(57)【要約】  本発明は、以下の式（Ｉ）：Ｎｔｅｒ−Ａｃ−Ｘ１０−Ｅ−Ｇ−Ｒ−Ｅ−Ｘ１５−Ｖ−Ｒ−Ｘ１８−Ｘ１９−Ｉ−Ｘ２１−Ｘ２２−Ｅ−Ｇ−Ｘ２５−Ｓ−Ｘ２７−Ｘ２８−Ｘ２９−Ｘ３０−Ｘ３１−Ｘ３２−Ｘ３３−ＮＨ２−Ｃｔｅｒを有する生物学的に活性な一本鎖リラキシンペプチドまたはその塩もしくは溶媒和物に関する。本発明はまた、本発明の少なくとも１つのペプチドを含む医薬組成物、および医薬品として使用するための該ペプチドまたは該医薬組成物にも関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式（Ｉ）：
Ｎｔｅｒ−Ａｃ−Ｘ１０−Ｅ−Ｇ−Ｒ−Ｅ−Ｘ１５−Ｖ−Ｒ−Ｘ１８−Ｘ１９−Ｉ−Ｘ２１−Ｘ２２−Ｅ−Ｇ−Ｘ２５−Ｓ−Ｘ２７−Ｘ２８−Ｘ２９−Ｘ３０−Ｘ３１−Ｘ３２−Ｘ３３−ＮＨ２−Ｃｔｅｒ
（式中：
Ｎｔｅｒは、ペプチドのＮ末端を表し；
Ｃｔｅｒは、ペプチドのＣ末端を表し；
Ａｃは、アセチル基を表し；
Ｘ１０は、ロイシン、２−アミノイソ酪酸、Ｎε−アセチル−リジンおよびα−メチル−ロイシンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｅは、グルタミン酸を表し；
Ｇは、グリシンを表し；
Ｒは、アルギニンを表し；
Ｘ１５は、リジン、アルギニン、ホモリジン、ホモアルギニン、オルニチン、グルタミン、フェニルアラニンおよびロイシンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｖは、バリンを表し；
Ｘ１８は、アラニン、２−アミノイソ酪酸、ロイシン、Ｎε−アセチル−リジンおよびグルタミンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ１９は、リジン、Ｎε−アセチル−リジン、シトルリン、グルタミン、アラニンおよび２−アミノイソ酪酸からなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｉは、イソロイシンを表し；
Ｘ２１は、２−アミノイソ酪酸およびアラニンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ２２は、２−アミノイソ酪酸およびイソロイシンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ２５は、以下の構造を表し：
【化１】
2021512099.tif 000028
（ここで：
−＊は、式（Ｉ）のＸ２５の前のグリシンとの共有結合を表し；
−◆は、式（Ｉ）のＸ２５の後のセリンとの共有結合を表し；および
Ｚは、式（ＩＩ）：
−［（ＰＥＧｘｘ）ｂ（ｇＥ）ｃＣｄ］
（ｂおよびｃは、１、２、３、４または５を独立して表し；
ＰＥＧｘｘは、ＰＥＧ２、ＰＥＧ２ＤＧＡ、およびＴＴＤＳからなる群から選択されるポリエチレングリコール誘導体を独立して表し；
ｇＥは、ガンマ−グルタミン酸を表し；ならびに
Ｃｄは、直鎖飽和Ｃ１２〜Ｃ２２アシル基を表す）の基を表す）；
Ｓは、セリンを表し；
Ｘ２７は、スレオニン、リジン、アルギニンおよびグルタミンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ２８は、トリプトファン、フェニルアラニン、５−フルオロ−トリプトファン、５−クロロ−トリプトファン、５−メトキシ−トリプトファン、チロシン、４−フルオロ−フェニルアラニン、１−ナフチルアラニン、２−ナフチルアラニン、α−メチル−トリプトファン、α−メチル−フェニルアラニンおよび５−ヒドロキシ−トリプトファンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ２９は、セリン、Ｄ−セリン、２−アミノイソ酪酸、スレオニン、α−メチル−セリン、Ｎε−アセチル−リジンおよびバリンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ３０は、２−アミノイソ酪酸、α−メチル−リジン、Ｄ−リジン、リジン、ホモリジン、オルニチン、アルギニンおよびα−メチル−アルギニンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ３１は、アルギニン、Ｎω−メチル−アルギニン、アラニン、Ｎω，Ｎω’−ジメチル−アルギニンおよびシトルリンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ３２は、リジン、アラニン、アルギニン、Ｎε−アセチル−リジンおよびＮε，Ｎε，Ｎε−トリ−メチル−リジンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；ならびに
Ｘ３３は、リジン、Ｎε−アセチル−リジン、ロイシン、アルギニンおよびアラニンから選択されるアミノ酸を表す）を有するペプチド；
またはその塩もしくは溶媒和物。
【請求項２】
ｂは２、３、４または５を表し、およびｃは２、３または４を表す、請求項１に記載のペプチド。
【請求項３】
Ｃｄは、Ｃ１２（Ｌａｕ）、Ｃ１４（Ｍｙｒ）、Ｃ１５（Ｐｅｎｔａ）、Ｃ１６（Ｐａｌｍ）、Ｃ１７（Ｈｅｐｔａ）、Ｃ１８（Ｓｔｅａ）、Ｃ２０（Ｅｉｃｏ）およびＣ２２（Ｄｏｃｏ）アシル基からなる群から選択される直鎖飽和アシル基、特にＣ１２（Ｌａｕ）、Ｃ１４（Ｍｙｒ）、Ｃ１５（Ｐｅｎｔａ）、Ｃ１６（Ｐａｌｍ）、Ｃ１７（Ｈｅｐｔａ）またはＣ１８（Ｓｔｅａ）アシル基からなる群から選択される直鎖飽和アシル基、ならびに特に直鎖Ｃ１６またはＣ１８アシル基を表す、請求項１または２に記載のペプチド。
【請求項４】
以下の式（Ｉｂ）：
Ｎｔｅｒ−Ａｃ−Ｘ１０−Ｅ−Ｇ−Ｒ−Ｅ−Ｘ１５−Ｖ−Ｒ−Ｘ１８−Ｘ１９−Ｉ−Ｘ２１−Ｘ２２−Ｅ−Ｇ−Ｘ２５−Ｓ−Ｘ２７−Ｘ２８−Ｘ２９−Ｘ３０−Ｒ−Ｘ３２−Ｘ３３−ＮＨ２−Ｃｔｅｒ
（式中：
Ｎｔｅｒは、ペプチドのＮ末端を表し；
Ｃｔｅｒは、ペプチドのＣ末端を表し；
Ａｃは、アセチル基を表し；
Ｘ１０は、ロイシン、Ｎε−アセチル−リジンおよび２−アミノイソ酪酸からなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｅは、グルタミン酸を表し；
Ｇは、グリシンを表し；
Ｒは、アルギニンを表し；
Ｘ１５は、リジン、アルギニン、ホモリジン、グルタミン、フェニルアラニンおよびロイシンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｖは、バリンを表し；
Ｘ１８は、アラニン、２−アミノイソ酪酸およびＮε−アセチル−リジンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ１９は、リジン、Ｎε−アセチル−リジン、グルタミンおよびシトルリンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｉは、イソロイシンを表し；
Ｘ２１は、２−アミノイソ酪酸およびアラニンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ２２は、２−アミノイソ酪酸およびイソロイシンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ２５は、以下の構造を表し：
【化２】
2021512099.tif 000029
（ここで：
−＊は、式（Ｉａ）のＸ２５の前のグリシンとの共有結合を表し；
−◆は、式（Ｉａ）のＸ２５の後のセリンとの共有結合を表し；および
Ｚは、−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＰＥＧ２ＤＧＡ）３−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＰＥＧ２）４−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）２−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａ、−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａ、−（ＰＥＧ２ＤＧＡ）３−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａ、−（ＰＥＧ２ＤＧＡ）３−（ｇＥ）４−Ｓｔｅａ、−（ＰＥＧ２）３−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＰＥＧ２）４−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａ、−（ＰＥＧ２）５−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＰＥＧ２）５−（ｇＥ）４−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）４−Ｓｔｅａ、−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）４−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）２−Ｓｔｅａ、−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）４−Ｓｔｅａ、−（ＴＴＤＳ）４−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａ、−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）４−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）４−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）３−Ｍｙｒおよび−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）４−Ｍｙｒ（ここで、
ｇＥは、ガンマ−グルタミン酸を表し
Ｐａｌｍは、パルミトイルを表し、および
Ｓｔｅａは、ステアロイルを表す）からなる群から選択される）；
Ｓは、セリンを表し；
Ｘ２７は、スレオニン、グルタミン、アルギニンおよびリジンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ２８は、トリプトファン、フェニルアラニン、５−クロロトリプトファン、α−メチル−フェニルアラニン、４−フルオロ−フェニルアラニンおよび５−フルオロトリプトファンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ２９は、セリン、Ｄ−セリン、２−アミノイソ酪酸、Ｎε−アセチル−リジン、スレオニンおよびバリンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ３０は、２−アミノイソ酪酸、α−メチル−リジン、Ｄ−リジン、リジン、ホモリジンおよびアルギニンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ３２は、リジン、アラニン、アルギニンおよびＮε−アセチル−リジンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；ならびに
Ｘ３３は、リジン、Ｎε−アセチル−リジンおよびアルギニンから選択されるアミノ酸を表す）を有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載のペプチド；
またはその塩もしくは溶媒和物。
【請求項５】
参照配列番号１〜９７のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項６】
Ｚは、−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＰＥＧ２ＤＧＡ）３−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＰＥＧ２）４−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）２−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａ、−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａ、−（ＰＥＧ２ＤＧＡ）３−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａ、−（ＰＥＧ２）３−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＰＥＧ２）４−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａ、−（ＰＥＧ２）５−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）４−Ｓｔｅａ、−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）４−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）４−Ｓｔｅａ、−（ＴＴＤＳ）４−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａ、−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）４−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）４−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）３−Ｍｙｒおよび−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）４−Ｍｙｒからなる群から選択される、式（Ｉｂ）の請求項１〜５のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項７】
配列番号３、６、７、９〜１２、２０〜２２、２６、２８、３０〜３４、４５、４７〜４９、５１、５４〜６２、６４、６７〜６９、７１〜８６、９１、９３、および９６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項８】
配列番号３、６、７、２０、２６、３０〜３４、４５、４８、４９、５１、５４〜６１、６７、７１、７３、７５〜７９、８１、８３〜９２および９７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項１〜７のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項９】
参照配列番号３、配列番号６、配列番号７および配列番号２０のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項１〜８のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項１０】
参照配列番号３のアミノ酸配列を有する、請求項１〜９のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の少なくとも１つのペプチド、または薬学的に許容されるその塩もしくは溶媒和物を、少なくとも１つの薬学的に許容される担体と一緒に含む医薬組成物。
【請求項１２】
医薬品として使用するための、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のペプチド、薬学的に許容されるその塩もしくは溶媒和物、または請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
ＲＸＦＰ１受容体が関与する様々な疾患または状態の処置および／または予防において使用するための、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のペプチド、薬学的に許容されるその塩もしくは溶媒和物、または請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
疾患または状態は、線維症；線維性疾患、特に全身性硬化症、強皮症および線維筋痛症；特発性肺線維症；線維症を伴う腎臓病；肺高血圧および妊娠高血圧腎症からなる群から選択される、請求項１３に記載の使用のための、ペプチド、薬学的に許容されるその塩もしくは溶媒和物、または医薬組成物。
【請求項１５】
疾患または状態は、特に、急性または慢性心不全、収縮期または拡張期心不全、冠動脈疾患、アテローム性動脈硬化、微小血管狭心症および糖尿病の心血管合併症からなる群からの、心臓および血管疾患からなる群から選択される、請求項１３に記載の使用のための、ペプチド、薬学的に許容されるその塩もしくは溶媒和物、または医薬組成物。
【請求項１６】
疾患または状態は、腎不全、特に肝硬変における腎機能障害；慢性腎臓病および急性腎傷害からなる群から選択される、請求項１３に記載の使用のための、ペプチド、薬学的に許容されるその塩もしくは溶媒和物、または医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＲＸＦＰ１受容体を活性化することができるリラキシン−２のＢ鎖のペプチド類似体に関する。
【０００２】
特に、本発明は、ＲＸＦＰ１受容体を活性化することができるリラキシン−２のＢ鎖の脂質化ペプチド類似体に関する。
【０００３】
さらに、本発明は、少なくとも前記ペプチドを含む医薬組成物、ならびに医薬品として使用するための、ならびに特に、ＲＸＦＰ１受容体が関与する様々な疾患または状態、より詳細には：
−線維症；線維性疾患、特に全身性硬化症、強皮症および線維筋痛症；特発性肺線維症；線維症を伴う腎臓病；肺高血圧および妊娠高血圧腎症からなる群；
−特に、急性もしくは慢性心不全、収縮期もしくは拡張期心不全、冠動脈疾患、アテローム性動脈硬化、微小血管狭心症および糖尿病の心血管合併症からなる群からの心臓および血管疾患からなる群；ならびに／または
−腎不全、特に肝硬変における腎機能障害；慢性腎臓病および急性腎傷害からなる群
から選択される疾患または状態の処置および／または予防において使用するための、本発明によるペプチドまたはその医薬組成物を提供する。
【背景技術】
【０００４】
ヒトリラキシン−２（Ｈ２リラキシン）は、５３個のアミノ酸の６ｋＤａペプチド性ホルモンである。その構造は、２つの別々のポリペプチド鎖、すなわち、次のような：
Ｈ２リラキシンＡ鎖：Ｈ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ＊−Ｃｙｓ＊＊−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ＊−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ＊＊＊−ＯＨ（配列番号１００）
Ｈ２リラキシンＢ鎖：Ｈ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ＊＊−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ＊＊＊−Ｇｌｙ−Ｍｅｔ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−ＯＨ（配列番号１０１）
（Ｃｙｓ＊、Ｃｙｓ＊＊およびＣｙｓ＊＊＊は、同じ標識を有するシステイン間のジスルフィド結合を示す）
２つのジスルフィド（Ｓ−Ｓ）結合によって架橋され、第３のＳ−Ｓ鎖内結合がＡ鎖中に位置する、Ｈ２リラキシン鎖Ａ（配列番号１００）およびＨ２リラキシン鎖Ｂ（配列番号１０１）からなる。
【０００５】
リラキシン−２は、黄体によって産生される天然に存在するペプチドホルモンであり、女性の妊娠第一期中に循環中のピークに達する。リラキシン−２は、インスリン様ペプチドファミリーに属し、該ファミリーのメンバーは、リラキシンファミリーペプチド（ＲＸＦＰ）受容体（ＲＸＦＰ１、ＲＸＦＰ２、ＲＸＦＰ３、およびＲＸＦＰ４）として分類される異なる種類の受容体に結合後、非常に多くの作用を発揮する。
【０００６】
ＲＸＦＰ１は、リラキシンの主要な受容体である。ＲＸＦＰ１は、アミノ末端の単一の低密度リポタンパク質クラスＡ（ＬＤＬａ）モジュールおよび１０個の細胞外ロイシンリッチリピートドメイン（ＬＲＲ）と、これに続く７回膜貫通（７ＴＭ）らせんドメインを含む、大きな細胞外ドメインを含有する。ＲＸＦＰ１のＬＤＬａモジュールは、３２残基リンカーを介してＬＲＲドメインに連結されている。
【０００７】
ＲＸＦＰ１の活性化は、複雑な多段階のプロセスである。以前の研究により、Ｈ２リラキシンＢ鎖のアルギニンカセット（ＲｘｘｘＲｘｘＩ／Ｖ、式中、ｘは任意の残基である）のＡｒｇ１３、Ａｒｇ１７およびＩｌｅ２０が、ＲＸＦＰ１のＬＲＲドメインのＬＲＲ４〜８に位置するＡｓｐ２３１、Ａｓｐ２７９、Ｇｌｕ２３３およびＧｌｕ２７７に結合することが示された。リガンド結合だけでは受容体を活性化するのに十分でない。ＬＤＬａモジュールのトランケーションまたは置換は、細胞外ドメインへの結合にもかかわらず不活性な受容体をもたらす。ＲＸＦＰ１およびＲＸＦＰ２のＬＤＬａモジュールを交換する研究（非特許文献１）は、受容体活性化におけるリンカーの役割に光を当てた。膜貫通ドメインのＬＲＲ（高親和性部位）および第１のエキソループ（ｅｘｏｌｏｏｐ）（低親和性部位）がリラキシン結合に関与しているのに対し、ＬＤＬａモジュールはエキソループ２が関与する受容体活性化に必要とされる（非特許文献２）。
【０００８】
いくつかの種では、リラキシンは、インスリン様ペプチド３（ＩＮＳＬ３）に対するＧＰＣＲを含有する天然のロイシンリッチリピート、ＲＸＦＰ２も活性化することができる。ＲＸＦＰ２によってのみ作用するリラキシンの生理学的役割の証拠は現在のところないにもかかわらず、これは、潜在的な交差反応性がリラキシンの様々な生物学的活性と関連している可能性があることを示唆するものである。
【０００９】
最近の発表データは、ヒトとげっ歯類の間のＥＣＬ３ドメインの種差により、ＲＸＦＰ１を活性化するアゴニストの能力に種間差があることを示した（非特許文献３）。並行して、偏ったアゴニスト活性がいくつかのリラキシン由来一本鎖模倣物について記載された（非特許文献４）。しかし、ＩＵＰＨＡＲ命名法に基づくと、ＲＸＦＰ１はＧｓ共役受容体であり、ＲＸＦＰ１の主要なシグナル伝達経路はｃＡＭＰ（環状アデノシン一リン酸）蓄積をもたらす。
【００１０】
リラキシンは、子宮リモデリングおよび胚着床だけでなく、妊婦の血行力学的適応にも関与する妊娠ホルモンとして最初に同定された。これには、心後負荷の改善を目標とした効果の組み合わせである、血管抵抗の減少、心拍出量の増加およびＧＦＲの上昇が含まれる。これらの特性は、急性心不全の状況でのいくつかの臨床試験における組換えヒトリラキシン２の使用に至った。
【００１１】
腎臓血管系および全身血管系の変化に起因するリラキシンの有益な心血管効果も、前臨床試験および第ＩＩ相臨床試験における鬱血性および急性心不全患者で示されている。意識下の正常血圧および高血圧オスおよびメスラットでは、リラキシンの急性静脈内投与および長期皮下投与は、平均動脈圧に影響を与えることなく心拍出量および全動脈コンプライアンスを増加させ、全身の血管抵抗を低下させる。
【００１２】
リラキシンはまた、高血圧のラットモデルにおいて平均動脈圧を低下させることも示されている。リラキシンの血管作用は、受動的壁コンプライアンスの変更にまで及ぶ。ラットおよびマウスにおける長期皮下リラキシン輸注は、腎小動脈、腸間膜動脈、子宮動脈および頸動脈の動脈コンプライアンスを増加させる。さらにリラキシンは、心臓線維症および腎線維症の動物モデルにおいて抗線維化特性を有する。
【００１３】
故に、リラキシンは、後負荷を減少させ、心臓活性を救済することによって慢性心不全患者に恩恵をもたらし得る他、肺高血圧患者、駆出率が低下したまたは保たれた心不全患者、ならびに全身性硬化症、特発性肺線維症、および線維症を伴う任意の腎臓病を含む線維性疾患患者にも恩恵をもたらし得る。
【００１４】
リラキシン−２は故に、明らかに高い治療的利益がある。
【００１５】
それにもかかわらず、Ｈ２リラキシン複合体ヘテロ二量体構造はその化学合成および精製を難しくし、最終産物の低収量につながっている（非特許文献５）。
【００１６】
したがって、ＲＸＦＰ１受容体を活性化するリラキシンの能力を有する安定なリラキシンペプチド、より具体的には、天然のリラキシンより構造的に単純でありながらリラキシン生物活性を保持するペプチドを得ることへの関心がある。
【００１７】
より単純な構造を有するペプチドは、Ｈ２リラキシンより複雑でない効率的な合成を必要とし得る。それによって、Ｈ２リラキシン合成に関連する処理費用が低減される。
【００１８】
さらに、そのより単純で小さな構造ゆえに、そのようなペプチドは、天然のリラキシンと比べて改善された取り込みを示し、インビボでの治療活性の改善につながり得る。
【００１９】
いくつかの単純化されたＨ２リラキシン類似体が文献に記載されている。非特許文献６は、Ｈ２リラキシンの最小構造を同定し、そのＢ鎖が、効力の喪失を最小限にしながらＮ末端で最大６または７アミノ酸までトランケートされ得ることを示した。この刊行物に記載された構造は、合成するのが依然として難しく、天然のＨ２リラキシンと比べて利点がない二本鎖リラキシン類似体である。
【００２０】
リラキシンファミリーペプチドを単純化するさらなる試みが行われた。近年、非特許文献７および特許文献１は、Ｈ２リラキシンＢ鎖のみを含むＲＸＦＰ１アゴニストペプチドを提案した。しかし、本明細書に例示されるように、特許文献１のペプチドは、ＲＸＦＰ１受容体を活性化するのに不十分な能力を呈する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２１】
【特許文献１】ＷＯ２０１５／１５７８２９
【非特許文献】
【００２２】
【非特許文献１】Ｂｒｕｅｌｌ、Ｓ．ら、Ｆｒｏｎｔ．  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．（Ｌａｕｓａｎｎｅ）４、１７１（２０１３）
【非特許文献２】Ｓｅｔｈｉ  Ａ．ら  Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ（２０１６）
【非特許文献３】Ｈｕａｎｇら  Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ２０１５年８月１７日；６：１２８頁
【非特許文献４】Ｈｏｓｓａｉｎら  Ｃｈｅｍ．  Ｓｃｉ．、２０１６、７、３８０５頁
【非特許文献５】Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｌ．  ２０１４、２２、４７〜５５頁
【非特許文献６】Ｍ．Ａ．  Ｈｏｓｓａｉｎら（Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．（２０１１）、４３、３７５５頁）
【非特許文献７】Ｍ．Ａ．  Ｈｏｓｓａｉｎら  ｉｎ  Ｃｈｅｍ．  Ｓｃｉ．（２０１６）、７、３８０５〜３８１９頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２３】
故に、ＲＸＦＰ１受容体を活性化することができる、特にＲＸＦＰ１受容体を活性化する能力が改善されたリラキシン−２のＢ鎖の新たなペプチド類似体が必要である。
【００２４】
また、単純な構造、特に、既に公知のリラキシンペプチドより単純な構造を有し、およびＲＸＦＰ１受容体を活性化する改善された能力を有する新たな修飾リラキシンペプチドも必要である。
【００２５】
本発明は、上記に示されたニーズを満たすことを目指す。
【課題を解決するための手段】
【００２６】
本発明者らは、以下の例に示されるように、従来技術で提案された最初の単純化されたリラキシンファミリーペプチドと比べて、ＲＸＦＰ１受容体を活性化する能力の有意な改善を示す新たな修飾リラキシンペプチド、および特に脂質化ペプチドを実際に提供する。
【００２７】
以下に記載されるように、本発明者らによっていくつかの欠失および修飾が天然のリラキシンＢ鎖アミノ酸配列に引き起こされ、天然のリラキシンおよび従来技術で既に提案されたリラキシンペプチドと比べて改善された特性を有するより短いペプチドをもたらした。特に、添付の実験は、ペプチドＢ７−３３  Ｃ１１．２３Ｓ（配列番号１０２）およびＷＯ２０１５／１５７８２９からの類似ペプチド、ＡｃＢ７−３３  Ｃ１１．２３Ｓ（配列番号１０３）およびＫＫＫＫ（ＡｃＢ７−２９  Ｃ１１．２３Ｓ）（配列番号１０４）が、本発明のペプチドを選択するのに使用された細胞アッセイにおいて、それぞれ１６４１ｎＭ、９２９ｎＭおよび２０６ｎＭのＲＸＦＰ１の５０％活性化濃度（ＥＣ５０）を有する一方で、本発明による脂質化ペプチドで得られたＥＣ５０値は、３６．４ｎＭから０．０７ｎＭに下がることを示している。さらに、本発明のテストされたペプチドの大多数は、５ｎＭ以下のＥＣ５０値を有する。
【００２８】
さらに、以下の従来技術は、リラキシンのＢ鎖が、効力の有意な低下なく７個を超えるアミノ酸をトランケートし得ないことを示唆したが（Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．（２０１１）、４３、３７５５頁；ＷＯ２０１５／１５７８２９）、本発明のペプチドは、Ｎ末端（Ｎｔｅｒ）で９個のアミノ酸がトランケートされ、ＲＸＦＰ１受容体で依然として高い活性を示す。
【００２９】
ＷＯ２０１５／１５７８２９のＲＸＦＰ１アゴニストペプチドと比べて、本発明のペプチドは、ｐＨ４．５またはｐＨ７．５での可溶性の改善、ラットおよびヒト血漿または血中安定性およびインビボ半減期の改善を示す。
【００３０】
これらの特性は、より長時間そのインビボ効能を保持する医薬品として使用するために、本発明のペプチドを幅広い濃度範囲で製剤化できるようにし、静脈内または皮下経路による、例えば１日１回投与を可能にするであろう。
【００３１】
したがって、本発明の目的の１つは、以下の式（Ｉ）：
Ｎｔｅｒ−Ａｃ−Ｘ１０−Ｅ−Ｇ−Ｒ−Ｅ−Ｘ１５−Ｖ−Ｒ−Ｘ１８−Ｘ１９−Ｉ−Ｘ２１−Ｘ２２−Ｅ−Ｇ−Ｘ２５−Ｓ−Ｘ２７−Ｘ２８−Ｘ２９−Ｘ３０−Ｘ３１−Ｘ３２−Ｘ３３−ＮＨ２−Ｃｔｅｒ
（式中：
Ｎｔｅｒは、ペプチドのＮ末端を表し；
Ｃｔｅｒは、ペプチドのＣ末端を表し；
Ａｃは、アセチル基を表し；
Ｘ１０は、ロイシン、２−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、Ｎε−アセチル−リジン（Ｋ（Ａｃ））およびα−メチル−ロイシン（Ｍｅｌ）からなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｅは、グルタミン酸（Ｇｌｕ）を表し；
Ｇは、グリシン（Ｇｌｙ）を表し；
Ｒは、アルギニン（Ａｒｇ）を表し；
Ｘ１５は、リジン（Ｌｙｓ）、アルギニン（Ａｒｇ）、ホモリジン（Ｈｌｙ）、ホモアルギニン（Ｈａｒ）、オルニチン（Ｏｒｎ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）およびロイシン（Ｌｅｕ）からなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｖは、バリン（Ｖａｌ）を表し；
Ｘ１８は、アラニン（Ａｌａ）、２−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、Ｎε−アセチル−リジン（Ｋ（Ａｃ））およびグルタミン（Ｇｌｎ）からなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ１９は、リジン（Ｌｙｓ）、Ｎε−アセチル−リジン（Ｋ（Ａｃ））、シトルリン（Ｃｉｔ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、アラニン（Ａｌａ）および２−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）からなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｉは、イソロイシン（Ｉｌｅ）を表し；
Ｘ２１は、２−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）およびアラニン（Ａｌａ）からなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ２２は、２−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）およびイソロイシン（Ｉｌｅ）からなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ２５は、以下の構造を表し：
【化１】
2021512099.tif 000002
（ここで：
−＊は、式（Ｉ）のＸ２５の前のグリシンとの共有結合を表し；
−◆は、式（Ｉ）のＸ２５の後のセリンとの共有結合を表し；および
Ｚは、式（ＩＩ）：
−［（ＰＥＧｘｘ）ｂ（ｇＥ）ｃＣｄ］
（ｂおよびｃは、１、２、３、４または５を独立して表し；
ＰＥＧｘｘは、ＰＥＧ２、ＰＥＧ２ＤＧＡ、およびＴＴＤＳからなる群から選択されるポリエチレングリコール誘導体を独立して表し；
ｇＥは、ガンマ−グルタミン酸を表し；ならびに
Ｃｄは、直鎖飽和Ｃ１２〜Ｃ２２アシル基を表す）の基を表す）；
Ｓは、セリン（Ｓｅｒ）を表し；
Ｘ２７は、スレオニン（Ｔｈｒ）、リジン（Ｌｙｓ）、アルギニン（Ａｒｇ）およびグルタミン（Ｇｌｎ）からなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ２８は、トリプトファン（Ｔｒｐ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、５−フルオロ−トリプトファン（Ｔｒｐ（５Ｆ））、５−クロロ−トリプトファン（Ｔｒｐ（５Ｃｌ））、５−メトキシ−トリプトファン（Ｔｒｐ（５ＯＭｅ））、チロシン（Ｔｙｒ）、４−フルオロ−フェニルアラニン（Ｐｆｐ）、１−ナフチルアラニン（１−Ｎａｌ）、２−ナフチルアラニン（２−Ｎａｌ）、α−メチル−トリプトファン（Ｍｔｒ）、α−メチル−フェニルアラニン（Ｍｐｈ）および５−ヒドロキシ−トリプトファン（Ｗｏｘ）からなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ２９は、セリン（Ｓｅｒ）、Ｄ−セリン（Ｄｓｅｒ）、２−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、α−メチル−セリン（Ｍｓｅ）、Ｎε−アセチル−リジン（Ｋ（Ａｃ））およびバリン（Ｖａｌ）からなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ３０は、２−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、α−メチル−リジン（Ｍｌｙ）、Ｄ−リジン（Ｄｌｙｓ）、リジン、ホモリジン（Ｈｌｙ）、オルニチン（Ｏｒｎ）、アルギニン（Ａｒｇ）およびα−メチル−アルギニン（Ｍａｒ）からなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ３１は、アルギニン（Ａｒｇ）、Ｎω−メチル−アルギニン（Ｒｍｅ）、アラニン（Ａｌａ）、Ｎω，Ｎω’−ジメチル−アルギニン（Ｒｄｓ、対称性ジメチルアルギニン）およびシトルリン（Ｃｉｔ）からなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ３２は、リジン（Ｌｙｓ）、アラニン（Ａｌａ）、アルギニン（Ａｒｇ）、Ｎε−アセチル−リジン（Ｋ（Ａｃ））およびＮε，Ｎε，Ｎε−トリ−メチル−リジン（Ｔｍｌ）からなる群から選択されるアミノ酸を表し；ならびに
Ｘ３３は、リジン（Ｌｙｓ）、Ｎε−アセチル−リジン（Ｋ（Ａｃ））、ロイシン（Ｌｅｕ）、アルギニン（Ａｒｇ）およびアラニン（Ａｌａ）から選択されるアミノ酸を表す）を有するペプチド；
またはその塩もしくは溶媒和物に関する。
【００３２】
特定の実施形態において本発明は、ＲＸＦＰ１受容体を活性化することができる式（Ｉ）を有するペプチド、または薬学的に許容されるその塩もしくは溶媒和物を提供する。
【００３３】
本発明の別の目的は、本発明による少なくとも１つのペプチド、または薬学的に許容されるその塩もしくは溶媒和物を、少なくとも１つの薬学的に許容される担体と一緒に含む医薬組成物である。
【００３４】
本発明のさらなる目的は、医薬品として使用するための、本発明のペプチド、薬学的に許容されるその塩もしくは溶媒和物、または本発明によるその医薬組成物に関する。
【００３５】
したがって、本発明は、さらに、ＲＸＦＰ１受容体が関与する様々な疾患または状態の処置および／または予防、より具体的には：
−線維症；線維性疾患、特に全身性硬化症、強皮症および線維筋痛症；特発性肺線維症；線維症を伴う腎臓病；肺高血圧および妊娠高血圧腎症からなる群；
−特に、急性もしくは慢性心不全、収縮期もしくは拡張期心不全、冠動脈疾患、アテローム性動脈硬化、微小血管狭心症および糖尿病の心血管合併症からなる群からの心臓および血管疾患からなる群；ならびに／または
−腎不全、特に肝硬変における腎機能障害、慢性腎臓病および急性腎傷害からなる群
から選択される疾患または状態の処置および／または予防において使用するための、本発明のペプチド、薬学的に許容されるその塩もしくは溶媒和物、または本発明によるその医薬組成物に関する。
【００３６】
１つの実施形態において、前記疾患または状態は、特に、急性または慢性心不全、収縮期または拡張期心不全、冠動脈疾患、アテローム性動脈硬化、微小血管狭心症および糖尿病の心血管合併症からなる群からの、心臓および血管疾患からなる群から選択することができる。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
定義
本明細書で使用される場合：
−ｙが異なる値を有する、本発明の式に使用される「Ｘｙ」は、前記式の定義に規定されるアミノ酸を表す。ｙは、リラキシン−２の天然のＢ鎖における前記アミノ酸の位置を示す。例えば、Ｘ１０は、リラキシン−２の天然のＢ鎖のアミノ酸配列の１０位のアミノ酸を表す。
−「薬学的に許容される担体」は、医薬組成物が生理的に認容される、すなわち毒性または過度の不快感なく個体に投与されるように、流体、特に本発明のペプチドを含む液体が意図される。
−本発明による「生物学的に活性な」ペプチドは、ＲＸＦＰ１受容体を活性化することができるペプチドである。
−該当する場合、本発明のペプチド中のアミノ酸は、それぞれ独立してＬ−アミノ酸またはＤ−アミノ酸であってもよい。特定の実施形態において、本発明によるアミノ酸はＬ−アミノ酸である。本明細書では、任意のアミノ酸のＬ型またはＤ型に関する情報が示されないならば、このアミノ酸はＬ−アミノ酸である。
−ＮｔｅｒおよびＣｔｅｒは、それぞれ、本発明のペプチドのＮ末端およびペプチドのＣ末端を示すのに使用される従来の表示である。
−本発明による「ペプチド」または「リラキシンペプチド」は、本発明による修飾された脂質化リラキシンＢ鎖ペプチドである。特に、そのような「ペプチド」または「リラキシンペプチド」は、生物学的に活性な、すなわち典型的にはリラキシンと関連した生物活性を示す、特に、ＲＸＦＰ１受容体を活性化することができる上記に示されたようなペプチドを意味する。本発明による修飾ペプチドによって示されるそのようなリラキシン生物活性のレベルは、天然に存在するもしくは天然のリラキシンの活性と比べた場合、または本発明のものとは異なる既に開示されたリラキシンペプチドと比べた場合でさえ同等であり得、または有利には増強される。
−用語「天然の（ｎａｔｉｖｅ）」は、リラキシンに関連して本明細書で使用される場合、天然に存在する分子または野生型分子を指す。
−「予防（妨げるｉｎｇ）」は、検討中の現象の出現リスクを低下させることを意味することが意図される。この低下は完全または部分的であってもよく、すなわち、本発明による使用において既存のものより低いリスクの程度をもたらす。
−「処置（Ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、検討中の望ましくない状態または疾患を低減またはさらには排除することを意味することが意図される。
−「個体」または「患者」は、本発明により検討される状態に罹患した、または罹患する可能性があるヒトまたはヒト以外の哺乳動物が意図される。前記個体は、特にヒトである。
【００３８】
本発明者らは、新たな修飾ペプチド、特に脂質化ペプチドを設計した。
【００３９】
本発明者らは、より短いおよび強く修正された本発明によるペプチド、すなわち本発明によるアミノ酸配列が、当技術分野で公知の単一のＢ鎖リラキシンと比較して、優れた生物活性、特にＲＸＦＰ１受容体を活性化する優れた能力を有することを本明細書において思いがけず見出した。
【００４０】
本発明のペプチド
本発明によるペプチドは、該ペプチドが、式（Ｉ）：
Ｎｔｅｒ−Ａｃ−Ｘ１０−Ｅ−Ｇ−Ｒ−Ｅ−Ｘ１５−Ｖ−Ｒ−Ｘ１８−Ｘ１９−Ｉ−Ｘ２１−Ｘ２２−Ｅ−Ｇ−Ｘ２５−Ｓ−Ｘ２７−Ｘ２８−Ｘ２９−Ｘ３０−Ｘ３１−Ｘ３２−Ｘ３３−ＮＨ２−Ｃｔｅｒ
（式中：
Ｎｔｅｒは、ペプチドのＮ末端を表し；
Ｃｔｅｒは、ペプチドのＣ末端を表し；
Ａｃは、アセチル基を表し；
Ｘ１０は、ロイシン、２−アミノイソ酪酸、Ｎε−アセチル−リジンおよびα−メチル−ロイシンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｅは、グルタミン酸を表し；
Ｇは、グリシンを表し；
Ｒは、アルギニンを表し；
Ｘ１５は、リジン、アルギニン、ホモリジン、ホモアルギニン、オルニチン、グルタミン、フェニルアラニンおよびロイシンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｖは、バリンを表し；
Ｘ１８は、アラニン、２−アミノイソ酪酸、ロイシン、Ｎε−アセチル−リジンおよびグルタミンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ１９は、リジン、Ｎε−アセチル−リジン、シトルリン、グルタミン、アラニンおよび２−アミノイソ酪酸からなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｉは、イソロイシンを表し；
Ｘ２１は、２−アミノイソ酪酸およびアラニンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ２２は、２−アミノイソ酪酸およびイソロイシンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ２５は、以下の構造を表し：
【化３】
2021512099.tif 000003
（ここで：
−＊は、式（Ｉ）のＸ２５の前のグリシンとの共有結合を表し；
−◆は、式（Ｉ）のＸ２５の後のセリンとの共有結合を表し；および
Ｚは、式（ＩＩ）：
−［（ＰＥＧｘｘ）ｂ（ｇＥ）ｃＣｄ］
（ｂおよびｃは、１、２、３、４または５を独立して表し；
ＰＥＧｘｘは、ＰＥＧ２、ＰＥＧ２ＤＧＡ、およびＴＴＤＳからなる群から選択されるポリエチレングリコール誘導体を独立して表し；
ｇＥは、ガンマ−グルタミン酸を表し；ならびに
Ｃｄは、直鎖飽和Ｃ１２〜Ｃ２２アシル基を表す）の基を表す）；
Ｓは、セリンを表し；
Ｘ２７は、スレオニン、リジン、アルギニンおよびグルタミンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ２８は、トリプトファン、フェニルアラニン、５−フルオロ−トリプトファン、５−クロロ−トリプトファン、５−メトキシ−トリプトファン、チロシン、４−フルオロ−フェニルアラニン、１−ナフチルアラニン、２−ナフチルアラニン、α−メチル−トリプトファン、α−メチル−フェニルアラニンおよび５−ヒドロキシ−トリプトファンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ２９は、セリン、Ｄ−セリン、２−アミノイソ酪酸、スレオニン、α−メチル−セリン、Ｎε−アセチル−リジンおよびバリンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ３０は、２−アミノイソ酪酸、α−メチル−リジン、Ｄ−リジン、リジン、ホモリジン、オルニチン、アルギニンおよびα−メチル−アルギニンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ３１は、アルギニン、Ｎω−メチル−アルギニン、アラニン、Ｎω，Ｎω’−ジメチル−アルギニンおよびシトルリンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ３２は、リジン、アラニン、アルギニン、Ｎε−アセチル−リジンおよびＮε，Ｎε，Ｎε−トリ−メチル−リジンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ３３は、リジン、Ｎε−アセチル−リジン、ロイシン、アルギニンおよびアラニンから選択されるアミノ酸を表す）のもの；
またはその塩もしくは溶媒和物であることを特徴とする。
【００４１】
本発明はまた、本明細書に定義された式（Ｉ）または（Ｉａ）のペプチドの塩、１つの実施形態では薬学的に許容される塩、例えば、酸付加物としての塩（塩酸、硫酸、硝酸、臭化水素酸、リン酸、過塩素酸、チオシアン酸およびホウ酸などの無機酸との；またはギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、クエン酸、酒石酸、コハク酸、グルコン酸、乳酸、マロン酸、フマル酸、アントラニル酸、安息香酸、ケイ皮酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸およびスルファニル酸などの有機酸との）；ならびにアルカリ金属（例えばナトリウム、カリウム、リチウム、亜鉛、およびアルミニウム）などの金属との塩も含む。
【００４２】
１つの実施形態においてペプチドの塩は、薬学的に許容される塩、例えば、塩酸、硫酸、リン酸、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、クエン酸、酒石酸、コハク酸、グルコン酸、乳酸、マロン酸、フマル酸、アントラニル酸、安息香酸、ケイ皮酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸およびスルファニル酸との酸付加物；ならびにアルカリ金属、例えばナトリウム、カリウム、リチウムおよび亜鉛などの金属との塩である。
【００４３】
本発明はまた、上記の式（Ｉ）または（Ｉａ）のペプチドの溶媒和物、１つの実施形態では薬学的に許容される溶媒和物も含む。
【００４４】
溶媒和物は、本発明の化合物またはその塩と溶媒分子、例えば有機溶媒分子および／または水との複合体を意味する。
【００４５】
本発明の実施形態によれば、本発明はまた、本発明のペプチドの薬学的に許容される塩または溶媒和も含む。
【００４６】
例示されているように、本発明によるペプチドはアミノ酸配列である。
【００４７】
標準的なポリペプチド命名法（Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．、２４３：３５５２〜５９頁（１９６９））に従って、本発明で使用されるα−アミノ酸残基の略号は次の通りである：
【００４８】
【表１】
2021512099.tif 000004
【００４９】
非天然または修飾アミノ酸には、以下の略号が使用される：
【００５０】
【表２】
2021512099.tif 000005
【００５１】
アミノ酸配列が、上述の略号および例えばＸ１８などのＸｙ表記を使用して表される本発明による式全てにおいて、左から右方向がアミノ末端からカルボキシ末端の従来の方向である。
【００５２】
したがって、例えば、トリプトファン、５−フルオロ−トリプトファン、５−クロロ−トリプトファン、５−メトキシ−トリプトファン、チロシン、フェニルアラニン、４−フルオロ−フェニルアラニン、１−ナフチルアラニン、２−ナフチルアラニン、α−メチル−トリプトファン、α−メチル−フェニルアラニンおよび５−ヒドロキシ−トリプトファンの群から選択されるアミノ酸を表すＸ２８では、前記アミノ酸のＮ末端またはアミノ基がＸ２７によって表されるアミノ酸に連結され、前記アミノ酸のＣ末端またはカルボキシル基がＸ２９によって表されるアミノ酸に連結される。
【００５３】
そのＮ末端（Ｎｔｅｒ）端において、本発明のペプチドはアセチル基（Ａｃ）：ＣＨ３Ｃ（Ｏ）−と置換される。
【００５４】
そのＣ末端（Ｃｔｅｒ）端において、本発明のペプチドは−ＮＨ２基と置換される。
【００５５】
そのＸ２５位において、本発明のペプチドは、以下の構造：
【化５】
2021512099.tif 000006
を含む。
【００５６】
この構造は、リジンアミノ酸に対応する（式中：
−アルファ（α）窒素原子（＊）は、ペプチドの前の部分に結合され（すなわち、共有結合、特にペプチド結合を通じて、本発明による式に表されたＮｔｅｒ−Ｃｔｅｒ方向に基づくＸ２５のＮｔｅｒの基が、すなわち２４位（Ｘ２４）のグリシンと）；
−カルボキシル基の炭素原子（◆）は、Ｘ２５位の後のペプチドの部分に結合され（すなわち、共有結合、特にペプチド結合を通じて、本発明による式に表されたＮｔｅｒ−Ｃｔｅｒ方向に基づくＸ２５のＣｔｅｒの基が、すなわち２６位（Ｘ２６）のセリンと）；および
−その側鎖の窒素原子はＺ基に結合される）。
【００５７】
このＺ基は、式（ＩＩ）：
−［（ＰＥＧｘｘ）ｂ（ｇＥ）ｃＣｄ］として定義される。
【００５８】
式（ＩＩ）中、−は、Ｘ２５のリジン構造の側鎖の窒素原子との共有結合を表す。
【００５９】
ｂおよびｃは、１、２、３、４または５、特に２、３、４または５を独立して表す。
【００６０】
特定の実施形態において、ｂは２、３、４または５を表す。
【００６１】
特定の実施形態において、ｃは２、３または４を表す。
【００６２】
好ましい実施形態において、ｂは２、３、４または５を表し、およびｃは２、３または４を独立して表す。
【００６３】
本発明の式中のＰＥＧｘｘは、ＰＥＧ２、ＰＥＧ２ＤＧＡおよびＴＴＤＳからなる群から選択されるポリエチレングリコール誘導体を独立して表す。
【００６４】
前記群は、次のように定義される：
【００６５】
【表３】
2021512099.tif 000007
式中、式（ＩＩ）の（ＰＥＧｘｘ）ｂにおいて、
△は、（ｇＥ）ｃ基との共有結合を表し、および
□は、式（ＩＩ）の基とＸ２５のリジン構造の側鎖の窒素原子とを連結する共有結合を表す。
【００６６】
特定の実施形態において、（ＰＥＧｘｘ）ｂは、（ＴＴＤＳ）２、（ＴＴＤＳ）３、（ＰＥＧ２ＤＧＡ）３、（ＰＥＧ２）３、（ＰＥＧ２）４および（ＰＥＧ２）５からなる群から選択されるポリエチレングリコール誘導体を表す。
【００６７】
以前に示されているように、γＥ、ｇＧｌｕまたはγＧｌｕとしても表されるｇＥは、ガンマ−グルタミン酸を表す。このアミノ酸は、以下の構造を有する：
【化４】
2021512099.tif 000008
（式中、式（ＩＩ）において（ｇＥ）ｃとして表されるとき、
△は、Ｃｄとの共有結合を表し、および
□は、（ＰＥＧｘｘ）ｂ基との共有結合を表す）。
【００６８】
Ｃｄは、直鎖飽和Ｃ１２〜Ｃ２２アシル基、特に、Ｃ１２（Ｌａｕ）、Ｃ１４（Ｍｙｒ）、Ｃ１５（Ｐｅｎｔａ）、Ｃ１６（Ｐａｌｍ）、Ｃ１７（Ｈｅｐｔａ）、Ｃ１８（Ｓｔｅａ）、Ｃ２０（Ｅｉｃｏ）およびＣ２２（Ｄｏｃｏ）アシル基からなる群から選択される直鎖飽和アシル基を表す。１つの実施形態においてＣｋは、Ｃ１２（Ｌａｕ）、Ｃ１４（Ｍｙｒ）、Ｃ１５（Ｐｅｎｔａ）、Ｃ１６（Ｐａｌｍ）、Ｃ１７（Ｈｅｐｔａ）またはＣ１８（Ｓｔｅａ）アシル基からなる群から選択される直鎖飽和アシル基、特に直鎖飽和Ｃ１４、Ｃ１６またはＣ１８アシル基、さらにより具体的には直鎖Ｃ１６またはＣ１８アシル基を表す。
【００６９】
特定の実施形態において、Ｃｄは、直鎖飽和Ｃ１２アシル基を表す。本発明の直鎖飽和Ｃ１２アシル基は、ラウロイル基（本明細書では「Ｌａｕ」としても表される）である。
【００７０】
特定の実施形態において、Ｃｄは、直鎖飽和Ｃ１４アシル基を表す。本発明の直鎖飽和Ｃ１４アシル基は、ミリストイル基（本明細書では「Ｍｙｒ」としても表される）である。
【００７１】
特定の実施形態において、Ｃｄは、直鎖飽和Ｃ１５アシル基を表す。本発明の直鎖飽和Ｃ１５アシル基は、ペンタデカノイル基（本明細書では「Ｐｅｎｔａ」としても表される）である。
【００７２】
特定の実施形態において、Ｃｄは、直鎖飽和Ｃ１６アシル基を表す。本発明の直鎖飽和Ｃ１６アシル基は、パルミトイル基（本明細書では「Ｐａｌｍ」としても表される）である。
【００７３】
特定の実施形態において、Ｃｄは、直鎖飽和Ｃ１７アシル基を表す。本発明の直鎖飽和Ｃ１７アシル基は、ヘプタデカノイル基（本明細書では「Ｈｅｐｔａ」としても表される）である。
【００７４】
別の特定の実施形態において、Ｃｄは、直鎖飽和Ｃ１８アシル基を表す。本発明の直鎖飽和Ｃ１８アシル基は、ステアロイル基（本明細書では「Ｓｔｅａ」としても表される）である。
【００７５】
別の特定の実施形態において、Ｃｄは、直鎖飽和Ｃ２０アシル基を表す。本発明の直鎖飽和Ｃ２０アシル基は、エイコサノイル基（本明細書では「Ｅｉｃｏ」としても表される）である。
【００７６】
別の特定の実施形態において、Ｃｄは、直鎖飽和Ｃ２２アシル基を表す。本発明の直鎖飽和Ｃ２２アシル基は、ドコサノイル基（本明細書では「Ｄｏｃｏ」としても表される）である。
【００７７】
特定の実施形態において、Ｚは、−（ＴＴＤＳ）２−（ガンマ−グルタミン酸）３−パルミトイル（−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ）、−（ＴＴＤＳ）３−（ガンマ−グルタミン酸）３−パルミトイル（−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ）、−（ＰＥＧ２ＤＧＡ）３−（ガンマ−グルタミン酸）３−パルミトイル（−（ＰＥＧ２ＤＧＡ）３−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ）、−（ＰＥＧ２）４−（ガンマ−グルタミン酸）３−パルミトイル（−（ＰＥＧ２）４−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ）、−（ＴＴＤＳ）２−（ガンマ−グルタミン酸）２−パルミトイル（−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）２−Ｐａｌｍ）、−（ＴＴＤＳ）２−（ガンマ−グルタミン酸）３−ステアロイル（−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａ）、−（ＴＴＤＳ）３−（ガンマ−グルタミン酸）３−ステアロイル（−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａ）、−（ＰＥＧ２ＤＧＡ）３−（ガンマ−グルタミン酸）３−ステアロイル（−（ＰＥＧ２ＤＧＡ）３−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａ）、−（ＰＥＧ２ＤＧＡ）３−（ガンマ−グルタミン酸）４−ステアロイル（−（ＰＥＧ２ＤＧＡ）３−（ｇＥ）４−Ｓｔｅａ）、−（ＰＥＧ２）３−（ガンマ−グルタミン酸）３−パルミトイル（−（ＰＥＧ２）３−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ）、−（ＰＥＧ２）４−（ガンマ−グルタミン酸）３−ステアロイル（−（ＰＥＧ２）４−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａ）、−（ＰＥＧ２）５−（ガンマ−グルタミン酸）３−パルミトイル（−（ＰＥＧ２）５−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ）、−（ＰＥＧ２）５−（ガンマ−グルタミン酸）４−パルミトイル（−（ＰＥＧ２）５−（ｇＥ）４−Ｐａｌｍ）、−（ＴＴＤＳ）３−（ガンマ−グルタミン酸）４−ステアロイル（−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）４−Ｓｔｅａ）、−（ＴＴＤＳ）２−（ガンマ−グルタミン酸）４−パルミトイル（−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）４−Ｐａｌｍ）、−（ＴＴＤＳ）３−（ガンマ−グルタミン酸）２−ステアロイル（−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）２−Ｓｔｅａ）および−（ＴＴＤＳ）２−（ガンマ−グルタミン酸）４−ステアロイル（−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）４−Ｓｔｅａ）からなる群から選択され、より特定の実施形態においてＺは、−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＰＥＧ２ＤＧＡ）３−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＰＥＧ２）４−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）２−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａ、−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａ、−（ＰＥＧ２）３−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＰＥＧ２）４−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａおよび−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）４−Ｐａｌｍからなる群から選択され、特別な実施形態においてＺは、−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａおよび−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａ、例えば−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍおよび−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａからなる群から選択される。
【００７８】
全てのこれらのＺ基では、最初の−記号は、Ｚ基とリジンＸ２５構造の側鎖の窒素原子の間の共有結合を表す。
【００７９】
したがって、Ｚ基が、例えば−（ＴＴＤＳ）２−（ガンマ−グルタミン酸）３−パルミトイル（−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍとしても表される）として表される場合、第１のＴＴＤＳ基は、Ｘ２５構造の側鎖の窒素原子に結合される。共有結合はまた、第２のＴＴＤＳ基も結合するが、別の共有結合がこの第２のＴＴＤＳ基を第１のガンマ−グルタミン酸（ｇＥ）に結合させる。この第１のガンマ−グルタミン酸（ｇＥ）は、それ自体が共有結合により第２のガンマ−グルタミン酸（ｇＥ）に結合され、この第２のガンマ−グルタミン酸（ｇＥ）は、別の共有結合により第３のガンマ−グルタミン酸（ｇＥ）に結合され、この第３のガンマ−グルタミン酸（ｇＥ）基は、共有結合によってパルミトイル（Ｐａｌｍ）基にさらに連結される。
【００８０】
さらに、例えば−（ＴＴＤＳ）２−（ガンマ−グルタミン酸）３−パルミトイル（−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍとしても表される）として表される本発明によるＺ基は、−ＴＴＤＳ−ＴＴＤＳ−ｇＥ−ｇＥ−ｇＥ−Ｐａｌｍともなり得ることが本出願から理解されなければならない。
【００８１】
同じことが、本発明による他の表されたＺ基に準用される。
【００８２】
特定の実施形態によれば、本発明によるペプチドは、式（Ｉａ）：
Ｎｔｅｒ−Ａｃ−Ｌ−Ｅ−Ｇ−Ｒ−Ｅ−Ｘ１５−Ｖ−Ｒ−Ｘ１８−Ｘ１９−Ｉ−Ａｉｂ−Ａｉｂ−Ｅ−Ｇ−Ｘ２５−Ｓ−Ｔ−Ｘ２８−Ｘ２９−Ｘ３０−Ｒ−Ｘ３２−Ｘ３３−ＮＨ２−Ｃｔｅｒ
（式中：
Ｎｔｅｒは、ペプチドのＮ末端を表し；
Ｃｔｅｒは、ペプチドのＣ末端を表し；
Ａｃは、アセチル基を表し；
Ｌは、ロイシンを表し；
Ｅは、グルタミン酸を表し；
Ｇは、グリシンを表し；
Ｒは、アルギニンを表し；
Ｘ１５は、リジン、アルギニン、ホモリジン、グルタミン、フェニルアラニンおよびロイシンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｖは、バリンを表し；
Ｘ１８は、アラニンおよび２−アミノイソ酪酸からなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ１９は、リジン、Ｎε−アセチル−リジン、グルタミンおよびシトルリンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｉは、イソロイシンを表し；
Ａｉｂは、２−アミノイソ酪酸を表し；
Ｘ２５は、以下の構造を表し：
【化５】
2021512099.tif 000009
（ここで：
−＊は、式（Ｉａ）のＸ２５の前のグリシンとの共有結合を表し；
−◆は、式（Ｉａ）のＸ２５の後のセリンとの共有結合を表し；ならびに
Ｚは、
−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＰＥＧ２ＤＧＡ）３−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＰＥＧ２）４−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）２−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａ、−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａ、−（ＰＥＧ２ＤＧＡ）３−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａ、−（ＰＥＧ２ＤＧＡ）３−（ｇＥ）４−Ｓｔｅａ、−（ＰＥＧ２）３−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＰＥＧ２）４−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａ、−（ＰＥＧ２）５−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＰＥＧ２）５−（ｇＥ）４−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）４−Ｓｔｅａ、−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）４−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）２−Ｓｔｅａおよび−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）４−Ｓｔｅａ（ここで、
ｇＥは、ガンマ−グルタミン酸を表し
Ｐａｌｍは、パルミトイルを表し、および
Ｓｔｅａは、ステアロイルを表す）からなる群から選択される）；
Ｓは、セリンを表し；
Ｔは、スレオニンを表し；
Ｘ２８は、トリプトファンおよびフェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ２９は、セリン、Ｄ−セリンおよび２−アミノイソ酪酸からなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ３０は、２−アミノイソ酪酸、α−メチル−リジン、Ｄ−リジンおよびリジンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ３２は、リジン、アラニンおよびアルギニンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；ならびに
Ｘ３３は、リジンおよびＮε−アセチル−リジンから選択されるアミノ酸を表す）のもの；
またはその塩もしくは溶媒和物である。
【００８３】
特定の実施形態によれば、本発明によるペプチドは、参照配列番号１〜９７のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。特に、本発明によるペプチドは、参照配列番号１〜３２、３４〜３７、３９、４２、４４、４５、４７〜４９、５１および５４〜９７のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。
【００８４】
特定の実施形態において、上記に記載される式（Ｉａ）を有するペプチドに関して：
Ｘ１９は、Ｎε−アセチル−リジンおよびシトルリンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ２５は、以下の構造を表し：
【化６】
2021512099.tif 000010
（ここで：
−＊は、式（Ｉａ）のＸ２５の前のグリシンとの共有結合を表し；
−◆は、式（Ｉａ）のＸ２５の後のセリンとの共有結合を表し；ならびに
Ｚは、
−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＰＥＧ２ＤＧＡ）３−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＰＥＧ２）４−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）２−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａ、−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａ、−（ＰＥＧ２）３−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＰＥＧ２）４−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａおよび−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）４−Ｐａｌｍ（ここで、
ｇＥは、ガンマ−グルタミン酸を表し
Ｐａｌｍは、パルミトイルを表し、および
Ｓｔｅａは、ステアロイルを表す）からなる群から選択される）；
Ｘ３２は、リジンおよびアラニンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；ならびに
Ｘ３３は、Ｎε−アセチル−リジンを表す
またはその塩もしくは溶媒和物。
【００８５】
別の実施形態によれば、本発明によるペプチドは、参照配列番号１〜３０のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。
【００８６】
特定の実施形態において、式（Ｉａ）の本発明によるペプチドは：
Ｎｔｅｒが、ペプチドのＮ末端を表し；
Ｃｔｅｒが、ペプチドのＣ末端を表し；
Ａｃが、アセチル基を表し；
Ｌが、ロイシンを表し；
Ｅが、グルタミン酸を表し；
Ｇが、グリシンを表し；
Ｒが、アルギニンを表し；
Ｘ１５が、リジンおよびホモリジンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｖが、バリンを表し；
Ｘ１８が、アラニンを表し；
Ｘ１９が、Ｎε−アセチル−リジンおよびシトルリンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｉが、イソロイシンを表し；
Ａｉｂが、２−アミノイソ酪酸を表し；
Ｘ２５が、以下の構造を表し：
【化７】
2021512099.tif 000011
（ここで：
−＊は、式（Ｉａ）のＸ２５の前のグリシンとの共有結合を表し；
−◆は、式（Ｉａ）のＸ２５の後のセリンとの共有結合を表し；ならびに
Ｚは、−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）２−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）４−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＰＥＧ２ＤＧＡ）３−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａ、−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａおよび−（ＰＥＧ２）４−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａ（ここで、
ｇＥは、ガンマ−グルタミン酸を表し
Ｐａｌｍは、パルミトイルを表し、および
Ｓｔｅａは、ステアロイルを表す）からなる群から選択される）；
Ｓが、セリンを表し；
Ｔが、スレオニンを表し；
Ｘ２８が、トリプトファンおよびフェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ２９が、セリンを表し；
Ｘ３０が、２−アミノイソ酪酸およびα−メチル−リジンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ３２が、リジン、アラニンおよびアルギニンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；ならびに
Ｘ３３が、リジンおよびＮε−アセチル−リジンから選択されるアミノ酸を表す；ことを満たし
またはその塩もしくは溶媒和物である。
【００８７】
特別な実施形態において、式（Ｉａ）の本発明によるペプチドは：
Ｎｔｅｒが、ペプチドのＮ末端を表し；
Ｃｔｅｒが、ペプチドのＣ末端を表し；
Ａｃが、アセチル基を表し；
Ｌが、ロイシンを表し；
Ｅが、グルタミン酸を表し；
Ｇが、グリシンを表し；
Ｒが、アルギニンを表し；
Ｘ１５が、リジンを表し；
Ｖが、バリンを表し；
Ｘ１８が、アラニンを表し；
Ｘ１９が、Ｎε−アセチル−リジンを表し；
Ｉが、イソロイシンを表し；
Ａｉｂが、２−アミノイソ酪酸を表し；
Ｘ２５が、以下の構造を表し：
【化８】
2021512099.tif 000012
（ここで：
−＊は、式（Ｉａ）のＸ２５の前のグリシンとの共有結合を表し；
−◆は、式（Ｉａ）のＸ２５の後のセリンとの共有結合を表し；ならびに
Ｚは、−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａ、−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａおよび−（ＰＥＧ２）４−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａ（ここで、
ｇＥは、ガンマ−グルタミン酸を表し
Ｐａｌｍは、パルミトイルを表し、および
Ｓｔｅａは、ステアロイルを表す）からなる群から選択される）；
Ｓが、セリンを表し；
Ｔが、スレオニンを表し；
Ｘ２８が、トリプトファンおよびフェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ２９が、セリンを表し；
Ｘ３０が、２−アミノイソ酪酸およびα−メチル−リジンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ３２が、リジン、アラニンおよびアルギニンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；ならびに
Ｘ３３が、リジンおよびＮε−アセチル−リジンから選択されるアミノ酸を表す；ことを満たし
またはその塩もしくは溶媒和物である。
【００８８】
特定の実施形態によれば、本発明によるペプチドは、式（Ｉｂ）：
Ｎｔｅｒ−Ａｃ−Ｘ１０−Ｅ−Ｇ−Ｒ−Ｅ−Ｘ１５−Ｖ−Ｒ−Ｘ１８−Ｘ１９−Ｉ−Ｘ２１−Ｘ２２−Ｅ−Ｇ−Ｘ２５−Ｓ−Ｘ２７−Ｘ２８−Ｘ２９−Ｘ３０−Ｒ−Ｘ３２−Ｘ３３−ＮＨ２−Ｃｔｅｒ
（式中：
Ｎｔｅｒは、ペプチドのＮ末端を表し；
Ｃｔｅｒは、ペプチドのＣ末端を表し；
Ａｃは、アセチル基を表し；
Ｘ１０は、ロイシン、Ｎε−アセチル−リジンおよび２−アミノイソ酪酸からなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｅは、グルタミン酸を表し；
Ｇは、グリシンを表し；
Ｒは、アルギニンを表し；
Ｘ１５は、リジン、アルギニン、ホモリジン、グルタミン、フェニルアラニンおよびロイシンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｖは、バリンを表し；
Ｘ１８は、アラニン、２−アミノイソ酪酸およびＮε−アセチル−リジンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ１９は、リジン、Ｎε−アセチル−リジン、グルタミンおよびシトルリンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｉは、イソロイシンを表し；
Ｘ２１は、２−アミノイソ酪酸およびアラニンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ２２は、２−アミノイソ酪酸およびイソロイシンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ２５は、以下の構造を表し：
【化９】
2021512099.tif 000013
（ここで：
−＊は、式（Ｉａ）のＸ２５の前のグリシンとの共有結合を表し；
−◆は、式（Ｉａ）のＸ２５の後のセリンとの共有結合を表し；および
Ｚは、−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＰＥＧ２ＤＧＡ）３−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＰＥＧ２）４−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）２−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａ、−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａ、−（ＰＥＧ２ＤＧＡ）３−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａ、−（ＰＥＧ２ＤＧＡ）３−（ｇＥ）４−Ｓｔｅａ、−（ＰＥＧ２）３−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＰＥＧ２）４−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａ、−（ＰＥＧ２）５−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＰＥＧ２）５−（ｇＥ）４−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）４−Ｓｔｅａ、−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）４−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）２−Ｓｔｅａ、−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）４−Ｓｔｅａ、−（ＴＴＤＳ）４−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａ、−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）４−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）４−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）３−Ｍｙｒおよび−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）４−Ｍｙｒ（ここで、
ｇＥは、ガンマ−グルタミン酸を表し
Ｐａｌｍは、パルミトイルを表し、および
Ｓｔｅａは、ステアロイルを表す）からなる群から選択される）；
Ｓは、セリンを表し；
Ｘ２７は、スレオニン、グルタミン、アルギニンおよびリジンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ２８は、トリプトファン、フェニルアラニン、５−クロロトリプトファン、α−メチル−フェニルアラニン、４−フルオロ−フェニルアラニンおよび５−フルオロトリプトファンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ２９は、セリン、Ｄ−セリン、２−アミノイソ酪酸、Ｎε−アセチル−リジン、スレオニンおよびバリンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ３０は、２−アミノイソ酪酸、α−メチル−リジン、Ｄ−リジン、リジン、ホモリジンおよびアルギニンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；
Ｘ３２は、リジン、アラニン、アルギニンおよびＮε−アセチル−リジンからなる群から選択されるアミノ酸を表し；ならびに
Ｘ３３は、リジン、Ｎε−アセチル−リジンおよびアルギニンから選択されるアミノ酸を表す）のもの；
またはその塩もしくは溶媒和物である。
【００８９】
特に、Ｚは、−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＰＥＧ２ＤＧＡ）３−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＰＥＧ２）４−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）２−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａ、−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａ、−（ＰＥＧ２ＤＧＡ）３−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａ、−（ＰＥＧ２）３−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＰＥＧ２）４−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａ、−（ＰＥＧ２）５−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）４−Ｓｔｅａ、−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）４−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）２−（ｇＥ）４−Ｓｔｅａ、−（ＴＴＤＳ）４−（ｇＥ）３−Ｓｔｅａ、−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）４−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）４−（ｇＥ）３−Ｐａｌｍ、−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）３−Ｍｙｒおよび−（ＴＴＤＳ）３−（ｇＥ）４−Ｍｙｒからなる群から選択される。
【００９０】
本発明の特定の実施形態において、本発明のペプチドは、配列番号３、６、７、９、１０、１１、１２、１３、２０、２１、２２、２６、２８および３０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。
【００９１】
本発明の特定の実施形態において、本発明のペプチドは、配列番号３、６、７、９〜１２、２０〜２２、２６、２８、３０〜３４、４５、４７〜４９、５１、５４〜６２、６４、６７〜６９、７１〜９３、９６および９７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。上記に示されおよび添付の例に例示されるように、これらのペプチドは全て、１ｎＭ以下のＥＣ５０を有するという点で特に有利である。
【００９２】
特に、本発明のペプチドは、配列番号３、６、７、１３、２０、２６および３０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。
【００９３】
特に、本発明のペプチドは、配列番号３、６、７、２０、２６、３０〜３４、４５、４８、４９、５１、５４〜６１、６７、７１、７３、７５〜７９、８１、８３〜９２および９７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。添付の例に例示されているように、この実施形態によるペプチドは全て、０．５ｎＭ以下のＥＣ５０を有するという点で特に有利である。
【００９４】
特定の実施形態において、本発明のペプチドは、参照配列番号３、配列番号６、配列番号７および配列番号２０のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有し、特に参照配列番号３のアミノ酸配列を有する。
【００９５】
本発明のペプチドは、限定するものではないが、任意の化学的、生物学的、遺伝学的または酵素的手法（単独でまたは組み合わせのいずれかで）などの、当技術分野でそれ自体が公知の任意の手法によって作製することができる。所望の配列のアミノ酸配列が分かれば、当業者は、非天然アミノ酸が使用されるとしても、ポリペプチドの作製のための標準的な手法によって、または本明細書に記載された方法に従って前記ポリペプチドを容易に作製することができる。
【００９６】
例えば、本発明のペプチドは、周知の固相法を使用して、特に市販のペプチド合成装置（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、Ｇｙｒｏｓ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｔｕｃｓｏｎ、ＡｒｉｚｏｎａまたはＣＥＭ  ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｍａｔｔｈｅｗｓ、Ｎｏｒｔｈ  Ｃａｒｏｌｉｎａによって製造されたものなど）を使用して、および製造者の説明書に従って合成することができる。
【００９７】
適当な方法の例は、添付の例に例示されている。
【００９８】
本発明のペプチドは、特に酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、生物発光物質および放射性物質からなる群から選択される、少なくとも１つの検出可能な分子または物質を用いて標識することができる。
【００９９】
しかし、前記標識は、前記ペプチドが、以前に定義された目的とするその生物活性を有するのを変えないまたは妨げない、すなわち、ＲＸＦＰ１受容体を結合および活性化するペプチド能力を妨げないまたは変えないことが重要である。
【０１００】
ナノ材料支持体に対する好ましい検出可能な分子または物質は、インビボ投与後に非侵襲的に外部で検出することができるものである。
【０１０１】
検出可能な分子または物質は、当業者に周知である。
【０１０２】
そのような標識された本発明のペプチドは、診断および／または撮像法において使用することができる。
【０１０３】
本発明者らは、さらに、本発明のペプチドの半減期、特にインビボ半減期が、リラキシンより有意に優れていることを観察した。
【０１０４】
実際に、リラキシンは腎臓によって迅速に除去され、慢性状況においては使用することができない。組換えホルモンは、インビボでの半減期が極めて短く（Ｂ．Ｌ．  Ｆｅｒｒａｉｏｌｏら  Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．（１９９１）、８、１０３２頁およびＳ．Ａ．  Ｃｈｅｎら  Ｐｈａｒｍ．  Ｒｅｓ．（１９９３）、１０、８３４頁にサルおよびヒトで例示されているように）、静脈内送達を必要とする。リラキシンの半減期は実際非常に短いため、それを必要とする個体、特に、例えば急性心不全などの急性疾患または障害に罹患している個体に投与するために、病院において連続輸注が数時間にわたって必要とされ得る。この処置において、改善されたインビボ半減期を有するリラキシンペプチドによってリラキシンを置換することにより、例えば静脈内または皮下経路による、１日１回投与などのより単純なものによってこの制約する処置の置換が有利には可能になる。
【０１０５】
したがって、ＲＸＦＰ１を活性化するリラキシンの能力を有する本発明のリラキシンペプチド、より具体的にはＲＸＦＰ１の持続性アゴニストであるペプチドは、急性または慢性心不全を含むより幅広い治療的適用の可能性を有する。
【０１０６】
組成物および医薬品
本出願はまた、上記に記載される本発明の少なくとも１つのペプチドを含む医薬品もしくは医薬組成物、またはその薬学的に許容されるその塩もしくは溶媒和物の１つ、および少なくとも１つの薬学的に許容される担体にも関する。
【０１０７】
本発明の少なくとも１つのペプチドは、有効成分として本発明の医薬品または医薬組成物中に存在する。
【０１０８】
本発明の組成物または医薬品は、哺乳動物投与に適した形態にある。
【０１０９】
本発明の組成物または医薬品は、例えば、経口、非経口、静脈内、直腸、経皮、局所的にまたは吸入によって投与することができる。特に、本発明による組成物は、静脈内または皮下経路によって投与される。
【０１１０】
特定の実施形態によれば、本発明の組成物の薬学的に許容される担体は、注射用滅菌水などの注射可能な担体液体；および食塩水などの水溶液からなる群から適切に選択される。
【０１１１】
本発明の組成物または医薬品は、０．０１ｍｇ／ｍＬから３０ｍｇ／ｍＬの間、特に０．３ｍｇ／ｍＬから３ｍｇ／ｍＬの間に含まれる本発明のペプチドの含量を含み得る。
【０１１２】
本発明の医薬品または医薬組成物は、本発明の少なくとも１つのペプチドを唯一の有効成分として含んでもよく、または前記他の有効成分が本発明によるペプチドの生物活性を妨げない限り、少なくとも１つの他の有効成分も含んでもよい。
【０１１３】
本発明による医薬組成物または医薬品は、少なくとも１つの抗酸化剤、分散剤、乳化剤、消泡剤、香料、保存料、可溶化剤および／または着色料を、この／これらの追加の物質が本発明によるペプチドの生物学的特性を妨げない限りさらに含んでもよい。
【０１１４】
非経口投与用の本発明の滅菌組成物は、特に水性または非水性の溶液、懸濁液またはエマルジョンであってもよい。使用される溶媒またはビヒクルには、水、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、特にオリーブ油、注射可能な有機エステル、例えばオレイン酸エチル、または他の適切な有機溶媒が含まれる。これらの組成物は、補助剤、特に湿潤剤、等張化剤、乳化剤、分散剤および安定剤も含むことができる。滅菌は、いくつかの方法で、例えば無菌濾過、組成物への滅菌剤の組み込み、照射または加熱によって行われる。それらは、使用時に滅菌水または任意の他の注射可能な滅菌媒体に溶解される滅菌固体組成物の形態で製造することもできる。
【０１１５】
局所投与用組成物は、例えば、点鼻薬またはエアロゾルであってもよい。
【０１１６】
皮下、筋肉内または静脈内投与に関して、使用される本発明のペプチドは、所望であればこの目的のために通例の、可溶化剤、乳化剤または他の賦形剤などの物質を用いて、溶液、懸濁液またはエマルジョンに変換される。適切な溶媒の例は：水、生理食塩水またはアルコール、例えばエタノール、プロパノール、グリセリン、およびグルコースもしくはマンニトール溶液などの糖液、あるいは言及された様々な溶媒の混合物である。
【０１１７】
特定の実施形態において、本発明の組成物、本発明の医薬品、または本発明のペプチドは、またはその薬学的に許容されるその塩もしくは溶媒和物の１つは、非経口経路によって個体に投与され、特に経皮、静脈内、皮下または筋肉内、特に静脈内または皮下投与される。
【０１１８】
非経口的に投与可能な組成物を製造する方法は当業者には明らかであり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、第１５版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ．により詳細に記載されている。
【０１１９】
本発明の組成物または本発明のペプチドの個体への投与は、全身投与であってもよく、または例えば線維症の存在が分かっている、予想される、もしくは確定される必要がある個体の組織、器官および／もしくは部位に局在化された投与であってもよい。
【０１２０】
ペプチドおよび組成物の使用
本発明は、医薬品として使用するための、本発明によるペプチド、本発明によるその薬学的に許容されるその塩または溶媒和物に関する。
【０１２１】
さらに、本発明はまた、医薬品として使用するための本発明による医薬組成物にも関する。
【０１２２】
さらに、本発明は、ＲＸＦＰ１受容体が関与する様々な疾患または状態の処置および／または予防、より具体的には：
−線維症；線維性疾患、特に全身性硬化症、強皮症および線維筋痛症；特発性肺線維症；線維症を伴う腎臓病；肺高血圧および妊娠高血圧腎症からなる群；
−特に、急性もしくは慢性心不全、収縮期もしくは拡張期心不全、冠動脈疾患、アテローム性動脈硬化、微小血管狭心症および糖尿病の心血管合併症からなる群からの心臓および血管疾患からなる群；ならびに／または
−腎不全、特に肝硬変における腎機能障害；慢性腎臓病および急性腎傷害からなる群
から選択される疾患または状態の処置および／または予防において使用するための、本発明のペプチド、その薬学的に許容されるその塩もしくは溶媒和物、または本発明の医薬組成物に関する。
【０１２３】
１つの態様において、そのようなペプチド、薬学的に許容されるその塩もしくは溶媒和物、または本発明による医薬組成物は、特に静脈内または皮下経路によって、１日１回投与される。
【０１２４】
ペプチド、またはその薬学的に許容されるその塩もしくは溶媒和物の投与されるべき投与量、および投与の頻度は、使用される化合物の所望の効果、効力および作用の持続期間；さらにまた、処置されるべき疾患または状態の性質および重症度、ならびに処置されるべき哺乳動物の性別、年齢、体重および個体の応答性に依存する。一般に、医師は、年齢および体重および処置されるべき個体に特異的な全ての他の要因の関数として、適当な投与量を決定することになる。
【０１２５】
リラキシン受容体ＲＸＦＰ１が関与する疾患または状態の個体に、本発明の少なくとも１つのペプチド、薬学的に許容されるその塩もしくは溶媒和物、もしくは本発明による少なくとも１つのペプチドを含む本発明の医薬組成物、または治療的に有効な量の本発明の少なくとも１つのペプチド、薬学的に許容されるその塩もしくは溶媒和物、もしくは本発明による少なくとも１つのペプチドを含む本発明の医薬組成物を投与することを含む、前記個体における予防および／または処置のための方法も記載される。
【０１２６】
以前に示されているように、前記疾患または状態は：
−線維症；線維性疾患、特に全身性硬化症、強皮症および線維筋痛症；特発性肺線維症；線維症を伴う腎臓病；肺高血圧および妊娠高血圧腎症からなる群；
−特に、急性もしくは慢性心不全、収縮期もしくは拡張期心不全、冠動脈疾患、アテローム性動脈硬化、微小血管狭心症および糖尿病の心血管合併症からなる群からの心臓および血管疾患からなる群；ならびに／または
−腎不全、特に肝硬変における腎機能障害；慢性腎臓病および急性腎傷害からなる群
から特に選択される。
【０１２７】
リラキシン受容体ＲＸＦＰ１が関与する疾患または状態の個体における予防および／または処置のための医薬品を製造するための、本発明の少なくとも１つのペプチド、薬学的に許容されるその塩もしくは溶媒和物、もしくは本発明による少なくとも１つのペプチドを含む本発明の医薬組成物、または治療的に有効な量の本発明の少なくとも１つのペプチド、薬学的に許容されるその塩もしくは溶媒和物、もしくは本発明による少なくとも１つのペプチドを含む本発明の医薬組成物の使用がさらに記載される。
【０１２８】
−線維症；線維性疾患、特に全身性硬化症、強皮症および線維筋痛症；特発性肺線維症；線維症を伴う腎臓病；肺高血圧および妊娠高血圧腎症からなる群；
−特に、急性もしくは慢性心不全、収縮期もしくは拡張期心不全、冠動脈疾患、アテローム性動脈硬化、微小血管狭心症および糖尿病の心血管合併症からなる群からの心臓および血管疾患からなる群；ならびに／または
−腎不全、特に肝硬変における腎機能障害；慢性腎臓病および急性腎傷害からなる群
から選択される疾患または状態を処置および／または予防するための、本発明による少なくとも１つのペプチド、その薬学的に許容されるその塩もしくは溶媒和物、または本発明による医薬組成物の使用がさらに記載される。
【実施例】
【０１２９】
本発明は、純粋に例示目的で与えられる以下の例によって例示される。
【実施例１】
【０１３０】
本発明のペプチドの合成
使用材料
様々なリンクアミド樹脂を、本発明のＣ末端アミドペプチドの合成に使用した：
−  Ｃｈｅｍ−Ｉｍｐｅｘによって販売される４−（２’，４’−ジメトキシフェニル−Ｆｍｏｃ−アミノメチル）フェノキシ樹脂；または
−  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｍｅｒｃｋによって販売される４−（２’，４’−ジメトキシフェニル−Ｆｍｏｃ−アミノメチル）フェノキシアセトアミドメチル樹脂。
【０１３１】
それらを０．２〜０．４ｍｍｏｌ．ｇの範囲で充填した。
【０１３２】
Ｆｍｏｃ（フルオレニルメチルオキシカルボニル）保護天然アミノ酸は、種々の供給元、すなわち、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．、Ｍｅｒｃｋ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ、Ｉｒｉｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｂａｃｈｅｍ、Ｃｈｅｍ−Ｉｍｐｅｘ  ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌまたはＭＡＴＲＩＸ  Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎから購入した。
【０１３３】
以下の標準的なアミノ酸を合成を通して使用した：Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｉｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨおよびＦｍｏｃ−Ｌ−Ｖａｌ−ＯＨ。
【０１３４】
さらに、以下の特別なアミノ酸を上記と同じ供給業者から購入した：Ｆｍｏｃ−Ｌ−ｈＡｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｃｉｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ａｒｇ（Ｍｅ，Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ−ｈＬｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｏｒｎ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｉｂ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ−α−Ｍｅ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ−α−Ｍｅ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ−α−Ｍｅ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ−α−Ｍｅ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｎｌｅ−ＯＨおよびＦｍｏｃ−Ｌ−１−Ｎａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ−２−Ｎａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−５−Ｗｏｘ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｆｐ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ−α−Ｍｅ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ−α−Ｍｅ−Ｐｈｅ−ＯＨ。
【０１３５】
【表４】
2021512099.tif 000014
【０１３６】
本発明のＣ末端脂質化ペプチドを合成するために、直交的に保護されたリジンを以下に示すように使用した。
【０１３７】
１．Ａ．本発明のペプチドの合成に使用した一般的方法
配列番号１〜９７の本発明によるペプチドは、図１および２に表される方法に基づき合成した。
【０１３８】
ＲｉｎｋアミドＡＭ樹脂０．２ｍｍｏｌを、ＣＥＭ  Ｌｉｂｅｒｔｙブルーマイクロ波ペプチドシンセサイザーに入れて完全ペプチド配列を構築した（図１参照）。
【０１３９】
全合成を、溶媒としてのＤＭＦ中で行った。標準的な加熱プロトコルを使用して、０．１〜０．２ｍｍｏｌスケールでペプチドを合成した：
標準的な加熱プロトコル：１７０ワット、７５℃、１５秒で照射、次いで３０ワット、９０℃、１２０秒で照射。
【０１４０】
ＤＭＦ中２０％ｖ／ｖピペリジンを用いて脱保護を行い、その後３回のＤＭＦ洗浄工程を行なった。
脱保護のための加熱プロトコル：１７０ワット、７５℃、１５秒で照射、次いで３０ワット、９０℃、５０秒で照射。
【０１４１】
アミノ酸カップリングは、カップリング試薬として５当量Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）０．５Ｍおよび５当量Ｏｘｙｍａ（２−シアノ−２−（ヒドロキシイミノ）酢酸エチル（ｏｘｙｍａ  ｐｕｒｅ（商標）））１Ｍを使用し、０．２Ｍ  ＤＭＦ溶液としてのＦｍｏｃ−ＡＡ  ５当量を使用して行なった。
【０１４２】
より良好な最終収量のために、各アミノ酸は、９０℃、１２０秒間の二重カップリングを必要とした。本発明による式（Ｉ）のＸ２１位およびＸ２２位の２−アミノイソ酪酸ならびにＸ２９位のセリンについては、９０℃、２分間の三重カップリングを使用した。
【０１４３】
高価なアミノ酸誘導体、例えばＦｍｏｃ−α−メチルリジン（Ｂｏｃ）−ＯＨの場合は、アミノ酸３当量およびＨＡＴＵもしくはＨＣＴＵなどのカップリング剤３当量を使用して室温で１〜１８時間、またはＤＩＣおよびＯｘｙｍａ  Ｐｕｒｅ（商標）を使用してマイクロ波加熱により１２０秒間、手動カップリングを行うことが有利であり得た。
【０１４４】
Ｘ２５位において、側鎖窒素に直交保護基を担持するＦｍｏｃ−リジン−ＯＨの誘導体を使用した。選択的脱保護は、このアミノ酸側鎖の修飾を可能にした。
【０１４５】
合成の最後に、Ｆｍｏｃ脱保護を、ＤＭＦ中２０％ｖ／ｖピペリジンを用いて室温で３０分、２回手動で行なった。
【０１４６】
アセチル化を、ＤＭＦ中無水酢酸５〜１０当量およびＤＩＥＡ  ５〜１０当量で１５分間処理して、Ｎ末端で行った。次いで、完全に保護されたペプチドを含有する樹脂を、ＤＣＭ／ＤＭＦ／ＤＣＭを用いて各３回洗浄し、真空下で乾燥した。
【０１４７】
次いで、Ｘ２５位のリジンのＮε保護基（Ｄｄｅ、ｉｖＤｄｅ、Ａｌｏｃ、またはＭｔｔ）を、ＤＭＦ中希釈ヒドラジン（Ｄｄｅ、ｉｖＤｄｅ）、ＤＣＭ中パラジウム（０）触媒の存在下でフェニルシランもしくはジメチルアミノボラン（ａｌｏｃ）、またはＤＣＭ中１％ＴＦＡ（Ｍｔｔ）を使用して除去した。
【０１４８】
次いで、Ｚ基を、以下の工程に従って固体支持体上でＸ２５リジンの側鎖窒素に付加した：
Ｘ２５位のリジンが、その側鎖上でＤｄｅまたはｉｖ−Ｄｄｅによって保護された場合、樹脂−ペプチドを５０ｍｌポリプロピレンシリンジに移した。ヒドラジン５％のＤＭＦ溶液８０ｍｌを樹脂を通して濾過し、その後ＤＭＦ洗浄を行った（３回）。反応をＫａｉｓｅｒ  Ｔｅｓｔによってモニターした。
Ｘ２５位のリジンが、その側鎖上でアリルオキシカルボニル基（ａｌｏｃ）によって保護された場合、樹脂−ペプチドを５０ｍｌポリプロピレンシリンジに移し、ジクロロメタン中で膨潤させ、アルゴン下、２０当量フェニルシラン（ＰｈＳｉＨ３）（またはボランジメチルアミン錯体（（ＣＨ３）２ＮＨ．ＢＨ３）およびピペリジン）および１０％（ｍｏｌ／ｍｏｌ）テトラキス−（トリフェニルホスフィン）パラジウム（Ｐｄ（ＰＰｈ３）４）で２時間処理した。この処理を、樹脂のアリコート部分の切断後、開始ａｌｏｃ保護ペプチドがＵＰＬＣ／ＭＳ分析によって検出できなくなるまで繰り返した。
反応が完了したら、ジクロロメタン、ＤＭＦ中１％ＤＩＥＡ、ＤＭＦ中５％ジエチルジチオカルバメート、ＤＭＦ、ＤＭＦ中１０％ＤＩＥＡ、ＤＭＦおよびジクロロメタンで樹脂を洗浄した（各３回）。
Ｘ２５位のリジンが、その側鎖上でメチルトリチル基（Ｍｔｔ）によって保護された場合、樹脂−ペプチドを５０ｍｌポリプロピレンシリンジに移し、ジクロロメタン中で膨潤させ、１０ｍＬ  ＤＣＭ／ＴＩＳ／ＴＦＡ（８８／５／２）混合物で処理した。１時間振とう後、溶媒を排出し、樹脂をＤＣＭで洗浄し、１０ｍｌ  ＤＣＭ／ＤＩＥＡ（９０／１０）混合物で振とうし、ＤＣＭで数回洗浄した。
【０１４９】
本発明の任意のペプチドに関して該当する場合、Ｚ基のＰＥＧｘｘ基を、Ｆｍｏｃ−ＰＥＧｘｘ−ＯＨ  ３当量、１８時間と、ＤＩＣ  ３当量およびＨＯＡｔ  ３当量を用いて単一アシル化によって導入し、ニンヒドリン（Ｋａｉｓｅｒ）Ｔｅｓｔにより反応をモニターした。次いで、樹脂をＤＭＦ中２０％ｖ／ｖピペリジンで処理してＦｍｏｃ保護基を除去し（２×３０分）、ＤＭＦで３回洗浄した。Ｆｍｏｃ−ＰＥＧｘｘ−ＯＨカップリング、Ｆｍｏｃ除去および洗浄工程をｘ回繰り返した（ｘ＝０〜５）。
【０１５０】
次いで、ｇＥが本発明のペプチドのＺ基に存在しているならば、アミノ酸３当量、１８時間と、ＤＩＣ  ３当量およびＨＯＡｔ  ３当量を用いて単一カップリングを行なって、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕ（（４Ｓ）−５−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−５−オキソ−ペンタン酸）を導入し、Ｋａｉｓｅｒ  Ｔｅｓｔにより反応をモニターした。
【０１５１】
次いで、Ｆｍｏｃ保護基を除去するために樹脂をＤＭＦ中２０％ｖ／ｖピペリジンで処理し（２×３０分）、ＤＭＦで３回洗浄した。Ｆｍｏｃ除去およびＦｍｏｃ−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕカップリング工程をｙ回繰り返した（ｙ＝１〜５）。
【０１５２】
次いで、３当量のＣｋラウリン酸（Ｃ１２）、ミリスチン酸（Ｃ１４）、ペンタデカン酸（Ｃ１５）、パルミチン酸（Ｃ１６）、ヘプタデカン酸（Ｃ１７）、ステアリン酸（Ｃ１８）、エイコサン酸（Ｃ２０）もしくはドコサン酸（Ｃ２２）を使用して、ＮＭＰ中３当量ＤＩＣおよび３当量ＨＯＡｔを使用して、ジクロロメタン中の塩基として対応する塩化アシルおよびＤＩＥＡを使用して、またはＤＭＦ中の塩基として対応するＮ−スクシンイミジルエステルおよびＤＩＥＡを使用して、側鎖を脂質化した。
【０１５３】
反応をＫａｉｓｅｒ  Ｔｅｓｔによってモニターし、一晩放置した。
【０１５４】
次いで、完全に保護されたペプチドを含有する樹脂をＤＣＭ／ＤＭＦ／ＤＣＭで各３回洗浄し、真空下で乾燥した。
【０１５５】
１．Ｂ．ペプチド−樹脂切断
固相合成が完了したら、ペプチドを切断試薬Ｂ：ＴＦＡ／フェノール／Ｈ２Ｏ／ＴＩＰＳ（８７．５％／５％／５％／２．５％／２５ｍｌ）で３時間処理して、固体支持体から切断した。（ＴＩＰＳはトリイソプロピルシランを表す）
【０１５６】
特定の例では、１，２−エタンジチオールまたはＤＯＤＴ（２，２’−（エチレンジオキシ）ジエタンチオール）などのジチオールの付加が有利であり得た（例えば切断試薬Ｋ）。ペプチドを含有するＴＦＡ溶液を濾過し、減圧下、Ｔ＜３０℃で濃縮した。
【０１５７】
所望の産物を氷冷ＭＴＢＥ（メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル）またはジエチルエーテルで沈殿させ、３０００ｒｐｍで３０分間遠心分離した。遠心分離ペレットを次いで氷冷ジエチルエーテルで洗浄し、遠心分離した。このプロセスを３回繰り返した。
【０１５８】
いくつかの例では、粗ペプチドを処理して、ＴＦＡエステル、トリプトファンのインドール窒素上のＣＯ２付加体（カルバミン酸）およびメチオニン残基上の２−ｔ−ブチル−スルファニルエチル付加体などの望ましくない副産物を除去する必要があり得た。
【０１５９】
トリプトファンのインドール窒素上のＣＯ２付加体を除去するために、粗ペプチドを１０〜２０％ＣＨ３ＣＮを含有する水に溶解し、５ｍｇ／ｍｌ、凍結乾燥した。
【０１６０】
Ｍｅｔ上の２−ｔ−ブチル−スルファニルエチル付加体を除去するために、粗ペプチドを０．１％ギ酸を含有するＨ２Ｏ／ＣＨ３ＣＮ（５０：５０ｖ／ｖ）溶液に溶解した（２ｍｇ／ｍｌ）。
【０１６１】
混合物を、３７℃で一晩穏やかに振とうした。
【０１６２】
ＴＦＡエステルを除去するために、粗ペプチドを０．１％ギ酸を含有するＨ２Ｏ／ＣＨ３ＣＮ（５０：５０ｖ／ｖ）溶液に溶解した（２ｍｇ／ｍｌ）。混合物を３７℃で１〜４時間穏やかに振とうした。
【０１６３】
どちらの場合でも、故に得られた粗ペプチド溶液を減圧下およびＴ＜３０℃で部分的に濃縮し、凍結乾燥した。
【０１６４】
１．Ｃ．精製工程
本発明のペプチドを合成するために示された上記の方法にいずれかの後、前記ペプチドを使用する前に精製した。
【０１６５】
ペプチド８０ｍｇを１．５ｍＬ  ＤＭＳＯに溶解し、逆相高圧液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）によって精製した。ＲＰ−ＨＰＬＣは以下に記載した。
【０１６６】
ＧＸ２７１  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｈａｎｄｌｅｒ、３３３／３３４ポンプ、およびＵＶ／ＶＩＳ  １５１  Ｇｉｌｓｏｎシステムを使用した。
【０１６７】
前記ペプチドを精製するのに２つの異なるシステムを使用した：
システムＡ
−カラム  Ｗａｔｅｒｓ  Ｄｅｌｔａ−Ｐａｃｋ  Ｃ４  １５μｍ  ３００Å．  ２５０×２０ｍｍ；
−溶液Ａ：０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液；
−溶液Ｂ：０．１％ＴＦＡアセトニトリル溶液；
−勾配：１５％Ｂ、５分間；１５％Ｂから５０％Ｂ、２０分；
−流速：８０ｍｌ／分
システムＢ
−カラムＷａｔｅｒｓ  ＣＳＨ  Ｃ１８  ５μｍ  ２５０×５０ｍｍ、またはＷａｔｅｒｓ  Ｓｕｎｆｉｒｅ  Ｃ１８  １０μＭ  ２５０×５０ｍｍ；
−溶液Ａ＝０．１％ＴＦＡ水溶液；
−溶液Ｂ＝０．１％ＴＦＡアセトニトリル溶液；
−勾配：１％Ｂから１８％Ｂ、５分；１８％Ｂから２８％Ｂ、１０分；２８％Ｂ、１５分間；２８％Ｂから４８％Ｂ、１０分；次いでカラム洗浄４８％Ｂから９０％Ｂ、１０分；
−流速：１５０ｍｌ／分
【０１６８】
目的とするペプチドを、３５〜４０分の時間枠で溶出した。
【０１６９】
分析的ＵＨＰＬＣシステムでのその保持時間によって特徴付けられた各ペプチドの極性に従って、勾配をわずかに調整した。
【０１７０】
純粋なペプチドを含有する画分を、次いで減圧下、Ｔ＜３５℃で部分的に濃縮し、恒量になるまで凍結乾燥した。
【０１７１】
特定の使用（例えば、インビボテスト）に関して、ＴＦＡ塩を酢酸塩に交換することが有利であった。３つの対応する方法を使用した。以下のパート１．Ｄ．に記載する。
【０１７２】
１．Ｄ．酢酸塩交換
（ｉ）ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ（登録商標）ＤＥＡＥ  ６５０  Ｃ（Ｔｏｓｏｈ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）による酢酸塩交換
イオン交換は、ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ（登録商標）  ＤＥＡＥ  ６５０  Ｃグレード樹脂（弱陰イオン交換樹脂）を使用して行った。
樹脂１２０ｍｌを、１５容量のＮａＯＨ  １Ｍ、５容量のＨ２Ｏ、５容量の酢酸１．６Ｍ、５容量の酢酸  ０．１６Ｍ、および最後に５容量のＨ２Ｏで連続洗浄した。
ペプチド４１．８ｍｇを次いで蒸留水４ｍｌに溶解し、樹脂に充填（ｄｏｗｎｌｏａｄ）し、穏やかに２時間混合した。
最後に、ペプチドを溶出によって回収し、水で洗浄し、凍結乾燥した。
ペプチド回収：３５ｍｇ（Ｆ１９  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ）ｎｓ  １０２８により酢酸塩として）
【０１７３】
（ｉｉ）Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ＨｉＴｒａｐ  Ｑ  ＨＰカラム（強陰イオン交換カラム）による酢酸塩交換
この第２の方法では、イオン交換はＨｉＴｒａｐ  Ｑ  ＨＰを使用して行なった。
カラム（５ｍｌベッドボリューム）を４８（４．５ｍｌ／分）にセットした蠕動ポンプに接続し、ペプチドを充填する前にＨ２Ｏ  ５０ｍｌ（１０カラム容量）、酢酸ナトリウムの１Ｍ溶液１００ｍｌ（２０カラム容量）、Ｈ２Ｏ  １５０ｍｌ（３０カラム容量）および酢酸の０．１６Ｍ溶液５０ｍｌ（１０カラム容量）でカラムを洗浄した。
純粋なペプチドを０．１６Ｍ酢酸溶液に２ｍｇ／ｍｌで溶解し、カラムにゆっくり充填し、４．５ｍｌ／分で溶出した。
回収した溶液を凍結乾燥した。
イオン交換の有効性を、Ｆ１９  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）ｎｓ  １０２８によって証明した。
【０１７４】
（ｉｉｉ）ＢＩＯ  ＲＡＤ  ＡＧ１Ｘ４（登録商標）陰イオン交換樹脂による酢酸塩交換
底に焼結ガラスを備えた１２５ｍｌリアクターに、６．２ｇ  ＢＩＯ  ＲＡＤ  ＡＧ１Ｘ４（登録商標）陰イオン交換樹脂、１００−２００ドライメッシュサイズ（ＯＨ−型）を詰めた。
３×１００ｍｌ  １．６Ｍ水性酢酸（１０％ｖ／ｖ）および３×５０ｍｌ  ０．１６Ｍ水性酢酸（１％ｖ／ｖ）を用いて、樹脂を攪拌プレート上で各２０分間振とうした。
【０１７５】
ＴＦＡ塩としての精製ペプチド（１００ｍｇ）を５０ｍｌ蒸留水に溶解し、交換樹脂に流し、攪拌プレート上で１２０分間振とうした。
水溶液を１００ｍｌ丸底フラスコに排出し、樹脂を２×１５ｍｌ  ０．１６Ｍ水性酢酸（１％ｖ／ｖ）で洗浄した。
ペプチドを酢酸塩として含有する合わせた溶液を、恒量になるまで凍結乾燥した。収量＝酢酸塩としてのペプチド８０ｍｇ。
イオン交換の有効性を、Ｆ１９  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ｎｓ  １０２８）および／またはイオン性クロマトグラフィーによって証明した。
【実施例２】
【０１７６】
本発明の特定のペプチドの例示的合成
２．Ａ  Ｒｉｎｋアミド樹脂へのＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＯＨの充填
底に焼結ガラスを備えた１００ｍｌリアクターで、ＮｏｖａｂｉｏｃｈｅｍまたはＣｈｅｍＩｍｐｅｘ  ＲｉｎｋアミドＡＭ樹脂（低充填０．４７ｍｍｏｌ／ｇ）６ｇをＤＭＦ  ４０ｍｌ中で膨潤させた。溶媒を排出し、２０％ピペリジンＤＭＦ溶液３０ｍｌを添加した。１５分振とう後、溶媒を排出した。これを２回繰り返して、完全なＦｍｏｃ保護基除去を確保した。樹脂を５×３０ｍｌ  ＤＭＦで洗浄した。
【０１７７】
別のフラスコで、３０ｍｌ  ＤＭＦ中Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＯＨ（３．５ｇ、８ｍｍｏｌ、３当量）、ＨＯＢＴ．Ｈ２０（１．３ｇ  ８．５ｍｍｏｌ）を含有する溶液を製造した。ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）（１ｇ、８．５ｍｍｏｌ）をこの溶液に添加し、５分後、得られた混合物を樹脂に添加した。懸濁液を攪拌プレート上で４時間、または樹脂のアリコート部分でＫａｉｓｅｒ  Ｔｅｓｔ（ニンヒドリンテスト）によって判定した反応の完了まで振とうした。
【０１７８】
溶媒を次いで排出し、樹脂を３０ｍｌ  ＤＭＦで３回洗浄した。Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＮＨ２充填樹脂を、その後の工程のためにすぐに使用するか、または必要になるまで４℃で湿った状態で保管した。
【０１７９】
２．Ｂ．配列番号３を有するペプチドの合成
それぞれＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＮＨ２  ０．２ｍｍｏｌに相当する、工程２．Ａ．で得られた樹脂の５倍の量を使用して、以下の合成を行った。ＣＥＭ  Ｌｉｂｅｒｔｙ  Ｂｌｕｅマイクロ波ペプチドシンセサイザーを使用して、合成を個々のバッチで別々に行って、ペプチド配列の第２および第３の残基を構築した（Ｃ末端から開始）。
ＤＭＦ中ＤＩＣ  ０．５Ｍ／Ｏｘｙｍａ  １Ｍを使用してペプチド合成を行った。
全てのアミノ酸を、標準的な加熱プロトコルを使用して二重カップリングにより導入した。
樹脂を合成器から除去し、Ｆｍｏｃ−α−メチル−リジン（Ｂｏｃ）−ＯＨ（３当量）を、マイクロ波加熱しながら（７５℃、１５秒および９０℃、１１０秒）３当量Ｏｘｙｍａ（商標）および３当量ＤＩＣを使用して手動でカップリングした。反応の完了はＫａｉｓｅｒテストによって制御した。陽性ならば、ＤＩＣ  ３当量を添加し、その後上記のようにマイクロ波加熱した。
Ｆｍｏｃ−α−メチル−リジン（Ｂｏｃ）−ＯＨのカップリングが完了したら、ＣＥＭ  Ｌｉｂｅｒｔｙ  Ｂｌｕｅマイクロ波ペプチドシンセサイザーを使用してペプチド配列の残りを構築する。
９０°で２分間、三重カップリングを行った２１位のアミノイソ酪酸および２９位のセリンを除いて、全てのアミノ酸を上記のように９０℃で二重カップリングにより導入した。Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）−ＯＨを２５位で使用した。
５つの合成の最後に、樹脂の５つのバッチを合わせ、５０ｍＬポリプロピレンシリンジに移し、ペプチドをＤＭＦ（３０ｍＬ）中、無水酢酸（９４４μＬ、１０ｍｍｏｌ）により２０分間Ｎ末端でアセチル化し、該サイクルを２回繰り返した。
次いで、ヒドラジン５％ｗ／ｖのＤＭＦ溶液５０ｍＬを濾過してリジン２５側鎖のＤｄｅ  保護基を除去し、その後ＤＭＦ洗浄を行った（５×２０ｍｌ）。反応をＫａｉｓｅｒ  Ｔｅｓｔによってモニターし、樹脂のアリコート部分を切断し、ＵＰＬＣ／ＭＳ分析を行った。
【０１８０】
３つのＴＴＤＳスペーサー単位を、以下の手順を３回行って単一カップリングによって導入した：樹脂に、Ｆｍｏｃ−ＴＴＤＳ−ＯＨ（１．６２ｇ、３ｍｍｏｌ）の３０ｍＬ  ＤＭＦ溶液を添加し、その後ＨＯＡｔ（０．６ｍｌ  ＤＭＦ溶液５ｍｌ、３ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（１ｍｌ、６ｍｍｏｌ）を添加した。シリンジをオービタルテーブルで１８時間攪拌した。反応をＫａｉｓｅｒ  Ｔｅｓｔによってモニターした。樹脂をＤＭＦで洗浄した（２×３０ｍＬ）。次いで樹脂に、ＤＭＦ中２０％ｖ／ｖのピペリジン３０ｍＬを添加した。シリンジをオービタルテーブル（ｏｒｂｉｔａｌ  ｔａｂｌｅ）上で２０分間攪拌した。この脱保護手順をもう一度繰り返し、樹脂をＤＭＦ（２×３０ｍＬ）およびジクロロメタン（３×３０ｍＬ）で洗浄した。
【０１８１】
３つのガンマ−グルタミン酸スペーサーを、それぞれＦｍｏｃ−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕの二重カップリングを行なって導入した。故に、以下の手順を３回適用した：
樹脂に、（４Ｓ）−５−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−５−オキソ−ペンタン酸（Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕ）（１．２７５ｇ、３ｍｍｏｌ）の３０ｍＬ  ＤＭＦ溶液を添加し、その後ＨＯＡｔ（０．６ｍｌ  ＤＭＦ溶液５ｍｌ、３ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（１ｍｌ、６ｍｍｏｌ）を添加した。シリンジをオービタルテーブルで４時間攪拌した。樹脂をＤＭＦで洗浄し（２×２０ｍＬ）、カップリングをもう一度繰り返した。反応をＫａｉｓｅｒ  Ｔｅｓｔによってモニターした。樹脂をＤＭＦで洗浄した（２×３０ｍＬ）。次いで樹脂に、ＤＭＦ中２０％ｖ／ｖのピペリジン３０ｍＬを添加した。シリンジをオービタルテーブルで２０分間攪拌した。この脱保護手順をもう一度繰り返し、樹脂をＤＭＦ（３×３０ｍＬ）およびジクロロメタン（３×３０ｍＬ）で洗浄した。
最後に、ＤＭＦ（３０ｍＬ）中２．５時間のパルミチン酸（７６８ｍｇ、３ｍｍｏｌ）、ＨＯＡｔ（０．６Ｍ  ＤＭＦ溶液５ｍｌ、３ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（１ｍｌ、６ｍｍｏｌ）活性化によりペプチドをアセチル化した。樹脂をＤＭＦ（２×３０ｍＬ）およびジクロロメタン（３×３０ｍＬ）で洗浄し、真空下で乾燥した。
【０１８２】
樹脂からのペプチドの切断は、フェノール（６．２５ｇ）、水（６．２５ｍＬ）およびＴＩＰＳ（３ｍＬ）のＴＦＡ溶液（ＱＳＰ  １２５ｍＬ）を使用して室温で２．５時間行った。樹脂を濾過し、２×３０ｍＬ  ＴＦＡで洗浄した。合わせた濾液を２５０ｍＬ丸底フラスコに移し、真空下、Ｔ＜３０℃で部分的に濃縮し、１００ｍＬ氷冷ＭＴＢＥを添加してペプチドを沈殿させ、３６００ｒｐｍで３０分間遠心分離した。
【０１８３】
遠心分離ペレットを次いで氷冷ジエチルエーテルで洗浄し、遠心分離した。このプロセスを３回繰り返した。粗ペプチド４．３ｇを得た。０．１％ギ酸を含有するＨ２Ｏ／ＣＨ３ＣＮ（５０：５０ｖ／ｖ）の溶液に粗ペプチドを溶解し（１０ｍｇ／ｍＬ）、混合物を３７℃で１時間穏やかに振とうし、部分的に濃縮し、凍結乾燥した。
【０１８４】
精製システムＡを各々３５０ｍｇの１０回注入で使用して精製を行い、純粋な所望のペプチドを含有する画分を凍結乾燥した。トリフルオロ酢酸塩としてのペプチドを白色固体として得た。
ｍ＝４２８ｍｇ（１７．５％）
ＵＰＬＣ／ＭＳ：
ＲＴ：４．９８分（分析条件Ａ）、純度９９％（ＵＶ）
観察された質量ｍ／ｚ（イオン型）：１４５４．５（Ｍ＋３Ｈ）；１０９１．１（Ｍ＋４Ｈ）；８７３．１（Ｍ＋５Ｈ）
【０１８５】
２．Ｃ．配列番号７を有するペプチドの合成
それぞれＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＮＨ２  ０．２ｍｍｏｌ（合計０．４ｍｍｏｌ）に相当する、工程２．Ａ．で得られた樹脂の２バッチを、例２．Ｂ．と同じ手順後に並行して処理した。第３の（４Ｓ）−５−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−５−オキソ−ペンタン酸（Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕ）をカップリングした後、重さ２．６ｇの合わせた樹脂バッチを５０ｍＬポリプロピレンシリンジに移した。
【０１８６】
次いで、ＤＭＦ中２０％ｖ／ｖのピペリジン３０ｍＬを樹脂に添加した。シリンジをオービタルテーブルで２０分間攪拌した。この脱保護手順をもう一度繰り返し、樹脂をＤＭＦ（３×３０ｍＬ）およびジクロロメタン（３×３０ｍＬ）で洗浄した。
【０１８７】
ステアロイルクロリド（３６２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．２５５ｍｌ、１．５ｍｍｏｌ）の２０ｍｌ  ＤＣＭ溶液を２．５時間添加してペプチドをアセチル化した。樹脂をＤＭＦ（２×３０ｍＬ）およびジクロロメタン（３×３０ｍＬ）で洗浄し、真空下で乾燥した。
【０１８８】
樹脂からのペプチドの切断は、フェノール（１．５ｇ）、水（１．５ｍＬ）およびＴＩＰＳ（０．６ｍＬ）のＴＦＡ溶液（ＱＳＰ  ３０ｍＬ）を使用して  室温で２．５時間行った。樹脂を濾過し、２×１０ｍＬ  ＴＦＡで洗浄した。合わせた濾液を２５０ｍＬ丸底フラスコに移し、真空下、Ｔ＜３０℃で部分的に濃縮し、１００ｍＬ氷冷ＭＴＢＥを添加してペプチドを沈殿させ、３６００ｒｐｍで３０分間遠心分離した。
【０１８９】
遠心分離ペレットを次いで氷冷ジエチルエーテルで洗浄し、遠心分離した。このプロセスを３回繰り返した。粗ペプチド７２０ｍｇを得た。精製システムＢを各々２４０ｍｇの３回注入で使用して精製を行った。純粋な所望のペプチドを含有する画分を凍結乾燥した。トリフルオロ酢酸塩としてのペプチドを白色固体として得た。
ｍ＝７２ｍｇ（３．６％）
ＵＰＬＣ／ＭＳ：
ＲＴ：５．８６  分（分析条件Ａ）、純度９８％（ＵＶ）
観察された質量ｍ／ｚ（イオン型）：１４６３．９（Ｍ＋３Ｈ）；１０９８．２（Ｍ＋４Ｈ）；８７８．７（Ｍ＋５Ｈ）
【０１９０】
２．Ｄ．配列番号６を有するペプチドの合成
Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＮＨ２  ０．１ｍｍｏｌに相当する、工程２．Ａ．で得られた樹脂のバッチをＣＥＭ  Ｌｉｂｅｒｔｙ  Ｂｌｕｅマイクロ波ペプチドシンセサイザーのリアクターに入れた。ＤＭＦ中ＤＩＣ  ０．５Ｍ／Ｏｘｙｍａ  １Ｍを使用してペプチド合成を行った。
【０１９１】
９０°で２分間、三重カップリングを行った２１位のアミノイソ酪酸および２９位のセリンを除いて、全てのアミノ酸を上記のように９０℃で二重カップリングにより導入した。Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）−ＯＨを２５位で使用した。
【０１９２】
ペプチド構築の最後に、樹脂を２０ｍｌポリプロピレンシリンジに移し、ペプチドをＤＭＦ（１０ｍＬ）中、無水酢酸（９５μＬ、１ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１７４μＬ、１ｍｍｏｌ）により２０分間Ｎ末端でアセチル化し、該サイクルを２回繰り返した。
【０１９３】
次いで、樹脂のアリコート部分の切断およびＵＰＬＣ／ＭＳ分析後に出発材料が検出できなくなるまで、必要な回数だけヒドラジン５％ｗ／ｖのＤＭＦ溶液１０ｍＬを用いて２０分間攪拌して、リジン２５側鎖のｉｖＤｄｅ保護基を除去した。脱保護が完了したと判定されたら、樹脂をＤＭＦで洗浄した（５×１０ｍｌ）。
【０１９４】
２つのＴＴＤＳスペーサー単位を、以下の手順を２回行って単一カップリングによって導入した：樹脂に、Ｆｍｏｃ−ＴＴＤＳ−ＯＨ（１６３ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）、ＨＯＡｔ（４２ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（７７μＬ、０．５ｍｍｏｌ）の７ｍＬ  ＤＭＦ溶液を添加した。シリンジをオービタルテーブルで１８時間攪拌した。反応をＫａｉｓｅｒ  Ｔｅｓｔによってモニターした。必要に応じて、二重カップリングを行った。樹脂をＤＭＦで洗浄した（２×１０ｍＬ）。次いで樹脂に、ＤＭＦ中２０％ｖ／ｖのピペリジン１０ｍＬを添加した。シリンジをオービタルテーブルで２０分間攪拌した。この脱保護手順をもう一度繰り返し、樹脂をＤＭＦ（２×１０ｍＬ）およびジクロロメタン（３×１０ｍＬ）で洗浄した。
【０１９５】
３つのガンマ−グルタミン酸スペーサーを、それぞれＦｍｏｃ−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕの二重カップリングを行なって導入した。故に、以下の手順を３回適用した：
樹脂に、（４Ｓ）−５−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−（９Ｈ−フルオレン−９−イル  メトキシカルボニルアミノ）−５−オキソ−ペンタン酸（Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕ）（１２７ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）、ＨＯＡｔ（４２ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（７７μＬ、０．５ｍｍｏｌ）の７ｍＬ  ＤＭＦ溶液。シリンジをオービタルテーブルで１８時間攪拌した。反応をＫａｉｓｅｒ  Ｔｅｓｔによってモニターした。樹脂をＤＭＦで洗浄した（２×１０ｍＬ）。次いで樹脂に、ＤＭＦ中２０％ｖ／ｖのピペリジン１０ｍＬを添加した。シリンジをオービタルテーブルで２０分間攪拌した。この脱保護手順をもう一度繰り返し、樹脂をＤＭＦ（３×１０ｍＬ）およびジクロロメタン（３×３０ｍＬ）で洗浄した。
最後に、ペプチドを、５ｍｌ  ＤＣＭ中ステアロイルクロリド（６２ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（５４μＬ、０．３ｍｍｏｌ）で２．５時間アセチル化した。樹脂をＤＭＦ（２×３０ｍＬ）およびジクロロメタン（３×３０ｍＬ）で洗浄し、真空下で乾燥した。
【０１９６】
樹脂からのペプチドの切断は、フェノール（０．５ｇ）、水（０．５ｍＬ）およびＴＩＰＳ（０．２ｍＬ）のＴＦＡ溶液（ＱＳＰ  １０ｍＬ）を使用して室温で２．５時間行った。樹脂を濾過し、２×４ｍＬ  ＴＦＡで洗浄した。合わせた濾液を１００ｍＬ丸底フラスコに移し、真空下、Ｔ＜３０℃で部分的に濃縮し、５０ｍＬ氷冷ＭＴＢＥを添加してペプチドを沈殿させ、３６００ｒｐｍで３０分間遠心分離した。
【０１９７】
遠心分離ペレットを次いで氷冷ジエチルエーテルで洗浄し、遠心分離した。このプロセスを３回繰り返した。粗ペプチド２４０ｇを得た。精製システムＢを使用して精製行い、純粋な所望のペプチドを含有する画分を凍結乾燥した。トリフルオロ酢酸塩としてのペプチドを白色固体として得た。
ｍ＝３８ｍｇ（８％）
ＵＰＬＣ／ＭＳ：
ＲＴ：５．４０分（分析条件Ａ）、純度９７％（ＵＶ）
観察された質量ｍ／ｚ（イオン型）：１３７６．１（Ｍ＋３Ｈ）；１０３２．０（Ｍ＋４Ｈ）；８２６．０（Ｍ＋５Ｈ）
【０１９８】
２．Ｅ．配列番号２０を有するペプチドの合成
この化合物は、３つのＴＴＤＳをリジン２５側鎖に導入したこと以外は、例２．Ｄで使用したものと同じ手順後に得られた。
故に、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＮＨ２  ０．１ｍｍｏｌに相当する、工程２．Ａ．で得られた樹脂２５０ｍｇから白色固体を得た。
ｍ＝２０ｍｇ（４．５％）
ＵＰＬＣ／ＭＳ：
ＲＴ：５．４４分（分析条件Ａ）、純度９９％（ＵＶ）
観察された質量ｍ／ｚ（イオン型）：２２１５．０（Ｍ＋２Ｈ）；１４７６．８（Ｍ＋３Ｈ）；１１０７．９（Ｍ＋４Ｈ）；８８６．７（Ｍ＋５Ｈ）
【０１９９】
２．Ｆ．配列番号２２を有するペプチドの合成
この化合物は、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）−ＯＨの代わりにＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨを２５位（Ｘ２５）に使用したこと以外は、例２．Ｂ．で使用したものと同じ手順後に得られた。
故に、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＮＨ２  ０．１ｍｍｏｌに相当する、工程２．Ａ．で得られた樹脂２５０ｍｇを、Ｎ末端アセチル化工程まで２．Ｂ．のように処理した。
【０２００】
フェニルシラン１ｍｌ（８．３３ｍｍｏｌ）の２ｍｌ脱気ＤＣＭ溶液およびテトラキス−（トリフェニルホスフィン）パラジウム１０ｍｇ（２５．９６μモル）の４ｍｌ  ＤＣＭ溶液をアルゴン雰囲気下で樹脂に添加して、Ｌｙｓ２５側鎖のＡｌｏｃ基を除去した。樹脂をオービタルテーブルで６０分間振とうし、反応媒体を新鮮な試薬と２回取り替え、毎回６０分振とうした。
【０２０１】
反応が完了したら、ジクロロメタン、ＤＭＦ中１％ＤＩＥＡ、ＤＭＦ中５％ジエチルジチオカルバメート、ＤＭＦ、ＤＭＦ中１０％  ＤＩＥＡ、ＤＭＦおよびジクロロメタンで樹脂を洗浄した（各３回）。
【０２０２】
３つのＰＥＧ２ＤＧＡスペーサー単位を、以下の手順を３回行って単一カップリングによって導入した：樹脂に、Ｆｍｏｃ−ＰＥＧ２ＤＧＡ−ＯＨ（１７０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）の８ｍＬ  ＤＣＭ溶液を添加し、その後ＨＯＡｔ（０．６ｍｌ  ＤＭＦ溶液０．５ｍｌ、０．３ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（１００μｌ、０．６４２ｍｍｏｌ）を添加した。シリンジをオービタルテーブルで１８時間攪拌した。反応をＫａｉｓｅｒ  Ｔｅｓｔによってモニターした。樹脂をＤＭＦで洗浄した（２×１０ｍＬ）。次いで樹脂に、ＤＭＦ中２０％ｖ／ｖのピペリジン１０ｍＬを添加した。シリンジをオービタルテーブルで２０分間攪拌した。この脱保護手順をもう一度繰り返し、樹脂をＤＭＦ（２×３０ｍＬ）およびジクロロメタン（３×３０ｍＬ）で洗浄した。
【０２０３】
３つのガンマ−グルタミン酸スペーサーを、それぞれＦｍｏｃ−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕの二重カップリングを行なって導入した。故に、以下の手順を３回適用した：
樹脂に、（４Ｓ）−５−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−５−オキソ−ペンタン酸（Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕ）（０．１３ｇ、０．３ｍｍｏｌ）の８ｍＬ  ＤＭＦ溶液を添加し、その後ＨＯＡｔ（０．６ｍｌ溶液ＤＭＦ  ０．５ｍｌ、０．３ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（０．１ｍｌ、０．６ｍｍｏｌ）を添加した。シリンジをオービタルテーブルで４時間攪拌した。樹脂をＤＭＦで洗浄し（２×２０ｍＬ）、カップリングをもう一度繰り返した。反応をＫａｉｓｅｒ  Ｔｅｓｔによってモニターした。樹脂をＤＭＦで洗浄した（２×１０ｍＬ）。次いで樹脂に、ＤＭＦ中２０％ｖ／ｖのピペリジン１０ｍＬを添加した。シリンジをオービタルテーブルで２０分間攪拌した。この脱保護手順をもう一度繰り返し、樹脂をＤＭＦ（３×３０ｍＬ）およびジクロロメタン（３×３０ｍＬ）で洗浄した。
最後に、ＤＭＦ中（１０ｍＬ）２．５時間のパルミチン酸（８０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）、ＨＯＡｔ（０．６Ｍ  ＤＭＦ溶液０．５ｍｌ、３ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（０．１ｍｌ、６ｍｍｏｌ）活性化によりペプチドをアセチル化した。樹脂をＤＭＦ（２×３０ｍＬ）およびジクロロメタン（３×３０ｍＬ）で洗浄し、真空下で乾燥した。
【０２０４】
樹脂からのペプチドの切断は、フェノール（０．５ｇ）、水（０．５ｍＬ）およびＴＩＰＳ（０．２５ｍＬ）のＴＦＡ溶液（ＱＳＰ  １０ｍＬ）を使用して室温で２．５時間行った。樹脂を濾過し、２×５ｍＬ  ＴＦＡで洗浄した。合わせた濾液を２５０ｍＬ丸底フラスコに移し、真空下、Ｔ＜３０℃で部分的に濃縮し、１００ｍＬ氷冷ＭＴＢＥを添加してペプチドを沈殿させ、３６００ｒｐｍで３０分間遠心分離した。
【０２０５】
遠心分離ペレットを次いで氷冷ジエチルエーテルで洗浄し、遠心分離した。このプロセスを３回繰り返した。粗ペプチド２２０ｍｇを得た。
【０２０６】
精製システムＢを使用して精製を行った。純粋な所望のペプチドを含有する画分を凍結乾燥した。トリフルオロ酢酸塩としてのペプチドを白色固体として得た。
ｍ＝３７ｍｇ（８％）
ＵＰＬＣ／ＭＳ：
ＲＴ：４．９９分（分析条件Ａ）、純度９９％（ＵＶ）
観察された質量ｍ／ｚ（イオン型）：２２０５．２（Ｍ＋２Ｈ）；１４７０．５（Ｍ＋３Ｈ）；１１０３．１（Ｍ＋４Ｈ）；８８２．７（Ｍ＋５Ｈ）
【０２０７】
２．Ｇ．結果
配列番号１〜３２、３４〜３７、３９、４４、４５、４７〜４９、５１および５４〜９７の本発明のペプチドで得られた結果を、以下の表１に示した。
【０２０８】
【表５】
2021512099.tif 000015
【表６】
2021512099.tif 000016
【表７】
2021512099.tif 000017
【０２０９】
条件Ａは、以下であった：
−カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＣＳＨ、Ｃ１８、１３０Å、２．１×１００ｍｍ、１．７ｕｍ；
−カラム温度：５０℃；流速＝０．６ｍｌ／分；
−溶媒Ａ：Ｈ２Ｏ中０．１％ＴＦＡ；
−溶媒Ｂ：ＣＨ３ＣＮ中０．１％ＴＦＡ；
−勾配：０〜１分  Ｂ＝２％、１〜７分  Ｂ＝２％から７０％、７〜８分  Ｂ＝７０％から１００％；
−ＵＶ検出器：波長：２２０ｎｍ；ＭＳ取得：ＥＳＩ＋２００〜３０００ｕｍａ
【０２１０】
条件Ｂは、以下であった：
−カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＢＥＨ  Ｃ１８、１３０Å、  ２．１×５０ｍｍ、１．７μｍ
−カラム温度  ６０℃；流速０．６ｍｌ／ｍｎ
−溶媒Ａ：Ｈ２Ｏ中０．０５％ＴＦＡ
−溶媒Ｂ：ＣＨ３ＣＮ中０．０５％ＴＦＡ
勾配：０〜１分  Ｂ＝２％、１〜１６分  Ｂ＝２％から１００％、１６〜１７分  Ｂ＝１００％
ＵＶ検出器：波長：２２０ｎｍ；ＭＳ取得：ＥＳＩ＋２００〜３０００ｕｍａ
【０２１１】
条件Ｃは、以下であった：
−カラム：ＡＣＱＵＩＴＹ  ＢＥＨ  Ｃ４、１３０Å、２．１×５０ｍｍ、１．７μｍ；
−カラム温度  ４５℃；流速：０．４ｍｌ／分；
−溶媒Ａ：Ｈ２Ｏ中０．１％ＴＦＡ；
−溶媒Ｂ：ＣＨ３ＣＮ中０．０５％ＴＦＡ
勾配：０〜１分  Ｂ＝３０％、１〜５分  Ｂ＝３０％から５０％、５〜６ｍｉｎ  Ｂ＝８０％
ＵＶ検出器：波長：２２０ｎｍ；ＭＳ取得：ＥＳＩ＋２００〜３０００ｕｍａ
【０２１２】
条件Ｄは、以下であった：
−カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＣＳＨ、Ｃ１８、１３０Å、２．１×１５０ｍｍ、１．７ｕｍ；
−カラム温度：６０℃；流速＝０．４ｍｌ／分；
−溶媒Ａ：Ｈ２Ｏ中０．１％ＴＦＡ；
−溶媒Ｂ：ＣＨ３ＣＮ中０．１％ＴＦＡ；
−勾配：０〜１分  Ｂ＝２％、１〜１４分  Ｂ＝２％から７０％、１４〜１６分  Ｂ＝７０％から１００％；
−ＵＶ検出器：波長：２２０ｎｍ；ＭＳ取得：ＥＳＩ＋２００〜３０００ｕｍａ
【０２１３】
本発明による以下のペプチドは、上記に記載したようにそれぞれ製造することができる：配列番号３３、３８、４０、４１、４３、４６、５０、５２および５３。
【実施例３】
【０２１４】
ＲＸＦＰ１受容体における本発明のペプチドのインビトロ分析（ＯＶＣＡＲ５  ｃＡＭＰアッセイ）
Ａ．方法
内因性ＲＸＦＰ１を発現するＯＶＣＡＲ５細胞を使用して、本発明のペプチド、特に配列番号１〜９７のペプチドのＲＸＰ１アゴニスト特性をテストした。
【０２１５】
ＲＸＦＰ１はＧｓ結合ＧＰＣＲであるため、ｃＡＭＰをＲＸＦＰ１活性化の読み出しとして使用した。
【０２１６】
イソブチルメチルキサンチン（ＩＢＭＸ）を使用してホスホジエステラーゼ活性を阻害し、ｃＡＭＰ  測定を容易にした。その高度な感度のため、ＨＴＲＦ（ホモジニアス時間分解蛍光）技術を使用してｃＡＭＰを検出した。
【０２１７】
要約すると、ＯＶＣＡＲ５を、１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）および１％抗生物質（ペニシリン／ストレプトマイシン）を含有する通常の培地（ＲＰＭＩ）で増殖させた。
実験前に、細胞をアキュターゼで剥離し、１ｍＭ（３−イソブチル−１−メチルキサンチン）ＩＢＭＸと３７℃で４０分間インキュベートした。
細胞を次いで、一定容量の培地（ＦＣＳなし）に漸増濃度の種々のペプチドを含有する３８４ブラックウェルプレートに分配した。
５％ＣＯ２の湿潤インキュベーターで３７度、３０分のインキュベーション後、溶解緩衝液およびｃＡＭＰ−Ｄ２（色素ｄ２で標識したｃＡＭＰ）、ならびにユーロピウムに連結し、ｃＡＭＰ検出に使用した抗ｃＡＭＰ抗体を含有する一定容量の溶液を添加して、反応を止めた。
実験の読み出しは、ＨＴＲＦ測定を可能にする蛍光光度計で行った。化合物濃度のｌｏｇ１０に対してｃＡＭＰの細胞内値をプロットして、活性化曲線を生成した。
５０％活性化濃度（ＥＣ５０）を、Ｐｒｉｓｍ  ５ソフトウェアを用いたシグモイド用量反応（可変勾配）式を使用して非線形回帰によって計算した。
Ｅｍａｘ％は、テスト化合物のｃＡＭＰの最大細胞内値（ｃＡＭＰの上限ｖｓ濃度曲線）を、同じテスト時に決定したＨ２リラキシンのｃＡＭＰの最大細胞内値で割り、１００を掛けた値として決定した。
Ｅｍａｘ％＝１００×［ｃＡＭＰｔｅｓｔ  ｃｐｄ］／［ｃＡＭＰＨ２−Ｒｌｘ］
【０２１８】
Ｂ．結果
本発明のペプチドを用いて得られた結果を、以下の表２に表す。
【０２１９】
【表８】
2021512099.tif 000018
【表９】
2021512099.tif 000019
【表１０】
2021512099.tif 000020
【０２２０】
本発明によるペプチドは、極めて興味深いＲＸＰ１アゴニスト特性を有し、ＲＸＦＰ１を結合および活性化するのに極めて有効であるようだ。
【０２２１】
さらに、本発明によるペプチドは全て、ＲＸＦＰ１受容体を活性化することに関して従来技術からのペプチドより有意におよび予想外に優れている。
【０２２２】
Ｂ７−３３  Ｃ１１．２３Ｓ、ＡｃＢ７−３３  Ｃ１１．２３ＳおよびＫＫＫＫ（ＡｃＢ７−２９  Ｃ１１．２３Ｓ）の名称で知られる従来技術（ＷＯ２０１５／１５７８２９）からのペプチドを用いて、同じ実験を行った。
【０２２３】
以下のＥＣ５０結果は、これらの３つのペプチドについて得られた。
【０２２４】
【表１１】
2021512099.tif 000021
【０２２５】
上記で示したように、本発明によるペプチドは、極めて興味深いＲＸＦＰ１アゴニスト特性を有し、ＲＸＦＰ１を活性化するのに極めて有効である。さらに、本発明によるペプチドは全て、従来技術からのペプチドより有意におよび思いがけなく優れている。
【実施例４】
【０２２６】
緩衝液中での本発明のペプチドの可溶性テスト
Ａ．方法
ペプチドバッチの可溶性のテストの前に、その純度（ＨＰＬＣ−ＵＶ）を決定した。
試験培地：
リン酸緩衝液５０ｍＭ  ｐＨ６．５：１５．９ｍｌ  Ｎａ２ＨＰＯ４  ０．１Ｍ（Ｃａｒｌｏ  Ｅｒｂａ  ４８００８７）＋３４．１ｍｌ  Ｎａ２ＨＰＯ４  ０．１Ｍ（Ｃａｒｌｏ  Ｅｒｂａ  ４８０１４１）＋Ｈ２Ｏ  ＭｉｌｌｉＱ  ＱＳＰ  １００ｍｌ
リン酸緩衝液５０ｍＭ  ｐＨ７．４：４０．５ｍｌ  Ｎａ２ＨＰＯ４  ０．１Ｍ（Ｃａｒｌｏ  Ｅｒｂａ  ４８００８７）＋９．５ｍｌ  Ｎａ２ＨＰＯ４  ０．１Ｍ（Ｃａｒｌｏ  Ｅｒｂａ  ４８０１４１）＋Ｈ２Ｏ  ＭｉｌｌｉＱ  ＱＳＰ  １００ｍｌ
酢酸緩衝液５０ｍＭ  ｐＨ４．５：０．７５ｇ  Ｃ２Ｈ３ＣＯ２Ｎａ，３Ｈ２Ｏ（Ｓｉｇｍａ  Ｓ７５４５）＋Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ水に溶解した０．３５ｍｌ  ＣＨ３ＣＯ２Ｈ  １００％溶液（希釈（１：１）ＣＨ３ＣＯ２ＨでのｐＨに調整、およびＭｉｌｌｉｐｏｒｅ水で２５０ｍｌに希釈）
【０２２７】
４ｍｌエッペンドルフバイアル中で、正確に秤量した化合物試料を試験培地に希釈して純粋な化合物２、６または１０ｍｇ／ｍｌの目標濃度を得た。試料バイアルを約１９時間振とうした（ロックンロールシェーカー）。Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ「Ｓｏｌｖｉｎｅｒｔ」プレート（０．４５μｍ−ＰＴＦＥ親水性）を通じて、３００μＬアリコートを濾過した。次いで、濾液の０．２ｐＬ注入と、０．２〜２ｐＬにわたる様々な容量を注入して、ＤＭＳＯ中１．２ｍｇ／ｍｌの濃度のペプチドストック溶液（％純度に基づく）で得られたＵＶピーク面積との比較によって可溶性を決定した。
【０２２８】
分析：
ｐＨを微小電極で測定した。
ＨＰＬＣ条件：
ＤＡＤ検出器を備えたＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  Ｓｙｓｔｅｍ
カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｃｏｌｕｍｎ  ＣＳＨ  Ｃ１８（１３０Å；１．７μｍ；５０×２．１ｍｍ）
カラム温度：６０℃
流速：０．３ｍｌ／分
フルループ（約５μＬ）−オーバーフィルファクタ５
弱洗浄および強洗浄：Ｈ２Ｏ／ＡＣＮ（７５／２５；Ｖ／Ｖ）；シール洗浄：Ｈ２Ｏ／ＩｓＯＨ（９５／５；Ｖ／Ｖ）
移動相：
溶媒Ａ：０．０５％ＴＦＡ水；溶媒Ｂ：ＣＨ３ＣＮ中０．０３５％ＴＦＡ
勾配：０〜１２分  Ｂ＝２％から６０％、１２〜１４分  Ｂ＝６０％から１００％。カラム洗浄  １００％Ｂ  １分、カラム平衡  ２％Ｂ  ２．５分
ＵＶ検出器：波長：２２０ｎｍ
【０２２９】
Ｂ．結果
得られた可溶性結果を、以下の表４に表す。
【０２３０】
【表１２】
2021512099.tif 000022
【０２３１】
Ｂ７−３３  Ｃ１１．２３Ｓ、ＡｃＢ７−３３  Ｃ１１．２３ＳおよびＫＫＫ（ＡｃＢ７−２９  Ｃ１１．２３Ｓ）の名称で知られる従来技術（ＷＯ２０１５／１５７８２９）からのペプチドを用いて、同じ実験を行った。
【０２３２】
以下の可溶性結果は、これらの３つのペプチドについて得られた。
【０２３３】
【表１３】
2021512099.tif 000023
【０２３４】
本発明のペプチドは、従来技術の化合物と比べて可溶性の改善を示す。この特性は、注射可能な溶液を製造するときにより広範囲の濃度を可能にし、故にインビボ投与量範囲を拡大するであろう。
【実施例５】
【０２３５】
ラットまたはヒト血漿または血液中でのペプチドの安定性テスト
Ａ．方法
ペプチドバッチの血漿（または血液）中での安定性テストの前に、その純度（ＨＰＬＣ−ＵＶ）を決定した。
試験培地：
ラットおよびヒト血漿：抗凝固ナトリウムまたはリチウムヘパリン
ラットおよびヒト血液：抗凝固ナトリウムまたはリチウムヘパリン
ストック溶液：
５０ｍＭリン酸緩衝液ｐＨ７．４中、試験化合物の１００μＭ溶液
【０２３６】
９５０μＬ血漿（または血液）を３７℃で５分間プレインキュベートした。化合物ストック溶液５０μＬを添加した。最終化合物濃度＝５μＭ。各時点で１５０μＬ血漿（または血液）をボルテックスし、エッペンドルフに移した。時点０、１および４時間を種ごとに２通り実行した。
【０２３７】
インキュベーション後、１５０μＬ血漿（または血液）を、１％ＴＦＡを含有する６００μＬアセトニトリルで抽出した。前記混合物を次いでボルテックスし、１４６００ｒｐｍで１０分遠心分離した。２００μＬ上清をＮ２下で乾燥した。試料を次いで、Ｈ２Ｏ／ＣＨ３ＣＮ  ９８／２＋０．１％  ＦＡ＋５０ｎｇ／ｍｌラベタロール２００μＬで再構成し、可溶性および安定性試験で使用した分析システムを使用して分析した。
【０２３８】
残留ペプチド量の決定に関して、ｔ０および各時点（日）の標的化合物のピーク面積を比較し、等式に従って「残留ペプチド％」を得た：
残留ペプチド％＝［（ピーク面積ペプチド時間）×１００］／ピーク面積ペプチドｔ０。安定性を「残留ペプチド％」として表した。
判定基準：精度が約１５％であり、回収率が８５〜１１５％範囲内であるならば、テスト化合物は安定とみなした。
【０２３９】
Ｂ．結果
得られた血漿および血中安定性結果を、以下の表６に表す。
【０２４０】
【表１４】
2021512099.tif 000024
【０２４１】
Ｂ７−３３  Ｃ１１．２３Ｓ、ＡｃＢ７−３３、およびＫＫＫＫ（ＡｃＢ７−２９  Ｃ１１．２３Ｓ）の名称で知られる従来技術（ＷＯ２０１５／１５７８２９）からのペプチドを用いて、同じ実験を行った。
【０２４２】
以下の血漿安定性結果は、これらの３つのペプチドについて得られた。
【０２４３】
【表１５】
2021512099.tif 000025
【０２４４】
本発明のペプチドは、血漿および／または血液中で従来技術の化合物より安定であるようだ。
【実施例６】
【０２４５】
ラットへのインビボ投与後のペプチドの薬物動態（ＰＫ）決定
Ａ．方法：
ペプチドバッチのテストの前に、その純度（ＨＰＬＣ−ＵＶ）を決定した。塩の存在、溶媒および純度について用量を補正した。
ラットにおけるペプチドの定量化のための生物学的分析スクリーニング法：
Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットに、１ｍｇ／ｋｇ静脈内（ｉ．ｖ．）または３ｍｇ／ｋｇ皮下（ｓ．ｃ．）の用量でＰＢＳ溶液として（それぞれ０．２ｍｇ／ｍｌおよび０．６ｍｇ／ｍｌ）試験ペプチドを投与した。
血液試料を回収した：適用後０．０８３、０．２５、０．５、１、２、４、８、２４、４８および７２時間（ｉ．ｖ．経路）および０．２５、０．５、１、２、４、６、８、１０、２４、４８および７２時間（ｓ．ｃ経路）。
血漿試料を、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ／ＭＳ）によりタンパク質沈殿後に分析した。
ＰＫパラメータおよび半減期を、Ｐｈｏｅｎｉｘ  ６４（ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ  ６．４）−Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ（Ｃｅｒｔａｒａ（商標））（非コンパートメントモデル）を使用して計算した。その後の計算およびＰＫ分析のために、定量下限未満（ＢＬＱ）値をゼロに置き換えた。
【０２４６】
Ｂ．結果：
得られたＰＫパラメータを、以下の表８に表す。
以下の略号を使用した：
Ｔ１／２：インビボ半減期、ＰＫ実験中、テスト化合物血漿濃度が２で割られるのに要する時間
Ｃ０：ｔ＝０時点の外挿テスト化合物血漿濃度（ｉ．ｖ．経路）
Ｃｍａｘ：示された時点の最大テスト化合物血漿濃度（ｓ．ｃ．経路）
Ｔｍａｘ：Ｃｍａｘが達成された時点
Ｆ％：ｓ．ｃ．  ｖｓ  ｉ．ｖ．生物学的利用率、用量補正曲線下面積（ＡＵＣ）ＡＵＣｉ．ｖ．で割ったｓ．ｃ．経路
【０２４７】
【表１６】
2021512099.tif 000026
【０２４８】
同じ実験をＨ２リラキシンで行った。
【０２４９】
【表１７】
2021512099.tif 000027
【０２５０】
Ｈ２リラキシンと比べて、本発明の選択されたペプチドは、改善された薬物動態パラメータを示す。特にラットにおけるそのインビボ半減期は、４時間〜９時間にわたる。そのようなペプチドは、次いでその効能をより長時間保持し、静脈内または皮下経路による１日１回投与を可能にし得る。
【０２５１】
配列表
配列番号１
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2
配列番号２
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-Aib-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号３
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号４
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2
配列番号５
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(PEG2-PEG2-PEG2-PEG2-gE-gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2
配列番号６
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Stea)-S-T-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2
配列番号７
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Stea)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号８
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(PEG2-PEG2-PEG2-PEG2-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号９
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号１０
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-gE-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号１１
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号１２
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-Cit-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号１３
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-K-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号１４
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-Dser-K-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号１５
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-Aib-K-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号１６
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-Dlys-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号１７
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Dlys-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号１８
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Dlys-R-K-K(Ac)-NH2
配列番号１９
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(PEG2-PEG2-PEG2-gE-gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2
配列番号２０
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Stea)-S-T-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2
配列番号２１
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(PEG2-PEG2-PEG2-PEG2-gE-gE-gE-Stea)-S-T-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2
配列番号２２
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(PEG2DGA-PEG2DGA-PEG2DGA-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号２３
Ac-L-E-G-R-E-L-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号２４
Ac-L-E-G-R-E-F-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号２５
Ac-L-E-G-R-E-Q-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号２６
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(PEG2-PEG2-PEG2-PEG2-gE-gE-gE-Stea)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号２７
Ac-L-E-G-R-E-R-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号２８
Ac-L-E-G-R-E-Hly-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号２９
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-Aib-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号３０
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Stea)-S-T-W-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号３１
Ac-L-E-G-R-E-R-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Aib-R-R-K(Ac)-NH2
配列番号３２
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(PEG2DGA-PEG2DGA-PEG2DGA-gE-gE-gE-Stea)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号３３
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号３４
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Stea)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号３５
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-W-Aib-K-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号３６
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-Dlys-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号３７
Ac-L-E-G-R-E-L-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Aib-R-R-K(Ac)-NH2
配列番号３８
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(PEG2-PEG2-PEG2-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号３９
Ac-L-E-G-R-E-F-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Aib-R-R-K(Ac)-NH2
配列番号４０
Ac-L-E-G-R-E-Q-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Aib-R-R-K(Ac)-NH2
配列番号４１
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(PEG2DGA-PEG2DGA-PEG2DGA-gE-gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号４２
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(PEG2-PEG2-PEG2-PEG2-gE-gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号４３
Ac-L-E-G-R-E-Hly-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Stea)-S-T-W-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号４４
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-W-Dser-K-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号４５
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(PEG2-PEG2-PEG2-PEG2-PEG2-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号４６
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(PEG2-PEG2-PEG2-PEG2-PEG2-gE-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号４７
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号４８
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-Q-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号４９
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-Mly-R-A-K-NH2
配列番号５０
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(PEG2DGA-PEG2DGA-PEG2DGA-gE-gE-gE-Stea)-S-T-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2
配列番号５１
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-gE-Stea)-S-T-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2
配列番号５２
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-Stea)-S-T-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2
配列番号５３
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(PEG2DGA-PEG2DGA-PEG2DGA-gE-gE-gE-gE-Stea)-S-T-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2
配列番号５４
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-gE-gE-gE-gE-Stea)-S-T-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2
配列番号５５
Ac-L-E-G-R-E-R-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Aib-R-R-K(Ac)-NH2
配列番号５６
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-Cit-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Stea)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号５７
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Hly-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号５８
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Stea)-S-T-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2
配列番号５９
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Stea)-S-T-F-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2
配列番号６０
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Stea)-S-T-F-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2
配列番号６１
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Stea)-S-T-F-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2
配列番号６２
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2
配列番号６３
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-Q-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2
配列番号６４
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-R-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2
配列番号６５
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-K(Ac)-Q-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2
配列番号６６
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-W-K(Ac)-Aib-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号６７
Ac-L-E-G-R-E-R-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2
配列番号６８
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Aib-R-K(Ac)-K-NH2
配列番号６９
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Aib-R-K(Ac)-R-NH2
配列番号７０
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-I-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2
配列番号７１
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Aib-R-A-K-NH2
配列番号７２
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-Aib-R-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号７３
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-K-W-S-Aib-R-A-K-NH2
配列番号７４
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-I-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2
配列番号７５
Ac-L-E-G-R-E-R-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Aib-R-R-K(Ac)-NH2
配列番号７６
Ac-L-E-G-R-E-R-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-Aib-R-R-K(Ac)-NH2
配列番号７７
Ac-L-E-G-R-E-R-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-Aib-R-R-K(Ac)-NH2
配列番号７８
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号７９
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-K-F-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2
配列番号８０
Ac-L-E-G-R-E-R-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-Trp(5-Cl)-S-Aib-R-R-K(Ac)-NH2
配列番号８１
Ac-K(Ac)-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号８２
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-Aib-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Aib-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号８３
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-K-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2
配列番号８４
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-I-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号８５
Ac-L-E-G-R-E-R-V-R-Aib-K(Ac) I Aib Aib E G K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm) S T W S Aib R R K(Ac)-NH2
配列番号８６
Ac-Aib-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-I-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号８７
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-R-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号８８
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-Hly-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号８９
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-Mph-S-R-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号９０
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-A-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号９１
Ac-L-E-G-R-E-R-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-Pfp-S-Aib-R-R-K(Ac)-NH2
配列番号９２
Ac-L-E-G-R-E-R-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-Trp(5-F)-S-Aib-R-R-K(Ac)-NH2
配列番号９３
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-T-R-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号９４
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-V-R-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号９５
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Myr)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2
配列番号９６
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Myr)-S-T-F-S-Mly-R-A-K-NH2
配列番号９７
Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-gE-gE-Myr)-S-T-F-S-Mly-R-A-K-NH2
配列番号１００ = H2リラキシンA鎖
H-Gln-Leu-Tyr-Ser-Ala-Leu-Ala-Asn-Lys-Cys-Cys-His-Val-Gly-Cys-Thr-Lys-Arg-Ser-Leu-Ala-Arg-Phe-Cys-OH
配列番号１０１ = H2リラキシンB鎖
H-Asp-Ser-Trp-Met-Glu-Glu-Val-Ile-Lys-Leu-Cys-Gly-Arg-Glu-Leu-Val-Arg-Ala-Gln-Ile-Ala-Ile-Cys-Gly-Met-Ser-Thr-Trp-Ser-OH
配列番号１０２ = SEQ ID B7-33 C11.23S*
H-Val-Ile-Lys-Leu-Ser-Gly-Arg-Glu-Leu-Val-Arg-Ala-Gln-Ile-Ala-Ile-Ser-Gly-Met-Ser-Thr-Trp-Ser-Lys-Arg-Ser-Leu-NH2
配列番号１０３ = SEQ ID AcB7-33 C11.23S*
Ac-Val-Ile-Lys-Leu-Ser-Gly-Arg-Glu-Leu-Val-Arg-Ala-Gln-Ile-Ala-Ile-Ser-Gly-Met-Ser-Thr-Trp-Ser-Lys-Arg-Ser-Leu-NH2
配列番号１０４ = SEQ ID KKKK(AcB7-29 C11.23S)*
Ac-Val-Ile-Lys-Leu-Ser-Gly-Arg-Glu-Leu-Val-Arg-Ala-Gln-Ile-Ala-Ile-Ser-Gly-Met-Ser-Thr-Trp-Ser-Lys-Lys-Lys-Lys-NH2
＊比較例
【図面の簡単な説明】
【０２５２】
【図１】本発明のペプチドを合成する方法を示した図である。
【図２】本発明のペプチドを合成する方法を示した図である。
【図１】
2021512099.tif 000030
【図２】
2021512099.tif 000031
【配列表】
2021512099000001.app
【国際調査報告】
2021512099.tif 000032
2021512099.tif 000033
2021512099.tif 000034