(57)【要約】【解決手段】  （Ａ）コリンの有機エステルの少なくとも１種の塩、またはコリンの誘導体の少なくとも１種の塩、および  （Ｂ）両性界面活性剤およびアニオン性界面活性剤および非イオン性界面活性剤から選択される少なくとも１種の界面活性剤  を含有する組成物。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ａ）一般式（Ｉ）
（Ｒ２）３Ｎ＋−（ＣＨ２）ｎＣ（Ｒ３）（Ｒ４）−（Ｏ−Ｘ）ｍ−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ１      Ａ−      （Ｉ）
（式中、
ｎは、１〜１２の中から選択され、
ｍは、０〜５０の中から選択され、
Ｒ１は、直鎖または分岐であるＣ１〜Ｃ１０アルキル、およびＣ６〜Ｃ１０アリールから選択され、Ｒ１は、部分的にまたは完全に中和されている１個以上のヒドロキシル基またはＣ＝Ｏ基またはＣＯＯＨ基を有することがあってもよく、
Ｒ２は、同じであるかまたは異なるものであり、そして、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、フェニルから選択され、
Ｒ３およびＲ４は、同じであるかまたは異なるものであり、そして、水素原子およびＣ１〜Ｃ４アルキルから選択され、
Ｘは、Ｃ２〜Ｃ４アルキレンであり、そして
Ａ−は、無機または有機の対アニオンである）
で表される少なくとも１種の塩
および
（Ｂ）両性界面活性剤およびアニオン性界面活性剤および非イオン性界面活性剤から選択される少なくとも１種の界面活性剤
を含有する組成物。
【請求項２】
塩（Ａ）が、ハライド、スルフェート、カーボネート、タートレート、シトレート、ラクテート、およびメタンスルホネートから選択される対イオンを有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記組成物が、
（Ｃ）少なくとも１種の酵素
をさらに含有する、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記少なくとも１種の酵素（Ｃ）が、プロテアーゼ、アミラーゼ、およびリパーゼから選択される、請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記組成物が室温で液体である、請求項１から４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
一般式（Ｉ）で表される化合物のＲ２がすべてメチルである、請求項１から５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記組成物が０．５〜３０質量％の塩（Ａ）を含有する、請求項１から６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
塩（Ａ）が、化合物（Ａ’） 
（Ｒ２）３Ｎ＋−（ＣＨ２）ｎＣ（Ｒ３）（Ｒ４）−（Ｏ−Ｘ）ｍ−ＯＨ    Ｒ１−ＣＯＯ−
（式中、様々な可能性のあるＲ１、Ｒ２、Ｘ、ｎおよびｍは、対応する塩（Ａ）におけるＲ１、Ｒ２、Ｘ、ｎおよびｍの定義と同じである）
を不純物として含有する、請求項１から７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
布地を洗濯するための、請求項１から８のいずれか一項に記載の組成物の使用方法。
【請求項１０】
酵素を安定化するための、塩（Ａ）の使用方法。
【請求項１１】
組成物の製造方法であって、
（ａ）
（Ａ）一般式（Ｉ）の化合物である少なくとも１種の塩（Ａ）と
（Ｃ）少なくとも１種の酵素と
を混合する工程、
（Ｒ２）３Ｎ＋−（ＣＨ２）ｎＣ（Ｒ３）（Ｒ４）−（Ｏ−Ｘ）ｍ−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ１      Ａ−      （Ｉ）
（式中、
ｎは、１〜１２の中から選択され、
ｍは、０〜５０の中から選択され、
Ｒ１は、直鎖または分岐であるＣ１〜Ｃ１０アルキル、およびＣ６〜Ｃ１０アリールから選択され、そして、そのＲ１は、部分的にまたは完全に中和されている１個以上のヒドロキシル基またはＣ＝Ｏ基またはＣＯＯＨ基を有することがあってもよく、
Ｒ２は、同じであるかまたは異なるものであり、そして、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、フェニルから選択され、
Ｒ３およびＲ４は、同じであるかまたは異なるものであり、そして、水素原子およびＣ１〜Ｃ４アルキルから選択され、
Ｘは、Ｃ２〜Ｃ４アルキレンであり、および
Ａ−は、無機または有機の対アニオンである）、
（ｂ）両性界面活性剤およびアニオン性界面活性剤および非イオン性界面活性剤から選択される少なくとも１種の界面活性剤（Ｂ）を加える工程、
を含む、製造方法。
【請求項１２】
塩（Ａ）が、ハライド、スルフェート、カーボネート、タートレート、シトレート、ラクテート、およびメタンスルホネートから選択される対イオンを有する、請求項１１に記載の製造方法。
【請求項１３】
前記少なくとも１種の酵素（Ｃ）がプロテアーゼ、アミラーゼ、およびリパーゼから選択される、請求項１１または１２に記載の製造方法。
【請求項１４】
一般式（Ｉ）による化合物のＲ２がすべてメチルである、請求項１１から１３のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項１５】
一般式
（ＣＨ３）３Ｎ＋−（ＣＨ２）ＣＨ（Ｒ３）−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ５      （Ａ１）−      （ＩＩ）
（式中、（Ａ１）−は、タートレートおよびシトレートから選択され、
Ｒ３は、水素原子およびＣ１〜Ｃ４アルキルから選択され、
Ｒ５は、−ＣＨ２−Ｃ（ＯＨ）（ＣＯＯＸ２）−ＣＨ２−ＣＯＯＸ２および−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＯＯＸ１から選択され、
Ｘ１は、水素原子、アルカリ金属、および（ＣＨ３）３Ｎ＋−（ＣＨ２）２−から選択され、そして
Ｘ２は、同じであるかまたは異なるものであり、そして、水素原子、アルカリ金属および（ＣＨ３）３Ｎ＋−（ＣＨ２）２−から選択される）で表される塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、
（Ａ）一般式（Ｉ）
（Ｒ２）３Ｎ＋−（ＣＨ２）ｎＣ（Ｒ３）（Ｒ４）−（Ｏ−Ｘ）ｍ−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ１      Ａ−      （Ｉ）
（式中、
ｎは、１〜１２から選択され、
ｍは、０〜５０から選択され、
Ｒ１は、直鎖または分岐のＣ１〜Ｃ１０−アルキル、およびＣ６〜Ｃ１０−アリールから選択され、Ｒ１は、部分的にまたは完全に中和されている１個以上のヒドロキシル基またはＣ＝Ｏ基またはＣＯＯＨ基を有することがあってもよく、
Ｒ２は、同じまたは異なり、Ｃ１〜Ｃ１０−アルキル、フェニルから選択され、
Ｒ３およびＲ４は、同じまたは異なり、水素原子およびＣ１〜Ｃ４−アルキルから選択され、
Ｘは、Ｃ２〜Ｃ４−アルキレンであり、および
Ａ−は、無機または有機の対アニオンである）
による少なくとも１種の塩
および
（Ｂ）両性およびアニオン性および非イオン性界面活性剤から選択される少なくとも１種の界面活性剤
を含有する組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
組成物、および特に洗剤組成物は、種々の洗浄用途、例えば洗濯または自動食器洗浄のために作られる。これら組成物のすべては、多くの異なる要件を満たさなければならない。固体組成物が伝統的な役割を果たす一方で、液体組成物にもその利点がある。液体組成物は、コインランドリー（ｌａｕｎｄｒｏｍａｔ）に完全に移動させることができ、使われない洗剤の残留物を投入ユニットに残さない。特にいわゆる色物用洗濯洗剤の場合、液体洗濯洗剤は非常に重要である。
【０００３】
洗剤製造者は、製造者らが使用する（ビルダーを含む）材料に大きな柔軟性を求めている。液体重質洗剤の人気の高まりから、よく知られたビルダーはナトリウムシトレート、クエン酸の三ナトリウム塩である。ナトリウムシトレートは、水道水に見出されるカルシウムおよびマグネシウムイオンを封止する能力があり、ホスフェートビルダーとは違って環境に安全であるので、重質洗濯洗剤のビルダーとしての使用に適している。他の環境に安全な洗剤ビルダーとは違って、三ナトリウムシトレートは溶解性が良好であるので、ナトリウムシトレートは液体洗剤配合物での使用に特に適している。ただし通常、３０質量％の最低水分含有量が必要である。この要件により、洗濯洗剤製造者の柔軟性が制限される。この要件は、この産業の今の傾向、すなわち投与単位（ポーチ）の小型化と、これによる水分含有量の削減を考慮すると、さらにより弊害をもたらすことが判明している。
【０００４】
洗濯洗剤が直面するもう１つの問題は貯蔵寿命である。特に液体組成物は通常、しばらくするとその活性を失う。種々の理由が明らかにされている。しばらくすると失活するおそれのある成分の１つは、酵素である。酵素は、例えば、卵、果物などのような食品のしみの除去に有用な成分であるが、この酵素の活性は、棚に置いた後しばらくして、または最終消費者の時点で低下する。酵素安定剤として知られているホウ素化合物（例えば、ＵＳ４，４６５，６１９参照）は、現在精査されているところである。
【０００５】
ＷＯ９７／０３１５６では、或る特定のコリン誘導体および界面活性剤としてのその使用が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】ＵＳ４，４６５，６１９
【特許文献２】ＷＯ９７／０３１５６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
したがって本発明の目的は、水分含有量が高くても低くても、柔軟な配合が可能となる組成物を提供することであった。さらに、特に含有される酵素に関して、優れた貯蔵寿命を有する組成物を提供することが目的であった。さらに、そのような組成物の製造方法を提供することが目的であり、さらに、そのような組成物の使用方法を提供することが目的であった。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
よって冒頭に定義した組成物が見出された。以下、本発明の組成物または本発明による組成物とも定義する。本発明の組成物は、
（Ａ）一般式（Ｉ）による少なくとも１種の塩（以下、全体で、エステル（Ａ）または塩（Ａ）または成分（Ａ）とも称する）、および
（Ｂ）両性およびアニオン性および非イオン性界面活性剤から選択される少なくとも１種の界面活性剤（以下、界面活性剤（Ｂ）または成分（Ｂ）とも称する）
を含有する。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
塩（Ａ）は、コリンの有機エステルの、またはコリンの誘導体の塩である。塩（Ａ）のアニオン（対イオン）は、無機または有機でよく、有機が好ましい。塩（Ａ）の無機対イオンの例は、ニトレート、ヒドロキシド、スルフェート、ホスフェート、ヒドロゲンホスフェート、ジヒドロゲンホスフェート、カーボネート、バイカーボネート、およびハライドであり、例えばブロミドまたはクロリドである。ハライド、特にクロリド、およびスルフェート、カーボネート、およびバイカーボネートが好ましい。有機対イオンの例は、ラクテート、アセテート、タートレート、シトレート、およびＣＨ３ＳＯ３−（メタンスルホネート）である。二価または三価の対イオンを有する実施形態では、それぞれのモル量のカチオンが存在する。
【００１０】
塩（Ａ）の窒素原子は、３個のメチル基と１個のヒドロキシエチル基を有する。本発明の文脈で使用するコリンの誘導体という用語は、メチル基以外の少なくとも１個のアルキル基、または２−ヒドロキシエチル基以外のヒドロキシアルキル基、またはさらなるアルコキシ基をもつ化合物を指す。
【００１１】
より具体的には、塩（Ａ）は一般式（Ｉ）
（Ｒ２）３Ｎ＋−（ＣＨ２）ｎＣ（Ｒ３）（Ｒ４）−（Ｏ−Ｘ）ｍ−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ１      Ａ−      （Ｉ）
の化合物であり、
式中、
ｎは、１〜１２、例えば１〜９、好ましくは１、２、３、または４から選択され、さらにより好ましくは、ｎは１であり、
ｍは、０〜５０、例えば２〜５０から選択され、好ましくは１０〜２５である。しかしながら、最も好ましくは、ｍは０である。
【００１２】
Ｒ１は、直鎖または分岐のＣ１〜Ｃ１０−アルキル、およびＣ６〜Ｃ１０−アリールから選択され、そして、Ｒ１は、部分的にまたは完全に中和された、１個以上のヒドロキシル基またはＣ＝Ｏ基またはＣＯＯＨ基を有することがあってもよい。Ｒ１の好ましい例は、非置換のＣ１〜Ｃ６−アルキル、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｎ−ヘキシルであり、好ましい非置換のＣ１〜Ｃ１０−アルキルは、メチルおよびエチル、さらに置換Ｃ１〜Ｃ１０−アルキル、例えば−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＯＯＨ、ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ３、（Ｅ）−ＣＨ＝ＣＨＣＯＯＨ、（Ｚ）−ＣＨ＝ＣＨＣＯＯＨ、−Ｃ６Ｈ５、パラ−ＨＯ−Ｃ６Ｈ４−、ｏ，ｐ−ジヒドロキシフェニル、および３，４，５−トリヒドロキシフェニルである。好ましい実施形態では、Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ１は、共にシトレートを構成する。さらにより好ましくは、Ｒ１はメチルである。
【００１３】
Ｒ２は同じまたは異なり、フェニルおよびＣ１〜Ｃ１０−アルキル、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｓｅｃ．−ブチル、ｔｅｒｔ．−ブチル、ｎ−ペンチル、イソ−ペンチル、ｓｅｃ．−ペンチル、ネオ−ペンチル、１，２−ジメチルプロピル、イソ−アミル、ｎ−ヘキシル、イソ−ヘキシル、ｓｅｃ．−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、２−エチルヘキシル、ｎ−ノニル、ｎ−デシル、２−ｎ−プロピル−ヘプチル、またはイソ−デシルから選択され、好ましくは直鎖Ｃ１〜Ｃ１０−アルキル、より好ましくは直鎖Ｃ１〜Ｃ４−アルキルである。
【００１４】
さらにより好ましい少なくとも２種のＲ２基はＣＨ３であり、第３のＲ２は直鎖Ｃ１〜Ｃ１０−アルキルから選択され、最も好ましくは、すべてのＲ２は同じであり、メチルである。
【００１５】
Ｒ３およびＲ４は、同じまたは異なり、水素原子およびＣ１〜Ｃ４−アルキルから選択され、好ましくは、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、およびｎ−ブチルであり、さらにより好ましくは、Ｒ３およびＲ４の両方が水素原子である。別の実施形態では、Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ４−アルキルであり、Ｒ４は水素原子であり、好ましくはＲ３はメチルであり、Ｒ４は水素原子である。
【００１６】
Ｘは、Ｃ２〜Ｃ４−アルキレンであり、例えば-ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−、−（ＣＨ２）３−、ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−、または−（ＣＨ２）４−であり、および
Ａ−は、無機または有機の対アニオンである。塩（Ａ）の無機対イオンの例は、スルフェート、ホスフェート、ヒドロゲンホスフェート、ジヒドロゲンホスフェート、カーボネート、バイカーボネート、およびハライド、例えばブロミドまたはクロリドである。ハライド、特にクロリド、およびスルフェート、カーボネート、およびバイカーボネートが好ましい。有機対イオンの例は、ラクテート、アセテート、タートレート、シトレート、およびＣＨ３ＳＯ３−（メタンスルホネート）である。
【００１７】
塩（Ａ）の最も好ましい例は、対イオンとしてのタートレートまたはシトレートとのコリンエステルの塩、およびアセチルコリン、コリンシトレート、およびコリンタートレートの塩、例えば、ラクテート、アセテート、タートレート、シトレートである。
【００１８】
成分（ａ）は界面活性剤ではない。一実施形態では、水１０００ｇ中の５ｇの成分（ａ）の溶液は、２０℃および１０１．３ｋＰａで、＞４５ｍＮ／ｍの動的表面張力を有する。水１０００ｇ中の５ｇの成分（ａ）の溶液は、２０℃および１０１．３ｋＰａで、≧５０ｍＮ／ｍの動的表面張力を有することがある。動的表面張力は、気泡圧力張力計を用いて測定され、毛管によって液体中に形成される気泡の最大内部圧力が測定される。測定値は通常、或る特定の表面経時（泡の形成が開始してから最大圧力が発生するまでの時間）での表面張力に対応する。一実施形態では、気泡圧力張力計を用いて２０℃および１０１．３ｋＰａで動的表面張力を測定している間の表面経時は、５０ｍｓである。
【００１９】
対アニオンＡ−がスルフェート、タートレート、カーボネートなどの二価、またはホスフェートまたはシトレートなどの多価である実施形態では、必要な正電荷は、別の塩（Ａ）由来のカチオン、またはアルカリ金属カチオン、例えば、カリウム、または好ましくはナトリウムによって、または非置換のまたはＣ１〜Ｃ４−アルキルおよび／または２−ヒドロキシエチルで置換されたアンモニウムによって提供される。
【００２０】
Ｒ１が１個以上のカルボキシル基をもつ実施形態では、そのカルボキシル基は遊離ＣＯＯＨ基であるか、またはアルカリ、例えばカリウムまたは特にナトリウムで部分的にまたは完全に中和されているか、またはそのカルボキシル基は、例えば（Ｒ２）３Ｎ＋−（ＣＨ２）ｎ−（Ｏ−Ｘ）ｍ−ＯＨでエステル化されている。そのような実施形態は、それぞれのジカルボン酸またはトリカルボン酸のジエステルまたはトリエステルをもたらすこともある。モノエステルおよびジエステルの混合物、例えば酒石酸またはクエン酸のモノエステルとジエステルの混合物、およびクエン酸のジエステルとトリエステルの混合物も、可能である。
【００２１】
本発明の好ましい実施形態では、塩（Ａ）は、
（ＣＨ３）３Ｎ＋−（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ５      （Ａ１）−      （ＩＩ）
（式中、（Ａ１）−は、メタンスルホネート、タートレートおよびシトレートから選択され、
Ｒ５は、−ＣＨ２−Ｃ（ＯＨ）（ＣＯＯＸ２）−ＣＨ２−ＣＯＯＸ２および-ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＯＯＸ１から選択され、
Ｘ１は水素原子、アルカリ金属（特にナトリウム）、および（ＣＨ３）３Ｎ＋−（ＣＨ２）２−から選択され、そして
Ｘ２は同じまたは異なり、水素原子、アルカリ金属（特にナトリウム）および（ＣＨ３）３Ｎ＋−（ＣＨ２）２−から選択される）から選択される。好ましい実施形態では、Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ５および（Ａ１）−のエステル基は互いに対応する。
【００２２】
本発明の一実施形態では、本発明の組成物は、組成物全体に対して、０．５〜３０質量％、好ましくは０．５〜６質量％、より好ましくは１〜３質量％の範囲の塩（Ａ）を含有する。
【００２３】
本発明の一実施形態では、塩（Ａ）は不純物として化合物（Ａ’） 
（Ｒ２）３Ｎ＋−（ＣＨ２）ｎＣ（Ｒ３）（Ｒ４）−（Ｏ−Ｘ）ｍ−ＯＨ    Ｒ１−ＣＯＯ−
（式中、様々な可能性のあるＲ１、Ｒ２、Ｘ、ｎおよびｍは、対応する塩（Ａ）と同じである）を含有する。前記不純物は、合計で塩（Ａ）の５０モル％以下、好ましくは０．１〜２０モル％、さらにより好ましくは１〜１０モル％に達してよい。不純物（Ａ’）は塩（Ａ）の合成に由来することがあり、および精製方法によって除去されることがあるが、除去しないことが好ましい。
【００２４】
本発明の組成物は、両性界面活性剤から、および特にアニオン性界面活性剤および非イオン性界面活性剤（以下、それぞれ、両性界面活性剤（Ｂ）、アニオン性界面活性剤（Ｂ）および非イオン性界面活性剤（Ｂ）とも称する）から選択される少なくとも１種の界面活性剤（Ｂ）をさらに含有する。
【００２５】
適したアニオン性界面活性剤（Ｂ）の例としては、Ｃ８〜Ｃ１８−アルキルスルフェート、Ｃ８〜Ｃ１８−脂肪アルコールポリエーテルスルフェート、エトキシル化Ｃ４〜Ｃ１２−アルキルフェノールの硫酸半エステル（エトキシル化：エチレンオキシド１〜５０モル／モル）、Ｃ１２〜Ｃ１８−スルホ脂肪酸アルキルエステル、例えばＣ１２〜Ｃ１８−スルホ脂肪酸メチルエステル、さらにＣ１２〜Ｃ１８−アルキルスルホン酸およびＣ１０〜Ｃ１８−アルキルアリールスルホン酸、のアルカリ金属およびアンモニウム塩が挙げられる。好ましくは、前述した化合物のアルカリ金属塩、特に好ましくはナトリウム塩である。
【００２６】
アニオン性界面活性剤（Ｂ）の特定の例は、一般式（ＩＩＩ）
ＣｓＨ２ｓ＋１−Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｔ−ＳＯ３Ｍ        （ＩＩＩ）
（式中、
ｓは、１０〜１８、好ましくは１２〜１４の範囲の数であり、さらにより好ましくはｓ＝１２であり、
ｔは、１〜５、好ましくは２〜４の範囲の数であり、さらにより好ましくは３であり、
Ｍは、アルカリ金属から選択され、好ましくはカリウム、さらにより好ましくはナトリウムである）による化合物である。
【００２７】
界面活性剤（Ｂ）では、変数ｓおよびｔは平均数でよく、したがってそれら変数は必ずしも整数ではない一方、式（ＩＩＩ）による個々の分子では、ｓおよびｔは両方とも整数を表す。
【００２８】
適したアニオン性界面活性剤（Ｂ）のさらなる例としては、せっけん、例えば、ステアリン酸、オレイン酸、パルミチン酸のナトリウムまたはカリウム塩、エーテルカルボキシレート、およびアルキルエーテルホスフェートが挙げられる。
【００２９】
好ましい非イオン性界面活性剤（Ｂ）は、アルコキシル化アルコール、エチレンオキシドおよびプロピレンオキシドのジブロックおよびマルチブロックコポリマー、およびソルビタンとエチレンオキシドまたはプロピレンオキシドとの反応生成物、アルキルポリグリコシド（ＡＰＧ）、ヒドロキシアルキル混合エーテルおよびアミンオキシドである。
【００３０】
アルコキシル化アルコールおよびアルコキシル化脂肪アルコールの好ましい例は、例えば、一般式（ＩＶ）
【化１】
2021504546.tif 000002
（式中、
Ｒ６は、同一または異なり、水素原子および直鎖Ｃ１〜Ｃ１０−アルキルから選択され、好ましくは各場合とも同一でエチルであり、および特に好ましくは水素原子またはメチルであり、
Ｒ７は、分岐または直鎖のＣ８〜Ｃ２２−アルキル、例えばｎ−Ｃ８Ｈ１７、ｎ−Ｃ１０Ｈ２１、ｎ−Ｃ１２Ｈ２５、ｎ−Ｃ１４Ｈ２９、ｎ−Ｃ１６Ｈ３３またはｎ−Ｃ１８Ｈ３７から選択され、
Ｒ８は、Ｃ１〜Ｃ１０−アルキル、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ｓｅｃ−ペンチル、ネオペンチル、１，２−ジメチルプロピル、イソアミル、ｎ−ヘキシル、イソヘキシル、ｓｅｃ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、２−エチルヘキシル、ｎ−ノニル、ｎ−デシルまたはイソデシルから選択される）
の化合物である。
【００３１】
変数ｍおよびｘは、０〜３００の範囲にあり、ｎおよびｍの合計は少なくとも１、好ましくは３〜５０の範囲にある。好ましくは、ｍは１〜１００の範囲にあり、ｘは０〜３０の範囲にある。
【００３２】
一実施形態では、一般式（ＩＩＩ）の化合物は、ブロックコポリマーまたはランダムコポリマーであってよく、ブロックコポリマーが好ましい。
【００３３】
他の好ましいアルコキシル化アルコールの例は、例えば、一般式（Ｖ）
【化２】
2021504546.tif 000003
（式中、
Ｒ６は同一または異なり、水素原子および直鎖Ｃ１〜Ｃ１０−アルキルから選択され、好ましくは各場合とも同一でエチルであり、特に好ましくは水素原子またはメチルであり、
Ｒ９は分岐または直鎖のＣ６〜Ｃ２０−アルキル、特にｎ−Ｃ８Ｈ１７、ｎ−Ｃ１０Ｈ２１、ｎ−Ｃ１２Ｈ２５、ｎ−Ｃ１３Ｈ２７、ｎ−Ｃ１５Ｈ３１、ｎ−Ｃ１４Ｈ２９、ｎ−Ｃ１６Ｈ３３、ｎ−Ｃ１８Ｈ３７から選択され、
ａは、０〜１０の、好ましくは１〜６の範囲の数であり、
ｂは、１〜８０の、好ましくは４〜２０の範囲の数であり、
ｄは、０〜５０の、好ましくは４〜２５の範囲の数である）
の化合物である。
【００３４】
ａ＋ｂ＋ｄの合計は、好ましくは５〜１００の範囲、さらにより好ましくは９〜５０の範囲にある。
【００３５】
ヒドロキシアルキル混合エーテルの好ましい例は、一般式（ＶＩ）
【化３】
2021504546.tif 000004
（式中、様々な可能性のあるものは、以下のように定義する。
Ｒ６は、同一または異なり、水素原子および直鎖Ｃ１〜Ｃ１０−アルキルから選択され、好ましくは各場合とも同一でエチルあり、および特に好ましくは水素原子またはメチルであり、
Ｒ７は、分岐または直鎖のＣ８〜Ｃ２２−アルキル、例えば、イソ−Ｃ１１Ｈ２３、イソ−Ｃ１３Ｈ２７、ｎ−Ｃ８Ｈ１７、ｎ−Ｃ１０Ｈ２１、ｎ−Ｃ１２Ｈ２５、ｎ−Ｃ１４Ｈ２９、ｎ−Ｃ１６Ｈ３３またはｎ−Ｃ１８Ｈ３７から選択され、
Ｒ８は、Ｃ１〜Ｃ１８−アルキル、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ｓｅｃ−ペンチル、ネオペンチル、１，２−ジメチルプロピル、イソアミル、ｎ−ヘキシル、イソヘキシル、ｓｅｃ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、２−エチルヘキシル、ｎ−ノニル、ｎ−デシル、イソデシル、ｎ−ドデシル、ｎ−テトラデシル、ｎ−ヘキサデシル、およびｎ−オクタデシルから選択される）
の化合物である。
【００３６】
様々な可能性のあるｍおよびｘは、０〜３００の範囲にあり、ｎおよびｍの合計は、少なくとも１、好ましくは５〜５０の範囲にある。好ましくは、ｍは１〜１００の範囲にあり、ｎは０〜３０の範囲にある。
【００３７】
一般式（Ｖ）および（ＶＩ）の化合物はブロックコポリマーまたはランダムコポリマーであってよく、ブロックコポリマーが好ましい。
【００３８】
さらなる適した非イオン性界面活性剤は、エチレンオキシドおよびプロピレンオキシドから構成されるジブロックおよびマルチブロックコポリマーから選択される。さらなる適した非イオン性界面活性剤は、エトキシル化またはプロポキシル化ソルビタンエステルから選択される。アミンオキシドまたはアルキルポリグリコシド、特に直鎖Ｃ４〜Ｃ１８−アルキルポリグリコシドおよび分岐Ｃ８〜Ｃ１８−アルキルポリグルコシド、例えば一般平均式（ＶＩＩ）
【化４】
2021504546.tif 000005
（式中、
Ｒ１０は、Ｃ１〜Ｃ４−アルキル、特にエチル、ｎ−プロピルまたはイソプロピルであり、
Ｒ１１は、−（ＣＨ２）２−Ｒ１０であり、
Ｇ１は、４〜６個の炭素原子を有する単糖類から、特にグルコースおよびキシロースから選択され、
ｙは、１．１〜４の範囲にあり、ｙは平均値である）
の化合物も同様に適している。
【００３９】
非イオン性界面活性剤のさらなる例は、一般式（ＶＩＩＩ）および（ＩＸ）
【化５】
2021504546.tif 000006
の化合物であり、
ＡＯは、エチレンオキシド、プロピレンオキシドおよびブチレンオキシドから選択され、
ＥＯは、エチレンオキシド、ＣＨ２ＣＨ２−Ｏであり、
Ｒ１０は、Ｃ１〜Ｃ４−アルキル、特にエチル、ｎ−プロピルまたはイソプロピルであり、
Ｒ１２は、分岐または直鎖のＣ８〜Ｃ１８−アルキルから選択され、
Ａ３Ｏは、プロピレンオキシドおよびブチレンオキシドから選択され、
ｗは、１５〜７０の、好ましくは３０〜５０の範囲の数であり、
ｗ１およびｗ３は、１〜５の範囲の数であり、および
ｗ２は、１３〜３５の範囲の数である。
【００４０】
適したさらなる非イオン性界面活性剤の概要は、ＥＰ−Ａ０８５１０２３およびＤＥ−Ａ１９８１９１８７に見出すことができる。
【００４１】
２種以上の異なる非イオン性界面活性剤（Ｂ）の混合物も、存在してよい。
【００４２】
存在する他の界面活性剤は、両性（双性イオン）界面活性剤、アニオン性界面活性剤およびそれらの混合物から選択される。
【００４３】
両性界面活性剤（Ｂ）の例としては、使用条件下で同じ分子中に正電荷および負電荷をもつものが挙げられる。両性界面活性剤の好ましい例は、いわゆるベタイン型界面活性剤である。ベタイン型界面活性剤の多くの例は、１分子当たり、１個の四級化窒素原子および１個のカルボン酸基をもつ。両性界面活性剤の特に好ましい例は、コカミドプロピルベタイン（ラウラミドプロピルベタイン）である。
【００４４】
アミンオキシド界面活性剤の例は、一般式（Ｘ）
Ｒ１３Ｒ１４Ｒ１５Ｎ→Ｏ                  （Ｘ）
の化合物であり、式中、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、脂肪族、脂環式またはＣ２〜Ｃ４−アルキレンＣ１０〜Ｃ２０−アルキルアミド部分から互いに独立して選択される。好ましくは、Ｒ１２はＣ８〜Ｃ２０−アルキルまたはＣ２〜Ｃ４−アルキレンＣ１０〜Ｃ２０−アルキルアミドから選択され、Ｒ１３およびＲ１４は両方ともメチルである。
【００４５】
特に好ましい例は、ラウラミンオキシドと呼ばれることもある、ラウリルジメチルアミンオキシドである。さらなる特に好ましい例は、コカミドプロピルアミンオキシドと呼ばれることもある、コカミジルプロピルジメチルアミンオキシドである。
【００４６】
本発明の一実施形態において、本発明の組成物は、好ましくはアニオン性界面活性剤（Ｂ）、非イオン性界面活性剤（Ｂ）、両性界面活性剤（Ｂ）およびアミンオキシド界面活性剤、および前述の少なくとも２種の組み合わせから選択される界面活性剤（Ｂ）を、０．１〜６０質量％含有する。好ましい実施形態では、本発明の組成物は、アニオン性界面活性剤および少なくとも１種の非イオン性界面活性剤を、５〜３０質量％、例えば３〜２０質量％の範囲で含有する。
【００４７】
本発明の組成物は、周囲温度（２０℃）で液体である。好ましくは、本発明の組成物は周囲温度で安定な液体である。この文脈において、「安定」という用語は、そのような本発明の組成物が液体であり、２０日間の貯蔵後であっても、沈殿物形成の痕跡または濁りを示さないことを意味する。
【００４８】
本発明の一実施形態では、本発明の組成物は水性であり、通常は、水を５〜９５質量％含有し、例えば５〜３０質量％、より好ましくは５〜２５質量％、または２０〜７０質量％の範囲の水および０〜２０質量％の有機溶媒を含有する。５〜１５質量％の水を含有し、有意な量の有機溶媒を含有しない、例えば１質量％以下しか含有しないことが好ましい。
【００４９】
本発明の組成物は、アルカリ性であるか、または中性、またはわずかに酸性のｐＨ値（例えば６〜１４、好ましくは６．５〜１３、より好ましくは８〜１０．５、最も好ましくは８．５〜９．０）を示す。
【００５０】
本発明の一実施形態では、本発明の組成物はさらに、
（Ｃ）少なくとも１種の酵素（以下、酵素（Ｃ）とも称する）、例えばヒドロラーゼ（Ｃ）を含む。好ましい酵素（Ｃ）は、プロテアーゼ、アミラーゼ、およびリパーゼから選択され、以下、それぞれプロテアーゼ（Ｃ）、アミラーゼ（Ｃ）、またはリパーゼ（Ｃ）とも称する。
【００５１】
本発明の組成物中の酵素（Ｃ）は、特に長い寿命を示すことが見出された。本発明の組成物において特に有益である酵素（Ｃ）は、ヒドロラーゼ（ＥＣ３）から選択される。好ましい酵素（Ｃ）は、エステル結合に作用する酵素（Ｅ．Ｃ．３．１）、グリコシラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２）、およびペプチダーゼ（Ｅ．Ｃ．３．４）の群から選択される。エステル結合に作用する酵素（Ｅ．Ｃ．３．１）は、以下、それぞれリパーゼ（成分（ｂ））も指す。グリコシラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２）は、以下、アミラーゼ（Ｃ）およびセルラーゼ（Ｃ）のいずれかも指す。ペプチダーゼは、以下、プロテアーゼ（Ｃ）も指す。
【００５２】
本発明の文脈におけるヒドロラーゼ（Ｃ）は、本明細書においてアミノ酸配列とも呼ばれるポリペプチド配列により同定される。ポリペプチド配列は、酵素の「活性部位」を含む三次元構造を特定し、酵素の触媒活性を決定する。ポリペプチド配列は、配列番号によって識別される。世界知的所有権機関（ＷＩＰＯ）の標準ＳＴ．２５（１９９８年）によると、ここでのアミノ酸は、最初の文字が大文字または対応する１文字の、３文字コードを使用して表される。
【００５３】
本発明の文脈における酵素（Ｃ）は、親酵素および／またはバリアント酵素に関連し、これらは両方とも酵素活性を有する。酵素活性を有する酵素は、酵素的に活性であるか、または酵素的変換を発揮する。つまり、酵素は基質に作用し、これらを生成物に変換する。本明細書における「酵素」という用語は、酵素の不活性なバリアントを除外する。
【００５４】
「親酵素」とも呼ばれる親タンパク質または酵素の「親」配列は、例えば、１個以上のアミノ酸置換、挿入、欠失、またはそれらの組み合わせを配列に導入することによる、変化の導入のための開始配列であり、親配列の「バリアント」をもたらす。親酵素（または親配列）という用語には、（さらなる）変化を導入するための開始配列として使用される、野生型酵素（配列）および合成的に生成された配列（酵素）が含まれる。
【００５５】
「酵素バリアント」または「配列バリアント」または「バリアント酵素」という用語は、そのアミノ酸配列がその親酵素と或る特定の程度まで異なる酵素を指す。特に明記しない限り、「酵素活性を有する」バリアント酵素は、このバリアント酵素がそれぞれの親酵素と同じタイプの酵素活性を有することを意味する。
【００５６】
本発明の変形を説明する際に、以下のように説明される命名法を使用する。
【００５７】
アミノ酸置換は、親酵素の元のアミノ酸、続いてアミノ酸配列内の位置の番号、続いて置換されたアミノ酸を提供することによって記述する。
【００５８】
アミノ酸の欠失は、親酵素の元のアミノ酸、続いてアミノ酸配列内の位置の番号、続いて＊を提供することによって記述する。
【００５９】
アミノ酸の挿入は、親酵素の元のアミノ酸、続いてアミノ酸配列内の位置の番号、続いて元のアミノ酸とさらなるアミノ酸を提供することで記述する。例えば、グリシンの隣のリジンの位置１８０での挿入は、「Ｇｌｙ１８０ＧｌｙＬｙｓ」または「Ｇ１８０ＧＫ」と示される。
【００６０】
置換と挿入が同じ位置で起こる場合、これはＳ９９ＳＤ＋Ｓ９９Ａ、または短くＳ９９ＡＤと示される。既存のアミノ酸残基と同一のアミノ酸残基が挿入される場合、命名法の縮重が生じることが明確である。例えば、上記の例でグリシンの後にグリシンが挿入される場合、これはＧ１８０ＧＧで示される。
【００６１】
１つの位置に様々な変更を導入できる場合、様々な変更は、コンマによって分けられ、例えば、「Ａｒｇ１７０Ｔｙｒ，Ｇｌｕ」は、チロシンまたはグルタミン酸による位置１７０のアルギニンの置換を表す。あるいは、様々な変更または任意の置換は、括弧内に示される（例えば、Ａｒｇ１７０［Ｔｙｒ，Ｇｌｙ］またはＡｒｇ１７０｛Ｔｙｒ，Ｇｌｙ｝または短くＲ１７０［Ｙ，Ｇ］またはＲ１７０｛Ｙ，Ｇ｝、または長くＲ１７０Ｙ、Ｒ１７０Ｇ）。
【００６２】
酵素バリアントは、親酵素と比較したときのその配列同一性によって定義される。配列同一性は通常、「％配列同一性」または「％同一性」として提供される。配列同一性の計算では、最初の工程において、配列アラインメントを生成する必要がある。本発明によれば、ペアワイズグローバルアラインメントを生成する必要があり、これは、２つの配列がその全長にわたってアラインされなければならないことを意味し、通常、これは、アラインメントアルゴリズムと呼ばれる数学的アプローチを使用して生成される。
【００６３】
本発明の文脈において、アラインメントは、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈのアルゴリズムを使用することにより生成される（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９７９  ４８、第４４３〜４５３頁）。好ましくは、本発明の目的に対して、プログラム「ＮＥＥＤＬＥ」（Ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｏｐｅｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｓｕｉｔｅ（ＥＭＢＯＳＳ））を使用し、プログラムのデフォルトパラメータ（ｇａｐ  ｏｐｅｎ＝１０．０、ｇａｐ  ｅｘｔｅｎｄ＝０．５およびｍａｔｒｉｘ＝ＥＢＬＯＳＵＭ６２）を使用する。本発明によれば、％同一性の以下の計算が利用される。％同一性＝（同一残基／本発明のそれぞれの配列をその全長にわたって示しているアラインメント領域の長さ）・１００。
【００６４】
本発明の文脈において、酵素バリアントは、それぞれの親酵素のアミノ酸配列に対して少なくともｎ％同一であるアミノ酸配列として記述され、ｎは１０と１００との間の整数である。一実施形態では、バリアント酵素は、親酵素の全長アミノ酸配列と比較した場合、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であり、バリアント酵素は、酵素活性を有する。
【００６５】
酵素バリアントは、親酵素と比較したときのその配列類似性によって定義される。配列類似性は通常、「％配列類似性」または「％類似性」として提供される。％配列類似性は、アミノ酸の所定のセットが、例えば、そのサイズ、その疎水性、その電荷、または他の特性により、類似の特性を共有することを考慮に入れる。本明細書において、１種のアミノ酸の類似のアミノ酸との交換は、「保存的突然変異」と呼ぶ。本発明による％類似性の決定のために、以下を利用する。アミノ酸Ａは、アミノ酸Ｓに類似する。アミノ酸Ｄは、アミノ酸ＥおよびＮに類似する。アミノ酸Ｅは、アミノ酸ＤおよびＫおよびＱに類似する。アミノ酸Ｆは、アミノ酸ＷおよびＹに類似する。アミノ酸Ｈは、アミノ酸ＮおよびＹに類似する。アミノ酸Ｉは、アミノ酸ＬおよびＭおよびＶに類似する。アミノ酸Ｋは、アミノ酸ＥおよびＱおよびＲに類似する。アミノ酸Ｌは、アミノ酸ＩおよびＭおよびＶに類似する。アミノ酸Ｍは、アミノ酸ＩおよびＬおよびＶに類似する。アミノ酸Ｎは、アミノ酸ＤおよびＨおよびＳに類似する。アミノ酸Ｑは、アミノ酸ＥおよびＫおよびＲに類似する。アミノ酸Ｒは、アミノ酸ＫおよびＱに類似する。アミノ酸Ｓは、アミノ酸ＡおよびＮおよびＴに類似する。アミノ酸Ｔは、アミノ酸Ｓに類似する。アミノ酸Ｖは、アミノ酸ＩおよびＬおよびＭに類似する。アミノ酸Ｗは、アミノ酸ＦおよびＹに類似する。アミノ酸Ｙは、アミノ酸ＦおよびＨおよびＷに類似する。
【００６６】
保存的アミノ酸置換は、酵素などの機能的タンパク質のポリペプチド配列の配列全長にわたって生じてもよい。一実施形態では、そのような突然変異は、酵素の機能的ドメインに関与していない。一実施形態では、保存的突然変異は、酵素の触媒中心に関与していない。
【００６７】
保存的突然変異を考慮に入れるため、２個のアミノ酸配列の類似性についての値を、％同一性の計算に使用する同じアラインメントから計算してもよい。本発明によれば、％類似性の以下の計算が利用される。％類似性＝［（同一残基＋類似残基）／その全長にわたって本発明のそれぞれの配列（複数可）を示しているアラインメント領域の長さ］＊１００。
【００６８】
本発明の文脈において、酵素バリアントは、それぞれの親配列と少なくともｍ％類似しているアミノ酸配列として記述され、「ｍ」は１０と１００との間の整数である。一実施形態では、バリアント酵素は、親酵素の全長ポリペプチド配列と比較した場合、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％類似し、バリアント酵素は酵素活性を有する。
【００６９】
「酵素活性」は、酵素が発揮する触媒効果を意味し、通常、酵素１ミリグラムあたりの単位（比活性）として表され、酵素１分子あたり１分あたりに変換される基質の分子（分子活性）に関連する。
【００７０】
前記酵素バリアントが、それぞれの親酵素の少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％の酵素活性を示す場合、バリアント酵素は本発明による酵素活性を有する。
【００７１】
一実施形態では、本発明の組成物は、少なくとも１種のプロテアーゼ（Ｃ）を含む。タンパク質分解活性を有する酵素（Ｃ）は、本発明の文脈では「プロテアーゼ」またはペプチダーゼと呼ばれる。このような酵素は、ＥＣ３．４クラスのメンバーである。
【００７２】
プロテアーゼ（Ｃ）は、アミノペプチダーゼ（ＥＣ３．４．１１）、ジペプチダーゼ（ＥＣ３．４．１３）、ジペプチジル−ペプチダーゼおよびトリペプチジル−ペプチダーゼ（ＥＣ３．４．１４）、ペプチジル−ジペプチダーゼ（ＥＣ３．４．１５）、セリン型カルボキシペプチダーゼ（ＥＣ３．４．１６）、メタロカルボキシペプチダーゼ（ＥＣ３．４．１７）、システイン型カルボキシペプチダーゼ（ＥＣ３．４．１８）、オメガペプチダーゼ（ＥＣ３．４．１９）、セリンエンドペプチダーゼ（ＥＣ３．４．２１）、システインエンドペプチダーゼ（ＥＣ３．４．２２）、アスパラギン酸エンドペプチダーゼ（ＥＣ３．４．２３）、メタロ−エンドペプチダーゼ（ＥＣ３．４．２４）、トレオニンエンドペプチダーゼ（ＥＣ３．４．２５）、または未知の触媒機構のエンドペプチダーゼ（ＥＣ３．４．９９）としてさらに分類される。
【００７３】
プロテアーゼ（Ｃ）は、任意の種類のエンドペプチダーゼまたは任意の種類のエンドペプチダーゼの混合物でよい。一実施形態では、本発明によるプロテアーゼはセリンプロテアーゼ（ＥＣ３．４．２１）から選択される。
【００７４】
セリンプロテアーゼまたはセリンペプチダーゼは、触媒反応中に基質と共有結合付加体を形成するセリンを触媒活性部位に有することを特徴とする。本発明の文脈におけるセリンプロテアーゼは、キモトリプシン（例えばＥＣ３．４．２１．１）、エラスターゼ（例えばＥＣ３．４．２１．３６）、エラスターゼ（例えばＥＣ３．４．２１．３７またはＥＣ３．４．２１．７１）、グランザイム（例えばＥＣ３．４．２１．７８またはＥＣ３．４．２１．７９）、カリクレイン（例えばＥＣ３．４．２１．３４、ＥＣ３．４．２１．３５、ＥＣ３．４．２１．１１８、またはＥＣ３．４．２１．１１９）、プラスミン（例えばＥＣ３．４．２１．７）、トリプシン（例えばＥＣ３．４．２１．４）、トロンビン（例えばＥＣ３．４．２１．５）、およびズブチリシンからなる群から選択される。ズブチリシンはサブチロペプチダーゼとしても既知であり、例えばＥＣ３．４．２１．６２としても知られ、後者はこれ以降「ズブチリシン」とも称する。
【００７５】
プロテアーゼ（Ｃ）の結晶学的構造により、活性部位は、一般には、隣接する構造ドメイン間の分子表面の溝に位置し、基質特異性が、切断可能な結合の加水分解を担う触媒部位の片側または両側の溝に沿って配置された結合部位の特性に支配されることが示される。よってプロテアーゼ（Ｃ）の特異性は、各特異性の副次部位が単一のアミノ酸残基の側鎖を収容することができるという概念モデルを使用することで、説明が可能である。部位は、触媒部位から基質のＮ末端に向かってＳ１、Ｓ２．．．Ｓｎ、およびＣ末端に向かってＳ１’、Ｓ２’．．．Ｓｎ’と番号付けされる。それらが収容する残基は、それぞれＰ１、Ｐ２．．．Ｐｎ、およびＰ１’、Ｐ２’．．．Ｐｎ’と番号付けされる。
【００７６】
【表１】
2021504546.tif 000007
【００７７】
この表現において、酵素の触媒部位には「＊」と印を付し、切断されたペプチド結合（切断可能な結合）は記号「＋」で示す。
【００７８】
一般に、プロテアーゼ活性（タンパク質分解活性）の３つの主な型は、Ｐ１でＡｒｇ（Ｎ）またはＬｙｓ（Ｋ）に続いてアミド基質の切断がある場合はトリプシン様であり、Ｐ１で疎水性アミノ酸の１個に続いて切断が起こる場合はキモトリプシン様であり、およびＰ１でＡｌａ（Ａ）に続く切断ではエラスターゼ様である。
【００７９】
暫定的にズブチラーゼとして指定されたセリンプロテアーゼのサブグループが、Ｓｉｅｚｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１），Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．４：７１９−７３７およびＳｉｅｚｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７），Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ６：５０１−５２３によって提案されている。それらは、ズブチリシン様プロテアーゼと以前は称されていたセリンプロテアーゼの１７０を超えるアミノ酸配列のホモロジー分析によって定義される。ズブチリシンは、以前はグラム陽性細菌または真菌によって産生されるセリンプロテアーゼとしてしばしば定義されていたが、現在はＳｉｅｚｅｎ  ｅｔ  ａｌ．によるとズブチラーゼのサブグループである。多種多様なズブチラーゼが同定されており、多数のズブチラーゼのアミノ酸配列が決定されている。そのようなズブチラーゼおよびそれらのアミノ酸配列のより詳細な記載については、Ｓｉｅｚｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７），Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ６：５０１−５２３を参照されたい。ズブチラーゼは、６つの細区分、すなわちズブチリシン科、テルミターゼ科、プロテイナーゼＫ科、ランチビオティックペプチダーゼ科、ケキシン科およびピロリシン科に分割することができる。
【００８０】
ズブチラーゼのサブグループは、ＭＥＲＯＰＳデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｍｅｒｏｐｓ．ｓａｎｇｅｒ．ａｃ．ｕｋ）により定義されるように、ファミリーＳ８からのセリンプロテアーゼであるズブチリシンである。ペプチダーゼファミリーＳ８は、セリンエンドペプチダーゼズブチリシンおよびその相同体を含有する。サブファミリーＳ８Ａでは、活性部位残基がモチーフＡｓｐ−Ｔｈｒ／Ｓｅｒ−Ｇｌｙ（クラン（clan）ＡＡ中のアスパラギン酸エンドペプチダーゼのファミリーの配列モチーフに類似している）、Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−ＨｉｓおよびＧｌｙ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｘａａ−Ｐｒｏにおいてしばしば生じる。
【００８１】
ファミリーＳ８、サブファミリーＡの顕著なメンバーは以下のとおりである。
【００８２】
【表２】
2021504546.tif 000008
【００８３】
セリンプロテアーゼのズブチリシン関連クラスは、それらをセリンプロテアーゼのキモトリプシン関連クラスと区別する、触媒三残基を定義する一般のアミノ酸配列を共有する。セリンプロテアーゼと関連するズブチリシンおよびキモトリプシンの両方は、アスパルテート、ヒスチジンおよびセリンを含む触媒三残基を有する。
【００８４】
プロテアーゼ（Ｃ）と関連するズブチリシンにおいて、アミノ末端からカルボキシ末端まで読むと、これらのアミノ酸の相対的な順序は、アスパルテート−ヒスチジン−セリンである。しかしながら、プロテアーゼと関連するキモトリプシンにおいて、相対的な順序はヒスチジン−アスパルテート−セリンである。よってここでは、ズブチリシンは、プロテアーゼと関連するズブチリシンの触媒三残基を有するセリンプロテアーゼを指す。例としては、ＷＯ８９／０６２７６およびＥＰ０２８３０７５、ＷＯ８９／０６２７９、ＷＯ８９／０９８３０、ＷＯ８９／０９８１９、ＷＯ９１／０６６３７およびＷＯ９１／０２７９２に記載されているズブチリシンが挙げられる。
【００８５】
ズブチリシン型（ＥＣ３．４．２１．６２）の親プロテアーゼおよびバリアントは、細菌プロテアーゼである。前述の細菌プロテアーゼは、グラム陽性細菌ポリペプチドであり、例えばバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、クロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、エンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、ジオバチルス（Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）、オセアノバチルス（Ｏｃｅａｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）またはストレプトマイセスプロテアーゼ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｐｒｏｔｅａｓｅ）、またはグラム陰性細菌ポリペプチド、例えばカンピロバクター（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）、大腸菌（Ｅ．  ｃｏｌｉ）、フラボバクテリウム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、フソバクテリウム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ヘリコバクター（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ）、リョーバクター（ｌｌｙｏｂａｃｔｅｒ）、ナイセリア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）またはウレアプラズマ（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ）プロテアーゼである。それらは非特異的エンドペプチダーゼとして作用する、すなわち、それらは任意のペプチド結合を加水分解する。
【００８６】
市販のプロテアーゼ酵素としては、商品名Ａｌｃａｌａｓｅ（登録商標）、Ｂｌａｚｅ（登録商標）、Ｄｕｒａｌａｓｅ（商標）、Ｄｕｒａｚｙｍ（商標）、Ｒｅｌａｓｅ（登録商標）、Ｒｅｌａｓｅ（登録商標）Ｕｌｔｒａ、Ｓａｖｉｎａｓｅ（登録商標）、Ｓａｖｉｎａｓｅ（登録商標）Ｕｌｔｒａ、Ｐｒｉｍａｓｅ（登録商標）、Ｐｏｌａｒｚｙｍｅ（登録商標）、Ｋａｎｎａｓｅ（登録商標）、Ｌｉｑｕａｎａｓｅ（登録商標）、Ｌｉｑｕａｎａｓｅ（登録商標）Ｕｌｔｒａ、Ｏｖｏｚｙｍｅ（登録商標）、Ｃｏｒｏｎａｓｅ（登録商標）、Ｃｏｒｏｎａｓｅ（登録商標）Ｕｌｔｒａ、Ｎｅｕｔｒａｓｅ（登録商標）、Ｅｖｅｒｌａｓｅ（登録商標）およびＥｓｐｅｒａｓｅ（登録商標）（ＮｏｖｏｚｙｍｅｓＡ／Ｓ）で販売されているもの、商品名Ｍａｘａｔａｓｅ（登録商標）、Ｍａｘａｃａｌ（登録商標）、Ｍａｘａｐｅｍ（登録商標）、Ｐｕｒａｆｅｃｔ（登録商標）、Ｐｕｒａｆｅｃｔ（登録商標）Ｐｒｉｍｅ、Ｐｕｒａｆｅｃｔ  ＭＡ（登録商標）、Ｐｕｒａｆｅｃｔ  Ｏｘ（登録商標）、Ｐｕｒａｆｅｃｔ  ＯｘＰ（登録商標）、Ｐｕｒａｍａｘ（登録商標）、Ｐｒｏｐｅｒａｓｅ（登録商標）、ＦＮ２（登録商標）、ＦＮ３（登録商標）、ＦＮ４（登録商標）、Ｅｘｃｅｌｌａｓｅ（登録商標）、Ｅｒａｓｅｒ（登録商標）、Ｕｌｔｉｍａｓｅ（登録商標）、Ｏｐｔｉｃｌｅａｎ（登録商標）、Ｅｆｆｅｃｔｅｎｚ（登録商標）、Ｐｒｅｆｅｒｅｎｚ（登録商標）およびＯｐｔｉｍａｓｅ（登録商標）（Ｄａｎｉｓｃｏ／ＤｕＰｏｎｔ）、Ａｘａｐｅｍ（商標）（Ｇｉｓｔ−Ｂｒｏｃａｓｅｓ  Ｎ．Ｖ．）で販売されているもの、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｅｎｔｕｓアルカリプロテアーゼ（ＢＬＡＰ；ＵＳ５，３５２，６０４の図２９で示される配列）およびそのバリアントおよびＫａｏからのＫＡＰ（バチルス・アルカロフィルス・ズブチリシン（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ））が挙げられる。
【００８７】
本発明の一態様では、親酵素およびバリアントは、バチルス・アルカロフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｌｃａｌｏｐｈｉｌｕｓ）、バチルス・アミロリクエファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、バチルス・ブレビス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ）、バチルス・サークランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｉｒｃｕｌａｎｓ）、バチルス・クラウジ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｌａｕｓｉｉ）、バチルス・コアグランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、バチルス・フィルマス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｉｒｍｕｓ）、バチルス・ギブソニ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｇｉｂｓｏｎｉｉ）、バチルス・ラウタス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌａｕｔｕｓ）、バチルス・レンタス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｅｎｔｕｓ）、バチルス・リケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、バチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）、バチルス・パミラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｕｍｉｌｕｓ）、バチルス・スファエリクス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ）、バチルス・ステアロサーモフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、バチルス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、またはバチルス・チュリンジエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）プロテアーゼである。
【００８８】
本発明の一実施形態では、ズブチラーゼは、以下から選択される：
・  バチルス・アミロリクエファシエンスＢＰＮ’からのズブチリシン（Ｖａｓａｎｔｈａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．第１５９巻、８１１−８１９頁およびＪＡ  Ｗｅｌｌｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９８３）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、第１１巻、７９１１−７９２５頁に記載されている）、
・  バチルス・リケニホルミスからのズブチリシン（ズブチリシンカールスバーグ；ＥＬ  Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．（１９６８），Ｊ．Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ、第２４３巻、２１８４−２１９１頁、およびＪａｃｏｂｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５），Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、第１３巻、８９１３−８９２６頁に開示されている）、
・  ズブチリシンＰＢ９２（アルカリプロテアーゼＰＢ９２の元の配列はＥＰ２８３０７５Ａ２に記載されている）
・  ＧＢ１２４３７８４で開示されているズブチリシン１４７および/または３０９（Ｅｓｐｅｒａｓｅ（登録商標）、Ｓａｖｉｎａｓｅ（登録商標）)
・  ＷＯ９１／０２７９２で開示されているバチルス・レンタスからの、例えばバチルス・レンタスＤＳＭ５４８３からのズブチリシン、またはＷＯ９５／２３２２１に記載されているバチルス・レンタスＤＳＭ５４８３のバリアント、
・  ＤＥ１００６４９８３で開示されているバチルス・アルカロフィルス（ＤＳＭ１１２３３）からのズブチリシン、
・  ＷＯ２００３／０５４１８４で開示されているバチルス・ギブソニ（ＤＳＭ１４３９１）からのズブチリシン、
・  ＷＯ２００３／０５６０１７で開示されているバチルスｓｐ．（ＤＳＭ１４３９０）からのズブチリシン、
・  ＷＯ２００３／０５５９７４で開示されているバチルスｓｐ．（ＤＳＭ１４３９２）からのズブチリシン、
・  ＷＯ２００３／０５４１８４で開示されているバチルス・ギブソニ（ＤＳＭ１４３９３）からのズブチリシン、
・  ＷＯ２００５／０６３９７４に記載されている配列番号：４を有するズブチリシン、またはそれと少なくとも４０％同一でタンパク質分解活性を有するズブチリシン、
・  ＷＯ２００５／１０３２４４に記載されている配列番号：４を有するズブチリシン、またはそれと少なくとも８０％同一でタンパク質分解活性を有するズブチリシン、
・  ＷＯ２００５／１０３２４４に記載されている配列番号：７を有するズブチリシン、またはそれと少なくとも８０％同一でタンパク質分解活性を有するズブチリシン、
・  出願ＤＥ１０２００５０２８２９５．４に記載されている配列番号：２を有するズブチリシン、またはそれと少なくとも６６％同一でタンパク質分解活性を有するズブチリシン。
【００８９】
本発明による有用なプロテアーゼ（Ｃ）の例は、ＷＯ９２／１９７２９、ＷＯ９５／２３２２１、ＷＯ９６／３４９４６、ＷＯ９８／２０１１５、ＷＯ９８／２０１１６、ＷＯ９９／１１７６８、ＷＯ０１／４４４５２、ＷＯ０２／０８８３４０、ＷＯ０３／００６６０２、ＷＯ２００４／０３１８６、ＷＯ２００４／０４１９７９、ＷＯ２００７／００６３０５、ＷＯ２０１１／０３６２６３、ＷＯ２０１１／０３６２６４、およびＷＯ２０１１／０７２０９９に記載されているバリアントを含む。適した例は、特に、タンパク質分解活性を有する、ＥＰ１９２１１４７に記載されている配列番号：２２に由来するズブチリシンプロテアーゼのプロテアーゼバリアント（バチルス・レンタスＤＳＭ５４８３からの成熟アルカリプロテアーゼの配列である）で、アミノ酸置換を次の位置の１個以上で有するものを含む：３、４、９、１５、２４、２７、３３、３６、５７、６８、７６、７７、８７、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０６、１１８、１２０、１２３、１２８、１２９、１３０、１３１、１５４、１６０、１６７、１７０、１９４、１９５、１９９、２０５、２０６、２１７、２１８、２２２、２２４、２３２、２３５、２３６、２４５、２４８、２５２および２７４（ＢＰＮ’の番号付けによる）。一実施形態では、そのようなズブチリシンプロテアーゼは、Ａｓｐ３２、Ｈｉｓ６４およびＳｅｒ２２１の位置（ＢＰＮ’の番号付けによる）で突然変異していない。
【００９０】
一実施形態では、ズブチリシンはＥＰ１９２１１４７に記載されている配列番号：２２を有し、またはそれと少なくとも８０％同一でタンパク質分解活性を有するズブチリシンである。一実施形態では、ズブチリシンは、ＥＰ１９２１１４７に記載されている配列番号：２２と少なくとも８０％同一であり、アミノ酸グルタミン酸（Ｅ）、またはアスパラギン酸（Ｄ）、またはアスパラギン（Ｎ）、またはグルタミン（Ｑ）、またはアラニン（Ａ）、またはグリシン（Ｇ）、またはセリン（Ｓ）を１０１位（ＢＰＮ’の番号付けによる）に有することを特徴とし、タンパク質分解活性を有する。一実施形態では、ズブチリシンは、ＥＰ１９２１１４７に記載されている配列番号：２２と少なくとも８０％同一であり、アミノ酸グルタミン酸（Ｅ）、またはアスパラギン酸（Ｄ）を１０１位（ＢＰＮ’の番号付けによる）に有することを特徴とし、タンパク質分解活性を有する。そのようなズブチリシンバリアントは、１０１位、例えばＲ１０１ＥまたはＲ１０１Ｄにアミノ酸置換を単独で、または３、４、９、１５、２４、２７、３３、３６、５７、６８、７６、７７、８７、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０６、１１８、１２０、１２３、１２８、１２９、１３０、１３１、１５４、１６０、１６７、１７０、１９４、１９５、１９９、２０５、２０６、２１７、２１８、２２２、２２４、２３２、２３５、２３６、２４５、２４８、２５２および／または２７４位（ＢＰＮ’の番号付けによる）の１個以上の置換との組み合わせで含み、タンパク質分解活性を有する。
【００９１】
別の実施形態では、ズブチリシンは、ＥＰ１９２１１４７に記載されている配列番号：２２と少なくとも８０％同一であり、少なくとも以下のアミノ酸（ＢＰＮ’の番号付けによる）を含むことを特徴とし、タンパク質分解活性を有する：
（ａ）３位のトレオニン（３Ｔ）
（ｂ）４位のイソロイシン（４Ｉ）
（ｃ）６３位のアラニン、スレオニンまたはアルギニン（６３Ａ、６３Ｔ、または６３Ｒ）
（ｄ）１５６位のアスパラギン酸またはグルタミン酸（１５６Ｄまたは１５６Ｅ）
（ｅ）１９４位のプロリン（１９４Ｐ）
（ｆ）１９９位のメチオニン（１９９Ｍ）
（ｇ）２０５位のイソロイシン（２０５Ｉ）
（ｈ）２１７位のアスパラギン酸、グルタミン酸またはグリシン（２１７Ｄ、２１７Ｅまたは２１７Ｇ）
（ｉ）（ａ）〜（ｈ）による２種以上のアミノ酸の組み合わせ。
【００９２】
別の実施形態では、ズブチリシンは、ＥＰ１９２１１４７に記載されている配列番号：２２と少なくとも８０％同一であり、１種のアミノ酸（（ａ）〜（ｈ）による）または（ｉ）による組合せを、アミノ酸１０１Ｅ、１０１Ｄ、１０１Ｎ、１０１Ｑ、１０１Ａ、１０１Ｇ、または１０１Ｓ（ＢＰＮ’の番号付けによる）と一緒に含むことを特徴とし、タンパク質分解活性を有する。
【００９３】
一実施形態では、ズブチリシンは、ＥＰ１９２１１４７に記載されている配列番号：２２と少なくとも８０％同一であり、突然変異体（ＢＰＮ’の番号付けによる）Ｒ１０１Ｅ、またはＳ３Ｔ＋Ｖ４Ｉ＋Ｖ２０５Ｉ、またはＳ３Ｔ＋Ｖ４Ｉ＋Ｖ１９９Ｍ＋Ｖ２０５Ｉ＋Ｌ２１７Ｄを含むことを特徴とし、タンパク質分解活性を有する。
【００９４】
別の実施形態では、ズブチリシンは、ＥＰ１９２１１４７に記載されている配列番号：２２と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含み、Ｒ１０１ＥおよびＳ３Ｔ、Ｖ４Ｉ、およびＶ２０５Ｉ（ＢＰＮ’の番号付けによる）を含むことをさらに特徴とし、タンパク質分解活性を有する。
【００９５】
別の実施形態では、ズブチリシンは、ＥＰ１９２１１４７に記載されている配列番号：２２と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含み、Ｒ１０１Ｅと、Ｓ１５６Ｄ、Ｌ２６２Ｅ、Ｑ１３７Ｈ、Ｓ３Ｔ、Ｒ４５Ｅ、Ｄ、Ｑ、Ｐ５５Ｎ、Ｔ５８Ｗ、Ｙ、Ｌ、Ｑ５９Ｄ、Ｍ、Ｎ、Ｔ、Ｇ６１Ｄ、Ｒ、Ｓ８７Ｅ、Ｇ９７Ｓ、Ａ９８Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｓ１０６Ａ、Ｗ、Ｎ１１７Ｅ、Ｈ１２０Ｖ、Ｄ、Ｋ、Ｎ、Ｓ１２５Ｍ、Ｐ１２９Ｄ、Ｅ１３６Ｑ、Ｓ１４４Ｗ、Ｓ１６１Ｔ、Ｓ１６３Ａ、Ｇ、Ｙ１７１Ｌ、Ａ１７２Ｓ、Ｎ１８５Ｑ、Ｖ１９９Ｍ、Ｙ２０９Ｗ、Ｍ２２２Ｑ、Ｎ２３８Ｈ、Ｖ２４４Ｔ、Ｎ２６１Ｔ、ＤおよびＬ２６２Ｎ、Ｑ、Ｄ（ＷＯ２０１６／０９６７１１の記載およびＢＰＮ’の番号付けによる）からなる群から選択される１種以上の置換とを含むことをさらに特徴とし、タンパク質分解活性を有する。
【００９６】
ズブチリシンバリアントについてのパーセント同一性は、上に開示したように計算される。それぞれの親配列に対して少なくともｎ％同一である上に開示したズブチリシンバリアント酵素は、ｎが少なくとも４０〜１００であるバリアントを含む。上で示した利用可能な％同一性値に応じて、一実施形態でズブチリシンバリアントはタンパク質分解活性を有し、親酵素の全長ポリペプチド配列と比較した場合、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一である。
【００９７】
別の実施形態では、本発明は、それぞれのズブチリシンプロテアーゼの機能的ドメインに関与していない保存的突然変異を含むズブチリシンバリアントに関する。上で示した利用可能な％同一性値に応じて、この実施形態のズブチリシンバリアントは、タンパク質分解活性を有し、親酵素の全長ポリペプチド配列と比較した場合、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％類似する。
【００９８】
セリンプロテアーゼを含む本発明によるプロテアーゼは、「タンパク質分解活性」または「プロテアーゼ活性」を有する。この特性は、タンパク質含有基質、例えば、カゼイン、ヘモグロビン及びＢＳＡに対するプロテアーゼの加水分解活性（ポリペプチド鎖中でアミノ酸を結び付けているペプチド結合の加水分解を意味する、タンパク質分解）と関連する。定量的には、タンパク質分解活性は、所定の時間経過におけるプロテアーゼまたはタンパク質分解酵素によるタンパク質の分解の速度と関連する。タンパク質分解活性を分析する方法は、文献でよく知られている（例えば、Ｇｕｐｔａ  ｅｔ  ａｌ．（２００２），Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．６０：３８１−３９５を参照）。タンパク質分解活性自体は、スクシニル−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ｐ−ニトロアニリド（Ｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡ、短くＡＡＰＦ；例えば、ＤｅｌＭａｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９７９），Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ９９、３１６−３２０を参照）を使用することによって決定することができる。基質ｐＮＡが、タンパク質分解切断によって基質分子から切断され、結果として、ＯＤ４０５を測定することによって定量することができる黄色の遊離ｐＮＡの放出をもたらすためである。
【００９９】
前記プロテアーゼバリアントが、それぞれの親プロテアーゼの少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％のタンパク質分解活性を示す場合、プロテアーゼバリアントはタンパク質分解活性を有する。
【０１００】
好ましくは、本発明で使用されるズブチリシンプロテアーゼのｐＩ値（等電点）は、ｐＨ７．０〜ｐＨ１０．０、好ましくはｐＨ８．０〜ｐＨ９．５の範囲にある。
【０１０１】
リパーゼおよびクチナーゼ
一実施形態では、本発明の組成物は、少なくとも１種のリパーゼ（Ｃ）を含む。「リパーゼ」、「脂肪分解酵素」、「脂質エステラーゼ」はすべて、ＥＣクラス３．１．１の酵素（「カルボン酸エステルヒドロラーゼ」）を指す。そのような酵素（Ｃ）は、リパーゼ活性（または脂肪分解活性；トリアシルグリセロールリパーゼ、ＥＣ３．１．１．３）、クチナーゼ活性（ＥＣ３．１．１．７４；クチナーゼ活性を有する酵素は、本明細書においてクチナーゼと呼ぶ）、ステロールエステラーゼ活性（ＥＣ３．１．１．１３）及び／またはワックス−エステルヒドロラーゼ活性（ＥＣ３．１．１．５０）を有してもよい。リパーゼは、細菌または真菌起源のものを含む。
【０１０２】
市販のリパーゼ（Ｃ）としては、商品名Ｌｉｐｏｌａｓｅ（商標）、Ｌｉｐｅｘ（商標）、Ｌｉｐｏｌｅｘ（商標）及びＬｉｐｏｃｌｅａｎ（商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ａ／Ｓ）、Ｌｕｍａｆａｓｔ（当初はＧｅｎｅｎｃｏｒから）及びＬｉｐｏｍａｘ（Ｇｉｓｔ−Ｂｒｏｃａｄｅｓ／現在はＤＳＭ）で販売されているものが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０３】
本発明の一態様では、適したリパーゼは、以下から選択される。
【０１０４】
・  フミコラ（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）（同義語サーモマイセス（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ））由来、例えば、ＥＰ２５８０６８、ＥＰ３０５２１６、ＷＯ９２／０５２４９及びＷＯ２００９／１０９５００に記載されるＨ．ラヌギノサ（Ｈ．ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ）（Ｔ．ラヌギノスス（Ｔ．ｌａｎｕｇｉｎｏｓｕｓ））由来、またはＷＯ９６／１３５８０に記載されるＨ．インソレンス（Ｈ．ｉｎｓｏｌｅｎｓ）由来のリパーゼ
・  ＷＯ９２／０５２４９に記載されるリゾムコール・ミーヘイ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ）由来のリパーゼ
・  シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）（これらのいくつかは現在、バークホルデリア（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ）に改名されている）の株由来、例えば、Ｐ．アルカリゲネス（Ｐ．ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）またはＰ．シュードアルカリゲネス（Ｐ．ｐｓｅｕｄｏａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）（ＥＰ２１８２７２、ＷＯ９４／２５５７８、ＷＯ９５／３０７４４、ＷＯ９５／３５３８１、ＷＯ９６／００２９２）、Ｐ．セパシア（Ｐ．ｃｅｐａｃｉａ）（ＥＰ３３１３７６）、Ｐ．スタッツェリ（Ｐ．ｓｔｕｔｚｅｒｉ）（ＧＢ１３７２０３４）、Ｐ．フルオレッセンス（Ｐ．ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）、シュードモナス属の種（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐ．）株ＳＤ７０５（ＷＯ９５／０６７２０及びＷＯ９６／２７００２）、Ｐ．ウィスコンシネンシス（Ｐ．ｗｉｓｃｏｎｓｉｎｅｎｓｉｓ）（ＷＯ９６／１２０１２）、シュードモナス・メンドシナ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｍｅｎｄｏｃｉｎａ）（ＷＯ９５／１４７８３）、Ｐ．グルマエ（Ｐ．ｇｌｕｍａｅ）（ＷＯ９５／３５３８１、ＷＯ９６／００２９２）由来のリパーゼ
・  ストレプトマイセス・グリセウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｇｒｉｓｅｕｓ）（ＷＯ２０１１／１５０１５７）及びＳ．プリスチナエスピラリス（Ｓ．ｐｒｉｓｔｉｎａｅｓｐｉｒａｌｉｓ）（ＷＯ２０１２／１３７１４７）由来のリパーゼ、ＧＤＳＬ型ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）リパーゼ（ＷＯ２０１０／０６５４５５）
・  ＷＯ２０１１／０８４４１２に開示されるサーモビフィダ・フスカ（Ｔｈｅｒｍｏｂｉｆｉｄａ  ｆｕｓｃａ）由来のリパーゼ
・  ＷＯ２０１１／０８４４１７に開示されるゲオバチルス・ステアロサーモフィルス（Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）由来のリパーゼ
・  バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）リパーゼ、例えば、ＷＯ００／６００６３に開示されるもの、Ｄａｒｔｏｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２），Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ，１１３１，２５３−３６０またはＷＯ２０１１／０８４５９９に開示されるＢ．ズブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、Ｂ．ステアロサーモフィルス（Ｂ．ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）（ＪＰ  Ｓ６４−０７４９９２）またはＢ．プミルス（Ｂ．ｐｕｍｉｌｕｓ）（ＷＯ９１／１６４２２）由来のリパーゼ
・  ＷＯ９４／０１５４１に開示されるカンジダ・アンタークティカ（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｎｔａｒｃｔｉｃａ）由来のリパーゼ
・  シュードモナス・メンドシナ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｍｅｎｄｏｃｉｎａ）（ＵＳ５３８９５３６、ＷＯ８８／０９３６７）由来のクチナーゼ
・  マグナポルテ・グリセア（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ  ｇｒｉｓｅａ）（ＷＯ２０１０／１０７５６０）由来のクチナーゼ
・  ＷＯ９０／０９４４６、ＷＯ００／３４４５０及びＷＯ０１／９２５０２に開示されるフサリウム・ソラニ・ピシ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｏｌａｎｉ  ｐｉｓｉ）由来のクチナーゼ
・  ＷＯ００／３４４５０及びＷＯ０１／９２５０２に開示されるフミコラ・ラヌギノサ（Ｈｕｍｉｃｏｌａ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ）由来のクチナーゼ
適したリパーゼ（Ｃ）はまた、アシルトランスフェラーゼまたはペルヒドロラーゼと称されるもの、例えば、カンジダ・アンタークティカ（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｎｔａｒｃｔｉｃａ）リパーゼＡ（ＷＯ２０１０／１１１１４３）に対する相同性を有するアシルトランスフェラーゼ、マイコバクテリウム・スメグマチス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｍｅｇｍａｔｉｓ）（ＷＯ２００５／０５６７８２）由来のアシルトランスフェラーゼ、ＣＥ７ファミリー（ＷＯ２００９／６７２７９）由来のペルヒドロラーゼ、及びＭ．スメグマチス（Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓ）ペルヒドロラーゼのバリアント、特にＳ５４Ｖバリアント（ＷＯ２０１０／１０００２８）を含む。
【０１０５】
適したリパーゼは、脂肪分解活性を有する上記リパーゼ及び／またはクチナーゼのバリアントであるものも含む。そのような適したリパーゼバリアントは、例えば、ＷＯ９５／２２６１５、ＷＯ９７／０４０７９、ＷＯ９７／０７２０２、ＷＯ００／６００６３、ＷＯ２００７／０８７５０８、ＥＰ４０７２２５及びＥＰ２６０１０５に開示される方法によって開発されるものである。
【０１０６】
適したリパーゼ／クチナーゼ（Ｃ）は、脂肪分解活性を有する上記リパーゼ／クチナーゼのバリアントであるものも含む。適したリパーゼ／クチナーゼバリアントは、上に開示した親酵素の全長ポリペプチド配列と比較した場合、少なくとも４０〜１００％の同一性を有するバリアントを含む。一実施形態では、脂肪分解活性を有するリパーゼ／クチナーゼバリアントは、上に開示した親酵素の全長ポリペプチド配列と比較した場合、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であってよい。
【０１０７】
別の実施形態では、本発明の組成物は、それぞれのリパーゼ／クチナーゼの機能的ドメインに関与していない保存的突然変異を含む少なくとも１種のリパーゼ／クチナーゼバリアントを含む。脂肪分解活性を有するそのような実施形態のリパーゼ／クチナーゼバリアントは、親酵素の全長ポリペプチド配列と比較した場合、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％類似してよい。
【０１０８】
リパーゼ（Ｃ）は、「脂肪分解活性」を有する。脂肪分解活性を決定する方法は、文献でよく知られている（例えば、Ｇｕｐｔａ  ｅｔ  ａｌ．（２００３），Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３７、第６３〜７１頁を参照）。例えば、リパーゼ活性は、基質パラニトロフェニルパルミテート（ｐＮＰ−パルミテート、Ｃ：１６）のエステル結合加水分解によって測定され、黄色く、４０５ｎｍで検出することができるｐＮＰを放出する。
【０１０９】
前記リパーゼバリアントが、それぞれの親リパーゼの少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％の脂肪分解活性を示す場合、本発明によるリパーゼバリアントは脂肪分解活性を有する。
【０１１０】
本発明の一実施形態では、前述のリパーゼ（Ｃ）の少なくとも２種の組み合わせを使用してよい。
【０１１１】
リパーゼ（Ｃ）は、その精製していない形態または精製された形態、例えばフェニルセファロース吸着技術などのよく知られた吸着方法を用いて精製された形態で、使用してよい。
【０１１２】
本発明の一実施形態では、リパーゼ（Ｃ）は、本発明の最終組成物が、組成物の１００〜０．００５ＬＵ／ｍｇ、好ましくは２５〜０．０５ＬＵ／ｍｇの範囲で脂肪分解酵素活性を有するような量で、本発明の組成物に含まれる。リパーゼ単位（ＬＵ）は、ｐＨスタットで、以下の条件で、１分あたり１μｍｏｌの滴定可能な脂肪酸を生成するリパーゼの量である：温度３０℃、ｐＨ＝９．０、５ｍｍｏｌ／Ｌトリス緩衝液中の１３ｍｍｏｌ／Ｌ  Ｃａ２＋および２０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌの存在下、基質は３．３質量％のオリーブ油と３．３％アラビアゴムのエマルジョンである。
【０１１３】
本発明の一実施形態では、プロテアーゼ（Ｃ）は、本発明の最終組成物が０．１〜５０ＧＵの範囲のタンパク質分解酵素活性を有するような量で、本発明の組成物に含まれる。
【０１１４】
組成物中に、リパーゼ（Ｃ）とプロテアーゼ（Ｃ）を、例えば１〜２質量％のプロテアーゼ（Ｃ）と０．１〜０．５質量％のリパーゼ（Ｃ）の組み合わせで使用することが好ましい。
【０１１５】
本発明の文脈において、酵素（Ｃ）は、貯蔵前の初期の酵素活性と比較した場合、「本願において利用可能」な酵素活性が１００％に等しいとき、安定であると呼ぶ。本願において利用可能な酵素活性が、貯蔵前の初期の酵素活性と比較した場合、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも９９．５％であるとき、本発明において安定であると呼ぶ。
【０１１６】
一実施形態では、３７℃で３０日間貯蔵した後に利用可能な脂肪分解活性は、貯蔵前の初期の脂肪分解活性と比較した場合、少なくとも６０％である。
【０１１７】
１００％からａ％を減じると、貯蔵前の初期酵素活性と比較した場合の「貯蔵中のタンパク質分解活性の損失」が得られる。一実施形態では、貯蔵中にタンパク質分解活性の損失が本質的に生じない場合、すなわち、貯蔵前の初期酵素活性と比較した場合のタンパク質分解活性の損失が０％に等しい場合、本発明により、酵素は安定である。本発明においてタンパク質分解活性の損失が本質的にないとは、タンパク質分解活性の損失が、貯蔵前の初期酵素活性と比較した場合、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、または１％未満であることを意味する。
【０１１８】
一実施形態では、３７℃で３０日間貯蔵した後の脂肪分解活性の損失は、保管前の初期脂肪分解活性と比較した場合、４０％未満である。
【０１１９】
本発明における酵素活性の損失の低減とは、酵素活性の損失が、貯蔵前の初期酵素活性と比較した場合、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも９９．５％低減されることを意味する。
【０１２０】
本発明の一実施形態では、塩（Ａ）は、それ自体既知のセリンプロテアーゼ阻害剤と組み合わせて使用される。セリンプロテアーゼ阻害剤の例は、ホウ酸、ホウ酸塩、または別のボロン酸誘導体またはペプチドアルデヒドである。阻害剤は、１Ｅ−１２−１Ｅ−０３（より好ましくは１Ｅ−１１−１Ｅ−０４、さらにより好ましくは１Ｅ−１０−１Ｅ−０５、さらにより好ましくは１Ｅ−１０−１Ｅ−０６、最も好ましくは１Ｅ−０９−１Ｅ−０７）のセリンプロテアーゼＫｉ（Ｍ、ｍｏｌ／Ｌ）に対する阻害定数を有する。しかしながら、本発明の配合物において、ホウ素ベースの阻害剤なしで塩（Ａ）を使用することが好ましい。
【０１２１】
本発明の組成物は、好ましくは洗剤組成物として使用する。しかしながら、本発明の組成物をさらなる分野、例えば皮革の製造において使用することが可能である。このような本発明の組成物において、酵素（Ｃ）および好ましくはリパーゼ（Ｃ）は、０．０１〜４．０質量％、好ましくは０．１〜１．５質量％の量で存在する。洗剤ではない用途では、塩（Ａ）：リパーゼ（Ｃ）の質量比は、０．５：１〜５０：１の範囲が好ましく、より好ましくは５：１〜２０：１、さらにより好ましくは５：１〜１０：１の範囲である。洗剤ではない液体組成物中の他の材料は、ポリオールおよびポリオールの混合物（例えば、それぞれ１〜６０％の量のソルビトール、グリセロール、およびプロピレングリコール、少量の非イオン性界面活性剤（例えばソフタノール（softanol）、０〜５％のカルシウムイオン、０．００１％〜０．５％の水）から選択される。さらなる例は防腐剤、例えば、２−フェノキシエタノールである。
【０１２２】
本発明の組成物は、塩（Ａ）、界面活性剤（Ｂ）または酵素（Ｃ）以外の１種以上の材料、例えば、有機溶媒、香料、染料、殺生物剤、防腐剤、ヒドロトロープ、ビルダー、粘度調整剤、ポリマー、緩衝剤、消泡剤、および腐食防止添加剤を含有してよい。
【０１２３】
本発明の一実施形態では、本発明による組成物は、１種以上の有機溶媒、例えばエタノール、ｎ−プロパノール、イソ−プロパノール、ｎ−ブタノール、イソ−ブタノール、ｓｅｃ．−ブタノール、エチレングリコール、プロピレングリコール、１，３−プロパンジオール、ブタンジオール、グリセロール、ジグリコール、プロピルジグリコール、ブチルジグリコール、ヘキシレングリコール、エチレングリコールメチルエーテル、エチレングリコールエチルエーテル、エチレングリコールプロピルエーテル、およびフェノキシエタノールを含んでよく、エタノール、イソプロパノールまたはプロピレングリコールが好ましい。有機溶媒の好ましい量は、本発明の組成物全体に対して、０．５〜２５質量％である。特に、本発明の組成物がポーチなどで送達される場合、８〜２５質量％の有機溶媒（複数可）を含む。
【０１２４】
香料の例は、ベンジルサリチレート、２−（４−ｔｅｒｔ．−ブチルフェニル）２−メチルプロピオナール（Ｌｉｌｉａｌ（登録商標）として市販されている）、およびヘキシルシンナムアルデヒドである。
【０１２５】
染料の例は、アシッドブルー９、アシッドイエロー３、アシッドイエロー２３、アシッドイエロー７３、ピグメントイエロー１０１、アシッドグリーン１、ソルベントグリーン７、およびアシッドグリーン２５である。
【０１２６】
本発明の液体洗剤組成物は、１種以上の防腐剤または殺生物剤を含有してよい。殺生物剤および防腐剤は、微生物の攻撃による本発明の液体洗剤組成物の変性を防ぐ。殺生物剤および防腐剤の例は、ＢＴＡ（１，２，３−ベンゾトリアゾール）、ベンザルコニウムクロリド、１，２−ベンズイソチアゾリン−３−オン（「ＢＩＴ」）、２−メチル−２Ｈ−イソチアゾール−３−オン（「ＭＩＴ」）および５−クロロ−２−メチル−２Ｈ−イソチアゾール−３−オン（「ＣＩＴ」）、安息香酸、ソルビン酸、ヨードプロピニルブチルカーバメート（「ＩＰＢＣ」）、ジクロロジメチルヒダントイン（「ＤＣＤＭＨ」）、ブロモクロロジメチルヒダントイン（「ＢＣＤＭＨ」）、およびジブロモジメチルヒダントイン（「ＤＢＤＭＨ」）である。
【０１２７】
粘度調整剤の例は、寒天、カラゲン、トラガカント、アラビアゴム、アルギネート、ペクチン、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、デンプン、ゼラチン、ローカストビーンガム、架橋ポリ（メタ）アクリレート、例えばビス−（メタ）アクリルアミドと架橋したポリアクリル酸、さらにケイ酸、粘土、例えば、限定するものではないが、モンモリロナイト、ゼオライト、デキストリン、およびカゼインなどである。
【０１２８】
本発明の文脈におけるヒドロトロープは、水中で限られた溶解性を示す化合物の溶解を促進する化合物である。ヒドロトロープの例は、エタノール、イソプロパノール、エチレングリコール、１，２−プロピレングリコールなどの有機溶媒、および通常の条件下で制限なしに水混和性である、さらなる有機溶媒である。好適なヒドロトロープのさらなる例は、トルエンスルホン酸、キシレンスルホン酸、およびクメンスルホン酸のナトリウム塩である。
【０１２９】
ポリマーの例としては、特にポリアクリル酸およびそのそれぞれのアルカリ金属塩、特にそのナトリウム塩が挙げられる。適したポリマーは、特に、２，０００〜４０，０００ｇ／ｍｏｌ、好ましくは２，０００〜１０，０００ｇ／ｍｏｌ、特に３，０００〜８，０００ｇ／ｍｏｌの範囲の平均分子量ＭＷを好ましくは有し、それぞれアルカリ、特にナトリウムで部分的にまたは完全に中和されている、ポリアクリル酸である。また、コポリマーポリカルボキシレート、特にメタアクリル酸とアクリル酸、およびマレイン酸および／またはフマル酸とアクリル酸またはメタアクリル酸のものも適している。ポリアクリル酸およびそのそれぞれのアルカリ金属塩は、汚れ再付着防止剤として役立つ。
【０１３０】
ポリマーのさらなる例は、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）である。ポリビニルピロリドンは移染防止剤として役立つ。
【０１３１】
ポリマーのさらなる例は、分子あたり１個または２個の親水性基でエンドキャップされた、ポリエチレンテレフタレート、ポリオキシエチレンテレフタレート、およびポリエチレンテレフタレートであり、親水基はＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−ＳＯ３Ｎａ、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ２−ＳＯ３Ｎａ）２、およびＣＨ２ＣＨ（ＣＨ２ＳＯ２Ｎａ）ＣＨ２−ＳＯ３Ｎａから選択される。
【０１３２】
緩衝剤の例は、モノエタノールアミンおよびＮ，Ｎ，Ｎ−トリエタノールアミンである。
【０１３３】
消泡剤の例は、シリコーンである。
【０１３４】
本発明の一実施形態において、本発明の組成物は、塩（Ａ）以外の１種以上のビルダーを含有する。
【０１３５】
本発明の組成物は、塩（Ａ）以外の洗剤ビルダー、例えば、限定するものではないが、ゼオライト、ホスフェート、ホスホネート、シトレート、ポリマービルダー、またはアミノカルボキシレート、例えばイミノジコハク酸のアルカリ金属塩、例えばＩＤＳ−Ｎａ４、さらにニトリロ三酢酸（「ＮＴＡ」）、メチルグリシン二酢酸（「ＭＧＤＡ」）、グルタミン酸二酢酸（「ＧＬＤＡ」）、エチレンジアミン四酢酸（「ＥＤＴＡ」）またはジエチレントリアミン五酢酸（「ＤＴＰＡ」）を、１〜４０質量％含有する。好ましいアルカリ金属塩は、カリウム塩、特にナトリウム塩である。
【０１３６】
洗剤ビルダーのさらなる例は、例えば、Ｎ−原子の２０〜９０モル％が少なくとも１個のＣＨ２ＣＯＯ−基をもつポリエチレンイミンのような錯化基をもつポリマー、および上記の金属イオン封鎖剤のそれぞれのアルカリ金属塩、特にそのナトリウム塩である。
【０１３７】
適したポリマーのさらなる例は、ポリアルキレンイミン、例えばポリエチレンイミンおよびポリプロピレンイミンである。ポリアルキレンイミンはそれ自体で、またはポリアルコキシル化した誘導体として、例えばエトキシル化またはプロポキシル化して使用してよい。ポリアルキレンイミンは、分子あたり少なくとも３個のアルキレンイミン単位を含有する。
【０１３８】
本発明の一実施形態では、前記アルキレンイミン単位は、Ｃ２〜Ｃ１０−アルキレンジアミン単位、例えば、１，２−プロピレンジアミン、好ましくは、α，ω−Ｃ２〜Ｃ１０−アルキレンジアミン、例えば、１，２−エチレンジアミン、１，３−プロピレンジアミン、１，４−ブチレンジアミン、１，５−ペンチレンジアミン、１，６−ヘキサンジアミン（１，６−ヘキシレンジアミンとも呼ばれる）、１，８−ジアミンまたは１，１０−デカンジアミンであり、さらにより好ましくは１，２−エチレンジアミン、１，３−プロピレンジアミン、１，４−ブチレンジアミン、および１，６−ヘキサンジアミンである。
【０１３９】
本発明の別の実施形態では、前記ポリアルキレンイミンは、ポリアルキレンイミン単位、好ましくはポリエチレンイミンまたはポリプロピレンイミン単位から選択される。
【０１４０】
本発明の文脈における「ポリエチレンイミン」という用語は、ポリエチレンイミンホモポリマーだけでなく、ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ構造要素を他のアルキレンジアミン構造要素、例えばＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ構造要素、ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＨ構造要素、ＮＨ−（ＣＨ２）４−ＮＨ構造要素、ＮＨ−（ＣＨ２）６−ＮＨ構造要素または（ＮＨ−（ＣＨ２）８−ＮＨ構造要素と共に含有するポリアルキレンイミンも指すが、モル占有率（molar share）に関しては、ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ構造要素が大部分を占める。好ましいポリエチレンイミンは、モル占有率に関して大部分を占める、例えば、すべてのアルキレンイミン構造要素に対して合計で６０モル％以上に達する量の、より好ましくは合計で少なくとも７０モル％に達する量の、ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ構造要素を含有する。特別な実施形態では、ポリエチレンイミンという用語は、ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨとは異なるアルキレンイミン構造要素を、ポリエチレンイミン単位当たり１個しか持たないまたはまったく持たないポリアルキレンイミンを指す。
【０１４１】
本発明の文脈において、「ポリプロピレンイミン」という用語は、ポリプロピレンイミンホモポリマーだけではなく、ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＨ構造要素を他のアルキレンジアミン構造要素、例えばＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ構造要素、ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ構造要素、ＮＨ−（ＣＨ２）４−ＮＨ構造要素、ＮＨ−（ＣＨ２）６−ＮＨ構造要素またはＮＨ−（ＣＨ２）８−ＮＨ構造要素と共に含有するポリアルキレンイミンも指すが、モル占有率に関しては、ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＨ構造要素が大部分を占める。好ましいポリプロピレンイミンは、モル占有率に関して大部分を占める、例えばすべてのアルキレンイミン構造要素に対して合計で６０モル％以上に達する量の、より好ましくは合計で少なくとも７０モル％に達する量の、ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＨ構造要素を含有する。特別な実施形態では、ポリプロピレンイミンという用語は、ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＨとは異なるアルキレンイミン構造要素を、ポリプロピレンイミン単位当たり１個しか持たないまたはまったく持たないポリアルキレンイミンを意味する。
【０１４２】
分岐はアルキレンアミノ基、例えば、限定するものではないが、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２基または（ＣＨ２）３−ＮＨ２−基であってよい。より長い分岐は、例えば−（ＣＨ２）３−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）２または−（ＣＨ２）２−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）２基であってよい。高分岐ポリエチレンイミンは、例えばポリエチレンイミンデンドリマー、または０．２５〜０．９５の範囲、好ましくは０．３０〜０．８０の範囲、特に好ましくは少なくとも０．５の分岐度を有する関連する分子である。分岐度は、例えば１３Ｃ−ＮＭＲまたは１５Ｎ−ＮＭＲ分光法によって、好ましくはＤ２Ｏで決定することができ、次のように定義される。
【０１４３】
ＤＢ＝Ｄ＋Ｔ／Ｄ＋Ｔ＋Ｌ
式中、Ｄ（樹枝状）は第３級アミノ基の部分に相当し、Ｌ（直鎖）は第２級アミノ基の部分に相当し、Ｔ（末端）は第１級アミノ基の部分に相当する。
【０１４４】
本発明の文脈において、分岐ポリエチレンイミン単位は、０．２５〜０．９５の範囲、特に好ましくは０．３０〜０．９０％の範囲、および非常に特に好ましくは少なくとも０．５のＤＢを有するポリエチレンイミン単位である。好ましいポリエチレンイミン単位は、分岐をほとんどまたはまったく示さず、よって主に直鎖または直鎖のポリエチレンイミン単位である。
【０１４５】
本発明の文脈において、ＣＨ３−基は分岐としてみなされない。
【０１４６】
本発明の一実施形態では、ポリアルキレンイミンは、１〜１０００ｍｇ  ＫＯＨ／ｇ、好ましくは１０〜５００ｍｇ  ＫＯＨ／ｇ、最も好ましくは５０〜３００ｍｇ  ＫＯＨ／ｇの範囲の第１級アミン価を有する。第１級アミン価はＡＳＴＭ  Ｄ２０７４−０７によって決定することができる。
【０１４７】
本発明の一実施形態では、ポリアルキレンイミンは、１０〜１０００ｍｇ  ＫＯＨ／ｇ、好ましくは５０〜５００ｍｇ  ＫＯＨ／ｇ、最も好ましくは５０〜５００ｍｇ  ＫＯＨ／ｇの範囲の第２級アミン値を有する。第２級アミン価は、ＡＳＴＭ  Ｄ２０７４−０７によって決定することができる。
【０１４８】
本発明の一実施形態では、ポリアルキレンイミンは、１〜３００ｍｇ  ＫＯＨ／ｇ、好ましくは５〜２００ｍｇ  ＫＯＨ／ｇ、最も好ましくは１０〜１００ｍｇ  ＫＯＨ／ｇの範囲の第３級アミン値を有する。第３級アミン価は、ＡＳＴＭ  Ｄ２０７４−０７によって決定することができる。
【０１４９】
本発明の一実施形態では、第３級Ｎ原子のモル占有率は、１５Ｎ−ＮＭＲ分光法によって決定される。第３級アミン価と１３Ｃ−ＮＭＲ分光法による結果が一致しない場合、１３Ｃ−ＮＭＲ分光法によって得られた結果が優先される。
【０１５０】
本発明の一実施形態では、前記ポリアルキレンイミンの平均分子量Ｍｗは、２５０〜１００，０００ｇ／ｍｏｌ、好ましくは５０，０００ｇ／ｍｏｌ以下の、より好ましくは８００〜２５，０００ｇ／ｍｏｌ以下の範囲にある。ポリアルキレンイミンの平均分子量Ｍｗは、１．５質量％の水性ギ酸を溶離液とし、架橋ポリヒドロキシエチルメタクリレートを固定相として、それぞれの中間ポリアルキレンイミンのゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）によって測定される。
【０１５１】
前記ポリアルキレンイミンは、遊離していてもアルコキシル化されていてもよく、前記アルコキシル化は、エトキシル化、プロポキシル化、ブトキシル化および前述の少なくとも２種の組み合わせから選択される。エチレンオキシド、１，２−プロピレンオキシド、およびエチレンオキシドと１，２−プロピレンオキシドとの混合物が好ましい。少なくとも２種のアルキレンオキシドの混合物が利用される場合、それらは段階的にまたは同時に反応させることができる。
【０１５２】
本発明の一実施形態では、アルコキシル化ポリアルキレンイミンは、単位あたり少なくとも６個の窒素原子を有する。
【０１５３】
本発明の一実施形態では、ポリアルキレンイミンは、ＮＨ基あたり２〜５０モルのアルキレンオキシド、好ましくはＮＨ基あたり５〜３０モルのアルキレンオキシド、さらにより好ましくはＮＨ基あたり５〜２５モルのエチレンオキシドまたは１，２−のプロピレンオキシドまたはそれらの組み合わせで、アルコキシル化されている。本発明の文脈において、ＮＨ２単位は２個のＮＨ基として数える。好ましくは、すべての、またはほとんどすべてのＮＨ基がアルコキシル化されており、検出可能な量のＮＨ基は残っていない。
【０１５４】
そのようなアルコキシル化ポリアルキレンイミンの製造によって、分子量分布は狭くも広くもなる。例えば、多分散度Ｑ＝Ｍｗ／Ｍｎは１〜３の範囲、好ましくは少なくとも１．２、より好ましくは１．２〜２．５の範囲であり、または３より大きく２０まで、例えば３．５〜１５であり、広い分子量分布の場合、より好ましくは４〜５．５の範囲にある。
【０１５５】
本発明の一実施形態では、アルコキシル化ポリアルキレンイミンの多分散度Ｑは、２〜１０の範囲にある。
【０１５６】
本発明の一実施形態では、アルコキシル化ポリアルキレンイミンは、ポリエトキシル化ポリエチレンイミン、エトキシル化ポリプロピレンイミン、エトキシル化α，ω−ヘキサンジアミン、エトキシル化およびプロポキシル化ポリエチレンイミン、エトキシル化およびプロポキシル化ポリプロピレンイミン、およびエトキシル化およびポリプロポキシル化α，ω−ヘキサンジアミンから選択される。
【０１５７】
本発明の一実施形態では、アルコキシル化ポリエチレンイミンの平均分子量Ｍｎ（数平均）は、ＧＰＣにより決定して、２，５００〜１，５００，０００ｇ／モルの範囲、好ましくは５００，０００ｇ／モル以下である。
【０１５８】
本発明の一実施形態において、平均的なアルコキシル化ポリアルキレンイミンは、エトキシル化α，ω−ヘキサンジアミンおよびエトキシル化およびポリプロポキシル化α，ω−ヘキサンジアミンから選択され、それぞれ平均分子量Ｍｎ（数平均）が８００〜５００，０００ｇ／モルの範囲にある。
【０１５９】
本発明の別の実施形態では、本発明の組成物はアンビルト（unbuilt）であり、すなわち本質的にさらなる洗剤ビルダーを含まない。
【０１６０】
本発明の一実施形態では、本発明の液体組成物は、約０．１％〜約１５％、より具体的には０．２５％〜１０％、最も具体的には約０．５％〜５％の塩（Ａ）を含む。
【０１６１】
よって、安定化された液体酵素配合物は、０．５〜２０質量％、特に１〜１０質量％の酵素（Ｃ）（プロテアーゼと任意の第２の酵素の総計）および０．０１％〜１０％の塩（Ａ）、より具体的には０．０５〜５質量％、最も具体的には０．１〜２質量％の塩（Ａ）を含有する。
【０１６２】
コハク酸ビルダーは、ナトリウム、カリウム、アンモニウムおよびアルカノールアンモニウム塩などを含み、水溶性塩の形態で使用することが好ましい。コハク酸ビルダーの具体例には、ラウリルコハク酸、ミリスチルコハク酸、パルミチルコハク酸、２−ドデセニルコハク酸（好ましい）、２−ペンタデセニルコハク酸などが含まれる。ラウリルコハク酸は、上記群の好ましいビルダーである。
【０１６３】
本発明の組成物により、含水分含有量が高くても低くても、柔軟な配合が可能となる。さらに、特に含有される酵素に関して、優れた貯蔵寿命を有する組成物を提供することが目的である。従って本発明の組成物は、布地の洗濯に非常に適している。従って、本発明のさらなる態様は、布地の洗濯のために本発明の組成物を使用する方法に関する。特に、液体の本発明の配合物は、布地の洗濯に非常に適している。
【０１６４】
本発明の洗剤組成物は、布地洗浄組成物、硬質表面洗浄組成物、食器洗浄組成物および自動食器洗浄機洗剤組成物を含む軽質洗浄組成物として使用してよい。
【０１６５】
本発明のさらなる態様は、酵素の安定化のための塩（Ａ）の使用方法に関する。塩（Ａ）は、上記で詳細に定義している。
【０１６６】
本発明のさらなる態様は、本発明の組成物を製造するための方法であり、以下、本発明の製造方法とも称する。本発明の製造方法は、以下の工程を含む。
【０１６７】
（ａ）
（Ａ）少なくとも１種の塩（Ａ）、および
（Ｃ）少なくとも１種の酵素、を混合する工程、
（ｂ）両性およびアニオン性および非イオン性界面活性剤から選択される少なくとも１種の界面活性剤（Ｂ）を加える工程。
【０１６８】
工程（ａ）および（ｂ）は、任意の順序で実行してよい。しかしながら、界面活性剤（Ｂ）が泡の形成をもたらす実施形態では、最初に塩（Ａ）と酵素（Ｃ）とを混合し、それから界面活性剤（Ｂ）を加えることが好ましい。
【０１６９】
塩（Ａ）と酵素（Ｃ）との混合は、任意の種類の容器で行ってよい。発泡および混合中の高剪断速度は、避けることが好ましい。好ましい装置は、管状ミキサーおよび静的ミキサーである。
【０１７０】
本発明の製造方法の好ましい実施形態では、塩（Ａ）は一般式（Ｉ）
（Ｒ２）３Ｎ＋−（ＣＨ２）ｎＣ（Ｒ３）（Ｒ４）−（Ｏ−Ｘ）ｍ−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ１      Ａ−      （Ｉ）
（式中、
ｎは、１〜１２から選択され、
ｍは、０〜５０から選択され、
Ｒ１は、直鎖または分岐のＣ１〜Ｃ１０−アルキル、およびＣ６〜Ｃ１０−アリールから選択され、Ｒ１は、部分的にまたは完全に中和された、１個以上のヒドロキシル基またはＣ＝Ｏ基またはＣＯＯＨ基を有することがあってもよく、
Ｒ２は、同じまたは異なり、Ｃ１〜Ｃ１０−アルキル、フェニルから選択され、
Ｒ３およびＲ４は、同じまたは異なり、水素原子およびＣ１〜Ｃ４−アルキルから選択され、
Ｘは、Ｃ２〜Ｃ４−アルキレンであり、および
Ａ−は、無機または有機の対アニオンである）
の化合物である。様々な可能性のあるＲ１、Ｒ２、ｍ、ｎおよびＡ−は、上記で定義したとおりである。好ましくは、一般式（Ｉ）による化合物のＲ２はすべてメチルである。
【０１７１】
本発明の製造方法の好ましい実施形態では、塩（Ａ）は、ハライド、スルフェート、カーボネート、タートレート、シトレート、ラクテート、およびメタンスルホネートから選択される対イオンを有する。
【０１７２】
本発明の製造方法の好ましい実施形態では、少なくとも１種の酵素（Ｃ）は、プロテアーゼ、アミラーゼ、およびリパーゼから選択される。
【実施例】
【０１７３】
本発明を実施例によりさらに説明する。
【０１７４】
全般的な注釈：特に明記しない限り、パーセンテージは質量パーセントである。
【０１７５】
酵素の質量％は、商業的に利用可能な使用した酵素調製物を指す。純粋なタンパク質の質量％は極めて低いので、記載するターンオーバー数／ｍｇは重要である。
【０１７６】
アセチルコリン（Ａ．１２）はＳｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。対イオンはクロリドであった。
【０１７７】
（Ａ．１４）の前駆体は、トリメチルアミンのエトキシル化でＨＣｌを使用する代わりに直接、またはコリンヒドロゲンカーボネートとメタンスルホン酸との反応を介して、生成することができる。Ｃｏｎｓｔａｎｔｉｎｅｓｃｕ  ｅｔ  ａｌのＣｈｅｍ．Ｅｎｇ．Ｄａｔａ，２００７，５２  １２８０−１２８５を参照されたい。
【０１７８】
Ｉ．  塩の合成（Ａ）
留去された水の量に基づいて、およびＩＲ分光法により、エステル化反応が完了していることを示すことができた。
【０１７９】
９０％のメタンスルホン酸は、１０％の水と９０％のメタンスルホン酸との混合物を指す。
【０１８０】
Ｉ．１  本発明の塩の合成（Ａ．１）
酒石酸（１．５モル）を２２５ｇの量で、７５質量％のコリンクロリド（１．５モル）水溶液２８０ｇに溶解した。ロータリーエバポレーター（２−ｌフラスコ）で４５分以内に水を除去した（油浴温度１００〜１２０℃、５０〜８０ミリバール）。９０質量％の水性メタンスルホン酸を１５ｇの量で加え、８００ミリバールの圧力で温度を１４５℃に上げた。ロータリーエバポレーターにかけて１時間後、圧力を継続的に１０ミリバールに下げながら、水を１４５℃でさらに４．５時間除去した。淡黄色がかった物質が得られ、これを２００ｇのジエチレングリコールで希釈した。６１７ｇの量の黄色がかった液体が得られた。そのようにして得られた液体のアリコート２００ｇを、７．８ｇのエタノールアミンでｐＨ値６〜６．５（水中１０％）に中和した。本発明の塩（Ａ．１）が得られた。
【０１８１】
Ｉ．２  本発明の塩の合成（Ａ．２）
酒石酸（１．０モル）を１５０ｇの量で、７５質量％のコリンクロリド（２．０モル）水溶液３７４ｇに溶解した。ロータリーエバポレーター（２−ｌフラスコ）で４５分以内に水を除去した（油浴温度１００〜１２０℃、５０〜８０ミリバール）。９０質量％のメタンスルホン酸を１５ｇの量で加え、８００ミリバールの圧力で温度を１４５℃に上げた。ロータリーエバポレーターにかけて１時間後、圧力を継続的に１０ミリバールに下げながら、水を１４５℃でさらに４．５時間除去した。淡黄色がかった物質が得られ、これを２００ｇのジエチレングリコールで希釈した。６０７ｇの量の黄色がかった液体が得られた。そのようにして得られた液体のアリコート２００ｇを、８．７ｇのエタノールアミンでｐＨ値６〜６．５（水中１０％）に中和した。本発明の塩（Ａ．２）が得られた。
【０１８２】
Ｉ．３  本発明の塩の合成（Ａ．３）
クエン酸一水和物（１．０モル）を２１０ｇの量で、７５質量％のコリンクロリド（２．０モル）水溶液３７４ｇに溶解した。ロータリーエバポレーター（２−ｌフラスコ）で４５分以内に水を除去した（油浴温度１００〜１２０℃、５０〜８０ミリバール）。９０質量％のメタンスルホン酸を１８ｇの量で加え、８００ミリバールの圧力で温度を１４５℃に上げた。ロータリーエバポレーターにかけて１時間後、圧力を継続的に１０ミリバールに下げながら、水を１４５℃でさらに４．５時間除去した。淡黄色がかった物質が得られ、これを２００ｇのジエチレングリコールで希釈した。６０７ｇの量の黄色がかった液体が得られた。そのようにして得られた液体のアリコート２００ｇを、１０．３ｇのエタノールアミンでｐＨ値６〜６．５（水中１０％）に中和した。本発明の塩（Ａ．３）が得られた。
【０１８３】
Ｉ．４  本発明の塩の合成（Ａ．４）
クエン酸一水和物（１．０モル）を２１０ｇの量で、７５質量％のコリンクロリド（３．０モル）水溶液５６１ｇに溶解した。ロータリーエバポレーター（２−ｌフラスコ）で４５分以内に水を除去した（油浴温度１００〜１２０℃、５０〜８０ミリバール）。９０質量％のメタンスルホン酸を１８ｇの量で加え、８００ミリバールの圧力で温度を１４５℃に上げた。ロータリーエバポレーターにかけて１時間後、圧力を継続的に１０ミリバールに下げながら、水を１４５℃でさらに４．５時間除去した。淡黄色がかった物質が得られ、これを２７０ｇのジエチレングリコールで希釈した。８６８ｇの量の黄色がかった液体が得られた。そのようにして得られた液体のアリコート２００ｇを、９．６ｇのエタノールアミンでｐＨ値６〜６．５（水中１０％）に中和した。本発明の塩（Ａ．４）が得られた。
【０１８４】
Ｉ．５  本発明の塩の合成（Ａ．５）
クエン酸一水和物（１．０モル）を２１０ｇの量で、７５質量％のコリンメタンスルホネート（２．０モル）水溶液４８５ｇに溶解した。ロータリーエバポレーター（２−ｌフラスコ）で４５分以内に水を除去した（油浴温度１００〜１２０℃、５０〜８０ミリバール）。９０質量％のメタンスルホン酸を１８ｇの量で加え、８００ミリバールの圧力で温度を１４５℃に上げた。ロータリーエバポレーターにかけて１時間後、圧力を継続的に１０ミリバールに下げながら、水を１４５℃でさらに４．５時間除去した。淡黄色がかった物質が得られ、これを２７０ｇのジエチレングリコールで希釈した。６６３ｇの量の黄色がかった液体が得られた。そのようにして得られた液体のアリコート２００ｇを、１２．５ｇのエタノールアミンでｐＨ値６〜６．５（水中１０％）に中和した。本発明の塩（Ａ．５）が得られた。
【０１８５】
Ｉ．６  本発明の塩の合成（Ａ．６）
無水マレイン酸（１．０モル）を９８．１ｇの量で、乾燥物質としてのコリンメタンスルホネート（２．０モル）３６３ｇと混合した。混合物をロータリーエバポレーターで１３５℃に加熱した。１時間の混合後、メタンスルホン酸（純粋）を１２ｇの量で加え、８００ミリバールの圧力で温度を１４５℃に上げた。１時間の混合後、圧力を継続的に１０ミリバールに下げながら、水を１４５℃でさらに４．５時間除去した。淡黄色がかった物質が得られ、これを２００ｇのジエチレングリコールで希釈した。６５３ｇの量の黄色がかった液体が得られた。そのようにして得られた液体のアリコート２００ｇを、８．９ｇのエタノールアミンでｐＨ値６〜６．５（水中１０％）に中和した。本発明の塩（Ａ．６）が得られた。
【０１８６】
Ｉ．７  本発明の塩の合成（Ａ．７）
クエン酸一水和物（１．０モル）を２１０ｇの量で、７０質量％のベータメチルコリンクロリド（ＨＯ−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）３Ｃｌ、２．０モル）水溶液４３７ｇに溶解した。ロータリーエバポレーター（２−ｌフラスコ）で４５分以内に水を除去した（油浴温度１００〜１２０℃、５０〜８０ミリバール）。９０質量％のメタンスルホン酸を１８ｇの量で加え、８００ミリバールの圧力で温度を１４５℃に上げた。ロータリーエバポレーターにかけて１時間後、圧力を継続的に１０ミリバールに下げながら、水を１４５℃でさらに４．５時間除去した。淡黄色がかった物質が得られ、これを２００ｇのジエチレングリコールで希釈した。６７６ｇの量の黄色がかった液体が得られた。そのようにして得られた液体のアリコート２００ｇを、１２．３ｇのエタノールアミンでｐＨ値６〜６．５（水中１０％）に中和した。本発明の塩（Ａ．７）が得られた。
【０１８７】
Ｉ．８  本発明の塩の合成（Ａ．８）
クエン酸一水和物（０．５モル）を１０５ｇの量で、７０質量％のベータメチルコリンクロリド（１．５モル）水溶液３２７ｇに溶解した。ロータリーエバポレーター（２−ｌフラスコ）で４５分以内に水を除去した（油浴温度１００〜１２０℃、５０〜８０ミリバール）。９０質量％のメタンスルホン酸を１３ｇの量で加え、８００ミリバールの圧力で温度を１４５℃に上げた。ロータリーエバポレーターにかけて１時間後、圧力を継続的に１０ミリバールに下げながら、水を１４５℃でさらに４．５時間除去した。淡黄色がかった物質が得られ、これを１７０ｇのジエチレングリコールで希釈した。４７１ｇの量の黄色がかった液体が得られた。そのようにして得られた液体のアリコート２００ｇを、２１．７ｇのトリエタノールアミンでｐＨ値６〜６．５（水中１０％）に中和した。本発明の塩（Ａ．８）が得られた。
【０１８８】
Ｉ．９  本発明の塩の合成（Ａ．９）
クエン酸一水和物（１．０モル）を２１０ｇの量で、７０質量％のベータ−ｎ−プロピルコリンクロリド（２．０モル）水溶液５２０ｇに溶解した。ロータリーエバポレーター（２−ｌフラスコ）で４５分以内に水を除去した（油浴温度１００〜１２０℃、５０〜８０ミリバール）。９０質量％のメタンスルホン酸を１８ｇの量で加え、８００ミリバールの圧力で温度を１４５℃に上げた。ロータリーエバポレーターにかけて１時間後、圧力を継続的に１０ミリバールに下げながら、水を１４５℃でさらに４．５時間除去した。淡黄色がかった物質が得られ、これを２５０ｇのプロピレングリコールで希釈した。７７４ｇの量の黄色がかった液体が得られた。そのようにして得られた液体のアリコート２００ｇを、１１．９ｇのエタノールアミンでｐＨ値６〜６．５（水中１０％）に中和した。本発明の塩（Ａ．９）が得られた。
【０１８９】
Ｉ．１０  本発明の塩の合成（Ａ．１０）
クエン酸一水和物（１．０モル）を２１０ｇの量で、７０質量％のジメチルモノブチルコリンクロリド（２．０モル）水溶液５２０ｇに溶解した。ロータリーエバポレーター（２−ｌフラスコ）で４５分以内に水を除去した（油浴温度１００〜１２０℃、５０〜８０ミリバール）。９０質量％のメタンスルホン酸を１８ｇの量で加え、８００ミリバールの圧力で温度を１４５℃に上げた。ロータリーエバポレーターにかけて１時間後、圧力を継続的に１０ミリバールに下げながら、水を１４５℃でさらに４．５時間除去した。淡黄色がかった物質が得られ、これを２００ｇのプロピレングリコールで希釈した。７８８ｇの量の黄色がかった液体が得られた。そのようにして得られた液体のアリコート２００ｇを、１１．４ｇのエタノールアミンでｐＨ値６〜６．５（水中１０％）に中和した。本発明の塩（Ａ．１０）が得られた。
【０１９０】
Ｉ．１１  本発明の塩の合成（Ａ．１１）
クエン酸一水和物（０．５モル）を１０５ｇの量で、６０質量％のジメチルｎ−オクチルコリンクロリド（１．０モル）水溶液３９７ｇに溶解した。ロータリーエバポレーター（２−ｌフラスコ）で９０分以内に水を除去した（油浴温度１００〜１２０℃、５０〜８０ミリバール）。９０質量％のメタンスルホン酸を９．５ｇの量で加え、８００ミリバールの圧力で温度を１４５℃に上げた。ロータリーエバポレーターにかけて１時間後、圧力を継続的に１０ミリバールに下げながら、水を１４５℃でさらに４．５時間除去した。淡黄色がかった物質が得られ、これを２００ｇのプロピレングリコールで希釈した。４７０ｇの量の黄色がかった液体が得られた。そのようにして得られた液体のアリコート２００ｇを、８．９ｇのエタノールアミンでｐＨ値６〜６．５（水中１０％）に中和した。本発明の塩（Ａ．１１）が得られた。
【０１９１】
Ｉ．１３  本発明の塩の合成（Ａ．１３）
没食子酸（３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸、０．５モル）を８５ｇの量で、７５質量％のコリンメタンスルホネート（０．５モル）水溶液１２１ｇに溶解した。ロータリーエバポレーター（２−ｌフラスコ）で９０分以内に水を除去した（油浴温度１００〜１２０℃、５０〜８０ミリバール）。９０質量％のメタンスルホン酸を８ｇの量で加え、８００ミリバールの圧力で温度を１４５℃に上げた。ロータリーエバポレーターにかけて１時間後、圧力を継続的に１０ミリバールに下げながら、水を１４５℃でさらに４．５時間除去した。淡黄色がかった物質が得られ、これを１００ｇのジエチレングリコールで希釈した。２７１ｇの量の黄色がかった液体が得られた。そのようにして得られた１００ｇの液体のアリコートを、４．６ｇのエタノールアミンでｐＨ値６〜６．５（水中１０％）に中和した。本発明の塩（Ａ．１３）が得られた。
【０１９２】
比較例の塩：
Ｃ−（Ａ．１５）  コリンクロリド、７５質量％水溶液、ＢＡＳＦ  ＳＥ社から市販されている。
【０１９３】
Ｃ−（Ａ．１６）  酒石酸を７５ｇ（０．５モル）の量で、８０質量％のコリンバイカーボネート（１．０モル）水溶液２０６ｇに少量ずつ（１５ｇ単位）溶解した。ＣＯ２の放出が止まるまで溶液を攪拌した。ロータリーエバポレーターにかけて（２−ｌフラスコ）９０分以内に水を除去した（油浴温度１２０℃、１０ミリバール）。透明な物質が得られ、これを１５０ｇのジエチレングリコールで希釈した。３９０ｇの量の透明な溶液が得られ、Ｃ−（Ａ．１６）とした。エステル形成は検出できなかった。
【０１９４】
Ｃ−（Ａ．１７）  クエン酸一水和物を１０５ｇ（０．５モル）の量で、８０質量％のコリンバイカーボネート（１．０モル）水溶液２０６ｇに少量ずつ（２０ｇ単位）溶解した。ＣＯ２の放出が止まるまで溶液を攪拌した。ロータリーエバポレーターにかけて（２−ｌフラスコ）９０分以内に水を除去した（油浴温度１２０℃、１０ミリバール）。透明な物質が得られ、これを１５０ｇのジエチレングリコールで希釈した。４１２ｇの量の透明な溶液が得られ、Ｃ−（Ａ．１７）とした。エステル形成は検出できなかった。
【０１９５】
Ｃ−（Ａ．１８）  クエン酸一水和物を１０５ｇ（０．５モル）の量で、８０質量％のコリンバイカーボネート（１．５モル）水溶液３０９ｇに少量ずつ（２０ｇ単位）溶解した。ＣＯ２の放出が止まるまで溶液を攪拌した。ロータリーエバポレーターにかけて（２−ｌフラスコ）９０分以内に水を除去した（油浴温度１２０℃、１０ミリバール）。透明な物質が得られ、これを１５０ｇのジエチレングリコールで希釈した。４９７ｇの量の透明な粘稠の溶液が得られ、Ｃ−（Ａ．１８）とした。エステル形成は検出できなかった。
【０１９６】
Ｃ−（Ａ．１９）：クエン酸一水和物、Ｃ−（Ａ．２０）：クエン酸の一ナトリウム塩、Ｃ−（Ａ．２１）：クエン酸の二ナトリウム塩、Ｃ−（Ａ．２２）：クエン酸の三ナトリウム塩。Ｃ−（Ａ．１９）、Ｃ−（Ａ．２０）、Ｃ−（Ａ．２１）およびＣ−（Ａ．２２）は、洗剤配合物で使用される既知のビルダー化合物であった。
【０１９７】
ＩＩ．  応用試験
ＩＩ．１  安定した液体配合物の形成
水分量の低い液体洗剤配合物は、ジエチレングリコールまたはＤＰＧなどのグリコールで水を置換するので、溶解性は必然である。塩（Ａ．１）〜（Ａ．１１）およびＣ−（Ａ．１６）〜Ｃ−（Ａ．１８）は、それぞれジエチレングリコールおよび／またはジプロピレングリコールに可溶であるので、水なしで配合することができる。
【０１９８】
Ｃ−（Ａ．１９）、Ｃ−（Ａ．２０）、Ｃ−（Ａ．２１）およびＣ−（Ａ．２２）５０ｇを、それぞれ１００ｇのジエチレングリコールとフラスコ内で組み合わせ、撹拌しながら１００℃で３０分間加熱した。熱源を取り除き、得られた白色の懸濁液を１０時間かけて周囲温度まで冷却した。得られたスラリーを濾過し（紙フィルター）、濾過ケーキを５０ｇのイソプロパノールで２回洗浄した。単離された化合物Ｃ−（Ａ．１９）、Ｃ−（Ａ．２０）、Ｃ−（Ａ．２１）およびＣ−（Ａ．２２）を質量測定により測定すると、水がない場合、Ｃ−（Ａ．１９）、Ｃ−（Ａ．２０）、Ｃ−（Ａ．２１）、Ｃ−（Ａ．２２）は溶解性が不十分なため使用できないことが示された。以下の量が濾過ケーキとして得られた。
【０１９９】
Ｃ−（Ａ．１９）：４４．０ｇ、Ｃ−（Ａ．２０）：４５．８ｇ、Ｃ−（Ａ．２１）：４７．２ｇ、Ｃ−（Ａ．２２）：４８．２ｇ
【０２００】
ＩＩ．２  酵素安定性試験
水中でのリパーゼおよびプロテアーゼの貯蔵安定性を３７℃で評価した。
【０２０１】
ベースとなる試験配合物は、表１による成分を混合してベース配合物Ｉ〜ＶＩを作ることにより、製造した。
【０２０２】
塩（Ａ）または比較例の化合物のそれぞれは、使用される場合には、表１に示す量でそれぞれのベース配合物に加えた。
【０２０３】
酵素（Ｃ）を、表１に示す量で、それぞれのベース配合物に加えた。表１に示す酵素の量は、活性タンパク質を指す。測定した酵素活性に応じて、リパーゼまたはプロテアーゼのいずれかを加えた。
【０２０４】
Ｌｉｐｏｌａｓｅ（登録商標）１００Ｌ（ＣＡＳ番号９００１−６２−１、ＥＣ番号２３２−６１９−９）は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社から購入した。Ｓａｖｉｎａｓｅ（登録商標）１６．０Ｌ（ＣＡＳ番号９０１４−０１−１、ＥＣ番号２３２−７５２−２）は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社から購入した。水を加えて残部を満たし１００とした。
【０２０５】
表２に示す或る特定の時点でのリポラーゼ活性は、基質としてｐニトロフェノール吉草酸塩（ｐＮｉｔｒｏｐｈｅｎｏｌ−ｖａｌｅｒａｔｅ）（１００ｍＭのＴｒｉｓ中２．４ｍＭのｐＮＰ−Ｃ５、ｐＨ８．０、０．０１％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ１００）を用いて測定した。吸収は、４０５ｎｍで５分間にわたり、２０℃で３０秒ごとに測定した。時間依存吸収曲線の傾き（４０５ｎｍでの分あたりの吸光度の増加）は、リパーゼの活性に直接比例する。
【０２０６】
表２は、貯蔵（３７℃で１〜３０日）後に測定した液体配合物のリパーゼ活性を示す。表２に示す脂肪分解活性値は、時間０における対照配合物で測定した１００％値に基づいて計算した。
【０２０７】
配合物の命名法は次のとおりである。ピリオド前のローマ数字はベース配合物を特徴付け、アラビア数字は塩の種類を特徴付ける。ゼロ：塩（Ａ）なし。「Ｃ−」：比較例の配合物。
【０２０８】
【表３】
2021504546.tif 000009
【０２０９】
（Ｂ．１）：ｎ−Ｃ１８−アルキル−（ＯＣＨ２ＣＨ２）２５−ＯＨ
（Ｂ．２）：Ｃ１０〜Ｃ１８−アルキルポリグリコシドブレンド
（Ｂ．３）：Ｃ１０〜Ｃ１２−アルキルベンゼンスルホネート
（Ｂ．４）：ナトリウムクメンスルホネート
（Ｂ．５）：ナトリウムラウレススルフェート−ｎ−Ｃ１２Ｈ２５−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３−ＳＯ３Ｎａ
（Ｂ．６）：ｎ−Ｃ１２Ｈ２５（ＣＨ３）２Ｎ→Ｏ
＊  比較試験では、酵素なしで実験を繰り返した
＊
＊＊  塩（Ａ）なしの比較試験では、塩（Ａ）の量を同量のジエチレングリコールで置き換えた。
【０２１０】
プロテアーゼの酵素活性は、ＤＭＳＯ中のＮ−スクシニル−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ｐ−ピトロアニリドを用いた滴定により、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｇａｌｌｅｒｙの１チャネル干渉フィルター光度計（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）で測定した。パラニトロアニリンの放出は、４０５ｎｍで吸光度の増加をもたらし、ＰＲＯＴ単位で測定される酵素活性に比例していた。１つのＰＲＯＴは、ｐＨ９．０および３７℃で、１ｍＭのＮ−スクシニル−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ｐ−ピトロアニリドから１分あたり１μモルのパラニトロアニリンを放出する酵素の量である。表２において、配合物および比較例の配合物におけるリパーゼ活性は、貯蔵（３７℃で１〜３０日）後に測定した。１００％の活性は、水性環境中および同じ濃度における活性を指す。
【０２１１】
【表４】
2021504546.tif 000010
2021504546.tif 000011
【０２１２】
プロテアーゼ活性：
表３に示す或る特定の時点でのサビナーゼ活性は、基質としてスクシニル−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ｐ−ニトロアニリド（Ｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡ、短くＡＡＰＦ）を用いて測定した。タンパク質分解的切断によってｐＮＡが基質分子から切断され、ＯＤ４０５の測定により決定される黄色の遊離ｐＮＡが放出される。測定は２０℃で行った。表３は、３７℃で１〜３０日間貯蔵した後の液体配合物で測定されたプロテアーゼ活性を示す。表３に示すタンパク質分解活性値は、時間０における対照配合物で測定した１００％値に基づいて計算した。
【０２１３】
配合物の命名法は次のとおりである。ピリオド前のローマ数字はベース配合物を特徴付け、アラビア数字は塩の種類を特徴付ける（Ａ．＃  本発明の塩（成分（ａ））、Ｃ−（Ａ．＃）  比較例の化合物）。ゼロ（「０」）：塩ではなくジエチレングリコールを含む。
【０２１４】
【表５】
2021504546.tif 000012
【０２１５】
ＩＩ．３  織物洗浄試験
２種類の試験布地を洗浄し、これら配合物の洗剤性能を行った。布サンプルの試験は、ＣＦＴプロセスによるタンパク成分と脂肪成分を含有する複雑な汚れから構成され、且つ試験布サンプルは、脂肪／粒子タイプの汚れを含有していた。
【０２１６】
試験は次のように行った。８つの標準化された汚れ布地の布片（それぞれ寸法２．５ｘ２．５ｃｍであり、２つの側がポリエステルのキャリアに縫い付けられている）を含有するマルチステインモニターを、ラウンダーオメーター（launder-O-meter）で２．５ｇの綿布地および５ｇ／Ｌの液体試験洗濯洗剤と共に洗浄した（表４）。
【０２１７】
条件は次のとおりであった。装置：ＳＤＬ  Ａｔｌａｓ社、ロックヒル、米国のラウンダーオメーター。洗浄液：２５０ｍｌ、洗浄時間：６０分、洗浄温度：３０℃。水硬度：２．５ｍｍｏｌモル／Ｌ、Ｃａ：Ｍｇ：ＨＣ０３  ４：１：８
布地と液体の比率  １：１２、洗浄サイクル後、マルチステインモニターを水ですすぎ、その後、周囲温度で１４時間乾燥させた。
【０２１８】
次のあらかじめ汚した試験布地を使用した。
ＣＦＴ  Ｃ−Ｓ−１０：綿にバター
ＣＦＴ  Ｃ−Ｓ−６２：綿にラード、着色
ＣＦＴ  Ｃ−Ｓ−６８
ＥＭＰＡ  １１２：綿にココア
ＥＭＰＡ  １４１／１：綿に口紅
ＥＭＰＡ  １２５：
ｗｆｋ２０Ｄ：ポリエステル／綿混合布地に顔料と皮脂型の脂肪
ＣＦＴ  Ｃ−Ｓ−７０：チョコレート、ムースクリーム
ｗｆｋ  ＝  ｗｆｋ  ｔｅｓｔ  ｆａｂｒｉｃｓ  ＧｍｂＨ、Ｋｒｅｆｅｌｄ
ＥＭＰＡ  ＝スイス連邦材料試験協会
ＣＦＴ  ＝  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｔｅｓｔ  Ｍａｔｅｒｉａｌ  Ｂ．Ｖ．
【０２１９】
色測定を使用して洗浄の総レベルを評価した。モニター上のしみの反射率値は、４６０ｎｍでＵＶカットオフフィルターを備えた球形反射分光計（Ｄａｔａｃｏｌｏｒ社、米国のＳＦ５００型、波長範囲３６０〜７００ｎｍ、光学的形状ｄ／８°）を使用して測定した。この場合、ＣＩＥ−Ｌａｂ色空間分類を用いて、モニターの８つのしみについて、明度Ｌ＊、赤−緑の色軸の値ａ＊および黄−青の色軸のｂ＊値を洗浄前後に測定し、平均した。色値（ΔＥ）値の変化は、次の式の評価色ツールによって自動的に定義および計算される。
【０２２０】
ΔＥ＝ΔＤｅｌｔａ  ａ＊２＋ΔＤｅｌｔａ  ｂ＊２＋＋ΔＤｅｌｔａ  Ｌ＊２
ΔＥは、達成された洗浄効果の尺度である。すべての測定を６回繰り返し、平均数を算出した。ΔＥの値が高いほど、クリーニングが優れていることに留意されたい。当業者は、１単位の違いを検出することができる。非専門家は、２単位を容易に検出することができる。結果を表５に示す。
Ｒｗ＝洗浄した汚れの反射率
Ｒｏ＝汚れていない反射率
【０２２１】
ビルダーによる洗浄力の増加は、次のように計算した。この調査では、それぞれの布について合計６回繰り返した。９０〜９５％の統計的信頼水準を計算した。
【０２２２】
試験配合物は、表４による成分を混合して配合物ＶＩＩ〜ＸＩＩＩを作ることにより、製造した。
塩（Ａ）または比較例の化合物のそれぞれは、使用される場合には、表４に示す量でそれぞれのベース配合物に加えた。
Ｌｉｐｏｌａｓｅ（登録商標）１００Ｌは、使用される場合には、表４に示す量でそれぞれのベース配合物に加えた。
Ｓａｖｉｎａｓｅ（登録商標）１６．０Ｌは、使用される場合には、表４に示す量でそれぞれのベース配合物に加えた。
水を加えて残部を満たし１００とした。
【０２２３】
【表６】
2021504546.tif 000013
【０２２４】
（Ｂ．１）：ｎ−Ｃ１８−アルキル−（ＯＣＨ２ＣＨ２）２５−ＯＨ
（Ｂ．２）：Ｃ１０〜Ｃ１８−アルキルポリグリコシドブレンド
（Ｂ．３）：ナトリウムＣ１０〜Ｃ１２−アルキルベンゼンスルホネート
（Ｂ．４）：ナトリウムクメンスルホネート
（Ｂ．５）：ナトリウムラウレススルフェート−ｎ−Ｃ１２Ｈ２５−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３−ＳＯ３Ｎａ
（Ｂ．６）：ｎ−Ｃ１２Ｈ２５（ＣＨ３）２Ｎ→Ｏ
【０２２５】
リポラーゼは貯蔵前に７５００ＬＵ／ｍｌの量で存在していた。
【０２２６】
塩（Ａ）による洗浄力の増加は、次のように計算した。この調査では、それぞれの布について合計６回繰り返した。＞９０％の統計的信頼水準を計算した。上記のマルチステインモニターのΔＥの合計を表５に示す。ラウンダーオメーター試験は、３７℃の温度で２か月間の貯蔵中、新たに調製した配合物（ｔ０）を用いて実行した。３７℃でのおよそ１週間は、２０℃での３週間半と同等である。
【０２２７】
【表７】
2021504546.tif 000014
【０２２８】
塩（Ａ）なしの比較試験については、後者を同量のジエチレングリコールで置き換えた。
【手続補正書】
【提出日】令和1年9月13日(2019.9.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ａ）一般式（Ｉ）
（Ｒ２）３Ｎ＋−（ＣＨ２）ｎＣ（Ｒ３）（Ｒ４）−（Ｏ−Ｘ）ｍ−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ１      Ａ−      （Ｉ）
（式中、
ｎは、１〜１２の中から選択され、
ｍは、０〜５０の中から選択され、
Ｒ１は、直鎖または分岐である非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、置換されたＣ１〜Ｃ１０アルキル、−Ｃ６Ｈ５、パラ−ＨＯ−Ｃ６Ｈ４−、ｏ，ｐ−ジヒドロキシフェニル、および３，４，５−トリヒドロキシフェニルから選択され、そして、そのＲ１は、部分的にまたは完全に中和されている１個以上のヒドロキシル基またはＣ＝Ｏ基またはＣＯＯＨ基を有することがあってもよく、
Ｒ２は、同じであるかまたは異なるものであり、そして、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、フェニルから選択され、
Ｒ３およびＲ４は、同じであるかまたは異なるものであり、そして、水素原子およびＣ１〜Ｃ４アルキルから選択され、
Ｘは、Ｃ２〜Ｃ４アルキレンであり、そして
Ａ−は、有機の対アニオンである）
で表される少なくとも１種の塩
および
（Ｂ）両性界面活性剤およびアニオン性界面活性剤および非イオン性界面活性剤から選択される少なくとも１種の界面活性剤
を含有する組成物。
【請求項２】
塩（Ａ）が、タートレート、シトレート、ラクテート、およびメタンスルホネートから選択される対イオンを有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記組成物が、
（Ｃ）少なくとも１種の酵素
をさらに含有する、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記の少なくとも１種の酵素（Ｃ）が、プロテアーゼ、アミラーゼ、およびリパーゼから選択される、請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記組成物が室温で液体である、請求項１から４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
一般式（Ｉ）で表される化合物のＲ２がすべてメチルである、請求項１から５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記組成物が０．５〜３０質量％の塩（Ａ）を含有する、請求項１から６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
塩（Ａ）が、化合物（Ａ’） 
（Ｒ２）３Ｎ＋−（ＣＨ２）ｎＣ（Ｒ３）（Ｒ４）−（Ｏ−Ｘ）ｍ−ＯＨ    Ｒ１−ＣＯＯ−
（式中、様々な可能性のあるＲ１、Ｒ２、Ｘ、ｎおよびｍは、対応する塩（Ａ）におけるＲ１、Ｒ２、Ｘ、ｎおよびｍの定義と同じである）
を不純物として含有する、請求項１から７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
布地を洗濯するための、請求項１から８のいずれか一項に記載の組成物の使用方法。
【請求項１０】
酵素を安定化するための、一般式（Ｉ）
（Ｒ２）３Ｎ＋−（ＣＨ２）ｎＣ（Ｒ３）（Ｒ４）−（Ｏ−Ｘ）ｍ−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ１ Ａ−      （Ｉ）
（式中、
ｎは、１〜１２の中から選択され、
ｍは、０〜５０の中から選択され、
Ｒ１は、直鎖または分岐である非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、置換されたＣ１〜Ｃ１０アルキル、−Ｃ６Ｈ５、パラ−ＨＯ−Ｃ６Ｈ４−、ｏ，ｐ−ジヒドロキシフェニル、および３，４，５−トリヒドロキシフェニルから選択され、そして、そのＲ１は、部分的にまたは完全に中和されている１個以上のヒドロキシル基またはＣ＝Ｏ基またはＣＯＯＨ基を有することがあってもよく、
Ｒ２は、同じであるかまたは異なるものであり、そして、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、フェニルから選択され、
Ｒ３およびＲ４は、同じであるかまたは異なるものであり、そして、水素原子およびＣ１〜Ｃ４アルキルから選択され、
Ｘは、Ｃ２〜Ｃ４アルキレンであり、そして
Ａ−は、有機の対アニオンである）
で表される塩（Ａ）の使用方法。
【請求項１１】
組成物の製造方法であって、
（ａ）
（Ａ）一般式（Ｉ）で表される化合物である少なくとも１種の塩（Ａ）と
（Ｃ）少なくとも１種の酵素と
を混合する工程、
（Ｒ２）３Ｎ＋−（ＣＨ２）ｎＣ（Ｒ３）（Ｒ４）−（Ｏ−Ｘ）ｍ−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ１      Ａ−      （Ｉ）
（式中、
ｎは、１〜１２の中から選択され、
ｍは、０〜５０の中から選択され、
Ｒ１は、直鎖または分岐であるＣ１〜Ｃ１０アルキル、およびＣ６〜Ｃ１０アリールから選択され、そして、そのＲ１は、部分的にまたは完全に中和されている１個以上のヒドロキシル基またはＣ＝Ｏ基またはＣＯＯＨ基を有することがあってもよく、
Ｒ２は、同じであるかまたは異なるものであり、そして、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、フェニルから選択され、
Ｒ３およびＲ４は、同じであるかまたは異なるものであり、そして、水素原子およびＣ１〜Ｃ４アルキルから選択され、
Ｘは、Ｃ２〜Ｃ４アルキレンであり、そして
Ａ−は、有機の対アニオンである）、
（ｂ）両性界面活性剤およびアニオン性界面活性剤および非イオン性界面活性剤から選択される少なくとも１種の界面活性剤（Ｂ）を加える工程、
を含む、製造方法。
【請求項１２】
塩（Ａ）が、タートレート、シトレート、ラクテート、およびメタンスルホネートから選択される対イオンを有する、請求項１１に記載の製造方法。
【請求項１３】
前記少なくとも１種の酵素（Ｃ）がプロテアーゼ、アミラーゼ、およびリパーゼから選択される、請求項１１または１２に記載の製造方法。
【請求項１４】
一般式（Ｉ）による化合物のＲ２がすべてメチルである、請求項１１から１３のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項１５】
一般式
（ＣＨ３）３Ｎ＋−（ＣＨ２）ＣＨ（Ｒ３）−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ５      （Ａ１）−      （ＩＩ）
（式中、（Ａ１）−は、タートレートおよびシトレートから選択され、
Ｒ３は、水素原子およびＣ１〜Ｃ４−アルキルから選択され、
Ｒ５は、−ＣＨ２−Ｃ（ＯＨ）（ＣＯＯＸ２）−ＣＨ２−ＣＯＯＸ２および−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＯＯＸ１から選択され、
Ｘ１は、水素原子、アルカリ金属、および（ＣＨ３）３Ｎ＋−（ＣＨ２）２−から選択され、
Ｘ２は、同じであるかまたは異なるものであり、そして、水素原子、アルカリ金属および（ＣＨ３）３Ｎ＋−（ＣＨ２）２−から選択される）で表される塩。
【国際調査報告】
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