(57)【要約】  患者におけるＦｃγＲＩＩｂ陰性癌の治療において、そのＦａｂ領域を介してＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合し、Ｆｃ領域が欠如しているか、またはそのＦｃ領域を介してＦｃγ受容体への結合が低減している、第１の抗体分子と、これと組み合わせて使用するための、免疫細胞上に存在する受容体に特異的に結合する第２の抗体分子であって、免疫細胞が、抗癌免疫を抑制する免疫細胞であり、第２の抗体分子が、少なくとも１つの活性化Ｆｃγ受容体に結合するＦｃ領域を有し、免疫細胞上の受容体への第２の抗体分子の結合が免疫細胞の除去および／または不活性化を引き起こす、第２の抗体分子と、を記載し、ならびにこれらの２つの抗体分子を含む薬学的組成物とキット、およびこれらの２つの抗体を用いて癌を治療する方法も記載する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者におけるＦｃγＲＩＩｂ陰性癌の治療において、そのＦａｂ領域を介してＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合し、Ｆｃ領域が欠如しているか、またはそのＦｃ領域を介してＦｃγ受容体への結合が低減している、第１の抗体分子であって、
免疫細胞上に存在する受容体に特異的に結合する第２の抗体分子であって、前記免疫細胞が、抗癌免疫を抑制する免疫細胞であり、前記第２の抗体分子が、少なくとも１つの活性化Ｆｃγ受容体に結合するＦｃ領域を有し、前記免疫細胞上の前記受容体への前記第２の抗体分子の結合が、前記免疫細胞の除去および／または不活性化を引き起こす、第２の抗体分子
と組み合わせて使用するための、第１の抗体分子。
【請求項２】
患者におけるＦｃγＲＩＩｂ陰性癌の治療での使用のための薬学的組成物であって、
（ｉ）そのＦａｂ領域を介してＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合し、Ｆｃ領域が欠如しているか、またはそのＦｃ領域を介してＦｃγ受容体への結合が低減している、第１の抗体分子と、
（ｉｉ）免疫細胞上に存在する受容体に特異的に結合する第２の抗体分子であって、前記免疫細胞が、抗癌免疫を抑制する免疫細胞であり、前記第２の抗体分子が、少なくとも１つの活性化Ｆｃγ受容体に結合するＦｃ領域を有し、前記免疫細胞上の受容体への前記第２の抗体の結合が、前記免疫細胞の除去および／または不活性化を引き起こす、第２の抗体分子と、を含む、薬学的組成物。
【請求項３】
ＦｃγＲＩＩｂ陰性癌の治療での使用のためのキットであって、
（ｉ）そのＦａｂ領域を介してＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合し、Ｆｃ領域が欠如しているか、またはそのＦｃ領域を介してＦｃγ受容体への結合が低減している、第１の抗体分子と、
（ｉｉ）免疫細胞上に存在する受容体に特異的に結合する第２の抗体分子であって、前記免疫細胞が、抗癌免疫を抑制する免疫細胞であり、前記第２の抗体分子が、少なくとも１つの活性化Ｆｃγ受容体に結合するＦｃ領域を有し、前記免疫細胞上の受容体への前記第２の抗体分子の結合が、前記免疫細胞の除去および／または不活性化を引き起こす、第２の抗体分子と、を含む、キット。
【請求項４】
患者におけるＦｃγＲＩＩｂ陰性癌の治療での使用のための薬物の製造における、
（ｉ）そのＦａｂ領域を介してＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合し、Ｆｃ領域が欠如しているか、またはそのＦｃ領域を介してＦｃγ受容体への結合が低減している、第１の抗体分子と、
（ｉｉ）免疫細胞上に存在する受容体に特異的に結合する第２の抗体分子であって、前記免疫細胞が、抗癌免疫を抑制する免疫細胞であり、前記第２の抗体分子が、少なくとも１つの活性化Ｆｃγ受容体に結合するＦｃ領域を有し、前記免疫細胞上の受容体への前記第２の抗体の結合が、前記免疫細胞の除去および／または不活性化を引き起こす、第２の抗体分子と、の使用。
【請求項５】
患者におけるＦｃγＲＩＩｂ陰性癌の治療方法であって、
（ｉ）そのＦａｂ領域を介してＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合し、Ｆｃ領域が欠如しているか、またはそのＦｃ領域を介してＦｃγ受容体への結合が低減している、第１の抗体分子と、
（ｉｉ）免疫細胞上に存在する受容体に特異的に結合する第２の抗体分子であって、前記免疫細胞が、抗癌免疫を抑制する免疫細胞であり、前記第２の抗体分子が、少なくとも１つの活性化Ｆｃγ受容体を活性化することが可能であるＦｃ領域を有し、前記免疫細胞上の受容体への前記第２の抗体の結合が、前記免疫細胞の除去および／または不活性化を引き起こす、第２の抗体分子と、を投与することを含む、方法。
【請求項６】
前記第１の抗体は、Ｆｃ領域が欠如している、請求項１に記載の第２の抗体分子と組み合わせて使用するための第１の抗体分子、請求項２に記載の使用のための薬学的組成物、請求項３に記載の使用のためのキット、請求項４に記載の使用、または請求項５に記載の方法。
【請求項７】
抗癌免疫を抑制する前記免疫細胞が、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）である、請求項１もしくは６に記載の第２の抗体分子と組み合わせて使用するための第１の抗体分子、請求項２もしくは６に記載の使用のための薬学的組成物、請求項３もしくは６に記載の使用のためのキット、請求項４もしくは６に記載の使用、または請求項５もしくは請求項６に記載の方法。
【請求項８】
抗癌免疫を抑制する前記免疫細胞が、骨髄系細胞である、請求項１もしくは６に記載の第２の抗体分子と組み合わせて使用するための第１の抗体分子、請求項２もしくは６に記載の使用のための薬学的組成物、請求項３もしくは６に記載の使用のためのキット、請求項４もしくは６に記載の使用、または請求項５もしくは請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記骨髄系細胞が、腫瘍関連マクロファージである、請求項８に記載の第２の抗体分子と組み合わせて使用するための第１の抗体分子、請求項８に記載の使用のための薬学的組成物、請求項８に記載の使用のためのキット、請求項８に記載の使用、または請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＦｃγＲＩＩｂ陰性癌が、固形癌である、請求項１もしくは６〜９のいずれか１項に記載の第２の抗体分子と組み合わせて使用するための第１の抗体分子、請求項２もしくは６〜９のいずれか１項に記載の使用のための薬学的組成物、請求項３もしくは６〜９のいずれか１項に記載の使用のためのキット、請求項４もしくは６〜９のいずれか１項に記載の使用、または請求項５もしくは請求項６〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記固形癌が、癌腫、肉腫、およびリンパ腫からなる群から選択される、請求項１０に記載の第２の抗体分子と組み合わせて使用するための第１の抗体分子、請求項１０に記載の使用のための薬学的組成物、請求項１０に記載の使用のためのキット、請求項１０に記載の使用、または請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記固形癌が、黒色腫、乳癌、前立腺癌、結腸直腸癌、肺癌、膀胱癌、腎臓癌、中皮腫、メルケル細胞癌、および頭頸部癌からなる群から選択される、請求項１０もしくは１１に記載の第２の抗体分子と組み合わせて使用するための第１の抗体分子、請求項１０もしくは１１に記載の使用のための薬学的組成物、請求項１０もしくは１１に記載の使用のためのキット、請求項１０もしくは１１に記載の使用、または請求項１０もしくは請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記第１の抗体分子が、ヒト抗体分子、ヒト化抗体分子、およびヒト由来の抗体分子からなる群から選択される、請求項１もしくは６〜１２のいずれか１項に記載の第２の抗体分子と組み合わせて使用するための第１の抗体分子、請求項２もしくは６〜１２のいずれか１項に記載の使用のための薬学的組成物、請求項３もしくは６〜１２のいずれか１項に記載の使用のためのキット、請求項４もしくは６〜１２のいずれか１項に記載の使用、または請求項５もしくは請求項６〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記第１の抗体分子が、モノクローナル抗体分子またはモノクローナル抗体由来の抗体分子である、請求項１もしくは６〜１３のいずれか１項に記載の第２の抗体分子と組み合わせて使用するための第１の抗体分子、請求項２もしくは６〜１３のいずれか１項に記載の使用のための薬学的組成物、請求項３もしくは６〜１３のいずれか１項に記載の使用のためのキット、請求項４もしくは６〜１３のいずれか１項に記載の使用、または請求項５もしくは請求項６〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記第１の抗体分子が、全長抗体、キメラ抗体、一本鎖抗体、Ｆａｂフラグメント、（Ｆａｂ’）２フラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、（Ｆａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメント、およびｓｃＦｖフラグメントからなる群から選択される、請求項１もしくは６〜１４のいずれか１項に記載の第２の抗体分子と組み合わせて使用するための第１の抗体分子、請求項２もしくは６〜１４のいずれか１項に記載の使用のための薬学的組成物、請求項３もしくは６〜１４のいずれか１項に記載の使用のためのキット、請求項４もしくは６〜１４のいずれか１項に記載の使用、または請求項５もしくは請求項６〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記第１の抗体分子が、非グリコシル化Ｆｃ領域を有するヒトＩｇＧ抗体分子、または非グリコシル化Ｆｃ領域を有するヒト由来のＩｇＧ抗体分子である、請求項１もしくは６〜１５のいずれか１項に記載の第２の抗体分子と組み合わせて使用するための第１の抗体分子、請求項２もしくは６〜１５のいずれか１項に記載の使用のための薬学的組成物、請求項３もしくは６〜１５のいずれか１項に記載の使用のためのキット、請求項４もしくは６〜１５のいずれか１項に記載の使用、または請求項５もしくは請求項６〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＩｇＧ抗体分子が、ＩｇＧ１またはＩｇＧ２の抗体分子である、請求項１６に記載の第２の抗体分子と組み合わせて使用するための第１の抗体分子、請求項１６に記載の使用のための薬学的組成物、請求項１６に記載の使用のためのキット、請求項１６に記載の使用、または請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＩｇＧ抗体分子が、非グリコシル化ヒトＩｇＧ１、もしくは非グリコシル化ヒト化マウス抗体、もしくは非グリコシル化ヒト化ラマｈｃＩｇＧ抗体、もしくは非グリコシル化キメラ化マウスＩｇＧである、請求項１７に記載の第２の抗体分子と組み合わせて使用するための第１の抗体分子、請求項１７に記載の使用のための薬学的組成物、請求項１７に記載の使用のためのキット、請求項１７に記載の使用、または請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
２９７位のアミノ酸置換により非グリコシル化されている、請求項１８に記載の第２の抗体分子と組み合わせて使用するための第１の抗体分子、請求項１８に記載の使用のための薬学的組成物、請求項１８に記載の使用のためのキット、請求項１８に記載の使用、または請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
Ｎ２９７Ｑ置換によって非グリコシル化されている、請求項１９に記載の第２の抗体分子と組み合わせて使用するための第１の抗体分子、請求項１９に記載の使用のための薬学的組成物、請求項１９に記載の使用のためのキット、請求項１９に記載の使用、または請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記第１の抗体分子が、以下のＣＤＲ：
（ｉ）配列番号５１および配列番号５２および配列番号５３、または
（ｉｉ）配列番号５７および配列番号５８および配列番号５９、または
（ｉｉｉ）配列番号６３および配列番号６４および配列番号６５、または
（ｉｖ）配列番号６９および配列番号７０および配列番号７１、または
（ｖ）配列番号７５および配列番号７６および配列番号７７、または
（ｖｉ）配列番号８１および配列番号８２および配列番号８３、または
（ｖｉｉ）配列番号８７および配列番号８８および配列番号８９、または
（ｖｉｉｉ）配列番号９３および配列番号９４および配列番号９５、または
（ｉｘ）配列番号９９および配列番号１００および配列番号１０１、または
（ｘ）配列番号１０５および配列番号１０６および配列番号１０７、または
（ｘｉ）配列番号１１１および配列番号１１２および配列番号１１３、または
（ｘｉｉ）配列番号１１７および配列番号１１８および配列番号１１９、または
（ｘｉｉｉ）配列番号１２３および配列番号１２４および配列番号１２５、または
（ｘｉｖ）配列番号１２９および配列番号１３０および配列番号１３１、または
（ｘｖ）配列番号１３５および配列番号１３６および配列番号１３７、または
（ｘｖｉ）配列番号１４１および配列番号１４２および配列番号１４３、または
（ｘｖｉｉ）配列番号１４７および配列番号１４８および配列番号１４９、または
（ｘｖｉｉｉ）配列番号１５３および配列番号１５４および配列番号１５５、または
（ｘｉｘ）配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、または
（ｘｘ）配列番号１６５および配列番号１６６および配列番号：１６７、または
（ｘｘｉ）配列番号１７１および配列番号１７２および配列番号１７３、または
（ｘｘｉｉ）配列番号１７７および配列番号１７８および配列番号１７９、または
（ｘｘｉｉｉ）配列番号１８３および配列番号１８４および配列番号１８５、または
（ｘｘｉｖ）配列番号１８９および配列番号１９０および配列番号１９１を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、請求項１もしくは６〜２０のいずれか１項に記載の第２の抗体分子と組み合わせて使用するための第１の抗体分子、請求項２もしくは６〜２０のいずれか１項に記載の使用のための薬学的組成物、請求項３もしくは６〜２０のいずれか１項に記載の使用のためのキット、請求項４もしくは６〜２０のいずれか１項に記載の使用、または請求項５もしくは請求項６〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記第１の抗体分子が、以下のＣＤＲ：
（ｉ）配列番号５４および配列番号５５および配列番号５６、または
（ｉｉ）配列番号６０および配列番号６１および配列番号６２、または
（ｉｉｉ）配列番号６６および配列番号６７および配列番号６８、または
（ｉｖ）配列番号７２および配列番号７３および配列番号７４、または
（ｖ）配列番号７８および配列番号７９および配列番号８０、または
（ｖｉ）配列番号８４および配列番号８５および配列番号８６、または
（ｖｉｉ）配列番号９０および配列番号９１および配列番号９２、または
（ｖｉｉｉ）配列番号９６および配列番号９７および配列番号９８、または
（ｉｘ）配列番号１０２および配列番号１０３および配列番号１０４、または
（ｘ）配列番号１０８および配列番号１０９および配列番号１１０、または
（ｘｉ）配列番号１１４および配列番号１１５および配列番号１１６、または
（ｘｉｉ）配列番号１２０および配列番号１２１および配列番号１２２、または
（ｘｉｉｉ）配列番号１２６および配列番号１２７および配列番号１２８、または
（ｘｉｖ）配列番号１３２および配列番号１３３および配列番号１３４、または
（ｘｖ）配列番号１３８および配列番号１３９および配列番号１４０、または
（ｘｖｉ）配列番号１４４および配列番号１４５および配列番号１４６、または
（ｘｖｉｉ）配列番号１５０および配列番号１５１および配列番号１５２、または
（ｘｖｉｉｉ）配列番号１５６および配列番号１５７および配列番号１５８、または
（ｘｉｘ）配列番号１６２および配列番号１６３および配列番号１６４、または
（ｘｘ）配列番号１６８および配列番号１６９および配列番号１７０、または
（ｘｘｉ）配列番号１７４および配列番号１７５および配列番号１７６、または
（ｘｘｉｉ）配列番号１８０および配列番号１８１および配列番号１８２、または
（ｘｘｉｉｉ）配列番号１８６および配列番号１８７および配列番号１８８、または
（ｘｘｉｖ）配列番号１９２および配列番号１９３および配列番号１９４を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、請求項１もしくは６〜２１のいずれか１項に記載の第２の抗体分子と組み合わせて使用するための第１の抗体分子、請求項２もしくは６〜２１のいずれか１項に記載の使用のための薬学的組成物、請求項３もしくは６〜２１のいずれか１項に記載の使用のためのキット、請求項４もしくは６〜２１のいずれか１項に記載の使用、または請求項５もしくは請求項６〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記第１の抗体分子が、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、および配列番号２６からなる群から選択される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列を含む、請求項１もしくは６〜２２のいずれか１項に記載の第２の抗体分子と組み合わせて使用するための第１の抗体分子、請求項２もしくは６〜２２のいずれか１項に記載の使用のための薬学的組成物、請求項３もしくは６〜２２のいずれか１項に記載の使用のためのキット、請求項４もしくは６〜２２のいずれか１項に記載の使用、または請求項５もしくは請求項６〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記第１の抗体分子が、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、および配列番号５０からなる群から選択される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を含む、請求項１もしくは６〜２３のいずれか１項に記載の第２の抗体分子と組み合わせて使用するための第１の抗体分子、請求項２もしくは６〜２３のいずれか１項に記載の使用のための薬学的組成物、請求項３もしくは６〜２３のいずれか１項に記載の使用のためのキット、請求項４もしくは６〜２３のいずれか１項に記載の使用、または請求項５もしくは請求項６〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
前記第１の抗体分子が、以下のＣＤＲアミノ酸配列：
（ｉ）配列番号５１および配列番号５２および配列番号５３および配列番号５４および配列番号５５および配列番号５６、または
（ｉｉ）配列番号５７および配列番号５８および配列番号５９および配列番号６０および配列番号６１および配列番号６２、または
（ｉｉｉ）配列番号６３および配列番号６４および配列番号６５および配列番号６６および配列番号６７および配列番号６８、または
（ｉｖ）配列番号６９および配列番号７０および配列番号７１および配列番号７２および配列番号７３および配列番号７４、または
（ｖ）配列番号７５および配列番号７６および配列番号７７および配列番号７８および配列番号７９および配列番号８０、または
（ｖｉ）配列番号８１および配列番号８２および配列番号８３および配列番号８４および配列番号８５および配列番号８６、または
（ｖｉｉ）配列番号８７および配列番号８８および配列番号８９および配列番号９０および配列番号９１および配列番号９２、または
（ｖｉｉｉ）配列番号９３および配列番号９４および配列番号９５および配列番号９６および配列番号９７および配列番号９８、または
（ｉｘ）配列番号９９および配列番号１００および配列番号１０１および配列番号１０２および配列番号１０３および配列番号１０４、または
（ｘ）配列番号１０５および配列番号１０６および配列番号１０７および配列番号１０８および配列番号１０９および配列番号１１０；または
（ｘｉ）配列番号１１１および配列番号１１２および配列番号１１３および配列番号１１４および配列番号１１５および配列番号１１６、または
（ｘｉｉ）配列番号１１７および配列番号１１８および配列番号１１９および配列番号１２０および配列番号１２１および配列番号１２２；または
（ｘｉｉｉ）配列番号１２３および配列番号１２４および配列番号１２５および配列番号１２６および配列番号１２７および配列番号１２８、または
（ｘｉｖ）配列番号１２９および配列番号１３０および配列番号１３１および配列番号１３２および配列番号１３３および配列番号１３４、または
（ｘｖ）配列番号１３５および配列番号１３６および配列番号１３７および配列番号１３８および配列番号１３９および配列番号１４０、または
（ｘｖｉ）配列番号１４１および配列番号１４２および配列番号１４３および配列番号１４４および配列番号１４５および配列番号１４６、または
（ｘｖｉｉ）配列番号１４７および配列番号１４８および配列番号１４９および配列番号１５０および配列番号１５１および配列番号１５２；または
（ｘｖｉｉｉ）配列番号１５３および配列番号１５４および配列番号１５５および配列番号１５６および配列番号１５７および配列番号１５８、または
（ｘｉｘ）配列番号１５９および配列番号１６０および配列番号１６１および配列番号１６２および配列番号１６３および配列番号１６４、または
（ｘｘ）配列番号１６５および配列番号１６６および配列番号１６７および配列番号１６８および配列番号１６９および配列番号１７０、または
（ｘｘｉ）配列番号１７１および配列番号１７２および配列番号１７３および配列番号１７４および配列番号１７５および配列番号１７６、または
（ｘｘｉｉ）配列番号１７７および配列番号１７８および配列番号１７９および配列番号１８０および配列番号１８１および配列番号１８２、または
（ｘｘｉｉｉ）配列番号１８３および配列番号１８４および配列番号１８５および配列番号１８６および配列番号１８７および配列番号１８８、または
（ｘｘｉｖ）配列番号１８９および配列番号１９０および配列番号１９１および配列番号１９２および配列番号１９３および配列番号１９４を含む、請求項１もしくは６〜２４のいずれか１項に記載の第２の抗体分子と組み合わせて使用するための第１の抗体分子、請求項２もしくは６〜２４のいずれか１項に記載の使用のための薬学的組成物、請求項３もしくは６〜２４のいずれか１項に記載の使用のためのキット、請求項４もしくは６〜２４のいずれか１項に記載の使用、または請求項５もしくは請求項６〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記第１の抗体分子が、以下のアミノ酸配列：
（ｉ）配列番号３および配列番号２７、または
（ｉｉ）配列番号４および配列番号２８、または
（ｉｉｉ）配列番号５および配列番号２９、または
（ｉｖ）配列番号６および配列番号３０、または
（ｖ）配列番号７および配列番号３１、または
（ｖｉ）配列番号８および配列番号３２、または
（ｖｉｉ）配列番号９および配列番号３３、または
（ｖｉｉｉ）配列番号１０および配列番号３４、または
（ｉｘ）配列番号１１および配列番号３５、または
（ｘ）配列番号１２および配列番号３６、または
（ｘｉ）配列番号１３および配列番号３７、または
（ｘｉｉ）配列番号１４および配列番号３８、または
（ｘｉｉｉ）配列番号１５および配列番号３９、または
（ｘｉｖ）配列番号１６および配列番号４０、または
（ｘｖ）配列番号１７および配列番号４１、または
（ｘｖｉ）配列番号１８および配列番号４２、または
（ｘｖｉｉ）配列番号１９および配列番号４３、または
（ｘｖｉｉｉ）配列番号２０および配列番号４４、または
（ｘｉｘ）配列番号２１および配列番号４５、または
（ｘｘ）配列番号２２および配列番号４６、または
（ｘｘｉ）配列番号２３および配列番号４７、または
（ｘｘｉｉ）配列番号２４および配列番号４８、または
（ｘｘｉｉｉ）配列番号２５および配列番号４９、または
（ｘｘｉｖ）配列番号２６および配列番号５０を含む、請求項１もしくは６〜２５のいずれか１項に記載の第２の抗体分子と組み合わせて使用するための第１の抗体分子、請求項２もしくは６〜２５のいずれか１項に記載の使用のための薬学的組成物、請求項３もしくは６〜２５のいずれか１項に記載の使用のためのキット、請求項４もしくは６〜２５のいずれか１項に記載の使用、または請求項５もしくは請求項６〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記第１の抗体分子が、ＦｃγＲＩＩｂへの結合において請求項２１〜２５のいずれか１項で定義する抗体分子と競合することが可能である抗体分子である、請求項１もしくは６〜２０のいずれか１項に記載の第２の抗体分子と組み合わせて使用するための第１の抗体分子、請求項２もしくは６〜２０のいずれか１項に記載の使用のための薬学的組成物、請求項３もしくは６〜２０のいずれか１項に記載の使用のためのキット、請求項４もしくは６〜２０のいずれか１項に記載の使用、または請求項５もしくは請求項６〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記第２の抗体分子が、ヒト抗体分子、ヒト化抗体分子およびヒト由来の抗体分子からなる群から選択される、請求項１もしくは６〜２７のいずれか１項に記載の第２の抗体分子と組み合わせて使用するための第１の抗体分子、請求項２もしくは６〜２７のいずれか１項に記載の使用のための薬学的組成物、請求項３もしくは６〜２７のいずれか１項に記載の使用のためのキット、請求項４もしくは６〜２７のいずれか１項に記載の使用、または請求項５もしくは請求項６〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記第２の抗体分子が、ヒトＩｇＧ抗体である、請求項１もしくは６〜２８のいずれか１項に記載の第２の抗体分子と組み合わせて使用するための第１の抗体分子、請求項２もしくは６〜２８のいずれか１項に記載の使用のための薬学的組成物、請求項３もしくは６〜２８のいずれか１項に記載の使用のためのキット、請求項４もしくは６〜２８のいずれか１項に記載の使用、または請求項５もしくは請求項６〜２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記第２の抗体分子が、ＣＴＬＡ−４、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＴＮＦＲ２、ＰＤ−Ｌ１、ＩＬ−２Ｒ、およびＧＩＴＲからなる群から選択される受容体に特異的に結合する、請求項１もしくは６〜２９のいずれか１項に記載の第２の抗体分子と組み合わせて使用するための第１の抗体分子、請求項２もしくは６〜２９のいずれか１項に記載の使用のための薬学的組成物、請求項３もしくは６〜２９のいずれか１項に記載の使用のためのキット、請求項４もしくは６〜２９のいずれか１項に記載の使用、または請求項５もしくは請求項６〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記第２の抗体分子が、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する、請求項３０に記載の第２の抗体分子と組み合わせて使用するための第１の抗体分子、請求項３０に記載の使用のための薬学的組成物、請求項３０に記載の使用のためのキット、請求項３０に記載の使用、または請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記第２の抗体分子が、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する、請求項３０に記載の第２の抗体分子と組み合わせて使用するための第１の抗体分子、請求項３０に記載の使用のための薬学的組成物、請求項３０に記載の使用のためのキット、請求項３０に記載の使用、または請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
前記第２の抗体分子が、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する、請求項３０に記載の第２の抗体分子と組み合わせて使用するための第１の抗体分子、請求項３０に記載の使用のための薬学的組成物、請求項３０に記載の使用のためのキット、請求項３０に記載の使用、または請求項３０に記載の方法。
【請求項３４】
添付の特許請求の範囲、発明を実施するための形態、実施例および／または図面において実質的に本明細書に記載される使用のためのＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合する抗体分子、使用のための薬学的組成物、キット、使用または方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＦｃγＲＩＩｂ陰性癌の治療において、１）そのＦａｂ領域を介してＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合するが、Ｆｃ領域が欠如しているか、またはそのＦｃ領域を介して少なくとも１つのＦｃγ受容体への結合が低減している抗体分子と、２）抗癌免疫を抑制する、免疫細胞上に存在する受容体に特異的に結合する免疫細胞を除去または免疫細胞不活性化する抗体分子であって、免疫細胞除去抗体分子または免疫細胞不活性化抗体分子が少なくとも１つの活性化Ｆｃγ受容体に結合するＦｃ領域を有する、免疫細胞を除去または免疫細胞不活性化する抗体分子とを組み合わせて用いることに関する。
【背景技術】
【０００２】
免疫系の多数の細胞によって発現される抑制性Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）ＩＩＢは、免疫複合体（ＩＣ）の関与を介して、自然免疫と適応免疫の両方を負に調節することが長らく認識されてきた。同様に、ＦｃγＲＩＩＢがモノクローナル抗体を介した免疫療法を負に調節するという知識は、１０年超にわたって既知である。このように、ＦｃγＲＩＩＢ欠損マウスは、治療用モノクローナル抗体で処置した場合、野生型（ＷＴ）マウスよりも効果的に腫瘍を除去でき、エフェクター細胞（すなわち、マクロファージおよび単球）上でのＦｃγＲＩＩＢ発現が、それらの食作用および細胞傷害性の可能性をインビボで抑制することを示している。さらに、ＦｃγＲＩＩＢは、樹状細胞（ＤＣ）およびＦｃγＲＩＩＢ−ｖｅの抗原提示潜在力を調節する（ｖａｎ  Ｍｏｎｔｆｏｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２０１２  Ｊｕｌ  １；１８９（１）：９２〜１０１）。ＤＣは、ナイーブＴ細胞を活性化する能力が向上している。近年、Ｂ細胞におけるＦｃγＲＩＩＢシグナル伝達および内部移行を遮断するアンタゴニスト抗体が開発された。そのような抗体は、ＦｃγＲＩＩＢ発現Ｂ細胞の効率的な除去を示し、リツキシマブを介した正常なＢ細胞および悪性Ｂ細胞の除去を効率的に促進し、血液癌での有用性を示した。しかし、そのような抗体が固形癌などのＦｃγＲＩＩＢ陰性癌の治療においても有用性を有するかどうかは検討も実証もされなかった。
【発明の概要】
【０００３】
ここで、本出願者らは、Ｆｃ領域が欠如しているか、またはそのＦｃ領域がＦｃγＲ、例えばＦ（ａｂ）’２抗体もしくは非グリコシル化抗体への結合が低減もしくは障害されることを示す、抗ＦｃγＲＩＩＢ抗体だけが、予想外に、固形癌を含むＦｃγＲＩＩＢ陰性癌の治療で使用される抗体の治療活性を高めることができることを示す。以前の研究では、野生型ＩｇＧ１抗ＦｃγＲＩＩＢ抗体がＦｃγＲＩＩＢ受容体を同様に遮断することが可能であり、リツキシマブの内部移行およびリツキシマブ誘発ＦｃγＲＩＩＢリン酸化をインビトロで同様に防止することが可能であることが示されているので、この発見は予想外であった。
【０００４】
本発明によれば、免疫調節性抗癌抗体の治療活性を高めることが可能であり、該抗癌抗体の治療活性は、ＦｃγＲの関与に依存する。そのような抗体には、これらに限定されるものではないが、いわゆるチェックポイント阻害剤標的、例えばＣＴＬＡ−４、免疫アゴニスト標的、例えばＯＸ４０、４−１ＢＢ、およびＧＩＴＲ、ならびにインターロイキン−２受容体（ＩＬ−２Ｒ）が挙げられる。
【０００５】
本明細書に開示されるのは、患者におけるＦｃγＲＩＩｂ陰性癌の治療において、そのＦｃ領域を介して（または通して）ＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合し、Ｆｃ領域が欠如しているか、またはそのＦｃ領域を介して（または通して）Ｆｃγ受容体への結合が低減している第１の抗体分子と、それと組み合わせて使用するための、
免疫細胞上に存在する受容体に特異的に結合する第２の抗体分子であって、免疫細胞が、抗癌免疫を抑制する免疫細胞であり、第２の抗体分子が少なくとも１つの活性化Ｆｃγ受容体に結合するＦｃ領域を有し、免疫細胞上の受容体への第２の抗体分子の結合が、免疫細胞の除去および／または不活性化を引き起こす、第２の抗体分子である。
【０００６】
また、本明細書に開示されるのは、患者におけるＦｃγＲＩＩｂ陰性癌の治療において使用するための以下を含む薬学的組成物であって、
（ｉ）そのＦａｂ領域を介してＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合し、Ｆｃ領域が欠如しているか、またはそのＦｃ領域を介してＦｃγ受容体への結合が低減している第１の抗体分子と、
（ｉｉ）免疫細胞上に存在する受容体に特異的に結合する第２の抗体分子と、を含み、免疫細胞は抗癌免疫を抑制する免疫細胞であり、第２の抗体分子は少なくとも１つの活性化Ｆｃγ受容体に結合するＦｃ領域を有し、免疫細胞上の受容体への第２の抗体の結合が免疫細胞の除去および／または不活性化を引き起こす。
【０００７】
本明細書にさらに開示されるのは、ＦｃγＲＩＩｂ陰性癌の治療において使用するためのキットであって、
（ｉ）そのＦａｂ領域を介してＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合し、Ｆｃ領域が欠如している、またはそのＦｃ領域を介してＦｃγ受容体への結合が低減している第１の抗体分子と、
（ｉｉ）免疫細胞上に存在する受容体に特異的に結合する第２の抗体分子と、を含み、免疫細胞は抗癌免疫を抑制する免疫細胞であり、第２の抗体分子は少なくとも１つの活性化Ｆｃγ受容体に結合するＦｃ領域を有し、免疫細胞上の受容体への第２の抗体分子の結合することで、免疫細胞の除去または不活性化を引き起こす。
【０００８】
本明細書にさらに開示されるのは、患者におけるＦｃγＲＩＩｂ陰性癌の治療での使用のための薬物の製造における、
（ｉ）そのＦａｂ領域を介してＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合し、Ｆｃ領域が欠如しているか、またはそのＦｃ領域を介してＦｃγ受容体への結合が低減している第１の抗体分子と、
（ｉｉ）免疫細胞上に存在する受容体に特異的に結合する第２の抗体分子と、の使用であり、免疫細胞は抗癌免疫を抑制する免疫細胞であり、第２の抗体分子は少なくとも１つの活性化Ｆｃγ受容体に結合するＦｃ領域を有し、免疫細胞上の受容体への第２の抗体の結合することで、免疫細胞の除去または不活性化を引き起こす。
【０００９】
また、本明細書に開示されるのは、患者におけるＦｃγＲＩＩｂ陰性癌の治療のための方法であって、
（ｉ）そのＦａｂ領域を介してＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合し、Ｆｃ領域が欠如しているか、またはそのＦｃ領域を介してＦｃγ受容体への結合が低減している第１の抗体分子と、
（ｉｉ）免疫細胞上に存在する受容体に特異的に結合する第２の抗体分子と、を投与することを含み、免疫細胞は抗癌免疫を抑制する免疫細胞であり、第２の抗体分子は少なくとも１つの活性化Ｆｃγ受容体を活性化することが可能であるＦｃ領域を有し、免疫細胞上の受容体への第２の抗体の結合が免疫細胞の除去または不活性化を引き起こす。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
以下の実施例では、次の図を参照している。
【００１１】
【図１】本発明が作用する理由を説明する潜在的な機構を示す。免疫細胞を除去または不活性化する抗体分子（この場合は抗ＣＴＬＡ−４抗体）は、抗癌免疫を抑制する（この場合はＴｒｅｇ）免疫細胞上に存在する受容体に結合する。抗ＣＴＬＡ−４抗体のＦｃ領域は、活性化Ｆｃγ受容体（この場合、これはマクロファージの表面に存在する）に結合する。さらに、ＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合する抗体分子は、マクロファージの表面に存在するＦｃγＲＩＩｂに結合する。この特異的な抗体は、活性化Ｆｃγ受容体への結合が低減したＦｃ領域を有するので、マクロファージ上に存在する活性化Ｆｃγ受容体には結合せず、その代わりに抗ＣＴＬＡ−４抗体のＦｃ領域に自由に結合する。  図１Ａは、抗ＣＴＬＡ−４抗体のみの使用を示す。抗ＣＴＬＡ−４抗体は、活性化Ｆｃγ受容体および抑制性Ｆｃγ受容体の両方に結合し、したがって活性化し、したがって、活性化が弱まり、したがって、抗ＣＴＬＡ−４抗体が活性化Ｆｃγ受容体のみに結合していた状況と比較して、効果が低減する。  図１Ｂは、抗ＣＴＬＡ−４抗体およびＷＴ（野生型）ＦｃγＲＩＩｂ抗体の組み合わせにより、活性化が低下することを示している。この場合、ＦｃγＲＩＩｂ抗体は、活性化Ｆｃγ受容体を遮断するとともに、抑制性Ｆｃγ受容体を活性化する。これは、本発明による望ましい効果の反対である。  図１Ｃは、本発明による抗ＣＴＬＡ−４抗体および非グリコシル化ＦｃγＲＩＩｂ抗体の組み合わせが最大の活性化をもたらすことを示す。活性化Ｆｃγ受容体を遮断することはなく、抑制性Ｆｃγ受容体の活性化もないため、標的は最大除去となる。ここで、非グリコシル化ＦｃγＲＩＩｂ抗体は、Ｆｃ領域が欠如しているか、またはさもなければＦｃＲへの結合が低減したものであり得る。
【図２】ＦｃγＲＩＩＢ抗体は活性化Ｆｃ受容体へのＦｃ結合が障害されたが、野生型抗体は、活性化Ｆｃ受容体への結合を保持し、ＣＤ２０モノクローナル抗体によるＢ細胞除去を促進したことを示している。  （図２Ａ〜Ｂ）ＣＦＳＥ＋ｈＣＤ２０＋／−  ｘ  ｍＦｃγＲＩＩ−／−（標的）およびｍＦｃγＲＩＩ−／−（非標的）脾細胞をｈＦｃγＲＩＩＢ＋／−  ｘ  ｍＦｃγＲＩＩ−／−レシピエントマウスに注入した。以前と同様に、マウスに野生型またはＮ２９７ＱＦｃγＲＩＩＢモノクローナル抗体（６Ｇ１１）（２×２０ｍｇ／ｋｇ）を投与し、続いてＲｉｔ（０．２〜２ｍｇ／ｋｇ）を投与し、血液（Ａ）と脾臓（Ｂ）のＣＦＳＥ＋ＣＤ１９＋細胞の比率を判定した。データは、少なくとも２つの独立した実験から集約した。（図２Ｃ）ＣＦＳＥ＋ｈＣＤ２０＋／−  ｘ  ｍＦｃγＲＩＩ−／−（標的）およびｍＦｃγＲＩＩ−／−（非標的）脾細胞をｈＦｃγＲＩＩＢ＋／−  ｘ  ｍＦｃγＲＩＩ−／−レシピエントマウスに注入した。マウスに野生型またはＮ２９７Ｑ  ＦｃγＲＩＩＢモノクローナル抗体（６Ｇ１１）（２０ｍｇ／ｋｇ）を投与し、続いてＲｉｔ（２ｍｇ／ｋｇ）を投与し、示したモノクローナル抗体を用いて、活性化ｍＦｃγＲの発現を脾臓のＦ４／８０＋エフェクター細胞上で定量化した。（図２Ｄ〜Ｅ）野生型およびＮ２９７Ｑ（ＮＱ）ｈＦｃγＲＩＩＢ特異的モノクローナル抗体（６Ｇ１１；１０μｇ／ｍＬで１５分間）が（図２Ｄ）マウスＢＭＤＭでｈＦｃγＲＩＩＢ  ＩＴＩＭリン酸化（ｐＦｃγＲＩＩＢ）を誘発する能力、および（図２Ｅ）高密度培養後のそれぞれの単離された初代末梢血単球を示す。示したように、α−チューブリン、ＧＡＰＤＨおよびｈＦｃγＲＩＩＢをローディング対照として使用し、代表的なブロットを示した。
【図３】野生型とＦｃγＲヌル  ＦｃγＲＩＩＢモノクローナル抗体を組み合わせて標的細胞を最適に除去することができることを示す。  ＣＦＳＥ＋ｈＣＤ２０＋／−（標的）およびｍＦｃγＲＩＩ−／−（非標的）脾細胞をｈＦｃγＲＩＩＢ＋／−  ｘ  ｍＦｃγＲＩＩ−／−（Ｂａｌｂ／ｃ）レシピエントマウスに注入した。Ｘ軸に示すように、マウスに野生型（２×１０〜２０ｍｇ／ｋｇ）もしくはＦ（ａｂ’）２（２×２０ｍｇ／ｋｇ）ｍＦｃγＲＩＩ（ＡＴ１３０−５）または野生型（２×２０ｍｇ／ｋｇ）もしくはＦ（ａｂ’）２（２×４０ｍｇ／ｋｇ）ｈＦｃγＲＩＩＢモノクローナル抗体（ＡＴ１０）に続いてＲｉｔ（０．２〜２ｍｇ／ｋｇ）を投与し、次いで前と同様に脾臓ＣＦＳＥ＋ＣＤ１９＋細胞の比率を判定した。データは、１〜３の独立した実験から集約した。各点は個々のマウスの結果を示し、平均比率は水平線で示した。データは、一元配置分散分析を使用して分析した。
【図４】Ｆｃ不活性ＮＡ変異体モノクローナル抗体による抗ＩＬ２Ｒモノクローナル抗体＋／−ＦｃγＲＩＩＢ阻害によりＴｒｅｇ除去の評価を示す。図４Ａ）雌のＢａｌｂ／ｃマウスに１００μｇのＡＴ１３０−２ＮＡを腹腔内注射（ｉｐ）によって投与した。６時間後に１００μｇのＰＣ６１をｉ．ｐ．投与した。４日後、血液、脾臓、リンパ節中のＴｒｅｇ（ＦｏｘＰ３＋）をＦＡＣにより判定した。マウスを殺処分し、脾臓、リンパ節、および血液から得られた単細胞懸濁液をＦＡＣ  ｃａｎｔｏで分析する前に、細胞内ＦｏｘＰ３染色に先立ってＣＤ４、ＣＤ８、およびＢ２２０に対する抗体で染色した。各組織の白血球数を判定した。Ｔｒｅｇは、ＣＤ８−ＣＤ４＋ＦｏｘＰ３＋と定義し、Ｔｒｅｇの数は白血球数を使用して算出した。図４Ｂ）マウスはＣ５７ＢＬ／６を用いて、上記のように投与した。図４Ｃ）図４Ｂ）から算出したＣＤ８／Ｔｒｅｇの比率を示す。
【図５】野生型またはＮＡ変異体モノクローナル抗体による抗ＩＬ２Ｒモノクローナル抗体＋／−ＦｃγＲＩＩＢ阻害によりＴｒｅｇ除去の評価を示す。野生型ＡＴ１３０−２は、除去のいかなる向上も見られないが、一方ＮＡ変異体は、向上が見られる。Ａ）１００μｇのＡＴ１３０−２ＮＡまたはｍＩｇＧ１野生型ＡＴ１３０−２を雌のＢａｌｂ／ｃマウスにｉ．ｐ．投与した。６時間、１００μｇのＰＣ６１をｉ．ｐ．投与した。４日後、脾臓中のＴｒｅｇ（ＦｏｘＰ３＋）をＦＡＣにより判定した。マウスを殺処分し、脾臓から得られた単細胞懸濁液をＦＡＣ  ｃａｎｔｏで分析する前に、細胞内ＦｏｘＰ３染色に先立ってＣＤ４、ＣＤ８およびＢ２２０に対する抗体で染色した。各組織の白血球数を判定した。Ｔｒｅｇは、ＣＤ８−ＣＤ４＋ＦｏｘＰ３＋と定義し、Ｔｒｅｇの数は白血球数を使用して算出した。野生型ｍＩｇＧ１  ＡＴ１３０−２と比較して、Ｎ２９７Ａ抗体をＰＣ６１と組み合わせて４日間投与したマウスの脾臓では、Ｔｒｅｇの数が有意に少なかった（対応のないＴ検定、Ｐ＝０．０４４）。
【図６】抗ＣＴＬＡ−４およびＦｃγＲＩＩＢの阻害による併用療法を示す。５×１０５のＣＴ２６細胞を雌のＢＡＬＢ／ｃマウスに皮下注射した。腫瘍の幅×長さが約１００ｍｍ２であるときに、マウスを無作為に処置群に分けた。処置は０、２、４および１１日目に行われた。９Ｈ１０（ハムスター抗マウスＣＴＬＡ４）のみのマウスに、２００μＬのＰＢＳ中２００μｇの抗体を毎日ｉ．ｐ．投与した。０日目に、併用マウスに２００μＬのＰＢＳ中１００μｇのＡＴ１３０−２Ｎ２９７Ａ（抗マウスＣＤ３２）をｉ．ｐ．投与し、６時間後に２００μＬのＰＢＳ中２００μｇの９Ｈ１０をｉ．ｐ．投与した。２、４、および１１日目に、併用マウスに、両抗体（２００μｇの９Ｈ１０および１００μｇのＡＴ１３０−２ＮＡ）を２００μＬの単回ｉ．ｐ．注入で投与した。腫瘍の幅と長さを測定し、腫瘍の長さ×幅が４００ｍｍ２を超えたときにマウスを殺処分した。図６Ａ）は、処置スケジュールを表す。１群：抗体なし、２群：抗ｍＣＤ３２（ＡＴ１３０−２ＮＡ；１００μｇ）、３群：抗ＣＴＬＡ−４（９Ｈ１０；２００μｇ）、４群：ＡＴ１３０−２の６時間後に（ＰＣ６１）を併用。腫瘍を確立させ、１００ｍｍ２において処置した。１２日目に追加の用量を投与した。図６Ｂ）は、個々の腫瘍の成長を示す。図６Ｃ）は、平均腫瘍面積＋／−ＳＤまたはＳＥＭを表す。図６Ｄ）は動物の生存を表す。図６Ｅ）生存を示す２つの個別の実験（ｎ＝１０／群）からの複合。９Ｈ１０およびＡＴ１３０−２ＮＡ（ＮＡコンボ）の組み合わせは、９Ｈ１０単独よりも生存時間の延長において有意に強力であることを示した（ｐ＝０．０１７９）。
【図７】抗ＣＴＬＡ−４およびＦｃγＲＩＩＢ阻害の併用療法を示し、野生型（Ｍ１コンボと表示）とＦｃ不活性（ＮＡコンボと表示）ＡＴ１３０−２モノクローナル抗体を比較する。５×１０５  ＣＴ２６細胞を雌のＢＡＬＢ／ｃマウスに皮下注射した。腫瘍の幅×長さが約１００ｍｍ２であるときに、マウスを無作為に処置群に分けた。処置は、０、２、４および１１日目に行われた。０日目に、併用マウスに２００μＬのＰＢＳ中に１００μｇのＡＴ１３０−２Ｎ２９７ＡまたはＡＴ１３０−２ｍＩｇＧ１（抗マウスＣＤ３２）をｉ．ｐ．投与し、６時間後に２００μＬのＰＢＳ中２００μｇの９Ｈ１０をｉ．ｐ．投与した。２、４、１１日目に、併用マウスに、両方の抗体（２００μｇの９Ｈ１０および１００μｇのＡＴ１３０−２ＮＡ／ｍＩｇＧ１）を２００μＬの単回ｉ．ｐ．注入した。腫瘍の幅および長さを測定し、腫瘍の長さ×幅が４００ｍｍ２を超えたときにマウスを殺処分した。データは、Ｎ＝１１〜１２以下の生存曲線で示す。ＮＡ組み合わせで処置された群では、ｍＩｇＧ１の組み合わせを投与されたマウスと比較して、生存時間が有意に長かった（ログランク検定Ｐ＝０．０４６０）。
【図８】抗ＰＤ−Ｌ１およびＦｃγＲＩＩＢの阻害による併用療法を示し、この効果が抗体のＮＡ形式に依存するかどうかに取り組むために、野生型ｍＩｇＧ１およびＮＡ形式の両方を使用して実験を行った。図８Ａは、各群における個々の腫瘍の成長を示す（１群ごとに１つのグラフ）。数字は、各群における生存マウスの数を示す。図８Ｂは、マウスの生存曲線を示す。
【図９】ＦｃγＲに結合する抗マウスＦｃγＲＩＩＢモノクローナル抗体のＡＴ１３０−２の野生型（上のグラフ）およびＮ２９７Ａ（下のグラフ）の形式を示す。これは、ＡＴ１３０−２のＳＰＲ分析を、示したマウスＦｃγＲ（１００ｎＭ）に結合するいずれかの形式で示す。
【図１０】Ｆｃγ受容体（マウスおよびヒト）に結合する野生型６Ｇ１１対Ｎ２９７Ａ  ６Ｇ１１を示す。これは、示した低親和性ヒトおよびマウスＦｃγＲに結合する天然およびＮ２９７Ａ抗ｈｕＣＤ３２ｂ  ６Ｇ１１  ｈＩｇＧ１のＳＰＲ分析を示している。図１０ＡおよびＢは、ヒトＦｃγＲ（１００ｎＭ）の結果を示す。図１０ＣおよびＤは、マウスＦｃγＲ（１００ｎＭ）の結果を示す。図１０ＥおよびＥは、ヒトＦｃγＲ（連続的に増加して添加）−ＦｃγＲＩＩｂおよびｈＣＤ６４の結果を示す。図１０ＧおよびＨは、マウスＦｃγＲ（１００ｎＭ）の結果を示す。すなわち、図１０Ｃと同じだが、より明確に見るために目盛を変更した。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
したがって、本発明は、
（ｉ）そのＦａｂ領域を介してＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合し、Ｆｃ領域が欠如しているか、またはそのＦｃ領域を介してＦｃγ受容体への結合が低減している抗体分子（以下、多くの場合、第１の抗体分子（ａ  ｆｉｒｓｔ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｍｏｌｅｃｕｌｅまたはｔｈｅ  ｆｉｒｓｔ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｍｏｌｅｃｕｌｅと表される）と、
（ｉｉ）免疫細胞上に存在する受容体に特異的に結合する抗体分子（以下、多くの場合、第２の抗体（ａ  ｓｅｃｏｎｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙまたはｔｈｅ  ｓｅｃｏｎｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙと表される）であって、免疫細胞は、抗癌免疫を抑制する免疫細胞であり、抗体分子は、少なくとも１つの活性化Ｆｃγ受容体に結合するＦｃ領域を有し、この抗体分子が免疫細胞上の受容体への結合が免疫細胞の除去または不活性化を引き起こす、抗体分子と組み合わせて使用することに関する。したがって、この第２の抗体分子は、免疫細胞を除去または不活性化する抗体分子である。
【００１３】
この組み合わせは、患者におけるＦｃγＲＩＩｂ陰性癌の治療において使用することを意図し、そのＦｃ部分の活性化ＦｃγＲへの結合を強化することにより第２の抗体分子の治療効果の向上を目指し、抑制性ＦｃγＲの結合／活性化を低減させる。
【００１４】
Ｆｃ受容体は、マクロファージなどの免疫エフェクター細胞の細胞表面に見られる膜タンパク質である。この名称は、抗体が受容体に結合する通常の方法である、抗体のＦｃ領域へのそれらの結合特異性に由来する。しかし、特定の抗体は、抗体が１つ以上のＦｃ受容体に特異的に結合する場合、抗体のＣＤＲ配列を介してＦｃ受容体に結合することもできる。
【００１５】
Ｆｃ受容体のサブグループには、ＩｇＧ抗体に特異的なＦｃγ受容体（Ｆｃ−γ受容体、ＦｃγＲ）がある。Ｆｃγ受容体には、活性化Ｆｃγ受容体（活性化Ｆｃγ受容体とも表される）、および抑制性Ｆｃγ受容体の２種類がある。活性化受容体および抑制性受容体は、それぞれ、免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）または免疫受容抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）を介して、それらのシグナルを伝達する。ヒトにおいて、ＦｃγＲＩＩｂ（ＣＤ３２ｂ）は、抑制性Ｆｃγ受容体であり、一方ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩａ（ＣＤ３２ａ）、ＦｃγＲＩＩｃ（ＣＤ３２ｃ）、ＦｃγＲＩＩＩａ（ＣＤ１６ａ）およびＦｃγＲＩＶは、活性化Ｆｃγ受容体である。ＦｃγｇＲＩＩＩｂは、好中球上で発現するＧＰＩ結合受容体であり、ＩＴＡＭモチーフが欠如しているが、脂質ラフトをクロスリンクし、他の受容体と結合するその能力によっても活性化とみなされる。マウスにおいて、活性化受容体は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＩおよびＦｃγＲＩＶである。
【００１６】
抗体がＦｃγ受容体との相互作用を介して免疫細胞活性を調節することは、公知である。具体的には、抗体免疫複合体が免疫細胞の活性化をどのように調節するかは、活性化Ｆｃγ受容体および抑制性Ｆｃγ受容体の相対的な関与によって判定される。異なる抗体アイソタイプは、異なる親和性で活性化Ｆｃγ受容体および抑制性Ｆｃγ受容体に結合し、結果として異なるＡ：Ｉ比率（活性化：抑制の比率）をもたらす（Ｎｉｍｍｅｒｊａｈｎ  ｅｔ  ａｌ；Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００５  Ｄｅｃ  ２；３１０（５７５３）：１５１０〜２）。
【００１７】
抑制性Ｆｃγ受容体に結合することにより、抗体は、エフェクター細胞機能を阻害、遮断、および／または下方制御することができる。
【００１８】
活性化Ｆｃγ受容体に結合することにより、抗体は、エフェクター細胞の機能を活性化し、それによって抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、サイトカイン放出、および／または抗体依存性エンドサイトーシス、ならびに好中球の場合、ネトーシス（すなわち、ＮＥＴ（好中球細胞外トラップ）の活性化および放出）などの機構を誘発することができる。活性化Ｆｃγ受容体に結合する抗体も、ＣＤ４０、ＭＨＣＩＩ、ＣＤ３８、ＣＤ８０、および／またはＣＤ８６などの特定の活性化マーカーの増加を引き起こすことができる。
【００１９】
ＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合する本発明による抗体分子、すなわち第１の抗体は、抗体のＦａｂ領域を介して、すなわち、それぞれ重鎖および軽鎖の１つの定常領域と１つの可変領域で構成される、抗原に結合する抗体上の抗原結合領域を介して、このＦｃγ受容体に結合または相互作用する。特に、それは、免疫エフェクター細胞上に存在するＦｃγＲＩＩｂ、特に免疫エフェクター細胞の表面に存在するＦｃγＲＩＩｂに結合する。この抗体が通常のＦｃ領域または普通のＦｃ領域を有していた場合、抗体は、Ｆｃ領域とＦｃ受容体との間の正常な相互作用により活性化Ｆｃγ受容体に結合することもできただろう。しかし、本発明によれば、ＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合する抗体分子は、Ｆｃ領域が完全に欠如しているか、またはＦｃγ受容体への結合が低減しており、これは、ＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合する、もしくは相互作用する抗体分子がＦｃγ受容体に十分に結合しない、もしくはＦｃγ受容体に全く結合できない、もしくは相互作用できないことを意味する。これは、以下の少なくとも２つの治療上重要な結果を有すると考えられる：
１）活性化ＦｃγＲへのＦｃ媒介性結合の欠如により、（他の）治療用抗癌抗体のＦｃへの結合に利用可能な活性化Ｆｃγ受容体がより多く残される。これは、増え続ける活性化ＦｃγＲ（対抑制性ＦｃγＲｓ；Ｎｉｍｍｅｒｊａｈｎ  ｅｔ  ａｌ；Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００５  Ｄｅｃ  ２；３１０（５７５３）：１５１０〜２）のクラスター形成により、チェックポイント阻害薬とともに免疫アゴニスト、および抗ＩＬ−２Ｒなどの他の免疫調節性抗体の活性の根底にある機構の、エフェクター細胞媒介標的細胞の除去が増加することが既知であることから、重要である。
２）抑制性ＦｃγＲへのＦｃ媒介性結合の欠如または低減により、ＦｃγＲ発現免疫エフェクター細胞において抑制性シグナル伝達が低減することが示された。したがって、ＦｃγＲＩＩＢ標的抗体のＦｃγＲへのＦｃ媒介性結合の欠如または低減により、第２の免疫調節性抗癌抗体に応答する免疫エフェクター細胞における活性化ＦｃγＲの向上および抑制性Ｆｃγシグナル伝達の低減の両方を含む、少なくとも２つの機構によりおそらく治療効果が向上する。
【００２０】
「結合の低減」または「親和性が低減した結合」とは、これに関連して、抗体分子がＦｃγ受容体へのＦｃ媒介性結合を低減させたこと、言い換えれば、ＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合する抗体分子のＦｃ領域が、正常なヒトＩｇＧ１のＦｃ領域よりも低い親和性で活性化Ｆｃγ受容体に結合することを意味する。結合の低減は、表面プラズモン共鳴などの技術を使用して評価することができる。これに関連して、「正常なＩｇＧ１」とは、そのグリコシル化を変化させるようには生成されていない、非変異Ｆｃ領域を有する従来通りに生成されたＩｇＧ１を意味する。この「正常なＩｇＧ１」の基準として、ＣＨＯ細胞で生成されたリツキシマブをなんら修飾せずに使用することができる（Ｔｉｐｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｌｏｏｄ  ２０１５  １２５：１９０１〜１９０９；リツキシマブは、とりわけ、ＥＰ０６０５４４２に記載されている）。
【００２１】
「結合の低減」とは、ＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合する抗体分子のＦｃ領域の活性化Ｆｃγ受容体への結合が、正常なヒトＩｇＧ１のＦｃ領域の同じ受容体への結合に比べて、すべてのＦｃ受容体で少なくとも１０倍低減することを意味する。いくつかの実施形態では、結合は、少なくとも２０倍低減する。いくつかの実施形態では、結合は、少なくとも３０倍低減する。いくつかの実施形態では、結合は、少なくとも４０倍低減する。いくつかの実施形態では、結合は、少なくとも５０倍低減する。いくつかの実施形態では、結合は、少なくとも６０倍低減する。いくつかの実施形態では、結合は、少なくとも７０倍低減する。
【００２２】
本発明のいくつかの実施形態では、ＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合する抗体分子は、そのＦｃ領域とまったく結合せず、いくつかのそのような場合では、抗体はＦｃ領域を有さず、その場合、それは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’２、ｓｃＦｖ、またはそれらのＰＥＧ化バージョンであり得る。
【００２３】
いくつかの実施形態では、ＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合する抗体分子は、ラマ抗体、特にラマｈｃＩｇＧであってよい。すべての哺乳類と同様に、ラクダ科動物は、２つの重鎖と２つの軽鎖がジスルフィド結合でＹ字型に結合した従来の抗体を生成する（ＩｇＧ１）。しかし、それらはまた、重鎖ＩｇＧ（ｈｃＩｇＧ）としても既知である、免疫グロブリンＧの２つの固有のサブクラスであるＩｇＧ２とＩｇＧ３を生成する。これらの抗体は、ＣＨ１領域が欠如する２つの重鎖のみで構成されているが、それらのＮ末端にＶＨＨと呼ばれる抗原結合領域を保持している。従来のＩｇは、抗原抗体相互作用の高度な多様性を可能にするように、重鎖と軽鎖の両方からの可変領域の結合を必要とする。分離された重鎖と軽鎖は依然としてこの能力を示すが、重鎖と軽鎖の対と比較すると、それらは極めて低い親和性４を示す。ｈｃＩｇＧの固有の特徴は、それらの単量体抗原結合領域が、別の領域と対形成する必要がなく、従来の抗体に相当する特異性、親和性、特に多様性とともに抗原に結合する能力である。
【００２４】
いくつかの実施形態では、結合の低減は、抗体がＦｃγＲＩへの結合に関して２０倍低減した親和性を有することを意味する。
【００２５】
ＩｇＧ１抗体などのＦｃ受容体への結合が低減したＩｇＧ１抗体を得るために、非グリコシル化によりＩｇＧ抗体のＦｃ領域を改変することが可能である。例えば、ＩｇＧ１抗体のそのような非グリコシル化は、例えば、抗体鎖の２９７位（Ｎ２９７Ｘ）におけるアスパラギンのアミノ酸置換によって達成され得る。置換は、グルタミン（Ｎ２９７Ｑ）、もしくはアラニン（Ｎ２９７Ａ）、もしくはグリシン（Ｎ２９７Ｇ）、もしくはアスパラギン（Ｎ２９７Ｄ）で、またはセリン（Ｎ２９７Ｓ）によって行われてもよい。
【００２６】
Ｆｃ領域は、例えば、Ｊａｃｏｂｓｅｎ  ＦＷ  ｅｔ  ａｌ．，ＪＢＣ  ２０１７，２９２，１８６５〜１８７５に記載のさらなる置換により修飾されてもよい（例えば表１を参照されたい）。そのようなさらなる置換には、Ｌ２４２Ｃ、Ｖ２５９Ｃ、Ａ２８７Ｃ、Ｒ２９２Ｃ、Ｖ３０２Ｃ、Ｌ３０６Ｃ、Ｖ３２３Ｃ、Ｉ３３２Ｃ、および／またはＫ３３４Ｃが含まれる。そのような修飾には、ＩｇＧ１における以下の置換の組み合わせも含まれる：
Ｌ２４２Ｃ、Ｎ２９７Ｇ、Ｋ３３４Ｃ、
Ａ２８７Ｃ、Ｎ２９７Ｇ、Ｌ３０６Ｃ、
Ｒ２９２Ｃ、Ｎ２９７Ｇ、Ｖ３０２Ｃ、
Ｎ２９７Ｇ、Ｖ３２３Ｃ、Ｉ３３２Ｃ、および
Ｖ２５９Ｃ、Ｎ２９７Ｇ、Ｌ３０６Ｃ。
【００２７】
代替的に、Ｆｃ領域において炭水化物は酵素的に切断されることができ、および／または抗体を生成するために使用される細胞は、炭水化物の付加を障害する培地で増殖されることができ、および／または糖を付加する能力が欠如するように操作された細胞は、抗体生成のために、または抗体をグリコシル化しない、もしくは機能的にグリコシル化しない宿主細胞、例えば上記で説明したように、Ｅ．ｃｏｌｉを含む原核生物中での抗体の生成によって達成される。
【００２８】
Ｆｃγ受容体に対する親和性の低減は、抗体のＦｃ領域におけるアミノ酸の操作（このような修飾は、例えば、Ｘｅｎｃｏｒ、Ｍａｃｒｏｇｅｎｉｃｓ、およびＧｅｎｅｎｔｅｃｈによってこれまでに説明されている）を介して、または抗体をグリコシル化しない、もしくは機能的にグリコシル化しない宿主細胞、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉを含む原核生物中での抗体の生成によってさらに達成し得る。
【００２９】
Ｆｃ領域を介してＦｃγ受容体への結合が低減していることに加えて、いくつかの実施形態では、ＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合する抗体分子が、標的に結合するときにＦｃγＲＩＩｂのリン酸化を引き起こさないことが好ましい。ＦｃγＲＩＩｂのＩＴＩＭのリン酸化は、免疫細胞の活性を遮断する抑制現象である。
【００３０】
Ｆｃγ受容体発現免疫エフェクター細胞は、本明細書では主に自然免疫エフェクター細胞を指し、具体的には、マクロファージ、好中球、単球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好塩基球、好酸球、肥満細胞、および血小板を含む。細胞傷害性Ｔ細胞およびメモリーＴ細胞は、通常はＦｃγＲを発現しないが、特定の状況では発現し得る。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞は、自然免疫エフェクター細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞はマクロファージである。
【００３１】
ＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合する抗体分子とは対照的に、標的免疫細胞上に存在する受容体に特異的に結合または相互作用する抗体分子、すなわち、第２の抗体分子または免疫細胞を除去または不活性化する抗体分子は、低減してない、または少なくとも実質的に低減してない程度で、活性化Ｆｃγ受容体に結合または相互作用するＦｃ領域を有する。第２の抗体分子、すなわち、免疫細胞を除去または不活性化する抗体分子が結合する免疫細胞は、抗癌免疫を抑制する免疫細胞であり、第２の抗体のその細胞への結合することで、免疫系の自然免疫アーム（例えば、ＴＡＭ、ＴＡＮもしくはＭＤＳＣ）または適応免疫アーム（例えば、Ｔ細胞）に属し得る、その免疫細胞の除去または不活性化を引き起こす。
【００３２】
細胞の除去とは、本明細書では、細胞の物理的クリアランスを介した免疫細胞の除去、欠失または排除を指す。特に、腫瘍内免疫細胞の除去、または腫瘍流入領域リンパ節に存在する腫瘍関連免疫細胞の除去を指す。
【００３３】
免疫細胞の不活性化とは、本明細書では、活性の遮断または低減、例えば、サイトカイン、成長因子、アルギナーゼ、または一酸化窒素産生の低減を指す。これに関連して、免疫細胞の不活性化も、免疫細胞のスキューイング（ｓｋｅｗｉｎｇ）を包含し、その結果、その腫瘍形成型の表現型は、例えば、抗炎症性サイトカイン放出の減少、血管新生促進増殖因子の放出の減少、および炎症性サイトカイン放出の増加、活性酸素種（ＲＯＳ）、食作用またはＡＤＣＣ活性の増加によって、抗腫瘍表現型に変化する。
【００３４】
抗体が免疫細胞除去抗体または不活性化抗体であるかどうかを判断する方法については、以下でさらに説明する。
【００３５】
第２の抗体分子が特異的に結合する免疫細胞は、抗癌免疫を抑制する免疫細胞である。これに関連して、抗癌免疫には、記憶想起反応の生成を含む、適応性Ｔ細胞媒介抗癌免疫の誘導が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【００３６】
第２の抗体分子が特異的に結合する免疫細胞は、制御性Ｔ細胞であり得る。制御性Ｔ細胞、Ｔｒｅｇ細胞、ＴｒｅｇまたはＴｒｅｇ（以前は抑制性Ｔ細胞として既知であり、時には抑制性制御性Ｔ細胞とも称される）は、通常の免疫環境下および病理学的な免疫環境下で他の免疫細胞を抑制することが可能であるＴ細胞の亜集団である。代替的に、第２の抗体分子が特異的に結合する免疫細胞は、骨髄細胞、特に腫瘍関連骨髄系細胞であり得る。いくつかの実施形態では、腫瘍関連骨髄系細胞は、腫瘍関連マクロファージであり、これは、時にはＴＡＭと表される。いくつかの実施形態において、腫瘍関連骨髄系細胞は、腫瘍関連好中球であり、これは、時にはＴＡＮと表される。いくつかの実施形態では、腫瘍関連骨髄系細胞は、樹状細胞である。いくつかの実施形態では、腫瘍関連骨髄系細胞は、骨髄由来のサプレッサー細胞であり、単球型または顆粒球型であり得る。
【００３７】
免疫細胞上の標的に特異的に結合することに加えて、第２の抗体分子は、そのＦｃ領域を介して、第１の抗体分子が結合するＦｃγＲＩＩｂと同じ免疫エフェクター細胞上に存在する活性化Ｆｃγ受容体に、および／または別の免疫エフェクター細胞上に存在する活性化Ｆｃγ受容体に結合する。活性化Ｆｃγ受容体に結合できるようにするために、第２の抗体のＦｃ領域は、少なくともいくつかの実施形態では、２９７位でグリコシル化される必要がある。この位置の炭水化物残基は、Ｆｃγ受容体への結合に役立つ。いくつかの実施形態では、これらの残基は、末端ガラクトース残基およびシアル酸とともに、ＧｌｎＮＡｃ、マンノースを含む二分岐炭水化物であることが好ましい。Ｆｃ分子のＣＨ２部分を含む必要がある。
【００３８】
本発明に従って治療されるまたは治療可能な癌は、ＦｃγＲＩＩｂ陰性癌であり、これは、その癌がいずれのＦｃγＲＩＩｂ受容体も提示しない癌であることを意味する。これは、Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０１５，１９５（１１）５５０３〜５５１６に示されているような免疫組織化学およびフローサイトメトリーを含む多様な方法で抗ＦｃγＲＩＩＢ特異的抗体を使用して検査され得る。
【００３９】
抗体は、免疫学および分子生物学分野の当業者には公知である。通常は、抗体は、２つの重鎖（Ｈ）と、２つの軽鎖（Ｌ）と、を含む。本明細書では、時には、この完全な抗体分子をフルサイズ抗体または完全長抗体と称する。抗体の重鎖は、１つの可変領域（ＶＨ）と３つの定常領域（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３）とを含み、抗体分子の軽鎖は、１つの可変領域（ＶＬ）と１つの定常領域と（ＣＬ）を含む。可変領域（時にＦＶ領域と総称される）は、抗体の標的、すなわち抗原に結合する。各可変領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される３つのループを含み、これらのループが標的の結合に関与する。定常領域は、抗体の抗原への結合には直接関与しないが、種々のエフェクター機能を呈する。それらの重鎖の定常領域のアミノ酸配列に応じて、抗体または免疫グロブリンを異なるクラスに割り当てることができる。免疫グロブリンには、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭの５つの主要なクラスがあり、ヒトにおいて、これらのうちのいくつかは、さらにサブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２に分割される。
【００４０】
抗体の別の部分は、Ｆｃ領域（あるいは断片結晶化可能領域としても既知である）であり、抗体の重鎖の各々に２つの定常領域を含む。上で言及されるように、Ｆｃ領域は抗体とＦｃ受容体との間の相互作用に関与する。
【００４１】
本明細書で用いる場合、抗体分子という用語は、完全長抗体またはフルサイズ抗体、ならびに完全長抗体の機能的フラグメントおよびこのような抗体分子の誘導体を包含する。
【００４２】
フルサイズ抗体の機能的フラグメントは、対応するフルサイズ抗体と同じ抗原結合特徴を有し、対応するフルサイズ抗体と同じ可変領域（すなわち、ＶＨ配列およびＶＬ配列）および／または同じＣＤＲ配列のいずれかを含む。機能的フラグメントが、対応するフルサイズ抗体と同じ抗原結合特徴を有するということは、標的上のフルサイズ抗体と同じエピトープに結合することを意味する。このような機能的フラグメントは、フルサイズ抗体のＦｖ部分に対応し得る。代替的に、このようなフラグメントは、Ｆｃ部分を含有しない、一価の抗原結合性フラグメントであるＦ（ａｂ）とも表されるＦａｂ、またはジスルフィド結合によって一緒に結合された２つの抗原結合Ｆａｂ部分を含有する二価の抗原結合性フラグメントであるＦ（ａｂ’）２、またはＦ（ａｂ’）、すなわちＦ（ａｂ’）２の一価の変異体であり得る。このようなフラグメントは、一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）でもあり得る。
【００４３】
機能的フラグメントは、対応するフルサイズ抗体の６つのＣＤＲのすべてを常に含有するわけではない。３つ以下のＣＤＲ領域（場合によっては、単一のＣＤＲだけまたはその一部）を含有する分子は、そのＣＤＲ（複数可）に由来する抗体の抗原結合活性を保持することが可能であることが理解される。例えば、全ＶＬ鎖（３つのＣＤＲをすべて含む）がその基質に対して高い親和性を有することが、Ｇａｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６９：３２３８９〜９３に記載されている。
【００４４】
２つのＣＤＲ領域を含有する分子については、例えば、Ｖａｕｇｈａｎ ＆ Ｓｏｌｌａｚｚｏ  ２００１，Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ＆ Ｈｉｇｈ  Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ，４：４１７〜４３０に記載されている。４１８頁（右欄−３（Ｏｕｒ  Ｓｔｒａｔｅｇｙ  ｆｏｒ  Ｄｅｓｉｇｎ））に、フレームワーク領域内に散在するＨ１およびＨ２  ＣＤＲ超可変領域のみを含むミニボディについて記載されている。ミニボディは、標的に結合することが可能であると記載されている。Ｐｅｓｓｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｎａｔｕｒｅ，３６２：３６７〜９、およびＢｉａｎｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２３６：６４９〜５９は、Ｖａｕｇｈａｎ ＆ Ｓｏｌｌａｚｚｏによって参照され、Ｈ１およびＨ２ミニボディ、ならびにその特性についてより詳細に記載している。Ｑｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２５：９２１〜９では、２つの結合されたＣＤＲからなる分子が抗原に結合することが可能であることが実証されている。Ｑｕｉｏｃｈｏ  １９９３，Ｎａｔｕｒｅ，３６２：２９３〜４は、「ミニボディ」技術の概要を提供している。Ｌａｄｎｅｒ  ２００７，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２５：８７５〜７は、２つのＣＤＲを含有する分子が抗原結合活性を保持することが可能であると見解を述べている。
【００４５】
単一のＣＤＲ領域を含有する抗体分子については、例えば、Ｌａｕｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，ＪＢＣ，２７２：３０９３７〜４４に記載されており、ここでは、ＣＤＲに由来する一連のヘキサペプチドが抗原結合活性を示すことが実証され、完全な単一のＣＤＲの合成ペプチドが強力な結合活性を示すことが留意されている。Ｍｏｎｎｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，ＪＢＣ，２７４：３７８９〜９６では、様々な１２量体ペプチドおよび関連するフレームワーク領域が、抗原結合活性を有することが示されており、ＣＤＲ３様ペプチド単独で抗原に結合することが可能であると見解を述べている。Ｈｅａｐ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．，８６：１７９１〜１８００では、「マイクロ抗体」（単一のＣＤＲを含有する分子）は抗原に結合することが可能であることが報告されており、抗ＨＩＶ抗体からの環状ペプチドが、抗原結合活性および機能を有することが示されている。Ｎｉｃａｉｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，１３：１８８２〜９１では、単一のＣＤＲが、そのリゾチーム抗原に対する抗原結合活性および親和性を付与し得ることが示されている。
【００４６】
したがって、５個、４個、３個またはそれ以下のＣＤＲを有する抗体分子は、それらが由来する完全長抗体の抗原結合特性を保持することが可能である。
【００４７】
抗体分子は、完全長抗体の誘導体またはそのような抗体のフラグメントであってもよい。誘導体が、対応するフルサイズ抗体と同じ抗原結合特徴を有するということは、フルサイズ抗体と同じ標的上のエピトープに結合することを意味する。
【００４８】
したがって、本明細書で用いる場合、「抗体分子」という用語は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、合成抗体、組換えで生成された抗体、多重特異性抗体、二重特異性抗体、ヒト抗体、ヒト由来抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、一本鎖抗体、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆ（ａｂ’）フラグメント、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、抗体重鎖、抗体軽鎖、抗体重鎖のホモ二量体、抗体軽鎖のホモ二量体、抗体重鎖のヘテロ二量体、抗体軽鎖のヘテロ二量体、そのようなホモ二量体およびヘテロ二量体の抗原結合機能的フラグメントを含む、すべての種類の抗体分子、ならびにそれらの機能的フラグメントおよびそれらの誘導体を含む。
【００４９】
さらに、本明細書で用いる場合、「抗体分子」という用語は、特に明記しない限り、ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＥを含む、すべてのクラスの抗体分子および機能的フラグメントを含む。
【００５０】
いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ１である。当業者は、マウスＩｇＧ２ａおよびヒトＩｇＧ１が、活性化Ｆｃγ受容体と結合し、例えばＡＤＣＰおよびＡＤＣＣによる、活性化Ｆｃγ受容体を担持する免疫細胞の活性化により、標的細胞の除去を活性化する能力を共有していることを認識する。このように、マウスＩｇＧ２ａがマウスにおける除去に好ましいアイソタイプである実施形態では、ヒトＩｇＧ１は、そのような実施形態においてヒトにおける除去に好ましいアイソタイプである。
【００５１】
上記の概略のように、抗体分子の異なる種類および形態は本発明に包含され、免疫学分野の当業者には既知であろう。治療目的に使用される抗体は、多くの場合、抗体分子の特性を修正する追加の構成成分を用いて改変されることが公知である。
【００５２】
したがって、本発明の抗体分子または本発明に従って使用される抗体分子（例えば、モノクローナル抗体分子、および／またはポリクローナル抗体分子、および／または二重特異性抗体分子）は、検出可能な部分および／または細胞傷害性部分を備える場合を含む。
【００５３】
「検出可能な部分」とは、酵素、放射性原子、蛍光部分、化学発光部分、生物発光部分で構成される群からの１つ以上を含む。検出可能な部分により、抗体分子をインビトロ、および／またはインビボ、および／またはエクスビボで視覚化することが可能になる。
【００５４】
「細胞傷害性部分」とは、放射性部分および／または酵素が挙げられ、酵素はカスパーゼおよび／または毒素であり、毒素は細菌毒素または毒液であり、細胞傷害性部分は細胞溶解を誘導することが可能である。
【００５５】
さらに、抗体分子は、単離された形態および／または精製された形態であってよく、ならびに／またはＰＥＧ化されてもよいことを含む。ＰＥＧ化は、その挙動を修正する、例えば、その流体力学的サイズを増加させ、腎クリアランスを予防することでその半減期を延ばすように、ポリエチレングリコールポリマーを抗体分子または誘導体などの分子に付加する方法である。
【００５６】
上述のように、抗体のＣＤＲは、抗体標的に結合する。本明細書に記載の各ＣＤＲへのアミノ酸の割り当ては、Ｋａｂａｔ  ＥＡ  ｅｔ  ａｌ．１９９１、“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１〜３２４２，ｐｐ  ｘｖ−ｘｖｉｉによる定義に従う。
【００５７】
当業者が認識するように、アミノ酸を各ＣＤＲに割り当てるための他の方法も存在する。例えば、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ  ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ（ＩＭＧＴ（商標））（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／およびＡｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，２００１により出版のＬｅｆｒａｎｃ  ａｎｄ  Ｌｅｆｒａｎｃ“Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ＦａｃｔｓＢｏｏｋ”）。
【００５８】
さらなる実施形態では、本発明の抗体分子、または本発明に従って使用される抗体分子は、本明細書で提供される特定の抗体と競合することが可能である抗体分子であり、特定の標的に結合するため、例えば、配列番号１〜１９４に提示されるアミノ酸配列のうちのいずれかを含む抗体分子である。
【００５９】
「競合することが可能である」とは、競合抗体が、本明細書で定義される抗体分子の特定の標的への結合を少なくとも部分的に抑制またはその他の方法で干渉する能力があることを意味する。
【００６０】
例えば、そのような競合抗体分子は、本明細書に記載の抗体分子の結合を、少なくとも約１０％、例えば少なくとも約２０％、または少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、約１００％抑制する能力があり得、および／あるいは特定の標的への結合を防止もしくは低減する本明細書に記載の抗体の結合能力を少なくとも約１０％、例えば少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％抑制することが可能であり得る。
【００６１】
競合結合は、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）などの当業者に公知の方法によって判定することができる。
【００６２】
ＥＬＩＳＡアッセイを使用して、エピトープ修飾抗体または遮断抗体を評価することができる。競合抗体を同定するために好適な追加の方法は、参照により本明細書に組み込まれるＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｈａｒｌｏｗ ＆ Ｌａｎｅに開示されている（例えば、５６７〜５６９頁、５７４〜５７６頁、５８３頁、および５９０〜６１２頁、１９８８，ＣＳＨＬ，ＮＹ，ＩＳＢＮ ０−８７９６９−３１４−２を参照されたい）。
【００６３】
抗体が、定義された標的分子または抗原に特異的に結合する、または相互作用することは公知である。つまり、抗体は、抗体の標的に優先的かつ選択的に結合し、標的ではない分子には結合しない。
【００６４】
本発明による抗体の標的、または本発明に従って使用される抗体の標的は、細胞の表面で発現する、すなわち、それらは抗体にとっての、エピトープ（あるいは、これに関連して細胞表面エピトープとして既知である）を含む細胞表面抗原である。細胞表面抗原およびエピトープは、免疫学または細胞生物学の当業者によって容易に理解される用語である。
【００６５】
「細胞表面抗原」とは、細胞表面抗原が、細胞膜の細胞外側に露出されているが、細胞膜の細胞外側に一時的にのみ露出される場合を含む。「一時的に露出される」とは、細胞表面抗原が、細胞内に内部移行する、あるいは細胞膜の細胞外側から細胞外空間に放出されている場合を含む。細胞表面抗原は、切断によって細胞膜の細胞外側から放出され得、これはプロテアーゼによって媒介され得る。
【００６６】
また、細胞表面抗原は、細胞膜に結合し得るが、一時的にのみ細胞膜と会合する場合を含む。「一時的に会合する」とは、細胞表面抗原が、細胞膜の細胞外側から細胞外空間に放出されている場合を含む。細胞表面抗原は、切断によって細胞膜の細胞外側から放出され得、これはプロテアーゼによって媒介され得る。
【００６７】
さらに、細胞表面抗原は、ペプチド、またはポリペプチド、または炭水化物、またはオリゴ糖鎖、または脂質、および／またはタンパク質、もしくは糖タンパク質、もしくはリポタンパク質上に存在するエピトープである場合を含む。
【００６８】
タンパク質の結合を評価する方法は、生化学および免疫学の当業者には既知である。当業者であれば、それらの方法を使用して、抗体の標的への結合および／または抗体のＦｃ領域のＦｃ受容体への結合、ならびにそれらの相互作用の相対的な強度、もしくは特異性、もしくは抑制、もしくは防止、もしくは低減を評価することができることを理解するであろう。タンパク質の結合を評価するために使用され得る方法の例は、例えば、イムノアッセイ、ＢＩＡｃｏｒｅ、ウェスタンブロット、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、および酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）がある（抗体特異性に関する考察については、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ第２版，Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、３３２〜３３６頁（１９８９）を参照されたい）。
【００６９】
したがって、「特異的に結合する抗体分子」または「標的特異性抗体分子」とは、抗体分子が標的に特異的に結合するが、非標的には結合しないか、あるいは非標的に、標的よりも（例えば低い親和性で）弱く結合する場合を含む。
【００７０】
また、抗体が、非標的よりも標的に少なくとも２倍強く、または少なくとも５倍強く、または少なくとも１０倍強く、または少なくとも２０倍強く、または少なくとも５０倍強く、または少なくとも１００倍強く、または少なくとも２００倍強く、または少なくとも５００倍強く、または少なくとも約１０００倍強く、特異的に結合するという意味を含む。
【００７１】
加えて、抗体が標的に、少なくとも約１０−１Ｋｄ、または少なくとも約１０−２Ｋｄ、または少なくとも約１０−３Ｋｄ、または少なくとも約１０−４Ｋｄ、または少なくとも約１０−５Ｋｄ、または少なくとも約１０−６Ｋｄ、または少なくとも約１０−７Ｋｄ、または少なくとも約１０−８Ｋｄ、または少なくとも約１０−９Ｋｄ、または少なくとも約１０−１０Ｋｄ、または少なくとも約１０−１１Ｋｄ、または少なくとも約１０−１２Ｋｄ、または少なくとも約１０−１３Ｋｄ、または少なくとも約１０−１４Ｋｄ、または少なくとも約１０−１５ＫｄのＫｄで結合する場合、抗体が標的に特異的に結合するという意味を含む。
【００７２】
本明細書で用いる場合、免疫細胞除去抗体分子または免疫細胞不活性化抗体分子という用語は、患者への投与時に免疫細胞の表面に発現する標的に特異的に結合する抗体分子を指し、この結合により、免疫細胞の除去または不活性化がもたらされる。いくつかの実施形態では、標的は、腫瘍上に、または腫瘍の微小環境下で優先的に発現する標的である。
【００７３】
抗体分子が、本発明の意味において免疫細胞を除去する抗体分子であるか、否かを判定するために、インビトロ抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）アッセイ、または抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）アッセイを用いることが可能である。抗体分子が免疫細胞除去抗体分子であるかどうかを判定するために、同じアッセイが、除去抗体の存在下および非存在下で行われ、試験される除去抗体が実際に除去しているかどうかを示す。
【００７４】
ＡＤＣＣアッセイは、標的細胞をカルセインＡＭ（アセチルメチルエステル）で標識し、続いて希釈濃度の抗体を添加することによって行うことができる。次いで、標的細胞を、５０：１のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比率でヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）とともに３７°Ｃで、４時間共培養する。プレートを４００×ｇで５分間遠心分離して細胞をペレット化し、上清を白色の９６ウェルプレートに移す。カルセイン放出は、４８５ｎｍの励起波長および５３０ｎｍの発光波長を用いて、Ｖａｒｉｏｓｋａｎ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して測定する。最大放出の割合は、次のように算出する：最大放出％＝（試料／トリトン処置）＊１００。
【００７５】
ＡＤＣＰアッセイは、５ｍＭのカルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）で、室温で１０分間、標的細胞を標識し、その後ウシ胎仔血清含有培地中で洗浄することで行うことができる。次いで、ＣＦＳＥ標識された標的を希釈濃度の抗体でオプソニン化し、その後、１：５のＥ：Ｔ比率で骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）とともに９６ウェルプレートで、３７°Ｃで１時間共培養する。次いで、ＢＭＤＭを室温で１５分間、抗Ｆ４／８０−アロフィコシアニンで標識し、ＰＢＳで２回洗浄する。プレートを氷上に保持し、ウェルを削り取ってＢＭＤＭを収集し、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（ＢＤ）を使用するフローサイトメトリーによって食作用を評価し、Ｆ４／８０＋細胞集団内のＦ４／８０＋ＣＦＳＥ＋細胞の割合を判定する。
【００７６】
Ｃｌｅａｒｙ  ｅｔ  ａｌによってＪ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，Ａｐｒｉｌ  １２，２０１７，１６０１４７３に記載されている方法を用いることも可能である。
【００７７】
いくつかの実施形態では、ＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合する抗体分子は、ヒト抗体である。
【００７８】
いくつかの実施形態では、ＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合する抗体分子は、ヒト由来の抗体、すなわち、本明細書に記載されるように改変されたヒト由来の抗体である。
【００７９】
いくつかの実施形態では、ＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合する抗体分子は、ヒト化抗体、すなわち、ヒト抗体に対する類似性を高めるように改変された非ヒト由来の抗体である。ヒト化抗体は、例えば、マウス抗体またはラマ抗体であってよい。
【００８０】
いくつかの実施形態では、ＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合する抗体分子は、以下の定常領域（ＣＨおよびＣＬ）を含む：
ＩｇＧ１−ＣＨ［配列番号１］
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬ−ＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ−ＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡ−ＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰ−ＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰ−ＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
ＩｇＧ１−ＣＬ［配列番号２］
ＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＳＳＰＶ−ＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ
【００８１】
これらの定常領域（配列番号１および配列番号２）は、ヒト由来である。Ｆｃ領域は、そのＦｃ領域を介してＦｃγ受容体への結合を低減させるためにさらに改変されている。本明細書で言及されるように、いくつかの実施形態では、配列番号１がＮ２９７Ｑ置換により非グリコシル化され、次いで、ＩｇＧ１−ＣＨが以下のＣＨ配列［配列番号１９５］を有し、太字でマークされている２９７Ｑ残基を有することが好ましい。
2021510299.tif 000003
【００８２】
いくつかの実施形態および／または例では、マウス抗体分子が使用される。これらは代理抗体にも使用できる。これらは、以下の定常領域（ＣＨおよびＣＬ）を含む。
2021510299.tif 000004
ＣＬ［配列番号１９７］
ＱＰＫＳＳＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＥＴＮＫＡＴＬＶＣＴＩＴＤＦＹＰＧＶＶＴＶＤＷＫＶＤＧＴＰＶＴＱＧＭＥＴ−ＴＱＰＳＫＱＳＮＮＫＹＭＡＳＳＹＬＴＬＴＡＲＡＷＥＲＨＳＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＨＴＶＥＫＳＬＳＲＡＤＣＳ
【００８３】
したがって、これらの定常領域（配列番号１９６および配列番号１９７）はマウス由来のものである。配列番号１９６はＮ２９７Ａ変異を含む（上の配列では、２９７Ａ残基は太字で示されている）。マウス配列中のこのＮ２９７Ａ変異は、ヒト配列中のＮ２９７Ｑ変異に対応する。
【００８４】
いくつかの実施形態では、ＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合する抗体分子は、以下のクローンのうちの１つ以上の配列を含む：
抗体クローン：１Ａ０１
１Ａ０１−ＶＨ［配列番号：３］
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＹＹＭＮＷＩＲＱＴＰＧＫＧＬＥＷＶＳＬＩＧ−ＷＤＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＥＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＡＹＳＧＹＥＬＤＹ−
ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
１Ａ０１−ＶＬ［配列番号２７］
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＡＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩ−
ＹＤＮＮＮＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＲＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＡＳＩ−
ＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ
ＣＤＲ領域
ＣＤＲＨ１：ＤＹＹＭＮ［配列番号５１］
ＣＤＲＨ２：ＬＩＧＷＤＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ［配列番号５２］
ＣＤＲＨ３：ＡＹＳＧＹＥＬＤＹ［配列番号５３］
ＣＤＲＬ１：ＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＡＶＮ［配列番号５４］
ＣＤＲＬ２：ＤＮＮＮＲＰＳ［配列番号５５］
ＣＤＲＬ３：ＡＡＷＤＤＳＬＮＡＳＩ［配列番号５６］
抗体クローン：１Ｂ０７
１Ｂ０７−ＶＨ［配列番号４］
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＦＴＲＹＤ−ＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＲＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥ−
ＮＩＤＡＦＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
１Ｂ０７−ＶＬ［配列番号２８］
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＡＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩ−ＹＤＮＱＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＲＳＥＤＥＡＤＹＹＣＥ−
ＡＷＤＤＲＬＦＧＰＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ
ＣＤＲ領域
ＣＤＲＨ１：ＳＹＧＭＨ［配列番号５７］
ＣＤＲＨ２：ＦＴＲＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＲＧ［配列番号５８］
ＣＤＲＨ３：ＥＮＩＤＡＦＤＶ［配列番号５９］
ＣＤＲＬ１：ＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＡＶＮ［配列番号６０］
ＣＤＲＬ２：ＤＮＱＱＲＰＳ［配列番号６１］
ＣＤＲＬ３：ＷＤＤＲＬＦＧＰＶ［配列番号６２］
抗体クローン：１Ｃ０４
１Ｃ０４−ＶＨ［配列番号５］
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲ−
ＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＳＤＳＧＡＧＲＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤ−
ＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＴＨＤＳＧＥＬＬＤＡＦＤＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
１Ｃ０４−ＶＬ［配列番号２９］
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＨＶＬＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩ−ＹＧＮＳＮＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＲ−
ＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＧＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ
ＣＤＲ領域
ＣＤＲＨ１：ＳＹＡＭＳ［配列番号６３］
ＣＤＲＨ２：ＳＩＳＤＳＧＡＧＲＹＹＡＤＳＶＥＧ［配列番号６４］
ＣＤＲＨ３：ＴＨＤＳＧＥＬＬＤＡＦＤＩ［配列番号６５］
ＣＤＲＬ１：ＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＨＶＬ［配列番号６６］
ＣＤＲＬ２：ＧＮＳＮＲＰＳ［配列番号６７］
ＣＤＲＬ３：ＡＡＷＤＤＳＬＮＧＷＶ［配列番号６８］
抗体クローン：１Ｅ０５
１Ｅ０５−ＶＨ［配列番号６］
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＴＹＡＭＮＷＶＲＱＶＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＹＤ−ＧＳＮＫＮＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＮＦＤＮＳＧＹＡＩＰＤＡＦＤ−ＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
１Ｅ０５−ＶＬ［配列番号３０］
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩ−ＹＤＮＮＳＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＲＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＧＧ−
ＰＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ
ＣＤＲ領域
ＣＤＲＨ１：ＴＹＡＭＮ［配列番号６９］
ＣＤＲＨ２：ＶＩＳＹＤＧＳＮＫＮＹＶＤＳＶＫＧ［配列番号７０］
ＣＤＲＨ３：ＮＦＤＮＳＧＹＡＩＰＤＡＦＤＩ［配列番号７１］
ＣＤＲＬ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ［配列番号７２］
ＣＤＲＬ２：ＤＮＮＳＲＰＳ［配列番号７３］
ＣＤＲＬ３：ＡＡＷＤＤＳＬＧＧＰＶ［配列番号７４］
抗体クローン：２Ａ０９
２Ａ０９−ＶＨ［配列番号７］
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＡＷＭＳＷＶＲ−ＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＹＩＳＲＤＡＤＩＴＨＹＰＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣ−ＴＴＧＦＤＹＡＧＤＤＡＦＤＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
２Ａ０９−ＶＬ［配列番号３１］
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＡＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩ−ＹＧＮＳＤＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＲ−
ＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＧＲＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ
ＣＤＲ領域
ＣＤＲＨ１：ＮＡＷＭＳ［配列番号７５］
ＣＤＲＨ２：ＹＩＳＲＤＡＤＩＴＨＹＰＡＳＶＫＧ［配列番号７６］
ＣＤＲＨ３：ＧＦＤＹＡＧＤＤＡＦＤＩ［配列番号７７］
ＣＤＲＬ１：ＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＡＶＮ［配列番号７８］
ＣＤＲＬ２：ＧＮＳＤＲＰＳ［配列番号７９］
ＣＤＲＬ３：ＡＡＷＤＤＳＬＮＧＲＷＶ［配列番号８０］
抗体クローン：２Ｂ０８
２Ｂ０８−ＶＨ［配列番号８］
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＹＹＭＳＷＶＲ−ＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＬＩＧＨＤＧＮＮＫＹＹＬＤＳＬＥＧＲＦＴＩＳＲＤ−ＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＡＴＤＳＧＹＤＬＬＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
２Ｂ０８−ＶＬ［配列番号３２］
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＡＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰ−ＫＬＬＩＹＹＤＤＬＬＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＲＳＥＤＥＡＤＹＹＣＴＴ−
ＷＤＤＳＬＳＧＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ
ＣＤＲ領域
ＣＤＲＨ１：ＤＹＹＭＳ［配列番号８１］
ＣＤＲＨ２：ＬＩＧＨＤＧＮＮＫＹＹＬＤＳＬＥＧ［配列番号８２］
ＣＤＲＨ３：ＡＴＤＳＧＹＤＬＬＹ［配列番号８３］
ＣＤＲＬ１：ＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＡＶＮ［配列番号８４］
ＣＤＲＬ２：ＹＤＤＬＬＰＳ［配列番号８５］
ＣＤＲＬ３：ＴＴＷＤＤＳＬＳＧＶＶ［配列番号８６］
抗体クローン：２Ｅ８−ＶＨ
２Ｅ８−ＶＨ［配列番号９］
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳ−ＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＹＹＭＳＷＩＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＧＦＳＤＤＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤ−ＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＧＧＤＧＳＧＷＳＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
２Ｅ８−ＶＬ［配列番号３３］
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＡＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＤＮＮ−ＫＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＲＳＥＤＥＡＤＹＹ−
ＣＡＴＷＤＤＳＬＲＧＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ
ＣＤＲ領域
ＣＤＲＨ１：ＤＹＹＭＳ［配列番号８７］
ＣＤＲＨ２：ＡＩＧＦＳＤＤＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ［配列番号８８］
ＣＤＲＨ３：ＧＤＧＳＧＷＳＦ［配列番号８９］
ＣＤＲＬ１：ＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＡＶＮ［配列番号９０］
ＣＤＲＬ２：ＤＮＮＫＲＰＳ［配列番号９１］
ＣＤＲＬ３：ＡＴＷＤＤＳＬＲＧＷＶ［配列番号９２］
抗体クローン：５Ｃ０４
５Ｃ０４−ＶＨ［配列番号１０］
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＹＤ−ＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＷＲＤＡＦＤ−
ＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
５Ｃ０４−ＶＬ［配列番号３４］
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＤＮＱＲＰＳ
ＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＲＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＳＧＳＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ
ＣＤＲ領域
ＣＤＲＨ１：ＮＹＧＭＨ［配列番号９３］
ＣＤＲＨ２：ＶＩＳＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ［配列番号９４］
ＣＤＲＨ３：ＷＲＤＡＦＤＩ［配列番号９５］
ＣＤＲＬ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ［配列番号９６］
ＣＤＲＬ２：ＳＤＮＱＲＰＳ［配列番号９７］
ＣＤＲＬ３：ＡＡＷＤＤＳＬＳＧＳＷＶ［配列番号９８］
抗体クローン：５Ｃ０５
５Ｃ０５−ＶＨ［配列番号１１］
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＴＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＹＤ−ＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤ−
ＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＮＦＤＡＦＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
５Ｃ０５−ＶＬ［配列番号３５］
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＮＳ−ＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＲ−
ＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＧＱＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ
ＣＤＲ領域
ＣＤＲＨ１：ＴＹＧＭＨ［配列番号９９］
ＣＤＲＨ２：ＶＩＳＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ［配列番号１００］
ＣＤＲＨ３：ＥＮＦＤＡＦＤＶ［配列番号１０１］
ＣＤＲＬ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ［配列番号１０２］
ＣＤＲＬ２：ＳＮＳＱＲＰＳ［配列番号１０３］
ＣＤＲＬ３：ＡＡＷＤＤＳＬＮＧＱＶＶ［配列番号１０４］
抗体クローン：５Ｄ０７
５Ｄ０７−ＶＨ［配列番号１２］
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＴＹＧＭＨＷＶＲ−ＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＡＹＤＧＳＫＫＤＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤ−ＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＹＲＤＡＦＤＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
５Ｄ０７−ＶＬ［配列番号３６］
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩ−ＹＧＮＳＮＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＴＡＳＬＡＩＳＧＬＲ−
ＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＶＳＧＷＭＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ
ＣＤＲ領域
ＣＤＲＨ１：ＴＹＧＭＨ［配列番号１０５］
ＣＤＲＨ２：ＶＩＡＹＤＧＳＫＫＤＹＡＤＳＶＫＧ［配列番号１０６］
ＣＤＲＨ３：ＥＹＲＤＡＦＤＩ［配列番号１０７］
ＣＤＲＬ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ［配列番号１０８］
ＣＤＲＬ２：ＧＮＳＮＲＰＳ［配列番号１０９］
ＣＤＲＬ３：ＡＡＷＤＤＳＶＳＧＷＭ［配列番号１１０］
抗体クローン：５Ｅ１２
５Ｅ１２−ＶＨ［配列番号１３］
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＹＤ−ＧＩＮＫＤＹＡＤＳＭＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＲＫＤＡＦＤ−
ＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
５Ｅ１２−ＶＬ［配列番号３７］
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰ−ＫＬＬＩＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＲＳＥＤＥＡＤＹＹ−
ＣＡＴＷＤＤＳＬＮＧＬＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ
ＣＤＲ領域
ＣＤＲＨ１：ＳＹＧＭＨ［配列番号１１１］
ＣＤＲＨ２：ＶＩＳＹＤＧＩＮＫＤＹＡＤＳＭＫＧ［配列番号１１２］
ＣＤＲＨ３：ＥＲＫＤＡＦＤＩ［配列番号１１３］
ＣＤＲＬ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ［配列番号１１４］
ＣＤＲＬ２：ＳＮＮＱＲＰＳ［配列番号１１５］
ＣＤＲＬ３：ＡＴＷＤＤＳＬＮＧＬＶ［配列番号１１６］
抗体クローン：５Ｇ０８
５Ｇ０８−ＶＨ［配列番号１４］
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＮＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＹＤ−ＧＳＮＲＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＭＳＲＤ−
ＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＲＷＮＧＭＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
５Ｇ０８−ＶＬ［配列番号３８］
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩ−ＹＡＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＲ−
ＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＧＰＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ
ＣＤＲ領域
ＣＤＲＨ１：ＮＹＧＭＨ［配列番号：１１７］
ＣＤＲＨ２：ＶＩＳＹＤＧＳＮＲＹＹＡＤＳＶＫＧ［配列番号１１８］
ＣＤＲＨ３：ＤＲＷＮＧＭＤＶ［配列番号１１９］
ＣＤＲＬ１：ＳＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ［配列番号１２０］
ＣＤＲＬ２：ＡＮＮＱＲＰＳ［配列番号１２１］
ＣＤＲＬ３：ＡＡＷＤＤＳＬＮＧＰＷＶ［配列番号１２２］
抗体クローン：５Ｈ０６
５Ｈ０６−ＶＨ［配列番号１５］
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＹＤ−ＧＳＤＴＡＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＨＳＶＩＧＡＦＤ−
ＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
５Ｈ０６−ＶＬ［配列番号３９］
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＴＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＤＮＮ−ＫＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＲＳＥＤＥＡＤＹＹＣＳＳＹＡＧＳＮＮＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ
ＣＤＲ領域
ＣＤＲＨ１：ＳＹＧＭＨ［配列番号１２３］
ＣＤＲＨ２：ＶＩＳＹＤＧＳＤＴＡＹＡＤＳＶＫＧ［配列番号１２４］
ＣＤＲＨ３：ＤＨＳＶＩＧＡＦＤＩ［配列番号１２５］
ＣＤＲＬ１：ＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＴＶＮ［配列番号１２６］
ＣＤＲＬ２：ＤＮＮＫＲＰＳ［配列番号１２７］
ＣＤＲＬ３：ＳＳＹＡＧＳＮＮＶＶ［配列番号１２８］
抗体クローン：６Ａ０９
６Ａ０９−ＶＨ［配列番号１６］
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＴＳＹＤ−ＧＮＴＫＹＹＡＮＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＣＧＧ−
ＤＣＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
６Ａ０９−ＶＬ［配列番号４０］
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩ−ＹＧＮＳＮＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＲ−
ＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＥＧＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ
ＣＤＲ領域
ＣＤＲＨ１：ＳＹＧＭＨ［配列番号１２９］
ＣＤＲＨ２：ＶＴＳＹＤＧＮＴＫＹＹＡＮＳＶＫＧ［配列番号１３０］
ＣＤＲＨ３：ＥＤＣＧＧＤＣＦＤＹ［配列番号１３１］
ＣＤＲＬ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ［配列番号１３２］
ＣＤＲＬ２：ＧＮＳＮＲＰＳ［配列番号１３３］
ＣＤＲＬ３：ＡＡＷＤＤＳＬＮＥＧＶ［配列番号１３４］
抗体クローン：６Ｂ０１
６Ｂ０１−ＶＨ［配列番号１７］
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＹＤ−ＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＬＧＥＡＦＤ−
ＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
６Ｂ０１−ＶＬ［配列番号４１］
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＤＮＮ−ＫＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＲＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＴＷＤＤＳＬＳＧＰＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ
ＣＤＲ領域
ＣＤＲＨ１：ＮＹＧＭＨ［配列番号１３５］
ＣＤＲＨ２：ＶＩＳＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ［配列番号１３６］
ＣＤＲＨ３：ＤＱＬＧＥＡＦＤＩ［配列番号１３７］
ＣＤＲＬ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ［配列番号１３８］
ＣＤＲＬ２：ＤＮＮＫＲＰＳ［配列番号１３９］
ＣＤＲＬ３：ＡＴＷＤＤＳＬＳＧＰＶ［配列番号１４０］
抗体クローン：６Ｃ１１
６Ｃ１１−ＶＨ［配列番号１８］
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＧＭＳＷＶＲ−ＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＳＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤ−ＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＧＧＤＩＤＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
６Ｃ１１−ＶＬ［配列番号４２］
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＦＧＡＧＹＤＶＨＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＥＮＮ−ＫＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＲＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＧＰＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ
ＣＤＲ領域
ＣＤＲＨ１：ＤＹＧＭＳ［配列番号１４１］
ＣＤＲＨ２：ＡＩＳＧＳＧＳＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ［配列番号１４２］
ＣＤＲＨ３：ＧＤＩＤＹＦＤＹ［配列番号１４３］
ＣＤＲＬ１：ＴＧＳＳＳＮＦＧＡＧＹＤＶＨ［配列番号１４４］
ＣＤＲＬ２：ＥＮＮＫＲＰＳ［配列番号１４５］
ＣＤＲＬ３：ＡＡＷＤＤＳＬＮＧＰＶ［配列番号１４６］
抗体クローン：６Ｃ１２
６Ｃ１２−ＶＨ［配列番号１９］
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＹＤ−ＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＲＲＤＡＦＤ−
ＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
６Ｃ１２−ＶＬ［配列番号４３］
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰ−ＫＬＬＩＹＳＤＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＲＳＥＤＥＡＤＹＹ−
ＣＡＴＷＤＳＤＴＰＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ
ＣＤＲ領域
ＣＤＲＨ１：ＳＹＧＭＨ［配列番号１４７］
ＣＤＲＨ２：ＶＩＳＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ［配列番号１４８］
ＣＤＲＨ３：ＥＲＲＤＡＦＤＩ［配列番号１４９］
ＣＤＲＬ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ［配列番号１５０］
ＣＤＲＬ２：ＳＤＮＱＲＰＳ［配列番号１５１］
ＣＤＲＬ３：ＡＴＷＤＳＤＴＰＶ［配列番号１５２］
抗体クローン：６Ｄ０１
６Ｄ０１−ＶＨ［配列番号２０］
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＹＤ−ＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＤＨＳＡＡ−
ＧＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
６Ｄ０１−ＶＬ［配列番号４４］
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＴＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩ−ＹＧＮＳＩＲＰＳＧＧＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＲ−
ＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＳＷＤＤＳＬＳＳＰＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ
ＣＤＲ領域
ＣＤＲＨ１：ＳＹＧＭＨ［配列番号１５３］
ＣＤＲＨ２：ＶＩＳＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ［配列番号１５４］
ＣＤＲＨ３：ＤＨＳＡＡＧＹＦＤＹ［配列番号１５５］
ＣＤＲＬ１：ＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＴＶＮ［配列番号１５６］
ＣＤＲＬ２：ＧＮＳＩＲＰＳ［配列番号１５７］
ＣＤＲＬ３：ＡＳＷＤＤＳＬＳＳＰＶ［配列番号１５８］
抗体クローン：６Ｇ０３
６Ｇ０３−ＶＨ［配列番号２１］
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＧＳＹＧＭＨＷＶＲ−ＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＳＷＤＳＡＩＩＤＹＡＧＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤ−ＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＤＥＡＡＡＧＡＦＤＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
６Ｇ０３−ＶＬ［配列番号４５］
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩ−ＹＧＮＴＤＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＲ−
ＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＳＧＰＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ
ＣＤＲ領域
ＣＤＲＨ１：ＳＹＧＭＨ［配列番号１５９］
ＣＤＲＨ２：ＧＩＳＷＤＳＡＩＩＤＹＡＧＳＶＫＧ［配列番号１６０］
ＣＤＲＨ３：ＤＥＡＡＡＧＡＦＤＩ［配列番号１６１］
ＣＤＲＬ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ［配列番号１６２］
ＣＤＲＬ２：ＧＮＴＤＲＰＳ［配列番号１６３］
ＣＤＲＬ３：ＡＡＷＤＤＳＬＳＧＰＶＶ［配列番号１６４］
抗体クローン：６Ｇ０８
６Ｇ０８−ＶＨ［配列番号２２］
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＬＳＳＹＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＳ−ＧＳＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＳＶＧＡＹＡＮＤＡＦＤ−ＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
６Ｇ０８−ＶＬ［配列番号４６］
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＧ−ＤＴＮＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＲ−
ＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＧＰＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ
ＣＤＲ領域
ＣＤＲＨ１：ＳＹＧＩＳ［配列番号１６５］
ＣＤＲＨ２：ＧＩＳＧＳＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ［配列番号１６６］
ＣＤＲＨ３：ＳＶＧＡＹＡＮＤＡＦＤＩ［配列番号１６７］
ＣＤＲＬ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ［配列番号１６８］
ＣＤＲＬ２：ＧＤＴＮＲＰＳ［配列番号１６９］
ＣＤＲＬ３：ＡＡＷＤＤＳＬＮＧＰＶ［配列番号１７０］
抗体クローン：６Ｇ１１
６Ｇ１１−ＶＨ［配列番号２３］
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＭＡＶＩＳＹＤ−ＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＬＹＤＡＦＤ−
ＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
６Ｇ１１−ＶＬ［配列番号４７］
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩ−ＹＡＤＤＨＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＲＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＳＷＤＤＳＱＲＡＶＩ−
ＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ
ＣＤＲ領域
ＣＤＲＨ１：ＳＹＧＭＨ［配列番号１７１］
ＣＤＲＨ２：ＶＩＳＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ［配列番号１７２］
ＣＤＲＨ３：ＥＬＹＤＡＦＤＩ［配列番号１７３］
ＣＤＲＬ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ［配列番号１７４］
ＣＤＲＬ２：ＡＤＤＨＲＰＳ［配列番号１７５］
ＣＤＲＬ３：ＡＳＷＤＤＳＱＲＡＶＩ［配列番号１７６］
抗体クローン：６Ｈ０８
６Ｈ０８−ＶＨ［配列番号２４］
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＮＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＹＤ−ＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＫＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＹＫＤＡＦＤ−
ＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
６Ｈ０８−ＶＬ［配列番号４８］
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＳＮＴＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＤＮＮ−ＫＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＲＳＥＤＥＡＤＹＹＣＱＡＷＧＴＧＩＲＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ
ＣＤＲ領域
ＣＤＲＨ１：ＮＹＧＭＨ［配列番号１７７］
ＣＤＲＨ２：ＶＩＳＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ［配列番号１７８］
ＣＤＲＨ３：ＥＹＫＤＡＦＤＩ［配列番号１７９］
ＣＤＲＬ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＳＮＴＶＮ［配列番号１８０］
ＣＤＲＬ２：ＤＮＮＫＲＰＳ［配列番号１８１］
ＣＤＲＬ３：ＱＡＷＧＴＧＩＲＶ［配列番号１８２］
抗体クローン：７Ｃ０７
７Ｃ０７−ＶＨ［配列番号２５］
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＹＤ−ＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＱＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＦＧＹＩＩＬＤＹ−
ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
７Ｃ０７−ＶＬ［配列番号４９］
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＴＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩ−ＹＲＤＹＥＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＲ−
ＳＥＤＥＡＤＹＹＣＭＡＷＤＤＳＬＳＧＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ
ＣＤＲ領域
ＣＤＲＨ１：ＳＹＧＭＨ［配列番号１８３］
ＣＤＲＨ２：ＶＩＳＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ［配列番号１８４］
ＣＤＲＨ３：ＥＦＧＹＩＩＬＤＹ［配列番号１８５］
ＣＤＲＬ１：ＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＴＶＮ［配列番号１８６］
ＣＤＲＬ２：ＲＤＹＥＲＰＳ［配列番号１８７］
ＣＤＲＬ３：ＭＡＷＤＤＳＬＳＧＶＶ［配列番号１８８］
抗体クローン：４Ｂ０２
４Ｂ０２−ＶＨ［配列番号２６］
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＨＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＹＤ−ＧＴＮＫＹＹＡＤＳＶＲＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＴＷ−
ＤＡＦＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
４Ｂ０２−ＶＬ［配列番号５０］
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＮＡＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＤＮＮ−ＫＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＲＳＥＤＥＡＤＹＹＣＱＡＷＤＳＳＴＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ
ＣＤＲ領域
ＣＤＲＨ１：ＮＨＧＭＨ［配列番号１８９］
ＣＤＲＨ２：ＶＩＳＹＤＧＴＮＫＹＹＡＤＳＶＲＧ［配列番号１９０］
ＣＤＲＨ３：ＥＴＷＤＡＦＤＶ［配列番号１９１］
ＣＤＲＬ１：ＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＮＡＮ［配列番号１９２］
ＣＤＲＬ２：ＤＮＮＫＲＰＳ［配列番号１９３］
ＣＤＲＬ３：ＱＡＷＤＳＳＴＶＶ［配列番号１９４］
【００８５】
いくつかの実施形態、時として好ましい実施形態では、ＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合する抗体分子は、次のＣＤＲ領域、配列番号１７１（ＣＤＲＨ１）、配列番号１７２（ＣＤＲＨ２）、配列番号１７３（ＣＤＲＨ３）、配列番号１７４（ＣＤＲＬ１）、配列番号１７５（ＣＤＲＬ２）および配列番号１７６（ＣＤＲＬ３）、すなわちクローン６Ｇ１１のＣＤＲ領域を含む。
【００８６】
いくつかの実施形態、時として好ましい実施形態では、ＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合する抗体分子は、次の定常領域、配列番号１（ＣＨ）および配列番号２（ＣＬ）、ならびに以下の可変領域、配列番号２３（ＶＬ）および配列番号４７（ＶＨ）、すなわち、クローン６Ｇ１１の定常領域および可変領域を含み、この抗体分子は、さらに、そのＦｃ領域を介してＦｃγ受容体への結合が低減するように改変されている。いくつかの実施形態、時として好ましい実施形態では、ＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合する抗体分子は、次の定常領域、配列番号１９５（ＣＨ）および配列番号２（ＣＬ）、ならびに次の可変領域、配列番号２３（ＶＬ）および配列番号４７（ＶＨ）、すなわちＮ２９７Ｑ変異体を含むクローン６Ｇ１１の定常領域と可変領域を含む。
【００８７】
いくつかの実施形態では、免疫細胞除去抗体または免疫細胞不活性化抗体分子は、ヒト抗体分子またはヒト由来の抗体分子である。いくつかのこのような実施形態では、ヒト抗体分子またはヒト由来の抗体分子は、ＩｇＧ抗体である。いくつかのこのような実施形態では、ヒト抗体分子またはヒト由来の抗体分子は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ２抗体である。
【００８８】
いくつかの実施形態では、免疫細胞除去抗体分子または免疫細胞不活性化抗体分子は、ヒト化抗体分子である。
【００８９】
いくつかの実施形態では、免疫細胞除去抗体分子または免疫細胞不活性化抗体分子は、キメラ抗体である。
【００９０】
上で言及されるように、免疫細胞除去抗体または免疫細胞不活性化抗体は、ＦｃγＲに結合する能力を有する必要がある。
【００９１】
本発明による免疫細胞除去抗体分子または免疫細胞不活性化抗体分子が結合する標的は、ＣＴＬＡ−４、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＴＮＦＲ２、ＰＤ−Ｌ１、ＩＬ−２Ｒ、およびＧＩＴＲからなる群から選択され得る。
【００９２】
本発明のいくつかの実施形態では、本発明による免疫細胞除去抗体分子または免疫細胞不活性化抗体分子が結合する標的は、ＣＴＬＡ−４である。ＣＴＬＡ−４、すなわち、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４の略語であるＣＴＬＡ４は、ＣＤ１５２としても既知である。それは、免疫チェックポイントとして機能し、免疫応答を下方調節するタンパク質受容体である。ＣＴＬＡ４は制御性Ｔ細胞において恒常的に発現されるが、活性化後に通常のＴ細胞でのみ増加する−特に癌において注目すべき現象である。いくつかのこのような実施形態では、免疫細胞除去抗体分子は、イピリムマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  ＳｑｕｉｂｂからのＹｅｒｖｏｙ（登録商標）など）である。いくつかのこのような実施形態では、免疫細胞除去抗体分子は、トレメリムマブ（ＣＰ−６７５，２０６、旧称チシリムマブ）であり、これはＣＴＬＡ−４に対する完全ヒトモノクローナル抗体であり、これまでＰｆｉｚｅｒによる開発下にあり、現在はＭｅｄＩｍｍｕｎｅによる臨床開発中である。
【００９３】
本発明のいくつかの実施形態では、少なくとも１つの標的は４−１ＢＢであり、これはＣＤ１３７および腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー９（ＴＮＦＲＳＦ９）とも表される。４−１ＢＢは、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化後にＴｒｅｇ上に発現し、そのライゲーションが、マウスにおけるウイルスおよびＢ細胞リンパ腫に対する最適な防御ＣＤ８Ｔ細胞応答のために必要とされる。抗４−１ＢＢ特異抗体は、インビトロで抗原に刺激されたＴ細胞の増殖および生存を向上させ、抗ＣＤ４０と同様に、抗４−１ＢＢモノクローナル抗体は、主にＣＤ８Ｔ細胞に依存して前臨床癌モデルにおいて抗腫瘍免疫を促進する。いくつかのこのような実施形態では、免疫細胞除去抗体分子は、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂにより開発されたヒト化アゴニストＩｇＧ４モノクローナル抗体のウレルマブである。いくつかのこのような実施形態では、免疫細胞除去抗体分子は、Ｐｆｉｚｅｒにより開発された４−１ＢＢのヒトＨｕＣＡＬモノクローナル抗体アゴニストのウトミルマブ（（ＰＦ−０５０８２５６６、ＰＦ−２５６６、およびＰＦ−５０８２５６６とも表される）である。
【００９４】
本発明のいくつかの実施形態では、少なくとも１つの標的はＯＸ４０である。腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー、メンバー４（ＴＮＦＲＳＦ４）、およびＣＤ１３４としても既知であるＯＸ４０は、二次共刺激免疫チェックポイント分子である。いくつかのそのような実施形態では、免疫細胞除去抗体分子は、ＭＥＤＩ６４６９（９Ｂ１２）、ＭＥＤＩ０５６２、ＰＦ−０４５１８６００、ＩＮＣＡＧＮ０１９４９、ＢＭＳ−９８６１７８、ＭＯＸＲ０９１６、ＧＳＫ３１７４９９８、ＭＥＤＩ６３８３である（例えば、Ｂｕｃｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ２０１８  １３１：３９〜４８の表１を参照されたい）。
【００９５】
本発明のいくつかの実施形態では、少なくとも１つの標的はＴＮＦＲ−２である。腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１Ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ）およびＣＤ１２０ｂとしても既知である、腫瘍壊死因子受容体２（ＴＮＦＲ−２またはＴＮＦＲ２）は、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦα）に結合する膜受容体である。
【００９６】
本発明のいくつかの実施形態では、本発明による免疫細胞除去抗体分子または免疫細胞不活性化抗体分子が結合する標的は、プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）であり、ＣＤ２７４またはＢ７ホモログ１（Ｂ７−Ｈ１）としても既知である。
【００９７】
本発明のいくつかの実施形態では、少なくとも１つの標的は、ＩＬ−２Ｒである。ＩＬ−２Ｒは、ＣＤ２５としても既知であり、主に制御性Ｔ細胞に高度に発現する。
【００９８】
本発明のいくつかの実施形態では、少なくとも１つの標的は、ＧＩＴＲである。ＧＩＴＲは、ＴＮＦＳＦＲのメンバーであり、主に制御性Ｔ細胞上にも発現する。
【００９９】
いくつかの実施形態において、ＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合する抗体分子および免疫細胞除去抗体分子または免疫細胞不活性化抗体分子は、同時に患者に投与される。すなわち、それらは同時に投与されるか、または互いに非常に近い時間内に別々に投与されるいずれかを意味する。
【０１００】
いくつかの実施形態では、ＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合する抗体分子は、免疫細胞除去抗体分子または免疫細胞不活性化抗体分子の投与前に患者に投与される。このような連続投与は、２つの抗体を時間的に分離することで達成され得る。代替的に、または第１の選択肢と組み合わせて、連続投与は、抗体分子が免疫細胞除去抗体分子に先立って癌に達するように腫瘍内投与などの方法で、ＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合する抗体分子の投与により、次いで、抗体分子が、ＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合する抗体分子の後に癌に達するように全身投与などの方法で投与される、２つの抗体分子の空間的分離によっても達成されてよい。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、免疫細胞除去抗体は、ＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合する抗体分子の投与前に患者に投与される。このような連続投与は、上記のように達成され得る。
【０１０２】
例えば、薬剤が体に吸収される速度を変更するように、薬剤は、異なる添加物で改変することができ、例えば身体への特定の投与経路を可能にするように異なる形態で改変することができることは、医薬当業者には既知であろう。
【０１０３】
したがって、本発明の組成物、および／または抗体、および／または薬物は、賦形剤および／もしくは薬学的に許容される担体および／もしくは薬学的に許容される希釈剤および／もしくはアジュバントと組み合わせる場合を含む。
【０１０４】
本発明の組成物、および／または抗体、および／または薬物は、抗酸化剤、および／もしくは緩衝剤、および／もしくは静菌剤、および／もしくは意図するレシピエントの血液と製剤を等張にする溶質を含有することができる、水性および／または非水性の無菌注射溶液、ならびに／または懸濁剤および／もしくは増粘剤を含むことができる水性および／または非水性の無菌懸濁液を含む非経口投与に好適であり得る場合を含む。本発明の組成物、および／または抗体、および／または薬剤、および／または薬物は、単位用量または複数回投与の容器、例えば、密封されたアンプルおよびバイアルで提供されてもよく、使用直前に無菌液担体、例えば注射用水の添加のみを必要とするフリーズドライ（すなわち、凍結乾燥）状態で保存されてもよい。
【０１０５】
即時注射液および懸濁液剤は、前述の種類の無菌散剤、および／または顆粒剤、および／または錠剤から調製され得る。
【０１０６】
ヒト患者への非経口投与の場合、ＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合する抗体分子、および／または免疫細胞除去抗体分子もしくは免疫細胞不活性化抗体分子の１日投与量レベルは通常、１ｍｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ（患者体重）であり、あるいは場合によっては、最大１００ｍｇ／ｋｇを単回投与で、または分割投与で投与される。特別な状況下、例えば長期投与と組み合わせて、より低い用量を使用してもよい。いずれにしても、医師は個々の患者に最も好適であろう実際の投与量を判定し、それは特定の患者の年齢、体重、および反応によって変動するであろう。上述の投与量は平均的な場合の例示である。当然ながら、より高いかまたはより低い投与量範囲が妥当である個々の症例があり得、それらも本発明の範囲内に含まれる。
【０１０７】
通常は、本発明の組成物および／または薬物は、ＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合する抗体分子、および／または免疫細胞除去抗体もしくは免疫細胞不活性化抗体をおよそ２ｍｇ／ｍＬ〜１５０ｍｇ／ｍＬ、またはおよそ２ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度で含有する。好ましい実施形態において、本発明の薬物および／または組成物は、ＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合する抗体分子および／または免疫細胞除去抗体分子もしくは免疫細胞不活性化抗体分子を１０ｍｇ／ｍＬの濃度で含有する。
【０１０８】
一般に、ヒトでは、本発明の組成物、および／または抗体、および／または薬剤、および／または薬物の経口または非経口投与が好ましい経路であり、最も便利である。獣医学的使用の場合、本発明の組成物、および／または抗体、および／または薬剤、および／または薬物は、通常の獣医学診療に従って好適に許容される製剤として投与され、獣医師は、ある特定の動物にとって最も適切であろう投与計画および投与経路を判定するであろう。したがって、本発明は、（上述および以下でさらに説明する）様々な状態を治療するのに有効な量の、本発明の抗体および／または薬剤を含む薬学的製剤を提供する。好ましくは、組成物、および／または抗体、および／または薬剤、および／または薬物は、静脈内（ＩＶ）、皮下（ＳＣ）、筋肉内（ＩＭ）、または腫瘍内を含む群から選択される経路による送達に適合している。
【０１０９】
いくつかの実施形態では、第１の抗体分子または第２の抗体のいずれかもしくは両方は、プラスミドまたはウイルスを用いて投与されてもよい。次いで、そのようなプラスミドは、第１の抗体分子または第２の抗体のいずれかもしくは両方をコードするヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の抗体分子または第２の抗体のいずれかもしくはその両方の一部または完全配列をコードするヌクレオチド配列は、細胞もしくはウイルスゲノムもしくはウイルスのビロームに組み込まれ、次いで、そのような細胞もしくはウイルスは、第１の抗体分子または第２の抗体もいずれか、もしくはその両方の送達ビヒクル（あるいは第１の抗体分子または第２の抗体のいずれか、もしくはその両方をコードするヌクレオチド配列の送達ビヒクル）として作用する。例えば、いくつかの実施形態では、そのようなウイルスは、本明細書に記載される抗体分子の少なくとも１つをコードするヌクレオチド配列を含む治療上の腫瘍溶解性ウイルスの形態であってよい。いくつかの実施形態では、そのような腫瘍溶解性ウイルスは、完全長ヒトＩｇＧ抗体をコードするヌクレオチド配列を含む。腫瘍溶解性ウイルスは、医薬およびウイルス学の当業者に既知である。
【０１１０】
本発明はまた、本発明のポリペプチド結合部分の薬学的に許容される酸付加塩または塩基付加塩を含む組成物、および／または抗体、および／または薬剤、および／または薬物を含む。本発明で有用な前述の塩基化合物の薬学的に許容される酸付加塩を調製するために使用される酸は、とりわけ、非毒性酸付加塩、すなわち塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、クエン酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、重酒石酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、糖酸塩、安息香酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、およびパモエート［すなわち、１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３ナフトエート）］塩などの薬理学的に許容されるアニオンを含有する塩を形成するものである。また、薬学的に許容される塩基付加塩を使用して、本発明による薬剤の薬学的に許容される塩の形態を生成してもよい。本質的に酸性である本薬剤の薬学的に許容される塩基塩を調製するための試薬として使用され得る化学塩基は、そのような化合物と非毒性塩基塩を形成するものである。そのような非毒性塩基塩には、これらに限定されないが、とりわけ、アルカリ金属カチオン（例えばカリウムおよびナトリウム）およびアルカリ土類金属カチオン（例えばカルシウムおよびマグネシウム）、アンモニウムまたは水溶性アミン付加塩、例えばＮ−メチルグルカミン−（メグルミン）、および低級アルカノールアンモニウム、ならびに他の薬学的に許容される有機アミンの塩基塩などのそのような薬理学的に許容されるカチオンに由来するものが挙げられる。本発明の薬剤および／またはポリペプチド結合部分は、保存のために凍結乾燥され、使用前に好適な担体で再構成されてもよい。任意の好適な凍結乾燥法（例えば、噴霧乾燥、ケーキ乾燥）、および／または再構成技法を用いてもよい。凍結乾燥および再構成によって、抗体活性低下の程度の変動に至る場合があり（例えば、従来の免疫グロブリンでは、ＩｇＭ抗体はＩｇＧ抗体よりも活性が大きく低下する傾向を有する）、使用レベルを上方調節して補う必要があり得ることを当業者は理解するであろう。一実施形態では、凍結乾燥（フリーズドライ）ポリペプチド結合部分は、再水和されるとき、（凍結乾燥前の）その活性のうちの約２０％未満、または約２５％未満、または約３０％未満、または約３５％未満、または約４０％未満、または約４５％未満、または約５０％未満を損失する。
【０１１１】
ＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合する抗体分子と免疫細胞除去抗体分子または免疫細胞不活性化抗体分子の組み合わせは、癌の治療において使用することができる。
【０１１２】
本明細書で用いる場合、「患者」という用語は、ＦｃγＲＩＩｂ陰性癌を有すると診断された、またはＦｃγＲＩＩｂ陰性癌である可能性が高いと考えられる、および／またはそのような癌の症状を示す癌を有すると診断された、ヒトを含む動物を指す。
【０１１３】
患者は、哺乳類または非哺乳類であり得る場合を含む。好ましくは、患者はヒトであるか、またはウマ、もしくはウシ、もしくはヒツジ、もしくはブタ、もしくはラクダ、もしくはイヌ、もしくはネコなどの哺乳類である。最も好ましくは、哺乳類患者はヒトである。
【０１１４】
「呈する」とは、対象が、癌症状および／もしくは癌診断マーカーを表すこと、ならびに／または癌症状および／もしくは癌診断マーカーを測定、および／または評価、および／または定量化できる場合を含む。
【０１１５】
医薬当業者であれば、癌症状および癌診断マーカーがどのようなものであるか、ならびに癌症状の重症度に低減または増加があるかどうか、または癌診断マーカーに低減もしくは増加があるかどうかを測定および／もしくは評価および／もしくは定量化する方法、ならびに癌症状および／もしくは癌診断マーカーを使用して、癌に関する予後診断を形成することができる方法は、容易に明らかであろう。
【０１１６】
癌治療は、多くの場合、一連の治療として投与される、すなわち治療剤は、ある期間にわたって投与される。一連の治療の時間の長さは、他の理由のなかでもとりわけ、投与される治療薬の種類、治療される癌の種類、治療される癌の重症度、ならびに患者の年齢および健康状態を含むいくつかのの要因に依存する。
【０１１７】
「治療中」とは、患者が現在、一連の治療を受けていること、および／または治療薬を受けていること、および／または一連の治療薬を受けている場合を含む。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、本発明に従って治療されるＦｃγＲＩＩｂ陰性癌は、固形癌である。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、癌は、癌腫、肉腫、およびリンパ腫からなる群から選択される。
【０１２０】
いくつかの実施形態では、癌は、腺癌、扁平上皮癌、腺扁平上皮癌、低分化癌または未分化癌、大細胞癌および小細胞癌からなる群から選択される癌腫である。
【０１２１】
いくつかの実施形態では、癌は、骨肉腫、軟骨肉腫、脂肪肉腫、および平滑筋肉腫からなる群から選択される肉腫である。
ＦｃγＲＩＩｂ陰性癌は、黒色腫、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、転移性ホルモン不応性前立腺癌、大腸癌、肺癌、小細胞肺癌腫（ＮＳＣＬＣ）、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、非小細胞肺癌、尿路上皮癌、膀胱癌、腎臓癌、中皮腫、メルケル細胞癌、および頭頸部癌からなる群から選択される。
【０１２２】
上述の癌のいずれもが公知であり、症状および癌診断マーカーは、それらの癌を治療するのに使用される治療薬であるため、十分に説明されている。したがって、上で言及される種類の癌を治療するために用いられる症状、癌診断マーカーおよび治療薬は、医薬当業者には既知であろう。
【０１２３】
大多数の癌の診断、予後診断、進行の臨床的定義は、ステージ分類として既知である、ある特定の分類による。それらのステージ分類システムは、多くの異なる癌診断マーカーおよび癌症状を照合して、癌の診断、および／または予後診断、および／または進行の概要を提供するように機能する。ステージ分類システムを使用して、癌の診断、および／または予後診断、および／または進行を評価する方法、ならびにそのためにどの癌診断マーカーおよび癌症状を使用すべきかということは、腫瘍学当業者には既知であろう。
【０１２４】
「癌のステージ分類」とは、ステージ０、ステージＩ、ステージＩＩ、ステージＩＩＩ、およびステージＩＶを含む、Ｒａｉステージ分類、ならびに／またはステージＡ、ステージＢ、およびステージＣを含むＢｉｎｅｔステージ分類、ならびに／またはステージＩ、ステージＩＩ、ステージＩＩＩ、およびステージＩＶを含む、Ａｎｎ  Ａｒｂｏｕｒステージ分類が挙げられる。
【０１２５】
癌は、細胞の形態に異常を引き起こし得ることが既知である。これらの異常は、多くの場合、ある特定の癌で再現性よく生じ、これは形態におけるこれらの変化の検査（あるいは組織学的検査としても既知である）が、癌の診断または予後診断に使用することができることを意味する。細胞の形態を検査するために試料を視覚化し、視覚化用に試料を準備するための技法は、例えば、光学顕微鏡法または共焦点顕微鏡法など、当技術分野で公知である。
【０１２６】
「組織学的検査」とは、小さな成熟リンパ球の存在、および／または細胞質の境界が狭い小さな成熟リンパ球の存在、識別可能な核小体が欠如する密な核を有する小さな成熟リンパ球の存在、および／または細胞質の境界が狭く、識別可能な核小体が欠如する密な核を有する小さな成熟リンパ球の存在、および／または異型細胞、および／もしくは切断細胞、および／もしくは前リンパ球の存在が挙げられる。
【０１２７】
癌は、細胞のＤＮＡの変異の結果であり、これによって細胞の細胞死回避、または制御不能な増殖に至り得ることは公知である。したがって、これらの変異の検査（細胞遺伝学的検査としても既知である）は、癌の診断および／または予後診断を評価するための有用なツールであり得る。この例は、慢性リンパ球性白血病の特徴である染色体上の位置１３ｑ１４．１の欠失である。細胞内の変異を検査するための技法は、例えば、蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）など、当技術分野で公知である。
【０１２８】
「細胞遺伝学的検査」とは、細胞内のＤＮＡ、具体的には染色体の検査を含む。細胞遺伝学的検査を使用して、難治性癌および／または再発した癌の存在に関連し得る、ＤＮＡの変化を同定することができる。そのようなものとしては、１３番染色体の長腕の欠失、および／または染色体位置１３ｑ１４．１の欠失、ならびに／または１２番染色体のトリソミー、および／または１２番染色体の長腕の欠失、ならびに／または１１番染色体の長腕の欠失、および／または１１ｑの欠失、ならびに／または６番染色体の長腕の欠失、および／または６ｑの欠失、ならびに／または１７番染色体の短腕の欠失、および／または１７ｐの欠失、ならびに／またはｔ（１１：１４）転座、ならびに／または（ｑ１３：ｑ３２）転座、ならびに／または抗原遺伝子受容体再配列、ならびに／またはＢＣＬ２再配列、ならびに／またはＢＣＬ６再配列、ならびに／またはｔ（１４：１８）転座、ならびに／またはｔ（１１：１４）転座、ならびに／または（ｑ１３：ｑ３２）転座、ならびに／または（３：ｖ）転座、ならびに／または（８：１４）転座、ならびに／または（８：ｖ）転座、ならびに／またはｔ（１１：１４）および（ｑ１３：ｑ３２）転座を挙げることができる。
【０１２９】
癌患者は、ある特定の身体症状を呈することが既知であり、これは多くの場合、癌が身体に負担をかけている結果である。これらの症状は、多くの場合、同じ癌で再発するため、疾患の診断、および／または予後診断、および／または進行の特徴であり得る。医薬当業者であれば、どの身体症状がどの癌に関連しているか、ならびにそれらの身体系の評価が疾患の診断、および／または予後診断、および／または進行とどのように相関し得るかを理解するであろう。「身体的症状」としては、肝腫大および／または脾腫が挙げられる。
【実施例】
【０１３０】
ここで、本発明のいくつかの態様を具体的に示す、特定の非限定的な実施例を説明する。複雑なインビボシステムにおいてＦｃγＲＩＩＢの阻害効果を調査できるようにするには、代替抗体を２セット使用する必要がある。６Ｇ１１に相当するマウスはＡＴ１３０−２と呼ばれる。ヒト抗体のＦｃミュートするように（したがって、ＦｃγＲへの結合が著しく障害されるようにする、または無視できるようにするため）、アミノ酸２９７位をＮからＱに置き換えた。マウス抗体のＦｃミュートするように、同じ位置をＮからＱに置き換えた。したがって、マウス系ではＡＴ−１３０を指すが、本特許出願ではヒト対応物６Ｇ１１に関する。つまり、ヒト６Ｇ１１はマウス代替抗体ＡＴ１３０２−２に対応し、６Ｇ１１−Ｎ２９７ＱはＡＴ１３０−３−Ｎ２９７Ａに対応する。
【０１３１】
抗体のＦｃミュートするための別の方法（および当業者に公知の方法）は、Ｆｃ部分を取り除いて、ＦａｂまたはＦａｂ２フラグメントを形成することである。
【０１３２】
（実験手順）
（動物）
ｈＣＤ２０  Ｔｇ（トランスジェニック）、ｈＦｃγＲＩＩＢ＋／−およびｍＦｃγＲＩＩＢ−／−マウスは、ＰＣＲおよび／またはフローサイトメトリーにより確認された遺伝子型を有することが以前に記述されている（Ｂｅｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ２００８  Ｎｏｖ  １５；１１２（１０）：４１７０−７；  Ｒｏｇｈａｎｉａｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２７，  ４７３−４８８，  Ａｐｒｉｌ  １３，  ２０１５）。マウスは、ＵＫ  Ｈｏｍｅ  Ｏｆｆｉｃｅのガイドラインまたは地元のスウェーデン倫理委員会に従って、地元の施設で飼育し、維持した。
【０１３３】
（細胞培養）
細胞培養は、補充されたＲＰＭＩ（２ｍＭのグルタミン、１ｍＭのピルビン酸、１００ＩＵ／ｍＬのペニシリンおよびストレプトマイシン、ならびに１０％のＦＣＳ［Ｍｙｏｃｌｏｎｅ］を含有するＲＰＭＩ１６４０）（ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ，  Ｐａｉｓｌｅｙ，  Ｓｃｏｔｌａｎｄ）で行った。マウス脾臓Ｂ細胞をＭＡＣＳ  Ｂ細胞分離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ，  ＵＫ）を使用して、ネガティブセレクションにより精製し、次いで同じ培地で培養した。細胞株は、ＥＣＡＣＣから入手し、抗生物質を含まないＲＰＭＩ培地で維持した。
【０１３４】
ヒト単球由来マクロファージ（ＭＤＭ）およびマウス骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）の生成
ヒトＭＤＭをＮａｔｉｏｎａｌ  Ｂｌｏｏｄ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｓｏｕｔｈａｍｐｔｏｎ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ（Ｓｏｕｔｈａｍｐｔｏｎ、ＵＫ）またはＨａｌｍｓｔａｄのいずれか、もしくはＳｋａｎｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ  （Ｓｗｅｄｅｎ）の血液センターから入手した末梢血から分化させた。手短に言えば、付着ＣＤ１４＋単球を、以前に記載されているように（Ｒｏｇｈａｎｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２０１０；２６５（２）：１２０〜６．）、２５〜１００ｎｇ／ｍＬのエンドトキシン低組換えヒトマクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ；  Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  ＵＳまたは自社生成）を含むＲＰＭＩを補充して、培養した。収集まで２日ごとに、培地の半分を新しいＭ−ＣＳＦと交換した。培養の７〜１０日目に、ＭＤＭを収集し、続いて冷ＰＢＳとともに短時間インキュベートした。
マウスＢＭＤＭは、以前に報告されているように（Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１３  Ｏｃｔ  １５；１９１（８）：４１３０〜４０．）、マウスの大腿骨と脛骨の骨髄から単離された細胞から生成した。手短に言えば、骨髄細胞を、２０％のＬ９２９細胞馴化培地（Ｍ−ＣＳＦ含有）を含むＲＰＭＩを補充して、培養した。使用前に細胞を３７℃で、５％ＣＯ２で１０〜１２日間培養した。マクロファージの分化を、ＣＤ１１ｂおよびＦ４／８０の発現について形態学的検査および／またはフローサイトメトリーによって日常的に確認した。
【０１３５】
（抗体および試薬）
モノクローナル抗体は通常、ハイブリドーマの培養上清または安定にトランスフェクトされたＣＨＯ−ｋ１細胞（ＥＣＡＣＣから入手）から生成した。Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、以前に記載されたように生成した（Ｇｌｅｎｎｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７）。ｈＦｃγＲＩＩモノクローナル抗体ＡＴ１０は、以前に記載されている（Ｇｒｅｅｎｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１）。抗ＣＴＬＡ４（９Ｈ１０；Ｂｉｏ  Ｘ  Ｃｅｌｌ，ＵＳ）、抗ＩＬ２Ｒ（ＰＣ−６１．５．３；Ｂｉｏ  Ｘ  Ｃｅｌｌ／自社生成）、抗ＰＤＬ−１（１０Ｆ．９Ｇ２  Ｂｉｏ  Ｘ  Ｃｅｌｌ，ＵＳ）。ｈＦｃγＲＩＩモノクローナル抗体６Ｇ１１  ｈＩｇＧ１およびＮ２９７Ｑは、ＢｉｏＩｎｖｅｎｔで生成した（Ｒｏｇｈａｎｉａｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２７、４７３〜４８８，Ａｐｒｉｌ  １３、２０１５を参照されたい）。ｍＦｃγＲＩモノクローナル抗体ＡＴ１３０−２  ｍＩｇＧ１、ｍＩｇＧ２ａ、およびｍＩｇＧ１  Ｎ２９７Ａは、自社生成した。ＡＴ１３０−５（Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１２；４２（８）：２１０９〜２０、およびＴｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０１５，１９５（１１）５５０３〜５５１６）は、ヒト抗体クローン６Ｇ１１と同様のマウス抗マウスＦｃγＲＩＩ抗体である。ｈＦｃγＲＩＩＢ（クローンＥＰ８８８Ｙ；Ａｂｃａｍ，ＵＫ）、リン酸化ｈＦｃγＲＩＩＢ（クローンＥＰ９２６Ｙ；Ｏｒｉｇｅｎｅ，ＵＳ）、ＧＡＰＤＨ（Ａｂｃａｍ，ＵＫ）およびα−チューブリン（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、ＵＳ）に対する抗体をイムノブロッティングで使用した。ＰＢＭＣイムノフェノタイピングでは、ｚｅｎｏｎラベリングキット（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）を使用してＰＥで標識されたＦｃγＲＩＩＢモノクローナル抗体を、抗ＣＤ３−ＦＩＴＣ、抗ＣＤ１９−ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５および抗ＣＤ５６−ＡＰＣ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄから入手した抗体）と組み合わせて使用した。
【０１３６】
（フローサイトメトリー）
蛍光結合したモノクローナル抗体は、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、ＡｂＤ  Ｓｅｒｏｔｅｃ（すべてＵＫ）から購入、または自社製造した。フローサイトメトリーは、以前に記載されているように（Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）行い、試料をＦＡＣＳｃａｎ、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ、またはＦＡＣＳＣａｎｔｏ  ＩＩで評価し、データをＣｅｌｌＱｕｅｓｔ  Ｐｒｏ、ＦＡＣＳＤｉｖａ（すべてＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＵＫ）またはＦＣＳ  Ｅｘｐｒｅｓｓ（Ｄｅ  Ｎｏｖｏ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，ＣＡ，ＵＳ）で分析した。
【０１３７】
（ウエスタンブロッティング）
以前に記載されている通り（Ｒｏｇｈａｎｉａｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２７，４７３〜４８８，Ａｐｒｉｌ  １３，２０１５）。
【０１３８】
（インビボでの免疫療法）
養子移入：以前に記載されている通り（Ｂｅｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．２０１０  Ｊｕｎ  ２４；１１５（２５）：５１９１〜２０１）。
Ｂ細胞除去：マウスにｈＣＤ２０またはｈＦｃγＲＩＩＢモノクローナル抗体を単独で、または組み合わせて静脈内投与し、白血球を以前のように評価した（Ｂｅｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．２０１０  Ｊｕｎ  ２４；１１５（２５）：５１９１〜２０１）。
【０１３９】
（ＣＴ２６）
ＣＴ２６細胞を完全ＤＭＥＭで維持し、トリプシンＥＤＴＡを使用して収集した。細胞を洗浄し、ＰＢＳに再懸濁し、血球計算盤を使用して濃度を５×１０６細胞／ｍＬに調整した。１００μＬの細胞懸濁液（５×１０５細胞）をＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ，  ＵＫから入手した最初の系統から自社飼育）に皮下注射した。腫瘍を確立させ、無作為化および治療に先立ち、腫瘍サイズを週に３回測定した。腫瘍の長さ×幅が４００ｍｍ２を超えた場合、腫瘍を末期とみなした。
【０１４０】
（ＭＣ３８）
ＭＣ３８細胞を完全ＤＭＥＭで維持し、トリプシンＥＤＴＡを使用して収集した。細胞を洗浄し、ＰＢＳに再懸濁し、血球計算盤を使用して濃度を５×１０６細胞／ｍＬに調整した。１００μＬの細胞懸濁液（５×１０５細胞）をＣ５６／Ｂｌ６マウス（Ｔａｃｏｎｉｃ，Ｄｅｎｍａｒｋから入手）に皮下注射した。腫瘍を確立させ、無作為化および治療に先立ち、腫瘍サイズを測定した。治療は、５０〜１００ｍｍ２の腫瘍体積で開始し、その後、腫瘍を週に２回測定した。治療を、３〜４日の治療間隔で４回行い、抗ＰＤ−Ｌ１の投与量を１０ｍｇ／ｋｇに設定し、ＡＴ１３０−２変異体は両方とも２０ｍｇ／ｋｇに設定した。腫瘍体積が２０００ｍｍ２を超えた場合、腫瘍を末期とみなした。
【０１４１】
（統計分析）
実験群を比較するために、ウィルコクソン検定、対応のあるｔ検定または対応のないｔ検定分析を行った。カプランマイヤー生存曲線を作成し、ログランク検定で分析した。２つ以上の群を含むインビボ養子移入アッセイでは、一元配置または二元配置の分散分析を使用した。
【０１４２】
ＯＲとＣＲの違いについては、カイ２乗検定を使用した。ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ（５版または６版）を使用して統計分析を行った。特に明記しない限り、星印は、以下の有意性を表す：＊ｐ≦０．０５、＊＊ｐ≦０．０１、＊＊＊ｐ≦０．００１および＊＊＊＊ｐ≦０．０００１。
【０１４３】
（結果）
（Ｂ細胞除去の有効性はＦｃγＲＩＩＢモノクローナル抗体の形式に依存する）
ＦｃγＲＩＩＢは、標的Ｂ細胞およびエフェクター単球／マクロファージの両方に発現し、ＦｃγＲＩＩＢモノクローナル抗体がより深い標的細胞除去のどこに影響するかを解釈することは困難である。これをさらに分析するために、我々の様々なｈＦｃγＲＩＩＢＴｇおよびＫＯマウス系統の利点を利用して、標的細胞またはエフェクターのいずれか、または両方をＦｃγＲＩＩＢモノクローナル抗体で標的化し得るシステムを提供する。ｈＦｃγＲＩＩＢが欠如しているｈＣＤ２０＋／−標的をｈＦｃγＲＩＩＢ＋／−  ｘ  ｍＦｃγＲＩＩＢ−／−レシピエントに養子移入したアッセイでは、ＦｃγＲヌルおよび野生型ＦｃγＲＩＩＢモノクローナル抗体処置だけでは、予想通りのＢ細胞除去の影響がなかった（図２Ａ）。ＦｃγＲヌル  ＦｃγＲＩＩＢモノクローナル抗体は、リツキシマブと組み合わせると、循環中の標的細胞（図２Ａ）および組織常在性の標的細胞（図２Ｂ）の両方の除去を増強したが、一方、野生型ＦｃγＲＩＩＢモノクローナル抗体は除去を障害した。これは、通常のＦｃγＲＩＩＢモノクローナル抗体を使用すると、第２の抗体により標的細胞の除去が障害されることを示しており、本発明者らにとって非常に予想外であった。治療マウス由来の脾臓Ｆ４／８０＋マクロファージのＦｃγＲ発現を評価すると、ＦｃγＲヌルではなく野生型ＦｃγＲＩＩＢモノクローナル抗体を使用した場合、ｍＦｃγＲＩＶ（図２Ｃ）の検出が低下したことが明らかであり、これは、野生型ＦｃγＲＩＩＢモノクローナル抗体の抑制効果を一部説明することができる。これは、通常のＩｇＧＦｃγＲＩＩＢモノクローナル抗体が活性化ＦｃγＲＩＶを遮断するため、除去を悪化させることを示している。
【０１４４】
このいわゆるスコーピオン効果（Ｈｏｇａｒｔｈのレビュー）は、細胞表面結合モノクローナル抗体からの機能的Ｆｃ領域が、同じ細胞で発現されたＦｃγＲのＦｃ結合溝を占有する場合に生じ、したがってＦｃγＲヌル  ＦｃγＲＩＩＢモノクローナル抗体では観察されない。これは以前に記載されており、ＦｃγＲＩＶモノクローナル抗体９Ｅ９などのＦｃ機能的抗ＦｃγＲモノクローナル抗体で遮断された場合、個々のＦｃγＲの相対的重要性を過剰に解釈する可能性を説明している（Ｔｉｐｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｌｏｏｄ  ２０１５  １２５：１９０１−１９０９）。
【０１４５】
物理的阻害に加えて、このスコーピオン効果は、受容体の架橋およびＦｃγＲの活性化をもたらす可能性もある。ＩＴＩＭ含有ＦｃγＲＩＩＢはエフェクター細胞上の唯一の抑制性ＦｃγＲであり、その活性化はエフェクター細胞機能の抑制に寄与し得るので（Ｄａｈａｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ．２０１５  Ｎｏｖ；２６８（１）：１０４〜２２）、野生型またはＦｃγＲヌル  ＦｃγＲＩＩＢモノクローナル抗体による治療後のその活性化を評価した。以前に、Ｂ細胞（ＦｃγＲＩＩＢのみを発現する）では、アンタゴニスト６Ｇ１１野生型またはＮＱモノクローナル抗体による処置はＦｃγＲＩＩＢを活性化しないことを示した（Ｒｏｇｈａｎｉａｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２７，４７３〜４８８，Ａｐｒｉｌ  １３，２０１５）。しかし、ＦｃγＲヌル  ＦｃγＲＩＩＢモノクローナル抗体ではなく野生型では、処置されたヒト単球由来マクロファージ（ＭＤＭ）（図２Ｄ）およびマウスｈＦｃγＲＩＩＢ＋／−  ｘ  ｍＦｃγＲＩＩＢ−／−ＢＭＤＭ（図２Ｅ）の両方においてＦｃγＲＩＩＢ−ＩＴＩＭのリン酸化をもたらし、我々のシステムにおけるこの現象の証拠を提供し、野生型ＦｃγＲＩＩＢモノクローナル抗体を用いると、エフェクター活性化が最適になり得ないことを示した。これは、正常なＦｃγＲＩＩＢモノクローナル抗体が免疫エフェクター細胞の抑制シグナルを活性化することを示している。この所見を上記のものと合わせて、標的細胞を除去させるための最適なＦｃγＲＩＩＢモノクローナル抗体の形式を考慮し、次に、最適な除去がどのように達成されるかを調べた。
【０１４６】
（最適な標的細胞の除去のために野生型とＦｃγＲヌル  ｈＦｃγＲＩＩＢモノクローナル抗体を組み合わせることができる）
次に、ｍＦｃγＲＩＩＢが標的Ｂ細胞上でのみ発現し、ｈＦｃγＲＩＩＢがエフェクター細胞上でのみ発現するシステムにおいて、リツキシマブの存在下または非存在下で、種々のｈＦｃγＲＩＩＢおよびｍＦｃγＲＩＩモノクローナル抗体のフォームの有効性を調べた。このシステムにより、標的制限およびエフェクター制限ＦｃγＲＩＩＢを標的にする共存分析が可能になった。最初に、標的でのみモノクローナル抗体結合ＦｃγＲＩＩＢへの効果を調べた。単剤リツキシマブの最適以下の用量でマウスを処置すると、標的Ｂ細胞の除去が最小になった（図３）。最適用量の単剤野生型ｍＦｃγＲＩＩモノクローナル抗体（標的上にのみ存在するＦｃγＲＩＩＢを標的にする）でマウスを処置すると、標的細胞の約５０％が除去された。野生型ｍＦｃγＲＩＩモノクローナル抗体およびリツキシマブの同時投与は、除去が著明になり（常在性脾臓Ｂ細胞の約７５％）、一方、Ｆｃヌル  Ｆ（ａｂ’）２ｍＦｃγＲＩＩモノクローナル抗体を添加すると、単独で、またはリツキシマブの存在下のいずれでも効果がなかった。これは、エフェクター上でＦｃγＲＩＩＢの非存在下でＦｃγＲＩＩＢ発現標的を除去するために、通常のＦｃγＲＩＩＢモノクローナル抗体が使用されることを示している。
【０１４７】
続いて、特にエフェクター細胞上のＦｃγＲＩＩＢを標的にすることを調べた。野生型またはＦ（ａｂ’）２ｈＦｃγＲＩＩＢ（エフェクター上のみのＦｃγＲＩＩＢを標的にする）によりマウスを処置すると、予想どおり、Ｂ細胞の除去は生じなかった。しかし、リツキシマブおよび野生型またはＦ（ａｂ’）２ｈＦｃγＲＩＩＢの組み合わせは、リツキシマブ単独と比較して、標的細胞の除去が増加した。野生型ｍＦｃγＲＩＩモノクローナル抗体を用いてＢ細胞を標的化し、Ｆ（ａｂ’）２ｈＦｃγＲＩＩＢを用いてエフェクターを標的化すると、さらにより強力な除去が観察された。対照的に、野生型ｈＦｃγＲＩＩＢモノクローナル抗体とともに野生型ｍＦｃγＲＩＩＢモノクローナル抗体で処置すると、除去が抑制された（図３）。これは、通常の遮断ＦｃγＲＩＩＢモノクローナル抗体が標的の除去を障害することを示している。Ｆｃ修飾Ｆａｂ２モノクローナル抗体を使用してエフェクターを遮断した。
【０１４８】
これらの組み合わせをさらに調べると、野生型ｈＦｃγＲＩＩＢモノクローナル抗体を用いて、エフェクター細胞ｈＦｃγＲＩＩＢを遮断すると、リツキシマブと野生型ｍＦｃγＲＩＩモノクローナル抗体の組み合わせによる除去はわずか約３０％であった。ともに標的Ｂ細胞をオプソニン化するリツキシマブおよび野生型ｍＦｃγＲＩＩモノクローナル抗体を、エフェクター細胞ｈＦｃγＲＩＩＢを遮断するＦｃヌル  Ｆ（ａｂ’）２ｈＦｃγＲＩＩＢモノクローナル抗体と組み合わせると、はるかに著明な除去が見られ、標的細胞の約９０％が除去された（図３）。
【０１４９】
（ＦｃｇＲＩＩＢ遮断モノクローナル抗体の最適な形式は、Ｔｒｅｇ除去を増大させる）
次に、ＦｃｇＲＩＩＢを遮断することにより標的の除去を増大させるこの能力を、Ｔｒｅｇなどの他の細胞標的にも転用し得るがどうかを評価した。これは上記の実施例と類似しているが、しかしＩＬ２Ｒを用いてＴｒｅｇを除去する。これに取り組むために、１００μｇのＦｃ不活性抗ＦｃγＲＩＩｂモノクローナル抗体（ＡＴ１３０−２  ｍＩｇＧ１  ＮＡ、図９）をＢａｌｂ／ｃマウスに腹腔内投与した。続いて、６時間後、ＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇ細胞を除去させるために、１００μｇの抗ＩＬ２Ｒ（ＰＣ６１）を腹腔内投与した。次いで、４日後、ＦＡＣによって血液、脾臓、リンパ節中のこれらを評価した。ＡＴ１３０−２ＮＡは、特に脾臓においてＴｒｅｇの除去を向上させることを示した（図４Ａ）。この効果の再現性に取り組むために、Ｃ５７ＢＬ／６マウスでこの実験を繰り返した。この場合も、ＡＴ１３０−２ＮＡは、Ｂ６マウスにおいて、特に脾臓とリンパ節においてＴｒｅｇ除去を向上させ（図４Ｂ）、血液、脾臓、リンパ節中のＣＤ８：Ｔｒｅｇの比率が高くなった（図４Ｃ）。血中の比率は、ＰＣ６１単独よりもＮＡとの組み合わせで有意に高かった（ＰＣ６１対組み合わせＰ＝０．０２１８）。初期の結果を確認するために、次に、野生型ＡＴ１３０−２対Ｆｃ不活性ＡＴ１３０−２ＮＡ変異体の能力を評価し、ＩＬ２Ｒモノクローナル抗体媒介Ｔｒｅｇの除去を向上させた。野生型ＡＴ１３０−２は除去の向上を示さなかったが、一方、ＮＡ変異体は向上を示した（＊対応のないＴ検定、Ｐ＝０．０４４）（図５）。したがって、これは、正常なＦｃγＲＩＩｂ遮断モノクローナル抗体が除去を向上させないことを示している。
【０１５０】
（モノクローナル抗体媒介ＦｃｇＲＩＩＢ阻害はＣＴＬＡ−４免疫療法を増強する）
この場合も、これは、上記と同じ概念だが、腫瘍関連Ｔｒｅｇ細胞（ＣＴＬＡ−４）上で強く発現するさらに別の標的に対する抗体を用いることで、抗腫瘍免疫になる。したがって、このアプローチが抗癌免疫療法を増強するかどうかに取り組むために、ＣＴ２６細胞を雌のＢＡＬＢ／ｃマウスに皮下注射した。腫瘍の幅×長さが約１００ｍｍ２あるときに、マウスを無作為に処置群に分けた。０、２、４、および１１日目に、マウスに２００μＬのＰＢＳ中の２００μｇの９Ｈ１０（ハムスター抗マウスＣＴＬＡ４）抗体を腹腔内投与した。０日目に、併用マウスに１００μｇのＡＴ１３０−２  Ｎ２９７Ａを投与した。腫瘍の幅と長さを測定し、腫瘍の長さ×幅が４００ｍｍ２を超えたときにマウスを殺処分した（図６Ａ）。図６Ｂは、各群の個々の腫瘍の成長を示し、図６Ｃは、中央値領域（＋／−ＳＥＭまたはＳＤ）を表す。これらのマウスの生存曲線を図６Ｄに示し、図６Ｅには第２の実験からの複合生存曲線を表し、ＮＡ組み合わせ対９Ｈ１０単独の間の生存の差は統計的に有意であった（ログランク検定０．０１７９）。最後に、この効果が抗体のＮＡ形式に依存しているかどうかに取り組むために、野生型ｍＩｇＧ１を用いて実験を繰り返し、以前と同様にＮＡ形式と比較した。ＮＡ変異体は、９Ｈ１０単独群と有意差がなく、ＮＡの組み合わせは、野生型モノクローナル抗体との組み合わせよりも著しく効果的であった（ログランク検定Ｐ＝０．０４６０）（図７）。これは、野生型抗体、すなわち通常のグリコシル化モノクローナル抗体が効果的に結合せず、代わりに望ましい治療効果を障害することを示している。
【０１５１】
（モノクローナル抗体媒介ＦｃγＲＩＩＢ阻害は、ＰＤ−Ｌ１免疫療法を増強する）
ＣＴＬＡ４と同様に、ＰＤ−Ｌ１を標的とする抗体の効果はＦｃγＲの活性化に依存すると考えられる。しかし、別々の形式のＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ１は様々な細胞、特に骨髄細胞系列および癌細胞上で発現する。ＰＤ−Ｌ１抗体とＦｃγＲＩＩＢ阻害を組み合わせると抗癌免疫療法が増強するかどうかに取り組むために、ＭＣ３８細胞を雌のＣ５７／Ｂｌ６マウスに皮下注射した。腫瘍の幅×長さが約１００ｍｍ２になったときに、マウスを無作為に処置群に分けた。０、２、４、および１１日目に、マウスに２００μＬのＰＢＳ中１０ｍｇ／ｋｇの９Ｈ１０（ハムスター抗マウスＣＴＬＡ４）抗体を腹腔内投与した。０日目に、併用マウスに１００μｇのＡＴ１３０−２  Ｎ２９７Ａまたは野生型ＡＴ１３０−２を投与した。腫瘍の幅と長さを測定し、腫瘍体積が２０００ｍｍ２を超えたときにマウスを殺処分した。図８Ａは、各群の個々の腫瘍の成長を示す。数字は、各群で生存しているマウスの数を示す。図８Ｂは、マウスの生存曲線を示す。この効果が抗体のＮＡ形式に依存しているかどうかに取り組むために、以前のように野生型ｍＩｇＧ１とＮＡ形式の両方を用いて、実験を行った。ＮＡ変異体は、野生型モノクローナル抗体との組み合わせよりも効果的であり、より多くのマウスが生存した（図８Ｂ）。これは、主に癌細胞および単球／マクロファージ／骨髄由来サプレッサー細胞を標的とするＰＤ−Ｌ１抗体の最も効果的な組み合わせが、非グリコシル化ＮＡ形式であることを示している。
【０１５２】
まとめると、上記のデータは、他の抗体の治療効果を高める手段としてのＦｃγＲＩＩＢの阻害が広範であり、種々の細胞型（Ｂ細胞、Ｔｒｅｇ細胞および骨髄系細胞）上に発現する種々の標的（ＣＤ２０、ＣＤ２５、ＣＴＬＡ４およびＰＤ−Ｌ１）に対する抗体のために適用可能であることを示す。
【０１５３】
（Ｆｃγ受容体（マウスおよびヒト）への野生型６Ｇ１１対Ｎ２９７Ａ  ６Ｇ１１の結合の比較）
ＳＰＲ分析は、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で実行した。試料をＨＢＳ−ＥＰ＋緩衝液中２５℃で、３０ｍＬ／分で流した。データは、ＢｉａＥｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアで分析した。ブランク対照のフローセルの反応は、データ分析前に自動的に差し引いた。ＦｃγＲ結合の比較のため、６Ｇ１１野生型または６Ｇ１１  Ｎ２９７Ｑ  ｈＩｇＧ１をｐＨ５でアミンカップリングによりＣＭ５センサーチップに固定化し、組換えヒトまたはマウスＦｃγＲ（１００ｎＭ）（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を両面全体に１８０秒間注入した。代替的に、様々な濃度のＦｃγＲ（０〜５００ｎＭ）を連続して添加して、反応を測定した。結果を図１０Ａ〜Ｈに示す。
【図１】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図６Ｅ】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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【図１０Ｅ】
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【図１０Ｆ】
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【図１０Ｇ】
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【図１０Ｈ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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