(57)【要約】本発明は、ＩＬ‐１７Ａ及びＩＬ‐１７Ｆに結合する抗体又はその断片、並びにグリシン、ｐＨ４．６〜５．５のアセタートバッファー及びポリソルベート８０の組み合わせを含む医薬組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下を含む医薬組成物：
ａ．配列番号１を含む重鎖可変領域及び配列番号２を含む軽鎖可変領域を有する、約８０ｍｇ／ｍｌ〜約２００ｍｇ／ｍｌの抗体又はその抗原結合断片；
ｂ．アセタート；
ｃ．グリシン；
ｄ．ポリソルベート８０及び；
約４．６〜約５．５のｐＨを有する。
【請求項２】
約１２０ｍｇ／ｍｌ〜約１８５ｍｇ／ｍｌの抗体又はその抗原結合断片、好ましくは約１６０ｍｇ／ｍＬを含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
組成物が、約０．０１％〜約０．０７％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０を含む、請求項１〜２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項４】
組成物が約１４０ｍＭ〜約３５０ｍＭのグリシンを含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
組成物が約２０ｍＭ〜約１００ｍＭのアセタート、好ましくは約４０ｍＭ〜約９０ｍＭのアセタートを含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
抗体又はその抗原結合断片がヒトＩＬ‐１７Ａ及びヒトＩＬ１７Ｆに特異的に結合する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
組成物が以下を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の医薬組成物：
ａ．約１２０ｍｇ／ｍＬ〜約１８５ｍｇ／ｍＬの抗体又はその抗原結合断片；
ｂ．約２０ｍＭ〜約１００ｍＭのアセタート、好ましくは約４０ｍＭ〜約９０ｍＭのアセタート；
ｃ．約１４０ｍＭ〜約３５０ｍＭのグリシン；
ｄ．約０．０１％〜約０．０７％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０、
ここで、組成物は、約４．６〜約５．５のｐＨを有する。
【請求項８】
医薬組成物を調製する方法であって：
ａ．配列番号１を含む重鎖可変領域及び配列番号２を含む軽鎖可変領域を有する、約４０ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌの抗体又はその抗原結合断片を、ｐＨ約４．６〜約５．５でグリシン及びアセタートを含む緩衝液と組み合わせることにより低濃度製剤を調製するステップ；
ｂ．ａ）で得られた低濃度製剤の抗体又はその抗原結合断片を約１６０ｍｇ／ｍｌ〜約１８０ｍｇ／ｍｌの濃度に濃縮することにより高濃度製剤を調製するステップ；
ｃ．ｂ）で得られた高濃度製剤にポリソルベート８０を加えるステップ；
ｄ．任意選択で、ステップｃ）の前に、グリシン及びアセタートを含む緩衝液で抗体又はその抗原結合断片の濃度を調整するステップ
を含む、上記方法。
【請求項９】
緩衝液が約２０ｍＭ〜約１００ｍＭのアセタート、好ましくは約４０ｍＭ〜約９０ｍＭのアセタート及び約１４０ｍＭ〜約３５０ｍＭのグリシンを含み、ポリソルベート８０がステップｃ）で約０．０１〜約０．０７％（ｗ／ｖ）の最終濃度で添加される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
請求項８又は請求項９により得られる医薬組成物。
【請求項１１】
組成物のｐＨが約４．６〜約５．５である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
請求項１〜７、１０又は１１のいずれか一項に記載の医薬組成物を含む容器。
【請求項１３】
治療に使用するための、請求項１〜７、１０又は１１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
ＩＬ‐１７Ａ及び／又はＩＬ‐１７Ｆによって媒介される、又は増加したレベルのＩＬ‐１７Ａ及び／又はＩＬ‐１７Ｆに関連する、病理学的障害の治療又は予防に使用するための、請求項１〜７、１０又は１１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
ＩＬ‐１７Ａ及び／又はＩＬ‐１７Ｆによって媒介される、又は増加したレベルのＩＬ‐１７Ａ及び／又はＩＬ‐１７Ｆに関連する、病理学的障害の治療又は予防のための医薬の製造における、請求項１〜７、１０又は１１のいずれか一項に記載の医薬組成物の使用。
【請求項１６】
請求項１〜７、１０又は１１のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含む、哺乳動物対象におけるＩＬ‐１７Ａ及び／又はＩＬ‐１７Ｆによって媒介される、又は増加したレベルのＩＬ‐１７Ａ及び／又はＩＬ‐１７Ｆに関連する、病理学的障害を治療又は予防する方法。
【請求項１７】
病理学的障害が、関節炎、関節リウマチ、乾癬、乾癬性関節炎、全身性発症若年性特発性関節炎（ＪＩＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、喘息、慢性閉塞性気道疾患、慢性閉塞性肺疾患、アトピー性皮膚炎、強皮症、全身性硬化症、肺線維症、クローン病、潰瘍性大腸炎、強直性脊椎炎、軸索性脊椎炎、及び他の脊椎関節症からなる群から選択される、請求項１４に記載の使用、請求項１５に記載の使用又は請求項１６に記載の方法のための医薬組成物。
【請求項１８】
病理学的障害が、関節リウマチ、クローン病、潰瘍性大腸炎、乾癬、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎及び軸性脊椎関節炎からなる群から選択される、請求項１４に記載の使用、請求項１５に記載の使用又は請求項１６に記載の方法のための医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬製剤の分野に属する。より具体的には、本発明は、抗体、グリシン、アセタート（酢酸塩又は酢酸エステル）バッファー及びポリソルベート８０を含む医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
組換えＤＮＡ技術の初期の頃から承認を得ている生物製剤の数は増えてきており、生物製剤の種類、対象となる適応症、及び薬物活性の機構的根拠に関してこの分野はダイナミックなままであったが、近年、抗体ベースの治療法の承認が他の生物製剤の承認をはるかに上回ってきている。
【０００３】
抗体療法が患者にやさしい方法で投与されるためには、投与の方法と時間が重要である。これらの側面は、患者が健康な個人の生活にできるだけ近い生活を送るために薬剤に依存している慢性疾患では特に重要である。おそらく入院を伴う長い投与時間を必要とする薬物は、一般的に患者に優しいとは見なされていない。患者宅の快適な環境で皮下投与をすることが強く求められている。しかしながら、抗体が、患者によって皮下的に及び直接的に投与されるものなどの液体製剤中に高濃度で製剤化される必要がある場合、非常に多くの問題が生じる。
【０００４】
抗体はかなり安定した分子であるが、長期間保存すると、化学的及び物理的不安定性に悩まされる可能性がある。典型的な化学的不安定性は、脱アミド化、加水分解、酸化、ベータ脱離、ジスルフィド交換又は還元を引き起こす可能性がある。物理的不安定性は、変性、凝集、沈殿を引き起こす可能性がある。抗体が高濃度の液体溶液に保存されている場合、化学的及び物理的不安定性の両方ともより顕著なものとなる。
【０００５】
ただし、液体の高濃度の抗体水ベースの製剤は特に複雑である。水は反応物として作用するか、又は反応物の移動を促進して、化学的分解及びタンパク質の不安定性をもたらす。高濃度での抗体の処方には単純で普遍的なプロトコルはなく、安定剤は不安定性と凝集を減らすのに役立つ可能性があるが、高濃度でのそれらの存在は最終的な医薬品製剤の他の物理化学的特性、例えば、粘度と浸透圧に影響を与える可能性がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
凝集、沈殿又は分解を回避又は最小化することは、依然として特定の課題である。可溶性物質及び／又は不溶性沈殿物の形成を伴う凝集は、特に問題である。これは、例えば、送達デバイスの閉塞を引き起こすことによって、投与時に免疫反応を引き起こす可能性がある凝集体の形成及び／又は医薬製剤の適切な投与の実施の困難性などの様々な問題を引き起こす可能性がある。
【０００７】
高濃度での抗体の調製中に問題が発生することもあり、ろ過性、濁りの出現、長期安定性などのさまざまな製造工程での製剤の挙動として見られる、製剤の加工性が医薬品製造の非常に重要な局面であり、克服すべきさらなるハードルである。
【０００８】
抗体は高濃度で処方されている場合、低抗体濃度で行われる試験ではしばしば十分には説明できない。抗体の性質と必要な賦形剤（添加剤）によっては、大量生産が予期せぬ影響を受ける可能性がある。
【０００９】
疑いもなく、これらのすべての要因の最良の組み合わせを特定することにより、成功した医薬品製剤が達成される。
上記のことから、治療用抗体のさらに改善された医薬組成物を提供することが当技術分野において依然として必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
発明の概要
本発明は、適切な物理化学的特性を有する抗体又はその抗原結合断片を含む医薬組成物を提供することにより、上記で特定された必要性に取り組むものである。
【００１１】
以下の特定の実施形態は、以下に番号が付けられているものとして説明される。実施形態１：以下を含む医薬組成物：
ａ．配列番号１を含む重鎖可変領域及び配列番号２を含む軽鎖可変領域を有する、約８０ｍｇ／ｍｌ〜約２００ｍｇ／ｍｌの抗体又はその抗原結合断片；
ｂ．アセタート（酢酸塩又は酢酸エステル）；
ｃ．グリシン；
ｄ．ポリソルベート８０及び；
約４．６〜約５．５、又は約４．６〜約５．３のｐＨを有する。
【００１２】
実施形態２：約１２０ｍｇ／ｍｌ〜約１８５ｍｇ／ｍｌの抗体又はその抗原結合断片、好ましくは約１６０ｍｇ／ｍＬを含む、実施形態１による医薬組成物。
【００１３】
実施形態３：組成物が約０．０１％〜約０．０７％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０を含む、実施形態１又は実施形態２による医薬組成物。
【００１４】
実施形態４：組成物が約１４０ｍＭ〜約３５０ｍＭのグリシンを含む、先行する実施形態のいずれか１つによる医薬組成物。
【００１５】
実施形態５：組成物が約２０ｍＭ〜１００ｍＭのアセタート（酢酸塩又は酢酸エステル）、好ましくは約４０ｍＭ〜約９０ｍＭのアセタート（酢酸塩又は酢酸エステル）又は約５０ｍＭ〜約９０ｍＭのアセタート（酢酸塩又は酢酸エステル）を含む、先行する実施形態のいずれか１つによる医薬組成物。
【００１６】
実施形態６：抗体又はその抗原結合断片がヒトＩＬ‐１７Ａ及びヒトＩＬ１７Ｆに特異的に結合する、先行する実施形態のいずれか１つによる医薬組成物。
【００１７】
実施形態７：組成物が以下を含む、先行する実施形態のいずれか１つによる医薬組成物：
ａ．約１２０ｍｇ／ｍＬ〜約１８５ｍｇ／ｍＬの抗体又はその抗原結合断片；
ｂ．約２０ｍＭ〜約１００ｍＭのアセタート（酢酸塩又は酢酸エステル）、好ましくは約４０ｍＭ〜約９０ｍＭのアセタート（酢酸塩又は酢酸エステル）又は約５０ｍＭ〜約９０ｍＭのアセタート（酢酸塩又は酢酸エステル）；
ｃ．約１４０ｍＭ〜約３５０ｍＭのグリシン；
ｄ．約０．０１％〜約０．０７％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０、
ここで、組成物は、約４．６〜約５．５又は約４．６〜約５．３のｐＨを有する。
【００１８】
実施形態８：医薬組成物を調製する方法であって：
ａ．配列番号１を含む重鎖可変領域及び配列番号２を含む軽鎖可変領域を有する、約４０ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌの抗体又はその抗原結合断片を、約４．６〜約５．５又は約４．６〜約５．３のｐＨでグリシン及びアセタート（酢酸塩又は酢酸エステル）を含む緩衝液と組み合わせることにより低濃度製剤を調製するステップ；
ｂ．ａ）で得られた低濃度製剤の抗体又はその抗原結合断片を約１２０ｍｇ／ｍｌ〜約１８５ｍｇ／ｍｌの濃度に濃縮することにより高濃度製剤を調製するステップ；
ｃ．ｂで得られた高濃度製剤にポリソルベート８０を加えるステップ；
ｄ．任意選択で、ステップｃ）の前に、グリシン及びアセタート（酢酸塩又は酢酸エステル）を含む緩衝液で抗体又はその抗原結合断片の濃度を約４．６〜約５．５又は約４．６〜約５．３に調整するステップ
を含む、上記方法。
【００１９】
実施形態９：緩衝液が約２０ｍＭ〜約１００ｍＭのアセタート（酢酸塩又は酢酸エステル）、好ましくは約４０ｍＭ〜約９０ｍＭのアセタート（酢酸塩又は酢酸エステル）又は約５０ｍＭ〜約９０ｍＭのアセタート（酢酸塩又は酢酸エステル）及び約１４０ｍＭ〜約３５０ｍＭのグリシンを含み、ポリソルベート８０をステップｃ）で加えて、約０．０１〜約０．０７％（ｗ／ｖ）の最終濃度を与える、実施形態８による方法。
【００２０】
実施形態１０：実施形態８又は実施形態９によって得られる医薬組成物。
【００２１】
実施形態１１：組成物のｐＨが約４．６〜約５．５又は約４．６〜約５．３である、実施形態１０による医薬組成物。
【００２２】
実施形態１２：実施形態１〜７、１０又は１１のいずれか１つによる医薬組成物を含む容器。
【００２３】
実施形態１３：治療で使用するための実施形態１〜７、１０又は１１のいずれか１つによる医薬組成物。
【００２４】
実施形態１４：ＩＬ‐１７Ａ及び／又はＩＬ‐１７Ｆによって媒介される、又は増加したレベルのＩＬ‐１７Ａ及び／又はＩＬ‐１７Ｆに関連する、病理学的障害の治療又は予防に使用するための、実施形態１〜７、１０又は１１のいずれか１つによる医薬組成物。
【００２５】
実施形態１５：ＩＬ‐１７Ａ及び／又はＩＬ‐１７Ｆによって媒介される、又は増加したレベルのＩＬ‐１７Ａ及び／又はＩＬ‐１７Ｆに関連する、病理学的障害の治療又は予防のための医薬の製造における、実施形態１〜７、１０又は１１のいずれか１つによる医薬組成物の使用。
【００２６】
実施形態１６：実施形態１〜７、１０又は１１のいずれか１つによる医薬組成物を投与することを含む、哺乳動物対象におけるＩＬ‐１７Ａ及び／又はＩＬ‐１７Ｆによって媒介される、又は増加したレベルのＩＬ‐１７Ａ及び／又はＩＬ‐１７Ｆに関連する、病理学的障害を治療又は予防する方法。
【００２７】
実施形態１７：病理学的障害が、関節炎、関節リウマチ、乾癬、乾癬性関節炎、全身性発症若年性特発性関節炎（ＪＩＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、喘息、慢性閉塞性気道疾患、慢性閉塞性肺疾患、アトピー性皮膚炎、強皮症、全身性硬化症、肺線維症、クローン病、潰瘍性大腸炎、強直性脊椎炎、軸性脊椎関節炎、及び他の脊椎関節症からなる群から選択される、実施形態１４による使用、実施形態１５による使用、又は実施形態１６による方法のための医薬組成物。
【００２８】
実施形態１８：病理学的障害が、関節リウマチ、クローン病、潰瘍性大腸炎、乾癬、乾癬関節炎、強直性脊椎炎及び軸性脊椎関節炎からなる群から選択される、実施形態１４による使用、実施形態１５による使用、又は実施形態１６による方法のための医薬組成物。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
発明の詳細な説明
本発明は、医薬組成物の加工性及び抗体の長期安定性に影響を及ぼさずに、８０ｍｇ／ｍｌ〜２００ｍｇ／ｍｌの濃度で、配列番号１を含む重鎖可変領域及び配列番号２を含む軽鎖可変領域を有する、抗体又はその抗原結合断片のヒトでの使用に適した医薬組成物を調製するための、ポリソルベート８０と、アセタートバッファー（緩衝剤として）及びグリシン（両性イオンとして）を約４．６〜約５．５のｐＨで含む緩衝液との組み合わせに基づく。本発明による医薬組成物は、特に２〜２５℃で、例えば２〜８℃及び２５℃で保存した場合、経時的に安定であることが、本発明者らの発見である。
【００３０】
「安定な製剤」という用語は、目的のタンパク質（ここでは抗体又はその抗原結合断片）が保存時にその物理的、化学的及び／又は生物学的特性を本質的に保持する製剤を指す。製剤のタンパク質安定性を測定するために、さまざまな分析方法が十分に当業者の知識の範囲内にある（実施例のセクションのいくつかの例を参照のこと）。安定性は通常、選択した期間（たとえば、３か月、６か月、１２か月又はそれ以上）の選択した温度（たとえば、−７０℃、２〜８℃、２５℃、３５℃又はそれ以上）で評価される。抗体は、製剤化された後、患者に投与される前に通常冷蔵庫（通常２〜８℃）又は室温（通常１５〜２５℃）で保管されるため、少なくとも２〜２５℃、例えば、２〜８℃と２５℃で示されているように、上記の製剤化された抗体が経時的に安定していることが重要である。さまざまな値を使用して、特定の期間の安定性について（初期データと比較して）、次のような（そしてそれに限定されない）結論を出すことができる。１）抗体の単量体型の１０％以下の変化、２）高分子量種（ＨＭＷ又はＨＭＷＳ；本明細書では凝集体とも呼ばれる）の５％以下の増加、３）低分子量種（ＬＭＷ又はＬＭＷＳ）の１０％以下の増加、又は４）＋／−０．３単位以下のｐＨの変動。
【００３１】
本発明のすべての実施形態において、「医薬組成物」はまた、区別することなく「安定な医薬組成物」と呼ぶこともできる。
【００３２】
本発明の一実施形態では、本発明による医薬組成物は、好ましくは８０ｍｇ／ｍｌから又は約８０ｍｇ／ｍｌから２００ｍｇ／ｍｌまで又は約２００ｍｇ／ｍｌまで、好ましくは１２０ｍｇ／ｍｌから又は約１２０ｍｇ／ｍｌから１８５ｍｇ／ｍｌまで又は約１８５ｍｇ／ｍｌまで、又は１２０ｍｇ／ｍｌから又は約１２０ｍｇ／ｍｌから１８０ｍｇ／ｍＬまで又は約１８０ｍｇ／ｍＬまで、の抗体又はその抗原結合断片、例えば約１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５又は１８０ｍｇ／ｍｌ、さらに好ましくは約１６０ｍｇ／ｍＬの抗体又はその抗原結合断片を含む。
【００３３】
別の実施形態では、本発明の医薬組成物は、０．０１％から又は約０．０１％から０．０７％まで又は約０．０７％まで（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０、例えば約０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％又は０．０７％（ｗ／ｖ  ポリソルベート８０）を含む。
【００３４】
別の実施形態では、本発明による医薬組成物は、１４０ｍＭから又は約１４０ｍＭから３５０ｍＭまで又は約３５０ｍＭまでのグリシンを含む。好ましくは、本発明による医薬組成物は、１６０ｍＭから又は約１６０ｍＭから３００ｍＭまで又は約３００ｍＭまでのグリシン、例えば約１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０又は３００ｍＭのグリシンを含む。全体として、本発明の文脈において、グリシンは緩衝剤ではない。確かに、約４．６〜約５．５のｐＨでは、グリシンは両性イオンである。両性イオンとして、それは抗体又はその抗原結合断片の疎水性部分及び親水性部分と相互作用する能力を有し、したがって抗体又はその抗原結合断片間の自己相互作用をおそらく減少させ、安定化効果を提供する。
【００３５】
さらに別の実施形態では、本発明による医薬組成物は、全体として、約２０ｍＭ〜約１００ｍＭのアセタート（酢酸塩又は酢酸エステル）、好ましくは約４０ｍＭ〜約９０ｍＭのアセタート（酢酸塩又は酢酸エステル）、例えば約４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５又は９０ｍＭアセタート（酢酸塩又は酢酸エステル）を含む。あるいは、本発明による医薬組成物は、全体として、約５０ｍＭ〜約９０ｍＭのアセタート（酢酸塩又は酢酸エステル）、例えば約５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５又は９０ｍＭのアセタート（酢酸塩又は酢酸エステル）を含む。一実施形態では、医薬組成物は約５５ｍＭのアセタート（酢酸塩又は酢酸エステル）を含む。本発明の文脈において、全体として、アセタート（酢酸塩又は酢酸エステル）は緩衝剤である。酢酸カルシウム、酢酸マグネシウム、酢酸ナトリウム又は酢酸亜鉛などの任意の種類のアセタートを使用することができる。好ましくは、酢酸ナトリウムが使用される。
【００３６】
好ましくは、本発明による医薬組成物は、糖（単糖、二糖又は多糖など）もポリオールも含まない。
【００３７】
本発明による医薬組成物に含まれる抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＩＬ‐１７Ａ及びＩＬ‐１７Ｆに特異的に結合する。
【００３８】
「ヒトＩＬ‐１７Ａ及びＩＬ‐１７Ｆに特異的に結合する」という用語、及び本明細書で使用される同等物は、抗体が生物学的に意味のある効果を達成するのに十分な親和性と特異性でもってヒトＩＬ‐１７Ａ及びＩＬ‐１７Ｆに結合することを意味する。選択された抗体は通常、ヒトＩＬ‐１７Ａ及びＩＬ‐１７Ｆに対して結合親和性を有し、例えば、抗体は、１００ｎＭ〜１ｐＭのＫｄ値でヒトＩＬ‐１７Ａ及びＩＬ‐１７Ｆに結合することができる。抗体親和性は、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイ、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）；及び競合アッセイ（ＲＩＡなど）などの表面プラズモン共鳴塩基アッセイによって決定することができる。本発明の意味の範囲内で、ヒトＩＬ‐１７Ａ及びＩＬ‐１７Ｆに特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片は、別の分子にも結合し得る、例えばｃｙｎｏ  ＩＬ‐１７Ａ及びＩＬ‐１７Ｆに結合し得、又は例えば非限定的な例として、抗体又はその抗原結合断片が二重特異性抗体又は多重特異性抗体に組み込まれる場合などである。特に、本抗体又はその抗原結合断片は、ＩＬ‐１７Ａ、ＩＬ‐１７Ｆ、並びにＩＬ‐１７Ａ及びＩＬ‐１７Ｆヘテロダイマー以外のいずれの他のヒトＩＬ‐１７アイソフォームには結合しない。
【００３９】
ＩＬ‐１７Ａ（当初はＣＴＬＡ‐８と呼ばれていた）は炎症誘発性サイトカインであり、ＩＬ‐１７ファミリーの最初のＩＬ‐１７が発見された。その後、ファミリーの５つの追加メンバーが特定された（ＩＬ‐１７Ｂ〜Ｆ）。ＩＬ‐１７ＡとＦは約５５％のアミノ酸配列相同性を有し、それらはホモダイマー及びヘテロダイマーとして発現し、受容体ＩＬ‐１７Ｒ、ＩＬ‐１７ＲＣ又はＩＬ‐１７ＲＡ／ＲＣを介して信号を送り、多くの自己免疫疾患と関連している。
【００４０】
ヒトＩＬ‐１７Ａ及びＩＬ‐１７Ｆに特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片は、好ましくはまた、ヒトＩＬ‐１７Ａ及びＩＬ‐１７Ｆを中和する。
【００４１】
本明細書で使用される「中和する」という用語は、特異的に結合する分子の生物学的効果を阻害又は実質的に低減する抗体を指す。したがって、「抗体はヒトＩＬ‐１７Ａ及びＩＬ‐１７Ｆを中和する」という表現は、ヒトＩＬ‐１７Ａ及びＩＬ‐１７Ｆに特異的に結合し、それらの受容体へ結合するＩＬ‐１７Ａ及びＩＬ‐１７Ｆを遮断することなどによってその生物学的効果を阻害又は実質的に低減する抗体を指す。
【００４２】
本明細書で使用する「抗体」（単数又は複数）という用語は、モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体を指し、当技術分野で公知の組換え技術によって生成される組換え抗体に限定されない。
【００４３】
表１に示すように、配列番号１を含む可変重鎖及び配列番号２を含む可変軽鎖を有する抗体又はその抗原結合断片は、ＷＯ２０１２０９５６６２にさらに詳細に記載されており、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【００４４】
「抗体」（単数又は複数）という用語は、ヒト化抗体も指す。ヒト化抗体は、非ヒト抗体に由来する配列を含む抗体である。ほとんどの場合、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域の残基が、望ましい特異性、親和性、及び活性を持っているマウス、ラット、ウサギ、ニワトリ又は非ヒト霊長類のような非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域又は相補性決定領域（ＣＤＲ）の残基で置き換えられたヒト抗体（レシピエント抗体）である。ほとんどの場合、ＣＤＲ外、すなわち、フレームワーク領域（ＦＲ）では、ヒト（レシピエント）抗体の残基は対応する非ヒト残基によってさらに置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体又はドナー抗体には見られない残基を含み得る。これらの変更は、抗体のパフォーマンスをさらに改善するために行われる。ヒト化は、ヒトにおける非ヒト抗体の免疫原性を低下させ、したがってヒト疾患の治療への抗体の適用を容易にする。ヒト化抗体及びそれらを生成するためのいくつかの異なる技術は、当技術分野でよく知られている。「抗体」（単数又は複数）という用語はまた、ヒト化の代替として生成することができるヒト抗体を指す。例えば、内因性のマウス抗体の産生がなくても、免疫化によりヒト抗体の完全なレパートリーを産生することができるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を産生することが可能である。例えば、キメラ及び生殖系列変異マウスにおける抗体重鎖結合領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合性欠失は、内因性抗体産生の完全な阻害をもたらすことが記載されている。そのような生殖系列変異マウスにおけるヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイの移入は、前記抗原でヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子を保有するトランスジェニック動物を免疫すると、特定の抗原に対する特異性を有するヒト抗体の産生をもたらす。そのようなトランスジェニック動物を作製するための技術、及びそのようなトランスジェニック動物からヒト抗体を単離及び作製するための技術は、当技術分野で知られている。あるいは、トランスジェニック動物；例えばマウスでは、マウス抗体の可変領域をコードする免疫グロブリン遺伝子のみが、対応するヒト可変免疫グロブリン遺伝子配列で置き換えられる。抗体定常領域をコードするマウス生殖系列免疫グロブリン遺伝子は変化していない。このようにして、トランスジェニックマウスの免疫系での抗体エフェクター機能、及びその結果Ｂ細胞の発生が本質的に変化せず、それによりｉｎ  ｖｉｖｏでの抗原チャレンジの際に抗体応答が改善される可能性がある。目的の特定の抗体をコードする遺伝子がそのようなトランスジェニック動物から単離されると、完全なヒト抗体を得るために、定常領域をコードする遺伝子をヒト定常領域遺伝子で置き換えることができる。本明細書で使用する「抗体」（単数又は複数）という用語は、非グリコシル化抗体も指す。
【００４５】
本明細書で使用される「その抗原結合断片」という用語又はその文法的変形は、抗体断片を指す。本発明による抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ、ｓｃＦｖ断片、一本鎖抗体、抗体断片又は抗体から形成される二重特異性、三重特異性、四重特異性又は多重特異性抗体が含まれる。これらは、Ｆａｂ‐Ｆｖ又はＦａｂ‐Ｆｖ‐Ｆｖコンストラクトを含むが、それらに限定されない。上記で定義された抗体断片は、当技術分野で知られている。
【００４６】
好ましくは、本発明による医薬組成物は以下を含む（表１）：
１）配列番号１に定義された配列を有する重鎖及び配列番号２に定義された配列を有する軽鎖を含む抗体
２）配列番号３に定義された配列を有する重鎖及び配列番号４に定義された配列を有する軽鎖を含む抗体；又は
３）配列番号３で定義される配列の可変領域と少なくとも８０％の同一性又は類似性、好ましくは９０％の同一性又は類似性を有する重鎖、及び配列番号４で定義される配列の可変領域と少なくとも８０％の同一性又は類似性、好ましくは９０％の同一性又は類似性を有する軽鎖を含む抗体。
【００４７】
【表１】
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【００４８】
抗体分子は、典型的には、本発明の抗体分子をコードするＤＮＡからタンパク質の発現をもたらすのに適した条件下で、抗体配列をコードするベクターを含む宿主細胞を培養し、抗体分子を単離することにより産生され得る。
【００４９】
重鎖と軽鎖の両方を含む生成物の生産のために、細胞株は２つのベクター、すなわち軽鎖ポリペプチドをコードする第１のベクター及び重鎖ポリペプチドをコードする第２のベクターでトランスフェクトされ得る。あるいは、軽鎖及び重鎖ポリペプチドをコードする配列を含む単一のベクターを使用してもよい。
【００５０】
工業規模で製造することができる抗体又はその抗原結合断片は、組換え抗体断片をコードする１つ又は複数の発現ベクターでトランスフェクトされた真核宿主細胞を培養することによって生産することができる。真核宿主細胞は、好ましくは哺乳動物細胞、より好ましくはチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。
【００５１】
哺乳動物細胞は、組換えタンパク質の成長及び発現をサポートする任意の培地で培養することができ、好ましくは、培地は、動物血清及びペプトンなどの動物由来生成物を含まない化学的に定義された培地である。細胞増殖及びタンパク質産生を可能にする適切な濃度で存在する、ビタミン、アミノ酸、ホルモン、成長因子、イオン、バッファー、ヌクレオシド、グルコース又は同等のエネルギー源の異なる組み合わせを含む、当業者が利用可能な異なる細胞培養培地がある。追加の細胞培養培地成分は、当業者に知られているであろう細胞培養サイクルの間の異なる時間に適切な濃度で細胞培養培地に含まれてもよい。
【００５２】
哺乳動物細胞培養は、振とうフラスコ又はバイオリアクターなどの適切な容器で行うことができ、これらは必要な生産規模に応じて流加モードで操作してもしなくてもよい。これらのバイオリアクターは、攪拌タンク又はエアリフトリアクターのいずれかであってもよい。１，０００Ｌ超〜５０，０００Ｌ、好ましくは５，０００Ｌ〜２０，０００Ｌ、又は１０，０００Ｌまでの容量のさまざまな大規模バイオリアクターが利用できる。あるいは、２Ｌ〜１００Ｌなどのより小規模のバイオリアクターも抗体又は抗体断片の製造に使用される。
【００５３】
抗体又はその抗原結合断片は、典型的には哺乳動物宿主細胞培養物、典型的にはＣＨＯ細胞培養物の上清に見られる。抗体又はその抗原結合断片などの目的のタンパク質が上清中に分泌されるＣＨＯ培養プロセスの場合、前記上清は、当技術分野で公知の方法によって、典型的には遠心分離によって収集される。
したがって、抗体又はその抗原結合断片の製造方法は、細胞培養後かつタンパク質精製前の遠心分離及び上清回収のステップを含む。さらなる特定の実施形態では、前記遠心分離は連続遠心分離である。誤解を避けるために、上清とは、細胞培養液の遠心分離により沈殿した細胞の上にある液体を指す。
【００５４】
あるいは、宿主細胞は原核細胞、好ましくはグラム陰性細菌である。より好ましくは、宿主細胞は大腸菌細胞である。タンパク質発現のための原核宿主細胞は当技術分野でよく知られている（Terpe, K. Appl Microbiol Biotechnol 72, 211‐222(2006)）。宿主細胞は、抗体の抗原結合断片などの目的のタンパク質を産生するように遺伝子操作された組換え細胞である。組換え大腸菌宿主細胞は、ＭＣ４１００、ＴＧ１、ＴＧ２、ＤＨＢ４、ＤＨ５α、ＤＨ１、ＢＬ２１、Ｋ１２、ＸＬ１Ｂｌｕｅ、及びＪＭ１０９を含む任意の適切な大腸菌株に由来し得る。一例は、組換えタンパク質発酵に一般的に使用される宿主株である大腸菌株Ｗ３１１０（ＡＴＣＣ２７，３２５）である。抗体断片はまた、改変された大腸菌株、例えば、代謝変異株又はプロテアーゼ欠損大腸菌株を培養することによって生成され得る。
【００５５】
大腸菌宿主細胞培養物（発酵）は、大腸菌の増殖と組換えタンパク質の発現をサポートする任意の培地で培養できる。培地は、化学的に規定された培地、例えば、
Durany O, et al. (2004). Studies on the expression of recombinant fuculose-1-phosphate aldolase in Escherichia coli. (大腸菌における組換えフクロース‐１‐リン酸アルドラーゼの発現に関する研究。)Process Biochem 39, 1677-1684に記載されているような化学的に規定された培地であってもよい。
【００５６】
大腸菌宿主細胞の培養は、必要な生産規模に応じて、振とうフラスコ又は発酵槽などの適切な容器で行うことができる。１，０００リットル超〜約１０万リットルの容量のさまざまな大規模発酵槽が利用可能である。好ましくは、１，０００〜５０，０００リットル、より好ましくは１，０００〜２５，０００、２０，０００、１５，０００、１２，０００又は１０，０００リットルの発酵槽が使用される。より小規模の発酵槽も、０．５〜１，０００リットルの容量で使用できる。
【００５７】
ヒト抗体の抗原結合断片をインビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）で取得する他の方法は、ファージディスプレイやリボソームディスプレイ技術などのディスプレイ技術に基づいており、少なくとも一部は人工的に、又はドナーの免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーから生成された組換えＤＮＡライブラリーが使用される。ヒト抗体を生成するためのファージ及びリボソームディスプレイ技術は、当技術分野でよく知られている。ヒト抗体はまた、目的の抗原によりエクスビボ（ｅｘ  ｖｉｖｏ）で免疫され、続いて融合されて、次いで、最適なヒト抗体についてスクリーニングされ得るハイブリドーマを生成する単離されたヒトＢ細胞から生成され得る。
【００５８】
抗体は様々な翻訳後修飾を受ける可能性があることは当業者には理解されよう。これらの修飾の種類と程度は、多くの場合、抗体の発現に使用される宿主細胞株と培養条件に依存する。そのような修飾には、グリコシル化、メチオニン酸化、ジケトピペラジン形成、アスパラギン酸異性化及びアスパラギン脱アミド化のバリエーションが含まれ得る。頻繁な修飾は、カルボキシペプチダーゼの作用により、カルボキシ末端の塩基性残基（リジンやアルギニンなど）が失われることである（Harris, RJ. Journal of Chromatography 705：129-134、1995に記載）。したがって、抗体重鎖のＣ末端リジンは存在しない可能性がある。
【００５９】
本発明による医薬組成物は、全体として、約４．６〜約５．５、例えば、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４又は５．５のｐＨを有する。あるいは、それは、約４．６〜約５．３、例えば４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２又は５．３のｐＨを有する。本発明のすべての実施形態において、特に明記しない限り、ｐＨ値は２３〜２５℃で測定され、それはｐＨ単位の±０．１又は±０．２以内である。
【００６０】
本発明は、配列番号１を含む重鎖可変領域及び配列番号２を含む軽鎖可変領域を有する、抗体又はその抗原結合断片を含む医薬組成物を調製する方法を提供する。この方法は、ａ）約４０ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌの抗体又はその抗原結合断片を、約４．６〜約５．５のｐＨでグリシン及びアセタートを含む緩衝液と組み合わせることにより、低濃度製剤を調製するステップ；次に、ｂ）ａ）で得られた低濃度製剤中の抗体又はその抗原結合断片を約１６０ｍｇ／ｍｌ〜１８０ｍｇ／ｍｌの濃度に濃縮することによって高濃度製剤を調製するステップ；及び最後にｃ）ｂ）で得られた高濃度製剤にポリソルベート８０を加えるステップを含む。任意選択で、ステップｃ）の前に、抗体又はその抗原結合断片の濃度は、グリシン及びアセタートを含む緩衝液で調整され得る。
【００６１】
本発明による医薬組成物内で使用するためのさらなる賦形剤には、粘度増強剤、増量剤、可溶化剤又はそれらの組み合わせが含まれるが、これらには限定されない。
【００６２】
本発明はまた、本発明による医薬組成物を含む容器を提供する。特に、容器は、限定なしに、医薬組成物を含むバイアル、アンプル、チューブ、ボトル、又はシリンジ（プレフィルドシリンジなど）であり得る。
【００６３】
容器は、本発明による医薬組成物、及びシリンジ、プレフィルドシリンジ、自動注射器、無針デバイス、インプラント又はパッチなどの送達デバイス、又は、保護者による管理のための他のデバイスと使用の指示を含む１つ又は複数の容器を含むパーツキットの一部であってもよい。
【００６４】
本発明の一実施形態では、容器は、以下を含む医薬組成物を含む：
ａ．約８０ｍｇ／ｍｌ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、あるいは約１２０ｍｇ／ｍｌ〜約１８５ｍｇ／ｍｌの抗体又はその抗原結合断片であって、これは以下を有する：
ｉ．配列番号１を含む重鎖可変領域及び配列番号２を含む軽鎖可変領域；又は
ｉｉ．配列番号３を含む重鎖及び配列番号４を含む軽鎖；又は
ｉｉｉ．配列番号３で定義される配列の定常領域に対して少なくとも８０％の同一性又は類似性、好ましくは９０％の同一性又は類似性を有する重鎖、及び配列番号４で定義される配列の定常領域に対して少なくとも８０％の同一性又は類似性、好ましくは９０％の同一性又は類似性を有する軽鎖；
ｂ．アセタート；
ｃ．グリシン；
ｄ．ポリソルベート８０、
ここで、組成物は、約４．６〜約５．５のｐＨを有する。
【００６５】
本発明の好ましい一実施形態では、容器は、以下を含む医薬組成物を含む：
ａ．約１６０ｍｇ／ｍＬの抗体又はその抗原結合断片であって、これは以下を含む：
ｉ．配列番号１を含む重鎖可変領域及び配列番号２を含む軽鎖可変領域；又は
ｉｉ．配列番号３を含む重鎖及び配列番号４を含む軽鎖；又は
ｉｉｉ．配列番号３で定義される配列の定常領域に対して少なくとも８０％の同一性又は類似性、好ましくは９０％の同一性又は類似性を有する重鎖、及び配列番号４で定義される配列の定常領域に対して少なくとも８０％の同一性又は類似性、好ましくは９０％の同一性又は類似性を有する軽鎖；
ｂ．酢酸ナトリウム；
ｃ．グリシン；
ｄ．ポリソルベート８０、
ここで、組成物は約４．６〜約５．５のｐＨを有する。
【００６６】
また好ましくは、本発明は、本発明による方法によって得られた医薬組成物を含む容器を提供し、この方法は以下のステップを含む：
ａ．配列番号１を含む重鎖可変領域及び配列番号２を含む軽鎖可変領域を有する、約４０ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌの抗体又はその抗原結合断片を、ｐＨ約４．６〜約５．５でグリシン及びアセタートを含む緩衝液と組み合わせることにより低濃度製剤を調製するステップ；
ｂ．ａ）で得られた低濃度製剤の抗体又はその抗原結合断片を約１６０ｍｇ／ｍｌ〜１８０ｍｇ／ｍｌの濃度に濃縮することにより高濃度製剤を調製するステップ；
ｃ．ｂ）で得られた高濃度製剤にポリソルベート８０を、好ましくは約０．０１〜０．０７％（ｗ／ｖ）で添加するステップ；
ｄ．任選選択で、ステップｃ）の前に、グリシン及びアセタートを含む緩衝液で抗体又はその抗原結合断片の濃度を調整するステップ。
【００６７】
本発明の方法により得られる、容器に含まれる医薬組成物は、約４．６〜５．５のｐＨを有する。
好ましくは、緩衝液は、約２０ｍＭ〜約１００ｍＭのアセタート、好ましくは約４０ｍＭ〜約９０ｍＭのアセタート、及び約１４０ｍＭ〜約３５０ｍＭのグリシンを含む。
【００６８】
本発明による医薬組成物又は液体医薬製剤は、治療で使用するためのものである。
【００６９】
一実施形態では、治療で使用するための医薬組成物は、ｐＨ約４．６〜約５．５で、８０ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは約１２０〜約１８５ｍｇ／ｍＬの抗体又はその抗原結合断片、アセタート、グリシン、ポリソルベート８０を含む。
ここで、抗体又はその抗原結合断片（適用される場合）は以下を含む：
１）配列番号１を含む重鎖可変領域及び配列番号２を含む軽鎖可変領域；又は
２）配列番号３を含む重鎖及び配列番号４を含む軽鎖；又は
３）配列番号３で定義される配列の定常領域に対して少なくとも８０％の同一性又は類似性、好ましくは９０％の同一性又は類似性を有する重鎖、及び配列番号４で定義される配列の定常領域に対して少なくとも８０％の同一性又は類似性、好ましくは９０％の同一性又は類似性を有する軽鎖；
好ましくは、約４．６〜約５．５のｐＨで、約２０ｍＭ〜約１００ｍＭのアセタート、約１４０ｍＭ〜約３５０ｍＭのグリシン、及び約０．０１％〜約０．０７％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０。
【００７０】
別の実施形態では、治療で使用するための医薬組成物は、本発明による方法によって得られ、この方法は以下のステップを含む：
ａ．配列番号１を含む重鎖可変領域及び配列番号２を含む軽鎖可変領域を有する、約４０ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌの抗体又はその抗原結合断片を、ｐＨ約４．６〜約５．５でグリシン及びアセタートを含む緩衝液と組み合わせることにより低濃度製剤を調製するステップ；
ｂ．ａ）で得られた低濃度製剤の抗体又はその抗原結合断片を約１６０ｍｇ／ｍｌ〜１８０ｍｇ／ｍｌの濃度に濃縮することにより高濃度製剤を調製するステップ；
ｃ．ｂ）で得られた高濃度製剤にポリソルベート８０を、好ましくは約０．０１〜０．０７（ｗ／ｖ）％で添加するステップ；
ｄ．任意選択で、ステップｃ）の前に、グリシン及びアセタートを含む緩衝液で抗体又はその抗原結合断片の濃度を調整するステップ。
【００７１】
本発明による医薬組成物はまた、ＩＬ‐１７Ａ及び／又はＩＬ‐１７Ｆによって媒介される、又は増加したレベルのＩＬ‐１７Ａ及び／又はＩＬ‐１７Ｆに関連する病理学的障害の治療又は予防に使用するためのものである。
【００７２】
一実施形態では、ＩＬ‐１７Ａ及び／又はＩＬ‐１７Ｆによって媒介される、又は増加したレベルのＩＬ‐１７Ａ及び／又はＩＬ‐１７Ｆに関連する病理学的障害の治療又は予防に使用するための医薬組成物は、ｐＨ約４．６〜約５．５で、８０ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは約１２０〜約１８５ｍｇ／ｍＬの抗体又はその抗原結合断片、アセタート、グリシン、ポリソルベート８０を含み、
ここで、抗体又はその抗原結合断片（適用される場合）は以下を含む：
１）配列番号１を含む重鎖可変領域及び配列番号２を含む軽鎖可変領域；又は
２）配列番号３を含む重鎖及び配列番号４を含む軽鎖；又は
３）配列番号３で定義される配列の定常領域に対して少なくとも８０％の同一性又は類似性、好ましくは９０％の同一性又は類似性を有する重鎖、及び配列番号４で定義される配列の定常領域に対して少なくとも８０％の同一性又は類似性、好ましくは９０％の同一性又は類似性を有する軽鎖；
好ましくは、約４．６〜約５．５のｐＨで、約２０ｍＭ〜約１００ｍＭのアセタート、約１４０ｍＭ〜約３５０ｍＭのグリシン、及び約０．０１％〜約０．０７％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０。
【００７３】
好ましい一実施形態では、ＩＬ‐１７Ａ及び／又はＩＬ‐１７Ｆによって媒介される、又は増加したレベルのＩＬ‐１７Ａ及び／又はＩＬ‐１７Ｆに関連する病理学的障害の治療又は予防に使用するための医薬組成物は、本発明による方法により得られ、この方法は以下のステップを含む：
ａ．配列番号１を含む重鎖可変領域及び配列番号２を含む軽鎖可変領域を有する、約４０ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌの抗体又はその抗原結合断片を、ｐＨ約４．６〜約５．５でグリシン及びアセタートを含む緩衝液と組み合わせることにより低濃度製剤を調製するステップ；
ｂ．ａ）で得られた低濃度製剤の抗体又はその抗原結合断片を約１６０ｍｇ／ｍｌ〜１８０ｍｇ／ｍｌの濃度に濃縮することにより高濃度製剤を調製するステップ；
ｃ．ｂ）で得られた高濃度製剤にポリソルベート８０を、好ましくは約０．０１〜約０．０７（ｗ／ｖ）％で添加するステップ；
ｄ．任意選択で、ステップｃ）の前に、グリシン及びアセタートを含む緩衝液で抗体又はその抗原結合断片の濃度を調整するステップ。
【００７４】
本発明はまた、ＩＬ‐１７Ａ及び／又はＩＬ‐１７Ｆによって媒介される、又は増加したレベルのＩＬ‐１７Ａ及び／又はＩＬ‐１７Ｆに関連する病理学的障害の治療又は予防のための医薬の製造における医薬組成物の使用を提供する。ここで、医薬組成物は、約４．６〜約５．５のｐＨで、約８０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは約１２０〜約１８０ｍｇ／ｍＬの抗体又はその抗原結合断片、アセタート、グリシン、ポリソルベート８０を含む；
ここで、抗体又はその抗原結合断片（適用される場合）は以下を含む：
１）配列番号１を含む重鎖可変領域及び配列番号２を含む軽鎖可変領域；又は
２）配列番号３を含む重鎖及び配列番号４を含む軽鎖；又は
３）配列番号３で定義される配列の定常領域に対して少なくとも８０％の同一性又は類似性、好ましくは９０％の同一性又は類似性を有する重鎖、及び配列番号４で定義される配列の定常領域に対して少なくとも８０％の同一性又は類似性、好ましくは９０％の同一性又は類似性を有する軽鎖；
好ましくは、約４．６〜約５．５のｐＨで、約２０ｍＭ〜約１００ｍＭの酢酸ナトリウム、約１４０ｍＭ〜約３５０ｍＭのグリシン及び約０．０１〜約０．０７（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０。
【００７５】
１つの好ましい実施形態では、ＩＬ‐１７Ａ及び／又はＩＬ‐１７Ｆによって媒介される、又は増加したレベルのＩＬ‐１７Ａ及び／又はＩＬ‐１７Ｆに関連する病理学的障害の治療又は予防のための医薬品の製造における医薬組成物の使用。ここで、医薬組成物は、本発明による方法によって得られ、この方法は以下のステップを含む：
ａ．配列番号１を含む重鎖可変領域及び配列番号２を含む軽鎖可変領域を有する、約４０ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌの抗体又はその抗原結合断片を、ｐＨ約４．６〜約５．５でグリシン及びアセタートを含む緩衝液と組み合わせることにより低濃度製剤を調製するステップ；
ｂ．ａ）で得られた低濃度製剤の抗体又はその抗原結合断片を約１６０ｍｇ／ｍｌ〜１８０ｍｇ／ｍｌの濃度に濃縮することにより高濃度製剤を調製するステップ；
ｃ．ｂ）で得られた高濃度製剤にポリソルベート８０を、好ましくは約０．０１〜約０．０７（ｗ／ｖ）％で添加するステップ；
ｄ．任意選択で、ステップｃ）の前に、グリシン及びアセタートを含む緩衝液で抗体又はその抗原結合断片の濃度を調整するステップ。
【００７６】
約４．６〜約５．５のｐＨで、約８０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは約１２０〜約１８５ｍｇ／ｍＬの抗体又はその抗原結合断片、アセタート、グリシン、ポリソルベート８０を含む医薬組成物を投与することを含む、哺乳動物対象におけるＩＬ‐１７Ａ及び／又はＩＬ‐１７Ｆによって媒介される、又は増加したレベルのＩＬ‐１７Ａ及び／又はＩＬ‐１７Ｆに関連する病理学的障害を治療又は予防する方法もまた、本発明によって企図される。
ここで、抗体又はその抗原結合断片（適用される場合）は以下を含む：
１）配列番号１を含む重鎖可変領域及び配列番号２を含む軽鎖可変領域；又は
２）配列番号３を含む重鎖及び配列番号４を含む軽鎖；又は
３）配列番号３で定義される配列の定常領域に対して少なくとも８０％の同一性又は類似性、好ましくは９０％の同一性又は類似性を有する重鎖、及び配列番号４で定義される配列の定常領域に対して少なくとも８０％の同一性又は類似性、好ましくは９０％の同一性又は類似性を有する軽鎖；
好ましくは、約４．６〜約５．５のｐＨで、約２０ｍＭ〜約１００ｍＭのアセタート、約１５０ｍＭ〜約２５０ｍＭのグリシン、及び約０．０１〜約０．０７（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０。
【００７７】
好ましくは、病理学的障害は、感染（ウイルス、細菌、真菌及び寄生虫）、感染に関連する内毒素性ショック、関節炎、関節リウマチ、乾癬性関節炎、全身性発症若年性特発性関節炎（ＪＩＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、喘息、慢性閉塞性気道疾患（ＣＯＡＤ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性肺損傷、骨盤内炎症性疾患、アルツハイマー病、クローン病、炎症性腸疾患、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、キャッスルマン病、強直性脊椎炎、軸性脊椎関節炎及び他の脊椎関節症、皮膚筋炎、心筋炎、ブドウ膜炎、外眼炎、自己免疫性甲状腺炎、ペイロニー病、セリアック病、胆嚢疾患、毛様体疾患、腹膜炎、乾癬、アトピー性皮膚炎、血管炎、外科的癒着、脳卒中、自己免疫性糖尿病、Ｉ型糖尿病、ライム関節炎、髄膜脳炎、多発性硬化症やギラン・バー症候群などの中枢及び末梢神経系の免疫媒介性炎症性障害、他の自己免疫障害、膵炎、外傷（手術）、移植片対宿主病、移植拒絶、肺線維症、肝線維症、腎線維症を含む線維化障害、強皮症又は全身性硬化症、癌（黒色腫、肝芽腫、肉腫、扁平上皮癌、移行上皮癌、卵巣癌のような両方の固形腫瘍及び血液系悪性腫瘍、特に急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、胃癌及び結腸癌）、心筋梗塞などの虚血性疾患を含む心疾患、並びにアテローム性動脈硬化症、血管内凝固、骨吸収、骨粗しょう症、歯周炎及び低塩酸症からなる群から選択される。
【００７８】
より好ましくは、病理学的障害は、関節炎、関節リウマチ、乾癬、乾癬性関節炎、全身性発症若年性特発性関節炎（ＪＩＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、喘息、慢性閉塞性気道疾患、慢性閉塞性肺疾患、アトピー性皮膚炎、強皮症、全身性硬化症、肺線維症、クローン病、潰瘍性大腸炎、強直性脊椎炎、軸性脊椎関節炎及び他の脊椎関節症からなる群から選択される。さらにより好ましくは、病理学的障害は、関節リウマチ、乾癬、乾癬性関節炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、強直性脊椎炎及び軸性脊椎関節炎からなる群から選択される。
【００７９】
さらにより好ましくは、病理学的障害は、関節リウマチ、クローン病、潰瘍性大腸炎、乾癬、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、及び軸性脊椎関節炎からなる群から選択される。
【００８０】
本発明の好ましい一実施形態では、医薬組成物は、関節リウマチ、クローン病、潰瘍性大腸炎、乾癬、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎及び軸性脊椎関節炎の治療又は予防に使用するためのものであり、約４．６〜約５．５のｐＨで約１６０ｍｇ／ｍＬの抗体又はその抗原結合断片、アセタート、グリシン、ポリソルベート８０を含む。
ここで、抗体又はその抗原結合断片（適用される場合）は以下を含む：
１）配列番号１を含む重鎖可変領域及び配列番号２を含む軽鎖可変領域；又は
２）配列番号３を含む重鎖及び配列番号４を含む軽鎖；又は
３）配列番号３で定義される配列の定常領域に対して少なくとも８０％の同一性又は類似性、好ましくは９０％の同一性又は類似性を有する重鎖、及び配列番号４で定義される配列の定常領域に対して少なくとも８０％の同一性又は類似性、好ましくは９０％の同一性又は類似性を有する軽鎖。
【００８１】
別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、関節リウマチ、クローン病、潰瘍性大腸炎乾癬、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎及び軸性脊椎関節炎の治療又は予防に使用するためのものであり、医薬組成物は以下のステップを含む本発明による方法によって得られる：
ａ．配列番号１を含む重鎖可変領域及び配列番号２を含む軽鎖可変領域を有する、約４０ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌの抗体又はその抗原結合断片を、ｐＨ約４．６〜約５．５でグリシン及びアセタートを含む緩衝液と組み合わせることにより低濃度製剤を調製するステップ；
ｂ．ａ）で得られた低濃度製剤の抗体又はその抗原結合断片を約１６０ｍｇ／ｍｌ〜１８０ｍｇ／ｍｌの濃度に濃縮することにより高濃度製剤を調製するステップ；
ｃ．ｂ）で得られた高濃度製剤にポリソルベート８０を、好ましくは約０．０１〜約０．０７（ｗ／ｖ）％で添加するステップ；
ｄ．任意選択で、ステップｃ）の前に、グリシン及びアセタートを含む緩衝液で抗体又はその抗原結合断片の濃度を調整するステップ。
【００８２】
本発明による医薬組成物は、治療有効量で投与され得る。本明細書で使用する「治療有効量」という用語は、標的とする疾患、障害又は状態を治療、改善又は予防するため、又は検出可能な治療効果、薬理効果又は予防効果を示すために必要な治療薬（すなわち抗体）の量を指す。任意の抗体又はその抗原結合断片について、治療有効量は、最初は細胞培養アッセイ又は動物モデルのいずれかで、通常はげっ歯類、ウサギ、イヌ、ブタ又は霊長類で推定することができる。動物モデルを使用して、適切な濃度範囲及び投与経路を決定することもできる。次に、そのような情報を使用して、ヒトへの投与に有用な用量及び経路を決定することができる。
【００８３】
ヒト対象の正確な治療的有効量は、病状の重症度、対象の一般的な健康状態、対象の年齢、体重、性別、食事、投与の時間と頻度、薬物の組み合わせ、反応感受性及び治療に対する耐性／反応に依存する。この量は日常的な実験によって決定でき、臨床医の判断の範囲内である。一般に、抗体の治療有効量は、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ、例えば０．１ｍｇ／ｋｇ〜２００ｍｇ／ｋｇ又は１〜１００ｍｇ／ｋｇであろう。
【００８４】
上記の疾患及び／又は障害の治療のために、適切な投与量は、例えば、使用される特定の抗体、治療される対象、投与方法及び処置される状態の性質及び重症度に応じて変化する。特定の実施形態では、本発明による医薬組成物は、静脈内又は皮下経路によって投与される。静脈内注射を介して投与される場合、それはボーラス注射又は連続注入として投与されてもよい。本発明の実施形態のいずれかによる医薬組成物は、筋肉内注射によって投与することもできる。医薬組成物は、シリンジ、自動注射器などの注射装置、無針装置、インプラント及びパッチを使用して注射することができる。
【００８５】
本発明の液体医薬製剤は、一度に又は一連の治療にわたって患者に適切に投与され、診断以降いつでも患者に投与することができる。それは、単独の治療として、又は本明細書で前に記載した状態の処置に有用な他の薬物又は療法と組み合わせて投与することができる。
【００８６】
抗体又はその抗原結合断片は、液体医薬製剤における唯一の活性成分であり得る。あるいは、抗体又はその抗原結合断片は、組み合わせて、例えば、同時に、連続して、又は別々に、１つ又は複数の他の治療活性成分とともに投与されてもよい。本明細書で使用される活性成分は、関連する用量で、治療効果などの薬理学的効果を有する成分を指す。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の抗体又はその抗原結合断片は、他の炎症性疾患又は自己免疫疾患を治療するために、同じ又は異なる投与経路で投与される、他の抗体又は非抗体成分を含む他の活性成分を伴い得る。一実施形態では、対象は、抗ＴＮＦ抗体などの他の抗体成分又は小分子薬物分子などの非抗体成分を同時に又は順番に（前及び／又は後に）投与される。
【００８７】
次に、本発明を、添付の図面に示されている実施形態を参照して、例としてさらに説明する。
【実施例】
【００８８】
略語
抗ＩＬ‐１７Ａ／Ｆ  Ａｂ：表１の配列番号３及び４で定義される配列を有する抗ＩＬ‐１７Ａ及びＩＬ‐１７Ｆ抗体。ＡＦＴ：凍結／解凍の加速。ＢＰＰ：生物製剤パイロットプラント。ＣＣＰＳ：細胞培養プロセス科学。ＣＥＸ‐ＨＰＬＣ：陽イオン交換クロマトグラフィー-高圧液体クロマトグラフィー。ｃＩＥＦ：キャピラリー等電点電気泳動。ＤＳＬ：動的光散乱。ＤＦＳ：示差走査蛍光分析。ＤＰＳ：下流プロセス科学。ＤＴＴ：ジチオトレイトール。ＦＺＴ：凍結／解凍。ＨＭＷ：重い分子量。ＨＰＬＣ：高圧液体クロマトグラフィー。ＨＳＣ：ハイスループット自己相互作用クロマトグラフィー。ＩＡＡ：ヨードアセトアミド  ＩＣＥ：画像キャピラリー電気泳動。ＬＭＷ：低分子量。ＭＷ：分子量。ＮＰ：利用できない。ＰＣＲ：ポリメラーゼ連鎖反応。ＰＥＧ：ポリエチレングリコール。ＰＥＳ：ポリエーテルスルホン。ＰＳ２０：ポリソルベート２０。ＰＳ８０：ポリソルベート８０。ＰＴＦＥ：ポリテトラフルオロエチレン。ＰＶＤＦ：ポリフッ化ビニリデン。ＲＨ：相対湿度。ＲＳＤ％：相対標準偏差％。ＳＤＳ‐ＰＡＧＥ：ドデシル硫酸ナトリウム-ポリアクリルアミドゲル電気泳動。ｓ：秒。ＳＥＣ：サイズ排除クロマトグラフィー。ＳＥＣ-ＨＰＬＣ：サイズ排除クロマトグラフィー‐高圧液体クロマトグラフィー。ＳＩＣ：自己相互作用クロマトグラフィー。Ｔｒｐ：トリプトファン。ＷＦＩ：注射用水。ｗ／ｖ：重量／体積。
【００８９】
例１：添加剤スクリーニング
最初のスクリーニング試験は、ＳＩＣによってＢ２２（２番目のウイルス係数）値を決定し、最も成功の可能性が高い５つの上位の製剤を選択することにより、１ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ‐１７Ａ及びＩＬ‐１７Ｆ抗体に対するさまざまな添加剤の影響を調査することによって行われた（ＨＳＣ（商標）テクノロジー）。Ｂ２２の正の値は、どの添加剤が、抗ＩＬ‐１７Ａ／Ｆ  Ａｂを含む製剤の凝集や他の種類の分解につながり得るるタンパク質間相互作用をより効果的に緩和するのに役立つ可能性があるかということを示唆している。
【００９０】
さまざまな添加剤をスクリーニングした。抗体の立体配座の安定性を損なうことなく、最高のＢ２２値を返す上位の添加剤が特定された。最高の９つの添加剤と３つのバッファーシステムの可能な組み合わせの不完全な要因計画から、合計３６の製剤が生成され、結果のＢ２２値がＨＳＣ（商標）テクノロジー（Ｓｏｌｕｂｌｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（商標））を通じて測定された。
【００９１】
これらの３６の製剤の分析から、ＳＩＣを介して５つの製剤（表２）が予測され検証された（データは示していない）。表２で、Ｍは測定されたＢ２２値を意味し、Ｃは計算されたＢ２２値を意味する。
【００９２】
【表２】
2021504321.tif 000003
【００９３】
例２：最高性能の製剤に対する高濃度の抗体の影響
例１で行われた、１ｍｇ／ｍｌの抗ＩＬ‐１７Ａ／Ｆ  Ａｂで行われた試験の結果は、その後、約１６０ｍｇ／ｍｌの抗ＩＬ‐１７Ａ／Ｆ  Ａｂの濃度で検証され、代表的なものではないことがわかった。
【００９４】
スクリーンに含まれた製剤は（表３）であった：
【表３】
2021504321.tif 000004
【００９５】
２０ｍＭヒスチジン、２５０ｍＭソルビトールｐＨ６．０中の８８．７ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ‐１７Ａ／Ｆ  Ａｂは、３０ｋＤａ  ＰＥＳ膜のＭＷＣＯを備えたｖｉｖａｆｌｏｗ  ５０カセットを使用して濃縮された。抗体の損失が観察され、この予測された損失を説明するために、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ‐２５培地を含むＰＤ１０カラムを使用してバッファーを関連する製剤バッファーに交換する前に、抗体を１７５ｍｇ／ｍＬまで濃縮した。
【００９６】
バッファー交換後、関連する製剤バッファーを使用して、最終的な製剤を１６０ｍｇ／ｍＬに調整した（表３-製剤１〜６）。量はごくわずかであり、バッファー成分の濃度には影響しない）。この調整に続いて、ＰＳ２０を製剤２及び４にスパイクして最終含有量をそれぞれ０．０００４４及び０．０００２２％（ｗ／ｖ）にし、ベンジルアルコールを製剤３にスパイクして最終含有量を０．１％（ｗ／ｖ）にした。
【００９７】
層流フードの下で、製剤１〜６を２ｍＬの９６ディープウェルプレートに移し、次いで２０枚の無菌９６ウェルハーフエリアプレート（８０μＬ／ウェル）に小分けした。各試験の１ｍＬは、最初のテストのために、ＦｌｕｒｏｔｅｃコーティングされたＷｅｓｔａｒゴムストッパーとＴｒｕ‐Ｅｄｇｅ  Ｆｌｉｐ  オフシールで密封された滅菌２ｍＬ  ＳｃｈｏｔｔタイプＩガラスバイアルにも移された。
【００９８】
プレートは次のように保管した（表４；ａ：９６ウェルプレートに残った２ｍｌＳｃｈｏｔｔバイアル；ｂ：製剤１のみの場合；ｃ：製剤２〜６の場合；ｄ：製剤２〜６の場合、この測定を５週間行った）：
【００９９】
【表４】
2021504321.tif 000005
【０１００】
凍結／解凍ストレスは、低温凍結／解凍実験（ＦＺＴ）の場合０．５℃／分に、及び加速レートの凍結／解凍実験（ＡＦＴ）の場合２℃／分に設定した凍結及び解凍速度でＣｒｙｏｍｅｄ制御速度フリーザーを使用して、製剤を５回凍結／解凍することで行った。いずれの場合も、冷凍庫のプローブを、サンプルと同様の粘度の水／グリセロール溶液を含む追加のプレートのウェルに挿入した。ＦＺＴ分析は、製剤１については５℃で４週間後に行われ、製剤２〜６については５℃で８週間後に行われた。ＡＦＴ分析は、製剤１について５℃で１週間後に、製剤２〜６について５℃で５週間後に行われた。
【０１０１】
目視評価
Ｅｐｓｏｎ  Ｓｃａｎｎｅｒ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｖ７５０  ＰｒｏモデルＪ２２１Ａを使用して、カラー（１２００ｄｐｉ、２４ビット、画像処理なし）とグレースケール（１２００ｄｐｉ、１６ビット、画像処理なし）でプレートをスキャンした。Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ＤｅｖｉｃｅｓＭ５プレートリーダーを使用して自動目視検査スキャンを実行し、６００ｎｍで吸光度を測定する１ポイントウェルスキャンを実行した。
【０１０２】
目視検査では、すべての時点と条件で、製剤１は常に残りのすべての製剤よりも濁っていた。Ａ６００までに、すべての条件で、製剤１及び２は６００ｎｍでの吸光度の増加を示すようである（表８）が、増加はわずかであった。ＦＺＴ及びＡＦＴストレスの後、製剤１は６００ｎｍでの吸光度の増加を示し（表５）、ＡＦＴストレス後の増加はそれほど顕著ではない。
【０１０３】
【表５】
2021504321.tif 000006
【０１０４】
２８０ｎｍでのＵＶによるタンパク質濃度測定
サンプルを２０ｍｇ／ｍＬの公称濃度に希釈し、次に濾過脱イオン水で０．５ｍｇ／ｍＬの公称濃度に希釈した。濃度は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｍ５プレートリーダーを使用して、吸光係数１．５６ｍＬ／（ｍｇ＊ｃｍ）のフラットボトムＵＶ透明９６ウェルプレートの標準曲線と組み合わせた２８０ｎｍの吸光度を使用して決定した（サンプル量：１００μＬ）。
【０１０５】
試験の過程で、このデータには明らかな減少又は増加傾向は観察されない（表６Ａ）。
【０１０６】
【表６−Ａ】
2021504321.tif 000007
【０１０７】
ｐＨ測定
ｐＨは２３〜２５℃のＭｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ  Ｓ４７ｐＨメーターで測定した。測定前に希釈は行われなかった。
【０１０８】
５℃で保存されたサンプルの場合、試験中、すべての製剤のｐＨ値は初期値の０．２ｐＨ単位内であった（表６Ｂ）。
【０１０９】
【表６−Ｂ】
2021504321.tif 000008
【０１１０】
製剤３の場合、初期値はバッファーのみの値より０．１４高く、このバッファーでは抗体がｐＨ値を上昇させることを示唆している。製剤１と４は、ｐＨが初期の０．２ｐＨ単位内であっても、他の製剤では観察されない２か月と３か月の間に徐々に増加する傾向があるようである。２５℃で保存されたサンプルの場合、試験中、製剤２、３、５、及び６のｐＨ値は０．２ｐＨ単位内であったが、２、５、及び６はＴ１２でサンプルが残っていないため測定できなかった。２５℃で保管されたサンプルの場合、製剤１及び４では、Ｔ０４以降、２５℃及び３５℃でｐＨの大幅な増加が観察され、サンプルの劣化又は汚染を示唆している。３５℃で保存されたサンプルの場合、製剤２、５、及び６は初期の０．２ｐＨ単位内のｐＨ値を示すが、製剤６についてはＴ０８で観測された傾向外の値を示す。製剤２及び５についてはＴ１２で測定のためのサンプルが残っていなかったため、値はまだ初期の０．２ｐＨ単位内にあるので、時間の経過に伴うｐＨの増加の可能性に関して結論を出すことはできない。Ｔ１２での製剤３は、ｐＨの異常な増加を示す。
【０１１１】
サイズ排除クロマトグラフィー
分析は、９６ウェルプレートオートサンプラーを備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １２００シリーズＨＰＬＣを使用して、ろ過した移動相（０．２Ｍリン酸ナトリウムｐＨ７．０）で５ｍｇ／ｍＬに希釈したサンプルアリコートで行った。分析は次のように行った：
・サンプル負荷：５ｍｇ／ｍＬで５０μＬ（２５０μｇ）
・カラム：Ｔｏｓｏｈ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ  ＴＳＫ  Ｇｅｌ  Ｇ３０００  ＳＷＸＬ、２５０Å、５μｍ、７．８ｘ３００ｍｍ（部品番号：８５４１）
・溶離液Ａ：０．２Ｍリン酸ナトリウム、ｐＨ７．０
・流量：１ｍＬ／分
・検出：ＵＶ（波長：２８０ｎｍ、解像度：８ｎｍ、リファレンス：オフ）
・カラム温度：２５℃
・サンプル温度：４℃
・グラデーション：アイソクラティック
・最高圧力：７０ｂａｒ
・実行時間：１５分
・ポスト時間：５分
【０１１２】
データ分析は、Ｅｍｐｏｗｅｒ２ソフトウェアを使用して実行された。
【０１１３】
参照製剤ＤＳ（２０ｍＭヒスチジン中の８０ｍｇ／ｍｌの抗ＩＬ‐１７Ａ／Ｆ  Ａｂ、２５０ｍＭソルビトール、０．０２％ポリソルベート８０、ｐＨ６．０）及びＤＰ（ＤＳと同じであるが、ガラスバイアルにパッケージされている）と比較した製剤１〜６についての、ＳＥＣによるＨＭＷ種の増加％を表７に示す。
【０１１４】
５℃で保存されたサンプルの場合、１２週間後、製剤２、４、５、及び６はＤＳ及びＤＰ製剤と同様の凝集度を示し、製剤３はＤＳ及びＤＰ製剤よりも凝集の増加が大きい。断片の生成は、製剤２、３、５、及び６では最小限である（データは示していない）。
【０１１５】
２５℃で保存されたサンプルの場合、製剤３が最も効果的であったが、すべての製剤はＤＳ及びＤＰ製剤よりも性能が劣っている。すべての製剤は、製剤により断片化レベルの増加を示した（データは示していない）。製剤２は、１２週間でＨＭＷ種％の減少と断片化の大幅な増加を示す。
【０１１６】
３５℃で保存されたサンプルの場合、製剤６が最高の性能を示したが、すべての製剤はＤＳ及びＤＰ製剤よりも性能が劣っている。すべての製剤が断片化レベルの増加を示す（データは示していない）。
【０１１７】
【表７】
2021504321.tif 000009
【０１１８】
ｉＣＥ
画像化されたキャピラリー電気泳動は、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｉｍｐｌｅ  ｉＣＥ３システムを使用して実行された。分析は次のように行った：
製剤１〜６を２０ｍｇ／ｍＬの公称濃度に希釈し、次に濾過脱イオン水で２ｍｇ／ｍＬの濃度（Ａ２８０で測定された濃度を使用）に希釈した。分析は、０．２ｍｇ／ｍＬのサンプルに対して行われた（２ｍｇ／ｍＬのサンプルのマスターミックスの１／１０希釈）。以下の成分を含むマスターミックスを準備した（表８）：
【０１１９】
【表８】
2021504321.tif 000010
【０１２０】
フォーカスパラメータは次のとおりであった。１５００ボルトで１分、その後３０００ボルトで６分。結果を表９Ａ（％酸性種）及び表９Ｂ（％塩基性種）に報告する。５℃では、すべての条件と製剤で酸性種％に有意な変化は観察されず、値はすべて２〜３％以内である。
【０１２１】
２５℃で保存されたサンプルの場合、すべての製剤で酸性種％の増加が１２週間にわたって観察され、製剤１と４は大幅な増加を示す。この観察結果は、最初の混合後、これら２つの製剤で観察されたｐＨの増加に関連している可能性がある。
【０１２２】
３５℃で保存されたサンプルの場合、すべての製剤で最初の混合とその後の時点の後に、酸性種の％の大幅な増加が観察され、製剤４では１２週間で最も大きな増加を示す。凍結／解凍ストレスは、どの製剤でも酸性種の％に影響を与えない。
【０１２３】
５％の塩基性種％に関しては、製剤及び時点全体で観察された有意な変化はなかった。
【０１２４】
２５℃で保存されたサンプルの場合、製剤３、５、及び６は時間の経過とともに塩基性種％がわずかに増加し、製剤１と４は塩基性種のより大幅な増加（約２．５％）を示す。
【０１２５】
３５℃で保存されたサンプルの場合、すべての製剤で塩基性種％の増加が示され、製剤３では最も低い増加が示される。凍結／解凍ストレスは、どの製剤でも塩基性種の％に影響を与えなかった。
【０１２６】
【表９−Ａ】
2021504321.tif 000011
【０１２７】
【表９−Ｂ】
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【０１２８】
固有の蛍光
分析は、０．５ｍｇ／ｍＬの抗体で各製剤からの１００μＬのサンプルに対して行われた。この方法は、Ｔｒｐの固有の蛍光特性に基づいている。Ｔｒｐは、２８０ｎｍで励起され、水から遮蔽されると、３４０ｎｍで強く蛍光を発することが知られている。水に曝されたＴｒｐは弱い蛍光を発する。タンパク質が展開し始めると遮蔽されたＴｒｐが水に露出して蛍光が減少するため、タンパク質が凝集するとより多くのＴｒｐが遮蔽され、蛍光が増加するはずなので、この特性を使用してタンパク質の安定性を評価できる。この方法は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｄｅｖｉｃｅｓＭ５プレートリーダー（上部から読み取り、振れなし）を使用して、平底の９６ウェルの不透明な黒色蛍光プレートで、読み取り当たり６回フラッシュで２８０ｎｍの励起波長と３１０ｎｍ〜３７０ｎｍの発光波長で実施した。ブランクプレートは水であり、参照標準は０．５ｍｇ／ｍＬの５ｘ参照標準とした。結果は、参照標準に対する濃度に対して正規化され、次の計算を使用して応答係数（表１１）として報告された。
【数１】
2021504321.tif 000013
【０１２９】
５℃で１２週間にわたって、製剤２及び３は、製剤４、５及び６よりも応答係数の増加が少なく、分子が製剤２及び３の凝集の影響を受けにくいことを示唆している（表１０）。製剤２〜６のすべての製剤では、Ｔ０４で有意な増加が見られるが、これは他の条件でも観察される。これについての考えられる説明は、１か月後に製剤２〜６のすべての凝集に対する感受性が高まることであり、その後の時点では効果がはるかに少ないため、可逆的（非共有結合凝集）であろうということである。ただし、影響は条件間で類似しており、低温での影響は少ないと予想されるため、Ｔ０４でのすべての測定値が高いため、この観測は異常値のようである。これは、準備又は測定のエラーにリンクしている可能性もある。
【０１３０】
２５℃で、１２週間にわたって、製剤２は、製剤３、４、５、及び６に比べて応答係数の増加が最も少なく、この製剤では分子が凝集しにくいことを示唆している。
【０１３１】
３５℃で１２週間にわたって、製剤２と４は製剤３、５、及び６と比較して応答係数の増加が最も少なく、分子が製剤２と４の凝集の影響を受けにくいことを示唆している。
【０１３２】
遅い及び速い凍結／解凍ストレスの後、製剤２、４、及び６は、製剤３及び５よりも応答係数の増加が少なく、分子が製剤２、４、及び６の凝集の影響を受けにくいことを示唆している。
【０１３３】
製剤１の場合、すべての条件で遅い及び速い凍結／解凍ストレスをかけた後、及び１２週間後に、応答係数が減少し、この製剤ではタンパク質の展開にリンクしている可能性がある。
【０１３４】
製剤を区別するために、応答係数の変化の大きさがどの時点で重要になるかは不明であることに注意すべきである。したがって、ＳＥＣデータと相関しないため、固有の蛍光のみに基づいて製剤の性能を判断することは困難である。
【０１３５】
【表１０】
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【０１３６】
動的光散乱
分析は、Ｍａｌｖｅｒｎ  ＡＰＳ  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒと９６ウェルプレートオートサンプラーを使用して、ポリソルベート８０又はスクロース（これらの賦形剤が製剤の一部である場合）を含まない、関連するろ過バッファーで約５ｍｇ／ｍＬに希釈されたサンプルアリコートで行われた。分析は表１１に示すように、散乱角度９０°、サイズ範囲の上限０．５μｍで行った。
【０１３７】
【表１１】
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【０１３８】
ＤＬＳ測定から考慮されたパラメーターは、強度分布によるモノマー％とＰｄ％（多分散性）であった。分子のサイズがモノマーよりも６倍以上大きくない限り、ＤＬＳは分子を区別できないため、モノマー％は厳密にはモノマーではない。Ｐｄ％は、分布が単分散であるかどうかを示す。ただし、この手法ではダイマー種を検出できない場合がある。メーカーの文献によると、Ｐｄ％が２３％未満の分布は単分散、２８％未満はほぼ単分散、２８％超は多分散である。
【０１３９】
初期温度では、製剤１（９０％を超える）を除き、すべての製剤（データは示していない）について強度分布によるモノマー％は低い（約８０％未満）。５℃での試験全体を通して、値は、観察された値が約６６〜６８である製剤３を除いて、製剤２〜６では約８２及び９８％の間である。２５℃では、製剤１、３及び４は、製剤１及び３のＴ初期及び製剤４のＴ０４の後に強度が８０％未満の値に変化することにより、モノマー％での最も性能の悪い製剤である。３５℃では、製剤１、３及び４は、初期時点後の強度が８０％以下の値に変化することにより、モノマー％での最も性能の悪い製剤である。製剤５の場合、この変化はＴ０４の後に発生する。
【０１４０】
Ｐｄ％に関しては、５℃と２５℃で、すべての値が単分散分布であることを意味する２３％未満であり、条件と製剤全体で実際の傾向は観察できない。３５℃では、Ｐｄ％が２３％未満であっても、すべての製剤で増加傾向が見られる。
【０１４１】
示差走査蛍光分析
この方法は、Ａｐｐｌｉｅｄ  ＢｉｏＳｙｓｔｅｍ  ７５００  Ｆａｓｔ  Ｒｅａｌ  Ｔｉｍｅ  ＰＣＲオーブンを使用してＴｈｅｒｍｏｆｌｕｏｒによって実行された。この方法の基礎は、タンパク質が温度の上昇にさらされると、タンパク質が展開し始めることである。色素（色素は水性環境では消光されるが、非極性環境では消光されない）がタンパク質に追加され、展開が行われると、色素が露出した疎水性領域に結合し、蛍光応答を発し、これはＰＣＲオーブンの検出器により検出される。タンパク質の異なる領域には異なる熱安定性があるため、異なる温度で展開する。展開が発生する温度は、熱変性の中点として知られている。温度が高いほど、特定の環境におけるタンパク質の熱安定性が高くなる。
【０１４２】
すべてのサンプルは、関連する製剤バッファーを使用して０．１２ｍｇ／ｍＬに希釈した。四重反復調製が行われた。ポリソルベート２０、ＰＥＧ３３５０、及びベンジルアルコールの効果は不明であるため、次の測定を行った。
【０１４３】
製剤１は、ＰＥＧ３３５０あり及びなしの製剤バッファーで希釈して測定された。
製剤２及び４は、ＰＳ２０あり及びなしの製剤バッファーで希釈して測定した。
製剤３は、ベンジルアルコールあり及びなしの製剤バッファーで希釈して測定した。
製剤５及び６は、それぞれの製剤バッファー中で測定した。
【０１４４】
色素溶液は、２μＬの１０００Ｘ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｈｅｒｍａｌ  Ｓｈｉｆｔ（プロテインサーマルシフト）色素を２５０ｕｌの脱イオン水と混合して８Ｘ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｈｅｒｍａｌ  Ｓｈｉｆｔ色素溶液を得ることで調製した。
【０１４５】
アッセイのサンプル前処理は、表１２Ａに示すとおりである。
【表１２−Ａ】
2021504321.tif 000016
【０１４６】
３連のサンプルをＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ＭｉｃｒｏＡｍｐ  Ｆａｓｔ  Ｏｐｔｉｃａｌ  ９６ウェルプレートで調製し、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ＭｉｃｒｏＡｍｐ  Ｏｐｔｉｃａｌ接着フィルムで密閉した。タンパク質熱シフトソフトウェア（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｈｅｒｍａｌ  Ｓｈｉｆｔ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）をデータ分析に使用した。Ｔｍ２のみが自動的に決定することができた。Ｔｍ１は、サーモグラムの１次導関数を使用して手動で推定された。
【０１４７】
ＤＳＦによって製剤を区別できるようにするには、Ｔｍの差が２℃より大きい必要がある（表１２Ｂ）。結果は、少なくともＤＳＦによって、すべての製剤が類似していることを示した。
【０１４８】
【表１２−Ｂ】
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【０１４９】
浸透圧
分析は、メーカーのプロトコルを使用して凝固点降下を行うことにより、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｍｉｃｒｏ‐Ｏｓｍｏｍｅｔｅｒ  Ｍｏｄｅｌ  ３３２０で実行された。サンプルは３回測定された。製剤１と６は２４０ｍＯｓｍ／ｋｇ未満であり、皮下注射には適していない（表１３）。
【０１５０】
【表１３】
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【０１５１】
粘度
分析は、定常状態センシングフロースイープ法を使用するＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ＤＨＲ‐１レオメーターを使用して、７６μＬのサンプルアリコートで実行された。使用された形状は、測定中の材料の蒸発を低減するために、脱イオン水を含む溶媒トラップを備えた２０ｍｍ、１．９９°の円錐であった。定常状態センシングフロースイープ法では、定常状態に達したすべてのポイントの粘度が平均化された（合格基準：ポイント間のＲＳＤが５％以下）。
【０１５２】
定常状態センシングフロースイープ
温度：２５℃
浸漬時間：１０秒
スイープ：対数
せん断速度：２．９〜２８７．９ｓ‐１
１０あたりのポイント：５
定常状態センシング：あり
最大平衡時間：１８０秒
サンプル時間：２５秒
許容誤差％：５
連続：３以内
制御された速度：モーターモード自動
データ収集：「セーブポイント表示」
ステップの終了：なし
【０１５３】
製剤６を除くすべての製剤が適切であると見なされた（表１４）。
【表１４】
2021504321.tif 000019
【０１５４】
結論
ＳＥＣ及びＤＬＳは、差別化アッセイとして識別されている。
５℃でのＳＥＣを考慮すると、製剤３は１２週間にわたって凝集率の増加を示すが、Ｂ２２値は製剤４及び５と同様である。また、製剤２は製剤４、５及び６（２．８〜２．９）よりも高いＢ２２値（３．５）を持っており、製剤４、５、及び６よりも性能が良くないが、製剤６はタンパク質‐タンパク質の正味引力と同義である負のＢ２２を持ち、２、４、及び５と同様に高い凝集傾向をもたらす。ＤＬＳを考慮すると、５℃で保存した場合、製剤６は最もよく機能するようであったが、製剤３は最も悪い性能であった。
【０１５５】
タンパク質の自己会合は主にコロイドの安定性に関連し、部分的に展開された中間体の形成は主に立体配座の安定性に関連していることが知られている。ただし、これらの２つの集約経路を区別することが難しい場合がある。多くの場合、相対的なＢ２２値は凝集傾向を示さない。これは、測定されたＢ２２がより負で凝集傾向が低い異なる凝集傾向や条件に関係なく、異なる溶液条件で同様のＢ２２値が得られる可能性があるためである（Bajaj, H., Sharma, V.K and Kalonia, D. S., 2004, Biophys. J. 87(6), 4048-4054）。
【０１５６】
本明細書に例示される抗ＩＬ‐１７Ａ／Ｆ  Ａｂの場合、Ｂ２２値を使用したスクリーニングアプローチは、１６０ｍｇ／ｍＬでのこの分子の凝集挙動と相関していない。これは、凝集のメカニズムが１ｍｇ／ｍＬと１６０ｍｇ／ｍＬで異なるか、又はタンパク質の自己会合の傾向がこの分子の分解／凝集を主に支配するものではないという事実によると考えられる。
【０１５７】
さらに、製剤１及び６は２４０ｍＯｓｍ／ｋｇのしきい値を下回っており、浸透圧がこのような値を下回る製剤は皮下注射には適していない。したがって、それらはさらなる長期安定性評価には含まれなかった。１２週間にわたる凝集率のため、製剤３も除外された。
【０１５８】
例３：凝集試験１
本発明による抗ＩＬ‐１７Ａ／Ｆ抗体のＨＭＷ種形成の速度論を評価するために、２つの製剤バッファー：
Ａ：２０ｍＭヒスチジン、２５０ｍＭソルビトールｐＨ６．０及び
Ｂ：５５ｍＭ酢酸ナトリウム、２２０ｍＭグリシン、ｐＨ５．０
で、４種類の濃度（８０、１２０、１６０、及び２００ｍｇ／ｍＬ）の抗体とポリソルベート８０（抗体の濃度に応じて０．０２、０．０３、０．０４、及び０．０５％）で、ＨＭＷ種形成の３つの保管条件（５℃、２５℃／６０％ＲＨ及び３５℃／７５％ＲＨ）で３か月間にわたる多数の時点でＳＥＣにより試験した
【０１５９】
本発明による抗ＩＬ‐１７Ａ／Ｆ抗体は、２０ｍＭのヒスチジン、２５０ｍＭのソルビトールｐＨ６．０の元のバッファー中に約８８ｍｇ／ｍＬであったので、バッファー交換は、ポリソルベート８０なしで、ＰＥＳ膜と３０ｋＤａのＭＷＣＯを含むＶｉｖａｆｌｏｗ５０カセットを用いてバッファーＢについてのみ行った。２つの体積の製剤バッファーＢの３サイクルを実行した。
【０１６０】
製剤バッファーＡ及びＢ中の抗体は、１２０ｍｇ／ｍｌ、１６０ｍｇ／ｍｌ、及び２００ｍｇ／ｍＬの名目上の目標に濃縮された。目標値の５％以内にない濃度値は、関連するバッファーで調整された。濃度は、２８０ｎｍでの吸光係数が１．５６のＳｏｌｏＶＰＥ（Ｃａｒｙ５０分光光度計に接続されたＣ．ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓのＶａｒｉａｂｌｅ  Ｐａｔｈ  Ｅｘｔｅｎｓｉｏｎシステム）を使用して測定された。
【０１６１】
調製されたすべての製剤は、ＰＶＤＦ膜がブロックされた後にＰＥＳ膜が使用された２００ｍｇ／ｍＬの製剤Ｂを除き、０．２２μｍＰＶＤＦ膜を備えたＳｔｅｒｉｆｌｉｐチューブを使用して滅菌ろ過された。２００ｍｇ／ｍＬの製剤ＡのサンプルはＰＶＤＦ膜フィルターを使用してより簡単にろ過されたが、２００ｍｇ／ｍＬの製剤ＢのサンプルはＰＥＳメンブレンフィルターを使用してより簡単にろ過された。
【０１６２】
表１５に記載されている値が得られるように、すべての製剤に適切な量のポリソルベート８０をスパイクした。これは、層流フード内で行った。
【０１６３】
【表１５】
2021504321.tif 000020
【０１６４】
１ｍＬの充填容量を持つ３つの２ｍＬバイアルを、各濃度で各製剤用に準備した。各時点で、バイアルを層流フードに移し、サンプルごとに２ｘ１０μｌのアリコートをＳＥＣによる分析のため採取した後、バイアルを密封して、関連する保管条件に配置した。最後の時点までのヘッドスペースの減少は、１つのバイアルから取られた総容量がわずか２６０μＬであったため、試験結果に影響を与えない。保管は、５℃、２５℃／６０％ＲＨ、及び３５℃／７５％ＲＨで、初期、１、２、３、４、５、７、１０、１４、１８、２８、４２、５６及び８４日で行われた。１６０ｍｇ／ｍｌのみの製剤Ｂについて、１６８日目の追加測定を行った。
【０１６５】
サイズ排除クロマトグラフィー
分析は、９６ウェルプレートオートサンプラーを備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １２００シリーズＨＰＬＣを使用して、ろ過した移動相（０．２Ｍリン酸ナトリウムｐＨ７．０）で５ｍｇ／ｍＬに希釈したサンプルアリコートで行った。分析は次のように行った：
【０１６６】
サンプル負荷：５ｍｇ／ｍＬで５０μＬ（２５０μｇ）
カラム：Ｔｏｓｏｈ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ  ＴＳＫ  Ｇｅｌ  Ｇ３０００  ＳＷＸＬ、２５０Å、５μｍ、７．８ｘ３００ｍｍ
溶離液Ａ：０．２Ｍリン酸ナトリウム、ｐＨ７．０
流量：１ｍＬ／分
検出：ＵＶ（波長：２８０ｎｍ、解像度：８ｎｍ、リファレンス：オフ）
カラム温度：２５℃
サンプル温度：４℃；グラデーション：アイソクラティック
最大圧力：７０ｂａｒ  実行時間：１５分  ポスト時間：５分
【０１６７】
データ分析は、Ｅｍｐｏｗｅｒ２ソフトウェアを使用して実行された。
表１６及び１７に報告されている凝集率は、Ｔ０での凝集率と比較して、３か月後又は６か月後に測定された凝集に基づいて、各製剤の平均月間増加率を指している。
【０１６８】
すべての濃度で、製剤Ｂは、５℃で経時的に凝集率が低くなる最も優れた性能の製剤であった（表１６）。さらに、６か月後、５５ｍｇ酢酸ナトリウム、２２０ｍＭグリシン、０．０４％（ｗ／ｖ）ＰＳ８０ｐＨ５．０、抗ＩＬ‐１７Ａ／Ｆ  Ａｂ濃度１６０ｍｇ／ｍＬの製剤は、５℃で２０ｍＭヒスチジン、２５０ｍＭソルビトール、０．０２％（ｗ／ｖ）ＰＳ８０ｐＨ６．０中の抗ＩＬ‐１７Ａ／Ｆ  Ａｂ濃度８０ｍｇ／ｍＬで、ＤＰ製剤又は製剤化３か月後の率と同等の凝集率を示した（表１６）。５℃では、時間の経過に伴うＬＭＷ種％の有意な増加はない（データは示していない）。
【０１６９】
【表１６】
2021504321.tif 000021
【０１７０】
２５℃で、各濃度について、製剤ＡとＢは経時的に同等の凝集率を示す（表１７）。しかし、製剤Ｂは、２５℃で経時的に断片化する傾向がわずかに高く、その結果、製剤Ａは、すべての濃度で２５℃でより良い性能の製剤になる（データは示していない）。特に、２５℃では、５５ｍＭ酢酸ナトリウム、２２０ｍＭグリシン、０．０４％（ｗ／ｖ）ＰＳ８０ｐＨ５．０中、１６０ｍｇ／ｍＬで、本明細書に例示されている抗ＩＬ１７Ａ／Ｆ抗体は、２０ｍＭヒスチジン、２５０ｍＭソルビトール、０．０２％（ｗ／ｖ）ＰＳ８０ｐＨ６．０中、８０ｍｇ／ｍＬで処方された場合よりわずかに高い凝集率を示す（表１７）。ＤＰ及びＤＳ（例２に従って調製）と比較すると、両方の製剤は１６０ｍｇ／ｍＬ及び２００ｍｇ／ｍＬでより高い凝集率を示したが、８０ｍｇ／ｍｌ及び１２０ｍｇ／ｍＬでは、製剤ＢはＤＰ及びＤＳ材料と同様の凝集率を示した。
【０１７１】
【表１７】
2021504321.tif 000022
【０１７２】
３５℃で、すべての濃度において、製剤Ａはより低い凝集及び断片化率でより優れた性能を示した（表１８はＨＭＷ種％を示す）。特に、１６０ｍｇ／ｍＬの製剤Ａは、４０℃で８０ｍｇ／ｍＬのＤＰと同様の凝集率を示す（データは示していない）。ＤＳ及びＤＰは例２と同様に調製した。
【０１７３】
【表１８】
2021504321.tif 000023
【０１７４】
例４：凝集試験２
凝集率が、ＤＳ及びＤＰ材料（例２のように調製）に対して５℃と２５℃／６０％ＲＨの両方で１６０ｍｇ／ｍｌの抗ＩＬ‐１７Ａ／Ｆ抗体を含む製剤Ｂにより示されるとして、老化していない抗ＩＬ‐１７Ａ／Ｆ抗体を使用して、最初の試験（例３）の結果を検証するために、２回目の凝集試験を行った。４つの異なる抗体濃度（８０ｍｇ／ｍｌ、１２０ｍｇ／ｍｌ、１６０ｍｇ／ｍｌ及び２００ｍｇ／ｍＬ）で３つの保管条件（５℃、２５℃／６０％ＲＨ、３５℃／７５％ＲＨ）で、０．０２％、０．０３％、０．０４％又は０．０５％（ｗ／ｖ）ＰＳ８０（ＰＳ８０濃度は抗体の濃度に依存）を含む唯一の製剤５５ｍＭ酢酸ナトリウム、２２０ｍＭグリシン、ｐＨ５．０を調査した。
【０１７５】
凝集試験１と同様に、ＳＥＣを使用して３か月にわたってサンプルを調査した。３か月後も、１６０ｍｇ／ｍＬの製剤は長期安定性評価で考慮できる優れた性能を示したため、この製剤は６か月でもテストされた。バッファーとバイアルの準備、保管、ＳＥＣ方法論は、例３で説明したとおりである。
表１９Ｂ、２０Ｂ、及び２１Ｂに報告されている凝集率は、Ｔ０での凝集率と比較した、３か月後又は６か月後に測定された凝集に基づく、各製剤の平均月間率増加を指す。
【０１７６】
凝集試験２の結果は、５℃（表１９Ａ  ＨＭＷ種％とＬＭＷ種％‐表１９Ｂ、試験１と２の凝集率の比較）、２５℃／６０％ＲＨ（表２０Ａ、ＨＭＷ種％及びＬＭＷ種％-表２０Ｂ、試験１及び２の凝集率の比較）及び３５℃／７５％ＲＨ（表２１Ａ、ＨＭＷ種％及びＬＭＷ種％‐表２１Ｂ、試験１及び２）での凝集試験１の結果を確認する。
【０１７７】
【表１９−Ａ】
2021504321.tif 000024
【０１７８】
【表１９−Ｂ】
2021504321.tif 000025
【０１７９】
【表２０−Ａ】
2021504321.tif 000026
【０１８０】
【表２０−Ｂ】
2021504321.tif 000027
【０１８１】
表１９Ｂ、２０Ｂ、及び２１Ｂに示されている結果は、（新しい抗体材料を使用して実行された）凝集試験２では、凝集率と断片化が凝集試験１よりもわずかに低かったことを示す。
【０１８２】
【表２１−Ａ】
2021504321.tif 000028
【０１８３】
【表２１−Ｂ】
2021504321.tif 000029
【０１８４】
例５：長期安定性試験
両方の凝集試験（例３及び４）及び１６０ｍｇ／ｍＬでの添加剤スクリーニング試験（例２）の結果を考慮して、長期安定性評価のために次の製剤を選択した（表２２）。すべての製剤は、本明細書に例示されている１６０ｍｇ／ｍｌの抗ＩＬ‐１７Ａ／Ｆ  Ａｂを含み、５サイクルの凍結／解凍に供された。
【０１８５】
【表２２】
2021504321.tif 000030
【０１８６】
製剤調製の間、製剤Ａ、Ｂ、及びＣのバッファー交換サイクルは製剤Ｅよりも時間がかかった（製剤Ａ〜Ｃでは約９０分、製剤Ｅでは５０分）。製剤Ａ及びＢは同様に挙動し、バッファー交換及び濃縮ステップの両方の間、両方の製剤は濁っていた。さらに、これらの各製剤のフラッシュは曇っており、乳白色であった。製剤Ｃも、バッファー交換及び濃縮ステップの間、曇っていた。Ｅは他の製剤と比較して最も濃縮及びろ過されているように見えたが、製剤ＤとＥには目立った違いはなかった。浸透圧（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｍｕｌｔｉ‐Ｏｓｍｅｔｔｅｒ  ２４３０で測定）、粘度（Ａｎｔｏｎ  Ｐａａｒ  Ａｕｔｏｍａｔｅｄ  Ｍｕｌｔｉ  Ｖｉｓｃｏｍｅｔｅｒで測定）、ｐＨ（Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ  ＳｅｖｅｎＭｕｌｔｉ）、目視外観、２８０ｎｍでの吸光度（Ａｇｉｌｅｎｔ  ８４５３分光光度計）、ＳＤＳ‐ＰＡＧＥ分析、ｃＩＥＦ（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｉｍｐｌｅ  ｉＣＥ２８０システムで測定、例２を参照）、結合活性（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ１００システムで測定、光遮蔽（ＨａｃｈＬａｎｇｅのＨＩＡＣ  ９７０３システム）による目に見えない粒子分析）、ＣＥＸ‐ＨＰＬＣ及びＳＥＣ‐ＨＰＬＣ測定を、０、１か月、２か月、３か月、４か月、６か月の時点で６か月の期間（粘度と浸透圧は０の時点でのみ測定された）にわたって行った。明示されていなければ方法は例２に記載の通りとした。６か月の時点で、製剤Ｄのサンプルのみが評価された。すべての製剤について、１．０ｍＬのサンプル充填容量が使用された。凍結／解凍試験では、すべての製剤が−７０℃で１２時間以上保存され、その後完全に解凍されるまで（≧２時間）室温で保存された。これを合計５サイクルの凍結／解凍で繰り返した。
【０１８７】
粘度
粘度は、Ａｎｔｏｎ  Ｐａａｒ自動マルチ粘度計（Ａｎｔｏｎ  Ｐａａｒ  Ａｕｔｏｍａｔｅｄ  Ｍｕｌｔｉ  Ｖｉｓｃｏｍｅｔｅｒ）を使用して測定した。製剤Ａ〜Ｅの粘度値をゼロ時でテストした。すべての製剤は、２．３〜１７．３ｃＰの範囲の粘度値を示した。サンプルは室温（約２５．００±０．０１℃）で評価された。
【０１８８】
浸透圧
浸透圧は、Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｍｕｌｔｉ‐Ｏｓｍｅｔｔｅｒ  ２４３０を使用して実行された。希釈は実行しなかった。浸透圧は、すべての製剤についてゼロ時にテストした。浸透圧値は３１６ｍＯｓｍ／ｋｇ〜４５０ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲であった。
【０１８９】
ｐＨ
ｐＨは、Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ  ｓｅｖｅｎＭｕｌｔｉｐＨメーターを使用して２５℃で測定されている。希釈は行わなかった。各データポイントで、各製剤のｐＨをテストした。最初の６か月の安定性の間、各時点での製剤Ａ及びＢのｐＨは５．５±０．１、製剤ＣのｐＨは５．７±０．１、製剤ＥのｐＨは６．２±０．２であった。１２か月の安定性を通じて、製剤ＤのｐＨは５．１であった。ゼロ時と比較して、凍結解凍試験中に評価された５つの製剤のいずれについてもｐＨの変化は観察されなかった。
【０１９０】
外観
凍結解凍を含む１２か月の安定性の各時点で、各製剤の外観を評価した。最初の６か月の安定性のすべての製剤について、外観は「黄褐色の透明な溶液で、目に見える微粒子がない」であった。４ヶ月後の時点で、外観は「透明で黄色の液体で、目に見える微粒子がない」と判断された。すべての製剤の外観に観察された変化は、分析者のばらつきに起因する可能性がある。したがって、１２か月の安定性の間、製剤間に違いはなかった。
【０１９１】
２８０ｎｍでの吸光度
タンパク質濃度は、Ａｇｉｌｅｎｔ  ８４５３分光光度計を使用して測定した。サンプルはそれぞれのバッファーで０．５ｍｇ／ｍＬに重量測定で希釈された。各製剤の分析前に、製剤バッファーを使用してシステムをブランクにした。凍結解凍試験又は１２か月の安定性試験の経過にわたって明確な傾向は観察されず、濃度の変化がアッセイの変動範囲内にあったことが示唆される。５つの製剤のいずれについても、濃度の一貫した低下は観察されなかった。
【０１９２】
ＳＤＳ‐ＰＡＧＥ
ＳＤＳ‐ＰＡＧＥ分析は、レーンあたり３μｇ（ＩＡＡの非還元条件）又は４μｇ（ＤＴＴの還元条件）の負荷（ローディング）で４〜２０％トリス‐グリシン（Ｔｒｉｓ‐Ｇｌｙｃｉｎｅ）ゲルを使用して行った。変性は、サンプルを７０℃で５分間インキュベートすることにより行われた。使用した染色はコロイダルブルーであった。
【０１９３】
還元ＳＤＳ‐ＰＡＧＥによる安定性サンプルの分析では、加速条件及びストレス条件で実行された測定を除いて、いずれの製剤についても重鎖（ＨＣ）＋軽鎖（ＬＣ）の％に傾向（増加又は減少）はなかった。２５℃／６０％ＲＨ条件では、すべての製剤でＨＣ＋ＬＣ％の減少が観察され、４０℃／７５％ＲＨで製剤でより大きな減少が観察された。それらの条件での各製剤について、新しい種の形成が観察された。凍結解凍試験中に評価された製剤のいずれにも変化は観察されなかった。
【０１９４】
非還元ＳＤＳ‐ＰＡＧＥによる安定性サンプルの分析は、すべての製剤及び条件にわたって観察されたＩｇＧ％の一般的な減少を示した。ＩｇＧ％の最大の減少は、２５℃／６０％ＲＨ及び４０℃／７５％ＲＨで保存された製剤で観察された。凝集種の形成は、４０℃／７５％ＲＨでの製剤Ｄで特に明白であった。凍結解凍試験中に評価された製剤のいずれにも変化は観察されなかった。
【０１９５】
ｃＩＥＦ
−７０℃と２〜８℃で保存された製剤の主ピーク％は、１２か月の安定性の間にほとんど又はまったく変化を示さなかった。２５℃／６０％ＲＨで保存したすべての製剤のメインピーク面積％の減少が観察され、４０℃／７５％ＲＨの製剤で保存した場合、より大きな減少が観察された。この減少は、製剤Ｄでわずかに高く、製剤Ｅでわずかに低かった。
【０１９６】
すべての製剤について、−７０℃と２〜８℃での酸性種％の変化は観察されなかった。２５℃／６０％ＲＨ及び４０℃／７５％ＲＨの製剤で保存された製剤の酸性種％の増加が観察された。製剤Ｄでは、２５℃／６０％ＲＨで観察された酸性種％の増加がわずかに高かった。４０℃／７５％ＲＨでは、製剤ＢとＤは酸性種％の増加がわずかに高く、製剤Ｅはわずかに低い増加を示した。
【０１９７】
−７０℃と２〜８℃で保存された製剤では、塩基性種％の有意な変化は観察されなかった。２５℃／６０％ＲＨで保存された製剤でわずかな増加が観察され、４０℃／７５％ＲＨで保存された製剤Ａでは塩基性種％のさらに大きな増加が観察された。２か月の時点で、キャピラリーの問題により分離能が失われ、すべての製剤と条件で塩基性種の％が減少した。すべての時点で、塩基性種の％により大きなばらつきがあった。
【０１９８】
凍結解凍製剤Ａ〜Ｅでは、酸性種、メイン種、又は塩基性種の変化は観察されなかった。
【０１９９】
ビアコア（Ｂｉａｃｏｒｅ）
ＩＬ‐１７Ａ及びＩＬ‐１７Ｆの結合は、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ１００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して測定された。すべての実験は２５℃で行われた。Ａｆｆｉｎｉｐｕｒｅ  Ｆ（ａｂ’）２断片ヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆｃ断片特異的（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、カテゴリー＃１０９‐００６‐０９８、ロット＃８３２９５）が、約７０００応答単位（ＲＵ）の捕捉レベルへのアミンカップリング化学反応を介してＣＭ５センサーチップ（Ｂｉａｃｏｒｅ  ＡＢ、カテゴリー＃ＢＲ１０００‐１４、ロット＃１００３０６０８から使用されたさまざまなチップ）上に固定した。ＨＢＳ‐ＥＰバッファー（１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳｐＨ７．４、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．００５％Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ  Ｐ２０、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を、流速１０μＬ／ｍｉｎのランニングバッファーとして使用した。０．５μｇ／ｍＬの抗体の各サンプルの１０μＬ注入をキャプチャに使用した。組換えヒトＩＬ‐１７Ａ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号３１７‐ＩＬＢ）及びＩＬ‐１７Ｆ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号１３３５‐ＩＬ）は、それぞれ１０ｎＭ〜２．５ｎＭ及び１０ｎＭ〜１．２５ｎＭの２倍希釈で、捕捉された抗ＩＬ１７ＡＦ抗体に対して３０μＬ／分の流速で滴定された。４０ｍＭ  ＨＣｌを１０μＬ注入し、その後５ｍＭ  ＮａＯＨを５μＬ注入することで、流速１０ｕＬ／ｍｉｎで表面を再生した。
【０２００】
二重参照バックグラウンドを差し引いた結合曲線を、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア（バージョン３．２）を使用して標準手順に従って分析した。速度論的パラメーターは、フィッティングアルゴリズム（Ｂｉａｃｏｒｅ  １：１ラングミュアバインディングフィット）から決定された。
最初の１２か月の安定性の間、結合活性に傾向は見られず、ＫＤの変化がアッセイの変動内にあることが示唆された。凍結解凍試験サンプルの評価は、１か月の安定性サンプルと並行して行われた。これらのサンプルでは変化は観察されず、ＫＤのわずかな変化はアッセイの変動の範囲内である。
【０２０１】
サイズ排除クロマトグラフィー
ＳＥＣは、次のパラメーターを備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １２００シリーズシステムを使用して、ろ過された溶離液Ａで１ｍｇ／ｍＬに希釈されたサンプルアリコートで実行された。
サンプル負荷：１ｍｇ／ｍＬで２０μＬ（２０μｇ）
・カラム：Ｔｏｓｏｈ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ  ＴＳＫゲル  Ｇ３０００  ＳＷＸＬ、２５０Å、５μｍ、７．８ｘ３００ｍｍ（部品番号：８５４１）
・溶離液Ａ：０．０５Ｍ  Ｎａ２ＨＰＯ４、０．２５Ｍ  ＮａＣｌ  ｐＨ７．２
・流量：０．５ｍＬ／分
・検出：ＵＶ（波長：２８０ｎｍ、解像度：８ｎｍ、リファレンス：オフ）
・カラム温度：２０±５℃
・サンプル温度：６±２℃
・グラデーション：アイソクラティック
・最大圧力：７０ｂａｒ
・実行時間：３５分
【０２０２】
すべての製剤について、−７０℃でのメインピーク％の変化は観察されず、２〜８℃でわずかな変化が観察された。２５℃／６０％ＲＨで保存されたすべての製剤でメインピーク％の減少が観察され、４０℃／７５％ＲＨで保存された製剤ではさらに大きな減少が見られた。全体として、製剤Ｄは、２５℃／６０％ＲＨで６か月の安定性と４０℃／７５％ＲＨで３か月の安定性で、メインピーク％の最大の減少を示した。
−７０℃で保存されたすべての製剤のＨＭＷ種％及びＬＭＷ種％に有意な変化は観察されなかった。ＨＭＷ％はわずかに増加したが、２〜８℃で保存された製剤のＬＭＷ％に目立った変化はなかった。６か月の安定性で、製剤Ａ、Ｂ、及びＤの方が製剤Ｃ及びＥに比べて凝集率が低かった。２５℃／６０％ＲＨ及び４０℃／７５％ＲＨの条件では、ＨＭＷとＬＭＷの両方の種について増加が観察された。製剤Ｄは、２５℃／６０％ＲＨで６か月の安定性と、４０℃／７５％ＲＨで３か月の安定性で、ＨＭＷとＬＭＷの両方の種で最大の増加を示した。凍結解凍試験中に評価された製剤のいずれにも変化は観察されなかった。
【０２０３】
陽イオン交換クロマトグラフィー
ＣＥＸは、以下のパラメーターを備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １１００システムを使用して、溶離液Ａで１ｍｇ／ｍＬに希釈されたサンプルアリコートで実行された。
サンプル負荷：２０μＬ（２０μｇ）
カラム：ＢｉｏＭＡｂ、ＮＰ５、ＰＫ、４．６＊２５０ｍｍ＃Ａｇｉｌｅｎｔ  ５１９０‐２４０７
溶離液Ａ：１０ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ６．０
溶離液Ｂ：１０ｍＭリン酸ナトリウム、１Ｍ  ＮａＣｌ、ｐＨ６．０
流量：１ｍＬ／分
波長：２２０ｎｍ帯域幅８ｎｍ／２２０ｎｍ帯域幅８ｎｍ、リファレンス３６０ｎｍ帯域幅１００、スリット４ｎｍ
ピーク幅：０．１ｍｉｎ（２ｓ）
カラム温度：２５℃
サンプル温度：４℃
【０２０４】
勾配：
時間（分）                Ｂ％
０                        ２
４０                      １５
４０．０２                １００
４５                      １００
４５．０２                ２
６０                      ２
【０２０５】
１２か月の安定性におけるすべての製剤と条件で、−７０℃又は２〜８℃の条件でメインピーク面積％に変化はなかった。２５℃／６０％ＲＨで減少が観察され、４０℃／７５％ＲＨのストレス条件でさらに減少した。２５℃／６０％ＲＨでは、すべての製剤がアッセイの変動範囲内で同様の挙動を示した。４０℃／７５％ＲＨで、製剤Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤは同様に挙動し、製剤Ｅは減少が少ないことを示した。−７０℃と２〜８℃で保存された製剤の１２か月の試験で、酸性種と塩基性種の面積％は変化しなかった。ただし、２５℃／６０％ＲＨ及び４０℃／７５％ＲＨで保存された製剤のメインピーク％の減少は、主に、酸性種の面積％の増加に対応しているが、塩基性種の面積％で観察された増加はより小さかった。すべての製剤は、アッセイの変動範囲内で同様の挙動を示した。ＣＥＸメソッドは、変動性が高く、酸性種では５％、塩基性種では９％である。
【０２０６】
メインピーク％、酸性ピーク％、又は塩基性ピーク％領域での凍結解凍ストレスサンプルの変化は観察されなかった。
【０２０７】
ＨＩＡＣ
ＨＡＣＨ  Ｌａｎｇｅ  ＨＩＡＣ９７０３システムを使用して、２００μＬのサンプルを１０００μＬのＷＦＩに希釈することにより、光の遮へいによる目に見えない粒子の分析を行った。２、５、１０、及び２５μｍ以上の粒子について２つの５００μＬ吸引を分析し、２回目の吸引からのデータを希釈について補正し（結果に５を掛けたもの）、粒子／ｍＬとして報告した。
【０２０８】
結果は、１２か月間でかなり一貫しており、アッセイ内の変動により差異が発生した。凍結解凍ストレスサンプルの変化は観察されなかった。
【０２０９】
結論
サンプルを２〜８℃の条件で保存すると、ＳＥＣの結果のみが製剤間の差異を示した。すべての製剤は同様の低レベルの断片化を示すが、製剤Ａ、Ｂ、及びＤは試験の過程で最も低い凝集を示し、ＤはＨＭＷ種の初期レベルが低くなっている。ＳＥＣの結果と処理の観察結果を組み合わせることで、製剤の有効期間は５℃で、加速試験又はストレス試験で使用されているのと同様の条件下ではないことが想定されているため、また、抗ＩＬ‐１７Ａ／Ｆ  Ａｂの１６０ｍｇ／ｍｌの製剤Ｄが８０ｍｇ／ｍｌのＤＰと同等のプロファイルを持ち、処理の問題を軽減したという事実にも照らして、２〜８℃で製剤Ｄが最も効果的であり、製剤Ｅが続くという結論につながる。
【０２１０】
例６：選択された製剤の３か月の製剤堅牢性スクリーン試験
ＳＡＳのＪＭＰバージョン１１統計ソフトウェアを使用して、３つの中心点を持つ部分実施要因計画を使用するＤｏＥが生成された。これは、５±３℃及び２５±２oＣ／６０±５％ＲＨの２つの条件で１２週間にわたって主な効果と相互作用をテストすることにより、以下の製剤変数の一次スクリーニングを目的としている。
・アセタート濃度（５５ｍＭ±２０％）
・グリシン濃度（２２０ｍＭ±２０％）
・ポリソルベート８０濃度（０．０４％±０．０２％）
・ｐＨ（４．９±０．３）
・タンパク質濃度（１６０±１５％）
【０２１１】
本明細書に例示される抗ＩＬ１７Ａ／Ｆ抗体を含む製剤は、表２３に詳述されるように作製された。製剤２０は、低タンパク質及び賦形剤濃度の安定性への影響を評価するために加えられた。製剤は、ＰＳ８０なしで表２３に詳述された関連する製剤において、本明細書に例示される抗ＩＬ１７Ａ／Ｆ抗体を５０ｍｇ／ｍＬでバッファー交換することにより調製された。タンパク質濃度を表２３に記載されている目標濃度に調整する前に、７サイクルを実行した。製剤２０は、製剤９を希釈して調製した。ＰＳ８０の１０％原液を使用して、各製剤をスパイクし、表２３に詳述する目標ＰＳ８０濃度に達した。
【０２１２】
【表２３】
2021504321.tif 000031
【０２１３】
滅菌濾過後、各製剤の１ｍＬを、５±３℃及び２５±２℃／６０±５％ＲＨでの初期テスト及び保管のために、ＦｌｕｒｏｔｅｃコーティングされたＷｅｓｔａｒストッパー及びＴｒｕ‐Ｅｄｇｅ  Ｆｌｉｐオフシールで密封された２ｍＬ  Ｓｃｈｏｔｔ  Ｔｙｐｅ  １  Ｇｌａｓｓバイアルに移した。
【０２１４】
表２３に詳述されているｐＨと浸透圧はＴ初期で測定され、視覚的評価とＳＥＣ及びｉＣＥは４、８、及び１２週（Ｔ１２ｗ）で行われた。ＳＥＣは、ろ過された溶離液Ａ（０．０５Ｍ  Ｎａ２ＨＰＯ４、０．２５Ｍ  ＮａＣｌ  ｐＨ７．２）で１ｍｇ／ｍＬに希釈されたサンプルアリコートについて、以下のパラメーターを備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １２００シリーズシステムを使用して実行された。
【０２１５】
・サンプル負荷：１ｍｇ／ｍＬで２０μＬ（２０μｇ）
・カラム：Ｔｏｓｏｈ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ  ＴＳＫゲル  Ｇ３０００  ＳＷＸＬ、２５０Å、５μｍ、７．８ｘ３００ｍｍ（部品番号：８５４１）
・流量：０．５ｍＬ／分
・検出：ＵＶ（波長：２８０ｎｍ、解像度：８ｎｍ、リファレンス：オフ）
・カラム温度：２０±５℃
・サンプル温度：６±２℃
・グラデーション：アイソクラティック
・最大圧力：７０ｂａｒ
・実行時間：３５分
【０２１６】
データ分析は、Ｅｍｐｏｗｅｒ３ソフトウェアを使用して実行された。
すべての製剤について、５℃で保存されたすべての製剤のＬＭＷ種％に有意な変化は観察されなかったが、２５℃で保存されたすべての製剤で増加が観察された。予想どおり、すべての製剤で１２週間にわたってＨＭＷ種％の増加が観察され、２５℃で保存された製剤は５℃で保存されたものよりも顕著な増加を示した（表２４）。
【０２１７】
【表２４】
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【０２１８】
イメージキャピラリー電気泳動は、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｉｍｐｌｅ  ｉＣＥ３システムを使用して実行された。分析は次のように行った：
サンプルを２０ｍｇ／ｍＬの公称濃度に希釈し、次にろ過した脱イオン水で２ｍｇ／ｍＬの濃度に希釈した。分析は、０．２ｍｇ／ｍＬのサンプルに対して行われた（２ｍｇ／ｍＬのサンプルのマスターミックスの１／１０希釈）。以下の成分を含むマスターミックスを調製した（表２５）。
【０２１９】
【表２５】
2021504321.tif 000033
【０２２０】
フォーカスパラメータは次のとおりである。１５００ボルトで１分、その後３０００ボルトで６分。表２６に示すように、すべての製剤について、５℃で保存された製剤の酸性種％及び塩基性種％の有意な変化は観察されなかった。ＨＭＷ種％については、２５℃で保存された製剤は、５℃で保存されたものよりも酸性種％及び塩基性種％の増加が顕著であった（表２６）。
【０２２１】
【表２６】
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【配列表フリーテキスト】
【０２２２】
配列番号１：＜２２３＞重鎖可変領域
配列番号２：＜２２３＞軽鎖可変領域
配列番号３：＜２２３＞重鎖
配列番号４：＜２２３＞軽鎖
【配列表】
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【国際調査報告】
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