(57)【要約】  本開示は、ｓｉＲＮＡのような二本鎖オリゴヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドに組み込むことができる新規のヌクレオチド前駆体およびヌクレオチド類似体に関する。これらの類似体を含むオリゴヌクレオチドは、優れた生物活性、例えば、増加したｉｎ  ｖｉｔｒｏ安定性および改善されたｉｎ  ｖｉｔｒｏ効力、とりわけ作用持続時間を有する。改善されたオリゴヌクレオチドは、標的遺伝子の発現をサイレンシングする（例えば、低減または除去する）のに有用である。特定の実施形態では、本発明は、目的のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）にハイブリダイズし得る、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、とりわけｓｉＲＮＡに含まれる特定のヌクレオチド類似体を包含し、その結果、目的の標的遺伝子の発現が低減または遮断される。本化合物は、一般式（Ｉ）（式中、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄの各々は独立して、Ｈまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基であり、Ｂは、複素環式核酸塩基である）を有する。  【化１】2021517126.tif 000154
2021517126.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物：
【化１】
2021517126.tif 000129
（式中、
−  Ｂは、複素環式核酸塩基であり；
−  Ｐ１およびＰ２は各々独立して、Ｈ、反応性リン基または保護基であり；
−  Ｙは、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ１またはＮ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１であり、Ｒ１は：
・ハロゲン原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）複素環、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、（Ｃ５〜Ｃ１４）ヘテロアリール基、−Ｏ−Ｚ１、−Ｎ（Ｚ１）（Ｚ２）、−Ｓ−Ｚ１、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｊ）−Ｏ−Ｚ１、−Ｏ−Ｃ（＝Ｊ）−Ｚ１、−Ｃ（＝Ｊ）−Ｎ（Ｚ１）（Ｚ２）および−Ｎ（Ｚ１）−Ｃ（＝Ｊ）−Ｚ２（式中、
Ｊは、ＯもしくはＳであり、
Ｚ１およびＺ２の各々は独立して、Ｈ、ハロゲン原子および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基から選択される１つもしくはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基である）から選択される１つもしくはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基、
・ハロゲン原子および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基から選択される１つもしくはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基、または
・基−［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ−Ｒ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ−Ｒ３（式中：
ｍは、０または１を意味する整数であり、
ｐは、０〜１０の範囲の整数であり、
Ｒ２は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、−Ｏ−Ｚ３、−Ｎ（Ｚ３）（Ｚ４）、−Ｓ−Ｚ３、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｋ）−Ｏ−Ｚ３、−Ｏ−Ｃ（＝Ｋ）−Ｚ３、−Ｃ（＝Ｋ）−Ｎ（Ｚ３）（Ｚ４）もしくは−Ｎ（Ｚ３）−Ｃ（＝Ｋ）−Ｚ４（式中、
Ｋは、ＯもしくはＳであり、
Ｚ３およびＺ４の各々は独立して、Ｈ、ハロゲン原子および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基から選択される１つもしくはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基である）によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキレン基であり、
Ｒ３は、水素原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ基、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）複素環、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基および（Ｃ５〜Ｃ１４）ヘテロアリール基からなる群から選択されるか、
もしくは
Ｒ３は、細胞標的化部分である）
であり、
−  Ｘ１およびＸ２は各々独立して、水素原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基であり、
−  Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄの各々は独立して、Ｈまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基である）。
【請求項２】
Ｙは、ＮＲ１であり、Ｒ１は、場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基であり、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（Ｉ）について定義された通りである、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項３】
Ｙは、ＮＲ１であり、Ｒ１は、非置換（Ｃ１〜Ｃ１６）アルキル基であり、これには、メチル、イソプロピル、ブチル、オクチル、ヘキサデシルからなる群から選択されるアルキル基が含まれ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（Ｉ）について定義されたのと同じ意味を有する、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項４】
Ｙは、ＮＲ１であり、Ｒ１は、ハロゲン原子および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基であり、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（Ｉ）について定義されたのと同じ意味を有する、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項５】
Ｙは、ＮＲ１であり、Ｒ１は、シクロヘキシル基であり、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（Ｉ）について定義されたのと同じ意味を有する、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項６】
Ｙは、ＮＲ１であり、Ｒ１は、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基によって置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基であり、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（Ｉ）について定義されたのと同じ意味を有する、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項７】
Ｙは、ＮＲ１であり、Ｒ１は、フェニル基によって置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基であり、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（Ｉ）について定義されたのと同じ意味を有する、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項８】
Ｙは、ＮＲ１であり、Ｒ１は、フェニル基によって置換されたメチル基であり、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（Ｉ）について定義されたのと同じ意味を有する、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項９】
Ｙは、Ｎ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１であり、Ｒ１は、場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基であり、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（Ｉ）について定義されたのと同じ意味を有する、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項１０】
Ｙは、Ｎ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１であり、Ｒ１は、メチルおよびペンタデシルからなる群から選択され、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（Ｉ）について定義されたのと同じ意味を有する、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項１１】
Ｙは、ＮＲ１であり、Ｒ１は、−［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ−Ｒ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ−Ｒ３（式中、
ｍは、０または１を意味する整数であり、
ｐは、０〜１０の範囲の整数であり、
Ｒ２は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、−Ｏ−Ｚ３、−Ｎ（Ｚ３）（Ｚ４）、−Ｓ−Ｚ３、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｋ）−Ｏ−Ｚ３、−Ｏ−Ｃ（＝Ｋ）−Ｚ３、−Ｃ（＝Ｋ）−Ｎ（Ｚ３）（Ｚ４）、−Ｎ（Ｚ３）−Ｃ（＝Ｋ）−Ｚ４（式中、
Ｋは、ＯまたはＳであり、
Ｚ３およびＺ４の各々は独立して、Ｈ、ハロゲン原子および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基である）によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキレン基であり、
Ｒ３は、細胞標的化部分である）であり、
−  Ｘ１およびＸ２は各々独立して、水素原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基であり、
−  Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは独立して、Ｈまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基である、
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項１２】
Ｒ１は、基−［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ−Ｒ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ−Ｒ３であり、ｍは０であり、ｐは０であり、Ｒ３は、細胞標的化部分であり、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＲ２は、式（Ｉ）の化合物の一般定義における通りである、請求項１１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項１３】
Ｒ２はエチレン基であり、ｐは０であり、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子である、請求項１１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項１４】
Ｒ２はペンチレン基であり、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子である、請求項１１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項１５】
Ｒ２は（Ｃ１２）アルキレン基であり、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子である、請求項１１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項１６】
Ｒ１は、基−［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ−Ｒ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ−Ｒ３であり、ｍは０であり、ｐは、１、２、３および４からなる整数の群から選択され、Ｒ３は、細胞標的化部分であり、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＲ２は、式（Ｉ）の化合物の一般定義における通りである、請求項１１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項１７】
Ｒ２はエチレン基であり、ｐは１であり、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子である、請求項１６に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項１８】
Ｒ２はエチレン基であり、ｐは２であり、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子である、請求項１６に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項１９】
Ｒ２はエチレン基であり、ｐは３であり、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子である、請求項１６に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項２０】
Ｒ２はエチレン基であり、ｐは４であり、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子である、請求項１６に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項２１】
ｍは１であり、ｐは０であり、Ｒ３は、細胞標的化部分であり、Ｒ２、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２は、式（Ｉ）の化合物の一般定義における通りである、請求項１１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項２２】
Ｒ２は、ブチレンであり、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子を表し、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、一般式（Ｉ）について定義された通りである、請求項２１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項２３】
Ｒ２は、（Ｃ１１）アルキレンであり、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子を表し、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、一般式（Ｉ）について定義された通りである、請求項２１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項２４】
Ｒ２は、メチレンであり、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子を表し、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、一般式（Ｉ）について定義された通りである、請求項２１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項２５】
ｍは１であり、ｐは１および２からなる整数の群から選択され、Ｒ３は、細胞標的化部分であり、Ｒ２、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２は、式（Ｉ）の化合物の一般定義における通りである、請求項１１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項２６】
Ｒ２は、メチレン基であり、ｐは２であり、Ｒ３は、細胞標的化部分であり、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２は、一般式（Ｉ）について定義された通りである、請求項１１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項２７】
Ｒ２は、メチレン基であり、ｐは１であり、Ｒ３は、細胞標的化部分であり、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２は、一般式（Ｉ）について定義された通りである、請求項１１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項２８】
Ｒ３は、式（ＩＩＩ）の化合物：
【化２】
2021517126.tif 000130
（式中、Ａ１、Ａ２およびＡ３は、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ４であり、
Ｒ４は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルまたは（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール基であり；
Ａ４は、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ４またはＮＨＣ（＝Ｏ）−Ｒ５であり、Ｒ４は、上で定義された通りであり、Ｒ５は、ハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基である）
である、請求項１１〜２７のいずれか１項に記載式（Ｉ）の化合物。
【請求項２９】
Ａ１、Ａ２およびＡ３は、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ４であり、Ｒ４は、メチル基であり、
Ａ４は、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ４、ＮＨＣ（＝Ｏ）−Ｒ５であり、Ｒ４およびＲ５の各々は、メチル基である、請求項２８に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項３０】
Ｒ３は、３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−Ｎ−アセチルガラクトシルアミンである、請求項２８または２９に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項３１】
Ｂは、場合により保護されており、ピリミジン、置換ピリミジン、プリンおよび置換プリンを含む群から選択される、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項３２】
Ｐ１またはＰ２の一方は、Ｏ−４，４’−ジメトキシトリチル基であり、Ｐ１およびＰ２の他方は、Ｈ、反応性リン基または保護基であり、Ｙ、Ｂ、Ｘ１、Ｘ２、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、請求項１において定義された通りである、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項３３】
Ｐ１およびＰ２の一方は、２−シアノエチル−Ｎ，Ｎジイソプロピルホスホラミダイト基であり、Ｐ１およびＰ２の他方は、保護基であり、Ｙ、Ｂ、Ｘ１、Ｘ２、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、請求項１において定義された通りである、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項３４】
Ｐ１およびＰ２の一方は、２−シアノエチル−Ｎ，Ｎジイソプロピルホスホラミダイト基であり、Ｐ１およびＰ２の他方は、Ｏ−４，４’−ジメトキシトリチル基であり、Ｙ、Ｂ、Ｘ１、Ｘ２、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、請求項１において定義された通りである、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項３５】
１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物：
【化３】
2021517126.tif 000131
（式中：
−  Ｂは、複素環式核酸塩基であり；
−  Ｌ１およびＬ２の一方は、式（ＩＩ）の化合物とオリゴマー化合物とを連結するヌクレオシド間連結基であり、Ｌ１およびＬ２の他方は、Ｈ、保護基、リン部分または式（ＩＩ）の化合物とオリゴマー化合物とを連結するヌクレオシド間連結基であり、
−  Ｙは、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ１またはＮ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１であり、Ｒ１は：
・ハロゲン原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）複素環、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、（Ｃ５〜Ｃ１４）ヘテロアリール基、−Ｏ−Ｚ１、−Ｎ（Ｚ１）（Ｚ２）、−Ｓ−Ｚ１、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｊ）−Ｏ−Ｚ１、−Ｏ−Ｃ（＝Ｊ）−Ｚ１、−Ｃ（＝Ｊ）−Ｎ（Ｚ１）（Ｚ２）および−Ｎ（Ｚ１）−Ｃ（＝Ｊ）−Ｚ２（式中、
Ｊは、ＯまたはＳであり、
Ｚ１およびＺ２の各々は独立して、Ｈ、ハロゲン原子および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基である）から選択される１つまたはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基、
・ハロゲン原子および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基、
・基−［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ−Ｒ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ−Ｒ３（式中、
ｍは、０または１を意味する整数であり、
ｐは、０〜１０の範囲の整数であり、
Ｒ２は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、−Ｏ−Ｚ３、−Ｎ（Ｚ３）（Ｚ４）、−Ｓ−Ｚ３、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｋ）−Ｏ−Ｚ３、−Ｏ−Ｃ（＝Ｋ）−Ｚ３、−Ｃ（＝Ｋ）−Ｎ（Ｚ３）（Ｚ４）または−Ｎ（Ｚ３）−Ｃ（＝Ｋ）−Ｚ４（式中、
Ｋは、ＯまたはＳであり、
Ｚ３およびＺ４の各々は独立して、Ｈ、ハロゲン原子および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基である）によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキレン基であり、
Ｒ３は、水素原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ基、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）複素環、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基もしくは（Ｃ５〜Ｃ１４）ヘテロアリール基からなる群から選択されるか、
または、Ｒ３は、細胞標的化部分である）
であり、
−  Ｘ１およびＸ２は各々独立して、水素原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基であり、
−  Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは独立して、Ｈまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基である）
または薬学的に許容されるその塩を含むオリゴヌクレオチド。
【請求項３６】
Ｙは、ＮＲ１であり、Ｒ１は、非置換（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基であり、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ２、Ｒ３およびＢは、一般式（ＩＩ）について定義されたのと同じ意味を有する１つもしくはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物、または薬学的に許容されるその塩を含む、請求項３５に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項３７】
Ｙは、ＮＲ１であり、Ｒ１は、非置換（Ｃ１〜Ｃ１６）アルキル基であり、これには、メチル、イソプロピル、ブチル、オクチル、ヘキサデシルを含む群から選択されるアルキル基が含まれ、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ２、Ｒ３およびＢは、請求項３５において定義されたのと同じ意味を有する１つもしくはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物、または薬学的に許容されるその塩を含む、請求項３５に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項３８】
Ｙは、ＮＲ１であり、Ｒ１は、ハロゲン原子および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基であり、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ２、Ｒ３およびＢは、請求項３５において定義されたのと同じ意味を有する１つもしくはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物、または薬学的に許容されるその塩を含む、請求項３５に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項３９】
Ｙは、ＮＲ１であり、Ｒ１は、シクロヘキシル基であり、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ２、Ｒ３およびＢは、請求項３５において定義されたのと同じ意味を有する１つもしくはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物、または薬学的に許容されるその塩を含む、請求項３５に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項４０】
Ｙは、ＮＲ１であり、Ｒ１は、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基によって置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基であり、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ２、Ｒ３およびＢは、請求項３５において定義されたのと同じ意味を有する１つもしくはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物、または薬学的に許容されるその塩を含む、請求項３５に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項４１】
Ｙは、ＮＲ１であり、Ｒ１は、フェニル基によって置換されたメチル基であり、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ２、Ｒ３およびＢは、請求項３５において定義されたのと同じ意味を有する１つもしくはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物、または薬学的に許容されるその塩を含む、請求項３５に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項４２】
ＹはＮ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１であり、Ｒ１は、場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基であり、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ２、Ｒ３およびＢは、請求項３５において定義されたのと同じ意味を有する１つもしくはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物、または薬学的に許容されるその塩を含む、請求項３５に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項４３】
ＹはＮ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１であり、Ｒ１は、メチルおよびペンタデシルを含む群から選択され、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ２、Ｒ３およびＢは、請求項３５において定義されたのと同じ意味を有する１つもしくはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物、または薬学的に許容されるその塩を含む、請求項３５に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項４４】
Ｂは、ピリミジン、置換ピリミジン、プリンおよび置換プリンを含む群から選択される１つもしくはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物、または薬学的に許容されるその塩を含む、請求項３５に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項４５】
ヌクレオシド間連結基は独立して、ホスホジエステル、ホスホトリエステル、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、アルキルホスホネートおよびホスホラミデート主鎖連結基からなる群から選択される１つもしくはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物、または薬学的に許容されるその塩を含む、請求項３５に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項４６】
２〜１０個の式（ＩＩ）の化合物または薬学的に許容されるその塩を含む、請求項３５に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項４７】
１つまたはそれ以上の標的化されたヌクレオチドまたは薬学的に許容されるその塩を含む、請求項３５〜４６のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項４８】
Ｒ３が、式（ＩＩＩ）：
【化４】
2021517126.tif 000132
（式中、Ａ１、Ａ２およびＡ３は、ＯＨであり、
Ａ４は、ＯＨまたはＮＨＣ（＝Ｏ）−Ｒ５であり、Ｒ５は、ハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル基である）
のもの、または薬学的に許容されるその塩である、請求項３５〜４７のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項４９】
Ｒ３は、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンまたは薬学的に許容されるその塩である、請求項３５〜４８のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項５０】
二本鎖オリゴヌクレオチドであって、請求項３５〜４９のいずれか１項において定義された通りの１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物または薬学的に許容されるその塩を含む前記二本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項５１】
低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）であって、請求項３５〜４９のいずれか１項において定義された通りの１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物または薬学的に許容されるその塩を含む前記低分子干渉ＲＮＡ。
【請求項５２】
式（Ｉ−Ａ）の化合物
【化５】
2021517126.tif 000133
を調製するための方法であって、
ａ）式（Ｘ）の化合物
【化６】
2021517126.tif 000134
（式中、Ｂは、複素環式核酸塩基であり、Ｐ１およびＰ２は各々独立して、請求項１に記載の一般式（Ｉ）において定義された通りの保護基を表す）
と、過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ４）のような酸化剤との反応による、式（Ｘ）の該化合物の酸化の工程であって、それによって、以下の式（ＸＩ）の化合物：
【化７】
2021517126.tif 000135
を得る前記工程、ならびに
ｂ）式（ＸＩ）の化合物を、式（ＸＩＩ）の化合物
Ｒ１−ＮＨ２  （ＸＩＩ）
（式中、Ｒ１は、請求項１に記載の一般式（Ｉ）において定義された通りである）
の存在下で還元的アミノ化の工程にかけて、式（Ｉ−Ａ）の化合物：
【化８】
2021517126.tif 000136
（式中、Ｂは、複素環式核酸塩基であり、Ｐ１およびＰ２は各々独立して、請求項１に記載の一般式（Ｉ）において定義された通りの保護基を表す）
を得る工程
を含む前記方法。
【請求項５３】
式（Ｉ−Ｃ）の化合物：
【化９】
2021517126.tif 000137
を調製するための方法であって、
ａ）式（ＸＶ）の化合物
【化１０】
2021517126.tif 000138
（式中、
−  Ａ１、Ａ２およびＡ３は、ＯＨまたはＯ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ４であり、
Ｒ４は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルまたは（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール基であり；
−  Ａ４は、ＯＨ、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ４またはＮＨＣ（＝Ｏ）−Ｒ５であり、Ｒ４は、上で定義された通りであり、Ｒ５は、ハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基であり、
−  Ｙ−ＣＨＯは、還元的アミノ化反応によって、Ｘと等しい−Ｙ−ＣＨ２−に移行され、Ｘは、式−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｐ−Ｒ２−（式中、ｐおよびＲ２は、請求項（Ｉ）に記載の一般式（Ｉ）において定義された通りである）の基である）
を、式（ＸＩＩＩ）の化合物
【化１１】
2021517126.tif 000139
（式中、Ｐ１、Ｐ２およびＢは、請求項１に記載の一般式（Ｉ）において定義された通りである）
と、還元的アミノ化によって反応させて、式（Ｉ−Ｃ）の化合物
【化１２】
2021517126.tif 000140
を得る工程
を含む前記方法。
【請求項５４】
式（Ｉ−Ｄ）の化合物
【化１３】
2021517126.tif 000141
を得るための方法であって、
式（ＸＶＩ）の化合物
【化１４】
2021517126.tif 000142
（式中、
−  Ａ１、Ａ２およびＡ３は、ＯＨまたはＯ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ４であり、
Ｒ４は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルまたは（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール基であり；
−  Ａ４は、ＯＨ、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ４、またはＮＨＣ（＝Ｏ）−Ｒ５であり、Ｒ４は、上で定義された通りであり、Ｒ５は、ハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基であり、
−  Ｘは、式−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｐ−Ｒ２−（式中、ｐおよびＲ２は、請求項１に記載の一般式（Ｉ）において定義された通りである）の基である）
を、式（ＸＩＩＩ）の化合物
【化１５】
2021517126.tif 000143
（式中、Ｐ１、Ｐ２およびＢは、請求項１に記載の一般式（Ｉ）において定義された通りである）
と、ペプチドカップリング条件下で反応させて、式（Ｉ−Ｄ）の化合物を得る工程
を含む前記方法。
【請求項５５】
式（Ｉ−Ｅ）の化合物を調製するための方法であって、
ａ）式（ＸＩ）の化合物
【化１６】
2021517126.tif 000144
（式中、Ｐ１、Ｐ２およびＢは、一般式（Ｉ）において定義された通りである）を還元して、式（ＸＶＩＩ）の化合物
【化１７】
2021517126.tif 000145
を得る工程、
ｂ）式（ＸＶＩＩ）の該化合物を、スルホニル化剤（例えば、ｐ−トルエン−スルホニルクロリドＴｓ−Ｃｌ、メタンスルホニルクロリドＭｓ−Ｃｌ）の存在下で移行させて、式（ＸＶＩＩＩ）の化合物
【化１８】
2021517126.tif 000146
（式中、Ｔｓは、トシル基を表す）
を得る工程、ならびに
ｃ）式（ＸＶＩＩＩ）の化合物を塩基性条件にかけて、式（Ｉ−Ｅ）の化合物
【化１９】
2021517126.tif 000147
を得る工程
を含む前記方法。
【請求項５６】
式（Ｉ−Ｅ）の化合物を調製するための方法であって、
ａ）式（ＸＶＩＩ）の化合物
【化２０】
2021517126.tif 000148
（式中、Ｐ１、Ｐ２およびＢは、請求項１に記載の一般式（Ｉ）において定義された通りである）
を、過剰のスルホニル化剤の存在下で移行させて、式（ＸＩＸ）の化合物
【化２１】
2021517126.tif 000149
（式中、Ｔｓは、トシル基を表す）
を得る工程、
ｂ）基Ｐ１の除去によって、式（ＸＩＸ）の化合物を脱保護して、式（ＸＸ）の化合物
【化２２】
2021517126.tif 000150
を得る工程、
ｃ）式（ＸＸ）の化合物を塩基性条件にかけて、式（ＸＸＩ）の化合物
【化２３】
2021517126.tif 000151
を得る工程、および
ｄ）トシル基を保護基Ｐ１によって置き換えて、式（Ｉ−Ｅ）の化合物
【化２４】
2021517126.tif 000152
を得る工程
を含む前記方法。
【請求項５７】
式（Ｉ’）の化合物：
【化２５】
2021517126.tif 000153
（式中、Ｔ１およびＴ２は各々独立して、保護基、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｒ−ＣＯＯＨまたは−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｒ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−Ｒ７であり、
Ｒ７は、固体支持体材料を表し、ｒは、２、３および４から選択される整数であり、
Ｙ、Ｂ、Ｘ１、Ｘ２、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、一般式（Ｉ）において定義された通りである）。
【請求項５８】
Ｔ１およびＴ２の一方は、Ｃ（＝０）（ＣＨ２）ｒ−Ｃ（＝０）ＮＨ−Ｒ７であり、
Ｒ７は、ＣＰＧ固体支持体またはポリスチレン固体支持体であり、
Ｔ１およびＴ２の他方は、保護基であり、ｒは２である、請求項５７に記載の式（Ｉ’）の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）による、標的化された遺伝子サイレンシングの分野、より詳細には、ｓｉＲＮＡにおいて使用されるヌクレオチド前駆体および類似体に関する。
【背景技術】
【０００２】
特異的遺伝子の発現を制御するために合成オリゴヌクレオチドを使用する発想は、１９７０年代後半に遡り、このとき、短合成オリゴヌクレオチドを使用する標的化された遺伝子サイレンシングが最初に実証された（非特許文献１）。Ｓｔｅｐｈｅｎｓｏｎの発見に続いて、遺伝子発現の調整についてのＲＮＡ干渉経路、およびこのプロセスにおけるｓｉＲＮＡの役割の解明により、真核細胞における転写後遺伝子発現制御についての科学者の理解が大幅に拡大した。
【０００３】
合成オリゴヌクレオチドには、アンチセンスオリゴヌクレオチド（「ＡＳＯ」）、ａｎｔｉｍｉＲおよびａｎｔａｇｏｍｉＲのような一本鎖オリゴヌクレオチド、ならびにｓｉＲＮＡのような二本鎖オリゴヌクレオチドが含まれる。ＡＳＯおよびｓｉＲＮＡはいずれも、Ｗａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対合により標的ＲＮＡを結合することによって作用するが、それらの作用機序は異なる。アンチセンス技術において、ＡＳＯは、標的ＲＮＡとのＤＮＡ−ＲＮＡ二本鎖を形成し、ブロッキング機序によってｍＲＮＡ翻訳を阻害する、または標的化されたＲＮＡのＲＮアーゼＨ依存性分解を引き起こす。ＲＮＡ干渉技術において、ｓｉＲＮＡは、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（「ＲＩＳＣ」）に結合し、１つの鎖（「パッセンジャー鎖」または「センス鎖」）が外れ、残りの鎖（「ガイド鎖」または「アンチセンス鎖」）が、ＲＩＳＣと協働して相補的ＲＮＡ（標的ＲＮＡ）に結合し；結合すると、標的ＲＮＡは、ＲＩＳＣのＲＮＡエンドヌクレアーゼアルゴノート（ＡＧＯ）によって切断され、次いで、ＲＮＡエクソヌクレアーゼによってさらに分解される。
【０００４】
ｓｉＲＮＡ医薬を含むオリゴヌクレオチド医薬を開発するための最も大きな障壁としては、（ｉ）化合物の不十分な安定性、（ｉｉ）標的細胞へのｉｎ  ｖｉｖｏ送達が低効率であること、ならびに（ｉｉｉ）「オフターゲット」遺伝子サイレンシングおよび意図しない免疫活性化のような副作用が挙げられる。これらの障壁のいくつかに対処するために、研究により種々のオリゴヌクレオチド化学修飾が試みられている。これらの修飾は、３つのカテゴリー、すなわち、（ｉ）糖修飾、（ｉｉ）ヌクレオチド間結合修飾、および（ｉｉｉ）核酸塩基修飾に分類できる。
【０００５】
糖基への化学修飾には、リボース環の２’−炭素原子または２’−ヒドロキシ基での修飾が含まれる。２’−ＯＭｅ（メトキシ）ヌクレオチド類似体は、最も幅広く使用される修飾のうちの１種である。２’−Ｆ（フルオロ）ヌクレオチドおよび２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオチドもまた、使用されている。大部分の糖改変は２’位に限局されるが、他の位置、例えば、４’位での修飾もまた報告されている（非特許文献２）。
【０００６】
糖基の他の化学修飾としては、いわゆるロックド核酸（「ＬＮＡ」）を生じる、ヌクレオシドのリボーススキャフォールドの２’−酸素および４’−炭素を連結することが挙げられる。ＬＮＡはまた、二環式核酸と呼ばれ、増加したＲＮＡ結合親和性を有することが示されており（非特許文献３；非特許文献４）、得られた二本鎖オリゴヌクレオチドにおけるその溶融温度の大幅な上昇がもたらされる。しかしながら、８ヌクレオチドよりも長い完全ＬＮＡ修飾オリゴマーは、凝集する傾向がある。ＬＮＡ修飾の剛な性質とは対照的に、柔軟性の高い非ロックド核酸（「ＵＮＡ」）修飾がまた、オリゴヌクレオチド医薬における適用のために開発されている。ＵＮＡヌクレオシドは、リボース糖のＣ２’−Ｃ３’結合を有さない。その開放鎖構造に起因して、ＵＮＡは、立体配置を拘束されず、オリゴヌクレオチドの柔軟性を調整するために使用されている（非特許文献５）。ＵＮＡ挿入は、一部の場合には、二本鎖溶融温度（Ｔｍ）を１挿入当たり５℃〜１０℃低下させ得る。さらに、ＵＮＡ挿入は、ＲＩＳＣによるアンチセンス鎖選択を促進し、ｓｉＲＮＡガイド鎖のシード領域へのＵＮＡ修飾は、オフターゲット事象を低減させ得る（非特許文献６）。ＵＮＡおよびＬＮＡ含有ｓｉＲＮＡは、非特許文献７によって報告されている。
【０００７】
さらに、拡張糖環系がまた、開発され、遺伝子サイレンシング技術に適用されている。そのような系としては、ヌクレオシドのリボース部分がモルホリン環によって置き換えられた６員モルホリノ環系が挙げられる。モルホリノベースのヌクレオシドは、モルホリンサブユニットの窒素原子により、それらを含むオリゴヌクレオチド内でヌクレオチド間結合を形成する。ホスホロジアミデートモルホリノベースのオリゴヌクレオチド（「ＰＭＯ」）は、アンチセンス技術において使用されている（非特許文献８；非特許文献９）。しかしながら、相補的ＲＮＡへの低い結合親和性に起因して、アンチセンスＰＭＯは、比較的長い、例えば、２５塩基長である必要がある（非特許文献８）。モルホリノサブユニットの例はまた、特許文献１；特許文献２；特許文献３；特許文献４；および特許文献５に開示されている。
【０００８】
化学修飾はまた、３’−５’ホスホジエステル結合をより安定な部分で置き換えてヌクレアーゼ分解への感受性を低減することによって、ヌクレオチド間結合に対して実施できる。幅広く使用される修飾は、ホスホジエステル主鎖のホスホロチオエート結合による部分または完全置き換えであり、この場合、酸素原子に代えて硫黄原子が使用される。核酸に増加した生物学的安定性を付与する代替主鎖修飾は、ボラノホスフェート結合である。ボラノホスフェートオリゴヌクレオチドにおいて、非架橋ホスホジエステル酸素は等電子のボラン（−ＢＨ3）部分で置き換えられる。
【０００９】
しかしながら、ホスホロチオエートのような前述のホスホジエステル修飾の大部分は、ヌクレオチド間結合中にキラル亜リン酸を生じ、得られるオリゴヌクレオチドはジアステレオマー混合物となる。ジアステレオマーオリゴヌクレオチドの数は、各修飾ホスホジエステル結合の２倍であり得るため、得られるジアステレオマーの数は、修飾ホスホジエステル結合の数が増加するにつれて指数関数的に増加する。個々のジアステレオマーは、様々な程度のヌクレアーゼ耐性および標的ｍＲＮＡへの様々なハイブリダイズ特性を示し得る。さらに、ジアステレオマー混合物の精製および化学分析は複雑である。したがって、一部の場合、ホスホロチオエートのようなホスホジエステル修飾および得られるジアステレオマーオリゴヌクレオチド混合物の使用を回避することが望ましい場合がある。
【００１０】
ＲＮＡ干渉技術における他の大きな課題は、ｓｉＲＮＡの標的化送達および細胞取込みである。細胞膜は、負電荷のリン脂質の二重層であり、やはり負電荷のｓｉＲＮＡの進入障壁である。いくつかのグループは、ＧａｌＮＡｃ結合アシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）を発現し、エンドサイトーシスによりＡＳＧＰＲ結合ｓｉＲＮＡ−ＧａｌＮＡｃコンジュゲートを内部移行し得るＮ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）を使用して、それに結合したｓｉＲＮＡを肝細胞に標的化している（例えば、非特許文献１０を参照されたい）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】米国特許第５，０３４，５０６号
【特許文献２】米国特許第５，１６６，３１５号
【特許文献３】米国特許第５，１８５，４４４号
【特許文献４】米国特許第５，６９８，６８５号
【特許文献５】米国特許出願公開第ＵＳ２０１６／０１８６１７４号
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Ｓｔｅｐｈｅｎｓｏｎら、１９７８、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，７５：２８５〜２８８頁
【非特許文献２】Ｌｅｙｄｌｅｒら、１９９５、Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓ  Ｄｅｖ，５：１６１〜１７４頁
【非特許文献３】Ｋｏｓｈｉｎら、１９９８、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，５４：３６０７〜３６３０頁
【非特許文献４】Ｐｒａｋａｓｈら、２０１１、Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｄｉｖｅｒｓ，８：１６１６〜１６４１頁
【非特許文献５】Ｍａｎｇｏｓら、２００３、Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ，１２５：６５４〜６６１頁
【非特許文献６】Ｖａｉｓｈら、２０１１、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ，３９：１８２３〜１８３２頁
【非特許文献７】Ｂｒａｍｓｅｎら（２０１０、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，３８（１７）：５７６１〜５７７３頁）
【非特許文献８】Ｃｏｒｅｙら、２００１、Ｇｅｎｏｍｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２（５）：ｒｅｖｉｅｗｓ  １０１５．１−１０１５
【非特許文献９】Ｐａｒｔｒｉｄｇｅら、１９９６、Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ，６：１６９〜１７５頁
【非特許文献１０】Ｎａｉｒら、２０１４、Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ，１３６：１６９５８〜１６９６１頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
ＲＮＡ干渉技術において進歩はあるものの、改善された安定性を有するｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチドおよびその標的細胞への送達の必要性が当分野において依然として存在している。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本出願は、式（Ｉ）の化合物
【化１】
2021517126.tif 000003
（式中：
−  Ｂは、複素環式核酸塩基であり；
−  Ｐ１およびＰ２は各々独立して、Ｈ、反応性リン基（ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ  ｇｒｏｕｐ）または保護基であり；
−  Ｙは、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ１またはＮ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１であり、Ｒ１は：
・ハロゲン原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）複素環、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、（Ｃ５〜Ｃ１４）ヘテロアリール基、−Ｏ−Ｚ１、−Ｎ（Ｚ１）（Ｚ２）、−Ｓ−Ｚ１、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｊ）−Ｏ−Ｚ１、−Ｏ−Ｃ（＝Ｊ）−Ｚ１、−Ｃ（＝Ｊ）−Ｎ（Ｚ１）（Ｚ２）および−Ｎ（Ｚ１）−Ｃ（＝Ｊ）−Ｚ２（式中、
Ｊは、ＯもしくはＳであり、
Ｚ１およびＺ２の各々は独立して、Ｈ、ハロゲン原子および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基から選択される１つもしくはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基である）から選択される１つもしくはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基、
・ハロゲン原子および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基から選択される１つもしくはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基、または
・基−［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ−Ｒ２−（Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）ｐ−Ｒ３（式中：
ｍは、０もしくは１を意味する整数であり、
ｐは、０〜１０の範囲の整数であり、
Ｒ２は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、−Ｏ−Ｚ３、−Ｎ（Ｚ３）（Ｚ４）、−Ｓ−Ｚ３、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｋ）−Ｏ−Ｚ３、−Ｏ−Ｃ（＝Ｋ）−Ｚ３、Ｃ（＝Ｋ）−Ｎ（Ｚ３）（Ｚ４）およびＮ（Ｚ３）−Ｃ（＝Ｋ）−Ｚ４（式中、
Ｋは、ＯもしくＳであり、
Ｚ３およびＺ４の各々は独立して、Ｈ、ハロゲン原子および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基から選択される１つもしくはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基である）によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキレン基であり、
Ｒ３は、水素原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ基、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）複素環、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基もしくは（Ｃ５〜Ｃ１４）ヘテロアリール基からなる群から選択されるか、
もしくは
Ｒ３は、細胞標的化部分である）
であり、
−  Ｘ１およびＸ２は各々独立して、水素原子、−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基であり、
−  Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄの各々は独立して、Ｈまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基である）
を開示する。
【００１５】
式（Ｉ）の化合物の一部の実施形態では、Ｙは、ＮＲ１であり、Ｒ１は、場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基であり、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（Ｉ）について定義された通りである。
【００１６】
式（Ｉ）の化合物の一部の実施形態では、Ｙは、ＮＲ１であり、Ｒ１は、非置換（Ｃ１〜Ｃ１６）アルキル基であり、これには、メチル、イソプロピル、ブチル、オクチル、ヘキサデシルからなる群から選択されるアルキル基が含まれ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（Ｉ）について定義されたのと同じ意味を有する。
【００１７】
式（Ｉ）の化合物の一部の実施形態では、Ｙは、ＮＲ１であり、Ｒ１は、ハロゲン原子および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基であり、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（Ｉ）について定義されたのと同じ意味を有する。
【００１８】
式（Ｉ）の化合物の一部の実施形態では、Ｙは、ＮＲ１であり、Ｒ１は、シクロヘキシル基であり、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（Ｉ）について定義されたのと同じ意味を有する。
【００１９】
式（Ｉ）の化合物の一部の実施形態では、Ｙは、ＮＲ１であり、Ｒ１は、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基によって置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基であり、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（Ｉ）について定義されたのと同じ意味を有する。
【００２０】
式（Ｉ）の化合物の一部の実施形態では、Ｙは、ＮＲ１であり、Ｒ１は、フェニル基によって置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基であり、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（Ｉ）について定義されたのと同じ意味を有する。
【００２１】
式（Ｉ）の化合物の一部の実施形態では、Ｙは、ＮＲ１であり、Ｒ１は、フェニル基によって置換されたメチル基であり、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（Ｉ）について定義されたのと同じ意味を有する。
【００２２】
式（Ｉ）の化合物の一部の実施形態では、Ｙは、Ｎ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１であり、Ｒ１は、場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基であり、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（Ｉ）について定義されたのと同じ意味を有する。
【００２３】
式（Ｉ）の化合物の一部の実施形態では、Ｙは、Ｎ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１であり、Ｒ１は、メチルおよびペンタデシルからなる群から選択され、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（Ｉ）について定義されたのと同じ意味を有する。
【００２４】
式（Ｉ）の化合物の一部のさらなる実施形態では、Ｙは、ＮＲ１であり、Ｒ１は、基−［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ−Ｒ２−（Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）ｐ−Ｒ３（式中、
ｍは、０または１を意味する整数であり、
ｐは、０〜１０の範囲の整数であり、
Ｒ２は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、−Ｏ−Ｚ３、−Ｎ（Ｚ３）（Ｚ４）、−Ｓ−Ｚ３、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｋ）−Ｏ−Ｚ３、−Ｏ−Ｃ（＝Ｋ）−Ｚ３、−Ｃ（＝Ｋ）−Ｎ（Ｚ３）（Ｚ４）、−Ｎ（Ｚ３）−Ｃ（＝Ｋ）−Ｚ４（式中、
Ｋは、ＯまたはＳであり、
Ｚ３およびＺ４の各々は独立して、Ｈ、ハロゲン原子および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基である）によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキレン基であり、
Ｒ３は、細胞標的化部分である）
であり、
−  Ｘ１およびＸ２は各々独立して、水素原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基であり、
−  Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄの各々は独立して、Ｈまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基である。
【００２５】
式（Ｉ）の化合物のこれらのさらなる実施形態の一部では、Ｒ１は、基−［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ−Ｒ２−（Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）ｐ−Ｒ３であり、ｍは０であり、ｐは０であり、Ｒ３は、細胞標的化部分であり、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＲ２は、式（Ｉ）の化合物の一般定義における通りである。
【００２６】
式（Ｉ）の化合物のこれらのさらなる実施形態の一部では、Ｒ２は、エチレン基であり、ｐは０であり、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子である。
【００２７】
式（Ｉ）の化合物のこれらのさらなる実施形態の一部では、Ｒ２は、ペンチレン基であり、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子である。
【００２８】
式（Ｉ）の化合物のこれらのさらなる実施形態の一部では、Ｒ２は、（Ｃ１２）アルキレン基であり、Ｘ３およびＸ４はいずれも、水素原子である。
【００２９】
式（Ｉ）の化合物のこれらのさらなる実施形態の一部では、Ｒ１は、基−［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ−Ｒ２−（Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）ｐ−Ｒ３であり、ｍは０であり、ｐは、１、２、３および４からなる整数の群から選択され、Ｒ３は、細胞標的化部分であり、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＲ２は、式（Ｉ）の化合物の一般定義における通りである。
【００３０】
式（Ｉ）の化合物のこれらのさらなる実施形態の一部では、Ｒ２は、エチレン基であり、ｐは１であり、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子である。
【００３１】
式（Ｉ）の化合物のこれらのさらなる実施形態の一部では、Ｒ２は、エチレン基であり、ｐは２であり、Ｘ１およびＸ２は、いずれも水素原子である。
【００３２】
式（Ｉ）の化合物のこれらのさらなる実施形態の一部では、Ｒ２は、エチレン基であり、ｐは３であり、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子である。
【００３３】
式（Ｉ）の化合物のこれらのさらなる実施形態の一部では、Ｒ２は、エチレン基であり、ｐは４であり、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子である。
【００３４】
式（Ｉ）の化合物のこれらのさらなる実施形態の一部では、ｍは１であり、ｐは０であり、Ｒ３は、細胞標的化部分であり、Ｒ２、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２は、式（Ｉ）の化合物の一般定義における通りである。
【００３５】
式（Ｉ）の化合物のこれらのさらなる実施形態の一部では、Ｒ２は、ブチレンであり、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子を表し、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、一般式（Ｉ）について定義された通りである。
【００３６】
式（Ｉ）の化合物のこれらのさらなる実施形態の一部では、Ｒ２は、（Ｃ１１）アルキレンであり、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子を表し、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、一般式（Ｉ）について定義された通りである。
【００３７】
式（Ｉ）の化合物のこれらのさらなる実施形態の一部では、Ｒ２は、メチレンであり、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子を表し、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、一般式（Ｉ）について定義された通りである。
【００３８】
式（Ｉ）の化合物のこれらのさらなる実施形態の一部では、ｍは１であり、ｐは、１および２からなる整数の群から選択され、Ｒ３は、細胞標的化部分であり、Ｒ２、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２は、式（Ｉ）の化合物の一般定義における通りである。
【００３９】
式（Ｉ）の化合物のこれらのさらなる実施形態の一部では、Ｒ２は、メチレン基であり、ｐは２であり、Ｒ３は、細胞標的化部分であり、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２は、一般式（Ｉ）について定義された通りである。
【００４０】
式（Ｉ）の化合物のこれらのさらなる実施形態の一部では、Ｒ２は、メチレン基であり、ｐは１であり、Ｒ３は、細胞標的化部分であり、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２は、一般式（Ｉ）について定義された通りである。
【００４１】
式（Ｉ）の化合物のこれらのさらなる実施形態の一部では、Ｒ３は、式（ＩＩＩ）の化合物：
【化２】
2021517126.tif 000004
（式中、Ａ１、Ａ２およびＡ３は、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ４であり、
Ｒ４は、（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルまたは（Ｃ６〜Ｃ１０）−アリール基であり；
Ａ４は、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ４またはＮＨＣ（＝Ｏ）−Ｒ５であり、Ｒ４は、上記の通り定義され、Ｒ５は、ハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル基である）
である。
【００４２】
式（Ｉ）の化合物のこれらのさらなる実施形態の一部では、Ｒ３は、式（ＩＩＩ）の化合物（式中、Ａ１、Ａ２およびＡ３は、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ４であり、Ｒ４は、（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルまたは（Ｃ６〜Ｃ１０）−アリール基であり；
Ａ４は、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ４またはＮＨＣ（＝Ｏ）−Ｒ５であり、Ｒ４は、上記の通り定義され、Ｒ５は、ハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル基である）
である。
【００４３】
式（Ｉ）の化合物のこれらのさらなる実施形態の一部では、Ｒ３は、式（ＩＩＩ）の化合物（式中、Ａ１、Ａ２およびＡ３は、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ４であり、Ｒ４は、メチル基であり、
Ａ４は、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ４またはＮＨＣ（＝Ｏ）−Ｒ５であり、Ｒ４およびＲ５の各々は、メチル基である）
である。
【００４４】
式（Ｉ）の化合物の一部の実施形態では、Ｂは、場合により保護されており、ピリミジン、置換ピリミジン、プリンおよび置換プリンからなる群から選択される。
【００４５】
式（Ｉ）の化合物の一部の実施形態では、Ｐ１またはＰ２の一方は、Ｏ−４，４’−ジメトキシトリチル基であり、Ｐ１およびＰ２の他方は、Ｈ、反応性リン基または保護基であり、Ｙ、Ｂ、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、式（Ｉ）において定義された通りである。
【００４６】
式（Ｉ）の化合物の一部の実施形態では、Ｐ１およびＰ２の一方は、２−シアノエチル−Ｎ，Ｎジイソプロピルホスホラミダイト基であり、Ｐ１およびＰ２の他方は、保護基であり、Ｙ、Ｂ、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、式（Ｉ）において定義された通りである。
【００４７】
式（Ｉ）の化合物の一部の実施形態では、Ｐ１およびＰ２の一方は、２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホラミダイト基であり、Ｐ１およびＰ２の他方は、Ｏ−４，４’−ジメトキシトリチル基であり、Ｙ、Ｂ、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、式（Ｉ）において定義された通りである。
【００４８】
本発明はまた、１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）のヌクレオチド：
【化３】
2021517126.tif 000005
（式中：
−  Ｂは、複素環式核酸塩基であり；
−  Ｌ１およびＬ２の一方は、式（ＩＩ）の化合物とオリゴマー化合物とを連結するヌクレオシド間連結基であり、Ｌ１およびＬ２の他方は、Ｈ、保護基、リン部分または式（ＩＩ）の化合物とオリゴマー化合物とを連結するヌクレオシド間連結基であり、
−  Ｙは、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ１またはＮ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１であり、Ｒ１は：
・ハロゲン原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）複素環、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、（Ｃ５〜Ｃ１４）ヘテロアリール基、−Ｏ−Ｚ１、−Ｎ（Ｚ１）（Ｚ２）、−Ｓ−Ｚ１、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｊ）−Ｏ−Ｚ１、−Ｏ−Ｃ（＝Ｊ）−Ｚ１、−Ｃ（＝Ｊ）−Ｎ（Ｚ１）（Ｚ２）および−Ｎ（Ｚ１）−Ｃ（＝Ｊ）−Ｚ２（式中、
Ｊは、ＯもしくはＳであり、
Ｚ１およびＺ２の各々は独立して、Ｈ、ハロゲン原子および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基から選択される１つもしくはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル基である）から選択される１つもしくはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基、
・ハロゲン原子および（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル基から選択される１つもしくはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基、または
・基−［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ−Ｒ２−（Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）ｐ−Ｒ３（式中、
ｍは、０もしくは１を意味する整数であり、
ｐは、０〜１０の範囲の整数であり、
Ｒ２は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、−Ｏ−Ｚ３、−Ｎ（Ｚ３）（Ｚ４）、−Ｓ−Ｚ３、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｋ）−Ｏ−Ｚ３、−Ｏ−Ｃ（＝Ｋ）−Ｚ３、−Ｃ（＝Ｋ）−Ｎ（Ｚ３）（Ｚ４）、および−Ｎ（Ｚ３）−Ｃ（＝Ｋ）−Ｚ４（式中、
Ｋは、ＯもしくはＳであり、
Ｚ３およびＺ４の各々は独立して、Ｈ、ハロゲン原子および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基から選択される１つもしくはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基である）によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキレン基であり、
Ｒ３は、水素原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ基、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）複素環、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基もしくは（Ｃ５〜Ｃ１４）ヘテロアリール基からなる群から選択されるか、
もしくは、Ｒ３は、細胞標的化部分である）
であり、
−  Ｘ１およびＸ２は各々独立して、水素原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基であり、
−  Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄの各々は独立して、Ｈまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基である）
または薬学的に許容されるその塩を含むオリゴヌクレオチドに関する。
【００４９】
前記オリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物または薬学的に許容されるその塩において、Ｙは、ＮＲ１であり、Ｒ１は、非置換（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基であり、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ２、Ｒ３およびＢは、一般式（ＩＩ）について定義されたのと同じ意味を有する。
【００５０】
前記オリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物または薬学的に許容されるその塩において、Ｙは、ＮＲ１であり、Ｒ１は、非置換（Ｃ1〜Ｃ16）アルキル基であり、これには、メチル、イソプロピル、ブチル、オクチル、ヘキサデシルを含む群から選択されるアルキル基が含まれ、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ２、Ｒ３およびＢは、式（ＩＩ）において定義されたのと同じ意味を有する。
【００５１】
前記オリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物または薬学的に許容されるその塩において、Ｙは、ＮＲ１であり、Ｒ１は、ハロゲン原子および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、ならびにＬ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ２、Ｒ３およびＢから選択される１つまたはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基である。
【００５２】
前記オリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物または薬学的に許容されるその塩において、Ｙは、ＮＲ１であり、Ｒ１は、シクロヘキシル基であり、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ２、Ｒ３およびＢは、式（ＩＩ）において定義されたのと同じ意味を有する。
【００５３】
前記オリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物または薬学的に許容されるその塩において、Ｙは、ＮＲ１であり、Ｒ１は、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基によって置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基であり、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ２、Ｒ３およびＢは、式（ＩＩ）において定義されたのと同じ意味を有する。
【００５４】
前記オリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物または薬学的に許容されるその塩において、Ｙは、ＮＲ１であり、Ｒ１は、フェニル基によって置換されたメチル基であり、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ２、Ｒ３およびＢは、式（ＩＩ）において定義されたのと同じ意味を有する。
【００５５】
前記オリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物または薬学的に許容されるその塩において、Ｙは、Ｎ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１であり、Ｒ１は、場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基であり、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ２、Ｒ３およびＢは、式（ＩＩ）において定義されたのと同じ意味を有する。
【００５６】
前記オリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物または薬学的に許容されるその塩において、Ｙは、Ｎ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１であり、Ｒ１は、メチルおよびペンタデシルを含む群から選択され、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ２、Ｒ３およびＢは、式（ＩＩ）において定義されたのと同じ意味を有する。
【００５７】
前記オリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物または薬学的に許容されるその塩において、Ｂは、ピリミジン、置換ピリミジン、プリンおよび置換プリンを含む群から選択される。
【００５８】
前記オリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物において、前記ヌクレオシド間連結基は独立して、ホスホジエステル、ホスホトリエステル、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、アルキル−ホスホネートおよびホスホラミデート主鎖連結基からなる群から選択される。
【００５９】
一部の実施形態では、前記オリゴヌクレオチドは、２〜１０個の式（ＩＩ）の化合物を含む。
【００６０】
一部の実施形態では、前記オリゴヌクレオチドは、１つまたはそれ以上の標的化されたヌクレオチドを含む。
【００６１】
前記オリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物において、Ｒ３は、式（ＩＩＩ）：
【化４】
2021517126.tif 000006
（式中、Ａ１、Ａ２およびＡ３は、ＯＨであり、
Ａ４は、ＯＨまたはＮＨＣ（＝Ｏ）−Ｒ５であり、Ｒ５は、ハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル基である）
のものである。
【００６２】
前記オリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物において、Ｒ３は、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンである。
【００６３】
本発明はまた、本開示に記載の１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物または薬学的に許容されるその塩を含む二本鎖オリゴヌクレオチドに関する。
【００６４】
本発明はまた、本開示に記載の１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物または薬学的に許容されるその塩を含むｓｉＲＮＡに関する。
【００６５】
本開示はまた、本明細書で示されるヌクレオチド前駆体、ヌクレオチド類似体、および一本鎖または二本鎖オリゴヌクレオチドを得るための方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００６６】
【図１】ｌＴ３、ｌＴ３ｂ、ｌＴ１およびｌＴ１ｂ−オーバーハングを有するｓｉＲＮＡ５８〜７９のインビトロノックダウンを示す図である。縦軸：対照ｓｉＲＮＡに対する、トランスフェクトされたＨｅｐＧ２細胞におけるＡＨＡ−１発現パーセント横軸：ｓｉＲＮＡ番号、濃度
【図２】追加のコレステロール置換を有するまたは有しないｌＴ３−およびｌＴ３ｂ−オーバーハングを有するｓｉＲＮＡ２９〜５５のインビトロノックダウンを示す図である。縦軸：対照に対する、トランスフェクトされたＨｅｐＧ２細胞におけるＡＨＡ−１発現パーセント横軸：ｓｉＲＮＡ番号
【図３ａ】Ｘ軸ラベルに示されている物質のｓ．ｃ．投与前後の採血時点における相対的なＴＴＲタンパク質血清レベルを示す図である。縦軸：投与前に対するＴＴＲ血清レベル＋／−ＳＥＭ横軸：皮下投与後の日数
【図３ｂ】Ｘ軸ラベルに示されている物質のｓ．ｃ．投与前後の採血時点における相対的なＴＴＲタンパク質血清レベルを示す図である。縦軸：投与前に対するＴＴＲ血清レベル＋／−ＳＥＭ横軸：皮下投与後の日数
【図４】Ｘ軸ラベルに示されている物質のｓ．ｃ．投与の４８時間後の研究屠殺における、肝臓における相対的なＴＴＲ  ｍＲＮＡ発現レベルを示す図である。縦軸：肝臓におけるＴＴＲ  ｍＲＮＡ相対的発現＋／−ＳＤ横軸：ｓｉＲＮＡ番号、用量
【図５】Ｘ軸ラベルに示されている物質のｓ．ｃ．投与の４８時間後の研究屠殺におけるＴＴＲタンパク質血清レベルを示す図である。縦軸：ｎｇ／ｍｌで表される血清ＴＴＲ濃度＋／−ＳＤ横軸：ｓｉＲＮＡ番号、用量
【図６ａ】Ｘ軸ラベルに示されている物質のｓ．ｃ．投与後の採血時点における相対的なＴＴＲタンパク質血清レベルを示す図である。縦軸：投与前に対するＴＴＲ血清レベル＋／−ＳＥＭ横軸：皮下投与後の日数
【図６ｂ】Ｘ軸ラベルに示されている物質のｓ．ｃ．投与後の採血時点における相対的なＴＴＲタンパク質血清レベルを示す図である。縦軸：投与前に対するＴＴＲ血清レベル＋／−ＳＥＭ横軸：皮下投与後の日数
【図７】Ｘ軸ラベルに示されている物質のｓ．ｃ．投与の４８時間後の研究屠殺における、肝臓における相対的なＴＴＲ  ｍＲＮＡ発現レベルを示す図である。縦軸：肝臓におけるＴＴＲ  ｍＲＮＡ相対的発現＋／−ＳＤ横軸：ｓｉＲＮＡ番号、用量
【図８】Ｘ軸ラベルに示されている物質のｓ．ｃ．投与の４８時間後の研究屠殺におけるＴＴＲタンパク質血清レベルを示す図である。縦軸：ｎｇ／ｍｌで表される血清ＴＴＲ濃度＋／−ＳＤ横軸：ｓｉＲＮＡ番号、用量
【図９ａ】凡例に示されている物質のｓ．ｃ．投与後の採血時点における相対的なＴＴＲタンパク質血清レベルを示す図である。縦軸：投与前に対するＴＴＲ血清レベル＋／−ＳＥＭ横軸：皮下投与後の日数
【図９ｂ】凡例に示されている物質のｓ．ｃ．投与後の採血時点における相対的なＴＴＲタンパク質血清レベルを示す図である。縦軸：投与前に対するＴＴＲ血清レベル＋／−ＳＥＭ横軸：皮下投与後の日数
【図１０】Ｘ軸ラベルに示されている物質のｓ．ｃ．投与の４８時間後の研究屠殺における、肝臓における相対的なＴＴＲ  ｍＲＮＡ発現レベルを示す図である。縦軸：肝臓におけるＴＴＲ  ｍＲＮＡ相対的発現＋／−ＳＤ横軸：ｓｉＲＮＡ番号、用量
【図１１】Ｘ軸ラベルに示されている物質のｓ．ｃ．投与の４８時間後の研究屠殺におけるＴＴＲタンパク質血清レベルを示す図である。縦軸：ｎｇ／ｍｌで表される血清ＴＴＲ濃度＋／−ＳＤ横軸：ｓｉＲＮＡ番号、用量
【図１２ａ】凡例に示されている物質のｓ．ｃ．投与後の採血時点における相対的なＴＴＲタンパク質血清レベルを示す図である。縦軸：投与前に対するＴＴＲ血清レベル＋／−ＳＥＭ横軸：皮下投与後の日数
【図１２ｂ】凡例に示されている物質のｓ．ｃ．投与後の採血時点における相対的なＴＴＲタンパク質血清レベルを示す図である。縦軸：投与前に対するＴＴＲ血清レベル＋／−ＳＥＭ横軸：皮下投与後の日数
【図１３】Ｘ軸ラベルに示されている物質のｓ．ｃ．投与の４８時間後の研究屠殺における、肝臓における相対的なＴＴＲ  ｍＲＮＡ発現レベルを示す図である。縦軸：肝臓におけるＴＴＲ  ｍＲＮＡ相対的発現＋／−ＳＤ横軸：ｓｉＲＮＡ番号、用量
【図１４】Ｘ軸ラベルに示されている物質のｓ．ｃ．投与の４８時間後の研究屠殺におけるＴＴＲタンパク質血清レベルを示す図である。縦軸：ｎｇ／ｍｌで表される血清ＴＴＲ濃度＋／−ＳＤ横軸：ｓｉＲＮＡ番号、用量
【発明を実施するための形態】
【００６７】
本開示の発明は、ｓｉＲＮＡのような二本鎖オリゴヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドに組み込むことができる新規のヌクレオチド類似体を提供する。これらの類似体を含むオリゴヌクレオチドは、優れた生物活性、例えば、改善されたｉｎ  ｖｉｔｒｏ安定性およびｉｎ  ｖｉｖｏ作用持続時間を有する。改善されたオリゴヌクレオチドは、標的遺伝子の発現をサイレンシングする（例えば、低減または除去する）のに有用である。特定の実施形態では、本発明は、目的のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）にハイブリダイズし得る、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、とりわけｓｉＲＮＡに含まれる特定のヌクレオチド類似体を包含し、その結果、目的の標的遺伝子の発現が低減または遮断される。一部の実施形態では、本発明は、リボース糖環が６員複素環式環によって置き換えられたヌクレオチド類似体を提供する。以下でさらに詳細に記載される通り、６員複素環式基は、ジオキサンまたはモルホリノ環であり得る。複素環式基がモルホリノ環である場合、窒素原子は、置換または非置換のいずれかである。一部の実施形態では、６員複素環式基は、直鎖または環式基および／または標的化部分によって置換されていることがある。
【００６８】
定義
本明細書において使用される用語は、一般に、当技術分野におけるそれらの通常の意味を有する。本開示の主題の生成物および方法の記載におけるさらなる指針を提供するために、特定の用語を、以下、または本開示の他所で議論する。
【００６９】
以下の定義は、本開示の文脈に適用される：
【００７０】
本明細書および添付の特許請求の範囲において使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、文脈によりそうでないことが明らかに述べられない限り、複数の参照を含む。
【００７１】
本明細書で使用される場合、「約」という用語は、当技術分野の当業者に容易に知られる、それぞれの値についての通常の誤差範囲を指す。本明細書における「約」値またはパラメーターへの参照は、その値またはパラメーター自体を対象とする実施形態を含む（および記載する）。一部の実施形態では、「約」という用語は、所与の値の±１０％を指す。しかしながら、問題の値が、ヌクレオチドのような分割できない対象物または分割されるとその正体を喪失すると考えられる他の対象物を指す場合は必ず、「約」は分割できない対象物の±１を指す。
【００７２】
本明細書に記載の本開示の態様および実施形態は、態様および実施形態を「有すること」、「含むこと」、「からなること」および「から本質的になること」を含むことが理解される。「有する」および「含む」という語、または「有する（ｈａｓ）」、「有すること」、「含む（ｃｏｏｍｒｉｓｅｓ）」もしくは「含むこと」のような変化形は、述べられた要素（例えば、物質の組成物または方法工程）の包含を意図するが、任意の他の要素の除外は意図しないと理解される。「からなること」という用語は、述べられた要素の包含、任意のさらなる要素の除外を意図する。「から本質的になること」という用語は、述べられた要素、および他の要素が本発明の基本的かつ新規の特徴に実質的に影響しない場合、おそらく他の要素の包含を意図する。
【００７３】
他に示されない限り、「アルキル」は、鎖中に１〜２０個（例えば、１〜５個、１〜１０個、または１〜１５個）の炭素原子を有する、直鎖状であっても分枝状であってもよい脂肪族炭化水素基を意味する。「分枝状」は、１つまたはそれ以上のアルキル基、例えば、メチル、エチルまたはプロピル基が、直鎖状アルキル鎖に結合していることを意味する。例示的な直鎖状または分枝状アルキル基としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、３−ペンチル、オクチル、ノニルおよびデシルが挙げられる。
【００７４】
「シクロアルキル」は、上で定義された通りの環式飽和アルキル基を意味する。例は、これらに限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルおよびシクロオクチルである。
【００７５】
「アルコキシ」は、−ＯＲ基（式中、Ｒは、シクロアルキル基を含む、上で定義された通りのアルキル基である）として定義される。例は、これらに限定されないが、メトキシ、エトキシ、１−プロポキシ、２−プロポキシ、ブトキシおよびペントキシである。
【００７６】
「ハロゲン原子」は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素原子を指す。一部の実施形態では、フッ素または塩素原子が好ましいことがある。
【００７７】
他に示されない限り、「アリール」は、６〜１４個の炭素原子、例えば、６〜１０個の炭素原子の芳香族単環式または多環式炭化水素環系を意味する。例示的なアリール基としては、フェニルおよびナフチル基が挙げられる。
【００７８】
「複素環」または「複素環式」は、酸素、窒素、セレン、リンおよび硫黄の群から選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含む飽和、部分不飽和、または不飽和炭素環式基を指す。窒素、セレン、リンまたは硫黄は、場合により酸化され、窒素は、場合により、４級化される。例えば、複素環は、環の少なくとも１員がヘテロ原子である安定な環であり得る。一部の実施形態では、複素環は、３〜１４、例えば、５〜７または５〜１０員を有し得、１、２または複数の環を有し得る（すなわち、単、二または多環式環）。特定の実施形態では、ヘテロ原子は、酸素、窒素および硫黄である。ヘテロ原子の数は、例えば、１〜３個まで様々であり得る。好適な複素環はまた、Ｔｈｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃｓ、第７６版、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、１９９５〜１９９６、２−２５〜２−２６頁に開示されており、その開示は、参照によって本明細書に組み入れる。一部の実施形態では、複素環は非芳香族複素環であり、これらに限定されないが、ピロリジニル、ピラゾリジニル、イミダゾリジニル、オキシラニル、テトラヒドロフラニル、ジオキソラニル、テトラヒドロピラニル、ジオキサニル、ジオキソラニル、ピペリジル、ピペラジニル、モルホリニル、ピラニル、イミダゾリニル、ピロリニル、ピラゾリニル、チアゾリジニル、テトラヒドロチオピラニル、ジチアニル、チオモルホリニル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロピリジル、ジヒドロピリジル、テトラヒドロピリニジニル、ジヒドロチオピラニルおよびアゼパニル、ならびにフェニル基との縮合から得られる縮合系が挙げられる。
【００７９】
「ヘテロアリール」は、５〜１４員（例えば、５〜７員または５〜１０員）の芳香族複素環式環を指し、単、二または多環式環であり得る。ヘテロ原子の数は、典型的には、例えば、ＮおよびＯから選択される１〜３個のヘテロ原子で様々であり得る。ヘテロアリール基の例としては、ピロリル、ピリジル、ピラゾリル、チエニル、ピリミジニル、ピラジニル、テトラゾリル、インドリル、キノリニル、プリニル、イミダゾリル、チエニル、チアゾリル、ベンゾチアゾリル、フラニル、ベンゾフラニル、１，２，４−チアジアゾリル、オキサジアゾール、イソチアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、イソキノリル、ベンゾチエニル、イソベンゾフリル、ピラゾリル、カルバゾイル、ベンゾイミダゾリル、イソオキサゾリルおよびピリジル−Ｎ−オキシド、ならびにフェニル基との縮合から得られる縮合系が挙げられる。特定の実施形態では、ヘテロアリールは、ＮおよびＯから選択される１つまたはそれ以上のヘテロ原子、例えば、１〜３個のヘテロ原子を含む５または６員ヘテロアリールである。「アルキル」、「シクロアルキル」、「アルケニル」、「アルキニル」、「アリール」、「ヘテロアリール」および「ヘテロシクリル」はまた、２個の水素原子の除去によって形成される、対応する「アルキレン」、「シクロアルキレン」、「アルケニレン」、「アルキニレン」、「アリーレン」、「ヘテロアリーレン」および「ヘテロシクレン」を指す。
【００８０】
「複素環式核酸塩基」という用語は、核酸塩基が高分子構造に組み込まれる場合、その相補的核酸塩基または核酸塩基類似体（すなわち、核酸塩基の誘導体）との対形成においてＷａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ型水素結合を形成し、積層相互作用することが可能な任意の窒素含有複素環式部分を意味する。
【００８１】
他に示されない限り、「複素環式核酸塩基」という用語は、本明細書において、本開示による、場合により置換されたジオキサン環または場合により置換されたモルホリノ環に結合できる、場合により置換された窒素含有複素環式基を指す。一部の実施形態では、複素環式核酸塩基は、場合により置換されたプリン塩基または場合により置換されたピリミジン塩基から選択できる。「プリン塩基」という用語は、本明細書において、当業者によって理解される通りのその通常の意味で使用され、これには、その互変異性体が含まれる。同様に、「ピリミジン塩基」という用語は、本明細書において、当業者によって理解される通りのその通常の意味で使用され、これには、その互変異性体が含まれる。場合により置換されたプリン塩基の非限定リストには、プリン、アデニン、グアニン、ヒポキサンチン、キサンチン、アロキサンチン、７−アルキルグアニン（例えば、７−メチルグアニン）、テオブロミン、カフェイン、尿酸およびイソグアニンが含まれる。ピリミジン塩基の例としては、これらに限定されないが、シトシン、チミン、ウラシル、５，６−ジヒドロウラシルおよび５−アルキルシトシン（例えば、５−メチルシトシン）が挙げられる。複素環式核酸塩基の他の非限定例としては、ジアミノプリン、８−オキソ−Ｎ6アルキルアデニン（例えば、８−オキソ−Ｎ6メチルアデニン）、７−デアザキサンチン、７−デアザグアニン、７−デアザアデニン、Ｎ4，Ｎ4−エタノシトシン、Ｎ6，Ｎ6−エタノ−２，６−ジアミノプリン、５−ハロウラシル（例えば、５−フルオロウラシルおよび５−ブロモウラシル）、プソドイソシトシン、イソシトシン、イソグアニン、１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミド、ならびにさらなる複素環式塩基を開示する参照によって本明細書に組み入れる米国特許第５，４３２，２７２号および米国特許第７，１２５，８５５号に記載の他の複素環式核酸塩基が挙げられる。一部の実施形態では、複素環式核酸塩基は、アミンまたはエノール保護基で場合により置換されていることがある。
【００８２】
１つまたはそれ以上の「保護基」という用語は、本明細書で使用される場合、分子中の既存の基が望ましくない化学反応を受けることを防止するために分子に付加される任意の原子または原子の基を指す。「保護基」は、化学合成の間の望ましくないまたは時宜を得ない反応から反応性基を保護することが当技術分野で公知の不安定な化学部分、例えば、ヒドロキシル、アミノおよびチオール基であり得る。保護基は、典型的には、他の反応性位置における反応の間、位置を保護するように選択的および／または直交性に使用され、次いで、除去されて非保護基をそのまままたはさらなる反応のために利用可能なままにすることができる。
【００８３】
保護基部分の例は、そのいずれも、好適な保護基を開示する限られた目的のために参照によって本明細書に組み入れるＴ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅおよびＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第３版、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、１９９９およびＪ．Ｆ．Ｗ．ＭｃＯｍｉｅ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ、１９７３に記載されている。保護基部分は、それらが、特定の反応条件に安定であり、好都合な段階で、当技術分野において公知の方法論を使用して容易に除去されるように選択できる。
【００８４】
保護基の非限定的なリストには、ベンジル；置換ベンジル；アルキルカルボニルおよびアルコキシカルボニル（例えば、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、アセチルまたはイソブチリル）；アリールアルキルカルボニルおよびアリールアルコキシカルボニル（例えば、ベンジルオキシカルボニル）；置換メチルエーテル（例えば、メトキシメチルエーテル）；置換エチルエーテル；置換ベンジルエーテル；テトラヒドロピラニルエーテル；シリル（例えば、トリメチルシリル、トリエチルシリル、トリイソプロピルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、トリ−イソ−プロピルシリルオキシメチル、［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチルまたはｔ−ブチルジフェニルシリル）；エステル（例えば、安息香酸エステル）；カルボネート（例えば、メトキシメチルカルボネート）；スルホネート（例えば、トシレートまたはメシレート）；非環式ケタール（例えば、ジメチルアセタール）；環式ケタール（例えば、１，３−ジオキサン、１，３−ジオキソランおよび本明細書に記載のもの）；非環式アセタール；環式アセタール（例えば、本明細書に記載のもの）；非環式ヘミアセタール；環式ヘミアセタール；環式ジチオケタール（例えば、１，３−ジチアンまたは１，３−ジチオラン）；オルトエステル（例えば、本明細書に記載のもの）ならびにトリアリールメチル基（例えば、トリチル；モノメトキシトリチル（ＭＭＴｒ）；４，４’−ジメトキシトリチル（ＤＭＴｒ）；４，４’，４’’−トリメトキシトリチル（ＴＭＴｒ）；および本明細書に記載のもの）が含まれる。
【００８５】
好ましい保護基は、アセチル（Ａｃ）、ベンゾイル（Ｂｚｌ）、イソブチリル（ｉＢｕ）、フェニルアセチル、ジメトキシトリチル（ＤＭＴ）、メトキシトリチル（ＭＭＴ）、トリフェニルメチル（Ｔｒｔ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミジンおよび２−シアノエチル（ＣＥ）を含む群から選択される。
【００８６】
他に指示されない限り、任意の保護基、アミノ酸および他の化合物についての略号は、それらの通常の使用法、認識される略号またはＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ生化学命名委員会（Ｂｉｏｃｈｅｍ．１１：９４２〜９４４頁（１９７２）を参照されたい）に従う。本明細書で使用される場合、「固体支持体」（樹脂とも呼ばれる）という用語は、合成の間にオリゴヌクレオチドが結合する、典型的には直径５０〜２００μｍの不溶性粒子を意味する。多くの種類の固体支持体が使用されているが、細孔が制御されたガラス（ＣＰＧ）およびポリスチレン（高架橋ポリスチレンビーズ）が特に有用であることが証明されている。細孔が制御されたガラスは、剛性および非膨張性であり、オリゴヌクレオチド合成が起こる深部細孔（孔径５００〜１０００Å）を有する。従来のオリゴヌクレオチド合成のための固体支持体は、市販されており、典型的には、ＣＰＧ固体支持体の場合、樹脂１グラム当たり２０〜４０μｍｏｌのヌクレオシド担持量で製造される。ポリスチレンベースの固体支持体は、樹脂１グラム当たり３００μｍｏｌまでのより高担持量を示す。標準的なヌクレオチドが結合済みの固体支持体材料が、市販されており、アミノ官能化ＣＰＧおよびポリスチレン材料が、本明細書に記載のビルディングブロックについて後で示される通り、非商用ビルディングブロックの合成のために使用されている。既に第１のヌクレオチドビルディングブロックが結合した固体支持体に代えて、市販のユニバーサル固体支持体材料を、本開示において後で記載する通り、使用できる。
【００８７】
本明細書で使用される場合、「リボヌクレオチド」または「ヌクレオチド」という用語には、以下でさらに詳述する通りの天然に存在するもしくは修飾ヌクレオチド、または代替の置換部分が含まれる。修飾ヌクレオチドは、天然に存在しないヌクレオチドであり、本明細書において「ヌクレオチド類似体」とも呼ばれる。当業者であれば、ヌクレオチド中のグアニン、シトシン、アデニン、ウラシルまたはチミンは、そのような置換部分を有するヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドの塩基対形成特性を実質的に変更することなく、他の部分によって置き換えることができることを理解するであろう。例えば、限定なしに、その塩基としてイノシンを含むヌクレオチドは、アデニン、シトシンまたはウラシルを含むヌクレオチドと塩基対形成し得る。したがって、ウラシル、グアニンまたはアデニンを含むヌクレオチドは、本開示のヌクレオチド配列において、例えばイノシンを含むヌクレオチドによって置き換えることができる。そのような置換部分を含む配列は、本開示の実施形態に含まれる。
【００８８】
本明細書で使用される場合、「細胞標的化部分」は、（ｉ）選択した標的受容体を発現する細胞に結合するｓｉＲＮＡの特異性の増大を含む、選択した標的受容体（例えば、標的タンパク質）に結合するｓｉＲＮＡの特異性の増大；（ｉｉ）標的細胞によるｓｉＲＮＡの取込みの増加；および／または（ｉｉｉ）標的細胞に進入すると適切にプロセシングされるｓｉＲＮＡ能の増大、例えば輸送小胞から細胞質へのｓｉＲＮＡの移行を促進することによる、例えば、ｓｉＲＮＡの細胞内放出の増加を包含する、ｓｉＲＮＡの増加した送達を確実にする分子基を意味する。したがって、細胞標的化部分は、オリゴヌクレオチドを特定の細胞、組織、器官などに方向付けるおよび／または送達するために使用される。ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体またはオリゴヌクレオチドに含まれる細胞標的化部分は、前記ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体またはオリゴヌクレオチドが、標的化されていない細胞型と比べて標的化された細胞型によって優先的に認識、結合、内部移行、プロセシング、活性化などされるような特性を前記ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体またはオリゴヌクレオチドに付与する。例えば、内皮細胞は、ペプチド細胞標的化部分Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ（ＲＧＤ）に対する高い親和性を有し；がんおよび腎細胞は、葉酸部分を有する化合物と優先的に相互作用し；免疫細胞は、マンノースに対する親和性を有し；心筋細胞は、ペプチドＷＬＳＥＡＧＰＶＶＴＶＲＡＬＲＧＴＧＳＷ（配列番号１１８）に対する親和性を有する（例えば、Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ  ＺＶ−８０８１−８０８７、２０１０を参照されたい）。他の細胞標的化／送達部分も、当技術分野において公知である。したがって、細胞標的化部分を含む化合物は、標的化された細胞型と優先的に相互作用し、これによって取込まれる。
【００８９】
細胞標的化部分には、細胞標的化ペプチド基および細胞標的化非ペプチド基が包含される。
【００９０】
本明細書で使用される場合、「標的細胞」または「標的化された細胞」は、目的の細胞を指す。細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏ、ｉｎ  ｓｉｔｕまたは生体組織もしくは器官内で見出すことができる。生体は、動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒト、最も好ましくはヒト患者であり得る。
【００９１】
本明細書で使用される場合、「ＴＴＲ」という用語は、トランスチレチン遺伝子またはタンパク質を指す。本明細書で使用される場合、「ＴＴＲ」という用語は、そのアミノ酸およびヌクレオチド配列を、例えば、受託番号ＣＲ４５６９０８でＥＭＢＬデータベースにおいて見出すことができるヒトＴＴＲ；そのアミノ酸およびヌクレオチド配列を、例えば、受託番号ＡＡＨ２４７０２でＧｅｎＢａｎｋデータベースにおいて見出すことができるマウスＴＴＲを含む。ＴＴＲ  ｍＲＮＡ配列のさらなる例は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋにおいて容易に利用可能である。
【００９２】
本明細書で使用される場合、「ＡＨＡ−１」という用語は、ＡＨＳＡ１遺伝子またはタンパク質を指す。本明細書で使用される場合、「ＡＨＡ−１」という用語は、そのアミノ酸およびヌクレオチド配列を、例えば、受託番号ＡＫ３００７６６でＥＭＢＬデータベースにおいて見出すことができるヒトＡＨＳＡ−１を含む。
【００９３】
本明細書で使用される場合、「標的配列」は、第１次転写産物のＲＮＡプロセシングの産物であるｍＲＮＡを含む、標的遺伝子のＲＮＡ転写物またはその部分に見出される連続ヌクレオチド配列を指す。
【００９４】
本明細書で使用される場合、他に示されない限り、「相補的」という用語は、第２のヌクレオチド配列（例えば、オリゴヌクレオチド）との関連で第１のヌクレオチド配列（例えば、オリゴヌクレオチド）を記載するのに使用される場合、当業者に理解される通り、第１のヌクレオチド配列が特定の条件下で第２のヌクレオチド配列とハイブリダイズし、二本鎖構造を形成する能力を指す。これには、第１または第２のヌクレオチド配列の全長にわたる、第１のヌクレオチド配列の第２のヌクレオチド配列への塩基対形成が含まれる。そのような配列は、本明細書において、互いに関して「完全相補的」と呼ぶことができる。本明細書において、第１の配列が第２の配列に関して「実質的に相補的」と呼ばれる場合、２つの配列は、完全に相補的であり得、またはそれらは７０％以上のヌクレオチド同一性を有し得る一方、それらの最終標的に最適な条件下でハイブリダイズする能力を保持する。しかしながら、２つのオリゴヌクレオチドが、ハイブリダイゼーション時に、１つまたはそれ以上の一本鎖オーバーハングを形成するように設計されている場合、そのようなオーバーハングは、相補性の決定に関するミスマッチとみなされるべきではない。例えば、第２のオリゴヌクレオチドが第１のオリゴヌクレオチドに完全に相補的である２１ヌクレオチドの配列を含む、長さ２１ヌクレオチドの第１のオリゴヌクレオチドおよび長さ２３ヌクレオチドの第２のオリゴヌクレオチドを含む二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）はなお、本開示の目的のために「完全に相補的」と呼ぶことができる。「相補的」配列はまた、それらがハイブリダイズする能力に関する上記の要件が満たされる限り、非Ｗａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対ならびに／または非天然および修飾ヌクレオチドから形成される塩基対を含むまたはそれらから完全に形成される。「相補的」、「完全に相補的」および「実質的に相補的」という用語は、それらの使用の文脈から理解される通り、ｄｓＲＮＡのセンス鎖およびアンチセンス鎖間、またはｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖および標的配列間の塩基マッチングに関して使用できる。本明細書で使用される場合、ｍＲＮＡ「の少なくとも一部に実質的に相補的」であるポリヌクレオチドは、目的のｍＲＮＡの連続部分に実質的に相補的であるポリヌクレオチドを指す。本明細書で使用される場合、「二本鎖ＲＮＡ」または「ｄｓＲＮＡ」という用語は、上で定義された通りの２つの逆平行かつ実質的に相補的な核酸鎖を含む二本鎖構造を有するリボ核酸分子の複合体を指す。二本鎖構造を形成する２つの鎖は、１つのより大きいＲＮＡ分子の異なる部分であってもよく、またはそれらは、別個のＲＮＡ分子であってもよい。別個のＲＮＡ分子の場合、そのようなｄｓＲＮＡは、文献において短鎖干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）と呼ばれることがある。２つの鎖が１つのより大きい分子の一部である、したがって、二本鎖構造を形成する第１の鎖の３’末端および第２の鎖の５’末端の間で中断されていないヌクレオチドの鎖で接続されている場合、接続しているＲＮＡ鎖は、「ヘアピンループ」、「短ヘアピンＲＮＡ」または「ｓｈＲＮＡ」と呼ばれる。２つの鎖が、二本鎖構造を形成する第１の鎖の３’末端および第２の鎖の５’末端の間で中断されていないヌクレオチドの鎖以外の方法で共有結合されている場合、連結構造は、「リンカー」と呼ばれる。ＲＮＡ鎖は、同じまたは異なる数のヌクレオチドを有し得る。塩基対の最大数は、ｄｓＲＮＡの最短の鎖のオリゴヌクレオチドから二本鎖中に存在するオーバーハングを引いた数である。二本鎖構造に加えて、ｄｓＲＮＡは、１つまたはそれ以上のヌクレオチドオーバーハングを含み得る。加えて、本明細書で使用される場合、「ｄｓＲＮＡ」という用語は、複数のヌクレオチドにおける実質的な修飾を含み、本明細書に開示されるまたは当技術分野で公知のすべての種類の修飾を含む、リボヌクレオチドへの化学修飾を含み得る。ｓｉＲＮＡ型の分子において使用される任意のそのような修飾は、本開示の目的のために「ｄｓＲＮＡ」に包含される。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡにおけるヌクレオチド間結合は、例えば、本明細書に記載の通り、修飾されることがある。
【００９５】
本開示の範囲内において、核酸の２つの配列間の「パーセンテージ同一性」は、最適なアラインメント後に得られる、比較される２つの配列間の同一のヌクレオチド残基のパーセンテージを意味し、このパーセンテージは、純粋に統計的であり、２つの配列間の差はそれらの長さにわたってランダムに分布している。２つの核酸配列の比較は、それらを最適にアラインした後に配列を比較することによって伝統的に実施され、前記比較は、セグメントによってまたは「アラインメントウィンドウ」を使用することによって行うことができる。比較のための配列の最適なアラインメントは、手動による比較に加えて、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ（１９８１）の局所相同性アルゴリズムによって、ＮｅｄｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（１９７０）による局所相同性アルゴリズムによって、ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ（１９８８）の類似探索法によって、またはこれらのアルゴリズムを使用したコンピュータソフトウェア（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ、５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩのＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡおよびＴＦＡＳＴＡ、または比較ソフトウェアＢＬＡＳＴ  ＮＲもしくはＢＬＡＳＴ  Ｐによる）によって、実施できる。
【００９６】
２つの核酸配列間のパーセンテージ同一性は、比較するべき核酸配列が、２つの配列間の最適なアラインメントについて参照配列と比較される付加または欠失を有し得る２つの最適にアラインメントされた配列を比較することによって決定される。パーセンテージ同一性は、ヌクレオチド残基が、２つの配列間、好ましくは２つの完全配列間で同一である位置の数を決定し、同一位置の数をアラインメントウィンドウ中の位置の総数で割り、結果に１００を掛けて、２つの配列間のパーセンテージ同一性を得ることによって計算される。
【００９７】
本明細書で意図される通り、参照配列との少なくとも７０％ヌクレオチド同一性を有するヌクレオチド配列に、前記参照配列との少なくとも７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％および９９％ヌクレオチド同一性を有するものが包含される。
【００９８】
一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、例えば、デオキシリボヌクレオシドオーバーハング、ｄｓＲＮＡの二本鎖部分内の１つまたはそれ以上のデオキシリボヌクレオシドなどを含むデオキシリボヌクレオシドを含む修飾リボヌクレオシドを含む。しかしながら、どのような状況下でも、二本鎖ＤＮＡ分子は「ｄｓＲＮＡ］という用語に包含されないことが自明である。
【００９９】
本明細書で使用される場合、「ヌクレオチドオーバーハング」という用語は、ｄｓＲＮＡの第１の鎖の３’末端が第２の鎖の５’末端を超えて延びる場合、またはその逆も同様に、ｄｓＲＮＡの二本鎖構造から突き出る１つまたはそれ以上の不対ヌクレオチドを指す。「ブラント」または「平滑末端」は、ｄｓＲＮＡのその末端の不対ヌクレオチド、すなわち、ヌクレオチドオーバーハングが存在しないことを意味する。「平滑末端」ｄｓＲＮＡは、その全長にわたって二本鎖である、すなわち、分子のいずれの末端にもヌクレオチドオーバーハングが存在しないｄｓＲＮＡである。明瞭性のために、ｄｓＲＮＡの鎖の３’末端および／または５’末端にコンジュゲートした化学キャップまたは非ヌクレオチド化学部分は、ｄｓＲＮＡがオーバーハングを有するかまたは平滑末端であるかの決定において考慮しない。
【０１００】
本明細書で使用される場合、ｄｓＲＮＡの「アンチセンス鎖」という用語は、標的配列に実質的に相補的である配列を含むｄｓＲＮＡの鎖を指す。ｄｓＲＮＡの他の鎖は「センス鎖」である。
【０１０１】
本明細書で使用される場合、「細胞に導入する」という用語は、当業者によって理解される通り、細胞への取込みまたは吸収を促進することを意味する。ｄｓＲＮＡの吸収または取込みは、非補助拡散もしくは活性細胞プロセスを通して、または補助剤もしくはデバイスによって生じ得る。この用語の意味は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける細胞に限定されず；ｄｓＲＮＡはまた、生存生物の一部である「細胞に導入される」こともある。そのような場合、細胞への導入は、生体への送達を含む。例えば、ｉｎ  ｖｉｖｏ送達では、ｄｓＲＮＡは、組織部位に注射でき、または全身投与できる。ｉｎ  ｖｉｖｏ送達はまた、ベータグルカン送達系によって媒介される（例えば、Ｔｅｓｚ，Ｇ．Ｊ．ら、２０１１、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．４３６（２）：３５１〜６２頁を参照されたい）。細胞へのｉｎ  ｖｉｔｒｏ導入は、当技術分野で公知の方法、例えば、エレクトロポレーションおよびリポフェクションを含む。さらなる手法は、本明細書の以下に記載されているか、または当技術分野で公知である。
【０１０２】
本明細書で使用される場合、「発現を阻害する」または「発現の阻害」という用語は、それらが標的遺伝子を指す限り、標的遺伝子から転写されるｍＲＮＡの量の低下によって示される標的遺伝子の発現の少なくとも部分的な抑制を指す。本明細書で使用される場合、「阻害すること」という用語は、「低減すること」、「サイレンシング」、「下方調節すること」、「抑制すること」、「ノックダウン」および他の類似の用語と交換可能に使用され、任意のレベルの阻害を含む。阻害の程度は、通常、（（（対照細胞中のｍＲＮＡ）−（標的細胞中のｍＲＮＡ））／（対照細胞中のｍＲＮＡ））・１００％に関して表される。あるいは、阻害の程度は、標的遺伝子転写に機能的に関連するパラメーター、例えば、細胞が分泌する標的遺伝子によってコードされるタンパク質の量、または特定の表現型、例えば、アポトーシスを示す細胞の数の低下に関して示すことができる。原理的に、標的遺伝子サイレンシングは、構築的にまたは遺伝子工学によってのいずれかで、および任意の適切なアッセイによって、標的を発現する任意の細胞において決定できる。しかしながら、所与のｄｓＲＮＡが標的遺伝子の発現をある程度阻害し、したがって本開示に包含されるかを決定するために参照が必要である場合、以下の実施例で提供されるアッセイがそのような参照として役立つことになる。
【０１０３】
本明細書で使用される場合、標的遺伝子発現の文脈で、「処置する」、「処置」などの用語は、標的遺伝子の発現によって媒介される病理プロセスからの解放またはその緩和を指す。本開示の文脈では、本明細書の以下で列挙される他の状態（標的発現によって媒介される病理プロセス以外）のいずれかに関する限り、「処置する」、「処置」などの用語は、そのような状態に関連する１つまたはそれ以上の徴候を軽減または緩和することを指す。
【０１０４】
本明細書で使用される場合、疾患または障害に関する「予防する」または「進行を遅くする」という用語（およびその文法的変化形）は、例えば、疾患を有することが疑われる、または疾患を発症するリスクのある個体における、疾患の予防的処置に関する。予防には、これらに限定されないが、疾患の発病もしくは進行を防ぐもしくは遅らせること、および／または疾患の１つもしくはそれ以上の徴候を所望のもしくは病理未満のレベルで維持することが含まれ得る。
【０１０５】
本明細書で使用される場合、「治療有効量」および「予防有効量」という用語は、標的遺伝子発現によって媒介される病理プロセスまたは標的遺伝子の発現によって媒介される病理プロセスの明白な徴候の処置、予防または管理において治療利益をもたらす量を指す。治療有効である具体的な量は、通常の医師であれば容易に決定でき、標的遺伝子発現によって媒介される病理プロセスの種類および段階、患者の病歴および年齢、ならびに標的遺伝子によって媒介される生物学的プロセスを阻害する他の治療剤の投与のような因子に応じて変動し得る。
【０１０６】
本明細書で使用される場合、「個体」または「対象」という用語は、哺乳動物である。哺乳動物としては、これらに限定されないが、飼育動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌおよびウマ）、霊長類（例えば、ヒトおよび非ヒト霊長類、例えば、サル）、ウサギ、ならびにげっ歯類（例えば、マウスおよびラット）が挙げられる。一部の実施形態では、個体または対象は、ヒトである。
【０１０７】
「ヌクレオシド間結合」、「ヌクレオシド間連結基」、「ヌクレオチド間結合」または「ヌクレオチド間連結基」という用語は、本明細書において交換可能に使用され、例えば、これらに限定されないが、ホスフェート、ホスフェートの類似体、ホスホロチオエート、ホスホネート、グアジニウム、ヒドロキシルアミン、ヒドロキシルヒドラジニル、アミド、カルバメート、アルキルおよび置換アルキル結合を含む、当技術分野で公知の通りの、２つのヌクレオシド（すなわち、複素環式塩基部分および糖部分）ユニット間の任意のリンカーまたは結合を指す。「ヌクレオシド間連結基」は、２つのヌクレオシド間、２つのヌクレオシド類似体間、またはヌクレオシドおよびヌクレオシド類似体の間の結合に関与し得る。
【０１０８】
ヌクレオシド間結合は、核酸分子の主鎖を構成する。ヌクレオシド間連結基は、核酸分子に含まれる２つの隣接するヌクレオシド残基を連結する化学基を指し、これには、（ｉ）２つの隣接するヌクレオシド残基を連結する化学基、（ｉｉ）ヌクレオシド残基と隣接するヌクレオシド類似体残基とを連結する化学基、および（ｉｉｉ）同一であってもよく別個であってもよい第１のヌクレオシド類似体残基と第２のヌクレオシド類似体残基とを連結する化学基が包含される。ヌクレオシド類似体残基には、本明細書で開示される式（ＩＩ）の化合物が包含される。一態様では、本発明のｓｉＮＡ分子のヌクレオチドは、第１のヌクレオチドの糖部分の３’炭素および第２のヌクレオチドの糖部分の５’炭素の間の結合（本明細書において、３’ヌクレオシド間結合と呼ぶ）により隣接するヌクレオチドに連結し得る。３’−５’ヌクレオシド間結合は、本明細書で使用される場合、２つの隣接するヌクレオシドユニットを連結するヌクレオシド間結合を指し、結合は、第１のヌクレオシドの糖部分の３’炭素および第２のヌクレオシドの糖部分の５’炭素の間である。別の態様では、本発明のｓｉＮＡ分子のヌクレオチド（ヌクレオチド類似体を含む）は、第１のヌクレオチドの糖部分の２’炭素および第２のヌクレオチドの糖部分の５’炭素の間の結合（本明細書において、２’ヌクレオシド間結合と呼ぶ）により隣接するヌクレオチド（ヌクレオチド類似体を含む）に連結し得る。２’−５’ヌクレオシド間結合は、本明細書で使用される場合、２つの隣接するヌクレオシドユニットを連結するヌクレオシド間結合を指し、結合は、第１のヌクレオシドの糖部分の２’炭素および第２のヌクレオシドの糖部分の５’炭素の間である。
【０１０９】
本明細書で使用される場合、「ヌクレオシド間連結基」という用語には、リンおよび非リン含有ヌクレオシド間連結基が包含される。
【０１１０】
一部の実施形態では、リン含有ヌクレオシド間連結基には、通常３’−５’結合を有するホスホジエステル、ホスホロチオエート、キラルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、３’−アルキレンホスホネート、５’−アルキレンホスホネートおよびキラルホスホネートを含むメチルおよび他のアルキルホスホネート、ホスフィネート、３’−アミノホスホラミデートおよびアミノアルキルホスホラミデートを含むホスホラミデート、チオノホスホラミデート、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、セレノホスフェート、ならびにボラノホスフェート、ならびにその２’−５’連結類似体が包含される。
【０１１１】
上記リン含有ヌクレオシド間結合の調製を教示する代表的な米国特許としては、米国特許第３，６８７，８０８号；米国特許第４，４６９，８６３号；米国特許第４，４７６，３０１号；米国特許第５，０２３，２４３号；米国特許第５，１７７，１９６号；米国特許第５，１８８，８９７号；米国特許第５，２６４，４２３号；米国特許第５，２７６，０１９号；米国特許第５，２７８，３０２号；米国特許第５，２８６，７１７号；米国特許第５，３２１，１３１号；米国特許第５，３９９，６７６号；米国特許第５，４０５，９３９号；米国特許第５，４５３，４９６号；米国特許第５，４５５，２３３号；米国特許第５，４６６，６７７号；米国特許第５，４７６，９２５号；米国特許第５，５１９，１２６号；米国特許第５，５３６，８２１号；米国特許第５，５４１，３０６号；米国特許第５，５５０，１１１号；米国特許第５，５６３，２５３号；米国特許第５，５７１，７９９号；米国特許第５，５８７，３６１号；米国特許第５，１９４，５９９号；米国特許第５，５６５，５５５号；米国特許第５，５２７，８９９号；米国特許第５，７２１，２１８号；米国特許第５，６７２，６９７号および米国特許第５，６２５，０５０号が挙げられ、その各々は、参照によって本明細書に組み入れる。
【０１１２】
一実施形態では、非ホスホジエステル主鎖結合は、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、アルキルホスホネートおよびホスホラミデート主鎖連結基からなる群から選択される。
【０１１３】
一実施形態では、リン含有ヌクレオシド間連結基には、ホスホジエステル、ホスホトリエステルおよびホスホロチオエートが包含される。
【０１１４】
一部の実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチドは、リン原子を含まない１つまたはそれ以上のヌクレオシド間連結基を含む。そのようなオリゴヌクレオチドとしては、これらに限定されないが、短鎖アルキルもしくはシクロアルキルヌクレオシド間連結基、混合ヘテロ原子およびアルキルもしくはシクロアルキルヌクレオシド間連結基、または１つもしくはそれ以上の短鎖ヘテロ原子もしくは複素環式ヌクレオシド間連結基によって形成されるものが挙げられる。これらには、シロキサン主鎖；スルフィド、スルホキシドおよびスルホン主鎖；ホルムアセチルおよびチオホルムアセチル主鎖；メチレンホルムアセチルおよびチオホルムアセチル主鎖；リボアセチル主鎖；アルケン含有主鎖；スルファメート主鎖；メチレンイミノおよびメチレンヒドラジノ主鎖；スルホネートおよびスルホンアミド主鎖；アミド主鎖を有するもの；ならびにＮ、Ｏ、ＳおよびＣＨ2混合構成成分部を有する他のものが含まれる。上記の非リン含有ヌクレオシド間連結基の調製を教示する代表的な米国特許としては、これらに限定されないが、特許文献１；特許文献２；特許文献３；米国特許第５，２１４，１３４号；米国特許第５，２１６，１４１号；米国特許第５，２３５，０３３号；米国特許第５，２６４，５６２号；米国特許第５，２６４，５６４号；米国特許第５，４０５，９３８号；米国特許第５，４３４，２５７号；米国特許第５，４６６，６７７号；米国特許第５，４７０，９６７号；米国特許第５，４８９，６７７号；米国特許第５，５４１，３０７号；米国特許第５，５６１，２２５号；米国特許第５，５９６，０８６号；米国特許第５，６０２，２４０号；米国特許第５，６１０，２８９号；米国特許第５，６０２，２４０号；米国特許第５，６０８，０４６号；米国特許第５，６１０，２８９号；米国特許第５，６１８，７０４号；米国特許第５，６２３，０７０号；米国特許第５，６６３，３１２号；米国特許第５，６３３，３６０号；米国特許第５，６７７，４３７号；米国特許第５，７９２，６０８号；米国特許第５，６４６，２６９号および米国特許第５，６７７，４３９号が挙げられ、その各々は、参照によって本明細書に組み入れる。
【０１１５】
一実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチドは、非イオン性である１つまたはそれ以上の中性ヌクレオシド間連結基を含む。中性ヌクレオシド間連結基には、シロキサン（ジアルキルシロキサン）、カルボキシレートエステル、カルボキサミド、スルフィド、スルホン酸エステルおよびアミドを含む非イオン性連結基が包含される（例えば：Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ；Ｙ．Ｓ．ＳａｎｇｈｖｉおよびＰ．Ｄ．Ｃｏｏｋ編、ＡＣＳ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ  ５８０；第３および４章（４０〜６５頁）を参照されたい）。さらなる中性ヌクレオシド間連結基には、Ｎ、Ｏ、ＳおよびＣＨ２混合構成成分部を含む非イオン性結合が包含される。
【０１１６】
式（Ｉ）の化合物
本発明は、一般式（Ｉ）の化合物：
【化５】
2021517126.tif 000007
（式中、
−  Ｂは、複素環式核酸塩基であり；
−  Ｐ１およびＰ２は各々独立して、Ｈ、反応性リン基または保護基であり；
−  Ｙは、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ１またはＮ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１であり、Ｒ１は：
・ハロゲン原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）複素環、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、（Ｃ５〜Ｃ１４）ヘテロアリール基、−Ｏ−Ｚ１、−Ｎ（Ｚ１）（Ｚ２）、−Ｓ−Ｚ１、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｊ）−Ｏ−Ｚ１、−Ｏ−Ｃ（＝Ｊ）−Ｚ１、−Ｃ（＝Ｊ）−Ｎ（Ｚ１）（Ｚ２）および−Ｎ（Ｚ１）−Ｃ（＝Ｊ）−Ｚ２（式中、
Ｊは、ＯもしくはＳであり、
Ｚ１およびＺ２の各々は独立して、Ｈ、ハロゲン原子および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基から選択される１つもしくはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基である）から選択される１つもしくはそれ以上の基によって場合により置換されていないまたは置換された（Ｃ1〜Ｃ20）アルキル基、
・ハロゲン原子および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基から選択される１つもしくはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基、または
・基−［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ−Ｒ２−（Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）ｐ−Ｒ３（式中、
ｍは、０もしくは１を意味する整数であり、
ｐは、０〜１０の範囲の整数であり、
Ｒ２は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、−Ｏ−Ｚ３、−Ｎ（Ｚ３）（Ｚ４）、−Ｓ−Ｚ３、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｋ）−Ｏ−Ｚ３、−Ｏ−Ｃ（＝Ｋ）−Ｚ３、−Ｃ（＝Ｋ）−Ｎ（Ｚ３）（Ｚ４）、−Ｎ（Ｚ３）−Ｃ（＝Ｋ）−Ｚ４（式中、
Ｋは、ＯもしくはＳであり、
Ｚ３およびＺ４の各々は独立して、Ｈ、ハロゲン原子および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基から選択される１つもしくはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基である）によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキレン基であり、
Ｒ３は、水素原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ基、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）複素環、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基もしくは（Ｃ５〜Ｃ１４）ヘテロアリール基からなる群から選択されるか、
もしくは
Ｒ３は、細胞標的化部分である）
であり、
−  Ｘ１およびＸ２は各々独立して、水素原子、−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基であり、
−  Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄの各々は独立して、Ｈまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基である）
に関する。
【０１１７】
式（Ｉ）の化合物は、本開示の目的のために「ヌクレオチド前駆体」という用語に包含される。Ｒ３が存在し、細胞標的化部分を示す式（Ｉ）の化合物は、本開示の目的のために「標的化されたヌクレオチド前駆体」という用語に包含される。
【０１１８】
本明細書で開示される式（Ｉ）および（ＩＩ）の化合物には、その立体異性体が包含され、これには、式（Ｉ）および（ＩＩ）の化合物の位置番号付けおよびキラル中心を示す以下の式：
【化６】
2021517126.tif 000008
に具体的に記載される通りの、その（２Ｓ，６Ｒ）立体異性体およびその（２Ｒ，６Ｒ）立体異性体が含まれる。
【０１１９】
本明細書において実施例で示される通り、オリゴヌクレオチドに組み込まれた場合、式（Ｉ）の化合物の（２Ｓ，６Ｒ）立体異性体および式（Ｉ）の化合物の（２Ｒ，６Ｒ）立体異性体は、標的ｍＲＮＡの良好な阻害を可能にするｓｉＲＮＡを生成する同じ能力を有する。
【０１２０】
上記の通り、本発明者らは、オリゴヌクレオチドをサイレンシングする遺伝子を合成するため、とりわけ、ｓｉＲＮＡを合成するためのビルディングブロックユニットとして有用である、ジオキサン環またはモルホリノ環のいずれかを含む特定の式（Ｉ）のヌクレオチド前駆体に想到した。
【０１２１】
したがって、本明細書において「ジオキサン類似体」と呼ばれることもある式（Ｉ）の化合物の一部の実施形態では、ＹはＯである。本開示のそのようなヌクレオチド前駆体の実施形態は、ｐｒｅ−ｌＢ１（式中、Ｂは式（Ｉ）において定義された通りである）、例えば、Ｂがチミジニル基からなる場合、ｐｒｅ−ｌＴ１と呼ばれる。
【０１２２】
本明細書において「モルホリノ類似体」と呼ばれることもる式（Ｉ）の化合物の他の実施形態では、Ｙは、ＮＨ、ＮＲ１またはＮＣ（＝Ｏ）Ｒ１である。
【０１２３】
式（Ｉ）のモルホリノ類似体において、窒素原子は、好ましくは官能化されて、得られるモルホリノ類似体含有オリゴヌクレオチド、とりわけ得られるモルホリノ類似体含有ｓｉＲＮＡの特性が改善される。
【０１２４】
式（Ｉ）の化合物の一部の実施形態では、化合物は、細胞標的化部分を含まない本開示のモルホリノ類似体である。これらの実施形態によると、存在する場合、基Ｒ３は、細胞標的化部分を表さない。
【０１２５】
したがって、式（Ｉ）のモルホリノ類似体の一部の好ましい実施形態では、Ｙは、ＮＨ、ＮＲ１またはＮ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１であり、Ｒ１は、一般式（Ｉ）について定義された通りである。
【０１２６】
一部の実施形態では、Ｙは、ＮＲ１であり、Ｒ１は：
・  ハロゲン原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）複素環、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、（Ｃ５〜Ｃ１４）ヘテロアリール基、−Ｏ−Ｚ１、−Ｎ（Ｚ１）（Ｚ２）、−Ｓ−Ｚ１、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｊ）−Ｏ−Ｚ１、−Ｏ−Ｃ（＝Ｊ）−Ｚ１、−Ｃ（＝Ｊ）−Ｎ（Ｚ１）（Ｚ２）および−Ｎ（Ｚ１）−Ｃ（＝Ｊ）−Ｚ２（式中、
Ｊは、ＯもしくはＳであり、
Ｚ１およびＺ２の各々は独立して、Ｈ、ハロゲン原子および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基から選択される１つもしくはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基である）から選択される１つもしくはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基、または
・  ハロゲン原子および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基から選択される１つもしくはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基、
・基−［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ−Ｒ２−（Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）ｐ−Ｒ３（式中、
ｍは、０もしくは１を意味する整数であり、
ｐは、０〜１０の範囲の整数であり、
Ｒ２は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、−Ｏ−Ｚ３、−Ｎ（Ｚ３）（Ｚ４）、−Ｓ−Ｚ３、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｋ）−Ｏ−Ｚ３、−Ｏ−Ｃ（＝Ｋ）−Ｚ３、−Ｃ（＝Ｋ）−Ｎ（Ｚ３）（Ｚ４）、−Ｎ（Ｚ３）−Ｃ（＝Ｋ）−Ｚ４
（式中、
Ｋは、ＯもしくはＳであり、
Ｚ３およびＺ４の各々は独立して、Ｈ、ハロゲン原子および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基から選択される１つもしくはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基である）によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキレン基であり、
Ｒ３は、水素原子、（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）−アルコキシ、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）複素環、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基もしくは（Ｃ５〜Ｃ１４）ヘテロアリール基からなる群から選択される）
であり、
Ｘ１およびＸ２は各々独立して、水素原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基であり、
Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄの各々は独立して、Ｈまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基である。
【０１２７】
本明細書において意図される通り、非置換アルキル基または置換アルキル基のいずれであってもよい（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基には、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、Ｃ１０、Ｃ１１、Ｃ１２、Ｃ１３、Ｃ１４、Ｃ１５、Ｃ１６、Ｃ１７、Ｃ１８、Ｃ１９およびＣ２０アルキル基が含まれる。
【０１２８】
本明細書において意図される通り、非置換アルキル基または置換アルキル基のいずれであってもよい（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基には、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５およびＣ６アルキル基が含まれる。
【０１２９】
本明細書において意図される通り、非置換シクロアルキル基または置換シクロアルキル基のいずれであってもよい（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基には、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７およびＣ８シクロアルキル基が含まれる。
【０１３０】
本明細書において意図される通り、非置換または置換複素環のいずれであってもよい（Ｃ３〜Ｃ１４）複素環には、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、Ｃ１０、Ｃ１１、Ｃ１２、Ｃ１３およびＣ１４複素環が含まれる。
【０１３１】
本明細書において意図される通り、非置換アリール基または置換アリール基のいずれであってもよい（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基には、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、Ｃ１０、Ｃ１１、Ｃ１２、Ｃ１３およびＣ１４アリール基が含まれる。
【０１３２】
本明細書において意図される通り、非置換ヘテロアリール基または置換ヘテロアリール基のいずれであってもよい（Ｃ５〜Ｃ１４）ヘテロアリール基には、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、Ｃ１０、Ｃ１１、Ｃ１２、Ｃ１３およびＣ１４ヘテロアリール基が含まれる。
【０１３３】
ＹがＮＲ１である式（Ｉ）の化合物の一部の実施形態では、Ｒ１は、場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基であり、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（Ｉ）について定義された通りである。
【０１３４】
ＹがＮＲ１であるこれらの実施形態の一部では、Ｒ１は、非置換（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基である。
【０１３５】
ＹがＮＲ１である実施形態の一部では、Ｒ１は、非置換（Ｃ１〜Ｃ１６）アルキル基であり、これには、メチル、イソプロピル、ブチル、オクチル、ヘキサデシルを含む群から選択されるアルキル基が含まれ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（Ｉ）について定義されたのと同じ意味を有する。
【０１３６】
ＹがＮＲ１である一部の実施形態では、Ｒ１は、メチル基であり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１およびＸ２は、水素原子であり、Ｐ１およびＰ２は、一般式（Ｉ）について定義された通りである。本開示のそのようなヌクレオチド前駆体の実施形態は、ｐｒｅ−ｌＢ２と呼ばれ、Ｂは、一般式（Ｉ）におけるのと同じ意味を有し；例えば、本開示のそのようなヌクレオチド前駆体の実施形態は、Ｂがチミジニル基からなる場合、ｐｒｅ−ｌＴ２と呼ばれる。
【０１３７】
ＹがＮＲ１である一部の実施形態では、Ｒ１は、イソプロピル基であり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１およびＸ２は、水素原子であり、Ｐ１およびＰ２は、一般式（Ｉ）について定義された通りである。本開示のそのようなヌクレオチド前駆体の実施形態は、ｐｒｅ−ｌＢ３と呼ばれ、Ｂは、一般式（Ｉ）におけるのと同じ意味を有し；例えば、本開示のそのようなヌクレオチド前駆体の実施形態は、Ｂがチミジニル基からなる場合ｐｒｅ−ｌＴ３、Ｂがウラシル基からなる場合ｐｒｅ−ｌＵ３、Ｂがグアニル基からなる場合ｐｒｅ−ｌＧ３、Ｂがシトシル基からなる場合ｐｒｅ−ｌＣ３、Ｂがアデニル基からなる場合ｐｒｅ−ｌＡ３と呼ばれる。
【０１３８】
ＹがＮＲ１である一部の実施形態では、Ｒ１は、ブチル基であり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１およびＸ２は、水素原子であり、Ｐ１およびＰ２は、一般式（Ｉ）について定義された通りである。本開示のそのようなヌクレオチド前駆体の実施形態は、ｐｒｅ−ｌＢ６と呼ばれ、Ｂは、一般式（Ｉ）におけるのと同じ意味を有し；例えば、本開示のそのようなヌクレオチド前駆体の実施形態は、Ｂがチミジニル基からなる場合、ｐｒｅ−ｌＴ６と呼ばれる。
【０１３９】
ＹがＮＲ１である一部の実施形態では、Ｒ１は、オクチル基であり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１およびＸ２は、水素原子であり、Ｐ１およびＰ２は、一般式（Ｉ）について定義された通りである。本開示のそのようなヌクレオチド前駆体の実施形態は、ｐｒｅ−ｌＢ７と呼ばれ、Ｂは、一般式（Ｉ）におけるのと同じ意味を有し；例えば、本開示のそのようなヌクレオチド前駆体の実施形態は、Ｂがチミジニル基からなる場合、ｐｒｅ−ｌＴ７と呼ばれる。
【０１４０】
ＹがＮＲ１である一部の実施形態では、Ｒ１は、直鎖状Ｃ１６アルキル基であり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１およびＸ２は、水素原子であり、Ｐ１およびＰ２は、一般式（Ｉ）について定義された通りである。本開示のそのようなヌクレオチド前駆体の実施形態は、ｐｒｅ−ｌＢ８と呼ばれ、Ｂは、一般式（Ｉ）におけるのと同じ意味を有し；例えば、本開示のそのようなヌクレオチド前駆体の実施形態は、Ｂがチミジニル基からなる場合、ｐｒｅ−ｌＴ８と呼ばれる。
【０１４１】
ＹがＮＲ１である式（Ｉ）の化合物のさらなる実施形態では、Ｒ１は、一般式（Ｉ）において定義された通り置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基であり、これには、一般式（Ｉ）において定義された通り置換されたＣ１、Ｃ２またはＣ３アルキル基が含まれる。
【０１４２】
これらのさらなる実施形態の一部では、Ｒ１は、ハロゲン原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）複素環、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基および（Ｃ５〜Ｃ１４）ヘテロアリール基から選択される１つまたはそれ以上の基によって置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基であり、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（Ｉ）について定義されたのと同じ意味を有する。
【０１４３】
これらのさらなる実施形態の一部では、Ｒ１は、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基によって置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基であり、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（Ｉ）について定義されたのと同じ意味を有する。
【０１４４】
ＹがＮＲ１である式（Ｉ）の化合物の一部の実施形態では、Ｒ１は、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基によって置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基である。これらの実施形態は、ＹがＮＲ１であり、Ｒ１が、アリール基によって置換されたメチレン基である式（Ｉ）の化合物を包含する。これらの実施形態はまた、ＹがＮＲ１であり、Ｒ１が、フェニル基によって置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基である式（Ｉ）の化合物を包含する。
【０１４５】
ＹがＮＲ１である式（Ｉ）の化合物の一部の実施形態では、Ｒ１は、非置換フェニル基によって置換されたメチル基であり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１およびＸ２は各々、水素原子であり、Ｐ１およびＰ２は、一般式（Ｉ）において定義された通りである。本開示のそのようなヌクレオチド前駆体の実施形態は、ｐｒｅ−ｌＢ５と呼ばれ、Ｂは、一般式（Ｉ）におけるのと同じ意味を有し；例えば、本開示のそのようなヌクレオチド前駆体の実施形態は、Ｂがチミジニル基からなる場合、ｐｒｅ−ｌＴ５と呼ばれる。
【０１４６】
ＹがＮＲ１である式（Ｉ）の化合物のさらなる実施形態では、Ｒ１は、ハロゲン原子および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基であり、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（Ｉ）について定義されたのと同じ意味を有する。
【０１４７】
ＹがＮＲ１である式（Ｉ）の化合物のこれらのさらなる実施形態の一部では、Ｒ１は、シクロヘキシルである。
【０１４８】
ＹがＮＲ１である式（Ｉ）の化合物のこれらのさらなる実施形態の一部では、Ｒ１は、非置換シクロヘキシルであり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２は各々、水素原子であり、Ｐ１およびＰ２は、一般式（Ｉ）について定義された通りである。
【０１４９】
本開示のそのようなヌクレオチド前駆体の実施形態は、ｐｒｅ−ｌＢ４と呼ばれ、Ｂは、一般式（Ｉ）におけるのと同じ意味を有し；例えば、本開示のそのようなヌクレオチド前駆体の実施形態は、Ｂがチミジニル基からなる場合、ｐｒｅ−ｌＴ４と呼ばれる。
【０１５０】
式（Ｉ）のモルホリノ類似体の一部の他の実施形態では、Ｙは、Ｎ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１であり、Ｒ１は、ハロゲン原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）複素環、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、（Ｃ５〜Ｃ１４）ヘテロアリール基、−Ｏ−Ｚ１、−Ｎ（Ｚ１）（Ｚ２）、−Ｓ−Ｚ１、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｊ）−Ｏ−Ｚ１、−Ｏ−Ｃ（＝Ｊ）−Ｚ１、−Ｃ（＝Ｊ）−Ｎ（Ｚ１）（Ｚ２）および−Ｎ（Ｚ１）−Ｃ（＝Ｊ）−Ｚ２（式中、
Ｊは、ＯまたはＳであり、
Ｚ１およびＺ２の各々は独立して、Ｈ、ハロゲン原子および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基である）から選択される１つまたはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基であり、
Ｒ１は、ハロゲン原子または（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基であり、
Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（Ｉ）について定義されたのと同じ意味を有する。
【０１５１】
ＹがＮ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１である実施形態の一部では、Ｒ１は、場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基であり、これには、場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキル基が含まれ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（Ｉ）について定義されたのと同じ意味を有する。
【０１５２】
ＹがＮ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１であるこれらの実施形態の一部によると、Ｒ１は、メチルおよびペンタデシル基を含む基から選択され、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（Ｉ）について定義されたのと同じ意味を有する。
【０１５３】
これらの実施形態は、Ｙが、Ｎ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１であり、Ｒ１がメチル基であり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２が各々、水素原子を表し、Ｂ、Ｐ１およびＰ２が、一般式（Ｉ）において定義された通りである式（Ｉ）の化合物を包含する。
【０１５４】
本開示のそのようなヌクレオチド前駆体の実施形態は、ｐｒｅ−ｌＢ９と呼ばれ、Ｂは、一般式（Ｉ）と同じ意味を有し；例えば、本開示のそのようなヌクレオチド類似体の実施形態は、Ｂがチミジニル基からなる場合、ｐｒｅ−ｌＴ９と呼ばれる。これらの実施形態はまた、ＹがＮ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１であり、Ｒ１がペンタデシル基であり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２が各々、水素原子を表し、Ｂ、Ｐ１およびＰ２が一般式（Ｉ）において定義された通りである式（Ｉ）の化合物を包含する。本開示のそのようなヌクレオチド前駆体の実施形態は、ｐｒｅ−ｌＢ１０と呼ばれ、Ｂは、一般式（Ｉ）におけるのと同じ意味を有し；例えば、本開示のそのようなヌクレオチド前駆体の実施形態は、Ｂがチミジニル基からなる場合、ｐｒｅ−ｌＴ１０と呼ばれる。
【０１５５】
式（Ｉ）の化合物において、Ｂは、複素環式核酸塩基部分である。本明細書で使用される場合、「複素環式核酸塩基」という用語は、ジオキサン環またはモルホリノ環に共有結合した、場合により置換された窒素含有複素環を指す。一部の実施形態では、複素環式核酸塩基は、場合により置換されたプリン塩基および場合により置換されたピリミジン塩基から選択できる。「プリン塩基」という用語は、本明細書において、当業者によって理解される通りのその通常の意味で使用され、その互変異性体を含む。同様に、「ピリミジン塩基」という用語は、本明細書において、当業者によって理解される通りのその通常の意味で使用され、その互変異性体を含む。場合により置換されたプリン塩基の非限定リストには、プリン、アデニン、グアニン、ヒポキサンチン、キサンチン、アロキサンチン、７−アルキルグアニン（例えば、７−メチルグアニン）、テオブロミン、カフェイン、尿酸およびイソグアニンが含まれる。ピリミジン塩基の例としては、これらに限定されないが、シトシン、チミン、ウラシル、５，６−ジヒドロウラシルおよび５−アルキルシトシン（例えば、５−メチルシトシン）が挙げられる。複素環式塩基の他の非限定例としては、ジアミノプリン、８−オキソ−Ｎ6アルキルアデニン（例えば、８−オキソ−Ｎ6メチルアデニン）、７−デアザキサンチン、７−デアザグアニン、７−デアザアデニン、Ｎ4Ｎ4エタノシトシン、Ｎ<6>，Ｎ<6>−エタノ−２，６−ジアミノプリン、５−ハロウラシル（例えば、５−フルオロウラシルおよび５−ブロモウラシル）、プソドイソシトシン、イソシトシン、イソグアニン、１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミドおよびさらなる複素環式塩基を開示する限定された目的について参照によって本明細書に組み入れる米国特許第５，４３２，２７２号および米国特許第７，１２５，８５５号に記載される他の複素環式塩基が挙げられる。一部の実施形態では、複素環式塩基は、アミンまたはエノール保護基で場合により置換されていることがある。一部の実施形態では、Ｂは、存在する場合、そのアミノ基が、場合により保護基によって保護されたピリミジン、置換ピリミジン、プリンおよび置換プリンを含む群から選択される。
【０１５６】
好ましい実施形態では、Ｂは、アデニン、チミン、ウラシル、グアニンおよびシトシン（すなわち、アデニル、チミニル、ウラシル、グアニルおよびシトシル基）を含む群から選択される。アデニン、グアニンおよびシトシンは、アミン保護基によって場合により保護されている。アミン保護基には、アシル基、例えば、ベンゾイル、フェニルアセチルおよびイソブチリル保護基またはホルムアミジン保護基、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチル−ホルムアミジンが包含される。
【０１５７】
既に言及した通り、式（Ｉ）の化合物において、基Ｐ１およびＰ２は各々独立して、水素原子、反応性リン基または保護基である。
【０１５８】
本明細書で使用される場合、「反応性リン基」は、ヌクレオチドユニットまたはヌクレオチド類似体ユニットに含まれるリン含有基を指し、これは、別の分子、とりわけ、別のヌクレオチドユニットまたは別のヌクレオチド類似体に含まれるヒドロキシル基またはアミン基と求核攻撃反応により反応し得る。一般に、そのような反応により、前記第１のヌクレオチドユニットまたは前記第１のヌクレオチド類似体ユニットを前記第２のヌクレオチドユニットまたは前記第２のヌクレオチド類似体ユニットに連結するエステル型ヌクレオシド間結合が生成される。
【０１５９】
一部の実施形態では、反応性リン基は、天然ホスフェート、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ボラノホスフェート、ボラノチオホスフェート、ホスホネート、ハロゲン置換ホスホネートおよびホスフェート、ホスホラミデート、ホスホジエステル、ホスホトリエステル、チオホスホジエステル、チオホスホトリエステル、ジホスフェートならびにトリホスフェートを含むがこれらに限定されないホスホラミダイト、Ｈホスホネート、アルキルホスホネート、ホスフェートまたはホスフェート模倣体からなる群から選択できる。保護基には、ヒドロキシル−、アミン−およびホスホラミダイト保護基が包含され、これは、アセチル（Ａｃ）、ベンゾイル（Ｂｚｌ）、ベンジル（Ｂｎ）、イソブチリル（ｉＢｕ）、フェニルアセチル、ベンジルオキシメチルアセタール（ＢＯＭ）、ベータ−メトキシエトキシメチルエーテル（ＭＥＭ）、メトキシメチルエーテル（ＭＯＭ）、ｐ−メトキシベンジルエーテル（ＰＭＢ）、メチルチオメチルエーテル、ピバロイル（Ｐｉｖ）、テトラヒドロピラニル（ＴＨＰ）、トリフェニルメチル（Ｔｒｔ）、メトキシトリチル［（４−メトキシフェニル）ジフェニルメチル］（ＭＭＴ）、ジメトキシトリチル、［ビス−（４−メトキシフェニル）フェニルメチル（ＤＭＴ）、トリメチルシリルエーテル（ＴＭＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルエーテル（ＴＢＤＭＳ）、トリ−イソ−プロピルシリルオキシメチルエーテル（ＴＯＭ）、トリ−イソプロピルシリルエーテル（ＴＩＰＳ）、メチルエーテル、エトキシエチルエーテル（ＥＥ）Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミジンおよび２−シアノエチル（ＣＥ）を含む群から選択できる。
【０１６０】
Ｙ、Ｂ、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１およびＸ２が一般式（Ｉ）について定義された通りである式（Ｉ）の化合物の一部の実施形態では、Ｐ１またはＰ２の一方は、Ｏ−４，４’−ジメトキシトリチル基（ＤＭＴ）であり、Ｐ１およびＰ２の他方は、Ｈ、反応性リン基または保護基である。
【０１６１】
Ｙ、Ｂ、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１およびＸ２が一般式（Ｉ）について定義された通りである式（Ｉ）の化合物の一部の実施形態では、Ｐ１またはＰ２の一方は、２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホラミダイト基であり、Ｐ１およびＰ２の他方は、保護基である。
【０１６２】
Ｙ、Ｂ、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１およびＸ２が一般式（Ｉ）について定義された通りである式（Ｉ）の化合物の一部の実施形態では、Ｐ１またはＰ２の一方は、２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホラミダイト基であり、Ｐ１およびＰ２の他方は、Ｏ−４，４’−ジメトキシトリチル基である。さらに、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄの各々は独立して、Ｈまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、好ましくはＨまたは非置換（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル基である。
【０１６３】
本明細書で使用される場合、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基には、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５およびＣ６アルキル基を含む群から選択されるアルキル基が包含される。
【０１６４】
最も好ましい実施形態では、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子を表す。
【０１６５】
最も好ましい実施形態では、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄはいずれも、水素原子を表す。
【０１６６】
標的化されたヌクレオチド類似体を含む式（Ｉ）の化合物の実施形態
本明細書において既に示した通り、本開示は、式（Ｉ）の化合物
（式中：
−  Ｂは、複素環式核酸塩基であり；
−  Ｐ１およびＰ２は各々独立して、Ｈ、反応性リン基または保護基であり；
−  Ｙは、ＮＲ１であり、Ｒ１は、基−［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ−Ｒ２−（Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）ｐ−Ｒ３（式中、
ｍは、０または１を意味する整数であり、
ｐは、０〜１０の範囲の整数であり、
Ｒ２は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、−Ｏ−Ｚ３、−Ｎ（Ｚ３）（Ｚ４）、−Ｓ−Ｚ３、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｋ）−Ｏ−Ｚ３、−Ｏ−Ｃ（＝Ｋ）−Ｚ３、−Ｃ（＝Ｋ）−Ｎ（Ｚ３）（Ｚ４）、−Ｎ（Ｚ３）−Ｃ（＝Ｋ）−Ｚ４（式中、
Ｋは、ＯまたはＳであり、
Ｚ３およびＺ４の各々は独立して、Ｈ、ハロゲン原子および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基である）によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキレン基であり、
Ｒ３は、細胞標的化部分である）であり、
−  Ｘ１およびＸ２は各々独立して、水素原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基であり、
−  Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄの各々は独立して、Ｈまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基である）
を包含する。
【０１６７】
これらの式（Ｉ）の化合物は、本開示において「標的化されたヌクレオチド前駆体」と呼ばれることがある化合物のより一般的なファミリーに包含される。基Ｒ３が存在し、細胞標的化部分を表すそのような式（Ｉ）の化合物は、本開示において、「式（Ｉ）の標的化されたヌクレオチド前駆体」または「標的化されたヌクレオチド前駆体（Ｉ）」と呼ばれることがある。
【０１６８】
細胞標的化部分を表す基Ｒ３を含まない式（Ｉ）の化合物は、標的化されたヌクレオチド前駆体ではなく、本開示において「式（Ｉ）の標的化されていないヌクレオチド前駆体」または「標的化されていないヌクレオチド前駆体（Ｉ）」と呼ばれる。
【０１６９】
式（Ｉ）の標的化されたヌクレオチド前駆体の一部の実施形態では、Ｒ１は、基−［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ−Ｒ２−（Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）ｐ−Ｒ３であり、ｍは０であり、ｐは０であり、Ｒ３は、細胞標的化部分であり、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＲ２は、式（Ｉ）の化合物の一般定義における通りである。一部の実施形態では、Ｒ２はエチレン基であり、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子である。これらの実施形態の一部の他のものでは、Ｒ２はペンチレン基であり、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子である。一部の実施形態では、Ｒ２は（Ｃ１２）アルキレンであり、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子である。
【０１７０】
式（Ｉ）の化合物の一部の実施形態では、Ｒ１は、基−［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ−Ｒ２−（Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）ｐ−Ｒ３であり、ｍは０であり、ｐは、１、２、３および４からなる群から選択される整数であり、Ｒ３は、細胞標的化部分であり、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＲ２は、式（Ｉ）の化合物の一般定義における通りである。一部の実施形態では、Ｒ２はエチレン基であり、ｐは１であり、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子である。一部の実施形態では、Ｒ２はエチレン基であり、ｐは２であり、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子である。一部の実施形態では、Ｒ２はエチレン基であり、ｐは３であり、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子である。一部の実施形態では、Ｒ２はエチレン基であり、ｐは４であり、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子である。
【０１７１】
式（Ｉ）の化合物の一部の実施形態では、Ｒ１は、基−［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ−Ｒ２−（Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）ｐ−Ｒ３であり、ｍは１であり、ｐは０であり、Ｒ３は、細胞標的化部分であり、Ｒ２、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２は、式（Ｉ）の化合物の一般定義における通りである。これらの実施形態の一部では、Ｒ２は、ブチレンであり、Ｘ１およびＸ２は各々、水素原子を表し、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、一般式（Ｉ）について定義された通りである。これらの実施形態の一部のさらなるものでは、Ｒ２は、（Ｃ１１）アルキレンであり、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子を表し、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、一般式（Ｉ）について定義された通りである。これらの実施形態の一部のなおさらなるものでは、Ｒ２は、メチレンであり、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子を表し、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、一般式（Ｉ）について定義された通りである。
【０１７２】
Ｒ１が基−［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ−Ｒ２−（Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）ｐ−Ｒ３である式（Ｉ）の化合物の一部の実施形態では、ｍは１であり、ｐは、１および２からなる整数の群から選択され、Ｒ３は、細胞標的化部分であり、Ｒ２、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２は、式（Ｉ）の化合物の一般定義における通りである。これらの実施形態の一部では、Ｒ２は、メチレン基であり、ｐは２であり、Ｒ３は、細胞標的化部分であり、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２は、一般式（Ｉ）について定義された通りである。これらの実施形態の一部の他のものでは、Ｒ２は、メチレン基であり、ｐは１であり、Ｒ３は、細胞標的化部分であり、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２は、一般式（Ｉ）について定義された通りである。
【０１７３】
式（Ｉ）の化合物の一部の実施形態では、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、水素原子である。
【０１７４】
一般に、基Ｒ３には、本開示において示される任意の細胞標的化部分を含む当技術分野で公知の任意の細胞標的化部分が包含され、これには、本開示の標的化されたオリゴヌクレオチドの説明のために示される細胞標的化部分が含まれる。
【０１７５】
式（Ｉ）の化合物の一部の実施形態では、Ｒ３は、式（ＩＩＩ）
【化７】
2021517126.tif 000009
（式中、
Ａ１、Ａ２およびＡ３は、ＯＨまたはＯ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ４であり、Ｒ４は、（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルまたは（Ｃ６〜Ｃ１０）−アリール基である）
のものである。
【０１７６】
Ａ４は、ＯＨ、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ４、ＮＨＣ（＝Ｏ）−Ｒ５であり、Ｒ４は、上で定義された通りであり、Ｒ５は、ハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル基である。
【０１７７】
一部の好ましい実施形態では、Ａ１、Ａ２およびＡ３は、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ４であり、Ｒ４は、（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルまたは（Ｃ６〜Ｃ１０）−アリール基である。
【０１７８】
一部の好ましい実施形態では、Ａ１、Ａ２およびＡ３は、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ４であり、Ｒ４は、メチルまたはフェニル基である。
【０１７９】
一部の好ましい実施形態では、Ａ１、Ａ２およびＡ３は、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ４であり、Ｒ４は、メチルである。
【０１８０】
一部の好ましい実施形態では、Ａ４は、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ４またはＮＨＣ（＝Ｏ）−Ｒ５であり、Ｒ４は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルまたは（Ｃ６〜Ｃ１０）−アリール基であり、Ｒ５は、ハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル基である。
【０１８１】
一部の好ましい実施形態では、Ａ１、Ａ２およびＡ３は、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ４であり、Ｒ４は、メチルであり、Ａ４は、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ４またはＮＨＣ（＝Ｏ）−Ｒ５であり、Ｒ４およびＲ５の各々はメチルである。
【０１８２】
一部の好ましい実施形態では、Ｒ３は、式（ＩＩＩ−Ａ）の３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−Ｎ−アセチルガラクトシルアミン：
【化８】
2021517126.tif 000010
である。
【０１８３】
本開示はまた、本明細書で示される式（Ｉ）の化合物であるヌクレオチド類似体前駆体を使用することによってオリゴヌクレオチドに導入された１つまたはそれ以上のヌクレオチド類似体を含むオリゴヌクレオチドに関する。
【０１８４】
本開示の他所で詳述される通り、本発明は、１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物を含む一本鎖および二本鎖オリゴヌクレオチド、とりわけｓｉＲＮＡにさらに関する。
【０１８５】
修飾オリゴヌクレオチド
本明細書で開示される式（Ｉ）の化合物は、二本鎖ＲＮＡ（「ｄｓＲＮＡ」）オリゴマーのモノマーユニット、とりわけｓｉＲＮＡのモノマーユニットを含む、オリゴマー化合物のモノマーユニット、特にオリゴヌクレオチドのモノマーユニットとして想到されている「ヌクレオチド前駆体」とも呼ばれるヌクレオチド類似体ビルディングブロックである。式（Ｉ）の化合物において本明細書に記載のヌクレオチド前駆体のオリゴヌクレオチドへの導入により、式（ＩＩ）の化合物として本明細書に記載のオリゴヌクレオチドの対応するモノマーユニットがもたらされる。
【０１８６】
「オリゴマー化合物」および「オリゴヌクレオチド」という用語は、本明細書において交換可能に使用できる。
【０１８７】
したがって、本発明はまた、標的化されていない、標的化された、または標的化されていない、および標的化された１つまたはそれ以上の式（Ｉ）の化合物が組み込まれた、式（ＩＩ）の化合物をもたらすオリゴヌクレオチドに関する。
【０１８８】
本開示においてさらに詳述される通り、本発明によるオリゴヌクレオチドは、一本鎖形態または二本鎖形態のいずれかであり得る。
【０１８９】
本発明は、１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物：
【化９】
2021517126.tif 000011
（式中、式（ＩＩ）の各化合物について独立して：
−  Ｂは、複素環式核酸塩基であり；
−  Ｌ１およびＬ２の一方は、式（ＩＩ）の化合物とオリゴマー化合物とを連結するヌクレオシド間連結基であり、Ｌ１およびＬ２の他方は、Ｈ、保護基、リン部分または式（ＩＩ）の化合物とオリゴマー化合物とを連結するヌクレオシド間連結基であり、
−  Ｙは、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ１またはＮ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１であり、Ｒ１は：
・ハロゲン原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）複素環、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、（Ｃ５〜Ｃ１４）ヘテロアリール基、−Ｏ−Ｚ１、−Ｎ（Ｚ１）（Ｚ２）、−Ｓ−Ｚ１、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｊ）−Ｏ−Ｚ１、−Ｏ−Ｃ（＝Ｊ）−Ｚ１、−Ｃ（＝Ｊ）−Ｎ（Ｚ１）（Ｚ２）、−Ｎ（Ｚ１）−Ｃ（＝Ｊ）−Ｚ２（式中、
Ｊは、ＯまたはＳであり、
Ｚ１およびＺ２の各々は独立して、Ｈ、ハロゲン原子および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基である）から選択される１つまたはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基、
・ハロゲン原子および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基、
・基−［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ−Ｒ２−（Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）ｐ−Ｒ３（式中、
ｍは、０または１を意味する整数であり、
ｐは、０〜１０の範囲の整数であり、
Ｒ２は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、−Ｏ−Ｚ３、−Ｎ（Ｚ３）（Ｚ４）、−Ｓ−Ｚ３、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｋ）−Ｏ−Ｚ３、−Ｏ−Ｃ（＝Ｋ）−Ｚ３、−Ｃ（＝Ｋ）−Ｎ（Ｚ３）（Ｚ４）、および−Ｎ（Ｚ３）−Ｃ（＝Ｋ）−Ｚ４（式中、
Ｋは、ＯまたはＳであり、
Ｚ３およびＺ４の各々は独立して、Ｈ、ハロゲン原子および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基である）によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキレン基であり、
Ｒ３は、水素原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ基、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）複素環、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基もしくは（Ｃ５〜Ｃ１４）ヘテロアリール基からなる群から選択されるか、
または
Ｒ３は、細胞標的化部分である）
であり、
−  Ｘ１およびＸ２は各々独立して、水素原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基であり、
−  Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄの各々は独立して、Ｈまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基である）
または薬学的に許容されるその塩を含むオリゴヌクレオチドに関する。
【０１９０】
本明細書に記載のオリゴヌクレオチドの一部の好ましい実施形態では、式（ＩＩ）の化合物において、ＹはＯである。
【０１９１】
本明細書に記載の通りのオリゴヌクレオチドの一部の他の好ましい実施形態では、式（ＩＩ）の化合物において、Ｙは、ＮＲ１またはＮ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１であり、Ｒ１は、一般式（Ｉ）について定義された通りである。
【０１９２】
ＹがＮＲ１である一部の実施形態では、Ｒ１は、ハロゲン原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）複素環、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、（Ｃ５〜Ｃ１４）ヘテロアリール基、−Ｏ−Ｚ１、−Ｎ（Ｚ１）（Ｚ２）、−Ｓ−Ｚ１、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｊ）−Ｏ−Ｚ１、−Ｏ−Ｃ（＝Ｊ）−Ｚ１、−Ｃ（＝Ｊ）−Ｎ（Ｚ１）（Ｚ２）、−Ｎ（Ｚ１）−Ｃ（＝Ｊ）−Ｚ２（式中、
Ｊは、ＯまたはＳであり、
Ｚ１およびＺ２の各々は独立して、Ｈ、塩基または酸との付加塩の形態の、ハロゲン原子および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基である）
から選択される１つまたはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基である。
【０１９３】
ＹがＮＲ１であるこれらの実施形態の一部では、Ｒ１は、非置換（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基であり、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ２、Ｒ３およびＢは、一般式（ＩＩ）または薬学的に許容されるその塩について定義されたのと同じ意味を有する。
【０１９４】
ＹがＮＲ１である実施形態の一部では、Ｒ１は、非置換（Ｃ１〜Ｃ１６）アルキル基であり、これには、メチル、イソプロピル、ブチル、オクチル、ヘキサデシルを含む群から選択されるアルキル基が含まれ、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（ＩＩ）について定義されたのと同じ意味を有する。
【０１９５】
ＹがＮＲ１である一部の実施形態では、Ｒ１は、メチル基であり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１およびＸ２は、水素原子であり、Ｌ１およびＬ２は、一般式（ＩＩ）について定義された通りである。
【０１９６】
ＹがＮＲ１である一部の実施形態では、Ｒ１は、イソプロピル基であり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１およびＸ２は、水素原子であり、Ｌ１およびＬ２は、一般式（ＩＩ）について定義された通りである。
【０１９７】
ＹがＮＲ１である一部の実施形態では、Ｒ１は、フェニル基で置換されたメチル基であり、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ２、Ｒ３およびＢは、一般式（ＩＩ）または薬学的に許容されるその塩について定義されたのと同じ意味を有する。
【０１９８】
ＹがＮＲ１である一部の実施形態では、Ｒ１は、ブチル基であり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１およびＸ２は、水素原子であり、Ｌ１およびＬ２は、一般式（ＩＩ）について定義された通りである。
【０１９９】
ＹがＮＲ１である一部の実施形態では、Ｒ１は、オクチル基であり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１およびＸ２は、水素原子であり、Ｌ１およびＬ２は、一般式（ＩＩ）について定義された通りである。
【０２００】
ＹがＮＲ１である一部の実施形態では、Ｒ１は、直鎖状Ｃ１６アルキル基であり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１およびＸ２は、水素原子であり、Ｌ１およびＬ２は、一般式（ＩＩ）について定義された通りである。
【０２０１】
ＹがＮＲ１である式（ＩＩ）の化合物のさらなる実施形態では、Ｒ１は、一般式（ＩＩ）において定義された通り置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基であり、これには、一般式（ＩＩ）において定義された通り置換されたＣ１、Ｃ２またはＣ３アルキル基が含まれる。
【０２０２】
これらのさらなる実施形態の一部では、Ｒ１は、ハロゲン原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）複素環、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基および（Ｃ５〜Ｃ１４）ヘテロアリール基から選択される１つまたはそれ以上の基によって置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基である。
【０２０３】
これらのさらなる実施形態の一部では、Ｒ１は、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基によって置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基であり、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（ＩＩ）について定義されたのと同じ意味を有する。
【０２０４】
ＹがＮＲ１である式（ＩＩ）の化合物の一部の実施形態では、Ｒ１は、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基によって置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基である。これらの実施形態は、ＹがＮＲ１であり、Ｒ１が、アリール基によって置換されたメチレン基である式（ＩＩ）の化合物を包含する。これらの実施形態はまた、ＹがＮＲ１であり、Ｒ１が、フェニル基によって置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基である式（ＩＩ）の化合物を包含する。
【０２０５】
ＹがＮＲ１である式（ＩＩ）の化合物の一部の実施形態では、Ｒ１は、非置換フェニル基によって置換されたメチル基であり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄは各々、水素原子であり、Ｌ１およびＬ２は、一般式（ＩＩ）において定義された通りである。
【０２０６】
ＹがＮＲ１である式（ＩＩ）の化合物のさらなる実施形態では、Ｒ１は、ハロゲン原子および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基であり、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（ＩＩ）について定義されたのと同じ意味を有する。
【０２０７】
ＹがＮＲ１である式（ＩＩ）の化合物または薬学的に許容されるその塩のこれらのさらなる実施形態の一部では、Ｒ１は、シクロヘキシル基であり、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ２、Ｒ３およびＢは、一般式（ＩＩ）について定義されたのと同じ意味を有する。
【０２０８】
ＹがＮＲ１である式（ＩＩ）の化合物のこれらのさらなる実施形態の一部では、Ｒ１は、非置換シクロヘキシルであり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２は各々、水素原子であり、Ｌ１およびＬ２は、一般式（ＩＩ）について定義された通りである。
【０２０９】
式（ＩＩ）のオリゴヌクレオチドの一部の他の実施形態では、Ｙは、Ｎ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１であり、Ｒ１は、（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基であり、Ｒ１は、メチルおよびペンタデシルを含む群から選択され、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ２、Ｒ３およびＢは、一般式（ＩＩ）または薬学的に許容されるその塩について定義されたのと同じ意味を有する。
【０２１０】
式（ＩＩ）のオリゴヌクレオチドの一部の他の実施形態では、Ｙは、Ｎ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１であり、Ｒ１は、ハロゲン原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）複素環、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、（Ｃ５〜Ｃ１４）ヘテロアリール基、−Ｏ−Ｚ１、−Ｎ（Ｚ１）（Ｚ２）、−Ｓ−Ｚ１、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｊ）−Ｏ−Ｚ１、−Ｏ−Ｃ（＝Ｊ）−Ｚ１、−Ｃ（＝Ｊ）−Ｎ（Ｚ１）（Ｚ２）および−Ｎ（Ｚ１）−Ｃ（＝Ｊ）−Ｚ２（式中、
Ｊは、ＯまたはＳであり、
Ｚ１およびＺ２の各々は独立して、Ｈ、ハロゲン原子および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基である）から選択される１つまたはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基であり、
Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（ＩＩ）について定義されたのと同じ意味を有する。
【０２１１】
ＹがＮ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１である実施形態の一部では、Ｒ１は、場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基であり、これには、場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキル基が含まれ、Ｌ１、Ｌ２、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（ＩＩ）について定義されたのと同じ意味を有する。
【０２１２】
ＹがＮ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１である実施形態の一部では、Ｒ１は、非置換（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキル基であり、これには、非置換（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキル基が含まれ、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（ＩＩ）について定義されたのと同じ意味を有する。
【０２１３】
ＹがＮ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１であるこれらの実施形態の一部によると、Ｒ１は、メチルおよびペンタデシルを含む群から選択され、Ｌ１およびＬ２およびＢは、一般式（ＩＩ）について定義されたのと同じ意味を有する。これらの実施形態は、Ｙが、Ｎ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１であり、Ｒ１がメチル基であり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２が各々、水素原子を表し、Ｂ、Ｌ１およびＬ２が、一般式（ＩＩ）において定義された通りである式（ＩＩ）の化合物を包含する。これらの実施形態はまた、ＹがＮ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１であり、Ｒ１がペンタデシル基であり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２が各々、水素原子を表し、Ｂ、Ｌ１およびＬ２が一般式（ＩＩ）において定義された通りである式（ＩＩ）の化合物を包含する。
【０２１４】
式（ＩＩ）の化合物は、遊離塩基または酸との付加塩の形態で存在し得る。式（ＩＩ）の化合物はまた、やはり本開示内であるその薬学的に許容される塩の形態で存在し得る。
【０２１５】
式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体を含むオリゴヌクレオチドの実施形態
本明細書において既に示した通り、本開示はまた、塩基または酸との付加塩の形態である式（ＩＩ）の化合物（式中、
−  Ｂは、複素環式核酸塩基であり；
−  Ｌ１およびＬ２の一方は、式（ＩＩ）の化合物とオリゴマー化合物とを連結するヌクレオシド間連結基であり、Ｌ１およびＬ２の他方は、Ｈ、保護基、リン部分または式（ＩＩ）の化合物とオリゴマー化合物とを連結するヌクレオシド間連結基であり；
−  Ｙは、ＮＲ１であり、Ｒ１は、基−［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ−Ｒ２−（Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）ｐ−Ｒ３（式中、
ｍは、０または１を意味する整数であり、
ｐは、０〜１０の範囲の整数であり、
Ｒ２は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、−Ｏ−Ｚ３、−Ｎ（Ｚ３）（Ｚ４）、−Ｓ−Ｚ３、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｋ）−Ｏ−Ｚ３、−Ｏ−Ｃ（＝Ｋ）−Ｚ３、−Ｃ（＝Ｋ）−Ｎ（Ｚ３）（Ｚ４）、−Ｎ（Ｚ３）−Ｃ（＝Ｋ）−Ｚ４（式中、
Ｋは、ＯまたはＳであり、
Ｚ３およびＺ４の各々は独立して、Ｈ、ハロゲン原子および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基である）によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキレン基であり、
Ｒ３は、細胞標的化部分である）であり、
−  Ｘ１およびＸ２は各々独立して、水素原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基であり、
−  Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄの各々は独立して、Ｈまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基である）を包含する。
【０２１６】
これらの式（ＩＩ）の化合物は、本開示において「標的化されたヌクレオチド類似体」と呼ばれることがある化合物のより一般的なファミリーに包含される。
【０２１７】
Ｒ１が基−［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ−Ｒ２−（Ｏ−ＣＨ2-ＣＨ2）ｐ−Ｒ３である式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体の一部の実施形態では、ｍは０であり、ｐは０であり、Ｒ３は、細胞標的化部分であり、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＲ２は、式（ＩＩ）の化合物の一般定義における通りである。
【０２１８】
一部の実施形態では、Ｒ２はエチレン基であり、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子であり、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄは、式（ＩＩ）の化合物の一般定義における通りである。
【０２１９】
これらの実施形態の一部の他のものでは、Ｒ２はペンチレン基であり、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子であり、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄは、式（ＩＩ）の化合物の一般定義における通りである。
【０２２０】
これらの実施形態の一部の他のものでは、Ｒ２は（Ｃ１２）アルキレン基であり、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子であり、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄは、式（ＩＩ）の化合物の一般定義における通りである。
【０２２１】
Ｒ１が基−［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ−Ｒ２−（Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）ｐ−Ｒ３である式（ＩＩ）の化合物の一部の実施形態では、ｍは０であり、ｐは、１、２、３および４からなる整数の群から選択され、Ｒ３は、細胞標的化部分であり、Ｂ、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＲ２は、式（ＩＩ）の化合物の一般定義における通りである。これらの実施形態の一部では、Ｒ２はエチレン基であり、ｐは１であり、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子である。これらの実施形態のなおさらなるものでは、Ｒ２はエチレン基であり、ｐは２であり、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子である。これらの実施形態のなおさらなるものでは、Ｒ２はエチレン基であり、ｐは３であり、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子である。これらの実施形態のなお他のものでは、Ｒ２はエチレン基であり、ｐは４であり、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子である。
【０２２２】
Ｒ１が基−［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ−Ｒ２−（Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）ｐ−Ｒ３である式（ＩＩ）の化合物の一部の実施形態では、ｍは１であり、ｐは０であり、Ｒ３は、細胞標的化部分であり、Ｒ２、Ｂ、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２は、式（ＩＩ）の化合物の一般定義における通りである。
【０２２３】
これらの実施形態の一部では、Ｒ２は、ブチレンであり、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子を表し、Ｂ、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、一般式（ＩＩ）について定義された通りである。
【０２２４】
これらの実施形態の一部のさらなるものでは、Ｒ２は、（Ｃ１１）アルキレンであり、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子を表し、Ｂ、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、一般式（ＩＩ）について定義された通りである。
【０２２５】
これらの実施形態の一部のなおさらなるものでは、Ｒ２は、メチレンであり、Ｘ１およびＸ２はいずれも、水素原子を表し、Ｂ、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、一般式（ＩＩ）について定義された通りである。
【０２２６】
Ｒ１が基−［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ−Ｒ２−（Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）ｐ−Ｒ３である式（ＩＩ）の化合物の一部の実施形態では、ｍは１であり、ｐは、１および２からなる整数の群から選択され、Ｒ３は、細胞標的化部分であり、Ｒ２、Ｂ、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２は、式（ＩＩ）の化合物の一般定義における通りである。
【０２２７】
これらの実施形態の一部では、Ｒ２は、メチレン基であり、ｐは２であり、Ｒ３は、細胞標的化部分であり、Ｂ、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２は、一般式（ＩＩ）について定義された通りである。
【０２２８】
これらの実施形態の一部の他のものでは、Ｒ２は、メチレン基であり、ｐは１であり、Ｒ３は、細胞標的化部分であり、Ｂ、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２は、一般式（ＩＩ）について定義された通りである。
【０２２９】
一般に、基Ｒ３には、本開示において示される任意の細胞標的化部分を含む当技術分野で公知の任意の細胞標的化部分が包含され、これには、本開示の標的化されたオリゴヌクレオチドの説明のために示される細胞標的化部分が含まれる。
【０２３０】
式（ＩＩ）の化合物の一部の実施形態では、Ｒ３は、式（ＩＩＩ）：
【化１０】
2021517126.tif 000012
（式中、Ａ１、Ａ２およびＡ３は、ＯＨであり、
Ａ４は、ＯＨまたはＮＨＣ（＝Ｏ）−Ｒ５であり、Ｒ５は、ハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル基である）
のものである。
【０２３１】
一部の実施形態では、Ｒ３は、式（ＩＩＩ−Ｂ）のＮ−アセチル−ガラクトサミン：
【化１１】
2021517126.tif 000013
である。
【０２３２】
本開示によると、「ＧａｌＮＡｃ」または「Ｎ−アセチルガラクトサミン」への参照には、β形態：２−（アセチルアミノ）−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノースおよびアルファ形態：２−（アセチルアミノ）−２−デオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノースの両方が含まれる。ある特定の実施形態では、β形態：２−（アセチルアミノ）−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノースおよびアルファ形態：２−（アセチルアミノ）−２−デオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノースの両方は、交換可能に使用できる。
【０２３３】
式（ＩＩ）のオリゴヌクレオチドにおいて、Ｂは、複素環式核酸塩基部分である。本明細書で使用される場合、「複素環式核酸塩基」という用語は、ジオキサン環またはモルホリノ環に共有結合した、場合により置換された窒素含有複素環を指す。一部の実施形態では、複素環式核酸塩基は、場合により置換されたプリン塩基、場合により置換されたピリミジン塩基から選択できる。「プリン塩基」という用語は、本明細書において、当業者によって理解される通りのその通常の意味で使用され、その互変異性体を含む。同様に、「ピリミジン塩基」という用語は、本明細書において、当業者によって理解される通りのその通常の意味で使用され、その互変異性体を含む。場合により置換されたプリン塩基の非限定リストには、プリン、アデニン、グアニン、ヒポキサンチン、キサンチン、アロキサンチン、７−アルキルグアニン（例えば、７−メチルグアニン）、テオブロミン、カフェイン、尿酸およびイソグアニンが含まれる。ピリミジン塩基の例としては、これらに限定されないが、シトシン、チミン、ウラシル、５，６−ジヒドロウラシルおよび５−アルキルシトシン（例えば、５−メチルシトシン）が挙げられる。複素環式塩基の他の非限定例としては、ジアミノプリン、８−オキソ−Ｎ6アルキルアデニン（例えば、８−オキソ−Ｎ6メチルアデニン）、７−デアザキサンチン、７−デアザグアニン、７−デアザアデニン、Ｎ4Ｎ4−エタノシトシン、Ｎ<6>，Ｎ<6>−エタノ−２，６−ジアミノプリン、５−ハロウラシル（例えば、５−フルオロウラシルおよび５−ブロモウラシル）、プソドイソシトシン、イソシトシン、イソグアニン、１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミド、ならびにさらなる複素環式塩基を開示するための、参照によって本明細書に組み入れる、米国特許第５，４３２，２７２号および米国特許第７，１２５，８５５号に記載の他の複素環式塩基が挙げられる。
【０２３４】
一部の実施形態では、Ｂは、ピリミジン、置換ピリミジン、プリンおよび置換プリンを含む群から選択される。
【０２３５】
好ましい実施形態では、Ｂは、アデニン、チミン、ウラシル、グアニンおよびシトシン（すなわち、アデニル、チミニル、ウラシル、グアニルおよびシトシル基）を含む群から選択される。
【０２３６】
既に言及した通り、式（ＩＩ）のオリゴヌクレオチドにおいて、Ｌ１およびＬ２のうちの一方の基は、式（ＩＩ）の化合物とオリゴマー化合物とを連結するヌクレオシド間連結基であり、Ｌ１およびＬ２のうちの他方の基は、Ｈ、保護基、または式（ＩＩ）の化合物とオリゴマー化合物とを連結するヌクレオシド間連結基である。
【０２３７】
実施例において示される通り、式（Ｉ）の化合物は、相補的配列を有する第２のオリゴヌクレオチドと二本鎖を形成する第１のオリゴヌクレオチドに組み込まれた場合、得られたヌクレオチド類似体含有オリゴヌクレオチドのＴｍ値の実質的な低下を示した。得られる二本鎖のＴｍ値は、式（ＩＩ）の化合物の数の増加につれて低下する。例示として、約７４℃のＴｍ値を有する出発２１ｍｅｒオリゴヌクレオチドの場合、Ｔｍ値は、得られる修飾オリゴヌクレオチド内の種々の位置に位置する式（ＩＩ）の５つの化合物を含む得られる修飾オリゴヌクレオチドについて、約５０℃もの低さに低下し得る。したがって、Ｔｍ値の低下は、ジオキサン環を含む１つもしくはそれ以上の式（Ｉ）の化合物またはモルホリノ環を含む１つもしくはそれ以上の式（Ｉ）の化合物を組み込んだ場合に起こる。しかしながら、大半の実施形態では、そのような低下したＴｍ値によりなお、所望の標的配列への得られるｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖のハイブリダイゼーション前の適切な二本鎖形成、次いで、ＲＩＳＣ複合体の適切な二本鎖取込みが確実になる。
【０２３８】
本明細書において実施例により、オリゴヌクレオチドは、１つまたはそれ以上の式（Ｉ）の化合物が組み込まれた場合、標的遺伝子の効果的な阻害を確実にするために必要とされる安定性を保有するｓｉＲＮＡ二本鎖構造を生成することが可能になることが示される。
【０２３９】
まったく予想外であることに、実施例によりまた、式（ＩＩ）の化合物が互いに、またはリボース含有ヌクレオチドと、従来のホスホジエステル結合により連結した場合、１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物を含むｓｉＲＮＡ二本鎖の高代謝安定性が得られることが示される。式（ＩＩ）の化合物が、オリゴヌクレオチド内で従来のホスホジエステル結合により連結し、ｓｉＲＮＡの鎖を形成している場合、得られるｓｉＲＮＡ二本鎖は、ヌクレアーゼ分解に対して式（ＩＩ）の化合物ではなくホスホロチオエート連結デオキシリボヌクレオチドを有する同じｓｉＲＮＡよりも高い安定性を保有することが予想外に示された。この予想外の安定性の増加は、とりわけ、式（ＩＩ）の化合物がそのセンス鎖の３’末端もしくは５’末端または３’末端および５’末端の両方のオーバーハングに存在するｓｉＲＮＡを含む、式（ＩＩ）の化合物がそのセンス鎖およびアンチセンス鎖のオーバーハングに存在するｓｉＲＮＡの実施形態について示された。
【０２４０】
ホスホジエステル結合により連結された場合、式（ＩＩ）の化合物のこの代謝安定性の高い増加は、ホスホロチオエートのような修飾ヌクレオチド間連結亜リン酸基による安定化を回避できるため、明らかな技術的利点である。そのような非従来のホスホロチオエートはキラル中心を導入し、これは、得られるｓｉＲＮＡの望ましくないジアステレオマー混合物をもたらすことが、本明細書において注記される。後者は、標的化された配列のｓｉＲＮＡ特異性を低下させ得、オフターゲット事象の増加につながる。本明細書において、１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物を有するｓｉＲＮＡは、ｓｉＲＮＡがトランスフェクション剤の非存在下で標的細胞によって内部移行された場合でさえ、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける良好な標的遺伝子サイレンシング活性を有することも示される。実施例において開示される通り、式（ＩＩ）の化合物の実施形態は、ピコモル濃度範囲のＩＣ50値を有する標的遺伝子サイレンシング活性を示す。
【０２４１】
加えて、モルホリン−窒素（ＧａｌＮＡｃ残基）に結合した標的化部分を有する１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物を組み込む二本鎖オリゴヌクレオチドの本明細書に記載の実施例は、標的ｍＲＮＡのｉｎ  ｖｉｖｏノックダウンおよび対応するタンパク質レベルをもたらす、肝臓への頑強な送達を示す。
【０２４２】
予想外なことに、１つの二本鎖オリゴヌクレオチド内で式（ＩＩ）の標的化された化合物および式（ＩＩ）の標的化されていない化合物を組み合わせた場合、二本鎖オリゴヌクレオチドのｉｎ  ｖｉｖｏ挙動（特に、ｉｎ  ｖｉｖｏ作用持続時間）の大幅な改善が実証され；これはまた、センス鎖がホスホロチオエート基を含まない場合に示される。ホスホロチオエート安定化なしのアンチセンス鎖のオーバーハングとして式（ＩＩ）の標的化されていない化合物のさらなる結合でさえ、得られるｓｉＲＮＡの頑強なｉｎ  ｖｉｖｏ効力を示す。
【０２４３】
センス鎖、アンチセンス鎖、またはセンスおよびアンチセンス鎖の両方、とりわけセンス鎖に組み込まれた１つまたはそれ以上の式（Ｉ）の化合物を有するｓｉＲＮＡはまた、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける効果的な標的遺伝子サイレンシング活性を示す。標的遺伝子サイレンシング活性は、（ｉ）その中に存在する式（Ｉ）の化合物の実施形態、（ｉｉ）その中に存在する式（Ｉ）の化合物の数、および（ｉｉｉ）ｓｉＲＮＡのセンス鎖またはアンチセンス鎖内の式（Ｉ）の化合物の位置に従って制御できる。重要なことに、組み込まれた１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物を有するｓｉＲＮＡは、ｓｉＲＮＡが標的遺伝子サイレンシング効果を示すことが示されている用量範囲において、ｉｎ  ｖｉｖｏ副作用を有さない。
【０２４４】
例示の目的で、本開示を限定することなく、二本鎖オリゴヌクレオチドはまた、修飾されたセンスおよび／またはアンチセンス鎖に１つまたはそれ以上のヌクレオチドを含み得る。
【０２４５】
修飾は、核酸または塩基の類似体の置換または挿入、および塩基、糖またはホスフェート部分の化学修飾から選択できる。選択された修飾は各々個々に、３’−末端デオキシチミン、２’−Ｏ−メチル、２’−デオキシ修飾、２’−デオキシ−フルオロ、２’−アミノ修飾、２’アルキル修飾、ホスホロチオエート修飾、ホルホラミデート修飾、５’−ホスホロチオエート基修飾、５’−ホスフェートもしくは５’−ホスフェート模倣体修飾およびコレステリル誘導体もしくはドデカン酸ビスデシルアミド基修飾中から選択でき、ならびに／または修飾ヌクレオチドは、ロックドヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチドもしくはヌクレオチドを含む非天然塩基のうちの任意の１つであり得る。好ましい実施形態のうちの１つは、２’−Ｏ−メチルである少なくとも１つの修飾および／または２’−デオキシ−フルオロである少なくとも１つの修飾であり得る。
【０２４６】
修飾オリゴヌクレオチドの他の例としては、本明細書で使用される場合、以下の修飾のうちの１つまたはそれ以上を挙げることができる：修飾、例えば、非連結ホスフェート酸素の一方もしくは両方および／または連結ホスフェート酸素の一方もしくは両方の置き換え；ホスフェート部分の置き換え；天然に存在する塩基の修飾または置き換え；リボースホスフェート主鎖の置き換えまたは修飾；ＲＮＡの３’末端または５’末端の修飾、例えば、末端ホスフェート基の除去、修飾もしくは置き換え、または部分、例えば、蛍光標識部分の、ＲＮＡの３’もしくは５’末端のいずれかへのコンジュゲート。
【０２４７】
式（Ｉ）の化合物の合成のための方法
式（Ｉ）の化合物は、本明細書の開示において例示される詳細な方法に従って調製できる。
【０２４８】
本開示は、式（Ｉ−Ａ）の化合物を調製するための方法であって：
ａ）式（Ｘ）の化合物
【化１２】
2021517126.tif 000014
（式中、Ｂは、複素環式核酸塩基であり、Ｐ１およびＰ２は各々独立して、本明細書において一般式（Ｉ）で定義された通りの保護基を表す）
と、過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ4）のような酸化剤との反応による、式（Ｘ）の化合物の酸化の工程であって、それによって、以下の式（ＸＩ）の化合物：
【化１３】
2021517126.tif 000015
を得る前記工程、ならびに
【０２４９】
ｂ）式（Ｘ１）の化合物を、式（ＸＩＩ）
Ｒ１−ＮＨ2  （ＸＩＩ）
（式中、Ｒ１は、本明細書において一般式（Ｉ）で定義された通りである）
の化合物の存在下で、還元的アミノ化の工程にかけて、式（Ｉ−Ａ）：
【化１４】
2021517126.tif 000016
（式中、Ｂは、複素環式核酸塩基であり、Ｐ１およびＰ２は各々独立して、一般式（Ｉ）において定義された通りの保護基を表す）
得る工程
を含む方法に関する。
【０２５０】
本開示はまた、式（Ｉ−Ｂ）の化合物を調製するための方法であって：
ａ）式（Ｘ）の化合物
【化１５】
2021517126.tif 000017
（式中、Ｂは、複素環式核酸塩基であり、Ｐ１およびＰ２は各々独立して、本明細書において一般式（Ｉ）において定義された通りの保護基を表す）
と、酸化剤、例えば、過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ4）との反応による、式（Ｘ）の化合物の酸化の工程であって、それによって、以下の式（ＸＩ）の化合物：
【化１６】
2021517126.tif 000018
を得る工程、ならびに
【０２５１】
ｂ）式（ＸＩ）の化合物を、アミン、例えば、アンモニアまたは二ホウ酸化アンモニウムの存在下で還元的アミノ化の工程にかけて、式（ＸＩＩＩ）の化合物
【化１７】
2021517126.tif 000019
を得る工程、
【０２５２】
ｃ）式（ＸＩＩＩ）の化合物を、式（ＸＩＶ）の化合物
Ｒｌ−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＨ  （ＸＩＶ）
（式中、Ｒ１は、本明細書において一般式（Ｉ）において定義された通りである）
の存在下で、アミドカップリングの工程にかけて、式（Ｉ−Ｂ）の化合物
【化１８】
2021517126.tif 000020
（式中、Ｂは、複素環式核酸塩基であり、Ｐ１およびＰ２は各々独立して、一般式（Ｉ）において定義された通りの保護基を表し、Ｒ１は、一般式（Ｉ）において定義された通りである）
を得る工程、
【０２５３】
ｄ）式（ＸＩＩＩ）の化合物を、アルデヒドまたはケトンの存在下で、還元的アミノ化の工程にかけて、式（Ｉ−Ａ）の化合物
【化１９】
2021517126.tif 000021
を得る工程
を含む方法に関する。
【０２５４】
本開示はまた、式（Ｉ−Ｃ）の化合物
【化２０】
2021517126.tif 000022
を調製するための方法であって、式（ＸＶ）の化合物
【化２１】
2021517126.tif 000023
（式中、Ａ１、Ａ２、Ａ３およびＡ４は、本明細書において式（ＩＩＩ）または（ＩＩＩ−Ａ）で定義された通りであり、−Ｙ−ＣＨＯは、還元的アミノ化反応によって、Ｘと等しい−Ｙ−ＣＨ２に移行され、Ｘは、式−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｐ−Ｒ２−（式中、ｐおよびＲ２は、一般式（Ｉ）において定義された通りである）の基である）
を、式（ＸＩＩＩ）の化合物
【０２５５】
【化２２】
2021517126.tif 000024
（式中、Ｐ１、Ｐ２およびＢは、本明細書において一般式（Ｉ）で定義された通りである）
と、還元的アミノ化によって反応させて、式（Ｉ−Ｃ）の化合物
【化２３】
2021517126.tif 000025
を得る工程を含む方法に関する。
【０２５６】
上記方法は、本開示のスキーム２に例示されている。
【０２５７】
本開示はまた、式（Ｉ−Ｄ）の化合物
【化２４】
2021517126.tif 000026
を得るための方法であって：
【０２５８】
ａ）式（ＸＶＩ）の化合物
【化２５】
2021517126.tif 000027
（式中、Ａ１、Ａ２、Ａ３およびＡ４は、本明細書において式（ＩＩＩ）または（ＩＩＩ−Ａ）で定義された通りであり、Ｘは、式−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｐ−Ｒ２−（式中、ｐおよびＲ２は、一般式（Ｉ）で定義された通りである）の基である）
を、式（ＸＩＩＩ）の化合物
【化２６】
2021517126.tif 000028
（式中、Ｐ１、Ｐ２およびＢは、本明細書において一般式（Ｉ）で定義された通りである）
と、ペプチドカップリング条件下で反応させて、式（Ｉ−Ｄ）の化合物を得る工程を含む方法に関する。
【０２５９】
上記方法は、本開示のスキーム２に例示されている。
【０２６０】
本開示は、式（Ｉ−Ｅ）の化合物を調製するための方法であって：
ａ）式（ＸＩ）の化合物
【化２７】
2021517126.tif 000029
（式中、Ｐ１、Ｐ２およびＢは、一般式（Ｉ）において定義された通りである）を還元して、式（ＸＶＩＩ）の化合物
【化２８】
2021517126.tif 000030
を得る工程、
【０２６１】
ｂ）式（ＸＶＩＩ）の化合物を、スルホニル化剤（例えば、ｐ−トルエン−スルホニルクロリドＴｓ−Ｃｌ、メタンスルホニルクロリドＭｓ−Ｃｌ）の存在下で移行させて、式（ＸＶＩＩＩ）の化合物
【化２９】
2021517126.tif 000031
（式中、Ｔｓは、トシル基を表す）
を得る工程、
【０２６２】
ｃ）式（ＸＶＩＩＩ）の化合物を塩基性条件にかけて、式（Ｉ−Ｅ）の化合物
【化３０】
2021517126.tif 000032
を得る工程
を含む方法にさらに関する。
【０２６３】
上記方法は、本開示のスキーム３に例示されている。
【０２６４】
本開示はまた、式（Ｉ−Ｅ）の化合物を調製するための代替的な方法であって、
ａ）式（ＸＶＩＩ）の化合物
【化３１】
2021517126.tif 000033
を、過剰のスルホニル化剤（例えば、ｐ−トルエン−スルホニルクロリドＴｓ−Ｃｌ、メタンスルホニルクロリドＭｓ−Ｃｌ）の存在下で移行させて、式（ＸＩＸ）の化合物
【化３２】
2021517126.tif 000034
（式中、Ｔｓは、トシル基を表す）
を得る工程、
【０２６５】
ｂ）基Ｐ１の除去によって、式（ＸＩＸ）の化合物を脱保護して、式（ＸＸ）の化合物
【化３３】
2021517126.tif 000035
を得る工程、
【０２６６】
ｃ）式（ＸＸ）の化合物を塩基性条件にかけて、式（ＸＸＩ）の化合物
【化３４】
2021517126.tif 000036
を得る工程、および
【０２６７】
ｄ）トシル基を保護基Ｐ１によって置き換えて、式（Ｉ−Ｅ）の化合物
【化３５】
2021517126.tif 000037
を得る工程
を含む方法に関する。
【０２６８】
上記方法は、本開示のスキーム３に例示されている。
【０２６９】
式（Ｉ）、（Ｉ−Ａ）、（Ｉ−Ｂ）、（Ｉ−Ｃ）、（Ｉ−Ｄ）および（Ｉ−Ｅ）の化合物は、本明細書において開示される以下のスキーム１〜８に例示される詳細な方法に従って調製できる。
【０２７０】
市販のリボース誘導体Ｇ１から開始して、２つの第一級ＯＨ基は、標準的な文献プロトコルに従う選択的ベンジル化によって分化できる。得られたベンジルエーテルＧ２の標準的な保護基修飾により、完全に保護されたリボース類似体Ｇ３がもたらされ、これは、核酸塩基Ｂ（例えば、Ｔ、Ｕ、ＣBzl、Ｉ、ＧiBu、ＡBzl）の存在下でグリコシル供与体として使用でき、ヌクレオシド誘導体Ｇ４が得られる（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、１９９８、５４、３６０７〜３６３０頁）。
【０２７１】
【化３６】
2021517126.tif 000038
スキーム１：ＹがＮである式（Ｉ）の化合物の合成
【０２７２】
ヌクレオシド類似体Ｇ４で開始して、標準的な手順による保護基パターンの修飾により、２つの第一級アルコールに一般式（Ｉ）において定義された通りの直交性保護基Ｐ１およびＰ２、ならびにリボーススキャフォールドのＣ２’およびＣ３’に非保護ＯＨ基を有する中間体Ｇ５がもたらされる。Ｇ５化合物のジヒドロキシ官能基のｃｉｓ配向により、酸化剤としてＮａＩＯ4を使用するＣ２’およびＣ３’間のＣ−Ｃ結合の酸化的切断が可能になる。得られたジアルデヒドは、一水和物Ｇ６として単離でき、これは、ＮａＣＮＢＨ3のような還元剤との還元的アミノ化反応によって所望のモルホリンスキャフォールドに変換される。アンモニアまたは二ホウ酸アンモニウムのようなアミン基剤を使用することにより、モルホリンスキャフォールド中に遊離ＮＨ基を有するモルホリン中間体Ｇ７がもたらされる。例えば、ＮａＣＮＢＨ3の存在下での対応するアルデヒドまたはケトンとの第２の還元的アミノ化反応により、Ｒ１が一般式（Ｉ）において定義された通りであるアルキル化モルホリンＧ８が得られる。あるいは、中間体Ｇ６は、適切なアミンＲ１−ＮＨ2（式中、Ｒ１は、一般式（Ｉ）において定義された通りである）の存在下での還元的アミノ化反応を受けることができ、アルキル化モルホリンＧ８が直接もたらされる。類似体アシル化モルホリンは、遊離モルホリンビルディングブロックＧ７および対応するカルボン酸Ｒ１−ＣＯＯＨ間の標準的なペプチドカップリング反応によって得られ、アミド中間体Ｇ９が得られる。
【０２７３】
化合物Ｇ７、Ｇ８およびＧ９は、本開示に記載の式（Ｉ）の化合物の実施形態からなる。
【０２７４】
一般式（Ｉ）の化合物の形成のためのスキーム１に記載の合成と同様に、本明細書に記載の一般式（Ｉ）の標的化された化合物は、アミン試薬として中間体Ｇ７を使用する還元的アミノ化またはペプチドカップリング反応によって調製できる。
【０２７５】
保護細胞標的化部分として過アセチル化Ｎ−アセチルガラクトサミンＧ１１を使用して、一般式（Ｉ）の化合物の合成が、以下のスキーム２に記載される。
【０２７６】
【化３７】
2021517126.tif 000039
スキーム２：アミド（Ｇ１４）およびアミン（Ｇ１５）結合、細胞標的化部分として保護ＧａｌＮＡｃおよび異なるＸリンカー基（ここで、Ｘは、（Ｇ１３）のリンカー断片−Ｙ−ＣＨＯから生成され、還元的アミノ化後、−Ｙ−ＣＨ2−に変換される）による一般式（Ｉ）の化合物の合成。
【０２７７】
以下では、Ｘは、一般式（Ｉ）の化合物において定義された通りの基−［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ−Ｒ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ−Ｒ３に含まれる基−Ｒ２（ＯＣＨ２−ＣＨ２）ｐ−として定義される。
【０２７８】
標準的なグリコシル化条件下でのω−ヒドロキシカルボン酸エステル（ＨＯ−Ｘ−ＣＯＯＢｎ）による過アセチル化ＧａｌＮＡｃ誘導体Ｇ１１の処理により、エステル切断後、カルボン酸Ｇ１２がもたらされ、これは、モルホリン誘導体Ｇ７の存在下、ペプチドカップリング条件下で所望のアミドＧ１４を形成する。あるいは、ω−ヒドロキシ−ベンジルエーテル（ＨＯ−Ｘ−ＯＢｎ）によるＧ１１のグリコシル化により、ベンジルエーテル切断および対応するアルコールの酸化後、アルデヒド中間体Ｇ１３がもたらされる。アミン成分としてモルホリンＧ７による還元的アミノ化によりアルキル化モルホリンＧ１５が形成される。化合物Ｇ１４およびＧ１５は、本開示において記載の通りの式（Ｉ）の化合物である。
【０２７９】
ジオキサン系列（ＹはＯである）の一般式（Ｉ）の化合物への合成経路が、スキーム３に示される。
【０２８０】
【化３８】
2021517126.tif 000040
スキーム３：ＹがＯである一般式（Ｉ）の化合物への合成経路
【０２８１】
既に記載のｃｉｓジオール中間体Ｇ５、およびビルディングブロックＧ６へのその酸化切断で開始し（スキーム１を参照）、水素化ホウ素ナトリウムのような還元剤での処理により、２’および３’−Ｃに２つの第一級ＯＨ基を有するジオール中間体Ｇ１６がもたらされる。塩基性条件下で化学量論量のｐ−トルエンスルホニルクロリドのようなスルホニル化剤の存在下、２’−ＯＨ−官能基は、選択的にトシル化でき、モノトシレートＧ１７が形成される。塩基性条件下で、例えば、ＭｅＯＨ中水性ＮａＯＨまたはＮａＯＭｅを使用して、Ｇ１７は、３’−Ｃにおける遊離ＯＨ基による第一級トシレートの求核置換を受け、これにより、所望のジオキサンスキャフォールドＧ１８が形成される。
【０２８２】
化合物Ｇ１８は、本開示に記載の通りの一般式（Ｉ）の化合物からなる。
【０２８３】
あるいは、ジオール中間体Ｇ１６は、例えば、過剰のｐ−トルエンスルホニルクロリドおよび増加した反応時間によりビス−スルホニル化でき、ビス−トシレートＧ１９が得られる。直交性保護基Ｐ１またはＰ２の一方の脱保護の後、得られた第一級アルコールＧ２０は、求核置換下でＧ１７と同様に反応し（スキーム３を参照）、所望のジオキサンスキャフォールドＧ２１が形成する。残留トシレートは、安息香酸ナトリウムで置き換えることができ、再度、第一級ヒドロキシル基において直交性保護基Ｐ１およびＰ２により完全に保護されたジオキサンスキャフォールドＧ１８が得られる。
【０２８４】
【化３９】
2021517126.tif 000041
スキーム４：ＹがＯである式（Ｉ）の化合物の代替的合成
【０２８５】
直交性保護基Ｐ１およびＰ２を有する記載の一般式（Ｉ）のビルディングブロック（Ｇ８、Ｇ９、Ｇ１４、Ｇ１５およびＧ１８）は、最後に、対応するＤＭＴ保護ホスホラミダイトに変換され、自動化オリゴヌクレオチド合成におけるヌクレオチド前駆体としてのそれらの使用が可能になる。
【０２８６】
この目的のために、完全に保護された一般式（Ｉ）の化合物（Ｇ８、Ｇ９、Ｇ１４、Ｇ１５およびＧ１８）は、標準的な保護基修飾によってモノ−ＤＭＴ−保護中間体Ｇ２２に変換される。標準的なプロトコルによるＧ２２ビルディングブロックの遊離ＯＨ基の亜リン酸化により、自動化オリゴヌクレオチド合成のためのヌクレオチド前駆体として最終ＤＭＴ保護ホスホラミダイトＧ２３が得られる。
【０２８７】
【化４０】
2021517126.tif 000042
スキーム５：自動化オリゴヌクレオチド合成のための一般式（Ｉ）および（Ｖ）の化合物の最終ホスホラミダイトビルディングブロックの合成
【０２８８】
化合物Ｇ２３は、式（Ｉ）の化合物（式中、基Ｐ１はＤＭＴ保護基であり、基Ｐ２は、ホスホラミダイト基からなる反応性亜リン酸基である）である。
【０２８９】
中間体Ｇ２２をもたらす保護基修飾に依存して、一般構造（Ｉ）の化合物の（２Ｓ，６Ｒ）−および（２Ｒ，６Ｒ）−ジアステレオマーを合成できる。
【０２９０】
【化４１】
2021517126.tif 000043
スキーム６：一般式（Ｉ）の化合物Ｇ２３のジアステレオマー構造
【０２９１】
オリゴヌクレオチド一本鎖の３’末端の開始ヌクレオチドは、自動化合成の第１のヌクレオチドスキャフォールドとして対応するホスホラミダイトＧ２３と反応させる、ユニバーサル固体支持体材料（実験の部、オリゴヌクレオチドの合成を参照されたい）を用いた標準的な手順によって調製できる。
【０２９２】
あるいは、本明細書に記載の一般式（Ｉ）の化合物の固体支持体材料は、一般スキーム７に示される通りに合成できる。
【０２９３】
【化４２】
2021517126.tif 000044
スキーム７：自動化オリゴヌクレオチド合成のための一般式（Ｉ）の化合物の最終ＣＰＧ（細孔が制御されたガラス）固体支持体材料の合成
【０２９４】
アルコールＧ２２は、無水コハク酸のようなアシル化剤によりアシル化され、対応するスクシネートＧ２４が得られる。遊離カルボン酸部分は、ペプチドカップリング条件下で固体支持体材料（ＣＰＧ：細孔が制御されたガラス）の遊離アミノ基とカップリングされ、所望の固体支持体Ｇ２５が得られ、これは、自動化オリゴヌクレオチド合成の出発材料として使用できる。
【０２９５】
ホスホラミダイトＧ２３の合成のためのジアステレオ選択的経路（スキーム６を参照されたい）と同様に、両方のジアステレオマー系列の固体支持体Ｇ２５を合成できる（スキーム８を参照されたい）。
【０２９６】
【化４３】
2021517126.tif 000045
スキーム８：化合物Ｇ２５のジアステレオマー構造
【０２９７】
一般式（Ｉ’）：
【化４４】
2021517126.tif 000046
（式中、Ｔ１およびＴ２は各々独立して、保護基、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｒ−ＣＯＯＨまたは−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｒ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−Ｒ７であり、Ｒ７は、固体支持体材料を表し、ｒは、２、３および４から選択される整数であり、
Ｙ、Ｂ、Ｘ１、Ｘ２、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、一般式（Ｉ）において定義された通りである）
で定義される通りの、スクシネート誘導体および一般式（Ｉ）の化合物の固体支持体材料もまた、本開示の対象である。
【０２９８】
一部の実施形態では、Ｔ１およびＴ２の一方は、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｒ−ＣＯＯＨであり、他方は、保護基である。
【０２９９】
一部の実施形態では、Ｔ１およびＴ２の一方は、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｒＣ（＝Ｏ）ＮＨ−Ｒ７であり、Ｒ７は、ＣＰＧ固体支持体またはポリスチレン固体支持体であり、Ｔ１およびＴ２の他方は、保護基である。
【０３００】
一部の実施形態では、ｒは２である。
【０３０１】
式（ＩＩ）の化合物を含むオリゴヌクレオチドの調製
本明細書において「修飾オリゴヌクレオチド」と呼ばれることもある、本発明による使用のためのオリゴヌクレオチドは、最終オリゴヌクレオチドの成長鎖の選択された位置で組み込むために出発ビルディングブロックの一部として式（Ｉ）の１つまたはそれ以上の化合物を使用し、したがって、１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物を含むオリゴヌクレオチドを生成することによる本明細書に記載の方法を含む任意の有用な技術に従って調製でき、１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物は最終オリゴヌクレオチドの選択された位置に位置する。
【０３０２】
式（Ｉ）の化合物は、本開示に記載の通りに合成できる。
【０３０３】
本発明の修飾オリゴヌクレオチドは、オーバーハングを有するもしくは有さない二本鎖であり得、または少なくとも二本鎖部分を含み得る。二本鎖修飾オリゴヌクレオチドは、第１のヌクレオチド配列（例えば、ヌクレオチドセンス配列）および第１のヌクレオチド配列に相補的であり、それにハイブリダイズする第２のヌクレオチド配列（例えば、ヌクレオチドアンチセンス配列）を含むオリゴヌクレオチド一本鎖から形成でき、第２のヌクレオチド配列はまた、その阻害が求められる標的ＲＮＡ配列に相補的である。これらの実施形態によると、第１のヌクレオチド配列および第２のヌクレオチド配列は、修飾オリゴヌクレオチド内の別々の鎖上にあってもよく；または同じ鎖上にあるが、第１のヌクレオチド配列が第２のヌクレオチド配列にハイブリダイズすると、ヘアピンループが形成されるように、スペーサーもしくは適切な長さのさらなるヌクレオチド配列によって分離されていてもよい。
【０３０４】
一部の実施形態では、本発明の修飾オリゴヌクレオチドは、一本鎖であり、ｓｉＲＮＡのような二本鎖ＲＮＡのセンスまたはアンチセンス鎖のいずれかを含み得る。
【０３０５】
１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物を含むもののような本発明のオリゴヌクレオチドは、当技術分野で公知のプロトコルを使用して化学合成できる。例えば、Ｃａｒｕｔｈｅｒｓら、１９９２、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２１１：３〜１９頁；Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、国際ＰＣＴ公開第ＷＯ９９／５４４５９号；Ｗｉｎｃｏｔｔら、１９９５、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，２３：２６７７〜２６８４頁；Ｗｉｎｃｏｔｔら、１９９７、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．，７４：５９頁；Ｂｒｅｎｎａｎら、１９９８、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ．，６１：３３〜４５頁；およびＢｒｅｎｎａｎ、米国特許第６，００１，３１１号を参照されたい。オリゴヌクレオチドの合成では、５’末端のジメトキシトリチルおよび３’末端のホスホラミダイトのような、一般的な核酸保護およびカップリング基が使用される。ある特定の実施形態では、式（ＩＩ）の化合物を含むオリゴヌクレオチドは、米国特許第６，９９５，２５９号；米国特許第６，６８６，４６３号；米国特許第６，６７３，９１８号；米国特許第６，６４９，７５１号；米国特許第６，９８９，４４２号；および米国特許第７，２０５，３９９号に記載の方法に従って、合成、脱保護および分析される。非限定合成例では、小規模合成が、３９４  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．／Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｃｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ．合成機で行われる。
【０３０６】
あるいは、１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物を含むオリゴヌクレオチドは、別々に合成し、例えば、合成および／または脱保護後のライゲーションによって（Ｍｏｏｒｅら、１９９２、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６：９９２３頁；Ｄｒａｐｅｒら、国際ＰＣＴ公開第ＷＯ９３／２３５６９号；Ｓｈａｂａｒｏｖａら、１９９１、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １９：４２４７頁；Ｂｅｌｌｏｎら、１９９７、Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  ＆  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１６：９５１頁；Ｂｅｌｌｏｎら、１９９７、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，８：２０４頁）またはハイブリダイゼーションによって、合成後に一緒に合わせることができる。本開示による種々の修飾オリゴヌクレオチドはまた、Ｓｃａｒｉｎｇｅら、米国特許第５，８８９，１３６号；米国特許第６，００８，４００号；および米国特許第６，１１１，０８６号の教示を使用して合成できる。
【０３０７】
二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）
本発明の重要な側面は、１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物を含む修飾オリゴヌクレオチドの調製を可能にする式（Ｉ）の化合物を提供することである。修飾オリゴヌクレオチドは、二本鎖オリゴヌクレオチド、例えば、選択された標的ｍＲＮＡに特異的にハイブリダイズするｓｉＲＮＡを生成するために使用できる。
【０３０８】
式（ＩＩ）のオリゴマー化合物は、（ｉ）その中に含まれるヌクレオチドモノマーユニットの大部分に含まれるリボース糖部分、および（ｉｉ）その中に含まれる核酸塩基の種類を考慮して、「リボ核酸」または「ＲＮＡ」と呼ばれることがある。したがって、本開示のある特定の態様は、目的のｍＲＮＡを標的とする二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）分子に関する。本発明のｄｓＲＮＡは、１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物を含む修飾オリゴヌクレオチドを含み得る。
【０３０９】
一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、２つの鎖、第１の配列を含むセンス鎖および第２の配列を含むアンチセンス鎖を含み、第１の鎖および第２の鎖は、二本鎖構造を形成するのに十分相補的である。一部の実施形態では、センス鎖は、アンチセンス鎖の第２の配列と実質的に相補的または完全に相補的である第１の配列を含む。一部の実施形態では、アンチセンス鎖の第２の配列は、標的配列、例えば、標的遺伝子から転写されるｍＲＮＡの配列に、実質的に相補的または完全に相補的である。
【０３１０】
一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡのセンス鎖およびアンチセンス鎖は、２つの別々の分子である。一部の実施形態では、二本鎖領域が、２つの別々の分子のセンス鎖の第１の配列とアンチセンス鎖の第２の配列との間に形成される。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、ｓｉＲＮＡである。一部の実施形態では、２つの別々の分子は、互いに共有結合していない。一部の実施形態では、２つの別々の分子は、互いに共有結合している。一部の実施形態では、２つの別々の分子は、ヘアピンループ以外の方法で互いに共有結合している。一部の実施形態では、２つの別々の分子は、連結構造（本明細書において「共有リンカー」と呼ばれる）を介して互いに共有結合している。
【０３１１】
一部の実施形態では、センスおよびアンチセンス鎖の各々は、９〜３６ヌクレオチド長の範囲であり得る。例えば、各鎖は、１２〜３０ヌクレオチド長、１４〜３０ヌクレオチド長、１５〜３０ヌクレオチド長、２５〜３０ヌクレオチド長、２７〜３０ヌクレオチド長、１５〜２６ヌクレオチド長、１５〜２３ヌクレオチド長、１５〜２２ヌクレオチド長、１５〜２１ヌクレオチド長、１５〜２０ヌクレオチド長、１５〜１９ヌクレオチド長、１５〜１８ヌクレオチド長、１５〜１７ヌクレオチド長、１７〜３０ヌクレオチド長、１７〜２３ヌクレオチド長、１７〜２１ヌクレオチド長、１７〜１９ヌクレオチド長、１８〜３０ヌクレオチド長、１８〜２６ヌクレオチド長、１８〜２５ヌクレオチド長、１８〜２３ヌクレオチド長、１８〜２２ヌクレオチド長、１８〜２１ヌクレオチド長、１８〜２０ヌクレオチド長、１９〜３０ヌクレオチド長、１９〜２５ヌクレオチド長、１９〜２４ヌクレオチド長、１９〜２３ヌクレオチド長、１９〜２２ヌクレオチド長、１９〜２１ヌクレオチド長、１９〜２０ヌクレオチド長、２０〜３０ヌクレオチド長、２０〜２６ヌクレオチド長、２０〜２５ヌクレオチド長、２０〜２４ヌクレオチド長、２０〜２３ヌクレオチド長、２０〜２２ヌクレオチド長、２０〜２１ヌクレオチド長、２１〜３０ヌクレオチド長、２１〜２６ヌクレオチド長、２１〜２５ヌクレオチド長、２１〜２４ヌクレオチド長、２１〜２３ヌクレオチド長、または２１〜２２ヌクレオチド長であり得る。一部の実施形態では、各鎖は、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４または３５ヌクレオチド長以上である。一部の実施形態では、各鎖は、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５または３６ヌクレオチド長以下である。つまり、各鎖は、下限が上限未満である、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５または３６の上限、および９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４または３５の、独立して選択される下限を有するヌクレオチド長範囲のうちの任意のものであり得る。一部の実施形態では、各鎖は、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５または３６ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖は、同じ数のヌクレオチド長である。一部の実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖は、異なる数のヌクレオチド長である。
【０３１２】
オーバーハング
一部の実施形態では、本開示のｄｓＲＮＡは、センスおよびアンチセンス鎖の一方または両方の３’末端、５’末端またはその両方の末端に１つまたはそれ以上のオーバーハングを含む。一部の実施形態では、１つまたはそれ以上のオーバーハングにより、オーバーハング中のＰＳ基のより少ない数で安定性が改善される。
【０３１３】
一部の実施形態では、オーバーハングは、１つもしくはそれ以上、２つ以上、３つ以上、４つ以上、５つ以上、または６つ以上のヌクレオチドを含む。例えば、オーバーハングは、１〜８ヌクレオチド、２〜８ヌクレオチド、３〜８ヌクレオチド、４〜８ヌクレオチド、５〜８ヌクレオチド、１〜５ヌクレオチド、２〜５ヌクレオチド、３〜５ヌクレオチド、４〜５ヌクレオチド、１〜４ヌクレオチド、２〜４ヌクレオチド、３〜４ヌクレオチド、１〜３ヌクレオチド、２〜３ヌクレオチド、または１〜２ヌクレオチドを含み得る。一部の実施形態では、オーバーハングは、１、２、３、４、５または６ヌクレオチド長である。
【０３１４】
一部の実施形態では、本開示のオーバーハングは、１つまたはそれ以上のリボヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、本開示のオーバーハングは、１つまたはそれ以上のデオキシリボヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、オーバーハングは、１つまたはそれ以上のチミンを含む。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、アンチセンス鎖の３’末端に位置するオーバーハングを含む。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、アンチセンス鎖の５’末端に平滑末端を含む。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、アンチセンス鎖の３’末端に位置するオーバーハングおよびアンチセンス鎖の５’末端に平滑末端を含む。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、センス鎖の３’末端に位置するオーバーハングを含む。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、センス鎖の５’末端に平滑末端を含む。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、センス鎖の３’末端に位置するオーバーハングおよびセンス鎖の５’末端に平滑末端を含む。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、ｄｓＲＮＡのセンス鎖およびアンチセンス鎖の両方の３’末端に位置するオーバーハングを含む。
【０３１５】
一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、アンチセンス鎖の５’末端に位置するオーバーハングを含む。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、アンチセンス鎖の３’末端に平滑末端を含む。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、アンチセンス鎖の５’末端に位置するオーバーハングおよびアンチセンス鎖の３’末端に平滑末端を含む。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、センス鎖の５’末端に位置するオーバーハングを含む。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、センス鎖の３’末端に平滑末端を含む。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、センス鎖の５’末端に位置するオーバーハングおよびセンス鎖の３’末端に平滑末端を含む。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、ｄｓＲＮＡの両方の鎖に位置するオーバーハングを含む。
【０３１６】
一部の実施形態では、オーバーハングは、アンチセンス鎖よりも長いセンス鎖の結果である。一部の実施形態では、オーバーハングは、センス鎖よりも長いアンチセンス鎖の結果である。一部の実施形態では、オーバーハングは、付着末端である同じ長さのセンスおよびアンチセンス鎖の結果である。一部の実施形態では、オーバーハングは、標的ｍＲＮＡとのミスマッチを形成する。一部の実施形態では、オーバーハングは、標的ｍＲＮＡに相補的である。
【０３１７】
一部の実施形態では、本開示のｄｓＲＮＡは、第１の配列を含むセンス鎖、および第２の配列を含むアンチセンス鎖を含み、第１および第２の配列は、実質的に相補的または相補的である。一部の実施形態では、第１および第２の配列は、実質的に相補的または相補的であり、ｄｓＲＮＡの二本鎖領域を形成する。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡの二本鎖領域は、９〜３６ヌクレオチド対の長さである。例えば、二本鎖領域は、１２〜３０ヌクレオチド対の長さ、１４〜３０ヌクレオチド対の長さ、１５〜３０ヌクレオチド対の長さ、１５〜２６ヌクレオチド対の長さ、１５〜２３ヌクレオチド対の長さ、１５〜２２ヌクレオチド対の長さ、１５〜２１ヌクレオチド対の長さ、１５〜２０ヌクレオチド対の長さ、１５〜１９ヌクレオチド対の長さ、１５〜１８ヌクレオチド対の長さ、１５〜１７ヌクレオチド対の長さ、１７〜３０ヌクレオチド対の長さ、２７〜３０ヌクレオチド対の長さ、１７〜２３ヌクレオチド対の長さ、１７〜２１ヌクレオチド対の長さ、１７〜１９ヌクレオチド対の長さ、１８〜３０ヌクレオチド対の長さ、１８〜２６ヌクレオチド対の長さ、１８〜２５ヌクレオチド対の長さ、１８〜２４ヌクレオチド対の長さ、１８〜２３ヌクレオチド対の長さ、１８〜２２ヌクレオチド対の長さ、１８〜２１ヌクレオチド対の長さ、１８〜２０ヌクレオチド対の長さ、１９〜３０ヌクレオチド対の長さ、１９〜２５ヌクレオチド対の長さ、１９〜２４ヌクレオチド対の長さ、１９〜２３ヌクレオチド対の長さ、１９〜２２ヌクレオチド対の長さ、１９〜２１ヌクレオチド対の長さ、１９〜２０ヌクレオチド対の長さ、２０〜３０ヌクレオチド対の長さ、２０〜２６ヌクレオチド対の長さ、２０〜２５ヌクレオチド対の長さ、２０〜２４ヌクレオチド対の長さ、２０〜２３ヌクレオチド対の長さ、２０〜２２ヌクレオチド対の長さ、２０〜２１ヌクレオチド対の長さ、２１〜３０ヌクレオチド対の長さ、２１〜２６ヌクレオチド対の長さ、２１〜２５ヌクレオチド対の長さ、２１〜２４ヌクレオチド対の長さ、２１〜２３ヌクレオチド対の長さ、または２１〜２２ヌクレオチド対の長さであり得る。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡの二本鎖領域は、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４または３５ヌクレオチド対以上の長さである。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡの二本鎖領域は、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５または３６ヌクレオチド対以下の長さである。つまり、ｄｓＲＮＡの二本鎖領域は、下限が上限未満である、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５または３６の上限、および９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４または３５の、独立して選択される下限を有するヌクレオチド対の長さ範囲のうちの任意のものであり得る。一部の実施形態では、二本鎖領域は、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５または３６ヌクレオチド対の長さである。１つよりも多いｄｓＲＮＡが使用される場合、各ｄｓＲＮＡの二本鎖領域は、１つまたはそれ以上のさらなるｄｓＲＮＡと同じ長さであっても異なる長さであってもよい。
【０３１８】
二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）における式（ＩＩ）の化合物の位置
本明細書において実施例で例示される通り、式（ＩＩ）のヌクレオチド類似体は、二本鎖オリゴヌクレオチドの各鎖の種々の位置、つまり、二本鎖リボヌクレオチドの各鎖の種々の位置に存在し得る。
【０３１９】
基Ｒ３が存在し、細胞標的化部分を表す式（ＩＩ）の化合物は、本開示において、「式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体」または「標的化されたヌクレオチド類似体（ＩＩ）」と呼ばれることがある。
【０３２０】
細胞標的化部分を表す基Ｒ３を含まない式（ＩＩ）の化合物は、標的化されたヌクレオチド類似体ではなく、本開示において「式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体」または「標的化されていないヌクレオチド類似体（ＩＩ）」と呼ばれる。
【０３２１】
式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体の位置
特定の実施形態では、式（ＩＩ）のヌクレオチド類似体は、ｄｓＲＮＡの核酸鎖の３’末端、５’末端、または３’末端および５’末端の両方、例えば、ｓｉＲＮＡの核酸鎖の３’末端または５’末端に位置する。これらの特定の実施形態の一部では、式（ＩＩ）のヌクレオチド類似体は、ｄｓＲＮＡの核酸鎖の３’末端にのみ位置し、例えば、ｓｉＲＮＡの核酸鎖の３’末端のみに位置する。
【０３２２】
これらの特定の実施形態の一部では、式（ＩＩ）のヌクレオチド類似体は、ｓｉＲＮＡのセンス鎖の３’末端に位置する。一部の他の実施形態では、式（ＩＩ）のヌクレオチド類似体は、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖の３’末端に位置する。なお他の実施形態では、式（ＩＩ）のヌクレオチド類似体は、ｓｉＲＮＡのセンス鎖の３’末端およびｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖の３’末端の両方に位置する。
【０３２３】
これらの特定の実施形態の一部では、式（ＩＩ）のヌクレオチド類似体は、（ｉ）ｓｉＲＮＡのセンス鎖の３’末端および５’末端の両方に位置し、（ｉｉ）ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖の３’末端に位置する。
【０３２４】
一部の実施形態では、２〜１０個（例えば、２〜５個）の式（ＩＩ）のヌクレオチド類似体が、オリゴヌクレオチド中に存在する。本明細書で使用される場合、２〜１０個の式（ＩＩ）のヌクレオチド類似体には、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０個の式（ＩＩ）のヌクレオチド類似体が包含される。
【０３２５】
式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体の位置
本明細書において実施例で例示される通り、式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体は、二本鎖オリゴヌクレオチドの各鎖の種々の位置に存在し得る。例えば、式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体は、核酸鎖の３’末端、５’末端または５’末端、例えば、ｓｉＲＮＡの核酸鎖の３’末端または５’末端に位置する。これらの実施形態の一部では、式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体は、ｓｉＲＮＡのセンス鎖の３’末端または５’末端に位置する。
【０３２６】
一部の好ましい実施形態では、式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体は、ｄｓＲＮＡ、例えば、ｓｉＲＮＡのオーバーハングに位置する。例えば、式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体は、オーバーハング、例えば、ｓｉＲＮＡのセンス鎖の５’オーバーハングに位置する。
【０３２７】
一部の実施形態では、２〜１０個（例えば、２〜５個）の式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体が、オリゴヌクレオチド中に存在する。本明細書で使用される場合、２〜１０個の式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体には、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０個の式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体が包含される。
【０３２８】
標的化されたオリゴヌクレオチド
本開示による標的化されたオリゴヌクレオチドは、少なくとも式（ＩＩ）のヌクレオチド類似体を含み、前記オリゴヌクレオチド内の標的化されたヌクレオチドに含まれる細胞標的化部分をさらに含む、オリゴヌクレオチドである。
【０３２９】
一部の実施形態では、本開示による標的化されたオリゴヌクレオチドに含まれる標的化されたヌクレオチドは、式（ＩＩ）の構造を有する。したがって、一部の実施形態では、本開示による標的化されたオリゴヌクレオチドは、１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体を含む。
【０３３０】
一部の他の実施形態では、本開示による標的化されたオリゴヌクレオチドに含まれる標的化されたヌクレオチドは、当技術分野で公知である標的化されたヌクレオチドの中から選択される。したがって、一部の実施形態では、本開示による標的化されたオリゴヌクレオチドは、１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体、および式（ＩＩ）とは異なる構造を有する１つまたはそれ以上の標的化されたヌクレオチドを含む。
【０３３１】
なお他の実施形態では、標的化されたオリゴヌクレオチドには、（ｉ）１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体、および（ｉｉ）１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体を含むものが包含される。
【０３３２】
本開示の他所で開示される通り、式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体には、ＹがＯである実施形態、ＹがＮＲ１である実施形態、ＹがＮＨである実施形態、およびＹがＮ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１である実施形態が包含される。標的化されていないヌクレオチドには、特に、式（ＩＩ）のヌクレオチド類似体（式中、Ｙは、ＮＲ１およびＮ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１からなる群から選択され、Ｒ１は、基−Ｃ（＝Ｏ）］ｍ−Ｒ２−（Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）ｐ−Ｒ３（式中、ｍ、ｐおよびＲ２は、一般式（ＩＩ）について開示される通りに定義され、Ｒ３は、水素原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ基、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）複素環、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基および（Ｃ５〜Ｃ１４）ヘテロアリール基からなる群から選択される）である）が包含される。
【０３３３】
本開示の他所で開示される通り、式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体は、細胞標的化部分として基Ｒ３を有する。細胞標的化部分は、本開示の他所で開示される。
【０３３４】
一部の実施形態では、本開示による標的化されたオリゴヌクレオチドは、一本鎖オリゴヌクレオチドである。
【０３３５】
一部の他の実施形態では、本開示による標的化されたオリゴヌクレオチドは、二本鎖オリゴヌクレオチドである。
【０３３６】
一本鎖または二本鎖オリゴヌクレオチドのいずれかである本開示による標的化されたオリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、そのオリゴヌクレオチド鎖は、１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体を含み、これは、前記オリゴヌクレオチド鎖の種々の位置、例えば、その内部および／または３’末端もしくは５’末端に位置し得る。
【０３３７】
本明細書で使用される場合、ヌクレオチド類似体は、（ｉ）前記ヌクレオチド類似体が、３’末端または５’末端に位置するヌクレオチドである場合、または（ｉｉ）前記ヌクレオチド類似体が、前記オリゴヌクレオチド鎖の３’末端または５’末端に位置する末端ヌクレオチドを有する連続ヌクレオチド類似体の連続鎖に含まれるヌクレオチドである場合、オリゴヌクレオチド鎖の前記３’末端または５’末端に位置すると定義される。
【０３３８】
一本鎖または二本鎖オリゴヌクレオチドのいずれかである、本開示による標的化されたオリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、そのオリゴヌクレオチド鎖は、前記オリゴヌクレオチド鎖の３’末端もしくは５’末端のいずれか、またはその両方の末端に位置する１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体を含む。
【０３３９】
一本鎖または二本鎖オリゴヌクレオチドのいずれかである、本開示による標的化されたオリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、そのオリゴヌクレオチド鎖は、前記鎖の３’末端もしくは５’末端のいずれか、または前記鎖内の１つもしくはそれ以上の他の位置に位置する１〜１０個の式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体を含む。
【０３４０】
一部の実施形態では、前記標的化されたオリゴヌクレオチドは、前記オリゴヌクレオチド鎖内の種々の位置、例えば、内部および／またはその３’末端もしくは５’末端に位置し得る１〜１０個の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体をさらに含む。
【０３４１】
一本鎖または二本鎖オリゴヌクレオチドのいずれかである本開示による標的化されたオリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、そのオリゴヌクレオチド鎖は、（Ａ）前記オリゴヌクレオチド鎖の３’末端もしくは５’末端のいずれか、またはその両方の末端に位置する１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体、ならびに（Ｂ）前記オリゴヌクレオチド鎖の３’末端もしくは５’末端のいずれか、またはその両方の末端に位置する１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体を含み、式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体および式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体は、前記オリゴヌクレオチド鎖内の別個の位置に位置する。
【０３４２】
一本鎖または二本鎖オリゴヌクレオチドのいずれかである、本開示による標的化されたオリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、そのオリゴヌクレオチド鎖は、前記鎖の３’末端または５’末端のいずれかに位置する１〜１０個の式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体を含む。一部の実施形態では、前記標的化されたオリゴヌクレオチドは、前記オリゴヌクレオチド鎖の反対側の末端に位置する１〜１０個の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体をさらに含む。したがって、これらの実施形態によると、オリゴヌクレオチド鎖の選択された末端の式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体の数は、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個であり得る。これらの実施形態の一部によると、オリゴヌクレオチド鎖の選択された末端の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体の数は、存在する場合、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個であり得る。
【０３４３】
特定の実施形態では、前記１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体は互いに連結されて、オリゴヌクレオチドの鎖の選択された末端でこれらの標的化されたヌクレオチド類似体の連続鎖を形成する。
【０３４４】
特定の実施形態では、前記１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体は、一本鎖または二本鎖オリゴヌクレオチドのいずれかである標的化されたオリゴヌクレオチドの鎖の５’末端に位置する。これらの実施形態の一部では、５’末端ヌクレオチドは、式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体である。
【０３４５】
一本鎖または二本鎖オリゴヌクレオチドのいずれかである、本開示による標的化されたオリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、そのオリゴヌクレオチド鎖は、その３’末端または５’末端のいずれかに、とりわけ１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体を含む末端の反対側の末端に、１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体を含む。
【０３４６】
一本鎖または二本鎖オリゴヌクレオチドのいずれかである、本開示による標的化されたオリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、そのオリゴヌクレオチド鎖は、３’末端または５’末端のいずれかに１〜１０個の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体を含み、好ましくは、その反対側の末端に１〜１０個の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体を含む。したがって、これらの実施形態では、オリゴヌクレオチド鎖の選択された末端の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体の数は、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個であり得る。これらの実施形態の一部によると、オリゴヌクレオチド鎖の選択された末端の式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体の数は、存在する場合、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個であり得る。
【０３４７】
特定の実施形態では、前記１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体は互いに連結されて、オリゴヌクレオチドの鎖の選択された末端でこれらの標的化されていないヌクレオチド類似体の連続鎖を形成する。
【０３４８】
特定の実施形態では、前記１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体は、標的化されたオリゴヌクレオチドのオリゴヌクレオチド鎖の３’末端に位置する。さらなる実施形態では、３’末端ヌクレオチドは、式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体である。
【０３４９】
したがって、本開示は、（ｉ）１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体、好ましくは１〜１０個の式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体を含む一本鎖の標的化されたオリゴヌクレオチドを包含し、これは、オリゴヌクレオチド鎖中で連続し得、前記一本鎖の標的化されたオリゴヌクレオチドの５’末端に位置する。これらの実施形態の一部では、前記一本鎖の標的化されたオリゴヌクレオチドは、（ｉｉ）１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体、例えば、１〜１０個の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体をさらに含み、これは、オリゴヌクレオチド鎖中で連続し得、前記一本鎖の標的化されたオリゴヌクレオチドの３’末端に位置する。
【０３５０】
（ｉ）その５’末端に３つの式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体、および（ｉｉ）その３’末端に２つの式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体を含む一本鎖の標的化されたオリゴヌクレオチドの例示が、本明細書の実施例において開示される。
【０３５１】
本開示はまた、（ｉ）第１の鎖が、上記の通りの、１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体および１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体を含む標的化されたオリゴヌクレオチドであり、（ｉｉ）第２の鎖が、１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体および１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体を含む別の標的化されたオリゴヌクレオチドである、二本鎖オリゴヌクレオチドを包含する。
【０３５２】
本開示は、少なくとも１つのその鎖が、上記の通りの標的化されたオリゴヌクレオチド、例えば、上記の通りの、１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体および１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体を含む標的化されたオリゴヌクレオチドであり、（ｉｉ）第２の鎖が、標的化されていないオリゴヌクレオチドまたは標的化されたオリゴヌクレオチドのいずれかである、二本鎖オリゴヌクレオチドをさらに包含する。
【０３５３】
本開示はまた、（ｉ）第１の鎖が、上記の通りの、１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体および１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体を含む標的化されたオリゴヌクレオチドであり、（ｉｉ）第２の鎖が、１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体を含む標的化されていないオリゴヌクレオチドである、二本鎖オリゴヌクレオチドをさらに包含する。
【０３５４】
本開示はまた：
−  （ｉ）その５’末端に位置する１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体、とりわけ１〜１０個の式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体、および（ｉｉ）その３’末端に位置する１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体、とりわけ１〜１０個の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体を含むセンス鎖、ならびに
−  標的化されていないオリゴヌクレオチドまたは標的化されたオリゴヌクレオチドのいずれかであるアンチセンス鎖
を含むｓｉＲＮＡを記載する。
【０３５５】
本開示はまた：
−  （ｉ）その３’末端に位置する１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体、とりわけ１〜１０個の式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体を含むセンス鎖、および
−  式（ＩＩ）のヌクレオチド類似体を含まないアンチセンス鎖
を含むｓｉＲＮＡを記載する。
【０３５６】
本開示は：
−  （ｉ）その５’末端に位置する１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体、とりわけ１〜１０個の式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体、および（ｉｉ）その３’末端に位置する１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体、とりわけ１〜１０個の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体を含むセンス鎖、ならびに
−  その３’末端に位置する１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体、とりわけ１〜１０個の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体を含むアンチセンス鎖
を含むｓｉＲＮＡをさらに記載する。
【０３５７】
本開示は：
−  （ｉ）その３’末端に位置する１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体、とりわけ１〜１０個の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体を含むセンス鎖、および
−  最も好ましくは、式（ＩＩ）の標的化されていない類似体も標的化された類似体も含まないアンチセンス鎖
を含むｓｉＲＮＡをさらに記載する。
【０３５８】
本開示は：
−  （ｉ）その３’末端に位置する１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体、とりわけ１〜１０個の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体を含むセンス鎖、および
−  （ｉ）その３’末端に位置する１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体、とりわけ１〜１０個の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体を含むアンチセンス鎖
を含むｓｉＲＮＡをさらに記載する。
【０３５９】
本開示は：
−  （ｉ）その３’末端に位置する１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体、とりわけ１〜１０個の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体、および（ｉｉ）その５’末端に位置する１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体、とりわけ１〜１０個の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体を含むセンス鎖、
−  最も好ましくは、式（ＩＩ）の標的化されていない類似体も標的化された類似体も含まないアンチセンス鎖
を含むｓｉＲＮＡをさらに記載する。
【０３６０】
本開示は：
−  （ｉ）その３’末端に位置する１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体、とりわけ１〜１０個の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体、および（ｉｉ）その５’末端に位置する１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体、とりわけ１〜１０個の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体を含むセンス鎖、
−  （ｉ）その３’末端に位置する１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体、とりわけ１〜１０個の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体を含むアンチセンス鎖
を含むｓｉＲＮＡをさらに記載する。
【０３６１】
本開示は：
−  最も好ましくは、式（ＩＩ）の標的化されていない類似体も標的化された類似体も含まないセンス鎖、
−  （ｉ）１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体、とりわけ１〜１０個の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体を含むアンチセンス鎖
を含むｓｉＲＮＡをさらに記載する。
【０３６２】
標的化されたオリゴヌクレオチドのさらなる実施形態
１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物、とりわけ１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド類似体を含むオリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドを標的細胞または細胞受容体タンパク質に対して標的化することを可能にする１つまたはそれ以上の修飾ヌクレオチド（「標的化されたヌクレオチド」）をさらに含み得る。例えば、オリゴヌクレオチドは、一方または両方のオリゴヌクレオチド鎖が、１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物を含み、一方または両方のオリゴヌクレオチド鎖が、１つまたはそれ以上の標的化されたヌクレオチドをさらに含む、二本鎖である。そのような二本鎖オリゴヌクレオチドはまた、本開示の目的のために「ｄｓＲＮＡコンジュゲート」と呼ばれることがある。
【０３６３】
標的化されたヌクレオチド
式（ＩＩ）に基づく標的化されたオリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、標的化リガンド（例えば、細胞標的化部分）は、モルホリノ基の窒素原子に直接共有結合している。一部の他の実施形態では、リガンドは、リンカー基を介してモルホリノ基の窒素原子に共有結合している。例として、式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体は、例えば、式（ＩＩ）の化合物（式中、Ｙは、ＮＲ１であり、Ｒ１は、基−［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ−Ｒ２−（Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）ｐ−Ｒ３であり、Ｒ３は、細胞標的化部分であり、Ｂ、Ｌ１、Ｌ２、ｍ、ｐ、Ｒ２、Ｘ１、Ｘ２、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、一般式（ＩＩ）について定義された通りである）を含み得る。
【０３６４】
細胞標的化部分
本明細書において標的化されたヌクレオチドは、特定の細胞または組織を標的とする１つまたはそれ以上のリガンドに連結し得る。そのようなリガンドは、「細胞標的化部分」とも呼ばれる。リガンドには、特異的細胞標的化を改善する、オリゴヌクレオチドの細胞内部移行を改善する、および／または細胞間ｍＲＮＡ標的化を改善することによって、得られるオリゴヌクレオチド、例えば、ｓｉＲＮＡの細胞への送達の効率を増加させる任意の分子基が包含される。リガンドは、受容体特異的ペプチド、受容体特異的タンパク質（例えば、モノクローナル抗体または融合タンパク質）、および受容体特異的小分子リガンド（例えば、ＧａｌＮＡｃ基のような炭水化物）を含む群から選択できる。
【０３６５】
リガンドは、天然に存在してもよく、または組換えもしくは合成であってもよい。例えば、リガンドは、タンパク質、炭水化物、リポ多糖、脂質、合成ポリマー、ポリアミン、アルファ螺旋ペプチド、レクチン、ビタミンまたは補因子であり得る。一部の実施形態では、リガンドは、１種またはそれ以上の色素、架橋剤、多環式芳香族炭化水素、ペプチドコンジュゲート（例えば、ＲＧＤペプチド、アンテナペディアペプチド、Ｔａｔペプチド）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、酵素、ヘプテン、輸送／吸収促進剤、合成リボヌクレアーゼ（例えば、イミダゾール、ビスイミダゾール、ヒスタミンもしくはイミダゾールクラスター）、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）またはＬＤＬである。
【０３６６】
例として、リガンドは、１種またはそれ以上のタンパク質、糖タンパク質、ペプチドまたは共リガンドへの特異的親和性を有する分子であり得る。そのようなリガンドとしては、甲状腺刺激ホルモン、メラニン細胞刺激ホルモン、糖タンパク質、界面活性タンパク質Ａ、ムチン炭化水素、ラクトース（例えば、多価ラクトース）、ガラクトース（例えば、多価ガラクトース）、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン（例えば、多価Ｎ−アセチル−ガラクトサミン）、Ｎ−アセチル−グルコサミン（例えば、多価Ｎ−アセチル−グルコサミン）、マンノース（例えば、多価マンノース）、フコース（例えば、多価フコース）、グリコシル化ポリアミノ酸、トランスフェリン、ビスホスホネート、ポリグルタメート、ポリアスパルテート、脂質、コレステロール、ステロイド、胆汁酸、葉酸、ビタミンＢ１２およびビオチンが挙げられる。
【０３６７】
一部の実施形態では、細胞標的化部分は、１種またはそれ以上の色素、架橋剤、多環式芳香族炭化水素、ペプチドコンジュゲート（例えば、アンテナペディアペプチド、Ｔａｔペプチド）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、酵素、ヘプテン、輸送／吸収促進剤、合成リボヌクレアーゼ（例えば、イミダゾール、ビスイミダゾール、ヒスタミンもしくはイミダゾールクラスター）、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）またはＬＤＬである。
【０３６８】
一部の実施形態では、リガンドは、１種またはそれ以上のコレステロール誘導体または親油性部分であり得る。任意の親油性化合物としては、限定なしに、コレステロールもしくはコレステロール誘導体；コール酸；ビタミン（例えば、葉酸、ビタミンＡ、ビタミンＥ（トコフェロール）、ビオチン、ピリドキサール；飽和および不飽和の両方を含む胆汁もしくは脂肪酸コンジュゲート（例えば、ラウロイル（Ｃ12）、ミリストイル（Ｃ14）およびパルミトイル（Ｃ16）、ステアロイル（Ｃ18）およびドコサニル（Ｃ22）、リトコール酸および／もしくはリトコール酸オレイルアミンコンジュゲート（リトコール−オレイル、Ｃ43）；高分子主鎖もしくはスキャフォールド（例えば、ＰＥＧ、トリエチレングリコール（ＴＥＧ）、ヘキサエチレングリコール（ＨＥＧ）、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧ）、流体力学ポリマー；ステロイド（例えば、ジヒドロテストステロン）；テルペン（例えば、トリテルペン）；カチオン性脂質もしくはペプチド；ならびに／または脂質もしくは脂質ベースの分子が挙げられる。そのような脂質または脂質ベースの分子は、血清タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）に結合し得る。脂質ベースのリガンドは、コンジュゲートの標的組織への結合を調節（例えば、制御）するために使用できる。例えば、より強力にＨＳＡに結合する脂質または脂質ベースのリガンドは、腎臓を標的としにくく、したがって、身体から除去されにくい。標的組織は、肝臓の実質細胞を含む肝臓であり得る。
【０３６９】
ポリアミノ酸、トランスフェリン、細胞標的化リガンドまたは部分はまた、肝細胞などの特異的細胞型に対する受容体に結合する抗体であり得る。例示的な細胞受容体特異的モノクローナル抗体は、Ｘｉａら（２００９、Ｍｏｌ  Ｐｈａｒｍ，６３（３）：７４７〜７５ｌ頁）；Ｃｕｅｌｌａｒら（２０１５、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，４３（２）：１１８９〜１２０３頁）；Ｂａｕｍｅｒら（２０１６、Ｎａｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌ，１１（１）：２２〜３６頁）；Ｉｂｔｅｊａｈら（２０１７、Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，１７６：１２２〜１３０頁）；およびＳｕｇｏら（２０１６、Ｊ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌｅａｓｅ，２３７：１〜１３頁）に記載されているものである。
【０３７０】
細胞標的化リガンドまたは部分にはまた、一価または多価（例えば、三価）ＧＡｌＮＡｃ基、例えば、Ｐｒａｋａｓｈら（２０１５、Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ，２５（１９）：４ｌ２７〜４ｌ３０頁）；Ｚｕら（２０１６、Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ  −  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ，ｅ３１７，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｍｎｔａ．２０１６．２６）；Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎら（２０１７、Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ，２５（１）：７１〜７８頁）；Ｓｈｅｍｅｓｈら（２０１６、Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ，５：ｅ３１９−ｄｏｉ：１０．１０３８／ｍｎｔａ．２０１６．３１）；Ｈｕａｎｇら（２０１６、Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ  −  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ，６：１１６〜１３２頁）；Ｒｏｚｅｍａら（２００７、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，１０４（３２）：１２９８２〜１２９８７頁）；Ｒａｊｅｅｖら（２０１５、Ｃｈｅｍｂｉｏｃｈｅｍ，１６（６）：９０３〜９０８頁）；およびＮａｉｒら（２０１４、Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ，１３６（４９）：１６９５８〜１６９６１頁）に開示されているものが包含される。
【０３７１】
修飾ｄｓＲＮＡの調製
本開示のｄｓＲＮＡは、１つまたはそれ以上のリガンド、部分またはコンジュゲートに化学的／物理的に連結し得る。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、リンカーを介して１つまたはそれ以上のリガンドにコンジュゲート／結合している。例えば、多価分枝状リンカーを含む、当技術分野で公知の任意のリンカーを使用できる。リガンドをｄｓＲＮＡにコンジュゲートすることにより、その分布が変化し、その細胞吸収および／もしくは特定の組織への標的化および／もしくは１つもしくはそれ以上の特異的細胞型（例えば、肝細胞）による取込みが向上し、ならびに／またはｄｓＲＮＡ剤の寿命が向上し得る。一部の実施形態では、疎水性リガンドは、ｄｓＲＮＡにコンジュゲートして、細胞膜を通した直接浸透および／または細胞（例えば、肝細胞）による取込みが促進される。
【０３７２】
ｄｓＲＮＡコンジュゲートの一部の実施形態では、１つまたはそれ以上のヌクレオチドは、標的化部分保有基を含み得、例えば、１つまたはそれ以上のヌクレオチドは、標的化部分がおそらく連結基を介してヌクレオチド主鎖に共有結合した標的化部分保有基を含む。これらの実施形態によると、ｄｓＲＮＡの１つまたはそれ以上のヌクレオチドは、標的化部分を含む標的化部分保有基にコンジュゲートされ、標的化部分は、組成物の細胞内送達を向上するリガンド（例えば、細胞浸透部分または作用物質）であり得る。
【０３７３】
本開示のリガンドコンジュゲートｄｓＲＮＡならびにリガンド分子保有配列特異的結合ヌクレオシドおよびヌクレオチドは、例えば、標準的なヌクレオチド前駆体、または既に連結部分を有するヌクレオチドもしくはヌクレオシドコンジュゲート前駆体、リガンド−ヌクレオチド、または既にリガンド分子を有するヌクレオシドコンジュゲート前駆体、または非ヌクレオシドリガンド保有ビルディングブロックを利用する好適なＤＮＡ合成機でのアセンブリによるものを含む、当技術分野で公知の任意の方法によってアセンブルできる。
【０３７４】
本開示のリガンドコンジュゲートｄｓＲＮＡは、例えば、連結分子のｄｓＲＮＡへの結合に由来するもののようなペンダント反応性官能基を有するｄｓＲＮＡの使用によるものを含む、当技術分野で公知の任意の方法によって合成できる。一部の実施形態では、この反応性オリゴヌクレオチドは、市販のリガンド、種々の保護基のうちの任意のものを有して合成されたリガンド、またはそれに結合した連結部分を有するリガンドと直接反応させることができる。一部の実施形態では、方法は、リガンドと適切にコンジュゲートされ、固体支持体材料にさらに結合していてもよいヌクレオシドモノマーの使用によって、リガンドコンジュゲートｄｓＲＮＡの合成を促進する。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡの３’末端に結合したアラルキルリガンドを有するｄｓＲＮＡは、まず、細孔が制御されたガラスの支持体にアミノアルキル基を介してモノマービルディングブロックを共有結合し；次いで、ヌクレオチドを、標準的な固相合成技術により、固体支持体に結合したモノマービルディングブロックに結合することによって調製される。モノマービルディングブロックは、ヌクレオシドまたは固相合成と適合性である他の有機化合物であり得る。
【０３７５】
組成物
本開示のある特定の態様は、本明細書に記載の通りのｄｓＲＮＡを含む組成物（例えば、医薬組成物）に関する。一部の実施形態では、組成物（例えば、医薬組成物）は、薬学的に許容される担体をさらに含む。一部の実施形態では、組成物（例えば、医薬組成物）は、標的化された遺伝子の発現または活性と関連する疾患または障害を処置するために有用である。
【０３７６】
例えば、非経口送達を介して肝臓に送達するために製剤化された組成物を含む本開示の組成物（例えば、医薬組成物）は、送達方法に基づいて製剤化される。
【０３７７】
本開示の組成物（例えば、医薬組成物）は、標的化された遺伝子の発現を阻害するのに十分な投与量で投与できる。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡの好適な用量は、レシピエントの体重１ｋｇ当たり０．０１ｍｇ〜４００ｍｇの範囲である。
【０３７８】
当業者であれば、疾患または障害の重症度、以前の処置、健康状態および／または対象の年齢、ならびに存在している１つまたはそれ以上の他の疾患を含むがこれらに限定されない特定の因子が、対象を効果的に処置するために必要とされる投与量およびタイミングに影響を与え得ることを認識するであろう。さらに、治療有効量の医薬組成物による対象の処置には、単回処置または一連の処置が含まれ得る。有効投与量および本明細書に開示される通りのｄｓＲＮＡのｉｎ  ｖｉｖｏ半減期は、従来の方法論を使用して、または適切な動物モデルを使用したｉｎ  ｖｉｖｏ試験に基づいて推定できる。
【０３７９】
本開示のｄｓＲＮＡ分子は、薬学的に許容される担体または希釈剤中で製剤化できる。薬学的に許容される担体は、液体または固体であってもよく、所望のバルク、粘稠度および他の適当な輸送および化学特性をもたらすことを念頭に計画された投与方式により選択できる。例えば、水、食塩水、結合剤（例えば、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキプロピルメチルセルロース）、充填剤（例えば、ラクトースおよび他の糖、ゼラチンまたは硫酸カルシウム）、潤滑剤（例えば、デンプン、ポリエチレングリコールまたは酢酸ナトリウム）、崩壊剤（例えば、デンプンまたはデンプングリコール酸ナトリウム）、カルシウム塩（例えば、硫酸カルシウム、塩化カルシウム、リン酸カルシウムなど）、および湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）を含む任意の公知の薬学的に許容される担体または希釈剤を使用できる。
【０３８０】
本開示のｄｓＲＮＡ分子は、他の分子、分子構造または核酸の混合物と混合、封入、コンジュゲートまたは他に会合されたｄｓＲＮＡを含む組成物（例えば、医薬組成物）に製剤化できる。例えば、本明細書に記載の通りの１つまたはそれ以上のｄｓＲＮＡを含む組成物は、他の治療剤、例えば、他の脂質低下剤（例えば、スタチン）を含み得る。一部の実施形態では、組成物（例えば、医薬組成物）は、送達ビヒクル（本明細書に記載の通り）をさらに含む。
【０３８１】
ベクターおよびｄｓＲＮＡ送達
本開示のｄｓＲＮＡは、直接または間接的に送達できる。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、ｄｓＲＮＡを含む組成物（例えば、医薬組成物）を、対象に投与することによって直接送達される。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、本明細書に記載の１つまたはそれ以上のベクターを投与することによって間接的に送達される。
【０３８２】
送達
本開示のｄｓＲＮＡは、例えば、核酸分子を送達する方法をｄｓＲＮＡとの使用のために適合することによるもの（例えば、Ａｋｈｔａｒ，Ｓ．ら（１９９２）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２（５）：１３９〜１４４頁；ＷＯ９４／０２５９５を参照されたい）を含む当技術分野で公知の任意の方法によって、または当技術分野で公知のさらなる方法（例えば、Ｋａｎａｓｔｙ  Ｒ．ら（２０１３）Ｎａｔｕｒｅ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  １２：９６７〜９７７頁；Ｗｉｔｔｒｕｐ，Ａ．およびＬｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｊ．（２０１５）Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １６：５４３〜５５２頁；Ｗｈｉｔｅｈｅａｄ，Ｋ．ら（２００９）Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ８：１２９〜１３８頁；Ｇａｒｙ，Ｄ．ら（２００７）１２１（１−２）：６４〜７３頁；Ｗａｎｇ．Ｊ．ら（２０１０）ＡＡＰＳＪ．１２（４）：４９２〜５０３頁；Ｄｒａｚ，Ｍ．ら（２０１４）Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓ  ４（９）：８７２〜８９２頁；Ｗａｎ，Ｃ．ら（２０１３）Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌ．Ｒｅｓ．４（１）：７４〜８３頁；Ｅｒｄｍａｎｎ，Ｖ．Ａ．およびＢａｒｃｉｓｚｅｗｓｋｉ，Ｊ．（編）（２０１０）「ＲＮＡ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−  Ｖｅｒｌａｇ  Ｂｅｒｌｉｎ  Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，ＤＯＩ  １０．１００７／９７８−３−６４２−１２１６８−５；およびＸｕ，Ｃ．およびＷａｎｇ，Ｊ．（２０１５）Ａｓｉａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １０（１）：１〜１２頁を参照されたい）を介して送達できる
【０３８３】
一部の実施形態では、本開示のｄｓＲＮＡは、ｄｓＲＮＡを含む送達ビヒクルによって送達される。一部の実施形態では、送達ビヒクルは、リポソーム、リポプレックス、複合体またはナノ粒子である。
【０３８４】
リポソーム製剤
リポソームは、親油性材料から形成される膜および水性の内部部分を有する単層または多層小胞である。一部の実施形態では、リポソームは、１つまたはそれ以上の球形の二層中に配置された両親媒性脂質で構成される小胞である。水性部分は、送達される組成物を含む。カチオン性リポソームは、細胞壁に融合できるという利点を有する。リポソームの利点としては、例えば、天然リン脂質から得られたリポソームは生体適合性および生分解性であること；リポソームは、広範囲の水溶性および脂溶性薬物を組み込むことができること；リポソームは、それらの内部コンパートメント中で封入薬を代謝および分解から保護できること（Ｒｏｓｏｆｆ、ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ、ＲｉｅｇｅｒおよびＢａｎｋｅｒ（編）、１９８８、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．、第１巻、２４５頁）が挙げられる。リポソーム製剤の調製において考慮される重要な事項は、脂質表面電荷、小胞サイズおよびリポソームの水性体積である。例えば、操作されたカチオン性リポソームおよび立体安定化リポソームを、ｄｓＲＮＡの送達のために使用できる。例えば、Ｐｏｄｅｓｔａら（２００９）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．４６４、３４３〜５４頁；米国特許第５，６６５，７１０号を参照されたい。
【０３８５】
核酸−脂質粒子
一部の実施形態では、本開示のｄｓＲＮＡは、脂質製剤中に完全に封入されて、例えば、核酸−脂質粒子、例えば、ＳＰＬＰ、ｐＳＰＬＰまたはＳＮＡＬＰが形成される。本明細書で使用される場合、「ＳＮＡＬＰ」という用語は、ＳＰＬＰを含む安定な核酸−脂質粒子を指す。本明細書で使用される場合、「ＳＰＬＰ」という用語は、脂質小胞内に封入されたプラスミドＤＮＡを含む核酸−脂質粒子を指す。核酸−脂質粒子、例えば、ＳＮＡＬＰは、典型的には、カチオン性脂質、非カチオン性脂質、コレステロールおよび粒子の凝集を防ぎ、循環時間を増加させる脂質（例えば、ＰＥＧ−脂質コンジュゲート）を含む。ＳＮＡＬＰおよびＳＰＬＰは、静脈内（ｉ．ｖ．）注射後に延長された循環寿命を示し、遠位部位（例えば、投与部位から物理的に離れた部位）に蓄積するため、合成用途に有用である。ＳＰＬＰは、「ｐＳＰＬＰ」を含み、これには、ＰＣＴ公開第ＷＯ００／０３６８３号に示される封入縮合剤−核酸複合体が含まれる。
【０３８６】
一部の実施形態では、核酸−脂質粒子中に存在する場合、ｄｓＲＮＡは、水溶液中でのヌクレアーゼによる分解に抵抗性である。核酸−脂質粒子およびその調製方法は、例えば、米国特許第５，９７６，５６７号；米国特許第５，９８１，５０１号；米国特許第６，５３４，４８４号；米国特許第６，５８６，４１０号；米国特許第６，８１５，４３２号；およびＰＣＴ公開第ＷＯ９６／４０９６４号に開示されている。
【０３８７】
一部の実施形態では、核酸−脂質粒子は、カチオン性脂質を含む。当技術分野で公知の任意のカチオン性脂質またはその混合物を使用できる。一部の実施形態では、核酸−脂質粒子は、非カチオン性脂質を含む。当技術分野で公知の任意の非カチオン性脂質またはその混合物を使用できる。一部の実施形態では、核酸−脂質粒子は、コンジュゲート脂質を含む（例えば、凝集を防ぐために）。当技術分野で公知の任意のコンジュゲート脂質を使用できる。
【０３８８】
さらなる製剤
ｄｓＲＮＡ分子をｉｎ  ｖｉｖｏで成功裡に送達するために考慮することが重要な因子としては：（１）送達される分子の生物学的安定性、（２）非特異的影響を防ぐこと、および（３）標的組織における送達された分子の蓄積が挙げられる。ｄｓＲＮＡの非特異的影響は、例えば、調剤の組織への直接注射もしくは埋込み、または局所投与することによる、局所投与によって最小にできる。疾患の処置のためにｄｓＲＮＡを全身投与するために、ｄｓＲＮＡは、修飾してもよく、または薬物送達系を使用して送達してもよく；いずれの方法も、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるエンドヌクレアーゼおよびエクソヌクレアーゼによるｄｓＲＮＡの急速な分解を防ぐように作用する。ＲＮＡまたは薬学担体の修飾によりまた、ｄｓＲＮＡ組成物の標的組織への標的化が可能になり、望ましくないオフターゲット効果が回避できる。上記の通り、ｄｓＲＮＡ分子は、コレステロールのような親油性基への化学コンジュゲーションによって修飾して、細胞取込みを向上し、分解を防ぐことができる。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、薬物送達系、例えば、ナノ粒子、デンドリマー、ポリマー、リポソームまたはカチオン性送達系を使用して送達される。正電荷のカチオン性送達系により、ｄｓＲＮＡ分子（負電荷）の結合が促進され、また、負電荷の細胞膜における相互作用が向上して、細胞によるｄｓＲＮＡの効果的な取込みが可能になる。カチオン性脂質、デンドリマーまたはポリマーは、ｄｓＲＮＡに結合するか、またはｄｓＲＮＡを包む小胞もしくはミセルを形成するように誘導できる（例えば、Ｋｉｍ  Ｓ．Ｈ．ら（２００８）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  １２９（２）：１０７〜１１６頁を参照されたい）。小胞またはミセルの形成により、全身投与される場合、ｄｓＲＮＡの分解がさらに防止される。カチオン−ｄｓＲＮＡ複合体を作製および投与するための方法は、当技術分野で公知である。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、全身投与のためのシクロデキストリンとの複合体を形成する。
【０３８９】
ｄｓＲＮＡを使用する方法
本開示のある特定の態様は、哺乳動物において標的化された遺伝子の発現を阻害するための方法であって、有効量の１つもしくはそれ以上の本開示のｄｓＲＮＡ、１つもしくはそれ以上の本開示のベクター、または１つもしくはそれ以上の本開示のｄｓＲＮＡを含む本開示の組成物（例えば、医薬組成物）を投与することを含む方法に関する。本開示のある特定の態様は、１つまたはそれ以上の標的遺伝子により媒介される疾患または障害を処置および／または予防する方法であって、１つもしくはそれ以上の本開示のｄｓＲＮＡおよび／または本開示の１つもしくはそれ以上のベクターおよび／または１つもしくはそれ以上の本開示のｄｓＲＮＡを含む組成物（例えば、医薬組成物）を投与することを含む方法に関する。一部の実施形態では、対象において標的遺伝子発現を下方調節することにより、対象において標的化された遺伝子により媒介される疾患または障害の１つまたはそれ以上の徴候が緩和される。
【０３９０】
一部の実施形態では、対象における標的遺伝子の発現は、処置前レベルと比較して、処置後に少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または約１００％阻害される。一部の実施形態では、標的遺伝子の発現は、処置前レベルと比較して、処置後に少なくとも約１．１倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約４．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約５．５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約６．５倍、少なくとも約７倍、少なくとも約７．５倍、少なくとも約８倍、少なくとも約８．５倍、少なくとも約９倍、少なくとも約９．５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約７５倍、少なくとも約１００倍阻害される。一部の実施形態では、標的遺伝子は、対象の肝臓において阻害される。
【０３９１】
一部の実施形態では、対象はヒトである。一部の実施形態では、対象は標的遺伝子により媒介される障害または疾患を有するまたは診断されている。一部の実施形態では、対象は、標的遺伝子により媒介される障害または疾患を有することが疑われる。一部の実施形態では、対象は、標的遺伝子により媒介される障害または疾患を発症するリスクがある。
【０３９２】
本開示の要旨から理解される通り、本明細書に記載の通りのｄｓＲＮＡは、それに含まれる１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）のヌクレオチド類似体の存在をその主な特徴とし、この式（ＩＩ）のヌクレオチド類似体は、その「糖類様」基の特定の構造特徴を有する。本明細書に記載の通りのｄｓＲＮＡは、一般に、目的の標的核酸に含まれる選択された核酸配列を標的にすることが想到される。とりわけ、ｓｉＲＮＡからなる本明細書に記載のｄｓＲＮＡの実施形態は、目的の標的核酸に含まれる核酸配列と特異的にハイブリダイズするアンチセンス鎖を含む。本明細書に記載のｄｓＲＮＡまたは組成物（例えば、医薬組成物）は、標的遺伝子により媒介される障害または疾患の処置における使用のためであり得る。特に、本明細書に記載のｄｓＲＮＡまたは組成物（例えば、医薬組成物）、とりわけ、１つまたはそれ以上の標的化されたヌクレオチド類似体、とりわけ、１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体を含むｄｓＲＮＡ、は、肝臓標的化が必要とされる標的遺伝子により媒介される障害または疾患の処置における使用のためであり得る。
【０３９３】
本開示のある特定の態様はまた、肝細胞に核酸を送達する方法であって、肝細胞を本明細書に記載のｄｓＲＮＡと接触させることを含む方法に関する。
【０３９４】
本明細書に記載のｄｓＲＮＡまたは組成物（例えば、医薬組成物）は、静脈内、筋肉内、皮下、肺内、経皮および気道（エアロゾル）投与を含む、経口または非経口経路を制限なしに含む、当技術分野で公知の任意の手段によって投与できる。典型的には、高脂血症を有する哺乳動物を処置する場合、ｄｓＲＮＡ分子は、非経口手段により全身投与される。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡおよび／または組成物は、皮下投与によって投与される。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡおよび／または組成物は、静脈内投与によって投与される。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡおよび／または組成物は、肺内投与によって投与される。
【０３９５】
ｄｓＲＮＡの処置または予防効果は、疾患ステータスの１つまたはそれ以上のパラメーターの統計的に有意な改善がある場合、またはそうでない場合に予想されるであろう徴候の悪化または発症がないことによって証明される。例えば、疾患の測定可能なパラメーターの少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％またはそれ以上の好都合な変化は、効果的な処置を示し得る。所与のｄｓＲＮＡまたはｄｓＲＮＡを含む組成物の効力はまた、当技術分野で公知の所与の疾患または障害のための実験動物モデルを使用して判断できる。実験動物モデルを使用した場合、処置の効力は、マーカーまたは徴候の統計的に有意な減少が観察される場合に証明される。
【０３９６】
キットおよび製品
本開示のある特定の態様は、上記の通りの標的遺伝子により媒介される障害または疾患の処置および／または予防ために有用な本明細書に記載の通りの１つまたはそれ以上のｄｓＲＮＡ、ベクターまたは組成物（例えば、医薬組成物）を含む製品またはキットに関する。製品またはキットは、容器、および容器上のまたは容器に添付されたラベルまたは添付文書をさらに含み得る。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグなどが挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックのような種々の材料から形成できる。容器は、それ自体でまたは別の組成物と組み合わせて、疾患の処置または予防に効果的である組成物を保持し、無菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグまたはバイアルであり得る）。組成物中の少なくとも１種の活性剤は、本明細書に記載のｄｓＲＮＡである。ラベルまたは添付文書は、組成物が標的により媒介される障害または疾患を処置するために使用されることを示す。さらに、製品またはキットは、（ａ）本明細書に記載のｄｓＲＮＡを含む組成物を含む第１の容器；および（ｂ）第２の治療剤を含む組成物を含む第２の容器を含み得る。本開示のこの実施形態の製品またはキットは、特定の疾患を処置するために組成物を使用できることを示す添付文書をさらに含み得る。あるいは、またはさらに、製品またはキットは、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンゲル溶液およびデキストロース溶液のような薬学的に許容される担体を含む第２の（または第３の）容器をさらに含み得る。製品またはキットは、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針およびシリンジを含む、商用および使用者の観点から望ましい他の材料をさらに含み得る。
【０３９７】
核酸配列は、本明細書、とりわけ本明細書の実施例に開示されており、これは参照として役立つ。同じ配列はまた、特許事項の目的のための標準要件に従って体裁を整えられた配列リストに提示される。標準配列リストとの配列ミスマッチの場合、本明細書に記載の配列が参照されることになる。
【０３９８】
本開示を限定することなく、本開示のいくつかの実施形態を、例示の目的で以下に記載する。
【０３９９】
使用される略語：
−  ＡｃＯＨ：酢酸
−  ＦＡ：ギ酸
−  ＡＣＮ：アセトニトリル
−  ＤＣＭ：ジクロロメタン
−  ＤＭＡ：ジメチルアセトアミド
−  ＤＣＥ：ジクロロエタン
−  ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
−  ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
−  ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル
−  ＥｔＯＨ：エタノール
−  Ｅｔ2Ｏ：ジエチルエーテル
−  ｉＰｒＯＨ：イソプロパノール
−  ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
−  ＭｅＯＨ：メタノール
−  ＮＭＰ：Ｎ−メチル−２−ピロリドン
−  ＰＥ：石油エーテル
−  Ｐｙｒ：ピリジン
−  ｉＰｒ：イソプロピル
−  ｃＨｅｘ：シクロヘキシル
−  ＭＴＢ：メチル−ｔｅｒｔ．−ブチル
−  ＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
−  ＤＭＡＰ：４−（ジメチルアミノ）−ピリジン
−  ＨＢＴＵ：（２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロホスフェート）
−  ＴＢＴＵ：Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート
−  ＤＤＴＴ：３−（（Ｎ，Ｎ−ジメチル−アミノメチリデン）アミノ）−３Ｈ−１，２，４−ジチアゾール−５−チオン
−  ＮＥｔ3：トリエチルアミン
−  ＮＥＭ：Ｎ−エチル−モルホリン
−  ＢＳＡ：Ｎ，Ｏ−ビス−トリメチルシリルアセトアミド
−  ＴＭＳＯＴｆ：トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル
−  Ｔｓ：ｐ−トルエンスルホニル
−  Ｔｆ：トリフルオロメタンスルホニル
−  トリフルオロメタンスルホネート
−  ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
−  ＤＣＡ：ジクロロ酢酸
−  ＴＥＡ：トリエチルアンモニウム
−  ＴＩＰＳ：トリイソプロピルシリル
−  ＴＢＤＭＳ：ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル
−  ＤＭＴ：４，４’−ジメトキシトリチル
−  Ｂｚｌ：ベンゾイル
−  Ｂｎ：ベンジル
−  ＢＯＭ：ベンジルオキシメチル
−  Ａｃ：アセチル
−  iＢｕ：イソブチリル
−  Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル
−  Ｆｍｏｃ：フルオレニルメチルオキシカルボニル
−  Ｆｍｏｃ−ＯＳｕ：Ｎ−（９−フルオレニルメトキシカルボニルオキシ）スクシンイミド
−  ＣＥ：シアノエチル
−  ＣＰＧ：制御細孔ガラス
−  Ｔ：チミン
−  Ｕ：ウラシル
−  Ｃ：シトシン
−  Ａ：アデニン
−  Ｇ：グアニン
−  Ｉ：ヒポキサンチン
−  ＴBOM：Ｎ−ベンジルオキシメチル−チミン
−  ＵBOM：Ｎ−ベンジルオキシメチル−ウラシル
−  ＵBzl：Ｎ−ベンゾイル−ウラシル
−  ＣBzl：Ｎ−ベンゾイル−シトシン
−  ＡBzl：Ｎ−ベンゾイル−アデニン
−  ＧiBu：Ｎ−イソブチリル−グアニン
−  ＧａｌＮＡｃ：Ｄ−Ｎ−アセチルガラクトサミン
−  ＦＲ：流速
−  ＨＰＬＣ：高圧液体クロマトグラフィー
−  ＭＳ−ＴＯＦ：飛行時間型質量分析
−  ＬＣ−ＭＳ：高圧液体クロマトグラフィー−質量分析
−  Ｒt：保持時間
−  ＲＴ：室温
−  Ｈａｌ：ハロゲン
−  ＥＬＳＤ：蒸発光散乱検出器
−  ｑｕａｎｔ．：定量的
−  ｓａｔ．：飽和
−  ｉ．  ｖａｃ．：真空中
−  ｎ．ｄ．：決定せず
−  ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー
−  ｈ：時間
−  ｍｉｎ：分
−  Ｔｍ：融解温度
−  ｒ：リボヌクレオチド
−  ｄ：デスオキシ−リボヌクレオチド
−  ｍ：２’−ＯＭｅ−ヌクレオチド
−  ｆ：２’−デスオキシ−フルオロ−ヌクレオチド
−  −ｓｓ：センス鎖
−  ａｓ：アンチセンス鎖
−  −ｄｓ：二本鎖
−  ｃｈｏｌ：コレステロール
−  ＰＯ：ホスホジエステル結合
−  ＊またはＰＳ：ホスホロチオエート結合
−  ｍｐｋ：ｍｇ／ｋｇ
−  Ｍ：モル濃度
−  ＃：番号、ｎ°
−  ＦＢＳ：ウシ胎児血清
−  ＡＴＰ：アデノシン−三リン酸
−  ｐｒｅ−ｌＢ：前駆体ヌクレオチド
−  ｐｒｅ−ｌｇＢ：標的化された前駆体ヌクレオチド
−  ｌＢ：ヌクレオチド類似体
−  ｌｇＢ：標的化されたヌクレオチド類似体
【実施例】
【０４００】
命名法は、ＩＵＰＡＣ規則に従って規定されている。
【０４０１】
Ａ．ＸがＮである式（Ｉ）のヌクレオチド類似体の合成
別段の指示がない限り、以下のＬＣ−ＭＳ方法が使用されている：
Ａ：
カラム：Ｗａｔｅｒｓ  ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８、１．７μｍ、２．１×５０ｍｍ
溶離液：（Ｈ2Ｏ＋０．０５％ＦＡ）／（ＡＣＮ＋０．０３５％ＦＡ）  ９５：５（０分）〜５：９５（２分）〜５：９５（２．６分）〜９５：５（２．７分）〜９５：５（３．０分）、０．９ｍｌ／分  ５５℃。
Ｂ−１：
カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８、３．０μｍ、２．０×１０ｍｍ
溶離液：（Ｈ2Ｏ＋０．０５％ＴＦＡ）／ＡＣＮ  ９３：７（０分）〜５：９５（１．２０分）〜５：９５  ＡＣＮ（１．４０分）〜９３：７（１．５０分）；１．１ｍｌ／分、室温。
Ｂ−２：
カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８、３．０μｍ、２．０×１０ｍｍ
溶離液：（Ｈ2Ｏ＋０．０５％ＴＦＡ）／ＡＣＮ  ９３：７（０分）〜５：９５（１．００分）〜５：９５  ＡＣＮ（１．４５分）〜９３：７（１．５０分）；１．１ｍｌ／分、室温。
Ｂ−３：
カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８、３．０μｍ、２．０×１０ｍｍ
溶離液：（Ｈ2Ｏ＋０．０５％ＴＦＡ）／ＡＣＮ  ２０：８０（０分）〜５：９５（０．６０分）〜５：９５  ＡＣＮ（１．４５分）〜８０：２０（１．５０分）；１．１ｍｌ／分、室温。
Ｃ：
カラム：Ｗａｔｅｒｓ  ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８、１．７μｍ、２．１×５０ｍｍ
溶離液：（Ｈ2Ｏ＋０．０５％ＦＡ）／（ＡＣＮ＋０．０３５％ＦＡ）  ９８：２（０分）〜９８：２（０．２分）〜２：９８（３．８分）〜２：９８（４．３分）〜９８：２（４．５分）、１．０ｍｌ／分、５５℃。
Ｄ：
カラム：Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ＠Ｆｌａｓｈ  ＲＰ−１８Ｅ  ２×２５ｍｍ
溶離液：（Ｈ2Ｏ＋０．０３７５％ＴＦＡ）／（ＡＣＮ＋０．０１８７５％ＴＦＡ）  ９５：５（０分）〜５：９５（０．８０分）〜５：９５（１．２０分）〜９５：５（１．２１分）〜９５：５（１．５５分）、１．５ｍｌ／分、５０℃。
Ｅ：
カラム：Ｋｉｎｅｔｅｘ  ＥＶＯ  Ｃ１８Ｅ  ２．１×３０ｍｍ、５μｍ
溶離液：（Ｈ2Ｏ＋０．０３７５％ＴＦＡ）／（ＡＣＮ＋０．０１８７５％ＴＦＡ）  ９５：５（０分）〜５：９５（０．８０分）〜５：９５（１．２０分）〜９５：５（１．２１分）〜９５：５（１．５５分）、１．５ｍｌ／分、５０℃。
【０４０２】
〔実施例Ａ．１〕
合成スキーム１
【化４５】
2021517126.tif 000047
【０４０３】
１ａ：［（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−４−アセトキシ−３−ベンジルオキシ−２−（ベンジルオキシメチル）−５−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）テトラヒドロフラン−２−イル］メチルアセテート
出発物質Ｇ３  ４２．５ｇ（８７．４ｍｍｏｌ）およびチミン２２．３ｇ（１７４．７ｍｍｏｌ）を、アルゴン雰囲気下で乾燥ＡＣＮ５００ｍｌに溶解した。ＢＳＡ１０６．６ｇ（１２８．２ｍｌ、５２４．１ｍｍｏｌ）を添加した後、溶液を８０℃で１時間撹拌した。溶液を５０℃に冷却した後、ＴＭＳＯＴｆ３１．８ｇ（２５．９ｍｌ、１４１．５ｍｍｏｌ）を添加し、加熱を８０℃で１時間続けた。溶媒を真空中で蒸発させ、残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ3溶液、Ｈ2Ｏおよび飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ4で脱水した後、有機層を蒸発させ、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン中１０〜１００％酢酸エチル）により精製して、所望のチミジン誘導体１ａを無色泡状物（４０．９ｇ、８４．７％）として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．８２
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝５５１．３
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ[ppm]: 8.55 (s, 1H) 7.51-7.17 (m, 12H), 6.23 (d, J=5.27 Hz, 1H), 5.44 (t, J=5.65 Hz, 1H), 4.72-4.35 (m, 6H), 4.19 (d, J=12.17 Hz, 1H), 3.79 (d, J=10.16 Hz, 1H), 3.53 (d, J=10.16 Hz, 1H) 2.17-2.06 (m, 6H), 1.55 (d, J=0.75 Hz, 3H).
【０４０４】
１ｂ：［（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−４−アセトキシ−３−ベンジルオキシ−２−（ベンジルオキシメチル）−５−（２，４−ジオキソピリミジン−１−イル）−テトラヒドロフラン−２−イル］メチルアセテート
Ｇ３  １０．０ｇ（２０．５５ｍｍｏｌ）およびウラシル３．４９ｇ（３０．８ｍｍｏｌ）を、乾燥ＡＣＮ２００ｍｌに溶解した。ＢＳＡ２０．０９ｇ（３０．１５ｍｌ、１２３．３ｍｍｏｌ）を添加した後、溶液を８１℃で１時間撹拌した。溶液を０℃に冷却した後、ＴＭＳＯＴｆ７．４８ｇ（６．１０ｍｌ、３３．３ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を６５℃に加熱した。撹拌をこの温度で１時間続け、そのときに完全な変換が達成された。室温で、飽和ＮａＨＣＯ3溶液５００ｍｌを添加し、混合物をＥｔＯＡｃ５００ｍｌで抽出した。有機層を分離し、Ｈ2Ｏおよび飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ4で脱水した後、粗生成物をシリカゲル（ｎ−ヘプタン中２０〜１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、保護ヌクレオシド類似体１ｂを収率８２．３％（９．１１ｇ）で無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．８２
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝５３９．１
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ[ppm]: 8.97 (s, 1H), 7.66 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.38-7.35 (m, 10H), 6.19 (d, J=4.0 Hz, 1H), 5.38-5.30 (m, 2H), 4.63 (d, J=12.0 Hz, 1H), 4.46-4.41 (m, 5H), 4.19 (d, J=12.0 Hz, 1H), 3.79 (d, J=12.0 Hz, 1H), 3.51 (d, J=12.0 Hz, 1H), 2.12 (s, 3H), 2.07 (s, 3H).
【０４０５】
１ｃ：［（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−４−アセトキシ−３−ベンジルオキシ−２−（ベンジルオキシメチル）−５−［２−（２−メチルプロパノイル−アミノ）−６−オキソ−１Ｈ−プリン−９−イル］テトラヒドロフラン−２−イル］メチルアセテート
ＤＣＥ６．６８ｌ中の化合物Ｇ３（１４８．５ｇ、０．３０ｍｏｌ）の溶液に、Ｎ−イソブチリル−グアニン（１３５ｇ、０．６１ｍｏｌ）およびＢＳＡ（３１１．８５ｍＬ、１．２ｍｏｌ）をＮ2雰囲気下、１５℃で添加した。混合物を８５℃で３時間撹拌した。次いで、ＴＭＳＯＴｆ（１８３．４ｇ、０．９０ｍｏｌ）を８５℃で添加し、撹拌を３時間続け、そのときにＴＬＣは完全な変換を示した。混合物を室温に冷却し、飽和ＮａＨＣＯ3溶液６．５ｌに注ぎ入れた。有機層を分離し、水相をＤＣＭ５ｌで２回抽出した。有機層を合わせ、無水Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、濾過し、濃縮した。得られた粗生成物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡ／ＡＣＮ）により精製して、化合物１ｃ（１２８ｇ、６４％）を白色固体として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.09 (s, 1H), 11.62 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.41-7.30 (m, 10H), 6.12 (d, J=6.4 Hz, 1H), 5.90 (t, J1=J2 =5.6 Hz, 1H), 4.71 (d, J=5.2 Hz, 1H), 4.63-4.55 (m, 4H), 4.34 (d, J=5.6 Hz, 1H), 4.23 (d, J=5.6 Hz, 1H), 3.71-3.66 (m, 2H), 3.18 (d, J=4.8 Hz, 1H), 2.76-2.51 (m, 1H), 2.05 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.20-1.12 (s, 6H).
【０４０６】
１ｄ：［（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−４−アセトキシ−３−ベンジルオキシ−２−（ベンジルオキシメチル）−５−（６−オキソ−１Ｈ−プリン−９−イル）−テトラヒドロフラン−２−イル］メチルアセテート
Ｇ３  １０．０ｇ（２０．５５ｍｍｏｌ）および核酸塩基としてのヒポキサンチン３．３２ｇ（２３．６６ｍｍｏｌ）から出発して、１ｃについて記載したプロトコールに従って表題化合物を合成した。シリカゲル精製（ｎ−ヘプタン中１０〜１００％ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（９：１））した後、表題化合物１ｄを無色泡状物（９．５３ｇ、８１．１％）として単離した。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．７３
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝５６３．３
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.42 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.25 -7.39 (m, 10H), 6.21 (d, J=4.89 Hz, 1H), 5.90 - 5.97 (m, 1H), 4.78 (d, J=5.75 Hz, 1H), 4.45 - 4.61 (m, 4H), 4.32 - 4.41 (m, 1H), 4.17 - 4.25 (m, 1H), 3.59 - 3.74 (m, 2H), 2.04 (m, 3H), 1.98 (m, 3H).
【０４０７】
１ｅ：［（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−４−アセトキシ−５−（６−ベンズアミドプリン−９−イル）−３−ベンジルオキシ−２−（ベンジルオキシメチル）−テトラヒドロフラン−２−イル］メチルアセテート
ＤＣＥ６．５６ｌ中の化合物Ｇ３（１６４ｇ、０．３３７ｍｏｌ）およびＮ−ベンゾイルアデニン（１２１ｇ、０．５０６ｍｏｌ）の混合物に、ＢＳＡ（２７４ｇ、１．３４８ｍｏｌ）を室温で滴下添加し、混合物を９０℃で１．５時間撹拌した。ＴＭＳＯＴｆ（２２５ｇ、１．０１１ｍｏｌ）を４０〜５０℃で滴下添加した後、混合物を９０℃で１時間撹拌した。混合物を飽和ＮａＨＣＯ3溶液１５ｌでクエンチし、層を分離した。水層をＥｔＯＡｃ３ｌで２回抽出し、合わせた有機層を無水Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、濾過し、真空中で濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ  １：２）により精製して、化合物１ｅを黄色油状物としてのアノマー混合物（２２４．４ｇ）として得た。混合物を２回の逆相フラッシュクロマトグラフィー（中性）により精製して、純粋な化合物１ｅ（７５．５ｇ、３３．７％）を無色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.25 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.05 (d, J=7.40 Hz, 2H), 7.71-7.62 (m, 1H), 7.60-7.50 (m, 2H), 7.43-7.21 (m, 10H), 6.38 (d, J=4.77 Hz, 1H), 6.12 (t, J=5.33 Hz, 1H), 4.88 (d, J=5.77 Hz, 1H), 4.63 (s, 2H), 4.56-4.45 (m, 2H), 4.41 (d, J=11.92 Hz, 1H), 4.25 (d, J=11.80 Hz, 1H), 3.75-3.59 (m, 2H), 2.06 (s, 3H), 2.00 (s, 3H).
【０４０８】
２ａ：１−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−４−ベンジルオキシ−５−（ベンジルオキシメチル）−３−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）−テトラヒドロフラン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
ＴＨＦ／ＥｔＯＨ（４：１）５００ｍｌ中の１ａ４０．９ｇ（７４．０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＯＨ水溶液（２Ｎ）２２１．９ｍｌ（４４３．８ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。氷浴を取り外した後、混合物を２時間撹拌して完全な変換に到達させた。溶液を、２Ｎ  ＨＣｌ溶液を添加することにより０℃で中性ｐＨにした。溶媒を真空中で濃縮し、残った水相をＤＣＭ２５０ｍｌで２回抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させて、脱保護生成物２ａ３４．８ｇ（定量的）を得、これをさらに精製することなく以下の工程で使用した。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．６４
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝４６９．２
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ[ppm]: 9.24-8.77 (m, 1H), 7.45 (br s, 1H), 7.41-7.30 (m, 8H), 7.27 (br d, J=7.78 Hz, 2H), 6.04 (br d, J=4.02 Hz, 1H), 4.86 (br d, J=11.67 Hz, 1H), 4.63-4.51 (m, 3H), 4.45-4.31 (m, 2H), 4.31-3.96 (m, 1H), 3.84 (br d, J=11.29 Hz, 1H), 3.76-3.64 (m, 2H), 3.58 (d, J=10.42 Hz, 1H), 2.96-2.62 (m, 1H), 1.63-1.51 (m, 3H).
【０４０９】
２ｂ：１−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−４−ベンジルオキシ−５−（ベンジルオキシメチル）−３−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）−テトラヒドロフラン−２−イル］ピリミジン−２，４−ジオン
１ｂ９．１０ｇ（１６．９ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ／ＥｔＯＨ（３：１）２４０ｍｌに溶解した。０℃で、１Ｍ  ＮａＯＨ溶液８．４９ｍｌ（８４．５ｍｍｏｌ）を添加し、溶液を撹拌し、室温に到達させた。１時間後、ｐＨ７に到達するまでクエン酸を添加し、溶媒を蒸発させた。水性残留物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ4で脱水した後、溶媒を除去して、粗生成物７．６６ｇ（９９．７％）を無色泡状物として得、これをさらに精製することなく使用した。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．６３
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝４５５．１
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.29 (s, 1H), 7.69 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.27 - 7.41 (m, 10H), 5.88 (d, J=5.7 Hz, 1H), 5.57 (d, J=7.2 Hz, 1H), 5.37 (d, J=8.1 Hz, 1H), 4.98 (t, J=5.4 Hz, 1H), 4.80 (d, J=11.7 Hz, 1H), 4.46 - 4.58 (m, 3H), 4.27 - 4.37 (m, 1H), 4.00 -4.14 (m, 1H), 3.50 - 3.69 (m, 4H).
【０４１０】
２ｃ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−４−ベンジルオキシ−５−（ベンジルオキシメチル）−３−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）−テトラヒドロフラン−２−イル］−６−オキソ−１Ｈ−プリン−２−イル］−２−メチル−プロパンアミド
ＴＨＦ／ＥｔＯＨ（４：１）１．７ｌ中の化合物１ｃ（７２ｇ、０．１１ｍｏｌ）の溶液に、１Ｍ  ＮａＯＨ溶液（４４３ｍＬ）を０℃で滴下添加した。溶液を０℃で１時間撹拌して完全な変換に到達させた。ｐＨを、１Ｎ  ＨＣｌを添加することにより７に調整し、溶媒を除去した。残留物をＨ2Ｏ（５００ｍＬ）に溶解し、ＤＣＭ３×５００ｍｌで抽出した。有機層を合わせ、無水Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、濃縮して、化合物２ｃ（１１３ｇ、定量的）を無色固体として得、これをさらに精製することなく次の工程で使用した。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.07(s,1H), 11.66 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.42-7.30 (m, 10H), 5.92 (d, J=6.8 Hz, 1H) , 4.99 (s, 1H) , 4.87-4.84 (m, 2H), 4.63 (d, J =15.6 Hz, 1H), 4.56 (s, 2H), 4.24 (d, J=4.8 Hz, 1H), 3.69-3.62 (m, 4H), 2.76-2.73 (m, 1H), 1.13-1.04 (m, 7H).
【０４１１】
２ｄ：９−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−４−ベンジルオキシ−５−（ベンジルオキシメチル）−３−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）−テトラヒドロフラン−２−イル］−１Ｈ−プリン−６−オン
２ｂについて記載した手順に従って、１ｄ９．３４ｇ（１６．６５ｍｍｏｌ）を脱保護して、表題化合物２ｄ７．７６ｇ（９７．４％）を粗生成物として得、これをさらに精製することなく使用した。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．５３
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝４７９．３
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) d[ppm]: 8.16 (s, 1H), 7.97 - 8.04 (m, 1H), 7.27 - 7.41 (m, 10H), 5.97 (d, J=5.75 Hz, 1H), 5.75 (s, 1H), 5.03 (br s, 1H), 4.79 - 4.92 (m, 2H), 4.47 -4.62 (m, 3H), 4.24 - 4.34 (m, 1H), 3.55 - 3.70 (m, 4H).
【０４１２】
２ｅ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−４−ベンジルオキシ−５−（ベンジルオキシメチル）−３−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）−テトラヒドロフラン−２−イル］プリン−６−イル］ベンズアミド
２ｂについて記載した手順に従って、１ｅ１４４ｇ（２１６ｍｍｏｌ）を脱保護して、表題化合物２ｅ１２６ｇ（定量的、粗製）を無色泡状物として得、これをさらに精製することなく使用した。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.23 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.05 (br d, J=7.46 Hz, 2H), 7.71-7.63 (m, 1H), 7.61-7.52 (m, 2H), 7.49-7.23 (m, 10H), 6.16 (d, J=5.75 Hz, 1H), 5.85 (d, J=7.46 Hz, 1H), 5.14-4.99 (m, 2H), 4.86 (d, J=11.86 Hz, 1H), 4.63 (d, J=11.74 Hz, 1H), 4.53 (s, 2H), 4.38 (d, J=5.14 Hz, 1H), 3.79-3.57 (m, 4H).
【０４１３】
３ａ：１−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−ベンジルオキシ−５−（ベンジルオキシメチル）−３−ヒドロキシ−５−（トリイソプロピルシリルオキシ−メチル）テトラヒドロフラン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
出発化合物２ａ３４．７ｇ（７４．２ｍｍｏｌ）およびイミダゾール１６．８ｇ（２４４．７ｍｍｏｌ）を、乾燥ＤＣＭ３００ｍｌに溶解した。室温で、ＤＣＭ２００ｍｌ中のＴＩＰＳ−クロリド１６．２ｇ（１８．０ｍｌ、８１．６ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、反応物を１９時間撹拌した。ＥｔＯＨでクエンチした後、溶媒を蒸発させ、残留物をＥｔＯＡｃに溶解した。有機溶液をＨ2Ｏ、１Ｎ  ＨＣｌ、Ｈ2Ｏおよび飽和ＮａＨＣＯ3溶液、続いて飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ4で脱水した後、溶媒を除去し、粗生成物（４７．１ｇ）をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン中１０〜１００％ＥｔＯＡｃ）により精製して、所望のＴＩＰＳ保護生成物３ａを無色泡状物（３７．５ｇ、８０．９％）として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．２２
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝６２５．３
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ[ppm]: 8.52 (s, 1H), 7.35-7.13 (m, 11H), 5.88 (d, J=3.89 Hz, 1H), 4.72-4.63 (m, 1H), 4.60-4.51 (m, 1H), 4.46 (s, 2H), 4.34-4.26 (m, 1H), 4.22 (d, J=6.27 Hz, 1H), 3.90 (d, J= 10.92 Hz, 1H), 3.77 (d, J=1.00 Hz, 2H), 3.63-3.51 (m, 2H), 1.52 (d, J=0.88 Hz, 3H), 1.12-0.90 (m, 21H).
【０４１４】
３ｂ：１−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−ベンジルオキシ−５−（ベンジルオキシメチル）−３−ヒドロキシ−５−（トリイソプロピルシリルオキシ−メチル）テトラヒドロフラン−２−イル］ピリミジン−２，４−ジオン
２ｂ７．６６ｇ（１６．８ｍｍｏｌ）から出発して、３ａについてのプロトコールに記載した通りに表題化合物を製造して、シリカゲルクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン中２０〜８０％ＥｔＯＡｃ）の後に、所望のシリル化生成物３ｂ８．６９ｇ（８４．５％）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．２３
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝６１１．２
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ[ppm]: 9.04 (s, 1H), 7.63 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.37-7.34 (m, 8H), 7.26-7.24 (m, 2H), 5.96 (d, J=4.0 Hz, 1H), 5.37 (d, J=8.0 Hz, 1H), 4.77 (d, J=12.0 Hz, 1H), 4.62 (d, J=12.0 Hz, 1H), 4.49 (s, 2H), 4.26 (d, J=8.0 Hz, 1H), 3.83 (dd, J=8.0, 10.0 Hz, 2H), 3.63 (dd, J=8.0, 10.0 Hz, 2H), 1.15-1.04 (m, 21H).
【０４１５】
３ｃ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−ベンジルオキシ−５−（ベンジルオキシメチル）−３−ヒドロキシ−５−（トリイソプロピルシリルオキシ−メチル）テトラヒドロフラン−２−イル］−６−オキソ−１Ｈ−プリン−２−イル］−２−メチル−プロパンアミド
無水ＤＣＭ（１５６８ｍＬ）中の化合物２ｃ（７５ｇ、１３３ｍｍｏｌ）の溶液に、イミダゾール（３８ｇ、５５９ｍｍｏｌ）およびＴＩＰＳＣｌ（３５．９ｇ、１８６ｍｍｏｌ）をＮ2雰囲気下、０℃で添加した。１０〜１５℃で１２時間撹拌した後、溶液を氷水（２Ｌ）に注ぎ入れ、ＤＣＭ（３×１．５ｌ）で抽出した。有機層を合わせ、ブライン（１ｌ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ  ２：１〜ＥｔＯＡｃ）により精製して、表題化合物３ｃ６５ｇ（６８％）を白色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.07 (s,1H), 11.61 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.37-7.22 (m, 10H), 5.89 (d, J=6.8 Hz, 1H), 5.72 (d, J=5.6 Hz, 1H) , 4.94-4.93 (m, 2H) , 4.90-4.53 (m, 3H), 4.19 (d, J=4.4 Hz, 1H), 3.92-3.88 (m, 2H), 3.85-3.71(m, 2H), 2.78-2.71 (m, 1H), 1.13-1.05 (m, 6H), 1.00-0.94 (m, 21H).
【０４１６】
３ｄ：９−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−ベンジルオキシ−５−（ベンジルオキシメチル）−３−ヒドロキシ−５−（トリイソプロピルシリルオキシ−メチル）テトラヒドロフラン−２−イル］−１Ｈ−プリン−６−オン
２ｄ７．７５ｇ（１６．２ｍｍｏｌ）から出発して、３ａについてのプロトコールに記載した通りに表題化合物を製造して、シリカゲルクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（９：１））の後に、所望のシリル化生成物３ｄ８．６０ｇ（８３．６％）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．１９
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝６３５．５
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.38 (br s, 1H), 8,22 (s, 1H), 8,03 (s, 1H), 7.26 -7.39 (m, 10H), 5.94 (d, J=6.85 Hz, 1H), 5.67 (d, J=6.48 Hz, 1H), 4.98 - 4.74 (m, 2H), 4.61 -4.48 (m, 3H), 4.24 (d, J=4.89 Hz, 1H), 3.97 - 3.82 (m, 2H), 3.69 (s, 2H), 0.80 - 1.18 (m, 21H).
【０４１７】
３ｅ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−ベンジルオキシ−５−（ベンジルオキシメチル）−３−ヒドロキシ−５−（トリイソプロピルシリルオキシ−メチル）テトラヒドロフラン−２−イル］プリン−６−イル］ベンズアミド
ＤＣＭ１．３５ｌ中の化合物２ｅ（１３５ｇ、０．２３２ｍｏｌ）およびイミダゾール（４７．４ｇ、０．６９６ｍｏｌ）の混合物に、ＤＣＭ１．３５ｌ中のＴＩＰＳＣｌ（８０．６ｇ、０．４１８ｍｏｌ）の溶液を室温で添加した。混合物を２４時間撹拌した。ＥｔＯＨ４００ｍｌでクエンチした後、混合物を水１．５ｌで洗浄した。水層をＥｔＯＡｃ１ｌで２回抽出し、合わせた有機層を無水Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、濾過し、真空中で濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ  ２：１）により精製して、シリルエーテル３ｅ（１４５ｇ、８４．８％）を白色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.23 (s, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.06 (d, J=7.28 Hz, 2H), 7.71-7.62 (m, 1H), 7.60-7.51 (m, 2H), 7.44-7.23 (m, 10H), 6.13 (d, J=6.78 Hz, 1H), 5.77 (d, J=6.40 Hz, 1H), 5.21-5.10 (m, 1H), 4.94 (d, J=11.92 Hz, 1H), 4.66-4.50 (m, 3H), 4.30 (d, J=4.77 Hz, 1H), 4.00-3.86 (m, 2H), 3.74 (s, 2H), 1.11-0.89 (m, 21H).
【０４１８】
４ａ：１−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）−５−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）−テトラヒドロフラン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
オートクレーブ内で、ＥｔＯＨ１００ｍｌ中のビス−ベンジルエーテル３ａ１３．４ｇ（２１．４ｍｍｏｌ）の溶液を脱気し、アルゴンでパージした。触媒量のＰｄ（ＯＨ）2（炭素上２０％）を添加した後、溶液を４ｂａｒのＨ2雰囲気下に１時間セットした。Ｐｄ触媒を濾別し、濾液を蒸発させて、所望の脱ベンジル化生成物９．７４ｇ（定量的）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．８４
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝４４５．３
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ[ppm]: 8.85 (s, 1H), 7.25 (d, J=1.00 Hz, 1H), 5.58 (d, J=6.15 Hz, 1H), 4.71-4.61 (m, 1H), 4.51-4.44 (m, 1H), 4.02-3.95 (m, 1H), 3.94-3.89 (m, 1H), 3.88-3.77 (m, 3H), 3.76-3.67 (m, 1H), 3.22 (br dd, J=6.71, 3.83 Hz, 1H), 1.93 (d, J=1.00 Hz, 3H), 1.00 - 1.24 (m, 21H).
【０４１９】
４ｂ：１−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）−５−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）−テトラヒドロフラン−２−イル］ピリミジン−２，４−ジオン
３ｂ８．６９ｇ（１４．２ｍｍｏｌ）から出発して、４ａについてのプロトコールに記載した通りに表題化合物を製造して、所望の生成物４ｂ６．２１ｇ（定量的、粗製）を得、これを精製することなく使用した。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．７８
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝４３１．１
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.29 (s, 1H), 7.91 (d, J=8.0 Hz, 1H), 5.87 (d, J=8.0 Hz, 1H), 5.69 (d, J=8.0 Hz, 1H), 5.28 (d, J=8.0 Hz, 1H), 5.12 (t, J=4.0 Hz, 1H), 5.00 (d, J=4.0 Hz, 1H), 4.19(dd, J=8.0, 12.0 Hz, 1H), 4.05(t, J=4.0 Hz, 2H), 3.81(dd, J=8.0, 12.0 Hz, 2H), 3.62 (d, J=4.0 Hz, 2H), 1.05-1.00 (m, 21H).
【０４２０】
４ｃ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）−５−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）−テトラヒドロフラン−２−イル］−６−オキソ−１Ｈ−プリン−２−イル］−２−メチル−プロパンアミド
無水ＤＣＭ（３００ｍＬ）中の化合物３ｃ（９５ｇ、０．１３２ｍｏｌ）の溶液に、ＢＣｌ3（９２１ｍＬ）をＮ2雰囲気下、−７０℃で添加した。反応溶液を−７５〜−６０℃の間で２時間撹拌し、そのときに完全な変換がＴＬＣにより検出された。混合物に、ＭｅＯＨ中ＮＨ3の飽和溶液およそ２００ｍｌを添加した。ｐＨを１０〜１１に調整し、溶媒を減圧下で除去した。粗生成物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ  ２０：１〜４：１）により精製して、脱ベンジル化生成物４ｃ（５１ｇ、収率、７１．６％）を黄色固体として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.86 (s, 2H), 8.27 (s, 1H), 5.83 (d, J=7.2 Hz, 1H), 5.42 (s, 1H), 5.06 (s, 2H), 4.64 (s, 1H) , 4.17 (d, J=4.0 Hz, 1H), 3.89 (d, J=10.8 Hz, 1H), 3.79 (d, J=10.4 Hz, 1H), 3.67 (s, 2H), 2.80-2.73 (m, 1H), 1.17-1.08 (m, 6H), 1.02-0.92 (m, 21H).
【０４２１】
４ｄ：９−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）−５−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）−テトラヒドロフラン−２−イル］−１Ｈ−プリン−６−オン
出発化合物３ｄ８．５９ｇ（１３．５３ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ２００ｍｌに溶解した。−７０〜−５０℃に冷却した後、トルエン中ＢＣｌ3の１Ｍ溶液７４．４ｍｌ（７４．４ｍｍｏｌ）を１５分間かけて添加した。−７０℃でさらに１５分間撹拌した後、冷却浴を取り外し、撹拌を室温でさらに３０分間続けた。次いで、反応溶液をＭｅＯＨ中ＮＨ3の７Ｍ溶液１８０ｍｌ中に滴下添加した。２０分間撹拌した後、混合物を蒸発させ、残留物をＤＣＭ／ｉＰｒＯＨ（４：１）１００ｍｌに溶解した。飽和ＮａＨＣＯ3溶液で洗浄した後、層を分離し、水層をＤＣＭ／ｉＰｒＯＨ（４：１）で３回抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ4で脱水し、濾過し、蒸発させた。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０〜１０％ＭｅＯＨ）により精製して、表題化合物４ｄ４．１４ｇ（６７．３％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．７４
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝４５３．４
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.38 (m, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 5.87 (d, J=7.34 Hz, 1H), 5.37 (d, J=6.97 Hz, 1H), 5.01 - 5.14 (m, 2H), 4.64 - 4.76 (m, 1H), 4.15 -4.20 (m, 1H), 3.81 - 3.93 (m, 2H), 3.65 (d, J=5.14 Hz, 2H), 0.94 - 1.14 (m, 21H).
【０４２２】
４ｅ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）−５−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）−テトラヒドロフラン−２−イル］プリン−６−イル］ベンズアミド
ＤＣＭ６２０ｍｌ中の化合物３ｅ（３１ｇ、４２．０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＢＣｌ3（２５２ｍＬ、０．２５２ｍｏｌ）を−７０℃で滴下添加した。混合物をＮ2下、−７０℃で３０分間撹拌し、１５℃に加温した。この温度でさらに３０分間撹拌した後、温度を−２０℃未満に保ちながら反応混合物をＭｅＯＨ中７Ｍ  ＮＨ3６００ｍｌに慎重に注ぎ入れた。蒸発させた後、残留物をＤＣＭ／ｉＰｒＯＨ（４：１）３ｌに溶解し、水１ｌおよび飽和ＮａＨＣＯ3溶液で洗浄した。合わせた水層をＤＣＭ／ｉＰｒＯＨ（４：１）２×１ｌで抽出し、合わせた有機層を無水Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、濾過し、真空中で濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ  １：４）により精製して、化合物４ｅ（１６．９ｇ、収率７２．２％）を白色固体として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.23 (s, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.06 (d, J=7.28 Hz, 2H), 7.70-7.61 (m, 1H), 7.60-7.51 (m, 2H), 6.06 (d, J=7.53 Hz, 1H), 5.48 (d, J=6.90 Hz, 1H), 5.22-5.11(m, 2H), 4.93-4.83 (m, 1H), 4.24 (t, J=4.77 Hz, 1H), 3.92 (q, J=10.67 Hz, 2H), 3.78-3.62 (m, 2H), 1.14-1.01 (m, 21H).
【０４２３】
５ａ：１−［（２Ｒ，６Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
出発物質４ａ２．９３ｇ（６．６ｍｍｏｌ）を、アセトン／Ｈ2Ｏ（４：１）１２０ｍｌに溶解した。Ｈ2Ｏ５０ｍｌ中のＮａＩＯ4１．６９ｇ（７．９ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、混合物を室温で１時間撹拌した。沈殿物を濾別し、濾液を真空中で濃縮した。残った水溶液をＥｔＯＡｃ２００ｍｌで抽出した。有機層をＨ2Ｏおよび飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した後、これをＭｇＳＯ4で脱水し、溶媒を減圧下で除去して、所望の生成物２．８６ｇ（９４．１％）を無色固体として得、これをさらに精製することなく使用した。
ＬＣＭＳ−方法Ｂ−１：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．０４
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ−Ｈ2Ｏ］+＝４４３．２
【０４２４】
５ｂ：１−［（２Ｒ，６Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］ピリミジン−２，４−ジオン
４ｂ６．２１ｇ（１４．４ｍｍｏｌ）から出発して、４ａに記載したプロトコールに従って表題化合物を作製して、所望の生成物５ｂ６．３８ｇ（９９％）を粗生成物として得、これをさらに精製することなく使用した。
ＬＣＭＳ−方法Ｂ−１：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．００
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ−Ｈ2Ｏ］+＝４２９．５
【０４２５】
５ｃ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］−６−オキソ−１Ｈ−プリン−２−イル］−２−メチル−プロパンアミド
アセトン（４８５ｍｌ）および水（１４５ｍｌ）の混合溶媒中の化合物４ｃ（２５ｇ、４６ｍｍｏｌ）の溶液に、水（１５０ｍｌ）中のＮａＩＯ4（１３．９ｇ、６５ｍｍｏｌ）の溶液を２５℃で添加し、混合物を１２時間撹拌した。溶媒を真空中で蒸発させた後、残留物をＥｔＯＡｃ（５００ｍｌ）に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ3溶液（５００ｍｌ）およびブライン（５００ｍｌ）で洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4で脱水し、濾過し、真空中で濃縮して、粗製の５ｃ（２５．７ｇ、定量的）を白色固体として得、これをさらに精製することなく使用した。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.05 (br s, 1H), 11.79 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.52 (d, J=5.62 Hz, 1H), 6.23 (s, 1H), 5.34 (d, J=5.62 Hz, 1H), 5.23 (s, 1H), 4.46 (d, J=9.54 Hz, 1H), 4.15-4.04 (m, 1H), 3.93 (d, J=9.78 Hz, 1H), 3.85 (d, J= 10.03 Hz, 1H), 3.71 (d, J= 10.03 Hz, 1H), 2.85-2.66 (m, 1H), 1.12 (d, J=6.85 Hz, 6H), 1.07-0.95 (m, 21H).
【０４２６】
５ｄ：９−［（２Ｒ，６Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］−１Ｈ−プリン−６−オン
出発物質４ｄ４．１４ｇ（９．１ｍｍｏｌ）を、アセトン／Ｈ2Ｏ（４：１）１２０ｍｌに溶解した。Ｈ2Ｏ５０ｍｌ中のＮａＩＯ4２．６３ｇ（１２．３ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、混合物を室温で１８時間撹拌した。沈殿物を濾別し、濾液を真空中で濃縮した。残った水溶液に、飽和ＮａＨＣＯ３溶液１００ｍｌを添加し、水層をＤＣＭ／ｉＰｒＯＨ（４：１）１００ｍｌで２回抽出した。有機層をＭｇＳＯ4で脱水し、溶媒を減圧下で除去して、所望の生成物５ｄ４．２７ｇ（９９．７％）を無色泡状物として得、これをさらに精製することなく使用した。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．８２
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ−Ｈ2Ｏ］+＝４５３．３
【０４２７】
６ａ：１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−（ヒドロキシメチル）−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
無水ＭｅＯＨ（５２７ｍｌ）中の化合物５ａ（３１ｇ、６７ｍｍｏｌ）の溶液に、（ＮＨ4）2Ｂ2Ｏ7・４Ｈ2Ｏ（１９．５ｇ、７４ｍｍｏｌ）をＮ2雰囲気下、室温で添加した。混合物を２時間撹拌し、続いてＡｃＯＨ（８．０８ｇ、１３４ｍｍｏｌ）、４Åモレキュラーシーブ（６２ｇ）およびＮａＢＨ3ＣＮ（８．４４ｇ、１３４ｍｍｏｌ）を添加した。ＴＬＣが出発物質の完全な消費を示すまで、混合物をＮ2雰囲気下、室温で１２時間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、残留物を水（２００ｍｌ）に溶解し、ＤＣＭ（３×２００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層をＮａ2ＳＯ4で脱水し、真空中で濃縮した。残留物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ５０：１〜１０：１）により精製して、化合物６ａ（１９．５ｇ、６７％）を無色固体として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.27 (br s, 1H), 7.71-7.52 (m, 1H), 5.90-5.68 (m, 1H), 4.68-4.46 (m, 1H), 4.05-3.83 (m, 2H), 3.40 (br d, J=5.38 Hz, 2H), 2.83 (br d, J=9.78 Hz, 1H), 2.79-2.72 (m, 1H), 2.66 (br d, J= 12.96 Hz, 2H),1.79 (s, 3H), 1.22-0.83 (m, 23H).
【０４２８】
６ｃ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｓ）−６（ヒドロキシメチル）−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン−２−イル］−６−オキソ−１Ｈ−プリン−２−イル］−２−メチル−プロパンアミド
化合物５ｃ２５．７ｇ（４６．４ｍｍｏｌ）から出発して、６ａについて記載したプロトコールに従って表題化合物を合成して、所望のモルホリン６ｃを無色固体（７．５ｇ、３０．６％）として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.56 (br s, 1H), 8.13 - 8.25 (m, 1H), 5.67 - 5.81 (m, 2H), 4.56 (br s, 1H), 4.08 (br d, J=9.54 Hz, 1H), 3.83 (br d, J=9.29 Hz, 1H), 3.39 - 3.48 (m, 2H), 3.10 (br d, J=9.54 Hz, 1H), 2.65 - 2.93 (m, 4H), 1.12 (br d, J=6.60 Hz, 7H), 0.96 -1.07 (m, 21H).
【０４２９】
７ａ：１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−（ヒドロキシメチル）−４−イソプロピル−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン（６ａから）
無水ＭｅＯＨ（３９０ｍｌ）中の化合物６ａ（１９．５ｇ、４５．７ｍｍｏｌ）の溶液に、４Åモレキュラーシーブ（３９ｇ）、アセトン（１３．２５ｇ、２２８ｍｍｏｌ）およびＮａＢＨ3ＣＮ（１４．４ｇ、２２８ｍｍｏｌ）をＮ2雰囲気下、室温で添加した。２時間撹拌した後、混合物をＡｃＯＨ（約２．０ｍｌ）でｐＨ＝５〜６に調整し、撹拌を１２時間続け、そのときに出発物質の完全な消費がＴＬＣにより検出された。溶媒を真空中で除去し、残留物を水（５００ｍｌ）に溶解した。ＤＣＭ（３×５００ｍｌ）で抽出した後、有機層を合わせ、Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、真空中で濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ５０：１〜１０：１）により精製した後、表題化合物７ａを無色固体（１７ｇ、８１％）として得た。
【０４３０】
７ａ：１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−（ヒドロキシメチル）−４−イソプロピル−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン（５ａから）
出発化合物５ａ２．８５ｇ（６．２ｍｍｏｌ）、ＮＥｔ3１．２６ｇ（１．７４ｍｌ、１２．４ｍｍｏｌ）、ＡｃＯＨ３．７３ｇ（３．５６ｍｌ、６１．９ｍｍｏｌ）およびイソプロピルアミン９２４ｍｇ（１．３４ｍｌ、１５．５ｍｍｏｌ）を、乾燥ＭｅＯＨ６０ｍｌに溶解した。室温で、シアノ水素化ホウ素ナトリウム１．６４ｇ（２４．８ｍｍｏｌ）を添加し、溶液を６０℃で２時間撹拌した。室温まで冷却した後、反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ3溶液１００ｍｌに注ぎ入れ、溶媒を減圧下で濃縮した。残った水相をＥｔＯＡｃで抽出し、これを飽和ＮａＨＣＯ3溶液および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ4で脱水した後、溶媒を蒸発させ、粗生成物（３．０ｇ）をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン中１０〜８０％酢酸エチル）により精製して、所望のモルホリン７ａ１．７６ｇ（６０．７％）を無色固体として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．８０
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝４７０．２
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.30 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 5.77 (dd, J= 10.42, 2.89 Hz, 1H), 4.61 (t, J=5.90 Hz, 1H), 4.00 (d, J=9.29 Hz, 1H), 3.74 (d, J=9.03 Hz, 1H), 3.53-3.41 (m, 2H), 2.83-2.63 (m, 3H), 2.26 (br d, J= 11.29 Hz, 1H), 2.21-2.07 (m, 1H), 1.80 (s, 3H), 1.14-1.00 (m, 21H), 0.97 (d, J=6.53 Hz, 6H).
【０４３１】
７ｂ：１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−（ヒドロキシメチル）−４−イソプロピル−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン−２−イル］ピリミジン−２，４−ジオン（５ｂから）
ＭｅＯＨ１５０ｍｌ中の５ｂ（６．３８ｇ、１４．３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＡｃＯＨ８．６２ｇ（８．２３ｍｌ、１４２．８ｍｍｏｌ）、ＮＥｔ3２．９０ｇ（３．９８ｍｌ、２８．６ｍｍｏｌ）およびイソプロピルアミン２．１３ｇ（３．０９ｍｌ、３５．７ｍｍｏｌ）を室温で添加した。１時間後、シアノ水素化ホウ素ナトリウム３．７８ｇ（５７．１ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌を室温で１時間、続いて６５℃でさらに１時間続けた。混合物を室温に冷却し、飽和ＮａＨＣＯ3溶液１５０ｍｌを添加し、ＭｅＯＨを真空中で蒸発させた。水溶液をＥｔＯＡｃ３５０ｍｌで抽出し、有機層を飽和ＮａＨＣＯ3および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ4で脱水した後、溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０〜５％ＭｅＯＨ）により精製して、表題化合物７ｂ３．１８ｇ（４８．９％）を無色固体として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．７６
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝４５６．４
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.32 (b s, 1H), 7.77 (d, J=8.07 Hz, 1H), 5.75 (dd, J=9.90, 2.81 Hz, 1H), 5.61 (d, J=8.07 Hz, 1H), 4.62 (t, J=5.93 Hz, 1H), 3.99 (d, J=9.29 Hz, 1H), 3.74 (d, J=9.17 Hz, 1H), 3.45 (dd, J=10.33, 6.05 Hz, 2H), 2.82 (br d, J=10.27 Hz, 1H), 2.64 - 2.77 (m, 2H), 2.24 (d, J=11.37 Hz, 1H), 2.03 - 2.13 (m, 1H), 1.00 - 1.10 (m, 21H), 0.96 (m, 6H).
【０４３２】
７ｃ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−（ヒドロキシメチル）−４−イソプロピル−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン−２−イル］−６−オキソ−１Ｈ−プリン−２−イル］−２−メチル−プロパンアミド（６ｃから）
６ｃ７．５ｇ（１４．０ｍｍｏｌ）から出発して、７ａ（６ａから）について記載したプロトコールに従って表題化合物を合成した。シリカゲル（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ  ４：１〜１：１）上で最終精製した後、７ｃを無色固体（５．１３ｇ、６３％）として単離した。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.09 (s, 1H), 11.56 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 5.80 (dd, J=9.79, 2.76 Hz, 1H), 4.60 (t, J=6.27 Hz, 1H), 4.09 (d, J=8.78 Hz, 1H), 3.71 (d, J=8.78 Hz, 1H), 3.48 (d, J=6.27 Hz, 2H), 2.98 (br d, J=10.04 Hz, 1H), 2.89-2.65 (m, 3H), 2.43 (t, J = 10.42 Hz, 1H), 2.34 (d, J=11.29 Hz, 1H), 1.13 (d, J=6.78 Hz, 6H), 1.08-1.01 (m, 21H), 0.99 (d, J=6.27 Hz, 6H).
【０４３３】
７ｄ：９−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−（ヒドロキシメチル）−４−イソプロピル−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン−２−イル］−１Ｈ−プリン−６−オン（５ｄから）
出発化合物５ｄ４．２７ｇ（９．１ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ１００ｍｌに溶解した。ＮＥｔ3１．８４ｇ（２．５３ｍｌ、１８．１ｍｍｏｌ）、ＡｃＯＨ５．４４ｇ（５．１９ｍｌ、９０．６ｍｍｏｌ）およびイソプロピルアミン８０８ｍｇ（１．１７ｍｌ、１３．６ｍｍｏｌ）を添加した後、溶液を室温で１時間撹拌した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム１．８０ｇ（２７．２ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を室温で３０分間、６０℃でさらに３０分間撹拌し、そのときに完全な変換が検出された。反応混合物に、飽和ＮａＨＣＯ3溶液１００ｍｌを添加し、ＭｅＯＨを蒸発させた。残った水相をＥｔＯＡｃ２５０ｍｌで抽出した。有機層を飽和ＮａＨＣＯ3およびＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させた。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０〜５％ＭｅＯＨ）により精製して、表題化合物７ｄを無色固体（２．６８ｇ、６１．７％）として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．８０
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝４８０．４
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.35 (br s, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 5.91 (dd, J=9.90, 2.81 Hz, 1H), 4.57 (t, J=6.05 Hz, 1H), 4.11 (d, J=9.05 Hz, 1H), 3.77 (d, J=9.05 Hz, 1H), 3.40 - 3.50 (m, 2H), 2.94 - 3.02 (m, 1H), 2.67 - 2.87 (m, 2H), 2.54 - 2.63 (m, 1H), 2.33 (d, J=11.37 Hz, 1H), 0.97 - 1.11 (m, 27H).
【０４３４】
〔実施例Ａ．２〕
合成スキーム２
【化４６】
2021517126.tif 000048
【０４３５】
８：［（２Ｓ，６Ｒ）−６−（２，４−ジオキソピリミジン−１−イル）−４−イソプロピル−２−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）−モルホリン−２−イル］メチルベンゾエート
出発物質７ｂ６．００ｇ（１３．２ｍｍｏｌ）を、乾燥ピリジン８０ｍｌに溶解した。室温で、塩化ベンゾイル２．８０ｇ（２．３２ｍｌ、１９．７５ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を２０時間撹拌して完全な変換を達成した。溶媒を蒸発させた後、残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、１０％クエン酸溶液２×１００ｍｌ、Ｈ2Ｏ、飽和ＮａＨＣＯ3およびＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させて、表題化合物７．９９ｇ（定量的）を無色泡状物として得、これをさらに精製することなく使用した。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．２３
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝５６０．５
【０４３６】
９：［（２Ｓ，６Ｒ）−６−（４−アミノ−２−オキソ−ピリミジン−１−イル）−４−イソプロピル−２−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）−モルホリン−２−イル］メチルベンゾエート
出発化合物８（粗製物７．９９ｇ、１３．２ｍｍｏｌ）を、乾燥ＡＣＮ２００ｍｌに溶解した。ＮＥｔ3２２．８８ｇ（３１．４ｍｌ、２２３．８ｍｍｏｌ）および１Ｈ−１，２，４−トリアゾール１１．１３ｇ（１５８．０ｍｍｏｌ）を添加した後、溶液を０℃に冷却し、激しく撹拌しながら乾燥ＡＣＮ５０ｍｌ中のＰＯＣｌ3６．０６ｇ（３．６８ｍｌ、３９．５ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。氷浴を取り外し、溶液を２時間撹拌した。減圧下で、溶媒約２００ｍｌを蒸発させ、残った溶液を飽和ＮａＣＨＯ3溶液／Ｈ2Ｏ（１：１）５００ｍｌに注ぎ入れた。水性混合物をＤＣＭ１５０ｍｌで３回抽出し、合わせた有機抽出物をＭｇＳＯ4で脱水した。溶媒を蒸発させた後、粗中間体（９．１ｇ、黄色泡状物）をＡＣＮ２００ｍｌに溶解し、アンモニア水溶液（３２％）１００ｍｌを添加した。反応溶液を室温で１８時間撹拌し、そのときに完全な変換が達成された。溶媒を減圧下で除去し、Ｈ2Ｏ１００ｍｌを残留物に添加した。ＤＣＭ２×２００ｍｌで抽出し、有機相をＭｇＳＯ4で脱水し、溶媒を蒸発させて、粗化合物９  ７．６５ｇ（定量的）を得、これをさらに精製することなく使用した。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．０２
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝５５７．４
【０４３７】
１０：［（２Ｓ，６Ｒ）−６−（４−ベンズアミド−２−オキソ−ピリミジン−１−イル）−４−イソプロピル−２−（トリイソプロピルシリルオキシ−メチル）モルホリン−２−イル］メチルベンゾエート
出発化合物９  ７．６４ｇ（１３．２ｍｍｏｌ）を、乾燥ピリジン１３０ｍｌに溶解した。室温で、塩化ベンゾイル２．９０ｇ（２．４０ｍｌ、２０．５ｍｍｏｌ）を添加し、溶液を２０時間撹拌し、そのときに完全な変換が達成された。溶媒を蒸発させた後、残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、１０％クエン酸溶液２×１００ｍｌ、Ｈ2Ｏ、飽和ＮａＨＯＣ3およびＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させて、粗生成物８．８８ｇを得、これをシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）により精製して、表題化合物（１０）６．６９ｇ（７６．７％）を薄黄色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．２９
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝６６１．５
【０４３８】
７ｆ：Ｎ−［１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−（ヒドロキシメチル）−４−イソプロピル−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン−２−イル］−２−オキソ−ピリミジン−４−イル］ベンズアミド
化合物１０  ３．６３ｇ（５．４８ｍｍｏｌ）を、ピリジン／ＥｔＯＨ（２：１）４５ｍｌに溶解した。０℃で、１Ｍ  ＮａＯＨ溶液２７．４ｍｌ（２７．４ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を０℃で３０分間、室温でさらに３時間撹拌して完全な変換を達成した。ｐＨを、クエン酸一水和物（およそ２．０ｇ）を添加することにより約６に調整した。有機溶媒を３５℃で除去し、水溶液をＥｔＯＡｃで抽出した。有機相を１０％クエン酸溶液１５０ｍｌ、Ｈ2Ｏ、飽和ＮａＨＣＯ3およびＮａＣｌ溶液で３回洗浄した。ＭｇＳＯ4で脱水した後、溶媒を蒸発させた。得られた粗生成物（２．７３ｇ、黄色泡状物）をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン中１０〜７０％ＥｔＯＡｃ）により精製して、表題化合物（７ｆ）２．２５ｇ（７３．４％）を薄黄色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．８９
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝５５９．５
【０４３９】
〔実施例Ａ．３〕
合成スキーム３
【化４７】
2021517126.tif 000049
【０４４０】
１１：［（２Ｓ，６Ｒ）−４−イソプロピル−６−（６−オキソ−１Ｈ−プリン−９−イル）−２−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン−２−イル］メチルベンゾエート
出発物質７ｄ２．６８ｇ（５．５９ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ２．５３ｇ（３．４２ｍｌ、１９．５５ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ０．３４ｇ（２．７９ｍｍｏｌ）を、乾燥ＤＣＭ５０ｍｌに溶解した。室温で、塩化ベンゾイル１．１８ｇ（０．９７ｍｌ、８．３８ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を１８時間撹拌して完全な変換を達成した。ＭｅＯＨ２０ｍｌを添加した後、溶媒を蒸発させ、残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、１０％クエン酸溶液２×１００ｍｌ、飽和ＮａＨＣＯ3およびＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機層相をＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させて、表題化合物（１１）３．４７ｇ（定量的、粗製）を無色泡状物として得、これをさらに精製することなく使用した。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．１８
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝５８４．４
【０４４１】
１２：［（２Ｓ，６Ｒ）−６−（６−クロロプリン−９−イル）−４−イソプロピル−２−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン−２−イル］メチルベンゾエート
出発化合物１１（粗製物２．８６ｇ、４．９０ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン（１．２８ｇ、１．３４ｍｌ、１０．５３ｍｍｏｌ）およびテトラエチルアンモニウムクロリド（１．２４ｇ、７．３５ｍｍｏｌ）を、乾燥ＡＣＮ３０ｍｌに溶解した。撹拌しながら、ＰＯＣｌ3１．７０ｇ（１．０３ｍｌ、１１．０７ｍｍｏｌ）を室温で添加し、溶液を３時間還流させた。室温に冷却した後、混合物を飽和ＮａＨＣＯ3溶液１５０ｍｌに注ぎ入れ、固体ＮａＨＣＯ3３．０ｇをさらに添加した。反応物を３０分間撹拌し、ＤＣＭ１００ｍｌで抽出した。層を分離し、水相をＤＣＭ５０ｍｌで２回抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させた。粗生成物をシリカゲル（ｎ−ヘプタン中０〜５０％ＥｔＯＡｃ）上で精製した後、表題化合物１２  １．５２ｇ（５１．４％）を薄黄色泡状物として単離することができた。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．３３
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝６０２．４
【０４４２】
１３：［（２Ｓ，６Ｒ）−６−（６−ベンズアミドプリン−９−イル）−４−イソプロピル−２−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン−２−イル］メチルベンゾエート
クロロプリン１２（１．５４ｇ、２．５６ｍｍｏｌ）、ベンズアミド（６４６ｍｇ、３．８４ｍｍｏｌ）およびＣｓ2ＣＯ3（１．２５ｇ、３．８４ｍｍｏｌ）を、ジオキサン３０ｍｌに溶解した。Ｐｄ（ＯＡｃ）2（４３ｍｇ、１９１．８μｍｏｌ）およびキサントホス（１１１ｍｇ、１９１．８μｍｏｌ）を添加した後、反応溶液をアルゴン下、１００℃で１時間撹拌して完全な変換を達成した。反応物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃ５０ｍｌで希釈した。溶液を濾過し、濾液を真空中で蒸発させた。粗生成物（２．４８ｇ）をシリカゲル（ｎ−ヘプタン中１０〜１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、所望の化合物１３  １．２９ｇ（７３．４％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．２６
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝６８７．６
【０４４３】
７ｅ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−（ヒドロキシメチル）−４−イソプロピル−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン−２−イル］プリン−６−イル］ベンズアミド
ベンゾエート１３  １．００ｇ（１．４６ｍｍｏｌ）を、７ｆについて記載したプロトコールに従って鹸化した。クロマトグラフィー精製することなく、表題化合物７ｅ７３１ｍｇ（８６．２％、粗製）を薄黄色泡状物として単離することができた。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．９７
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝５８３．５
【０４４４】
〔実施例Ａ．４〕
合成スキーム４
【化４８】
2021517126.tif 000050
【０４４５】
１４ａ：１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−イソプロピル−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
第一級アルコール７ａ８１０ｍｇ（１．７ｍｍｏｌ）およびＮＥｔ3８７３ｍｇ（１．２０ｍｌ、８．６ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ３０ｍｌに溶解した。室温で、ＤＭＴ−Ｃｌ７１６ｍｇ（２．１ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を室温で２時間撹拌した。ＤＭＴ−Ｃｌをさらに０．６当量添加し、終夜撹拌した後、反応物は完全な変換を示した。粗生成物の溶液をシリカカラムに直接移し、ｎ−ヘプタン中０〜６５％ＥｔＯＡｃで精製して、所望の生成物（１４ａ）１．１９ｇ（８９．０％）を薄黄色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．３８
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝７７２．５
【０４４６】
１４ｂ：１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−イソプロピル−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン−２−イル］ピリミジン−２，４−ジオン
７ｂ１．００ｇ（２．２ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ１．４２ｇ（１．９２ｍｌ、１１．０ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ３０ｍｌに溶解した。ＤＭＴ−クロリド９４８ｍｇ（２．７ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を室温で終夜撹拌して完全な変換を達成した。Ｉｓｏｌｕｔｅ吸着剤を添加した後、有機溶媒を除去し、固体物質をシリカ（ｎ−ヘプタン＋０．５％ＮＥｔ3で事前調整、ｎ−ヘプタン中０〜７５％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、ＤＭＴ保護生成物（１４ｂ）１．６１ｇ（９６．８％）を薄黄色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．３４
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝７５８．３
【０４４７】
１４ｃ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−イソプロピル−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン−２−イル］−６−オキソ−１Ｈ−プリン−２−イル］−２−メチル−プロパンアミド
出発化合物７ｃ１．００ｇ（１．７７ｍｍｏｌ）を、１４ａについて記載したプロトコールに従って保護した。シリカゲル（ＤＣＭ中０〜５％ＭｅＯＨ）上で精製した後、所望の生成物（１４ｃ）を黄色泡状物（１．４６ｇ、９４．８％）として単離した。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝３．６６
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝８６７．６
【０４４８】
１４ｅ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−イソプロピル−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン−２−イル］プリン−６−イル］ベンズアミド
出発物質７ｅ９５０ｍｇ（１．６３ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ／ピリジン（１：１）１０ｍｌに溶解した。ＤＣＭ２０ｍｌ中のＤＭＴ−Ｃｌ７３３ｍｇ（２．１２ｍｍｏｌ）の溶液を添加した後、反応物を１．５時間撹拌して完全な変換を達成した。溶媒を蒸発させた後、残留物をＥｔＯＡｃに溶かし、Ｈ2Ｏで洗浄し、１０％クエン酸溶液および飽和ＮａＨＣＯ3溶液で２回洗浄した。ＭｇＳＯ4で脱水した後、溶媒を除去し、粗生成物をシリカ（ｎ−ヘプタン＋０．５％ＮＥｔ3で事前処理；ｎ−ヘプタン中０〜５０％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、ＤＭＴ−エーテル１４ｅ１．２０ｇ（８３．２％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．３８
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝８８３．５
【０４４９】
１４ｆ：Ｎ−［１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−イソプロピル−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン−２−イル］−２−オキソ−ピリミジン−４−イル］ベンズアミド
出発物質７ｆ２．２５ｇ（４．０２ｍｍｏｌ）を、１４ｅについてのプロトコールに従って乾燥ピリジン中で保護した。シリカ上での最終クロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン＋０．５％ＮＥｔ3で事前処理；ｎ−ヘプタン中０〜８０％ＥｔＯＡｃ）の後、表題化合物（１４ｆ）３．３５ｇ（９６．９％）を黄色泡状物として単離した。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．４０
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝８６１．６
【０４５０】
１５ａ：１−［（２Ｒ，６Ｒ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（ヒドロキシメチル）−４−イソプロピル−モルホリン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
ＴＩＰＳ保護モルホリン１４ａ１．１８ｇ（１．５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン６．７４ｇ（９．２６ｍｌ、６６．０ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ３０ｍｌに溶解した。室温で、ＮＥｔ3・３ＨＦ１２．２３ｇ（１２．４ｍｌ、７３．６ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を６５℃で１時間撹拌した。室温で終夜静置した後、ＮＭＰ１０ｍｌを添加し、反応物を６５℃でさらに１４時間撹拌して完全な変換を達成した。溶媒を真空中で濃縮し、残ったＮＭＰ溶液をＨ2Ｏ／飽和ＮａＨＣＯ3溶液混合物（１：２）に添加した。水溶液をＥｔＯＡｃで抽出し、有機層をＨ2Ｏおよび飽和ＮａＣｌ溶液で３回洗浄した。ＭｇＳＯ4で脱水した後、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン中１％ＮＥｔ3で事前調整、ｎ−ヘプタン中１０〜１００％酢酸エチル）により精製して、脱シリル化生成物１５ａ６４５ｍｇ（６８．８％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．６７
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝６１６．４
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.36 (s, 1H), 7.53 - 7.58 (m, 1H), 7.41 (d, J=7.34 Hz, 2H), 7.20 - 7.31 (m, 7H), 6.87 (d, J=8.80 Hz, 4H), 5.82 (dd, J=9.66, 2.93 Hz, 1H), 4.61 (br s, 1H), 3.67 - 3.79 (m, 8H), 3.07 (s, 1H), 2.97 - 3.10 (m, 1H), 2.80 (br d, J=9.78 Hz, 1H), 2.63 - 2.76 (m, 2H), 2.17 - 2.31 (m, 2H), 1.69 (s, 3H), 0.95 (d, J=6.60 Hz, 6H).
【０４５１】
１５ｂ：１−［（２Ｒ，６Ｒ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（ヒドロキシメチル）−４−イソプロピル−モルホリン−２−イル］ピリミジン−２，４−ジオン
１４ｂ１．６０ｇ（２．１ｍｍｏｌ）を、ＮＭＰ２０ｍｌに溶解した。ＮＥｔ3４．７３ｇ（６．５０ｍｌ、４６．３ｍｍｏｌ）およびＮＥｔ3・３ＨＦ８．４１ｇ（８．５０ｍｌ、５０．６ｍｍｏｌ）を添加した後、混合物を室温で１５時間、続いて６５℃で５時間撹拌した。混合物を室温まで冷却し、続いて飽和ＮａＨＣＯ3溶液２５０ｍｌおよびＨ2Ｏ２５０ｍｌを添加した。ＥｔＯＡｃ２５０ｍｌで抽出した後、有機層をＨ2Ｏ（２×）および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ4で脱水し、シリカ（ｎ−ヘプタン＋０．５％ＮＥｔ3で事前調整、ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、所望のアルコール１５ｂを無色泡状物（１．１６ｇ、９１．１％）として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．６３
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝６０２．３
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.36 (br s, 1H), 7.63 (d, J=8.07 Hz, 1H), 7.40 (br d, J=7.82 Hz, 2H), 7.20 - 7.33 (m, 7H), 6.88 (d, J=8.56 Hz, 4H), 5.81 (br d, J=7.34 Hz, 1H), 5.62 (d, J=8.07 Hz, 1H), 4.62 (br s, 1H), 3.78 - 3.95 (m, 1H), 3.68 - 3.76 (m, 7H), 3.11 (d, J=9.05 Hz, 1H), 2.96 (br d, J=9.05 Hz, 1H), 2.82 (br d, J=10.27 Hz, 1H), 2.60 - 2.76 (m, 2H), 2.10 - 2.22 (m, 2H), 0.94 (d, J=6.36 Hz, 6H).
【０４５２】
１５ｃ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｒ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（ヒドロキシメチル）−４−イソプロピル−モルホリン−２−イル］−６−オキソ−１Ｈ−プリン−２−イル］−２−メチル−プロパンアミド
ＴＩＰＳ保護アルコール１４ｃ１．４４ｇ（１．６６ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ１７ｍｌに溶解した。６５％Ｐｙｒ．・ＨＦ溶液１．２７ｇ（１．１５ｍｌ、８．３０ｍｍｏｌ）を添加した後、反応混合物を室温で１時間撹拌した。激しく撹拌しながら、ＮａＨＣＯ3０．９ｇおよびＨ2Ｏ１０ｍｌを添加し、撹拌を２時間続けた。ＴＨＦを除去し、水溶液をＤＣＭ／ｉＰｒＯＨ（４：１）で１０回抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させて、１５ｃ０．８３ｇ（７０．１％、粗製）を得、これをさらに精製することなく次の工程で使用した。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．１１
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝７０９．５
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.09 (s, 1H), 11.67 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.38 (d, J=7.34 Hz, 2H), 7.18 - 7.30 (m, 7H), 6.85 (d, J=8.80 Hz, 4H), 5.92 (dd, J=8.99, 3.00 Hz, 1H), 4.64 (t, J=5.14 Hz, 1H), 3.71 - 3.84 (m, 8H), 2.90 - 3.08 (m, 3H), 2.55 - 2.83 (m, 4H), 2.31 - 2.47 (m, 1H), 1.12 (dd, J=6.79, 3.36 Hz, 6H), 0.96 (d, J=6.48 Hz, 6H).
【０４５３】
１５ｅ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｒ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（ヒドロキシメチル）−４−イソプロピル−モルホリン−２−イル］プリン−６−イル］ベンズアミド
出発化合物１４ｅ１．２０ｇ（１．３５ｍｍｏｌ）およびＮＥｔ3１．９１ｇ（２．６３ｍｌ、１８．９０ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ２０ｍｌに溶解した。ＮＥｔ3・３ＨＦ３．５９ｇ（３．６３ｍｌ、２１．６０ｍｍｏｌ）を添加した後、溶液を６５℃で加熱し、続いてさらなるＮＥｔ3０．９５ｇ（１．３２ｍｌ、９．４５ｍｍｏｌ）およびＮＥｔ3・３ＨＦ１．８０ｇ（１．８２ｍｌ、１０．８ｍｍｏｌ）を添加した。完全な変換が達成されるまで（およそ１０時間）反応混合物を６５℃で撹拌した。室温に冷却した後、混合物をＨ2Ｏ／飽和ＮａＨＣＯ3溶液（１：１）１５０ｍｌに注ぎ入れ、３０分間撹拌した。水溶液を５０ＤＣＭで３回抽出し、ＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させた。シリカゲルクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン中１０〜１００％ＥｔＯＡｃ）の後、脱保護生成物１５ｅ８３５ｍｇ（８４．９％）を無色泡状物として単離した。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．７４
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝７２９．５
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.21 (br s, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.04 (d, J=7.62 Hz, 2H), 7.62 - 7.67 (m, 1H), 7.52 - 7.58 (m, 2H), 7.37 (d, J=7.34 Hz, 2H), 7.15 - 7.29 (m, 7H), 6.82 (d, J=7.95 Hz, 4H), 6.16 (dd, J=9.17, 2.93 Hz, 1H), 4.67 (t, J=5.20 Hz, 1H), 3.86 - 3.96 (m, 1H), 3.79 (dd, J=11.00, 5.87 Hz, 1H), 3.69 - 3.73 (m, 6H), 3.01 - 3.15 (m, 2H), 2.90 - 2.99 (m, 2H), 2.68 - 2.84 (m, 2H), 2.40 (m, 1H), 1.00 (d, J=6.60 Hz, 6H).
【０４５４】
１５ｆ：Ｎ−［１−［（２Ｒ，６Ｒ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（ヒドロキシメチル）−４−イソプロピル−モルホリン−２−イル］−２−オキソ−ピリミジン−４−イル］ベンズアミド
出発化合物１４ｆ３．３５ｇ（３．８８ｍｍｏｌ）を、１５ｅについて記載した通りにＮＥｔ3・３ＨＦで処理した。７０℃で２０時間の反応時間の後、完全な変換が達成された。１５ｅの通りの後処理および最終精製をして、表題化合物１５ｆ２．５７ｇ（９３．７％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．７９
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝７０５．４
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.28 (br s, 1H), 8.10 (br d, J=7.58 Hz, 1H), 8.00 (d, J=7.69 Hz, 2H), 7.58 - 7.67 (m, 1H), 7.51 (t, J=7.64 Hz, 2H), 7.21 - 7.43 (m, 10H), 6.89 (d, J=8.80 Hz, 4H), 5.93 (dd, J=9.41, 2.69 Hz, 1H), 4.66 (t, J=5.26 Hz, 1H), 3.91 (dd, J=10.94, 4.22 Hz, 1H), 3.71 - 3.77 (m, 7H), 3.19 (d, J=9.05 Hz, 1H), 2.92 - 3.06 (m, 2H), 2.65 - 2.79 (m, 2H), 2.18 (d, J=11.49 Hz, 1H), 2.07 (t, J= 10.21 Hz, 1H), 0.95 (d, J=6.36 Hz, 6H).
【０４５５】
１６ａ：３−［［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−イソプロピル−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−２−イル］メトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシ−プロパンニトリル
乾燥ＤＣＭ１５ｍｌ中の１５ａ６２４ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン４０１．０ｍｇ（５１３μｌ、３．０ｍｍｏｌ）の溶液に、２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルクロロホスホルアミダイト３７０．９ｍｇ（３４９．６μｌ、１．５ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下、室温で添加した。１時間撹拌した後、反応物を、ｎ−ブタノール２００μｌを添加することによりクエンチし、撹拌を１０分間続けた。反応溶液をＨ2Ｏで洗浄し、水相をＤＣＭで１回抽出した。有機層をＭｇＳＯ4で脱水した後、溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン中０．５％ＮＥｔ3で事前調整、ｎ−ヘプタン中１０〜１００％メチル−ｔｅｒｔ．ブチルエーテル）により精製して、所望のホスホルアミダイト（ジアステレオマーの混合物）１６ａ６６８ｍｇ（８０．８％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｂ−２：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝０．８２
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ］+＝７３３．１（Ｍ−iＰｒ2Ｎ＋ＯＨ＋Ｈ+）
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.37,11.36 (2 x s, 1H), 7.60, 7.56 (2 x s, 1H), 7.41 (m, 2H), 7.20 - 7.32 (m, 7H), 6.83 - 6.90 (m, 4H), 5.88 (m, 1H), 3.84 - 4.05 (m, 2H), 3.74 (s, 6H), 3.54 - 3.73 (m, 2H), 3.40 - 3.54 (m, 2H), 3.14 (m, 1H), 2.95 - 3.05 (m, 1H), 2.57 - 2.84 (m, 5H), 2.15 - 2.37 (m, 2H), 1.76, 1.73 (2 x s, 3H), 0.93 - 1.14 (m, 18H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 148,1, 147,6.
【０４５６】
１６ｂ：３−［［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（２，４−ジオキソピリミジン−１−イル）−４−イソプロピル−モルホリン−２−イル］メトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシプロパンニトリル
１６ａについて記載したプロトコールに従って表題化合物を製造した。第一級アルコール１５ｂ１．９５ｇ（３．２ｍｍｏｌ）から出発して、シリカゲル（ｎ−ヘプタン＋０．５％ＮＥｔ3で事前調整、ｎ−ヘプタン中０〜８０％ＥｔＯＡｃ）上で精製した後、所望のホスホルアミダイト１６ｂ１．７０ｇ（６５．７％）を無色泡状物として単離した。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．８５
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ］+＝７１９．２（Ｍ−iＰｒ2Ｎ＋ＯＨ＋Ｈ+）
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.36 (br s, 1H), 7.67, 7.63 (2 x d, J=8.19 Hz, 1H), 7.35 - 7.44 (m, 2H), 7.20 - 7.32 (m, 7H), 6.84 - 6.89 (m, 4H), 5.81 - 5.89 (m, 1H), 5.67, 5.63 (2 x d, J=8.13 Hz, 1H), 3.89 - 4.08 (m, 2H), 3.73 (s, 6H), 3.54 - 3.72 (m, 2H), 3.41 -3.54 (m, 2H), 3.16 (d, J=9.05 Hz, 1H), 2.96 (t, J=9.05 Hz, 1H), 2.84 (br d, J=10.15 Hz, 1H), 2.55 - 2.76 (m, 4H), 2.10 - 2.33 (m, 2H), 0.89 - 1.12 (m, 18H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 148,3, 147,6.
【０４５７】
１６ｃ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−［［２−シアノエトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］−４−イソプロピル−モルホリン−２−イル］−６−オキソ−１Ｈ−プリン−２−イル］−２−メチル−プロパンアミド
アルコール１５ｃ１００ｍｇ（１４１μｍｏｌ）、モレキュラーシーブ（４Å）０．２ｇおよびジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド１２．７ｍｇ（７０μｍｏｌ）を、乾燥ＤＣＭ２．５ｍｌに溶解した。Ａｒ雰囲気下で、２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスホロ−ジアミダイト４２．８ｍｇ（４５μｌ、１３８μｍｏｌ）を添加し、溶液を室温で２時間撹拌して完全な変換を達成した。飽和ＮａＨＣＯ3溶液を添加した後、有機相を分離し、水相をＤＣＭで抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させた。粗生成物をシリカ（ＤＣＭ＋０．５％ＮＥｔ3で事前調整、ＤＣＭ中０〜１０％ＭｅＯＨ）上で精製して、表題化合物（１６ｃ）８７ｍｇ（６７．９％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．５０、２．５２
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ−iＰｒ2Ｎ＋ＯＨ＋Ｈ］+＝８２８．３
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.08 (br s, 1H), 11.62 (br s, 1H), 8.09, 8.04 (2 x s, 1H), 7.33 - 7.40 (m, 2H), 7.18 - 7.29 (m, 7H), 6.81 - 6.87 (m, 4H), 5.91 (m, 1H), 3.93 -4.07 (m, 2H), 3.73 (s, 6H), 3.54 - 3.72 (m, 2H), 3.39 - 3.50 (m, 2H), 3.11 (m, 1H), 2.92 -3.07 (m, 2H), 2.54 - 2.81 (m, 6H), 2.26 - 2.38 (m, 1H), 0.94 - 1.16 (m, 18H), 0.83 - 0.91 (m, 6H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,5, 146,7.
【０４５８】
１６ｅ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−［［２−シアノエトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］−４−イソプロピル−モルホリン−２−イル］プリン−６−イル］ベンズアミド
１５ｅ８２０ｍｇ（１．１３ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド５８４ｍｇ（３．３８ｍｍｏｌ）を、乾燥ＤＣＭ２０ｍｌに溶解した。Ａｒ雰囲気下で、２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスホロジアミダイト５２４ｍｇ（１．６９ｍｍｏｌ）を添加し、溶液を室温で撹拌した。終夜撹拌した後、Ｈ2Ｏ５０ｍｌを添加し、層を分離した。水層をＤＣＭ３０ｍｌで１回抽出し、合わせた有機相をＭｇＳＯ4で脱水した。溶媒を蒸発させた後、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン＋０．５％ＮＥｔ3で事前調整、ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＭＴＢ−エーテル／ＤＣＭ（１：１））により精製して、表題化合物（１６ｅ）９１３ｍｇ（８７．３％）を無色固体として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.19 (s, 1H), 8.76, 8.74 (2 x s, 1H), 8.61, 8.59 (2 x s, 1H), 8.04 (d, J=8.09 Hz, 2H), 7.64 (t, J=7.37 Hz, 1H), 7.51 - 7.60 (m, 2H), 7.37 (m, 2H), 7.16 - 7.28 (m, 7H), 6.77 - 6.84 (m, 4H), 6.19 (m, 1H), 3.98 - 4.15 (m, 2H), 3.71 (2 x s, 6H), 3.56 - 3.69 (m, 2H), 3.41 - 3.56 (m, 2H), 3.03 - 3.17 (m, 2H), 2.89 - 3.01 (m, 2H), 2.74 - 2.88 (m, 2H), 2.70 (t, J=6.15 Hz, 1H), 2.59 (m, 1H), 2.36 (m, 1H), 0.92 - 1.18 (m, 18H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,0, 146,7.
【０４５９】
１６ｆ：Ｎ−［１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−［［２−シアノエトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］−４−イソプロピル−モルホリン−２−イル］−２−オキソ−ピリミジン−４−イル］ベンズアミド
第一級アルコール１５ｆ５５０ｍｇ（０．７８ｍｍｏｌ）を、１６ｅについて記載したプロトコールに従ってホスフィチル化した。シリカゲル（ｎ−ヘプタン＋０．５％ＮＥｔ3で事前調整、ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＭＴＢ−エーテル／ＤＣＭ（１：１））上でクロマトグラフィー精製した後、１６ｆ５６０ｍｇ（７９．３％）を無色泡状物として単離した。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.29 (br s, 1H), 8.12 (2 x d, J=7.50 Hz, 1H), 7.98 - 8.04 (m, 2H), 7.63 (t, J=7.40 Hz, 1H), 7.48 - 7.55 (m, 2H), 7.36 - 7.45 (m, 3H), 7.21 - 7.35 (m, 7H), 6.88 (2 x d, J=8.89, 4H), 5.95, 6.01 (2 x m, 1H), 3.89 - 4.14 (m, 2H), 3.74, 3.75 (2 x s, 6H), 3.55 - 3.72 (m, 2H), 3.39 - 3.55 (m, 2H), 3.24 (d, J=8.85 Hz, 1H), 2.93 -3.05 (m, 2H), 2.68 - 2.87 (m, 3H), 2.55 - 2.64 (m, 1H), 2.10 - 2.23 (m, 2H), 0.90 - 1.22 (m, 18H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,4, 146,7.
【０４６０】
〔実施例Ａ．５〕
合成スキーム５
【化４９】
2021517126.tif 000051
【０４６１】
１７ａ：［（２Ｓ，６Ｒ）−４−イソプロピル−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）−２−（トリイソプロピルシリルオキシ−メチル）モルホリン−２−イル］メチルベンゾエート
遊離アルコール７ａ８１０ｍｇ（１．７ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ２０ｍｌに溶解した。ＤＩＰＥＡ１．１４ｇ（１．４５ｍｌ、８．６ｍｍｏｌ）および塩化ベンゾイル２９４ｍｇ（２４３μｌ、２．１ｍｍｏｌ）を添加した後、溶液を室温で２時間撹拌した。完全な変換に到達させるために、さらなる塩化ベンゾイル０．２当量を添加し、撹拌を１８時間続けた。反応溶液を、ｎ−ヘプタン中０〜６５％ＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲルカラムに直接移した。ベンゾイル化生成物１７ａ７２６ｍｇ（７３．３％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．２９
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝５７４．３
【０４６２】
１７ｂ：［（２Ｓ，６Ｒ）−６−（３−ベンゾイル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）−４−イソプロピル−２−（トリイソプロピルシリルオキシ−メチル）モルホリン−２−イル］メチルベンゾエート
第一級アルコール７ｂ１．４５ｇ（３．１８ｍｍｏｌ）を、１７ａに記載した通りに塩化ベンゾイルで処理して、モノ−およびジベンジル化生成物の混合物を得た。したがって、反応混合物を蒸発させ、粗生成物をピリジン３０ｍｌに溶解した。塩化ベンゾイル５６５ｍｇ（３．９８ｍｍｏｌ）および触媒量のＤＭＡＰを添加した後、反応溶液を室温で４時間撹拌した。溶媒を蒸発させた後、残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、１０％クエン酸および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ4で脱水し、溶媒を除去した。シリカ上での最終クロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン中０〜３５％ＥｔＯＡｃ）により、ジベンゾイル化生成物１７ｂ１．６４ｇ（７７．８％）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝３．６７
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝６６４．４
【０４６３】
１７ｃ：［（２Ｓ，６Ｒ）−４−イソプロピル−６−［２−（２−メチルプロパノイルアミノ）−６−オキソ−１Ｈ−プリン−９−イル］−２−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン−２−イル］メチルベンゾエート
出発化合物７ｃ０．８９ｇ（１．５８ｍｍｏｌ）を、ピリジン３０ｍｌに溶解した。塩化ベンゾイル２４６ｍｇ（２０３μｌ、１．７３ｍｍｏｌ）を添加した後、反応溶液を室温で終夜撹拌し、そのときに完全な変換が検出された。溶媒を真空中で除去し、残留物をＥｔＯＡｃに溶解した。Ｈ2Ｏで洗浄した後、有機相を分離し、ＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させた。シリカ（ＤＣＭ中０〜５％ＭｅＯＨ）上で最終精製して、表題化合物１７ｃを無色泡状物（１．０１ｇ、９５．４％）として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝３．２８
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝６６９．２
【０４６４】
１８ａ：［（２Ｒ，６Ｒ）−２−（ヒドロキシメチル）−４−イソプロピル−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−２−イル］メチルベンゾエート
ＴＨＦ１５ｍｌ中の１７ａ７２０ｍｇ（１．２５ｍｍｏｌ）の溶液を、ピリジン−フッ化水素１．３４ｇ（１．２２ｍｌ、８．８ｍｍｏｌ）で処理した。室温で１時間撹拌した後、反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ3溶液で処理してｐＨ７．５に到達させた。溶媒を減圧下で濃縮し、水溶液をＤＣＭで２回抽出した。有機層をＭｇＳＯ4で脱水し、溶媒を除去した。粗生成物をトルエン５０ｍｌと２回共蒸留し、残った残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）により精製して、所望の生成物（１８ａ）５０２ｍｇ（９５．８％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．３０
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝４１８．２
【０４６５】
１８ｂ：［（２Ｒ，６Ｒ）−６−（３−ベンゾイル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）−２−（ヒドロキシメチル）−４−イソプロピル−モルホリン−２−イル］メチルベンゾエート
シリルエーテル１７ｂ１．６４ｇ（２．４７ｍｍｏｌ）を、１８ａについて記載したプロトコールに従って脱シリル化して、所望の生成物１８ｂ１．３３ｇを粗生成物として得、これをクロマトグラフィー精製することなく次の工程に使用した。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．８１
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝５０８．２
【０４６６】
１８ｃ：［（２Ｒ，６Ｒ）−２−（ヒドロキシメチル）−４−イソプロピル−６−［２−（２−メチルプロパノイルアミノ）−６−オキソ−１Ｈ−プリン−９−イル］モルホリン−２−イル］メチルベンゾエート
１７ｃ１．０ｇ（１．４９ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ１０ｍｌに溶解した。ＮＥｔ3１．５３ｇ（２．１０ｍｌ、１５．０ｍｍｏｌ）およびＮＥｔ3・３ＨＦ１．４８ｇ（１．４９ｍｌ、９．０ｍｍｏｌ）を添加した後、反応溶液を９０℃で２時間撹拌した。混合物を室温に冷却した後、ＮａＨＣＯ3２．５ｇおよびＨ2Ｏ１０ｍｌを添加し、反応混合物を２時間撹拌した。溶媒を真空中で蒸発させ、残留物を、ＤＣＭ／ｉＰｒＯＨ２５ｍｌに溶解し、Ｈ2Ｏで洗浄した。有機相を分離し、ＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させた。粗生成物をシリカ（ＤＣＭ中０〜１０％ＭｅＯＨ）上で精製して、脱シリル化生成物１８ｃ２４５ｍｇ（３２．０％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．４５
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝５１３．１
【０４６７】
１８ｅ：［（２Ｒ，６Ｒ）−６−（６−ベンズアミドプリン−９−イル）−２−（ヒドロキシメチル）−４−イソプロピル−モルホリン−２−イル］メチルベンゾエート
シリルエーテル１３  １．２３ｇ（１．７９ｍｍｏｌ）を、１８ａについて記載したプロトコールに従って脱保護して、シリカゲルクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）の後に、表題化合物（１８ｅ）９３９ｍｇ（９８．８％）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．６０
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝５２９．３
【０４６８】
１８ｆ：［（２Ｒ，６Ｒ）−６−（４−ベンズアミド−２−オキソ−ピリミジン−１−イル）−２−（ヒドロキシメチル）−４−イソプロピル−モルホリン−２−イル］メチルベンゾエート
シリルエーテル１０  ３．６３ｇ（５．４８ｍｍｏｌ）を、１８ａについて記載したプロトコールに従って脱保護して、シリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ）の後に、表題化合物（１８ｆ）２．４５（８８．４％）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．５３
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝５０７．３
【０４６９】
１９ａ：［（２Ｒ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−イソプロピル−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−２−イル］メチルベンゾエート
出発化合物１８ａ４９７ｍｇ（１．２ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ１５ｍｌに溶解した。ＤＩＰＥＡ５０２ｍｇ（６４３μｌ、３．８ｍｍｏｌ）およびＤＭＴ−Ｃｌ６５９ｍｇ（１．９０ｍｍｏｌ）を添加した後、反応溶液を室温で２時間撹拌した。反応混合物を真空中で蒸発させ、粗生成物をシリカゲル（ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製した。ＤＭＴ保護生成物１９ａを無色泡状物（７７９ｍｇ、９０．９％）として単離した。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．１４
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝７２０．４
【０４７０】
１９ｂ：［（２Ｒ，６Ｒ）−６−（３−ベンゾイル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−イソプロピル−モルホリン−２−イル］メチルベンゾエート
第一級アルコール１８ｂ１．３０ｇ（２．４１ｍｍｏｌ）およびＮＥｔ3４９２ｍｇ（６７６μｌ、４．８２ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ２０ｍｌに溶解した。ＤＭＴ−Ｃｌ９２５ｍｇ（２．６５ｍｍｏｌ）を添加した後、反応物を室温で６時間撹拌し、続いてさらなるＤＭＴ−Ｃｌ９２５ｍｇ（２．６５ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を７２時間撹拌した。ｎ−プロパノール２．０ｍｌを添加した後、溶液を１０分間撹拌した。混合物をＨ2Ｏで洗浄し、有機層を分離した。ＭｇＳＯ4で脱水した後、溶媒を真空中で除去した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン中０〜２５％ＥｔＯＡｃ）により精製して、所望のＤＭＴ−エーテル１９ｂ１．７４ｇ（８９．２％）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝３．２５
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝８１０．３
【０４７１】
１９ｃ：［（２Ｒ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−イソプロピル−６−［２−（２−メチルプロパノイルアミノ）−６−オキソ−１Ｈ−プリン−９−イル］モルホリン−２−イル］メチルベンゾエート
出発アルコール１８ｃ２４０ｍｇ（４６８μｍｏｌ）を、ＤＣＭ５．０ｍｌに溶解した。ＮＥｔ3９５．７ｍｇ（１３１．５μｌ、９３６μｍｏｌ）およびＤＭＴ−Ｃｌ１８０ｍｇ（５１５μｍｏｌ）を添加した後、反応物を室温で３日間撹拌して完全な変換を達成した。ｎ−プロパノール２．０ｍｌを添加した後、溶液を１０分間撹拌した。混合物をＨ2Ｏで洗浄し、有機層を分離した。ＭｇＳＯ4で脱水した後、溶媒を真空中で除去した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン中０〜２５％ＥｔＯＡｃ）により精製して、所望のＤＭＴ−エーテル１９ｃ３０３ｍｇ（７９．４％）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．９３
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝８１３．２
【０４７２】
１９ｅ：［（２Ｒ，６Ｒ）−６−（６−ベンズアミドプリン−９−イル）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−イソプロピル−モルホリン−２−イル］メチルベンゾエート
出発物質１８ｅ９３４ｍｇ（１．７６ｍｍｏｌ）を、ＤＭＣ／ピリジン（１：１）２０ｍｌに溶解した。ＤＭＴ−Ｃｌ９７４ｍｇ（２．８２ｍｍｏｌ）を添加した後、反応溶液を室温で１７時間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、Ｈ2Ｏ、２×１０％クエン酸、飽和ＮａＨＣＯ3およびＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させた。得られた粗生成物（１．７７ｇ）を、ＥｔＯＡｃ／ジエチルエーテル（１：２）２０ｍｌに溶解した。ｎ−ペンタン４０ｍｌを添加した後、沈殿物を遠心分離し、上澄み液を廃棄した。沈殿手順をさらに２回繰り返して、所望のＤＭＴ−エーテル１９ｅを無色固体として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝３．０７
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝８３１．５
【０４７３】
１９ｆ：［（２Ｒ，６Ｒ）−６−（４−ベンズアミド−２−オキソ−ピリミジン−１−イル）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−イソプロピル−モルホリン−２−イル］メチルベンゾエート
１８ｆ２．４５ｇ（４．８４ｍｍｏｌ）を、ピリジン４０ｍｌに溶解した。ＤＭＴ−Ｃｌ２．５１ｇ（７．２６ｍｍｏｌ）を添加した後、反応混合物を室温で４日間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、Ｈ2Ｏ、２×１０％クエン酸、飽和ＮａＨＣＯ3およびＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させた。粗生成物をシリカゲル（ｎ−ヘプタン＋０．５％ＮＥｔ3で事前調整、ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、表題化合物１９ｆ３．６９ｇ（９４．３％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．１４
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝８０７．４
【０４７４】
２０ａ：１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（ヒドロキシメチル）−４−イソプロピル−モルホリン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
ベンゾイルエステル１９ａ（７７５ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ−メタノール（４：１）２０ｍｌに溶解した。室温で、２Ｎ  ＮａＯＨ水溶液４．３１ｍｌ（８．６ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を９０分間撹拌した。クエン酸一水和物を添加することにより、ｐＨを７〜８の間に調整し、次いで溶媒を減圧下で除去した。残留物をＤＣＭおよびＨ2Ｏに溶かした。有機層を分離し、水相をＤＣＭで抽出した。合わせた有機相をＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させた。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン中５〜１００％ＥｔＯＡｃ）により精製して、所望の生成物（２０ａ）６６３ｍｇ（定量的）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．７３
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝６１６．３
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.29 (s, 1H), 7.60 (d, J=1.10 Hz, 1H), 7.39 (d, J=6.93 Hz, 2H), 7.19 - 7.33 (m, 7H), 6.88 (d, J=8.68 Hz, 4H), 5.60 (dd, J=9.96, 2.87 Hz, 1H), 4.64 (t, J=5.93 Hz, 1H), 3.74 (m, 6H), 3.53 - 3.60 (m, 1H), 3.44 - 3.52 (m, 1H), 3.32 - 3.37 (m, 1H), 3.09 (d, J=8.56 Hz, 1H), 2.76 (br d, J=11.62 Hz, 1H), 2.61 - 2.72 (m, 2H), 2.37 (d, J=11.49 Hz, 1H), 2.10 (t, J=10.45 Hz, 1H), 1.78 (s, 3H), 0.84 - 0.96 (m, 6H).
【０４７５】
２０ｂ：１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（ヒドロキシメチル）−４−イソプロピル−モルホリン−２−イル］ピリミジン−２，４−ジオン
出発化合物１９ｂ１．４０ｇ（１．７３ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ８０ｍｌに溶解した。室温で、ＭｅＯＨ中ＮａＯＭｅの０．５Ｍ溶液１３．８３ｍｌ（６．９１ｍｍｏｌ）を添加し、反応溶液を２時間撹拌して完全な変換を達成した。クエン酸０．９２ｇを添加した後、溶媒を除去した。残留物をＨ2Ｏに溶かし、水性混合物をＤＣＭ／ｉＰｒＯＨ（４：１）で３回抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させて、所望の化合物２０ｂ０．８５ｇ（８１．２％、粗製）を得、これをさらに精製することなく以下の工程で使用した。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．０４
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝６０２．２
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.31 (s, 1H), 7.75 (d, J=8.07 Hz, 1H), 7.39 (d, J=7.34 Hz, 2H), 7.10 - 7.33 (m, 8H), 6.88 (d, J=8.31 Hz, 4H), 5.55 - 5.64 (m, 2H), 4.66 (t, J=5.93 Hz, 1H), 3.74 (s, 6H), 3.57 (dd, J=11.31, 6.79 Hz, 1H), 3.46 (br dd, J= 11.25, 5.14 Hz, 1H), 3.08 (d, J=8.56 Hz, 1H), 2.54 - 2.79 (m, 3H), 2.32 - 2.39 (m, 1H), 1.95 - 2.13 (m, 1H), 0.86 - 0.98 (m, 6H).
【０４７６】
２０ｃ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（ヒドロキシメチル）−４−イソプロピル−モルホリン−２−イル］−６−オキソ−１Ｈ−プリン−２−イル］−２−メチル−プロパンアミド
出発物質１９ｃ２６０ｍｇ（３１９μｍｏｌ）を、ＥｔＯＨ１０ｍｌに溶解した。１Ｍ  ＮａＯＨ溶液１．０ｍｌ（１．０ｍｍｏｌ）を添加した後、溶液を室温で４時間撹拌して完全な変換を達成した。溶液を１Ｍ  ＨＣｌで中和し、溶媒を真空中で除去した。残留物をＨ2Ｏに溶解し、ＤＣＭで抽出した。有機相を分離し、ＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させた。シリカ（ＤＣＭ中０〜１０％ＭｅＯＨ）上で最終精製して、所望のアルコール２０ｃ１１４ｍｇ（５０．３％）を黄色固体として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．３６
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝７０９．３
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.08 (s, 1H), 11.52 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.35 -7.43 (m, 2H), 7.20 - 7.33 (m, 7H), 6.83 - 6.92 (m, 4H), 5.56 (dd, J=9.60, 2.75 Hz, 1H), 4.59 - 4.66 (m, 1H), 3.73 (2 x s, 6H), 3.51 - 3.62 (m, 2H), 3.43 - 3.50 (m, 1H), 2.88 - 3.02 (m, 3H), 2.70 - 2.82 (m, 2H), 2.30 - 2.39 (m, 1H), 1.11 (m, 6H), 1.01 (d, J=6.48 Hz, 3H), 0.97 (d, J=6.48 Hz, 3H).
【０４７７】
２０ｅ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（ヒドロキシメチル）−４−イソプロピル−モルホリン−２−イル］プリン−６−イル］ベンズアミド
出発化合物１９ｅ（１．２７ｇ、１．５２ｍｍｏｌ）を、ＥｔＯＨ／ピリジン（１：１）１４ｍｌに溶解した。０℃で、１Ｍ  ＮａＯＨ溶液７．５９ｍｌ（１５．１９ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で１．５時間撹拌した。ｐＨを、クエン酸一水和物（９５８ｍｇ）を添加することにより７に調整した後、Ｈ2Ｏ７０ｍｌおよびＥｔＯＡｃを添加した。有機層を分離し、１０％クエン酸溶液（３×）、Ｈ2Ｏ、飽和ＮａＨＣＯ3およびＮａＣｌ溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ4で脱水した後、有機相を蒸発させて、粗生成物１．０８ｇを無色泡状物として得、これをＥｔＯＡｃ／ジエチルエーテル（１：１）２０ｍｌに溶解した。ｎ−ペンタン４０ｍｌを添加した後、沈殿物を遠心分離し、上澄み液を廃棄した。沈殿手順をさらに２回繰り返して、表題化合物（２０ｅ）９６４ｍｇ（８７．１％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．４２
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝７２７．５
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.18 (s, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.05 (d, J=7.34 Hz, 2H), 7.61 - 7.68 (m, 1H), 7.56 (t, J=7.58 Hz, 2H), 7.45 (d, J=7.46 Hz, 2H), 7.28 - 7.36 (m, 6H), 7.20 - 7.28 (m, 1H), 6.90 (dd, J=8.99, 2.26 Hz, 4H), 5.89 (dd, J=9.84, 2.63 Hz, 1H), 4.69 (t, J=5.99 Hz, 1H), 3.75 (s, 6H), 3.45 - 3.61 (m, 3H), 3.24 - 3.30 (m, 1H), 3.00 (br d, J=10.15 Hz, 1H), 2.85 (br d, J=11.62 Hz, 1H), 2.60 - 2.78 (m, 2H), 2.45 - 2.55 (m, 1H), 0.98 (br d, J=6.48 Hz, 3H), 0.95 (br d, J=6.48 Hz, 3H).
【０４７８】
２０ｆ：Ｎ−［１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（ヒドロキシメチル）−４−イソプロピル−モルホリン−２−イル］−２−オキソ−ピリミジン−４−イル］ベンズアミド
１９ｆ３．６８ｇ（４．５５ｍｍｏｌ）を、２０ｅについて記載した手順に従って鹸化した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン中２０〜１００％ＥｔＯＡｃ）により精製して、２０ｆ１．７２ｇ（５３．５％）を薄黄色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．８１
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝７０３．３
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.24 (s, 1H), 8.29 (d, J=7.46 Hz, 1H), 8.01 (d, J=7.46 Hz, 2H), 7.62 (t, J=7.40 Hz, 1H), 7.51 (t, J=7.70 Hz, 2H), 7.20 - 7.41 (m, 10H), 6.88 (dd, J=8.99, 2.38 Hz, 4H), 5.68 (dd, J=9.35, 2.38 Hz, 1H), 4.71 (t, J=6.11 Hz, 1H), 3.74 (s, 6H), 3.58 - 3.69 (m, 1H), 3.48 - 3.58 (m, 1H), 3.35 - 3.43 (m, 1H), 3.11 (d, J=8.56 Hz, 1H), 2.79 - 2.95 (m, 2H), 2.66 - 2.76 (m, 1H), 2.39 - 2.47 (m, 1H), 1.91 - 2.00 (m, 1H), 0.96 (d, J=6.54 Hz, 3H), 0.94 (d, J=6.54 Hz, 3H).
【０４７９】
２１ａ：３−［［（２Ｒ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−イソプロピル−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−２−イル］メトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］−オキシプロパンニトリル
出発物質２０ａ７６４ｍｇ（１．２ｍｍｏｌ）を、１６ａ（スキーム４）についてのプロトコールに従って、所望のホスホルアミダイト２１ａに変換した。８４２ｍｇ（８３．２％、ジアステレオマーの混合物）を無色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.34, 11.32 (2 x s, 1H), 7.59, 7.54 (2 x d, J=1.10 Hz, 1H), 7.36 - 7.43 (m, 2H), 7.20 - 7.34 (m, 7H), 6.89 (m, 4H), 5.59 - 5.75 (m, 1H), 3.44 -3.95 (m, 6H), 3.74 (s, 6H), 3.36 (m, 1H), 3.22 (m, 1H), 2.60 - 2.85 (m, 5H), 2.36 (m, 1H), 2.18 (m, 1H), 1.78 (2 x d, J=8.69 Hz, 3H), 0.83 - 1.17 (m, 18H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 148,6, 148,3.
【０４８０】
２１ｂ：３−［［（２Ｒ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（２，４−ジオキソピリミジン−１−イル）−４−イソプロピル−モルホリン−２−イル］メトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシプロパンニトリル
１６ｂについてのプロトコールに従って、対応するアルコール２０ｂ１．３６ｇ（２．２６ｍｍｏｌ）から出発して、表題化合物２１ｂを合成した。表題化合物１．０９ｇ（６０．１％）を無色泡状物として単離した。
ＬＣＭＳ−方法Ｂ−１：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝０．８０
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ−ＮiＰｒ2＋ＯＨ＋Ｈ］+＝７１８．３
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.32 (br s, 1H), 7.71, 7.66 (2 x s, J= 8.13 Hz, 1H), 7.35 - 7.42 (m, 2H), 7.20 - 7.33 (m, 7H), 6.83 - 6.92 (m, 4H), 5.60 - 5.70 (m, 2H), 3.73 (s, 6H), 3.43 - 3.95 (m, 6H), 3.29 - 3.39 (m, 1H), 3.22 (m, 1H), 2.59 - 2.83 (m, 5H), 2.33 (m, 1H), 2.13 (m, 1H), 0.84 - 1.21 (m, 18H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 148,5, 148,3.
【０４８１】
２１ｃ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｒ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−［［２−シアノエトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］−４−イソプロピル−モルホリン−２−イル］−６−オキソ−１Ｈ−プリン−２−イル］−２−メチル−プロパンアミド
１６ｃの合成について記載したプロトコールに従って、出発化合物２０ｃ４０ｍｇ（５６μｍｏｌ）から、シリカゲルクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン中０〜１００％メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル、カラムはｎ−ヘプタン＋１％ＮＥｔ3で事前調整）の後に、所望のホスホルアミダイト２１ｃ２３ｍｇ（４４．９％）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．５７
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ−ＮiＰｒ2＋ＯＨ＋Ｈ］+＝８２８．２
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.70 - 12.30 (b s, 1H), 11.53 (b s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.35 - 7.45 (m, 2H), 7.20 - 7.33 (m, 7H), 6.82 - 6.91 (m, 4H), 5.54 - 5.68 (m, 1H), 3.80 - 3.93 (m, 0.5H), 3.73, 3.72 (2 x s, 6H), 3.68 - 3.76 (m, 1.5H), 3.60 - 3.67 (m, 2H), 3.35 -3.60 (m, 4H), 3.12 (m, 1H), 2.57 - 2.98 (m, 7H), 0.92 - 1.13 (m, 24H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147.6, 147.4.
【０４８２】
２１ｅ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｒ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−［［２−シアノエトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］−４−イソプロピル−モルホリン−２−イル］プリン−６−イル］ベンズアミド
２０ｅ９５０ｍｇ（１．３０ｍｍｏｌ）から出発して、１６ｅ（スキーム４）について記載したプロトコールに従って表題化合物を製造して、２１ｅ１．１０ｇ（９１．０％）を無色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.19 (br s, 1H), 8.73, 8.71 (2 x s, 1H), 8.63, 8.59 (2 x s, 1H), 8.04 (d, J=7.65 Hz, 2H), 7.64 (t, J=7.34 Hz, 1H), 7.55 (t, J=7.43 Hz, 2H), 7.44 (d, J=7.78 Hz, 2H), 7.21 - 7.35 (m, 7H), 6.86 - 6.93 (m, 4H), 5.89 - 5.99 (m, 1H), 3.80 -4.15 (m, 1H), 3.74 (s, 6H), 3.63 - 3.72 (m, 2H), 3.31 - 3.60 (m, 5H), 3.01 (br d, J=10.79 Hz, 1H), 2.66 - 2.90 (m, 4H), 2.59 - 2.64 (m, 1H), 2.42 - 2.47 (m, 1H), 0.91 - 1.12 (m, 18H). 31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,6, 147,5.
【０４８３】
２１ｆ：Ｎ−［１−［（２Ｒ，６Ｒ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−［［２−シアノエトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］−４−イソプロピル−モルホリン−２−イル］−２−オキソ−ピリミジン−４−イル］ベンズアミド
２０ｆ６２０ｍｇ（０．８８ｍｍｏｌ）から出発して、１６ｅ（スキーム４）について記載したプロトコールに従って表題化合物を製造して、２１ｆ６８１ｍｇ（８５．５％）を無色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) d[ppm]: 11.28 (br s, 1H), 8.12 - 8.23 (2 x d, J= 7.47 Hz, 1H), 8.01 (d, J=7.65 Hz, 2H), 7.58 - 7.67 (m, 1H), 7.51 (t, J=7.58 Hz, 2H), 7.35 - 7.42 (m, 3H), 7.20 - 7.35 (m, 7H), 6.83 - 6.93 (m, 4H), 5.71 - 5.80 (2 x dd, J=9.49, 2.54 Hz, 1H), 3.44 - 4.00 (m, 6H), 3.74 (s, 6H), 3.38 (m, 1H), 3.24 - 3.33 (m, 1H), 2.60 - 2.94 (m, 5H), 2.33 -2.48 (m, 1H), 2.01 - 2.09 (m, 1H), 1.02 - 1.23 (m, 12H), 0.83 - 1.00 (m, 6H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,5, 147,4.
【０４８４】
〔実施例Ａ．６〕
合成スキーム６
【化５０】
2021517126.tif 000052
【０４８５】
２２ａ：１−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−５−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−３，４−ジヒドロキシ−５−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）テトラヒドロフラン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
無水ピリジン２４０ｍｌ中の出発化合物４ａ２３．７ｇ（５３．４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＭＴ−Ｃｌ２３．１３ｇ（８０ｍｍｏｌ）をＮ2雰囲気下、室温で添加した。１２時間撹拌した後、溶媒を真空中で除去し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ  １０：１〜１：１）により精製して、所望のＤＭＴ保護生成物（２２ａ）１６．３ｇ（４１％）を無色固体として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.34 (s, 1H), 7.50 (d, J=0.75 Hz, 1H), 7.42-7.37 (m, 2H), 7.32 (t, J=7.53 Hz, 2H), 7.29-7.22 (m, 6H), 6.90 (dd, J=8.91, 2.13 Hz, 4H), 5.89 (d, J=7.28 Hz, 1H), 5.45 (d, J=6.53 Hz, 1H), 5.15 (d, J=5.02 Hz, 1H), 4.48-4.39 (m, 1H), 4.31 (t, J=5.14 Hz, 1H), 3.86-3.80 (m, 1H), 3.74 (s, 6H), 1.28 (s, 3H), 0.98-0.83 (m, 22H).
【０４８６】
２２ｂ：１−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−５−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−３，４−ジヒドロキシ−５−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）テトラヒドロフラン−２−イル］ピリミジン−２，４−ジオン
無水ピリジン７５０ｍｌ中の化合物４ｂ（７５ｇ、１７４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＭＴ−Ｃｌ（７０．８ｇ、２０９ｍｍｏｌ）をＮ2雰囲気下、室温で添加した。混合物を１２時間撹拌して完全な変換を達成した。溶媒を真空中で除去し、残留物を水５００ｍｌで希釈し、ＥｔＯＡｃ３×５００ｍｌで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、濾過し、真空中で濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ  １：１〜ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  ２０：１）により精製して、２２ｂ８０ｇ（６２．６％）を無色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.35 (s, 1H), 7.61 (d, J=8.28 Hz, 1H), 7.42-7.36 (m, 2H), 7.32 (t, J=7.65 Hz, 2H), 7.28-7.19 (m, 5H), 6.90 (d, J=8.03 Hz, 4H), 5.83 (d, J=6.53 Hz, 1H), 5.48 (d, J=6.02 Hz, 1H), 5.27 (d, J=8.03 Hz, 1H), 5.21 (d, J=5.27 Hz, 1H), 4.33-4.26 (m, 1H), 4.22 (q, J=6.02 Hz, 1H), 3.89-3.79 (m, 2H), 3.74 (s, 6H), 3.24 (d, J=10.04 Hz, 1H), 1.01-0.84 (m, 21H).
【０４８７】
２２ｃ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−５−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−３，４−ジヒドロキシ−５−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）テトラヒドロフラン−２−イル］−６−オキソ−１Ｈ−プリン−２−イル］−２−メチル−プロパン−アミド
２２ｂについて記載したプロトコールに従って、４ｃ５５．８ｇ（１０３ｍｍｏｌ）をピリジン中ＤＭＴ−Ｃｌで保護して、２２ｃ５０．０ｇ（５７．４％）を無色固体として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.12 (br s, 1H), 11.67 (br s, 1H), 7.99-7.83 (m, 1H), 7.38 (br d, J=7.28 Hz, 2H), 7.32-7.13 (m, 8H), 6.84 (dd, J=8.78, 2.26 Hz, 4H), 5.86 (d, J=7.03 Hz, 1H), 5.70-5.45 (m, 1H), 5.18 (br s, 1H), 4.73-4.62 (m, 1H), 4.25 (br d, J=4.77 Hz, 1H), 3.97 (br d, J=10.29 Hz, 1H), 3.84 (br d, J=10.29 Hz, 1H), 3.73 (s, 6H), 3.20 (br d, J=10.04 Hz, 1H), 2.76 (dt, J=13.61, 6.87 Hz, 1H), 1.12 (d, J=6.78 Hz, 6H), 1.01-0.87 (m, 21H).
【０４８８】
２２ｅ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−５−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−３，４−ジヒドロキシ−５−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）テトラヒドロフラン−２−イル］プリン−６−イル］ベンズアミド
２２ｂについて記載したプロトコールに従って、４ｅ５７．０ｇ（１０２ｍｍｏｌ）をピリジン中ＤＭＴ−Ｃｌで保護して、２２ｅを無色固体（７０．０％）として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.22 (s, 1H), 8.68-8.58 (m, 1H), 8.49 (s, 1H), 8.05 (d, J=7.28 Hz, 2H), 7.70-7.60 (m, 1H), 7.59-7.50 (m, 2H), 7.43 (d, J=7.28 Hz, 2H), 7.33-7.17 (m, 7H), 6.86 (dd, J=8.91, 1.38 Hz, 4H), 6.00 (d, J=7.28 Hz, 1H), 5.53 (d, J=6.78 Hz, 1H), 5.32 (d, J=4.89 Hz, 1H), 5.00-4.87 (m, 1H), 4.34 (t, J=4.89 Hz, 1H), 4.08-4.04 (m, 1H), 3.98 (d, J=10.79 Hz, 1H), 3.73 (s, 6H), 3.40 (d, J=9.54 Hz, 1H), 3.30 (br d, J=9.54 Hz, 1H), 1.12-0.93 (m, 21H).
【０４８９】
２３ａ：１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−３，５−ジヒドロキシ−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
アセトン／Ｈ2Ｏ（３：１）２５０ｍｌ中の出発物質２２ａ１２．６ｇ（１６．９ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｈ2Ｏ（６０ｍｌ）中のＮａＩＯ4５．０５ｇ（２３．６ｍｍｏｌ）の水溶液を室温で滴下添加した。混合物を１２時間撹拌して完全な変換に到達させ、氷水５００ｍｌに注ぎ入れた。混合物をＤＣＭ５００ｍｌで３回抽出した。有機層を合わせ、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、濾過し、真空中で濃縮して、所望の生成物２３ａ１１．２０ｇ（８７％）を白色泡状物として得、これをさらに精製することなく次の工程で使用した。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.62-11.33 (m, 1H), 7.80-7.65 (m, 1H), 7.57-7.38 (m, 3H), 7.33-7.13 (m, 9H), 6.88-6.73 (m, 5H), 6.08-5.86 (m, 1H), 5.71-5.51 (m, 1H), 5.24-5.06 (m, 1H), 5.01-4.94 (m, 1H), 4.29-4.16 (m, 1H), 3.75-3.70 (m, 7H), 3.34-3.24 (m, 1H), 3.06-2.81 (m, 1H), 2.02-1.59 (m, 2H), 1.03 (m, 1H), 1.09-0.74 (m, 21H).
【０４９０】
２３ｂ：１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−３，５−ジヒドロキシ−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］ピリミジン−２，４−ジオン
２３ａについて記載したプロトコールに従って、ジオール２２ｂ７７．０ｇ（１０５ｍｍｏｌ）から、表題化合物２３ｂ８０ｇ（定量的、粗生成物）を黄色固体として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.67-11.36 (m, 1H), 7.87-7.77 (m, 1H), 7.76-7.67 (m, 1H), 7.55-7.41 (m, 2H), 7.39-7.20 (m, 8H), 6.94-6.81 (m, 4H), 5.94-5.87 (m, 1H), 5.78-5.63 (m, 1H), 5.59-5.51 (m, 1H), 5.25-5.08 (m, 1H), 5.07-4.99 (m, 1H), 4.32-4.20 (m, 1H), 3.82-3.70 (m, 6H), 3.34-3.26 (m, 1H), 3.15-3.04 (m, 1H), 2.95-2.86 (m, 1H), 1.14-0.81 (m, 22H).
【０４９１】
２３ｃ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−３，５−ジヒドロキシ−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］−６−オキソ−１Ｈ−プリン−２−イル］−２−メチル−プロパンアミド
２３ａについて記載したプロトコールに従って、ジオール２２ｃ５０．０ｇ（５９ｍｍｏｌ）から、表題化合物２３ｃ４７ｇ（９６．１％、粗生成物）を黄色固体として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.25-12.06 (m, 1H), 11.78-11.55 (m, 1H), 8.19 (d, J=8.78 Hz, 1H), 7.44 (br d, J=7.28 Hz, 1H), 7.38 (br d, J=6.53 Hz, 1H), 7.34-7.14 (m, 10H), 6.99 (d, J=6.78 Hz, 1H), 6.90-6.71 (m, 5H), 6.05-5.98 (m, 1H), 5.74 (d, J=7.78 Hz, 1H), 5.61-5.53 (m, 1H), 5.48 (q, J=6.78 Hz, 1H), 5.24-5.17 (m, 1H), 5.06 (d, J=6.53 Hz, 1H), 4.35-4.22 (m, 1H), 3.83 (br d, J=11.54 Hz, 1H), 3.72 (d, J=3.26 Hz, 7H), 3.27 (br d, J=9.29 Hz, 1H), 3.29-3.23 (m, 1H), 3.12-3.04 (m, 1H), 2.91-2.75 (m, 1H), 1.22-0.76 (m, 29H).
【０４９２】
２３ｅ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−３，５−ジヒドロキシ−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］プリン−６−イル］ベンズアミド
２３ａについて記載したプロトコールに従って、ジオール２２ｅ７８．０ｇ（９０．６ｍｍｏｌ）から、表題化合物２３ｅ７５．２ｇ（９４．６％、粗生成物）を白色固体として得た。
MS (m/z) = 876,2 [M+H]+
【０４９３】
２４ａ：１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（トリイソプロピルシリルオキシ−メチル）モルホリン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
無水ＭｅＯＨ４４ｍｌ中の出発化合物２３ａ２．６ｇ（３．４ｍｍｏｌ）の溶液に、（ＮＨ4）2Ｂ4Ｏ7．４Ｈ2Ｏ０．９８ｇ（３．７ｍｍｏｌ）をＮ2雰囲気下、室温で添加した。混合物を２時間撹拌し、続いてＡｃＯＨ０．４５ｇ（６．８ｍｍｏｌ）、４Åモレキュラーシーブ５．０ｇおよびＮａＢＨ3ＣＮ０．４７ｇ（６．８ｍｍｏｌ）を添加した。室温で１２時間撹拌した後、ＴＬＣは、出発物質が完全に消費されたことを示した。溶媒を真空中で除去し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ  ４：１〜１：１）により精製して、所望のモルホリン２４ａ１．５９ｇ（６４％）を白色泡状物として得た。
MS (m/z) = 752,5 [M+Na]+
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.39 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.43 (br d, J=7.28 Hz, 2H), 7.33-7.23 (m, 8H), 6.84 (d, J=8.78 Hz, 5H), 5.86 (br dd, J=9.91, 2.64 Hz, 1H), 5.89-5.81 (m, 1H), 4.13 (br d, J=9.54 Hz, 1H), 3.96 (br d, J=9.54 Hz, 1H), 3.72 (d, J=0.75 Hz, 6H), 3.06 (br d, J=9.29 Hz, 1H), 2.97 (br d, J=9.03 Hz, 1H), 2.93-2.78 (m, 2H), 2.76-2.57 (m,
3H), 1.76 (s, 3H), 0.98-0.87 (m, 22H).
【０４９４】
２４ｂ：１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（トリイソプロピルシリルオキシ−メチル）モルホリン−２−イル］ピリミジン−２，４−ジオン
無水ＭｅＯＨ８５ｍｌ中の化合物２３ｂ（５．０ｇ、６．７ｍｍｏｌ）の溶液に、（ＮＨ4）2Ｂ4Ｏ7・４Ｈ2Ｏ（１．９３ｇ、７．６ｍｍｏｌ）をＮ2雰囲気下、２５℃で添加した。混合物を２時間撹拌し、続いてＡｃＯＨ０．８０ｇ（１３．４ｍｍｏｌ）、４Åモレキュラーシーブ１０ｇおよびＮａＢＨ3ＣＮ０．８４ｇ（１３．４ｍｍｏｌ）を添加した。１２時間撹拌した後、混合物を濾過し、濾液を真空中で濃縮した。残留物を氷水で希釈し、ＥｔＯＡｃ５０ｍｌで３回抽出した。有機層を合わせ、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、濾過し、真空中で濃縮した。粗生成物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ  １０：１〜１：１）により精製して、表題化合物２４ｂを白色泡状物（９４％）として得た。
MS (m/z) = 738,5 [M+H]+
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.44 (br s, 1H), 7.75 (d, J=8.07 Hz, 1H), 7.45 (br d, J=7.34 Hz, 2H), 7.37-7.20 (m, 7H), 6.89 (d, J=8.80 Hz, 4H), 5.88 (br dd, J=10.03, 2.45 Hz, 1H), 5.73 (d, J=8.07 Hz, 1H), 4.17 (br d, J=9.78 Hz, 1H), 4.11-4.02 (m, 2H), 3.77 (d, J=0.73 Hz, 6H), 3.12 (br d, J=9.05 Hz, 1H), 3.02-2.83 (m, 3H), 2.70-2.58 (m, 2H), 1.06-0.90 (m, 21H).
【０４９５】
２４ｃ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（トリイソプロピルシリル−オキシメチル）モルホリン−２−イル］−６−オキソ−１Ｈ−プリン−２−イル］−２−メチル−プロパンアミド
２４ｂについて記載したプロトコールに従って、出発物質２３ｃ７．０ｇ（８．２ｍｍｏｌ）をモルホリン化合物２４ｃに変換し、これを、シリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ  ５：１〜１：１）の後に、無色泡状物（７３．２％）として単離した。
MS (m/z) = 825,2 [M+H]+
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.12 (br s, 1H), 11.59 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.40 (br d, J=7.03 Hz, 2H), 7.30-7.12 (m, 7H), 6.81 (br d, J=7.78 Hz, 4H), 5.83 (dd, J=9.66, 3.14 Hz, 1H), 4.23 (br d, J=9.03 Hz, 1H), 3.92 (br d, J=9.03 Hz, 1H), 3.72 (d, J=2.76 Hz, 6H), 2.97 - 3.18 (m, 3H), 2.96-2.86 (m, 2H), 2.80 (dt, J=13.55, 6.78 Hz, 1H), 2.67 (br d, J=12.05 Hz, 1H), 1.13 (t, J=6.15 Hz, 6H), 1.03-0.82 (m, 22H).
【０４９６】
２４ｅ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（トリイソプロピルシリル−オキシメチル）モルホリン−２−イル］プリン−６−イル］ベンズアミド
２４ｂについて記載したプロトコールに従って、出発物質２３ｅ５．０ｇ（５．７ｍｍｏｌ）をモルホリン化合物２４ｅに変換し、これを、シリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ  １：４）の後に、無色泡状物（７３．４％）として単離した。
MS (m/z) = 843,1 [M+H]+
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.22 (br s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.05 (d, J=7.34 Hz, 2H), 7.70-7.62 (m, 1H), 7.60-7.51 (m, 2H), 7.38 (br d, J=6.97 Hz, 2H), 7.26-7.16 (m, 7H), 6.78 (d, J=8.93 Hz, 4H), 6.16 (dd, J=10.03, 2.81 Hz, 1H), 4.26 (d, J=9.66 Hz, 1H), 4.10-3.98 (m, 1H), 3.71 (d, J=0.73 Hz, 6H), 3.28 (br d, J=10.64 Hz, 1H), 3.16 (br d, J=9.17 Hz, 1H), 3.06 (br d, J=9.17 Hz, 1H), 2.98-2.90 (m, 2H), 2.79 (br d, J=12.47 Hz, 1H), 1.10-0.82 (m, 21H).
【０４９７】
〔実施例Ａ．７〕
合成スキーム７
【化５１】
2021517126.tif 000053
【０４９８】
２５：ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）−２−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン−４−カルボキシレート
ＤＣＭ５００ｍｌ中のモルホリン２４ｂ（５０ｇ、６９．８ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１８ｇ、１３９．７ｍｏｌ）の混合物に、Ｂｏｃ2Ｏ（２２．９ｇ、１０４．８ｍｏｌ）を室温で滴下添加した。２４時間撹拌した後、溶媒を真空中で除去し、残留物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ  １：１）により精製して、化合物２５（６０ｇ、収率９３％）を白色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 7.58 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.45 (d, J=7.2 Hz, 2H), 7.33-7.26 (m, 7H), 6.85-6.81 (m, 4H), 6.02-5.98 (dd, J=10.0 3.6 Hz, 1H), 5.77 (d, J=8.0 Hz, 1H), 4.24-4.11 (m, 2H), 3.99 (d, J=9.6 Hz, 1H), 3.80 (s, 1H), 3.75 (m, 1H), 3.28-3.20 (m, 2H), 3.08 (d, J=12.8 Hz, 1H), 2.69 (t, J=11.4 Hz, 1H), 1.48 (m, 9H), 1.03-0.95 (m, 21H).
【０４９９】
２６：ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−［２−オキソ−４−（１，２，４−トリアゾール−１−イル）ピリミジン−１−イル］−２−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン−４−カルボキシレート
ＡＣＮ６５０ｍｌ中の１Ｈ−１，２，４−トリアゾール（６５ｇ、０．９４ｍｏｌ）の混合物に、ＰＯＣｌ3（４９．７９ｇ、０．３１ｍｏｌ）を３０℃で滴下添加した。０℃に冷却した後、ＤＩＰＥＡ（１９８ｇ、１．５３ｍｏｌ）を滴下添加し、撹拌を０℃で３０分間続けた。同じ温度で、出発物質２５（３２ｇ、３９．２１ｍｍｏｌ）を混合物に一度に添加し、氷浴を取り外し、反応物を３０℃で３時間撹拌した。混合物を、ＥｔＯＡｃ／水（１：２）の混合溶媒３ｌに注ぎ入れた。分離した後、有機層を飽和ＮａＨＣＯ3溶液５００ｍｌおよびブラインで洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、濾過し、真空中で濃縮して、粗化合物２６（４０ｇ）を黄色油状物として得、これをさらに精製することなく次の工程に使用した。
MS (m/z) = 867,5 [M+H]+
【０５００】
２７：ｔｅｒｔ−ブチル−（２Ｓ，６Ｒ）−６−（４−ベンズアミド−２−オキソ−ピリミジン−１−イル）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−２−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン−４−カルボキシレート
ジオキサン３８０ｍｌ中のベンズアミド（３８ｇ、０．３１ｍｏｌ）の混合物に、ＮａＨ（１２．８ｇ、０．３１ｍｏｌ）を０℃で少量ずつ添加した。３０℃で３０分間撹拌した後、トリアゾール２６（４０ｇ、３９．２１ｍｍｏｌ、粗製）を一度に添加し、混合物を３０℃で１時間撹拌した。反応物を飽和ＮＨ4Ｃｌ溶液２４ｌでクエンチし、ＥｔＯＡｃ３ｌで抽出した。有機層を水２ｌおよびブラインで洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、濾過し、真空中で濃縮して、粗化合物５４ｇを黄色油状物として得た。最終シリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ  ２：１）により、２７  ２０．４ｇ（５６．６％）を黄色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.31 (br s, 1H), 8.20 (br d, J=7.21 Hz, 1H), 8.01 (br d, J=7.46 Hz, 2H), 7.70-7.59 (m, 1H), 7.58-7.48 (m, 2H), 7.47-7.36 (m, 3H), 7.34-7.16 (m, 7H), 6.87 (br d, J=7.70 Hz, 4H), 5.96 (br dd, J=10.09, 2.63 Hz, 1H), 4.12 (br d, J= 11.25 Hz, 1H), 4.00-3.83 (m, 3H), 3.74 (s, 6H), 3.28-3.16 (m, 2H), 3.06 (br d, J=9.17 Hz, 2H), 1.55-1.32 (m, 9H), 1.11-0.80 (m, 21H).
【０５０１】
２８：Ｎ−［１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−（ヒドロキシメチル）−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン−２−イル］−２−オキソ−ピリミジン−４−イル］ベンズアミド
ＤＣＭ９３ｍｌ中の２７（１３．５ｇ、１４．７０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＦＡ３１ｍｌを０℃で滴下添加した。反応物を３０℃で１６時間撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ3溶液でｐＨ＝７〜８に中和した後、有機層を分離し、水相をＤＣＭ１００ｍｌで２回抽出した。合わせた有機層を無水Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、濾過し、真空中で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ＝３０：１）により精製して、２８（２．７ｇ、収率３５．６％）を黄色泡状物として、対応するトリフルオロ−酢酸エステルを副生成物（４．７８ｇ、５３．１％）として得、これをＴＨＦ１８６ｍｌおよびＥｔＯＨ６２ｍｌの混合溶媒に溶解した。０℃で、１Ｍ  ＮａＯＨ水溶液７５．８ｍｌを添加した。２分間撹拌した後、溶液を飽和クエン酸溶液で中和し、Ｈ2Ｏ３００ｍｌで希釈し、ＥｔＯＡｃ３００ｍｌで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、蒸発させた。シリカゲルクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ  ３０：１）により精製して、２８  ５．２ｇ（６８．５％）を白色固体として得た。
MS (m/z) = 517,4 [M+H+]+
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.26 (br s, 1H), 8.28 (d, J=7.53 Hz, 1H), 8.01 (d, J=7.28 Hz, 2H), 7.67-7.58 (m, 1H), 7.57-7.47 (m, 2H), 7.34 (d, J=7.40 Hz, 1H), 5.86 (dd, J=9.66, 2.64 Hz, 1H), 4.64 (br s, 1H), 4.01-3.90 (m, 2H), 3.46 (br s, 2H), 3.05 (dd, J=11.98, 2.57 Hz, 1H), 3.11-3.00 (m, 1H), 2.87-2.75 (m, 1H), 2.74-2.63 (m, 1H), 2.40-2.27 (m, 1H), 1.15-0.99 (m, 21H).
【０５０２】
２９：９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル（２Ｓ，６Ｒ）−６−（４−ベンズアミド−２−オキソ−ピリミジン−１−イル）−２−（ヒドロキシメチル）−２−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン−４−カルボキシレート
ＤＭＦ７０ｍｌ中のモルホリン２８（１３．５５ｍｍｏｌ）７．０ｇ（１３．５５ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｆｍｏｃ−Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミドエステル５．５ｇ（１６．２６ｍｍｏｌ）を０℃で少量ずつ添加した。１６時間撹拌した後、溶液を水１００ｍｌに注ぎ入れ、ＥｔＯＡｃ３０ｍｌで３回抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、濾過し、真空中で濃縮した。シリカ（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ  １：２）上で最終精製して、化合物２９  １０．０ｇ（定量的）を黄色固体として得た。
MS (m/z) = 739,4 [M+H]+
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.26 (br s, 1H), 8.33 (br s, 1H), 8.02 (br d, J=7.46 Hz, 2H), 7.90 (d, J=7.58 Hz, 2H), 7.64 (br t, J=7.40 Hz, 3H), 7.57-7.49 (m, 2H), 7.48-7.40 (m, 3H), 7.39-7.30 (m, 2H), 6.11-5.79 (m, 1H), 4.98 (t, J=6.05 Hz, 1H), 4.52-4.12 (m, 4H), 3.89-3.69 (m, 2H), 3.54 (br s, 3H), 3.21-3.07 (m, 1H), 3.04-2.77 (m, 1H), 1.11-0.89 (m, 21H).
【０５０３】
３０：９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル−（２Ｓ，６Ｒ）−６−（４−ベンズアミド−２−オキソ−ピリミジン−１−イル）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−２−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン−４−カルボキシレート
ピリジン１４０ｍｌ中の化合物２９（１３．９ｇ、１８．８３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＭＴ−Ｃｌ１２．７５ｇ（３７．６２ｍｍｏｌ）を２５℃で添加した。混合物を２５℃で１６時間撹拌して完全な変換を達成した。溶媒を蒸発させた後、残留物をＥｔＯＡｃ２００ｍｌに溶解し、水１００ｍｌおよびブラインで洗浄した。有機相をＮａ2ＳＯ4で脱水し、濾過し、真空中で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ  １：１）により精製して、化合物３０  １７．３ｇ（８８．１％）を黄色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.32 (br s, 1H), 8.21 (br s, 1H), 8.02 (br d, J=7.58 Hz, 2H), 7.88 (br s, 2H), 7.76-7.60 (m, 3H), 7.59-7.50 (m, 2H), 7.42 (br d, J=7.21 Hz, 5H), 7.38-7.19 (m, 9H), 6.89 (br d, J=8.44 Hz, 4H), 6.19-5.85 (m, 1H), 4.28 (br s, 4H), 3.91 (br d, J=8.80 Hz, 2H), 3.75 (s, 6H), 3.23 (br s, 1H), 3.10 (br d, J=9.05 Hz, 3H), 1.06-0.78 (m, 21H).
【０５０４】
２４ｆ：Ｎ−［１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（トリイソプロピルシリル−オキシメチル）モルホリン−２−イル］−２−オキソ−ピリミジン−４−イル］ベンズアミド
ＤＣＭ８５ｍｌ中の３０  ８．４ｇ（８．０７ｍｍｏｌ）の溶液に、ピペリジン１７ｍｌを室温で添加した。完全な変換（およそ２０分）後、反応溶液を飽和ＮＨ4Ｃｌ溶液で洗浄した。水相をＤＣＭで抽出し、合わせた有機層をＮａ2ＳＯ4で脱水し、濾過し、真空中で濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ  １：４）により精製して、表題化合物２４ｆ４．７ｇ（７１．２％）を白色泡状物として得た。
MS (m/z) = 819,4 [M+H]+
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.31 (br s, 1H), 8.18 (d, J=7.58 Hz, 1H), 8.01 (br d, J=7.34 Hz, 2H), 7.67-7.58 (m, 1H), 7.57-7.47 (m, 2H), 7.42 (br d, J=7.46 Hz, 3H), 7.34-7.15 (m, 7H), 6.86 (br d, J=8.56 Hz, 4H), 6.04-5.89 (m, 1H), 4.18 (br d, J=9.54 Hz, 1H), 4.07 (br d, J=9.54 Hz, 1H), 3.73 (d, J=1.34 Hz, 6H), 3.15 (br d, J=9.17 Hz, 1H), 3.05 (br d, J=10.15 Hz, 1H), 2.97 (br d, J=9.17 Hz, 1H), 2.88 (br d, J=12.47 Hz, 1H), 2.62 (br d, J=12.47 Hz, 1H), 2.46 (br s, 1H), 1.08-0.83 (m, 21H).
【０５０５】
〔実施例Ａ．８〕
合成スキーム８
【化５２】
2021517126.tif 000054
【０５０６】
化合物３１ａ〜３１ｆを製造する還元的アミノ化反応のための一般手順Ａ
モルホリン２４ａ１．０ｇ（１．４ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ２５ｍｌに溶解し、続いてモレキュラーシーブ（４Å）２．０ｇ、ＮＥｔ3５６０ｍｇ（７６９μｌ、５．５ｍｍｏｌ）、ＡｃＯＨ８２７ｍｇ（７８９μｌ、１３．７ｍｍｏｌ）および対応するアルデヒドまたはケトン１．０〜３．０当量を添加した。１５分間撹拌した後、シアノ水素化ホウ素ナトリウム３４４ｍｇ（５．５ｍｍｏｌ）を３０分ごとに４回に分けて添加し、反応物を室温で６時間撹拌した。終夜静置した後、混合物を濾過し、濾液を飽和ＮａＨＣＯ3溶液２５ｍｌで希釈した。ＭｅＯＨを蒸発させ、水相をＤＣＭ／ｉＰｒＯＨ（５：１）５０ｍｌで抽出した。さらに濾過した後、有機相を分離し、ＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させた。得られた粗生成物をさらに精製することなく次の工程で使用した。
【０５０７】
３１ａ：１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−メチル−６−（トリイソ−プロピルシリルオキシメチル）モルホリン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
一般手順Ａに従って、ホルムアルデヒド３．０当量（３７％水溶液）を使用して、表題化合物３１ａ１．０ｇを粗生成物として単離し、さらに精製することなく使用した。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．２９
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝７４４．３
【０５０８】
３１ｂ：１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−ブチル−６−（トリイソ−プロピルシリルオキシメチル）モルホリン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
一般手順Ａに従って、ブチルアルデヒド２．０当量を使用して、表題化合物３１ｂ１．１９ｇを粗生成物として単離し、さらに精製することなく使用した。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．４１
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝７８６．７
【０５０９】
３１ｃ：１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−オクチル−６−（トリイソ−プロピルシリルオキシメチル）モルホリン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
一般手順Ａに従って、オクタナール２．０当量を使用して、表題化合物３１ｃ１．３５ｇを粗生成物として単離し、さらに精製することなく使用した。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．６６
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝８４２．７
【０５１０】
３１ｄ：１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−ヘキサデシル−６−（トリイソ−プロピルシリルオキシメチル）モルホリン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
一般手順Ａに従って、ヘキサデカナール１．０当量を使用して、表題化合物３１ｄ１．５８ｇを粗生成物として単離し、さらに精製することなく使用した。
【０５１１】
３１ｅ：１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−シクロヘキシル−６−（トリイソ−プロピルシリルオキシメチル）モルホリン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
一般手順Ａに従って、シクロヘキサノン１．２５当量を使用して、表題化合物３１ｅ１．１４ｇを粗生成物として単離し、さらに精製することなく使用した。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．４５
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝８１２．５
【０５１２】
３１ｆ：１−［（２Ｒ，６Ｓ）−４−ベンジル−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（トリイソプロピル−シリルオキシメチル）モルホリン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
一般手順Ａに従って、ベンズアルデヒド１．２５当量を使用して、表題化合物３１ｆ１．１２ｇを粗生成物として単離し、さらに精製することなく使用した。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．３７
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝８２１．４
【０５１３】
３１ｇ：１−［（２Ｒ，６Ｓ）−４−アセチル−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（トリイソ−プロピルシリルオキシメチル）モルホリン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
出発化合物２４ａ１．０ｇ（１．４ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ２５ｍｌに溶解した。ＡｃＯＨ１０３ｍｇ（９９μｌ、１．７ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ７７９ｍｇ（２．１ｍｍｏｌ）およびジイソプロピル−エチルアミン９０３ｍｇ（１．１９ｍｌ、６．９ｍｍｏｌ）を添加した後、反応混合物を室温で４時間撹拌して完全な変換を達成した。反応溶液をＨ2Ｏ２５ｍｌで洗浄し、有機層を分離した。ＭｇＳＯ4で脱水した後、溶媒を蒸発させ、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０〜５％ＭｅＯＨ）により精製して、表題化合物３１ｇ１．０６ｇ（定量的）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．２０
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝７７０．２
【０５１４】
３１ｈ：１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−ヘキサデカノイル−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
３１ｇのためのプロトコールに従って、出発化合物２４ａ１．０ｇ（１．４ｍｍｏｌ）およびパルミチン酸を、シリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０〜２０％ＭｅＯＨ）の後に、表題化合物３１ｈ１．１４ｇ（８６％）に変換した。
【０５１５】
化合物３２ａ〜３２ｈを製造する脱シリル化反応のための一般手順Ｂ
粗生成物３１ａ〜３１ｈを、ＮＭＰ１２ｍｌに溶解した。ＮＥｔ3２．１ｇ（２．９ｍｌ、２０．６ｍｍｏｌ）およびＮＥｔ3・３ＨＦ１．１４ｇ（１．１５ｍｌ、６．９ｍｍｏｌ）を添加した後、反応混合物を９０℃で２時間撹拌した。室温まで冷却した後、溶液を飽和ＮａＨＣＯ3溶液に注ぎ入れ、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。有機層をＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させた。残留物をアセトニトリル／Ｈ2Ｏに溶解し、凍結乾燥した。得られた粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、所望の化合物３２ａ〜３２ｈを得た。
【０５１６】
３２ａ：１−［（２Ｒ，６Ｒ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（ヒドロキシメチル）−４−メチル−モルホリン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
一般手順Ｂに従って、粗生成物３１ａから出発して、最終シリカゲル精製（ＤＣＭ中０〜５％ＭｅＯＨ）により、表題化合物３２ａ５４３ｍｇ（６６．０％、２工程）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．５９
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝５８８．３
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.37 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.40 (d, J=7.46 Hz, 2H), 7.19 - 7.32 (m, 7H), 6.87 (d, J=8.80 Hz, 4H), 5.85 (dd, J=9.78, 2.93 Hz, 1H), 4.63 (t, J=5.32 Hz, 1H), 3.70 - 3.78 (m, 7H), 3.65 (m, 1H), 2.96 - 3.06 (m, 2H), 2.81 (br d, J=9.29 Hz, 1H), 2.63 - 2.74 (m, 1H), 2.21 (s, 3H), 2.06 - 2.16 (m, 1H), 1.97 - 2.04 (m, 1H), 1.67 (s, 3H).
【０５１７】
３２ｂ：１−［（２Ｒ，６Ｒ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−ブチル−６−（ヒドロキシ−メチル）モルホリン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
一般手順Ｂに従って、粗生成物３１ｂから出発して、最終シリカゲル精製（ＤＣＭ中０〜５％ＭｅＯＨ）により、表題化合物３２ｂ７５３ｍｇ（８５．５％、２工程）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．７５
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝６３０．３
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.36 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.40 (d, J=7.46 Hz, 2H), 7.20 - 7.34 (m, 7H), 6.87 (d, J=8.68 Hz, 4H), 5.85 (dd, J=9.66, 2.93 Hz, 1H), 4.62 (t, J=5.14 Hz, 1H), 3.70 - 3.78 (m, 7H), 3.65 (m, 1H), 2.96 - 3.09 (m, 2H), 2.86 (br d, J=9.05 Hz, 1H), 2.71 - 2.80 (m, 1H), 2.31 (br t, J=7.15 Hz, 2H), 1.99 - 2.22 (m, 2H), 1.67 (s, 3H), 1.20 - 1.45 (m, 4H), 0.88 (m, 3H).
【０５１８】
３２ｃ：１−［（２Ｒ，６Ｒ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（ヒドロキシメチル）−４−オクチル−モルホリン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
一般手順Ｂに従って、粗生成物３１ｃから出発して、最終シリカゲル精製（ＤＣＭ中０〜５％ＭｅＯＨ）により、表題化合物３２ｃ７５１ｍｇ（７８．２％、２工程）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．９９
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝６８６．４
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.36 (b s, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.40 (d, J=7.34 Hz, 2H), 7.19 - 7.34 (m, 7H), 6.87 (d, J=8.68 Hz, 4H), 5.84 (dd, J=9.72, 2.87 Hz, 1H), 4.61 (t, J=5.14 Hz, 1H), 3.69 - 3.82 (m, 7H), 3.64 (m, 1H), 2.97 - 3.14 (m, 2H), 2.82 - 2.91 (m, 1H), 2.70 - 2.76 (m, 1H), 2.30 (br t, J=7.09 Hz, 2H), 1.98 - 2.21 (m, 2H), 1.67 (s, 3H), 1.33 -1.46 (m, 2H), 1.26 (m, 10H), 0.81 - 0.92 (m, 3H).
【０５１９】
３２ｄ：１−［（２Ｒ，６Ｒ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−ヘキサデシル−６−（ヒドロキシメチル）モルホリン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
一般手順Ｂに従って、粗生成物３１ｄから出発して、最終シリカゲル精製（ＤＣＭ中０〜５％ＭｅＯＨ）により、表題化合物３２ｄ６７７ｍｇ（６０．６％、２工程）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．４４
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝７９８．５
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.36 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.40 (d, J=7.46 Hz, 2H), 7.18 - 7.34 (m, 7H), 6.86 (m, 4H), 5.84 (m, 1H), 4.61 (m, 1H), 3.69 - 3.80 (m, 7H), 3.64 (m, 1H), 2.97 - 3.07 (m, 2H), 2.85 (br d, J=8.80 Hz, 1H), 2.68 - 2.77 (m, 1H), 2.24 -2.35 (m, 2H), 1.99 - 2.20 (m, 2H), 1.67 (s, 3H), 1.35 - 1.46 (m, 2H), 1.23 (s, 26H), 0.82 -0.88 (m, 3H).
【０５２０】
３２ｅ：１−［（２Ｒ，６Ｒ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−シクロヘキシル−６−（ヒドロキシメチル）モルホリン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
一般手順Ｂに従って、粗生成物３１ｅから出発して、最終シリカゲル精製（ＤＣＭ中０〜５％ＭｅＯＨ）により、表題化合物３２ｅ７０１ｍｇ（７６．４％、２工程）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．７５
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝６５６．４
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.35 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.40 (d, J=7.46 Hz, 2H), 7.18 - 7.33 (m, 7H), 6.87 (d, J=8.93 Hz, 4H), 5.81 (m, 1H), 4.59 (t, J=5.20 Hz, 1H), 3.72 - 3.78 (m, 7H), 3.66 (m, 1H), 3.03 (m, 2H), 2.84 (br d, J=9.41 Hz, 1H), 2.66 - 2.73 (m, 1H), 2.23 - 2.39 (m, 3H), 1.64 - 1.78 (m, 4H), 1.68 (s, 3H), 0.99 - 1.27 (m, 6H).
【０５２１】
３２ｆ：１−［（２Ｒ，６Ｒ）−４−ベンジル−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（ヒドロキシ−メチル）モルホリン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
一般手順Ｂに従って、粗生成物３１ｆから出発して、最終シリカゲル精製（ＤＣＭ中０〜５％ＭｅＯＨ）により、表題化合物３２ｆ５９１ｍｇ（６３．６％、２工程）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．９４
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝６６４．３
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.33 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.18 - 7.39 (m, 14H), 6.86 (d, J=8.80 Hz, 4H), 5.86 (dd, J=9.66, 2.93 Hz, 1H), 4.62 (t, J=5.20 Hz, 1H), 3.83 (dd, J=10.94, 4.46 Hz, 1H), 3.73 (s, 6H), 3.66 (dd, J=11.00, 5.99 Hz, 1H), 3.47 - 3.61 (m, 2H), 3.01 (s, 2H), 2.72 - 2.84 (m, 2H), 2.22 - 2.31 (m, 1H), 2.14 - 2.21 (m, 1H), 1.66 (s, 3H).
【０５２２】
３２ｇ：１−［（２Ｒ，６Ｒ）−４−アセチル−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（ヒドロキシ−メチル）モルホリン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
一般手順Ｂに従って、粗生成物３１ｇから出発して、最終シリカゲル精製（ＤＣＭ中０〜５％ＭｅＯＨ）により、表題化合物３２ｇ６００ｍｇ（６９．６％、２工程）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．７７
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝６１４．２
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.43 (s, 1H), 7.64 (s, 0.65H), 7.58 (s, 0.35H), 7.36 - 7.47 (m, 2H), 7.20 - 7.33 (m, 7H), 6.84 - 6.91 (m, 4H), 5.88 (dd, J=10.58, 2.75 Hz, 0.35H), 5.74 - 5.80 (m, 0.65H), 5.00 (t, J=4.40 Hz, 0.65H), 4.63 (t, J=4.83 Hz, 0.35H), 4.39 (br d, J=10.88 Hz, 0.65H), 4.22 (br d, J=13.33 Hz, 0.35H), 3.89 (m, 0.35H), 3.74 (s, 6.65H), 3.42 - 3.65 (m, 2H), 3.35 - 3.41 (m, 1H), 3.00 - 3.12 (m, 2H), 2.83 - 2.98 (m, 1H), 2.03 (m, 3H), 1.73 (s, 3H).
【０５２３】
３２ｈ：１−［（２Ｒ，６Ｒ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−ヘキサデカノイル−６−（ヒドロキシメチル）モルホリン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
一般手順Ｂに従って、粗生成物３１ｈから出発して、最終シリカゲル精製（ＤＣＭ中０〜５％ＭｅＯＨ）により、表題化合物３２ｈ８７４ｍｇ（７６．９％、２工程）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．３３
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝３０４．３（ＤＭＴ+）
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.42 (br s, 1H), 7.61, 7.57 (2 x s, 1H), 7.41 (m, 2H), 7.20 - 7.34 (m, 7H), 6.87 (m, 4H), 5.84 (m, 0.5H), 5.77 (m, 0.5H), 4.95 (m, 0.5H), 4.64 (m, 0.5H), 4.40 (m, 0.5H), 4.24 (m, 0.5H), 3.95 (m, 0.5H), 3.69 -3.84 (m, 0.5H), 3.74 (s, 6H), 3.41 - 3.62 (m, 2H), 3.00 - 3.15 (m, 2H), 2.22 - 2.40 (m, 2H), 1.72 (s, 3H), 1.47 (br s, 2H), 1.23 (br s, 26H), 0.82 - 0.90 (m, 3H).
【０５２４】
ホスホルアミダイト３３ａ〜３３ｈの製造のための一般手順Ｃ
出発物質３２ａ〜３２ｈ（１．０ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド（３．０ｍｍｏｌ）を、乾燥ＤＣＭ２５ｍｌに溶解した。２−シアノエチルＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピル−ホスホロジアミダイト（１．５ｍｍｏｌ）を添加した後、溶液をアルゴン雰囲気下、室温で撹拌した。１．５時間後、反応溶液をＨ2Ｏ５０ｍｌで洗浄した。層を分離し、水相をＤＣＭで抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させた。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン中０〜１００％メチル−ｔｅｒｔ．−ブチルエーテル、カラムはｎ−ヘプタン＋１％ＮＥｔ3で事前調整）により精製して、最終ホスホロアミダイト３３ａ〜３３ｈを得た。
【０５２５】
３３ａ：３−［［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−メチル−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−２−イル］メトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシ−プロパンニトリル
一般手順Ｃに従って、３２ａ（５４０ｍｇ、０．９２ｍｍｏｌ）を表題化合物３３ａに変換し、これを無色泡状物（５６８ｍｇ、７８．５％）として単離した。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.35 (br s, 1H), 7.54, 7.52 (2 x s, 1H), 7.35 -7.44 (m, 2H), 7.20 - 7.32 (m, 7H), 6.86 (d, J=8.85 Hz, 4H), 5.90 (m, 1H), 4.02 (m, 1H), 3.79 - 3.92 (m, 1H), 3.73 (s, 6H), 3.39 - 3.64 (m, 4H), 2.98 - 3.12 (m, 2H), 2.66 - 2.84 (m, 3H), 2.53 - 2.64 (m, 1H), 2.23, 2.21 (2 x s, 3H), 1.99 - 2.18 (m, 2H), 1.72, 1.69 (2 x s, 3H), 0.91 - 1.12 (m, 12H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,9, 147,7.
【０５２６】
３３ｂ：３−［［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−ブチル−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−２−イル］メトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシ−プロパンニトリル
一般手順Ｃに従って、３２ｂ（７５０ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）を表題化合物３３ｂに変換し、これを無色泡状物（５６９ｍｇ、７０．２％）として単離した。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.36 (br s, 1H), 7.57, 7.54 (2 x s, 1H), 7.35 -7.44 (m, 2H), 7.20 - 7.32 (m, 7H), 6.86 (d, J=8.78 Hz, 4H), 5.90 (m, 1H), 3.83 - 4.01 (m, 2H), 3.73 (s, 6H), 3.53 - 3.64 (m, 2H), 3.39 - 3.52 (m, 2H), 3.06 - 3.15 (m, 1H), 2.96 - 3.05 (m, 1H), 2.73 - 2.90 (m, 2H), 2.63 - 2.70 (m, 1H), 2.59 (m, 1H), 2.24 - 2.48 (m, 2H), 1.99 -2.19 (m, 2H), 1.73, 1.70 (2 x s, 3H), 1.27 - 1.42 (m, 4H), 0.95 - 1.18 (m, 12H), 0.87 (m, 3H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,4, 147,0.
【０５２７】
３３ｃ：３−［［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）−４−オクチル−モルホリン−２−イル］メトキシジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシ−プロパンニトリル
一般手順Ｃに従って、３２ｃ（７４５ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を表題化合物３３ｃに変換し、これを無色泡状物（５３７ｍｇ、６０．６％）として単離した。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.37, 11.36 (2 x s, 1H), 7.56, 7.53 (2 x s, 1H), 7.40 (m, 2H), 7.20 - 7.31 (m, 7H), 6.86 (d, J=8.72 Hz, 4H), 5.89 (m, 1H), 3.75 - 4.02 (m, 2H), 3.73 (s, 6H), 3.53 - 3.63 (m, 2H), 3.41 - 3.52 (m, 2H), 3.10 (m, 1H), 2.95 - 3.05 (m, 1H), 2.73 - 2.89 (m, 2H), 2.52 - 2.69 (m, 2H), 2.23 - 2.41 (m, 2H), 1.98 - 2.18 (m, 2H), 1.73, 1.70 (2 x s, 3H), 1.14 - 1.49 (m, 12H), 0.96 - 1.11 (m, 12H), 0.85 (m, 3H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,3, 147,1.
【０５２８】
３３ｄ：３−［［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−ヘキサデシル−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−２−イル］メトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］−オキシプロパンニトリル
一般手順Ｃに従って、３２ｄ（６７５ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）を表題化合物３３ｄに変換し、これを無色泡状物（６０８ｍｇ、７９．１％）として単離した。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.36 (br s, 1H), 7.56, 7.53 (2 x s, 1H), 7.37 -7.42 (m, 2H), 7.19 - 7.31 (m, 7H), 6.86 (d, J=8.85 Hz, 4H), 5.89 (m, 1H), 3.82 - 4.02 (m, 2H), 3.73 (s, 6H), 3.53 - 3.63 (m, 2H), 3.39 - 3.52 (m, 2H), 3.07 - 3.13 (m, 1H), 2.95 - 3.05 (m, 1H), 2.71 - 2.90 (m, 2H), 2.62 - 2.68 (m, 1H), 2.58 (m, 1H), 2.23 - 2.39 (m, 2H), 1.96 -2.18 (m, 2H), 1.73, 1.70 (2 x s, 3H), 1.13 - 1.45 (m, 28H), 0.96 - 1.13 (m, 12H), 0.82 - 0.88 (m, 3H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,3, 147,1.
【０５２９】
３３ｅ：３−［［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−シクロヘキシル−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−２−イル］メトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシ−プロパンニトリル
一般手順Ｃに従って、３２ｅ（６９５ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ）を表題化合物３３ｅに変換し、これを無色泡状物（５６０ｍｇ、７６．２％）として単離した。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.36, 11.35 (2 x br s, 1H), 7.57, 7.54 (2 x s, 1H), 7.37 - 7.43 (m, 2H), 7.21 - 7.31 (m, 7H), 6.86 (d, J=8.85 Hz, 4H), 5.86 (m, 1H), 3.87 - 4.02 (m, 2H), 3.73 (s, 6H), 3.53 - 3.65 (m, 2H), 3.40 - 3.52 (m, 2H), 3.12 (m, 1H), 3.00 (m, 1H), 2.79 - 2.88 (m, 1H), 2.64 - 2.77 (m, 2H), 2.54 - 2.63 (m, 1H), 2.23 - 2.41 (m, 3H), 1.64 - 1.73 (s, 7H), 0.91 - 1.25 (m, 18H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,2, 146,7.
【０５３０】
３３ｆ：３−［［（２Ｓ，６Ｒ）−４−ベンジル−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−２−イル］メトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシ−プロパンニトリル
一般手順Ｃに従って、３２ｆ（５８９ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）を表題化合物３３ｆに変換し、これを無色泡状物（６６８ｍｇ、９９．０％）として単離した。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.34 (s, 1H), 7.54, 7.53 (2 x s, 1H), 7.19 - 7.39 (m, 14H), 6.80 - 6.89 (m, 4H), 5.92 (m, 1H), 4.10 (dd, J=9.94, 7.56 Hz, 0.5H), 4.01 (m, 0.5H), 3.93 (m, 0.5H), 3.85 (m, 0.5H), 3.73 (s, 6H), 3.35 - 3.64 (m, 6H), 3.03 - 3.12 (m, 2H), 2.98 (d, J=9.10 Hz, 1H), 2.72 - 2.91 (m, 2H), 2.62 - 2.69 (m, 1H), 2.12 - 2.26 (m, 2H), 1.71, 1.70 (2 x s, 3H), 0.97 - 1.10 (m, 9H), 0.91 (d, J=6.71 Hz, 3H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,2.
【０５３１】
３３ｇ：３−［［（２Ｓ，６Ｒ）−４−アセチル−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−２−イル］メトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシ−プロパンニトリル
一般手順Ｃに従って、３２ｇ（５９８ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）を表題化合物３３ｇに変換し、これを無色泡状物（７２８ｍｇ、定量的）として単離した。粗生成物の精製を、ｔｅｒｔ．−ブチル−メチルエーテル１０ｍｌに溶解し、ｎ−ペンタン４０ｍｌを添加することにより行った。沈殿物を遠心分離し、上澄み液を廃棄した。この洗浄手順をさらに２回繰り返した。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.41 (br s, 1H), 7.56 - 7.71 (m, 1H), 7.35 - 7.46 (m, 2H), 7.20 - 7.33 (m, 7H), 6.82 - 6.91 (m, 4H), 5.79 - 5.97 (m, 1H), 4.27 - 4.45 (m, 1H), 3.53 - 3.97 (m, 4H), 3.73 (s, 6H), 3.32 - 3.50 (m, 4H), 3.02 - 3.19 (m, 2H), 2.80 - 3.00 (m, 1H), 2.55 - 2.74 (m, 2H), 1.99 - 2.09 (m, 3H), 1.69 - 1.81 (m, 3H), 1.04 - 1.13 (m, 9H),
0.97 - 1.03 (m, 3H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,9, 146,9, 146,8, 146,5.
【０５３２】
３３ｈ：３−［［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−ヘキサデカノイル−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−２−イル］メトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシ−プロパンニトリル
一般手順Ｃに従って、３２ｈ（８７２ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）を表題化合物３３ｈに変換し、これを無色泡状物（９１５ｍｇ、８７．７％）として単離した。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.42, 11.40 (2 x s, 1H), 7.55 - 7.71 (m, 1H), 7.40 (m, 2H), 7.18 - 7.34 (m, 7H), 6.82 - 6.91 (m, 4H), 5.73 - 5.99 (m, 1H), 4.27 - 4.50 (m, 1H), 3.98 (m, 0.5H), 3.75 - 3.85 (m, 1.5H), 3.73 (s, 6H), 3.53 - 3.65 (m, 2H), 3.37 - 3.52 (m, 2H), 3.02 - 3.25 (m, 2H), 2.82 - 3.00 (m, 1H), 2.67 (m, 1H), 2.58 (m, 1H), 2.21 - 2.48 (m, 2H), 1.69 - 1.80 (m, 3H), 1.49 (br s, 2H), 1.18 - 1.31 (m, 26H), 1.04 - 1.12 (m, 6H), 0.92 -1.03 (m, 6H), 0.82 - 0.89 (m, 3H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,7, 147,3, 147,2, 146,7.
【０５３３】
〔実施例Ａ．９〕
合成スキーム９
【化５３】
2021517126.tif 000055
【０５３４】
９０ｂ：１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−シクロヘキシル−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン−２−イル］ピリミジン−２，４−ジオン
ＭｅＯＨ（４５０ｍｌ）中の２４ｂ（２５ｇ、３３ｍｍｏｌ）、シクロヘキサノン（１６．１ｇ、１６５ｍｍｏｌ）および４ÅＭＳ（３０ｇ）の混合物に、ＡｃＯＨを添加して、ｐＨを２５℃で５〜６の間に調整した。４０℃で１時間撹拌した後、ＮａＢＨ3ＣＮ（１０．３ｇ、１６５ｍｍｏｌ）を４０℃で少量ずつ添加した。撹拌を１２時間続けて完全な変換を達成した。混合物を濾過し、濾液を真空中で濃縮した。残留物をＥｔＯＡｃ（１５００ｍｌ）で希釈し、Ｈ2Ｏ（２×５００ｍｌ）および飽和ＮａＣｌ溶液（５００ｍｌ）で洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4で脱水し、濾過し、真空中で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ  ２：１）により精製して、９０ｂ２８ｇ（８２％）を無色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.42 (br s, 1H), 7.71 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.41 (br d, J=7.5 Hz, 2H), 7.31 - 7.19 (m, 7H), 6.85 (d, J=8.8 Hz, 4H), 5.82 (br dd, J=2.6, 9.8 Hz, 1H), 5.73 (d, J=8.1 Hz, 1H), 4.14 (br d, J=8.9 Hz, 1H), 3.93 (br d, J=8.8 Hz, 1H), 3.74 (d, J=2.0 Hz, 6H), 3.13 (br d, J=9.4 Hz, 1H), 2.99 - 2.83 (m, 2H), 2.72 (br d, J=10.8 Hz, 1H), 2.31 - 2.17 (m, 3H), 1.78 - 1.48 (m, 5H), 1.32 - 1.09 (m, 6H), 1.01 - 0.83 (m, 21H).
【０５３５】
９１ｂ：１−［（２Ｒ，６Ｒ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−シクロヘキシル−６−（ヒドロキシメチル）モルホリン−２−イル］ピリミジン−２，４−ジオン
ＴＨＦ（２８０ｍｌ）中の化合物９０ｂ（２８ｇ、３５．１ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮＥｔ3（３５ｇ、３５１ｍｍｏｌ）およびＮＥｔ3・３ＨＦ（５６．３ｇ、３５１ｍｍｏｌ）を室温で添加した。Ｎ2雰囲気下、７０℃で１６時間撹拌した後、完全な脱保護がＴＬＣにより検出された。混合物を真空中で濃縮し、残留物をＥｔＯＡｃ（５００ｍｌ）で希釈した。有機溶液を水（２×２００ｍｌ）および飽和ＮａＣｌ溶液（２００ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、濾過し、真空中で濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ  １：２）により精製して、表題化合物９１ｂ２０ｇ（８８．８％）を無色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.41 (br s, 1H), 7.66 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.47 -7.40 (m, 2H), 7.36 - 7.21 (m, 7H), 6.92 (br d, J=8.7 Hz, 4H), 5.84 (br dd, J=2.3, 9.4 Hz, 1H), 5.65 (br d, J=7.9 Hz, 1H), 4.67 (br s, 1H), 3.88 (br d, J=10.9 Hz, 1H), 3.78 (s, 6H), 3.72 (br d, J=10.5 Hz, 1H), 3.15 (br d, J=9.0 Hz, 1H), 3.10 - 2.96 (m, 2H), 2.91 (br d, J=9.8 Hz, 1H), 2.73 (br d, J=11.5 Hz, 1H), 2.35 - 2.18 (m, 3H), 1.73 (br s, 4H), 1.32 - 1.10 (m, 9H).
【０５３６】
９２ｂ：３−［［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−シクロヘキシル−６−（２，４−ジオキソピリミジン−１−イル）モルホリン−２−イル］メトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］−オキシプロパンニトリル
ＤＣＭ（１５０ｍｌ）中の９１ｂ（１４ｇ、２２．４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（１１．５ｇ、８９．８ｍｍｏｌ）および３−［クロロ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシプロパンニトリル（６．９ｇ、２９．２ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下で添加した。溶液を１３℃で０．５時間撹拌して完全な変換を達成した。反応混合物を真空中でおよそ５０ｍｌの体積に濃縮し、シリカ（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ  ２：１）上で精製して、９２ｂ１２．０ｇ（６５．５％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．６０
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ−iＰｒ2Ｎ＋ＯＨ］+＝７５９．５
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 11.34 (br s, 1H), 7.59 - 7.69 (2 x d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.35 -7.44 (m, 2H), 7.20 - 7.32 (m, 7H), 6.87 (m, 4H), 5.84 (m, 1H), 5.59 - 5.68 (2 x d, J=8.1 Hz, 1H), 3.99 - 4.09 (m, 1H), 3.93 (m, 1H), 3.73 (s, 6H), 3.54 - 3.68 (m, 2H), 3.40 - 3.53 (m, 2H), 3.16 (br d, J=8.9 Hz, 1H), 2.96 (t, J=9.5 Hz, 1H), 2.88 (m, 1H), 2.66 - 2.80 (m, 2H), 2.60 (m, 1H), 2.15 - 2.35 (m, 3H), 1.69 (m, 4H), 1.53 (m, 1H), 0.95 - 1.21 (m, 17H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,4, 146,7.
【０５３７】
９０ｃ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−シクロヘキシル−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン−２−イル］−６−オキソ−１Ｈ−プリン−２−イル］−２−メチル−プロパンアミド
９０ｂの合成について記載したプロトコールに従って、出発物質２４ｃ３５ｇ（４２．４ｍｍｏｌ）から、シリカゲル精製（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ  １：１）の後に、所望の生成物９０ｃ３２ｇ（６４．７％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｄ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．１８
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝９０７．５
【０５３８】
９１ｃ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｒ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−シクロヘキシル−６−（ヒドロキシメチル）モルホリン−２−イル］−６−オキソ−１Ｈ−プリン−２−イル］−２−メチル−プロパンアミド
９１ｂの合成について記載したプロトコールに従って、出発物質９０ｃ３２ｇ（３５．３ｍｍｏｌ）から、シリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ  １：２）の後に、所望の生成物９１ｃ２１ｇ（７９％）を無色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.10 (s, 1H), 11.68 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.38 (d, J=7.3 Hz, 2H), 7.31 - 7.20 (m, 7H), 6.85 (d, J=8.7 Hz, 4H), 5.91 (dd, J=3.1, 8.8 Hz, 1H), 4.63 (t, J=5.2 Hz, 1H), 3.87 - 3.78 (m, 1H), 3.74 (s, 7H), 3.06 - 2.94 (m, 3H), 2.84 -2.65 (m, 3H), 2.43 (d, J=11.6 Hz, 1H), 2.37 - 2.28 (m, 1H), 2.37 - 2.28 (m, 1H), 1.72 (br s, 4H), 1.56 (br d, J=10.8 Hz, 1H), 1.27 - 1.02 (m, 13H).
【０５３９】
９２ｃ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−［［２−シアノエトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］−４−シクロヘキシル−モルホリン−２−イル］−６−オキソ−１Ｈ−プリン−２−イル］−２−メチル−プロパンアミド
９２ｂの合成について記載したプロトコールに従って、出発物質９１ｃ２０ｇ（２６．６ｍｍｏｌ）から、室温で１５分間の反応時間およびシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ  １：１）の後に、所望の生成物９２ｃ２０ｇ（７９％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．７０、２．７３
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ−iＰｒ2Ｎ＋ＯＨ］+＝８６８．５
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 12.08 (br s, 1H), 11.63 (br s, 1H), 8.07, 8.03 (2 x s, 1H), 7.37 (d, J=8.2 Hz, 2H), 7.18 - 7.29 (m, 7H), 6.79 - 6.87 (m, 4H), 5.89 (m, 1H), 3.92 - 4.11 (m, 2H), 3.72 - 3.74 (m, 6H), 3.55 - 3.72 (m, 2H), 3.38 - 3.51 (m, 2H), 3.10 (m, 1H), 2.96 -3.05 (m, 2H), 2.66 - 2.93 (m, 4H), 2.55 - 2.62 (m, 1H), 2.27 - 2.45 (m, 2H), 1.71 (m, 4H), 1.55 (m, 1H), 0.83 - 1.29 (m, 23H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,5, 146,7.
【０５４０】
９０ｅ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−シクロヘキシル−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン−２−イル］プリン−６−イル］ベンズアミド
９０ｂの合成について記載したプロトコールに従って、出発物質２４ｅ５８ｇ（６８．８ｍｍｏｌ）から、シリカゲル精製（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ  ２：１）の後に、所望の生成物９０ｅ４９ｇ（７７％）を無色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.21 (br s, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.06 (br d, J=7.2 Hz, 2H), 7.68 - 7.61 (m, 1H), 7.60 - 7.52 (m, 2H), 7.38 (dd, J=1.6, 7.8 Hz, 2H), 7.26 - 7.15 (m, 7H), 6.76 (dd, J=3.1, 9.0 Hz, 4H), 6.16 (dd, J=3.1, 9.7 Hz, 1H), 4.29 (d, J=9.0 Hz, 1H), 3.95 (d, J=8.8 Hz, 1H), 3.70 (d, J=1.0 Hz, 6H), 3.17 - 3.02 (m, 3H), 2.94 (d, J=9.3 Hz, 1H), 2.83 (br d, J=11.1 Hz, 1H), 2.36 - 2.30 (m, 1H), 1.82 - 1.70 (m, 4H), 1.55 (br d, J=11.2 Hz, 1H), 1.34 - 1.15 (m, 8H), 1.04 - 0.91 (m, 23H).
【０５４１】
９１ｅ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｒ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−シクロヘキシル−６−（ヒドロキシメチル）モルホリン−２−イル］プリン−６−イル］ベンズアミド
９１ｂの合成について記載したプロトコールに従って、出発物質９０ｅ４９ｇ（５３．０ｍｍｏｌ）から、１２時間の反応時間およびシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ  １：２）の後に、所望の生成物９１ｅ３８ｇ（８８％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｄ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝０．９４
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝７６９．４
【０５４２】
９２ｅ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−［［２−シアノエトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］−４−シクロヘキシル−モルホリン−２−イル］プリン−６−イル］ベンズアミド
９２ｂの合成について記載したプロトコールに従って、出発物質９１ｅ２２ｇ（３１．２ｍｍｏｌ）から、室温で１５分間の反応時間およびシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ  １：１）の後に、所望の生成物９２ｅ２２．３ｇ（８０．５％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．７８
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ−iＰｒ2Ｎ＋ＯＨ］+＝８８６．６
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 11.18 (s, 1H), 8.75, 8.73 (2 x s, 1H), 8.59, 8.57 (2 x s, 1H), 8.04 (d, J=7.8 Hz, 2H), 7.64 (t, J=7.3 Hz, 1H), 7.55 (t, J=7.6 Hz, 2H), 7.37 (m, 2H), 7.17 - 7.27 (m, 7H), 6.77 - 6.84 (m, 4H), 6.18 (m, 1H), 3.97 - 4.17 (m, 2H), 3.71 (m, 6H), 3.56 - 3.71 (m, 2H), 3.43 - 3.56 (m, 2H), 2.92 - 3.15 (m, 4H), 2.78 - 2.91 (m, 1H), 2.70 (t, J=6.0 Hz, 1H), 2.55 - 2.62 (m, 1H), 2.31 - 2.47 (m, 2H), 1.74 (m, 4H), 1.55 (m, 1H), 0.90 - 1.29 (m, 17H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,0, 146,7.
【０５４３】
〔実施例Ａ．１０〕
合成スキーム１０
【化５４】
2021517126.tif 000056
【０５４４】
９３：１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−シクロヘキシル−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン−２−イル］−４−（１，２，４−トリアゾール−１−イル）ピリミジン−２−オン
ＡＣＮ（４１５ｍｌ）中の１，２，４−トリアゾール（４１．５ｇ、０．６０１ｍｏｌ）の混合物に、ＰＯＣｌ3（３０．５８ｇ、０．２０ｍｏｌ）を２０℃で滴下添加した。０℃で、ＤＩＰＥＡ（１２６ｇ、０．９７７ｍｏｌ）を慎重に添加し、撹拌を０℃で５時間続け、続いて出発物質９０ｂ（２０ｇ、２５．０ｍｍｏｌ）を一度に添加した。溶液を２０℃で３時間撹拌して完全な変換を達成した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（５００ｍｌ）および水（１ｌ）に注ぎ入れた。有機層を分離し、水相をＥｔＯＡｃ（２×２００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相を飽和ＮａＨＣＯ3（５００ｍｌ）および飽和ＮａＣｌ溶液（５００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、濾過し、真空中で濃縮して、表題化合物９３（２９ｇ、粗製）を黄色泡状物として得、これをさらに精製することなく使用した。
【０５４５】
９０ｆ：Ｎ−［１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−シクロヘキシル−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン−２−イル］−２−オキソ−ピリミジン−４−イル］ベンズアミド
ジオキサン（３１０ｍｌ）中のベンズアミド（３０．３ｇ、０．２５１ｍｏｌ）の溶液に、ＮａＨ（１０ｇ、２５１ｍｍｏｌ）を０℃で少量ずつ添加した。２０℃で３０分間撹拌した後、トリアゾール９３（２９ｇ、粗生成物２５．０ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌を２時間続けて完全な変換を達成した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（５００ｍｌ）および飽和ＮＨ4Ｃｌ溶液（８１）に注ぎ入れた。水層を分離し、ＥｔＯＡｃ（２×５００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相を水（２×５００ｍｌ）および飽和ＮａＣｌ溶液（５００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、真空中で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ  ５：１）により精製して、９０ｆ（１６ｇ、７０．８％）を黄色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｅ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．１６
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝９０１．６
【０５４６】
９１ｆ：Ｎ−［１−［（２Ｒ，６Ｒ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−シクロヘキシル−６−（ヒドロキシメチル）モルホリン−２−イル］−２−オキソ−ピリミジン−４−イル］ベンズアミド
９１ｂの合成について記載したプロトコールに従って、出発物質９０ｆ４０ｇ（４４．４ｍｍｏｌ）から、１６時間の反応時間およびシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ  １：１）の後に、所望の生成物９１ｆ２４ｇ（７２．７％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｅ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝０．９２
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝７４５．３
【０５４７】
９２ｆ：Ｎ−［１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−［［２−シアノエトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］−４−シクロヘキシル−モルホリン−２−イル］−２−オキソ−ピリミジン−４−イル］ベンズアミド
９２ｂの合成について記載したプロトコールに従って、出発物質９１ｆ１６ｇ（２２．８ｍｍｏｌ）から、室温で１５分間の反応時間およびシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ  １：１）の後に、所望の生成物９２ｆ１７ｇ（６５．５％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．９２
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ−iＰｒ2Ｎ＋ＯＨ］+＝８６２．５
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 11.29, 11.26 (2 x br s, 1H), 8.14, 8.09 (2 x br d, J=7.6 Hz, 1H), 8.01 (br d, J=7.8 Hz, 2H), 7.63 (m, 1H), 7.51 (t, J=7.3 Hz, 2H), 7.35 - 7.45 (m, 3H), 7.21 - 7.34 (m, 7H), 6.88 (m, 4H), 5.96 (m, 1H), 3.94 - 4.15 (m, 2H), 3.74 (s, 6H), 3.55 -3.69 (m, 2H), 3.41 - 3.53 (m, 2H), 3.19 - 3.28 (m, 1H), 2.95 - 3.08 (m, 2H), 2.66 - 2.92 (m, 2H), 2.52 - 2.64 (m, 1H), 2.32 (m, 1H), 2.13 - 2.28 (m, 2H), 1.70 (m, 4H), 1.54 (m, 1H), 0.91 - 1.27 (m, 17H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,5, 146,7.
【０５４８】
〔実施例Ａ．１１〕
合成スキーム１１
【化５５】
2021517126.tif 000057
【０５４９】
９４ａ：１−［（２Ｒ，６Ｓ）−４−シクロヘキシル−６−（ヒドロキシメチル）−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）−モルホリン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
ＤＭＴ−エーテル９０ａ５．０９ｇ（６．２６ｍｍｏｌ）を、ジオキサン類似体４０ｅの合成について記載したプロトコールに従って、ジクロロ酢酸で脱保護した。シリカ（ＤＣＭ中０〜１０％ＭｅＯＨ）上でクロマトグラフィー精製した後、所望の生成物９４ａを無色泡状物（３．０７ｇ、９６．０％）として単離した。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．４７
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝５１０．３
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.29 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 5.75 (dd, J=9.9, 2.7 Hz, 1H), 4.60 (t, J=6.0 Hz, 1H), 3.97 (d, J=9.3 Hz, 1H), 3.77 (d, J=9.3 Hz, 1H), 3.38 - 3.53 (m, 2H), 2.78 (m, 2H), 2.15 - 2.38 (m, 3H), 1.78 (s, 3H), 1.65 - 1.76 (m, 4H), 1.50 - 1.59 (m, 1H), 1.13 - 1.27 (m, 5H), 0.99 - 1.13 (m, 21H).
【０５５０】
９５ａ：［（２Ｓ，６Ｒ）−４−シクロヘキシル−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）−２−（トリイソ−プロピルシリルオキシ−メチル）モルホリン−２−イル］メチルベンゾエート
出発物質９４ａ３．０５ｇ（６．０ｍｍｏｌ）を、乾燥ピリジン６０ｍｌに溶解した。室温で、塩化ベンゾイル１．０６ｇ（８７７．６μｌ、７．５ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ７４５．９ｍｇ（６．０ｍｍｏｌ）を添加し、溶液を４時間撹拌した。追加の塩化ベンゾイル２１２．０ｍｇ（１７５．５μｌ、１．５ｍｍｏｌ）を添加した後、溶液を終夜撹拌し、そのときに完全な変換が検出された。溶媒を真空中で除去し、残留物をＥｔＯＡｃに溶解した。溶液を５％クエン酸、飽和ＮａＨＣＯ3および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させた。シリカ（ＤＣＭ中０〜５％ＭｅＯＨ）上で精製して、ベンゾエート９５ａ３．０５ｇ（８３．０％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝３．５７
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝６１４．５
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.32 (s, 1H), 7.97 - 8.02 (m, 2H), 7.68 (s, 1H), 7.52 - 7.58 (m, 2H), 7.47 - 7.49 (m, 1H), 5.80 (dd, J=9.9, 2.9 Hz, 1H), 4.40 (d, J=11.3 Hz, 1H), 4.31 (d, J=11.4 Hz, 1H), 4.17 (d, J=9.4 Hz, 1H), 3.95 (d, J=9.4 Hz, 1H), 2.95 (br d, J=11.5 Hz, 1H), 2.87 (br d, J=10.0 Hz, 1H), 2.44 (br d, J=11.4 Hz, 1H), 2.33 (m, 2H), 1.69 - 1.80 (m, 4H), 1.66 (s, 3H), 1.52 - 1.60 (m, 1H), 1.13 - 1.31 (m, 5H), 0.96 - 1.12 (m, 21H).
【０５５１】
９６ａ：［（２Ｒ，６Ｒ）−４−シクロヘキシル−２−（ヒドロキシメチル）−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）−モルホリン−２−イル］メチルベンゾエート
シリルエーテル９５ａ３．０ｇ（４．８９ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ１５ｍｌに溶解した。ＮＥｔ3７．４９ｇ（７３．３ｍｍｏｌ、１０．２９ｍｌ）およびＮＥｔ3・３ＨＦ６．０３ｇ（３６．７ｍｍｏｌ、６．１０ｍｌ）を添加した後、溶液を７５℃で２時間撹拌して完全な変換を達成した。反応物を室温に冷却し、５％ＮａＨＣＯ3溶液１００ｍｌで洗浄した。濾過した後、水溶液をＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させた。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０〜１０％ＭｅＯＨ）により精製して、所望の脱保護生成物９６ａ１．２３ｇ（５５．０％）を得たが、これは、遊離ＯＨ基へのベンゾイルエステル移動の結果として生じた約２０％の異性体不純物を含有していた。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．６３
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝４５８．４
【０５５２】
９７ａ：［（２Ｒ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−シクロ−ヘキシル−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−２−イル］メチルベンゾエート
出発物質９６ａ２．０５ｇ（４．４８ｍｍｏｌ）を、乾燥ピリジン４０ｍｌに溶解した。室温で、ＤＣＭ１０ｍｌ中のＤＭＴ−Ｃｌ１．６４ｇ（４．７０ｍｍｏｌ）の溶液を滴下添加し、反応溶液を終夜撹拌した。ｉＰｒＯＨ５ｍｌを添加した後、反応溶液を蒸発させ、残留物をＤＣＭに溶解した。有機溶液をＭｇＳＯ４で脱水し、蒸発させた。得られた粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０〜１０％ＭｅＯＨ）により精製し、続いてＨＰＬＣ（カラム：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＺ−Ｈ／１４０、２５０×４．６ｍｍ、１．０ｍｌ／分、３０℃；溶離液：ＭｅＯＨ／ＥｔＯＨ  １：１）により第２の精製を行って、表題化合物９７ａ１．０５ｇ（３０．８％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝３．１７
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝７５８．６
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.31 (s, 1H), 7.73 - 7.79 (m, 2H), 7.63 - 7.71 (m, 1H), 7.46 - 7.54 (m, 3H), 7.35 (d, J=7.1 Hz, 2H), 7.16 - 7.28 (m, 7H), 6.79 (dd, J=8.9, 3.6 Hz, 4H), 5.65 (dd, J=9.9, 2.9 Hz, 1H), 4.50 (d, J=11.3 Hz, 1H), 4.40 (d, J=11.1 Hz, 1H), 3.69 (d, J=1.59 Hz, 6H), 3.55 (d, J=8.6 Hz, 1H), 3.01 (d, J=11.4 Hz, 1H), 2.81 (d, J=9.9 Hz, 1H), 2.66 - 2.69 (m, 1H), 2.23 - 2.39 (m, 2H), 1.61 - 1.78 (m, 4H), 1.68 (s, 3H), 1.51 - 1.60 (m, 1H), 0.98 - 1.30 (m, 5H).
【０５５３】
９８ａ：１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−シクロヘキシル−６−（ヒドロキシ−メチル）モルホリン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
ベンゾイルエステル９７ａ１．０ｇ（１．３２ｍｍｏｌ）を、ＥｔＯＨ／Ｐｙｒ．（５：１）１２ｍｌに溶解した。０℃で、２Ｍ  ＮａＯＨ溶液６．５８ｍｌ（１３．１６ｍｍｏｌ）を添加した。冷却浴を取り外した後、反応溶液を室温で１時間撹拌して完全な変換を達成した。溶液をＨ2Ｏ５０ｍｌで希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、１０％クエン酸、５％ＮａＨＣＯ3および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ4で脱水し、溶媒を蒸発させた後、粗生成物をシリカ（ｎ−ヘプタン中０〜５０％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、表題化合物９８ａ３２５ｍｇ（３７．７％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．３３
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝６５６．５
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.28 (s, 1H), 7.58 (d, J=1.0 Hz, 1H), 7.39 (d, J=7.5 Hz, 2H), 7.19 - 7.32 (m, 7H), 6.87 (d, J=8.8 Hz, 4H), 5.56 (dd, J=9.9, 2.7 Hz, 1H), 4.65 (t, J=6.0 Hz, 1H), 3.73 (s, 6H), 3.58 (dd, J=11.4, 6.9 Hz, 1H), 3.50 (dd, J=11.3, 5.0 Hz, 1H), 3.35 (d, J=8.7 Hz, 1H), 3.10 (d, J=8.6 Hz, 1H), 2.68 - 2.83 (m, 2H), 2.42 (d, J=11.6 Hz, 1H), 2.22 (m, 1H), 2.14 (t, J=10.4 Hz, 1H), 1.78 (s, 3H), 1.58 - 1.71 (m, 4H), 1.53 (br d, J=12.2 Hz, 1H), 1.00 - 1.32 (m, 5H).
【０５５４】
９９ａ：３−［［（２Ｒ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−シクロ−ヘキシル−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−２−イル］メトキシ−（ジイソプロピルアミノ）−ホスファニル］−オキシプロパンニトリル
出発物質９８ａ３２０ｍｇ（４８８μｍｏｌ）を、乾燥ＤＣＭ６ｍｌに溶解した。アルゴン雰囲気下で、iＰｒ2ＮＨ−テトラゾール４４ｍｇ（２４４μｍｏｌ）および２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスホロジアミダイト１９０ｍｇ（６０１μｍｏｌ）を添加し、溶液を室温で終夜撹拌した。Ｈ2Ｏ５０ｍｌおよびＤＣＭを添加した後、有機層を分離し、ＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させた。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン＋１％ＮＥｔ3で事前調整、ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）により精製して、所望のホスホルアミダイト９９ａ３２２ｍｇ（７８．６％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｂ−２：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝０．８３
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ−iＰｒ2Ｎ＋ＯＨ］+＝７７３．３
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.32, 11.30 (2 x br s, 1H), 7.57, 7.52 (2 x d, J=1.0 Hz, 1H), 7.38 (m, 2H), 7.19 - 7.32 (m, 7H), 6.84 - 6.91 (m, 4H), 5.68, 5,59 (2 x m, 1H), 3.89 (m, 0.5H), 3.59 - 3.78 (m, 3.5H), 3.73 (s, 6H), 3.46 - 3.57 (m, 2H), 3.35 (m, 1H), 3.22 (m, 1H), 2.66 - 2.84 (m, 4H), 2.40 (m, 1H), 2.17 - 2.28 (m, 2H), 1.78, 1.76 (2 x s, 3H), 1.56 - 1.72 (m, 4H), 1.47 - 1.56 (m, 1H), 1.00 - 1.31 (m, 17H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,6, 147,5.
【０５５５】
９４ｅ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｓ）−４−シクロヘキシル−６−（ヒドロキシメチル）−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン−２−イル］プリン−６−イル］ベンズアミド
ＤＭＴ−エーテル９０ｅ２．１８ｇ（２．３６ｍｍｏｌ）を、ジオキサン類似体４０ｅの合成について記載したプロトコールに従って、ジクロロ酢酸で脱保護した。シリカ（ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）上でクロマトグラフィー精製した後、所望の生成物９４ｅを無色泡状物（１．１４ｇ、７７．５％）として単離した。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．９４
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝６２３．７
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.17 (s, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.04 (br d, J=7.3 Hz, 2H), 7.65 (m, 1H), 7.55 (t, J=7.1 Hz, 2H), 6.10 (m, 1H), 4.60 (m, 1H), 4.14 (m, 1H), 3.88 (m, 1H), 3.45 (br d, J=6.2 Hz, 2H), 3.12 (m, 1H), 2.77 - 2.93 (m, 2H), 2.45 (m, 1H), 2.35 (m, 1H), 1.76 (m, 4H), 1.56 (br d, J=11.5 Hz, 1H), 1.16 - 1.33 (m, 4H), 0.99 - 1.15 (m, 22H).
【０５５６】
９５ｅ：［（２Ｓ，６Ｒ）−６−（６−ベンズアミドプリン−９−イル）−４−シクロヘキシル−２−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）−モルホリン−２−イル］メチルベンゾエート
出発物質９４ｅ１．１３ｇ（１．８ｍｍｏｌ）を、乾燥ピリジン２０ｍｌに溶解した。室温で、塩化ベンゾイル３３４．９ｍｇ（２７６．５μｌ、２．４ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ２２３．９ｍｇ（１．８ｍｍｏｌ）を添加し、溶液を３時間撹拌した。追加の塩化ベンゾイル１０３．０ｍｇ（８５．１μｌ、０．７ｍｍｏｌ）を添加した後、溶液を、完全な変換が達成されるまで撹拌した。溶媒を真空中で除去し、残留物をＥｔＯＡｃに溶解した。溶液をＨ2Ｏ、２×１０％クエン酸、飽和ＮａＨＣＯ3および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させた。シリカ（ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、ベンゾエート９５ｅ８７７ｍｇ（６６．５％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝３．６５
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝７２７．８
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.15 (m, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.02 (d, J=7.3 Hz, 2H), 7.92 (d, J=7.4 Hz, 2H), 7.59 - 7.69 (m, 2H), 7.48 - 7.58 (m, 4H), 6.15 (m, 1H), 4.24 - 4.40 (m, 3H), 3.99 (m, 1H), 3.17 (m, 1H), 2.98 - 3.10 (m, 2H), 2.60 (m, 1H), 2.42 (m, 1H), 1.70 - 1.90 (m, 4H), 1.57 (br d, J=12.1 Hz, 1H), 1.16 - 1.32 (m, 4H), 0.99 - 1.14 (m, 22H).
【０５５７】
９６ｅ：［（２Ｒ，６Ｒ）−６−（６−ベンズアミドプリン−９−イル）−４−シクロヘキシル−２−（ヒドロキシメチル）モルホリン−２−イル］メチルベンゾエート
シリルエーテル９５ｅ８７０ｍｇ（１．２ｍｍｏｌ）を、４５ｅについて記載したプロトコールに従って脱保護した。クロマトグラフィー精製（ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）した後、９６ｅを無色泡状物（６１６ｍｇ、９０．２％）として単離した。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．９０
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝５７１．５
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.13 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.02 (br d, J=7.3 Hz, 2H), 7.93 (m, 2H), 7.65 (m, 2H), 7.48 - 7.59 (m, 4H), 6.16 (dd, J=8.7, 3.0 Hz, 1H), 4.97 (br s, 1H), 4.21 - 4.38 (m, 2H), 3.89 (br d, J=10.5 Hz, 1H), 3.80 (br d, J=10.2 Hz, 1H), 3.15 (m, 1H), 3.05 (m, 1H), 2.93 (br d, J=11.6 Hz, 1H), 2.63 (m, 1H), 2.37 - 2.44 (m, 1H), 1.65 - 1.82 (m, 4H), 1.57 (br d, J=11.7 Hz, 1H), 1.13 - 1.32 (m, 4H), 1.01 - 1.13 (m, 1H).
【０５５８】
９７ｅ：［（２Ｒ，６Ｒ）−６−（６−ベンズアミドプリン−９−イル）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−シクロヘキシル−モルホリン−２−イル］メチルベンゾエート
出発物質９６ｅ６１０ｍｇ（１．１ｍｍｏｌ）を乾燥ピリジン３０ｍｌに溶解し、蒸発させた。この手順を３回繰り返した。次いで、化合物を乾燥ピリジン３０ｍｌに溶解し、続いてＮＥｔ3１６２．７ｍｇ（２２３．６μｌ、１．６ｍｍｏｌ）およびＤＭＴ−Ｃｌ５５４．４ｍｇ（１．６ｍｍｏｌ）を添加した。反応溶液を室温で終夜撹拌し、そのときに完全な変換が達成された。溶媒を真空中で除去し、残留物をＥｔＯＡｃに溶解した。Ｈ2Ｏ、１０％クエン酸（２×）、飽和ＮａＨＣＯ3および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した後、有機相をＭｇＳＯ4で脱水した。溶媒を蒸発させ、シリカゲルクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）により精製して、ＤＭＴ−エーテル９７ｅ８０７ｍｇ（８６．５％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝３．２６
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝８７３．８
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.17 (br s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.02 (m, 2H), 7.73 (m, 2H), 7.64 (m, 2H), 7.54 (m, 2H), 7.47 (m, 2H), 7.39 (m, 2H), 7.18 -7.28 (m, 7H), 6.75 - 6.84 (m, 4H), 5.95 (dd, J=9.4, 2.9 Hz, 1H), 4.44 (m, 2H), 3.65 - 3.72 (m, 7H), 3.44 (m, 1H), 3.02 - 3.14 (m, 2H), 2.94 (br t, J=10.3 Hz, 1H), 2.67 (m, 1H), 2.41 (br d, J=7.7 Hz, 1H), 1.66 - 1.83 (m, 4H), 1.57 (br d, J=11.62 Hz, 1H), 1.13 - 1.29 (m, 4H), 1.01 - 1.12 (m, 1H).
【０５５９】
９８ｅ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−シクロヘキシル−６−（ヒドロキシメチル）モルホリン−２−イル］プリン−６−イル］ベンズアミド
化合物６３ｅについて記載したプロトコールに従って、９７ｅ８００ｍｇ（０．９ｍｍｏｌ）を２Ｍ  ＮａＯＨ溶液で鹸化した。クロマトグラフィー精製（ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）した後、所望の化合物９８ｅ６３４ｍｇ（９０．０％）を無色泡状物として単離した。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．６９
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝７６７．５
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.18 (br s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.04 (d, J=7.7 Hz, 2H), 7.64 (m, 1H), 7.55 (t, J=7.6 Hz, 2H), 7.44 (d, J=7.5 Hz, 2H), 7.27 - 7.34 (m, 6H), 7.22 (m, 1H), 6.89 (dd, J=9.1, 2.6 Hz, 4H), 5.84 (dd, J=9.9, 2.7 Hz, 1H), 4.68 (br t, J=5.8 Hz, 1H), 3.74, 3.73 (2 x s, 6H), 3.47 - 3.63 (m, 3H), 3.28 (m, 1H), 3.03 (br d, J=9.9 Hz, 1H), 2.86 (br d, J=11.6 Hz, 1H), 2.72 (t, J=10.5 Hz, 1H), 2.53 (m, 1H), 2.24 - 2.34 (m, 1H), 1.61 - 1.73 (m, 4H), 1.54 (br d, J=11.4 Hz, 1H), 1.00 - 1.30 (m, 5H).
【０５６０】
９９ｅ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｒ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−［［２−シアノエトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］−４−シクロヘキシル−モルホリン−２−イル］プリン−６−イル］−ベンズアミド
出発化合物９８ｅ６２５ｍｇ（８１３μｍｏｌ）を、４３ｅについて記載したプロトコールに従ってホスフィチル化して、所望のホスホルアミダイト９９ｅ７１０ｍｇ（９０．１％）を無色固体として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｂ−３：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝０．６３
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ−iＰｒ2Ｎ＋ＯＨ−ＡBzl］+＝６４７．３
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.16 (br s, 1H), 8.72, 8.70 (2 x s, 1H), 8.60, 8.57 (2 x s, 1H), 8.04 (d, J=8.1 Hz, 2H), 7.63 (m, 1H), 7.55 (m, 2H), 7.44 (m, 2H), 7.20 - 7.36 (m, 7H), 6.85 - 6.94 (m, 4H), 5.83 - 5.95 (m, 1H), 3.83 - 3.95 (m, 1H), 3.74 (s, 6H), 3.34 -3.73 (m, 7H), 3.00 - 3.11 (m, 2H), 2.76 - 2.92 (m, 2H), 2.71, 2.62 (2 x m, 2H), 2.23 - 2.39 (m, 1H), 1.59 - 1.77 (m, 4H), 1.47 - 1.58 (m, 1H), 0.99 - 1.30 (m, 14H), 0.90 - 0.97 (m, 3H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,5, 147,3.
【０５６１】
Ｂ．ＸがＯである式（Ｉ）のヌクレオチド類似体の合成
【０５６２】
〔実施例Ｂ．１〕
合成スキーム１２
【化５６】
2021517126.tif 000058
【０５６３】
３４ａ：３−（ベンジルオキシメチル）−１−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）−５−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）テトラヒドロフラン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
ＤＭＦ７２８ｍｌ中の化合物４ａ（７２．７５ｇ、０．１６４ｍｍｏｌ）の混合物に、ＢＯＭ−Ｃｌ４４．６ｇ（０．２８５ｍｏｌ）およびＤＢＵ５０ｇ（０．３２７ｍｏｌ）を−３０℃で添加した。混合物を−１５℃〜−３０℃で３時間撹拌して完全な変換を達成した。混合物を飽和ＮａＨＣＯ3溶液（２ｌ）に注ぎ入れ、ＥｔＯＡｃ（３×１ｌ）で抽出した。合わせた有機層を無水Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、濾過し、真空中で濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ２０：１）により精製して、ＢＯＭ保護生成物３４ａ６２．７ｇ（６７．７％）を黄色油状物として得た。
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ[ppm]: 8.67-8.55 (m, 4H), 7.70 (tt, J=7.64, 1.77 Hz, 2H), 7.52-7.20 (m, 10H), 5.69-5.62 (m, 1H), 5.52-5.44 (m, 1H), 4.74-4.54 (m, 2H), 4.51-4.42 (m, 1H), 4.11-3.63 (m, 6H), 2.01-1.84 (m, 4H), 1.30-0.85 (m, 21H).
【０５６４】
３４ｂ：３−（ベンジルオキシメチル）−１−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）−５−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）テトラヒドロフラン−２−イル］ピリミジン−２，４−ジオン
３４ａについて記載したプロトコールに従って、出発化合物４ｂ２４ｇ（０．０５６ｍｏｌ）から、シリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ２０：１〜１０：１）の後に、３４ｂ２２．０ｇ（７１．７％）を無色固体として得た。
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ[ppm]: 8.02 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.34-7.31 (m, 5H), 5.95 (d, J=8.0 Hz, 1H), 5.85 (d, J=8.0 Hz, 1H), 5.35-5.32 (m, 3H), 5.08 (d, J=4.0 Hz, 1H), 4.59 (s, 2H), 4.50 (d, J=4.0 Hz, 1H), 4.24-4.19 (m, 2H), 4.09 (t, J=4.0 Hz, 1H), 3.83 (s, 2H), 3.65 (t, J=4.0 Hz, 2H), 1.03-1.02 (m, 21H).
【０５６５】
３５ａ：３−（ベンジルオキシメチル）−１−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−５−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］−メチル］−３，４−ジヒドロキシ−５−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）テトラヒドロフラン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
出発物質３４ａ７．４２ｇ（１３．１ｍｍｏｌ）をピリジン４０ｍｌと２回共蒸留し、ＤＣＭ／ピリジン（４：１）１５０ｍｌに溶解した。ＤＭＴ−Ｃｌ４．７７ｇ（１３．８ｍｍｏｌ）を添加した後、溶液を室温で６５時間撹拌した。溶液をクエン酸水溶液（１０％）、続いてＨ2Ｏ、飽和ＮａＨＣＯ3およびＮａＣｌ溶液で２回洗浄した。有機相を分離し、ＭｇＳＯ4で脱水し、シリカゲルクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）により精製して、所望の生成物３５ａ８．５０ｇ（７４．７％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．３４
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｎａ］+＝８８９．５
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ[ppm]: 7.46-7.40 (m, 1H), 7.35-7.12 (m, 14H), 6.75 (d, J=7.91 Hz, 4H), 6.04 (d, J=5.52 Hz, 1H), 5.53-5.37 (m, 2H), 4.67-4.54 (m, 2H), 4.46-4.37 (m, 2H), 3.89 (d, J=10.29 Hz, 1H), 3.76-3.68 (m, 7H), 3.62 (d, J=10.16 Hz, 1H), 3.52 (br d, J=8.41 Hz, 1H), 3.40-3.33 (m, 1H), 3.17 (d, J=10.16 Hz, 1H), 1.44 (s, 3H), 1.05-0.85 (m, 21H).
【０５６６】
３５ｂ：３−（ベンジルオキシメチル）−１−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−５−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］−メチル］−３，４−ジヒドロキシ−５−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）テトラヒドロフラン−２−イル］ピリミジン−２，４−ジオン
乾燥ＤＭＦ２３０ｍｌ中の化合物３４ｂ（２１．０ｇ、３８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（９．８ｇ、７６ｍｍｏｌ）およびＤＭＴ−Ｃｌ（１５．４ｇ、４５．６ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応溶液をＮ2雰囲気下で４時間撹拌した。ＥｔＯＨ３０ｍｌを添加した後、溶媒を減圧下で除去し、残留物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ  １０：１〜１：１）により精製して、３５ｂ１９．０ｇ（５８．５％）を黄色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 7.72 (d, J=8.0 Hz, 1H), 6.90 (d, J=8.0 Hz, 4H), 7.39-7.24 (m, 14H), 5.89 (d, J=8.0 Hz, 1H), 3.51 (d, J=8.0 Hz, 1H), 5.37-5.24 (m, 4H), 4.58 (s, 2H), 4.34 (t, J=4.0 Hz, 1H), 4.24 (dd, J=12.0, 8.0 Hz, 1H), 3.73 (s, 6H), 3.40 (d, J=12.0 Hz, 1H), 3.29 (d, J=1 2.0 Hz, 1H), 1.19-0.86 (m, 21H).
【０５６７】
３５ｃ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−５−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−３，４−ジヒドロキシ−５−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）テトラヒドロフラン−２−イル］−６−オキソ−１Ｈ−プリン−２−イル］−２−メチル−プロパンアミド
無水ピリジン／ＤＣＭ（１／４）３１４ｍｌ中の４ｃ（２４ｇ、４４．５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＭＴ−Ｃｌ（１８ｇ、５３．４ｍｍｏｌ）をＮ2雰囲気下、０℃で添加した。１５℃で２時間撹拌した後、混合物を氷水５００ｍｌに注ぎ入れ、ＤＣＭ（３×３００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（３００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、真空中で濃縮した。粗生成物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ５０：１〜１０：１）により精製して、３５ｃ３７．４ｇ（定量的）を黄色固体として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.09 (s,1H), 11.65 (s,1H), 7.93 (s, 1H), 7.37-7.34 (m, 2H), 7.27 (m, 7H), 6.85-6.83 (m, 4H), 5.86 (d, J=7.2 Hz, 1H), 5.60 (d, J=6.8 Hz, 1H), 5.20 (s, 1H), 4.67-4.64 (m, 1H), 4.26-4.24 (m, 1H), 3.98-3.95 (m, 1H), 3.84 (d, J =10.4 Hz, 1H), 3.38-3.34 (m, 2H), 3.20-3.18 (m, 1H), 2.80-2.74 (m, 1H), 1.13-0.95 (m, 6H), 0.93-0.90 (m, 21H).
【０５６８】
３６ａ：３−（ベンジルオキシメチル）−１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−３，５−ジヒドロキシ−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
アセトン／水（３：１）４００ｍｌ中の３５ａ（２０ｇ、２３．０７ｍｍｏｌ）の溶液に、水１００ｍｌ中のＮａＩＯ4（６．９ｇ、３２．２９ｍｍｏｌ）の溶液を室温で添加した。１６時間撹拌した後、溶媒を真空中で除去し、残留物をＥｔＯＡｃ（３００ｍｌ）に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ3（２００ｍｌ）およびブライン（２００ｍｌ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、濾過し、真空中で濃縮して、３６ａを黄色泡状物として得、これをさらに精製することなく次の工程に使用した。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．３０、２．３２（２つの異性体）
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｎａ］+＝９０５．５
【０５６９】
３６ｂ：３−（ベンジルオキシメチル）−１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−３，５−ジヒドロキシ−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］ピリミジン−２，４−ジオン
３５ｂ２０ｇ（２３．５ｍｍｏｌ）を、３６ａについて記載したプロトコールに従って、表題化合物３６ｂに変換した（１８．６ｇ、粗製）。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．２３、２．２５（２つの異性体）
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｎａ］+＝８９１．４
【０５７０】
３６ｃ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−３，５−ジヒドロキシ−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］−６−オキソ−１Ｈ−プリン−２−イル］−２−メチル−プロパンアミド
アセトン／Ｈ2Ｏ（５：１）６９４ｍｌ中の３５ｃ（３０ｇ、３５．７ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｈ2Ｏ２４０ｍｌ中のＮａＩＯ4（１０．６２ｇ、５０ｍｍｏｌ）の溶液を０℃で添加した。１５℃で１２時間撹拌した後、混合物を氷水２００ｍｌに注ぎ入れ、ＤＣＭ（３×２００ｍｌ）で抽出した。有機層を合わせ、ブライン（３００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、真空中で濃縮して、３６ｃ（３０ｇ、粗製）を黄色泡状物として得、これをさらに精製することなく次の工程で使用した。
【０５７１】
３７ａ：３−（ベンジルオキシメチル）−１−［（１Ｒ）−１−［（１Ｓ）−１−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−１−（ヒドロキシメチル）−２−トリイソプロピルシリルオキシ−エトキシ］−２−ヒドロキシ−エチル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
ＥｔＯＨ３２０ｍｌ中の化合物３６ａ（粗生成物、２３．０７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＢＨ4（１．０５ｇ、２７．６８ｍｍｏｌ）を室温で少量ずつ添加した。混合物を終夜撹拌し、溶媒を真空中で除去した。残留物をＥｔＯＡｃ（５００ｍｌ）に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ3溶液（５００ｍｌ）およびブライン（５００ｍｌ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、濾過し、真空中で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ２０：１）の後、３７ａ１２．０ｇ（４８％）を黄色泡状物として単離した。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．３１
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｎａ］+＝８９１．５
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ[ppm]: 7.52-7.06 (m, 20H), 6.80-6.65 (m, 5H), 6.08 (dd, J=7.03, 3.76 Hz, 1H), 5.44-5.25 (m, 1H), 4.64-4.46 (m, 2H), 3.85-3.63 (m, 12H), 3.60-3.40 (m, 2H), 3.35.3.22 (m, 2H), 2.95-2.66 (m, 2H), 1.80 (s, 3H), 1.51 (s, 3H), 1.03-0.81 (m, 23H).
【０５７２】
３７ｂ：３−（ベンジルオキシメチル）−１−［（１Ｒ）−１−［（１Ｓ）−１−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］−メチル］−１−（ヒドロキシメチル）−２−トリイソプロピルシリルオキシ−エトキシ］−２−ヒドロキシ−エチル］ピリミジン−２，４−ジオン
ＥｔＯＨ２５０ｍｌ中の３６ｂ１５．３５ｇ（１７．７ｍｍｏｌ、粗製）の溶液に、ＮａＢＨ4８１８ｍｇ（２１．２ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応物を１６時間撹拌し、そのときに完全な変換が検出された。溶媒を真空中で除去し、残留物をＥｔＯＡｃに溶解した。有機溶液をＨ2Ｏ、飽和ＮａＨＣＯ3および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した後、有機層をＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させて、３７ｂ１４．８５ｇ（９８．３％）を無色泡状物として得、これをさらに精製することなく使用した。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．２３
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ］+＝３０３．２（ＤＭＴ+）
【０５７３】
３７ｃ：Ｎ−［９−［（１Ｒ）−１−［（１Ｓ）−１−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−１−（ヒドロキシ−メチル）−２−トリイソプロピルシリルオキシ−エトキシ］−２−ヒドロキシ−エチル］−６−オキソ−１Ｈ−プリン−２−イル］−２−メチル−プロパンアミド
無水ＥｔＯＨ４００ｍｌ中の３６ｃ（３０ｇ、３５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＢＨ4（１．６ｇ、４２ｍｍｏｌ）を１５〜２０℃で添加した。４時間撹拌した後、ｐＨを、１０％クエン酸溶液（約２５ｍｌ）を使用することにより７に調整した。溶媒を真空中で濃縮し、残留物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ２０：１〜１０：１）により精製して、３７ｃ２２．０ｇ（７４．５％）を黄色固体として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.06 (s,1H), 11.71 (s,1H), 8.04 (s, 1H), 7.37-7.28 (m, 3H), 7.26-7.19 (m, 11H), 6.87-6.83 (m, 4H), 6.09 (d, J1 =5.6 Hz, J2=5.6 Hz, 1H), 5.22 (d, J =5.6 Hz, 1H), 4.75 (d, J1=4.8 Hz, J2 =4.8 Hz, 1H), 3.85-3.84 (m, 2H), 3.74-3.70 (m, 9H), 3.68-3.49 (m, 2H), 3.14 (m, 1H), 2.99-2.81 (m, 1H), 1.15-1.12 (m, 6H), 0.80-0.79 (m, 21H).
【０５７４】
３８ａ：［（２Ｒ）−２−［３−（ベンジルオキシメチル）−５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル］−２−［（１Ｓ）−１−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−１−（ヒドロキシメチル）−２−トリイソプロピルシリルオキシ−エトキシ］エチル］４−メチルベンゼンスルホネート
ＤＣＭ１０８ｍｌ中の３７ａ（１０．８ｇ、１２．４３ｍｍｏｌ）、ＮＥｔ3（３．１４ｇ、３１．０７ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（１．５２ｇ、１２．４３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＭ５４ｍｌ中のＴｓ−Ｃｌ（１．９ｇ、９．９４ｍｍｏｌ）の溶液を１５℃で添加した。混合物を２時間撹拌し、続いてさらなるＴｓ−Ｃｌ５００ｍｇを添加し、ＤＣＭ５ｍｌに溶解した。１５℃でさらに１時間撹拌した後、反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ3溶液（２００ｍｌ）およびブライン（２００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、濾過し、真空中で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ  ２：１）により精製して、３８ａ（１０ｇ、７８．７％）を黄色油状物として得た。
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ[ppm]: 7.74-7.43 (m, 2H), 7.34-7.00 (m, 18H) 6.84-6.64 (m, 4H), 6.42-6.24 (m, 1H), 5.43-5.15 (m, 2H), 5.00-4.72 (m, 1H), 4.63-4.47 (m, 2H), 4.21-3.90 (m, 2H), 3.83-3.56 (m, 10H), 3.29-3.11 (m, 1H), 2.44-2.19 (m, 4H), 1.89-1.64 (m, 3H), 1.07-0.71 (m, 21H).
【０５７５】
３８ｂ：［（２Ｒ）−２−［３−（ベンジルオキシメチル）−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル］−２−［（１Ｓ）−１−［［ビス（４−メトキシ−フェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−１−（ヒドロキシメチル）−２−トリイソプロピルシリルオキシ−エトキシ］エチル］４−メチルベンゼンスルホネート
Ｔｓ−Ｃｌ１．２当量を使用することにより、３８ａについてのプロトコールに従って、３７ｂ３．０ｇ（３．５ｍｍｏｌ）を３８ｂに変換した。シリカゲル（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ  １０：１〜２：１）上で最終精製した後、表題化合物（３８ｂ）２．０ｇ（５７％）を無色泡状物として単離した。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 7.65-7.56 (m, 3H), 7.35-7.18 (m, 16H), 6.84-6.80 (m, 4H), 6.37-6.36 (m, 1H), 5.74 (s, 2H), 5.64 (d, J=12.0 Hz, 1H), 5.23-5.18 (m, 2H), 4.93-4.91 (m, 1H), 4.52 (s, 2H), 4.18-4.09 (m, 2H), 3.71 (s, 6H), 3.23-3.01 (m, 4H), 2.34 (s, 3H), 0.96-0.79 (m, 21H).
【０５７６】
３８ｃ：［（２Ｒ）−２−［（１Ｓ）−１−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−１−（ヒドロキシメチル）−２−トリイソプロピルシリルオキシ−エトキシ］−２−［２−（２−メチルプロパノイルアミノ）−６−オキソ−１Ｈ−プリン−９−イル］エチル］４−メチルベンゼンスルホネート
無水ＤＣＭ５３７ｍｌ中の３７ｃ（３１．５ｇ、４０．８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮＥｔ3（１０．３ｇ、１０２ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（４．９８ｇ、４０．８ｍｍｏｌ）をＮ2雰囲気下、０℃で添加した。１０分後、Ｔｓ−Ｃｌ（９．３ｇ、４９ｍｍｏｌ）を混合物に０℃で添加し、撹拌を１５〜２０℃で６時間続けた。溶媒を蒸発させ、残留物をカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ２０：１〜１０：１）により精製して、３８ｃ（３０ｇ、７３．７％）を黄色固体として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.03 (s,1H), 11.59 (s,1H), 8.11 (s, 2H), 7.09 (s, 1H), 7.50-7.49 (m, 2H), 7.31-7.16 (m, 12H), 6.87-6.86 (m, 4H), 6.59-6.58 (m, 2H), 6.31 (s, 1H), 4.96 (s, 1H), 4.62 (s, 1H), 4.37 (s, 1H), 4.04 (s, 2H), 3.66-3.61 (m, 4H), 3.59-3.51 (m, 1H), 3.12-3.03 (m, 2H), 2.95 (s, 6H), 2.79-2.61 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 1.20-1.11 (m, 7H), 0.86-0.79 (m, 21H).
【０５７７】
３９ａ：３−（ベンジルオキシメチル）−１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
無水ＴＨＦ３４３ｍｌおよびＭｅＯＨ３４３ｍｌ中の化合物３８ａ（１０．５ｇ、１０．２６ｍｍｏｌ）の混合物に、２Ｍ  ＮａＯＨの溶液（７４ｍＬ、１４７．４７ｍｍｏｌ）を１５℃で添加した。混合物を６５℃で３時間撹拌し、そのときに完全な変換が検出された。混合物をクエン酸水溶液（１０％）で中和し、真空中で濃縮した。残留物をＥｔＯＡｃ（７００ｍｌ）に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ3溶液（７００ｍｌ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、濾過し、真空中で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ  ５：１）により精製して、表題化合物３９ａ（４．９ｇ、４９．１％）を黄色油状物として得た。
MS (m/z) = 873,4 (M+Na)
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ[ppm]: 7.62-7.18 (m, 19H), 6.82 (br d, J=8.66 Hz, 4H), 6.10 (dd, J=10.04, 3.39 Hz, 1H), 5.53 (s, 1H), 4.74 (s, 1H), 4.26-4.15 (m, 1H), 4.04-3.88 (m, 2H), 3.81 (d, J=1.00 Hz, 7H), 3.72-3.59 (m, 1H), 3.31-3.12 (m, 3H), 1.94-1.80 (m, 3H), 1.17-0.78 (m, 23H).
【０５７８】
３９ｂ：３−（ベンジルオキシメチル）−１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］ピリミジン−２，４−ジオン
ＭｅＯＨ２５０ｍｌ中の化合物３８ｂ（１．０ｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＯＭｅ（２．５ｇ、４５．０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をＮ2雰囲気下、５０℃で３時間加熱し、そのときにＴＬＣは完全な変換を示した。溶媒を減圧下で除去し、残留物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ  １０：１〜３：１）により精製して、３９ｂ（０．２７ｇ、３３％）を白色泡状物として得た。
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ[ppm]: 7.54 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.39-7.37 (m, 2H), 7.35-7.30 (m, 6H), 7.28-7.26 (m, 3H), 7.24-7.22 (m, 1H), 6.85 (d, J=8.0 Hz, 4H), 6.05 (dd, J=12.0, 4.0 Hz, 1H), 5.79 (d, J=12.0 Hz, 1H), 5.49 (s, 2H), 4.72 (s, 2H), 4.20 (d, J=8.0 Hz, 1H), 4.0 (dd, J=12.0, 4.0 Hz, 1H), 3.94 (d, J=12.0 Hz, 1H), 3.86 (d, J=12.0 Hz, 1H), 3.79 (s, 6H), 3.56 (d, J=12.0 Hz, 1H), 3.22-3.12 (m, 3H), 1.10-0.95 (m, 21H).
【０５７９】
３９ｃ：２−アミノ−９−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（トリイソプロピル−シリルオキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］−１Ｈ−プリン−６−オン
ＭｅＯＨ６１６ｍｌ中の化合物３８ｃ（２８ｇ、２８ｍｍｏｌ）の溶液に、５Ｍ  ＮａＯＨ１５１ｍｌ（７５８ｍｍｏｌ）を１５〜２０℃で滴下添加した。混合物を６０〜７０℃の間で３０分間撹拌して完全な変換を達成した。混合物を０℃に冷却し、ｐＨを、１０％クエン酸溶液（約２００ｍｌ）を使用して７に調整した。溶媒を３０℃で濃縮し、残った水相をＤＣＭ（３×５００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ２０：１〜１０：１）により精製して、３９ｃ（１８ｇ、７９％）を黄色固体として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 10.71 (m, 1H), 7.91 (m,1H), 7.41-7.40 (m, 2H), 7.27-7.20 (m, 12H), 6.82-6.50 (m, 6H), 6.50 (s, 1H), 5.88-5.85 (m, 1H), 4.17-4.14 (m, 1H), 3.96-3.89 (m, 1H), 3.80 (m, 2H), 3.74-3.72 (m, 10H), 3.69-3.61 (m, 1H), 3.10-3.08 (m, 1H), 2.41-2.58 (m, 1H), 0.94-0.91 (m, 21H).
【０５８０】
４０ａ：１−［（２Ｒ，６Ｒ）−６−（ヒドロキシメチル）−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
ＥｔＯＡｃ５５．５ｍｌ中の化合物３９ａ（３．７ｇ、４．３５ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｐｄ（ＯＨ）2／Ｃ（２ｇ、炭素上２０％および水中５０％）およびトリクロロ酢酸（１．４２ｇ、８．７０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物をＨ2（１５ｐｓｉ）下、１５℃で１時間撹拌して完全な変換を達成した。混合物を濾過し、濾液を真空中で濃縮して、粗製の脱ベンジル化および脱トリチル化した中間体を黄色油状物として得、これをＭｅＯＨ９０ｍｌに溶解した。ＮＥｔ3（１．１４ｇ、１１．２８ｍｍｏｌ）を１５℃で添加した後、溶液を終夜撹拌し、そのときに完全な変換が検出された。溶媒を真空中で除去し、残留物をカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ５０：１）により精製して、表題化合物４０ａ９５０ｍｇ（５１．０％）を白色泡状物として得た。
MS (m/z) = 451,2 (M+Na)
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 8.22 (s, 1H), 7.26-7.17 (m, 1H), 6.06-5.93 (m, 1H), 5.52 (d, J=8.16 Hz, 1H), 4.39-4.25 (m, 1H), 4.08 (d, J=11.92 Hz, 1H), 4.01-3.90 (m, 1H), 3.85 (d, J=9.29 Hz, 1H), 3.74 (s, 2H), 3.56-3.49 (m, 1H), 3.31 (dd, J=11.29, 10.29 Hz, 1H), 2.32-2.10 (m, 1H), 2.02-1.89 (m, 3H), 1.32-0.96 (m, 17H).
【０５８１】
４０ｂ：１−［（２Ｒ，６Ｒ）−６−（ヒドロキシメチル）−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］ピリミジン−２，４−ジオン
３９ｂ９．５ｇ（１１．４ｍｍｏｌ）から出発して、４０ａについて記載したプロトコールに従って、表題化合物４０ｂを合成した。シリカゲル（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ  １０：１〜１：１）上で精製した後、４０ｂ４．０ｇ（８６％）を白色泡状物として単離した。
MS (m/z) = 415,0 (M+H)
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 8.74 (br. s., 1H), 7.47 (d, J=8.03 Hz, 1H), 6.02-5.97 (m, 1H), 5.85-5.78 (m, 1H), 5.50 (br. s., 1H), 4.32-4.26 (m, 1H), 4.08 (d, J=12.05 Hz, 1H), 4.03-3.96 (m, 1H), 3.85 (d, J=9.29 Hz, 1H), 3.73 (s, 2H), 3.51 (d, J=12.05 Hz, 1H), 3.27 (t, J=10.67 Hz, 1H), 1.19-1.09 (m, 21H).
【０５８２】
４１：１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（トリイソプロピルシリルオキシ−メチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
出発化合物４０ａ（６８３ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を、乾燥ＤＣＭ３０ｍｌに溶解した。室温で、ＮＥｔ3７５３ｍｇ（１．０３ｍｌ、７．４ｍｍｏｌ）およびＤＭＴ−Ｃｌ６１６ｍｇ（１．８ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を１６時間撹拌し、そのときに出発物質の変換が完了した。反応溶液を蒸発させ、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）により精製して、ＤＭＴ保護生成物４１  ９９０ｍｇ（９１．０％）を薄黄色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．３１
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｎａ］+＝７５３．４
【０５８３】
４２：１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（ヒドロキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
出発物質４１  ９８５ｍｇ（１．３５ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ４０ｍｌに溶解した。ＮＥｔ3５．９５ｇ（８．１８ｍｌ、５８．２５ｍｍｏｌ）およびＮＥｔ3・３ＨＦ１０．８０ｇ（１０．９２ｍｌ、６５．０ｍｍｏｌ）を添加した後、反応物を、完全な変換が検出されるまで（およそ１６時間）６５℃で撹拌した。溶媒を除去し、残留物をＨ2Ｏ／飽和ＮａＨＣＯ3溶液（１：２）４００ｍｌに注ぎ入れた。水性混合物をＤＣＭ（２×５０ｍｌ）で２回抽出した。有機層をＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させて、粗生成物９５６ｍｇを得、これをシリカ（ｎ−ヘプタン中１％ＮＥｔ3で事前調整、ｎ−ヘプタン中１０〜１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製した。所望のアルコール４２  ７６０ｍｇ（９８．２％）を無色泡状物として単離した。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．８６
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ］+＝３０３．１（ＤＭＴ+）
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.41 (s, 1H), 7.56 - 7.61 (m, 1H), 7.40 (d, J=7.34 Hz, 2H), 7.20 - 7.32 (m, 7H), 6.87 (d, J=8.56 Hz, 4H), 5.90 (dd, J=10.09, 3.36 Hz, 1H), 4.79 (t, J=5.20 Hz, 1H), 3.70 - 3.85 (m, 10H), 3.62 (d, J=11.74 Hz, 1H), 3.49 (t, J=10.76 Hz, 1H), 2.97 - 3.12 (m, 2H), 1.70 (s, 3H).
【０５８４】
４３ａ：３−［［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）−１，４−ジオキサン−２−イル］メトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシプロパンニトリル
出発物質４２  ６６９ｍｇ（１．２ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ４１５ｍｇ（５３０μｌ、３．１ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ１０ｍｌに溶解した。アルゴン雰囲気下、２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルクロロホスホルアミダイト３８４ｍｇ（３６１μｌ、１．６ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、溶液を室温に到達させながら１時間撹拌した。完全な変換を達成するために、追加のＤＩＰＥＡ０．５当量および２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルクロロホスホルアミダイトを添加し、反応物をさらに２時間撹拌した。ｎ−ブタノール２００μｌを添加した後、反応物を１０分間撹拌した。溶液をＨ2Ｏ５０ｍｌで洗浄した。水層を分離し、ＤＣＭ５０ｍｌで抽出した。有機層をＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させた。残留物をジエチルエーテル３０ｍｌに溶解し、ｎ−ペンタン１００ｍｌ中に−３０℃で滴下添加した。沈殿物を濾過し、真空中で乾燥させて、所望の生成物７２３ｍｇ（８０．１％）を無色固体として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.40 (s, 1H), 7.63, 7.60 (2 x s, 1H), 7.36 - 7.45 (m, 2H), 7.21 - 7.34 (m, 7H), 6.84 - 6.90 (m, 4H), 5.93 - 6.03 (m, 1H), 3.76 - 4.04 (m, 4H), 3.74 (s, 6H), 3.42 - 3.71 (m, 6H), 2.98 - 3.12 (m, 2H), 2.58 - 2.74 (m, 2H), 1.75, 1.72 (2 x s, 3H), 0.95 - 1.14 (m, 12H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 148,8, 148,7.
【０５８５】
４４：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（トリイソプロピルシリル−オキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］−６−オキソ−１Ｈ−プリン−２−イル］−２−メチル−プロパンアミド
無水ピリジン１５０ｍｌ中の３９ｃ（１４．１８ｇ、１８．８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＭＳＣｌ（１５．２２ｇ、１４１ｍｍｏｌ）をＮ2雰囲気下、０℃で添加した。室温で２時間撹拌した後、２−メチルプロパノイルクロリド（２．１８ｇ、２０．６ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、撹拌を室温で２時間続けて完全な変換を達成した。ＥｔＯＨ２０ｍｌを添加した後、混合物をさらに１０分間撹拌した。溶液を氷水（５００ｍｌ）に注ぎ入れ、ＤＣＭ（３×５００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を１０％クエン酸水溶液（２×５００ｍｌ）、飽和ＮａＨＣＯ3溶液（３００ｍｌ）およびブライン（２００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、濃縮した。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＦＡ／ＡＣＮ）により精製して、４４  ９．５ｇ（６１．２％）を白色固体として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 8.08 (s, 2H), 7.39-7.26 (m, 2H), 7.25-7.19 (m, 8H), 6.80 (d, J=8.0 Hz, 4H), 5.79 (d, J=1.6 Hz, 1H), 4.18-4.12 (m, 1H), 3.99-3.81 (m, 4H), 3.72 (s, 7H), 3.69 (d, J=10 Hz, 1H), 3.11 (d, J=11.2 Hz, 1H), 2.93 (d, J=10.4 Hz, 1H), 2.72 (s, 1H), 1.11-1.08 (m, 7H), 1.01-0.91 (m, 21H).
【０５８６】
４５：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（ヒドロキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］−６−オキソ−１Ｈ−プリン−２−イル］−２−メチル−プロパンアミド
４４  １．３３ｇ（１．６１ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ１６ｍｌに溶解した。ＮＥｔ3１．６５ｇ（２．２６ｍｌ、１６．１ｍｍｏｌ）およびＮＥｔ3・３ＨＦ１．３２ｇ（１．３４ｍｌ、８．０５ｍｍｏｌ）を添加した後、溶液を９０℃で２時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、続いてＮａＨＣＯ3２．５ｇおよびＨ2Ｏ１０ｍｌを添加した。２時間撹拌した後、混合物を蒸発させ、残留物をＤＣＭ／ｉＰｒＯＨ（４：１）２５ｍｌに溶解し、シリカ（ＤＣＭ中０〜１０％ＭｅＯＨ）上で精製して、表題化合物４５  ０．８３ｇ（７６．５％）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．３３
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝６７０．２
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.11 (br s, 1H), 11.66 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.37 (d, J=7.46 Hz, 2H), 7.18 - 7.29 (m, 7H), 6.84 (dd, J=8.93, 2.69 Hz, 4H), 5.98 (dd, J=8.31, 4.40 Hz, 1H), 4.81 (t, J=5.26 Hz, 1H), 3.90 - 4.02 (m, 2H), 3.67 - 3.86 (m, 4H), 3.72 (s, 6H), 3.04 (d, J=9.54 Hz, 1H), 2.96 (m, 1H), 2.75 - 2.81 (m, 1H), 1.11 (t, J=6.66 Hz, 6H).
【０５８７】
４３ｃ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−［［２−シアノエトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］−１，４−ジオキサン−２−イル］−６−オキソ−１Ｈ−プリン−２−イル］−２−メチル−プロパンアミド
アルコール４５  １００ｍｇ（１４９μｍｏｌ）、モレキュラーシーブ（４Å）０．２ｇおよびジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド１３．５ｍｇ（７５μｍｏｌ）を、乾燥ＤＣＭ２．５ｍｌに溶解した。Ａｒ雰囲気下で、２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスホロ−ジアミダイト４５．５ｍｇ（４８μｌ、１４６μｍｏｌ）を添加し、溶液を室温で２時間撹拌して完全な変換を達成した。飽和ＮａＨＣＯ3溶液を添加した後、有機相を分離し、水相をＤＣＭで１回洗浄した。合わせた有機層を飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させた。粗生成物をシリカ（ＤＣＭ＋０．５％ＮＥｔ3で事前調整、ＤＣＭ中０〜１０％ＭｅＯＨ）上で精製して、表題化合物（４３ｃ）９５ｍｇ（７３．１％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．３４、２．３６
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ］+＝７８７．２（Ｍ−iＰｒ2Ｎ＋ＯＨ＋Ｈ+）
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.09 (br s, 1H), 11.61, 11.58 (2 x s, 1H), 8.13, 8.08 (2 x s, 1H), 7.35 (m, 2H), 7.18 - 7.28 (m, 7H), 6.80 - 6.85 (m, 4H), 5.97 (m, 1H), 3.95 - 4.07 (m, 4H), 3.56 - 3.94 (m, 4H), 3.72 (s, 6H), 3.36 - 3.54 (m, 2H), 2.96 - 3.11 (m, 2H), 2.68 - 2.82 (m, 2H), 2.59 (m, 1H), 0.96 - 1.15 (m, 12H), 0.83 - 0.90 (m, 6H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 148,1, 147,9.
【０５８８】
〔実施例Ｂ．２〕
合成スキーム１３
【化５７】
2021517126.tif 000059
【０５８９】
４６：［（２Ｒ）−２−［３−（ベンジルオキシメチル）−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル］−２−［（１Ｓ）−１−［［ビス（４−メトキシ−フェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−１−（ｐ−トリルスルホニルオキシメチル）−２−トリイソプロピルシリルオキシ−エトキシ］エチル］４−メチルベンゼンスルホネート
出発物質３７ｂ１４．８０ｇ（１７．３１ｍｍｏｌ）を、乾燥ピリジン１２０ｍｌに溶解した。室温で、Ｔｓ−Ｃｌ１３．３３ｇ（６９．２３ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を室温で撹拌した。２３時間後、ＤＭＡＰ１．０ｇ（８．２ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌をさらに２４時間続けた。追加のＴｓ−Ｃｌ６．６７ｇ（３４．６２ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を４８時間撹拌して完全な変換を達成した。溶媒を除去し、残留物をＥｔＯＡｃに溶解した。有機溶液をＨ2Ｏ、クエン酸水溶液（１０％）、飽和ＮａＨＣＯ3溶液およびブラインで洗浄した。ＭｇＳＯ4で脱水し、溶媒を蒸発させて、粗生成物を得、これをシリカ（ｎ−ヘプタン＋０．５％ＮＥｔ3で事前調整、ｎ−ヘプタン中２０〜５０％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、４６  １２．０ｇ（５９．６％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．３３
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｎａ］+＝１１８５．５
【０５９０】
４７：［（２Ｒ）−２−［３−（ベンジルオキシメチル）−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル］−２−［（１Ｓ）−１−（ヒドロキシメチル）−１−（ｐ−トリルスルホニルオキシメチル）−２−トリイソプロピルシリルオキシ−エトキシ］エチル］４−メチルベンゼンスルホネート
ＤＣＭ２４０ｍｌ中の４６  １２．０ｇ（１０．３１ｍｍｏｌ）の溶液を、ＤＣＡ２６．８７ｇ（１７．２２ｍｌ、２０６．２８ｍｍｏｌ）で処理した。溶液を室温で３０分間撹拌して完全な変換を達成した。有機溶液を飽和ＮａＨＣＯ3溶液で洗浄し、層を分離した。水相をＤＣＭで２回洗浄し、合わせた有機層をＭｇＳＯ4で脱水した。溶媒を蒸発させた後、粗生成物をシリカ（ｎ−ヘプタン中０〜１００ＥｔＯＡｃ）上で精製して、表題化合物４７  ７．８４ｇ（８８．３％）を橙色油状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．１９
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝８６１．３
【０５９１】
４８：［（２Ｓ，６Ｒ）−６−［３−（ベンジルオキシメチル）−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル］−２−（トリイソプロピルシリルオキシ−メチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］メチル４−メチルベンゼンスルホネート
４７  ７．８３ｇ（９．０９ｍｍｏｌ）を、乾燥ＭｅＯＨ２５０ｍｌに溶解した。ナトリウムメトキシド２２．１１ｇ（４０９、１８ｍｍｏｌ）を添加した後、溶液を５０℃で撹拌した。２．５時間後、溶媒を除去し、残留物をＥｔＯＡｃに溶解した。有機溶液をＨ2Ｏ、およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させた。粗生成物をシリカ（ｎ−ヘプタン中２０〜１００％エチル）上で精製して、所望のジオキサン４８を無色泡状物（３．８４ｇ、６１．３％）として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．２０
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝６８９．３
【０５９２】
４９：［（２Ｒ，６Ｒ）−６−［３−（ベンジルオキシメチル）−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル］−２−（トリイソプロピルシリルオキシ−メチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］メチルベンゾエート
出発化合物４８  ３．８４ｇ（５．５７ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ２００ｍｌに溶解した。安息香酸ナトリウム２．０３ｇ（１３．９４ｍｍｏｌ）を添加した後、溶液を１５０℃で２４時間撹拌して完全な変換を達成した。反応混合物を室温に冷却し、溶媒を真空中で除去した。残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、Ｈ2Ｏおよびブラインで２回洗浄した。ＭｇＳＯ4で脱水し、溶媒を蒸発させた後、粗生成物をシリカ（ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、４９  ２．６３ｇ（７３．８％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．２４
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝６３９．３
【０５９３】
５０：［（２Ｒ，６Ｒ）−６−（２，４−ジオキソピリミジン−１−イル）−２−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］メチルベンゾエート
ＭｅＯＨ６５ｍｌ中の４９  ２．６２ｇ（４．１０ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｐｄ（ＯＨ）2（炭素上２０％）１４４ｍｇ（０．２１ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下で添加した。溶液をＨ2でパージした後、反応混合物を４ｂａｒのＨ2雰囲気下、室温で撹拌した。１時間後、触媒を濾過し、濾液を減圧下で蒸発させた。粗生成物（２．１１ｇ）をＭｅＯＨ４０ｍｌに溶解し、ＮＥｔ3３．６３ｇ（５．０ｍｌ、３５．８７ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を室温で３０分間撹拌して完全な変換を達成した。ｐＨを、クエン酸水溶液（１０％）を使用して７に調整した後、溶媒を除去し、残留物をＥｔＯＡｃに溶解した。クエン酸水溶液（１０％）および飽和ＮａＨＣＯ3溶液で洗浄した後、有機相をＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させて、５０  １．９７ｇ（９９．３％、粗製）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．１２
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝５１９．３
【０５９４】
５１：［（２Ｒ，６Ｒ）−６−（２，４−ジオキソピリミジン−１−イル）−２−（ヒドロキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］メチルベンゾエート
５０  ９８０ｍｇ（１．８９ｍｍｏｌ）を、乾燥ＴＨＦ３５ｍｌに溶解した。室温で、ピリジン−ＨＦ（６５％）７．２０ｇ（６．５５ｍｌ、４７．２４ｍｍｏｌ）を添加し、溶液を１．５時間撹拌した。さらなるピリジン−ＨＦ（６５％）７．２０ｇを添加した後、撹拌を５時間続け、そのときに完全な変換が検出された。固体ＮａＨＣＯ3（およそ２４ｇ）を添加した後、反応物を１．５時間撹拌した。無機塩を濾別し、濾液を蒸発させた。粗生成物をシリカ（ＤＣＭ中０〜５％ＭｅＯＨ）上で精製して、表題化合物５１（４９４ｍｇ、７２．２％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．２２
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝３６３．１
【０５９５】
５２：［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（２，４−ジオキソピリミジン−１−イル）−１，４−ジオキサン−２−イル］メチルベンゾエート
ＤＣＭ２０ｍｌ中の５１  ４９０ｍｇ（１．３５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ８７４ｍｇ（１．１８ｍｌ、６．７６ｍｍｏｌ）およびＤＭＴ−Ｃｌ５８４ｍｇ（１．６９ｍｍｏｌ）を室温で添加した。１６時間撹拌した後、溶液を蒸発させ、粗生成物をシリカ（ｎ−ヘプタン＋０．５％ＮＥｔ3で事前調整、ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、所望のＤＭＴ−エーテル５２  ８９４ｍｇ（９９．５％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．９６
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｎａ］+＝６８７．２
【０５９６】
５３：１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（ヒドロキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］ピリミジン−２，４−ジオン
５２  ８８８ｍｇ（１．３４ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ２０ｍｌおよびＭｅＯＨ５ｍｌに溶解した。０℃で、２Ｍ  ＮａＯＨ溶液６．６８ｍｌ（１３．３６ｍｍｏｌ）を添加し、溶液を室温に到達させながら１時間撹拌した。０℃まで冷却した後、クエン酸水溶液（１０％）１２ｍｌを添加し、混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、飽和ＮａＨＣＯ3溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ4で脱水した後、溶媒を除去した。粗生成物をシリカ（ｎ−ヘプタン＋０．５％ＮＥｔ3で事前調整、ｎ−ヘプタン中０〜１００％（ＥｔＯＡｃ＋５％ＭｅＯＨ））上で精製して、５３  ７３０ｍｇ（９７．５％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．７８
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝５５９．４
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.42 (br s, 1H), 7.67 (d, J=8.07 Hz, 1H), 7.39 (d, J=6.95 Hz, 2H), 7.19 - 7.33 (m, 7H), 6.85 - 6.90 (m, 4H), 5.89 (dd, J=10.03, 3.18 Hz, 1H), 5.66 (d, J=8.07 Hz, 1H), 4.80 (t, J=5.26 Hz, 1H), 3.70 - 3.83 (m, 10H), 3.55 (d, J=11.62 Hz, 1H), 3.44 (m, 1H), 3.08 (d, J=9.41 Hz, 1H), 2.97 (d, J=9.41 Hz, 1H).
【０５９７】
４３ｂ：３−［［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（２，４−ジオキソピリミジン−１−イル）−１，４−ジオキサン−２−イル］メトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシプロパンニトリル
出発化合物５３  ７２５ｍｇ（１．２９ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド１２２ｍｇ（０．７１ｍｍｏｌ）を、乾燥ＤＣＭ２０ｍｌに溶解した。アルゴン雰囲気下、２−シアノエチルＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスホロ−ジアミダイト４２９ｍｇ（４５２μｌ、１．４３ｍｍｏｌ）を室温で添加し、溶液を１６時間撹拌した。さらなるジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド１２２ｍｇ（０．７１ｍｍｏｌ）および２−シアノエチルＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスホロジアミダイト４２９ｍｇ（４５２μｌ、１．４３ｍｍｏｌ）を添加した後、撹拌を２時間続けて完全な変換を達成した。溶媒を除去し、残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、Ｈ2Ｏおよび飽和ＮａＨＣＯ3溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ4で脱水した後、溶媒を蒸発させ、粗生成物をジエチルエーテル２５ｍｌに溶解した。撹拌しながら、有機溶液をｎ−ペンタン１５０ｍｌ中に滴下した。沈殿物を濾過し、真空中４０℃で乾燥させて、表題化合物４３ｂ７５１ｍｇ（７６．３％）を無色固体として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.39 (br s, 1H), 7.65 - 7.73 (m, 1H), 7.34 - 7.43 (m, 2H), 7.19 - 7.34 (m, 7H), 6.84 - 6.90 (m, 4H), 5.95 (m, 1H), 5.66 (m, 1H), 3.92 - 4.10 (m, 2H), 3.78 - 3.91 (m, 2H), 3.73 (s, 6H), 3.41 - 3.68 (m, 6H), 3.11 (m, 1H), 2.98 (m, 1H), 2.70 (m, 1H), 2.61 (m, 1H), 0.94 - 1.14 (m, 12H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 148,9, 148,7.
【０５９８】
〔実施例Ｂ．３〕
合成スキーム１４
【化５８】
2021517126.tif 000060
【０５９９】
５４：［（２Ｓ，６Ｒ）−６−（２，４−ジオキソピリミジン−１−イル）−２−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］メチルベンゾエート
４０ｂ２．６６ｇ（６．４２ｍｍｏｌ）を、乾燥ピリジン３５ｍｌに溶解した。室温で、塩化ベンゾイル１．３７ｇ（１．１３ｍｌ、９．６２ｍｍｏｌ）を滴下添加し、溶液を１６時間撹拌して完全な変換を達成した。溶媒を真空中で除去し、残留物をＥｔＯＡｃに溶解した。１０％クエン酸水溶液（２×）、飽和ＮａＨＣＯ3およびＮａＣｌ溶液で洗浄した後、有機層をＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させた。粗生成物をシリカ（ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、５４  ２．０ｇ（６０．０％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝３．０２
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝５１９．４
【０６００】
５５：［（２Ｓ，６Ｒ）−６−（４−アミノ−２−オキソ−ピリミジン−１−イル）−２−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］メチルベンゾエート
乾燥ＡＣＮ中の５４  １．９９ｇ（３．６１ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮＥｔ3６．２８ｇ（８．６３ｍｌ、６１．４３ｍｍｏｌ）および１Ｈ−１，２，４−トリアゾール３．０６ｇ（４３．３６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を０℃に冷却し、激しく撹拌しながら、乾燥ＡＣＮ１５ｍｌ中のＰＯＣｌ3１．６６ｇ（１．０１ｍｌ、１０．８４ｍｍｏｌ）の溶液を滴下添加した。１時間後、溶媒を真空中で除去し、残留物に、飽和ＮａＨＣＯ3／Ｈ2Ｏ混合物（１：１）１５０ｍｌを添加した。水性混合物をＤＣＭで３回抽出し、合わせた有機層をＭｇＳＯ４で脱水した。溶媒を蒸発させた後、粗生成物を乾燥ＡＣＮ５０ｍｌに溶解し、続いてＮＨ3水溶液（３２％）５０ｍｌを添加した。終夜（１７時間）撹拌した後、溶液を濃縮し、残った水性混合物をＤＣＭ（２×１００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ4で脱水した。溶媒を蒸発させて、５５  １．９３ｇ（定量的、粗生成物）を薄黄色泡状物として得、これをさらに精製することなく使用した。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．５９
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝５１８．４
【０６０１】
５６：［（２Ｓ，６Ｒ）−６−（４−ベンズアミド−２−オキソ−ピリミジン−１−イル）−２−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］メチルベンゾエート
５５  １．９３ｇ（３．７２ｍｍｏｌ）を、乾燥ピリジン３０ｍｌに溶解した。室温で、塩化ベンゾイル０．７９ｇ（０．６６ｍｌ、５．５９ｍｍｏｌ）を滴下添加し、溶液を１８時間撹拌して完全な変換を達成した。溶媒を真空中で除去し、残留物をＥｔＯＡｃに溶解した。１０％クエン酸水溶液（２×）、飽和ＮａＨＣＯ3およびＮａＣｌ溶液で洗浄した後、有機層をＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させた。粗生成物をシリカ（ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、５６  １．９１ｇ（８２．５％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝３．２７
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝６２２．５
【０６０２】
５７：Ｎ−［１−［（２Ｒ，６Ｒ）−６−（ヒドロキシメチル）−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］−２−オキソ−ピリミジン−４−イル］ベンズアミド
５６  ９５２ｍｇ（１．５３ｍｍｏｌ）を、ＥｔＯＨ／ピリジン（１：１）２０ｍｌに溶解した。０℃で、１Ｍ  ＮａＯＨ溶液９．１９ｍｌ（９．１９ｍｍｏｌ）を添加し、溶液を０℃で３時間撹拌し、そのときに完全な変換が検出された。クエン酸一水和物（およそ６５０ｍｇ、Ｈ2Ｏ１５ｍｌに溶解）を使用して、ｐＨを６にした。有機溶媒を蒸発させた後、水層をＥｔＯＡｃで抽出した。有機相をクエン酸水溶液（１０％）、Ｈ2Ｏおよび飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させた後、粗生成物をシリカ（ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、表題化合物５７  ６７８ｍｇ（８５．５％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．７２
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝５１８．２
【０６０３】
５８：Ｎ−［１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（トリイソプロピルシリルオキシ−メチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］−２−オキソ−ピリミジン−４−イル］ベンズアミド
５７  ６７３ｍｇ（１．３０ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ／ピリジン（１：１）２０ｍｌに溶解した。ＤＭＴ−Ｃｌ７１９ｍｇ（２．０８ｍｍｏｌ）を室温で添加した後、溶液を２時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物をＥｔＯＡｃに溶解した。２×クエン酸水溶液（１０％）および飽和ＮａＨＣＯ3溶液で洗浄した後、有機層をＭｇＳＯ4で脱水し、真空中で濃縮した。粗生成物をシリカ（ｎ−ヘプタン＋０．５％ＮＥｔ3で事前調整、ｎ−ヘプタン中０〜７０％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、ＤＭＴ−エーテル５８  ９７５ｍｇ（９１．５％）を薄黄色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝３．６１
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝８１８．４
【０６０４】
５９：Ｎ−［１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（ヒドロキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］−２−オキソ−ピリミジン−４−イル］ベンズアミド
５８  ９７０ｍｇ（１．１８ｍｍｏｌ）およびＮＥｔ3１．６８ｇ（２．３１ｍｌ、１６．５６ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ２０ｍｌに溶解した。ＮＥｔ3・３ＨＦ３．１５ｇ（３．１８ｍｌ、１８．９３ｍｍｏｌ）を添加した後、反応物を６５℃で４８時間撹拌して完全な変換を達成した。室温に冷却した後、混合物を飽和ＮａＨＣＯ3溶液２００ｍｌに注ぎ入れ、１．５時間撹拌した。ＤＣＭ２×１００ｍｌで抽出した後、合わせた有機層をＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させた。シリカ（ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）上で最終精製して、５９  ７４５ｍｇ（９４．９％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．６１
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝６６４．３
1H-NMR (DMSO-d6, 600 MHz) δ[ppm]: 11.31 (br s, 1H), 8.13 (br d, J=7.15 Hz, 1H), 8.00 (d, J=7.66 Hz, 2H), 7.63 (t, J=7.38 Hz, 1H), 7.51 (t, J=7.79 Hz, 2H), 7.36 - 7.42 (m, 3H), 7.22 - 7.33 (m, 7H), 6.87 - 6.91 (m, 4H), 6.03 (dd, J=9.72, 3.12 Hz, 1H), 4.84 (t, J=5.50 Hz, 1H), 3.94 (dd, J=11.19, 3.12 Hz, 1H), 3.84 - 3.89 (m, 1H), 3.72 - 3.81 (m, 8H), 3.56 (d, J=11.92 Hz, 1H), 3.33 - 3.38 (m, 1H), 3.16 (d, J=9.35 Hz, 1H), 3.02 (d, J=9.17 Hz, 1H).
【０６０５】
４３ｄ：Ｎ−［１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−［［２−シアノエトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］−１，４−ジオキサン−２−イル］−２−オキソ−ピリミジン−４−イル］ベンズアミド
出発化合物５９  ７１５ｍｇ（１．０８ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド５５９ｍｇ（３．２３ｍｍｏｌ）を、乾燥ＤＣＭ２０ｍｌに溶解した。アルゴン雰囲気下、２−シアノエチルＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスホロ−ジアミダイト５０２ｍｇ（５２９μｌ、１．６２ｍｍｏｌ）を室温で添加し、溶液を１６時間撹拌して完全な変換を達成した。Ｈ2Ｏ４０ｍｌを添加した後、有機層を分離し、水相をＤＣＭで抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させた。粗生成物をシリカ（ｎ−ヘプタン＋１．０％ＮＥｔ3で事前調整、ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＭＴＢ−エーテル／ＤＣＭ（１：１））上で精製して、表題化合物４３ｄ８８７ｍｇを無色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.30 (br s, 1H), 8.15 (2 x d, J=7.53 Hz, 1H), 8.00 (m, 2H), 7.63 (m, 1H), 7.51 (m, 2H), 7.20 - 7.44 (m, 10H), 6.89 (br d, J=8.72 Hz, 4H), 6.03 - 6.13 (m, 1H), 3.78 - 4.17 (m, 4H), 3.74 (s, 6H), 3.35 - 3.71 (m, 6H), 3.20 (m, 1H), 3.03 (m, 1H), 2.89 (m, 1H), 2.72 (m, 1H), 0.89 - 1.22 (m, 12H).
31P-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 148,2, 147,7.
【０６０６】
〔実施例Ｂ．４〕
合成スキーム１５
【化５９】
2021517126.tif 000061
【０６０７】
６０：［（２Ｓ，６Ｒ）−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）−２−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］メチルベンゾエート
化合物５４について記載したプロトコールに従って、４０ａ１．０ｇ（２．３３ｍｍｏｌ）から、シリカ（ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）上での精製の後に、ベンゾイル化生成物６０  １．２４ｇ（８６．４％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝３．１０
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝５３１．６
【０６０８】
６１ａ：［（２Ｓ，６Ｒ）−２−（ヒドロキシメチル）−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）−１，４−ジオキサン−２−イル］メチルベンゾエート
６０  １．０７ｇ（２．０１ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ２０ｍｌに溶解した。室温で、ピリジン−ＨＦ（６５％）１．５３ｇ（１．３９ｍｌ、１０．０３ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１８時間撹拌した。さらなるピリジン−ＨＦ（６５％）３．０６ｇ（２．７８ｍｌ、２０．０６ｍｍｏｌ）を添加した後、溶液を６５℃で５時間撹拌し、そのときに完全な変換が検出された。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ3溶液２５０ｍｌに注ぎ入れた。１時間撹拌した後、混合物をＤＣＭ（３×５０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させた。粗生成物をシリカ（ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、６１ａ６８０ｍｇ（９０．０％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．４６
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝３７５．３
【０６０９】
６１ｄ：［（２Ｓ，６Ｒ）−６−（４−ベンズアミド−２−オキソ−ピリミジン−１−イル）−２−（ヒドロキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］メチルベンゾエート
化合物６１ａについて記載したプロトコールに従って、ピリジン−ＨＦ１０．０当量を使用して、５６  ９５２ｍｇ（１．５３ｍｍｏｌ）から、６１ｄ４７１ｍｇ（６６．１％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．８９
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝４６６．１
【０６１０】
６２ａ：［（２Ｒ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）−１，４−ジオキサン−２−イル］メチルベンゾエート
６１ａ６７５ｍｇ（１．７９ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ／ピリジン（１：１）１０ｍｌに溶解した。ＤＣＭ１５ｍｌ中のＤＭＴ−Ｃｌ８０６ｍｇ（２．３３ｍｍｏｌ）の溶液を添加した後、反応溶液を室温で５．５時間撹拌し、続いてさらなるＤＭＴ−Ｃｌ４０３ｍｇ（１．１７ｍｍｏｌ）を添加した。撹拌を１８時間続け、そのときに完全な変換が検出された。溶媒を蒸発させ、残留物をＥｔＯＡｃに溶解した。クエン酸水溶液（１０％）および飽和ＮａＨＣＯ3溶液で２回洗浄した後、有機層をＭｇＳＯ4で脱水し、真空中で濃縮した。粗生成物をシリカ（ｎ−ヘプタン＋０．５％ＮＥｔ3で事前調整、ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、ＤＭＴ−エーテル６２ａ１．１５ｇ（９４．１％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．７６
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝６７７．３
【０６１１】
６２ｄ：［（２Ｒ，６Ｒ）−６−（４−ベンズアミド−２−オキソ−ピリミジン−１−イル）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−１，４−ジオキサン−２−イル］メチルベンゾエート
６２ａについて記載したプロトコールに従って、出発化合物６１ｄ４６７ｍｇ（１．００ｍｍｏｌ）をＤＭＴ保護して、６２ｄ６７７ｍｇ（８７．９％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．９５
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝７６６．４
【０６１２】
６３ａ：１−［（２Ｒ，６Ｒ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（ヒドロキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］−５−メチル−ピリミジン−２，４−ジオン
出発化合物６２ａ（５８０ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ／ＭｅＯＨ（４：１）２５ｍｌに溶解した。室温で、２Ｍ  ＮａＯＨ溶液４．２７ｍｌ（８．５５ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を３０分間撹拌した。固体クエン酸一水和物および飽和ＮａＨＣＯ3溶液を使用して、ｐＨを７にした。有機溶媒を真空中で除去し、水相をＤＣＭ（２×３０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ4で脱水した。蒸発させた後、表題化合物６３ａ４８１ｍｇ（９８．０％、粗製）を無色固体として得、これをさらに精製することなく使用した。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．８２
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝５７３．３
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.35 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.39 (d, J=7.34 Hz, 2H), 7.20 - 7.33 (m, 7H), 6.89 (d, J=8.31 Hz, 4H), 5.75 (m, 1H), 4.83 (t, J=5.81 Hz, 1H), 3.74 (s, 6H), 3.57 - 3.72 (m, 4H), 3.51 - 3.56 (m, 2H), 3.20 - 3.29 (m, 2H), 1.79 (d, J=0.86 Hz, 3H).
【０６１３】
６３ｄ：Ｎ−［１−［（２Ｒ，６Ｒ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（ヒドロキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］−２−オキソ−ピリミジン−４−イル］ベンズアミド
６２ｄ６７２ｍｇ（０．８８ｍｍｏｌ）を、ＥｔＯＨ／ピリジン（１：１）２０ｍｌに溶解した。０℃で、１Ｍ  ＮａＯＨ溶液５．２５ｍｌ（５．２５ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を１時間撹拌した。クエン酸水溶液を使用して、ｐＨを７にした。ＥｔＯＡｃ２００ｍｌおよびＨ2Ｏを添加した後、有機相を分離し、クエン酸水溶液（１０％）、Ｈ2ＯおよびＮａＣｌ溶液で２回洗浄した。ＭｇＳＯ4で脱水し、溶媒を蒸発させた後、粗生成物をシリカ（ｎ−ヘプタン＋０．５％ＮＥｔ3で事前調整、ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、表題化合物６３ｄ５５５ｍｇ（９５．５％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．４９
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝６６２．３
1H-NMR (DMSO-d6, 600 MHz) δ[ppm]: 11.28 (br s, 1H), 8.31 (br d, J=6.79 Hz, 1H), 8.00 (d, J=7.66 Hz, 2H), 7.63 (t, J=7.43 Hz, 1H), 7.52 (t, J=7.79 Hz, 2H), 7.39 (m, 3H), 7.21 -7.33 (m, 7H), 6.87 - 6.91 (m, 4H), 5.80 (dd, J=9.81, 3.21 Hz, 1H), 4.89 (t, J=5.96 Hz, 1H), 3.85 (dd, J=11.19, 3.12 Hz, 1H), 3.79 (m, 1H), 3.74 (s, 6H), 3.64 (d, J=11.92 Hz, 1H), 3.59 (m, 2H), 3.26 - 3.30 (m, 2H), 3.20 (t, J=10.55 Hz, 1H).
【０６１４】
６４ａ：３−［［（２Ｒ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）−１，４−ジオキサン−２−イル］メトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシプロパンニトリル
４３ａについて記載したプロトコールに従って、出発化合物６３ａ３８０ｍｇ（０．６６ｍｍｏｌ）をホスホロアミダイト６４ａに移した。ジエチルエーテル／ｎ−ペンタンから沈殿させた後、表題化合物（６４ａ）３４２ｍｇ（６６．７％）を無色固体として単離した。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.40, 11.39 (2 x s, 1H), 7.63, 7.61 (2 x s, 1H), 7.40 (m, 2H), 7.21 - 7.35 (m, 7H), 6.83 - 6.96 (m, 4H), 5.77 - 5.87 (m, 1H), 3.36 - 3.90 (m, 17H), 3.12 - 3.28 (m, 1H), 2.66 - 2.77 (m, 2H), 1.81 - 1.79 (2 x s, 3H), 1.02 - 1.17 (m, 12H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 148,5, 148,1.
【０６１５】
６４ｄ：Ｎ−［１−［（２Ｒ，６Ｒ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−［［２−シアノエトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］−１，４−ジオキサン−２−イル］−２−オキソ−ピリミジン−４−イル］ベンズアミド
４３ｄについて記載したプロトコールに従って、出発物質６３ｄ５２５ｍｇ（０．７９ｍｍｏｌ）をホスホロアミダイト６４ｄに移した。シリカ（ｎ−ヘプタン＋１．０％ＮＥｔ3で事前調整、ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＭＴＢ−エーテル／ＤＣＭ（１：１））上でクロマトグラフィー精製した後、表題化合物（６４ｄ）６２０ｍｇ（９０．７％）を無色泡状物として単離した。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.31 (br s, 1H), 8.22 (m, 1H), 8.01 (d, J=7.59 Hz, 2H), 7.57 - 7.69 (m, 1H), 7.52 (m, 2H), 7.39 (m, 3H), 7.20 - 7.34 (m, 7H), 6.86 - 6.92 (m, 4H), 5.88 (m, 1H), 3.39 - 3.95 (m, 11H), 3.74 (s, 6H), 3.26 - 3.34 (m, 0.5H), 3.17 -3.24 (m, 0.5H), 2.71 - 2.77 (m, 1H), 2.64 - 2.69 (m, 1H), 1.03 - 1.24 (m, 12H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,5, 147,3.
【０６１６】
〔実施例Ｂ．５〕
合成スキーム１６
【化６０】
2021517126.tif 000062
【０６１７】
６５：１−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−（ヒドロキシメチル）−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］ピリミジン−２，４−ジオン
出発物質５０  ９８０ｍｇ（１．８９ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ／ＭｅＯＨ（４：１）４０ｍｌに溶解した。０℃で、２Ｍ  ＮａＯＨ溶液９．４５ｍｌ（１８．９０ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を０℃で１時間撹拌した。溶液を、固体クエン酸（およそ１．３３ｇ）を添加することによりｐＨ７にした。有機溶媒を真空中で除去し、水性残留物をＥｔＯＡｃ１００ｍｌで抽出した。有機層を分離し、飽和ＮａＨＣＯ3溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ4で脱水した。溶媒を蒸発させた後、粗生成物をシリカ（ＤＣＭ中０〜５％ＭｅＯＨ）上で精製して、６５  ６０３ｍｇ（７７．０％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．９０
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝４１５．３
【０６１８】
６６：１−［（２Ｒ，６Ｒ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（トリイソプロピルシリルオキシ−メチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］ピリミジン−２，４−ジオン
６５  ５９７ｍｇ（１．４４ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ９３１ｍｇ（１．２６ｍｌ、７．２０ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ２０ｍｌに溶解した。ＤＭＴ−Ｃｌ６２２ｍｇ（１．８０ｍｍｏｌ）を添加した後、溶液を室温で２２時間撹拌して完全な変換を達成した。溶媒を真空中で除去し、粗生成物をシリカ（ｎ−ヘプタン＋０．５％ＮＥｔ3で事前調整、ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、ＤＭＴ−エーテル６６  ８６０ｍｇ（８３．３％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．２５
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｎａ］+＝７３９．４
【０６１９】
６７：１−［（２Ｒ，６Ｒ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（ヒドロキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］ピリミジン−２，４−ジオン
６６  ８５４ｍｇ（１．１９ｍｍｏｌ）を、ＮＭＰ１７ｍｌ中のＮＥｔ3５．２６ｇ（７．２３ｍｌ、５１．４９ｍｍｏｌ）およびＮＥｔ3・３ＨＦ９．５５ｇ（９．６６ｍｌ、５７．４６ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。６５℃で２時間撹拌した後、反応物を室温で終夜放置した。反応溶液をＨ2Ｏ／飽和ＮａＨＣＯ3溶液（１：１）４５０ｍｌに注ぎ入れ、溶液をＥｔＯＡｃ２×１００ｍｌで抽出した。合わせた有機層をＨ2Ｏおよび飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ4で脱水した後、粗生成物をシリカ（ｎ−ヘプタン＋０．５％ＮＥｔ3で事前調整、ｎ−ヘプタン中１０〜１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、表題化合物６７  ６６６ｍｇ（９９．７％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．７６
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｎａ］+＝５８３．３
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.37 (s, 1H), 7.79 (d, J=8.07 Hz, 1H), 7.35 -7.45 (m, 2H), 7.20 - 7.33 (m, 7H), 6.89 (2 x d, J=8.93, 4H), 5.72 (dd, J= 10.09, 3.24 Hz, 1H), 5.62 - 5.68 (m, 1H), 4.84 (t, J=5.75 Hz, 1H), 3.74 (s, 6H), 3.71 (m, 2H), 3.47 - 3.63 (m, 3H), 3.14 - 3.30 (m, 3H).
【０６２０】
６４ｂ：３−［［（２Ｒ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（２，４−ジオキソピリミジン−１−イル）−１，４−ジオキサン−２−イル］メトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシプロパンニトリル
出発化合物６７  ６５０ｍｇ（１．１６ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド１１０ｍｇ（０．６４ｍｍｏｌ）を、乾燥ＤＣＭ１６ｍｌに溶解した。アルゴン雰囲気下、２−シアノエチルＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスホロ−ジアミダイト３９６ｍｇ（４１８μｌ、１．２８ｍｍｏｌ）を室温で添加し、溶液を１６時間撹拌した。溶媒を除去し、残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、Ｈ2Ｏおよび飽和ＮａＨＣＯ3溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ4で脱水した後、溶媒を蒸発させ、粗生成物をメチル−ｔｅｒｔ．−ブチルエーテル１５ｍｌに溶解した。撹拌しながら、有機溶液をｎ−ペンタン１２０ｍｌ中に滴下した。沈殿物を濾過し、真空中４０℃で乾燥させて、表題化合物６４ｂ８２７ｍｇ（９３．７％）を無色固体として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.39 (br s, 1H), 7.74 (m, 1H), 7.35 - 7.44 (m, 2H), 7.18 - 7.35 (m, 7H), 6.84 - 6.92 (m, 4H), 5.73 - 5.86 (m, 1H), 5.67 (m, 1H), 3.54 - 3.89 (m, 7H), 3.74 (s, 6H), 3.35 - 3.53 (m, 4H), 3.12 - 3.28 (m, 1H), 2.62 - 2.76 (m, 2H), 1.02 -1.16 (m, 12H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 148,5, 148,1.
【０６２１】
〔実施例Ｂ．６〕
合成スキーム１７
【化６１】
2021517126.tif 000063
【０６２２】
１ｇ：［（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−４−アセトキシ−３−ベンジルオキシ−２−（ベンジルオキシメチル）−５−（６−クロロプリン−９−イル）テトラ−ヒドロフラン−２−イル］メチルアセテート
炭水化物ビルディングブロックＧ３  １２．６０ｇ（２５．９ｍｍｏｌ）および６−クロロ−プリン６．１９ｇ（３８．９ｍｍｏｌ）を、乾燥ＡＣＮ１７５ｍｌに溶解した。アルゴン雰囲気下、ＤＢＵ１２．０７ｇ（１１．８４ｍｌ、７７．７ｍｍｏｌ）およびＴＭＳＯＴｆ２３．２６ｇ（１８．９９ｍｌ、１０３．６ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。氷浴を取り外し、反応物を室温で１時間、８０℃でさらに１時間撹拌し、そのときに完全な変換が検出された。溶液を室温に冷却し、飽和ＮａＨＣＯ3溶液５００ｍｌに注ぎ入れた。１時間激しく撹拌した後、水溶液をＥｔＯＡｃ３００ｍｌで抽出した。有機層を分離し、飽和ＮａＨＣＯ3溶液／Ｈ2Ｏ（１：１）および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させた。粗生成物（１５．７８ｇ）をシリカゲル（ｎ−ヘプタン中１０〜１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、表題化合物１ｇ１２．３１ｇ（８１．８％）を薄黄色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．５７
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ＋ＦＡ］-＝６２５．１
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 8.80 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 7.16 - 7.39 (m, 10H), 6.38 (d, J=4.2 Hz, 1H), 6.10 (dd, J=5.6, 4.3 Hz, 1H), 4.86 (d, J=5.1 Hz, 1H), 4.54 - 4.68 (m, 2H), 4.37 - 4.47 (m, 3H), 4.24 (d, J=12.0 Hz, 1H), 3.69 (d, J=10.1 Hz, 1H), 3.60 (d, J=10.1 Hz, 1H), 2.05 (s, 3H), 1.99 (s, 3H).
【０６２３】
２ｇ：（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−２−（６−アミノプリン−９−イル）−４−ベンジルオキシ−５−（ベンジルオキシメチル）−５−（ヒドロキシ−メチル）テトラヒドロフラン−３−オール
クロロプリンリボシド１ｇ１２．３０ｇ（２１．２ｍｍｏｌ）を、ＡＣＮ４０ｍｌに溶解した。アンモニア水溶液（３５％）６８．０ｇ（７７．２ｍｌ、１．４０ｍｏｌ）を添加した後、反応溶液をオートクレーブ内に移し、７０℃で１８時間加熱した。反応混合物を蒸発させ、水性残留物をＤＣＭ／イソプロパノール（４：１）１５０ｍｌで３回抽出した。有機層を合わせ、ＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させて、粗生成物９．３７ｇを得、これをＡＣＮ４００ｍｌから再結晶して、アデノシン類似体２ｇ６．９２ｇ（６８．５％）を無色固体として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［ｍｍ］＝１．６９
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝４７７．９
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 8.22 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.24 - 7.42 (m, 12H), 6.01 (d, J=5.7 Hz, 1H), 5.72 (d, J=7.3 Hz, 1H), 5.01 (br t, J=5.1 Hz, 1H), 4.91 - 4.98 (m, 1H), 4.84 (d, J=11.9 Hz, 1H), 4.60 (d, J=11.7 Hz, 1H), 4.51 (s, 2H), 4.34 (d, J=5.3 Hz, 1H), 3.57 - 3.72 (m, 4H).
【０６２４】
２ｅ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−４−ベンジルオキシ−５−（ベンジルオキシメチル）−３−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）−テトラヒドロフラン−２−イル］プリン−６−イル］ベンズアミド
２ｇ６．９１ｇ（１４．５ｍｍｏｌ）を、アルゴン雰囲気下でピリジン１００ｍｌに溶解した。室温で、塩化ベンゾイル１０．１７ｇ（８．４１ｍｌ、７２．４ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を１時間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、残留物をＨ2Ｏに溶解し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、１Ｎ  ＨＣｌ（２×２５０ｍｌ）、Ｈ2Ｏ（１×２００ｍｌ）、飽和ＮａＨＣＯ3溶液（２×２００ｍｌ）および飽和ＮａＣｌ溶液（１×２００ｍｌ）で洗浄した。ＭｇＳＯ4で脱水した後、溶媒を除去し、粗生成物（１４．６６ｇ、黄色泡状物）をピリジン／ＥｔＯＨ（１：１）１４０ｍｌに溶解した。室温で、２Ｎ  ＮａＯＨ１０８．５ｍｌ（２１７．１ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を３０分間撹拌した。ＡｃＯＨ１１ｍｌを添加した後、反応溶液を真空中で濃縮した。残留物をＨ2Ｏ２００ｍｌで処理し、ＥｔＯＡｃ２００ｍｌで抽出した。有機層を１Ｎ  ＨＣｌ（２×２００ｍｌ）、Ｈ2Ｏ（１×２００ｍｌ）および飽和ＮａＨＣＯ3溶液（１×２００ｍｌ）で洗浄し、ＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させた。粗生成物（９．０ｇ）をシリカ（ｎ−ヘプタン中２０〜１００％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ（９：１））上で精製して、表題化合物２ｅ７．２５ｇ（８６．１％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．１２
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝５８２．４
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.19 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.05 (br d, J=7.3 Hz, 2H), 7.64 (br t, J=7.3 Hz, 1H), 7.52 - 7.60 (br t, 2H), 7.25 - 7.44 (m, 10H), 6.15 (d, J=5.6 Hz, 1H), 5.82 (d, J=7.5 Hz, 1H), 4.99 - 5.08 (m, 2H), 4.86 (d, J=11.9 Hz, 1H), 4.62 (d, J=11.9 Hz, 1H), 4.52 (s, 2H), 4.38 (d, J=5.1 Hz, 1H), 3.59 - 3.74 (m, 4H).
【０６２５】
〔実施例Ｂ．７〕
合成スキーム１８
【化６２】
2021517126.tif 000064
【０６２６】
３７ｅ：Ｎ−［９−［（１Ｒ）−１−［（１Ｓ）−１−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−１−（ヒドロキシメチル）−２−トリイソプロピルシリルオキシ−エトキシ］−２−ヒドロキシ−エチル］プリン−６−イル］ベンズアミド
出発物質２３ｅ３．５５ｇ（４．１ｍｍｏｌ）を、エタノール６０ｍｌに溶解した。アルゴン雰囲気下、水素化ホウ素ナトリウム２８５．５ｍｇ（７．４ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を０℃に冷却した後、クエン酸５０ｍｌを添加し、続いて飽和ＮａＨＣＯ3溶液を添加してｐＨ７を達成した。溶媒を真空中で除去し、水性残留物をＨ2Ｏで希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、飽和ＮａＨＣＯ3および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ4で脱水した後、溶媒を除去し、粗生成物をシリカ（ＤＣＭ中０〜５％ＭｅＯＨ）上で精製して、所望のジオール３７ｅ２．１５ｇを薄黄色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝３．２１
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝８６２．７
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.14 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.05 (br d, J=7.3 Hz, 2H), 7.61 - 7.67 (m, 1H), 7.51 - 7.60 (m, 2H), 7.36 (d, J=7.3 Hz, 2H), 7.27 (br t, J=7.6 Hz, 2H), 7.17 - 7.23 (m, 5H), 6.83 (dd, J=9.0, 3.0 Hz, 4H), 6.43 (t, J=5.7 Hz, 1H), 5.17 (t, J=5.7 Hz, 1H), 4.63 (t, J=4.7 Hz, 1H), 3.76 - 3.99 (m, 2H), 3.55 - 3.76 (m, 10H), 3.17 - 3.26 (m, 1H), 3.05 (d, J=9.7 Hz, 1H), 0.78 - 1.02 (m, 21).
【０６２７】
３８ｅ：［（２Ｒ）−２−（６−ベンズアミドプリン−９−イル）−２−［（１Ｓ）−１−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−１−（ヒドロキシメチル）−２−トリイソプロピルシリルオキシ−エトキシ］エチル］４−メチル−ベンゼンスルホネート
ジオール３７ｅ２．１５ｇ（２．５ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ６０ｍｌに溶解した。室温で、ＮＥｔ3８９１．４ｍｇ（１．２２ｍｌ、８．７ｍｍｏｌ）、ｐ−トルエンスルホニルクロリド５０３．８ｍｇ（２．６ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ３０．８ｍｇ（０．２５ｍｍｏｌ）を添加し、溶液を０．５時間撹拌した。２および４時間後に追加のｐ−トルエンスルホニルクロリド１６７．９ｍｇ（０．９ｍｍｏｌ）を添加した後、溶液をさらに１５時間撹拌して完全な変換を達成した。Ｈ2Ｏ１５０ｍｌを添加した後、有機層を分離し、ＭｇＳＯ4で脱水した。溶媒を除去し、得られた粗生成物（２．５６ｇ）３８ｅをさらに精製することなく使用した。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝３．４６
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝１０１４．８
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.20 (br s, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 8.04 -8.10 (m, 2H), 7.62 - 7.70 (m, 1H), 7.54 - 7.60 (m, 2H), 7.43 - 7.48 (m, 2H), 7.12 - 7.35 (m, 11H), 6.77 - 6.86 (m, 4H), 6.58 (m, 1H), 4.80 (m, 1H), 4.59 (m, 1H), 4.35 (m, 1H), 3.73 (s, 3H), 3.72 (s, 3H), 3.50 - 3.67 (m, 4H), 3.21 (m, 1H), 3.09 (m, 1H), 2.35 (s, 3H), 0.82 (br s, 21H).
【０６２８】
３９ｅ：９−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（トリイソプロピルシリル−オキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］プリン−６−アミン
ジオキサン５０ｍｌ中のトシレート３８ｅ２．４５ｇ（２．４ｍｍｏｌ）の溶液に、２Ｍ  ＮａＯＨ３６．１６ｍｌ（７２．３ｍｍｏｌ）を添加した。８０℃で２時間撹拌した後、反応混合物を室温に冷却し、有機溶媒を蒸発させた。水性残留物に、Ｈ2Ｏ２５０ｍｌおよびＤＣＭ１５０ｍｌ、続いて酢酸４．５ｍｌを添加した。有機層を分離し、飽和ＮａＨＣＯ3溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ4で脱水した後、溶媒を除去し、粗生成物をシリカ（ＤＣＭ中０〜５０％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ（１：１））上で精製して、ジオキサン３９ｅ１．２２ｇ（６８．６％）を薄黄色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝３．４１
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝７４０．６
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 8.33 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.11 - 7.45 (m, 11H), 6.72 - 6.79 (m, 4H), 6.13 (m, 1H), 4.13 - 4.26 (m, 2H), 4.04 (m, 1H), 3.93 (m, 1H), 3.5 (m, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.70 (s, 3H), 3.66 (br d, J=11.6 Hz, 1H), 3.06 (d, J=9.5 Hz, 1H), 2.92 (d, J=9.5 Hz, 1H), 0.88 - 0.95 (m, 21H).
【０６２９】
４４ｅ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（トリイソプロピルシリル−オキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］プリン−６−イル］ベンズアミド
ジオキサン３９ｅ１．８４ｇ（２．５ｍｍｏｌ）を、アルゴン雰囲気下で乾燥ピリジン３０ｍｌに溶解した。室温で、塩化ベンゾイル１．０５ｇ（８６７μｌ、７．５ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を３時間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、残留物をＨ2Ｏに溶解し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、クエン酸溶液（１０％）（２×１００ｍｌ）、Ｈ2Ｏ（１×１００ｍｌ）および飽和ＮａＨＣＯ3溶液（１×１００ｍｌ）で洗浄した。ＭｇＳＯ4で脱水した後、溶媒を除去し、粗生成物（２．６１ｇ、黄色泡状物）をピリジン／ＥｔＯＨ（１：１）４０ｍｌに溶解した。０℃で、２Ｎ  ＮａＯＨ７．４６ｍｌ（１４．９ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を３０分間撹拌した。ＡｃＯＨ８６４μｌを添加した後、反応溶液を真空中で濃縮した。残留物をＨ2Ｏ１００ｍｌで処理し、ＥｔＯＡｃ１００ｍｌで抽出した。有機層を分離し、クエン酸溶液（１０％）（２×１００ｍｌ）、Ｈ2Ｏ（１×１００ｍｌ）、飽和ＮａＨＣＯ3溶液（１×１００ｍｌ）および飽和ＮａＣｌ溶液（１×１００ｍｌ）で洗浄し、ＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させた。粗生成物（２．１９ｇ）をシリカ（ｎ−ヘプタン中０〜７０％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、表題化合物４４ｅ１．７２ｇ（８２．０％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝３．５６
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝８４２．８
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.26 (br s, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.05 (m, 2H), 7.64 (br t, J=7.3 Hz, 1H), 7.56 (m, 2H), 7.37 (dd, J=7.8, 1.5 Hz, 2H), 7.13 - 7.28 (m, 7H), 6.76 (dd, J=8.9, 1.7 Hz, 4H), 6.28 (dd, J=10.1, 3.4 Hz, 1H), 4.20 - 4.36 (m, 2H), 4.12 (m, 1H), 3.84 - 3.99 (m, 2H), 3.64 - 3.75 (m, 7H), 3.06 (m, 1H), 2.96 (m, 1H), 0.88 -1.06 (m, 21H).
【０６３０】
４５ｅ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（ヒドロキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］プリン−６−イル］ベンズアミド
シリルエーテル４４ｅ１．１０ｇ（１．３ｍｍｏｌ）を、ＮＭＰ２０ｍｌに溶解した。ＮＥｔ3・ＨＦ３．４７ｇ（３．５０ｍｌ、２０．９ｍｍｏｌ）およびＮＥｔ3１．８５ｇ（２．５４ｍｌ、１８．２ｍｍｏｌ）を添加した後、反応溶液を６５℃で１８時間撹拌した。室温に冷却した後、飽和ＮａＨＣＯ3溶液２５０ｍｌおよびＥｔＯＡｃ１５０ｍｌを添加し、混合物を３０分間撹拌した。有機層を分離し、飽和ＮａＨＣＯ3溶液で洗浄し、飽和ＮａＣｌ溶液で２回洗浄した。ＭｇＳＯ4で脱水した後、溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（０．５％ＮＥｔ3で事前調整、ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）により精製して、４５ｅ８５２ｍｇ（９５．１％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．４３
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝６８８．３
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.22 (br s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.04 (d, J=7.6 Hz, 2H), 7.64 (t, J=7.1 Hz, 1H), 7.55 (t, J=7.6 Hz, 2H), 7.38 (d, J=7.6 Hz, 2H), 7.14 - 7.32 (m, 7H), 6.80 (m, 4H), 6.26 (dd, J=9.8, 3.3 Hz, 1H), 4.85 (t, J=5.4 Hz, 1H), 4.29 (t, J=10.6 Hz, 1H), 4.09 (dd, J=11.1, 3.2 Hz, 1H), 3.73 - 3.90 (m, 4H), 3.72 (s, 3H), 3.71 (s, 3H), 3.03 (m, 1H), 2.95 (m, 1H).
【０６３１】
４３ｅ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｓ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−［［２−シアノエトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］−１，４−ジオキサン−２−イル］プリン−６−イル］ベンズアミド
出発物質４５ｅ８４８ｍｇ（１．２ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド６４０ｍｇ（３．７ｍｍｏｌ）を、乾燥ＤＣＭ２５ｍｌに溶解した。アルゴン雰囲気下、２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスホロジアミダイト５７４．７ｍｇ（１．９ｍｍｏｌ）を室温で添加した。１６時間後、Ｈ2Ｏ５０ｍｌを添加した。有機層を分離し、水相をＤＣＭで抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ4で脱水し、溶媒を真空中３５℃で除去した。粗生成物をＥｔＯＡｃ／ジエチルエーテル（１：１）１０ｍｌに溶解し、ｎ−ペンタン４０ｍｌを添加した。沈殿物を遠心分離により収集し、溶媒を廃棄した。沈殿手順を３回繰り返して、Ｓｐｅｅｄｖａｃ上で乾燥した後に、所望の生成物４３ｅ９９１ｍｇ（９０．５％）を無色固体として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｂ−３：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝０．６１
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ−iＰｒ2Ｎ＋ＯＨ］+＝８０５．３
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm] 11.21 (br s, 1H), 8.76, 8.74 (2 x s, 1H), 8.63, 8.61 (2 x s, 1H), 8.04 (d, J=7.3 Hz, 2H), 7.65 (t, J=7.3 Hz, 1H), 7.55 (m, 2H), 7.37 (br d, J=8.3 Hz, 2H), 7.14 - 7.30 (m, 7H), 6.75 - 6.86 (m, 4H), 6.30 (m, 1H), 4.27 (m, 1H), 3.85 - 4.17 (m, 4H), 3.61 - 3.80 (m, 9H), 3.49 (m, 2H), 3.08 (m, 1H), 2.98 (dd, J=9.1, 7.1 Hz, 1H), 2.72 (m, 1H), 2.62 (m, 1H), 1.04 - 1.14 (m, 6H), 1.02 (m, 3H), 0.93 (d, J=6.8 Hz, 3H). 31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,7, 147,6.
【０６３２】
〔実施例Ｂ．８〕
合成スキーム１９
【化６３】
2021517126.tif 000065
【０６３３】
４０ｃ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｒ）−６−（ヒドロキシメチル）−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］−６−オキソ−１Ｈ−プリン−２−イル］−２−メチル−プロパンアミド
無水ＤＣＭ１９０ｍｌ中のＤＭＴ−エーテル４４（９．５ｇ、１１．５ｍｍｏｌ；合成スキーム１２を参照）の溶液に、ＤＣＡＡ（２９．７ｇ、２３０ｍｍｏｌ）をＮ2雰囲気下、０℃で滴下添加した。室温で３０分間撹拌した後、ＴＬＣは完全な変換を示した。混合物を飽和ＮａＨＣＯ3溶液（１００ｍｌ）で中和し、ＤＣＭ（３×２００ｍｌ）で抽出した。有機層を合わせ、飽和ＮａＣｌ溶液（２００ｍｌ）で洗浄した。無水Ｎａ2ＳＯ4で脱水した後、有機溶液を蒸発させ、粗生成物を分取ＨＰＬＣ（ＡＣＮ、０．１％ＦＡ）により精製して、所望の生成物４０ｃ９．５ｇ（６１．２％）を白色固体として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．６８
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝５２４．４
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.10 (br s, 1H), 11.53 (br s, 1H), 8.21 (s, 1H), 5.88 (dd, J=9.8, 3.3 Hz, 1H), 4.75 (t, J=6.0 Hz, 1H), 4.06 (d, J=9.5 Hz, 1H), 3.98 (dd, J=11.4, 3.3 Hz, 1H), 3.86 (d, J=11.7 Hz, 1H), 3.74 - 3.83 (m, 2H), 3.61 (d, J=11.7 Hz, 1H), 3.46 (d, J=6.1 Hz, 2H), 2.79 (m, 1H), 1.00 - 1.16 (m, 27H).
【０６３４】
６０ｃ：［（２Ｓ，６Ｒ）−６−［２−（２−メチルプロパノイルアミノ）−６−オキソ−１Ｈ−プリン−９−イル］−２−（トリイソプロピルシリルオキシ−メチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］メチルベンゾエート
出発物質４０ｃ２．８０ｇ（５．３５ｍｍｏｌ）を、乾燥ピリジン２０ｍｌに溶解した。塩化ベンゾイル９４９ｍｇ（７８４μｌ、６．６８ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ６６７ｍｇ（５．３５ｍｍｏｌ）を添加した後、反応溶液を室温で４時間撹拌した。さらなる塩化ベンゾイル１８９ｍｇ（１５７μｌ、１．３７ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を終夜撹拌して完全な変換を達成した。溶媒を真空中で除去し、残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、５％クエン酸水溶液、５％ＮａＨＣＯ3水溶液および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ4で脱水した後、有機層を蒸発させ、粗生成物をシリカゲル（ＤＣＭ中０〜１０％ＭｅＯＨ）上で精製して、ベンゾイルエステル６０ｃ３．３３ｇ（９９．２％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝３．０６
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝６２８．５
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.84 (s, 1H), 11.58 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.79 -7.86 (m, 2H), 7.56 - 7.64 (m, 1H), 7.41 - 7.49 (m, 2H), 5.89 (dd, J=5.9 Hz, 3.4 Hz, 1H), 4.18 - 4.32 (m, 3H), 4.07 (m, 1H), 3.77 - 4.02 (m, 4H), 2.79 (m, 1H), 0.93 - 1.21 (m, 27H).
【０６３５】
６１ｃ：［（２Ｓ，６Ｒ）−２−（ヒドロキシメチル）−６−［２−（２−メチルプロパノイルアミノ）−６−オキソ−１Ｈ−プリン−９−イル］−１，４−ジオキサン−２−イル］メチルベンゾエート
シリルエーテル６０ｃ３．３０ｇ（５．２６ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ３３ｍｌに溶解した。ＮＥｔ3８．０６ｇ（７８．９ｍｍｏｌ、１１．１ｍｌ）およびＮＥｔ3・３ＨＦ６．４９ｇ（３９．４ｍｍｏｌ、６．５６ｍｌ）を添加した後、溶液を７５℃で２時間撹拌して完全な変換を達成した。反応物を室温に冷却し、５％ＮａＨＣＯ3溶液１００ｍｌで洗浄した。濾過した後、水溶液をＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させた。粗生成物をＨＰＬＣ（カラム：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＤ−Ｈ／７４、２５０×４．６ｍｍ、１．０ｍｌ／分、３０℃；溶離液：ヘプタン／ＥｔＯＨ  ５：２）により精製して、所望の生成物６１ｃ１．２０ｇ（４８．４％）を無色固体として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．４０
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝４７２．３
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.89 (s, 1H), 11.67 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.87 (d, J=7.7 Hz, 2H), 7.62 (t, J=7.2 Hz, 1H), 7.47 (t, J=7.6 Hz, 2H), 5.92 (dd, J=6.6, 3.3 Hz, 1H), 5.11 (t, J=5.7 Hz, 1H), 4.14 - 4.26 (m, 3H), 4.03 (dd, J=12.0, 3.4 Hz, 1H), 3.90 (d, J=12.0 Hz, 1H), 3.79 (d, J=12.0 Hz, 1H), 3.70 (m, 2H), 2.79 (七重線, J=6.8 Hz, 1H), 1.15 (d, J=6.9 Hz, 3H), 1.11 (d, J=6.7 Hz, 3H).
【０６３６】
６２ｃ：［（２Ｒ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−［２−（２−メチルプロパノイル−アミノ）−６−オキソ−１Ｈ−プリン−９−イル］−１，４−ジオキサン−２−イル］メチルベンゾエート
第一級アルコール６１ｃ１．２０ｇ（２．５５ｍｍｏｌ）を、乾燥ピリジン２５ｍｌに溶解した。ＮＥｔ3６４７ｍｇ（６．３６ｍｍｏｌ、８９１μｌ）およびＤＭＴ−Ｃｌ１．７８ｇ（５．０９ｍｍｏｌ）を添加し、溶液を室温で１時間、続いて８０℃で４時間撹拌した。室温に冷却した後、ＭｅＯＨ１ｍｌを添加し、溶液をＥｔＯＡｃで希釈した。有機溶液を１０％クエン酸水溶液および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ4で脱水した後、溶媒を蒸発させ、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０〜５％ＭｅＯＨ）により精製して、所望のＤＭＴ−エーテル６２ｃ１．９７ｇ（定量的）を薄黄色固体として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．７５
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝７７４．４
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.78 (s, 1H), 11.53 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.50 -7.55 (m, 2H), 7.31 - 7.41 (m, 5H), 7.14 - 7.29 (m, 7H), 6.81 (br d, J=8.9 Hz, 2H), 6.77 (d, J=8.9 Hz, 2H), 5.72 (m, 1H), 4.19 - 4.35 (m, 3H), 4.01 - 4.11 (m, 3H), 3.66 (s, 3H), 3.63 (s, 3H), 3.34 (d, J=8.8 Hz, 1H), 3.16 (d, J=8.7 Hz, 1H), 2.75 (m, 1H), 1.13 (d, J=6.9 Hz, 3H), 1.08 (d, J=6.7 Hz, 3H).
【０６３７】
６３ｃ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｒ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（ヒドロキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］−６−オキソ−１Ｈ−プリン−２−イル］−２−メチル−プロパンアミド
ベンゾイルエステル６２ｃ１．９７ｇ（２．５５ｍｍｏｌ）を、ＥｔＯＨ／ピリジン（３：１）４０ｍｌに溶解した。２Ｍ  ＮａＯＨ溶液１２．９ｍｌ（２５．８ｍｍｏｌ）を添加した後、混合物を室温で３０分間撹拌して完全な変換を達成した。クエン酸（固体）で中和した後、ＥｔＯＨを真空中で除去し、残留物をＥｔＯＡｃ５０ｍｌおよびＨ2Ｏ２５ｍｌで希釈した。沈殿物を濾過により除去し、濾液から、有機層を分離し、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ4で脱水した後、溶媒を除去し、粗生成物をシリカ（ＤＣＭ中０〜５％ＭｅＯＨ）上で精製して、表題化合物６３ｃ０．９９ｇ（５８．０％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．４６
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝６７０．４
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.10 (s, 1H), 11.52 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.20 -7.42 (m, 9H), 6.85 - 6.93 (m, 4H), 5.62 (dd, J=9.7, 3.3 Hz, 1H), 4.81 (br t, 1H), 3.91 - 3.99 (m, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.73 (s, 3H), 3.65 - 3.76 (m, 1H), 3.41 - 3.59 (m, 4H), 3.15 (d, J=9.1 Hz, 1H), 2.77 (m, 1H), 1.13 (m, 6H).
【０６３８】
６４ｃ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｒ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−［［２−シアノエトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］−１，４−ジオキサン−２−イル］−６−オキソ−１Ｈ−プリン−２−イル］−２−メチル−プロパンアミド
出発物質６３ｃ９８５ｍｇ（１．４７ｍｍｏｌ）を、乾燥ＤＣＭ３０ｍｌに溶解した。アルゴン雰囲気下で、iＰｒ2ＮＨ−テトラゾール１３３ｍｇ（７３５μｍｏｌ）および２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスホロジアミダイト５７１ｍｇ（１．８４ｍｍｏｌ、６０２μｌ）を添加し、溶液を室温で終夜撹拌した。Ｈ2Ｏ５０ｍｌおよびＤＣＭを添加した後、有機層を分離し、ＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させた。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン＋１％ＮＥｔ3で事前調整、ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）により精製して、所望のホスホルアミダイト６４ｃ１．０７ｇ（８３．８％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．４２
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ−iＰｒ2Ｎ＋ＯＨ］+＝７８７．４
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.08 (br s, 1H), 11.55 (br s, 1H), 8.06, 8.05 (2 x s, 1H), 7.18 - 7.44 (m, 9H), 6.82 - 6.94 (m, 4H), 5.65 (m, 1H), 3.66 - 4.01 (m, 3H), 3.73 (s, 3H), 3.72 (s, 3H), 3.35 - 3.65 (m, 6H), 3.21 - 3.29 (m, 1H), 2.72 - 2.83 (m, 1H), 2.59 -2.72 (m, 2H), 0.90 - 1.22 (m, 20H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,7, 147,3.
【０６３９】
４０ｅ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｒ）−６−（ヒドロキシメチル）−６−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］プリン−６−イル］ベンズアミド
ＤＭＴ−エーテル４４ｅ６１５ｍｇ（７２９μｍｏｌ）を、ＤＣＭ２５ｍｌに溶解した。ジクロロ酢酸９４９ｍｇ（６０８μｌ、７．３ｍｍｏｌ）を添加した後、反応混合物を１分間撹拌して完全な変換を達成した。反応溶液を飽和ＮａＨＣＯ3溶液１００ｍｌで洗浄した。有機層を分離し、水相をＤＣＭ３５ｍｌで２回抽出した。合わせた有機抽出物をＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させた。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）により精製して、所望の生成物４０ｅ３０２ｍｇ（７６．５％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．７０
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝５４２．５
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.20 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.04 (d, J=7.5 Hz, 2H), 7.65 (m, 1H), 7.55 (m, 2H), 6.23 (m, 1H), 4.75 (t, J=6.1 Hz, 1H), 4.01 -4.12 (m, 3H), 3.94 (d, J=9.9 Hz, 1H), 3.86 (d, J=11.9 Hz, 1H), 3.65 (d, J=11.7 Hz, 1H), 3.44 (m, 2H), 1.10 - 1.17 (m, 3H), 1.04 - 1.09 (m, 18H).
【０６４０】
６０ｅ：［（２Ｓ，６Ｒ）−６−［６−（ジベンゾイルアミノ）プリン−９−イル］−２−（トリイソプロピルシリルオキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］メチルベンゾエート
乾燥ピリジン１０ｍｌ中の遊離アルコール４０ｅ２９９ｍｇ（５５２μｍｏｌ）の溶液に、塩化ベンゾイル９４．０ｍｇ（７７．７μｌ、６６２．３μｍｏｌ）を室温で添加した。１８時間後、溶媒を５ｍｌの体積に濃縮し、さらなる塩化ベンゾイル９４．０ｍｇを添加した。室温でさらに６０分後、追加の塩化ベンゾイル２８２ｍｇを添加し、溶液を終夜撹拌した。溶媒を除去し、残留物をＨ2ＯおよびＥｔＯＡｃで処理した。有機層を分離し、クエン酸溶液（１０％）、飽和ＮａＨＣＯ3および飽和ＮａＣｌ溶液で２回洗浄した。ＭｇＳＯ4で脱水した後、溶媒を除去し、粗生成物をシリカ（ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、６０ｅ４０５ｍｇ（９７．８％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝３．４９
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝７５０．７
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 8.74 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 7.92 - 7.97 (m, 2H), 7.74 - 7.79 (m, 4H), 7.42 - 7.67 (m, 9H), 6.28 (dd, J=9.4, 3.4 Hz, 1H), 4.22 - 4.35 (m, 4H), 4.16 (m, 1H), 4.01 (m, 2H), 3.78 (m, 1H), 1.06 - 1.14 (m, 3H), 0.97 - 1.05 (m, 18H).
【０６４１】
６１ｅ：［（２Ｓ，６Ｒ）−６−［６−（ジベンゾイルアミノ）プリン−９−イル］−２−（ヒドロキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］メチルベンゾエート
シリルエーテル６０ｅ４０２ｍｇ（５３６μｍｏｌ）を、４５ｅについて記載したプロトコールを使用して脱保護した。シリカ（ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）上でクロマトグラフィー精製した後、所望の生成物６１ｅ１９４ｍｇ（６１．０％）を無色泡状物として単離した。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．２２
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝５９４．５
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 8.71 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 7.97 (m, 2H), 7.77 (m, 4H), 7.43 - 7.67 (m, 9H), 6.27 (m, 1H), 5.14 (m, 1H), 4.20 - 4.36 (m, 3H), 4.12 (m, 1H), 3.95 (m, 1H), 3.75 - 3.91 (m, 3H).
【０６４２】
６２ｅ：［（２Ｒ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−［６−（ジベンゾイルアミノ）−プリン−９−イル］−１，４−ジオキサン−２−イル］メチルベンゾエート
出発物質６１ｅ１９０ｍｇ（３２０μｍｏｌ）を乾燥ピリジン１０ｍｌに溶解し、蒸発させた。この手順を３回繰り返した。次いで、化合物を乾燥ピリジン１０ｍｌに溶解し、続いてＮＥｔ3４８．７ｍｇ（６６．９μｌ、４８０μｍｏｌ）およびＤＭＴ−Ｃｌ１６６ｍｇ（４８０μｍｏｌ）を添加した。室温で終夜撹拌した後、さらなるＮＥｔ3９７．４ｍｇおよびＤＭＴ−Ｃｌ３３２ｍｇを添加し、溶液をさらに１８時間撹拌して完全な変換を達成した。溶媒を真空中で除去し、残留物をＥｔＯＡｃに溶解した。Ｈ2Ｏ、クエン酸溶液（２×）、飽和ＮａＨＣＯ3および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した後、有機相をＭｇＳＯ4で脱水した。溶媒を蒸発させ、シリカゲルクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）により精製して、ＤＭＴ−エーテル６２ｅ２１６ｍｇ（７５．３％）を薄黄色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝３．１７
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝８９６．５
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 8.75 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 7.73 - 7.80 (m, 7H), 7.65 (m, 1H), 7.58 (m, 2H), 7.42 - 7.50 (m, 6H), 7.36 - 7.41 (m, 2H), 7.22 - 7.29 (m, 6H), 6.78 - 6.84 (m, 4H), 6.07 (m, 1H), 4.36 (m, 2H), 4.22 (m, 1H), 3.99 - 4.14 (m, 2H), 3.84 (d, J=11.9 Hz, 1H), 3.68 (s, 6H), 3.44 - 3.57 (m, 2H).
【０６４３】
６３ｅ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｒ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（ヒドロキシメチル）−１，４−ジオキサン−２−イル］プリン−６−イル］ベンズアミド
出発物質６２ｅ（２１３ｍｇ、２３８μｍｏｌ）を、ＥｔＯＨ／ピリジン（３：１）８ｍｌに溶解した。２Ｍ  ＮａＯＨ１．１９ｍｌ（２．４ｍｍｏｌ）を０℃で添加した後、溶液を０℃で１０分間、室温で６０分間撹拌して完全な変換を達成した。クエン酸一水和物１６６ｍｇを添加し、続いてＨ2Ｏ５０ｍｌおよびＥｔＯＡｃ５０ｍｌを添加した。有機層を分離し、１０％クエン酸溶液（２×）、Ｈ2Ｏ、飽和ＮａＨＣＯ3および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ4で脱水した後、粗生成物をシリカ（ＤＣＭ中０〜１００％アセトン）上で精製して、６３ｅ１３４ｍｇ（８２．０％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．４４
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝６８８．４
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 11.21 (br s, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.04 (m, 2H), 7.65 (m, 1H), 7.55 (m, 2H), 7.45 (m, 2H), 7.29 - 7.37 (m, 6H), 7.23 (m, 1H), 6.91 (dd, J=9.0, 2.0 Hz, 4H), 6.01 (m, 1H), 4.84 (t, J=5.9 Hz, 1H), 3.94 - 4.02 (m, 2H), 3.83 (m, 1H), 3.74 (s, 6H), 3.68 - 3.73 (m, 1H), 3.49 - 3.55 (m, 2H), 3.38 (m, 2H).
【０６４４】
６４ｅ：Ｎ−［９−［（２Ｒ，６Ｒ）−６−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−［［２−シアノエトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］−１，４−ジオキサン−２−イル］プリン−６−イル］ベンズアミド
出発化合物６３ｅ１３１ｍｇ（１９０μｍｏｌ）を、その立体異性体４３ｅについて記載したプロトコールに従ってホスフィチル化して、所望のホスホルアミダイト６４ｅを定量的収率で得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｂ−３：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝０．６１
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ−iＰｒ2Ｎ＋ＯＨ］+＝８０５．３
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.20 (br s, 1H), 8.74, 8.73 (2 x s, 1H), 8.62, 8.60 (2 x s, 1H), 8.05 (d, J=7.4 Hz, 2H), 7.65 (m, 1H), 7.55 (m, 2H), 7.45 (d, J=7.3 Hz, 2H), 7.29 - 7.36 (m, 6H), 7.24 (m, 1H), 6.91 (m, 4H), 6.06 (m, 1H), 3.99 - 4.14 (m, 2H), 3.62 -3.90 (m, 11H), 3.37 - 3.62 (m, 5H), 2.71 (m, 1H), 2.64 (m, 1H), 1.06 - 1.13 (m, 6H), 1.03 (d, J=6.7 Hz, 3H), 0.97 (m, 3H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,7, 147,6.
【０６４５】
式（ＩＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体の合成
【０６４６】
〔実施例Ｃ．１〕
合成スキーム２０
【化６４】
2021517126.tif 000066
【０６４７】
６９：［（３ａＲ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）−６，７−ジアセトキシ−２−メチル−５，６，７，７ａ−テトラヒドロ−３ａＨ−ピラノ［３，２−ｄ］オキサゾール−５−イル］メチルアセテート
ＤＣＥ２００ｍｌ中のＤ−ガラクトサミンペンタアセテート（６８）２０．０ｇ（５１．４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＭＳＯＴｆ１７．１ｇ（７７．１ｍｍｏｌ）を３０℃で滴下添加した。混合物を５０℃に２時間加熱した。室温で終夜静置した後、完全な変換が検出された。混合物を水１ｌ中のＮａＨＣＯ3（８．６３ｇ、１０２．８ｍｍｏｌ）の溶液によりクエンチし、ＤＣＭ２×５００ｍｌで抽出した。合わせた有機層を無水Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、濾過し、真空中で濃縮して、表題化合物６９（粗製）１９．０ｇを得、これをさらに精製することなく使用した。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＥＬＳＤ：Ｒt［分］＝０．９０
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝３３０．１
【０６４８】
７０ｇ：１２−ベンジルオキシドデカン−１−オール
１，１２−ドデカンジオール１４．０５ｇ（６８．７６ｍｍｏｌ）を、乾燥ＤＭＦ１５０ｍｌに溶解した。０℃で、ＮａＨ（６０％）２．７５ｇ（６８．７６ｍｍｏｌ）を３０分間かけて４回に分けて添加した。氷浴を取り外し、溶液を室温で３時間撹拌し、続いて乾燥ＤＭＦ５０ｍｌ中の臭化ベンジル１０．０ｇ（６．９９ｍｌ、５７．３３ｍｍｏｌ）の溶液を０℃で添加した。反応物を室温で終夜撹拌した。さらなるＮａＨ（６０％）１．９９ｇ（４９．８ｍｍｏｌ）を添加した後、撹拌を４時間続けた。反応混合物を氷水５００ｍｌに注ぎ入れ、ジエチルエーテルおよびＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させた。粗生成物をシリカ（ｎ−ヘプタン中０〜６０％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、表題化合物７０ｇ６．９１ｇ（４１．２％）を白色固体として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．０９
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝２９３．３
【０６４９】
化合物７１ａ〜７１ｇの製造のための一般手順Ｄ
乾燥ＤＣＥ（２００ｍｌ／５０．０ｍｍｏｌ）およびアルコール７０ａ〜７０ｇ（１．１０当量）中のオキサゾリン６９（１．０当量）の溶液に、モレキュラーシーブ４Å（２０．０ｇ）を添加した。室温で、ＴＭＳＯＴｆ（０．５当量）を滴下添加し、溶液を、完全な変換が達成されるまで撹拌した。反応物を、Ｈ2Ｏ４００ｍｌ中のＮａＨＣＯ3（２．０当量）の溶液を添加することによりクエンチした。有機相を分離し、水層をＤＣＭ２×１００ｍｌで抽出した。合わせた有機抽出物をＮａ2ＳＯ4で脱水し、真空中で濃縮した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、グリコシド７１ａ〜７０ｇを得た。
【０６５０】
７１ａ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−（２−ベンジルオキシエトキシ）テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｄに従って、６９  １７．０ｇ（５１．３７ｍｍｏｌ）および７０ａ８．６ｇ（５６．５６ｍｍｏｌ）から、シリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ  １：２）の後に、表題化合物７１ａ１８．８７ｇ（７６．４％）を黄色油状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 7.83 (d, J=9.29 Hz, 1H), 7.41-7.20 (m, 5H), 5.22 (d, J=3.30 Hz, 1H), 4.98 (dd, J= 11.25, 3.42 Hz, 1H), 4.58 (d, J=8.44 Hz, 1H), 4.52-4.43(m, 2H), 4.03 (s, 2H), 3.96-3.80 (m, 2H), 3.69-3.49 (m, 3H), 2.12-2.08 (m, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.89 (s, 3H), 1.74 (s, 3H).
【０６５１】
７１ｂ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［２−（２−ベンジルオキシエトキシ）エトキシ］−テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｄに従って、６９  １４．０ｇ（４２．５ｍｍｏｌ）および７０ｂ７．５ｇ（３８．２ｍｍｏｌ）から、シリカゲルクロマトグラフィーの後に、表題化合物７１ｂ１０．６ｇ（４８％）を黄色油状物として得た。
ＭＳ：イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝５２６．３
【０６５２】
７１ｃ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［２−［２−（２−ベンジルオキシエトキシ）エトキシ］−エトキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｄに従って、６９  １６．０ｇ（４８．６ｍｍｏｌ）および７０ｃ１４．０ｇ（５８．３ｍｍｏｌ）から、シリカゲルクロマトグラフィーの後に、表題化合物７１ｃ１５．６ｇ（５７％）を無色油状物として得た。
ＭＳ：イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝５７０．１
【０６５３】
７１ｄ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［２−［２−［２−（２−ベンジルオキシエトキシ）−エトキシ］エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｄに従って、６９  １９．０ｇ（５１．４ｍｍｏｌ）および７０ｄ１７．５ｇ（６１．７ｍｍｏｌ）から、シリカゲルクロマトグラフィーの後に、表題化合物７１ｄ１０．０ｇ（３２％）を無色油状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 7.79 (d, J=9.3 Hz, 1H), 7.40-7.25 (m, 5H), 5.27-5.20 (m, 1H), 5.22 (d, J=3.3 Hz, 1H), 4.98 (dd, J=3.4, 11.2 Hz, 1H), 4.49 (s, 2H), 4.08-3.99 (m, 3H), 3.94-3.75 (m, 2H), 3.62-3.43 (m, 16H), 2.15-2.07 (m, 3H), 2.00 (s, 3H), 1.90 (s, 3H), 1.78 (s, 3H).
【０６５４】
７１ｅ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［２−［２−［２−［２−（２−ベンジルオキシエトキシ）−エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｄに従って、６９  ３５．０ｇ（６４．２ｍｍｏｌ、純度６０％）および７０ｅ２３．２ｇ（７０．６ｍｍｏｌ）から、シリカゲルクロマトグラフィーの後に、表題化合物７１ｅ１３．４ｇ（３２％）を黄色油状物として得た。
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ[ppm]: 7.44-7.29 (m, 5H), 6.63 (d, J=9.29 Hz, 1H), 5.33 (d, J=2.76 Hz, 1H), 5.01 (dd, J=11.17, 3.39 Hz, 1H), 4.80 (d, J=8.66 Hz, 1H), 4.58 (s, 2H), 4.33-4.01 (m, 4H), 3.98-3.80 (m, 3H), 3.77-3.54 (m, 20H), 2.18-2.16 (m, 3H) 1.99 (s, 6H) 1.87 (s, 3H).
【０６５５】
７１ｆ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−（５−ベンジルオキシペントキシ）テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｄに従って、６９  １．６９ｇ（５．１３ｍｍｏｌ）および７０ｆ１．１０ｇ（１．０９ｍｌ、５．３９ｍｍｏｌ）から、シリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０〜１０％ＭｅＯＨ）の後に、表題化合物７１ｆ２．６０ｇ（９６．７％）を無色油状物として得た。
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ[ppm]: 7.36-7.28 (m, 6H), 5.24 (d, J= 12.0 Hz, 1H), 5.37 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 5.34-5.31 (m, 1H), 4.71 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 4.51 (s, 2H), 4.17-4.14 (m, 2H), 3.93-3.90 (m, 3H), 3.50-3.47 (m, 3H), 2.15 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 1.92 (s, 3H), 1.68 (s, 3H), 1.66-1.61 (m, 4H) , 1.48-1.44 (m, 2H).
【０６５６】
７１ｇ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−（１２−ベンジルオキシドデコキシ）テトラヒドロ−ピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｄに従って、６９  ４．１６ｇ（１２．６２ｍｍｏｌ）および７０ｇ４．４３ｇ（１５．１４ｍｍｏｌ）から、シリカゲルクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ中１０〜１００％ＤＣＭ）の後に、表題化合物７１ｇ５．６９ｇ（７２．６％）を薄黄色油状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．０７
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝６２２．４
【０６５７】
化合物７２ａ〜７２ｇの製造のための一般手順Ｅ
ベンジルエーテル７１ａ〜ｇを、ＴＨＦに溶解した（３７０ｍｌ中４０ｍｍｏｌ）。Ｐｄ／Ｃ（１０％、５０％Ｈ2Ｏを含有）５ｇを添加した後、混合物を、完全な脱ベンジル化が観察されるまでＨ2雰囲気（１５ｐｓｉ）下、室温で撹拌した。混合物を濾過し、濾液を真空中で蒸発させた。シリカ上で最終精製して、所望の表題化合物７２ａ〜ｇを得た。
【０６５８】
７２ａ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−（２−ヒドロキシエトキシ）テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｅに従って、７１ａ１８．８７ｇ（３９．１９ｍｍｏｌ）から、シリカ（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  １０：１）上での精製の後に、７２ａ１１．６ｇ（７５．８％）を無色固体として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 7.81 (br d, J=9.03 Hz, 1H), 5.22 (br d, J=2.38 Hz, 1H), 4.98 (br dd, J=10.98, 2.57 Hz, 1H), 4.66-4.44 (m, 2H), 4.04 (s, 3H), 3.94-3.79 (m, 1H), 3.68 (br d, J=4.64 Hz, 1H), 3.49 (br s, 3H), 2.11 (s, 3H), 2.01 (s, 3H), 1.90 (s, 3H), 1.78 (s, 3H).
【０６５９】
７２ｂ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ］−テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｅに従って、７１ｂ１０．６ｇ（２０．１ｍｍｏｌ）から、さらに精製することなく７２ｂ８．０ｇ（９２．０％）を無色油状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 7.80 (d, J=9.2 Hz, 1H), 5.22 (d, J=3.3 Hz, 1H), 4.98 (dd, J=3.4, 11.3 Hz, 1H), 4.64-4.53 (m, 2H), 4.11-4.00 (m, 3H), 3.94-3.83 (m, 1H), 3.82-3.73 (m, 1H), 3.61 (dt, J=3.2, 7.1 Hz, 1H), 3.56-3.46 (m, 4H), 3.44-3.38 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 2.01 (s, 3H), 1.90 (s, 3H), 1.78 (s, 3H).
【０６６０】
７２ｃ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［２−［２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ］−エトキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｅに従って、７１ｃ１５．６ｇ（２７．４ｍｍｏｌ）をＥｔＯＡｃ／ＴＨＦ（１：１）２００ｍｌの混合溶媒中で水素化して、さらに精製することなく７２ｃ１１．０ｇ（８４．６％）を無色油状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 7.80 (d, J=9.2 Hz, 1H), 5.22 (d, J=3.3 Hz, 1H), 4.98 (dd, J=3.4, 11.2 Hz, 1H), 4.62-4.52 (m, 2H), 4.09-4.00 (m, 4H), 3.89 (td, J=8.9, 11.0 Hz, 1H), 3.82-3.74 (m, 1H), 3.63-3.56 (m, 1H), 3.55-3.46 (m, 8H), 3.45-3.39 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 2.01 (s, 3H), 1.91-1.88 (m, 3H), 1.78 (s, 3H), 1.18 (t, J=7.1 Hz, 1H).
【０６６１】
７２ｄ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［２−［２−［２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ］−エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｅに従って、７１ｄ１０．０ｇ（１６．３ｍｍｏｌ）を１００ＥｔＯＡｃ中で水素化して、さらに精製することなく７２ｄ８．７ｇ（９３．０％）を無色油状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 7.80 (d, J=9.2 Hz, 1H), 5.22 (d, J=3.3 Hz, 1H), 4.97 (dd, J=3.4, 11.2 Hz, 1H), 4.62-4.53 (m, 2H), 4.09-3.98 (m, 4H), 3.89 (td, J=9.0, 10.9 Hz, 1H), 3.82-3.75 (m, 1H), 3.63-3.56 (m, 1H), 3.55-3.46 (m, 12H), 3.42 (d, J=5.0 Hz, 2H), 2.11 (s, 3H), 2.00 (s, 3H), 1.92-1.87 (m, 3H), 1.78 (s, 3H).
【０６６２】
７２ｅ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［２−［２−［２−［２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ］−エトキシ］エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｅに従って、７１ｅ１２．４ｇ（１８．９ｍｍｏｌ）を２５０ＥｔＯＡｃ中で水素化して、シリカ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  １５：１）上での最終精製の後に、７２ｅ９．７ｇ（８３．９％）を黄色油状物として得た。
1H-NMR (CDC13, 400 MHz) δ[ppm]: 6.96 (br d, J=9.29 Hz, 1H), 5.35-5.32 (m, 1H), 5.05 (dd, J=11.17, 3.39 Hz, 1H), 5.09-5.02 (m, 1H), 4.74 (d, J=8.66 Hz, 1H), 4.27 (dt, J=11.04, 8.97 Hz, 1H), 4.20-4.11 (m, 2H), 4.01-3.91 (m, 3H), 3.84-3.59 (m, 21H), 2.95 (br s, 2H), 2.17-2.15 (m, 3H), 2.05 (s, 3H), 2.01-1.98 (m, 6H).
【０６６３】
７２ｆ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−（５−ヒドロキシペントキシ）テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
７１ｆ２．５０ｇ（４．７７ｍｍｏｌ）を、完全な変換が達成されるまで、４ｂａｒのＨ2雰囲気下、室温で、Ｐｄ（ＯＨ）2／Ｃ（２０％）１６８ｍｇ（２３９μｍｏｌ）の存在下、ＴＨＦ１３ｍｌ中で水素化した。反応混合物を濾過し、濾液を蒸発させて、表題化合物７２ｆ２．０８ｇ（定量的、粗製）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＥＬＳＤ：Ｒt［分］＝１．１５
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ＋ギ酸］-＝４７８．２
【０６６４】
７２ｇ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−（１２−ヒドロキシドデコキシ）テトラヒドロ−ピラン−２−イル］メチルアセテート
ベンジルエーテル７１ｇ５．６９ｇ（９．１４ｍｍｏｌ）を、７２ｆについて記載したプロトコールに従って水素化して、表題化合物７２ｇ４．７９ｇ（９８．５％）を無色油状物として得、これは白色針状物に結晶化した。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＥＬＳＤ：Ｒt［分］＝１．７２
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ−Ｈ+］+＝５３２．３
【０６６５】
７３ａ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−（２−オキソエトキシ）テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
ＤＣＭ１０ｍｌ中の出発物質７２ａ０．７５ｇ（１．９２ｍｍｏｌ）の溶液に、１，１，１−トリアセトキシ−１，１−ジヒドロ−１，２−ベンゾヨードキソール−３（１Ｈ）−オン（デス−マーチンペルヨージナン）６．７７ｇ（４．９７ｍｌ、２．４０ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を室温で２時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物をシリカ（ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ  １：１〜ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ５：５：２）上で精製して、表題化合物７３ａ５９１ｍｇ（７９．２％）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＥＬＳＤ  Ｒt［分］＝０．８６
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝３９０．２
【０６６６】
７３ｂ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［２−（２−オキソエトキシ）エトキシ］テトラヒドロ−ピラン−２−イル］メチルアセテート
７３ａについて記載したプロトコールに従って、７２ｂ１．０ｇ（２．３０ｍｍｏｌ）を１，１，１−トリアセトキシ−１，１−ジヒドロ−１，２−ベンゾヨードキソール−３（１Ｈ）−オン（デス−マーチンペルヨージナン）８．１２ｇ（５．９６ｍｌ、２．８７ｍｍｏｌ）で酸化した。シリカ（ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ  １：１〜ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ５：５：２）上で最終精製して、表題化合物７３ｂ１．０ｇ（定量的）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｂ２：
ＭＳ  ＴＩＣ  Ｒt［分］＝０．３５
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝４３４．１
【０６６７】
７３ｃ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［２−［２−（２−オキソエトキシ）エトキシ］エトキシ］−テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
ＤＭＳＯ５９６ｍｇ（５４２μｌ、７．５９ｍｍｏｌ）を、乾燥ＤＣＭ１１ｍｌに溶解した。−６０℃に冷却した後、乾燥ＤＣＭ中塩化オキサリルの２Ｍ溶液１．７５ｍｌ（３．５０ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌を１０分間続け、続いて乾燥ＤＣＭ１１ｍｌ中のアルコール７２ｃ１．４０ｇ（２．９２ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。混合物を−６０℃でさらに１０分間撹拌し、ＮＥｔ3２．９７ｇ（４．０８ｍｌ、２９．２ｍｍｏｌ）を添加した。冷却浴を取り外し、反応混合物を室温に到達させた。完全な変換後、溶液をＤＣＭ２５ｍｌで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ3溶液で洗浄した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ4で脱水し、溶媒を除去して、所望のアルデヒド（７３ｃ）１．２７ｇ（９１．１％、粗製）を無色油状物として得、これをさらに精製することなく使用した。
ＬＣＭＳ−方法Ｂ２：
ＥＬＳＤ  Ｒt［分］＝１．６６
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝４７８．２
【０６６８】
７３ｄ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［２−［２−［２−（２−オキソエトキシ）エトキシ］エトキシ］−エトキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
７３ｃについて記載したプロトコールに従って、アルコール７２ｄ１．１０ｇ（２．１０ｍｍｏｌ）を酸化して、アルデヒド７３ｄ０．９９ｇ（９０．３％、粗製）を無色油状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＥＬＳＤ  Ｒt［分］＝１．６９
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝５２２．２
【０６６９】
７３ｅ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［２−［２−［２−［２−（２−オキソエトキシ）エトキシ］−エトキシ］エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
７３ｃについて記載したプロトコールに従って、アルコール７２ｅ１．１０ｇ（１．９４ｍｍｏｌ）を酸化して、アルデヒド７３ｅ１．１０ｇ（定量的、粗製）を無色油状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＥＬＳＤ  Ｒt［分］＝１．５０
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝５６６．４
【０６７０】
７３ｆ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−（５−オキソペントキシ）テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
７３ｃについて記載したプロトコールに従って、アルコール７２ｆ２．０５ｇ（４．７３ｍｍｏｌ）を酸化して、アルデヒド７３ｆ２．０５ｇ（定量的、粗製）を無色油状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＥＬＳＤ  Ｒt［分］＝１．１９
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ＋ギ酸］-＝４７６．２
【０６７１】
７３ｇ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−（１２−オキソドデコキシ）テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
７３ｃについて記載したプロトコールに従って、アルコール７２ｇ２．２０ｇ（４．１４ｍｍｏｌ）を酸化して、アルデヒド７３ｇ２．１９ｇ（９９．９％、粗製）を無色油状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＥＬＳＤ  Ｒt［分］＝１．７９
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ＋ギ酸］-＝５７４．３
【０６７２】
化合物７４ａ〜７４ｇの合成のための一般手順Ｆ
出発アルデヒド７３ａ〜７３ｅ１．０当量を、ＭｅＯＨ（２０ｍｌ／１．０ｍｍｏｌ）に溶解した。室温で、モレキュラーシーブ（４Å）５ｇ、ＮＥｔ3４．０当量およびＡｃＯＨ１０．０当量を添加し、続いてモルホリン２４ａ１．０当量を添加した。反応溶液を１５分間撹拌し、シアノ水素化ホウ素ナトリウム４．０当量を２時間かけて（４回に分けて）添加した。反応物を室温で終夜撹拌して完全な変換を達成した。混合物を濾過し、濾液を飽和ＮａＨＣＯ3溶液５０ｍｌに注ぎ入れた。ＭｅＯＨを蒸発させ、水性混合物をＤＣＭで２回抽出した。有機層をＭｇＳＯ4で脱水し、溶媒を真空中で除去し、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、表題化合物７４ａ〜７４ｇを得た。
【０６７３】
７４ａ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［２−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）−２−（トリイソプロピルシリルオキシ−メチル）モルホリン−４−イル］エトキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
出発アルデヒド７３ａ５８０ｍｇ（７４５μｍｏｌ）から、一般手順Ｆおよびシリカ（ＤＣＭ中０〜１０％ＭｅＯＨ）上での最終精製に続いて、表題化合物７４ａ５１０ｍｇ（６２．１％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝３．３０
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝１１０４．０
【０６７４】
７４ｂ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［２−［２−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシ−フェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）−２−（トリイソプロピル−シリルオキシメチル）モルホリン−４−イル］エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
出発アルデヒド７３ｂ５００ｍｇ（５７７μｍｏｌ）から、一般手順Ｆおよびシリカ（ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ  １：１〜ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ５：５：１）上での最終精製に続いて、表題化合物７４ｂ３５２ｍｇ（５３．２％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝３．２７
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝１１４８．０
【０６７５】
７４ｃ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［２−［２−［２−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシ−フェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）−２−（トリイソプロピルシリル−オキシメチル）モルホリン−４−イル］エトキシ］エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
出発アルデヒド７３ｃ９００ｍｇ（１．８８ｍｍｏｌ）から、一般手順Ｆおよびシリカ（ＤＣＭ中０〜１０％ＭｅＯＨ）上での最終精製に続いて、表題化合物７４ｃ１．３４ｇ（５９．５％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝３．２９
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝１１８９．９
【０６７６】
７４ｄ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［２−［２−［２−［２−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）−２−（トリイソ−プロピルシリルオキシメチル）モルホリン−４−イル］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
出発アルデヒド７３ｄ８４０ｍｇ（１．６１ｍｍｏｌ）から、一般手順Ｆおよびシリカ（ＤＣＭ中０〜１０％ＭｅＯＨ）上での最終精製に続いて、表題化合物７４ｄ８３５ｍｇ（４２．０％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝３．３０
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝１２３５．８
【０６７７】
７４ｅ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［２−［２−［２−［２−［２−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）−２−（トリイソ−プロピルシリルオキシメチル）モルホリン−４−イル］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
出発アルデヒド７３ｅ１．０９ｇ（１．５４ｍｍｏｌ、純度８０％）から、一般手順Ｆおよびシリカ（ＤＣＭ中０〜１０％ＭｅＯＨ）上での最終精製に続いて、表題化合物７４ｅ１．１２ｇ（５６．８％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．２０
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝１２７９．９
【０６７８】
７４ｆ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［５−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）−２−（トリイソプロピルシリルオキシ−メチル）モルホリン−４−イル］ペントキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
出発アルデヒド７３ｆ１．０ｇ（２．３２ｍｍｏｌ）から、一般手順Ｆおよびシリカ（ＤＣＭ中０〜１０％ＭｅＯＨ）上での最終精製に続いて、表題化合物７４ｆ２．１８ｇ（８２．１％）を無色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.44 (s, 1H), 7.84-7.77 (m, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.42 (d, J= 7.6 Hz, 2H), 7.33-7.18 (m, 8H), 6.84 (d, J= 8.8 Hz, 4H), 5.88 (dd, J= 2.4, 10.0 Hz, 1H), 5.22 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 4.98 (dd, J= 3.2, 11.2 Hz, 1H), 4.52-4.47 (m, 1H), 4.11 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.07-3.97 (m, 4H), 3.93-3.83 (m, 2H), 3.80-3.65 (m, 8H), 3.47-3.38 (m, 1H), 3.11 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 2.97 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 2.90 (d, J=8.8 Hz, 1H), 2.79 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 2.29 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.14-2.04 (m, 5H), 2.02-1.95 (m, 3H), 1.90 (s, 3H), 1.82-1.73 (m, 6H), 1.57-1.22 (m, 6H), 1.01-0.83 (m, 21H).
【０６７９】
７４ｇ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［１２−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシ−フェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）−２−（トリイソプロピル−シリルオキシメチル）モルホリン−４−イル］ドデコキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
出発アルデヒド７３ｇ２．１９ｇ（４．１３ｍｍｏｌ）から、一般手順Ｆおよびシリカ（ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ（９：１））上での最終精製に続いて、表題化合物７４ｇ４．８４ｇ（９４．３％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｂ−２：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．１４
イオン化方法：ＥＳ+：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］+＝６２２．５
【０６８０】
化合物７５ａ〜ｇおよび８１ａ〜ｅの合成のための一般手順Ｇ
ＴＩＰＳ保護出発化合物７４ａ〜ｅ（８０ａ〜ｅ、スキーム２２を参照）１．０当量を、ＮＭＰ（１４ｍｌ／１．０ｍｍｏｌ）に溶解した。トリエチルアミン１５．０当量およびＮＥｔ3・３ＨＦ６．０当量を添加した後、反応混合物を、完全な変換が達成されるまで９０℃で撹拌した。溶液を室温に冷却した後、飽和ＮａＨＣＯ3溶液を添加し、混合物をＥｔＯＡｃで３回抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ4で脱水した。溶媒を蒸発させた後、粗生成物をシリカ上で精製して、脱保護生成物７５ａ〜ｇ（８１ａ〜ｅ、スキーム２２を参照）を得た。
【０６８１】
７５ａ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［２−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−２−（ヒドロキシメチル）−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−４−イル］エトキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｇに従って、ＴＩＰＳ−エーテル７４ａ８５０ｍｇ（７７０μｍｏｌ）を脱保護して、シリカゲルクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ  １：１〜ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ５：５：１）の後に、表題化合物７５ａ４０１ｍｇ（５５．０％）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．１６
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝９４７．８
1H-NMR (DMSO-d6, 600 MHz) δ[ppm]: 11.37 (s, 1H), 7.78 (d, J=9.17 Hz, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.40 (d, J=7.52 Hz, 2H), 7.18 - 7.32 (m, 7H), 6.87 (d, J=8.99 Hz, 4H), 5.85 (dd, J=9.90, 3.12 Hz, 1H), 5.20 (d, J=3.48 Hz, 1H), 4.96 (dd, J=11.19, 3.48 Hz, 1H), 4.57 (t, J=5.32 Hz, 1H), 4.52 (d, J=8.44 Hz, 1H), 3.99 - 4.06 (m, 3H), 3.79 - 3.91 (m, 2H), 3.72 - 3.76 (m, 7H), 3.66 (dd, J=11.10, 5.78 Hz, 1H), 3.59 (dt, J=11.51, 5.52 Hz, 1H), 3.00 (s, 2H), 2.90 (br d, J=9.35 Hz, 1H), 2.76 (br d, J=11.55 Hz, 1H), 2.51 - 2.60 (m, 2H), 2.25 (d, J=11.37 Hz, 1H), 2.17 (t, J=10.64 Hz, 1H), 2.04 (m, 3H), 1.97 (m, 3H), 1.88 (s, 3H), 1.70 (s, 3H), 1.69 (s, 3H).
【０６８２】
７５ｂ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［２−［２−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシ−フェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−２−（ヒドロキシメチル）−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−４−イル］エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｇに従って、ＴＩＰＳ−エーテル７４ｂ７２０ｍｇ（６３５μｍｏｌ）を脱保護して、シリカゲルクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ  １：１〜ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ５：５：１）の後に、表題化合物７５ｂ５２７ｍｇ（８３．７％）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．１２
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝９９１．９
1H-NMR DMSO-d6, 600 MHz) δ[ppm]: 11.36 (s, 1H), 7.79 (d, J=9.17 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.40 (d, J=7.70 Hz, 2H), 7.21 - 7.31 (m, 7H), 6.87 (d, J=8.80 Hz, 4H), 5.85 (br d, J=7.34 Hz, 1H), 5.21 (d, J=3.30 Hz, 1H), 4.98 (dd, J=11.19, 3.30 Hz, 1H), 4.61 (br s, 1H), 4.54 (d, J=8.62 Hz, 1H), 3.99 - 4.04 (m, 3H), 3.83 - 3.90 (m, 1H), 3.72 - 3.79 (m, 8H), 3.55 - 3.67 (m, 2H), 3.48 - 3.55 (m, 4H), 3.01 (s, 2H), 2.90 (br d, J=10.09 Hz, 1H), 2.80 (br d, J=12.10 Hz, 1H), 2.51 - 2.55 (m, 2H), 2.27 (br d, J=11.74 Hz, 1H), 2.15 - 2.21 (m, 1H), 2.09 (s, 3H), 1.98 (s, 3H), 1.89 (s, 3H), 1.76 (s, 3H), 1.67 (s, 3H).
【０６８３】
７５ｃ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［２−［２−［２−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−２−（ヒドロキシメチル）−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−４−イル］エトキシ］エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｇに従って、ＴＩＰＳ−エーテル７４ｃ１．２５ｇ（１．０５ｍｍｏｌ）を脱保護して、シリカゲルクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ  １：１〜ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ５：５：１）の後に、表題化合物７５ｃ６３０ｍｇ（５８．０％）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．１１
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝１０３５．６
1H-NMR (DMSO-d6, 600 MHz) δ[ppm]: 11.36 (s, 1H), 7.77 (d, J=9.17 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.40 (d, J=7.34 Hz, 2H), 7.20 - 7.31 (m, 7H), 6.87 (d, J=8.62 Hz, 4H), 5.85 (dd, J=9.72, 3.12 Hz, 1H), 5.21 (d, J=3.48 Hz, 1H), 4.97 (dd, J=11.19, 3.30 Hz, 1H), 4.60 (t, J=5.41 Hz, 1H), 4.54 (d, J=8.62 Hz, 1H), 4.00 - 4.06 (m, 3H), 3.84 - 3.91 (m, 1H), 3.71 - 3.77 (m, 8H), 3.59 - 3.67 (m, 1H), 3.42 - 3.57 (m, 9H), 3.01 (s, 2H), 2.92 (br d, J=9.54 Hz, 1H), 2.80 (br d, J=11.55 Hz, 1H), 2.51 - 2.56 (m, 2H), 2.27 (d, J=11.55 Hz, 1H), 2.17 (t, J= 10.45 Hz, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.89 (s, 3H), 1.76 (m, 3H), 1.67 (m, 3H).
【０６８４】
７５ｄ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［２−［２−［２−［２−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−（ヒドロキシ−メチル）−２−［［（４−ヒドロキシフェニル）−（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−４−イル］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｇに従って、ＴＩＰＳ−エーテル７４ｄ７８０ｍｇ（６３１μｍｏｌ）を脱保護して、シリカゲルクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ  １：１〜ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ５：５：１）の後に、表題化合物７５ｄ４５０ｍｇ（６６．１％）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．１２
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝１０７９．７
1H-NMR (DMSO-d6, 600 MHz) δ[ppm]: 11.36 (s, 1H), 7.77 (d, J=9.17 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.40 (d, J=7.34 Hz, 2H), 7.20 - 7.31 (m, 7H), 6.87 (d, J=8.80 Hz, 4H), 5.84 (dd, J=9.72, 3.12 Hz, 1H), 5.21 (d, J=3.48 Hz, 1H), 4.97 (dd, J=11.28, 3.39 Hz, 1H), 4.60 (t, J=5.32 Hz, 1H), 4.55 (d, J=8.44 Hz, 1H), 4.00 - 4.06 (m, 3H), 3.85 - 3.91 (m, 1H), 3.72 - 3.78 (m, 8H), 3.61 - 3.66 (m, 1H), 3.55 - 3.60 (m, 1H), 3.43 - 3.54 (m, 12H), 3.00 (s, 2H), 2.92 (br d, J=8.99 Hz, 1H), 2.81 (br d, J=11.19 Hz, 1H), 2.51 - 2.56 (m, 2H), 2.28 (d, J=11.74 Hz, 1H), 2.15 - 2.21 (m, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.89 (m, 3H), 1.77 (s, 3H), 1.67 (s, 3H).
【０６８５】
７５ｅ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［２−［２−［２−［２−［２−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−２−（ヒドロキシメチル）−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−４−イル］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｇに従って、ＴＩＰＳ−エーテル７４ｅ１．１０ｇ（８６０μｍｏｌ）を脱保護して、シリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０〜５％ＭｅＯＨ）の後に、表題化合物７５ｅ４３７ｍｇ（４５．３％）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．７２
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝１１２１．６
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.36 (s, 1H), 7.77 (d, J=9.17 Hz, 1H), 7.53 -7.56 (m, 1H), 7.40 (d, J=7.34 Hz, 2H), 7.19 - 7.31 (m, 7H), 6.87 (d, J=8.93 Hz, 4H), 5.85 (dd, J=9.66, 2.93 Hz, 1H), 5.21 (d, J=3.42 Hz, 1H), 4.97 (dd, J=11.25, 3.42 Hz, 1H), 4.53 -4.62 (m, 2H), 4.03 (s, 3H), 3.83 - 3.93 (m, 1H), 3.72 - 3.82 (m, 8H), 3.44 - 3.66 (m, 18H), 2.98 - 3.04 (m, 2H), 2.92 (br d, J=8.80 Hz, 1H), 2.77 - 2.86 (m, 1H), 2.52 - 2.57 (m, 2H), 2.25 - 2.32 (m, 1H), 2.18 (br t, J=10.51 Hz, 1H), 2.10 (m, 3H), 1.99 (m, 3H), 1.89 (s, 3H), 1.77 (s, 3H), 1.67 (s, 3H).
【０６８６】
７５ｆ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−２−（ヒドロキシメチル）−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−４−イル］ペントキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｇに従って、ＴＩＰＳ−エーテル７４ｆ２．１５ｇ（１．８８ｍｍｏｌ）を脱保護して、シリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０〜５％ＭｅＯＨ）の後に、表題化合物７５ｆ１．２１ｇ（６５．０％）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．６９
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝９８９．５
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.36 (s, 1H), 7.79 (d, J=9.29 Hz, 1H), 7.51 -7.58 (m, 1H), 7.40 (d, J=7.34 Hz, 2H), 7.19 - 7.32 (m, 7H), 6.87 (d, J=8.44 Hz, 4H), 5.84 (dd, J=9.90, 2.93 Hz, 1H), 5.21 (d, J=3.42 Hz, 1H), 4.96 (dd, J=11.25, 3.42 Hz, 1H), 4.58 -4.65 (m, 1H), 4.48 (d, J=8.44 Hz, 1H), 3.98 - 4.06 (m, 3H), 3.80 - 3.94 (m, 1H), 3.63 - 3.78 (m, 9H), 3.34 - 3.45 (m, 1H), 2.97 - 3.08 (m, 2H), 2.87 (br d, J=9.05 Hz, 1H), 2.74 (br d, J=11.49 Hz, 1H), 2.24 - 2.33 (m, 2H), 2.01 - 2.17 (m, 5H), 1.98 (s, 3H), 1.89 (s, 3H), 1.76 (s, 3H), 1.67 (s, 3H), 1.35 - 1.54 (m, 4H), 1.23 - 1.35 (m, 2H).
【０６８７】
７５ｇ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［１２−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシ−フェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−２−（ヒドロキシメチル）−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−４−イル］ドデコキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｇに従って、ＴＩＰＳ−エーテル７４ｇ４．８３ｇ（３．８８ｍｍｏｌ）を脱保護して、さらに精製することなく表題化合物７５ｇ３．０３ｇ（７１．７％）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．８９
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝１０８５．５
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.36 (s, 1H), 7.79 (d, J=9.29 Hz, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.40 (d, J=7.46 Hz, 2H), 7.19 - 7.32 (m, 7H), 6.87 (d, J=8.80 Hz, 4H), 5.84 (dd, J=9.72, 2.87 Hz, 1H), 5.21 (d, J=3.30 Hz, 1H), 4.96 (dd, J=11.25, 3.30 Hz, 1H), 4.61 (t, J=5.14 Hz, 1H), 4.48 (d, J=8.44 Hz, 1H), 3.98 - 4.07 (m, 3H), 3.82 - 3.91 (m, 1H), 3.61 - 3.78 (m, 9H), 3.35 - 3.44 (m, 1H), 2.96 - 3.08 (m, 2H), 2.86 (br d, J=9.17 Hz, 1H), 2.66 - 2.77 (m, 1H), 2.30 (br t, J=7.09 Hz, 2H), 2.01 - 2.16 (m, 5H), 1.99 (s, 3H), 1.89 (m, 3H), 1.76 (m, 3H), 1.67 (m, 3H), 1.36 - 1.48 (m, 4H), 1.20 - 1.31 (br s, 16H).
【０６８８】
化合物７６ａ〜ｇおよび８２ａ〜ｅの合成のための一般手順Ｈ
出発アルコール７５ａ〜ｅ（８１ａ〜ｅ、スキーム２２を参照）１．０当量およびジイソプロピル−アンモニウムテトラゾリド６．０当量を、乾燥ＤＣＭ（３３ｍｌ／１．０ｍｍｏｌ）に溶解した。アルゴン雰囲気下、２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスホロジアミダイト３．０当量を室温で滴下添加し、溶液を、完全な変換が達成されるまで撹拌した。反応物をＨ2Ｏ（２５ｍｌ）でクエンチし、有機層を分離した。水相をＤＣＭで抽出し、合わせた有機抽出物をＭｇＳＯ4で脱水した。溶媒を蒸発させた後、粗生成物を酢酸エチル／ジエチルエーテル（１：１）およそ１０ｍｌに溶解し、ｎ−ペンタン４０ｍｌを添加した。沈殿物を遠心分離し（２分、１０℃、４４００ｕｐｍ）、液体層を廃棄した。沈殿物の精製を３回繰り返した。ｓｐｅｅｄｖａｃ上で乾燥した後、表題化合物７６ａ〜ｇ（８２ａ〜ｅ、スキーム２２を参照）を無色固体として単離した。
【０６８９】
７６ａ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［２−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−２−［［２−シアノエトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−４−イル］エトキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｈに従って、出発アルコール７５ａ４０１ｍｇ（４２３μｍｏｌ）をホスフィチル化して、表題化合物７６ａ４３０ｍｇ（８８．５％）を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.35 (br s, 1H), 7.78 (d, J=9.03 Hz, 1H), 7.52, 7.55 (2 x s, 1H), 7.35 - 7.44 (m, 2H), 7.19 - 7.32 (m, 7H), 6.81 - 6.90 (m, 4H), 5.86 - 5.92 (m, 1H), 5.20 (m, 1H), 4.95 (2 x t, 3.12 Hz, 1H), 4.50 (m, 1H), 3.96 - 4.08 (m, 4H), 3.77 -3.93 (m, 3H), 3.73 (s, 6H), 3.38 - 3.67 (m, 5H), 2.87 - 3.11 (m, 3H), 2.72 - 2.83 (m, 1H), 2.52 - 2.70 (m, 4H), 2.13 - 2.36 (m, 2H), 1.93 - 2.04 (m, 6H), 1.85 - 1.91 (m, 3H), 1.67 -1.76 (m, 6H), 0.94 - 1.13 (m, 12H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,7, 147,5.
【０６９０】
７６ｂ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［２−［２−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシ−フェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−２−［［２−シアノエトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシ−メチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−４−イル］エトキシ］エトキシ］テトラヒドロ−ピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｈに従って、出発アルコール７５ｂ５２７ｍｇ（５３２μｍｏｌ）をホスフィチル化して、表題化合物７６ｂ５２８ｍｇ（８３．４％）を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.35 (br s, 1H), 7.79 (d, J=9.16, 1H), 7.55 (2 x s, 1H), 7.35 - 7.43 (m, 2H), 7.19 - 7.32 (m, 7H), 6.82 - 6.90 (m, 4H), 5.84 - 5.93 (m, 1H), 5.21 (m, 1H), 4.98 (m, 1H), 4.54 (m, 1H), 3.95 - 4.09 (m, 5H), 3.71 - 3.92 (m, 3H), 3.73 (s, 6H), 3.39 - 3.64 (m, 9H), 2.96 - 3.12 (m, 2H), 2.77 - 2.96 (m, 2H), 2.63 - 2.73 (m, 1H), 2.52 - 2.63 (m, 2H), 2.16 - 2.35 (m, 2H), 2.09 (s, 3H), 1.98, 1.99 (2 x s, 3H), 1.89 (s, 3H), 1.76 (s, 3H) 1.72, 1.69 (2 x s, 3H), 0.91 - 1.14 (m, 12H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,6, 147,4.
【０６９１】
７６ｃ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［２−［２−［２−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−２−［［２−シアノエトキシ−（ジイソプロピルアミノ）−ホスファニル］オキシメチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−４−イル］エトキシ］−エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｈに従って、出発アルコール７５ｃ６３０ｍｇ（６０９μｍｏｌ）をホスフィチル化して、表題化合物７６ｃ６９８ｍｇ（９２．８％）を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.35 (br s, 1H), 7.76 (m, 1H), 7.56, 7.53 (2 x s, 1H), 7.39 (m, 2H), 7.19 - 7.33 (m, 7H), 6.82 - 6.91 (m, 4H), 5.84 - 5.93 (m, 1H), 5.21 (m, 1H), 4.97 (m, 1H), 4.55 (m, 1H), 3.96 - 4.09 (m, 4H), 3.70 - 3.91 (m, 4H), 3.73 (s, 6H), 3.40 - 3.63 (m, 13H), 2.98 - 3.08 (m, 2H), 2.79 - 2.96 (m, 2H), 2.64 - 2.73 (m, 1H), 2.52 - 2.62 (m, 2H), 2.17 - 2.34 (m, 2H), 2.10 (s, 3H), 1.99 (m, 3H), 1.89 (m, 3H), 1.78 (m, 3H), 1.72, 1.70 (2 x s, 3H), 0.91 - 1.25 (m, 12H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,6, 147,4.
【０６９２】
７６ｄ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［２−［２−［２−［２−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−２−［［２−シアノエトキシ−（ジイソプロピルアミノ）−ホスファニル］オキシメチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−４−イル］エトキシ］−エトキシ］エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｈに従って、出発アルコール７５ｄ４５０ｍｇ（４１７μｍｏｌ）をホスフィチル化して、表題化合物７６ｄ４６０ｍｇ（８６．２％）を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: (br s, 1H), 7.77 (d, J=9.22 Hz, 1H), 7.56, 7.53 (2 x s, 1H), 7.35 - 7.43 (m, 2H), 7.19 - 7.33 (m, 7H), 6.82 - 6.90 (m, 4H), 5.84 - 5.93 (m, 1H), 5.22 (m, 1H), 4.97 (m, 1H), 4.56 (m, 1H), 3.97 - 4.09 (m, 4H), 3.68 - 3.96 (m, 4H), 3.73 (s, 6H), 3.37 - 3.66 (m, 17H), 2.79 - 3.08 (m, 4H), 2.64 - 2.71 (m, 1H), 2.52 - 2.62 (m, 2H), 2.17 - 2.35 (m, 2H), 2.10 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.89 (s, 3H), 1.77 (s, 3H), 1.72, 1.69 (2 x s, 3H), 0.89 - 1.22 (m, 12H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,6, 147,4.
【０６９３】
７６ｅ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［２−［２−［２−［２−［２−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−２−［［２−シアノエトキシ−（ジイソプロピルアミノ）−ホスファニル］オキシメチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−４−イル］エトキシ］−エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｈに従って、出発アルコール７５ｅ４９５ｍｇ（４４１μｍｏｌ）をホスフィチル化して、表題化合物７６ｅ５８９ｍｇ（定量的）を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.35 (br s, 1H), 7.77 (d, J=9.16 Hz, 1H), 7.56, 7.53 (2 x s, 1H), 7.35 - 7.43 (m, 2H), 7.18 - 7.33 (m, 7H), 6.86 (br d, J=8.78 Hz, 4H), 5.84 -5.93 (m, 1H), 5.22 (dm, 1H), 4.97 (m, 1H), 4.56 (m, 1H), 3.96 - 4.10 (m, 4H), 3.72 - 3.95 (m, 4H), 3.73 (s, 6H), 3.41 - 3.63 (m, 21H), 2.79 - 3.08 (m, 4H), 2.64 - 2.72 (m, 1H), 2.53 - 2.61 (m, 2H), 2.14 - 2.33 (m, 2H), 2.10 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.89 (s, 3H), 1.77 (s, 3H), 1.72, 1.69 (2 x s, 3H), 0.93 - 1.12 (m, 12H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,6, 147,4.
【０６９４】
７６ｆ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［５−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−２−［［２−シアノエトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−４−イル］ペントキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｈに従って、出発アルコール７５ｆ１．１７ｇ（１．１８ｍｍｏｌ）をホスフィチル化して、表題化合物７６ｆ１．３２ｇ（９４．１％）を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.36 (br s, 1H), 7.78 (2 x d, J=9. 19, 1H), 7.57, 7.54 (2 x s, 1H), 7.36 - 7.44 (m, 2H), 7.19 - 7.32 (m, 7H), 6.86 (br d, J=8.78 Hz, 4H), 5.89 (m, 1H), 5.21 (m, 1H), 4.96 (m, 1H), 4.48 (m, 1H), 3.94 - 4.09 (m, 4H), 3.81 - 3.93 (m, 2H), 3.66 - 3.75 (m, 1H), 3.73 (s, 6H), 3.53 - 3.66 (m, 2H), 3.37 - 3.51 (m, 3H), 3.07 - 3.13 (m, 1H), 2.95 - 3.05 (m, 1H), 2.84 - 2.92 (m, 1H), 2.77 (m, 1H), 2.63 - 2.71 (m, 1H), 2.52 - 2.62 (m, 1H), 2.23 - 2.39 (m, 2H), 2.02 - 2.16 (m, 2H), 2.10 (s, 3H), 1.99, 1.98 (2 x s, 3H), 1.89 (s, 3H), 1.76 (s, 3H), 1.73, 1.70 (2 x s, 3H), 1.35 - 1.56 (m, 4H), 1.22 - 1.33 (m, 2H), 0.93 - 1.13 (m, 12H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,4, 147,1.
【０６９５】
７６ｇ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［１２−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシ−フェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−２−［［２−シアノエトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシ−メチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−４−イル］ドデコキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｈに従って、出発アルコール７５ｇ１．５２ｇ（１．４０ｍｍｏｌ）をホスフィチル化して、表題化合物７６ｇ１．５５ｇ（８６．３％）を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.37 (br s, 1H), 7.80 (d, J=9.22 Hz, 1H), 7.57, 7.54 (2 x s, 1H), 7.36 - 7.45 (m, 2H), 7.20 - 7.32 (m, 7H), 6.86 (d, J=8.85 Hz, 4H), 5.86 -5.93 (m, 1H), 5.22 (m, 1H), 4.97 (m, 1H), 4.49 (m, 1H), 3.82 - 4.09 (m, 6H), 3.74 (s, 6H), 3.65 - 3.72 (m, 1H), 3.54 - 3.64 (m, 2H), 3.36 - 3.52 (m, 3H), 3.06 - 3.14 (m, 1H), 2.96 -3.06 (m, 1H), 2.73 - 2.91 (m, 2H), 2.64 - 2.71 (m, 1H), 2.53 - 2.61 (m, 1H), 2.20 - 2.39 (m, 2H), 2.03 - 2.16 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.90 (s, 3H),1.77 (s, 3H), 1.73, 1.71 (2 x s, 3H), 1.35 - 1.52 (m, 4H), 1.17 - 1.32 (m, 16H), 0.97 - 1.14 (m, 12H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,3, 147,1.
【０６９６】
〔実施例Ｃ．２〕
合成スキーム２１
【化６５】
2021517126.tif 000067
【０６９７】
７８ａ：ベンジル２−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−３−アセトアミド−４，５−ジアセトキシ−６−（アセトキシメチル）テトラヒドロ−ピラン−２−イル］オキシアセテート
ＤＣＥ１６０ｍｌ中の出発化合物６８（１６ｇ、４１．１ｍｍｏｌ）およびベンジル２−ヒドロキシ−アセテート７７ａ（１３．６ｇ、８２．２ｍｍｏｌ）の混合物に、Ｓｃ（ＯＴｆ）3（１．４１ｇ、２．８８ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を９０℃で１６時間撹拌して完全な変換を達成した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ3２００ｍｌに注ぎ入れ、ＤＣＭ３×１００ｍｌで抽出した。合わせた有機相を無水Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、濾過し、濾液を真空中で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ  １：１）、次いで逆相フラッシュクロマトグラフィー（中性）により精製して、表題化合物７８ａ１２．０ｇ（６０％）を黄色油状物として得た。
MS [M+H]+ (m/z) = 496,0
【０６９８】
７９ａ：２−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−３−アセトアミド−４，５−ジアセトキシ−６−（アセトキシメチル）テトラヒドロピラン−２−イル］オキシ酢酸
ＥｔＯＡｃ１５０ｍｌ中の化合物７８ａ（１２ｇ、２４．２ｍｍｏｌ）の混合物に、Ｐｄ／Ｃ（３ｇ、炭素上１０％および５０％の含水率）を２５℃で添加した。混合物を、完全な変換が達成されるまで、Ｈ2雰囲気（１５ｐｓｉ）下、室温で１２時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を真空中で濃縮して、７９ａ（９．２ｇ、９３％）を無色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 7.93 (br d, J=8.7 Hz, 1H), 5.22 (d, J=3.4 Hz, 1H), 5.01 (dd, J=3.3, 11.1 Hz, 1H), 4.63 (d, J=8.5 Hz, 1H), 4.10 (br d, J=4.9 Hz, 2H), 4.05-3.99 (m, 3H), 3.94 - 3.85 (m, 2H), 2.14-2.10 (m, 3H), 2.02-1.99 (m, 3H), 1.89 (s, 3H), 1.79 (s, 3H).
【０６９９】
７８ｃ：ベンジル２−［２−［２−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−３−アセトアミド−４，５−ジアセトキシ−６−（アセトキシメチル）テトラ−ヒドロピラン−２−イル］オキシエトキシ］エトキシ］アセテート
化合物７８ａについて記載したプロトコールに従って、６８  １４．６ｇ（３７．６ｍｍｏｌ）およびベンジル２−［２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ］アセテート７７ｃ１９．１ｇ（７５．２ｍｍｏｌ）から、表題化合物７８ｃ１２．０ｇ（５４．８％）を薄黄色油状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 7.75 (d, J=9.17 Hz, 1H), 7.50-7.27 (m, 5H), 5.21 (d, J=3.30 Hz, 1H,) 5.15 (s, 2H), 4.97 (dd, J=11.19, 3.36 Hz, 1H), 4.57 (d, J=8.44 Hz, 1H), 4.19 (s, 2H), 4.04-4.00 (m, 3H), 3.88 (dt, J=10.97, 8.94 Hz, 1H), 3.81-3.71 (m, 1H), 3.63-3.48 (m, 7H), 2.10 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.89 (s, 3H), 1.77 (s, 3H).
【０７００】
７９ｃ：２−［２−［２−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−３−アセトアミド−４，５−ジアセトキシ−６−（アセトキシメチル）テトラヒドロ−ピラン−２−イル］オキシエトキシ］エトキシ］酢酸
ＥｔＯＡｃ４００ｍｌ中のベンジルエステル７８ｃ（１２．０ｇ、２０．６ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｐｄ／Ｃ（２ｇ、炭素上１０％および５０％の含水率）を添加した。混合物をＨ2雰囲気（１５ｐｓｉ）下、室温で１２時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を真空中で濃縮して、７９ｃ８．５ｇ（８３．７％）を無色油状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 7.78 (d, J=9.17 Hz, 1H), 5.22 (d, J=3.42 Hz, 1H), 4.98 (dd, J=11.13, 3.42 Hz, 1H), 4.59 (d, J=8.44 Hz, 1H), 4.10-3.98 (m, 5H), 3.89 (dt, J=11.00, 8.93 Hz, 1H), 3.78 (dt, J=11.16, 4.63 Hz, 1H), 3.65-3.46 (m, 7H), 2.11 (s, 3H), 2.01 (s, 3H), 1.90 (s, 3H), 1.78 (s, 3H).
【０７０１】
７８ｂ：ベンジル２−［２−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−３−アセトアミド−４，５−ジアセトキシ−６−（アセトキシメチル）テトラヒドロ−ピラン−２−イル］オキシエトキシ］アセテート
ＤＣＥ１００ｍｌ中の化合物７７ｂ（７．０ｇ、２１．２ｍｍｏｌ）およびオキサゾリン６９（６．７ｇ、３１．９ｍｍｏｌ）の混合物に、４Åシーブ（１０ｇ）を２５℃で添加した。混合物を１．５時間撹拌し、続いてＴＭＳＯＴｆ（２．３ｇ、１０．６ｍｍｏｌ）を添加した。室温で１２時間撹拌した後、反応溶液を飽和ＮａＨＣＯ3溶液２００ｍｌに注ぎ入れ、ＤＣＭ３×１００ｍｌで抽出した。合わせた有機相を無水Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、濾過し、真空中で濃縮した。残留物を逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製して、化合物７８ｂ（４．０ｇ、３６％）を黄色油状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 7.68 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.29-7.16 (m, 5H), 5.12 -5.05 (m, 1H), 5.02 (s, 2H), 4.89-4.79 (m, 1H), 4.43 (d, J=8.4 Hz, 1H), 4.06 (d, J=1.6 Hz, 2H), 3.92-3.85 (m, 3H), 3.81-3.64 (m, 2H), 3.55-3.41 (m, 3H), 1.97 (s, 3H), 1.87-1.84 (m, 3H), 1.78-1.74 (m, 3H), 1.65-1.57 (m, 3H).
【０７０２】
７９ｂ：２−［２−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−３−アセトアミド−４，５−ジアセトキシ−６−（アセトキシメチル）テトラヒドロピラン−２−イル］オキシエトキシ］酢酸
ＥｔＯＡｃ１００ｍｌ中の化合物７８ｂ（６．０ｇ、１１．１ｍｍｏｌ）の混合物に、Ｐｄ／Ｃ（０．６ｇ、炭素上１０％および５０％の含水率）を室温で添加した。混合物をＨ2（１５ｐｓｉ）下で１２時間撹拌して完全な変換を達成した。反応混合物を濾過し、濾液を真空中で濃縮して、表題化合物７９ｂ５．０ｇ（９６％）を白色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 7.83 (d, J=9.3 Hz, 1H), 5.22 (d, J=3.4 Hz, 1H), 4.97 (dd, J=3.4, 11.2 Hz, 1H), 4.57 (d, J=8.6 Hz, 1H), 4.06-4.02 (m, 3H), 4.01 (s, 2H), 3.89 (td, J=8.9, 11.1 Hz, 1H), 3.83-3.77 (m, 1H), 3.66-3.52 (m, 3H), 2.13-2.07 (m, 3H), 2.02- 1.98 (m, 3H), 1.89 (s, 3H), 1.78 (s, 3H).
【０７０３】
７８ｄ：ベンジル５−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−３−アセトアミド−４，５−ジアセトキシ−６−（アセトキシメチル）テトラヒドロ−ピラン−２−イル］オキシペンタノエート
ＤＣＥ４ｌ中の（Ｄ）−２−デスオキシ−２−アミノ−ガラクトシル−ペンタアセテート６８（３８７ｇ、０．９６８ｍｏｌ）の溶液に、ＴＭＳＯＴｆ（３２２ｇ、１．４５２ｍｏｌ）を１５℃で滴下添加した。混合物を５０℃で１．５時間加熱し、次いで３０℃で終夜撹拌した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ3溶液４ｌに注ぎ入れ、ＤＣＭ１ｌで２回抽出した。合わせた有機層を無水Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、濾過し、真空中で濃縮した。残留物をＤＣＥ４ｌに溶解し、ベンジル−５−ヒドロキシペンタノエート７７ｄ（３０２ｇ、１．４５２ｍｏｌ）および粉末モレキュラーシーブ（４Å）３００ｇを１５℃で添加した。１時間撹拌した後、ＴＭＳＯＴｆ（１０７．４ｇ、０．４８４ｍｏｌ）を１５℃で滴下添加した。懸濁液を１５℃で終夜撹拌して完全な変換を達成した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ3溶液４ｌに注ぎ入れ、濾過し、ＤＣＭ１ｌで２回抽出した。合わせた有機層をＮａ2ＳＯ4で脱水し、濾過し、真空中で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ  ３：１）により精製して、所望の生成物（２４０ｇ、４６％）を無色油状物として得た。
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ[ppm]: 7.47-7.30 (m, 5H), 5.74 (br d, J=8.5 Hz, 1H), 5.36 (d, J=2.8 Hz, 1H), 5.30-5.23 (m, 1H), 5.17-5.07 (m, 2H), 4.65 (d, J=8.4 Hz, 1H), 4.20-4.08 (m, 3H), 4.02-3.94 (m, 1H), 3.94-3.85 (m, 2H), 3.50 (td, J=6.1, 9.9 Hz, 1H), 2.49-2.32 (m, 2H), 2.15 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 2.01 (s, 3H), 1.92 (s, 3H), 1.78-1.56 (m, 4H).
【０７０４】
７９ｄ：５−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−３−アセトアミド−４，５−ジアセトキシ−６−（アセトキシメチル）テトラヒドロピラン−２−イル］オキシペンタン酸
ＭｅＯＨ２．５ｌ中のベンジルエステル７８ｄ（２４０ｇ、０．４４７ｍｏｌ）の溶液に、Ｐｄ／Ｃ（２４ｇ、炭素上１０％、含水率５０％）を添加した。混合物をＨ2（１５ｐｓｉ）下、１５℃で終夜撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を真空中で濃縮して、７９ｄ１９６ｇ（９７％）を白色固体として得た。
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ[ppm]: 6.19 (d, J=8.8 Hz, 1H), 5.37 (d, J=3.1 Hz, 1H), 5.30 (dd, J=3.4, 11.2 Hz, 1H), 4.69 (d, J=8.3 Hz, 1H), 4.16 (m, 1H), 3.98-3.92 (m, 2H), 3.57-3.48 (m, 2H), 2.40-2.30 (m, 2H), 2.18-2.15 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 2.02 (s, 3H), 1.99-1.94 (s, 3H), 1.76-1.59 (m, 4H).
【０７０５】
７７ｅ：ベンジル１２−ヒドロキシドデカノエート
１２−ヒドロキシドデカン酸５．０ｇ（２２．４ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ１００ｍｌに溶解した。臭化ベンジル４．５ｇ（３．１５ｍｌ、２５．８ｍｍｏｌ）および重炭酸カリウム３．３７ｇ（３３．６ｍｍｏｌ）を添加した後、混合物を２０時間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、残留物をジエチルエーテルに溶解した。Ｈ2Ｏで洗浄した後、水相を分離し、ジエチルエーテルで抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ4で脱水し、シリカゲルクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン中０〜３０％ＥｔＯＡｃ）により精製して、所望のベンジルエステル５．７０ｇ（８２．９％）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．０４
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝３０７．２
【０７０６】
７８ｅ：ベンジル１２−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−３−アセトアミド−４，５−ジアセトキシ−６−（アセトキシメチル）テトラヒドロ−ピラン−２−イル］オキシドデカノエート
６８  ２．２０ｇ（５．７ｍｍｏｌ）から出発して、７８ｄについて記載したプロトコールに従って、表題化合物７８ｅ２．０ｇ（５５．９％）を合成した。７０℃で４時間、室温でさらに１６時間撹拌した後、７７ｅによる完全なグリコシル化を達成した。最終精製を、ｎ−ヘプタン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ（１：１）で溶出するシリカゲル上で行った。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．９９
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝６３６．５
【０７０７】
７９ｅ：１２−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−３−アセトアミド−４，５−ジアセトキシ−６−（アセトキシメチル）テトラヒドロピラン−２−イル］オキシドデカン酸
ベンジルエステル７８ｅ２．０ｇ（３．２ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ２０ｍｌに溶解した。Ｐｄ（炭素上１０％）１６７ｍｇ（１５７μｍｏｌ）を添加した後、反応混合物をＨ2でパージし、４ｂａｒのＨ2圧で水素化した。４時間後、Ｐｄ触媒を濾別し、濾液を真空中で蒸発させた。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０〜２０％ＭｅＯＨ、１０％ＡｃＯＨ）により精製して、カルボン酸７９ｅ１．６７ｇ（９７．３％）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＥＬＳＤ：Ｒt［分］＝１．６８
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝５４６．４
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.79 (br s, 1H), 7.67 (d, J=9.17 Hz, 1H), 5.08 (d, J=3.42 Hz, 1H), 4.83 (dd, J= 11.25, 3.42 Hz, 1H), 4.35 (d, J=8.44 Hz, 1H), 3.84 - 3.95 (m, 3H), 3.73 (m, 1H), 3.56 (m, 1H), 3.44 - 3.51 (m, 1H), 3.28 (m, 1H), 1.97 (s, 3H), 1.87 (s, 3H), 1.76 (s, 3H), 1.63 (s, 3H), 1.28 - 1.39 (m, 4H), 1.11 (s, 14H).
【０７０８】
〔実施例Ｃ．３〕
合成スキーム２２
【化６６】
2021517126.tif 000068
【０７０９】
化合物８０ａ〜８０ｅの合成のための一般手順Ｊ
カルボン酸（７９ａ〜ｅ、１．０〜１．２当量）およびモルホリン化合物２４ａ（１．０当量）を、ＤＣＭ（２０ｍｌ／１．０ｍｍｏｌ）に溶解した。ＨＢＴＵ１．５当量およびＤＩＰＥＡ３．０当量を添加した後、反応物を室温で１８時間撹拌して完全な変換を達成した。反応溶液を飽和ＮａＣＨＯ3および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ4で脱水し、溶媒を蒸発させた。粗生成物をシリカ上で精製して、所望のアミドを無色固体として得た。
【０７１０】
８０ａ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［２−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）−２−（トリイソプロピルシリルオキシ−メチル）モルホリン−４−イル］−２−オキソ−エトキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｊに従って、カルボン酸７９ａ４００ｍｇ（９８６μｍｏｌ、１．２当量）から、シリカ（ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ  １：１中０〜１０％ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  １０：１０：１）上での精製の後に、表題化合物８０ａ５３０ｍｇ（５７．７％）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝３．１５
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝１１１５．９
【０７１１】
８０ｂ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［２−［２−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシ−フェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）−２−（トリイソプロピル−シリルオキシメチル）モルホリン−４−イル］−２−オキソ−エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｊに従って、カルボン酸７９ｂ４０６ｍｇ（９０４μｍｏｌ、１．１当量）から、シリカ（ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ  １：１中０〜１０％ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  １０：１０：１）上での精製の後に、表題化合物８０ｂ５９０ｍｇ（６１．８％）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝３．１６
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝１１６０．０
【０７１２】
８０ｃ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［２−［２−［２−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシ−フェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）−２−（トリイソプロピルシリル−オキシメチル）モルホリン−４−イル］−２−オキソ−エトキシ］エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｊに従って、カルボン酸７９ｃ４０６ｍｇ（８２２μｍｏｌ、１．２当量）から、シリカ（ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ  １：１中０〜１０％ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  １０：１０：１）上での精製の後に、表題化合物８０ｃ４１３ｍｇ（５０．０％）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝３．１７
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝１２０４．０
【０７１３】
８０ｄ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［５−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシ−フェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）−２−（トリイソプロピルシリル−オキシメチル）モルホリン−４−イル］−５−オキソ−ペントキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｊに従って、カルボン酸７９ｄ７５０ｍｇ（１．６８ｍｍｏｌ、１．０当量）から、シリカ（ＤＣＭ中０〜５％ＭｅＯＨ）上での精製の後に、表題化合物８０ｄ１．７６ｇ（９０．６％）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．１６
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝１１５７．５
【０７１４】
８０ｅ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［１２−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシ−フェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）−２−（トリイソプロピルシリル−オキシメチル）モルホリン−４−イル］−１２−オキソ−ドデコキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｊに従って、カルボン酸７９ｅ８９７ｍｇ（１．６４ｍｍｏｌ、１．２当量）から、シリカ（ＤＣＭ中０〜５％ＭｅＯＨ）上での精製の後に、表題化合物８０ｅ１．４６ｇ（８４．５％）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．２５
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝１２５５．６
【０７１５】
８１ａ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［２−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−２−（ヒドロキシメチル）−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−４−イル］−２−オキソ−エトキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｇ（スキーム２０を参照）に従って、ＴＩＰＳ−エーテル８０ａ５３０ｍｇ（４７４μｍｏｌ）を脱保護して、シリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ  １：１中０〜１０％ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  ５：５：１）の後に、表題化合物８１ａ３８０ｍｇ（８３．４％）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．２９
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝９５９．９
1H-NMR (DMSO-d6, 600 MHz) δ[ppm]: 11.44 (br s, 1H), 7.83 - 7.88 (m, 0.4H), 7.78 (br d, J=9.17 Hz, 0.6H), 7.64 (s, 1H), 7.39 - 7.44 (m, 2H), 7.21 - 7.32 (m, 7H), 6.85 - 6.90 (m, 4H), 5.88 - 5.93 (m, 0.4H), 5.83 (m, 0.6H), 5.19 - 5.23 (m, 1H), 4.90 - 5.02 (m, 1.6H), 4.53 -4.62 (m, 1.4H), 21 4.42 (br d, J=14.12 Hz, 0.6H), 4.32 - 4.39 (m, 1H), 4.20 - 4.31 (m, 1.4H), 3.81 - 4.07 (m, 6H), 3.72 - 3.79 (m, 7H), 3.47 - 3.65 (m, 2H), 2.99 - 3.11 (m, 2H), 2.88 - 2.97 (m, 1H), 2.10, 2.04 (2 x s, 3H), 1.99, 1.97 (2 x s, 3H), 1.88 (s, 3H), 1.73, 1.72 (m, 6H).
【０７１６】
８１ｂ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［２−［２−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシ−フェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−２−（ヒドロキシメチル）−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−４−イル］−２−オキソ−エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｇ（スキーム２０を参照）に従って、ＴＩＰＳ−エーテル８０ｂ６７０ｍｇ（５７７μｍｏｌ）を脱保護して、シリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ  １：１中０〜１０％ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  ５：５：１）の後に、表題化合物８１ｂ５０４ｍｇ（８６．９％）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．３０
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝１００３．９
1H-NMR (DMSO-d6, 600 MHz) δ[ppm]: 11.42 (br s, 1H), 7.80 (d, J=9.35 Hz, 1H), 7.64, 7.60 (2 x s, 1H), 7.39 - 7.44 (m, 2H), 7.19 - 7.35 (m, 7H), 6.85 - 6.90 (m, 4H), 5.87 - 5.93 (m, 0.4H), 5.82 (br d, J=8.07 Hz, 0.6H), 5.21 (br s, 1H), 4.94 - 5.00 (m, 1.6H), 4.64 - 4.70 (m, 0.4H), 4.54 - 4.58 (m, 1H), 4.33 - 4.39 (m, 0.6H), 4.11 - 4.26 (m, 2.4H), 4.00 - 4.05 (m, 3.4H), 3.78 - 3.94 (m, 2.6H), 3.74 (m, 6H), 3.42 - 3.70 (m, 6H), 3.07 - 3.11 (m, 1H), 2.89 -3.05 (m, 2H), 2.04 - 2.12 (m, 3H), 1.97 - 2.01 (m, 3H), 1.89 (s, 3H), 1.71 - 1.78 (m, 6H).
【０７１７】
８１ｃ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［２−［２−［２−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシ−フェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−２−（ヒドロキシメチル）−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）−モルホリン−４−イル］−２−オキソ−エトキシ］エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｇ（スキーム２０を参照）に従って、ＴＩＰＳ−エーテル８０ｃ４１０ｍｇ（３４０μｍｏｌ）を脱保護して、シリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ  １：１中０〜１０％ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  ５：５：１）の後に、表題化合物８１ｃ２８５ｍｇ（７９．９％）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ｃ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．３１
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝１０４７．９
1H-NMR (DMSO-d6, 600 MHz) δ[ppm]: 11.43 (br s, 1H), 7.76 (m, 1H), 7.57 - 7.65 (m, 1H), 7.42 (m, 2H), 7.21 - 7.32 (m, 7H), 6.85 - 6.90 (m, 4H), 5.88 - 5.94 (m, 0.4H), 5.82 (m, 0.6H), 5.21 (m, 1H), 4.94 - 4.99 (m, 1.6H), 4.63 - 4.69 (m, 0.4H), 4.57 (m, 1H), 4.36 (m, 0.6H), 4.16 - 4.26 (m, 2H), 4.09 - 4.15 (m, 0.4H), 3.99 - 4.05 (m, 3H), 3.85 - 3.92 (m, 2H), 3.69 - 3.79 (m, 8H), 3.45 - 3.62 (m, 9H), 3.06 - 3.10 (m, 1H), 2.88 - 3.06 (m, 2H), 2.10 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.88 (s, 3H), 1.76 (br s, 3H), 1.73 (s, 3H).
【０７１８】
８１ｄ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−２−（ヒドロキシメチル）−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−４−イル］−５−オキソ−ペントキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｇ（スキーム２０を参照）に従って、ＴＩＰＳ−エーテル８０ｄ１．７５ｇ（１．５１ｍｍｏｌ）を脱保護して、シリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０〜１０％ＭｅＯＨ）の後に、表題化合物８１ｄ１．１７ｇ（７７．３％）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．８０
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝１００１．４
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.43 (s, 1H), 7.78 (m, 1H), 7.64, 7.58 (2 x b s, 1H), 7.41 (m, 2H), 7.20 - 7.33 (m, 7H), 6.88 (m, 4H), 5.85 (m, 0.4H), 5.77 (m, 0.6H), 5.21 (m, 1H), 4.92 - 5.01 (m, 1.6H), 4.61 - 4.67 (m, 0.4H), 4.45 - 4.52 (m, 1H), 4.37 - 4.45 (m, 0.6H), 4.21 - 4.29 (m, 0.4H), 3.67 - 4.07 (m, 12H), 3.32 - 3.64 (m, 4H), 2.81 - 3.14 (m, 3H), 2.27 - 2.38 (m, 2H), 2.06 - 2.12 (m, 3H), 1.96 - 2.01 (m, 3H), 1.89 (m, 3H), 1.76 (m, 3H), 1.72 (m, 3H), 1.49 (br s, 4H).
【０７１９】
８１ｅ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［１２−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシ−フェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−２−（ヒドロキシメチル）−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）−モルホリン−４−イル］−１２−オキソ−ドデコキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｇ（スキーム２０を参照）に従って、ＴＩＰＳ−エーテル８０ｅ１．４５ｇ（１．１５ｍｍｏｌ）を脱保護して、シリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０〜５％ＭｅＯＨ）の後に、表題化合物８１ｅ１．１０ｇ（８６．６％）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．９６
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝１０９９．６
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.42 (br s, 1H), 7.79 (d, J=9.29 Hz, 1H), 7.63, 7.57 (2 x s, 1H), 7.41 (m, 2H), 7.20 - 7.34 (m, 7H), 6.87 (m, 4H), 5.84 (m, 0.4H), 5. 77 (m, 0.6H), 5.21 (m, 1H), 4.91 - 5.01 (m, 1.6H), 4.61 - 4.68 (m, 0.4H), 4.48 (m, 1H), 4.39 (m, 0.6H), 4.24 (m, 0.4H), 3.98 - 4.06 (m, 3H), 3.66 - 3.90 (m, 3H), 3.74 (s, 6H), 3.56 (m, 1H), 3.36 - 3.50 (m, 2H), 2.77 - 3.16 (m, 2H), 2.22 - 2.39 (m, 2H), 2.10 (m, 3H), 1.99 (m, 3H), 1.89 (m, 3H), 1.76 (m, 3H), 1.72 (m, 3H), 1.39 - 1.56 (m, 4H), 1.18 - 1.32 (br s, 16H).
【０７２０】
８２ａ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［２−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−２−［［２−シアノエトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−４−イル］−２−オキソ−エトキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｈ（スキーム２０を参照）に従って、出発アルコール８１ａ３８０ｍｇ（３９５μｍｏｌ）から、表題化合物８２ａ４３４ｍｇ（９４．４％）を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.41 (b s, 1H), 7.72 - 7.90 (m, 1H), 7.60 - 7.71 (m, 1H), 7.35 - 7.48 (m, 2H), 7.17 - 7.33 (m, 7H), 6.82 - 6.95 (m, 4H), 5.78 - 6.05 (m, 1H), 5.16 - 5.26 (m, 1H), 4.91 - 5.03 (m, 1H), 4.55 - 4.64 (m, 1H), 4.10 - 4.54 (m, 3H), 3.52 -4.08 (m, 16H), 3.36 - 3.50 (m, 2H), 2.85 - 3.18 (m, 3H), 2.57 - 2.72 (m, 2H), 2.07 (m, 3H), 1.98 (m, 3H), 1.88 (m, 3H), 1.68 - 1.78 (m, 6H), 0.89 - 1.22 (m, 12H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 148,2, 147,1, 146,8, 146,3.
【０７２１】
８２ｂ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［２−［２−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシ−フェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−２−［［２−シアノエトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシ−メチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−４−イル］−２−オキソ−エトキシ］エトキシ］テトラ−ヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｈ（スキーム２０を参照）に従って、出発アルコール８１ｂ５００ｍｇ（４９７μｍｏｌ）から、表題化合物８２ｂ５７５ｍｇ（９５．９％）を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.40 (br s, 1H), 7.79 (br d, J=9.22 Hz, 1H), 7.63 (m, 1H), 7.40 (br s, 2H), 7.20 - 7.34 (m, 7H), 6.83 - 6.91 (m, 4H), 5.80 - 6.03 (m, 1H), 5.22 (m, 1H), 4.96 (m, 1H), 4.56 (m, 1H), 4.08 - 4.43 (m, 4H), 4.03 (s, 3H), 3.52 - 3.91 (m, 16H), 3.38 - 3.50 (m, 2H), 2.86 - 3.18 (m, 3H), 2.52 - 2.75 (m, 2H), 2.07 (m, 3H), 1.99 (m, 3H), 1.90 (m, 3H), 1.68 - 1.81 (m, 6H), 0.89 - 1.22 (m, 12H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 148,2, 147,2, 147,13, 147,06.
【０７２２】
８２ｃ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［２−［２−［２−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシ−フェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−２−［［２−シアノエトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシ−メチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−４−イル］−２−オキソ−エトキシ］エトキシ］−エトキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｈ（スキーム２０を参照）に従って、出発アルコール８１ｃ２８５ｍｇ（２７２μｍｏｌ）から、表題化合物８２ｃ３１７ｍｇ（９３．５％）を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.40 (br s, 1H), 7.77 (m, 1H), 7.60 - 7.71 (m, 1H), 7.40 (m, 2H), 7.21 - 7.33 (m, 7H), 6.87 (m, 4H), 5.82 - 5.99 (m, 1H), 5.21 (m, 1H), 4.97 (m, 1H), 4.57 (m, 1H), 4.09 - 4.39 (m, 3H), 3.97 - 4.08 (m, 3H), 3.34 - 3.95 (m, 20H), 2.90 - 3.18 (m, 3H), 2.56 - 2.73 (m, 2H), 2.10 (m, 3H), 2.07 (m, 3H), 1.99 (m, 3H), 1.89 (m, 3H), 1.71 - 1.80 (m, 6H), 0.89 - 1.22 (m, 12H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 148,1, 147,3, 147,2, 147,0.
【０７２３】
８２ｄ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［５−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−２−［［２−シアノエトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−４−イル］−５−オキソ−ペントキシ］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｈ（スキーム２０を参照）に従って、出発アルコール８１ｄ１．０ｇ（９９７μｍｏｌ）から、表題化合物８２ｄ１．１９ｇ（９９．２％）を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.41 (br s, 1H), 7.74 - 7.81 (m, 1H), 7.58 - 7.70 (m, 1H), 7.40 (m, 2H), 7.20 - 7.33 (m, 7H), 6.87 (m, 4H), 5.79 - 5.93 (m, 1H), 5.21 (br s, 1H), 4.96 (m, 1H), 4.31 - 4.52 (m, 2H), 3.96 - 4.08 (m, 4H), 3.53 - 3.94 (m, 6H), 3.73 (s, 6H), 3.34 - 3.50 (m, 4H), 3.02 - 3.19 (m, 1H), 2.83 - 3.01 (m, 1H), 2.56 - 2.74 (m, 2H), 2.52 - 2.54 (m, 1H), 2.26 - 2.43 (m, 2H), 2.10, 2.08 (2 x s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.89 (m, 3H), 1.71 - 1.79 (m, 6H), 1.41 - 1.69 (m, 4H), 0.89 - 1.12 (m, 12H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,9, 147,1, 147,0, 146,7.
【０７２４】
８２ｅ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−３，４−ジアセトキシ−６−［１２−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシ−フェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−２−［［２−シアノエトキシ−（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシ−メチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−４−イル］−１２−オキソ−ドデコキシ］テトラ−ヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
一般手順Ｈ（スキーム２０を参照）に従って、出発アルコール８１ｅ５５７ｍｇ（５０６μｍｏｌ）から、表題化合物８２ｅ３９６ｍｇ（６０．２％）を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.35 - 11.48 (m, 1H), 7.76 - 7.84 (m, 1H), 7.56 -7.70 (m, 1H), 7.33 - 7.45 (m, 2H), 7.21 - 7.33 (m, 7H), 6.87 (m, 4H), 5.77 - 5.96 (m, 1H), 5.21 (m, 1H), 4.93 - 5.01 (m, 1H), 4.31 - 4.51 (m, 2H), 3.94 - 4.11 (m, 4H), 3.53 - 3.92 (m, 4H), 3.73 (m, 6H), 3.33 - 3.49 (m, 3H), 3.03 - 3.21 (m, 2H), 2.83 - 2.99 (m, 1H), 2.62 - 2.72 (m, 1H), 2.21 - 2.48 (m, 2H), 2.10 (m, 3H), 1.99 (m, 3H), 1.89 (m, 3H), 1.71 - 1.82 (m, 6H), 1.45 (br s, 4H), 1.14 - 1.30 (m, 18H), 0.83 - 1.13 (m, 12H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,7, 147,3, 147,2, 146,7.
【０７２５】
Ｃ．オリゴヌクレオチド合成のための固体支持体ビルディングブロックの合成
【０７２６】
合成スキーム２３
【化６７】
2021517126.tif 000069
【０７２７】
スクシネート８３ａ〜ｂおよび８４ａ〜ｂの製造のための一般手順Ｋ
出発化合物（１５ａ、４２、２０ａ、６３ａ、１．０当量）、ＤＩＰＥＡ（５．０当量）およびＤＭＡＰ（０．２５当量）を、乾燥ＤＣＭ（２０ｍｌ／１．０ｍｍｏｌ）に溶解した。無水コハク酸５．０当量を添加した後、溶液を室温で終夜（およそ１６時間）撹拌して完全な変換を達成した。Ｈ2Ｏを添加した後、有機層を分離し、クエン酸の水溶液（１０％）および飽和ＮａＨＣＯ3溶液で１回洗浄した。ＭｇＳＯ4で脱水した後、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。生成物画分を収集し、ＮＥｔ3１．０当量を添加した。溶媒を真空中で蒸発させた後、生成物を無色泡状物（ＮＥｔ3塩）として単離した。
【０７２８】
８３ａ：４−［［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−イソプロピル−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−２−イル］メトキシ］−４−オキソ−ブタン酸（ＮＥｔ3塩）
一般手順Ｋに従って、１５ａ１４６ｍｇ（２３７μｍｏｌ）から、シリカ（ＤＣＭ／ＮＥｔ3  ９９．５：０．５で事前調整、ＤＣＭ中０〜２０％ＭｅＯＨ）上での精製の後に、所望のスクシネート８３ａ１１２ｍｇ（５７．９％、ＮＥｔ3塩）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．８５
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝７１６．２
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.34 (br s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.20 - 7.39 (m, 9H), 6.88 (dd, J=8.99, 2.75 Hz, 4H), 5.81 (dd, J=9.84, 2.75 Hz, 1H), 4.57 (d, J=11.00 Hz, 1H), 4.32 (d, J=11.13 Hz, 1H), 3.73 (s, 6H), 3.08 (d, J=9.05 Hz, 1H), 2.95 (d, J=8.93 Hz, 1H), 2.76 (m, 3H), 2.40 - 2.48 (m, 6H), 2.22 - 2.37 (m, 6H), 1.74 (s, 3H), 0.76 - 0.97 (m, 15H).
【０７２９】
８３ｂ：４−［［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）−１，４−ジオキサン−２−イル］メトキシ］−４−オキソ−ブタン酸
一般手順Ｋに従って、４２  ７５ｍｇ（１３１μｍｏｌ）から、所望のスクシネート８３ｂ７３ｍｇ（７１．９％、部分的にＮＥｔ3塩）を得、これをさらに精製することなく次の工程で使用した。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．８５
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝６７３．４
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.38 (br s, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.20 - 7.38 (m, 9H), 6.88 (dd, J=8.93, 3.06 Hz, 4H), 5.89 (dd, J=10.03, 3.30 Hz, 1H), 4.62 (d, J=11.61 Hz, 1H), 4.33 (d, J=11.74 Hz, 1H), 3.76 - 3.92 (m, 2H), 3.73 (s, 6H), 3.51 - 3.63 (m, 2H), 3.03 (d, J=9.17 Hz, 1H), 2.95 (d, J=9.05 Hz, 1H), 2.58 - 2.68 (m, 2H), 2.31 - 2.41 (m, 2H), 1.73 (s, 3H).
【０７３０】
８４ａ：４−［［（２Ｒ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−４−イソプロピル−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−２−イル］メトキシ］−４−オキソ−ブタン酸（ＮＥｔ3塩）
一般手順Ｋに従って、２０ａ７８ｍｇ（１２７μｍｏｌ）から、シリカ（ＤＣＭ／ＮＥｔ3  ９９．５：０．５で事前調整、ＤＣＭ中０〜２０％ＭｅＯＨ）上での精製の後に、所望のスクシネート８４ａ５０ｍｇ（４８．３％、ＮＥｔ3塩）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．８６
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝７１６．２
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.32 (br s, 1H), 7.54 - 7.58 (m, 1H), 7.20 - 7.39 (m, 9H), 6.89 (d, J=8.80 Hz, 4H), 5.64 (dd, J=10.03, 2.93 Hz, 1H), 4.19 (d, J=11.25 Hz, 1H), 4.09 (d, J=11.13 Hz, 1H), 3.74 (s, 6H), 3.42 (br d, J=8.80 Hz, 2H), 3.15 (m, 1H), 2.86 (br d, J=11.37 Hz, 1H), 2.69 - 2.77 (m, 2H), 2.44 (q, J=7.13 Hz, 6H), 2.28 - 2.40 (m, 5H), 2.16 - 2.25 (m, 1H), 1.78 (s, 3H), 0.89 - 0.98 (m, 15H).
【０７３１】
８４ｂ：４−［［（２Ｒ，６Ｒ）−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）−１，４−ジオキサン−２−イル］メトキシ］−４−オキソ−ブタン酸
一般手順Ｋに従って、６３ａ６９ｍｇ（１１９μｍｏｌ）から、所望のスクシネート８４ｂ６３ｍｇ（６８．２％、部分的にＮＥｔ3塩）を得、これをさらに精製することなく次の工程で使用した。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．８２
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝６７３．３
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.39 (br s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.20 - 7.39 (m, 9H), 6.90 (d, J=8.93 Hz, 4H), 5.78 (dd, J=10.21, 3.36 Hz, 1H), 4.23 (d, J=11.25 Hz, 1H), 4.10 (d, J=11.25 Hz, 1H), 3.68 - 3.80 (m, 8H), 3.51 - 3.59 (m, 1H), 3.20 - 3.51 (m, 5H), 2.45 - 2.52 (m, 2H), 1.79 (s, 3H).
【０７３２】
ＣＰＧ固体支持体８５ａ〜ｂおよび８６ａ〜ｂの製造のための一般手順Ｌ
ＣＰＧ固体支持体物質を真空中３５℃で２時間乾燥させた。ＤＭＦ（８ｍｌ、０．１２５ｍｍｏｌ）中のスクシネート（８３ａ、８３ｂ、８４ａ、８４ｂ）１．０当量、ＴＢＴＵ１．２当量およびＮ−エチル−モルホリン１．２当量の溶液を室温で１時間撹拌し、次いでＣＰＧ固体支持体１．０当量（遊離アミノ３０μｍｏｌ／ｇ、５００Å）を含有するファルコンチューブ内に移した。ＤＭＦ２０ｍｌで希釈した後、混合物を室温で２４時間振盪した。固体支持体を濾過し、ＭｅＯＨ３０ｍｌ（３×）、アセトン３０ｍｌ（３×）およびジエチルエーテル３０ｍｌ（３×）で洗浄した。
乾燥させた後、固体支持体を、ファルコンチューブ内において、キャッピング試薬Ａ（ＴＨＦ、２，６−ルチジン、無水酢酸  ８：１：１  ｖ／ｖ／ｖ）１５ｍｌおよびキャッピング試薬Ｂ（Ｎ−メチルイミダゾール、ＴＨＦ  １：９  ｖ／ｖ）１５ｍｌで１時間処理した。上記の通り濾過および洗浄した後、固体物質を真空中３５℃で２時間乾燥させた。ローディングは測光的に決定した。
【０７３３】
８５ａ：スクシネート８３ａのＣＰＧ上の固体支持体
スクシネート８３ａ１０５ｍｇ（１２８．５μｍｏｌ）を、一般手順Ｌに従って、ＣＰＧ固体支持体（遊離アミン３０μｍｏｌ／ｇ）４．２８ｇに固定化した。最終ローディングは、固体支持体８５ａ３０．１μｍｏｌ／ｇ（４．２５ｇ）であると決定した。
【０７３４】
８５ｂ：スクシネート８３ｂのＣＰＧ上の固体支持体
スクシネート８３ｂ６３ｍｇ（８１μｍｏｌ）を、一般手順Ｌに従って、ＣＰＧ固体支持体（遊離アミン３０μｍｏｌ／ｇ）２．３２ｇに固定化した。最終ローディングは、固体支持体８５ｂ３２．８μｍｏｌ／ｇ（２．３１ｇ）であると決定した。
【０７３５】
８６ａ：スクシネート８４ａのＣＰＧ上の固体支持体
スクシネート８４ａ４４ｍｇ（５４μｍｏｌ）を、一般手順Ｌに従って、ＣＰＧ固体支持体（遊離アミン３０μｍｏｌ／ｇ）１．８０ｇに固定化した。最終ローディングは、固体支持体８６ａ３０．４μｍｏｌ／ｇ（１．７６ｇ）であると決定した。
【０７３６】
８６ｂ：スクシネート８４ｂのＣＰＧ上の固体支持体
スクシネート８４ｂ５４ｍｇ（７０μｍｏｌ）を、一般手順Ｌに従って、ＣＰＧ固体支持体（遊離アミン３０μｍｏｌ／ｇ）１．９９ｇに固定化した。最終ローディングは、固体支持体８６ｂ３６．１μｍｏｌ／ｇ（２．００ｇ）であると決定した。
【０７３７】
〔実施例Ｄ．２〕
合成スキーム２４
【化６８】
2021517126.tif 000070
【０７３８】
スクシネート８７ａ〜ｅの合成のための一般手順Ｍ
出発化合物（７５ｆ、７５ｇ、７５ｅ、８１ｄ、８１ｅ、１．０当量）を、乾燥ＤＣＭ（１２０ｍｌ、１．０ｍｍｏｌ）に溶解した。無水コハク酸２．０当量およびＤＭＡＰ３．０当量を添加した後、溶液を、完全な変換が達成されるまで室温で撹拌した。クエン酸の冷水溶液（１０％）を添加し、有機相を分離し、ＭｇＳＯ4で脱水し、蒸発させた。粗生成物をＡＣＮ／Ｈ2Ｏ（１：１）に溶解し、凍結乾燥して、粗生成物を無色泡状物として得、これをさらに精製することなく使用した。
【０７３９】
８７ａ：４−［［（２Ｓ，６Ｒ）−４−［５−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−３−アセトアミド−４，５−ジアセトキシ−６−（アセトキシメチル）テトラ−ヒドロピラン−２−イル］オキシペンチル］−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−２−イル］メトキシ］−４−オキソ−ブタン酸
一般手順Ｍに従って、７５ｆ５０ｍｇ（５１μｍｏｌ）から、所望のスクシネート８７ａ５４ｍｇ（９８．１％、粗製）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．８２
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝１０８９．７
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz): 12.19 (br s, 1H), 11.33 (s, 1H), 7.79 (d, J=9.17 Hz, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.19 - 7.39 (m, 9H), 6.81 - 6.91 (m, 4H), 5.82 (dd, J=9.78, 2.57 Hz, 1H), 5.21 (d, J=3.30 Hz, 1H), 4.96 (dd, J=11.25, 3.30 Hz, 1H), 4.61 (d, J=11.25 Hz, 1H), 4.49 (d, J=8.44 Hz, 1H), 4.27 (d, J=11.49 Hz, 1H), 3.96 - 4.08 (m, 3H), 3.82 - 3.95 (m, 1H), 3.68 -3.76 (m, 7H), 3.36 - 3.49 (m, 2H), 3.05 (d, J=8.80 Hz, 1H), 2.96 (d, J=8.93 Hz, 1H), 2.81 -2.92 (m, 2H), 2.25 - 2.41 (m, 5H), 2.05 - 2.17 (m, 5H), 1.98 (s, 3H), 1.88 (s, 3H), 1.77 (s, 3H), 1.72 (s, 3H), 1.36 - 1.56 (m, 4H), 1.22 - 1.34 (m, 2H).
【０７４０】
８７ｂ：４−［［（２Ｓ，６Ｒ）−４−［１２−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−３−アセトアミド−４，５−ジアセトキシ−６−（アセトキシメチル）−テトラヒドロピラン−２−イル］オキシドデシル］−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−２−イル］メトキシ］−４−オキソ−ブタン酸
一般手順Ｍに従って、７５ｇ５０ｍｇ（４６μｍｏｌ）から、所望のスクシネート８７ｂ５５ｍｇ（９９．８％、粗製）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝２．０３
イオン化方法：ＥＳ+：［Ｍ＋Ｈ］+＝１１８７．８
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz): 12.20 (br s, 1H), 11.33 (s, 1H), 7.79 (d, J=9.29 Hz, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.20 - 7.39 (m, 9H), 6.88 (dd, J=8.99, 2.87 Hz, 4H), 5.81 (dd, J=9.78, 2.69 Hz, 1H), 5.21 (d, J=3.30 Hz, 1H), 4.96 (dd, J=11.19, 3.48 Hz, 1H), 4.60 (d, J=11.37 Hz, 1H), 4.48 (d, J=8.56 Hz, 1H), 4.26 (d, J=11.25 Hz, 1H), 3.97 - 4.06 (m, 3H), 3.82 - 3.91 (m, 1H), 3.66 - 3.75 (m, 7H), 3.37 - 3.45 (m, 2H), 3.04 (br d, J=8.80 Hz, 1H), 2.93 - 2.99 (m, 1H), 2.80 - 2.88 (m, 2H), 2.25 - 2.41 (m, 5H), 2.05 - 2.20 (m, 5H), 1.99 (s, 3H), 1.89 (s, 3H), 1.76 (s, 3H), 1.72 (s, 3H), 1.44 (m, 4H), 1.24 (br s, 16H).
【０７４１】
８７ｃ：４−［［（２Ｓ，６Ｒ）−４−［５−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−３−アセトアミド−４，５−ジアセトキシ−６−（アセトキシメチル）テトラ−ヒドロピラン−２−イル］オキシペンタノイル］−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−２−イル］メトキシ］−４−オキソ−ブタン酸
一般手順Ｍに従って、８１ｄ１５０ｍｇ（１５０μｍｏｌ）から、所望のスクシネート８７ｃ９５ｍｇ（５７．６％、粗製）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．７８
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝１１０１．４
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz): 12.20 (br s, 1H), 11.37 - 11.43 (m, 1H), 7.74 - 7.81 (m, 1H), 7.58 - 7.65 (m, 1H), 7.18 - 7.42 (m, 9H), 6.90 (m, 4H), 5.75 - 5.92 (m, 1H), 5.21 (m, 1H), 4.96 (m, 1H), 4.50 (m, 1H), 4.07 - 4.46 (m, 3H), 4.02 (s, 3H), 3.81 - 3.99 (m, 2H), 3.74 (s, 7H), 3.36 - 3.49 (m, 2H), 3.15 (m, 1H), 2.93 - 3.08 (m, 2H), 2.31 - 2.43 (m, 8H), 2.10, 2.07 (2 x s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.89 (s, 3H), 1.72 - 1.79 (m, 6H), 1.51 (br s, 4H).
【０７４２】
８７ｄ：４−［［（２Ｓ，６Ｒ）−４−［１２−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−３−アセトアミド−４，５−ジアセトキシ−６−（アセトキシメチル）−テトラヒドロピラン−２−イル］オキシドデカノイル］−２−［［ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−２−イル］メトキシ］−４−オキソ−ブタン酸
一般手順Ｍに従って、８１ｅ１５０ｍｇ（１５０μｍｏｌ）から、所望のスクシネート８７ｄ１０２ｍｇ（６２．３％、粗製）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．９２
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝１１９９．５
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz): 12.17 (br s, 1H), 11.36 - 11.45 (m, 1H), 7.79 (d, J=9.17 Hz, 1H), 7.58 - 7.65 (m, 1H), 7.17 - 7.45 (m, 9H), 6.84 - 6.94 (m, 4H), 5.76 - 5.89 (m, 1H), 5.21 (m, 1H), 4.96 (m, 1H), 4.48 (m, 1H), 4.08 - 4.45 (m, 3H), 3.97 - 4.05 (m, 3H), 3.80 -3.97 (m, 2H), 3.63 - 3.79 (m, 7H), 3.34 - 3.46 (m, 2H), 2.87 - 3.20 (m, 3H), 2.29 - 2.44 (m, 8H), 2.06 - 2.14 (m, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.84 - 1.94 (m, 3H), 1.68 - 1.84 (m, 6H), 1.45 (br s, 4H), 1.24 (br s, 12H).
【０７４３】
８７ｅ：４−［［（２Ｓ，６Ｒ）−４−［２−［２−［２−［２−［２−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−３−アセトアミド−４，５−ジアセトキシ−６−（アセトキシ−メチル）テトラヒドロピラン−２−イル］オキシエトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エチル］−２−［［ビス（４−メトキシ−フェニル）−フェニル−メトキシ］メチル］−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）モルホリン−２−イル］−メトキシ］−４−オキソ−ブタン酸
一般手順Ｍに従って、７５ｅ５０ｍｇ（４４．５μｍｏｌ）から、所望のスクシネート８７ｅ５４ｍｇ（９９．２％、粗製）を得た。
ＬＣＭＳ−方法Ａ：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒt［分］＝１．８１
イオン化方法：ＥＳ-：［Ｍ−Ｈ］-＝１２２１．７
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz): 12.19 (b s, 1H), 11.33 (s, 1H), 7.77 (d, J=9.17 Hz, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.20 - 7.39 (m, 9H), 6.88 (dd, J=8.93, 3.18 Hz, 4H), 5.81 (dd, J=9.90, 2.69 Hz, 1H), 5.21 (d, J=3.30 Hz, 1H), 4.97 (dd, J=11.25, 3.42 Hz, 1H), 4.62 (d, J= 11.49 Hz, 1H), 4.56 (d, J=8.56 Hz, 1H), 4.26 (d, J=11.49 Hz, 1H), 4.03 (s, 3H), 3.83 - 3.95 (m, 1H), 3.71 -3.82 (m, 7H), 3.42 - 3.58 (m, 16H), 2.88 - 3.04 (m, 4H), 2.53 - 2.62 (m, 2H), 2.23 - 2.41 (m, 7H), 2.10 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.89 (s, 3H), 1.77 (s, 3H), 1.71 (s, 3H).
【０７４４】
ＣＰＧ固体支持体８８ａ〜ｅの製造のための一般手順Ｎ
ＣＰＧ固体支持体物質を真空中３５℃で２時間乾燥させた。ＤＭＦ（１０ｍｌ／０．１００ｍｍｏｌ）中のスクシネート（８７ａ〜ｅ）１．０当量、ＨＢＴＵ１．５当量およびＤＩＰＥＡ５．０当量の溶液を室温で１０分間撹拌し、続いてＣＰＧ固体支持体（遊離アミノ３０μｍｏｌ／ｇ、５００Å）１．０当量を添加した。混合物を室温で２４時間振盪した。固体支持体を濾過し、ＤＣＭ２０ｍｌ、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１０：１）およびジエチルエーテル３０ｍｌで２回洗浄した。乾燥させた後、固体支持体を、ファルコンチューブ内において、キャッピング試薬Ａ（ＴＨＦ、２，６−ルチジン、無水酢酸  ８：１：１  ｖ／ｖ／ｖ）１５ｍｌおよびキャッピング試薬Ｂ（Ｎ−メチルイミダゾール、ＴＨＦ  １：９  ｖ／ｖ）１５ｍｌで１時間処理した。上記の通り濾過および洗浄した後、固体物質を真空中３５℃で２時間乾燥させた。ローディングは測光的に決定した。
【０７４５】
８８ａ：スクシネート８７ａのＣＰＧ上の固体支持体
スクシネート８７ａ５０ｍｇ（４６μｍｏｌ）を、一般手順Ｎに従って、ＣＰＧ固体支持体（遊離アミン３０μｍｏｌ／ｇ）１．５３ｇに固定化した。最終ローディングは、固体支持体８８ａ２４．２μｍｏｌ／ｇであると決定した。
【０７４６】
８８ｂ：スクシネート８７ｂのＣＰＧ上の固体支持体
スクシネート８７ｂ５２ｍｇ（４４μｍｏｌ）を、一般手順Ｎに従って、ＣＰＧ固体支持体（遊離アミン３０μｍｏｌ／ｇ）１．４５ｇに固定化した。最終ローディングは、固体支持体８８ｂ２２．３μｍｏｌ／ｇであると決定した。
【０７４７】
８８ｃ：スクシネート８７ｃのＣＰＧ上の固体支持体
スクシネート８７ｃ９０ｍｇ（８２μｍｏｌ）を、一般手順Ｎに従って、ＣＰＧ固体支持体（遊離アミン３０μｍｏｌ／ｇ）２．７２ｇに固定化した。最終ローディングは、固体支持体８８ｃ２８．７μｍｏｌ／ｇであると決定した。
【０７４８】
８８ｄ：スクシネート８７ｄのＣＰＧ上の固体支持体
スクシネート８７ｄ１００ｍｇ（８３μｍｏｌ）を、一般手順Ｎに従って、ＣＰＧ固体支持体（遊離アミン３０μｍｏｌ／ｇ）２．７６ｇに固定化した。最終ローディングは、固体支持体８８ｄ３２．０μｍｏｌ／ｇであると決定した。
【０７４９】
８８ｅ：スクシネート８７ｅのＣＰＧ上の固体支持体
スクシネート８７ｅ５５ｍｇ（４５μｍｏｌ）を、一般手順Ｎに従って、ＣＰＧ固体支持体（遊離アミン３０μｍｏｌ／ｇ）１．５０ｇに固定化した。最終ローディングは、固体支持体８８ｅ２９．２μｍｏｌ／ｇであると決定した。
【０７５０】
本明細書による化合物のいくつかの実施例の化学構造を以下の表に例示する；本明細書およびスキームへの対応、ならびに立体化学を示す。表Ａは、オリゴヌクレオチド合成のためのホスホルアミダイトヌクレオチド類似体のいくつかの実施例を示し；表Ｂは、オリゴヌクレオチド合成のためのヌクレオチド類似体のいくつかの固体支持体を示す。
（２Ｓ，６Ｒ）ジアステレオマー系列において、ヌクレオチド前駆体としてのホスホルアミダイトは「ｐｒｅ−ｌ」と略記され、ヌクレオチド類似体は「ｌ」と略記され、これに核酸塩基および数字が続き、これは式（Ｉ）および（ＩＩ）におけるＹ基を指定する。両方の立体化学を区別するために、類似体（２Ｒ，６Ｒ）−ジアステレオ異性体は追加の「ｂ」で示される。固体支持体については、略語「ＣＰＧ−ｌ」が上記の通りの追加の情報とともに使用される。標的化されたヌクレオチド前駆体、標的化されたヌクレオチド類似体および固体支持体は、上記の通りに略記されるが、「ｌ」の代わりに「ｌｇ」が用いられる。
【０７５１】
【表１】
2021517126.tif 000071
【表２】
2021517126.tif 000072
【表３】
2021517126.tif 000073
【表４】
2021517126.tif 000074
【表５】
2021517126.tif 000075
【表６】
2021517126.tif 000076
【表７】
2021517126.tif 000077
【表８】
2021517126.tif 000078
【０７５２】
【表９】
2021517126.tif 000079
【表１０】
2021517126.tif 000080
【０７５３】
ヌクレオチド類似体ならびに標的化されたヌクレオチドおよび類似体を含むｓｉＲＮＡの合成
オリゴヌクレオチド合成およびｓｉＲＮＡ製造
すべてのオリゴヌクレオチドは、ＡＢＩ３９４合成装置で合成した。５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−チミジン−３’−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル−２−シアノエチル）−ホスホルアミダイト、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−ウラシル−３’−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル−２−シアノエチル）−ホスホルアミダイト、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−Ｎ４−シチジン−３’−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル−２−シアノエチル）−ホスホルアミダイト、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−Ｎ６−ベンゾイル−アデノシン−３’−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル−２−シアノエチル）−ホスホルアミダイト、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−Ｎ２−イソブチリル−グアノシン−３’−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル−２−シアノエチル）−ホスホルアミダイト、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ−メチル−ウラシル−３’−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル−２−シアノエチル）−ホスホルアミダイト、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ−メチル−Ｎ４−シチジン−３’−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル−２−シアノエチル）−ホスホルアミダイト、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ−メチル−Ｎ６−ベンゾイル−アデノシン−３’−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル−２−シアノエチル）−ホスホルアミダイト、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ−メチル−Ｎ２−イソブチリル−グアノシン−３’−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル−２−シアノエチル）−ホスホルアミダイト、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−デスオキシ−フルオロ−ウラシル−３’−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル−２−シアノエチル）−ホスホルアミダイト、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−デスオキシ−フルオロ−Ｎ４−シチジン−３’−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル−２−シアノエチル）−ホスホルアミダイト、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−デスオキシ−フルオロ−Ｎ６−ベンゾイル−アデノシン−３’−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル−２−シアノエチル）−ホスホルアミダイトおよび５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−デスオキシ−フルオロ−Ｎ２−イソブチリル−グアノシン−３’−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル−２−シアノエチル）−ホスホルアミダイトのような標準的な保護基を有する市販の（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）ＤＮＡ−、ＲＮＡ−、２’−ＯＭｅ−ＲＮＡおよび２’−デスオキシ−Ｆ−ＲＮＡ−ホスホルアミダイト、ならびに対応する固体支持体物質（ＣＰＧ−５００Å、ローディング４０μｍｏｌ／ｇ、ＣｈｅｍＧｅｎｅｓ）を、自動オリゴヌクレオチド合成に使用した。３’末端コレステロールコンジュゲートには、固体支持体３’−コレステロールＳｙｎＢａｓｅ（商標）ＣＰＧ１０００（ｌｉｎｋ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）３２μｍｏｌ／ｇを使用した。
【０７５４】
ホスホルアミダイトビルディングブロックをアセトニトリル中０．１Ｍ溶液として使用し、５−（ビス−３，５−トリフルオロメチルフェニル）−１Ｈ−テトラゾール（ａｃｔｉｖａｔｏｒ４２、アセトニトリル中０．２５Ｍ、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）で活性化した。２００ｓの反応時間を標準的なホスホルアミダイトカップリングに使用した。表Ａに列挙した本明細書に記載のホスホルアミダイトの場合、３００ｓのカップリング時間を適用した。キャッピング試薬として、ＴＨＦ中無水酢酸（ＡＢＩ用ｃａｐＡ、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）およびＴＨＦ中Ｎ−メチルイミダゾール（ＡＢＩ用ｃａｐＢ、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用した。酸化試薬として、ＴＨＦ／ピリジン／水中ヨウ素（０．０２Ｍ；ＡＢＩ用酸化剤、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用した。代替として、ＰＳ酸化を、ピリジン／アセトニトリル（１：１）中３−（（Ｎ，Ｎ−ジメチル−アミノメチリデン）アミノ）−３Ｈ−１，２，４−ジチアゾール−５−チオン（ＤＤＴＴ）の０．０５Ｍ溶液を用いて達成した。ＤＭＴ保護基の脱保護を、ＤＣＭ中ジクロロ酢酸（ＤＣＡ  ｄｅｂｌｏｃｋ、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用して行った。固体支持体からの最終切断および脱保護（アシルおよびシアノエチル保護基）を、ＮＨ3（３２％水溶液／エタノール、ｖ／ｖ  ３：１）を用いて達成した。ＮＭＰ／ＮＥｔ3／ＮＥｔ3・３ＨＦ（３：１．５：２）による処理を、ＴＢＤＭＳ脱保護に適用した。
【０７５５】
３’末端に本明細書に記載のモルホリノまたはジオキサンビルディングブロックを有するオリゴヌクレオチドを、表Ｂに示した固体支持体物質上で、またはユニバーサルリンカー固体支持体（ＣＰＧ−５００Å、ローディング３９μｍｏｌ／ｇ、ＡＭ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  ＬＬＣ）および表Ａに示した対応するホスホルアミダイト上で合成した。
【０７５６】
粗生成物をＨＰＬＣにより分析し、一本鎖の精製をイオン交換または分取ＨＰＬＣ法により実行した。
イオン交換：ＡＫＴＡ精製装置（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＤＮＡＰａｃ  ＰＡ２００半分取イオン交換カラム、８μｍ粒子、幅２２ｍｍ×長さ２５０ｍｍ）。
緩衝液Ａ：Ｈ2Ｏ１．５０ｌ、ＮａＣｌＯ4２．１０７ｇ、ＥＤＴＡ４３８ｍｇ、ＴＲＩＳ１．８１８ｇ、尿素５４０．５４ｇ、ｐＨ７．４。
緩衝液Ｂ：Ｈ2Ｏ１．５０ｌ、ＮａＣｌＯ4１０５．３４ｇ、ＥＤＴＡ４３８ｍｇ、ＴＲＩＳ１．８１８ｇ、尿素５４０．５４ｇ、ｐＨ７．４。オリゴヌクレオチドの単離を、４体積のエタノールの添加および−２０℃での貯蔵により誘発される沈殿により達成した。
分取ＨＰＬＣ：Ａｇｉｌｅｎｔ１１００シリーズ分取ＨＰＬＣ、（Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ（登録商標）ＢＥＨ  Ｃ１８  ＯＢＤ（商標）分取カラム１３０Å、５μｍ、１０ｍｍ×１００ｍｍ）。溶離液：アセトニトリル／水中酢酸トリエチルアンモニウム（０．１Ｍ）。凍結乾燥した後、生成物を２．５Ｍ  ＮａＣｌ溶液１．０ｍｌおよびＨ2Ｏ４．０ｍｌに溶解した。エタノール２０ｍｌを添加して−２０℃で１８時間貯蔵することにより沈殿させた後に、対応するＮａ+塩を単離した。
【０７５７】
一本鎖の最終分析をＬＣ／ＭＳ−ＴＯＦ法により行った。結果を表Ｃに示す。
【０７５８】
二本鎖形成のために、等モル量のセンスおよびアンチセンス鎖を、１×ＰＢＳ緩衝液中で混合し、８５℃に１０分間加熱し、ゆっくりと室温まで冷却した。ｓｉＲＮＡ二本鎖の最終分析をＬＣ／ＭＳ−ＴＯＦ法により行った。結果を表Ｄに示す。
【０７５９】
インビトロ生物学的アッセイの物質および方法
Ｔm−決定
ＰＢＳ緩衝液（１×ＰＢＳ）中ｓｉＲＮＡの１．０μＭ溶液を、１℃／分の加熱速度で２０〜９０℃にて分光光度計（Ｊａｓｃｏ  Ｖ−６５０）において加熱した。吸光度を２６０ｎｍで測定し、対応する温度に対してプロットした。９０℃に到達した後、溶液を１℃／分の同じ速度で２０℃まで冷却し、加熱冷却サイクルを繰り返した。融解温度を、２つの加熱曲線の変曲点の平均値として計算した。
【０７６０】
細胞および組織培養
ヒトＨｅｐＧ２細胞を３７℃、５％ＣＯ2および９５％ＲＨで増殖させ、１０％ＦＢＳを補充したＭＥＭ培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号４１０９０）中で培養した。
【０７６１】
Ｓｅｇｌｅｎ、Ｐ．Ｏ．（１９７６）：Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｓｏｌａｔｅｄ  Ｒａｔ  Ｌｉｖｅｒ  Ｃｅｌｌｓ；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、１３：２９〜８３から適合させたプロトコールに基づいて、実験を行う前に雌性Ｃ５７ＢＬ／６マウスからの初代肝細胞を新たに単離した。単離した肝細胞のプレーティングを、２ｍＭグルタミン（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号２５０３０）、ペニシリン−ストレプトマイシン（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号１５１４０）１００Ｕ／ｍｌ、デキサメタゾン（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｄ１７５６）１μｇ／ｍｌ、１×ＩＴＳ溶液（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号４１４００）および５％ＦＢＳを補充したＷｉｌｌｉａｍｓ’Ｅ培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号２２５５１）中、３７℃、５％ＣＯ２および９５％ＲＨで３〜５時間行った。プレーティングの後、培地を、１％ＦＢＳの補充以外はプレーティング培地と同一である培養培地に交換した。４８または７２時間のインキュベーション期間中に、さらなる培地交換は行わなかった。
【０７６２】
製造業者の指示書に従ってヘパリンナトリウム（ＢＤ、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ、ドイツ）で被覆したＶａｃｕｔａｉｎｅｒチューブに収集した３人の健常ドナー由来の血液およそ１６ｍＬから、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を単離した。
【０７６３】
ｓｉＲＮＡトランスフェクション
ＨｅｐＧ２細胞におけるノックダウン実験のために、２０，０００細胞／ウェルを、コラーゲンＩ被覆９６ウェルプレート（Ｃｏｍｉｎｇ、カタログ番号３５６４０７）中で使用した。リバーストランスフェクションセットアップにおいて製造業者のプロトコールに従ってリポフェクタミンＲＮＡｉＭＡＸトランスフェクション試薬（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）０．２μｌ／ウェルを使用して、細胞に、示した濃度のＡＨＡ−１ｓｉＲＮＡをトランスフェクトし、培地交換することなく４８時間インキュベートした。通常、Ｎ＝４の技術的反復を試験サンプルごとに行った。
【０７６４】
ヒトＰＢＭＣのトランスフェクションのために、無血清ＲＰＭＩ培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号１１８７５）総体積１５０μＬ中、９６ウェル（Ｎ＝２）当たりリポフェクタミン２０００  ０．３μＬを用いて、１００ｎＭのｓｉＲＮＡを、ＰＢＭＣ１×１０5個に２４時間リバーストランスフェクトした。
【０７６５】
ＩＣ50測定
初代の新たなマウス肝細胞におけるＩＣ50測定のために、コラーゲンＩ被覆９６ウェルプレート中の細胞３０，０００個を、１０倍希釈ステップを使用する１μＭ〜１ｐＭの範囲の濃度でｓｉＲＮＡを用いる遊離取り込み条件下、４８時間インキュベートした。各ｓｉＲＮＡについての半最大阻害濃度（ＩＣ50）を、Ｂｉｏｓｔａｔ−Ｓｐｅｅｄ統計計算ツールを適用することにより計算した。結果は、ＲａｔｋｏｖｓｋｙおよびＲｅｅｄｙ（１９８６）による４パラメータロジスティックモデルを使用して得た。調整は、ＳＡＳ  ｖ９．１．３ソフトウェアにおいてＬｅｖｅｎｂｅｒｇ−Ｍａｒｑｕａｒｄｔアルゴリズムを使用する非線形回帰により得た。
【０７６６】
ｍＲＮＡ発現分析
ｓｉＲＮＡトランスフェクションまたは遊離ｓｉＲＮＡ取り込みの４８時間後、手順中のＤＮａｓｅ工程を含む製造業者のプロトコールに従ったＰｒｏｍｅｇａのＳＶ９６全ＲＮＡ単離システム（カタログ番号Ｚ３５００）の使用法により、細胞ＲＮＡを回収した。
【０７６７】
ｃＤＮＡ合成のために、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ製の逆転写酵素キット（カタログ番号Ｎ８０８０２３４）を使用した。ＲＮＡ３０ｎｇからのｃＤＮＡ合成を、総体積１２μｌ中、１０×ＲＴ緩衝液１．２μｌ、ＭｇＣｌ2（２５ｍＭ）２．６４μｌ、ｄＮＴＰｓ（１０ｍＭ）２．４μｌ、ランダムヘキサマー（５０μＭ）０．６μｌ、オリゴ（ｄＴ）１６（５０μＭ）０．６μｌ、ＲＮａｓｅ阻害剤（２０Ｕ／μｌ）０．２４μｌおよびＭｕｌｔｉｓｃｒｉｂｅ（５０Ｕ／μｌ）０．３μｌを使用して実行した。サンプルを２５℃で１０分間、４２℃で６０分間インキュベートした。９５℃に５分間加熱することにより、反応を停止させた。
【０７６８】
ヒトＡＨＡ−１およびマウスＴＴＲ  ｍＲＮＡレベルを、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  ＴａｑＭａｎユニバーサルＰＣＲマスターミックス（カタログ番号４３０５７１９）ならびにＴａｑＭａｎ遺伝子発現アッセイＨｓ００２０１６０２＿ｍ１およびＭｍ００４４３２６７＿ｍ１をそれぞれ使用して、ｑＰＣＲにより定量した。ＰＣＲを、以下のＰＣＲ条件下、ＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ７９００を用いて技術的に二重に実行した：５０℃で２分間、９５℃で１０分間、９５℃１５秒と６０℃１分とを４０サイクル。ＰＣＲは、１回の反応で標的遺伝子を検出し、第２の反応で正規化のためのハウスキーピング遺伝子（ヒト／マウスＲＰＬ３７Ａ）を検出する、単純ＰＣＲとしてセットアップした。ＰＣＲ反応のための最終体積を１×ＰＣＲマスターミックスで１２．５μｌとし、ＲＰＬ３７Ａプライマーを最終濃度５０ｎＭおよびプローブ２００ｎＭで使用した。ΔΔＣｔ法を適用して、標的転写物の相対的発現レベルを計算した。標的遺伝子発現の百分率を、ＬＶ２またはＬＶ３非サイレンシングｓｉＲＮＡ対照配列のレベルに基づく正規化により計算した。
【０７６９】
ＩＦＮα決定
ＩＦＮαタンパク質濃度を、ヒトＰＢＭＣの上清において以下の通り定量した：細胞培養上清２５μＬを、ＭｅｓｏＳｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙの技術に基づく自己確立電気化学発光アッセイを適用してｐａｎ  ＩＦＮαモノクローナル捕捉抗体（ＭＴ１／３／５、Ｍａｂｔｅｃｈ）を使用する、ＩＦＮα濃度の測定に使用した。代替として、ヒトＩＦＮα２ａアイソフォーム特異的アッセイ（カタログ番号Ｋ１５１ＶＨＫ）を、ＭｅｓｏＳｃａｌｅのＵ−ＰＬＥＸプラットフォームに基づいて、かつ供給業者のプロトコールに従って適用した。
【０７７０】
細胞毒性
マウスＴＴＲ  ｓｉＲＮＡの細胞毒性は、各サンプルにおける細胞生存性／毒性の比率を決定することにより、遊離取り込み条件下での初代の新たなマウス肝細胞３０，０００個とのインキュベーションの７２時間後に測定した。細胞生存性は、製造業者のプロトコールに従ってＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｇ７５７０）を使用する細胞内ＡＴＰ含量の決定により測定した。細胞毒性は、製造業者のプロトコールに従ってＬＤＨアッセイ（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号１１６４４７９３００１）を使用して上清において測定した。
【０７７１】
ヌクレアーゼ安定性
ｓｉＲＮＡを、５０％マウス血清においてヌクレアーゼ安定性について試験した。この目的のために、マウス血清（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｍ５９０５）１６０μＬを、３７℃で０、８、２４、３２、４８、５６、７２、８０および９６時間キュベートした。各時点で、反応物２１μＬを取り出し、停止溶液２３μＬ（停止溶液３，０００μＬについて：組織および細胞溶解溶液（Ｅｐｉｃｅｎｔｒｅ、カタログ番号ＭＴＣ０９６Ｈ）１１２３μＬ、２０ｍｇ／ｍＬプロテイナーゼＫ（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｐ２３０８）１８３μＬ、水１６９４μＬ）で６５℃にて３０分間クエンチした。Ｗａｔｅｒｓ２６９５分離モジュールおよび２４８７デュアル吸光度検出器上でのＨＰＬＣ分析の前に、ＲＮａｓｅを含まない水３３μＬを各サンプルに添加した。溶液５０μＬを、ＤＮＡＰａｃ  ＰＡ２００分析カラム（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号０６３０００）および以下の勾配を使用するＨＰＬＣにより分析した：
【０７７２】
【表１１】
2021517126.tif 000081
【０７７３】
〔実施例１〕
融点により測定される例示的ｓｉＲＮＡの安定性
ＡＨＡ−１（ｓｉＲＮＡ−１）を標的とするｓｉＲＮＡ配列において、センス鎖のすべてのｒＵ−ヌクレオチドを、iＰｒ−モルホリン−Ｕヌクレオチド類似体ｌＵ３およびｌＵ３ｂにより連続的に置き換えた。センス鎖の３’末端から出発し、ホスホルアミダイトビルディングブロックとしてｐｒｅ−ｌＵ３ｂを使用する、連続的な置き換えにより、修飾センス鎖ｓｓ２（１個のｌＵ３ｂ）〜ｓｓ６（５個のｌＵ３ｂ）を得、これを未修飾アンチセンス鎖ａｓ１とアニーリングして、ｌＵ３ｂ修飾二本鎖ｓｉＲＮＡ−２〜ｓｉＲＮＡ−６（表１〜３）を得た。ヌクレオチド前駆体としてｐｒｅ−ｌＵ３を使用する類似体ジアステレオマー系列により、対応する二本鎖ｓｉＲＮＡ−９〜ｓｉＲＮＡ１３（表１〜３）を得た。
【０７７４】
【表１２】
2021517126.tif 000082
【０７７５】
【表１３】
2021517126.tif 000083
【０７７６】
【表１４】
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【０７７７】
ｓｉＲＮＡのＴｍ値を、本開示において指定した物質および方法に従って測定した。未修飾ｓｉＲＮＡ−１の融点は７３．６℃で測定された。２’−ＯＭｅ修飾アンチセンス鎖を使用することにより、予期された、わずかに上昇した融解温度７６．８℃（ｓｉＲＮＡ−７）を得た。第１のｒＵ−ヌクレオチドをｌＵ３ｂ−類似体で置き換えることにより、Ｔｍ値にわずかな減少が生じた。表３におけるデータは、追加のｌＵ３ｂ−組み入れごとに、融解温度がさらに低下し、結果として、５個のｌＵ３ｂ−ビルディングブロックを組み入れたｓｉＲＮＡ−６では５０．２℃のＴｍ値となったことを示している。ｓｉＲＮＡ−６におけるアンチセンス鎖を２’−ＯＭｅ類似体に変えた（ｓｉＲＮＡ−８）結果として、融解温度が上昇することはなかった。
【０７７８】
モルホリンの２位で反対の立体化学を有するｌＵ３−系列において、同様の結果が得られた。表３におけるデータは、同数のｌＵ３ｂ−またはｌＵ３−ビルディングブロックを対応するｓｉＲＮＡのセンス鎖に組み入れたｓｉＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ−２およびｓｉＲＮＡ−９、ｓｉＲＮＡ−３およびｓｉＲＮＡ−１０、ｓｉＲＮＡ−４およびｓｉＲＮＡ−１１、ｓｉＲＮＡ−５およびｓｉＲＮＡ−１２、ｓｉＲＮＡ−６およびｓｉＲＮＡ−１３ならびにｓｉＲＮＡ−８およびｓｉＲＮＡ−１４）と比較すると、両系列における融解温度はほぼ同一であったことを示している。
【０７７９】
これらの結果は、iＰｒ−モルホリン−ＵベースのビルディングブロックｌＵ３ｂおよびｌＵ３により、対応するｓｉＲＮＡの融解温度がそれらの未修飾対応物と比較して低下することを実証している。ｌＵ３ｂ−またはｌＵ３−ヌクレオチドの数を増加させると、Ｔｍ値の低下が大きくなる。ｌＵ３ｂ−およびｌＵ３−構造につながるモルホリン足場における２つのジアステレオマー配向の間に有意差はない。
【０７８０】
ジオキサン系におけるウリジン類似体を使用して、同様の評価を実行した（表４〜６）。ルシフェラーゼ配列に基づいて、未修飾ｓｉＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ−１５）の融解温度を７４℃で決定した。センス鎖（ｓｓ１３）において、すべてのｒＵ−ヌクレオチドを以下のものにより連続的に置き換えた：
・センス鎖（ｓｓ１４〜ｓｓ１９）において１〜６個のｌＵ１ｂ−ビルディングブロックを有する二本鎖ｓｉＲＮＡ−１６〜ｓｉＲＮＡ−２１をもたらす、ｌＵ１ｂ−ヌクレオチド、または
・センス鎖（ｓｓ２０〜ｓｓ２５）において１〜６個のｌＵ１−ビルディングブロックを有する二本鎖ｓｉＲＮＡ−２２〜ｓｉＲＮＡ−２７をもたらす、ｌＵ１−ヌクレオチド。
【０７８１】
【表１５】
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【０７８２】
【表１６】
2021517126.tif 000086
【０７８３】
【表１７】
2021517126.tif 000087
【０７８４】
表６におけるデータは、センス鎖においてジオキサンベースのヌクレオチドビルディングブロックｌＵ１ｂまたはｌＵ１の数が増加すると、得られるｓｉＲＮＡは、対応する融解温度が連続的に低下し、ｌＵ１ｂ−系列におけるｓｉＲＮＡ−２１およびｌＵ１修飾ｓｉＲＮＡにおけるｓｉＲＮＡ−２７で最小値になったことを示している。
【０７８５】
表３および６における結果は、iＰｒ−モルホリン−Ｕ−またはジオキサン−Ｕ−ヌクレオチド（ｌＵ３ｂ、ｌＵ３、ｌＵ１ｂおよびｌＵ１）をｓｉＲＮＡ−センス鎖へ組み入れることが、二本鎖安定性の低下につながり、これが融解温度の低下につながることを実証している。iＰｒ−モルホリン−またはジオキサン−Ｕビルディングブロックの数が多いほど、Ｔｍ値およびｓｉＲＮＡ分子の二本鎖安定性は低くなる。両系列における立体化学（ｌＵ３ｂ対ｌＵ３およびｌＵ１ｂ対ｌＵ１）に対する有意な依存性はない。
【０７８６】
〔実施例２〕
時間における例示的ｓｉＲＮＡの安定性
表７〜１０は、使用した対照配列を含む。
【０７８７】
【表１８】
2021517126.tif 000088
【０７８８】
【表１９】
2021517126.tif 000089
【０７８９】
【表２０】
2021517126.tif 000090
【０７９０】
iＰｒ−モルホリン−Ｔ−およびジオキサン−Ｔビルディングブロックの両方のジアステレオマー異性体（ｐｒｅ−ｌＴ３、ｐｒｅ−ｌＴ３ｂ、ｐｒｅ−ｌＴ１およびｐｒｅ−ｌＴ１ｂ）を、ＡＨＡ１−配列におけるセンス鎖の３’および５’末端ならびにアンチセンス鎖の３’末端でオーバーハングとして結合させた。一本鎖のセンスおよびアンチセンス鎖配列を、表１０および１１にそれぞれ列挙する。対応するｓｉＲＮＡを表１２に示す。対照ｓｉＲＮＡとして、標準的なｄＴ−ＰＳ−ｄＴ−安定化分子（ｓｉＲＮＡ−７）を使用した。ＰＯ連結修飾ｓｉＲＮＡ（表９）と直接比較するために、部分的または完全ＰＯ架橋オーバーハングを有する類似体対照（ｓｉＲＮＡ−２８およびｓｉＲＮＡ−５６）を合成した。
【０７９１】
修飾ｓｉＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ−５８〜ｓｉＲＮＡ−７９）のマウス血清における安定性を、標準的なｄＴ−ＰＳ−ｄＴ−オーバーハング（ｓｉＲＮＡ−７）ならびに部分的ＰＯ架橋類似体ｓｉＲＮＡ−２８および−５６と比較した。安定性は、５０％マウス血清中での２４時間インキュベーション後にＨＰＬＣ法により検出することができるアンチセンス鎖の量により決定した。これを０時間−インキュベーションにおける初期量に対する％値として列挙する。得られたアンチセンス鎖量（％）を表１３に列挙する。
【０７９２】
【表２１】
2021517126.tif 000091
【０７９３】
【表２２】
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【０７９４】
【表２３】
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【表２４】
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【０７９５】
【表２５】
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【表２６】
2021517126.tif 000096
【０７９６】
表１３から分かるように、試験条件下、対照ｓｉＲＮＡの中で、２個のホスホチオエート−安定化ｄＴ−ｄＴオーバーハングを有するｓｉＲＮＡ−７のみが、２４時間のインキュベーション後に有意な量のアンチセンス（１５％）を示した。類似体分子である、アンチセンス鎖（ａｓ２）においてＰＳ基を１個だけ有するｓｉＲＮＡ−２８、およびＰＳ基を有しないｓｉＲＮＡ−５６は、選択された時点で、検出可能な量のアンチセンス鎖を示さなかった。
【０７９７】
対照的に、すべてのｌＴｌＴ−修飾ｓｉＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ−５８〜−７９）は、２４時間後に有意な量のアンチセンス鎖を示した。その量は、対照分子ｓｉＲＮＡ−７で観察された量に匹敵したが、ｌＴ−修飾二本鎖はすべて、ｌＴｌＴ−オーバーハング（ｌＴ＝ｌＴ３、ｌＴ３ｂ、ｌＴ１およびｌＴ１ｂ）において追加のＰＳ−安定化なしで合成された。さらに、ｓｉＲＮＡ−修飾のいくつかは、ｄＴ−ＰＳ−ｄＴ−安定化対照化合物ｓｉＲＮＡ−７で観察された量の約２倍のアンチセンス量を示した。例は、ｓｉＲＮＡ−６１、−６６および−７２であり、これらはすべて、センスおよびアンチセンス鎖で二本鎖のｌＴ−オーバーハング（ｌＴ３、ｌＴ３ｂおよびｌＴ１）を有し、全ｓｉＲＮＡ配列においてＰＳ基を有しない。加えて、ｌＴ３−安定化分子であるｓｉＲＮＡ−５９およびｓｉＲＮＡ−６２は、予想外に高い安定性を示したが、ｓｉＲＮＡ−５９が、センス鎖およびｄＴ−ＰＳ−ｄＴ−安定化アンチセンス鎖（ａｓ２）の３’および５’末端でｌＴ３−オーバーハングを含有する一方、ｓｉＲＮＡ−６２は、同じセンス鎖を有するが、アンチセンス鎖（ａｓ１０）の３’末端にてｌＴ３−オーバーハングでさらに安定化されていることを強調しなければならない。同様の安定化は、対応するｌＴ３ｂ−修飾を有するｓｉＲＮＡ−６７において達成されている。
【０７９８】
表１３における結果は、標準的なｄＴ−ＰＳ−ｄＴ（ｓｉＲＮＡ−７）３’−オーバーハングをｌＴ−ｌＴ−オーバーハング（ｌＴ＝ｌＴ３、ｌＴ３ｂ、ｌＴ１および多少顕著さが劣るｌＴ１ｂ）で置き換えることにより、ｓｉＲＮＡ安定性が、ｌＴ−オーバーハング内の追加のＰＳ基なしに有意に増大することを実証している。化合物安定性のさらなる増大は、センス鎖の５’末端でｌＴ−ｌＴ−オーバーハングを使用することによってもまだ達成することができる。
【０７９９】
図１から分かるように、アンチセンス鎖の３’末端で一本鎖のｌＴ−オーバーハングを有するもの（ｓｉＲＮＡ−６０、−６５、−７１および−７７）を除いて、すべての化合物がヒトＨｅｐＧ２細胞において依然として強力であった。ｌＴ１、ｌＴ１ｂ、ｌＴ３−またはｌＴ３ｂ−オーバーハングを有するすべてのｓｉＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ２９〜ｓｉＲＮＡ５５）を、ＩＦＮα中アッセイおよび細胞毒性アッセイで試験したが、これらは免疫刺激または細胞生存性に対して何らの影響も示さなかった。
【０８００】
〔実施例３〕
本開示による修飾ｓｉＲＮＡによる標的遺伝子のインビトロ阻害
表１４〜１８に含まれる配列を使用した（ヌクレオチド類似体ｌＴ３およびｌＴ３ｂを含有するオーバーハングで合成したＡＨＡ１−配列）。
【０８０１】
【表２７】
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【０８０２】
【表２８】
2021517126.tif 000098
【０８０３】
【表２９】
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【０８０４】
【表３０】
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【０８０５】
【表３１】
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【０８０６】
説明
ＡＨＡ−１配列に基づいて、センス鎖における３’末端オーバーハングを、ｐｒｅ−ｌＴ３−またはｐｒｅ−ｌＴ３ｂ−ヌクレオチド前駆体を使用して結合した。両方のヌクレオチド類似体について、追加のコレステロール置換基を有するいくつかの実施例化合物（オリゴヌクレオチド合成の章を参照）において、８個までのｌＴ３−またはｌＴ３ｂ−ヌクレオチドをセンス鎖に結合した。両系列についての合成したセンス鎖を、表１４（ｌＴ３含有３’−オーバーハング）および表１７（ｌＴ３ｂ含有３’−オーバーハング）に列挙する。
【０８０７】
上記センス鎖をアンチセンス鎖ａｓ２およびａｓ４（表１５を参照）と合わせて、対応する二本鎖ｓｉＲＮＡ−２９〜ｓｉＲＮＡ−４４（ｌＴ３−オーバーハング、表１６）およびｓｉＲＮＡ−４５〜ｓｉＲＮＡ−５５（ｌＴ３ｂ−オーバーハング、表１８）を得た。
【０８０８】
得られたｓｉＲＮＡを、濃度５ｎＭでヒトＨｅｐＧ２細胞においてトランスフェクトした。ＡＨＡ１−ｍＲＮＡ濃度を４８時間後に決定した。
【０８０９】
図２から分かるように、ＡＨＡ−１対照ｓｉＲＮＡである、ｓｉＲＮＡ−７およびｓｉＲＮＡ−２８は、９０〜９５％の間で同様のｍＲＮＡ−ノックダウンを示す。これらの分子と比較して、ｌＴ３−またはｌＴ３ｂ−修飾を有するほとんどすべてのｓｉＲＮＡは、＞８５％阻害で満足のいくノックダウン挙動を依然として示す。３’末端に追加のコレステロール置換基を有する、アンチセンス鎖としてａｓ４を有するｓｉＲＮＡのみが、阻害効力の有意な損失を示す一方、修飾センス鎖を有するすべてのｓｉＲＮＡは、極めて高いインビトロノックダウンを依然として示す。驚くべきことに、ｌＴ３−またはｌＴ３ｂ−ヌクレオチドの数は、対応するｓｉＲＮＡの阻害効力に違いをもたらさない。３’−オーバーハングとして８個のｌＴ３−またはｌＴ３ｂ−ヌクレオチドを有するｓｉＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ−３４およびｓｉＲＮＡ−４８）であっても、ＡＨＡ１−ｍＲＮＡのロバストなダウンレギュレーションを示す。センス鎖での３’−オーバーハングにおける追加のコレステロール置換基の結合もまた、分子の効力において有意な変化を示さない。
【０８１０】
ｌＴ３−またはｌＴ３ｂ−オーバーハングを有するすべてのｓｉＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ２９〜ｓｉＲＮＡ５５）を、ＩＦＮα中アッセイおよび細胞毒性アッセイで試験したが、これらは免疫刺激または細胞生存性に対して何らの影響も示さなかった。
【０８１１】
〔実施例４〕
本開示による修飾ｓｉＲＮＡによる標的遺伝子発現のインビボ阻害
表１９〜２１に含まれる配列を使用した。
【０８１２】
【表３２】
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【０８１３】
【表３３】
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【０８１４】
【表３４】
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【０８１５】
インビボ実施例４．１：
ＧａｌＮＡｃ−ｓｉＲＮＡコンジュゲートのインビボ活性の実証、およびＲＮＡ干渉活性に対するＧａｌＮＡｃ結合用の異なるｓｉＲＮＡビルディングブロックの影響の比較
【０８１６】
方法：
Ｃ５７ＢＬ／６Ｎマウス（雌性２０〜２２ｇ；Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ、ドイツ）を、ｎ＝５の群にてｓｉＲＮＡ１−１〜ｓｉＲＮＡ１−１２またはＰＢＳ（模擬対照）２．５ｍｐｋの単回用量で皮下処置した。投与された化合物の配列および化学組成を、表１９〜表２１に列挙する。図１．１に示すように、投与前後に血液サンプルを採取した。ｓｉＲＮＡ標的ＴＴＲを、市販のＥＬＩＳＡアッセイ（Ａｌｐｃｏ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、カタログ番号：４１−ＰＡＬＭＳ−Ｅ０１）により血清から定量した。
【０８１７】
結果
図３ａ／ｂから分かるように、センス鎖の二重ＰＳ−安定化３’末端を有しないｓｉＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ１−１、ｓｉＲＮＡ１−３、ｓｉＲＮＡ１−６およびｓｉＲＮＡ１−９）は、極めて弱いノックダウンのみを示し、およそ２週間以内にベースラインに戻る。
【０８１８】
対照的に、残りのすべての分子において、３個のｌｇＴ−ヌクレオチド（ｌｇＴ＝ｌｇＴ１、ｌｇＴ２、ｌｇＴ３、ｌｇＴ４およびｌｇＴ５）の結合は、ＴＴＲ−標的ｍＲＮＡのロバストなノックダウンをもたらし、したがって肝細胞中へのロバストな送達をもたらす。全く予想外であるが、ｌｇＴ−ｓｉＲＮＡ−コンジュゲートは、それらのインビボ作用持続時間と、ＧａｌＮＡｃ標的化リガンドがｌｇＴ−足場のモルホリン窒素原子にそれにより結合するリンカー単位との間に、興味深いＳＡＲを示す。加えて、センス鎖へのｌｇＴ−足場の結合部位の間で興味深い相関作用を推論することができる（３’末端対５’末端）。
【０８１９】
５’末端結合には、３’末端コンジュゲートに優る明らかな利点がある。図３ａ／ｂに示すように、例えばｌｇＴ１およびｌｇＴ３の５’末端結合（ｓｉＲＮＡ１−５およびｓｉＲＮＡ１−８）は、それらの３’末端類似体（それぞれｓｉＲＮＡ１−７およびｓｉＲＮＡ１−１０）よりも有意に長い作用持続時間を示す。
【０８２０】
加えて、モルホリン−とＧａｌＮＡｃとの間のリンカーがより長いと、それらのより短い類似体よりも働きが弱くなり、例えばＣ１２−アルキル−連結ｌｇＴ４−足場を有するｓｉＲＮＡ１−１１は、ｌｇＴ３−ビルディングブロックにおいてＣ５−アルキルリンカーを有する類似体ｓｉＲＮＡ１−８よりも短い作用持続時間を示すことが見出された。両方がセンス鎖の５’末端で結合している場合、より短いｌｇＴ３−ヌクレオチド類似体を使用することに明らかな利益がある。
【０８２１】
加えて、モルホリン−およびＧａｌＮＡｃ−部分の間にＰＥＧ型リンカーを有するｌｇＴ５含有ｓｉＲＮＡ１−４は、極めて魅力的なインビボ効力および作用持続時間を示した。
【０８２２】
インビボ実施例４．２：
インビボ実施例４．１からの選択化合物の用量依存的インビボ活性および急性毒性評価
方法
動物研究
Ｃ５７ＢＬ／６Ｎマウス（雌性２０〜２２ｇ；Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ、ドイツ）を、ｎ＝６（０．５および２．５ｍｐｋについて）またはｎ＝４（２０ｍｐｋについて）の群にて、ｓｉＲＮＡまたはＰＢＳ（模擬対照）０．５、２．５または２０ｍｐｋの単回用量で皮下処置した。投与された化合物の配列および化学組成は、表１９〜表２１で参照される。動物を、処置の４８時間後に屠殺し、血液を血液学的分析、臨床化学のために採取し、臓器を回収し、秤量した。血球計数をｓｃｉｌ  Ｖｅｔ動物用血球計数装置で実行し、臨床化学分析をＲｏｃｈｅ  Ｃｏｂａｓシステムで実行した。
【０８２３】
研究後分析
ｓｉＲＮＡ標的ＴＴＲを、市販のＥＬＩＳＡアッセイ（Ａｌｐｃｏ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、カタログ番号：４１−ＰＡＬＭＳ−Ｅ０１）により血清から定量した。
【０８２４】
肝臓組織を、ＤＮａｓｅ消化を含む全ＲＮＡ抽出（ＲＮＡｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ、Ｑｉａｇｅｎ）により、ＲＴ−ｑＰＣＲ分析のために処理した。ＴＴＲ（ＴａｑＭａｎアッセイＩＤ  Ｍｍ００４４３２６７＿ｍ１）および参照ｍＲＮＡ（Ａｃｔｂ（ＴａｑＭａｎアッセイＩＤ４３５２３４１Ｅ）、Ｇａｐｄｈ（ＴａｑＭａｎアッセイＩＤ４３０８３１３））を、ＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ７９００システム上でｑＰＣＲにより定量し、続いてオリゴ−ｄＴおよびランダムヘキサマープライム化ｃＤＮＡ合成を行った。ΔΔＣｔ法を適用して、標的転写物の相対的発現レベルを計算した。
【０８２５】
２０ｍｐｋ処置群（＋ＰＢＳ）の右上の肝葉、脾臓および腎臓をホルマリン固定し、標準的なＨ＆Ｅ染色に続いて異常について病理学的に評価した。
【０８２６】
結果（図４および５を参照）
タンパク質およびｍＲＮＡレベルの両方が、投与の４８時間後に用量依存的に、すべての試験された活性ｓｉＲＮＡにより低減した。ｍＲＮＡおよびタンパク質低減は、平行して起こった。試験された活性物質の中で、ｓｉＲＮＡ１−４、１−５および１−８の間では有意差は観察されなかった一方、ｓｉＲＮＡ１−１０は、特に処置用量０．５および２．５ｍｐｋで、前者のものと比較してわずかに顕著さが劣る効能を示した。これは、図４に示す縦断的研究からの観察に一致する。
【０８２７】
処置および用量依存的影響は、標準的な血液学および肝臓／腎臓臨床化学アッセイにおいて観察されなかった。また、有意の処置依存的な、血清サイトカインの変質、および臓器または体重への影響も、屠殺において観察されなかった。すべての偏差が正常な生理学的範囲または正常な動物間変動性内であった。肝臓、脾臓および腎臓の組織病理学的評価には所見がなかった。
【０８２８】
化合物ｓｉＲＮＡ１−１〜ｓｉＲＮＡ１−１２の初代マウス肝細胞におけるインビトロノックダウン結果を表２２に要約する：
【０８２９】
【表３５】
2021517126.tif 000105
【０８３０】
ｌｇＴ−オーバーハングを有するすべてのｓｉＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ１−１〜ｓｉＲＮＡ１−１２）を、ＩＦＮα中アッセイおよび細胞毒性アッセイで試験したが、これらは免疫刺激または細胞生存性に対して何らの影響も示さなかった。
【０８３１】
〔実施例５〕
本開示による修飾ｓｉＲＮＡによる標的遺伝子発現のインビボ阻害
インビボ実施例５．１：
ＧａｌＮＡｃ−ｓｉＲＮＡコンジュゲートのインビボ活性の実証、ならびにＲＮＡ干渉活性に対する異なる二本鎖配置および組合せの影響の比較。
【０８３２】
方法
Ｃ５７ＢＬ／６Ｎマウス（雌性２０〜２２ｇ；Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ、ドイツ）を、ｎ＝５の群にて、ＧａｌＮＡｃ−ｓｉＲＮＡ（インビボ実施例１との比較のためにｓｉＲＮＡ１−８について＋２．５ｍｐｋ）またはＰＢＳ（模擬対照）１ｍｐｋの単回用量で皮下処置した。投与された化合物の配列および化学組成を、表２３〜表２５に列挙する。図６に示すように、投与前後に血液サンプルを採取した。ｓｉＲＮＡ標的ＴＴＲを、市のＥＬＩＳＡアッセイ（Ａｌｐｃｏ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、カタログ番号：４１−ＰＡＬＭＳ−Ｅ０１）により血清から定量した。
【０８３３】
【表３６】
2021517126.tif 000106
【０８３４】
【表３７】
2021517126.tif 000107
【０８３５】
【表３８】
2021517126.tif 000108
【０８３６】
結果
センス鎖の５’末端にｌｇＴ３−オーバーハングのみを有し、センスまたはアンチセンス鎖の３’末端に追加のｌＴ−オーバーハング（ｌＴ＝ｌＴ１〜ｌＴ９）を有しない対照ｓｉＲＮＡ１−８と比較して、図６ａ／ｂは、センス鎖の３’末端にｌＴ３の追加の結合を有するｓｉＲＮＡ２−５が、５’末端にも３’末端にもＰＳ基を有しないセンス鎖を使用して、対照ｓｉＲＮＡ１−８と同等のインビボ性能を示すことを示しており、ここでｓｉＲＮＡ１−８は３’末端に２個のＰＳ基をさらに有している。
【０８３７】
センス鎖の３’末端およびアンチセンス鎖の３’末端にｌＴ４−ｌＴ４−オーバーハングを有し、ここでもまた、アンチセンス鎖ａｓ２−５のｌＴ４−結合部位で２個のＰＳ基が減少している、ｓｉＲＮＡ２−７で、さらなる進展を達成することができた。ここでもまたｓｉＲＮＡ２−７は、センスおよびアンチセンス鎖における共通のＰＳ安定化パターンで、ｓｉＲＮＡ１−８と同等のインビボ効力および作用持続時間を示す。
【０８３８】
インビボ実施例５．２：
用量依存的インビボ活性および急性毒性評価を、インビボ実施例５．１から選択した化合物について決定した。
【０８３９】
方法
動物研究
Ｃ５７ＢＬ／６Ｎマウス（雌性２０〜２２ｇ；Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ、ドイツ）を、ｎ＝６（０．５および２．５ｍｐｋについて）またはｎ＝５（２５ｍｐｋについて）の群にて、ｓｉＲＮＡまたはＰＢＳ（模擬対照）０．５、２．５または２５ｍｐｋの単回用量で皮下処置した。投与された化合物の配列および化学組成は、表２３〜表２５で参照される。動物を、処置の４８時間後に屠殺し、血液を血液学的分析、臨床化学のために採取し、臓器を回収し、秤量した。血液学的血球計数をｓｃｉｌ  Ｖｅｔ動物用血球計数装置で実行し、臨床化学分析をＲｏｃｈｅ  Ｃｏｂａｓシステムで実行した。
【０８４０】
研究後分析
ｓｉＲＮＡ標的ＴＴＲを、市販のＥＬＩＳＡアッセイ（Ａｌｐｃｏ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、カタログ番号：４１−ＰＡＬＭＳ−Ｅ０１）により血清から定量した。
【０８４１】
肝臓組織を、ＤＮａｓｅ消化を含む全ＲＮＡ抽出（ＲＮＡｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ、Ｑｉａｇｅｎ）により、ＲＴ−ｑＰＣＲ分析のために処理した。ＴＴＲ（ＴａｑＭａｎアッセイＩＤ  Ｍｍ００４４３２６７＿ｍ１）および参照ｍＲＮＡ（Ａｃｔｂ（ＴａｑＭａｎアッセイＩＤ４３５２３４１Ｅ）、Ｇａｐｄｈ（ＴａｑＭａｎアッセイＩＤ４３０８３１３））を、ＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ７９００システム上でｑＰＣＲにより定量し、続いてオリゴ−ｄＴおよびランダムヘキサマープライム化ｃＤＮＡ合成を行った。ΔΔＣｔ法を適用して、標的転写物の相対的発現レベルを計算した。
【０８４２】
２５ｍｐｋ処置群（＋ＰＢＳ）の右上の肝葉、脾臓および腎臓をホルマリン固定し、標準的なＨ＆Ｅ染色に続いて異常について病理学的に評価した。
【０８４３】
結果（図７および８を参照）
タンパク質およびｍＲＮＡレベルの両方が、投与の４８時間後に用量依存的に、すべての試験されたｓｉＲＮＡにより低減した。ｍＲＮＡおよびタンパク質低減は、平行して起こった。試験された活性物質の中で、ｓｉＲＮＡ１−８および２−５の間では有意差は観察されなかった一方、ｓｉＲＮＡ２−７は、特に処置用量０．５および２．５ｍｐｋで、前者のものと比較してわずかに顕著さが劣る効能となる傾向を示した。
【０８４４】
処置用量依存的影響は、標準的な血液学および肝臓／腎臓臨床化学アッセイにおいて観察されなかった。また、有意の処置依存的な、血清サイトカインの変質、および臓器または体重への影響も、屠殺において観察されなかった。すべての偏差が正常な生理学的範囲または正常な動物間変動性内であった。肝臓および脾臓の組織病理学的評価には所見がなかった。
【０８４５】
化合物ｓｉＲＮＡ２−２〜ｓｉＲＮＡ２−１３について初代マウス肝細胞において得られたインビトロノックダウン結果を表２６に要約する：
【０８４６】
【表３９】
2021517126.tif 000109
【０８４７】
ｌｇＴ−およびｌＴ−オーバーハングを有するすべてのｓｉＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ１−８、ｓｉＲＮＡ２−２〜ｓｉＲＮＡ２−１３）を、ＩＦＮα中アッセイおよび細胞毒性アッセイで試験したが、これらは免疫刺激または細胞生存性に対して何らの影響も示さなかった。
【０８４８】
インビトロ安定性
表２７に示すように、ＰＳ−安定化センスまたはアンチセンス３’末端をｌＴ−オーバーハングの結合により置き換えることが、インビトロ安定性の増大につながっている。
【０８４９】
【表４０】
2021517126.tif 000110
【０８５０】
表２７において、「Ｘ」は、両方の鎖のうちの１つの残りの量が５０％未満であることを意味する。
【０８５１】
すべてのｌＴ−修飾ｓｉＲＮＡは、３２時間の対照化合物ｓｉＲＮＡ１−８と同じ安定性を少なくとも示す。ここでもまた、ｌＴ−オーバーハングが結合している、ｓｉＲＮＡ番号２−２〜２−１３における末端は、追加のＰＳ−安定化を全く含まない。センス鎖の３末端修飾をＰＳ−安定化から二重ｌＴ３−オーバーハングに変えることにより（ｓｉＲＮＡ２−５）、３２時間から５６時間に有意に安定性が増大する。両方の鎖の３’末端にｌＴ４−オーバーハングを結合することでも、ｓｉＲＮＡ２−７は４８時間に増加した。
【０８５２】
〔実施例６〕
本開示による修飾ｓｉＲＮＡによる標的遺伝子発現のインビボ阻害
【０８５３】
【表４１】
2021517126.tif 000111
【０８５４】
【表４２】
2021517126.tif 000112
【０８５５】
【表４３】
2021517126.tif 000113
【０８５６】
インビボ実施例６．１：
ＰＥＧ−ＧａｌＮＡｃ−ｓｉＲＮＡコンジュゲートのインビボ活性の実証、およびＲＮＡ干渉活性に対する異なるＰＥＧ−ＧａｌＮＡｃビルディングブロックの影響の比較。
【０８５７】
方法
Ｃ５７ＢＬ／６Ｎマウス（雌性２０〜２２ｇ；Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ、ドイツ）を、ｎ＝６の群にて、ＰＥＧ−ＧａｌＮＡｃ−ｓｉＲＮＡまたはＰＢＳ（模擬対照）５ｍｐｋの単回用量で皮下処置した。投与された化合物の配列および化学組成を、表２８〜表３０に列挙する。図９ａ／ｂに示すように、投与前後に血液サンプルを採取した。ｓｉＲＮＡ標的ＴＴＲを、市販のＥＬＩＳＡアッセイ（Ａｌｐｃｏ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、カタログ番号：４１−ＰＡＬＭＳ−Ｅ０１）により血清から定量した。
【０８５８】
結果（図９ａ／ｂを参照）
ここでもまた、５’末端におけるｌｇＴ−ビルディングブロック（ｌｇＴ＝ｌｇＴ５、ｌｇＴ６、ｌｇＴ７、ｌｇＴ８およびｌｇＴ９）の結合（ｓｉＲＮＡ３−６〜ｓｉＲＮＡ３−１０）には、類似体３’末端対応物（ｓｉＲＮＡ３−１〜ｓｉＲＮＡ３−５）に優る明らかな利益がある。ＴＴＲ−ｍＲＮＡの明らかなノックダウンを既に示している、ｌｇＴ３含有ｓｉＲＮＡ１−８と比較して、ＰＥＧ型類似体ｓｉＲＮＡ３−７およびｓｉＲＮＡ３−８は、改善された作用持続時間を３０日後に示している。ｌｇＴ６およびｌｇＴ７が、モルホリン−ＮおよびＧａｌＮＡｃ−部分の間に、より長いリンカーを含有しているので、これは予想外の結果である。連結単位のＰＥＧ構造は、対応するｓｉＲＮＡのインビボ効力に対して正の効果を有すると思われる。
【０８５９】
センス鎖の５’末端におけるｌｇＴ３−結合（ｓｓ１−８）を３’末端における追加のｌＴ４−ｌＴ４−オーバーハング（ｓｓ３−１１）と組み合わせることにより、作用持続時間のさらなる改善を達成した。センス鎖にＰＳ基を残すことなく、対応するｓｉＲＮＡ３−１１は、作用持続時間においてさらなる改善を示し、上記インビボ研究において最も強力な化合物であった。
【０８６０】
これらの結果は、モルホリン−ヌクレオチド類似体が、肝臓ｓｉＲＮＡ標的化のためのＧａｌＮＡｃ置換ヌクレオチド類似体（ｌｇＴ）として使用される場合、インビボで有益な特性を示すことを明らかに示している。これらの三重ｌｇＴ置換ｓｉＲＮＡを、同じセンス鎖の３’末端において二重ｌＴ−オーバーハングで修飾する場合、さらなる利益を達成することができる。この第２の修飾は、明らかに改善された作用持続時間につながる（ｓｉＲＮＡ１−８対ｓｉＲＮＡ３−１１を参照）。
【０８６１】
インビボ実施例６．２：
インビボ実施例６．１から選択した化合物の用量依存的インビボ活性および急性毒性評価
方法
動物研究
Ｃ５７ＢＬ／６Ｎマウス（雌性２０〜２２ｇ；Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ、ドイツ）を、ｎ＝６（０．５および２．５ｍｐｋについて）またはｎ＝５（２５ｍｐｋについて）の群にて、ｓｉＲＮＡまたはＰＢＳ（模擬対照）０．５、２．５または２５ｍｐｋの単回用量で皮下処置した。投与された化合物の配列および化学組成は、表２５〜表２７で参照される。動物を、処置の４８時間後に屠殺し、血液を血液学的分析、臨床化学のために採取し、臓器を回収し、秤量した。血液学的血球計数をｓｃｉｌ  Ｖｅｔ動物用血球計数装置で実行し、臨床化学分析をＲｏｃｈｅ  Ｃｏｂａｓシステムで実行した。
【０８６２】
研究後分析
ｓｉＲＮＡ標的ＴＴＲを、市販のＥＬＩＳＡアッセイ（Ａｌｐｃｏ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、カタログ番号：４１−ＰＡＬＭＳ−Ｅ０１）により血清から定量した。
【０８６３】
肝臓組織を、ＤＮａｓｅ消化を含む全ＲＮＡ抽出（ＲＮＡｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ、Ｑｉａｇｅｎ）により、ＲＴ−ｑＰＣＲ分析のために処理した。ＴＴＲ（ＴａｑＭａｎアッセイＩＤ  Ｍｍ００４４３２６７＿ｍ１）および参照ｍＲＮＡ（Ａｃｔｂ（ＴａｑＭａｎアッセイＩＤ４３５２３４１Ｅ）、Ｇａｐｄｈ（ＴａｑＭａｎアッセイＩＤ４３０８３１３））を、ＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ７９００システム上でｑＰＣＲにより定量し、続いてオリゴ−ｄＴおよびランダムヘキサマープライム化ｃＤＮＡ合成を行った。ΔΔＣｔ法を適用して、標的転写物の相対的発現レベルを計算した。
【０８６４】
２５ｍｐｋ処置群（＋ＰＢＳ）の右上の肝葉、脾臓および腎臓をホルマリン固定し、標準的なＨ＆Ｅ染色に続いて異常について病理学的に評価した。
【０８６５】
結果（図１０および１１を参照）
タンパク質およびｍＲＮＡレベルの両方が、投与の４８時間後に用量依存的に、すべての試験された活性ｓｉＲＮＡにより低減した。ｍＲＮＡおよびタンパク質低減は、平行して起こった。試験された活性物質の中では、いかなる用量でも、タンパク質またはｍＲＮＡレベルのいずれにおいても有意差は観察されなかった。
【０８６６】
化合物ｓｉＲＮＡ３−１〜ｓｉＲＮＡ３−１１の初代マウス肝細胞におけるインビトロノックダウン結果を表３１に要約する。
【０８６７】
処置用量依存的影響は、標準的な血液学および肝臓／腎臓臨床化学アッセイにおいて観察されなかった。また、有意の処置依存的な、血清サイトカインの変質、および臓器または体重への影響も、屠殺において観察されなかった。すべての偏差が正常な生理学的範囲または正常な動物間変動性内であった。肝臓および脾臓の組織病理学的評価には所見がなかった。
【０８６８】
【表４４】
2021517126.tif 000114
【０８６９】
ｌｇＴ−またはｌｇＴ−およびｌＴ−オーバーハングを有するすべてのｓｉＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ１−８、ｓｉＲＮＡ３−１〜ｓｉＲＮＡ３−１１）を、ＩＦＮα中アッセイおよび細胞毒性アッセイで試験したが、これらは免疫刺激または細胞生存性に対して何らの影響も示さなかった。
【０８７０】
〔実施例７〕
本開示による修飾ｓｉＲＮＡによる標的遺伝子発現のインビボ阻害
インビボ実施例７．１：
【０８７１】
【表４５】
2021517126.tif 000115
【０８７２】
【表４６】
2021517126.tif 000116
【０８７３】
【表４７】
2021517126.tif 000117
【０８７４】
方法
Ｃ５７ＢＬ／６Ｎマウス（雌性２０〜２２ｇ；Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ、ドイツ）を、ｎ＝６の群にて、ｓｉＲＮＡまたはＰＢＳ（模擬対照）１ｍｐｋの単回用量で皮下処置した。投与された化合物の配列および化学組成を、表３２〜表３４に列挙する。図１２ａ／ｂに示すように、投与前後に血液サンプルを採取した。ｓｉＲＮＡ標的ＴＴＲを、市販のＥＬＩＳＡアッセイ（Ａｌｐｃｏ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、カタログ番号：４１−ＰＡＬＭＳ−Ｅ０１）により血清から定量した。
【０８７５】
表３４に列挙したｓｉＲＮＡ−コンジュゲートのインビボ活性の実証、およびそれらのＲＮＡｉ活性の比較
結果（図１２ａ／１２ｂを参照）
２つの陽性対照ｓｉＲＮＡ４−１およびｓｉＲＮＡ４−２を比較することにより、初期のホスホチオエート安定化と比較して、センス鎖の３’末端におけるｌＴ４−ｌＴ４−オーバーハングに明らかな利益があることが確認される。
【０８７６】
ｓｉＲＮＡ４−１における３個のｌｇＴ３−ビルディングブロックを、モルホリン環とＧａｌＮＡｃ標的化部分との間にＰＥＧ型リンカーを有するｌｇＴ６−またはｌｇＴ７−類似体に交換することにより、作用持続時間をさらに改善することができた（ｓｉＲＮＡ４−３およびｓｉＲＮＡ４−４を参照）。
【０８７７】
予想外であるが、ｓｉＲＮＡ４−４とｓｉＲＮＡ４−５との比較により、センス鎖のｌＴ４−ｌＴ４−３’末端−安定化がこれらの位置で追加のホスホチオエート基を有する場合に作用持続時間がさらに増加することはないことが示される（ｓｓ４−５を参照）。
【０８７８】
インビボ実施例７．２：
インビボ実施例７．１からの選択化合物の用量依存的インビボ活性および急性毒性評価
方法
動物研究
Ｃ５７ＢＬ／６Ｎマウス（雌性２０〜２２ｇ；Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ、ドイツ）を、ｎ＝６（０．５および２．５ｍｐｋについて）またはｎ＝５（２５ｍｐｋについて）の群にて、ｓｉＲＮＡまたはＰＢＳ（模擬対照）０．５、２．５または２５ｍｐｋの単回用量で皮下処置した。投与された化合物の配列および化学組成は、表３２〜表３４で参照される。動物を、処置の４８時間後に屠殺し、血液を血液学的分析、臨床化学のために採取し、臓器を回収し、秤量した。血液学的血球計数をｓｃｉｌ  Ｖｅｔ動物用血球計数装置で実行し、臨床化学分析をＲｏｃｈｅ  Ｃｏｂａｓシステムで実行した。
【０８７９】
研究後分析
ｓｉＲＮＡ標的ＴＴＲを、市販のＥＬＩＳＡアッセイ（Ａｌｐｃｏ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、カタログ番号：４１−ＰＡＬＭＳ−Ｅ０１）により血清から定量した。
【０８８０】
肝臓組織を、ＤＮａｓｅ消化を含む全ＲＮＡ抽出（ＲＮＡｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ、Ｑｉａｇｅｎ）により、ＲＴ−ｑＰＣＲ分析のために処理した。ＴＴＲ（ＴａｑＭａｎアッセイＩＤ  Ｍｍ００４４３２６７＿ｍ１）および参照ｍＲＮＡ（Ａｃｔｂ（ＴａｑＭａｎアッセイＩＤ４３５２３４１Ｅ）、Ｇａｐｄｈ（ＴａｑＭａｎアッセイＩＤ４３０８３１３））を、ＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ７９００システム上でｑＰＣＲにより定量し、続いてオリゴ−ｄＴおよびランダムヘキサマープライム化ｃＤＮＡ合成を行った。ΔΔＣｔ法を適用して、標的転写物の相対的発現レベルを計算した。
【０８８１】
２５ｍｐｋ処置群（＋ＰＢＳ）の右上の肝葉、脾臓および腎臓をホルマリン固定し、標準的なＨ＆Ｅ染色に続いて異常について病理学的に評価した。
【０８８２】
結果（図１３および１４を参照）：
タンパク質およびｍＲＮＡレベルの両方が、投与の４８時間後に用量依存的に、すべての試験された活性ｓｉＲＮＡにより低減した。ｍＲＮＡおよびタンパク質低減は、平行して起こった。試験された活性物質の中では、いかなる用量でも、タンパク質またはｍＲＮＡレベルのいずれにおいても有意差は観察されなかった。
【０８８３】
処置用量依存的影響は、標準的な血液学および肝臓／腎臓臨床化学アッセイにおいて観察されなかった。また、有意の処置依存的な、血清サイトカインの変質、および臓器または体重への影響も、屠殺において観察されなかった。すべての偏差が正常な生理学的範囲または正常な動物間変動性内であった。肝臓および脾臓の組織病理学的評価には所見がなかった。
【０８８４】
化合物ｓｉＲＮＡ４−１〜ｓｉＲＮＡ４−１１の初代マウス肝細胞におけるインビトロノックダウン結果を表３５に要約する：
【０８８５】
【表４８】
2021517126.tif 000118
【０８８６】
それぞれ１６０および５５８ｐＭのＩＣ50値を示す、陽性対照ｓｉＲＮＡ４−１（＝ｓｉＲＮＡ１−８）およびｓｉＲＮＡ４−２（＝ｓｉＲＮＡ３−１１）と比較して、新しい類似体であるｓｉＲＮＡ４−３〜ｓｉＲＮＡ４−１１は、同じ範囲である１１１ｐＭ（ｓｉＲＮＡ４−６）〜５４５ｐＭ（ｓｉＲＮＡ４−５）の間でインビトロ効力を示す。ｌＴ−またはｌＡ−オーバーハングを有するまたは有しないｌｇＴ−オーバーハングを有するすべてのｓｉＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ４−１〜ｓｉＲＮＡ４−１１）を、ＩＦＮα中アッセイおよび細胞毒性アッセイで試験したが、これらは免疫刺激または細胞生存性に対して何らの影響も示さなかった。
【０８８７】
収集したすべてのデータ（インビボおよびインビトロ）に基づいて、ヌクレオチド類似体ｌｇＴ７およびｌＴ４を、対応するｓｉＲＮＡの肝臓標的化および３’末端安定化のために選択した。
【０８８８】
〔実施例８〕
本開示に記載の修飾オリゴヌクレオチドの分析データ
８．１．一本鎖オリゴヌクレオチドの分析結果
【０８８９】
８．１．１．−センス鎖
【表４９】
2021517126.tif 000119
【表５０】
2021517126.tif 000120
【表５１】
2021517126.tif 000121
【０８９０】
【表５２】
2021517126.tif 000122
【表５３】
2021517126.tif 000123
【０８９１】
８．１．２．アンチセンス鎖
【表５４】
2021517126.tif 000124
【０８９２】
８．２．二本鎖オリゴヌクレオチドの分析結果
【表５５】
2021517126.tif 000125
【表５６】
2021517126.tif 000126
【表５７】
2021517126.tif 000127
【表５８】
2021517126.tif 000128
【図１】
2021517126.tif 000155
【図２】
2021517126.tif 000156
【図３ａ】
2021517126.tif 000157
【図３ｂ】
2021517126.tif 000158
【図４】
2021517126.tif 000159
【図５】
2021517126.tif 000160
【図６ａ】
2021517126.tif 000161
【図６ｂ】
2021517126.tif 000162
【図７】
2021517126.tif 000163
【図８】
2021517126.tif 000164
【図９ａ】
2021517126.tif 000165
【図９ｂ】
2021517126.tif 000166
【図１０】
2021517126.tif 000167
【図１１】
2021517126.tif 000168
【図１２ａ】
2021517126.tif 000169
【図１２ｂ】
2021517126.tif 000170
【図１３】
2021517126.tif 000171
【図１４】
2021517126.tif 000172
【配列表】
2021517126000001.app
【国際調査報告】
2021517126.tif 000173
2021517126.tif 000174