にする、細胞傷害の一形態を指す。標的細胞の表面に対するリガンド特異的高親和性ＩｇＧ抗体は、細胞傷害性細胞または食細胞を刺激することができ、かかる死滅に使用することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＦｃバリアントを含むポリペプチド構築物は、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチド構築物と比較して、ＡＤＣＣまたはＡＤＣＰの低下を示す。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＦｃバリアントを含むポリペプチド構築物は、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチド構築物と比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれを超える、ＡＤＣＣまたはＡＤＣＰの低下を示す。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＦｃバリアントを含む抗体は、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチド構築物と比較して、ＡＤＣＣまたはＡＤＣＰの除去を示す。
【０１６０】
補体依存性細胞傷害は、本明細書においてＣＤＣとも呼ばれ、抗体Ｆｃに補体成分Ｃ１ｑが結合することによって補体カスケードが活性化される、細胞傷害の一形態を示す。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＦｃバリアントを含むポリペプチド構築物は、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチド構築物と比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれを超える、Ｃ１ｑ結合の減少を示す。いくつかの場合において、本明細書に記載されるＦｃバリアントを含むポリペプチド構築物は、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチド構築物と比較して、ＣＤＣの低下を示す。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＦｃバリアントを含むポリペプチド構築物は、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチド構築物と比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれを超える、ＣＤＣの低下を示す。いくつかの場合において、本明細書に記載されるＦｃバリアントを含む抗体は、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチド構築物と比較して、ごくわずかなＣＤＣしか示さない。
【０１６１】
本明細書におけるＦｃバリアントは、野生型ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域と比較して、Ｆｃγ受容体に対する結合が減少しているものを含む。例えば、いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントは、Ｆｃγ受容体に対する結合が、野生型ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域によって示されるＦｃγ受容体に対する結合よりも少ない。いくつかの場合において、Ｆｃバリアントは、Ｆｃγ受容体に対する結合の減少が、１０％、２０％３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％（エフェクター機能の完全な除去）である。いくつかの実施形態では、結合の減少は、任意の１つ以上のＦｃγ受容体、例えば、ＣＤ１６ａ、ＣＤ３２ａ、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３２ｃまたはＣＤ６４に対するものである。
【０１６２】
いくつかの場合において、本明細書で開示されるＦｃバリアントは、その野生型ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域と比較して、食作用の低下を示す。かかるＦｃバリアントは、その野生型ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域と比較して、食作用の低下を示し、その食作用活性の低下は、例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％である。いくつかの場合において、Ｆｃバリアントは、その野生型ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域と比較して、食作用の除去を示す。
【０１６３】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、薬剤にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、薬剤は、細胞毒性剤であり、本明細書に記載される例示的な細胞毒性剤が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、薬剤は、標識であり、本明細書に記載される例示的な標識が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６４】
いくつかの実施形態では、薬剤は、免疫系を調節する部分である。例えば、部分は、ＳＩＲＰ−αをその表面上に発現する細胞、例えば、ＳＩＲＰ−αを発現する細胞の細胞シグナル伝達経路を調節する小分子（ＩＤＯ／ＴＤＯ阻害剤、ＡｈＲ阻害剤、アルギナーゼ阻害剤、Ａ２ａ  Ｒ阻害剤、ＴＬＲアゴニスト、ＳＴＩＮＧアゴニスト、またはＲｉｇ−１アゴニストなど）を標的にし得る、及び／またはその機能を調節し得る。いくつかの実施形態では、部分は、ＳＩＲＰ−αをその表面上に発現する細胞に近接して、別のマクロ分子または細胞を動員し得る。いくつかの実施形態では、部分は、サイトカイン、例えば、ＩＬ２、ＩＬ７、ＩＬ−１０、ＩＬ１５、またはＩＦＮを含む。いくつかの実施形態では、部分（例えば、小分子）は、サイトカイン、例えば、ＩＬ２、ＩＬ７、ＩＬ−１０、ＩＬ１５、またはＩＦＮの活性を調節する。いくつかの実施形態では、部分は、がんワクチン（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ペプチド、または他の細胞成分（複数可））を含む。いくつかの実施形態では、部分は、アジュバントを含む。いくつかの実施形態では、部分は、ＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、部分は、抗体精製、スクリーニング、及び／または提示に影響する。いくつかの実施形態では、部分はまた、Ｆｃ受容体への結合の程度または食作用の低下の程度に影響する。
【０１６５】
いくつかの実施形態では、融合パートナーは、リンカー配列を介してＦｃバリアント配列に連結される。いくつかの実施形態では、リンカー配列は、一般に、少数のアミノ酸を含み、例えば、１０個未満のアミノ酸を含むが、それより長いリンカーも利用される。いくつかの場合において、リンカーは、１０、９、８、７、６もしくは５未満のアミノ酸長またはそれより短いアミノ酸長である。いくつかの場合において、リンカーは、少なくとも１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、３０もしくは３５アミノ酸長またはそれより長いアミノ酸長である。任意選択により、いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーが使用される。
【０１６６】
いくつかの実施形態では、融合パートナーは、Ｆｃバリアントタンパク質と任意の関連する融合パートナーを、所望の細胞位置または細胞外培地に誘導する、ターゲット配列またはシグナル配列である。いくつかの実施形態では、ある特定のシグナル伝達配列は、タンパク質を成長培地中、または細胞膜の内膜と外膜との間に位置するペリプラズム中に分泌されるように標的にする。いくつかの実施形態では、融合パートナーは、精製またはスクリーニングを可能にするペプチドまたはタンパク質をコードする配列である。このような融合パートナーには、固定化金属アフィニティークロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）システム（例えば、Ｎｉ＋２アフィニティーカラム）で使用されるポリヒスチジンタグ（Ｈｉｓタグ）（例えば、Ｈｉｓ６及びＨｉｓ１０）または他のタグ、ＧＳＴ融合物、ＭＢＰ融合物、Ｓｔｒｅｐタグ、細菌酵素ＢｉｒＡのＢＳＰビオチン化標的配列、及び抗体の標的になるエピトープタグ（例えば、ｃ−ｍｙｃタグ、ｆｌａｇタグなど）が含まれるが、これらに限定されない。
【０１６７】
いくつかの実施形態では、このようなタグは、精製、スクリーニング、またはその両方に有用である。例えば、いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントは、Ｈｉｓタグを使用してＮｉ＋２アフィニティーカラムに固定化されることにより精製され、次に、精製した後、同じＨｉｓタグを使用して、Ｎｉ＋２をコーティングしたプレートに抗体を固定化し、ＥＬＩＳＡまたは他の結合アッセイを実施する。
【０１６８】
様々な選択方法を可能にする様々な融合パートナーが利用可能である。例えば、Ｆｃバリアントのライブラリーメンバーをｇｅｎｅ  ＩＩＩタンパク質に融合させることによる、ファージディスプレイが使用される。いくつかの実施形態では、融合パートナーは、Ｆｃバリアントの標識化を可能にする。あるいは、いくつかの実施形態では、融合パートナーは、発現ベクター上の特定の配列に結合し、これにより、融合パートナー及び関連するＦｃバリアントが、それらをコードする核酸と共有結合または非共有結合的に連結可能となる。
【０１６９】
いくつかの実施形態では、融合パートナーが治療部分である場合、治療部分は、例えば、細胞傷害剤、ペプチド、タンパク質、抗体、ｓｉＲＮＡまたは小分子である。
【０１７０】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、様々な担体または標識に結合され、特定の抗原発現細胞の存在を検出するために使用される。担体の例には、ガラス、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、天然及び変性セルロース、ポリアクリルアミド、アガロース、ならびにマグネタイトが挙げられる。担体の性質は、可溶性でも不溶性もよい。様々な異なる標識及び標識方法が知られている。標識の例には、酵素、放射性同位体、蛍光化合物、コロイド金属、化学発光化合物及び生物発光化合物が挙げられる。本明細書で開示される抗体に標識を結合するには、様々な技術が利用可能である。いくつかの実施形態では、抗体は、低分子量のハプテンに結合される。これらのハプテンは、次いで、第２の反応を用いて特異的に検出される。例えば、いくつかの実施形態では、ハプテンであるビオチンがアビジンとともに使用され、あるいは、ハプテンであるジニトロフェノール、ピリドキサールまたはフルオレセインが特定の抗ハプテン抗体（例えば、それぞれ抗ジニトロフェノール抗体、抗ピリドキサール抗体及び抗フルオレセイン抗体）により検出される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、免疫アッセイなどの結合アッセイのために、インビトロで使用される。例えば、いくつかの実施形態では、抗体は、液相で使用されるか、固相担体に結合される。いくつかの実施形態では、イムノアッセイに使用される抗体は、様々な方法で検出可能に標識される。
【０１７１】
治療方法
本開示のある特定の態様は、本明細書に記載される抗体を使用して、疾患または障害を治療することに関する。いくつかの実施形態では、疾患は、がんである。いくつかの実施形態では、疾患は、自己免疫疾患または炎症性疾患である。
【０１７２】
例えば、本明細書で提供されるのは、本開示の抗体の有効量を投与することによって、個体のがんを治療するか、個体のがんの進行を遅らせる方法である。理論に束縛されることを望むものではないが、本明細書に記載される抗体は、例えば、ＣＤ４７：ＳＩＲＰ−αシグナル伝達軸を介して食作用及び免疫監視を阻害するがんの能力を無効化すること、または免疫系の活性化（樹状細胞の活性化によるものなど）を亢進することにより、がんの治療に有用であり得ると考えられる。
【０１７３】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、第２の抗体、例えば、がんによって発現される抗原に結合する抗体と組み合わせて投与される（例えば、第２の抗体の有効量は、上述されるいくつかの実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰ−α抗体の投与の文脈において考えられ得る）。がんによって発現される例示的な抗原は、当該技術分野において知られており、限定するものではないが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＳ１／ＳＬＡＭＦ７、Ｔｒｏｐ−２、５Ｔ４、ＥｐｈＡ４、ＢＣＭＡ、ムチン１、ムチン１６、ＰＴＫ７、ＰＤ−Ｌ１、ＳＴＥＡＰ１、エンドセリンＢ型受容体、メソテリン、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＮＰＰ３、ＳＬＣ４４Ａ４、ＧＮＭＢ、ネクチン４、ＮａＰｉ２ｂ、ＬＩＶ−１Ａ、グアニル酸シクラーゼＣ、ＤＬＬ３、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、インテグリンαＶβ３、インテグリンα５β１、ＭＥＴ、ＩＧＦ１Ｒ、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＲＡＮＫＬ、ＦＡＰ、テネイシン、Ｌｅｙ、ＥｐＣＡＭ、ＣＥＡ、ｇｐＡ３３、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ７２、ムチン、ＣＡＩＸ、ＥＰＨＡ３、葉酸受容体α、ＧＤ２、ＧＤ３、及びＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ、ＳＳＸ−２、ＭＡＧＥファミリータンパク質、ＭＡＧＥ−Ａ３、ｇｐ１００／ｐｍｅｌ１７、Ｍｅｌａｎ−Ａ／ＭＡＲＴ−１、ｇｐ７５／ＴＲＰ１、チロシナーゼ、ＴＲＰ２、ＣＥＡ、ＰＳＡ、ＴＡＧ−７２、未成熟ラミニン受容体、ＭＯＫ／ＲＡＧＥ−１、ＷＴ−１、ＳＡＰ−１、ＢＩＮＧ−４、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ１、ＰＲＡＭＥ、サバイビン、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、ＭＡＲＴ−２、ｐ５３、Ｒａｓ、β−カテニン、ＴＧＦ−βＲＩＩ、ＨＰＶ  Ｅ６またはＨＰＶ  Ｅ７に由来するペプチドを含むＭＨＣ／ペプチド複合体が挙げられる。例えば、いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、タラコツズマブ（ＣＳＬ３６２及びＪＮＪ−５６０２２４７３としても知られる）などのＣＤ１２３（ＩＬ−３受容体αとしても知られる）に結合するモノクローナル抗体と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、ＥＧＦＲに結合するモノクローナル抗体（セツキシマブなど）と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、第２の抗体は、１つ以上のエフェクター機能を含み、例えば、限定するものではないが、ＡＤＣＣもしくはＡＤＣＰ、及び／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を含む、免疫細胞上のＦｃ受容体（ＦｃＲ）結合に付随するエフェクター機能である。理論に束縛されることを望むものではないが、かかる抗体と本開示の抗体とを組み合わせることは、例えば、ＳＩＲＰ−α抗体により、腫瘍細胞によって発現される任意のＣＤ４７に対する、白血球によって発現されるＳＩＲＰ−αの応答性を阻害しつつ、第２の抗体が結合する腫瘍細胞を標的にするようにＦｃＲ発現白血球を指向付けるのに特に有利であると考えられる。
【０１７４】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、ＮＫ細胞によって発現される抗原に結合する第２の抗体と組み合わせて投与される。ＮＫ細胞によって発現される例示的な抗原には、ＮＫＲ−Ｐ１Ａ（ＫＬＲＢ１）、ＣＤ９４（ＮＫＧ２Ａ）、ＫＬＲＧ１、ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ、ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＫＩＲ２ＤＳ２、ＫＩＲ２ＤＳ３、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＫＩＲ２ＤＳ５、ＫＩＲ３ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＣＤ９４（ＮＫＧ２Ｃ／Ｅ）、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１６（ＦｃγＲＩＩＩＡ）、ＮＫｐ４６（ＮＣＲ１）、ＮＫｐ３０（ＮＣＲ３）、ＮＫｐ４４（ＮＣＲ２）、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＣＲＴＡＭ、ＣＤ２７、ＮＴＢ−Ａ（ＳＬＡＭＦ６）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１、ＣＬＥＣ５Ｃ）、ＳＬＡＭＦ７（ＣＲＡＣＣ、ＣＳ１、ＣＤ３１９）、及びＣＤ２４４（２Ｂ４、ＳＬＡＭＦ４）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１７５】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、免疫療法剤と組み合わせて投与される（例えば、免疫療法剤の有効量は、上述されるいくつかの実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰ−α抗体の投与の文脈において考えられ得る）。免疫療法剤は、免疫系を標的にし、免疫系の治療的方向転換を促進する任意の治療剤、例えば、共刺激経路の調節因子、がんワクチン、組換え的に改変された免疫細胞などを指し得る。例示的及び非限定的な免疫療法剤は、以下に記載される。理論に束縛されることを望むものではないが、本開示の抗体は、例えば、マクロファージ及びエフェクターＴ細胞などの他の免疫細胞の両方を活性化して腫瘍細胞を標的にする相補的作用機序があることから、免疫療法剤との併用に好適であると考えられる。
【０１７６】
いくつかの実施形態では、免疫療法剤は、抗体を含む。免疫療法用抗体の例示的な抗原は、当該技術分野で公知であり、ＢＤＣＡ２、ＢＤＣＡ４、ＩＬＴ７、ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ２、ＬＩＬＲＢ３、ＬＩＬＲＢ４、ＬＩＬＲＢ５、Ｓｉｇｌｅｃ−３、Ｓｉｇｌｅｃ−７、Ｓｉｇｌｅｃ−９、Ｓｉｇｌｅｃ−１５、ＦＧＬ−１、ＣＤ２００、ＣＤ２００Ｒ、ＣＳＦ−１Ｒ、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ１６３、ＣＤ２０６、ＤＥＣ２０５、ＣＤ４７、ＣＤ１２３、アルギナーゼ、ＩＤＯ、ＴＤＯ、ＡｈＲ、ＥＰ２、ＣＯＸ−２、ＣＣＲ２、ＣＣＲ−７、ＣＸＣＲ１、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ７、ＴＧＦ−β  ＲＩ、ＴＧＦ−β  ＲＩＩ、ｃ−Ｋｉｔ、ＣＤ２４４、Ｌ−セレクチン／ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ６８、４１ＢＢ、ＣＴＬＡ４、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ−３、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＣＣＲ４、ＣＤ２５、ＣＤ１０３、ＫＩｒｇ１、Ｎｒｐ１、ＣＤ２７８、Ｇｐｒ８３、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１５４、ＣＤ１６０、ＴＮＦＲ２、ＰＶＲＩＧ、ＤＮＡＭ、及びＩＣＯＳが挙げられるが、これらに限定されない。承認されているかまたは後期臨床試験中である免疫療法剤には、イピリムマブ、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブなどが挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、本開示の抗体は、ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１経路の阻害剤と組み合わせて投与され、例えば、抗ＰＤ−Ｌ１または抗ＰＤ−１抗体である。本明細書で示されるように、本開示の抗ＳＩＲＰ−α抗体とＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１経路阻害剤の組み合わせ投与は、相乗的な抗腫瘍活性をもたらし得る。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、免疫療法剤は、ワクチン、腫瘍溶解性ウイルス、養子細胞療法、サイトカイン、または小分子免疫療法剤を含む。かかる免疫療法剤の例は、当該技術分野で公知である。例えば、養子細胞療法及び治療法には、キメラ抗原受容体Ｔ細胞療法（ＣＡＲ−Ｔ）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＴＣＲ操作されたＮＫ細胞、及びマクロファージ細胞生成物を挙げることができるが、これらに限定されない。ワクチンには、ポリヌクレオチドワクチン、ポリペプチドワクチン、または細胞ベース（例えば、腫瘍または樹状細胞ベース）ワクチンを挙げることができるが、これらに限定されない。がんの治療に有用な様々なサイトカインが知られており、ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ２１、ＴＮＦａ、ＩＦＮ、ＧＭ−ＣＳＦ、及び操作されたサイトカイン変異体が挙げられるが、これらに限定されない。小分子免疫療法剤には、ＩＤＯ／ＴＤＯ阻害剤、ＡｈＲ阻害剤、アルギナーゼ阻害剤、Ａ２ａ  Ｒ阻害剤、ＴＬＲアゴニスト、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及びＲｉｇ−１アゴニストを挙げることができるが、これらに限定されない。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、化学療法剤または小分子抗がん剤と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、免疫療法剤及び化学療法剤または小分子抗がん剤と組み合わせて投与される。例えば、キナーゼ阻害剤またはシグナル伝達経路の他の阻害剤（例えば、ＰＡＫ４、ＰＩ３Ｋなど）は、免疫系の調節と組み合わせて、がんの治療に有用であり得ると考えられる。したがって、本開示の抗体は、１つ以上の化学療法剤及び／または小分子（例えば、キナーゼ阻害剤）と併用して、がんの治療に使用され得る。本開示の抗体との併用が企図される化学療法剤及び／または抗がん剤の非限定例が、以下に提供される。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、治療剤（例えば、化学療法／細胞毒性剤）と組み合わせて投与され、これには、メトトレキサート（ＲＨＥＵＭＡＴＲＥＸ（登録商標）、アメトプテリン）シクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））、サリドマイド（ＴＨＡＬＩＤＯＭＩＤ（登録商標））、アクリジンカルボキサミド、アクチミド（登録商標）、アクチノマイシン、１７−Ｎ−アリルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン、アミノプテリン、アムサクリン、アントラサイクリン、抗悪性腫瘍薬、アンチネオプラストン、５−アザシチジン、アザチオプリン、ＢＬ２２、ベンダムスチン、ビリコダール、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ボスタチン（ｂ  ｏｓｔａｔｉｎ）、ブスルファン、カリクリン、カンプトセシン、カペシタビン、カルボプラチン、セツキシマブ、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロファラビン、シタラビン、ダカルバジン、ダサチニブ、ダウノルビシン、デシタビン、ジクロロ酢酸、ディスコデオリド（ｄｉｓｃｏｄｅ  ｏｌｉｄｅ）、ドセタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、エポシロン、エリブリン、エストラムスチン、エトポシド、エキサテカン、エクシスリンド、フェルギノール、フロキシウリジン、フルダラビン、フルオロウラシル、ホスフェストロール、ホテムスチン、ガンシクロビル、ゲムシタビン、水酸化尿素、ＩＴ−１０１、イダルビシン、イホスファミド、イミキモド、イリノテカン、イロフルベン、イクサベピロン、ラニキダル、ラパチニブ、レナリドマイド、ロムスチン、ラルトテカン、マホスファミド、マソプロコール、メクロレタミン、メルファラン、メルカプトプリン、マイトマイシン、ミトタン、ミトキサントロン、ネララビン、ニロチニブ、オブリメルセン、オキサリプラチン、ＰＡＣ−１、パクリタキセル、ペメトレキセド、ペントスタチン、ピポブロマン、ピクサントロン、プリカマイシン、プロカルバジン、プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ）、ラルチトレキセド、レベッカマイシン、レブリミド（登録商標）、ルビテカン、ＳＮ−３８、サリノスポラミドＡ、サトラプラチン、ストレプトゾトシン、スウェインソニン、タリキダル、タキサン、テガフールウラシル、テモゾロマイド、テストラクトン、チオテパ、チオグアニン、トポテカン、トラベクテジン、トレチノイン、四硝酸トリプラチン、トリス（２−クロロエチル）アミン、トロキサシタビン、ウラシルマスタード、バルルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ボリノスタット、ゾスキダルなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１８０】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、標的化小分子阻害剤と組み合わせて投与される。例えば、いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、ＶＥＧＦＲ／ＰＤＧＦＲ阻害剤（例えば、ソラフェニブ、スニチニブ、レンバチニブ、バンデタニブ、カボザンチニブ、アパチニブ、パゾパニブ、アキシチニブ、またはレゴラフェニブ）、ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、エルロチニブ、ゲフィチニブ、またはオシメルチニブ）、ＭＥＫ阻害剤（例えば、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、またはセルメチニブ）、ＡＬＫ阻害剤（例えば、クリゾチニブ、セリチニブ、アレクチニブ、ブリガチニブ、ロルラチニブ、エヌトレクチニブ、ＴＳＲ−０１１、ＣＥＰ−３７４４０、またはＸ−３９６）、ＣＤＫ４／６阻害剤（例えば、パルボシクリブ、リボシクリブ、またはアベマシクリブ）、ＰＡＲＰ阻害剤（例えば、オラパリブ、ルカパリブ、ニラパリブ、タラゾパリブ、パミパリブ、ベリパリブ、ＣＥＰ９７２２、またはＥ７０１６）、ｍＴＯＲ阻害剤、ＫＲＡＳ阻害剤、ＴＲＫ阻害剤（例えば、ラロトレクチニブ）、ＢＣＬ２阻害剤（例えば、ベネトクラクス）、ＩＤＨ阻害剤（例えば、イボシデニブまたはエナシデニブ）、低メチル化剤（例えば、デシタビンまたはアザシチジン）、ＰＩ３Ｋ阻害剤、またはＤＤＲ（例えば、ＣＨＫ、ＡＴＭ、またはＡＴＲ）阻害剤と組み合わせて投与される。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、治療剤と組み合わせて投与され、これには、３Ｆ８、８Ｈ９、アバゴボマブ、アブシキシマブ、アビツズマブ、アブリルマブ、アクトクスマブ、アダリムマブ、アデカツムマブ、アデュカヌマブ、アフェリモマブ、アフツズマブ、アラシズマブペゴル、ＡＬＤ５１８、アレムツズマブ、アリロクマブ、アルツモマブペンテタート、アマツキシマブ、アナツモマブマフェナトックス、アネツマブラブタンシン、アニフロルマブ、キンズマブ（ｋｉｎｚｕｍａｂ）（ＩＭＡ−６３８）、アポリズマブ、アルシツモマブ、アスクリンバクマブ、アセリズマブ、アテゾリズマブ、アチヌマブ、アトリズマブ（トシリズマブ）、アトロリムマブ、バピネオズマブ、バシリキシマブ、バビツキシマブ、ベクツモマブ、ベゲロマブ、ベリムマブ、ベンラリズマブ、ベルチリムマブ、ベシレソマブ、ベバシズマブ、ベズロトクスマブ、ビシロマブ、ビマグルマブ、ビメキズマブ、ビバツズマブメルタンシン、ブリナツモマブ、ブロソズマブ、ボコシズマブ、ブレンツキシマブベドチン、ブリアキヌマブ、ブロダルマブ、ブロルシズマブ、ブロンチクツズマブ、カナキヌマブ、カンツズマブメルタンシン、カンツズマブラブタンシン、カプラシズマブ、カプロマブペンデチド、カルルマブ、カツマキソマブ、ｃＢＲ９６−ドキソルビシン免疫複合体、ＣＣ４９、セデリツマブ、セルトリズマブペゴル、セツキシマブ、Ｃｈ．１４．１８、シタツズマブボガトクス、シクスツムマブ、クラザキズマブ、クレノリキシマブ、クリバツズマブテトラキセタン、コドリツズマブ、コルツキシマブラブタンシン、コナツムマブ、コンシズマブ、クレネズマブ、ＣＲ６２６１、ダセツズマブ、ダクリズマブ、ダロツズマブ、ダピロリズマブペゴル、ダラツムマブ、デクトレクマブ、デムシズマブ、デニンツズマブマホドチン、デノスマブ、デロツキシマブビオチン、デツモマブ、ジヌツキシマブ、ジリダブマブ、ドルリモマブアリトクス、ドロジツマブ、デュリゴツマブ、デュピルマブ、ドゥルバルマブ、ドゥシギツマブ、エクロメキシマブ、エクリズマブ、エドバコマブ、エドレコロマブ、エファリズマブ、エングマブ、エルデルマブ、エルゲムツマブ、エロツズマブ、エルシリモマブ、エマクツズマブ、エミベツズマブ、エナバツズマブ、エンフォツマブベドチン、エンリモマブペゴル、エノビリツズマブ、エノキズマブ、エノチクマブ、エンシツキシマブ、エピツモマブシツキセタン、エプラツズマブ、エルリズマブ、エルツマキソマブ、エタラシズマブ、エトロリツマブ、エビナクマブ、エボロクマブ、エクスビビルマブ、ファノレゾマブ、ファラリモマブ、ファルレツズマブ、ファシヌマブ、ＦＢＴＡ０５、フェルビツマブ、フェザキヌマブ、フィクラツズマブ、フィギツムマブ、フィリブマブ、フランボツマブ、フレチクマブ、フォントリズマブ、フォラルマブ、フォラビルマブ、フレゾリムマブ、フルラヌマブ、フツキシマブ、ガリキシマブ、ガニツマブ、ガンテネルマブ、ガビリモマブ、ゲムツズマブオゾガマイシン、ゲボキズマブ、ギレンツキシマブ、グレムバツムマブベドチン、ゴリムマブ、ゴミリキシマブ、グセルクマブ、イバリツマブ、イブリツモマブチウキセタン、イクルクマブ、イダルシズマブ、イゴボマブ、ＩＭＡＢ３６２、イマルマブ、イムシロマブ、イムガツズマブ、インラクマブ、インダツキシマブラブタンシン、インヅサツマブベドチン、イニキシリマブ（Ｉｎ  ｉｘｉｍａｂ）、インテツムマブ、イノリモマブ、イノツズマブオゾガマイシン、イピリムマブ、イラツムマブ、イサツキシマブ、イトリズマブ、イクセキズマブ、ケリキシマブ、ラベツズマブ、ランブロリズマブ、ランパリズマブ、レブリキズマブ、レマレソマブ、レンジルマブ、レルデリムマブ、レクサツムマブ、リビビルマブ、リファスツズマブベドチン、リゲリズマブ、リロトマブサテトラキセタン、リンツズマブ、リリルマブ、ロデルシズマブ、ロキベトマブ、ロルボツズマブメルタンシン、ルカツムマブ、リュリツマブペゴル、ルミリキシマブ、ルムレツズマブ、マパツムマブ、マージツキシマブ、マスリモマブ、マブリリムマブ、マツズマブ、メポロリズマブ、メテリムマブ、ミラツズマブ、ミンレツモマブ、ミツモマブ、モガムリズマブ、モロリムマブ、モタビズマブ、モキセツモマブシュードトクス、ムロモナブ−ＣＤ３、ナコロマブタフェナトクス、ナミルマブ、ナプツモマブエスタフェナトクス、ナマツマブ（Ｎａｍａｔｕｍａｂ）、ナタリズマブ、ネバクマブ、ネチツムマブ、ネモリツマブ、ネレリモマブ、ネスバクマブ、ニモツズマブ、ニボルマブ、ノフェツモマブメエンタン（Ｎｏｆｅｔｕｍｏｍａｂ  ｍｅ  ｅｎｔａｎ）、オビルトキサキシマブ、オカラツズマブ、オクレリツマブ、オズリモマブ、オファツムマブ、オララツマブ、オロキズマブ、オマリズマブ、オナルツズマブ、オンツキシズマブ、オピシヌマブ、オポルツズマブモナトックス、オレゴボマブ、オルティクマブ、オテリキシズマブ、オトレルツズマブ、オキセルマブ、オザネズマブ、オゾラリズマブ、パギバキシマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、パンコマブ、パノバクマブ、パルサツズマブ、パスコリズマブ、パソツキシズマブ、パテクリズマブ、パトリツマブ、ペンブロリズマブ、ペムツモマブ、ペラキズマブ、ペルツズマブ、ペクセリズマブ、ピディリズマブ、ピナツズマブベドチン、ペンツモマブ、プラクルマブ、ポラツズマブベドチン、ポネズマブ、プリリキシマブ、プリトキサキシマブ、プリツムマブ、ＰＲＯ１４０、クイリズマブ、ラコツモマブ、ラドレツマブ、ラフィビルマブ、ラルパンシズマブ、ラムシルマブ、ラニビズマブ、ラキシバクマブ、レファネツマブ、レガビルマブ、レスリズマブ、リロツムマブ、リヌクマブ、リツキシマブ、ロバツムマブ、ロレデュマブ、ロモソズマブ、ロンタリズマブ、ロベリズマブ、ルプリズマブ、サマリズマブ、サリルマブ、サツモマブペンデチド、セクキヌマブ、セリバンツマブ、セトキサキシマブ、セビルマブ、シブロツズマブ、ＳＧＮ−ＣＤ１９Ａ、ＳＧＮ−ＣＤ３３Ａ、シファリムマブ、シルツキシマブ、シムツズマブ、シプリズマブ、シルクマブ、ソツズマブベドチン（Ｓｏｔｕｚｕｍａｂ  ｖｅｄｏｔｉｎ）、ソラネズマブ、ソリトマブ、ソネプシズマブ、ソンツズマブ、スタムルマブ、スレソマブ、スビズマブ、タバルマブ、タカツズマブテトラキセタン、タドシズマブ、タリズマブ、タネズマブ、タプリツモマブパプトックス、タレクスツマブ、テバズマブ（Ｔｅ  ｂａｚｕ��ａｂ）、テリモマブアリトクス、テナツモマブ、テネリキシマブ、テプリズマブ、テプロツムマブ、テシドルマブ、ＴＧＮ１４１２、チシリムマブ（トレメリムマブ）、チルドラキズマブ、ティガツズマブ、ＴＮＸ６５０、トシリズマブ（アトリズマブ）、トラリズマブ、トサトキスマブ、トシツモマブ、トベツマブ、トラロキヌマブ、トラスツズマブ、ＴＲＢＳ０７、トレガリズマブ、トレメリムマブ、ツコツズマブセルモロイキン、ツビルマブ、ウブリツキシマブ、ウロクプルマブ、ウレルマブ、ウルトキサズマブ、ウステキヌマブ、バンドルツズズマブベドチン、バンチクツマブ、バヌシズマブ、バパリキシマブ、バルリルマブ、バテリズマブ、ベドリズマブ、ベルツズマブ、ベパリモマブ、ベセンクマブ、ビシリズマブ、ボロシキシマブ、ボルセツズマブマホドチン、ボツムマブ、ザルツムマブ、ザノリムマブ、ザツキシマブ、ジラリムマブ（Ｚｉｒａｌｉｍｕｍａｂ）、またはゾリモマブアリトクスが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１８２】
本開示の抗体と、多数の追加の薬剤（例えば、上記のように）とを含む併用治療が企図される。例えば、いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、化学療法／細胞毒性剤及び抗体または標的化小分子阻害剤と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、化学療法／細胞毒性剤及び免疫療法剤と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、抗体または標的化小分子阻害剤及び免疫療法剤と組み合わせて投与される。
【０１８３】
当該技術分野において知られている任意のがんの種類には、限定するものではないが、癌腫、肉腫、リンパ腫、白血病、リンパ腫及び芽細胞腫などが含まれ得る。このようながんのより具体的な例には、肺癌、扁平上皮細胞癌、脳腫瘍、膠芽腫、頭頸部癌、肝細胞癌、大腸癌（例えば、結腸癌または直腸癌）、肝臓癌、膀胱癌、胃癌、膵臓癌、子宮頸癌、卵巣癌、尿路癌、乳癌、腹膜癌、子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肛門癌、陰茎癌、黒色腫、多発性骨髄腫及びＢ細胞リンパ腫（非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、メルケル細胞癌、毛様細胞性白血病、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、ならびに関連転移が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１８４】
がん治療に加えて、本明細書で提供される抗体は、細胞を枯渇させる目的でモノクローナル抗体が投与される治療、例えば、免疫細胞枯渇による炎症性疾患の治療に有用である。当該目的のために、本明細書で提供される抗体は、第２の治療抗体（例えば、炎症性疾患及び自己免疫状態におけるＢ細胞の枯渇にはリツキシマブ、多発性硬化症にはアレムツズマブ、免疫抑制にはＯＫＴ３、骨髄移植前処置には他の剤など）と組み合わせて投与される。
【０１８５】
さらに、本明細書で提供されるのは、本開示の抗体の有効量を投与することによって、個体の自己免疫疾患または炎症性疾患を治療するか、個体の自己免疫疾患または炎症性疾患の進行を遅らせる方法である。本開示による治療を適用できる自己免疫疾患及び炎症性疾患には、多発性硬化症、関節リウマチ、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、抗体媒介性の炎症性疾患または自己免疫疾患、移植片対宿主病、敗血症、糖尿病、乾癬、アテローム性動脈硬化症、シェーグレン症候群、全身性進行性硬化症、強皮症、急性冠症候群、虚血再灌流、クローン病、子宮内膜症、糸球体腎炎、重症筋無力症、特発性肺線維症、線維症（例えば、肺線維症、肝硬変、心房線維症、心筋線維症、骨髄線維症、または後腹膜線維症）、喘息、急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）、血管炎及び自己免疫性炎症性筋炎が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、免疫抑制剤、抗炎症剤または免疫調節剤などの治療薬と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、自己免疫疾患または炎症性疾患、例えば、多発性硬化症、関節リウマチ、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、抗体媒介性の炎症性疾患もしくは自己免疫疾患、移植片対宿主病、敗血症、糖尿病、乾癬、乾癬性関節炎、アテローム性動脈硬化症、シェーグレン症候群、全身性進行性硬化症、強皮症、急性冠症候群、虚血再灌流、クローン病、潰瘍性大腸炎、子宮内膜症、糸球体腎炎、ＩｇＡ腎症、多発性嚢胞腎疾患、重症筋無力症、特発性肺線維症、線維症（例えば、肺線維症、肝硬変、心房線維症、心筋線維症、骨髄線維症、または後腹膜線維症）、喘息、アトピー性皮膚炎、急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）、血管炎または自己免疫性炎症性筋炎の治療に使用される。
【０１８６】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、例えば、抗体及び１つ以上の薬学的に許容される担体を含む製剤処方物の一部である。本明細書に記載される医薬組成物及び製剤処方物は、所望の純度を有する有効成分（抗体またはポリペプチドなど）を、１つ以上の任意選択の薬学的に許容される担体と混合することによって、凍結乾燥製剤または水性液剤の形態で調製することができる（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））。薬学的に許容される担体は、一般に、使用される用量及び濃度で、レシピエントに対して無毒であり、これらには、リン酸、クエン酸及び他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチンもしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；アミノ酸；グルコース、マンノースもしくはデキストリンを含む、単糖、二糖及び他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロースもしくはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属複合体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）；及び／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、凍結乾燥される。
【０１８７】
いくつかの実施形態では、個体に、個体の体重に正規化した用量を投与する。いくつかの実施形態では、個体に、本開示の抗体の約１０μｇ／ｋｇ、約５０μｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ、約２００μｇ／ｋｇ、約３００μｇ／ｋｇ、約４００μｇ／ｋｇ、約５００μｇ／ｋｇ、約６００μｇ／ｋｇ、約７００μｇ／ｋｇ、約８００μｇ／ｋｇ、約９００μｇ／ｋｇ、約１，０００μｇ／ｋｇ、約１，１００μｇ／ｋｇ、１，２００μｇ／ｋｇ、１，３００μｇ／ｋｇ、１，４００μｇ／ｋｇ、１，５００μｇ／ｋｇ、１，６００μｇ／ｋｇ、１，７００μｇ／ｋｇ、１，８００μｇ／ｋｇ、１，９００μｇ／ｋｇ、約２，０００μｇ／ｋｇ、約３０００μｇ／ｋｇ、約４０００μｇ／ｋｇ、約５０００μｇ／ｋｇ、約６０００μｇ／ｋｇ、約７０００μｇ／ｋｇ、約８０００μｇ／ｋｇ、約９０００μｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ、約８０ｍｇ／ｋｇ、約９０ｍｇ／ｋｇ、約１００ｍｇ／ｋｇ、約２００ｍｇ／ｋｇ、約３００ｍｇ／ｋｇ、約４００ｍｇ／ｋｇ、約５００ｍｇ／ｋｇ、約６００ｍｇ／ｋｇ、約７００ｍｇ／ｋｇ、約８００ｍｇ／ｋｇ、約９００ｍｇ／ｋｇ、または約１０００ｍｇ／ｋｇの用量を投与する。
【０１８８】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体が個体に投与される期間は、疾患の段階、患者の病歴、及び主治医の判断により決定されるような任意の適切な期間である。かかる適切な期間の例には、限定されないが、少なくとも約３ヵ月、少なくとも約４ヵ月、少なくとも約５ヵ月、少なくとも約６ヵ月、少なくとも約７ヵ月、少なくとも約８ヵ月、少なくとも約９ヵ月、少なくとも約１０ヵ月、少なくとも約１１ヵ月、少なくとも約１２ヵ月、少なくとも約１３ヵ月、少なくとも約１４ヵ月、少なくとも約１５ヵ月、少なくとも約１６ヵ月、少なくとも約１７ヵ月、少なくとも約１８ヵ月、少なくとも約１９ヵ月、少なくとも約２０ヵ月、少なくとも約２１ヵ月、少なくとも約２２ヵ月、少なくとも約２３ヵ月、または少なくとも約２４ヵ月以上を含む。特定の態様では、治療期間は、２４ヵ月よりも長い間、所望される場合、３０ヵ月、３１ヵ月、３２ヵ月、３３ヵ月、３４ヵ月、３５ヵ月、３６ヵ月、または３６ヵ月より長い間、継続される。いくつかの実施形態では、期間は、６ヵ月、１年、または２年である。別の実施形態では、本明細書に記載される方法のいずれかのための投与の期間は、少なくとも約２週間、少なくとも約４週間、少なくとも約８週間、少なくとも約１６週間、少なくとも約１７週間、少なくとも約１８週間、少なくとも約１９週間、少なくとも約２０週間、少なくとも約２４週間、少なくとも約２８週間、少なくとも約３２週間、少なくとも約３６週間、少なくとも約４０週間、少なくとも約４４週間、少なくとも約４８週間、少なくとも約５２週間、少なくとも約６０週間、少なくとも約６８週間、少なくとも約７２週間、少なくとも約８０週間、少なくとも約８８週間、少なくとも約９６週間、または少なくとも約１０４週間である。
【実施例】
【０１８９】
本開示は、以下の実施例を参照することによって、より十分に理解されるであろう。しかしながら、実施例は、本開示の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書に記載される実施例及び実施形態は、例示のみを目的にするものであり、それらを考慮した様々な変形または変更が当業者に想起され、本出願の趣旨及び範囲ならびに添付の特許請求の範囲内に含まれることを理解されたい。
【０１９０】
実施例１：ＳＩＲＰ−αタンパク質に対して新しい結合特異性を有する抗体の特定
方法
抗体産生
以下のタンパク質を免疫化に使用した。各々は、免疫原性を高めるために、改変したＦｃ領域（Ｓ２２８Ｐ変異を含むヒンジ領域を有するヒトＩｇＧ４  Ｆｃ、またはＩｇＧ１＿ＡＡＡ＿Ｎ２９７Ａと記載されるＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｎ２９７Ａ  ヒトＩｇＧ１  Ｆｃのいずれか）を融合させたヒトまたはマウスＳＩＲＰ−αペプチドを含む。
【表Ａ−１】
2021518142.tif 000021
【表Ａ−２】
2021518142.tif 000022
【０１９１】
上記タンパク質を使用して、野生型ニワトリ、ＳｙｎＶＨニワトリ（ヒト由来のＶＨ及びニワトリ由来のＶＬを含有するトランスジェニックニワトリ）、または完全なヒト「ＨｕＭＡＢ」免疫グロブリン遺伝子座を有するニワトリ（Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、例えば、ＷＯ２０１２１６２４２２、ＷＯ２０１１０１９８４４及びＷＯ２０１３０５９１５９参照）を免疫化した。抗原を交互に投与する可変スケジュールでニワトリを免疫化した。例示的な免疫化スケジュールは、次のとおりである。１週目に配列番号１の配列を有する抗原を１００μｇの用量で初回免疫し、３週目に配列番号２の配列を有する抗原１００μｇを追加免疫し、４週目に採血し、５週目に配列番号１の配列を有する抗原を５０μｇの用量で追加免疫し、６週目に採血し、７週目に配列番号２の配列を有する抗原５０μｇを追加免疫し、８週目に採血する。ニワトリの免疫化に関するさらなる説明は、例えば、Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｉｚｑｕｉｅｒｄｏ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ（Ｏｘｆ）１−１６に見ることができる。
【０１９２】
ニワトリのＳＩＰＲα配列は、哺乳動物のＳＩＲＰ−α配列と比較すると、著しく異なることがわかった。理論に束縛されることを望むものではないが、哺乳動物とニワトリのＳＩＲＰ−α配列の間の相違により、複数の哺乳動物ＳＩＲＰ−αタンパク質に対して交差反応を示す抗体を作製するという特有の機会が得られると考えられた。例えば、マウス宿主由来のマウス配列と交差反応を示す抗ＳＩＲＰ−α抗体を作製することは、免疫寛容があるために、困難であり得る。さらに、ニワトリと哺乳動物における免疫系の相違が大きければ、抗体産生における多様性も大きくなり得る。
【０１９３】
理論に束縛されることを望むものではないが、ヒト、カニクイザル及び／またはマウスタンパク質の間で交差反応性結合を有する抗体は、動物モデルと臨床試験の両方における抗体の特性評価を可能にし得ると考えられる。アイソフォーム及び／またはバリアント特異的結合を有する抗体は、特定のヒト集団に対する個別化医療アプローチ及び／または目的の特定バリアントに関する研究に有用であり得る。
【０１９４】
Ｋｏｆｆの決定
様々なＳＩＲＰタンパク質に対する抗体クローンの結合は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）検出を使用し、０．０１％Ｔｗｅｅｎ−２０（ＰＢＳＴ）を添加したリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）をランニング緩衝液に用い、ＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ３６機器（Ｂｉｏ−Ｒａｄ（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ））で測定した。分泌された抗体を含有する培地を予め濾過し、これをアッセイに直接使用した。まず、抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ（ＢＲ−１００８−３９（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ））をＧＬＣセンサーチップ上にアミン結合させ、抗体に対する捕捉表面を作った。１フローセル当たり約４０００ＲＵの固定化抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃが得られる。以下と同じ方法を使用して、各クローンをスクリーニングする。スクリーニングに使用したＳＩＲＰアナライトは、様々な種（ヒトｖ１、ヒトｖ２、カニクイザル、マウス１２９、ＢＬ６、ＢＡＬＢｃ、ＮＯＤ）由来のＳＩＲＰ−α、ヒトＳＩＲＰ−β、及びヒトＳＩＲＰ−γであり；それぞれ、配列番号５、６、１１、７、９、１０、８、１３、及び１５であった。
【０１９５】
１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．５）中の約５〜１０ｕＬの予め濾過した培地を３０ｕｌ／分で２分間注入した後、緩衝液を１００ｕＬ／分で１分間流した。ＳＩＲＰアナライト（１００ｎＭ）を１００ｕＬ／分で１分間注入し、続いて、１０分の解離サイクルを行った。３Ｍ塩化マグネシウムを２５ｕＬ／分で両方向に１分間流すことによってチップ表面を再生した後、緩衝液を１００ｕＬ／分で１分間流した。バイオセンサーのデータは、反応スポットのデータ（固定化抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ）からインタースポットのデータ（固定化抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ不含）を差し引き、次に、アナライト注入の反応から緩衝液「ブランク」アナライト注入の反応を差し引くことによって、ダブルリファレンスを行った。１：１  Ｌａｎｇｍｕｉｒを使用して結合をフィッティングし、Ｋｏｆｆ（１／Ｓ）値を算出した。ＳＰＲアッセイは全て２５℃で実施した。
【０１９６】
ＫＤの決定
抗ＳＩＲＰα抗体と、様々な種（ヒトｖ１、ヒトｖ２、カニクイザル、マウス１２９、ＢＬ６、ＢＡＬＢｃ、ＮＯＤ）に由来するＳＩＰＲα、ＳＩＲＰβ及びＳＩＲＰγとの相互作用について、抗体の直接固定化（ＧＬＣチップによる）またはビオチン化プロテインＡを介した捕捉（ＮＬＣチップによる）による２つの方法を次のプロトコルに従って使用して分析した。実験は全て、ＧＬＣまたはＮＬＣセンサーチップを備えるＳＰＲ系ＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ３６バイオセンサー（ＢｉｏＲａｄ，Ｉｎｃ（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ））を使用して２５℃で実施した。ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３−ＦＳ細胞（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を使用して抗体を発現させた。標準的なプロテインＡアフィニティーカラムクロマトグラフィーにより精製を行い、溶出した抗体をＰＢＳ緩衝液中に保存した。
【０１９７】
ランニング緩衝液は、０．０１％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むＰＢＳ（ＰＢＳＴ＋）（ｐＨ７．４）であった。アナライトは全て、Ａ２８０の吸光度と、算出されたモル吸光係数を使用して決定される名目上の濃度で使用した。アナライトは、別途記載されるように（例えば、Ｂｒａｖｍａｎ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３５８：２８１−２８８参照）、「ワンショット」キネティックモードで注入した。
【０１９８】
ＧＬＣチップを使用する方法の場合、Ｐｒｏｔｅｏｎ  Ａｍｉｎｅ  Ｃｏｕｐｌｉｎｇ  Ｋｉｔを使用してＧＬＣチップ上に固定化した抗ＳＩＲＰα抗体（約１０００ＲＵ）上に、アナライトを注入して流した。固定化工程のために、１／１００に希釈したＥＤＡＣ／Ｓｕｌｐｈｏ−ＮＨＳ  １：１（Ｂｉｏｒａｄ）を２５μＬ／分で用いて、ＧＬＣチップを３００秒間活性化した。抗ＳＩＲＰα抗体は、１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．５）中で８０ｎＭの濃度に希釈し、３０μＬ／分で５０秒間、チップに固定化した。エタノールアミンを２５μＬ／分で用いて、チップを３００秒間不活性化した。アナライト（例えば、異なる種に由来するＳＩＲＰ−α、ＳＩＲＰ−β、ＳＩＲＰ−γ）を１００、３３、１１、３．７、１．２及び０ｎＭの名目上の濃度で、「ワンショット」キネティックモードで注入した。結合時間は、１００μＬ／分で９０秒間モニターし、解離時間は、１２００秒間モニターした。ＰｉｅｒｃｅのＩｇＧ溶出緩衝液／４Ｍ  ＮａＣｌの２：１（ｖ／ｖ）ブレンドを用いて表面を再生した。
【０１９９】
あるいは、ＮＬＣチップによる抗体捕捉を使用してＫＤ決定を行った。この場合、ＮＬＣチップ上にビオチン化プロテインＡ（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ）１５ｕｇ／ｍＬを３０ｕＬ／分で１２０秒間注入し、約１０００〜１２００ＲＵの固定化反応を得た。次に、抗ＳＩＲＰα抗体（約１６０ｎＭ）を３０ｕＬ／分で８０秒間注入した。その後、アナライト（異なる種に由来するＳＩＲＰ−α、ＳＩＲＰ−β及びＳＩＲＰ−γ）を１００、３３、１１、３．７、１．２及び０ｎＭの名目上の濃度で、「ワンショット」キネティックモードで注入した。結合時間は、２５μＬ／分で６０秒間モニターし、解離時間は、１２００秒間モニターした。ＰｉｅｒｃｅのＩｇＧ溶出緩衝液／４Ｍ  ＮａＣｌの２：１（ｖ／ｖ）ブレンドを用いて表面を再生した。
【０２００】
バイオセンサーのデータは、反応スポットのデータ（固定化タンパク質）からインタースポットのデータ（固定化タンパク質不含）を差し引き、次に、アナライト注入の反応から緩衝液「ブランク」アナライト注入の反応を差し引くことによって、ダブルリファレンスを行った。ダブルリファレンスを行ったデータを単純なＬａｎｇｍｕｉｒモデルにグローバルフィッティングし、見かけの反応速度定数の比からＫＤ値を算出した（ＫＤ＝ｋｄ／ｋａ）。
【０２０１】
結果
選択されたマウスＳＩＲＰ−αタンパク質に対する様々な抗体クローンの結合反応速度を決定した。試験したマウスタンパク質には、ＢＡＬＢｃ（配列番号１０）、ＢＬ６（配列番号９）、ＮＯＤ（配列番号８）及びｍ１２９（配列番号７）のＳＩＲＰ−αタンパク質が含まれる。結果を以下の表Ｂ〜Ｅにまとめる。ＡＢ２１及びＡＢ２５の可変ドメイン配列を表Ｊ１に示す。
【０２０２】
本明細書で使用されるとき、抗体クローンは、クローンＩＤ番号によって示される。加えて、「Ｓ［クローン番号］」という表記は、ｓｃ−Ｆｖ−Ｆｃフォーマットを指し、「ＡＢ［クローン番号］」という表記は、完全ＩｇＧ抗体フォーマットを指し、「ＡＢ［クローン番号］ｂ」という表記は、マウスＩｇＧ１のＮ２９７Ａフォーマットを指し、「ＡＢ［クローン番号］ｃ」という表記は、マウスＩｇＧ２ａフォーマットを指す。
【表Ｂ】
2021518142.tif 000023
【表Ｃ】
2021518142.tif 000024
【表Ｄ】
2021518142.tif 000025
【表Ｅ】
2021518142.tif 000026
【０２０３】
これらの結果は、ＡＢ２１及びＡＢ２５抗体クローンが４つの全てのマウスＳＩＲＰ−αタンパク質に結合することから、これらの抗体がインビボマウスモデルにおける特性評価に好適となることを示している。
【０２０４】
実施例２：抗ＳＩＲＰ−α抗体の機能特性
先の実施例は、抗ＳＩＲＰ−α抗体の特定及び特性評価について記載している。次に、これらの抗体を、動物モデルで試験し、腫瘍成長に対するＳＩＲＰ−αの生物学的効果を調査した。
【０２０５】
上記のとおり、「ｂ」と表示される抗体クローンは、Ｎ２９７Ａの変異を含む完全長マウスＩｇＧ１抗体として試験した。「ｃ」と表示される抗体クローンは、完全長マウスＩｇＧ２ａ抗体として試験した。
【０２０６】
方法
インビボにおける抗腫瘍活性
ＭＣ３８同系マウス結腸癌モデルの場合、ＭＣ３８細胞をＣ５７ＢＬ／６マウスに皮下移植し、複数群（８〜１０匹／群）に無作為化した。処置群には、ビヒクル（ＰＢＳ）、ＡＢ２５ｂ、ＡＢ２５ｃ、及びＡＢ２７ｂを含めた。全ての抗ＳＩＲＰα抗体は、マウスＩｇＧ２ａを有するＡＢ２５ｃを除き、Ｎ２９７Ａの変異を有するマウスＩｇＧ１  Ｆｃ領域を有した。処置は、移植後７日目に、腫瘍が平均６０〜６５ｍｍ３になったときに開始した。マウスに抗ＳＩＲＰαを１０ｍｇ／ｋｇで週２回、３週間にわたって腹腔内（ＩＰ）投与した。腫瘍が約２０００ｍｍ３の体積に達したら、動物を屠殺した。
【０２０７】
結果
様々な抗ＳＩＲＰ−α抗体のインビボ抗腫瘍作用を同系マウス結腸癌モデルでアッセイした。ＭＣ３８同系マウス結腸癌モデルにおいて、遮断抗ＳＩＲＰ−α抗体ＡＢ２５ｂ、ＡＢ２５ｃ及びＡＢ２７ｂの抗腫瘍活性を試験して、それぞれの単剤活性を評価した。遮断抗ＳＩＲＰ−α抗体ＡＢ２５ｂ、ＡＢ２５ｃ、及びＡＢ２７ｂは、ＭＣ３８同系マウスモデルにおいて、ビヒクル単独と比較して１０ｍｇ／ｋｇで腫瘍形成を遅らせた（図１）。２５日目に、抗ＳＩＲＰα抗体で処置した群では、６００ｍｍ３未満のマウスがＡＢ２５ｂで３匹、６００ｍｍ３未満のマウスがＡＢ２５ｃで４匹、６００ｍｍ３未満のマウスがＡＢ２７ｂで３匹であったのに対し、ビヒクル処置群では、６００ｍｍ３未満のマウスは２匹のみであった。
【０２０８】
これらの結果は、インビボにおける腫瘍成長の阻害における抗ＳＩＲＰ−α抗体処置の有効性を示している。遮断抗ＳＩＲＰ−α抗体は、インビボで腫瘍成長を阻止することがわかった。
【０２０９】
実施例３：抗ＳＩＲＰ−α抗体のヒト化
上記の実施例は、完全ヒト重鎖及びニワトリ軽鎖を有する抗ＳＩＲＰ−α抗体の作製及び特徴付けについて記載している。ニワトリ由来の軽鎖をヒト化するために、これらの抗体のニワトリＨＶＲを様々なヒトλ軽鎖フレームワーク上にグラフト化した。
【０２１０】
方法
ヒト化
標準的な技術を使用して抗体をヒト化した。生産収率を測定するために、抗ＳＩＲＰα抗体を発現する、同量のＥｘｐｉ２９３培養液をプロテインＡアフィニティークロマトグラフィーによって精製した。緩衝液をＰＢＳに交換した後、Ａ２８０によりタンパク質濃度を決定し、ｍｇ／ｍＬで示した。
【０２１１】
結果
ヒト化軽鎖を設計するために、ＩｇＢＬＡＳＴ（ＮＣＢＩ）により、各ニワトリ軽鎖配列と、最も近いヒト生殖細胞系列フレームワークとのアライメントを行った。この解析を使用すると、ニワトリλ軽鎖フレームワークに最も近いものは、ヒトＩＧＬＶ３である（配列番号２７〜３０参照）。
【０２１２】
別のアプローチでは、文献検索を行って、ヒトＶＨ３配列（当該抗体に使用されるヒト重鎖）と対合するのに最適なヒトλ軽鎖フレームワーク配列を決定した。これらの解析に基づくと、ヒトＶＨ３は、ヒトＩＧＬＶ１及びＩＧＬＶ２と良好に対合するであろうと考えられた。Ｇｌａｎｖｉｌｌｅ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１０６：２０２１６−２０２２１、Ｌｌｏｙｄ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．２２：１５９−１６８、及びＪａｙａｒａｍ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．２５：５２３−５２９を参照されたい。
【０２１３】
したがって、６つのヒト化軽鎖：Ｈｕｍ１（ＡＢ２５ＨＶＲ＋ヒトＩＧＬＶ３フレームワーク；配列番号２５）、Ｈｕｍ２（ＡＢ２５ＨＶＲ＋ヒトＩＧＬＶ１フレームワーク）、Ｈｕｍ３（ＡＢ６６ＨＶＲ＋ヒトＩＧＬＶ３フレームワーク）、Ｈｕｍ４（ＡＢ６６ＨＶＲ＋ヒトＩＧＬＶ１フレームワーク）、Ｈｕｍ５（ＡＢ２５ＨＶＲ＋ヒトＩＧＬＶ２フレームワーク）、及びＨｕｍ６（ＡＢ２１ＨＶＲ＋ヒトＩＧＬＶ１フレームワーク）を作製した。
【０２１４】
６つのヒト化軽鎖のそれぞれをＡＢ２１重鎖と対合させた。抗体は、上記のとおりに発現させた。驚くべきことに、ヒトＩＧＬＶ１フレームワーク配列は、重鎖にかかわらず、抗体発現が減少した。これは、Ｈｕｍ２、Ｈｕｍ４及びＨｕｍ６との重鎖対合を指す。結果を「タンパク質収率」として図２にまとめる（行１）。対照的に、ヒトＩＧＬＶ２及びＩＧＬＶ３フレームワーク（Ｈｕｍ１、Ｈｕｍ３、Ｈｕｍ５）を含む軽鎖を含む抗体は、発現レベルが高くなった。
【０２１５】
選択した抗体も、様々なＳＩＲＰタンパク質（例えば、ヒトＳＩＲＰ−α  ｖ１（配列番号５）、ヒトＳＩＲＰ−α  ｖ２（配列番号６）、カニクイザルＳＩＲＰ−α（配列番号１１）、マウスＢＡＬＢ／ｃ  ＳＩＲＰ−α（配列番号１０）、及びヒトＳＩＲＰ−γ（配列番号１５））に対する結合について特徴付けた。これらのデータについても図２にまとめる。選択したヒト化軽鎖は、１つ以上の抗原に対して、結合の減少をもたらした。例えば、ヒトＩＧＬＶ３フレームワーク（Ｈｕｍ１及びＨｕｍ３で表される）は、結合親和性を変更することなく、優れた抗体産生レベルを可能にすることがわかった。例えば、ＩＧＬＶ３フレームワークと、抗体２５または抗体６６のＨＶＲ配列のいずれかとを含む軽鎖可変ドメイン（それぞれＨｕｍ１及びＨｕｍ３で表される）は、ＡＢ２１重鎖と良好に結合し、異なるＳＩＲＰ−α及びＳＩＲＰ−γタンパク質に対して同様の結合を示した。対照的に、ＩＧＬＶ１及びＩＧＬＶ２フレームワーク（Ｈｕｍ２、Ｈｕｍ４、Ｈｕｍ５及びＨｕｍ６で表される）は、ＡＢ２１重鎖と対合したとき、発現低下及び／またはＳＩＲＰへの結合減少のいずれかが認められた。これらの実験からのさらなる結合データを以下の表Ｌに記載する。さらなる試験のために、ヒトＩＧＬＶ３フレームワークを選択した。
【０２１６】
Ｈｕｍ１のＶＬドメインに基づいて、さらなるＶＬドメインＨｕｍ９及びＨｕｍ８を作製した。Ｈｕｍ１と比較して、Ｈｕｍ９は、ＨＶＲ−Ｌ１及びＨＶＲ−Ｌ２中またはその付近に、軽鎖のヒト性を８５％以上のヒト軽鎖配列同一性まで上昇させる４つのアミノ酸置換を含有する。Ｈｕｍ１と比較して、Ｈｕｍ８は、ＨＶＲ−Ｌ１及びＨＶＲ−Ｌ２中またはその付近にそれぞれ、軽鎖のヒト性を８５％以上のヒト軽鎖配列同一性まで上昇させる５つのアミノ酸置換を含有する。Ｈｕｍ１、Ｈｕｍ８及びＨｕｍ９  ＶＬは、重鎖ＶＨドメインａｌｌ＿ｍｕｔ＿ＡＢ２１（生殖細胞系列変異を有する；配列番号２６）と対合したとき、１０ｐＭ以上の親和性でヒトＳＩＲＰ−α  ｖ１に結合する、抗ＳＩＲＰα抗体をもたらした（表Ｍ）。
【０２１７】
実施例４：抗ＳＩＲＰ−α抗体による食作用の誘導及び樹状細胞の活性化
次に、様々な抗ＳＩＲＰ−α抗体を食作用及び樹状細胞活性化アッセイで調べた。
【０２１８】
方法
腫瘍細胞株の培養
ＤＬＤ−１（ヒト大腸腺癌）細胞及びＯＥ１９（ヒト食道癌）細胞を、１０％非働化ウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ）、１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ）及び１％Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｇｉｂｃｏ）を添加したＲＰＭＩ（Ｇｉｂｃｏ）からなる成長培地中に維持した。
【０２１９】
ヒト単球由来マクロファージの誘導及び培養
Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｎｔｅｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｐａｃｉｆｉｃからトリマ残留物を入手し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ））で１：４に希釈した。希釈した血液を４つのチューブに分け、２０ｍｌのＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  Ｐｌｕｓ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）の上に重ねた。試験管を４００×ｇで３０分間遠心分離にかけた。境界面からＰＢＭＣを回収し、ＦＡＣＳ緩衝液（０．５％ウシ血清アルブミン含有ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ））中に再懸濁した。Ｍｏｎｏｃｙｔｅ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ  ＩＩ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）及びＬＳカラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）を製造元のプロトコルに従って使用して、ネガティブ選択によりＣＤ１４＋単球を精製した。
【０２２０】
非極性化マクロファージの場合、１０％ヒトＡＢ血清（Ｃｏｒｎｉｎｇ）、１％ペニシリン／ストレプトマイシン及び１％Ｇｌｕｔａｍａｘを添加した２５ｍｌのＩＭＤＭ（Ｇｉｂｃｏ）を入れた１５ｃｍ組織培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）中に、ＣＤ１４＋単球を１ディッシュ当たり１０００万細胞で播種した。細胞を７〜１０日間培養した。
【０２２１】
Ｍ２極性化マクロファージの場合、１０ウシ胎児血清（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）、１％ペニシリン／ストレプトマイシン及び１％Ｇｌｕｔａｍａｘを添加した２５ｍｌのＲＰＭＩ（Ｇｉｂｃｏ）及び５０ｎｇ／ｍｌのＭ−ＣＳＦ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を入れた１５ｃｍ組織培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）中に、ＣＤ１４＋単球を１ディッシュ当たり６００万細胞で播種した。細胞を７〜１０日間培養した。
【０２２２】
インビトロ食作用アッセイ
ＤＬＤ−１細胞を、２０ｍｌのＰＢＳで２回洗浄し、１０ｍｌのＴｒｙｐＬＥ  Ｓｅｌｅｃｔ（Ｇｉｂｃｏ）中で３７℃、１０分間、インキュベーションすることによって、培養プレートから剥離した。細胞を遠心分離にかけ、ＰＢＳで洗浄し、培地中に再懸濁した。Ｃｅｌｌｔｒａｃｅ  ＣＦＳＥ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎキット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を製造元の説明書に従って用いて細胞に標識し、ＩＭＤＭ中に再懸濁した。マクロファージを、２０ｍｌのＰＢＳで２回洗浄し、１０ｍｌのＴｒｙｐＬＥ  Ｓｅｌｅｃｔ中で３７℃、２０分間、インキュベーションすることによって、培養プレートから剥離した。セルスクレーパー（Ｃｏｒｎｉｎｇ）を用いて細胞を取り出し、ＰＢＳで洗浄し、ＩＭＤＭ中に再懸濁した。
【０２２３】
１００，０００個のＤＬＤ−１細胞、５０，０００個のマクロファージ、抗ＳＩＲＰ−α抗体の５倍段階希釈液（１００ｎＭ〜６．４ｐＭ）、及び１もしくは０．０１ｕｇ／ｍｌのセツキシマブ（絶対抗体）、または同じアイソタイプの対照抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を含有する超低接着Ｕ底９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）中で、食作用アッセイを組み立てた。５％二酸化炭素の加湿インキュベータ内でプレートを３７℃で２時間インキュベートした。細胞を４００×ｇで５分間遠心分離にかけてペレット化し、２５０μｌのＦＡＣＳ緩衝液で洗浄した。１０μｌのヒトＦｃＲ  Ｂｌｏｃｋｉｎｇ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）、０．５μｌの抗ＣＤ３３  ＢＶ４２１（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）及び０．５μｌの抗ＣＤ２０６  ＡＰＣ−Ｃｙ７（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を含有する５０μｌのＦＡＣＳ緩衝液中でマクロファージを氷上で１５分間染色した。細胞を２００μｌのＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、２５０μｌのＰＢＳで洗浄し、ＰＢＳで１：１０００に希釈した５０μｌのＦｉｘａｂｌｅ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ｄｙｅ  ｅＦｌｕｏｒ  ５０６（ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）中、氷上で３０分間染色した。細胞を２５０μｌのＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、７５μｌのＣｙｔｏｆｉｘ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）中、氷上で３０分間固定した。細胞を１７５μｌのＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、７５μｌのＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁した。ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で細胞を解析し、続いて、Ｆｌｏｗｊｏ  １０．７（Ｔｒｅｅｓｔａｒ）でデータを解析した。ｅ５０６ネガティブ集団でゲーティングし、死細胞を除外した。腫瘍細胞を貪食したマクロファージは、ＣＤ３３、ＣＤ２０６及びＣＦＳＥがポジティブである細胞として特定した。
【０２２４】
樹状細胞活性化アッセイ
Ｂａｌｂ／ｃマウス（ｎ＝３／群）に対し、ヒトＩｇＧ１対照、様々な抗ＳＩＲＰ−α抗体、マウスＩｇＧ対照、またはビヒクル（ＰＢＳ）を１０ｍｇ／ｋｇで静脈内注射した。注射から５時間後、脾臓を摘出し、物理的に解離させることによって単一細胞懸濁液に処理した。ＣＤ４＋脾臓樹状細胞の活性化マーカーＣＤ８６、ＭＨＣＩＩ及びＣＣＲ７のレベルをフローサイトメトリーにより測定した。
【０２２５】
結果
Ｍ２マクロファージによるＥＧＦＲ（＋）ＤＬＤ−１細胞の食作用に対する、上記のヒト化抗体の作用について、抗ＥＧＦＲ抗体セツキシマブと組み合わせて、試験した（図３Ａ）。全てのヒト化抗体がセツキシマブ誘導食作用を亢進することがわかった。Ｍ２マクロファージによるＥＧＦＲ（＋）ＤＬＤ−１細胞の食作用に対する、上記の追加のヒト化抗体（Ｈｕｍ１またはＨｕｍ９軽鎖と組み合わせた抗体２５重鎖バリアント、及びＨｕｍ１軽鎖と組み合わせた抗体２７重鎖バリアント）の作用について、抗ＥＧＦＲ抗体セツキシマブと組み合わせて、試験した（図３Ｂ）。全てのヒト化抗体がセツキシマブ誘導食作用を亢進することがわかった。試験した全ての抗体は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａ変異を有する完全長ヒトＩｇＧ１抗体として作製された。
【０２２６】
次に、様々な抗ＳＩＲＰ−α抗体を、インビボ樹状細胞活性化に対する作用について調べた（図４Ａ及び４Ｂ）。脾臓樹状細胞上のマウスＳＩＲＰ−α受容体にＣＤ４７結合を介した結合がない場合、脾臓樹状細胞の活性化が生じる。抗ＳＩＲＰ−α抗体Ｈｕｍ１／ＡＢ２１ｍｕｔａｌｌ、Ｈｕｍ８／ＡＢ２１ｍｕｔａｌｌ、及びＨｕｍ９／ＡＢ２１ｍｕｔａｌｌをインビボで試験して、樹状細胞の活性化をもたらすかどうかを決定した。ＣＤ８６及びＭＨＣＩＩ発現によって決定されるように、これらの抗ＳＩＲＰ−α遮断抗体は、樹状細胞の活性化を誘導することができた。
【０２２７】
実施例５：抗ＳＩＲＰ−α抗体とＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１経路の阻害との併用による相乗的な抗腫瘍作用
方法
インビボにおける抗腫瘍活性
ＣＴ２６同系マウス結腸癌モデルの場合、ＣＴ２６細胞をＢＡＬＢ／ｃマウスに皮下移植し、複数群（８〜９匹／群）に無作為化した。処置群には、ビヒクル（ＰＢＳ）、ＡＢ２５ｂ、抗ＰＤ−Ｌ１、及びＡＢ２５ｂ／抗ＰＤ−Ｌ１を含めた。抗ＰＤ−Ｌ１は、アテゾリズマブのＶＨ及びＶＬドメインと、Ｎ２９７Ａ変異を有するマウスＩｇＧ１  Ｆｃ領域とを融合することによって作製される。抗ＳＩＲＰ−α抗体も全て、Ｎ２９７Ａ変異を有するマウスＩｇＧ１  Ｆｃ領域を有する。処置は、移植後７または８日目に、腫瘍が平均７５〜８０ｍｍ３になったときに開始した。マウスに抗ＳＩＲＰα抗体を３ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇで週２回３週間、及び抗ＰＤ−Ｌ１を３ｍｇ／ｋｇで、３回５日間隔で腹腔内（ＩＰ）投与した。腫瘍が約２０００ｍｍ３の体積に達したら、動物を屠殺した。
【０２２８】
ＭＣ３８同系マウス結腸癌モデルの場合、ＭＣ３８細胞をＣ５７ＢＬ／６マウスに皮下移植し、複数群（８〜１０匹／群）に無作為化した。処置群には、ビヒクル（ＰＢＳ）、ＡＢ２５ｂ、抗ＰＤ１（クローンＲＭＰ１−１４、ＢｉｏＸＣｅｌｌ）、及びＡＢ２５ｂ／抗ＰＤ１を含めた。全ての抗ＳＩＲＰα抗体は、ＡＢ２５ｃを除き、Ｎ２９７Ａの変異を有するマウスＩｇＧ１  Ｆｃ領域を有した。処置は、移植後７日目に、腫瘍が平均６０〜６５ｍｍ３になったときに開始した。マウスに抗ＳＩＲＰαを１０ｍｇ／ｋｇで週２回３週間、及び抗ＰＤ−１を２ｍｇ／ｋｇで３回、腹腔内（ＩＰ）投与した。腫瘍が約２０００ｍｍ３の体積に達したら、動物を屠殺した。
【０２２９】
結果
ＣＴ２６同系マウス結腸癌モデルにおいて、遮断ＡＢ２５ｂ抗ＳＩＲＰ−α抗体の抗腫瘍活性を、単独で、また抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせて試験した。図５に示されるように、ＡＢ２５ｂ  １０ｍｇ／ｋｇを抗ＰＤ−Ｌ１  ３ｍｇ／ｋｇと組み合わせて投与すると、単剤またはビヒクル対照のそれぞれによる処置と比較して、腫瘍形成が遅延した。試験２７日目に、ビヒクル、抗ＰＤ−Ｌ１単剤及び抗ＳＩＲＰ−α単剤の処置群における腫瘍の大きさが６００ｍｍ３未満のマウスは、それぞれ２匹、２匹及び２匹であったのに比べて、併用処置群における腫瘍の大きさが６００ｍｍ３未満のマウスは、６匹であった。
【０２３０】
次に、ＭＣ３８同系マウス結腸癌モデルにおいて、ＡＢ２５ｂ抗ＳＩＲＰ−α抗体の抗腫瘍活性を、単独で、また抗ＰＤ−１抗体と組み合わせて試験した。図６に示されるように、ＡＢ２５ｂ（１０ｍｇ／ｋｇ）を抗ＰＤ−１  ５ｍｇ／ｋｇと組み合わせると、単剤またはビヒクル対照のそれぞれによる処置と比較して、腫瘍形成が遅延した。試験２７日目に、ビヒクル、抗ＰＤ−１単剤、及びＡＢ２５ｂ単剤の処置群における腫瘍の大きさが６００ｍｍ３未満のマウスは、それぞれ１匹、５匹、及び１匹であったのに比べて、ＡＢ２５ｂ／ＰＤ−１併用処置群における腫瘍の大きさが６００ｍｍ３未満のマウスは、７匹であった。
【０２３１】
本明細書に記載される抗体及びその特性の概要を表Ｋに記載する。さらなる結合データを表Ｌ及びＮに記載する。
【０２３２】
実施例６：潜在的な不安定性ホットスポットを除去するように操作された新規の抗ＳＩＲＰ−α抗体軽鎖
上述の遮断抗ＳＩＲＰ−α抗体ＡＢ２１及びＡＢ２５の特性により、バリアントＡＢ２１  ＶＨドメイン（配列番号２６）及びヒト化Ｈｕｍ１  ＶＬドメイン（配列番号２５）を含む抗体を分析用に選択した。上述のＨｕｍ１ヒト化可変軽鎖ドメインを含む抗体軽鎖の配列を、潜在的な不安定性ホットスポット、例えば、脱アミドまたは糖化部位について分析した。
【０２３３】
タンパク質脱アミドは、グルタミンまたはアスパラギン残基の側鎖アミドが酸性カルボン酸基に変換される翻訳後修飾である。アスパラギンの非酵素的脱アミドは、グルタミンのものよりも速いため、ポリペプチドベース治療薬の製造及び保存において、より大きな生理学的意義と、より大きな潜在的不安定性リスクとを提示する。
【０２３４】
糖化とは、非酵素的糖化またはタンパク質のメイラード反応を指し、これは、リジンのε−アミノ基または遊離アミノ基で主に発生する。アルギニン、ヒスチジン、トリプトファン、及びシステイン残基の側鎖は、さらなる潜在的な糖化部位を表す。アマドリ修飾タンパク質は、初期糖化産物であり、さらに反応して、終末糖化産物（ＡＧＥ）を生じる。
【０２３５】
Ｈｕｍ１含有軽鎖の分析により、例えば、抗ＳＩＲＰ−α抗体の製造、保存及び／または薬物開発中に生じ得る修飾に起因するリスクを制限するために、工学的操作が望まれ得る部位を特定した。この実施例は、これらの潜在的な不安定性を除くＨｕｍ１バリアントの試験及び構築について記載する。
【０２３６】
方法
ペプチドマッピング分析
トリプシン消化の場合、試料を６ＭグアニジンＨＣｌ及び１ｍＭ  ＥＤＴＡ中で希釈した。１０ｍＭのＤＴＴ及び１０ｍＭのヨードアセトアミドを使用して、試料をそれぞれ還元し、アルキル化した。その後、緩衝液を０．１ＭトリスＨＣｌに交換し、試料を４時間インキュベートして、消化させた。キモトリプシン消化の場合、試料を１００ｍＭ炭酸水素アンモニウム中で希釈した。１％のＰｒｏｇｅｎｔａアニオン酸分解性界面活性剤を加えた。１０ｍＭのＤＴＴ及び１０ｍＭのヨードアセトアミドを再び使用して、試料をそれぞれ還元し、アルキル化した。試料を一晩インキュベートした。
【０２３７】
質量スペクトルデータは、Ｑ  Ｅｘａｃｔｉｖｅ  Ｈｙｂｒｉｄ  Ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ−Ｏｒｂｉｔｒａｐに連結したＷａｔｅｒｓ  Ａｃｕｉｔｙ  ＵＨＰＬＣ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ  ＣＡ）によって取得した。使用したカラムは、Ａｇｉｌｅｎｔ  ＡｄｖａｎｃｅＢｉｏペプチドマッピング（Ｃ１８、１×１５０ｍｍ  ＩＤ）である。逆相溶媒を使用して、使用した勾配は、４１分にわたって２％〜４０％の緩衝液であった。ＭＳフルスキャン範囲は、２５０〜２０００ｍ／ｚであった。ペプチド検索及び相対的存在度は、Ｐｒｏｔｅｉｎ  ＭｅｔｒｉｃｓからのＢｙｏｎｉｃ及びＢｙｏｌｏｇｉｃを用いて分析した。１０ｐｐｍの前駆体質量精度、及び２０ｐｐｍのフラグメント質量精度を採用した。
【０２３８】
ＫＤの決定
抗ＳＩＲＰα抗体と、様々な種（ヒトｖ１、ヒトｖ２、カニクイザル、マウス１２９、ＢＬ６、ＢＡＬＢｃ、ＮＯＤ）に由来するＳＩＰＲα、ＳＩＲＰβ及びＳＩＲＰγとの相互作用について、抗体の直接固定化を用いて分析した。実験は全て、ＧＬＣセンサーチップを備えるＳＰＲ系ＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ３６バイオセンサー（ＢｉｏＲａｄ，Ｉｎｃ（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ））を使用して２５℃で実施した。ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３−ＦＳ細胞（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を使用して抗体を発現させた。標準的なプロテインＡアフィニティーカラムクロマトグラフィーにより精製を行い、溶出した抗体をＰＢＳ緩衝液中に保存した。
【０２３９】
ランニング緩衝液は、０．０１％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むＰＢＳ（ＰＢＳＴ＋）（ｐＨ７．４）であった。アナライトは全て、Ａ２８０の吸光度と、算出されたモル吸光係数を使用して決定される名目上の濃度で使用した。アナライトは、別途記載されるように（例えば、Ｂｒａｖｍａｎ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３５８：２８１−２８８参照）、「ワンショット」キネティックモードで注入した。
【０２４０】
ＧＬＣチップを使用する固定化の場合、Ｐｒｏｔｅｏｎ  Ａｍｉｎｅ  Ｃｏｕｐｌｉｎｇ  Ｋｉｔを使用してＧＬＣチップ上に固定化した抗ＳＩＲＰ−α抗体（約１０００ＲＵ）上に、アナライトを注入して流した。固定化工程のために、１／１００に希釈したＥＤＡＣ／Ｓｕｌｐｈｏ−ＮＨＳ  １：１（Ｂｉｏｒａｄ）を２５μＬ／分で用いて、ＧＬＣチップを３００秒間活性化した。抗ＳＩＲＰ−α抗体は、１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．５）中で８０ｎＭの濃度に希釈し、３０μＬ／分で５０秒間、チップに固定化した。エタノールアミンを２５μＬ／分で用いて、チップを３００秒間不活性化した。アナライト（例えば、異なる種に由来するＳＩＲＰ−α、ＳＩＲＰ−β、ＳＩＲＰ−γ）を１００、３３、１１、３．７、１．２及び０ｎＭの名目上の濃度で、「ワンショット」キネティックモードで注入した。結合時間は、１００μＬ／分で９０秒間モニターし、解離時間は、１２００秒間モニターした。ＰｉｅｒｃｅのＩｇＧ溶出緩衝液／４Ｍ  ＮａＣｌの２：１（ｖ／ｖ）ブレンドを用いて表面を再生した。
【０２４１】
バイオセンサーのデータは、反応スポットのデータ（固定化タンパク質）からインタースポットのデータ（固定化タンパク質不含）を差し引き、次に、アナライト注入の反応から緩衝液「ブランク」アナライト注入の反応を差し引くことによって、ダブルリファレンスを行った。ダブルリファレンスを行ったデータを単純なＬａｎｇｍｕｉｒモデルにグローバルフィッティングし、見かけの反応速度定数の比からＫＤ値を算出した（ＫＤ＝ｋｄ／ｋａ）。
【０２４２】
結果
Ｈｕｍ１  ＶＬドメイン（配列番号２５）及びヒトＩＧＬＣ１  λ定常ドメイン（配列番号３７）を有する軽鎖（配列番号４７）と、ＡＢ２１  ＭｕｔＡｌｌ  ＶＨドメイン（配列番号２６）を有する重鎖（配列番号６１）と、ヒトＩｇＧ２Ｄａ  Ｆｃ領域を含む（Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓ変異を含む、ＥＵに従ったアミノ酸位置ナンバリング）定常領域（配列番号３４）とを含む抗ＳＩＲＰ−α抗体（抗体ＰＣ３３６）にトリプシン及びキモトリプシン消化を上述のように実施した。重鎖の全体的な配列包括度は、１００％（４４４個のアミノ酸のうちの４４４個）であり、軽鎖は、９８．６％（２１４個のアミノ酸のうちの２１１個）であった。全ての抗体の可変ドメイン及び完全鎖配列を表Ｊ１及びＪ２に提供する。
【０２４３】
これらの分析により、糖化によって修飾される３つの軽鎖残基が明らかになった。表Ｆは、軽鎖で観察された糖化を示す。合計で３つの糖化ペプチドを単離した。これらのうち、配列番号６５の配列を有するペプチドの約４８％が糖化されたことが観察された。糖化修飾をＫ１０４に割り当てた（軽鎖に対するアミノ酸シーケンスナンバリングに基づくナンバリング、Ｋａｂａｔではない）。図７は、抗体ＰＣ３３６のペプチドの糖化形態対非改変形態の総抽出イオンクロマトグラフィー、曲線下面積（ＸＩＣ、ＡＵＣ）を示す。
【表Ｆ】
2021518142.tif 000027
【０２４４】
同じ軽鎖（配列番号４７）と、ＡＢ２１  ＭｕｔＡｌｌ  ＶＨドメイン（配列番号２６）を有する重鎖（配列番号５８）と、野生型ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域を含む定常領域（配列番号３１）とを含む第２の抗ＳＩＲＰ−α抗体（抗体ＰＣ３３３）のペプチドマッピングも実施した。抗体３３６で観察されたことと同様に、軽鎖の１０４位でのリジン残基も、この抗体（ペプチドの約３４％；表Ｇを参照）で糖化されることが観察された。
【表Ｇ】
2021518142.tif 000028
【０２４５】
ペプチドマッピングにより、Ｈｕｍ１  ＶＬドメイン（配列番号２５）及びヒトＩＧＬＣ２  λ定常ドメイン（配列番号３８）を有する軽鎖（配列番号６３）と、ＡＢ２１  ＭｕｔＡｌｌ  ＶＨドメイン（配列番号２６）を有する重鎖（配列番号５９）と、ヒトＩｇＧ１  ＡＡＡ  Ｎ２９７Ａ  Ｆｃ領域（Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａ変異を含む、ＥＵに従ったアミノ酸位置ナンバリング）を含む定常領域（配列番号３２）と含む抗体ＰＣ３０１のＨｕｍ１含有軽鎖における脱アミド化残基の存在も明らかになった。図８に示すように、抗体ＰＣ３０１の軽鎖及び重鎖中の様々な部位は、脱アミド化されることが観察された。特に、軽鎖定常ドメインのＮ１７１及びＮ１７２残基を含むペプチドのおよそ５０％は、脱アミドによって修飾されることが分かった。ペプチドマッピングから、Ｎ１７１、Ｎ１７２、または両方の残基が脱アミド化されたかどうか決定することはできなかったが、これは、これらの２つの残基は互いに隣接して、同じペプチドで単離されるためである。
【０２４６】
脱アミド及び糖化などの後翻訳修飾は、薬物開発には望ましくない。これは、薬物製造中の製品の不均一性による潜在的な問題に起因する。したがって、修飾が、抗ＳＩＲＰ−α抗体の結合親和性に影響を与えるように見えなかった場合でも、これらの修飾を制限することが望ましい。
【０２４７】
潜在的に脱アミド化された残基（Ｎ１７１／Ｎ１７２）を除くため、４つの脱アミド部位バリアントを最初に試験した。抗体ＰＣ３３４は、元のＨｕｍ１  ＶＬ＋ＩＧＬＣ１軽鎖（配列番号４７）を含有した。抗体ＰＣ３３８は、元のＨｕｍ１  ＶＬドメイン及びＮ１７２Ｄバリアント定常ドメイン（配列番号４８）を有する軽鎖を含有した。抗体ＰＣ３３９は、元のＨｕｍ１  ＶＬドメイン及びＮ１７１Ｄバリアント定常ドメイン（配列番号４９）を有する軽鎖を含有した。抗体ＰＣ３４０は、元のＨｕｍ１  ＶＬドメイン、及びＮ１７１Ｄ、Ｎ１７２Ｓ脱アミド部位バリアント定常ドメイン（配列番号５０）を有する軽鎖を含有した。抗体ＰＣ３４１は、元のＨｕｍ１  ＶＬドメイン及びＮ１７１Ｓ、Ｎ１７２Ｄ脱アミド部位バリアント定常ドメイン（配列番号５１）を有する軽鎖を含有した。全ての抗体は、ＡＢ２１ＨＣ  ｍｕｔ  ａｌｌ  ＶＨドメイン（配列番号２６）を含む重鎖と、ヒトＩｇＧ１  ＡＡＡ  Ｎ２９７Ａ  Ｆｃ領域を含む定常領域（配列番号３２）とを有した（配列番号５９に示すような完全重鎖配列）。結合アッセイ結果を表Ｈに示す。４つ全ての変異体は、野生型抗体と比較して、ヒトＳＩＲＰ−α  ｖ１に同等の親和性で結合した。
【表Ｈ】
2021518142.tif 000029
【０２４８】
次に、糖化部位バリアントを試験した。糖化部位を有するＨｕｍ１  ＶＬドメイン領域を図９に示す。この糖化部位を除くため、このＶＬドメインの３つのバリアントを作成し、バージョン１、２、及び３と標識した（ｖ１、ｖ２、及びｖ３は、本明細書で交換可能にも使用される）。これらのバリアントは、Ｋ１０４糖化部位とその周辺で残基を変異する。バージョン１及び２は、それぞれ、天然ヒトＩＧＬＪ１及びＩＧＬＪ７配列に同一な配列を使用する。バージョン３は、リジンをアルギニンに置き換えて、正電荷及び残基のサイズを維持した。糖化部位バリアントは、Ｎ１７１Ｓ、Ｎ１７２Ｄ脱アミドバリアントに関連させて試験した。
【０２４９】
抗体ＰＣ３３４は、元のＨｕｍ１  ＶＬ＋ＩＧＬＣ１軽鎖（配列番号４７）を含有した。抗体ＰＣ３４１は、元のＨｕｍ１  ＶＬドメイン、及びＮ１７１Ｓ、Ｎ１７２Ｄ（「ＳＤ」と略称）脱アミド部位バリアント定常ドメイン（配列番号５１）を有する軽鎖を含有した。抗体ＰＣ３４５、ＰＣ３４６、及びＰＣ３４７は、ＳＤ脱アミド部位バリアント定常ドメインも含有したが、Ｈｕｍ１バリアント１、２、及び３  ＶＬドメインをそれぞれ含んだ（それぞれ、配列番号５３、５５、及び５７）。全ての抗体は、ＡＢ２１ＨＣ  ｍｕｔ  ａｌｌ  ＶＨドメイン（配列番号２６）を含む重鎖と、ヒトＩｇＧ１  ＡＡＡ  Ｎ２９７Ａ  Ｆｃ領域を含む定常領域（配列番号３２）とを有した（配列番号５９に示すような完全重鎖配列）。結合アッセイの結果を表Ｉ１に示す。
【表Ｉ１】
2021518142.tif 000030
【０２５０】
表Ｈ及びＩ１に示すように、全ての抗体は、野生型抗体と比較して、ヒトＳＩＲＰ−α  ｖ１に同等の親和性で結合した。これらの結果は、脱アミド及び糖化の不安定性ホットスポットを除くように操作されたバリアントが、ＳＩＲＰ−αへの結合に効果を有さないことを示す。
【０２５１】
上記の結果に基づいて、６つの好ましい軽鎖バリアントを生成し、それぞれの配列（配列番号５２〜５７）のアラインメントを図１０及び１１に示す。これらは、２つの好ましい脱アミド部位バリアント（Ｎ１７１Ｄ／Ｎ１７２Ｓ及びＮ１７１Ｓ／Ｎ１７２Ｄ、それぞれ、「ＤＳ」及び「ＳＤ」と略称）、及び３つの糖化バリアント（ｖ１、ｖ２、ｖ３）の組み合わせを含んだ。元のｈｕｍ１  ＶＬドメイン、及びヒトＩＧＬＣ１  λ定常領域（配列番号４７）をアラインメントでも示す。
【０２５２】
実施例７：抗ＳＩＲＰ−α抗体の生物活性に対する定常ドメイン配列の効果
異なるＦｃ領域及び軽鎖定常ドメインを有する抗ＳＩＲＰ−α抗体を、これらの配列が抗ＳＩＲＰ−α抗体の生物学的特性にどのように影響を及ぼすかを理解するために、食作用に対する効果について試験した。
【０２５３】
方法
樹状細胞の機能的枯渇に関して、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  Ｐｌｕｓにより健康な個体のトリマ残留物から単離した。５００，０００個のＰＢＭＣを、抗ＳＩＲＰを１０ｕｇ／ｍＬの濃度で有するＵ底９６ウェルプレート（ｃｏｒｎｉｎｇ）で、３７℃にて４８時間インキュベートした。フローサイトメトリーに関して、細胞をヒトＦｃＲ遮断試薬中でインキュベートし、ｌｉｎ−（ＣＤ３、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ５６）及びＨＬＡＤＲに対する蛍光色素標識抗体のカクテルで染色した。固定可能な生死判別色素（Ｆｉｘａｂｌｅ  ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  ｄｙｅ）を使用して、生細胞を同定した。染色後、細胞を洗浄し、ＰＢＳ中の０．５％パラホルムアルデヒドで固定した。取得前に、絶対計数ビーズを加え、Ｃａｎｔｏ  ＩＩフローサイトメーターで試料を取得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを用いて分析した。
【０２５４】
食作用は、実施例４に記載されるインビトロアッセイを用いて測定した。
【０２５５】
結果
異なるＦｃ領域を有するヒト化抗ＳＩＲＰ−α抗体を、抗ＥＧＦＲ抗体セツキシマブと組み合わせたＭ２マクロファージによるＥＧＦＲ（＋）ＤＬＤ−１細胞の食作用に対する効果について試験した（図１２）。全ての抗体は、配列番号５５の軽鎖配列、及び配列番号２６のＶＨドメイン配列を有した。試験したＦｃ領域は、ＩｇＧ２野生型（配列番号３３の定常ドメイン配列に表されるように）、ＩｇＧ２Ｄａ  Ｆｃ領域（Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓ変異を含む、ＥＵに従ったアミノ酸位置ナンバリング；配列番号３４の定常ドメイン配列に表されるように）、Ｎ２９７Ａ変異を含むＩｇＧ２  Ｆｃ領域（ＥＵに従ったアミノ酸位置ナンバリング；配列番号１３７の定常ドメイン配列に表されるように）、及びＮ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３７Ａ変異を含むＩｇＧ１  Ｆｃ領域（ＥＵに従ったアミノ酸位置ナンバリング；配列番号３２の定常ドメイン配列に表されるように）を含んだ。全ての抗体は、セツキシマブ誘発食作用の亢進におけるほぼ同等の活性を有することが分かった。
【０２５６】
次に、異なるＦｃ領域を有する抗ＳＩＲＰ−α抗体（または対応するアイソタイプ対照）を、ドナーＰＢＭＣから異なる細胞型を枯渇させる能力について試験した。全ての抗体は、配列番号５５の軽鎖配列、及び配列番号２６のＶＨドメイン配列を有した。図１３Ａ及び１３Ｂに示すように、野生型ＩｇＧ１、野生型ＩｇＧ４、野生型ＩｇＧ２、またはＩｇＧ２Ｄａ  Ｆｃ領域を有する抗ＳＩＲＰ−α抗体は、２人の異なるドナーから得られたＰＢＭＣからＤＣを枯渇することができた。これは、これらのＦｃ領域が、ＰＢＭＣアッセイに関連させていくつかのＤＣ枯渇を増強する能力を有することを示している（ＤＣは、ＳＩＲＰ−αを発現することが知られている）。これに対し、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｎ２９７Ａ  ＩｇＧ１及びＩｇＧ２  Ｎ２９７Ａ  Ｆｃ領域のみは、ＤＣ枯渇を示さなかった。試験した抗体はいずれも、Ｔ細胞、単球、またはＢ細胞の著しい枯渇をもたらさなかった（図１３Ｃ〜１３Ｅ）。ＩｇＧ２  Ｎ２９７Ａ  Ｆｃ領域は、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｎ２９７Ａ  ＩｇＧ１  Ｆｃ領域と同じ枯渇の欠如をもたらすが、変異がより少ないことが有利である（したがって、免疫原性が潜在的に少ない）。
【０２５７】
抗ＳＩＲＰ−α抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α  ｖ１；ＮＯＤ、Ｃ５７ＢＬ／６、及びＢＡＬＢｃマウスＳＩＲＰ−α；ヒトＳＩＲＰ−β；及びヒトＳＩＲＰ−γに対する結合親和性についても試験した。試験した抗体は、以下の重鎖及び軽鎖：ＰＣ３０１：配列番号６３の軽鎖及び配列番号５９の重鎖；ＰＣ３３４：配列番号４７の軽鎖及び配列番号５９の重鎖；及びＰＣ３６７：配列番号５５の軽鎖及び配列番号１２９の重鎖を含んだ。
【表Ｉ２】
2021518142.tif 000031
【０２５８】
ヒトＩｇＧ２抗体は、ジスルフィド系アイソフォーム（Ａ、Ｂ、及びＡＢ）中に存在すると考えられ、Ｃ２３２ＳまたはＣ２３３Ｓ変異をヒトＩｇＧ２定常領域に導入することで、ジスルフィドシャッフリングによって引き起こされる不均一性を減らすことが報告されている（Ｌｉｇｈｔｌｅ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．１９：７５３−７６２）。これらの変異の各々は、ＩｇＧ２抗体をアイソフォームＡに強制すると考えられる。加えて、λ軽鎖はまた、アイソフォームＡ存在度を促進することが考えられる。Ｃ２３２ＳまたはＣ２３３Ｓ変異を含む野生型ＩｇＧ２（図１４Ａ）またはＩｇＧ２  Ｎ２９７Ａ（図１４Ｂ）Ｆｃ領域を有する抗ＳＩＲＰ−α抗体を、抗ＥＧＦＲ抗体セツキシマブと組み合わせたＭ２マクロファージによるＥＧＦＲ（＋）ＤＬＤ−１細胞の食作用に対する効果について試験した。全ての抗体は、配列番号５５の軽鎖配列、及び配列番号２６のＶＨドメイン配列を有した。野生型及びＮ２９７Ａ  Ｆｃ領域は、アイソフォームＡ優勢を推進するλ軽鎖を有する抗体を用いて試験した。Ｃ２３２ＳまたはＣ２３３Ｓ変異を有するＦｃ領域を含むＩｇＧ２抗ＳＩＲＰ−α抗体は、野生型ＩｇＧ２またはＩｇＧ２  Ｎ２９７Ａ  Ｆｃ領域を有する抗体と比較して、同様の食作用の亢進を示した。
【０２５９】
抗ＳＩＲＰ−α抗体が食作用を亢進する能力に対する軽鎖定常ドメインの効果についても調べた。全ての抗体は、配列番号２６のＶＨドメイン配列、及び配列番号１８のＶＬドメイン配列を有した。λ軽鎖及びκ軽鎖を有する抗ＳＩＲＰ−α抗体は、野生型ＩｇＧ２  Ｆｃ（図１５Ａ）またはＩｇＧ２ｄａ  Ｆｃ（図１５Ｂ）を含有する重鎖と関連させて、両方とも同様の食作用の亢進を示した。。
【０２６０】
理解を明確にするために、上記の開示について、例示及び実施例によって、ある程度詳細に説明してきたが、その説明及び実施例は、本開示の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書に引用される全ての特許及び科学参考文献の開示は、その全体が参照により明示的に援用される。
【０２６１】
【表Ｊ１−１】
2021518142.tif 000032
【表Ｊ１−２】
2021518142.tif 000033
【表Ｊ１−３】
2021518142.tif 000034
【表Ｊ１−４】
2021518142.tif 000035
【表Ｊ２−１】
2021518142.tif 000036
【表Ｊ２−２】
2021518142.tif 000037
【表Ｊ２−３】
2021518142.tif 000038
【表Ｊ２−４】
2021518142.tif 000039
【表Ｊ２−５】
2021518142.tif 000040
【表Ｊ２−６】
2021518142.tif 000041
【表Ｊ２−７】
2021518142.tif 000042
【表Ｊ２−８】
2021518142.tif 000043
【表Ｊ２−９】
2021518142.tif 000044
【表Ｊ２−１０】
2021518142.tif 000045
【表Ｊ２−１１】
2021518142.tif 000046
【表Ｊ２−１２】
2021518142.tif 000047
【表Ｊ２−１３】
2021518142.tif 000048
【表Ｊ２−１４】
2021518142.tif 000049
【表Ｊ２−１５】
2021518142.tif 000050
【表Ｊ２−１６】
2021518142.tif 000051
【表Ｊ２−１７】
2021518142.tif 000052
【表Ｊ２−１８】
2021518142.tif 000053
【表Ｋ】
2021518142.tif 000054
【表Ｌ】
2021518142.tif 000055
【表Ｍ−１】
2021518142.tif 000056
【表Ｍ−２】
2021518142.tif 000057
【表Ｎ】
2021518142.tif 000058
【図１−１】
2021518142.tif 000059
【図１−２】
2021518142.tif 000060
【図２】
2021518142.tif 000061
【図３Ａ】
2021518142.tif 000062
【図３Ｂ】
2021518142.tif 000063
【図４Ａ】
2021518142.tif 000064
【図４Ｂ】
2021518142.tif 000065
【図５−１】
2021518142.tif 000066
【図５−２】
2021518142.tif 000067
【図６−１】
2021518142.tif 000068
【図６−２】
2021518142.tif 000069
【図７】
2021518142.tif 000070
【図８】
2021518142.tif 000071
【図９】
2021518142.tif 000072
【図１０】
2021518142.tif 000073
【図１１】
2021518142.tif 000074
【図１２】
2021518142.tif 000075
【図１３Ａ】
2021518142.tif 000076
【図１３Ｂ】
2021518142.tif 000077
【図１３Ｃ】
2021518142.tif 000078
【図１３Ｄ】
2021518142.tif 000079
【図１３Ｅ】
2021518142.tif 000080
【図１４Ａ】
2021518142.tif 000081
【図１４Ｂ】
2021518142.tif 000082
【図１５Ａ】
2021518142.tif 000083
【図１５Ｂ】
2021518142.tif 000084
【配列表】
2021518142000001.app
【国際調査報告】
2021518142.tif 000085
2021518142.tif 000086
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