(57)【要約】 本出願は、酸性ｐＨでＶドメイン免疫グロブリン含有Ｔ細胞活性化抑制因子（ＶＩＳＴＡ）に特異的に結合する抗体と、がん治療におけるその使用に関する。いくつかの実施態様では、該抗体は、酸性ｐＨでヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合するが、中性または生理的ｐＨでは有意には特異的に結合しない。【選択図】図１Ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
酸性条件下でヒトＶＩＳＴＡ（ｈＶＩＳＴＡ）に特異的に結合する単離された抗体。
【請求項２】
酸性条件下ではｈＶＩＳＴＡに特異的に結合するが、中性または生理的条件下では有意には特異的に結合しない、請求項１に記載の単離された抗体。
【請求項３】
酸性条件下では中性または生理的条件下でのＫＤの１０分の１以下のＫＤでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１または２に記載の単離された抗体。
【請求項４】
酸性条件下では中性または生理的条件下でのＫＤの１００分の１以下のＫＤでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から３のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項５】
酸性条件下では中性または生理的条件下でのＫＤの１０００分の１以下のＫＤでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から４のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項６】
中性または生理的条件下では１０−５ Ｍ以上のＫＤでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から５のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項７】
中性または生理的条件下では１０−４ Ｍ以上のＫＤでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から６のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項８】
中性または生理的条件下では１０−３ Ｍ以上のＫＤでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から７のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項９】
酸性条件下では１０−７ Ｍ以下のＫＤでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から８のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１０】
酸性条件下では１０−８ Ｍ以下のＫＤでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から９のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１１】
酸性条件下では１０−９ Ｍ以下のＫＤでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から１０のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１２】
酸性条件下では１０−７以下のＫＤでｈＶＩＳＴＡに結合し、中性または生理的条件下では１０−４以上のＫＤでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から１１のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１３】
酸性条件下では１０−７以下のＫＤでｈＶＩＳＴＡに結合し、中性または生理的条件下では１０−５以上のＫＤでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から１２のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１４】
酸性条件下では中性または生理的条件下でのｋｏｆｆの５分の１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から１３のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１５】
酸性条件下では中性または生理的条件下でのｋｏｆｆの１０分の１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から１４のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１６】
酸性条件下では中性または生理的条件下でのｋｏｆｆの５０分の１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から１５のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１７】
酸性条件下では中性または生理的条件でのｋｏｆｆの１００分の１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から１６のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１８】
酸性条件下では７ｘ１０−３ ｓ−１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から１７のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１９】
酸性条件下では５ｘ１０−３ ｓ−１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から１８のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項２０】
酸性条件下では３ｘ１０−３ ｓ−１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から１９のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項２１】
酸性条件下では１０−３ ｓ−１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から２０のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項２２】
酸性条件下では７ｘ１０−４ ｓ−１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から２１のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項２３】
酸性条件下では５ｘ１０−４ ｓ−１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から２２のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項２４】
酸性条件下では３ｘ１０−４ ｓ−１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から２３のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項２５】
酸性条件下では１０−４ ｓ−１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から２４のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項２６】
酸性条件下では７ｘ１０−５ ｓ−１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から２５のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項２７】
酸性条件下では５ｘ１０−５ ｓ−１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から２６のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項２８】
酸性条件下では３ｘ１０−５ ｓ−１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から２１のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項２９】
酸性条件下では１０−５ ｓ−１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から２８のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項３０】
中性または生理的条件下では１０−３ ｓ−１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から２９のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項３１】
中性または生理的条件下では３ｘ１０−３ ｓ−１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から３０のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項３２】
中性または生理的条件下では５ｘ１０−３ ｓ−１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から３１のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項３３】
中性または生理的条件下では７ｘ１０−３ ｓ−１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から３２のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項３４】
中性または生理的条件下では１０−２ ｓ−１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から３３のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項３５】
中性または生理的条件下では３ｘ１０−２ ｓ−１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から３４のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項３６】
中性または生理的条件下では５ｘ１０−２ ｓ−１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から３５のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項３７】
中性または生理的条件下では７ｘ１０−２ ｓ−１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から３６のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項３８】
中性または生理的条件下でのｈＶＩＳＴＡへの抗体の結合が、例えば表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって検出できない、請求項１から３７のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項３９】
酸性条件下では５ｘ１０−３ ｓ−１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡに結合し、中性または生理的条件下では７ｘ１０−３ ｓ−１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から３８のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項４０】
酸性条件下では１０−４ ｓ−１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡに結合し、中性または生理的条件下では１０−２ ｓ−１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から３９のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項４１】
酸性条件下では１０−８ Ｍ以下のＫＤおよび５ｘ１０−３ ｓ−１以下のｋｏｆｆで、中性または生理的条件下では１０−６ Ｍ以上のＫＤおよび７ｘ１０−３ ｓ−１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から４０のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項４２】
酸性条件では１０−８ Ｍ以下のＫＤおよび３ｘ１０−３ ｓ−１以下のｋｏｆｆで、中性または生理的条件では１０−６ Ｍ以上のＫＤおよび１０−２ ｓ−１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から４１のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項４３】
酸性条件下では１０−１２ から１０−８ ＭのＫＤおよび１０−４から５ｘ１０−３ ｓ−１のｋｏｆｆで、中性または生理的条件下では１０−７から１０−４ ＭのＫＤおよび３ｘ１０−３から１０−２ ｓ−１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から４２のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項４４】
酸性条件下は１０−１２ から１０−８ ＭのＫＤおよび１０−４から５ｘ１０−３ ｓ−１のｋｏｆｆで、中性または生理的条件下では１０−７から１０−４ ＭのＫＤおよび３ｘ１０−３から１０−２ ｓ−１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡに結合し、かつ、１０−７以下のＫＤでｃｙｎｏ ＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から４３のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項４５】
ｐＨ６．９においてｐＨ７．４での１０分の１以下のＫＤで、および／またはｐＨ６．５においてｐＨ７．４での１００分の１以下のＫＤで、およびｐＨ６．０においてｐＨ７．４での１０００分の１以下のＫＤでｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から４４のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項４６】
カニクイザル（ｃｙｎｏ）ＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から４５のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項４７】
生理的条件と比較して酸性条件下でより高い親和性でｃｙｎｏ ＶＩＳＴＡに結合する、請求項４６に記載の単離された抗体。
【請求項４８】
酸性条件下で１０−８以下のＫＤおよび／または１０−２以下のｋｏｆｆで、生理的条件下で１０−６以上のＫＤおよび／または１０−２以上のｋｏｆｆでｃｙｎｏ ＶＩＳＴＡに結合する、請求項４５から４７のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項４９】
酸性条件が６．５以下のｐＨを有する条件である、請求項１から４８のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項５０】
酸性条件が６．０から６．５のｐＨを有する条件である、請求項１から４９のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項５１】
中性条件が７．０のｐＨを有する条件である、請求項１から５０のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項５２】
生理的条件が７．３５から７．４５のｐＨを有する条件である、請求項１から５１のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項５３】
生理的条件が７．４のｐＨを有する条件である、請求項１から５２のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項５４】
ヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞（アンタゴニスト抗体）などのヒトＴ細胞へのｈＶＩＳＴＡの結合を阻害する、請求項１から５３のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項５５】
ｐＨ７．０未満のｐＨを有する条件下でヒトＴ細胞へのｈＶＩＳＴＡの結合を阻害する、請求項５４の単離された抗体。
【請求項５６】
ヒトＰＳＧＬ−１へのｈＶＩＳＴＡの結合（ｈｕＰＳＧＬ−１）を阻害し、かつ／またはｈＶＩＳＴＡへの結合についてｈｕＰＳＧＬ１と競合する、請求項１から５５のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項５７】
ｐＨ７．０未満のｐＨを有する条件下でｈｕＰＳＧＬ−１へのｈＶＩＳＴＡの結合を阻害する、請求項５６の単離された抗体。
【請求項５８】
ヘパラン硫酸プロテオグリカンへのｈＶＩＳＴＡの結合を阻害する、請求項１から５７のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項５９】
ｐＨ７．０未満のｐＨを有する条件下でヘパラン硫酸プロテオグリカンへのｈＶＩＳＴＡの結合を阻害する、請求項５８に記載の単離された抗体。
【請求項６０】
ｐＨ７．０未満のｐＨを有する条件が、対象におけるｐＨ７．０未満のｐＨを有する腫瘍または任意の患部であり、免疫刺激が望まれる、請求項５５、５７または５９のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項６１】
例えばＴ細胞増殖を強化すること；Ｔ細胞からのＩＦＮ−γ産生を強化すること；および／またはＴ細胞受容体媒介のＮＦ−κＢシグナル伝達を刺激することによって証明されるように、Ｔ細胞の活性化を刺激する、請求項１から６０のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項６２】
ｐＨ７．０未満のｐＨを有する条件下でＴ細胞活性化を刺激する、請求項６１に記載の単離された抗体。
【請求項６３】
ＶＩＳＴＡ媒介の細胞−細胞接着を低減させる、請求項１から６２のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項６４】
ＶＩＳＴＡ（アゴニスト抗体）の活性を刺激する、請求項１から５３のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項６５】
ヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞などのヒトＴ細胞へのｈＶＩＳＴＡの結合を刺激する、請求項１から５３および６４のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項６６】
ｐＨ７．０未満のｐＨを有する条件下でヒトＴ細胞へのｈＶＩＳＴＡの結合を刺激する、請求項６５に記載の単離された抗体。
【請求項６７】
ｈＶＩＳＴＡのｈｕＰＳＧＬ−１への結合を刺激する、請求項１から５３および６４から６６のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項６８】
ｐＨ７．０未満のｐＨを有する条件下でｈｕＰＳＧＬ−１へのｈＶＩＳＴＡの結合を刺激する、請求項６７に記載の単離された抗体。
【請求項６９】
ｈＶＩＳＴＡのヘパラン硫酸プロテオグリカンへの結合を刺激する、請求項１から５３および６４から６８のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項７０】
ｐＨ７．０未満のｐＨを有する条件下でヘパラン硫酸プロテオグリカンへのｈＶＩＳＴＡの結合を刺激する、請求項６９に記載の単離された抗体。
【請求項７１】
ｐＨ７．０未満のｐＨを有する条件が、対象におけるｐＨ７．０未満のｐＨを有する自己免疫（例えば関節リウマチおよび狼瘡）環境、炎症部位または任意の患部であり、免疫刺激が望まれる、請求項６６、６８および７０のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項７２】
カニクイザルにおいて少なくとも１００、２００、３００、４００または５００日の平均滞留時間（ＭＲＴ）を有する、請求項１から７１のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項７３】
抗体が投与される対象の末梢血中のＶＩＳＴＡ陽性細胞、例えば好中球に有意には結合しない、請求項１から７２のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項７４】
抗体が投与される対象の末梢血中のＶＩＳＴＡ陽性細胞、例えば好中球を有意には枯渇させない、請求項１から７３のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項７５】
酸性ｐＨでｈＶＩＳＴＡに結合するが、中性または生理的ｐＨでは結合しないように操作された、請求項１から７４のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項７６】
ｈＶＩＳＴＡ結合抗体のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３における１−８のアミノ酸をグルタミン酸、アスパラギン酸またはヒスチジン残基で置き換えることによって操作された、請求項７５に記載の単離された抗体。
【請求項７７】
Ｐ１−０６１０２９のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／もしくはＣＤＲ３を含む請求項１から６３および７２から７６のいずれか一項に記載の単離された抗体、または抗体Ｐ１−０６１０２９と比較してＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／もしくはＣＤＲ３に１から６もしくは１から８のアミノ酸の違いを含むその変異体であって、最大で１、２もしくは３のアミノ酸変異がいずれか１つのＣＤＲに存在する変異体。
【請求項７８】
Ｐ１−０６１０２９のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む請求項７７に記載の単離された抗体、またはＰ１−０６１０２９と比較してＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／もしくはＣＤＲ３に１から６もしくは１から８のアミノ酸の違いを含むその変異体。
【請求項７９】
アミノ酸変異がグルタミン酸残基（Ｅ）、アスパラギン酸残基（Ｄ）またはヒスチジン残基（Ｈ）への置換である、請求項７７または７８に記載の単離された抗体。
【請求項８０】
− Ｘ１がＤもしくはＬであり、Ｘ２がＥもしくはＤであり、Ｘ３がＥもしくはＹであるＧＦＴＸ１Ｘ２ＤＸ３ＡＭＨ（配列番号４６３）を含むＣＤＲ１；
− Ｘ４がＤもしくはＮであり、Ｘ５がＤもしくはＮであり、Ｘ６がＤ、Ｅ、ＨもしくはＡであり、Ｘ７がＤ、Ｅ、ＨもしくはＮであるＧＩＸ４ＷＸ５ＳＸ６Ｘ７ＩＧＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４６４）を含むＣＤＲ２；および／または
− Ｘ８がＥ、ＨもしくはＧであり、Ｘ９がＥ、ＤもしくはＦであり、Ｘ１０がＤ、ＥもしくはＶであるＶＰＧＹＳＸ８ＧＷＩＤＡＸ９ＤＸ１０（配列番号４６５）を含むＣＤＲ３
を含む、請求項７７から７９のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項８１】
− Ｘ１がＤまたはＬであり、Ｘ２がＥまたはＤであり、Ｘ３がＥまたはＹであるＧＦＴＸ１Ｘ２ＤＸ３ＡＭＨ（配列番号４６３）を含むＣＤＲ１；
− Ｘ４がＤまたはＮであり、Ｘ５がＤまたはＮであり、Ｘ６がＤ、Ｅ、ＨまたはＡであり、Ｘ７がＤ、Ｅ、ＨまたはＮであるＧＩＸ４ＷＸ５ＳＸ６Ｘ７ＩＧＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４６４）を含むＣＤＲ２；および
− Ｘ８がＥ、ＨまたはＧであり、Ｘ９がＥ、ＤまたはＦであり、Ｘ１０がＤ、ＥまたはＶであるＶＰＧＹＳＸ８ＧＷＩＤＡＸ９ＤＸ１０（配列番号４６５）を含むＣＤＲ３
を含む、請求項８０に記載の抗体。
【請求項８２】
Ｘ３がＥであり、Ｘ９がＥである、請求項８０または８１に記載の単離された抗体。
【請求項８３】
Ｘ２がＥであり、Ｘ７がＥであり、および／またはＸ８がＨである、請求項８０から８２のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項８４】
次の３つの条件：Ｘ２がＥであり、Ｘ７がＥであり、および／またはＸ８がＨである、のうちの２つ以上を満たす、請求項８３に記載の単離された抗体。
【請求項８５】
Ｘ２がＥであり、Ｘ７がＥであり、Ｘ８がＨである、請求項８４に記載の単離された抗体。
【請求項８６】
Ｘ６がＥである、請求項８０から８５のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項８７】
Ｘ６がＡである、請求項８０から８５のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項８８】
Ｘ１がＬであり、Ｘ４がＮであり、Ｘ５がＮであり、および／またはＸ１０がＶである、請求項８０から８６のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項８９】
次の４つの条件：Ｘ１がＬであり、Ｘ４がＮであり、Ｘ５がＮであり、および／またはＸ１０がＶである、のうちの２つ以上を満たす、請求項８８に記載の単離された抗体。
【請求項９０】
次の４つの条件：Ｘ１がＬであり、Ｘ４がＮであり、Ｘ５がＮであり、および／またはＸ１０がＶである、のうちの３つ以上を満たす、請求項８９に記載の単離された抗体。
【請求項９１】
Ｘ１がＬであり、Ｘ４がＮであり、Ｘ５がＮであり、および／またはＸ１０がＶである、請求項９０に記載の単離された抗体。
【請求項９２】
Ｘ１０がＤである、請求項８０から９１のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項９３】
Ｘ９がＥである、請求項８０から９２のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項９４】
Ｘ２がＥであり、Ｘ４がＤであり、および／またはＸ６がＥである、請求項８０から９３のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項９５】
次の条件：Ｘ２がＥであり、Ｘ４がＤであり、および／またはＸ６がＥである、のうちの２つ以上を満たす、請求項９４に記載の単離された抗体。
【請求項９６】
Ｘ２がＥであり、Ｘ４がＤであり、Ｘ６がＥである、請求項９５に記載の単離された抗体。
【請求項９７】
Ｘ１がＬであり、Ｘ３がＹであり、Ｘ５がＮであり、Ｘ７がＮであり、および／またはＸ８がＧである、請求項８０から９６のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項９８】
次の条件：Ｘ１がＬであり、Ｘ３がＹであり、Ｘ５がＮであり、Ｘ７がＮであり、および／またはＸ８がＧである、のうちの２つ以上を満たす、請求項９７に記載の単離された抗体。
【請求項９９】
次の条件：Ｘ１がＬであり、Ｘ３がＹであり、Ｘ５がＮであり、Ｘ７がＮであり、および／またはＸ８がＧである、のうちの３つ以上を満たす、請求項９８に記載の単離された抗体。
【請求項１００】
次の条件：Ｘ１がＬであり、Ｘ３がＹであり、Ｘ５がＮであり、Ｘ７がＮであり、および／またはＸ８がＧである、のうちの４つ以上を満たす、請求項９９に記載の単離された抗体。
【請求項１０１】
Ｘ１がＬであり、Ｘ３がＹであり、Ｘ５がＮであり、Ｘ７がＮであり、Ｘ８がＧである、請求項１００に記載の単離された抗体。
【請求項１０２】
Ｐ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７５７、Ｐ１−０６８７５９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６３、Ｐ１−０６８７６５、Ｐ１−０６８７６７、Ｐ１−０６８７６９、Ｐ１−０６８７７１、Ｐ１−０６８７７３、Ｐ１−０６８７７５、Ｐ１−０６９０５９、Ｐ１−０６９０６１、Ｐ１−０６９０６３、Ｐ１−０６９０６５、Ｐ１−０６９０６７、Ｐ１−０６９０６９、Ｐ１−０６９０７１、Ｐ１−０６９０７３、Ｐ１−０６９０７５、Ｐ１−０６９０７７、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、またはＰ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、またはＰ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ、またはＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３を含む、請求項７７から１０１のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１０３】
Ｐ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７５７、Ｐ１−０６８７５９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６３、Ｐ１−０６８７６５、Ｐ１−０６８７６７、Ｐ１−０６８７６９、Ｐ１−０６８７７１、Ｐ１−０６８７７３、Ｐ１−０６８７７５、Ｐ１−０６９０５９、Ｐ１−０６９０６１、Ｐ１−０６９０６３、Ｐ１−０６９０６５、Ｐ１−０６９０６７、Ｐ１−０６９０６９、Ｐ１−０６９０７１、Ｐ１−０６９０７３、Ｐ１−０６９０７５、Ｐ１−０６９０７７、Ｐ１−０６９０７７、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ，Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、またはＰ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥまたはＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む、請求項１０２に記載の単離された抗体。
【請求項１０４】
Ｐ１−０６１０２９のＶＬのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む、請求項７７から１０３のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１０５】
Ｐ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７５７、Ｐ１−０６８７５９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６３、Ｐ１−０６８７６５、Ｐ１−０６８７６７、Ｐ１−０６８７６９、Ｐ１−０６８７７１、Ｐ１−０６８７７３、Ｐ１−０６８７７５、Ｐ１−０６９０５９、Ｐ１−０６９０６１、Ｐ１−０６９０６３、Ｐ１−０６９０６５、Ｐ１−０６９０６７、Ｐ１−０６９０６９、Ｐ１−０６９０７１、Ｐ１−０６９０７３、Ｐ１−０６９０７５、Ｐ１−０６９０７７、Ｐ１−０６９０７７、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、またはＰ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ、またはＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％もしくは９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨを含むか；あるいは
１、２、３、４もしくは５のアミノ酸置換によって、１、２、３、４もしくは５の保存的アミノ酸置換によって、またはＫ１６Ｒ置換とＴ８４Ａ置換の一方もしくは両方によって修飾された、Ｐ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７５７、Ｐ１−０６８７５９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６３、Ｐ１−０６８７６５、Ｐ１−０６８７６７、Ｐ１−０６８７６９、Ｐ１−０６８７７１、Ｐ１−０６８７７３、Ｐ１−０６８７７５、Ｐ１−０６９０５９、Ｐ１−０６９０６１、Ｐ１−０６９０６３、Ｐ１−０６９０６５、Ｐ１−０６９０６７、Ｐ１−０６９０６９、Ｐ１−０６９０７１、Ｐ１−０６９０７３、Ｐ１−０６９０７５、Ｐ１−０６９０７７、Ｐ１−０６９０７７、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、またはＰ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ、またはＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＶＨを含む、請求項１から６３および７２から１０４のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１０６】
Ｐ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７５７、Ｐ１−０６８７５９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６３、Ｐ１−０６８７６５、Ｐ１−０６８７６７、Ｐ１−０６８７６９、Ｐ１−０６８７７１、Ｐ１−０６８７７３、Ｐ１−０６８７７５、Ｐ１−０６９０５９、Ｐ１−０６９０６１、Ｐ１−０６９０６３、Ｐ１−０６９０６５、Ｐ１−０６９０６７、Ｐ１−０６９０６９、Ｐ１−０６９０７１、Ｐ１−０６９０７３、Ｐ１−０６９０７５、Ｐ１−０６９０７７、Ｐ１−０６９０７７、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、またはＰ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、またはＰ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ、またはＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨを含むか；あるいは
Ｋ１６Ｒ置換とＴ８４Ａ置換の一方もしくは両方によって修飾された、Ｐ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７５７、Ｐ１−０６８７５９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６３、Ｐ１−０６８７６５、Ｐ１−０６８７６７、Ｐ１−０６８７６９、Ｐ１−０６８７７１、Ｐ１−０６８７７３、Ｐ１−０６８７７５、Ｐ１−０６９０５９、Ｐ１−０６９０６１、Ｐ１−０６９０６３、Ｐ１−０６９０６５、Ｐ１−０６９０６７、Ｐ１−０６９０６９、Ｐ１−０６９０７１、Ｐ１−０６９０７３、Ｐ１−０６９０７５、Ｐ１−０６９０７７、Ｐ１−０６９０７７、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、またはＰ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥまたはＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＶＨを含む、請求項１から６３および７２から１０５のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１０７】
Ｐ１−０６１０２９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む、請求項１から１０６のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１０８】
Ｐ１−０６１０２９のＶＬを含む、請求項１０７に記載の単離された抗体。
【請求項１０９】
Ｐ１−０６１０１５のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／もしくはＣＤＲ３を含む請求項１から６３および７２から７６のいずれか一項に記載の単離された抗体、またはＰ１−０６１０１５と比較してＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／もしくはＣＤＲ３に１から６もしくは１から８のアミノ酸の違いを含むその変異体であって、最大で１、２もしくは３のアミノ酸変異がいずれか１つのＣＤＲに存在する変異体。
【請求項１１０】
Ｐ１−０６１０１５のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む請求項１０９に記載の単離された抗体、またはＰ１−０６１０１５と比較してＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／もしくはＣＤＲ３に１から６のアミノ酸の違いを含むその変異体であって、最大で１、２もしくは３のアミノ酸変異がいずれか１つのＣＤＲに存在する変異体。
【請求項１１１】
アミノ酸変異がグルタミン酸残基（Ｅ）、アスパラギン酸残基（Ｄ）またはヒスチジン残基（Ｈ）への置換である、請求項１０８または１０９に記載の単離された抗体。
【請求項１１２】
− Ｘ１がＥ、Ｄ、ＨもしくはＳであり；Ｘ２がＨもしくはＹであり；Ｘ３がＤもしくはＡであるＧＦＴＦＸ１Ｘ２Ｘ３ＭＨ（配列番号４６６）を含むＣＤＲ１；
− Ｘ４がＥ、ＨもしくはＩであり；Ｘ５がＤもしくはＩであり；Ｘ６がＤもしくはＹであり；Ｘ７がＤもしくはＮであり；Ｘ８がＤ、ＨもしくはＫであり；Ｘ９がＤ、ＨもしくはＹであり；Ｘ１０がＥもしくはＹであるＸ４Ｘ５ＷＸ６ＤＧＳＸ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０ＡＤＳＶＫＧ（配列番号４６７）を含むＣＤＲ２；および／または
− Ｘ１１がＥもしくはＳであり；Ｘ１２がＥもしくはＧであり；Ｘ１３がＤ、ＥもしくはＳであり；Ｘ１４がＤもしくはＳであり；Ｘ１５がＤ、ＥもしくはＹであるＤＸ１１Ｘ１２ＦＹＸ１３Ｘ１４ＹＹＤＦＸ１５（配列番号４６８）を含むＣＤＲ３
を含む、請求項１０８から１１１のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１１３】
− Ｘ１がＥ、Ｄ、ＨまたはＳであり；Ｘ２がＨまたはＹであり；Ｘ３がＤまたはＡであるＧＦＴＦＸ１Ｘ２Ｘ３ＭＨ（配列番号４６６）を含むＣＤＲ１；
− Ｘ４がＥ、ＨまたはＩであり；Ｘ５がＤまたはＩであり；Ｘ６がＤまたはＹであり；Ｘ７がＤまたはＮであり；Ｘ８がＤ、ＨまたはＫであり；Ｘ９がＤ、ＨまたはＹであり；Ｘ１０がＥまたはＹであるＸ４Ｘ５ＷＸ６ＤＧＳＸ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０ＡＤＳＶＫＧ（配列番号４６７）を含むＣＤＲ２；および
− Ｘ１１がＥまたはＳであり；Ｘ１２がＥまたはＧであり；Ｘ１３がＤ、ＥまたはＳであり；Ｘ１４がＤまたはＳであり；Ｘ１５がＤ、ＥまたはＹであるＤＸ１１Ｘ１２ＦＹＸ１３Ｘ１４ＹＹＤＦＸ１５（配列番号４６８）を含むＣＤＲ３
を含む、請求項１０８から１１２のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１１４】
Ｐ１−０６１０１５、Ｐ１−０６８７３６、Ｐ１−０６８７３８、Ｐ１−０６８７４０、Ｐ１−０６８７４２、Ｐ１−０６８７４４、Ｐ１−０６８７４８、Ｐ１−０６８７５０、Ｐ１−０６８７５２またはＰ１−０６８７５４のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３を含む、請求項９８から１０２のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１１５】
Ｐ１−０６１０１５、Ｐ１−０６８７３６、Ｐ１−０６８７３８、Ｐ１−０６８７４０、Ｐ１−０６８７４２、Ｐ１−０６８７４４、Ｐ１−０６８７４８、Ｐ１−０６８７５０、Ｐ１−０６８７５２またはＰ１−０６８７５４のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む、請求項１１４に記載の単離された抗体。
【請求項１１６】
Ｐ１−０６１０１５のＶＬのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む、請求項９８から１１５のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１１７】
Ｐ１−０６１０１５、Ｐ１−０６８７３６、Ｐ１−０６８７３８、Ｐ１−０６８７４０、Ｐ１−０６８７４２、Ｐ１−０６８７４４、Ｐ１−０６８７４８、Ｐ１−０６８７５０、Ｐ１−０６８７５２もしくはＰ１−０６８７５４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％もしくは９９％同一のアミノ酸配列を含むか；あるいは
１、２、３、４もしくは５のアミノ酸置換によって修飾されたか、または１、２、３、４もしくは５の保存的アミノ酸置換によって修飾された、Ｐ１−０６１０１５、Ｐ１−０６８７３６、Ｐ１−０６８７３８、Ｐ１−０６８７４０、Ｐ１−０６８７４２、Ｐ１−０６８７４４、Ｐ１−０６８７４８、Ｐ１−０６８７５０、Ｐ１−０６８７５２もしくはＰ１−０６８７５４のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨを含む、請求項９８から１１６のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１１８】
Ｐ１−０６１０１５、Ｐ１−０６８７３６、Ｐ１−０６８７３８、Ｐ１−０６８７４０、Ｐ１−０６８７４２、Ｐ１−０６８７４４、Ｐ１−０６８７４８、Ｐ１−０６８７５０、Ｐ１−０６８７５２もしくはＰ１−０６８７５４のアミノ酸配列を含むか；あるいは
１、２、３、４もしくは５のアミノ酸置換によって修飾されたか、または１、２、３、４もしくは５の保存的アミノ酸置換によって修飾された、Ｐ１−０６１０１５、Ｐ１−０６８７３６、Ｐ１−０６８７３８、Ｐ１−０６８７４０、Ｐ１−０６８７４２、Ｐ１−０６８７４４、Ｐ１−０６８７４８、Ｐ１−０６８７５０、Ｐ１−０６８７５２もしくはＰ１−０６８７５４のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨを含む、請求項９８から１１７のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１１９】
Ｐ１−０６１０１５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む、請求項９８から１１８のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１２０】
Ｐ１−０６１０１５のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、請求項１１９に記載の単離された抗体。
【請求項１２１】
ヒスチジンリッチβシート伸長部などの、ｈＶＩＳＴＡのヒスチジンリッチ領域またはその付近で結合する、請求項１から１２０のいずれか一項に記載の単離された単離抗体（ｉｓｏｌａｔｅｄ ｉｓｏｌａｔｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ）。
【請求項１２２】
ｐＨ６．０−６．５を有する条件下で、ヒスチジンリッチβシート伸長部などの、ｈＶＩＳＴＡのヒスチジンリッチ領域またはその付近で結合する、請求項１２１に記載の単離された単離抗体。
【請求項１２３】
例えば実施例１５に記載の競合バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）エピトープビニングアッセイによって決定して、ｈＶＩＳＴＡへの結合についてここに記載の１または複数の抗体、例えば、Ｐ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７５７、Ｐ１−０６８７５９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６３、Ｐ１−０６８７６５、Ｐ１−０６８７６７、Ｐ１−０６８７６９、Ｐ１−０６８７７１、Ｐ１−０６８７７３、Ｐ１−０６８７７５、Ｐ１−０６９０５９、Ｐ１−０６９０６１、Ｐ１−０６９０６３、Ｐ１−０６９０６５、Ｐ１−０６９０６７、Ｐ１−０６９０６９、Ｐ１−０６９０７１、Ｐ１−０６９０７３、Ｐ１−０６９０７５、Ｐ１−０６９０７７、Ｐ１−０６９０７７、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、またはＰ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥまたはＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥ、Ｐ１−０６１０１５、Ｐ１−０６８７３６、Ｐ１−０６８７３８、Ｐ１−０６８７４０、Ｐ１−０６８７４２、Ｐ１−０６８７４４、Ｐ１−０６８７４８、Ｐ１−０６８７５０、Ｐ１−０６８７５２またはＰ１−０６８７５４のＶＨおよびＶＬを含む抗体と競合または交差競合する、請求項１から１２２のいずれか一項に記載の単離された単離抗体。
【請求項１２４】
例えば実施例１５に記載の競合バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）エピトープビニングアッセイによって決定して、エピトープ群Ａにビニングする、請求項１から１２３のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１２５】
例えば実施例に記載の酵母変異分析によって決定して、次のアミノ酸残基：Ｔ３５、Ｙ３７、Ｋ３８、Ｔ３９、Ｙ４１、Ｒ５４、Ｔ６１、Ｆ６２、Ｑ６３、Ｌ６５、Ｈ６６、Ｌ６７、Ｈ６８、Ｈ６９、Ｆ９７、Ｌ１１５、Ｖ１１７、Ｉ１１９、Ｈ１２１、Ｈ１２２、Ｓ１２４、Ｅ１２５、Ｒ１２７のうちの１または複数が突然変異しているという点で修飾されているｈＶＩＳＴＡに有意には結合しない、請求項１から１２４のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１２６】
配列番号１または２からなるｈＶＩＳＴＡには結合するが、次のアミノ酸残基：Ｔ３５、Ｙ３７、Ｋ３８、Ｔ３９、Ｙ４１、Ｒ５４、Ｔ６１、Ｆ６２、Ｑ６３、Ｌ６５、Ｈ６６、Ｌ６７、Ｈ６８、Ｈ６９、Ｆ９７、Ｌ１１５、Ｖ１１７、Ｉ１１９、Ｈ１２１、Ｈ１２２、Ｓ１２４、Ｅ１２５、Ｒ１２７のうちの１または複数のアミノ酸残基が突然変異しているという点で修飾されているｈＶＩＳＴＡに有意には結合しない、単離された抗体。
【請求項１２７】
次のアミノ酸残基：Ｔ３５、Ｙ３７、Ｋ３８、Ｔ３９、Ｙ４１、Ｒ５４、Ｔ６１、Ｆ６２、Ｑ６３、Ｌ６５、Ｈ６６、Ｌ６７、Ｈ６８、Ｈ６９、Ｆ９７、Ｌ１１５、Ｖ１１７、Ｉ１１９、Ｈ１２１、Ｈ１２２、Ｓ１２４、Ｅ１２５、Ｒ１２７のうちの２、３、４、または５以上のアミノ酸残基が突然変異しているという点で修飾されているｈＶＩＳＴＡに有意には結合しない、請求項１から１２６のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１２８】
次の残基：Ｈ６８、Ｆ９７、Ｌ１１５、Ｖ１１７、Ｉ１１９、Ｈ１２１、Ｈ１２２、Ｓ１２４、Ｅ１２５、Ｒ１２７の残基のうちの１または複数が表１５に示した対応する残基のうちの１つに突然変異しているという点で修飾されているｈＶＩＳＴＡに結合しない、請求項１２５から１２７のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１２９】
（例えば実施例に記載のアッセイの１つによって測定して）酸性条件下、例えばｐＨ６．５でｈＶＩＳＴＡに結合する単離された抗体（Ａｂ）であって、ｈＶＩＳＴＡと（ａ）Ｔ細胞および／または（ｂ）ＰＳＧＬ−１との間の相互作用を阻害し、かつ、Ｐ１−０６１０１５、Ｐ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７６１またはＰ１−０６８７６７等のここに記載の抗体の、１つ以上（例えば少なくとも１−３、１−５、１−１０、５−１０、５−１５個、または全て）のエネルギー的に重要な接触残基、例えば、実施例１５に記載の酵母表面ディスプレイおよびＮＧＳアッセイなどを用いて決定され、付番は成熟ｈＶＩＳＴＡのものである次のエネルギー的に重要な接触残基の群：（ｉ）Ｖ３４、Ｔ３５、Ｙ３７、Ｋ３８、Ｔ３９、Ｙ４１、Ｓ５２、Ｒ５４、Ｔ６１、Ｆ６２、Ｑ６３、Ｌ６５、Ｈ６６、Ｌ６７、Ｈ６８、Ｈ６９、Ｆ９７、Ｌ１１５、Ｖ１１７、Ｉ１１９、Ｈ１２１、Ｈ１２２、Ｓ１２４、Ｅ１２５、Ｒ１２７；（ｉｉ）Ｖ３４、Ｔ３５、Ｙ３７、Ｔ３９、Ｙ４１、Ｓ５２、Ｒ５４、Ｆ６２、Ｌ６５、Ｈ６６、Ｈ６８、Ｌ１１５、Ｖ１１７、Ｉ１１９、Ｒ１２０、Ｈ１２、Ｈ１２２、Ｓ１２４、Ｅ１２５；または（ｉｉｉ）Ｙ３７、Ｔ３９、Ｒ５４、Ｆ６２、Ｈ６６、Ｌ１１５もしくはＶ１１７のうちの１つの群から選択される１または複数のアミノ酸を介してｈＶＩＳＴＡに接触する、単離された抗体。
【請求項１３０】
（例えば実施例に記載のアッセイの１つによって測定して）酸性条件下、例えばｐＨ６．５でｈＶＩＳＴＡに結合する単離されたＡｂであって、ｈＶＩＳＴＡと（ａ）Ｔ細胞および／または（ｂ）ＰＳＧＬ−１との間の相互作用を阻害し、かつ、例えば実施例１５に記載の酵母表面ディスプレイおよびＮＧＳアッセイを用いて決定され、付番は成熟ｈＶＩＳＴＡのものである１つ以上（例えば少なくとも１−３、１−５、１−１０、５−１０、５−１５個、または全て）のエネルギー的に重要な接触残基Ｙ３７、Ｔ３９、Ｒ５４、Ｆ６２、Ｈ６６、Ｖ１１７、Ｉ１１９またはＳ１２４を介してｈＶＩＳＴＡに接触する、単離されたＡｂ。
【請求項１３１】
（例えば実施例に記載のアッセイの１つによって測定して）酸性条件下、例えばｐＨ６．５でｈＶＩＳＴＡに結合する単離されたＡｂであって、ｈＶＩＳＴＡと（ａ）Ｔ細胞および／または（ｂ）ＰＳＧＬ−１との間の相互作用を阻害し、かつ、Ｐ１−０６１０１５、Ｐ１−０６１０２９もしくはＰ１−０６８７６１またはここに記載の他の抗体の、例えば実施例１５に記載の酵母表面ディスプレイおよびＮＧＳアッセイを用いて決定され、付番は成熟ｈＶＩＳＴＡのものである１つ以上（例えば少なくとも１−３、１−５、１−１０、５−１０、５−１５個、または全て）のエネルギー的に重要な接触残基を介してｈＶＩＳＴＡに接触する、単離されたＡｂ。
【請求項１３２】
ｈＶＩＳＴＡのＦＧループに結合する、請求項１から１３１のいずれか一項に記載の単離されたＡｂ。
【請求項１３３】
例えば実施例に記載されているように、例えば結晶学によって決定される、ｈＶＩＳＴＡのヒスチジンリッチなβシート伸長部に結合する、請求項１から１３２のいずれか一項に記載の単離されたＡｂ。
【請求項１３４】
例えば実施例に記載されているように、例えば結晶学によって決定される、成熟ｈＶＩＳＴＡのＨ１２１、Ｈ１２２およびＨ１２３（ヒスチジン三連構造）に、例えば水素結合を介して接触する（例えば４．０オームストロング（Å）以下の距離）、請求項１から１３３のいずれか一項に記載の単離されたＡｂ。
【請求項１３５】
ＶＨ ＣＤＲ１およびＶＨ ＣＤＲ３を介してｈＶＩＳＴＡに接触し、例えばVH ＣＤＲ２および／またはＶＬ ＣＤＲを介しては有意には接触しない、請求項１から１３４のいずれか一項に記載の単離されたＡｂ。
【請求項１３６】
請求項１から１３５のいずれか一項に記載の単離されたＡｂであって、そのアミノ酸残基１１０および１１２が、それぞれｈＶＩＳＴＡのＨ１２１およびＨ１２２と水素結合を形成し、場合によって、そのアミノ酸残基がｈＶＩＳＴＡのＨ１２３と水素結合を形成する、単離されたＡｂ。
【請求項１３７】
ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３にある、少なくとも１つまたは複数のグルタミン酸、アスパラギン酸またはヒスチジン残基を介してｈＶＩＳＴＡに接触する、請求項１から１３６のいずれか一項に記載の単離されたＡｂ。
【請求項１３８】
（例えば実施例に記載のアッセイの１つによって測定して）中性または生理的ｐＨでｈＶＩＳＴＡに有意には結合しない、請求項１から１３７のいずれか一項に記載の単離されたＡｂ。
【請求項１３９】
（例えば実施例に記載のアッセイの１つによって測定して）酸性条件下、例えばｐＨ６．５で、中性または生理的ｐＨでのｈＶＩＳＴＡへの結合のＫＤおよび／またはｋｏｆｆの１０分の１以下、１００分の１以下または１０００分の１以下のＫＤ（またはｋｏｆｆ）でｈＶＩＳＴＡに結合する、請求項１から１３８のいずれか一項に記載の単離されたＡｂ。
【請求項１４０】
（例えば実施例に記載のアッセイの１つによって測定して）中性または生理的ｐＨでｈＶＩＳＴＡに有意には結合しない、請求項１から１３９のいずれか一項に記載の単離されたＡｂ。
【請求項１４１】
（例えば実施例に記載のアッセイの１つによって測定して）酸性条件下、例えばｐＨ６．５でｈＶＩＳＴＡに結合する単離された抗体（Ａｂ）であって、
・ ｈＶＩＳＴＡと（ａ）Ｔ細胞および／または（ｂ）ＰＳＧＬ−１との間の相互作用を阻害する（例えば、配列番号１を有するｈＶＩＳＴＡのＨ１５３およびＨ１５４とＰＳＧＬ−１チロシンＹ４６およびＹ４８との間の相互作用を阻害する）；
・ 例えば、Ｔ細胞増殖を強化すること；Ｔ細胞からのＩＦＮ−γ産生を強化すること；および／またはＴ細胞受容体媒介のＮＦ−κＢシグナル伝達を刺激することによって、Ｔ細胞活性化を強化する；
・ 例えば実施例１５に記載の酵母表面ディスプレイおよびＮＧＳアッセイを使用して決定され、付番は成熟ｈＶＩＳＴＡのものである１つ以上（例えば、少なくとも１−３、１−５、１−１０、５−１０、５−１５個、または全て）のエネルギー的に重要な接触残基Ｙ３７、Ｔ３９、Ｒ５４、Ｆ６２、Ｈ６６、Ｖ１１７、Ｉ１１９またはＳ１２４を介してｈＶＩＳＴＡに接触する；
・ 例えば実施例に記載されているように、例えば結晶学によって決定される、ｈＶＩＳＴＡのヒスチジンリッチなβシート伸長部に結合する；
・ 例えば実施例に記載されているように、例えば結晶学によって決定される、成熟ｈＶＩＳＴＡのＨ１２１、Ｈ１２２および／またはＨ１２３に、例えば水素結合を介して接触する（４．０オングストローム（Å）以下の距離）；
・ 配列番号１を有するｈＶＩＳＴＡの領域１：５７ＬＧＰＶＤＫＧＨＤＶＴＦ６８；領域２：８６ＲＲＰＩＲＮＬＴＦＱＤＬ９７；および領域３：１４８ＶＶＥＩＲＨＨＨＳＥＨＲＶＨＧＡＭＥ１６５へ結合し、場合によって前記結合が、実施例２１に記載されるようにＭＳ−ＨＤＸにより決定して、領域２に対して最も強い；
・ ここに記載されている１または複数の抗体、例えばＰ１−０６１０１５、Ｐ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６７およびＶＩＳＴＡ．４と、ｈＶＩＳＴＡへの結合について競合する（双方向競合）；
・ ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３にある、少なくとも１つまたはそれ以上のグルタミン酸、アスパラギン酸またはヒスチジン残基を介してｈＶＩＳＴＡに接触する；かつ／あるいは
・ 例えば実施例に記載されているように測定して、少なくとも１００、２００、３００、４００、５００、６００または７００時間の平均滞留時間（ＭＲＴ）をもたらす、低い標的介在性薬物動態を有する
単離された抗体（Ａｂ）。
【請求項１４２】
（例えば実施例に記載のアッセイの１つによって測定して）酸性条件下、例えばｐＨ６．５で、中性または生理的ｐＨでのｈＶＩＳＴＡへの結合のＫＤまたはｋｏｆｆの１０分の１以下、１００分の１以下または１０００分の１以下のＫＤ（および／またはｋｏｆｆ）でｈＶＩＳＴＡに結合する単離された抗体（Ａｂ）であって、
・ ｈＶＩＳＴＡと（ａ）Ｔ細胞および／または（ｂ）ＰＳＧＬ−１との間の相互作用を阻害する（例えば、配列番号１を有するｈＶＩＳＴＡのＨ１５３およびＨ１５４とＰＳＧＬ−１チロシンＹ４６およびＹ４８との間の相互作用を阻害する）；
・ 例えば、Ｔ細胞増殖を強化すること；Ｔ細胞からのＩＦＮ−γ産生を強化すること；および／またはＴ細胞受容体媒介のＮＦ−κＢシグナル伝達を刺激することによって、Ｔ細胞活性化を強化する；
・ 例えば実施例１５に記載の酵母表面ディスプレイおよびＮＧＳアッセイを使用して決定され、付番は成熟ｈＶＩＳＴＡのものである１つ以上（例えば、少なくとも１−３、１−５、１−１０、５−１０、５−１５個、または全て）のエネルギー的に重要な接触残基Ｙ３７、Ｔ３９、Ｒ５４、Ｆ６２、Ｈ６６、Ｖ１１７、Ｉ１１９またはＳ１２４を介してｈＶＩＳＴＡに接触する；
・ 例えば実施例に記載されているように、例えば結晶学によって決定される、ｈＶＩＳＴＡのヒスチジンリッチなβシート伸長部に結合する；
・ 例えば実施例に記載されているように、例えば結晶学によって決定される、成熟ｈＶＩＳＴＡのＨ１２１、Ｈ１２２および／またはＨ１２３に、例えば水素結合を介して接触する（４．０オングストローム（Å）以下の距離）；
・ 配列番号１を有するｈＶＩＳＴＡの領域１：５７ＬＧＰＶＤＫＧＨＤＶＴＦ６８；領域２：８６ＲＲＰＩＲＮＬＴＦＱＤＬ９７；および領域３：１４８ＶＶＥＩＲＨＨＨＳＥＨＲＶＨＧＡＭＥ１６５へ結合し、場合によって前記結合が、実施例２１に記載されるようにＭＳ−ＨＤＸにより決定して、領域２に対して最も強い；
・ ここに記載されている１つ以上の抗体、例えばＰ１−０６１０１５、Ｐ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６７およびＶＩＳＴＡ．４と、ｈＶＩＳＴＡへの結合について競合する（双方向競合）；
・ ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３にある、少なくとも１つ以上のグルタミン酸、アスパラギン酸またはヒスチジン残基を介してｈＶＩＳＴＡに接触する；かつ／あるいは
・ 例えば実施例に記載されているように測定して、少なくとも１００、２００、３００、４００、５００、６００または７００時間の平均滞留時間（ＭＲＴ）をもたらす、低い標的介在性薬物動態を有する
単離された抗体（Ａｂ）。
【請求項１４３】
例えばｉｃＩＥＦによって測定して６．５から６．８の間の等電点（ｐＩ）を有する、請求項１から１４２のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１４４】
例えば実施例において決定されたように、例えば、抗体‘０２９、‘７６１または‘７６７（それぞれ、Ｐ１−０６１０１５、Ｐ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７６１またはＰ１−０６８７６７）の凝集と同様かそれより低い凝集度を示す、請求項１から１４３のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１４５】
例えば実施例において決定されたように、‘０２９、‘７６１または‘７６７の粘度と同様かそれより低い粘度を示す、請求項１から１４４のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１４６】
例えば実施例において決定されたように、‘０２９、‘７６１または‘７６７の流体力学的半径と同様かそれより少ない流体力学的半径を示す、請求項１から１４５のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１４７】
例えば実施例において決定されたように、‘０２９、‘７６１または‘７６７の融解温度（Ｔｍ１）と同様かそれより高い融解温度（Ｔｍ１）を示す、請求項１から１４６のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１４８】
例えば実施例において決定されたように、‘０２９、‘７６１または‘７６７の高分子量種の量と同様かそれより少ない高分子量種の量を示す、請求項１から１４７のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１４９】
ＩｇＧ抗体である、請求項１から１４８のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１５０】
ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４抗体（場合によってＳ２２８Ｐを有するＩｇＧ４）である、請求項１４９に記載の単離された抗体。
【請求項１５１】
例えば、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣを欠くなどのエフェクターレス抗体であり、かつ／あるいは１または複数のＦｃγＲ、例えばＦｃγＲＩＩＩに有意には結合しない、請求項１から１５０のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１５２】
定常領域が、抗体のエフェクター機能および／または１もしくは複数のＦｃγＲ、例えばＦｃγＲＩＩＩＩに結合する能力を、対応する野生型重鎖定常領域のものと比較して低下させる１−５つの突然変異を野生型重鎖定常領域内に含む、請求項１５１に記載の単離された抗体。
【請求項１５３】
抗体の定常領域がＩｇＧ１．３、ＩｇＧ１．１であるか、またはＰ２３８Ｋ置換を有するＩｇＧ１（例えばＩｇＧ１．Ｐ２３８Ｋ）である、請求項１から１５２のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１５４】
エフェクター機能を有し、かつ／または１もしくは複数のＦｃγＲ、例えばＦｃγＲＩＩＩに結合する、請求項１から１５０のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１５５】
アフコシル化されている（例えばアフコシル化ＩｇＧ１抗体）、請求項１５４に記載の単離された抗体。
【請求項１５６】
定常領域が、抗体のエフェクター機能および／または１もしくは複数のＦｃγＲ、例えばＦｃγＲＩＩＩＩに結合する能力を、対応する野生型定常領域と比較して向上させる１−５つの突然変異を含む、請求項１５４または１５５に記載の単離された抗体。
【請求項１５７】
完全長抗体であるか、または全長重鎖（Ｃ末端リジンの有無を問わず）と全長軽鎖とを含む抗体である、請求項１から１５６のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１５８】
抗体の抗原結合断片である、請求項１から１５６のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１５９】
多量体（例えば二量体または三量体）抗体である、請求項１から１５８のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１６０】
他の分子に（例えば共有結合的に）連結されている、請求項１から１５９のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１６１】
前記他の分子が標識である、請求項１６０に記載の単離された抗体。
【請求項１６２】
前記他の分子がペプチドである、請求項１６０または１６１に記載の単離された抗体
【請求項１６３】
抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）または活性化可能な抗体である、請求項１から１６２のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１６４】
請求項１から１６３のいずれか一項または２０６から２１２のいずれか一項に記載の抗体をコードする単離された核酸。
【請求項１６５】
請求項１から１６３のいずれか一項または２０６から２１２のいずれか一項に記載の抗体の重鎖および／または軽鎖をコードする単離された核酸。
【請求項１６６】
請求項１から１６３のいずれか一項または２０６から２１２のいずれか一項に記載の抗体の重鎖をコードする単離された核酸と、前記抗体の軽鎖をコードする核酸とを含む組成物。
【請求項１６７】
請求項１６４から１６６のいずれか一項に記載の単離された核酸を含む細胞。
【請求項１６８】
抗体が発現される条件で請求項１６７に記載の細胞を培養することを含む、抗体を調製する方法。
【請求項１６９】
請求項１から１６８のいずれか一項に記載の単離された抗体、核酸、組成物または細胞と薬学的に許容される担体とを含む組成物。
【請求項１７０】
第２の治療剤を含む、請求項１６９に記載の組成物。
【請求項１７１】
第２の治療剤が免疫刺激剤または化学療法剤である、請求項１７０に記載の組成物。
【請求項１７２】
第２の治療剤が、免疫抑制分子、例えばＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４およびＬＡＧ−３のアンタゴニストである免疫刺激剤であるか、または免疫刺激分子、例えばＧＩＴＲおよびＯＸ４０のアゴニストである、請求項１７１に記載の組成物。
【請求項１７３】
対象のがんを治療する方法であって、免疫応答を刺激し、かつ／またはＶＩＳＴＡアンタゴニスト抗体である請求項１から１７２のいずれか一項または２０６から２１２のいずれか一項に記載の組成物または単離された抗体の治療有効量を対象に投与することを含む、方法。
【請求項１７４】
対象が、ＶＩＳＴＡ陽性細胞を、例えばがんの腫瘍内に有する、請求項１７３に記載の方法。
【請求項１７５】
細胞がＶＩＳＴＡ陽性浸潤リンパ球（例えばＴ細胞）または骨髄単核細胞である、請求項１７４に記載の方法。
【請求項１７６】
対象が、腫瘍内のＶＩＳＴＡ陽性細胞の存在について最初に試験される、請求項１７３から１７５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７７】
第２の治療を投与することをさらに含む、請求項１７３から１７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７８】
前記第２の治療が化学療法、放射線療法、手術、または第２の薬剤の投与である、請求項１７７に記載の方法。
【請求項１７９】
前記第２の治療が第２の薬剤であり、前記第２の薬剤が免疫刺激剤または化学療法剤である、請求項１７８に記載の方法。
【請求項１８０】
前記第２の治療剤が、免疫抑制分子、例えばＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４およびＬＡＧ−３のアンタゴニストである免疫刺激剤であるか、または免疫刺激分子、例えばＧＩＴＲおよびＯＸ４０のアゴニストである、請求項１７９に記載の方法。
【請求項１８１】
対象の感染症（例えばウイルス性疾患）を治療する方法であって、免疫応答を刺激し、かつ／またはＶＩＳＴＡアンタゴニストである請求項１から１７２のいずれか一項または２０６から２１２のいずれか一項に記載の組成物または単離された抗体の治療有効量を対象に投与することを含む、方法。
【請求項１８２】
炎症、炎症状態、および自己免疫疾患、移植片対宿主疾患、または免疫応答を減少させることから利益を得る疾患を治療する方法であって、免疫応答、例えばＴ細胞活性化を阻害するか、またはＶＩＳＴＡアゴニストである請求項１から１７２のいずれか一項または２０６から２１２のいずれか一項に記載の組成物または単離された抗体の治療有効量を対象に投与することを含む、方法。
【請求項１８３】
ｐＨ６．５以下において、１０−７ Ｍ以下のＫＤでヒトＶＩＳＴＡ細胞外ドメイン（ｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤ）に結合する抗体（Ａｂ）を同定するための方法であって、１または複数の試験Ａｂを、ｐＨ６．５以下で、ｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤのＩｇＶドメインを含むかまたは配列番号２のアミノ酸２０−９５、２０−７０、３５−７０−１２７もしくは３５−１２７を含むｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤまたはその断片を含むポリペプチドと接触させることと、１０−７ Ｍ以下のＫＤで前記ポリペプチドに結合する１または複数の前記試験Ａｂを選択することとを含む、方法。
【請求項１８４】
ｐＨ６．５以下において、５ｘ１０−３ ｓｅｃ−１以下のＫｏｆｆでヒトＶＩＳＴＡ細胞外ドメイン（ｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤ）に結合する抗体（Ａｂ）を同定するための方法であって、１または複数の試験Ａｂを、ｐＨ６．５以下で、ｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤのＩｇＶドメインを含むかまたは配列番号２のアミノ酸２０−９５、２０−７０、３５−７０もしくは３５−１２７を含むｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤまたはその断片を含むポリペプチドと接触させることと、５ｘ１０−３ ｓｅｃ−１以下のＫｏｆｆで前記ポリペプチドに結合する１または複数の前記試験Ａｂを選択することとを含む、方法。
【請求項１８５】
ｐＨ６．５においてｐＨ７．０での場合と同様の親和性でヒトＶＩＳＴＡ細胞外ドメイン（ｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤ）に結合する抗体（Ａｂ）を同定するための方法であって、
ａ． １または複数の試験Ａｂを、ｐＨ６．５で、ｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤのＩｇＶドメインを含むかまたは配列番号２のアミノ酸２０−９５、２０−７０もしくは３５−７０もしくは３５−１２７を含むｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤまたはその断片を含むポリペプチドと接触させること；
ｂ． １または複数の前記試験Ａｂを、ｐＨ７．０で、（ａ）のポリペプチドと接触させること；および
ｃ． 試験ＡｂがｐＨ６．５とｐＨ７．０において１０−７ Ｍ以下のＫＤで前記ポリペプチドと結合していれば、それを選択すること
を含む、方法。
【請求項１８６】
ｐＨ６．５においてｐＨ７．０での場合よりも高い親和性でヒトＶＩＳＴＡ細胞外ドメイン（ｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤ）に結合する抗体（Ａｂ）を同定するための方法であって、
ａ． １または複数の試験Ａｂを、ｐＨ６．５で、ｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤのＩｇＶドメインを含むかまたは配列番号２のアミノ酸２０−９５、２０−７０、３５−７０もしくは３５−１２７を含むｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤまたはその断片を含むポリペプチドと接触させること；
ｂ． １または複数の前記試験Ａｂを、ｐＨ７．０で、（ａ）のポリペプチドと接触させること；および
ｃ． 試験ＡｂがｐＨ６．５においてｐＨ７．０での場合の２分の１以下のＫＤまたはｋｏｆｆでポリペプチドと結合していれば、それを選択すること
を含む、方法。
【請求項１８７】
がんの治療における使用のための、ヒトＶＩＳＴＡ細胞外ドメイン（ｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤ）に特異的に結合する抗体（Ａｂ）を同定するための方法であって、
ａ． 例えば請求項１８３から１８６の方法に従って、ｐＨ６．５以下でｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに特異的に結合するＡｂを同定すること；および
ｂ． 腫瘍モデルにおいて、ｐＨ６．５以下で、免疫応答を誘発もしくは強化するか、または腫瘍成長を阻害する（ａ）のＡｂを選択すること
を含む、方法。
【請求項１８８】
工程（ｂ）がＴ細胞活性を測定することを含む、請求項１８７に記載の方法。
【請求項１８９】
Ａｂの抗腫瘍効果を測定することをさらに含む、請求項１８７または１８８に記載の方法。
【請求項１９０】
ヒトＶＩＳＴＡ細胞外ドメイン（ｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤ）に結合する抗体（Ａｂ）の抗腫瘍効果を改善するための方法であって、
ａ． ｐＨ６．５以下で所望の値未満の親和性でｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合するＡｂを提供すること；
ｂ． Ａｂの重鎖または軽鎖の１‐５のアミノ酸残基を異なるアミノ酸残基で（例えばグルタミン酸、アスパラギン酸またはヒスチジン残基で）置換することであって、１‐５のアミノ酸残基がｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤとの接触残基、例えばアミノ酸残基２６、３０、３１、３２、１１０および１１２（表２４に示す；配列番号６７、５１または５５において付番）のうちの１または複数である、置換すること；
ｃ． ｐＨ６．５以下において、（ｂ）で得られたＡｂが、ｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに対して（ａ）のＡｂが有するよりも高い親和性を有するかどうかを判定すること；および
ｄ． ｐＨ６．５以下において１０−７ Ｍ以下のＫＤでｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合するＡｂを得るのに十分な数のラウンド分、工程（ａ）−（ｃ）を繰り返すこと
を含む、方法。
【請求項１９１】
ヒトＶＩＳＴＡ細胞外ドメイン（ｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤ）に結合する抗体（Ａｂ）の抗腫瘍効果を改善するための方法であって、
ａ． ｐＨ６．５以下で所望の値未満の親和性でｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合するＡｂを提供すること；
ｂ． （ａ）のＡｂの変異体のライブラリーを作製することであって、各変異体が、異なるアミノ酸残基で（例えばグルタミン酸、アスパラギン酸またはヒスチジン残基で）の前記Ａｂの重鎖または軽鎖の１‐５のアミノ酸残基の置換を含み、１‐５のアミノ酸残基がｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤとの接触残基、例えばアミノ酸残基２６、３０、３１、３２、１１０および１１２（表２４に示す；配列番号６７、５１または５５において付番）のうちの１または複数である、作製すること；
ｃ． ｐＨ６．５以下において１０−７ Ｍ以下のＫＤでｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合する（ｂ）の変異体のライブラリーのＡｂを選択すること；および
ｄ． 任意選択的に、腫瘍モデルにおける（ｃ）のＡｂの抗腫瘍効果を試験すること
を含む、方法。
【請求項１９２】
酸性条件下、例えばｐＨ６．５以下でヒトＶＩＳＴＡに結合する抗体の能力を強化することを含む、ヒトＶＩＳＴＡ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に結合する抗体の薬物動態を改善するための方法。
【請求項１９３】
ヒトＶＩＳＴＡに結合し、かつ、延長された半減期（良好な薬物動態特性）を有する抗体を選択するための方法であって、酸性条件下、例えばｐＨ６．５以下でヒトＶＩＳＴＡに結合する抗体を選択することを含む、方法。
【請求項１９４】
ヒトＶＩＳＴＡ（ｈＶＩＳＴＡ）に結合する抗体の効力を改善するための方法であって、酸性ｐＨでのｈＶＩＳＴＡへの抗体の結合を強化するために、抗体の１つ以上のＶＨ ＣＤＲにおけるアスパラギン酸、グルタミン酸および／またはヒスチジン残基の数を増加させることを含む、方法。
【請求項１９５】
ヒトＶＩＳＴＡ（ｈＶＩＳＴＡ）に結合し、ヒトの血液中での半減期が長く、かつ／または腫瘍環境下でＴ細胞を刺激する抗体を単離するための方法であって、酸性ｐＨでは結合するが、中性ｐＨでは結合しない抗体について、ｈＶＩＳＴＡに結合する抗体のライブラリーをスクリーニングすることを含む、方法。
【請求項１９６】
生理的ｐＨで結合する抗体についてカウンターセレクションを行うことを含む、請求項１８３から１９５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９７】
ＶＩＳＴＡアンタゴニストまたはＶＩＳＴＡアゴニストのいずれかである抗体を選択することをさらに含む、請求項１８３から１９６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９８】
ＶＩＳＴＡとＶＩＳＴＡ共受容体（例えばＰＳＧＬ−１）との間の相互作用および／またはＶＩＳＴＡとＴ細胞または骨髄単核細胞との間の相互作用を阻害する抗体を選択することを含む、請求項１８３から１９７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９９】
Ｐ１−０６８７６１またはＰ１−０６８７６７の１つまたは複数の特性を有する抗体を選択することをさらに含む、請求項１８３から１９８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２００】
ヒトＶＩＳＴＡ細胞外ドメイン（ｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤ）に結合する抗体（Ａｂ）の抗腫瘍効果を改善するための方法であって、
ａ． ｐＨ７．０ではｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合するが、ｐＨ６．５では有意には結合しないＡｂを提供すること；
ｂ． Ａｂの重鎖または軽鎖（例えばＣＤＲ）の１‐５のアミノ酸残基を異なるアミノ酸残基で置換することであって、例えば１‐５のアミノ酸残基がｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤとの接触残基、例えばアミノ酸残基２６、３０、３１、３２、１１０および１１２（表２４に示す；配列番号６７、５１または５５において付番）のうちの１または複数である、置換すること；
ｃ． （ｂ）で得られたＡｂがｐＨ６．５においてｐＨ７．０での場合よりも高いｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに対する親和性を有するかどうかを判定すること、および／または（ｂ）で得られたＡｂが、ｐＨ６．５において親抗体（（ａ）の抗体）と比較して同様または高い親和性を有し、ｐＨ７．０において（ａ）の抗体と比較して低い親和性を有するかどうかを判定すること；ならびに
ｄ． ｐＨ６．５以下において１０−７ Ｍ以下のＫＤでｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合し、かつ、ｐＨ７．０以上では１０−６ Ｍ以上のＫＤでｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合するＡｂを得るのに十分な数のラウンド分、工程（ａ）−（ｃ）を繰り返すこと
を含む、方法。
【請求項２０１】
試料を、請求項１から１６３のいずれか一項または２０６から２１２のいずれか一項に記載のＶＩＳＴＡ抗体と接触させることを含む、試料中のＶＩＳＴＡを検出する方法。
【請求項２０２】
対象におけるがんを治療する方法であって、ヒトＶＩＳＴＡ（ｈＶＩＳＴＡ）に結合し、ｈＶＩＳＴＡの活性（例えばＴ細胞の活性化）を阻害する単離された抗体と、ＰＤ１／ＰＤ−Ｌ１経路アンタゴニストとを対象に投与することを含み、例えば対象の腫瘍におけるＣＤ４＋およびＣＤ８＋ Ｔ細胞の数の増加をもたらす、方法。
【請求項２０３】
対象におけるがんを治療する方法であって、ヒトＶＩＳＴＡ（ｈＶＩＳＴＡ）に結合し、ｈＶＩＳＴＡの活性（例えばＴ細胞の活性化）を阻害する単離された抗体と、ＰＤ１／ＰＤ−Ｌ１経路アンタゴニストとを対象に投与することを含み、例えば対象の腫瘍における消耗Ｔ細胞、ならびに／またはＰＤ−１、ＬＡＧ３および／もしくはＴＩＭ−３を発現するＴ細胞の数の減少をもたらす、方法。
【請求項２０４】
対象におけるがんを治療する方法であって、ヒトＶＩＳＴＡ（ｈＶＩＳＴＡ）に結合し、ｈＶＩＳＴＡの活性（例えばＴ細胞の活性化）を阻害する単離された抗体と、ＰＤ１／ＰＤ−Ｌ１経路アンタゴニストとを対象に投与することを含み、例えば対象の腫瘍におけるＣＤ４＋およびＣＤ８＋ Ｔ細胞の数の増加、例えば対象の腫瘍における消耗Ｔ細胞、ならびに／またはＰＤ−１、ＬＡＧ３および／もしくはＴＩＭ−３を発現するＴ細胞の数の減少、ならびに／またはここに記載の他の特徴をもたらす、方法。
【請求項２０５】
ｈＶＩＳＴＡに結合する抗体が、請求項１から１６３のいずれか一項または２０６から２１２のいずれか一項に記載の抗体などの、ここに記載の抗体である、請求項２０２から２０４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０６】
抗体が、表２４に記載のｈＶＩＳＴＡとの１つ以上（例えば１−５、５−１０、１０−１５、１０−２０または１５−２０）の相互作用を含む、請求項１から２０５のいずれか一項に記載の抗体、組成物または方法。
【請求項２０７】
抗体が２６、３０、３１、１１０、１１１および１１２位のうちの１つ以上にグルタミン酸、アスパラギン酸、またはヒスチジン（例えば、表２４の結晶学的に同定された接触残基）を含み、ここで付番は配列番号６７、５１および５５のものに従っている、請求項１から２０６のいずれか一項に記載の抗体、組成物または方法。
【請求項２０８】
ｐＨ６．５でヒトＶＩＳＴＡ細胞外ドメインに結合し、場合によってｐＨ７．０では有意には結合しない単離された抗体であって、２６、３０、３１、１１０、１１１および１１２位のうちの１つ以上にグルタミン酸、アスパラギン酸またはヒスチジン（例えば、表２４の結晶学的に同定された接触残基）を含み、ここで付番は配列番号６７、５１および５５のものに従っている、単離された抗体。
【請求項２０９】
抗体が、Ｐ１−０６９０５９、Ｐ１−０６９０６１、Ｐ１−０６９０６３、Ｐ１−０６９０６５、Ｐ１−０６９０６７、Ｐ１−０６９０７１、Ｐ１−０６９０７３、Ｐ１−０６９０７５、Ｐ１−０６９０７７、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６７、Ｐ１−０６８７７３、Ｐ１−０６８７６５、Ｐ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７５７、Ｐ１−０６８７７１、Ｐ１−０６８７７５、Ｐ１−０６８７６９、Ｐ１−０６８７５９、Ｐ１−０６８７６３、Ｐ１−０６１０１５、Ｐ１−０６８７４８、Ｐ１−０６８７４４、Ｐ１−０６８７３６、Ｐ１−０６８７５２、Ｐ１−０６８７４０、Ｐ１−０６８７４２、Ｐ１−０６８７４６、Ｐ１−０６８７５０、Ｐ１−０６８７３８、Ｐ１−０６８７５４、Ｐ１−０６９２９３、Ｐ１−０６９２９８、Ｐ１−０６９３０２、Ｐ１−０６９３１２、Ｐ１−０６９３０９、Ｐ１−０６９３０７、Ｐ１−０７０８６４、Ｐ１−０７０８６６、Ｐ１−０７０８６８、Ｐ１−０７０８７０、Ｐ１−０７０８７２、Ｐ１−０７０８７４、Ｐ１−０７０８７６、Ｐ１−０７０８７８、Ｐ１−０７０８８０、Ｐ１−０７０８８２、Ｐ１−０７０８８４、Ｐ１−０７０８８６、Ｐ１−０７０８８８、Ｐ１−０７０８９０、Ｐ１−０７０８９２、Ｐ１−０７０８９４、Ｐ１−０７０８９６、Ｐ１−０７０８９８、Ｐ１−０７０９００、Ｐ１−０７０９０２、Ｐ１−０７０９０４、Ｐ１−０７０９０６、Ｐ１−０７０９０８、Ｐ１−０７０９１０、Ｐ１−０７０９１２、Ｐ１−０７０９１４、Ｐ１−０７０９１６、Ｐ１−０７０９１８、Ｐ１−０７０９２０、Ｐ１−０７０９２２、Ｐ１−０７０９２４、Ｐ１−０７０９２６、Ｐ１−０７０９２８、Ｐ１−０７０９３０、Ｐ１−０７０９３２のうちのいずれかの重鎖可変領域（すなわち、配列番号：１１、１５、１９、２３、２７、３１、３５、３９、４３、４７、５１、５５、５９、６３、６７、７１、７５、７９、８３、８７、９１、９５、９９、１０３、１０７、１１１、１１５、１１９、１２３、１２７、１３１、１３５、１３９、１４３、１４７、１５１、１５５、１５９、１８５、１８９、１９３、１９７、２０１、２０５、２０９、２１３、２１７、２２１、２２５、２２９、２３３、２３７、２４１、２４５、２４９、２５３、２５７、２６１、２６５、２６９、２７３、２７７、２８１、２８５、２８９、２９３、２９７、３０１、３０５、３０９、３１３、３１７、３２１）を含まないか、または国際公開第２０１８／１６９９９３号に開示されている任意の抗体の重鎖可変領域を含まない、請求項１から２０８のいずれか一項に記載の抗体、組成物または方法。
【請求項２１０】
抗体がｈＶＩＳＴＡ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）とＰＳＧＬ−１との間の相互作用を阻害する、請求項１から２０９のいずれか一項に記載の抗体、組成物または方法。
【請求項２１１】
抗体が、 ‘７６１および‘７６７などのここに記載の抗体とｈＶＩＳＴＡ ＥＣＤへの結合について競合し（例えばここに記載のＢＬＩを使用）、かつ／または‘７６１および‘７６７などのここに記載の抗体と同じアミノ酸残基を介してｈＶＩＳＴＡ ＥＣＤに結合する、請求項１から２１０のいずれか一項に記載の抗体、組成物または方法。
【請求項２１２】
抗体が、例えばここで決定されるように、Ｘ線結晶解析によって決定して、ヒスチジン三連構造（成熟ｈＶＩＳＴＡのＨ１２１、１２２および１２３）と相互作用する、請求項１から２１１のいずれか一項に記載の抗体、組成物または方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、酸性ｐＨでＶドメイン免疫グロブリン含有Ｔ細胞活性化抑制因子（ＶＩＳＴＡ）に特異的に結合する抗体と、がん治療におけるその使用に関する。
【発明の概要】
【０００２】
ＶドメインＩｇ含有Ｔ細胞活性化抑制因子（ＶＩＳＴＡ）は、骨髄単核細胞および他の白血球によって発現される免疫受容体のＢ７ファミリーの共抑制メンバーである。ただし、ＶＩＳＴＡが免疫応答を抑制するメカニズムはよくわかっていない。
【０００３】
本発明者らは、他の既知の免疫受容体とは異なり、ＶＩＳＴＡはその対抗受容体に結合し、酸性ｐＨで選択的に機能し、生理的ｐＨ（例えば７．３−７．４）ではほとんど活性がないことを発見した。したがって、ＶＩＳＴＡは、腫瘍床または炎症部位などの酸性微小環境で、血液中を循環している細胞または炎症を起こしていない非酸性組織に常在する細胞を攪乱させることなく、免疫応答を抑制し得る。さらに発明者らは、抗ＶＩＳＴＡ抗体はＶＩＳＴＡに、ＶＩＳＴＡ自体の酸性ｐＨ選択性を反映して、生理的ｐＨではほとんどまたは全く結合せず、酸性ｐＨで選択的に結合するように操作することができることを発見した。これらの酸性ｐＨ選択的抗体は、生理的ｐＨでＶＩＳＴＡに結合する抗体と比較して、がんなどの疾患の治療に望ましい特性を提供し得る。
【０００４】
本開示は、ヒトＶＩＳＴＡ（「ｈＶＩＳＴＡ」または「ｈｕＶＩＳＴＡ」）などのＶＩＳＴＡの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に酸性ｐＨ（例えば酸性条件）で特異的に結合する抗体に関する。本開示はまた、ｈＶＩＳＴＡなどのＶＩＳＴＡの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に酸性ｐＨで特異的に結合し、中性または生理的ｐＨではほとんどまたは全く結合しない抗体に関する。本発明者らは、ｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤアミノ酸配列には多くの保存されたヒスチジン残基と保存されていないヒスチジン残基が含まれていることと、ＶＩＳＴＡのＥＣＤ内のヒスチジン残基の頻度が他のＢ７ファミリーメンバーおよび他の免疫グロブリンスーパーファミリーメンバーと比較して非常に高いこととを本明細書で指摘した。（図１Ａおよび１Ｂを参照。）溶液中では、アミノ酸ヒスチジンは、約６．５のｐＫａを有し、これはつまり、ｐＨ６．５以下ではタンパク質内のヒスチジン残基がプロトン化されて正に帯電することが多く、一方、ｐＨ６．５より高いｐＨでは次第に非プロトン化され、中性の電荷になることを意味する。腫瘍の微小環境と炎症を起こした組織は酸性であることが多いため、これらの微小環境で見つかるＶＩＳＴＡタンパク質は、ヒスチジン残基において少なくとも部分的にプロトン化されている可能性がある。本発明者らは、本明細書で論じられるように、ヒスチジンプロトン化が、ＶＩＳＴＡのコンフォメーション、表面構造および／または電荷密度に影響を及ぼし、ひいては、受容体−リガンド相互作用と抗体結合両方のためのｐＨ特異的またはｐＨ選択的エピトープを生成する可能性があると仮定した。酸性ｐＨで結合するが中性または生理的ｐＨで結合しない抗体を用いてＶＩＳＴＡを標的にすると、循環している骨髄単球細胞およびリンパ系臓器に常在する骨髄単核細胞を介して標的介在性の薬物動態が妨げられ、腫瘍微小環境における抗体のＰＫ、受容体占有率および活性を向上させることができる。酸性ｐＨ選択的抗体はまた、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、相補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、およびペイロード（抗体−薬物コンジュゲート）の送達等の治療モダリティの場合、循環している標的細胞ではなく、腫瘍内の標的細胞に対するＶＩＳＴＡ抗体の特異性を向上させる可能性がある。
【０００５】
本出願が利益を主張する優先権を有する米国仮出願には、カラーで描かれた少なくとも１点の図面が含まれている。当該仮出願が後に一般に公開されるようになった場合、カラー図面のコピーは、請求および必要な料金の支払いにより、米国特許商標庁から入手可能である。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
【図１Ａ】図１Ａ−Ｃは、ＶＩＳＴＡの細胞外ドメインに非常に高い頻度のヒスチジン残基が含まれていること、これらのヒスチジン残基の多くが保存されていること、これらのヒスチジン残基の少なくともいくつかが受容体−リガンド結合に関与している可能性があることを示している。図１Ａは、免疫グロブリンドメイン含有タンパク質のグラフであり、各タンパク質の細胞外ドメインのアミノ酸残基数をｘ軸にプロットし、各タンパク質の細胞外ドメイン内のヒスチジン残基の頻度をｙ軸にプロットしたものである。各データポイントのサイズは、各タンパク質の細胞外ドメイン内のヒスチジン残基の総数に対応している。
【図１Ｂ】ヒト、カニクイザルおよびマウスＶＩＳＴＡの細胞外ドメインのアライメントされたアミノ酸配列を示す。シグナルペプチド（Ｓｉｇ）と膜貫通ドメイン（ＴＭＤ）の配列の位置がマークされている。３つの種全てで保存されたヒスチジン残基を太字で下線付きで示しており、ヒトとカニクイザルで保存されたヒスチジン残基は、太字のみで示している。
【図１Ｃ】ヒトＶＩＳＴＡ免疫グロブリンドメインの３次元構造のモデルを示す。ヒスチジン残基は、球状と棒状の図形で描かれている。
【図２Ａ】図２Ａ‐Ｂは、ＶＩＳＴＡの細胞外ドメインのヒスチジン残基が生理的ｐＨではなく酸性ｐＨに対する対抗受容体選択性を与えるモデルを示している。図２Ａは、ヒスチジン残基におけるピロールアンモニウム基（ＮＨ）のプロトン化の欠如と存在の間の平衡を示している。溶液中のヒスチジンのｐＫａは６．５であり、ヒスチジン残基がより高いｐＨよりもｐＨ６．５以下でプロトン化される可能性が高く、したがって、正に帯電していることを示している。
【図２Ｂ】図２Ｂは、ＶＩＳＴＡがＰ−セレクチン糖タンパク質リガンド１（ＰＳＧＬ−１）または他の対抗受容体およびリガンド（「ＶＩＳＴＡ−Ｒ」）と酸性ｐＨで選択的に結合するモデルを示す。したがって、生理的ｐＨではなく酸性ｐＨでＶＩＳＴＡの細胞外ドメインに結合する抗体が、ＶＩＳＴＡの活性を阻害または調節するために重要であり得る。
【図３】腫瘍浸潤性マクロファージ、樹状細胞、好中球、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞、ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、およびＢ細胞におけるＶＩＳＴＡ表面発現レベル（抗ＶＩＳＴＡ抗体染色の平均蛍光強度（ＭＦＩ））を示す。ＶＩＳＴＡは、多くの腫瘍浸潤白血球、特に骨髄細胞に発現している。腫瘍微小環境は酸性であることが多く、ＶＩＳＴＡが対抗受容体およびリガンドに結合することを可能にしている。
【図４Ａ】図４Ａ−Ｇは、ＶＩＳＴＡが酸性ｐＨで白血球およびＰＳＧＬ−１に選択的に結合し、中性ｐＨではほとんどまたは全く結合しないこと、およびこの結合が抗ＶＩＳＴＡ抗体によって遮断されることを示している。図４Ａの左側は、活性化されたヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞に結合する蛍光コンジュゲート（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｌｙ−ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ）組換えＶＩＳＴＡ多量体の代表的なヒストグラムを示す。濃い灰色から薄い灰色まで、塗りつぶされたヒストグラムは、ｐＨ７．０、６．５、６．４、６．３、６．１、および６．０での結合を示している。一部のヒストグラムは、対応するｐＨでラベル付けされている。ｐＨ６．０での非ＶＩＳＴＡコントロール多量体結合は、塗りつぶされていないヒストグラムとして表示されている。右側では、異なるｐＨでの２ドナーからの活性化ヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞に結合するＶＩＳＴＡ（丸）およびコントロール（三角形）多量体の平均ＭＦＩをグラフ化している。
【図４Ｂ】ｐＨ６．０およびｐＨ７．４における末梢血単核球（ＰＢＭＣ）への組換えＶＩＳＴＡ多量体結合の代表的なヒストグラムを示す。濃い灰色から薄い灰色まで、塗りつぶされたヒストグラムは、ｐＨ６．０でのＣＤ１９＋ Ｂ細胞、ＣＤ４＋ Ｔ細胞、ＣＤ８＋ Ｔ細胞、ＣＤ５６＋ ＮＫ細胞、およびＣＤ１４＋単球への結合を示している。塗りつぶされていない、実線の境界線と点線の境界線のヒストグラムは、ｐＨ７．４での全ＰＢＭＣリンパ球と単球への結合をそれぞれ示している。
【図４Ｃ】抗ＶＩＳＴＡ遮断抗体（四角形または非ＶＩＳＴＡ特異的アイソタイプが一致するコントロール抗体抗体（丸）の存在下で活性化されたヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞に結合する代表的な組換えＶＩＳＴＡ多量体を示す。抗体濃度は対数スケールでプロットされている。非線形回帰も表示されている。三角形は、組換えＶＩＳＴＡ多量体で染色されなかった活性化ヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞からのバックグラウンドシグナルを示す。
【図４Ｄ】組換えＶＩＳＴＡ多量体の、ヒトＰＳＧＬ−１を発現するようにトランスフェクトされたヘパラン硫酸欠乏チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（ｐＧＳＤ−６７７株、アメリカンタイプカルチャーコレクション）へのｐＨ６．０での結合の代表的な２次元フローサイトメトリープロットを示す。図４Ｃに示した抗ＶＩＳＴＡ遮断抗体の存在下および非存在下で多量体結合を行った。組換えＶＩＳＴＡ多量体によって染色されていないままの細胞は、コントロールとして表示されている。ＰＳＧＬ−１抗体染色をｙ軸にプロットし、ＶＩＳＴＡ多量体染色をｘ軸にプロットした。
【図４Ｅ】ｐＨ６．０およびｐＨ７．４でマウス脾細胞に結合する組換えマウスＶＩＳＴＡ−Ｆｃ融合タンパク質の代表的なヒストグラムを示す。濃い灰色から薄い灰色まで、塗りつぶされたヒストグラムは、ｐＨ６．０でのＣＤ８＋ Ｔ細胞、ＣＤ１１ｂ＋骨髄細胞およびＣＤ４＋ Ｔ細胞への結合を示している。塗りつぶされていないヒストグラムは、全脾細胞へのｐＨ７．４での結合を示している。
【図４Ｆ−Ｇ】図４Ｆと４Ｇは、ＶＩＳＴＡ多量体がそれぞれ単球、好中球に結合し、ｐＨ６．０ではｐＨ７．４より強く結合することを示している。
【図５Ａ−Ｂ】図５Ａ−Ｄは、ＶＩＳＴＡがＴ細胞抑制および細胞：細胞接着を酸性ｐＨで優先的に媒介することと、両方の効果が抗ＶＩＳＴＡ遮断抗体で逆転され得ることを示す。図５Ａは、ｐＨ６．０および７．０における、ｈＶＩＳＴＡまたはベクターコントロールを発現する２９３Ｔ細胞（ｙ軸上にプロット）と細胞表面ヘパラン硫酸を内因的に発現するＣＨＯ細胞（ｘ軸上）との間の代表的な細胞：細胞コンジュゲート形成を示す。図５Ｂは、抗ＶＩＳＴＡ遮断抗体、抗ＶＩＳＴＡ非遮断抗体、またはアイソタイプが一致する非ＶＩＳＴＡ特異的コントロール抗体の存在下で、同じ細胞間でｐＨ６．０で形成された細胞コンジュゲートの頻度のグラフである。
【図５Ｃ−Ｄ】図５Ｃは、ＶＩＳＴＡを発現する２９３Ｔ細胞および抗ヒトＴ細胞受容体アゴニスト抗体ＯＫＴ３（「人工抗原提示細胞」）との様々なｐＨでの共培養後に、ＮＦｋＢルシフェラーゼレポーターを発現するＪｕｒｋａｔ（ヒトＴ細胞株）細胞によって生成されたルシフェラーゼ活性の代表的なプロットを示す。抗ＶＩＳＴＡ遮断抗体（四角形）またはアイソタイプが一致する非ＶＩＳＴＡ特異的コントロール抗体（丸）を共培養細胞に加えた。図５Ｄでは、図５Ａに示したデータを、コントロールと比較した、抗ＶＩＳＴＡ抗体処理によるルシフェラーゼシグナルの増加倍率としてプロットされている（「効果サイズ」）。
【図６Ａ】図６Ａ−Ｇは、ＶＩＳＴＡが細胞内エンドソーム、特にＲａｂ１１＋リサイクリングエンドソーム内に見られ、エンドソーム輸送により細胞表面との間で再利用され得ることを示している。図６Ａは、ヒトＶＩＳＴＡを発現する２９３Ｔ細胞内のＶＩＳＴＡ、Ｒａｂ５（初期エンドソームマーカー）、Ｒａｂ７（後期エンドソームマーカー）、およびＲａｂ１１（リサイクリングエンドソームマーカー）の共局在を示す。
【図６Ｂ】ヒト単球内のＶＩＳＴＡとＲａｂ１１の共局在を示す。細胞内ＶＩＳＴＡは、Ｒａｂ１１＋リサイクリングエンドソームと共局在している。ＶＩＳＴＡ抗体と同じアイソタイプの非ＶＩＳＴＡ結合性コントロール抗体（「ｃＡｂ」）は、単球に検出可能に結合しない。
【図６Ｃ】ｐＨ７．４（黒）、６．７（濃い灰色）、６．０（薄い灰色）での組換えＶＩＳＴＡに対する３つの抗ＶＩＳＴＡ抗体の結合を示す。
【図６Ｄ】同じ抗ＶＩＳＴＡ抗体１（逆三角形）、２（丸）、３（四角）、またはカテプシンＢ感受性リンカーおよび細胞傷害性ペイロードを有する非ＶＩＳＴＡ特異的コントロール抗体（三角形）による死滅に対するＶＩＳＴＡ発現急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞株の感受性を示す。細胞生存性（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ ＬＵ）をｙ軸にプロットされ、抗体濃度はｘ軸にプロットされている。
【図６Ｅ】抗ＶＩＳＴＡ抗体３のｈＶＩＳＴＡ結合を、酸性ｐＨで損なわれた結合を示さない、操作された変異体（「ＶＩＳＴＡ ｍＡｂ ３ｃ」）のそれと比較している。
【図６Ｆ】抗ＶＩＳＴＡ抗体３（四角形）と３ｃ（菱形）の力価を比較した抗体薬物−コンジュゲートアッセイを示す。
【図６Ｇ】初期エンドソームおよびリサイクリングエンドソームを経由してＶＩＳＴＡが細胞表面との間で再利用されるエンドソーム輸送の模式図である。
【図７Ａ】図７Ａ−７Ｆは、酸性ｐＨ選択的な抗体を得るために、抗ＶＩＳＴＡ抗体変異体ライブラリーをどのように設計し、スクリーニングしたかを示す。図７Ａは、スクリーニング用の‘０２９ライブラリーを作製するために、抗ヒト抗体クローンＰ１−０６１０２９（略称‘０２９）のＶＨ ＣＤＲ ３中で行われたアミノ酸置換を示す。酸性ｐＨでのＶＩＳＴＡのヒスチジンリッチ領域への結合を潜在的に改善するために、ライブラリーは、負に帯電したアミノ酸であるアスパラギン酸塩およびグルタミン酸塩、ならびにｐＨ応答性ヒスチジンの置換を可能にした。Ｘ＝Ｈ、ＤまたはＥ。括弧の付いた配列は、傾向性の導入を避けるために合成から排除した。１−２個の変異を有するＰ１−０６１０２９ ＨＣＤＲ３の合計６４７個のユニークな配列を合成した。
【図７Ｂ】‘０２９ライブラリーを反復的にスクリーニングし酸性ｐＨ選択的抗体変異体を選択する手順を示す。Ｒは選択ラウンドを示す。
【図７Ｃ】９ラウンドの選択後の変異体プールを示す代表的な二次元フローサイトメトリーのプロットデータを示す。ＶＩＳＴＡ結合はｙ軸にプロットされ、変異体抗体の発現はｘ軸にプロットされている。様々な抗体濃度とｐＨでの結合データが示されている。
【図７Ｄ】ｐＨ６．０および７．４でのヒトＶＩＳＴＡへのＰ１−０６１０２９およびその子孫クローンの結合の図である。
【図７Ｅ】ｐＨ６．０でのヒトＶＩＳＴＡへのＰ１−０６１０２９およびその子孫クローンのオフ速度の図である。
【図７Ｆ】ｐＨ６．０およびｐＨ７．４でのヒトＶＩＳＴＡに対する抗体Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６７およびＰ１−０６１０２９のＳＰＲ結合データを示す。
【図８Ａ−Ｂ】図８Ａ−Ｆは、ＶＩＳＴＡ抗体Ｐ１−０６８７６１およびＰ１−０６８７６７の酸性ｐＨ選択的細胞結合、遮断、およびエフェクター活性を示す。図８Ａおよび図８Ｂは、ヒトＶＩＳＴＡを異所的に発現するＲａｊｉ細胞に結合した酸性ｐＨ選択的抗体Ｐ１−０６８７６１（図８Ａ）およびＰ１−０６８７６７（図８Ｂ）の平均蛍光強度を示す。細胞を、約ｐＨ６．０（丸；図８Ａの最も高い曲線）、６．１（四角形；３番目に高い曲線）、６．２（三角形；２番目に高い曲線）、６．４（逆三角形；ｐＨ６．１の曲線に近い４番目に高い曲線）、６．６（菱形；下から４番目の曲線）、７．０（丸；下から３番目の曲線）、７．２（四角形；下から２番目の曲線）、および８．１（塗りつぶされていない三角形；図８Ａの１番下の曲線）で染色した。結合は、蛍光コンジュゲート抗ヒトＩｇＧ二次抗体で検出された。
【図８Ｃ】様々なｐＨで３１２５ｎｇ／ｍＬで、ヒトＶＩＳＴＡを異所的に発現するＲａｊｉ細胞に結合するＰ１−０６８７６７（丸）およびアイソタイプが一致する非特異的コントロール抗体（三角形）を示す。Ｐ１−０６８７６７の結合の５０％が失われるｐＨである「ｐＨ５０」は、約６．６である。
【図８Ｄ】ヒト単球に結合している、アイソタイプが一致する非特異的コントロール抗体（ｐＨ７．０が塗りつぶされた円で、ｐＨ６．０が塗りつぶされていない円）、抗ＶＩＳＴＡ ｍＡｂ ２（「コントロール」、図６Ｃ参照、ｐＨ７．０が塗りつぶされた四角形で、ｐＨ６．０が塗りつぶされていない四角形）、Ｐ１−０６８７６１（ｐＨ７．０が塗りつぶされた三角形で、ｐＨ６．０が塗りつぶされていない三角形）およびＰ１−０６８７６７（ｐＨ７．０が塗りつぶされた逆三角形で、ｐＨ６．０が塗りつぶされていない逆三角形）の平均蛍光強度を示す。結合は、蛍光コンジュゲート抗ヒトＩｇＧ二次抗体により検出された。
【図８Ｅ】図８Ｅは、Ｐ１−０６１０２９（四角形）、Ｐ１−０６８７６１（三角形）およびＰ１−０６８７６７（逆三角形）による、組換えＶＩＳＴＡ多量体の活性化ヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞へのｐＨ６．０での結合の同等の遮断を示す一方、非ＶＩＳＴＡ特異的コントロール抗体（丸）はＶＩＳＴＡ結合を遮断しなかったことも示している。
【図８Ｆ】生理的ｐＨでの抗体依存性細胞細胞傷害性（ＡＤＣＣ）の媒介におけるＰ１−０６８７６１（三角形）とＰ１−０６８７６７（逆三角形）の力価の低下を示す。Ｐ１−０６１０２９（四角形）、非ＶＩＳＴＡ特異的ポジティブコントロール抗体（丸）および非ＶＩＳＴＡ特異的ネガティブコントロール抗体（菱形）も示されている。全標的細胞に対する標的細胞をパーセンテージとしてＮＫ細胞特異的溶解をｙ軸にプロットし、抗体濃度をｘ軸にプロットしている。非線形回帰も表示されている。
【図９】カニクイザルにおける酸性ｐＨ選択的抗ＶＩＳＴＡ抗体の強化された薬物動態（ＰＫ）を示す。この図は、ＶＩＳＴＡ抗体２（「コントロール」、丸、図６Ｃを参照）、ＶＩＳＴＡ抗体３（「酸性ｐＨ感受性」、四角形、図６Ｃを参照）、またはＰ１−０６８７６７（三角形）で処理されたカニクイザルにおける経時的な血清抗体濃度を示す。
【図１０Ａ】図１０Ａおよび図１０Ｂは、酸性ｐＨ選択的抗ＶＩＳＴＡ抗体‘７６１および‘７６７における突然変異体の結合効果を示す。図１０Ａは、ｐＨ７．４、ｐＨ６．７およびｐＨ６．０でのＰ１−０６８７６１復帰変異体の速度論的結合データと、Ｐ１−０６８７６１と比較したそれらの復帰突然変異の位置を示す。
【図１０Ｂ】ｐＨ７．４、ｐＨ６．７およびｐＨ６．０でのＰ１−０６８７６７復帰変異体の速度論的結合データと、Ｐ１−０６８７６７と比較したそれらの復帰突然変異の位置を示す。
【図１１Ａ】図１１Ａ−Ｃは、様々な抗ＶＩＳＴＡ抗体のエピトープビニングおよびマッピングを示す。図１１Ａは、Ｐ１−０６１０２９およびＶＩＳＴＡ抗体コントロールと比較したＰ１−０６８７６１およびＰ１−０６８７６７のＶＩＳＴＡエピトープ競合を示す。
【図１１Ｂ−Ｃ】非遮断ｈＶＩＳＴＡ抗体（ｍＡｂ１；図１１Ｃ）と比較した、表１４に列挙されている遮断ｈＶＩＳＴＡ抗体（図１１Ｂ）の全ての残基のエピトープの描写を示す。アミノ酸残基６６（Ｈ）および１６２（Ａ）は、分子の配向を示すために表示されている。ヒスチジン残基は灰色であり、エピトープ残基は黒色である。
【図１２Ａ−Ｃ】次の画像キャピラリー等電気泳動（ｉｃＩＥＦ）データを示す：図１２Ａ：Ｐ１−０６１０２９、図１２Ｂ：Ｐ１−０６８７６１、および図１２Ｃ：Ｐ１−０６８７６７。主な種の等電点（ｐＩメイン）とｐＩマーカーを表示している。
【図１３Ａ】図１３ＡおよびＢは、‘０２９および‘０１５子孫クローンの可変領域のアライメントを示している。図１３Ａは、‘０２９とその子孫クローンの可変領域のアミノ酸配列のアライメントを示す。
【図１３Ｂ】‘０１５とその子孫クローンの可変領域のアミノ酸配列のアライメントを示す。
【図１４】Ｐ１−０６８７６１のＶＨ配列のアライメントを、Ｋ１６ＲおよびＴ８４Ａ置換ありとなしで示す。二重下線付きの残基は、フレームワーク領域の位置１６および８４を示し、網掛け部分はＣＤＲを示す。
【図１５Ａ−Ｆ】図１５Ａ−Ｏ：野生型Ｃ５７ＢＬ６マウスにＭＣ３８腫瘍を移植し、非結合性のアイソタイプ一致コントロール抗体（黒の四角形）、マウスＶＩＳＴＡ遮断抗体ＶＩＳＴＡ．１０（上向きの三角形）、マウスＰＤ−１遮断抗体（四角形）、またはＶＩＳＴＡとＰＤ−１遮断抗体（下向きの三角形）との組み合わせで処理した。全ての抗体は、マウスＩｇＧ１−Ｄ２６５Ａ（Ｆｃ不活性）アイソタイプであった。（図１５Ａ−Ｄ参照）これらのデータは、３つの独立した実験からの代表的なものである。図１５Ａ−Ｄは、経時的な腫瘍体積を示す。グループあたりｎ＝１０。「ＴＦ」は腫瘍を拒絶したマウスを表す。図１５ＥおよびＦは、治療開始７日後の腫瘍内ＣＤ８＋ Ｔ細胞およびＣＤ４＋ Ｔ細胞の頻度を示す。グループあたりｎ＝５。ダネットの多重比較法を用いた一方向ＡＮＯＶＡ、Ｐ＝０．０００１。
【図１５Ｇ−Ｈ】図１５ＧおよびＨは、図１５Ａ−Ｄに示されている個々のマウスの結果を示す。
【図１５Ｉ】図１５Ｉ：ノックアウトマウスと野生型ＶＩＳＴＡ同腹仔にＭＣ３８腫瘍を移植し、非結合性のアイソタイプ一致コントロール抗体（上の２本の曲線（０／７ ＴＦおよび０／５ ＴＦ、丸と下向き三角形の印）またはマウスＰＤ−１遮断抗体（下の２本の曲線０／５ ＴＦと５／８ ＴＦ、四角形と下向き三角形の印）で処理した。腫瘍成長の中央値および試験の終了時に無腫瘍（ＴＦ）であったマウスの数対マウスの総数は、各曲線（例えば０／７ＴＦ）の隣に示されている。これらのデータは、２つの独立した実験からの代表的なものである。エラーバーは四分位範囲を表す。
【図１５Ｊ−Ｋ】図１５Ｊ−Ｋは、ＭＣ３８腫瘍が移植され、非結合性のアイソタイプ一致コントロール抗体（図１５Ｊ）、マウスＰＤ−１遮断抗体（図１５Ｋ）で処理されたヒトＶＩＳＴＡノックイン（ＫＩ）マウスの腫瘍体積を示す。
【図１５Ｌ−Ｍ】図１５Ｌ−Ｍは、ＭＣ３８腫瘍が移植され、マウスＰＤ−１遮断抗体と非ｐＨ選択的ヒトＶＩＳＴＡ遮断抗体Ｐ１−０６１０２９との組み合わせ（図１５Ｌ）またはマウスＰＤ−１遮断抗体と酸性ｐＨ選択的ヒトＶＩＳＴＡ遮断抗体Ｐ１−０６８７６７との組み合わせ（図１５Ｍ）で処理されたヒトＶＩＳＴＡノックイン（ＫＩ）マウスの腫瘍体積を示す。全ての抗体は、マウスＩｇＧ１−Ｄ２６５Ａアイソタイプであった。経時的な腫瘍体積が示されている。グループあたりｎ＝５−８。これらのデータは、１つの独立した実験からの代表的なものである。
【図１５Ｎ−Ｏ】図１５Ｎは、５ｍｇ／ｋｇのＰ１−０６１０２９（ＷＴ、下向き三角形；ＫＩ、四角形）またはＰ１−０６８７６７（ＷＴ、上向き三角形；ＫＩ、菱形）の静脈内注射後のヒトＶＩＳＴＡ ＫＩおよび野生型同腹子（ＷＴ）マウス血清抗体濃度を示す。ＫＩマウスにおけるＰ１−０６１０２９およびＰ１−０６８７６７の算出された血清平均滞留時間（ＭＲＴ）は、それぞれ４．１時間、７１時間と推定される。抗体あたりｎ＝４頭のＫＩマウスおよび１−２頭のＷＴマウス。これらのデータは、単一の実験からの代表的なものである。図１５０は、５ｍｇ／ｋｇのＶＩＳＴＡ．４（丸）またはＰ１−０６８７６７（四角形）の静脈内注射後のカニクイザル血清抗体濃度を示す。ＶＩＳＴＡ．４およびＰ１−０６１０２９の算出された血清平均滞留時間（ＭＲＴ）は、それぞれ７．６時間、７１７時間と推定される。抗体あたりｎ＝１頭のサル。これらのデータは、単一の実験からの代表的なものである。エラーバーは、特に記載のない限り、平均値の標準誤差を表す。
【図１６Ａ−Ｃ】治療開始７日後のＰＤ−１（図１６Ａ）、ＬＡＧ−３（図１６Ｂ）、およびＴＩＭ−３（図１６Ｃ）の腫瘍内ＣＤ８＋ Ｔ細胞発現の典型的なヒストグラムを示す。エラーバーは、平均値の標準誤差を表す。
【図１７Ａ】図１７Ａ−Ｃは、ＶＩＳＴＡが酸性ｐＨでＰＳＧＬ−１に結合すること、およびこの相互作用がＶＩＳＴＡ抗体Ｐ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６７およびＶＩＳＴＡ．４によって遮断されることを示す。図１７Ａは、ｐＨ６．０およびｐＨ７．４で捕捉されたＰＳＧＬ１へのＰ−セレクチン−ＦｃおよびＶＩＳＴＡ−Ｆｃ結合のＢＬＩ結合センサーグラムを示す。
【図１７Ｂ】抗体Ｐ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６７およびＶＩＳＴＡ．４が、ＰＳＧＬ−１のｈＶＩＳＴＡへの結合を阻害することを示すヒストグラムである。
【図１７Ｃ】ＶＩＳＴＡ．４（上向き三角形）および抗ＰＳＧＬ−１抗体ＫＰＬ−１（丸）による、ＣＨＯ−ＰＳＧＬ−１細胞に対するＶＩＳＴＡ−Ｆｃ結合の抗体遮断を示す。これらのデータは、２つの独立した実験からの代表的なものである。エラーバーは、平均値の標準誤差を表す。
【図１８Ａ】図１８Ａ−Ｅは、Ｐ１−０６８７６７ ＦａｂおよびｈＶＩＳＴＡまたは（図１８Ｅでは）非遮断抗体ＶＩＳＴＡ．５およびｈＶＩＳＴＡの共結晶構造の描写である。ＶＩＳＴＡ ＩｇＶドメインは、中央のβシートの、ヒスチジンリッチな異常な伸長部を特徴とする。ＶＩＳＴＡ ＩｇＶドメインは、Ｐ１−０６８７６７断片抗原結合（Ｆａｂ）と共結晶化された。ＶＩＳＴＡ＋Ｐ１−０６８７６７複合体の結晶構造分解能１．６Åで決定した。図１８Ａは、ＶＩＳＴＡ ＩｇＶドメイン：Ｐ１−０６８７６７ Ｆａｂ共結晶構造を示す。図１８Ａは、Ｐ１−０６８７６７ Ｆａｂとの複合体におけるＶＩＳＴＡ ＩｇＶドメインの全体構造を示す（重鎖、濃い灰色；軽鎖、薄い灰色）。
【図１８Ｂ】図１８Ｂは、ＶＩＳＴＡおよびＰＤ−Ｌ１ ＩｇＶドメインの重ね合わせを示す。ＶＩＳＴＡのヒスチジン残基は、棒の形で描かれている。図１８Ｂは、ＶＩＳＴＡのＩｇＶドメインがヒスチジンリッチな異常なβシート伸長部を有することを示す。
【図１８Ｃ】図１８Ｃは、ＶＩＳＴＡ＋Ｐ１−０６８７６７結晶構造によって明らかにされたＰ１−０６８７６７エピトープの分子表面（薄い灰色の静電表面）を示している。図１８Ｃは、遮断抗体がＶＩＳＴＡのヒスチジンリッチなβシート伸長部に結合することを示す。
【図１８Ｄ】図１８Ｄは、ＶＩＳＴＡ（灰色のリボンのイラスト、エピトープの残基Ｈ１２１、Ｈ１２２およびＨ１２３が棒の形で描かれている）とＰ１−０６８７６７（静電表面として描かれ、その残基Ｅ１００とＤ１０２が棒の形）との間の界面の拡大図である。図１８Ｄは、酸性ｐＨ選択的Ｐ１−０６８７６７がＶＩＳＴＡヒスチジンを酸性残基と結合させることを示す。
【図１８Ｅ】図１８Ｅは、非遮断抗体ＶＩＳＴＡ．５がＰ１−０６８７６７とは異なるｈＶＩＳＴＡの領域に結合することを示す。
【図１９】図１９は、ＭＳ−ＨＤＸ（ＭＳトレース）によって決定されたＶＩＳＴＡ．４のエピトープを示す。
【図２０】図１９のデータに基づいて、ｈＶＩＳＴＡのアミノ酸配列におけるＶＩＳＴＡ．４のエピトープの位置を示す。残基５７−６８、８６−９７および１４８−１６５は図１９でも強調されており、図２０では、より薄い灰色のテキストと下線で示されている。
【図２１Ａ−Ｂ】図２１Ａおよび２１Ｂは、ＶＩＳＴＡ．４（三角形）抗体、ＶＩＳＴＡ．５（四角形）抗体、および非ＶＩＳＴＡ結合性抗体（コントロール、丸）の存在下でｐＨ６．０で活性化ヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞に結合するＶＩＳＴＡ多量体を示す。図２１Ｂは、遮断されていないＴ細胞に対する各抗体の遮断効率を示す。ダネットの多重比較法を用いた一方向ＡＮＯＶＡ、＊＊＊，Ｐ＜０．００１。これらのデータは、５つ以上（ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ｆｏｕｒ）の独立した実験の代表的なものである。エラーバーは、平均値の標準誤差を表す。
【図２２Ａ−Ｂ】図２２Ａ−Ｂは、酸性ｐＨでＶＩＳＴＡ結合を遮断する抗体が機能することを示している。遮断抗体ＶＩＳＴＡ．４（四角形）、非遮断抗体ＶＩＳＴＡ．５（三角形、および非ＶＩＳＴＡ結合性（コントロール、丸）抗体の、ＶＩＳＴＡを発現するように操作された２９３Ｔ細胞とＴＣＲアゴニスト（２９３Ｔ−ＯＫＴ３−ＶＩＳＴＡ）との共培養ヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞の増殖（図２２Ａ）およびインターフェロンγ産生（図２２Ｂ）に対する効果。ダネットの多重比較法を用いた一方向ＡＮＯＶＡ、＊，Ｐ＜０．０５。これらのデータは、５つ以上の独立した実験の代表的なものである。
【図２３】図２３は、様々なｐＨでの２９３Ｔ−ＯＫＴ３−ＶＩＳＴＡ細胞との共培養後のＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞活性化（ＮＦ−ｋＢ阻害の測定による）に対するＶＩＳＴＡ．４遮断の効果を示す。これらのデータは、３つの独立した実験からの代表的なものからなる。
【図２４】図２４は、ヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞のＶＩＳＴＡ抑制に対するｐＨの効果を示している。ＶＩＳＴＡ．４（上向き三角形）、ＶＩＳＴＡ．５（下向き三角形）、または非ＶＩＳＴＡ結合性抗体（抗体コントロール、四角形）の存在下で、プレートコーティングされたＯＫＴ３およびＶＩＳＴＡ−Ｆｃを使用して、示されたｐＨで細胞を刺激した。プレートコートされたＯＫＴ３とコントロールＩｇＧ（ＶＩＳＴＡコントロール、黒の丸）、またはＯＫＴ３なし（ＯＫＴ３なし、灰色の菱形）で刺激された細胞も示されている。これらのデータは、１つの独立した実験からの代表的なものである。
【図２５Ａ】図２５Ａ−Ｅは、ＶＩＳＴＡ：ＰＳＧＬ−１の結合特異性がヒスチジン残基およびスルホチロシン残基によって決定されることを示す。図２５Ａに示すように、シアリルルイスＸ修飾（ｄｅｃｏｒａｔｉｏｎ）の有無（それぞれＳＬＸ＋、ＳＬＸ−）にかかわらず、ヒトＰＳＧＬ−１ １９−ｍｅｒ−Ｆｃ組換えタンパク質が細胞内で作製された。ＶＩＳＴＡ−ＦｃおよびＰ−セレクチン−Ｆｃについて、ｐＨ６．０（白）および７．４（黒）でのＢＬＩ結合の大きさを示す。データは、単一の独立した実験からの代表的なものである。
【図２５Ｂ】図２５Ｂに示すように、シアリルルイスＸ修飾で生成されたヒトＰＳＧＬ−１ １９−ｍｅｒ−Ｆｃ糖ペプチドは、９０％を超えるチロシン硫酸化（高ｓＹ）と１％未満のチロシン硫酸化（低ｓＹ）のを有する画分に分離された。ＶＩＳＴＡ−ＦｃおよびＰ−セレクチン−Ｆｃについて、ｐＨ６．０（白）と７．４（黒）でのＢＬＩ結合の大きさを示す。これらのデータは、単一の独立した実験からの代表的なものである。
【図２５Ｃ】図２５Ｃ−２５Ｄで提供されるように、ヒトＶＩＳＴＡ−Ｆｃ組換えタンパク質は、１５３−１５５位のヒスチジン残基をそのまま残して（ＷＴ ＶＩＳＴＡ）、またはアラニン（Ｈ２Ａ突然変異体）、アスパラギン酸（Ｈ２Ｄ突然変異体）もしくはアルギニン（Ｈ２Ｒ突然変異体）で置換した状態で生成された。図２５Ｃは、ｐＨ６．０および７．４で捕捉されたＰＳＧＬ−１に結合する野生型および突然変異型ＶＩＳＴＡ−Ｆｃタンパク質のＢＬＩ結合の大きさを示す。これらのデータは、単一の実験からの代表的なものである。
【図２５Ｄ】図２５Ｄは、ＷＴ ＶＩＳＴＡ（丸）、Ｈ２Ａ突然変異体（四角形）、Ｈ２Ｄ突然変異体（下向き三角形）およびＨ２Ｒ突然変異体（灰色、上向き三角形）ならびにコントロール（菱形）のｐＨ６．０でのＣＨＯ−ＰＳＧＬ−１細胞へのＩＳＴＡ−Ｆｃの結合を示す。これらのデータは、２つの独立した実験からの代表的なものである。
【図２５Ｅ】図２５Ｅは、ＶＩＳＴＡのヒスチジンリッチなリガンド図２５Ｅは、ＶＩＳＴＡのヒスチジンリッチなリガンド界面（灰色のリボン、下）との複合体におけるＰＳＧＬ−１ １９−ｍｅｒ糖ペプチド（上）の計算モデルを示す。ＶＩＳＴＡ残基Ｈ９８、Ｈ１００、Ｈ１５３およびＨ１５４が示されている。ＰＳＧＬ−１残基Ｙ４６、Ｙ４８、Ｅ５６、Ｔ５７およびＹ５８も示されている。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
定義
本明細書において、別途指定のない限り、「または（ｏｒ）」の使用は、「および／または（ａｎｄ／ｏｒ）」を意味する。多数項従属クレームの文脈において、「または」の使用は、択一的な形式によってのみ、複数の先行する独立または従属クレームを引用する。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「有する（ｈａｖｉｎｇ）」という用語は、本明細書では互換的に使用することができる。本発明によれば、「単離された」分子は、その自然環境から取り出された分子である。したがって、「単離された」という用語は、分子が精製されている程度を必ずしも反映するものではない。
【０００８】
「ポリペプチド」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指し、最小の長さに限定されない。「タンパク質」は、１つ以上のポリペプチドを含み得る。そのようなアミノ酸残基のポリマーは、天然または非天然アミノ酸残基を含有し得、限定されないが、ペプチド、オリゴペプチド、アミノ酸残基の二量体、三量体、および多量体が含まれる。全長タンパク質およびその断片の両方がこの定義に包含される。この用語はまた、ポリペプチドの発現後修飾、例えばグリコシル化、シアリル化、アセチル化、リン酸化等を包含する。さらに、本発明において「ポリペプチド」または「タンパク質」とは、それぞれ、タンパク質が所望の活性を維持する限り、天然配列に対する欠失、付加および置換（一般的に保存的な性質）などの修飾が含むポリペプチドまたはタンパク質を指す。これらの修飾は、部位特異的突然変異誘発などによる意図的なものでも、タンパク質を産生する宿主の突然変異またはＰＣＲ増幅によるエラーなどによる偶発的なものでもよい。タンパク質は２つ以上のポリペプチドを含み得る。
【０００９】
「ＶＩＳＴＡ」は、免疫チェックポイント制御因子のＢ７ファミリーのメンバーである、Ｔ細胞活性化タンパク質のＶドメイン免疫グロブリン含有抑制因子の略語である。ＶＩＳＴＡは、ＰＤ−１ホモログ（ＰＤ１Ｈ）、Ｂ７−Ｈ５、Ｃ１０ｏｒｆ５４、ＥＳＣ−１の分化（Ｄｉｅｓ−１）、血小板受容体Ｇｉ２４前駆体、およびデスドメイン１α（ＤＤ１α）としても知られている。本明細書における「ｈＶＩＳＴＡ」または「ｈｕＶＩＳＴＡ」という用語は、ヒトＶＩＳＴＡタンパク質を指す。シグナルペプチドを含むｈＶＩＳＴＡのアミノ酸配列は、配列番号１に提供されているが、シグナルペプチドを含まない配列は、配列番号２に提供されている。（以下の配列表を参照のこと。）ＶＩＳＴＡの細胞外ドメインすなわち「ＥＣＤ」または「ＶＩＳＴＡ−ＥＣＤ」は、細胞外空間に位置するＶＩＳＴＡタンパク質の部分を指し、ｈＶＩＳＴＡの場合は、配列番号２の１−１６２のアミノ酸を含む。（図１Ｂも参照のこと。）ｈＶＩＳＴＡの「ＩｇＶドメイン」部分は、配列番号２の５−１３５の残基を含む。
【００１０】
「リーダーペプチド」または「リーダー配列」という用語は、哺乳動物細胞からのポリペプチドの分泌を促進する、ポリペプチドのＮ末端に位置するアミノ酸残基の配列を指す。リーダー配列は、哺乳動物細胞からのポリペプチドの輸送の際に切断され、成熟タンパク質を形成し得る。リーダー配列は、天然でも合成でもよく、それらが結合するタンパク質に対して異種または相同でもよい。
【００１１】
本明細書における用語「抗体」または「Ａｂ」は最も広い意味で用いられ、種々の抗体構造を包含し、限定されるものではないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、および、所望の抗原結合活性を示す限り、抗体断片を含む。本明細書で使用される場合、この用語は、重鎖の少なくとも相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに軽鎖の少なくともＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む分子を指し、ここで、分子は抗原へ結合することができる。また、抗体という用語には、抗原に結合することが可能な断片、例えばＦｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’および（Ｆａｂ’）２を含むが、これらに限定されない。また、抗体という用語には、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、およびマウス、カニクイザルなどの種々の種の抗体も含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００１２】
「重鎖」または「ＨＣ」という用語は、リーダー配列の有無を問わず、少なくとも重鎖可変領域を含むポリペプチドを指す。いくつかの実施態様では、重鎖は、重鎖定常領域の少なくとも一部を含む。「完全長重鎖」という用語は、リーダー配列の有無を問わず、およびＣ末端リジン（Ｋ）の有無を問わず、重鎖可変領域および重鎖定常領域を含むポリペプチドを指す。
【００１３】
「重鎖可変領域」または「ＶＨ」という用語は、重鎖の相補鎖決定領域（ＣＤＲ）１、フレームワーク領域（ＦＲ）２、ＣＤＲ２、ＦＲ３およびＣＤＲ３を含む領域を指す。いくつかの実施態様では、重鎖可変領域はまた、ＦＲ１の少なくとも一部および／またはＦＲ４の少なくとも一部を含む。以下に明記されるように、いくつかの実施態様では、重鎖ＣＤＲ１は、本明細書中のＶＨ配列番号の残基２６−３５を含み；重鎖ＣＤＲ２は、本明細書中のＶＨ配列番号の残基５０−６６を含み；重鎖ＣＤＲ３は、本明細書中のＶＨ配列番号の残基９９−１１０を含む。他の実施態様では、指定する場合、重鎖ＣＤＲ１はＫａｂａｔ残基３１−３５に対応し；重鎖ＣＤＲ２はＫａｂａｔ残基５０−６５に対応し；重鎖ＣＤＲ３はＫａｂａｔ残基９５−１０２に対応する。例えば、Ｋａｂａｔ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（１９８７ ａｎｄ １９９１，ＮＩＨ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．）を参照のこと。いくつかの実施態様では、重鎖ＣＤＲは、以下の配列表または表２などにあるように、本明細書で指定されている通りである。
【００１４】
「軽鎖」または「ＬＣ」という用語は、リーダー配列の有無を問わず、少なくとも軽鎖可変領域を含むポリペプチドを指す。いくつかの実施態様では、軽鎖は、軽鎖定常領域の少なくとも一部を含む。「完全長軽鎖」という用語は、リーダー配列の有無を問わず、軽鎖可変領域および軽鎖定常領域を含むポリペプチドを指す。
【００１５】
「軽鎖可変領域」または「ＶＬ」という用語は、軽鎖ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＨＶＲ２、ＦＲ３およびＨＶＲ３を含む領域を指す。いくつかの実施態様では、軽鎖可変領域はまた、ＦＲ１および／またはＦＲ４を含む。以下に明記されるように、いくつかの実施態様では、軽鎖ＣＤＲ１は、本明細書中のＶＬ配列番号の残基２４−３５を含み；軽鎖ＣＤＲ２は、本明細書中のＶＬ配列番号の残基５１−５７を含み；軽鎖ＣＤＲ３は、本明細書中のＶＬ配列番号の残基９０−９８を含む。他の実施態様では、指定する場合、軽鎖ＣＤＲ１はＫａｂａｔ残基２４−３４に対応し；軽鎖ＣＤＲ２はＫａｂａｔ残基５０−５６に対応し；軽鎖ＣＤＲ３はＫａｂａｔ残基８９−９７に対応する。例えば、Ｋａｂａｔ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（1987 and 1991, NIH, Bethesda, Md.）を参照のこと。いくつかの実施態様では、軽鎖ＣＤＲは、配列表などにあるように、本明細書で指定されている通りである。
【００１６】
「キメラ」抗体は、重鎖および／または軽鎖の一部分が特定の起源または種に由来する一方、重鎖および／または軽鎖の残りは異なる起源または種に由来する抗体を指す。いくつかの実施態様では、キメラ抗体は、第１の種（マウス、ラット、カニクイザル等）からの少なくとも１つの可変領域と第２の種（ヒト、カニクイザルなど）からの少なくとも１つの定常領域とを含む抗体を指す。いくつかの実施態様では、キメラ抗体は、少なくとも１つのマウス可変領域と少なくとも１つのヒト定常領域とを含む。いくつかの実施態様では、キメラ抗体は、少なくとも１つのカニクイザル可変領域と少なくとも１つのヒト定常領域とを含む。いくつかの実施態様では、キメラ抗体の可変領域の全てが第１の種に由来し、キメラ抗体の定数領域の全てが第２の種に由来する。
【００１７】
「ヒト化抗体」は、非ヒト可変領域のフレームワーク領域内の少なくとも１つのアミノ酸が、ヒト可変領域由来の対応するアミノ酸で置換されている抗体を指す。いくつかの実施態様では、ヒト化抗体は、少なくとも１つのヒト定常領域またはその断片を含む。いくつかの実施態様では、ヒト化抗体は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、（Ｆａｂ’）２等である。
【００１８】
本明細書で使用される「ヒト抗体」は、ヒトで産生される抗体、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）などのヒト免疫グロブリン遺伝子を含む非ヒト動物で産生される抗体、およびファージディスプレイなどのｉｎ ｖｉｔｒｏ法を使用して選択される抗体を指し、ここで、抗体レパートリーはヒト免疫グロブリン配列に基づく。
【００１９】
本明細書で使用される「ＶＩＳＴＡ抗体」または「抗ＶＩＳＴＡ抗体」は、酸性ｐＨなどの少なくともいくつかの条件下でＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗体を指す。いくつかの実施態様では、抗体は、それが酸性ｐＨなどの少なくともいくつかの条件下でヒトＶＩＳＴＡタンパク質に特異的に結合することを示す「ｈｕＶＩＳＴＡ抗体」または「抗ｈｕＶＩＳＴＡ抗体」であってもよい。例えば、ＶＩＳＴＡの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に特異的に結合するＶＩＳＴＡ抗体は、「ＶＩＳＴＡ−ＥＣＤ抗体」と呼ばれる場合がある。
【００２０】
いくつかの実施態様では、本明細書の抗体は、特定の、指定された配列と比較して１つ以上の「保存的置換」を含み得る。本明細書における「保存的アミノ酸置換」とは、類似の側鎖を有するアミノ酸残基によるアミノ酸残基の置換を指す。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーには、塩基性側鎖（例えばリジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えばアスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えばグリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、ベータ分岐側鎖（例えばスレオニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族側鎖（例えばチロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が含まれる。特定の実施態様では、本明細書の抗体中の予測される非必須アミノ酸残基は、同じ側鎖ファミリー（例えば塩基性、酸性、ベータ分岐、芳香族、非荷電極性）からの別のアミノ酸残基で置き換えられる。抗原結合を排除しないヌクレオチドおよびアミノ酸の保存的置換を同定する方法は、例えばＢｒｕｍｍｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．３２：１１８０−１１８７（１９９３）；Ｋｏｂａｙａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１２（１０）：８７９−８８４（１９９９）；およびＢｕｒｋｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９４：４１２−４１７（１９９７）に記載されている。
【００２１】
いくつかの実施態様では、抗体は、中性および／または生理的ｐＨよりも酸性ｐＨでより高い親和性でＶＩＳＴＡに結合することができる。いくつかの実施態様では、抗体は、酸性ｐＨでより高い親和性でＶＩＳＴＡに結合することができ、中性および／または生理的ｐＨでは無視できる程度か非特異的にしか結合できない。
【００２２】
タンパク質、例えば、ＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質への抗体の結合についての「ＫＤ」または「解離定数」は、タンパク質、例えばＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質への抗体の親和性または特異的結合の尺度である。低いＫＤは、高いＫＤよりも改善された結合性または親和性を示す。ＫＤは、抗体およびポリペプチドに対する「オフ速度」（またはｋｏｆｆまたはｋｄ）と、「オン速度」（またはｋｏｎまたはｋａ）との間の比率である。オフ速度とオン速度は、２つの結合パートナーが系内で会合と解離を行う速度である。したがって、オン速度がほぼ一定のままである遅いオフ速度は、全体の親和性が高くなり、結果としてＫＤが低くなる。本明細書で使用されるように、特定の値「またはそれ以下」のｋｏｆｆは、ｋｏｆｆまたは「オフ速度」が指定された通りであるか、または指定された測度よりも遅いことを示す。
【００２３】
用語「特異的結合」または「特異的に結合する」または同様の用語は、抗体とそのポリペプチド標的のような２つのポリペプチドの結合のＫＤが、同じ条件下で存在する２つのランダムポリペプチド間の場合よりも低いことを意味する。言い換えると、そのＫＤの低さは、系内のポリペプチドの非特異的凝集の少なさによるものである。
【００２４】
いくつかの実施態様において、抗体は、特定のｐＨまたはｐＨ範囲でＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合する。本明細書において、「酸性」ｐＨは７．０未満のｐＨを通常指し、「塩基性」ｐＨは７．０より高いｐＨを通常指し、「中性」ｐＨは約７．０のｐＨを通常指す。本明細書における「生理的ｐＨ」は、正常な（すなわち非がん性）生理的条件、例えば７．３５から７．４５、または７．３から７．４、例えば約７．４のｐＨを指す。本明細書において、ＶＩＳＴＡとＶＩＳＴＡ結合パートナーまたはＶＩＳＴＡとＴ細胞などの２つの分子の結合の文脈で使用される「酸性条件での結合」または「生理的条件での結合」などの表現はそれぞれ、酸性ｐＨでの結合、生理的ｐＨでの結合を指す。
【００２５】
単独または細胞上の受容体（またはリガンド）へのリガンド（または受容体）または競合抗体の「結合を遮断する」もしくは「結合を阻害する」抗体を指す場合、コントロールと比較して統計的に有意な全体的な減少、例えば５０％以上の全体的な減少、例えば７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％以上の全体的な減少があれば、結合は遮断されている。「抗ＶＩＳＴＡ遮断抗体」は、例えば、酸性ｐＨなどの少なくともいくつかの条件下で、ＰＳＧＬ−１または別のＶＩＳＴＡリガンドもしくは受容体またはヘパラン硫酸プロテオグリカンへのＶＩＳＴＡの結合を遮断することができる抗体である。
【００２６】
本明細書で使用する「腫瘍モデル」は、ＶＩＳＴＡ−ＥＣＤ抗体の生物学的活性を研究するために使用することができるｉｎ ｖｉｖｏ前臨床アッセイを指し、異種移植または天然マウス腫瘍アッセイ系を含む。場合によっては、抗体が免疫応答を誘発または強化したかどうかを判定するために、腫瘍モデルによって、抗体での治療時の腫瘍の大きさまたは成長の追跡および／または腫瘍内の免疫細胞（特定のタイプのＴ細胞またはＮＫ細胞など）の存在の追跡を可能にすることができる。
【００２７】
本明細書で使用される「免疫刺激剤」という用語は、共刺激分子を含む免疫刺激分子のアゴニストとして作用するか、または共抑制分子を含む免疫抑制分子のアンタゴニストとして作用することにより、免疫系を刺激する分子を意味する。免疫刺激性分子または免疫抑制性分子は、ＶＩＳＴＡなどの免疫チェックポイント調整剤、または別のＢ７ファミリーメンバー、または以下にさらに記載される別の分子であってもよい。免疫刺激剤は、抗体または抗体断片、他のタンパク質、またはワクチン等の生物学的製剤であってもよいし、低分子薬であってもよい。「免疫刺激分子」には、免疫応答を強化、刺激、誘導、またはその他の方法で「オン」にするように作用する受容体またはリガンドが含まれる。本明細書で定義される免疫刺激分子には、共刺激分子が含まれる。「免疫抑制分子」には、免疫応答を減少させ、抑制し、阻止し、またはその他の方法で「オフ」にするように作用する受容体またはリガンドが含まれる。本明細書で定義される免疫抑制分子には、共抑制分子が含まれる。そのような免疫刺激分子および免疫抑制分子は、例えば、Ｔ細胞などの免疫細胞に見られる、またはＮＫ細胞などの自然免疫に関与する細胞に見られる受容体またはリガンドであり得る。
【００２８】
ペプチド、ポリペプチドまたは抗体配列に対する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」および「相同性」は、最大の配列同一性パーセントを得るように配列のアライメントを行い、必要に応じてギャップを導入した後の、いかなる保存的置換も配列同一性の一部とみなさない、特定のペプチドまたはポリペプチド配列のアミノ酸残基と同一である候補配列のアミノ酸残基の百分率と定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するためのアライメントは、当分野の技術の範囲内にある様々な方法、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮまたはＭＥＧＡＬＩＧＮＴＭ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア等の一般に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して得ることができる。当業者であれば、比較する配列の全長にわたって最大のアライメントを得るのに必要な任意のアルゴリズムを含めた、アライメントを測定するための適切なパラメーターを決定することができる。
【００２９】
「誘発する」または「強化する」という用語は、任意の事象（タンパク質リガンド結合など）の開始もしくは増加、または任意の生物学的活性（免疫応答など）もしくは表現型特性の開始もしくは増加、またはその活性もしくは特性の発生率、程度もしくは尤度の開始もしくは上昇を指す。「誘発する」または「強化する」とは、参照と比較して、ある活性、機能および／または量を開始または増加させることである。誘発または強化が完全である必要はない。例えば、特定の実施態様において、「強化する」とは、２０％以上の全体的な増加を引き起こす能力を意味する。別の実施態様では、「強化する」とは、５０％以上の全体的な増加を引き起こす能力を意味する。さらに別の実施態様では、「強化する」とは、７５％、８５％、９０％、または９５％以上の全体的な増加を引き起こす能力を意味する。
【００３０】
「抑制」または「抑制する」という用語は、より一般的には、任意の事象（タンパク質リガンド結合）の減少もしくは停止、または任意の表現型特性の減少もしくは停止、またはその特性の発生率、程度もしくは尤度の低下もしくは停止を指す。「減少させる」または「抑制する」とは、参照と比較して、ある活性、機能および／または量を減少、低減または停止させることである。抑制または減少が完全である必要はない。例えば、特定の実施態様において、「減少させる」または「抑制する」とは、２０％以上の全体的な減少を引き起こす能力を意味する。別の実施態様では、「減少させる」または「抑制する」とは、５０％以上の全体的な減少を引き起こす能力を意味する。さらに別の実施態様では、「減少させる」または「抑制する」とは、７５％、８５％、９０％、または９５％以上の全体的な増加を引き起こす能力を意味する。
【００３１】
本明細書で使用される「治療」は、ヒトにおける疾患の治療薬の任意の投与または適用を含み、疾患または疾患の進行または１つ以上の疾患症状を抑制すること、疾患または疾患の進行または１つ以上の疾患症状を抑制または遅らせること、疾患の発症を阻止すること、疾患または疾患の１つ以上の症状を部分的または完全に緩和すること、あるいは疾患の１つ以上の症状の再発を防止することを含む。
【００３２】
用語「対象」及び「患者」は、本明細書では互換的に使用され、ヒトを指す。
【００３３】
「有効量」または「治療有効量」という用語は、１つ以上の症状を部分的または完全に緩和するなどの、対象の疾患または障害の治療に有効な薬物の量を指す。いくつかの実施態様では、有効量とは、所望の治療的または予防的結果を達成するために必要な投薬量および期間での有効な量を指す。
【００３４】
「がん」という用語は、本明細書では、異常に高レベルの増殖および成長を示す細胞のグループを指すのに使用される。がんは、良性（良性腫瘍とも呼ばれる）、前悪性または悪性であってもよい。がん細胞は、固形がん細胞または白血病がん細胞であり得る。「腫瘍成長」という用語は、本明細書では、がんの大きさまたは程度の相当する増加をもたらす、がんを含む細胞による増殖または成長を指すために使用される。
【００３５】
本明細書の治療方法に適用可能がんの例には、限定されないが、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫および白血病が含まれる。このようながんのより具体的な非限定的な例には、扁平上皮がん、小細胞肺がん、下垂体がん、食道がん、星細胞腫、軟部組織肉腫、非小細胞肺がん（扁平上皮非小細胞肺がんを含む）、肺腺癌、肺扁平上皮癌、腹膜がん、肝細胞がん、消化器がん、膵臓がん、膠芽腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝臓がん、膀胱がん、肝がん、乳がん、大腸がん、大腸直腸がん、子宮内膜癌または子宮体癌、唾液腺がん、腎臓がん、腎細胞癌、肝臓がん、前立腺がん、外陰部がん、甲状腺がん。肝癌、脳がん、子宮内膜がん、精巣がん、胆管癌、胆嚢癌、胃がん、メラノーマ、および各種頭頸部がん（頭頸部扁平上皮癌など）が含まれる。
【００３６】
１または複数のさらなる治療剤「と併用した」投与には、任意の順序での同時（”ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ”または”ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔ”）および連続（”ｃｏｎｓｅｃｕｔｉｖｅ”）（逐次（”ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ”））投与が含まれる。
【００３７】
「薬学的に許容される担体」とは、対象に投与するための「薬学的組成物」を一緒に構成する治療剤と共に使用するために当技術分野で慣用されている、非毒性の固体、半固体もしくは液体の充填剤、希釈剤、封入材料、製剤補助剤または担体を指す。薬学的に許容される担体は、使用される用量および濃度でレシピエントに無毒であり、製剤の他の成分と相溶性である。薬学的に許容される担体は、使用される製剤に適している。例えば、治療剤が経口投与される場合、担体はゲルカプセルとすることができる。治療剤が皮下投与される場合、担体は、理想的には、皮膚に対して刺激性がなく、注射部位反応を起こさない。
【００３８】
「化学療法剤」は、がんの治療に有用な化学物質である。本明細書の方法で投与可能な化学療法剤の例には、限定されないが、アルキル化剤、例えばチオテパおよびサイトキサン（登録商標）シクロホスファミド；アルキルスルホン酸エステル、例えばブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファンなど；ベンゾドパ、カルボコン、メトレドパおよびウレドパなどのアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミドおよびトリメチルオロメラミンを含むエチレンイミン類およびメチルアメラミン類；アセトゲニン類（特にブラタシンとブラタシノン）；カンプトテシン（合成アナログトポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシンおよびビゼレシン合成アナログを含む）；クリプトフィシン類（特にクリプトフィシン１とクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成アナログのＫＷ−２１８９およびＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エレウテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン；スポンギスタチン；ナイトロジェンマスタード、例えばクロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩（ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ ｏｘｉｄｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、メルファラン、ノベムビチン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード等；ニトロソ尿素、例えばカルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチン等；抗生物質、例えばエンジイン抗生物質［例：カリケアマイシン、特にカリケアマイシンガンマ１ＩおよびカリケアマイシンオメガＩ１（例えばAgnew, Chem Intl. Ed. Engl., 33: 183-186 (1994)参照）；ジネマイシンＡなどのジネマイシン；ビスホスホネート製剤、例えばクロドロネート；エスペラマイシン；ならびにネオカルジノスタチン発色団および関連する色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団］、アクラシノマイシン類、アクチノマイシン、アントラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン類、カクチノマイシン、カルビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン類（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎｉｓ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、アドリアマイシン（登録商標）、ドキソルビシン（モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、例えばマイトマイシンなどのＣマイトマイシン類、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン類、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、ケラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗剤、例えば��トトレキサートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；葉酸アナログ、例えばデノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート；プリンアナログ、例えばフルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジンアナログ、例えばアンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン；アンドロゲン、例えばカルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗副腎剤、例えばアミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）などの葉酸補液；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビスアントレン；エダトラキサート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルシン；ジアジクオン；エルフォルニチン（ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）；エリプチニウムアセテート；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダイニン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；メイタンシノイド類、例えばメイタンシンおよびアンサマイトシン類；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖類複合体（オレゴン州ユージーンのＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン類（特にＴ−２トキシン、ベラキュリン（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ）Ａ、ロリジンＡおよびアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド類、例えばタキソール（登録商標）パクリタキセル（ニュージャージー州プリンストンのＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）、アブラキサン（登録商標）ヒマシ油フリー、アルブミン結合型のパクリタキセルのナノ粒子製剤（イリノイ州ショウンバーグのＡｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｎｅｒｓ）およびタキソテール（登録商標）ドセタキセル（フランス、アントニーのローヌ・プーラン・ローラー）；クロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｎｂｕｃｉｌ）；ジェムザール（登録商標）ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金アナログ、例えばシスプラチン、オキサリプラチンおよびカルボプラチン；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ナベルビン（登録商標）ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；イリノテカン（カンプトサール、ＣＰＴ−１１）（イリノテカンと５−ＦＵおよびロイコボリンの治療レジメンを含む）；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；例えばレチノイン酸などのレチノイド；カペシタビン；コンブレスタチン；ロイコボリン（ＬＶ）；オキサリプラチン（オキサリプラチン治療レジメン（ＦＯＬＦＯＸ）を含む）；カペシタビン：細胞増殖を減少させる、ＰＫＣ−アルファ、Ｒａｆ、Ｈ−Ｒａｓ、ＥＧＦＲ（例：エルロチニブ（タルセバ（登録商標））およびＶＥＧＦ−Ａの阻害剤、ならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体が含まれる。
【００３９】
本明細書の方法で投与可能なさらなる非限定的かつ例示的な化学療法剤には、（ｉ）がんに対するホルモン作用を調節または阻害するように作用する抗ホルモン剤、例えば抗エストロゲン類および選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）（例えば、タモキシフェン（ノルバデックス（登録商標）タモキシフェンを含む）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストンおよびフェアストン（登録商標）トレミフェンを含む）；副腎においてエストロゲン産生を調節する酵素であるアロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、例えば４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド、メゲース（Ｍｅｇａｓｅ）（登録商標）酢酸メゲストロール、アロマシン（登録商標）エキセメスタン、ホルメスタン（ｆｏｒｍｅｓｔａｎｉｅ）、ファドロゾール、Ｒｉｖｉｓｏｒ（登録商標）ボロゾール、フェマーラ（登録商標）レトロゾールおよびアリミデックス（登録商標）アナストロゾ−ル；ならびに抗アンドロゲン、例えばフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリドおよびゴセレリン；ならびにトロキサシタビン（１，３−ジオキソランニクレオシドシトシンアナログ）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に異常な細胞増殖に関与しているシグナル伝達経路における遺伝子（例えばＰＫＣ−アルファ、ＲａｌｆおよびＨ−Ｒａｓ）の発現を阻害するもの；リボザイム、例えばＶＥＧＦ発現阻害剤（例：アンギオザイム（登録商標）リボザイム）およびＨＥＲ２発現阻害剤；遺伝子療法ワクチンなどのワクチン、例えばアロベクチン（登録商標）ワクチン、ロイベクチン（登録商標）ワクチンおよびＶａｘｉｄ（登録商標）ワクチン；プロロイキン（登録商標）ｒＩＬ−２；ラルトテカン（登録商標）トポイソメラーゼ１阻害剤；アバレリックス（登録商標）ｒｍＲＨ；ならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体が含まれる。
【００４０】
「抗血管新生剤」または「血管新生阻害剤とは、直接的または間接的に血管新生、脈管形成または望ましくない血管透過性を抑制する低分子量物質、ポリヌクレオチド（例えば抑制ＲＮＡ（ＲＮＡｉまたはｓｉＲＮＡ）を含む）、ポリペプチド、単離されたタンパク質、組換えタンパク質、抗体、またはこれらのコンジュゲートもしくは融合タンパク質を指す。抗血管新生剤には、血管新生因子またはその受容体に結合して血管新生活性を遮断する薬剤が含まれることが理解されるべきである。例えば、本明細書の方法で投与可能な抗血管新生剤には、血管新生剤に対する抗体または他のアンタゴニスト、例えば、ＶＥＧＦ−Ａに対する抗体（例：ベバシズマブ（アバスチン（登録商標）））またはＶＥＧＦ−Ａ受容体（例えばＫＤＲ受容体またはＦｌｔ−１受容体）に対する抗体、グリベック（登録商標）（イマチニブメシル酸塩）などの抗ＰＤＧＦＲ阻害剤、ＶＥＧＦ受容体シグナル伝達を遮断する低分子（例えばＰＴＫ７８７／ＺＫ２２８４、ＳＵ６６６８、スーテント（登録商標）／ＳＵ１１２４８（スニチニブリンゴ酸塩）、ＡＭＧ７０６、または、例えば国際公開第２００４／１１３３０４号に記載されているもの）が含まれ得る。また、抗血管新生剤には、天然の血管新生阻害剤、例えばアンジオスタチン、エンドスタチンなどが含まれる。例えばＫｌａｇｓｂｒｕｎ ａｎｄ Ｄ’Ａｍｏｒｅ（１９９１）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．５３：２１７−３９；Ｓｔｒｅｉｔ ａｎｄ Ｄｅｔｍａｒ（２００３）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２２：３１７２−３１７９（例えば、悪性メラノーマにおける抗血管新生療法の一覧を示す表３）；Ｆｅｒｒａｒａ ＆ Ａｌｉｔａｌｏ（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ５（１２）：１３５９−１３６４；Ｔｏｎｉｎｉ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２２：６５４９−６５５６（例えば、既知の抗血管新生因子の一覧を示す表２）；およびＳａｔｏ（２００３）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．８：２００−２０６（例えば、臨床試験において使用される抗血管新生剤の一覧を示す表１）を参照のこと。
【００４１】
本明細書において使用される「増殖抑制剤」は、細胞（例えばＶＥＧＦを発現している細胞）の増殖をｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで抑制する化合物または組成物を指す。したがって、本明細書の方法で投与可能な増殖抑制剤は、Ｓ期の細胞（ＶＥＧＦを発現する細胞など）の割合を有意に低下させるものであり得る。増殖抑制剤の例には、限定されないが、細胞周期の進行を（Ｓ期以外の所で）遮断する薬剤、例えばＧ１停止およびＭ期停止を誘発する薬剤を含む。古典的なＭ期ブロッカーには、ビンカス（ビンクリスチンおよびビンブラスチン）、タキサン類およびトポイソメラーゼＩＩ阻害剤、例えばドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシドおよびブレオマイシンが含まれる。Ｇ１期を停止させＳ期停止にも波及する薬剤は、例えば、タモキシフェン、プレドニゾン、ダカルバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキセート、５−フルオロウラシルおよびＡｒａ−Ｃ等のＤＮＡアルキル化剤である。ＭｅｎｄｅｌｓｏｈｎとＩｓｒａｅｌ編のＴｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒの第１章に、Ｍｕｒａｋａｍｉらによる「Ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，ｏｎｃｏｇｅｎｅ，ａｎｄ ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ ｄｒｕｇｓ」という表題の詳細情報が記載されている（ＷＢ Ｓａｕｎｄｅｒｓ：Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，１９９５、例えば１３頁）。タキサン類（パクリタキセルおよびドセタキセル）は、いずれもイチイに由来する抗がん薬である。ヨーロッパイチイに由来するドセタキセル（タキソテール（登録商標）、ローヌ・プーラン・ローラー）は、パクリタキセル（タキソール（登録商標）、ブリストル・マイヤーズスクイブ）の半合成アナログである。パクリタキセルとドセタキセルは、チューブリン二量体からの微小管のアセンブリを促進し、細胞内の有糸分裂を阻害する結果を招く脱重合を防ぐことによって微小管を安定化する。
【００４２】
「抗腫瘍性組成物」という用語は、少なくとも１つの活性治療剤を含む、がんの治療に有用な組成物を指す。治療剤の例には、限定されないが、例えば化学療法剤、増殖抑制剤、細胞傷害性剤、放射線療法で使用される薬剤、抗血管新生剤、がん免疫療法剤、アポトーシス剤、抗チューブリン剤、および他のがん治療剤、例えば抗ＨＥＲ−２抗体、抗ＣＤ２０抗体、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）アンタゴニスト（例：チロシンキナーゼ阻害剤）、ＨＥＲ１／ＥＧＦＲ阻害剤（例：エルロチニブ（タルセバ（登録商標））、血小板由来成長因子阻害剤（例：グリベック（登録商標）（イマチニブメシル酸塩））、ＣＯＸ−２阻害剤（例：セレコキシブ）、インターフェロン、ＣＴＬＡ４阻害剤（例：抗ＣＴＬＡ抗体イピリムマブ（ヤーボイ（登録商標）））、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤（例：オプジーボ（登録商標）、キイトルーダ（登録商標）、テセントリク（登録商標）、バベンチオ（登録商標）、イミフィンジ（登録商標））、ＴＩＭ３阻害剤（例：抗ＴＩＭ３抗体）、サイトカイン、次の標的：ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＰＤＧＦＲ−ベータ、ＢｌｙＳ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３またはＶＥＧＦ受容体の１つ以上に結合するアンタゴニスト（例：中和抗体）、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２、ならびに他の生理活性および有機化学剤等が含まれる。これらの併用もまた、本開示に含まれる。
【００４３】
酸性ｐＨでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに特異的に結合する抗体
ＶＩＳＴＡは、その細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に多数のヒスチジン残基を有するため、そのフォールディングおよび全体構造、ならびに抗体などのリガンドの結合に利用可能な表面は、酸性ｐＨでは、中性ｐＨと比較して、特にヒスチジンのｐＫａであるｐＨ６．５付近では異なる場合がある。
腫瘍の微小環境は一般に酸性であるため、これらの微小環境でＶＩＳＴＡに結合するためには、抗体は、表面ヒスチジン残基の少なくともいくつかがプロトン化される可能性が高い酸性ｐＨでＶＩＳＴＡに特異的に結合する必要がある場合がある。
【００４４】
以下の配列表は、ヒトＶＩＳＴＡ（ｈＶＩＳＴＡ）のアミノ酸配列であって、シグナルペプチドを有するもの（配列番号１）またはシグナルペプチドを有しないもの（配列番号２（成熟ｈＶＩＳＴＡ））を提供する。シグナルペプチドは、配列番号１のアミノ酸残基１−３２に相当する。細胞外ドメイン（ＥＣＤ）は、配列番号２のアミノ酸残基１−１６２から構成される。ＩｇＶドメインは、配列番号１のアミノ酸残基３７−１６７および配列番号２のアミノ酸残基５−１３５に相当する。ストーク領域は、配列番号１のアミノ酸残基１７２−１９４および配列番号２のアミノ酸残基１３６−１６２にあり、膜貫通ドメインは、配列番号１のアミノ酸残基１９５−２１６および配列番号２のアミノ酸残基１６３−１８４にある。配列番号１のアミノ酸残基１８７および配列番号２の１５５（太字および下線）は、ｈＶＩＳＴＡにおける多型を表すＤまたはＥのいずれかであり得る。その残基は太字で示され、下線が引かれている。したがって、配列番号１および配列番号２は、その残基における両方のヒト多型を包含する。ＶＩＳＴＡのＥＣＤにおけるヒスチジン残基は灰色の網掛けで示されている。
【００４５】
抗ＶＩＳＴＡ抗体（Ａｂ）は、例えばＶＩＳＴＡのＩｇＶドメインまたはｈＶＩＳＴＡからの領域（例えば配列番号２のアミノ酸２０−９５、２０−７０、３５−７０、３５−９５、３５−１２７または３７−１２５を含む領域）を含むＶＩＳＴＡ−ＥＣＤまたはその断片に酸性ｐＨで特異的に結合することができる。特定の実施態様では、Ａｂは、ｐＨ７．０未満のｐＨでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合する。特定の実施態様では、Ａｂは、ｐＨ６．８未満のｐＨでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合する。特定の実施態様では、Ａｂは、ｐＨ６．５未満のｐＨでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合する。特定の実施態様では、Ａｂは、ｐＨ６．３未満のｐＨでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合する。特定の実施態様では、Ａｂは、ｐＨ６．０未満のｐＨでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合する。特定の実施態様では、Ａｂは、ｐＨ５．８未満のｐＨでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合する。特定の実施態様では、Ａｂは、ｐＨ５．５未満のｐＨでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合する。特定の実施態様では、Ａｂは、ｐＨ５．３未満のｐＨでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合する。特定の実施態様では、Ａｂは、ｐＨ５．０未満のｐＨでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合する。
【００４６】
特定のＡｂは、ｐＨ５．０−ｐＨ７．０の範囲内のｐＨでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合する。特定のＡｂは、ｐＨ５．０−ｐＨ６．５の範囲内のｐＨでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合する。特定のＡｂは、ｐＨ５．０−ｐＨ６．０の範囲内のｐＨでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合する。特定のＡｂは、ｐＨ５．５−ｐＨ７．０の範囲内のｐＨでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合する。特定のＡｂは、ｐＨ５．５−ｐＨ６．５の範囲内のｐＨでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合する。特定のＡｂは、ｐＨ６．０−ｐＨ６．５の範囲内のｐＨでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合する。
【００４７】
また、本明細書で提供されるのは、６．５以下のｐＨにおいて、１０−６ Ｍ以下のＫＤでＶＩＳＴＡのＩｇＶドメインまたはｈＶＩＳＴＡからの領域（例えば配列番号２のアミノ酸２０−９５、２０−７０、３５−７０、３５−９５、３５−１２７または３７−１２５を含む領域）を含むｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤまたはその断片などのＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合するＡｂである。いくつかの実施態様では、Ａｂは、１０−７ Ｍ以下のＫＤで結合する。いくつかの実施態様では、Ａｂは、１０−８ Ｍ以下のＫＤで結合する。いくつかの実施態様では、Ａｂは、１０−９ ＭのＫＤで結合する。いくつかの実施態様では、Ａｂは、１０−１０ Ｍ以下のＫＤで結合する。例えば、Ａｂは、６．５以下のｐＨでは、１０−８ Ｍ以下のＫＤでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合し得る。
【００４８】
また、本明細書で提供されるのは、６．０−６．５の範囲内のｐＨにおいて、１０−６ Ｍ以下のＫＤでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合するＡｂである。いくつかの実施態様では、Ａｂは、１０−７ Ｍ以下のＫＤで結合する。いくつかの実施態様では、Ａｂは、１０−８ Ｍ以下のＫＤで結合する。いくつかの実施態様では、Ａｂは、１０−９ ＭのＫＤで結合する。いくつかの実施態様では、Ａｂは、１０−１０ Ｍ以下のＫＤで結合する。例えば、Ａｂは、６．５以下のｐＨ、例えば６．０−６．５の範囲内のｐＨでは、１０−７ Ｍ以下のＫＤでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合し得る。さらに、Ａｂは、６．５以下のｐＨ、例えば６．０−６．５の範囲内のｐＨでは、１０−８ Ｍ以下のＫＤでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合し得る。Ａｂは、６．５以下のｐＨ、例えば６．０−６．５の範囲内のｐＨでは、１０−９ Ｍ以下のＫＤでｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合し得る。
【００４９】
また、本明細書で提供されるのは、例えば６．５以下のｐＨにおいて、２５℃か３７℃で１０−５ ｓ−１以下のｋｏｆｆで、ＶＩＳＴＡのＩｇＶドメインまたはｈＶＩＳＴＡからの領域（例えば配列番号２のアミノ酸２０−９５、２０−７０、３５−７０、３５−９５、３５−１２７または３７−１２５を含む領域）を含むｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤまたはその断片などのＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合するＡｂである。いくつかの実施態様では、Ａｂは、２５℃か３７℃で１０−４ ｓ−１以下のｋｏｆｆを有する。いくつかの実施態様では、Ａｂは、２５℃か３７℃で２ １０−４ ｓ−１以下のｋｏｆｆを有する。いくつかの実施態様では、Ａｂは、２５℃か３７℃で５ １０−４ ｓ−１以下のｋｏｆｆを有する。いくつかの実施態様では、Ａｂは、２５℃か３７℃で７ １０−４ ｓ−１以下のｋｏｆｆを有する。いくつかの実施態様では、Ａｂは、２５℃か３７℃で１０− ｓ−１以下のｋｏｆｆを有する。いくつかの実施態様では、Ａｂは、２５℃か３７℃で２ １０−３ ｓ−１以下のｋｏｆｆを有する。いくつかの実施態様では、Ａｂは、２５℃か３７℃で５ １０−３ ｓ−１以下のｋｏｆｆを有する。いくつかの実施態様では、Ａｂは、２５℃か３７℃で７ １０−３ ｓ−１以下のｋｏｆｆを有する。いくつかの実施態様では、Ａｂは、２５℃か３７℃で１０−２ ｓ−１以下のｋｏｆｆを有する。いくつかの実施態様では、Ａｂは、２５℃か３７℃で１０−１ ｓ−１以下のｋｏｆｆを有する。例えば、Ａｂは、６．５以下のｐＨにおいては、２５℃か３７℃で１０−３ ｓ−１以下のｋｏｆｆでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合し得る。Ａｂは、６．５以下のｐＨにおいては、２５℃か３７℃での１０−３ ｓ−１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに特異的に結合し得る。さらに、Ａｂは、６．５以下のｐＨにおいては、２５℃か３７℃で１０−２ ｓ−１以下のＫｏｆｆでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合し得る。
【００５０】
本明細書で提供されるのは、例えば６．５以下のｐＨにおいて、例えば２５℃か３７℃で測定して（ｉ）１０−６ Ｍ以下、１０−７ Ｍ以下、１０−８ Ｍ以下、１０−９ Ｍ以下または１０−１０ Ｍ以下のＫＤおよび（ｉｉ）１０−５ ｓ−１以下、１０−４（または２、５もしくは７ １０−４）ｓ−１以下、１０−３（または２、５もしくは７ １０−４）ｓ−１以下、１０−２ ｓ−１以下、または１０−１ ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度で、ＶＩＳＴＡのＩｇＶドメインまたはｈＶＩＳＴＡからの領域（例えば配列番号２のアミノ酸２０−９５、２０−７０、３５−７０または３５−９５、３５−９５、３５−１２７または３７−１２５を含む領域）を含むｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤまたはその断片などのＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合するＡｂである。例えば、Ａｂは、６．５以下のｐＨにおいては、例えば２５℃か３７℃で測定して１０−７ Ｍ以下のＫＤおよび１０−３ ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度でＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合し得る。Ａｂは、６．５以下のｐＨにおいては、例えば２５℃か３７℃で測定して１０−８ Ｍ以下のＫＤおよび１０−３ ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度でＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合し得る。Ａｂは、６．５以下のｐＨにおいては、例えば２５℃か３７℃で測定して１０−８ Ｍ以下のＫＤおよびが１０−２ ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度でＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合し得る。例えば、Ａｂは、６．５以下のｐＨにおいては、例えば２５℃か３７℃で測定して１０−７ Ｍ以下のＫＤおよび１０−３ ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度でｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合し得る。Ａｂは、６．５以下のｐＨにおいては、例えば２５℃か３７℃で測定して１０−９ Ｍ以下のＫＤおよび１０−３ ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度でｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合し得る。Ａｂは、６．５以下のｐＨにおいては、例えば２５℃か３７℃で測定して１０−９ Ｍ以下のＫＤおよび１０−２ ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度でｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合し得る。Ａｂは、６．５以下のｐＨにおいては、例えば２５℃か３７℃で測定して１０−８ Ｍ以下のＫＤおよび１０−４（または２、５もしくは７ １０−４）ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度でｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合し得る。Ａｂは、６．５以下のｐＨにおいては、例えば２５℃か３７℃で測定して１０−８ Ｍ以下のＫＤおよび１０−５（または２、５もしくは７ １０−５）ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度でｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合し得る。Ａｂは、６．５以下のｐＨにおいては、例えば２５℃か３７℃で測定して１０−９ Ｍ以下のＫＤおよび１０−４（または２、５もしくは７ １０−４）ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度でｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合し得る。Ａｂは、６．５以下のｐＨにおいては、例えば２５℃か３７℃で測定して１０−９ Ｍ以下のＫＤおよび１０−５（または２、５もしくは７ １０−５）ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度でｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合し得る。
【００５１】
本明細書で提供されるのは、例えば６．５以下のｐＨにおいて、２５℃か３７℃で１０４ Ｍ−１ ｓ−１以上のｋｏｎでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合するＡｂである。いくつかのこのような実施態様では、Ａｂは、１０５ Ｍ−１ ｓ−１以上のｋｏｎで結合し得る。いくつかのこのような実施態様では、Ａｂは、１０６ Ｍ−１ ｓ−１以上のｋｏｎで結合し得る。いくつかのこのような実施態様では、Ａｂは、１０７ Ｍ−１ ｓ−１以上のｋｏｎで結合し得る。例えば、Ａｂは、６．５以下のｐＨにおいては、例えば２５℃か３７℃で測定して１０６ Ｍ−１ ｓ−１以上のｋｏｎでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合し得る。例えば、Ａｂは、６．５以下のｐＨにおいては、例えば２５℃か３７℃で測定して１０６ Ｍ−１ ｓ−１以上のｋｏｎでｈＶＩＳＴＡのＥＣＤに結合し得る。
【００５２】
本明細書で提供されるのは、例えば６．５以下のｐＨにおいて、例えば２５℃か３７℃で測定して（ｉ）１０−６ Ｍ以下、１０−７ Ｍ以下、１０−８ Ｍ以下、１０−９ Ｍ以下または１０−１０ Ｍ以下のＫＤおよび（ｉｉ）１０４ Ｍ−１ ｓ−１以上、１０５ Ｍ−１ ｓ−１以上、１０６ Ｍ−１ ｓ−１以上、１０７ Ｍ−１ ｓ−１以上のｋｏｎでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合するＡｂである。例えば、Ａｂは、６．５以下のｐＨにおいては、例えば２５℃か３７℃で測定して１０−７ Ｍ以下のＫＤおよび１０６ Ｍ−１ ｓ−１以上のｋｏｎ速度でＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合し得る。例えば、Ａｂは、６．５以下のｐＨにおいては、例えば２５℃か３７℃で測定して１０−８ Ｍ以下のＫＤおよび１０６ Ｍ−１ ｓ−１以上のｋｏｎ速度でＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合し得る。例えば、Ａｂは、６．５以下のｐＨにおいては、例えば２５℃か３７℃で測定して１０−７ Ｍ以下のＫＤおよび１０６ Ｍ−１ ｓ−１以上のｋｏｎ速度でｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合し得る。例えば、Ａｂは、６．５以下のｐＨにおいては、例えば２５℃か３７℃で測定して１０−８ Ｍ以下のＫＤおよび１０６ Ｍ−１ ｓ−１以上のｋｏｎ速度でｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合し得る。
【００５３】
いくつかの実施態様では、Ａｂは、６．５以下のｐＨにおいては、例えば２５℃か３７℃で測定して１０−７ Ｍ以下のＫＤおよび１０−５ ｓ−１以下、２ １０−５ ｓ−１以下、５ １０−５ ｓ−１以下、７ １０−５ ｓ−１以下、１０−４ ｓ−１以下、２ １０−４ ｓ−１以下、５ １０−４ ｓ−１以下、７ １０−４ ｓ−１以下、１０−３ ｓ−１以下、２ １０− ｓ−１以下、５ １０−３ ｓ−１以下、７ １０−３ ｓ−１以下、１０−２ ｓ−１以下または１０−１ ｓ−１以下のｋｏｆｆでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合し得る。いくつかの実施態様では、Ａｂは、６．５以下のｐＨにおいては、例えば２５℃か３７℃で測定して１０−９ Ｍ以下のＫＤおよび１０−５ ｓ−１以下、１０−４ ｓ−１以下、１０−３ ｓ−１以下、１０−２ ｓ−１以下または１０−１ ｓ−１以下のｋｏｆｆでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合し得る。いくつかのこのような実施態様では、Ａｂは、６．５以下のｐＨにおいては、例えば２５℃か３７℃で測定して１０−１０ Ｍ以下のＫＤおよび１０−５ ｓ−１以下、１０−４ ｓ−１以下、１０−３ ｓ−１以下、１０−２ ｓ−１以下または１０−１ ｓ−１以下のｋｏｆｆでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合し得る。
【００５４】
いくつかの実施態様では、Ａｂは、６．５以下のｐＨにおいては、例えば２５℃か３７℃で測定して１０−７ Ｍ以下のＫＤおよび１０４ Ｍ−１ ｓ−１以上、１０５ Ｍ−１ ｓ−１以上、１０６ Ｍ−１ ｓ−１以上、１０７ Ｍ−１ ｓ−１以上のｋｏｎでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合し得る。いくつかの実施態様では、Ａｂは、６．５以下のｐＨにおいては、例えば２５℃か３７℃で測定して１０−８ Ｍ以下のＫＤおよび１０４ Ｍ−１ ｓ−１以上、１０５ Ｍ−１ ｓ−１以上、１０６ Ｍ−１ ｓ−１以上、１０７ Ｍ−１ ｓ−１以上のｋｏｎでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合し得る。いくつかのこのような実施態様では、Ａｂは、６．５以下のｐＨにおいては、例えば２５℃か３７℃で測定して１０−１０ Ｍ以下のＫＤおよび１０４ Ｍ−１ ｓ−１以上、１０５ Ｍ−１ ｓ−１以上、１０６ Ｍ−１ ｓ−１以上、１０７ Ｍ−１ ｓ−１以上のｋｏｎでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合し得る。いくつかのこのような実施態様では、Ａｂは、６．５以下のｐＨにおいては、例えば２５℃か３７℃で測定して１０−１０ Ｍ以下のＫＤおよび１０４ Ｍ−１ ｓ−１以上、１０５ Ｍ−１ ｓ−１以上、１０６ Ｍ−１ ｓ−１以上、１０７ Ｍ−１ ｓ−１以上のｋｏｎでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合し得る。
【００５５】
いくつかの実施態様では、Ａｂは、６．５以下のｐＨにおいては、例えば２５℃か３７℃で測定して１０−７ Ｍ以下のＫＤおよび１０−５ ｓ−１以下、１０−４ ｓ−１以下、１０−３ ｓ−１以下、１０−２ ｓ−１以下または１０−１ ｓ−１以下のｋｏｆｆで、ならびに例えば２５℃か３７℃で測定して１０４ Ｍ−１ ｓ−１以上、１０５ Ｍ−１ ｓ−１以上、１０６ Ｍ−１ ｓ−１以上、１０７ Ｍ−１ ｓ−１以上のｋｏｎでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合し得る。いくつかの実施態様では、Ａｂは、６．５以下のｐＨにおいては、例えば２５℃か３７℃で測定して１０−８ Ｍ以下およびｋｏｆｆが１０−５ ｓ−１以下、１０−４ ｓ−１以下、１０−３ ｓ−１以下、１０−２ ｓ−１以下または１０−１ ｓ−１以下のＫＤで、ならびに例えば２５℃か３７℃で測定して１０４ Ｍ−１ ｓ−１以上、１０５ Ｍ−１ ｓ−１以上、１０６ Ｍ−１ ｓ−１ 以上、１０７ Ｍ−１ ｓ−１以上のｋｏｎでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合し得る。いくつかの実施態様では、Ａｂは、６．５以下のｐＨにおいては、例えば２５℃か３７℃で測定して１０−９ Ｍ以下およびｋｏｆｆが１０−５ ｓ−１以下、１０−４ ｓ−１以下、１０−３ ｓ−１以下、１０−２ ｓ−１以下、または１０−１ ｓ−１以下のＫＤで、ならびに例えば２５℃か３７℃で測定して１０４ Ｍ−１ ｓ−１以上、１０５ Ｍ−１ ｓ−１以上、１０６ Ｍ−１ ｓ−１ 以上、１０７ Ｍ−１ ｓ−１以上のｋｏｎでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合し得る。いくつかのこのような実施態様では、Ａｂは、６．５以下のｐＨにおいては、例えば２５℃か３７℃で測定して１０−１０ Ｍ以下のＫＤ、および１０−５ ｓ−１以下、１０−４ ｓ−１以下、１０−３ ｓ−１以下、１０−２ ｓ−１以下または１０−１ ｓ−１以下のｋｏｆｆで、ならびに例えば２５℃か３７℃で測定して１０４ Ｍ−１ ｓ−１以上、１０５ Ｍ−１ ｓ−１以上、１０６ Ｍ−１ ｓ−１以上、１０７ Ｍ−１ ｓ−１以上のｋｏｎでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合し得る。
【００５６】
また上記のように、上記の実施態様のいくつかでは、ＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質はｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤであるか、または、例えばＩｇＶドメインなどのようなｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤの一部である。上記の実施態様のいくつかでは、Ａｂは、配列番号２のアミノ酸２０−９５を含むエピトープに特異的に結合し得る。上記の実施態様のいくつかでは、Ａｂは、配列番号２のアミノ酸２０−７０を含むエピトープに特異的に結合し得る。上記の実施態様のいくつかでは、Ａｂは、配列番号２のアミノ酸３５−９５を含むエピトープに特異的に結合し得る。上記の実施態様のいくつかでは、Ａｂは、配列番号２のアミノ酸３５−７０を含むエピトープに特異的に結合し得る。上記のいくつかの実施態様では、エピトープは、残基２０−９５、２０−７０、３５−９５または３５−７０からの、配列番号２の上記の部分のうちの１つだけではなく、配列番号２の別の部分、例えば配列番号２の残基９５−１０５を含む３次元のエピトープである。特定の実施態様では、Ａｂは、国際公開第２０１５／０９７５３６号に記載のＡｂが結合するｈＶＩＳＴＡのエピトープに結合する。例えば、Ａｂは、国際公開第２０１５／０９７５３６号に開示されたＡｂと、ｈＶＩＳＴＡへの結合について競合または交差競合してもよい。特定の実施態様では、Ａｂは、ヒトＶＩＳＴＡのコンフォメーションエピトープに結合する。特定の実施態様では、Ａｂは、ヒトＶＩＳＴＡの配列番号２の残基１０３−１１１および配列番号２の残基１３６−１４６を含むか、またはその中に存在するコンフォメーションエピトープに結合する。特定の実施態様では、Ａｂは、ヒトＶＩＳＴＡの場合、配列番号２の残基２４−３６、５４−６５および１００−１０２を含むか、またはその中に存在するコンフォメーションエピトープに結合する。特定の実施態様では、Ａｂは、ヒトＶＩＳＴＡのＦＧループ内のアミノ酸残基を含むコンフォメーションエピトープに結合する。いくつかの実施態様では、Ａｂは、配列番号２のアミノ酸残基３５−１２７および／または３７−１２５を含むポリペプチドに結合する。いくつかの実施態様では、Ａｂは、配列番号２のアミノ酸残基３５０−１２７を含むＶＩＳＴＡ ＥＣＤポリペプチドまたはその部分に結合するが、抗体は、アミノ酸置換を含むＶＩＳＴＡ ＥＣＤポリペプチドまたはその部分に結合しないか、または親和性が低下した状態で結合し、ここで置換は、（１）次のアミノ酸残基：Ｔ３５、Ｙ３７、Ｋ３８、Ｔ３９、Ｙ４１、Ｒ５４、Ｔ６１、Ｆ６２、Ｑ６３、Ｌ６５、Ｈ６６、Ｌ６７、Ｈ６８、Ｈ６９、Ｆ９７、Ｌ１１５、Ｖ１１７、Ｉ１１９、Ｈ１２１、Ｈ１２２、Ｓ１２４、Ｅ１２５、Ｒ１２７と配列番号２のうちの１つの置換であるか、または（２）次のアミノ酸残基：Ｙ３７、Ｔ３９、Ｒ５４、Ｆ６２、Ｑ６３、Ｈ６６、Ｌ１１５、Ｖ１１７、Ｉ１１９、Ｓ１２４またはＥ１２５のうちの１つの置換である。いくつかの実施態様では、抗ＶＩＳＴＡ抗体は、例えば、実施例および／または特許請求の範囲に記載されるように、本明細書に記載の抗体と同じ結合特性（または著しく似ている結合特性）を有する。
【００５７】
上記の抗体の中には、ｐＨによってＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に対する差別的な結合親和性を示すものもある。酸性条件下、例えばｐＨ６．５以下でＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合する特定のＡｂは、中性および／またはアルカリ性ｐＨでも、同様の親和性でＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合する（すなわち、それらは「ｐａｎバインダー」である）。例えば、いくつかのこのようなＡｂの中には、ｐＨ６．５でのＫＤがｐＨ７．０でのＫＤの１．５倍以内であるような、（例えば２５℃または３７℃の一定温度で）ｐＨ６．５およびｐＨ７．０の両方で１０−７ Ｍ以下のＫＤでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合するものもある。いくつかのこのようなＡｂの中には、ｐＨ６．５でのＫＤがｐＨ７．０でのＫＤの１．５倍以内であるような、（例えば２５℃または３７℃の一定温度で）ｐＨ６．５およびｐＨ７．０の両方で１０−８ Ｍ以下のＫＤでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合するものもある。いくつかのこのようなＡｂの中には、ｐＨ６．５でのＫＤがｐＨ７．０でのＫＤの１．５倍以内であるような、（例えば２５℃または３７℃の一定温度で）ｐＨ６．５およびｐＨ７．０の両方で１０−８ Ｍ以下のＫＤでｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合するものもある。
【００５８】
酸性条件下、例えばｐＨ６．５以下でＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合する特定のＡｂは、中性、生理的および／またはアルカリ性条件では、より低い親和性でＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合し得る（「ｐＨ感受性バインダー」または「ｐＨ感受性Ａｂ」）。酸性条件下、例えばｐＨ６．５以下でＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合する特定のＡｂは、中性、生理的および／またはアルカリ性条件では、ＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に有意でない、例えばほぼ検出不可能な結合を有することがある。例えば、いくつかの実施態様では、Ａｂは、ｐＨ６．５では１０−８ Ｍ以下のＫＤで、かつ、ｐＨ７．０および／またはｐＨ７．４では１０−８ Ｍを上回るＫＤで、ＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合し得る。いくつかのこのような実施態様では、Ａｂは、ｐＨ６．５においては１０−８ Ｍ以下のＫＤで、かつ、ｐＨ７．０および／またはｐＨ７．４においては、ｐＨ６．５でのＫＤの１．５倍を超えるＫＤでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合し得る。特定の実施態様では、（例えば２５℃または３７℃の一定温度で）ｐＨ６．５において、ｐＨ７．０におけるＫｄの３分の２以下、２分の１以下、５分の１以下、１０分の１以下、２０分の１以下、５０分の１以下、１００分の１以下、３００分の１以下、５００分の１以下、１０００分の１以下、または５０００分の１以下のＫＤでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合するｐＨ感受性Ａｂが提供される。例えば、場合によってＡｂは、（例えば２５℃または３７℃の一定温度で）ｐＨ６．０において、ｐＨ７．０および／またはｐＨ７．４以上におけるＫＤと比較して、３分の２以下、２分の１以下、５分の１以下、１０分の１以下、２０分の１以下、５０分の１以下、１００分の１以下、３００分の１以下、５００分の１以下、１０００分の１以下、または５０００分の１以下のＫＤでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合する。
【００５９】
特定の実施態様では、Ａｂは、中性、生理的またはアルカリ性条件におけるよりも酸性条件においてより低いｋｏｆｆでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合する。特定の実施態様では、例えば２５℃か３７℃で測定して、酸性条件下、ｐＨ６．５において、ｐＨ７．０および／またはｐＨ７．４におけるｋｏｆｆの３分の２以下、２分の１以下、５分の１以下、１０分の１以下、２０分の１以下、５０分の１以下、１００分の１以下、または１０００分の１以下のｋｏｆｆでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合するＡｂが提供される。言い換えると、オフ速度は、中性ｐＨよりも酸性ｐＨにおいて、より遅い。例えば、いくつかの実施態様では、Ａｂは、例えば２５℃か３７℃で測定して、ｐＨ６．０においては、ｐＨ７．０および／またはｐＨ７．４におけるｋｏｆｆ速度の３分の２以下、２分の１以下、５分の１以下、１０分の１以下、２０分の１以下、５０分の１以下、１００分の１以下または１０００分の１以下のｋｏｆｆ速度でＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合する。特定の実施態様では、例えば２５℃か３７℃で測定して、ｐＨ６．５において、ｐＨ７．４におけるＫｏｆｆの３分の２以下、２分の１以下、５分の１以下、１０分の１以下、２０分の１以下、５０分の１以下、１００分の１以下または１０００分の１以下のＫｏｆｆでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合するＡｂが提供される。いくつかの実施態様では、Ａｂは、例えば２５℃か３７℃で測定して、ｐＨ６．０においては、ｐＨ７．４におけるｋｏｆｆ速度の３分の２以下、２分の１以下、５分の１以下、１０分の１以下、２０分の１以下、５０分の１以下、１００分の１以下または１０００分の１以下のｋｏｆｆ速度でＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合する。特定の実施態様では、例えば２５℃か３７℃で測定して、ｐＨ６．０−６．５において、ｐＨ７．０−７．４におけるＫｏｆｆの３分の２以下、２分の１以下、５分の１以下、１０分の１以下、２０分の１以下、５０分の１以下、１００分の１以下または１０００分の１以下のＫｏｆｆでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合するＡｂが提供される。
【００６０】
特定の実施態様では、Ａｂは、中性、生理的またはアルカリ性条件におけるよりも酸性条件においてより高いｋｏｎでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合する。特定の実施態様では、例えば２５℃か３７℃で測定して、酸性条件下、ｐＨ６．５において、ｐＨ７．０および／またはｐＨ７．４におけるｋｏｎの２倍以上、５倍以上、１０倍以上、２０倍以上、５０倍以上、１００倍以上または１０００倍以上のｋｏｎでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合するＡｂが提供される。例えば、いくつかの実施態様では、Ａｂは、例えば２５℃か３７℃で測定して、ｐＨ６．０においては、ｐＨ７．０および／またはｐＨ７．４におけるｋｏｎの２倍以上、５倍以上、１０倍以上、２０倍以上、５０倍以上、１００倍以上または１０００倍以上のｋｏｎでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合する。
【００６１】
特定の実施態様では、Ａｂは、少なくとも１つのヒスチジン残基、例えば、配列番号１のＨｉｓ ９８がプロトン化されるｐＨでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合する。特定の実施態様では、Ａｂは、ＥＣＤ中のほとんどのヒスチジン残基がプロトン化されるｐＨ（これはｐＨ６．５以下、例えばｐＨ６．０からｐＨ６．５の間であると予想される）でＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合する。
【００６２】
また、本明細書に包含されるのは、酸性ｐＨでの結合の親和性が高いままであるという条件で、中性、生理的またはアルカリ性ｐＨにおいて酸性ｐＨにおけるよりも高い親和性でＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合するＡｂである。例えば、Ａｂは、ｐＨ７．０ではｐＨ６．５での３分の２以下、２分の１以下、５分の１以下、１０分の１以下、２０分の１以下、５０分の１以下、１００分の１以下、３００分の１以下、５００分の１以下、１０００分の１以下のＫＤで結合するにもかかわらず、ｐＨ６．５とｐＨ７．０の両方において１０−８ Ｍ以下のＫＤでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合する。
【００６３】
また、本明細書に包含されるのは、本セクションの上記特性のうちの１つ以上を共有するＡｂである。特定のＫＤ、ｋｏｆｆ、ｋｏｎ、特定のエピトープなどの上記の特性は、単独では扱われない。したがって、Ａｂは、上述した配列番号２の領域のいずれかの領域を含むエピトープに結合してもよく、また、異なるｐＨでのそのＫＤ、ｋｏｆｆまたはｋｏｎの１または複数の挙動によって示されているように、上述したｐａｎ結合性またはｐＨ感受性またはｐＨ選択的結合特性を有してもよい。
【００６４】
上記のいずれかの実施態様において、Ａｂは、例えば、全長抗体（すなわち全長重鎖（Ｃ末端リジンを有するか否かにかかわらず）および全長軽鎖を含む）、またはＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片、（Ｆａｂ’）２断片、ｓｃＦｖ断片、Ｆｖ断片等の抗原結合断片であってもよく、またはＡｂは、キメラ、ヒト化またはヒト抗体であってもよく、またはＡｂは、二重特異性抗体または多重特異性抗体であってもよい。
【００６５】
所与のｐＨにおいて、あるＡｂがＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質にどの程度よく結合するかの判定は、複数の異なる方法を用いて実施することができる。例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）アッセイなどの表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）による方法がある。例示的なＳＰＲアッセイは、固定化されたキャプチャー用試薬を用いてＣＭ４センサーチップ上の１または複数の抗体を捕捉すること（例えばＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）抗ヒトＦｃキャプチャー用キット、ＧＥヘルスケア カタログ＃ＢＲ−１００８−３９、またはＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）抗マウスキャプチャー用キット、ＧＥヘルスケア カタログ＃ＢＲ−１００８−３９を使用）と、濃度シリーズのアナライトとしてＶＩＳＴＡ抗原を流して、所望のｐＨを持つランニング緩衝液中の結合速度と親和性を決定することとを含む。一実施態様では、ＶＩＳＴＡは、０．１ｎＭから５００ｎＭの範囲内の２‐５の濃度（例：０．１ｎＭ、１ｎＭ、１０ｎＭ、１００ｎＭ、５００ｎＭ）で、３０ｕＬ／ｍｉｎの流量で、最大４分間の結合時間および最大１０分間の解離時間で注入される。結合サイクルの合間に、それぞれのキャプチャーキットのメーカーの指示書に従って、キャプチャー表面を再生させる。全てのデータは、参照フローセルとブランク注入を使用して二重参照される。Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ２００評価ソフトウェアを使用して、単純な１：１のカイネティクスを持つデータを質量移動を伴うＬａｎｇｍｕｉｒ結合モデルに当てはめる。実施例に記載されているＳＰＲ法も使用することができる。
【００６６】
ＶＩＳＴＡ ＥＣＤポリペプチドに対するＡｂの親和性は、ＶＩＳＴＡ ＥＣＤポリペプチド、ＰＳＧＬ−１またはヘパラン硫酸を発現する細胞をその表面に使用して決定でき、この方法は、フローサイトメトリーを含み、細胞結合ＶＩＳＴＡ−ＥＣＤへのＡｂの結合は所与のｐＨ、例えばｐＨ６．５以下で決定される。例示的なフローサイトメトリーアッセイは、次のように構成される：２９３Ｔ細胞、またはｈＶＩＳＴＡ ＥＣＤを異所的に発現する他の細胞を、望ましいｐＨに調整したＨＢＳＳ＋１％ＢＳＡからなる緩衝液、例えば、ＭＥＳを用いたｐＨ６．０またはＨＥＰＥＳを用いたｐＨ７．４に再懸濁する。ｈＶＩＳＴＡに対するＡｂ（例えばヒトＩｇＧ）を約２０ｇ／ｍＬから連続的に希釈し、再懸濁した細胞と一緒に４℃で３０分間インキュベートする。その後、細胞を同じ緩衝液で２回洗浄して、所望のｐＨ、例えば６．０または７．４のｐＨを維持し、一次抗体（例えばヒトＩｇＧ）を認識し、かつ、低いｐＨで安定なフルオロフォアコンジュゲート二次抗体とインキュベートする。その後、細胞を前と同様に洗浄し、固定せずに直ちにＢＤ Ｆｏｒｔｅｓｓａまたは他のフローサイトメーター上で取得する。ＶＩＳＴＡ ＥＣＤポリペプチドに対するＡｂの親和性は、実施例に記載されているように決定することができる。
【００６７】
特定の実施態様では、ｈＶＩＳＴＡ ＥＣＤに結合するＡｂは、例えば細胞上のその結合パートナー（例えばＶＩＳＴＡ受容体）へのｈＶＩＳＴＡの結合を遮断する。阻害または遮断は、１００％または少なくとも９９％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％または５０％であり得る。特定の実施態様では、Ａｂは、酸性ｐＨ、例えばｐＨ６．５以下でＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合し、ＶＩＳＴＡのその結合パートナーへの結合を少なくとも５０％、例えば少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または１００％阻害する。特定の実施態様では、Ａｂは、ｐＨ７．０未満のｐＨで、ＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合し、ＶＩＳＴＡのその結合パートナーへの結合を少なくとも５０％阻害する。特定の実施態様では、Ａｂは、ｐＨ６．８．未満のｐＨで、ＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合し、ＶＩＳＴＡのその結合パートナーへの結合を少なくとも５０％阻害する。特定の実施態様では、Ａｂは、ｐＨ６．５未満のｐＨで、ＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合し、ＶＩＳＴＡのその結合パートナーへの結合を少なくとも５０％阻害する。特定の実施態様では、Ａｂは、ｐＨ６．３未満のｐＨで、ＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合し、ＶＩＳＴＡのその結合パートナーへの結合を少なくとも５０％阻害する。特定の実施態様では、Ａｂは、ｐＨ６．０未満のｐＨで、ＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合し、ＶＩＳＴＡのその結合パートナーへの結合を少なくとも５０％阻害する。特定の実施態様では、Ａｂは、ｐＨ５．８未満のｐＨで、ＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合し、ＶＩＳＴＡのその結合パートナーへの結合を少なくとも５０％阻害する。特定の実施態様では、Ａｂは、ｐＨ５．５未満のｐＨで、ＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合し、ＶＩＳＴＡのその結合パートナーへの結合を少なくとも５０％阻害する。特定の実施態様では、Ａｂは、ｐＨ５．３未満のｐＨで、ＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合し、ＶＩＳＴＡのその結合パートナーへの結合を少なくとも５０％阻害する。特定の実施態様では、Ａｂは、ｐＨ５．０未満のｐＨで、ＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合し、ＶＩＳＴＡのその結合パートナーへの結合を少なくとも５０％阻害する。
【００６８】
特定のＡｂは、ｐＨ５．０−ｐＨ７．０の範囲内のｐＨで、ＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合し、ＶＩＳＴＡのその結合パートナーへの結合を少なくとも５０％阻害する。特定のＡｂは、ｐＨ５．０−ｐＨ６．５の範囲内のｐＨで、ＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合し、ＶＩＳＴＡのその結合パートナーへの結合を少なくとも５０％阻害する。特定のＡｂは、ｐＨ５．０−ｐＨ６．０の範囲内のｐＨで、ＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合し、ＶＩＳＴＡのその結合パートナーへの結合を少なくとも５０％阻害する。特定のＡｂは、ｐＨ５．０−ｐＨ７．０の範囲内のｐＨで、ＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合し、ＶＩＳＴＡのその結合パートナーへの結合を少なくとも５０％阻害する。特定のＡｂは、ｐＨ５．５−ｐＨ６．５の範囲内のｐＨで、ＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合し、ＶＩＳＴＡのその結合パートナーへの結合を少なくとも５０％阻害する。特定のＡｂは、ｐＨ６．０−６．５の範囲内のｐＨで、ＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合し、ＶＩＳＴＡのその結合パートナーへの結合を少なくとも５０％阻害する。結合の阻害は、実施例に記載のように決定され得る。
【００６９】
ＶＩＳＴＡ結合パートナーは、ＰＳＧＬ−１（ヒトＰＳＧＬ−１など）でもよい。ヒトＰＳＧＬ−１アイソフォームの配列は、本明細書において配列番号３−１０として提供される。ＶＩＳＴＡはシアリルルイスＸの有無にかかわらずＰＳＧＬ−１に結合する。また、結合パートナーは、例えば特定の細胞に存在するヘパラン硫酸プロテオグリカンであってもよい。
【００７０】
ＶＩＳＴＡ結合パートナーへの結合の阻害は、抗体の存在下および非存在下で、ＶＩＳＴＡが結合する細胞、例えばＴ細胞（例えば、活性化されているか否かにかかわらずＣＤ４＋ Ｔ細胞、ＣＤ８＋ Ｔ細胞）、ＮＫ細胞またはＶＩＳＴＡが結合する他の細胞へのＶＩＳＴＡ（またはＶＩＳＴＡ ＥＣＤまたはＶＩＳＴＡ ＩｇＶドメインまたはＶＩＳＴＡ陽性細胞）の結合の阻害を測定することにより決定できる。抗体がその結合パートナーまたは結合パートナーを発現するＴ細胞へのＶＩＳＴＡの結合を阻害するかどうかを判定するために使用できる例示的な実験は、フローサイトメトリーアッセイ、例えば次を含むアッセイである：ドナー血液、バフィーコートまたはロイコパックからのヒト末梢血単核球、バフィーコート、またはロイコパックを、ＨＢＳＳ＋１％ＢＳＡからなる緩衝液に再懸濁させ、例えば、ＭＥＳを用いてｐＨ６．０またはＨＥＰＥＳを用いてｐＨ７．４などの望ましいｐＨに調整する。その後、細胞を４℃で３０分間、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ（ＶＩＳＴＡ−Ｆｃ）に融合したｈＶＩＳＴＡ ＥＣＤからなる２０μｇ／ｍＬ組換えキメラタンパク質と、様々な濃度の候補ＶＩＳＴＡ遮断抗体またはコントロール抗体と共にインキュベートする。その後、細胞を同じ緩衝液で２回洗浄して、所望のｐＨ、例えば６．０または７．４のｐＨを維持し、ＶＩＳＴＡ−Ｆｃを認識するが候補遮断抗体またはコントロール抗体は認識せず、かつ、低いｐＨで安定なフルオロフォアコンジュゲート二次抗体と共にさらに３０分間、４℃でインキュベートする。その後、細胞を前と同様に洗浄し、固定せずに直ちにＢＤ Ｆｏｒｔｅｓｓａまたは他のフローサイトメーター上で取得する。結合の阻害は、例えば実施例に記載のように決定され得る。
【００７１】
特定の実施態様では、本明細書に記載されるＡｂは、抗原特異的免疫応答などの免疫応答を誘発または強化することができる。特定の実施態様では、Ａｂは、特に腫瘍微小環境で見られるような酸性ｐＨで、Ｔ細胞活性を刺激する。Ｔ細胞活性の刺激は、例えば、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）において、または抗原提示細胞（天然または合成）およびＴ細胞を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイで測定することができる。Ｔ細胞活性の刺激はまた、例えば、実施例に記載のＪｕｒｋａｔアッセイを使用しても測定することができる。Ｔ細胞活性の刺激はまた、Ｔ細胞からのＩＦＮ−γ分泌を決定することによっても測定することができ、ここで、強化されたＩＦＮ−γ分泌がＴ細胞刺激を示す。活性化Ｔ細胞からの他のサイトカインの分泌も測定することができる。特定の実施態様では、活性化されたＴ細胞のシグナル伝達、例えばＮＦ−ｋＢレベルが測定される。特定の実施態様では、本明細書に記載されているＡｂは細胞接着を阻害し、これは、実施例に記載されているように測定することができる。
【００７２】
特に腫瘍微小環境で見られるような酸性ｐＨにおける抗ＶＩＳＴＡ Ａｂの活性は、単球アッセイ、ＡＤＣＣアッセイおよびＡＤＣＰアッセイでも示すことができる。
【００７３】
特定の実施態様では、抗ＶＩＳＴＡ Ａｂは、腫瘍モデル、例えばヒトＶＩＳＴＡノックイン腫瘍モデルにおける腫瘍成長を阻害する。
【００７４】
本明細書の実施例に示されるように、抗体の薬物動態（ＰＫ）特性（すなわち半減期）を増大させるなどのエンドソーム内での抗ＶＩＳＴＡ Ａｂのリサイクルには、抗ＶＩＳＴＡ抗体が酸性条件下でＶＩＳＴＡに結合する必要がある。したがって、本明細書で詳述されているように、低ｐＨでＶＩＳＴＡに結合する抗ＶＩＳＴＡ Ａｂは、酸性ｐＨでＶＩＳＴＡに結合しないＶＩＳＴＡ抗体と比較して、より長い許容可能な半減期を有することが期待される。
【００７５】
例示的なｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤ結合Ａｂ
本明細書で提供されるのは、生理的ｐＨまたは中性ｐＨと比較して酸性ｐＨ（例えば酸性条件）でｈＶＩＳＴＡ（ＥＣＤ）に優先的に結合するＡｂである。
【００７６】
特定の実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、本明細書で提供される任意の抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（「ＶＨ」）を含む。特定の実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、本明細書で提供される任意の抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＨを含む。特定の実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、Ｐ１−０６１０２９もしくはＰ１−０６１０１５またはその子孫、例えばＰ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７５７、Ｐ１−０６８７５９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６３、Ｐ１−０６８７６５、Ｐ１−０６８７６７、Ｐ１−０６８７６９、Ｐ１−０６８７７１、Ｐ１−０６８７７３、Ｐ１−０６８７７５、Ｐ１−０６９０５９、Ｐ１−０６９０６１、Ｐ１−０６９０６３、Ｐ１−０６９０６５、Ｐ１−０６９０６７、Ｐ１−０６９０６９、Ｐ１−０６９０７１、Ｐ１−０６９０７３、Ｐ１−０６９０７５、Ｐ１−０６９０７７、Ｐ１−０６１０１５、Ｐ１−０６８７３６、Ｐ１−０６８７３８、Ｐ１−０６８７４０、Ｐ１−０６８７４２、Ｐ１−０６８７４４、Ｐ１−０６８７６６、Ｐ１−０６８７４８、Ｐ１−０６８７５０、Ｐ１−０６８７５２、Ｐ１−０６８７５４、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥまたはＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３を含むＶＨを含む。これらの各種のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３は、下記の配列表に示す上記抗体種のそれぞれのＶＨ配列のアミノ酸位置２６−３５（ＶＨ ＣＤＲ１）、５０−６６（ＶＨ ＣＤＲ２）および９９−１１０（ＶＨ ＣＤＲ３）を含む。また、これらのＣＤＲは、下記の配列表に記載されている上記抗体種のＶＨの各配列に下線が引かれ、太字で記載されている。
【００７７】
特定の実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、本明細書で提供される任意の抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬを含む。特定の実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、Ｐ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７５７、Ｐ１−０６８７５９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６３、Ｐ１−０６８７６５、Ｐ１−０６８７６７、Ｐ１−０６８７６９、Ｐ１−０６８７７１、Ｐ１−０６８７７３、Ｐ１−０６８７７５、Ｐ１−０６９０５９、Ｐ１−０６９０６１、Ｐ１−０６９０６３、Ｐ１−０６９０６５、Ｐ１−０６９０６７、Ｐ１−０６９０６９、Ｐ１−０６９０７１、Ｐ１−０６９０７３、Ｐ１−０６９０７５、Ｐ１−０６９０７７、Ｐ１−０６１０１５、Ｐ１−０６８７３６、Ｐ１−０６８７３８、Ｐ１−０６８７４０、Ｐ１−０６８７４２、Ｐ１−０６８７４４、Ｐ１−０６８７６６、Ｐ１−０６８７４８、Ｐ１−０６８７５０、Ｐ１−０６８７５２、Ｐ１−０６８７５４、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥまたはＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのうちの１つのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬを含む。これらの各種のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３は、下記の配列表に示す上記抗体種のそれぞれのＶＬ配列のアミノ酸位置２４−３５（ＶＬ ＣＤＲ１）、５１−５７（ＶＬ ＣＤＲ２）および９０−９８（ＶＨＬＣＤＲ３）を含む。また、これらのＣＤＲは、それらの配列のそれぞれに下線が引かれ、太字で記載されて���る。
【００７８】
特定の実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、本明細書で提供される任意の抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３を含むＶＨと、本明細書で提供される任意の抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。特定の実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、本明細書で提供される任意の抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＨと、本明細書で提供される任意の抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。特定の実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、Ｐ１−０６１０２９もしくはＰ１−０６１０１５またはその子孫、例えばＰ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７５７、Ｐ１−０６８７５９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６３、Ｐ１−０６８７６５、Ｐ１−０６８７６７、Ｐ１−０６８７６９、Ｐ１−０６８７７１、Ｐ１−０６８７７３、Ｐ１−０６８７７５、Ｐ１−０６９０５９、Ｐ１−０６９０６１、Ｐ１−０６９０６３、Ｐ１−０６９０６５、Ｐ１−０６９０６７、Ｐ１−０６９０６９、Ｐ１−０６９０７１、Ｐ１−０６９０７３、Ｐ１−０６９０７５、Ｐ１−０６９０７７、Ｐ１−０６１０１５、Ｐ１−０６８７３６、Ｐ１−０６８７３８、Ｐ１−０６８７４０、Ｐ１−０６８７４２、Ｐ１−０６８７４４、Ｐ１−０６８７６６、Ｐ１−０６８７４８、Ｐ１−０６８７５０、Ｐ１−０６８７５２、Ｐ１−０６８７５４、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥまたはＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３を含むＶＨと、Ｐ１−０６１０２９もしくはＰ１−０６１０１５またはその子孫、例えばＰ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７５７、Ｐ１−０６８７５９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６３、Ｐ１−０６８７６５、Ｐ１−０６８７６７、Ｐ１−０６８７６９、Ｐ１−０６８７７１、Ｐ１−０６８７７３、Ｐ１−０６８７７５、Ｐ１−０６９０５９、Ｐ１−０６９０６１、Ｐ１−０６９０６３、Ｐ１−０６９０６５、Ｐ１−０６９０６７、Ｐ１−０６９０６９、Ｐ１−０６９０７１、Ｐ１−０６９０７３、Ｐ１−０６９０７５、Ｐ１−０６９０７７、Ｐ１−０６１０１５、Ｐ１−０６８７３６、Ｐ１−０６８７３８、Ｐ１−０６８７４０、Ｐ１−０６８７４２、Ｐ１−０６８７４４、Ｐ１−０６８７６６、Ｐ１−０６８７４８、Ｐ１−０６８７５０、Ｐ１−０６８７５２、Ｐ１−０６８７５４、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥまたはＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３を含むＶＬとを含む。
【００７９】
いくつかの実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、以下を含み得る。
（ａ） Ｐ１−０６１０２９のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６１０２９のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｂ） Ｐ１−０６１０１５のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６１０１５のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｃ） Ｐ１−０６８７５７のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７５７のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｄ） Ｐ１−０６８７５９のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７５９のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｅ） Ｐ１−０６８７６１のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｆ） Ｐ１−０６８７６３のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６３のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｇ） Ｐ１−０６８７６５のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６５のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｈ） Ｐ１−０６８７６７のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｉ） Ｐ１−０６８７６９のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６９のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｊ） Ｐ１−０６８７７１のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７７１のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｋ） Ｐ１−０６８７７３のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７７３のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｌ） Ｐ１−０６８７７５のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７７５のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｍ） Ｐ１−０６９０５９のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６９０５９のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｎ） Ｐ１−０６９０６１のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６９０６１のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｏ） Ｐ１−０６９０６３のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６９０６３のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｐ） Ｐ１−０６９０６５のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６９０６５のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｑ） Ｐ１−０６９０６７のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６９０６７のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｒ） Ｐ１−０６９０６９のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６９０６９のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｓ） Ｐ１−０６９０７１のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６９０７１のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｔ） Ｐ１−０６９０７３のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６９０７３のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｕ） Ｐ１−０６９０７５のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６９０７５のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｖ） Ｐ１−０６９０７７のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６９０７７のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｗ） Ｐ１−０６８７３６のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７３６のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｘ） Ｐ１−０６８７３８のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７３８のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｙ） Ｐ１−０６８７４０のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７４０のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｚ） Ｐ１−０６８７４２のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７４２のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ａａ） Ｐ１−０６８７４４のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７４４のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｂｂ） Ｐ１−０６８７４６のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７４６のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｃｃ） Ｐ１−０６８７４８のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７４８のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｄｄ） Ｐ１−０６８７５０のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７５０のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｅｅ） Ｐ１−０６８７５２のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７５２のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｆｆ） Ｐ１−０６８７５４のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７５４のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｇｇ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５ＡのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５ＡのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｈｈ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００ＧのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００ＧのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｉｉ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６ＮのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６ＮのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｊｊ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６ＮのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６ＮのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｋｋ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０ＤのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０ＤのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｌｌ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｍｍ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００ＧのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００ＧのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｎｎ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００ＧのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００ＧのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｏｏ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６ＮのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６ＮのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｐｐ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｑｑ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｒｒ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｓｓ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｔｔ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｕｕ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２ＹのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２ＹのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｖｖ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５ＡのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５ＡのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｗｗ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６ＮのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６ＮのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｘｘ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２ＹのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２ＹのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｙｙ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００ＧのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００ＧのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｚｚ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ａａａ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２ＶのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２ＶのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｂｂｂ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２ＮのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２ＮのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｃｃｃ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５ＡのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５ＡのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｄｄｄ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２ＶのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２ＶのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｅｅｅ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２ＶのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２ＶのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｆｆｆ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５ＡのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５ＡのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｇｇｇ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２ＮのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２ＮのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｈｈｈ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２ＶのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２ＶのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｉｉｉ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０ＤのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０ＤのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｊｊｊ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｋｋｋ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２ＶのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２ＶのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｌｌｌ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｍｍｍ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｎｎｎ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｏｏｏ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｐｐｐ） Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２ＤのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２ＤのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｑｑｑ） Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｒｒｒ） Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２ＤのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２ＤのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｓｓｓ） Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ；または
（ｔｔｔ） Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ。
【００８０】
繰り返しになるが、以下の配列表は、上で列挙したＩｇＧ１．３重鎖定常領域を有する抗体の重鎖および軽鎖可変領域配列と完全長重鎖および軽鎖配列を提供し（表中に別のＨＣ定常領域が記載されていない限り）、それらのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の位置をアミノ酸残基別に注記し、各ＶＨおよびＶＬ配列中のＣＤＲを太字および下線で示したものである。したがって、配列表に示す配列番号６７のアミノ酸の太字と下線で示されているように、例えばＰ１−０６１０２９のＶＨ ＣＤＲ１は配列番号６７のアミノ酸２６−３５を含む一方、ＶＨ ＣＤＲ２は配列番号６７のアミノ酸５０−６６を含み、ＶＨ ＣＤＲ３は配列番号６７のアミノ酸９９−１１０を含む等、以下同様である。
【００８１】
特定の実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、本明細書で提供される任意の抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨを含む。本明細書で提供される特定の抗体種に対する個々のＶＨ配列は配列表に列挙されている。特定の実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、Ｐ１−０６１０２９もしくはＰ１−０６１０１５またはその子孫、例えばＰ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７５７、Ｐ１−０６８７５９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６３、Ｐ１−０６８７６５、Ｐ１−０６８７６７、Ｐ１−０６８７６９、Ｐ１−０６８７７１、Ｐ１−０６８７７３、Ｐ１−０６８７７５、Ｐ１−０６９０５９、Ｐ１−０６９０６１、Ｐ１−０６９０６３、Ｐ１−０６９０６５、Ｐ１−０６９０６７、Ｐ１−０６９０６９、Ｐ１−０６９０７１、Ｐ１−０６９０７３、Ｐ１−０６９０７５、Ｐ１−０６９０７７、Ｐ１−０６１０１５、Ｐ１−０６８７３６、Ｐ１−０６８７３８、Ｐ１−０６８７４０、Ｐ１−０６８７４２、Ｐ１−０６８７４４、Ｐ１−０６８７６６、Ｐ１−０６８７４８、Ｐ１−０６８７５０、Ｐ１−０６８７５２、Ｐ１−０６８７５４、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥまたはＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨを含む。
【００８２】
いくつかの実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、抗体Ｐ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７５７、Ｐ１−０６８７５９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６３、Ｐ１−０６８７６５、Ｐ１−０６８７６７、Ｐ１−０６８７６９、Ｐ１−０６８７７１、Ｐ１−０６８７７３、Ｐ１−０６８７７５、Ｐ１−０６９０５９、Ｐ１−０６９０６１、Ｐ１−０６９０６３、Ｐ１−０６９０６５、Ｐ１−０６９０６７、Ｐ１−０６９０６９、Ｐ１−０６９０７１、Ｐ１−０６９０７３、Ｐ１−０６９０７５、Ｐ１−０６９０７７、Ｐ１−０６１０１５、Ｐ１−０６８７３６、Ｐ１−０６８７３８、Ｐ１−０６８７４０、Ｐ１−０６８７４２、Ｐ１−０６８７４４、Ｐ１−０６８７６６、Ｐ１−０６８７４８、Ｐ１−０６８７５０、Ｐ１−０６８７５２、Ｐ１−０６８７５４、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥまたはＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのうちのいずれかのＶＨを含むが、ＶＨ配列のフレームワーク領域に１、２、３、４または５つのアミノ酸置換、例えば１、２、３、４または５つの保存的置換を有する。いくつかの実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、抗体Ｐ１−０６１０２９もしくはその子孫、例えばＰ１−０６８７５７、Ｐ１−０６８７５９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６３、Ｐ１−０６８７６５、Ｐ１−０６８７６７、Ｐ１−０６８７６９、Ｐ１−０６８７７１、Ｐ１−０６８７７３、Ｐ１−０６８７７５、Ｐ１−０６９０５９、Ｐ１−０６９０６１、Ｐ１−０６���０６３、Ｐ１−０６９０６５、Ｐ１−０６９０６７、Ｐ１−０６９０６９、Ｐ１−０６９０７１、Ｐ１−０６９０７３、Ｐ１−０６９０７５、Ｐ１−０６９０７７、Ｐ１−０６８７６６、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥまたはＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのいずれかのＶＨを含むが、配列表に示すＶＨ配列のフレームワーク領域に１つ以上の生殖系列復帰置換、例えばＫ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換の一方または両方を有する。そのようなアミノ酸置換を有する例示的なＶＨ配列は、配列表に提供され、残基１６および８４が太字および下線で強調されている。Ｐ１−０６１０１５は、そのＶＨフレームワーク領域の１６位にＲを含み、８４位にＡを含むことに注意されたい。
【００８３】
特定の実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、本明細書で提供される任意の抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのＶＨ ＣＤＲのアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、本明細書で提供される任意の抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのＶＨと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨを含む。特定の実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、Ｐ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７５７、Ｐ１−０６８７５９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６３、Ｐ１−０６８７６５、Ｐ１−０６８７６７、Ｐ１−０６８７６９、Ｐ１−０６８７７１、Ｐ１−０６８７７３、Ｐ１−０６８７７５、Ｐ１−０６９０５９、Ｐ１−０６９０６１、Ｐ１−０６９０６３、Ｐ１−０６９０６５、Ｐ１−０６９０６７、Ｐ１−０６９０６９、Ｐ１−０６９０７１、Ｐ１−０６９０７３、Ｐ１−０６９０７５、Ｐ１−０６９０７７、Ｐ１−０６１０１５、Ｐ１−０６８７３６、Ｐ１−０６８７３８、Ｐ１−０６８７４０、Ｐ１−０６８７４２、Ｐ１−０６８７４４、Ｐ１−０６８７６６、Ｐ１−０６８７４８、Ｐ１−０６８７５０、Ｐ１−０６８７５２、Ｐ１−０６８７５４、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥまたはＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＶＨのアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。特定の実施態様では、抗体のＶＨは、ＶＨ配列のフレームワーク領域における１、２、３、４または５個のアミノ酸置換、例えば１、２、３、４もしくは５個の保存的置換、またはＰ１−０６１０２９もしくはその子孫におけるＫ１６Ｒおよび／もしくはＴ８４Ａ置換の一方もしくは両方などの置換のために、配列表に示されたＶＨ配列のものとは異なる。
【００８４】
特定の実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、本明細書で提供される任意の抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨを含む。特定の実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、Ｐ１−０６１０２９もしくはＰ１−０６１０１５またはその子孫、例えばＰ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７５７、Ｐ１−０６８７５９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６３、Ｐ１−０６８７６５、Ｐ１−０６８７６７、Ｐ１−０６８７６９、Ｐ１−０６８７７１、Ｐ１−０６８７７３、Ｐ１−０６８７７５、Ｐ１−０６９０５９、Ｐ１−０６９０６１、Ｐ１−０６９０６３、Ｐ１−０６９０６５、Ｐ１−０６９０６７、Ｐ１−０６９０６９、Ｐ１−０６９０７１、Ｐ１−０６９０７３、Ｐ１−０６９０７５、Ｐ１−０６９０７７、Ｐ１−０６１０１５、Ｐ１−０６８７３６、Ｐ１−０６８７３８、Ｐ１−０６８７４０、Ｐ１−０６８７４２、Ｐ１−０６８７４４、Ｐ１−０６８７６６、Ｐ１−０６８７４８、Ｐ１−０６８７５０、Ｐ１−０６８７５２、Ｐ１−０６８７５４、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥまたはＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨを含み、場合によってＫ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換の一方または両方を有する。
【００８５】
特定の実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、本明細書で提供される任意の抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬを含む。特定の実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、Ｐ１−０６１０２９もしくはＰ１−０６１０１５またはその子孫、例えばＰ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７５７、Ｐ１−０６８７５９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６３、Ｐ１−０６８７６５、Ｐ１−０６８７６７、Ｐ１−０６８７６９、Ｐ１−０６８７７１、Ｐ１−０６８７７３、Ｐ１−０６８７７５、Ｐ１−０６９０５９、Ｐ１−０６９０６１、Ｐ１−０６９０６３、Ｐ１−０６９０６５、Ｐ１−０６９０６７、Ｐ１−０６９０６９、Ｐ１−０６９０７１、Ｐ１−０６９０７３、Ｐ１−０６９０７５、Ｐ１−０６９０７７、Ｐ１−０６１０１５、Ｐ１−０６８７３６、Ｐ１−０６８７３８、Ｐ１−０６８７４０、Ｐ１−０６８７４２、Ｐ１−０６８７４４、Ｐ１−０６８７６６、Ｐ１−０６８７４８、Ｐ１−０６８７５０、Ｐ１−０６８７５２、Ｐ１−０６８７５４、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥまたはＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬを含む。特定の実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、本明細書で提供される任意の抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのＶＬ ＣＤＲのアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、本明細書で提供される任意の抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少な���とも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＬを含む。特定の実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、Ｐ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７５７、Ｐ１−０６８７５９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６３、Ｐ１−０６８７６５、Ｐ１−０６８７６７、Ｐ１−０６８７６９、Ｐ１−０６８７７１、Ｐ１−０６８７７３、Ｐ１−０６８７７５、Ｐ１−０６９０５９、Ｐ１−０６９０６１、Ｐ１−０６９０６３、Ｐ１−０６９０６５、Ｐ１−０６９０６７、Ｐ１−０６９０６９、Ｐ１−０６９０７１、Ｐ１−０６９０７３、Ｐ１−０６９０７５、Ｐ１−０６９０７７、Ｐ１−０６１０１５、Ｐ１−０６８７３６、Ｐ１−０６８７３８、Ｐ１−０６８７４０、Ｐ１−０６８７４２、Ｐ１−０６８７４４、Ｐ１−０６８７６６、Ｐ１−０６８７４８、Ｐ１−０６８７５０、Ｐ１−０６８７５２、Ｐ１−０６８７５４、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥまたはＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＶＬのアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。特定の実施態様では、抗体のＶＬは、ＶＬ配列のフレームワーク領域における１、２、３、４または５個のアミノ酸置換、例えば１、２、３、４もしくは５個の保存的置換のために、配列表に示されたＶＬ配列のものとは異なる。
【００８６】
特定の実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、本明細書で提供される任意の抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬを含む。特定の実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、Ｐ１−０６１０２９もしくはＰ１−０６１０１５またはその子孫、例えばＰ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７５７、Ｐ１−０６８７５９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６３、Ｐ１−０６８７６５、Ｐ１−０６８７６７、Ｐ１−０６８７６９、Ｐ１−０６８７７１、Ｐ１−０６８７７３、Ｐ１−０６８７７５、Ｐ１−０６９０５９、Ｐ１−０６９０６１、Ｐ１−０６９０６３、Ｐ１−０６９０６５、Ｐ１−０６９０６７、Ｐ１−０６９０６９、Ｐ１−０６９０７１、Ｐ１−０６９０７３、Ｐ１−０６９０７５、Ｐ１−０６９０７７、Ｐ１−０６１０１５、Ｐ１−０６８７３６、Ｐ１−０６８７３８、Ｐ１−０６８７４０、Ｐ１−０６８７４２、Ｐ１−０６８７４４、Ｐ１−０６８７６６、Ｐ１−０６８７４８、Ｐ１−０６８７５０、Ｐ１−０６８７５２、Ｐ１−０６８７５４、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥまたはＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬを含む。
【００８７】
特定の実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、本明細書で提供される任意の抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨを含み、かつ、本明細書で提供される任意の抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬを含む。これらの特定の実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、Ｐ１−０６１０２９もしくはＰ１−０６１０１５またはその子孫、例えばＰ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７５７、Ｐ１−０６８７５９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６３、Ｐ１−０６８７６５、Ｐ１−０６８７６７、Ｐ１−０６８７６９、Ｐ１−０６８７７１、Ｐ１−０６８７７３、Ｐ１−０６８７７５、Ｐ１−０６９０５９、Ｐ１−０６９０６１、Ｐ１−０６９０６３、Ｐ１−０６９０６５、Ｐ１−０６９０６７、Ｐ１−０６９０６９、Ｐ１−０６９０７１、Ｐ１−０６９０７３、Ｐ１−０６９０７５、Ｐ１−０６９０７７、Ｐ１−０６１０１５、Ｐ１−０６８７３６、Ｐ１−０６８７３８、Ｐ１−０６８７４０、Ｐ１−０６８７４２、Ｐ１−０６８７４４、Ｐ１−０６８７６６、Ｐ１−０６８７４８、Ｐ１−０６８７５０、Ｐ１−０６８７５２、Ｐ１−０６８７５４、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥまたはＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６１０２９またはＰ１−０６１０１５のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。
【００８８】
ただし、特定の実施態様では、抗体のＶＨは、Ｐ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７５７、Ｐ１−０６８７５９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６３、Ｐ１−０６８７６５、Ｐ１−０６８７６７、Ｐ１−０６８７６９、Ｐ１−０６８７７１、Ｐ１−０６８７７３、Ｐ１−０６８７７５、Ｐ１−０６９０５９、Ｐ１−０６９０６１、Ｐ１−０６９０６３、Ｐ１−０６９０６５、Ｐ１−０６９０６７、Ｐ１−０６９０６９、Ｐ１−０６９０７１、Ｐ１−０６９０７３、Ｐ１−０６９０７５、Ｐ１−０６９０７７、Ｐ１−０６１０１５、Ｐ１−０６８７３６、Ｐ１−０６８７３８、Ｐ１−０６８７４０、Ｐ１−０６８７４２、Ｐ１−０６８７４４、Ｐ１−０６８７６６、Ｐ１−０６８７４８、Ｐ１−０６８７５０、Ｐ１−０６８７５２、Ｐ１−０６８７５４、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥのＶＨであるが、ＶＨ配列のフレームワーク領域に１、２、３、４または５つのアミノ酸置換、例えば１、２、３、４または５つの保存的置換を有し、ＶＬは、Ｐ１−０６１０２９またはＰ１−０６１０１５のＶＬである。特定の実施態様では、抗体のＶＨは、Ｐ１−０６１０２９またはその子孫、例えばＰ１−０６８７５７、Ｐ１−０６８７５９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６３、Ｐ１−０６８７６５、Ｐ１−０６８７６７、Ｐ１−０６８７６９、Ｐ１−０６８７７１、Ｐ１−０６８７７３、Ｐ１−０６８７７５、Ｐ１−０６９０５９、Ｐ１−０６９０６１、Ｐ１−０６９０６３、Ｐ１−０６９０６５、Ｐ１−０６９０６７、Ｐ１−０６９０６９、Ｐ１−０６９０７１、Ｐ１−０６９０７３、Ｐ１−０６９０７５、Ｐ１−０６９０７７、Ｐ１−０６８７６６、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥまたはＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＶＨであるが、Ｋ１６ＲまたはＴ８４Ａ置換の一方または両方を有し、ＶＬはＰ１−０６１０２９またはＰ１−０６１０１５のＶＬである。
【００８９】
特定の実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、Ｐ１−０６１０２９もしくはＰ１−０６１０１５またはその子孫、例えばＰ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７５７、Ｐ１−０６８７５９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６３、Ｐ１−０６８７６５、Ｐ１−０６８７６７、Ｐ１−０６８７６９、Ｐ１−０６８７７１、Ｐ１−０６８７７３、Ｐ１−０６８７７５、Ｐ１−０６９０５９、Ｐ１−０６９０６１、Ｐ１−０６９０６３、Ｐ１−０６９０６５、Ｐ１−０６９０６７、Ｐ１−０６９０６９、Ｐ１−０６９０７１、Ｐ１−０６９０７３、Ｐ１−０６９０７５、Ｐ１−０６９０７７、Ｐ１−０６１０１５、Ｐ１−０６８７３６、Ｐ１−０６８７３８、Ｐ１−０６８７４０、Ｐ１−０６８７４２、Ｐ１−０６８７４４、Ｐ１−０６８７６６、Ｐ１−０６８７４８、Ｐ１−０６８７５０、Ｐ１−０６８７５２、Ｐ１−０６８７５４、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥまたはＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＶＬを含み、場合によってＶＨはＫ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換の一方または両方を含む。
【００９０】
特定の実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、本明細書で提供される任意の抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのＶＨ ＣＤＲのアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに本明細書で提供される任意の抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのＶＬ ＣＤＲのアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、また、本明細書で提供される任意の抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂの対応するＶＨおよびＶＬとそれぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬも含む。特定の実施態様では、抗体のＶＨおよびＶＬは、配列のフレームワーク領域における１、２、３、４または５個のアミノ酸置換、例えば１、２、３、４もしくは５個の保存的置換、またはＶＨ配列におけるＫ１６Ｒおよび／もしくはＴ８４Ａ置換の一方もしくは両方などの置換のために、配列表に示されたＶＨおよびＶＬ配列とは異なる。
【００９１】
特定の実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、本明細書で提供される任意の抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＶＬを含む。特定の実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、Ｐ１−０６１０２９もしくはＰ１−０６１０１５またはその子孫、例えばＰ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７５７、Ｐ１−０６８７５９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６３、Ｐ１−０６８７６５、Ｐ１−０６８７６７、Ｐ１−０６８７６９、Ｐ１−０６８７７１、Ｐ１−０６８７７３、Ｐ１−０６８７７５、Ｐ１−０６９０５９、Ｐ１−０６９０６１、Ｐ１−０６９０６３、Ｐ１−０６９０６５、Ｐ１−０６９０６７、Ｐ１−０６９０６９、Ｐ１−０６９０７１、Ｐ１−０６９０７３、Ｐ１−０６９０７５、Ｐ１−０６９０７７、Ｐ１−０６１０１５、Ｐ１−０６８７３６、Ｐ１−０６８７３８、Ｐ１−０６８７４０、Ｐ１−０６８７４２、Ｐ１−０６８７４４、Ｐ１−０６８７６６、Ｐ１−０６８７４８、Ｐ１−０６８７５０、Ｐ１−０６８７５２、Ｐ１−０６８７５４、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥまたはＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列からそれぞれなるＶＨおよびＶＬを含み、場合によってＶＨはＫ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換の一方または両方を含む。
【００９２】
抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、以下を含み得る。
（ａ） Ｐ１−０６１０２９のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６１０２９のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｂ） Ｐ１−０６１０１５のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６１０１５のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｃ） Ｐ１−０６８７５７のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７５７のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｄ） Ｐ１−０６８７５９のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７５９のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｅ） Ｐ１−０６８７６１のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｆ） Ｐ１−０６８７６３のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６３のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｇ） Ｐ１−０６８７６５のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６５のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｈ） Ｐ１−０６８７６７のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６７のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｉ） Ｐ１−０６８７６９のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６９のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｊ） Ｐ１−０６８７７１のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７７１のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｋ） Ｐ１−０６８７７３のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７７３のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｌ） Ｐ１−０６８７７５のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７７５のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｍ） Ｐ１−０６９０５９のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６９０５９のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｎ） Ｐ１−０６９０６１のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６９０６１のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｏ） Ｐ１−０６９０６３のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６９０６３のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｐ） Ｐ１−０６９０６５のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６９０６５のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｑ） Ｐ１−０６９０６７のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６９０６７のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｒ） Ｐ１−０６９０６９のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６９０６９のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｓ） Ｐ１−０６９０７１のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６９０７１のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｔ） Ｐ１−０６９０７３のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６９０７３のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｕ） Ｐ１−０６９０７５のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６９０７５のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｖ） Ｐ１−０６９０７７のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６９０７７のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｗ） Ｐ１−０６８７３６のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７３６のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｘ） Ｐ１−０６８７３８のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７３８のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｙ） Ｐ１−０６８７４０のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７４０のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｚ） Ｐ１−０６８７４２のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７４２のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ａａ） Ｐ１−０６８７４４のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７４４のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｂｂ） Ｐ１−０６８７４６のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７４６のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｃｃ） Ｐ１−０６８７４８のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７４８のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｄｄ） Ｐ１−０６８７５０のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７５０のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｅｅ） Ｐ１−０６８７５２のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７５２のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｆｆ） Ｐ１−０６８７５４のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７５４のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｇｇ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｅ５５ＡのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｈｈ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｈ１００ＧのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｉｉ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｅ５６ＮのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｊｊ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６ＮのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｋｋ） Ｐ１−０６８７６１のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｌｌ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｍｍ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００ＧのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｎｎ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００ＧのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｏｏ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６ＮのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｐｐ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｑｑ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｒｒ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｓｓ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｔｔ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｕｕ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２ＹのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｅ３２ＹのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｖｖ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５ＡのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｗｗ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６ＮのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｘｘ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２ＹのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２ＹのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｙｙ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００ＧのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｚｚ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ａａａ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２ＶのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｂｂｂ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２ＮのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６７＿Ｄ５２ＮのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｃｃｃ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５ＡのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｄｄｄ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２ＶのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｅｅｅ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６７＿Ｄ１０２ＶのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｆｆｆ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６７＿Ｅ５５ＡのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｇｇｇ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２ＮのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２ＮのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｈｈｈ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２ＶのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｉｉｉ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０ＤのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６７＿Ｅ３０ＤのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｊｊｊ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｋｋｋ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２ＶのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｌｌｌ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｍｍｍ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｎｎｎ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｏｏｏ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｐｐｐ） Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２ＤのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２ＤのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｑｑｑ） Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｒｒｒ） Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２ＤのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６１０２９＿Ｖ１０２ＤのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｓｓｓ） Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｔｔｔ） Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ。
【００９３】
抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、以下を含み得る。
（ａ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６１０２９のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６１０２９のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｂ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７５７のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７５７のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｃ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７５９のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７５９のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｄ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６１のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｅ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６３のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６３のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｆ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６５のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６５のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｇ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６７のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｈ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６９のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６９のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｉ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７７１のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７７１のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｊ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７７３のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７７３のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｋ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７７５のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７７５のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｌ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６９０５９のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６９０５９のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｍ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６９０６１のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６９０６１のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｎ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６９０６３のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６９０６３のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｏ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６９０６５のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６９０６５のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｐ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６９０６７のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６９０６７のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｑ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６９０６９のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６９０６９のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｒ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６９０７１のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６９０７１のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｓ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６９０７３のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨ、Ｐ１−０６９０７３のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｔ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６９０７５のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６９０７５のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｕ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６９０７７のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６９０７７のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｖ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５ＡのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｗ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００ＧのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｘ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６ＮのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｙ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６ＮのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｚ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０ＤのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０ＤのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ａａ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｂｂ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００ＧのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｃｃ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００ＧのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｄｄ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６ＮのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｅｅ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｆｆ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｇｇ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｈｈ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｉｉ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｊｊ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２ＹのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２ＹのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｋｋ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５ＡのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｌｌ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６ＮのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｍｍ）Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２ＹのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２ＹのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｎｎ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００ＧのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｏｏ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｐｐ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２ＶのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｑｑ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２ＮのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２ＮのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｒｒ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５ＡのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｓｓ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２ＶのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｔｔ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２ＶのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｕｕ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５ＡのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｖｖ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２ＮのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２ＮのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｗｗ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２ＶのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｘｘ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０ＤのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０ＤのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｙｙ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｚｚ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２ＶのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ａａａ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｂｂｂ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｃｃｃ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｄｄｄ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｅｅｅ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２ＤのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２ＤのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｆｆｆ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｇｇｇ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２ＤのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２ＤのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｈｈｈ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｉｉｉ） Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａ置換によって修飾された、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
【００９４】
抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、以下を含み得る。
（ａ） Ｐ１−０６１０２９のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６１０２９のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６１０２９のＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｂ） Ｐ１−０６１０１５のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６１０１５のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６１０１５のＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｃ） Ｐ１−０６８７５７のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７５７のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７５７のＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｄ） Ｐ１−０６８７５９のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７５９のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７５９のＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｅ） Ｐ１−０６８７６１のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６１のＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｆ） Ｐ１−０６８７６３のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６３のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６３のＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｇ） Ｐ１−０６８７６５のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６５のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６５のＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｈ） Ｐ１−０６８７６７のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６７のＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｉ） Ｐ１−０６８７６９のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６９のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６９のＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｊ） Ｐ１−０６８７７１のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７７１のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７７１のＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｋ） Ｐ１−０６８７７３のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７７３のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７７３のＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｌ） Ｐ１−０６８７７５のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７７５のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７７５のＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｍ） Ｐ１−０６９０５９のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６９０５９のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６９０５９のＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｎ） Ｐ１−０６９０６１のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６９０６１のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６９０６１のＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｏ） Ｐ１−０６９０６３のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６９０６３のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６９０６３のＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｐ） Ｐ１−０６９０６５のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６９０６５のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６９０６５のＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｑ） Ｐ１−０６９０６７のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６９０６７のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６９０６７のＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｒ） Ｐ１−０６９０６９のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６９０６９のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６９０６９のＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｓ） Ｐ１−０６９０７１のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６９０７１のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６９０７１のＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｔ） Ｐ１−０６９０７３のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６９０７３のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６９０７３のＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｕ） Ｐ１−０６９０７５のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６９０７５のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６９０７５のＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｖ） Ｐ１−０６９０７７のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６９０７７のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６９０７７のＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｗ） Ｐ１−０６８７３６のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７３６のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７３６のＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｘ） Ｐ１−０６８７３８のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７３８のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７３８のＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｙ） Ｐ１−０６８７４０のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７４０のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７４０のＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｚ） Ｐ１−０６８７４２のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７４２のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７４２のＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ａａ） Ｐ１−０６８７４４のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７４４のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７４４のＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｂｂ） Ｐ１−０６８７４６のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７４６のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７４６のＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｃｃ） Ｐ１−０６８７４８のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７４８のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７４８のＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｄｄ） Ｐ１−０６８７５０のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７５０のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７５０のＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｅｅ） Ｐ１−０６８７５２のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７５２のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７５２のＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｆｆ） Ｐ１−０６８７５４のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７５４のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７５４のＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｇｇ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５ＡのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５ＡのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５ＡのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｈｈ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００ＧのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００ＧのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００ＧのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｉｉ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６ＮのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６ＮのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６ＮのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｊｊ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６ＮのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６ＮのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６ＮのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｋｋ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０ＤのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０ＤのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０ＤのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｌｌ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｍｍ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００ＧのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００ＧのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００ＧのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｎｎ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００ＧのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００ＧのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００ＧのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｏｏ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ のＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｐｐ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｑｑ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｒｒ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｓｓ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｔｔ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｕｕ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２ＹのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２ＹのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２ＹのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｖｖ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５ＡのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５ＡのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５ＡのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｗｗ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６ＮのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６ＮのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｘｘ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２ＹのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２ＹのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２ＹのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｙｙ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００ＧのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００ＧのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００ＧのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｚｚ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ａａａ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２ＶのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２ＶのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｂｂｂ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２ＮのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２ＮのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２ＮのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｃｃｃ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５ＡのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５ＡのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５ＡのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｄｄｄ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２ＶのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２ＶのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｅｅｅ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２ＶのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２ＶのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２ＶのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｆｆｆ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５ＡのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５ＡのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５ＡのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｇｇｇ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２ＮのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２ＮのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２ＮのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｈｈｈ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２ＶのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２ＶのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｉｉｉ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０ＤのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０ＤのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０ＤのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｊｊｊ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｋｋｋ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２ＶのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２ＶのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｌｌｌ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｍｍｍ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｎｎｎ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｏｏｏ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｐｐｐ） Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２ＤのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２ＤのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２ＤのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｑｑｑ） Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｒｒｒ） Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２ＤのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２ＤのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２ＤのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｓｓｓ） Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
（ｔｔｔ） Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨと、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬと、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＶＨおよびＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列；
場合によって、ここで、（ａ）から（ｔｔｔ）のいずれかのＶＨは、Ｋ１６ＲおよびＴ８４Ａ置換の一方または両方を含む。
【００９５】
上記のいくつかの実施態様において、ＶＨおよび／またはＶＬは、１、２、３、４または５個のアミノ酸置換、例えば１、２、３、４または５個の保存的置換の存在によって、種（ａ）から（ｔｔｔ）のそれぞれの配列と異なっていてもよい。いくつかの実施態様では、ＶＨは、Ｋ１６ＲおよびＴ８４Ａ置換の一方または両方を含んでいてもよい。
【００９６】
抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、以下を含み得る。
（ａ） Ｐ１−０６１０２９のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨとＰ１−０６１０２９のＶＬからなるＶＬ；
（ｂ） Ｐ１−０６１０１５のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨとＰ１−０６１０１５のＶＬからなるＶＬ；
（ｃ） Ｐ１−０６８７５７のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨとＰ１−０６８７５７のＶＬからなるＶＬ；
（ｄ） Ｐ１−０６８７５９のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨとＰ１−０６８７５９のＶＬからなるＶＬ；
（ｅ） Ｐ１−０６８７６１のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨとＰ１−０６８７６１のＶＬからなるＶＬ；
（ｆ） Ｐ１−０６８７６３のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨとＰ１−０６８７６３のＶＬからなるＶＬ；
（ｇ） Ｐ１−０６８７６５のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨとＰ１−０６８７６５のＶＬからなるＶＬ；
（ｈ） Ｐ１−０６８７６７のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨとＰ１−０６８７６７のＶＬからなるＶＬ；
（ｉ） Ｐ１−０６８７６９のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨとＰ１−０６８７６９のＶＬからなるＶＬ；
（ｊ） Ｐ１−０６８７７１のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨとＰ１−０６８７７１のＶＬからなるＶＬ；
（ｋ） Ｐ１−０６８７７３のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨとＰ１−０６８７７３のＶＬからなるＶＬ；
（ｌ） Ｐ１−０６８７７５のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨとＰ１−０６８７７５のＶＬからなるＶＬ；
（ｍ） Ｐ１−０６９０５９のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨとＰ１−０６９０５９のＶＬからなるＶＬ；
（ｎ） Ｐ１−０６９０６１のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨとＰ１−０６９０６１のＶＬからなるＶＬ；
（ｏ） Ｐ１−０６９０６３のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨとＰ１−０６９０６３のＶＬからなるＶＬ；
（ｐ） Ｐ１−０６９０６５のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨとＰ１−０６９０６５のＶＬからなるＶＬ；
（ｑ） Ｐ１−０６９０６７のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨとＰ１−０６９０６７のＶＬからなるＶＬ；
（ｒ） Ｐ１−０６９０６９のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨとＰ１−０６９０６９のＶＬからなるＶＬ；
（ｓ） Ｐ１−０６９０７１のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨとＰ１−０６９０７１のＶＬからなるＶＬ；
（ｔ） Ｐ１−０６９０７３のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨとＰ１−０６９０７３のＶＬからなるＶＬ；
（ｕ） Ｐ１−０６９０７５のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨとＰ１−０６９０７５のＶＬからなるＶＬ；
（ｖ） Ｐ１−０６９０７７のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨとＰ１−０６９０７７のＶＬからなるＶＬ；
（ｗ） Ｐ１−０６８７３６のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨとＰ１−０６８７３６のＶＬからなるＶＬ；
（ｘ） Ｐ１−０６８７３８のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨとＰ１−０６８７３８のＶＬからなるＶＬ；
（ｙ） Ｐ１−０６８７４０のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨとＰ１−０６８７４０のＶＬからなるＶＬ；
（ｚ） Ｐ１−０６８７４２のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨとＰ１−０６８７４２のＶＬからなるＶＬ；
（ａａ） Ｐ１−０６８７４４のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨとＰ１−０６８７４４のＶＬからなるＶＬ；
（ｂｂ） Ｐ１−０６８７４６のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨとＰ１−０６８７４６のＶＬからなるＶＬ；
（ｃｃ） Ｐ１−０６８７４８のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨとＰ１−０６８７４８のＶＬからなるＶＬ；
（ｄｄ） Ｐ１−０６８７５０のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨとＰ１−０６８７５０のＶＬからなるＶＬ；
（ｅｅ） Ｐ１−０６８７５２のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨとＰ１−０６８７５２のＶＬからなるＶＬ；
（ｆｆ） Ｐ１−０６８７５４のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨとＰ１−０６８７５４のＶＬからなるＶＬ；
（ｇｇ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｅ５５ＡのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｈｈ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｈ１００ＧのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｉｉ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｅ５６ＮのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｊｊ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６ＮのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｋｋ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０ＤのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｅ３０ＤのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｌｌ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｍｍ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００ＧのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｎｎ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００ＧのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｏｏ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６ＮのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｐｐ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｑｑ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｒｒ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｓｓ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｔｔ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｕｕ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２ＹのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｅ３２ＹのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｖｖ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５ＡのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｗｗ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６ＮのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｘｘ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２ＹのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２ＹのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｙｙ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００ＧのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｚｚ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ａａａ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２ＶのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｂｂｂ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２ＮのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６７＿Ｄ５２ＮのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｃｃｃ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５ＡのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｄｄｄ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２ＶのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｅｅｅ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６７＿Ｄ１０２ＶのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｆｆｆ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６７＿Ｅ５５ＡのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｇｇｇ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２ＮのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２ＮのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｈｈｈ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２ＶのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｉｉｉ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０ＤのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６７＿Ｅ３０ＤのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｊｊｊ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｋｋｋ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２ＶのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｌｌｌ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｍｍｍ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｎｎｎ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｏｏｏ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｐｐｐ） Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２ＤのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２ＤのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｑｑｑ） Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｒｒｒ） Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２ＤのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６１０２９＿Ｖ１０２ＤのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｓｓｓ） Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｔｔｔ） Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨとＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ；
場合によって、ここで、（ａ）から（ｔｔｔ）のいずれかのＶＨは、Ｋ１６ＲおよびＴ８４Ａ置換の一方または両方を含む。
【００９７】
特定の実施態様では、抗ＶＩＳＴＡ Ａｂは、上記および本明細書の他の場所に記載されている抗体の可変領域および／または可変領域ＣＤＲ１−３、例えば：Ｐ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７５７、Ｐ１−０６８７５９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６３、Ｐ１−０６８７６５、Ｐ１−０６８７６７、Ｐ１−０６８７６９、Ｐ１−０６８７７１、Ｐ１−０６８７７３、Ｐ１−０６８７７５、Ｐ１−０６９０５９、Ｐ１−０６９０６１、Ｐ１−０６９０６３、Ｐ１−０６９０６５、Ｐ１−０６９０６７、Ｐ１−０６９０６９、Ｐ１−０６９０７１、Ｐ１−０６９０７３、Ｐ１−０６９０７５、Ｐ１−０６９０７７、Ｐ１−０６１０１５、Ｐ１−０６８７３６、Ｐ１−０６８７３８、Ｐ１−０６８７４０、Ｐ１−０６８７４２、Ｐ１−０６８７４４、Ｐ１−０６８７６６、Ｐ１−０６８７４８、Ｐ１−０６８７５０、Ｐ１−０６８７５２、Ｐ１−０６８７５４、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥまたはＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥの
（１） ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の１つ以上、
（２） ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、
（３） ＶＨ、
（４） ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の１つ以上、ならびにＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の１つ以上、
（５） ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、
（６） ＶＨとＶＬ（複数）、
または
（７） （Ｐ１−０６１０２９またはその子孫の場合）ＶＨ内のＫ１６ＲおよびＴ８４Ａ置換の一方もしくは両方を除いて、ＶＬおよびＶＨ
のいずれかを含み；抗ＶＩＳＴＡ Ａｂはまた、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４抗体等のＩｇＧ抗体、または以下のセクションに記載されているようなそれらの改変された形態でもある。いくつかの実施態様では、定常領域はエフェクター機能を有し、いくつかの実施態様では、定常領域はエフェクターがない。特定の実施態様では、定常領域はＩｇＧ１．３のものである。
【００９８】
特定の実施態様では、抗ＶＩＳＴＡ Ａｂは、上記および本明細書の他の場所に記載されている抗体の可変領域および／または可変領域ＣＤＲ１−３、例えば：Ｐ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７５７、Ｐ１−０６８７５９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６３、Ｐ１−０６８７６５、Ｐ１−０６８７６７、Ｐ１−０６８７６９、Ｐ１−０６８７７１、Ｐ１−０６８７７３、Ｐ１−０６８７７５、Ｐ１−０６９０５９、Ｐ１−０６９０６１、Ｐ１−０６９０６３、Ｐ１−０６９０６５、Ｐ１−０６９０６７、Ｐ１−０６９０６９、Ｐ１−０６９０７１、Ｐ１−０６９０７３、Ｐ１−０６９０７５、Ｐ１−０６９０７７、Ｐ１−０６１０１５、Ｐ１−０６８７３６、Ｐ１−０６８７３８、Ｐ１−０６８７４０、Ｐ１−０６８７４２、Ｐ１−０６８７４４、Ｐ１−０６８７６６、Ｐ１−０６８７４８、Ｐ１−０６８７５０、Ｐ１−０６８７５２Ｐ１−０６８７５４、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥまたはＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥの
（１） ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の１つ以上、
（２） ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、
（３） ＶＨ、
（４） ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の１つ以上、ならびにＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の１つ以上、
（５） ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、
（６） ＶＨとＶＬ（複数）、
または
（７） （Ｐ１−０６１０２９およびその子孫の場合）ＶＨ内のＫ１６ＲおよびＴ８４Ａ置換の一方もしくは両方を除いて、ＶＬおよびＶＨ
のいずれかを含み、
かつ、以下の特性のうちの１つ以上をさらに含む。
− 酸性ｐＨ、例えばｐＨ６．０またはｐＨ６．５で、ｈＶＩＳＴＡ、例えばＥＣＤのヒスチジンリッチ領域または配列番号２のアミノ酸残基３５−１２７を含むポリペプチドに特異的に結合すること；
− 生理的ｐＨまたは中性ｐＨ、例えばｐＨ７．４またはｐＨ７．０で、ｈＶＩＳＴＡ、例えばＥＣＤのヒスチジンリッチ領域または配列番号２のアミノ酸残基３５−１２７を含むポリペプチドへの有意な結合を欠くこと；
− 酸性ｐＨ、例えばｐＨ６．０またはｐＨ６．５で、ｃｙｎｏ ＶＩＳＴＡ、例えばＥＣＤのヒスチジンリッチ領域に特異的に結合すること；
− 生理的ｐＨまたは中性ｐＨ、例えばｐＨ７．４またはｐＨ７．０で、ｃｙｎｏ ＶＩＳＴＡ、例えばＥＣＤのヒスチジンリッチ領域への有意な結合を欠くこと；
− 配列番号２を有するｈＶＩＳＴＡ ＥＣＤと比較して、アミノ酸Ｔ３５、Ｙ３７、Ｋ３８、Ｔ３９、Ｙ４１、Ｒ５４、Ｔ６１、Ｆ６２、Ｑ６３、Ｌ６５、Ｈ６６、Ｌ６７、Ｈ６８、Ｈ６９、Ｆ９７、Ｌ１１５、Ｖ１１７、Ｉ１１９、Ｈ１２１、Ｈ１２２、Ｓ１２４、Ｅ１２５、Ｒ１２７の１つ以上に置換を有するｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤへの結合が減少していること；
− ｈＶＩＳＴＡへの結合に関し、Ｐ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６７および／またはＰ１−０６１０１５と交差競合すること；
− 酸性ｐＨ、例えばｐＨ６．０またはｐＨ６．５で、ＶＩＳＴＡを発現するヒトＴ細胞（例えばナイーブまたは活性化Ｔ細胞）へのｈＶＩＳＴＡの結合を阻害すること；
− 酸性ｐＨ、例えばｐＨ６．０またはｐＨ６．５で、ｈＶＩＳＴＡのＰＳＧＬ−１への結合を阻害すること（例えば、配列番号１を有するｈＶＩＳＴＡのＨ１５３およびＨ１５４とＰＳＧＬ−１チロシンＹ４６およびＹ４８との間の相互作用を阻害すること）であって、ＰＳＧＬ−１はシアリルルイスＸを有していてもいなくてもよく、チロシンは好ましくはスルホチロシンである、阻害すること；
− 例えば実施例に記載のように測定した、カニクイザルにおける少なくとも１００、２００、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００または７００時間（例：少なくとも３５０時間）の平均滞留時間（ＭＲＴ）；
− 例えば、Ｔ細胞増殖を強化すること；Ｔ細胞からのＩＦＮ−γ産生を強化すること；および／またはＴ細胞受容体媒介のＮＦ−κＢシグナル伝達を刺激することによる、Ｔ細胞活性化を刺激すること；
− ＶＩＳＴＡ媒介の細胞：細胞接着を阻害すること；
− ＶＩＳＴＡを発現する、ヒト腫瘍細胞の試料または炎症を起こしたヒト組織の試料において、ｈＶＩＳＴＡに特異的に結合すること；
− 例えば実施例１５に記載の酵母表面ディスプレイおよびＮＧＳアッセイを使用して決定され、付番は成熟したｈＶＩＳＴＡのものである１つ以上（例えば、少なくとも１−３、１−５、１−１０、５−１０、５−１５個、または全て）のエネルギー的に重要な接触残基Ｙ３７、Ｔ３９、Ｒ５４、Ｆ６２、Ｈ６６、Ｖ１１７、Ｉ１１９またはＳ１２４を介してｈＶＩＳＴＡに接触すること；
− 配列番号１を有するｈＶＩＳＴＡの領域１：５７ＬＧＰＶＤＫＧＨＤＶＴＦ６８；領域２：８６ＲＲＰＩＲＮＬＴＦＱＤＬ９７；および領域３：１４８ＶＶＥＩＲＨＨＨＳＥＨＲＶＨＧＡＭＥ１６５へ結合することであって、場合によってその結合が、実施例２１に記載されるようにＭＳ−ＨＤＸで決定して、領域２に対して最も強い、結合すること；
− 例えば実施例に記載されているように、例えば結晶学によって決定される、ｈＶＩＳＴＡのヒスチジンリッチなβシート伸長部に結合すること；
− 例えば実施例に記載されているように、例えば結晶学によって決定される、成熟ｈＶＩＳＴＡのＨ１２１、Ｈ１２２および／またはＨ１２３に、例えば水素結合を介して接触すること（４．０オングストローム（Å）以下の距離）；
− ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３にある、少なくとも１つ以上のグルタミン酸、アスパラギン酸またはヒスチジン残基を介してｈＶＩＳＴＡに接触すること；および
請求項および／または実施例に記載されている追加の特性。
【００９９】
特定の実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、本明細書で提供される任意の抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂの重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）を含む。特定の実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、ＩｇＧ１．３重鎖定常領域を含む、以下の配列表に示されるようなＰ１−０６１０２９もしくはＰ１−０６１０１５またはその子孫の重鎖のアミノ酸配列、例えば：Ｐ１−０６１０２９．ＩｇＧ１．３（配列番号６９）、Ｐ１−０６８７５７．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７５９．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６３．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６５．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６７．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６９．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７７１．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７７３．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７７５．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６９０５９．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６９０６１．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６９０６３．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６９０６５．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６９０６７．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６９０６９．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６９０７１．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６９０７３．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６９０７５．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６９０７７．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６１０１５．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７３６．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７３８．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７４０．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７４２．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７４４．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６６．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７４８．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７５０．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７５２．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７５４．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ．ＩｇＧ１．３またはＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥ．ＩｇＧ１．３を含む重鎖を含み、場合によって、ここで、ＶＨはＫ１６ＲおよびＴ８４Ａ置換の一方または両方を含む。
【０１００】
特定の実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、ＩｇＧ１．３重鎖定常領域を含む、本明細書で提供される任意の抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂの重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、本明細書で提供される任意の抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂの軽鎖のアミノ酸配列とを含む。特定の実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、ＩｇＧ１．３ ＨＣ定常領域を含む、Ｐ１−０６１０２９もしくはＰ１−０６１０１５またはその子孫のＶＨのアミノ酸配列、例えば：Ｐ１−０６１０２９．ＩｇＧ１．３（配列番号６９）、Ｐ１−０６８７５７．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７５９．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６３．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６５．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６７．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６９．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７７１．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７７３．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７７５．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６９０５９．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６９０６１．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６９０６３．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６９０６５．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６９０６７．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６９０６９．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６９０７１．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６９０７３．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６９０７５．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６９０７７．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６１０１５．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７３６．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７３８．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７４０．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７４２．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７４４．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６６．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７４８．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７５０．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７５２．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７５４．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５���＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ．ＩｇＧ１．３またはＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥ．ＩｇＧ１．３を含む重鎖を含み、場合によって、ここで、ＶＨはＫ１６ＲおよびＴ８４Ａ置換の一方または両方を含み、かつ、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、Ｐ１−０６１０２９またはＰ１−０６１０１５の軽鎖のアミノ酸配列を含む軽鎖も含む。
【０１０１】
抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、以下を含み得る。
（ａ） Ｐ１−０６１０２９．ＩｇＧ１．３（配列番号６９）の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６１０２９（配列番号７０）の軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｂ） Ｐ１−０６１０１５．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６１０１５の軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｃ） Ｐ１−０６８７５７．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７５７の軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｄ） Ｐ１−０６８７５９．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７５９の軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｅ） Ｐ１−０６８７６１．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１の軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｆ） Ｐ１−０６８７６３．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６３の軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｇ） Ｐ１−０６８７６５．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６５の軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｈ） Ｐ１−０６８７６７．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７の軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｉ） Ｐ１−０６８７６９．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６９の軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｊ） Ｐ１−０６８７７１．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７７１の軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｋ） Ｐ１−０６８７７３．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７７３の軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｌ） Ｐ１−０６８７７５．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７７５の軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｍ） Ｐ１−０６９０５９．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０５９の軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｎ） Ｐ１−０６９０６１．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０６１の軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｏ） Ｐ１−０６９０６３．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０６３の軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｐ） Ｐ１−０６９０６５．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０６５の軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｑ） Ｐ１−０６９０６７．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０６７の軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｒ） Ｐ１−０６９０６９．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０６９の軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｓ） Ｐ１−０６９０７１．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０７１の軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｔ） Ｐ１−０６９０７３．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０７３の軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｕ） Ｐ１−０６９０７５．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０７５の軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｖ） Ｐ１−０６９０７７．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０７７の軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｗ） Ｐ１−０６８７３６．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７３６の軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｘ） Ｐ１−０６８７３８．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７３８の軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｙ） Ｐ１−０６８７４０．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７４０の軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｚ） Ｐ１−０６８７４２．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７４２の軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ａａ） Ｐ１−０６８７４４．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７４４の軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｂｂ） Ｐ１−０６８７４６．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７４６の軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｃｃ） Ｐ１−０６８７４８．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７４８の軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｄｄ） Ｐ１−０６８７５０．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７５０の軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｅｅ） Ｐ１−０６８７５２．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７５２の軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｆｆ） Ｐ１−０６８７５４．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７５４の軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｇｇ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｈｈ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｉｉ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｊｊ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｋｋ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｌｌ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｍｍ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｎｎ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｏｏ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｐｐ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｑｑ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｒｒ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｓｓ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｔｔ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｕｕ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｖｖ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｗｗ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｘｘ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｙｙ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｚｚ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ａａａ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｂｂｂ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｃｃｃ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｄｄｄ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｅｅｅ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｆｆｆ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｇｇｇ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｈｈｈ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｉｉｉ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｊｊｊ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｋｋｋ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｌｌｌ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｍｍｍ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｎｎｎ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｏｏｏ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
【０１０２】
（ｐｐｐ） Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｑｑｑ） Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｒｒｒ） Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｓｓｓ） Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
（ｔｔｔ） Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥの軽鎖アミノ酸配列とを含む軽鎖；
場合によって、ここで、（ａ）から（ｔｔｔ）のいずれかのＶＨは、Ｋ１６ＲおよびＴ８４Ａ置換の一方または両方を含む。
【０１０３】
抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、以下を含み得る。
（ａ） Ｐ１−０６１０２９のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含む重鎖（ＨＣ）と、Ｐ１−０６１０２９のＬＣ ＣＤＲを含む軽鎖（ＬＣ）と、Ｐ１−０６１０２９．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣとそれぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｂ） Ｐ１−０６１０１５のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６１０１５のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６１０１５．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣとそれぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｃ） Ｐ１−０６８７５７のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７５７のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７５７．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣとそれぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｄ） Ｐ１−０６８７５９のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７５９のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７５９．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣとそれぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｅ） Ｐ１−０６８７６１のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６１のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６１．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣとそれぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｆ） Ｐ１−０６８７６３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６３のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６３．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣとそれぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｇ） Ｐ１−０６８７６５のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６５のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６５．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣとそれぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｈ） Ｐ１−０６８７６７のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６７のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６７．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣとそれぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｉ） Ｐ１−０６８７６９のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６９のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６９．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣとそれぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｊ） Ｐ１−０６８７７１のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７７１のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７７１．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣとそれぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｋ） Ｐ１−０６８７７３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７７３のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７７３．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣとそれぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｌ） Ｐ１−０６８７７５のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７７５のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７７５．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣとそれぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｍ） Ｐ１−０６９０５９のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６９０５９のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６９０５９．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣとそれぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｎ） Ｐ１−０６９０６１のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６９０６１のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６９０６１．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣとそれぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｏ） Ｐ１−０６９０６３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６９０６３のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６９０６３．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣとそれぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｐ） Ｐ１−０６９０６５のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６９０６５のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６９０６５．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣとそれぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｑ） Ｐ１−０６９０６７のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６９０６７のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６９０６７．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣとそれぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｒ） Ｐ１−０６９０６９のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６９０６９のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６９０６９．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣとそれぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｓ） Ｐ１−０６９０７１のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６９０７１のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６９０７１．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣとそれぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｔ） Ｐ１−０６９０７３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６９０７３のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６９０７３．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣとそれぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｕ） Ｐ１−０６９０７５のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６９０７５のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６９０７５．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣとそれぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｖ） Ｐ１−０６９０７７のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６９０７７のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６９０７７．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣとそれぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｗ） Ｐ１−０６８７３６のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７３６のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７３６．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣとそれぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｘ） Ｐ１−０６８７３８のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７３８のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７３８．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣとそれぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｙ） Ｐ１−０６８７４０のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７４０のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７４０．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣとそれぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｚ） Ｐ１−０６８７４２のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７４２のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７４２．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣとそれぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ａａ） Ｐ１−０６８７４４のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７４４のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７４４．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣとそれぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｂｂ） Ｐ１−０６８７４６のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７４６のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７４６．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣとそれぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｃｃ） Ｐ１−０６８７４８のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７４８のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７４８．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣとそれぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｄｄ） Ｐ１−０６８７５０のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７５０のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７５０．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣとそれぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｅｅ） Ｐ１−０６８７５２のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７５２のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７５２．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣとそれぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｆｆ） Ｐ１−０６８７５４のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７５４のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７５４．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣとそれぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｇｇ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５ＡのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｈｈ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００ＧのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｉｉ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６ＮのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｊｊ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６ＮのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｋｋ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０ＤのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｌｌ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｍｍ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００ＧのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｎｎ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００ＧのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｏｏ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６ＮのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｐｐ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｑｑ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３ のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｒｒ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｓｓ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｔｔ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｕｕ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２ＹのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｖｖ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５ＡのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｗｗ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６ＮのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｘｘ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２ＹのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｙｙ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００ＧのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｚｚ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ａａａ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２ＶのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｂｂｂ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２ＮのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｃｃｃ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５ＡのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｄｄｄ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２ＶのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｅｅｅ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２ＶのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｆｆｆ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５ＡのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｇｇｇ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２ＮのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｈｈｈ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２ＶのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｉｉｉ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０ＤのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｊｊｊ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｋｋｋ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２ＶのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｌｌｌ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｍｍｍ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｎｎｎ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｏｏｏ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｐｐｐ） Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２ＤのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｑｑｑ） Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｒｒｒ） Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２ＤのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｓｓｓ） Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
（ｔｔｔ） Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣと、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣと、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列；
【０１０４】
上記のいくつかの実施態様において、ＨＣおよび／またはＬＣは、１、２、３、４または５個のアミノ酸置換、例えば１、２、３、４または５個の保存的置換の存在によって、種（ａ）から（ｔｔｔ）のそれぞれの配列と異なっていてもよい。いくつかの実施態様では、例えば、Ｐ１−０６１０２９またはその子孫の１つのＨＣは、ＨＣのＶＨ領域にＫ１６ＲおよびＴ８４Ａ置換の１つまたは両方を含んでいてもよい（Ｐ１−０６１０１５およびその子孫は、それらの位置にそれぞれＲおよびＡを既に有している）。
【０１０５】
いくつかの実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、以下を含み得る。
（ａ） Ｐ１−０６１０２９．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６１０２９の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｂ） Ｐ１−０６１０１５．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６１０１５の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｃ） Ｐ１−０６８７５７．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７５７の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｄ） Ｐ１−０６８７５９．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７５９の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｅ） Ｐ１−０６８７６１．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６１の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｆ） Ｐ１−０６８７６３．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６３の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｇ） Ｐ１−０６８７６５．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６５の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｈ） Ｐ１−０６８７６７．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６７の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｉ） Ｐ１−０６８７６９．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６９の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｊ） Ｐ１−０６８７７１．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７７１の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｋ） Ｐ１−０６８７７３．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７７３の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｌ） Ｐ１−０６８７７５．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７７５の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｍ） Ｐ１−０６９０５９．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６９０５９の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｎ） Ｐ１−０６９０６１．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６９０６１の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｏ） Ｐ１−０６９０６３．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６９０６３の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｐ） Ｐ１−０６９０６５．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６９０６５の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｑ） Ｐ１−０６９０６７．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６９０６７の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｒ） Ｐ１−０６９０６９．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６９０６９の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｓ） Ｐ１−０６９０７１．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６９０７１の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｔ） Ｐ１−０６９０７３．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６９０７３の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｕ） Ｐ１−０６９０７５．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６９０７５の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｖ） Ｐ１−０６９０７７．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６９０７７の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｗ） Ｐ１−０６８７３６の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７３６の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｘ） Ｐ１−０６８７３８．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７３８の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｙ） Ｐ１−０６８７４０．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７４０の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｚ） Ｐ１−０６８７４２．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７４２の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ａａ） Ｐ１−０６８７４４．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７４４の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｂｂ） Ｐ１−０６８７４６．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７４６の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｃｃ） Ｐ１−０６８７４８．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７４８の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｄｄ） Ｐ１−０６８７５０．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７５０の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｅｅ） Ｐ１−０６８７５２．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７５２の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｆｆ） Ｐ１−０６８７５４の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７５４の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｇｇ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｈｈ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｉｉ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｊｊ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｋｋ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｌｌ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｍｍ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｎｎ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｏｏ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｐｐ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｑｑ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｒｒ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｓｓ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｔｔ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｕｕ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｖｖ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｗｗ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｘｘ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ．ＩｇＧ１．の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｙｙ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｚｚ） Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ａａａ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｂｂｂ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｃｃｃ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｄｄｄ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｅｅｅ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｆｆｆ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｇｇｇ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｈｈｈ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｉｉｉ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｊｊｊ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｋｋｋ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｌｌｌ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｍｍｍ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｎｎｎ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｏｏｏ） Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｐｐｐ） Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｑｑｑ） Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｒｒｒ） Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｓｓｓ） Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｔｔｔ） Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖。
場合によって、ここで、（ａ）から（ｔｔｔ）のいずれかのＶＨは、Ｋ１６ＲおよびＴ８４Ａ置換の一方または両方を含む。
【０１０６】
いくつかの実施態様では、本開示は、抗ＶＩＳＴＡ ｍＡｂであって、
上記（ａ）から（ｔｔｔ）の重鎖のアミノ酸配列と、それに続くＬｙｓ残基からなる重鎖；および
上記（ａ）から（ｔｔｔ）の軽鎖アミノ酸配列
を含む抗ＶＩＳＴＡ ｍＡｂを企図しており、
ここで、重鎖および軽鎖アミノ酸配列が上記（ａ）から（ｔｔｔ）の中の同じ抗体種から選択される。
【０１０７】
いくつかの実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、本明細書に記載の抗体種のＶＨアミノ酸を含む重鎖アミノ酸配列を含むが、本明細書の配列表のＨＣ配列で提供されるようなＩｇＧ１．３重鎖定常領域は含まず（配列番号１６３を参照）；該抗体は例えば、ヒトＩｇＧ１アロタイプｆ（ＩｇＧ１ｆ）（配列番号１８２）などのヒト野生型ＩｇＧ１定常領域、またはＩｇＧ１．１ｆ（配列番号１８３）などの修飾されたヒトＩｇＧ１定常領域、またはＩｇＧ１．Ｐ２３８Ｋ（配列番号（１８４）などの修飾されたヒトＩｇＧ１定常領域といった定常領域などといった異なる重鎖定常領域配列を含んでもよい。したがって、本開示の実施態様には、以下を含む抗ＶＩＳＴＡ Ａｂｓが含まれる。
（ａ） （ｉ）Ｐ１−０６１０２９のＶＨのアミノ酸配列（配列番号６７）および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６１０２９の軽鎖アミノ酸配列（配列番号７０）を含む軽鎖；
（ｂ） （ｉ）Ｐ１−０６１０１５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６１０１５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｃ） （ｉ）Ｐ１−０６８７５７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７５７の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｄ） （ｉ）Ｐ１−０６８７５９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７５９の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｅ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｆ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｇ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｈ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｉ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６９の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｊ） （ｉ）Ｐ１−０６８７７１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７７１の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｋ） （ｉ）Ｐ１−０６８７７３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７７３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｌ） （ｉ）Ｐ１−０６８７７５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７７５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｍ） （ｉ）Ｐ１−０６９０５９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０５９の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｎ） （ｉ）Ｐ１−０６９０６１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０６１の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｏ） （ｉ）Ｐ１−０６９０６３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０６３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｐ） （ｉ）Ｐ１−０６９０６５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０６５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｑ） （ｉ）Ｐ１−０６９０６７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０６７の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｒ） （ｉ）Ｐ１−０６９０６９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０６９の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｓ） （ｉ）Ｐ１−０６９０７１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０７１の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｔ） （ｉ）Ｐ１−０６９０７３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０７３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｕ） （ｉ）Ｐ１−０６９０７５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０７５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｖ） （ｉ）Ｐ１−０６９０７７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０７７の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｗ） （ｉ）Ｐ１−０６８７３６のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７３６の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｘ） （ｉ）Ｐ１−０６８７３８のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７３８の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｙ） （ｉ）Ｐ１−０６８７４０のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７４０の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｚ） （ｉ）Ｐ１−０６８７４２のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７４２の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ａａ） （ｉ）Ｐ１−０６８７４４のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７４４の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｂｂ） （ｉ）Ｐ１−０６８７４６のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７４６の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｃｃ） （ｉ）Ｐ１−０６８７４８のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７４８の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｄｄ） （ｉ）Ｐ１−０６８７５０のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７５０の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｅｅ） （ｉ）Ｐ１−０６８７５２のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７５２の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｆｆ） （ｉ）Ｐ１−０６８７５４のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７５４の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｇｇ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｈｈ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｉｉ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｊｊ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｋｋ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０ＤのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｌｌ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｍｍ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｎｎ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｏｏ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｐｐ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｑｑ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｒｒ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｓｓ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｔｔ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｕｕ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２ＹのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｖｖ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｗｗ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｘｘ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２ＹのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｙｙ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｚｚ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ａａａ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｂｂｂ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｃｃｃ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｄｄｄ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｅｅｅ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｆｆｆ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｇｇｇ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｈｈｈ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｉｉｉ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０ＤのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｊｊｊ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｋｋｋ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｌｌｌ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｍｍｍ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｎｎｎ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｏｏｏ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｐｐｐ） （ｉ）Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２ＤのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｑｑｑ） （ｉ）Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｒｒｒ） （ｉ）Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２ＤのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｓｓｓ） （ｉ）Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｔｔｔ） （ｉ）Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖。
場合によって、ここで、（ａ）から（ｔｔｔ）のいずれかのＶＨは、Ｋ１６ＲおよびＴ８４Ａ置換の一方または両方を含む。
【０１０８】
いくつかの実施態様において、ＬＣは上記（ａ）から（ｔｔｔ）で指定された通りであってよいが、ＨＣは、１、２、３、４または５個のアミノ酸置換、例えば１、２、３、４または５個の保存的置換の存在によって、種（ａ）から（ｔｔｔ）のそれぞれの配列と異なっていてもよい。いくつかの実施態様では、例えば、Ｐ１−０６１０２９またはその子孫の１つのＨＣは、ＨＣのＶＨ領域にＫ１６ＲおよびＴ８４Ａ置換の１つまたは両方を含んでいてもよい（Ｐ１−０６１０１５およびその子孫は、ＶＨ１６位にＲをＶＨ８４位Ａを既に有している）。
【０１０９】
本開示の特定の実施態様には、以下を含む抗ＶＩＳＴＡ Ａｂｓが含まれる。
（ａ） （ｉ）Ｐ１−０６１０２９のＶＨのアミノ酸配列（配列番号６７）および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６１０２９の軽鎖アミノ酸配列（配列番号７０）からなる軽鎖；
（ｂ） （ｉ）Ｐ１−０６１０１５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６１０１５の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｃ） （ｉ）Ｐ１−０６８７５７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７５７の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｄ） （ｉ）Ｐ１−０６８７５９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７５９の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｅ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｆ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６３の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｇ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６５の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｈ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｉ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６９の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｊ） （ｉ）Ｐ１−０６８７７１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７７１の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｋ） （ｉ）Ｐ１−０６８７７３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７７３の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｌ） （ｉ）Ｐ１−０６８７７５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７７５の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｍ） （ｉ）Ｐ１−０６９０５９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６９０５９の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｎ） （ｉ）Ｐ１−０６９０６１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６９０６１の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｏ） （ｉ）Ｐ１−０６９０６３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６９０６３の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｐ） （ｉ）Ｐ１−０６９０６５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６９０６５の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｑ） （ｉ）Ｐ１−０６９０６７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６９０６７の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｒ） （ｉ）Ｐ１−０６９０６９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６９０６９の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｓ） （ｉ）Ｐ１−０６９０７１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６９０７１の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｔ） （ｉ）Ｐ１−０６９０７３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６９０７３の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｕ） （ｉ）Ｐ１−０６９０７５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６９０７５の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｖ） （ｉ）Ｐ１−０６９０７７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６９０７７の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｗ） （ｉ）Ｐ１−０６８７３６のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７３６の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｘ） （ｉ）Ｐ１−０６８７３８のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７３８の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｙ） （ｉ）Ｐ１−０６８７４０のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７４０の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｚ） （ｉ）Ｐ１−０６８７４２のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７４２の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ａａ） （ｉ）Ｐ１−０６８７４４のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７４４の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｂｂ） （ｉ）Ｐ１−０６８７４６のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７４６の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｃｃ） （ｉ）Ｐ１−０６８７４８のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７４８の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｄｄ） （ｉ）Ｐ１−０６８７５０のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７５０の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｅｅ） （ｉ）Ｐ１−０６８７５２のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７５２の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｆｆ） （ｉ）Ｐ１−０６８７５４のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７５４の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｇｇ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｈｈ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｉｉ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｊｊ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｋｋ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０ＤのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｌｌ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｍｍ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｎｎ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｏｏ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｐｐ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｑｑ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｒｒ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｓｓ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｔｔ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｕｕ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２ＹのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｖｖ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｗｗ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｘｘ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２ＹのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｙｙ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｚｚ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ａａａ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｂｂｂ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｃｃｃ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｄｄｄ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｅｅｅ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｆｆｆ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｇｇｇ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｈｈｈ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｉｉｉ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０ＤのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｊｊｊ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｋｋｋ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列からなる鎖；
（ｌｌｌ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｍｍｍ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｎｎｎ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｏｏｏ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｐｐｐ） （ｉ）Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２ＤのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｑｑｑ） （ｉ）Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｒｒｒ） （ｉ）Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２ＤのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｓｓｓ） （ｉ）Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｔｔｔ） （ｉ）Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖。
ここで、ＶＨのＣ末端アミノ酸および配列番号１８２のＮ末端アミノ酸は、ペプチド結合を形成し；
場合によって、（ａ）から（ｔｔｔ）のいずれかのＶＨは、Ｋ１６ＲおよびＴ８４Ａ置換の一方または両方を含む。
【０１１０】
いくつかの実施態様では、本開示は、
（ｉ）上記（ａ）から（ｔｔｔ）のＶＨ、（ｉｉ）配列番号１８２および（ｉｉｉ）リジン残基のアミノ酸配列からなる重鎖であって、ＶＨのＣ末端アミノ酸と配列番号１８２のＮ末端アミノ酸がペプチド結合を形成し、かつ、配列番号１８２のＣ末端アミノ酸がリジンのＮ末端に結合している、重鎖と；
上記（ａ）から（ｔｔｔ）の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖
とを含む抗ＶＩＳＴＡ ｍＡｂを企図しており、
ここで、ＶＨおよび軽鎖アミノ酸配列が、上記（ａ）から（ｔｔｔ）の中の同じ抗体種から選択される。
【０１１１】
本開示の特定の実施態様には、以下を含む抗ＶＩＳＴＡ Ａｂｓが含まれる。
（ａ） （ｉ）Ｐ１−０６１０２９のＶＨのアミノ酸配列（配列番号６７）および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６１０２９の軽鎖アミノ酸配列（配列番号７０）を含む軽鎖；
（ｂ） （ｉ）Ｐ１−０６１０１５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６１０１５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｃ） （ｉ）Ｐ１−０６８７５７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７５７の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｄ） （ｉ）Ｐ１−０６８７５９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７５９の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｅ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｆ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｇ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｈ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｉ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６９の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｊ） （ｉ）Ｐ１−０６８７７１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７７１の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｋ） （ｉ）Ｐ１−０６８７７３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７７３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｌ） （ｉ）Ｐ１−０６８７７５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７７５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｍ） （ｉ）Ｐ１−０６９０５９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０５９の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｎ） （ｉ）Ｐ１−０６９０６１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０６１の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｏ） （ｉ）Ｐ１−０６９０６３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０６３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｐ） （ｉ）Ｐ１−０６９０６５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０６５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｑ） （ｉ）Ｐ１−０６９０６７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０６７の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｒ） （ｉ）Ｐ１−０６９０６９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０６９の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｓ） （ｉ）Ｐ１−０６９０７１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０７１の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｔ） （ｉ）Ｐ１−０６９０７３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０７３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｕ） （ｉ）Ｐ１−０６９０７５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０７５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｖ） （ｉ）Ｐ１−０６９０７７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０７７の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｗ） （ｉ）Ｐ１−０６８７３６のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７３６の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｘ） （ｉ）Ｐ１−０６８７３８のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７３８の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｙ） （ｉ）Ｐ１−０６８７４０のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７４０の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｚ） （ｉ）Ｐ１−０６８７４２のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７４２の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ａａ） （ｉ）Ｐ１−０６８７４４のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７４４の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｂｂ） （ｉ）Ｐ１−０６８７４６のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７４６の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｃｃ） （ｉ）Ｐ１−０６８７４８のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７４８の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｄｄ） （ｉ）Ｐ１−０６８７５０のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７５０の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｅｅ） （ｉ）Ｐ１−０６８７５２のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７５２の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｆｆ） （ｉ）Ｐ１−０６８７５４のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７５４の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｇｇ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｈｈ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｉｉ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｊｊ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｋｋ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０ＤのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｌｌ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｍｍ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｎｎ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｏｏ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｐｐ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｑｑ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｒｒ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｓｓ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｔｔ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｕｕ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２ＹのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｖｖ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｗｗ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｘｘ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２ＹのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｙｙ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｚｚ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ａａａ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｂｂｂ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｃｃｃ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｄｄｄ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｅｅｅ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｆｆｆ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｇｇｇ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｈｈｈ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｉｉｉ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０ＤのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｊｊｊ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｋｋｋ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｌｌｌ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｍｍｍ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｎｎｎ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｏｏｏ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｐｐｐ） （ｉ）Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２ＤのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｑｑｑ） （ｉ）Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｒｒｒ） （ｉ）Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２ＤのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｓｓｓ） （ｉ）Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｔｔｔ） （ｉ）Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖。
場合によって、ここで、（ａ）から（ｔｔｔ）のいずれかのＶＨは、Ｋ１６ＲおよびＴ８４Ａ置換の一方または両方を含む。
【０１１２】
本開示の特定の実施態様には、以下を含む抗ＶＩＳＴＡ Ａｂｓが含まれる。
（ａ） （ｉ）Ｐ１−０６１０２９のＶＨのアミノ酸配列（配列番号６７）および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６１０２９の軽鎖アミノ酸配列（配列番号７０）からなる軽鎖；
（ｂ） （ｉ）Ｐ１−０６１０１５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６１０１５の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｃ） （ｉ）Ｐ１−０６８７５７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７５７の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｄ） （ｉ）Ｐ１−０６８７５９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７５９の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｅ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｆ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６３の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｇ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６５の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｈ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｉ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６９の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｊ） （ｉ）Ｐ１−０６８７７１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７７１の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｋ） （ｉ）Ｐ１−０６８７７３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７７３の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｌ） （ｉ）Ｐ１−０６８７７５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７７５の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｍ） （ｉ）Ｐ１−０６９０５９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６９０５９の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｎ） （ｉ）Ｐ１−０６９０６１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６９０６１の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｏ） （ｉ）Ｐ１−０６９０６３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６９０６３の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｐ） （ｉ）Ｐ１−０６９０６５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６９０６５の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｑ） （ｉ）Ｐ１−０６９０６７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６９０６７の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｒ） （ｉ）Ｐ１−０６９０６９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６９０６９の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｓ） （ｉ）Ｐ１−０６９０７１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６９０７１の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｔ） （ｉ）Ｐ１−０６９０７３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６９０７３の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｕ） （ｉ）Ｐ１−０６９０７５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６９０７５の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｖ） （ｉ）Ｐ１−０６９０７７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６９０７７の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｗ） （ｉ）Ｐ１−０６８７３６のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７３６の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｘ） （ｉ）Ｐ１−０６８７３８のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７３８の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｙ） （ｉ）Ｐ１−０６８７４０のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７４０の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｚ） （ｉ）Ｐ１−０６８７４２のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７４２の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ａａ） （ｉ）Ｐ１−０６８７４４のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７４４の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｂｂ） （ｉ）Ｐ１−０６８７４６のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７４６の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｃｃ） （ｉ）Ｐ１−０６８７４８のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７４８の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｄｄ） （ｉ）Ｐ１−０６８７５０のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７５０の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｅｅ） （ｉ）Ｐ１−０６８７５２のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７５２の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｆｆ） （ｉ）Ｐ１−０６８７５４のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７５４の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｇｇ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｈｈ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｉｉ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｊｊ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｋｋ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０ＤのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｌｌ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｍｍ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｎｎ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｏｏ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｐｐ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｑｑ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｒｒ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｓｓ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｔｔ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｕｕ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２ＹのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｖｖ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｗｗ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｘｘ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２ＹのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｙｙ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｚｚ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ａａａ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｂｂｂ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｃｃｃ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｄｄｄ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｅｅｅ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｆｆｆ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｇｇｇ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｈｈｈ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｉｉｉ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０ＤのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｊｊｊ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｋｋｋ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列からなる鎖；
（ｌｌｌ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｍｍｍ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｎｎｎ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｏｏｏ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｐｐｐ） （ｉ）Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２ＤのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｑｑｑ） （ｉ）Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｒｒｒ） （ｉ）Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２ＤのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｓｓｓ） （ｉ）Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｔｔｔ） （ｉ）Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖。
【０１１３】
ここで、ＶＨのＣ末端アミノ酸および配列番号１８３のＮ末端アミノ酸は、ペプチド結合を形成し；
場合によって、（ａ）から（ｔｔｔ）のいずれかのＶＨは、Ｋ１６ＲおよびＴ８４Ａ置換の一方または両方を含む。
【０１１４】
いくつかの実施態様では、本開示は、
（ｉ）上記（ａ）から（ｔｔｔ）のＶＨ、（ｉｉ）配列番号１８３および（ｉｉｉ）リジン残基のアミノ酸配列からなる重鎖であって、ＶＨのＣ末端アミノ酸と配列番号１８３のＮ末端アミノ酸がペプチド結合を形成し、かつ、配列番号１８３のＣ末端アミノ酸がリジンのＮ末端に結合している、重鎖と；
上記（ａ）から（ｔｔｔ）の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖
とを含む抗ＶＩＳＴＡ ｍＡｂを企図しており、
ここで、ＶＨおよび軽鎖アミノ酸配列が、上記（ａ）から（ｔｔｔ）の中の同じ抗体種から選択される。
【０１１５】
本開示のさらなる実施態様には、以下を含む抗ＶＩＳＴＡ Ａｂが含まれる。
（ａ） （ｉ）Ｐ１−０６１０２９のＶＨのアミノ酸配列（配列番号６７）および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６１０２９の軽鎖アミノ酸配列（配列番号７０）を含む軽鎖；
（ｂ） （ｉ）Ｐ１−０６１０１５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６１０１５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｃ） （ｉ）Ｐ１−０６８７５７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７５７の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｄ） （ｉ）Ｐ１−０６８７５９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７５９の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｅ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｆ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｇ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｈ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｉ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６９の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｊ） （ｉ）Ｐ１−０６８７７１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７７１の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｋ） （ｉ）Ｐ１−０６８７７３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７７３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｌ） （ｉ）Ｐ１−０６８７７５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７７５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｍ） （ｉ）Ｐ１−０６９０５９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０５９の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｎ） （ｉ）Ｐ１−０６９０６１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０６１の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｏ） （ｉ）Ｐ１−０６９０６３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０６３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｐ） （ｉ）Ｐ１−０６９０６５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０６５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｑ） （ｉ）Ｐ１−０６９０６７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０６７の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｒ） （ｉ）Ｐ１−０６９０６９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０６９の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｓ） （ｉ）Ｐ１−０６９０７１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０７１の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｔ） （ｉ）Ｐ１−０６９０７３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０７３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｕ） （ｉ）Ｐ１−０６９０７５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０７５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｖ） （ｉ）Ｐ１−０６９０７７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６９０７７の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｗ） （ｉ）Ｐ１−０６８７３６のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７３６の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｘ） （ｉ）Ｐ１−０６８７３８のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７３８の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｙ） （ｉ）Ｐ１−０６８７４０のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７４０の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｚ） （ｉ）Ｐ１−０６８７４２のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７４２の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ａａ） （ｉ）Ｐ１−０６８７４４のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７４４の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｂｂ） （ｉ）Ｐ１−０６８７４６のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７４６の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｃｃ） （ｉ）Ｐ１−０６８７４８のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７４８の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｄｄ） （ｉ）Ｐ１−０６８７５０のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７５０の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｅｅ） （ｉ）Ｐ１−０６８７５２のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７５２の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｆｆ） （ｉ）Ｐ１−０６８７５４のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７５４の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｇｇ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｈｈ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｉｉ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｊｊ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｋｋ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０ＤのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｌｌ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｍｍ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｎｎ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｏｏ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｐｐ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｑｑ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｒｒ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｓｓ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｔｔ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｕｕ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２ＹのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｖｖ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｗｗ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｘｘ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２ＹのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｙｙ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｚｚ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ａａａ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｂｂｂ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｃｃｃ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｄｄｄ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｅｅｅ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｆｆｆ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｇｇｇ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｈｈｈ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｉｉｉ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０ＤのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｊｊｊ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｋｋｋ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｌｌｌ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｍｍｍ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｎｎｎ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｏｏｏ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｐｐｐ） （ｉ）Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２ＤのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｑｑｑ） （ｉ）Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｒｒｒ） （ｉ）Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２ＤのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｓｓｓ） （ｉ）Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｔｔｔ） （ｉ）Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖。
ここで、場合によって、（ａ）から（ｔｔｔ）のいずれかのＶＨは、Ｋ１６ＲおよびＴ８４Ａ置換の一方または両方を含む。
【０１１６】
本開示のなおさらなる実施態様には、以下を含む抗ＶＩＳＴＡＡｂが含まれる。
（ａ） （ｉ）Ｐ１−０６１０２９のＶＨのアミノ酸配列（配列番号６７）および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６１０２９の軽鎖アミノ酸配列（配列番号７０）からなる軽鎖；
（ｂ） （ｉ）Ｐ１−０６１０１５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６１０１５の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｃ） （ｉ）Ｐ１−０６８７５７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７５７の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｄ） （ｉ）Ｐ１−０６８７５９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７５９の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｅ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｆ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６３の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｇ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６５の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｈ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｉ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６９の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｊ） （ｉ）Ｐ１−０６８７７１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７７１の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｋ） （ｉ）Ｐ１−０６８７７３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７７３の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｌ） （ｉ）Ｐ１−０６８７７５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７７５の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｍ） （ｉ）Ｐ１−０６９０５９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６９０５９の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｎ） （ｉ）Ｐ１−０６９０６１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６９０６１の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｏ） （ｉ）Ｐ１−０６９０６３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６９０６３の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｐ） （ｉ）Ｐ１−０６９０６５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６９０６５の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｑ） （ｉ）Ｐ１−０６９０６７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６９０６７の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｒ） （ｉ）Ｐ１−０６９０６９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６９０６９の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｓ） （ｉ）Ｐ１−０６９０７１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６９０７１の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｔ） （ｉ）Ｐ１−０６９０７３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６９０７３の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｕ） （ｉ）Ｐ１−０６９０７５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６９０７５の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｖ） （ｉ）Ｐ１−０６９０７７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６９０７７の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｗ） （ｉ）Ｐ１−０６８７３６のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７３６の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｘ） （ｉ）Ｐ１−０６８７３８のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７３８の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｙ） （ｉ）Ｐ１−０６８７４０のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７４０の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｚ） （ｉ）Ｐ１−０６８７４２のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７４２の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ａａ） （ｉ）Ｐ１−０６８７４４のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７４４の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｂｂ） （ｉ）Ｐ１−０６８７４６のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７４６の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｃｃ） （ｉ）Ｐ１−０６８７４８のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７４８の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｄｄ） （ｉ）Ｐ１−０６８７５０のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７５０の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｅｅ） （ｉ）Ｐ１−０６８７５２のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７５２の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｆｆ） （ｉ）Ｐ１−０６８７５４のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７５４の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｇｇ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｈｈ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｉｉ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｊｊ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｋｋ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０ＤのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｌｌ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｍｍ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｎｎ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｏｏ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｐｐ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｑｑ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｒｒ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｓｓ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｔｔ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｕｕ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２ＹのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｖｖ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｗｗ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｘｘ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２ＹのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｙｙ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｚｚ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ａａａ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｂｂｂ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｃｃｃ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｄｄｄ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｅｅｅ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｆｆｆ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｇｇｇ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｈｈｈ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｉｉｉ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０ＤのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｊｊｊ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｋｋｋ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列からなる鎖；
（ｌｌｌ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｍｍｍ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｎｎｎ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｏｏｏ） （ｉ）Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｐｐｐ） （ｉ）Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２ＤのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｑｑｑ） （ｉ）Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｒｒｒ） （ｉ）Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２ＤのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖；
（ｓｓｓ） （ｉ）Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖； 
（ｔｔｔ） （ｉ）Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖と、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖。
【０１１７】
ここで、ＶＨのＣ末端アミノ酸と配列番号１８４のＮ末端アミノ酸はペプチド結合を形成し；
場合によって、（ａ）から（ｔｔｔ）のいずれかのＶＨは、Ｋ１６ＲおよびＴ８４Ａ置換の一方または両方を含む。
【０１１８】
いくつかの実施態様では、本開示は、
（ｉ）上記（ａ）から（ｔｔｔ）のＶＨ、（ｉｉ）配列番号１８４および（ｉｉｉ）リジン残基のアミノ酸配列からなる重鎖であって、ＶＨのＣ末端アミノ酸と配列番号１８４のＮ末端アミノ酸がペプチド結合を形成し、かつ、配列番号１８４のＣ末端アミノ酸がリジンのＮ末端に結合している、重鎖と；
上記（ａ）から（ｔｔｔ）の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖
とを含む抗ＶＩＳＴＡ ｍＡｂを企図しており、
ここで、ＶＨおよび軽鎖アミノ酸配列が、上記（ａ）から（ｔｔｔ）の中の同じ抗体種から選択される。
【０１１９】
いくつかの実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、Ｐ１−０６１０２９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸ＶＨ配列を含んでもよく、ここで、該抗体は、少なくとも１つの残基がＤ、ＥまたはＨで置換されているＰ１−０６１０２９のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３を含む。いくつかの実施態様では、Ｐ１−０６１０２９のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３のそれぞれは、Ｄ、ＥまたはＨで置換されている１、２または３個の残基を含有する。いくつかの実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、Ｐ１−０６１０２９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸ＶＨ配列を含んでもよく、ここで、該抗体は、ＣＤＲ１のアミノ酸４、５または７位に１つまたは２つのＤまたはＥ残基を含むＶＨ ＣＤＲ１を含み、かつ／あるいはＣＤＲ２の３、５、６または７位に１、２または３個のＤ、ＥまたはＨ残基を有するＶＨ ＣＤＲ２を含み、かつ／あるいはＣＤＲ ３の６、１２または１４位に１、２または３個のＤ、ＥまたはＨ残基を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む。（これらの実施態様に該当するＯＳ抗体の例については、以下の表５を参照のこと。）このような場合、軽鎖可変領域は、Ｐ１−０６１０２９もしくはＰ１−０６１０１５またはその子孫、例えばＰ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７５７、Ｐ１−０６８７５９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６３、Ｐ１−０６８７６５、Ｐ１−０６８７６７、Ｐ１−０６８７６９、Ｐ１−０６８７７１、Ｐ１−０６８７７３、Ｐ１−０６８７７５、Ｐ１−０６９０５９、Ｐ１−０６９０６１、Ｐ１−０６９０６３、Ｐ１−０６９０６５、Ｐ１−０６９０６７、Ｐ１−０６９０６９、Ｐ１−０６９０７１、Ｐ１−０６９０７３、Ｐ１−０６９０７５、Ｐ１−０６９０７７、Ｐ１−０６１０１５、Ｐ１−０６８７３６、Ｐ１−０６８７３８、Ｐ１−０６８７４０、Ｐ１−０６８７４２、Ｐ１−０６８７４４、Ｐ１−０６８７６６、Ｐ１−０６８７４８、Ｐ１−０６８７５０、Ｐ１−０６８７５２Ｐ１−０６８７５４、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８���６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥまたはＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３を含み、かつ／あるいは該軽鎖可変領域はＰ１−０６１０２９もしくはＰ１−０６１０１５またはその子孫、例えばＰ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７５７、Ｐ１−０６８７５９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６３、Ｐ１−０６８７６５、Ｐ１−０６８７６７、Ｐ１−０６８７６９、Ｐ１−０６８７７１、Ｐ１−０６８７７３、Ｐ１−０６８７７５、Ｐ１−０６９０５９、Ｐ１−０６９０６１、Ｐ１−０６９０６３、Ｐ１−０６９０６５、Ｐ１−０６９０６７、Ｐ１−０６９０６９、Ｐ１−０６９０７１、Ｐ１−０６９０７３、Ｐ１−０６９０７５、Ｐ１−０６９０７７、Ｐ１−０６１０１５、Ｐ１−０６８７３６、Ｐ１−０６８７３８、Ｐ１−０６８７４０、Ｐ１−０６８７４２、Ｐ１−０６８７４４、Ｐ１−０６８７６６、Ｐ１−０６８７４８、Ｐ１−０６８７５０、Ｐ１−０６８７５２、Ｐ１−０６８７５４、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ���０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥまたはＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥの軽鎖可変領域と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であり得る。
【０１２０】
いくつかの実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、Ｐ１−０６１０１５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸ＶＨ配列を含んでもよく、ここで、該抗体は、少なくとも１つの残基がＤ、ＥまたはＨで置換されているＰ１−０６１０１５のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３を含む。いくつかの実施態様では、Ｐ１−０６１０１５のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３のそれぞれは、Ｄ、ＥまたはＨで置換されている１、２または３個の残基を含有する。いくつかの実施態様では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、Ｐ１−０６１０１５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸ＶＨ配列を含んでもよく、ここで、該抗体は、ＣＤＲ１のアミノ酸６、７、８および９位に１つまたは２つのＤ、ＥまたはＥ残基を含むＶＨ ＣＤＲ１を含み、かつ／あるいはＣＤＲ２の１、２、４または８−１１位に１、２または３個のＤ、ＥまたはＨ残基を有するＶＨ ＣＤＲ２を含み、かつ／あるいはＣＤＲ ３の２、３、６、７または１２位に１、２または３個のＤ、ＥまたはＨ残基を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む。（これらの実施態様に該当するＯＳ抗体の例については、以下の表６を参照のこと。）このような場合、軽鎖可変領域は、Ｐ１−０６１０２９もしくはＰ１−０６１０１５またはその子孫、例えばＰ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７５７、Ｐ１−０６８７５９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６３、Ｐ１−０６８７６５、Ｐ１−０６８７６７、Ｐ１−０６８７６９、Ｐ１−０６８７７１、Ｐ１−０６８７７３、Ｐ１−０６８７７５、Ｐ１−０６９０５９、Ｐ１−０６９０６１、Ｐ１−０６９０６３、Ｐ１−０６９０６５、Ｐ１−０６９０６７、Ｐ１−０６９０６９、Ｐ１−０６９０７１、Ｐ１−０６９０７３、Ｐ１−０６９０７５、Ｐ１−０６９０７７、Ｐ１−０６１０１５、Ｐ１−０６８７３６、Ｐ１−０６８７３８、Ｐ１−０６８７４０、Ｐ１−０６８７４２、Ｐ１−０６８７４４、Ｐ１−０６８７６６、Ｐ１−０６８７４８、Ｐ１−０６８７５０、Ｐ１−０６８７５２、Ｐ１−０６８７５４、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿���５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥまたはＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥのＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３を含み、かつ／あるいは該軽鎖可変領域はＰ１−０６１０２９もしくはＰ１−０６１０１５またはその子孫、例えばＰ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７５７、Ｐ１−０６８７５９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６３、Ｐ１−０６８７６５、Ｐ１−０６８７６７、Ｐ１−０６８７６９、Ｐ１−０６８７７１、Ｐ１−０６８７７３、Ｐ１−０６８７７５、Ｐ１−０６９０５９、Ｐ１−０６９０６１、Ｐ１−０６９０６３、Ｐ１−０６９０６５、Ｐ１−０６９０６７、Ｐ１−０６９０６９、Ｐ１−０６９０７１、Ｐ１−０６９０７３、Ｐ１−０６９０７５、Ｐ１−０６９０７７、Ｐ１−０６１０１５、Ｐ１−０６８７３６、Ｐ１−０６８７３８、Ｐ１−０６８７４０、Ｐ１−０６８７４２、Ｐ１−０６８７４４、Ｐ１−０６８７６６、Ｐ１−０６８７４８、Ｐ１−０６８７５０、Ｐ１−０６８７５２、Ｐ１−０６８７５４、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１−０６���７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ、Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２ＥまたはＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥの軽鎖可変領域と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であり得る。
【０１２１】
いくつかの実施態様では、このような修飾された抗ｈＶＩＳＴＡ Ｐ１−０６１０２９またはＰ１−０６１０１５子孫は、以下の特徴の１つ以上を有する。
− 酸性ｐＨ、例えばｐＨ６．０またはｐＨ６．５で、ｈＶＩＳＴＡ、例えばＥＣＤのヒスチジンリッチ領域または配列番号２のアミノ酸残基３５−１２７を含むポリペプチドに特異的に結合すること；
− 生理的ｐＨまたは中性ｐＨ、例えばｐＨ７．４またはｐＨ７．０で、ｈＶＩＳＴＡ、例えばＥＣＤのヒスチジンリッチ領域または配列番号２のアミノ酸残基３５−１２７を含むポリペプチドへの有意な結合を欠くこと；
− 酸性ｐＨ、例えばｐＨ６．０またはｐＨ６．５で、ｃｙｎｏ ＶＩＳＴＡ、例えばＥＣＤのヒスチジンリッチ領域に特異的に結合すること；
− 生理的ｐＨまたは中性ｐＨ、例えばｐＨ７．４またはｐＨ７．０で、ｃｙｎｏ ＶＩＳＴＡ、例えばＥＣＤのヒスチジンリッチ領域への有意な結合を欠くこと；
− 配列番号２を有するｈＶＩＳＴＡ ＥＣＤと比較して、アミノ酸Ｔ３５、Ｙ３７、Ｋ３８、Ｔ３９、Ｙ４１、Ｒ５４、Ｔ６１、Ｆ６２、Ｑ６３、Ｌ６５、Ｈ６６、Ｌ６７、Ｈ６８、Ｈ６９、Ｆ９７、Ｌ１１５、Ｖ１１７、Ｉ１１９、Ｈ１２１、Ｈ１２２、Ｓ１２４、Ｅ１２５、Ｒ１２７の１つ以上に置換を有するｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤへの結合が減少していること；
− ｈＶＩＳＴＡへの結合に関し、Ｐ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６７および／またはＰ１−０６１０１５と交差競合すること；
− 酸性ｐＨ、例えばｐＨ６．０またはｐＨ６．５で、ＶＩＳＴＡを発現するヒトＴ細胞（例えばナイーブまたは活性化Ｔ細胞）へのｈＶＩＳＴＡの結合を阻害すること；
− 酸性ｐＨ、例えばｐＨ６．０またはｐＨ６．５で、ｈＶＩＳＴＡのＰＳＧＬ−１への結合を阻害すること（例えば、配列番号１を有するｈＶＩＳＴＡのＨ１５３およびＨ１５４とＰＳＧＬ−１チロシンＹ４６およびＹ４８との間の相互作用を阻害すること）であって、ＰＳＧＬ−１はシアリルルイスＸを有していてもいなくてもよく、チロシンは好ましくはスルホチロシンである、阻害すること；
− 例えば実施例に記載のように測定した、カニクイザルにおける少なくとも１００、２００、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００または７００時間（例：少なくとも３５０時間）の平均滞留時間（ＭＲＴ）；
− 例えば、Ｔ細胞増殖を強化すること；Ｔ細胞からのＩＦＮ−γ産生を強化すること；および／またはＴ細胞受容体媒介のＮＦ−κＢシグナル伝達を刺激することによる、Ｔ細胞活性化を刺激すること；
− ＶＩＳＴＡ媒介の細胞：細胞接着を阻害すること；
− ＶＩＳＴＡを発現する、ヒト腫瘍細胞の試料または炎症を起こしたヒト組織の試料において、ｈＶＩＳＴＡに特異的に結合すること；
− 例えば実施例１５に記載の酵母表面ディスプレイおよびＮＧＳアッセイを使用して決定され、付番は成熟したｈＶＩＳＴＡのものである１つ以上（例えば、少なくとも１−３、１−５、１−１０、５−１０、５−１５個、または全て）のエネルギー的に重要な接触残基Ｙ３７、Ｔ３９、Ｒ５４、Ｆ６２、Ｈ６６、Ｖ１１７、Ｉ１１９またはＳ１２４を介してｈＶＩＳＴＡに接触すること；
− 配列番号１を有するｈＶＩＳＴＡの領域１：５７ＬＧＰＶＤＫＧＨＤＶＴＦ６８；領域２：８６ＲＲＰＩＲＮＬＴＦＱＤＬ９７；および領域３：１４８ＶＶＥＩＲＨＨＨＳＥＨＲＶＨＧＡＭＥ１６５へ結合することであって、場合によってその結合が、実施例２１に記載されるようにＭＳ−ＨＤＸで決定して、領域２に対して最も強い、結合すること；
− 例えば実施例に記載されているように、例えば結晶学によって決定される、ｈＶＩＳＴＡのヒスチジンリッチなβシート伸長部に結合すること；
− 例えば実施例に記載されているように、例えば結晶学によって決定される、成熟ｈＶＩＳＴＡのＨ１２１、Ｈ１２２および／またはＨ１２３に、例えば水素結合を介して接触すること（４．０オングストローム（Å）以下の距離）；
− ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３にある、少なくとも１つ以上のグルタミン酸、アスパラギン酸またはヒスチジン残基を介してｈＶＩＳＴＡに接触すること；および
請求項および／または実施例に記載されている追加の特性。
【０１２２】
例示的な抗体定常領域
いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、１つまたは複数のヒト定常領域を含む。いくつかの実施態様では、ヒト重鎖定常領域は、ＩｇＡ、ＩｇＧおよびＩｇＤから選択されるアイソタイプのものである。いくつかの実施態様では、ヒト軽鎖定常領域は、κおよびλから選択されるアイソタイプのものである。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４等のヒトＩｇＧ定常領域を含む。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。いくつかのこのような実施態様では、本明細書に記載の抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域にＳ２４１Ｐ突然変異を含む。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域およびヒトκ軽鎖を含む。
【０１２３】
重鎖定常領域の選択により、抗体がｉｎ ｖｉｖｏでエフェクター機能を有するかどうかを判定することができる。このようなエフェクター機能は、いくつかの実施態様では、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）および／または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を含み、抗体が結合している細胞の死滅をもたらし得る。いくつかのがんを治療する方法を含むいくつかの治療方法では、例えば抗体が腫瘍の維持または増殖を支持する細胞に結合する場合、細胞死滅が望ましい場合がある。腫瘍の維持または増殖を支持し得る例示的な細胞には、限定されないが、腫瘍細胞自体、腫瘍への脈管構造の動員を助ける細胞、および腫瘍の増殖または生存を支持または促進するリガンド、増殖因子または対抗受容体を提供する細胞が含まれる。いくつかの実施態様では、エフェクター機能が望ましい場合、ヒトＩｇＧ１重鎖またはヒトＩｇＧ３重鎖を含む抗体が選択される。
【０１２４】
ある実施態様において、本明細書で提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増大または低下させるように作り変えられる。抗体に対するグリコシル化部位の付加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が作製または除去されるようにアミノ酸配列を変更することにより、簡便に達成することができる。
【０１２５】
抗体がＦｃ領域を含む場合には、それに結合する糖類を変えることができる。哺乳動物細胞によって産生された天然抗体は、典型的には、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７にＮ結合により一般に付着した分岐状の二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ １５：２６−３２（１９９７）を参照。オリゴ糖には、様々な糖類、例えばマンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトースおよびシアル酸、ならびに二分岐オリゴ糖構造の「幹」のＧｌｃＮＡｃに結合したフコースが含まれ得る。いくつかの実施態様において、本発明の抗体におけるオリゴ糖の修飾は、特定の改善された特性を有する抗体を作製するためになされ得る。例えば、いくつかの実施態様において、抗体は、例えば、フコース含有グリコシル化で通常グリコシル化されているＡｓｎ２９７などの残基を突然変異させることによって、または他の手段によってアフコシル化されてもよい。いくつかの実施態様では、本明細書の抗体は、アフコシル化されたヒトＩｇＧ１定常領域を含み得る。
【０１２６】
抗体は、二分されたオリゴ糖、例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃにより二分されているオリゴ糖をさらに備えている。このような抗体は、低下したフコシル化および／または改善されたＡＤＣＣ機能を有することができる。このような抗体の例は、例えば国際公開第２００３／０１１８７８号（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔら）、米国特許第６６０２６８４号（Ｕｍａｎａら）、および米国特許出願公開第２００５／０１２３５４６号（Ｕｍａｎａら）に記載されている。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖内に少なくとも１つのガラクトース残基を持つ抗体も提供される。このような抗体は、改善されたＣＤＣ機能を有することができる。このような抗体は、例えば国際公開第１９９７／３００８７号（Ｐａｔｅｌら）；国際公開第１９９８／５８９６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）；および国際公開第１９９９／２２７６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載されている。
【０１２７】
抗体には、アミノ末端リーダー伸長部も備わっている。例えば、アミノ末端リーダー配列の１つ以上のアミノ酸残基は、抗体の任意の１つ以上の重鎖または軽鎖のアミノ末端に存在する。例示的なアミノ末端リーダー伸長部は、抗体の一方または両方の軽鎖上に存在する３つのアミノ酸残基ＶＨＳを含むかまたはそれらからなる。
【０１２８】
ヒトＦｃＲｎ高親和性結合ポリペプチドのｉｎ ｖｉｖｏまたは血清半減期は、例えばトランスジェニックマウス、ヒト、または変異Ｆｃ領域を有するポリペプチドが投与される非ヒト霊長類でアッセイすることができる。例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １８（１２）：１７５９−１７６９（２００６）も参照されたい。
【０１２９】
本発明のいくつかの実施態様において、アフコシル化抗体は、ヒトエフェクター細胞の存在下でフコースを含む親抗体よりも効果的にＡＤＣＣを媒介する。一般に、ＡＤＣＣ活性は、本明細書で開示されるｉｎ ｖｉｔｒｏのＡＤＣＣアッセイを用いて決定され得るが、ＡＤＣＣ活性を決定するための他のアッセイまたは方法、例えば動物モデルなどでなどでのものも企図される。
【０１３０】
特定の実施態様では、Ｆｃ領域は、少なくとも１つのアミノ酸残基を異なるアミノ酸残基で置き換えることによって作り変えられ、抗体のエフェクター機能を変化させる。例えば、アミノ酸残基２３４、２３５、２３６、２３７、２９７、３１８、３２０、３２２、３３０および／または３３１から選択される１つ以上のアミノ酸は、抗体がエフェクターリガンドに対する変化した親和性を有するものの、親抗体の抗原結合能力は保持するように、異なるアミノ酸残基で置換することができる。親和性が変化するエフェクターリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体または補体のＣ１成分であり得る。このアプローチは、米国特許第５６２４８２１号および同第５６４８２６０号（共にＷｉｎｔｅｒらによる）にさらに詳細に記載されている。
【０１３１】
いくつかの例では、アミノ酸残基３２９、３３１および３２２から選択される１つ以上のアミノ酸は、抗体がＣ１ｑ結合を変化させ、かつ／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を低下もしくは消失させたりするように、異なるアミノ酸残基で置き換えることができる。このアプローチは、Ｉｄｕｓｏｇｉｅらによる米国特許第６１９４５５１号および同第５６４８２６０号にさらに詳細に記載されている。
【０１３２】
いくつかの例では、アミノ酸２３１および２３９位内の１つ以上のアミノ酸残基が変更され、それによって補体を固定する抗体の能力を変える。このアプローチは、Ｂｏｄｍｅｒらによる国際公開第９４／２９３５１号にさらに記載されている。いくつかの例では、Ｆｃ領域は、２３４、２３５、２３６、２３８、２３９、２４０、２４１、２４３、２４４、２４５、２４７、２４８、２４９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６２、２６３、２６４、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１２、３１３、３１５、３２０、３２２、３２４、３２５、３２６、３２７、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、３７８、３８２、３８８、３８９、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３３、４３４、４３５、４３６、４３７、４３８または４３９位の１つ以上のアミノ酸を修飾することにより、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を低下させるために、および／またはＦｃγ受容体に対する親和性を低下させるために修飾することができる。例示的な置換には、２３６Ａ、２３９Ｄ、２３９Ｅ、２６８Ｄ、２６７Ｅ、２６８Ｅ、２６８Ｆ、３２４Ｔ、３３２Ｄおよび３３２Ｅが含まれる。例示的な変異体には、２３９Ｄ／３３２Ｅ、２３６Ａ／３３２Ｅ、２３６Ａ／２３９Ｄ／３３２Ｅ、２６８Ｆ／３２４Ｔ、２６７Ｅ／２６８Ｆ、２６７Ｅ／３２４Ｔおよび２６７Ｅ／２６８Ｆ７３２４Ｔが含まれる。Ｆｃに対して行うことができる他のＦｃ修飾は、ＦｃγＲおよび／または補体タンパク質への結合を低減または除去し、それによりＡＤＣＣ、ＡＤＣＰおよびＣＤＣ等のＦｃを介したエフェクター機能を低減または除去するためのものである。例示的な修飾には、２３４、２３５、２３６、２３７、２６７、２６９、３２５、３２８、３３０および／または３３１（例えば３３０および３３１）位（ＥＵインデックスによる付番）での置換、挿入および欠失が含まれるが、これらに限定されない。例示的な置換には、２３４Ａ、２３５Ｅ、２３６Ｒ、２３７Ａ、２６７Ｒ、２６９Ｒ、３２５Ｌ、３２８Ｒ、３３０Ｓおよび３３１Ｓ（例えば３３０Ｓおよび３３１Ｓ）（ＥＵインデックスによる付番）が含まれるが、これらに限定されない。Ｆｃ変異体は、２３６Ｒ／３２８Ｒを含んでもよい。ＦｃγＲおよび補体相互作用を低減するための他の修飾には置換２９７Ａ、２３４Ａ、２３５Ａ、２３７Ａ、３１８Ａ、２２８Ｐ、２３６Ｅ、２６８Ｑ、３０９Ｌ、３３０Ｓ、３３１Ｓ、２２０Ｓ、２２６Ｓ、２２９Ｓ、２３８Ｓ、２３３Ｐおよび２３４Ｖ、ならびに突然変異もしくは酵素的手段による、またはタンパク質をグリコシル化しない細菌などの生物での生産による２９７位でのグリコシル化の除去が含まれる。これらおよびその他の修飾は、Ｓｔｒｏｈｌ，２００９，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０：６８５−６９１に総説されている。例えば、ヒトＩｇＧ１．３ Ｆｃ定常領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ���３５ＥおよびＧ２３７Ａ置換を含有する。ＩｇＧ１ｆａ．Ｐ２３８Ｋ（またはＩｇＧ１．Ｐ２３８Ｋ）は、Ｐ２３８Ｋ置換を含有する。ＩｇＧ１．１ｆは、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓ置換を含む。
【０１３３】
抑制性受容体ＦｃγＲＩＩｂに対する親和性を強化するＦｃ変異体も使用できる。このような変異体は、例えばＢ細胞および単球を含むＦｃγＲＩＩｂ細胞に関連する免疫調節活性有するＦｃ融合タンパク質を提供する。一実施態様では、Ｆｃ変異体は、１つ以上の活性化受容体と比較して、ＦｃγＲＩＩｂへの選択的に強化された親和性を提供する。ＦｃγＲＩＩｂへの結合を変化させるための修飾には、ＥＵインデックスによる２３４、２３５、２３６、２３７、２３９、２６６、２６７、２６８、３２５、３２６、３２７、３２８、３３０、３３１および３３２からなる群から選択される位置における１つ以上の修飾が含まれる。ＦｃγＲｌｌｂ親和性を強化するための例示的な置換には、２３４Ａ、２３４Ｄ、２３４Ｅ、２３４Ｆ、２３４Ｗ、２３５Ｄ、２３５Ｅ、２３５Ｆ、２３５Ｒ、２３５Ｙ、２３６Ｄ、２３６Ｎ、２３７Ａ、２３７Ｄ、２３７Ｎ、２３９Ｄ、２３９Ｅ、２６６Ｍ、２６７Ｄ、２６７Ｅ、２６８Ｄ、２６８Ｅ、３２７Ｄ、３２７Ｅ、３２８Ｆ、３２８Ｗ、３２８Ｙ、３３０Ｓ、３３１Ｓおよび３３２Ｅが含まれるが、これらに限定されない。例示的な置換には、２３５Ｙ、２３６Ｄ、２３９Ｄ、２６６Ｍ、２６７Ｅ、２６８Ｄ、２６８Ｅ、３２８Ｆ、３３２Ｗおよび３２８Ｙが含まれる。ＦｃγＲＩＩｂへの結合を強化するための他のＦｃ変異体には、２３５Ｙ／２６７Ｅ、２３６Ｄ／２６７Ｅ、２３９Ｄ／２６８Ｄ、２３９Ｄ／２６７Ｅ、２６７Ｅ／２６８Ｄ、２６７Ｅ／２６８Ｅ、および２６７Ｅ／３２８Ｆが含まれる。
【０１３４】
ＦｃγＲおよび補体相互作用を強化するための他の修飾には、限定されないが、置換２９８Ａ、３３３Ａ、３３４Ａ、３２６Ａ、２４７１、３３９Ｄ、３３９Ｑ、２８０Ｈ、２９０Ｓ、２９８Ｄ、２９８Ｖ、２４３Ｌ、２９２Ｐ、３００Ｌ、３９６Ｌ、３０５１および３９６Ｌが含まれる。これらのおよびその他の修飾は、Ｓｔｒｏｈｌ，２００９，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０：６８５−６９１に総説されている。Ｆｃγ受容体への結合を増加させるＦｃ修飾には、アミノ酸の２３８、２３９、２４８、２４９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７９、２８０、２８３、２８５、２９８、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３０１、３０３、３０５、３０７、３１２、３１５、３２４、３２７、３２９、３３０、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、３７９、３８２、３８８、３８９、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８または４３９位のいずれか１つ以上におけるアミノ酸修飾が含まれ、ここで、Ｆｃ領域の残基の付番は、国際公開第００／４２０７２号にあるように、ＥＵインデックスのものである。
【０１３５】
任意選択的に、Ｆｃ領域は、当業者に知られている追加および／または代替の位置に非天然アミノ酸残基を含むことができる（例えば、米国特許第５６２４８２１号；同第６２７７３７５号；同第６７３７０５６号；同第６１９４５５１号；同第７３１７０９１号；同第８１０１７２０号；国際公開第００／４２０７２号；同第０１／５８９５７号；同第０２／０６９１９号；同第０４／０１６７５０号；同第０４／０２９２０７号；同第０４／０３５７５２号；同第０４／０７４４５５号；同第０４／０９９２４９号；同第０４／０６３３５１号；同第０５／０７０９６３号；同第０５／０４０２１７号、同第０５／０９２９２５号、および同第０６／０２０１１４号を参照）。
【０１３６】
Ｆｃ領域のそのリガンドに対する親和および結合特性は、当技術分野で知られている平衡法（例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ））またはカイネティクス（例えばＢＩＡＣＯＲＥ解析）、ならびにその他の方法、例えば間接結合アッセイ、競合阻害アッセイ、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）、ゲル電気泳動およびクロマトグラフィー（例えばゲル濾過）を含むがこれらに限定されない様々なｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ法（生化学的または免疫学的アッセイ）によって決定され得る。これらの方法および他の方法では、検査される成分の１つもしくは複数の標識を利用することができ、かつ／または発色、蛍光、発光もしくは同位体標識を含むがこれらに限定されない様々な検出方法を採用することができる。結合親和性およびカイネティクスの詳細な説明は、Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，ｅｄ．，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ（１９９９）に記載されており、抗体−免疫原相互作用に焦点を当てている。
【０１３７】
特定の実施態様では、抗体は、その生物学的半減期を延ばすために修飾される。様々アプローチが可能である。例えば、これは、Ｆｃ領域のＦｃＲｎに対する結合親和性を増加させることによって行うことができる。例えば、米国特許第６２７７３７５号に記載されているように、次の残基：２５２、２５４、２５６、４３３、４３５、４３６の１つまたは複数を突然変異させることができる。特定の例示的な置換には、Ｔ２５２Ｌ、Ｔ２５４Ｓおよび／またはＴ２５６Ｆの１つまたは複数が含まれる。あるいは、生物学的半減期を延ばすために、抗体は、Ｐｒｅｓｔａらによる米国特許第５８６９０４６号および第６１２１０２２号に記載されているようにＣＨ１またはＣＬ領域内で変化させ、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインの２つのループから取得されたサルベージ受容体結合エピトープを含めることができる。ＦｃＲｎへの結合を増加させ、かつ／または薬物動態特性を改善する他の例示的な変異体には、例えば２５９１、３０８Ｆ、４２８Ｌ、４２８Ｍ、４３４Ｓ、４３４１ １．４３４Ｆ、４３４Ｙおよび４３４Ｘ１を含む、２５９、３０８、４２８および４３４位での置換が含まれる。ＦｃＲｎへの結合を増加させる他の変異体には、２５０Ｅ、２５０Ｑ、４２８Ｌ、４２８Ｆ、２５０Ｑ／４２８Ｌ（Hinton et al.2004, J. Biol. Chem. 279 (8) 6213-6216, Hinton et al. 2006 Journal of Immunology 176:346-356)、２５６Ａ、２７２Ａ、２８６Ａ、３０５Ａ、３０７Ａ、３０７Ｑ、３１ １Ａ、３１２Ａ、３７６Ａ、３７８Ｑ、３８０Ａ、３８２Ａ、４３４Ａ(Shields et al., Journal of Biological Chemistry, 2001, 276(9):6591-6604）、２５２Ｆ、２５２Ｔ、２５２Ｙ、２５２Ｗ、２５４Ｔ、２５６Ｓ、２５６Ｒ、２５６Ｑ、２５６Ｅ、２５６Ｄ、２５６Ｔ、３０９Ｐ、３１ １Ｓ、４３３Ｒ、４３３Ｓ、４３３１、４３３Ｐ、４３３Ｑ、４３４Ｈ、４３４Ｆ、４３４Ｙ、２５２Ｙ／２５４Ｔ／２５６Ｅ、４３３Ｋ／４３４Ｆ／４３６Ｈ、３０８Ｔ／３０９Ｐ／３１１Ｓ（Dall Acqua et al. Journal of Immunology, 2002, 169:5171-5180, Dall’Acqua et al., 2006, Journal of Biological Chemistry 281:23514-23524）が含まれる。ＦｃＲｎ結合を調節するための他の修飾は、Ｙｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１８２：７６６３−７６７１に記載されている。
【０１３８】
特定の実施態様では、特定の生物学的特性を有するハイブリッドＩｇＧアイソタイプを使用することができる。例えば、ＩｇＧ１／ＩｇＧ３ハイブリッド変異体は、ＣＨ２および／またはＣＨ３領域のＩｇＧ１位置を、２つのアイソタイプが異なる位置のＩｇＧ３からのアミノ酸で置換することによって構築することができる。したがって、ハイブリッド変異体ＩｇＧ抗体は、１つ以上の置換、例えば２７４Ｑ、２７６Ｋ、３００Ｆ、３３９Ｔ、３５６Ｅ、３５８Ｍ、３８４Ｓ、３９２Ｎ、３９７Ｍ、４２２１、４３５Ｒおよび４３６Ｆを含む抗体を構築することができる。いくつかの実施態様では、ＩｇＧ１／ＩｇＧ３ハイブリッド変異体は、ＣＨ２および／またはＣＨ３領域のＩｇＧ１位置を、２つのアイソタイプが異なる位置のＩｇＧ３からのアミノ酸で置換することによって構築することができる。したがって、１つ以上の置換、例えばアミノ酸置換２３３Ｅ、２３４Ｌ、２３５Ｌ、−２３６Ｇ（２３６位におけるグリシンの挿入を意味する）および３２７Ａのうちの１つ以上の置換を含むハイブリッド変異体ＩｇＧ抗体を構築することができる。
【０１３９】
さらに、ヒトＩｇＧ１上のＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩおよびＦｃＲｎに対する結合部位がマッピングされ、結合が改善された変異体が記載された（Shields, R.L. et al. (2001) J. Biol. Chem. 276 (6591-6604)参照)。２５６、２９０、２９８、３３３、３３４および３３９位における特定の突然変異は、ＦｃγＲＩＩＩへの結合を改善することが示された。さらに、以下の組み合わせ変異体は、ＦｃγＲＩＩＩへの結合を改善することが示された。Ｔ２５６Ａ／Ｓ２９８Ａ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ、Ｓ２９８Ａ／Ｋ２２４ＡおよびＳ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａであり、これらは、強化されたＦｃγＲＩＩＩａ結合およびＡＤＣＣ活性を示すことが示されている(Shields et al., 2001）。ＦｃγＲＩＩＩａへの結合が強く増強された他のＩｇＧ１変異体が同定されており、その中にはＦｃγＲＩＩＩａに対する親和性の最大の増加、ＦｃγＲＩＩｂへの結合の減少、およびカニクイザルにおける強い細胞傷害活性を示したＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２ＥおよびＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌ変異を有する変異体が含まれている（Ｌａｚａｒら，２００６）。アレムツズマブ（ＣＤ５２特異的）、トラスツズマブ（ＨＥＲ２／ｎｅｕ特異的）、リツキシマブ（ＣＤ２０特異的）、およびセツキシマブ（ＥＧＦＲ−特異的）等の抗体へのトリプル変異の導入は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで大幅に強化されたＡＤＣＣ活性に変換され、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ変異体はサルにおいてＢ細胞を枯渇させる能力の強化を示した（Ｌａｚａｒら，２００６）。さらに、Ｂ細胞悪性腫瘍および乳がんのモデルにおいてヒトＦｃγＲＩＩＩａを発現するトランスジェニックマウスにおいて、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合の強化とおよびそれに伴うＡＤＣＣ活性の強化を示した、Ｌｃ ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００ＬおよびＰ３９６Ｌ変異を含むＩｇＧ１変異体が同定されている（Ｓｔａｖｅｎｈａｇｅｎら，２００７；Ｎｏｒｄｓｔｒｏｍら，２０１１）。使用することができる他のＦｃ変異体には、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｌ３３４Ａ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌ、Ｌ２３５Ｖ／Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６Ｌ、およびＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓが含まれる。
【０１４０】
特定の実施態様では、ＦｃγＲへの結合が低下したＦｃが選択される。ＦｃγＲ結合が低下した例示的なＦｃ、例えばＩｇＧ１ Ｆｃは、次の３つのアミノ酸置換、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＥおよびＧ２３７Ａを含む。
【０１４１】
特定の実施態様では、補体結合が低減されたＦｃが選択される。補体結合が低減された例示的なＦｃ、例えばＩｇＧ１ Ｆｃは、次の２つのアミノ酸置換、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓを有する。
【０１４２】
特定の実施態様では、本質的にエフェクター機能を有しない、すなわちＦｃγＲへの結合が低減され、かつ、補体結合が低減されたＦｃが選択される。エフェクターのない例示的なＦｃ、例えばＩｇＧ１ Ｆｃは、次の５つの変異、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓを含む。
【０１４３】
ＩｇＧ４定数ドメインを使用する場合、ＩｇＧ１のヒンジ配列を模倣し、それによってＩｇＧ４分子を安定化する置換Ｓ２２８Ｐを含むことができる。
【０１４４】
国際公開第２０１７／０８７６７８号または同第２０１６０８１７４６号に記載されているＦｃ修飾も用いることができる。
【０１４５】
特定の実施態様では、抗体のグリコシル化が改変される。例えば、アグリコシル化抗体を作ることができる（すなわち、抗体がグリコシル化を欠いている）。グリコシル化は、例えば、抗原に対する抗体の親和性を高めるために変化し得る。このような炭水化物修飾は、例えば、抗体配列内のグリコシル化の１つまたは複数の部位を変更することによって達成することができる。例えば、１つまたは複数のアミノ酸置換は、１つまたは複数の可変領域フレームワークグリコシル化部位の除去をもたらすことにより、その部位でのグリコシル化を除去するように行うことができる。このようなアグリコシル化は、抗原に対する抗体の親和性を高めることができる。このようなアプローチは、Ｃｏらによる米国特許第５７１４３５０号および同第６３５０８６１号にさらに詳細に記載されている。
【０１４６】
Ｎ２９７上の定常領域のグリコシル化は、Ｎ２９７残基を別の残基、例えばＮ２９７Ａに変異させることにより、および／または隣接アミノ酸、例えば２９８を変異させてそれによりＮ２９７上のグリコシル化を低下させることにより防ぐことができる。
【０１４７】
追加的にまたは代替的に、フコシル残基の量が減少した低フコシル化抗体または二分するＧｌｃＮａｃ構造が増加した抗体など、糖化のタイプが変化した抗体を作ることができる。このような変化したグリコシル化パターンは、抗体のＡＤＣＣ能力を増加させることが実証されている。このような炭水化物修飾は、例えば、変化したグリコシル化機構を有する宿主細胞において抗体を発現させることによって達成することができる。グリコシル化機構が変化した細胞は当技術分野で記載されており、本明細書に記載の組換え抗体を発現させ、それによりグリコシル化が変化した抗体を産生する宿主細胞として使用できる。例えば、ＨａｎａｉらによるＥＰ第１１７６１９５号には、フコシル転移酵素をコードする機能的に破壊されたＦＵＴ８遺伝子を有する細胞株が記載されており、このような細胞株で発現された抗体は、低フコシル化を示す。Ｐｒｅｓｔａによる国際公開第０３／０３５８３５号には、Ａｓｎ（２９７）結合炭水化物にフコースを結合する能力が低下し、その宿主細胞で発現される抗体の低フコシル化をもたらす変異型ＣＨＯ細胞株、Ｌｅｄ ３細胞が記載されている（また、Shields, R.L. et al. (2002) J. Biol. Chem. 277 (26733-26740）も参照）。Ｕｍａｎａらによる国際公開第９９／５４３４２号には、糖タンパク質修飾グリコシル転移酵素｛例えば、ベータ（ｌ，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニル転移酵素ＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ））を発現するように操作された細胞株が記載されており、このような操作された細胞株において発現された抗体は、増加した二分するＧｌｃＮａｃ構造を示し、その結果、抗体のＡＤＣＣ活性が増加する（Umana et al. (1999) Nat. Biotech. 17: 176-180も参照）。
【０１４８】
本明細書に記載される抗体の別の修飾は、ペグ化である。抗体をペグ化して、例えば、抗体の生物学的（例えば血清）半減期を延ばすことができる。抗体をペグ化するために、抗体またはその断片は、１つまたは複数のＰＥＧ基が抗体または抗体断片に結合するようになる条件下で、典型的にはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、例えばＰＥＧの反応性エステルまたはアルデヒド誘導体などと反応させる。いくつかの実施態様では、ペグ化は、反応性ＰＥＧ分子（または類似の反応性水溶性ポリマー）とのアシル化反応またはアルキル化反応を介して行われる。本明細書で使用する場合、「ポリエチレングリコール」という用語は、モノ（ＣＩ−ＣＩＯ）アルコキシ−またはアリールオキシ−ポリエチレングリコールもしくはポリエチレングリコール−マレイミド等、他のタンパク質を誘導体化するために使用されているＰＥＧの任意の形態を包含するものとする。特定の実施態様では、ペグ化される抗体は、アグリコシル化抗体である。タンパク質をペグ化する方法は当技術分野で知られており、本明細書に記載の抗体に適用することができる。例えば、ＮｉｓｈｉｍｕｒａらによるＥＰ第０１５４３１６号およびＩｓｈｉｋａｗａらによるＥＰ第０４０１３８４号参照。
【０１４９】
様々な実施態様において、本明細書に記載されるＶＩＳＴＡに結合する抗体は、抗原結合が有害であろう組織および環境においては抗原結合を選択的に遮断するが、有益であろう場所においては抗原結合を可能にするように改変される（「活性化可能抗体」）。一実施態様では、抗体の抗原結合表面に特異的に結合し、抗原結合を妨害する遮断ペプチド「マスク」が生成され、このマスクは、ペプチダーゼ切断可能なリンカーによって抗体の結合アームのそれぞれに連結される。例えば、ＣｙｔｏｍＸへの米国特許第８５１８４０４号を参照のこと。このような構築物は、非腫瘍組織と比較して腫瘍微小環境においてプロテアーゼレベルが大幅に増加しているがんの治療に有用である。腫瘍微小環境における切断可能なリンカーの選択的切断は、マスキング／遮断ペプチドの解離を可能にし、抗原結合が望ましくない副作用を引き起こす可能性のある末梢組織ではなく、腫瘍内で選択的に抗原結合を可能にする。抗体に連結された遮断ペプチドの例は、国際公開第２０１８／０８５５５号に提供されている。
【０１５０】
あるいは、関連する実施態様では、（二価）抗体の両方の抗原結合表面に結合し、抗原結合を妨害する、２つの抗原結合ドメインを含む二価結合化合物（「マスキングリガンド」）が開発され、この場合、２つの結合ドメインマスクは、切断可能なリンカー、例えば、ペプチダーゼによって切断可能なリンカーによって、（抗体ではなく）互いに連結されている。例えば、Ｔｅｇｏｐｈａｒｍ社に対する国際公開第２０１０／０７７６４３号を参照。マスキングリガンドは、抗体が結合することが目的の抗原を含むか、またはそれに由来してもよく、または独立に生成されてもよい。このようなマスキングリガンドは、非腫瘍組織と比較して腫瘍微小環境でプロテアーゼレベルが大幅に増加しているがんの治療に有用である。腫瘍微小環境での切断可能なリンカーの選択的切断は、２つの結合ドメインの相互解離を可能にし、抗体の抗原結合表面のアビディティを低下させる。結果として生じる抗体からのマスキングリガンドの解離は、抗原結合が望ましくない副作用を引き起こす可能性のある末梢組織ではなく、腫瘍内で選択的に抗原結合を可能にする。
【０１５１】
核酸および宿主細胞
抗体またはその重鎖もしくは軽鎖またはその一部をコードする核酸も提供される。例示的な核酸は、配列表に提供されている。配列表の核酸に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％または９９％である任意の核酸が本明細書に包含される。本明細書で提供される抗体をコードする核酸を含む組成物も包含され、これらを含む細胞、および、抗ＶＩＳＴＡ抗体をコードする核酸で形質転換された細胞を培養することと培地または細胞から抗体を単離することとを含む、抗体を調製する方法も包含される。
【０１５２】
ＶＩＳＴＡ−ＥＣＤ結合Ａｂを用いる治療方法および関連する薬学的組成物
特定の実施態様では、低ｐＨでＶＩＳＴＡに結合し、例えば、中性または生理的ｐＨで有意な結合を欠く抗ＶＩＳＴＡ抗体は、ＶＩＳＴＡアンタゴニスト抗体、すなわち、免疫応答が刺激されるようなＶＩＳＴＡの作用を阻害する抗体であり得る。このような抗体は、免疫系または免疫応答を刺激することが望まれる疾患、例えば増殖性疾患（良性または悪性）、がんおよび感染症（例えばウイルス感染症）を治療するために使用することができる。
【０１５３】
特定の実施態様では、低ｐＨでＶＩＳＴＡに結合し、例えば、中性または生理的ｐＨで有意な結合を欠く抗ＶＩＳＴＡ抗体は、ＶＩＳＴＡアゴニスト抗体、すなわち、免疫応答が抑制されるようなＶＩＳＴＡの作用を増大させる抗体であり得る。このような抗体は、自己免疫疾患および炎症状態などの免疫系または免疫応答の抑制が望まれる疾患、例えば関節リウマチ、全身性紅斑性狼瘡、セリアック病、シェーグレン（Ｓｊｏｉｇｒｅｎ）症候群、グレイブ病、炎症性腸疾患、乾癬、強直性脊椎炎、移植片対宿主病、アレルギーおよび喘息等の治療のために使用され得る。
【０１５４】
本明細書に記載される抗体は、例えば、がんを治療するために使用され得る。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の有効量の抗体を患者に投与することを含む、がんを治療する方法が提供される。いくつかの実施態様では、Ａｂは、抗原特異的免疫応答などの患者の免疫応答を誘発または強化することができる。いくつかの実施態様では、Ａｂは、Ｔ細胞活性を刺激し得る。いくつかの実施態様では、Ａｂは、患者の少なくとも１つの腫瘍の成長を阻害することができる。
【０１５５】
本明細書で提供されるのは、対象が治療されるように、対象に治療有効量の本明細書に記載の抗ＶＩＳＴＡ抗体を投与することを含む、がんを有する対象を治療する方法である。抗ＶＩＳＴＡ抗体は単独で使用することができる。あるいは、抗ＶＩＳＴＡ抗体は、以下にさらに記載されるように、別の薬剤と併せて使用され得る。
【０１５６】
本明細書に記載の酸性条件下でＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合するＡｂで治療できるがんの例には、カルシノーマ、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫および白血病が含まれるが、これらに限定されない。また、本明細書に記載されるＡｂで治療され得るがんには、典型的には免疫療法に応答性であるがんおよび典型的には免疫療法に応答性ではないがんが含まれる。治療され得るがんにはまた、ＶＩＳＴＡ陽性がん、例えばＶＩＳＴＡ陽性腫瘍浸潤細胞、例えばリンパ球、骨髄または単球細胞を有するがんを含む。がんは、固形腫瘍または血液悪性腫瘍（液体腫瘍）を伴うがんであり得る。
【０１５７】
治療のためのがんの非限定的な例には、扁平上皮癌、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、扁平上皮非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、非扁平上皮ＮＳＣＬＣ、神経膠腫、消化器がん、腎がん（例：明細胞癌）、卵巣がん、肝臓がん、結腸直腸がん、子宮内膜がん、腎臓がん（例：腎腺癌（ＲＣＣ））、前立腺がん（例：ホルモン抵抗性前立腺腺癌）、甲状腺がん、神経芽細胞腫、膵臓がん、膠芽細胞腫（多形神経膠芽腫）、子宮頸がん、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、膀胱がん、肝細胞癌、乳がん、結腸癌、および頭頚部がん（または癌）、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、生殖細胞腫瘍、小児の肉腫、副鼻腔ナチュラルキラー、黒色腫（例：転移性悪性黒色腫、例えば皮膚または眼内悪性黒色腫）、骨がん、皮膚がん、子宮がん、肛門部のがん、精巣がん、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰部癌、食道がん、小腸がん、内分泌系がん、副甲状腺がん、副腎がん、軟部組織肉腫。尿道がん、陰茎がん、小児固形腫瘍、尿管がん、腎盂癌中枢神経系（ＣＮＳ）新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳腫瘍。脳幹グリオーマ、下垂体腺腫、カポジ肉腫、表皮がん、扁平上皮がん、Ｔ細胞リンパ腫、アスベストによって誘発されたものを含む環境誘発性がん、ウイルス関連がんまたはウイルス起源のがん（例：ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ関連またはＨＰＶ発腫瘍））、および２つの主要な血球系統のいずれか、すなわち骨髄細胞株（顆粒球、赤血球、血小板、マクロファージおよびマスト細胞を産生する）またはリンパ系細胞株（Ｂ、Ｔ、ＮＫおよび血漿細胞を産生する）に由来する全てのタイプの白血病、リンパ腫および骨髄腫等の血液悪性腫瘍、例えば、急性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）等の急性、慢性、リンパ球性および／または骨髄性白血病、未分化ＡＭＬ（ＭＯ）、骨髄芽球性白血病（Ｍｌ）、骨髄芽球性白血病（Ｍ２．細胞成熟を伴う）、前骨髄球性白血病（Ｍ３またはＭ３変種［Ｍ３Ｖ］）、骨髄単球性白血病（Ｍ４または好酸球増多を伴うＭ４変種［Ｍ４Ｅ］）、単球性白血病（Ｍ５）、赤白血病（Ｍ６）、巨核芽球性白血病（Ｍ７）、孤立性顆粒球肉腫および緑色腫；リンパ腫、例えば、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、Ｂ細胞血液悪性腫瘍（例：Ｂ細胞リンパ腫）、Ｔ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞様リンパ腫、単球様Ｂ細胞リンパ腫、粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、未分化（例えばＫｉ １＋）大細性リンパ腫、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病、マントル細胞リンパ腫、血管免疫芽球Ｔ細胞リンパ腫、血管中心性リンパ腫、腸管Ｔ細胞性リンパ腫、縦隔原発Ｂ細胞リンパ腫、前駆Ｔリンパ芽球性リンパ腫、Ｔリンパ芽球性リンパ腫／白血病（Ｔ−Ｌｂｌｙ／Ｔ−ＡＬＬ）、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、移植後リンパ増殖性疾患、真性組織球性リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）、リンパ系の造血器腫瘍、急性リンパ芽球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性組織球性リンパ腫（ＤＨＬ）、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＬＣ）（菌状息肉腫またはセザリー症候群とも呼ばれる）、およびウォルデンシュトレームマクログロブリン血症を伴うリンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）；骨髄腫、例えば、ＩｇＧ骨髄腫、軽鎖骨髄腫、非分泌性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫（無痛性骨髄腫とも呼ばれる）、孤立性形質細胞腫、および多発性骨髄腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、毛様細胞リンパ腫；骨髄系の造血器腫瘍、線維肉腫および横紋筋肉腫を含む間葉起源の腫瘍；精上皮腫、悪性奇形腫、星状細胞腫を含む中枢神経系および末梢神経系の腫瘍、シュワン腫；線維肉腫、横紋筋肉腫、骨肉腫を含む葉起源の腫瘍；ならびにメラノーマ、色素性乾皮症、ケラトアカントーマ、精上皮腫、甲状腺濾胞がんおよび悪性奇形腫を含むがこれらに限定されない他の腫瘍、リンパ系の造血系腫瘍、例えばＴ細胞およびＢ細胞腫瘍（小細胞および大脳様細胞型のものを含むＴ細胞性前リンパ球性白血病（Ｔ−ＰＬＬ）などのＴ細胞障害を含むがこれらに限定されない）；Ｔ細胞型の大顆粒リンパ球性白血病（ＬＧＬ）；ａ／ｄ ＮＨＬ肝脾Ｔ細胞リンパ腫（Ｔ−ＮＨＬ ｈｅｐａｔｏｓｐｌｅｎｉｃ ｌｙｍｐｈｏｍａ）；末梢性／胸腺後（ｐｏｓｔ−ｔｈｙｍｉｃ）Ｔ細胞リンパ腫（多形性および免疫芽球性サブタイプ）；血管中心性（鼻）Ｔ細胞リンパ腫；頭頸部がん、腎がん、直腸がん、甲状腺がん；急性骨髄性リンパ腫、ならびに前記がんの任意の組み合わせが含まれる。本明細書に記載される方法はまた、転移性がん、切除不能な不応性がん（例：例えば遮断ＣＴＬＡ−４抗体またはＰＤ−１抗体を用いた先行の免疫療法に対して不応性のがん）、および／または再発がんの治療のために使用され得る。
【０１５８】
いくつかの実施態様では、がんを治療する方法が提供され、ここで、該方法は、本明細書に記載されているような酸性条件下でｈｕＶＩＳＴＡに特異的に結合する単離された抗体を、がんを有する対照に投与することを含む。いくつかの実施態様では、がんを治療するための本明細書に記載の抗体の使用が提供される。
【０１５９】
特定の実施態様では、本明細書に記載の抗体は、先行治療、例えば免疫腫瘍学的薬剤または免疫療法薬による先行治療に対して不十分な応答を示した、または先行治療に対して進行したがんを有する患者に投与される。いくつかの実施態様では、がんは、先行治療に対して不応性または抵抗性であり、内因的に不応性もしくは抵抗性（例えば、ＰＤ−１経路アンタゴニストに対して不応性）であるか、または抵抗性もしくは不応性の状態が獲得される。例えば、本明細書に記載の抗体は、第１の治療に反応しないもしくは十分に反応しない対象、または、治療、例えば、単独でまたは別の療法と（例：抗ＰＤ−１経路アンタゴニスト療法と）併用した抗ＰＤ−１経路アンタゴニスト治療などの後に疾患が進行した対象に投与することができる。他の実施態様では、本明細書に記載の抗体は、免疫腫瘍学的薬剤、例えばＰＤ−１経路アンタゴニストを以前に摂取したことがない（すなわち、それで治療されていない）患者に投与される。
【０１６０】
特定の実施態様では、対象におけるがんを治療する方法は、まず、対象における腫瘍の腫瘍変異負荷（ＴＭＢ）を決定することと、その結果に基づいて、例えば高いＴＭＢを有することが判明した対象に抗ＶＩＳＴＡ抗体を投与することとを含む。
【０１６１】
免疫刺激剤との併用
いくつかの実施態様では、本明細書に記載される抗体、例えば本明細書に記載されるアンタゴニストＶＩＳＴＡ抗体は、少なくとも１種の免疫刺激剤と併用して投与される。例えば、治療薬は、一緒に注入されてもよいし、ほぼ同時に注入されてもよい。いくつかの実施態様では、抗体および少なくとも１種の免疫刺激剤は、連続的に投与される。例えば、いくつかの実施態様では、抗体は、２つの治療薬が３０分、６０分、９０分、１２０分、３時間、６時間、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、３日、５日、７日、または２週間間隔で投与されるような、少なくとも１種の免疫刺激剤の投与の前または後に連続的に投与される。
【０１６２】
いくつかの実施態様では、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３用量、少なくとも５用量、または少なくとも１０用量の抗体が、少なくとも１種の免疫刺激剤の投与の前に投与される。いくつかの実施態様では、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３用量、少なくとも５用量、または少なくとも１０用量の少なくとも１種の免疫刺激剤が抗体の投与の前に投与される。いくつかの実施態様では、免疫刺激剤の最終用量は、抗体の初回投与の少なくとも１、２、３、５もしくは１０日、または１、２、３、５、１２もしくは２４週前に投与される。いくつかの実施態様では、抗体の最終用量は、少なくとも１種の免疫刺激剤の初回投与の少なくとも１、２、３、５もしくは１０日、または１、２、３、５、１２もしくは２４週前に投与される。いくつかの実施態様では、対象は、少なくとも１種の免疫刺激剤による治療を受けたかまたは受けており、治療レジメンにＶＩＳＴＡ−ＥＣＤ結合抗体が加えられている。
【０１６３】
いくつかの実施態様では、少なくとも１種の免疫刺激剤は、Ｔ細胞の活性化の阻害剤のアンタゴニストを含み、いくつかの実施態様では、上記少なくとも１種の免疫刺激剤は、Ｔ細胞の活性化の刺激剤のアゴニストを含む。いくつかの実施態様では、上記少なくとも１種の免疫刺激剤は、ＣＴＬＡ４、ＬＡＧ−３、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ガレクチン１、ガレクチン９、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＢＴＬＡ、ＣＤ２５、ＣＤ６９、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１３、ＧＰＲ５６、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、２Ｂ４、ＣＤ４８、ＧＡＲＰ、ＰＤ１Ｈ、ＬＡＩＲ１、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、ＩＬＴ４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＴＧＦβ、ＶＥＧＦ、ＫＩＲ、ＬＡＧ−３、アデノシンＡ２Ａ受容体、ＰＩ３Ｋデルタ、またはＩＤＯのアンタゴニストを含む。いくつかの実施態様では、上記少なくとも１種の免疫刺激剤は、Ｂ７−１、Ｂ７−２、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、４−１ＢＢＬ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＤＲ３、ＣＤ２８Ｈ、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＩＦＮα、ＳＴＩＮＧのアゴニスト、またはＴＬＲ２／４アゴニストなどのＴｏｌｌ様受容体アゴニストを含む。いくつかの実施態様では、上記少なくとも１種の免疫刺激剤は、Ｂ７−１、Ｂ７−２、Ｂ７−Ｈ２（ＩＣＯＳ−Ｌ）、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４およびＢ７−Ｈ６のような膜結合タンパク質のＢ７ファミリーの別のメンバーに結合する薬剤を含む。いくつかの実施態様では、上記少なくとも１種の免疫刺激剤は、ＴＮＦ受容体ファミリーのメンバーに結合する薬剤、またはＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ７０、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２−Ｌ、ＴＲＡＩＬＲ１／ＤＲ４、ＴＲＡＩＬＲ２／ＤＲ５、ＴＲＡＩＬＲ３、ＴＲＡＩＬＲ４、ＯＰＧ、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ、ＴＷＥＡＫＲ／Ｆｎ１４、ＴＷＥＡＫ、ＢＡＦＦＲ、ＥＤＡＲ、ＸＥＤＡＲ、ＥＤＡ１、ＥＤＡ２、ＴＡＣＩ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＬＴβＲ、ＬＩＧＨＴ、ＤｅＲ３、ＨＶＥＭ、ＶＥＧＬ／ＴＬ１Ａ、ＴＲＡＭＰ／ＤＲ３、ＴＮＦＲ１、ＴＮＦβ、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦα、１β２、ＦＡＳ、ＦＡＳＬ、ＲＥＬＴ、ＤＲ６、ＴＲＯＹもしくはＮＧＦβ等のＴＮＦ受容体ファミリーのメンバーに結合する共刺激性もしくは共抑制性分子を含む。いくつかの実施態様では、上記少なくとも１種の免疫刺激剤は、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＴＧＦβ、ＶＥＧＦ等のＴ細胞活性化を阻害するサイトカインに拮抗またはそれを阻害する薬剤を含む。いくつかの実施態様では、上記少なくとも１種の免疫刺激剤は、Ｔ細胞活性化を阻害するサイトカイン（例えばＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１およびＩＦＮα）のアゴニストを含む。いくつかの実施態様では、上記少なくとも１種の免疫刺激剤は、ケモカイン（例えばＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ２またはＣＣＲ４）のアンタゴニストを含む。いくつかの実施態様では、上記少なくとも１種の免疫刺激剤は、抗体を含む。いくつかの実施態様では、上記少なくとも１つの免疫刺激剤は、メソテリン標的化ワクチンまたはＣＲＳ−２０７などの減弱化リステリアがんワクチンのようなワクチンを含み得る。
【０１６４】
例えば、本明細書に記載の抗ＶＩＳＴＡ抗体は、以下の薬剤のうちの１または複数と一緒に投与することができる。
（１） ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、およびＬＡＧ−３、ガレクチン９、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＢＴＬＡ、ＣＤ６９、ガレクチン−１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１３、ＧＰＲ５６、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、２Ｂ４、ＣＤ４８、ＧＡＲＰ、ＰＤ１Ｈ、ＬＡＩＲ１、ＴＩＭ−１、ＴＩＭ−３およびＴＩＭ−４等のＴ細胞の活性化を阻害するタンパク質のアンタゴニスト（阻害剤または遮断剤）（例：免疫チェックポイント阻害剤）；ならびに／または（２）Ｂ７−１、Ｂ７−２、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、４−１ＢＢＬ、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＤＲ３およびＣＤ２８Ｈ等のＴ細胞活性化を刺激するタンパク質のアゴニスト。
【０１６５】
がんを治療するために本明細書に記載の抗ＶＩＳＴＡ抗体と組み合わせることができる例示的な薬剤には、ヤーボイ（登録商標）（イピリムマブ）またはトレメリムマブ（耐ＣＴＬＡ−４）、ガリキシマブ（対Ｂ７．１）、ＢＭＳ−９３６５５８（対ＰＤ−１）、ＭＫ−３４７５（対ＰＤ−１）、アテゾリズマブ（テセントリク（登録商標））、アベルマブ、デュルバルマブ、ＰＤＲ００１（ノバルティス）、ＡＭＰ２２４（対Ｂ７ＤＣ）、ＢＭＳ−９３６５５９（対Ｂ７−Ｈ１）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（対Ｂ７−Ｈ１）、ＭＥＤＩ−５７０（対ＩＣＯＳ）、ＡＭＧ５５７（対Ｂ７Ｈ２）、ＭＧＡ２７１（対７Ｈ３）、ＩＭＰ３２１（対ＬＡＧ−３）、ＢＭＳ−６６３５１３（対ＣＤ１３７）、ＰＦ−０５０８２５６６（対ＣＤ１３７）、ＣＤＸ−１１２７（対ＣＤ２７）、抗ＯＸ４０（Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｅ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ）、ｈｕＭＡｂＯＸ４０Ｌ（対ＯＸ４０Ｌ）、アタシセプト（対ＴＡＣＩ）、ＣＰ−８７０８９３（対ＣＤ４０）、ルカツムマブ（対ＣＤ４０）、ダセツズマブ（対ＣＤ４０）、ムロモナブ−ＣＤ３（対ＣＤ３）；抗ＧＩＴＲ抗体ＭＫ４１６６、ＴＲＸ５１８、Ｍｅｄｉ１８７３、ＩＮＢＲＸ−１１０、ＬＫ２−１４５、ＧＷＮ−３２３、ＧＩＴＲＬ−Ｆｃ、またはこれらの任意の組み合わせが含まれる。
【０１６６】
がんの治療のために抗ＶＩＳＴＡ抗体と組み合わせることができる他の分子には、ＮＫ細胞の抑制性受容体のアンタゴニストまたはＮＫ細胞の活性化受容体のアゴニスト、例えばＫＩＲのアンタゴニスト（例えばリリルマブ）が含まれる。
【０１６７】
Ｔ細胞活性化は、可溶性サイトカインによっても調節され得る。いくつかの実施態様では、抗ＶＩＳＴＡ抗体は、Ｔ細胞活性化を阻害することを目的とするサイトカインのアンタゴニストまたはＴ細胞活性化を刺激するサイトカインのアゴニストと併用して投与することができる。例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体は、（ｉ）Ｔ細胞活性化を阻害するＩｇＳＦファミリーもしくはＢ７ファミリーもしくはＴＮＦファミリーのタンパク質のアンタゴニスト（または阻害剤または遮断剤）、またはＴ細胞活性化を阻害するサイトカイン（例：ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−β、ＶＥＧＦ；「免疫抑制性サイトカイン」）のアンタゴニストおよび／あるいは（ｉｉ）Ｔ細胞活性化を刺激するＩｇＳＦファミリー、Ｂ７ファミリーもしくはＴＮＦファミリーの刺激性受容体のアゴニスト、またはＴ細胞活性化を刺激するサイトカインのアゴニストと併用して使用され得る。
【０１６８】
併用療法のためのさらに他の薬剤には、ＲＧ７１５５（国際公開第１１／７００２４号、国際公開第１１／１０７５５３号、国際公開第１１／１３１４０７号、国際公開第１３／８７６９９号、国際公開第１３／１１９７１６号、国際公開第１３／１３２０４４）またはＦＰＡ−００８（国際公開第１１／１４０２４９号、国際公開第１３１６９２６４号、国際公開第１４／０３６３５７）を含むＣＳＦ−１Ｒアンタゴニスト抗体などのＣＳＦ−１Ｒアンタゴニストを含むがこれらに限定されない、マクロファージまたは単球を阻害または枯渇させる薬剤が含まれる。
【０１６９】
抗ＶＩＳＴＡ抗体は、ＴＧＦ−βシグナル伝達を阻害する薬剤と共に投与することもできる。
【０１７０】
抗ＶＩＳＴＡ抗体と組み合わせることができる追加の薬剤には、腫瘍抗原提示を強化する薬剤、例えば樹状細胞ワクチン、ＧＭ−ＣＳＦ分泌細胞ワクチン、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、およびイミキモド、または腫瘍細胞の免疫原性を強化する治療薬（例：アントラサイクリン）が含まれる。
【０１７１】
抗ＶＩＳＴＡ抗体と組み合わせることができるさらなる他の療法には、Ｔｒｅｇ細胞を枯渇させるかまたは遮断する療法、例えばＣＤ２５に特異的に結合する薬剤が含まれる。
【０１７２】
抗ＶＩＳＴＡ抗体と組み合わせることができる別の療法には、インドールアミンジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、ジオキシゲナーゼ、アルギナーゼまたは一酸化窒素合成酵素等の代謝酵素を阻害する療法がある。
【０１７３】
抗ＶＩＳＴＡ抗体と共に使用することができる別のクラスの薬剤には、アデノシンの形成を阻害する薬剤、例えばＣＤ７３阻害剤、またはアデノシンＡ２Ａ受容体を阻害する薬剤が含まれる。
【０１７４】
がんを治療するために抗ＶＩＳＴＡ抗体と組み合わせることができる他の療法には、Ｔ細胞アネルギーまたは消耗を逆転させる／防止する療法、ならびに腫瘍部位での自然免疫活性化および／または炎症を誘発する療法が含まれる。
【０１７５】
がんを治療するために抗ＶＩＳＴＡ抗体と組み合わせることができる他の療法には、ＩＬ−８を遮断する療法、例えば、ＨｕＭａｘ（登録商標）−ＩＬ８を用いた療法が含まれる。
【０１７６】
抗ＶＩＳＴＡ抗体は、複数の免疫腫瘍学的薬剤と組み合わせることができ、例えば、免疫経路の複数の要素を標的とすることを目的とした以下のうちの１つ以上のコンビナトリアルアプローチと組み合わせることができる：腫瘍抗原提示を強化する療法（例：樹状細胞ワクチン、ＧＭ−ＣＳＦ分泌細胞ワクチン、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、イミキモド）；例えばＣＴＬＡ−４および／もしくはＰＤ１／ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−Ｌ２経路を阻害することにより、ならびに／またはＴｒｅｇもしくは他の免疫抑制細胞を枯渇させるかもしくは遮断することにより、負の免疫制御を阻害する療法；例えばＣＤ−１３７、ＯＸ−４０および／もしくはＣＤ４０もしくはＧＩＴＲ経路を刺激し、かつ／もしくはＴ細胞エフェクター機能を刺激するアゴニストを用いて、正の免疫制御を刺激する療法；抗腫瘍Ｔ細胞の頻度を全身的に増加させる療法；例えば、ＣＤ−２５のアンタゴニストを用いて、またはｅｘ ｖｉｖｏ抗ＣＤ２５ビーズ枯渇によって腫瘍内のＴｒｅｇなどのＴｒｅｇを枯渇させるかもしくは阻害する療法；腫瘍内の抑制性骨髄系細胞の機能に影響を与える療法；腫瘍細胞の免疫原性を強化する療法（例：アントラサイクリン系）；遺伝子組換え細胞、例えば、キメラ抗原受容体によって組換えられた細胞を含む養子Ｔ細胞またはＮＫ細胞移植（ＣＡＲ−Ｔ療法）；インドールアミンジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、ジオキシゲナーゼ、アルギナーゼ、または一酸化窒素合成酵素などの代謝酵素を阻害する療法；Ｔ細胞アネルギーもしくは消耗を逆転させる／防止する療法；腫瘍部位での自然免疫活性化および／または炎症を誘発する療法；免疫刺激性サイトカインの投与；または免疫抑制性サイトカインの遮断。
【０１７７】
本明細書に記載の抗ＶＩＳＴＡ抗体は、正の共刺激受容体を結合する１または複数のアゴニスト剤；抑制性受容体を介したシグナル伝達を減衰させる遮断剤；アンタゴニスト；および抗腫瘍Ｔ細胞の頻度を全身的に増加させる１または複数の薬剤；腫瘍微小環境内の異なる免疫抑制経路を弱らせる（例えば、抑制性受容体結合（例：ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１相互作用）を遮断する、（例えば抗ＣＤ２５モノクローナル抗体（ダクリズマブなど）を使用して、またはｅｘ ｖｉｖｏ抗ＣＤ２５ビーズ枯渇によって）Ｔｒｅｇを枯渇させるかもしくは阻害する）、ＩＤＯのような代謝酵素を阻害する、またはＴ細胞アネルギーもしくは枯渇を逆転させる／防ぐ）薬剤；ならびに腫瘍部位における自然免疫活性化および／または炎症を誘発する薬剤と一緒に使用され得る。
【０１７８】
特定の実施態様では、抗ＶＩＳＴＡ抗体は、対象がＢＲＡＦ Ｖ６００突然変異陽性である場合、ＢＲＡＦ阻害剤と一緒に対象に投与される。
【０１７９】
本明細書に記載の併用療法で使用するのに適したＰＤ−１アンタゴニストには、リガンド、抗体（例：モノクローナル抗体および二重特異性抗体）および多価の薬剤が含まれるが、これらに限定されない。一実施態様では、ＰＤ−１アンタゴニストは、融合タンパク質、例えば、ＡＭＰ−２４４などのＦｃ融合タンパク質である。いくつかの実施態様では、ＰＤ−１アンタゴニストは、抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。
【０１８０】
例示的な抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブ（ＢＭＳ−９３６５５８）、または国際公開第２００６／１２１１６８号に記載の抗体１７Ｄ８、２Ｄ３、４Ｈ１、５Ｃ４、７Ｄ３、５Ｆ４および４Ａ１１のうちの１つのＣＤＲもしくは可変領域を含む抗体である。特定の実施態様では、抗ＰＤ−ｌ抗体は、国際公開第２０１２／１４５４９３号に記載のＭＫ−３４７５（ランブロリズマブ）；国際公開第２０１２／１４５４９３号に記載のＡＭＰ−５１４；またはＰＤＲ００１である。さらに既知のＰＤ−１抗体および他のＰＤ−１阻害剤には、国際公開第２００９／０１４７０８号、国際公開第０３／０９９１９６号、国際公開第２００９／１１４３３５号、国際公開第２０１１／０６６３８９号、国際公開第２０１１／１６１６９９号、国際公開第２０１２／１４５４９３号、米国特許第７６３５７５７号および第８２１７１４９号、ならびに米国特許出願公開第２００９／０３１７３６８号に記載のものが含まれる。また、国際公開第２０１３／１７３２２３号で開示されている抗ＰＤ−１抗体のいずれも使用することができる。これらの抗体のうちの１つとの結合に関して競合する抗ＰＤ−１抗体、および／またはこれらの抗体のうちの１つと同じ、ＰＤ−１上のエピトープに結合する抗ＰＤ−１抗体もまた、併用治療において使用することができる。
【０１８１】
いくつかの実施態様では、併用療法に有用な抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＢＭＳ−９３６５５９（国際公開第２００７／００５８７４号および米国特許第７９４３７４３号において１２Ａ４と呼ばれる）または国際公開第０７／００５８７４号および米国特許第７９４３７４３号に記載されている３Ｇ１０、１２Ａ４、１０Ａ５、５Ｆ８、１０Ｈ１０、１Ｂ１２、７Ｈ１、１１Ｅ６、１２Ｂ７および１３Ｇ４のＣＤＲまたは可変領域を含む抗体である。特定の実施態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＭＥＤＩ４７３６（デュルバルマブおよび抗Ｂ７−Ｈ１としても知られている）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（アテゾリズマブおよびＲＧ７４４６としても知られている）、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（アベルマブとしても知られている；国際公開第２０１３／７９１７４号）またはｒＨｉｇＭ１２Ｂ７である。また、国際公開第２０１３／１７３２２３号、国際公開第２０１１／０６６３８９号、国際公開第Ｏ２０１２／１４５４９３号、米国特許第７６３５７５７号および第８２１７１４９号、ならびに米国特許出願公開第２００９／１４５４９３号に開示されている抗ＰＤ−Ｌ１抗体のいずれも使用することができる。また、これらの抗体のいずれかと競合する抗ＰＤ−Ｌ１抗体および／またはこれらの抗体のいずれかのエピトープと同じエピトープに結合する抗ＰＤ−Ｌ１抗体も、併用治療で使用することができる。
【０１８２】
特定の実施態様では、本開示の抗ＶＩＳＴＡ抗体は、ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト、例えば抗ＣＴＬＡ−４抗体と共に使用することができる。一実施態様では、抗ＣＴＬＡ−４抗体は、ヤーボイ（登録商標）（イピリムマブまたは抗体１０Ｄ１、国際公開第０１／１４４２４号に記載）、トレメリムマブ（旧チシリマブ、ＣＰ−６７５，２０６）、国際公開第９８／４２７５２号；国際公開第００／３７５０４号；米国特許第６２０７１５６号；Ｈｕｒｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｐｒｏ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５．１７ １００６７−１００７１；Ｃａｍａｃｈｏ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２２（１４５）：抄録番号２５０５（抗体ＣＰ−６７５２０６）；およびＭｏｋｙｒ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５８（５３０１−５３０４）のいずれかの刊行物に記載されているモノクローナルまたは抗ＣＴＬＡ−４抗体の群から選択される抗体である。また、国際公開第２０１３／１７３２２３号で開示されている抗ＣＴＬＡ−４抗体のいずれも使用することができる。
【０１８３】
いくつかの実施態様では、本開示の抗ＶＩＳＴＡ抗体は、ＬＡＧ３アンタゴニストと併せて使用される。抗ＬＡＧ３抗体の例には、米国特許出願公開第２０１１／０１５０８９２号、国際公開第１０／１９５７０号および国際公開第２０１４／００８２１８号に記載されている抗体２５Ｆ７、２６Ｈ１、２５Ｅ３、８Ｂ７、１１Ｆ２または１７Ｅ５のＣＤＲまたは可変領域を含む抗体が含まれる。一実施態様では、抗ＬＡＧ−３抗体はＢＭＳ−９８６０１６である。使用できる他の技術的に認められた抗ＬＡＧ−３抗体には、米国特許出願公開第２０１１／００７０２３号、国際公開第０８／１３２６０１号および国際公開第０９／４４２７３号に記載のＩＭＰ７３１およびＩＭＰ−３２１が含まれる。また、これらの抗体のいずれかと競合する抗ＬＡＧ−３抗体および／またはこれらの抗体のいずれかのエピトープと同じエピトープに結合する抗ＰＤ−Ｌ１抗体も、併用治療で使用することができる。
【０１８４】
いくつかの実施態様では、本開示の抗ＶＩＳＴＡ抗体は、アゴニストＣＤ１３７抗体などのＣＤ１３７（４−１ＢＢ）アゴニストと併せて投与することができる。適切なＣＤ１３７抗体には、例えばウレルマブまたはＰＦ−０５０８２５６６（国際公開第１２／３２４３３号）が含まれる。
【０１８５】
いくつかの実施態様では、抗ＶＩＳＴＡ抗体は、アゴニストＯＸ４０抗体などのＯＸ４０アゴニストと併せて投与することができる。適切なＯＸ４０抗体には、例えばＭＥＤＩ−６３８３、ＭＥＤＩ−６４６９またはＭＯＸＲ０９１６（ＲＧ７８８８；国際公開第０６／０２９８７９号）が含まれる。
【０１８６】
一実施態様では、抗ＶＩＳＴＡ抗体は、アゴニストＣＤ４０抗体などのＣＤ４０（ＣＤ４０）アゴニストと併せて投与することができる。特定の実施態様では、免疫腫瘍学的薬剤は、アンタゴニストＣＤ４０抗体などのＣＤ４０アンタゴニストである。適切なＣＤ４０抗体には、例えばルカツムマブ（ＨＣＤ１２２）、ダセツズマブ（ＳＧＮ−４０）、ＣＰ−８７０，８９３またはＣｈｉ Ｌｏｂ ７／４が含まれる。
【０１８７】
一実施態様では、抗ＶＩＳＴＡ抗体は、アゴニストＣＤ２７抗体などのＣＤ２７（ＣＤ４０）アゴニストと併せて投与することができる。適切なＣＤ２７抗体には、例えばバルリルマブ（ＣＤＸ−１１２７））が含まれる。
【０１８８】
特定の実施態様では、抗ＶＩＳＴＡ抗体は、抗ＧＩＴＲ抗体、例えば、国際公開第２００６／１０５０２１号に記載されているような、６Ｃ８のＣＤＲ配列を有する抗体、例えば６Ｃ８のＣＤＲ配列を有するヒト化抗体；国際公開第２０１１／０２８６８３号に記載の、抗ＧＩＴＲ抗体のＣＤＲを含む抗体；ＪＰ第２００８２７８８１４号に記載の、抗ＧＩＴＲ抗体のＣＤＲを含む抗体；国際公開第２０１５／０３１６６７号、国際公開第２０１５／１８７８３５号、国際公開第２０１５／１８４０９９号、国際公開第２０１６／０５４６３８号、国際公開第２０１６／０５７８４１号もしくは国際公開第２０１６／０５７８４６号に記載の、抗ＧＩＴＲ抗体のＣＤＲを含む抗体又は本明細書で記載または言及されている他の抗ＧＩＴＲ抗体と一緒に投与される。
【０１８９】
いくつかの実施態様では、抗ＶＩＳＴＡ抗体は、ＭＧＡ２７１（対Ｂ７Ｈ３）（国際公開第１１／１０９４００号）と併せて投与される。
【０１９０】
いくつかの実施態様では、抗ＶＩＳＴＡ抗体は、リリルマブなどのＫＩＲアンタゴニストと併せて投与される。
【０１９１】
いくつかの実施態様では、抗ＶＩＳＴＡ抗体は、ＩＤＯアンタゴニストと併せて投与される。適切なＩＤＯアンタゴニストには、例えばＩＮＣＢ−０２４３６０（国際公開第２００６／１２２１５０号、国際公開第０７／７５５９８号、国際公開第０８／３６６５３号、国際公開第０８／３６６４２）、インドキシモド、ＮＬＧ−９１９（国際公開第０９／７３６２０号、国際公開第０９／１１５６６５２号、国際公開第１１／５６６５２号、国際公開第１２／１４２２３７号）またはＦ００１２８７が含まれる。
【０１９２】
いくつかの実施態様では、抗ＶＩＳＴＡ抗体は、Ｔｏｌｌ様受容体アゴニスト、例えばＴＬＲ２／４アゴニスト（例：無菌化ウシ型結核菌）；ＴＬＲ７アゴニスト（例：ヒルトノール（Ｈｉｌｔｏｎｏｌ）またはイミキモド）；ＴＬＲ７／８アゴニスト（例：レシキモド）；またはＴＬＲ９アゴニスト（例：ＣｐＧ７９０９）と併せて投与される。
【０１９３】
一実施態様では、抗ＶＩＳＴＡは、ＴＧＦ−β阻害剤、例えばＧＣ１００８、ＬＹ２１５７２９９、ＴＥＷ７１９７またはＩＭＣ−ＴＲ１と併用して投与される。
【０１９４】
特定の実施態様では、抗ＶＩＳＴＡ剤、例えば抗体は、抗ＰＳＧＬ−１抗体と共に投与される。
【０１９５】
追加の併用療法
本明細書のＡｂはまた、他の治療様式、例えば手術、化学療法、放射線療法、または別の治療用抗体などの生物製剤の投与の前、実質的に同時、または後に提供されてもよい。いくつかの実施態様では、がんは、手術、化学療法および放射線療法、またはこれらの組み合わせから選択される療法の後に再発または進行したものである。例えば、本明細書に記載される抗ＶＩＳＴＡ抗体は、微小転移が存在し得るリスクがある場合、および／または再発のリスクを低減するために、補助療法として投与され得る。
【０１９６】
がんの治療の場合、組み合わせは、化学療法剤、成長抑制剤、遺伝子治療ワクチンなどの抗がんワクチン、抗血管新生剤および／または抗悪性腫瘍組成物のような１もしくは複数の追加の抗がん剤と共に投与することができる。本発明の抗体と併せて使用することができる化学療法剤、成長抑制剤、抗がんワクチン、抗血管新生剤および抗悪性腫瘍組成物の非限定的な例は、本明細書においてば「定義」の項で提供される。
【０１９７】
いくつかの実施態様では、抗炎症薬は、ステロイドまたは非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）など、組み合わせで投与されてもよい。本明細書に記載の抗ＶＩＳＴＡ抗体による治療と併せて、またはその前に異常増殖細胞を休止状態にすることが望ましい場合、ホルモンおよびステロイド（合成アナログを含む）、例えば１７ａ−エチニルエストラジオール、ジエチルスチルベストロール、テストステロン、プレドニゾン、フルオキシメステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、テストラクトン、メゲストロールアセテート、メチルプレドニゾロン、メチル−テストステロン、プレドニゾン、トリアムシノロン、クロロトリアニセン、ヒドロキシプロゲステロン、アミノグルテチミド、エストラムスチン、メドロキシプロゲステロンアセテート、ロイプロリド、フルタミド、トレミフェン、ゾラデックス（登録商標）も患者に投与可能である。本明細書に記載の方法または組成物を使用する場合、抗模倣薬などの、臨床設定での腫瘍成長または転移の調節に使用される他の薬剤も、所望に応じて投与することができる。
【０１９８】
本明細書に記載の抗体はまた、免疫原性物質、例えば癌細胞、精製腫瘍抗原（組換えタンパク質、ペプチドおよび炭水化物分子を含む）、細胞、および免疫刺激性サイトカインをコードする遺伝子でトランスフェクトされた細胞と組み合わせることができる（He et al.,(2004) J. Immunol. 173 (4919-28）。使用することができる腫瘍ワクチンの非限定的な例には、黒色腫抗原のペプチド、例えば、ｇｐ１００、ＭＡＧＥ抗原、Ｔｒｐ−２、ＭＡＲＴ１および／またはチロシナーゼのペプチド、またはサイトカインＧＭ−ＣＳＦを発現するようにトランスフェクトされた腫瘍細胞（以下でさらに議論される）が含まれる。
【０１９９】
ヒトでは、黒色腫などのいくつかの腫瘍が免疫原性であることが示されている。ＶＩＳＴＡ抑制を介してＴ細胞活性化の閾値を下げることにより、宿主の腫瘍応答を活性化し、非免疫原性腫瘍または免疫原性が限られている腫瘍の治療を可能にすることができる。
【０２００】
本明細書に記載されている抗ＶＩＳＴＡ抗体は、ワクチン接種プロトコルと組み合わせることもできる。腫瘍に対するワクチン接種のための多くの実験的戦略が考案されてきた（Rosenberg, S., 2000, Development of Cancer Vaccines, ASCO Educational Book Spring: 60-62; Logothetis, C, 2000, ASCO Educational Book Spring: 300-302; Khayat, D. 2000, ASCO Educational Book Spring: 414-４２８; Foon, K. 2000, ASCO Educational Book Spring: 730-738を参照；また、DeVita et al. (編), 1997, Cancer: Principles and Practice of Oncology, 第5版のRestifo, N. およびSznol, M., Cancer Vaccines, 第61章, 3023-3043頁も参照）。これらの戦略の１つでは、自己または同種異系腫瘍細胞を使用してワクチンが調製される。これらの細胞ワクチンは、腫瘍細胞がＧＭ−ＣＳＦを発現するように形質導入されるときに最も効果的であることが示されている。ＧＭ−ＣＳＦは、腫瘍ワクチン接種のための抗原提示の強力な活性化剤であることが示されている（Dranoff et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A. 90: 3539-43）。
【０２０１】
様々な腫瘍における遺伝子発現および大規模な遺伝子発現パターンの研究により、いわゆる腫瘍特異的抗原の定義が導かれた（Rosenberg, S A (1999) Immunity 10: (281-7）。多くの場合、これらの腫瘍特異的抗原は、腫瘍および腫瘍が発生した細胞内で発現される分化抗原であり、例えばメラノサイト抗原ｇｐ１００、ＭＡＧＥ抗原およびＴｒｐ−２である。さらに重要なことに、これらの抗原の多くは、宿主に見られる腫瘍特異的Ｔ細胞の標的であることが示されている。ＶＩＳＴＡ抑制は、これらのタンパク質に対する免疫応答を生成するために、腫瘍内で発現した組換えタンパク質および／またはペプチドの集合体と併せて用いることができる。これらのタンパク質は、通常、免疫系によって自己抗原と見なされ、したがって、それらに対して耐性を有する。腫瘍抗原は、染色体のテロメアの合成に必要であり、ヒトがんの８５％以上で発現し、限られた数の体細胞組織でしか発現しないタンパク質テロメラーゼを含むことができる（Kim et al. (1994) Science 266: (2011-2013）。腫瘍抗原はまた、タンパク質配列を変更するか、または無関係な２つの配列の間に融合タンパク質を作る体細胞突然変異（すなわちフィラデルフィア染色体のｂｃｒ−ａｂｌ）またはＢ細胞腫瘍からのイディオタイプのために、がん細胞において発現する「ネオ抗原」であり得る。
【０２０２】
他の腫瘍ワクチンは、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、肝炎ウイルス（ＨＢＶおよびＨＣＶ）およびカポジヘルペス肉腫ウイルス（ＫＨＳＶ）のようなヒトがんに関与するウイルスからのタンパク質を含むことができる。ＶＩＳＴＡ抑制と併せて使用することができる別の形態の腫瘍特異的抗原は、腫瘍組織自体から単離された精製熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）である。これらの熱ショックタンパク質は腫瘍細胞からのタンパク質の断片を含み、これらのＨＳＰは腫瘍免疫を誘発するための抗原提示細胞への送達において非常に効率的である（Suot & Srivastava (1995) Science 269: 1585-1588; Tamura et al. (1997) Science 278: 117-120）。
【０２０３】
また、腫瘍溶解性ウイルスは、ＶＩＳＴＡ抗体と併せて使用することができる。
【０２０４】
樹状細胞（ＤＣ）は、抗原特異的応答を促進するために使用できる強力な抗原提示細胞である。ＤＣは、ｅｘ ｖｉｖｏで産生され、様々なタンパク質およびペプチド抗原、ならびに腫瘍細胞抽出物を負荷することができる（Nestle et al. (1998) Nature Medicine 4: (328-332）。ＤＣはまた、これらの腫瘍抗原を同様に発現するように遺伝的手段によって形質導入することができる。ＤＣはまた、免疫化の目的で腫瘍細胞に直接融合されている（Kugler et al. (2000) Nature Medicine 6:332-336）。ワクチン接種の方法として、ＤＣ免疫化をＶＩＳＴＡ抑制と効果的に組み合わせて、より強力な抗腫瘍応答を活性化することができる。
【０２０５】
感染症治療
本明細書に記載の方法は、特定の毒素または病原体に曝された患者を治療するためにも用いることができる。したがって、本開示はまた、対象が感染症について治療されるように、対象に本明細書に記載の抗体、例えばアンタゴニストＶＩＳＴＡ抗体を投与することを含む、対象における感染症を治療する方法を企図している。上述の腫瘍への適用と同様に、抗体媒介性ＶＩＳＴＡ抑制は、単独で、またはアジュバントとして、病原体、毒素および自己抗原に対する免疫応答を刺激するためにワクチンと併せて使用することができる。この療法が特に有用であると考えられる病原体の例には、現在有効なワクチンが存在しない病原体、または従来のワクチンが完全に有効ではない病原体が含まれる。これらには、ＨＩＶ、肝炎（Ａ、ＢおよびＣ）、インフルエンザ、ヘルペス、ジアルジア、マラリア、リーシュマニア、黄色ブドウ球菌、緑膿菌等が含まれるが、これらに限定されない。ＶＩＳＴＡ抑制は、ＨＩＶなど、感染の過程で変化した抗原を提示する病原体による確立された感染症に対して有効であり得る。
【０２０６】
本明細書に記載の方法によって治療可能であり得る感染症を引き起こす病原性ウイルスのいくつかの例には、ＨＩＶ、肝炎（Ａ、ＢまたはＣ）、ヘルペスウイルス（例：ＶＺＶ、ＨＳＶ−１、ＨＡＶ−６、ＨＳＶ−ＩＩおよびＣＭＶ、エプスタイン・バーウイルス）、アデノウイルス、インフルエンザウイルス、フラビウイルス、エコーウイルス、ライノウイルス、コクサッキーウイルス、コロナウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、おたふく風邪ウイルス、ロタウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、パルボウイルス、ワクシニアウイルス、ＨＴＬＶウイルス、デングウイルス、パピローマウイルス、軟属腫ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ＪＣウイルス、およびアルボウイルス脳炎ウイルスが含まれる。
【０２０７】
本明細書に記載の方法により治療可能な感染症を引き起こす病原性細菌のいくつかの例には、クラミジア、病原体リケッチア、マイコバクテリア、ブドウ球菌、レンサ球菌、肺炎球菌、髄膜炎菌および淋菌、肺炎桿菌、プロテウス、セラチア菌、シュードモナス、レジオネラ菌、ジフテリア菌、サルモネラ菌、桿菌、コレラ菌、破傷風菌、ボツリヌス菌、炭疽菌、ペスト菌、レプトスピラ菌およびライム病（Ｌｙｍｅｓ ｄｉｓｅａｓｅ）菌が含まれる。
【０２０８】
本明細書に記載の方法によって治療可能であり得る感染症を引き起こす病原性真菌のいくつかの例には、カンジダ属（アルビカンス、クルセイ、グラブラタ、トロピカリス等．）、クリプトコッカス属ネオフォルマンス、アスペルギルス属（フミガーツス、二ガー等）、ムーコル目（Ｇｅｎｕｓ Ｍｕｃｏｒａｌｅｓ）（ムコール属、アブシジア属、リゾプス属）、スポロスリックス‐シェンキー、ブラストミセス・デルマチチジス、南アメリカ分芽菌、コクシジオイデス・イミチス、およびヒストプラズマ・カプスラーツムが含まれる。
【０２０９】
本明細書に記載の方法により治療可能な感染症を引き起こす病原性寄生虫のいくつかの例には、赤痢アメーバ、大腸バランチジウム、フォーラーネグレリア、アカントアメーバ（Ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ ｓｐ．）、ランブル鞭毛虫、クリプトスポリジウム（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｓｐ．）、カリニ肺炎菌、三日熱マラリア原虫、ネズミバベシア、ブルセイトリパノソーマ、クルーズトリパノソーマ、ドノバンリーシュマニア、トキソプラズマ原虫およびブラジル鉤虫が含まれる。
【０２１０】
上記の方法全てにおいて、ＶＩＳＴＡ抑制は、免疫療法の他の形態、例えば、サイトカイン治療（例えばインターフェロン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＬ−２）などの本明細書に記載されたもの、または腫瘍抗原の強化された提示を提供し得る二重特異性抗体療法と組み合わせることができる（例えばHolliger (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448; Poljak (1994) Structure 2: 1121-1123参照）。
【０２１１】
投与経路および担体
様々な実施態様において、抗体は、経口、動脈内、非経口、鼻腔内、筋肉内、心臓内、脳室内、気管内、口腔内、直腸内、腹腔内、皮内、局所、経皮、髄腔内を含むがこれらに限定されない様々な経路によって、または移植もしくは吸入によるその他の方法によってｉｎ ｖｉｖｏ投与することができる。被験組成物は、錠剤、カプセル剤、粉末、顆粒剤、軟膏、溶液、坐剤、浣腸剤、注射剤、吸入剤およびエアゾールを含むがこれらに限定されない、固体、半固体、液体または気体の形態の製剤に製剤化され得る。抗体をコードする核酸分子は、文献に記載されているように、金微粒子上にコーティングされ、粒子衝撃装置または「遺伝子銃」によって皮内送達され得る（例えば、Tang et al., Nature 356:152-154 (1992)参照）。適切な製剤および投与経路は、意図された用途に応じて選択され得る。
【０２１２】
様々な実施態様では、抗体を含む組成物は、薬学的に許容される様々な担体を含む製剤で提供される（例えば、Gennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy with Facts and Comparisons: Drugfacts Plus, 20th ed. (2003); Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems,  7th ed.,  Lippencott Williams and Wilkins (2004); Kibbe et al., Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3rd ed., Pharmaceutical Press (2000)参照）。ビヒクル、アジュバントおよび希釈剤等、種々の薬剤学的に許容される担体が利用可能である。さらに、ｐＨ調整剤および緩衝剤、等張化剤、安定剤、湿潤剤等の様々な薬学的に許容される補助物質も利用可能である。非限定的かつ例示的な担体には、生理食塩水、緩衝生理食塩水、ブドウ糖、水、グリセロール、エタノール、およびこれらの組み合わせが含まれる。
【０２１３】
様々な実施態様において、抗体を含む組成物を、植物性または他の油、合成脂肪族酸グリセリド、高級脂肪族酸のエステルまたはプロピレングリコール等の水性または非水性溶媒中に溶解、懸濁または乳化させることにより、皮下投与を含む注射用に製剤化してもよく、また、所望により可溶化剤、等張化剤、懸濁化剤、乳化剤、安定化剤および防腐剤等の一般的な添加剤と一緒に製剤化してもよい。様々な実施態様において、組成物は、例えばジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素等の加圧された許容される噴射剤を使用して、吸入のために製剤化されてもよい。組成物はまた、様々な実施態様において、生分解性または非生分解性ポリマーなどの徐放性マイクロカプセルに製剤化されてもよい。非限定的かつ例示的な生分解性製剤には、ポリ乳酸−グリコール酸ポリマーが含まれる。非限定的かつ例示的な非生分解性製剤には、ポリグリセリン脂肪酸エステルが含まれる。このような製剤を作製する特定の方法は、例えばＥＰ第１１２５５８４号に記載されている。
【０２１４】
抗体または抗体の組み合わせの１または複数の用量をそれぞれ含む１または複数の容器を備えた医薬パックおよびキットも提供される。いくつかの実施態様では、単位投与量が提供され、ここで、単位投与量は、抗体または抗体の組み合わせを含む組成物の所定量を、１または複数の追加剤の有無にかかわらず、含んでいる。いくつかの実施態様では、そのような単位投与量は、注射のための使い捨てのプレフィルドシリンジで提供される。様々な実施態様では、単位投与量に含まれる組成物は、生理食塩水、スクロースもしくは類似のもの；リン酸塩などの緩衝液もしくは類似のものを含み；かつ／または安定で有効なＰｈ範囲内で配合される。あるいは、いくつかの実施態様では、組成物は、適切な液体、例えば滅菌水を添加すると再構成され得る凍結乾燥粉末として提供され得る。いくつかの実施態様では、組成物は、スクロースおよびアルギニンを含むがこれらに限定されない、タンパク質の凝集を阻害する１または複数の物質を含む。いくつかの実施態様では、本発明の組成物は、ヘパリンおよび／またはプロテオグリカンを含む。
【０２１５】
薬学的組成物は、特定の適応症の治療または予防に有効な量で投与される。治療有効量は、典型的には、治療される対象の体重、対象の体調もしくは健康状態、治療されるべき状態の広範さ、または治療される対象の年齢に依存する。一般に、抗体は、体重１ｋｇ当たり１回約１０μｇ／ｋｇから約１００ｍｇの範囲の量で投与される。いくつかの実施態様では、抗体は、体重１ｋｇ当たり１回約５０μｇ／ｋｇから約５ｍｇの範囲の量で投与される。いくつかの実施態様では、抗体は、体重１ｋｇ当たり１回約１００μｇ／ｋｇから約１０ｍｇの範囲の量で投与される。いくつかの実施態様では、抗体は、体重１ｋｇ当たり１回約１００μｇ／ｋｇから約２０ｍｇの範囲の量で投与される。いくつかの実施態様では、抗体は、体重１ｋｇ当たり１回約０．５ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇの範囲の量で投与される。
【０２１６】
本抗体組成物は、必要に応じて対象に投与することができる。投与頻度の決定は、例えば治療される状態、治療される対象の年齢、治療される状態の重症度、治療される対象の全体的な健康状態等の考慮事項に基づいて、主治医などの当業者によってなされ得る。いくつかの実施態様では、抗体の有効量が、１回または複数回対象に投与される。様々な実施態様では、抗体の有効用量は、月に１回、月に１回未満、例えば２ヶ月ごとまたは３ヶ月ごとなどに対象に投与される。他の実施態様では、抗体の有効量は、月に１回より多く、例えば３週間ごと、２週間ごと、または毎週など、投与される。いくつかの実施態様では、抗体の有効量は、１、２、３、４または５週間に１回投与される。いくつかの実施態様では、抗体の有効量は、週に２回または３回投与される。抗体の有効量は、少なくとも１回対象に投与される。いくつかの実施態様では、抗体の有効量は、少なくとも１カ月、少なくとも６カ月、または少なくとも１年にわたる期間、複数回投与され得る。
【０２１７】
特定の実施態様では、本明細書で論じた抗ＶＩＳＴＡ抗体と第２剤との組み合わせを、薬学的に許容される担体中の単一の組成物として同時に投与することができ、または薬学的に許容される担体中の、それぞれ抗ＶＩＳＴＡ抗体および第２剤を含む別々の組成物として同時に投与することができる。一実施態様では、抗ＶＩＳＴＡ抗体と第２剤との組み合わせは、連続的に投与することができる。この２つの薬剤の投与は、例えば３０分、６０分、９０分、１２０分、３時間、６時間、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、３日、５日、７日、もしくは１週間以上時間を空けて開始することができ、または第２の薬剤の投与は、第１剤が投与された後、例えば３０分、６０分、９０分、１２０分、３時間、６時間、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、３日、５日、７日、もしくは１週間以上時間を空けて開始することができる。
【０２１８】
低ｐＨ結合ｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤ Ａｂの同定方法
また、本明細書では、酸性（または低ｐＨ）条件下でＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合するＡｂを同定するための方法も提供される。特定の実施態様では、ｐＨ６．５以下でＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合するＡｂを同定するための方法は、ｐＨ６．５以下でＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に１または複数の試験Ａｂを接触させることと、それが１０−７ Ｍ、１０−８ Ｍ、１０−９ Ｍ以下のＫＤでＶＩＳＴＡタンパク質のＥＣＤに結合していれば、その試験Ａｂを選択することからなる。いくつかの実施態様では、この方法はｐＨ６．５で実施されるが、他の実施態様では、ｐＨ６．０またはｐＨ５．５またはｐＨ５．０で行われる。いくつかの実施態様では、ＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質は、ｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質であるか、あるいはｈＶＩＳＴＡ ＩｇＶドメインを含むか、あるいは配列番号２のアミノ酸２０−９５を含むかまたは配列番号２のアミノ酸２０−７０、３５−９５もしくは３５−７０を含むポリペプチドである。いくつかの実施態様において、ポリペプチドはまた、配列番号２のアミノ酸９５−１０５を含む。いくつかの実施態様では、ポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸３５−１２７または３７−１２５を含む。
【０２１９】
いくつかの実施態様では、本方法は、ｐＨ７．０またはｐＨ７．４などの中性、生理的またはアルカリ性ｐＨで、１または複数の試験Ａｂの結合を試験することをさらに含む。いくつかの実施態様では、本方法は、抗体がｐＨ６．５以下で１０−７ Ｍ、１０−８ Ｍ、１０−９ Ｍ以下のＫＤでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合するだけでなく、ｐＨ７．０またはｐＨ７．４でもポリペプチドに特異的に結合すれば、それを選択することを含む。試験Ａｂは、酸性条件下、例えばｐＨ６．５以下でＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合し、また、中性および／もしくはアルカリ性ｐＨでも、同様の親和性でＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合すれば、選択される（すなわち、それらは「ｐａｎバインダー」である）。例えば、いくつかのこのようなＡｂの中には、ｐＨ６．５でのＫＤがｐＨ７．０でのＫＤの１．５倍以内であるような、（例えば２５℃または３７℃の一定温度で）ｐＨ６．５とｐＨ７．０の両方またはｐｈ７．４で１０−７ Ｍ、１０−８ Ｍ、１０−９ Ｍ以下のＫＤでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合するものもある。
【０２２０】
特定のＡｂは、酸性条件下、例えばｐＨ６．５以下で、中性またはアルカリ性のｐＨでよりも高い親和性でＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合する場合、選択される（「ｐＨ感受性バインダー」または「ｐＨ感受性Ａｂ」）。例えば、いくつかの実施態様では、Ａｂは、ｐＨ６．５では１０−８ Ｍ以下のＫＤで、かつ、ｐＨ７．０またはｐＨ７．４では１０−８ Ｍを上回るＫＤで、ＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合し得る。いくつかのこのような実施態様では、Ａｂは、ｐＨ６．５においては１０−８ Ｍ以下のＫＤで、かつ、ｐＨ７．０またはｐＨ７．４においては、ｐＨ６．５でのＫＤの１．５倍を超えるＫＤでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合し得る。特定の実施態様では、ｐＨ感受性Ａｂは、（例えば２５℃または３７℃の一定温度で）ｐＨ６．５において、ｐＨ７．０またはｐＨ７．４におけるＫＤの３分の２以下、２分の１以下、５分の１以下、１０分の１以下、２０分の１以下、５０分の１以下、１００分の１以下、３００分の１以下、５００分の１以下、１０００分の１以下、または５０００分の１以下のＫＤでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合する場合、選択される。例えば、場合によってＡｂは、（例えば２５℃または３７℃の一定温度で）ｐＨ６．０において、ｐＨ７．０またはｐＨ７．４以上におけるＫＤと比較して、３分の２以下、２分の１以下、５分の１以下、１０分の１以下、２０分の１以下、５０分の１以下、１００分の１以下、３００分の１以下、５００分の１以下、１０００分の１以下、または５０００分の１以下のＫＤでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合する場合、選択される。
【０２２１】
特定の実施態様では、Ａｂは、中性、生理的またはアルカリ性条件におけるよりも酸性条件においてより低いｋｏｆｆでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合する場合、選択される。特定の実施態様では、Ａｂは、例えば２５℃か３７℃で測定して、酸性条件下、ｐＨ６．５においては、ｐＨ７．０またはｐＨ７．４におけるｋｏｆｆの３分の２以下、２分の１以下、５分の１以下、１０分の１以下、２０分の１以下、５０分の１以下または１００分の１以下のｋｏｆｆでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合する場合、選択される。例えば、いくつかの実施態様では、Ａｂは、２５℃か３７℃で測定して、ｐＨ６．０においては、ｐＨ７．０またはｐＨ７．４におけるｋｏｆｆ速度の３分の２以下、２分の１以下、５分の１以下、１０分の１以下、２０分の１以下、５０分の１以下または１００分の１以下のｋｏｆｆ速度でＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合する場合、選択される。
【０２２２】
特定の実施態様では、Ａｂは、中性またはアルカリ性条件におけるよりも酸性条件においてより高いｋｏｎでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合する場合、選択される。特定の実施態様では、Ａｂは、例えば２５℃か３７℃で測定して、酸性条件下、ｐＨ６．５においては、ｐＨ７．０またはｐＨ７．４におけるｋｏｎの２倍以上、５倍以上、１０倍以上、２０倍以上、５０倍以上または１００倍以上のｋｏｎでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合する場合、選択される。例えば、いくつかの実施態様では、Ａｂは、例えは２５℃か３７℃で測定して、ｐＨ６．０においては、ｐＨ７．０またはｐＨ７．４におけるｋｏｎの２倍以上、５倍以上、１０倍以上、２０倍以上、５０分倍以上または１００倍以上のｋｏｎでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合する場合、選択される。
【０２２３】
ＶＩＳＴＡ−ＥＣＤ結合抗体のｐＨ感受性を変化させる方法
ＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合するが、ｐＨ６．５以下では結合しない、またはｐＨ６．５以下では高親和性で結合しないＡｂを、ｐＨ６．５以下でその結合の親和性を高めるように操作することができる。例えば、Ａｂのパラトープを、例えば、１または複数のアミノ酸残基の置換により、突然変異させることができる。例えば、いくつかの実施態様では、ＶＩＳＴＡ−ＥＣＤとの接触残基である、Ａｂの重鎖または軽鎖の１から８つ、例えば１から６つ、１から４つ、１から３つ、１から２つ、または１つのアミノ酸残基（例えば、１つまたは複数のＣＤＲ内の残基）を、異なるアミノ酸残基で置き換えてもよい。その後、突然変異させたＡｂをｐＨ６．５以下でＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質への結合について試験し、親抗体よりも高い親和性で結合するＡｂ種を選択することができる。所望に応じて、上記の工程を繰り返して、２ラウンド以上の変異誘発と選択をＡｂで行い、酸性ｐＨで最も高い親和性を示すバインダーを選択することができる。いくつかの実施態様では、このような選択は、その親よりも得られる抗体の抗腫瘍効果を改善し得る。
【０２２４】
上記の選択方法は、抗体に特異的に結合するＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質についての前述の一般的な選択に従うように設計することもできる。すなわち、特定の実施態様では、改善されたＡｂは、それがｐＨ６．５で１０−８ Ｍ以下のＫＤでＶＩＳＴＡタンパク質のＥＣＤに結合する場合、選択される。いくつかの実施態様では、選択は、ｐＨ６．５ではなく、ｐＨ６．０、またはｐＨ５．５、またはｐＨ５．０で行われる。いくつかの実施態様では、選択プロセスに使用されるＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質は、完全なｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質であるか、あるいはｈＶＩＳＴＡ ＩｇＶドメインを含むポリペプチドであるか、あるいは配列番号２のアミノ酸２０−９５を含むか、または配列番号２のアミノ酸２０−７０、３５−９５もしくは３５−７０を含むポリペプチドである。いくつかの実施態様において、ポリペプチドはまた、配列番号２のアミノ酸９５−１０５を含む。いくつかの実施態様において、配列番号２のアミノ酸残基３５−１２７を含むポリペプチドが使用される。
【０２２５】
いくつかの実施態様では、酸性ｐＨでのＶＩＳＴＡ ＥＣＤに対するＶＩＳＴＡ抗体の結合を改善するための方法は、１つまたは複数のＶＨもしくはＶＬ ＣＤＲ、例えばＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはＶＨ ＣＤＲ１およびＣＤＲ３のみにおいてグルタミン酸、アスパラギン酸および／またはヒスチジン残基の数を増加させることを含む。特定の実施態様では、方法は、例えば、結晶学によって決定される、ｈＶＩＳＴＡに接触する抗体の領域におけるグルタミン酸、アスパラギン酸および／またはヒスチジン残基の数を増加させることを含む。
【０２２６】
いくつかの実施態様では、方法は、選択されたＡｂの結合を、中性、アルカリ性または生理的ｐＨ、例えばｐＨ７．０または７．４で試験することをさらに含む。いくつかの実施態様では、本方法は、抗体がｐＨ６．５以下で１０−８ Ｍ以下のＫＤでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合するだけでなく、ｐＨ７．０またはｐＨ７．４でもポリペプチドに特異的に結合すれば、それを選択することを含む。いくつかのこのような実施態様では、Ａｂは、酸性条件下、例えばｐＨ６．５以下でＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合し、また、中性および／もしくはアルカリ性もしくは生理的ｐＨでも、同様の親和性でＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合すれば、選択される（すなわち、それらは「ｐａｎバインダー」である）。例えば、いくつかのこのようなＡｂの中には、ｐＨ６．５でのＫＤがｐＨ７．０またはｐＨ７．４でのＫＤの１．５倍以内であるような、（例えば２５℃または３７℃の一定温度で）ｐＨ６．５およびｐＨ７．０の両方で１０−８ Ｍ以下のＫＤでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合するものもある。
【０２２７】
特定のＡｂは、酸性条件下、例えばｐＨ６．５以下で、中性、生理的またはアルカリ性のｐＨでよりも高い親和性でＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合する場合、選択される（「ｐＨ感受性バインダー」または「ｐＨ感受性Ａｂ」）。例えば、いくつかの実施態様では、Ａｂは、ｐＨ６．５では１０−８ Ｍ以下のＫＤで、かつ、ｐＨ７．０では１０−８ Ｍを上回るＫＤで、ＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合し得る。いくつかのこのような実施態様では、Ａｂは、ｐＨ６．５においては１０−８ Ｍ以下のＫＤで、かつ、ｐＨ７．０においては、ｐＨ６．５でのＫＤの１．５倍を超えるＫＤでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合し得る。特定の実施態様では、ｐＨ感受性Ａｂは、（例えば２５℃または３７℃の一定温度で）ｐＨ６．５において、ｐＨ７．０またはｐＨ７．４におけるＫＤの３分の２以下、２分の１以下、５分の１以下、１０分の１以下、２０分の１以下、５０分の１以下、１００分の１以下、３００分の１以下、５００分の１以下、１０００分の１以下、または５０００分の１以下のＫＤでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に特異的に結合する場合、選択される。例えば、場合によってＡｂは、（例えば２５℃または３７℃の一定温度で）ｐＨ６．０において、ｐＨ７．０またはｐＨ７．４以上におけるＫＤと比較して、３分の２以下、２分の１以下、５分の１以下、１０分の１以下、２０分の１以下、５０分の１以下、１００分の１以下、３００分の１以下、５００分の１以、１０００分の１以下、または５０００分の１以下のＫＤでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合する場合、選択される。
【０２２８】
特定の実施態様では、方法は、２つのｐＨ値でのｋｏｆｆを決定することをさらに含む。いくつかの実施態様では、Ａｂは、中性、生理的またはアルカリ性条件におけるよりも酸性条件においてより低いｋｏｆｆでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合する場合、選択される。特定の実施態様では、Ａｂは、例えば２５℃または３７℃で測定して、酸性条件下、ｐＨ６．５においては、ｐＨ７．０またはｐＨ７．４におけるｋｏｆｆの３分の２以下、２分の１以下、５分の１以下、１０分の１以下、２０分の１以下、５０分の１以下または１００分の１以下のｋｏｆｆでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合する場合、選択される。例えば、いくつかの実施態様では、Ａｂは、２５℃か３７℃で測定して、ｐＨ６．０においては、ｐＨ７．０におけるｋｏｆｆ速度の３分の２以下、２分の１以下、５分の１以下、１０分の１以下、２０分の１以下、５０分の１以下または１００分の１以下のｋｏｆｆ速度でＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合する場合、選択される。
【０２２９】
特定の実施態様では、方法は、２つのｐＨ値におけるｋｏｎを決定することをさらに含む。いくつかのこのような実施態様では、Ａｂは、中性、生理的またはアルカリ性条件におけるよりも酸性条件においてより高いｋｏｎでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合する場合、選択される。特定の実施態様では、Ａｂは、例えば２５℃か３７℃で測定して、酸性条件下、ｐＨ６．５においては、ｐＨ７．０またはｐＨ７．４におけるｋｏｎの２倍以上、５倍以上、１０倍以上、２０倍以上、５０倍以上または１００倍以上のｋｏｎでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合する場合、選択される。例えば、いくつかの実施態様では、Ａｂは、例えは２５℃か３７℃で測定して、ｐＨ６．０においては、ｐＨ７．０またはｐＨ７．４におけるｋｏｎの２倍以上、５倍以上、１０倍以上、２０倍以上、５０倍以上または１００倍以上のｋｏｎでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に結合する場合、選択される。
【０２３０】
酸性ｐＨにおいて中性ｐＨまたは生理的ｐＨにおけるよりもｈｕＶＩＳＴＡに優先的に結合する抗体は、酸性ｐＨ、例えばｐＨ６．０または６．５での結合についてＶＩＳＴＡ抗体またはＦａｂまたはｓｃＦｖのライブラリーをポジティブスクリーニングし、中性ｐＨ、例えばｐＨ７．０または生理的ｐＨ、例えばｐＨ７．４での結合の欠如についてライブラリーをネガティブスクリーニングすることによって同定することができる。ライブラリーは、酸性ｐＨでＶＩＳＴＡに荷電し、ＶＩＳＴＡに結合する可能性が高い結合ドメインを選択するような、グルタミン酸、アスパラギン酸およびヒスチジン残基で濃縮されていてもよい。スクリーニングには、酸性ｐＨでのポジティブセレクション、および中性または生理的ｐＨでのネガティブセレクションが含まれる場合がある。ポジティブセレクションとネガティブセレクションは交互に行われてもよい。
【０２３１】
あるいは、中性および酸性ｐＨでＶＩＳＴＡに結合する抗体は、中性ｐＨでの結合を欠き、酸性ｐＨでの結合を維持または強化するように操作することができる。例えば、ライブラリーは、１つまたは複数のＣＤＲなどにあるＶＨアミノ酸残基と場合によってＶＬアミノ酸残基を置換することによって、および酸性ｐＨでｈＶＩＳＴＡに結合する抗体のポジティブセレクションと、中性（または生理的）ｐＨでＶＩＳＴＡに結合しない抗体のネガティブセレクションとによってライブラリーをスクリーニングすることにより、作成することができる。同様の方法を使用して、所望のｐＨ選択的、ｐＨ依存的またはｐＨ非依存的ＶＩＳＴＡ結合プロファイルを有するＶＩＳＴＡ結合抗体を操作することもできる。
【０２３２】
具体的な実施態様
本開示の追加の実施態様には以下が含まれる。
１． ヒトＶドメイン免疫グロブリン含有Ｔ細胞活性化抑制因子（ｈＶＩＳＴＡ）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に特異的に結合する単離された抗体（Ａｂ）であって、
ａ． ｐＨ６．５以下において１０−７ Ｍ以下の親和定数（ＫＤ）でｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合し；
ｂ． ｐＨ６．５以下において１０−３ ｓｅｃ−１以下の解離速度定数（Ｋｏｆｆ）でｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合し；または
ｃ． ｐＨ６．５以下において１０−７ Ｍ以下のＫＤおよび１０−３ ｓｅｃ−１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合する、
単離されたＡｂ。
【０２３３】
２． ｐＨ６．５以下において１０−８ Ｍ以下のＫＤでｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合する、実施態様１に記載の単離されたＡｂ。
【０２３４】
３． ｐＨ６．５以下において１０−９ Ｍ以下のＫＤでｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合する、実施態様２に記載の単離されたＡｂ。
【０２３５】
４． ｐＨ６．５以下において１０−４ ｓｅｃ−１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合する、実施態様１から３のいずれか一項に記載の単離されたＡｂ。
【０２３６】
５． ｐＨ７．０以上において、
ａ． １０−７ Ｍ以下のＫＤ；
ｂ． １０−３ ｓｅｃ−１以下のｋｏｆｆ；または
ｃ． １０−７ Ｍ以下のＫＤおよび１０−３ ｓｅｃ−１以下のｋｏｆｆ
でｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合する、実施態様１から４のいずれか一項に記載の単離されたＡｂ。
【０２３７】
６． ｐＨ７．０以上において１０−８ Ｍ以下のＫＤでｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合する、実施態様５に記載の単離されたＡｂ。
【０２３８】
７． ｐＨ７．０以上において１０−９ Ｍ以下のＫＤでｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合する、実施態様６に記載の単離されたＡｂ。
【０２３９】
８． ｐＨ７．０以上において１０−４ ｓｅｃ−１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合する、実施態様５から７のいずれか一項に記載の単離されたＡｂ。
【０２４０】
９． ｐＨ６．５においてｐＨ７．０と同様の親和性でｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合する、実施態様５から８のいずれか一項に記載の単離されたＡｂ。
【０２４１】
１０． ｐＨ６．５においてｐＨ７．０でよりも高い親和性でｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合する、実施態様９に記載の単離されたＡｂ。
【０２４２】
１１． ｐＨ６．５においてｐＨ７．０の３分の２以下のＫＤでｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合する、実施態様１０に記載の単離されたＡｂ。
【０２４３】
１２． ｐＨ６．５においてｐＨ７．０の２分の１以下のＫＤでｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合する、実施態様１１に記載の単離されたＡｂ。
【０２４４】
１３． ｐＨ６．５においてｐＨ７．０の５分の１以下のＫＤでｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合する、実施態様１１に記載の単離されたＡｂ。
【０２４５】
１４． ｐＨ６．５においてｐＨ７．０よりも低いＫｏｆｆでｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合する、実施態様１０から１３のいずれか一項に記載の単離されたＡｂ。
【０２４６】
１５． ｐＨ６．５においてｐＨ７．０の３分の２以下のＫｏｆｆでｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合する、実施態様１４に記載の単離されたＡｂ。
【０２４７】
１６． ｐＨ６．５においてｐＨ７．０の２分の１以下のＫｏｆｆでｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合する、実施態様１５に記載の単離されたＡｂ。
【０２４８】
１７． ｐＨ６．５においてｐＨ７．０の５分の１以下のＫｏｆｆでｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合する、実施態様１６に記載の単離されたＡｂ。
【０２４９】
１８． ｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤの少なくとも１つのヒスチジン残基がプロトン化されている条件下でｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに特異的に結合する、実施態様１から１７のいずれか一項に記載の単離されたＡｂ。
【０２５０】
１９． ｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤのＩｇＶドメインに結合する、実施態様１８に記載の単離されたＡｂ。
【０２５１】
２０． 配列番号２のアミノ酸２０および９５内に位置する領域に結合する、実施態様１９に記載の単離されたＡｂ。
【０２５２】
２１． 配列番号２のアミノ酸２０および７０内に位置する領域に結合する、実施態様２０に記載の単離されたＡｂ。
【０２５３】
２２． 配列番号２のアミノ酸３５および７０内に位置する領域に結合する、実施態様２１に記載の単離されたＡｂ。
【０２５４】
２３． ｈＶＩＳＴＡのＥＣＤの他の領域にさらに結合する、実施態様２０から２２のいずれか一項に記載の単離されたＡｂ。
【０２５５】
２４． その他の領域が配列番号２のアミノ酸９５および１０５内に位置する、実施態様２３に記載の単離されたＡｂ。
【０２５６】
２５． 結合が水素−重水素交換質量分析（ＨＤＸ−ＭＳ）によって決定される、実施態様１８から２４のいずれか一項に記載の単離されたＡｂ。
【０２５７】
２６． 自身が阻害しなければｈＶＩＳＴＡが結合するであろう細胞へのｈＶＩＳＴＡの結合を阻害する、実施態様１から２５のいずれか一項に記載の単離されたＡｂ。
【０２５８】
２７． 腫瘍モデルにおいて免疫応答を誘発または強化する、実施態様１から２６のいずれか一項に記載の単離されたＡｂ。
【０２５９】
２８． Ａｂが腫瘍モデルにおいてＴ細胞活性化を誘発または強化する、実施態様２７に記載の単離されたＡｂ。
【０２６０】
２９． 腫瘍モデルにおいて腫瘍成長を阻害する、実施態様１から２８のいずれか一項に記載の単離されたＡｂ。
【０２６１】
３０． ｈＶＩＳＴＡのＴ細胞への結合を阻害する、実施態様１から２９のいずれか一項に記載の単離されたＡｂ。
【０２６２】
３１． ｐＨ６．５においてｐＨ７．０でよりもより強くｈＶＩＳＴＡのＴ細胞への結合を阻害するなど、ｐＨ６．５以下においてｐＨ７．０以上でよりもより強くｈＶＩＳＴＡのＴ細胞への結合を阻害する、実施態様３０に記載のＡｂ。
【０２６３】
３２． 実施態様１から３１のいずれか一項に記載の単離されたＡｂと薬学的に許容される担体とを含む組成物。
【０２６４】
３３． がんを有する対象を治療する方法であって、実施態様３２に記載の組成物を対象に投与することを含む、方法。
【０２６５】
３４． ｐＨ６．５以下において、１０−７ Ｍ以下のＫＤでｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合するＡｂを同定するための方法であって、１または複数の試験Ａｂを、ｐＨ６．５以下で、ｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤのＩｇＶドメインを含むかまたは配列番号２のアミノ酸２０−９５、２０−７０もしくは３５−７０を含むｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤまたはその断片を含むポリペプチドドと接触させることと、１０−７ Ｍ以下のＫＤでポリペプチドに結合する１または複数の試験Ａｂを選択することとを含む、方法。
【０２６６】
３５． ｐＨ６．５以下において、１０−３ ｓｅｃ−１以下のＫｏｆｆでｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合するＡｂを同定するための方法であって、１または複数の試験Ａｂを、ｐＨ６．５以下で、ｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤのＩｇＶドメインを含むかまたは配列番号２のアミノ酸２０−９５、２０−７０もしくは３５−７０を含むｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤまたはその断片を含むポリペプチドと接触させることと、１０−３ ｓｅｃ−１以下のＫｏｆｆでポリペプチドに結合する１または複数の試験Ａｂを選択することとを含む、方法。
【０２６７】
３６． ｐＨ６．５においてｐＨ７．０での場合と同様の親和性でｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに特異的に結合するＡｂを同定するための方法であって、
ａ． １または複数の試験Ａｂを、ｐＨ６．５で、ｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤのＩｇＶドメインを含むかまたは配列番号２のアミノ酸２０−９５、２０−７０もしくは３５−７０を含むｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤまたはその断片を含むポリペプチドと接触させること；
ｂ． １または複数の試験Ａｂを、ｐＨ７．０で、（ａ）のポリペプチドと接触させること；および
ｃ． 試験ＡｂがｐＨ６．５とｐＨ７．０において１０−７ Ｍ以下のＫＤでポリペプチドと結合していれば、それを選択すること
を含む、方法。
【０２６８】
３７． ｐＨ６．５においてｐＨ７．０でよりも高い親和性でｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合するＡｂを同定するための方法であって、
ａ． １または複数の試験Ａｂを、ｐＨ６．５で、ｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤを含むポリペプチドと、またはｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤのＩｇＶドメインを含むかもしくは配列番号２のアミノ酸２０−９５、２０−７０もしくは３５−７０を含むその断片と接触させること；
ｂ． １または複数の前記試験Ａｂを、ｐＨ７．０で、（ａ）のポリペプチドと接触させること；および
ｃ． 試験ＡｂがｐＨ６．５においてｐＨ７．０でよりも２分の１以下のＫＤでポリペプチドと結合していれば、それを選択すること
を含む、方法。
【０２６９】
３８． がんの治療における使用のための、ｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに特異的に結合するＡｂを同定するための方法であって、
ａ． 実施態様３２から３５の方法に従うなど、ｐＨ６．５以下でｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに特異的に結合するＡｂを同定すること；および
ｂ． 腫瘍モデルにおいて、ｐＨ６．５以下で、免疫応答を誘発もしくは強化するか、または腫瘍成長を阻害する（ａ）のＡｂを選択すること
を含む、同定するための方法。
【０２７０】
３９． 工程（ｂ）がＴ細胞活性を測定することを含む、実施態様３８に記載の方法。
【０２７１】
４０． Ａｂの抗腫瘍効果を測定することをさらに含む、実施態様３８または３９に記載の方法。
【０２７２】
４１． ｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合するＡｂの抗腫瘍効果を改善するための方法であって、
ａ． ｐＨ６．５以下において所望の値より低い親和性、例えば１０−７ Ｍ以上、例えば１０−６ Ｍ、１０−５ Ｍ以上のＫＤおよび／または１０−２ ｓｅｃ−１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合するＡｂを提供すること；
ｂ． Ａｂの重鎖または軽鎖の１から５個のアミノ酸残基であって、ｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤとの接触残基である１から５個のアミノ酸残基を、異なるアミノ酸残基で置換すること；
ｃ． ｐＨ６．５以下において、（ｂ）で得られたＡｂが、ｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに対して（ａ）のＡｂが有するよりも高い親和性を有するかどうかを判定すること；および
ｄ． ｐＨ６．５以下において、１０−７ Ｍ以下のＫＤでｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合するＡｂを得るのに十分な数のラウンド分、工程（ａ）−（ｃ）を繰り返すこと
を含む、改善する方法。
【０２７３】
４２． ｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合するＡｂの抗腫瘍効果を改善するための方法であって、
ａ． ｐＨ６．５以下において所望の値より低い親和性、例えば１０−７ Ｍ以上、例えば１０−６ Ｍ、１０−５ Ｍ以上のＫＤおよび／または１０−２ ｓｅｃ−１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合するＡｂを提供すること；
ｂ． （ａ）のＡｂの変異体のライブラリーを作製することであって、各変異体が、異なるアミノ酸残基によるＡｂの重鎖または軽鎖の１から５のアミノ酸残基の置換を含み、１から５のアミノ酸残基がｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤとの接触残基である、ライブラリーを作製すること；
ｃ． ｐＨ６．５以下において１０−７ Ｍ以下のＫＤでｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに結合する（ｂ）の変異体のライブラリーのＡｂを選択すること；および任意選択的に
ｄ． 腫瘍モデルにおける（ｃ）のＡｂの抗腫瘍効果を試験すること
を含む、改善する方法。
【０２７４】
４３． ヒトＶＩＳＴＡ ＥＣＤに結合する抗体の薬物動態を改善する方法であって、酸性条件下、例えばｐＨ６．５以下でヒトＶＩＳＴＡに結合する抗体の能力を強化することを含む、改善するための方法。
【０２７５】
４４． ヒトＶＩＳＴＡに結合し、かつ、延長された半減期（良好な薬物動態特性）を有する抗体を選択する方法であって、酸性条件下、例えばｐＨ６．５以下でヒトＶＩＳＴＡに結合する抗体を選択することを含む、選択するための方法。
【０２７６】
さらなる例示的な実施態様は、後述の特許請求の範囲で提供される。
【０２７７】
実施例
以下の実施例は、単に本発明の例示であることが意図されており、決して本発明を限定するものと考えられるべきではない。これらの実施例は、以下の実験が実施された全てまたは唯一の実験であることを表すことを意図したものではない。使用した数（例えば量、温度など）に関しては正確を期すべく努力したが、いくらかの実験誤差および偏差が考慮されるべきである。特に断りのない限り、部分（ｐａｒｔ）は重量部、分子量は平均分子量、温度は摂氏温度、圧力は大気圧またはそれに近い圧力である。
【０２７８】
実施例１： ＶＩＳＴＡの細胞外ドメインは非常にヒスチジンが豊富である。
この例は、ＶＩＳＴＡの細胞外ドメインはヒスチジン残基を非常に豊富であり、これらのヒスチジン残基は進化的に保存されており、ＶＩＳＴＡが関与する受容体−リガンド相互作用に寄与している可能性があることを示している。
【０２７９】
免疫グロブリンドメイン含有タンパク質の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）のアミノ酸配列をｕｎｉｐｒｏｔおよびｓｗｉｓｓ−ｐｒｏｔデータベースから抽出し、ヒスチジン含有量を解析した。図１Ａは、この分析結果をグラフとして表したものである。各タンパク質について、全ての細胞外ドメインアミノ酸残基に対するヒスチジン残基のパーセンテージでの頻度をｙ軸にプロットし、細胞外ドメインアミノ酸残基の総数をｘ軸にプロットしている。各データポイントの直径は、各タンパク質の細胞外ドメイン内のヒスチジン残基の総数に対応している。ＶＩＳＴＡ（標識）は、その細胞外ドメインに例外的に高い頻度でヒスチジン残基を含む。
【０２８０】
その後、ＶＩＳＴＡのヒスチジン残基の進化的保存性を評価した。図１Ｂは、シグナルペプチド（「Ｓｉｇ」）、膜貫通ドメイン（「ＴＭＤ」）および細胞内ドメインを除いた、ヒト、カニクイザルおよびマウスＶＩＳＴＡのアミノ酸参照配列をアライメントしたものである。３種全てで保存されているヒスチジン残基は太字で下線が引かれている。ヒトおよびｃｙｎｏ ＶＩＳＴＡで保存されているヒスチジン残基は、下線なしで太字になっている。ＶＩＳＴＡの細胞外ドメインのヒスチジン残基の多くは進化的に保存されており、ＶＩＳＴＡヒスチジンの高含有の重要な生物学的役割を示唆している。
【０２８１】
ＰＤＢデータベースで利用可能な解析済みの構造に対する配列相同性解析に基づいて、ｈＶＩＳＴＡ ＩｇＶドメインの３次元モデルを作成した。図１Ｃに示されたモデルは、ＶＩＳＴＡのＥＣＤの多くのヒスチジンが分子表面で露出しており、抗体認識と同様にリガンド結合にも役割を果足し得ることを示している。ヒスチジン残基は球と棒として描かれている。
【０２８２】
実施例２： ヒスチジンプロトン化は、腫瘍およびその他の酸性微小環境におけるＶＩＳＴＡ受容体−リガンド結合と免疫抑制活性を制御し得る。
本実施例は、生理的に適切な酸性ｐＨに応じたヒスチジンプロトン化、およびＶＩＳＴＡ細胞外ドメインヒスチジンが生理的ｐＨではなく酸性ｐＨに対する対抗受容体またはリガンド選択性を付与するモデルについて説明する。
【０２８３】
図２Ａは、ヒスチジン残基におけるピロールアンモニウム基（ＮＨ）のプロトン化の欠如と存在の間の平衡を示している。溶液中のヒスチジンのｐＫａは６．５であり、ヒスチジン残基がより高いｐＨよりもｐＨ６．５以下でプロトン化される可能性が高く、したがって、正に帯電していることを示している。プロトン化の結果としてのＶＩＳＴＡＥＣＤの表面での正電荷の増加は、受容体またはリガンドの結合、ならびにＶＩＳＴＡの構造および／または機能に影響を与える可能性がある。したがって、ｐＨの変化はまた、抗体結合エピトープを改変し、かつ／または様々な抗体親和性をもたらす可能性がある。
【０２８４】
図２Ｂは、ＶＩＳＴＡがＰＳＧＬ−１または他の対抗受容体およびリガンド（「ＶＩＳＴＡ−Ｒ」）と酸性ｐＨで選択的に結合するモデルを示す。血中のような生理的ｐＨでは、ＶＩＳＴＡのＥＣＤ上のヒスチジン残基は非プロトン化されていると予想される。結果として、生理的ｐＨでは、ＰＳＧＬ−１または他の対抗受容体およびリガンドへのＶＩＳＴＡの結合は無視できる。対照的に、酸性の細胞外ｐＨを持つ傾向がある場所、例えば腫瘍微小環境または炎症の部位では、酸性ｐＨは、部分的にまたは完全にＶＩＳＴＡのＥＣＤヒスチジンプロトン化を促進し、したがってＶＩＳＴＡのＰＳＧＬ−１または他の対抗受容体およびリガンドとの結合を可能にする。したがって、酸性のｐＨ範囲でＶＩＳＴＡ−ＥＣＤタンパク質に強く結合する抗体は、腫瘍におけるＶＩＳＴＡ活性の阻害により効果的である可能性がある。
【０２８５】
実施例３： ＶＩＳＴＡは腫瘍の骨髄単核細胞によって発現される。
本実施例は、ＶＩＳＴＡが、マクロファージ、樹状細胞および顆粒球を含む、腫瘍中の骨髄単核細胞によって頻繁に発現していることを示している。
【０２８６】
外科的に切除された非小細胞肺癌、腎明細胞癌、黒色腫、大腸癌および他の腫試料を氷冷ＰＢＳ中で洗浄し、約１５ｍｍ３サイズの断片に切断し、２％熱不活化ＦＢＳおよび２ｍＭ ＥＤＴＡ（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ １５５７５０２０）を補充した氷冷ＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ カタログ番号１１８７５０９３）に懸濁させた。各試料を大きなオールガラス製ダウンス（ｄｏｕｎｃｅ）（テンブロック型ホモジナイザー（Ｔｅｎｂｒｏｅｃｋ Ｔｉｓｓｕｅ Ｇｒｉｎｄｅｒｓ））に移し、組織片が目視で分離するまで粉砕した。懸濁液を７０μＭナイロンメッシュで濾過し、遠心分離した。上清を廃棄し、細胞ペレットを０．１％ウシ血清アルブミンと２５０ｍｇ／ｍＬの滅菌濾過ＤＮａｓｅ １（グレードＩＩ、ウシ膵臓由来、Ｒｏｃｈｅカタログ番号１０１０４１５９００１）を補充した室温のＰＢＳに室温で３分間再懸濁させた。次いで、細胞を氷冷補充ＲＰＭＩ中で洗浄し、氷冷ＰＢＳに再懸濁させた。生細胞染色色素（ｃｅｌｌ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｄｙｅ）を添加し、暗所で氷上でインキュベートした。２０分後、４％正常ラット血清、４％正常マウス血清、ＡＢ血漿由来の２０％ヒト血清、および１：１２５希釈ヒトＴｒｕＳｔａｉｎ ＦｃＸTM（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ カタログ番号４２２３０２）を添加することにより、非特異的抗体染色を遮断した。細胞を、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ Ｓｔａｉｎ Ｂｕｆｆｅｒ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ カタログ番号５６２７９４）に暗所で氷上３０分間懸濁させた、ＨＬＡ−ＤＲ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ カタログ番号５６４０４０）、ＣＤ８（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ カタログ番号４６−００８７−４２）、ＣＤ１４（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ カタログ番号３２５６２０）、ＣＤ４５（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ カタログ番号３０４０１７）、ＣＤ４（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ カタログ番号５６３８７５）、ＣＤ１１ｃ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ カタログ番号７４４４３９）、ＣＤ１５（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ カタログ番号５６３１４２）、ＰＤ−１（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ カタログ番号５６５２９９）、ＣＤ３（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ カタログ番号５６５１５）、ＣＤ５６（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ カタログ番号６１−０５６７−４２）、ＣＤ１９（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ カタログ番号５６４９７７）およびＶＩＳＴＡ（ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒＴＭ６４７にコンジュゲートしたＶＩＳＴＡ抗体３、Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ カタログ番号Ａ２０１８６）に対する蛍光色素標識抗体で染色した。染色した細胞を氷冷ＰＢＳ中で洗浄し、固定し（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ カタログ番号００−５５２３−００）、フローサイトメーターで取得した。データは、ＦｌｏｗＪｏＴＭソフトウェア（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて分析された。図３に示すように、ＶＩＳＴＡ細胞表面発現は、マクロファージおよび顆粒球上で最も高く、樹状細胞上では中等度であり、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞およびＢ細胞上では低かった。
【０２８７】
実施例４： ＶＩＳＴＡ細胞結合は酸性ｐＨ選択性を示す。
本実施例は、多量体化ヒトＶＩＳＴＡ ＥＣＤが、刺激されたヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞およびヒト末梢血単核細胞に中性ｐＨまたは生理的ｐＨよりも酸性ｐＨで効率的に結合し、この結合が抗ヒトＶＩＳＴＡロック抗体によって遮断され得ることを示す。マウス脾細胞への酸性ｐＨ選択的二量化マウスＶＩＳＴＡ ＥＣＤの結合も示されている。
【０２８８】
ヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞を、ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐＴＭ（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ カタログ番号１５０６２）によって健康なドナー血液から濃縮し、ヒトＴ−アクチベーターＣＤ３／ＣＤ２８ ＤｙｎａｂｅａｄｓＴＭ（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ カタログ番号１１１．３２Ｄ）と組換えヒトＩＬ−２（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ カタログ番号２００−０２）を用い、１０％熱不活化ＦＢＳ、ＧｌｕｔａｍａｘＴＭ（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ カタログ番号３５０５００６１）、非必須アミノ酸（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ １１１４００５０）、ピルビン酸ナトリウム（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ カタログ番号１１３６００７０）および２−メルカプトエタノール（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ２１９８５０２３）を補充したＲＰＭＩ−１６４０中で約４日間、ｉｎ ｖｉｔｒｏで刺激した。活性化されたＣＤ４＋ Ｔ細胞を、室温で３０分間、ｍＭＭＥＳ（Ｓｉｇｍａ、１３１７−１００ＭＬ）で様々なｐＨに酸性化されたハンクス緩衝塩類溶液（ＨＢＳＳ、Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ カタログ番号１４０２５１３４）で希釈されたフィコエリトリン（ＰＥ）−コンジュゲートストレプトアビジンデキストラマー（カタログ番号ＤＸ０１−ＰＥ）に２８：１のモル比でロードされたモノビオチン化ｈＶＩＳＴＡ ＥＣＤ分子（Ｐｈｅ３３−Ａｌａ１９４（受入番号ＡＡＨ２０５６８）−ポリヒスチジン；ＡｃｒｏＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社Ｂ７５−Ｈ８２Ｆ３）で染色した。コントロールとして、活性化ＣＤ４＋ Ｔ細胞を、ｈＶＩＳＴＡをロードしていないＰＥ−コンジュゲートストレプトアビジンデキストラマーで染色した。染色された細胞をＨＢＳＳ＋ＭＥＳで洗浄し、フローサイトメーターで取得した。データは、ＦｌｏｗＪｏＴＭソフトウェア（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて分析された。図４Ａに示されている結果は、ｈＶＩＳＴＡがｐＨ＞６．５でコントロールよりもＣＤ４＋ Ｔ細胞によく結合しなかったことを示している。対照的に、ｈＶＩＳＴＡは、ｐＨ＜６．５でＣＤ４＋ Ｔ細胞への漸進的により強い結合を示した。左の濃い灰色から薄い灰色まで、塗りつぶされたヒストグラムは、ｐＨ７．０、６．５、６．４、６．３、６．１、および６．０での結合を示している。一部のヒストグラムは、対応するｐＨでラベル付けされている。ｐＨ６．０での非ＶＩＳＴＡコントロール多量体結合は、塗りつぶされていないヒストグラムとして表示されている。右は、様々なｐＨでｈＶＩＳＴＡがロードされたデキストラマー（丸）または非ロードのデキストラマー（三角形）で染色されたＣＤ４＋ Ｔ細胞の平均蛍光強度（ＭＦＩ）をグラフ化したものである。
【０２８９】
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、フィコール勾配遠心分離（Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ Ｐｌｕｓ、ＧＥ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ カタログ番号１７１４４００３）によって健康なドナー血液から濃縮し、上述のようにＨＢＳＳ＋ＭＥＳ緩衝液で希釈したｈＶＩＳＴＡがロードされたデキストラマー（多量体とも呼ばれる）およびフルオロフォアコンジュゲートで染色した。図４Ｂは、ｐＨ６．０でのＣＤ１９＋ Ｂ細胞、ＣＤ４＋ Ｔ細胞、ＣＤ８＋ Ｔ細胞、ＣＤ５６＋ ＮＫ細胞およびＣＤ１４＋ 単球への結合を濃い灰色から薄い灰色へと描写する塗りつぶされたヒストグラムを示す。塗りつぶされていない、実線の境界線と点線の境界線のヒストグラムは、ｐＨ７．４での全ＰＢＭＣリンパ球と単球への結合をそれぞれ示している。図４Ｆと４Ｇは、ＶＩＳＴＡが単球と好中球の両方に結合し、ｐＨ６．０ではｐＨ７．４での場合よりも強く結合することを示している。結果は、ｈＶＩＳＴＡは酸性ｐＨでは多くの白血球に結合することができるが、生理的ｐＨではそれほど多くには結合しないことを示す。
【０２９０】
活性化されたヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞を、滴定した抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体またはアイソタイプが一致する非ＶＩＳＴＡ特異的抗体の存在下で、ｐＨ６でｈＶＩＳＴＡ多量体を用いて染色した。図４Ｃにグラフ化した結果は、抗体濃度に対するＶＩＳＴＡ多量体ＭＦＩを示す。抗ｈＶＩＳＴＡ抗体（ＶＩＳＴＡ抗体３；四角形）は、非ＶＩＳＴＡ特異的コントロール抗体（丸）ではなく、活性化されたＣＤ４＋ Ｔ細胞へのｈＶＩＳＴＡ結合を濃度依存的に遮断した。ｈＶＩＳＴＡをロードした多量体で染色されなかったＣＤ４＋ Ｔ細胞のＰＥ ＭＦＩは、コントロールとして含まれている（唯一の三角形）。
【０２９１】
図４Ｄは、全長ヒトＰＳＧＬ−１を発現するようにトランスフェクトされたヘパラン硫酸突然変異チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（ｐＧＳＤ−６７７株、アメリカンタイプカルチャーコレクション）に対する、ｐＨ６．０でのＶＩＳＴＡ多量体の染色の代表的な２次元フローサイトメトリープロットを示す。染色は、滴定した抗ＶＩＳＴＡ遮断抗体（ｍＡｂ ３）の存在下または非存在下で行った。ＶＩＳＴＡ多量体によって染色されていないままの細胞は、コントロールとして表示されている。ＰＳＧＬ−１抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ カタログ番号５６２７５８）染色をｙ軸にプロットし、ＶＩＳＴＡ多量体染色をｘ軸にプロットした。
【０２９２】
脾臓細胞をＣ５７ＢＬ６／Ｊマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ カタログ番号０００６６４）から収集し、ｐＨ６．０または７．４で、ｍＶＩＳＴＡ ＥＣＤ／ヒトＩｇＧ Ｆｃ（断片、結晶化可能）キメラ融合タンパク質で染色した後、フルオロフォアコンジュゲート抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ カタログ番号１０９−０６５−０９８）を用いて染色した。図４Ｅのヒストグラムによって描かれた結果は、ｍＶＩＳＴＡが、生理的ｐＨ（約ｐＨ７．４）よりもｐＨ６．０でマウス脾臓細胞をより効率的に結合することを示している。濃い灰色から薄い灰色まで、塗りつぶされたヒストグラムは、ｐＨ６．０でのＣＤ８＋ Ｔ細胞、ＣＤ１１ｂ＋骨髄細胞およびＣＤ４＋ Ｔ細胞への結合を示している。塗りつぶされていないヒストグラムは、全脾細胞へのｐＨ７．４での結合を示している。
【０２９３】
実施例５： ＶＩＳＴＡは酸性ｐＨで選択的に細胞：細胞接着と免疫抑制を媒介する。
本実施例は、中性または生理的ｐＨよりも酸性ｐＨで、ＶＩＳＴＡが細胞：細胞の接着を媒介し、Ｔ細胞の活性化をより強力に抑制することを示している。
【０２９４】
酸性ｐＨ適合性フローサイトメトリーに基づく細胞／細胞コンジュゲートアッセイを確立した。全長ヒトＶＩＳＴＡまたはベクターを異所的に発現する２９３Ｔ細胞（不死化ヒト胎児性腎細胞株、ＡＴＣＣ カタログ番号ＣＲＬ−３２１６）を、ＣＦＳＥ（カルボキシフルオレセインサクシニミジルエステル；Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ カタログ番号Ｃ３４５５４）で標識した。ＣＨＯ細胞をＣｅｌｌＴｒａｃＴＭＦａｒ Ｒｅｄ（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ カタログ番号Ｃ３４５６４）で標識した。ベクターまたはＶＩＳＴＡ ２９３Ｔ細胞を、ｐＨ７．０またはｐＨ６．０の緩衝液中でＣＨＯ細胞と１：１の比率で混合し、室温で１時間インキュベートした。ＣＨＯおよび２９３Ｔ細胞／細胞コンジュゲートの形成をフローサイトメトリーによって評価した。図５Ａ−Ｂに示す結果は、ＶＩＳＴＡを発現する２９３Ｔ細胞が優先的に酸性ｐＨでＣＨＯ細胞に接着し、抗ＶＩＳＴＡ遮断抗体（ＶＩＳＴＡ ｍＡｂ ３；白いバー）の封入がＶＩＳＴＡ媒介の細胞／細胞接着を阻害することを実証している。
【０２９５】
酸性ｐＨ適合性Ｔ細胞抑制アッセイを確立した。ＮＦｋＢプロモーター駆動ルシフェラーゼレポーターを発現するＪｕｒｋａｔ細胞（不死化ヒトＴ細胞株、ＡＴＣＣカタログ番号ＴＩＢ−１５２）を、様々なｐＨのＨＢＳＳ＋ＭＥＳ緩衝液中、全長ヒトＶＩＳＴＡと抗ヒトＴ細胞受容体アゴニスト抗体クローンＯＫＴ３の一本鎖可変断片とを異所的に発現している２９３Ｔ細胞（不死化ヒト胎児性腎細胞株、ＡＴＣＣ カタログ番号ＣＲＬ−３２１６）と１０：１のＪｕｒｋａｔ：２９３Ｔ細胞比で共培養した。抗ＶＩＳＴＡ遮断抗体（ＶＩＳＴＡ ｍＡｂ ３）またはアイソタイプ一致非ＶＩＳＴＡ特異的コントロール抗体を１０μｇ／ｍＬで共培養物に添加した。インキュベーション後、ルシフェラーゼ活性を測定することにより、Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞の活性化を定量した（１秒間隔Ｐｒｏｍｅｇａ カタログ番号Ｇ７９４０）。結果を図５Ｃ−Ｄに示す。図５Ｃは、異なるｐＨで抗ＶＩＳＴＡ抗体（四角形）またはコントロール抗体（丸）で処理したＪｕｒｋａｔにおけるルシフェラーゼユニットのプロットを示す。図５Ｄは、試験した各ｐＨにおける、抗ＶＩＳＴＡ抗体で処理した共培養物中のルシフェラーゼシグナルを、コントロール抗体で処理した共培養物中のルシフェラーゼシグナルで割ったプロットを示す。結果は、ＶＩＳＴＡ媒介のＴ細胞抑制が酸性ｐＨで最も強力であることを示している。
【０２９６】
実施例６： 細胞内リサイクリングエンドソームを介したＶＩＳＴＡ輸送
本実施例は、ＶＩＳＴＡが細胞内エンドソーム、特にＲａｂ１１＋リサイクリングエンドソーム内に見られ、エンドソーム輸送により細胞表面との間で再利用され得ることを示している。抗ＶＩＳＴＡ抗体が酸性ｐＨでＶＩＳＴＡに結合する強さは、エンドソーム輸送中にＶＩＳＴＡに結合したままになるその能力に影響を与える。
【０２９７】
単球を、磁気活性化細胞ソーティングによりＰＢＭＣから単離した。次いで、単球および２９３Ｔ細胞の両方を４％パラホルムアルデヒドで固定し、Ｒａｂ５、Ｒａｂ７またはＲａｂ１１について、抗ＶＩＳＴＡ抗体またはコントロール抗体で細胞内染色した。抗ＶＩＳＴＡ抗体と同じアイソタイプの非ＶＩＳＴＡ結合抗体であるコントロール抗体（「ｃＡｂ」）は、ヒトＶＩＳＴＡを発現する単球または２９３Ｔ細胞に検出可能に結合しない。抗ＶＩＳＴＡ抗体およびコントロール抗体は、Ａｌｅｘａ４８８で直接標識した。Ｒａｂ抗体は、Ａｌｅｘａ５９４抗ウサギＩｇ二次抗体を用いて検出した。細胞核を同定するためにＨｏｅｓｃｈｔ ３３３４２染色を行った。画像は、スピニングディスク共焦点顕微鏡を用いて撮影した。図６Ａは、ヒトＶＩＳＴＡを発現する２９３Ｔ細胞内のＶＩＳＴＡ、Ｒａｂ５（初期エンドソームマーカー）、Ｒａｂ７（後期エンドソームマーカー）、およびＲａｂ１１（リサイクリングエンドソームマーカー）の共局在を示す。図６Ｂは、ヒト単球内のＶＩＳＴＡとＲａｂ１１の共局在を示す。細胞内ＶＩＳＴＡは、Ｒａｂ１１＋リサイクリングエンドソームと共局在している。
【０２９８】
エンドソームを経由してリサイクルするＶＩＳＴＡの能力を評価するために、エンドリゾーム依存性抗体薬物コンジュゲート死滅アッセイを、生理的および酸性ｐＨでＶＩＳＴＡ結合特性を変化させた３つの抗ｈＶＩＳＴＡ抗体（ＶＩＳＴＡ ｍＡｂ１、２および３）を用いて実施した。最初にＳＰＲアッセイを実施して、ｐＨ７．４、６．７および６．０における３つのＶＩＳＴＡ抗体全てのｈＶＩＳＴＡ結合プロファイルを比較した。ＶＩＳＴＡ抗体を、固定化されたプロテインＡを含むＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ１００（ＧＥヘルスケア）ＣＭ５バイオセンサー上で捕捉し、次いで、１００ｎＭのｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤ（７×ヒスチジンテールを有する配列番号１のアミノ酸３２−１９３、すなわち、ＡＦＫＶＡＴＰＹＳＬ ＹＶＣＰＥＧＱＮＶＴ ＬＴＣＲＬＬＧＰＶＤ ＫＧＨＤＶＴＦＹＫＴ ＷＹＲＳＳＲＧＥＶＱ ＴＣＳＥＲＲＰＩＲＮ ＬＴＦＱＤＬＨＬＨＨ ＧＧＨＱＡＡＮＴＳＨ ＤＬＡＱＲＨＧＬＥＳ ＡＳＤＨＨＧＮＦＳＩ ＴＭＲＮＬＴＬＬＤＳ ＧＬＹＣＣＬＶＶＥＩ ＲＨＨＨＳＥＨＲＶＨ ＧＡＭＥＬＱＶＱＴＧ ＫＤＡＰＳＮＣＶＶＹ ＰＳＳＳＱＥＳＥＮＩ ＴＡＨＨＨＨＨＨＨ；配列番号３２５）を、３７℃で指定のｐＨでＰＢＳＴランニング緩衝液に流した。参照を差し引いたセンサーグラムを「結合」報告点（ｒｅｐｏｒｔ ｐｏｉｎｔ）に正規化してプロットした。ＶＩＳＴＡ抗体３、「ｍＡｂ ３」、（図６Ｃ、上）は、酸性ｐＨで最大のＶＩＳＴＡ結合障害を示し、これにＶＩＳＴＡ抗体２、「ｍＡｂ ２」（図６Ｃ、中央）が続くが、中程度の障害に留まった。ＶＩＳＴＡ抗体１、「ｍＡｂ １」は、酸性および生理的ｐＨ条件で強いＶＩＳＴＡ結合を維持した（図６Ｃ、下）。
【０２９９】
エンドリゾーム依存性抗体薬物コンジュゲート死滅アッセイは、以下のようにして行った。ヒトＶＩＳＴＡを内因的に発現するＡＭＬ３細胞（不死化ヒト単球細胞株、ＡＴＣＣ ＣＲＬ−９５８９）を、滴定した抗ＶＩＳＴＡ抗体または非ＶＩＳＴＡ特異的コントロール抗体、およびカテプシンＢ感受性リンカーと細胞傷害性チューブリシンペイロードにコンジュゲートした抗ヒトＩｇＧ二次抗体を用いて培養した。カテプシンＢは主に後期エンドソームとリソソームで活性があるため、初期エンドソームおよびリサイクリングエンドソームを経由してＶＩＳＴＡとともに再利用される抗ＶＩＳＴＡ抗体は、低レベルのリンカー切断を経験し、その結果、低レベルの細胞傷害性ペイロードの放出および細胞死を経験することになる。酸性エンドソームでＶＩＳＴＡから解離し、後期エンドソームおよびリソソームにソートされる抗ＶＩＳＴＡ抗体は、より高いレベルのリンカー切断を経験するであろう。細胞生存率は、培養５日後にＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ（登録商標）（Ｐｒｏｍｅｇａ カタログ番号Ｇ７５７３）により測定した。図６Ｄは、このアッセイの結果を示しており、ＡＭＬ３生存率（Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ）はｙ軸にプロットされ、一次抗体濃度はｘ軸にプロットされている。一次抗体：ＶＩＳＴＡ抗体１、逆三角形、０．４８５μｇ／ｍＬ；ＶＩＳＴＡ抗体２、丸、０．０９２μｇ／ｍＬ；ＶＩＳＴＡ抗体３、四角、０．００６μｇ／ｍＬ；コントロール、三角形、１．０８５μｇ／ｍＬの算出されたＥＣ５０。抗体の力価は、酸性ｐＨでの抗ＶＩＳＴＡ抗体の結合と逆相関していた。
【０３００】
酸性ｐＨでの結合が力価の相違の原因であることを確認するために、ＶＩＳＴＡ抗体３の親和性を、酸性ｐＨでそのＶＩＳＴＡ結合能が向上するように最適化した。図６Ｅは、図６Ｃに記載のアッセイ条件を用いて、ＶＩＳＴＡ抗体３のｈＶＩＳＴＡ抗体結合プロファイルをこの変異体であるＶＩＳＴＡ抗体３ｃと比較したＳＰＲアッセイを示す。ＶＩＳＴＡ抗体３は、酸性ｐＨで再びＶＩＳＴＡ結合障害を示したが、一方、変異体ＶＩＳＴＡ抗体３ｃは、酸性および生理的ｐＨで同等のＶＩＳＴＡ結合を示した。図６Ｆは、図６Ｄについて説明した死滅アッセイにおけるＶＩＳＴＡ抗体３ｃ（菱形）の活性を示す。ＶＩＳＴＡ抗体３の酸性ｐＨに最適化された変異体は、元の抗体の３１分の１の力価を示し、酸性ｐＨでの抗ＶＩＳＴＡ抗体結合が損なわれると、ＶＩＳＴＡリサイクル中に抗体結合が失われることを示している。
【０３０１】
これらの知見に基づいて、初期エンドソームとリサイクリングエンドソームを経由してＶＩＳＴＡが細胞表面との間で再利用され細胞表面にリサイクルされるリサイクルモデルが提案される。このモデルは、図６Ｇに描かれている。抗ＶＩＳＴＡ抗体は、これらのエンドソームを経由してＶＩＳＴＡとともに再利用され、標的結合を維持することができる。ただし、酸性ｐＨでのＶＩＳＴＡ結合が損なわれた抗体、特に酸性ｐＨでのオフ速度が速い抗体は、リサイクル中にＶＩＳＴＡから解離し、細胞内に捕えられるかまたは分解され、その結果標的結合が不十分になり、循環している抗体が継続的に消費される可能性がある。対照的に、酸性ｐＨでＶＩＳＴＡに結合し、結合したままの抗体は、特に腫瘍のような酸性の微小環境では、より高レベルの標的結合を維持し、ｉｎ ｖｉｖｏでより長い平均滞留時間を示し得る。
【０３０２】
実施例７： 生理的ｐＨでの結合を欠くＶＩＳＴＡ抗体の優位性
本発明者らは、ＶＩＳＴＡが酸性ｐＨ選択的な免疫受容体であることを示し、酸性ｐＨでよく結合する抗体でＶＩＳＴＡを標的化することの重要性および有用性を実証した。さらに、生理的ｐＨでＶＩＳＴＡに結合しないか、または無視できる程度にしか結合しない抗体は、いくつかの理由から有利である。第一に、循環している骨髄単核細胞、特に単球および好中球上でのＶＩＳＴＡの発現が比較的豊富であるため、生理的ｐＨでＶＩＳＴＡを結合する抗体は、血中で高レベルの標的介在性薬物動態（ＴＭＤＤ）を受ける。この効果は、細胞内エンドソームを介して再利用されるＶＩＳＴＡの性質によって悪化し、抗ＶＩＳＴＡ抗体の内部移行と分解につながる。この二次的効果は、ＶＩＳＴＡのヒスチジンリッチなリガンド界面に結合する抗体に観察されるように、酸性ｐＨでの結合が損なわれた抗体にとって特に問題となる。両方の効果は、循環中の抗ＶＩＳＴＡ抗体の量を減少させ、腫瘍に到達する抗体の量を減少させ、従って、抗体の目的の生物学的活性を減少させる。第二に、生理的ｐＨでＶＩＳＴＡに結合し、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）、または免疫調節ペイロードの送達等のエフェクター機能を有する抗体は、循環している骨髄単核細胞をそれらのエフェクターにさらすことになり、循環している好中球の枯渇または活性化のような望ましくない結果をもたらす可能性がある。したがって、本発明者らは、酸性ｐＨではｈｕＶＩＳＴＡに結合するが、生理的ｐＨでは無視できる程度にしか結合しない抗体が（１）腫瘍などの関連部位での曝露が良好であり、（２）ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、または免疫調節ペイロードの送達のようなエフェクター機能を有する抗体の場合には、毒性が低減されるという二重の利点を有することを発見した。さらに、ＶＩＳＴＡ自体は酸性ｐＨ選択的な免疫受容体であるため、生理的ｐＨでのＶＩＳＴＡのリガンド界面の遮断は、ＶＩＳＴＡ受容体−リガンド活性を調節するためには不要である可能性が高い。したがって、酸性ｐＨではｈｕＶＩＳＴＡに結合するが、生理的ｐＨでは有意には結合しない抗体を、以下に記載するように生成した。
【０３０３】
実施例８： 酸性ｐＨでヒトＶＩＳＴＡに優先的に結合する抗ＶＩＳＴＡ抗体の単離
本実施例は、中性または生理的ｐＨよりも低い（酸性）ｐＨでヒトＶＩＳＴＡに優先的に結合する抗体の生成を説明する
【０３０４】
抗体の抗ＶＩＳＴＡ抗原結合断片のライブラリーを構築し、以下のようにスクリーニングした。全長ヒトＶＩＳＴＡ（ｈＶＩＳＴＡ）で免疫したＨｕＭａｂマウスから単離された遺伝物質を用いて抗体ライブラリーを作製した。これらの抗体はｓｃＦｖとしてフォーマットされ、ｍＲＮＡディスプレイを介して低ｐＨ（ｐＨ６．０）での全長ｈＶＩＳＴＡ結合に対して選択された（Xu L et al. (2002) Chemistry & Biology 9: 933; Roberts RW and JW Szostak (1997) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:12297; Kurz et al. (2000) Nucleic Acids Res. 28(18):E83）。選択出力を次世代シーケンシング（ＮＧＳ）で分析し、低ｐＨでのＶＩＳＴＡ結合の濃縮を示したライブラリーメンバーを特定し、ＩｇＧ １．３（アミノ酸突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＥおよびＧ２３７Ａを持つＩｇＧ１ ＦｃからなるエフェクターレスＩｇＧ１定常領域）として再フォーマットして、ＳＰＲによってＶＩＳＴＡへの結合についてスクリーニングした。
【０３０５】
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析を、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ２００機器（ＧＥヘルスケア）を用いて、酸性および生理的ｐＨでのＶＩＳＴＡ Ａｂの会合速度（ｋａまたはｋｏｎ、１／Ｍｓ単位で定義）、解離速度（ｋｄまたはｋｏｆｆ、ｓ−１単位で定義）および親和定数（ＫＤ、Ｍ単位で定義）を測定するために実施した。プロテインＡ（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ カタログ＃２１１８１）を１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．５）で２０μｇ／ｍｌに希釈し、メーカーのアミンカップリングプロトコル（ＧＥヘルスケア）に従ってＣＭ５バイオセンサーのフローセルに固定化し、フローセルあたり６０００ＲＵのプロテインＡ固定化密度を目標とした。ＳＰＲ実験を、ＰＢＳＴ（１３７ｍＭ塩化ナトリウム、２．７ｍＭ塩化カリウム、１０ｍＭリン酸緩衝液、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）ランニング緩衝液を用いて、ｐＨ７．４および６．０で３７℃で行った。抗体をＰＢＳＴ ｐＨ７．４で２０ｎＭに希釈し、活性バイオセンサーフローセル全体で５μｌ／ｍｉｎで５０秒間捕捉した。５０−０．２ｎＭの一価のｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤ（配列番号３２５）の濃度シリーズをｐＨ７．４および６．０のランニング緩衝液中で調製し、４０μｌ／ｍｉｎで捕捉した抗体に注入して、会合および解離を測定した。１０ｍＭグリシンｐＨ１．５の２つの１５秒の注入を使用して、アッセイサイクルの合間にプロテインＡキャプチャー表面を再生した。速度定数ｋａ（ｋｏｎ）およびｋｄ（ｋｏｆｆ）は、参照フローセルおよび０ｎＭブランク差引センサーグラムから導出し、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ２００評価ソフトウェアｖ．２．０で１：１結合モデルに当てはめた。各ＶＩＳＴＡ抗体について、酸性ｐＨでは遅いオフ速度を示し、生理的ｐＨでは速いオフ速度を示す抗体を同定するために、ｐＨ６でのｋｏｆｆ／ｐＨ７．４でのｋｏｆｆの比率を算出した。
【０３０６】
ＩｇＧ１．３抗体として再フォーマットされた６つの抗体は、ｐＨ６およびｐＨ７．４の両方でほぼ同等の親和性を示した。特に、２つの抗体は、ｐＨ６．０でのオフ速度がｐＨ７．４でのオフ速度よりも遅かった（すなわち、ｐＨ６．０よりもｐＨ７．４でのオフ速度が速かった）。これら２つのｈｕＶＩＳＴＡ抗体の可変領域をＰ１−０６１０１５およびＰ１−０６１０２９と称し、これらの可変領域を含み、ＩｇＧ１．３抗体としてフォーマットされた抗体をそれぞれＰ１−０６１０１５．ＩｇＧ１．３およびＰ１−０６１０２９．ＩｇＧ１．３と称する。Ｐ１−０６１０１５．ＩｇＧ１．３およびＰ１−０６１０２９．ＩｇＧ１．３のｋｏｆｆ速度を表１に示す。
2021518133.tif 000003
【０３０７】
Ｐ１−０６１０１５およびＰ１−０６１０２９の重鎖および軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列は、以下の表２に提供されており、本開示の実施例セクションに続く配列表にも示されている。
2021518133.tif 000004
【０３０８】
実施例９： 酸性ｐＨ選択的抗体を開発するためのＰ１−０６１０１５およびＰ１−０６１０２９抗ＶＩＳＴＡ Ａｂのさらなる操作
本実施例は、ｐＨ７．４に対するｐＨ６．０での結合の間のより高いｋｏｆｆ比を有する抗ｈｕＶＩＳＴＡ可変領域を得るための、実施例２で同定された可変領域Ｐ１−０６１０１５およびＰ１−０６１０２９のさらなる操作を説明する。
【０３０９】
Ｐ１−０６１０１５およびＰ１−０６１０２９のＶＨ ＣＤＲにそれぞれ特異的な変異を導入することにより、２つのライブラリーを構築した。ライブラリーは、低ｐＨでの結合を改善する可能性が最も高いアミノ酸置換、すなわちアスパラギン酸塩、グルタミン酸塩およびヒスチジンの置換のみを可能にした。ライブラリーはまた、各ＣＤＲにおける単一および二重のアミノ酸置換、ならびにＣＤＲ間での組換え（１鎖あたり最大６のアミノ酸置換）も可能にした。図７Ａは、Ｐ１−０６１０２９ライブラリーを作製するためにＰ１−０６１０２９の重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列に導入された突然変異を示す。図は、傾向性の導入を避けるために特定の配列を除外したことを示している（例えばＤＧ）。
【０３１０】
‘０２９および‘０１５ライブラリーを、酵母表面ディスプレイを介してｐＨ６．０で全長ｈＶＩＳＴＡに結合する複数回のラウンドによってスクリーニングした。さらなる選択ラウンドは、ポジティブ選択（ｐＨ６．０でｈｕＶＩＳＴＡに結合）とネガティブ選択（ｐＨ７．４でｈｕＶＩＳＴＡに結合）（図７Ｂに示す）の間で切り替えることによって行われ、ｐＨ７．４でＶＩＳＴＡに結合しなかったライブラリーメンバーは、ネガティブ選択のラウンドで収集された。選択出力をＮＧＳで分析した。選択ラウンド９の後にｐＨ６．０でｈｕＶＩＳＴＡに結合したライブラリーメンバー’０２９を、フローサイトメトリーを介してｐＨ６．０およびｐＨ７．４でのヒトＶＩＳＴＡへの結合について分析した。図７Ｃは、９ラウンドの選択後の変異体プールを示す代表的な二次元フローサイトメトリーのプロットを示す。ＶＩＳＴＡ結合はｙ軸にプロットされ、変異体抗体の発現はｘ軸にプロットされている。様々な抗体濃度とｐＨでの結合データが示されている。結果は、特に２０ｎＭでのヒトＶＩＳＴＡに対する非常に強いｐＨ６選択的結合を実証した。
【０３１１】
‘０２９の追加の子孫クローンを別の方法で‘０２９ライブラリーから単離した。いくつかのクローンは最初の方法で同定されたものと同じであり、９個の追加クローンが単離された。
【０３１２】
さらなる分析のために’０２９ライブラリーから分離された１９のクローンをＩｇＧ１．３抗体として再フォーマットした。これらのクローンの重鎖ＣＤＲにおけるアミノ酸の違いを、’０２９ＶＨＣＤＲにおけるものと比較して、表５に示す。
表５： ’０２９親抗体に由来する抗体のＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３アミノ酸配列（下線で区切られている）
名称        CDR1           CDR2            CDR3         配列番号
(26-35位)    (50-66位)     (99-110位)
P1-061029 GFTLDDYAMH_GINWNSANIGYADSVKG_VPGYSGGWIDAFDV       67
P1-068757 ----E-E---_------EE---------_-----------E-D       71
P1-068759 ----E-E---_--D---E----------_-----------E-D       87
P1-068761 ----E-E---_------EE---------_-----H-----E--       51
P1-068763 ----E-----_--D---E----------_-----H-----E--       91
P1-068765 ---DE-----_------EE---------_-----------E-D       63
P1-068767 ----E-----_--D---E----------_-----------E-D       55
P1-068769 ----E-E---_------DH---------_-----------E-D       83
P1-068771 ----E-E---_------HE---------_-----------E-D       75
P1-068773 ----E-----_--D---D----------_-----------E-D       59
P1-068775 ----E-E---_--D---EE---------_-----H-----E-D       79
P1-069059 ----E-----_------DH---------_-----------E-D     11  
P1-069061 ----E-----_-------E---------_-----------E-D     15
P1-069063 ----E-----_-------E---------_-----------D-E     19
P1-069065 ----E-E---_------DD---------_--------------     23
P1-069067 ----------_------EE---------_-----------D-E     27
P1-069069 ----------_------EE---------_-----------D--     31
P1-069071 ----E-E---_-------D---------_-----E--------     35
P1-069073 ----E-----_--D---D----------_-----------E-D     39
P1-069075 ----E-----_----D--E---------_-----H-----E--     43
P1-069077 ----E-E---_------DE---------_--------------     47
【０３１３】
‘０２９の子孫クローンと親‘０２９抗体（ＩｇＧ１．３抗体としてフォーマットされている）の各調製物のヒトＶＩＳＴＡへの結合を、ｐＨ６．０および７．４で表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）法により測定した。ＳＰＲ分析を行い、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ１００機器（ＧＥヘルスケア）を用いて、酸性および中性ｐＨでのＶＩＳＴＡ ＡｂのｋｏｆｆおよびＫＤ結合親和性を測定した。プロテインＡ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ カタログ＃２１１８１）を１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．５）で２０μｇ／ｍｌに希釈し、メーカーのアミンカップリングプロトコル（ＧＥヘルスケア）に従ってＣＭ５バイオセンサーのフローセルに固定化し、フローセルあたり２０００ＲＵのプロテインＡ固定化密度を目標とした。ＳＰＲ実験を、ＰＢＳＴ（１３７ｍＭ塩化ナトリウム、２．７ｍＭ塩化カリウム、１０ｍＭリン酸緩衝液、０．０５％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０）ランニング緩衝液を用いて、ｐＨ７．４および６．０で３７℃で行った。抗体をＰＢＳＴ ｐＨ７．４で２５ｎＭに希釈し、活性バイオセンサーフローセル全体で５μｌ／ｍｉｎで６０秒間捕捉した。５０−５ｎＭの一価のｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤ（配列番号３２５）の濃度シリーズをｐＨ７．４および６．０のランニング緩衝液中で調製し、４０μｌ／ｍｉｎで捕捉した抗体に注入して、会合および解離を測定した。１０ｍＭグリシンｐＨ１．５の２つの１５秒の注入を使用して、アッセイサイクルの合間にプロテインＡキャプチャー表面を再生した。ｋａ（ｋｏｎ）およびｋｄ（ｋｏｆｆ）は、参照フローセルおよび０ｎＭ参照差引センサーグラムから導出し、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ２００評価ソフトウェアｖ．２．０で１：１結合モデルに当てはめた。親和定数，ＫＤは、各ＶＩＳＴＡ抗体の速度定数ｋｏｆｆ／ｋｏｎの比率として算出された。
【０３１４】
最大の（または大きな）ヒトＶＩＳＴＡ結合応答は、各抗体の５０ｎＭ ＶＩＳＴＡ注入終了時の参照差引「結合」報告点応答と定義され、応答単位（ＲＵ）で報告される。各抗体に対する最大のヒトＶＩＳＴＡ結合応答（ＲＵ）が図７Ｄにプロットされている。平均結合応答（２から４個の複製抗体間）がプロットされ、エラーバーは標準偏差を表す。結果は、’０２９の選択された子孫クローンがｐＨ６．０ではｈＶＩＳＴＡに結合するが、ｐＨ７．４では結合しないことを示している（ｐＨ７．４での結合を表す白丸は、親’０２９クローンを除いて全てグラフの下部に位置している）。
【０３１５】
’０２９およびその子孫のｐＨ６．０におけるｋｏｆｆ速度は、上述の方法を用いてＳＰＲにより決定され、図７Ｅに示されている。図中の破線は’０２９のｋｏｆｆ速度を表し、破線の左側のクローンはｐＨ６．０で親’０２９抗体のそれと比較して遅いｋｏｆｆ速度を有し、右側のクローンはｐＨ６．０で親’０２９抗体のそれと比較して速いｋｏｆｆ速度をｐＨ６．０で有している。
【０３１６】
中性および酸性ｐＨでの’０２９、’７６１および’７６７抗体に対する代表的なｈＶＩＳＴＡ ＳＰＲ結合センサーグラムを図７Ｆに示す。参照を差し引いた５０ｎＭおよび５ｎＭのｈｕＶＩＳＴＡセンサーグラムがプロットしている。中性ｐＨにおいて、’７６１および’７６７で＜１０ＲＵ ＶＩＳＴＡ結合シグナルが観察されたため、’７６１と’７６７のｋｏｆｆとＫＤを適切に測定し、’０２９と比較するためには、生理的ｐＨでのμＭ ＶＩＳＴＡ濃度を用いたＳＰＲカイネティクスアッセイが必要であった。
【０３１７】
このアッセイのために、’０２９、’７６１および’７６７は、ｈＩｇＧ１ｆアイソタイプとして再フォーマットされ、ｈＩｇＧ１．３ｆ Ｆｃと比較するために、標準的なｈＩｇＧ１ｆおよびｈＩｇＧ１ｆアフコシル化フォーマットの両方で発現された。ＳＰＲカイネティクスアッセイを行い、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ１００機器（ＧＥヘルスケア）を用いて、酸性および生理的ｐＨでのＶＩＳＴＡ ＡｂのｋｏｆｆおよびＫＤ結合親和性測定を測定した。プロテインＡ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ カタログ＃２１１８１）を１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．５）で２０μｇ／ｍｌに希釈し、メーカーのアミンカップリングプロトコル（ＧＥヘルスケア）に従ってＣＭ５バイオセンサーのフローセルに固定化し、フローセルあたり２０００ＲＵのプロテインＡ固定化密度を目標とした。ＳＰＲ実験を、ＰＢＳＴ（１３７ｍＭ塩化ナトリウム、２．７ｍＭ塩化カリウム、１０ｍＭリン酸緩衝液、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）ランニング緩衝液を用いて、ｐＨ７．４および６．０で３７℃で行った。抗体をＰＢＳＴ ｐＨ７．４で２５ｎＭに希釈し、活性バイオセンサーフローセル全体で５μｌ／ｍｉｎで４５秒間捕捉した。１６００−０．７８ｎＭ（ｐＨ７．４）および１００−０．７８ｎＭ（ｐＨ６．０）の一価のｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤ（配列番号３２５）の濃度シリーズをランニング緩衝液中で調製し、４０μｌ／ｍｉｎで捕捉した抗体に注入して、会合および解離を測定した。１０ｍＭグリシンｐＨ１．５の２つの１５秒の注入を使用して、アッセイサイクルの合間にプロテインＡキャプチャー表面を再生した。速度定数ｋａ（ｋｏｎ）およびｋｄ（ｋｏｆｆ）は、参照フローセルおよび０ｎＭブランク差引センサーグラムから導出し、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ２００評価ソフトウェアｖ．２．０で１：１結合モデルに当てはめた。親和定数，ＫＤは、各ＶＩＳＴＡ抗体の速度定数の比率ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして算出された。ｐＨ７．４／ｐＨ６．０でのｋｏｆｆとＫＤの比率を算出して、酸性ｐＨでのオフ速度および親和性の向上を生理的ｐＨと比較した。５０ｎＭのｈＶＩＳＴＡを使用して’７６１および’７６７の中性ｐＨ結合速度定数を決定することは以前はできなかったが（図７Ｄと７Ｆ）、中性ｐＨのＶＩＳＴＡ濃度範囲を１．６μＭに上げると、１：１の結合モデルに当てはまるこれらのクローンの結合応答（＞１０ＲＵ）が生じた。これらの酸性選択的ＶＩＳＴＡ抗体のカイネティックスデータは、表６に示されている。‘０２９親は、両方のｐＨで同等のｋｏｆｆを示すが、‘７６１および‘７６７は、ｋｏｆｆではｐＨ７．４よりもｐＨ６に対して１０倍以上の選択性を示し、ＫＤではｐＨ７．４よりもｐＨ６に対して２０００倍以上の選択性を示す。ヒトＶＩＳＴＡ結合速度定数は、ｈＩｇＧ１．３ｆ、ｈＩｇＧ１ｆ、およびアフコシル化ｈＩｇＧ１ｆアイソタイプ変異体間で保存されている。
2021518133.tif 000005
【０３１８】
Ｐ１−０６１０２９（「‘０２９」）、Ｐ１−０６８７６１（「‘７６１」）およびＰ１−０６８７６７（「‘７６７」）（ＩｇＧ１．３抗体として）のヒトＶＩＳＴＡ結合速度を、ｐＨ７．４とｐＨ６．０の間のｐＨ値、すなわち、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ１００機器（ＧＥヘルスケア）を用いてｐＨ６．９とｐＨ６．４５で測定した。プロテインＡ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ カタログ＃２１１８１）を１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．５）で２０μｇ／ｍｌに希釈し、メーカーのアミンカップリングプロトコル（ＧＥヘルスケア）に従ってＣＭ５バイオセンサーのフローセルに固定化し、フローセルあたり２０００ＲＵのプロテインＡ固定化密度を目標とした。アッセイを、ＰＢＳＴ（１３７ｍＭ塩化ナトリウム、２．７ｍＭ塩化カリウム、１０ｍＭリン酸緩衝液、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）ランニング緩衝液を用いて、ｐＨ７．４、６．９、６．４５および６．０で３７℃で行った。抗体をＰＢＳＴ ｐＨ７．４で２５ｎＭに希釈し、活性バイオセンサーフローセル全体で５μｌ／ｍｉｎで４５秒間捕捉した。１００−０．７８ｎＭの一価のｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤ（配列番号３２５）の濃度シリーズをｐＨ７．４、６．９、６．４５および６．０のランニング緩衝液中で調製し、４０μｌ／ｍｉｎで捕捉した抗体に注入して、会合および解離を測定した。１０ｍＭグリシンｐＨ１．５の２つの１５秒の注入を使用して、アッセイサイクルの合間にプロテインＡキャプチャー表面を再生した。ｋａ（ｋｏｎ）およびｋｄ（ｋｏｆｆ）は、参照フローセルおよび０ｎＭ参照差引センサーグラムから導出し、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ２００評価ソフトウェアｖ．２．０で１：１結合モデルに当てはめた。親和定数ＫＤは、各ＶＩＳＴＡ抗体の速度定数の比率ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして算出された。緩衝液のｐＨが生理的ｐＨに移行するとＶＩＳＴＡのｋｏｆｆとＫＤがどのように変化するかを評価するために、ｐＨ６．０に対する各ｐＨでのｋｏｆｆとＫＤの比率を算出した結果を表７に示す。‘０２９親は、試験された各ｐＨで一貫したｋｏｆｆを示したが、’７６１および’７６７子孫は、ｐＨ６．０と比較してｐＨ６．９で１０倍以上のＶＩＳＴＡ ｋｏｆｆおよび１００分の１以下のＶＩＳＴＫＤを示した。緩衝液のｐＨが酸性から生理的ｐＨに移行すると、ＶＩＳＴＡ ｋｏｆｆとＫＤの両方が’７６１と’７６７で弱まる。比較のための’７６１および’７６７の生理的ｐＨデータは、表７から参照され、アスタリスク（＊）が付いている。
2021518133.tif 000006
【０３１９】
表７のデータは、ｐＨ６．０と比較してｐＨ６．４５における’７６１および’７６７のｈＶＩＳＴＡへの結合親和性が１０分の１以下；ｐＨ６．０と比較してｐＨ６．９における’７６１および’７６７のｈＶＩＳＴＡへの結合親和性が１００分の１以下；およびｐＨ６．０と比較してｐＨ７．４における’７６１および’７６７のｈＶＩＳＴＡへの結合親和性が１０００分の１以下であることを示している。
【０３２０】
‘０１５ライブラリーはまた、ＶＩＳＴＡへのｐＨ６選択的な結合に対するわずかな選好性を示した。‘０１５ＶＨ ＣＤＲに対する子孫クローンのアミノ酸の違いを表８に示す。上記の‘０２９分析について記載したのと同じ方法を用いて、ｐＨ６．０および７．４での’０１５子孫クローンおよび親’０１５（全てＩｇＧ１．３抗体として）の各々の複数の調製物のヒトＶＩＳＴＡへの結合をＳＰＲを介して測定し、結果を表８に示す。
表８： ’０１５親抗体に由来する抗体のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３アミノ酸配列（下線で区切られている）
名称        CDR1            CDR2               CDR3         配列番号
(26-35位)    (50-66位)       (99-110位)
P1-061015  GFTFSSYAMH_IIWYDGSNKYYADSVKG_DSGFYSSYYFDY       95
P1-068736  -----E----_-D-------D-------_-----D-----D       107
P1-068738  -----E--H-_---D----H--------_-----ED-----       131
P1-068740  -----D----_-------D-D-------_-----D-----D       115
P1-068742  -----D----_-------D-D-------_-----ED-----       119
P1-068744  -----E----_H---------E------_-----E-----E       103
P1-068746  ----------_--------HH-------_-----D------       123
P1-068748  -----HH---_--------DD-------_-----D------       99
P1-068750  -----D-D--_E--D------------_-EE---------        127
P1-068752  ----------_E--------D-------_-----D-----E       111
P1-068754  -----D-D--_E--D-------------_----H-D-----      135
【０３２１】
ＳＰＲによって決定されたｐＨ６．０および７．４での’０２９および’０１５とその子孫クローンのｈｕＶＩＳＴＡへの結合速度の概要を表９および１０に示す。
2021518133.tif 000007
2021518133.tif 000008
2021518133.tif 000009
【０３２２】
このようにして、ｐＨ６．０では‘０２９親と比較してＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに対するｋｏｆｆを維持または改善する複数の‘０２９子孫クローンを同定し、また、生理的ｐＨではｋｏｆｆが弱くなるかまたはＶＩＳＴＡとの結合が失われたりすることが実証された。‘０１５子孫は酸性ｐＨでＶＩＳＴＡ−ＥＣＤに選択的に結合し、中性ｐＨではＶＩＳＴＡとの結合は検出されなかったが、ｐＨ６．０で全ての’０１５子孫が’０１５親と比較してより速いｋｏｆｆを示した。
【０３２３】
実施例１０： 酸性ｐＨ選択的‘０２９子孫は、ＶＩＳＴＡ遮断活性を維持したまま、酸性ｐＨ依存性の細胞結合およびエフェクター機能を発揮する。
全長ヒトＶＩＳＴＡ（配列番号１、Ｄ１８７Ｅ置換を含む）を異所的に発現するように操作されたＲａｊｉ細胞へのクローン’７６１および’７６７のｐＨ依存性の結合を測定した。この実験では、’７６１および’７６７をＩｇＧ１．３抗体としてフォーマットし、抗ヒトＩｇＧ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ カタログ番号１０９−０６５−０９８）によって結合を測定した。図８Ａ−８Ｂに示す結果は、クローン’７６１（図８Ａ）およびクローン’７６７（図８Ｂ）が、ｐＨ７．２および８．１では結合が不十分だが、酸性ｐＨ、特にｐＨ６．０、６．１、６．２および６．４では良好であることを示している。結合ＭＦＩはｙ軸にプロットされ一次抗体濃度は対数スケールでｘ軸にプロットされている。非線形回帰も示されている。
【０３２４】
図８Ｃは、異なるｐＨにおいて３１２５ｎｇ／ｍＬでヒトＶＩＳＴＡを発現するＲａｊｉ細胞に結合するＰ１−０６８７６７（丸）およびアイソタイプ一致の非特異的コントロール抗体（三角形）を測定する図８Ａ−Ｂに記載の実験からのデータを示す。Ｐ１−０６８７６７の結合の５０％が失われるｐＨである「ｐＨ５０」は、約６．６である。結合ＭＦＩはｙ軸にプロットされ、緩衝液ｐＨはｘ軸にプロットされている。非線形回帰も示されている。
【０３２５】
図８Ｄは、ヒト単球に結合している、アイソタイプが一致する非特異的コントロール抗体（ｐＨ７．０が塗りつぶされた円で、ｐＨ６．０が塗りつぶされていない円）、抗ＶＩＳＴＡ ｍＡｂ ２（「コントロール」、図６Ｃ参照、ｐＨ７．０が塗りつぶされた四角形で、ｐＨ６．０が塗りつぶされていない四角形）、Ｐ１−０６８７６１（ｐＨ７．０が塗りつぶされた三角形で、ｐＨ６．０が塗りつぶされていない三角形）およびＰ１−０６８７６７（ｐＨ７．０が塗りつぶされた逆三角形で、ｐＨ６．０が塗りつぶされていない逆三角形）のＭＦＩを示す。図８Ａ−Ｂに記載されているように結合が検出された。非ｐＨ選択的ＶＩＳＴＡコントロール抗体（ｍＡｂ ２）は、両方のｐＨで単球に結合した。両方の操作された酸性ｐＨ選択的抗体は、ｐＨ６．０で単球によく結合したが、ｐＨ７．０で非特異的アイソタイプ一致コントロールよりも良好には結合しなかった。したがって、クローン‘７６１および‘７６７は、中性ｐＨではＶＩＳＴＡに弱い結合を示すかまたは全く結合せず、代わりに酸性ｐＨで細胞上のＶＩＳＴＡに選択的に結合する。
【０３２６】
図８Ｅは、‘０２９（四角形）、‘７６１（三角形）および‘７６７（逆三角形）による、組換えＶＩＳＴＡ多量体の活性化ヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞へのｐＨ６．０での結合の同等の遮断を示す一方、非ＶＩＳＴＡ特異的コントロール抗体（丸）はＶＩＳＴＡ結合を遮断しなかったことも示している。この遮断アッセイは、実施例４に記載されているように実施した。これらのデータは、酸性ｐＨ選択的に操作されたＶＩＳＴＡ抗体は、酸性ｐＨでＶＩＳＴＡ受容体リガンド結合を遮断することが依然可能であることを示している。
【０３２７】
生理的ｐＨでの抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を介した標的細胞（図８Ａ−Ｂで説明したヒトＶＩＳＴＡを発現する同じＲａｊｉ細胞）のＮＫ細胞特異的な溶解を、Ｐ１−０６１０２９．ＩｇＧ１ｆ、Ｐ１−０６８７６１．ＩｇＧ１ｆ、Ｐ１−０６８７６７．ＩｇＧ１ｆ抗体、非ＶＩＳＴＡ特異的抗体、および非ＶＩＳＴＡ特異的ネガティブコントロール抗体について測定し、全てアフコシル化ＩｇＧ１抗体として発現させた。ＮＫ細胞を、ネガティブビーズセレクション（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ カタログ番号１９０５５）によりＰＢＭＣから濃縮し、１Ｍヒドロコルチゾン（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ カタログ番号０７９０４）および５００Ｕ／ｍＬ組換えヒトＩＬ−２（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ カタログ番号２００−０２）を補充したＭｙｅｌｏｃｕｌｔＴＭ培地（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ カタログ番号０５１５０）中で一晩培養した。アッセイの日に、ヒトＶＩＳＴＡを異所的に発現するＲａｊｉ細胞（図８Ａ−Ｂで説明）をＣａｌｃｅｉｎ ＡＭ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ カタログ番号Ｃ３１００ＭＰ）で標識し、ＮＫ対標的細胞比１０：１で培養したＮＫ細胞、ならびにＰ１−０６１０２９ＩｇＧ１ｆ、Ｐ１−０６８７６１．ＩｇＧ１ｆ、Ｐ１−０６８７６７．ＩｇＧ１ｆ抗体、非ＶＩＳＴＡ特異的抗体および非ＶＩＳＴＡ特異的ネガティブコントロール抗体と一緒に生理的ｐＨで２時間共培養した。特異的な溶解は、上清の蛍光シグナル（ＥｎＶｉｓｉｏｎＴＭプレートリーダー）から補間した。抗体を用いない共培養から自然溶解シグナルが得られ、最大溶解シグナルを、Ｄｅｌｆｉａ（登録商標）溶解緩衝液（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒカタログ番号４００５−００１０）を用いた標的細胞の溶解によって決定した。抗体特異的溶解は、観察された溶解の割合を、最大溶解シグナルから自然溶解シグナルを差し引いた値で割って算出した。
【０３２８】
図８Ｆに提供している結果は、生理的ｐＨでの抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を媒介する際に、Ｐ１−０６１０２９およびポジティブコントロールと比較して、Ｐ１−０６８７６１．ＩｇＧ１ｆおよびＰ１−０６８７６７．ＩｇＧ１ｆの力価が減少していることを示す。
【０３２９】
実施例１１： ＶＩＳＴ抗体のｃｙｎｏ ＰＫ
ヒト抗ナイーブのカニクイザルに、酸性ｐＨと中性ｐＨとで同等に結合するＶＩＳＴＡ抗体（「コントロール」；ｍＡｂ２）、酸性ｐＨでの結合が損なわれたＶＩＳＴＡ抗体（「酸性ｐＨ感受性」；ｍＡｂ３）、酸性ｐＨ選択的抗体‘７６７のいずれかを５ｍｐｋの単回投与で静脈内注射し、これらの抗体のｃｙｎｏ ＰＫを決定した。
【０３３０】
本実施例で使用した抗体のＳＰＲ結合速度は表１１に示しているが、以下のように決定した。酸性ｐＨ選択的抗体およびコントロール抗ＶＩＳＴＡ抗体に対するｃｙｎｏ ＶＩＳＴＡ交差反応性を酸性および中性ｐＨで評価した。ＶＩＳＴＡ Ａｂに対する結合親和性測定は、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ１００機器（ＧＥヘルスケア）を用いて実施した。プロテインＡ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ カタログ番号＃２１１８１）を１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．５）で２０μｇ／ｍｌに希釈し、メーカーのアミンカップリングプロトコル（ＧＥヘルスケア）に従ってＣＭ５バイオセンサーのフローセルに固定化し、フローセルあたり２０００ＲＵのプロテインＡ固定化密度を目標とした。アッセイを、ＰＢＳＴ（１３７ｍＭ塩化ナトリウム、２．７ｍＭ塩化カリウム、１０ｍＭリン酸緩衝液、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）ランニング緩衝液を用いて、ｐＨ７．４および６．０で３７℃で行った。抗体（ＩｇＧ１．３抗体としてフォーマット）をＰＢＳＴ ｐＨ７．４で２５ｎＭに希釈し、活性バイオセンサーフローセル全体で５μｌ／ｍｉｎで４５秒間捕捉した。１６００−０．７８ｎＭ（ｐＨ７．４および１００−０．７８ｎＭ（ｐＨ６．０）の一価ｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤ（配列番号３２５）およびｃｙｎｏ ＶＩＳＴＡ−ＥＣＤ（ＡＦＫＶＡＴＬＹＳＬ ＹＶＣＰＥＧＱＮＶＴ ＬＴＣＲＶＦＧＰＶＤ ＫＧＨＤＶＴＦＹＫＴ ＷＹＲＳＳＲＧＥＶＱ ＴＣＳＥＲＲＰＩＲＮ ＬＴＦＱＤＬＨＬＨＨ ＧＧＨＱＡＡＮＴＳＨ ＤＬＡＱＲＨＧＬＥＳ ＡＳＤＨＨＧＮＦＳＩ ＴＭＲＮＬＴＬＬＤＳ ＧＬＹＣＣＬＶＶＥＩＲＨＨＨＳＥＨＲＶＨ ＧＡＭＥＬＱＶＱＴＧ ＫＤＡＰＳＳＣＶＡＹ ＰＳＳＳＱＥＳＥＮＩ ＴＡＨＨＨＨＨＨＨ；（配列番号３２６）の濃度シリーズをランニング緩衝液中で調製し、４０μｌ／ｍｉｎで捕捉した抗体に注入し、会合および解離を測定した。１０ｍＭグリシンｐＨ１．５の２つの１５秒の注入を使用して、アッセイサイクルの合間にプロテインＡキャプチャー表面を再生した。速度定数ｋａ（ｋｏｎ）およびｋｄ（ｋｏｆｆ）は、参照フローセルおよび０ｎＭブランク差引センサーグラムから導出し、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ２００評価ソフトウェアｖ．２．０で１：１結合モデルに当てはめた。親和定数ＫＤは、各ＶＩＳＴＡ抗体の速度定数の比率ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして算出された。ｐＨ７．４／ｐＨ６．０でのｋｏｆｆとＫＤの比率を算出して、中性ｐＨと比較した酸性ｐＨでのオフ速度および親和性の違いを表１１に示す。試験した全ての抗ＶＩＳＴＡ抗体は、試験した両方のｐＨで同等〈２倍以内）ヒトおよびｃｙｎｏ ＶＩＳＴＡ速度論的結合パラメーターを示し、ｃｙｎｏ ＶＩＳＴＡとの交差反応性を確認した。両方の抗ＶＩＳＴＡコントロール抗体は、酸性ｐＨと比較して、生理的ｐＨで改善されたｋｄと強いＫＤを示し、酸性ｐＨ感受性のコントロール抗体は、コントロール抗体と比較して酸性ｐＨでより速いＶＩＳＴＡ ｋｄを示した。
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【０３３１】
ヒト抗体ナイーブのカニクイザルを、ＶＩＳＴＡ ｍＡｂ２（「コントロール」）、ＶＩＳＴＡ ｍＡｂ３（「酸性ｐＨ感受性」）、Ｐ１−０６８７６７．ＩｇＧ１．３のいずれかを５ｍｐｋの単回投与で静脈内に注入した。注入後の各抗体の血清濃度を図９に示す。Ｐ１−０６８７６７．ＩｇＧ１．３およびコントロール抗ＶＩＳＴＡ抗体の平均滞留時間はそれぞれ７１７時間と２２時間であり、酸性ｐＨ選択性がＶＩＳＴＡ抗体の標的介在性薬物動態（ＴＭＤＤ）を大幅に減少させていることが示された。コントロール抗体（ｍＡｂ ２）および酸性ｐＨ感受性抗体（ｍＡｂ ３）は、生理的ｐＨで同等にＶＩＳＴＡを結合するが、酸性ｐＨ感受性抗体の方が平均滞留時間が７．６時間と短く、実施例６および７で説明したようなＶＩＳＴＡ抗体のリサイクルに対する酸性ｐＨ結合の重要性を実証した。この結果は、酸性ｐＨ選択的抗体が優れたＰＫを有し、したがって腫瘍または他の微小環境における標的結合をより容易に達成することを示している。
【０３３２】
実施例１２： ｐＨ選択的な’０２９子孫は高ｐＩタンパク質と非特異的に結合しない。
ＶＩＳＴＡおよび他の高ｐＩタンパク質に対する‘０２９、‘７６１および‘７６７クローンの結合特異性を、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ１００機器（ＧＥヘルスケア）を用いて、中性および酸性ｐＨでＳＰＲにより評価した。プロテインＡ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ カタログ＃２１１８１）を１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．５）で２０μｇ／ｍｌに希釈し、メーカーのアミンカップリングプロトコル（ＧＥヘルスケア）に従ってＣＭ３バイオセンサーのフローセルに固定化し、フローセルあたり８００ＲＵのプロテインＡ固定化密度を目標とした。ＳＰＲ実験を、ＰＢＳＴ（１３７ｍＭ塩化ナトリウム、２．７ｍＭ塩化カリウム、１０ｍＭリン酸緩衝液、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）ランニング緩衝液を用いて、ｐＨ７．４および６．０で２５℃で行った。抗体をＰＢＳＴ ｐＨ７．４で５０ｎＭに希釈し、活性バイオセンサーフローセル全体で５μｌ／ｍｉｎで６０秒間捕捉した。１００−１０ｎＭの一価のｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤ（配列番号３２５）、アビジン（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ カタログ＃２１１２８）、サイトクロムＣ（Ｓｉｇｍａ カタログ＃Ｃ２８６７）、ＢＳＡ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ カタログ＃１２６５９３）、および一価のコントロール抗原（「Ａｇ」）の濃度シリーズをｐＨ７．４および６．０のランニング緩衝液中で調製し、捕捉した抗体に５０μｌ／ｍｉｎで注入して結合特異性を評価した。１０ｍＭグリシンｐＨ１．５の２つの１５秒の注入を使用して、アッセイサイクルの合間にプロテインＡキャプチャー表面を再生した。Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ２００評価ソフトウェアｖ．２．０を使用して、参照フローセルと０ｎＭブランク差引センサーグラムを検査した。結果を１２に示す。
2021518133.tif 000011
【０３３３】
表１２において、試料の注入終了時に＞１０ＲＵ ＳＰＲ結合応答と定義される特異的結合は、塗りつぶされた灰色のボックスによって示されている。「抗Ａｇ」は、ＶＩＳＴＡ結合コントロールＡｂである。‘０２９クローンは、酸性および中性ｐＨにおいてＶＩＳＴＡに特異的であった。‘０２９子孫クローン７６１および‘７６７は、酸性ｐＨにおいてＶＩＳＴＡに対して特異的であったが、コントロール抗体もまた抗原特異性を維持した。ｐＩコントロールタンパク質のプロテインＡ参照表面への非特異的結合（「ＮＳＢ」）は、このアッセイでは観察されなかった。
【０３３４】
したがって、‘７６１および’‘７６７のＶＨ ＣＤＲに導入された荷電アミノ酸は、これらの抗体を、アビジンおよびサイトクロムＣなどの他の高ｐＩタンパク質、またはＢＳＡなどの低ｐＩタンパク質に静電的に結合させることはない。
【０３３５】
実施例１３： 抗体‘７６１および‘７６７によるＴ細胞活性化の阻害
本実施例は、Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞活性化のｈＶＩＳＴＡ阻害を遮断する抗体’７６１および’７６７の能力を決定するために実施することができるアッセイを記載している。
【０３３６】
実施例５に記載したのと同じアッセイを使用する。簡潔には、ＮＦｋＢルシフェラーゼレポーターを発現するＪｕｒｋａｔ（ヒトＴ細胞株）細胞を、ヒトＶＩＳＴＡを発現する２９３Ｔ細胞および抗ヒトＴ細胞受容体アゴニスト抗体ＯＫＴ３の一本鎖可変断片と一緒に様々なｐＨで共培養する。抗ＶＩＳＴＡ抗体’７６１および’７６７またはアイソタイプが一致する非ＶＩＳＴＡ特異的コントロール抗体を共培養細胞に加える。Ｊｕｒｋａｔ活性化は、ルシフェラーゼユニットとして、およびコントロールと比較した抗ＶＩＳＴＡ処理によるルシフェラーゼシグナルの倍増として示される。
【０３３７】
実施例１４： 突然変異解析により、ＶＩＳＴＡ抗体にｐＨ依存性の結合特性を与える重要な残基が同定された。
抗体Ｐ１−０６８７６１．ＩｇＧ１．３およびＰ１−０６８７６７．ＩｇＧ１．３は、Ｐ１−０６１０２９からの５−６個の突然変異を含む（表７）。突然変異解析は、ＶＩＳＴＡ抗体のｐＨ依存性特性を付与するのに重要な残基を同定するために実施された。このように、Ｐ１−０６８７６１およびＰ１−０６８７６７のＮ−１（Ｐ１−０６１０２９への１アミノ酸の復帰）およびＮ−２（Ｐ１−０６１０２９への２アミノ酸の復帰）変異体のパネルを合成し、ＩｇＧ１．３として発現させ、ｐＨ６、ｐＨ６．７およびｐＨ７．４でのｈｕＶＩＳＴＡへのそれらの結合について解析した。
【０３３８】
結合速度は、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ１００機器（ＧＥヘルスケア）を用いて測定した。プロテインＡ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ カタログ＃２１１８１）を１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．５）で２０μｇ／ｍｌに希釈し、メーカーのアミンカップリングプロトコル（ＧＥヘルスケア）に従ってＣＭ５バイオセンサーのフローセルに固定化し、フローセルあたり２０００ＲＵのプロテインＡ固定化およびｋｄ（ｋｏｆｆ）は、参照フローセルおよび０ｎＭブランク差引センサーグラム密度を目標とした。アッセイを、ＰＢＳＴ（１３７ｍＭ塩化ナトリウム、２．７ｍＭ塩化カリウム、１０ｍＭリン酸緩衝液、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）ランニング緩衝液を用いて、ｐＨ７．４、６．７および６．０で３７℃で行った。抗体をＰＢＳＴ ｐＨ７．４で２５ｎＭに希釈し、活性バイオセンサーフローセル全体で５μｌ／ｍｉｎで４０秒間捕捉した。１００−１０ｎＭの一価のｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤ（配列番号３２５）の濃度シリーズをｐＨ７．４および６．０のランニング緩衝液中で調製し、４０μｌ／ｍｉｎで捕捉した抗体に注入して、会合および解離を測定した。１０ｍＭグリシンｐＨ１．５の２つの１５秒の注入を使用して、アッセイサイクルの合間にプロテインＡキャプチャー表面を再生した。速度定数ｋａ（ｋｏｎ）およびｋｄ（ｋｏｆｆ）は、参照フローセルおよび０ｎＭブランク差引センサーグラムから導出し、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ２００評価ソフトウェアｖ．２．０で１：１結合モデルに当てはめた。
【０３３９】
親和定数ＫＤは、各ＶＩＳＴＡ抗体の速度定数の比率ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして算出された。％Ｒｍａｘは、ｐＨが抗体のＶＩＳＴＡに対する結合能にどのように影響するかを比較するために算出され、予想最大ＶＩＳＴＡ結合能に対する測定された最大ＶＩＳＴＡ結合能を表す。％Ｒｍａｘは、予想ＶＩＳＴＡ結合応答（Ｒｅｘｐ）に対する各抗体の１００ｎＭのＶＩＳＴＡ注入の終了時の参照差引された「結合」報告点応答（Ｒｍａｘ）の比率と定義される。Ｒｅｘｐは、Ｒｅｘｐ＝［（ＶＩＳＴＡ−ＥＣＤ分子量／ｍＡｂ分子量）ｘ（ｍＡｂ「捕捉」報告点応答（ＲＵ）］ｘｍＡｂあたりの２結合部位として算出される。
【０３４０】
Ｐ１−０６８７６１復帰変異体について得られたＳＰＲの結果を、ｐＨ６．０のｋｏｆｆを遅いものから速いものまでランク付けして、図１０Ａに示す。表中、１００ｎＭのｈＶＩＳＴＡに対して弱い応答しか示さないかまたは結合応答を全く示さない（＜１０ＲＵ）抗体は、非結合（ＮＢ）として分類した。これらの結果は、これらのＰ１−０６１０２９親配列への復帰が生理的ｐＨ（％Ｒｍａｘ＞１０）での有意なｈＶＩＳＴＡ結合を可能にしたことから、３２位のＥ（すなわち’７６１のＶＨ ＣＤＲ１のアミノ酸残基７）と１００ｆ（’７６１のＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸残基１２）の両方が酸性ｐＨ選択性を維持するために必要であることを示している。さらなる解析により、Ｅ５５Ａ（’７６１のＶＨ ＣＤＲ２におけるアミノ酸残基６）の復帰を有する変異体は、酸性ｐＨ選択性を維持し、Ｐ１−０６８７６１の２倍以内で同等の結合速度を示したことが明らかになった。対照的に、Ｈ１００Ｇ、Ｅ５６ＮおよびＥ３０Ｄ（それぞれ’７６１のＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸残基１２、ＶＨ ＣＤＲ２のアミノ酸残基７およびＶＨ ＣＤＲ１のアミノ酸残基４）を持つ変異体は酸性ｐＨでの選択性を維持していたが、これらのｍＡｂはまた、酸性ｐＨでＰ１−０６８７６１と比較して約３倍速いｋｏｆｆを示し、酸性ｐＨでのこれらの変異体のオフ速度をＰ１−０６１０２９親クローンに近づけた。このように、元のＰ１−０６１０２９クローンにＧ１００Ｈ、Ｎ５６Ｅおよび／またはＤ３０Ｅ突然変異を加えることは、酸性選択的なＰ１−０６８７６１クローンで観察された酸性ｐＨのＶＩＳＴＡ親和性の改善に寄与した。
【０３４１】
Ｐ１−０６８７６７復帰変異体について得られたＳＰＲの結果を、ｐＨ６．０のｋｏｆｆを遅いものから速いものまでランク付けして、図１０Ｂに示す。これらの結果は、１０２位のＤ（すなわち’７６７のＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸残基１４）が酸性ｐＨ選択性を維持するために必要であり、Ｄ１０２ＶのＰ１−０６１０２９親配列への復帰が中性ｐＨでの有意なｈＶＩＳＴＡ結合（％Ｒｍａｘ＞１０）を可能にしたことを示している。さらなる解析により、Ｅ３０Ｄ、Ｄ５２ＮおよびＥ５５Ａ（’７６７のＶＨ ＣＤＲ１のアミノ酸残基４、ＶＨ ＣＤＲ２のアミノ酸残基３およびＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸残基６）の復帰を有する変異体は、酸性ｐＨ選択性を維持し、Ｐ１−０６８７６７の２倍以内で同等のｐＨ６．０結合速度を示したことが明らかになった。対照的に、Ｅ１００ｆＦ（’７６７のＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸残基１２）の復帰を有する変異体は、酸性ｐＨでのｋｏｆｆがＰ１−０６８７６７と比較して３倍以上速いにもかかわらず、酸性ｐＨ選択性を維持した。注目すべきことに、Ｅ１００ｆＦの復帰を有する変異体は、親ｍＡｂ Ｐ１−０６１０２９と比較して酸性ｐＨでさらに速いｋｏｆｆを示した。
【０３４２】
得られた確証的速度論的結合データは、（実施例９に記載の方法を用いて）いくつかの復帰変異体で得られたものであり、表２２および２３に示している。
【０３４３】
このように、Ｐ１−０６１０２９（ｐＨ耐性）に対するＰ１−０６８７６１およびＰ１−０６８７６７（酸性ｐＨ選択的）の復帰突然変異体の概要は、表１３に示す通りである（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３はアンダースコア下線で区切られている）。
表１３：                                                配列番号
P1-061029 GFTLDDYAMH_GINWNSANIGYADSVKG_VPGYSGGWIDAFDV   67 
P1-068761 ....E.E..._......EE........._.....H.....E.. 51
P1-068767 ....E....._..D...E.........._...........E.D   55
アミノ酸位置26-35        50-66            99-110
【０３４４】
表１３のＰ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７６１およびＰ１−０６８７６７についての上記ＶＨ ＣＤＲ配列は、それぞれ配列番号６７、５１、５５のアミノ酸（「アミノ酸位置」）２６−３５、５０−６６、９９−１１０にある。酸性ｐＨ選択性に必要な主要な突然変異は太字で示され、Ｐ１−０６８７６１およびＰ１−０６８７６７と比較してｐＨ６．０ｋｄに３倍以上の影響を与える突然変異には下線が引かれている。
【０３４５】
次に、突然変異Ｆ１００ｆＥ、Ｖ１０２ＤおよびＹ３２Ｅを’０２９に単独でまたは一緒にして導入し、これらのアミノ酸置換が’０２９をｐＨ選択的にするのに十分であるかどうかを決定した。抗体Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ（Ｐ１−０７２０００）；Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ（Ｐ１−０７２００２）；Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ（Ｐ１−０７２００４）；Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ（Ｐ１−０７２００６）、およびＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥ（Ｐ１−０７２００８）を作製し、これらの結合速度を実施例９に記載したように決定した。これらの抗体のＣＤＲのアミノ酸配列を表２３に示す。表２２に示す結果から、Ｖ１０２Ｄは’０２９をｐＨ選択的にするのに十分であるが、Ｆ１００ｆＥも存在すると結合速度が改善されることがわかる。しかし、Ｆ１００ｆＥまたはＹ３２Ｅは、単独では’０２９をｐＨ選択的にすることはできない。
【０３４６】
実施例１５： ＶＩＳＴＡ抗体エピトープのマッピング
ＩｇＧ１．３抗体としてフォーマットされた‘０１５、‘０２９、‘７６１および‘７６７のｈＶＩＳＴＡエピトープは、ＢＬＩ（バイオレイヤー干渉法）競合と酵母表面ディスプレイの２つの異なる方法で決定された。
【０３４７】
競合ＢＬＩエピトープビニングアッセイを実施して、酸性ｐＨ選択的ＶＩＳＴＡ抗体Ｐ１−０６８７６１およびＰ１−０６８７６７がＰ１−０６１０２９親、Ｐ１−０６１０１５、ならびに関連するＶＩＳＴＡコントロール抗体１、２および３と比較してＶＩＳＴＡ上に類似または重複するエピトープを保持しているかどうかを評価した。サンドイッチおよびタンデムフォーマットのビニングアッセイを、ＯｃｔｅｔＲｅｄ３８４ ＢＬＩ機器（ＰＡＬＬ／ＦｏｒｔｅＢｉｏ）で実施した。全てのアッセイステップは３０℃で１０００ｒｐｍの振盪速度で実施し、使用した緩衝液は酸性（ｐＨ６．０）または中性（ｐＨ７．４）のＰＢＳＴ（１３７ｍＭ塩化ナトリウム、２．７ｍＭ塩化カリウム、１０ｍＭリン酸緩衝液、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）であった。サンドイッチフォーマットの場合、抗ヒトＩｇＧ−Ｆｃセンサー（ＡＨＣ、ＰＡＬＬ／ＦｏｒｔｅＢｉｏ）は、最初にｐＨ７．４でＶＩＳＴＡ抗体パネルを捕捉し、その後抗ヒト捕捉センサーを全ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＃００９−０００−００２）で遮断した。次に、ヒトＶＩＳＴＡ−ＥＣＤをｐＨ６．０で捕獲し、最後にｐＨ６．０で全ての可能な抗体の組み合わせについての競合を評価した。タンデムフォーマットアッセイの場合、ストレプトアビジンでコーティングされたバイオセンサー（ＳＡＸ、ＰＡＬＬ／ＦｏｒｔｅＢｉｏ）が最初にｐＨ７．４でビオチン化ｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤを捕捉し、その後センサーがｐＨ６．０で完全なＶＩＳＴＡ抗体パネルを捕捉し、ｐＨ６．０で全ての可能な抗体の組み合わせとの競合を評価する前にＶＩＳＴＡ上の各抗体の完全な結合飽和を確かなものにした。
【０３４８】
競合ＢＬＩエピトープビニングアッセイの結果は、競合マトリックス、図１１Ａにまとめられている。この図では、最初に捕捉された抗体が行に記載されており、（第２の）競合抗体に対するその結合または遮断活性が各列に示されている。競合マトリックスは、両方のアッセイフォーマットについて同一であった。サンドイッチアッセイの場合、競合抗体の結合（薄い灰色）は、０．４−１．２ｎｍの間にわたるシグナルによって定義され、遮断された抗体（黒）は、非結合シグナル＜０．１ｎｍを示した。タンデムアッセイの場合、競合抗体の結合は、０．３−０．８ｎｍの間にわたるシグナルによって定義され、遮断された抗体は、非結合シグナル＜０．２ｎｍを示した。「ＶＩＳＴＡ ｍＡｂ ３」は、３７℃でのＳＰＲによるｈＶＩＳＴＡ−ＥＣＤからの速い酸性ｐＨ解離を示したが（図６Ｃ）、いずれのＢＬＩアッセイフォーマット（３０℃で実施）でも迅速に解離しなかった。これらの競合アッセイは、Ｐ１−０６１０１５、Ｐ１−０６１０２９、酸性ｐＨ選択的抗体Ｐ１−０６８７６１およびＰ１−０６８７６７、ならびにＶＩＳＴＡ抗体２および３が全てＶＩＳＴＡ上の類似または重複エピトープについて互いに競合していることを示した。しかしながら、ＶＩＳＴＡ抗体１は、別個の異なるエピトープに結合する。したがって、酸性選択的クローンＰ１−０６８７６１およびＰ１−０６８７６７を生成するためにＰ１−０６１０２９のＶＨ ＣＤＲに導入された荷電アミノ酸突然変異は、ＶＩＳＴＡ結合エピトープを大きくは変化させていない。
【０３４９】
抗体‘０２９、‘０１５、‘７６１および‘７６７のエピトープも、Chao et al. (2004) J. Mol. Biol. 342:539-550、Oliphant et al. (2006) J. Virol. 80:12149−12159、およびKowalsky et al. (2015) J. Biol. Chem. 290 (26457-26470)の方法に従って酵母表面ディスプレイおよびＮＧＳを使用してマッピングされた。簡潔には、ＶＩＳＴＡ ＥＣＤの単一点突然変異体（ｓｉｎｇｌｅ ｐｏｉｎｔ ｍｕｔａｎｔ）の飽和変異誘発ライブラリーが生成され、酵母の表面にディスプレイされた。マッピングされている抗体への結合は失ったが、非遮断抗体（ｍＡｂ１）への結合を保持したＶＩＳＴＡ突然変異体を選別し、配列決定した。これらの突然変異体はｍＡｂ１との結合を保持していたため、正しく折り畳まれていた可能性が高く、マッピングされている抗体に見られる結合の喪失は、エネルギー的に重要な接触残基の喪失によるものである可能性が高かった。これらの突然変異の位置は、抗体のエピトープ内のエネルギー的に重要な残基として指定され、表１４に示されている。
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【０３５０】
表１５には、表１４の詳細データが含まれ、酵母表面ディスプレイ／ＮＧＳ法で観察された残基頻度に基づいて、リスト上の各抗体の結合を低減させる可能性が高いｈＶＩＳＴＡのアミノ酸残基列挙されている。
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【０３５１】
図１１Ｂと図１１Ｃにより、非遮断ｈＶＩＳＴＡ抗体（ｍＡｂ１；図１１Ｃ）のエピトープと比較した、表１４に列挙されているｈＶＩＳＴＡ抗体を遮断するための全残基を包含するエピトープの描写を示す。アミノ酸残基６６（Ｈ）および１６２（Ａ）は、分子の配向を示すために表示されている。ヒスチジン残基は灰色であり、エピトープ残基は黒色である。注目すべきことに、全ての遮断抗ＶＩＳＴＡ ｍＡｂは同じエピトープ領域を占めており、オクテットビニングデータと一致する（それらが互いに競合していることを示している）が、クエリ抗体間でわずかな残基の違いがある。対照的に、非遮断ｈＶＩＳＴＡ抗体（ｍＡｂ１）は、ｈＶＩＳＴＡ分子上の異なるエピトープ領域を占めており、これは、オクテットビニングデータが、遮断ｍＡｂのいずれもｍＡｂ１と競合しなかったことを示すオクテットビニングデータによってさらにサポートされる。
【０３５２】
実施例１６： ‘７６１および‘７６７の生物学的特性
Ｐ１−０６８７６１およびＰ１−０６８７６７の物理的および化学的特性を、以下の分析的および生物物理学的手法により、親Ｐ１−０６１０２９（いずれもＩｇＧ１．３定数領域を有する）のものと比較した。
【０３５３】
分析用ＳＥＣデータは、ＳｈｏｄｅｘＴＭ ＫＷ４０３−４Ｆカラム（４．６ｍｍＩＤＸ３００ｍｍＬ）を使用するＡｇｉｌｅｎｔ １２６０ ＨＰＬＣ機器を用い、０．３０ｍＬ／ｍｉｎの流量で流れる、１００ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ塩化ナトリウムを含有する緩衝液（ｐＨ７．３）（０．２μｍ濾過済み）で取得された。データは、２８０ｎｍで収集するように設定されたＡｇｉｌｅｎｔ １２６０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ Ｄｉｏｄｅ Ａｒｒａｙ Ｄｅｔｅｃｔｏｒによって収集し、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｃｈｅｍｓｔａｔｉｏｎソフトウェア（カリフォルニア州サンタクララのＡｇｉｌｅｎｔ社）で分析した。
【０３５４】
画像キャピラリー等電気泳動（ｉｃＩＥＦ）データＡｌｃｏｔｔ ７２０ＮＶオートサンプラーを備えたＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅ ｉＣＥ３機器で取得した。抗体試料を、最終濃度が０．２ｍｇ／ｍｌ抗体、０．３５％メチルセルロース、２．０Ｍ尿素、１％ｖ／ｖファルマライト（ｐＩ５−８）、および３％ｖ／ｖファルマライト（ｐＩ８−１０．５）となるように、分離混合物（ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｍｉｘｔｕｒｅ）と混合した。これらの試料は、ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅ ｃＩＥＦカートリッジＦコーティング（製品＃１０１７０１）で、１５００Ｖで１分のプレ焦点化時間と３０００Ｖで１０分の焦点化時間を用いて分析された。ｉＣＥ ＣＦＲソフトウェア Ｖ４．３．１．５３５２を使用して、データを分析した。
【０３５５】
抗体の流体力学的サイズは動的光散乱（ＤＬＳ）によって決定され、熱安定性は蛍光分光法とＵＮｃｌｅ分子特性評価機器（Ｕｎｃｈａｉｎｅｄ Ｌａｂｓ）を使用した静的光散乱（ＳＬＳ）によって特徴付けられた。抗体Ｐ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７６１およびＰ１−０６８７６７を、１ＸＰＢＳ緩衝液中で２ｍｇ／ｍｌの濃度で調製し、その後、ｐＨ３．０、４．０、５．０、６．０、７．０、８．０または９．０の２０ｍＭトリス／１ＸＰＢＳ中１ｍｇ／ｍｌ抗体または２０ｍＭクエン酸塩／１ＸＰＢＳ中１ｍｇ／ｍｌ抗体の最終試料を得るために、異なるｐＨ、１ＸＰＢＳ中４０ｍＭトリスまたは１ＸＰＢＳ中４０ｍＭクエン酸塩のいずれかで１：１希釈した。これら試料をＵＮｉキュベットカートリッジにロードし、様々なｐＨ製剤に希釈して１時間以内に解析した。ＤＬＳデータは、５秒ずつ４回の取得を使用して、２５℃で収集された。強度自己相関関数は、ＵＮｃｌｅ解析ソフトウェアバージョンＶ２．０を使用して当てはめられた。熱変性データは、２５℃から９０℃までの試料を０．５ｏ／ｍｉｎのスキャン速度でスキャンし、２６６ｎｍと４７３ｎｍで励起することによって得られた。蛍光データは、２５０ｎｍ−７２０ｎｍの範囲で取得された。ＵＮｃｌｅ解析ソフトウェアバージョンＶ２．０を使用して、蛍光およびＳＬＳデータを解析した。
【０３５６】
抗体Ｐ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７６１およびＰ１−０６８７６７のみかけ粘度を、ＵＮｃｌｅ分子特性評価機器（Ｕｎｃｈａｉｎｅｄ Ｌａｂｓ）で、Ｕｎｃｈａｉｎｅｄ Ｌａｂｓ推奨プロトコルに従い、製剤化された抗体溶液の存在下でのポリスチレンビーズの拡散速度を測定するビーズベースのＤＬＳ法を用いて測定した。簡潔には、１００ｎｍのポリスチレンビーズ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ カタログ＃３１００Ａ）の１０％溶液を、０．５％のｔｗｅｅｎ８０を含む製剤緩衝液中で調製した。このポリスチレンビーズ混合物３μｌを３０μｌの製剤化された抗体（２０ｍＭヒスチジン、２６０ｍＭスクロース（ｐＨ６．０）中の様々なＡｂ濃度）に添加し、得られたタンパク質／ビーズ混合物をＵＮｉキュベットカートリッジ（各レーン９μｌ）の３つの独立したレーンにロードして、３回の解析を行った。データは、ＵＮｃｌｅ解析ソフトウェアバージョンＶ２．０を使用して、１．３ｃＰの参照粘度を使用して解析された。
【０３５７】
抗体Ｐ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７６１およびＰ１−０６８７６７の物理的安定性は、２０ｍＭヒスチジン、２６０ｍＭスクロース（ｐＨ６．０）で５０ｍｇ／ｍｌの抗体試料を調製し、４０℃の熱ストレスに４週間さらすことにより、加速ストレス条件下で研究された。アリコートを、４０℃インキュベーションの直前（ゼロ時間＝ｔ０）、および１週間（１ｗ）の熱ストレスの後と４週間（４ｗ）の熱ストレスの後に除去し、試料を製剤緩衝液を用いて２ｍｇ／ｍｌに希釈し、ａＳＥＣで分析した。ａＳＥＣデータは、Ｓｈｏｄｅｘ ＫＷ４０３−４Ｆカラム（４．６ｍｍＩＤＸ３００ｍｍＬ）を使用するＡｇｉｌｅｎｔ １２６０ ＨＰＬＣ機器を用い、０．３０ｍＬ／ｍｉｎの流量で流れる、１００ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ塩化ナトリウムを含有する緩衝液（ｐＨ７．３）（０．２μｍ濾過済み）で取得された。データは、２８０ｎｍで収集するように設定されたＡｇｉｌｅｎｔ １２６０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ Ｄｉｏｄｅ Ａｒｒａｙ Ｄｅｔｅｃｔｏｒによって収集し、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｃｈｅｍｓｔａｔｉｏｎソフトウェア（カリフォルニア州サンタクララのＡｇｉｌｅｎｔ社）で分析した。
【０３５８】
結果は以下の通りであった。分析用サイズ排除クロマトグラフィー（ａＳＥＣ）データは、各抗体試料が９９．３％以上のモノマー（メインピーク）、０．７％未満の高分子量（ＨＭＷ）種、および検出不可能なレベルの低分子量（ＬＭＷ）種から構成されている３つの抗体（表１６）全てを高純度に精製することができたことを示した。
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【０３５９】
画像キャピラリー等電気泳動（ｉｃＩＥＦ）（ｉｃＩＥＦ）によって決定された抗体Ｐ１−０６１０２９の電荷変異体プロファイルは、８．５６の等電点（ｐＩ）を有するメイン種（６９．４％）と３０．６％の酸性種の存在を示した。（図１２Ａ−Ｃ）Ｐ１−０６８７６１は、６．６９の等電点（ｐＩ）を有するメイン種（６６．４％）と３３．６％の酸性種を示した。Ｐ１−０６８７６７は、６．６３の等電点（ｐＩ）を有するメイン種（６１．４％）と３８．６％の酸性種を示した。したがって、酸性種、塩基性種およびメイン種の分布は、３つの抗体について類似しているが、操作された抗体Ｐ１−０６８７６１およびＰ１−０６８７６７は、親であるＰ１−０６１０２９抗体よりも著しく低い等電点を有している。
【０３６０】
Ｐ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７６１およびＰ１−０６８７６７のオリゴマーの状態を、異なるｐＨの緩衝液中で動的光散乱（ＤＬＳ）を用いて３−９のｐＨ範囲で測定した。各抗体の全ての流体力学的半径（Ｒｈ）値（表１７）は４．８−５．７ｎＭの範囲であり、これはモノマー抗体サンプルに典型的なものである。このことは、これらの抗体は、３−９の間のｐＨを有する製剤への希釈後最初の１時間以内に、１ｍｇ／ｍｌで検出可能なレベルの高分子量凝集種を形成しないことを示唆している。
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【０３６１】
Ｐ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７６１およびＰ１−０６８７６７の熱安定性を、異なるｐＨの緩衝液中で温度に応じて蛍光および静的光散乱をモニターすることにより、３−９のｐＨ範囲にわたって測定した。ＩｇＧ１抗体のＣＨ２ドメインの変性を通常表す第１の熱変性転移点（Ｔｍ１）を蛍光によって決定し、表１８に示し、また、ＩｇＧ１抗体のＦＡＢドメインの変性を通常表す凝集開始点（Ｔａｇｇ）を静的光散乱によって測定し、表１９に示した。トリス／ＰＢＳ製剤の中性ｐＨ（ｐＨ７．０）では、３種の抗体のＴｍ１値は、Ｐ１−０６１０２９（６７．４℃）、Ｐ１−０６８７６１（６７．０℃）およびＰ１−０６８７６７（６５．３℃）であり、Ｔａｇｇ値は、Ｐ１−０６１０２９（６７．８℃）、Ｐ１−０６８７６１（６７．５℃）およびＰ１−０６８７６７（６５．８℃）であった。同じ中性ｐＨ７．０またはやや酸性のｐＨ６．０のクエン酸塩／ＰＢＳ製剤中の各抗体のＴｍ１は、いずれもトリスＰＢＳ ｐＨ７．０の値の０．７ｏ以内であった。しかし、Ｔｍ１の値は、各抗体とも、より塩基性のｐＨ８−９ではわずかに低く（０．３ｏ−１．１ｏの間）、より酸性のｐＨ３−５では著しく低くなっていた。中性ｐＨと比較して、Ｐ１−０６１０２９のＴａｇｇは、より塩基性のｐＨ８．０−９．０ではｐＨ７．０での値の０．１ｏ以内であり、ｐＨ５．０では１．０ｏ低く、最も酸性のｐＨ条件ｐＨ３．０−４．０ではかなり低かった（６．１ｏ−１９．６ｏ低い）。Ｐ１−０６８７６１およびＰ１−０６８７６７のＴａｇｇも、ｐＨ３．０−４．０で著しく低かった。ただし、ｐＨ５．０ではＰ１−０６８７６１のＴａｇｇはｐＨ６．０でのＴａｇｇよりもわずかに０．２ｏ低いだけであったのに対し、Ｐ１−０６８７６７のＴａｇｇはｐＨ５．０でｐＨ６．０での場合よりも２．２ｏ低く、各抗体のＴａｇｇにいくらか違いがあることを示している（表１９）。
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【０３６２】
Ｐ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７６１およびＰ１−０６８７６７のみかけ粘度を、製剤化された抗体溶液の存在下でポリスチレンビーズの拡散速度を測定するビーズベースのＤＬＳ法を用いて測定した。４４ｍｇ／ｍｌでの３種の抗体全ての比較は、これらの条件下で両方の操作された抗体の粘度が親抗体と同様であることを示している（表２０）。第２の研究では、Ｐ１−０６８７６１およびＰ１−０６８７６７の追加のタンパク質材料を高濃度に濃縮して、１３６ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌおよび５０ｍｇ／ｍｌの粘度を分析した。これらのデータは、抗体濃度が高くなるとみかけ粘度が増加することを示しており、１３６ｍｇ／ｍｌでの最大みかけ粘度がＰ１−０６８７６１で５．７±０．７、Ｐ１−０６８７６７で５．３±０．６であった。
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【０３６３】
２０ｍＭヒスチジン、２６０ｍＭスクロース（ｐＨ６．０）中のＰ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７６１およびＰ１−０６８７６７の試料５０ｍｇ／ｍｌの物理的安定性を、４０℃で４週間の加速ストレス条件下で研究した。抗体のオリゴマーの状態は、４０ｏＣインキュベーションの直前（ゼロ時間＝ｔ０）、および１週間（１ｗ）の４０ｏＣストレスの後と４週間（４ｗ）の４０℃ストレスの後に、試料についてのａＳＥＣによりモニターされた。これらのデータは、３種の抗体全てが４０℃で４週間後も９６％以上がモノマーのままであり、ＨＭＷ種（＜１．６％ＨＭＷ）とＬＭＷ種（＜２．０％ＬＭＷ）は低レベルであったことを示している（表２１）。
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【０３６４】
実施例１７： 生殖系列重鎖フレームワーク領域置換を有する抗ＶＩＳＴＡ抗体の生成
重鎖可変領域フレームワーク領域がＫ１６Ｒ置換とＴ８４Ａ置換の一方または両方によって修飾された抗ＶＩＳＴＡ抗体Ｐ１−０６１０２９またはその子孫、具体的にはＰ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６７、Ｐ１−０６８７６１＿Ｅ５５Ａ（Ｐ１−０７０８６８）、Ｐ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ（Ｐ１−０７０９０６）、Ｐ１−０６８７６７＿Ｅ５５Ａ（Ｐ１−０７０９０８）およびＰ１−０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ（Ｐ１−０７０９１６）が調製された。（すなわち、抗体Ｐ１−０７０８６８は、抗体Ｐ１−０６８７６１ Ｅ５５ＡのＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列を有するが、重鎖フレームワーク領域にＫ１６ＲおよびＴ８４Ａの置換を有する。）これらの置換は、これらの抗体が残基１６Ｒおよび８４Ａを含む重鎖フレームワーク領域の生殖系列配列にさらによく類似するように行われた。図１４は、Ｐ１−０６８７６１のＶＨおよびそのＣＤＲ配列に対するこれらのアミノ酸残基のそれぞれの位置を示すアライメントを提供する。Ｐ１−０６８７６１および他の抗体のＶＨにおけるＫ１６ＲおよびＴ８４Ａ置換は、配列表に示されている。
【０３６５】
これらの置換は、’０２９重鎖が由来する生殖系列のアミノ酸と同じアミノ酸を含むように、これら２つの位置のアミノ酸残基を変化させる。１６Ｒ残基および８４Ａ残基は、Ｐ１−６１０１５ＶＨフレームワーク領域にも存在する（配列番号９５を参照）。
【０３６６】
これらの抗体のｈＶＩＳＴＡへの結合を、実施例９に記載されているように測定した。その結果を表２２に示し、これらの抗体のアミノ酸置換を表２３に示す。その結果は、Ｋ１６ＲおよびＴ８４Ａが’０２９子孫の結合速度に著しい影響を与えないことを示している。
【０３６７】
したがって、本明細書に記載の抗ｈＶＩＳＴＡ抗体のいずれも、Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａを含み得る。Ｋ１６Ｒおよび／またはＴ８４Ａを有する抗体Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ＿Ｖ１０２Ｄ（Ｐ１−０７２０００）；Ｐ１−０６１０２９＿Ｆ１００ｆＥ（Ｐ１−０７２００２）；Ｐ１−０６１０２９＿Ｖ１０２Ｄ（Ｐ１−０７２００４）；Ｐ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ（Ｐ１−０７２００６）およびＰ１−０６１０２９＿Ｙ３２Ｅ＿Ｆ１００ｆＥ（Ｐ１−０７２００８）が、本明細書に記載のように構築され、それらの結合が試験される。
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【０３６８】
このように、本実施例は、酸性ｐＨにおいて生理的ｐＨよりも２００−１００００倍の親和性でヒトＶＩＳＴＡに結合する抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体を同定した。細胞結合アッセイにおいて、これらの酸性ｐＨ選択的ＶＩＳＴＡ抗体は、Ｔ細胞へのＶＩＳＴＡの結合について観察されたものと同様に、およそｐＨ６．５で結合強度の変曲点を示した。
【０３６９】
実施例１８： 抗ＶＩＳＴＡ抗体と抗ＰＤ−１抗体は相乗的に作用して腫瘍拒絶反応を誘発する。
腫瘍におけるＶＩＳＴＡの酸性ｐＨ選択的リガンド界面遮断する効果を特徴づけるために、酸性ｐＨでのマウスＴ細胞へのマウスＶＩＳＴＡ結合を遮断するマウスサロゲート抗体ＶＩＳＴＡ．１０を作製した。（ＶＩＳＴＡ．１０は生理的ｐＨでｍＶＩＳＴＡに結合する）Ｆｃ受容体結合とその後のエフェクター機能を回避するために、ＶＩＳＴＡ．１０を点突然変異Ｄ２６５Ａを含むＩｇＧ１アイソタイプに変換し、Ｆｃ受容体結合とエフェクター機能を回避した｛Ｃｌｙｎｅｓ，２０００｝。マウスにＭＣ３８腫瘍を皮下移植し、腫瘍が約７０ｍｍ２に達した時点で、マウスに対して次の処置を３日ごとに行った：１群：抗ＫＬＨ ｍＩｇＧ１−Ｄ２６５Ａを３０ｍｐｋで４回投与；２群：抗ＰＤ−１ ｍＩｇＧ１−Ｄ２６５Ａを５ｍｇ／ｋｇで２回投与；３群：抗ＶＩＳＴＡｍＩｇＧ１−Ｄ２６５Ａを３０ｍｇ／ｋｇで４回投与；および４群：抗ＰＤ−１＋抗ＶＩＳＴＡの組み合わせ。ＶＩＳＴＡ．１０とＰＤ−１遮断抗体の併用処置は、ＭＣ３８大腸腺癌腫瘍（図１５Ａ−Ｄ）を移植したほとんどのマウスにおいて腫瘍拒絶反応を誘発し（図１５Ａ−Ｄ）、抗ＰＤ−１およびＶＩＳＴＡ．１０の単剤処置は腫瘍進行を中程度に遅らせたが、防ぎはしなかった（図１５Ａ−Ｄ）。
【０３７０】
これらの結果と一致して、処置されたマウスの腫瘍のｅｘ ｖｉｖｏ分析は、ＶＩＳＴＡ．１０および抗ＰＤ−１で処置されたマウスにおいて、それぞれ５倍および１０倍の腫瘍浸潤ＣＤ８＋ Ｔ細胞およびＣＤ４＋ Ｔ細胞の頻度を示した（図１５Ｅ−Ｆ）。他の白血球サブセットはほとんど影響を受けなかった。併用療法はまた、腫瘍浸潤ＣＤ８＋ Ｔ細胞において、Ｔ細胞枯渇および機能不全の全てのマーカーであるＰＤ−１、ＬＡＧ−３およびＴＩＭ−３の発現を有意に低下させた（図１５Ｅ）。ＰＤ−１またはＶＩＳＴＡ抗体単独での処理は、Ｔ細胞の頻度と表現型にわずかな影響しか与えなかった（図１５Ｅ−Ｆ）。マクロファージ、単球性骨髄由来抑制因子細胞（ＭＤＳＣ）および顆粒球性ＭＤＳＣを含む腫瘍内骨髄細胞サブセットの頻度は、ＶＩＳＴＡ抗体処理による影響をほとんど受けなかった。
【０３７１】
ＶＩＳＴＡ抗体活性を文脈によって解釈可能にするために、ＶＩＳＴＡノックアウトマウスにＭＣ３８腫瘍を移植し、ＰＤ−１遮断抗体またはコントロール抗体で処置した。図１５Ｉに示すように、コントロール処置群では、ＶＩＳＴＡノックアウトマウスとその野生型同腹仔でＭＣ３８腫瘍が同等に成長した。ＶＩＳＴＡノックアウトマウスは、ＶＩＳＴＡとＰＤ−１の組み合わせ効果を想起させる抗ＰＤ−１に対する応答性の増加を示した。この応答性は、腫瘍内ＣＤ４＋およびＣＤ８＋ Ｔ細胞の増加と再び相関していた。これらのデータは、酸性ｐＨでＶＩＳＴＡ結合を遮断する抗体が、ＶＩＳＴＡが媒介する免疫抑制を逆転させるのに十分であることを示している。
【０３７２】
ＶＩＳＴＡは酸性ｐＨで選択的に機能することから、本発明者らは、ＶＩＳＴＡが媒介する抗腫瘍応答の抑制は、主に腫瘍床自体の内部で起こると仮定した。本発明者らは、内因性ＶＩＳＴＡ細胞外ドメインの代わりにヒトＶＩＳＴＡ細胞外ドメインを発現するトランスジェニックマウス（ヒトＶＩＳＴＡノックインマウス、ｇｅｎＯｗａｙ）において、酸性ｐＨ選択的ヒトＶＩＳＴＡ遮断抗体Ｐ１−０６８７６７（’ ７６７）とその非ｐＨ選択的親抗体Ｐ１−０６１０２９（’ ０２９）の活性を試験した。上述の組み合わせおよびＶＩＳＴＡノックアウト実験と一致してＰ１−０６１０２９とＰ１−０６８７６７は、マウスＰＤ−１遮断抗体との組み合わせで同等の効力を引き出した（図１５Ｊ−Ｍ）。
【０３７３】
ヒトＶＩＳＴＡノックインマウスにおけるＰ１−０６８７６７およびＰ１−０６１０２９の半減期を測定した。図１５Ｎに示すように、Ｐ１−０６８７６７はＰ１−０６１０２９の２０倍近い平均滞留時間（ＭＲＴ）を示し、ｐＨ７．４でＶＩＳＴＡとの結合が弱く、結果としてＴＭＤＤが減少した（それぞれ７１時間と４．１時間）ことを示している。
【０３７４】
非トランスジェニックモデルにおける末梢性ＶＩＳＴＡの抗体結合を評価するために、本発明者らは、Ｐ１−０６８７６７およびＶＩＳＴＡ．４と呼ばれる中性ｐＨを好む抗体（同一出願人の別の特許出願ファミリーにはＶＩＳＴＡ．４のさらなる説明がある）でカニクイザルを以下のように処置した。ＶＩＳＴＡ．４とＰ１−０６８７６７は、タンパク質ナイーブカニクイザル（抗体あたりｎ＝１）への５ｍｇ／ｋｇ用量での１０分間の静脈内注入後、評価された。注入後０．１７、０．５、２、４、６、２４、４８、７２、１６８、２１６、２４０、３３６時間後に連続血液試料を採取した。その後、組換えＶＩＳＴＡを捕捉剤として、抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ ｍＡｂを検出剤として用いたリガンド結合アッセイを使って、抗体濃度分析のために血清試料を得た。アッセイの定量下限は１ｎｇ／ｍＬであった。平均滞留時間は、Ｋｉｎｅｔｉｃａソフトウェア（バージョン５．０、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いた血清ｍＡｂ濃度−時間データのノンコンパートメント分析によって推定した。結果は、Ｐ１−０６８７６７が再びかなり長いＭＲＴを示した（それぞれ７１７時間と７．６時間、図６Ｏ）ことを示した。これらの結果は、血液および非酸性組織ではなく、腫瘍微小環境におけるＶＩＳＴＡ遮断が抗腫瘍効果を促すことを示唆している。
【０３７５】
実施例１９： ＶＩＳＴＡ．４はＶＩＳＴＡのＰＳＧＬ−１への結合を阻害する
刺激受容体Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）はＶＩＳＴＡリガンドとして以前に同定されていた（国際公開第２０１８１３２４７６号参照）。ＰＳＧＬ−１は、セレクチン、特にＰ−セレクチンの受容体であり、その一次リガンドであるＰ−セレクチンへの結合は、白血球、血小板および内皮細胞間の接着相互作用の促進剤としてよく特徴づけられている（Carlow, D.A., et al., PSGL-1 function in immunity and steady state homeostasis. Immunol Rev, 2009. 230(1): p. 75-96、および Abadier, M. and K. Ley, P-selectin glycoprotein ligand-1 in T cells. Curr Opin Hematol, 2017. 24(3): p. 265-273. 18）。また、ＰＳＧＬ−１は、慢性ウイルス感染、がん腫瘍免疫および一部の自己免疫疾患の状況において、Ｔ細胞応答のネガティブな制御因子として同定されている（Angiari, S., et al., Regulatory T cells suppress the late phase of the immune response in lymph nodes through P-selectin glycoprotein ligand-1. J Immunol, 2013. 191(11): p. 5489-500; Matsumoto, M., M. Miyasaka, and T. Hirata, P-selectin glycoprotein ligand-1 negatively regulates T-cell immune responses. J Immunol, 2009. 183(11): p. 7204-11; Nunez-Andrade, N., et al., P-selectin glycoprotein ligand-1 modulates immune inflammatory responses in the enteric lamina propria. J Pathol, 2011. 224(2): p. 212-21;  Perez-Frias, A., et al., Development of an autoimmune syndrome affecting the skin and internal organs in P-selectin glycoprotein ligand 1 leukocyte receptor-deficient mice. Arthritis Rheumatol, 2014. 66(11): p. 3178-89; Tinoco, R., et al., PSGL-1 Is an Immune Checkpoint Regulator that Promotes T Cell Exhaustion. Immunity, 2016. 44(5): p. 1190-203）。この免疫抑制機能は、既知のＰＳＧＬ−１リガンドとは無関係なようである（Tinoco, R., et al., PSGL-1: A New Player in the Immune Checkpoint Landscape. Trends Immunol, 2017. 38(5): p. 323-335）。
【０３７６】
細胞ベースのアッセイでは、組換えＰＳＧＬ−１と組換えＰ−セレクチンの両方に活性化ヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞へのＶＩＳＴＡ多量体結合を遮断する能力があることが示された。活性化ＣＤ４＋ Ｔ細胞からのＰＳＧＬ−１のＣＲＩＳＰＲによる欠失もＶＩＳＴＡ多量体結合を切断した。さらに、ＰＳＧＬ−１の異所性発現は、酸性ｐＨでＣＨＯ細胞へのＶＩＳＴＡ結合を可能にするのに十分であり、ＶＩＳＴＡ発現は、酸性ｐＨで２９３Ｔ細胞へのＰＳＧＬ−１結合を可能にするのに十分であることが示された。
【０３７７】
この実施例は、ＰＳＧＬ−１が酸性および生理的ｐＨで同等にＰ−セレクチンに結合したが、ＶＩＳＴＡには酸性ｐＨでのみ結合したことを示している（図１７Ａ）。実験は、ＶＩＳＴＡ、Ｐ−セレクチン、および以前に高親和性Ｐ−セレクチン結合を支持することが示された最小ＰＳＧＬ−１糖ペプチド（アミノ酸１−１９、スルホチロシンおよびシアリルルイスＸ（ｓｉａｙｌ ｌｅｗｉｓ Ｘ）炭水化物翻訳後修飾の両方を有する）を用いたＯｃｔｅｔバイオセンサーアッセイを用いて実施した（Sako, D., et al., A sulfated peptide segment at the amino terminus of PSGL-1 is critical for P-selectin binding. Cell, 1995. 83(2): p. 323-319）。
【０３７８】
ＰＳＧＬ−１のリガンド界面は、負に帯電したスルホチロシンとシアリルルイスＸの翻訳後修飾に依存して、Ｐ−セレクチンに高い親和性で結合し（Sako et al. 1995 Cell 83(2): p. 323-319）、非シアリルルイスＸで装飾されたＰＳＧＬ−１を発現するナイーブＴ細胞は、結果的にＰ−セレクチンと効率的に結合することができない。シアリルルイスＸで装飾されたＰＳＧＬ−１は、循環している単球および好中球上で構成的に発現し、活性化Ｔ細胞上では誘導的に発現し、酸性ｐＨでのこれらの細胞タイプへの強力なＶＩＳＴＡ結合と一致する。ただし、ＶＩＳＴＡは、ナイーブＴ細胞と活性化Ｔ細胞の両方に結合することがわかり、Ｐ−セレクチンとは異なって、ＶＩＳＴＡはシアリルルイスＸとは無関係にＰＳＧＬ−１に結合することを示唆している。追加のＯｃｔｅｔバイオセンサーアッセイでは、ＶＩＳＴＡとＰ−セレクチンの両方がシアリルルイスＸ装飾を有するＰＳＧＬ−１糖ペプチドに優先的に結合するのに対し、ＶＩＳＴＡのみはシアリルルイスＸなしでＰＳＧＬ−１糖ペプチドに結合することが見出された。さらに、グルコサミニル（Ｎ−アセチル）転移酵素（ＧＣＮＴ１）およびアルファ（１，３）−フコシル転移酵素−７酵素（ＦＵＴ７）を発現していない細胞内で産生されたＰＳＧＬ−１は、シアリルルイスＸ装飾を欠いており、Ｐ−セレクチンとの結合が不十分であった（図２５Ａ）。対照的に、ＶＩＳＴＡはシアリルルイスＸとは無関係にＰＳＧＬ−１に結合した（図２５Ａ）。この結果は、Ｐ−セレクチンではなく、ＶＩＳＴＡがシアリルルイスＸを欠くナイーブＴ細胞に結合していることと一致している。
【０３７９】
また、Ｐ−セレクチンと同様に、ＶＩＳＴＡは酸性ｐＨでヘパラン硫酸と適度に結合した。
【０３８０】
さらに、Ｐ−セレクチン結合を遮断するＰＳＧＬ−１抗体はＶＩＳＴＡ結合を遮断しなかった。これらのデータは、ＶＩＳＴＡがＰＳＧＬ−１の界面に結合しており、その界面はＰ−セレクチンが結合しているものと類似しているが異なることを示している。
【０３８１】
本実施例はさらに、Ｔ細胞へのＶＩＳＴＡ結合を遮断する抗体Ｐ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６７およびＶＩＳＴＡ．４がＰＳＧＬ−１糖ペプチドへのＶＩＳＴＡ結合も遮断したことを示している。
【０３８２】
競合Ｏｃｔｅｔアッセイを実施して、酸性ｐＨ選択的α−ＶＩＳＴＡ抗体Ｐ１−０６８７６１とＰ１−０６８７６７、ｐＨ非依存性親であるＰ１−０６１０２９、および酸性ｐＨ感受性ＶＩＳＴＡ．４がＶＩＳＴＡのＰＳＧＬ１への結合を遮断したかどうかを評価した。結合アッセイは、ＯｃｔｅｔＲｅｄ３８４バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）機器（ＰＡＬＬ／ＦｏｒｔｅＢｉｏ）で実施した。全てのアッセイステップは３０℃で１０００ｒｐｍの振盪速度で実施し、使用した緩衝液はＰＢＳＴ（ｐＨ６．０）（１３７ｍＭ塩化ナトリウム、２．７ｍＭ塩化カリウム、１０ｍＭリン酸緩衝液、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）であった。ヒトＶＩＳＴＡ−Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ ＃７１２６−Ｂ７）をＰＢＳＴ ｐＨ６．０で４００ｎＭに希釈し、０ｎＭ、４０ｎＭおよび４００ｎＭのＰ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６７、Ｐ１−０６１０２９およびＶＩＳＴＡ．４の滴定シリーズで３０分間予混合した。ヒトＦｃに融合した成熟ＰＳＧＬ１のアミノ末端の１９のアミノ酸からなるヒトＰＳＧＬ１ １９−ｍｅｒ−ｈｕＦｃタンパク質を、抗ヒトＩｇＧ−Ｆｃセンサー（ＡＨＣ、ＰＡＬＬ／ＦｏｒｔｅＢｉｏ）上に捕捉した。次に抗ヒト捕捉センサーは、全ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ＃００９−００００−００２）で遮断された。次に、捕捉されたＰＳＧＬ１のＶＩＳＴＡ−Ｆｃ／α−ＶＩＳＴＡ抗体混合物への結合を測定して、α−ＶＩＳＴＡ抗体がＶＩＳＴＡのＰＳＧＬ１への結合を妨げたかどうかを評価した。各抗体滴定シリーズについて、ＰＳＧＬ１に対するＶＩＳＴＡ結合の大きさ（ｎｍシフト）は、１００％に設定された０ｎＭの遮断されていないＶＩＳＴＡ：ＰＳＧＬ１応答に正規化された。このアッセイの結果は図１７Ｂにまとめられている。このアッセイでは、４００ｎＭの濃度のＰ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７６１、Ｐ１−０６８７６７およびＶＩＳＴＡ．４の全てが遮断活性を示した。観察されたＶＩＳＴＡ結合の減少によって示されるように、ＶＩＳＴＡ−Ｆｃタンパク質は捕捉されたヒトＰＳＧＬ１−１９−ｍｅｒ−ｈｕＦｃタンパク質への結合が妨げられた。
【０３８３】
さらに、ＣＨＯ−ＰＳＧＬ−１細胞へのＶＩＳＴＡ結合は、ＶＩＳＴＡ．４およびＰ−セレクチン遮断ＰＳＧＬ−１抗体ＫＰＬ−１の両方によって遮断されたことが実証された（図１７Ｃ）。ＰＳＧＬ−１抗体遮断アッセイでは、細胞は、３２ｎＭをロードしたＶＩＳＴＡ多量体またはＶＩＳＴＡ−Ｆｃキメラタンパク質で標識する前に、示された抗体ＫＰＬ−１（ＢＤ ＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓまたはＢｉｏｌｅｇｅｎｄ）またはＰＬ２（ＭＢＬ）と一緒にプレインキュベートされた。ＶＩＳＴＡ−Ｆｃ結合は、抗ＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）または抗６ｘｈｉｓ（Ｃｏｌｕｍｂｉａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）抗体によって検出された。細胞は、フローサイトメトリーまたは均一時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）によって取得された。
【０３８４】
実施例２０： ｈＶＩＳＴＡに結合したＰ１−０６８７６７の結晶構造
ＶＩＳＴＡの構造とＶＩＳＴＡ抗体結合の分子決定因子を特徴づけるために、Ｐ１−０６８７６７断片抗原結合（Ｆａｂ）とｈＶＩＳＴＡ ＩｇＶドメインの共結晶を作製した。得られた複合体の構造は、１．６Åの分解能で決定された。ＶＩＳＴＡ ＩｇＶドメインは、一般に、そのファミリーの特徴であり、ＰＤ−Ｌ１にいくらか類似している（図１８Ｂ）。ただし、ＰＤ−Ｌ１および他のほとんどのＢ７ファミリーまたは免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーとは異なり、ＶＩＳＴＡ ＩｇＶドメインの２つのＣ末端β鎖は複数の付加的な残基を含み、その結果、異常に伸長したヒスチジンリッチな中央のβシートが生じる（図１８Ｂ）。遮断抗体であるＰ１−０６８７６７は、このβシート伸長部でＶＩＳＴＡを結合する（図１８Ｃ）が、非遮断抗体ＶＩＳＴＡ．５は異なる領域を結合する（図１８Ｅ）。ＶＩＳＴＡのβシート伸長部は、３つのヒスチジン残基Ｈ１２１、Ｈ１２２およびＨ１２３によってキャップされている。Ｐ１−０６８７６７残基Ｅ１１０およびＤ１１２は、それぞれＶＩＳＴＡ残基Ｈ１２１およびＨ１２２と水素結合を形成する（図１８Ｄ）。これらの相互作用は、Ｐ１−０６８７６７残基Ｅ１１０およびＤ１１２が酸性ｐＨ選択性に必要かつ十分であるという、先の実施例に記載された知見によく当てはまる。共結晶において、ＶＩＳＴＡ残基Ｈ１２３は、硫酸塩の非存在下でＰ１−０６８７６７と真の水素結合を形成することが可能であるにもかかわらず、沈殿剤の硫酸塩分子と相互作用して、Ｐ１−０６８７６７残基Ｅ１と塩橋を形成する（図１８Ｄ）。さらなる相互作用を表２４に示す。これらのデータは、ＶＩＳＴＡ ＩｇＶドメインの異常な、ヒスチジンリッチなβシート伸長部が、ＶＩＳＴＡの酸性ｐＨ選択的受容体−リガンド界面の重要な構成要素であることを示唆している。
表２４は、ＶＩＳＴＡ原子から４Å以内の‘７６７Ｆａｂ ＨＣ原子間の距離をオングストローム（Å）で詳細に示している。
----.------------------.-------.------------------
## | ’767 Fab HC  | Dist. | VISTA
----+------------------+-------+------------------
1 | H:GLU 1 [ OE1] | 3.1 | V:HIS 123 [ NE2]
2 | H:VAL 2 [ N ] | 3.2 | V:HIS 123 [ O ]
3 | H:GLY 26 [ O ] | 3.1 | V:GLU 125 [ N ]
4 | H:GLU 30 [ O ] | 3.3 | V:ARG 54 [ NH2]
5 | H:GLU 30 [ OE1] | 3.8 | V:ARG 127 [ NE ]
6 | H:GLU 30 [ OE1] | 3.2 | V:ARG 127 [ NH2]
7 | H:GLU 30 [ OE2] | 3.4 | V:ARG 127 [ NH1]
8 | H:GLU 30 [ OE2] | 3.5 | V:ARG 127 [ NH2]
9 | H:ASP 31 [ OD1] | 2.8 | V:ARG 54 [ NH1]
10 | H:ASP 31 [ OD1] | 2.7 | V:ARG 54 [ NH2]
11 | H:ASP 31 [ OD1] | 2.8 | V:ARG 127 [ NH1]
12 | H:ASP 31 [ OD2] | 3.8 | V:ARG 127 [ NE ]
13 | H:ASP 31 [ OD2] | 3.1 | V:ARG 127 [ NH1]
14 | H:TYR 32 [ OH ] | 2.6 | V:GLU 125 [ OE1]
15 | H:GLU 110 [ OE2] | 2.8 | V:HIS 122 [ N ]
16 | H:GLU 110 [ OE1] | 2.7 | V:HIS 121 [ ND1]
17 | H:GLU 110 [ OE2] | 3.8 | V:HIS 121 [ ND1]
18 | H:GLU 110 [ OE2] | 3.5 | V:HIS 122 [ ND1]
19 | H:ASP 111 [ OD1] | 3.6 | V:HIS 122 [ NE2]
20 | H:ASP 112 [ OD1] | 3.5 | V:HIS 122 [ ND1]
----’------------------’-------’------------------
【０３８５】
実施例２１： ＶＩＳＴＡ．４のエピトープマッピング
ＶＩＳＴＡ．４は、実施例１５で先に記載した競合ＢＬＩエピトープビニングアッセイにおいて使用された。その結果、ＶＩＳＴＡ．４は、ヒトＶＩＳＴＡとの結合について、上記の抗体Ｐ１−０６１０１５、Ｐ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７６１およびＰ１−０６８７６７と競合し、したがって、これらの抗体と同じエピトープ群（群Ａ）に属することが示された。ＶＩＳＴＡ．４は、ヒトＶＩＳＴＡとの結合についてＶＩＳＴＡ ｍＡｂ １と競合しない（図１１Ａ参照）。
【０３８６】
抗体Ｐ１−０６１０１５、Ｐ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７６１およびＰ１−０６８７６７について実施例１５に記載しているように、ＶＩＳＴＡ．４のエピトープも酵母表面ディスプレイおよびＮＧＳを使用してマッピングした。マッピングされている抗体への結合は失ったが、非遮断抗体（ｍＡｂ１）への結合を保持したＶＩＳＴＡ突然変異体を選別し、配列決定した。これらの突然変異体はｍＡｂ１との結合を保持していたため、正しく折り畳まれていた可能性が高く、マッピングされている抗体に見られる結合の喪失は、エネルギー的に重要な接触残基の喪失によるものである可能性が高かった。結合の喪失をもたらした変異の位置、および抗体のエピトープにおけるエネルギー的に重要な残基として指定された位置を、抗体Ｐ１−０６１０１５、Ｐ１−０６１０２９、Ｐ１−０６８７６１およびＰ１−０６８７６７のエネルギー的に重要な接触残基とともに表３１に示す（上記の表１４にも示す）。
2021518133.tif 000028
【０３８７】
水素／重水素交換質量分析（ＨＤＸ−ＭＳ）を利用して、ｍＡｂＶＩＳＴＡ．４でヒトＶＩＳＴＡの結合エピトープをプローブした。ＨＤＸ−ＭＳは、骨格アミド水素原子の重水素交換の速度と程度をモニターすることによって、溶液中のタンパク質のコンフォメーションとコンフォメーションのダイナミクスをプローブする（Huang and Chen (2014) Analytical and Bioanalytical Chemistry 406, 6541-6558; Wei, et al. Drug Discovery Today (2014) 19, 95-102）。ＨＤＸのレベルは、骨格アミド水素原子の溶媒接触度とタンパク質の水素結合に依存する。ＨＤＸでのタンパク質の質量増加は、ＭＳで正確に測定できる。この手法を酵素消化と組み合わせると、ペプチドレベルでの構造の特徴を解明でき、表面に露出したペプチドを、内側に折りたたまれたペプチド、またはタンパク質−タンパク質複合体の界面に隔離されたペプチドから区別することができる。通常、重水素標識とそれに続くクエンチング実験が行われ、その後、酵素消化、ペプチド分離およびＭＳ分析が行われる。
【０３８８】
エピトープマッピング実験の前に、非重水素化実験を実施して、ＶＩＳＴＡ‐ｍＡｂ ＶＩＳＴＡ．４タンパク質複合体（モル比１：１）と組換えヒトＶＩＳＴＡ（１５μＭ）の共通（ｃｏｍｍｏｎ）ペプチドのリストを作成した。ＨＤＸ−ＭＳ実験では、５μＬの各サンプル（ＶＩＳＴＡまたはＶＩＳＴＡ‐ｍＡｂ ＶＩＳＴＡ．４）を５５μＬのＤ２Ｏ緩衝液（１０ｍＭリン酸緩衝液、Ｄ２Ｏ、ｐＨ７．０）で希釈して、標識反応を開始した。反応は、１分、１０分および２４０分の異なる時間で実行された。各標識反応時間の終わりまでにクエンチング緩衝液（４ＭのＧｄｎＣｌと０．４ＭのＴＣＥＰを含む１００ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ２．５、１：１、ｖ／ｖ）を添加することにより反応をクエンチし、５０μＬのクエンチした試料を分析のためにＷａｔｅｒｓ ＨＤＸ−ＭＳシステムに注入した。共通する消化ペプチドの重水素取り込みレベルを、ＶＩＳＴＡ．４の非存在下／存在下でモニターした。得られた配列カバレッジは８２％であった。
【０３８９】
ＨＤＸ−ＭＳ実験では、ヒトＶＩＳＴＡの８５％の配列カバレッジが得られた。図１９に示すように、ヒトＶＩＳＴＡのＶＩＳＴＡ．４のＨＤＸ−ＭＳデータ分析は、ＶＩＳＴＡ．４のエピトープはヒトＶＩＳＴＡの以下の３つの領域から構成されており、領域２が主要なエピトープであることを示す（残基番号はヒトＶＩＳＴＡのネイティブ配列に対応している；図２０）。
領域１： ５７ＬＧＰＶＤＫＧＨＤＶＴＦ６８
領域２： ８６ＲＲＰＩＲＮＬＴＦＱＤＬ９７
領域３： １４８ＶＶＥＩＲＨＨＨＳＥＨＲＶＨＧＡＭＥ１６５
【０３９０】
抗体ＶＩＳＴＡ．４は、酸性および中性のｐＨで同等によく結合した。さらなる選択を繰り返すと、ｐＨ６．０ではｐＨ７．４での２００倍の高い親和性でＶＩＳＴＡに結合する変異体が得られた。ＶＩＳＴＡ遮断抗体を用いた同様の試みにより、ｐＨ６．０ではｐＨ７．４と比較して最大１００００倍の選択性を持つ変異体が得られた。これらの抗体を用いて、酸性および中性ｐＨでのＶＩＳＴＡの受容体−リガンド結合界面をマッピングした。ｐＨ非依存性、中性ｐＨ選択的、および酸性ｐＨ選択的ＶＩＳＴＡ遮断抗体は、ほぼ同じエピトープに結合したが、このことは、顕著なコンフォメーション変化を伴わないヒスチジンプロトン化のみで酸性ｐＨでのその対抗受容体との結合能力を制御していることを示唆している。（ＶＩＳＴＡ．４は、同じ出願人による別の出願ファミリーで詳述されている）
【０３９１】
実施例２２： ＶＩＳＴＡ．４は酸性ｐＨでのＴ細胞へのＶＩＳＴＡ結合を阻害する。
本実施例は、エピトープ群ＡのＶＩＳＴＡ．４および他の抗体が酸性ｐＨでのＴ細胞へのＶＩＳＴＡ結合を遮断したのに対し、エピトープ群ＢのＶＩＳＴＡ．５（ｍＡｂ１）および他の抗体は遮断しなかったことを示している（図２１ＡおよびＢ）。
【０３９２】
本実施例は、基本的には実施例４に記載した通りに実施した。
【０３９３】
実施例２３： ＶＩＳＴＡ．４は、Ｔ細胞の増殖およびＩＦＮ−γ産生を強化する。
本実施例は、ＶＩＳＴＡ遮断ブロッキングＡｂ（エピトープ群Ａ）がＴ細胞増殖およびＩＦＮ−γ産生を強化したことを示している（図２２）。遮断抗体ではないＶＩＳＴＡ．５（ｍＡｂ１）は、Ｔ細胞の増殖およびＩＦＮ−γ産生を強化しなかった。ＶＩＳＴＡ．４は、ＶＩＳＴＡを発現しなかった２９３Ｔ−ＯＫＴ３細胞とＴ細胞を共培養した場合には効果がなかった。
【０３９４】
この実験は、ヒトＶＩＳＴＡを発現するように操作された２９３Ｔ細胞と共培養したＣＤ４＋ Ｔ細胞と、Ｔ細胞受容体アゴニスト抗体ＯＫＴ３の一本鎖可変断片とにＶＩＳＴＡ抗体を添加することによって行われた（２９３Ｔ−ＯＫＴ３−ＶＩＳＴＡ）。
【０３９５】
実施例２４： ＶＩＳＴＡはＴ細胞受容体媒介性ＮＦ−ｋＢシグナル伝達を抑制した。
本実施例は、ＶＩＳＴＡ機能に対するｐＨの影響をさらに評価するために実施され、ＶＩＳＴＡが、中性ｐＨよりも酸性ｐＨにおいて、Ｔ細胞受容体媒介性ＮＦ−κＢシグナル伝達をより強力に抑制したことを示す（図２３Ａ）。最大の抑制はｐＨ６．５以下で達成され、ＶＩＳＴＡ：Ｔ細胞結合と同様であった（図２３Ａおよび図４Ａ）。
【０３９６】
ＮＦ−ｋＢシグナル伝達は、基本的に実施例５および１３に記載した通りに、ＮＦｋＢを報告するＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞を用いて測定した。Ｊｕｒｋａｔ細胞を、ＮＦ−ｋＢ誘導性プロモーターの制御下でルシフェラーゼを発現するように操作した。これらのＪｕｒｋａｔ ＮＦｋＢ−ルシフェラーゼ細胞を、ＭＥＳおよびヒト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体を用いて様々なｐＨに酸性化したＨＢＳＳ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）中で４：１の比率で、非照射２９３Ｔ−ＯＫＴ３−ＶＩＳＴＡ細胞と一緒に４時間共培養した。Ｊｕｒｋａｔ細胞の活性化を、ルシフェラーゼ基質アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）により測定した。
【０３９７】
ＶＩＳＴＡを介した抑制は、ｐＨ７．０以上で中程度の活性が維持されたが、酸性ｐＨで最も強力であった。同様に、組換えＶＩＳＴＡは、酸性ｐＨではｐＨ７．４の場合よりもＴ細胞ＮＦｋＢリン酸化を抑制した（図２３Ｂ）。これらの結果は、ＶＩＳＴＡが酸性ｐＨでＴ細胞を優先的に抑制することと、酸性ｐＨでＴ細胞の結合を遮断する抗体によってこの活性が逆転されることとを示している。
【０３９８】
したがって、これらのデータは、ＶＩＳＴＡの酸性ｐＨ選択的受容体−リガンド界面の遮断が免疫抑制を逆転させる可能性があることを示唆している。
【０３９９】
実施例２５： ＶＩＳＴＡ：ＰＳＧＬ−１結合特異性は、ヒスチジン残基およびスルホチロシン残基によって決定される。
本発明者らは、ＰＳＧＬ−１結合特異性を特徴付けるために、シアリルルイスＸ（実施例１９に記載）によって提供されるものの他に、Ｐ−セレクチン結合に寄与するチロシン硫酸化翻訳後修飾を調べた。チロシン硫酸化の役割を試験するために、ＰＳＧＬ−１糖ペプチドを、陰イオン交換液体クロマトグラフィーにより、スルホチロシンに富む＞９０％）ピーク（およびスルホチロシンに乏しい（＜１％）ピークに分画した。ＶＩＳＴＡもＰ−セレクチンも、スルホチロシンに乏しいＰＳＧＬ−１に検出可能に結合しなかった（図２５Ｂ）。また、ＶＩＳＴＡは、チロシンがアラニンで置換されたＰＳＧＬ−１糖ペプチドにも結合できなかった（図示せず）。これらの結果は、スルホチロシン残基がＰＳＧＬ−１のＶＩＳＴＡへの結合の鍵となるメディエーターであることを示している。
【０４００】
本発明者らは、ＶＩＳＴＡの結合特異性はＶＩＳＴＡ遮断抗体エピトープ内に見られるのと同じヒスチジン残基：Ｈ１５３、Ｈ１５４およびＨ１５５（実施例２０参照）によって媒介されると仮定した。非荷電アラニンまたは負に帯電したアスパラギン酸でこれらのヒスチジン残基を置換することにより、組換えＰＳＧＬ−１およびＣＨＯ−ＰＳＧＬ−１細胞へのＶＩＳＴＡ結合が有意に低減された（図２５Ｃ−Ｄ）。アラニン、アスパラギン酸またはアルギニンに突然変異したＨ１５３、Ｈ１５４およびＨ１５５残基を有するＶＩＳＴＡ−Ｆｃタンパク質が、Ｅｘｐｉ２９３細胞の一過性のトランスフェクションにより産生された。また、これらの突然変異体は、Ｔ細胞を機能的に抑制することができなかった（図示せず）。対照的に、正に帯電したアルギニン残基による置換は、ＶＩＳＴＡの結合と機能を維持した（図２５Ｃ−Ｄ）。遮断抗体ＶＩＳＴＡ．４およびＰ１−０６８７６７は、アラニンおよびアルギニン突然変異体ＶＩＳＴＡにはよく結合したが、アスパラギン酸突然変異体ＶＩＳＴＡにはほとんど結合しなかった（図示せず）。非遮断抗体ＶＩＳＴＡ．５は、野生型および突然変異体型ＶＩＳＴＡタンパク質に同等に結合した（図示せず）。
【０４０１】
そこで、本発明者らは、Ｐ−セレクチンに結合されたＰＳＧＬ−１の解析済みの構造と、Ｐ１−０６８７６７ Ｆａｂに結合されたＶＩＳＴＡの解析済みの構造（図１８）を使用して、ＶＩＳＴＡにドッキングしたＰＳＧＬ−１ １９−ｍｅｒ糖ペプチドの計算モデルを開発した（図２５Ｅ）。このモデルでは、ＰＳＧＬ−１チロシン残基Ｙ４６およびＹ４８は、ＶＩＳＴＡヒスチジン残基Ｈ１５３およびＨ１５４（２．５−３．０Åの距離）とイオン的相互作用を行う。ＰＳＧＬ−１ Ｙ５１はＶＩＳＴＡからさらに遠く（約４．５Å）に存在するが、ＶＩＳＴＡ Ｈ１００と意義深い相互作用をなし得る。ＰＳＧＬ−１ Ｅ５６もまた、ＶＩＳＴＡ Ｈ９８およびＨ１００とイオン相互作用を形成する。ＰＳＧＬ−１ Ｔ５７の水酸基は、シアリルルイスＸで装飾することができ、ＶＩＳＴＡとは別の方向を向いており、ＶＩＳＴＡ：ＰＳＧＬ−１結合に対するシアリルルイスＸの影響がごくわずかであることと一致している。まとめると、これらのデータとモデル化は、酸性ｐＨでのＰＳＧＬ−１へのＶＩＳＴｓの結合が、主にＶＩＳＴＡヒスチジン残基とＨ１５３、Ｈ１５４およびＨ１５５、ならびにＰＳＧＬ−１硫酸化チロシン残基Ｙ４６およびＹ４８によって促進されることを示唆している。
【０４０２】
配列表
以下は、本願で参照される特定の配列の表である。配列番号２において、アミノ酸位置１８７は、ＤまたはＥのいずれであってよい。
【０４０３】
以下の抗体配列において、ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列は、それぞれアミノ酸２６−３５、５０−６６、および９９−１１０を含むアミノ酸位置に位置し、ＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列はそれぞれアミノ酸２４−３５、５１−５７、および９０−９８を含むアミノ酸位置に位置する。ＶＨ ＣＤＲ１は、ＡｂＭ（ＡＡ ２６−３５；Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ（２００８ Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４５：３８３２−３８３９；Ｓｗｉｎｄｅｌｌｓ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｊ． Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４２９：３５６−３６４）に従って番号付けされ、他の全てのＣＤＲ（ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１−３）は、Ｋａｂａｔに従って番号付けされている。特定の抗体種のＣＤＲ配列は太字であり、それらのＶＨおよびＶＬ配列に太字および下線を付した。
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【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
2021518133.tif 000164
【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
2021518133.tif 000166
【図４Ｅ】
2021518133.tif 000167
【図４Ｆ−Ｇ】
2021518133.tif 000168
【図５Ａ−Ｂ】
2021518133.tif 000169
【図５Ｃ−Ｄ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
2021518133.tif 000174
【図６Ｅ】
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【図６Ｆ】
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【図６Ｇ】
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【図７Ａ】
2021518133.tif 000178
【図７Ｂ】
2021518133.tif 000179
【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図７Ｅ】
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【図７Ｆ】
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【図８Ａ−Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図８Ｅ】
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【図８Ｆ】
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【図９】
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【図１０Ａ】
2021518133.tif 000190
【図１０Ｂ】
2021518133.tif 000191
【図１１Ａ】
2021518133.tif 000192
【図１１Ｂ−Ｃ】
2021518133.tif 000193
【図１２Ａ−Ｃ】
2021518133.tif 000194
【図１３Ａ−１】
2021518133.tif 000195
【図１３Ａ−２】
2021518133.tif 000196
【図１３Ｂ】
2021518133.tif 000197
【図１４】
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【図１５Ａ−Ｆ】
2021518133.tif 000199
【図１５Ｇ−Ｈ】
2021518133.tif 000200
【図１５Ｉ】
2021518133.tif 000201
【図１５Ｊ−Ｋ】
2021518133.tif 000202
【図１５Ｌ−Ｍ】
2021518133.tif 000203
【図１５Ｎ−Ｏ】
2021518133.tif 000204
【図１６Ａ−Ｃ】
2021518133.tif 000205
【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
2021518133.tif 000207
【図１７Ｃ】
2021518133.tif 000208
【図１８Ａ】
2021518133.tif 000209
【図１８Ｂ】
2021518133.tif 000210
【図１８Ｃ】
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【図１８Ｄ】
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【図１８Ｅ】
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【図１９】
2021518133.tif 000214
【図２０】
2021518133.tif 000215
【図２１Ａ−Ｂ】
2021518133.tif 000216
【図２２Ａ−Ｂ】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５Ａ】
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【図２５Ｂ】
2021518133.tif 000221
【図２５Ｃ】
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【図２５Ｄ】
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【図２５Ｅ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
2021518133.tif 000225
2021518133.tif 000226