(57)【要約】  本発明は、免疫原性細胞死（ＩＣＤ）を誘導するのに使用することができる化合物に関する。場合により、２種以上の化合物を組み合わせて、ＩＣＤを誘導する。本発明はまた、ＩＣＤ誘導化合物と免疫チェックポイントインヒビターのような免疫系を刺激する薬剤との組合せであって、特に、がんを治療するまたは腫瘍増殖を阻害するための組合せに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象において腫瘍、好ましくはがんを治療する方法における使用のためのトポイソメラーゼインヒビター、ＡＴＭインヒビター、および免疫系を刺激する薬剤であって、同時にまたは逐次的に対象に投与される、トポイソメラーゼインヒビター、ＡＴＭインヒビター、および免疫系を刺激する薬剤。
【請求項２】
前記トポイソメラーゼインヒビターが、トポイソメラーゼＩインヒビター、好ましくはイリノテカン、または薬学的に許容されるその塩である、請求項１に記載の使用のための化合物。
【請求項３】
前記ＡＴＭインヒビターが、イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン誘導体、好ましくは３−フルオロ−４−［７−メトキシ−３−メチル−８−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロイミダゾ［４，５−ｃ］−キノリン−１−イル］ベンゾニトリル、または薬学的に許容されるその塩である、請求項１または２に記載の使用のための化合物。
【請求項４】
前記免疫系を刺激する薬剤が、免疫チェックポイントインヒビター、好ましくはＰＤ−１アンタゴニスト、より好ましくは抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用のための化合物。
【請求項５】
前記トポイソメラーゼインヒビターが、イリノテカン、または薬学的に許容されるその塩であり、前記ＡＴＭインヒビターが、３−フルオロ−４−［７−メトキシ−３−メチル−８−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロイミダゾ［４，５−ｃ］−キノリン−１−イル］ベンゾニトリル、または薬学的に許容されるその塩であり、前記免疫系を刺激する薬剤が、ＰＤ−１アンタゴニストである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用のための化合物。
【請求項６】
前記腫瘍またはがんが、結腸直腸腫瘍または結腸直腸がん、乳房腫瘍または乳がん、卵巣腫瘍または卵巣がん、膵臓腫瘍または膵臓がん、胃腫瘍または胃がん、前立腺腫瘍または前立腺がん、腎臓腫瘍または腎臓がん、子宮頚部腫瘍または子宮頚部がん、骨髄腫、リンパ腫、白血病、甲状腺腫瘍または甲状腺がん、子宮内膜腫瘍または子宮内膜がん、子宮腫瘍または子宮がん、膀胱腫瘍または膀胱がん、神経内分泌腫瘍または神経内分泌がん、頭頚部腫瘍または頭頚部がん、肝臓腫瘍または肝臓がん、上咽頭腫瘍または上咽頭がん、精巣腫瘍または精巣がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、黒色腫、基底細胞皮膚がん、扁平上皮細胞皮膚がん、隆起性皮膚線維肉腫、メルケル細胞癌、膠芽腫、神経膠腫、肉腫、中皮腫、および骨髄異形成症候群からなる群から選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用のための化合物。
【請求項７】
前記腫瘍またはがんが、ＡＴＭを発現する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の使用のための化合物。
【請求項８】
（ａ）トポイソメラーゼインヒビター；
（ｂ）ＡＴＭインヒビター；および
（ｃ）免疫系を刺激する薬剤
を含む、キットまたは薬学的に許容される組成物。
【請求項９】
前記トポイソメラーゼインヒビターが、トポイソメラーゼＩインヒビター、好ましくはイリノテカン、または薬学的に許容されるその塩である、請求項８に記載のキットまたは組成物。
【請求項１０】
前記ＡＴＭインヒビターが、イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン誘導体、好ましくは３−フルオロ−４−［７−メトキシ−３−メチル−８−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロイミダゾ［４，５−ｃ］−キノリン−１−イル］ベンゾニトリル、または薬学的に許容されるその塩である、請求項８または９に記載のキットまたは組成物。
【請求項１１】
前記免疫系を刺激する薬剤が、免疫チェックポイントインヒビター、好ましくはＰＤ−１アンタゴニスト、より好ましくは抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項８〜１０のいずれか一項に記載のキットまたは組成物。
【請求項１２】
前記トポイソメラーゼインヒビターが、イリノテカン、または薬学的に許容されるその塩であり、前記ＡＴＭインヒビターが、３−フルオロ−４−［７−メトキシ−３−メチル−８−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロイミダゾ［４，５−ｃ］−キノリン−１−イル］ベンゾニトリル、または薬学的に許容されるその塩であり、前記免疫系を刺激する薬剤が、ＰＤ−１アンタゴニストである、請求項８〜１１のいずれか一項に記載のキットまたは組成物。
【請求項１３】
医薬として使用するための、請求項８〜１２のいずれか一項に記載のキットまたは組成物。
【請求項１４】
免疫原性細胞死の誘導による腫瘍、好ましくはがんの治療における使用のためのトポイソメラーゼインヒビター。
【請求項１５】
免疫原性細胞死の誘導における使用のためのトポイソメラーゼインヒビター。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、免疫原性細胞死を誘導するための化合物に関する。本発明はまた、腫瘍の治療に有用な併用療法に関する。詳細には、本発明は、トポイソメラーゼインヒビター、ＡＴＭインヒビター、および免疫系を刺激する薬剤の併用投与に関する。これら化合物を含む組成物およびキットも開示する。
【背景技術】
【０００２】
免疫原性細胞死（ＩＣＤ）は、免疫応答を引き起こすことができる細胞死の形態である。ＩＣＤは、瀕死細胞からの危険シグナルの放出を特徴とし、損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）として知られている。重要なＤＡＭＰは、膜表面でのＣＡＬＲ、ＰＤＩＡ３、ＨＳＰ７０、およびＨＳＰ９０の曝露、ならびに、瀕死細胞からのＨＭＧＢ１およびＡＴＰの放出を含む。次に、これらＤＡＭＰは、例えば、抗原提示細胞（ＡＰＣ）でのパターン認識受容体（ＰＲＲ）との相互作用を通して、免疫応答を引き起こす。
【０００３】
オキサリプラチンおよび放射線療法のようながん治療のサブセットが、がん細胞のＩＣＤを引き起こすことができることが観察されており、ＩＣＤが、療法の抗腫瘍効果に寄与することが理解されている。重要なことに、ＩＣＤは、がんを攻撃する免疫系を刺激するので、がんの再発および転移に対して長期にわたる防御をもたらす。ＩＣＤを促進することができるさらなる薬剤を特定する必要性が、依然として存在する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本明細書で提供されるのは、ＩＣＤを誘導するための方法、例えば、腫瘍、好ましくはがんを治療するためにＩＣＤを誘導するための方法であって、対象にトポイソメラーゼインヒビターを投与することを含む、方法である。任意選択で、トポイソメラーゼインヒビターは、ＡＴＭ（毛細血管拡張性運動失調症突然変異型）インヒビター、および／または免疫系を刺激する薬剤と共に投与される。
【０００５】
本明細書で提供されるのはまた、腫瘍、好ましくはがんを治療するための方法であって、対象にトポイソメラーゼインヒビター、ＡＴＭインヒビター、および免疫系を刺激する薬剤を投与することを含む、方法である。
【０００６】
本明細書で提供されるのはまた、トポイソメラーゼインヒビター、ＡＴＭインヒビター、および免疫系を刺激する薬剤を含む、キットおよび組成物である。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１−１】３５個のがん細胞株の細胞増殖に対する、トポイソメラーゼインヒビター、イリノテカン、トポテカン、およびエトポシドを含む様々な化学療法剤との２つのＡＴＭインヒビターの組合せ効果を示すグラフである。組合せ効果は、相加的な単独療法効果に対するＢＬＩＳＳ超過として表現される。正のＢＬＩＳＳ超過値は、相乗作用であり、負のＢＬＩＳＳ超過値は、拮抗作用である。−０．１〜０．１の値は、線形結合効果に近いと考えられる。
【図１−２】同上。
【図２−１】２つのＡＴＭ非欠損細胞株（ATM proficient cell line）（ＨＣＴ１１６およびＳＷ６２０）、ならびに２つのＡＴＭ欠損細胞株（ＳＫＣＯ１およびＮＣＩ−Ｈ２３）ににおける、２つの異なるＡＴＭインヒビターの単剤としての、または、異なる固定濃度のＳＮ３８と組み合わせた、増殖阻害に対する効果を示すグラフである。
【図２−２】同上。
【図２−３】同上。
【図２−４】同上。
【図２−５】同上。
【図２−６】同上。
【図２−７】同上。
【図２−８】同上。
【図３】マウスの皮下に埋め込まれたヒト結腸異種移植片モデルにおける、ＳＮ３８との２つのＡＴＭインヒビターの組合せ効果を示す。腫瘍体積を経時的に追跡し、ｙ軸上にプロットしたグラフである。ビヒクル処置された腫瘍は、基準として考える。異なる治療様式および組合せの抗腫瘍効果は、基準と比較して、経時的な腫瘍体積の減少により判断することができる。１０匹の動物を、処置アームごとに使用し、平均腫瘍体積をプロットする。
【図４−１】Ａ）カルレティキュリン（ＣＲＴ）、ＨＳＰ７０、およびＨＳＰ９０の増大した曝露、Ｂ）ＡＴＰおよびＨＭＧＢ１放出における増大、ならびに、Ｃ）カスパーゼ−３／−７の活性化により示される、免疫原性細胞死誘導およびアポトーシスに関する、トポイソメラーゼインヒビターＳＮ３８の単剤としての、または、ＡＴＭインヒビターと組み合わせた効果を示すグラフである。各々の実験で、２回の生物学的反復を示す。非染色（図示せず）で適切なアイソタイプが一致する抗体を、ＦＡＣＳ解析に対する対照として使用した。
【図４−２】同上。
【図４−３】同上。
【図４−４】同上。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
チェックポイントインヒビターのような免疫系を刺激する薬剤のがんを治療する能力は、腫瘍組織内の腫瘍抗原特異的Ｔ細胞の存在に依存する。これは、腫瘍組織が、自身を非形質転換した対応物から、例えば、ネオアンチゲンとして知られている新規のタンパク質生成物によって、識別する抗原を発現する必要がある。腫瘍ネオアンチゲン負荷量は、免疫原性および例えばチェックポイントインヒビター療法に対する感受性に強く相関し、このことは、免疫原性に低い腫瘍はこれらの薬剤に強い耐性を示すはずであることを意味する。免疫原性細胞死を誘導するもののようなＡＰＣによる取込みに利用可能な腫瘍抗原を放出するのに役立つ療法は、とりわけ、チェックポイントインヒビターのような免疫系を刺激する薬剤とさらに組み合わせる場合、抗腫瘍免疫を効果的に促進する可能性がある。
【０００９】
本発明者らは、トポイソメラーゼインヒビターが腫瘍細胞のＩＣＤを引き起こすことができることを発見した。さらに、トポイソメラーゼインヒビターおよびＡＴＭインヒビターの様々な組合せは、例えば、ＩＣＤを促進する上で、少なくとも相加的にまたは相乗的に作用することが観察された。
【００１０】
したがって、本開示は、ＩＣＤを、例えば、腫瘍細胞、好ましくはがん細胞のＩＣＤを誘導するための方法であって、トポイソメラーゼインヒビターの投与、ならびに、任意選択で、ＡＴＭインヒビターおよび／または免疫系を刺激する薬剤の追加投与を含む、方法を提供する。
【００１１】
本開示はまた、腫瘍を治療するための方法であって、トポイソメラーゼインヒビター、ＡＴＭインヒビター、および免疫系を刺激する薬剤の投与を含む、方法を提供する。好ましい実施形態では、治療される腫瘍は、がん性または悪性腫瘍である。
【００１２】
別の治療様式を加えた１つの治療様式の投与とは、対象への別の治療様式の投与前、投与の間、または投与後の１つの治療様式の投与を指す。これは、トポイソメラーゼインヒビター、ＡＴＭインヒビター、および免疫系を刺激する薬剤の投与に関して、トポイソメラーゼインヒビター、ＡＴＭインヒビター、および免疫系を刺激する薬剤の各々が、任意の順で（すなわち、同時に、もしくは逐次的に）、または一緒に単一の組成物、製剤もしくは単位剤形で、患者に投与されることを意味する。一部の実施形態では、トポイソメラーゼインヒビター、ＡＴＭインヒビター、および免疫系を刺激する薬剤は、同時にまたは逐次的に投与される。特定の実施形態では、トポイソメラーゼインヒビター、ＡＴＭインヒビター、および免疫系を刺激する薬剤は、トポイソメラーゼインヒビター、ＡＴＭインヒビター、および免疫系を刺激する薬剤を含む同じ組成物で同時に投与される。特定の実施形態では、トポイソメラーゼインヒビター、ＡＴＭインヒビター、および免疫系を刺激する薬剤は、別々の組成物で同時に投与される、すなわち、トポイソメラーゼインヒビター、ＡＴＭインヒビター、および免疫系を刺激する薬剤は、別々の単位剤形で各々同時に投与される。トポイソメラーゼインヒビター、ＡＴＭインヒビター、および免疫系を刺激する薬剤は、同日または別の日に、適切な投与プロトコルにしたがった任意の順で投与することができると理解されよう。
【００１３】
別の治療様式を加えて投与される１つの治療様式の場合、これら治療様式は、同じ治療レジメン内で投与される。例えば、これらは、一次、二次または三次治療として共に使用される。
【００１４】
「治療すること」または「治療」に対する言及には、病態の確立した症状の予防ならびに緩和が含まれることが理解されよう。したがって、状態、障害、または病態を「治療すること」または「治療」とは、以下を含む：（１）状態、障害、もしくは病態に罹患しているか、もしくは素因があるが、状態、障害、もしくは病態の臨床的もしくは準臨床的な症状をまだ経験していないか、もしくは呈していないヒトで発症する、状態、障害、もしくは病態の臨床的な症状の出現を防止もしくは遅延すること、（２）状態、障害、もしくは病態を阻害すること、すなわち、疾患もしくはその再発（維持治療の場合）、もしくは少なくとも１つのその臨床的もしくは準臨床的な症状の発症を停止、低減、もしくは遅延すること、または、（３）疾患を緩和もしくは軽減すること、すなわち、状態、障害、もしくは病態、もしくはその臨床的もしくは準臨床的な症状の少なくとも１つの退縮をもたらすこと。
【００１５】
好ましくは、「対象」とは、ヒトである。一般に、対象は、腫瘍またはがんの１つまたは複数の症状と診断されているか、または罹患する危険性があるヒトである。特定の実施形態では、「対象」とは、薬物および療法をスクリーニングする、特徴付ける、および評価するのに使用される、非ヒト哺乳動物、例えば、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ウサギ、ブタ、マウス、またはラットを指すことができる。
【００１６】
本発明に従って治療される腫瘍またはがんの具体的な種類として、限定されないが、結腸直腸腫瘍または結腸直腸がん、乳房腫瘍または乳がん、卵巣腫瘍または卵巣がん、膵臓腫瘍または膵臓がん、胃腫瘍または胃がん、前立腺腫瘍または前立腺がん、腎臓腫瘍または腎臓がん、子宮頚部腫瘍または子宮頚部がん、骨髄腫、リンパ腫、白血病、甲状腺腫瘍または甲状腺がん、子宮内膜腫瘍または子宮内膜がん、子宮腫瘍または子宮がん、膀胱腫瘍または膀胱がん、神経内分泌腫瘍または神経内分泌がん、頭頚部腫瘍または頭頚部がん、肝臓腫瘍または肝臓がん、上咽頭腫瘍または上咽頭がん、精巣腫瘍または精巣がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、黒色腫、基底細胞皮膚がん、扁平上皮細胞皮膚がん、隆起性皮膚線維肉腫、メルケル細胞癌、膠芽腫、神経膠腫、肉腫、中皮腫、および骨髄異形成症候群からなる群から選択される腫瘍またはがんが挙げられる。好ましくは、治療される腫瘍またはがんは、ＡＴＭを発現する。
【００１７】
一部の実施形態では、トポイソメラーゼインヒビターは、トポイソメラーゼＩおよび／またはＩＩを阻害する。トポイソメラーゼインヒビターは、例えば、トポテカン、ヒカプタミン、イリノテカン、ルビテカン、６−エトキシプロピオニル−３’，４’−Ｏ−エキソベンジリデンチャートロイシン（exobenzylidenechartreusin）、９−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−５−ニトロピラゾロ［３，４，５−ｋｌ］アクリジン−２−（６Ｈ）プロパンアミン、１−アミノ−９−エチル−５−フルオロ−２，３−ジヒドロ−９−ヒドロキシ−４−メチル−１Ｈ，１２Ｈ−ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：ｂ，７］インドリジノ［１，２ｂ］キノリン−１０，１３（９Ｈ，１５Ｈ）−ジオン、ラルトテカン、７−［２−（Ｎ−イソプロピルアミノ）エチル］−（２０Ｓ）カンプトテシン、ＢＮＰ１３５０、ＢＮＰＩ１１００、ＢＮ８０９１５、ＢＮ８０９４２、リン酸エトポシド、テニポシド、ソブゾキサン、２’−ジメチルアミノ−２’−デオキシエトポシド、ＧＬ３３１、Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−９−ヒドロキシ−５，６−ジメチル−６Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］カルバゾール−１−カルボキサミド、アスラクリン、（５ａ，５ａＢ，８ａａ，９ｂ）−９−［２−［Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−Ｎ−メチルアミノ］エチル］−５−［４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシフェニル］−５，５ａ，６，８，８ａ，９−ヘキソヒドロフロ（３’，４’：６，７）ナフト（２，３−ｄ）−１，３−ジオキソール−６−オン、２，３−（メチレンジオキシ）−５−メチル−７−ヒドロキシ−８−メトキシベンゾ［ｃ］フェナンスリジニウム、６，９−ビス［（２−アミノエチル）アミノ］ベンゾ［ｇ］イソキノリン−５，１０−ジオン、５−（３−アミノプロピルアミノ）−７，１０−ジヒドロキシ−２−（２−ヒドロキシエチルアミノメチル）−６Ｈ−ピラゾロ［４，５，１−ｄｅ］アクリジン−６−オン、Ｎ−［１−［２（ジエチルアミノ）−エチルアミノ］−７−メトキシ−９−オキソ−９Ｈ−チオキサンテン−４−イルメチル］ホルムアミド、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）アクリジン−４−カルボキサミド、６−［［２−（ジメチルアミノ）エチル］アミノ］−３−ヒドロキシ−７Ｈ−インデノ［２，１−ｃ］キノリン−７−オン、およびジメスナである。
【００１８】
好ましくは、トポイソメラーゼインヒビターは、カンプトテシン誘導体、好ましくはイリノテカン、トポテカン、またはエトポシドのいずれか１つ、より好ましくはイリノテカンである。イリノテカンはまた、ＣＰＴ−１１としても知られており、以下の構造：
【００１９】
【化１】
2021517145.tif 000002
を有する。
【００２０】
別段指定がない限り、用語「イリノテカン」はまた、薬学的に許容されるその塩、例えば、塩酸塩、および、ＳＮ−３８のようなその代謝物を含む。
【００２１】
好ましくは、イリノテカンは、２０ｍｇ〜３００ｍｇ、より好ましくは４０〜２００ｍｇの量で、２〜４週間の期間内に、好ましくは約３週間の期間内に、患者に投与され、期間は、好ましくは１サイクルとみなされる。より好ましくは、患者に投与されるイリノテカンの量は、患者の体表面１平方メートル当たりのｍｇ、すなわちｍｇ／ｍ２で示される。したがって、より好ましくは、イリノテカンは、３０ｍｇ／ｍ２〜１００ｍｇ／ｍ２、より好ましくは５０ｍｇ／ｍ２〜７０ｍｇ／ｍ２の量で、例えば、約６０ｍｇ／ｍ２の量で、２〜４週間の期間内に、好ましくは約３週間の期間内に、患者に投与され、期間は、好ましくは１サイクルとみなされる。さらにより好ましくは、患者に投与されるイリノテカンの量が、１日に、好ましくはイリノテカンに対して１サイクルの開始時に、患者に投与される。とりわけ好ましくは、イリノテカンは、約２１日からなる１サイクルの第１日に、１日当たり約４０ｍｇ／ｍ２〜６０ｍｇ／ｍ２の量で、患者に投与される。好ましくは２〜１２サイクル、より好ましくは４〜８サイクル、とりわけ約６サイクルを、好ましくは実質的に休止することなく、イリノテカンに対して患者に適用する。イリノテカンに対して上述した全ての手順／レジメンは、好ましくは手順／レジメンの各々の繰返しの間に休止して、１回または複数回、好ましくは１〜１２回、とりわけ２〜６回、例えば、約５回繰り返すことができる。
【００２２】
好ましくは、ＡＴＭインヒビターのＩＣ５０は、１ｍＭ未満、より好ましくは１００μＭ未満、より好ましくは１μＭ未満、より好ましくは１００ｎＭ未満、最も好ましくは１０ｎＭ未満である。好ましくは、ＡＴＭインヒビターは、ＡＴＭのＩＣ５０の他のキナーゼのＩＣ５０に対する比により測定した場合に、他のキナーゼ、好ましくはＡＴＲに対して少なくとも１０倍、より好ましくは少なくとも１００倍、最も好ましくは少なくとも１０００倍である、ＡＴＭ阻害特異性を有する。
【００２３】
ＡＴＭインヒビターのＩＣ５０を測定するためのアッセイは、当業者に周知されている。ＩＣ５０は、例えば、以下の生化学ＡＴＭキナーゼアッセイを用いて決定することができる。アッセイは、２つのステップ：酵素反応および検出ステップからなる。最初に、ＡＴＭタンパク質および被検物質を、基質タンパク質ｐ５３およびＡＴＰを加えて、異なる濃度でインキュベートする。ＡＴＭは、アミノ酸Ｓ１５を含むいくつかの位置で、ｐ５３のリン酸化を媒介する。リン酸化ｐ５３の量は、特異的抗体およびＴＲ−ＦＲＥＴ法を用いて決定する。酵素的ＡＴＭアッセイは、ＴＲ−ＦＲＥＴ（ＨＴＲＦＴＭ、Ｃｉｓｂｉｏ  Ｂｉｏａｓｓａｙｓ）ベースの３８４ウェルアッセイで行う。第１のステップでは、精製されたヒト組換えＡＴＭ（ヒトＡＴＭ、完全長、ＧｅｎＢａｎｋ  ＩＤ  ＮＭ＿００００５１、哺乳動物細胞株で発現）を、様々な濃度でのＡＴＭインヒビターで、陰性または中性対照としての被検物質なしに、１５分間、アッセイ緩衝液においてインキュベートする。アッセイ緩衝液は、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ８．０、１０ｍＭ  Ｍｇ（ＣＨ３ＣＯＯ）２、１ｍＭ  ＭｎＣｌ２、０．１％ＢＳＡ、および０．０１％Ｂｒｉｊ（登録商標）３５、５ｍＭジチオトレイトール（ＤＴＴ）を含む。被検物質溶液は、ＥＣＨＯ５５５（Ｌａｂｃｙｔｅ）を使用して、マイクロタイタープレートに分注する。第２のステップでは、精製されたヒト組換えｃｍｙｃ標識ｐ５３（ヒトｐ５３、完全長、ＧｅｎＢａｎｋ  ＩＤ  ＢＣ００３５９６、Ｓｆ２１昆虫細胞で発現）およびＡＴＰを添加し、反応混合物を、２２℃で３０〜３５分間、インキュベートする。薬理学的に関連するアッセイ体積は、５μｌである。反応混合物のインキュベートの間のアッセイの最終濃度は、０．３〜０．４ｎＭ  ＡＴＭ、５０〜７５ｎＭ  ｐ５３、および１０μＭ  ＡＴＰである。酵素反応は、ＥＤＴＡを添加することにより停止させる。ＡＴＰの存在下でのＡＴＭ媒介反応の結果としてのリン酸化ｐ５３の形成は、ＦＲＥＴを可能とする、［ドナーとしてのフルオロフォアユウロピウム（Ｅｕ）、およびアクセプターとしてのｄ２で標識された（Ｃｉｓｂｉｏ  Ｂｉｏａｓｓａｙｓ）］特異的抗体を介して検出される。２μｌの抗体含有停止溶液（１２．５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ８．０、１２５ｍＭ  ＥＤＴＡ、３０ｍＭ塩化ナトリウム、３００ｍＭフッ化カリウム、０．１００６％Ｔｗｅｅｎ−２０、０．００５％Ｂｒｉｊ（登録商標）３５、０．２１ｎＭ抗ホスホ−ｐ５３（ｓｅｒ１５）−Ｅｕ抗体、および１５ｎＭ抗ｃｍｙｃ−ｄ２抗体）を、反応混合物に添加する。インキュベート後、通常、２時間（１．５〜１５時間の間）、シグナルの発現のために、ＴＲＦモードを（レーザー励起と共に）使用してプレートリーダー（ＥｎＶｉｓｉｏｎ、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）でプレートを分析する。３４０ｎｍの波長でのドナーユウロピウムの励起後、６６５ｎｍでのアクセプターｄ２および６１５ｎｍでのドナーＥｕの両方の放出された蛍光を測定する。リン酸化ｐ５３の量は、放射光の量の比率、すなわち、６６５ｎｍおよび６１５ｎｍでの相対蛍光単位（ＲＦＵ）の比率に正比例する。測定データは、Ｇｅｎｅｄａｔａ  Ｓｃｒｅｅｎｅｒソフ��ウェアを用いて処理される。ＩＣ５０の決定は、特に、非線形回帰分析を用いて、用量／作用曲線を、データポイントに当てはめることにより行う。
ＩＣ５０＝最大半量阻害濃度
ＡＴＰ＝アデノシン三リン酸
ＴＲ−ＦＲＥＴ＝時間分解蛍光共鳴エネルギー移動
ＨＴＲＦ（登録商標）＝均一時間分解蛍光
ＨＥＰＥＳ＝２−（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル）エタンスルホン酸
Ｍｇ（ＣＨ３ＣＯＯ）２＝酢酸マグネシウム
ＭｎＣｌ２＝塩化マンガン（ＩＩ）
ＢＳＡ＝ウシ血清アルブミン
ＥＤＴＡ＝エチレンジアミン四酢酸塩
ＴＲＦ＝時間分解蛍光
【００２４】
ＡＴＭインヒビターは、以下の群から選択することができる：
【００２５】
【表１−１】
2021517145.tif 000003
【００２６】
【表１−２】
2021517145.tif 000004
【００２７】
【表１−３】
2021517145.tif 000005
【００２８】
【表１−４】
2021517145.tif 000006
【００２９】
一部の実施形態では、ＡＴＭインヒビターは、イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン誘導体である。より好ましくは、ＡＴＭインヒビターは、国際公開第２０１２／０２８２３３号パンフレットの請求項６の化合物、または国際公開第２０１６／１５５８８４号パンフレットの請求項１８の化合物からなる群から選択されるいずれか一つである。最も好ましくは、ＡＴＭインヒビターは、３−フルオロ−４−［７−メトキシ−３−メチル−８−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロイミダゾ［４，５−ｃ］−キノリン−１−イル］ベンゾニトリル（化合物１ともいう）である。
【００３０】
化合物１は、２０１２年３月８日に公開された国際公開第２０１２／０２８２３３号パンフレットに詳述されている。化合物１は、国際公開第２０１２／０２８２３３号パンフレットの表５の化合物３６と指定される。
【００３１】
別段指定がない限り、用語「化合物１」はまた、薬学的に許容されるその塩も含む。
【００３２】
化合物１の可能な投与量は、国際公開第２０１２／０２８２３３号パンフレットに記載されている。
【００３３】
別の好ましい実施形態では、ＡＴＭインヒビターは、８−（１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１−（３−フルオロ−５−メトキシ−ピリジン−４−イル）−７−メトキシ−３−メチル−１，３−ジヒドロ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン、または薬学的に許容されるその塩である。
【００３４】
好ましくは、ＡＴＭインヒビターは、化合物１、もしくは８−（１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１−（３−フルオロ−５−メトキシ−ピリジン−４−イル）−７−メトキシ−３−メチル−１，３−ジヒドロ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン、または薬学的に許容されるその塩である。
【００３５】
用語「免疫系を刺激する薬剤」とは、免疫系の活性を高めることが可能な薬剤を指す。一部の実施形態では、免疫系を刺激する薬剤は、免疫チェックポイントインヒビター、例えば、ＰＤ−１（プログラム細胞死１）経路のアンタゴニスト（「ＰＤ−１アンタゴニスト」ともいう）である。好ましくは、免疫系を刺激する薬剤は、抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム死リガンド１）抗体である。
【００３６】
「抗ＰＤ−Ｌ１抗体」とは、がん細胞に発現されたＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１への結合を阻止する抗体を意味する。ヒト対象を治療する本発明の治療方法、医薬および使用のいずれかでは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、特異的にヒトＰＤ−Ｌ１に結合し、ヒトＰＤ−Ｌ１のヒトＰＤ−１への結合を阻止する。抗体は、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体であってもよく、ヒト定常領域を含んでもよい。一部の実施形態では、ヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４定常領域からなる群から選択され、好ましい実施形態では、ヒト定常領域は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常領域である。一部の実施形態では、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、およびＦｖ断片からなる群から選択される。ヒトＰＤ−Ｌ１に結合し、本発明の治療方法、医薬、および使用に有用な抗体の例は、国際公開第２００７／００５８７４号パンフレット、国際公開第２０１０／０３６９５９号パンフレット、国際公開第２０１０／０７７６３４号パンフレット、国際公開第２０１０／０８９４１１号パンフレット、国際公開第２０１３／０１９９０６号パンフレット、国際公開第２０１３／０７９１７４号パンフレット、国際公開第２０１４／１０００７９号パンフレット、国際公開第２０１５／０６１６６８号パンフレット、ならびに、米国特許第８，５５２，１５４号明細書、米国特許第８，７７９，１０８号明細書、および米国特許第８，３８３，７９６号明細書に記載されている。本発明の治療方法、医薬、および使用においてＰＤ−Ｌ１抗体として有用な特異的抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体として、限定されないが、例えば、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、ニボルマブ（ＢＭＳ−９３６５５８）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（ＩｇＧ１操作された抗ＰＤ−Ｌ１抗体）、ＢＭＳ−９３６５５９（完全ヒト抗ＰＤ−Ｌ１、ＩｇＧ４モノクローナル抗体）、ＭＥＤＩ４７３６（抗体依存性細胞媒介性細胞傷害活性を除去するために、Ｆｃドメインに三重突然変異を有する、操作されたＩｇＧ１カッパモノクローナル抗体）、国際公開第２０１３／０７９１７４号パンフレットの配列番号２４および配列番号２５それぞれの重鎖および軽鎖可変領域を含む抗体、ならびに、国際公開第２０１５／１１８１７５号パンフレットの配列番号１および配列番号３それぞれの軽鎖および重鎖配列を含む抗体が挙げられる。一部の好ましい実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、国際公開第２０１３／０７９１７４号パンフレットの重鎖配列、配列番号３２、および軽鎖配列、配列番号３３を含む。一部の好ましい実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、アベルマブである。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ヒト対象の治療に使用される。一部の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１は、ヒトＰＤ−Ｌ１である。
【００３７】
一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、静脈内（例えば静脈内注入として）または皮下に投与される。好ましくは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、静脈内注入として投与される。より好ましくは、インヒビターは、５０〜８０分間投与され、最も好ましくは１時間の静脈内注入として投与される。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、隔週で（すなわち２週おきに、または「Ｑ２Ｗ」）、体重１ｋｇ当たり約１０ｍｇの用量で投与される。
【００３８】
一部の実施形態では、上記の治療方法のいずれかは、化学療法（ＣＴ）、放射線療法（ＲＴ）、または化学放射線療法（ＣＲＴ）をさらに組み合わせて使用する。
【００３９】
放射線療法は、電子、光子、陽子、アルファ放出体、他のイオン、放射性ヌクレオチド、ホウ素捕捉中性子、およびそれらの組合せで与えられる治療であり得る。一部の実施形態では、放射線療法は、約３５〜７０Ｇｙ／２０〜３５分画を含む。
【００４０】
「化学療法」は、腫瘍またはがんの治療に有用な化学化合物である、化学療法剤を伴う療法である。化学療法剤の例として、アルキル化剤、例えばチオテパおよびシクロホスファミド；アルキルスルホン酸塩、例えばブスルファン、インプロスルファン、およびピポスルファン；アジリジン、例えばベンゾドーパ（benzodopa）、カルボコン、メツレドーパ（meturedopa）、およびウレドーパ（uredopa）；エチレンイミンおよびメチロールメラミン（アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド、およびトリメチロールメラミンを含む）；アセトゲニン（とりわけブラタシンおよびブラタシノン）；デルタ−９−テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール）；ベータ−ラパコン；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトテシン（合成類似体トポテカン（ＣＰＴ−１１（イリノテカン））、アセチルカンプトテシン、スコポレクチン（scopolectin）、および９−アミノカンプトテシンを含む）；ブリオスタチン；ペメトレキセド；カリスタチン（callystatin）；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼルシン、およびビゼレシン合成類似体を含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸；テニポシド；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体ＫＷ−２１８９およびＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エロイテロビン（eleutherobin）；パンクラチスタチン；ＴＬＫ−２８６；ＣＤＰ３２３、経口アルファ−４インテグリンインヒビター；サルコジクチイン；スポンギスタチン；ナイトロジェンマスタード、例えばクロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノブエンビキン（novembichin）、フェネステリン、プレドニマスチン、トロホスファミド、およびウラシルマスタード；ニトロソウレア、例えばカルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチン；抗生物質、例えばエンジイン抗生物質（例として、カリケアミシン、とりわけカリケアミシンガンマｌｌおよびカリケアミシンオメガｌｌ（例として、Nicolaou et al. (1994) Angew. Chem Intl. Ed. Engl. 33: 183を参照）；ジネミシン（dynemicin）（ジネミシンＡを含む）；エスペラミシン；ならびに、ネオカルジノスタチン発色団、および関連するクロモプロテインエンジイン抗生物質発色団、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン（carabicin）、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン（detorubicin）、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン（モルフォリノ−ドキソルビシン、シアノモルフォリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣｌリポソーム注射、およびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、例えばマイトマイシンＣ、マイコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、���トフィロマイシン（potfiromycin）、ピューロマイシン、クエラマイシン（quelamycin）、ロドルビシン（rodorubicin）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、およびゾルビシン；代謝拮抗剤、例えばメトトレキセート、ゲムシタビン、テガフール、カペシタビン、エポチロン、および５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；葉酸類似体、例えばデノプテリン、メトトレキセート、プテロプテリン、およびトリメトレキセート；プリン類似体、例えばフルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、およびチオグアニン；ピリミジン類似体、例えばアンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、およびイマチニブ（２−フェニルアミノピリミジン誘導体）、ならびに、他のｃ−Ｋｉｔインヒビター；抗副腎剤、例えばアミノグルテチミド、ミトタン、およびトリロスタン；葉酸補充液、例えばフォリン酸；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトレキセート；デフォファミン（defofamine）；デメコルシン；ジアジコン；エフロルニチン；酢酸エリプチニウム；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダイニン（lonidainine）；メイタンシノイド、例えばメイタンシンおよびアンサマイトシン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール（mopidanmol）；ニトラエリン（nitraerine）；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；２−エチルヒドラジド（ethylhydrazide）；プロカルバジン；ＰＳＫ多糖類複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（とりわけ、Ｔ−２トキシン、ベラクリン（verracurin）Ａ、ロリジンＡ、およびアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（gacytosine）；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；チオテパ；タキソイド、例えばパクリタキセル、パクリタキセルのアルブミン操作されたナノ粒子製剤、およびドセタキセル；クロラムブシル；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキセート；白金類似体、例えばシスプラチンおよびカルボプラチン；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；オキサリプラチン；ロイコボリン；ビノレルビン；ノバントロン；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロン酸塩；トポイソメラーゼインヒビターＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド、例えばレチノイン酸；上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体；ならびに、上記の２つ以上の組合せ、例えばＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾロンの併用療法の略）、またはＦＯＬＦＯＸ（５−ＦＵおよびロイコボリンと組み合わせたオキサリプラチンとの治療レジメンの略）が挙げられる。
【００４１】
本明細書で参照する化合物は、治療有効量で使用される。化合物の「治療有効量」とは、予防的または治療的な側面から効果的である量を指す。腫瘍またはがんの治療の場合、治療有効量の化合物の投与は、意図する治療効果、例えば、患者の腫瘍もしくはがんの１つもしくは複数の兆候の緩和、改善、寛解もしくは排除、または、腫瘍もしくはがんの患者の治療の過程におけるいずれかの他の臨床結果に寄与するであろう。治療効果は、１用量の投与で必ずしも起こらず、一連の用量の投与後のみに起こり得る。ゆえに、治療有効量は、１回または複数回の投与で投与することができる。このような治療有効量は、個々の疾患状態、年齢、性別、および体重、ならびに個々において所望の応答を誘発する化合物の能力のような因子によって異なり得る。治療有効量はまた、治療的に有益な効果が、化合物のいかなる毒性または有害な効果を上回る量である。
【００４２】
本開示はまた、上述のトポイソメラーゼインヒビター、ＡＴＭインヒビター、および免疫系を刺激する薬剤を含む、キットおよび薬学的に許容される組成物に関する。
【００４３】
「薬学的に許容される」とは、物質または組成物が、製剤を含む残りの成分および／またはそれによって治療される対象と、化学的および／または毒物学的に適合しなければならないことを示す。「薬学的に許容される担体」には、生理学的に適合するあらゆる溶媒、分散媒体、コーティング、抗細菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などが含まれる。薬学的に許容される担体の例として、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなどの１つまたは複数、ならびにそれらの組合せが挙げられる。
【００４４】
本開示の組成物は、様々な形態であり得る。これらは、例えば、液体、半固体および固体剤形、例えば、液剤（例として、注射用および注入用液剤）、分散剤または懸濁剤、錠剤、丸剤、散剤、リポソーム剤、ならびに坐剤を含む。好ましい形態は、投与および治療適用の意図する様式に依存する。典型的な好ましい組成物は、注射用または注入用液剤の形態であり、例えば、ヒトの受動免疫法で使用されるものに類似した組成物である。投与の好ましい様式は、非経口（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、または筋肉内）である。好ましい実施形態では、組成物は、静脈内注入または注射により投与される。別の好ましい実施形態では、組成物は、筋肉内または皮下注射により投与される。
【００４５】
経口投与用の液体剤形として、限定されないが、薬学的に許容される乳剤、ミクロ乳剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤、およびエリキシル剤が挙げられる。トポイソメラーゼインヒビター、ＡＴＭインヒビター、および／または免疫系を刺激する薬剤に加えて、液体剤形は、当該技術分野で一般的に使用される不活性希釈剤、例えば、水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に、綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、およびソルビタンの脂肪酸エステル、ならびにそれらの混合物を含有することができる。不活性希釈剤の他に、経口組成物はまた、補助剤、例えば湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤、甘味剤、着香剤、および香料を含むこともできる。
【００４６】
注射用調製物、例えば、無菌注射用水性または油性懸濁液は、好適な分散化剤または湿潤剤、および懸濁化剤を使用して公知の技術に従って製剤化することができる。無菌注射用調製物はまた、無毒性の、非経口的に許容される希釈液または溶媒中の無菌注射用液剤、懸濁剤、または乳剤、例えば、１，３−ブタンジオール中溶液であり得る。許容されるビヒクルおよび溶媒のうち、利用することができるのは、水、リンガー溶液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．および等張性塩化ナトリウム溶液である。加えて、無菌不揮発性油が、従来、溶媒または懸濁媒体として利用されている。この目的のために、合成モノまたはジグリセリドを含む、任意の無刺激性不揮発性油を利用することができる。加えて、オレイン酸のような脂肪酸を、注射剤の調製に使用する。
【００４７】
注射用製剤は、例えば、細菌保持フィルターを通したろ過により、または、使用する前に、無菌水または他の無菌注射用媒体に溶解または分散することができる、無菌固体組成物の形態で滅菌剤を組み込むことにより、滅菌することができる。
【００４８】
トポイソメラーゼインヒビター、ＡＴＭインヒビター、および／または免疫系を刺激する薬剤の効果を延長するために、多くの場合、皮下または筋肉内注射からの吸収を遅くすることが望ましい。これは、難水溶性である結晶性または非晶性物質の液体懸濁剤を使用することにより達成することができる。次いで、吸収速度は、その溶解速度に依存し、溶解速度はまた、結晶径および結晶形に依存する。あるいは、化合物を油ビヒクルに溶解または懸濁させることにより、非経口投与されるトポイソメラーゼインヒビター、ＡＴＭインヒビター、および／または免疫系を刺激する薬剤の吸収を遅延させることができる。注射用デポ形態は、ポリラクチド−ポリグリコリドのような生分解性ポリマー中に、トポイソメラーゼインヒビター、ＡＴＭインヒビター、および／または免疫系を刺激する薬剤のマイクロカプセルマトリクスを形成することにより作製される。化合物とポリマーとの比および利用する特定のポリマーの性質に依存して、化合物放出の速度を制御できる。他の生分解性ポリマーの例として、ポリ（オルトエステル）およびポリ（無水物）が挙げられる。デポ注射用製剤はまた、体組織に適合するリポソーム剤またはミクロ乳剤に、化合物を収容することにより調製する。
【００４９】
直腸または膣内投与用の組成物は、好ましくは、坐剤であり、これは、本発明の化合物と、ココアバター、ポリエチレングリコールまたは坐薬ワックスのような好適な非刺激性添加剤または担体とを混合することにより調製することができ、周囲温度で固体であるが、体温で液体であるため、直腸または膣内で溶融し、活性化合物を放出する。
【００５０】
経口投与用の固体剤形として、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤、および顆粒剤が挙げられる。このような固体剤形では、活性化合物は、少なくとも１つの不活性で薬学的に許容される添加剤または担体、例えば、クエン酸ナトリウムもしくはリン酸二カルシウム、ならびに／または、ａ）充填剤もしくは増量剤、例えばデンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、およびケイ酸、ｂ）結合剤、例えばカルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロース、およびアカシア、ｃ）保水剤、例えばグリセロール、ｄ）崩壊剤、例えば寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、特定のケイ酸塩、および炭酸ナトリウム、ｅ）溶解遅延剤、例えばパラフィン、ｆ）吸収促進剤、例えば第四級アンモニウム化合物、ｇ）湿潤剤、例えばセチルアルコール、およびモノステアリン酸グリセロール、ｈ）吸収剤、例えばカオリン、およびベントナイト粘土、ならびに、ｉ）滑沢剤、例えばタルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、ならびに、それらの混合物と混合する。カプセル剤、錠剤、および丸剤の場合、剤形はまた、緩衝化剤を含み得る。
【００５１】
類似の種類の固体組成物はまた、ラクトースまたは乳糖、ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどのような添加剤を使用して、軟質および硬質充填ゼラチンカプセル剤における充填剤として利用することができる。錠剤、糖衣錠、カプセル剤、丸剤、および顆粒剤の固体剤形は、腸溶コーティングおよび薬学的製剤化（pharmaceutical formulating）の技術分野で周知の他のコーティングのような、コーティングおよびシェルを用いて調製することができる。それらは、任意選択で不透明化剤を含有し得、それらが活性成分のみを放出する、または優先的に腸管の特定の部分で、任意選択で遅延して、活性成分を放出する組成であってもよい。使用することができる埋封組成物の例として、ポリマー物質およびワックスが挙げられる。
【００５２】
トポイソメラーゼインヒビター、ＡＴＭインヒビター、および／または免疫系を刺激する薬剤はまた、上述した通り、１つまたは複数の添加剤を含むマイクロカプセル形態であり得る。錠剤、糖衣錠、カプセル剤、丸剤、および顆粒剤の固体剤形は、腸溶コーティング、放出制御コーティング、および薬学的製剤化分野で周知の他のコーティングのような、コーティングおよびシェルを用いて調製することができる。このような固体剤形では、トポイソメラーゼインヒビター、ＡＴＭインヒビター、および／または免疫系を刺激する薬剤は、スクロース、ラクトース、またはデンプンのような少なくとも１つの不活性希釈剤と混合し得る。このような剤形はまた、通常実施されるように、不活性希釈剤以外の追加物質、例えば、打錠用滑沢剤、および他の打錠用助剤、例としてステアリン酸マグネシウムおよび微結晶セルロースを含むこともできる。カプセル剤、錠剤、および丸剤の場合、剤形はまた、緩衝化剤を含み得る。これらは、任意選択で不透明化剤を含有し得、それらが活性成分のみを放出する、または優先的に腸管の特定の部分で、任意選択で遅延して、活性成分を放出する組成であってもよい。使用することができる埋封組成物の例として、ポリマー物質およびワックスが挙げられる。
【００５３】
トポイソメラーゼインヒビター、ＡＴＭインヒビター、および／または免疫系を刺激する薬剤の局所または経皮的投与用の剤形として、軟膏剤、ペースト剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、散剤、液剤、スプレー剤、吸入剤、または貼付剤が挙げられる。活性成分は、薬学的に許容される担体、および必要に応じて、任意の必要な保存剤または緩衝剤と、滅菌条件下で混合する。眼科用製剤、点耳剤、および点眼剤もまた、本発明の範囲内であると考えられる。さらに、本発明は、経皮的貼付剤の使用を考慮し、経皮的貼付剤は、化合物を身体に制御して送達するさらなる利点を有する。このような剤形は、適切な媒体に化合物を溶解または分散することにより作製することができる。吸収促進剤もまた、化合物の皮膚を透過する流量を高めるために使用することができる。速度制御膜を提供すること、またはポリマーマトリクスもしくはゲル中の化合物を分散することのいずれかにより、速度を制御することができる。
【００５４】
典型的には、トポイソメラーゼインヒビター、ＡＴＭインヒビター、および／または免疫系を刺激する薬剤は、対象への投与に好適な医薬組成物に組み込まれ、医薬組成物は、トポイソメラーゼインヒビター、ＡＴＭインヒビター、および／または免疫系を刺激する薬剤、ならびに薬学的に許容される担体を含む。多くの場合、組成物中に、等張剤、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールのようなポリアルコール、または塩化ナトリウムを含むことが好ましい。薬学的に許容される担体は、少量の補助物質、例えば湿潤剤または乳化剤、保存剤、または緩衝剤をさらに含むことができ、トポイソメラーゼインヒビター、ＡＴＭインヒビター、および／または免疫系を刺激する薬剤の貯蔵寿命または有効性を高める。
【００５５】
治療組成物は、典型的には、製造および保管の条件下で、無菌で安定でなければならない。組成物は、液剤、ミクロ乳剤、分散剤、リポソーム剤、または、高い薬物濃度に好適な他の規則構造として製剤化することができる。無菌注射用液剤は、トポイソメラーゼインヒビター、ＡＴＭインヒビター、および／または免疫系を刺激する薬剤を所望の量で、上で列挙した１つの成分または成分の組合せを含む適切な溶媒に、必要に応じて組み合わせた後、ろ過滅菌することにより、調製することができる。一般に、分散剤は、活性成分を、基本的な分散媒体、および上で列挙したものから所望の他の成分を含有する無菌ビヒクルに組み込むことによって調製される。無菌注射用液剤の調製用の無菌粉末の場合、好ましい調製方法は、既に滅菌ろ過したその溶液から、活性成分と任意の所望の追加成分との粉末をもたらす真空乾燥および凍結乾燥である。溶液の適切な流動性は、例えば、レシチンのようなコーティングの使用、分散剤の場合は所望の粒径の維持、および、界面活性剤の使用により維持することができる。組成物中に、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを含むことにより、注射用組成物の吸収は延長することができる。
【００５６】
一実施形態では、アベルマブは、ＩＶ投与を意図した無菌の透明で無色の溶液である。アベルマブバイアルの内容物は、非発熱性であり、静菌性保存剤を含有しない。アベルマブは、２０ｍｇ／ｍＬの溶液として製剤化され、単回使用のガラスバイアルで供給され、ゴム製の隔壁で栓をし、アルミニウムポリプロピレンフリップオフシールで密封する。投与目的で、アベルマブは、０．９％塩化ナトリウム（生理食塩水）で希釈しなければならない。ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）製の０．２ミクロンのインライン低タンパク質結合フィルターを有するチューブを、投与の間、使用する。
【００５７】
さらなる態様では、本発明は、トポイソメラーゼインヒビター、ＡＴＭインヒビター、および免疫系を刺激する薬剤からなる群から選択される１つの化合物を含むキット、ならびに、対象において腫瘍、好ましくはがんを治療するために、残りの２つの化合物と組み合わせた３つの上記化合物のいずれかを使用するための指示を含む添付文書に関する。さらに提供されるのは、免疫系を刺激する薬剤、好ましくは抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含むキット、ならびに、対象において腫瘍、好ましくはがんを治療するために、トポイソメラーゼインヒビターおよびＡＴＭインヒビターと組み合わせた免疫系を刺激する薬剤を使用するための指示を含む添付文書である。さらに提供されるのは、トポイソメラーゼインヒビター、ＡＴＭインヒビター、および免疫系を刺激する薬剤を含むキット、ならびに、対象において腫瘍、好ましくはがんを治療するために、トポイソメラーゼインヒビター、ＡＴＭインヒビター、および免疫系を刺激する薬剤を使用するための指示を含む添付文書である。キットの化合物は、別々の容器に入っていてもよい。あるいは、２つ以上の化合物が、同じ容器に入っている。キットは、第１の容器、第２の容器、第３の容器、および添付文書を含むことができ、第１の容器は、トポイソメラーゼインヒビターを含む少なくとも１用量の医薬を含み、第２の容器は、ＡＴＭインヒビターを含む少なくとも１用量の医薬を含み、第３の容器は、免疫系を刺激する薬剤を含む少なくとも１用量の医薬を含み、添付文書は、医薬を使用して、腫瘍またはがんの対象を治療するための指示を含む。第１、第２、および第３の容器は、同じもしくは別々の形状（例えばバイアル、シリンジ、および瓶）、ならびに／または、材料（例えばプラスチックもしくはガラス）で構成されることができる。キットは、希釈剤、フィルター、ＩＶバッグおよびライン、針、ならびにシリンジのような、医薬を投与するのに有用であり得る他の材料をさらに含むことができる。
【００５８】
一部の実施形態では、本開示は、以下に関する：
１．対象において腫瘍、好ましくはがんを治療する方法における使用のためのトポイソメラーゼインヒビター、ＡＴＭインヒビター、および免疫系を刺激する薬剤であって、同時にまたは逐次的に対象に投与される、トポイソメラーゼインヒビター、ＡＴＭインヒビター、および免疫系を刺激する薬剤。
２．トポイソメラーゼインヒビターが、トポイソメラーゼＩインヒビター、好ましくはイリノテカンである、項目１に記載の使用のための化合物。
３．ＡＴＭインヒビターが、イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン誘導体、好ましくは化合物１または８−（１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１−（３−フルオロ−５−メトキシ−ピリジン−４−イル）−７−メトキシ−３−メチル−１，３−ジヒドロ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン、より好ましくは化合物１である、項目１または２に記載の使用のための化合物。
４．免疫系を刺激する薬剤が、免疫チェックポイントインヒビター、好ましくはＰＤ−１アンタゴニスト、より好ましくは抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、項目１から３のいずれか一項に記載の使用のための化合物。
５．トポイソメラーゼインヒビターが、イリノテカンであり、ＡＴＭインヒビターが、化合物１であり、免疫系を刺激する薬剤が、ＰＤ−１アンタゴニストである、項目１から４のいずれか一項に記載の使用のための化合物。
６．腫瘍またはがんが、結腸直腸腫瘍または結腸直腸がん、乳房腫瘍または乳がん、卵巣腫瘍または卵巣がん、膵臓腫瘍または膵臓がん、胃腫瘍または胃がん、前立腺腫瘍または前立腺がん、腎臓腫瘍または腎臓がん、子宮頚部腫瘍または子宮頚部がん、骨髄腫、リンパ腫、白血病、甲状腺腫瘍または甲状腺がん、子宮内膜腫瘍または子宮内膜がん、子宮腫瘍または子宮がん、膀胱腫瘍または膀胱がん、神経内分泌腫瘍または神経内分泌がん、頭頚部腫瘍または頭頚部がん、肝臓腫瘍または肝臓がん、上咽頭腫瘍または上咽頭がん、精巣腫瘍または精巣がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、黒色腫、基底細胞皮膚がん、扁平上皮細胞皮膚がん、隆起性皮膚線維肉腫、メルケル細胞癌、膠芽腫、神経膠腫、肉腫、中皮腫、および骨髄異形成症候群からなる群から選択される、項目１から５のいずれか一項に記載の使用のための化合物。
７．腫瘍またはがんが、ＡＴＭを発現する、項目１から５のいずれか一項に記載の使用のための化合物。
８．対象において腫瘍、好ましくはがんを治療する方法であって、トポイソメラーゼインヒビター、ＡＴＭインヒビター、および免疫系を刺激する薬剤を、同時にまたは逐次的に対象に投与することを含む、方法。
９．トポイソメラーゼインヒビターが、トポイソメラーゼＩインヒビター、好ましくはイリノテカンである、項目８に記載の方法。
１０．ＡＴＭインヒビターが、イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン誘導体、好ましくは化合物１または８−（１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１−（３−フルオロ−５−メトキシ−ピリジン−４−イル）−７−メトキシ−３−メチル−１，３−ジヒドロ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン、より好ましくは化合物１である、項目８または９に記載の方法。
１１．免疫系を刺激する薬剤が、免疫チェックポイントインヒビター、好ましくはＰＤ−１アンタゴニスト、より好ましくは抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、項目８から１０のいずれか一項に記載の方法。
１２．トポイソメラーゼインヒビターが、イリノテカンであり、ＡＴＭインヒビターが、化合物１であり、免疫系を刺激する薬剤が、ＰＤ−１アンタゴニストである、項目８から１１のいずれか一項に記載の方法。
１３．腫瘍またはがんが、結腸直腸腫瘍または結腸直腸がん、乳房腫瘍または乳がん、卵巣腫瘍または卵巣がん、膵臓腫瘍または膵臓がん、胃腫瘍または胃がん、前立腺腫瘍または前立腺がん、腎臓腫瘍または腎臓がん、子宮頚部腫瘍または子宮頚部がん、骨髄腫、リンパ腫、白血病、甲状腺腫瘍または甲状腺がん、子宮内膜腫瘍または子宮内膜がん、子宮腫瘍または子宮がん、膀胱腫瘍または膀胱がん、神経内分泌腫瘍または神経内分泌がん、頭頚部腫瘍または頭頚部がん、肝臓腫瘍または肝臓がん、上咽頭腫瘍または上咽頭がん、精巣腫瘍または精巣がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、黒色腫、基底細胞皮膚がん、扁平上皮細胞皮膚がん、隆起性皮膚線維肉腫、メルケル細胞癌、膠芽腫、神経膠腫、肉腫、中皮腫、および骨髄異形成症候群からなる群から選択される、項目８から１２のいずれか一項に記載の方法。
１４．腫瘍またはがんが、ＡＴＭを発現する、項目８から１３のいずれか一項に記載の方法。
１５．（ａ）トポイソメラーゼインヒビター；
（ｂ）ＡＴＭインヒビター；および
（ｃ）免疫系を刺激する薬剤
を含む、キットまたは組成物。
１６．トポイソメラーゼインヒビターが、トポイソメラーゼＩインヒビター、好ましくはイリノテカンである、項目１５に記載のキットまたは組成物。
１７．ＡＴＭインヒビターが、イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン誘導体、好ましくは化合物１または８−（１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１−（３−フルオロ−５−メトキシ−ピリジン−４−イル）−７−メトキシ−３−メチル−１，３−ジヒドロ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン、より好ましくは化合物１である、項目１５または１６に記載のキットまたは組成物。
１８．免疫系を刺激する薬剤が、免疫チェックポイントインヒビター、好ましくはＰＤ−１アンタゴニスト、より好ましくは抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、項目１５から１７のいずれか一項に記載のキットまたは組成物。
１９．トポイソメラーゼインヒビターが、イリノテカンであり、ＡＴＭインヒビターが、化合物１であり、免疫系を刺激する薬剤が、ＰＤ−１アンタゴニストである、項目１５から１８のいずれか一項に記載のキットまたは組成物。
２０．医薬として使用するための、項目１５から１９のいずれか一項に記載のキットまたは組成物。
２１．腫瘍、好ましくはがんを治療する方法における使用のための、項目１５から１９のいずれか一項に記載のキットまたは組成物。
２２．腫瘍またはがんが、結腸直腸腫瘍または結腸直腸がん、乳房腫瘍または乳がん、卵巣腫瘍または卵巣がん、膵臓腫瘍または膵臓がん、胃腫瘍または胃がん、前立腺腫瘍または前立腺がん、腎臓腫瘍または腎臓がん、子宮頚部腫瘍または子宮頚部がん、骨髄腫、リンパ腫、白血病、甲状腺腫瘍または甲状腺がん、子宮内膜腫瘍または子宮内膜がん、子宮腫瘍または子宮がん、膀胱腫瘍または膀胱がん、神経内分泌腫瘍または神経内分泌がん、頭頚部腫瘍または頭頚部がん、肝臓腫瘍または肝臓がん、上咽頭腫瘍または上咽頭がん、精巣腫瘍または精巣がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、黒色腫、基底細胞皮膚がん、扁平上皮細胞皮膚がん、隆起性皮膚線維肉腫、メルケル細胞癌、膠芽腫、神経膠腫、肉腫、中皮腫、および骨髄異形成症候群からなる群から選択される、項目２１に記載の使用のためのキットまたは組成物。
２３．腫瘍またはがんが、ＡＴＭを発現する、項目２１または２２に記載の使用のためのキットまたは組成物。
２４．対象において腫瘍、好ましくはがんを治療する方法であって、項目１５から１９のいずれか一項に記載の組成物またはキットの化合物を、同時にまたは逐次的に対象に投与することを含む、方法。
２５．腫瘍またはがんが、結腸直腸腫瘍または結腸直腸がん、乳房腫瘍または乳がん、卵巣腫瘍または卵巣がん、膵臓腫瘍または膵臓がん、胃腫瘍または胃がん、前立腺腫瘍または前立腺がん、腎臓腫瘍または腎臓がん、子宮頚部腫瘍または子宮頚部がん、骨髄腫、リンパ腫、白血病、甲状腺腫瘍または甲状腺がん、子宮内膜腫瘍または子宮内膜がん、子宮腫瘍または子宮がん、膀胱腫瘍または膀胱がん、神経内分泌腫瘍または神経内分泌がん、頭頚部腫瘍または頭頚部がん、肝臓腫瘍または肝臓がん、上咽頭腫瘍または上咽頭がん、精巣腫瘍または精巣がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、黒色腫、基底細胞皮膚がん、扁平上皮細胞皮膚がん、隆起性皮膚線維肉腫、メルケル細胞癌、膠芽腫、神経膠腫、肉腫、中皮腫、および骨髄異形成症候群からなる群から選択される、項目２４に記載の方法。
２６．腫瘍またはがんが、ＡＴＭを発現する、項目２４または２５に記載の方法。
２７．免疫原性細胞死を誘導することによる腫瘍、好ましくはがんの治療における使用のためのトポイソメラーゼインヒビター。
２８．腫瘍またはがんが、結腸直腸腫瘍または結腸直腸がん、乳房腫瘍または乳がん、卵巣腫瘍または卵巣がん、膵臓腫瘍または膵臓がん、胃腫瘍または胃がん、前立腺腫瘍または前立腺がん、腎臓腫瘍または腎臓がん、子宮頚部腫瘍または子宮頚部がん、骨髄腫、リンパ腫、白血病、甲状腺腫瘍または甲状腺がん、子宮内膜腫瘍または子宮内膜がん、子宮腫瘍または子宮がん、膀胱腫瘍または膀胱がん、神経内分泌腫瘍または神経内分泌がん、頭頚部腫瘍または頭頚部がん、肝臓腫瘍または肝臓がん、上咽頭腫瘍または上咽頭がん、精巣腫瘍または精巣がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、黒色腫、基底細胞皮膚がん、扁平上皮細胞皮膚がん、隆起性皮膚線維肉腫、メルケル細胞癌、膠芽腫、神経膠腫、肉腫、中皮腫、および骨髄異形成症候群からなる群から選択される、項目２７に記載の使用のためのトポイソメラーゼインヒビター。
２９．腫瘍またはがんが、ＡＴＭを発現する、項目２７または２８に記載の使用のためのトポイソメラーゼインヒビター。
３０．免疫原性細胞死の誘導、好ましくはＡＴＭを発現する細胞の免疫原性細胞死の誘導における使用のためのトポイソメラーゼインヒビター。
３１．トポイソメラーゼＩインヒビター、好ましくはイリノテカンである、項目２７から３０のいずれか一項に記載の使用のためのトポイソメラーゼインヒビター。
３２．ＡＴＭインヒビターと、同時にまたは逐次的に投与される、項目２７から３１のいずれか一項に記載の使用のためのトポイソメラーゼインヒビター。
３３．ＡＴＭインヒビターが、イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン誘導体、好ましくは化合物１または８−（１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１−（３−フルオロ−５−メトキシ−ピリジン−４−イル）−７−メトキシ−３−メチル−１，３−ジヒドロ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン、より好ましくは化合物１である、項目３２に記載の使用のためのトポイソメラーゼインヒビター。
３４．免疫系を刺激する薬剤と、同時にまたは逐次的に投与される、項目２７から３３のいずれか一項に記載の使用のためのトポイソメラーゼインヒビター。
３５．免疫系を刺激する薬剤が、免疫チェックポイントインヒビター、好ましくはＰＤ−１アンタゴニスト、より好ましくは抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、項目３４に記載の使用のためのトポイソメラーゼインヒビター。
３６．トポイソメラーゼインヒビターが、イリノテカンであり、ＡＴＭインヒビターが、化合物１であり、免疫系を刺激する薬剤が、ＰＤ−１アンタゴニストである、項目２７から３５のいずれか一項に記載の使用のためのトポイソメラーゼインヒビター。
３７．対象において免疫原性細胞死、好ましくはＡＴＭを発現する細胞の免疫原性細胞死を誘導する方法であって、トポイソメラーゼインヒビターが対象に投与される、方法。
３８．トポイソメラーゼインヒビターが、トポイソメラーゼＩインヒビター、好ましくはイリノテカンである、項目３７に記載の対象において免疫原性細胞死を誘導する方法。
３９．トポイソメラーゼインヒビターが、ＡＴＭインヒビターと、同時にまたは逐次的に投与される、項目３７または３８に記載の対象において免疫原性細胞死を誘導する方法。
４０．ＡＴＭインヒビターが、イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン誘導体、好ましくは化合物１または８−（１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１−（３−フルオロ−５−メトキシ−ピリジン−４−イル）−７−メトキシ−３−メチル−１，３−ジヒドロ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン、より好ましくは化合物１である、項目３７から３９のいずれか一項に記載の対象において免疫原性細胞死を誘導する方法。
４１．トポイソメラーゼインヒビターが、免疫系を刺激する薬剤と、同時にまたは逐次的に投与される、項目３７から４０のいずれか一項に記載の対象において免疫原性細胞死を誘導する方法。
４２．免疫系を刺激する薬剤が、免疫チェックポイントインヒビター、好ましくはＰＤ−１アンタゴニスト、より好ましくは抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、項目３７から４１のいずれか一項に記載の対象において免疫原性細胞死を誘導する方法。
４３．トポイソメラーゼインヒビターが、イリノテカンであり、ＡＴＭインヒビターが、化合物１であり、免疫系を刺激する薬剤が、ＰＤ−１アンタゴニストである、項目３７から４２のいずれか一項に記載の対象において免疫原性細胞死を誘導する方法。
４４．対象における免疫原性細胞死の誘導によって、腫瘍、好ましくはがんを治療する方法における使用のための、トポイソメラーゼインヒビター、ＡＴＭインヒビター、および免疫系を刺激する薬剤であって、同時にまたは逐次的に対象に投与される、トポイソメラーゼインヒビター、ＡＴＭインヒビター、および免疫系を刺激する薬剤。
４５．トポイソメラーゼインヒビターが、トポイソメラーゼＩインヒビター、好ましくはイリノテカンである、項目４４に記載の使用のための化合物。
４６．ＡＴＭインヒビターが、イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン誘導体、好ましくは化合物１または８−（１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１−（３−フルオロ−５−メトキシ−ピリジン−４−イル）−７−メトキシ−３−メチル−１，３−ジヒドロ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン、より好ましくは化合物１である、項目４４または４５に記載の使用のための化合物。
４７．免疫系を刺激する薬剤が、免疫チェックポイントインヒビター、好ましくはＰＤ−１アンタゴニスト、より好ましくは抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、項目４４から４６のいずれか一項に記載の使用のための化合物。
４８．トポイソメラーゼインヒビターが、イリノテカンであり、ＡＴＭインヒビターが、化合物１であり、免疫系を刺激する薬剤が、ＰＤ−１アンタゴニストである、項目４４から４７のいずれか一項に記載の使用のための化合物。
４９．腫瘍またはがんが、結腸直腸腫瘍または結腸直腸がん、乳房腫瘍または乳がん、卵巣腫瘍または卵巣がん、膵臓腫瘍または膵臓がん、胃腫瘍または胃がん、前立腺腫瘍または前立腺がん、腎臓腫瘍または腎臓がん、子宮頚部腫瘍または子宮頚部がん、骨髄腫、リンパ腫、白血病、甲状腺腫瘍または甲状腺がん、子宮内膜腫瘍または子宮内膜がん、子宮腫瘍または子宮がん、膀胱腫瘍または膀胱がん、神経内分泌腫瘍または神経内分泌がん、頭頚部腫瘍または頭頚部がん、肝臓腫瘍または肝臓がん、上咽頭腫瘍または上咽頭がん、精巣腫瘍または精巣がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、黒色腫、基底細胞皮膚がん、扁平上皮細胞皮膚がん、隆起性皮膚線維肉腫、メルケル細胞癌、膠芽腫、神経膠腫、肉腫、中皮腫、および骨髄異形成症候群からなる群から選択される、項目４４から４８のいずれか一項に記載の使用のための化合物。
５０．腫瘍またはがんが、ＡＴＭを発現する、項目４４から４９のいずれか一項に記載の使用のための化合物。
５１．対象における免疫原性細胞死の誘導によって腫瘍、好ましくはがんを治療する方法であって、トポイソメラーゼインヒビター、ＡＴＭインヒビター、および免疫系を刺激する薬剤を、同時にまたは逐次的に対象に投与することを含む、方法。
５２．トポイソメラーゼインヒビターが、トポイソメラーゼＩインヒビター、好ましくはイリノテカンである、項目５１に記載の方法。
５３．ＡＴＭインヒビターが、イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン誘導体、好ましくは化合物１または８−（１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１−（３−フルオロ−５−メトキシ−ピリジン−４−イル）−７−メトキシ−３−メチル−１，３−ジヒドロ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン、より好ましくは化合物１である、項目５１または５２に記載の方法。
５４．免疫系を刺激する薬剤が、免疫チェックポイントインヒビター、好ましくはＰＤ−１アンタゴニスト、より好ましくは抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、項目５１から５３のいずれか一項に記載の方法。
５５．トポイソメラーゼインヒビターが、イリノテカンであり、ＡＴＭインヒビターが、化合物１であり、免疫系を刺激する薬剤が、ＰＤ−１アンタゴニストである、項目５１から５４のいずれか一項に記載の方法。
５６．腫瘍またはがんが、結腸直腸腫瘍または結腸直腸がん、乳房腫瘍または乳がん、卵巣腫瘍または卵巣がん、膵臓腫瘍または膵臓がん、胃腫瘍または胃がん、前立腺腫瘍または前立腺がん、腎臓腫瘍または腎臓がん、子宮頚部腫瘍または子宮頚部がん、骨髄腫、リンパ腫、白血病、甲状腺腫瘍または甲状腺がん、子宮内膜腫瘍または子宮内膜がん、子宮腫瘍または子宮がん、膀胱腫瘍または膀胱がん、神経内分泌腫瘍または神経内分泌がん、頭頚部腫瘍または頭頚部がん、肝臓腫瘍または肝臓がん、上咽頭腫瘍または上咽頭がん、精巣腫瘍または精巣がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、黒色腫、基底細胞皮膚がん、扁平上皮細胞皮膚がん、隆起性皮膚線維肉腫、メルケル細胞癌、膠芽腫、神経膠腫、肉腫、中皮腫、および骨髄異形成症候群からなる群から選択される、項目５１から５５のいずれか一項に記載の方法。
５７．腫瘍またはがんが、ＡＴＭを発現する、項目５１から５６のいずれか一項に記載の方法。
５８．対象における腫瘍、好ましくはがんの治療用の医薬を製造するためのトポイソメラーゼインヒビターの使用であって、トポイソメラーゼインヒビターが、ＡＴＭインヒビター、および免疫系を刺激する薬剤と、同時にまたは逐次的に対象に投与することを含む、使用。
５９．トポイソメラーゼインヒビターが、トポイソメラーゼＩインヒビター、好ましくはイリノテカン、または薬学的に許容されるその塩である、項目５８に記載の使用。
６０．ＡＴＭインヒビターが、イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン誘導体、好ましくは化合物１または８−（１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１−（３−フルオロ−５−メトキシ−ピリジン−４−イル）−７−メトキシ−３−メチル−１，３−ジヒドロ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン、より好ましくは化合物１である、項目５８または５９に記載の使用。
６１．免疫系を刺激する薬剤が、免疫チェックポイントインヒビター、好ましくはＰＤ−１アンタゴニスト、より好ましくは抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、項目５８から６０のいずれか一項に記載の使用。
６２．トポイソメラーゼインヒビターが、イリノテカンまたは薬学的に許容されるその塩であり、ＡＴＭインヒビターが、化合物１であり、免疫系を刺激する薬剤が、ＰＤ−１アンタゴニストである、項目５８から６１のいずれか一項に記載の使用。
６３．腫瘍またはがんが、結腸直腸腫瘍または結腸直腸がん、乳房腫瘍または乳がん、卵巣腫瘍または卵巣がん、膵臓腫瘍または膵臓がん、胃腫瘍または胃がん、前立腺腫瘍または前立腺がん、腎臓腫瘍または腎臓がん、子宮頚部腫瘍または子宮頚部がん、骨髄腫、リンパ腫、白血病、甲状腺腫瘍または甲状腺がん、子宮内膜腫瘍または子宮内膜がん、子宮腫瘍または子宮がん、膀胱腫瘍または膀胱がん、神経内分泌腫瘍または神経内分泌がん、頭頚部腫瘍または頭頚部がん、肝臓腫瘍または肝臓がん、上咽頭腫瘍または上咽頭がん、精巣腫瘍または精巣がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、黒色腫、基底細胞皮膚がん、扁平上皮細胞皮膚がん、隆起性皮膚線維肉腫、メルケル細胞癌、膠芽腫、神経膠腫、肉腫、中皮腫、および骨髄異形成症候群からなる群から選択される、項目５８から６２のいずれか一項に記載の使用。
６４．腫瘍またはがんが、ＡＴＭを発現する、項目５８から６３のいずれか一項に記載の使用。
６５．医薬としての使用のためのトポイソメラーゼインヒビター、ＡＴＭインヒビター、および免疫系を刺激する薬剤であって、同時にまたは逐次的に対象に投与される、トポイソメラーゼインヒビター、ＡＴＭインヒビター、および免疫系を刺激する薬剤。
６６．トポイソメラーゼインヒビターが、トポイソメラーゼＩインヒビター、好ましくはイリノテカンである、項目６５に記載の使用のための化合物。
６７．ＡＴＭインヒビターが、イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン誘導体、好ましくは化合物１または８−（１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１−（３−フルオロ−５−メトキシ−ピリジン−４−イル）−７−メトキシ−３−メチル−１，３−ジヒドロ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン、より好ましくは化合物１である、項目６５または６６に記載の使用のための化合物。
６８．免疫系を刺激する薬剤が、免疫チェックポイントインヒビター、好ましくはＰＤ−１アンタゴニスト、より好ましくは抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、項目６５から６７のいずれか一項に記載の使用のための化合物。
６９．トポイソメラーゼインヒビターが、イリノテカンであり、ＡＴＭインヒビターが、化合物１であり、免疫系を刺激する薬剤が、ＰＤ−１アンタゴニストである、項目６５から６８のいずれか一項に記載の使用のための化合物。
【００５９】
本明細書で引用される全ての参照は、本発明の開示において参照により本明細書に組み込まれる。
【００６０】
本発明が、本明細書に記載された特定の分子、医薬組成物、使用、および方法に限定されず、当然このようなことは、変更することができることは理解されるべきである。また、本明細書で使用される用語が、特定の実施形態のみを記載する目的であり、本発明の範囲を限定することを意図しておらず、添付の特許請求の範囲に規定されているのみであることも理解されるべきである。本発明に重要である技術は、本明細書に詳述されている。詳述されていない他の技術は、当業者に周知である公知の標準的な方法に相当するか、または、技術は、引用された参考文献、特許出願もしくは標準的な文献に、より詳細に記載されている。但し、本出願に他のヒントが与えられていない場合、例としてのみ使用され、本発明に重要ではないとみなされるが、他の好適な手段および生物学的な物質で置き換えることができる。さらに、本明細書に記載された実施形態の各々は、その範囲において、本明細書に記載された化合物の薬学的に許容される塩を想定する。したがって、成句「または、薬学的に許容されるその塩」とは、本明細書に記載された全ての化合物の記載において暗黙的である。
【００６１】
本発明の任意の特定の態様に関して記載される、任意選択の好適で好ましい特徴を含む、いかなる特徴も、本発明の任意の他の態様の、任意選択の好適で好ましい特徴を含む特徴であり得る。
【００６２】
本明細書に記載されたものと類似であるか、または同等である方法および物質が、本発明の実施または試験で使用することができるが、好適な例は、以下に記載する。実施例の中で、汚染活性物を含まない標準的な試薬および緩衝液を、（実状に即して）使用する。実施例は、特に、特徴の明白に実証した組合せに限定されないが、本発明の技術的な課題が解決されるのであれば、例示的な特徴が無制限に再度組み合わせることができると解釈すべきである。同様に、いかなる請求項の特徴も、１つまたは複数の他の請求項の特徴と組み合わせることができる。要約して記載し、詳細に記載している本発明は、例示であり、以下の実施例に限定されない。
【実施例】
【００６３】
[実施例１]
３５個の細胞株の増殖に対するトポイソメラーゼインヒビターと組み合わせたＡＴＭインヒビターの効果の評価
２つのＡＴＭインヒビター（イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン誘導体、「ＡＴＭｉ１」は化合物１に相当する）を、独立して、トポイソメラーゼＩインヒビターＳＮ−３８（イリノテカンの活性代謝物）およびトポテカン、ならびにトポイソメラーゼＩＩインヒビターエトポシドを含む、様々な化学療法剤と組み合わせて試験して、細胞増殖阻害に対する組合せ効果を分析した。ＡＴＭインヒビターは、１μＭで使用し、トポイソメラーゼインヒビターは、以下の漸増濃度で使用する：３．９１Ｅ−１０Ｍ、１．５６Ｅ−０９Ｍ、６．２５Ｅ−０９Ｍ、２．５Ｅ−０８Ｍ、および１Ｅ−０７ＭでＳＮ３８、１．９５Ｅ−０９Ｍ、７．８１Ｅ−０９Ｍ、３．１３Ｅ−０８Ｍ、１．２５Ｅ−０７Ｍ、および５Ｅ−０７Ｍでトポテカン、ならびに、１．９５Ｅ−０８Ｍ、７．８１０Ｅ−０８Ｍ、３．１３Ｅ−０７Ｍ、１，２５Ｅ−０６Ｍ、および５Ｅ−０６Ｍでエトポシド。３５個の異なるがん細胞株を、前記の組合せで処置した。
【００６４】
実験条件／処置スケジュール：細胞を、標準的な条件下で９６ウェルマイクロタイタープレートに播種した。細胞は、処置の前に４８時間放置した。処置を、１２０時間実施し、トリクロロ酢酸に続いてスルホローダミンＢ染色を加えて停止した。組合せは、両薬剤の対を同時に添加することを含む。
【００６５】
化合物の組合せ効果を、それらの細胞増殖阻害を、組合せ用に使用するのと同じ濃度を使用したこれらの化合物の単独療法で観察された阻害と比較して測定することにより決定した。組合せ効果は、ＢＬＩＳＳ独立モデル（Ｅ１＋２＝Ｅ１＋Ｅ２−Ｅ１Ｅ２）を使用して、単独療法効果の線形結合に対する超過として計算されている。平均ＢＬＩＳＳ超過は、全てのインヒビター濃度にわたって、単独療法効果の線形結合に対する平均超過として計算される。０．１超の正のＢＬＩＳＳ超過値は、相乗効果を示し、−０．１未満のＢＬＩＳＳ超過値は、拮抗効果を示す。３５個の細胞株に対して、２つのＡＴＭインヒビター、および、記載したトポイソメラーゼインヒビターを含む様々な化学療法剤の組合せのＢＬＩＳＳ超過測定を、図１に示す。
【００６６】
[実施例２]
ｉｎ  ｖｉｔｒｏの細胞増殖に対するトポイソメラーゼインヒビターと組み合わせたＡＴＭインヒビターの効果の評価
２つのＡＴＭｉインヒビター（イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン誘導体、「ＡＴＭｉ１」は化合物１に相当する）を、イリノテカンの活性代謝物（ＳＮ３８）と組み合わせて試験した。ＡＴＭおよびＳＮ３８に対するインヒビターを、ＡＴＭインヒビターの各濃度を、組合せパートナーの各濃度との組合せで試験するように、行列設定して連続希釈で試験した。２．５Ｅ−０８Ｍ、６．３Ｅ−０９Ｍ、１．６Ｅ−０９Ｍ、４Ｅ−１０Ｍ、９．８Ｅ−１１、２．４Ｅ−１１Ｍ、および０Ｍを、ＳＮ３８に使用し、１．０Ｅ−５Ｍ、２．５Ｅ−０６Ｍ、６．３Ｅ−０７、１．６Ｅ−０７、３．９Ｅ−０８、９．８Ｅ−０９Ｍ、および０Ｍを、ＡＴＭインヒビターに使用した。細胞を、９６ウェルプレートに播種し、次の日に、化合物を添加した。７２時間後、生存率を、Ａｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅ試薬を使用して測定した。ブランク対照を−１００％に、未処置対照を０％に設定することにより、正規化を行った。
【００６７】
増殖阻害は、図２において、固定濃度のＳＮ３８の存在下の各ＡＴＭｉ濃度に対して示す。比較のために、ＳＮ３８の連続希釈により誘導された増殖阻害も示す。より低いＡＴＭｉ濃度および高い増殖阻害に対する濃度応答曲線の変曲点の移動を導く明白な組合せ効果は、ＳＮ３８と組み合わせることにより、野生型ＡＴＭ（結腸癌細胞株ＨＣＴ１１６およびＳＷ６２０）を発現する細胞株で実証することができた。ＡＴＭ（ＳＫＣＯ１およびＮＣＩ−Ｈ２３）を発現しない細胞株に対して、組合せ効果は、検出することができなかった。この場合、増殖阻害が誘導されるのは、トポイソメラーゼインヒビターの結果のみである。効果は、２つの異なるＡＴＭｉで実証することができた。
【００６８】
[実施例３]
ＣＲＣ異種移植片モデルにおける、トポイソメラーゼインヒビターと組み合わせたＡＴＭインヒビターの治療効果の評価
イリノテカンと組み合わせた２つの異なるＡＴＭインヒビター（イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン誘導体、「ＡＴＭｉ１」は化合物１に相当する）の治療効果を、マウスのヒト結腸がん異種移植片モデルＳＷ６２０（皮下腫瘍移植）で試験した。動物を、イリノテカンおよびそれぞれのＡＴＭインヒビターの組合せ、または、それぞれの単独療法の対照アームの１週間サイクルで３回処置した。１サイクルは、５０ｍｇ／ｋｇの用量での１回のイリノテカン投与（ｉｐ）に続いて、２４時間後および続く４日間、１００および５０ｍｇ／ｋｇのＡＴＭｉ１、または１０および２５ｍｇ／ｋｇのＡＴＭｉ２（ｐｏ）からなる。
【００６９】
腫瘍体積に対する処置の効果は、図３に示す。
【００７０】
それぞれのより高いＡＴＭｉ用量をイリノテカンに添加することにより、イリノテカン処置アームと比較して、著しく高い有用性をもたらした。例えば、３回の１週間処置サイクルの終点（第２１日）で、ＡＴＭｉ２で実施した研究において、それぞれの（２５ｍｇ／ｋｇ）併用群（ｎ＝１０）の平均腫瘍体積は、５３ｍｍ３であり、開始体積と比較して約８７％減少した一方、イリノテカン群（ｎ＝１０）の平均腫瘍体積は、２２３％増加して、約２２０ｍｍ３であった。処置の停止の１週間後（ｄ２８）、腫瘍開始体積と比較して、併用アームでの５／１０の動物は、依然として進行せず（腫瘍体積の７３％未満の増加）、３／１０は、安定して減少し（３０％減少と７３％増加との間の腫瘍体積変化）、２／１０は、部分応答した（腫瘍体積の３０％超の減少）。イリノテカンアームでは、全ての動物が、第２８日で疾患の進行を示した。
【００７１】
処置は、十分に許容された。体重減少は、ビヒクル処置された動物と比較して、単独療法または併用処置アームで観察されなかった。両方のＡＴＭインヒビターは、同様の結果を示した。
【００７２】
[実施例４]
結腸がん細胞株の免疫原性細胞死に対するトポイソメラーゼインヒビターと組み合わせたＡＴＭインヒビターの効果の評価
ＡＴＭｉインヒビターを、イリノテカンの活性代謝物（ＳＮ３８）と組み合わせて使用した。ＡＴＭおよびＳＮ３８に対するインヒビターを、単剤として、または、組合せのＧＩ５０の濃度で組み合わせて試験した。ＳＮ３８のＧＩ５０は、免疫原性細胞死を誘導する陽性対照として含まれた。単剤として、または組み合わせて使用される濃度は、０．４ｎＭ  ＳＮ３８および２５０ｎＭ  ＡＴＭｉ２であり、ＳＮ３８のＧＩ５０は、２ｎＭであった。カルレティキュリン、ＨＳＰ７０、およびＨＳＰ９０の細胞表面発現を、フローサイトメトリーにより分析し、ＡＴＰ分泌を、ＡＴＰｌｉｔｅアッセイＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒにより分析し、ＨＭＧＢ１放出を、ＨＭＧＢ１  Ｅｌｉｓａ（ＩＢＬ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）により分析し、アポトーシスを、カスパーゼ−Ｇｌｏ３／７アッセイシステム（カスパーゼ３／７活性を測定する）により分析した。
【００７３】
ＤＡＭＰ（カルレティキュリン、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ９０、ＨＭＧＢ１、およびＡＴＰ）の分析を、同じサンプルで行った。細胞を、播種の２４時間後に処置し、処置の７２時間後に分析を行った。細胞は、ＦＡＣＳ分析に使用し、上清は、ＡＴＰおよびＨＭＧＢ１測定に使用した。カスパーゼ−Ｇｌｏ３／７を、同じ処置スケジュールに続いて、並行して行った。
【００７４】
ＦＡＣＳ分析に対して、未染色サンプルをゲーティング対照として使用し、アイソタイプサンプルは、非特異的抗体結合を測定するために使用した。ＰＥ陽性細胞％は、試験したマーカーの細胞表面発現を伴う細胞を表す（全てのマーカーは、ＰＥとコンジュゲートさせ、独立して試験した）。ＡＴＰ分泌、ＨＭＧＢ１放出、およびアポトーシスを、販売供給元から提供されるプロトコルに従って行った（データは、２回の独立した生物学的反復の平均として表された）。
【００７５】
図４により表されているように、免疫原性細胞死の明白な誘導は、カルレティキュリン、Ｈｓｐ７０、およびＨｓｐ９０の細胞表面発現での増大、ならびに、ＳＮ３８（ＧＩ５０）ならびにＡＴＭｉ２およびＳＮ３８の組合せの両方を伴うＡＴＰおよびＨＭＧＢ１放出およびアポトーシス（カスパーゼ３−７の活性）での増大により観察されたが、組み合わせて使用された濃度での単剤としてこれら化合物が使用される場合は、観察されなかった。
【図１−１】
2021517145.tif 000007
【図１−２】
2021517145.tif 000008
【図２−１】
2021517145.tif 000009
【図２−２】
2021517145.tif 000010
【図２−３】
2021517145.tif 000011
【図２−４】
2021517145.tif 000012
【図２−５】
2021517145.tif 000013
【図２−６】
2021517145.tif 000014
【図２−７】
2021517145.tif 000015
【図２−８】
2021517145.tif 000016
【図３】
2021517145.tif 000017
【図４−１】
2021517145.tif 000018
【図４−２】
2021517145.tif 000019
【図４−３】
2021517145.tif 000020
【図４−４】
2021517145.tif 000021
【国際調査報告】
2021517145.tif 000022
2021517145.tif 000023
2021517145.tif 000024