(57)【要約】  本発明は、標的細胞抗原に結合する細胞外受容体ドメイン及びＮＫ細胞の表面上に細胞外受容体ドメインを固着するための膜貫通ドメインを含む接着受容体を発現する改変ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む組成物に関する。かかる接着受容体を発現するＮＫ細胞は、特殊化細胞、例えばがん細胞又は感染症に冒された細胞を標的にする増強された能力を有する。いくつかの例示された実施形態は、Ｈｅｒ２又はＰＳＭＡがん抗原を標的にするｓｃＦｖを含む接着受容体を発現するＮＫ細胞に関し、ＮＫ細胞が標的細胞に結合するとき、ＮＫ細胞は細胞傷害性及び／又は細胞溶解性効果を示す。【特許請求の範囲】
【請求項１】
接着受容体をコードするポリヌクレオチドであって、前記接着受容体が、
（ａ）標的細胞抗原に結合するペプチドを含む細胞外受容体ドメインであって、
ここで前記標的細胞抗原が、健常細胞と標的細胞との間で差次的に発現され；
ここで前記標的細胞が、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞による認識及び破壊のために標的にされ；
ここで標的細胞抗原に結合する前記ペプチドが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）2、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ミニボディ、二重特異性抗体、及び単一ドメイン抗体、それらの機能的誘導体、それらの変異体又はそれらの断片を含む、細胞外受容体ドメイン；並びに
（ｂ）前記細胞外受容体ドメインを前記ＮＫ細胞の表面上に固着する膜貫通ドメイン
を含む、ポリヌクレオチド。
【請求項２】
前記標的細胞抗原が、疾患に関連する、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３】
前記疾患が、新生物、がん、又は腫瘍である、請求項２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４】
前記標的細胞抗原が、腫瘍関連抗原である、請求項３に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５】
前記標的細胞抗原が、腫瘍特異抗原である、請求項３に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６】
前記疾患が、ウイルス、細菌、真菌及び／又は寄生虫感染である、請求項２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項７】
前記標的細胞抗原が、ウイルス、細菌、真菌又は寄生虫抗原である、請求項６に記載のポリヌクレオチド。
【請求項８】
前記標的細胞抗原が、ＣＤ１２３、ＣＤ１９、４−１ＢＢ、アディポフィリン、ＡＦＰ、ＡＩＭ−２、アネキシンＩＩ、ＡＲＴ−４、ＢＡＧＥ、ｂ−カテニン、ｂｃｒ−ａｂｌ、ｂｃｒ−ａｂｌｐ１９０（ｅ１ａ２）、ｂｃｒ−ａｂｌｐ２１０（ｂ２ａ２）、ｂｃｒ−ａｂｌｐ２１０（ｂ３ａ２）、ＢＩＮＧ−４、ＣＡＧ−３、ＣＡＩＸ、ＣＡＭＥＬ、カスパーゼ−８、ＣＤ１７１、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤＣ２７、ＣＤＫ−４、ＣＥＡ、ＣＬＣＡ２、Ｃｙｐ−Ｂ、ＤＡＭ−１０、ＤＡＭ−６、ＤＥＫ−ＣＡＮ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ−２、ＥＧＰ−４０、ＥＬＦ２、Ｅｐ−ＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ｅｒｂ−Ｂ２、ｅｒｂ−Ｂ３、ｅｒｂ−Ｂ４、ＥＳ−ＥＳＯ−１ａ、ＥＴＶ６／ＡＭＬ、ＦＢＰ、胎児アセチルコリン受容体、ＦＧＦ−５、ＦＮ、Ｇ２５０、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＧＡＧＥ−３、ＧＡＧＥ−４、ＧＡＧＥ−５、ＧＡＧＥ−６、ＧＡＧＥ−７Ｂ、ＧＡＧＥ−８、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧｎＴ−Ｖ、Ｇｐ１００、ｇｐ７５、Ｈｅｒ−２、ＨＬＡ−Ａ*０２０１−Ｒ１７０Ｉ、ＨＭＷ−ＭＡＡ、ＨＳＰ７０−２Ｍ、ＨＳＴ−２（ＦＧＦ６）、ＨＳＴ−２／ｎｅｕ、ｈＴＥＲＴ、ｉＣＥ、ＩＬ−１１ＲＩ、ＩＬ−１３ＲＩ２、ＫＤＲ、ＫＩＡＡ０２０５、Ｋ−ＲＡＳ、Ｌ１−細胞接着分子、ＬＡＧＥ−１、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、ルイスＹ、ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−１０、ＭＡＧＥ−１２、ＭＡＧＥ−２、ＭＡＧＥ−３、ＭＡＧＥ−４、ＭＡＧＥ−６、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ｂ１、ＭＡＧＥ−Ｂ２、リンゴ酸酵素、マンマグロビン−Ａ、ＭＡＲＴ−１／Ｍｅｌａｎ−Ａ、ＭＡＲＴ−２、ＭＣ１Ｒ、Ｍ−ＣＳＦ、メソセリン、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ２、ＭＵＭ−１、ＭＵＭ−２、ＭＵＭ−３、ミオシン、ＮＡ８８−Ａ、Ｎｅｏ−ＰＡＰ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＰＭ／ＡＬＫ、Ｎ−ＲＡＳ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＯＡ１、ＯＧＴ、がん胎児性抗原（ｈ５Ｔ４）、ＯＳ−９、Ｐポリペプチド、Ｐ１５、Ｐ５３、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＡ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＰＴＰＲＫ、ＲＡＧＥ、ＲＯＲ１、ＲＵ１、ＲＵ２、ＳＡＲＴ−１、ＳＡＲＴ−２、ＳＡＲＴ−３、ＳＯＸ１０、ＳＳＸ−２、サバイビン、サバイビン−２Ｂ、ＳＹＴ／ＳＳＸ、ＴＡＧ−７２、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、ＴＧＦａＲＩＩ、ＴＧＦｂＲＩＩ、ＴＰ１、ＴＲＡＧ−３、ＴＲＧ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ＴＲＰ−２／ＩＮＴ２、ＴＲＰ−２−６ｂ、チロシナーゼ、ＶＥＧＦ−Ｒ２、及びＷＴ１の１つ以上を含む、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項９】
前記標的細胞抗原が、Ｈｅｒ２である、請求項３に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１０】
前記標的細胞抗原が、ＰＳＭＡである、請求項３に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１１】
前記ポリヌクレオチドによってコードされる前記接着受容体を発現するＮＫ細胞が、前記接着受容体を発現しないＮＫ細胞と比べられるとき、より迅速に標的細胞に結合する、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１２】
前記ポリヌクレオチドによってコードされる前記接着受容体を発現するＮＫ細胞が、前記接着受容体を発現しないＮＫ細胞と比べられるとき、腫瘍又は感染部位への増強されたホーミングを有する、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１３】
前記ポリヌクレオチドによってコードされる前記接着受容体を発現するＮＫ細胞が、前記接着受容体を発現しないＮＫ細胞と比べられるとき、標的細胞抗原を提示する細胞に対して増強された細胞傷害活性を示す、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１４】
前記ポリヌクレオチドによってコードされる前記接着受容体を発現するＮＫ細胞が、前記接着受容体を発現しないＮＫ細胞と比べられるとき、低減されたオフターゲット細胞傷害性効果を有する、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１５】
標的細胞抗原に結合する前記ペプチドが、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１６】
前記接着受容体が、抗Ｈｅｒ２  ｓｃＦｖを含む、請求項１５に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１７】
前記ｓｃＦｖが、配列番号５８の核酸配列によってコードされる、請求項１６に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１８】
前記ｓｃＦｖが、配列番号５９のアミノ酸配列を含む、請求項１６に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１９】
前記接着受容体が、配列番号６０の核酸配列によってコードされる、請求項１６に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２０】
前記接着受容体が、配列番号６１のアミノ酸配列を含む、請求項１６に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２１】
前記接着受容体が、抗ＰＳＭＡ  ｓｃＦｖを含む、請求項１５に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２２】
前記ｓｃＦｖが、配列番号６２の核酸配列によってコードされる、請求項２１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２３】
前記ｓｃＦｖが、配列番号６３のアミノ酸配列を含む、請求項２１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２４】
前記接着受容体が、配列番号６４の核酸配列によってコードされる、請求項２１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２５】
前記接着受容体が、配列番号６５のアミノ酸配列を含む、請求項２１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２６】
前記細胞外受容体ドメインが、前記第１のペプチドとは異なる標的細胞抗原に結合する第２のペプチドをさらに含む、請求項１〜２５のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２７】
前記細胞外受容体ドメインが、前記第１のペプチドと同じ標的細胞抗原に結合する第２のペプチドをさらに含む、請求項１〜２５のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２８】
第２の接着受容体をコードする、請求項１〜２５のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２９】
前記第１及び第２の接着受容体が、異なる標的細胞抗原に結合する、請求項２８に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３０】
前記第１及び第２の接着受容体が、前記同じ標的細胞抗原に結合する、請求項２８に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３１】
前記第１及び第２の接着受容体が、前記同じ標的細胞抗原の異なるエピトープに結合する、請求項２８に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３２】
前記接着受容体が、二量体化するように形成される、請求項１〜２５のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３３】
前記細胞外受容体ドメインが、シグナルペプチドをさらに含む、請求項１〜２５のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３４】
前記細胞外受容体ドメインが、ヒンジ領域をさらに含む、請求項１〜２５のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３５】
前記ポリヌクレオチドが、（ａ）ナチュラルキラーグループ２メンバーＤ（ＮＫＧ２Ｄ）の天然リガンドに結合するペプチドを含む細胞外受容体ドメイン；及び（ｂ）膜貫通領域及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むエフェクタードメイン、を含むキメラ受容体をさらにコードする、請求項１〜２５のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３６】
膜結合型インターロイキン１５（ｍｂＩＬ１５）をコードする追加的な構築物と同時発現される、請求項３５に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３７】
ｍＲＮＡである、請求項１〜３６のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３８】
前記接着受容体の発現のため、少なくとも１つの調節エレメントに作動可能に連結される、請求項１〜３７のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３９】
前記ポリヌクレオチドが、前記接着受容体の発現のため、少なくとも１つの調節エレメントに作動可能に連結される、請求項１〜３８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項４０】
レトロウイルスである、請求項３９に記載のベクター。
【請求項４１】
請求項３５に記載のポリヌクレオチドを含む遺伝子改変ナチュラルキラー細胞。
【請求項４２】
患者から単離された自家細胞である、請求項４１に記載の遺伝子改変ナチュラルキラー細胞。
【請求項４３】
ドナーから単離された同種細胞である、請求項４１に記載の遺伝子改変ナチュラルキラー細胞。
【請求項４４】
請求項１〜３４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、並びに
（ｉ）（ａ）ナチュラルキラーグループ２メンバーＤ（ＮＫＧ２Ｄ）の天然リガンドに結合するペプチドを含む細胞外受容体ドメイン；及び（ｂ）膜貫通領域及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むエフェクタードメインを含むキメラ受容体をコードするポリヌクレオチド；
（ｉｉ）膜結合型インターロイキン１５（ｍｂＩＬ１５）をコードするポリヌクレオチド；並びに
（ｉｉｉ）（ｉ）及び（ｉｉ）の組み合わせ
から選択される追加的なポリヌクレオチドを含む、遺伝子改変ナチュラルキラー細胞。
【請求項４５】
患者から単離された自家細胞である、請求項４４に記載の単離された遺伝子改変ナチュラルキラー細胞。
【請求項４６】
ドナーから単離された同種細胞である、請求項４４に記載の単離された遺伝子改変ナチュラルキラー細胞。
【請求項４７】
それを必要とする哺乳動物におけるＮＫ細胞の細胞傷害性を増強するための方法であって、前記哺乳動物にＮＫ細胞を投与することを含み、ここで前記ＮＫ細胞が、請求項１〜３８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドによってコードされる接着受容体を発現する、方法。
【請求項４８】
前記ＮＫ細胞は、患者から単離された自家細胞である、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記ＮＫ細胞は、ドナーから単離された同種細胞である、請求項４７に記載の方法。
【請求項５０】
それを必要とする哺乳動物におけるがん又は感染症を治療又は予防するための薬剤の製造における、請求項１〜３８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドの使用。
【請求項５１】
それを必要とする哺乳動物におけるＮＫ細胞の細胞傷害性を増強するための薬剤の製造における、請求項３９又は４０に記載のベクターの使用。
【請求項５２】
それを必要とする哺乳動物におけるがん又は感染症を治療又は予防するための薬剤の製造における、請求項３９又は４０に記載のベクターの使用。
【請求項５３】
それを必要とする哺乳動物におけるＮＫ細胞の細胞傷害性を増強するための、請求項４１〜４６のいずれか一項に記載の単離された遺伝子改変ナチュラルキラー細胞の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本願は、２０１８年２月９日に出願された米国仮特許出願第６２／６２８，７９７号明細書及び２０１８年９月２６日に出願された米国仮特許出願第６２／７３６，９６５号明細書の利益を主張する。これらの出願の各々の全体は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
ＡＳＣＩＩテキストファイルでのマテリアルの参照による援用
本願は、本明細書と同時に提出されている以下のＡＳＣＩＩテキストファイル中に含まれる配列表を参照により援用する。
ａ）ファイル名：４４５９  １１４８  ００２  Ｓｅｑ  Ｌｉｓｔ．ｔｘｔ；８６．１ＫＢのサイズで２０１９年２月６日に作成
【背景技術】
【０００３】
多くの疾患の出現及び持続性は、悪性及びウイルス感染細胞を含む異常細胞に対する不十分な免疫応答によって特徴付けられる。免疫療法は、様々な疾患を治療するための患者の免疫系の使用及び操作である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
免疫療法は、疾患の治療における新しい技術的進歩を提示し、免疫細胞は、罹患又は損傷細胞に対して特異的に同定及び反応する特定の標的化及び／又はエフェクター分子を発現するように操作される。これは、より従来の手法、例えば化学療法（すべての細胞が影響を受ける場合）と異なり、少なくとも部分的に、罹患又は損傷細胞を特異的に標的にするという能力に基づく有望な進歩を表し、また所望の結果は、十分な健常細胞が生存することで患者の生存を可能にすることである。１つの免疫療法アプローチは、目的の異常細胞の標的化された認識及び破壊を達成するための免疫細胞における接着受容体の組換え発現である。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
罹患又は感染細胞を特異的に標的にする、破壊する、無能化する、又はその他として不活性化するためのこの必要性に対処するため、本明細書中で、免疫細胞、例えばナチュラルキラー細胞に増強された標的化、ひいては標的化された細胞傷害性を与える接着受容体をコードするポリヌクレオチド、アミノ酸、及びベクターが提供される。さらに、かかるポリヌクレオチドによってコードされる接着受容体を発現する免疫細胞を作製するための方法、及び該細胞を用いて、罹患又は損傷細胞を標的にし、破壊するための方法が提供される。
【０００６】
いくつかの実施形態では、細胞外受容体ドメイン及び膜貫通ドメインを含む接着受容体をコードするポリヌクレオチドが提供され、ここで膜貫通ドメインは、細胞外受容体ドメインを免疫細胞、例えばＮＫ細胞の表面上に固着する。
【０００７】
いくつかの実施形態では、細胞外受容体ドメインは、細胞外受容体ドメインが標的細胞抗原に結合することを可能にするペプチドを含む。いくつかの実施形態では、標的抗原は、標的細胞と比べると、健常細胞上に差次的に発現され、それにより接着受容体を発現する細胞に対してある程度の特異的標的化をもたらす。それ故、かかる差次的な（例えば増強された）発現を有する細胞は、接着受容体を発現する免疫細胞、例えば、ＮＫ細胞、Ｔ細胞、又はそれらの組み合わせなどにより、優先的に認識され、破壊される。いくつかの実施形態では、標的細胞抗原は、疾患、例えば、新生物、がん、又は腫瘍に関連する。固形又は浮遊がんは、接着受容体を発現する免疫細胞により標的にされ得る。いくつかの実施形態では、標的細胞抗原は、腫瘍関連抗原である一方で、さらなる実施形態では標的細胞抗原は、腫瘍特異抗原である。本明細書に開示される接着受容体はまた、他の抗原、限定はされないが、ウイルス、細菌、真菌及び／又は寄生虫感染で冒された細胞を標的にするため、用いることができる。かかる場合、標的細胞抗原は、ウイルス、細菌、真菌又は寄生虫抗原である。
【０００８】
標的細胞抗原の非限定例として、ｂｃｒ−ａｂｌ、ＣＤ１９、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｈｅｒ−２、Ｋ−ＲＡＳ、ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−１０、ＭＡＧＥ−１２、ＭＡＧＥ−２、ＭＡＧＥ−３、ＭＡＧＥ−４、ＭＡＧＥ−６、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ｂ１、ＭＡＧＥ−Ｂ２、メソセリン、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ２、ＭＵＭ−１、ＭＵＭ−２、ＭＵＭ−３、ミオシン、ＮＹ−ＥＳＯ、Ｐ５３、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＡ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＡＧＥ、ＳＳＸ−２、サバイビン、サバイビン−２Ｂ、ＴＧＦａＲＩＩ、ＴＧＦｂＲＩＩ、ＶＥＧＦ−Ｒ２、及びＷＴ１が挙げられる。一実施形態では、標的細胞抗原は、Ｈｅｒ２である。一実施形態では、標的細胞抗原は、ＰＳＭＡである。一実施形態では、標的細胞抗原は、ＣＤ１２３である。一実施形態では、標的細胞抗原は、ＧＤ−２である。一実施形態では、標的細胞抗原は、ＧＤ−３である。一実施形態では、標的細胞抗原は、ＮＹ−ＥＳＯである。一実施形態では、標的細胞抗原は、ＣＤ１９である。いくつかの実施形態では、接着受容体は、ＣＤ１２３又はＣＤ１９を標的にしない。
【０００９】
実施形態に応じて、標的細胞抗原に結合するため、種々の異なる部分を用いることができる。例えば、一実施形態では、標的細胞抗原に結合するペプチドは、モノクローナル抗体を含む。いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体は、ハイブリドーマに由来する。ポリクローナル抗体もまた、実施形態に応じて用いられる。組換え抗体（例えば改変抗体）もまた、いくつかの実施形態では用いられる。例えば、いくつかの実施形態では、開発される抗体は、哺乳類、例えばヒトを治療するために用いられるとき、その活性又は安定性を促進するため、突然変異され得、換言すれば、該抗体は、ヒト化される。さらなる実施形態では、抗体の断片が用いられるが、標的細胞抗原への結合を保持する（又はさらに増強する）。例えば、いくつかの実施形態では、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）2、Ｆｖ、又は一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）が用いられる。いくつかの実施形態では、免疫細胞を標的細胞に対して標的化するため、ミニボディ、二重特異性抗体、及び／又は単一ドメイン抗体もまた用いられる。いくつかの実施形態では、接着受容体は、改変されなくてもよい（例えば、別の細胞型に対して天然であり、ＮＫ細胞内で全体として発現される）。いくつかの実施形態では、接着受容体は、ｓｃＦｖでない。いくつかの実施形態では、接着受容体は、目的の標的に特異的に結合する新規結合ドメイン含有ポリペプチド（ＤＢＤｐｐ）でない。ＤＢＤｐｐについてのさらなる情報は、例えば、国際特許出願のＰＣＴ／米国特許出願公開第２０１６／０２５８６８号明細書及び／又はＰＣＴ／米国特許出願公開第２０１６／０２５８８０号明細書（それら各々の内容全体は参照により本明細書中に援用される）に見出すことができる。
【００１０】
そのようなものとして、いくつかの実施形態では、標的細胞抗原に結合するペプチドは、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）であり、接着受容体は、抗Ｈｅｒ２  ｓｃＦｖを含む。いくつかのかかる実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号５８の核酸配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号５９のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、接着受容体は、配列番号６０の核酸配列によってコードされる。一実施形態では、接着受容体は、配列番号６１のアミノ酸配列を含む。さらなる実施形態では、接着受容体は、抗ＰＳＭＡ  ｓｃＦｖを含む。いくつかのかかる実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号６２の核酸配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号６３のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、接着受容体は、配列番号６４の核酸配列によってコードされる。一実施形態では、接着受容体は、配列番号６５のアミノ酸配列を含む。
【００１１】
いくつかの実施形態では、特定のヌクレオチド又はアミノ酸配列が用いられる一方で、本明細書に提供されるさらなる実施形態では、かかる配列に対して約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９８％、又は約９９％の相同性があるヌクレオチド又はアミノ酸が用いられる。いくつかの実施形態では、パーセント相同性は、異なってもよい（例えばより低くてもよい）が、該構築物は、本明細書に具体的に開示される配列によってコードされるか又はそれを有する接着受容体の機能の少なくとも一部を保持する。
【００１２】
接着受容体の発現は、該受容体を発現する免疫細胞（例えばＮＫ細胞）に種々の有利な特性を与える。例えば、いくつかの実施形態では、接着受容体を発現するＮＫ細胞は、接着受容体を発現しないＮＫ細胞と比べてより迅速に標的細胞に結合する。いくつかの実施形態では、接着受容体を発現するＮＫ細胞は、腫瘍又は感染部位に対して、接着受容体を発現しないＮＫ細胞と比べて増強されたホーミングを有する。いくつかの実施形態では、接着受容体を発現するＮＫ細胞は、標的細胞抗原を提示する細胞に対して、接着受容体を発現しないＮＫ細胞と比べて増強された細胞傷害活性を示す。いくつかの実施形態では、該ポリヌクレオチドによってコードされる接着受容体を発現するＮＫ細胞は、接着受容体を発現しないＮＫ細胞と比べて低減されたオフターゲット細胞傷害性効果を有する。
【００１３】
いくつかの実施形態では、接着受容体の細胞外受容体ドメインはまた、任意選択的には第１のペプチドと異なる標的細胞抗原に結合する第２のペプチドを含む。いくつかの実施形態では、細胞外受容体ドメインはまた、任意選択的には、第１のペプチドと同じ標的細胞抗原に結合する第２のペプチドを含む。
【００１４】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、２つ以上の接着受容体をコードする。例えば、いくつかの実施形態では、該ポリヌクレオチドは、いくつかのかかる実施形態では異なる標的細胞抗原に結合する、第１及び第２の接着受容体をコードしてもよい。しかし、いくつかの実施形態では、第１及び第２（又は２を超える）の接着受容体は、同じ標的細胞抗原に結合するように設計される。さらにかかる実施形態では、接着受容体は、有利には免疫細胞の標的細胞への標的化の効率を増加させ得る、同じ標的細胞抗原の異なるエピトープに結合するように形成され得る。いくつかの実施形態では、追加的な生化学的な相互作用又は特性が提供される。例えば、いくつかの実施形態では、接着受容体は、標的親和性を増強し得るように二量体化する（ホモ又はヘテロ二量体のいずれかの可能性がある）ように形成される。いくつかの実施形態では、細胞外受容体ドメインは、該受容体ドメインの所望される膜配向性を提供するため、シグナルペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態では、細胞外受容体ドメインは、細胞外受容体ドメインの有効な標的化効率を場合によって低減し得る立体障害の低減及び／又は除去をもたらし得るヒンジ領域をさらに含む。
【００１５】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドはまた、キメラ受容体をコードする。例えば、いくつかの実施形態では、細胞外受容体ドメイン並びに膜貫通領域及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むエフェクタードメインを含むキメラ受容体をコードするポリヌクレオチドが提供される。いくつかの実施形態では、キメラ受容体の細胞外受容体ドメインは、ナチュラルキラーグループ２メンバーＤ（ＮＫＧ２Ｄ）の天然リガンドに結合するペプチドを含む。いくつかの実施形態では、膜結合型インターロイキン１５（ｍｂＩＬ１５）をコードするポリヌクレオチドもまた提供される。いくつかの実施形態では、単一のポリヌクレオチドが、接着受容体、キメラ受容体及び任意選択的にはｍｂＩＬ１５をコードする。さらなる実施形態では、これらの様々な要素をコードするような１つ以上の構築物が用いられる。いくつかの実施形態では、該ポリヌクレオチドは、ｍＲＮＡである。いくつかの実施形態では、該ポリヌクレオチドは、接着受容体の発現のため、少なくとも１つの調節エレメントに作動可能に連結される。
【００１６】
ポリヌクレオチドに加えて、該ポリヌクレオチドを含むベクターが本明細書に提供され、該ベクターは、細胞、例えば免疫細胞（例えばＮＫ細胞）においてポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質を送達し、且つその発現を促進するように形成される。いくつかの実施形態では、該ベクターは、レトロウイルス、例えばレンチウイルス又はＨＩＶである。さらなる実施形態は、他のベクター、例えば、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、さらには非ウイルスベクター（例えばリポソーム）が提供される。
【００１７】
加えて、本明細書に開示されるポリヌクレオチドを含み、且つ接着受容体を発現する遺伝子改変細胞、例えば免疫細胞が本明細書に提供される。様々な免疫細胞が、実施形態に応じて用いられる。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞が用いられる。いくつかの実施形態では、接着受容体を発現するように改変された自家細胞（例えばＮＫ細胞）が提供される。さらなる実施形態では、本明細書に開示される接着受容体を発現するように改変された同種細胞（例えばＮＫ細胞）が提供される。
【００１８】
加えて、本明細書に提供されるポリペプチドによってコードされる接着受容体を発現するＮＫ細胞を改変することによる、哺乳動物におけるＮＫ細胞の細胞傷害性を増強するための方法が本明細書に提供される。さらなる実施形態は、さらにリガンド結合ドメイン及びシグナル伝達ドメインを含むキメラ受容体を発現し且つ／又はｍｂＩＬ１５を発現するようにＮＫ細胞を改変することによる、増強されたＮＫ細胞の細胞傷害性のさらなる提供に関する。実施形態に応じて、増強されたＮＫ細胞の細胞傷害性は、がん、感染、又は別の病気を治療する、低減する、又はその他として寛解するために活用され得る。
【００１９】
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の細胞傷害性を増強するための細胞に基づく薬剤の製造における接着受容体をコードするポリヌクレオチドの使用もまた提供される。上で考察したように、薬剤の作製において、接着受容体は、標的細胞抗原に結合するように形成された細胞外受容体ドメイン、及び膜貫通ドメインを含み、ここで標的細胞抗原は、健常細胞と標的細胞との間で差次的に発現され、ここで膜貫通ドメインは、細胞外受容体ドメインをＮＫ細胞の表面上に固着する。いくつかの実施形態では、標的細胞抗原は、ＰＳＭＡ、Ｈｅｒ２、ＣＤ１２３、ＧＤ−２、ＧＤ−３、ＮＹ−ＥＳＯ、及びＣＤ１９から選択される。いくつかの実施形態では、標的細胞抗原に結合する細胞外受容体ドメインは、抗体、Ｆａｂ、又はｓｃＦｖを含む。
【００２０】
上で概説され、以下でさらに詳細に示される組成物及び関連の方法は、施術者によってとられる特定の行動を説明するが、それらが別の団体によるそれら行動の指示も含み得ることが理解されるべきである。したがって、「接着受容体を発現するＮＫ細胞の集団を投与すること」などの行動は、「接着受容体を発現するＮＫ細胞の集団の投与を指示すること」を含む。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】いくつかの実施形態に従う特定の構築物の膜結合抗Ｈｅｒ２  ｓｃＦｖ（ｍｂａＨｅｒ２）のプラスミド（マウス幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）プラスミドが図示される）への挿入点を図示するプラスミドマップを表す。ＥｃｏＲＩ及びＸｈｏＩ制限部位へのｍｂａＨｅｒ２構築物のベクターの挿入が表される。
【図２Ａ−２Ｃ】増殖された一次ＮＫ細胞の表面上でのｍｂａＨｅｒ２の発現に関するフローサイトメトリーデータを表す。（図２Ａ）非形質導入ＮＫ細胞、（図２Ｂ）ＧＦＰのみを有するベクターで形質導入されたＮＫ細胞、及び（図２Ｃ）抗Ｈｅｒ２  ｓｃＦｖ及びＧＦＰを有するベクターで形質導入されたＮＫ細胞、のｍｂａＨｅｒ２発現特性が表される。ｍｂａＨｅｒ２の発現は、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）コンジュゲート抗Ｆａｂ抗体によって検出された（Ｙ軸）。ウイルス形質導入は、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）シグナルにより示される（Ｘ軸）。
【図３Ａ−３Ｂ】（図３Ａ）高レベルのＨｅｒ２（Ｈｅｒ２高／中間、ＳＫＢＲ３、ＳＫＯＶ３、ＬＮＣａｐ、ＺＲ７５１及び（図３Ｂ）低レベルのＨｅｒ２（Ｈｅｒ２不明瞭／陰性、ＤＵ１４５、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５）を発現するがん細胞株に対する、モック形質導入ＮＫ細胞及びｍｂａＨｅｒ２発現ＮＫ細胞の２：１のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比での４時間細胞傷害性アッセイに関するデータを表す。
【図４】ＩｎｃｕＣｙｔｅ生細胞イメージングシステム（Ｅｓｓｅｎ）による測定としての、ＳＫＯＶ３細胞に対する、ｍｂａＨｅｒ２又はＧＦＰのみを発現するＮＫ細胞の長期細胞傷害性に関するデータを表す。１：１のＥ：Ｔで、最初にＳＫＯＶ３細胞が蒔かれ、２４時間後にＮＫ細胞が添加された。３通りの測定値の平均±標準偏差が示される。
【図５Ａ−５Ｃ】１：１のエフェクター：標的比での、（図５Ａ）ＮＫ細胞を伴わない培養、（図５Ｂ）ＧＦＰのみを発現するＮＫ細胞との培養、又は（図５Ｃ）ｍｂａＨｅｒ２を発現するＮＫ細胞との培養の６日後のｍＣｈｅｒｒｙ標識ＳＫＯＶ３細胞の画像を表す。
【図６Ａ−６Ｂ】（図６Ａ）移動距離及び（図６Ｂ）測定速度での、ＳＫＯＶ３細胞上に播種されたモック形質導入ＮＫ細胞又はｍｂａＨｅｒ２を発現する形質導入ＮＫ細胞の追跡に関するデータを表す。
【図７Ａ−７Ｂ】（図７Ａ）フローサイトメーターによるＳＫＯＶ３細胞とのｍｂａＨｅｒ２を発現するＮＫ細胞の凝集、及び（図７Ｂ）（図７Ａ）のＱ１−ＵＲ象限内に存在する凝集体の定量化に関するデータを表す。
【図８Ａ−８Ｈ】ＧＦＰのみを有するベクターで形質導入されたＮＫ細胞（図８Ａ〜Ｄ）、並びに抗Ｈｅｒ２  ｓｃＦｖ及びＧＦＰを有するベクターで形質導入されたＮＫ細胞（図８Ｅ〜Ｈ）に対するＳＫＯＶ３細胞の結合に関するデータを表す。データは、ＮＫ細胞を接着されたＳＫＯＶ細胞に通流させ、免疫蛍光共焦点顕微鏡を用いて試験することにより収集された。
【図９Ａ−９Ｃ】図８のデータの６つの顕微鏡視野からの（図９Ａ）ヘキスト染色、（図９Ｂ）ＧＦＰ発現、及び（図９Ｃ）ヨウ化プロピジウム染色による、細胞の凝集細胞数に関するデータを表す。データは、ＮＫ細胞を接着されたＳＫＯＶ細胞に通流させ、免疫蛍光共焦点顕微鏡を用いて試験することにより収集された。
【図１０】いくつかの実施形態に従う特定の構築物の膜結合抗ＰＳＭＡ  ＳｃＦｖ（ｍｂａＰＳＭＡ）のプラスミド（マウス幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）プラスミドが図示される）への挿入点を図示するプラスミドマップを表す。ベクターのＥｃｏＲＩ及びＸｈｏＩ制限部位へのｍｂａＰＳＭＡ構築物の挿入が表される。
【図１１Ａ−１１Ｃ】フローサイトメトリーによる増殖された一次ＮＫ細胞の表面上でのｍｂａＰＳＭＡの発現を表す。（図１１Ａ）非形質導入ＮＫ細胞、（図１１Ｂ）ＧＦＰのみを有するベクターで形質導入されたＮＫ細胞、及び（図１１Ｃ）抗ＰＳＭＡ  ｓｃＦｖ及びＧＦＰを有するベクターで形質導入されたＮＫ細胞、のｍｂａＰＳＭＡ発現特性が示される。ｍｂａＰＳＭＡの発現は、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）コンジュゲート抗Ｆａｂ抗体によって検出された（Ｙ軸）。ウイルス形質導入は、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）シグナルによって示される（Ｘ軸）。
【図１２】本発明のいくつかの実施形態に従う構築物及びその部分の非限定的実施形態を提供する。
【図１３】ＤＵ１４５細胞に対する、本明細書に開示される構築物の非限定例の細胞傷害性効果を評価するために用いられる細胞傷害性アッセイに関するデータを表す。
【図１４】ＬＮＣａｐ細胞に対する、本明細書に開示される構築物の非限定例の細胞傷害性効果を評価するために用いられる細胞傷害性アッセイに関するデータを表す。
【図１５】本明細書に開示される構築物の非限定例を用いての注射したＳＫＯＶ３細胞に対する細胞傷害性のインビボ評価に関するデータを表す。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
多くの疾患の基礎をなす（ウイルス感染及び悪性細胞を含む）異常細胞の出現及び持続は、前記異常細胞に対する不十分な免疫応答によって可能になる。免疫療法の目標は、患者の免疫系の応答を開始又は増強する例えば免疫細胞、例えばナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が損傷又は異常細胞を損傷させるか、殺滅するか、又は他に阻害する能力を後押しすることである。１つの免疫療法アプローチは、異常細胞の標的認識（それを原因で生じる可能性があるそれらの破壊）のための免疫細胞における接着受容体の組換え発現である。一般に、本明細書に記載のような接着受容体は、標的細胞上のリガンドを認識する細胞外受容体ドメイン及びアンカー膜貫通ドメインを含む。
【００２３】
本明細書に開示されるいくつかの実施形態では、その一般構造を有する、又はその一般構造におけるバリエーションを有する接着受容体が用いられる。以下により詳細に考察される通り、実施形態により、免疫細胞（例えばＮＫ細胞）において所望の程度の発現を示し、非標的細胞に対する有害作用を回避する程度の標的結合活性と平衡した、ＮＫ細胞から細胞傷害活性を誘導する接着受容体構築物を作製するため、切断、突然変異、追加的なリンカー／スペーサーエレメント、二量体などが用いられる。免疫細胞の表面上での本明細書で開示されるような接着受容体の組換え発現により、目的の異常細胞に対する免疫細胞の標的化が再誘導され、且つ会合時の免疫活性化が増強される可能性がある。
【００２４】
免疫療法のためのＮＫ細胞
１つの免疫療法アプローチは、受容体を発現するように操作されたＴ細胞を患者に投与し、陽性免疫応答を誘発することを含む。しかし、この手法の欠点は、患者における移植片対宿主病の誘導を予防するために自家細胞の使用が必要である点である。本明細書に開示されるいくつかの実施形態において提供される通り、改変ＮＫ細胞を含む組成物は、いくつかの利点を享受し、かかる利点は、本明細書に開示される標的化方法及び組成物によって増強される。例えば、自家又はドナー由来同種細胞のいずれかは、ＮＫ細胞アプローチで用いることができる。加えて、いくつかの実施形態によると、操作されたＮＫ細胞は、正常細胞に対して細胞傷害性を増強することが有意でない。さらに、ＮＫ細胞は、活性化されると、有意な細胞傷害性効果を有する。これを考慮すると、本明細書で提供されるような操作されたＮＫ細胞が、その細胞傷害性効果をさらに高めることにより、罹患した標的細胞を選択的に殺滅するといったさらにより有効な手段を提供し得ることは、想定外である。したがって、いくつかの実施形態では、癌又は感染性疾患を治療又は予防する方法であって、治療有効量の、本明細書に記載の接着受容体を発現するＮＫ細胞を投与することを含む方法が提供される。一実施形態では、投与されるＮＫ細胞は、自家細胞である。さらなる実施形態では、投与されるＮＫ細胞は、ドナー由来（同種）細胞である。
【００２５】
いくつかの実施形態では、接着受容体を発現する（例えば、標的細胞上のリガンドに結合することによる）組換えＮＫ細胞の会合及び活性化により、細胞溶解によるストレス及び／又は異常細胞（例えば、腫瘍細胞、ウイルス感染細胞など）の直接的殺滅がもたらされる。したがって、いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞の細胞傷害性を増強する方法であって、本明細書に記載の接着受容体を発現するように操作されたＮＫ細胞を投与することを含む方法が提供される。一実施形態では、投与されるＮＫ細胞は、自家細胞である。さらなる実施形態では、ＮＫ細胞は、ドナー由来（同種）細胞である。いくつかの実施形態では、操作されたＮＫ細胞は、ストレス及び／又は異常細胞（例えば、腫瘍細胞、ウイルス感染細胞など）の間接的破壊又は阻害をもたらす。
【００２６】
細胞外受容体ドメイン
上述の通り、いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞は、腫瘍細胞及びウイルス感染細胞を含む異常細胞を認識し、破壊する。ＮＫ細胞活性化の第１段階は、形質転換及び／又は感染細胞とＮＫ細胞との間の初期接着であり、そこでは様々な細胞外タンパク質（例えばセレクチン及びインテグリン）が２つの細胞を一緒に連結することが提示されている。一旦界面が形成されると、これらの自然免疫細胞の細胞傷害活性は、細胞表面上に存在する阻害性及び活性化受容体各々からのシグナル伝達の平衡により調節される。前者は、健常細胞の表面上で発現される自己分子に結合する一方で、後者は、異常細胞上に発現されるリガンドに結合する。阻害性受容体と比べての活性化受容体の増強された会合により、ＮＫ細胞活性化及び標的細胞溶解がもたらされる。
【００２７】
ＮＫ細胞が腫瘍細胞及びウイルス感染細胞を含む異常細胞を認識し、破壊する能力から、（キメラ受容体に基づく免疫療法アプローチを含む）免疫療法アプローチの構成要素が潜在的に有用になる。しかし、ＮＫ細胞の使用を複雑化していることは、ＮＫ細胞の標的細胞への不十分な送達、標的細胞でのＮＫ細胞の蓄積速度が遅いこと、健常細胞の会合、及び／又はオフターゲット死滅時のＮＫ細胞による標的細胞の不十分な死滅である。本明細書に開示されるいくつかの実施形態によると、接着受容体をコードするポリヌクレオチドが提供され、ここでかかる受容体を発現する細胞外受容体ドメインは、標的細胞上の抗原に結合する。いくつかの実施形態では、接着受容体は、専ら標的細胞の結合を目的とする（例えば、それはシグナル伝達機能を果たさない）。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される接着受容体を発現するＮＫ細胞は、より迅速に（例えば、より早く、より効率的に）標的細胞に会合する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される接着受容体を発現するＮＫ細胞は、標的細胞（例えば罹患又は損傷細胞）に対してより強力な細胞傷害性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される接着受容体を発現するＮＫ細胞は、標的細胞のより多くの部分を殺滅する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される接着受容体を発現するＮＫ細胞は、殺滅する健常オフターゲット細胞がより少ない。
【００２８】
いくつかの実施形態では、細胞外受容体ドメインは、膜結合抗原、例えば細胞（例えば標的細胞）の細胞外表面の抗原に結合する。いくつかの実施形態では、抗原は、腫瘍抗原である。いくつかの実施形態では、腫瘍抗原は、腫瘍特異抗原（例えば、腫瘍細胞に特有であり、且つ身体における他の細胞内又は細胞上で生じない抗原）である。いくつかの実施形態では、腫瘍抗原は、腫瘍関連抗原（例えば、腫瘍細胞に特有でなく、且つ抗原に対する免疫応答を誘導しない条件下で正常細胞内又は正常細胞上でも発現される抗原）である。いくつかの実施形態では、細胞外受容体ドメインは、疾患に関連する抗原に結合する。抗原は、ウイルス、細菌、及び／若しくは寄生虫感染；炎症性及び／若しくは自己免疫性疾患；又はがん及び／若しくは腫瘍などの新生物といった疾患に関連し得る。
【００２９】
いくつかの実施形態では、抗原は、健常細胞と標的細胞との間で差次的に発現される。いくつかの実施形態では、抗原の発現は、健常及び標的細胞において同じであるが、本明細書に開示される接着受容体を発現するＮＫ細胞による健常細胞の殺滅は、健常細胞がＮＫ細胞活性化のリガンド特性を欠くことから最小である。
【００３０】
いくつかの実施形態では、細胞外受容体ドメインは、抗原に対する内因性受容体を含む。いくつかの実施形態では、接着受容体の細胞外受容体ドメインは、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、又はそれらの機能的誘導体、変異体若しくは断片を含み、限定はされないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）2、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ミニボディ、二重特異性抗体、及び単一ドメイン抗体、例えば、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、及びラクダ類由来ナノボディの可変ドメイン（ＶＨＨ）を含む。いくつかの実施形態では、細胞外受容体ドメインは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖの少なくとも１つを含む。しかし、いくつかの実施形態では、標的細胞上の目的の標的に特異的に結合するｓｃＦｖや新規結合ドメイン含有ポリペプチド（ＤＢＤｐｐ）のいずれも、接着受容体として用いられない。
【００３１】
いくつかの実施形態では、細胞外受容体ドメインは、例えば、がん、感染、又は他の疾患に関連した抗原に結合するように形成される。例えば、いくつかの実施形態では、細胞外受容体ドメインは、抗原：ＮＹ−ＥＳＯ、ＣＤ１９、ＣＤ１２３、ＧＤ−２、ＧＤ−３、デクチン１、Ｈｅｒ２、及びＰＳＭＡの１つ以上に結合する。これらの抗原の組み合わせは、いくつかの実施形態では、複数又は組み合わせの細胞外受容体ドメインを発現する免疫細胞、又は様々な抗原に特異的な種々の細胞外ドメインを発現する免疫細胞の集団のいずれかによって標的にされる。いくつかの実施形態では、接着受容体は、ＣＤ１９やＣＤ１２３のいずれも標的にしない。
【００３２】
細胞外受容体ドメインによって結合され得る抗原の非限定例として、限定はされないが、１−４０−β−アミロイド、４−１ＢＢ、５ＡＣ、５Ｔ４、７０７−ＡＰ、Ａキナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ−４）、アクチビン受容体タイプ２Ｂ（ＡＣＶＲ２Ｂ）、アクチビン受容体様キナーゼ１（ＡＬＫ１）、腺がん抗原、アディポフィリン、アドレナリン受容体β３（ＡＤＲＢ３）、ＡＧＳ−２２Ｍ６、α葉酸受容体、α−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、ＡＩＭ−２、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）、アンドロゲン受容体、アンジオポエチン２、アンジオポエチン３、アンジオポエチン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ２）、炭疽菌毒素、ＡＯＣ３（ＶＡＰ−１）、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、バチルス・アントラシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ）炭疽菌、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、Ｂリンパ腫細胞、骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）、Ｂｒｏｔｈｅｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  Ｉｍｐｒｉｎｔｅｄ  Ｓｉｔｅｓ（ＢＯＲＩＳ）、Ｃ２４２抗原、Ｃ５、ＣＡ−１２５、がん抗原１２５（ＣＡ−１２５又はＭＵＣ１６）、がん／精巣抗原１（ＮＹ−ＥＳＯ−１）、がん／精巣抗原２（ＬＡＧＥ−１ａ）、炭酸脱水酵素９（ＣＡ−ＩＸ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、心臓ミオシン、ＣＣＣＴＣ結合因子（ＣＴＣＦ）、ＣＣＬ１１（エオタキシン−１）、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＤ１１、ＣＤ１２３、ＣＤ１２５、ＣＤ１４０ａ、ＣＤ１４７（ベイシジン）、ＣＤ１５、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４（ＣＤ４０Ｌ）、ＣＤ１７１、ＣＤ１７９ａ、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２、ＣＤ２０、ＣＤ２００、ＣＤ２２、ＣＤ２２１、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、ＣＤ２４、ＣＤ２５（ＩＬ−２受容体のα鎖）、ＣＤ２７、ＣＤ２７４、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ３Ｉ、ＣＤ３０、ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）、ＣＤ３１９、（ＳＬＡＭＦ７）、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４１、ＣＤ４４ｖ７、ＣＤ４４ｖ８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ５、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ６、ＣＤ７０、ＣＤ７２、ＣＤ７４、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ９７、ＣＥＡ関連抗原、ＣＦＤ、ｃｈ４Ｄ５、染色体Ｘオープンリーディングフレーム６１（ＣＸＯＲＦ６１）、クローディン１８．２（ＣＬＤＮ１８．２）、クローディン６（ＣＬＤＮ６）、クロストリジウム・ディフィシレ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）、凝集因子Ａ、ＣＬＣＡ２、コロニー刺激因子１受容体（ＣＳＦ１Ｒ）、ＣＳＦ２、ＣＴＬＡ−４、Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）、Ｃ型レクチン様分子１（ＣＬＬ−１又はＣＬＥＣＬ１）、Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体タイプ４、サイクリンＢ１、チトクロムＰ４５０１Ｂ１（ＣＹＰ１Ｂ１）、ｃｙｐ−Ｂ、サイトメガロウイルス（ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ）、サイトメガロウイルス糖タンパク質Ｂ、ダビガトラン、ＤＬＬ４、ＤＰＰ４、ＤＲ５、大腸菌志賀毒素１型、大腸菌志賀毒素２型、エクト−ＡＤＰ−リボシルトランスフェラーゼ４（ＡＲＴ４）、ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）���ＥＧＦ様ドメインマルチプル７（ＥＧＦＬ７）、伸長因子２突然変異（ＥＬＦ２Ｍ）、内毒素、エフリンＡ２、エフリンＢ２、エフリンＡ型受容体２、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、上皮成長因子受容体変異体ＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、エピシアリン、上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）、上皮糖タンパク質２（ＥＧＰ−２）、上皮糖タンパク質４０（ＥＧＰ−４０）、ＥＲＢＢ２、ＥＲＢＢ３、ＥＲＢＢ４、ＥＲＧ（膜貫通プロテアーゼ、セリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、染色体１２ｐに位置するＥＴＳ転座変異体遺伝子６（ＥＴＶ６−ＡＭＬ）、呼吸器シンシチウムウイルスのＦタンパク質、ＦＡＰ、ＩｇＡ受容体のＦｃ断片（ＦＣＡＲ又はＣＤ８９）、Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）、胎児アセチルコリン受容体、フィブリンＩＩβ鎖、線維芽細胞活性化タンパク質α（ＦＡＰ）、フィブロネクチン外部ドメインＢ、ＦＧＦ−５、Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）、葉酸結合タンパク質（ＦＢＰ）、葉酸ヒドロラーゼ、葉酸受容体１、葉酸受容体α、葉酸受容体β、Ｆｏｓ関連抗原１、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ受容体、フコシルＧＭ１、Ｇ２５０、Ｇタンパク質共役受容体２０（ＧＰＲ２０）、Ｇタンパク質共役受容体クラスＣグループ５、メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）、ガングリオシドＧ２（ＧＤ２）、ＧＤ３ガングリオシド、糖タンパク質１００（ｇｐ１００）、グリピカン３（ＧＰＣ３）、ＧＭＣＳＦ受容体α鎖、ＧＰＮＭＢ、ＧｎＴ−Ｖ、増殖分化因子８、ＧＵＣＹ２Ｃ、熱ショックタンパク質７０−２突然変異（ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２）、ヘマグルチニン、Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）、Ｂ型肝炎表面抗原、Ｂ型肝炎ウイルス、ＨＥＲ１、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＥＲ３、ｇｌｏｂｏＨグリコセラミド（ＧｌｏｂｏＨ）の六糖部分、ＨＧＦ、ＨＨＧＦＲ、高分子量メラノーマ関連抗原（ＨＭＷ−ＭＡＡ）、ヒストン複合体、ＨＩＶ−１、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＮＧＦ、Ｈｓｐ９０、ＨＳＴ−２（ＦＧＦ６）、ヒトパピローマウイルスＥ６（ＨＰＶ  Ｅ６）、ヒトパピローマウイルスＥ７（ＨＰＶ  Ｅ７）、ヒト散乱因子受容体キナーゼ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、ヒトＴＮＦ、ＩＣＡＭ−１（ＣＤ５４）、ｉＣＥ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、ＩｇＥ、ＩｇＥ  Ｆｃ領域、ＩＧＦ−１、ＩＧＦ−１受容体、ＩＧＨＥ、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１α、ＩＬ−２０、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−３１、ＩＬ−３１ＲＡ、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−６受容体、ＩＬ−９、免疫グロブリンλ様ポリペプチド１（ＩＧＬＬ１）、インフルエンザＡ型ヘマグルチニン、インスリン様増殖因子１受容体（ＩＧＦ−Ｉ受容体）、インスリン様増殖因子２（ＩＬＧＦ２）、インテグリンα４β７、インテグリンβ２、インテグリンα２、インテグリンα４、インテグリンα５β１、インテグリンα７β７、インテグリンαＩＩｂβ３、インテグリンαｖβ３、インターフェロンα／β受容体、インターフェロンβ誘導性タンパク質、インターロイキン１１受容体α（ＩＬ−１１Ｒα）、インターロイキン１３受容体サブユニットα−２（ＩＬ−１３Ｒα２又はＣＤ２１３Ａ２）、腸管カルボキシルエステラーゼ、キナーゼドメイン領域（ＫＤＲ）、ＫＩＲ２Ｄ、ＫＩＴ（ＣＤ１１７）、Ｌ１細胞接着分子（Ｌ１−ＣＡＭ）、レグマイン、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＡメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）、白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１）、ルイスＹ抗原、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ）、ＬＩＮＧＯ−１、リポテイコ酸、ＬＯＸＬ２、Ｌ−セレクチン（ＣＤ６２Ｌ）、リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｋ９（ＬＹ６Ｋ）、リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）、リンパ球特異タンパク質チロシンキナーゼ（ＬＣＫ）、リンホトキシン−α（ＬＴ−α）又は腫瘍壊死因子−β（ＴＮＦ−β）、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ又はＭＭＩＦ）、Ｍ−ＣＳＦ、乳腺分化抗原（ＮＹ−ＢＲ−１）、ＭＣＰ−１、黒色腫がん精巣抗原−１（ＭＡＤ−ＣＴ−１）、黒色腫がん精巣抗原−２（ＭＡＤ−ＣＴ−２）、アポトーシスの黒色腫阻害剤（ＭＬ−ＩＡＰ）、黒色腫関連抗原１（ＭＡＧＥ−Ａ１）、メソセリン、ムチン１、細胞表面関連（ＭＵＣ１）、ＭＵＣ−２、ムチンＣａｎＡｇ、ミエリン関連糖タンパク質、ミオスタチン、Ｎ−アセチルグルコサミニル−トランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）、ＮＣＡ−９０（顆粒球抗原）、神経成長因子（ＮＧＦ）、神経アポトーシス調節プロテイナーゼ１、神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）、神経突起伸長阻害剤（例えば、ＮＯＧＯ−Ａ、ＮＯＧＯ−Ｂ、ＮＯＧＯ−Ｃ）、ニューロピリン−１（ＮＲＰ１）、Ｎ−グリコリルノイラミン酸、ＮＫＧ２Ｄ、ノッチ受容体、ｏ−アセチル−ＧＤ２ガングリオシド（ＯＡｃＧＤ２）、嗅覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）、がん胎児性抗原（ｈ５Ｔ４）、ブレークポイントクラスター領域（ＢＣＲ）及びＡｂｅｌｓｏｎネズミ白血病ウイルスがん遺伝子ホモログ１（Ａｂｌ）（ｂｃｒ−ａｂｌ）からなるがん遺伝子融合タンパク質、アナウサギ（Ｏｒｙｃｔｏｌａｇｕｓ  ｃｕｎｉｃｕｌｕｓ）、ＯＸ−４０、ｏｘＬＤＬ、ｐ５３突然変異体、ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ−３（ＰＡＸ３）、ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ−５（ＰＡＸ５）、パネキシン３（ＰＡＮＸ３）、リン酸ナトリウム共輸送体、ホスファチジルセリン、胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）、血小板由来増殖因子受容体α（ＰＤＧＦ−Ｒα）、血小板由来増殖因子受容体β（ＰＤＧＦＲ−β）、ポリシアル酸、プロアクロシン結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹ−ＴＥＳ１）、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）、プロタンパク質転換酵素スブチリシン／ケキシンタイプ９（ＰＣＳＫ９）、プロスターゼ、前立腺がん腫瘍抗原−１（ＰＣＴＡ−１又はガレクチン８）、Ｔ細胞１によって認識される黒色腫抗原（ＭｅｌａｎＡ又はＭＡＲＴ１）、Ｐ１５、Ｐ５３、ＰＲＡＭＥ、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺特異膜抗原（ＰＳＭＡ）、前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）、前立腺がん細胞、プロステイン、プロテアーゼセリン２１（テスティシン又はＰＲＳＳ２１）、プロテアソーム（プロソーム、マクロパイン）サブユニット、ｕｅタイプ、９（ＬＭＰ２）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、狂犬病ウイルス糖タンパク質、ＲＡＧＥ、ＲａｓホモログファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）���核内因子κ−Ｂリガンドの受容体アクチベーター（ＲＡＮＫＬ）、終末糖化産物受容体（ＲＡＧＥ−１）、受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）、腎ユビキタス（ｒｅｎａｌ  ｕｂｉｑｕｉｔｏｕｓ）１（ＲＵ１）、腎ユビキタス２（ＲＵ２）、呼吸器多核体ウイルス（呼吸器シンシチウムウイルス）、Ｒｈ血液群Ｄ抗原、アカゲザル因子、肉腫転座ブレークポイント、スクレロスチン（ＳＯＳＴ）、セレクチンＰ、シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）、精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）、スフィンゴシン−１−リン酸、Ｔ細胞１、２、及び３によって認識される扁平上皮がん抗原（ＳＡＲＴ１、ＳＡＲＴ２、及びＳＡＲＴ３）、ステージ特異的胚性抗原−４（ＳＳＥＡ−４）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、ＳＴＥＡＰ１、サバイビング（ｓｕｒｖｉｖｉｎｇ）、シンデカン１（ＳＤＣ１）＋Ａ３１４、ＳＯＸ１０、サバイビン、サバイビング（ｓｕｒｖｉｖｉｎｇ）２Ｂ、滑膜肉腫、Ｘブレークポイント２（ＳＳＸ２）、Ｔ細胞受容体、ＴＣＲγ選択的リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）、テロメラーゼ、ＴＥＭ１、テネイシンＣ、ＴＧＦ−β（例えば、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３）、甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）、組織因子経路阻害剤（ＴＦＰＩ）、Ｔｎ抗原（（Ｔｎ  Ａｇ）又は（ＧａｌＮＡｃＩ−Ｓｅｒ／Ｔｈｒ））、ＴＮＦ受容体ファミリーメンバーＢ細胞成熟（ＢＣＭＡ）、ＴＮＦ−Ｉ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、ＴＲＧ、トランスグルタミナーゼ５（ＴＧＳ５）、腫瘍抗原ＣＴＡＡ１６．８８、腫瘍内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）、腫瘍内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）、腫瘍タンパク質ｐ５３（ｐ５３）、ＭＵＣ１の腫瘍特異的グリコシル化、腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサー２、腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ７２）、腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ−７２）＋Ａ３２７、ＴＷＥＡＫ受容体、チロシナーゼ、チロシナーゼ関連タンパク質１（ＴＹＲＰ１又は糖タンパク質７５）、チロシナーゼ関連タンパク質２（ＴＹＲＰ２）、ウロプラキン２（ＵＰＫ２）、血管内皮増殖因子（例えば、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＰＩＧＦ）、血管内皮増殖因子受容体１（ＶＥＧＦＲ１）、血管内皮増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）、ビ
メンチン、ｖ−ｍｙｃトリ骨髄細胞腫症ウイルスがん遺伝子神経芽細胞腫由来ホモログ（ＭＹＣＮ）、フォン・ヴィルブランド因子（ＶＷＦ）、ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）、Ｘ抗原ファミリー、メンバー１Ａ（ＸＡＧＥ１）、７０７−ＡＰ、ビオチン化分子、ａ−アクチニン−４、ａｂｌ−ｂｃｒ  ａｌｂ−ｂ３（ｂ２ａ２）、ａｂｌ−ｂｃｒ  ａｌｂ−ｂ４（ｂ３ａ２）、アディポフィリン、ＡＦＰ、ＡＩＭ−２、アネキシンＩＩ、ＡＲＴ−４、ＢＡＧＥ、ｂ−カテニン、ｂｃｒ−ａｂｌ、ｂｃｒ−ａｂｌ  ｐ１９０（ｅ１ａ２）、ｂｃｒ−ａｂｌ  ｐ２１０（ｂ２ａ２）、ｂｃｒ−ａｂｌ  ｐ２１０（ｂ３ａ２）、ＢＩＮＧ−４、ＣＡＧ−３、ＣＡＩＸ、ＣＡＭＥＬ、カスパーゼ−８、ＣＤ１７１、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤＣ２７、ＣＤＫ−４、ＣＥＡ、ＣＬＣＡ２、Ｃｙｐ−Ｂ、ＤＡＭ−１０、ＤＡＭ−６、ＤＥＫ−ＣＡＮ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ−２、ＥＧＰ−４０、ＥＬＦ２、Ｅｐ−ＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ｅｒｂ−Ｂ２、ｅｒｂ−Ｂ３、ｅｒｂ−Ｂ４、ＥＳ−ＥＳＯ−１ａ、ＥＴＶ６／ＡＭＬ、ＦＢＰ、胎児アセチルコリン受容体、ＦＧＦ−５、ＦＮ、Ｇ２５０、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＧＡＧＥ−３、ＧＡＧＥ−４、ＧＡＧＥ−５、ＧＡＧＥ−６、ＧＡＧＥ−７Ｂ、ＧＡＧＥ−８、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧｎＴ−Ｖ、Ｇｐ１００、ｇｐ７５、Ｈｅｒ−２、ＨＬＡ−Ａ*０２０１−Ｒ１７０Ｉ、ＨＭＷ−ＭＡＡ、ＨＳＰ７０−２Ｍ、ＨＳＴ−２（ＦＧＦ６）、ＨＳＴ−２／ｎｅｕ、ｈＴＥＲＴ、ｉＣＥ、ＩＬ−１１ＲＩ、ＩＬ−１３ＲＩ２、ＫＤＲ、ＫＩＡＡ０２０５、Ｋ−ＲＡＳ、Ｌ１−細胞接着分子、ＬＡＧＥ−１、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、ルイスＹ、ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−１０、ＭＡＧＥ−１２、ＭＡＧＥ−２、ＭＡＧＥ−３、ＭＡＧＥ−４、ＭＡＧＥ−６、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ｂ１、ＭＡＧＥ−Ｂ２、リンゴ酸酵素、マンマグロビン−Ａ、ＭＡＲＴ−１／メラン−Ａ、ＭＡＲＴ−２、ＭＣ１Ｒ、Ｍ−ＣＳＦ、メソセリン、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ２、ＭＵＭ−１、ＭＵＭ−２、ＭＵＭ−３、ミオシン、ＮＡ８８−Ａ、Ｎｅｏ−ＰＡＰ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＰＭ／ＡＬＫ、Ｎ−ＲＡＳ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＯＡ１、ＯＧＴ、がん胎児性抗原（ｈ５Ｔ４）、ＯＳ−９、Ｐポリペプチド、Ｐ１５、Ｐ５３、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＡ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＰＴＰＲＫ、ＲＡＧＥ、ＲＯＲ１、ＲＵ１、ＲＵ２、ＳＡＲＴ−１、ＳＡＲＴ−２、ＳＡＲＴ−３、ＳＯＸ１０、ＳＳＸ−２、サバイビン、サバイビン−２Ｂ、ＳＹＴ／ＳＳＸ、ＴＡＧ−７２、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、ＴＧＦａＲＩＩ、ＴＧＦｂＲＩＩ、ＴＰ１、ＴＲＡＧ−３、ＴＲＧ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ＴＲＰ−２／ＩＮＴ２、ＴＲＰ−２−６ｂ、チロシナーゼ、ＶＥＧＦ−Ｒ２、及びＷＴ１が挙げられる。いくつかの実施形態では、細胞外受容体ドメインは、抗体に結合し、次いで上記の抗原に結合する。いくつかの実施形態では、細胞外受容体ドメインは、上記の抗原に結合する抗体のＦｃドメインに結合する。
【００３３】
いくつかの実施形態では、細胞外受容体ドメインは、２０−（７４）−（７４）（ミラツズマブ；ベルツズマブ）、２０−２ｂ−２ｂ、３Ｆ８、７４−（２０）−（２０）（ミラツズマブ；ベルツズマブ）、８Ｈ９、Ａ３３、ＡＢ−１６Ｂ５、アバゴボマブ、アブシキシマブ、アビツズマブ、ＡＢＰ４９４（セツキシマブバイオシミラー）、アブリルマブ（ａｂｒｉｌｕｍａｂ）、ＡＢＴ−７００、ＡＢＴ−８０６、Ａｃｔｉｍａｂ−Ａ（アクチニウムＡｃ−２２５リンツズマブ）、アクトクスマブ、アダリムマブ、ＡＤＣ−１０１３、ＡＤＣＴ−３０１、ＡＤＣＴ−４０２、アデカツムマブ、アデュカヌマブ、アフェリモマブ、ＡＦＭ１３、アフツズマブ、ＡＧＥＮ１８８４、ＡＧＳ１５Ｅ、ＡＧＳ−１６Ｃ３Ｆ、ＡＧＳ６７Ｅ、アラシズマブペゴール、ＡＬＤ５１８、アレムツズマブ、アリロクマブ、アルツモマブペンテテート、アマツキシマブ、ＡＭＧ２２８、ＡＭＧ８２０、アナツモマブマフェナトクス、アネツマブラブタンシン、アニフロルマブ、アンルキンズマブ、ＡＰＮ３０１、ＡＰＮ３１１、アポリズマブ、ＡＰＸ００３／ＳＩＭ−ＢＤ０８０１（セバシズマブ）、ＡＰＸ００５Ｍ、アルシツモマブ、ＡＲＸ７８８、アスクリンバクマブ、アセリズマブ、ＡＳＧ−１５ＭＥ、アテゾリズマブ、アチヌマブ、ＡＴＬ１０１、アトリズマブ（トシリズマブとも称される）、アトロリムマブ、アベルマブ、Ｂ−７０１、バピネオズマブ、バシリキシマブ、バビツキシマブ、ＢＡＹ１１２９９８０、ＢＡＹ１１８７９８２、ベクツモマブ、ベゲロマブ、ベリムマブ、ベンラリズマブ、ベルチリムマブ、ベシレソマブ、Ｂｅｔａｌｕｔｉｎ（１７７Ｌｕ−テトラキセタン−テツロマブ）、ベバシズマブ、ＢＥＶＺ９２（ベバシズマブバイオシミラー）、ベズロトクスマブ、ＢＧＢ−Ａ３１７、ＢＨＱ８８０、ＢＩ８３６８８０、ＢＩ−５０５、ビシロマブ、ビマグルマブ、ビメキズマブ、ビバツヅマブメルタンシン、ＢＩＷ−８９６２、ブリナツモマブ、ブロソズマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、ＢＭＳ−９８６０１２、ＢＭＳ−９８６０１６、ＢＭＳ−９８６１４８、ＢＭＳ−９８６１７８、ＢＮＣ１０１、ボコシズマブ、ブレンツキシマブベドチン、ブレバレックス（ＢｒｅｖａＲｅｘ）、ブリアキヌマブ、ブロダルマブ、ブロルシズマブ、ブロンチクツズマブ、Ｃ２−２ｂ−２ｂ、カナキヌマブ、カンツズマブメルタンシン、カンツズマブラブタンシン、カプラシズマブ、カプロマブペンデチド、カルルマブ、カツマキソマブ、ＣＢＲ９６−ドキソルビシン免疫複合体、ＣＢＴ１２４（ベバシズマブ）、ＣＣ−９０００２、ＣＤＸ−０１４、ＣＤＸ−１４０１、セデリズマブ、セルトリズマブペゴル、セツキシマブ、ＣＧＥＮ−１５００１Ｔ、ＣＧＥＮ−１５０２２、ＣＧＥＮ−１５０２９、ＣＧＥＮ−１５０４９、ＣＧＥＮ−１５０５２、ＣＧＥＮ−１５０９２、Ｃｈ．１４．１８、シタツズマブボガトクス、シズツムマブ、クラザキズマブ、クレノリキシマブ、クリバツズマブテトラキセタン、ＣＭ−２４、コドリツズマブ、コルツキシマブラブタンシン、コナツムマブ、コンシズマブ、ｃＲ６２６１、クレネズマブ、ＤＡ−３１１１（トラスツズマブバイオシミラー）、ダセツズマブ、ダクリズマブ、ダロツズマブ、ダピロリズマブペゴル、ダラツムマブ、Ｄａｒａｔｕｍｕｍａｂ  Ｅｎｈａｎｚｅ（ダラツムマブ）、Ｄａｒｌｅｕｋｉｎ、デクトレクマブ、デミシズマブ、デニンツズマブマホドチン、デノスマブ、デパツキシズマブ、デパツキシズマブマホドチン、デルロツキシマブビオチン、デツモマブ、ＤＩ−Ｂ４、ジヌツキシマブ、ジリダブマブ、ＤＫＮ−０１、ＤＭＯＴ４０３９Ａ、ドルリモマブアリトクス、ドロジツマブ、ＤＳ−１１２３、ＤＳ−８８９５、デュリゴツマブ、デュピルマブ、デュルバルマブ、ドゥシギツマブ、エクロメキシマブ、エクリズマブ、エドバコマブ、エドレコロマブ、エファリズマブ、エフングマブ、エルデルマブ、エルゲムツマブ、エロツズマブ、エルシリモマブ、エマクツヅマブ、エミベツズマブ、エナバツズマブ、エンホルツマブベドチン、エンリモマブペゴル、エノビリツズマブ、エノキズマブ、エノチクマブ、エンシツキシマブ、エピツモマブシツキセタン、エプラツズマブ、エルリズマブ、エルツマキソマブ、エタラシズマブ、エトロリズマブ、エビナクマブ、エボロクマブ、エキシビビルマブ、ファノレソマブ、ファラリモマブ、ファーレツズマブ、ファシヌマブ、ＦＢＴＡ０５、フェルビズマブ、フェザキヌマブ、ＦＦ−２１１０１、ＦＧＦＲ２抗体薬剤コンジュゲート、フィブロムン（Ｆｉｂｒｏｍｕｎ）、フィクラツズマブ、フィギツムマブ、フィリブマブ、フランボツマブ、フレチクマブ、フォントリズマブ、フォラルマブ、フォラビルマブ、ＦＰＡ１４４、フレソリムマブ、ＦＳ１０２、フルラヌマブ、フツキシマブ、ガリキシマブ、ガニツマブ、ガンテネルマブ、ガビリモマブ、ゲムツズマブオゾガマイシン、Ｇｅｒｉｌｉｍｚｕｍａｂ、ゲボキズマブ、ギレンツキシマブ、グレンバツムマブべドチン、ＧＮＲ−００６、ＧＮＲ−０１１、ゴリムマブ、ゴミリキシマブ、ＧＳＫ２８４９３３０、ＧＳＫ２８５７９１６、ＧＳＫ３１７４９９８、ＧＳＫ３３５９６０９、グセルクマブ、Ｈｕ１４．１８Ｋ３２２Ａ  ＭＡｂ、ｈｕ３Ｓ１９３、Ｈｕ８Ｆ４、ＨｕＬ２Ｇ７、ＨｕＭａｂ−５Ｂ１、イバリズマブ、イブリツモマブチウキセタン、イクルクマブ、イダルシズマブ、ＩＧＮ００２、ＩＧＮ５２３、イゴボマブ、ＩＭＡＢ３６２、ＩＭＡＢ３６２（クローディキシマブ）、イマルマブ、ＩＭＣ−ＣＳ４、ＩＭＣ−Ｄ１１、イムシロマブ、イムガツズマブ、ＩＭＧＮ５２９、ＩＭＭＵ−１０２（イットリウムＹ−９０エプラツズマブテトラキセタン）、ＩＭＭＵ−１１４、ＩｍｍｕＴｕｎｅ  ＩＭＰ７０１アンタゴニスト抗体、ＩＮＣＡＧＮ１８７６、インクラクマブ、ＩＮＣＳＨＲ１２１０、インダツキシマブラブタンシン、インデュサツマブベドチン、インフリキシマブ、イノリモマブ、イノツズマブオゾガマイシン、インテツムマブ、Ｉｐａｆｒｉｃｅｐｔ、ＩＰＨ４１０２、イピリムマブ、イラツムマブ、イサツキシマブ、イスチラツマブ、イトリズマブ、イキセキズマブ、ＪＮＪ−５６０２２４７３、ＪＮＪ−６１６１０５８８、ケリキシマブ、ＫＴＮ３３７９、Ｌ１９ＩＬ２／Ｌ１９ＴＮＦ、ラベツズマブ、ラベツズマブゴビテカン、ＬＡＧ５２５、ランブロリズマブ、ラムパリズマブ、Ｌ−ＤＯＳ４７、レブリキズマブ、レマレソマブ、レンジルマブ、レルデリムマブ、ロイコツキシマブ、レクサツムマブ、リビビルマブ、リファスツズマブベドチン、リゲリズマブ、リロトマブサテトラキセタン、リンツズマブ、リリルマブ、ＬＫＺ１４５、ロデルシズマブ、ロキベトマブ、ロルボツズマブメルタンシン、ルカツムマブ、ルリズマブペゴル、ルミリキシマブ、ルムレツズマブ、ＬＹ３１６４５３０、マパツズマブ、マルゲツキシマブ、マスリモマブ、マツズマブ、マブリリムマブ、ＭＢ３１１、ＭＣＳ−１１０、ＭＥＤＩ０５６２、ＭＥＤＩ−０６３９、ＭＥＤＩ０６８０、ＭＥＤＩ−３６１７、ＭＥＤＩ−５５１（イネビリズマブ）、ＭＥＤＩ−５６５、ＭＥＤＩ６４６９、メポリズマブ、メテリムマブ、ＭＧＢ４５３、ＭＧＤ００６／Ｓ８０８８０、ＭＧＤ００７、ＭＧＤ００９、ＭＧＤ０１１、ミラツズマブ、ミラツズマブ−ＳＮ−３８、ミンレツモマブ、ミルベツキシマブソラブタンシン、ミツモマブ、ＭＫ−４１６６、ＭＭ−１１１、ＭＭ−１５１、ＭＭ−３０２、モガムリズマブ、ＭＯＲ２０２、ＭＯＲ２０８、ＭＯＲＡｂ−０６６、モロリムマブ、モタビズマブ、モキセツモマブシュードトクス、ムロモナブ−ＣＤ３、ナコロマブタフェナトクス、ナミルマブ、ナプツモマブエスタフェナトクス、ナルナツマブ、ナタリズマブ、ネバクマブ、ネシツムマブ、ネモリズマブ、ネレリモマブ、ネスバクマブ、ニモツズマブ、ニボルマブ、ノフェツモマブメルペンタン、ＮＯＶ−１０、オビルトキサキシマブ、オビヌツズマブ、オカラツズマブ、オクレリズマブ、オデュリモマブ、オファツムマブ、オララツマブ、オロキズマブ、オマリズマブ、ＯＭＰ−１３１Ｒ１０、ＯＭＰ−３０５Ｂ８３、オナルツズマブ、オンツキシズマブ、オピシヌマブ、オポルツズマブモナトクス、オレゴボマブ、オルチクマブ、オテリキシズマブ、オトレルツズマブ、ＯＸ００２／ＭＥＮ１３０９、オキセルマブ、オザネズマブ、オゾラリズマブ、パギバキシマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、パンコマブ、ＰａｎｋｏＭａｂ−ＧＥＸ、パノバクマブ、パルサツズマブ、パスコリズマブ、パソツキシズマブ、パテクリズマブ、パトリツマブ、ＰＡＴ−ＳＣ１、ＰＡＴ−ＳＭ６、ペンブロリズマブ、ペムツモマブ、ペラキズマブ、ペルツズマブ、パキセリズマブ、ＰＦ−０５０８２５６６（ウトミルマブ）、ＰＦ−０６６４７２６３、ＰＦ−０６６７１００８、ＰＦ−０６８０１５９１、ピディリズマブ、ピナツズマブベドチン、ピンツモマブ、プラクルマブ、ポラツズマブベドチン、ポネズマブ、プリリキシマブ、プリトキサキシマブ、プリツムマブ、ＰＲＯ１４０、Ｐｒｏｘｉｎｉｕｍ、ＰＳＭＡＡＤＣ、キリズマブ、ラコツモマブ、ラドレツマブ、ラフィビルマブ、ラルパンシズマブ、ラムシルマブ、ラニビズマブ、ラキシバクマブ、レファネズマブ、レガビルマブ、ＲＥＧＮ１４００、ＲＥＧＮ２８１０／ＳＡＲ４３９６８４、レスリズマブ、ＲＦＭ−２０３、ＲＧ７３５６、ＲＧ７３８６、ＲＧ７８０２、ＲＧ７８１３、ＲＧ７８４１、ＲＧ７８７６、ＲＧ７８８８、ＲＧ７９８６、リロツムマブ、リヌクマブ、リツキシマブ、ＲＭ−１９２９、ＲＯ７００９７８９、ロバツムマブ、ロレデュマブ、ロモソズマブ、ロンタリズマブ、ロベリズマブ、ルプリズマブ、サシツズマブゴビテカン、サマリズマブ、ＳＡＲ４０８７０１、ＳＡＲ５６６６５８、サリルマブ、ＳＡＴ０１２、サツモマブペンデチド、ＳＣＴ２００、ＳＣＴ４００、ＳＥＡ−ＣＤ４０、セクキヌマブ、セリバンツマブ、セトキサキシマブ、セヴィルマブ、ＳＧＮ−ＣＤ１９Ａ、ＳＧＮ−ＣＤ１９Ｂ、ＳＧＮ−ＣＤ３３Ａ、ＳＧＮ−ＣＤ７０Ａ、ＳＧＮ−ＬＩＶ１Ａ、シブロツズマブ、シファリムマブ、シルツキシマブ、シムツズマブ、シプリズマブ、シルクマブ、ソフィツズマブベドチン、ソラネズマブ、ソリトマブ、ソネプシズマブ、ソンツズマブ、スタムルマブ、スレソマブ、スビズマブ、ＳＹＤ９８５、ＳＹＭ００４（フツキシマブ及びモドツキシマブ）、Ｓｙｍ０１５、ＴＡＢ０８、タバルマブ、タカツズマブテトラキセタン、タドシズマブ、タリズマブ、タネズマブ、タニビルマブ、タプリツモマブパプトクス、タレクスツマブ、ＴＢ−４０３、テフィバズマブ、テロイキン、テリモマブアリトクス、テナツモマブ、テネリキシマブ、テプリズマブ、テプロツムマブ、テシドルマブ、テツロマブ、ＴＧ−１３０３、ＴＧＮ１４１２、トリウム−２２７−エプラツズマブコンジュゲート、チシリムマブ、ティガツズマブ、チルドラキズマブ、チソツマブベドチン、ＴＮＸ−６５０、トシリズマブ、トラリズマブ、トサトクスマブ、トシツモマブ、トベツマブ、トラロキヌマブ、トラスツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、ＴＲＢＳ０７、ＴＲＣ１０５、トレガリズマブ、トレメリムマブ、トレボグルマブ、ＴＲＰＨ０１１、ＴＲＸ５１８、ＴＳＲ−０４２、ＴＴＩ−２００．７、ツコツズマブセルモロイキン、ツビルマブ、Ｕ３−１５６５、Ｕ３−１７８４、ウブリツキシマブ、ウロクプルマブ、ウレルマブ、ウルトキサズマブ、ウステキヌマブ、バダスツキシマブタリリン、バンドルツズマブベドチン、バンチクツマブ、バヌシズマブ、バパリキシマブ、バルリルマブ、バテリズマブ、ＶＢ６−８４５、ベドリズマブ、ベルツズマブ、ベパリモマブ、ベセンクマブ、ビジリズマブ、ボロシキシマブ、ボルセツズマブマホドチン、ボツムマブ、ＹＹＢ−１０１、ザルツムマブ、ザノリムマブ、ザツキシマブ、ジラリムマブ、及びゾリモマブアリトクスの１つ以上からの抗体又はその機能的誘導体、変異体若しくは断片を含む。いくつかの実施形態では、細胞外受容体ドメインは、上記抗体に結合する。さらなる実施形態では、細胞外受容体ドメインは、上記抗体のＦｃドメインに結合する。
【００３４】
アンカー膜貫通ドメイン
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ポリペプチドを含む。接着受容体の細胞外受容体ドメインを固着する膜貫通ドメインは、任意の好適なポリペプチド配列を有し得る。場合によっては、膜貫通ドメインは、内因性又は野生型膜貫通タンパク質の膜貫通部分のポリペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、内因性又は野生型膜貫通タンパク質の膜貫通部分と比べて、アミノ酸の置換、欠失、及び挿入の少なくとも１つ（例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上）を有するポリペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、非天然ポリペプチド配列、例えばポリペプチドリンカーの配列を含む。ポリペプチドリンカーは、可動性又は剛直性であってもよい。ポリペプチドリンカーは、構造化され得るか又は構造不定であり得る。いくつかの実施形態では、キメラ受容体に、膜貫通ドメインとしてβアドレナリン受容体の一部が用いられる。
【００３５】
細胞質エフェクタードメイン
いくつかの実施形態では、接着受容体は、細胞質エフェクタードメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、細胞質エフェクタードメインは、接着受容体の抗原への結合時にＮＫ細胞の増殖を誘導する細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、細胞質エフェクタードメインは、ＮＫ細胞の増殖を、細胞傷害性を誘導することなく誘導する。いくつかの実施形態では、細胞質エフェクタードメインは、サイトカイン受容体（例えば、ＩＬ−２又はＩＬ−１５）の細胞質ドメインである。いくつかの実施形態では、かかる細胞質エフェクタードメインは、ヘテロ二量体化するように改変される。
【００３６】
抗Ｈｅｒ２接着受容体
Ｈｅｒ２は、ヒト上皮成長因子受容体（ＨＥＲ／ＥＧＦＲ／ＥＲＢＢ）ファミリーのメンバーである。このがん遺伝子の増幅又は過剰発現は、乳がんの特定の侵襲性タイプの発生及び進行において重要な役割を担うことが示されている。いくつかの実施形態では、細胞外受容体ドメインは、Ｈｅｒ２に結合する。いくつかの実施形態では、抗Ｈｅｒ２細胞外受容体ドメインは、抗Ｈｅｒ２抗体のトラスツズマブ、ペルツズマブ、及びそれらの機能的誘導体、変異体又は断片を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｈｅｒ２細胞外受容体は、ｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、抗Ｈｅｒ２  ｓｃＦｖは、配列番号５８によってコードされる。いくつかの実施形態では、抗Ｈｅｒ２  ｓｃＦｖは、配列番号５９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞外受容体は、配列番号５８からの１つ以上の追加的な突然変異を有してもよいが、Ｈｅｒ２結合機能を保持するか、又はいくつかの実施形態では増強している。いくつかの実施形態では、抗Ｈｅｒ２細胞外受容体ドメインは、二量体、三量体、又は他のコンカテマー形式として提供され、かかる実施形態では、増強されたリガンド結合活性が提供される。いくつかの実施形態では、抗Ｈｅｒ２細胞外受容体ドメインをコードする配列は、任意選択的には完全に又は部分的にコドン最適化される。加えて、いくつかの実施形態では、シグナルペプチドが用いられる。シグナルペプチドの種又は配列は、該構築物と異なり得る。しかし、いくつかの実施形態では、ＣＤ８αのシグナルペプチド、又はその一部若しくは誘導体が用いられる。一実施形態では、シグナルペプチドは、ＣＤ８ａに由来し、配列番号４の配列を有する。一実施形態では、シグナルペプチドは、ＣＤ８に由来し、配列番号６７のＤＮＡ配列を有する。一実施形態では、シグナルペプチドは、ＣＤ８に由来し、配列番号６８のタンパク質配列を有する。
【００３７】
抗ＰＳＭＡ接着受容体
葉酸ヒドロラーゼ１（ＦＯＬＨ１）としても公知の前立腺特異膜抗原（ＰＳＭＡ）は、前立腺上皮細胞内で高度に発現され、前立腺がんに対する細胞表面マーカーである非脱落膜内在性の糖タンパク質である。いくつかの実施形態では、細胞外受容体ドメインは、ＰＳＭＡに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＰＳＭＡ細胞外受容体ドメインは、ｓｃＦｖ（一本鎖Ｆｖ）抗体、例えば：ＡＳ、ＧＯ、Ｇ１、Ｇ２、及びＧ４、ｍＡｂの３／Ｅ７、３／Ｆ１１、３／Ａ１２、Ｋ７、Ｋ１２、及びＤ２０；ｍＡｂのＥ９９、Ｊ５９１、Ｊ５３３、及びＪ４１５；ｍＡｂの７Ｅ１１−０５．３；抗体７Ｅ１１；並びにＣｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５９：３１９２；Ｍｕｒｐｈｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｊ．Ｕｒｏｌ．，１６０：２３９６；Ｇｒａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５８：４７８７；及びＷａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，９２：８７１に記載の抗体、及びそれらの機能的誘導体、変異体又は断片を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＳＭＡ細胞外受容体は、ｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＳＭＡ  ｓｃＦｖは、配列番号６２によってコードされる。いくつかの実施形態では、抗ＰＳＭＡ  ｓｃＦｖは、配列番号６３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞外受容体は、配列番号６２からの１つ以上の追加的な突然変異を有してもよいが、ＰＳＭＡ結合機能を保持する、又はいくつかの実施形態では増強している。いくつかの実施形態では、細胞外受容体ドメインは、二量体、三量体、又は他のコンカテマー形式として提供され、かかる実施形態は、増強されたリガンド結合活性をもたらす。いくつかの実施形態では、抗ＰＳＭＡ細胞外受容体ドメインをコードする配列は、任意選択的には完全に又は部分的にコドン最適化される。加えて、いくつかの実施形態では、シグナルペプチドが用いられる。シグナルペプチドの種又は配列は、該構築物と異なり得る。しかし、いくつかの実施形態では、ＣＤ８αのシグナルペプチドが用いられる。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、ＣＤ８の部分又は誘導体である。一実施形態では、シグナルペプチドは、ＣＤ８ａに由来し、配列番号４の配列を有する。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、配列番号４からの１つ以上の追加的な突然変異を有してもよいが、該受容体ドメインの所望される膜配向性をさらにもたらす。一実施形態では、シグナルペプチドは、ＣＤ８に由来し、配列番号６７のＤＮＡ配列を有する。一実施形態では、シグナルペプチドは、ＣＤ８に由来し、配列番号６８のタンパク質配列を有する。
【００３８】
接着受容体構築物
本明細書に提供される開示内容を考慮して、特定の標的細胞、例えば罹患又はがん細胞を標的にし、破壊するため、ＮＫ細胞内で生成され、発現され得る種々の接着受容体が存在する。かかる接着受容体の非限定例が、下記により具体的に考察される。
【００３９】
いくつかの実施形態では、細胞外受容体ドメイン及びアンカー膜貫通ドメインを含む接着受容体をコードするポリヌクレオチドが提供される。いくつかの実施形態では、２つ以上の接着受容体をコードするポリヌクレオチドが提供される。いくつかの実施形態では、２つ以上の接着受容体は、リガンドの接着受容体への結合時、ＮＫ細胞を活性化する（例えば増殖させる）ように相乗的様式で作用する。いくつかの実施形態では、２つ以上の接着受容体は、異なる抗原に結合する。いくつかの実施形態では、２つ以上の接着受容体は、同じ抗原に結合する。いくつかの実施形態では、２つ以上の接着受容体は、同じ抗原の異なるエピトープに結合する。
【００４０】
いくつかの実施形態では、接着受容体の単一タイプ、接着受容体の１つのタイプの複数の「繰り返し」及び接着受容体の異なるタイプの組み合わせに加えて、さらなる共活性化分子が提供される。例えば、いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞は、膜結合性インターロイキン１５（ｍｂＩＬ１５）を発現するように操作される。かかる実施形態では、ＮＫ細胞上でのｍｂＩＬ１５の存在は、ＮＫ細胞の増殖及び寿命を相乗的に高めることにより、ＮＫ細胞の細胞傷害性効果をさらに増強するように機能する。いくつかの実施形態では、ｍｂＩＬ１５は、配列番号１６の核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｍｂＩＬ１５は、配列番号１６の配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％相同であるように切断又は修飾され得る。いくつかの実施形態では、ｍｂＩＬ１５は、配列番号１７のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｍｂＩＬ１５は、配列番号１７の配列と、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の相同性があるように、切断又は修飾され得る。いくつかの実施形態では、ｍｂＩＬ１５は、切断される一方で、ｍｂＩＬ１５の機能の少なくとも約５０％、約６０％約７０％、約８０％、約９０％、又は約９５％を保持する。本明細書に開示される接着受容体と併せて、かかる実施形態は、特定の標的細胞を標的にし、破壊するのに特に有効なＮＫ細胞組成物を提供する。
【００４１】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される接着受容体の表面発現及び有効性は、いくつかの実施形態では膜貫通ドメインに隣接した細胞外受容体ドメイン内に位置するスペーサー領域（ヒンジ）内でのバリエーションにより増強される。いくつかの実施形態では、本明細書中の他の箇所に開示されるような特定の目的に役立つドメインは、追加的な機能を果たし得る（例えば、たとえ特定のドメインがシグナル伝達ドメインを開示するセクション内に記載されることがあっても、そのドメインはまた、構築物の異なる部分における別の機能に用いてもよい）。例えば、いくつかの実施形態では、ＣＤ８ａは、（いくつかの実施形態では配列番号５の核酸配列によってコードされる）ヒンジ領域として機能するように再利用される。さらに別の実施形態では、このヒンジ領域は、ＣＤ８ａのＮ末端切頭型及び／又はＣＤ８ａのＣ末端切頭型を含む。実施形態に応じて、これらの切頭は、配列番号５によってコードされるヒンジに対して少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％又は少なくとも約９０％相同であり得る。いくつかの追加的な実施形態では、このヒンジは、グリシン残基及びセリン残基のスパン（本明細書では「ＧＳリンカー」と称される）を含み、ＧＳｎは、配列（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）ｎ（配列番号４２）を表す。一実施形態では、このヒンジは、ＣＤ８ａ及びＧＳ３の両方を含み、配列番号３２のアミノ酸配列によってコードされ、例えばｎ＝３である。追加的な実施形態では、ｎの値は、実施形態に応じて、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５と等しいか又はそれより高いことができる。いくつかの実施形態では、このヒンジは、ＧＳｎ／ＣＤ８ａとして構成されている可能性もある。代わりに、このＧＳリンカーは、ヒンジ領域全体を含み得る。そのような一実施形態では、このヒンジ領域は、配列番号３３の核酸配列によってコードされる。別のそのような実施形態では、このヒンジ領域は、配列番号３４の核酸配列によってコードされる。
【００４２】
いくつかの実施形態では、接着受容体は、本明細書中でさらに詳細に考察される通り、二量体化するように形成される。二量体化は、実施形態に応じて、ホモ二量体又はヘテロ二量体を含んでもよい。いくつかの実施形態では、二量体化は、接着受容体（ひいては該受容体を発現するＮＫ細胞）の結合活性の、有害な毒性効果の減少（又は欠如）における協調的平衡を伴う、より優れたリガンド認識への変化をもたらす。さらなる実施形態では、細胞外受容体ドメインは、ＣＤ８ａシグナルペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態では、接着受容体では、内部二量体、又は１つ以上の成分サブユニットの繰り返しが用いられる。
【００４３】
任意選択により、実施形態に応じて、本明細書で開示されたポリヌクレオチドのいずれかは、接着受容体の構成サブユニットの１つ又は複数の切頭及び／又はバリアントもコードし得、ＮＫ細胞を標的細胞に向ける能力を依然として保持し得、いくつかの実施形態では、結合時に細胞傷害性を予想外にも増強し得る。加えて、本明細書で開示されたポリヌクレオチドのいずれかは、任意選択により、接着受容体の様々な構成サブユニットをコードするコドン最適化ヌクレオチド配列も含み得る。本明細書で使用される場合、用語「断片」及び「切頭型」は、それらの通常の意味が与えられるものとし、且つタンパク質のＮ末端欠失バリアント及びＣ末端欠失バリアントも含むものとする。
【００４４】
いくつかの実施形態では、抗Ｈｅｒ２  ｓｃＦｖ及び膜貫通領域を含む、抗Ｈｅｒ２接着受容体をコードするポリヌクレオチドが提供される。一実施形態では、この接着受容体は、配列番号６０の核酸配列によってコードされる。さらに別の実施形態では、抗Ｈｅｒ２接着受容体は、配列番号６１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、この構築物は、ＮＫ細胞がｍｂＩＬ１５を同時に発現するとき、特に有効であり、ｍｂＩＬ１５は、ＮＫ細胞の活性化及び細胞傷害性に関連してさらなる相乗効果をもたらす。いくつかの実施形態では、接着受容体の配列は、配列番号６０と異なってもよいが、実施形態に応じて、配列番号６０との少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％の相同性を維持する。いくつかの実施形態では、接着受容体が配列番号６０と異なってもよい一方で、接着受容体は、ＮＫ細胞の標的化、活性化及び／又は細胞傷害性機能を保持するか、又はいくつかの実施形態ではそれらを増強している。
【００４５】
いくつかの実施形態では、抗ＰＳＭＡ  ｓｃＦｖ及び膜貫通領域を含む、抗ＰＳＭＡ接着受容体をコードするポリヌクレオチドが提供される。一実施形態では、この接着受容体は、配列番号６４の核酸配列によってコードされる。さらに別の実施形態では、抗ＰＳＭＡ接着受容体は、配列番号６５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、この構築物は、ＮＫ細胞がｍｂＩＬ１５を同時に発現するとき、特に有効であり、ｍｂＩＬ１５は、ＮＫ細胞の活性化及び細胞傷害性に関連してさらなる相乗効果をもたらす。いくつかの実施形態では、接着受容体の配列は、配列番号６４と異なってもよいが、実施形態に応じて、配列番号６４との少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％の相同性を維持する。いくつかの実施形態では、接着受容体が配列番号６４と異なってもよい一方で、接着受容体は、ＮＫ細胞の標的化、活性化及び／又は細胞傷害性機能を保持するか、又はいくつかの実施形態ではそれらを増強している。
【００４６】
本明細書に記載の接着受容体をコードするポリヌクレオチドは、ＮＫ細胞内での組換えタンパク質の発現を達成するため、ベクターに挿入されてもよい。一実施形態では、このポリヌクレオチドは、この接着受容体の発現のための少なくとも１つの調節エレメントに作動可能に連結されている。具体的な実施形態では、本明細書で開示されたペプチドに対して異種の転写調節エレメント（例えば、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）又はエンハンサーエレメント）を利用して、この接着受容体の転写が指示される。実施形態に応じて、接着受容体の様々な構成部分は、単一のベクターで又は代わりに複数のベクターでＮＫ細胞に送達され得る。一部の実施形態では、接着受容体構築物は、単一のベクターで送達されるが、接着受容体の効力を増強する別の因子（例えば、ｍｂＩＬ１５）は、別個のベクターで送達される。いくつかの実施形態では、接着受容体及びこの接着受容体の効力を増強する因子（例えば、ｍｂＩＬ１５）は、単一のベクターで送達される。使用されるベクターの数に関係なく、任意のポリヌクレオチドは、タグ配列を任意選択により含み得、この構築物を発現するＮＫ細胞の存在の認識を可能にする。例えば、いくつかの実施形態では、ＦＬＡＧタグ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ、配列番号５５）が使用される。同様に利用可能であるのは、他のタグ配列であり、例えばポリヒスチジンタグ（Ｈｉｓ−タグ）（ＨＨＨＨＨＨ、配列番号５６）、ＨＡ−タグ又はｍｙｃ−タグ（ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ；配列番号５７）である。代わりに、緑色蛍光タンパク質又は他の蛍光部分が使用される。タグのタイプの組み合わせも使用して、接着受容体のサブコンポーネントを個別に認識し得る。
【００４７】
いくつかの実施形態では、接着受容体をコードするポリヌクレオチドは、エレクトロポレーションによりＮＫ細胞中に導入され得るｍＲＮＡである。別の実施形態では、ベクターは、形質導入によりＮＫ細胞中に導入され得るウイルス（好ましくはレトロウイルス）である。いくつかの実施形態では、このベクターは、マウス幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）である。追加的な実施形態では、他のベクターが使用され得、例えばレンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス及び同様のものが使用され得る。いくつかの実施形態では、非ＨＩＶ由来レトロウイスルが使用される。選択されるベクターは、様々な因子（例えば、限定されないが、転写調節エレメントの強度及びタンパク質を発現するために使用される細胞）に依存するであろう。このベクターは、プラスミド、ファージミド、コスミド、ウイルスベクター、ファージ、人工染色体及び同様のものであり得る。追加的な実施形態では、このベクターは、エピソームの非相同的に又は相同的に組み込むベクターであり得、このベクターは、このベクターを形質転換するための任意の適切な手段（形質転換、遺伝子導入、コンジュゲーション、プロトプラスト融合、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、直接マイクロインジェクション等）により、適切な細胞中に導入され得る。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞中で接着受容体の発現を誘導するための他のアプローチが使用され、このアプローチとして例えば下記が挙げられる：ＳＶ４０初期プロモーター領域、ラウス肉腫ウイルスの３’長末端反復に含まれるプロモーター、ヘルペスチミジンキナーゼプロモーター、メタロチオネイン遺伝子の調節配列、アデノウイルス（ＡＤＶ）プロモーター、サイトメガロウイスル（ＣＭＶ）プロモーター、ウシパピローマウイルス（ＢＰＶ）プロモーター、パロウイルスＢ１９ｐ６プロモーター、βラクタマーゼプロモーター、ｔａｃプロモーター、ノパリンシンテターゼプロモーター領域又はカリフラワーモザイクウイルス３５Ｓ  ＲＮＡプロモーター、リブロースビスリン酸カルボキシラーゼのプロモーター、Ｇａｌ  ４プロモーター、ＡＤＣ（アルコールデヒドロゲナーゼ）プロモーター、ＰＧＫ（ホスホグリセロールキナーゼ）プロモーター、骨髄増殖性肉腫ウイルスエンハンサーとともに、操作されたＭｏＭｕＬＶ  ＬＴＲのＵ３領域を含む合成ＭＮＤプロモーター及びアルカリホスファターゼプロモーター。
【００４８】
本明細書で開示された接着受容体を発現するようにナチュラルキラー細胞を操作し得る。接着受容体発現構築物は、当業者に既知の技術のいずれかを使用してＮＫ細胞に導入され得る。一実施形態では、この接着受容体は、ＮＫ細胞中で一時的に発現される。別の実施形態では、この接着受容体は、ＮＫ細胞中で安定的に発現される。追加的な実施形態では、このＮＫ細胞は、自己細胞である。さらに別の実施形態では、このＮＫ細胞は、ドナー由来（同種）細胞である。
【００４９】
本明細書でさらに提供されるのは、癌又は感染性疾患を有する対象を処置する方法であって、本明細書で開示された接着受容体を発現するように操作されたＮＫ細胞を含む組成物を対象に投与することを含み、この接着受容体は、損傷又は罹患した細胞又は組織上で差次的に発現される（例えば、正常な細胞又は組織と比較して異なる程度で発現される）マーカー又はリガンドを標的とするように設計されている、方法である。本明細書で使用される場合、用語「発現する」、「発現される」及び「発現」は、それらの通常の意味が与えられ、遺伝子配列又はポリヌクレオチド配列の情報の顕在化を可能にすること又は引き起こすことを指すものとし、例えば対応する遺伝子配列又はＤＮＡ配列の転写及び翻訳に関与する細胞機能を活性化させることによるタンパク質の産生を指すものとする。発現産物自体（例えば、結果として生じるタンパク質）が細胞により「発現される」と呼ばれる場合もある。発現産物は、細胞内、細胞外又は膜貫通として特徴付けられ得る。用語「細胞内」は、その通常の意味が与えられるものとし、且つ細胞の内側を指すものとする。用語「細胞外」は、その通常の意味が与えられるものとし、且つ細胞の外側を指すものとする。用語「膜貫通」は、その通常の意味が与えられるものとし、且つポリペプチドの少なくとも一部が細胞膜に埋め込まれていることを指すものとする。用語「細胞質」は、その通常の意味が与えられるものとし、且つ細胞膜内、核外に存在することを指すものとする。本明細書で使用される場合、対象への治療の投与に関連する用語「処置する」、「処置すること」及び「処置」は、それらの通常の意味が与えられるものとし、且つ対象が治療から得られる有益な効果を指すものとする。いくつかの実施形態では、本明細書で説明された遺伝子改変細胞による対象の処置により、例えば下記で挙げられる効果の１つ、２つ、３つ、４つ又はより多くが達成される：（ｉ）疾患又はそれに関連する症状の重症度の軽減又は寛解；（ｉｉ）疾患に関連する症状の持続時間の短縮；（ｉｉｉ）疾患又はそれに関連する症状の進行に対する保護；（ｉｖ）疾患又はそれに関連する症状の退行；（ｖ）疾患に関連する症状の発生又は発症に対する保護；（ｖｉ）疾患に関連する症状の再発に対する保護；（ｖｉｉ）対象の入院の減少；（ｖｉｉｉ）入院の長さの短縮；（ｉｘ）疾患を有する対象の生存率の増加；（ｘ）疾患に関連する症状の数の減少；（ｘｉ）別の治療の予防効果又は治療効果の増強、改善、補充、補完又は増大。投与は、様々な経路（例えば、限定されないが、罹患した組織への静脈内送達、動脈内送達、皮下送達、筋肉内送達、肝内送達、腹腔内送達及び／又は局所送達）によるものであり得る。ＮＫ細胞の用量は、所定の対象に関して、この対象の体重、疾患の種類及び状態並びに所望の処置の積極性に基づいて用意に決定され得るが、実施形態に応じて、１ｋｇ当たり約１０5個の細胞〜１ｋｇ当たり約１０12個の細胞の範囲（例えば、１０5〜１０7個、１０7〜１０10個、１０10〜１０12個及びそれらの重複範囲）である。一実施形態では、用量漸増レジメンを使用する。いくつかの実施形態では、ある範囲のＮＫ細胞（例えば、約１×１０6個の細胞／ｋｇ〜約１×���０8個の細胞／ｋｇ）を投与する。実施形態に応じて、様々な種類の癌又は感染性疾患を処置し得る。本明細書で提供される様々な実施形態は、下記の癌の非限定的な例の処置又は予防を含む：例えば、限定されないが、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、副腎皮質癌、カポジ肉腫、リンパ腫、胃腸癌、虫垂癌、中枢神経癌、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳腫瘍（例えば、限定されないが、星状細胞腫、脊髄腫瘍、脳幹グリオーマ、頭蓋咽頭腫、上衣芽細胞腫、上衣腫、髄芽腫、髄上皮腫）、乳癌、気管支腫瘍、バーキットリンパ腫、子宮頸癌、結腸癌、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄増殖性障害、乳管癌、子宮内膜癌、食道癌、胃癌、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、有毛細胞白血病、腎細胞癌、白血病、口腔癌、上咽頭癌、肝癌、肺癌（例えば、限定されないが、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）及び小細胞肺癌）、膵癌、腸癌、リンパ腫、黒色腫、眼癌、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、下垂体癌、子宮癌並びに腟癌。
【００５０】
さらに、本明細書で提供される様々な実施形態は、下記の非限定的な例の感染性疾患の処置又は予防を含み、この感染性疾患として細菌起源の感染が挙げられるが、それに限定されず、例えば下記の属の１つ又は複数からの細菌による感染が含まれ得る：ボルデテラ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ）、ボレリア（Ｂｏｒｒｅｌｉａ）、ブルセラ（Ｂｒｕｃｅｌｌａ）、カンピロバクター（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）、クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ）及びクラミドフィラ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ）、クロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、エンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、エシェリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、フランシセラ（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ）、ヘモフィルス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）、ヘリコバクター（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ）、レジオネラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）、レプトスピラ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ）、リステリア（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）、マイコバクテリウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ）、ナイセリア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、リケッチア（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ）、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、シゲラ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ）、ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）及びエルシニア（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）並びにこれらの変異体又は組み合わせ。いくつかの実施形態では、種々の真菌感染症を治療するための方法が提供される。実施形態に応じて、真菌起源の感染は、例えば、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属、ブラストミセス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ）属、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属、コクシジオイデス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ）属、クリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、及びヒストプラズマ（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ）属、並びにそれらの突然変異体又は組み合わせの１つ以上由来の真菌による感染を含んでもよい。いくつかの実施形態では、ウイルス感染（例えば、１つ又は複数のウイルスにより引き起こされるもの）を処置するために様々なものを処置する方法が提供され、このウイルとして下記が挙げられる：アデノウイルス、コクサッキーウイルス、エプスタイン−バーウイルス、ａ型肝炎ウイルス、ｂ型肝炎ウイルス、ｃ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、サイトメガロウイルス、デボラウイルス、ヒトヘルペスウイルス８型、ＨＩＶ、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、ヒトパピローマウイルス、パラインフルエンザウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、呼吸器合抱体ウイルス、風疹ウイルス及び水痘帯状疱疹ウイルス。
【００５１】
いくつかの実施形態では、同様に本明細書で提供されるのは、配列番号１〜６５のそれぞれの核酸配列又はアミノ酸配列と比較して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％（及びそれらの中の範囲）相同であり、且つそれぞれの配列番号１〜６５と比較して機能の１つ又は複数も示す核酸配列及びアミノ酸配列であり、この機能として下記が挙げられるが、それらに限定されない：（ｉ）増殖の増強、（ｉｉ）活性化の増強、（ｉｉｉ）核酸配列及びアミノ鎖配列によってコードされる受容体を有するＮＫ細胞が結合するリガンドを提示する細胞に対する細胞傷害活性の増強、（ｉｖ）腫瘍又は感染部位へのホーミングの増強、（ｖ）オフターゲット細胞傷害効果の減少、（ｖｉ）免疫刺激性サイトカイン及びケモカイン（例えば、限定されないが、ＩＦＮｇ、ＴＮＦａ、ＩＬ−２２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４及びＣＣＬ５）の分泌の増強、（ｖｉｉ）さらなる自然免疫応答及び適応免疫応答を刺激する能力の増強、並びに（ｖｉｉｉ）これらの組み合わせ。
【００５２】
加えて、いくつかの実施形態では、核酸コードの縮重を説明しつつ、本明細書で開示された核酸のいずれかに対応するアミノ鎖配列が提供される。さらに、本明細書で明示的に開示されたものと異なるが、機能の類似性又は均等性を有するこの配列（核酸又はアミノ酸）も本開示の範囲内で企図される。上記には、変異体、切頭、置換又は他の種類の改変が含まれる。
【００５３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の接着受容体は、ナチュラルキラーグループ２メンバーＤ（ＮＫＧ２Ｄ）の天然リガンドを発現する細胞を標的にし、相乗的に増強されたＮＫ細胞の活性化及び細胞傷害性をもたらすキメラ受容体と同時発現される。したがって、いくつかの実施形態では、天然ＮＫＧ２Ｄに結合するペプチドを含む細胞外受容体ドメイン、膜貫通領域、及びエフェクタードメインを含むＮＫＧＤキメラ受容体をコードするポリヌクレオチドも提供され、ここでＮＫＧ２Ｄの天然リガンドに結合するペプチドはＮＫＧ２Ｄの断片である。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２Ｄの断片は、配列番号１の配列の断片を含むポリヌクレオチドによってコードされる。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２Ｄの断片は、配列番号２の配列を含む一方で、さらなる実施形態では、ＮＫＧ２Ｄをコードする断片は、コドン最適化され、例えば配列番号３の配列を含む。いくつかの実施形態では、エフェクタードメインは、ＣＤ１６、ＮＣＲ１、ＮＣＲ２、ＮＣＲ３、４−１ＢＢ、ＣＤ２８、ＮＫｐ８０、ＣＤ３ζ及び２Ｂ４の１つ以上を含む。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２Ｄは、完全長ヒトＮＫＧ２Ｄではなく、むしろ１つ以上のＮＫＧ２Ｄリガンドに結合するその能力を保持する断片である。いくつかの実施形態では、これらのエフェクタードメインは、ＣＤ８αに共役される。本明細書で考察される通り、膜貫通及び細胞内ドメインの組み合わせは、いくつかの実施形態において用いられ、ＮＫＧ２Ｄキメラ受容体の成分間での相乗的相互作用をもたらし、増強された細胞傷害性効果をもたらす。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２Ｄキメラ受容体構築物において、リンカー、ヒンジ、又は他の「スペーシング」エレメントが提供される。例えば、いくつかの実施形態では、エフェクタードメインは、リンカーを含む。いくつかの実施形態では、該ポリヌクレオチドは、ＮＫＧ２Ｄキメラ受容体構築物の部分間、例えば、４−１ＢＢ、ＣＤ２８、ＣＤ１６、ＮＣＲ１、ＮＣＲ３、ＣＤ３ζ、ＤＡＰ１０、２Ｂ４又はＮＫｐ８０のいずれかの間のＧＳリンカーをコードする。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２Ｄキメラ受容体のエフェクタードメインは、リンカーを含む。いくつかの実施形態では、該ポリヌクレオチドは、ＮＫＧ２Ｄキメラ受容体構築物の部分間、例えば、４−１ＢＢ、ＣＤ２８、ＣＤ１６、ＮＣＲ１、ＮＣＲ３、２Ｂ４又はＮＫｐ８０のいずれかの間のＧＳリンカーをコードする。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域を含むキメラ受容体が提供される。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２Ｄキメラ受容体のエフェクタードメインは、１つ以上のヘミＩＴＡＭ配列を含む。加えて、本明細書に開示されるキメラ受容体のいずれもまた、膜結合型インターロイキン１５（ｍｂＩＬ１５）と同時発現され得る。いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを使用しない。いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、シグナル伝達ドメイン内のＩＴＡＭ又はヘミＩＴＡＭモチーフを使用しない。いくつかの実施形態では、ＤＡＰ１０は、キメラ受容体中に含まれない。
【００５４】
いくつかの実施形態では、提供されるポリヌクレオチドは、ｍＲＮＡである。一部の実施形態では、このポリヌクレオチドは、接着受容体の発現のための少なくとも１つの調節エレメントに作動可能に連結されている。本明細書で使用される場合、用語「核酸」、「ヌクレオチド」及び「ポリヌクレオチド」は、その通常の意味が与えられるものとし、デオキシリボヌクレオチド、デオキシリボ核酸、リボヌクレオチド及びリボ核酸並びにそれらのポリマー形態を含むものとし、且つ一本鎖形態又は二本鎖形態を含む。核酸は、天然に存在する核酸（例えば、デオキシリボ核酸（「ＤＮＡ」）及びリボ核酸（「ＲＮＡ」））並びに核酸類似体を含む。核酸類似体として、天然に存在するホスホジエステル結合以外の他のヌクレオチドと結合するヌクレオチドである、天然に存在しない塩基を含むもの又はホスホジエステル結合以外の結合を介して付着した塩基を含むものが挙げられる。そのため、核酸類似体として、例えば、限定されないが、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロトリエステル、ホスホルアミデート、ボラノホスフェート、メチルホスホネート、キラルメチルホスホネート、２−Ｏ−メチルリボヌクレオチド、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）及び同様のものが挙げられる。本明細書で使用される場合、例えば異種核酸配列に「作動可能に連結されている」調節核酸配列に関連する用語「作動可能に連結されている」は、その通常の意味が与えられるものとし、且つこの調節核酸配列が異種核酸配列と機能的関係に置かれていることを意味するものとする。ＩＲＥＳに関連して、「作動可能に連結されている」は、内部リボソーム侵入部位を含む核酸配列と、異種コード配列が翻訳されるｍＲＮＡ配列の中央での異種コード配列開始との間の機能的連結を指す。本明細書で使用される場合、用語「ベクター」は、その通常の意味が与えられるものとし、且つＤＮＡ配列又はＲＮＡ配列（例えば、外来遺伝子）を遺伝子改変細胞中に導入し、遺伝子改変された細胞を形質転換させて、導入された配列の発現（例えば、転写及び／又は翻訳）を促進し得る媒体を指すものとする。ベクターとして、ウイルス、プラスミド、ファージ等が挙げられる。用語「接着受容体」は、本明細書で用いられるとき、その通常の意味が与えられるものとし、標的細胞（例えばウイルス感染及び形質転換細胞）上のリガンドを認識し、それに結合する膜結合型受容体を指すものとする。用語「キメラ受容体」は、本明細書で用いられるとき、その通常の意味が与えられるものとし、単一のタンパク質上に天然には一緒に見出されない少なくとも２つのポリペプチドドメインを含む、細胞表面受容体を指すものとする。用語「キメラ受容体複合体」は、本明細書で使用される場合、単一タンパク質上で自然界において一緒に見出されない組み合わせで少なくとも２つのポリペプチドドメインを含み得る第１のポリペプチドを指し、この第１のポリペプチドは、第２のポリペプチド（例えば、アダプターポリペプチド）、シグナル伝達分子又は刺激分子と関連している。本明細書で開示された接着受容体の生成及び使用に関する追加的な用語は、当業者により容易に理解され、且つ国際公開第２０１４／１１７１２１号パンフレット及び米国特許第７，９９４，２９８号明細書（これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）でも見出され得る。
【００５５】
いくつかの実施形態に従って追加で提供されるのは、本明細書で提供されたポリヌクレオチドのいずれかをコードするポリヌクレオチドを含むベクターであって、このポリヌクレオチドは、任意選択により、接着受容体の発現のための少なくとも１つの調節エレメントに作動可能に連結されている、ベクターである。いくつかの実施形態では、このベクターは、レトロウイルスである。
【００５６】
本明細書でさらに提供されるのは、本明細書で開示されたポリヌクレオチド、ベクター又は接着受容体を含む操作されたナチュラルキラー細胞である。いくつかの実施形態では、このＮＫ細胞は、疾患（例えば、癌及び／又は感染性疾患）の予防の処置での使用に適している。
【００５７】
いくつかの実施形態によると、それを必要とする哺乳動物におけるがん又は感染症を治療又は予防するための方法であって、ＮＫ細胞を治療有効量で前記哺乳動物に投与することを含む方法が本明細書に提供され、ここで前記ＮＫ細胞は、本開示に従うポリヌクレオチドによってコードされる接着受容体を発現する。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞は、がん又は感染症を有する患者から単離される自家細胞である。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞は、ドナーから単離される同種細胞である。それを必要とする哺乳動物におけるＮＫ細胞の細胞傷害性を増強するための薬剤の製造における、本開示に従うポリヌクレオチドの使用も本明細書に提供される。それを必要とする哺乳動物におけるがん又は感染症を治療又は予防するための、本開示に従う単離された遺伝子改変ナチュラルキラー細胞の使用も提供される。
【００５８】
加えて、いくつかの実施形態では、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の細胞傷害性を増強するための薬剤の製造における接着受容体をコードするポリヌクレオチドの使用が提供され、接着受容体は、標的細胞抗原に結合するように形成された細胞外受容体ドメインと、細胞外受容体ドメインをＮＫ細胞の表面上に固着する膜貫通ドメインとを含み、ここで標的細胞抗原は、健常細胞と標的細胞との間で差次的に発現され、ＰＳＭＡである。いくつかの実施形態では、標的細胞抗原に結合する細胞外受容体ドメインは、抗体、Ｆａｂ、又はｓｃＦｖを含む。
【００５９】
加えて、いくつかの実施形態では、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の細胞傷害性を増強するための薬剤の製造における接着受容体をコードするポリヌクレオチドの使用が提供され、接着受容体は、標的細胞抗原に結合するように形成された細胞外受容体ドメインと、細胞外受容体ドメインをＮＫ細胞の表面上に固着する膜貫通ドメインとを含み、ここで標的細胞抗原は、健常細胞と標的細胞との間で差次的に発現され、Ｈｅｒ２である。いくつかの実施形態では、標的細胞抗原に結合する細胞外受容体ドメインは、抗体、Ｆａｂ、又はｓｃＦｖを含む。
【００６０】
加えて、いくつかの実施形態では、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の細胞傷害性を増強するための薬剤の製造における接着受容体をコードするポリヌクレオチドの使用が提供され、接着受容体は、標的細胞抗原に結合するように形成された細胞外受容体ドメインと、細胞外受容体ドメインをＮＫ細胞の表面上に固着する膜貫通ドメインとを含み、ここで標的細胞抗原は、健常細胞と標的細胞との間で差次的に発現され、ＣＤ１２３である。いくつかの実施形態では、標的細胞抗原に結合する細胞外受容体ドメインは、抗体、Ｆａｂ、又はｓｃＦｖを含む。
【００６１】
加えて、いくつかの実施形態では、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の細胞傷害性を増強するための薬剤の製造における接着受容体をコードするポリヌクレオチドの使用が提供され、接着受容体は、標的細胞抗原に結合するように形成された細胞外受容体ドメインと、細胞外受容体ドメインをＮＫ細胞の表面上に固着する膜貫通ドメインとを含み、ここで標的細胞抗原は、健常細胞と標的細胞との間で差次的に発現され、ＧＤ−２である。いくつかの実施形態では、標的細胞抗原に結合する細胞外受容体ドメインは、抗体、Ｆａｂ、又はｓｃＦｖを含む。
【００６２】
加えて、いくつかの実施形態では、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の細胞傷害性を増強するための薬剤の製造における接着受容体をコードするポリヌクレオチドの使用が提供され、接着受容体は、標的細胞抗原に結合するように形成された細胞外受容体ドメインと、細胞外受容体ドメインをＮＫ細胞の表面上に固着する膜貫通ドメインとを含み、ここで標的細胞抗原は、健常細胞と標的細胞との間で差次的に発現され、ＧＤ−３である。いくつかの実施形態では、標的細胞抗原に結合する細胞外受容体ドメインは、抗体、Ｆａｂ、又はｓｃＦｖを含む。
【００６３】
加えて、いくつかの実施形態では、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の細胞傷害性を増強するための薬剤の製造における接着受容体をコードするポリヌクレオチドの使用が提供され、接着受容体は、標的細胞抗原に結合するように形成された細胞外受容体ドメインと、細胞外受容体ドメインをＮＫ細胞の表面上に固着する膜貫通ドメインとを含み、ここで標的細胞抗原は、健常細胞と標的細胞との間で差次的に発現され、ＮＹ−ＥＳＯである。いくつかの実施形態では、標的細胞抗原に結合する細胞外受容体ドメインは、抗体、Ｆａｂ、又はｓｃＦｖを含む。
【００６４】
加えて、いくつかの実施形態では、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の細胞傷害性を増強するための薬剤の製造における接着受容体をコードするポリヌクレオチドの使用が提供され、接着受容体は、標的細胞抗原に結合するように形成された細胞外受容体ドメインと、細胞外受容体ドメインをＮＫ細胞の表面上に固着する膜貫通ドメインとを含み、ここで標的細胞抗原は、健常細胞と標的細胞との間で差次的に発現され、ＣＤ１９である。いくつかの実施形態では、標的細胞抗原に結合する細胞外受容体ドメインは、抗体、Ｆａｂ、又はｓｃＦｖを含む。
【００６５】
いくつかの実施形態では、抗Ｈｅｒ２一本鎖可変断片（抗Ｈｅｒ２  ｓｃＦｖ）をコードするポリヌクレオチドが提供される。いくつかの実施形態では、抗Ｈｅｒ２  ｓｃＦｖは、配列番号５９を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｈｅｒ２  ｓｃＦｖは、配列番号５８を含む核酸によってコードされる。いくつかの実施形態では、該ポリヌクレオチドは、膜貫通ドメインをさらにコードする。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８膜貫通ドメインは、配列番号７０を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８膜貫通ドメインは、配列番号６９を含む核酸によってコードされる。いくつかの実施形態では、該ポリヌクレオチドは、シグナルペプチドをさらにコードする。いくつかの実施形態では、該シグナルペプチドは、配列番号６８のＣＤ８シグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、該ポリヌクレオチドは、コザック配列をさらに含む。いくつかの実施形態では、コザック配列は、配列番号６６の核酸配列を含む。
【００６６】
いくつかの実施形態では、抗ＰＳＭＡ一本鎖可変断片（抗ＰＳＭＡ  ｓｃＦｖ）をコードするポリヌクレオチドが提供される。いくつかの実施形態では、抗ＰＳＭＡ  ｓｃＦｖは、配列番号６３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＳＭＡ  ｓｃＦｖは、配列番号６２を含む核酸によってコードされる。いくつかの実施形態では、該ポリヌクレオチドは、膜貫通ドメインをさらにコードする。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８膜貫通ドメインは、配列番号７０を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８膜貫通ドメインは、配列番号６９を含む核酸によってコードされる。いくつかの実施形態では、該ポリヌクレオチドは、シグナルペプチドをさらにコードする。いくつかの実施形態では、該シグナルペプチドは、配列番号６８のＣＤ８シグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、該ポリヌクレオチドは、コザック配列をさらに含む。いくつかの実施形態では、コザック配列は、配列番号６６の核酸配列を含む。
【００６７】
いくつかの実施形態では、抗Ｈｅｒ２一本鎖可変断片（抗Ｈｅｒ２  ｓｃＦｖ）をコードするポリヌクレオチドが提供され、ここで抗Ｈｅｒ２  ｓｃＦｖは、配列番号５９を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｈｅｒ２  ｓｃＦｖは、膜貫通ドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８膜貫通ドメインは、配列番号７０を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｈｅｒ２  ｓｃＦｖは、シグナルペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、配列番号６８のＣＤ８シグナルペプチドを含む。
【００６８】
いくつかの実施形態では、抗ＰＳＭＡ一本鎖可変断片（抗ＰＳＭＡ  ｓｃＦｖ）が提供され、ここで抗ＰＳＭＡ  ｓｃＦｖは、配列番号６３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＳＭＡ  ｓｃＦｖは、膜貫通ドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８膜貫通ドメインは、配列番号７０を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＳＭＡ  ｓｃＦｖは、シグナルペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、配列番号６８のＣＤ８シグナルペプチドを含む。
【実施例】
【００６９】
方法
以下の実験方法及び材料は、下に開示する非限定的な実験例において用いた。
【００７０】
細胞株及び培養条件
ヒト腫瘍細胞株ＳＫＢＲ３、ＳＫＯＶ３、ＬＮＣａｐ、ＺＲ７５１、ＤＵ１４５、及びＰＬＣ／ＰＲＦ／５は、アメリカ合衆国培養細胞系統保存機関（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）（ＡＴＣＣ；Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）から購入した。細胞株をＲＰＭＩ−１６４０（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）中で維持し；培地に１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ；ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）及び抗生物質を添加した。細胞株に、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）又はルシフェラーゼ又はｍＣｈｅｒｒｙのいずれかを有するマウス幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）レトロウイルスベクター（Ｓｔ．Ｊｕｄｅ  Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ＨｏｓｐｉｔａｌのＶｅｃｔｏｒ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｓｈａｒｅｄ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ，Ｍｅｍｐｈｉｓ，ＴＮから入手）を形質導入した。
【００７１】
ヒトＮＫ細胞の増殖
末梢血サンプルは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ  Ｂｌｏｏｄ  Ｂａｎｋ，Ｓｉｎｇａｐｏｒｅでの健常成人ドナーからの血小板輸血の匿名扱いの廃棄副生物から得た。
【００７２】
単核性細胞を、Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ  ｄｅｎｓｉｔｙ  ｓｔｅｐ（Ｎｙｃｏｍｅｄ，Ｏｓｌｏ，Ｎｏｒｗａｙ）での遠心分離により分離し、ＲＰＭＩ−１６４０中で２回洗浄した。ＮＫ細胞を増殖するため、単核性細胞を遺伝子組換えＫ５６２−ｍｂ１５−４１ＢＢＬ細胞と共培養した。つまり、末梢血単核性細胞（３×１０6個）を、１０％ＦＢＳ及び４０ＩＵ／ｍＬのヒトインターロイキン（ＩＬ）−２（Ｎｏｖａｒｔｉｓ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を含有するＳＣＧＭ培地（ＣｅｌｌＧｅｎｉｘ，Ｆｒｅｉｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）中、２×１０6個の照射した（１００Ｇｙ）Ｋ５６２−ｍｂ１５−４１ＢＢＬ細胞を有する６ウェル組織培養プレート内で培養した。２〜３日ごとに、新しい組織培地及びＩＬ−２を添加した。共培養の７日後、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ  ＣＤ３（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて残留Ｔ細胞を除去し、＞９０％のＣＤ５６＋ＣＤ３−ＮＫ細胞を含有する細胞集団を生成した。実験前、増殖したＮＫ細胞を、ＦＢＳ、抗生物質、及び４００ＩＵ／ｍＬのＩＬ２を有するＳＣＧＭ中で維持した。
【００７３】
ＤＮＡプラスミド、レトロウイルスの生成及びＮＫ細胞の形質導入
抗Ｈｅｒ２−ＣＤ８ｔｍ及び抗ＰＳＭＡ−ＣＤ８ｔｍ構築物をコードするプラスミドは、Ｇｅｎｅｓｃｒｉｐｔ（Ｎａｎｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ）により合成した。抗Ｈｅｒ２−ＣＤ８ｔｍ及び抗ＰＳＭＡ−ＣＤ８ｔｍ構築物を有するＡＲＤ１１４シュードタイプＭＳＣＶレトロウイルスを用いて、ＮＫ細胞に形質導入した。レトロウイルスベクター培養上清を、レトロネクチン（Ｔａｋａｒａ、大津、日本）でコーティングしたポリプロピレン管に添加し；遠心分離及び上清の除去後、増殖したＮＫ細胞（５×１０5個）を該管に添加し、３７℃で１２時間放置し；新しいウイルス上清を１２時間ごとに全部で６回添加した。次に、実験の時期まで、ＦＢＳ、抗生物質及び４００ＩＵ／ｍｌのＩＬ２を有するＲＰＭＩ中で細胞を維持した。
【００７４】
フローサイトメトリーによる接着受容体発現の検出
抗ＰＳＭＡ−ＣＤ８ｔｍ構築物の表面発現を、ビオチンコンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧ  Ｆ（ａｂ’）2断片特異抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）を用いて検出した。抗Ｈｅｒ２−ＣＤ８ｔｍの表面発現を、プロテインＬ−ビオチン（Ｇｅｎｅｓｃｒｉｐｔ）を用いて検出した。いずれかの試薬を、フィコエリトリン（ＰＥ）又はＡＰＣコンジュゲートストレプトアビジン（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を用いて可視化した。細胞染色は、Ａｃｃｕｒｉ  Ｃ６フローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）において分析した。
【００７５】
フローサイトメトリーによる腫瘍細胞を伴うＮＫ細胞の凝集の検出
細胞間凝集を測定するため、ｍＣｈｅｒｒｙを形質導入したＳＫＯＶ３細胞をトリプシン処理し、２回洗浄し、１．５ｍｌのエッペンドルフチューブに移した。抗Ｈｅｒ２−ＣＤ８ｔｍ＋ＧＦＰ、又はＧＦＰ単独（「モック」）のいずれかを形質導入したＮＫ細胞を１：１の比で添加した。３７℃、５％ＣＯ２で３０分後、細胞懸濁液を１０秒間ボルテックスし、次にダブレットｍＣｈｅｒｒｙ＋ＧＦＰ＋の比をフローサイトメトリーにより計数した。
【００７６】
ＮＫ細胞と腫瘍細胞との結合の検出
ＳＫＯＶ３細胞をＩｂｉｄｉの１マイクロスライド（Ｉｂｉｄｉ，Ｍａｒｔｉｎｓｒｉｅｄ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に播種し、コンフルエンスになるまで増殖させた。Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２溶液で１０分間染色後、細胞をＲＰＭＩで２回洗浄した。抗Ｈｅｒ２−ＣＤ８ｔｍ又はＧＦＰ単独を発現するＮＫ細胞を各チャネルに添加した（１×１０5個）。１０分後、接着していないＮＫ細胞をチャンバの両末端から除去し、チャネルをＲＰＭＩで２回洗浄し、ヨウ化プロピジウムを添加し、Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＦｌｕｏＶｉｅｗ  ＦＶ１０００共焦点顕微鏡を用いて細胞を試験した。
【００７７】
細胞傷害性アッセイ
ＧＦＰ／ルシフェリンを形質導入した標的細胞を、１０％ＦＢＳを有するＲＰＭＩ−１６４０に懸濁し、９６ウェル平底プレート（Ｃｏｓｔａｒ，Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ）に蒔いた。プレートをインキュベーター内に少なくとも４時間置き、ＮＫ細胞を添加する前に細胞接着を可能にした。次に、１０％ＦＢＳを有するＲＰＭＩ−１６４０に懸濁した、抗Ｈｅｒ２−ＣＤ８ｔｍ又はＧＦＰ単独を発現する増殖したＮＫ細胞を様々なエフェクター対標的（Ｅ：Ｔ）比で添加し、標的細胞とともに４時間共培養した。培養の終了時、Ｆｌｘ  ８００プレートリーダー（ＢｉｏＴｅｋ，Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，ＶＴ）を用いて、ＢｒｉｇｈｔＧｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｆｉｔｃｈｂｕｒｇ，ＷＩ）をウェルに添加後、生細胞の数を測定した。いくつかの試験では、ＩｎｃｕＣｙｔｅ  Ｚｏｏｍ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｅｓｓｅｎ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ）を用いて、細胞傷害性を測定した。ｍＣｈｅｒｒｙを形質導入したＳＫＯＶ３細胞を、単独で、又は抗Ｈｅｒ２−ＣＤ８ｔｍ又はＧＦＰ単独のいずれかを形質導入したＮＫ細胞とともに培養した。各条件における３連培養物中での生存可能標的細胞の数を４時間ごとに１６０時間測定した。細胞画像もまた、同じ装置を用いて記録した。
【００７８】
実施例１−抗Ｈｅｒ２接着受容体構築物
本明細書に開示の通り、様々な膜貫通ドメインと共役された細胞外受容体ドメインを含む様々な接着受容体構築物を準備する。本実験は、抗Ｈｅｒ２接着受容体構築物の発現及び細胞傷害活性を評価するため、実施した。抗Ｈｅｒ２接着受容体構築物は、上記の方法及び材料に従って調製し、試験した。構築物に応じて、使用方法は、構築物の作製、発現及び試験にとって必要なバリエーションに対処するように容易に調節することができる。
【００７９】
図１は、膜結合抗Ｈｅｒ２  ｓｃＦｖ（ｍｂａＨｅｒ２）のマウス幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）プラスミドへの挿入点を図示するプラスミドマップを表す。このプラスミドマップは、ｍｂａＨｅｒ２構築物のベクターのＥｃｏＲＩ及びＸｈｏＩ制限部位への挿入を示す。ｍｂａＨｅｒ２構築物の細胞外受容体ドメインは、抗Ｈｅｒ２一本鎖可変断片（抗Ｈｅｒ２  ｓｃＦｖ）及び受容体ドメインの所望される膜配向性を提供するＣＤ８シグナルペプチドを含む。ＣＤ８シグナルペプチドは、配列番号６８のアミノ酸配列を含み、配列番号６７の核酸配列によってコードされる。抗Ｈｅｒ２  ｓｃＦｖは、配列番号５９のアミノ酸配列を含み、配列番号５８の核酸配列によってコードされる。図１に示す通り、ｍｂａＨｅｒ２構築物は、細胞外受容体ドメインをＮＫ細胞の表面上に固着する、細胞外受容体ドメインの下流のＣＤ８膜貫通ドメインをさらに含む。ＣＤ８膜貫通ドメインは、配列番号７０のアミノ酸配列を含み、配列番号６９の核酸によってコードされる。図１に示す通り、ｍｂａＨｅｒ２構築物は、シグナルペプチドの上流に配列番号６６のコザック配列をさらに含む。まとめると、ｍｂａＨｅｒ２構築物は、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、且つ配列番号６０の核酸配列によってコードされる接着受容体をコードする。
【００８０】
ＮＫ細胞がこの構築物を有効に発現する能力をまず評価した。図２は、増殖された一次ＮＫ細胞の表面上でのｍｂａＨｅｒ２の発現に関するフローサイトメトリーデータを表す。非形質導入ＮＫ細胞及びモック形質導入ＮＫ細胞（ＧＦＰのみを有する空のＭＳＣＶベクターで形質導入された）を対照として用いた。ｍｂａＨｅｒ２の存在及び相対的存在量を、ＮＫ細胞のアロフィコシアニン（ＡＰＣ）コンジュゲート抗Ｆａｂ抗体による染色を通じて判定した。緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）の発現をウイルス形質導入の指標として用いた。対照の双方がフローサイトメトリー分析によりｍｂａＨｅｒ２の発現を示さなかった（図２Ａ〜Ｂ）一方で、抗Ｈｅｒ２  ｓｃＦｖ及びＧＦＰを有するベクターで形質導入されたＮＫ細胞は、強固なｍｂａＨｅｒ２の発現を示した（図２Ｃ）。まとめると、これらのデータは、本明細書で開示されるいくつかの実施形態によると、操作した接着構築物がＮＫ細胞上で十分に発現され得ることを示す。
【００８１】
いくつかの実施形態では、構築物の増強された発現は、ＮＫ細胞への特定構築物の形質導入の反復により達成され得る。いくつかの実施形態では、構築物の成分は、単一のベクターで又は代わりに複数のベクターを用いて細胞に送達され得る。実施形態に応じて、構築物自体が増強された発現をもたらし得、例えば、線状又はヘッドトゥテール構築物は、複数のサブユニット構築物が必要とする細胞内アセンブリの程度減少が理由で、増強された発現をもたらし得る。
【００８２】
形質導入ＮＫ細胞の集団の効力を評価するため、高レベルのＨｅｒ２（ＳＫＢＲ３、ＳＫＯＶ３、ＬＮＣａｐ、ＺＲ７５１）及び低レベルのＨｅｒ２（ＤＵ１４５、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５）を発現するがん細胞株を用いて、細胞傷害性アッセイを実施した。ｍｂａＨｅｒ２を発現するＮＫ細胞のＨｅｒ２の会合を介した標的細胞への接着の増強が増強された細胞傷害性を引き起こすという仮説に合致して、ｍｂａＨｅｒ２を発現するＮＫ細胞で、Ｈｅｒ２の発現が低いがん細胞株（図３Ｂ）でなく、高レベルのＨｅｒ２を発現するがん細胞株（図３Ａ）に対して、細胞傷害性における有意な増強が認められた。加えて、ｍｂａＨｅｒ２を発現するＮＫ細胞は、ＩｎｃｕＣｙｔｅ生細胞イメージングシステムによる測定として、ＳＫＯＶ３細胞に対して、対照と比べてより強力な長期細胞傷害性を示した（図４）。さらに、上記の細胞傷害性の結果に合致して、ｍｂａＨｅｒ２を発現するＮＫ細胞との培養の６日後、対照と比べて、ｍＣｈｅｒｒｙ標識ＳＫＯＶ３細胞の数の減少が認められた（図５）。これらのデータは、ＮＫ細胞が接着受容体構築物を発現するように改変され得るだけでなく、接着受容体を発現する細胞が、活性化され、標的細胞に対して増強された細胞傷害性効果を十分にもたらし得るという証拠を提供する。
【００８３】
細胞傷害性データに加えて、ＮＫ細胞がこれらの効果を果たしている機構を、ＳＫＯＶ３細胞上に播種したモック形質導入ＮＫ細胞及びｍｂａＨｅｒ２を発現するＮＫ細胞の運動性及び凝集を評価することにより試験した。細胞傷害性アッセイに合致して、ｍｂａＨｅｒ２を発現するＮＫ細胞は、モック形質導入ＮＫ細胞と比べて、移動距離及び平均速度における統計学的に有意な減少を示した（図６）。さらに、図７に示す通り、ｍｂａＨｅｒ２を発現するＮＫ細胞は、フローサイトメトリー測定によると、ＳＫＯＶ３細胞との凝集を有意に増強していた。重要なことに、これらのデータは、いくつかの実施形態によると、接着構築物が、ＮＫ細胞の標的細胞への標的化を増強し、ＮＫ細胞が標的細胞に会合するのに必要な時間を低減し、且つＮＫ細胞が標的細胞に会合するために移動するのに必要な距離を減少させることを示す。ＳＫＯＶ３細胞の２つのＮＫ細胞集団への接着をセルフローアッセイにて評価し、ここでＧＦＰ（ｍｂａＨｅｒ２のＮＫ発現を示す）及び（標的細胞死滅を示す）ヨウ化プロピジウム陽性染色を施した標的細胞の実質的共局在化が認められた（図８）。（図９に示す）このアッセイの結果の定量化により、接着受容体の発現が標的細胞死滅に関与したという証拠がさらに得られる。
【００８４】
実施例２−抗ＰＳＭＡ接着受容体構築物
本明細書に開示の通り、様々な膜貫通ドメインと共役された細胞外受容体ドメインを含む様々な接着受容体構築物を準備する。本実験は、抗ＰＳＭＡ接着受容体構築物の発現及び細胞傷害活性を評価するため、実施した。抗ＰＳＭＡ接着受容体構築物は、上記の方法及び材料に従って調製し、試験した。構築物に応じて、使用方法は、構築物の作製、発現及び試験にとって必要なバリエーションに対処するように容易に調節することができる。
【００８５】
図１０は、膜結合抗ＰＳＭＡ（ｍｂａＰＳＭＡ）ｓｃＦｖのマウス幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）プラスミドへの挿入点を図示するプラスミドマップを表す。このプラスミドマップは、ｍｂａＰＳＭＡ構築物のベクターのＥｃｏＲＩ及びＸｈｏＩ制限部位への挿入を示す。ｍｂａＰＳＭＡ構築物の細胞外受容体ドメインは、抗ＰＳＭＡ一本鎖可変断片（抗ＰＳＭＡ  ｓｃＦｖ）及び受容体ドメインの所望される膜配向性を提供するＣＤ８シグナルペプチドを含む。ＣＤ８シグナルペプチドは、配列番号６８のアミノ酸配列を含み、配列番号６７の核酸配列によってコードされる。抗ＰＳＭＡ  ｓｃＦｖは、配列番号６３のアミノ酸配列を含み、配列番号６２の核酸配列によってコードされる。図１０に示す通り、ｍｂａＰＳＭＡ構築物は、細胞外受容体ドメインをＮＫ細胞の表面上に固着する、細胞外受容体ドメインの下流のＣＤ８膜貫通ドメインをさらに含む。ＣＤ８膜貫通ドメインは、配列番号７０のアミノ酸配列を含み、配列番号６９の核酸によってコードされる。図１０に示す通り、ｍｂａＰＳＭＡ構築物は、シグナルペプチドの上流に配列番号６６のコザック配列をさらに含む。まとめると、ｍｂａＰＳＭＡ構築物は、配列番号６５のアミノ酸配列を含み、且つ配列番号６４の核酸配列によってコードされる接着受容体をコードする。
【００８６】
ＮＫ細胞がこの構築物を有効に発現する能力を次に評価した。図１１は、増殖された一次ＮＫ細胞の表面上でのｍｂａＰＳＭＡの発現に関するフローサイトメトリーデータを表す。非形質導入ＮＫ細胞及びモック形質導入ＮＫ細胞（ＧＦＰのみを有する空のＭＳＣＶベクターで形質導入された）を対照として用いた。ｍｂａＰＳＭＡの存在及び相対的存在量を、ＮＫ細胞のアロフィコシアニン（ＡＰＣ）コンジュゲート抗Ｆａｂ抗体による染色を通じて判定した。緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）の発現をウイルス形質導入の指標として用いた。対照の双方がフローサイトメトリー分析によりｍｂａＰＳＭＡの発現を示さなかった（図１１Ａ〜Ｂ）一方で、抗ＰＳＭＡ  ｓｃＦｖ及びＧＦＰを有するベクターで形質導入されたＮＫ細胞は、強固なｍｂａＰＳＭＡの発現を示した（図１１Ｃ）。まとめると、これらのデータは、本明細書に開示されるいくつかの実施形態によると、改変接着構築物がＮＫ細胞上で十分に発現され得ることを実証する。
【００８７】
実施例３−抗ＰＳＭＡ−ＮＫ構築物のインビトロ評価
本明細書に開示されるいくつかの実施形態に従い、ＮＫ構築物の長期細胞傷害性を評価するため、さらなる実験を実施した。特に、この実験は、抗ＰＳＭＡ接着受容体を含むＮＫ構築物のインビトロ細胞傷害性を評価するように設計した。前立腺がん細胞株のＤＵ１４５細胞を標的細胞集団として用いた。ＤＵ１４５細胞は、その天然状態でＰＳＭＡ陰性である。しかし、ここでＤＵ１４５細胞は、ＰＳＭＡを発現するように形質導入した（「ＤＵ１４５−ＰＳＭＡ」）。
【００８８】
ＤＵ１４５−ＰＳＭＡを蒔き、２４時間後、膜結合抗ＰＳＭＡ接着受容体を含むＮＫ細胞を添加した。ＮＫ細胞は、１：１のエフェクター：標的細胞比で添加した。ＤＵ１４５−ＰＳＭＡ細胞数／ウェルを経時的に評価し、データをＮＫ細胞添加後１５０時間かけて収集・出力した。データは、対照（ＮＫ細胞を添加しない）、ＮＫモック（接着受容体を有しないが、ＧＦＰを発現する天然ＮＫ細胞）及びＮＫ  ＭｂａＰＳＭＡ（抗ＰＳＭＡ接着受容体を発現するように改変したＮＫ細胞）について収集した。３通りの測定値の平均を図１３に示す。ＩｎｃｕＣｙｔｅ生細胞イメージングシステム（Ｅｓｓｅｎ）により、細胞生存度を評価した。
【００８９】
図１３に示す通り、ＮＫ細胞に曝露していないＤＵ１４５−ＰＳＭＡ細胞は、実験の持続期間全体を通じて増殖し、培養下で約１２０時間後に約１．７５×１０８細胞／ウェルのプラトーに達した（図１３中の「ＮＫなし」曲線）。天然ＮＫ細胞に曝露されたＤＵ１４５−ＰＳＭＡ（図１３中の「ＮＫモック」曲線）もまた、対照と比べてより遅い速度ではあるが、実験全体を通じて増殖を示し、やはりより少ない全集団数に達した。それに対し、抗ＰＳＭＡ接着受容体を発現するＮＫ細胞と共培養したＤＵ１４５−ＰＳＭＡは、主に共培養から最初の数時間以内に非常に限られた増殖を示した（図１３中の「ＮＫ  ＭｂａＰＳＭＡ」曲線）。約８〜１０時間後、ＤＵ１４５−ＰＳＭＡ細胞数は、減少し始め、培養下で約１００時間後、細胞数／ウェルがゼロに達した。これらのデータは、いくつかの実施形態によると、接着受容体を発現するようにＮＫ細胞を改変し、ＮＫ細胞を標的細胞集団により効率的に局在化することにより、長期細胞傷害性の増強がもたらされることを実証する。実施形態に応じて、約５０時間、約７５時間、約１００時間、約１２５時間、約１５０時間、又はそれ以上の持続期間にわたり、増強された細胞傷害性が示される。いくつかの実施形態では、増強された細胞傷害性は、患者を治療するのに要求されるＮＫ細胞免疫療法構築物の減少した用量（例えば、本明細書に開示されるような接着受容体を発現しないＮＫ細胞で患者を治療するのに要求される用量よりも少ない用量）をもたらす。
【００９０】
特に、長期細胞傷害性が、天然に独力で比較的高度な細胞傷害性を示すことが知られる天然ＮＫ細胞の場合よりも増強されることは注目すべきである。この非限定例と同様、いくつかの実施形態によると、抗ＰＳＭＡ  ｓｃＦｖ、例えば先行例にて記載のもの（例えば、配列番号６３のアミノ酸配列を含み、且つ配列番号６２の核酸配列によってコードされる抗ＰＳＭＡ  ｓｃＦｖ）を用いる。しかし、本明細書に記載の通り、他の標的細胞集団を標的にし、ひいてはそれらに対するＮＫに基づく細胞傷害性を増強するため、他の接着受容体をさらに用いてもよい。いくつかの実施形態では、接着受容体の使用は、ＮＫに基づくがん免疫療法レジームの有効性を増強するのに有利である。
【００９１】
実施例４−追加的な抗ＰＳＭＡ−ＮＫ構築物のさらなるインビトロ評価
接着構築物が様々な標的細胞に対するＮＫ細胞の細胞傷害性を増強する能力をさらに実証するため、本明細書に開示されるいくつかの実施形態に従うＮＫ構築物の長期細胞傷害性のさらなるインビトロ評価で評価した。この実験は、ＰＳＭＡを内因性に発現するアンドロゲン依存性ＬＮＣａｐ前立腺がん株に対する、抗ＰＳＭＡ接着受容体を含むＮＫ構築物のインビトロ細胞傷害性を評価するように設計した。
【００９２】
ＬＮＣａｐ細胞を蒔き、２４時間後、膜結合抗ＰＳＭＡ接着受容体を含むＮＫ細胞を添加した。ＮＫ細胞は、１：１のエフェクター：標的細胞比で添加した。ＬＮＣａｐ細胞数／ウェルを経時的に評価し、データをＮＫ細胞添加後１３０時間かけて収集・出力した。データは、対照（ＮＫ細胞を添加しない）、ＮＫモック（接着受容体を有しないが、ＧＦＰを発現する天然ＮＫ細胞）及びＮＫ  ＭｂａＰＳＭＡ（抗ＰＳＭＡ接着受容体を発現するように改変したＮＫ細胞）について収集した。３通りの測定値の平均を図１４に示す。ＩｎｃｕＣｙｔｅ生細胞イメージングシステム（Ｅｓｓｅｎ）により、細胞生存度を評価した。
【００９３】
図１４に示す通り、ＮＫ細胞に曝露していないＬＮＣａｐ細胞は、実験の持続期間全体を通じて増殖し、培養下で１３０時間後に約５０，０００細胞／ウェルに達した（図１４中の「ＮＫなし」曲線）。天然ＮＫ細胞に曝露されたＬＮＣａｐ細胞（図１４中の「ＮＫ  ＧＦＰのみ」曲線）もまた、対照と比べてより遅い速度ではあるが、実験全体を通じて増殖を示し、やはりより少ない全集団数（１３０時間、約３０，０００細胞／ウェル）に達した。抗ＰＳＭＡ接着受容体を発現するＮＫ細胞と共培養したＬＮＣａｐ細胞は、実験の持続期間にわたり限られた増殖を示した（図１４中の「ＮＫ  ＭｂａＰＳＭＡ」曲線）。共培養から最初の１８〜２０時間、細胞数は（約１０，０００細胞／ウェルで）比較的一定を維持した。その後、ＬＮＣａｐ細胞数は減少し、共培養の２０〜９０時間、約１０，０００細胞／ウェルを下回った。約１００時間後、ＬＮＣａｐ細胞数は、ベースラインまで戻っていて、約１００〜１２０時間、中程度の増加が検出された。ＬＮＣａｐ細胞数におけるわずかな全体的増加が認められた一方で、対照群及び天然ＮＫ群と比べて、増殖における明らかな減少が認められる。したがって、これらは、いくつかの実施形態によると、接着受容体を発現するようにＮＫ細胞を改変し、ＮＫ細胞を標的細胞集団により効率的に局在化することにより、標的細胞集団に対する長期細胞傷害性の増強がもたらされることを実証する。実施形態に応じて、約１０〜２０時間、約２０〜３０時間、約３０〜４０時間、約４０〜５０時間、又はそれ以上の持続期間にわたり、増強された細胞傷害性が示される。いくつかの実施形態では、増強された細胞傷害性は、患者、特にアンドロゲン依存性前立腺がんを有する患者を治療するのに要求されるＮＫ細胞免疫療法構築物の減少した用量（例えば、本明細書に開示されるような接着受容体を発現しないＮＫ細胞で患者を治療するのに要求される用量よりも少ない用量）をもたらす。
【００９４】
先行例と同様、長期細胞傷害性が、天然に独力で比較的高度な細胞傷害性を示すことが知られる天然ＮＫ細胞の場合よりも増強されることは注目すべきである。いくつかの実施形態によると、抗ＰＳＭＡ  ｓｃＦｖ、例えば本明細書に記載のものを用いる。しかし、他の標的細胞集団を標的にし、ひいてはそれらに対するＮＫに基づく細胞傷害性を増強するため、他の接着受容体をさらに用いてもよい。いくつかの実施形態では、接着受容体の使用は、ＮＫに基づくがん免疫療法レジームの有効性を増強するのに有利である。
【００９５】
実施例５−抗ＨＥＲ２−ＮＫ構築物のインビボ評価
本明細書で考察するインビトロ例に基づき、標的細胞集団に対するインビボ細胞傷害性について本明細書に開示されるような接着受容体を用いてＮＫ細胞を標的にする効果を評価するため、追加的な非限定的実験を実施した。この非限定例では、ＨＥＲ２を発現する卵巣がん株ＳＫＯＶ−３を標的細胞集団として用いた。ホタルルシフェラーゼを発現するように、ＳＫＯＶ−３細胞を形質導入した。形質導入ＳＫＯＶ−３細胞を、２１ＮＯＤ．Ｃｇ−ＰｒｋｄｃSCIDＩＬ２ｒｇtm1Wjl／ＳｚＪ（ＮＯＤ／ｓｃｉｄ  ＩＬ２ＲＧｎｕｌｌ）マウスに、０．２×１０6細胞／マウスの用量で腹腔内注射した。３つの実験群を次のように設定した（１群あたりマウス７匹）：（ｉ）ＮＫ細胞を投与しないものの組織培地を注射した対照、（ｉｉ）ＧＦＰのみを形質導入したＮＫ細胞を投与したモック、及び（ｉｉｉ）膜結合抗Ｈｅｒ２接着受容体を形質導入したＮＫ細胞を投与したＭｂａ−Ｈｅｒ２。ＮＫ細胞は、ＳＫＯＶ−３細胞の注射後３日目及び７日目に腹腔内注射した。各注射におけるＮＫ細胞用量は、１×１０7細胞／マウスであった。各マウスはまた、週３回のＩＬ−２（各注射につき２０，０００ＩＵ）の腹腔内注射を受けた。Ｘｅｎｏｇｅｎ  ＩＶＩＳ−２００システム（Ｃａｌｉｐｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて、腹側及び背側の腫瘍発光を測定した。ＳＫＯＶ−３細胞注射前と注射後２２日目に、ベースライン腫瘍発光を記録した。Ｄ−ルシフェリンカリウム塩（３ｍｇ／マウス、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）の水溶液の腹腔内注射の５分後、発光イメージングが開始した。Ｌｉｖｉｎｇ  Ｉｍａｇｅ  ３．０ソフトウェアプログラムを用いて、光子を定量化した。データを図１５に表す。
【００９６】
図１５の左カラムは、対照マウスにおけるデータを示す。相対発光は、ＳＫＯＶ−３卵巣がん細胞の注射２２日後のこれらのマウスにおける増加した腫瘍量を示す。それに対し、中央パネル（ＧＦＰのみを発現するＮＫ細胞の投与）は、（低下した相対発光によって表される）対照と比べて有意に減少した腫瘍量を表すデータを示す。図１５の右パネルは、抗Ｈｅｒ２接着構築物を発現するＮＫ細胞を投与するマウスの群におけるデータを示す。マウスのこの群における相対発光は、モック群と対照群の双方の場合よりも低く、腫瘍量における有意な減少を示した（モックと比べて、Ｐ値は０．００４に等しい）。図１５における統計分析はｔ検定による。インビトロ実験と組み合わせて上で考察したように、インビボデータは、特に天然ＮＫ細胞の比較的高い天然細胞傷害性を考慮すると、接着受容体を発現するＮＫ細胞の細胞傷害性における想定外の増強を示す。これらのデータは、接着受容体構築物の発現がＮＫ細胞の増強された抗腫瘍活性を促進するという点でインビトロ試験を裏付ける。いくつかの実施形態によると、接着受容体の発現は、ＮＫ細胞の標的抗原を有する標的細胞へのホーミングを増強することがある。さらに、いくつかの実施形態によると、接着受容体の発現は、標的細胞におけるＮＫ細胞の間で生じるようにより高い親和性相互作用を可能にすることがある。同様に、いくつかの実施形態では、接着受容体の発現は、標的細胞上でのＮＫ細胞の滞留持続期間（例えば、ＮＫ細胞が標的細胞と相互作用する全期間）を増加させることがある。いくつかの実施形態では、接着受容体の発現は、ＮＫに基づく免疫療法レジームの有効性の全体的増強をもたらし得る、かかる効果の１つ以上を有する。いくつかの実施形態では、接着受容体の発現により、全体的ながん免疫療法治療の用量、投与頻度、又は持続期間の１つ以上が低減される。いくつかの実施形態では、接着受容体の発現により、ＮＫに基づく免疫療法治療を受けている患者における患者生存率が改善し得る。上（又は本明細書中の他の箇所）に挙げたかかるすべての比較は、本明細書に開示されるような接着受容体を発現するＮＫ細胞をかかる接着受容体を発現しないＮＫ細胞と比べた特性比較を説明する。
【００９７】
上に開示された実施形態の具体的特徴及び態様の様々な組み合わせ又は部分的組み合わせが本発明の１つ以上の範囲内に設けられ、さらに属し得ることが考慮される。さらに、本明細書で示されるすべての他の実施形態において、実施形態に関連した任意の特定の特色、態様、方法、特性、特徴、品質、属性、要素などに関する本明細書中の開示を用いることができる。したがって、開示される本発明の異なる態様を形成するため、開示される実施形態の様々な特徴及び態様は、相互に組み合わせるか又は置き換えられ得ることが理解されるべきである。したがって、本明細書で開示される本発明の範囲は、上記の特定の開示される実施形態によって限定されるべきでないことが意図される。さらに、本発明は、様々な修飾形態及び代替形態が可能であるが、その具体例は、図面で示されており、本明細書中で詳述される。しかし、本発明が開示される特定の形態又は方法に限定されるべきでなく、逆に、本発明は、記述される様々な実施形態及び添付の特許請求の範囲の趣旨及び範囲内に入るすべての修飾形態、均等物及び代替物を網羅するべきであることが理解されるべきである。本明細書で開示される任意の方法は、列挙される順序で実施される必要はない。本明細書で開示される方法は、施術者によってとられる特定の行動を含むが、それらは、明示的又は暗示的のいずれかでそれらの行動についての任意の第三者の指示も含み得る。例えば、「拡大されたＮＫ細胞の集団を投与すること」などの行動は、「拡大されたＮＫ細胞の集団の投与を指示すること」を含む。さらに、本開示の特色又は態様がマーカッシュグループの観点で説明される場合、当業者は、本開示が、それにより、マーカッシュグループの任意の個々のメンバー又はそのメンバーのサブグループの観点でも説明されることを理解するであろう。
【００９８】
本明細書で開示される範囲は、あらゆる重複、部分範囲及びそれらの組み合わせも包含する。「最大」、「少なくとも」、「〜よりも大きい」、「〜よりも少ない」、「〜の間」などの文言は、列挙される数を含む。「約」又は「概ね」などの用語が先行する数は、列挙される数を含む。例えば、「約１０ナノメーター」は、「１０ナノメーター」を含む。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７Ａ−１】
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【図７Ａ−２】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図８Ｅ】
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【図８Ｆ】
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【図８Ｇ】
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【図８Ｈ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図１０】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１２−１】
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【図１２−２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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